(57)【要約】  本発明は、歯の表面、特に、歯のエナメル質を石灰化するための組成物に関する。歯の齲蝕、歯の腐食及びフッ素症に起因する歯のエナメル質における低石灰化病変（表層下病変を含む）を石灰化する方法も提供する。【選択図】  なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
モノフルオロリン酸カルシウム及び石灰化剤を含む、歯の表面又は表層下を石灰化するための組成物。
【請求項２】
モノフルオロリン酸カルシウムの量が、約２００ｐｐｍ〜約５０００ｐｐｍＦである、請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
モノフルオロリン酸カルシウムの量が、約４００ｐｐｍ〜約１５００ｐｐｍＦである、請求項２に記載の組成物。
【請求項４】
モノフルオロリン酸カルシウムの量が、約１０００ｐｐｍ〜約１４５０ｐｐｍＦである、請求項３に記載の組成物。
【請求項５】
石灰化剤が、安定化非晶質リン酸カルシウム（ＡＣＰ）及び／又は非晶質フッ化リン酸カルシウム（ＡＣＦＰ）である、請求項１〜４の何れか１項に記載の組成物。
【請求項６】
練り歯磨き、歯磨き粉、液体歯磨剤、マウスウォッシュ、マウスリンス、マウススプレー、バーニッシュ、歯科用セメント、トローチ、チューインガム、ロゼンジ、歯科用軟膏、歯肉マッサージクリーム、うがい用錠剤、乳製品及びその他の食品からなる群から選ばれる、請求項１〜５の何れか１項に記載の組成物。
【請求項７】
練り歯磨きである、請求項６に記載の組成物。
【請求項８】
バーニッシュである、請求項６に記載の組成物。
【請求項９】
歯科用セメントである、請求項６に記載の組成物。
【請求項１０】
マウスウォッシュである、請求項６に記載の組成物。
【請求項１１】
家畜、伴侶動物又は動物園の動物に使用するための請求項１〜１０の何れか１項に記載の組成物。
【請求項１２】
歯の表面又は表層下とモノフルオロリン酸カルシウム及び石灰化剤とを接触させることを含む歯の表面又は表層下を石灰化する方法。
【請求項１３】
モノフルオロリン酸カルシウムの量が、約２００ｐｐｍ〜約５０００ｐｐｍＦである、請求項１２に記載の方法。
【請求項１４】
モノフルオロリン酸カルシウムの量が、約４００ｐｐｍ〜約１５００ｐｐｍＦである、請求項１２に記載の方法。
【請求項１５】
モノフルオロリン酸カルシウムの量が、約１０００ｐｐｍ〜約１４５０ｐｐｍＦである、請求項１２に記載の方法。
【請求項１６】
モノフルオロリン酸カルシウムが組成物で提供され、モノフルオロリン酸カルシウムが口腔への投与前に組成物中に存在する、請求項１２〜１５の何れか１項に記載の方法。
【請求項１７】
歯の表面が、歯のエナメル質である、請求項１２〜１６の何れか１項に記載の方法。
【請求項１８】
歯の表面が、齲蝕、歯の浸食又はフッ素症に起因するエナメル質内の病変である、請求項１２〜１６の何れか１項に記載の方法。
【請求項１９】
石灰化剤が、安定化非晶質リン酸カルシウム（ＡＣＰ）及び／又は非晶質フッ化リン酸カルシウム（ＡＣＦＰ）である、請求項１２〜１８の何れか１項に記載の方法。
【請求項２０】
石灰化剤が、カゼインホスホペプチド安定化非晶質リン酸カルシウム（ＡＣＰ）及び／又は非晶質フッ化リン酸カルシウム（ＡＣＦＰ）である、請求項１９に記載の方法。
【請求項２１】
表層下の歯の表面が、家畜、伴侶動物又は動物園の動物の歯の表面である、請求項１２〜２０の何れか１項に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、歯の表面、特に、歯のエナメル質の石灰化を含む用途のための組成物に関する。また、歯の齲蝕、歯の腐食及びフッ素症を含む様々な様態に起因する歯のエナメル質における低石灰化病変（表層下病変を含む）を石灰化する方法も提供する。
【０００２】
関連出願の相互参照
本出願は、豪州仮特許出願第２０１４９０５２８１号の優先権を主張し、その開示の全体が参照により本明細書に組み込まれる。
【背景技術】
【０００３】
低石灰化病変の一般的な原因は、齲蝕及びフッ素症である。
【０００４】
歯の齲蝕は、通常歯垢の歯科病原性細菌による食事性糖質の発酵による歯の硬組織の脱灰から生じる。歯の齲蝕は、依然として重大な公衆衛生上の問題である。さらに、再生した歯の表面は、再生部分の縁の周りがさらなる歯の齲蝕に冒される可能性がある。多くの先進国でフルオリドの使用によって歯の齲蝕の罹患率が低下しているにもかからわず、この疾患は依然として重大な公衆衛生上の問題である。歯の浸食又は腐食は、食事の酸又は逆流した酸による歯の石灰質の喪失である。歯の過敏症は、保護された石灰化層のセメント質の喪失による象牙質細管の露出による。歯の歯石は、歯の表面上でのリン酸カルシウムの石灰分の望ましくない付着物である。このように、全てのこれらの病態、歯の齲蝕、歯の浸食、歯の過敏症及び歯の歯石は、リン酸カルシウム量の不均衡に関係している。
【０００５】
エナメル質フッ素症（斑紋）は、１世紀近くの間確認されていたが、フルオリドの病原学的役割は、１９４２年まで確認されていなかった。フッ素症の特徴的な外観は、他のエナメル質の障害とは区別可能である。エナメル質のフッ素病変（ＦＬＥ）の臨床的特徴は、周波条に続く細い不透明な線から白亜の白色エナメル質までの範囲の連続体を表す。フッ素病変における比較的高石灰質のエナメル質外表面及び低石灰化した表層下の存在は、初期のエナメル質の「白斑」齲蝕病変を刺激する。重症度が増すにつれ、病変に関与するエナメル質の深度と低石灰化の程度の両方が増大する。フッ素症の発症は、フルオリド曝露の用量、期間及び時期に大きく依存し、血清フルオリド濃度の上昇に関連していると考えられている。また、白亜の「白斑」病変は、抗生剤での治療後又は発熱後に小児の発達過程の歯に形成され得る。このような病変は、歯のエナメル質の低石灰化（即ち、石灰化があまりにも少ない）領域を示す。
【０００６】
病変の重症度に応じて、フッ素症は、外側のエナメル質の置き換え再生又は微小摩耗により臨床的に管理されている。これらの治療は、歯の組織の再生及び除去を伴うため満足できるものではない。望まれていることは、低石灰化したエナメル質を石灰化し、自然な外観及び構造を作り出す治療である。
【０００７】
カゼインホスホペプチド及び非晶質リン酸カルシウムの特定の複合体（「ＣＰＰ−ＡＣＰ」、Ｒｅｃａｌｄｅｎｔ（登録商標）として市販されているもの）がエナメル質の表層下病変をｉｎ  ｖｉｔｒｏ及びｉｎ  ｓｉｔｕで再石灰化することが示されている（Ｒｅｙｎｏｌｄｓ，  １９９８；  Ｓｈｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，  ２００１；  Ｒｅｙｎｏｌｄｓ  ｅｔ  ａｌ．，  ２００３）。
【０００８】
メルボルン大学の名前のＷＯ９８／４０４０６（その内容は参照により完全に本明細書に組み込まれる）に、アルカリ性のｐＨで製造されるカゼインホスホペプチド−非晶質リン酸カルシウム複合体（ＣＰＰ−ＡＣＰ）及びＣＰＰ−安定化非晶質フッ化リン酸カルシウム複合体（ＣＰＰ−ＡＣＦＰ）が記載されている。このような複合体は、動物及びヒトのｉｎ  ｓｉｔｕ齲蝕モデルでエナメル質の表層下病変のエナメル質の脱灰を防ぎ、再石灰化を促進することが示されている（Ｒｅｙｎｏｌｄｓ，１９９８）。また、改良されたカゼインホスホペプチド−非晶質リン酸カルシウム複合体（ＣＰＰ−ＡＣＰ）及びＣＰＰ−安定化非晶質フッ化リン酸カルシウム複合体（ＣＰＰ−ＡＣＦＰ）が、５〜６．５のｐＨで形成する好ましい複合体を含めて、ＷＯ２００６／０５６０１３及びＷＯ２００６／１３５９８２に記載されている。
【０００９】
複合体形成時に活性があるＣＰＰは、完全長カゼインタンパク質の一部であるか否かにかかわらず活性がある。完全長カゼインのトリプシン消化後に単離することができる活性型（ＣＰＰ）の例は、米国特許第５，０１５，６２８号で特定されており、ペプチドのＢｏｓ  αｓ１−カゼインＸ−５Ｐ（ｆ５９−７９）、Ｂｏｓ  β−カゼインＸ−４Ｐ（ｆ１−２５）、Ｂｏｓ  αｓ２−カゼインＸ−４Ｐ（ｆ４６−７０）及びＢｏｓ  αｓ２−カゼインＸ−４Ｐ（ｆ１−２１）が挙げられる。
【００１０】
ＷＯ２０１０／０６８３５９には、リン酸カルシウム粒子を少なくとも１種の糖アルコール及び／又は少なくとも１種のグリセロリン酸化合物で処理することが記載されている。
【００１１】
低石灰化病変のための改良した治療法又は別の治療法を提供する必要がある。
【００１２】
明細書における任意の先行技術の言及は、当該先行技術が豪州又はその他の区域の共通の一般的な知識の一部を形成するか或いは当該先行技術が、当業者により関連があると確認され、理解され、みなされると合理的に期待され得ることの承認又は示唆のいかなる形態でもなく、そのようなものとして捉えるべきではない。
【発明の概要】
【００１３】
ある形態では、本発明は、歯の表面又は表層下をモノフルオロリン酸カルシウム及び石灰化剤と接触させることを含む歯の表面又は表層下を石灰化する方法を提供する。
【００１４】
モノフルオロリン酸カルシウム（本明細書ではＣａＭＦＰ又はＣａＦＰＯ３０ともいう）は、以下に概説される量で存在し得るか、又は提供され得る。例えば、モノフルオロリン酸カルシウムは、約２００ｐｐｍ〜５０００ｐｐｍＦで本発明の組成物に存在し得るか或いは本発明の方法で用いられ得る。さらに以下で説明するように、フルオリド含有量はｐｐｍで表すのが一般的である（各ＣａＭＦＰは１つのフルオリドを有するので、同じ測定が適切である。）。好ましい実施形態では、モノフルオロリン酸カルシウムは、約２００ｐｐｍ〜約３０００ｐｐｍＦ、４００ｐｐｍ〜約１５００ｐｐｍＦ、又は約１０００ｐｐｍ〜１４５０ｐｐｍＦの量で存在する。さらに好ましい実施形態では、モノフルオロリン酸カルシウムは、約５００、９００、１０００、１１００、１２００、１３００、１４００又は１５００ｐｐｍＦを上回る量で存在する。
【００１５】
好ましくは、石灰化剤は、安定化非晶質リン酸カルシウム（ＡＣＰ）及び／又は非晶質フッ化リン酸カルシウム（ＡＣＦＰ）である。歯の表面は、好ましくは、歯のエナメル質である。ある実施形態では、歯の表層下には、齲蝕、歯の浸食又はフッ素症に起因する病変のようなエナメル質内の病変がある。
【００１６】
ＡＣＰ及びＡＣＦＰは、治療濃度で沈殿し得るので、好ましくは、ＡＣＰ及び／又はＡＣＦＰは、ホスホペプチド（ＰＰ）で安定化される。好ましくは、ホスホペプチド（以下で定義される）は、カゼインホスホペプチドである。好ましくは、ＡＣＰ又はＡＣＦＰは、カゼインホスホペプチド安定化ＡＣＰ又はＡＣＦＰ複合体の形態である。
【００１７】
好ましい実施形態では、ホスホペプチド安定化非晶質リン酸カルシウム（ＡＣＰ）又は非晶質フッ化リン酸カルシウム（ＡＣＦＰ）複合体は、強く結合したカルシウム及び弱く結合したカルシウムを有し、ｐＨ７．０で形成したＡＣＰ又はＡＣＦＰ複合体においては、強く結合したカルシウムよりも複合体中で弱く結合したカルシウムの方が少ない。場合によっては、ＡＣＰ又はＡＣＦＰは、主に、塩基型である。
【００１８】
好ましい実施形態では、安定化ＡＣＰ又はＡＣＦＰ複合体のカルシウムイオン含有量は、ＰＰ１モルあたり約３０〜１００モルのカルシウムの範囲内である。より好ましくは、カルシウムイオン含有量は、ＰＰ１モルあたり約３０〜約５０モルのカルシウムの範囲内である。
【００１９】
本明細書に記載の任意の形態又は実施形態では、安定化ＡＣＰ及び／又はＡＣＦＰは、追加のカルシウム塩（例えば、乳酸塩、炭酸塩、リン酸塩、塩化物等）を伴う製剤であってもよい。通常、製剤は、少なくとも等重量の溶解性リン酸カルシウムと共にＰＰ安定化ＡＣＰ及び／又はＡＣＦＰ複合体を含む。
【００２０】
好ましくは、ＡＣＰの相は、主に塩基性相であり、ＡＣＰは、主に、Ｃａ２＋、ＰＯ４３−及びＯＨ−の種を含む。ＡＣＰの塩基性相は、一般式［Ｃａ３（ＰＯ４）２］ｘ［Ｃａ２（ＰＯ４）（ＯＨ）］（式中、ｘ≧１）を有し得る。好ましくは、ｘ＝１〜５である。より好ましくは、ｘ＝１である。好ましくは、式の２つの成分は、等しい割合で存在する。したがって、ある実施形態では、ＡＣＰの塩基性相は、式Ｃａ３（ＰＯ４）２Ｃａ２（ＰＯ４）（ＯＨ）を有する。
【００２１】
好ましくは、ＡＣＦＰの相は、主に塩基性相であり、ＡＣＦＰは、主に、Ｃａ２＋、ＰＯ４３−及びＦ−の種を含む。ＡＣＦＰの塩基性相は、一般式［Ｃａ３（ＰＯ４）２］ｘ［Ｃａ２（ＰＯ４）Ｆ］ｙ（式中、ｙ＝１の場合でｘ≧１又はｘ＝１の場合でｙ≧１）を有し得る。好ましくは、ｙ＝１且つｘ＝１〜３である。より好ましくは、ｙ＝１且つｘ＝１である。好ましくは、式の２つの成分は、等しい割合で存在する。したがって、ある実施形態では、ＡＣＦＰの塩基性相は、式Ｃａ３（ＰＯ４）２Ｃａ２（ＰＯ４）Ｆを有する。
【００２２】
