(57)【要約】  ＩＬ−１３を検出及び定量する方法が提供される。また、Ｔｈ２経路阻害剤（２型関連阻害剤）である特定の治療剤による治療のための、Ｔｈ２関連疾患（２型関連疾患）を有する患者の診断、選択及び同定方法も提供される。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
ＩＬ−１３を検出及び定量するためのイムノアッセイ法であって、試料中のＩＬ−１３を高感度かつ高特異性で検出及び定量することができる、方法。
【請求項２】
感度が定量下限（ＬＬＯＱ）として決定され、ＬＬＯＱが０．１ｆｇ／ｍＬ〜３５ｆｇ／ｍＬの間、又は１ｆｇ／ｍＬ〜３０ｆｇ／ｍＬの間、又は５ｆｇ／ｍＬ〜２５ｆｇ／ｍＬの間、又は１０ｆｇ／ｍＬ〜２０ｆｇ／ｍＬの間である、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
ＬＬＯＱが１４ｆｇ／ｍＬである、請求項２に記載の方法。
【請求項４】
前記方法がサンドイッチイムノアッセイ法であり、ＩＬ−１３に特異的に結合する第１のモノクローナル捕捉抗体及びＩＬ−１３に特異的に結合する第２のモノクローナル検出抗体を含み、ここで第１の抗体は第２の抗体とは異なるエピトープに結合する、請求項１から３の何れか一項に記載の方法。
【請求項５】
特異性が抗原枯渇法によって決定され、該枯渇法はイムノアッセイ法を実施する前に過剰量の第１の抗体と試料をインキュベートすることを含む、請求項４に記載の方法。
【請求項６】
試料中の抗原が完全に枯渇し、それによりイムノアッセイ法においてＬＬＯＱ未満のシグナルが生成される、請求項５に記載の方法。
【請求項７】
試料が可溶性ＩＬ−１３Ｒα２を含み、可溶性ＩＬ−１３Ｒα２がイムノアッセイ法の感度又は特異性を妨害しない、請求項１から６の何れか一項に記載の方法。
【請求項８】
第１の抗体が、配列番号５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、配列番号６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び配列番号７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む可変重鎖領域と、配列番号８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、配列番号９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び配列番号１０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む可変軽鎖領域とを含む可変領域を含む、請求項４から７の何れか一項に記載の方法。
【請求項９】
第１の抗体が、配列番号１のアミノ酸配列を含む可変重鎖領域及び配列番号２のアミノ酸配列を含む可変軽鎖領域を含む可変領域を含む、請求項８に記載の方法。
【請求項１０】
第２の抗体が、配列番号１３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、配列番号１４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び配列番号１５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む可変重鎖領域と、配列番号１６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、配列番号１７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び配列番号１８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む可変軽鎖領域とを含む可変領域を含む、請求項４から９の何れか一項に記載の方法。
【請求項１１】
第２の抗体が、配列番号１２のアミノ酸配列を含む可変重鎖領域及び配列番号１１のアミノ酸配列を含む可変軽鎖領域を含む可変領域を含む、請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
第１の抗体が抗体断片である、請求項４から１１の何れか一項に記載の方法。
【請求項１３】
抗体断片が、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆａｂ’、及びＦｖから選択される、請求項１２に記載の方法。
【請求項１４】
第２の抗体に特異的に結合し、かつ検出可能に標識される第３の抗体を更に含む、請求項４から１３の何れか一項に記載の方法。
【請求項１５】
第２の抗体がハプテンで標識され、第３の抗体が抗ハプテン抗体である、請求項１４に記載の方法。
【請求項１６】
ハプテンがジゴキシゲニンであり、抗ハプテン抗体が蛍光ラテックスとコンジュゲートした抗ジゴキシゲニンモノクローナル抗体である、請求項１５に記載の方法。
【請求項１７】
試料が血清である、請求項１から１６の何れか一項に記載の方法。
【請求項１８】
試料がヒト血清である、請求項１７に記載の方法。
【請求項１９】
喘息又はＴｈ２関連疾患に罹患している患者のＴｈ２経路阻害剤を含む治療に対する応答を予測する方法であって、
患者から生物学的試料を得ること、
請求項１から１８の何れか一項に記載の方法を用いてＩＬ−１３レベルを測定すること、
試料中で検出されたＩＬ−１３レベルを基準レベルと比較すること、
及び
試料中で測定されたＩＬ−１３レベルが基準レベルと比較して上昇したときに患者が治療に応答すると予測すること、又は試料中で測定されたＩＬ−１３レベルが基準レベルと比較して低下したときに患者が治療に応答しないと予測すること
を含む、方法。
【請求項２０】
喘息又はＴｈ２関連疾患に罹患している患者のＴｈ２経路阻害剤を含む治療に対する応答性を予測する方法であって、請求項１から１８の何れか一項に記載の方法を用いて患者からの生物学的試料中のＩＬ−１３レベルを測定することを含み、基準レベルと比較して上昇したＩＬ−１３レベルが、患者をＴｈ２経路阻害剤治療に応答する可能性のあるものとして同定する、方法。
【請求項２１】
Ｔｈ２経路阻害剤を含む治療に応答する可能性のある、喘息又はＴｈ２関連疾患に罹患している患者を同定する方法であって、
（ａ）請求項１から１８の何れか一項に記載の方法を用いて患者からの生物学的試料中のＩＬ−１３レベルを測定すること；
（ｂ）（ａ）で測定されたＩＬ−１３レベルを基準レベルと比較すること；及び
（ｃ）（ａ）で測定されたＩＬ−１３レベルが基準レベルを上回っている場合に、Ｔｈ２経路阻害剤を含む治療に応答する可能性が高いとして患者を同定することを含む、
方法。
【請求項２２】
Ｔｈ２経路阻害剤が、ＩＴＫ、ＢＴＫ、ＩＬ−９の阻害剤（例えばＭＥＤＩ−５２８）、ＩＬ−５の阻害剤（例えばメポリズマブ、ＣＡＳ番号１９６０７８−２９−２；レシリズマブ（ｒｅｓｉｌｉｚｕｍａｂ））、ＩＬ−１３の阻害剤（例えばＩＭＡ−０２６、ＩＭＡ−６３８（アンルキンズマブとも言う、ＩＮＮ番号９１０６４９−３２−０；ＱＡＸ−５７６；ＩＬ４／ＩＬ１３トラップ）、トラロキヌマブ（ＣＡＴ−３５４とも言う、ＣＡＳ番号１０４４５１５−８８−９）；ＡＥＲ−００１、ＡＢＴ−３０８（ヒト化１３Ｃ５．５抗体とも言う）、ＩＬ−４の阻害剤（例えばＡＥＲ−００１、ＩＬ４／ＩＬ１３トラップ）、ＩＬ−１７、ＯＸ４０Ｌ、ＴＳＬＰ、ＩＬ−２５、ＩＬ−３３及びＩｇＥの阻害剤（例えばＸＯＬＡＩＲ（登録商標）、ＱＧＥ−０３１；ＭＥＤＩ−４２１２；キリズマブ）；及び受容体、例えばＩＬ−９受容体、ＩＬ−５受容体の阻害剤（例えばＭＥＤＩ−５６３（ベンラリズマブ、ＣＡＳ番号１０４４５１１−０１−４））、ＩＬ−４受容体アルファの阻害剤（例えばＡＭＧ−３１７、ＡＩＲ−６４５、デュピルマブ）、ＩＬ−１３受容体アルファ１の阻害剤（例えばＲ−１６７１）及びＩＬ−１３受容体アルファ２、ＯＸ４０、ＴＳＬＰ−Ｒ、ＩＬ−７Ｒアルファ（ＴＳＬＰの共受容体）、ＩＬ１７ＲＢ（ＩＬ−２５の受容体）、ＳＴ２（ＩＬ−３３の受容体）、ＣＣＲ３、ＣＣＲ４、ＣＲＴＨ２の阻害剤（例えばＡＭＧ−８５３、ＡＰ７６８、ＡＰ−７６１、ＭＬＮ６０９５、ＡＣＴ１２９９６８）、ＦｃｅｐｓｉｌｏｎＲＩ、ＦｃｅｐｓｉｌｏｎＲＩＩ／ＣＤ２３（ＩｇＥの受容体）の阻害剤、Ｆｌａｐの阻害剤（例えばＧＳＫ２１９０９１５）、Ｓｙｋキナーゼの阻害剤（Ｒ−３４３、ＰＦ３５２６２９９）；ＣＣＲ４の阻害剤（ＡＭＧ−７６１）、ＴＬＲ９の阻害剤（ＱＡＸ−９３５）であるか、又はＣＣＲ３、ＩＬ５、ＩＬ３、ＧＭ−ＣＳＦの多重サイトカイン阻害剤（例えばＴＰＩ  ＡＳＭ８）である、請求項１９から２１の何れか一項に記載の方法。
【請求項２３】
Ｔｈ２経路阻害剤がＩＬ−１３経路阻害剤又は抗ＩｇＥ結合剤である、請求項１９から２２の何れか一項に記載の方法。
【請求項２４】
Ｔｈ２経路阻害剤が抗ＩＬ−１３抗体又は抗ＩＬ−１３二重特異性抗体である、請求項１９から２３の何れか一項に記載の方法。
【請求項２５】
抗ＩＬ−１３抗体が、配列番号１、３、及び２４から選択される配列を含むＶＨ、及び配列番号２、４、及び２５から選択される配列を含むＶＬを含む抗体；ＨＶＲＨ１、ＨＶＲＨ２、ＨＶＲＨ３、ＨＶＲＬ１、ＨＶＲＬ２、及びＨＶＲＬ３を含み、各ＨＶＲが配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、配列番号９、及び配列番号１０のアミノ酸配列を有する抗ＩＬ−１３抗体；又はレブリキズマブである、請求項２４に記載の方法。
【請求項２６】
抗ＩＬ−１３二重特異性抗体が、配列番号１、３、及び２４から選択される配列を含むＶＨ、及び配列番号２、４、及び２５から選択される配列を含むＶＬを含む抗ＩＬ−１３  ＶＨ／ＶＬユニット；又はＨＶＲＨ１、ＨＶＲＨ２、ＨＶＲＨ３、ＨＶＲＬ１、ＨＶＲＬ２、及びＨＶＲＬ３を含み、各ＨＶＲが配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、配列番号９、及び配列番号１０のアミノ酸配列を有する抗ＩＬ−１３  ＶＨ／ＶＬユニットを含む、請求項２４に記載の方法。
【請求項２７】
抗ＩＬ−１３二重特異性抗体が、抗ＩＬ−４／抗ＩＬ−１３二重特異性抗体又は抗ＩＬ−１３／抗ＩＬ−１７二重特異性抗体である、請求項２４に記載の方法。
【請求項２８】
抗ＩＬ−１３／抗ＩＬ−１７二重特異性抗体が、ＨＶＲＨ１、ＨＶＲＨ２、ＨＶＲＨ３、ＨＶＲＬ１、ＨＶＲＬ２、及びＨＶＲＬ３を含み、各ＨＶＲが配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、配列番号９、及び配列番号１０のアミノ酸配列を有する抗ＩＬ−１３  ＶＨ／ＶＬユニット；及びＨＶＲＨ１、ＨＶＲＨ２、ＨＶＲＨ３、ＨＶＲＬ１、ＨＶＲＬ２、及びＨＶＲＬ３を含み、各ＨＶＲが配列番号２６、配列番号２７、配列番号２８、配列番号２９、配列番号３０、及び配列番号３１のアミノ酸配列を有する抗ＩＬ−１７  ＶＨ／ＶＬユニットを含む、請求項２７に記載の方法。
【請求項２９】
抗ＩＬ−１３／抗ＩＬ−１７二重特異性抗体が、配列番号１、３、及び２４から選択されるアミノ酸配列を含むＶＨ、及び配列番号２、４、及び２５から選択されるアミノ酸配列を含むＶＬを含む抗ＩＬ−１３  ＶＨ／ＶＬユニット；及び配列番号３２のアミノ酸配列を含むＶＨ、及び配列番号３３のアミノ酸配列を含むＶＬを含む抗ＩＬ−１７  ＶＨ／ＶＬユニットを含む、請求項２８に記載の方法。
【請求項３０】
Ｔｈ２経路阻害剤が抗ＩｇＥ抗体である、請求項２３に記載の方法。
【請求項３１】
抗ＩｇＥ抗体が（ｉ）ＸＯＬＡＩＲ（登録商標）抗体又は（ｉｉ）可変重鎖領域及び可変軽鎖領域を含む抗ＩｇＥ抗体であり、該可変重鎖領域は配列番号２２であり、該可変軽鎖領域は配列番号２３である、請求項３０に記載の方法。
【請求項３２】
喘息又はＴｈ２関連疾患に罹患している患者を治療する方法であって、
（ａ）請求項１から１８の何れか一項に記載の方法を用いて患者からの生物学的試料中のＩＬ−１３のレベルを測定すること；
（ｂ）（ａ）で測定されたＩＬ−１３レベルを基準レベルと比較すること；
（ｃ）（ａ）で測定されたＩＬ−１３レベルが基準レベルを上回っている場合に、Ｔｈ２経路阻害剤を含む治療に応答する可能性が高いとして患者を同定すること；
及び
（ｄ）（ａ）で測定されたＩＬ−１３レベルが基準レベルを上回った場合に治療薬を投与し、それにより喘息又はＴｈ２関連疾患を治療すること
を含む方法。
【請求項３３】
患者における喘息又はＴｈ２関連疾患を治療する方法であって、治療的有効量のＴｈ２経路阻害剤を患者に投与することを含み、患者から得られた生物学的試料が、基準集団におけるＩＬ−１３レベルと比較して上昇したＩＬ−１３レベルを有すると決定されており、ＩＬ−１３レベルが請求項１から１８の何れか一項に記載の方法によって決定されていた、方法。
【請求項３４】
患者における喘息又はＴｈ２関連疾患を治療する方法であって、治療的有効量のＴｈ２経路阻害剤を患者に投与することを含み、患者は、基準集団におけるＩＬ−１３レベルと比較して、ＩＬ−１３の患者から得られた生物学的試料中の上昇したＩＬ−１３レベルに基づいて、治療のために選択されており、ＩＬ−１３レベルが請求項１から１８の何れか一項に記載の方法によって決定されていた、方法。
【請求項３５】
基準レベルが基準集団におけるＩＬ−１３の中央値レベルである、請求項１９から３４の何れか一項に記載の方法。
【請求項３６】
Ｔｈ２経路阻害剤が、ＩＴＫ、ＢＴＫ、ＩＬ−９の阻害剤（例えばＭＥＤＩ−５２８）、ＩＬ−５の阻害剤（例えばメポリズマブ、ＣＡＳ番号１９６０７８−２９−２；レシリズマブ（ｒｅｓｉｌｉｚｕｍａｂ））、ＩＬ−１３の阻害剤（例えばＩＭＡ−０２６、ＩＭＡ−６３８（アンルキンズマブとも言う、ＩＮＮ番号９１０６４９−３２−０；ＱＡＸ−５７６；ＩＬ４／ＩＬ１３トラップ）、トラロキヌマブ（ＣＡＴ−３５４とも言う、ＣＡＳ番号１０４４５１５−８８−９）；ＡＥＲ−００１、ＡＢＴ−３０８（ヒト化１３Ｃ５．５抗体とも言う）、ＩＬ−４の阻害剤（例えばＡＥＲ−００１、ＩＬ４／ＩＬ１３トラップ）、ＩＬ−１７、ＯＸ４０Ｌ、ＴＳＬＰ、ＩＬ−２５、ＩＬ−３３及びＩｇＥの阻害剤（例えばＸＯＬＡＩＲ（登録商標）、ＱＧＥ−０３１；ＭＥＤＩ−４２１２；キリズマブ）；及び受容体、例えばＩＬ−９受容体、ＩＬ−５受容体の阻害剤（例えばＭＥＤＩ−５６３（ベンラリズマブ、ＣＡＳ番号１０４４５１１−０１−４））、ＩＬ−４受容体アルファの阻害剤（例えばＡＭＧ−３１７、ＡＩＲ−６４５、デュピルマブ）、ＩＬ−１３受容体アルファ１の阻害剤（例えばＲ−１６７１）及びＩＬ−１３受容体アルファ２、ＯＸ４０、ＴＳＬＰ−Ｒ、ＩＬ−７Ｒアルファ（ＴＳＬＰの共受容体）、ＩＬ１７ＲＢ（ＩＬ−２５の受容体）、ＳＴ２（ＩＬ−３３の受容体）、ＣＣＲ３、ＣＣＲ４、ＣＲＴＨ２の阻害剤（例えばＡＭＧ−８５３、ＡＰ７６８、ＡＰ−７６１、ＭＬＮ６０９５、ＡＣＴ１２９９６８）、ＦｃｅｐｓｉｌｏｎＲＩ、ＦｃｅｐｓｉｌｏｎＲＩＩ／ＣＤ２３（ＩｇＥの受容体）の阻害剤、Ｆｌａｐの阻害剤（例えばＧＳＫ２１９０９１５）、Ｓｙｋキナーゼの阻害剤（Ｒ−３４３、ＰＦ３５２６２９９）；ＣＣＲ４の阻害剤（ＡＭＧ−７６１）、ＴＬＲ９の阻害剤（ＱＡＸ−９３５）であるか、又はＣＣＲ３、ＩＬ５、ＩＬ３、ＧＭ−ＣＳＦの多重サイトカイン阻害剤（例えばＴＰＩ  ＡＳＭ８）である、請求項３２から３５の何れか一項に記載の方法。
【請求項３７】
Ｔｈ２経路阻害剤がＩＬ−１３経路阻害剤又は抗ＩｇＥ結合剤である、請求項３２から３５の何れか一項に記載の方法。
【請求項３８】
Ｔｈ２経路阻害剤が抗ＩＬ−１３抗体又は抗ＩＬ−１３二重特異性抗体である、請求項３２から３５の何れか一項に記載の方法。
【請求項３９】
抗ＩＬ−１３抗体が、配列番号１、３、及び２４から選択される配列を含むＶＨ、及び配列番号２、４、及び２５から選択される配列を含むＶＬを含む抗体；ＨＶＲＨ１、ＨＶＲＨ２、ＨＶＲＨ３、ＨＶＲＬ１、ＨＶＲＬ２、及びＨＶＲＬ３を含み、各ＨＶＲが配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、配列番号９、及び配列番号１０のアミノ酸配列を有する抗ＩＬ−１３抗体；又はレブリキズマブである、請求項３８に記載の方法。
【請求項４０】
抗ＩＬ−１３二重特異性抗体が、配列番号１、３、及び２４から選択される配列を含むＶＨ、及び配列番号２、４、及び２５から選択される配列を含むＶＬを含む抗ＩＬ−１３  ＶＨ／ＶＬユニット；又はＨＶＲＨ１、ＨＶＲＨ２、ＨＶＲＨ３、ＨＶＲＬ１、ＨＶＲＬ２、及びＨＶＲＬ３を含み、各ＨＶＲが配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、配列番号９、及び配列番号１０のアミノ酸配列を有する抗ＩＬ−１３  ＶＨ／ＶＬユニットを含む、請求項３８に記載の方法。
【請求項４１】
抗ＩＬ−１３二重特異性抗体が、抗ＩＬ−４／抗ＩＬ−１３二重特異性抗体又は抗ＩＬ−１３／抗ＩＬ−１７二重特異性抗体である、請求項３８に記載の方法。
【請求項４２】
抗ＩＬ−１３／抗ＩＬ−１７二重特異性抗体が、ＨＶＲＨ１、ＨＶＲＨ２、ＨＶＲＨ３、ＨＶＲＬ１、ＨＶＲＬ２、及びＨＶＲＬ３を含み、各ＨＶＲが配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、配列番号９、及び配列番号１０のアミノ酸配列を有する抗ＩＬ−１３  ＶＨ／ＶＬユニット；及びＨＶＲＨ１、ＨＶＲＨ２、ＨＶＲＨ３、ＨＶＲＬ１、ＨＶＲＬ２、及びＨＶＲＬ３を含み、各ＨＶＲが配列番号２６、配列番号２７、配列番号２８、配列番号２９、配列番号３０、及び配列番号３１のアミノ酸配列を有する抗ＩＬ−１７  ＶＨ／ＶＬユニットを含む、請求項４１に記載の方法。
【請求項４３】
抗ＩＬ−１３／抗ＩＬ−１７二重特異性抗体が、配列番号１、３、及び２４から選択されるアミノ酸配列を含むＶＨ、及び配列番号２、４、及び２５から選択されるアミノ酸配列を含むＶＬを含む抗ＩＬ−１３  ＶＨ／ＶＬユニット；及び配列番号３２のアミノ酸配列を含むＶＨ、及び配列番号３３のアミノ酸配列を含むＶＬを含む抗ＩＬ−１７  ＶＨ／ＶＬユニットを含む、請求項４２に記載の方法。
【請求項４４】
Ｔｈ２経路阻害剤が抗ＩｇＥ抗体である、請求項３７に記載の方法。
【請求項４５】
抗ＩｇＥ抗体が（ｉ）ＸＯＬＡＩＲ（登録商標）抗体又は（ｉｉ）可変重鎖領域及び可変軽鎖領域を含む抗ＩｇＥ抗体であり、該可変重鎖領域は配列番号２２であり、該可変軽鎖領域は配列番号２３である、請求項４４に記載の方法。
【請求項４６】
患者が中等度から重度の喘息に罹患している、請求項１９から４５の何れか一項に記載の方法。
【請求項４７】
喘息又はＴｈ２関連疾患がコルチコステロイドでコントロール不良である、請求項１９から４６の何れか一項に記載の方法。
【請求項４８】
コルチコステロイドが吸入コルチコステロイドである、請求項４７に記載の方法。
【請求項４９】
患者が第二のコントローラーで治療されている、請求項４６から４８の何れか一項に記載の方法。
【請求項５０】
患者がヒトである、請求項１９から４９の何れか一項に記載の方法。
【請求項５１】
試料が血清又は血漿である、請求項１９から５０の何れか一項に記載の方法。
【請求項５２】
患者をＴｈ２経路阻害剤による治療的処置に対する可能性のある応答者及び非応答者へと層別化するための、喘息患者又はＴｈ２関連疾患患者から得られた生物学的試料中のＩＬ−１３のレベルを測定するためのキットの使用であって、ＩＬ−１３レベルが請求項１から１８の何れか一項に記載の方法によって決定される、使用。
【請求項５３】
キットの使用が、
ａ）患者から得られた試料中のＩＬ−１３レベルを測定すること；
ｂ）工程（ａ）におけるＩＬ−１３のレベルを基準レベルと比較すること；及び
ｃ）前記患者を工程（ｂ）で得られた比較に基づいて応答者又は非応答者のカテゴリーに層別化すること
を含む、請求項５２に記載の使用。
【請求項５４】
基準レベルが基準集団におけるＩＬ−１３の中央値レベルである、請求項５３に記載の使用。
【請求項５５】
患者からの試料中のＩＬ−１３のレベルが中央値レベル以上である場合、使用が、Ｔｈ２経路阻害剤を含む治療を選択することを含む、請求項５４に記載の使用。
【請求項５６】
患者が中等度から重度の喘息に罹患している、請求項５２から５５の何れか一項に記載の使用。
【請求項５７】
喘息又はＴｈ２関連疾患がコルチコステロイドでコントロール不良である、請求項５２から５６の何れか一項に記載の使用。
【請求項５８】
コルチコステロイドが吸入コルチコステロイドである、請求項５７に記載の使用。
【請求項５９】
患者が第二のコントローラーでも治療されている、請求項５２から５８の何れか一項に記載の使用。
【請求項６０】
Ｔｈ２経路阻害剤が、ＩＴＫ、ＢＴＫ、ＩＬ−９の阻害剤（例えばＭＥＤＩ−５２８）、ＩＬ−５の阻害剤（例えばメポリズマブ、ＣＡＳ番号１９６０７８−２９−２；レシリズマブ（ｒｅｓｉｌｉｚｕｍａｂ））、ＩＬ−１３の阻害剤（例えばＩＭＡ−０２６、ＩＭＡ−６３８（アンルキンズマブとも言う、ＩＮＮ番号９１０６４９−３２−０；ＱＡＸ−５７６；ＩＬ４／ＩＬ１３トラップ）、トラロキヌマブ（ＣＡＴ−３５４とも言う、ＣＡＳ番号１０４４５１５−８８−９）；ＡＥＲ−００１、ＡＢＴ−３０８（ヒト化１３Ｃ５．５抗体とも言う）、ＩＬ−４の阻害剤（例えばＡＥＲ−００１、ＩＬ４／ＩＬ１３トラップ）、ＩＬ−１７、ＯＸ４０Ｌ、ＴＳＬＰ、ＩＬ−２５、ＩＬ−３３及びＩｇＥの阻害剤（例えばＸＯＬＡＩＲ（登録商標）、ＱＧＥ−０３１；ＭＥＤＩ−４２１２；キリズマブ）；及び受容体、例えばＩＬ−９受容体、ＩＬ−５受容体の阻害剤（例えばＭＥＤＩ−５６３（ベンラリズマブ、ＣＡＳ番号１０４４５１１−０１−４））、ＩＬ−４受容体アルファの阻害剤（例えばＡＭＧ−３１７、ＡＩＲ−６４５、デュピルマブ）、ＩＬ−１３受容体アルファ１の阻害剤（例えばＲ−１６７１）及びＩＬ−１３受容体アルファ２、ＯＸ４０、ＴＳＬＰ−Ｒ、ＩＬ−７Ｒアルファ（ＴＳＬＰの共受容体）、ＩＬ１７ＲＢ（ＩＬ−２５の受容体）、ＳＴ２（ＩＬ−３３の受容体）、ＣＣＲ３、ＣＣＲ４、ＣＲＴＨ２の阻害剤（例えばＡＭＧ−８５３、ＡＰ７６８、ＡＰ−７６１、ＭＬＮ６０９５、ＡＣＴ１２９９６８）、ＦｃｅｐｓｉｌｏｎＲＩ、ＦｃｅｐｓｉｌｏｎＲＩＩ／ＣＤ２３（ＩｇＥの受容体）の阻害剤、Ｆｌａｐの阻害剤（例えばＧＳＫ２１９０９１５）、Ｓｙｋキナーゼの阻害剤（Ｒ−３４３、ＰＦ３５２６２９９）；ＣＣＲ４の阻害剤（ＡＭＧ−７６１）、ＴＬＲ９の阻害剤（ＱＡＸ−９３５）であるか、又はＣＣＲ３、ＩＬ５、ＩＬ３、ＧＭ−ＣＳＦの多重サイトカイン阻害剤（例えばＴＰＩ  ＡＳＭ８）である、請求項５２から５９の何れか一項に記載の使用。
【請求項６１】
Ｔｈ２経路阻害剤がＩＬ−１３経路阻害剤又は抗ＩｇＥ結合剤である、請求項６０に記載の使用。
【請求項６２】
Ｔｈ２経路阻害剤が抗ＩＬ−１３抗体又は抗ＩＬ−１３二重特異性抗体である、請求項６０に記載の方法。
【請求項６３】
抗ＩＬ−１３抗体が、配列番号１、３、及び２４から選択される配列を含むＶＨ、及び配列番号２、４、及び２５から選択される配列を含むＶＬを含む抗体；ＨＶＲＨ１、ＨＶＲＨ２、ＨＶＲＨ３、ＨＶＲＬ１、ＨＶＲＬ２、及びＨＶＲＬ３を含み、各ＨＶＲが配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、配列番号９、及び配列番号１０のアミノ酸配列を有する抗ＩＬ−１３抗体；又はレブリキズマブである、請求項６２に記載の使用。
【請求項６４】
抗ＩＬ−１３二重特異性抗体が、配列番号１、３、及び２４から選択される配列を含むＶＨ、及び配列番号２、４、及び２５から選択される配列を含むＶＬを含む抗ＩＬ−１３  ＶＨ／ＶＬユニット；又はＨＶＲＨ１、ＨＶＲＨ２、ＨＶＲＨ３、ＨＶＲＬ１、ＨＶＲＬ２、及びＨＶＲＬ３を含み、各ＨＶＲが配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、配列番号９、及び配列番号１０のアミノ酸配列を有する抗ＩＬ−１３  ＶＨ／ＶＬユニットを含む、請求項６２に記載の使用。
【請求項６５】
抗ＩＬ−１３二重特異性抗体が、抗ＩＬ−４／抗ＩＬ−１３二重特異性抗体又は抗ＩＬ−１３／抗ＩＬ−１７二重特異性抗体である、請求項６２に記載の使用。
【請求項６６】
抗ＩＬ−１３／抗ＩＬ−１７二重特異性抗体が、ＨＶＲＨ１、ＨＶＲＨ２、ＨＶＲＨ３、ＨＶＲＬ１、ＨＶＲＬ２、及びＨＶＲＬ３を含み、各ＨＶＲが配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、配列番号９、及び配列番号１０のアミノ酸配列を有する抗ＩＬ−１３  ＶＨ／ＶＬユニット；及びＨＶＲＨ１、ＨＶＲＨ２、ＨＶＲＨ３、ＨＶＲＬ１、ＨＶＲＬ２、及びＨＶＲＬ３を含み、各ＨＶＲが配列番号２６、配列番号２７、配列番号２８、配列番号２９、配列番号３０、及び配列番号３１のアミノ酸配列を有する抗ＩＬ−１７  ＶＨ／ＶＬユニットを含む、請求項６５に記載の使用。
【請求項６７】
抗ＩＬ−１３／抗ＩＬ−１７二重特異性抗体が、配列番号１、３、及び２４から選択されるアミノ酸配列を含むＶＨ、及び配列番号２、４、及び２５から選択されるアミノ酸配列を含むＶＬを含む抗ＩＬ−１３  ＶＨ／ＶＬユニット；及び配列番号３２のアミノ酸配列を含むＶＨ、及び配列番号３３のアミノ酸配列を含むＶＬを含む抗ＩＬ−１７  ＶＨ／ＶＬユニットを含む、請求項６６に記載の使用。
【請求項６８】
Ｔｈ２経路阻害剤が抗ＩｇＥ抗体である、請求項６１に記載の使用。
【請求項６９】
抗ＩｇＥ抗体が（ｉ）ＸＯＬＡＩＲ（登録商標）抗体又は（ｉｉ）可変重鎖領域及び可変軽鎖領域を含む抗ＩｇＥ抗体であり、該可変重鎖領域は配列番号２２であり、該可変軽鎖領域は配列番号２３である、請求項６８に記載の使用。
【請求項７０】
患者がヒトである、請求項５２から６９の何れか一項に記載の使用。
【請求項７１】
試料が血清又は血漿である、請求項５２から７０の何れか一項に記載の使用。
【請求項７２】
喘息患者又はＴｈ２関連疾患患者を層別化するためのキットであって、
ａ）患者から得られた試料中のＩＬ−１３レベルを測定するための試薬；並びに
ｂ）（ｉ）請求項１から１８の何れか一項に記載の方法に従ってＩＬ−１３レベルを測定し；（ｉｉ）測定されたＩＬ−１３レベルを基準レベルと比較し；及び（ｉｉｉ）比較に基づいて前記患者を応答者又は非応答者のカテゴリーに層別化するための説明書
を含む、キット。
【請求項７３】
患者がＴｈ２経路阻害剤に応答する可能性があるかを決定するための添付文書を含む、請求項７２に記載のキット。
【請求項７４】
請求項５２から７１の何れか一項に記載の使用を説明する情報を含んだ添付文書を更に含む、請求項７２又は請求項７３に記載のキット。
【請求項７５】
生物学的試料を保持するための空の容器を更に含む、請求項７２から７４の何れか一項に記載のキット。
【請求項７６】
重度の増悪を被る可能性があるとして喘息患者を同定する方法であって、
患者から試料を得ること、
請求項１から１８の何れか一項に記載の方法に従って試料中のＩＬ−１３のレベルを測定し、試料中で検出されたＩＬ−１３レベルを基準レベルと比較すること、
及び
試料中で測定されたＩＬ−１３レベルが基準レベルと比較して上昇した場合、患者が重度の増悪を被る可能性があると予測すること
を含む、方法。
【請求項７７】
基準レベルが基準集団におけるＩＬ−１３の中央値レベルである、請求項７６に記載の方法。
【請求項７８】
ペリオスチン、ＦｅＮＯ、好酸球、及びＩｇＥから選択される１つ又は複数のＴｈ２関連バイオマーカーのレベルを測定することを更に含む、請求項１９から５１若しくは７６から７７の何れか一項に記載の方法、又は請求項５２から７１の何れか一項に記載の使用、又は請求項７２から７５の何れか一項に記載のキット。
【請求項７９】
血中好酸球のレベルを測定することを更に含む、請求項１９から５１若しくは７６から７７の何れか一項に記載の方法、又は請求項５２から７１の何れか一項に記載の使用、又は請求項７２から７５の何れか一項に記載のキット。
【請求項８０】
Ｔｈ２関連疾患が、喘息、アトピー性皮膚炎、特発性肺線維症、アレルギー性鼻炎、線維症、炎症性腸疾患、潰瘍性大腸炎、クローン病、慢性閉塞性肺疾患、及び肝線維症から選択される、請求項１９から４５、４７から５１、若しくは７８から７９の何れか一項に記載の方法、又は請求項５２から５５若しくは５７から７１の何れか一項に記載の使用、又は請求項７２から７５の何れか一項に記載のキット。
【請求項８１】
Ｔｈ２関連疾患が特発性肺線維症又はアトピー性皮膚炎である、請求項８０に記載の方法、使用、又はキット。
【請求項８２】
投与工程が、４週間ごとに３７．５ｍｇの抗ＩＬ−１３抗体又は４週間ごとに１２５ｍｇの抗ＩＬ−１３抗体を投与することを含む、請求項３９に記載の方法。
【請求項８３】
ペリオスチン、ＦｅＮＯ、好酸球、及びＩｇＥから選択される１つ又は複数のＴｈ２関連バイオマーカーのレベルを測定することを更に含む、請求項８２に記載の方法。
【請求項８４】
Ｔｈ２関連バイオマーカーが血中好酸球である、請求項８３に記載の方法。
【請求項８５】
血中好酸球レベルが３００細胞／マイクロリッター又はそれ以上と決定される、請求項８４に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
（関連出願とのクロスリファレンス）
本出願は、２０１５年３月１６日に出願された米国仮出願第６２／１３３，６９３号の優先権の利益を主張するものであり、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
配列表
【０００２】
本出願は、ＥＦＳ−Ｗｅｂを介して提出された配列リストを含み、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。２０１６年３月９日に作成された前記ＡＳＣＩＩコピーはＰ３２６７５−ＷＯ＿ＳＬ．ｔｘｔと命名され、大きさは２０２７２バイトである。
分野
【０００３】
ＩＬ−１３を検出及び定量する方法が提供される。また、Ｔｈ２経路阻害剤である特定の治療剤による治療のための、Ｔｈ２関連疾患を有する患者の診断、選択及び同定方法も提供される。
背景
【０００４】
インターロイキン（ＩＬ）−１３は、Ｔヘルパー２型（Ｔｈ２）炎症の重要なメディエーターと考えられており、ＩＬ−１３レベルの上昇は、限定されるものではないが、喘息、炎症性腸疾患、特発性肺線維症（ＩＰＦ）、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、及びアトピー性皮膚炎などを含む多くの疾患に関連付けられている（Oh CK, et al., Eur Respir Rev 19:46-54 (2010); Fahy JV, et al., Nat Rev Immunol 15:57-65 [2015]）。ＩＬ−１３は、Ｔｈ２細胞、好塩基球、好酸球、及び肥満細胞並びに気道上皮細胞及び２型自然リンパ球系細胞を含む多くの細胞型によって産生される。ＩＬ−１３は、ＩＬ−４と共有され、ＳＴＡＴ−６シグナル伝達経路を活性化するヘテロ二量体受容体であるＩＬ−４Ｒα／ＩＬ−１３Ｒα１に結合する（Hershey GK, J Allergy Clin Immunol 111(4):677-90 [2003]）。それは、粘液産生、上皮細胞線維症、ＩｇＥ産生、平滑筋過形成、並びに炎症細胞の動員及び活性化を含む特定の症例における喘息の臨床症状に関連している（Hershey GK, J Allergy Clin Immunol 111(4):677-90 [2003]; Fahy JV, et al., Nat Rev Immunol 15:57-65 [2015]）。Ｔｈ２炎症は、２型自然リンパ球系細胞（ＩＬＣ２）を含むＴｈ２細胞に加えて幾つかの細胞型の活性を含むので、「Ｔｈ２炎症」は最近は科学文献において「２型炎症」と呼ばれている。Ｔｈ２細胞に加えて、ＩＬＣ２は、ＩＬ−５及びＩＬ−１３などのサイトカインの重要な供給源として同定されている。従って、Ｔｈ２サイトカインとして以前に同定されているＩＬ−１３及びＩＬ−５などのサイトカインは、現在、科学文献において２型サイトカインとも呼ばれる。同様に、このようなサイトカインに関連する疾患状態は、現在、２型駆動性疾患又は２型関連疾患とも呼ばれる。例えば、Noonan et al., J. Allergy Clin Immunol., 132(3): 567-574 (2013); Hanania et al., Thorax 70(8): 748-56 (2015)；及びCai et al., Bioanalysis 8(4): 323-332 (2016)を参照。例えば、科学文献における用語「２型喘息」の使用は、喘息の理解の進化を反映し、肺組織中のＩＬ−５及びＩＬ−１３を含む高レベルのインターロイキンをによって特徴付けられる。従って、「Ｔｈ２」及び「２型」は、本明細書では互換的に使用される。
【０００５】
ＩＰＦは、肺に限定される未知の病因の線維化間質性肺炎の特定の形態であり、間質性線維症の程度の差異によって特徴付けられる（Raghu G, et al., Am J Respir Crit Care Med 183:788-824 [2011]）。複数の観察がＩＰＦ病理におけるＩＬ−１３の役割を支持している（Zhu Z, et al., J Clin Invest 103:779-88 [1999]; Lee CG, et al., J Exp Med 194:809-22 [2001]; Park SW, et al., J Korean Med Sci 24:614-20 [2009]; Chandriani S, et al., J Immunol 193:111-9 [2014]）。ＩＬ−１３及びＩＬ−１３受容体の発現は、健常対照と比較して、ＩＰＦを有する患者由来の肺組織及び気管支肺胞洗浄液（ＢＡＬ）において増加する（Jakubzick C, et al., Am J Pathol 164:1989-2001 [2004]; Park SW, et al., J Korean Med Sci 24:614-20 [2009]）。
【０００６】
重要な病原性成分としてのＩＬ−１３による別のＴｈ２炎症関連疾患は、アトピー性皮膚炎（ＡＤ）である。ＩＬ−１３の発現増加は、ＡＤ皮膚において一貫して報告されており（Hamid Q, et al., J Allergy Clin Immunol 98:225-31 [1996]; Jeong CW, et al., Clin Exp Allergy 33:1717-24 [2003]; Tazawa T, et al., Arch Dermatol Res 295:459-64 [2004]; Neis MM, et al., J Allergy Clin Immunol 118:930-7 [2006]; Suarez-Farinas M, et al., J Allergy Clin Immunol 132:361-70 [2013]; Choy DF, et al., J Allergy Clin Immunol.130:1335-43 [2012]）、幾つかの報告は、ＩＬ−１３発現と疾患の重篤度との間の関係を示唆している（La Grutta S, et al., Allergy 60:391-5 [2005]）。従って、ＩＬ−１３及びその受容体は、喘息、ＩＰＦ及びＡＤ、並びに他のＴｈ２関連疾患の治療のための治療標的となっている（Corren J, et al., N Eng J Med 365:1088-98 [2011]; Scheerens H, et al., Clin Exp Allergy 44:38-46 [2014]; Beck LA, et al., N Eng J Med 371:130-9 [2014]）。
【０００７】
ＩＬ−１３は、気管支生検、肺生検、誘発喀痰、ＢＡＬ、鼻洗浄液、鼻咽頭吸引液、及び皮膚生検を含む喘息、ＩＰＦ、及びＡＤの作用部位で検出されている。結果はＴｈ２炎症関連疾患の患者におけるＩＬ−１３レベルの上昇を示し、そのような上昇したＩＬ−１３レベルは、これらの患者を健常対照と区別した（Fitzpatrick AM, et al., J Allergy Clin Immunol 125;851-7.e18 [2010]; Becker AB, J Allergy Clin Immunol 109;S533-8 [2002]; Jakubzick C, et al., Am J Pathol 164:1989-2001 [2004]; Noah TL, et al., Ann Allergy Asthma Immunol 96:304-10 [2006]; Feleszko W, et al., J Allergy Clin Immunol 117:97-102 [2006]; Eickmeier O, et al., Cytokine 50:152-157 [2010]）。しかしながら、直接的な気道及び皮膚のサンプリングは、侵襲的又は不便な採取手順を必要とする。対照的に、末梢血は容易に利用できる組織であり、それの収集は侵襲性の低いプロセスである。ＩＬ−１３の循環レベルは典型的に低いため、これらの低レベルの測定が困難であるため、循環ＩＬ−１３レベルが疾患活動部位のレベルとどのように関連するかについての理解が不足している。従って、疾患メカニズムに対するＩＬ−１３の寄与の我々の理解を容易にするために、Ｔｈ２駆動性疾患における循環ＩＬ−１３レベルを特徴付けるために、高感度かつ高度に特異的な血清ＩＬ−１３アッセイが必要である。
