(57)【要約】  本発明は、抗ＣＤ３８抗体及びサバイビン阻害剤による血液悪性疾患の併用療法に関する。
2018522857.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ＣＤ３８陽性血液悪性疾患を有する対象を治療する方法であって、該治療を要する前記対象に、抗ＣＤ３８抗体及びサバイビン阻害剤を前記ＣＤ３８陽性血液悪性疾患を治療するうえで充分な時間にわたって投与すること、を含む、方法。
【請求項２】
前記ＣＤ３８陽性血液悪性疾患が、多発性骨髄腫（ＭＭ）、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）、バーキットリンパ腫（ＢＬ）、濾胞性リンパ腫（ＦＬ）、マントル細胞リンパ腫（ＭＣＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、又は慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）である、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記ＣＤ３８陽性血液悪性疾患が、形質細胞疾患である、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
前記形質細胞疾患が、軽鎖アミロイドーシス（ＡＬ）、多発性骨髄腫（ＭＭ）、又はワルデンストレームマクログロブリン血症である、請求項３に記載の方法。
【請求項５】
前記形質細胞疾患がＭＭである、請求項４に記載の方法。
【請求項６】
前記抗ＣＤ３８抗体が、ＣＤ３８への結合に関して、配列番号４の重鎖可変領域（ＶＨ）及び配列番号５の軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む抗体と競合する、請求項１〜５のいずれかに記載の方法。
【請求項７】
前記ＣＤ３８抗体が、ヒトＣＤ３８（配列番号１）の領域ＳＫＲＮＩＱＦＳＣＫＮＩＹＲ（配列番号２）及び領域ＥＫＶＱＴＬＥＡＷＶＩＨＧＧ（配列番号３）に結合する、請求項６に記載の方法。
【請求項８】
前記抗ＣＤ３８抗体が、それぞれ配列番号６、７、及び８の重鎖相補性決定領域（ＨＣＤＲ）１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３の配列と、それぞれ配列番号９、１０、及び１１の軽鎖相補性決定領域（ＬＣＤＲ）１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３の配列とを含む、請求項７に記載の方法。
【請求項９】
前記抗ＣＤ３８抗体が、配列番号４のアミノ酸配列と９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるアミノ酸配列を含むＶＨと、配列番号５のアミノ酸配列と９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるアミノ酸配列を含むＶＬとを含む、請求項８に記載の方法。
【請求項１０】
前記抗ＣＤ３８抗体が、配列番号４のＶＨ及び配列番号５のＶＬを含む、請求項９に記載の方法。
【請求項１１】
前記抗ＣＤ３８抗体が、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、又はＩｇＧ４アイソタイプのものである、請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
前記抗ＣＤ３８抗体が、ＩｇＧ１アイソタイプのものである、請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
前記抗ＣＤ３８抗体が、抗体依存性細胞性細胞傷害（ＡＤＣＣ）、抗体依存性細胞性貪食作用（ＡＤＣＰ）、補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）、又はアポトーシスによってＣＤ３８陽性細胞の殺傷を誘発する、請求項１２に記載の方法。
【請求項１４】
前記抗ＣＤ３８抗体が、
ａ．配列番号１４のＶＨ及び配列番号１５のＶＬ、
ｂ．配列番号１６のＶＨ及び配列番号１７のＶＬ、
ｃ．配列番号１８のＶＨ及び配列番号１９のＶＬ、又は、
ｄ．配列番号２０のＶＨ及び配列番号２１のＶＬのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む、請求項１又は３に記載の方法。
【請求項１５】
前記抗ＣＤ３８抗体が、
ａ．配列番号１４のＶＨ及び配列番号１５のＶＬ、
ｂ．配列番号１６のＶＨ及び配列番号１７のＶＬ、
ｃ．配列番号１８のＶＨ及び配列番号１９のＶＬ、又は、
ｄ．配列番号２０のＶＨ及び配列番号２１のＶＬを含む、請求項１４に記載の方法。
【請求項１６】
前記サバイビン阻害剤が、小分子、ポリヌクレオチド、又はワクチンである、請求項１に記載の方法。
【請求項１７】
前記小分子がＹＭ１５５である、請求項１６に記載の方法。
【請求項１８】
前記抗ＣＤ３８抗体と前記サバイビン阻害剤とが、同時、順次、又は別々に投与される、請求項１に記載の方法。
【請求項１９】
前記抗ＣＤ３８抗体が静脈内投与される、請求項１８に記載の方法。
【請求項２０】
前記抗ＣＤ３８抗体が、前記抗ＣＤ３８抗体及びヒアルロニダーゼを含む医薬組成物中で皮下投与される、請求項１８に記載の方法。
【請求項２１】
前記ヒアルロニダーゼが配列番号２３のｒＨｕＰＨ２０である、請求項２０に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、血液悪性疾患の併用療法に関する。
【背景技術】
【０００２】
多発性骨髄腫（ＭＭ）は、低い増殖指数及び延長された寿命を有する、骨髄中の分泌形質細胞の潜在的蓄積を特徴とするＢ細胞悪性疾患である。この疾患は、最終的に骨及び骨髄を攻撃し、骨格系の至るところで多数の腫瘍及び病変を生じる。すべての癌のおよそ１％及びすべての血液悪性疾患の１０％強が、ＭＭに起因し得る。ＭＭの発生率は高齢人口において増加し、診断時の年齢中央値は約６１歳である。
【０００３】
現在ＭＭに使用可能な治療法としては、化学療法レジメン、幹細胞移植、ＴＨＡＬＯＭＩＤ（登録商標）（サリドマイド）、ＲＥＶＬＩＭＩＤ（登録商標）（レナリドマイド）、ＰＯＭＡＬＹＳＴ（登録商標）（ポマリドミド）、ＶＥＬＣＡＤＥ（登録商標）（ボルテゾミブ）、ＫＹＰＲＯＬＩＳ（登録商標）（カルフィルゾミブ）、ＦＡＲＡＤＹＫ（登録商標）（パノビノスタット）、ＡＲＥＤＩＡ（登録商標）（パミドロネート）、及びＺＯＭＥＴＡ（登録商標）（ゾレドロン酸）が挙げられる。ビンクリスチン、ＢＣＮＵ、メルファラン、シクロホスファミド、アドリアマイシン、及びプレドニゾン若しくはデキサメタゾンなどの化学療法剤の併用を含む現行の治療プロトコールは、わずか約５％の完全寛解率をもたらすに過ぎず、生存期間中央値は、診断時からおよそ３６〜４８か月である。高用量の化学療法を用いた後、骨髄又は末梢血単核球の自家移植を行う最近の進歩によって、完全寛解率及び寛解期間の増大がもたらされた。しかしながら、全体の生存期間はわずかに延びただけであり、治癒のエビデンスは得られていない。最終的には、インターフェロン−アルファ（ＩＦＮ−α）単独又はステロイドとの併用による維持療法下でも、全ＭＭ患者が再発する。
【０００４】
ＭＭに対する利用可能な薬剤治療レジメンの有効性は、低い細胞増殖速度及び９０％に及ぶ患者での薬剤耐性の確立によって限定されている。染色体の転座、癌遺伝子の突然変異、抗アポトーシス及び細胞生存経路のようなシグナル伝達経路の調節障害、並びに骨髄ニッチが、ＭＭにおける薬剤耐性に寄与していることが示唆されている（概論についてはＡｂｄｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｏｎｃｏｔａｒｇｅｔ  ４：２１８６〜２２０７，２０１３を参照）。骨髄（ＢＭ）ニッチは、悪性軽質細胞の増殖、生存、分化、移動、及び薬剤耐性への関与が示唆されている（Ｍａｎｉｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｂｉｏｍｅｄ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ  ２０１２；（２０１２年１０月３日オンライン上で刊行）  ｄｏｉ：＿１０．１１５５／＿２０１２／＿１５７４９６）。
【０００５】
ＩＩ型膜貫通糖タンパク質であるＣＤ３８は、多発性骨髄腫をはじめとする様々な血液悪性疾患の抗体療法の有望な標的である。抗ＣＤ３８抗体については、例えば国際公開第２００８／０３７２５７号、同第２００８／０４７２４２号、及び同第２００７／０４２３０９号に記載されており、多発性骨髄腫及び他の血液悪性疾患におけるその有効性について臨床現場で評価が行われている。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００６】
本発明は、ＣＤ３８陽性血液悪性疾患を有する対象を治療する方法であって、該治療を要する対象に、抗ＣＤ３８抗体及びサバイビン阻害剤をＣＤ３８陽性血液悪性疾患を治療するうえで充分な時間にわたって投与することを含む、方法を提供する。
【図面の簡単な説明】
【０００７】
【図１Ａ】骨髄間質細胞（ＢＭＳＣ）は、ＭＭ細胞株において抗ＣＤ３８抗体ダラツムマブによって誘発されるＡＤＣＣによる多発性骨髄腫（ＭＭ）細胞の殺傷（killing）に対する保護を媒介する。ルシフェラーゼを形質導入したＣＤ３８＋  ＵＭ９  ＭＭ細胞を健康なドナーのＢＭＳＣ（ＨＤ−ＢＭＳＣ）の存在下又は非存在下で１６時間培養した後、３０：１のＰＢＭＣ：ＭＭ細胞の比で連続濃度のダラツムマブ及びＨＤ−ＰＢＭＣとインキュベートした。ＭＭ細胞の生存率を、生物発光イメージング（ＢＬＩ）によって４時間後に測定した。ＡＤＣＣ率（％）を、ダラツムマブの非存在下での細胞生存率に対して計算した。エラーバーは３重の測定値の標準誤差（ＳＥＭ）を表す。データは、３つの独立した実験を表している。ＢＭＳＣの存在下又は非存在下での培養物間での差について、独立ｔ検定（＊＝ｐ＜０．０５）によって検定した。
【図１Ｂ】骨髄間質細胞（ＢＭＳＣ）は、ＭＭ細胞株において抗ＣＤ３８抗体ダラツムマブによって誘発されるＡＤＣＣによる多発性骨髄腫（ＭＭ）細胞の殺傷（killing）に対する保護を媒介する。ルシフェラーゼを形質導入したＣＤ３８＋  ＲＰＭＩ８２２６  ＭＭ細胞をＨＤ−ＢＭＳＣの存在下又は非存在下で１６時間培養した後、３０：１のＰＢＭＣ：ＭＭ細胞の比で連続濃度のダラツムマブ及びＨＤ−ＰＢＭＣとインキュベートした。ＭＭ細胞の生存率を、ＢＬＩによって４時間後に測定した。ＡＤＣＣ率（％）を、ダラツムマブの非存在下での細胞生存率に対して計算した。エラーバーは３重のＳＥＭを表す。データは、３つの独立した実験を表している。ＢＭＳＣの存在下又は非存在下での培養物間での差について、独立ｔ検定（＊＝ｐ＜０．０５）によって検定した。
【図２Ａ】ＢＭＳＣは、初代ＭＭ患者試料において抗ＣＤ３８抗体ダラツムマブによって誘発されるＡＤＣＣによるＭＭ細胞の殺傷に対する保護を媒介する。ＭＭ患者１から得た全骨髄吸引物を自家骨髄間質細胞の存在下（白抜きの棒グラフ）又は非存在下（黒い棒グラフ）で培養した後、示した濃度のダラツムマブで処理した。吸引物中に存在する自家細胞をエフェクター細胞として用いた。ＢＭ−ＭＮＣはエフェクター細胞としてＮＫ細胞を既に含んでいるため、更なるエフェクター細胞は加えなかった。培養物中のＣＤ１３８＋  ＭＭ細胞の生存率を、２４時間後にフローサイトメトリーによって測定した。エラーバーは３重のＳＥＭを表す。ＢＭＳＣの存在下又は非存在下での培養物間での差について、独立ｔ検定（＊＝ｐ＜０．０５）によって検定した。＊ｐ＜０．０５。上のパネル：患者番号１、下のパネル：患者番号２。ＢＭＳＣ：骨髄間質細胞。ＡＤＣＣ：抗体依存性細胞傷害作用。
【図２Ｂ】ＢＭＳＣは、初代ＭＭ患者試料において抗ＣＤ３８抗体ダラツムマブによって誘発されるＡＤＣＣによるＭＭ細胞の殺傷に対する保護を媒介する。ＭＭ患者２から得た全骨髄吸引物を自家骨髄間質細胞の存在下（白抜きの棒グラフ）又は非存在下（黒い棒グラフ）で培養した後、示した濃度のダラツムマブで処理した。吸引物中に存在する自家細胞をエフェクター細胞として用いた。ＢＭ−ＭＮＣはエフェクター細胞としてＮＫ細胞を既に含んでいるため、更なるエフェクター細胞は加えなかった。培養物中のＣＤ１３８＋  ＭＭ細胞の生存率を、２４時間後にフローサイトメトリーによって測定した。エラーバーは３重のＳＥＭを表す。ＢＭＳＣの存在下又は非存在下での培養物間での差について、独立ｔ検定（＊＝ｐ＜０．０５）によって検定した。＊ｐ＜０．０５。上のパネル：患者番号１、下のパネル：患者番号２。ＢＭＳＣ：骨髄間質細胞。ＡＤＣＣ：抗体依存性細胞傷害作用。
【図３】ＹＭ１５５はＮＫ細胞溶解を誘発しない。ＨＤ−ＢＭＳＣ及び患者骨髄単核球（ＢＭＭＮＣ）を、示した濃度のＹＭ１５５と２４時間インキュベートした。生存ＣＤ３−ＣＤ５６＋  ＮＫ細胞の数をフローサイトメトリーによって測定し、非処理の試料をネガティブコントロールとして用いて溶解率（％）を計算した。
【図４Ａ】ダラツムマブとＹＭ１５５との併用は、形質細胞の存在下でＡＤＣＣによるＭＭ細胞の殺傷作用に相乗効果をもたらす。ルシフェラーゼを形質導入したＲＰＭＩ８２２６  ＭＭ細胞を、ＨＤ−ＢＭＳＣの存在下又は非存在下で培養した。ダラツムマブ及びＹＭ１５５を、示される濃度で加えた。ＨＤ−ＰＢＭＣを、ＡＤＣＣを誘発するためのＮＫ細胞源として４０：１のＰＢＭＣ：ＭＭ比ですべてのウェルに加えた。ＲＰＭＩ８２２６細胞の生存率を、ＢＬＩによって４時間後に測定した。溶解率（％）を、いずれの処理も行わなかったＲＰＭＩ８２２６細胞の生存率に対して計算した。ＹＭ１５５とダラツムマブを併用した場合では、累積効果が相乗的ではなく、相加的であるものと仮定して、予想される溶解率の値をダラツムマブ及びＹＭ１５５単独の処理から推測した。予想される結果と観察された結果との統計的な差を、独立ｔ検定＊＊＊＝ｐ＜０．００５、＊＝ｐ＜０．０５によって検定した。ＤＡＲＡ：ダラツムマブ。
【図４Ｂ】ダラツムマブとＹＭ１５５との併用は、形質細胞の存在下でＡＤＣＣによる初代ＭＭ細胞の殺傷に相乗効果をもたらす。ＭＭ患者１の全ＢＭ吸引物を、自家ＭＭ−ＢＭＳＣの存在下又は非存在下で培養した。ダラツムマブ及びＹＭ１５５を、示される濃度で加えた。ＢＭ−ＭＮＣは充分なＮＫ細胞を含んでいるため（いずれの場合も約３０：１のＮＫ：ＭＭ細胞比で）、更なるエフェクター細胞は加えなかった。２４時間後、生存ＣＤ１３８＋ＭＭ細胞をフローサイトメトリーによって各条件で計数した。溶解率（％）を、同じ条件で培養したがいずれの処理も行わなかった、ＢＭ−ＭＮＣ中のＭＭ細胞の生存率に対して計算した。予想される結果と観察された結果との統計的な差を、独立ｔ検定によって検定した。＊ｐ＜０．０５。
【図４Ｃ】ダラツムマブとＹＭ１５５との併用は、形質細胞の存在下でＡＤＣＣによる初代ＭＭ細胞の殺傷に相乗効果をもたらす。ＭＭ患者２の全ＢＭ吸引物を、自家ＭＭ−ＢＭＳＣの存在下又は非存在下で培養した。ダラツムマブ及びＹＭ１５５を、示される濃度で加えた。ＢＭ−ＭＮＣは充分なＮＫ細胞を含んでいるため（いずれの場合も約３０：１のＮＫ：ＭＭ細胞比で）、更なるエフェクター細胞は加えなかった。２４時間後、生存ＣＤ１３８＋  ＭＭ細胞をフローサイトメトリーによって各条件で計数した。溶解率（％）を、同じ条件で培養したがいずれの処理も行わなかった、ＢＭ−ＭＮＣ中のＭＭ細胞の生存率に対して計算した。予想される結果と観察された結果との統計的な差を、独立ｔ検定によって検定した。＊ｐ＜０．０５。
【図４Ｄ】ダラツムマブとＹＭ１５５との併用は、形質細胞の存在下でＡＤＣＣによる初代ＭＭ細胞の殺傷に相乗効果をもたらす。ＣＤ１３８＋ＭＭ細胞を含む４人のＭＭ患者からの骨髄単核球（ＢＭ−ＭＮＣ）（患者１〜４についてそれぞれ、４５％、５．５％、１０．２％、２１．６％）を、自家ＭＭ−ＢＭＳＣの存在下又は非存在下で培養した。ダラツムマブ（１ｎｇ／ｍＬ）及び最大濃度以下の適当な濃度のＹＭ１５５（患者１〜４についてそれぞれ、１２５、６２、７５及び５０ｎｇ／ｍＬ）を加えた。ＢＭ−ＭＮＣは充分なＮＫ細胞を含んでいたため（それぞれ７．９％、７．９％、１０．３％及び９．５％）、更なるエフェクター細胞は加えなかった。２４時間後、生存ＣＤ１３８＋  ＭＭ細胞をフローサイトメトリーによって各条件で計数した。溶解率（％）を、同じ条件で培養したがいずれの処理も行わなかった、ＢＭ−ＭＮＣ中のＭＭ細胞の生存率に対して計算した。予想される結果と観察された結果との統計的な差を、独立ｔ検定によって検定した。＊ｐ＜０．０５。ｎｓ：有意差でない。ＤＡＲＡ：ダラツムマブ。