ある実施形態では、ＡＣＰ複合体は、基本的に、ホスホペプチド、カルシウム、リン酸及び水酸化物イオン並びに水からなる。
【００２３】
ある実施形態では、ＡＣＦＰ複合体は、基本的に、ホスホペプチド、カルシウム、リン酸、フッ化物及び水酸化物イオン並びに水からなる。
【００２４】
本発明のさらなる形態では、モノフルオロリン酸カルシウム及びＡＣＰ又はＡＣＦＰの供給源の提供を含む歯の表面を石灰化する方法を提供する。好ましい実施形態では、歯の表面は、エナメル質である。
【００２５】
本発明のさらなる形態では、歯のエナメル質におけるフッ素病変をモノフルオロリン酸カルシウム及び安定化ＡＣＰ及び／又はＡＣＦＰと接触させることを含むフッ素症の治療方法を提供する。
【００２６】
本発明のさらなる形態では、歯のエナメル質における齲蝕病変をモノフルオロリン酸カルシウム及び安定化ＡＣＰ及び／又はＡＣＦＰと接触させることを含む歯の齲蝕の治療方法を提供する。
【００２７】
本発明のさらなる形態では、浸食に起因する歯のエナメル質における病変をモノフルオロリン酸カルシウム及び安定化ＡＣＰ及び／又はＡＣＦＰと接触させることを含む歯の浸食の治療方法を提供する。
【００２８】
本発明のさらなる形態では、白斑病変をモノフルオロリン酸カルシウム及び安定化ＡＣＰ及び／又はＡＣＦＰと接触させることを含む歯のエナメル質上の白斑病変を低減する方法を提供する。
【００２９】
本発明のさらなる形態では、病変をモノフルオロリン酸カルシウム及び安定化ＡＣＰ及び／又はＡＣＦＰと接触させることを含む歯のエナメル質における病変を再石灰化する方法を提供する。
【００３０】
本発明のさらなる形態では：
病変をモノフルオロリン酸カルシウム及びＡＣＰ又はＡＣＦＰの供給源と接触させること；及び
溶液のｐＨを上昇又は維持する能力がある組成物を投与すること
を含む歯のエナメル質における病変を再石灰化する方法を提供する。
【００３１】
好ましくは、溶液のｐＨを上昇又は維持する能力がある組成物は、炭酸水素ナトリウム又は尿素を含む。好ましくは、組成物は、マウスリンス又はマウスウォッシュである。
【００３２】
ある実施形態では、溶液のｐＨを上昇又は維持する能力がある化合物は、ＮａＯＣｌではない。即ち、本発明の組成物はＮａＯＣｌを含まない。
【００３３】
本明細書に記載の本発明の任意の形態又は実施形態では、溶液のｐＨを上昇又は維持する能力がある化合物は、前処理又は後処理として、安定化ＡＣＰ又はＡＣＦＰの供給源及びモノフルオロリン酸カルシウムと同時に投与される。
【００３４】
本明細書に記載の本発明の任意の形態又は実施形態では、ＡＣＰ及び／又はＡＣＦＰは、ホスホペプチド（ＰＰ）で安定化される。好ましくは、ホスホペプチド（下記で定義される）は、カゼインホスホペプチドである。好ましくは、ＡＣＰ又はＡＣＦＰは、カゼインホスホペプチド安定化ＡＣＰ又はＡＣＦＰ複合体の形態である。
【００３５】
他の形態では、安定化非晶質リン酸カルシウム（ＡＣＰ）及び／又は非晶質フッ化リン酸カルシウム（ＡＣＦＰ）及びモノフルオロリン酸カルシウムを含む組成物を提供する。好ましくは、組成物は、さらに、本明細書に記載の溶液のｐＨを上昇又は維持する化合物を含む。
【００３６】
安定化ＡＣＰ及び／又はＡＣＦＰ及び／又はモノフルオロリン酸カルシウムは、約１分〜２時間、又は５分〜６０分間又は約１０分間、歯の表面と接触させてもよい。安定化ＡＣＰ及び／又はＡＣＦＰは、１日〜数か月にわたって歯の表面に繰り返し塗布してもよい。
【００３７】
ある実施形態では、歯の表面を安定化ＡＣＰ及び／又はＡＣＦＰと接触させる１〜６０分前又は１〜３０分前又は１〜５分前に、モノフルオロリン酸カルシウムを歯の表面と接触させる。
【００３８】
ある実施形態では、歯の表面を安定化ＡＣＰ及び／又はＡＣＦＰと接触させた１〜６０分後又は１〜３０分後又は１〜５分後に、モノフルオロリン酸カルシウムを歯の表面と接触させる。
【００３９】
本発明のさらなる形態では、安定化ＡＣＰ及び／又はＡＣＦＰ複合体及びモノフルオロリン酸カルシウムを歯の表面に塗布することを含む歯の表面を石灰化する方法を提供する。好ましくは、歯の表面は、歯のエナメル質又は象牙質である。通常、歯の表面は、白斑病変；フッ素病変；齲蝕病変；又は歯の浸食に起因する病変のうち１以上からなる群から選ばれる病変を含む歯のエナメル質である。好ましくは、安定化ＡＣＰ及び／又はＡＣＦＰ複合体及びモノフルオロリン酸カルシウムは、歯の表面に塗布する同じ組成物に含まれる。
【００４０】
また、本発明は、歯の表面又は表層下をモノフルオロリン酸、カルシウム源及び石灰化剤を含む化合物と接触させることを含む歯の表面又は表層下を石灰化する方法であって、モノフルオロリン酸及びカルシウム源を含む化合物が、モノフルオロリン酸カルシウムの形成を可能にする条件下で口腔に提供される方法を提供する。好ましくは、モノフルオロリン酸を含む化合物が、本明細書に記載の通りであり、さらに好ましくは、モノフルオロリン酸を含む化合物が、モノフルオロリン酸二ナトリウムである。好ましくは、カルシウム源が、本明細書に記載の通りであり、さらに好ましくは、カルシウム源が、塩化カルシウムである。
【００４１】
また、本発明は、歯の表面又は表層下への接触前にモノフルオロリン酸カルシウム及び石灰化剤を含む歯の表面又は表層下に接触させる組成物を提供することを含む歯の表面又は表層下を石灰化する方法を提供する。言い換えれば、モノフルオロリン酸カルシウムは、組成物が歯の表面又は表層下に接触する前或いは口腔への投与前に組成物中に存在する。好ましくは、石灰化剤が、ＣＰＰ−ＡＣＰ及び／又はＣＰＰ−ＡＣＦＰのようなホスホペプチド安定化ＡＣＰ及び／又はＡＣＦＰである。
【００４２】
本発明の任意の方法又は組成物では、
約５．０〜約７．０のｐＨでモノフルオロリン酸源とカルシウム源を混合する工程、
その結果、モノフルオロリン酸カルシウムを形成させる工程
を含む方法でモノフルオロリン酸カルシウムを形成させることができる。
【００４３】
好ましくは、モノフルオロリン酸源は、本明細書に記載の通りであり、より好ましくは、モノフルオロリン酸源が、モノフルオロリン酸二ナトリウムである。好ましくは、カルシウム源が、本明細書に記載の通りであり、より好ましくは、カルシウム源が、塩化カルシウムである。通常、ｐＨは約７．０である。
【００４４】
モノフルオロリン酸源及びカルシウム源は、およそ等量で混合することができる。例えば、１ｇあたり約８０μｍｏｌのモノフルオロリン酸二ナトリウムを、１ｇあたり８０．０μｍｏｌの塩化カルシウム（ＣａＣｌ２）と十分に混合することができる。ある実施形態では、１ｇあたり７６．３μｍｏｌのモノフルオロリン酸二ナトリウムを、１ｇあたり８０．０μｍｏｌの塩化カルシウム（ＣａＣｌ２）と十分に混合する。
【００４５】
本発明の任意の方法又は組成物では、モノフルオロリン酸カルシウムは、実施例９に記載の方法によって形成させることができる。
【００４６】
本発明の任意の方法又は組成物では、ＡＣＰ又はＡＣＦＰは、ＣＰＰにより安定化される。好ましくは、ＣＰＰ−ＡＣＰ複合体が、基本的に、ホスホペプチド、カルシウム、リン酸及び水酸化物イオン並びに水からなる。好ましくは、ＣＰＰ−ＡＣＦＰ複合体が、基本的に、ホスホペプチド、カルシウム、リン酸、フッ化物及び水酸化物イオン並びに水からなる。
【００４７】
任意の実施形態では、歯の表面は、そのような治療を必要とする。したがって、本発明は、本明細書に記載の任意の方法の工程に加えて、フッ素症、歯の齲蝕、象牙質過敏症又は歯の歯石を患う対象、白斑病変；フッ素病変；齲蝕病変；又は歯の浸食に起因する病変を特定する工程を含む。
【００４８】
本発明は、モノフルオロリン酸カルシウム及び安定化非晶質リン酸カルシウム（ＡＣＰ）及び／又は非晶質フッ化リン酸カルシウム（ＡＣＦＰ）を含む歯の表面又は表層下を石灰化するための組成物を提供する。
【００４９】
本発明は、歯の表面又は表層下の石灰化に使用するためのモノフルオロリン酸カルシウム及び安定化非晶質リン酸カルシウム（ＡＣＰ）及び／又は非晶質フッ化リン酸カルシウム（ＡＣＦＰ）を含む組成物を提供する。
【００５０】
さらなる形態では、モノフルオロリン酸カルシウムを対象の歯に投与し、続いてＡＣＰ又はＡＣＦＰ複合体又は組成物を投与する工程を含む、歯の齲蝕、齲歯、歯の浸食及びフッ素症のそれぞれのうち１以上の治療又は予防方法を提供する。複合体の局所投与が好ましい。好ましくは、方法は、本明細書に記載の製剤における複合体の投与を含む。
【００５１】
さらなる形態では、歯の齲蝕、齲歯、歯の浸食及びフッ素症のうち１以上の治療及び／又は予防のための組成物の製造におけるモノフルオロリン酸カルシウム及び安定化非晶質リン酸カルシウム（ＡＣＰ）又は非晶質フッ化リン酸カルシウム（ＡＣＦＰ）の使用を提供する。
【００５２】
さらなる形態では、歯の表面又は表層下を石灰化するための、モノフルオロリン酸カルシウム及び安定化非晶質リン酸カルシウム（ＡＣＰ）又は非晶質フッ化リン酸カルシウム（ＡＣＦＰ）を活性剤として含む組成物を提供する。通常、歯の表面又は表層下の石灰化は、歯の齲蝕、齲歯、歯の浸食及びフッ素症のうち１以上の治療及び／又は予防のためである。
【００５３】
さらなる形態では或いは上記の本発明の任意の方法又は使用では、さらに、遊離フッ化物イオン源を塗布する工程が提供される。遊離フッ化物イオン源は、モノフルオロリン酸カルシウム及びＡＣＰ又はＡＣＦＰの供給源と同時に塗布してもよい。或いは、遊離フッ化物イオン源は、モノフルオロリン酸カルシウム又はＡＣＰ又はＡＣＦＰの供給源の前又は後に塗布してもよい。代表的な遊離フッ化物イオン源としては、フッ化ナトリウム、フッ化第一スズ及びアミンフッ化物が挙げられる。いかなる理論にも束縛されることなく、これらの遊離フッ化物イオンは、ＡＣＰ又はＡＣＦＰと相互作用し、歯の表面と接触して、通常の歯のエナメル質よりも酸の攻撃に対して耐性があり得るフルオロアパタイトを形成し得る。
【００５４】
また、本発明は、モノフルオロリン酸カルシウム及び石灰化剤を含む組成物を提供する。好ましくは、石灰化剤は、安定化非晶質リン酸カルシウム（ＡＣＰ）又は非晶質フッ化リン酸カルシウム（ＡＣＦＰ）である。好ましくは、組成物は、さらに、医薬上許容される担体、希釈剤又は賦形剤を含む。
【００５５】
好ましい実施形態では、組成物中のホスホペプチド安定化非晶質リン酸カルシウム（ＡＣＰ）又は非晶質フッ化リン酸カルシウム（ＡＣＦＰ）複合体は、強く結合したカルシウム及び弱く結合したカルシウムを有し、７．０のｐＨで形成したＡＣＰ又はＡＣＦＰ複合体においては、強く結合したカルシウムよりも複合体中で結合したカルシウムの方が少ない。場合によっては、ＡＣＰ又はＡＣＦＰは、主に、塩基型である。
【００５６】
他の好ましい実施形態では、組成中の安定化ＡＣＰ又はＡＣＦＰ複合体のカルシウムイオン含有量は、ＰＰ１モルあたり約３０〜１００モルのカルシウムの範囲内である。より好ましくは、カルシウムイオン含有量は、ＰＰ１モルあたり約３０〜約５０モルのカルシウムの範囲内である。
【００５７】
任意の実施形態では、組成物中のＡＣＰ及び／又はＡＣＦＰは、カゼインホスホペプチド安定化ＡＣＰ及び／又はＡＣＦＰ複合体の形態であり得る。
【００５８】
また、本発明は、医薬上許容される担体中の（ａ）モノフルオロリン酸カルシウム、及び（ｂ）安定化ＡＣＰ及び／又は安定化ＡＣＦＰ複合体を含む、歯の齲蝕、フッ素症及び歯の浸食のうち１以上の治療又は予防のためのキットに関する。望ましく、キットは、さらに、上記の治療を必要とする患者の歯の表面の石灰化のためのそれらの使用のための説明書を含む。説明書は、歯の齲蝕、齲歯、歯の浸食及びフッ素症のそれぞれのうちの１以上の治療又は予防のためのキットの使用を説明する。ある実施形態では、薬剤及び複合体は、患者の治療に適した量で存在する。好ましくは、安定化ＡＣＰ及び／又はＡＣＦＰは、ホスホペプチド（ＰＰ）で安定化される。好ましくは、ホスホペプチド（下記で定義される）は、カゼインホスホペプチドである。好ましくは、ＡＣＰ又はＡＣＦＰは、カゼインホスホペプチド安定化ＡＣＰ又はＡＣＦＰ複合体の形態である。
【００５９】
本発明の組成物又はキットは、さらに、遊離フッ化物イオン源を含み得る。遊離フッ化物イオンは、任意の適切な供給源に由来し得る。遊離フッ化物イオン源は、遊離フッ化物イオン又はフッ化物塩を含み得る。フッ化物イオン源の例としては、以下のものが挙げられるが、これらに限定されない：フッ化ナトリウム、フッ化第一スズ、ケイフッ化ナトリウム、フッ化銀、アミンフッ化物又は任意の金属イオンフッ化物塩。フッ化物イオン源は、ヒポフルオライトであってもよい。これらのフッ化物イオン源は、溶液（通常、水溶液）又は懸濁液で提供され得る。
【図面の簡単な説明】
【００６０】
【図１】実施例１０に記載の臨床試験で用いられる実施例８に記載の通りに準備した器具。