【０００８】
喘息及び他のＴｈ−２関連疾患を治療するために、多数の薬物が市場に出回っているか、又は開発中である。喘息及びＴｈ２関連疾患の標的には、ＩＬ−１３、ＩＬ−１７、ＩＬ−５、及びＩＬ−４などのサイトカイン、及びそれらの受容体、並びにＩｇＥなどのアレルギーに関連する標的が含まれる。市販されている例示的治療分子及び喘息の治療のための開発候補化合物には、限定されないが、オマリズマブ（ＸＯＬＡＩＲ（登録商標））（可溶性ＩｇＥを標的とする）（例えば、Chang et al., J Allergy Clin Immunol. 117 (6): 1203-12 (2006); Winchester et al., N. Engl. J. Med. 355 (12): 1281-2 (2006); Brodlie et al., Arch Dis Child. 97 (7): 604-9 (2012); Bousquet et al., Chest 125 (4): 1378-86 (2004); Schulman, ES, Am J Respir Crit Care Med. 164 (8 Pt 2): S6-11 (2001); Chang et al., Adv Immunol. 93: 63-119 (2007)を参照）、レブリキズマブ（ＩＬ−１３を標的とする）（例えば、Corren et al. (2011) N Engl J Med 365: 1088-98; Scheerens et al. (2012) Am J Respir Crit Care Med 185: A3960; Jia et al. (2012) J Allergy Clin Immunol 130: 647-654 e10；国際公開第２０１２／０８３１３２号を参照）、メポリズマブ（標的ＩＬ−５）（例えば、Haldar et al., N Engl J Med. 2009 Mar 5;360(10):973-84; Nair et al., N Engl J Med. 2009 Mar 5;360(10):985-93; Pavord et al., The Lancet 380 (9842): 651-659, doi:10.1016/S0140-6736(12)60988-Xを参照）、キリズマブ（膜結合ＩｇＥを標的とする）（例えば、米国特許出願公開第２０１３／０２４３７５０号を参照）及びデュピルマブ（ＩＬ−４Ｒα受容体を標的とする）（例えば、Beck LA, et al., N Eng J Med 371:130-9 [2014]を参照）が含まれる。
【０００９】
ヒト喘息は、気道における２型サイトカイン発現及び好酸球性炎症を特徴とするアレルギー性疾患として一般に考えられているが、気道炎症に関しては明らかに異種である。ゲノムアプローチは、２型サイトカイン発現及び好酸球性炎症の程度に対応する喘息気道における異種遺伝子発現パターンを同定した。これらの遺伝子発現パターンは、気管支鏡検査又は喀痰誘導を必要としない好酸球性気道炎症の候補バイオマーカーの同定をもたらした。例えば、国際公開第２００９／１２４０９０号、国際公開第２０１２／０８３１３２号、及びＰＣＴ／ＵＳ２０１４／０６１７５９を参照。近年、中等度−重度喘息を有する患者の臨床試験により、２型気道炎症のメディエーターを標的とした候補生物学的治療法が進歩している。ＩＬ−１３、ＩＬ−５、及びＩＬ−１３を標的とする生物学的療法の臨床試験における臨床的利益のためにの濃縮する可能性のある予測的及び薬力学的バイオマーカーとして出現したバイオマーカーの中には、血清ペリオスチン、呼気中一酸化窒素（ＦＥＮＯ）、及び血液好酸球数がある。Arron et al., 2013, DOI: 10.1513/AnnalsATS.201303-047AW。
【００１０】
上記に議論されるバイオマーカーは、特定の治療法に応答する可能性がより高い喘息患者を同定する可能性を示しているが、今日まで、規制当局によるそのような使用のために検証されかつ承認されていない。更に、以前に同定されたバイオマーカーは、バイオマーカー、患者内若しくは患者間の有意な変動性、又は発達中に変化し得るバイオマーカーレベル（例えば、成人レベルと比較した小児レベル）、又は併用薬物によって変化し得るバイオマーカーレベルを測定するための特定の装置の必要性などのそれらの使用に関連する特定の実際的制限と交絡因子を有する場合がある。また、臨床医又は他者に、喘息及び他のＴｈ２関連疾患の病態生理学的側面、臨床的活動を正確に定義し、治療への応答、予後、又は疾患を発症するリスクを予測することを可能とする臨床的に有効性が確認された診断マーカー、例えばバイオマーカーは同定されていない。従って、喘息患者及びＴｈ２関連疾患を有する患者が治療を求めるので、現在のところ、特定の患者に有効な治療剤の探索に関与するかなりの試行錯誤が存在する。そのような試行錯誤は、最も効果的な治療法を見つけるために患者にかなりのリスク及び不快感を伴うことが多い。
【００１１】
従って、喘息患者、及び他のＴｈ２関連疾患、例えば、限定されるものではないが、アトピー性皮膚炎、アレルギー性鼻炎、鼻ポリープ症、好酸球性食道炎、好酸球増加症候群、ＣＯＰＤ、又はＩＢＤに罹患している患者が、どの治療に対して応答するであろうかを決定し、そのような決定を喘息及び他のＴｈ２関連疾患患者のためのより有効な治療レジメンに組み込むために有効な新しいバイオマーカーを同定する必要が継続している。更に、特定の治療剤による治療から有意に利益を得ると予想される患者の特定のサブセットを同定する努力において、治療剤がそのような特定の患者亜集団における治療上の利点であるか、又は臨床試験でそれが示されている場合、このようなバイオマーカーと疾患状態との関連に関する統計学的及び生物学的に有意で再現性のある情報を不可欠な構成要素として利用することができる。
【００１２】
上記のように、ＩＬ−１３の循環レベル（血清レベル）は、典型的には低いので、現在入手可能な方法では測定が困難である。現在利用可能な方法には、超高感度であると記載されたプラットフォームである、Ｓｉｎｇｕｌｅｘ（登録商標）（Ａｌａｍｅｄａ、ＣＡ）のＥｒｅｎｎａ（登録商標）及びＱｕａｎｔｅｒｉｘ（商標）（Ｌｅｘｉｎｇｔｏｎ、ＭＡ）からのＳｉｍｏａ（商標）を使用する２つのアッセイを含む、市販の酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）及びビーズベースの多重アッセイなどの多くの異なるイムノアッセイ法が含まれる（Fischer et al., The AAPS Journal 17:93-101 [2015]）。そのようなアッセイを使用して、科学文献はアトピー性の個体、喘息の個体、低ｐｇ／ｍＬから亜ｐｇ／ｍＬレベルまでの範囲の報告を伴う健常対照についての広範な循環ＩＬ−１３レベルを報告している。更に、Ｔｈ２炎症性疾患の患者において、健常対照と比較してＩＬ−１３レベルが類似しているのか（Silvestri et al., Clin. Exp. Allergy 36:1373 [2006], Pukelsheim K, et al., PLoS One 5:e14299 [2010], Doucet J, et al., Dis Markers 35:465-74 [2013]）又は上昇しているのか（Lee YC, et al., J Asthma 38:665-71 [2001]; Gauvreau GM, et al., Am J Resp Crit Care 183:1007-14 [2011], Doucet J, et al., Dis Markers 35:465-74 [2013]）どうかの相反するデータがある。
【００１３】
１つの血清ＩＬ−１３アッセイは、St. Ledger et al., J. Imm. Methods 350:161-70 (2009)に記載されており、最初は高感度であると報告された。Ｓｉｎｇｕｌｅｘ（登録商標）から商品名ＥＲＥＮＮＡ（登録商標）で市販されているこのイムノアッセイ法は、独自のモノクローナル抗ＩＬ−１３抗体、常磁性微粒子及び単一分子を検出するデジタル計数システムを組み込んだ特殊計装プラットフォームを使用する（同文献）。その後の刊行物では、Ｅｒｅｎｎａ（登録商標）ＩＬ−１３イムノアッセイはマトリックス干渉の影響を受け、マトリクス干渉の程度が感度及び特異性に有意に影響することが示された。Fraser S, et al., Bioanalysis 6:1123-9 (2014)。この後の報告は、０．３ｐｇ／ｍＬの定量下限（ＬＬＯＱ）の改訂値を示し（同文献）、これは、初期報告からの感度の約５倍の差である。Ｓｉｎｇｕｌｅｘ（登録商標）は最近、市販されているＥｒｅｎｎａ（登録商標）ＩＬ−１３アッセイの新しいバージョン、バージョン２を作成し、その報告されているＬＬＯＱは０．０４ｐｇ／ｍＬである（Ｅｒｅｎｎａ（登録商標）ＩＬ−１３（ｖ２）イムノアッセイキット、カタログ番号０３−０１０９−ｘｘ製品情報シート、ｗｗｗ（ｄｏｔ）ｓｉｎｇｕｌｅｘ（ｄｏｔ）ｃｏｍで入手可能）。しかしながら、特異性に関して公に利用可能な情報はない。更に、カスタマイズされたＳｉｎｇｕｌｅｘ（登録商標）アッセイシステムを使用する研究者は、０．１μｇ／ｍＬのＬＬＯＱを報告したが、試験した喘息及び健常対照の試料の２０〜６０％においてＩＬ−１３を検出することができなかった。Gaye et al., J. Immunol. Methods 426:82-85 (2015)。更に、Ｓｉｍｏａ（商標）ＩＬ−１３イムノアッセイの製品資料では、０．０１１４ｐｇ／ｍＬのＬＬＯＱが報告されているが、特異性に関する情報は提供されていない（Ｓｉｍｏａ（商標）ＩＬ−１３イムノアッセイ製品情報シート、www(dot)quanterix(dot)comで入手可能）。Ｅｒｅｎｎａ（登録商標）及びＳｉｍｏａ（商標）プラットフォームなどの超高感度プラットフォームは、特異性について慎重に評価されなければならないことは、当技術分野において認識されている。上記及びFisher et al., The AAPS Journal 17:93-101 (2015)を参照。特に超高感度プラットフォームでは、検出されたシグナルが分析物の「真の」測定値であることを保証する必要がある。従って、競合又は免疫枯渇工程を介してシグナルの特異性を実証し、特定のシグナルを阻害する能力を示すことが重要である。Fisher et al., The AAPS Journal 17:93-101 (2015)。従って、高感度でかつ特異性の高いＩＬ−１３アッセイが依然として必要とされている。
【００１４】
本明細書に記載された発明は、上記の必要性のあるものを満たし、他の利点を提供する。
【００１５】
特許出願及び刊行物を含む、本明細書中に引用される全ての参考文献は、あらゆる目的のためにその全体が参照により組み込まれる。
【００１６】
要旨
本発明は、試験された試料の９８％超でＩＬ−１３のフェムトグラム／ｍＬレベルを検出する高感度であり、本明細書に記載のように高度に特異的であるＩＬ−１３イムノアッセイ法を少なくとも部分的に提供する。このような高感度かつ高度に特異的なイムノアッセイ法を用いて、Ｔｈ２経路阻害剤（２型経路阻害剤としても知られている）である治療的処置に応答する可能性がより高い、血清ＩＬ−１３レベルが上昇した患者を選択又は同定する方法並びに重度の増悪を被る可能性がより高い喘息患者を特定する方法も本明細書で提供される。
【００１７】
従って、一態様では、試料中のＩＬ−１３を検出及び定量するための高感度及び高特異性イムノアッセイ法が提供される。特定の実施態様では、試料は生物学的試料である。特定の実施態様では、試料は血清である。特定の実施態様では、試料はヒト血清である。幾つかの実施態様では、感度は定量下限（ＬＬＯＱ）として決定される。特定の実施態様では、ＬＬＯＱは０．１ｆｇ／ｍＬ〜３５ｆｇ／ｍＬの間又は約０．１ｆｇ／ｍＬ〜約３５ｆｇ／ｍＬの間である。特定の実施態様では、ＬＬＯＱは１ｆｇ／ｍＬ〜３０ｆｇ／ｍＬの間又は約１ｆｇ／ｍＬ〜約３０ｆｇ／ｍＬの間である。特定の実施態様では、ＬＬＯＱは５ｆｇ／ｍＬ〜２５ｆｇ／ｍＬの間又は約５ｆｇ／ｍＬ〜約２５ｆｇ／ｍＬの間である。特定の実施態様では、ＬＬＯＱは１０ｆｇ／ｍＬ〜２０ｆｇ／ｍＬの間又は約１０ｆｇ／ｍＬ〜約２０ｆｇ／ｍＬの間である。特定の実施態様では、ＬＬＯＱは１４ｆｇ／ｍＬ又は約１４ｆｇ／ｍＬである。
【００１８】
別の態様では、ＩＬ−１３に特異的に結合する第１のモノクローナル捕捉抗体及びＩＬ−１３に特異的に結合する第２のモノクローナル検出抗体を含むサンドイッチイムノアッセイ法が提供され、ここで第１の抗体は第２の抗体とは異なるエピトープに結合する。幾つかの実施態様では、特異性は、イムノアッセイ法を実施する前に過剰量の第１の抗体と試料をインキュベートすることを含む抗原枯渇法（免疫枯渇法とも呼ばれる）によって決定される。このような特定の実施態様では、試料中の抗原が完全に枯渇し、それによりイムノアッセイ法においてＬＬＯＱ未満のシグナルが生成される。幾つかの実施態様では、試料は可溶性ＩＬ−１３Ｒα２を含み、可溶性ＩＬ−１３Ｒα２はイムノアッセイ法の感度又は特異性を妨害しない。
【００１９】
更に別の態様では、イムノアッセイ法は、配列番号５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、配列番号６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び配列番号７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む可変重鎖領域と、配列番号８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、配列番号９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び配列番号１０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む可変軽鎖領域とを含む可変領域を含む第１の抗体を含む。幾つかの実施態様では、第１の抗体は、配列番号１のアミノ酸配列を含む可変重鎖領域及び配列番号２のアミノ酸配列を含む可変軽鎖領域を含む可変領域を含む。特定の実施態様では、第１の抗体は抗体断片である。特定の実施態様では、第１の抗体はＦ（ａｂ’）２又はＦａｂである抗体断片である。特定の実施態様では、第１の抗体はＦａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆａｂ’、又はＦｖである抗体断片である。幾つかの実施態様では、イムノアッセイ法は、配列番号１３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、配列番号１４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び配列番号１５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む可変重鎖領域と、配列番号１６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、配列番号１７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び配列番号１８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む可変軽鎖領域とを含む可変領域を含む第２の抗体を含む。幾つかの実施態様では、第２の抗体は、配列番号１２のアミノ酸配列を含む可変重鎖領域及び配列番号１１のアミノ酸配列を含む可変軽鎖領域を含む可変領域を含む。
【００２０】
更に別の態様では、イムノアッセイ方法は第３の抗体を更に含み、第３の抗体は第２の抗体に特異的に結合し、かつ検出可能に標識される。幾つかの実施態様では、第２の抗体はハプテンで標識され、第３の抗体は抗ハプテン抗体である。幾つかの実施態様では、ハプテンはジゴキシゲニンであり、抗ハプテン抗体は蛍光ラテックスとコンジュゲートした抗ジゴキシゲニンモノクローナル抗体である。
【００２１】
本明細書に提供される治療及び診断の方法は、喘息、好酸球性疾患、呼吸器疾患、ＩＬ−１３媒介性疾患、Ｔｈ２関連疾患、及び／又はＩｇＥ媒介性疾患、又はそれら疾患に関連する症状に罹患した患者に適用することができる喘息と診断されていない患者を含む喘息様の症状を患っている患者は、本明細書で提供される方法に従って治療することができる。
【００２２】
一実施態様によれば、本明細書に提供される方法に従って治療される患者は、喘息、好酸球性疾患、呼吸器疾患、ＩＬ−１３媒介性疾患、Ｔｈ２関連疾患（２型関連疾患）及び／又はＩｇＥ媒介性疾患、又はこれら疾患に関連した症状に罹患している。別の実施態様によれば、本明細書に提供される方法に従って治療される患者は、喘息、好酸球性疾患、呼吸器疾患、ＩＬ−１３媒介性疾患、Ｔｈ２関連疾患及び／又はＩｇＥ媒介性疾患、又はこれら疾患に関連した症状に罹患しており、２歳以上、１２歳以上、１８歳以上、１９歳以上、２から１８歳の間、２から１７歳の間、又は１２〜１７歳の間、又は１２から１８歳の間、２から７５歳の間、１２から７５歳の間、又は１８から７５歳の間である。
【００２３】
幾つかの実施態様では、Ｔｈ２経路阻害剤による治療に応答する可能性がある喘息患者又はＴｈ２関連疾患（２型関連疾患）患者を同定する方法が提供される。幾つかの実施態様では、方法は、基準レベルと比較して、上記要約に記載のＩＬ−１３イムノアッセイ方法の何れかを使用して、患者がＩＬ−１３の上昇したレベルを有するかどうかを判定することを含み、ここで、上昇したＩＬ−１３は、患者がＴｈ２経路阻害剤での治療に応答する可能性があることを示す。
【００２４】
幾つかの実施態様では、重度の増悪を被る可能性がある喘息患者又は呼吸器疾患患者を同定する方法が提供される。幾つかの実施態様では、方法は、基準レベルと比較して、上記要約に記載のＩＬ−１３イムノアッセイ方法の何れかを使用して、患者がＩＬ−１３の上昇したレベルを有するかどうかを判定することを含み、ここで、上昇したＩＬ−１３は、患者が重度の増悪を被る可能性が高いことを示す。幾つかの実施態様では、方法は、患者から生物学的試料を得ること、ＩＬ−１３レベルを測定すること、試料中で検出されたＩＬ−１３レベルを基準レベルと比較すること、及び試料中で測定されたＩＬ−１３レベルが基準レベルと比較して上昇した場合、患者が重度の増悪を被る可能性があると予測することを含む。幾つかの実施態様では、方法は、（ａ）患者からの生物学的試料中のＩＬ−１３を測定すること；（ｂ）（ａ）で測定されたＩＬ−１３レベルを基準レベルと比較すること；及び（ｃ）（ａ）で測定されたＩＬ−１３レベルが基準レベルを上回っている場合に、重度の増悪を被る可能性が高いとして患者を同定することを含む。幾つかの実施態様では、基準レベルは、基準集団におけるＩＬ−１３の中央値レベルである。
【００２５】
幾つかの実施態様では、Ｔｈ２経路阻害剤（２型経路阻害剤）で治療されている喘息患者又はＴｈ２関連疾患（２型関連疾患）患者をモニタリングする方法が提供される。幾つかの実施態様では、方法は、上記要約に記載のＩＬ−１３イムノアッセイ方法の何れかを使用して、患者がＩＬ−１３の上昇したレベルを有するかどうかを決定することを含む。幾つかの実施態様では、方法は、Ｔｈ２経路阻害剤の治療レジメンを決定することを更に含む。そのような幾つかの実施態様では、ＩＬ−１３レベルの測定は、Ｔｈ２経路阻害剤による治療の継続又はＴｈ２経路阻害剤による治療の中止を示す。
【００２６】
本明細書に記載の実施態様の何れかにおいて、方法は、ａ）上記要約に記載のＩＬ−１３イムノアッセイ方法の何れかを使用して患者から得られた試料中のＩＬ−１３のレベルを決定する工程；及びｂ）ａ）で決定されたＩＬ−１３のレベルを基準レベルと比較する工程を含み得る。幾つかの実施態様では、方法は、ｃ）前記患者を工程（ｂ）で得られた比較に基づいて応答者又は非応答者のカテゴリーに層別化する工程を更に含む。幾つかの実施態様では、方法は、患者が応答者である場合、Ｔｈ２経路阻害剤を含む治療を選択することを更に含む。
【００２７】
幾つかの実施態様では、喘息又はＴｈ２関連疾患（２型関連疾患）に罹患している患者のＴｈ２経路阻害剤（２型経路阻害剤）を含む治療に対する応答を予測する方法が提供される。幾つかの実施態様では、方法は、患者から生物学的試料を得ること、及び上記要約に記載のＩＬ−１３イムノアッセイ方法の何れかを使用して試料中のＩＬ−１３レベルを測定することを含む。幾つかの実施態様では、方法は、試料中で検出されたＩＬ−１３レベルを基準レベルと比較することを含む。幾つかの実施態様では、方法は、試料中で測定されたＩＬ−１３レベルが基準レベルと比較して上昇したときに患者が治療に応答すると予測すること、及び試料中で測定されたＩＬ−１３レベルが基準レベルと比較して低下したときに患者が治療に応答しないと予測することを含む。
【００２８】
幾つかの実施態様では、Ｔｈ２経路阻害剤（２型経路阻害剤）治療に対する喘息患者又はＴｈ２関連疾患患者（２型関連疾患）の応答性を予測する方法が提供される。幾つかの実施態様では、方法は、上記要約に記載のＩＬ−１３イムノアッセイ方法の何れかを使用して患者からの生物学的試料中のＩＬ−１３レベルを測定することを含む。幾つかの実施態様では、基準レベルと比較して上昇したＩＬ−１３レベルは、患者をＴｈ２経路阻害剤治療に応答する可能性のあるものとして同定する。
【００２９】
幾つかの実施態様では、Ｔｈ２経路阻害剤（２型経路阻害剤）を含む治療に応答する可能性がある、喘息又はＴｈ２関連疾患（２型関連疾患）に罹患している患者を同定する方法が提供される。幾つかの実施態様では、方法は、上記要約に記載のＩＬ−１３イムノアッセイ方法の何れかを使用して患者からの生物学的試料中のＩＬ−１３レベルを測定することを含む。幾つかの実施態様では、方法は、測定されたＩＬ−１３レベルを基準レベルと比較することを更に含む。幾つかの実施態様では、方法は、測定されたＩＬ−１３レベルが基準レベルを上回っている場合にＴｈ２経路阻害剤を含む治療に応答する可能性が高いとして患者を同定することを含む。
【００３０】
幾つかの実施態様では、喘息又はＴｈ２関連疾患（２型関連疾患）を有する患者を治療する方法が提供される。幾つかの実施態様では、方法は、上記要約に記載のＩＬ−１３イムノアッセイ方法の何れかを使用して患者からの生物学的試料中のＩＬ−１３レベルを測定することを含む。幾つかの実施態様では、方法は、測定されたＩＬ−１３レベルを基準レベルと比較することを含む。幾つかの実施態様では、方法は、測定されたＩＬ−１３レベルが基準レベルを上回っている場合にＴｈ２経路阻害剤を含む治療に応答する可能性が高いとして患者を同定することを含む。幾つかの実施態様では、方法は、測定されたＩＬ−１３レベルが基準レベルを上回った場合にその治療薬を投与し、それにより喘息又はＴｈ２関連疾患を治療することを含む。
【００３１】
幾つかの実施態様では、患者における喘息又はＴｈ２関連疾患（２型関連疾患）を治療する方法は、治療的有効量のＴｈ２経路阻害剤（２型経路阻害剤）を患者に投与することを含み、ここで、患者から得られた生物学的試料は、上記要約に記載のＩＬ−１３イムノアッセイ方法の何れかを使用して上昇したＩＬ−１３レベルを有すると決定されている。
【００３２】
幾つかの実施態様では、患者における喘息又はＴｈ２関連疾患（２型関連疾患）を治療する方法は、治療的有効量のＴｈ２経路阻害剤（２型経路阻害剤）を患者に投与することを含み、ここで、患者は、上記要約に記載のＩＬ−１３イムノアッセイ方法の何れかを使用して患者から得られた生物学的試料中の上昇したＩＬ−１３レベルに基づいて、治療のために選択されている。
【００３３】
本明細書に記載の実施態様の何れにおいても、基準レベルは、基準集団におけるＩＬ−１３の中央値、平均値、又は平均レベルであり得る。本明細書に記載の実施態様の何れにおいても、基準レベルは、基準集団におけるＩＬ−１３の中央値レベルであり得る。本明細書に記載の実施態様の何れにおいても、基準レベルは、基準集団におけるＩＬ−１３の平均値レベルであり得る。本明細書に記載の実施態様の何れにおいても、基準レベルは、基準集団におけるＩＬ−１３の平均レベルであり得る。非限定的な例示的な基準集団には、喘息患者、中等度から重度の喘息患者、特発性肺線維症の患者、アトピー性皮膚炎患者、健常個体、並びに健常個体及び前述の患者の何れかを含む群が含まれる。幾つかの実施態様では、基準集団は、中等度から重度の喘息を有する患者を含む。更なる非限定的な例示的な基準集団は、喘息、アトピー性皮膚炎、特発性肺線維症、アレルギー性鼻炎、線維症、炎症性腸疾患、潰瘍性大腸炎、クローン病、慢性閉塞性肺疾患、及び肝線維症などのＴｈ２関連疾患を有する患者を含む。
【００３４】
幾つかの実施態様では、ＩＬ−１３のレベルが基準レベルを上回る場合、患者は応答者のカテゴリーに層別化される。
【００３５】
幾つかの実施態様では、生物学的試料は、血液、血清、血漿から選択される。幾つかの実施態様では、生物学的試料は血清である。幾つかの実施態様では、生物学的試料は血漿である。幾つかの実施態様では、生物学的試料は喘息患者から得られる。特定の実施態様では、上述した方法に従う患者は中等度から重度の喘息に罹患している。特定の実施態様では、喘息又は呼吸器疾患はコルチコステロイドでコントロール不良である。特定の実施態様では、コルチコステロイドは吸入コルチコステロイドである。特定の実施態様では、吸入コルチコステロイドは、キュバール（登録商標）、パルミコート（登録商標）、シンビコート（登録商標）、Ａｅｒｏｂｉｄ（登録商標）、フロベント（登録商標）、フルナーゼ（登録商標）、アドベア（登録商標）又はアズマコート（登録商標）である。一実施態様において、患者はまた、第二のコントローラーで治療されている。特定の実施態様では、第二のコントローラーは長時間作用型気管支拡張薬（ＬＡＢＤ）である。特定の実施態様では、ＬＡＢＤは長時間作用型β２アゴニスト（ＬＡＢＡ）、ロイコトリエン受容体アンタゴニスト（ＬＴＲＡ）、長時間作用型ムスカリンアンタゴニスト（ＬＡＭＡ）、テオフィリン、又は経口コルチコステロイド（ＯＣＳ）である。特定の実施態様では、ＬＡＢＤはシンビコート（登録商標）、アドベア（登録商標）、ブロバナ（登録商標）、フォラジル（登録商標）、ＰｅｒｆｏｒｏｍｉｓｔＴＭ、又はセレベント（登録商標）である。
【００３６】
本明細書に記載の実施態様の何れかにおいて、患者は０〜１７歳、２〜１７歳、２〜６歳、６〜１１歳、８〜１７歳、１２〜１７歳、２歳以上、６歳以上、又は１２歳以上であり得る。幾つかの実施態様では、患者は１８歳以上である。本明細書に記載の実施態様の何れかにおいて、患者はヒトであり得る。
【００３７】
本明細書に記載の実施態様の何れかにおいて、Ｔｈ２経路阻害剤は、標的ＩＴＫ、ＢＴＫ、ＩＬ−９（例えばＭＥＤＩ−５２８）、ＩＬ−５（例えばメポリズマブ、ＣＡＳ番号１９６０７８−２９−２；レシリズマブ（ｒｅｓｉｌｉｚｕｍａｂ））、ＩＬ−１３（例えばＩＭＡ−０２６、ＩＭＡ−６３８（アンルキンズマブとも言う、ＩＮＮ番号９１０６４９−３２−０；ＱＡＸ−５７６；ＩＬ４／ＩＬ１３トラップ）、トラロキヌマブ（ＣＡＴ−３５４とも言う、ＣＡＳ番号１０４４５１５−８８−９）；ＡＥＲ−００１、ＡＢＴ−３０８（ヒト化１３Ｃ５．５抗体とも言う）、ＩＬ−４（例えばＡＥＲ−００１、ＩＬ４／ＩＬ１３トラップ）、ＩＬ−１７、ＯＸ４０Ｌ、ＴＳＬＰ、ＩＬ−２５、ＩＬ−３３及びＩｇＥ（例えばＸＯＬＡＩＲ（登録商標）、ＱＧＥ−０３１；ＭＥＤＩ−４２１２；キリズマブ）；及び受容体、例えばＩＬ−９受容体、ＩＬ−５受容体（例えばＭＥＤＩ−５６３（ベンラリズマブ、ＣＡＳ番号１０４４５１１−０１−４））、ＩＬ−４受容体アルファ（例えばＡＭＧ−３１７、ＡＩＲ−６４５、デュピルマブ）、ＩＬ−１３受容体アルファ１（例えばＲ−１６７１）及びＩＬ−１３受容体アルファ２、ＯＸ４０、ＴＳＬＰ−Ｒ、ＩＬ−７Ｒアルファ（ＴＳＬＰの共受容体）、ＩＬ１７ＲＢ（ＩＬ−２５の受容体）、ＳＴ２（ＩＬ−３３の受容体）、ＣＣＲ３、ＣＣＲ４、ＣＲＴＨ２（例えばＡＭＧ−８５３、ＡＰ７６８、ＡＰ−７６１、ＭＬＮ６０９５、ＡＣＴ１２９９６８）、ＦｃｅｐｓｉｌｏｎＲＩ、ＦｃｅｐｓｉｌｏｎＲＩＩ／ＣＤ２３（ＩｇＥの受容体）、Ｆｌａｐ（例えばＧＳＫ２１９０９１５）、Ｓｙｋキナーゼ（Ｒ−３４３、ＰＦ３５２６２９９）；ＣＣＲ４（ＡＭＧ−７６１）、ＴＬＲ９（ＱＡＸ−９３５）を阻害し得るか、又はＣＣＲ３、ＩＬ５、ＩＬ３、ＧＭ−ＣＳＦの多重サイトカイン阻害剤（例えばＴＰＩ  ＡＳＭ８）である。
【００３８】
本明細書に記載の実施態様の何れかにおいて、Ｔｈ２経路阻害剤（２型経路阻害剤）は、ＩＬ−１３阻害剤、ＩＬ−１３及びＩＬ−４の両方を阻害する薬剤、ＩＬ−１３及びＩＬ−１７の両方を阻害する薬剤、又は抗ＩｇＥ結合剤である。本明細書に記載の実施態様の何れかにおいて、Ｔｈ２経路阻害剤は抗ＩＬ−１３抗体である。特定の実施態様では、抗ＩＬ−１３抗体は、配列番号１、３、及び２４から選択される配列を含むＶＨ、及び配列番号２、４、及び２５から選択される配列を含むＶＬを含む抗体；ＨＶＲＨ１、ＨＶＲＨ２、ＨＶＲＨ３、ＨＶＲＬ１、ＨＶＲＬ２、及びＨＶＲＬ３を含み、各ＨＶＲが配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、配列番号９、及び配列番号１０のアミノ酸配列を有する抗ＩＬ−１３抗体；又はレブリキズマブである。
【００３９】
幾つかの実施態様では、患者は４週間ごとに３７．５ｍｇ又は１２５ｍｇ又は２５０ｍｇの抗ＩＬ１３抗体又はレブリキズマブのフラット用量を投与される。幾つかの実施態様では、抗ＩＬ−１３抗体は皮下に投与される。ある実施態様において、抗ＩＬ−１３抗体は、予め充填されたシリンジ又は自動注入装置を使用して投与される。
【００４０】
特定の実施態様では、抗ＩＬ−１３抗体は二重特異性抗体である。特定の実施態様では、抗ＩＬ−１３抗体はＩｌ−４にも結合する二重特異性抗体である。特定の実施態様では、抗ＩＬ−１３抗体はＩｌ−１７にも結合する二重特異性抗体である。幾つかの実施態様では、抗ＩＬ−１３二重特異性抗体は、配列番号１、３、及び２４から選択される配列を含むＶＨ、及び配列番号２、４、及び２５から選択される配列を含むＶＬを含む抗ＩＬ−１３  ＶＨ／ＶＬユニット；又はＨＶＲＨ１、ＨＶＲＨ２、ＨＶＲＨ３、ＨＶＲＬ１、ＨＶＲＬ２、及びＨＶＲＬ３を含み、各ＨＶＲが配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、配列番号９、及び配列番号１０のアミノ酸配列を有する抗ＩＬ−１３  ＶＨ／ＶＬユニットを含む。
【００４１】
本明細書に記載の実施態様の何れかにおいて、Ｔｈ２経路阻害剤（２型経路阻害剤）は抗ＩＬ−１３／抗ＩＬ−１７二重特異性抗体である。幾つかの実施態様では、抗ＩＬ−１３／抗ＩＬ−１７二重特異性抗体は、ＨＶＲＨ１、ＨＶＲＨ２、ＨＶＲＨ３、ＨＶＲＬ１、ＨＶＲＬ２、及びＨＶＲＬ３を含み、各ＨＶＲが配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、配列番号９、及び配列番号１０のアミノ酸配列を有する抗ＩＬ−１３  ＶＨ／ＶＬユニット；及びＨＶＲＨ１、ＨＶＲＨ２、ＨＶＲＨ３、ＨＶＲＬ１、ＨＶＲＬ２、及びＨＶＲＬ３を含み、各ＨＶＲが配列番号２６、配列番号２７、配列番号２８、配列番号２９、配列番号３０、及び配列番号３１のアミノ酸配列を有する抗ＩＬ−１７  ＶＨ／ＶＬユニットを含む。幾つかの実施態様では、抗ＩＬ−１３／抗ＩＬ−１７二重特異性抗体は、配列番号１、３、及び２４から選択されるアミノ酸配列を含むＶＨ、及び配列番号２、４、及び２５から選択されるアミノ酸配列を含むＶＬを含む抗ＩＬ−１３  ＶＨ／ＶＬユニット；及び配列番号３２のアミノ酸配列を含むＶＨ、及び配列番号３３のアミノ酸配列を含むＶＬを含む抗ＩＬ−１７  ＶＨ／ＶＬユニットを含む。
【００４２】
本明細書に記載の実施態様の何れかにおいて、Ｔｈ２経路阻害剤は抗ＩｇＥ抗体であり得る。特定の実施態様では、抗ＩｇＥ抗体は、（ｉ）ＸＯＬＡＩＲ（登録商標）抗体又は（ｉｉ）可変重鎖領域及び可変軽鎖領域を含む抗ＩｇＥ抗体であり、ここで、可変重鎖領域は配列番号２２であり、可変軽鎖領域は配列番号２３である。
【００４３】
一実施態様において、本発明によるＴｈ２経路阻害剤（２型経路阻害剤）で治療された患者は、一種、二種、三種、又はそれ以上の治療剤でまた治療される。一実施態様において、患者は喘息患者である。一実施態様によれば、患者はＴｈ２経路阻害剤と一種、二種、三種以上の治療剤で治療され、ここで、Ｔｈ２阻害剤以外の少なくとも一種の治療剤は、コルチコステロイド、ロイコトリエンアンタゴニスト、ＬＡＢＡ、コルチコステロイド／ＬＡＢＡの併用組成物、テオフィリン、クロモグリク酸ナトリウム、ネドクロミルナトリウム、オマリズマブ、ＬＡＭＡ、ＭＡＢＡ、５−リポキシゲナーゼ活性化タンパク質（ＦＬＡＰ）阻害剤、又は酵素ＰＤＥ−４阻害剤である。本発明の一態様によれば、Ｔｆ２経路阻害剤は、上昇したＩＬ−１３を有すると診断された喘息患者に投与され、ここでその診断は、上記要旨に記載のＩＬ−１３イムノアッセイ方法の何れかの使用を含む。一つの更なる実施態様において、喘息患者は治療の前にコルチコステロイドでコントロール不良である。別の実施態様では、喘息患者はまた、第二のコントローラーで治療されている。一実施態様において、第二のコントローラーはコルチコステロイド、ＬＡＢＡ又はロイコトリエンアンタゴニストである。更なる実施態様において、喘息患者は中等度から重度の喘息に罹患している。従って、一実施態様では、Ｔｈ２経路阻害剤で治療されるべき患者は、Ｔｈ２経路阻害剤による治療前にコルチコステロイドでコントロール不良である中等度から重度の喘息患者であり、その後、Ｔｈ２経路阻害剤と一種、二種、三種又はそれ以上のコントローラーで治療される。一実施態様において、少なくとも一のコントローラーはコルチコステロイドである。更なる実施態様において、そのような患者はＴｈ２経路阻害剤、コルチコステロイド又は別のコントローラーで治療される。別の実施態様では、患者は軽度の喘息に罹患しているが、コルチコステロイドで治療されていない。治療剤は、Ｔｈ２阻害剤と比較した場合、異なる治療サイクルを有していてもよく、その結果、患者の治療の一部としてのＴｈ２阻害剤に比べて異なる時間で投与することができる。従って、一実施態様によれば、この発明による治療の方法は、患者へＴＨ２経路阻害薬を投与し、及び任意で、少なくとも一つ、二つ又は三つの追加の治療剤を投与する工程を含む。一実施態様において、Ｔｈ２経路阻害剤は別の治療剤とともに組成物中に存在する。別の実施態様では、Ｔｈ２経路阻害剤は、別の治療剤とともに組成物中に存在しない。
【００４４】
別の実施態様によれば、本発明は、配列番号１、３、及び２４から選択される配列を含むＶＨ、及び配列番号２、４、及び２５から選択される配列を含むＶＬを含む抗ＩＬ−１３抗体；ＨＶＲＨ１、ＨＶＲＨ２、ＨＶＲＨ３、ＨＶＲＬ１、ＨＶＲＬ２、及びＨＶＲＬ３を含み、各ＨＶＲが配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、配列番号９、及び配列番号１０のアミノ酸配列を有する抗ＩＬ−１３抗体；又はレブリキズマブをフラット用量として投与することを含む、喘息を治療するための方法を含む。一実施態様において、抗ＩＬ−１３抗体は、３７．５ｍｇのフラット用量として（すなわち、体重に依存せず）、又は１２５ｍｇのフラット用量、又は２５０ｍｇのフラット用量として４週間に１回皮下注射投与される。幾つかの実施態様では、患者は、上記要約に記載のＩＬ−１３イムノアッセイ方法の何れかを使用して、上昇したＩＬ−１３を有すると診断される。幾つかの実施態様では、患者は、ペリオスチン、ＦｅＮＯ、好酸球、及びＩｇＥから選択される１つ又は複数のＴｈ２関連バイオマーカーの上昇したレベルを有すると更に診断される。幾つかの実施態様では、患者は、上記要約に記載のＩＬ−１３イムノアッセイ方法の何れかを使用して、上昇したＩＬ−１３、及び上昇した血中好酸球レベルを有すると診断される。幾つかの実施態様では、血中好酸球レベルは３００細胞／マイクロリッター又はそれ以上と決定される。幾つかの実施態様では、患者は、上記要約に記載のＩＬ−１３イムノアッセイ方法の何れかを使用して、上昇したＩＬ−１３、上昇した血清ペリオスチン、及び上昇した血中好酸球レベルを有すると診断される。幾つかの実施態様では、血中好酸球レベルは３００細胞／マイクロリッター又はそれ以上と決定される。
【００４５】
