(57)【要約】  薬物性疾患および状態を治療するのに有用な方法および化合物が提供される。薬物性疾患または状態に関する治療として、１つまたは複数のＭＣＪ阻害化合物を投与して、細胞、組織、および／または対象においてＭＣＪポリペプチド活性を減少させる方法が提供される。【選択図】図１Ｂ
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
対象における薬物性疾患または状態を治療する方法であって、ＭＣＪ調節化合物を、対象における薬物性疾患または状態を治療するのに有効な量でかかる治療を必要とする対象に投与することを含む方法。
【請求項２】
ＭＣＪ調節化合物が、対象においてＭＣＪポリペプチド活性を低減させるＭＣＪ阻害化合物である、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
ＭＣＪポリペプチド活性を減少させることが、ＭＣＪポリペプチドレベルもしくは活性の１つまたは複数を減少させることを含む、請求項２に記載の方法。
【請求項４】
薬物性疾患または状態が、薬物性肝疾患または状態および腎疾患または状態、心疾患または状態、および心血管疾患または状態の１つまたは複数である、請求項１〜３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５】
疾患または状態が、急性疾患または状態である、請求項１〜４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６】
疾患または状態が、慢性疾患または状態である、請求項１〜４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７】
ＭＣＪ調節化合物が、ＭＣＪ分子、抗ＭＣＪポリペプチド抗体またはその機能性断片、および小分子ＭＣＪ阻害剤の１つまたは複数を含む、請求項１〜６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８】
ＭＣＪ調節化合物が、ターゲティング剤、任意にミトコンドリアターゲティング剤をさらに含む、請求項７に記載の方法。
【請求項９】
ＭＣＪ分子が、変異体ＭＣＪポリペプチドまたは変異体ＭＣＪポリペプチドをコードするポリヌクレオチドである、請求項７または８に記載の方法。
【請求項１０】
小分子ＭＣＪ阻害剤が、低分子干渉ＲＮＡ分子（ｓｉＲＮＡ）、小ヘアピンＲＮＡ（ｓｈＲＮＡ）分子、アンチセンスＤＮＡオリゴ、小ガイドＲＮＡ（ｓｇＲＮＡ）分子、転写活性化因子様エフェクターヌクレアーゼ（タレン）分子である、請求項７または８に記載の方法。
【請求項１１】
ｓｉＲＮＡ分子が、配列番号２１として本明細書中に記載される核酸配列を含む、請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
ｓｉＲＮＡ分子が、配列番号７として本明細書中に記載される核酸配列を含む、請求項１０に記載の方法。
【請求項１３】
ＭＣＪ調節化合物が、医薬組成物で投与され、該医薬組成物が、薬学的に許容される担体をさらに含み、任意に、担体剤、送達剤、標識剤、およびターゲティング剤の１つまたは複数を含む、請求項１〜１２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１４】
担体剤が、ナノキャリア、細胞透過性ペプチド、ポリマー、デンドリマー、ｓｉＲＮＡバイオコンジュゲート、および脂質ベースのｓｉＲＮＡ担体の１つまたは複数を含む、請求項１３に記載の方法。
【請求項１５】
医薬組成物が、薬物性疾患または状態を誘導することが知られているか、または疑われる薬物をさらに含む、請求項１３に記載の方法。
【請求項１６】
薬物性疾患または状態が、薬物性の肝硬変、肝線維症、静脈閉塞性肝疾患、特異体質性毒性、バッド・キアリ症候群、肝損傷、腎損傷、薬物アレルギー、急性腎傷害（ＡＫＩ）、劇症肝炎、胆汁うっ滞、心毒性、およびアルコール摂取の１つまたは複数を含む、請求項１〜１５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１７】
薬物性疾患または状態の誘導薬物が、エタノール、医薬品、または生物学的作用物質の１つまたは複数を含む、請求項１６に記載の方法。
【請求項１８】
誘導薬物が、摂取手段によって対象に入り、該摂取手段は、任意に、吸入、注射、吸収、注入、輸注、飲用、および摂食の１つまたは複数を含む、請求項１７に記載の方法。
【請求項１９】
医薬品が、スタチン、抗うつ薬、抗生物質、ベンゾジアゼピン、ニコチン酸、タクリン、アスピリン、キニジン、ＮＳＡＩＤ、アスピリン、インドメタシン、イブプロフェン、ナプロキセン、ピロキシカム、ナブメトン、アセトアミノフェン、フェニトイン、イソニアジド、ジクロフェナク、オーグメンチン、アモキシシリン／クラブラン酸の組合せ、ミノサイクリン、ニトロフラントイン、フェノフィブラート、メタンフェタミン、アンフェタミン、エリスロマイシン、クロルプロマジン、コトリモキサゾール、スルファメトキサゾールおよびトリメトプリムの組合せ、アミトリプチリン、テマゼパム、ジアゼパム、カルバマゼピン、アンピシリン、リファンピン、エストラジオール、カプトプリル、経口避妊ピル、経口避妊薬、タンパク質同化ステロイド、ジスルフィラム、ビタミンＡ、ハロペリドール、イミプラミン、テトラサイクリン、フェニトイン、メトトレキサート、アミオダロン、メチルドパ、化学療法剤、造影剤、チアジン、フェノチアジン、クロラムフェニコール、ジゴキシン、ジギトキシン、オキサゼパム、フェノバルビタール、キニジン、バンコマイシン、テオフィリン、ベラパミル、インターフェロン、インターフェロンベータ１ａ、およびワルファリンを含む、請求項１７に記載の方法。
【請求項２０】
生物学的作用物質が、ハーブ剤を含む、請求項１７に記載の方法。
【請求項２１】
ハーブ剤が、エフェデュラ、カバカバ、シャパラル、カノコソウ、トチノキ抽出物、カバ抽出物、およびカバの葉の１つまたは複数を含む、請求項２０に記載の方法。
【請求項２２】
薬物性疾患または状態が、体重過多、体重増加、肥満、非アルコール性脂肪肝疾患、糖尿病、インシュリン抵抗性、アルコール性脂肪肝疾患、脂質異常症、脂肪症、肝脂肪症、心脂肪症、腎脂肪症、筋脂肪症、無βリポタンパク質血症、糖原病、ウェーバー・クリスチャン病、リポジストロフィー；肝疾患、肝臓炎、肝炎、脂肪性肝炎、Ｃ型肝炎、遺伝子型３のＣ型肝炎、アルファ１−抗トリプシン欠乏症、急性妊娠脂肪肝、ウィルソン病；腎疾患；心疾患、高血圧、虚血、心不全、心筋症；中毒；ＨＩＶ；神経変性疾患、パーキンソン病、アルツハイマー病；またはがんの代謝性疾患または状態ではない、請求項１〜２１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２３】
対象が、体重過多、体重増加、肥満、非アルコール性脂肪肝疾患、糖尿病、インシュリン抵抗性、アルコール性脂肪肝疾患、脂質異常症、脂肪症、肝脂肪症、心脂肪症、腎脂肪症、筋脂肪症、無βリポタンパク質血症、糖原病、ウェーバー・クリスチャン病、リポジストロフィー；肝疾患、肝臓炎、肝炎、脂肪性肝炎、Ｃ型肝炎、遺伝子型３のＣ型肝炎、アルファ１−抗トリプシン欠乏症、急性妊娠脂肪肝、ウィルソン病；腎疾患；心疾患、高血圧、虚血、心不全、心筋症；中毒；ＨＩＶ；神経変性疾患、パーキンソン病、アルツハイマー病；およびがんの代謝性疾患または状態の１つまたは複数を有さない、請求項１〜２１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２４】
ＭＣＪ調節化合物が、薬物性疾患または状態を誘導するのに適した薬物の対象による摂取前、摂取時、および摂取後の１つまたは複数で、対象に投与される、請求項１に記載の方法。
【請求項２５】
細胞における薬物性疾患または状態を低減させる方法であって、細胞を、細胞においてＭＣＪポリペプチド活性を減少させるのに有効な量でＭＣＪ阻害化合物と接触させることを含む方法。
【請求項２６】
ＭＣＪポリペプチド活性を減少させることが、細胞においてＭＣＪポリペプチドのレベルもしくは機能の１つまたは複数を減少させることを含む、請求項２５に記載の方法。
【請求項２７】
細胞が、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ、ｅｘ  ｖｉｖｏ、またはｉｎ  ｖｉｖｏである、請求項２５または２６に記載の方法。
【請求項２８】
ｉｎ  ｖｉｖｏの細胞が、対象中に存在し、接触させることが、対象に、ＭＣＪ阻害化合物を投与することを含む、請求項２７に記載の方法。
【請求項２９】
ＭＣＪ阻害化合物が、ＭＣＪ分子、抗ＭＣＪポリペプチド抗体もしくはその機能性断片、または小分子ＭＣＪ阻害剤を含む、請求項２５〜２８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３０】
ＭＣＪ阻害化合物が、ターゲティング剤、任意にミトコンドリアターゲティング剤をさらに含む、請求項２９に記載の方法。
【請求項３１】
ＭＣＪ分子が、変異体ＭＣＪポリペプチドまたは変異体ＭＣＪポリペプチドをコードするポリヌクレオチドである、請求項２９または３０に記載の方法。
【請求項３２】
小分子ＭＣＪ阻害剤が、ｓｉＲＮＡ分子である、請求項２９または３０に記載の方法。
【請求項３３】
ｓｉＲＮＡ分子が、配列番号２１として本明細書中に記載される核酸配列を含む、請求項３２に記載の方法。
【請求項３４】
ｓｉＲＮＡ分子が、配列番号７として本明細書中に記載される核酸配列を含む、請求項３２に記載の方法。
【請求項３５】
細胞が、医薬組成物中のＭＣＪ阻害化合物と接触し、医薬組成物が、薬学的に許容される担体をさらに含み、任意に、担体剤、送達剤、標識剤、およびターゲティング剤の１つまたは複数を含む、請求項２５〜３４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３６】
薬物性疾患または状態が、薬物性肝疾患または状態および腎疾患または状態、薬物性心疾患または状態の１つまたは複数である、請求項２５〜３５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３７】
薬物性疾患または状態が、急性疾患または状態および慢性疾患または状態の１つまたは複数である、請求項２５〜３６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３８】
担体剤が、ナノキャリア、細胞透過性ペプチド、ポリマー、デンドリマー、ｓｉＲＮＡバイオコンジュゲート、および脂質ベースのｓｉＲＮＡ担体の１つまたは複数を含む、請求項３７に記載の方法。
【請求項３９】
医薬組成物が、薬物性疾患または状態を誘導することが知られているか、または疑われる薬物をさらに含む、請求項３７に記載の方法。
【請求項４０】
薬物性疾患または状態が、薬物性の肝硬変、肝線維症、静脈閉塞性肝疾患、特異体質性毒性、バッド・キアリ症候群、肝損傷、腎損傷、薬物アレルギー、急性腎傷害（ＡＫＩ）、劇症肝炎、胆汁うっ滞、心毒性、およびアルコール摂取の１つまたは複数を含む、請求項２５〜３９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４１】
薬物性疾患または状態の誘導薬物が、エタノール、医薬品、または生物学的作用物質の１つまたは複数を含む、請求項２５〜３９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４２】
誘導薬物が細胞と接触することにより、細胞において薬物性疾患または状態が誘導される、請求項４０に記載の方法。
【請求項４３】
医薬品が、スタチン、抗うつ薬、抗生物質、ベンゾジアゼピン、ニコチン酸、タクリン、アスピリン、キニジン、ＮＳＡＩＤ、アスピリン、インドメタシン、イブプロフェン、ナプロキセン、ピロキシカム、ナブメトン、アセトアミノフェン、フェニトイン、イソニアジド、ジクロフェナク、オーグメンチン、アモキシシリン／クラブラン酸の組合せ、ミノサイクリン、ニトロフラントイン、フェノフィブラート、メタンフェタミン、アンフェタミン、エリスロマイシン、クロルプロマジン、コトリモキサゾール、スルファメトキサゾールおよびトリメトプリムの組合せ、アミトリプチリン、テマゼパム、ジアゼパム、カルバマゼピン、アンピシリン、リファンピン、エストラジオール、カプトプリル、経口避妊ピル、経口避妊薬、タンパク質同化ステロイド、ジスルフィラム、ビタミンＡ、ハロペリドール、イミプラミン、テトラサイクリン、フェニトイン、メトトレキサート、アミオダロン、メチルドパ、化学療法剤、造影剤、チアジン、フェノチアジン、クロラムフェニコール、ジゴキシン、ジギトキシン、オキサゼパム、フェノバルビタール、キニジン、バンコマイシン、テオフィリン、ベラパミル、インターフェロン、インターフェロンベータ１ａ、およびワルファリンを含む、請求項４０に記載の方法。
【請求項４４】
生物学的作用物質が、ハーブ抽出物を含む、請求項４０に記載の方法。
【請求項４５】
ハーブ抽出物が、エフェデュラ、カバカバ、コンフリー（Comfrey）、ジャーマンダー（germander）、シャパラル、カノコソウ、トチノキ抽出物、カバ抽出物、およびカバの葉の１つまたは複数を含む、請求項４０に記載の方法。
【請求項４６】
薬物性疾患または状態が、体重過多、体重増加、肥満、非アルコール性脂肪肝疾患、糖尿病、インシュリン抵抗性、アルコール性脂肪肝疾患、脂質異常症、脂肪症、肝脂肪症、心脂肪症、腎脂肪症、筋脂肪症、無βリポタンパク質血症、糖原病、ウェーバー・クリスチャン病、リポジストロフィー；肝疾患、肝臓炎、肝炎、脂肪性肝炎、Ｃ型肝炎、遺伝子型３のＣ型肝炎、アルファ１−抗トリプシン欠乏症、急性妊娠脂肪肝、ウィルソン病；腎疾患；心疾患、高血圧、虚血、心不全、心筋症；中毒；ＨＩＶ；神経変性疾患、パーキンソン病、アルツハイマー病；またはがんの代謝性疾患または状態ではない、請求項２５〜４５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４７】
細胞が、体重過多、体重増加、肥満、非アルコール性脂肪肝疾患、糖尿病、インシュリン抵抗性、アルコール性脂肪肝疾患、脂質異常症、脂肪症、肝脂肪症、心脂肪症、腎脂肪症、筋脂肪症、無βリポタンパク質血症、糖原病、ウェーバー・クリスチャン病、リポジストロフィー；肝疾患、肝臓炎、肝炎、脂肪性肝炎、Ｃ型肝炎、遺伝子型３のＣ型肝炎、アルファ１−抗トリプシン欠乏症、急性妊娠脂肪肝、ウィルソン病；腎疾患；心疾患、高血圧、虚血、心不全、心筋症；中毒；ＨＩＶ；神経変性疾患、パーキンソン病、アルツハイマー病；およびがんの代謝性疾患または状態の１つまたは複数を有さない、請求項２５〜４６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４８】
細胞と薬物性疾患または状態を誘導するのに適した薬物との接触前、接触時、および接触後の１つまたは複数で、細胞をＭＣＪ阻害化合物と接触させる、請求項２５に記載の方法。
【請求項４９】
ＭＣＪ阻害化合物および薬学的に許容される担体を含む組成物。
【請求項５０】
担体剤、送達剤、標識剤、およびターゲティング剤の１つまたは複数をさらに含む、請求項４９に記載の組成物。
【請求項５１】
担体剤が、ナノキャリア、細胞透過性ペプチド、ポリマー、デンドリマー、ｓｉＲＮＡバイオコンジュゲート、および脂質ベースのｓｉＲＮＡ担体の１つまたは複数を含む、請求項５０に記載の組成物。
【請求項５２】
医薬組成物が、薬物性疾患または状態を誘導することが知られているか、または疑われる薬物をさらに含む、請求項５０に記載の組成物。
【請求項５３】
ＭＣＪ阻害化合物が、ターゲティング剤、任意にミトコンドリアターゲティング剤を含む、請求項４９〜５２のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項５４】
ＭＣＪ阻害化合物が、小分子ＭＣＪ阻害剤を含む、請求項４９〜５３のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項５５】
小分子ＭＣＪ阻害剤が、低分子干渉ＲＮＡ分子（ｓｉＲＮＡ）、小ヘアピンＲＮＡ（ｓｈＲＮＡ）分子、アンチセンスＤＮＡオリゴ、小ガイドＲＮＡ（ｓｇＲＮＡ）分子、転写活性化因子様エフェクターヌクレアーゼ（タレン）分子である、請求項５４に記載の組成物。
【請求項５６】
小分子ＭＣＪ阻害剤分子が、配列番号２１として本明細書中に記載される核酸配列を有する、請求項５５に記載の組成物。
【請求項５７】
小分子ＭＣＪ阻害剤分子が、配列番号７として本明細書中に記載される核酸配列を有する、請求項５５に記載の組成物。
【請求項５８】
薬物が細胞と接触するかまたは対象に送達されたときに、それぞれ細胞および対象の少なくとも１つにおいて薬物性疾患または状態を誘導するのに適した薬物をさらに含む、請求項４９に記載の組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願
本出願は、米国特許法第１１９条（ｅ）に基づき２０１５年７月１０日に出願された米国仮出願番号第６２／１９０，８０３号および２０１６年４月１９日に出願された米国仮出願番号第６２／３２４，５８４号の利益を主張し、これらそれぞれの開示は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。
【０００２】
政府の権利
本発明は、国立衛生研究所により授与されたＲ２１  ＡＩ０９４０２７に基づく政府支援を受けて行われた。政府は、本発明において一定の権利を有する。
【０００３】
発明の分野
本発明は、一つには、毒性および薬物性の疾患および状態を治療するのに有用な方法および化合物に関する。
【背景技術】
【０００４】
肝硬変は、人口の最大１％に影響を及ぼす世界規模の健康問題であり、最も高頻度の致命的な固形臓器腫瘍の１つである肝細胞癌（ＨＣＣ）への進行に関する主要な危険因子である。幾つかの病原因子が肝硬変の発症に寄与するが、Ｃ型肝炎、脂肪肝およびアルコール依存症が最も一般的な原因である。肝硬変は、肝線維症の進行段階を特徴とする。現在、肝移植が肝硬変の管理における基礎の一つであるが、その適用は、厳しい選択基準、高い費用およびドナー移植組織不足によって制限されている。
【０００５】
肝傷害はまた、薬物の蓄積によっても誘導され得る。薬物性肝傷害（ＤＩＬＩ）は、薬用ハーブ、植物、および栄養補助食品ならびに多数の薬物によって引き起こされる傷害を含む。薬物性傷害メカニズムは、免疫傷害、細胞経路の阻害、細胞輸送ポンプの封鎖、アポトーシスの誘導、およびミトコンドリア機能障害等をもたらす、薬物の細胞タンパク質への共有結合を含み得る。肝毒作用を招くアセトアミノフェン（Ｔｙｌｅｎｏｌ）の過剰摂取は、米国および英国において急性肝不全の主な原因であると報告されている。ＦＤＡは、その治療指数を減らし、併用療法を最低限に抑えることにより、アセトアミノフェンの肝毒性を制限することを提唱した。
【発明の概要】
【０００６】
本発明の一態様によれば、対象において肝臓および他の臓器および臓器系における毒性および薬物性の疾患および状態を治療する方法が提供される。上記方法は、かかる治療を必要とする細胞および／または対象に、細胞および／または対象において毒性および薬物性の疾患または状態を治療するのにそれぞれ有効な量でＭＣＪ阻害化合物を投与することを含む。
【０００７】
