(57)【要約】  ＩｇＧ抗体のヒンジ領域の両方のＣｙｓ部位にコンジュゲートされた、ｃ−Ｍｅｔ標的と結合するＩｇＧ抗体を有する抗体薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）が開示される。有効量のｃ−Ｍｅｔ  ＡＤＣを提供することを含む、乳がんを治療するための方法がさらに開示される。【特許請求の範囲】
【請求項１】
ｃ−Ｍｅｔと結合するＩｇＧ抗体、ＩｇＧ抗体のヒンジ領域の両方のＣｙｓ残基と結合するコンジュゲーションリンカー部分および毒素部分を含む、抗体薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）組成物。
【請求項２】
毒素部分がチューブリン阻害剤またはドキソルビシンアナログである、請求項１に記載のＡＤＣ組成物。
【請求項３】
抗体が、Ｈ８（重／軽  配列番号１９／２０）ファミリーに由来するＩｇＧ抗体である、またはＢ１２（重／軽  配列番号７／８）であり、Ｈ８抗体ファミリーが、Ｈ８−Ａ２、Ｈ８−９、Ｈ８−９ＥＥ８Ｌ３、Ｈ８−Ｃ１、Ｈ８−Ｄ４、Ｈ８−Ｄ５、Ｈ８−Ｄ６、Ｈ８−Ｄ１０、Ｈ８−Ｅ５、Ｈ８−Ｇ７、Ｈ８−Ｈ６、Ｈ８−２Ａ２、Ｈ８−２Ｂ１、Ｈ８−２Ｂ２、Ｈ８−２Ｂ４、Ｈ８−２Ｂ７、Ｈ８−Ａ７Ｐ、Ｈ８−９ＥＨ１１Ｌ、Ｈ８−９ＥＨ１１ＬおよびＨ８−６ＡＧ２Ｈ３からなる群から選択される、請求項１に記載のＡＤＣ組成物。
【請求項４】
コンジュゲートされた毒素が、
【化１】
2018502149.tif 000017
である、請求項１に記載のＡＤＣ組成物。
【請求項５】
ｃ−Ｍｅｔと結合するＩｇＧ抗体、ＩｇＧ抗体のヒンジ領域の両方のＣｙｓ残基と結合するコンジュゲーションリンカー部分および毒素部分を含む有効量の抗体薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）組成物を投与することを含む、乳がんを治療するための方法。
【請求項６】
毒素部分がチューブリン阻害剤またはドキソルビシンアナログである、請求項５に記載の乳がんを治療するための方法。
【請求項７】
抗体が、Ｈ８（重／軽  配列番号１９／２０）ファミリーに由来するＩｇＧ抗体である、またはＢ１２（重／軽  配列番号７／８）であり、Ｈ８抗体ファミリーが、Ｈ８−Ａ２、Ｈ８−９、Ｈ８−９ＥＥ８Ｌ３、Ｈ８−Ｃ１、Ｈ８−Ｄ４、Ｈ８−Ｄ５、Ｈ８−Ｄ６、Ｈ８−Ｄ１０、Ｈ８−Ｅ５、Ｈ８−Ｇ７、Ｈ８−Ｈ６、Ｈ８−２Ａ２、Ｈ８−２Ｂ１、Ｈ８−２Ｂ２、Ｈ８−２Ｂ４、Ｈ８−２Ｂ７、Ｈ８−Ａ７Ｐ、Ｈ８−９ＥＨ１１Ｌ、Ｈ８−９ＥＨ１１ＬおよびＨ８−６ＡＧ２Ｈ３からなる群から選択される、請求項５に記載の乳がんを治療するための方法。
【請求項８】
コンジュゲートされた毒素が、
【化２】
2018502149.tif 000018
である、請求項５に記載の乳がんを治療するための方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本開示は、ＩｇＧ抗体のヒンジ領域の両方のＣｙｓ部位にコンジュゲートされた、ｃ−Ｍｅｔ標的と結合するＩｇＧ抗体を有する抗体薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）を提供する。本開示は、有効量のｃ−Ｍｅｔ  ＡＤＣを提供することを含む、乳がんを治療するための方法をさらに提供する。
【背景技術】
【０００２】
ＨＧＦは、多数の異なる細胞型に対する分裂促進性、運動源性および形態形成性作用を有する間葉由来多面作用因子（ｍｅｓｅｎｃｈｙｍｅ−ｄｅｒｉｖｅｄ  ｐｌｅｉｏｔｒｏｐｈｉｃ  ｆａｃｔｏｒ）である。ＨＧＦ効果は、特異的チロシンキナーゼであるｃ−Ｍｅｔを通じて媒介され、異常ＨＧＦおよびｃ−Ｍｅｔ発現は、様々な腫瘍において頻繁に観察される。（Ｍａｕｌｉｋら、Ｃｙｔｏｋｉｎｅ  ＆  Ｇｒｏｗｔｈ  Ｆａｃｔｏｒ  Ｒｅｖｉｅｗｓ（２００２）、１３：４１−５９頁；Ｄａｎｉｌｋｏｖｉｔｃｈ−Ｍｉａｇｋｏｖａ  ＆  Ｚｂａｒ、Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．（２００２）、１０９（７）：８６３−８６７頁）。ＨＧＦ／ｃ−Ｍｅｔシグナリング経路の調節は、腫瘍進行および転移に関与する。（Ｔｒｕｓｏｌｉｎｏ  ＆  Ｃｏｍｏｇｌｉｏ、Ｎａｔｕｒｅ  Ｒｅｖ．（２００２）、２：２８９−３００頁）。
【０００３】
ＨＧＦは、Ｍｅｔ受容体チロシンキナーゼ（ＲＴＫ）の細胞外ドメインと結合し、細胞散乱、増殖、および生存のような多様な生物学的プロセスを調節する。ＨＧＦ−Ｍｅｔシグナリングは、正常な胚発生のために、とりわけ筋肉前駆細胞の移動ならびに肝臓および神経系の発達において不可欠である（Ｂｌａｄｔら、Ｎａｔｕｒｅ  ３７６、７６８−７７１頁．１９９５年；Ｈａｍａｎｏｕｅら  Ｊ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．Ｒｅｓ．４３、５５４−５６４頁．１９９６年；Ｓｃｈｍｉｄｔら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９４、１１４４５−１１４５０頁、１９９５年；Ｕｅｈａｒａら、Ｎａｔｕｒｅ  ３７３、７０２−７０５頁、１９９５年）。ＭｅｔおよびＨＧＦノックアウトマウスの発生表現型は非常に類似しており、ＨＧＦがＭｅｔ受容体の同族リガンドであることを示唆する（Ｓｃｈｍｉｄｔら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９４、１１４４５−１１４５０頁、１９９５年；Ｕｅｈａｒａら、Ｎａｔｕｒｅ  ３７３、７０２−７０５頁、１９９５年）。ＨＧＦ−Ｍｅｔはまた、肝再生、血管新生、および創傷治癒において役割を果たす（Ｂｕｓｓｏｌｉｎｏら、Ｊ．Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ．１１９、６２９−６４１頁  １９９２年；Ｎｕｓｒａｔら、Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．９３、２０５６−２０６５頁  １９９４年）。前駆体Ｍｅｔ受容体は、タンパク質切断を受けて、ジスルフィド結合により連結された細胞外サブユニットおよび膜貫通サブユニットとなる（Ｔｅｍｐｅｓｔら、Ｂｒ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ  ５８、３−７頁  １９８８年）。