別の実施態様によれば、配列番号１、３、及び２４から選択される配列を含むＶＨ、及び配列番号２、４、及び２５から選択される配列を含むＶＬを含む抗ＩＬ−１３抗体；ＨＶＲＨ１、ＨＶＲＨ２、ＨＶＲＨ３、ＨＶＲＬ１、ＨＶＲＬ２、及びＨＶＲＬ３を含み、各ＨＶＲが配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、配列番号９、及び配列番号１０のアミノ酸配列を有する抗ＩＬ−１３抗体；又はレブリキズマブが、経時的に患者の増悪の速度を低下させるか、又はＦＥＶ１を改善するために十分な治療的有効量で喘息を治療するために投与される。更に別の実施態様では、本発明は、配列番号１、３、及び２４から選択される配列を含むＶＨ、及び配列番号２、４、及び２５から選択される配列を含むＶＬを含む抗ＩＬ−１３抗体；ＨＶＲＨ１、ＨＶＲＨ２、ＨＶＲＨ３、ＨＶＲＬ１、ＨＶＲＬ２、及びＨＶＲＬ３を含み、各ＨＶＲが配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、配列番号９、及び配列番号１０のアミノ酸配列を有する抗ＩＬ−１３抗体；又はレブリキズマブを３７．５ｍｇのフラット用量（すなわち体重に依存せずに）、又は１２５ｍｇのフラット用量、又は２５０ｍｇのフラット用量として投与することを含む喘息を治療するための方法を含む。特定の実施態様では、用量は一定の期間４週間に１回皮下注射によって投与される。特定の実施態様では、その期間は、６ヶ月、１年、２年、５年、１０年、１５年、２０年、又は患者の一生涯である。特定の実施態様では、喘息は重度の喘息であり、患者は吸入ステロイドと第二のコントローラー薬物で不十分にコントロールされるか又はコントロール不良である。幾つかの実施態様では、患者は、上記要約に記載のＩＬ−１３イムノアッセイ方法の何れかを使用して、上昇したＩＬ−１３を有すると診断され、患者は上記のように、抗ＩＬ１３抗体による治療のために選択される。別の実施態様では、方法は、上記のように抗ＩＬ１３抗体により喘息患者を治療することを含み、ここで該患者は、上記要約に記載のＩＬ−１３イムノアッセイ方法の何れかを使用して、上昇したＩＬ−１３を有すると以前に診断された。幾つかの実施態様では、患者は更に、ペリオスチン、ＦｅＮＯ、好酸球、及びＩｇＥから選択される１つ又は複数のＴｈ２関連バイオマーカーの上昇したレベルを有すると以前に診断された。幾つかの実施態様では、患者は、上記要約に記載のＩＬ−１３イムノアッセイ方法の何れかを使用して、上昇したＩＬ−１３、及び上昇した血中好酸球レベルを有すると以前に診断された。幾つかの実施態様では、血中好酸球レベルは３００細胞／マイクロリッター又はそれ以上と決定された。幾つかの実施態様では、患者は、上記要約に記載のＩＬ−１３イムノアッセイ方法の何れかを使用して、上昇したＩＬ−１３、上昇した血清ペリオスチン、及び上昇した血中好酸球レベルを有すると以前に診断された。幾つかの実施態様では、血中好酸球レベルは３００細胞／マイクロリッター又はそれ以上と決定された。
【００４６】
本発明は、上記要約に記載のＩＬ−１３イムノアッセイ方法の何れかを使用することによって決定された上昇したＩＬ−１３レベルを有する患者において、喘息又はＴｈ２関連疾患（２型関連疾患）の治療に使用のための、Ｔｈ２経路阻害剤（２型経路阻害剤）である治療剤を提供する。幾つかの実施態様では、Ｔｈ２経路の阻害のための標的は、ＩＬ−９、ＩＬ−５、ＩＬ−１３、ＩＬ−４、ＯＸ４０Ｌ、ＴＳＬＰ、ＩＬ−２５、ＩＬ−３３及びＩｇＥ；及びＩＬ−９受容体、ＩＬ−５受容体、ＩＬ−４受容体アルファ、ＩＬ−１３受容体アルファ１及びＩＬ−１３受容体アルファ２、ＯＸ４０、ＴＳＬＰ−Ｒ、ＩＬ−７Ｒα（ＴＳＬＰの共受容体）、ＩＬ１７ＲＢ（ＩＬ−２５の受容体）、ＳＴ２（ＩＬ−３３の受容体）、ＣＣＲ３、ＣＣＲ４、ＣＲＴＨ２、ＦｃｅｐｓｉｌｏｎＲＩ及びＦｃｅｐｓｉｌｏｎＲＩＩ／ＣＤ２３（ＩｇＥの受容体）などの受容体から選択される。一実施態様では、本発明の方法によって治療されるべき患者は、軽度から重度の喘息、場合によっては中等度から重度の喘息に罹患しており、その喘息がコルチコステロイドでコントロール不良である。
【００４７】
別の態様において、喘息患者をＴｈ２経路阻害剤による治療的処置に対する可能性のある応答者及び非応答者へと層別化／分類するために喘息患者から得られた試料中のＩＬ−１３のレベルを測定するためのキットの使用が提供される。特定の実施態様では、該使用は、（ａ）上記要約に記載のＩＬ−１３イムノアッセイ方法の何れかを使用して喘息患者から得られた試料中のＩＬ−１３のレベルを決定する工程；（ｂ）ａ）で決定されたＩＬ−１３のレベルを基準レベルと比較する工程；及び（ｃ）工程（ｂ）において得られた比較に基づいて前記患者を応答者又は非応答者のカテゴリーに層別化する工程を含む。
【００４８】
特定の実施態様では、上記使用に係るＴｈ２経路阻害剤（２型経路阻害剤）は、標的ＩＴＫ、ＢＴＫ、ＩＬ−９（例えばＭＥＤＩ−５２８）、ＩＬ−５（例えばメポリズマブ、ＣＡＳ番号１９６０７８−２９−２；レシリズマブ（ｒｅｓｉｌｉｚｕｍａｂ））、ＩＬ−１３（例えばＩＭＡ−０２６、ＩＭＡ−６３８（アンルキンズマブとも言う、ＩＮＮ番号９１０６４９−３２−０；ＱＡＸ−５７６；ＩＬ４／ＩＬ１３トラップ）、トラロキヌマブ（ＣＡＴ−３５４とも言う、ＣＡＳ番号１０４４５１５−８８−９）；ＡＥＲ−００１、ＡＢＴ−３０８（ヒト化１３Ｃ５．５抗体とも言う）、ＩＬ−４（例えばＡＥＲ−００１、ＩＬ４／ＩＬ１３トラップ）、ＯＸ４０Ｌ、ＴＳＬＰ、ＩＬ−２５、ＩＬ−３３及びＩｇＥ（例えばＸＯＬＡＩＲ（登録商標）、ＱＧＥ−０３１；ＭＥＤＩ−４２１２；キリズマブ）；及び受容体、例えばＩＬ−９受容体、ＩＬ−５受容体（例えばＭＥＤＩ−５６３（ベンラリズマブ、ＣＡＳ番号１０４４５１１−０１−４））、ＩＬ−４受容体アルファ（例えばＡＭＧ−３１７、ＡＩＲ−６４５、デュピルマブ）、ＩＬ−１３受容体アルファ１（例えばＲ−１６７１）及びＩＬ−１３受容体アルファ２、ＯＸ４０、ＴＳＬＰ−Ｒ、ＩＬ−７Ｒアルファ（ＴＳＬＰの共受容体）、ＩＬ１７ＲＢ（ＩＬ−２５の受容体）、ＳＴ２（ＩＬ−３３の受容体）、ＣＣＲ３、ＣＣＲ４、ＣＲＴＨ２（例えばＡＭＧ−８５３、ＡＰ７６８、ＡＰ−７６１、ＭＬＮ６０９５、ＡＣＴ１２９９６８）、ＦｃｅｐｓｉｌｏｎＲＩ、ＦｃｅｐｓｉｌｏｎＲＩＩ／ＣＤ２３（ＩｇＥの受容体）、Ｆｌａｐ（例えばＧＳＫ２１９０９１５）、Ｓｙｋキナーゼ（Ｒ−３４３、ＰＦ３５２６２９９）；ＣＣＲ４（ＡＭＧ−７６１）、ＴＬＲ９（ＱＡＸ−９３５）を阻害するか、又はＣＣＲ３、ＩＬ５、ＩＬ３、ＧＭ−ＣＳＦの多重サイトカイン阻害剤（例えばＴＰＩ  ＡＳＭ８）である。
【００４９】
更に別の態様では、喘息患者又はＴｈ２関連疾患（２型関連疾患）に罹患している患者から得られた生物学的試料中のＩＬ−１３レベルを測定するためのキットが提供される。幾つかの実施態様では、キットは、（ｉ）上記要約に記載のＩＬ−１３イムノアッセイ方法の何れかを使用してＩＬ−１３のレベルを測定し；（ｉｉ）ＩＬ−１３のレベルを基準レベルと比較し；及び（ｉｉｉ）比較に基づいて前記患者を応答者又は非応答者のカテゴリーに層別化するための説明書を含む。幾つかの実施態様では、キットは、少なくとも１つ、少なくとも２つ、又は少なくとも３つの抗体を含む。幾つかの実施態様では、キットは、ＩＬ−１３に特異的に結合する第１のモノクローナル捕捉抗体及びＩＬ−１３に特異的に結合する第２のモノクローナル検出抗体を含み、ここで第１の抗体は第２の抗体とは異なるエピトープに結合する。幾つかの実施態様では、キットは、配列番号５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、配列番号６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び配列番号７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む可変重鎖領域と、配列番号８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、配列番号９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び配列番号１０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む可変軽鎖領域とを含む可変領域を含む第１の抗体を含む。幾つかの実施態様では、第１の抗体は、配列番号１のアミノ酸配列を含む可変重鎖領域及び配列番号２のアミノ酸配列を含む可変軽鎖領域を含む可変領域を含む。特定の実施態様では、第１の抗体は抗体断片である。特定の実施態様では、第１の抗体はＦ（ａｂ’）２又はＦａｂである抗体断片である。特定の実施態様では、第１の抗体はＦａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆａｂ’、又はＦｖである抗体断片である。幾つかの実施態様では、イムノアッセイ法は、配列番号１３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、配列番号１４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び配列番号１５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む可変重鎖領域と、配列番号１６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、配列番号１７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び配列番号１８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む可変軽鎖領域とを含む可変領域を含む第２の抗体を含む。幾つかの実施態様では、第２の抗体は、配列番号１２のアミノ酸配列を含む可変重鎖領域及び配列番号１１のアミノ酸配列を含む可変軽鎖領域を含む可変領域を含む。幾つかの実施態様では、キットは第３の抗体を含み、第３の抗体は第２の抗体に特異的に結合し、かつ検出可能に標識される。幾つかの実施態様では、第２の抗体はハプテンで標識され、第３の抗体は抗ハプテン抗体である。幾つかの実施態様では、ハプテンはジゴキシゲニンであり、抗ハプテン抗体は蛍光ラテックスとコンジュゲートした抗ジゴキシゲニンモノクローナル抗体である。特定の実施態様では、該キットは上で提供された使用を記述する情報を含んでいる添付文書を含む。
【００５０】
更に別の態様において、患者の喘息のサブタイプを診断するためのキットが提供され、該キットは：（１）上記要約に記載のＩＬ−１３イムノアッセイ方法の何れかを使用して患者から得られた試料中のＩＬ−１３のレベルを決定すること；及び
（２）血清試料中のＩＬ−１３レベルを測定するための説明書であって、ＩＬ−１３の上昇した発現レベルが喘息サブタイプの指標である説明書を含む。
【００５１】
幾つかの実施態様では、キットは、喘息患者又はＴｈ２関連疾患（２型関連疾患）患者が上昇したＩＬ−１３レベルを有するか否かを決定するための添付文書を更に含む。幾つかの実施態様では、キットは喘息患者又はＴｈ２関連疾患患者が、Ｔｈ２経路阻害剤に応答する可能性があるかを決定するための添付文書を更に含む。幾つかの実施態様では、キットは上に提供される使用の何れかを説明する情報を含んだ添付文書を更に含む。幾つかの実施態様では、キットは生物学的試料を保持するための空の容器を更に含む。幾つかの実施態様では、キットは、ＩＬ−１３のレベルを決定するための試薬を含む。
【００５２】
更に別の態様において、上昇した循環ＩＬ−１３レベルを有すると診断された患者にＴｈ２経路阻害剤（２型経路阻害剤）を投与することを含む、喘息又はＴｈ２関連疾患（２型関連疾患）に罹患している患者を治療する方法が提供される。特定の実施態様では、方法は、上記要約に記載のＩＬ−１３イムノアッセイ方法の何れかを使用して、患者が上昇したＩＬ−１３レベルを有すると診断する工程を含む。特定の実施態様では、その方法は、患者が上昇したＩＬ−１３レベルを有すると決定される場合、Ｔｈ２経路阻害剤で患者を再治療する工程を更に含む。特定の実施態様では、血清又は血漿を使用して、患者が上昇したＩＬ−１３レベルを有するかどうかを決定する。
【００５３】
本明細書中に記載される実施態様の何れかにおいて、ＩＬ−１３レベルに加えて、１つ以上のＴｈ２関連バイオマーカー（２型関連バイオマーカー）のレベルが決定される。幾つかの実施態様では、更なるＴｈ２関連バイオマーカーはペリオスチンである。幾つかの実施態様では、更なるＴｈ２関連バイオマーカーは血清ペリオスチンである。幾つかの実施態様では、更なるＴｈ２関連バイオマーカーはＦｅＮＯである。幾つかの実施態様では、更なるＴｈ２関連バイオマーカーは好酸球である。幾つかの実施態様では、更なるＴｈ２関連バイオマーカーは血中好酸球である。幾つかの実施態様では、更なるＴｈ２関連バイオマーカーはＩｇＥである。
【図面の簡単な説明】
【００５４】
【図１】実施例２に記載のＥｒｅｎｎａ（登録商標）ＩＬ−１３アッセイの感度及び特異性の評価。喘息患者（ｎ＝１０）からの血清試料を、過剰のアッセイ捕捉抗体とのプレインキュベーション有り（右側）及び無し（左側）により測定した。より高いＩＬ−１３値（ｎ＝４）は、過剰のアッセイ捕捉抗体とのプレインキュベーションによりＬＬＯＱより上にとどまった。点線は製造業者により推奨されるＬＬＯＱを示し、０．３９ｐｇ／ｍＬである。
【図２Ａ−２Ｂ】アッセイの改変は、実施例２に記載されるように、Ｅｒｅｎｎａ（登録商標）ＩＬ−１３イムノアッセイの特異性を改善したが、感度は改善しなかった。図２Ａは、製造業者の標準プロトコルに従って（図２Ａ、左側、ＨＶ）、及び過剰の捕捉抗体被覆微粒子とのプレインキュベーション後に（図２Ａ、右側、ＨＶ＋捕捉抗体）測定された３人の健常ボランティア（ＨＶ）の血清試料を示す。図２Ｂは、高塩濃度緩衝液を用いて１：１（Ｖ／Ｖ）希釈後に（図２Ｂ、左側、ＨＶ）、及び過剰捕捉抗体被覆微粒子とのプレインキュベーション後に（図２Ｂ、右側、ＨＶ＋捕捉抗体）測定された同じ３つのＨＶ試料を示す。図２Ａ及び図２Ｂの破線は、ＬＬＯＱを表す。高塩緩衝液による１：１（Ｖ／Ｖ）の試料希釈を説明するために、図２ＢのＬＬＯＱが図２ＡのＬＬＯＱと比較して修正されていることに留意されたい。
【図３】改変されたアッセイ条件は、Ｅｒｅｎｎａ（登録商標）ＩＬ−１３イムノアッセイの特異性を改善したが、実施例２に記載されるように、ヒト血清試料中の天然型ＩＬ−１３を検出する能力を減少させた。ＨＶ（ｎ＝１０）、喘息患者（ｎ＝１０）、及びＩＰＦ患者（ｎ＝１０）からの血清試料を、過剰捕捉抗体被覆マイクロ粒子プレインキュベーション無し及び有りで測定した。点線は、Ｅｒｅｎｎａ（登録商標）ＩＬ−１３イムノアッセイのＬＬＯＱが０．７８ｐｇ／ｍＬであることを示す。
【図４】実施例３に記載のＩＭＰＡＣＴ  ＩＬ−１３アッセイの特異性。健常ボランティア及び異なるＴｈ２関連疾患を有する患者（総数ｎ＝１０１）からの血清を、過剰アッセイ第一捕捉抗体とのプレインキュベーション有り（右側、血清＋捕捉抗体）及び無し（左側、血清）で測定した。点線は、ＩＭＰＡＣＴ  ＩＬ−１３アッセイのＬＬＯＱが０．０１４ｐｇ／ｍＬであることを示す。
【図５】実施例３に記載のＩＭＰＡＣＴ  ＩＬ−１３アッセイによる血清ＩＬ−１３レベル。ＨＶ（ｎ＝５０）、喘息患者（ｎ＝３４）、ＩＰＦ患者（ｎ＝３２）、及びアトピー性皮膚炎患者（ｎ＝２５）からの試料についての個々の値ならびに各群の中央値が示されている。点線は、ＩＭＰＡＣＴ  ＩＬ−１３アッセイのＬＬＯＱが０．０１４ｐｇ／ｍＬであることを示す。ＨＶと喘息、ＩＰＦ、又はアトピー性皮膚炎との間の平均をそれぞれ比較するためにマンホイットニー検定を行った。＊＊は各比較のＰ値が＜０．０００１であったことを示す。
【図６】実施例４に記載のベースライン（０週目）の血清ＩＬ−１３レベルと血中好酸球数、血清ペリオスチン、ＦｅＮＯ、及び血清ＩｇＥレベルとの相関。各比較のスピアマン順位相関係数（ρ）が、それぞれの散布図に示されている。
【図７Ａ−７Ｂ】実施例４に記載のＩＬ−１３の状態によるＦＥＶ１のベースラインと比較した第１２週目での平均変化率。図７Ａは、血清ＩＬ−１３が高い群におけるプラセボ及び３つの用量群（４週間ごとに３７．５ｍｇのレブリキズマブ、４週間ごとに１２５ｍｇのレブリキズマブ、又は４週間ごとに２５０ｍｇのレブリキズマブ）の結果を示し、それらの被験者はベースライン時の中央値以上の血清ＩＬ−１３を有する；図７Ｂは、血清ＩＬ−１３が低い群におけるプラセボ及び３つの用量群（４週間ごとに３７．５ｍｇのレブリキズマブ、４週間ごとに１２５ｍｇのレブリキズマブ、又は４週間ごとに２５０ｍｇのレブリキズマブ）の結果を示し、それらの被験者はベースライン時の中央値より下の血清ＩＬ−１３を有する。
【図８】実施例４に記載した、血清ＩＬ−１３が高い群（左の４つのバー）及び血清ＩＬ−１３が低い群（右の４つのバー）におけるプラセボ対照期間にわたる喘息増悪率。灰色の矢印は、３つの用量群（４週間ごとに３７．５ｍｇのレブリキズマブ、４週間ごとに１２５ｍｇのレブリキズマブ、又は４週間ごとに２５０ｍｇのレブリキズマブ）のレブリキズマブ（ＬＥＢ）について、プラセボと比較して観察された増悪率の低下、パーセンテージ（９５％ＣＩ）を示す。詳細な説明
【００５５】
特許出願及び刊行物を含む、本明細書中に引用される全ての参考文献は、あらゆる目的のためにその全体が参照により組み込まれる。
【００５６】
別に規定されない限り、本明細書で使用される技術用語及び科学用語は、本発明が属する技術分野の当業者によって一般的に理解されるのと同じ意味を有する。Singleton et al., Dictionary of Microbiology and Molecular Biology 2nd ed., J. Wiley & Sons (New York, N.Y. 1994), and March, Advanced Organic Chemistry Reactions, Mechanisms and Structure 4th ed., John Wiley & Sons (New York, N.Y. 1992)は、本願において使用される多くの用語に対する一般的な指針を当業者に提供する。
特定の定義
【００５７】
本明細書を解釈する目的のために、以下の定義が適用され、適切な場合はいつでも、単数で使用される用語はまたその逆も複数形を含む。以下に記載した任意の定義が、参照により本明細書に組み込まれる任意の文書と矛盾する場合には、以下に記載した定義が統制するべきである。
【００５８】
本明細書及び添付の特許請求の範囲に使用される場合、単数形の「ａ」、「ａｎ」、及び「ｔｈｅ」は、文脈から明らかでない限り、複数の指示対象を含む。従って、例えば、「タンパク質」又は「抗体」への言及は、複数のタンパク質又は抗体をそれぞれ包含し；「細胞」への言及は細胞混合物を含む等々である。
【００５９】
本明細書及び添付の特許請求の範囲において提供される範囲は、両方の終点及び終点間の全ての点を含む。従って、例えば、２．０から３．０の範囲は、２．０と３．０、及び２．０と３．０との間の全ての点を含む。
【００６０】
用語「検出する」は、標的分子の定性的及び定量的測定の両方を含む最も広い意味で本明細書において使用される。検出は、試料中の標的分子の単なる存在を同定すること、並びに標的分子が検出可能なレベルで試料中に存在するかどうかを決定することを含む。
【００６１】
「捕捉抗体」は、試料中の標的分子に特異的に結合する抗体を指す。特定の条件下では、捕捉抗体は、抗体−標的分子複合体を残りの試料から分離することができるように、標的分子と複合体を形成する。特定の実施態様では、そのような分離は、捕捉抗体に結合しなかった試料中の物質又は材料を洗い流すことを含むことができる。特定の実施態様では、捕捉抗体は、例えば、限定されないが、プレート又はビーズなどの固体支持体表面に付着され得る。
【００６２】
「検出抗体」は、試料中の標的分子又は試料−捕捉抗体の組み合わせ材料中の標的分子に特異的に結合する抗体を指す。特定の条件下では、検出抗体は、標的分子又は標的分子−捕捉抗体複合体と複合体を形成する。検出抗体は、増幅され得る標識を介して直接的に、又は間接的に、例えば、標識された（例えば、検出可能に標識された）別の抗体若しくは検出抗体に結合する別の抗体の使用を介して検出され得る。直接標識のために、検出抗体は、典型的には、例えばビオチン又はルテニウムを含むがこれに限定されない幾つかの手段によって検出可能な部分にコンジュゲートされる。
【００６３】
用語「標識」又は「検出可能な標識」は、例えば、検出又は定量されるべき物質、例えば抗体に連結することができる任意の化学基又は部分を指す。典型的には、標識は、物質の高感度検出又は定量化に適した検出可能な標識である。検出可能な標識の例としては、限定されるものではないが、発光標識、例えば、蛍光標識、燐光標識、化学発光標識、生物発光標識、及び電気化学発光標識；放射性標識、酵素、粒子、磁性物質、電気活性種等が含まれる。あるいは、検出可能な標識は、特異的結合反応に関与することによってその存在を知らせることができる。そのような標識の例には、ハプテン、抗体、ビオチン、ストレプトアビジン、ｈｉｓタグ、ニトリロトリ酢酸、グルタチオンＳ−トランスフェラーゼ、グルタチオンなどが含まれる。
【００６４】
用語「検出手段」とは、次にアッセイで読み取られるシグナル報告を介して、検出可能な抗体の存在を検出するために使用される部分又は技術を指す。典型的には、検出手段は、マイクロタイタープレート、例えば、アビジン又はストレプトアビジン−ＨＲＰ上に捕捉された標識などの固定化された標識を増幅する試薬を用いる。
【００６５】
「フォトルミネッセンス」とは、材料が光のその物質による吸収に続いて発光するプロセス（別法では電磁放射と呼ばれる）を指す。蛍光と燐光はフォトルミネッセンスの２つの異なるタイプである。化学発光」プロセスは、化学反応による発光種の生成を含む。「エレクトロ・ケミルミネッセンス」又は「ＥＣＬ」は、種、例えば抗体が、その種を適切な周囲の化学的環境における電気化学的エネルギーに曝露すると発光するプロセスである。
【００６６】
用語「感度」は、分析物を検出するアッセイの能力を指す。一実施態様では、感度は「定量下限」又はＬＬＯＱによって定義される。ＬＬＯＱは、適切な精度及び正確性により定量的に決定できる試料中の検体の最低量である。本明細書中で使用される場合、「高感度」とは、アッセイが検体のサブ−ｐｇ／ｍＬレベルを検出することができることを意味する。一実施態様では、アッセイは分析物のｆｇ／ｍＬレベルを検出することができる。
【００６７】
用語「特異性」は、同様の又は関連する分子の存在下で、目的の検体のみを検出するアッセイの能力を指す。本明細書で使用されるアッセイは、抗原競合又は免疫枯渇が本明細書に記載のアッセイを実施する前に行われる場合、アッセイにおいて少なくとも１０個の試料が試験され、又は少なくとも２０個の試料を試験され、又は少なくとも３０個の試料が試験され、又は少なくとも５０個の試料が試験され、かつ試験した全試料におけるアッセイシグナルの少なくとも９０％、又は少なくとも９５％、又は１００％がＬＬＯＱ未満である場合に「高特異性」を有する。幾つかの実施態様では、アッセイは、目的の分析物と比較してより高い濃度で存在し得る、１つ以上の無関係な分子の存在下で目的の分析物のみを検出することができる。
【００６８】
特定の実施態様では、用語「基準レベルにある」は、基準レベルかあるいは基準レベルと１％まで、２％まで、３％まで、４％まで、５％まで異なるレベルと本質的に同一である、個体又は患者からの試料中のバイオマーカーのレベルを指す。幾つかの実施態様では、基準レベルは基準集団の中央値レベルである。幾つかの実施態様では、マーカーの基準レベルは基準集団のマーカーの平均値レベルである。幾つかの実施態様では、マーカーの基準レベルは基準集団のマーカーの平均レベルである。非限定的な例示的な基準集団には、喘息患者、中等度から重度の喘息患者、特発性肺線維症の患者、アトピー性皮膚炎患者、健常個体、並びに健常個体及び前述の患者の何れかを含む群が含まれる。
【００６９】
特定の実施態様では、用語「基準レベルを超えている」は、基準レベルと比較した場合、本明細書に記載の方法によって決定して、少なくとも５％、１０％、２０％、２５％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、８５％、９０％、９５％、１００％又はそれ以上、基準レベルを越えている個体又は患者からの試料中のバイオマーカーのレベルを指す。幾つかの実施態様では、基準レベルは基準集団の中央値レベルである。幾つかの実施態様では、マーカーの基準レベルは基準集団のマーカーの平均値レベルである。幾つかの実施態様では、マーカーの基準レベルは基準集団のマーカーの平均レベルである。非限定的な例示的な基準集団には、喘息患者、中等度から重度の喘息患者、特発性肺線維症の患者、アトピー性皮膚炎患者、健常個体、並びに健常個体及び前述の患者の何れかを含む群が含まれる。
【００７０】
特定の実施態様では、用語「基準レベルより低い」は、基準レベルと比較した場合、本明細書に記載の方法によって決定して、少なくとも５％、１０％、２０％、２５％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、８５％、９０％、９５％、１００％又はそれ以上、基準レベルより低い個体又は患者からの試料中のバイオマーカーのレベルを指す。幾つかの実施態様では、基準レベルは基準集団の中央値レベルである。幾つかの実施態様では、マーカーの基準レベルは基準集団のマーカーの平均値レベルである。幾つかの実施態様では、マーカーの基準レベルは基準集団のマーカーの平均レベルである。非限定的な例示的な基準集団には、喘息患者、中等度から重度の喘息患者、特発性肺線維症の患者、アトピー性皮膚炎患者、健常個体、並びに健常個体及び前述の患者の何れかを含む群が含まれる。
【００７１】
「マーカー」及び「バイオマーカー」なる用語は、分子、例えば遺伝子、タンパク質、糖鎖構造、又は糖脂質、代謝物、ｍＲＮＡ、ｍｉＲＮＡ、タンパク質、ＤＮＡ（ｃＤＮＡ又はゲノムＤＮＡ）、ＤＮＡコピー数、又は後成的変化、例えばＤＮＡメチル化の増加、減少、又は変化（例えばシトシンメチル化、又はＣｐＧメチル化、非ＣｐＧメチル化）；ヒストン修飾（例えば（脱）アセチル化、（脱）メチル化、（脱）リン酸化、ユビキチン化、ＳＵＭＯ化、ＡＤＰリボシル化）；ヌクレオソーム位置の変化で、その哺乳動物組織又は細胞中又は上の発現もしくは存在を標準的な方法（又はここに開示した方法）によって検出することができ、例えば本明細書に記載のＴｈ２経路阻害剤を使用するＴｈ２経路阻害に基づく治療計画に対する哺乳動物細胞又は組織の感受性を予測し、診断し、及び／又は予後判断し得るものを指すために交換可能に使用される。バイオマーカーはまた被験者から得られた生物学的試料において測定され得る生物学的又は臨床的特性、例えば限定されないが、血球数、例えば血中好酸球数、ＦＥＶ１又はＦｅＮＯであり得る。特定の実施態様では、そのようなバイオマーカーのレベルは、基準集団に対して観察されたものよりも高いか又は低いことが決定される。特定の実施態様では、血中好酸球数は２００／μｌ、又は２５０／μｌ、又は３００／μｌ、又は４００／μｌである。
【００７２】
「比較する」なる用語は、個体又は患者からの試料中のバイオマーカーのレベルを、この明細書の他の場所で特定されたバイオマーカーの基準レベルと比較することを指す。比較は、通常、対応するパラメーター又は値の比較を指し、例えば絶対量は絶対基準量と比較され、濃度は基準濃度と比較され、又は試料中のバイオマーカーから得られた強度シグナルは基準試料から得られた同じタイプの強度シグナルと比較されることが理解されなければならない。比較は手作業で実施されてもよいし、コンピューター支援下でもよい。よって、比較は（例えばここに開示されたシステムの）計算装置によって実施され得る。個体又は患者からの試料中のバイオマーカーの測定又は検出レベルの値と基準レベルを例えば互いに比較することができ、該比較は、比較のためのアルゴリズムを実行するコンピュータープログラムによって自動的に実施され得る。前記評価を実施するコンピュータープログラムが適切な出力形式で所望の評価を与える。コンピューター支援による比較では、決定された量の値が、コンピュータープログラムによってデータベースに保存されている適切な基準に対応する値と比較され得る。コンピュータープログラムは比較の結果を更に評価し得、すなわち、適切な出力形式で所望の評価を自動的に提供する。コンピューター支援による比較では、決定された量の値が、コンピュータープログラムによってデータベースに保存されている適切な基準に対応する値と比較され得る。コンピュータープログラムは比較の結果を更に評価し得、すなわち、適切な出力形式で所望の評価を自動的に提供する。
【００７３】
バイオマーカーのレベルを「測定する」なる用語は、バイオマーカーの定量、例えば、本明細書の他の場所に記載した適切な検出方法を用いて試料中のバイオマーカーのレベルを決定することを指す。
【００７４】
「治療の有効性をモニタリングする」なる用語は、試料が治療前及び／又は治療中の患者から、連続的なものを含めて、少なくとも１回得られ、治療が効率的であるかどうかの指標を得るために１つ以上のバイオマーカーがそこで測定されることを示すために使用される。
【００７５】
治療の有効性のモニタリングにおいて、１つ以上のバイオマーカーのレベルが測定され、幾つかの実施態様では、バイオマーカーの基準レベルと比較され、又は幾つかの実施態様では、より早い時点で同じ患者から得られた試料中のバイオマーカーのレベルと比較される。幾つかの実施態様では、１つ以上のバイオマーカーの現在のレベルが、患者の治療開始前に同じ患者から得られた試料中におけるバイオマーカーのレベルと比較される。
【００７６】
「治療を推奨する」なる語句は、Ｔｈ２経路阻害剤で適切に治療されるか又は適切には治療されないとして患者を同定するために、患者の試料中における本明細書に記載の１つ以上のバイオマーカーのレベル又は存在に関して生成された情報又はデータを使用することを指す。「治療を推奨する」なる語句は、Ｔｈ２経路阻害剤を含む治療に程度の差はあれ応答するとして同定され又は選択された患者に対してＴｈ２経路阻害剤を含む治療を提案し又は選択するために生成された情報又はデータを使用することを指す場合がある。使用され又は生成された情報又はデータは文書、口頭又は電子的など、任意の形態であってよい。幾つかの実施態様では、生成された情報又はデータの使用は、通信（communicating）、提示、報告、保存、送信（sending）、伝達（transferring）、供給、伝送（transmitting）、分配、又はそれらの組み合せを含む。幾つかの実施態様では、通信、提示、報告、保存、送信、伝達、供給、伝送、分配、又はそれらの組み合せは、計算装置、解析ユニット又はその組み合せによって実施される。幾つかの更なる実施態様では、通信、提示、報告、保存、送信、伝達、供給、伝送、分配、又はそれらの組み合せは、研究室又は医療専門家によって実施される。幾つかの実施態様では、情報又はデータは、本明細書に記載の１つ以上のマーカーのレベルの基準レベルとの比較を含む。幾つかの実施態様では、情報又はデータは、患者がＴｈ２経路阻害剤を含む治療で適切に治療され又は適切には治療されないとの表示を含み、幾つかの例では、患者が特定のＴｈ２経路阻害剤、例えば抗ＩＬ−１３抗体又は抗ＩｇＥ抗体を含む治療で適切に治療され又は適切には治療されないとの表示を含む。
【００７７】
「患者を選択する」又は「患者を同定する」なる語句は、Ｔｈ２経路阻害剤を含む治療法から利益を受ける可能性が高い又は利益を受ける可能性が低いとして患者を同定し又は選択するために患者の試料中のここに記載の一又は複数のマーカーのレベルに関して生成された情報又はデータを使用することを指す。使用され又は生成された情報又はデータは文書、口頭又は電子的など、任意の形態であってよい。幾つかの実施態様では、生成された情報又はデータの使用は、通信（communicating）、提示、報告、保存、送信（sending）、伝達（transferring）、供給、伝送（transmitting）、分配、又はそれらの組み合せを含む。幾つかの実施態様では、通信、提示、報告、保存、送信、伝達、供給、伝送、分配、又はそれらの組み合せは、計算装置、解析ユニット又はその組み合せによって実施される。幾つかの更なる実施態様では、通信、提示、報告、保存、送信、伝達、供給、伝送、分配、又はそれらの組み合せは、研究室又は医療専門家によって実施される。幾つかの実施態様では、情報又はデータは、本明細書に記載の１つ以上のマーカーのレベルの基準レベルとの比較を含む。幾つかの実施態様では、情報又はデータは、患者がＴｈ２経路阻害剤を含む治療で適切に治療され又は適切には治療されないとの表示を含み、幾つかの例では、患者が特定のＴｈ２経路阻害剤、例えば抗ＩＬ−１３抗体又は抗ＩｇＥ抗体を含む治療で適切に治療され又は適切には治療されないとの表示を含む。
【００７８】
「治療を選択する」なる語句は、患者に対する治療法を特定するか又は選択するために患者の試料中のここに記載の一又は複数のマーカーのレベル又は存在に関して生成された情報又はデータを使用することを指す。幾つかの実施態様では、治療薬はＴｈ２経路阻害剤を含み得る。使用され又は生成された情報又はデータは文書、口頭又は電子的など、任意の形態であってよい。幾つかの実施態様では、生成された情報又はデータの使用は、通信（communicating）、提示、報告、保存、送信（sending）、伝達（transferring）、供給、伝送（transmitting）、分配、又はそれらの組み合せを含む。幾つかの実施態様では、通信、提示、報告、保存、送信、伝達、供給、伝送、分配、又はそれらの組み合せは、計算装置、解析ユニット又はその組み合せによって実施される。幾つかの更なる実施態様では、通信、提示、報告、保存、送信、伝達、供給、伝送、分配、又はそれらの組み合せは、研究室又は医療専門家によって実施される。幾つかの実施態様では、情報又はデータは、患者がＴｈ２経路阻害剤を含む治療で適切に治療され又は適切には治療されないとの表示を含み、幾つかの例では、患者が特定のＴｈ２経路阻害剤、例えば抗ＩＬ−１３抗体又は抗ＩｇＥ抗体を含む治療で適切に治療され又は適切には治療されないとの表示を含む。
【００７９】
本明細書で使用される用語「生物学的試料」は、限定されないが、血液、血清、血漿、唾液、組織生検（例えば、肺試料）、及び鼻腔スワブ又は鼻ポリープを含む鼻試料を含む。試料は、治療前、治療中、又は治療後に採取され得る。試料は、喘息又はＴｈ２関連疾患に罹患していると疑われるか又は罹患していると診断されており、よって治療を必要とする可能性が高い患者から、又は如何なる疾患にも罹患しているとは疑われていない正常の個体から採取され得る。幾つかの実施態様では、生物学的試料は血清である。幾つかの実施態様では、生物学的試料は血漿である。
【００８０】
ＦＥＮＯアッセイは、ＦＥＮＯ（呼気一酸化窒素濃度）レベルを測定するアッセイを指す。そのようなレベルは、例えば、２００５年に米国胸部学会（ＡＴＳ）が刊行したガイドラインに従って、手持ち式携帯装置ＮＩＯＸ  ＭＩＮＯ（登録商標）（Ａｅｒｏｃｒｉｎｅ、Ｓｏｌｎａ、Ｓｗｅｄｅｎ）を使用して評価することができる。ＦＥＮＯは他の同様な方法、例えばＦｅＮＯ又はＦＥＮＯとも言及され得、そのような類似の変形例全てが同じ意味を持つことが理解されるべきである。
【００８１】
本明細書に与えられる方法に従って試験される又は治療される患者の年齢は全年齢を含む。幾つかの実施態様では、年齢は１８＋歳である。幾つかの実施態様では、年齢は１２＋歳である。幾つかの実施態様では、年齢は２＋歳である。幾つかの実施態様では、年齢は２〜１８歳、１２〜１８歳、１８〜７５歳、１２〜７５歳又は２〜７５歳である。
【００８２】
喘息は、変化しやすく再発性の症状、可逆性気流閉塞（例えば、気管支拡張による）及び気管支過感受性を特徴とする複合疾患で、根底にある炎症と関連している場合があり、又は関連していない場合がある。喘息の例としては、アスピリン感受性／増悪喘息、アトピー性喘息、重度の喘息、軽度の喘息、中等度から重度の喘息、コルチコステロイドナイーブ喘息、慢性喘息、コルチコステロイド抵抗性喘息、コルチコステロイド難治性喘息、新たに診断され未治療の喘息、喫煙による喘息、コルチコステロイドでコントロール不良である喘息、及びJ Allergy Clin Immunol (2010) 126(5):926-938に述べられたような他の喘息が含まれる。
【００８３】
ＩＬ−１３媒介性疾患とは、過剰のＩＬ−１３レベル又は活性に関連する障害であり、その非定型症状は、体内の局所的及び／又は全身的なＩＬ−１３のレベル又は活性に起因して現れる場合がある。ＩＬ−１３媒介性疾患の例には、がん（例えば、非ホジキンリンパ腫、神経膠芽腫）、アトピー性皮膚炎、アレルギー性鼻炎、喘息、線維症、炎症性腸疾患（例えば、潰瘍性大腸炎又はクローン病）、肺の炎症性疾患（例えば、ＩＰＦのような肺線維症）、ＣＯＰＤ、肝線維症が含まれる。
【００８４】
