(57)【要約】ペプチド系化合物を用いて免疫不全を治療する方法が提供される。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
免疫反応の誘発または刺激を必要とする対象における免疫反応の誘発または刺激に使用するための、ＡＡ１−Ｌｅｕ−ＡＡ３−ＡＡ４−ＡＡ５の配列を含むペプチドであって、
該ペプチドは、その塩、エステル、水和物、ラセミ化合物、鏡像異性体、プロドラッグ又は代謝物であってもよく、
ＡＡ１はＰｈｅ、Ｌｅｕ、ノルロイシン、トリプトファン、２−ナフチルアラニン（２ＮａｐＡ）、または１−ナフチルアラニン（１ＮａｐＡ）であり、
ＡＡ３はＳｅｒ、Ｔｈｒ、またはＣｙｓであり、
ＡＡ４はＴｙｒ、２−ナフチルアラニン（２ＮａｐＡ）、１−ナフチルアラニン（１ＮａｐＡ）、ジフェニルアラニン、７−ヒドロキシルテトラヒドロイソキノリン（７ＨＴｉｑ）、またはテトラヒドロイソキノリン（Ｔｉｑ）であり、
ＡＡ５はＬｙｓ、Ａｒｇ、またはシトルリンである、ペプチド。
【請求項２】
ＡＡ１はＰｈｅまたは２ＮａｐＡであり、
ＡＡ３はＳｅｒであり、
ＡＡ４はＴｙｒまたは２ＮａｐＡであり、
ＡＡ５はＬｙｓまたはＡｒｇであるペプチド、またはその塩、エステル、水和物、ラセミ化合物、鏡像異性体、プロドラッグもしくは代謝物である、請求項１に記載のペプチド。
【請求項３】
環状である請求項１または２に記載のペプチド。
【請求項４】
サイクリック（２−ナフチルＡｌａ）−Ｌｅｕ−Ｓｅｒ−（２−ナフチルＡｌａ）−Ａｒｇ、またはその塩、エステル、水和物、ラセミ化合物、鏡像異性体、プロドラッグもしくは代謝物である、請求項１〜３のいずれか１項に記載のペプチド。
【請求項５】
前記対象におけるＣＤ４Ｔ細胞の誘発または刺激に使用するための、請求項１〜４のいずれか１項に記載のペプチド。
【請求項６】
前記対象は免疫不全であるか、または免疫抑制されている、請求項１〜５のいずれか１項に記載のペプチド。
【請求項７】
前記対象は感染性の疾患を有する、請求項１〜６のいずれか１項に記載のペプチド。
【請求項８】
前記対象はウイルス性感染症を有する、請求項７に記載のペプチド。
【請求項９】
ＨＩＶ感染対象のＡＩＤＳを治療するために使用される、請求項１〜８のいずれか１項に記載のペプチド。
【請求項１０】
ＨＩＶ−仲介免疫不全を抑制または回復するための、請求項９に記載のペプチド。
【請求項１１】
ＨＩＶ感染対象のＣＤ４Ｔ細胞機能を回復するための、請求項９または１０に記載のペプチド。
【請求項１２】
前記対象はがんを有する、請求項１〜６のいずれか１項に記載のペプチド。
【請求項１３】
前記ペプチドは０．０１μｇを上回り１００ｍｇ未満の投与量で前記対象に投与される、請求項１〜１２のいずれか１項に記載のペプチド。
【請求項１４】
前記ペプチドは前記対象に繰り返し投与される、請求項１〜１３のいずれか１項に記載のペプチド。
【請求項１５】
注入、好ましくは筋肉内、皮下、経皮、静脈内もしくは動脈内注入、経鼻、経口、粘膜の投与、直腸の投与、または吸入により投与される、請求項１〜１４のいずれか１項に記載のペプチド。
【請求項１６】
薬学的に許容可能な媒介物または賦形剤を含む医薬組成物において調製される、請求項１〜１５のいずれか１項に記載のペプチド。
【請求項１７】
前記対象はヒト対象である、請求項１〜１６のいずれか１項に記載のペプチド。
【請求項１８】
（ｉ）ＡＡ１−Ｌｅｕ−ＡＡ３−ＡＡ４−ＡＡ５の配列を含むペプチド、またはその塩、エステル、水和物、ラセミ化合物、鏡像異性体、プロドラッグもしくは代謝物であって、
ＡＡ１はＰｈｅ、Ｌｅｕ、ノルロイシン、トリプトファン、２−ナフチルアラニン（２ＮａｐＡ）、または１−ナフチルアラニン（１ＮａｐＡ）であり、
ＡＡ３はＳｅｒ、Ｔｈｒ、またはＣｙｓであり、
ＡＡ４はＴｙｒ、２−ナフチルアラニン（２ＮａｐＡ）、１−ナフチルアラニン（１ＮａｐＡ）、ジフェニルアラニン、７−ヒドロキシルテトラヒドロイソキノリン（７ＨＴｉｑ）、またはテトラヒドロイソキノリン（Ｔｉｑ）であり、
ＡＡ５はＬｙｓ、Ａｒｇ、またはシトルリンであるペプチド、またはその塩、エステル、水和物、ラセミ化合物、鏡像異性体、プロドラッグもしくは代謝物と、
（ｉｉ）さらなる抗ウイルス剤とを含み、