【図２】フッ化ナトリウム（ＮａＦ）によるｉｎ  ｓｉｔｕでのエナメル質表層下病変の再石灰化を、ＣＰＰ−ＡＣＰを伴う及び伴わないモノフルオロリン酸カルシウム（ＣａＭＦＰ）と比較した。上部の器具の結果を左側の列に示し、下部の器具の結果を右側の列に示した。モノフルオロリン酸カルシウムを含む組成物は、フッ化ナトリウムを含むものよりも統計的に有意に大きい再石灰化をもたらした。＊反復測定分散分析による統計分析及び有意水準はｐ＜０．０５であった。
【００６１】
（発明の詳細な説明）
本発明のさらなる形態及び前段落に記載の形態のさらなる実施形態は、添付の図面を参照して、例として示された以下の説明から明らかになるだろう。本明細書に開示及び定義された本発明は、本文又は図面から明らか又は言及された個々の特徴のうち２以上の全ての代替的な組み合わせにまで及ぶと理解されるだろう。これらの異なる組み合わせの全ては、本発明の様々な代替的形態を構成する。
【００６２】
ここで、本発明のある実施形態を詳細に説明する。本発明を実施形態と共に説明するが、本発明をそれらの実施形態に限定するものではないと理解されるだろう。それどころか、本発明は、特許請求の範囲に定義の本発明の範囲内に含まれ得る全ての代替物、改変物及び均等物を包含することを意図している。
【００６３】
当業者は、本発明の実施に用いることができる本明細書に記載のものと同様又は同等の多くの方法及び材料を認識するだろう。本発明は、記載の方法及び材料に決して限定されない。本明細書で言及する全ての特許及び刊行物は、それらの全体が参照により組み込まれる。
【００６４】
本明細書の解釈のために、単数形で用いられる用語は複数形も含み、その逆もまた同様である。本明細書で用いられる、文脈上他の意味に解すべき場合を除き、用語「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅ）」、並びに「含むこと（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ）」及び「含まれ（ｃｏｍｐｒｉｓｅｄ）」のような用語の変形は、さらなる添加剤、成分、整数又は工程を排除することを意図しない。本明細書で用いられる「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅ）」及び「含む（ｉｎｃｌｕｄｅ）」は、文脈上他の意味に解すべき場合を除き、互換的に使用され得る。
【００６５】
本発明は、歯の表面又は表層下とモノフルオロリン酸カルシウム及び石灰化剤を接触させることを含む歯の表面又は表層下を石灰化する方法を提供する。歯の表層下は、通常、歯の表面に接触した化合物及び石灰化剤が任意の表面層（即ちペリクル及び／又はプラーク）を介して（多孔質の歯の表面を介して）石灰化を必要とする領域に移動するような低石灰化病変である。好ましくは、石灰化剤は、安定化非晶質リン酸カルシウム（ＡＣＰ）及び／又は非晶質フッ化リン酸カルシウム（ＡＣＦＰ）である。歯の表面は、好ましくは、歯のエナメル質である。歯の表面は、齲蝕、歯の浸食又はフッ素症に起因する病変のようなエナメル質における病変であり得る。
【００６６】
明示的に別段示していない限り、本明細書中でモノフルオロリン酸カルシウムを言及する場合には、モノフルオロリン酸及びカルシウムを含むか、或いは水溶液にさらした場合にモノフルオロリン酸カルシウムを生成し得る化合物又は組成物も含む。言い換えれば、本発明の任意の方法又は任意の組成物では、モノフルオロリン酸源又は化合物（例えばモノフルオロリン酸二ナトリウム）、及びカルシウム源又は化合物（例えば塩化カルシウム）により、口腔への投与前にモノフルオロリン酸カルシウムを形成させてもよいし、或いは口腔内でモノフルオロリン酸カルシウムを形成させてもよい。モノフルオロリン酸カルシウムを提供するか又は形成させる好ましい化合物は、モノフルオロリン酸ナトリウム及びカルシウム源（例えば、カルシウム塩）を含む。以下に記載され及び実施例に記載された量及びｐＨのような適切な条件にさらした場合に、モノフルオロリン酸ナトリウム及びカルシウム源（例えば、カルシウム塩）が、モノフルオロリン酸カルシウムを形成し得る。ＡＣＰはすでに安定化された形態にあるのでＣＰＰ−ＡＣＰ及びモノフルオロリン酸ナトリウムを加えてもモノフルオロリン酸カルシウムは簡単に形成し得ない。さらに、リン酸三カルシウム、二水和リン酸カルシウム、無水リン酸二カルシウム又はピロリン酸カルシウムのような一般的に練り歯磨きに見られる水不溶性研磨材と混合したモノフルオロリン酸ナトリウムからはモノフルオロリン酸カルシウムは形成し得ない。さらに、例えば、モノフルオロリン酸ナトリウム又は任意のその他のモノフルオロリン酸塩含有化合物は口腔内に存在するが、口腔内に十分なカルシウム、ましてや生物学的に利用可能な形態のカルシウムは存在せず、治療有効量のモノフルオロリン酸カルシウムは生成しない。口腔内にはいくらかのカルシウムが存在するが、これは、本明細書に記載されているような治療有効量のモノフルオロリン酸カルシウムを形成するのに必要とされるカルシウムのほんの一部にすぎない。
【００６７】
本発明では、意外なことに、エナメル質の再石灰化を促進する上で中性イオン対のＣａＦＰＯ３０はＦ−よりも優れていることが確認されている。遊離フッ化物イオンが表層下病変の表面の再石灰化のために必要であるとこれまで考えられてきたが、モノフルオロリン酸塩、特に、モノフルオロリン酸カルシウムは遊離フッ化物イオンを遊離しないと考えられていたため、これは予想外のことであった。したがって、モノフルオロリン酸塩は、特にホスホペプチド安定化ＡＣＰ及び／又はＡＣＦＰと共に、表面又は表層下の病変の再石灰化に用いるのに適した化合物ではないと考えられていた。いかなる理論又は作用機構にも束縛されることなく、モノフルオロリン酸は、カルシウムイオンと中性イオン対を形成し（Ｃａ２＋＋ＦＰＯ３２−←→ＣａＦＰＯ３０）、この中性イオン対が、表面又は表層下の病変でのフルオロアパタイトの生成を促進すると考えられている。モノフルオロリン酸カルシウムは、モノフルオロリン酸ナトリウムとは異なり病変の外側の口腔内で容易には加水分解されない。モノフルオロリン酸ナトリウムは解離して陰イオン（例えば、ＰＦＯ３２−又はＨＰＦＯ３１−）を形成し、陰イオンはエナメル質／プラークの帯電表面に引き寄せられ／反発するため、病変にそれらが入ることを制限する一方で、モノフルオロリン酸カルシウムは中性イオンとして維持され、その結果より容易に病変に入るためこれは有利である。中性イオン対ＣａＦＰＯ３０は、濃度勾配的に表層下のエナメル質病変に拡散し、カルシウム、フッ化物及びリン酸イオンをもたらすことにより再石灰化することが可能である。ＣａＦＰＯ３０は、Ｃａ、Ｆ及びリン酸をもたらす一方で、その他の中性イオン対がカルシウム及びリン酸イオンのみをもたらすため、中性イオン対ＣａＨＰＯ４０よりも優れている。
【００６８】
発明の分野において、組成物中のフルオリドの量は、通常、百万分率（ｐｐｍ）で表される。したがって、当該分野の当業者は、モノフルオロリン酸塩のようなフルオリド含有化合物により放出されたフルオリドのｐｐｍによってフルオリド含有量に言及する。生理学的に重要なのは、生物学的に利用可能なフルオリド、即ち、フルオリドの含有量及び放出量である。本発明の任意の形態では、モノフルオロリン酸カルシウムは、以下に概説される量で存在する。例えば、約２００ｐｐｍ〜５０００ｐｐｍＦのモノフルオロリン酸カルシウムが本発明の組成物に存在する又は本発明の方法で用いられ得る。好ましい実施形態では、モノフルオロリン酸カルシウムは、約２００ｐｐｍ〜約３０００ｐｐｍＦ、４００ｐｐｍ〜約１５００ｐｐｍＦ、又は約１０００ｐｐｍ〜１４５０ｐｐｍＦの量で存在する。さらに好ましい実施形態では、モノフルオロリン酸カルシウムは、約５００、９００、１０００、１１００、１２００、１３００、１４００又は１５００ｐｐｍＦを上回る量で存在する。
【００６９】
本発明の任意の組成物又は方法では、モノフルオロリン酸カルシウムは、約１ｍＭ、５ｍＭ、１０ｍＭ、２０ｍＭ、４０ｍＭ、５０ｍＭ、６０ｍＭ又は７０ｍＭを上回って存在する。好ましくは、モノフルオロリン酸カルシウムは、約１ｍＭ、５ｍＭ、１０ｍＭ、２０ｍＭ、４０ｍＭ、５０ｍＭ、６０ｍＭ、７０ｍＭ又は７５ｍＭ存在する。
【００７０】
本発明の任意の組成物又は方法は、モノフルオロリン酸カルシウムが存在しない場合と比較して、歯の表面又は表層下に接触した場合に臨床的に観察可能な量の再石灰化をもたらす量のモノフルオロリン酸カルシウムを含む。
【００７１】
本明細書に記載の本発明の任意の形態では、モノフルオロリン酸をもたらす化合物の言及には、モノフルオロリン酸カルシウムが含まれる。
【００７２】
現在の明細書に記載の安定化ＡＣＰ又はＡＣＦＰ複合体は、「閉鎖」複合体であり、「Ｃｒｏｓｓ  ｅｔ  ａｌ．，２００７」の図２に示されている。ｐＨ７で製造されたＣＰＰ−ＡＣＰ複合体は「開鎖」であり、その一方で水酸化物イオンの連続添加で製造されたＣＰＰ−ＡＣＰは「閉鎖」複合体であるということがＣｒｏｓｓらによって示されている。完全に異なる構造を有し、塩基性リン酸カルシウム相を含有するため、この「閉鎖」複合体は「開鎖」複合体とは大きく異なる。臨床的に、実質的に向上した作用を有し、より多くのリン酸カルシウムを歯に送ることが示されている。
【００７３】
本発明で言及する安定化ＡＣＰ又はＡＣＦＰ複合体には、ＷＯ２００６／０５６０１３（その内容は参照により組み込まれる）に記載されているような安定化ＡＣＰ又はＡＣＦＰ複合体が含まれる。
【００７４】
好ましい実施形態では、ホスホペプチド安定化非晶質リン酸カルシウム（ＡＣＰ）又は非晶質フッ化リン酸カルシウム（ＡＣＦＰ）複合体は、強く結合したカルシウム及び弱く結合したカルシウムを有し、ｐＨ７．０で形成したＡＣＰ又はＡＣＦＰ複合体においては、強く結合したカルシウムよりも複合体中で結合したカルシウムの方が少ない。場合によって、ＡＣＰ又はＡＣＦＰは、主に、塩基型である。
【００７５】
本明細書で言及される安定化ＡＣＰ又はＡＣＦＰ複合体は、７．０未満のｐＨで形成した安定化ＡＣＰ又はＡＣＦＰ複合体を含む。好ましくは、複合体は、約５．０以上７．０未満の範囲のｐＨで形成する。より好ましくは、複合体は、約５．０〜約６．０のｐＨ範囲で形成する。好ましい実施形態では、複合体は、約５．０又は約５．５のｐＨで形成する。好ましくは、複合体中のＡＣＰ又はＡＣＦＰは、主に、塩基型である。
【００７６】
安定化ＡＣＰは、
（ｉ）  少なくとも１種のホスホペプチドを含む溶液を得る工程及び；
（ｉｉ）  ｐＨを約７．０以下に維持しながら、カルシウムイオン、リン酸イオン及び水酸化物イオンを含む溶液を混合する工程
を含む方法により製造することができる。
【００７７】
安定化ＡＣＦＰは、
（ｉ）  少なくとも１種のホスホペプチドを含む溶液を得る工程及び；
（ｉｉ）  ｐＨを約７．０以下に維持しながら、カルシウムイオン、リン酸イオン、水酸化物イオン及びフッ化物イオンを含む溶液を混合する工程
を含む方法により製造することができる。
【００７８】
水酸化物イオンは、ホスホペプチド溶液を基本的に一定のｐＨに維持するための溶液中に滴定することができる。カルシウム及びリン酸イオンは、ホスホペプチド溶液中のリン酸カルシウム析出物形成を回避する速度で、一定の混合でホスホペプチド溶液に滴定することができる。
【００７９】
また、本明細書で用いられる、ホスホペプチド安定化非晶質リン酸カルシウム（ＡＣＰ）又は非晶質フッ化リン酸カルシウム（ＡＣＦＰ）複合体は、強く結合したカルシウム及び弱く結合したカルシウムを有する複合体中のＡＣＰを含んでいてもよく、ｐＨ７．０で形成したＡＣＰ又はＡＣＦＰ複合体における強く結合したカルシウムよりも複合体中の強く結合したカルシウムの方が少なく、ＡＣＰ又はＡＣＦＰは、主に、塩基型であり：
ａ）  カルシウムイオンを含む第一の溶液、リン酸イオンを含む第二の溶液、及び場合によってフッ化物イオンを含む第三の溶液を、約５以上７未満のｐＨのホスホペプチド及び溶媒を含む溶液に混合すること；及び
ｂ）  水酸化物イオンを加えて混合する間、溶液のｐＨを約５．０以上７．０未満に維持すること
を含む方法で得られる又は得られたものである。
【００８０】
「強く」及び「弱く」結合したカルシウム及びリン酸は、実施例２に示されるような分析限外ろ過を用いて測定することができる。簡単にいえば、ｐＨを約７．０以下に維持しながら混合したホスホペプチド、カルシウム、リン酸及び場合によってフルオリドの溶液を、まず、０．１ミクロンのフィルターでろ過し、複合体に関連しない遊離カルシウム及びリン酸を除去することができる。この遊離カルシウム及びリン酸塩はろ液に存在し、廃棄される。いずれの方法でも複合体と結びついていない任意の遊離カルシウム又はリン酸は、生物学的に利用可能ではない、即ち、ホスホペプチドによって歯に送られない。０．１ミクロンのろ過の残余分は、さらに、１，０００ｇでの１５分間の３０００ｍｗのカットオフフィルターを通した遠心分離により分析することができる。得られたろ液は、複合体と弱く結合した又は結びついたカルシウム及びリン酸を含む。この遠心力では、複合体に強く結合していないカルシウム及びリン酸が放出され、ろ液に移る。複合体中で強く結合したＣａ及びＰｉは、残余分に保持される。次いで、残余分中の強く結合したＣａ及びＰｉの量は、０．１ミクロンろ過の残余分におけるＣａ及びＰｉの総量から、ろ液中のＣａ及びＰｉの量を差し引くことにより決定することができる。