ＩＬ−４媒介性疾患とは、過剰のＩＬ−４レベル又は活性に関連する障害であり、その非定型症状は、体内の局所的及び／又は全身的なＩＬ−４のレベル又は活性に起因して現れる場合がある。ＩＬ−４媒介性疾患の例には、がん（例えば、非ホジキンリンパ腫、神経膠芽腫）、アトピー性皮膚炎、アレルギー性鼻炎、喘息、線維症、炎症性腸疾患（例えば、潰瘍性大腸炎又はクローン病）、肺の炎症性疾患（例えば、ＩＰＦのような肺線維症）、ＣＯＰＤ、肝線維症が含まれる。
【００８５】
ＩＬ−５媒介性疾患とは、過剰のＩＬ−５レベル又は活性に関連する障害であり、その非定型症状は、体内の局所的及び／又は全身的なＩＬ−５のレベル又は活性に起因して現れる場合がある。ＩＬ−５媒介性疾患の例には、がん（例えば、非ホジキンリンパ腫、神経膠芽腫）、アトピー性皮膚炎、アレルギー性鼻炎、喘息、線維症、炎症性腸疾患（例えば、潰瘍性大腸炎又はクローン病）、肺の炎症性疾患（例えば、ＩＰＦのような肺線維症）、ＣＯＰＤ、肝線維症が含まれる。
【００８６】
ＩＬ−９媒介性疾患とは、過剰のＩＬ−９レベル又は活性に関連する障害であり、その非定型症状は、体内の局所的及び／又は全身的なＩＬ−９のレベル又は活性に起因して現れる場合がある。ＩＬ−９媒介性疾患の例には、がん（例えば、非ホジキンリンパ腫、神経膠芽腫）、アトピー性皮膚炎、アレルギー性鼻炎、喘息、線維症、炎症性腸疾患（例えば、潰瘍性大腸炎又はクローン病）、肺の炎症性疾患（例えば、ＩＰＦのような肺線維症）、ＣＯＰＤ、肝線維症が含まれる。
【００８７】
ＴＳＬＰ媒介性疾患とは、過剰のＴＳＬＰレベル又は活性に関連する障害であり、その非定型症状は、体内の局所的及び／又は全身的なＴＳＬＰのレベル又は活性に起因して現れる場合がある。ＴＳＬＰ媒介性疾患の例には、がん（例えば、非ホジキンリンパ腫、神経膠芽腫）、アトピー性皮膚炎、アレルギー性鼻炎、喘息、線維症、炎症性腸疾患（例えば、潰瘍性大腸炎又はクローン病）、肺の炎症性疾患（例えば、ＩＰＦのような肺線維症）、ＣＯＰＤ、肝線維症が含まれる。
【００８８】
ＩｇＥ媒介性疾患とは、過剰のＩｇＥレベル又は活性に関連する障害であり、その非定型症状は、体内の局所的及び／又は全身的なＩｇＥのレベル又は活性に起因して現れる場合がある。そのような疾患は、喘息、アトピー性皮膚炎、アレルギー性鼻炎、線維症（例えば、ＩＰＦなどの肺線維症）を含む。
【００８９】
喘息様症状には、息切れ、咳（痰の産生及び／又は痰の質及び／又は咳頻度の変化）、喘鳴、胸部絞扼感、気管支収縮及び上記の症状の何れか又はこれらの症状の組み合わせに起因する夜間中途覚醒からなる群から選択される症状が含まれる（Juniper et al (2000) Am. J. Respir. Crit. Care Med., 162(4), 1330-1334）。
【００９０】
用語「呼吸器疾患」は、限定されないが、喘息（例えば、アレルギー性及び非アレルギー性喘息（例えば、年少の子供たちの中で、例えば呼吸器合胞体ウイルス（ＲＳＶ）による感染による））；気管支炎（例えば、慢性気管支炎）；慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）（例えば、肺気腫（例えば、タバコ誘発性肺気腫）；気道炎症、好酸球増加症、線維症、過剰粘液産生、例えば、嚢胞性線維症、肺線維症、アレルギー性鼻炎を含む状態が含まれる。気道炎症、過剰な気道分泌物、及び気道閉塞によって特徴付けられる疾患の例には、喘息、慢性気管支炎、気管支拡張症、及び嚢胞性線維症が含まれる。
【００９１】
増悪（一般に喘息発作又は急性の喘息とも呼ばれる）は、息切れ、咳（痰の産生及び／又は痰の質及び／又は咳頻度の変化）、喘鳴、胸部絞扼感、上記の症状又はこれらの症状の組み合わせの何れかに起因する夜間覚醒の新規又は進行性の増加の症状の発現である。増悪はしばしば呼気の気流（ＰＥＦ又はＦＥＶ１）の低下によって特徴付けられる。しかし、ＰＥＦの変動性は、増悪からの回復に至るまで又はその最中には増加するかもしれないが、増悪の最中には通常は増加しない。増悪の重症度は、軽度から生命を脅かす範囲に及び、症状及び肺機能の両方に基づいて評価することができる。本明細書に記載されたような重度の喘息増悪は、喘息治療のための以下の入院加療、つまり、高コルチコステロイドの使用（例えば、一日のコルチコステロイドの総用量又は５００マイクログラム以上のＦＰ又は等価物の一日の総用量を３日間又はそれ以上連続して４倍にする）、又は経口／非経口のコルチコステロイドの使用の任意の一つ又は組み合わせをもたらす増悪を含む。
【００９２】
Ｔｈ２経路阻害剤は、２型経路阻害剤とも呼ばれ、Ｔｈ２経路を阻害する薬剤である。Ｔｈ２経路阻害剤の例には、ＩＴＫ、ＢＴＫ、ＩＬ−９（例えば、ＭＥＤＩ−５２８）、ＩＬ−５（例えば、メポリズマブ、ＣＡＳ番号１９６０７８−２９−２；レシリズマブ（ｒｅｓｉｌｉｚｕｍａｂ））、ＩＬ−１３（例えば、ＩＭＡ−０２６，ＩＭＡ−６３８（アンルキンズマブとも言う、ＩＮＮ番号９１０６４９−３２−０；ＱＡＸ−５７６；ＩＬ４／ＩＬ１３トラップ）、トラロキヌマブ（ＣＡＴ−３５４とも言う，ＣＡＳ番号１０４４５１５−８８−９）；ＡＥＲ−００１，ＡＢＴ−３０８（ヒト化１３Ｃ５．５抗体とも言う）、ＩＬ−４（例えばＡＥＲ−００１，ＩＬ４／ＩＬ１３トラップ）、ＩＬ−１７、ＯＸ４０Ｌ、ＴＳＬＰ、ＩＬ−２５、ＩＬ−３３、可溶型ＩｇＥ（例えば、ＸＯＬＡＩＲ、ＱＧＥ−０３１；ＭＥＤＩ−４２１２）及び膜結合型ＩｇＥ（キリズマブ）；及び受容体、例えば、ＩＬ−９受容体、ＩＬ−５受容体（例えば、ＭＥＤＩ−５６３（ベンラリズマブ，ＣＡＳ番号１０４４５１１−０１−４）、ＩＬ−４受容体アルファ（例えば、ＡＭＧ−３１７、ＡＩＲ−６４５，デュピルマブ）、ＩＬ−１３受容体アルファ１（例えばＲ−１６７１）及びＩＬ−１３受容体アルファ２、ＯＸ４０、ＴＳＬＰ−Ｒ、ＩＬ−７Ｒアルファ（ＴＳＬＰの共受容体）、ＩＬ１７ＲＢ（ＩＬ−２５の受容体）、ＳＴ２（ＩＬ−３３の受容体）、ＣＣＲ３、ＣＣＲ４、ＣＲＴＨ２（例えばＡＭＧ−８５３、ＡＰ７６８、ＡＰ−７６１、ＭＬＮ６０９５、ＡＣＴ１２９９６８）、ＦｃｅｐｓｉｌｏｎＲＩ、ＦｃｅｐｓｉｌｏｎＲＩＩ／ＣＤ２３（ＩｇＥの受容体）、Ｆｌａｐ（例えば、ＧＳＫ２１９０９１５）、Ｓｙｋキナーゼ（Ｒ−３４３、ＰＦ３５２６２９９）；ＣＣＲ４（ＡＭＧ−７６１）、ＴＬＲ９（ＱＡＸ−９３５）及びＣＣＲ３、ＩＬ５、ＩＬ３、ＧＭ−ＣＳＦの多重サイトカイン阻害剤（例えば、ＴＰＩ  ＡＳＭ８）から選択される標的の何れか一つの活性の阻害剤が含まれる。上記標的の阻害剤の例は、例えば、国際公開第２００８／０８６３９５号；国際公開第２００６／０８５９３８号；米国特許第７６１５２１３号；米国特許第７５０１１２１号；国際公開第２００６／０８５９３８号；国際公開第２００７／０８０１７４号；米国特許第７８０７７８８号；国際公開第２００５００７６９９号；国際公開第２００７０３６７４５号；国際公開第２００９／００９７７５号；国際公開第２００７／０８２０６８号；国際公開第２０１０／０７３１１９号；国際公開第２００７／０４５４７７号；国際公開第２００８／１３４７２４号；米国特許出願公開第２００９／００４７２７７号；及び国際公開第２００８／１２７２７１号）に開示されている。
【００９３】
本明細書に提供される治療剤は、例えば、ポリペプチド（例えば、抗体、イムノアドヘシン又はペプチボディ）、ここで同定された標的をコードする核酸分子に結合し得るタンパク質又は核酸分子に結合し得るアプタマー又は小分子（すなわち、ｓｉＲＮＡ）など、上で特定された標的に結合することができる薬剤を含む。
【００９４】
「抗ＩＬ１３／ＩＬ４経路阻害剤」は、ＩＬ−１３及び／又はＩＬ−４シグナル伝達を阻害する治療剤を指す。抗ＩＬ１３／ＩＬ４経路阻害剤の例は、ＩＬ１３及び／又はＩＬ４とその受容体との相互作用の阻害剤を含み、そのような阻害剤は、限定されないが、抗ＩＬ１３結合剤、抗ＩＬ４結合剤、抗ＩＬ３／ＩＬ４二重特異性結合剤、抗ＩＬ４受容体アルファ結合剤、抗ＩＬ１３受容体アルファ１結合剤及び抗ＩＬ１３受容体アルファ２結合剤を含む。ＩＬ１３、ＩＬ４に結合できる単一ドメイン抗体（単一のドメイン結合ＩＬ１３と単一のドメイン結合ＩＬ４を持つ二重特異性抗体を含む）、ＩＬ−１３Ｒアルファ１、ＩＬ−１３Ｒアルファ２又はＩＬ−４Ｒアルファが特に阻害剤として含まれる。複数の標的と結合することができる分子が含まれていることを理解すべきである。
【００９５】
「抗ＩＬ４結合剤」はヒトＩＬ４に結合する薬剤を指す。そのような結合剤は、小分子、アプタマー又はポリペプチドを含めることができる。そのようなポリペプチドは、限定されるものではないが、イムノアドヘシン、抗体、ペプチボディ及びペプチドからなる群から選択されるポリペプチドを含めることができる。一実施態様によれば、結合剤はヒトＩＬ−４配列に１ｕＭ〜１ｐＭの間の親和性で結合する。抗ＩＬ４結合剤の具体的な例は、可溶性ＩＬ４受容体アルファ（例えばヒトＦｃ領域に融合したＩＬ４受容体の細胞外ドメイン）、抗ＩＬ４抗体、及び可溶性ＩＬ１３受容体アルファ１（例えばヒトＦｃ領域に融合したＩＬ１３受容体の細胞外ドメイン）を含めることができる。
【００９６】
「抗ＩＬ４受容体アルファ結合剤」はヒトＩＬ４受容体アルファに結合する薬剤を指す。そのような結合剤は、小分子、アプタマー又はポリペプチドを含めることができる。そのようなポリペプチドは、限定されるものではないが、イムノアドヘシン、抗体、ペプチボディ及びペプチドからなる群から選択されるポリペプチドを含めることができる。一実施態様によれば、結合剤はヒトＩＬ−４受容体アルファ配列に１ｕＭ〜１ｐＭの間の親和性で結合する。抗ＩＬ４受容体アルファ結合剤の具体的な例は、抗ＩＬ４受容体アルファ抗体を含めることができる。
【００９７】
「抗ＩＬ１３結合剤」はヒトＩＬ１３に結合する薬剤を指す。そのような結合剤は、小分子、アプタマー又はポリペプチドを含めることができる。そのようなポリペプチドは、限定されるものではないが、イムノアドヘシン、抗体、ペプチボディ及びペプチドからなる群から選択されるポリペプチドを含めることができる。一実施態様によれば、結合剤はヒトＩＬ−１３配列に１ｕＭ〜１ｐＭの間の親和性で結合する。抗ＩＬ１３結合剤の具体的な例は、抗ＩＬ１３抗体、ヒトＦｃに融合した可溶性ＩＬ１３受容体アルファ２、ヒトＦｃに融合した可溶性ＩＬ４受容体アルファ、ヒトＦｃに融合した可溶性ＩＬ１３受容体アルファを含めることができる。一実施態様によれば、抗ＩＬ−１３抗体は、配列番号１、３、及び２４から選択される配列を含むＶＨ、並びに配列番号２、４、及び２５から選択される配列を含むＶＬを含む。一実施態様において、抗ＩＬ１３抗体は、ＨＶＲＨ１、ＨＶＲＨ２、ＨＶＲＨ３、ＨＶＲＬ１、ＨＶＲＬ２、及びＨＶＲＬ３を含み、それぞれのＨＶＲは、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、配列番号９、及び配列番号１０を含む。一実施態様では、抗ＩＬ−１３抗体はレブリキズマブである。一実施態様によれば、抗体はＩｇＧ１抗体である。別の実施態様によれば、抗体はＩｇＧ４抗体である。一実施態様によれば、ＩｇＧ４抗体はその定常ドメインにＳ２２８Ｐ変異を含む。一実施態様では、抗ＩＬ−１３抗体はその可変重鎖領域にＱ１Ｅ変異を含む。一実施態様では、抗ＩＬ−１３抗体はその可変軽鎖領域にＭ４Ｌ変異を含む。
【００９８】
「抗ＩＬ１３受容体アルファ１結合剤」はヒトＩＬ１３受容体アルファ１に特異的に結合する薬剤を指す。そのような結合剤は、小分子、アプタマー又はポリペプチドを含めることができる。そのようなポリペプチドは、限定されるものではないが、イムノアドヘシン、抗体、ペプチボディ及びペプチドからなる群から選択されるポリペプチドを含めることができる。一実施態様によれば、結合剤はヒトＩＬ−１３受容体アルファ１配列に１ｕＭ〜１ｐＭの間の親和性で結合する。抗ＩＬ１３受容体アルファ１結合剤の具体的な例は、抗ＩＬ１３受容体アルファ１抗体を含めることができる。
【００９９】
「抗ＩＬ１３受容体アルファ２結合剤」はヒトＩＬ１３受容体アルファ２に特異的に結合する薬剤を指す。そのような結合剤は、小分子、アプタマー又はポリペプチドを含めることができる。そのようなポリペプチドは、限定されるものではないが、イムノアドヘシン、抗体、ペプチボディ及びペプチドからなる群から選択されるポリペプチドを含めることができる。一実施態様によれば、結合剤はヒトＩＬ−１３受容体アルファ２配列に１μＭ〜１ｐＭの間の親和性で結合する。抗ＩＬ１３受容体アルファ２結合剤の具体的な例は、抗ＩＬ１３受容体アルファ２抗体を含めることができる。
【０１００】
「抗ＩｇＥ結合剤」はヒトＩｇＥに特異的に結合する薬剤を指す。そのような結合剤は、小分子、アプタマー又はポリペプチドを含めることができる。そのようなポリペプチドは、限定されるものではないが、イムノアドヘシン、抗体、ペプチボディ及びペプチドからなる群から選択されるポリペプチドを含めることができる。一実施態様によれば、抗ＩｇＥ抗体は、可変重鎖領域及び可変軽鎖領域を含み、可変重鎖領域は配列番号２２であり、可変軽鎖領域は配列番号２３である。一実施態様によれば、抗ＩｇＥ抗体は、ＸＯＬＡＩＲ（登録商標）抗体である。
【０１０１】
「Ｔｈ２関連疾患」は、本明細書において「２型関連疾患」と互換的に用いられ、Ｔヘルパー２型細胞（Ｔｈ２）及び炎症を伴うものであり、かつ例えば、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−９、及びＩＬ−１３を含むがこれらに限定されないＴｈ２サイトカインと関連している、線維症又は粘液産生などの他の病理学的及び臨床的特徴を含むことがある。このような細胞によって産生される更なる免疫及び／又は炎症細胞及びサイトカイン、酵素及び他の炎症性メディエーター（例えば、ヒスタミン、トリプターゼ、ロイコトリエン、ＩｇＥ）は、炎症及び／又は疾患の兆候及び症状に寄与し得る。このような更なる免疫及び／又は炎症細胞には、Ｔｈ１７細胞、２型先天性リンパ球細胞、好酸球、肥満細胞、好塩基球、好中球、及びＩｇＥ産生Ｂ細胞が含まれるが、これらに限定されない。Ｔｈ２関連疾患（本明細書では２型関連疾患とも呼ばれる）の例には、喘息、アトピー性喘息、アレルギー性喘息、重症喘息、アトピー性皮膚炎、アレルギー性鼻炎（季節性アレルギー性鼻炎を含む）、食物過敏症、蕁麻疹、水疱性皮膚疾患、慢性好酸球性肺炎、アレルギー性気管支肺アスペルギルス症、セリアック病、チャーグ・ストラウス症候群（結節性動脈周囲炎＋アトピー）、好酸球性筋痛症候群、好酸球増加症候群；突発性血管腫、好酸球性食道炎、好酸球性胃炎、好酸球性胃腸炎、好酸球性腸炎、及び好酸球性大腸炎を含む浮腫性反応；鼻腔ミクロポリープ及びポリポーシス、炎症性腸疾患（例えば、潰瘍性大腸炎及びクローン病）、強皮症、線維症、特発性肺線維症（ＩＰＦ）、肺炎症性疾患、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、肝線維症、心筋梗塞、慢性気管支炎、気管支拡張症、嚢胞性線維症、及び悪性腫瘍、例えばＩＬ−１３のようなＴｈ２サイトカインの異常発現に関連するがん又は腫瘍を含む。
【０１０２】
用語「小分子」は、５０ダルトンから２５００ダルトンの間の分子量を有する有機分子を指す。
【０１０３】
「抗体」なる用語は最も広範な意味で使用され、特に、例えば、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、ポリエピトープ特異性を有する抗体、単鎖抗体、二重特異性抗体を含む多重特異性抗体、及び所望の抗原結合活性を示す限り抗体断片を網羅する。そのような抗体は、キメラ、ヒト化、ヒト及び合成であり得る。
【０１０４】
用語「コントロール不良である」又は「コントロールできない」とは、疾患の症状を最小限に抑えるための治療レジメンが不十分であることを指す。本明細書で使用されるように、用語「コントロール不良である」及び「コントロール不充分である」とは交換可能に使用され同じ状態を指す。患者のコントロール状態は、患者の病歴、治療に対する応答性及び処方された現在の治療のレベルを含む多くの要因に基づいて、主治医によって決定することができる。例えば、医師は、７５％未満と予測されるＦＥＶ１又は自己最高値、過去２〜４週間におけるＳＡＢＡの必要の頻度（例えば、２回の用量／週に等しいかそれ以上）、過去２〜４週間における夜間中途覚醒／症状（例えば、２夜／週に等しいかそれ未満）、過去２〜４週間における活動の制限、過去２〜４週間における昼間症状などの要因を考慮する場合がある。
【０１０５】
用語「治療剤」は疾患を治療するために使用される任意の薬剤を指す。
【０１０６】
用語「コントローラー」又は「プリベンター（ｐｒｅｖｅｎｔｏｒ）」は、喘息の炎症をコントロールするために使用される任意の治療剤を指す。コントローラーの例は、コルチコステロイド、ロイコトリエン受容体アンタゴニスト（例えば、モンテルカスト、ジレウトン、プランルカスト、ザフィルルカストのようなロイコトリエンの合成又は活性を阻害する）、ＬＡＢＡ、コルチコステロイド／ＬＡＢＡ併用組成物、テオフィリン（アミノフィリンを含む）、クロモグリク酸ナトリウム、ネドクロミルナトリウム、オマリズマブ、ＬＡＭＡ、ＭＡＢＡ（例えば、二官能性ムスカリン性アンタゴニスト−ベータ２アゴニスト）、５−リポキシゲナーゼ活性化タンパク質（ＦＬＡＰ）阻害剤、及び酵素ＰＤＥ−４阻害剤（例えば、ロフルミラスト）を含む。「第二のコントローラー」は典型的には第一コントローラーとは同一でないコントローラーを指す。
【０１０７】
「コルチコステロイド節約（sparing）」又は「ＣＳ」なる用語は、他の治療剤の投与に起因する疾患の治療のためにコルチコステロイドを摂取している患者における疾患を治療するために使用されるコルチコステロイドの頻度及び／又は量の減少、又は消失を意味する。「ＣＳ剤」は、コルチコステロイドを摂取している患者においてＣＳを生じさせ得る治療剤を指す。
【０１０８】
用語「コルチコステロイド」は、限定されないが、フルチカゾン（プロピオン酸フルチカゾン（ＦＰ）を含む）、ベクロメタゾン、ブデソニド、シクレソニド、モメタゾン、フルニソリド、ベタメタゾン及びトリアムシノロンを含む。「吸入コルチコステロイド」は、吸入による送達に適しているコルチコステロイドを意味する。例示的な吸入可能コルチコステロイドは、フルチカゾン、ジプロピオン酸ベクロメタゾン、ブデノシド、フランカルボン酸モメタゾン、シクレソニド、フルニソリド、トリアムシノロンアセトニド、及び現在利用可能な又は将来利用可能になる任意の他のコルチコステロイドである。吸入することができ、かつ長時間作用型β２−アゴニストと併用され得るコルチコステロイドの例には、限定されないが、ブデソニド／ホルモテロール及びフルチカゾン／サルメテロールが含まれる。
【０１０９】
コルチコステロイド／ＬＡＢＡ併用薬の例は、フランカルボン酸フルチカゾン／ビランテロールトリフェニル酢酸塩（ｖｉｌａｎｔｅｒｏｌ  ｔｒｉｆｅｎａｔａｔｅ）及びインダカテロール／モメタゾンを含む。
【０１１０】
用語「ＬＡＢＡ」は、長時間作用型β−２アゴニストを意味し、そのアゴニストには、例えば、サルメテロール、ホルモテロール、バンブテロール、アルブテロール、インダカテロール、アルホルモテロール及びクレンブテロールが含まれる。
【０１１１】
用語「ＬＡＭＡ」は長時間作用型ムスカリン性アンタゴニストを意味し、そのアゴニストにはチオトロピウムが含まれる。
【０１１２】
ＬＡＢＡ／ＬＡＭＡの組み合わせの例は、限定されないが、オロダテロールチオトロピウム（Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ  Ｉｎｇｅｌｈｅｉｍ’ｓ）及びインダカテロールグリコピロニウム（Ｎｏｖａｒｔｉｓ）を含む。
【０１１３】
用語「ＳＡＢＡ」は、短時間作用型β−２アゴニストを意味し、そのアゴニストには、限定されないが、サルブタモール、レボサルブタモール、フェノテロール、テルブタリン、ピルブテロール、プロカテロール、ビトルテロール、リミテロール、カルブテロール、ツロブテロール及びレプロテロールが含まれる。
【０１１４】
ロイコトリエン受容体アンタゴニスト（ローカスト（ｌｅｕｋａｓｔ）と称することもある）（ＬＴＲＡ）は、ロイコトリエンを阻害する薬物である。ロイコトリエン阻害剤の例には、モンテルカスト、ジロートン、プランルカスト、及びザフィルルカストが含まれる。
【０１１５】
用語「ＦＥＶ１」は、強制呼気の最初の一秒間に吐き出される空気の体積を指す。それは気道閉塞の尺度である。ＦＥＶ１の２０％減少（ＰＣ２０）を誘導するために必要とされるメサコリンの刺激的濃度は気道過敏性の尺度である。ＦＥＶ１は他の同様の方法、例えばＦＥＶ１とも言及され得、そのような類似の変形例全てが同じ意味を持つことが理解されるべきである。
【０１１６】
用語「ＦＥＶ１の相対的変化」＝（治療の第１２週目でのＦＥＶ１−治療開始前のＦＥＶ１）をＦＥＶ１で割ったもの。
【０１１７】
用語「軽度の喘息」は、一般に１週間に２回未満の症状又は増悪、１ヶ月に２回未満の夜行性の症状を経験する患者を指し、増悪の間に無症候性である。軽度の、断続的な喘息は以下により必要に応じてしばしば治療される：吸入気管支拡張薬（短時間作用型吸入β２アゴニスト）；既知のトリガーの回避；毎年のインフルエンザワクチン接種；６〜１０年毎の肺炎球菌ワクチン接種；及び場合によっては同定されたトリガーへの曝露前の吸入β２−アゴニスト、クロモリン、又はネドクロミル。患者において短時間作用型β２アゴニストの必要性が増加している（例えば、急性増悪のために１日に短時間作用型β２−アゴニストを３から４回以上使用するか又は症状のため１ヶ月に１つ以上のキャニスターを使用する）場合、患者は治療に漸増を必要とし得る。
【０１１８】
用語「中等度喘息」は、一般に、患者が週２回以上増悪を経験しかつその増悪が睡眠や活動に影響を与える；患者が１ヶ月に２回以上喘息のため夜間に覚醒する；患者が短時間作用型吸入β２−アゴニストを毎日又は一日おきに必要とする慢性的な喘息症状を持っている；患者のＰＥＦ又はＦＥＶ１の治療前ベースラインが６０から８０％と予測され、ＰＥＦ変動が２０から３０％である、喘息を指す。
【０１１９】
用語「重度の喘息」は、一般に、患者がほぼ継続した症状、頻繁な増悪、喘息に起因する頻繁な夜間覚醒を有し、活動が制限され、ＰＥＦ又はＦＥＶ１ベースラインが６０％未満と予測され、かつＰＥＦ変動が２０から３０％である、喘息を指す。
【０１２０】
救急薬の例には、アルブテロール、ベントリンなどが含まれる。
【０１２１】
「耐性（抵抗性）」とは、治療剤による治療後にほとんど又は全く有意な改善を示さない疾患を指す。例えば、喘息がコントロール不良のままであるか又はＦＥＶ１が改善しないかを確定するために、高用量のＩＣＳ（例えば、一日のコルチコステロイドの総用量又は５００マイクログラム以上のＦＰ（又は等価物）の一日の総用量を少なくとも３日間又はそれ以上連続して４倍する）、又は全身のコルチコステロイドによる治療を２週間の治験中、必要とする喘息は、しばしば重度の難治性喘息と考えられる。
【０１２２】
本明細書に提供される治療薬は、非経口、皮下、腹腔内、肺内、及び鼻腔内を含む、任意の適切な手段により投与することができる。非経口注入には、筋肉内、静脈内、動脈内、腹腔内、又は皮下投与が含まれる。一実施態様では、治療剤は吸入される。別の実施態様によれば、投与は注射、例えば、静脈内又は皮下注射によって与えられる。更に別の実施態様によれば、治療薬は、注射器（例えば、充填済又は未充填）又はオートインジェクターを使用して投与される。
【０１２３】
疾患の予防又は治療のために、治療剤の適切な投薬量は、治療される疾患のタイプ、疾患の重症度及び過程、治療剤が予防目的か治療目的として投与されるのかどうか、過去の治療法、患者の臨床歴、及び薬剤への応答、及び主治医の裁量に依存するであろう。治療剤は、一回で又は一連の治療に渡って適切に患者に投与される。治療剤組成物は良好な医療実務に合致した形で処方され、用量決定され、投与されるであろう。この観点において考慮すべき要因には、治療されている特定の疾患、治療されている特定の哺乳類、個々の患者の臨床状態、疾患の原因、薬剤送達の部位、投与方法、投与スケジュール、及び医療従事者に知られている他の要因が含まれる。
【０１２４】
Ｔｈ２関連疾患（喘息を含む）のため、及びＴＨ２療法を使用して他の疾患を治療するためのレブリキズマブの投薬：レブリキズマブは０．１ｍｇ／ｋｇから１００ｍｇ／ｋｇ（患者体重）を投与することができる。一実施態様では、患者に投与される投薬量は０．１ｍｇ／ｋｇから２００ｍｇ／ｋｇ（患者体重）の間である。別の実施態様では、用量は１ｍｇ／ｋｇから１０ｍｇ／ｋｇ（患者体重）である。
【０１２５】
代替の実施態様では、レブリキズマブはフラット用量として投与することができる。一実施態様では、レブリキズマブは１２５〜１０００ｍｇのフラット用量（すなわち、体重に依存しない）、又は３７．５ｍｇのフラット用量、又は１２５ｍｇのフラット用量、又は２５０ｍｇのフラット用量、又は５００ｍｇのフラット用量として、皮下注射によるか又は静脈内注射により、２週間毎、３週間毎、４週間毎、５週間毎、６週間毎、７週間毎、８週間毎、９週間毎、１０週間毎、１１週間毎、１２週間毎、１３週間毎、１４週間毎、１５週間毎、１６週間毎、１ヶ月毎、２ヶ月毎、３ヶ月毎、又は４ヶ月毎からなる群から選択される時間の頻度で投与される。別の実施態様では、患者が体重過多である場合、レブリキズマブは、例えば月あたり３回の頻度で１２５〜２５０ｍｇを投与することができる。一実施態様では、レブリキズマブは４週間ごとに１２５ｍｇ、２５０ｍｇ又は５００ｍｇのフラット用量として投与される。別の実施態様では、レブリキズマブは４０ｋｇを超える患者に対して４週間ごとに３７．５ｍｇ、１２５ｍｇ、２５０ｍｇ又は５００ｍｇのフラット用量として投与される。
【０１２６】
一実施態様では、患者は１８歳以上である。一実施態様では、喘息患者は１２から１７歳であり、レブリキズマブが２５０ｍｇのフラット用量で又は１２５ｍｇのフラット用量で投与される。一実施態様では、喘息患者は６から１１歳であり、レブリキズマブが１２５ｍｇのフラット用量で投与される。
【０１２７】
治療剤に対する「患者の応答」又は「応答」（及びその文法的変化形）は、限定しないが、（１）減速及び完全な停止を含む疾患の進行のある程度の阻害；（２）疾患の発現及び／又は症状の数の減少；（３）病巣サイズの縮小；（４）隣接末梢器官及び／又は組織への免疫又は炎症細胞浸潤の阻害（すなわち、減少、減速又は完全停止）；（５）疾患拡散の阻害（すなわち減少、減速又は完全停止）；（６）疾病病巣の退縮又は消失を、必ずでは無いが、もたらし得る自己免疫応答の減少；（７）疾患に伴う一又は複数の症状のある程度の軽減；（８）治療後の無病を提示する期間の増加；及び／又は（９）治療後の任意の時点での死亡率の減少を含む、患者に対する利益を示す任意のエンドポイントを使用して評価することができる。
【０１２８】
「親和性」とは、分子（例えば、抗体）の単一結合部位とその結合パートナー（例えば、抗原）との間の非共有結合相互作用の総和の強度を指す。本明細書で使用する場合、特に断らない限り、「結合親和性」は、結合対（例えば、抗体及び抗原結合アーム）のメンバー間の１：１の相互作用を反映している内因的な結合親和性を指す。そのパートナーＹに対する分子Ｘの親和性は、一般的に解離定数（Ｋｄ）で表すことができる。親和性は、本明細書に記載したものを含む、当技術分野で周知である一般的な方法によって測定することができる。結合親和性を測定するための特定の例証的かつ例示的実施態様は、次に説明される。
【０１２９】
「親和性成熟」抗体とは、その改変を有していない親抗体と比較して、抗原に対する抗体の親和性に改良を生じせしめる一又は複数の改変を、一又は複数の超可変領域（ＨＶＲ）に持つ抗体を指す。
【０１３０】
「抗標的抗体」及び「標的に結合する抗体」なる用語は、抗体が、標的を標的とする点で診断及び／又は治療用薬剤として有用であるように、十分な親和性で標的に結合することができる抗体を指す。一実施態様では、抗標的抗体の無関係な非標的タンパク質への結合の程度は、例えば、ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）又はビアコアアッセイによって測定して、抗体の標的への結合の約１０％未満である。特定の実施態様では、標的へ結合する抗体は、解離定数（Ｋｄ）が、≦１μＭ、≦１００ｎＭ、≦１０ｎＭ、≦１ｎＭ、≦０．１ｎＭ、≦０．０１ｎＭ、又は≦０．００１ｎＭ（例えば、１０−８Ｍ以下、例えば、１０−８Ｍから１０−１３Ｍ、例えば、１０−９Ｍから１０−１３Ｍ）である。特定の実施態様では、抗標的抗体は、異なる種の間で保存されている標的のエピトープに結合する。
【０１３１】
「抗体断片」は、インタクトな抗体が結合する抗原に結合するインタクトな抗体の一部を含むインタクトな抗体以外の分子を指す。抗体断片の例としては、限定されないが、単鎖Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆａｂ’−ＳＨ、Ｆ（ａｂ’）２；ダイアボディ；直鎖状抗体；単鎖抗体分子（例えばｓｃＦｖ）；及び抗体断片から形成された多重特異性抗体が含まれる。
【０１３２】
参照抗体と「同じエピトープに結合する抗体」とは、競合アッセイにおいて５０％以上、参照抗体のその抗原への結合をブロックする抗体を指し、逆に参照抗体は、競合アッセイにおいて５０％以上、その抗体のその抗原への結合をブロックする。競合アッセイを実施するための様々な方法が当該分野においてよく知られている。
【０１３３】
本明細書における目的のための「アクセプターヒトフレームワーク」とは、以下に定義されるように、ヒト免疫グロブリンフレームワーク又はヒトコンセンサスフレームワークから得られる軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）フレームワーク又は重鎖可変ドメイン（ＶＨ）フレームワークのアミノ酸配列を含むフレームワークである。ヒト免疫グロブリンフレームワーク又はヒトコンセンサスフレームワーク「に由来する」アクセプターヒトフレームワークは、その同一のアミノ酸配列を含んでいてもよく、又はそれはアミノ酸配列変化を含み得る。幾つかの実施態様では、アミノ酸変化の数は、１０以下、９以下、８以下、７以下、６以下、５以下、４以下、３以下、又は２以下である。幾つかの実施態様では、ＶＬアクセプターヒトフレームワークは、ＶＬヒト免疫グロブリンフレームワーク配列又はヒトコンセンサスフレームワーク配列と配列が同一である。
【０１３４】
用語「キメラ」抗体は、重鎖及び／又は軽鎖の一部分が特定の起源又は種から由来する一方、重鎖及び／又は軽鎖の残りが異なる起源又は種から由来する抗体を指す。
【０１３５】
抗体の「クラス」は、その重鎖が保有する定常ドメイン又は定常領域のタイプを指す。抗体には５つの主要なクラス：ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ及びＩｇＭがあり、これらの幾つかは、サブクラス（アイソタイプ）、例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩＧＡ１、及びＩｇＡ２に更に分けられ得る。免疫グロブリンの異なるクラスに対応する重鎖定常ドメインは、それぞれα、δ、ε、γ、及びμと呼ばれる。
【０１３６】
「エフェクター機能」とは、抗体のアイソタイプにより変わる、抗体のＦｃ領域に起因する生物学的活性を指す。抗体エフェクター機能の例としては、Ｃ１ｑ結合及び補体依存性細胞傷害性（ＣＤＣ）；Ｆｃ受容体結合性；抗体依存性細胞媒介性細胞障害性（ＡＤＣＣ）；ファゴサイトーシス；細胞表面受容体（例えば、Ｂ細胞受容体）のダウンレギュレーション；及びＢ細胞活性化が含まれる。
【０１３７】
薬剤、例えば、薬学的製剤の「有効量」とは、所望の治療的又予防的結果を達成するために必要な用量及び期間での、有効な量を指す。
【０１３８】
本明細書における用語「Ｆｃ領域」は、定常領域の少なくとも一部を含む、免疫グロブリン重鎖のＣ末端領域を定義するために使用される。その用語は、天然配列Ｆｃ領域と変異体Ｆｃ領域を含む。一実施態様では、ヒトＩｇＧ重鎖Ｆｃ領域はＣｙｓ２２６又はＰｒｏ２３０から重鎖のカルボキシル末端まで伸長する。しかし、Ｆｃ領域のＣ末端リジン（Ｌｙｓ４４７）は存在しているか、又は存在していない場合がある。本明細書に明記されていない限り、Ｆｃ領域又は定常領域内のアミノ酸残基の番号付けは、Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD, 1991に記載されるように、ＥＵインデックスとも呼ばれるＥＵ番号付けシステムに従う。
【０１３９】
「フレームワーク」又は「ＦＲ」は、超可変領域（ＨＶＲ）残基以外の可変ドメイン残基を指す。可変ドメインのＦＲは、一般に４つのＦＲのドメイン、つまり、ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３、及びＦＲ４からなる。従って、ＨＶＲ及びＦＲ配列は、一般にＶＨ（又はＶＬ）の以下の配列に現れる：ＦＲ１−Ｈ１（Ｌ１）−ＦＲ２−Ｈ２（Ｌ２）−ＦＲ３−Ｈ３（Ｌ３）−ＦＲ４。
【０１４０】
「完全長抗体」、「インタクトな抗体」及び「全抗体」なる用語は、ここでは互換的に使用され、天然型抗体構造と実質的に類似の構造を有するか、又はここで定義されるＦｃ領域を含む重鎖を有する抗体を指す。
【０１４１】
「宿主細胞」、「宿主細胞株」及び「宿主細胞培養」なる用語は互換的に使用され、外因性の核酸が導入された細胞を指し、そのような細胞の子孫を含む。宿主細胞は、「形質転換体」及び「形質転換された細胞」を含み、これは継代の数に関係なく、一次形質転換細胞と、それに由来する子孫を含む。子孫は親細胞と核酸含量が完全には同一ではないかもしれないが、突然変異が含まれる場合がある。最初に形質転換された細胞においてスクリーニング又は選択されたものと同じ機能又は生物活性を有する変異型子孫が本明細書において含まれる。
【０１４２】
「ヒト抗体」は、ヒト又はヒト細胞により産生されるか、又はヒト抗体のレパートリー又は他のヒト抗体をコードする配列を利用した非ヒト源に由来する抗体のそれに対応するアミノ酸配列を有するものである。ヒト抗体のこの定義は、非ヒト抗原結合残基を含むヒト化抗体を特に除外する。
【０１４３】
「ヒトコンセンサスフレームワーク」とは、ヒト免疫グロブリンＶＬ又はＶＨフレームワーク配列の選択において最も一般的に存在するアミノ酸残基を表すフレームワークである。一般的には、ヒト免疫グロブリンＶＬ又はＶＨ配列の選択は、可変ドメイン配列のサブグループからのものである。一般的に、配列のサブグループは、 Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, Fifth Edition, NIH Publication 91-3242, Bethesda MD (1991), vols. 1-3のサブグループである。一実施態様において、ＶＬについて、サブグループは上掲のＫａｂａｔらのサブグループカッパＩである。一実施態様において、ＶＨについて、サブグループは上掲のＫａｂａｔらのサブグループＩＩＩである。
【０１４４】
「ヒト化」抗体は、非ヒトＨＶＲ由来のアミノ酸残基とヒトＦＲ由来アミノ酸残基を含むキメラ抗体を指す。特定の実施態様では、ヒト化抗体は、少なくとも一つ、典型的には２つの可変ドメインの実質的に全てを含み、ＨＶＲ（例えば、ＣＤＲ）の全て又は実質的に全てが非ヒト抗体のものに対応し、ＦＲの全て又は実質的に全てがヒト抗体のものに対応する。ヒト化抗体は、任意には、ヒト抗体由来の抗体定常領域の少なくとも一部を含んでいてもよい。抗体、例えば、非ヒト抗体の「ヒト化型」は、ヒト化を受けた抗体を指す。
【０１４５】
「超可変領域」又は「ＨＶＲ」なる用語は、配列が超可変であるか、及び／又は構造的に定まったループ（「超可変ループ」）を形成する抗体可変ドメインの領域の各々を指す。一般的に、天然４鎖抗体は、ＶＨ（Ｈ１、Ｈ２、Ｈ３）に３つ、ＶＬ（Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３）に３つの６つのＨＶＲを含む。ＨＶＲは、一般的に超可変ループ由来及び／又は「相補性決定領域」（ＣＤＲ）由来のアミノ酸残基を含み、後者は、典型的には最も配列可変性であり、及び／又は抗原認識に関与している。本明細書で使用されるＨＶＲは、位置２４−３６（ＨＶＲＬ１について）、４６−５６（ＨＶＲＬ２について）、８９−９７（ＨＶＲＬ３について）、２６−３５Ｂ（ＨＶＲＨ１について）、４７−６５（ＨＶＲＨ２について）、及び９３−１０２（ＨＶＲＨ３について）の内に位置する残基の任意の番号を含む。
【０１４６】