【図５】ダラツムマブとＹＭ１５５の併用療法の抗腫瘍効果。ＵＭ９細胞を移植したＲＡＧ２−／−γｃ−／−マウスにおける処理群当たりの腫瘍ロード量の分析。ヒトＭＳＣでコーティングし、ルシフェラーゼを形質導入したＭＭ細胞株ＵＭ９をロードしたハイブリッド足場材を、ＲＡＧ２−／−γｃ−／−マウスの背部の皮下に移植した（マウス１匹当たり４個の足場材）。移植の１０日後、増殖中の腫瘍をＢＬＩによって可視化し、定量した。次いで、示されるように、異なるマウス群（ｎ＝４）を、溶媒コントロールで処理するか（コントロール）、又はダラツムマブ、ＹＭ１５５、若しくはダラツムマブ＋ＹＭ１５５で処理した。ＹＭ１５５（又はその溶媒のＰＢＳ）は、１ｍｇ／ｋｇ／ｄのＹＭ１５５の速度で１０日間にわたり、皮下注入ポンプにより投与した。コントロール群のマウスを含む各マウスに、ＡＤＣＣを誘発するためのヒトＮＫ細胞源として、Ｔ細胞を枯渇させたＨＤ−ＰＢＭＣ（５×１０６細胞）を投与した。マウスをＢＬＩにより毎週監視した。結果は、各足場材内の平均腫瘍ロード量として表した。エラーバーはＳＥＭを表す。ダラツムマブで処理したマウスと、ダラツムマブ＋ＹＭ１５５で処理したマウスとの間の統計的差を、マンホイットニーＵ検定を用いて計算した。  ＊＊＊Ｐ＜０．００１。
【発明を実施するための形態】
【０００８】
「ＣＤ３８」は、ヒトＣＤ３８タンパク質（同義語：ＡＤＰリボシルシクラーゼ１、ｃＡＤＰｒヒドロラーゼ１、環状ＡＤＰリボースヒドロラーゼ１）を指す。ヒトＣＤ３８は、配列番号１に示されるアミノ酸配列を有している。ＣＤ３８は、アミノ酸残基１〜２１がＣＤ３８のサイトゾルドメインを表し、アミノ酸残基２２〜４２が膜貫通ドメインを表し、残基４３〜３００がＣＤ３８の細胞外ドメインを表す、１回貫通型のＩＩ型膜タンパク質であることはよく知られている。
【０００９】
本明細書で使用するところの「抗体」なる用語は、広義の意味を有し、マウス、ヒト、ヒト適合化、ヒト化、及びキメラモノクローナル抗体を含むモノクローナル抗体、抗体フラグメント、二重特異性又は多重特異性抗体、二量体、四量体、又は多量体抗体、及び一本鎖抗体を含む、免疫グロブリン分子を含む。
【００１０】
免疫グロブリンは、重鎖定常ドメインのアミノ酸配列に応じて５つの主なクラス、即ち、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ及びＩｇＭに分類することができる。ＩｇＡ及びＩｇＧは、アイソタイプのＩｇＡ１、ＩｇＡ２、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３及びＩｇＧ４へと更に細分類される。いずれの脊椎動物種の抗体軽鎖も、それらの定常ドメインのアミノ酸配列に基づいて２つの明確に異なるタイプ、即ちカッパ（κ）及びラムダ（λ）のうちの一方に分類することができる。
【００１１】
「抗体フラグメント」なる用語は、重鎖及び／又は軽鎖抗原結合部位、例えば、重鎖相補性決定領域（ＨＣＤＲ）１、２、及び３、軽鎖相補性決定領域（ＬＣＤＲ）１、２、及び３、重鎖可変領域（ＶＨ）、又は軽鎖可変領域（ＶＬ）を有する免疫グロブリン分子の部分を指す。抗体フラグメントは、ＶＬ、ＶＨ、ＣＬ、及びＣＨＩドメインからなる一価のフラグメントであるＦａｂフラグメントと、ヒンジ領域でジスルフィド架橋によって連結された２つのＦａｂフラグメントを含む二価のフラグメントであるＦ（ａｂ）２フラグメントと、ＶＨ及びＣＨＩドメインからなるＦｄフラグメントと、抗体の１本のアームのＶＬ及びＶＨドメインからなるＦｖフラグメントと、ＶＨドメインからなる、ドメイン抗体（ｄＡｂ）フラグメント（Ｗａｒｄら（１９８９年）、Ｎａｔｕｒｅ  ３４１：５４４〜５４６）と、を含む。ＶＨドメイン及びＶＬドメインは、操作され、合成リンカーを介して一緒に連結して様々な種類の一本鎖抗体設計を形成することができ、ここでＶＨ／ＶＬドメインは、分子内で対合するか、又はＶＨドメイン及びＶＬドメインが別々の一本鎖抗体構築物によって発現される場合には分子間で対合して、一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）又はダイアボディなどの一価の抗原結合部位を形成する。これらは、例えば、国際公開第１９９８／４４００１号、同第１９８８／０１６４９号、同第１９９４／１３８０４号、及び同第１９９２／０１０４７号に記載されている。これらの抗体フラグメントは、当業者に周知の技術を使用して得られ、これらのフラグメントは完全長抗体の場合と同一の方法で、有用性に関してスクリーニングされる。
【００１２】
「単離された抗体」というフレーズは、異なる抗原特異性を有する他の抗体を実質的に含まない抗体又は抗体断片を指す（例えば、ＣＤ３８に特異的に結合する単離された抗体は、ヒトＣＤ３８以外の抗原に特異的に結合する抗体を実質的に含まない）。しかし、ヒトＣＤ３８に特異的に結合する単離された抗体は、マカカ・ファシキュラリス（Macaca fascicularis）（カニクイザル）ＣＤ３８などのヒトＣＤ３８のオルソログのような他の抗原に対して交差反応性を有する可能性がある。更に、単離された抗体は、他の細胞物質及び／又は化学物質を実質的に含まない場合もある。
【００１３】
抗体可変領域は、３つの「抗原結合部位」で隔てられた「フレームワーク」領域からなる。抗原結合部位は、異なる用語を用いて定義される：（ｉ）相補性決定領域（ＣＤＲ）、これは、配列特異性に基づいてＶＨ内に３個（ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３）及びＶＬ内に３個（ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３）が存在する（Ｗｕ  ａｎｄ  Ｋａｂａｔ，Ｊ  Ｅｘｐ  Ｍｅｄ  １３２：２１１〜５０，１９７０、Ｋａｂａｔら、Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ、第５版、公衆衛生局、国立衛生研究所、メリーランド州ベセスダ、１９９１年）。（ｉｉ）「超可変領域」、すなわち「ＨＶＲ」又は「ＨＶ」、ＶＨ内に３個（Ｈ１、Ｈ２、Ｈ３）及びＶＬ内に３個（Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３）が存在し、これは、Ｃｈｏｔｈｉａ  ａｎｄ  Ｌｅｓｋ（Ｃｈｏｔｈｉａ  ａｎｄ  Ｌｅｓｋ，Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１〜１７，１９８７）により定義される構造において超可変性である抗体可変ドメインの領域を指す。他の用語には、「ＩＭＧＴ−ＣＤＲ」（Ｌｅｆｒａｎｃ  ｅｔ  ａｌ．，Ｄｅｖ．Ｃｏｍｐａｒａｔ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２７：５５〜７７、２００３年）及び「特異性決定残基使用」（ＳＤＲＵ）（Ａｌｍａｇｒｏ、Ｍｏｌ．Ｒｅｃｏｇｎｉｔ、１７：１３２〜４３、２００４年）が含まれる。Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  ＩｍＭｕｎｏＧｅｎｅＴｉｃｓ（ＩＭＧＴ）データベース（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ＿ｉｍｇｔ＿ｏｒｇ）は、抗原結合部位の標準化番号付け及び定義を提供する。ＣＤＲ、ＨＶ、及びＩＭＧＴの表記間の対応関係については、Ｌｅｆｒａｎｃ  ｅｔ  ａｌ．，Ｄｅｖ．Ｃｏｍｐａｒａｔ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２７：５５〜７７、２００３年に記載されている。
【００１４】
本明細書で使用するところの「Ｃｈｏｔｈｉａ残基」とは、Ａｌ−Ｌａｚｉｋａｎｉ（Ａｌ−Ｌａｚｉｋａｎｉｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ  ２７３：９２７〜４８、１９９７年）に準じて番号付けされた抗体ＶＬ残基及びＶＨ残基である。
【００１５】
「フレームワーク」又は「フレームワーク配列」は、抗原結合部位として定義されたものを除く、可変領域の残りの配列である。抗原結合部位は上記のような様々な用語によって定義され得るため、フレームワークの正確なアミノ酸配列は抗原結合部位がどのように定義されるかによって決まる。
【００１６】
「ヒト化抗体」とは、抗原結合部位がヒト以外の種に由来し、可変領域フレームワークがヒト免疫グロブリン配列に由来する、抗体を指す。ヒト化抗体はフレームワーク領域内に置換を含む可能性があることから、当該フレームワークは、発現したヒト免疫グロブリン又は生殖細胞系列遺伝子配列の完全な複製物でなくてもよい。
【００１７】
「ヒト抗体」とは、フレームワーク及び抗原結合部位の両方がヒト起源の配列に由来する重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を有する抗体を指す。抗体が定常領域を含む場合、定常領域もヒト起源の配列に由来する。
【００１８】
ヒト抗体は、抗体の可変領域がヒト生殖系列免疫グロブリン又は再編成された免疫グロブリン遺伝子を使用する系から得られた場合のヒト起源の配列に「由来する」重鎖可変領域又は軽鎖可変領域を含む。そのような系は、ファージ上に提示されたヒト免疫グロブリン遺伝子ライブラリ、及び本明細書に記載されるヒト免疫グロブリン遺伝子座を保有するマウスなど、トランスジェニックのヒト以外の動物を含む。「ヒト抗体」は、例えばフレームワーク又は抗原結合部位内に天然に存在する体細胞突然変異、又は意図的な置換の導入によりヒト生殖系列又は再編成された免疫グロブリン配列と比較した場合に、アミノ酸の相違を含み得る。一般的に、「ヒト抗体」のアミノ酸配列は、ヒト生殖系列又は再編成された免疫グロブリン遺伝子によってコードされるアミノ酸配列と少なくとも約８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一である。場合により、「ヒト抗体」は、例えばＫｎａｐｐｉｋ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ  ２９６：５７〜８６，２０００）に記載されるヒトフレームワーク配列分析から得られたコンセンサスフレームワーク配列、又は例えばＳｈｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ  ３９７：３８５〜９６，２０１０及び国際公開第２００９／０８５４６２号）に記載されるファージ上に提示されたヒト免疫グロブリン遺伝子ライブラリに組み込まれた合成ＨＣＤＲ３を含みうる。抗原結合部位がヒト以外の種に由来する抗体は、「ヒト抗体」の定義には含まれない。
【００１９】
単離されたヒト化抗体は合成であり得る。ヒト抗体は、ヒト免疫グロブリン配列に由来するものであるが、合成ＣＤＲ及び／若しくは合成フレームワークを組み込んだファージディスプレイなどの系を用いて生成するか、又はインビトロ突然変異誘発を行って抗体の特性を向上させることができ、インビボのヒト抗体生殖系列レパートリー内に天然に存在しない抗体を得ることができる。
【００２０】
「組換え抗体」は、ヒト免疫グロブリン遺伝子のトランスジェニック若しくは染色体導入動物（例えばマウス）又はそれから調製されたハイブリドーマ（下で更に説明される）から単離された抗体、抗体を発現するように形質転換された宿主細胞から単離された抗体、組換えコンビナトリアル抗体ライブラリから単離された抗体、並びにヒト免疫グロブリン遺伝子配列を他のＤＮＡ配列にスプライスすることを伴う任意の他の手段により調製、発現、作製、又は単離された抗体、あるいはＦａｂアーム交換を用いてインビトロで生成される抗体などの組換え手段により調製、発現、作製、又は単離されるすべての抗体を含む。
【００２１】
「モノクローナル抗体」とは、単一分子組成の抗体分子の調製物を指す。モノクローナル抗体組成物は、特定のエピトープに対する単一の結合特異性及び親和性を示し、又は二重特異性モノクローナル抗体の場合には、２つの別個のエピトープに対する二重結合特異性を示す。したがって、「モノクローナル抗体」とは、抗体重鎖からのＣ末端リシンの除去などの可能な周知の変化を除き、各重鎖及び各軽鎖のアミノ酸組成が単一である抗体集団のことを指す。モノクローナル抗体は、抗体集団内で異成分のグリコシル化を有しうる。モノクローナル抗体は、単一特異性若しくは多特異性、又は一価、二価、若しくは多価でありうる。二価抗体は、モノクローナル抗体なる用語に包含される。
【００２２】
本明細書で使用するところの「エピトープ」とは、抗体が特異的に結合する抗原の部分を指す。エピトープは通常、アミノ酸又は多糖類側鎖などの部位の化学的に活性な（極性、非極性又は疎水性など）表面基からなり、特定の三次元構造特性及び特定の電荷特性を有しうる。エピトープは、立体配座的な空間単位を形成する連続的な、かつ／又は不連続的なアミノ酸で構成されうる。不連続的エピトープでは、抗原の直鎖配列の異なる部分のアミノ酸が、タンパク質分子の折り畳みにより三次元空間で近接する。
【００２３】
「変異体」とは、例えば、置換、挿入、又は欠失のような１以上の改変において参照ポリペプチド又は参照ポリヌクレオチドと異なるポリペプチド又はポリヌクレオチドを指す。
【００２４】
「〜と併用される」とは、２以上の治療薬が、対象に混合物の状態で一緒に、又はそれぞれ単独の薬剤として同時に、又はそれぞれ単独の薬剤として任意の順番で順次に投与できることを意味する。
【００２５】
「治療する」又は「治療」とは、治療的処置及び予防的又は防止的措置の両方を指すものであり、その目的は、腫瘍又は腫瘍細胞の進行又は転移のような望ましくない生理学的変化又は障害を予防又は遅延（緩和）することにある。有益な又は所望の臨床結果としては、検出可能であるか検出不能であるかによらず、症状の緩和、疾患の程度の軽減、安定した（すなわち、悪化しない）疾患状態、疾患の進行の遅延又は鈍化、疾患状態の改善又は緩和、及び寛解（部分又は完全）、並びに、治療を受けなかった場合の予想生存期間と比較した生存期間の延長が挙げられる。治療を要する者には、既に状態若しくは疾患を有している者、及び、状態若しくは疾患を有しやすい者、又は状態若しくは疾患を予防しようとする者が含まれる。
【００２６】
「治療有効量」とは、所望の治療結果を得るために必要な用量及び期間で有効な量を指す。治療的に有効な量は、個体の病態、年齢、性別、及び体重などの要因、並びに個体において所望の応答を引き出す治療薬又は治療薬の組み合わせの能力によって種々であってよい。抵抗性に伴って低下又は減少しうる有効な治療薬又は治療薬の組み合わせの例示的な指標としては、例えば、患者の健康状態の改善、腫瘍量の減少、腫瘍の増殖の停止若しくは鈍化、及び／又は体内の他の場所への癌細胞の転移の不在が含まれる。
【００２７】
「相乗」、「相乗作用」又は「相乗的な」とは、組み合わせることで得られると予想される相加効果を超えることを意味する。
【００２８】
「増殖を阻害する」（例えば、腫瘍細胞などの細胞に言及する場合）は、当業者に周知の適切な対照条件で増殖された同一の細胞の増殖と比較して、治療薬又は治療薬若しくは薬剤の組み合わせと接触されるときのインビトロ又はインビボでの細胞増殖における測定可能な減少を指す。インビトロ又はインビボでの細胞の増殖の阻害は、少なくとも約１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９９％、又は１００％でありうる。細胞増殖の阻害は、例えばＡＤＣＣ、アポトーシス、壊死などの様々な機構により、又は細胞分裂の阻害によって生じうる。
【００２９】
「対象」には、あらゆるヒト又は非ヒト動物が含まれる。「非ヒト動物」には、例えば、非ヒト霊長類、ヒツジ、イヌ、ネコ、ウマ、ウシ、ニワトリ、両生類、爬虫類などの哺乳動物及び非哺乳動物などのすべての脊椎動物が含まれる。「対象」及び「患者」なる用語は、本明細書では互換的に使用される。
【００３０】
本明細書で使用するところの「サバイビン（Survivin）」とは、配列番号２２に示されるアミノ酸配列を有するサバイビンタンパク質を指す。サバイビンは、アポトーシス阻害因子（inhibitor of apoptosis）（ＩＡＰ）ファミリーに属する。サバイビンは、アポトーシス阻害剤及び細胞周期調節因子として作用する二重機能タンパク質である。ヒトの悪性腫瘍では、サバイビンの過剰発現が認められ、悪い予後、腫瘍再発、及び治療抵抗性と正の相関関係がある（Ｌｉｕ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ  Ｂｉｏｌ．Ｔｈｅｒ．，７：１０５３〜１０６０，２００８；ＭＭｉｔａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｌｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ  １４：５０００〜５００５，２００８）。
【００３１】
配列番号２２
ＭＧＡＰＴＬＰＰＡＷＱＰＦＬＫＤＨＲＩＳＴＦＫＮＷＰＦＬＥＧＣＡＣＴＰＥＲＭＡＥＡＧＦＩＨＣＰＴＥＮＥＰＤＬＡＱＣＦＦＣＦＫＥＬＥＧＷＥＰＤＤＤＰＩＥＥＨＫＫＨＳＳＧＣＡＦＬＳＶＫＫＱＦＥＥＬＴＬＧＥＦＬＫＬＤＲＥＲＡＫＮＫＩＡＫＥＴＮＮＫＫＫＥＦＥＥＴＡＥＫＶＲＲＡＩＥＱＬＡＡＭＤ