【００８１】
本明細書で言及する安定化ＡＣＰ又はＡＣＦＰ複合体には、ＷＯ２００６／１３５９８２（その内容は参照により組み込まれる）に記載されるような安定化ＡＣＰ又はＡＣＦＰ複合体が含まれる。
【００８２】
「過充填（ｓｕｐｅｒｌｏａｄｅｄ）」ホスホペプチド又はホスホタンパク質（ＰＰ）安定化非晶質リン酸カルシウム（ＡＣＰ）又は非晶質フッ化リン酸カルシウム（ＡＣＦＰ）複合体。複合体は、任意のｐＨ（例えば３〜１０）で形成させることができる。好ましくは、ホスホペプチドは、配列−Ａ−Ｂ−Ｃ−（ここで、Ａは、ホスホアミノ酸、好ましくは、ホスホセリンであり、Ｂは、ホスホアミノ酸を含む任意のアミノ酸であり、Ｃは、グルタミン酸、アスパラギン酸又はホスホアミノ酸である。）を含む。ホスホアミノ酸は、ホスホセリンであり得る。ＰＰはカルシウム及びリン酸イオンと過充填される。カルシウムイオンは、ＰＰ１モルあたり３０〜１０００ｍｏｌの範囲のＣａ、或いはＰＰ１モルあたり３０〜１００又は３０〜５０モルの範囲のＣａであり得る。他の実施形態では、ＰＰ１ｍｏｌあたりのＣａのｍｏｌ数は、少なくとも、２５、３０、３５、４０、４５又は５０である。
【００８３】
本発明は、ＰＰ１モルあたり約３０モルのカルシウムを上回るカルシウムイオン含有量を有するホスホペプチド又はホスホタンパク質（ＰＰ）安定化非晶質リン酸カルシウム又は非晶質フッ化リン酸カルシウム複合体を含む。好ましい実施形態では、カルシウムイオン含有量は、ＰＰ１モルあたり約３０〜１００モルの範囲のカルシウムである。より好ましくは、カルシウムイオン含有量は、ＰＰ１モルあたり約３０〜約５０モルの範囲のカルシウムである。
【００８４】
また、本発明は、
（ｉ）  カルシウム、無機リン酸及びフルオリド（任意）を含む溶液を得る工程；及び
（ｉｉ）  （ｉ）とＰＰ−ＡＣＰを含む溶液を混合する工程
を含む方法により製造されるホスホペプチド又はホスホタンパク質（ＰＰ）安定化非晶質リン酸カルシウム（ＡＣＰ）又は非晶質フッ化リン酸カルシウム（ＡＣＦＰ）複合体を提供する。
【００８５】
好ましい実施形態では、ＰＰは、カゼインホスホペプチド（ＣＰＰ）である。
【００８６】
さらなる形態では、本発明は、（ａ）少なくとも等重量のリン酸カルシウムを伴うＰＰ安定化ＡＣＰ及び／又はＡＣＦＰ複合体、及び（ｂ）モノフルオロリン酸をもたらす化合物の製剤を用いることも含む。好ましくは、リン酸カルシウムは、ＣａＨＰＯ４又は乳酸カルシウム又は任意の他の溶解性リン酸カルシウム化合物である。好ましくは、リン酸カルシウム（例えば、ＣａＨＰＯ４）は、ＰＰ安定化ＡＣＰ及び／又はＡＣＦＰ複合体とドライブレンドされる。好ましい実施形態では、ＰＰ−ＡＣＰ及び／又はＰＰ−ＡＣＦＰ複合体：リン酸カルシウムの比は、約１：１〜５０、より好ましくは約１：１〜２５、より好ましくは約１：５〜１５である。ある実施形態では、ＰＰ−ＡＣＰ及び／又はＰＰ−ＡＣＦＰ複合体：リン酸カルシウムの比は、約１：１０である。
【００８７】
口腔に用いる場合にＰＰ１モルあたり約３０モルを上回るカルシウムのカルシウムイオン含有量を有するホスホペプチド又はホスホタンパク質（ＰＰ）安定化非晶質リン酸カルシウム（ＡＣＰ）及び／又は非晶質フッ化リン酸カルシウム（ＡＣＦＰ）複合体を含む口腔ケア製剤は、
（ｉ）  ＰＰ−ＡＣＰ及び／又はＰＰ−ＡＣＦＰ複合体を含む粉末を得る工程；
（ｉｉ）  有効量のリン酸カルシウム及びモノフルオロリン酸カルシウムをもたらす化合物とドライブレンドする工程；及び
（ｉｉｉ）  ドライブレンドされた混合物を口腔ケア製剤に製剤化する工程
を含む方法により製造することができる。
【００８８】
好ましくは、ドライブレンドのためのリン酸カルシウムの形態は、任意の溶解性リン酸カルシウムであり、ＣａＨＰＯ４、Ｃａ２ＨＰＯ４及び乳酸カルシウムが挙げられるが、これらに限定されない。
【００８９】
本明細書で言及される安定化ＡＣＰ又はＡＣＦＰ複合体は、メルボルン大学の名前で２０１４年１２月２４日に出願されたＰＣＴ出願ＰＣＴ／ＡＵ２０１４／０５０４４７に記載されているような第一スズが結びついた安定化非晶質リン酸カルシウム（ＡＣＰ）及び／又は非晶質フッ化リン酸カルシウム（ＡＣＦＰ）複合体も含み得る。実施例２の実験プロトコルを用いて測定されたように、第一スズは安定化非晶質リン酸カルシウム（ＡＣＰ）及び／又は非晶質フッ化リン酸カルシウム（ＡＣＦＰ）に結合し得る。ある実施形態では、第一スズが結びついた安定化非晶質リン酸カルシウム（ＡＣＰ）及び／又は非晶質フッ化リン酸カルシウム（ＡＣＦＰ）複合体は、本明細書に記載の方法（実施例１に記載の方法が挙げられるが、これらに限定されるものではない）により製造される。
【００９０】
カゼインホスホペプチドは、水性環境下で第一スズ化合物を安定化することができる。安定化非晶質リン酸カルシウム（ＡＣＰ）及び安定化非晶質フッ化リン酸カルシウム（ＡＣＦＰ）の存在下では、エナメル質の表層下病変の再石灰化において、これらの複合体は、フルオリド及び安定化ＡＣＰ又はＡＣＦＰの他の形態よりも優れている。安定化ＡＣＰ及び／又は安定化ＡＣＦＰによる石灰化プロセスの間に、第一スズ化合物を供給することにより、歯の表面の石灰化を有意に増強することができる。特に、第一スズが結びついたＡＣＰ複合体及び第一スズが結びついたＡＣＦＰ複合体の安定化溶解性形態によるエナメル質の石灰化は、第一スズが結びついていない安定化ＡＣＰ及びフルオリドと比較して増強されるということが見出された。言い換えれば、ＣＰＰ−ＡＣＰ及び／又はＣＰＰ−ＡＣＦＰ複合体を伴う第一スズイオン複合体、及びこれらのＳｎが結びついたＣＰＰ−ＡＣ（Ｆ）Ｐ複合体は、優れた性質をもたらす。投与のためにこれらの複合体を組み込んだ様々な組成物が有用である。フッ化第一スズの塩が用いられる場合、追加のフッ化物イオンは、第一スズが結びついたＡＣＰ／ＡＣＦＰ複合体の組成物で利用可能である。組成物中にＮａＦを包含させることにより追加のフッ化物イオンを供給することもできる。
【００９１】
第一スズが結びついた安定化ＡＣＰ又はＡＣＦＰは、ホスホペプチド１モルあたり少なくとも１モルの第一スズの第一スズイオン含有量を有し得る。好ましくは、第一スズが結びついた安定化ＡＣＰ又はＡＣＦＰは、ホスホペプチド１モルあたり少なくとも２、３、４、５、６、７、８、９又は１０モルの第一スズの第一スズイオン含有量を有する。さらに好ましくは、第一スズイオン含有量は、ホスホペプチド１モルあたり１〜１００、１〜５０、１〜２０又は１〜１０モルの範囲の第一スズである。
【００９２】
第一スズが結びついた安定化ＡＣＰ又はＡＣＦＰは、以下により調製することができる。カゼインホスホペプチド−非晶質リン酸カルシウム（ＣＰＰ−ＡＣＰ）は、Ｒｅｃａｌｄｅｎｔ（登録商標）の商標名でＣａｄｂｕｒｙ  Ｅｎｔｅｒｐｒｉｓｅｓ  Ｐｔｅ  Ｌｔｄから入手する。ＣＰＰ−ＡＣＰ、ＳｎＦ２及びＮａＦを用いて溶液を調製し、０．４％ｗ／ｖのＣＰＰ−ＡＣＰ、２２０ｐｐｍＦのＳｎＦ２及び７０ｐｐｍＦのＮａＦ（ｐＨ５．６）を製造する。具体的に、ＣＰＰ−ＡＣＰを蒸留／脱イオン水に加え、次いでＳｎＦ２（固体）及びＮａＦを加え、１Ｍ  ＨＣｌを加え、ｐＨを４．０〜６．５に維持することにより、第一スズが結びついた安定化ＡＣＰ複合体を調製することができる。ｐＨが６．５を上回らないようにすることができる。加えられた酸の総体積は、第一スズが結びついた安定化ＡＣＰ溶液の体積の１％未満であった。当該方法ではＮａＦを加えることができるが、それは微量成分であり、フルオリドの大部分がＳｎＦ２に由来する。方法は、ＳｎＦ２（ＮａＦを伴わない）のみを用いることにより行うことができた。
【００９３】
また、本発明は、
（ｉ）  歯の表面をタンパク質分解剤と接触させる工程、及び
（ｉｉ）  歯の表面を本発明の組成物と接触させる工程
を含む歯の表面又は表層下を石灰化する方法を提供する。歯の表面は、好ましくは歯のエナメル質である。ある実施形態では、歯の表面は、齲蝕、歯の浸食又はフッ素症に起因する病変のようなエナメル質の病変である。任意の適切なタンパク質分解剤を本発明の方法に用いることができる。薬剤は、歯の上のペリクルのような治療すべき表面上に形成されたタンパク質性バリアを減少させることが求められる。適切な薬剤の例としては、漂白剤、洗剤、尿素のようなカオトロピック剤、高リン酸濃縮物、プロテアーゼのカクテル（例えば、エンドペプチダーゼ、プロテイナーゼ及びエキソペプチダーゼ）及び任意のその他のタンパク質可溶化剤、崩壊剤又は加水分解剤が挙げられる。適切な漂白剤の例としては、次亜塩素酸ナトリウム（ＮａＯＣｌ）、及び過酸化カバミド漂白剤が挙げられる。好ましい実施形態では、漂白剤は、アルカリ性漂白剤である。さらに好ましい実施形態では、アルカリ性漂白剤は、ＮａＯＣｌである。タンパク質分解剤は、歯の表面のタンパク質（特にペリクルのタンパク質）を可溶化し、部分的又は完全に除去する作用がある。
【００９４】
本明細書に記載の組成物は、さらに遊離フッ化物イオンを含んでいてもよい。遊離フッ化物イオンは、任意の適切な供給源に由来し得る。遊離フッ化物イオン源は、遊離フッ化物イオン又はフッ化物塩を含み得る。フッ化物イオン源の例としては、以下が挙げられるが、これらに限定されない：フッ化ナトリウム、フッ化第一スズ、ケイフッ化ナトリウム及びアミンフッ化物。これらは、溶液（通常水溶液）又は懸濁液として提供され得る。
【００９５】
遊離フッ化物イオンは、好ましくは、１ｐｐｍを上回る量で組成物中に存在する。より好ましくは、その量は、３ｐｐｍを上回る。他の実施形態では、好ましくは１０ｐｐｍを上回る。以下に記載された代表的な実施形態では、その量は数百又は数千ｐｐｍであり得る。遊離フルオリド含有量は、通常、当該技術分野で一般的に使用される方法で経口組成物中のｐｐｍとして測定される。フルオリドが安定化ＡＣＰを伴う供給源から得られる場合、ｐｐｍとは、その供給源（通常、生物学的に利用可能なフルオリドの溶液又は懸濁液）中のフルオリド濃度をいう。
【００９６】
石灰化プロセスの過程で病変のｐＨを上昇させることにより、歯の表面の石灰化を有意に増強することができる。特に、病変内ｐＨが酸性である場合に病変内ｐＨを上昇させ、或いは病変内ｐＨが中性又は塩基性である場合に病変内ｐＨを維持する化合物によって、ＡＣＰ（ＣＰＰ−ＡＣＰ）及びＡＣＦＰ（ＣＰＰ−ＡＣＦＰ）の安定化溶解性形態によるエナメル質の石灰化が増強されるということが見出された。例えば、齲蝕の発生過程での病変内流体のｐＨは６以下であり得る。
【００９７】
溶液のｐＨを上昇又は維持する能力がある化合物を、約１〜６０分間又は約１〜３０分間、歯の表面と接触させてもよい。ある実施形態では、溶液のｐＨを上昇又は維持する能力がある化合物を約２０分間歯の表面と接触させる。これを達成する方法の例は、化合物をペーストのような経口組成物に製剤化し、次いで組成物を歯の表面に接触又は塗布することである。ペーストのような経口組成物は、必要な期間歯に保持するのに十分な粘性を有する。
【００９８】
好ましくは、安定化ＡＣＰ及び／又はＡＣＦＰを、約１分間〜２時間又は５分間〜６０分間又は約１０分間歯の表面と接触させる。安定化ＡＣＰ及び／又はＡＣＦＰを、１日〜数か月にわたって歯の表面に繰り返し塗布してもよい。
【００９９】
ある実施形態では、歯の表面を安定化ＡＣＰ及び／又はＡＣＦＰと接触させる１〜６０分前又は１〜３０分前又は１〜５分前に、溶液のｐＨを上昇又は維持する能力がある化合物を歯の表面と接触させる。
【０１００】
ある実施形態では、歯の表面を安定化ＡＣＰ及び／又はＡＣＦＰと接触させた１〜６０分後又は１〜３０分後又は１〜５分後に溶液のｐＨを上昇又は維持する能力がある化合物を歯の表面と接触させる。
【０１０１】
本発明のさらなる形態では、ＡＣＰ及び／又はＡＣＦＰ複合体、モノフルオロリン酸をもたらす化合物及び溶液のｐＨを上昇又は維持する能力がある化合物を歯の表面に塗布することを含む歯の表面を石灰化する方法を提供する。好ましくは、歯の表面は歯のエナメル質である。通常、歯の表面は、白斑病変；フッ素病変；齲蝕病変；又は歯の浸食に起因する病変のうち１以上からなる群から選ばれる病変を含む歯のエナメル質又は象牙質である。
【０１０２】
ある実施形態では、歯の表面は、そのような治療を必要とする。したがって、他の形態では、本発明は、本明細書に記載の任意の方法の工程に加えて、フッ素症、歯の齲蝕、象牙質過敏症又は歯の歯石を患う対象、白斑病変；フッ素病変；齲蝕病変；又は歯の浸食に起因する病変を特定する工程を含む。