本発明の一態様によれば、対象において薬物性疾患および状態を治療する方法が提供される。上記方法は、ＭＣＪ阻害化合物を、対象において薬物性疾患または状態を治療するのに有効な量でかかる治療を必要とする対象に投与することを含む。幾つかの実施形態では、ＭＣＪ調節化合物は、対象においてＭＣＪポリペプチド活性を低減させるＭＣＪ阻害化合物である。幾つかの実施形態では、ＭＣＪポリペプチド活性を減少させることは、ＭＣＪポリペプチドレベルもしくは活性の１つまたは複数を減少させることを含む。ある特定の実施形態では、薬物性疾患または状態は、薬物性肝疾患または状態および腎疾患または状態、心疾患または状態、および心血管疾患または状態の１つまたは複数である。幾つかの実施形態では、疾患または状態は、急性疾患または状態である。幾つかの実施形態では、疾患または状態は、慢性疾患または状態である。ある特定の実施形態では、ＭＣＪ調節化合物は、ＭＣＪ分子、抗ＭＣＪポリペプチド抗体またはその機能性断片、および小分子ＭＣＪ阻害剤の１つまたは複数を含む。幾つかの実施形態では、ＭＣＪ調節化合物は、ターゲティング剤、任意にミトコンドリアターゲティング剤をさらに含む。幾つかの実施形態では、ＭＣＪ分子は、変異体ＭＣＪポリペプチドまたは変異体ＭＣＪポリペプチドをコードするポリヌクレオチドである。幾つかの実施形態では、小分子ＭＣＪ阻害剤は、低分子干渉ＲＮＡ分子（ｓｉＲＮＡ）、小ヘアピンＲＮＡ（ｓｈＲＮＡ）分子、アンチセンスＤＮＡオリゴ、小ガイドＲＮＡ（ｓｇＲＮＡ）分子、転写活性化因子様エフェクターヌクレアーゼ（タレン（talen））分子である。ある特定の実施形態では、ｓｉＲＮＡ分子は、配列番号７として本明細書中に記載される核酸配列を含む。ある特定の実施形態では、ｓｉＲＮＡ分子が、配列番号２１として本明細書中に記載される核酸配列を含む。幾つかの実施形態では、ＭＣＪ調節化合物は、医薬組成物で投与され、医薬組成物は、薬学的に許容される担体をさらに含み、任意に、担体剤、送達剤、標識剤、およびターゲティング剤の１つまたは複数を含む。幾つかの実施形態では、担体剤は、ナノキャリア、細胞透過性ペプチド、ポリマー、デンドリマー、ｓｉＲＮＡバイオコンジュゲート、および脂質ベースのｓｉＲＮＡ担体の１つまたは複数を含む。ある特定の実施形態では、医薬組成物は、薬物性疾患または状態を誘導することが知られているか、または疑われる薬物をさらに含む。幾つかの実施形態では、薬物性疾患または状態は、薬物性の肝硬変、肝線維症、静脈閉塞性肝疾患、特異体質性毒性、バッド・キアリ症候群、肝損傷、腎損傷、薬物アレルギー、急性腎傷害（ＡＫＩ）、劇症肝炎、胆汁うっ滞、心毒性、およびアルコール摂取の１つまたは複数を含む。幾つかの実施形態では、薬物性疾患または状態の誘導薬物は、エタノール、医薬品、および生物学的作用物質の１つまたは複数を含む。幾つかの実施形態では、誘導薬物は、任意に、吸入、注射、吸収、注入、輸注、飲用、および摂食の１つまたは複数を含む摂取手段によって対象に入る。ある特定の実施形態では、医薬品は、スタチン、抗うつ薬、抗生物質、ベンゾジアゼピン、ニコチン酸、タクリン、アスピリン、キニジン、ＮＳ���ＩＤ（アスピリン、インドメタシン、イブプロフェン、ナプロキセン、ピロキシカム、ナブメトンを含むが、これらに限定されない）、アセトアミノフェン、フェニトイン、イソニアジド、ジクロフェナク、オーグメンチン（アモキシシリン／クラブラン酸の組合せ）、ミノサイクリン、ニトロフラントイン、フェノフィブラート、メタンフェタミン、アンフェタミン、エリスロマイシン、クロルプロマジン、コトリモキサゾール（スルファメトキサゾールおよびトリメトプリムの組合せ）、アミトリプチリン、テマゼパム、ジアゼパム、カルバマゼピン、アンピシリン、リファンピン、エストラジオール、カプトプリル、経口避妊ピル（経口避妊薬）、タンパク質同化ステロイド、ジスルフィラム、ビタミンＡ、ハロペリドール、イミプラミン、テトラサイクリン、フェニトイン、メトトレキサート、アミオダロン、メチルドパ、化学療法剤、造影剤、チアジン（フェノチアジンを含むが、これに限定されない）、クロラムフェニコール、ジゴキシン、ジギトキシン、オキサゼパム、フェノバルビタール、キニジン、バンコマイシン、テオフィリン、ベラパミル、インターフェロン（インターフェロンベータ１ａを含むが、これに限定されない）、およびワルファリンを含む。ある特定の実施形態では、生物学的作用物質は、ハーブ抽出物である。ある特定の実施形態では、ハーブ抽出物は、エフェデュラ（Ma Huang）、カバカバ（Kava Kava）、シャパラル、カノコソウ、トチノキ抽出物、およびカバ（Kava）の葉の１つまたは複数を含む。幾つかの実施形態では、薬物性疾患または状態は、体重過多、体重増加、肥満、非アルコール性脂肪肝疾患、糖尿病、インシュリン抵抗性、アルコール性脂肪肝疾患、脂質異常症、脂肪症（例えば、肝脂肪症、心脂肪症、腎脂肪症、筋脂肪症）、無βリポタンパク質血症、糖原病、ウェーバー・クリスチャン病、リポジストロフィー；肝疾患、肝臓炎、肝炎、脂肪性肝炎、Ｃ型肝炎、遺伝子型３のＣ型肝炎、アルファ１−抗トリプシン欠乏症、急性妊娠脂肪肝、ウィルソン病；腎疾患；心疾患、高血圧、虚血、心不全、心筋症；中毒；ＨＩＶ；神経変性疾患、パーキンソン病、アルツハイマー病；またはがんの代謝性疾患または状態ではない。幾つかの実施形態では、対象は、体重過多、体重増加、肥満、非アルコール性脂肪肝疾患、糖尿病、インシュリン抵抗性、アルコール性脂肪肝疾患、脂質異常症、脂肪症（例えば、肝脂肪症、心脂肪症、腎脂肪症、筋脂肪症）、無βリポタンパク質血症、糖原病、ウェーバー・クリスチャン病、リポジストロフィー；肝疾患、肝臓炎、肝炎、脂肪性肝炎、Ｃ型肝炎、遺伝子型３のＣ型肝炎、アルファ１−抗トリプシン欠乏症、急性妊娠脂肪肝、ウィルソン病；腎疾患；心疾患、高血圧、虚血、心不全、心筋症；中毒；ＨＩＶ；神経変性疾患、パーキンソン病、アルツハイマー病；およびがんの代謝性疾患または状態の１つまたは複数を有さない。幾つかの実施形態では、ＭＣＪ調節化合物は、薬物性疾患または状態を誘導するのに適した薬物の対象による摂取前、摂取時、および摂取後の１つまたは複数で対象に投与される。
【０００８】
本発明の別の態様によれば、細胞において薬物性疾患または状態を低減させる方法が提供される。上記方法は、細胞を、細胞においてＭＣＪポリペプチド活性を減少させるのに有効な量でＭＣＪ阻害化合物と接触させることを含む。ある特定の実施形態では、ＭＣＪポリペプチド活性を減少させることは、細胞においてＭＣＪポリペプチドのレベルもしくは機能の１つまたは複数を減少させることを含む。幾つかの実施形態では、細胞は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ、ｅｘ  ｖｉｖｏ、またはｉｎ  ｖｉｔｒｏである。幾つかの実施形態では、ｉｎ  ｖｉｖｏの細胞は、対象中に存在し、接触させることは、対象に、ＭＣＪ阻害化合物を投与することを含む。ある特定の実施形態では、ＭＣＪ阻害化合物は、ＭＣＪ分子、抗ＭＣＪポリペプチド抗体もしくはその機能性断片、または小分子ＭＣＪ阻害剤を含む。幾つかの実施形態では、ＭＣＪ阻害化合物は、ターゲティング剤、任意にミトコンドリアターゲティング剤をさらに含む。幾つかの実施形態では、ＭＣＪ分子が、変異体ＭＣＪポリペプチドまたは変異体ＭＣＪポリペプチドをコードするポリヌクレオチドである。ある特定の実施形態では、小分子ＭＣＪ阻害剤は、ｓｉＲＮＡ分子である。幾つかの実施形態では、ｓｉＲＮＡ分子は、配列番号７として本明細書中に記載される核酸配列を含む。幾つかの実施形態では、小分子ＭＣＪ阻害剤分子は、配列番号２１として本明細書中に記載される核酸配列を有する。幾つかの実施形態では、細胞は、医薬組成物中に存在するＭＣＪ阻害化合物と接触し、医薬組成物は、薬学的に許容される担体をさらに含み、任意に、担体剤、送達剤、標識剤、およびターゲティング剤の１つまたは複数を含む。幾つかの実施形態では、薬物性疾患または状態は、薬物性肝疾患または状態および腎疾患または状態、薬物性心疾患または状態の１つまたは複数である。ある特定の実施形態では、薬物性疾患または状態は、急性疾患または状態および慢性疾患または状態の１つまたは複数である。幾つかの実施形態では、担体剤は、ナノキャリア、細胞透過性ペプチド、ポリマー、デンドリマー、ｓｉＲＮＡバイオコンジュゲート、および脂質ベースのｓｉＲＮＡ担体の１つまたは複数を含む。幾つかの実施形態では、医薬組成物は、薬物性疾患または状態を誘導することが知られているか、または疑われる薬物をさらに含む。ある特定の実施形態では、薬物性疾患または状態は、薬物性の肝硬変、肝線維症、静脈閉塞性肝疾患、特異体質性毒性、バッド・キアリ症候群、肝損傷、腎損傷、薬物アレルギー、急性腎障害（ＡＫＩ）、劇症肝炎、胆汁うっ滞、心毒性、およびアルコール摂取の１つまたは複数を含む。幾つかの実施形態では、薬物性疾患または状態の誘導薬物は、エタノール、医薬品、および生物学的作用物質の１つまたは複数を含む。幾つかの実施形態では、誘導薬物が細胞と接触することにより、細胞において薬物性疾患または状態が誘導される。ある特定の実施形態では、医薬品は、スタチン、抗うつ薬、抗生物質、ベンゾジアゼピン、ニコチン酸、タクリン、アスピリン、キニジン、ＮＳＡＩＤ（アスピリン、インドメタシン、イブプロフェン、ナプロキセン、ピロキサミン、ナブメトンを含むが、これらに限定されない）、アセトアミノフ���ン、フェニトイン、イソニアジド、ジクロフェナク、オーグメンチン（アモキシシリン／クラブラン酸の組合せ）、ミノサイクリン、ニトロフラントイン、フェノフィブラート、メタンフェタミン、アンフェタミン、エリスロマイシン、クロルプロマジン、コトリモキサゾール（スルファメトキサゾールおよびトリメトプリムの組合せ）、アミトリプチリン、テマゼパム、ジアゼパム、カルバマゼピン、アンピシリン、リファンピン、エストラジオール、カプトプリル、経口避妊ピル（経口避妊薬）、タンパク質同化ステロイド、ジスルフィラム、ビタミンＡ、ハロペリドール、イミプラミン、テトラサイクリン、フェニトイン、メトトレキサート、アミオダロン、メチルドパ、化学療法剤、造影剤、チアジン（フェノチアジンを含むが、これに限定されない）、クロラムフェニコール、ジゴキシン、ジギトキシン、オキサゼパム、フェノバルビタール、キニジン、バンコマイシン、テオフィリン、ベラパミル、インターフェロン（インターフェロンベータ１ａを含むが、これに限定されない）、およびワルファリンを含む。幾つかの実施形態では、生物学的作用物質は、ハーブ抽出物である。ある特定の実施形態では、ハーブ抽出物は、エフェデュラ、カバカバ、シャパラル、カノコソウ、トチノキ抽出物、およびカバの葉の１つまたは複数を含む。ある特定の実施形態では、薬物性疾患または状態は、体重過多、体重増加、肥満、非アルコール性脂肪肝疾患、糖尿病、インシュリン抵抗性、アルコール性脂肪肝疾患、脂質異常症、脂肪症（例えば、肝脂肪症、心脂肪症、腎脂肪症、筋脂肪症）、無βリポタンパク質血症、糖原病、ウェーバー・クリスチャン病、リポジストロフィー；肝疾患、肝臓炎、肝炎、脂肪性肝炎、Ｃ型肝炎、遺伝子型３のＣ型肝炎、アルファ１−抗トリプシン欠乏症、急性妊娠脂肪肝、ウィルソン病；腎疾患；心疾患、高血圧、虚血、心不全、心筋症；中毒；ＨＩＶ；神経変性疾患、パーキンソン病、アルツハイマー病；またはがんの代謝性疾患または状態ではない。幾つかの実施形態では、細胞は、体重過多、体重増加、肥満、非アルコール性脂肪肝疾患、糖尿病、インシュリン抵抗性、アルコール性脂肪肝疾患、脂質異常症、脂肪症（例えば、肝脂肪症、心脂肪症、腎脂肪症、筋脂肪症）、無βリポタンパク質血症、糖原病、ウェーバー・クリスチャン病、リポジストロフィー；肝疾患、肝臓炎、肝炎、脂肪性肝炎、Ｃ型肝炎、遺伝子型３のＣ型肝炎、アルファ１−抗トリプシン欠乏症、急性妊娠脂肪肝、ウィルソン病；腎疾患；心疾患、高血圧、虚血、心不全、心筋症；中毒；ＨＩＶ；神経変性疾患、パーキンソン病、アルツハイマー病；およびがんの代謝性疾患または状態の１つまたは複数を有さない。幾つかの実施形態では、細胞と薬物性疾患または状態を誘導するのに適した薬物との接触前、接触時、および接触後の１つまたは複数で、細胞をＭＣＪ調節化合物と接触させる。
【０００９】
本発明のさらに別の態様によれば、ＭＣＪ阻害化合物および薬学的に許容される担体を含む組成物が提供される。ある特定の実施形態では、上記組成物は、担体剤、送達剤、標識剤、およびターゲティング剤の１つまたは複数をさらに含む。幾つかの実施形態では、担体剤は、ナノキャリア、細胞透過性ペプチド、ポリマー、デンドリマー、ｓｉＲＮＡバイオコンジュゲート、および脂質ベースのｓｉＲＮＡ担体の１つまたは複数を含む。幾つかの実施形態では、医薬組成物は、薬物性疾患または状態を誘導することが知られているか、または疑われる薬物をさらに含む。ある特定の実施形態では、ＭＣＪ阻害化合物は、ターゲティング剤、任意にミトコンドリアターゲティング剤を含む。幾つかの実施形態では、ＭＣＪ阻害化合物は、小分子ＭＣＪ阻害剤を含む。ある特定の実施形態では、小分子ＭＣＪ阻害剤は、低分子干渉ＲＮＡ分子（ｓｉＲＮＡ）、小ヘアピンＲＮＡ（ｓｈＲＮＡ）分子、アンチセンスＤＮＡオリゴ、小ガイドＲＮＡ（ｓｇＲＮＡ）分子、転写活性化因子様エフェクターヌクレアーゼ（タレン）分子である。幾つかの実施形態では、小分子ＭＣＪ阻害剤分子は、配列番号７として本明細書中に記載される核酸配列を有する。幾つかの実施形態では、小分子ＭＣＪ阻害剤分子は、配列番号２１として本明細書中に記載される核酸配列を有する。幾つかの実施形態では、上記組成物は、薬物が細胞と接触するかまたは対象に送達されたときに、それぞれ細胞および対象の少なくとも１つにおいて薬物性疾患または状態を誘導するのに適した薬物をさらに含む。
【００１０】
本発明は、本発明の任意の記載される目的または特色の１つまたは複数を満たさなくてはならない組成物または方法に限定されることを意図しない。また、本発明は、本明細書中に記載する例示的なまたは主要な実施形態に限定されないことも重要である。当業者による修飾および置換は、本発明の範囲内であるとみなされる。
【００１１】
配列の簡単な説明
配列番号１は、ＧＥＮＢＡＮＫ（登録商標）受託番号ＡＡＤ３８５０６．１として記載されるヒトＤＮＡＪドメイン含有タンパク質ＭＣＪのアミノ酸配列である：
MAARGVIAPVGESLRYAEYLQPSAKRPDADVDQQGLVRSLIAVGLGVAALAFAGRYAFRIWKPLEQVITETAKKISTPSFSSYYKGGFEQKMSRREAGLILGVSPSAGKAKIRTAHRRVMILNHPDKGGSPYVAAKINEAKDLLETTTKH
配列番号２は、ＧＥＮＢＡＮＫ（登録商標）受託番号ＡＦ１２６７４３．１として記載されるヒトＤＮＡＪドメイン含有タンパク質ＭＣＪのｍＲＮＡ配列（完全ＣＤＳ）である：
ggtcaggaaagctcaggcaagcccaccctcaggcattacagctagactccgagcttactgggcagtcatctgattcgaccaacatcagttcgcagggcttaagcccagtcccttacggcggctggggagggaccaggcccaagtatataaagctccctgagggtccgcgttggctttgcgcctgtgagtgtgattcaagaacgtcccagtgcccttggctcctttcggagtgtgaccccgtgcttgcacgggacacgttacccagctcgggtgagaagggtatcttccgggaacctcgcctttaatagcacaacgagcgcagagtccactggatctgcgagaagaaaccgcgctaactagtttgtccctacggccgcctcgtagtcactgccgcggcgccttgagtctccgggccgccttgccatggctgcccgtggtgtcatcgctccagttggcgagagtttgcgctacgctgagtacttgcagccctcggccaaacggccagacgccgacgtcgaccagcagggactggtaagaagtttgatagctgtaggactgggtgttgcagctcttgcatttgcaggtcgctacgcatttcggatctggaaacctctagaacaagttatcacagaaactgcaaagaagatttcaactcctagcttttcatcctactataaaggaggatttgaacagaaaatgagtaggcgagaagctggtcttattttaggtgtaagcccatctgctggcaaggctaagattagaacagctcataggagagtcatgattttgaatcacccagataaaggtggatctccttacgtagcagccaaaataaatgaagcaaaagacttgctagaaacaaccaccaaacattgatgcttaaggaccacactgaaggaaaaaaaaagaggggacttcgaaaaaaaaaaaagccctgcaaaatattctaaaacatggtcttcttaattttctatatggattgaccacagtcttatcttccaccattaagctgtataacaataaaatgttaatagtcttgctttttattatcttttaaagatctccttaaattct
配列番号３は、マウスＤＮＡＪドメイン含有タンパク質のアミノ酸配列である：
MATGGGVTSRESLRYAEYLPPSAQRSDADIDHTAGRRLIAVGLGVAAVAFAGRYAFQIWKPLEQVITATARKISSPSFSSYYKGGFEQKMSKREASLILGVSPSAGKAKIRTAHKRIMILNHPDKGGSPYVASKINEAKDLLEASSKAN
配列番号４は、ＧＥＮＢＡＮＫ（登録商標）受託番号ＡＡＨ９５４００．１として記載されるサブファミリーＣのヒトＤｎａＪ（Ｈｓｐ４０）ホモログのアミノ酸配列である：
MAARGVIAPVGESLRYAEYLQPSAKRPDADVDQQRLVRSLIAVGLGVAALAFAGRYAFRIWKPLEQVITETAKKISTPSFSSYYKGGFEQKMSRREAGLILGVSPSAGKAKIRTAHRRVMILNHPDKGGSPYVAAKINEAKDLLETTTKH
配列番号５は、ＧＥＮＢＡＮＫ（登録商標）受託番号ＢＣ０９５４００．１として記載されるサブファミリーＣのヒトＤｎａＪ（Ｈｓｐ４０）ホモログのヌクレオチド配列である：
agtctccgggccgccttgccatggctgcccgtggtgtcatcgctccagttggcgagagtttgcgctacgctgagtacttgcagccctcggccaaacggccagacgccgacgtcgaccagcagagactggtaagaagtttgatagctgtaggcctgggtgttgcagctcttgcatttgcaggtcgctacgcatttcggatctggaaacctctagaacaagttatcacagaaactgcaaagaagatttcaactcctagcttttcatcctactataaaggaggatttgaacagaaaatgagtaggcgagaagctggtcttattttaggtgtaagcccatctgctggcaaggctaagattagaacagctcataggagagtcatgattttgaatcacccagataaaggtggatctccttacgtagcagccaaaataaatgaagcaaaagacttgctagaaacaaccaccaaacattgatgcttaaggaccacactgaaggaaaaaaaaagaggggacttcaaaaaaaaaaaaaaagccctgcaaaatattctaaaacatggtcttcttaattttctatatggattgaccacagtcttatcttccaccattaagctgtataacaataaaatgttaatagtcttgctttttattatcttttaaagatctccttaaattctataactgatcttttttcttattttgtttgtgacattcatacatttttaagatttttgttatgttctgaattcccccctacacacacacacacacacacacacacacacgtgcaaaaaatatgatcaagaatgcaattgggatttgtgagcaatgagtagacctcttattgtttatatttgtaccctcattgtcaatttttttttagggaatttgggactctgcctatataaggtgttttaaatgtcttgagaacaagcactggctgatacctcttggagatatgatctgaaatgtaatggaatttattaaatggtgtttagtaaagtaggggttaaggacttgttaaagaaccccactatctctgagaccctatagccaaagcatgaggacttggagagctactaaaatgattcaggtttacaaaatgagccctgtgaggaaaggttgagagaagtctgaggagtttgtatttaattatagtcttccagtactgtatattcattcattactcattctacaaatatttattgaccccttttgatgtgcaaggcactatcgtgcgtcccctgagagttgcaagtatgaagcagtcatggatcatgaaccaaaggaacttatatgtagaggaaggataaatcacaaatagtgaatactgttagatacagatgatatattttaaaagttcaaaggaagaaaagaatgtgttaaacactgcatgagaggaggaataagtggcatagagctaggctttagaaaagaaaaatattccgataccatatgattggtgaggtaagtgttattctgagatgagaattagcagaaatagatatatcaatcggagtgattagagtgcagggtttctggaaagcaaggtttggacagagtggtcatcaaaggccagccctgtgacttacactgcattaaattaatttcttagaacatagtccctgatcattatcactttactattccaaaggtgagagaacagattcagatagagtgccagcattgtttcccagtattcctttacaaatcttgggttcattccaggtaaactgaactactgcattgtttctatcttaaaatactttttagatatcctagatgcatctttcaacttctaacattctgtagtttaggagttctcaaccttggcattattgacatgttaggccaaataattttttttgtgggaggtctcttgtgcgttttagatgattagcaataatccctgacctgttatctactaaagactagtcgtttctcatcagttgtgacaacaaaaatggttccagatattgccaaatgccctttagaggacagtaatcgcccccagttgagaaccatttcagtaaaactttaattactattttttcttttggtttataaaataatgatcctgaattaaattgatggaaccttgaagtcgataaaatatatttcttgctttaaagtccccatacgtgtcctactaattttctcatgctttagtgttttcacttttctcctgttatccttgtacctaagaatgccatcccaatccccagatgtccacctgcccaaagtctaggcatagctgaaggccaagctaaaatgtatccctctttttctggtacatgcagcaaaagtaatatgaattatcagctttctgagagcaggcattgtatctgtcttgtttggtgttacattggcacccaataaatatttgttgagcgaaaaaaaaaaaaaaa