【００３２】
「サバイビン阻害剤」とは、サバイビン活性を阻害するか、サバイビン活性に拮抗するか、サバイビン活性を低減するか、又は抑制する分子を指し、例えば、細胞内でのサバイビンの抗アポトーシス活性を阻害する分子を指す。サバイビン阻害剤は、サバイビンの抗アポトーシス活性を約２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９９％、又は１００％阻害することができる。サバイビン阻害剤は、小分子、ペプチド、ワクチン、ポリヌクレオチド、ＤＮＡ、又はＲＮＡ分子でありうる。
【００３３】
本発明は、ＢＭニッチに存在する骨髄間質細胞（ＢＭＳＣ）が、サバイビンの発現を上昇させることに少なくとも一部よって抗体誘発性ＡＤＣＣからＭＭ細胞を保護し、また、サバイビン阻害剤がＭＭ細胞の抗体介在性ＡＤＣＣを向上させ、ＢＭＳＣにより誘発されるＡＤＣＣ耐性を消失させる、という知見に少なくとも一部基づいたものである。ＢＭＳＣは、ＭＭ細胞を、細胞接着により媒介される免疫抵抗によって細胞傷害性Ｔリンパ球（ＣＴＬ）依存性溶解から保護することが示されており、サバイビンは、溶解抵抗性ＭＭ細胞において発現上昇することが見出されている（ｄｅ  Ｈａａｒｔｅｔ  ａｌ．，Ｃｌｉｎ  Ｃａｎｃｅ  Ｒｅｓ  １９：５５９１〜５６０１，２０１３）。
【００３４】
本発明は、ＣＤ３８陽性血液悪性疾患を有する対象を治療する方法であって、その治療を要する対象に、抗ＣＤ３８抗体及びサバイビン阻害剤をＣＤ３８陽性血液悪性疾患を治療するうえで充分な時間にわたって投与することを含む、方法を提供する。
【００３５】
本発明は更に、対象の体内の多発性骨髄腫細胞の増殖又は分裂を阻害する方法であって、その阻害を要する対象に、抗ＣＤ３８抗体及びサバイビン阻害剤を多発性骨髄腫細胞の増殖又は分裂を阻害するうえで充分な時間にわたって投与することを含む、方法も提供する。
【００３６】
「ＣＤ３８陽性血液悪性疾患」とは、白血病、リンパ腫、及び骨髄腫を含む、ＣＤ３８を発現する腫瘍細胞の存在によって特徴付けられる血液悪性疾患を指す。このようなＣＤ３８陽性血液悪性疾患の例としては、前駆Ｂ細胞リンパ芽球性白血病／リンパ腫及びＢ細胞非ホジキンリンパ腫、急性前骨髄球性白血病、急性リンパ芽球性白血病並びに成熟Ｂ細胞腫瘍、例えばＢ細胞慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）／小リンパ球性リンパ腫（ＳＬＬ）、Ｂ細胞急性リンパ球性白血病、Ｂ細胞前リンパ急性白血病、リンパ形質細胞性リンパ腫、マントル細胞リンパ腫（ＭＣＬ）、濾胞性リンパ腫（ＦＬ）（鄭悪性度、中悪性度及び高悪性度ＦＬを含む）、皮膚濾胞中心リンパ腫、辺縁帯Ｂ細胞リンパ腫（ＭＡＬＴ型、節性及び脾性型）、有毛細胞白血病、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）、バーキットリンパ腫（ＢＬ）、形質細胞腫、多発性骨髄腫（ＭＭ）、形質細胞白血病、移植後リンパ増殖性疾患、ワルデンストレームマクログロブリン血症、形質細胞白血病及び未分化大細胞型リンパ腫（ＡＬＣＬ）がある。
【００３７】
ＣＤ３８は、多発性骨髄腫、白血病、及びリンパ腫を含む様々な血液悪性疾患、例えば、Ｂ細胞慢性リンパ性白血病、白血病、ワルデンストレームマクログロブリン血症、原発性全身性アミロイド症、マントル細胞リンパ腫、前リンパ性／骨髄性白血病、急性骨髄性白血病、慢性骨髄性白血病、濾胞性リンパ腫、バーキットリンパ腫、大顆粒リンパ球性（ＬＧＬ）白血病、ＮＫ細胞白血病及び形質細胞白血病で発現される。ＣＤ３８の発現は、前立腺の腺上皮、膵臓の島細胞、耳下腺を含む腺の導管上皮、気管支上皮細胞、精巣及び卵巣の細胞、並びに結腸直腸腺癌における腫瘍上皮を含む異なる起源の上皮／内皮細胞に関して記載されている。ＣＤ３８発現が関与しうるその他の疾患としては、例えば、肺の気管支上皮癌、乳癌（乳房の乳管及び小葉における上皮層悪性増殖から発生）、β−細胞（インスリノーマ）から発生する膵臓腫瘍、消化管の上皮から発生する腫瘍（例えば、腺癌及び扁平上皮癌）、前立腺における癌、及び睾丸セミノーマ並びに卵巣癌が含まれる。中枢神経系においては、神経芽細胞腫がＣＤ３８を発現する。
【００３８】
いくつかの実施形態では、ＣＤ３８陽性血液悪性疾患は、多発性骨髄腫（ＭＭ）、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）、バーキットリンパ腫（ＢＬ）、濾胞性リンパ腫（ＦＬ）、マントル細胞リンパ腫（ＭＣＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、又は慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）である。
【００３９】
いくつかの実施形態では、ＣＤ３８陽性血液悪性疾患は、ＭＭである。
【００４０】
いくつかの実施形態では、ＣＤ３８陽性血液悪性疾患は、ＡＬＬである。
【００４１】
いくつかの実施形態では、ＣＤ３８陽性血液悪性疾患は、ＮＨＬである。
【００４２】
いくつかの実施形態では、ＣＤ３８陽性血液悪性疾患は、ＤＬＢＣＬである。
【００４３】
いくつかの実施形態では、ＣＤ３８陽性血液悪性疾患は、ＢＬである。
【００４４】
いくつかの実施形態では、ＣＤ３８陽性血液悪性疾患は、ＦＬである。
【００４５】
いくつかの実施形態では、ＣＤ３８陽性血液悪性疾患は、ＭＣＬである。
【００４６】
いくつかの実施形態では、ＣＤ３８陽性血液悪性疾患は、ＡＭＬである。
【００４７】
いくつかの実施形態では、ＣＤ３８陽性血液悪性疾患は、ＣＬＬである。
【００４８】
いくつかの実施形態では、ＣＤ３８陽性血液悪性疾患は、形質細胞疾患である。
【００４９】
いくつかの実施形態では、形質細胞疾患は、軽鎖アミロイドーシス（ＡＬ）、多発性骨髄腫（ＭＭ）、又はワルデンストレームマクログロブリン血症である。
【００５０】
いくつかの実施形態では、形質細胞疾患は、ＡＬである。
【００５１】
いくつかの実施形態では、形質細胞疾患は、ＭＭである。
【００５２】
いくつかの実施形態では、形質細胞疾患は、ワルデンストレームマクログロブリン血症である。
【００５３】
Ｂ細胞非ホジキンリンパ腫の例は、リンパ腫様肉芽腫症、原発性滲出性リンパ腫、血管内大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、縦隔大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、重鎖病（γ、μ、及びα病を含む）、免疫抑制剤による治療によって誘発されるリンパ腫、例えばシクロスポリン誘発性リンパ腫及びメトトレキサート誘発性リンパ腫である。
【００５４】
一実施形態では、ＣＤ３８を発現する細胞が関与する疾患は、ホジキンリンパ腫である。
【００５５】
ＣＤ３８を発現する細胞に関与する疾患の他の例としては、成熟Ｔ細胞及びＮＫ細胞腫瘍を含むＴ及びＮＫ細胞に由来する悪性疾患、例えば、Ｔ細胞前リンパ球性白血病、Ｔ細胞大顆粒リンパ性白血病、アグレッシブＮＫ細胞白血病、成人Ｔ細胞白血病／リンパ腫、節外性ＮＫ／Ｔ細胞リンパ腫、鼻型、７８腸管症型Ｔ細胞リンパ腫、肝脾Ｔ細胞リンパ腫、皮下脂肪織炎様Ｔ細胞リンパ腫、芽球性ＮＫ細胞リンパ腫、菌状息肉腫／セザリー症候群、原発性皮膚ＣＤ３０陽性Ｔ細胞リンパ増殖性疾患（原発性皮膚未分化大細胞リンパ腫Ｃ−ＡＬＣＬ、リンパ腫様丘疹症、境界病変）、血管免疫芽球性Ｔ細胞リンパ腫、非特定型末梢性Ｔ細胞リンパ腫、及び未分化大細胞型リンパ腫が挙げられる。
【００５６】
骨髄系細胞に由来する悪性疾患の例としては、急性前骨髄球性白血病を含む急性骨髄性白血病、及び慢性骨髄性白血病を含む慢性骨髄増殖性疾患が挙げられる。
【００５７】
あらゆる抗ＣＤ３８抗体を本発明の方法で使用することができる。抗ＣＤ３８抗体の可変領域は、既存の抗ＣＤ３８抗体から得ることができ、場合により、常法を用いて完全長抗体としてクローニングすることができる。使用することが可能な、ＣＤ３８に結合する例示的な抗体可変領域が、例えば国際公開第０５／１０３０８３号、同第０６／１２５６４０号、同第０７／０４２３０９号、同第０８／０４７２４２号、同第１２／０９２６１２号、同第０６／０９９８７５号及び同第１１／１５４４５３Ａ１号に記載されている。
【００５８】
使用することが可能な例示的な抗ＣＤ３８抗体として、ＤＡＲＺＡＬＥＸ（登録商標）（ダラツムマブ）がある。ＤＡＲＺＡＬＥＸ（商標）（ダラツムマブ）は、それぞれ配列番号４及び５に示される重鎖可変領域（ＶＨ）及び軽鎖可変領域（ＶＬ）のアミノ酸配列、それぞれ配列番号６、７、及び８に示される重鎖相補性決定領域（ＨＣＤＲ）１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３の配列、並びに配列番号９、１０、及び１１にそれぞれ示される軽鎖相補性決定領域（ＬＣＤＲ）１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３のアミノ酸配列を含みし、ＩｇＧ１／κサブタイプである。ＤＡＲＺＡＬＥＸ（商標）（ダラツムマブ）の重鎖のアミノ酸配列を配列番号１２に示し、軽鎖のアミノ酸配列を配列番号１３に示す。
【００５９】
配列番号１
ＭＡＮＣＥＦＳＰＶＳＧＤＫＰＣＣＲＬＳＲＲＡＱＬＣＬＧＶＳＩＬＶＬＩＬＶＶＶＬＡＶＶＶＰＲＷＲＱＱＷＳＧＰＧＴＴＫＲＦＰＥＴＶＬＡＲＣＶＫＹＴＥＩＨＰＥＭＲＨＶＤＣＱＳＶＷＤＡＦＫＧＡＦＩＳＫＨＰＣＮＩＴＥＥＤＹＱＰＬＭＫＬＧＴＱＴＶＰＣＮＫＩＬＬＷＳＲＩＫＤＬＡＨＱＦＴＱＶＱＲＤＭＦＴＬＥＤＴＬＬＧＹＬＡＤＤＬＴＷＣＧＥＦＮＴＳＫＩＮＹＱＳＣＰＤＷＲＫＤＣＳＮＮＰＶＳＶＦＷＫＴＶＳＲＲＦＡＥＡＡＣＤＶＶＨＶＭＬＮＧＳＲＳＫＩＦＤＫＮＳＴＦＧＳＶＥＶＨＮＬＱＰＥＫＶＱＴＬＥＡＷＶＩＨＧＧＲＥＤＳＲＤＬＣＱＤＰＴＩＫＥＬＥＳＩＩＳＫＲＮＩＱＦＳＣＫＮＩＹＲＰＤＫＦＬＱＣＶＫＮＰＥＤＳＳＣＴＳＥＩ
【００６０】
配列番号２
ＳＫＲＮＩＱＦＳＣＫＮＩＹＲ
【００６１】
配列番号３
ＥＫＶＱＴＬＥＡＷＶＩＨＧＧ
【００６２】
配列番号４
ＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＶＳＧＦＴＦＮＳＦＡＭＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＡ
ＩＳＧＳＧＧＧＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＦＣＡＫＤＫ
ＩＬＷＦＧＥＰＶＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ
【００６３】
配列番号５
ＥＩＶＬＴＱＳＰＡＴＬＳＬＳＰＧＥＲＡＴＬＳＣＲＡＳＱＳＶＳＳＹＬＡＷＹＱＱＫＰＧＱＡＰＲＬＬＩＹＤ
ＡＳＮＲＡＴＧＩＰＡＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＥＰＥＤＦＡＶＹＹＣＱＱＲＳＮＷＰＰＴＦＧＱ
ＧＴＫＶＥＩＫ
【００６４】
配列番号６
ＳＦＡＭＳ
【００６５】
配列番号７
ＡＩＳＧＳＧＧＧＴＹＹＡＤＳＶＫＧ
【００６６】
配列番号８
ＤＫＩＬＷＦＧＥＰＶＦＤＹ
【００６７】
配列番号９
ＲＡＳＱＳＶＳＳＹＬＡ
【００６８】
配列番号１０
ＤＡＳＮＲＡＴ
【００６９】
配列番号１１
ＱＱＲＳＮＷＰＰＴＦ
【００７０】
配列番号１２
ＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＶＳＧＦＴＦＮＳＦＡＭＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＡＩＳＧＳＧＧＧＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＦＣＡＫＤＫＩＬＷＦＧＥＰＶＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＲＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ
【００７１】
配列番号１３
ＥＩＶＬＴＱＳＰＡＴＬＳＬＳＰＧＥＲＡＴＬＳＣＲＡＳＱＳＶＳＳＹＬＡＷＹＱＱＫＰＧＱＡＰＲＬＬＩＹＤＡＳＮＲＡＴＧＩＰＡＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＥＰＥＤＦＡＶＹＹＣＱＱＲＳＮＷＰＰＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ
【００７２】
使用することができる別の例示的な抗ＣＤ３８抗体は、米国特許第７，８２９，６９３号に記載される、それぞれ配列番号１４及び１５のＶＨ及びＶＬ配列を含むｍＡｂ００３である。
【００７３】
配列番号１４
ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＳＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＧＴＦＳＳＹＡＦＳＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＲＶＩＰＦＬＧＩＡＮＳＡＱＫＦＱＧＲＶＴＩＴＡＤＫＳＴＳＴＡＹ
ＭＤＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＤＤＩＡＡＬＧＰＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＡＳ
【００７４】
配列番号１５
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＧＩＳＳＷＬＡＷＹＱＱＫＰＥＫＡＰＫＳＬＩＹＡＡＳＳＬＱＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰ
ＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＹＮＳＹＰＲＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫ
【００７５】
使用することができる別の例示的な抗ＣＤ３８抗体として、米国特許第７，８２９，６９３号に記載される、それぞれ配列番号１６及び１７のＶＨ及びＶＬ配列を含むｍＡｂ０２４がある。
【００７６】
配列番号１６
ＥＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＥＳＬＫＩＳＣＫＧＳＧＹＳＦＳＮＹＷＩＧＷＶＲＱＭＰＧＫＧＬＥＷＭＧＩＩＹＰＨＤＳＤＡＲＹＳＰＳＦＱＧＱＶＴＦＳＡＤＫＳＩＳＴＡＹ
ＬＱＷＳＳＬＫＡＳＤＴＡＭＹＹＣＡＲＨＶＧＷＧＳＲＹＷＹＦＤＬＷＧＲＧＴＬＶＴＶＳＳ
【００７７】
配列番号１７
ＥＩＶＬＴＱＳＰＡＴＬＳＬＳＰＧＥＲＡＴＬＳＣＲＡＳＱＳＶＳＳＹＬＡＷＹＱＱＫＰＧＱＡＰＲＬＬＩＹＤＡＳＮＲＡＴＧＩＰＡＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＥＰ
ＥＤＦＡＶＹＹＣＱＱＲＳＮＷＰＰＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫ
【００７８】
使用することができる別の例示的な抗ＣＤ３８抗体として、米国特許第８，０８８，８９６号に記載される、それぞれ配列番号１８及び１９のＶＨ及びＶＬ配列を含むＭＯＲ−２０２（ＭＯＲ−０３０８７）がある。
【００７９】
配列番号１８
ＱＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＳＹＹＭＮＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＧＩＳＧＤＰＳＮＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹ
ＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＤＬＰＬＶＹＴＧＦＡＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ
【００８０】
配列番号１９
ＤＩＥＬＴＱＰＰＳＶＳＶＡＰＧＱＴＡＲＩＳＣＳＧＤＮＬＲＨＹＹＶＹＷＹＱＱＫＰＧＱＡＰＶＬＶＩＹＧＤＳＫＲＰＳＧＩＰＥＲＦＳＧＳＮＳＧＮＴＡＴＬＴＩＳＧＴＱＡＥ
ＤＥＡＤＹＹＣＱＴＹＴＧＧＡＳＬＶＦＧＧＧＴＫＬＴＶＬＧＱ
【００８１】
使用することができる別の例示的な抗ＣＤ３８抗体として、米国特許第８，１５３，７６５号に記載される、それぞれ配列番号２０及び２１のＶＨ及びＶＬ配列を含むイサツキシマブがある。イサツキシマブのＶＨ及びＶＬは、ＩｇＧ１／κとして表すことができる。
【００８２】
配列番号２０
ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＡＫＰＧＴＳＶＫＬＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＤＹＷＭＱＷＶＫＱＲＰＧＱＧＬＥＷＩＧＴ
ＩＹＰＧＤＧＤＴＧＹＡＱＫＦＱＧＫＡＴＬＴＡＤＫＳＳＫＴＶＹＭＨＬＳＳＬＡＳＥＤＳＡＶＹＹＣＡＲＧＤ
ＹＹＧＳＮＳＬＤＹＷＧＱＧＴＳＶＴＶＳＳ
【００８３】
配列番号２１
ＤＩＶＭＴＱＳＨＬＳＭＳＴＳＬＧＤＰＶＳＩＴＣＫＡＳＱＤＶＳＴＶＶＡＷＹＱＱＫＰＧＱＳＰＲＲＬＩＹＳ
ＡＳＹＲＹＩＧＶＰＤＲＦＴＧＳＧＡＧＴＤＦＴＦＴＩＳＳＶＱＡＥＤＬＡＶＹＹＣＱＱＨＹＳＰＰＹＴＦＧＧ
ＧＴＫＬＥＩＫ
【００８４】
本発明の方法で使用される抗ＣＤ３８抗体は、例えばファージディスプレイライブラリから新たに選択されてもよく、その場合、ファージは、ヒト免疫グロブリン又はその一部（例えば、Ｆａｂ、一本鎖抗体（ｓｃＦｖ）、又は対をなさない若しくは対をなした抗体可変領域）を発現するように操作される（（Ｋｎａｐｐｉｋ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ  ２９６：５７〜８６，２０００、Ｋｒｅｂｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｍｅｔｈ  ２５４：６７〜８４，２００１、Ｖａｕｇｈａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  １４：３０９〜３１４，１９９６、Ｓｈｅｅｔｓ  ｅｔ  ａｌ．，ＰＩＴＡＳ（ＵＳＡ）９５：６１５７〜６１６２，１９９８、Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍ及びＷｉｎｔｅｒ、Ｊ  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ  ２２７：３８１，１９９１、Ｍａｒｋｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ  ２２２：５８１，１９９１）。ＣＤ３８結合可変ドメインは、例えば、Ｓｈｉ  ｅｔ  ａｌ．（２０１０），Ｊ  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ  ３９７：３８５〜９６及び国際公開第０９／０８５４６２号に記載されるバクテリオファージｐＩＸコートタンパク質との融合タンパク質として抗体の重鎖及び軽鎖可変領域を発現するファージディスプレイライブラリから単離することができる。抗体ライブラリをヒトＣＤ３８細胞外ドメインへの結合に関してスクリーニングし、得られた陽性クローンを更に特徴付け、クローンライセートからＦａｂを単離した後、完全長抗体としてクローニングすることができる。ヒト抗体を単離するためのそのようなファージディスプレイ法は、当技術分野にて確立されている。例えば、米国特許第５，２２３，４０９号、同第５，４０３，４８４号、及び同第５，５７１，６９８号、同第５，４２７，９０８号、同第５，５８０，７１７号、同第５，９６９，１０８号、同第６，１７２，１９７号、同第５，８８５，７９３号、同第６，５２１，４０４号、同第６，５４４，７３１号、同第６，５５５，３１３号、同第６，５８２，９１５号、及び同第６，５９３，０８１号を参照されたい。
【００８５】
本発明は更に、ＣＤ３８陽性血液悪性疾患を有する対象を治療する方法であって、その治療を要する対象に、配列番号４のＶＬ及び配列番号５のＶＬを含む抗体とＣＤ３８への結合に関して競合する抗ＣＤ３８抗体並びにサバイビン阻害剤を、ＣＤ３８陽性血液悪性疾患を治療するうえで充分な時間にわたって投与することを含む、方法も提供する。
【００８６】
本発明は更に、多発性骨髄腫を有する対象を治療する方法であって、その治療を要する対象に、配列番号４のＶＨ及び配列番号５のＶＬを含む抗体とＣＤ３８への結合に関して競合する抗ＣＤ３８抗体並びにサバイビン阻害剤を、多発性骨髄腫を治療するうえで充分な時間にわたって投与することを含む、方法も提供する。
【００８７】
本発明は更に、ＣＤ３８陽性血液悪性疾患を有する対象を治療する方法であって、その治療を要する対象に、ヒトＣＤ３８（配列番号１）の領域ＳＫＲＮＩＱＦＳＣＫＮＩＹＲ（配列番号２）及び領域ＥＫＶＱＴＬＥＡＷＶＩＨＧＧ（配列番号３）に結合する抗ＣＤ３８抗体を、ＣＤ３８陽性血液悪性疾患を治療するうえで充分な時間にわたって投与することを含む、方法も提供する。
【００８８】
本発明は更に、多発性骨髄腫を有する対象を治療する方法であって、その治療を要する対象に、ヒトＣＤ３８（配列番号１）の領域ＳＫＲＮＩＱＦＳＣＫＮＩＹＲ（配列番号２）及び領域ＥＫＶＱＴＬＥＡＷＶＩＨＧＧ（配列番号３）に結合する抗ＣＤ３８抗体並びにサバイビン阻害剤を、多発性骨髄腫を治療するうえで充分な時間にわたって投与することを含む、方法も提供する。
【００８９】
いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３８抗体は、それぞれ配列番号６、７、及び８のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ２を含む。
【００９０】
いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３８抗体は、それぞれ配列番号９、１０、及び１１のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む。
【００９１】
いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３８抗体は、それぞれ配列番号６、７、８、９、１０及び１１のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む。
【００９２】
いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３８抗体は、配列番号４のアミノ酸配列と９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるアミノ酸配列を有するＶＬと、配列番号５のアミノ酸配列と９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるアミノ酸配列を含むＶＬとを含む。
【００９３】
いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３８抗体は、配列番号４のＶＨ及び配列番号５のＶＬを含む。
【００９４】
いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３８抗体は、配列番号１４のＶＨ及び配列番号１５のＶＬを含む。
【００９５】
いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３８抗体は、配列番号１６のＶＨ及び配列番号１７のＶＬを含む。
【００９６】
いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３８抗体は、配列番号１８のＶＨ及び配列番号１９のＶＬを含む。
【００９７】
いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３８抗体は、配列番号２０のＶＨ及び配列番号２１のＶＬを含む。
【００９８】
抗体は、周知のインビトロ法を用いて、ＣＤ３８への結合に関して、参照抗体、例えばＤＡＲＺＡＬＥＸ（商標）（配列番号４のＶＨ及び配列番号５のＶＬを有するダラツムマブ）との競合について評価することができる。例示的な方法では、ＣＤ３８を組換えにより発現するＣＨＯ細胞を非標識参照抗体と４℃で１５分インキュベートした後、過剰量の蛍光標識した試験抗体と４℃で４５分インキュベートすることができる。ＰＢＳ／ＢＳＡ中での洗浄後、常法を用いてフローサイトメトリーにより蛍光を測定することができる。別の例示的な方法においては、ヒトＣＤ３８の細胞外部分が、ＥＬＩＳＡプレートの表面に被覆され得る。過剰の非標識参照抗体を、約１５分間添加し、その後ビオチン化試験抗体を添加し得る。ＰＢＳ／Ｔｗｅｅｎ中で洗浄後、試験ビオチン化抗体の結合を、西洋わさびペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）結合ストレプトアビジンと、標準的な方法を用いて検出されたシグナルとを用いて検出し得る。競合アッセイでは、参照抗体を標識し、試験抗体を標識しなくてよいことは直ちに明らかである。参照抗体が試験抗体の結合を阻害するか、又は試験抗体が参照抗体の結合を少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、又は１００％阻害する場合、試験抗体は参照抗体と競合する。試験抗体のエピトープは、例えば、ペプチドマッピングにより、又は既知の方法を用いる水素／重水素保護アッセイにより、又は結晶構造判定により、更に定義され得る。
【００９９】
抗体が配列番号２及び配列番号３内の少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、又は１４の残基に結合する場合、抗ＣＤ３８抗体は、ヒトＣＤ３８（配列番号１）の領域ＳＫＲＮＩＱＦＳＣＫＮＩＹＲ（配列番号２）及び領域ＥＫＶＱＴＬＥＡＷＶＩＨＧＧ（配列番号３）に結合する。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３８抗体は、ヒトＣＤ３８（配列番号１）の領域ＳＫＲＮＩＱＦＳＣＫＮＩＹＲ（配列番号２）内の少なくとも１つのアミノ酸及び領域ＥＫＶＱＴＬＥＡＷＶＩＨＧＧ（配列番号３）内の少なくとも１つのアミノ酸に結合する。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３８抗体は、ヒトＣＤ３８（配列番号１）の領域ＳＫＲＮＩＱＦＳＣＫＮＩＹＲ（配列番号２）内の少なくとも２つのアミノ酸及び領域ＥＫＶＱＴＬＥＡＷＶＩＨＧＧ（配列番号３）内の少なくとも２つのアミノ酸に結合する。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３８抗体は、ヒトＣＤ３８（配列番号１）の領域ＳＫＲＮＩＱＦＳＣＫＮＩＹＲ（配列番号２）内の少なくとも３つのアミノ酸及び領域ＥＫＶＱＴＬＥＡＷＶＩＨＧＧ（配列番号３）内の少なくとも３つのアミノ酸に結合する。
【０１００】
ヒトＣＤ３８（配列番号１）の領域ＳＫＲＮＩＱＦＳＣＫＮＩＹＲ（配列番号２）及び領域ＥＫＶＱＴＬＥＡＷＶＩＨＧＧ（配列番号３）に結合する例示的な抗体の１つとして、ＤＡＲＺＡＬＥＸ（商標）（ダラツムマブ）がある。
【０１０１】
ヒトＣＤ３８（配列番号１）の領域ＳＫＲＮＩＱＦＳＣＫＮＩＹＲ（配列番号２）及び領域ＥＫＶＱＴＬＥＡＷＶＩＨＧＧ（配列番号３）に結合する抗体は、例えば、標準方法を用いてかつ本明細書に記載される通りに、マウスを、配列番号２及び３に示したアミノ酸配列を有するペプチドで免疫化し、得られた抗体をこれらのペプチドとの結合に関して、例えばＥＬＩＳＡ又は突然変異誘発実験を用いて特徴付けることによって生成することができる。
【０１０２】
抗体のＦｃ部分は、下記により詳細に述べるように、抗体依存性細胞媒介細胞傷害作用（ＡＤＣＣ）、抗体依存性細胞性貪食作用（ＡＤＣＰ）、又は補体依存性細胞傷害作用（ＣＤＣ）などの抗体のエフェクター機能を媒介することができる。このような機能は、ＦＣエフェクタードメイン（複数可）の貧食活性若しくは溶解活性を有する免疫細胞上のＦｃ受容体への結合によって又はＦｃエフェクタードメイン（複数可）の補体系の成分への結合によって、媒介され得る。通常、Ｆｃ結合細胞又は補体成分によって媒介される作用（複数可）は、標的細胞、例えばＣＤ３８発現細胞の阻害及び／又は枯渇をもたらす。ヒトＩｇＧアイソタイプである、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、及びＩｇＧ４は、エフェクター機能に関して特異的な能力を呈する。ＡＤＣＣは、ＩｇＧ１及びＩｇＧ３によって媒介され、ＡＤＣＰは、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３及びＩｇＧ４によって媒介され、ＣＤＣは、ＩｇＧ１及びＩｇＧ３によって媒介され得る。
【０１０３】
いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３８抗体は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、又はＩｇＧ４アイソタイプのものである。
【０１０４】
いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３８抗体は、ＩｇＧ１アイソタイプのものである。
【０１０５】
いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３８抗体は、ＩｇＧ２アイソタイプのものである。
【０１０６】
いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３８抗体は、ＩｇＧ３アイソタイプのものである。
【０１０７】
いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３８抗体は、ＩｇＧ４アイソタイプのものである。
【０１０８】
いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３８抗体は、抗体依存性細胞性細胞傷害作用（ＡＤＣＣ）、抗体依存性細胞性貪食作用（ＡＤＣＰ）、補体依存性細胞傷害作用（ＣＤＣ）、又はアポトーシスによってＣＤ３８発現細胞のインビトロ殺傷を誘発する。
【０１０９】
いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３８抗体は、ＡＤＣＣによってＣＤ３８発現細胞の殺傷を誘発する。
【０１１０】
いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３８抗体は、ＡＤＣＰによってＣＤ３８発現細胞の殺傷を誘発する。
【０１１１】
いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３８抗体は、ＣＤＣによってＣＤ３８発現細胞の殺傷を誘発する。
【０１１２】
いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３８抗体は、アポトーシスによってＣＤ３８発現細胞の殺傷を誘発する。
【０１１３】
「抗体依存性細胞傷害作用」、「抗体依存性細胞媒介細胞傷害作用」、又は「ＡＤＣＣ」は、抗体で被覆された標的細胞と、ナチュラルキラー細胞、単球、マクロファージ、及び好中球などの溶解活性を有するエフェクター細胞との、エフェクター細胞上で発現されるＦｃγ受容体（ＦｃγＲ）を介した相互作用に依存する細胞死を誘発するための機構である。例えば、ＮＫ細胞はＦｃγＲＩＩＩａを発現し、一方単球はＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩ、及びＦｃγＲＩＩＩａを発現する。ＣＤ３８発現ＭＭ細胞などの抗体被覆標的細胞の死滅は、膜孔形成タンパク質及びプロテアーゼの分泌を通してのエフェクター細胞活性の結果として生じる。抗ＣＤ３８抗体のＡＤＣＣ活性を評価するために、抗体は、免疫エフェクター細胞と組み合わせて、ＣＤ３８発現細胞に添加され得るが、これらが抗原抗体複合体によって活性化されると、標的細胞の細胞溶解をもたらし得る。細胞溶解は、溶解した細胞からの標識（例えば、放射性基質、蛍光染料、又は天然細胞内タンパク質）の放出によって検出することができる。そのようなアッセイ用の例示的なエフェクター細胞としては、末梢血単核球（ＰＢＭＣ）及びＮＫ細胞が挙げられる。ＣＤ３８を発現する多発性骨髄腫細胞株又は初代ＭＭ細胞を標的細胞として用いることができる。例示的なアッセイでは、ルシフェラーゼを発現するように操作したＭＭ細胞株を抗ＣＤ３８抗体とインキュベートする。新しく単離したＰＢＭＣエフェクター細胞を、標的細胞：エフェクター細胞の比が４０：１となるように加える。ＰＢＭＣの添加の４時間後にルシフェリンを加え、ルミノメータ（ＳｐｅｃｔｒａＭａｘ、モレキュラー・デバイシーズ社（Molecular Devices））を使用して、生存ＭＭ細胞から放射される生じた生物発光シグナルを２０分以内に測定することで、ＭＭ細胞のＡＤＣＣ率（％）を、次式を用いて計算することができる。すなわち、ＡＤＣＣ（％）＝１−（ＰＢＭＣの非存在下での平均生物発光シグナル／ＰＢＭＣの存在下での平均生物発光シグナル）×１００％。抗ＣＤ３８抗体は、上記に述べたようなインビトロアッセイにおけるＡＤＣＣ率（％）が少なくとも約２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、８０％、９０％，又は１００％である場合に「インビトロでＡＤＣＣを誘発する」ものとする。