サブユニットは細胞質キナーゼドメインを含有し、アダプタータンパク質が結合してシグナリングを開始するＣ末端に多基質ドッキング部位を有する。ＨＧＦ結合の際、Ｍｅｔの活性化が、それぞれＧａｂ１およびＧｒｂ２／Ｓｏｓ媒介性ＰＩ３キナーゼおよびＲａｓ／ＭＡＰＫ活性化を通じて、チロシンリン酸化および下流シグナリングをもたらし、これは、細胞運動および増殖を駆動する（Ｆｕｒｇｅら、Ｏｎｃｏｇｅｎｅ  １９、５５８２−５５８９頁  ２０００年；Ｈａｒｔｍａｎｎら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６９、２１９３６−２１９３９頁  １９９４年；Ｐｏｎｚｅｔｔｏら、Ｃｅｌｌ  ８７、５３１−５４２頁  １９９６年；ならびにＲｏｙａｌおよびＰａｒｋ、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７０，２７７８０−２７７８７頁  １９９５年）。
【０００４】
Ｍｅｔ過剰発現または遺伝子増幅が、様々なヒトがんにおいて観察されてきた。たとえば、Ｍｅｔタンパク質は、結腸直腸がんにおいて少なくとも５倍過剰発現し、肝転移において遺伝子増幅されることが報告されている（Ｄｉ  Ｒｅｎｚｏら、Ｃｌｉｎ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．１、１４７−１５４頁、１９９５年；Ｌｉｕら、Ｏｎｃｏｇｅｎｅ  ７、１８１−１８５頁  １９９２年）。Ｍｅｔタンパク質はまた、口腔扁平上皮癌、肝細胞癌、腎細胞癌、乳癌、および肺癌において過剰発現すると報告されている（Ｊｉｎら、Ｃａｎｃｅｒ  ７９、７４９−７６０頁  １９９７年；Ｍｏｒｅｌｌｏら、Ｊ．Ｃｅｌｌ  Ｐｈｙｓｉｏｌ．１８９、２８５−２９０頁  ２００１年；Ｎａｔａｌｉら、Ｉｎｔ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ  ６９、２１２−２１７頁．１９９６年；Ｏｌｉｖｅｒｏら、Ｂｒ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ  ７４、１８６２−１８６８頁  １９９６年；Ｓｕｚｕｋｉら、Ｈｅｐａｔｏｌｏｇｙ  ２０、１２３１−１２３６頁  １９９４年）。加えて、ｍＲＮＡの過剰発現が、肝細胞癌、胃癌、および結腸直腸癌において観察された（Ｂｏｉｘら、Ｈｅｐａｔｏｌｏｇｙ  １９、８８−９１頁  １９９４年；Ｋｕｎｉｙａｓｕら、Ｉｎｔ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ  ５５、７２−７５頁  １９９３年；Ｌｉｕら、Ｏｎｃｏｇｅｎｅ  ７、１８１−１８５頁  １９９２年）。
【０００５】
腎乳頭癌において、Ｍｅｔのキナーゼドメインにおける数多くの変異が見出されており、これは、構成的受容体活性化をもたらす（Ｏｌｉｖｅｒｏら、Ｉｎｔ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ  ８２、６４０−６４３頁  １９９９年；Ｓｃｈｍｉｄｔら、Ｎａｔ．Ｇｅｎｅｔ．１６、６８−７３頁  １９９７年；Ｓｃｈｍｉｄｔら、Ｏｎｃｏｇｅｎｅ  １８、２３４３−２３５０頁  １９９９年）。これらの活性化変異は、構成的Ｍｅｔチロシンリン酸化を付与し、ＭＡＰＫ活性化、フォーカス形成、および腫瘍形成をもたらす（Ｊｅｆｆｅｒｓら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９４、１１４４５−１１４５０頁  １９９７年）。加えて、これらの変異は、細胞運動性および浸潤を増強する（Ｇｉｏｒｄａｎｏら、２０００年；Ｌｏｒｅｎｚａｔｏら、Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．６２、７０２５−７０３０頁  ２００２年）。形質転換細胞内でのＨＧＦ依存性Ｍｅｔ活性化は、運動性、散乱、および移動の増加を媒介し、これは最終的に、浸潤性腫瘍増殖および転移をもたらす（Ｊｅｆｆｅｒｓら、Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ．１６、１１１５−１１２５頁  １９９６年；Ｍｅｉｎｅｒｓら、Ｏｎｃｏｇｅｎｅ  １６、９−２０頁  １９９８年）。
【０００６】
Ｍｅｔは、ＲｏｎおよびＳｅａを含むＲＴＫのサブファミリーのメンバーである（Ｍａｕｌｉｋら、Ｃｙｔｏｋｉｎｅ  Ｇｒｏｗｔｈ  Ｆａｃｔｏｒ  Ｒｅｖ．１３、４１−５９頁  ２００２年）。Ｍｅｔの細胞外ドメイン構造の予測は、セマフォリンおよびプレキシンと共有される相同性を示唆する。ＭｅｔのＮ末端は、すべてのセマフォリンおよびプレキシンにおいて保存されている、およそ５００アミノ酸のＳｅｍａドメインを含有する。セマフォリンおよびプレキシンは、当初は神経発生における役割について記載された分泌膜結合タンパク質の大きなファミリーに属する（Ｖａｎ  ＶａｃｔｏｒおよびＬｏｒｅｎｚ、Ｃｕｒｒ．Ｂｉｏｌ．９、Ｒ２０１−２０４頁  １９９９年）。しかしながら、セマフォリン過剰発現は、腫瘍浸潤および転移と相関させられてきた。プレキシン、セマフォリン、およびインテグリンに見出されるシステインリッチＰＳＩドメイン（Ｍｅｔ関連配列ドメインとも呼ばれる）は、Ｓｅｍａドメインと隣接し、プレキシンおよび転写因子に見出される免疫グロブリン様領域である４つのＩＰＴリピートが続く。近年の研究は、Ｍｅｔ  Ｓｅｍａドメインが、ＨＧＦおよびヘパリン結合に十分であることを示唆する（Ｇｈｅｒａｒｄｉら、（２００３）．  Ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ  ｍａｐ  ａｎｄ  ｄｏｍａｉｎ  ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ  ｏｆ  Ｍｅｔ，ｔｈｅ  ｐｒｏｄｕｃｔ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｃ−Ｍｅｔ  ｐｒｏｔｏｏｎｃｏｇｅｎｅ  ａｎｄ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｆｏｒ  ｈｅｐａｔｏｃｙｔｅ  ｇｒｏｗｔｈ  ｆａｃｔｏｒ／ｓｃａｔｔｅｒ  ｆａｃｔｏｒ．  Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ２００３年）。さらに、Ｋｏｎｇ−Ｂｅｌｔｒａｎら（Ｃａｎｃｅｒ  Ｃｅｌｌ（２００４）、６：６１−７３頁）は、ＭｅｔのＳｅｍａドメインが、受容体二量化および活性化に必要であることを報告した。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００７】