それらを組み合わせて、または個別に投与するための、医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、特定のペプチド系化合物を用いて対象の免疫反応を誘発または刺激する組成物および方法に関する。本発明は、ＣＤ４Ｔ細胞を刺激するために特に効果があり、ＨＩＶ感染患者を治療するために使用されてもよい。
【背景技術】
【０００２】
ＣＤ４Ｔリンパ球は、免疫系（細胞性反応および液性反応の双方）を制御することにおいて卓越した役割を果たし、がんまたは感染性の疾患などの様々な疾患状態において重要である。
【０００３】
ＨＩＶ病因に関連する免疫性の疾患において、全ＣＤ４Ｔ細胞のうち（末梢血液中で測定される通り）実際に感染されているのは０．５％未満であるが、ＣＤ４Ｔ細胞の大部分が主な調節機能不全を示す。非感染ＣＤ４Ｔリンパ球は、それらの機能を次第に失い、アネルギー状態となり、数が減少してＣＤ４リンパ球減少という結果となる。アネルギーおよびリンパ球減少は、ＨＩＶ感染患者を特徴付ける免疫不全の特質である。これらの現象の背景にあるメカニズムは、完全に解明されているわけではない（参考文献１）。免疫活性化および炎症も、ＨＩＶ病因における重要な役割を果たす（参考文献２、３）。
【０００４】
発明者らは、ＣＤ４Ｔ細胞活性化のこの異常な状態の原因となるタンパク質、指定されたｓＰＬＡ２ＧＩＢをヒト血漿から同定し、単離し、特性評価することについて既に報告している（国際公開第２０１５／０９７１４０号）。
【０００５】
本発明は、ｓＰＬＡ２ＧＩＢを阻害するとともに免疫系の刺激を必要とする対象の免疫系を刺激することができる特定のペプチドを使用することに関する。より詳細には、発明者らは、強いｓＰＬＡ２ＧＩＢ阻害効果を示す特定の群のペプチド系化合物を選択した。発明者らは、これら化合物が、健康供与者から精製されたＣＤ４リンパ球において異常で病原性の反応を誘発するウイルス血症のＨＩＶ感染患者からの血清の能力を完全に中和することができるため、ＨＩＶ感染対象におけるＣＤ４Ｔ細胞機能を回復することができる、ということを実証した。
【発明の概要】
【０００６】
本発明の目的は、対象における免疫反応を刺激または誘発する方法に関し、この方法は、対象を式Ａの化合物、またはその塩、エステル、水和物、ラセミ化合物、鏡像異性体、プロドラッグもしくは代謝物に曝露することを含む。
【０００７】
本発明のさらなる目的は、対象の免疫不全障害の治療方法に関し、この方法は、対象を式Ａの化合物、その塩、エステル、水和物、ラセミ化合物、鏡像異性体、プロドラッグもしくは代謝物に曝露することを含む。
【０００８】
本発明の他の目的は、式Ａの化合物、またはその塩、エステル、水和物、ラセミ化合物、鏡像異性体、プロドラッグもしくは代謝物を、対象の免疫反応を誘発もしくは刺激する、または、対象の免疫不全障害を治療する薬剤の製造に使用することに関する。
【０００９】
本発明の他の目的は、対象の免疫反応を誘発もしくは刺激する、または、対象の免疫不全障害を治療する方法において使用する、式Ａの化合物、またはその塩、エステル、水和物、ラセミ化合物、鏡像異性体、プロドラッグもしくは代謝物に関する。
【００１０】
本発明は、免疫不全対象、または、刺激された免疫性を必要とする対象（例えば、感染性の疾患またはがんを患う対象）の治療に特に適している。これに関し、本発明の特定の目的は、対象に式Ａの化合物またはその塩、エステル、水和物、ラセミ化合物、鏡像異性体、プロドラッグもしくは代謝物を投与することを含む、対象の感染性の疾患を治療する方法である。
【００１１】
本発明のより特定の実施形態は、ＨＩＶ感染対象におけるＡＩＤＳを治療する方法に関し、この方法は、対象に式Ａの化合物、またはその塩、エステル、水和物、ラセミ化合物、鏡像異性体、プロドラッグもしくは代謝物を投与することを含む。
【００１２】
別の態様において、本発明は、（ｉ）式Ａの化合物、またはその塩、エーテル、水和物、ラセミ化合物、鏡像異性体、プロドラッグもしくは代謝物と（ｉｉ）さらなる抗ウイルス性剤または抗がん剤とを含む医薬組成物に関する。
【００１３】
本発明は、ヒトと、家畜化された動物（例えば、ウシ、ヒツジ、ネコ、イヌ、およびウマ）、非ヒト霊長動物（サルなど）、ウサギ、および齧歯類（例えば、マウスおよびラット）などであるがこれらに限定されない非ヒト動物とを含む任意の哺乳動物において使用されてもよい。本発明は、ヒト対象における使用に特に適している。本発明は、任意の哺乳動物において免疫反応を増加させるために使用されてもよく、免疫抑制された対象における強いＣＤ４−Ｔ細胞活性の誘発に特に適合されている。