【０１１４】
「補体依存性細胞傷害性」又は「ＣＤＣ」は、標的結合抗体のＦｃエフェクタードメインが補体成分Ｃ１ｑに結合してこれを活性化し、補体成分Ｃ１ｑが次に補体カスケードを活性化して、標的細胞の死滅をもたらす、細胞死を誘発するためのメカニズムを指す。補体の活性化はまた、標的細胞表面上の補体成分の沈着をもたらすことができ、これが白血球への補体受容体（例えば、ＣＲ３）の結合によって、ＡＤＣＣを容易にする。例示的なアッセイでは、Ｂ細胞悪性疾患を有する患者から単離された初代ＢＭ−ＭＮＣ細胞を、抗ＣＤ３８抗体及び１０％のプールされたヒト血清に由来する補体を用いて、０．３〜１０μｇ／ｍＬの濃度で１時間処理し、初代ＣＤ１３８＋  ＭＭ細胞の生存率を、ｖａｎ  ｄｅｒ  Ｖｅｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｈａｅｍａｔｏｌｏｇｉｃａ  ９６：２８４〜２９０，２０１１、ｖａｎ  ｄｅｒ  Ｖｅｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｊ  １（１０）：ｅ４１  ２０１１に記載される方法を用いたフローサイトメトリーによって決定することができる。ＭＭ細胞溶解の割合は、本明細書に記載されるアイソタイプ対照に対して決定することができる。本発明の方法において用いられる抗ＣＤ３８抗体は、ＣＤＣは、約２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％又は１００％まで誘発することができる。
【０１１５】
「抗体依存性細胞性貪食作用」（「ＡＤＣＰ」）とは、例えばマクロファージ又は樹状細胞のような貪食細胞による細胞内移行による抗体被覆標的細胞の排除の機構を指す。ＡＤＣＰは、エフェクター細胞として、単球由来マクロファージを、またＧＦＰ又はその他の標識分子を発現するように遺伝子操作された標的細胞として、ＣＤ３８を発現している、Ｄａｕｄｉ細胞（ＡＴＣＣ（登録商標）ＣＣＬ−２１３（商標））、Ｂ細胞性白血病、又はリンパ腫瘍細胞を用いて、評価され得る。エフェクター：標的細胞の比は、例えば４：１であり得る。エフェクター細胞は、標的細胞と共に４時間にわたり、抗ＣＤ３８抗体と共に又はそれなしでインキュベートされ得る。インキュベーション後、細胞は、アキュターゼを用いて剥離され得る。マクロファージは、蛍光標識に結合した抗ＣＤ１１ｂ抗体及び抗ＣＤ１４抗体により識別され得るが、貪食作用パーセントは、標準的な方法を用いて、ＣＤ１１＋及びＣＤ１４＋マクロファージ中のパーセントＧＦＰ蛍光に基づいて決定され得る。本発明の方法で使用される抗ＣＤ３８抗体は、ＡＤＣＰを約２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％又は１００％まで誘発することができる。
【０１１６】
抗ＣＤ３８抗体によって引き出されるＡＤＣＣは、抗体Ｆｃ内の特定の置換によって高めることができる。例示的な置換は、例えば、米国特許第６，７３７，０５６号に記載されたように、アミノ酸位置２５６、２９０、２９８、３１２、３５６、３３０、３３３、３３４、３６０、３７８、又は４３０（ＥＵインデックスに従った残基番号付け）における置換である。
【０１１７】
いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３８抗体は、抗体Ｆｃにアミノ酸置換を含む。
【０１１８】
いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３８抗体は、抗体Ｆｃにおいて、アミノ酸位置２５６、２９０、２９８、３１２、３５６、３３０、３３３、３３４、３６０、３７８、又は４３０における置換を含む（ＥＵインデックスに従った残基番号付け）。
【０１１９】
抗ＣＤ３８抗体によって誘発されるＡＤＣＣは、抗体オリゴ糖成分を操作することによっても高めることができる。ヒトＩｇＧ１又はＩｇＧ３は、Ａｓｎ２９７でＮ−グリコシル化されており、グリカンの大部分は、二分岐のＧ０、Ｇ０Ｆ、Ｇ１、Ｇ１Ｆ、Ｇ２、又はＧ２Ｆの形態である。遺伝子操作されていないＣＨＯ細胞により生成される抗体は、典型的には、少なくとも約８５％のグリカンフコース含量を有する。Ｆｃ領域に結合した二分岐の複合体型オリゴ糖からのコアフコースの除去は、抗原結合又はＣＤＣ活性を変更することなく、改善されたＦｃγＲＩＩＩａ結合を介して抗体のＡＤＣＣを増強する。かかる改変抗体は、培養物の浸透圧の制御（Ｋｏｎｎｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｙｔｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ６４（：２４９〜６５，２０１２）、宿主細胞株としての変異体ＣＨＯ株Ｌｅｃ１３の適用（Ｓｈｉｅｌｄｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ  ２７７：２６７３３〜２６７４０，２００２）、宿主細胞株としての変異体ＣＨＯ株ＥＢ６６の適用（Ｏｌｉｖｉｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，ＭＡｂｓ；２（４），２０１０；印刷に先立って電子公開、ＰＭＩＤ：２０５６２５８２）、ラットハイブリドーマ細胞株ＹＢ２／０の宿主細胞株としての適用（Ｓｈｉｎｋａｗａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ  ２７８：３４６６〜３４７３，２００３）、α  １，６−フコシルトランスフェラーゼ（ＦＵＴ８）遺伝子に対して特異的な低分子干渉ＲＮＡの導入（Ｍｏｒｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ  Ｂｉｏｅｎｇ８８：９０１〜９０８，２００４）、あるいはβ−１，４−Ｎ−アセチルグルコサミニルトランスフェラーゼＩＩＩ及びゴルジα−マンノシダーゼＩＩ又は強力なα−マンノシダーゼＩ阻害物質のキフネンシンの共発現（Ｆｅｒｒａｒａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ２８１：５０３２〜５０３６，２００６、Ｆｅｒｒａｒａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ  Ｂｉｏｅｎｇ９３：８５１〜８６１，２００６、Ｘｈｏｕ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ  Ｂｉｏｅｎｇ  ９９；６５２〜６５，２００８）などの、Ｆｃオリゴ糖の二分岐複合型を有する比較的高度に脱フコシル化された抗体の効果的な発現につながることが報告されている様々な方法を用いて得ることができる。
【０１２０】
いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３８抗体は、約０％〜約１５％、例えば、１５％、１４％、１３％、１２％、１１％、１０％、９％、８％、７％、６％、５％、４％、３％、２％、１％、又は０％のフコース含量を有する二分岐グリカン構造を有する。
【０１２１】
いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３８抗体は、約５０％、４０％、４５％、４０％、３５％、３０％、２５％、２０％、１５％、１４％、１３％、１２％、１１％、１０％、９％、８％、７％、６％、５％、４％、３％、２％、１％、又は０％のフコース含量を有する二分岐グリカン構造を有する。
【０１２２】
Ｆｃ中の置換及び減少したフコース含量は、抗ＣＤ３８抗体のＡＤＣＣ活性を増強することができる。
【０１２３】
「フコース含量」とは、Ａｓｎ２９７における糖鎖内のフコース単糖類の量を意味する。フコースの相対量は、全糖構造に対するフコース含有構造の割合である。これらの糖構造は、複数の方法、例えば、１）国際公開第２００８／０７７５４６号に記載されるような、Ｎ−グリコシダーゼＦ処理試料（例えば、複合体、ハイブリッド、及びオリゴ−並びに高マンノース構造）のＭＡＬＤＩ−ＴＯＦの使用、２）Ａｓｎ２９７グリカンの酵素放出、その後の誘導体化、及び蛍光検出を備えたＨＰＬＣ（ＵＰＬＣ）及び／又はＨＰＬＣ−ＭＳ（ＵＰＬＣ−ＭＳ）による検出／定量、３）第１のＧｌｃＮＡｃ単糖類と第２のＧｌｃＮＡｃ単糖類との間を切断し、フコースを第１のＧｌｃＮＡｃに結合させる、Ｅｎｄｏ  Ｓ又は他の酵素によるＡｓｎ２９７のグリカンの処理を伴うか又はこの処理なしでの、天然又は還元ｍＡｂのインタクトプロテイン分析、４）酵素消化（例えば、トリプシン又はエンドペプチダーゼＬｙｓ−Ｃ）による抗体の構成ペプチドへの消化、その後のＨＰＬＣ−ＭＳ（ＵＰＬＣ−ＭＳ）による分離、検出及び定量、５）Ａｓｎ２９７においてＰＮＧａｓｅ  Ｆを用いる、特異的酵素脱グリコシル化による抗体タンパク質からの抗体オリゴ糖の分離、によって特性評価かつ定量することができる。このようにして放出されるオリゴ糖は、フルオロフォアで標識され、グリカン構造の細かな特性評価を可能にする様々な補足的技術によって分離かつ特定することが可能であり、これらは、実験的質量の理論的質量との比較によるマトリックス支援レーザ脱離イオン化（ＭＡＬＤＩ）質量分析、イオン交換ＨＰＬＣ（ＧｌｙｃｏＳｅｐ  Ｃ）によるシアル化の程度の決定、順相ＨＰＬＣ（ＧｌｙｃｏＳｅｐ  Ｎ）による親水性の基準に準拠するオリゴ糖型の分離及び定量、並びに高性能キャピラリー電気泳動−レーザ誘起蛍光（ＨＰＣＥ−ＬＩＦ）によるオリゴ糖の分離及び定量による。
【０１２４】
本出願で使用される「低フコース」又は「低フコース含量」とは、抗体が約０％〜約１５％のフコース含量を有することを指す。
【０１２５】
本明細書で使用するところの「正常なフコース」又は「正常なフコース含量」とは、抗体が約５０％を超える、通常８０％を超える、又は８５％を超えるフコース含量を有することを指す。
【０１２６】
配列番号１２の重鎖及び配列番号１３の軽鎖を含む抗体と実質的に同一である抗体は、本発明の方法において用いることができる。本明細書で使用するところの「実質的に同一」なる用語は、比較される２つの抗体重鎖又は軽鎖のアミノ酸配列が同一であるか、又は「ごくわずかな相違」を有するということを意味する。ごくわずかな相違とは、抗体の特性に悪影響を及ぼさない抗体重鎖又は軽鎖における１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、又は１５個のアミノ酸の置換である。同一性パーセントは、例えば、Ｖｅｃｔｏｒ  ＮＴＩ  ｖ．９．０．０（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、Ｃａｒｌｓｂａｄ、ＣＡ）のＡｌｉｇｎＸモジュールの初期設定を使用するペアワイズアライメントによって決定することができる。本発明のタンパク質配列を問い合わせ配列として使用することで、例えば、近縁配列を確認するために公開データベース又は特許データベースでの検索を実行することができる。かかる検索を実行するために使用される例示的なプログラムは、初期設定を使用する、ＸＢＬＡＳＴ若しくはＢＬＡＳＴＰプログラム（ｈｔｔｐ＿／／ｗｗｗ＿ｎｃｂｉ＿ｎｌｍ／ｎｉｈ＿ｇｏｖ）、又はＧｅｎｏｍｅＱｕｅｓｔ（商標）（ＧｅｎｏｍｅＱｕｅｓｔ、Ｗｅｓｔｂｏｒｏｕｇｈ、ＭＡ）スイートである。本発明の方法において使用される抗ＣＤ３８抗体に対して行われうる例示的な置換は、例えば、同様な電荷、疎水性、又は化学両論的特性を有するアミノ酸による保存的置換である。保存的置換はまた、例えば安定性又は親和性といった抗体の特性を向上させるために、又は抗体エフェクターの機能を改善するためにも行われ得る。１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、又は１５個のアミノ酸置換が、例えば、抗ＣＤ３８抗体の重鎖又は軽鎖に対して行われ得る。更に、アラニンスキャニング変異導入法についてこれまでに述べられているように（ＭａｃＬｅｎｎａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｃｔａ  Ｐｈｙｓｉｏｌ．Ｓｃａｎｄ．Ｓｕｐｐｌ．６４３、５５〜６７，１９９８；Ｓａｓａｋｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｄｖ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．３５：１〜２４，１９９８）、重鎖又は軽鎖内の任意の天然残基をアラニンで置換することもできる。所望のアミノ酸置換は、そのような置換が望まれる時点で当業者が決定しうる。アミノ酸置換は、例えば、ＰＣＲ突然変異誘発（米国特許第４，６８３，１９５号）によって行うことができる。変異体のライブラリは、周知の方法を用いて、例えば、ランダムコドン（ＮＮＫ）又は非ランダムコドン、例えば１１個のアミノ酸（Ａｌａ、Ｃｙｓ、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ｇｌｙ、Ｌｙｓ、Ａｓｎ、Ａｒｇ、Ｓｅｒ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ）をコードするＤＶＫコドンを用い、そして所望の特性を有する変異体を求めてのライブラリをスクリーニングすることで生成されてもよい。生成された変異体は、本明細書に記載の方法を用いて、そのＣＤ３８への結合及びＡＤＣＣを誘発する能力について試験することができる。
【０１２７】
「保存的改変」とは、アミノ酸配列を含む抗体の結合特性に大きく影響するか、又はこれを変えることのないアミノ酸の改変のことを指す。保存的改変には、アミノ酸の置換、付加、及び欠失が含まれる。保存的置換とは、アミノ酸が、類似した側鎖を有するアミノ酸残基に置き換えられる置換である。類似した側鎖を有するアミノ酸残基のファミリーは、明確に定義されており、酸性側鎖を有するアミノ酸（例えばアスパラギン酸、グルタミン酸）、塩基性側鎖を有するアミノ酸（例えばリシン、アルギニン、ヒスチジン）、非極性側鎖を有するアミノ酸（例えばアラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、フェニルアラニン、メチオニン）、非荷電極性側鎖を有するアミノ酸（例えばグリシン、アスパラギン、グルタミン、システイン、セリン、スレオニン、チロシン、トリプトファン）、芳香族側鎖を有するアミノ酸（例えばフェニルアラニン、トリプトファン、ヒスチジン、チロシン）、脂肪族側鎖を有するアミノ酸（例えばグリシン、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、セリン、スレオニン）、アミドを有するアミノ酸（例えばアスパラギン、グルタミン）、β分枝側鎖を有するアミノ酸（例えばスレオニン、バリン、イソロイシン）、及び硫黄含有側鎖を有するアミノ酸（システイン、メチオニン）が挙げられる。更に、アラニンスキャニング変異導入法についてこれまでに述べられているように、ポリヌクレオチド内の任意の天然残基をアラニンで置換することもできる（ＭａｃＬｅｎｎａｎ  ｅｔ  ａｌ．（１９８８），Ａｃｔａ  Ｐｈｙｓｉｏｌ．Ｓｃａｎｄ．Ｓｕｐｐｌ．６４３、５５〜６７；Ｓａｓａｋｉ  ｅｔ  ａｌ．，（１９８８）Ａｄｖ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．３５：１〜２４）。本発明の抗体に対するアミノ酸置換は、例えばＰＣＲ変異導入法（米国特許第４，６８３，１９５号）などの周知の方法によって行うことができる。あるいは、変異体のライブラリは、例えば、ランダムコドン（ＮＮＫ）又は非ランダムコドン（例えば１１個のアミノ酸（Ａｌａ、Ｃｙｓ、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ｇｌｙ、Ｌｙｓ、Ａｓｎ、Ａｒｇ、Ｓｅｒ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ）をコードするＤＶＫコドン）を用いて生成することもできる。得られた抗体変異体は、本明細書に述べられるアッセイを使用してそれらの特性について試験することができる。
【０１２８】
いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３８抗体は、ある範囲の親和性（ＫＤ）でヒトＣＤ３８に結合することができる。一実施形態では、抗ＣＤ３８抗体は、約１×１０−８Ｍ以下のＫＤ、例えば、５×１０−９Ｍ、１×１０−９Ｍ、５×１０−１０Ｍ、１×１０−１０Ｍ、５×１０−１１Ｍ、１×１０−１１Ｍ、５×１０−１２Ｍ、１×１０−１２Ｍ、５×１０−１３Ｍ、１×１０−１３Ｍ、５×１０−１４Ｍ、１×１０−１４Ｍ、若しくは５×１０−１５Ｍ、又は、当業者により実施される、表面プラズモン共鳴法又は結合平衡除外（Ｋｉｎｅｘａ）法によって測定される任意の範囲若しくはその範囲内の任意の値のＫＤでＣＤ３８に結合する。例示的な１つの親和性として、１×１０−８Ｍ以下がある。別の例示的な親和性として、１×１０−９Ｍ以下がある。