「個体」又は「患者」又は「被験者」は哺乳動物である。哺乳動物は、限定されないが、家畜動物（例えば、ウシ、ヒツジ、ネコ、イヌ、ウマ）、霊長類（例えば、ヒト、及びサルなどの非ヒト霊長類）、ウサギ、げっ歯類（例えば、マウス及びラット）を含む。特定の実施態様では、個体又は患者又は被験者はヒトである。幾つかの実施態様では、ここでの「個体」又は「患者」又は「被験者」は、喘息又は呼吸器疾患の一又は複数の徴候、症状、又は他の指標を経験しているか経験した、治療に適格な任意の一人のヒト被験者である。被験者として含める意図があるのは、疾患の如何なる臨床徴候も示していない臨床研究治験に関与した任意の被験者、疫学的研究に関与した被験者、又は対照として一度使用された被験者である。被験者は、Ｔｈ２経路阻害剤又は他の薬剤で過去に治療されていてもよく、又は治療されていなくてもよい。被験者は、ここでの治療が開始されるときＴｈ２阻害剤に対してナイーブであってもよく、つまり、被験者は、「ベースライン」において（つまり、ここでの治療法におけるＴＨ２阻害剤の初回用量の投与前のセットポイント時点、例えば治療開始前の被験者の選別の日）、例えばＴｈ２阻害剤で過去に治療されていなくてもよい。そのような「ナイーブな」被験者は、一般に、そのような薬剤での治療のための候補であると考えられる。
【０１４７】
「小児」個体又は患者又は被験者は出生直後から１８歳（又は０から１８歳）までのヒトである。幾つかの実施態様では、小児個体又は患者又は被験者は２から６歳、２から１７歳、６から１１歳、６から１８歳、６から１７歳、８から１７歳、１２から１７歳、又は１２から１８歳である。
【０１４８】
「単離された」抗体は、その自然環境の成分から分離されたものである。幾つかの実施態様では、抗体は、例えば、電気泳動（例えば、ＳＤＳ−ＰＡＧＥ、等電点電気泳動（ＩＥＦ）、キャピラリー電気泳動）又はクロマトグラフィー（例えば、イオン交換又は逆相ＨＰＬＣ）により決定されて、９５％又は９９％を越える純度まで精製される。抗体純度の評価法の概説としては、例えば、Flatman et al., J. Chromatogr. B 848:79-87 (2007)を参照のこと。
【０１４９】
「単離された」核酸は、その自然環境の成分から分離された核酸分子を指す。単離された核酸は、核酸分子を通常含む細胞に含まれる核酸分子を含むが、その核酸分子は、染色体外又はその自然の染色体位置とは異なる染色体位置に存在している。
【０１５０】
「抗標的抗体をコードする単離された核酸」は、抗体の重鎖及び軽鎖（又はその断片）をコードする一又は複数の核酸分子を指し、単一のベクター又は別個のベクター内のそのような核酸分子、及び宿主細胞の一又は複数の位置に存在するそのような核酸分子を含む。
【０１５１】
用語「モノクローナル抗体」は、実質的に均一な抗体の集団から得られる抗体を意味し、すなわち、例えば、天然に生じる変異を含み、又はモノクローナル抗体調製物の製造時に発生し、一般的に少量で存在している変異体などの、可能性のある変異体抗体を除き、集団を構成する個々の抗体は同一であり、及び／又は同じエピトープに結合する。異なる決定基（エピトープ）に対する異なる抗体を典型的には含むポリクローナル抗体調製物とは対照的に、モノクローナル抗体調製物の各モノクローナル抗体は、抗原上の単一の決定基に対するものである。従って、「モノクローナル」なる修飾語は、実質的に均一な抗体の集団から得られる抗体の特徴を示し、任意の特定の方法による抗体の産生を必要とするものとして解釈されるべきではない。例えば、ここで提供される方法に従って使用されるモノクローナル抗体は、限定されないが、ハイブリドーマ法、組み換えＤＮＡ法、ファージディスプレイ法、ヒト免疫グロブリン遺伝子座の全部又は一部を含むトランスジェニック動物を利用する方法を含む様々な技術によって作製され得、そのような方法及びモノクローナル抗体を作製するための他の例示的な方法は本明細書に記載されている。
【０１５２】
「ネイキッド抗体」とは、異種性部分（例えば、細胞傷害性部分）又は放射性標識にコンジュゲートしていない抗体を指す。ネイキッド抗体が薬学的製剤中に存在していてもよい。
【０１５３】
「天然型抗体」は、様々な構造をとる天然に生じる免疫グロブリン分子を指す。例えば、天然型ＩｇＧ抗体は、ジスルフィド結合している２つの同一の軽鎖と２つの同一の重鎖からなる約１５００００ダルトンのヘテロ四量体糖タンパク質である。Ｎ末端からＣ末端に向けて、各重鎖は、可変重鎖ドメイン又は重鎖可変ドメインとも呼ばれる可変領域（ＶＨ）を有し、３つの定常ドメイン（ＣＨ１、ＣＨ２及びＣＨ３）が続く。同様に、Ｎ末端からＣ末端に向けて、各軽鎖は、可変軽鎖ドメイン又は軽鎖可変ドメインとも呼ばれる可変領域（ＶＬ）を有し、定常軽鎖（ＣＬ）ドメインが続く。抗体の軽鎖は、その定常ドメインのアミノ酸配列に基づいて、カッパ（κ）とラムダ（λ）と呼ばれる、２つのタイプの一つに割り当てることができる。
【０１５４】
用語「添付文書」は、適応、用法、用量、投与法、併用療法、禁忌についての情報、及び／又はそのような治療用製品の使用に関する警告を含む、治療用製品の商用パッケージに慣習的に含められるインストラクションを指すために使用される。用語「添付文書」はまた、意図される用途、試験の原理、試薬の調製及び取り扱い、検体の収集及び調製、アッセイのキャリブレーション及びアッセイ手順、アッセイの感度と特異性などの性能と精度のデータに関する情報を含む、診断用製品の商用パッケージに慣習的に含められるインストラクションを指すためにも使用される。
【０１５５】
参照ポリペプチド配列に関する「アミノ酸配列同一性パーセント（％）」は、配列を整列させ、最大のパーセント配列同一性を得るために必要ならば間隙を導入した後、如何なる保存的置換も配列同一性の一部と考えないとした、参照ポリペプチドのアミノ酸残基と同一である候補配列中のアミノ酸残基のパーセントとして定義される。パーセントアミノ酸配列同一性を決定する目的のためのアラインメントは、当業者の技量の範囲にある種々の方法、例えばＢＬＡＳＴ、ＢＬＡＳＴ−２、ＡＬＩＧＮ、又はＭｅｇａｌｉｇｎ（ＤＮＡＳＴＡＲ）ソフトウェアのような公に入手可能なコンピュータソフトウェアを使用することにより達成可能である。当業者であれば、比較される配列の完全長に対して最大のアラインメントを達成するために必要な任意のアルゴリズムを含む、配列をアラインするための適切なパラメーターを決定することができる。しかし、ここでの目的のためには、％アミノ酸配列同一性の値は、配列比較コンピュータープログラムＡＬＩＧＮ−２を使用することによって生成される。ＡＬＩＧＮ−２配列比較コンピュータープログラムはジェネンテック社によって著作され、そのソースコードは米国著作権庁（ワシントンＤ．Ｃ．，２０５５９）に使用者用書類とともに提出され、米国著作権登録番号ＴＸＵ５１００８７の下で登録されている。ＡＬＩＧＮ−２プログラムは、ジェネンテック社（サウスサンフランシスコ、カリフォルニア）から公的に入手可能であり、又はそのソースコードからコンパイルすることができる。ＡＬＩＧＮ−２プログラムは、デジタルＵＮＩＸ（登録商標）のＶ４．０Ｄを含む、ＵＮＩＸ（登録商標）オペレーティングシステム上での使用ではコンパイルされるべきである。全ての配列比較パラメーターは、ＡＬＩＧＮ−２プログラムによって設定され、変動しない。
【０１５６】
アミノ酸配列比較にＡＬＩＧＮ−２が用いられる状況では、与えられたアミノ酸配列Ａの、与えられたアミノ酸配列Ｂへの、それとの、又はそれに対する％アミノ酸配列同一性（あるいは、与えられたアミノ酸配列Ｂへ、それと、又はそれに対して所定の％アミノ酸配列同一性を持つか又は含む与えられたアミノ酸配列Ａと言うこともできる）は次のように計算される：
分数Ｘ／Ｙの１００倍であって、Ｘは配列アラインメントプログラムＡＬＩＧＮ−２により、ＡとＢのそのプログラムのアラインメントにおいて同一と一致したスコアのアミノ酸残基の数であり、ＹはＢ中の全アミノ酸残基数である。アミノ酸配列Ａの長さがアミノ酸配列Ｂの長さと異なる場合、ＡのＢに対する％アミノ酸配列同一性は、ＢのＡに対する％アミノ酸配列同一性とは異なることは理解されるであろう。特に断らない限り、ここで使用される全てのアミノ酸配列同一性％の値が、ＡＬＩＧＮ−２コンピュータープログラムを使用し、直前の段落で説明したようにして得られる。
【０１５７】
用語「薬学的製剤」は、その中に含まれる活性成分の生物学的活性が効果的であることを可能にする形態であって、製剤が投与される被験者にとって許容できない毒性がある更なる成分を含まない調製物を指す。
【０１５８】
「薬学的に許容される担体」は、被験者に非毒性である、有効成分以外の薬学的製剤中の成分を指す。薬学的に許容される担体は、限定されないが、緩衝剤、賦形剤、安定剤、又は保存料を含む。
【０１５９】
特に断らない限り、本明細書で使用する用語「標的」は、霊長類（例えばヒト）及び齧歯類（例えば、マウス及びラット）などの哺乳動物を含む任意の脊椎動物由来の任意の天然型分子を指す。その用語は、「完全長」の未処理の標的並びに細胞内でのプロセシングから生じる任意の形態の標的を包含する。その用語はまた、天然に存在する標的の変異体、例えば、スプライス変異体又は対立遺伝子変異体を包含する。
【０１６０】
用語「治療」（及び「治療する（ｔｒｅａｔ）」又は「治療している（ｔｒｅａｔｉｎｇ）」など文法上の変形）は、治療されている個体の自然経過を変えようと試みる臨床的介入を指し、予防のために、又は臨床病理の過程中の何れかで実施され得る。治療の望ましい効果は、限定されないが、疾患の発症又は再発を予防すること、症状の緩和、疾患の直接的又は間接的な病理学的帰結の縮小、転移を予防すること、疾患の進行の速度を遅らせること、疾患状態の改善又は緩和、及び寛解又は予後の改善を含む。幾つかの実施態様では、抗体は、疾患の発症を遅延させるか又は疾患の進行を遅くするために使用される。
【０１６１】
「可変領域」又は「可変ドメイン」なる用語は、抗体の抗原への結合に関与する抗体の重鎖又は軽鎖のドメインを指す。天然型抗体の重鎖及び軽鎖の可変ドメイン（それぞれＶＨ及びＶＬ）は、４つの保存されたフレームワーク領域（ＦＲ）と３つの超可変領域（ＨＶＲ）を含む各ドメインを持ち、一般的に類似構造を有する。（例えば、Kindt et al. Kuby Immunology, 6th ed., W.H. Freeman and Co., 91頁 (2007)を参照）。抗原結合特異性を付与するには、単一のＶＨ又はＶＬドメインで十分である。更に、特定の抗原に結合する抗体は、相補的なＶＬ又はＶＨドメインのそれぞれのライブラリーをスクリーニングするために、抗原に結合する抗体由来のＶＨ又はＶＬドメインを用いて単離することができる。例えば、Portolano et al., J. Immunol. 150:880-887 (1993); Clarkson et al., Nature 352:624-628 (1991)を参照。
【０１６２】
用語「ベクター」は、それが連結されている別の核酸を伝播することができる核酸分子を指す。この用語は、自己複製核酸構造としてのベクター、並びにそれが導入された宿主細胞のゲノム中に組み込まれたベクターを含む。ある種のベクターは、それらが作用可能なように連結されている核酸の発現を指示することができる。このようなベクターを、本明細書では「発現ベクター」と言う。
【０１６３】
組成物及び方法
本発明は、試験された試料の９８％超でＩＬ−１３のフェムトグラム／ｍＬレベルを検出する高感度であり、本明細書に記載のように高度に特異的であるＩＬ−１３イムノアッセイ法を少なくとも部分的に提供する。このような高感度かつ高度に特異的なイムノアッセイ法を用いて、Ｔｈ２経路阻害剤である治療的処置に応答する可能性がより高い、血清ＩＬ−１３レベルが上昇した患者を選択又は同定する方法並びに重度の増悪を被る可能性がより高い喘息患者を特定する方法も本明細書で提供される。
【０１６４】
例示的な抗体
抗ＩＬ１３抗体
一態様において、本発明はヒトＩＬ−１３に結合する単離された抗体を提供する。
【０１６５】
例示的抗ＩＬ１３抗体は、既知であり、例えば、限定しないが、レブリキズマブ、ＩＭＡ−０２６、ＩＭＡ−６３８（アンルキンズマブ（ａｎｒｕｋｉｎｚｕｍａｂ）とも呼ばれる、ＩＮＮ番号９１０６４９−３２−０；ＱＡＸ−５７６）、トラロキヌマブ（ｔｒａｌｏｋｉｎｕｍａｂ）（ＣＡＴ−３５４とも呼ばれる、ＣＡＳ番号１０４４５１５−８８−９）；ＡＥＲ−００１、ＡＢＴ−３０８（ヒト化１３Ｃ５．５抗体とも呼ばれる）を含む。このような抗ＩＬ１３抗体及びＩＬ１３の他の阻害剤の例は、例えば、国際公開第２００５／０６２９６７号、国際公開第２００８／０８６３９５号、国際公開第２００６／０８５９３８号、米国特許第７６１５２１３号、米国特許第７５０１１２１号、国際公開第２００７／０３６７４５号、国際公開第２０１０／０７３１１９号、国際公開第２００７／０４５４７７号、国際公開第２０１４／１６５７７１号に記載されている。一実施態様では、抗ＩＬ１３抗体はヒト化ＩｇＧ４抗体である。一実施態様では、抗ＩＬ１３抗体はレブリキズマブである。一実施態様では、抗ＩＬ１３抗体は、３つの重鎖ＨＶＲ、ＨＶＲ−Ｈ１（配列番号５）、ＨＶＲ−Ｈ２（配列番号６）、及びＨＶＲ−Ｈ３（配列番号７）を含む。一実施態様では、抗ＩＬ１３抗体は、３つの軽鎖ＨＶＲ、ＨＶＲ−Ｌ１（配列番号８）、ＨＶＲ−Ｌ２（配列番号９）、及びＨＶＲ−Ｌ３（配列番号１０）を含む。一実施態様では、抗ＩＬ１３抗体は、３つの重鎖ＨＶＲ及び３つの軽鎖ＨＶＲ、ＨＶＲ−Ｈ１（配列番号５）、ＨＶＲ−Ｈ２（配列番号６）、ＨＶＲ−Ｈ３（配列番号７）、ＨＶＲ−Ｌ１（配列番号８）、ＨＶＲ−Ｌ２（配列番号９）、及びＨＶＲ−Ｌ３（配列番号１０）を含む。一実施態様では、抗ＩＬ１３抗体は、配列番号１、３及び２４から選択されるアミノ酸配列を有する可変重鎖領域ＶＨを含む。一実施態様では、抗ＩＬ１３抗体は、配列番号２、４及び２５から選択されるアミノ酸配列を有する可変軽鎖領域ＶＬを含む。一実施態様では、抗ＩＬ１３抗体は、配列番号１、３及び２４から選択されるアミノ酸配列を有する可変重鎖領域ＶＨと、配列番号２、４及び２５から選択されるアミノ酸配列を有する可変軽鎖領域ＶＬとを含む。
【０１６６】
別の実施態様では、抗体は、配列番号１及び配列番号２の可変領域配列を含む。別の実施態様では、抗体は、配列番号１及び配列番号４の可変領域配列を含む。別の実施態様では、抗体は、配列番号１及び配列番号２５の可変領域配列を含む。別の実施態様では、抗体は、配列番号３及び配列番号２の可変領域配列を含む。別の実施態様では、抗体は、配列番号３及び配列番号４の可変領域配列を含む。別の実施態様では、抗体は、配列番号３及び配列番号２５の可変領域配列を含む。別の実施態様では、抗体は、配列番号２４及び配列番号２の可変領域配列を含む。別の実施態様では、抗体は、配列番号２４及び配列番号４の可変領域配列を含む。別の実施態様では、抗体は、配列番号２４及び配列番号２５の可変領域配列を含む。
【０１６７】
上記実施態様の何れかにおいて、抗ＩＬ−１３抗体はヒト化することができる。一実施態様において、抗ＩＬ−１３抗体は、上記実施態様の何れかにおけるＨＶＲを含み、更に、アクセプターヒトフレームワーク、例えばヒト免疫グロブリンのフレームワーク又はヒトコンセンサスフレームワークを含む。
【０１６８】
別の態様において、抗ＩＬ−１３抗体は、配列番号１のアミノ酸配列に対して、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の配列同一性を有する重鎖可変ドメイン（ＶＨ）配列を含む。特定の実施態様では、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％の同一性を有するＶＨ配列は、参照配列に対して置換（例えば保存的置換）、挿入、又は欠失を含むが、その配列を含む抗ＩＬ−１３抗体はＩＬ−１３へ結合する能力を保持する。特定の実施態様では、配列番号１において、合計１から１０のアミノ酸が、置換、変更、挿入及び／又は欠失している。特定の実施態様では、置換、挿入、又は欠失は、ＨＶＲ外の領域で（すなわちＦＲ内で）生じる。場合によっては、抗ＩＬ１３抗体は、配列番号１のＶＨ配列を含み、その配列の翻訳後修飾を含む。場合によっては、抗ＩＬ１３抗体は、配列番号３のＶＨ配列を含み、その配列の翻訳後修飾を含む。場合によっては、抗ＩＬ１３抗体は、配列番号２４のＶＨ配列を含み、その配列の翻訳後修飾を含む。
【０１６９】
他の態様では、配列番号２のアミノ酸配列に対して、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の配列同一性を有する軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）を含む、抗ＩＬ−１３抗体が提供される。特定の実施態様では、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％の同一性を有するＶＬ配列は、参照配列に対して置換（例えば保存的置換）、挿入、又は欠失を含むが、その配列を含む抗ＩＬ−１３抗体はＩＬ−１３へ結合する能力を保持する。特定の実施態様では、配列番号２において、合計１から１０のアミノ酸が、置換、挿入及び／又は欠失している。特定の実施態様では、置換、挿入、又は欠失は、ＨＶＲの外の（すなわちＦＲ内の）領域で生じる。場合によっては、抗ＩＬ−１３抗体は、配列番号２のＶＬ配列を含み、その配列の翻訳後修飾を含む。場合によっては、抗ＩＬ−１３抗体は、配列番号４のＶＬ配列を含み、その配列の翻訳後修飾を含む。場合によっては、抗ＩＬ−１３抗体は、配列番号２５のＶＬ配列を含み、その配列の翻訳後修飾を含む。
【０１７０】
他の態様では、上記に与えられた実施態様の何れかにあるＶＨと、上記に与えられた実施態様の何れかにあるＶＬとを含む抗ＩＬ−１３抗体が提供される。
【０１７１】
更なる態様では、本発明は、ここに提供された抗ＩＬ−１３抗体と同一のエピトープに結合する抗体を提供する。例えば、特定の実施態様では、配列番号１のＶＨ配列と配列番号２０のＶＬ配列を含む抗ＩＬ−１３抗体と同じエピトープに結合するか、又は該抗体によって競合的に阻害され得る抗体が提供される。
【０１７２】
本発明の更なる態様では、上記実施態様の何れかに記載の抗ＩＬ−１３抗体は、キメラ、ヒト化又はヒト抗体を含むモノクローナル抗体であり得る。一実施態様では、抗ＩＬ１３抗体は、抗体断片、例えば、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、ｓｃＦｖ、ダイアボディ、又はＦ（ａｂ’）２断片である。他の実施態様では、抗体は、完全長抗体、例えば、インタクトなＩｇＧ１又はＩｇＧ４抗体、又は本明細書において定義された他の抗体クラス又はアイソタイプである。別の実施態様によれば、抗体は二重特異性抗体である。一実施態様では、二重特異性抗体は、上述のＨＶＲを含むか又はＶＨ及びＶＬ領域を含む。
【０１７３】
一実施態様では、抗ＩＬ１３抗体は、３つの重鎖ＨＶＲ、ＨＶＲ−Ｈ１（配列番号１３）、ＨＶＲ−Ｈ２（配列番号１４）、及びＨＶＲ−Ｈ３（配列番号１５）を含む。一実施態様では、抗ＩＬ１３抗体は、３つの軽鎖ＨＶＲ、ＨＶＲ−Ｌ１（配列番号１６）、ＨＶＲ−Ｌ２（配列番号１７）、及びＨＶＲ−Ｌ３（配列番号１８）を含む。一実施態様では、抗ＩＬ１３抗体は、３つの重鎖ＨＶＲ及び３つの軽鎖ＨＶＲ、ＨＶＲ−Ｈ１（配列番号１３）、ＨＶＲ−Ｈ２（配列番号１４）、ＨＶＲ−Ｈ３（配列番号１５）、ＨＶＲ−Ｌ１（配列番号１６）、ＨＶＲ−Ｌ２（配列番号１７）、及びＨＶＲ−Ｌ３（配列番号１８）を含む。一実施態様では、抗ＩＬ１３抗体は、配列番号１２のアミノ酸配列を有する可変重鎖領域ＶＨを含む。一実施態様では、抗ＩＬ１３抗体は、配列番号１１のアミノ酸配列を有する可変軽鎖領域ＶＬを含む。一実施態様では、抗ＩＬ１３抗体は、配列番号１２のアミノ酸配列を有する可変重鎖領域ＶＨ、及び配列番号１１のアミノ酸配列を有する可変軽鎖領域ＶＬを含む。
【０１７４】
上記実施態様の何れかにおいて、抗ＩＬ−１３抗体はヒト化することができる。一実施態様において、抗ＩＬ−１３抗体は、上記実施態様の何れかにおけるＨＶＲを含み、更に、アクセプターヒトフレームワーク、例えばヒト免疫グロブリンのフレームワーク又はヒトコンセンサスフレームワークを含む。
【０１７５】
別の態様において、抗ＩＬ−１３抗体は、配列番号１２のアミノ酸配列に対して、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の配列同一性を有する重鎖可変ドメイン（ＶＨ）配列を含む。特定の実施態様では、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％の同一性を有するＶＨ配列は、参照配列に対して置換（例えば保存的置換）、挿入、又は欠失を含むが、その配列を含む抗ＩＬ−１３抗体はＩＬ−１３へ結合する能力を保持する。特定の実施態様では、配列番号１２において、合計１から１０のアミノ酸が、置換、変更、挿入及び／又は欠失している。特定の実施態様では、置換、挿入、又は欠失は、ＨＶＲ外の領域で（すなわちＦＲ内で）生じる。場合によっては、抗ＩＬ１３抗体は、配列番号１２のＶＨ配列を含み、その配列の翻訳後修飾を含む。
【０１７６】
他の態様では、配列番号１１のアミノ酸配列に対して、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の配列同一性を有する軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）を含む、抗ＩＬ−１３抗体が提供される。特定の実施態様では、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％の同一性を有するＶＬ配列は、参照配列に対して置換（例えば保存的置換）、挿入、又は欠失を含むが、その配列を含む抗ＩＬ−１３抗体はＩＬ−１３へ結合する能力を保持する。特定の実施態様では、配列番号１１において、合計１から１０のアミノ酸が、置換、挿入及び／又は欠失している。特定の実施態様では、置換、挿入、又は欠失は、ＨＶＲの外の（すなわちＦＲ内の）領域で生じる。場合によっては、抗ＩＬ−１３抗体は、配列番号１１のＶＬ配列を含み、その配列の翻訳後修飾を含む。
【０１７７】
他の態様では、上記に与えられた実施態様の何れかにあるＶＨと、上記に与えられた実施態様の何れかにあるＶＬとを含む抗ＩＬ−１３抗体が提供される。
【０１７８】
更なる態様では、本発明は、ここに提供された抗ＩＬ−１３抗体と同一のエピトープに結合する抗体を提供する。例えば、特定の実施態様では、配列番号１２のＶＨ配列と配列番号１１のＶＬ配列を含む抗ＩＬ−１３抗体と同じエピトープに結合するか、又は該抗体によって競合的に阻害され得る抗体が提供される。
【０１７９】
本発明の更なる態様では、上記実施態様の何れかに記載の抗ＩＬ−１３抗体は、キメラ、ヒト化又はヒト抗体を含むモノクローナル抗体であり得る。一実施態様では、抗ＩＬ１３抗体は、抗体断片、例えば、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、ｓｃＦｖ、ダイアボディ、又はＦ（ａｂ’）２断片である。他の実施態様では、抗体は、完全長抗体、例えば、インタクトなＩｇＧ１又はＩｇＧ４抗体、又は本明細書において定義された他の抗体クラス又はアイソタイプである。別の実施態様によれば、抗体は二重特異性抗体である。一実施態様では、二重特異性抗体は、上述のＨＶＲを含むか又はＶＨ及びＶＬ領域を含む。
【０１８０】
更なる態様にて、以下のセクション１−７で説明されるように、上記実施態様の何れかに記載の抗ＩＬ−１３抗体は、単独又は組み合わせで、任意の特徴を組み込むことができる。
【０１８１】
抗ＩｇＥ抗体
幾つかの実施態様では、本発明は、配列番号２２のアミノ酸配列を含む可変重鎖領域及び配列番号２３のアミノ酸配列を含む可変軽鎖領域を含む抗ＩｇＥ抗体を提供する。一実施態様によれば、抗ＩｇＥ抗体は、ＸＯＬＡＩＲ（登録商標）抗体である。
【０１８２】
二重特異性抗体
一態様では、本発明は、ＩＬ−４及びＩＬ−１３に特異的に結合する抗原結合ドメインを含む二重特異性抗体を提供する。そのような抗ＩＬ−４／抗ＩＬ−１３二重特異性抗体は、国際公開第２０１４／１６５７７１号に記載されている。
【０１８３】
別の態様では、本発明は、ＩＬ−１３及びＩＬ−１７に特異的に結合する抗原結合ドメインを含む二重特異性抗体を提供する。そのような抗ＩＬ−１３／抗ＩＬ−１７二重特異性抗体は、ＰＣＴ／ＵＳ２０１５／０１７１６８及び米国特許出願第１４／６２９，４４９号に記載されている。幾つかの実施態様では、抗ＩＬ−１７抗体は、ＩＬ−１７Ａホモ二量体、ＩＬ−１７Ｆホモ二量体、及びＩＬ−１７ＡＦホモ二量体に結合する。
【０１８４】
更なる態様において、抗ＩＬ−１３／抗ＩＬ−１７二重特異性抗体は、ＨＶＲＨ１、ＨＶＲＨ２、ＨＶＲＨ３、ＨＶＲＬ１、ＨＶＲＬ２、及びＨＶＲＬ３を含み、各ＨＶＲが配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、配列番号９、及び配列番号１０のアミノ酸配列を有する抗ＩＬ−１３  ＶＨ／ＶＬユニット；及びＨＶＲＨ１、ＨＶＲＨ２、ＨＶＲＨ３、ＨＶＲＬ１、ＨＶＲＬ２、及びＨＶＲＬ３を含み、各ＨＶＲが配列番号２６、配列番号２７、配列番号２８、配列番号２９、配列番号３０、及び配列番号３１のアミノ酸配列を有する抗ＩＬ−１７  ＶＨ／ＶＬユニットを含む。
【０１８５】
更なる態様において、抗ＩＬ−１３／抗ＩＬ−１７二重特異性抗体は、配列番号１、３、及び２４から選択されるアミノ酸配列を含むＶＨ、及び配列番号２、４、及び２５から選択されるアミノ酸配列を含むＶＬを含む抗ＩＬ−１３  ＶＨ／ＶＬユニット；及び配列番号３２のアミノ酸配列を含むＶＨ、及び配列番号３３のアミノ酸配列を含むＶＬを含む抗ＩＬ−１７  ＶＨ／ＶＬユニットを含む。
【０１８６】
更なる態様にて、以下のセクション１−７で説明されるように、上記実施態様の何れかに記載の抗ＩＬ−１３／抗ＩＬ−１７二重特異性抗体は、単独又は組み合わせで、任意の特徴を組み込むことができる。
【０１８７】
１．抗体親和性
特定の実施態様では、本明細書に提供される抗体は、解離定数（Ｋｄ）が、≦１μＭ、≦１００ｎＭ、≦１０ｎＭ、≦１ｎＭ、≦０．１ｎＭ、≦０．０１ｎＭ、又は≦０．００１ｎＭ（例えば、１０−８Ｍ以下、例えば、１０−８Ｍから１０−１３Ｍ、例えば、１０−９Ｍから１０−１３Ｍ）である。
【０１８８】
一実施態様では、Ｋｄは、次のアッセイによって記載されるように、対象の抗体のＦａｂ型とその抗原を用いて実施される放射標識抗原結合アッセイ（ＲＩＡ）によって測定される。抗原に対するＦａｂの溶液結合親和性は、一連の力価の非標識抗原の存在下で、最小濃度の（１２５Ｉ）標識抗原でＦａｂを均衡にし、次いで抗Ｆａｂ抗体被覆プレートで結合抗原を捕捉することによって測定する（例えば、Chen et al., J. Mol. Biol. 293:865-881(1999)を参照）。アッセイ条件を確立するために、ＭＩＣＲＯＴＩＴＥＲ（登録商標）マルチウェルプレート（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を５μｇ／ｍｌの５０ｍＭ炭酸ナトリウム（ｐＨ９．６）中の捕捉抗Ｆａｂ抗体（Ｃａｐｐｅｌ  Ｌａｂｓ）で一晩被覆し、その後ＰＢＳ中の２％（ｗ／ｖ）のウシ血清アルブミンで室温（およそ２３℃）で２から５時間、ブロックする。非吸着プレート（Ｎｕｎｃ  ＃２６９６２０）において、１００ｐＭ又は２６ｐＭの［１２５Ｉ］抗原を段階希釈した対象のＦａｂと混合する（例えば、Presta et al., Cancer Res. 57:4593-4599 (1997)における抗ＶＥＧＦ抗体Ｆａｂ−１２の評価と一致）。次いで対象のＦａｂを一晩インキュベートする；しかし、インキュベーションは平衡状態に達したことを確認するまでより長い時間（例えば約６５時間）継続する場合がある。その後、混合物を捕捉プレートに移し、室温で（例えば１時間）インキュベートする。次いで、溶液を取り除き、プレートをＰＢＳ中の０．１％ポリソルベート２０（Ｔｗｅｅｎ−２０（登録商標））で８回洗浄する。プレートが乾燥したら、１５０μｌ／ウェルの閃光物質（ＭｉｃｒｏＳｃｉｎｔ−２０ＴＭ；Ｐａｃｋａｒｄ）を加え、プレートをＴＯＰＣＯＵＮＴ ＴＭ γカウンター（Ｐａｃｋａｒｄ）で１０分間計数する。最大結合の２０％か又はそれ以下を与える各Ｆａｂの濃度を選択して競合結合アッセイに用いる。
【０１８９】
他の実施態様によれば、〜１０反応単位（ＲＵ）の固定した抗原ＣＭ５チップで２５℃のＢＩＡｃｏｒｅ（登録商標）−２０００又はＢＩＡｃｏｒｅ（登録商標）−３０００（ＢＩＡｃｏｒｅ、Ｉｎｃ．、Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ、ＮＪ）を使用して表面プラズモン共鳴アッセイを使用してＫｄが測定される。簡単に言うと、カルボキシメチル化デキストランバイオセンサーチップ（ＣＭ５、ＢＩＡｃｏｒｅ  Ｉｎｃ．）を、提供者の指示書に従ってＮ−エチル−Ｎ’−（３−ジメチルアミノプロピル）−カルボジイミド塩酸塩（ＥＤＣ）及びＮ−ヒドロキシスクシンイミド（ＮＨＳ）で活性化する。抗原を１０ｍＭの酢酸ナトリウム（ｐＨ４．８）で５μｇ／ｍｌ（〜０．２μＭ）に希釈した後、結合したタンパク質のおよそ１０反応単位（ＲＵ）を達成するように５μｌ／分の流量で注入する。抗原の注入後、未反応群をブロックするために１Ｍのエタノールアミンを注入する。動力学的な測定では、２倍の段階希釈したＦａｂ（０．７８ｎＭから５００ｎＭ）を２５℃、およそ２５μｌ／分の流量で０．０５％ポリソルベート２０（Ｔｗｅｅｎ−２０ＴＭ）界面活性剤（ＰＢＳＴ）を含むＰＢＳに注入する。結合及び解離のセンサーグラムを同時にフィットさせることによる単純一対一ラングミュア結合モデル（simple one-to-one Langmuir binding model）（ＢＩＡｃｏｒｅ  Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎソフトウェアバージョン３．２）を用いて、結合速度（ｋｏｎ）と解離速度（ｋｏｆｆ）を算出する。平衡解離定数（Ｋｄ）をｋｏｆｆ／ｋｏｎ比として算出する。例えば、Chen et al., J. Mol. Biol. 293:865-881 (1999)を参照のこと。上記の表面プラズモン共鳴アッセイにより結合速度が１０６Ｍ−１Ｓ−１を上回る場合、分光計、例えば、ストップフロー装備分光光度計（Ａｖｉｖ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ）又は撹拌キュベットを備えた８０００シリーズＳＬＭ−ＡＭＩＮＣＯＴＭ分光光度計（ＴｈｅｒｍｏＳｐｅｃｔｒｏｎｉｃ）で測定される、漸増濃度の抗原の存在下で、ＰＢＳ（ｐＨ７．２）、２５℃の、２０ｎＭの抗抗原抗体（Ｆａｂ型）の蛍光放出強度（励起＝２９５ｎｍ；放出＝３４０ｎｍ、バンドパス＝１６ｎｍ）の増加又は減少を測定する蛍光消光技術を用いて結合速度を測定することができる。
【０１９０】
２．抗体断片
特定の実施態様では、本明細書に提供される抗体は、抗体断片である。抗体断片は、限定されるものではないが、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆａｂ’−ＳＨ、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、及びｓｃＦｖ断片、並びに下記の他の断片を含む。特定の抗体断片の総説については、 Hudson et al. Nat. Med. 9:129-134 (2003)を参照。ｓｃＦｖ断片の総説については、例えば、Pluckthun, in The Pharmacology of Monoclonal Antibodies, vol. 113, Rosenburg and Moore eds., (Springer-Verlag, New York), pp. 269-315 (1994)を参照；また、国際公開第９３／１６１８５号；及び米国特許第５５７１８９４号及び第５５８７４５８号も参照。サルベージ受容体結合エピトープ残基を含み、かつインビボ半減期を増加させたＦａｂ及びＦ（ａｂ’）２断片の議論については、米国特許第５８６９０４６号を参照のこと。
【０１９１】
ダイアボディは２価又は二重特異性であり得る２つの抗原結合部位を有する抗体断片である。例えば、欧州特許第４０４０９７号；国際公開第１９９３／０１１６１号；Hollinger et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90: 6444-6448 (1993)を参照。トリアボディ及びテトラボディもまたHudson et al., Nat. Med. 9:129-134 (2003)に記載されている。
【０１９２】
単一ドメイン抗体は、抗体の重鎖可変ドメインの全て又は一部、又は軽鎖可変ドメインの全て又は一部を含む抗体断片である。特定の実施態様では、単一ドメイン抗体は、ヒト単一ドメイン抗体である（Ｄｏｍａｎｔｉｓ、Ｉｎｃ．、Ｗａｌｔｈａｍ、ＭＡ；例えば、米国特許第６２４８５１６Ｂ１号を参照）。
【０１９３】
抗体断片は様々な技術で作製することができ、限定されないが、ここに記載するように、インタクトな抗体のタンパク消化、並びに組み換え宿主細胞（例えば、大腸菌又はファージ）による生産を含む。
【０１９４】
３．キメラ及びヒト化抗体
特定の実施態様では、本明細書に提供される抗体は、キメラ抗体である。特定のキメラ抗体は、例えば、米国特許第４８１６５６７号、及びMorrison et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 81:6851-6855 (1984)に記載されている。一例では、キメラ抗体は、非ヒト可変領域（例えば、マウス、ラット、ハムスター、ウサギ、又はサル等の非ヒト霊長類由来の可変領域）及びヒト定常領域を含む。更なる例では、キメラ抗体は、クラス又はサブクラスが親抗体のものから変化した「クラススイッチ」抗体である。キメラ抗体は、その抗原結合断片を含む。
【０１９５】
特定の実施態様では、キメラ抗体は、ヒト化抗体である。典型的には、非ヒト抗体は、ヒトに対する免疫原性を低減するために、親の非ヒト抗体の特異性と親和性を保持したまま、ヒト化される。一般に、ヒト化抗体は、ＨＶＲ、例えば、ＣＤＲ（又はその一部）が、非ヒト抗体から由来し、ＦＲ（又はその一部）がヒト抗体配列に由来する、一以上の可変ドメインを含む。ヒト化抗体は、場合によっては、ヒト定常領域の少なくとも一部をまた含む。幾つかの実施態様では、ヒト化抗体の幾つかのＦＲ残基は、抗体特異性又は親和性を回復もしくは改善するために、非ヒト抗体（例えば、ＨＶＲ残基が由来する抗体）由来の対応する残基で置換されている。
【０１９６】
ヒト化抗体及びそれらの作製方法は、例えば、Almagro and Fransson, Front. Biosci. 13:1619-1633 (2008)に総説され、更に、Riechmann et al., Nature 332:323-329 (1988); Queen et al., Proc. Nat'l Acad. Sci. USA 86:10029-10033 (1989)；米国特許第５８２１３３７号、７５２７７９１号、６９８２３２１号、及び７０８７４０９号；Kashmiri et al., Methods 36:25-34 (2005)（ＳＤＲ（ａ−ＣＤＲ）グラフティングを記述）；Padlan, Mol. Immunol. 28:489-498 (1991)（「リサーフェシング」を記述）；Dall'Acqua et al., Methods 36:43-60 (2005)（「ＦＲシャッフリング」を記述）；及びOsbourn et al., Methods 36:61-68 (2005)及びKlimka et al., Br. J. Cancer, 83:252-260 (2000)（ＦＲシャッフリングへの「誘導選択」アプローチを記述）に記載されている。
【０１９７】
ヒト化に用いられ得るヒトフレームワーク領域は、限定されないが、「ベストフィット」法を用いて選択されるフレームワーク領域（例えば、Sims et al. J. Immunol. 151:2296 (1993)を参照）；軽鎖又は重鎖可変領域の特定のサブグループのヒト抗体のコンセンサス配列に由来するフレームワーク領域（例えば、Carter et al. Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 89:4285 (1992)；及びPresta et al. J. Immunol., 151:2623 (1993)を参照）；ヒト成熟（体細胞変異）フレームワーク領域又はヒトの生殖細胞系フレームワーク領域（例えば、Almagro and Fransson, Front. Biosci. 13:1619-1633 (2008)を参照）；及びＦＲライブラリースクリーニング由来のフレームワーク領域（例えば、Baca et al., J. Biol. Chem. 272:10678-10684 (1997)及び Rosok et al., J. Biol. Chem. 271:22611-22618 (1996)を参照）を含む。
【０１９８】
４．ヒト抗体
特定の実施態様では、本明細書に提供される抗体はヒト抗体である。ヒト抗体は、当技術分野において既知の様々な技術を用いて生産することができる。ヒト抗体は一般的にvan Dijk and van de Winkel, Curr. Opin. Pharmacol. 5: 368-74 (2001) 及びLonberg, Curr. Opin. Immunol. 20:450-459 (2008)に記載されている。