配列番号６は、ヒトＭＣＪ  ｃＤＮＡ配列である。
caccctcaggcactacagctagactccgagcttactgggcagtcatctgattcgaccaacatcagttcgcagggcttaagcccagtcccttacggcggcctggggagggaccaggcccaagtatataaagctccctgagggtccgcgttggctttgcgcctgtgagtgtgattcaagaacgtcccagtgcccttggctcctttcggagtgtgaccccgtgcttgcacgggacacgttacccagctcgggtgagaagggtatcttccgggaacctcgcctttaatagcacaacgagcgcagagtccactggatctgcgagaagaaaccgcgctaactagtttgtccctacggccgcctcgtagtcactgccgcggcgccttgagtctccgggccgccttgccatggctgcccgtggtgtcatcgctccagttggcgagagtttgcgctacgctgagtacttgcagccctcggccaaacggccagacgccgacgtcgaccagcagagactggtaagaagtttgatagctgtaggactgggtgttgcagctcttgcatttgcaggtcgctacgcatttcggatctggaaacctctagaacaagttatcacagaaactgcaaagaagatttcaactcctagcttttcatcctactataaaggaggatttgaacagaaaatgagtaggcgagaagctggtcttattttaggtgtaagcccatctgctggcaaggctaagattagaacagctcataggagagtcatgattttgaatcacccagataaaggtggatctccttacgtagcagccaaaataaatgaagcaaaagacttgctagaaacaaccaccaaacattgatgcttaaggaccacactgaaggaaaaaaaaagaggggacttcgaaaaaaaaaaaagccctgcaaaatattctaaaacatggtcttcttaattttctatatggattgaccacagtcttatcttccaccattaagctgtataacaataaaatgttaatagtcttgctttttattatcttttaaagatctccttaaattctataactgatcttttttcttattttgtttgtgacattcatacatttttaagatttttgttatgttctgaattcccccctacacacacacacacacacacacacacacacacgtgcaaaaaatatgatcaagaatgcaattgggatttgtgagcaatgagtagacctcttattgtttatatttgtaccctcattgtcaatttttttttagggaatttgggactctgcctatataaggtgttttaaatgtcttgagaacaagcactggctgatacctcttggagatatgatctgaaatgtaatggaatttattaaatggtgtttagtaaagtaggggttaaggacttgttaaagaaccccactatctctgagaccctatagccaaagcatgaggacttggagagctactaaaatgattcaggtttacaaaatgagccctgtgaggaaaggttgagagaagtctgaggagtttgtatttaattatagtcttccagtactgtatattcattcattactcattctacaaatatttattgaccccttttgatgtgcaaggcactatcgtgcgtcccctgagagttgcaagtatgaagcagtcatggatcatgaaccaaaggaacttatatgtagaggaaggataaatcacaaatagtgaatactgttagatacagatgatatattttaaaagttcaaaggaagaaaagaatgtgttaaacactgcatgagaggaggaataagtggcatagagctaggctttagaaaagaaaaatattccgataccatatgattggtgaggtaagtgttattctgagatgagaattagcagaaatagatatatcaatcggagtgattagagtgcagggtttctggaaagcaaggtttggacagagtggtcatcaaaggccagccctgtgacttacactgcattaaattaatttcttagaacatagtccctgatcattatcactttactattccaaaggtgagagaacagattcagatagagtgccagcattgtttcccagtattcctttacaaatcttgggttcattccaggtaaactgaactactgcattgtttctatcttaaaatactttttagatatcctagatgcatctttcaacttctaacattctgtagtttaggagttctcaaccttggcattattgacatgttaggccaaataattttttttgtgggaggtctcttgtgcgttttagatgattagcaataatccctgacctgttatctactaaagactagtcgtttctcatcagttgtgacaacaaaaatggttccagatattgccaaatgccctttagaggacagtaatcgcccccagttgagaaccatttcagtaaaactttaattactattttttcttttggtttataaaataatgatcctgaattaaattgatggaaccttgaagtcgataaaatatatttcttgctttaaagtccccatacgtgtcctactaattttctcatgctttagtgttttcacttttctcctgttatccttgtacctaagaatgccatcccaatccccagatgtccacctgcccaaagtctaggcatagctgaaggccaagctaaaatgtatccctctttttctggtacatgcagcaaaagtaatatgaattatcagctttctgagagcaggcattgtatctgtcttgtttggtgttacattggcacccaataaatatttgttgagtgaatgaaaaaaaaaaaaaaaaaa
以下のｓｉＲＮＡ分子は、ｓｉＭＣＪオリゴとも称され、二重鎖ＲＮＡオリゴである。
【００１２】
配列番号７  ヒトｓｉＲＮＡ配列gaagatttcaactcctagc。
配列番号８  ヒトｓｉＲＮＡ配列ggcgagaagctggtcttattt。
配列番号９  ヒトｓｉＲＮＡ配列gctaagattagaacagctcat。
【００１３】
配列番号１０  ヒトｓｉＲＮＡ配列gctcataggagagtcatgatt。
配列番号１１  ヒトｓｉＲＮＡ配列tttgggactctgcctatataa。
配列番号１２  ヒトｓｉＲＮＡ配列gttgcagctcttgcatttgca。
【００１４】
配列番号１３  ヒトｓｉＲＮＡ配列ctacgcatttcggatctggaa。
配列番号１４  ヒトｓｉＲＮＡ配列gcagggactggtaagaagttt。
配列番号１５  ヒトｓｉＲＮＡ配列gttgcagctcttgcatttgca。
【００１５】
配列番号１６  ヒトｓｉＲＮＡ配列cagataaaggtggatctcctt。
配列番号１７  ヒトｓｉＲＮＡ配列gctcataggagagtcatgatt。
配列番号１８  ヒトｓｉＲＮＡ配列gctaagattagaacagctcat。
【００１６】
配列番号１９  ヒトｓｉＲＮＡ配列gtttgatagctgtaggact。
配列番号２０  ヒトｓｉＲＮＡ配列tcacccagataaaggtgga。
配列番号２１  ヒトｓｉＲＮＡ配列gaagatttcaactcctagctt。
【００１７】
配列番号２２  マウスｓｉＲＮＡ配列gcgagaggctagtcttatt。
配列番号２３は、マウスＭＣＪ  ｃＤＮＡ配列である：
tcggagtcctgcagtgccatggctaccggtggcggcgtgacctccagagaggggctgcgctacgccgaatacctgcctccttctgcccaaaggtcggacgccgacatcgaccacacagcggggagaaggttgctagctgtaggactaggtgttgcagctgttgcatttgcaggtcgctatgcatttcagatctggaaacctctagaacaagtaatcacggcaacagcaaggaagatttcctctccaagcttttcatcctactataaaggaggattcgagcagaaaatgagtaagcgagaggctagtcttattttaggtgtaagcccatctgctggcaaggccaagattagaacagcacacaagagaattatgattttaaaccatccagacaaaggtggatctccttacttagcatccaaaataaatgaagcaaaagatttgctcgaagcatccagcaaagctaactgatgctaaaggactgtacataccgagggaaaatggaacaaacgcacagctgtaaaagtccttcagaagaatgtggcacgtggtcgtgttccatactgacccagtctgttttctgtcattaagtgtgcagcaataaaagcctggcagccttgcagccttggtctggcagggacttcatccgtcaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaa
【図面の簡単な説明】
【００１８】
【図１】図１Ａ〜Ｂは、肝硬変患者由来の肝臓におけるＭＣＪレベルの増加を示す顕微鏡画像およびグラフを示す図である。図１Ａ左側パネルにおける免疫組織化学の結果は、健常な対照対象（ＮＬ）（ｎ＝５）由来の肝臓におけるＭＣＪ発現を示し、図１Ａ右側パネルにおける免疫組織化学の結果は、肝硬変（Ｃ型肝炎）を有する患者（ｎ＝１６）由来の肝臓におけるＭＣＪ発現を示す。図１Ｂは、健常な患者および肝硬変患者に関して決定したＭＣＪ発現のレベルを示すグラフである。結果は、硬変した肝臓におけるＭＣＪのレベルの統計学的に有意な増加を示す。
【図２】図２Ａ〜Ｂは、薬物性肝傷害（ＤＩＬＩ）に関するマウスモデルとしてアセトアミノフェン投与の使用を示す顕微鏡画像およびグラフを提供する図である。結果は、アセトアミノフェンを腹腔内投与した野生型（ＷＴ）およびＭＣＪノックアウト（ＫＯ）マウスに関して示す。図２Ａは、４８時間後の結果を示し、Ｆ４／８０マクロファージマーカーに関して免疫組織化学によって検査した肝臓切片におけるマクロファージの存在を示す。図２Ａ（左側パネル）は、ＷＴに関する結果を示し、図２Ａ（右側パネル）は、ＭＣＪ  ＫＯに関する結果を示す。図２Ｂ右側グラフは、血清中のＡＬＴおよびＡＳＴトランスアミナーゼのレベルを示す。結果により、ＫＯマウスは、肝臓においてアセトアミノフェンによって誘導される損傷に対してより抵抗性であることが示された。図２Ｂ左側パネルは、ＫＯマウスにおけるより少ないＦ４／８０マクロファージマーカーを示す。ＭＣＪ  ＫＯマウスは、ＷＴマウスよりも少ない炎症を発症し、より少ないレベルのトランスアミナーゼを有した。図２Ｂ（左側パネル）は、各遺伝子型に関するマウス１匹の代表であり、図２Ｂ（右側パネル）は、各遺伝子型に関するｎ＝４マウスに対する値を示す。
【図３】図３Ａ〜Ｃは、肝硬変に関する胆管結紮（ＢＤＬ）マウスモデルを利用した、胆管結紮手術を受けたＷＴおよびＭＣＪ  ＫＯマウスからの結果を示す図である。図３Ａは、１４日後の肝臓の顕微鏡画像を示す。組織損傷は、炎症のマーカーとしてのＩＨＣによるマクロファージ（Ｆ４／８０）の存在によって示される。図３Ａ左側パネルは、ＷＴマウス１匹由来の画像であり、図３Ａ右側パネルは、ＭＣＪ  ＫＯマウス１匹由来の画像である。図３Ｂは、各遺伝子型に関するｎ＝４マウスに対するＦ４／８０陽性染色値を示すグラフである。図３Ｃは、胆管結紮手術時のＷＴおよびＭＣＪ  ＫＯマウスに関する生存曲線を提供する。ＭＣＪ  ＫＯマウスは、肝硬変型の肝損傷を発症するのに対してより抵抗性である。
【図４】図４Ａ〜Ｂは、ＭＣＪ  ｓｈＲＮＡ（ｓｈＭＣＪ）がＤＣＡ誘導死から初代肝細胞を防御したことを示すグラフを提供する図である。図４Ａは、対照（ＷＴ）またはｓｈＭＣＪ（ｓｈＭＣＪ）発現プラスミドでトランスフェクトしたＷＴマウス由来の初代肝細胞における酸素消費速度（ＯＣＲ）値を示す。結果により、ｓｈＭＣＪ処理が、ＷＴと比較してＯＣＲを低減させることが示された。図４Ｂは、対照（ＷＴ）またはｓｈＭＣＪ（ｓｈＭＣＪ）発現プラスミドでトランスフェクトしたＷＴマウス由来の初代肝細胞におけるＤＣＡ  １００μＭ処理後のカスパーゼ−３（細胞死に関するマーカー）を示す。結果により、ｓｈＭＣＪによる処理が、ＷＴと比較してカスパーゼ−３活性を低減させることが示された。
【図５】図５Ａ〜Ｂは、免疫組織化学、続くさらなる定量化によって検査されたＭＣＪ発現を示す顕微鏡画像およびグラフを提供する図である。図５Ａは、免疫組織化学によって決定される、健常な対照対象（対照）（ｎ＝７）および薬物性肝傷害を有する患者（ＤＩＬＩ）（ｎ＝２３）由来の肝臓におけるＭＣＪ発現を示す。図５Ｂは、ウェスタンブロット分析および対照としてのＧＡＰＤＨに対するＭＣＪの比によって決定される場合の、対照マウス（ｎ＝３）における、およびアセトアミノフェン（ＡＰＡＰ）で２４または４８時間処理したマウスの肝臓におけるＭＣＪの発現を示す。＊は、統計学的に有意であることを意味する（ｐ＜０．０５）。＊＊は、統計学的に有意であることを意味する（ｐ＜０．０１）。
【図６】図６Ａ〜Ｃは、ＭＣＪが、アセトアミノフェン誘導性ミトコンドリア機能障害および死から肝細胞を防御したことを示す研究からのグラフを提供する図である。図６Ａは、ＡＴＰレベルのグラフであり、図６Ｂは、ミトコンドリアＲＯＳレベルのグラフであり、図６Ｃは、アセトアミノフェン（１０ｍＭ）で９時間処理したＷＴおよびＭＣＪ  ＫＯ初代肝細胞（ｎ＝３）におけるＴＵＮＥＬアッセイによって測定される細胞死を示すグラフである。＊は、統計学的に有意であることを意味し（ｐ＜０．０５）、＊＊＊は、統計学的に有意であることを意味する（ｐ＜０．００１）。
【図７】図７は、ＭＣＪ  ｓｉＲＮＡ（ｓｉＭＣＪ）がｉｎ  ｖｉｖｏで肝臓においてＭＣＪ発現を崩壊させるのに使用することができることを示す結果のブロットを提供する図である。野生型マウスに、静脈内注射によりＩｎｖｉｖｏｆｅｃｔａｍｉｎｅと組み合わせてｓｉＭＣＪ（１．７ｍｇ／Ｋｇ）を投与した。各マウスを、投与後の指示された時間に収集した。肝臓を収集して、ウェスタンブロット分析によって、ＭＣＪ発現を決定した。ＧＡＤＰＨをローディング対照として使用した。
【図８】図８Ａ〜Ｃは、ｓｉＭＣＪの投与がアセトアミノフェン誘導性肝損傷を防止したことを示すブロット、顕微鏡画像、およびグラフを提供する図である。図８Ａは、ｉｎｖｉｖｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ３．０．と組み合わせて（ｓｉＭＣＪマウス）、またはｓｉＭＣＪを用いずに（対照マウス）ｓｉＭＣＪ（１．７ｍｇ／Ｋｇ）の静脈内注射を付与した野生型マウスからの結果のブロットを示す。２０時間後、マウスにアセトアミノフェンの腹腔内用量（３６０ｍｇ／Ｋｇ）を施した。２４時間後にマウスを収集して、ウェスタンブロット分析によって肝臓におけるＭＣＪ発現を決定した。ブロットの各レーンは、個々のマウス（ｎ＝３）由来の肝臓を表す。図８Ｂ〜Ｃは、図８Ａに記載するように処理および収集したマウス（ｎ＝５）からの結果を示す。図８Ｂは、肝臓切片由来の代表的なＨ＆Ｅ染色を示し、図８Ｃは、肝損傷の平均値（ｎ＝５）を示す。＊、ｐ＜０．０５。統計学的有意性は、スチューデントｔ検定によって決定した。
【図９】図９Ａ〜Ｂは、アセトアミノフェン後のｓｉＭＣＪによる処理が、アセトアミノフェン誘導性肝損傷を防止したことを示すウェスタンブロットおよびグラフを示す図である。研究に関して、野生型マウス（ｎ＝３）に、アセトアミノフェンの腹腔内用量（３６０ｍｇ／Ｋｇ）を投与した。２４時間後、マウスに、ｉｎｖｉｖｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ３．０．と組み合わせて（ｓｉＭＣＪマウス）、またはｓｉＭＣＪを用いずに（対照マウス）ｓｉＭＣＪ（１．７ｍｇ／Ｋｇ）の静脈内注射を施した。２４時間後に（アセトアミノフェン過剰投与の合計４８時間後に）マウスを収集して、肝臓および血清を採取した。図９Ａは、ウェスタンブロット分析によって決定される場合の肝臓におけるＭＣＪ発現を示す。ブロットの各レーンは、個々のマウスを表す。図９Ｂは、血清中で決定されるＡＬＴレベルのグラフを示す（ｎ＝５）。＊＊は、スチューデントｔ検定によって決定される場合に統計学的有意性である（ｐ＜０．０１）ことを表す。
【図１０】図１０は、ｈ−ｓｉＭＣＪでトランスフェクトしたヒトＭＣＦ７細胞におけるＭＣＪの低減を示すウェスタンブロットを示す図である。ＣｏｘＩＶ（ミトコンドリアタンパク質）およびＧＡＰＤＨレベルもまた、対照（ビヒクル）として検査した。
【発明を実施するための形態】
【００１９】
ここで、ＭＣＪポリペプチド活性を低減させる方法および化合物が、毒性疾患および状態を治療するのに有用であることを発見した。ここで、ＭＣＪ（ＤｎａＪＣ１５）の活性を低減させることによって、細胞、臓器および臓器系に対する毒性の効果を軽減させることができること、およびＭＣＪポリペプチド活性の非存在下で、肝臓においてミトコンドリア機能の増加が見られることを確認した。ここでは、ＭＣＪノックアウトマウスにおける肝硬変（胆管結紮、ＢＤＬ）のマウスモデルにおける研究により、ＭＣＪ欠損が線維症の発症から防御することが実証されている。高用量のアセトアミノフェンの投与を含む薬物性肝傷害（ＤＩＬＩ）に関するマウスモデルを使用して、ＭＣＪポリペプチドノックアウトマウスが、野生型マウスよりもＤＩＬＩに対してより抵抗性であることが示された。さらに、ここでは、ＭＣＪに関するｓｉＲＮＡによる処理が、毒性傷害から野生型細胞を防御することが確認され、例えば、限定的であることを意図しないが、ＭＣＪに関するｓｉＲＮＡの投与が、アセトアミノフェンによって引き起こされる毒性傷害の発症から野生型肝細胞を防御することがわかった。
【００２０】