【非特許文献１】Ｍａｕｌｉｋら、Ｃｙｔｏｋｉｎｅ  ＆  Ｇｒｏｗｔｈ  Ｆａｃｔｏｒ  Ｒｅｖｉｅｗｓ（２００２）、１３：４１−５９頁
【非特許文献２】Ｄａｎｉｌｋｏｖｉｔｃｈ−Ｍｉａｇｋｏｖａ  ＆  Ｚｂａｒ、Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．（２００２）、１０９（７）：８６３−８６７頁
【非特許文献３】Ｔｒｕｓｏｌｉｎｏ  ＆  Ｃｏｍｏｇｌｉｏ、Ｎａｔｕｒｅ  Ｒｅｖ．（２００２）、２：２８９−３００頁
【非特許文献４】Ｂｌａｄｔら、Ｎａｔｕｒｅ  ３７６、７６８−７７１頁．１９９５年
【非特許文献５】Ｈａｍａｎｏｕｅら  Ｊ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．Ｒｅｓ．４３、５５４−５６４頁．１９９６年
【非特許文献６】Ｓｃｈｍｉｄｔら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９４、１１４４５−１１４５０頁、１９９５年
【非特許文献７】Ｕｅｈａｒａら、Ｎａｔｕｒｅ  ３７３、７０２−７０５頁、１９９５年
【非特許文献８】Ｂｕｓｓｏｌｉｎｏら、Ｊ．Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ．１１９、６２９−６４１頁  １９９２年
【非特許文献９】Ｎｕｓｒａｔら、Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．９３、２０５６−２０６５頁  １９９４年
【非特許文献１０】Ｔｅｍｐｅｓｔら、Ｂｒ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ  ５８、３−７頁  １９８８年
【非特許文献１１】Ｆｕｒｇｅら、Ｏｎｃｏｇｅｎｅ  １９、５５８２−５５８９頁  ２０００年
【非特許文献１２】Ｈａｒｔｍａｎｎら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６９、２１９３６−２１９３９頁  １９９４年
【非特許文献１３】Ｐｏｎｚｅｔｔｏら、Ｃｅｌｌ  ８７、５３１−５４２頁  １９９６年
【非特許文献１４】ＲｏｙａｌおよびＰａｒｋ、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７０，２７７８０−２７７８７頁  １９９５年
【非特許文献１５】Ｄｉ  Ｒｅｎｚｏら、Ｃｌｉｎ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．１、１４７−１５４頁、１９９５年
【非特許文献１６】Ｌｉｕら、Ｏｎｃｏｇｅｎｅ  ７、１８１−１８５頁  １９９２年
【非特許文献１７】Ｊｉｎら、Ｃａｎｃｅｒ  ７９、７４９−７６０頁  １９９７年
【非特許文献１８】Ｍｏｒｅｌｌｏら、Ｊ．Ｃｅｌｌ  Ｐｈｙｓｉｏｌ．１８９、２８５−２９０頁  ２００１年
【非特許文献１９】Ｎａｔａｌｉら、Ｉｎｔ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ  ６９、２１２−２１７頁．１９９６年
【非特許文献２０】Ｏｌｉｖｅｒｏら、Ｂｒ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ  ７４、１８６２−１８６８頁  １９９６年
【非特許文献２１】Ｓｕｚｕｋｉら、Ｈｅｐａｔｏｌｏｇｙ  ２０、１２３１−１２３６頁  １９９４年
【非特許文献２２】Ｂｏｉｘら、Ｈｅｐａｔｏｌｏｇｙ  １９、８８−９１頁  １９９４年
【非特許文献２３】Ｋｕｎｉｙａｓｕら、Ｉｎｔ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ  ５５、７２−７５頁  １９９３年
【非特許文献２４】Ｏｌｉｖｅｒｏら、Ｉｎｔ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ  ８２、６４０−６４３頁  １９９９年
【非特許文献２５】Ｓｃｈｍｉｄｔら、Ｎａｔ．Ｇｅｎｅｔ．１６、６８−７３頁  １９９７年
【非特許文献２６】Ｓｃｈｍｉｄｔら、Ｏｎｃｏｇｅｎｅ  １８、２３４３−２３５０頁  １９９９年
【非特許文献２７】Ｊｅｆｆｅｒｓら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９４、１１４４５−１１４５０頁  １９９７年
【非特許文献２８】Ｇｉｏｒｄａｎｏら、２０００年
【非特許文献２９】Ｌｏｒｅｎｚａｔｏら、Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．６２、７０２５−７０３０頁  ２００２年
【非特許文献３０】Ｊｅｆｆｅｒｓら、Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ．１６、１１１５−１１２５頁  １９９６年
【非特許文献３１】Ｍｅｉｎｅｒｓら、Ｏｎｃｏｇｅｎｅ  １６、９−２０頁  １９９８年
【非特許文献３２】Ｖａｎ  ＶａｃｔｏｒおよびＬｏｒｅｎｚ、Ｃｕｒｒ．Ｂｉｏｌ．９、Ｒ２０１−２０４頁  １９９９年
【非特許文献３３】Ｇｈｅｒａｒｄｉら、（２００３）．  Ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ  ｍａｐ  ａｎｄ  ｄｏｍａｉｎ  ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ  ｏｆ  Ｍｅｔ，ｔｈｅ  ｐｒｏｄｕｃｔ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｃ−Ｍｅｔ  ｐｒｏｔｏｏｎｃｏｇｅｎｅ  ａｎｄ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｆｏｒ  ｈｅｐａｔｏｃｙｔｅ  ｇｒｏｗｔｈ  ｆａｃｔｏｒ／ｓｃａｔｔｅｒ  ｆａｃｔｏｒ．  Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ２００３年