【０１９９】
ヒト抗体は、抗原投与に反応してインタクトなヒト抗体又はヒト可変領域を有するインタクトな抗体を産生するように修飾されたトランスジェニック動物に免疫源を投与することによって調製することができる。このような動物は、ヒト免疫グロブリン座位の全て又は一部を典型的には含み、それは、内在性免疫グロブリン座位を置き換えるか、又は染色体外、又は動物の染色体内にランダムに組み込まれて存在する。そのようなトランスジェニックマウスにおいて、内在性免疫グロブリン座位は、一般的に不活性化される。トランスジェニック動物からヒト抗体を得るための方法の概説については、 Lonberg, Nat. Biotech. 23:1117-1125 (2005)を参照のこと。また、ＸＥＮＯＭＯＵＳＥ ＴＭ技術を記載する米国特許第６０７５１８１号及び同６１５０５８４号；ＨＵＭＡＢ（登録商標）技術を記載した米国特許第５７７０４２９号；Ｋ−Ｍ  ＭＯＵＳＥ（登録商標）技術を記載した米国特許第７０４１８７０号；ＶＥＬＯＣＩＭＯＵＳＥ（登録商標）技術を記載した米国特許出願公開第２００７／００６１９００号を参照。このような動物により産生されるインタクトな抗体からのヒト可変領域は、例えば異なるヒト定常領域と組合せることにより、更に修飾することができる。
【０２００】
ヒト抗体は、ハイブリドーマベース法によって作製することができる。ヒトモノクローナル抗体の産生のためのヒト骨髄腫及びマウス−ヒトヘテロ細胞株が記載されている。（例えば、Kozbor J. Immunol., 133: 3001 (1984); Brodeur et al., Monoclonal Antibody Production Techniques and Applications, pp. 51-63 (Marcel Dekker, Inc., New York, 1987)；及び Boerner et al., J. Immunol., 147: 86 (1991)を参照）。ヒトＢ細胞ハイブリドーマ技術により生成されるヒト抗体もLi et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 103:3557-3562 (2006)に記載されている。更なる方法は、例えば、米国特許第７１８９８２６号（ハイブリドーマ細胞株からのモノクローナルヒトＩｇＭ抗体の産生を記載している）及びNi, Xiandai Mianyixue, 26(4):265-268 (2006) （ヒト−ヒトハイブリドーマを記載している）に記載されたものを含む。ヒトハイブリドーマ技術（トリオーマ技術）もまた、Vollmers and Brandlein, Histology and Histopathology, 20(3):927-937 (2005) 及びVollmers and  Brandlein, Methods and Findings in Experimental and Clinical Pharmacology, 27(3):185-91 (2005)に記載される。
【０２０１】
ヒト抗体はまた、ヒト由来のファージディスプレイライブラリーから選択されたＦｖクローン可変ドメイン配列を単離することによって生成することもできる。このような可変ドメイン配列は、次に所望のヒト定常ドメインと組み合わせてもよい。抗体ライブラリーからヒト抗体を選択するための技術を以下に記載する。
【０２０２】
５．ライブラリー由来の抗体
本発明の抗体は、所望の活性又は活性群を有する抗体についてコンビナトリアルライブラリーをスクリーニングすることによって単離することができる。例えば、様々な方法が、ファージディスプレイライブラリーを生成し、所望の結合特性を有する抗体についてのライブラリーをスクリーニングするために、当技術分野で知られている。そのような方法は、例えば、Hoogenboom et al. in Methods in Molecular Biology 178:1-37 (O'Brien et al., ed., Human Press, Totowa, NJ, 2001)に総説され、更に、例えば、McCafferty et al., Nature 348:552-554; Clackson et al., Nature 352: 624-628 (1991); Marks et al., J. Mol. Biol. 222: 581-597 (1992); Marks and Bradbury, in Methods in Molecular Biology 248:161-175 (Lo, ed., Human Press, Totowa, NJ, 2003); Sidhu et al., J. Mol. Biol. 338(2): 299-310 (2004); Lee et al., J. Mol. Biol. 340(5): 1073-1093 (2004); Fellouse, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 101(34): 12467-12472 (2004)；及びLee et al., J. Immunol. Methods 284(1-2): 119-132(2004)に概説されている。
【０２０３】
特定のファージディスプレイ法において、ＶＨ及びＶＬ遺伝子のレパートリーがポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）により別個にクローニングされ、ファージライブラリーにランダムに再結合され、その後、Winter et al., Ann. Rev. Immunol., 12: 433-455 (1994)に記載されるように、抗原結合ファージについてスクリーニングすることができる。ファージは、典型的には、抗体断片を、単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）断片、又はＦａｂ断片の何れかとして提示する。免疫源からのライブラリーは、ハイブリドーマを構築する必要性なしで免疫原に高親和性抗体を提供する。あるいは、Griffiths et al., EMBO J, 12: 725-734 (1993)に記載されるように、ナイーブなレパートリーを、免疫感作なしで、広範囲の非自己抗原とまた自己抗原に対して単一ソースの抗体を提供するために、（例えばヒトから）クローン化することができる。最後に、ナイーブなライブラリーはまた、Hoogenboom and Winter, J. Mol. Biol., 227: 381-388 (1992)に記載されるように、非常に可変なＣＤＲ３領域をコードし、インビトロで再構成を達成するために、幹細胞由来の未転位Ｖ遺伝子セグメントをクローニングし、ランダム配列を含むＰＣＲプライマーを使用することにより、合成することができる。ヒト抗体ファージライブラリーを記述する特許公報は、例えば、米国特許第５７５０３７３号、及び米国特許出願公開第２００５／００７９５７４号、２００５／０１１９４５５号、２００５／０２６６０００号、２００７／０１１７１２６号、２００７／０１６０５９８号、２００７／０２３７７６４号、２００７／０２９２９３６号及び２００９／０００２３６０を含む。
【０２０４】
ヒト抗体ライブラリーから単離された抗体又は抗体断片は、本明細書におけるヒト抗体又はヒト抗体断片とみなされる。
【０２０５】
６．多重特異性抗体
特定の実施態様では、本明細書において提供される抗体は、多重特異性抗体、例えば二重特異性抗体である。多重特異性抗体は、少なくとも２つの異なる部位に対して結合特異性を有するモノクローナル抗体である。特定の実施態様では、結合特異性の１つはＩＬ−１３に対してであり、他は任意の他の抗原に対してである。特定の実施態様では、二重特異性抗体は、ＩＬ−１３の２つの異なるエピトープに結合し得る。二重特異性抗体はまた細胞に対して細胞傷害性薬物を局在化させるために用いることができる。二重特異性抗体は、完全長抗体又は抗体断片として調製することができる。
【０２０６】
多重特異性抗体を作製するための技術は、限定されないが、異なる特異性を有する２つの免疫グロブリン重鎖−軽鎖対の組み換え共発現（Milstein and Cuello, Nature 305: 537 (1983)）、国際公開第９３／０８８２９号、及びTraunecker et al., EMBO J. 10: 3655 (1991)を参照）及び「ノブ・イン・ホール」エンジニアリング（例えば、米国特許第５７３１１６８号を参照）を含む。多重特異抗体はまた、抗体のＦｃ−ヘテロ二量体分子を作成するための静電ステアリング効果を操作すること（国際公開第２００９／０８９００４Ａ１号）；二つ以上の抗体又は断片を架橋すること（例えば米国特許第４６７６９８０号、及びBrennan et al., Science, 229: 81 (1985)を参照）；二重特異性抗体を生成するためにロイシンジッパーを使用すること（例えば、Kostelny et al., J. Immunol., 148(5):1547-1553 (1992)を参照）；二重特異性抗体断片を作製するため、「ダイアボディ」技術を使用すること（例えば、Hollinger et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 90:6444-6448 (1993)を参照）；単鎖Ｆｖ（ｓＦｖ）二量体を使用すること（例えば、Gruber et al., J. Immunol., 152:5368 (1994)を参照）；及び、例えば、Tutt et al. J. Immunol. 147: 60 (1991)に記載されているように、三重特異性抗体を調製することによって作製することができる。
【０２０７】
「オクトパス抗体」を含む、３つ以上の機能性抗原結合部位を持つ改変抗体もまたここに含まれる（例えば、米国特許出願公開第２００６／００２５５７６Ａ１号を参照）。
【０２０８】
本明細書中の抗体又は断片はまたＩＬ−１３並びにその他の異なる抗原に結合する抗原結合部位を含む「２重作用（Ｄｕａｌ  Ａｃｔｉｎｇ）ＦＡｂ」又は「ＤＡＦ」を含む（例えば米国特許出願公開第２００８／００６９８２０号参照）。
【０２０９】
７．抗体変異体
特定の実施態様では、本明細書に提供される抗体のアミノ酸配列変異体が企図される。例えば、抗体の結合親和性及び／又は他の生物学的特性を改善することが望まれる場合がある。抗体のアミノ酸配列変異体は、抗体をコードするヌクレオチド配列に適切な改変を導入することにより、又はペプチド合成によって調製することができる。そのような改変は、例えば、抗体のアミノ酸配列内における、残基の欠失、及び／又は挿入及び／又は置換を含む。最終コンストラクトが所望の特性、例えば、抗原結合性を有していることを条件として、欠失、挿入、及び置換の任意の組み合わせが、最終コンストラクトに到達させるためになされ得る。
【０２１０】
ａ）置換変異体、挿入変異体、及び欠失変異体
特定の実施態様では、一又は複数のアミノ酸置換を有する抗体変異体が提供される。置換突然変異の対象となる部位は、ＨＶＲとＦＲを含む。保存的置換は、表１に「保存的置換」の見出しの下に示されている。より実質的な変更が、表１に「例示的な置換」の見出しの下に与えられ、アミノ酸側鎖のクラスに関連して以下に更に説明される。アミノ酸置換は、目的の抗体に導入することができ、その産物は、所望の活性、例えば、抗原結合の保持／改善、免疫原性の低下、又はＡＤＣＣ又はＣＤＣの改善についてスクリーニングされる。
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【０２１１】
アミノ酸は共通の側鎖特性に従ってグループに分けることができる：
（１）疎水性：ノルロイシン、Ｍｅｔ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ；
（２）中性の親水性：Ｃｙｓ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ；
（３）酸性：Ａｓｐ、Ｇｌｕ；
（４）塩基性：Ｈｉｓ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ；
（５）鎖配向に影響する残基：Ｇｌｙ、Ｐｒｏ；
（６）芳香族：Ｔｒｐ、Ｔｙｒ、Ｐｈｅ
【０２１２】
非保存的置換は、これらの分類の一つのメンバーを他の分類に交換することを必要とするであろう。
【０２１３】
置換変異体の一つのタイプは、親抗体（例えば、ヒト化又はヒト抗体）の一又は複数の高頻度可変領域残基の置換を含む。一般的には、更なる研究のために選択される得られた変異体は、親抗体に対して、特定の生物学的特性の改変（例えば、改善）（例えば、親和性の増加、免疫原性を減少）を有し、及び／又は親抗体の特定の生物学的特性を実質的に保持しているであろう。例示的な置換変異体は、親和性成熟抗体であり、これは、例えば、ここに記載されるもののようなファージディスプレイベースの親和性成熟技術を使用して、簡便に生成され得る。簡潔に言えば、一又は複数のＨＶＲ残基が変異させられ、変異体抗体は、ファージ上にディスプレイされ、特定の生物学的活性（例えば、結合親和性）についてスクリーニングされる。
【０２１４】
変更（例えば、置換）は、例えば抗体の親和性を向上させるために、ＨＶＲにおいて行うことができる。このような変更は、ＨＶＲの「ホットスポット」、すなわち、体細胞成熟過程中に高頻度で変異を受けるコドンにコードされた残基で（例えばChowdhury, Methods Mol. Biol. 207:179-196 (2008)を参照）、及び／又はＳＤＲ（ａ−ＣＤＲ）で行うことができ、得られた変異体ＶＨ又はＶＬが結合親和性について試験される。二次ライブラリーから構築し選択し直すことによる親和性成熟が、例えばHoogenboom et al. in Methods in Molecular Biology 178:1-37 (O'Brien et al., ed., Human Press, Totowa, NJ, (2001)に記載されている。親和性成熟の幾つかの実施態様では、多様性が、様々な方法（例えば、エラープローンＰＣＲ、鎖シャッフリング、又はオリゴヌクレオチド指定突然変異誘発）の何れかにより、成熟のために選択された可変遺伝子中に導入される。次いで、二次ライブラリーが作成される。次いで、所望の親和性を持つ抗体変異体を同定するためにライブラリーがスクリーニングされる。多様性を導入するするもう一つの方法は、幾つかのＨＶＲ残基（例えば、一度に４から６残基）がランダム化されるＨＶＲ指向のアプローチを含む。抗原結合に関与するＨＶＲ残基は、例えばアラニンスキャニング突然変異誘発又はモデリングを使用して、特異的に同定され得る。特にＣＤＲ−Ｈ３及びＣＤＲ−Ｌ３がしばしば標的にされる。
【０２１５】
特定の実施態様では、置換、挿入、又は欠失は、そのような改変が抗原に結合する抗体の能力を実質的に低下させない限り、一又は複数のＨＶＲ内で発生し得る。例えば、実質的に結合親和性を低下させない保存的改変（例えばここで提供される保存的置換）をＨＶＲ内で行うことができる。このような改変は、ＨＶＲ「ホットスポット」又はＳＤＲの外側であってもよい。上に与えられた変異体ＶＨ又はＶＬ配列の特定の実施態様では、各ＨＶＲは不変であるか、又は僅か１個、２個又は３個のアミノ酸置換を含むかの何れかである。
【０２１６】
突然変異誘発のために標的とすることができる抗体の残基又は領域を同定するための有用な方法は、Cunningham and Wells (1989) Science, 244:1081-1085により記載されるように、「アラニンスキャニング変異誘発」と呼ばれる。この方法では、標的残基の残基又はグループ（例えば、ａｒｇ、ａｓｐ、ｈｉｓ、ｌｙｓ及びｇｌｕなどの荷電残基）が同定され、抗原と抗体との相互作用が影響を受けるかどうかを判断するために、中性又は負に荷電したアミノ酸（例えば、アラニン又はポリアラニン）に置換される。更なる置換が、最初の置換に対する機能的感受性を示すアミノ酸の位置に導入され得る。代わりに、又は加えて、抗原抗体複合体の結晶構造が、抗体と抗原との接触点を同定する。そのような接触残基及び隣接残基が、置換の候補として標的とされるか又は排除され得る。変異体はそれらが所望の特性を含むかどうかを決定するためにスクリーニングされ得る。
【０２１７】
アミノ酸配列挿入は、一残基から百以上の残基を含むポリペプチド長にわたるアミノ及び／又はカルボキシル末端融合、並びに単一又は複数のアミノ酸残基の配列内挿入を含む。末端挿入の例としては、Ｎ末端メチオニン残基を有する抗体が含まれる。抗体分子の他の挿入変異体は、酵素に対する抗体のＮ末端又はＣ末端への融合（例えばＡＤＥＰＴの場合）、又は抗体の血清半減期を増加させるポリペプチドへの融合を含む。
【０２１８】
グリコシル化変異体
特定の実施態様では、本明細書で提供される抗体は、抗体がグリコシル化される程度を上昇又は減少させるように改変される。抗体へのグリコシル化部位の付加又は欠失は、一又は複数のグリコシル化部位が作成され又は除かれるようにアミノ酸配列を変えることによって簡便に達成することができる。
【０２１９】
抗体がＦｃ領域を含む場合には、それに結合する糖を変えることができる。哺乳動物細胞によって生成される天然型抗体は、典型的には、Ｆｃ領域のＣＨ２ドメインのＡｓｎ２９７にＮ結合により一般的に結合した分岐鎖、二分岐オリゴ糖を含んでいる。例えば、Wright et al. TIBTECH 15:26-32 (1997)を参照。オリゴ糖は、様々な炭水化物、例えば、マンノース、Ｎ−アセチルグルコサミン（ＧｌｃＮＡｃ）、ガラクトース、及びシアル酸、並びに二分岐糖鎖構造の「幹」のＧｌｃＮＡｃに結合したフコースを含む。幾つかの実施態様では、本発明の抗体におけるオリゴ糖の改変が、特定の改善された特性を有する抗体変異体を作製するために行われ得る。
【０２２０】
一実施態様では、抗体変異体は、Ｆｃ領域に（直接又は間接的に）結合したフコースを欠く糖鎖構造を有して提供される。例えば、そのような抗体のフコースの量は、１％から８０％、１％から６５％、５％から６５％又は２０％から４０％であり得る。フコースの量は、例えば、国際公開第２００８／０７７５４６号に記載されているように、ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ質量分析法によって測定されるＡｓｎ２９７に結合している全ての糖構造の合計（例えば、複合体、ハイブリッド及び高マンノース構造）に対して、Ａｓｎ２９７の糖鎖中のフコースの平均量を計算することによって決定される。Ａｓｎ２９７は、Ｆｃ領域（Ｆｃ領域残基のＥＵ番号付け）でおよそ２９７の位置に位置するアスパラギン残基を指す；しかし、Ａｓｎ２９７もまた位置２９７の上流又は下流のおよそ±３アミノ酸に、すなわち抗体の軽微な配列変異に起因して、位置２９４と３００の間に位置し得る。このようなフコシル化変異体はＡＤＣＣ機能を改善させる場合がある。例えば、米国特許出願公開第２００３／０１５７１０８号（Ｐｒｅｓｔａ、Ｌ．）；米国特許出願公開第２００４／００９３６２１号（協和発酵工業株式会社）を参照。「フコース非修飾」又は「フコース欠損」抗体変異体に関連する刊行物の例としては、米国特許出願公開第２００３／０１５７１０８号、国際公開第２０００／６１７３９号、国際公開第２００１／２９２４６号、米国特許出願公開第２００３／０１１５６１４号、米国特許出願公開第２００２／０１６４３２８号、米国特許出願公開第２００４／００９３６２１号、米国特許出願公開第２００４／０１３２１４０号、米国特許出願公開第２００４／０１１０７０４号、米国特許出願公開第２００４／０１１０２８２号、米国特許出願公開第２００４／０１０９８６５号、国際公開第２００３／０８５１１９号、国際公開第２００３／０８４５７０号、国際公開第２００５／０３５５８６号、国際公開第２００５／０３５７７８号、国際公開第２００５／０５３７４２号、国際公開第２００２／０３１１４０号、Okazaki et al J. Mol. Biol. 336:1239-1249 (2004);Yamane-Ohnuki et al. Biotech. Bioeng. 87: 614 (2004)が含まれる。非フコシル化抗体を産生する能力を有する細胞株の例としては、タンパク質フコシル化を欠損しているＬｅｃ１３  ＣＨＯ細胞（Ripka et al. Arch. Biochem. Biophys. 249:533-545 (1986)；米国特許出願公開第２００３／０１５７１０８ Ａ１号、Ｐｒｅｓｔａ、Ｌ；及び国際公開第２００４／０５６３１２Ａ１号，Ａｄａｍｓら、特に実施例１１）、及びノックアウト細胞株、例えばアルファ−１，６−フコシルトランスフェラーゼ遺伝子、ＦＵＴ８、ノックアウトＣＨＯ細胞（例えば、Yamane-Ohnuki et al. Biotech. Bioeng. 87: 614 (2004); Kanda, Y. et al., Biotechnol. Bioeng., 94(4):680-688 (2006)；及び国際公開第２００３／０８５１０７号を参照）を含む。
【０２２１】
二分オリゴ糖を伴う抗体変異体が更に提供され、例えば、そこでは、抗体のＦｃ領域に結合した二分岐オリゴ糖がＧｌｃＮＡｃによって二分されている。このような抗体変異体はフコシル化を減少させ、及び／又はＡＤＣＣ機能を改善する場合がある。そのような抗体変異体の例は、例えば、国際公開第２００３／０１１８７８号（Ｊｅａｎ−Ｍａｉｒｅｔら）；米国特許第６６０２６８４号（Ｕｍａｎａら）；及び米国特許出願公開第２００５／０１２３５４６号（Ｕｍａｎａら）に記載されている。Ｆｃ領域に結合したオリゴ糖内に少なくとも１つのガラクトース残基を持つ抗体変異体も提供される。このような抗体変異体はＣＤＣ機能を改善させる場合がある。このような抗体変異体は、例えば、国際公開第１９９７／３００８７号（Ｐａｔｅｌら）；国際公開第１９９８／５８９６４号（Ｒａｊｕ、Ｓ．）；及び国際公開第１９９９／２２７６４号（Ｒａｊｕ、Ｓ．）に記載されている。
【０２２２】
Ｆｃ領域変異体
特定の実施態様では、一又は複数のアミノ酸修飾を、ここで提供される抗体のＦｃ領域に導入することができ、それによってＦｃ領域変異体を生成する。Ｆｃ領域の変異体は、一又は複数のアミノ酸位置においてアミノ酸修飾（例えば置換）を含むヒトＦｃ領域の配列（例えば、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３又はＩｇＧ４のＦｃ領域）を含み得る。
【０２２３】
特定の実施態様では、本発明は、インビボでの抗体の半減期は重要であるが、ある種のエフェクター機能（例えば補体及びＡＤＣＣ）が不要又は有害である用途のための望ましい候補とならしめる、全てではないが一部のエフェクター機能を有する抗体変異体を意図している。インビトロ及び／又はインビボでの細胞毒性アッセイを、ＣＤＣ活性及び／又はＡＤＣＣ活性の減少／枯渇を確認するために行うことができる。例えば、Ｆｃ受容体（ＦｃＲ）結合アッセイは、抗体がＦｃγＲ結合を欠くが（よって、おそらくＡＤＣＣ活性を欠く）、ＦｃＲｎ結合能力を保持していることを確認するために行うことができる。ＡＤＣＣを媒介する初代細胞のＮＫ細胞は、ＦｃγＲＩＩＩのみを発現するが、単球はＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩ及びＦｃγＲＩＩＩを発現する。造血細胞におけるＦｃＲの発現は、Ravetch and Kinet, Annu. Rev. Immunol. 9:457-492 (1991)の４６４頁の表３に要約されている。目的の分子のＡＤＣＣ活性を評価するためのインビトロアッセイの非限定的な例は、米国特許第５５００３６２号（例えば、Hellstrom, I. et al. Proc. Nat'l Acad. Sci. USA 83:7059-7063 (1986)を参照）及びHellstrom, I et al., Proc. Nat'l Acad. Sci. USA 82:1499-1502 (1985)；５８２１３３７号（Bruggemann, M. et al., J. Exp. Med. 166:1351-1361 (1987)を参照）に記載されている。あるいは、非放射性アッセイ法を用いることができる（例えば、フローサイトメトリー用のＡＣＴＩＴＭ非放射性細胞傷害性アッセイ（ＣｅｌｌＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、Ｉｎｃ． Ｍｏｕｎｔａｉｎ  Ｖｉｅｗ、ＣＡ；及びＣｙｔｏＴｏｘ  ９６（登録商標）非放射性細胞毒性アッセイ（Ｐｒｏｍｅｇａ、Ｍａｄｉｓｏｎ、ＷＩ）を参照。このようなアッセイに有用なエフェクター細胞には、末梢血単核球（ＰＢＭＣ）及びナチュラルキラー（ＮＫ）細胞が含まれる。あるいは、又は追加的に、目的の分子のＡＤＣＣ活性は、Clynes et al. Proc. Nat'l Acad. Sci. USA 95:652-656 (1998)に開示されるもののように、インビボで、例えば動物モデルにおいて評価することができる。Ｃ１ｑ結合アッセイはまた、抗体が体Ｃ１ｑに結合することができず、よって、ＣＤＣ活性を欠いていることを確認するために行うことができる。例えば、国際公開第２００６／０２９８７９号及び国際公開第２００５／１００４０２号のＣ１ｑ及びＣ３ｃ結合ＥＬＩＳＡを参照。補体活性化を評価するために、ＣＤＣアッセイを行うことができる（例えば、Gazzano-Santoro et al., J. Immunol. Methods 202:163 (1996)； Cragg, M.S. et al., Blood 101:1045-1052 (2003)；及びCragg, M.S. and M.J. Glennie, Blood 103:2738-2743 (2004)を参照）。ＦｃＲｎ結合及びインビボでのクリアランス／半減期の測定をまた当該分野で知られている方法を使用して行うことができる（例えば、Petkova, S.B. et al., Int'l. Immunol. 18(12):1759-1769 (2006)を参照）。
【０２２４】
エフェクター機能が減少した抗体には、Ｆｃ領域の残基２３８、２６５、２６９、２７０、２９７、３２７、３２９の一又は複数の置換を有するものが含まれる（米国特許第６７３７０５６号）。そのようなＦｃ変異体は、残基２６５及び２９７のアラニンへの置換を有する、いわゆる「ＤＡＮＡ」Ｆｃ変異体を含む、アミノ酸位置２６５、２６９、２７０、２９７及び３２７の２以上での置換を有するＦｃ変異体を含む（米国特許第７３３２５８１号）。
【０２２５】
ＦｃＲへの改善又は減少させた結合を持つ特定の抗体変異体が記載されている。（例えば、米国特許第６７３７０５６号；国際公開第２００４／０５６３１２号、及びShields et al., J. Biol. Chem. 9(2): 6591-6604 (2001)を参照）。
【０２２６】
特定の実施態様では、抗体変異体はＡＤＣＣを改善する一又は複数のアミノ酸置換、例えば、Ｆｃ領域の位置２９８、３３３、及び／又は３３４における置換（ＥＵの残基番号付け）を含む。
【０２２７】
幾つかの実施態様では、例えば、米国特許第６１９４５５１号、国際公開第９９／５１６４２号、及びIdusogie et al. J. Immunol. 164: 4178-4184 (2000)に記載されているように、改変された（すなわち改善されたか減少した）Ｃ１ｑ結合及び／又は補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）を生じる、Ｆｃ領域における改変がなされる。
【０２２８】
増加した半減期を持ち、胎仔への母性ＩｇＧの移送を担う（Guyer et al., J. Immunol. 117:587 (1976)及びKim et al., J. Immunol. 24:249 (1994)）、新生児Ｆｃ受容体（ＦｃＲｎ）への結合が改善された抗体は、米国特許出願公開第２００５／００１４９３４Ａ１号（Ｈｉｎｔｏｎ等）に記載されている。これらの抗体は、ＦｃＲｎへのＦｃ領域の結合を改善する一又は複数の置換を有するＦｃ領域を含む。このようなＦｃ変異体は、Ｆｃ領域の残基の一又は複数に置換を有するものが含まれる：２３８、２５６、２６５、２７２、２８６、３０３、３０５、３０７、３１１、３１２、３１７、３４０、３５６、３６０、３６２、３７６、３７８、３８０、３８２、４１３、４２４又は４３４、例えば、Ｆｃ領域の残基４３４の置換（米国特許第７３７１８２６号）。
【０２２９】
Ｆｃ領域の変異体の他の例に関して、Duncan & Winter, Nature 322:738-40 (1988)；米国特許第５６４８２６０号；米国特許第５６２４８２１号；及び国際公開第９４／２９３５１号も参照のこと。
【０２３０】
システイン操作抗体変異体
特定の実施態様では、システイン操作抗体、例えば抗体の一又は複数の残基がシステイン残基で置換される「ｔｈｉｏＭＡｂｓ」を作ることが望ましいことがある。特定の実施態様では、置換される残基が抗体の接近可能な部位で生じる。。これらの残基をシステインと置換することによって、反応性チオール基が抗体の接近可能な部位に位置させられ、抗体を他の部分、例えば薬剤部分又はリンカー薬剤部分に結合させ、ここで更に記載されるように免疫コンジュゲートを作るために使用され得る。特定の実施態様では、以下の残基の任意の一又は複数がシステインと置換され得る：軽鎖のＶ２０５（カバット番号付け）；重鎖のＡ１１８（ＥＵ番号付け）；及び重鎖Ｆｃ領域のＳ４００（ＥＵ番号付け）。システイン操作抗体は、例えば米国特許第７５２１５４１号に記載されるようにして、産生され得る。
【０２３１】
抗体誘導体
特定の実施態様では、ここに提供される抗体は、当技術分野において知られ直ぐに利用できる更なる非タンパク質性部分を含むように更に修飾することができる。抗体の誘導体化に適した部分は、限定しないが、水溶性ポリマーを含む。水溶性ポリマーの非限定的な例には、限定されるものではないが、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、エチレングリコール／プロピレングリコールのコポリマー、カルボキシメチルセルロース、デキストラン、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、ポリ−１，３−ジオキソラン、ポリ−１，３，６−トリオキサン、エチレン／無水マレイン酸コポリマー、ポリアミノ酸（ホモポリマーかランダムコポリマー）、及びデキストラン又はポリ（ｎ−ビニルピロリドン）ポリエチレングリコール、プロピレングリコールホモポリマー、プロリプロピレンオキシド／エチレンオキシドコポリマー、ポリオキシエチレン化ポリオール（例えばグリセロール）、ポリビニルアルコール、及びそれらの混合物が含まれる。ポリエチレングリコールプロピオンアルデヒドは水中におけるその安定性のために製造の際に有利であり得る。ポリマーは任意の分子量であってよく、分枝状でも非分枝状でもよい。抗体に結合するポリマーの数は変化してもよく、一を超えるポリマーが結合する場合、それらは同じでも異なった分子でもよい。一般に、誘導体化に使用されるポリマーの数及び／又はタイプは、限定されるものではないが、抗体誘導体が定まった条件下での治療に使用されるかどうか等を含む、改善される抗体の特定の性質又は機能を含む考慮事項に基づいて決定することができる。
【０２３２】
他の実施態様では、放射線への暴露によって選択的に加熱され得る非タンパク質様部分及び抗体のコンジュゲートが提供される。一実施態様では、非タンパク質様部分はカーボンナノチューブである（Kam et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 102: 11600-11605 (2005)）。放射線は任意の波長のものであってよく、限定するものではないが、通常の細胞に害を与えないが、抗体−非タンパク質様部分に近位の細胞が死滅させられる温度まで非タンパク質様部分を加熱する波長が含まれる。
【０２３３】
組み換え方法及び組成物
抗体は、例えば米国特許第４８１６５６７号に記載されているように、組み換え法及び構成物を使用して製造することができる。一実施態様では、ここに記載される抗体をコードする単離核酸が提供される。このような核酸は、抗体のＶＬを含むアミノ酸配列及び／又は抗体のＶＨを含むアミノ酸配列（例えば、抗体の軽鎖及び／又は重鎖）をコードし得る。更なる実施態様では、そのような核酸を含む一又は複数のベクター（例えば、発現ベクター）が提供される。更なる実施態様では、そのような核酸を含む宿主細胞が提供される。一実施態様では、宿主細胞は、以下を含む（例えば、以下で形質転換される）：（１）抗体のＶＬを含むアミノ酸配列と抗体のＶＨを含むアミノ酸配列をコードする核酸を含むベクター、又は（２）抗体のＶＬを含むアミノ酸配列をコードする核酸を含む第一ベクター、及び抗体のＶＨを含むアミノ酸配列をコードする核酸を含む第二ベクター。一実施態様では、宿主細胞は、真核生物、例えばチャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞、又はリンパ系細胞（例えば、Ｙ０、ＮＳ０、Ｓｐ２０細胞）である。一実施態様では、抗体を作製する方法が提供され、その方法は、抗体の発現に適した条件下で、上で与えられたような抗体をコードする核酸を含む宿主細胞を培養することを含み、かつ必要に応じて、宿主細胞（又は宿主細胞培地）から抗体を回収することを含む。
【０２３４】
抗体の組み換え生産では、例えば上述のような抗体をコードする核酸が単離され、宿主細胞での更なるクローニング及び／又は発現のために一又は複数のベクターに挿入される。このような核酸は、直ちに単離され、一般的な手順を使用して（例えば、抗体の重鎖及び軽鎖をコードする遺伝子に特異的に結合可能であるオリゴヌクレオチドプローブを使用することによって）配列決定され得る。
【０２３５】
抗体をコードするベクターのクローニング又は発現のために適した宿主細胞は、本明細書に記載される原核細胞又は真核細胞である。例えば、抗体は、特にグリコシル化及びＦｃエフェクター機能が必要でない場合に、細菌で生産され得る。細菌での抗体断片及びポリペプチドの発現については、米国特許第５６４８２３７号、米国特許第５７８９１９９号、及び米国特許第５８４０５２３号を参照のこと。（また大腸菌中での抗体断片の発現を記述しているCharlton, Methods in Molecular Biology, Vol. 248 (B.K.C. Lo, ed., Humana Press, Totowa, NJ, 2003), pp. 245-254を参照）。発現後、抗体は、可溶性画分中の細菌細胞ペーストから単離され得、更に精製され得る。
【０２３６】
原核生物に加えて、糸状菌又は酵母などの真核微生物が、抗体をコードするベクターのための適切なクローニング又は発現宿主であり、そのグリコシル化経路が「ヒト化」された菌及び酵母株を含み、部分的に又は完全にヒト化したグリコシル化パターンを持つ抗体の生産を生じる。Gerngross, Nat. Biotech. 22:1409-1414 (2004)及びLi et al., Nat. Biotech. 24:210-215 (2006)を参照。
【０２３７】
グリコシル化抗体の発現に適した宿主細胞は、多細胞生物（無脊椎動物及び脊椎動物）からもまた誘導される。無脊椎動物細胞の例は、植物及び昆虫の細胞を含む。特にヨウトガ細胞のトランスフェクションのために、昆虫細胞と併用され得る多くのバキュロウィルス株が同定されている。
【０２３８】
植物細胞培養もまた宿主として利用することができる。例えば米国特許第５９５９１７７号、同第６０４０４９８号、同第６４２０５４８号、同第７１２５９７８号、及び同第６４１７４２９号（遺伝子導入植物において抗体を生産するためのＰＬＡＮＴＩＢＯＤＩＥＳＴＭ技術を記述）を参照。
【０２３９】
脊椎動物細胞をまた宿主として使用することができる。例えば、懸濁状態で増殖するよう適合化された哺乳動物細胞株が有用な場合がある。有用な哺乳動物細胞株の他の例は、ＳＶ４０（ＣＯＳ−７）によって形質転換されたサル腎臓ＣＶ１株；ヒト胚腎臓株（Graham et al., J. Gen Virol. 36:59 (1977)に記載された２９３又は２９３細胞）；ベビーハムスター腎細胞（ＢＨＫ）；マウスセルトリ細胞（例えばMather, Biol. Reprod. 23:243-251 (1980)に記載されるＴＭ４細胞）；サル腎細胞（ＣＶ１）；アフリカミドリザル腎細胞（ＶＥＲＯ−７６）；ヒト子宮頸癌細胞（ＨＥＬＡ）；イヌ腎細胞（ＭＤＣＫ）；バッファローラット肝細胞（ＢＲＬ３Ａ）；ヒト肺細胞（Ｗ１３８）；ヒト肝細胞（ＨｅｐＧ２）；マウス乳腺腫瘍（ＭＭＴ０６０５６２）；Mather et al., Annals N.Y. Acad. Sci. 383:44-68 (1982)に記載されるＴＲＩ細胞；ＭＲＣ５細胞；及びＦＳ４細胞である。他の有用な哺乳動物宿主細胞株は、ＤＨＦＲ−ＣＨＯ細胞を含むチャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞（Urlaub et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 77:4216 (1980)）；及びＹ０、ＮＳ０、及びＳｐ２／０等のミエローマ細胞株である。抗体生産のために適した哺乳類動物宿主細胞株の概説として、例えばYazaki and Wu, Methods in Molecular Biology, Vol. 248 (B.K.C. Lo, ed., Humana Press, Totowa, NJ)、255-268頁 (2003)を参照のこと。