メチル化制御Ｊタンパク質（ＭＣＪ）／ＤｎａＪＣ１５は、コシャペロンのＤｎａＪＣサブファミリーの成員である。ＭＣＪは、１５０個のアミノ酸の小タンパク質であり、ＤｎａＪＣファミリーの特有の成員である。それは、一般的なＮ末端位置と対照的に、Ｃ末端に位置するＪドメインを含有し、そのＮ末端領域は、任意の他の公知のタンパク質と相同性を有さない。さらに、ＭＣＪはまた、膜貫通ドメインを含有する一方で、ほとんどのＤｎａＪタンパク質が可溶性である。系統発生的研究により、ＭＣＪは、脊椎動物においてのみ存在し、そこでは、それは高度に保存されることが示されている（Ｈａｔｌｅ他、２００７年）。ＧＥＮＢＡＮＫ（登録商標）受託番号ＡＡＤ３８５０６．１のヒトＤＮＡＪドメイン含有タンパク質ＭＣＪのアミノ酸配列は、配列番号１として本明細書中に記載される。配列番号２は、ＧＥＮＢＡＮＫ（登録商標）受託番号ＡＦ１２６７４３．１として記載されるヒトＤＮＡＪドメイン含有タンパク質ＭＣＪのｍＲＮＡ配列である。ＧＥＮＢＡＮＫ（登録商標）受託番号ＡＡＨ９５４００．１は、サブファミリーＣのヒトＤｎａＪ（Ｈｓｐ４０）ホモログのアミノ酸配列を提供し、それは、配列番号４として本明細書中で提供される。配列番号５は、ＧＥＮＢＡＮＫ（登録商標）受託番号ＢＣ０９５４００．１として記載されるサブファミリーＣのヒトＤｎａＪ（ＨＳＰ４０）ホモログのヌクレオチド配列である。配列番号６は、ヒトＭＣＪ  ｃＤＮＡ配列である。
【００２１】
ここで、細胞のＭＣＪポリペプチド活性のレベルが、薬物性疾患もしくは状態の存在または非存在と相関すること、およびＭＣＪポリペプチド活性の減少されたレベルが、誘導薬物または作用物質の摂取と関連付けられる薬物性疾患または状態を有する対象の危険性の低減に相当することが決定されている。より高い、より低い、減少された、低減された、増加されたなどの用語は、対照レベルまたは値と比較した場合の相対レベルまたは値を表し得ることが当業者には理解されよう。
【００２２】
本発明は、一つには、ＭＣＪ／ＤｎａＪＣ１５（本明細書中ではＭＣＪポリペプチドとも称される）の活性（例えば、レベルおよび／または機能）を低減させて、細胞、組織、臓器、および対象において毒性および薬物性疾患ならびに状態を低減させる方法に関する。本発明の組成物、化合物、および方法は、対象において細胞、組織、臓器、および臓器系の１つまたは複数に対する毒性および損傷の１つまたは複数をもたらす薬物または作用物質の存在を特徴とし得る薬物性疾患または状態を有するか、または有する危険性がある対象を治療するのに使用され得る。したがって、本発明の方法および化合物は、対象において薬物性毒性と関連付けられる細胞、組織、および臓器における状態を治療するのに有用である。本発明はまた、一つには、ＭＣＪポリペプチド活性を、対象における初期活性レベルから、薬物性疾患もしくは状態の症状を低減または排除するのに、あるいは薬物性疾患もしくは状態を治療するのに有効である、より低い活性レベルへ減少させること／阻害することに関する。
【００２３】
本発明のある特定の実施形態では、ＭＣＪポリペプチド活性を調節することは、細胞、組織、および／または対象においてＭＣＪポリペプチド機能を低減させることを含む。ＭＣＪポリペプチド機能を低減させることは、細胞、組織、または対象における、ＭＣＪポリペプチドの量の減少および／またはＭＣＪポリペプチドの活性の減少に起因し得る。幾つかの実施形態では、本発明の方法は、細胞または組織においてＭＣＪポリペプチドの量を変更させずにＭＣＪポリペプチドの活性を低減させることが理解される。ＭＣＪポリペプチドの活性を低減させる本発明の方法の非限定的な例は、ＭＣＪポリペプチドを、ＭＣＪポリペプチドに結合して、その活性を低減させるＭＣＪ阻害抗体またはその機能性断片と接触させることを含む。幾つかの実施形態では、本発明の方法は、細胞または組織においてＭＣＪポリペプチドの量を低減させて、それにより細胞、組織または対象においてＭＣＪポリペプチド活性を低減させることが理解される。細胞または組織においてＭＣＪポリペプチドの量を低減させる方法の非限定的な例は、細胞および／または組織を、細胞または組織においてＭＣＪポリペプチドの量を低減させ、同時に細胞および／または組織においてＭＣＪポリペプチド活性の量を低減させるＭＣＪ分子のＲＮＡ阻害剤などの小分子阻害剤と接触させることを含む。
【００２４】
本発明の治療方法は、１つまたは複数のＭＣＪ阻害化合物を、細胞、組織、または対象に投与して、細胞、組織、および／または対象において、内因性ＭＣＪポリペプチドの活性を低減させ、内因性ＭＣＪポリペプチドの量を低減させ、および／または内因性ＭＣＪポリペプチドの量および活性の両方を低減させることを含み得る。
【００２５】
ＭＣＪポリペプチド機能を阻害して、および／またはＭＣＪポリペプチドレベルを低減させる分子および化合物は、本明細書中でＭＣＪ調節分子および化合物と称される。ＭＣＪポリペプチド活性を減少または低減させるＭＣＪ調節分子または化合物はまた、本明細書中でＭＣＪ阻害分子または化合物と称される。本明細書中で使用する場合、ＭＣＪ調節分子に関して使用される「分子」という用語は、変異体ＭＣＪポリペプチドまたはその断片、小分子ＭＣＪ阻害剤、ＲＮＡ干渉分子、抗体またはその断片、ＭＣＪポリヌクレオチドを指す。本明細書中で使用する場合、ＭＣＪ調節化合物に関して使用される「化合物」という用語は、標識剤、ターゲティング剤、送達剤、配列タグ等などのさらなる要素を含む変異体ＭＣＪポリペプチドまたはその断片、小分子ＭＣＪ阻害剤、ＲＮＡ干渉分子、抗体またはその断片、ＭＣＪポリヌクレオチドを指す。したがって、本発明の幾つかの実施形態では、ＭＣＪ調節化合物は、ＭＣＪ調節分子で構成され、本発明のある特定の実施形態では、ＭＣＪ調節化合物は、ＭＣＪ調節分子および１つまたは複数のさらなる要素を含む。
【００２６】
本発明は、細胞、組織または対象に、薬物性疾患または状態に関する治療として、細胞、組織、または対象においてＭＣＪポリペプチド活性を減少させるのに有効な量でＭＣＪ阻害分子または化合物を投与する方法を含む。本明細書中で使用する場合、「薬物性疾患または状態」は、対象に対して臓器損傷および傷害をもたらす作用物質（「薬物」）の、対象による摂取に起因する疾患または状態を意味する。本発明の方法で治療され得る薬物性疾患および状態の例として、薬物性肝疾患もしくは状態、薬物性腎疾患もしくは状態、薬物性心疾患もしくは状態、または薬物性心血管疾患もしくは状態が挙げられるが、これらに限定されず、それらの例として、肝硬変、肝線維症、静脈閉塞性肝疾患、特異体質性毒性、バッド・キアリ症候群、肝損傷、腎損傷、薬物アレルギー、急性腎傷害（ＡＫＩ）、劇症肝炎、胆汁うっ滞、心毒性、およびアルコール摂取が挙げられるが、これらに限定されない。
【００２７】
薬物性疾患および状態に関する誘導剤
薬物性疾患または状態は、対象中に存在すると、対象において薬物性疾患または状態をもたらす作用物質の摂取に起因する。摂取されると、薬物性疾患または状態をもたらし得る作用物質のタイプの例として、エタノール、医薬品、および生物学的作用物質が挙げられるが、これらに限定されない（それらの非限定的な例は、ハーブ抽出物、ハーブティー、ハーブ栄養補助食品等である）。対象への、薬物性疾患または状態を誘導する作用物質の進入の手段は、様々であり得る。薬物性疾患または状態をもたらす作用物質は、様々な状況下で対象に投与されてもよく、それらの非限定的な例は、少なくとも幾分は医療従事者によって決定される臨床治療の一部としての；対象によって決定される治療の一部としての；および医療従事者とともに対象によって決定される治療の一部としての、対象への投与である。本明細書中に記載するような薬物性疾患または状態をもたらす作用物質は、医療従事者によって投与され得るか、または対象によって投与され得る。
【００２８】
本発明の幾つかの実施形態では、医薬品または生物学的作用物質は、臨床状態または疾患を防止または治療するために対象に投与されてもよく、作用物質は、薬物性疾患または状態を二次的に誘導する場合がある。かかる例では、医薬品または生物学的作用物質は、造影用に、状態を治療するために、または別の生理学的理由で対象に投与されてもよく、投与された作用物質はまた、作用物質によって誘導される薬物性疾患または状態である対象における副作用をもたらす。例えば、限定的であることを意図しないが、アセトアミノフェンは、手術後の痛みを低減させるために対象に投与されてもよく、痛みを低減させるのに有効であり得るが、アセトアミノフェンはまた、アセトアミノフェン誘導性肝損傷、肝不全等などの本明細書中に記載するような薬物性疾患または状態を誘導し得る。
【００２９】
本明細書中で使用する場合、誘導剤に関して使用される「用量」は、対象体重当たりの作用物質の量（例えば、ｍｇ／ｋｇ等で）を意味する。誘導剤の用量は、単回投与値として、または対象への作用物質の２回またはそれ以上の投与にわたる対象体重当たりの作用物質の量の累積値として表され得る。対象へ投与される誘導剤の用量は、対象の年齢、体重、タイミング、作用物質クリアランスおよびさらなる条件等などの要因を考慮し得る日常的な手順を使用して決定され得る。本発明のある特定の態様では、薬物性疾患または状態は、薬物性疾患または状態を誘導する医薬品および／または生物学的作用物質の閾値用量での、またはそれを上回る用量の、対象への投与に起因し得る。誘導剤の閾値用量は、薬物性疾患または状態が、その用量またはそれを上回る用量で作用物質によって誘導される用量である、対象に投与される対象体重当たりの作用物質の既定量（例えば、ｍｇ／ｋｇ）であり得る。誘導剤の閾値用量は、薬物性疾患または状態を誘導する作用物質の単回または累積量を指し得る。例えば、限定的であることを意図しないが、医薬品および／または生物学的作用物質は、作用物質に関する閾値用量で、またはそれを上回って対象に投与されると、薬物性疾患または状態をもたらす場合があり、閾値レベル以下の用量で対象に投与されると、薬物性疾患または状態をもたらし得ない。本発明の幾つかの実施形態では、作用物質の閾値用量は、２、３、４、５、６またはそれ以上の対象において本質的に同じであってもよく、対象の大部分において、または全ての対象において本質的に同じであってもよい。
【００３０】
本発明のある特定の態様では、薬物性疾患または状態は、対象において特異体質性応答をもたらす作用物質の投与または摂取に起因し得る。本発明のある特定の実施形態では、特異体質性応答は、対象において薬物性疾患または状態を誘導する、投与される医薬品または生物学的作用物質をもたらすが、特徴を欠如する対象ではもたらさないその個々の対象の１つまたは複数の特異的な生理学的、医学的、遺伝的、および／または他の特徴の結果であり得る。例えば、限定的であることを意図しないが、造影剤の用量は、ある対象に投与されると、薬物性疾患または状態をもたらし得るが、第２の対象、または複数の対象に投与される同じ相対用量は、第２の対象または複数の対象において薬物性疾患または状態をもたらさない。別の非限定的な例では、エフェデュラまたはカバカバなどのハーブ抽出物の用量は、第１の対象または複数の対象において本明細書中に記載する薬物性疾患または状態をもたらさずにその対象（または複数の対象）によって摂取され得るが、第２の対象によって摂取される同じハーブ抽出物の対象体重当たりの等価用量は、第２の対象において薬物性疾患または状態をもたらし得る。本発明の幾つかの態様では、本明細書中に記載する薬物性疾患または状態は、薬物性疾患または状態を誘導する医薬品および／または生物学的作用物質を摂取したか、または投与された対象において特異体質性または免疫アレルギー性（immunoallergic）病原体の１つまたは複数に起因する。本発明の幾つかの実施形態では、対象への、医薬品または生物学的作用物質の投与は、対象に、医薬品または生物学的作用物質を投与することへの基盤ではなく、複数の、ほとんどの、または全ての他の対象中では非存在であり得る対象中に存在する生理学的状態のため、対象において誘導される特異体質性または免疫アレルギー性病原体をもたらし得る。
【００３１】
本明細書中に記載するものなどの薬物性疾患または状態を誘導する作用物質が、対象に入り得る送達手段は、摂取を含み、それは、本明細書中で規定する場合、吸入、注射、吸収、注入、輸注、経口摂取、飲用、摂食等などの手段による進入を含む。吸収による送達の非限定的な例として、経皮収入、粘膜を横切る吸収、皮膚または膜におけるひびによる吸収、目への吸収等が挙げられるが、これらに限定されない。
【００３２】
対象中に存在すると、ＭＣＪポリペプチド活性を低減させる方法および／化合物によって治療され得る薬物性疾患または状態をもたらし得る多数の作用物質。対象中に存在すると、薬物性疾患または状態をもたらし得る医薬品の非限定的な例として、スタチン、抗うつ薬、抗生物質、ベンゾジアゼピン、ニコチン酸、タクリン、アスピリン、キニジン、ＮＳＡＩＤ（アスピリン、インドメタシン、イブプロフェン、ナプロキセン、ピロキシカム、ナブメトンを含むが、これらに限定されない）、アセトアミノフェン、フェニトイン、イソニアジド、ジクロフェナク、オーグメンチン（アモキシシリン／クラブラン酸の組合せ）、ミノサイクリン、ニトロフラントイン、フェノフィブラート、メタンフェタミン、アンフェタミン、エリスロマイシン、クロルプロマジン、コトリモキサゾール（スルファメトキサゾールおよびトリメトプリムの組合せ）、アミトリプチリン、テマゼパム、ジアゼパム、カルバマゼピン、アンピシリン、リファンピン、エストラジオール、カプトプリル、経口避妊ピル（経口避妊薬）、タンパク質同化ステロイド、ジスルフィラム、ビタミンＡ、ハロペリドール、イミプラミン、テトラサイクリン、フェニトイン、メトトレキサート、アミオダロン、メチルドパ、化学療法剤、造影剤、チアジン（フェノチアジンを含むが、これに限定されない）、クロラムフェニコール、ジゴキシン、ジギトキシン、オキサゼパム、フェノバルビタール、キニジン、バンコマイシン、テオフィリン、ベラパミル、インターフェロン（インターフェロンベータ１ａを含むが、これに限定されない）、およびワルファリンが挙げられる。
【００３３】
対象中に存在すると、薬物性疾患または状態をもたらし得る生物学的作用物質の非限定的な例として、ハーブ剤および抽出物が挙げられる。本明細書中に記載するような薬物性疾患または状態をもたらし得るハーブ抽出物の例として、エフェデュラ、カバカバ、シャパラル、カノコソウ、トチノキ抽出物、カバ抽出物、およびカバの葉が挙げられるが、これらに限定されない。
【００３４】
医薬品、および／または生物学的作用物質の摂取に起因する薬物性疾患および状態の対象における存在は、対象において臓器機能を評価するために当該技術分野で使用される血液検査、スキャン、尿検査等などの日常的な診断方法を使用して同定することができる。
【００３５】
対象および対照
本発明の幾つかの態様では、対象は、ヒトまたはイヌ、ネコ、ウマ、ウシ、ヤギおよび霊長類、例えば、サルを含むがこれらに限定されない脊椎動物哺乳動物である。したがって、本発明は、ヒトおよび非ヒト対象において疾患または状態を治療するのに使用することができる。本発明の幾つかの態様では、対象は、農業動物、動物園動物、家畜または非家畜であってもよく、本発明の方法は、獣医学防止および治療レジメンにおいて使用することができる。本発明の幾つかの実施形態では、対象は、ヒトであり、本発明の方法は、ヒト防止および治療レジメンにおいて使用することができる。
【００３６】
本発明を適用することができる対象の非限定的な例は、薬物性疾患または状態を有すると診断されるか、薬物性疾患または状態を有することが疑われるか、あるいは薬物性疾患または状態を有する危険性がある対象である。本発明の方法は、処理時に、薬物性疾患または状態と診断されている対象、または薬物性疾患または状態を有するか、もしくは発症する危険性があるとみなされる対象に適用され得る。本発明の幾つかの態様では、薬物性疾患または状態は、急性薬物性疾患または状態であり、本発明のある特定の態様では、薬物性疾患または状態は、慢性薬物性疾患または状態である。
【００３７】
本発明の幾つかの実施形態では、対象は、下記の代謝性疾患または状態：体重過多、体重増加、肥満、非アルコール性脂肪肝疾患、糖尿病、インシュリン抵抗性、アルコール性脂肪肝疾患、脂質異常症、脂肪症（例えば、代謝性の肝脂肪症、心脂肪症、腎脂肪症、筋脂肪症）、無βリポタンパク質血症、糖原病、ウェーバー・クリスチャン病、リポジストロフィー；肝臓炎、肝炎、脂肪性肝炎、Ｃ型肝炎、遺伝子型３のＣ型肝炎、アルファ１−抗トリプシン欠乏症、急性妊娠脂肪肝、およびウィルソン病などの代謝性肝疾患；代謝性腎疾患；高血圧、虚血、心不全、心筋症などの代謝性心疾患；中毒；ＨＩＶ；パーキンソン病、アルツハイマー病などの代謝性神経変性疾患；運動およびがんの１つまたは複数を有さない。
【００３８】
本発明の幾つかの実施形態では、対象は、下記の代謝性疾患または状態：体重過多、体重増加、肥満、非アルコール性脂肪肝疾患、糖尿病、インシュリン抵抗性、アルコール性脂肪肝疾患、脂質異常症、脂肪症（例えば、代謝性の肝脂肪症、心脂肪症、腎脂肪症、筋脂肪症）、無βリポタンパク質血症、糖原病、ウェーバー・クリスチャン病、リポジストロフィー；肝臓炎、肝炎、脂肪性肝炎、Ｃ型肝炎、遺伝子型３のＣ型肝炎、アルファ１−抗トリプシン欠乏症、急性妊娠脂肪肝、およびウィルソン病などの代謝性肝疾患；代謝性腎疾患；高血圧、虚血、心不全、心筋症などの代謝性心疾患；中毒；ＨＩＶ；パーキンソン病、アルツハイマー病などの代謝性神経変性疾患；運動およびがんの１つまたは複数を有してもよいか、または有していた。
【００３９】
ＭＣＪポリペプチド活性（例えば、ＭＣＪポリペプチドのレベルおよび／またはＭＣＪポリペプチドの機能）は、本発明に従って、決定されて、ＭＣＪポリペプチド活性の対照値と比較され得る。対照は、既定値であってもよく、それは、様々な形態を取ることができる。それは、中央値または平均値などの単一カットオフ値であり得る。それは、正常なレベルのＭＣＪポリペプチド活性を有する群および低減されたレベルのＭＣＪポリペプチド活性を有する群などの比較群に基づいて確立することができる。比較群の別の例は、薬物性疾患または状態の１つまたは複数の症状あるいは診断を有する群、および薬物性疾患または状態の１つまたは複数の症状あるいは診断を有さない群であり得る。通常、対照は、適切な年齢層におけるみかけ上健常な正常な個体または見かけ上健常な細胞に基づき得る。
【００４０】
本発明による対照は、既定値に加えて、実験材料と平行して試験される材料の試料であってもよいことが理解される。例として、実験試料と平行して試験されるべき製造によって生成される対照集団からの試料または対照試料が挙げられる。
【００４１】
本発明の幾つかの態様では、対象に関して決定されるＭＣＪポリペプチド活性の値は、その同じ対象におけるＭＣＪポリペプチド活性のより後の決定に関する対照値として機能を果たしてもよく、したがって、対象における「ベースライン」ＭＣＪポリペプチド活性からの変化の評価を可能にする。したがって、初期ＭＣＪポリペプチド活性レベルは、対象において、存在してもよく、および／または決定されてもよく、本発明の方法および化合物は、対象においてＭＣＪポリペプチド活性のレベルを低減させるのに使用されてもよく、初期レベルは、その対象に関する対照レベルとして機能を果たす。本発明の方法および化合物を使用して、対象におけるＭＣＪポリペプチド活性は、対象における薬物性疾患または状態に関する治療として、初期レベルと比較して少なくとも０．５％、１％、５％、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％またはそれ以上減少され得る。
【００４２】
治療
本発明のある特定の態様では、対象に、薬物性疾患または状態を誘導する作用物質の対象による摂取前、摂取時、および摂取後の１つまたは複数である時に、ＭＣＪ阻害化合物が投与され得る。例えば、対象が、薬物性疾患または状態をもたらす可能性を有することが知られているか、または可能性を有することが疑われる１つまたは複数の医薬品および／または生物学的作用物質の少なくとも投与を含む臨床治療を受ける予定である場合、対象は、対象の細胞においてＭＣＪ活性を阻害するＭＣＪ調節化合物の投与で前処理され得る。本発明の幾つかの実施形態では、対象に、薬物性疾患または状態をもたらす可能性を有することが知られているか、または可能性を有することが疑われる作用物質と組み合わせて、ＭＣＪ阻害化合物が投与され得る。ある特定の状況下で、対象が、薬物性疾患または状態を誘導する可能性を有することが知られているか、または可能性を有することが疑われる作用物質を摂取したか、あるいは摂取したことが疑われると同定された後に、対象に、ＭＣＪ阻害化合物が投与され得る。
【００４３】