【非特許文献３４】Ｋｏｎｇ−Ｂｅｌｔｒａｎら、Ｃａｎｃｅｒ  Ｃｅｌｌ（２００４）、６：６１−７３頁
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
膜貫通受容体チロシンキナーゼであるｃ−Ｍｅｔは、細胞増殖、生存、移動および浸潤のために不可欠なシグナル伝達経路を活性化させることにより、上皮細胞の悪性転換において重要な役割を果たす。ｃ−Ｍｅｔ過剰発現は、遺伝子増幅ありまたはなしで、原発性乳がんにおいて報告されてきたのであり、予後不良と相関する。チロシンキナーゼ阻害剤（ＴＫＩ）のようなｃ−Ｍｅｔシグナリング阻害は、通常は持続的治効のために十分でない。したがって、本発明者らは、抗体薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）が、副作用の低減という利点を有する強力な抗腫瘍活性をもたらす将来性および潜在性を提示すると考える。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
（発明の要旨）
本開示は、ＩｇＧ抗体のヒンジ領域の両方のＣｙｓ部位にコンジュゲートされた、ｃ−Ｍｅｔ標的と結合するＩｇＧ抗体を有する抗体薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）を提供する。本開示は、有効量のｃ−Ｍｅｔ  ＡＤＣを提供することを含む、乳がんを治療するための方法をさらに提供する。
【００１０】
本発明者らは、新規ヒト抗ｃ−Ｍｅｔ抗体（ＳＴＩ−０６０２）（２０１３年６月２１日出願の米国特許出願番号第１３／９２４，４９２号に記載、その開示を参照により本明細書に組み込む）を、チューブリン阻害剤またはドキソルビシンアナログのようなＤＮＡ傷害剤のいずれかとともに含有する抗体薬物コンジュゲートを生成した。ＡＤＣコンジュゲートは、結合親和性を保持し、様々なｃ−Ｍｅｔ陽性細胞株において強力な殺細胞性を示した。
【００１１】
本開示は、ｃ−Ｍｅｔと結合するＩｇＧ抗体、ＩｇＧ抗体のヒンジ領域の両方のＣｙｓ残基と結合するコンジュゲーションリンカー部分および毒素部分を含む抗体薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）組成物を提供する。好ましくは、毒素部分は、チューブリン阻害剤またはドキソルビシンアナログである。好ましくは、抗体は、Ｈ８（重／軽  配列番号１９／２０）ファミリーに由来するＩｇＧ抗体である、またはＢ１２（重／軽  配列番号７／８）であり、Ｈ８抗体ファミリーは、Ｈ８−Ａ２、Ｈ８−９、Ｈ８−９ＥＥ８Ｌ３、Ｈ８−Ｃ１、Ｈ８−Ｄ４、Ｈ８−Ｄ５、Ｈ８−Ｄ６、Ｈ８−Ｄ１０、Ｈ８−Ｅ５、Ｈ８−Ｇ７、Ｈ８−Ｈ６、Ｈ８−２Ａ２、Ｈ８−２Ｂ１、Ｈ８−２Ｂ２、Ｈ８−２Ｂ４、Ｈ８−２Ｂ７、Ｈ８−Ａ７Ｐ、Ｈ８−９ＥＨ１１Ｌ、Ｈ８−９ＥＨ１１ＬおよびＨ８−６ＡＧ２Ｈ３からなる群から選択される。好ましくは、コンジュゲートされた毒素は、
【００１２】
【化１】
2018502149.tif 000002
である。
【００１３】
本開示は、ｃ−Ｍｅｔと結合するＩｇＧ抗体、ＩｇＧ抗体のヒンジ領域の両方のＣｙｓ残基と結合するコンジュゲーションリンカー部分および毒素部分を含む有効量の抗体薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）組成物を投与することを含む、乳がんを治療するための方法を提供する。好ましくは、毒素部分は、チューブリン阻害剤またはドキソルビシンアナログである。好ましくは、抗体は、Ｈ８（重／軽  配列番号１９／２０）ファミリーに由来するＩｇＧ抗体である、またはＢ１２（重／軽  配列番号７／８）であり、Ｈ８抗体ファミリーは、Ｈ８−Ａ２、Ｈ８−９、Ｈ８−９ＥＥ８Ｌ３、Ｈ８−Ｃ１、Ｈ８−Ｄ４、Ｈ８−Ｄ５、Ｈ８−Ｄ６、Ｈ８−Ｄ１０、Ｈ８−Ｅ５、Ｈ８−Ｇ７、Ｈ８−Ｈ６、Ｈ８−２Ａ２、Ｈ８−２Ｂ１、Ｈ８−２Ｂ２、Ｈ８−２Ｂ４、Ｈ８−２Ｂ７、Ｈ８−Ａ７Ｐ、Ｈ８−９ＥＨ１１Ｌ、Ｈ８−９ＥＨ１１ＬおよびＨ８−６ＡＧ２Ｈ３からなる群から選択される。好ましくは、コンジュゲートされた毒素は、
【００１４】
【化２】
2018502149.tif 000003
コンジュゲーションおよび薬物のための０２７６構造または
【００１５】
【化３】
2018502149.tif 000004
コンジュゲーションおよび薬物のための０１７４構造である。
【図面の簡単な説明】
【００１６】
【図１】本明細書に記載の抗ｃＭｅｔ  ＩｇＧ１抗体ＳＴＩ−０６０２によるＭＤＡ−ＭＢ−２３１およびＨＳ５７８Ｔの処置の効果を示す図である。細胞を、細胞１０Ｋ個／ウェルで一晩、完全ＲＰＭＩ中で蒔き、次に、１０μｇ／ｍｌの初期濃度から開始して全部で８つの異なる濃度となるよう１：５に連続希釈したＳＴＩ−０６０２抗体を用いて、無血清ＲＰＭＩ中で４時間処置した。４時間後、細胞を、無血清ＲＰＭＩ中で希釈された５０ｎｇ／ｍｌのＨＧＦを用いて１５分間刺激した（培地対照は未刺激のままにした）。次に、細胞を溶解し、−８０℃の冷凍庫で一晩冷凍し、リン酸化ｃ−Ｍｅｔレベルを、細胞シグナリングＥＬＩＳＡキットを使用して決定した。
【図２】２つのｃ−Ｍｅｔ  ＡＤＣ用量（３ｍｇ／ｋｇおよび１０ｍｇ／ｋｇ）を、ｃ−Ｍｅｔ抗体のみ（ＳＴＩ−０６０２、Ｈ８−Ａ２とも呼ばれ、重鎖配列番号２５および軽鎖配列番号２６として本明細書に開示）および対照ＡＤＣと比較する、達成されたインビボの結果の比較を示す図である。実験の詳細は、実施例１に記載されている。
【図３】２つのｃ−Ｍｅｔ  ＡＤＣ用量（３ｍｇ／ｋｇおよび１０ｍｇ／ｋｇ）をｃ−Ｍｅｔ抗体のみおよび対照ＡＤＣと比較する、達成されたインビボの結果の比較を示す図である。実験の詳細は、実施例１に記載されている。
【図４】実施例１に記載の実験の詳細を示す表である。図２および図３は、インビボの結果を示す。