【０２４０】
診断及び検出のための方法及び組成物
本発明は、試験された試料の９８％超でＩＬ−１３のフェムトグラム／ｍＬレベルを検出する高感度であり、本明細書に記載のように高度に特異的であるＩＬ−１３イムノアッセイ法に少なくとも部分的に基づいている。このような高感度かつ高度に特異的なイムノアッセイ法を用いて、Ｔｈ２経路阻害剤である治療的処置に応答する可能性がより高い、血清ＩＬ−１３レベルが上昇した患者を選択又は同定する方法並びに重度の増悪を被る可能性がより高い喘息患者を特定する方法も本明細書で提供される。
【０２４１】
従って、一態様では、試料中のＩＬ−１３を検出及び定量するための高感度及び高特異性イムノアッセイ法が提供される。特定の実施態様では、試料は生物学的試料である。特定の実施態様では、試料は血清である。特定の実施態様では、試料はヒト血清である。幾つかの実施態様では、感度は定量下限（ＬＬＯＱ）として決定される。特定の実施態様では、ＬＬＯＱは０．１ｆｇ／ｍＬ〜３５ｆｇ／ｍＬの間又は約０．１ｆｇ／ｍＬ〜約３５ｆｇ／ｍＬの間である。特定の実施態様では、ＬＬＯＱは１ｆｇ／ｍＬ〜３０ｆｇ／ｍＬの間又は約１ｆｇ／ｍＬ〜約３０ｆｇ／ｍＬの間である。特定の実施態様では、ＬＬＯＱは５ｆｇ／ｍＬ〜２５ｆｇ／ｍＬの間又は約５ｆｇ／ｍＬ〜約２５ｆｇ／ｍＬの間である。特定の実施態様では、ＬＬＯＱは１０ｆｇ／ｍＬ〜２０ｆｇ／ｍＬの間又は約１０ｆｇ／ｍＬ〜約２０ｆｇ／ｍＬの間である。特定の実施態様では、ＬＬＯＱは１４ｆｇ／ｍＬである。
【０２４２】
別の態様では、ＩＬ−１３に特異的に結合する第１のモノクローナル捕捉抗体及びＩＬ−１３に特異的に結合する第２のモノクローナル検出抗体を含むサンドイッチイムノアッセイ法が提供され、ここで第１の抗体は第２の抗体とは異なるエピトープに結合する。幾つかの実施態様では、特異性は、イムノアッセイ法を実施する前に過剰量の第１の抗体と試料をインキュベートすることを含む抗原枯渇法（免疫枯渇法とも呼ばれる）によって決定される。このような特定の実施態様では、試料中の抗原が完全に枯渇し、それによりイムノアッセイ法においてＬＬＯＱ未満のシグナルが生成される。幾つかの実施態様では、試料は可溶性ＩＬ−１３Ｒα２を含み、可溶性ＩＬ−１３Ｒα２はイムノアッセイ法の感度又は特異性を妨げない。
【０２４３】
更に別の態様では、イムノアッセイ法は、配列番号５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、配列番号６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び配列番号７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む可変重鎖領域と、配列番号８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、配列番号９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び配列番号１０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む可変軽鎖領域とを含む可変領域を含む第１の抗体を含む。幾つかの実施態様では、第１の抗体は、配列番号１のアミノ酸配列を含む可変重鎖領域及び配列番号２のアミノ酸配列を含む可変軽鎖領域を含む可変領域を含む。特定の実施態様では、第１の抗体は抗体断片である。特定の実施態様では、第１の抗体はＦ（ａｂ’）２又はＦａｂである抗体断片である。特定の実施態様では、第１の抗体はＦａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆａｂ’、又はＦｖである抗体断片である。幾つかの実施態様では、イムノアッセイ法は、配列番号１３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、配列番号１４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び配列番号１５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む可変重鎖領域と、配列番号１６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、配列番号１７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び配列番号１８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む可変軽鎖領域とを含む可変領域を含む第２の抗体を含む。幾つかの実施態様では、第２の抗体は、配列番号１２のアミノ酸配列を含む可変重鎖領域及び配列番号１１のアミノ酸配列を含む可変軽鎖領域を含む可変領域を含む。
【０２４４】
更に別の態様では、イムノアッセイ方法は第３の抗体を更に含み、第３の抗体は第２の抗体に特異的に結合し、かつ検出可能に標識される。幾つかの実施態様では、第２の抗体はハプテンで標識され、第３の抗体は抗ハプテン抗体である。幾つかの実施態様では、ハプテンはジゴキシゲニンであり、抗ハプテン抗体は蛍光ラテックスとコンジュゲートした抗ジゴキシゲニンモノクローナル抗体である。
【０２４５】
本発明はまた、Ｔｈ２経路阻害剤による治療的処置に多かれ少なかれ応答する可能性のある被験者を同定するための循環ＩＬ−１３の使用に少なくとも部分的に基づく。従って、開示された方法は、患者を治療するための適切な又は有効な療法を評価するのに有用なデータ及び情報を得るための便利で効率的な、潜在的に費用対効果の高い手段を提供する。例えば、試料は喘息患者又はＴｈ２関連疾患患者から得ることができ、本明細書に記載の高感度かつ高度に特異的なＩＬ−１３アッセイによって試料を検査して、ＩＬ−１３を測定し、ＩＬ−１３の発現レベルが基準集団における発現レベルと比較して増加したか減少したかを決定することができる。幾つかの実施態様では、患者由来の試料中の循環ＩＬ−１３の発現レベルが健常個体における発現レベル以上である場合、患者はＴｈ２経路阻害剤による治療から利益を受ける可能性が高い。
【０２４６】
特定の実施態様では、試料は、アッセイされるタンパク質の量の差及び使用されるタンパク質試料の品質の変動性の両方について、及びアッセイの実行の間の変動性について正規化される。患者あたりの試験試料あたりのタンパク質の正規化された発現レベルは、基準セットで測定された発現レベルのパーセンテージとして表すことができる。分析されるべき特定の患者試料において測定された発現レベルは、この範囲内の一部のパーセンタイルで低下し、これは当技術分野で周知の方法によって決定することができる。
【０２４７】
バイオマーカーを含む生物学的試料は、当技術分野で周知の方法によって得ることができる。更に、治療の進行は、標的遺伝子又は遺伝子産物についてそのような体サンプルを試験することにより、より容易にモニターすることができる。
【０２４８】
イムノアッセイ検出には２つの一般的な方法；直接的アッセイ及び間接的アッセイが利用可能である。最初のアッセイによれば、標的抗原に対する抗体の結合性が直接決定される。この直接アッセイは標識試薬、例えば蛍光タグ又は酵素標識一次抗体を使用するもので、その試薬は更なる抗体相互作用なしに可視化され得る。典型的な間接アッセイでは、非コンジュゲート一次抗体が抗原に結合し、次いで標識二次抗体が一次抗体に結合する。二次抗体が酵素標識にコンジュゲートされる場合、発色性又は蛍光発生基質が加えられて抗原の可視化がなされる。幾つかの二次抗体が一次抗体上の異なったエピトープと反応し得るので、シグナル増幅が生じる。
【０２４９】
一次及び／又は二次抗体は、典型的には検出可能な部分で標識されるであろう。一般に次のカテゴリーに分類できる数多くの標識が利用可能である：
（ａ）放射性同位元素、例えば３５Ｓ、１４Ｃ、１２５Ｉ、３Ｈ、及び１３１Ｉ。抗体は例えばImmunology, 1及び2巻、Coligen et al., Ed. Wiley-Interscience, New York, New York, Pubs (1991)のCurrent Protocolsに記載された技術を使用して放射性同位元素で標識することができ、放射能はシンチレーション測定を使用して測定することができる。
（ｂ）コロイド金粒子
（ｃ）限定されないが、希土類キレート（ユーロピウムキレート）、テキサスレッド、ローダミン、フルオレセイン、ダンシル、リサミン、ウンベリフェロン、フィコクリセリン（ｐｈｙｃｏｃｒｙｔｈｅｒｉｎ）、フィコシアニン又はＳＰＥＣＴＲＵＭ  ＯＲＡＮＧＥ７及びＳＰＥＣＴＲＵＭ  ＧＲＥＥＮ７などの市販のフルオロフォア及び／又は上記の何れか一又は複数の誘導体を含む蛍光標識。該蛍光標識は、例えば、上記のImmunologyのCurrent Protocolsに開示された技術を用いて抗体にコンジュゲートすることができる。蛍光は、蛍光計を使用して定量することができる。
（ｄ）様々な酵素基質標識が利用可能であり、米国特許第４２７５１４９号にはこれらの幾つかの概説がある。酵素は一般に様々な技術を使用して測定することができる色素生産性基質の化学変化を触媒する。例えば、酵素は、分光光度的に測定することができる基質の色の変化を触媒し得る。あるいは、酵素は、基質の蛍光又は化学発光を変え得る。蛍光の変化を定量化する技術は上記の通りである。化学発光基質は、化学反応によって電子的に励起され、（例えば化学発光計測器を使用して）測定できるか、又はエネルギーを蛍光アクセプターに与える光を発し得る。酵素標識の例には、ルシフェラーゼ（例えば、ホタルルシフェラーゼ及び細菌ルシフェラーゼ；米国特許第４７３７４５６号）、ルシフェリン、２，３−ジヒドロフタラジンジオン（ｄｉｈｙｄｒｏｐｈｔｈａｌａｚｉｎｅｄｉｏｎｅｓ）、リンゴ酸デヒドロゲナーゼ、ウレアーゼ、西洋わさびペルオキシダーゼ（ＨＲＰＯ）などのペルオキシダーゼ、アルカリホスファターゼ、β−ガラクトシダーゼ、グルコアミラーゼ、リゾチーム、サッカライドオキシダーゼ（例えばグルコースオキシダーゼ、ガラクトースオキシダーゼ及びグルコース−６−リン酸デヒドロゲナーゼ）、複素環オキシダーゼ（例えばウリカーゼ及びキサンチンオキシダーゼ）、ラクトペルオキシダーゼ、ミクロペルオキシダーゼなどが含まれる。抗体に酵素をコンジュゲートする技術は、O'Sullivan et al., Methods for the Preparation of Enzyme-Antibody Conjugates for use in Enzyme Immunoassay, in Methods in Enzym. (ed. J. Langone & H. Van Vunakis), Academic press, New York, 73:147-166 (1981)に記載されている。
【０２５０】
酵素−基質の組合せの例には、例えば以下のものが含まれる：
（ｉ）基質として水素ペルオキシダーゼを伴う西洋わさびペルオキシダーゼ（ＨＲＰＯ）、ここで水素ペルオキシダーゼが染料前駆体（例えば、オルトフェニレンジアミン（ＯＰＤ）又は３，３’，５，５’−テトラメチルベンジジン塩酸塩（ＴＭＢ））を酸化する；
（ｉｉ）色素生産性基質としてパラ−ニトロフェニルホスフェートを伴うアルカリホスファターゼ（ＡＰ）；及び
（ｉｉｉ）色素生産性基質（例えばｐ−ニトロフェニル−β−Ｄ−ガラクトシダーゼ）又は蛍光発生基質（例えば４−メチルウンベリフェリル−β−Ｄ−ガラクトシダーゼ）を伴うβ−Ｄ−ガラクトシダーゼ（β−Ｄ−Ｇａｌ）。
【０２５１】
多くの他の酵素基質の組合せが当業者に利用可能である。これらの一般的な概説については、米国特許第４２７５１４９号及び４３１８９８０を参照。しばしば、標識は抗体と間接的にコンジュゲートされる。これを達成するための様々な技術が当業者には知られている。例えば、抗体はビオチンとコンジュゲートさせることができ、前述した大きな４つの広いカテゴリーの標識の何れもアビジンとコンジュゲートさせることができ、その逆もまた可能である。ビオチンは選択的にアビジンと結合し、よって、標識はこの間接的な方法で抗体にコンジュゲートさせることができる。あるいは、抗体と標識を間接的にコンジュゲートさせるために、抗体を小ハプテンとコンジュゲートさせ、前述した標識の異なるタイプのうち一つを抗ハプテン抗体とコンジュゲートさせる。このようにして、抗体と標識の間接的なコンジュゲーションを達成することができる。
【０２５２】
任意のブロック工程の後に、一次抗体が試料中の標的タンパク質抗原と結合するような好適な条件下と十分な時間の間、試料を一次抗体に曝露させる。これを達成するための好適な条件は常套的な実験によって決定できる。試料に対する抗体の結合度合いは、上で検討された検出可能な標識の何れか一つを使用して決定される。特定の実施態様では、標識は、３，３’−ジアミノベンジジン色素原などの色素生産性基質の化学変化を触媒する酵素標識（例えばＨＲＰＯ）である。一実施態様では、酵素標識は、一次抗体（例えば、一次抗体はウサギポリクローナル抗体であり、二次抗体はヤギ抗ウサギ抗体である）に特異的に結合する抗体にコンジュゲートさせる。
【０２５３】
幾つかの実施態様では、試料を、抗体−バイオマーカー複合体が生じるのに十分な条件下で該バイオマーカーに特異的な抗体と接触させ、次いで該複合体を検出してもよい。バイオマーカーの存在は、多くの方法、例えば血漿又は血清を含む多種多様な組織及び試料を検定するためのウエスタンブロッティング及びＥＬＩＳＡ手順で検出することができる。このようなアッセイ形式を使用する広範囲のイムノアッセイ技術が利用可能であり、例えば米国特許第４０１６０４３号、同第４４２４２７９号及び同第４０１８６５３号を参照のこと。これらには、非競合型の単一部位及び２部位又は「サンドイッチ」アッセイの両方、並びに伝統的な競合結合アッセイが含まれる。また、これらのアッセイは、標的バイオマーカーに対する標識抗体の直接結合を含む。
【０２５４】
サンドイッチアッセイは最も有用で一般的に使用されるアッセイの一つである。サンドイッチアッセイ技術には多くのバリエーションあり、その全てが本発明により包含されることが意図される。簡潔に述べると、典型的なフォワードアッセイでは、非標識抗体を固形基体に固定して、試験される試料が結合分子と接触させられる。抗体−抗原複合体の生成を可能にする十分な時間、適当な時間のインキュベーション後、検出可能なシグナルを産生できるレポーター分子で標識された抗原に特異的な第二抗体を次いで添加し、抗体−抗原−標識抗体の他の複合体が形成されるのに十分な時間インキュベートする。反応しなかった材料を洗い流し、レポーター分子により産生されるシグナルを観察することによって抗原の存在が決定される。結果は、可視的なシグナルを単純に観察した定性的なものであり、又は既知量のバイオマーカーを含む参照試料と比較した定量的なものであり得る。
【０２５５】
フォワードアッセイの変形態様には、試料及び標識抗体の両方が結合抗体に同時に添加される同時アッセイが含まれる。これらの技術は、直ぐに明らかになる任意のマイナーな変形を含めて、当業者に知られている。典型的なフォワードサンドイッチアッセイでは、バイオマーカーに特異性を有する第一抗体が、固体表面に共有的又は受動的に結合している。固体表面は、典型的にはガラス又はポリマーであり、最も一般的に使用されるポリマーは、セルロース、ポリアクリルアミド、ナイロン、ポリスチレン、ポリ塩化ビニル、又はポリプロピレンである。固体支持体は、チューブ、ビーズ、マイクロプレートのディスク、又は免疫アッセイの実施に適した任意の他の表面の形態をしていてよい。結合方法は当該分野でよく知られており、一般的に架橋、共有結合、又は物理的吸着からなり、ポリマー−抗体複合体は、試験試料の調製の際に洗浄される。次いで、試験される試料のアリコートが、固相複合体に添加され、十分な時間（例えば、２−４０分、又は都合がよければ一晩）、適切な条件下（例えば、室温から４０℃、例えば２５℃〜３２℃）でインキュベートされ、抗体中に存在する任意のサブユニットの結合を可能にする。インキュベート時間後、抗体サブユニット固相を洗浄し、乾燥させ、バイオマーカーの一部に対して特異的な第二抗体と共にインキュベートする。分子マーカーへの第二抗体の結合を示すために使用されるレポーター分子に第二抗体を結合させる。
【０２５６】
別法では、試料中の標的バイオマーカーを固定し、その後レポーター分子で標識されていても又は標識されていなくともよい特異的抗体に固定標的を曝すことを伴う。標的の量及びレポーター分子シグナルの強度に応じて、結合標的は、抗体での直接標識によって検出可能とされ得る。あるいは、第一抗体に特異的な第二標識抗体を標的−第一抗体複合体に曝して、標的−第一抗体−第二抗体の三元複合体を形成させる。複合体は、レポーター分子により発されるシグナルにより検出される。本明細書で使用される「レポーター分子」とは、その化学的性質によって、抗原と結合した抗体の検出を可能にする分析して同定可能となるシグナルを提供する分子を意味する。この種のアッセイにおいて最も一般的に使用されるレポーター分子は、酵素、フルオロフォア又は放射性核種含有分子（すなわち、放射性同位元素）及び化学発光分子である。
【０２５７】
酵素イムノアッセイの場合、酵素は、一般にグルタルアルデヒド又は過ヨウ素酸塩によって、第二抗体にコンジュゲートされる。しかしながら、直ぐに認識されるように、当業者が直ぐ利用できる多種多様な異なるコンジュゲーション技術が存在する。一般的に使用される酵素には、とりわけ、西洋わさびペルオキシダーゼ、グルコースオキシダーゼ、ガラクトシダーゼ及びアルカリホスファターゼがある。特定の酵素と共に使用される基質は、一般に、対応する酵素による加水分解の際の、検出可能な色の変化の発生で選択される。適切な酵素の例には、アルカリホスファターゼ及びペルオキシダーゼが含まれる。また、上記の色素生産性基質よりも蛍光性産物を産生する蛍光発生基質を用いることができる。全ての場合において、酵素標識抗体を第一抗体−分子マーカー複合体に加えて、結合させ、次いで過剰な試薬を洗い流す。次いで、適切な基質を含む溶液を抗体−抗原−抗体の複合体に加える。基質が第二抗体に結合した酵素と反応して定性的可視シグナルを生じ、これを、通常は分光光度的に定量化して、試料中に存在するバイオマーカーの量の表示が得られる。別法では、フルオレセイン及びローダミンなどの蛍光性化合物を、抗体の結合能を変化させることなく抗体に化学的に結合させることができる。特定の波長の光が照射されて活性化されると、蛍光色素標識抗体はその光エネルギーを吸収し、分子内に励起状態を誘発し、続いて光学顕微鏡を用いて視覚的に検出可能な特徴的な色で光が放射される。ＥＩＡでは、蛍光標識抗体は、第一抗体−分子マーカー複合体に結合できる。結合していない試薬を洗い落とした後、残りの三元複合体を適切な波長の光に曝すと、観察される蛍光が対象の分子マーカーの存在を示す。免疫蛍光法及びＥＩＡ技術は双方とも当該分野で確立されたものである。しかしながら、放射性同位元素、化学発光性分子又は生物発光性分子などの他のレポーター分子を用いることもできる。
【０２５８】
試験結果に基づく患者のＩＬ−１３状態（例えば、上昇した、基準を上回る、又は基準を下回る）が報告書に提供されてもよい。報告書は、任意の形態の文書材料（例えば紙又はデジタル形態、又はインターネット）あるいは口頭発表（例えば人（ライブ）又はレコード）であり得る。報告書は、患者がインターフェロン阻害剤治療から利益を受け得るか又はそれに応答する可能性があるかを医療専門家（例えば医師）に更に示し得る。
【０２５９】
本発明のキットは多くの実施態様を有する。特定の実施態様では、キットは、容器と、該容器上のラベルと、該容器内に収容される組成物を含み、ここで、組成物は一又は複数のバイオマーカーに対応する一又は複数の標的ポリペプチド配列に結合する一又は複数の一次抗体を含み、該容器上のラベルは、該組成物を使用して少なくとも一種類の哺乳動物細胞中の一又は複数の標的タンパク質の存在を評価することができることと、少なくとも一種類の哺乳動物細胞中の一又は複数の標的タンパク質の存在を評価するための抗体の使用についてのインストラクションを示すものである。キットは、組織試料を調製し、組織試料の同じ部分に抗体とプローブを適用するための、一セットのインストラクションと材料を更に含み得る。キットは、一次抗体と二次抗体の双方を含んでいてもよく、ここで、二次抗体は例えば酵素標識などの標識にコンジュゲートされている。
【０２６０】
「検出する」なる用語は定量的又は定性的検出を包含する。特定の実施態様では、生体試料は細胞又は組織、例えば血清、血漿、鼻腔スワブ及び痰を含む。
【０２６１】
薬学的製剤
本明細書に記載された抗ＩＬ−１３抗体又は他のＴｈ２経路阻害剤の薬学的製剤は、所望の程度の純度を有するそのような抗体又は分子を一又は複数の任意成分の薬学的に許容される担体（Remington's Pharmaceutical Sciences 16th edition, Osol, A. Ed. (1980)）と混合することによって、凍結乾燥製剤又は水溶液の形態で調製される。薬学的に許容される担体は、用いられる投薬量及び濃度でレシピエントに一般に非毒性であり、限定されないが、緩衝剤、例えばリン酸塩、クエン酸塩、及び他の有機酸；アスコルビン酸及びメチオニンを含む抗酸化剤；保存料（例えば、オクタデシルジメチオルベンジルアンモニウムクロライド；ヘキサメトニウムクロライド；塩化ベンザルコニウム、塩化ベンゼトニウム、フェノール、ブチル又はベンジルアルコール；アルキルパラベン、例えばメチル又はプロピルパラベン；カテコール；レゾルシノール；シクロヘキサノール；３−ペンタノール；及びｍ−クレゾール）；低分子量（約１０残基未満）ポリペプチド；タンパク質、例えば、血清アルブミン、ゼラチン、又は免疫グロブリン；親水性ポリマー、例えば、ポリビニルピロリドン；アミノ酸、例えば、グリシン、グルタミン、アスパラギン、ヒスチジン、アルギニン又はリジン；グルコース、マンノース又はデキストリンを含む単糖類、二糖類、他の炭水化物；キレート剤、例えば、ＥＤＴＡ；糖、例えば、スクロース、マンニトール、トレハロース又はソルビトール；塩形成対イオン、例えば、ナトリウム、金属錯体（例えば、Ｚｎ−タンパク質錯体）；及び／又はポリエチレングリコール（ＰＥＧ）等の非イオン性界面活性剤が挙げられる。本明細書における例示的な薬学的に許容される担体は、介在性薬物分散剤、例えば、可溶性の中性活性ヒアルロニダーゼ糖タンパク質（ｓＨＡＳＥＧＰ）、例えば、ｒＨｕＰＨ２０（ＨＹＬＥＮＥＸ（登録商標）、Ｂａｘｔｅｒ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ、Ｉｎｃ．）などのヒト可溶性ＰＨ−２０ヒアルロニダーゼ糖タンパク質を更に含む。特定の例示的なｓＨＡＳＥＧＰ及び使用法は、ｒＨｕＰＨ２０を含み、米国特許出願公開第２００５／０２６０１８６号及び第２００６／０１０４９６８に開示されている。一態様では、ｓＨＡＳＥＧＰは、コンドロイチナーゼなどの一又は複数の追加のグルコサミノグリカナーゼと組み合わされる。
【０２６２】
例示的な凍結乾燥抗体製剤は、米国特許第６２６７９５８号に記載されている。水性の抗体製剤は、米国特許第６１７１５８６号及び国際公開第２００６／０４４９０８号に記載されているものが含まれ、後者の製剤はヒスチジン−酢酸緩衝剤を含む。
【０２６３】
本明細書における製剤は、また、治療を受けている特定の適応症のために必要な一を越える活性成分、好ましくは、互いに悪影響を及ぼさない相補的活性を持つものを含んでいてもよい。例えば、Ｔｈ２経路阻害剤と共にコントローラーを更に提供することが望ましい場合がある。そのような活性成分は、意図した目的のために有効な量で組み合わされて適切に存在する。
【０２６４】
活性成分は、例えばコアセルベーション技術により又は界面重合により調製されたマイクロカプセル、例えば、各々ヒドロキシメチルセルロース又はゼラチン−マイクロカプセル及びポリ（メタクリル酸メチル）マイクロカプセル中、コロイド状薬物送達系（例えば、リポソーム、アルブミンミクロスフィア、マイクロエマルション、ナノ粒子及びナノカプセル）中、又はマイクロエマルション中に封入されてもよい。このような技術は、Remington's Pharmaceutical Sciences 16th edition, Osol, A. Ed. (1980)に開示されている。
【０２６５】
徐放性製剤が調製されてもよい。徐放性製剤の好適な例は、抗体を含む固体疎水性ポリマーの半透性マトリクスを含み、そのマトリックスが成形品、例えばフィルム又はマイクロカプセルの形をしている。
【０２６６】
インビボ投与に使用される製剤は、一般的に無菌である。無菌性は、例えば、滅菌濾過膜を通して濾過することにより、直ぐに達成することができる。
【０２６７】
治療的方法及び組成物
好酸球性炎症は、アレルギー性及び非アレルギー性の両方の様々な疾患に関連している（Gonlugur (2006) Immunol. Invest. 35(1):29-45）。炎症は怪我に対する生体組織の回復性応答である。炎症反応の特徴は、組織それ自体に産生される特定の化学物質に起因する損傷組織における白血球の蓄積である。好酸球白血球は、例えばアレルギー性疾患、蠕虫感染症及び腫瘍性疾患など広範な病態において蓄積する（Kudlacz et al., (2002) Inflammation 26: 111-119）。免疫系の成分である好酸球白血球は、粘膜表面の防御的な要素である。それらは、抗原だけでなく寄生虫、化学物質及び外傷にも応答する。
【０２６８】
組織好酸球増加症は、湿疹、天疱瘡、急性蕁麻疹、及び中毒性表皮壊死症並びにアトピー性皮膚炎などの皮膚疾患で生じる（Rzany et al., Br. J. Dermatol. 135: 6-11 (1996)）。好酸球はＩｇＥ介在アレルギー性皮膚反応において組織及び空の顆粒タンパク質中に蓄積する（Nielsen et al., Ann. Allergy Asthma Immunol., 85: 489-494 (2001)）。肥満細胞と結合した好酸球は関節の炎症を引き起こす可能性がある（Miossec, J. Clin. Rheumatol. 3: 81-83 (1997)）。好酸球性炎症にはしばしば関節外傷が伴う。滑膜液好酸球増加症は、関節リウマチ、寄生虫症、好酸球増加症候群、ライム病、及びアレルギー性プロセス並びに関節血症などの疾患及び関節造影と関連付けることができる（Atanes et al., Scand. J. Rheumatol., 25: 183-185 (1996)）。好酸球性炎症は骨にも影響を与える場合がある（Yetiser et al., Int. J. Pediatr. Otorhinolaryngol., 62: 169-173 (2002)）。好酸球性筋疾患の例としては、好酸球性化膿性筋炎、好酸球性多発性筋炎、及び局所的好酸球性筋炎を含む（Lakhanpal et al., Semin. Arthritis Rheum., 17: 331-231 (1988)）。骨格筋に影響を与える好酸球性炎症は、寄生虫感染症又は薬物又は過好酸球増加症の幾つかの全身疾患の特徴（例えば、特発性好酸球増多症候群及び好酸球増多筋痛症候群）と関連付けられ得る。好酸球は自己免疫抗体によって認識されるエピトープに対する炎症応答に関与する（Engineer et al., Cytokine, 13: 32-38 (2001)）。結合組織の疾患は好中球性、好酸球性又はリンパ球性の血管の炎症に至る可能性がある（Chen et al., J. Am. Acad. Dermatol., 35: 173-182 (1996)）。組織及び末梢血の好酸球増加症は、活動的なリウマチ性疾患で発生する場合がある。結合組織病の一種である強直性脊椎炎における血清ＥＣＰレベルの上昇は、好酸球がまた根底にあるプロセスにも関与していることを示唆している（Feltelius et al., Ann. Rheum. Dis., 46: 403-407 (1987)）。ウェゲナー肉芽腫症は肺結節、胸水、末梢血好酸球増加症を伴う場合は滅多にない（Krupsky et al., Chest, 104: 1290-1292 (1993)）。
【０２６９】
少なくとも４００／ｍｍ３の末梢血好酸球増加症は、全身性硬化症の症例の７％、限局性強皮症の症例の３１％、及び好酸球性筋膜炎の症例の６１％で生じる可能性がある（Falanga, et al., J. Am. Acad. Dermatol., 17: 648-656 (1987)）。強皮症は、マイスナーとアウエルバッハ神経叢に密接に似た炎症過程を生じ、胃腸系における好酸球白血球及び肥満細胞からなる。好酸球由来神経毒は、強皮症で起きるように、胃腸運動機能障害の一因となり得る（DeSchryver-Kecskemeti, et al. Arch. Pathol. Lab Med., 113: 394-398 (1989)）。
【０２７０】
好酸球は、局所的（Varga, et al., Curr. Opin. Rheumatol., 9: 562-570 (1997)）又は全身性の（Bouros et al., Am. J. Respir. Crit. Care Med., 165: 1581-1586 (2002)）結合組織増殖を伴い得る。それらは線維芽細胞におけるプロテオグリカン分解を阻害することにより、繊維化を誘発する場合があり（Hernnas et al., Eur. J. Cell Biol., 59: 352-363 (1992)）、線維芽細胞が、ＧＭ−ＣＳＦを分泌することにより好酸球の生存を媒介する（Vancheri et al., Am. J. Respir. Cell Mol. Biol., 1: 289-214 (1989)）。好酸球は、鼻（Bacherct et al., J. allergy Clin. Immunol., 107: 607-614 (2001)）、気管支（Arguelles, et al., Arch. Intern. Med., 143: 570-571 (1983)）、及び消化管ポリープ組織（Assarian, et al., Hum. Pathol., 16: 311-312 (1985)）に見いだすことができる。同様に、好酸球は、炎症性偽腫瘍（筋線維芽細胞腫瘍）に局在する場合がある。好酸球は、多くの場合、眼窩部において炎症性偽腫瘍を伴い、その場合、症状は血管性浮腫又はアレルギー性結膜炎を模倣する場合がある（Li et al., Ann. Allergy, 69: 101-105 (1992)）。
【０２７１】
好酸球性炎症は組織外傷に見出すことができる（例えば、手術又は怪我の結果として）。好酸球性炎症はまた心血管系疾患（例えば、好酸球性心筋炎、好酸球性冠状動脈炎、虚血性心疾患、急性心筋梗塞、心臓破裂）に関係している場合がある。壊死性炎症過程はまた好酸球性炎症（多発性筋炎、冠状動脈解離、神経ベーチェット病の壊死性病変、認知症、脳梗塞）にまた関与する場合がある。
【０２７２】
Ｔｈ２惹起／好酸球性喘息サブフェノタイプの非侵襲的バイオマーカーには血清ペリオスチン、呼気一酸化窒素濃度（ＦｅＮＯ）、及び末梢血好酸球数がある。Arron et al. (2013) Adv Pharmacol 66: 1-49を参照。これらのマーカーのなかで、血清ペリオスチンが、レブリキズマブに対する予測診断として価値が上がっているが、これは、それが重度の喘息のＢＯＢＣＡＴ観察研究（Jia et al. (2012) J Allergy Clin Immunol 130: 647-654 e10）における（痰及び組織好酸球増加症の複合状態によって決定された）気道好酸球状態の最良の単一の予測因子であり、それがＭＩＬＬＹ試験（Corren et al. (2011) N Engl J Med 365: 1088-98）において２回の投薬前来診にわたってＦｅＮＯ又は血中好酸球よりも実質的に少ない患者内変動を示しており、（ＦｅＮＯのような）特殊なポイントオブケア機器を必要としないし、（血中好酸球のような）既存の臨床研究室において広くは標準化されていない自動細胞計数器に依存しない標準化され、広く利用可能なアッセイプラットフォームで利用できるためである。血清ペリオスチンは成人喘息のＴｈ２／好酸球性サブタイプに対するしっかりした一貫性のあるバイオマーカーであると思われるが、それを小児喘息に応用することができるかどうかは知られていなかった。
【０２７３】
ＭＩＬＬＹ試験では、ベースラインで５０ｎｇ／ｍｌを越える血清ペリオスチンレベルを有していたＩＣＳにもかかわらず喘息のコントロール不良の成人は、１２週間のレブリキズマブ治療後に血清ペリオスチンの平均１４．４％の減少（ｐ＝０．００１）を示したが、５０ｎｇ／ｍｌより少ないベースライン血清ペリオスチンレベルの患者は、治療期間中、有意でない２．９％の血清ペリオスチンの減少を示した（ｐ＝０．３）。Scheerens et al. (2012) Am J Respir Crit Care Med 185: A3960を参照。１２週のレブリキズマブ治療後の喘息患者における血清ペリオスチンレベルの分布は、健常対照成人における血清ペリオスチンレベルの分布とオーバーラップした（Arron et al, Annals Am. Thoracic Soc., 近刊（2013), DOI: 10.1513/AnnalsATS.201303-047AW）。これらの結果は、高血清ペリオスチンの成人喘息患者において、バックグラウンドレベルを越える過剰なペリオスチンは気道におけるＩＬ１３の活動のためであり、この過剰量は総全身ペリオスチンの約１０〜１５％を構成していることを示唆している。
【０２７４】
ペリオスチンは、骨基質を築く細胞である骨芽細胞の産物として最初は同定された。Horiuchi et al. (1999) J Bone Miner Res 14: 1239-49を参照。解剖学的には、骨におけるペリオスチンの発現は発達段階における軟骨内及び膜内骨化の部位に局在化しており、ペリオスチン発現レベルが骨成長の速度と相関しているかもしれないことを示唆している。若年マウスでは、全身ペリオスチンレベル及び骨代謝のマーカーは上昇しており、動物の成熟につれて減少し、８週齢から成体期全体にわたって比較的安定したレベルを達成する。Contie et al. (2010) Calcif Tissue Int 87: 341-5を参照。ヒトでは、小児集団の喘息は成人喘息よりもアトピー及び２型炎症により一般的に関連しているが、喘息の子供においても好酸球性及び非好酸球性気道炎症サブセットの証拠が残っている。Baraldo et al. (2011) Eur Respir J 38: 575-83を参照。よって、Ｔｈ２／好酸球性気道炎症の増加を伴う喘息の子供を同定するバイオマーカーは、抗ＩＬ１３及び２型炎症を標的とする他の治療薬からの臨床的有用性を証明するため患者の選択を可能にするのに有用な場合がある。
【０２７５】
本明細書では、本明細書に記載のＩＭＰＡＣＴ  ＩＬ−１３アッセイを用いて、患者からの生物学的試料中のＩＬ−１３のレベルを測定することによりＴｈ２経路阻害剤による治療に対する応答を予測する（又はそれに応答するであろう）循環ＩＬ−１３レベルの上昇した患者を同定する方法が提供される。
【０２７６】
本明細書ではまた、喘息、Ｔｈ２関連疾患、ＩＬ−１３媒介性疾患、ＩＬ４媒介性疾患、ＩＬ９媒介性疾患、ＩＬ５媒介性疾患、ＩＬ３３媒介性疾患、ＩＬ２５媒介性疾患、ＴＳＬＰ媒介性疾患、ＩｇＥ媒介性疾患、又は喘息様症状を治療する方法であって、上昇した循環ＩＬ−１３レベルを有する患者にＴｈ２経路阻害剤を投与することを含む方法を提供し、ここで、その患者は本明細書に記載のＩＭＰＡＣＴ  ＩＬ−１３アッセイを用いて診断されていた。
【０２７７】
また提供されるものは、喘息患者に治療的有効量のレブリキズマブを投与することを含む喘息（又は呼吸器疾患）を治療する方法であり、その治療が５％を越えるＦＥＶ１の相対的変化をもたらす。別の実施態様では、ＦＥＶ１は６％、７％、８％、９％、又は１０％ＦＥＶ１より大きい。別の実施態様では、患者は、ＩＭＰＡＣＴ  ＩＬ−１３アッセイを用いて上昇した循環ＩＬ−１３を有すると診断されている。
【０２７８】