本発明の幾つかの態様では、対象は、薬物性疾患または状態を有するか、または発症する危険性がある。薬物性疾患または状態を発症する危険性がある対象は、薬物性疾患または状態を発症する対照危険性と比較して、薬物性疾患または状態を発症する蓋然性の増加を有する対象である。本発明の幾つかの実施形態では、危険性のレベルは、危険性の対照レベルと比較して統計学的に有意であり得る。危険性がある対象としては、例えば、薬物性疾患または条件をもたらす可能性を有することが知られているか、もしくは疑われる医薬品の用量で治療されるか、治療される予定であるか、または治療された対象；薬物性疾患または状態をもたらす可能性を有することが知られているか、もしくは疑われる生物学的作用物質を摂取した対象；既存の疾患または遺伝子異常を有さない対照対象よりも、対象を薬物性疾患または状態に対してより感受性にさせる既存の疾患および／または遺伝子異常を有する対象；薬物性疾患または状態の家族および／または個人の病歴を有する対象；薬物性疾患または状態を誘導し得る作用物質であることが知られている医薬品、生物学的作用物質などの作用物質を摂取した疑いがある対象；および薬物性疾患または状態に関してこれまでに治療したことがある対象が挙げられ得る。対象を薬物性疾患または状態に対してより感受性にさせる既存の疾患および／または遺伝子異常は、存在すると、薬物性疾患または状態を発症するより高い見込みと相関関係を有するとこれまでに同定されたことがある疾患または遺伝子異常であり得ることが理解される。本発明のある特定の態様では、本明細書中に記載するような薬物性疾患または状態は、特異体質性または免疫アレルギー性の病原性基礎の１つまたは複数を有し得る。
【００４４】
本明細書中で使用する場合、「治療する」、「治療される」または「治療している」という用語は、薬物性疾患または状態に関して使用される場合、薬物性疾患または状態を発症する対象の見込みを減少させる予防的治療を指し、また薬物性疾患または状態のレベルを排除または低減させるために、薬物性疾患または状態が、より進行性に（例えば、より重篤に）なるのを防ぐために、および／またはＭＣＪ活性を低減させるための療法の非存在下での対象と比較して、対象における薬物性疾患または状態の進行を遅くさせるために、対象が薬物性疾患または状態を発症した後の治療を指し得る。
【００４５】
本発明は、幾つかの態様では、細胞、組織、および／または対象においてＭＣＪポリペプチド活性を調節する方法に関する。本明細書中で使用する場合、「調節すること」という用語は、細胞においてＭＣＪポリペプチド活性のレベル（例えば、ＭＣＪポリペプチドレベルおよび／または機能）を変化させることを意味する。本発明の幾つかの実施形態では、ＭＣＪポリペプチド活性を変化させることは、細胞または組織においてＭＣＪポリペプチドのレベルを変化させることを含む。したがって、細胞においてＭＣＪポリペプチドの活性を減少させることは、細胞においてＭＣＪポリペプチドのレベル（例えば、量）を減少させることを含む。したがって、本発明の幾つかの実施形態は、細胞、組織または対象に、薬物性疾患または状態に関する治療として、細胞、組織または対象においてＭＣＪポリペプチド活性を減少させるのに有効な量で、ＭＣＪ阻害化合物を投与する方法を含む。肝硬変、肝線維症、静脈閉塞性肝疾患、特異体質性毒性、バッド・キアリ症候群、肝損傷、腎損傷、薬物アレルギー、急性腎傷害（ＡＫＩ）、劇症肝炎、胆汁うっ滞、心毒性、およびアルコール摂取などの薬物性疾患および状態は、ＭＣＪ阻害剤を投与することによって治療されてもよく、それにより細胞、組織または対象においてＭＣＪポリペプチド活性を減少させて、対象を治療する。
【００４６】
ＭＣＪ阻害化合物を含む様々なＭＣＪ調節化合物が、本発明の方法で使用され得る。ＭＣＪポリペプチド量および／または活性を低減させるＭＣＪ阻害化合物の例として、本発明の幾つかの態様では、変異体ＭＣＪまたは変異体ＭＣＪポリペプチドをコードするポリヌクレオチドであり得るＭＣＪ分子；抗ＭＣＪポリペプチド抗体またはその機能性断片、および小分子ＭＣＪ阻害剤が挙げられる。本発明のある特定の態様では、薬物性疾患または状態を治療するのに有用な化合物は、野生型内因性ＭＣＪポリペプチドの活性に干渉して、それによりそれを低減させるＭＣＪポリペプチドまたは変異体ＭＣＪポリペプチドをコードするポリヌクレオチドである。本発明の幾つかの態様では、薬物性疾患または状態を治療するのに有用な化合物は、ＭＣＪポリペプチドまたは他の細胞構成成分に結合して、ＭＣＪポリペプチドの活性および機能を低減させる抗体またはその機能性断片を含む。本発明の幾つかの態様では、小分子ＭＣＪ阻害剤は、低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）分子、小ヘアピンＲＮＡ（ｓｈＲＮＡ）分子、アンチセンスＤＮＡオリゴ、小ガイドＲＮＡ（ｓｇＲＮＡ）分子、または転写活性化因子様エフェクターヌクレアーゼ（タレン）分子である。ＭＣＪに関するｓｉＲＮＡ分子はまた、本明細書中でｓｉＭＣＪオリゴとも称される。ｓｉＲＮＡは、ＲＮＡｉを活性化させて、標的ｍＲＮＡの相補的結合に依存している配列特異的な様式でｍＲＮＡの分解を引き起こす、２つのヌクレオチド３’末端オーバーハングを有する二重鎖ＲＮＡオリゴヌクレオチド（オリゴ）である。ｓｉＲＮＡ分子は、二重鎖ＲＮＡオリゴであり、当該技術分野における標準的習慣の通り、一本鎖を示す本明細書中に含まれるｓｉＲＮＡ配列が提示されることが理解される。低分子ヘアピンＲＮＡ（ｓｈＲＮＡ）は、ループ構造を含有し、細胞（例えば、限定的であることを意図しないが、プラスミドの一部として）に送達されると、細胞においてｓｉＲＮＡにプロセシングされて、それが、標的ｍＲＮＡの相補的結合に依存している配列特異的な様式でｍＲＮＡの分解を引き起こす。ＲＮＡ干渉分子を設計および使用する方法は、当該技術分野で公知であり、例えば、Ｊ．Ｋ．Ｊｏｕｎｇ＆Ｊ．Ｄ．Ｓａｎｄｅｒ  ２０１３年  Ｎａｔｕｒｅ  Ｒｅｖｉｅｗｓ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  第１４巻、４９〜５５頁；Ｍａ，Ｙ．他、２０１４年  ＦＥＢＳ  Ｊ．Ｄｅｃ；第２８１巻（２３）：５１８６〜９３頁；Ｐｅｎｇ，Ｊ．他、ＦＥＢＳ  Ｊ．２０１５年３月３日．ｄｏｉ：１０．１１１１／ｆｅｂｓ．１３２５１；Ｎｉｇｕｉｔａ，Ｇ．他、２０１５年  Ｆｒｏｎｔ  Ｂｉｏｅｎｇ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．５月２５日、Ｖｏｌ  ３，Ａｒｔｉｃｌｅ  ３７．ｄｏｉ：１０．３３８９／ｆｂｉｏｅ．２０１５．０００３７；およびＬａｇａｎａ，Ａ．Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ  ２０１５年；第１２６９巻：３９３〜４１２頁；Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ  ２０１４年；第１０９７巻：４７７〜９０頁．ｄｏｉ：１０．１００７／９７８−１−６２７０３−７０９−９＿２２；Ａｄｖ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖ  Ｒｅｖ  ２０１５年２月７日．ｐｉｉ：Ｓ０１６９−４０９Ｘ（１５）００００９−５．ｄｏｉ：１���．１０１６／ｊ．ａｄｄｒ．２０１５．０１．００７；およびＭｅｔｈｏｄｓ  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ．２０１５年；第１２１８巻：１〜１５頁．ｄｏｉ：１０．１００７／９７８−１−４９３９−１５３８−５＿１．を参照されたい。
【００４７】
本発明のＲＮＡ干渉方法で使用することができるポリヌクレオチド配列の非限定的な例は、配列番号７および配列番号２１として本明細書中に記載される。本発明のＲＮＡ干渉方法の幾つかの実施形態で有用なさらなる配列もまた提供され、配列番号８〜配列番号２０および配列番号２２として本明細書中に記載される。本発明のＲＮＡ干渉方法で有用なさらなる配列は、ヒトＭＣＪ発現を阻害する配列を同定するための設計基準を使用して調製され得る。本発明のＲＮＡ干渉方法における使用のための配列を調製するのに使用され得る１つまたは複数の設計基準の非限定的な例は、（１）配列が、（ＢＬＡＳＴ検索を使用して同定され得る）目的の遺伝子に特有であること、（２）配列が、翻訳開始および終了から１００ｂｐを上回ること、（３）配列が、列において３つ以下のアデニンまたはチミジンを有すること、（４）配列のＧＣ含有量が、３０％を上回ること、および（５）およそ１９ｎｔの標的配列が、５’末端にあるＡＡと、および幾つかの場合では、３’末端にあるＴＴとも、ｍＲＮＡにおいて隣接され得ることである。本発明のＲＮＡ干渉方法の使用における標的配列および適切な配列を同定するためのさらなる基準は、当該技術分野で日常的に使用される。
【００４８】
幾つかの実施形態では、本発明の方法は、例えば、ＭＣＪ阻害化合物を細胞、組織または対象に送達することによって、細胞、組織、または対象においてＭＣＪポリペプチドのレベルを直接的に減少させて、薬物性疾患または状態を治療することを含み得る。対象における薬物性疾患または状態を治療するために、１つまたは複数の細胞を、ＭＣＪ阻害化合物と接触させてもよく、それが、細胞においてＭＣＪポリペプチドの活性の減少されたレベルをもたらす。ＭＣＪ阻害化合物と接触されるべき細胞が対象中に存在する場合、ＭＣＪ阻害化合物は、対象に投与することができる。ＭＣＪ活性が、本発明の方法およびＭＣＪ阻害化合物を使用して低減され得る細胞として、肝臓細胞、腎細胞、心臓細胞、および循環細胞が挙げられるが、これらに限定されない。
【００４９】
ＭＣＪ阻害分子および化合物
本発明のＭＣＪ阻害化合物は、対象に、対象においてＭＣＪポリペプチド量および／または活性を低減させるのに有効な量および様式で投与されて、薬物性疾患または状態を治療し得る。本発明の方法は、幾つかの実施形態では、かかる治療を必要とする対象に、１つまたは複数のＭＣＪ阻害化合物を投与して、対象における薬物性疾患または状態を低減させることを含む。本発明のＭＣＪ阻害剤化合物は、対象の肝臓、腎臓、心臓組織、または他の細胞、細胞、組織および臓器においてＭＣＪポリペプチド活性を低減させるために投与され得る。
【００５０】
本明細書中で使用する場合、「タンパク質」および「ポリペプチド」という用語は、交換可能に使用され、したがって、ポリペプチドという用語は、完全長タンパク質を指すのに使用されてもよく、また完全長タンパク質の断片を指すのに使用されてもよい。ポリペプチド、タンパク質、またはそれらの断片およびかかるポリペプチドをコードするポリヌクレオチドに関して本明細書中で使用する場合、「外因性」という用語は、化合物が細胞または対象に投与されて、細胞または対象中で天然に存在する「内因性」分子ではなかったことを意味する。外因性ＭＣＪポリペプチドまたはＭＣＪポリペプチドコードポリヌクレオチドは、その配列の観点から、それぞれ、内因性ＭＣＪポリペプチドまたはＭＣＪポリペプチドコード核酸と同一であり得るが、細胞または対象に投与されたことが理解される。
【００５１】
本発明の幾つかの態様によれば、完全長ＭＣＪポリペプチドまたは完全長ＭＣＪポリペプチドの断片は、本発明の方法において投与され得る。かかるＭＣＪポリペプチドおよび断片は、変異体ＭＣＪポリペプチドであってもよく、本発明の幾つかの態様では、正常な（例えば、対照）ＭＣＪポリペプチド活性と比較して、低減されたか、またはゼロの量活性を有する低減機能のＭＣＪポリペプチドである。かかる変異体ＭＣＪポリペプチドは、細胞に導入されると、例えば標的に関して、内因性ＭＣＪと競合する場合があり、したがって、内因性ＭＣＪポリペプチドの活性を低減させる。変異体ポリペプチドおよびそれらの断片は、天然の断片であってもよく、または当該技術分野で公知の方法を使用して合成して、当該技術分野で公知の方法を使用して機能に関して試験してもよい。例えば、国際特許出願番号ＰＣＴ／ＵＳ２０１３／０４９８８５号および米国特許第８，３５４，２３７号に記載される方法を参照されたい。それらそれぞれの内容は、参照により本明細書に組み込まれる。本発明の方法および組成物において有用である完全長変異体ＭＣＪポリペプチドおよびそれらの断片は、組換えポリペプチドであってもよい。
【００５２】
本発明の方法において有用である「変異体」野生型もしくは突然変異完全長ＭＣＪポリペプチドまたはその断片は、アミノ酸または非アミノ酸部分の欠失、点突然変異、トランケーション、アミノ酸置換および／または付加を含み得る。本発明のポリペプチドの修飾は、ポリペプチドをコードする核酸配列の修飾によって成されてもよく、あるいは修飾は、切断、リンカー分子の付加、蛍光標識などの検出可能な部分の付加等によるように、ポリペプチドに直接成されてもよい。修飾はまた、ポリペプチドのアミノ酸配列の全てまたは一部を含む融合タンパク質を包含する。
【００５３】
完全長野生型または変異体ＭＣＪポリペプチドの断片は、ＭＣＪポリペプチドにおいて、またはその変異体において見出される連続した配列を有する完全長ＭＣＪポリペプチドの少なくとも最大ｎ−１個の連続したアミノ酸を含んでもよい（「ｎ」は、完全長ＭＣＪポリペプチドにおけるアミノ酸の数に等しい）。したがって、例えば、１５０個のアミノ酸長のＭＣＪポリペプチドの断片は、１５０個のアミノ酸ＭＣＪポリペプチドの少なくとも４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、１００、１１０、１２０、１３０、１４０、または１４９個（間に各整数を含む）の連続したアミノ酸である。
【００５４】
概して、変異体ＭＣＪポリペプチドは、その生理活性に関連したポリヌクレオチドの特色を変更させるように特異的に修飾されたポリペプチドを含んでもよい。ＭＣＪポリペプチドは、修飾を伴って合成することができ、および／または修飾は、アミノ酸置換、欠失、または付加を選択および導入することによって、ＭＣＪポリペプチドにおいて成され得る。続いて、修飾ポリペプチドは、１つまたは複数の活性（例えば、細胞または対象においてＭＣＪポリペプチド活性を低減させること、および薬物性疾患または状態の治療としての有効性等）に関して試験されて、どの修飾が所望の特性を有する変異体ポリペプチドを供給するかを決定することができる。
【００５５】
本発明の幾つかの実施形態では、ＭＣＪポリペプチドのレベルまたは機能は、ＭＣＪ阻害化合物を細胞に遺伝的に導入することによって低減され得る。ターゲティング剤および方法を使用して、特異的な細胞型、細胞サブタイプ、臓器、対象内の空間領域、および細胞内の亜細胞領域へのＭＣＪ阻害化合物の送達を助長し得る。遺伝的ターゲティングなどの当該技術分野で公知の方法はまた、本発明の実施形態において、細胞および／または対象においてＭＣＪ阻害剤化合物の量を制御するのに使用され得る。本発明の幾つかの実施形態は、ＭＣＪ阻害分子、例えば、変異体ＭＣＪポリペプチドの遺伝的にターゲティングされる発現用の試薬を含んでもよく、ここで、試薬は、ＭＣＪ変異体ポリペプチドまたはその断片をコードする核酸を含有するベクターを含む。
【００５６】
本発明のある特定の態様は、ＭＣＪポリペプチドに特異的に結合して、ＭＣＪポリペプチド活性を低減させる抗体またはそれらの抗原結合断片を投与する方法を含む。かかる抗体またはそれらの抗原結合断片は、細胞および／または対象に投与されて、細胞および／または対象においてＭＣＪポリペプチド活性を阻害し得る。抗体の「抗原結合断片」という用語は本明細書中で使用する場合、抗原（例えば、ＭＣＪポリペプチド）に特異的に結合して、抗原の活性を低減させる能力を保持する抗体の１つまたは複数の部分を指す。当該技術分野で公知の方法および日常的な手順を使用して、本発明の方法における使用のためのＭＣＪ活性阻害抗体の抗原結合断片を調製および試験し得る。本発明の幾つかの実施形態では、抗体は、組換え抗体、ポリクローナル抗体、モノクローナル抗体、ヒト化抗体またはキメラ抗体、またはこれらの混合物である。ＭＣＪポリペプチドに特異的に結合することが知られている抗体の例として、モノクローナル抗体ｉ）ＡＴＣＣ番号＃ＰＴＡ−８１３５で受託されたハイブリドーマＮ−ＭＣＪ  ３Ｃ１．３Ｆ３から生成されるＷＮ．Ｆ３；ｉｉ）ＡＴＣＣ番号＃ＰＴＡ−８１３３で受託されたハイブリドーマ細胞株Ｎ−ＭＣＪ  ３Ｃ１．５Ａ１２から生成されるＷＮ．Ａ１２；およびｉｉｉ）ＡＴＣＣ番号＃ＰＴＡ−８１３４で受託されたハイブリドーマ細胞株Ｎ−ＭＣＪ  ２Ａ２．５Ｅ４から生成されるＷＮ．Ｅ４が挙げられるが、これらに限定されない（米国特許第８，３５４，２３７号を参照、その内容は、参照により本明細書に組み込まれる）。ＷＮ．Ｆ３、ＷＮ．Ａ１２およびＷＮ．Ｅ４抗体は、ＭＣＪ調節化合物として本発明の方法において使用され得る抗体の例である。本発明の方法における使用のためのさらなる抗体は、本明細書中の開示および米国特許第８，３５４，２３７号に記載される開示と併せて、当該技術分野で公知の方法を使用して、産生および検査されてもよく、同様に、Ｈａｔｌｅ他、Ｍｏｌ  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ．２００７年４月；２７（８）：２９５２〜６６頁も参照されたい。それらそれぞれの内容が、参照により本明細書に組み込まれる。
【００５７】
本発明の治療方法において投与され得るさらなるＭＣＪ調節化合物は、ＭＣＪポリペプチド活性を阻害する小分子または化学物質を含む。本明細書中に提供する例は、限定的であることを意図しないが、ＲＮＡ干渉（ＲＮＡｉ）分子である。ＲＮＡｉ分子は、細胞、組織および対象に投与されて、遺伝子発現を阻害する。ＲＮＡ干渉方法では、ＲＮＡは、細胞および／または対象に投与されてもよく、ＲＮＡ分子は、他の特異的なｍＲＮＡ分子に結合し、それらの活性を減少させて、それによりｍＲＮＡの、タンパク質への翻訳を低減させる。本発明の幾つかの実施形態では、ＲＮＡｉ方法を使用して、細胞、組織および／または対象においてＭＣＪポリペプチドの発現を低減させる。したがって、本発明の方法は、細胞および／または対象に、ＭＣＪポリペプチド発現を低減させるのに有効な量で、１つまたは複数のＲＮＡｉ分子を投与して、それにより細胞および／または対象においてＭＣＪポリペプチド活性を低減させることを含み得る。かかる小分子、例えばＲＮＡ干渉分子を同定および試験する方法は、本明細書中に提供する教示と併せて、当該技術分野で公知のライブラリースクリーニングおよび実験手順の使用を含み得る。本発明の方法で使用されて、ＭＣＪポリペプチド活性を阻害することができるＲＮＡｉ分子のタイプの例として、低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）、小ヘアピンＲＮＡ（ｓｈＲＮＡ）、アンチセンスＤＮＡオリゴ、小ガイドＲＮＡ（ｓｇＲＮＡ）および転写活性化因子様エフェクターヌクレアーゼ（タレン）が挙げられるが、これらに限定されない。ＲＮＡｉ分子を設計および使用する方法は、当該技術分野で公知であり、例えば、Ｊ．Ｋ．Ｊｏｕｎｇ  ＆  Ｊ．Ｄ．Ｓａｎｄｅｒ  ２０１３年  Ｎａｔｕｒｅ  Ｒｅｖｉｅｗｓ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  １４、４９〜５５頁；Ｍａ，Ｙ．他、２０１４年  ＦＥＢＳ  Ｊ．１２月；２８１（２３）：５１８６〜９３頁；Ｐｅｎｇ，Ｊ．他、ＦＥＢＳ  Ｊ．２０１５年３月３日．ｄｏｉ：１０．１１１１／ｆｅｂｓ．１３２５１；Ｎｉｇｕｉｔａ，Ｇ．他、２０１５年  Ｆｒｏｎｔ  Ｂｉｏｅｎｇ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．３月２５日、Ｖｏｌ  ３、Ａｒｔｉｃｌｅ  ３７．ｄｏｉ：１０．３３８９／ｆｂｉｏｅ．２０１５．０００３７；Ｌａｇａｎａ，Ａ．Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ．２０１５年；１２６９：３９３〜４１２頁；Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ  ２０１４年；１０９７：４７７〜９０頁．ｄｏｉ：１０．１００７／９７８−１−６２７０３−７０９−９＿２２；Ａｄｖ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖ  Ｒｅｖ  ２０１５年２月７日．ｐｉｉ：Ｓ０１６９−４０９Ｘ（１５）００００９−５．ｄｏｉ：１０．１０１６／ｊ．ａｄｄｒ．２０１５．０１．００７；およびＭｅｔｈｏｄｓ  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ．２０１５年；１２１８：１〜１５頁．ｄｏｉ：１０．１００７／９７８−１−４９３９−１５３８−５＿１を参照されたい。
【００５８】
本発明のＭＣＪポリペプチド調節化合物は、単独で、あるいは１つまたは複数のさらなる化合物と組み合わせて投与され得る。薬物性疾患または状態を治療するために対象または細胞に投与されるＭＣＪ阻害化合物は、１つまたは複数の他の治療剤または治療と相乗的な様式で作用して、１つまたは複数の治療剤または活性の有効性を増加させ、および／または薬物性疾患または状態を治療する際のＭＣＪ阻害化合物の有効性を増加させ得る。
【００５９】