【０１２９】
ＫｉｎＥｘＡ装置、ＥＬＩＳＡ又は競合的結合アッセイは当業者には周知のものである。特定の抗体／ＣＤ３８相互作用について測定される親和性は、異なる条件下（例えば、浸透圧、ｐＨ）で測定した場合には異なりうる。したがって、親和性及び他の結合パラメータ（例えば、ＫＤ、Ｋｏｎ、Ｋｏｆｆ）の測定は、一般的には標準的な条件及び本明細書に記載される緩衝液などの標準化緩衝液を用いて行われる。例えばＢｉａｃｏｒｅ  ３０００又はＰｒｏｔｅＯｎを用いた親和性測定での内部誤差（標準偏差（ＳＤ）として測定されるもの）は典型的に、典型的な検出範囲内で測定した場合、５〜３３％の範囲内であり得ることが当業者には分かるであろう。したがって、ＫＤに関して用語「約」は、アッセイにおける一般的な標準偏差を反映する。例えば、ＫＤが１×１０−９Ｍである場合の一般的なＳＤは、±０．３３×１０−９Ｍ以下である。
【０１３０】
いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３８抗体は、二重特異性抗体である。既存の抗ＣＤ３８抗体のＶＬ及び／若しくはＶＨ領域、又は本明細書に記載されるようにして新たに特定されたＶＬ及びＶＨ領域は、遺伝子操作を受けて二重特異性の全長抗体にされてもよい。このような二重特異性抗体は、抗体Ｆｃ中のＣＨ３相互作用を、二重特異性抗体を形成するように調節することにより製造され得るが、それには、以下に記載のような技術を用いることができる：米国特許第７，６９５，９３６号、国際公開第０４／１１１２３３号、米国特許出願公開第２０１０／００１５１３３号、同第２００７／０２８７１７０号、国際公開第２００８／１１９３５３号、米国特許出願公開第２００９／０１８２１２７号、同第２０１０／０２８６３７４号、同第２０１１／０１２３５３２号、国際公開第２０１１／１３１７４６号、同第２０１１／１４３５４５号、又は米国特許出願公開第２０１２／０１４９８７６号。
【０１３１】
例えば、本発明の二重特異性抗体は、国際公開第２０１１／１３１７４６号に記載された方法に従って、インビトロで無細胞環境下、２種類の一重特異性ホモ二量体抗体のＣＨ３領域中に非対称な突然変異を導入し、ジスルフィド結合を異性化させる還元条件下において、２種類の親一重特異性ホモ二量体抗体から二重特異性ヘテロ二量体抗体を形成することにより生成されてもよい。この方法においては、第１の一重特異性二価抗体（例えば、抗ＣＤ３８抗体）及び第２の一重特異性二価抗体は、ヘテロ二量体の安定性を促進するＣＨ３ドメインにおける特定の置換を有するように遺伝子操作されるが、これらの抗体は、ヒンジ領域におけるシステインがジスルフィド結合異性化を受けるのに十分な還元条件下において共にインキュベートされ、これにより、Ｆａｂアーム交換による二重特異性抗体が生成される。インキュベーション条件は、最適には、非還元条件に戻されてもよい。使用されうる例示的な還元剤は、２−メルカプトエチルアミン（２−ＭＥＡ）、ジチオスレイトール（ＤＴＴ）、ジチオエリスリトール（ＤＴＥ）、グルタチオン、トリス（２−カルボキシエチル）ホスフィン（ＴＣＥＰ）、Ｌ−システイン、及びベータ−メルカプトエタノール、好ましくは、２−メルカプトエチルアミン、ジチオスレイトール、及びトリス（２−カルボキシエチル）ホスフィンからなる群から選択される還元剤である。例えば、少なくとも２０℃の温度において、少なくとも２５ｍＭの２−ＭＥＡの存在下又は少なくとも０．５ｍＭのジチオスレイトールの存在下で、ｐＨ５〜８、例えば、ｐＨ７．０又はｐＨ７．４において、少なくとも９０分のインキュベーションが使用されてもよい。
【０１３２】
二重特異性抗体の第１の重鎖及び第２の重鎖に使用されうる例示的なＣＨ３の変異は、Ｋ４０９Ｒ及び／又はＦ４０５Ｌである。
【０１３３】
本発明の抗体のＶＬ領域及び／又はＶＨ領域を組み込むことができる更なる二重特異性構造は、例えば、二重可変ドメイン免疫グロブリン（ＤＶＤ）（国際公開第２００９／１３４７７６号）、又は、ロイシンジッパー又はコラーゲン二量体化ドメインのような、２つの抗体アームを異なる特異性で連結する様々な二量体化ドメインを含む構造である（国際公開第２０１２／０２２８１１号、米国特許第５，９３２，４４８号、同第６，８３３，４４１号）。ＤＶＤは、ＶＨ１−リンカー−ＶＨ２−ＣＨ構造を有する重鎖と、ＶＬ１−リンカー−ＶＬ２−ＣＬ構造を有する軽鎖とを含む完全長抗体であるが、リンカーは任意である。
【０１３４】
いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３８抗体は毒素と結合される。結合方法及び好適な毒素は、周知のものである。
【０１３５】
いくつかの実施形態では、ＭＭを有する対象は、ＣＤ１６の１５８位でフェニルアラニンについてホモ接合型（ＦｃγＲＩＩＩａ−１５８Ｆ／Ｆ遺伝子系）であるか、又は、ＣＤ１６の１５８位でバリン及びフェニルアラニンについてヘテロ接合型（ＦｃγＲＩＩＩａ−１５８Ｆ／Ｖ遺伝子型）である。ＣＤ１６は、Ｆｃガンマ受容体ＩＩＩａ（ＦｃγＲＩＩＩａ）又は低親和性免疫グロブリンガンマＦｃ領域受容体ＩＩＩ−Ａアイソフォームとしても知られている。ＦｃγＲＩＩＩａタンパク質残基の１５８位におけるバリン／フェニルアラニン（Ｖ／Ｆ）多型性は、ヒトＩｇＧに対するＦｃγＲＩＩＩａ親和性に影響を及ぼすことが示されている。ＦｃγＲＩＩＩａ−１５８Ｆ／Ｆ又はＦｃγＲＩＩＩａ−１５８Ｆ／Ｖ多型性を有する受容体は、ＦｃγＲＩＩＩａ−１５８Ｖ／Ｖと比較するとき、Ｆｃ結合の低減を示し、したがってＡＤＣＣの低減を示す。ヒトＮ結合オリゴ糖状のフコースの欠如又は低量のフコースは、抗体のヒトＦｃγＲＩＩＩａ（ＣＤ１６）への結合の改善に起因して、抗体のＡＤＣＣを誘発する能力を改善する（Ｓｈｉｅｌｄｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ  ２７７：２６７３３〜４０、２００２年）。日常的方法を用いて、患者をＦｃγＲＩＩＩａ多型性について分析することができる。
【０１３６】
いくつかの実施形態では、サバイビン阻害剤は小分子である。
【０１３７】
いくつかの実施形態では、サバイビン阻害剤はポリヌクレオチドである。
【０１３８】
サバイビン阻害剤は、サバイビン遺伝子の転写若しくはタンパク質発現の阻害、サバイビンタンパク質の二量体化の阻害、不安定化の促進、又はその分解の誘発などの任意の機構によってサバイビン誘発性アポトーシスを阻害することができる。
【０１３９】
例示的なサバイビンの小分子阻害剤の１つにＹＭ１５５がある。ＹＭ１５５は、サバイビンのプロモーターに結合してその転写を阻害する。他の例示的なサバイビンの小分子阻害剤としては、例えば、米国特許第６，６０８，１０８号に記載されるノルジヒドログアイアレチン酸誘導体、及び米国特許出願公開第２０１２／０１２２９１０号に記載される分子がある。他のサバイビンのポリヌクレオチド阻害剤が、例えば米国特許第６，８３８，２８３号、国際公開第０１／０５７０５９号、同第０９／１１４４７６号、及び同第０９／０４４７９３号に記載されている。ポリヌクレオチド阻害剤としては、ｍｉＲＮＡ（ｍｉｃｒｏＲＮＡ）、ｓｉＲＭＡ（ｓｍａｌｌ  ｉｎｔｅｒｅｆｅｒｅｎｃｅ  ＲＮＡ）、ＡＳＯ（アレル特異的オリゴヌクレオチド）、及び当該技術分野では周知の他のポリヌクレオチド阻害剤が挙げられる。
【０１４０】
投与／医薬組成物
本発明の方法では、抗ＣＤ３８抗体は、抗ＣＤ３８抗体と医薬的に許容される担体とを含む好適な医薬組成物中で提供されうる。担体は、抗ＣＤ３８抗体と一緒に投与される希釈剤、補助剤、賦形剤、又はビヒクルであってよい。そのようなビヒクルは、落花生油、大豆油、鉱物油、ゴマ油などの、石油、動物、植物、又は合成物起源のものを含む、水及び油などの液体であってよい。例えば、０．４％生理食塩水及び０．３％グリシンを用いることができる。これらの溶液は滅菌され、一般には粒子状物質を含まない。これらは、通常の周知の滅菌技術（例えば、濾過）によって滅菌することができる。この組成物は、生理学的条件に近づけるために必要とされる医薬的に許容される補助物質、例えばｐＨ調整剤及び緩衝剤、安定化剤、増粘剤、潤滑剤及び着色剤等を含有することができる。そのような医薬製剤中の本発明の分子又は抗体の濃度は幅広く異なってもよく、即ち約０．５重量％未満から、通常は少なくとも約１重量％まで、最大で１５又は２０重量％までであってよく、また、選択される特定の投与方法に従って、必要とされる用量、流体体積、粘度等に主に基づいて選択される。好適なビヒクル及び製剤（他のヒトタンパク質、例えばヒト血清アルブミンを含む）は、例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ，２１ｓｔ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｔｒｏｙ，Ｄ．Ｂ．ｅｄ．，Ｌｉｐｉｎｃｏｔｔ  Ｗｉｌｌｉａｍｓ  ａｎｄ  Ｗｉｌｋｉｎｓ，Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ，ＰＡ  ２００６，Ｐａｒｔ  ５，Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｍａｎｕｆａｃｔｕｒｉｎｇ  ｐｐ  ６９１〜１０９２に記載され、特にｐｐ．９５８〜９８９を参照されたい。
【０１４１】
本発明の方法における抗ＣＤ３８抗体の投与方法は、当該技術分野において周知であるように、非経口投与、例えば、皮内、筋肉内、腹腔内、静脈内若しくは皮下、肺内、経粘膜（経口、鼻腔内、膣内、直腸）又は当業者に理解される他の手段などの任意の好適な経路であり得る。
【０１４２】
本発明の方法における抗ＣＤ３８抗体は、例えば、静脈内（ＩＶ）注入又はボーラス注射により非経口的に、筋肉内又は皮下又は腹腔内になど任意の適当な経路によって患者に投与することができる。静脈内注入は、例えば、１５、３０、６０、９０、１２０、１８０、若しくは２４０分にわたって、又は１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、若しくは１２時間にわたって実施されてもよい。
【０１４３】
ＣＤ３８陽性血液悪性疾患を有する患者に投与される用量は、治療される疾患を緩和するか又は少なくとも部分的に抑制するのに十分（「治療的に有効な量」）であり、時には、０．００５ｍｇ〜約１００ｍｇ／ｋｇ、例えば、約０．０５ｍｇ〜約３０ｍｇ／ｋｇ、又は約５ｍｇ〜約２５ｍｇ／ｋｇ、若しくは約４ｍｇ／ｋｇ、約８ｍｇ／ｋｇ、約１６ｍｇ／ｋｇ、若しくは約２４ｍｇ／ｋｇ、又は、例えば１、２、３、４、５、６、７、８、９若しくは１０ｍｇ／ｋｇであってもよいが、更により高い量、例えば、約１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、若しくは１００ｍｇ／ｋｇであってもよい。
【０１４４】
例えば、５０、１００、２００、５００、又は１０００ｍｇの固定単位用量が与えられるか、又は患者の表面積に基づいて例えば、５００、４００、３００、２５０、２００、若しくは１００ｍｇ／ｍ２の用量で与えられてもよい。通常、１〜８回の用量（例えば、１、２、３、４、５、６、７、又は８回）がＭＭを治療するために投与されるが、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０回、又はそれよりも多い用量を投与することが可能である。
【０１４５】
本発明の方法における抗ＣＤ３８抗体の投与は、１日、２日、３日、４日、５日、６日、１週間、２週間、３週間、１ヶ月、５週間、６週間、７週間、２ヶ月、３ヶ月、４ヶ月、５ヶ月、６ヶ月以上後に繰り返すことができる。治療過程を繰り返すことも可能であり、長期にわたる投与も同様に可能である。繰り返し投与は、同一用量であるか、又は異なる用量であってもよい。例えば、本発明の方法における抗ＣＤ３８抗体は、８ｍｇ／ｋｇ又は１６ｍｇ／ｋｇで１週間間隔で８週間にわたり投与され、８ｍｇ／ｋｇ又は１６ｍｇ／ｋｇで２週間毎に更に１６週間の投与が続き、その後、８ｍｇ／ｋｇ又は１６ｍｇ／ｋｇで４週間毎に静脈内注入による投与を続けて行うことができる。
【０１４６】
本発明の方法では、抗ＣＤ３８抗体は、例えば、１週間に１回、６ヶ月以上の期間にわたるなどの維持療法によって投与されてもよい。
【０１４７】
例えば、本発明の方法では、抗ＣＤ３８抗体は、単回投与又は２４、１２、８、６、４、若しくは２時間毎の分割投与を用いて、あるいはこれらの任意の組み合わせを用いて、約０．１〜１００ｍｇ／ｋｇの量の１日用量として、例えば、１日当たり０．５、０．９、１．０、１．１、１．５、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、４０、４５、５０、６０、７０、８０、９０又は１００ｍｇ／ｋｇで、治療開始後、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、又は４０日目のうちの少なくとも１日に、あるいは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、又は２０週目のうちの少なくとも１週に、あるいはこれらの任意の組み合わせで提供されてもよい。
【０１４８】
本発明の方法における抗ＣＤ３８抗体はまた、癌の進行リスクを低下させ、癌の進行におけるイベントの発生の開始を遅延させ、かつ／又は癌が緩解した際の再発リスクを低下させるために、予防的に投与されてもよい。これは、他の生物学的要因のために、存在することが知られている腫瘍の位置を特定することが難しい患者において特に有用であり得る。
【０１４９】
本発明の方法における抗ＣＤ３８抗体は、保存のために凍結乾燥させ、使用に先立って適当な担体中で戻すことができる。この技術は、通常のタンパク調製物に関して有効であることが示されており、周知の凍結乾燥法及び再構成技術を用いることができる。
【０１５０】
本発明の方法では、抗ＣＤ３８抗体を、サバイビン阻害剤と組み合わせて投与することができる。
【０１５１】
本発明の方法では、抗ＣＤ３８抗体を、サバイビン阻害剤ＹＭ１５５と組み合わせて投与することができる。
【０１５２】
本発明の方法で使用されるＹＭ１５５は、国際公開第０１／６０８０３号及び同第２００４／０９２１６０号に開示される製造方法によって容易に入手可能である。
【０１５３】
ＹＭ１５５は、経口投与若しくは非経口投与、又は静脈内投与することができる。これと関連して、静脈内投与用の注射製剤としては、滅菌水溶液又は非水性溶液、懸濁液、及び乳濁液を含むものが挙げられる。水性溶媒としては、例えば注射用の蒸留水、及び生理食塩水が挙げられる。非水性溶媒としては、例えばプロピレングリコール、ポリエチレングリコール、オリーブ油などの植物油、エタノールなどのアルコール、ポリソルベート８０などが挙げられる。これらの組成物は更に、張度調整剤、防腐剤、保湿剤、乳化剤、分散剤、安定化剤、及び可溶化剤を含むことができる。これらは、例えば細菌フィルターを通じた濾過、滅菌剤の混合又は照射によって滅菌することができる。あるいは、無菌固体組成物を調製し、これを注射用に滅菌水又は滅菌溶媒に使用直前に溶解若しくは懸濁することも可能である。
【０１５４】
静脈内投与では、ＹＭ１５５は、１日１回若しくは複数用量に分けて、又は注入によって連続的に（持続点滴投与）、例えば０．１〜２０ｍｇ／ｍ２／日、例えば１〜１０ｍｇ／ｍ２／日を投与することができる。ＹＭ１５５は、３〜１０ｍｇ／ｍ２／日を、４日間〜２０日間、例えば４日間〜１４日間、又は５日間、７日間、１０日間若しくは１４日間の期間にわたって、及び／又は７日間の期間にわたって連続的に注入することができる。投与が更に継続される場合には、上記の投薬期間の終了後、１日間〜２ヶ月、７日間〜２１日間、又は１４日間の休薬期間を含む投薬サイクルを用いることができる。あるいは、ＹＭ１５５は、３〜８ｍｇ／ｍ２／日の用量を７日間注入することにより連続的に投与した後、１４日間の休薬期間を置くこともでき、状況に応じてこのサイクルを１サイクルとして繰り返す。投与頻度、投与量、注入時間、投薬サイクルなどは、抗癌剤の種類、患者の状態、年齢、性別などを考慮して個別の症例に適宜したがって決定することができる。
【０１５５】
本発明の方法では、抗ＣＤ３８抗体とサバイビン阻害剤の組み合わせを、任意の都合のよい時間枠にわたって投与することができる。例えば、抗ＣＤ３８抗体とサバイビン阻害剤を同日に患者に投与することができる。しかしながら、抗ＣＤ３８抗体とサバイビン阻害剤とは、交互の日、又は交互の週若しくは月などで投与することもできる。いくつかの方法では、抗ＣＤ３８抗体とサバイビン阻害剤とは、治療される患者の体内で検出可能な濃度でこれらが同時に存在する（例えば血清中）ような充分に近い時間内に投与することができる。いくつかの方法では、多数の投与回数からなる抗ＣＤ３８抗体によるある期間にわたった治療過程全体の後、又は前に、多数の投与回数からなるサバイビン阻害剤による治療過程が行われる。１日、２日、又は数日間若しくは数週間の回復期間を、抗ＣＤ３８抗体とサバイビン阻害剤の投与の間に置くことができる。