【図面の簡単な説明】
【００１４】
【図１Ａ】図１Ａは、ペプチドＩがｓＰＬＡ２ＧＩＢを阻害することを示す。まず、組換え体ＰＬＡ２ＧＩＢ（７５ｎＭ）を指示濃度のペプチドＩに３０分間曝露した。次に、混合物を「患者および方法」に記載のバイオアッセイに適用した。リン酸化ＳＴＡＴ５のＩＬ−７誘導性核移行の阻害率をＳＴＥＤ顕微鏡によって測定した。
【図１Ｂ】図１Ｂは、ペプチドＩのＩＣ５０の計算結果を示す。ＩＣ５０を正確に計算するために、プリズムソフトウェアによって実験データを解析した。
【図１Ｃ】図１Ｃは、ペプチドＩがＣＤ４リンパ球の活性を回復することを示す。健康供与者から精製したＣＤ４リンパ球を１％または３％の希釈度でウイルスＨＩＶ感染患者からの血清に曝露した。このような曝露の結果、ｐＳＴＡＴ５のＩＬ−７誘導性核移行が完全に阻害された。１５μＭで、ペプチドＩはこの阻害を完全に逆転し、それゆえＣＤ４機能を回復した。５つの血清を試験し、結果を中央値＋／−ＳＤとして与える。
【発明を実施するための形態】
【００１５】
本発明は、免疫系の調節を必要とする対象において免疫系を調節する組成物および方法に関する。より詳細には、本発明は、特に、免疫抑制された、または、免疫不全の対象の免疫反応または免疫系を刺激する組成物および方法を提供することである。
【００１６】
本発明は、ＰＬＡ２ＧＩＢにより仲介された異常で病原性のＣＤ４Ｔリンパ球を完全に中和する特定のペプチドの顕著な能力を開示する。意外なことに、これらの化合物の効果は、無血清緩衝液に含まれる組換型酵素においてよりも患者の血漿に存在するＰＬＡ２ＧＩＢにおいて強いことが見出された。したがって、このような化合物は、ヒト対象における免疫系を刺激するため、より具体的には、ＨＩＶ感染患者を治療するための新規の強い作用物質に相当する。化合物は、感染プロセスの早期に投与される場合、免疫疾患への進行を防止でき、免疫不全の発現を防止することができる。化合物は、例えば高活性抗レトロウイルス性治療（ＨＡＡＲＴ）とともに、後期に投与される場合、免疫系によってＨＩＶ感染症が制御される機能免疫系の回復を可能にする。
【００１７】
したがって、本発明の目的は、対象における免疫反応を刺激または誘発する方法に関し、この方法は、対象を式Ａのペプチド、またはその塩、エステル、水和物、ラセミ化合物、鏡像異性体、プロドラッグもしくは代謝物に曝露することを含む。
【００１８】
本発明のさらなる目的は、対象の免疫不全障害の治療方法に関し、この方法は、対象を式Ａのペプチド、またはその塩、エステル、水和物、ラセミ化合物、鏡像異性体、プロドラッグもしくは代謝物に曝露することを含む。
【００１９】
本発明の他の目的は、式Ａのペプチド、またはその塩、エステル、水和物、ラセミ化合物、鏡像異性体、プロドラッグもしくは代謝物を、対象の免疫反応を誘発もしくは刺激する、または、対象の免疫不全障害を治療する薬剤の製造に使用することに関する。
【００２０】
また、本発明は、対象のＣＤ４Ｔ細胞を刺激または回復するための式Ａのペプチドの使用にも関する。
【００２１】
＜式Ａのペプチド＞
式Ａのペプチドは、ＡＡ１−Ｌｅｕ−ＡＡ３−ＡＡ４−ＡＡ５の配列を含むかまたは該配列からなるペプチドを指定し、
ＡＡ１は、Ｐｈｅ、Ｌｅｕ、ノルロイシン、トリプトファン、２−ナフチルアラニン（２ＮａｐＡ）、または１−ナフチルアラニン（１ＮａｐＡ）を指定し、
ＡＡ３は、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、またはＣｙｓを指定し、
ＡＡ４は、Ｔｙｒ、２−ナフチルアラニン（２ＮａｐＡ）、１−ナフチルアラニン（１ＮａｐＡ）、ジフェニルアラニン、７−ヒドロキシルテトラヒドロイソキノリン（７ＨＴｉｑ）、またはテトラヒドロイソキノリン（Ｔｉｑ）を指定し、
ＡＡ５は、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、またはシトルリンを指定する。
【００２２】