ＭＣＪ阻害化合物の投与を含む本発明の治療方法は、薬物性疾患または状態の発病前に、および／または薬物性疾患または状態の初期、中期および後期ならびにこれらの期のいずれかの前後の全ての時間を含む、薬物性疾患または状態が存在する時に使用することができる。本発明の方法はまた、これまでに、対象における薬物性疾患または状態の治療に成功しなかった、最低限しか成功しなかった、および／またはもはや成功の見込みがない１つまたは複数の他の医薬で薬物性疾患または状態に関して治療を受けたことがある対象を治療することになる場合もある。
【００６０】
さらなるＭＣＪ調節化合物が、本発明の方法で同定および使用され得ることが理解される。例えば、候補化合物は、本明細書中に提示するアッセイおよび方法を使用して、ＭＣＪポリペプチド活性（レベルおよび／または機能）を減少させるそれらの能力および薬物性疾患または状態を治療するそれらの能力に関して試験することができる。
【００６１】
ＭＣＪ阻害化合物の構成成分
本明細書中に記載する本発明のＭＣＪ調節化合物（変異体ＭＣＪ分子、抗ＭＣＪポリペプチド抗体またはその機能性断片、小分子ＭＣＪ阻害剤等を含む化合物）は、本発明の治療方法において、単独で、またはターゲティング剤、標識剤、膜を通過する送達剤等などの他の構成成分と併せて投与され得る。したがって、本発明の幾つかの実施形態では、ＭＣＪ阻害化合物は、ＭＣＪ阻害分子および任意に、１つまたは複数のさらなる構成成分を含む。
【００６２】
本発明の方法の幾つかの実施形態による有用なターゲティング剤は、本発明のＭＣＪ阻害化合物を、肝臓細胞、心臓細胞、循環細胞、腎細胞、肝細胞等などの、治療されるべき細胞におよび／または治療されるべき細胞へ誘導する作用物質を含み得る。選択されるターゲティング化合物は、薬物性疾患または状態の性質に依存する。非限定的な例において、幾つかの実施形態では、ＭＣＪ阻害化合物を、肝臓細胞、または腎細胞等におよび／または肝臓細胞、または腎細胞等へ標的とさせることが望ましい場合がある。本発明の方法の幾つかの実施形態では、ＭＣＪ阻害化合物は、任意のさらなる結合分子を伴わずに、まさにＭＣＪ阻害剤分子を含むことが理解される。例えば、本発明の幾つかの態様では、ＲＮＡｉ分子は、ＲＮＡｉ分子に結合される送達分子、標識等がないことを意味する「ネイキッド」形態で、細胞および／または対象に投与され得る。
【００６３】
ＭＣＪ阻害分子が、１つまたは複数の細胞または組織−担体剤、ターゲティング剤、標識剤、送達剤等に結合されるか、またはそれらとともに組成物中に存在する場合、当業者は、本発明の方法における使用のための適切な作用物質を認識しており、それらを選択および使用することが可能である。本発明の幾つかの態様では、担体剤は、ナノキャリア、細胞透過性ペプチド、ポリマー、デンドリマー、ｓｉＲＮＡバイオコンジュゲート、および脂質ベースのｓｉＲＮＡ担体の１つまたは複数を含む。
【００６４】
本発明の幾つかの態様では、ターゲティング剤は、本発明の方法で投与されるＭＣＪ阻害化合物の一部であるミトコンドリターゲティング剤であってもよい。ＲＮＡｉ分子に関する送達剤は、当該技術分野で周知であり、アプタマー；ガラクトサミン；ＮＡｃガラクトサミン；ＰＥＧ；コレステロール；脂質；カチオン性細胞透過性ペプチドを含むが、これに限定されない細胞透過性ペプチド；ナノキャリア等が挙げられるが、これらに限定されない。本発明のＭＣＪ阻害剤分子および化合物をミトコンドリアに送達するのに使用され得るターゲティング剤として、グラミシジンＳベースのミトコンドリアターゲティング剤、カルニチン−アシルカルニチントランスロカーゼ系、シトクロム、リンゴ酸脱水素酵素を利用する作用物質が挙げられるが、これらに限定されない。本発明の幾つかの実施形態で使用され得るターゲティング剤の例は、Ｄｉｅｋｅｒｔ，Ｋ．他、ＰＮＡＳ（１９９７年）ｖｏｌ  ９６、Ｎｏ．２１、１１７５２〜１１７５７頁；Ａｄｄｙａ，Ｓ．他、Ｊ．Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌｏｇｙ、（１９９７年）Ｖｏｌ．１３９、Ｎｏ．３、５８９〜５９９頁；Ｄｅｌ  Ｇａｉｚｏ，Ｖ．他、（２００３年）Ｍｏｌ．Ｇｅｎ．ａｎｄ  Ｍｅｔａｂｏｌ．Ｖｏｌ  ８０、１７０〜１８０頁が挙げられるが、これらに限定されない。それらそれぞれの内容は、参照により本明細書に組み込まれる。さらなる当該技術で公知の送達およびターゲティングの手段ならびに手順は、ビヒクルとしてカチオン性細胞透過性ペプチドを開示するＴｈｅｒ  Ｄｅｌｉｖ．２０１５年４月；６（４）：４９１〜５０７頁．ｄｏｉ：１０．４１５５／ｔｄｅ．１５．２；吸入送達のためのネイキッドｓｉＲＮＡの使用などの、様々な送達方法について記載するＩｎｔ  Ｊ  Ｍｏｌ  Ｓｃｉ．２０１５年３月６日；１６（３）：５２５４〜７０．ｄｏｉ：１０．３３９０／ｉｊｍｓ１６０３５２５；ｓｉＲＮＡに関する送達システムとしてのナノ粒子の使用に関する方法および材料について開示するＮａｎｏｍｅｄｉｃｉｎｅ（Ｌｏｎｄ）．２０１５年４月；１０（７）：１１６５〜８８頁．ｄｏｉ：１０．２２１７／ｎｎｍ．１４．２１４；選択細胞にターゲティングする方法（例えばペプチド、抗体等へのコンジュケーションの使用などの）について開示するＭｅｔｈｏｄｓ  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ．２０１５年；１２１８：２０１〜１６年．ｄｏｉ：１０．１００７／９７８−１−４９３９−１５３８−５＿１２；送達のための共重合体（ポリプレックス（plyplexes）とも称される）の使用について記載するＢｉｏｅｎｇｉｎｅｅｒｅｄ．２０１４年５月〜６月；５（３）：１５２〜４頁。ｄｏｉ：１０．４１６１／ｂｉｏｅ．２８０６２．Ｅｐｕｂ  ２０１４年２月３日；送達のためのリポソーム、ナノ粒子および脂質ナノ粒子の使用について記載するＣｕｒｒ  Ｐｈａｒｍ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２０１４年；１５（７）：６５９〜７２頁；および送達手段のためのリポソームおよびナノ粒子の使用について記載するＡｄｖ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖ  Ｒｅｖ．２０１４年２月；６６：１１０〜６．ｄｏｉ：１０．１０１６／ｊ．ａｄｄｒ．２０１３．１２．００８．Ｅｐｕｂ  ２０１３年１２月３０日に記載されている。それらそれぞれの内容は、参照により本明細書に組み込まれる。
【００６５】
標識剤は、細胞および組織においてＭＣＪポリペプチドの位置を決定するのに本発明の方法で使用されてもよく、投与された治療化合物の細胞、組織、または細胞小器官の位置を評価するのに使用されてもよい。酵素標識、色素、放射標識等などの標識剤を結合および利用するための手順は、当該技術分野で周知である。
【００６６】
治療方法に関する有効量
本発明のＭＣＪ調節化合物（例えば、抗ＭＣＪ抗体またはその機能性断片、変異体ＭＣＪポリペプチドコードポリヌクレオチド、変異体ＭＣＪポリペプチド、小分子ＭＣＪ阻害剤分子等を含む）は、対象に、薬物性疾患または状態を治療するのに有効な量で投与される。「薬物性疾患または状態を治療するのに有効な量」は、所望の生物学的効果を実現するのに必要または十分な量である。例えば、本発明の化合物の有効量は、（ｉ）疾患または状態の進行を遅くするか、または停止するのに、または（ｉｉ）薬物性疾患または状態の１つまたは複数の症状を逆転、低減または排除するのに必要な量であり得る。本発明の幾つかの態様では、有効量は、薬物性疾患または状態の治療を必要とする対象に投与されると、薬物性疾患または状態を防止および／または治療する治療的応答をもたらすＭＣＪ阻害化合物の量である。本発明の幾つかの態様によれば、有効量は、薬物性疾患または状態に関する別の治療的処理と組み合わせるか、または同時投与されると、薬物性疾患または状態を防止および／または治療する治療的応答をもたらすＭＣＪ阻害化合物の量である。本発明の幾つかの実施形態では、対象をＭＣＪ阻害化合物で治療する生物学的効果は、薬物性疾患または状態に起因する症状の改善および／または絶対的排除であり得る。本発明の幾つかの実施形態では、生物学的効果は、例えば、対象が、薬物性疾患または状態を有さないことを示す診断試験から明らかなように、薬物性疾患または状態の完全な抑止である。
【００６７】
通常、ＭＣＪポリペプチド活性を減少させるのに有効な量のＭＣＪアゴニスト化合物は、臨床試験で決定され、盲検試験において対照集団に対する試験集団に関して有効用量を確立する。幾つかの実施形態では、有効量は、所望の応答をもたらす有効量、例えば、薬物性疾患または状態を有する細胞、組織、および／または対象における薬物性疾患または状態を減少させる量である。したがって、ＭＣＪポリペプチド活性を低減させることによって治療され得る薬物性疾患または状態を治療するのに有効な量は、投与されると、対象においてＭＣＪポリペプチド活性の量を、ＭＣＪ阻害分子の投与なしで細胞、組織、および／または対象中に存在する量よりも少ない量に減少させる量であり得る。本発明のある特定の態様では、ＭＣＪ阻害化合物と接触していないか、またはそれを投与されていない細胞、組織、および／または対象中に存在するＭＣＪ活性のレベルを「対照」量と称する。薬物性疾患または状態を治療する場合、所望の応答は、細胞、組織、および／または対象における薬物性疾患または状態の１つまたは複数の症状を低減または排除している場合であり得る。低減または排除は、一時的であってもよく、または永続的であってもよい。薬物性疾患または状態の状況は、ＭＣＪポリペプチド活性を決定する方法、症状評価、臨床試験等を使用してモニタリングすることができることが理解される。本発明の幾つかの態様では、薬物性疾患または状態の治療に対する所望の応答はまた、薬物性疾患または状態の発症を遅延させせることができ、またはさらには薬物性疾患または状態の発症を防止することができる。
【００６８】
ＭＣＪポリペプチド活性を減少させる化合物の有効量はまた、投与後の薬物性疾患または状態の減少などの細胞または対象に対する化合物の投与の生理的効果を評価することによって決定され得る。対象のアッセイおよび／または症候モニタリングを使用して、本発明の医薬化合物の有効性を決定して、治療に対する応答の存在または非存在を決定し得る。例は、限定的であることを意図しないが、ＭＣＪ阻害化合物による対象の治療前および後に、対象における薬物性疾患または状態の状況を決定するための肝機能の当該技術分野で公知の試験の使用である。対象に投与されるＭＣＪ阻害化合物の量は、疾患および状態の状況のかかる決定に少なくとも幾分基づいて修飾され得ることが理解される。治療の量は、例えば、ＭＣＪ阻害化合物の量を増加または減少させること、投与されるＭＣＪ阻害化合物の組成物を変化させること、投与の経路を変化させること、投薬のタイミングを変化させることなどによって変更され得る。ＭＣＪ阻害化合物の有効量は、治療されている特定の状態、治療されている対象の年齢および身体状態、状態の重篤性、治療の持続期間、併用療法（存在する場合）の性質、投与の特定経路、ならびに医療関係者の知識および見解の範囲内のさらなる要因によって多様である。例えば、有効量は、薬物性疾患または状態を治療するのに有効であるＭＣＪポリペプチド活性の所望のレベルに依存し得る。当業者は、過度の実験を必要とせずに本発明の特定のＭＣＪ阻害化合物の有効量を経験的に決定することができる。本明細書中に提供する教示と併せて、様々なＭＣＪ阻害化合物の中から選択して、効力、相対的なバイオアベイラビリティ、患者の体重、有害な副作用の重篤性および投与の好ましい様式などの要因を比較検討すること（weighing）によって、特定の対象を治療するのに有効である有効な予防または治療上の治療レジメンを計画することができる。
【００６９】
本発明の方法を使用して投与されるＭＣＪ阻害化合物はまた、本明細書中で「医薬化合物」とも称される。医薬化合物投与量は、特に任意の合併症の場合には個々の医療専門家または獣医師によって調節されてもよい。治療上有効量は通常、毎日１回または複数回用量の投与で、１日または複数日の間、０．０１ｍｇ／ｋｇから約１０００ｍｇ／ｋｇ、約０．１ｍｇ／ｋｇから約２００ｍｇ／ｋｇ、または約０．２ｍｇ／ｋｇから約２０ｍｇ／ｋｇまで多様である。絶対量は、併用治療、用量の数ならびに年齢、身体状態、サイズおよび体重を含む個々の対象のパラメーターを含む様々な要因に依存する。これらは、当業者に周知の要因であり、単なる日常的な実験を用いて対処することができる。幾つかの実施形態では、最大用量、即ち、正当な医学的判断に従う最も高い安全な用量を使用することができる。
【００７０】
本発明の方法は、幾つかの場合において、ＭＣＪ阻害剤化合物の１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０回またはそれより多い用量で投与することを含む。幾つかの場合において、本発明の医薬化合物（例えば、抗ＭＣＪ抗体またはその機能性断片、変異体ＭＣＪポリペプチドコードポリヌクレオチド、変異体ＭＣＪポリペプチド、ＲＮＡ干渉分子などの小分子ＭＣＪ阻害剤等）は、少なくとも毎日、一日おきに、週１回、隔週で、月１回等で対象に投与することができる。用量は、１日につき１回または１日につき１回以上、例えば、２４時間の１つの期間中に２回、３回、４回、５回またはそれより多い回数で投与され得る。本明細書中で他の箇所に記載するように、ＭＣＪ阻害剤化合物は、薬物性疾患または状態を誘導することが知られている作用物質の、対象への投与に先立って、薬物性疾患または状態を誘導することが知られている作用物質の、対象への投与と併せて、薬物性疾患または状態を誘導することが知られている作用物質の、対象への投与の後に、またはこれらの時の任意の組合せで、対象に投与され得る。
【００７１】
本発明の方法は、幾つかの対象では、単独での、１つまたは複数の他のＭＣＪ阻害剤化合物と組み合わせた、および／または薬物性疾患または状態を有する対象に投与される他の薬物療法または治療レジメンと組み合わせた医薬化合物の投与を含む。医薬化合物は、医薬組成物で投与され得る。本発明の方法で使用される医薬組成物は、滅菌であってもよく、対象への投与に適した重量または用量の単位で、ＭＣＪポリペプチド活性を、所望の応答を生じるのに十分なレベルに低減させる量のＭＣＪ阻害化合物を含有する。ＭＣＪポリペプチド活性を低減させるためにＭＣＪ阻害化合物を含む医薬組成物の、対象に投与される用量は、種々のパラメーターに従って、特に使用する投与の様式および対象の状態に従って選択することができる。他の要因として、治療の所望の期間が挙げられ得る。対象における応答が、適用される初回用量で不十分である場合には、より高い用量（または異なるより局所的な送達経路によって効果的により高い用量）を、患者の許容性が許す程度まで用いてもよい。
【００７２】
投与方法
ＭＣＪ阻害化合物に関する様々な投与経路が、本発明の方法における使用に利用可能である。選択される特定の送達様式は、治療されている特定の状態および治療有効性に必要とされる投与量に少なくとも部分的に依存する。本発明の方法は、一般的に言うと、臨床上許容されない有害作用を引き起こさずに、薬物性疾患または状態の有効なレベルの治療をもたらす任意の様式を意味する医学的に許容される任意の投与様式を使用して実行され得る。本発明の幾つかの実施形態では、ＭＣＪ阻害化合物は、経口、経腸、粘膜、経皮および／または非経口経路を介して投与され得る。「非経口」という用語は、皮下、静脈内、筋内、腹腔内および胸骨内の注射または注入技法を含む。他の経路として、経鼻（例えば、胃−鼻チューブを介して）、真皮、膣内、直腸および舌下が挙げられるが、これらに限定されない。本発明の送達経路は、髄腔内、脳室内または頭蓋内を含んでもよい。本発明の幾つかの実施形態では、本発明の化合物は、徐放性マトリックス内に配置させて、対象におけるマトリックスの配置によって投与されてもよい。本発明の幾つかの態様では、ＭＣＪ阻害化合物（抗ＭＣＪ抗体またはその機能性断片、変異体ＭＣＪポリペプチドコードポリヌクレオチド、変異体ＭＣＪポリペプチド、または小分子ＭＣＪ阻害剤等などの）は、特定の細胞または細胞小器官（その非限定的な例は、ミトコンドリアである）を標的とする送達剤でコーティングしたナノ粒子を使用して、対象細胞に投与されてもよい。様々な送達手段、方法、作用物質が当該技術分野で公知である。送達方法および送達剤の非限定的な例は、本明細書中で他の箇所でさらに提供される。
【００７３】
本発明の幾つかの方法では、１つまたは複数のＭＣＪ阻害化合物は、製剤中に投与されてもよく、それは、薬学的に許容される溶液中に投与されてもよく、それは日常的に、薬学的に許容される濃度の塩、緩衝剤、防腐剤、適合性担体、補助剤、および任意に他の治療成分を含有し得る。本発明の幾つかの実施形態では、ＭＣＪ阻害化合物は、同時投与用の医薬品とともに製剤化されてもよい。非限定的な例は、ＭＣＪ阻害化合物およびアセトアミノフェン化合物を含む製剤、ならびにＭＣＪ阻害化合物および造影剤を含む製剤である。本発明の方法によれば、ＭＣＪ阻害組成物は、医薬組成物で投与されてもよい。概して、医薬組成物は、ＭＣＪ阻害化合物および薬学的に許容される担体を含む。薬学的に許容される担体は、当業者に周知である。本明細書中で使用する場合、薬学的に許容される担体は、活性成分の生物学的活性の有効性、例えば、抗ＭＣＪ抗体またはその機能性断片、変異体ＭＣＪポリペプチドコードポリヌクレオチド、変異体ＭＣＪポリペプチド、または小分子ＭＣＪ阻害剤等などの化合物の、薬物性疾患または状態を治療する能力を妨害しない無毒性材料を意味する。治療上の使用のための、抗体、ポリペプチド、ポリヌクレオチド、小分子、ＲＮＡｉ分子等を投与および送達するのに有用な多数の方法が、当該技術分野で公知である。
【００７４】
薬学的に許容される担体は、希釈剤、充填剤、塩、緩衝液、安定剤、可溶化剤および当該技術分野で周知である他の材料を含んでもよい。例示的な薬学的に許容される担体は、米国特許第５，２１１，６５７号に記載されており、他は当業者に公知である。かかる調製物は、塩、緩衝剤、防腐剤、適合性担体、および任意に他の治療剤を日常的に含有し得る。薬において使用する場合、塩は、薬学的に許容されるべきであるが、薬学的に許容されない塩は、利便性よく使用されて、それらの薬学的に許容される塩を調製してもよく、本発明の範囲から除外されない。かかる薬理学的および薬理的に許容される塩として、下記酸：塩酸、臭化水素酸、硫酸、硝酸、リン酸、マレイン酸、酢酸、サリチル酸、クエン酸、ギ酸、マロン酸、コハク酸等から調製されるものが挙げられるが、これらに限定されない。同様に、薬学的に許容される塩は、ナトリウム、カリウムまたはカルシウム塩などのアルカリ金属またはアルカリ土属塩類として調製することができる。
【００７５】
本発明の方法の幾つかの実施形態では、１つまたは複数のＭＣＪ阻害化合物を、組織に直接投与することを含む。幾つかの実施形態では、化合物が投与される組織は、薬物性疾患または状態が発生する可能性が高い組織であり、その非限定的な例は、肝臓、腎臓、心臓組織である。直接的な組織投与は、直接的な注射または他の手段によって達成され得る。多くの経口送達される化合物は、自然に移動して、肝臓および腎臓へ、また肝臓および腎臓を通って移動する。本発明の治療方法の幾つかの実施形態は、１つまたは複数のＭＣＪ阻害化合物の、対象への経口投与を含む。ＭＣＪ阻害化合物は、単独で、または他の作用物質と併せて、一度投与されてもよく、あるいはそれらは複数の投与で投与されてもよい。複数回で投与される場合、化合物は、種々の経路を介して投与され得る。例えば、限定的であることを意図しないが、最初の（または最初の数回の）投与は、経口投与によって行われてもよく、１つまたは複数のさらなる投与は、経口および／または全身性投与であり得る。
【００７６】
ＭＣＪ阻害化合物を全身的に投与することが望ましい本発明の実施形態に関して、ＭＣＪ阻害剤化合物は、注射による、例えばボーラス注射または連続注入による非経口投与用に製剤化され得る。注射用の製剤は、添加防腐剤を伴って、または伴わずに、単位投薬形態で、例えばアンプルで、または多重用量容器で提供され得る。ＭＣＪ阻害化合物製剤（医薬組成物とも称される）は、油性または水性ビヒクル中の懸濁液、溶液またはエマルジョンなどの形態を取ってもよく、懸濁化剤、安定剤および／または分散剤などの製剤化用物質（formulatory agents）を含有してもよい。
【００７７】