【０１５６】
サバイビン阻害剤と併用される抗ＣＤ３８抗体は、任意の形態の放射線療法、及び任意の形態の放射線手術、及び／又は外科手術と共に投与され得るが、そのような放射線療法には、体外照射療法、強度変調放射線療法（ＩＭＲＴ）が挙げられ、放射線手術には、ガンマナイフ、サイバーナイフ、Ｌｉｎａｃ、及び組織内放射線照射（例えば、放射性シードの埋め込み、Ｇｌｉａ  Ｓｉｔｅバルーン）が挙げられる。
【０１５７】
ＣＤ３８に特異的に結合する抗体及びヒアルロニダーゼを含む医薬組成物の皮下投与
抗ＣＤ３８抗体は、抗ＣＤ３８抗体及びヒアルロニダーゼを含む医薬組成物として皮下投与することができる。
【０１５８】
皮下投与される医薬組成物中の抗ＣＤ３８抗体の濃度は、約２０ｍｇ／ｍＬとすることができる。
【０１５９】
皮下投与される医薬組成物は、約１，２００ｍｇ〜１，８００ｍｇの抗ＣＤ３８抗体を含むことができる。
【０１６０】
皮下投与される医薬組成物は、約１，２００ｍｇの抗ＣＤ３８抗体を含むことができる。
【０１６１】
皮下投与される医薬組成物は、約１，６００ｍｇの抗ＣＤ３８抗体を含むことができる。
【０１６２】
皮下投与される医薬組成物は、約１，８００ｍｇの抗ＣＤ３８抗体を含むことができる。
【０１６３】
皮下投与される医薬組成物は、約３０，０００Ｕ〜４５，０００Ｕのヒアルロニダーゼを含むことができる。
【０１６４】
皮下投与される医薬組成物は、約１，２００ｍｇの抗ＣＤ３８抗体及び約３０，０００Ｕのヒアルロニダーゼを含むことができる。
【０１６５】
皮下投与される医薬組成物は、約１，８００ｍｇの抗ＣＤ３８抗体及び約４５，０００Ｕのヒアルロニダーゼを含むことができる。
【０１６６】
皮下投与される医薬組成物は、約１，６００ｍｇの抗ＣＤ３８抗体及び約３０，０００Ｕのヒアルロニダーゼを含むことができる。
【０１６７】
皮下投与される医薬組成物は、約１，６００ｍｇの抗ＣＤ３８抗体及び約４５，０００Ｕのヒアルロニダーゼを含むことができる。
【０１６８】
皮下投与される医薬組成物は、配列番号２３のアミノ酸配列を有するヒアルロニダーゼｒＨｕＰＨ２０を含むことができる。
【０１６９】
ｒＨｕＰＨ２０は、組換えヒアルロニダーゼ（ＨＹＬＥＮＥＸ（登録商標）組換え体）であり、国際公開第２００４／０７８１４０号に記載されている。
【０１７０】
ヒアルロニダーゼは、ヒアルロン酸（ＥＣ  ３．２．１．３５）を分解し、細胞外マトリクス中のヒアルロナンの粘性を低下させることにより組織の透過性を高める酵素である。
【０１７１】
配列番号２３
ＭＧＶＬＫＦＫＨＩＦＦＲＳＦＶＫＳＳＧＶＳＱＩＶＦＴＦＬＬＩＰＣＣＬＴＬＮＦＲＡＰＰＶＩＰＮＶＰＦＬＷＡＷＮＡＰＳＥＦＣＬＧＫＦＤＥＰＬＤＭＳＬＦＳＦＩＧＳＰＲＩＮＡＴＧＱＧＶＴＩＦＹＶＤＲＬＧＹＹＰＹＩＤＳＩＴＧＶＴＶＮＧＧＩＰＱＫＩＳＬＱＤＨＬＤＫＡＫＫＤＩＴＦＹＭＰＶＤＮＬＧＭＡＶＩＤＷＥＥＷＲＰＴＷＡＲＮＷＫＰＫＤＶＹＫＮＲＳＩＥＬＶＱＱＱＮＶＱＬＳＬＴＥＡＴＥＫＡＫＱＥＦＥＫＡＧＫＤＦＬＶＥＴＩＫＬＧＫＬＬＲＰＮＨＬＷＧＹＹＬＦＰＤＣＹＮＨＨＹＫＫＰＧＹＮＧＳＣＦＮＶＥＩＫＲＮＤＤＬＳＷＬＷＮＥＳＴＡＬＹＰＳＩＹＬＮＴＱＱＳＰＶＡＡＴＬＹＶＲＮＲＶＲＥＡＩＲＶＳＫＩＰＤＡＫＳＰＬＰＶＦＡＹＴＲＩＶＦＴＤＱＶＬＫＦＬＳＱＤＥＬＶＹＴＦＧＥＴＶＡＬＧＡＳＧＩＶＩＷＧＴＬＳＩＭＲＳＭＫＳＣＬＬＬＤＮＹＭＥＴＩＬＮＰＹＩＩＮＶＴＬＡＡＫＭＣＳＱＶＬＣＱＥＱＧＶＣＩＲＫＮＷＮＳＳＤＹＬＨＬＮＰＤＮＦＡＩＱＬＥＫＧＧＫＦＴＶＲＧＫＰＴＬＥＤＬＥＱＦＳＥＫＦＹＣＳＣＹＳＴＬＳＣＫＥＫＡＤＶＫＤＴＤＡＶＤＶＣＩＡＤＧＶＣＩＤＡＦＬＫＰＰＭＥＴＥＥＰＱＩＦＹＮＡＳＰＳＴＬＳＡＴＭＦＩＶＳＩＬＦＬＩＩＳＳＶＡＳＬ
【０１７２】
抗ＣＤ３８抗体及びヒアルロニダーゼを含む医薬組成物の投与は、１日、２日、３日、４日、５日、６日、１週間、２週間、３週間、４週間、５週間、６週間、７週間、２ヶ月、３ヶ月、４ヶ月、５ヶ月、６ヶ月、又はそれよりも長い期間の後に繰り返すことができる。治療過程を繰り返すことも可能であり、長期にわたる投与も同様に可能である。繰り返し投与は、同一用量であるか、又は異なる用量であってもよい。例えば、抗ＣＤ３８抗体及びヒアルロニダーゼを含む医薬組成物は、週１回を８週間、その後に２週に１回を１６週間、その後に４週に１回投与することができる。投与される医薬組成物は、約１，２００ｍｇの抗ＣＤ３８抗体及び約３０，０００Ｕのヒアルロニダーゼを含むことができ、その際、医薬組成物中のＣＤ３８に特異的に結合する抗体の濃度は約２０ｍｇ／ｍＬである。投与される医薬組成物は、約１，８００ｍｇの抗ＣＤ３８抗体及び約４５，０００Ｕのヒアルロニダーゼを含むことができる。投与される医薬組成物は、約１，６００ｍｇの抗ＣＤ３８抗体及び約３０，０００Ｕのヒアルロニダーゼを含むことができる。投与される医薬組成物は、約１，６００ｍｇの抗ＣＤ３８抗体及び約４５，０００Ｕのヒアルロニダーゼを含むことができる。
【０１７３】
抗ＣＤ３８抗体及びヒアルロニダーゼを含む医薬組成物は、腹部に皮下投与することができる。
【０１７４】
抗ＣＤ３８抗体及びヒアルロニダーゼを含む医薬組成物は、約８０ｍＬ、９０ｍＬ、１００ｍＬ、１１０ｍＬ、又は１２０ｍＬの全体積で投与することができる。
【０１７５】
投与を行うには、２０ｍｇ／ｍＬの抗ＣＤ３８抗体を２５ｍＭの酢酸ナトリウム、６０ｍＭの塩化ナトリウム、１４０ｍＭのＤ−マンニトール、０．０４％のポリソルベート２０（ｐＨ５．５）に加えたものを、ｒＨｕＰＨ２０（１．０ｍｇ／ｍＬ）（７５〜１５０ｋＵ／ｍＬ）を１０ｍＭのＬ−ヒスチジン、１３０ｍＭのＮａＣｌ、１０ｍＭのＬ−メチオニン、０．０２％ポリソルベート８０（ｐＨ６．５）に加えたものと、混合物を対象に投与する前に混合することができる。
【０１７６】
本発明の更なる実施形態
１．ＣＤ３８陽性血液悪性疾患を有する対象の治療においてサバイビン阻害剤と併用される、抗ＣＤ３８抗体。
２．ＣＤ３８陽性血液悪性疾患を有する対象の治療において抗ＣＤ３８抗体と併用される、サバイビン阻害剤。
３．ＣＤ３８陽性血液悪性疾患を有する患者の治療において使用される、抗ＣＤ３８抗体とサバイビン阻害剤との組み合わせ。
４．ＣＤ３８陽性血液悪性疾患が、多発性骨髄腫（ＭＭ）、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）、バーキットリンパ腫（ＢＬ）、濾胞性リンパ腫（ＦＬ）、マントル細胞リンパ腫（ＭＣＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、又は慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）である、実施形態１にしたがって使用される抗ＣＤ３８抗体、実施形態２にしたがって使用されるサバイビン阻害剤、又は実施形態３に記載の組み合わせ。
５．ＣＤ３８陽性血液悪性疾患が、形質細胞疾患である、実施形態１若しくは４にしたがって使用される抗ＣＤ３８抗体、実施形態２若しくは４にしたがって使用されるサバイビン阻害剤、又は実施形態３若しくは４に記載の組み合わせ。
６．形質細胞疾患が、軽鎖アミロイドーシス（ＡＬ）、多発性骨髄腫（ＭＭ）、又はワルデンストレームマクログロブリン血症である、実施形態１、４若しくは５にしたがって使用される抗ＣＤ３８抗体、実施形態２、４若しくは５にしたがって使用されるサバイビン阻害剤、又は実施形態３、４若しくは５に記載の組み合わせ。
７．形質細胞疾患がＭＭである、実施形態１若しくは４〜６のいずれか１つにしたがって使用される抗ＣＤ３８抗体、実施形態２若しくは４〜６のいずれか１つにしたがって使用されるサバイビン阻害剤、又は実施形態３若しくは４〜６のいずれか１つに記載の組み合わせ。
８．抗ＣＤ３８抗体が、抗体依存性細胞傷害作用（ＡＤＣＣ）、抗体依存性細胞性貪食作用（ＡＤＣＰ）、補体依存性細胞傷害作用（ＣＤＣ）、又はアポトーシスによってＣＤ３８陽性細胞の殺傷を誘発する、実施形態１若しくは４〜７のいずれか１つにしたがって使用される抗ＣＤ３８抗体、実施形態２若しくは４〜７のいずれか１つにしたがって使用されるサバイビン阻害剤、又は実施形態３若しくは４〜７のいずれか１つに記載の組み合わせ。
９．抗ＣＤ３８抗体が、
ａ．ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、若しくはＩｇＧ４アイソタイプのものであるか、又は、
ｂ．ＩｇＧ１アイソタイプのものである、実施形態１若しくは４〜８のいずれか１つにしたがって使用される抗ＣＤ３８抗体、実施形態２若しくは４〜８のいずれか１つにしたがって使用されるサバイビン阻害剤、又は実施形態３若しくは４〜６のいずれか１つに記載の組み合わせ。
１０．抗ＣＤ３８抗体が、
ａ．ＣＤ３８への結合に関して、配列番号４の重鎖可変領域（ＶＨ）及び配列番号５の軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む抗体と競合するか、
ｂ．ヒトＣＤ３８（配列番号１）の領域ＳＫＲＮＩＱＦＳＣＫＮＩＹＲ（配列番号２）及び領域ＥＫＶＱＴＬＥＡＷＶＩＨＧＧ（配列番号３）に結合するか、
ｃ．それぞれ配列番号６、７、及び８の重鎖相補性決定領域（ＨＣＤＲ）１（ＨＣＤＲ１）、２（ＨＣＤＲ２）、及び３（ＨＣＤＲ３）配列を含むか、
ｄ．それぞれ配列番号９、１０、及び１１の軽鎖相補性決定領域（ＬＣＤＲ）１（ＬＣＤＲ１）、２（ＬＣＤＲ２）、及び３（ＬＣＤＲ３）配列を含むか、
ｅ．それぞれ配列番号６、７、８、９、１０、及び１１のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含むか、
ｆ．配列番号４のアミノ酸配列と９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、若しくは１００％同一であるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）と、配列番号５のアミノ酸配列と９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、若しくは１００％同一であるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）とを含むか、
ｇ．配列番号４の重鎖可変領域（ＶＨ）及び配列番号５の軽鎖可変領域（ＶＬ）を含むか、
ｈ．
ｉ．配列番号１４のＶＨ及び配列番号１５のＶＬ、
ｉｉ．配列番号１６のＶＨ及び配列番号１７のＶＬ、
ｉｉｉ．配列番号１８のＶＨ及び配列番号１９のＶＬ、若しくは、
ｉｖ．配列番号２０のＶＨ及び配列番号２１のＶＬのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含むか、又は、
ｉ．
ｉ．配列番号１４のＶＨ及び配列番号１５のＶＬ、
ｉｉ．配列番号１６のＶＨ及び配列番号１７のＶＬ、
ｉｉｉ．配列番号１８のＶＨ及び配列番号１９のＶＬ、若しくは、
ｉｖ．配列番号２０のＶＨ及び配列番号２１のＶＬを含む、実施形態１若しくは４〜９のいずれか１つにしたがって使用される抗ＣＤ３８抗体、実施形態２若しくは４〜９のいずれか１つにしたがって使用されるサバイビン阻害剤、又は実施形態３若しくは４〜９のいずれか１つに記載の組み合わせ。
１１．抗ＣＤ３８抗体が、配列番号４の重鎖可変領域（ＶＨ）及び配列番号５の軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む、実施形態１若しくは４〜１０のいずれか１つにしたがって使用される抗ＣＤ３８抗体、実施形態２若しくは４〜１０のいずれか１つにしたがって使用されるサバイビン阻害剤、又は実施形態３若しくは４〜１０のいずれか１つに記載の組み合わせ。
１２．サバイビン阻害剤が、小分子、又はポリヌクレオチド又はワクチンである、実施形態１若しくは４〜１１のいずれか１つにしたがって使用される抗ＣＤ３８抗体、実施形態２若しくは４〜１１のいずれか１つにしたがって使用されるサバイビン阻害剤、又は実施形態３若しくは４〜１１のいずれか１つに記載の組み合わせ。
１３．サバイビン阻害剤がＹＭ１５５である、実施形態１若しくは４〜１２のいずれか１つにしたがって使用される抗ＣＤ３８抗体、実施形態２若しくは４〜１２のいずれか１つにしたがって使用されるサバイビン阻害剤、又は実施形態３若しくは４〜１２のいずれか１つに記載の組み合わせ。
１４．抗ＣＤ３８抗体とサバイビン阻害剤とが、同時、順次、又は別々に投与される、実施形態１若しくは４〜１３のいずれか１つにしたがって使用される抗ＣＤ３８抗体、実施形態２若しくは４〜１３のいずれか１つにしたがって使用されるサバイビン阻害剤、又は実施形態３若しくは４〜１３のいずれか１つに記載の組み合わせ。
１５．抗ＣＤ３８抗体が、それぞれ配列番号６、７、８、９、１０、及び１１のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３の配列を含む、ＣＤ３８陽性血液悪性疾患を有する対象の治療においてサバイビン阻害剤と併用される抗ＣＤ３８抗体。
１６．抗ＣＤ３８抗体が、配列番号４のＶＨ及び配列番号５のＶＬを含む、実施形態１５にしたがって使用される抗ＣＤ３８抗体。
１７．抗ＣＤ３８抗体が、ＩｇＧ１アイソタイプのものである、実施形態１５又は１６にしたがって使用される抗ＣＤ３８抗体。
１８．抗ＣＤ３８抗体が、配列番号１２の重鎖及び配列番号１３の軽鎖を含む、実施形態１５〜１７のいずれか１つにしたがって使用される抗ＣＤ３８抗体。
１９．抗ＣＤ３８抗体とサバイビン阻害剤とが、同時、順次、又は別々に投与される、実施形態１５〜１８のいずれか１つにしたがって使用される抗ＣＤ３８抗体。
２０．抗ＣＤ３８抗体が静脈内投与される、実施形態１５〜１９のいずれか１つにしたがって使用される抗ＣＤ３８抗体。
２１．抗ＣＤ３８抗体が、抗ＣＤ３８抗体及びヒアルロニダーゼを含む医薬組成物中で皮下投与される、実施形態１５〜１９のいずれか１つにしたがって使用される抗ＣＤ３８抗体。
２２．ヒアルロニダーゼが、配列番号２３のｒＨｕＰＨ２０である、実施形態２１にしたがって使用される抗ＣＤ３８抗体。
２３．ＣＤ３８陽性血液悪性疾患が多発性骨髄腫である、実施形態１５〜２２のいずれか１つにしたがって使用される抗ＣＤ３８抗体。
【０１７７】
以上、本発明を一般論として説明したが、本発明の各実施形態を、特許請求の範囲を限定するものとして解釈されるべきではない以下の実施例において更に開示する。
【０１７８】
材料及び方法
細胞及び細胞培養
骨髄単核球（ＢＭ−ＭＮＣ）及び末梢血単核球（ＰＢＭＣ）
多発性骨髄腫（ＭＭ）患者又は健康な個人からの骨髄（ＢＭ）吸引物及び健康な個人からの末梢血（ＰＢ）を、ヘルシンキ宣言に基づく研究医療機関倫理委員会（institutional medical ethical committee）によって承認されたプロトコール及び手順を用いて採取した。健康なドナー（ＨＤ）のＰＢＭＣ及びＢＭ−ＭＮＣを、それぞれ、ＰＢ試料及びＭＭ吸引物からＦｉｃｏｌｌ−Ｈｙｐａｑｕｅ密度勾配遠心分離によって単離した。ＰＢＭＣを、ＡＤＣＣ実験においてエフェクター細胞として直接使用した。ＢＭ−ＭＮＣは、使用時まで冷凍結保存した。
【０１７９】
多発性骨髄腫（ＭＭ）細胞株
ルシフェラーゼ（Ｌｕｃ）を形質導入したヒトＭＭ細胞株ＲＰＭＩ−８２２６及びＵＭ９を、１０％ウシ胎児血清（ＦＢＳ、インテグロ社（Integro）ＢＶ）及び抗生物質（ペニシリン／ストレプトマイシン、ライフ・テクノロジーズ社（Life Technologies））を添加したＲＰＭＩ１６４０（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）中、３７℃で、５％  ＣＯ２を含む加湿雰囲気中で維持した。
【０１８０】
骨髄間質細胞（ＢＭＳＣ）
接着性間質細胞を、プラスチック接着により健康な個人（ｈＢＭＳＣ）又はＭＭ患者（ｐＢＭＳＣ）のＢＭ−ＭＮＣから単離して培養した。細胞を、５％血小板溶解物、ヘパリン、及び抗生物質を加えたＯｐｔｉｍｅｍ（インビトロジェン社（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ））中で培養した。ｈＢＭＳＣは継代６代目まで実験で使用し、ｐＢＭＳＣは継代１回又は２回後に使用した。
【０１８１】
試薬
ＹＭ１５５（臭化セパントロニウム；４，９−ジヒドロ−１−（２−メトキシエチル）−２−メチル−４，９−ジオキソ−３−（２−ピラジニルメチル）−１Ｈ−ナフト［２，３−ｄ］イミダゾリウムブロミド；ＣＡＳ  ７８１６６１−９４−７）（セレック・ケミカルズ社（Selleck Chemicals））を、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）に１ｍＭの濃度で溶解し、アリコートに分けて使用時まで保存した。ＹＭ１５５を、各実験で示した濃度で培地中に希釈した。