式Ａのペプチドは、ヒトＩＩＡ型分泌性ホスホリパーゼＡ２（ｓＰＬＡ２−ＧＩＩＡ）の阻害物質として、Ｃｈｕｒｃｈ等（ＪＢＣ、２７６（３５）、（２００１年）３３１５６）により記載されている。しかしながら、これらのペプチドは、例えばブタｓＰＬＡ２−ＧＩＢにおける効果はなく、ＧＩＩＡに対して選択的であると報告されている。本発明者等は、驚くべきことに、式ＡのペプチドがｓＰＬＡ２−ＧＩＢの強力な阻害物質であり、免疫系、特にＣＤ４Ｔリンパ球を刺激する効果を示すことを発見した。より具体的には、本発明者らは、これらのペプチドがＨＩＶ感染対象におけるｓＰＬＡ２ＧＩＢ媒介のＣＤ４アネルギーを完全に中和可能であることを発見しており、これは全く知られていなかったことである。
【００２３】
本発明に使用する好ましいペプチドは、ＡＡ１−Ｌｅｕ−Ｓｅｒ−ＡＡ４−ＡＡ５の配列を含むペプチド、またはその薬学的に許容可能な塩、水和物もしくはプロドラッグであり、
ＡＡ１は、Ｐｈｅ、Ｌｅｕ、ノルロイシン、トリプトファン、２−ナフチルアラニン（２ＮａｐＡ）、または１−ナフチルアラニン（１ＮａｐＡ）、より好ましくはＰｈｅまたは２−ナフチルアラニン（２ＮａｐＡ）を指定し、
ＡＡ４は、Ｔｙｒ、２−ナフチルアラニン（２ＮａｐＡ）、１−ナフチルアラニン（１ＮａｐＡ）、ジフェニルアラニン、７−ヒドロキシルテトラヒドロイソキノリン（７ＨＴｉｑ）、またはＴｉｑ、より好ましくはＴｙｒまたは２ＮａｐＡを指定し、
ＡＡ５は、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、またはシトルリン、好ましくはＬｙｓまたはＡｒｇを指定する。
【００２４】
本発明のペプチドにおいて、アミノ酸はＤまたはＬ構造であってもよい。また、本発明のペプチドは、上記の一次アミノ酸配列を含み、その活性または特性をさらに向上させるためにもう1つのさらなる化学基または置換基を含んでもよい。好ましい実施形態において、その一次アミノ酸の骨格は、５を超える残基を含まないが、側鎖が化学基またはさらなるアミノ酸と誘導体化されていてもよい。本発明の好ましいペプチドはペンタペプチドである。
【００２５】
本発明に使用するもっとも好ましいペプチドは、ＦＬＳＹＫ（配列番号１）、ＦＬＳＹＲ（配列番号２）、（２ＮａｐＡ）ＬＳ（２ＮａｐＡ）Ｒ（配列番号３、ペプチドＩ）、（２ＮａｐＡ）ＬＳＹＲ（配列番号４）、およびＦＬＳ（２ＮａｐＡ）Ｒ（配列番号５）から選ばれる配列を有する。
【００２６】
さらに、好ましい実施形態において、本発明に使用するペプチドは環状である。環状化は、従来技術を用いるか、またはイオン結合および／もしくは水素結合によって、ペプチド合成時に得られる。
【００２７】
これに関して、本発明に使用するペプチドの特定の好ましい例は、環状ペプチドＦＬＳＹＫ、ＦＬＳＹＲ、および（２ＮａｐＡ）ＬＳ（２ＮａｐＡ）Ｒ（ペプチドＩ）である。
【００２８】
他の式Ａのペプチドは、１０アミノ酸長未満、好ましくは９アミノ酸長未満、より好ましくは７、６または５アミノ酸長のペプチドであり、
ＧＣＧＳＹ（配列番号６）
ＧＣＧＳＰ（配列番号７）
ＴＨＴＹＳ（配列番号８）
ＫＤＹＹＲ（配列番号９）
ＬＥＫＹＬ（配列番号１０）
ＶＤＨＹＤ（配列番号１１）
ＴＱＳＹＫ（配列番号１２）
ＴＥＲＹＳ（配列番号１３）
ＨＥＴＡＷ（配列番号１４）
のアミノ酸配列、またはその薬学的に許容可能な塩、水和物、変異体もしくはプロドラッグのいずれか１つを含む。
【００２９】
そうしたペプチドの変異体は、上記の一次アミノ酸配列を含み、かつその活性または特性をさらに向上させるためにもう1つのさらなる化学基または置換基を含むペプチドを指定する。好ましい実施形態において、その一次アミノ酸の骨格は５を超える残基を含まないが、側鎖が化学基またはさらなるアミノ酸と誘導体化されていてもよい。本発明のペプチドにおいて、アミノ酸はＤまたはＬ構造であってもよい。さらに特定の実施形態において、ペプチドは環状である。
【００３０】
本発明に使用するペプチドは、化学的なペプチド合成によってなど、それ自体既知である方法によって生成されることができる。例として、ペプチドは、固相合成器におけるt-ブチルオキシカルボニル化学によって、および／または、Ｆｍｏｃ（Ｎ−（９−フルオレニル）メトキシカルボニル）固相化学を用いて、調製可能である。ペプチドは、標準的なペプチド合成を用いてアミド結合形成によって環状化可能である。また、ペプチドは、例えばその安定性を向上させるために、１つ以上のペプチド模倣結合を含んでもよい。そうしたペプチド模倣結合の例は、例えば、メチレン（−ＣＨ２−）またはリン酸（−ＰＯ２−）基、２級アミン（−ＮＨ−）または酸素（−Ｏ−）、α−アザペプチド、α−アルキルペプチド、Ｎ−アルキルペプチド、ホスホンアミダート、デプシペプチド、ヒドロキシメチレン、ヒドロキシエチレン、ジヒドロキシエチレン、ヒドロキシエチルアミン、レトロ−インベルソ（ｒｅｔｒｏ−ｉｎｖｅｒｓｏ）ペプチド、エステル、ホスフィナート、ホスフィン酸、およびホスホンアミドなどの挿入を含む。さらに、ペプチドは、側鎖残基の付加または置換によってさらに修飾されてもよい。