【図５】ＳＴＩ  ０６０２抗ｃ−Ｍｅｔ  ＩｇＧ１抗体をそれぞれ有する、３つの異なるＡＤＣのグラフを示す図である。異なる毒素がｃ−Ｍｅｔ  ＴＮＢＣ細胞に対するそれらの結合親和性を保持する。マウスは、単回のｉｖ用量を１０ｍｇ／ｋｇで与えられた。血清中の全抗体およびＡＤＣの平均濃度は、ＥＬＩＳＡにより決定された。
【図６】ＡＤＣおよび対照ＳＴＩ  ０６０２抗ｃ−Ｍｅｔ  ＩｇＧ１抗体のグラフが、マウスにおいて類似した薬物動態特性を有することを示す図である。マウスは、単回のｉｖ用量を１０ｍｇ／ｋｇで与えられた。血清中の全抗体およびＡＤＣの平均濃度は、ＥＬＩＳＡにより決定された。
【図７Ａ】抗ｃ−Ｍｅｔ  ＡＤＣが、ｃ−Ｍｅｔ  ＴＮＢＣ細胞増殖を特異的に阻害することを示す図である。ＨＳ５７８Ｔの細胞増殖の阻害を示す。細胞を、１ウェル当たり４０００個で蒔き、３つのＡＤＣのうちの１つで処置した。４日間のインキューベーション後、Ｃｅｌｌ  Ｔｉｔｅｒ  Ｇｌｏアッセイを使用して増殖を測定した。
【図７Ｂ】抗ｃ−Ｍｅｔ  ＡＤＣが、ｃ−Ｍｅｔ  ＴＮＢＣ細胞増殖を特異的に阻害することを示す図である。Ｔ４７Ｄの細胞増殖の阻害を示す。細胞を、１ウェル当たり４０００個で蒔き、３つのＡＤＣのうちの１つで処置した。４日間のインキューベーション後、Ｃｅｌｌ  Ｔｉｔｅｒ  Ｇｌｏアッセイを使用して増殖を測定した。
【図８】抗ｃ−Ｍｅｔ  ＩｇＧ１抗体が、トリプルネガティブ乳がん細胞株内に内部移行したことを示す図である。ＭＤＡ−ＭＢ４６８における抗ｃ−Ｍｅｔ抗体ＩｇＧ１  Ｈ８−Ａ２（ＳＴＩ−０６０２  配列番号２５／配列番号２６とも呼ばれる）の内部移行。ＭＤＡ−ＭＢ４６８を一晩蒔き、１μｇ／ｍｌ  抗ｃ−Ｍｅｔ  Ｈ８Ａ２抗体と１８０分間、３７℃でインキュベートした。細胞を抗ＡＦ４８８で染色した。
【図９】３ｍｇ／ｋｇおよび１０ｍｇ／ｋｇの２つの用量のｃ−Ｍｅｔ  ０１７４  ＡＤＣならびにｃ−Ｍｅｔ抗体を有するビヒクル対照の、インビボでの比較を示す図である。
【図１０】単回１ｍｇ／ｋｇのはるかに低量の用量のｃ−Ｍｅｔ  ０２７６  ＡＤＣおよびビヒクル対照を示す図である。腫瘍体積は、すべてのマウスにおいて週２回測定した。図１０は、これらの比較データを提供し、腫瘍体積の測定時により低量の１ｍｇ／ｋｇ用量について有意な効果を示す。
【図１１Ａ】ビヒクル対照と比較して、ｃ−Ｍｅｔ  ０２７６  ＡＤＣについて、これらのマウスに有意な体重変化がなかったことを示す図である。これらのデータは、試験されたＡＤＣから毒性が観察されなかったことを示唆する。
【図１１Ｂ】ビヒクル対照と比較して、ｃ−Ｍｅｔ  ０１７４  ＡＤＣについて、これらのマウスに有意な体重変化がなかったことを示す図である。これらのデータは、試験されたＡＤＣから毒性が観察されなかったことを示唆する。
【発明を実施するための形態】
【００１７】
抗体成分
本開示は、少なくとも１０−６Ｍの結合親和性でｃ−Ｍｅｔエピトープと結合するＩｇＧクラスの完全ヒト抗体を提供し、これは、配列番号１、配列番号３、配列番号５、配列番号７、配列番号９、配列番号１１、配列番号１３、配列番号１５、配列番号１７、配列番号１９、配列番号２１、配列番号２４、配列番号２５、配列番号２７、配列番号２９、配列番号３１、配列番号３２、配列番号３３、配列番号３４、配列番号３６、配列番号３７、配列番号４０、配列番号４２、配列番号４４、配列番号４５、配列番号４７、配列番号４９、配列番号５１、配列番号５３、配列番号５６、配列番号５８、配列番号５９、配列番号６１、配列番号６３、配列番号６５、配列番号６９、配列番号７１、配列番号７４、配列番号７５、配列番号７６、配列番号７９、配列番号８０、配列番号８２、配列番号８４、配列番号８６、配列番号８８、配列番号９０、配列番号９２およびこれらの組合せからなる群から選択されるアミノ酸配列と少なくとも９５％同一である重鎖可変ドメイン配列を有し、配列番号２、配列番号４、配列番号６、配列番号８、配列番号１０、配列番号１２、配列番号１４、配列番号１６、配列番号１８、配列番号２０、配列番号２２、配列番号２３、配列番号２６、配列番号２８、配列番号３０、配列番号３５、配列番号３８、配列番号３９、配列番号４１、配列番号４３、配列番号４６、配列番号４８、配列番号５０、配列番号５２、配列番号５４、配列番号５５、配列番号５７、配列番号６０、配列番号６２、配列番号６４、配列番号６６、配列番号６７、配列番号６８、配列番号７０、配列番号７２、配列番号７３、配列番号７７、配列番号７８、配列番号８１、配列番号８３、配列番号８５、配列番号８７、配列番号８９、配列番号９１、配列番号９３およびこれらの組合せからなる群から選択されるアミノ酸配列と少なくとも９５％同一である軽鎖可変ドメイン配列を有する。好ましくは、完全ヒト抗体は重鎖および軽鎖の両方を有し、この抗体は、配列番号１／配列番号２（本明細書ではＡ１と呼ぶ）、配列番号３／配列番号４（本明細書ではＡ２と呼ぶ）、配列番号５／配列番号６（本明細書ではＡ８と呼ぶ）、配列番号７／配列番号８（本明細書ではＢ１２と呼ぶ）、配列番号９／配列番号１０（本明細書ではＤ６と呼ぶ）、配列番号１１／配列番号１２（本明細書ではＥ１と呼ぶ）、配列番号１３／配列番号１４（本明細書ではＥ６と呼ぶ）、配列番号１５／配列番号１６（本明細書ではＦ３と呼ぶ）、配列番号１７／配列番号１８（本明細書ではＨ６と呼ぶ）、配列番号１９／配列番号２０（本明細書ではＨ８と呼ぶ）、配列番号２１／配列番号２２（本明細書ではＨ８−９と呼ぶ）、配列番号２１／配列番号２３（本明細書ではＨ８−９ＥＥ８Ｌ３と呼ぶ）、配列番号２４／配列番号２２（本明細書ではＨ８−Ｇ３Ｓと呼ぶ）、配列番号２５／配列番号２６（本明細書ではＨ８−Ａ２と呼ぶ）、配列番号２７／配列番号２８（本明細書ではＨ８−Ｂ６と呼ぶ）、配列番号２９／配列番号２３（本明細書ではＨ８−Ｃ１と呼ぶ）、配列番号２４／配列番号３０（本明細書ではＨ８−Ｄ４と呼ぶ）、配列番号３１／配列番号２３（本明細書ではＨ８−Ｄ５と呼ぶ）、配列番号２４／配列番号２３（本明細書ではＨ８−Ｄ６と呼ぶ）、配列番号３２／配列番号２３（本明細書ではＨ８−Ｄ１０と呼ぶ）、配列番号３３／配列番号２２（本明細書ではＨ８−Ｅ５と呼ぶ）、配列番号３４／配列番号２２（本明細書ではＨ８−Ｇ７と呼ぶ）、配列番号２４／配列番号３５（本明細書ではＨ８−Ｇ９と呼ぶ）、配列番号３６／配列番号２６（本明細書ではＨ８−Ｈ６と呼ぶ）、配列番号２９／