【０１０３】
本発明は、歯の表面又は表層下の石灰化に用いるための
（ａ）溶液のｐＨを上昇又は維持する能力がある化合物；
（ｂ）安定化ＡＣＰ及び／又はＡＣＦＰ；及び
（ｃ）モノフルオロリン酸をもたらす化合物
を含む組成物を提供する。
【０１０４】
溶液のｐＨを上昇又は維持する能力がある化合物は、水素カチオン（プロトン）を受容し又はより一般的に一対の価電子を供与し得る化合物を含む。好ましくは、化合物は、一般的に、塩基であり得る。化合物は、酸性のｐＨ（即ち、ｐＨ７未満）を有する溶液のｐＨを上昇させる能力がある。好ましくは、化合物は、歯の病変の病変内流体のｐＨを６から７．５に上昇させる能力がある。ある実施形態では、溶液のｐＨを上昇又は維持する能力がある化合物は、水酸化物イオンを放出する能力のあるアルカリである。
【０１０５】
溶液のｐＨを上昇又は維持する能力がある化合物は、中性又は塩基性溶液を酸にさらした場合に、中性又は塩基性溶液のｐＨ（即ち７以上のｐＨ）を緩衝剤として維持することができる化合物も含む。通常、化合物は、溶液のｐＨを７〜９、好ましくは約７．５に維持する能力がある。
【０１０６】
塩基として記載されているいずれの医薬上許容される化合物も、本発明の使用に適している。通常、塩基は経口用途に適している。好ましくは、化合物は、塩基として作用し、即ち、酸の存在下で水酸化物イオンを放出し又は電子を供与するのみである。塩基は、遊離塩基の形態又は医薬上許容される塩の形態であり得る。本発明の使用に適した塩基の非限定的な例としては、水酸化物、塩化物、ホウ酸塩、リン酸塩（リン酸水素塩及びリン酸二水素塩を含む）、クエン酸塩、炭酸塩、重炭酸塩、次亜塩素酸塩、アミン及びアルカリ金属塩の形態を含むそれらの任意の塩の形態が挙げられる。より具体的に、適切な医薬上許容される塩基の非限定的な例としては、水酸化アンモニウム、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、水酸化リチウム、水酸化カルシウム、水酸化マグネシウム、水酸化第一鉄、水酸化亜鉛、水酸化銅、水酸化アルミニウム、水酸化第二鉄、イソプロピルアミン、トリメチルアミン、ジエチルアミン、トリエチルアミン、トリプロピルアミン、エタノールアミン、２−ジメチルアミノエタノール、２−ジエチルアミノエタノール、リジン、アルギニン、ヒスチジンが挙げられる。本明細書に記載の塩基として作用する能力のあるヒポフルオライトは、本発明においてｐＨを上昇又は維持するための薬剤としても有用である。適切なヒポフルオライトは、その場で反応して、フッ化物イオン及び水酸化物（又は他の塩基の）イオンを生成し得る。アパタイトを形成するフルオロアパタイトの結晶構造中において、フッ化物イオンは、水酸化物を置き換えることができると当業者に理解され得る。
【０１０７】
本明細書に記載の任意の形態又は実施形態では、安定化ＡＣＰ及び／又はＡＣＦＰは、ホスホペプチド（ＰＰ）で安定される。好ましくは、ホスホペプチド（下記で定義される）は、カゼインホスホペプチドである。好ましくは、ＡＣＰ又はＡＣＦＰは、カゼインホスホペプチド安定化ＡＣＰ又はＡＣＦＰ複合体の形態である。
【０１０８】
本発明の説明の文脈において「ホスホペプチド」は、少なくとも１つのアミノ酸がリン酸化されているアミノ酸配列を意味する。好ましくは、ホスホペプチドは、アミノ酸配列−Ａ−Ｂ−Ｃ−（ここで、Ａは、ホスホアミノ残基であり、Ｂは、ホスホアミノ残基を含む任意のアミノアシル残基であり、Ｃは、グルタミル、アスパルチル又はホスホアミノ残基から選ばれる。）のうち１以上を含む。ホスホアミノ残基の何れかは、独立して、ホスホセリル残基であり得る。Ｂは、側鎖が比較的大きくもなければ疎水性でもない残基であることが望ましい。Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｍｅｔ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｃｙｓ、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ又はＬｙｓであってもよい。好ましくは、配列中ホスホアミノ酸のうち少なくとも２つが、好ましくは、連続している。好ましくは、ホスホペプチドは、配列Ａ−Ｂ−Ｃ−Ｄ−Ｅ（ここで、Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ及びＥは、独立して、ホスホセリン、ホスホトレオニン、ホスホチロシン、ホスホヒスチジン、グルタミン酸又はアスパラギン酸であり、Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ及びＥの少なくとも２つ、好ましくは３つが、ホスホアミノ酸である。）を含む。好ましい実施形態では、ホスホアミノ酸残基がホスホセリンであり、最も好ましくは３つ連続したホスホセリン残基である。また、Ｄ及びＥは、独立して、グルタミン酸又はアスパラギン酸であることが好ましい。
【０１０９】
ある実施形態では、ＡＣＰ又はＡＣＦＰは、インタクトカゼイン又はカゼインフラグメントの形態のカゼインホスホペプチド（ＣＰＰ）によって安定化され、形成された複合体は、好ましくは、式［ＣＰＰ（ＡＣＰ）８］ｎ又は［（ＣＰＰ）（ＡＣＦＰ）８］ｎ（式中、ｎは、１以上、例えば６である。）を有する。形成された複合体は、コア粒子が凝集して水中に懸濁した大きな（例えば１００ｎｍ）コロイド粒子を形成するコロイド複合体であり得る。したがって、ＰＰは、カゼインタンパク質又はホスホペプチドであり得る。
【０１１０】
ＰＰは、任意の供給源に由来してもよい；完全長のカゼインポリペプチドを含むより大きなポリペプチドを背景として存在してもよいし、或いはカゼイン又はその他のホスホアミノ酸に富むタンパク質（例えばホスフィチン）のトリプシン消化又はその他の酵素的若しくは化学的消化により単離してもよいし、或いは化学合成又は組み換え合成により単離してもよい。ただし、上記のように配列−Ａ−Ｂ−Ｃ−又はＡ−Ｂ−Ｃ−Ｄ−Ｅを含むことが条件である。このコア配列に隣接する配列は任意の配列であり得る。しかしながら、αｓ１（５９−７９）、β（１−２５）、αｓ２（４６−７０）及びαｓ２（１−２１）の隣接配列が好ましい。隣接配列は、場合によって１以上の残基の欠失、付加又は保存的置換により修飾されていてもよい。隣接領域のアミノ酸の組成及び配列は、重要ではない。
【０１１１】
ホスホペプチドは、ＷＯ２００６／０５６０１３、ＷＯ２００６／１３５９８２又は米国特許第５，０１５，６２８号に記載されているものの何れかから選ぶことができる。
【０１１２】
保存的置換の例を下記表１に示す。
【０１１３】
【表１】
2018502099.tif 000002
【０１１４】
隣接配列は、非天然アミノ酸残基も含み得る。遺伝子コードによってコードされていない一般的に遭遇するアミノ酸としては以下のものが挙げられる：
Ｇｌｕ及びＡｓｐに対して、２−アミノアジピン酸（Ａａｄ）；
Ｇｌｕ及びＡｓｐに対して、２−アミノピメリン酸（Ａｐｍ）；
Ｍｅｔ、Ｌｅｕ及びその他の脂肪族アミノ酸に対して、２−アミノ酪（Ａｂｕ）酸；
Ｍｅｔ、Ｌｅｕ及びその他の脂肪族アミノ酸に対して、２−アミノヘプタン酸（Ａｈｅ）；
Ｇｌｙに対して、２−アミノイソ酪酸（Ａｉｂ）；
Ｖａｌ及びＬｅｕ及びＩｌｅに対して、シクロヘキシルアラニン（Ｃｈａ）；
Ａｒｇ及びＬｙｓに対して、ホモアルギニン（Ｈａｒ）；
Ｌｙｓ、Ａｒｇ及びＨｉｓに対して、２、３−ジアミノプロピオン酸（Ｄｐｒ）；
Ｇｌｙ、Ｐｒｏ及びＡｌａに対して、Ｎ−エチルグリシン（ＥｔＧｌｙ）；
Ａｓｎ及びＧｌｎに対して、Ｎ−エチルアスパラギン（ＥｔＡｓｎ）；
Ｌｙｓに対して、ヒドロキシルリジン（Ｈｙｌ）；
Ｌｙｓに対して、アロヒドロキシルリジン（ＡＨｙｌ）；
Ｐｒｏ、Ｓｅｒ及びＴｈｒに対して、３−（及び４）ヒドロキシプロリン（３Ｈｙｐ、４Ｈｙｐ）；
Ｉｌｅ、Ｌｅｕ及びＶａｌに対して、アロイソロイシン（Ａｌｌｅ）；
Ａｌａに対して、ρ−アミジノフェニルアラニン；
Ｇｌｙ、Ｐｒｏ、Ａｌａに対して、Ｎ−メチルグリシン（ＭｅＧｌｙ、サルコシン）。
Ｉｌｅに対して、Ｎ−メチルイソロイシン（ＭｅＩｌｅ）；
Ｍｅｔ及びその他の脂肪族アミノ酸に対して、ノルバリン（Ｎｖａ）；
Ｍｅｔ及びその他の脂肪族アミノ酸に対して、ノルロイシン（Ｎｌｅ）；
Ｌｙｓ、Ａｒｇ及びＨｉｓに対して、オルニチン（Ｏｒｎ）；
Ｔｈｒ、Ａｓｎ及びＧｌｎに対して、シトルリン（Ｃｉｔ）及びメチオニンスルホキシド（ＭＳＯ）；
Ｐｈｅに対して、Ｎ−メチルフェニルアラニン（ＭｅＰｈｅ）、トリメチルフェニルアラニン、ハロ（Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ及びＩ）フェニルアラニン、トリフルオリルフェニルアラニン。
【０１１５】
ある実施形態では、ＰＰは、αｓ１（５９−７９）、β（１−２５）、αｓ２（４６−７０）及びαｓ２（１−２１）からなる群から選ばれる１以上のホスホペプチドである。
【０１１６】
他の本発明の実施形態では、安定化ＡＣＦＰ又はＡＣＰ複合体及びモノフルオロリン酸をもたらす化合物が、歯の齲蝕、齲歯、歯の浸食又はフッ素症の予防及び／又は治療を助けるための練り歯磨き、マウスウォッシュ又は口腔用製剤のような経口組成物に組み込まれる。ＡＣＦＰ又はＡＣＰ複合体は、組成物に対して、０．０１〜５０重量％、好ましくは１．０〜５０％を含み得る。経口組成物の場合、好ましくは、投与されるＣＰＰ−ＡＣＰ及び／又はＣＰＰ−ＡＣＦＰの量が、組成物に対して、０．０１〜５０重量％であり、好ましくは、１．０％〜５０重量％である。特に好ましい実施形態では、本発明の経口組成物は、約２％のＣＰＰ−ＡＣＰ、ＣＰＰ−ＡＣＦＰ又はそれら両方の混合物を含む。上記の薬剤を含む本発明の経口組成物は、歯磨剤（練り歯磨き、歯磨き粉及び液体歯磨剤を含む）、マウスウォッシュ、マウスリンス、マウススプレー、バーニッシュ、歯科用セメント、トローチ、チューインガム、歯科用軟膏、歯肉マッサージクリーム、うがい用錠剤、乳製品及びその他の食品のような口に適した様々な形態に調製し、用いることができる。本発明の経口組成物は、さらに、特定の経口組成物のタイプや形態に応じて、追加のよく知られた成分を含んでいてもよい。
【０１１７】
本発明のある好ましい形態では、経口組成物は、マウスウォッシュ、リンス又はスプレーのような特徴の実質的に液体であり得る。このような調製物においては、ビヒクルは、通常、望ましくは以下に記載されるような湿潤剤を含む、水−アルコール混合物である。一般的に、水対アルコールの重量比は、約１：１〜約２０：１の範囲内である。このタイプの調製物では、水−アルコール混合物の総量は、通常、調製物に対して、約７０〜約９９．９重量％の範囲内である。アルコールは、通常、エタノール又はイソプロパノールである。エタノールが好ましい。
【０１１８】
本発明の他の望ましい形態では、組成物は、歯磨き粉、デンタルタブレット又は練り歯磨き（歯科用クリーム）又はゲル歯磨剤のような特徴の実質的に固体又はペースト状であり得る。このような固体又はペースト状経口製剤のビヒクルは、一般的に、歯科的に許容される研磨材を含む。研磨材の例は、水不溶性のメタリン酸ナトリウム、メタリン酸カリウム、リン酸三カルシウム、二水和リン酸カルシウム、無水リン酸二カルシウム、ピロリン酸カルシウム、オルトリン酸マグネシウム、リン酸三マグネシウム、炭酸カルシウム、アルミナ水和物、か焼アルミナ、ケイ酸アルミニウム、ケイ酸ジルコニウム、シリカ、ベントナイト、及びそれらの混合物である。その他の適切な研磨材は、メラミンホルムアルデヒド、フェノールホルムアルデヒド、及び尿素ホルムアルデヒド、並びに架橋ポリエポキシド及びポリエステルのような粒子状熱硬化性樹脂を含む。好ましい研磨材としては、約５ミクロン以下の粒径、約１．１ミクロン以下の平均粒径、及び約５０，０００ｃｍ２／ｇ以下の表面積を有する結晶シリカ、シリカゲル又はコロイド状シリカ、及び複合非晶質アルカリ金属ケイ酸アルミン酸塩が挙げられる。
【０１１９】
視覚的に透明なゲル剤を用いる場合、商標ＳＹＬＯＩＤでＳｙｌｏｉｄ７２及びＳｙｌｏｉｄ７４として、又は商標ＳＡＮＴＯＣＥＬでＳａｎｔｏｃｅｌ１００として販売されているようなコロイド状シリカの研磨剤、アルカリ金属ケイ酸アルミン酸塩複合体が、歯磨剤に一般的に使用されるゲル化剤−液体（水及び／又は湿潤剤を含む）系の屈折率に近い屈折率を有するので、とくに有用である。
【０１２０】