【００３１】
「塩」という用語は、任意の薬学的に許容可能な本発明の化合物の無機または有機の酸／塩基付加塩を指す。本発明の薬学的に許容可能な酸性塩類は、トリフルオロ酢酸、酢酸、硝酸、酒石酸、塩酸、硫酸、リン酸、メタンスルホン酸、シュウ酸、マレイン酸、琥珀酸またはクエン酸の塩類を含むがこれに限定されない。本発明の薬学的に許容可能な塩基性塩類は、ナトリウム、カリウム、カルシウム、マグネシウム、アンモニウム、またはコリンの塩類を含むがこれに限定されない。
【００３２】
本明細書において「プロドラッグ」という用語は、構造Ａの化合物の任意の機能性前駆体を指し、該機能性前駆体は、生物系に投与された場合、例えば、自発性の化学的、酵素的、生物学的および／または代謝性の一つまたは複数の反応結果として上記化合物を生成する。代表的なプロドラッグは、構造Ｙ−Ａを有し、Ｙは保護基であり、プロドラッグからインビボで切断されて化合物Ａを放出する。プロドラッグは、通常、不活性であるか、または、結果として生じる薬よりは活性ではなく、例えば、化合物の物理化学的または薬物動態学的な特性を向上させるために使用することができる。
【００３３】
「代謝物」という用語は、生体への投与後、化合物Ａのインビボの修飾または処理の結果として生じる分子を指す。このような修飾は、化合物の生物活性を維持する分子をもたらす固有酵素系を通して生じてもよい。
【００３４】
「鏡像異性体」という用語は、異性体の混合物（任意の相対比）の反対として、単離された光学的に純粋な鏡像異性体を指す。したがって、本発明において使用する化合物は、光学的に純粋な鏡像異性体またはその任意の混合物（例えば、ラセミ化合物）でもよい。
【００３５】
ペプチドは、従来の技術によって、溶液内または凍結または凍結乾燥で保管されるとよい。
【００３６】
＜組成物＞
本発明において使用する化合物は、任意の薬学的に許容可能な賦形剤、ビヒクルまたは媒介物とともに調製されてもよい。化合物は、軟膏、ゲル、ペースト、液体溶液、懸濁液、タブレット、ゼラチンカプセル、カプセル、坐剤、粉末、経鼻の滴剤、またはエアロゾルの形態、好ましくは注入可能な溶液または懸濁液の形態でもよい。注入のためには、化合物は一般的に、液体懸濁液の形態でパッケージ化されており、例えばシリンジまたは灌流を介して注入されてもよい。この点に関し、化合物は、一般的には、薬学的使用と互換性がありかつ当業者に知られている、食塩水、生理溶液、等張溶液または緩衝溶液に溶解される。したがって、組成物は、分散剤、可溶化剤、安定剤、防腐剤などから選択される１つまたは複数の作用剤または賦形剤を含んでいてもよい。液体および／または注入用の製剤において使用され得る作用剤または賦形剤は、とりわけ、メチルセルロース、ヒドロキシメチルセルロース、カルボキシメチルセルロース、ポリソルベート８０、マンニトール、ゼラチン、乳糖、植物油、アカシアなどである。媒介物も、例えば、メチル−ベータ−シクロデキストリン、アクリル酸のポリマー（カーボポールなど）、ポリエチレングリコールおよびポリプロピレングリコールの混合物、モノエタノールアミンおよびヒドロキシメチルセルロースから選択され得る。
【００３７】
組成物は、一般的に、有効量、例えばＧＩＢｓＰＬＡ２を阻害するために効果的な量の式Ａの化合物を含有する。一般的に、本発明の組成物は、約０．０１μｇから１００ｍｇ、例えば０．０５μｇを上回り５０ｍｇ未満、好ましくは０．０５μｇを上回り５ｍｇ未満、例えば１μｇを上回り１ｍｇ未満の式Ａの化合物を含有する。用量は、疾患および対象に応じて当業者によって調節されてもよい。
【００３８】
本発明の組成物は、同時または順次使用するための、１つまたは複数の追加の活性体をさらに含有し得る。特に、化合物Ａは、抗レトロウイルス性剤などのさらなる抗ウイルス剤と組み合わせて使用されてもよい。
【００３９】
さらに、本発明は、上記で定義したような式Ａの化合物と、さらなる抗ウイルス剤とを含み、任意で薬学的に許容可能な賦形剤を含む医薬組成物に関する。本発明の組成物は、任意の適した装置、または、シリンジ、アンプル、フラスコ、ボトル、パウチなどの容器に調製されてもよい。