配列番号２２（本明細書ではＨ８−２Ａ２と呼ぶ）、配列番号３７／配列番号３８（本明細書ではＨ８−２Ｂ１と呼ぶ）、配列番号３４／配列番号２３（本明細書ではＨ８−２Ｂ２と呼ぶ）、配列番号３７／配列番号２３（本明細書ではＨ８−２Ｂ４と呼ぶ）、配列番号３２／配列番号３９（本明細書ではＨ８−２Ｂ７と呼ぶ）、配列番号３２／配列番号２２（本明細書ではＨ８−Ａ７Ｐと呼ぶ）、配列番号４０／配列番号４１（本明細書ではＧＣＥ−Ａ１０と呼ぶ）、配列番号４２／配列番号４３（本明細書ではＧＣＥ−Ａ１１と呼ぶ）、配列番号４４／配列番号４１（本明細書ではＧＣＥ−Ａ１３と呼ぶ）、配列番号４５／配列番号４６（本明細書ではＧＣＥ−Ａ１４と呼ぶ）、配列番号４７／配列番号４８（本明細書ではＧＣＥ−Ａ１６と呼ぶ）、配列番号４９／配列番号５０（本明細書ではＧＣＥ−Ａ１８と呼ぶ）、配列番号５１／配列番号５２（本明細書ではＧＣＥ−Ｂ２と呼ぶ）、配列番号５３／配列番号５４（本明細書ではＧＣＥ−Ｂ９と呼ぶ）、配列番号４５／配列番号５５（本明細書ではＧＣＥ−Ｂ１１と呼ぶ）、配列番号５６／配列番号５７（本明細書ではＧＣＥ−Ｂ１３と呼ぶ）、配列番号５８／配列番号５７（本明細書ではＧＣＥ−Ｂ１９と呼ぶ）、配列番号５９／配列番号６０（本明細書ではＧＣＥ−ＢＲ１と呼ぶ）、配列番号６１／配列番号６２（本明細書ではＧＣＥ−Ｂ２０と呼ぶ）、配列番号６３／配列番号６４（本明細書ではＧＣＥ−Ａ１９と呼ぶ）、配列番号６５／配列番号６６（本明細書ではＧＣＥ−Ｂ１０と呼ぶ）、配列番号５８／配列番号６７（本明細書ではＧＣＥ−Ｂ５と呼ぶ）、配列番号６１／配列番号６８（本明細書ではＧＣＥ−Ｂ４と呼ぶ）、配列番号６９／配列番号７０（本明細書ではＧＣＥ−Ａ２６と呼ぶ）、配列番号７１／配列番号７２（本明細書ではＧＣＥ−Ｌ１Ａ−９と呼ぶ）、配列番号４９／配列番号７３（本明細書ではＧＣＥ−Ｈ３４−３６と呼ぶ）、配列番号７４／配列番号７３（本明細書ではＧＣＥ−Ｈ１３−１と呼ぶ）、配列番号６１／配列番号７３（本明細書ではＧＣＥ−Ｈ１３−２と呼ぶ）、配列番号４４／配列番号７３（本明細書ではＧＣＥ−Ｈ１３−３と呼ぶ）、配列番号４０／配列番号７３（本明細書ではＧＣＥ−Ｈ１３−４と呼ぶ）、配列番号７５／配列番号７３（本明細書ではＧＣＥ−Ｈ１３−５と呼ぶ）、配列番号６９／配列番号７３（本明細書ではＧＣＥ−Ｈ１３−６と呼ぶ）、配列番号７６／配列番号７３（本明細書ではＧＣＥ−Ｈ１３−８と呼ぶ）、配列番号２１／配列番号７７（本明細書ではＨ８−９ＥＨ１１Ｌと呼ぶ）、配列番号２１／配列番号７８（本明細書ではＨ８−９ＥＧ１１Ｌと呼ぶ）、配列番号７９／配列番号２０（本明細書ではＨ８−６ＡＧ２Ｈ３と呼ぶ）、配列番号８０／配列番号８１（本明細書ではＡ１−２と呼ぶ）、配列番号８２／配列番号８３（本明細書ではＡ１−４と呼ぶ）、配列番号８４／配列番号８５（本明細書ではＡ１−６と呼ぶ）、配列番号８６／配列番号８７（本明細書ではＡ１−８と呼ぶ）、配列番号８８／配列番号８９（本明細書ではＡ１−９と呼ぶ）、配列番号９０／配列番号９１（本明細書ではＡ１−２４と呼ぶ）、配列番号９２／配列番号９３（本明細書ではＡ１−３２と呼ぶ）およびこれらの組合せからなる群から選択される重鎖／軽鎖可変ドメイン配列を有する。
【００１８】
本開示は、重鎖に由来する可変ドメイン領域および軽鎖に由来する可変ドメイン領域を有する完全ヒト抗体Ｆａｂフラグメントを提供し、重鎖可変ドメイン配列は、配列番号１、配列番号３、配列番号５、配列番号７、配列番号９、配列番号１１、配列番号１３、配列番号１５、配列番号１７、配列番号１９、配列番号２１、配列番号２４、配列番号２５、配列番号２７、配列番号２９、配列番号３１、配列番号３２、配列番号３３、配列番号３４、配列番号３６、配列番号３７、配列番号４０、配列番号４２、配列番号４４、配列番号４５、配列番号４７、配列番号４９、配列番号５１、配列番号５３、配列番号５６、配列番号５８、配列番号５９、配列番号６１、配列番号６３、配列番号６５、配列番号６９、配列番号７１、配列番号７４、配列番号７５、配列番号７６、配列番号７９、配列番号８０、配列番号８２、配列番号８４、配列番号８６、配列番号８８、配列番号９０、配列番号９２およびこれらの組合せからなる群から選択されるアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であり、軽鎖可変ドメイン配列は、配列番号２、配列番号４、配列番号６、配列番号８、配列番号１０、配列番号１２、配列番号１４、配列番号１６、配列番号１８、配列番号２０、配列番号２２、配列番号２３、配列番号２６、配列番号２８、配列番号３０、配列番号３５、配列番号３８、配列番号３９、配列番号４１、配列番号４３、配列番号４６、配列番号４８、配列番号５０、配列番号５２、配列番号５４、配列番号５５、配列番号５７、配列番号６０、配列番号６２、配列番号６４、配列番号６６、配列番号６７、配列番号６８、配列番号７０、配列番号７２、配列番号７３、配列番号７７、配列番号７８、配列番号８１、配列番号８３、配列番号８５、配列番号８７、配列番号８９、配列番号９１、配列番号９３およびこれらの組合せからなる群から選択されるアミノ酸配列と少なくとも９５％同一である。好ましくは、完全ヒト抗体Ｆａｂフラグメントは、重鎖可変ドメイン領域および軽鎖可変ドメイン領域の両方を有し、この抗体は、配列番号１／配列番号２、配列番号３／配列番号４、配列番号５／配列番号６、配列番号７／配列番号８、配列番号９／配列番号１０、配列番号１１／配列番号１２、配列番号１３／配列番号１４、配列番号１５／配列番号１６、配列番号１７／配列番号１８、配列番号１９／配列番号２０、配列番号２１／配列番号２２、配列番号２１／配列番号２３、配列番号２４／配列番号２２、配列番号２５／配列番号２６、配列番号２７／配列番号２８、配列番号２９／配列番号２３、配列番号２４／配列番号３０、配列番号３１／配列番号２３、配列番号２４／配列番号２３、配列番号３２／配列番号２３、配列番号３３／配列番号２２、配列番号３４／配列番号２２、配列番号２４／配列番号３５、配列番号３６／配列番号２６、配列番号２９／配列番号２２、配列番号３７／配列番号３８、配列番号３４／配列番号２３、配列番号３７／配列番号２３、配列番号３２／配列番号３９、配列番号３２／配列番号２２、配列番号４０／配列番号４１、配列番号４２／配列番号４３、配列番号４４／配列番号４１、配列番号４５／配列番