いわゆる「水不溶性の」研磨材の多くは、アニオン性であり、少量の溶解性物質も含む。したがって、不溶性メタリン酸ナトリウムは、例えば、「Ｔｈｏｒｐｅ’ｓ  Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ  ｏｆ  Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，  Ｖｏｌｕｍｅ  ９，  ４ｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，  ｐｐ．  ５１０−５１１」に説明されるような任意の適切な方法で形成することができる。Ｍａｄｒｅｌｌの塩及びＫｕｒｒｏｌの塩として知られる不溶性メタリン酸ナトリウムの形態は、適切な物質のさらなる例である。これらのメタリン酸塩は、水に対する溶解性がごく僅かであり、したがって、一般的に不溶性メタリン酸（ＩＭＰ）と呼ばれる。ここには、不純物として少量の溶解性リン酸物質が存在し、通常、数パーセント（例えば４重量％以下）である。溶解性のリン酸物質（不溶性メタリン酸の場合には溶解性トリメタリン酸ナトリウムを含むと考えられる。）の量は、必要に応じて、水で洗浄することにより、減少させたり、除去したりすることができる。不溶性アルカリ金属メタリン酸塩は、通常、物質の１％以下が３７ミクロンを上回る粒径の粉末形態で用いられる。
【０１２１】
研磨材は、一般的に、固体又はペースト状の組成物中に約１０％〜約９９％の重量濃度で存在する。好ましくは、練り歯磨き中に約１０％〜約７５％、歯磨き粉中に約７０％〜約９９％の量で存在する。研磨材が天然のケイ質である場合、練り歯磨き中に、一般的に約１０〜３０重量％の量で存在する。その他の研磨材は、通常、約３０〜７５重量％の量で存在する。
【０１２２】
練り歯磨き中では、液体ビヒクルは、通常、調製物に対して約１０重量％〜約８０重量％の範囲の量の水及び湿潤剤を含み得る。グリセリン、プロピレングリコール、ソルビトール及びポリプロピレングリコールが、適切な湿潤剤／担体の例である。また、水、グリセリン及びソルビトールの液体混合物も有利である。屈折率が重要な問題となる透明のゲル剤では、好ましくは、約２．５〜３０％ｗ／ｗの水、０〜約７０％ｗ／ｗのグリセリン及び約２０〜８０％ｗ／ｗのソルビトールが用いられる。
【０１２３】
練り歯磨き、クリーム剤及びゲル剤は、通常、約０．１〜約１０、好ましくは約０．５〜約５％ｗ／ｗの割合で天然又は合成の増粘剤又はゲル化剤を含む。適切な増粘剤は、合成ヘクトライト、例えば、Ｌａｐｏｒｔｅ  Ｉｎｄｕｓｔｒｉｅｓ  Ｌｉｍｉｔｅｄにより市販されているＬａｐｏｎｉｔｅ（例えば、ＣＰ、ＳＰ  ２００２、Ｄ）として入手可能な合成コロイド状マグネシウムアルカリ金属ケイ酸塩複合粘土である。ＬａｐｏｎｉｔｅＤは、その重量基準で、およそ５８．００％ＳｉＯ２、２５．４０％ＭｇＯ、３．０５％Ｎａ２Ｏ、０．９８％Ｌｉ２Ｏ、並びにある程度の水及び微量の金属である。その真比重は、２．５３であり、８％の水分で１．０ｇ／ｍｌのみかけの嵩密度を有する。
【０１２４】
その他の適切な増粘剤としては、アイリッシュ・モス、イオタカラギナン、トラガカントガム、デンプン、ポリビニルピロリドン、ヒドロキシエチルプロピルセルロース、ヒドロキシブチルメチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース（例えばＮａｔｒｏｓｏｌとして入手可能）、カルボキシメチルセルロースナトリウム、及び細砕Ｓｙｌｏｉｄ（例えば２４４）のようなコロイド状シリカが挙げられる。また、可溶化剤としては、例えば、保湿性ポリオール（例えば、プロピレングリコール、ジプロピレングリコール及びヘキシレングリコール）、セロソルブ（例えば、メチルセロソルブ及びエチルセロソルブ）、少なくとも約１２個の炭素を含む直鎖の植物油及びワックス（例えば、オリーブ油）、ひまし油及び鉱油、並びにエステル類（例えば、酢酸アミル、酢酸エチル及び安息香酸ベンジル）が挙げられ得る。
【０１２５】
従来の通り、経口製剤は、通常、適切な表示付きパッケージで販売され或いはそうでなければ流通されると理解されるだろう。したがって、マウスリンスの瓶には、実質的にそれがマウスリンス又はマウスウォッシュであると記載され、その使用方法が示されたラベルが付いているだろう；通常、練り歯磨き、クリーム又はゲルは、内容物を計量するため、実質的に、練り歯磨き、ゲル又は歯科用クリームとして記載されたラベルを有する、通常アルミニウム、ライニング鉛又はプラスチック折り畳み式のチューブ中、又はその他の圧搾式、圧送式若しくは加圧式のディスペンサー中に存在するだろう。
【０１２６】
予防作用を増加させ、口腔全体にわたる活性剤の徹底的で完全な分散を促進し、本発明の組成物をより化粧品的に許容されるようにするために、有機界面活性剤を本発明の組成物中に使用してもよい。有機界面活性物質は、好ましくは、アニオン性、非イオン性又は両性であり、好ましくは、活性剤と相互作用しない。組成物に洗浄性及び発泡性を付与する洗浄物質を界面活性剤として用いることが好ましい。アニオン性界面活性剤の適切な例は、高級脂肪酸モノグリセリドモノサルフェートの水溶性の塩（例えば、水素化ヤシ油脂肪酸の一硫酸化モノグリセリドのナトリウム塩）、高級アルキル硫酸（例えば、ラウリル硫酸ナトリウム）、アルキルアリールスルホナート（例えば、ナトリウムドデシルベンゼンスルホナート）、高級アルキルスルホアセテート、１，２−ジヒドロキシプロパンスルホナートの高級脂肪酸エステル、及び低級脂肪族アミノカルボン酸化合物の実質的に飽和した高級脂肪族アシルアミド（例えば、脂肪酸、アルキル基又はアシル基中に１２〜１６個の炭素を有するもの）等である。最後に言及したアミドの例は、せっけん又は同様の高級脂肪酸物質を実質的に含まない、Ｎ−ラウロイルサルコシン、並びにＮ−ラウロイル、Ｎ−ミリストイル、又はＮ−パルミトイルサルコシンのナトリウム、カリウム及びエタノールアミン塩である。本発明の経口組成物中でのこれらのサルコナイト化合物の使用は、これらの物質が、酸溶液の歯のエナメル質の溶解性をある程度低下させるのに加えて炭水化物を分解するため口腔内の酸形成を阻害する長期間の顕著な効果を示すので、特に有利である。使用に適した水溶性非イオン性界面活性剤の例は、エチレンオキシドと、これと反応性の長い疎水鎖（例えば、約１２〜２０個の炭素原子の脂肪鎖）を有する様々な反応性の水素含有化合物との縮合生成物であり、その縮合生成物（「エトキサマー（ｅｔｈｏｘａｍｅｒｓ）」）が親水性ポリオキシエチレン部分を含み、例えば、ポリ（エチレンオキシド）と脂肪酸、脂肪族アルコール、脂肪酸アミド、多価アルコール（例えば、モノステアリン酸ソルビタン）及びポリプロピレンオキシド（例えば、プルロニック物質）との縮合生成物である。
【０１２７】
界面活性剤は、通常、約０．１〜５重量％の量で存在する。界面活性剤が、本発明の活性剤の溶解を促進し、その結果、必要な可溶化湿潤剤の量を減少させることができることに注目すべきである。
【０１２８】
美白剤、保存剤、シリコーン、クロロフィル化合物及び／又はアンモニア化物質（例えば、尿素、リン酸二アンモニウム及びその混合物）のような様々な他の物質が、本発明の経口製剤に組み込まれていてもよい。これらのアジュバントは、存在する場合、所望の性質及び特性に実質的に悪影響を与えない量で調製物中に組み込まれる。
【０１２９】
任意の適切な香料又は甘味料物質も用いることができる。適切な香料成分の例は、香油、例えば、スペアミント油、ペパーミント油、ウインターグリーン油、サッサフラス油、クローブ油、セージ油、ユーカリ油、マージョラム油、シナモン油、レモン油、及びオレンジ油、並びにサリチル酸メチルである。適切な甘味剤としては、スクロース、ラクトース、マルトース、ソルビトール、キシリトール、シクラミン酸ナトリウム、ペリラルチン、ＡＭＰ（アスパルチルフェニルアラニンメチルエステル）、サッカリン等が挙げられる。適切に、香味料及び甘味剤は、それぞれ又はあわせて、調製物中に約０．１％〜５％を上回って含んでいてもよい。
【０１３０】
本発明の組成物は、例えば、温めたガムベース中で攪拌或いはガムベースの外側表面をコーティングすることにより、ロゼンジ中又はチューインガム若しくはその他の製品中に組み込むこともでき、ガムベースは、例えば、ジェルトン、ゴムラテックス、ビニライト樹脂等であり、望ましくは、従来の可塑剤若しくは軟化剤、糖若しくはその他の甘味料又は例えばグルコース、ソルビトール等を有する。本発明の組成物は、それぞれの相が異なる期間に成分を放出する二相組成物であってもよい。例えば、使用中、二相組成物は、第二相からのモノフルオロリン酸をもたらす化合物の放出よりも速い速度で第一相から安定化ＡＣＰ及び／又はＡＣＦＰ、好ましくはＣＰＰ−ＡＣＰ及び／又はＣＰＰ−ＡＣＦＰを放出し得る。好ましくは、二相組成物は、二相チューインガムである。
【０１３１】
さらなる形態では、本発明は、モノフルオロリン酸をもたらす化合物及び薬学的に許容される担体と共に上記のようなＡＣＦＰ及び／又はＡＣＰ複合体の何れかを含む医薬組成物を含む組成物を提供する。このような組成物は、歯科用の抗齲蝕組成物及び治療用組成物からなる群から選ばれ得る。歯科用組成物又は治療用組成物は、ゲル、液体、固体、粉末、クリーム又はロゼンジの形態であり得る。また、治療用組成物は錠剤又はカプセル剤の形態であり得る。ある実施形態では、ＡＣＰ及び／又はＡＣＦＰ複合体及びモノフルオロリン酸カルシウムをもたらす化合物は、実質的に、このような組成物の唯一の再石灰化活性成分である。例えば、水；グリセロール；ＣＰＰ−ＡＣＰ；モノフルオロリン酸カルシウム；Ｄ−ソルビトール；二酸化ケイ素；カルボキシメチルセルロースナトリウム（ＣＭＣ−Ｎａ）；プロピレングリコール；二酸化チタン；キシリトール；リン酸；グアーガム；酸化亜鉛；サッカリンナトリウム；エチルｐ−ヒドロキシベンゾアート；酸化マグネシウム；ブチルｐ−ヒドロキシベンゾアート及びプロピルｐ−ヒドロキシベンゾアートを含むクリーム製剤を用いることができる。
【０１３２】
さらに、本発明は、歯の齲蝕又は齲歯、歯の浸食、過敏症及びフッ素症のうち何れか１以上を治療又は予防するためのその治療説明書と共に提供される上述の製剤を含む。
【０１３３】
ある実施形態では、組成物の活性成分は、基本的に、モノフルオロリン酸カルシウムをもたらす化合物及び安定化ＡＣＰ及び／又はＡＣＦＰからなる。どんな理論又は作用機構にも束縛されるものではないが、安定化ＡＣＰ及び／又はＡＣＦＰ及びモノフルオロリン酸カルシウムをもたらす化合物は、本発明の上記実施形態の治療又は予防効果に重要であるため、基本的にこれらの成分からなる実施形態（必要に応じて担体、賦形剤等を伴うもの）は、本発明の範囲内に含まれると考えられる。
【０１３４】
また、本発明は、医薬上許容される担体中に（ａ）モノフルオロリン酸カルシウムをもたらす化合物及び（ｂ）ＣＰＰ−ＡＣＰ又はＣＰＰ−ＡＣＦＰ複合体を含む、歯の齲蝕、フッ素症及び歯の浸食のうち１以上の治療又は予防のためのキットに関する。望ましくは、さらに、キットは、このような治療を必要とする患者の歯の表面の石灰化のためのそれらの使用説明書を含む。説明書には、歯の齲蝕、齲歯、歯の浸食及びフッ素症のそれぞれの１以上の治療又は予防のためのキットの使用法を記載することができる。ある実施形態では、薬剤及び複合体は、患者の治療に適した量で存在する。
【０１３５】
さらなる形態では、モノフルオロリン酸カルシウムをもたらす化合物を対象の歯に投与し、続いて、ＡＣＰ又はＡＣＦＰ複合体又は組成物を投与する工程を含む、歯の齲蝕、齲歯、歯の浸食及びフッ素症のそれぞれの１以上の治療又は予防方法を提供する。複合体の局所投与が好ましい。方法は、好ましくは、上記のような製剤中の複合体の投与を含む。
【０１３６】
さらなる形態では、歯の齲蝕、齲歯、歯の浸食及びフッ素症のうち１以上の治療及び／又は予防のための組成物の製造における、モノフルオロリン酸カルシウムをもたらす化合物及び安定化非晶質リン酸カルシウム（ＡＣＰ）又は非晶質フッ化リン酸カルシウム（ＡＣＦＰ）の使用を提供する。
【０１３７】
さらなる形態では、歯の表面又は表層下の石灰化のための活性剤としてモノフルオロリン酸カルシウムをもたらす化合物及び安定化非晶質リン酸カルシウム（ＡＣＰ）又は非晶質フッ化リン酸カルシウム（ＡＣＦＰ）を含む組成物を提供する。通常、歯の表面又は表層下の石灰化は、歯の齲蝕、齲歯、過敏症、歯の浸食及びフッ素症のうち１以上の治療及び／又は予防のために行われる。
【０１３８】
発明のさらなる形態によれば、本発明の組成物が加えられた歯の再生材料を含む歯の再生のための組成物を提供する。歯の再生材料の塩基は、グラスアイオノマーセメント、複合材料又は適合性のある任意のその他の再生材料であり得る。好ましくは、歯の再生材料に含まれる安定化ＡＣＰ又はＡＣＦＰ、好ましくはＣＰＰ−ＡＣＰ複合体又はＣＰＰ−ＡＣＦＰ複合体の量は、０．０１〜８０重量％、好ましくは０．５〜１０％、より好ましくは１〜５重量％である。上記の薬剤を含む本発明の歯の再生材料は、歯科診療に適した様々な形態に調整され、用いることができる。本実施形態による歯の再生材料は、特定の歯の再生材料のタイプ及び形態に応じて、例えば、抗菌性イオンＺｎ２＋、Ａｇ＋等のさらに別のイオン又はその他の追加の成分を含んでいてもよい。好ましくは、本実施形態による歯の再生材料のｐＨは、２〜１０、より好ましくは５〜９、さらに好ましくは５〜７である。好ましくは、ＣＰＰ−ＡＣＰ複合体又はＡＣＦＰ複合体を含む歯の再生材料のｐＨは、約２〜１０の範囲内、より好ましくは約５〜９の範囲内、さらに好ましくは約５〜７の範囲内である。