【００４０】
さらに、本発明は、（ｉ）先述のような式Ａの化合物を含む容器と、（ｉｉ）さらなる坑ウイルス剤を含む容器とを備え、任意で（ｉｉｉ）キットを使用するための指示書とを含むキットにも関する。
【００４１】
＜疾患＞
本発明の化合物および組成物は、向上した免疫性が対象状態を改善する可能性がある任意の疾患だけではなく、不適切な（例えば、欠陥があるかまたは不適当な）免疫反応、特に不適切なＣＤ４Ｔ細胞活性に関する任意の疾患も治療するために使用されてもよい。これらの疾患は、本願において「免疫性障害」または「免疫不全」と呼ばれることもある。これは、ウイルス性感染症もしくは病原体感染症またはがんにより引き起こされる特に免疫不全の状態を含む。
【００４２】
本願では、「治療」または「処置」という用語は、例えば、治療される個体の自然経過を変化させようとする任意の臨床介入を指し、予防または治癒のいずれかの目的で行われ得る。治療の望ましい効果は、疾患の発生または再発の防止、症状の緩和、疾患の何らかの直接的または間接的な病的な帰結の減少、転移の防止、疾患進行率の低下、疾患状態の寛解または緩和、および緩解または改善した予後であるがこれらに限らない。本発明の組成物および方法が疾患または障害の発生を遅らせるため、または、疾患または障害の進行を遅らせるために使用される実施形態もある。
【００４３】
このような治療から利益を得られる疾患の例は、ＨＩＶ−仲介免疫不全などの免疫不全を有するすべての疾患である。この点に関し、特定の実施形態では、本発明は、その治療を必要とする対象の免疫不全または関連障害を治療するため、該対象に式Ａの化合物を投与することを含む方法に関する。
【００４４】
別の特定の実施形態では、本発明は、その治療を必要とする対象の免疫不全または関連障害を治療するために使用される式Ａの化合物に関する。
【００４５】
免疫不全および関連障害は、対象における免疫機能低下または免役反応低下により特徴付けられるおよび／または引き起こされる任意の状態または病態を指す。免疫不全は、例えば、ウイルス性感染症（例えば、ＨＩＶ、Ｂ型肝炎など）、細菌性感染症、がん、または他の病的な状態によって引き起こされる可能性がある。したがって、「免疫不全関連の障害」という用語は、免疫不全により引き起こされる、または、免疫不全に関連する任意の疾患を指す。本発明は、ＣＤ４−Ｔ細胞に関連する免疫不全および関連疾患を治療するために特に適している。
【００４６】
特定の実施形態において、本発明は、対象のＨＩＶ感染症を該対象に式Ａの化合物を投与することにより治療する方法に関する。いくつかの実施形態では、対象は初期のＨＩＶ患者であり、本方法により、患者がＨＩＶコントローラである、つまり免疫不全を発症しないか、または免疫不全が中等度であるもしくは遅延されている可能性が増大する。いくつかの実施形態では、対象は、抗レトロウイルス性治療後に低い免疫再構成を有する、および／または、重篤な突発性のＣＤ４Ｔリンパ球減少（ＩＣＬ）を有する患者である。また本発明は、ＨＩＶ感染対象のＣＤ４−Ｔ細胞活性を該対象に式Ａの化合物を投与することにより増大させる方法にも関する。
【００４７】
本発明は、感染症の早期で対象を治療して、免疫不全の発生、広がり、または、持続を防止または低減するために使用されてもよい。代表的には、化合物を、感染性の疾患が発見されるとすぐに、臨床兆候の発現前に投与することができる。式Ａの化合物は、ＨＩＶによる感染の間の非常に早期に投与されると、患者をＨＩＶコントローラの状態に向かわせることができる。また、本発明の化合物は、感染した対象に後期に単独でまたは１もしくは複数の抗ウイルス剤と組み合わせて投与されてもよい。このような療法では、化合物は、ＣＤ４Ｔリンパ球の回復およびその機能の再生を促進させる。したがって、特定の実施形態では、本発明は、（ｉ）抗ウイルス剤と（ｉｉ）式Ａの化合物とをウイルス性感染症を有する対象に同時に、個別に、または順次に投与することを含む。このようなプロトコルは、ＨＩＶ感染対象を治療するために特に適しており、化合物Ａは、抗レトロウイルス性治療（例えば、ＨＡＡＲＴ）と組み合わせて使用され、ＨＡＡＲＴを低減でき、または、その重篤な有害な影響によって知られているＨＡＡＲＴ治療を少なくとも一時的に中断することさえできる。