号４６、配列番号４７／配列番号４８、配列番号４９／配列番号５０、配列番号５１／配列番号５２、配列番号５３／配列番号５４、配列番号４５／配列番号５５、配列番号５６／配列番号５７、配列番号５８／配列番号５７、配列番号５９／配列番号６０、配列番号６１／配列番号６２、配列番号６３／配列番号６４、配列番号６５／配列番号６６、配列番号５８／配列番号６７、配列番号６１／配列番号６８、配列番号６９／配列番号７０、配列番号７１／配列番号７２、配列番号４９／配列番号７３、配列番号７４／配列番号７３、配列番号６１／配列番号７３、配列番号４４／配列番号７３、配列番号４０／配列番号７３、配列番号７５／配列番号７３、配列番号６９／配列番号７３、配列番号７６／配列番号７３、配列番号２１／配列番号７７、配列番号２１／配列番号７８、配列番号７９／配列番号２０、配列番号８０／配列番号８１、配列番号８２／配列番号８３、配列番号８４／配列番号８５、配列番号８６／配列番号８７、配列番号８８／配列番号８９、配列番号９０／配列番号９１、配列番号９２／配列番号９３およびこれらの組合せからなる群から選択される重鎖／軽鎖可変ドメイン配列を有する。
【００１９】
本開示は、重鎖に由来する可変ドメイン領域および軽鎖に由来する可変ドメイン領域ならびに重鎖および軽鎖可変ドメイン領域を接続するペプチドリンカーを有する単鎖ヒト抗体を提供し、重鎖可変ドメイン配列は、配列番号１、配列番号３、配列番号５、配列番号７、配列番号９、配列番号１１、配列番号１３、配列番号１５、配列番号１７、配列番号１９、配列番号２１、配列番号２４、配列番号２５、配列番号２７、配列番号２９、配列番号３１、配列番号３２、配列番号３３、配列番号３４、配列番号３６、配列番号３７、配列番号４０、配列番号４２、配列番号４４、配列番号４５、配列番号４７、配列番号４９、配列番号５１、配列番号５３、配列番号５６、配列番号５８、配列番号５９、配列番号６１、配列番号６３、配列番号６５、配列番号６９、配列番号７１、配列番号７４、配列番号７５、配列番号７６、配列番号７９、配列番号８０、配列番号８２、配列番号８４、配列番号８６、配列番号８８、配列番号９０、配列番号９２およびこれらの組合せからなる群から選択されるアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であり、軽鎖可変ドメイン配列は、配列番号２、配列番号４、配列番号６、配列番号８、配列番号１０、配列番号１２、配列番号１４、配列番号１６、配列番号１８、配列番号２０、配列番号２２、配列番号２３、配列番号２６、配列番号２８、配列番号３０、配列番号３５、配列番号３８、配列番号３９、配列番号４１、配列番号４３、配列番号４６、配列番号４８、配列番号５０、配列番号５２、配列番号５４、配列番号５５、配列番号５７、配列番号６０、配列番号６２、配列番号６４、配列番号６６、配列番号６７、配列番号６８、配列番号７０、配列番号７２、配列番号７３、配列番号７７、配列番号７８、配列番号８１、配列番号８３、配列番号８５、配列番号８７、配列番号８９、配列番号９１、配列番号９３およびこれらの組合せからなる群から選択されるアミノ酸配列と少なくとも９５％同一である。好ましくは、完全ヒト単鎖抗体は、重鎖可変ドメイン領域および軽鎖可変ドメイン領域の両方を有し、この単鎖完全ヒト抗体は、配列番号１／配列番号２、配列番号３／配列番号４、配列番号５／配列番号６、配列番号７／配列番号８、配列番号９／配列番号１０、配列番号１１／配列番号１２、配列番号１３／配列番号１４、配列番号１５／配列番号１６、配列番号１７／配列番号１８、配列番号１９／配列番号２０、配列番号２１／配列番号２２、配列番号２１／配列番号２３、配列番号２４／配列番号２２、配列番号２５／配列番号２６、配列番号２７／配列番号２８、配列番号２９／配列番号２３、配列番号２４／配列番号３０、配列番号３１／配列番号２３、配列番号２４／配列番号２３、配列番号３２／配列番号２３、配列番号３３／配列番号２２、配列番号３４／配列番号２２、配列番号２４／配列番号３５、配列番号３６／配列番号２６、配列番号２９／配列番号２２、配列番号３７／配列番号３８、配列番号３４／配列番号２３、配列番号３７／配列番号２３、配列番号３２／配列番号３９、配列番号３２／配列番号２２、配列番号４０／配列番号４１、配列番号４２／配列番号４３、配列番号４４／配列番号４１、配列番号４５／配列番号４６、配列番号４７／配列番号４８、配列番号４９／配列番号５０、配列番号５１／配列番号５２、配列番号５３／配列番号５４、配列番号４５／配列番号５５、配列番号５６／配列番号５７、配列番号５８／配列番号５７、配列番号５９／配列番号６０、配列番号６１／配列番号６２、配列番号６３／配列番号６４、配列番号６５／配列番号６６、配列番号５８／配列番号６７、配列番号６１／配列番号６８、配列番号６９／配列番号７０、配列番号７１／配列番号７２、配列番号４９／配列番号７３、配列番号７４／配列番号７３、配列番号６１／配列番号７３、配列番号４４／配列番号７３、配列番号４０／配列番号７３、配列番号７５／配列番号７３、配列番号６９／配列番号７３、配列番号７６／配列番号７３、配列番号２１／配列番号７７、配列番号２１／配列番号７８、配列番号７９／配列番号２０、配列番号８０／配列番号８１、配列番号８２／配列番号８３、配列番号８４／配列番号８５、配列番号８６／配列番号８７、配列番号８８／配列番号８９、配列番号９０／配列番号９１、配列番号９２／配列番号９３およびこれらの組合せからなる群から選択される重鎖／軽鎖可変ドメイン配列を有する。
【００２０】
ｃＭｅｔ−ＤＭ１  ＡＤＣの調製
抗ｃ−Ｍｅｔ抗体は、ｐＨ６．５から７．５のリン酸緩衝液に緩衝液交換した。毒素リンカー、ＳＭＣＣ−ＤＭ１を、ＤＭＡ（ジメチルアセトアミド）溶液中に溶解させ、７から１０の毒素／抗体比で抗体溶液に添加した。抗体−毒素溶液を室温で一晩インキュベートした。非コンジュゲート抗体を、ゲル濾過クロマトグラフィーまたは遠心濾過のいずれかにより除去した。ｃＭｅｔ−ＤＭ１をＨＰＬＣにより特徴づけた。薬物抗体比（ＤＡＲ）を、ｃＭｅｔ−ＤＭ１のＵＶ−ＶＩＳに基づいて算出した。
【００２１】
ｃＭｅｔ−Ｄｕｏ３の調製