非経口投与用の製剤としては、滅菌水性または非水性溶液、懸濁液およびエマルジョンが挙げられる。非水性溶媒の例は、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール、オリーブ油などの植物油、およびオレイン酸エチルなどの注射用有機エステルである。水性担体としては、生理食塩水および緩衝媒質を含む水、アルコール／水溶液、エマルジョンまたは懸濁液が挙げられる。非経口ビヒクルとして、塩化ナトリウム溶液、リンゲルデキストロース、デキストロースおよび塩化ナトリウム、乳酸リンゲル液または不揮発性油が挙げられる。静脈内ビヒクルとしては、流体および栄養補充薬、電解質補充薬（リンゲルデキストロースに基づくものなどの）等が挙げられる。例えば、抗菌薬、酸化防止剤、キレート剤および不活性ガス等などの防腐剤および他の添加剤もまた存在してもよい。低用量は、静脈内投与などの他の形態の投与に起因し得る。対象における応答が、適用される初期用量で不十分である場合には、より高い用量（または異なるより局所的な送達経路によって効果的により高い用量）を、患者の許容性が許す程度まで用いてもよい。１日につき複数回用量は、１つまたは複数のＭＣＪ阻害剤化合物の適切な全身性もしくは局所レベルを達成するように必要に応じて使用され得る。
【００７８】
さらに他の実施形態では、本発明の方法は、レシピエントへの移植に適した生体適合性微粒子、ナノ粒子、または移植片などの送達ビヒクルの使用を含む。本方法に従って有用である例示的な生体内分解性移植片は、ＰＣＴ国際公開番号第ＷＯ９５／２４９２９号（参照により本明細書に組み込まれる）に記載されており、それは、生物学的高分子を含有するための生体適合性、生分解性ポリマーマトリックスについて記載している。かかる送達手段は、当該技術分野で周知であり、対象においてＭＣＪ阻害化合物の持続性放出を達成するのに使用することができ、分解せずに、むしろ長期間にわたって拡散によって放出するように選択され得る。
【００７９】
非生分解性および生分解性ポリマーマトリックスの両方を使用して、本発明の方法において、１つまたは複数のＭＣＪ阻害化合物を対象に送達することができる。幾つかの実施形態では、マトリックスは、生分解性であり得る。マトリックスポリマーは、天然または合成ポリマーであり得る。ポリマーは、一般的には数時間から数年またはそれよりも長い規模での、放出が望ましい期間に基づいて選択され得る。通常、数時間から３〜１２ヶ月に及ぶ期間にわたる放出が使用され得る。ポリマーは、任意に水中にその重量の最大約９０％を吸収することができるヒドロゲルの形態で存在し、さらに任意に、多価イオンまたは他のポリマーと架橋される。
【００８０】
概して、ＭＣＪ阻害化合物は、本発明の幾つかの実施形態では、拡散によって生体内分解性移植片を使用して、またはポリマーマトリックスの分解によって送達され得る。かかる使用のための例示的な合成ポリマーは、当該技術分野で周知である。生分解性ポリマーおよび非生分解性ポリマーは、当該技術分野で公知の方法を使用して、ＭＣＪ阻害化合物の送達に使用され得る。生体内分解性ヒドロゲルなどの生体接着性ポリマー（Ｈ．Ｓ．Ｓａｗｈｎｅｙ、Ｃ．Ｐ．ＰａｔｈａｋおよびＪ．Ａ．Ｈｕｂｅｌｌ、Ｍａｃｒｏｍｏｌｅｃｕｌｅｓ、１９９３年、第２６巻、５８１〜５８７頁を参照、その教示は、本明細書中に組み込まれる）もまた、薬物性疾患または状態の治療のためにＭＣＪ阻害化合物を送達するのに使用され得る。さらなる適した送達システムとしては、時間放出、遅延放出または持続性放出送達システムが挙げられ得る。かかるシステムは、ＭＣＪ阻害剤化合物の反復投与を回避することができ、対象および医師に対する利便性を高める。多くのタイプの放出送達システムが利用可能であり、当業者に公知である（例えば、米国特許第５，０７５，１０９号；同第４，４５２，７７５号；同第４，６７５，１８９号；同第５，７３６，１５２号；同第３，８５４，４８０号；同第５，１３３，９７４号；および同第５，４０７，６８６号（それらの教示それぞれが、参照により本明細書中に組み込まれる））。さらに、ポンプベースのハードウェア送達システムを使用することができ、その幾つかは、移植に適応される。
【００８１】
長期持続放出移植片の使用は、対象の予防的治療に、および再発薬物性疾患または状態を発症する危険性のある対象、例えば、薬物性疾患または状態の公知の副作用を有する、医薬品で治療中の対象に適切であり得る。長期放出は、本明細書中で使用する場合、移植片が、少なくとも３０日、６０日、９０日またはそれよりも長い間、治療レベルのＭＣＪ阻害化合物を送達するように構築および配置されることを意味する。長期間持続性放出移植片は、当業者に周知であり、上述の放出システムの幾つかを含む。
【００８２】
ＭＣＪ阻害化合物の治療用製剤は、凍結乾燥製剤または水溶液の形態で、所望の度合いの純度を有する分子または化合物を、任意の薬学的に許容される担体、賦形剤または安定剤［Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ  第２１版（２００６年）］と混合することによって、保管用に調製され得る。許容される担体、賦形剤または安定剤は、用いる投与量および濃度でレシピエントに対して無毒性であり、リン酸塩、クエン酸塩および他の有機酸などの緩衝液；アスコルビン酸およびメチオニンを含む酸化防止剤；防腐剤（塩化オクタデシルジメチルベンジルアンモニウム；塩化ヘキサメトニウム；塩化ベンズアルコニウム、塩化ベンゼトニウム；フェノール、ブチルまたはベンジルアルコール；メチルまたはプロピルパラベンなどのアルキルパラベン；カテコール；レゾルシノール；シクロヘキサノール；３−ペンタノールおよびｍ−クレゾールなどの）；低分子量（約１０個未満の残基）ポリペプチド；血清アルブミン、ゼラチンまたは免疫グロブリンなどのタンパク質；ポリビニルピロリドンなどの親水性ポリマー；グリシン、グルタミン、アスパラギン、ヒスチジン、アルギニンまたはリジンなどのアミノ酸；グルコース、マンノースまたはデキストリンを含む単糖類、二糖類および他の炭水化物；ＥＤＴＡなどのキレート剤；スクロース、マンニトール、トレハロースまたはソルビトールなどの糖；ナトリウムなどの塩形成対イオン；金属錯体（例えば、Ｚｎ−タンパク質錯体）；および／またはＴＷＥＥＮ（登録商標）、ＰＬＵＲＯＮＩＣＳ（登録商標）またはポリエチレングリコール（ＰＥＧ）などの非イオン性界面活性剤を含む。
【００８３】
治療を評価すること
細胞または組織においてＭＣＪポリペプチドの活性を減少させるための候補ＭＣＪ阻害分子および化合物の有効性の評価はまた、例えば、ＭＣＪポリペプチド活性を低減させるそれらの能力に関して、候補ＭＣＪ阻害化合物を評価するためのスクリーニングアッセイとして、培養物からの細胞において本発明のアッセイを使用して行われてもよい。細胞、組織、または対象においてＭＣＪポリペプチド活性を低減させるＭＣＪ阻害化合物は、薬物性疾患または状態の治療において、または薬物性疾患または状態に関する前処理として（例えば、薬物性疾患または状態を誘導することが知られている作用物質を用いて、続く治療のために細胞または対象を調製するために）使用され得る。
【００８４】
適切なアッセイは、細胞、組織、および対象において、ＭＣＪポリペプチドをコードするポリヌクレオチドのレベルを決定すること、ならびに／あるいはＭＣＪポリペプチドのレベルおよび／またはＭＣＪポリペプチド活性を決定することを含むが、これらに限定されないＭＣＪポリペプチド活性を決定するための手段を含み得る。ＭＣＪポリペプチドコードポリヌクレオチドおよびポリペプチドのレベルおよびそれらの活性は、本発明の様々な方法を実行する場合に多数の方法で決定することができる。本発明の幾つかの実施形態では、ＭＣＪポリペプチドコードポリヌクレオチドもしくはポリペプチドのレベルまたはそれらの活性は、細胞、組織、または対象において、それぞれＭＣＪポリペプチドコードポリヌクレオチドもしくはポリペプチドの対照レベルまたはそれらの活性に関して測定される。ＭＣＪポリペプチドコードポリヌクレオチドまたはポリペプチドのレベルの１つの考え得る測定は、ＭＣＪポリペプチドコードポリヌクレオチドまたはポリペプチドの絶対レベルの測定である。これは、例えば、細胞または組織の単位当たりのＭＣＪポリペプチドコードポリヌクレオチドまたはポリペプチドで表すことができる。ＭＣＪポリペプチドコードポリヌクレオチドまたはポリペプチドのレベルの別の測定は、経時的なＭＣＪポリペプチドコードポリヌクレオチドもしくはポリペプチドのレベルおよび／または活性の変化の測定である。これは、絶対量で表されてもよく、あるいは経時的な増加または減少パーセントの観点で表されてもよい。ＭＣＪポリペプチドに関する活性アッセイもまた、ＭＣＪ阻害剤分子または化合物の有効性を評価するのに使用され得る。さらに、本発明のある特定の実施形態では、抗体もしくはその抗原結合断片、またはＭＣＪポリペプチドを特異的に結合する他の化合物を使用して、ＭＣＪ阻害剤化合物による治療後に存在するＭＣＪポリペプチドのレベルを評価し得る。
【００８５】
本発明の幾つかの実施形態では、細胞または組織におけるＭＣＪポリペプチド活性レベルの減少は、この範囲における全ての値を含む０．２％を上回る、０．５％を上回る、１．０％、２．０％、３．０％、４．０％、５．０％、７．０％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％を上回るか、または１００％の減少であり得る。ＭＣＪ阻害化合物との接触後のＭＣＪポリペプチド活性の減少は、対象における薬物性疾患または状態を治療するためのＭＣＪ阻害化合物の有効性を示し得る。
【００８６】
当業者に理解されるように、本発明の治療の評価はまた、薬物性疾患もしくは状態の症状または臨床エンドポイントの評価に基づいてもよく、かかる評価は、薬物性疾患または状態の状況および／または薬物性疾患または状態の治療の有効性を評価するために本発明の方法と併用することができる。ＭＣＪポリペプチドを特異的に結合する抗体または抗原結合断片または他の化合物を使用して、ＭＣＪ阻害剤化合物による治療後のＭＣＪポリペプチドのレベルを評価することができる。ＭＣＪポリペプチドを特異的に結合する抗体または抗原結合断片または他の化合物を使用して、本発明の治療方法におけるＭＣＪ阻害剤化合物の投与後のＭＣＪポリペプチドのレベルを評価し得る。
【００８７】
キット
ＭＣＪ阻害化合物および本発明の方法におけるそれらの使用に関する説明書を含むキットもまた、本発明の範囲内である。本発明のキットは、抗ＭＣＪ抗体またはその機能性断片、変異体ＭＣＪポリペプチドコードヌクレオチド、変異体ＭＣＪポリペプチド、または小分子ＭＣＪ阻害剤等などのＭＣＪ阻害化合物の１つまたは複数を含んでもよく、それを使用して、薬物性疾患または状態を治療し得る。ＭＣＪ阻害化合物を含有するキットは、本発明の治療方法における使用のために調製することができる。本発明のキットの構成成分は、水性媒質中、または凍結乾燥形態のいずれかでパッケージングされ得る。本発明のキットは、試験管、バイアル、フラスコ、シリンジ等などの１つまたは複数の容器手段または一連の容器手段を、その中に閉じ込めた状態で受け入れるよう区分されている担体を含んでもよい。第１の容器手段または一連の容器手段は、抗ＭＣＪ抗体またはその機能性断片、変異体ＭＣＪポリペプチドコードポリヌクレオチド、変異体ＭＣＪポリペプチド、または小分子ＭＣＪ阻害剤等などの１つまたは複数の化合物を含有してもよい。第２の容器手段または一連の容器手段は、本発明の治療方法の実施形態において投与されるＭＣＪ阻害化合物の一部として含まれ得るターゲティング剤、標識剤、送達剤等を含有してもよい。
【００８８】
本発明のキットはまた、指示書を含んでもよい。指示書は通常、書面形式であり、キットにより具現化される治療を実行するための、およびその治療に基づいて決定を行うためのガイダンスを提供する。
【００８９】
候補化合物を同定する方法
本発明のある特定の態様は、細胞、組織、および／または対象においてＭＣＪポリペプチド活性を低減させる候補化合物を同定および／またはスクリーニングする方法を含む。方法は、候補化合物を、細胞または組織と接触させること、および／または対象に、候補化合物を投与すること、ならびに細胞、組織、および／または対象の、候補化合物との接触前および後にＭＣＪポリペプチド活性の量を決定することを含み得る。適切な対照と比較したＭＣＪポリペプチド活性の量の減少は、ＭＣＪのレベルを減少させることが可能である化合物を示している。
【００９０】
薬物性疾患または障害に関して治療候補を評価するのに有用なアッセイ混合物は、候補化合物を含む。候補化合物は、抗体、小有機化合物、小分子、ポリペプチド、ＤＮＡ分子、ＲＮＡ分子等であってもよく、したがって、コンビナトリアル抗体ライブラリー、コンビナトリアルタンパク質ライブラリー、小有機分子ライブラリー、または任意の他の適切な供給源から選択され得る。候補ＤＮＡまたはＲＮＡ分子は、遺伝子発現を低減させるのに有用な分子に関する当該技術分野で認識されるパラメーターに基づいて設計され得る。通常、候補化合物を試験するために、複数の反応混合物を、様々な濃度に対する種々の応答を得るために種々の化合物濃度と平行して実行させる。通常、これらの濃度の１つは、陰性対照として、即ち化合物のゼロ濃度で、またはアッセイ検出の限界以下の化合物濃度で機能を果たす。
【００９１】
様々な他の試薬もまた、候補化合物を試験するためにアッセイ混合物中に含まれ得る。これらは、塩、緩衝液、中性タンパク質（例えば、アルブミン）、洗浄剤等などの試薬を含んでもよく、それらを使用して、最適なタンパク質間結合および／またはタンパク質−化合物結合を容易とし得る。かかる試薬はまた、反応構成成分の非特異的な、またはバックグラウンド相互作用を低減させ得る。プロテアーゼ阻害剤、ヌクレアーゼ阻害剤、抗菌剤等などのアッセイの効率を改善させる他の試薬もまた使用され得る。構成成分の添加の順序、インキュベーション温度、インキュベーションの時間、およびアッセイの他のパラメーターは容易に決定され得る。かかる実験は、単にアッセイパラメーターの最適化を含むに過ぎず、アッセイの基本構図を含まない。インキュベーション温度は通常、４℃〜４０℃である。インキュベーション時間は、迅速なハイスループットスクリーニングを容易とするために最低限に抑えられてもよく、通常０．１〜１０時間である。インキュベーション後、ＭＣＪポリペプチドの存在、量、および／またはＭＣＪポリペプチドの活性などの変数は、使用者にとって利用可能な任意の利便性のよい方法によって検出することができる。例えば、候補化合物との接触後のＭＣＪポリペプチドの量および／または活性は、標準的な方法を使用して、また本明細書中に記載するように決定することができる。
【００９２】
下記実施例は、本発明の実施の特定の場合を説明するために提供されるものであり、本発明の範囲を限定することを意図されない。当業者にとって明らかであるように、本発明は、様々な組成物および方法に応用される。
【実施例】
【００９３】
実施例１
実験および研究は、細胞、臓器、および臓器系において薬物性損傷および傷害に対するＭＣＪ（ＤｎａＪＣ１５）の活性を低減させる効果を評価するために実施した。結果は、ＭＣＪの非存在下では、肝臓中のミトコンドリア機能の増加が見られることを示した。研究は、ＭＣＪノックアウトマウスにおける肝硬変（胆管結紮、ＢＤＬ）のマウスモデルにおいて実施されて、結果により、ＭＣＪ欠損が線維症の発症からマウスを防御することが実証された。高用量のアセトアミノフェンの投与を用いた薬物性肝傷害（ＤＩＬＩ）に関するマウスモデルを含む実験により、ＭＣＪノックアウトマウスが、正常なＭＣＪポリペプチド発現／活性を有するマウスよりもＤＩＬＩに対してより抵抗性であることが実証された。さらに、ＭＣＪに関するｓｉＲＮＡによる処理が、薬物性（毒性）傷害から野生型細胞を防御することを実証する実験を実施した。結果により、ＭＣＪに関するｓｉＲＮＡが、アセトアミノフェンの投与によって引き起こされる毒性傷害の発症から野生型肝細胞を防御することが示された。
【００９４】
材料および方法
ヒト試料
肝機能が保存され、またＢａｒｃｅｌｏｎａ  Ｃｌｉｎｉｃ  Ｌｉｖｅｒ  Ｃｅｎｔｅｒ（ＢＣＬＣ）ステージＡ（ｎ＝３４）およびＢ（ｎ＝１３）のいずれかに相当する肝硬変および肝細胞癌（ＨＣＣ）を有する４７名の患者は、Ｄｒａ．Ｅｒｉｃａ  Ｖｉｌｌａ（モデナ・レッジョ・エミリア大学、モデナ、イタリア）によって提供された。健常なヒト肝臓試料を対照として使用した（ｎ＝１３）。さらなる情報は、元の研究（Ｖｉｌｌａ，Ｅ．他、２０１５年、Ｎｅｏａｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓ−ｒｅｌａｔｅｄ  ｇｅｎｅｓ  ａｒｅ  ｈａｌｌｍａｒｋｓ  ｏｆ  ｆａｓｔ−ｇｒｏｗｉｎｇ  ｈｅｐａｔｏｃｅｌｌｕｌａｒ  ｃａｒｃｉｎｏｍａｓ  ａｎｄ  ｗｏｒｓｔ  ｓｕｒｖｉｖａｌ．プロスペクティブ研究からの結果。Ｇｕｔ．２０１５  Ｆｅｂ  ９．ｄｏｉ：１０．１１３６／ｇｕｔｊｎｌ−２０１４−３０８４８３−Ｅｐｕｂ）において提供される。インフォームドコンセントは、研究に含まれる患者全てから得られ、したがってヘルシンキ宣言で具現化された倫理原則を伴っていた。
【００９５】
動物
３ヶ月齢雄（Ｃ５７ＢＬ６）、ＭＣＪ野生型（ＷＴ）およびＭＣＪノックアウト（ＫＯ）マウスを研究に使用した。動物の手順は、ＡＡＡＬＡＣ証明書を有するＣＩＣ  ｂｉｏＧＵＮＥ動物施設のガイドラインに従って認可された。
【００９６】
免疫組織化学
パラフィン包埋した肝臓試料を切片化して、脱脂して、水分補給した。手順は全て、ＥｎＶｉｓｉｏｎ＋Ｓｙｓｔｅｍ  ＨＲＰ（Ｄａｋｏ、デンマーク）を用いて標準的なプロトコールに従って行った。最終的に、試料を、発色のためにＶｅｃｔｏｒ  Ｖｉｐ基板（Ｖｅｃｔｏｒ、ＵＳＡ）とともにインキュベートした。画像は、顕微鏡ＡＸＩＯ  Ｉｍａｇｅｒ  Ａ１（Ｃａｒｌ  Ｚｅｉｓｓ  ＡＧ、ドイツ）から１０倍または２０倍の対物レンズを用いて撮影した。染色強度の定量化、強度の平均合成および各試料の染色面積のパーセントは、ＦＲＩＤＡソフトウェア（ＦＲａｍｅｗｏｒｋ  ｆｏｒ  Ｉｍａｇｅ  Ｄａｔａｓｅｔ  Ａｎａｌｙｓｉｓ）ｈｔｔｐ：／／ｂｕｉ３．ｗｉｎ．ａｄ．ｊｈｕ．ｅｄｕ／ｆｒｉｄａ／を使用して算出した。
【００９７】
ＲＮＡ単離およびリアルタイムポリメラーゼ連鎖反応（ＲＴ−ＰＣＲ）
総ＲＮＡを、Ｔｒｉｚｏｌ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、ＵＳＡ）を使用して単離した。総ＲＮＡ  １〜２μｇをＤＮＡｓｅ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）で処理して、Ｍ−ＭＬＶ逆転写酵素（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を使用してｃＤＮＡへ逆転写した。続いて、ｉＱ（商標）ＳＹＢＲ（登録商標）Ｇｒｅｅｎ  Ｓｕｐｅｒｍｉｘ（ＢｉｏＲａｄ、ＵＳＡ）を使用して、ＣＦＸ  Ｃｏｎｎｅｃｔ（商標）ＲＴ−ＰＣＲ検出システム（ＢｉｏＲａｄ）を使用して、ｑＰＣＲを実施した。発現レベルは、各試料においてＧＡＰＤＨ  ｍＲＮＡの平均レベルに対して標準化した。
【００９８】
動物肝硬変実験モデルおよびｉｎ  ｖｉｖｏでの薬物治療
ＣＩＣ  ｂｉｏＧＵＮＥにある動物施設において繁殖させたＭＣＪ野生型（ＷＴ）およびＭＣＪノックアウト（ＫＯ）マウスを使用した。動物手順は、ＣＩＣ  ｂｉｏＧＵＮＥ  動物実験委員会（Animal Care and Use Committee）によって認可された。胆管結紮は、これまでに記載されるように実施した（Ｆｅｒｎａｎｄｅｚ−Ａｌｖａｒｅｚ  Ｓ他、（２０１５年）Ｌａｂ  Ｉｎｖｅｓｔ．９５、２２３〜３６頁）。１群につき少なくとも５匹の動物を使用した。
【００９９】
肝損傷の特性化
アラニンアミノトランスフェラーゼ（ＡＬＴ）、アスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ（ＡＳＴ）およびビリルビンは、Ｓｅｌｅｃｔｒａ  Ｊｕｎｉｏｒ  ＳｐｉｎＬａｂ  １００アナライザー（Ｖｉｔａｌ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）およびＳｐｉｎＲｅａｃｔ試薬を使用して、製造業者のプロトコールに従って、血清試料中で決定した。
【０１００】
初代肝細胞の単離および培養
初代肝細胞は、記載されるようにコラゲナーゼ灌流によって雄ＷＴ  ＭＣＪ−ＫＯマウスから単離した（Ｂａｒｂｉｅｒ−Ｔｏｒｒｅｓ  Ｌ他、（２０１５年）Ｏｎｃｏｔａｒｇｅｔ．６，２５０９〜２３頁を参照）。接着細胞は、１０％ウシ胎児血清（ＦＢＳ）を有するＭＥＭ中に維持した。
【０１０１】
酸素消費速度および細胞外酸性化速度の測定