【００４８】
また、本発明は、対象の免疫反応を増大させることによりがんを治療する方法であって、該対象に式Ａの化合物を投与することを含む方法を提供する。また、本発明は、対象のがんに関連するＣＤ４Ｔ細胞連鎖免疫不全を、該対象に式Ａの化合物を投与することにより治療する方法を提供する。
【００４９】
本発明の化合物または組成物の投与の期間、用量、および頻度は、対象および疾患に応じて適合されてもよい。治療は、単独で使用されてもよいし、他の活性成分と組み合わせて、同時に、または個別に、または順次に使用されてもよい。
【００５０】
本発明の化合物または組成物は、全身的な注入、筋肉内、静脈内、腹腔内、皮膚、皮下、真皮、経皮、髄腔内、眼球（例えば角膜の）もしくは直腸の経路、または、炎症部位における局所投与、好ましくは筋肉内または静脈内注入などであるがこれらに限定されない様々な方法および経路で投与されてもよい。
【００５１】
代表的な療法は、有効量の式Ａの化合物を、単回または繰り返して１日または数日、最長１年、１週間〜約６か月を含む期間にわたって投与することを含む。インビボで投与される本発明の医薬的化合物または組成物の用量は、受容者（対象）の年齢、健康、性別、および体重、もしあるなら並行する治療の種類、治療の頻度、ならびに所望の医薬的効果の特性に応じているものと理解される。本明細書で提供される有効量の範囲は、限定を意図するものではなく、好ましい用量範囲を示している。しかしながら、最も好ましい用量は、当業者により理解されており決定されるように個々の対象に適合される（例えば、Berkowet et al., eds., The Merck Manual, 16th edition, Merck andCo., Rahway, N.J., 1992; Goodmanetna., eds., Goodman and Cilman’s The pharmacological Basis of Therapeutics, 10th edition, PergamonPress, Inc., Elmsford, N.Y., (2001)を参照）。
【００５２】
本発明のさらなる態様および利点は、説明を目的とする下記の実験の項に開示されている。
【００５３】
［実施例］
＜患者および方法＞
＜＜血漿の由来＞＞
本研究に含まれるウイルス血症患者（ＶＰ）は、１年を超えてＨＩＶ陽性であった。患者は、いずれの抗レトロウイルス性剤も受けておらず、採血の時点でウイルス負荷が１００００ＲＮＡコピー／ｍｌを上回り、ＣＤ４カウントが２００／ｍｌを上回っていた（ＡＮＲＳＥＰ３３およびＥＰ２０の研究）。ＶＰからのすべての血液サンプルは、ビセートル病院（Hopital Bicetre）またはゴネス総合病院（CentreHospitalier de Gonesse）で採取された。
【００５４】
＜＜組換型ＰＬＡ２ＧＩＢ酵素の作製＞＞
ｓＰＬＡ２ＧＩＢを大腸菌において作製した。封入体を尿素に可溶化させ、その後復元した。ｓＰＬＡ２ＧＩＢをＨＰＬＣによってさらに精製した。製剤の均質性を質量分析法（Ｍａｌｄｉｔｏｆｆ）によって確認した。酵素の特定の活性を常時測定し、標準的な製剤と比較した。
【００５５】
＜＜バイオアッセイ＞＞
ＩＬ−７誘導性リン酸化ＳＴＡＴ５核移行（ＮＴｐＳＴＡＴ）の阻害を以下のように測定した。まず、ＶＰ血漿（５％または１０％）を、精製したＨＤＣＤ４Ｔ細胞と共にインキュベートして（２０分）、ＩＬ−７による刺激（２ｎＭ、１５分）を行った。次に、細胞をポリリジン被覆されたガラススライドで培養し、ＰＦＡ（１．５％）による固定およびメタノール（−２０°Ｃで９０％）による透過化処理を行った。次に、ｐＳＴＡＴ５をウサギ抗ＳＴＡＴ５によって染色し、ヤギ抗ウサギＡｔｔｏ６４２により標識した。細胞をパルスＳＴＥＤ顕微鏡によって解析し、ｐＳＴＡＴ５を発現する核の数を数えた。
【００５６】
＜＜化合物＞＞
ペプチドＩ（サイクリック（２−ナフチルＡｌａ−Ｌｅｕ−Ｓｅｒ−２−ナフチルＡｌａ−Ａｒｇ））をＣａｌｂｉｏｃｈｅｍから得た。使用前に化合物をＤＭＳＯに可溶化させた。
【００５７】
＜結果＞
まず、「患者および方法」に記載されたバイオアッセイにおいて試験したような組換型ＰＬＡ２ＧＩＢの生物活性における様々な用量のペプチドＩの効果を調査した。図１Ａは、ペプチドＩの阻害効果が５μＭで効果があり、１０μＭで非常に強くなることを示す。実験は２度繰り返された。実験データから、ＩＣ５０となる対応する理論曲線を導出した。ＩＣ５０はペプチドＩでは約４．９μＭである（図１Ｂ）。