【０１３９】
本発明のさらなる形態によれば、モノフルオロリン酸をもたらす化合物及び石灰化剤を含むバーニッシュを提供する。好ましくは、石灰化剤は、本明細書に記載の任意の安定化ＡＣＰ及び／又はＡＣＦＰ複合体及びモノフルオロリン酸カルシウムをもたらす化合物である。
【０１４０】
本明細書ではヒトにおける適用について具体的に言及しているが本発明が獣医学的目的に有用であるということも明確に理解され得る。したがって、全ての形態において、本発明は、ウシ、ヒツジ、ウマ及び家禽のような家畜；ネコ及びイヌのような伴侶動物；及び動物園の動物に有用である。
【０１４１】
これより、以下の非限定的な実施例を参照しながら本発明をさらに説明するだろう。
【０１４２】
石灰化する組成物又は薬剤の一例は、以下のものを含む（割合の高い順）：
水
グリセロール
ＣＰＰ−ＡＣＰ
Ｄ−ソルビトール
二酸化ケイ素
カルボキシメチルセルロースナトリウム（ＣＭＣ−Ｎａ）
プロピレングリコール
二酸化チタン
キシリトール
リン酸
グアーガム
酸化亜鉛
サッカリンナトリウム
エチルｐ−ヒドロキシベンゾアート
酸化マグネシウム
ブチルｐ−ヒドロキシベンゾアート
プロピルｐ−ヒドロキシベンゾアート。
【０１４３】
このような組成物は、Ｔｏｏｔｈ  Ｍｏｕｓｓｅ（登録商標）の名称でＧＣ  ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎより入手可能である。これは、モノフルオロリン酸カルシウムをもたらす化合物を加えた後に使用するのに適しており、適切な期間歯の上での保持を容易するためにペースト又はクリームの形態である。或いは、この石灰化する組成物は、モノフルオロリン酸カルシウムをもたらす化合物を含んでいてもよい。
【０１４４】
実施例１
ＣＰＰ−ＡＣＦＰ及びＣＰＰ−ＡＣＰ溶液の調製
およそ７８ｍＭ  Ｃａ２＋、４８ｍＭリン酸及び１２ｍＭフルオリド濃度の最終濃度が得られるまで、３．２５Ｍ  ＣａＣｌ２、１．２５Ｍ  Ｎａ２ＨＰＯ４、１Ｍ  ＮａＯＨ及び１Ｍ  ＮａＦのストック溶液を、およそ３０のアリコートで、１０〜１５％ｗ／ｖのカゼインのトリプシン消化物に加えた。溶液は、ゆっくりと加えた（すなわち１分あたりおよそ１体積％未満を加えた）。まず、リン酸溶液のアリコートを加え、続いて、カルシウム溶液のアリコートを加えた。十分に混合しながらＮａＯＨを用いてｐＨを約９．０〜５．５のｐＨに維持した。通常はカルシウムイオンをそれぞれ加えた後に水酸化物イオンを加えるｐＨスタットにより水酸化ナトリウム溶液を自動的に加えた。カルシウムイオン、リン酸イオン、水酸化物イオン及びフッ化物イオンを加え後、０．１ミクロンフィルターで溶液をろ過し、１〜２倍に濃縮した。必要に応じて、残余分を水で洗浄し、塩及び不活性（及び苦味のある）ペプチドを除去してもよい。ＣＰＰ−ＡＣＰ溶液は、フルオリドを加えずに上記のように調製した。
【０１４５】
実施例２
弱く及び強く結合したカルシウム及びリン酸の測定
実施例１の各ｐＨの滴定及びろ過の終了後、各残余分のサンプルを採取し、３０００分子量カットオフのＣｅｎｔｒｉｐｒｅｐ３限外ろ過膜を用いてろ液として１０％未満回収した。サンプルを含むＣｅｎｔｒｉｐｒｅｐを、ＪＡ１０．５ローターを使用するＢｅｃｋｍａｎ  Ｊ２−２１遠心分離機中、１，０００ｇで１５分間遠心分離した。Ｃｅｎｔｒｉｐｒｅｐの遠心分離前のオリジナルサンプル及びＣｅｎｔｒｉｐｒｅｐの遠心分離後のろ液サンプルを、カルシウム、リン酸及びフルオリドの濃度の分析のために採取した。オリジナルサンプルの分析により、全体のカルシウム、リン酸及びフルオリドイオンの濃度が得られ、ろ液の分析により、弱く結合したカルシウム、リン酸及びフルオリドの濃度が得られる。全体の濃度と弱く結合した濃度の間の差が、ＣＰＰによるＣａ、Ｐｉ及びＦの強く結合した濃度である。
【０１４６】
実施例３
ＣＰＰ−ＡＣＦＰ及びＣＰＰ−ＡＣＰ溶液の調製
Ｒｅｃａｌｄｅｎｔ（登録商標）（ＣＰＰ−ＡＣＰ）を、Ｒｅｃａｌｄｅｎｔ  Ｐｔｙ  Ｌｔｄ（豪州ビクトリア）より購入した。製品（＃８４１１１７）は、重量基準で１４．３％カルシウム、２２．３％リン酸及び４７％カゼインホスホペプチドを含有した。製品を０．５％で溶解し、ＨＣｌを加えることによりｐＨ５．５に調整した。次いで、２．５ＭのＮａＯＨを加えてｐＨを５．５に維持しながら、３．２５ＭのＣａＣｌ２及び２ＭのＮａＨ２ＰＯ４を滴定することによりカルシウム及びリン酸イオンを加えた。カルシウム及びリン酸イオンの滴定は、溶液が半透明になるまで継続した。加えたカルシウム及びリン酸の濃度を記録した。カルシウム及びリン酸イオンを０．５％ＣＰＰ−ＡＣＰ溶液に滴定し、さらなるリン酸カルシウムを加えることによりｐＨを５．５に下げることによって、溶液を形成することもできる。
【０１４７】
表２．通常及び過充填ＣＰＰ−ＡＣＰのカルシウム及びリン酸の量
【０１４８】
【表２】
2018502099.tif 000003
【０１４９】
これらの結果は、準安定溶液中、ＣＰＰ−ＡＣＰにカルシウム及びリン酸イオンを過充填して、熱力学的に安定した複合体を生成させることが可能であることを証明する。
【０１５０】
実施例４
ＣＰＰ−ＡＣＰ及びリン酸カルシウムの製剤の調製
別の例では、Ｒｅｃａｌｄｅｎｔ（商標登録）（ＣＰＰ−ＡＣＰ）粉末を、ＣａＨＰＯ４粉末と、ＣＰＰ−ＡＣＰ：ＣａＨＰＯ４の重量比１：１０でドライブレンドした。次いで、この粉末を、無糖ガム及び練り歯磨き製剤に１〜５％ｗ／ｗで加えた。
【０１５１】
実施例５
本実施例及び以下の実施例では、モノフルオロリン酸カルシウムをもたらす化合物（それ自体でモノフルオロリン酸カルシウムであるか、或いは水溶液にさらした場合にモノフルオロリン酸カルシウムを生み出す化合物又は組成物であり得る）を含む代表的な製剤を説明する。
【０１５２】
以下の成分を有する局所用クリームを、本発明に従って製造することができる：
水
グリセロール
安定化ＡＣＰ及び／又はＡＣＦＰ
モノフルオロリン酸カルシウムをもたらす化合物
Ｄ−ソルビトール
カルボキシメチルセルロースナトリウム（ＣＭＣ−Ｎａ）
プロピレングリコール
二酸化ケイ素
二酸化チタン
キシリトール
リン酸
フッ化ナトリウム
香料
サッカリンナトリウム
エチルｐ−ヒドロキシベンゾアート
プロピルｐ−ヒドロキシベンゾアート
ブチルｐ−ヒドロキシベンゾアート
【０１５３】
実施例６
以下の組成を有するマウスリンス製剤を、本発明に従って製造する：
水
アルコール
ポロキサマー４０７
ラウリル硫酸ナトリウム
安定化ＡＣＰ及び／又はＡＣＦＰ
モノフルオロリン酸カルシウムをもたらす化合物
フッ化ナトリウム
香味料
サッカリンナトリウム
エチルｐ−ヒドロキシベンゾアート
プロピルｐ−ヒドロキシベンゾアート
ブチルｐ−ヒドロキシベンゾアート
【０１５４】
実施例７
以下の組成を有する無糖チューインガム製剤を、本発明に従って製造する：
結晶質ソルビトール／マンニトール／キシリトール
ガムベース
炭酸カルシウム
グリセリン
安定化ＡＣＰ及び／又はＡＣＦＰ
モノフルオロリン酸カルシウムをもたらす化合物
フッ化ナトリウム
香油
水
【０１５５】
実施例８
エナメル質表層下病変の調製及び口腔内器具の製造
傷んでおらず、亀裂、染み及びフッ素病変のない比較的平面の頬側表面及び舌側表面（解剖顕微鏡下で見た場合）を、メルボルン王立歯科病院から入手し、１０％リン酸緩衝（ｐＨ７．０）ホルマリン中で少なくとも２週間処理した引き抜かれたヒトの第３大臼歯から選んだ。歯をミリＱ水で３回すすぎ、低速コントラアングル歯科用ハンドピースのＳｏｆｌｅｘ（３Ｍ）ディスクを用いて研磨して鏡面仕上げにした。次に、各研磨表面を、水冷ダイヤモンドブレードソー（デンマークＳｔｒｕｅｒｓ）を用いて、およそ８ｘ４ｍｍのスラブとして歯から切り出した。次に、全てのスラブを、Ｓｈｅｎ  ｅｔ  ａｌ．（２００１）に記載されているような２つの（咬合及び歯肉）近遠心窓を除いて耐酸性のネイルバーニッシュでカバーし、それぞれ１ｘ７ｍｍ、互いの間隔を１ｍｍとした。８０ｍＬ／ＬのＧｏｏｄｒｉｔｅ  Ｋ−７０２ポリアクリレート溶液（米国オハイオ州クリーブランドＬｕｂｒｉｚｏｌ  Ａｄｖａｎｃｅｄ  Ｍａｔｅｒｉａｌｓ  Ｉｎｃ）（Ｗｈｉｔｅ，１９８７）、５００ｍｇ／Ｌのヒドロキシアパタイト（Ｂｉｏ−Ｇｅｌ  ＨＴＰ，Ｂｉｏ−Ｒａｄ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、リッチモンド、ＣＬ）、０．１ｍｏｌ／Ｌの乳酸（ニューサウスウェールズ州オーバーンＡｊａｘ  Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ）（ｐＨ４．８）を含む４０ｍＬの不攪拌脱灰バッファーに各スラブを３７℃で４日間浸漬することにより、表層下の脱石灰化病変をエナメル質の窓に作成した。２日後、スラブをバッファーから取り出し、ミリＱ水で３回洗浄し、ブロット乾燥し、さらなる２日間新しい脱灰バッファー中に加え、次いで、再度洗浄し、乾燥した。脱灰後、各エナメル質スラブを各窓の正中線を通して２つの４ｘ４ｍｍ半スラブに切断し、各半スラブの切断面をネイルバーニッシュでカバーした。各対のうち一方の半スラブを、脱灰対照として保持し、湿った環境を作るための一滴のミリＱ水と共にラベルを付けた１．７ｍｌマイクロ遠心分離管に保存した。対のうち他方のエナメル質の半スラブを、以下に記載されするような口腔内器具にはめ込み、表層下のエナメル質病変を器具の表面から１ｍｍ下方に露出させる一方でくぼませて、プラークトラップを形成した。窓を無ワックスに保持するように注意した。それぞれの２つの半スラブ対を、対照又は治療の何れかに無作為に割り当てた。４つのエナメル質の半スラブを各器具にはめ込み、左右対称のトラフの両側に２つはめ込んだ（Ｒｅｙｎｏｌｄｓ  ｅｔ  ａｌ．，２００３）。
【０１５６】
アーチ中、最初の小臼歯から最後の歯まで口蓋をカバーする取り外し可能な中口蓋のアクリル製器具を、前記のように各対象のために製造した（Ｉｉｊｉｍａ  ｅｔ  ａｌ．，２００４）。器具の基部を、４つのナロウゲージのステンレススチールの円周留金によって口内に保持した。器具は、基部にカットした左右対称のトラフ（長さ１５ｍｍ、幅７ｍｍ、深さ３ｍｍ）を有するように設計し、エナメル質のスラブを収容できるように設計した。エナメル質のスラブを、Ｉｉｊｉｍａ  ｅｔ  ａｌ．（２００４）に記載されているような粘着性ワックスによって保持し、エナメル質の表面上に深さ１ｍｍのトラフを作り、プラークを定着させ、保持した。下記の臨床試験に使用した器具を、図１に示す。
【０１５７】
実施例９
ＣＰＰ−ＡＣＰ及びモノフルオロリン酸カルシウムを含む製剤の調製
以下の表３及び４並びに図２に使用した調製物及び命名を、これより説明する。これらの試験に使用する調製物を、１０％ＣＰＰ−ＡＣＰを含むＴｏｏｔｈ  Ｍｏｕｓｓｅ（登録商標）（ｐＨ７．０）の配合に基づいて調製した。例えば、表３に示されるように、ＴＭ１４５０ＭＦＰは、１０％ＣＰＰ−ＡＣＰを含むＴｏｏｔｈ  Ｍｏｕｓｓｅ製剤（ｐＨ７．０）であり、１４５０ｐｐｍＦのモノフルオロリン酸カルシウムを除いて、いかなる他のフルオリド含有化合物も含まないように改質されている。言い換えれば、ＭＦＰとは、１４５０ｐｐｍＦの量のモノフルオロリン酸カルシウムをいう。ｐＨ７．０で１ｇあたり８０．０μｍｏｌの塩化カルシウム（ＣａＣｌ２）と共に１ｇあたり７６．３μｍｏｌのモノフルオロリン酸二ナトリウムを加えることによりモノフルオロリン酸カルシウムを形成させ、十分に混合し、モノフルオロリン酸カルシウムを製造した。モノフルオロリン酸カルシウムを製造するために、例えば本明細書に記載の他のモノフルオロリン酸源、及び例えば本明細書に記載の他のカルシウム源を用いることができた。また、モノフルオロリン酸カルシウムは、別のｐＨ下で、例えば４．０〜９．０、好ましくは５．０〜７．０、さらに好ましくは約７．０のｐＨ下で形成させることもできた。さらに、例えば、表３のＭＦＰ１４５０を参照すると、ＣＰＰ−ＡＣＰを含まず且つモノフルオロリン酸カルシウムを除いていかなるその他のフルオリド含有化合物も含まないようにＴｏｏｔｈ  Ｍｏｕｓｓｅ製剤が改質されている。
【０１５８】
実施例１０
臨床試験は、エナメル質の表層下病変を再石灰化する実験製剤の能力を評価するための、二重盲式、無作為化、制御化、クロスオーバーのｉｎ  ｓｉｔｕ試験であった。
【０１５９】