初代ＭＣＪ−ＷＴマウス肝細胞を、それぞれ、コラーゲンＩでコーティングしたＸＦ２４細胞培養マイクロプレート（Ｓｅａｈｏｒｓｅ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）において、ウェル１つにつき２．０×１０４個の細胞で播種した。酸素消費速度（ＯＣＲ）および細胞外酸性化速度（ＥＣＡＲ）の測定は、アッセイ培地中で１時間の平衡化後に実施した。ＯＣＲおよびＥＣＡＲベースライン測定後に、オリゴマイシン（１μＭ）、カルボニルシアニド４−（トリフルオロメトキシ）フェニルヒドラゾン（ＦＣＣＰ）（３μＭ）およびロテノン（ＲＯ）（１μＭ）溶液を順次、各ウェルに添加して、作業濃度に到達させて、ＯＣＲおよびＥＣＡＲにおける変化を分析した。標準化したデータは、初代肝細胞に関してタンパク質１μｇにつき、１分当たりのＯ２  ｐｍｏｌまたは１分当たりのミリｐＨ単位（ｍｐＨ）として表した。
【０１０２】
ｉｎ  ｖｉｔｒｏでのサイレンシング
初代ＭＣＪ−ＷＴマウス肝細胞を、Ｊｅｔｐｒｉｍｅ試薬（Ｐｏｌｙｐｌｕｓ）を使用して、ｓｈＭＣＪまたは未関連ＳｈＣｏｎｔｒｏｌ  ２ｍｇで２４時間トランスフェクトした。ある特定の実験は、標準的なｓｈＲＮＡ手順によってプラスミド中に含まれ、プラスミドの一部として送達される配列番号２２を有するｓｉＲＮＡを含むｓｈＭＣＪの使用を含んでいた。初代肝細胞を、デオキシコール酸（ＤＮＡ）１００ｍＭで２時間処理した。各実験を３連を使用して行った。
【０１０３】
アポトーシス測定
カスパーゼ３活性アッセイは、これまでに記載されるように実施した［Ｂａｒｂｉｅｒ−Ｔｏｒｒｅｓ  Ｌ他、（２０１５年）Ｏｎｃｏｔａｒｇｅｔ．６，２５０９〜２３頁］。
【０１０４】
統計学的分析
実験は全て、３連で実施した。データは、平均値±ＳＥＭとして表した。統計学的有意性は、スチューデントｔ検定を用いて推定した。０．０５未満のｐ値を有意であるとみなした。
【０１０５】
結果
結果は、肝硬変を有する対象において肝臓におけるＭＣＪレベルの増加が見られることを示した。図１Ａ〜図１Ｂは、肝硬変患者の肝臓が、増加されたＭＣＪレベルを有することを示す顕微鏡画像およびグラフを示す。図１Ａ左側パネルにおける免疫組織化学の結果は、健常な対照対象（ＮＬ）（ｎ＝５）由来の肝臓におけるＭＣＪ発現を示し、図１Ａにおける免疫組織化学の結果は、肝硬変（Ｃ型肝炎）を有する患者（ｎ＝１６）由来の肝臓におけるＭＣＪ発現を示す。図１Ｂは、健常な患者および肝硬変患者に関して決定したＭＣＪ発現のレベルを示すグラフである。結果は、硬変した肝臓におけるＭＣＪのレベルの統計学的に有意な増加を示す。
【０１０６】
薬物性肝傷害（ＤＩＬＩ）のマウスモデルにおける肝傷害の重篤性に対するＭＣＪの存在の効果を評価するために実施した実験の結果により、ＭＣＪレベルの減少は、正常なＭＣＪレベルを有する野生型マウスにおける薬物性肝傷害の量に対して、薬物性肝傷害の量の低減をもたらすことが実証された。図２Ａ〜図２Ｂは、薬物性肝傷害（ＤＩＬＩ）に関するマウスモデルとしてアセトアミノフェン投与の使用を示す顕微鏡画像およびグラフを提供する。結果は、アセトアミノフェンを腹腔内投与した野生型（ＷＴ）およびＭＣＪノックアウト（ＫＯ）マウスに関して示す。図２Ａは、４８時間後の結果を示し、Ｆ４／８０マクロファージマーカーに関して免疫組織化学によって検査した肝臓切片におけるマクロファージの存在を示す。図２Ａ（左側パネル）は、ＷＴを代表し、図２Ａ（右側パネル）は、ＭＣＪ  ＫＯを代表する。図２Ｂ右側グラフは、血清中のＡＬＴおよびＡＳＴトランスアミナーゼのレベルを示す。図２Ｂ（左側パネル）は、各遺伝子型に関する１匹のマウスを代表する。図２Ｂ（右側パネル）は、各遺伝子型に関するｎ＝４マウスに対する値を示す。結果は、ＫＯマウスが、肝臓においてアセトアミノフェンによって誘導される損傷に対してより抵抗性であることを示した。図２Ｂ左側パネルは、ＫＯマウスにおいて、より少ないＦ４／８０マクロファージマーカーを示す。ＭＣＪ  ＫＯマウスは、ＷＴマウスよりも少ない炎症を発症し、またより低いレベルのトランスアミナーゼを有した。
【０１０７】
肝硬変型の肝損傷のマウスモデルにおける肝硬変型の肝損傷の重篤性に対するＭＣＪの存在の効果を評価するために実施した実験の結果により、ＭＣＪのレベルの減少が、正常なＭＣＪレベルを有する野生型マウスにおける肝硬変型の肝損傷の量に対して、肝硬変型の肝損傷の量の低減をもたらすことが実証された。図３Ａ〜図３Ｃは、肝硬変に関する胆管結紮（ＢＤＬ）マウスモデルを利用した、胆管結紮手術を受けたＷＴおよびＭＣＪ  ＫＯマウスからの結果を示す。図３Ａは、１４日後の肝臓の顕微鏡画像を示す。組織損傷は、炎症のマーカーとしてのＩＨＣによるマクロファージ（Ｆ４／８０）の存在によって示された。図３Ａ左側パネルは１匹のＷＴマウス由来の画像であり、図３Ａ右側パネルは、ＭＣＪ  ＫＯマウス１匹由来の画像である。図３Ｂは、各遺伝子型に関するｎ＝４マウスに対するＦ４／８０陽性染色値を示すグラフである。図３Ｃは、胆管結紮手術時のＷＴおよびＭＣＪ  ＫＯマウスに関する生存曲線を提供する。ＭＣＪ  ＫＯマウスは、肝硬変型の肝損傷を発症するのに対してより抵抗性である。
【０１０８】
ＭＣＪ  ｓｈＲＮＡの投与が、肝硬変型の損傷から肝臓細胞を防御するかどうかを評価するために肝臓細胞における酸素消費速度（ＯＣＲ）値を測定するために実施した実験の結果。ＭＣＪ  ｓｈＲＮＡの投与は、ＭＣＪ  ｓｈＲＮＡを投与していない野生型マウスにおける肝硬変型の損傷のレベルと比較して、肝硬変型の損傷の量を低減させた。図４Ａ〜図４Ｂは、ＭＣＪ  ｓｈＲＮＡ（ｓｈＭＣＪ）がＤＣＡ誘導死から初代肝細胞を防御したことを示すグラフを提供する。図４Ａは、対照（ＷＴ）またはｓｈＭＣＪ（ｓｈＭＣＪ）発現プラスミドでトランスフェクトしたＷＴマウス由来の初代肝細胞における酸素消費速度（ＯＣＲ）値を示す。結果により、ｓｈＭＣＪ処理が、ＷＴと比較してＯＣＲを低減させることが示された。図４Ｂは、対照（ＷＴ）またはｓｈＭＣＪ（ｓｈＭＣＪ）発現プラスミドでトランスフェクトしたＷＴマウス由来の初代肝細胞におけるＤＣＡ  １００μＭ処理後のカスパーゼ−３活性（細胞死に関するマーカー）を示す。結果により、ｓｈＭＣＪによる処理が、ＷＴと比較してカスパーゼ−３活性を低減させることが示された。
【０１０９】
実施例２
ミトコンドリアは、肝細胞において主なエネルギー供給源であり、肝臓の広範な酸化的代謝および正常な機能において重要な役割を果たす。損なわれたミトコンドリア機能は、細胞生存に影響を及ぼして、肝疾患に寄与するため、ミトコンドリアは、肝細胞傷害を媒介するシグナル伝達を制御する。とりわけ、ミトコンドリア機能の変更は、薬物性肝傷害（ＤＩＬＩ）を含む様々な慢性肝疾患において実証されている。研究の目標は、ミトコンドリア呼吸の内因性ネガティブレギュレーターであるＭＣＪがＤＩＬＩに対して効果があるかどうかを決定すること、およびＭＣＪ機能を阻害して、肝傷害を防御または治癒することができる薬物の開発であった。
【０１１０】
材料および方法
さらなる方法および詳細に関しては、実施例１における材料および方法を参照されたい。
【０１１１】
ＭＣＪに関する肝組織学および免疫組織化学
パラフィン包埋した肝臓試料を切片化して、脱脂して、水分補給した。免疫組織化学（ＩＨＣ）は、抗ＭＣＪ抗体を使用して実施し、核をヘマトキシリンで対比染色した。各試料の染色面積の定量化は、Ｆｒｉｄａソフトウェアを使用して分析し、総面積に対する染色面積の％として表した（倍率視野）。試料１つ当たり１０個の視野を撮影および分析した。肝組織学に関して、パラフィン包埋した組織由来の肝臓切片をヘマトキシリンおよびエオシン（Ｈ＆Ｅ染色）で染色した。Ｆｒｉｄａソフトウェアを定量化用に使用した。
【０１１２】
初代マウス肝細胞における分析
初代肝細胞を、コラゲナーゼ灌流によってＷＴ  ＭＣＪ  ＫＯマウスから単離した。細胞をＭＥＭ培地中で培養して、種々の時点に関して、アセトアミノフェン１０ｍＭで処理した。ＡＴＰレベルは、キットＡＴＰＬｉｔｅ（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ）を使用して測定した。ミトコンドリアＲＯＳは、蛍光顕微鏡分析に使用されるＭｉｔｏＳＯＸ試薬（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）で測定した。細胞死は、ＴＵＮＥＬアッセイ（Ｒｏｃｈｅ）で定量化した。
【０１１３】
ウェスタンブロッティング分析
ウェスタンブロット分析による肝臓におけるＭＣＪ発現の分析は、特異的な抗ＭＣＪ抗体を使用してこれまでに記載されるように（ＲＥＦ）実施した。ＧＡＰＤＨの発現は、対照として使用した。バンド強度は、ＩｍａｇｅＪソフトウェアを使用して定量化して、対照（ＧＡＰＤＨ）に対して標準化した。
【０１１４】
ｓｉＲＮＡの静脈内（ｉ．ｖ．）投与
設計した配列を含有するｓｉＭＣＪオリゴ（二重鎖ＲＮＡオリゴ、例えば、配列番号２２を参照）を、ｉｎ  ｖｉｖｏでの研究用に合成した（Ａｍｂｉｏｎ  ｉｎｖｉｖｏ  ｓｉＲＮＡ）。肝細胞へのｓｉＲＮＡのｉｎ  ｖｉｖｏでの送達の高い有効性を得ることが求められるため、送達系として、Ｉｎｖｉｖｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ３．０（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）を使用した。製造業者の推奨を受けて、１．７ｍｇ／Ｋｇをｉｎｖｉｖｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ３．０と組み合わせて使用した。Ｉｎｖｉｖｏｆｅｃｔａｍｉｎｅを用いたｓｉＲＮＡの調製は、製造業者によって推奨されるように実施した。マウスに、１５０μｌ中の単回静脈内用量のｓｉＭＣＪ／ｉｎｖｉｖｏｆｅｃｔａｍｉｎｅを投与した。
【０１１５】
結果
ヒトおよびマウスにおいて薬物性肝傷害（ＤＩＬＩ）によって引き起こされる肝臓におけるＭＣＪ発現の増加
ミトコンドリア機能は、薬物性肝傷害（ＤＩＬＩ）を有する患者の肝臓においてひどく損なわれているため、これらの患者ならびに健常な対照対象から得られる肝臓バイオプシーにおいて、ＭＣＪ発現を検査した。発現は、免疫組織化学、続くさらなる定量化によって検査した（方法を参照）。結果により、ＭＣＪ発現は、ＤＩＬＩ患者由来の肝臓において、統計学的に高いことが明らかとなった（図５Ａ）。
【０１１６】
マウス肝臓におけるＭＣＪの発現はまた、単回高用量のアセトアミノフェン（ＡＰＡＰ）がマウスに供給されて、３６〜４８時間以内に重篤な肝損傷（高いトランスアミナーゼ、組織損傷）を招くＤＩＬＩのマウスモデルを使用して検査した。アセトアミノフェン誘導性肝傷害は、急性肝不全の２番目に最も一般的な原因であり、多くの場合、唯一の治療として肝移植を必要とする。ウェスタンブロット分析によって決定されるようなＭＣＪ発現の分析は、対照マウスと比較して、ＡＰＡＰ処理マウス由来の肝臓において、有意により高いレベルのＭＣＪを示した（図５Ｂ）。
【０１１７】
まとめると、これらのデータは、薬物性肝損傷が、ヒト患者およびマウスの両方において、肝臓においてＭＣＪレベルの増加を引き起こすことを示した。また、これらのデータにより、ＭＣＪ発現および／機能を崩壊させることは、治療上のアプローチとして使用することができることが示唆された。
【０１１８】
ＭＣＪの欠如は、アセトアミノフェン誘導性ミトコンドリア機能不全および死から肝細胞を防御する
ミトコンドリア機能におけるＭＣＪのネガティブな役割およびＤＩＬＩを有する肝臓におけるＭＣＪの発現の上昇を考慮して、ＭＣＪの欠如が、アセトアミノフェン（ＡＰＡＰ）による処理時に肝細胞においてミトコンドリア機能を防御することができるかどうかを研究するために研究を実施した。肝細胞を、ＷＴマウスまたはＭＣＪ  ＫＯマウスの肝臓から単離して、ＡＰＡＰで処理した。処理の９時間後の速さで、ＷＴ肝細胞におけるＡＴＰのレベルは、ＷＴ肝細胞において顕著に低かったが、ＭＣＪ  ＫＯ肝細胞では高いままであった（図６Ａ）。ＡＰＡＰは、ミトコンドリアＲＯＳの生成を引き起こし、このことが、肝細胞死を媒介する原因であることがこれまでに示されている。予期せぬことに、ＭＣＪ  ＫＯ肝細胞におけるＭＣＪの欠如は、ＲＯＳの生成を防止した（図６Ｂ）。したがって、ＭＣＪの欠如は、ＡＰＡＰに応答して肝細胞において正常なミトコンドリア機能を維持するのに十分であり、ＲＯＳの生成を防止する。これらの効果と相関して、ＭＣＪ  ＫＯ肝細胞は、ＡＰＡＰによって引き起こされる細胞死に対してより抵抗性であることがわかった（図６Ｃ）。
【０１１９】
これらのデータは、ＭＣＪ発現および／または機能を崩壊させることにより、薬物性損傷から肝臓を防御することができるという結論を支持する。
ＭＣＪ  ｓｉＲＮＡ（ｓｉＭＣＪ）を使用して、ｉｎ  ｖｉｖｏで肝臓においてＭＣＪ発現を崩壊させることができる（薬力学）
肝臓分子を標的とするためにｓｉＲＮＡを使用した最近の試みからのポジティブな結果に基づいて（ＲＥＦ）、ＭＣＪに関するｓｉＲＮＡ（ｓｉＭＣＪ）は、肝臓においてＭＣＪのレベルを低減させるための戦略で使用した。ｓｉＭＣＪパイロット研究の有効性および薬力学を決定することを実施し、ここで正常な条件で維持した野生型マウスに、ｉｎｖｉｖｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ（送達系として）と組み合わせて、単回静脈内用量のｓｉＭＣＪを投与し、続いて種々の期間でマウスを収集した。それらのマウスの肝臓におけるＭＣＪのレベルをウェスタンブロット分析で検査した。ｓｉＭＣＪの投与の２４時間後にすぐ、肝臓における内因性ＭＣＪのレベルはほとんど検出不可能であった（図７）。ＭＣＪのレベルは、少なくとも７日間は非常に低いままであり、投与の９日後でさえ、ＭＣＪレベルの完全な回復は見られなかった（図７）。したがって、ｓｉＭＣＪは、長期間の間、ＭＣＪタンパク質の発現を抑制するのに非常に効率的であった。
【０１２０】
ｓｉＭＣＪの投与は、アセトアミノフェン誘導性肝損傷を防止する
アセトアミノフェン（ＡＰＡＰ）マウスモデルを使用したＤＩＬＩ治療におけるｓｉＭＣＪの効果を研究するために研究を実施した。本明細書中で上述する結果は、ＭＣＪ発現が、ｓｉＭＣＪの投与によって標的とされ得ることを示す。したがって、１回の単回ｓｉＭＣＪ投与が、アセトアミノフェンの投与によって引き起こされる損傷から肝臓を防御することができるかどうかを試験するさらなる研究を実施した。野生型マウスに、ｉｎｖｉｖｏｆｅｃｔａｍｉｎｅと一緒にｓｉＭＣＪの用量を付与した。対照マウスには、ｓｉＭＣＪを付与しなかった。次に、２０時間後、マウス全てに、上述するように腹腔内用量のアセトアミノフェンを投与した。アセトアミノフェン投与の２４時間後に、マウスを収集した。肝臓におけるＭＣＪのレベルをウェスタンブロット分析によって検査した。ｓｉＭＣＪで処理したＡＰＡＰマウスにおけるＭＣＪレベルは、ｓｉＭＣＪを付与しなかったＡＰＡＰマウスに対して顕著に低減した（図８Ａ）。収集時に、ｓｉＭＣＪで処理したマウスが、アセトアミノフェン誘導性損傷から防御され得ることが、肝臓の色彩に基づいてすでに明らかであった（アセトアミノフェン投与後、肝臓における色彩はより明るい）。これらの観察は、肝組織切片の組織学的分析によって確認されており、ここで、ＡＰＡＰマウス由来の肝臓は、明らかな組織損傷の領域を示すが、これらの領域は、ｓｉＭＣＪで処理したＡＰＡＰマウス由来の肝臓ではほとんど検出されなかった（図８Ｂ）。肝臓における損傷領域の定量化は、アセトアミノフェン誘導性肝傷害からのｓｉＭＣＪの防御効果の兆候を提供した（図８Ｃ）。したがって、ｉｎ  ｖｉｖｏにおいてｓｉＭＣＪでＭＣＪ発現を阻止することにより、肝臓におけるアセトアミノフェンの損傷効果から防御される。
【０１２１】
アセトアミノフェン後のｓｉＭＣＪによる処理は、アセトアミノフェン誘導性肝損傷を防止した
現在、アセトアミノフェン（急性肝不全の２番目の主要原因）の過剰投与に起因した急性肝不全を有する集中治療室に入院した患者の唯一の治療は、Ｎ−アセチルシステイン（ＮＡＣ）である。ＮＡＣは、肝保護効果を有するが、但し、アセトアミノフェンの取込み後の８時間以内に投与された場合のみである。８時間後、ＮＡＣの効果は、最小限であると知られており、唯一の選択は、肝移植である。ｓｉＭＣＪが、患者がアセトアミノフェン過剰投与後のより長い期間後である場合における処理として使用することができるかどうかを決定するために、実験を実施し、ここで、マウスにまず、高用量のアセトアミノフェンを投与した。続いて、２４時間後に、ｓｉＭＣＪおよびＩｎｖｉｖｏｆｅｃｔａｍｉｎｅによる静脈内注射を、マウスのコホート（ｓｉＭＣＪマウス）に付与した。２４時間後（アセトアミノフェン投与の４８時間後）、マウスを収集して、肝臓におけるＭＣＪのレベルをウェスタンブロット分析によって決定し、血中のトランスアミナーゼのレベルを、肝不全に関する診断として測定した。ｓｉＭＣＪで処理したマウスにおける肝臓におけるＭＣＪのレベルは、ほとんど検出不可能であり（図９Ａ）、肝臓においてこのタンパク質の存在を排除するための有効性を示した。より重要なことに、ＡＬＴ（患者において測定されるトランスアミナーゼの１つ）のレベルは、ｓｉＭＣＪで処理したマウスにおいて、劇的に低かった（図９Ｂ）。
【０１２２】
実施例３
ヒトｓｉＭＣＪは、ｉｎ  ｖｉｔｒｏでヒトＭＣＦ７細胞株において検査した。少量のｈ−ｓｉＭＣＪ（配列番号２１）による、ヒト細胞株細胞のトランスフェクションは、ＭＣＪタンパク質発現をノックダウンするのに十分であった（図１０）のに対して、別のミトコンドリアタンパク質であるＣｏｘＩＶのレベルには影響を及ぼさなかった。トランスフェクション方法は、ｈ−ｓｉＭＣＪ（５ｎＭ）でトランスフェクトしたヒトＭＣＦ７細胞を切除することを含み、３０時間後、細胞を収集して、ＭＣＪ発現を、抗ヒトＭＣＪ抗体を使用したウェスタンブロット分析によって検査した。ＣｏｘＩＶ（ミトコンドリアタンパク質）およびＧＡＰＤＨもまた、対照として検査した。結果は、ＭＣＪタンパク質発現を低減させるためのｓｉＲＮＡの使用を実証した。
【０１２３】
等価物
本発明の幾つかの実施形態を、本明細書中で記載および説明してきたが、当業者は、機能を実行して、ならびに／あるいは結果および／または本明細書中に記載する利点の１つまたは複数を得るための様々な他の手段および／または構造を容易に思い描き、かかる変形および／または変更はそれぞれ、本発明の範囲内であると考えられる。より一般的には、当業者は、本明細書中に記載するパラメーター、寸法、材料および形状は全て、例示的であると意図され、実際のパラメーター、寸法、材料および／または形状は、本発明の教示（複数可）が使用される特定用途（複数可）に依存することを容易に理解する。当業者は、単なる日常的な実験を使用して、本明細書中に記載する本発明の特定実施形態に対する多くの等価物を認識するか、または確認することが可能である。したがって、上述の実施形態は、単に例として提示されること、また併記の請求の範囲およびその等価物の範囲内で、本発明は、具体的に記載および特許請求される場合とは別のやり方で実施され得ることが理解されよう。本発明は、本明細書中に記載する個々の特徴、システム、物品、材料および／または方法に関する。さらに、２つまたはそれ以上のかかる特徴、システム、物品、材料および／または方法の任意の組合せは、かかる特徴、システム、物品、材料および／または方法が、相互に矛盾しない場合に、本発明の範囲内に含まれる。
【０１２４】
定義は全て、本明細書中で規定および使用するように、辞書的定義、参照により組み込まれる文書における定義および／または定義した用語の通常の意味を統制すると理解されるべきである。
【０１２５】
本明細書におけるおよび特許請求の範囲における不定冠詞「１つの（a）」および「１つの（an）」は、本明細書中で使用する場合、明らかに反対を示さない限り、「少なくとも１つ」を意味すると理解されるべきである。
【０１２６】
本明細書におけるおよび特許請求の範囲における「および／または」という語句は、本明細書中で使用する場合、そのように等位結合された要素、即ち幾つかの場合では結合的に存在し、また他の場合では分離的に存在する要素の「一方または両方」を意味すると理解されるべきである。「および／または」節によって具体的に同定される要素以外の他の要素は、具体的に同定されるそれらの要素に関連されても、または関連がなくても、明らかに反対を示さない限り、任意に存在してもよい。
【０１２７】
本出願において引用または参照される全ての参照文献、特許および特許出願および刊行物は、本明細書でそれらの全体が参照により本明細書に組み込まれる。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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