【００５８】
ウイルス血症患者の血漿に含まれるＰＬＡ２ＧＩＢがリン酸化ＳＴＡＴ５のＩＬ−７誘導性核移行（ＮＴｐＳＴＡＴ５）の阻害を誘発することは説明されている。その結果、健康供与者から精製されてウイルス血症の血漿に曝露されたＣＤ４Ｔリンパ球はＩＬ−７に反応しない。ここで、ＩＬ−７誘導性ＮＴｐＳＴＡＴ５を阻害するＶＰからの血清の能力に対するペプチドＩの効果を試験した。
【００５９】
様々なＨＩＶウイルス血症患者（少なくとも５人）からの血漿の効果を、ＩＬ−７誘導性ＮＴｐＳＴＡＴ５の阻害に対して滴定した。実験では、まず１％希釈の血漿を用い、その後３％希釈の血漿を用い、これが３０％を上回り７０％未満の最大阻害となった。これらの実験条件の下で、１５μＭのペプチドＩ（そのＩＣ５０の３倍）が血清の活性を完全に復帰させたことが示される（図１Ｃ）。
【００６０】
このようにペプチドＩはウイルス血症患者の血漿の阻害活性を復帰させることができる。なお、ペプチドＩは、無血清緩衝液に含まれる純粋な組換型酵素に対してよりも、患者の血漿に含まれる場合により活性である。組換型酵素で得られる阻害は、約８０％の最大阻害に相当する横ばい状態に達する。これに対し、血漿が使用される場合には約１００％の阻害になる（図１Ａのデータを図１Ｃのデータと比較）。このことは、高分子量の多分子性複合体の組織化後にＰＬＡ２ＧＩＢに干渉し、触媒部位へのアクセスを隠す可能性があり、それゆえ、ペプチドＩの効果を遅らせる可能性がある、高濃度の多数のタンパク質と複数の脂質部分の存在とにもかかわらず、ペプチドＩが血漿において高活性であることを示唆する。
【００６１】
＜考察＞
ＰＬＡ２ＧＩＢがＣＤ４Ｔリンパ球レベルでウイルス血症患者からのＣＤ４Ｔ細胞を特徴付ける様々な異常を誘発することを以前に実証した。リンパ球減少を説明するＩＬ−７に対する反応不能性が報告されている。また、この考察を深めて、ＰＬＡ２ＧＩＢ処置されたＣＤ４リンパ球のＩＬ−２またはＩＬ−４に対する反応不能性を実証し、それによりアネルギーを説明した。
【００６２】
ここで初めて、ウイルス血症のＨＩＶ感染患者の血漿において見出されたＰＬＡ２ＧＩＢの酵素活性を強力に阻害することで、ＰＬＡ２ＧＩＢの有害な影響を完全に無効にする化合物が説明される。重要なことは、ペプチドＩによって、試験されたすべてのウイルス血症患者からの血清の病原性活性が中和されることができたことである。観察された効果は完全なものであり、この治療的試みの強い可能性を明らかに指摘するものである。
【００６３】
参考文献
(1)Grossman Z, Meier-Schellersheim M, Sousa AE, Victorino RMM, Paul WE (2002) CD4+T-cell depletion in HIV infection: are we closer to understanding the cause-Nat Med 8(4):319-323
(2)Catalfamo M, et al. (2008) HIV infection-associated immune activation occurs bytwo distinct pathways that differentially affect CD4 and CD8 T cells. PNAS105(50):19851-19856.
(3)Armah KA, et al. (2012) HIV status, burden of comorbid disease and biomarkersof inflammation, altered coagulation, and monocyte activation. Clin Infec Dis55(1)126-36.
【図１Ａ】
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【図１Ｂ】
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【図１Ｃ】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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