【０１８２】
ＹＭ１５５：式Ｉ：
【０１８３】
【化１】
2018522857.tif 000003
【０１８４】
多発性骨髄腫細胞株に対する、細胞区画特異的生物発光に基づいた抗体依存性細胞傷害作用（ＡＤＣＣ）（「細胞区画特異的なＢＬＩに基づいた細胞傷害性アッセイ）
ｈＢＭＳＣを、１×１０４細胞／ウェルの密度で１００μＬの培地中、白色不透明の平底９６ウェルプレート（コスタ−社（Costar））に播種した。６時間の接着時間の後、ルシフェラーゼを形質導入したＭＭ細胞株を、１×１０４細胞／ウェルの密度でＢＭＳＣをコーティングしたウェル、又はコーティングしないウェルに加えた。ＹＭ１５５を試験する実験では、ＹＭ１５５を、示した濃度でＭＭ細胞と共に加えた。１６〜２０時間後、ダラツムマブを、示した濃度で加え、室温で１５分静置した。次いで、健康な個人から新たに単離したＰＢＭＣを、示したエフェクター：標的細胞比でエフェクター細胞として加えた。ＰＢＭＣを加えた４時間後に、１２５μｇ／ｍＬのホタルルシフェリン（プロメガ社（Promega））を加え、生存ＭＭ細胞から放射される生物発光シグナルをルミノメータ（ＳｐｅｃｔｒａＭａｘ，モレキュラー・デバイシーズ社（Molecular Devices））を使用して２０分以内に測定した。ＭＭ細胞の生存率（％）を次式を用いて計算した。すなわち、生存率（％）＝（ＰＢＭＣの非存在下での平均生物発光シグナル／ＰＢＭＣの存在下での平均生物発光シグナル）×１００％。これらのアッセイでは、ＭＭ細胞の生存率は、ＡＤＣＣ介在溶解を直接反映するものであり、ＭｃＭｉｌｌｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔ  Ｍｅｄ  １６：４８３〜４８９，２０１０に記載される古典的なクロム放出アッセイと相関している。
【０１８５】
多発性骨髄腫ＢＭ−ＭＮＣにおけるＦＡＣＳに基づいたＡＤＣＣアッセイ
１５〜３５％のＣＤ１３８＋  ＭＭ細胞を有するＭＭ患者からの凍結ＢＭ−ＭＮＣを、ＦＡＣＳに基づいたＡＤＣＣアッセイで使用した。細胞を解凍し、１０％  ＨＳを加えたＲＰＭＩ中で培養した。１６〜２０時間後、ＢＭ−ＭＮＣをトリパンブルー排除法によってカウントし、４×１０４細胞／ウェルを９６ウェル丸底プレートに播種した。ダラツムマブ及び／又はＹＭ１５５を、各実験について示したように各ウェルに加えた。２４時間後、蛍光標識した抗ＣＤ１３８抗体、抗ＣＤ３８抗体、抗ＣＤ５６抗体、及び抗ＣＤ３抗体で細胞を染色し、ＢＭ−ＭＮＣ中の初代ＣＤ１３８＋  ＭＭ細胞の生存率を上記に述べたようにＦＡＣＳによって測定した（Ｇｒｏｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ  １２０：ｅ９〜ｅ１６，２０１２）。ＭＭ細胞の溶解率（％）を下式を用いて推定した。すなわち、細胞溶解率（％）＝１−（処理ウェル中の生存ＣＤ１３８＋細胞のカウント／コントロールウェル中の生存ＣＤ１３８＋細胞数のカウント）×１００％。
【０１８６】
フローサイトメトリー
ＭＭ細胞上のＣＤ３８の発現レベルを調べるため、ＭＭ細胞を単独で、又はＢＭＳＣと培養し、ＣＤ３８フルオレセイン結合抗体とインキュベートした。細胞を、ＢＭＳＣのマーカーとしてのＣＤ１０５により更に染色した。ＣＤ１０５陰性細胞上でのＣＤ３８の発現を上記に述べたようにＦＡＣＳによって測定した（ｄｅ  Ｈａａｒｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｌｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ  １９：５５９１〜６０１，２０１３）。
【０１８７】
インビボ腫瘍標的化実験
ＨＤ−ＢＭＳＣでコーティングした３個の２〜３ｍｍの２相リン酸カルシウム粒子からなるハイブリッド足場材に、上記に述べたようにＬｕｃ＋  ＭＭ細胞株ＵＭ９（１×１０６細胞／足場）をインビトロでロードした後、ＲＡＧ２−／−γｃ−／−マウスに皮下移植した（Ｇｒｏｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ  １２０：ｅ９〜ｅ１６，２０１２）。移植の１０日後、足場内で増殖する腫瘍を有するマウスを、溶媒コントロール、ダラツムマブ＋ＰＢＳ、又はダラツムマブ＋ＹＭ１５５で処理した。コントロール群を含む各マウスに、ＡＤＣＣを誘発するためのヒトＮＫ細胞源として、Ｔ細胞を枯渇させたＨＤ−ＰＢＭＣ（５×１０６細胞）を更に投与した。ＰＢＳ及びＰＢＳに希釈したＹＭ１５５を皮下注入ポンプ（Ａｌｚｅｔ  １００７Ｄ）を使用して投与し、１ｍｇ／ｋｇ／ｄの薬剤を連続的に供給した。１０日後にポンプを取り外した。上記に述べたようにＢＬＩを行った（Ｓｐａａｐｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｌｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ  １６：５４８１〜８８，２０１０；Ｒｏｚｅｍｕｌｌｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｈａｅｍａｔｏｌｏｇｉｃａ  ９３：１０４９〜５７，２００８）。
【０１８８】
グランザイムＢ酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）
無細胞上清のグランザイムＢ（ＧｚＢ）含有量を、市販のＥＬＩＳＡキット（Ｐｅｌｉｐａｉｒ，サンクイン社（Sanquin）、オランダ、アムステルダム）を製造者の指示にしたがって使用して測定した。
【実施例】
【０１８９】
実施例１．骨髄間質細胞は多発性骨髄腫細胞の抗体依存性細胞傷害に対する保護を与える
骨髄（ＢＭ）微小環境の間質細胞はＣＴＬ及びＮＫ媒介性細胞傷害からＭＭ細胞を保護することから、ダラツムマブによって誘発される抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）に対して同様の保護作用が生じるか否かを評価した。
【０１９０】
２種類のＣＤ３８＋ルシフェラーゼ形質導入ＭＭ細胞株であるＵＭ９及びＲＰＭＩに対する健康なドナーのＢＭＳＣによるＡＤＣＣの誘発について、細胞区画特異的なＢＬＩに基づいた細胞傷害作用アッセイでエフェクター細胞としてのＨＤ−ＰＢＭＣの存在下又は非存在下で、ダラツムマブの連続的な濃度を用いて試験を行った。ＢＭＳＣの非存在下では、ダラツムマブは、両方のＭＭ細胞株でＡＤＣＣを用量依存的に媒介した。ＢＭＳＣの存在下では、どちらの細胞株もダラツムマブ誘発性ＡＤＣＣに対する感受性がより低かった。図１Ａは、ＵＭ９細胞におけるダラツムマブ誘発性ＡＤＣＣに対するＢＭＳＣの効果を示し、図１Ｂは、ＲＰＭＩ−８２２６細胞におけるダラツムマブ誘発性ＡＤＣＣに対するＢＭＳＣの効果を示している。
【０１９１】
初代ＭＭ細胞をダラツムマブ誘発性ＡＤＣＣから保護するＢＭＳＣの能力について、上記に述べた方法を用いてＦＡＣＳに基づいたＡＤＣＣアッセイで更に評価を行った。このアッセイでは、少なくとも１５％のＣＤ１３８＋悪性形質細胞を含むＢＭ−ＭＮＣと充分な数の自家エフェクターＮＫ細胞をダラツムマブとインキュベートして、ＡＤＣＣを誘発した。ＢＭ−ＭＮＣを単独又は自家ＢＭＳＣとの共培養中で試験して、ＢＭＳＣの効果を評価した。２４時間の培養後にＦＡＣＳに基づいた生存率アッセイを行ってＣＤ１３８＋の生存細胞を測定して、溶解率を計算した。初代ＭＭ細胞のＡＤＣＣの誘発は自家ＭＭ−ＢＭＳＣの存在下では試験したドナーの両方で効率が低く（図２Ａ及び図２Ｂ）、腫瘍微小環境の間質細胞がダラツムマブ療法に対する抵抗性を誘発したことを示すものである。
【０１９２】
実施例２．ＡＤＣＣのＢＭＳＣ誘発性抑制は、ＣＤ３８の発現低下又はＮＫ細胞の抑制によって引き起こされない
ＡＤＣＣに対するＢＭＳＣ媒介性保護の機構を理解するため、ＣＤ３８の表面発現及びＮＫ細胞活性の生じうる変化について評価を行った。
【０１９３】
ＭＭ細胞株であるＵＭ９及びＲＰＭＩ−８２２６を、健康なドナーのＢＭＳＣの存在下又は非存在下で培養した。いずれのＭＭ細胞株においても、ＭＭ細胞とＢＭＳＣとの共培養によってＣＤ３８の発現レベルは低下しなかった（データは示されていない）。
【０１９４】
ＢＭＳＣは、ＩＤＯ、ＴＧＦ−β又はＰＧＥ−２などの複数の免疫抑制因子を産生することが知られていることから、ＢＭＳＣによるＡＤＣＣからの保護はＮＫ細胞活性化の抑制によるものと考えられる（この抑制は、免疫シナプス内のグランザイムＢ及びパーフォリンを脱顆粒して放出させることによりその標的を殺傷するＮＫ細胞の能力を低下させる）。そこで、ダラツムマブによるＮＫ細胞活性化に対するＢＭＳＣの効果を、ＮＫ細胞活性のマーカーとしてダラツムマブ媒介性のグランザイムＢの分泌を用いて調べた。ＢＭＳＣの存在下では、グランザイムＢの濃度は一般的に上清中でより高かった（データは示されていない）。したがって、ＡＤＣＣに対するＢＭＳＣ媒介性の保護はＮＫ細胞の抑制によるものではない可能性が高かった。
【０１９５】
実施例３．サバイビンの阻害は、ＡＤＣＣに対するＢＭＳＣ媒介性保護を阻害し、ダラツムマブと多発性骨髄腫細胞の相乗的なＡＤＣＣ媒介性殺傷効果を与える。
ＢＭＳＣは、ＭＭ細胞におけるサバイビンの発現上昇によるＣＴＬ溶解からＭＭ細胞を保護することが示されている。ダラツムマブによって誘発されるＡＤＣＣに対するＢＭＳＣ媒介性保護の可能な機構としてのサバイビンの調節について、サバイビンの小分子阻害物質であるＹＭ１５５を用いて評価を行った。
【０１９６】
最初に、ＮＫ細胞の生存率に対するＹＭ１５５の効果を評価した。ＭＭ患者のＢＭ−ＭＮＣを、異なる用量のＹＭ１５５の存在下で２４時間培養した。ＭＭ細胞（ＣＤ１３８＋細胞）及び（ＣＤ３−ＣＤ１３８−ＣＤ５６＋細胞）の生存率を、ＦＡＣＳによって測定した。ＮＫ細胞は、ＭＭ細胞において既にある程度の傷害作用を示しているＹＭ１５５の用量において影響を受けなかった（図３）。
【０１９７】
ダラツムマブ、ＹＭ１５５、及びダラツムマブとＹＭ１５５との併用の効果を、ＮＫ細胞に対して傷害作用を有さないことが示されているＹＭ１５５の濃度を用いてＲＰＭＩ−８２２６細胞及び２つのＭＭ患者試料で評価した。
【０１９８】
これらのアッセイでは、ダラツムマブ及びＹＭ１５５を、ＲＰＭＩ−８２２６細胞についてはそれぞれ０．３μｇ／ｍＬ及び１ｎＭの濃度で、ＭＭ患者試料についてはそれぞれ１μｇ／ｍＬ及び１２０ｎＭの濃度で使用した。エフェクター細胞として健康なドナーのＰＢＭＣを、ＲＰＭＩ−８２２６細胞については４０：１、ＭＭ患者試料については３０：１のエフェクター：標的細胞の比で使用した。
【０１９９】
ＲＰＭＩ−８２２６細胞では、ＢＭＳＣの非存在下でダラツムマブ単独又はＹＭ１５５単独で約２０％の細胞に溶解が誘発された。ＢＭＳＣの存在下では、ダラツムマブが約１０％の細胞に溶解を誘発したのに対して、ＹＭ１５５では効果は見られなかった。ダラツムマブとＹＭ１５５との併用は相乗効果をもたらし、ＢＭＳＣの非存在下では約５０％の細胞の溶解を誘発し、ＢＭＳＣの存在下では約４５％の細胞の溶解を誘発した（図４Ａ）。ＢＭＳＣにおけるダラツムマブとＹＭ１５５との併用の相乗効果は約５倍であった。同様に、ダラツムマブとＹＭ１５５との併用は、１２０ｎＭのＹＭ１５５を使用したＭＭ患者試料１では相乗効果をもたらし（図４Ｂ）、より低量のＹＭ１５５（６４ｎＭ）を使用したＭＭ患者試料２（図４Ｃ）及び４人の患者から得たＭＭ細胞を加え合わせた試料（図４Ｄ）では中程度の相乗効果をもたらした。したがって、ＹＭ１５５は、ＭＭ細胞及び細胞株においてダラツムマブ媒介性ＡＤＣＣに対するＢＭＳＣの保護効果を阻害した。
【０２００】
したがって、サバイビンの発現上昇は、ＭＭ細胞のＡＤＣＣ媒介性殺傷効果の抑制の重要な機構の１つと考えられ、この機構はサバイビンの薬剤による調節によって防止することが可能である。
【０２０１】
実施例４．ダラツムマブとＹＭ１５５の併用療法のインビボ抗腫瘍効果
ダラツムマブとＹＭ１５５との併用のインビボでの妥当性について、ＲＡＧ２−／−ｇｃ−／−マウスにおける前臨床的異種移植モデルで試験した。この試験では、ＭＭ腫瘍を、ヒトＢＭＳＣでコーティングしたセラミック製足場材の皮下移植によって形成されたヒト化ＢＭ様ニッチ中で増殖させた。ヒトＭＳＣでコーティングし、ルシフェラーゼを形質導入したＭＭ細胞株ＵＭ９をロードしたハイブリッド足場材を、ＲＡＧ２−／−ｇｃ−／−マウスの背部の皮下に移植した（マウス１匹当たり４個の足場材）。移植の１０日後、増殖中の腫瘍をＢＬＩによって可視化し、定量した。次いで、異なるマウス群（ｎ＝４）を、溶媒コントロールで処理するか（コントロール）、又はダラツムマブ、ＹＭ１５５、若しくはダラツムマブ＋ＹＭ１５５で処理した。ＹＭ１５５又はその溶媒のＰＢＳは、１ｍｇ／ｋｇ／ｄのＹＭ１５５の速度で１０日間にわたり皮下注入ポンプにより投与した。コントロール群を含む各マウスに、ＡＤＣＣを誘発するためのヒトＮＫ細胞源として、Ｔ細胞を枯渇させたＨＤ−ＰＢＭＣ（５×１０６細胞）を投与した。マウスをＢＬＩにより毎週監視した。図５に、各群の相対腫瘍増殖率を示す。ダラツムマブで処理したマウスと、ダラツムマブ＋ＹＭ１５５で処理したマウスとの間の統計的差を、マンホイットニーＵ検定を用いて計算した。ダラツムマブは、腫瘍増殖率に対してわずかな効果を有した。抗ＭＭ作用はＹＭ１５５ではより顕著であり、ＹＭ１５５は更にダラツムマブと強い相乗作用を示して、有意に向上した抗ＭＭ作用が得られた。これらの効果は、ダラツムマブとサバイビン阻害剤ＹＭ１５５との併用により臨床的に有益な効果が期待されうることを示すものである。
【０２０２】
これらの結果は、小分子ＹＭ１５５によるサバイビンのレベルの抑制が、ＢＭＳＣの非存在下でのダラツムマブ媒介性ＡＤＣＣを向上させたばかりでなく、重要な点としてＢＭＳＣにより誘発されるＡＤＣＣ抵抗性を阻害したことを示している。ダラツムマブにＹＭ１５５を加えることでＢＭＳＣの非存在下においても高い抗腫瘍効果が示されたが、このことは、ＹＭ１５５／ダラツムマブ併用療法が、例えば形質細胞白血病におけるようにＭＭ細胞がＢＭＳＣと直接接触していない場合であっても潜在的に有益な効果を有することを示している。更に、ＢＭＳＣの存在下で、ＭＭ細胞の溶解率の最大で４倍の向上に見られるＡＤＣＣの有意な向上は、ＢＭ内に存在するＭＭ細胞に対して、ダラツムマブ療法をＹＭ１５５と併用することによってより大きな効果が得られることを示すものである。ＹＭ１５５による治療はＮＫ細胞の機能又は生存率に負の影響を与えないことも示されたが、このことは、この併用療法の臨床的応用を検討するうえでの必要条件である。
【０２０３】
ダラツムマブとＹＭ１５５との併用の有効性が多発性骨髄腫において実証されたが、この併用療法は、ＣＤ３８を発現する他の血液学的腫瘍、特に主としてＢＭ内に存在するものに対しても有効でありうることが推察される。この点に関し、ＡＭＬは、ＡＭＬ細胞が高レベルのＣＤ３８だけでなく、臨床転帰不良の予測因子である高レベルのサバイビンも発現することから、格好の候補である。ＣＬＬ細胞はＢＭ内で高いサバイビン発現レベルを有し、一部の患者でＣＤ３８が発現されることから、ＣＬＬは、併用療法の別の有望な候補となりうる。約５０％の非ホジキンリンパ腫における高いＣＤ３８及びサバイビンの発現は、この疾患をやはりＹＭ１５５／ダラツムマブの併用の有効性の評価の対象とするものである。これらを合わせると、ダラツムマブとＹＭ１５５の併用は、広範な血液学的腫瘍に幅広く適用可能であると考えられる。
【図１Ａ】
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【図１Ｂ】
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【図２Ａ】
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【図２Ｂ】
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【図３】
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【図４Ａ】
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【図４Ｂ】
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【図４Ｃ】
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【図４Ｄ】
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【図５】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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