メルボルン大学のヒト研究倫理委員会から試験の承認を得た。試験は豪州のメルボルンで行った。３０〜５０歳の健康な参加者１２名（男性６名及び女性６名）を、研究のために募集し、インフォームド・コンセントを得た。試験のために必要とされる参加者の最小人数は、同じｉｎ  ｓｉｔｕモデル及びクロスオーバーデザインを用いた我々の以前の試験に基づいていた（Ｃａｉ  ｅｔ  ａｌ．，２００９；Ｗａｌｋｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，２０１０）。全ての参加者は、アクティブな齲蝕、歯周病又はその他の口腔病変のない少なくとも２２本の天然歯を有し、唾液の流量に影響を与えることが知られている抗生剤又は医薬を使用していなかった。頭を傾け、唾液を１５ｍｌの予め計量したチューブに２分間流し込むことにより、唾液（無刺激）を各参加者から収集した。唾液を、２分間糖不含ガムを噛むことにより刺激し、無刺激唾液と同様にこの期間に収集した。唾液量を重量測定により決定した。
【０１６０】
コード化された治療法に無造作に製品を割り当てた。ある治験医が無作為の配分順序を作成し、参加者を登録し、参加者をコード化された製品に割り当てた。無作為化コードは、参加者及び試験治験医からは独立して保持された。製品の水スラリー（１ｇの製品及び４ｍｌの５分間ボルテックスした蒸留脱イオン水）を、毎日の処置前にコード化されたプラスチック管に新しく調製した。器具装着した各参加者は５ｍｌのスラリーで６０秒間すすいだ。これを以下の時間に１０日間１日４回行った：１０：００ａｍ、１１：３０ａｍ、２：００ｐｍ、及び３：３０ｐｍ。参加者は、飲食及び口腔衛生処置を行う前に器具を取り外すように指示された。器具を取り外した場合、それらを室温で密封された湿ったビニール袋に保存した。参加者は、各処置の後少なくとも１時間、器具を取り外さないように指示された。参加者は、器具装着時に、水以外のいかなるものも飲食しないように指示されていた。器具は、蒸留水でのみ洗浄し、嵌め込んだエナメル質のスラブは覆わなかった。参加者は、少なくとも１週間の休薬期間の後に処置のそれぞれにクロスオーバーした。参加者は製品の使用を日記に記録した。試験期間中、参加者の食生活及び口腔衛生処置に変更はなかった。参加者には、通常の口腔衛生処置のために１０００ｐｐｍＦ（ＮａＦ）の練り歯磨き（Ｃｏｌｇａｔｅ）及び歯ブラシ（Ｃｏｌｇａｔｅ）を供給したが、試験中に試験製品以外のその他のフルオリド製品は使用されなかった。各処理期間終了後、エナメル質のスラブを器具から取り外し、ミリＱ水で洗浄し、分析前に加湿環境に保存した。
【０１６１】
実施例１１
セクショニング及び微小血管造影法
再石灰化されたエナメル質の半スラブを、その脱石灰化された対照の半スラブと共に、病変窓に並列に新たに注がれた透明の冷硬化性メタクリレート樹脂（Ｐａｌａｄｕｒ、Ｈｅｒａｅｕｓ  Ｋｕｌｚｅｒ、独国）に入れた（Ｉｉｊｉｍａ  ｅｔ  ａｌ．，２００４）。樹脂バイアルの上部コーナーにマークをつけて、試験ブロック及び対照ブロックと同定し、樹脂を室温で終夜放置した。およそ２００μｍの厚さの切片を、内部環状ミクロトームを用いて、病変表面に対して垂直な埋め込みブロックから病変の正中線を通って切断した（Ｌｅｉｃａ  １６００、Ｌｅｉｃａ、独国）。次に、切片を、１２００及び２４００グリッドのラッピング紙で、ＲｏｔｏＰｏｌ−２１／ＲｏｔｏＦｏｒｃｅ４ラッピング機（デンマークＳｔｒｕｅｒｓ）を用いて、８０±５μｍにラップ仕上げした。同じエナメル質のスラブに由来する再石灰化病変及び脱石灰化対照病変を含む各切片について、Ｍｉｃｒｏｃｈｒｏｍｅ  Ｈｉｇｈ  Ｒｅｓｏｌｕｔｉｏｎガラスプレート（Ｔｙｐｅ１Ａ、米国Ｍｉｃｒｏｃｈｒｏｍｅ）及びニッケルフィルターを有する銅Ｋ放射線を２０ｋＶ、１０ｍＡで６分間使用し、１０ｘ１４μｍの厚さ増分のアルミニウム製段階くさびと共にレントゲン写真を撮影した。使用したレントゲン写真装置は、以前にＭａｌｃｏｌｍ（１９７２）によって開示されている。各ガラスプレートを、Ｍｉｃｒｏｃｈｒｏｍｅ  Ｄｅｖｅｌｏｐｅｒ  Ｄ５（１：４希釈、米国Ｍｉｃｒｏｃｈｒｏｍｅ）中で４分間現像し、氷酢酸停止浴に３０秒間入れ、次いで、Ｍｉｃｒｏｃｈｒｏｍｅ  Ｆｉｘｅｒ  Ｆ４（１：４希釈、米国Ｍｉｃｒｏｃｈｒｏｍｅ）に４分間定着させた。
【０１６２】
ミクロデンシトメトリー
病変のＸ線画像を、Ｄｉａｌｕｘ２０顕微鏡（独国Ｅｒｎｓｔ  Ｌｅｉｔｚ  Ｗｅｌｚｌａｒ）で透過光を介して観察した。次に、デジタルカメラ（Ｓｐｏｔ  Ｉｎｓｉｇｈｔ、Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ，Ｉｎｃ、米国ミシガン州）によって画像を取得し、イメージングソフトウエアＯｐｔｉｍａｔｅバージョン５．２を用いて解析した。０〜２５６のグレイ値の読み取りが得られるプログラムのライン輝度関数を用いて、病変及び正常なエナメル質の近傍領域の画像をスキャンした。分析のためにアーティファクト又は亀裂を含まない領域を選択した。各スキャンは、歯の表面から病変を通って正常なエナメル質まで２００の読み取りを含んだ。各スライド上のアルミニウム段階くさびをスキャンし、平均段階グレイ値の読み取りを、アルミニウムの厚さに対してプロットした。歯の切片加増の読み取りは、段階くさびの曲線の直線部分にあり、グレイ値データをアルミニウムの同等の厚さの値に変換するために線形回帰を用いた。切片厚さを測定し、Ａｎｇｍａｒ（１９６３）の方程式、並びにアルミニウム、有機物及び水並びにアパタイト石灰分の線形吸収係数（それぞれ１３１．５、１１．３及び２６０．５）を用いて、石灰分ｖｏｌ％データを計算した。２つの病変（歯肉及び咬合）の間の中間の正常なエナメル質の画像を６回スキャンし、平均し、対照の正常なエナメル質の密度測定プロファイルを得た。中間の正常なエナメル質の歯肉側及び咬合側の病変画像（再石灰化窓及び脱灰対照窓）を、病変端部で一般的に見られる任意のむらを回避して、中央のストリップの可能な限り近傍にて、同様に６回スキャンした。多重スキャン値を平均し、石灰分体積％プロファイルを計算した。各処置のために各参加者により用いられた４つのエナメル質のブロックに対してこれらの測定を繰り返し、続いて平均し、その参加者及び処置に対して個々の値を得た。
【０１６３】
実施例１２
再石灰化データ分析
各エナメル質のブロックの脱石灰化された病変及び再石灰化された病変の石灰分％プロファイルを、同じ切片の中間の正常なエナメル質の石灰分％プロファイルと比較した。脱石灰化された病変及び中間の正常なエナメル質の密度測定プロファイル下の面積の差異を、台形積分で計算し、ΔＺｄで表す。再石灰化された病変及び中間の正常なエナメル質の密度測定プロファイル下の面積の差異を、台形積分で計算し、ΔＺｒで表す。続いて、再石灰化後、これらのパラメーターを変化値％に変換し、再石灰化％（％Ｒ）のように、ΔＺ値の変化％を示す：％Ｒ＝（ΔＺｄ−ΔＺｒ）／ΔＺｄ×１００。  
【０１６４】
一番目の効果指標は、石灰分増加率（％Ｒ）であった。これを、処置順序、処置期間及び処置タイプの因子を伴う反復測定分散分析（ＡＮＯＶＡ）モデルを用いて処置間で比較した（Ｊｏｎｅｓ  ａｎｄ  Ｋｅｎｗａｒｄ，２００３）。二番目の効果指標は、製品洗浄後／唾液のカルシウム、無機リン酸及びフルオリドの濃度であり、処置順序、処置期間及び治療タイプの因子を伴う反復測定ＡＮＯＶＡモデルを用いて処置製品間で比較した。処置差の事後比較を、多重比較のためＳｉｄａｋ調整を用いて周辺平均に対して行った（ＳＰＳＳ、２００８）。ＡＮＯＶＡの仮定は、残差及び正規の確率プロットを用いてチェックした。分析の単位は参加者であった。効果指標を決定し、結果値を参加者及び処置期間によって平均した。０．０５未満のｐ値は、統計的に有意であるとみなされた。ＳＰＳＳ（バージョン１７、米国イリノイ州シカゴＳＰＳＳ  Ｉｎｃ）又はＳｔａｔａ（バージョン１０、米国テキサス州カレッジステーションＳｔａｔａ  Ｃｏｒｐ  ＬＰ）の統計ソフトウエアを用いて全ての分析を行った。
【０１６５】
実施例１０に記載の臨床試験の洗浄後サンプルを１，０００ｇで１５分間遠心分離した。上澄みサンプルを蒸留／脱イオン化水で希釈し、０．０１ＮのＨＮＯ３で酸性化し、十分に混合し、０．２μｍフィルター（Ｍｉｎｉｓａｒｔ、Ｓａｒｔｏｒｉｏｕｓ、豪州ビクトリア）を装着した１０ｍｌのシリンジに移した。結果を表５に示す。
【０１６６】
実施例１３
製品分析
製品の総（酸溶解性）カルシウム、リン酸及びフルオリドの量を、５０ｍｌの遠心分離管中の１９ｍの１ＮのＨＮＯ３に１ｇの製品を加えて、終夜混合することにより決定した。次いで、このスラリーを、必要に応じてさらに０．０１ＮのＨＮＯ３で希釈し、下記のように遠心分離及びろ過した後、イオンクロマトグラフィー系を用いてイオンについて分析した。水溶性カルシウム、リン酸及びフルオリドの量を、５０ｍｌの遠心分離管中の１９ｍｌの脱イオン水に１ｇの製品を加えて、終夜混合することにより決定した。次いで、サンプルを、室温で１５分間、１，０００ｇで遠心分離した。上澄みのサンプルを、等量の０．０１ＮのＨＮＯ３に加え、０．２μｍのフィルターでろ過した。
【０１６７】
２つの伝導度検出器（ＩＣＳ  ３０００）を用いたカチオン（ＩｏｎＰａｃ  ＣＳ１２）及びアニオン（ＩｏｎＰａｃ  ＡＳ１８）の両方の分析のための２つのカラムを備えた原子吸収分光又は自動イオンクロマトグラフィー系（米国カリフォルニア州Ｄｉｏｎｅｘ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）を用いて、無機イオン（カルシウム、無機リン酸及びフルオリド）について、ろ液を分析した。
【０１６８】
組み合わせた７つのアニオン標準及び組み合わせた６つのカチオン標準を用いて、計器を較正した。
【０１６９】
表３：実験製品の溶解性及び総量のカルシウム、無機リン酸、フルオリドの含有量
【０１７０】
【表３】
2018502099.tif 000004
【０１７１】
ｎｄ，試験条件下では検出されない
＊  およそ
【０１７２】
実施例１４
臨床試験結果
臨床試験の結果を表４、表５及び図２に示す。これらの結果は、モノフルオロリン酸カルシウム（ＣａＭＦＰ）を含む製品、即ちＴｏｏｔｈ  Ｍｏｕｓｓｅ（登録商標）が、同じフルオリド濃度（１４５０ｐｐｍＦ）でフッ化ナトリウムを含むものに比べて、エナメル質の表層下病変のｉｎ  ｓｉｔｕでの再石灰化に有意（反復測定分散分析の有意性：ｐ＜０．０５）に優れているということを示す。
【０１７３】
ＬＤｄ、ＬＤｒ、ＬＤｄ−ＬＤｒ、ΔＺｄ、ΔＺｄ−ΔＺｒの平均及び標準誤差§並びに再石灰化率（％Ｒ）を、各処置及び全ての処置の組み合わせについて、上部の器具及び下部の器具について別々に測定した。ボンフェローニ補正を伴うＷｉｌｃｏｘｏｎ  Ｓｉｇｎｅｄ  Ｒａｎｋｓ  Ｓｕｍ試験を用いた＊印のものを除き、対応ｔ検定を用いて２つの器具（図１）のパラメーター間の差異を分析した。各パラメーターについて、上部の器具と下部の器具の間に差異はなかった（ｐ＞０．０５）。
【０１７４】
表４：ＣＰＰ−ＡＣＰを伴う及び伴わないＮａＦ又はＣａＭＦＰによるｉｎ  ｓｉｔｕでのエナメル質の表層下病変の再石灰化
【０１７５】
【表４】
2018502099.tif 000005
【０１７６】
表５：ｉｎ  ｓｉｔｕで試験したペースト製品についての、すすいだ後の唾液のカルシウム、無機リン酸、フルオリド及びモノフルオロリン酸の含有量
【０１７７】
2018502099.tif 000006
【０１７８】
ｎｄ，試験条件下で検出されなかった
【０１７９】
表５の結果により、モノフルオロリン酸カルシウムとして製品中に存在するモノフルオロリン酸塩が、口腔内にモノフルオロリン酸塩として残存している一方で、フッ化ナトリウムは、対象の口腔内で遊離フッ化物イオンに完全に解離されたということが示されている。具体的に、モノフルオロリン酸カルシウムを含むＴｏｏｔｈ  Ｍｏｕｓｓｅ製品を使用した個体の洗浄後の唾液中には、ほぼ全てのモノフルオロリン酸塩が、遊離フッ化物イオンに分解することなくモノフルオロリン酸塩として残されていた（即ち１９２．０８±２０．０８ｐｐｍのフルオリドが製品中で検出され、１８０．２２±２０．０７ｐｐｍのモノフルオロリン酸塩が洗浄後の唾液中に検出された）。
【０１８０】
文献
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【図１】
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【図２】
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【国際調査報告】
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