抗ｃＭｅｔ抗体をＴＣＥＰ（トリス（２−カルボキシエチル）ホスフィン）により２０ｍＭまで還元した。過量のＴＣＥＰを、ゲル濾過クロマトグラフィーまたは遠心濾過により除去した。毒素−Ｄｕｏ３リンカーをＤＭＡ溶液中に溶解させ、還元抗体に４．５から６の毒素／抗体比で添加した。室温での数時間のインキューベーション後、非コンジュゲートＤｕｏ３リンカーを、ゲル濾過クロマトグラフィーまたは遠心濾過により除去した。ｃＭｅｔ−Ｄｕｏ３をＨＰＬＣにより特徴づけた。薬物抗体比（ＤＡＲ）を、ＵＶ−ＶＩＳまたはＨＩＣ−ＨＰＬＣに基づいて算出した。
【００２２】
【化４】
2018502149.tif 000005
【００２３】
化合物０３０−０２６０の構造および調製は以下のとおりである。
【００２４】
【化５】
2018502149.tif 000006
【００２５】
化合物５０（１８ｍｇ、０．０２ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（２ｍＬ）中溶液に、化合物６５（１５ｍｇ）、続いてＤＩＥＡ（５μＬ）を添加した。混合物を室温で１０分間撹拌した。次に、反応物をＤＣＭ（３０ｍＬ）で希釈し、水性飽和ＮａＨＣＯ３を用いて洗浄した。有機層を濃縮し、残留物をＲＰ−ＨＰＬＣにより精製し、化合物１４を赤色の固体として凍結乾燥後に得た（７ｍｇ、２９％）。ＭＳ  ｍ／ｚ  １２３１．３（Ｍ＋Ｈ）。
【００２６】
化合物０３０−０１７４の構造
【００２７】
【化６】
2018502149.tif 000007
【００２８】
この化合物の合成を、化合物８として記載した。
【００２９】
化合物８の調製
【００３０】
【化７】
2018502149.tif 000008
【００３１】
３ｍＬのＤＭＦ中の化合物４１（７２ｍｇ、０．１０ｍｍｏｌ）に、ＤＩＥＡ（７５μＬ）、およびアミンＴＦＡ  ６３（８６ｍｇ、０．１２ｍｍｏｌ）を添加した。混合物を、室温で３時間撹拌し、次に、ＤＣＭ（４０ｍＬ）で希釈した。混合物をブラインで洗浄した。有機層を乾燥させ、乾燥状態になるまで蒸発させた。残留物を、カラム（シリカゲル、ＤＣＭ：ＭｅＯＨ、９：１）により精製し、化合物８（６３ｍｇ、５２％）を得た。ＭＳ  ｍ／ｚ  １２１４．５（Ｍ＋Ｈ）。
【実施例】
【００３２】
［実施例１］
受領後に、動物を、制御環境下の部屋において１ケージ当たり５匹のマウスで収容した。動物に、げっ歯類動物の食餌および水を自由に与えた。実験室条件へのマウスの馴化は、細胞投与および投薬の開始前の少なくとも７２時間だった。馴化期間中、動物の健康状態を決定した。試験開始前に健康であることが認められた動物のみを使用した。
【００３３】
この実施例は、対照（ＰＢＳ）、抗ｃ−Ｍｅｔ  ＩｇＧ１抗体（ＳＴＩ−０６０２およびＳＴＩ−０６０７）ならびに両抗体のＡＤＣ変異体を用いたマウスの処置を比較する、インビボ実験を提供する。手順は、最初に、腫瘍細胞移植および腫瘍の定着を行う。
【００３４】
ａ．Ｕ８７細胞を１０％ＦＢＳ  Ｕ８７培地（ＥＭＥＭ）を用いて培養し、０．０５％トリプシンを用いて回収した。細胞を、無血清ＥＭＥＭを用いて２回洗浄し、計数し、無血清ＥＭＥＭおよびマトリゲルの１：１ミックス０．２ｍＬ中細胞５×１０６個、または、無血清ＥＭＥＭおよびマトリゲルの１：１ミックス１ｍＬ中細胞２５×１０６個で再懸濁させ、各マウスの右側腹上部内に皮下注射した。
【００３５】
ｂ．腫瘍増殖を、デジタルキャリパーを使用した腫瘍体積測定により、移植後第６−９日に開始して、その後は週２回、および試験終了前にモニタリングした。
【００３６】
ｃ．腫瘍をデジタルキャリパーを用いて測定した。長さ（最長寸法）および幅（長さと垂直で同一平面上の距離）を測定した。腫瘍体積を算出する式は、ＴＶ（ｍｍ３）＝１／２×Ｌ×Ｗ２だった。
【００３７】
処置：
ａ．腫瘍が所望の体積（平均で２００から３００ｍｍ３）に達したら、動物をランダム化し、非常に大きいまたは小さい腫瘍を有するマウスを間引いた。マウスを、それぞれ１０匹のマウスからなる８つの群に分け、腫瘍体積によりランダム化した。
【００３８】
ｂ．マウスを図４に記載のビヒクルまたは被験物質のいずれかで処置した。マウスに、全５回の用量を投与した。
【００３９】
ｃ．腫瘍応答をモニタリングし、明確な治療傾向が確立されるとおよび／またはビヒクル処置マウスの腫瘍量がＩＡＣＵＣプロトコル限界（２０００ｍｍ３）に達するとき、試験を終了した。
【００４０】
［実施例２］
この実施例は、Ｈ２９２非小細胞肺がん株を有するマウスを用いて２つの開示されたｃ−Ｍｅｔ  ＡＤＣをインビボで比較するインビボ実験である。ＡＤＣまたはビヒクル対照は、ｉｖで尾部に週３回の用量で投与した。図９は、３ｍｇ／ｋｇおよび１０ｍｇ／ｋｇの２つの異なる用量のｃ−Ｍｅｔ  ０１７４  ＡＤＣならびにビヒクル対照を示す。腫瘍体積は、すべてのマウスにおいて週２回測定した。
【００４１】
図９は、これらの比較データを提供し、腫瘍体積の測定時の有意な用量依存効果を示す。図１１Ｂは、ビヒクル対照と比較して、これらのマウスについて有意な体重変化がなかったことを示す。これらのデータは、ＡＤＣから毒性が観察されなかったことを示唆する。
【００４２】
図１０は、単回１ｍｇ／ｋｇのはるかに低量の用量のｃ−Ｍｅｔ  ０２７６  ＡＤＣおよびビヒクル対照を示す。腫瘍体積は、すべてのマウスにおいて週２回測定した。図１０は、これらの比較データを提供し、腫瘍体積の測定時により低量の１ｍｇ／ｋｇ用量について有意な効果を示す。図１１Ａは、ビヒクル対照と比較して、これらのマウスについて有意な体重変化がなかったことを示す。これらのデータは、このＡＤＣから毒性が観察されなかったことを示唆する。
【００４３】
【表１】
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【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７Ａ】
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【図７Ｂ】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１Ａ】
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【図１１Ｂ】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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