特定の実施態様では、喘息患者に治療的有効量のレブリキズマブを投与することを含む喘息を治療する方法であり、その治療が３５％を越える（他の実施態様では３６％、３７％、３８％、３９％、４０％、４１％、４２％、４３％、４４％、４５％、４６％、４７％、４８％、４９％、５０％、５１％を超え、最大８５％；別の実施態様では、患者は上昇した循環ＩＬ−１３を有すると診断されている）増悪率の減少をもたらす方法が提供される。
【０２７９】
特定の実施態様では、喘息患者に治療的有効量のレブリキズマブを投与することを含む喘息を治療する方法であって、その治療が夜間覚醒の低下をもたらす方法が提供される。一実施態様では、患者は、ＩＭＰＡＣＴ  ＩＬ−１３アッセイを用いて上昇した循環ＩＬ−１３レベルを有すると診断される。別の実施態様では、患者の喘息はコルチコステロイドでコントロール不良である。別の実施態様では、患者は上昇した循環ＩＬ−１３レベルを有すると診断される。
【０２８０】
また提供されるものは、喘息患者に治療的有効量のレブリキズマブを投与することを含む喘息（又は呼吸器疾患）を治療する方法であり、その治療が喘息コントロールの改善をもたらす。一実施態様では、患者は、ＩＭＰＡＣＴ  ＩＬ−１３アッセイを用いて上昇した循環ＩＬ−１３レベルを有すると診断される。別の実施態様において、患者の喘息はコルチコステロイドでコントロール不良である。別の実施態様では、患者は上昇した循環ＩＬ−１３レベルを有すると診断される。
【０２８１】
肺における炎症の減少をもたらす、治療的有効量のレブリキズマブを喘息患者に投与することを含む、喘息（又は呼吸器疾患）を治療する方法が提供される。一実施態様では、患者は、ＩＭＰＡＣＴ  ＩＬ−１３アッセイを用いて上昇した循環ＩＬ−１３レベルを有すると診断される。別の実施態様において、患者の喘息はコルチコステロイドでコントロール不良である。別の実施態様では、患者は上昇した循環ＩＬ−１３レベルを有すると診断される。
【０２８２】
特定の実施態様では、治療的有効量のレブリキズマブを患者に投与することを含む、Ｔｈ２関連疾患に罹患し、かつコルチコステロイドで治療されている患者においてＴｈ２関連疾患を治療する方法であって、その治療が疾患を治療することに使用されるコルチコステロイド治療（の量又は頻度）の減少又は排除をもたらす治療が提供される。一実施態様では、患者は、ＩＭＰＡＣＴ  ＩＬ−１３アッセイを用いて上昇した循環ＩＬ−１３レベルを有すると診断される。別の実施態様では、患者の喘息はコルチコステロイドでコントロール不良である。別の実施態様では、患者は上昇した循環ＩＬ−１３レベルを有すると診断される。
【０２８３】
また、喘息（又はＴｈ２関連疾患）に罹患している患者を治療する方法であって、ＩＭＰＡＣＴ  ＩＬ−１３アッセイを用いて上昇したＩＬ−１３レベルを有する患者を診断すること、治療的有効量のＴｈ２経路阻害剤を喘息患者に投与すること、患者のＩＬ−１３状態を診断すること、及びＩＬ−１３状態が上昇しているか又は基準レベルを上回っている場合、Ｔｈ２経路阻害剤により患者を再治療することを含む方法が提供される。診断は、イムノアッセイ（例えばＩＭＰＡＣＴ  ＩＬ−１３）を単独で用いて、又はＦＥＮＯレベル、ペリオスチンレベル、血中好酸球レベル、又はＩｇＥと組み合わせて用いて行うことができる。
【０２８４】
本明細書に提供される任意のＴｈ２経路阻害剤を、本明細書に記載の治療法、特に喘息に使用することができる。一実施態様では、喘息患者はコルチコステロイドで治療されており、本明細書に記載されるイムノアッセイを使用してＴｈ２経路阻害剤に応答性であると診断されている。更なる実施態様において、喘息患者は中等度から重度の喘息に罹患している。別の実施態様では、患者は軽度の喘息に罹患しているが、コルチコステロイドで治療されていない。
【０２８５】
本発明の抗体（及び任意の更なる治療剤）は、非経口、肺内、及び鼻腔内、及び局所治療が所望される場合は、病巣内投与を含む、任意の適切な手段によって投与することができる。非経口注入には、筋肉内、静脈内、動脈内、腹腔内、又は皮下投与が含まれる。投薬は、その投与が短期間か又は長期であるかどうかに部分的に依存して、任意の適切な経路、例えば、静脈内又は皮下注射などの注射により行うことができる。限定されないが、単回又は様々な時点にわたる複数回投与、ボーラス投与、及びパルス注入を含む様々な投与スケジュールが本明細書において考慮される。
【０２８６】
本発明の抗体は良好な医療実務に合致した方法で処方され、用量決定され、投与される。この文脈において考慮される要因は、治療されている特定の疾患、治療されている特定の哺乳類、個々の患者の臨床状態、疾患の原因、薬剤送達部位、投与方法、投与スケジュール、及び医療従事者に知られた他の要因を含む。抗体は、必要ではないが場合によっては、問題となる疾患の予防又は治療に現在使用されている一又は複数の薬剤と共に処方される。そのような他の薬剤の有効量は製剤中に存在する抗体の量、疾患又は治療の種類、及び上で検討された他の要因に依存する。これらは、ここに記載されたものと同じ投薬量及び投与経路で、又はここに記載された投薬量の約１％から９９％で、又は経験的に／臨床的に妥当であると決定された任意の投薬量及び任意の経路により、一般に使用される。
【０２８７】
疾患の予防又は治療では、本発明の抗体の適切な投薬量（単独か、又は、一又は複数の他の更なる治療剤との併用で使用される場合）は、治療されるべき疾患の種類、抗体の種類、疾患の重症度及び経過、抗体を予防目的か治療目的の何れで投与するか、以前の治療法、患者の臨床履歴及び抗体に対する応答、及び担当医の裁量に依存する。抗体は、一回で、又は一連の治療にわたって患者に適切に投与される。疾患の種類及び重症度に応じて、例えば一又は複数回の別個の投与によるか、連続注入によるかに関わらず、抗体約１μｇ／ｋｇから１５ｍｇ／ｋｇ（例えば０．１ｍｇ／ｋｇ〜１０ｍｇ／ｋｇ）が患者への投与のための初期候補投薬量であり得る。一つの典型的な一日当たり投薬量は上記された要因に応じて、約１μｇ／ｋｇから１００ｍｇ／ｋｇ又はそれ以上の範囲であるかもしれない。数日間以上に渡る反復投与では、病態に応じて、治療は、疾患症状の望まれる抑制が起こるまで一般に持続されるであろう。一つの例示的抗体投薬量は約０．０５ｍｇ／ｋｇから約１０ｍｇ／ｋｇの範囲であろう。従って、約０．５ｍｇ／ｋｇ、２．０ｍｇ／ｋｇ、４．０ｍｇ／ｋｇ又は１０ｍｇ／ｋｇの一又は複数の用量（又はその何れかの組み合わせ）が患者に投与され得る。このような用量は、断続的に、例えば毎週又は３週毎に（例えば患者が抗体の約２から約２０用量、又は例えば約６用量を受けるように）投与され得る。しかしながら、他の投与計画が有用な場合がある。この治療法の進行は、常套的な技術及びアッセイにより容易にモニターされる。
【０２８８】
特定の実施態様では、本発明の抗体は３７．５ｍｇのフラット用量（つまり体重に依存しない）、又は１２５ｍｇのフラット用量、又は２５０ｍｇのフラット用量として投与される。特定の実施態様では、その期間は、６ヶ月、１年、２年、５年、１０年、１５年、２０年、又は患者の一生涯である。特定の実施態様では、喘息は重度の喘息であり、患者は吸入ステロイドと第二のコントローラー薬物で不十分にコントロールされるか又はコントロール不良である。
【０２８９】
上記の製剤又は治療方法の何れかを、抗標的抗体の代わりか又は該抗体に加えて、本発明のイムノコンジュゲートを使用して実施してもよいことが理解される。
【０２９０】
製造品
本発明の他の態様では、上述した疾患の治療、予防、及び／又は診断に有用な物質を含む製造品が提供される。製造品は、容器と容器上の又は容器に付属するラベル又は添付文書を含む。好適な容器は、例えばボトル、バイアル、シリンジ、ＩＶ輸液バッグ等を含む。容器はガラス又はプラスチックなどの様々な物質から形成され得る。容器は、病態の治療、予防、及び／又は診断にそれ自体で又は他の組成物との併用で効果的である組成物を収容し、無菌のアクセスポートを有し得る（例えば、容器は静脈内溶液バッグ又は皮下注射針により貫通可能なストッパーを有するバイアルであり得る）。組成物中の少なくとも一の活性剤は本発明の抗体である。ラベル又は添付文書は、組成物が選択された病態を治療するために使用されることを示している。更に、製造品は、（ａ）本発明の抗体を含む組成物である組成物がそこに収容された第一の容器と；（ｂ）更なる細胞傷害性又はその他の治療剤を含む組成物である組成物がそこに収容された第２の容器を備え得る。本発明のこの実施態様における製造品は、組成物を特定の病態を治療するために使用できることを示す添付文書を更に含んでいてもよい。あるいは、又は加えて、製造品は、薬学的に許容される緩衝液、例えば注射用静菌水（ＢＷＦＩ）、リン酸緩衝生理食塩水、リンガー液及びデキストロース液を含む第二（又は第三）の容器を更に備えていてもよい。それは、他の緩衝液、希釈液、フィルター、針、及びシリンジを含む、商業的及び使用者の立場から望まれる他の材料を更に含んでいてもよい。
【０２９１】
上記の製造品の何れかは、抗標的抗体の代わりか又はそれに加えて、イムノコンジュゲートを含んでいてもよいことが理解される。
【実施例】
【０２９２】
実施例１  −  イムノアッセイ法
ヒト血清試料：実施例１〜３に記載の実験では、以下に示すように、市販のＥｒｅｎｎａ（登録商標）ＩＬ−１３イムノアッセイ又はＩＭＰＡＣＴ  ＩＬ−１３アッセイを特徴付けるために、健常ボランティア（ＨＶ）からの血清試料を使用した。これらの健常ボランティアの試料は、内部献血プログラムから得られたものである（Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ、Ｉｎｃ．、Ｓｏｕｔｈ  Ｓａｎ  Ｆｒａｎｃｉｓｃｏ、ＣＡ、ＵＳＡ；Ｒｏｃｈｅ  Ｐｒｏｆｅｓｓｉｏｎａｌ  Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ、Ｐｅｎｚｂｅｒｇ、Ｇｅｒｍａｎｙ）。更に、以下に示すように、喘息、ＩＰＦ、又はアトピー性皮膚炎患者の血清試料は、ＢｉｏｒｅｃｌａｍａｔｉｏｎＩＶＴ（Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ、ＵＳＡ）から購入した。
【０２９３】
Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｍｕｌｔｉｐａｒａｍｅｔｅｒ  Ｃｈｉｐ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ（ＩＭＰＡＣＴ）プラットフォームは以前に記載されている。例えば、国際公開第２００７／０３９２８０号及びClaudon et al., Clinical Chemistry 54(9):1554-1563を参照。以下はプラットフォーム及び一般的な手順の簡潔な概要とＩＭＰＡＣＴ  ＩＬ−１３アッセイの説明である。
【０２９４】
ＩＭＰＡＣＴ技術は、ストレプトアビジン−ビオチン相互作用を用いて製造された約２．５×６ｍｍの表面積を有する黒色ポリスチレンチップに基づいている。チップ表面をストレプトアビジン層でコーティングし、その上にインクジェット技術を用いて第１のビオチン化捕捉抗体（特異的に分析物に結合する）をスポットする。各スポットは直径約１５０μｍである。アッセイの間、チップは、分析物と、第１の抗体とは異なるエピトープ特異性の、分析物に特異的に結合する第２のジゴキシゲニン化モノクローナル抗体とを含む検体試料とともにインキュベートされる。第３の検出抗体は、蛍光ラテックスコンジュゲートと結合した抗ジゴキシゲニンモノクローナル抗体である。このラベルを使用すると、単一スポット内の１０個未満の個々の結合事象を検出することができ、その結果、非常に高感度であることが以前に報告された（Claudon et al., Clinical Chemistry 54(9):1554-1563）。チップは検出ユニットに搬送され、電荷結合素子（ＣＣＤ）カメラは専用ソフトウェアを使用して信号強度に変換される画像を生成する。個々のスポットは、所定の位置に自動的に配置され、画像解析によって定量化される。ＩＭＰＡＣＴプラットフォームを使用して首尾よく検出及び定量された検体には、抗ＣＣＰ抗体、抗核抗体、Ｉ型コラーゲンの血清Ｃ末端架橋テロペプチド、Ｉ型コラーゲンのＮ末端プロペプチド、オステオカルシン、及びインタクトな副甲状腺ホルモンを含む。単一アッセイとして実行した場合、これらの分析物について報告された感度（ＬＬＯＱとして報告）は、０．０８７μｇ／Ｌ（０．０８７ｎｇ／ｍＬ）から４．９ｎｇ／Ｌ（４．９ｐｇ／ｍＬ）の範囲である（同上）。
【０２９５】
我々は、ＩＭＰＡＣＴ  Ｉｌ−１３アッセイのために、捕捉試薬及び検出試薬それぞれとして２つの異なる独自の抗ＩＬ−１３抗体を使用した。第１の抗ＩＬ−１３抗体（「捕捉」抗体）は、以前に記載されているレブリキズマブ（ＭＩＬＲ１４４４Ａとも呼ばれる）であった。例えば、国際公開第２００５／０６２９６７号及びUltsch et al., J. Mol. Biol. 425:1330-9 (2013)を参照。第２の抗ＩＬ−１３抗体（「検出」抗体）は、以前に記載されている１１Ｈ４であった（例えば、国際公開第２０１４／１６５７７１号を参照）。当技術分野で周知の標準的な手順を用いてレブリキズマブのＦ（ａｂ’）２を調製し、ビオチン化した。ビオチン化レブリキズマブのＦ（ａｂ’）２を、上記のようにストレプトアビジン被覆ポリスチレンチップ上にスポットし、各々のチップは１６０μＭ直径の６０個の同一スポットを有していた。アッセイを開始するために、試料を、７５ｍＭリン酸水素二カリウム、２５ｍＭリン酸二水素カリウム、１５０ｍＭのＮａＣｌ、０．０１％メチルイソチアゾロン、０．０１％Ｂｒｏｎｉｄｏｘ（登録商標）、０．１６％Ｔｗｅｅｎ（登録商標）２０、０．０８％ポリドカノール、２ｍＭのＥＤＴＡ、２％ＢＳＡ、１％ウシＩｇＧ、５％ウマ血清（Ｓｉｇｍａ、カタログ番号Ｈ１４７０）を含有する試料緩衝液（Ｓａｍｐｌｅ  Ｂｕｆｆｅｒ（ｐＨ７．２５））で希釈した。試料１２μＬを試料緩衝液２８μＬで希釈し、チップと共に３６℃で１８分間インキュベートした。チップを０．８ｍＬの洗浄緩衝液で５秒間洗浄することによって反応を停止させた（洗浄緩衝液の組成は以下の通りであった：１０ｍＭのＴｒｉｓ−Ｃｌ（ｐＨ８．０）、０．００１％メチルイソチアゾール塩酸塩（ＭＩＴ）、０．００１％Ｏｘｙ−Ｐｙｒｉｏｎ、０．０１％ポリドカノール）。第２の抗ＩＬ−１３抗体である全長１１Ｈ４（ＩｇＧ１）を、当技術分野で周知の標準的な方法を用いてジゴキシゲニンで標識した。検出のために、ジゴキシゲニン化抗ＩＬ−１３  １１Ｈ４抗体及び蛍光タグ標識ラテックスとコンジュゲートした抗ジゴキシゲニンモノクローナル抗体を順次添加した。チップを２．０ｍＬの洗浄緩衝液で１０秒間洗浄し、続いて吸引を用いて１０秒間乾燥させることにより、反応を終了させた。ＣＣＤ−検出器を用いて蛍光強度を検出し、上記の専用ソフトウェアを用いて定量した。組み換えヒトＩＬ−１３（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ、ＭＮ、カタログ番号２１３−ＩＬＢ／ＣＦ）を使用して２〜１０００ｐｇ／ｍｌの範囲の標準曲線を作成した；組み換えヒトＩＬ−１３の希釈液を以下の緩衝液中で作製した：２０ｍＭリン酸カリウム（ｐＨ７．２５）、５０ｍＭのＮａＣｌ、４．０％スクロース、２．０％ＢＳＡ、０．２％ウシＩｇＧ、０．０１％ＭＩＴ、０．０１％Ｂｒｏｎｉｄｏｘ（登録商標）、０．２％Ｔｗｅｅｎ（登録商標）−２０。
【０２９６】
ヒト血清及び血漿中のＩＬ−１３レベルを検出及び定量するための市販のＩＬ−１３アッセイも使用した。市販のＩＬ−１３アッセイは、Ｓｉｎｇｕｌｅｘ（登録商標）（Ａｌａｍｅｄａ、ＣＡ）からのＥｒｅｎｎａ（登録商標）ＩＬ−１３イムノアッセイキットであった（バージョン１、カタログ番号０３−００６９−００はもはや利用できない；バージョン２、市販されているカタログ番号０３−０１０９−ｘｘは、本明細書に記載の実験では使用されず、報告されたＬＬＯＱは０．０４ｐｇ／ｍＬであった［Ｅｒｅｎｎａ（登録商標）ＩＬ−１３（ｖ２）イムノアッセイキット、カタログ番号０３−０１０９−ｘｘ製品情報シート、ｗｗｗ（ｄｏｔ）ｓｉｎｇｕｌｅｘ（ｄｏｔ）ｃｏｍで入手可能］）。記載した以外は、Ｅｒｅｎｎａ（登録商標）ＩＬ−１３イムノアッセイ、バージョン１を、製造業者の指示に従って実施した。
【０２９７】
実施例２−市販のＩＬ−１３アッセイ及び最適化の取り組み
製造業者が推奨するアッセイ条件を用いて、我々は喘息患者からの１０の血清試料を試験した。これらの１０個の試料のうち９個（９０％）は、製造業者により指定されたＬＬＯＱが０．３９ｐｇ／ｍＬを超える検出可能なレベルのＩＬ−１３を有する。定量されたＩＬ−１３レベルは０．６４ｐｇ／ｍＬから１．７５ｐｇ／ｍＬの範囲であった（図１）。過剰の捕捉抗体で試料をプレインキュベートすることにより、ＩＬ−１３のアッセイ特異性を試験した。プレインキュベーションを室温で１時間行った。これは、特異性を評価するための競合法又は免疫枯渇法と呼ばれる。６つの喘息血清試料からのアッセイシグナルは、このアプローチを使用してＬＬＯＱより低いレベルに効果的に競合した（図１）。しかし、より高レベルのＩＬ−１３レベルを有する４つの喘息血清試料からのアッセイシグナルは効果的に競合せず、特異性の欠如を示している。これらの試料における明らかに非特異的なシグナルは有意に現れ、０．４５ｐｇ／ｍＬから１．２８ｐｇ／ｍＬの範囲のシグナルを生じた（図１）。
【０２９８】
上記で論じた特異性評価の結果は、Ｅｒｅｎｎａ（登録商標）ＩＬ−１３イムノアッセイの特異性が最適ではないことを示唆した。従って、我々は、試料希釈液及び最小必要希釈についての製造業者の推奨アッセイ条件の改変が特異性を改善するかどうかを検討した。３人のＨＶからの血清試料を、製造業者の推奨（純粋）に従ってアッセイするか、あるいは、製造業者の高塩濃度緩衝液で１：１（Ｖ／Ｖ）に希釈した。図２Ａは、製造業者の推奨に従って、各ＨＶ試料のＩＬ−１３はＬＬＯＱを上回っていたが、しかしながら、最高レベルのＩＬ−１３を含有するＨＶ試料は、微粒子ビーズ上に被覆された過剰捕捉抗体（２５μｇの捕捉抗体／ｍｇの微粒子ビーズ）とのプレインキュベーションによって競合することができなかったことを示している。従って、この結果は、１０の喘息血清試料を用いて得られた先の結果と一致していた（図２Ａと図１とを比較する）。対照的に、高塩濃度緩衝液を用いたＨＶ試料の各々の１：１（Ｖ／Ｖ）希釈は、検出されたアッセイシグナルが０．７８ｐｇ／ｍＬの改変されたアッセイＬＬＯＱを下回っていたため、微粒子ビーズ上に被覆された過剰捕捉抗体（２５μｇの捕捉抗体／ｍｇの微粒子ビーズ）とのプレインキュベーションによる効果的な競合を示し（図２Ｂ、右側）、高塩濃度がアッセイ特異性を増加させることが示唆された。試料の２倍希釈を考慮するために、ＬＬＯＱを０．３９ｐｇ／ｍＬから０．７８ｐｇ／ｍＬに改変したことに留意されたい。しかし、ＨＶ試料のうちの１つのみが、改変されたアッセイＬＬＯＱよりも高いシグナルを示し、これは、感度を犠牲にして改善された特異性が得られたことを示唆している（図２Ｂ、左側）。
【０２９９】
次に、喘息（ｎ＝１０）及びＩＰＦ患者（ｎ＝１０）及びＨＶ（ｎ＝１０）からの血清試料中のＩＬ−１３レベルを、改変されたアッセイ条件を用いて測定した。ＩＬ−１３レベルは、喘息患者試料の４０％（ｎ＝１０）、ＩＰＦ患者試料の４０％（ｎ＝１０）及びＨＶ試料の１０％（ｎ＝１０）において検出可能であった（図３）。アッセイで試験する前に、微粒子ビーズ上に被覆された過剰捕捉抗体（２５μｇの捕捉抗体／ｍｇの微粒子ビーズ）とのプレインキュベーションにより、ＩＬ−１３に対するアッセイシグナルの特異性を確認した。観察されたＩＬ−１３レベルは、喘息患者試料では０．７８ｐｇ／ｍＬ〜１．０５ｐｇ／ｍＬ、ＩＰＦ患者試料では０．８９ｐｇ／ｍＬ〜１．５６ｐｇ／ｍＬであった。１人のＨＶ試料のみが検出可能なレベルのＩＬ−１３、１．２５ｐｇ／ｍＬを有した（図３）。
【０３００】
上記の結果に基づき、我々はＥｒｅｎｎａ（登録商標）ＩＬ−１３イムノアッセイは、種々のＴｈ−２関連疾患に罹患している大多数の患者において血清ＩＬ−１３レベルの検出及び正確な定量化を可能にするために十分に感受性及び特異性ではなかったと結論づけた。上に議論されるように、血清ＩＬ−１３レベルを健常個体及び種々のＴｈ−２関連疾患状態において正確に定量することができるように、高感度かつ高度に特異的な血清ＩＬ−１３アッセイが必要である。血清ＩＬ−１３レベルの正確な定量化は、疾患メカニズムと進行への洞察を提供し、並びにＩＬ−１３経路又はＴｈ２経路を標的とする治療的介入から最も利益を得ることができる患者を同定することができる、健常個体と種々のＴｈ−２関連疾患状態との間の比較を可能にするであろう。血清ＩＬ−１３レベルの正確な定量化はまた、ＩＬ−１３を標的とする特定の治療薬並びにＴｈ２経路における他の標的に対する特定の治療薬の薬力学的効果の調査を容易にするであろう。
【０３０１】
実施例３：ＩＭＰＡＣＴ  ＩＬ−１３アッセイの開発及び特徴付け
高感度かつ特異性の高い血清ＩＬ−１３アッセイを開発するために、８種類のＩＬ−１３抗体（一部は商業的に入手可能なもの、一部はＧｅｎｅｎｔｅｃｈによって生成されたもの）のペアワイズの組み合わせを試験することから始めた。以下の表２に、抗体対の一覧を示す。５６対の組み合わせのそれぞれについて、試料緩衝液中の１００ｐｇ／ｍＬの組み換えＩＬ−１３を用いた陰性（ブランク）シグナル及び陽性（特異的）シグナル及び陽性シグナル／陰性シグナルの比を決定した（試料緩衝液の組成については実施例１を参照のこと）。最良の陽性シグナル／陰性シグナルの比（すなわち、最高陽性シグナル［”Ｐｏｓ”］及び最低陰性シグナル［”Ｎｅｇ”］又はシグナル対ノイズ比）を提供する抗体対の組み合わせは、表２の灰色のボックスで識別され、更なるアッセイの最適化のために選択された。具体的には、この最適な抗体対の組み合わせは、捕捉抗体としてＭＩＬＲ１４４４Ａ、及び検出抗体として１１Ｈ４であった。
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【０３０２】
表２に示すように、捕捉抗体としての２２８Ｂ／Ｃを用いた結果は、捕捉抗体としてのＭＩＬＲ１４４４Ａを用いた結果とは異なっていた。ＭＩＬＲ１４４４Ａ−１１Ｈ４陽性／陰性の比は２２，７５３であり、２２８Ｂ／Ｃ−１１Ｈ４陽性／陰性の比は３１６．８７であった。ＭＩＬＲ１４４４Ａは２２８Ｂ／Ｃのヒト化変異体であるため、これらの結果が異なることは驚くべきことであった。これらの２つの抗体は、同じＣＤＲを有するだけでなく、ＩＬ−１３に対する類似の親和性も有し（例えば、国際公開第２００５／０６２９６７号を参照）、従って、抗原及び／又はエピトープに対する捕捉抗体親和性がアッセイ陽性／陰性の比の唯一の寄与因子ではないことを示している。更に我々は、捕捉抗体が一定に保たれた場合、検出抗体が陽性／陰性の比に影響を及ぼすことを観察した。捕捉抗体としてＭＩＬＲ１４４４Ａを使用し、異なる親和性で異なるエピトープに結合する異なる検出抗体（すなわち、１４Ｃ９、４Ｄ７、８Ｃ１１、ＭＡＢ２１３、及びＡＦ−２１３−ＮＡ）は、広範囲の陽性／陰性の比をもたらした（表２）。要約すると、表２に示される捕捉抗体と検出抗体のペアワイズ分析は、捕捉抗体と検出抗体との最適な組み合わせは、実験を実施する前に、抗体について知られている情報、例えばエピトープ、親和性からは予測できなかったことを示している。
【０３０３】
我々は、以下の実験では、試料緩衝液（試料緩衝液組成物については実施例１を参照）及び検出緩衝液（８０ｍＭのＴＡＰＳ、５００ｍＭ塩化ナトリウム、０．０１％メチルイソチオアゾロン、０．０１％Ｂｒｏｎｉｄｏｘ（登録商標）、０．０８％Ｔｗｅｅｎ（登録商標）２０、０．０４％ポリドカノール、０．３％ＢＳＡ、０．２５％ウシＩｇＧ及び０．１％カゼインを含む組成物（ｐＨ８．５））を使用した。最適な抗ＩＬ−１３抗体対は、第１（捕捉）抗体については、幾つかの実施態様ではＦ（ａｂ’）２であり、幾つかの実施態様ではＦａｂであるレブリキズマブ（ＭＩＬＲ１４４４Ａとも呼ばれる）であり、上記のように第２（検出）抗体については１１Ｈ４であると決定された。
【０３０４】
最適な抗ＩＬ−１３抗体対が選択された後、以下に記述されるように、アッセイ内精度、アッセイ間精度、ＬＬＯＱ、正確性、及び直線性／平行性、及び可溶性ＩＬ−１３Ｒα２からの干渉を決定した。これらの評価において、ＩＭＰＡＣＴ  ＩＬ−１３アッセイを特徴付けるために健常ボランティアからの血清試料を使用した。これらの健常ボランティアの試料は、内部献血プログラムから得られたものである（Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ、Ｉｎｃ．、Ｓｏｕｔｈ  Ｓａｎ  Ｆｒａｎｃｉｓｃｏ、ＣＡ、ＵＳＡ；Ｒｏｃｈｅ  Ｐｒｏｆｅｓｓｉｏｎａｌ  Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ、Ｐｅｎｚｂｅｒｇ、Ｇｅｒｍａｎｙ）。
【０３０５】
アッセイ内精度は、３つの異なる器具で実施された少なくとも８時間の持続時間内に分布された１２の二重測定で試料を測定することによって評価した。０．１７ｐｇ／ｍＬ〜７．５ｐｇ／ｍＬの間の天然型ＩＬ−１３のレベルを有する６つのヒト血清試料を使用した。これらの値は、標準として組み換えＩＬ−１３を使用して得られた。２つの追加の血清に組み換えヒトＩＬ−１３を添加して、２及び３桁のｐｇ／ｍＬ濃度範囲の精度を調べた。アッセイ内精度は１．５％〜３．８％ＣＶの範囲であり、アッセイ間精度は３．１〜５．１％の範囲であった（表３）。
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【０３０６】
定量下限（ＬＬＯＱ）は、検出不能なレベルのＩＬ−１３を有する液体中（ウマ血清、試料希釈液）に、異なるドナーからの内因性ＩＬ−１３を０．００２〜０．１１ｐｇ／ｍＬの範囲の濃度で添加した希釈系列を用いたアッセイ間精度（試料は２回測定、ｎ＝８回の実行、３種類の異なる器具を使用）の特性決定によって決定した。ＬＬＯＱは、変動係数（ＣＶ）が２０％以下であるＩＬ−１３の最低濃度として定義される。アッセイのＬＬＯＱを決定するために、天然型ＩＬ−１３試料及び組み換えＩＬ−１３試料の両方の測定の精度を評価した。ＬＬＯＱは、アッセイ間精度によって決定され、ＣＶ＜２０％が達成されたＩＬ−１３の最低濃度である０．０１４ｐｇ／ｍＬであることが見出された（表３）。
【０３０７】
正確性は、喘息患者の血清試料に組み換えヒトＩＬ−１３を３０μｇ／ｍＬ添加することによって評価した。試料を室温で１時間インキュベートし、次いで上記のＩＭＰＡＣＴ  ＩＬ−１３アッセイで分析した。平行性は、アッセイ希釈液を用いて喘息血清試料の連続１：１（Ｖ／Ｖ）希釈を実施することによって評価した。希釈した試料を、上記のようにＩＭＰＡＣＴ  ＩＬ−１３アッセイで分析した。回収率は試験した３５の喘息試料のうち３４〜８７％であった（表３）。平行性は、試料希釈剤を用いて希釈系列中の５つの試料を分析することによって評価した。回収率は許容可能な平行性を示す９５〜１０５％の範囲であった（表３）。
【０３０８】
存在する場合、ＩＬ−１３アッセイに潜在的に干渉することができる末梢血中のＩＬ−１３Ｒα２受容体の形態の存在又は非存在に関する科学文献には相反する報告がある。Kasaian et al., J. Immunol. 187:561-9 (2011); O'Toole et al., Clin Exp Allergy 38:594-601 (2008)。ｓＩＬ−１３Ｒα２がＩＬ−１３の検出を妨げる可能性を、２〜１０００ｐｇ／ｍＬのｓＩＬ−１３Ｒα２（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ、ＭＮ、カタログ番号６１４−ＩＮＳ）を健常対照血清試料に添加することにより評価した。試料を室温で１時間インキュベートし、次いで上記のＩＭＰＡＣＴ  ＩＬ−１３アッセイで試験した。２〜１０００ｐｇ／ｍＬのｓＩＬ−１３Ｒα２の存在下では、ＩＬ−１３を検出する能力において有意な干渉は検出されなかった（データ非表示）。
【０３０９】
ＩＭＰＡＣＴ  ＩＬ−１３アッセイの特異性、及び喘息、ＩＰＦ、アトピー性皮膚炎の患者からの血清中のＩＬ−１３レベル
ＩＭＰＡＣＴ  ＩＬ−１３アッセイを用いて、喘息又はＩＰＦ患者からの、及び健常ボランティアからの血清試料中のＩＬ−１３レベルを測定した（喘息  ｎ＝３４、ＩＰＦ  ｎ＝３２、及びＨＶ  ｎ＝１０）。喘息及びＩＰＦ患者試料（これらはまたＥｒｅｎｎａ（登録商標）ＩＬ−１３イムノアッセイを使用して調べられた）に加えて、ＩＭＰＡＣＴ  ＩＬ−１３アッセイにおいて、アトピー性皮膚炎患者（ｎ＝２５）の血清も調べられた。試験した全ての試料は、Ｔｈ２関連疾患を有する患者から得られたものであるか、又は０．１１ｐｇ／ｍＬ〜４．２２ｐｇ／ｍＬの範囲のＩＬ−１３レベルを有する健常ボランティアから得られたかにかかわらず、検出可能なレベルのＩＬ−１３レベルを有していた（図４）。この試料のセットで検出された最低のＩＬ−１３レベルは０．１１ｐｇ／ｍＬであり、ＬＬＯＱよりも９倍以上高かった。
【０３１０】
上記のＥｒｅｎｎａ（登録商標）ＩＬ−１３イムノアッセイで観察された特異性の問題を考慮して、ＩＭＰＡＣＴ  ＩＬ−１３アッセイの特異性を評価した。特異性は、上述の標準的条件下でＩＭＰＡＣＴ  ＩＬ−１３アッセイを実施する前に、血清試料を過剰量（１００μｇ／ｍＬ）の捕捉抗体（第１の抗体）と室温で１時間プレインキュベートすることによって評価した。図４に示すように、試験した全ての試料（ｎ＝１０１）からのＩＬ−１３アッセイシグナルは、ＩＬ−１３測定の特異性を確認するＬＬＯＱレベル未満まで効果的に枯渇した。
【０３１１】
検出及び定量された血清ＩＬ−１３レベルの範囲及び中央値は以下の通りであった：健常ボランティアでは、範囲は０．１１ｐｇ／ｍＬ〜２．２５ｐｇ／ｍＬであり、中央値は０．３６ｐｇ／ｍＬ（ｎ＝５０）であった；喘息患者では、範囲は０．１６ｐｇ／ｍＬ〜２．７３ｐｇ／ｍＬであり、中央値は０．６４ｐｇ／ｍＬ（ｎ＝３４）であった；ＩＰＦ患者では、範囲は０．２４ｐｇ／ｍＬ〜２．１５ｐｇ／ｍＬであり、中央値は０．７１ｐｇ／ｍＬ（ｎ＝３２）であった；アトピー性皮膚炎患者では、範囲は０．１７ｐｇ／ｍＬ〜４．２２ｐｇ／ｍＬであり、中央値は０．８２ｐｇ／ｍＬ（ｎ＝２５）であった（図５参照）。健常ボランティアにおけるＩＬ−１３の血清レベルは、Ｔｈ２関連疾患のレベルと重複していたが、喘息、ＩＰＦ、及びアトピー性皮膚炎の血清試料のそれぞれにおける血清ＩＬ−１３の中央値は健常ボランティアよりも高かった。ＨＶと喘息、ＩＰＦ、又はアトピー性皮膚炎との間の平均をそれぞれ比較するためにマンホイットニー検定を行った。各比較のＰ値は＜０．０００１であった。（図５、表４）。
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【０３１２】
Ｅｒｅｎｎａ（登録商標）ＩＬ−１３イムノアッセイとＩＭＰＡＣＴ  ＩＬ−１３アッセイとの比較
Ｅｒｅｎｎａ（登録商標）ＩＬ−１３イムノアッセイが、ＩＭＰＡＣＴ  ＩＬ−１３アッセイで使用されるものとは異なる抗ＩＬ−１３抗体を使用することを考慮すると、Ｅｒｅｎｎａ（登録商標）プラットフォームとＩＭＰＡＣＴプラットフォームの分析特性を直接比較できなかった。例えば、Ｅｒｅｎｎａ（登録商標）ＩＬ−１３イムノアッセイ（Fraser S, et al., Bioanalysis 6:1123-9 [2014]）で観察される有意なマトリックス干渉は、捕捉及び検出に使用される抗体試薬の反映であり得る。ＩＭＰＡＣＴ  ＩＬ−１３アッセイがＥｒｅｎｎａ（登録商標）ＩＬ−１３イムノアッセイと同じ分析試薬を使用した場合、同様の特異性の問題が観察された可能性がある。
【０３１３】
それにもかかわらず、バイオマーカーイムノアッセイ法の重要な側面は、疾患状態試料の大部分において天然のバイオマーカーを検出する能力である。従って、両方のアッセイの直接比較に対する実用的な代替アプローチは、両方の方法が患者試料の同じコホートにおけるバイオマーカーの天然形態を検出する能力を比較することである。改変されたＥｒｅｎｎａ（登録商標）ＩＬ−１３イムノアッセイ及びＩＭＰＡＣＴ  ＩＬ−１３アッセイで共通に試験された３０の血清試料のうち（ＨＶ［ｎ＝１０］、喘息患者［ｎ＝１０］及びＩＰＦ患者［ｎ＝１０］）、９つの試料が、両方のアッセイのそれぞれのＬＬＯＱを超える検出可能なＩＬ−１３レベルを示した。各アッセイによって得られたＩＬ−１３レベルの比較は、ピアソンの相関係数０．６５を与え、ＩＭＰＡＣＴ  ＩＬ−１３は、改変されたＥｒｅｎｎａ（登録商標）ＩＬ−１３イムノアッセイと比較して比較的高レベルのＩＬ−１３を提供する（データ非表示）。ＩＬ−１３定量における差異は、本方法で使用される基準物質の差異に起因する可能性がある。改変されたＥｒｅｎｎａ（登録商標）ＩＬ−１３イムノアッセイを用いたＩＬ−１３の検出は、ｓＩＬ−１３Ｒα２の存在によって妨げられた可能性もあり、上記のように、試験した濃度でＩＭＰＡＣＴ  ＩＬ−１３アッセイについて排除した可能性である。
【０３１４】
我々はまた、血清中のＩＬ−１３の最小の検出可能用量を３．４６−５７．４ｐｇ／ｍＬの間に有し、上記の元のＥｒｅｎｎａ（登録商標）ＩＬ−１３イムノアッセイ又は改変されたＥｒｅｎｎａ（登録商標）ＩＬ−１３イムノアッセイのいずれよりも少なくとも１０倍〜２０倍低い感度を有することが報告されているサンドイッチ原理（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ  Ｑｕａｎｔｉｋｉｎｅ（登録商標）ＥＬＩＳＡ、ヒトＩＬ−１３イムノアッセイ、カタログ番号Ｄ１３００Ｂ）を利用する市販のイムノアッセイを試験した。製造業者の指示に従って、我々はアッセイ標準曲線の精度は、１２５ｐｇ／ｍＬ未満で準最適であることを見出した。更に、ＩＬ−１３シグナルは、Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ  Ｑｕａｎｔｉｋｉｎｅ（登録商標）ＥＬＩＳＡキットを用いて、いかなる喘息試料においても検出できなかったが（２５名中０名）、ＩＭＰＡＣＴ  ＩＬ−１３アッセイを用いると、同じ喘息試料（２５のうち２５）において検出可能であった（データ非表示）。
【０３１５】
要約すると、我々は、驚くほどかつ予測できないほど高感度かつ高度に特異的である血清ＩＬ−１３の検出及び定量のためのイムノアッセイを開発した。我々は、このアッセイ、ＩＭＰＡＣＴ  ＩＬ−１３が、血清中のＩＬ−１３のｆｇ／ｍＬレベルを特異的に検出し、正確に定量することができることを実証した。我々は、このような高い感度と特異性を有する血清ＩＬ−１３のためのアッセイの最初の記述であると考えている。ＩＭＰＡＣＴ  ＩＬ−１３アッセイで使用される分析試薬は、多数の異なる抗ＩＬ−１３抗体対が試験され、これらの対のうちの１つのみが所望のアッセイ性能測定基準に合致するので、高いアッセイ感度と特異性に対する重要な寄与因子である可能性が高い。
【０３１６】
更に、ＩＭＰＡＣＴ  ＩＬ−１３アッセイを用いて、健常ボランティア、及びＴｈ２関連疾患、すなわち喘息、ＩＰＦ、及び／又はアトピー性皮膚炎を有する患者における循環ＩＬ−１３レベルを測定した。我々は、健常ボランティアの大多数が、Ｔｈ２関連疾患の患者に見られるＩＬ−１３レベルの中央値より低いＩＬ−１３レベルを有することを見出した。従って、この結果は、血清ＩＬ−１３レベルに従ってＴｈ２経路を標的とする治療薬による治療についての患者の層別化は有用なアプローチであり得ることを示唆し、次の実施例で検討される仮説である。
【０３１７】
実施例４  −  血清ＩＬ−１３レベルは、レブリキズマブ（Ｌｅｂｒｉｋｉｚｕｍａｂ）治療に対する応答性を予測し、喘息増悪の予後因子である
異なるバイオマーカーである血清ペリオスチン、血中好酸球、ＦｅＮＯ、及び血清ＩｇＥは、喘息患者のＴｈ２炎症の生物学を反映していることがよく報告されている。また、特定の臨床試験において、各バイオマーカーは、Ｔｈ２経路における治療的介入からの臨床的利益のために濃縮され、更にある場合には、薬物有効性を反映する予後バイオマーカー又は薬力学バイオマーカーであったことが示されている（例えば、Arron JR, et al., AnnalsATS 2013;10 （補足）：S206-13 [2013]; Nair et al., New Engl. J. Med. 360(10):985-93 [2009]; Pavord et al., Lancet 380(9842):651-9 [2012]; Bel et al., New Engl. J. Med. 371(13):1189-97 [2014]; Ortega et al., New Engl. J. Med. 371(13):1198-207 [2014]; Castro et al., Lancet Resp. Med. 2(11):879-90 [2014]を参照）。上記のＩＭＰＡＣＴ  ＩＬ−１３アッセイを用いて、末梢ＩＬ−１３レベルと他のＴｈ２喘息バイオマーカー（血清ペリオスチン、血中好酸球、ＦｅＮＯ、及び血清ＩｇＥ）との関係を評価し、並びに末梢のＩＬ−１３レベルをレブリキズマブ予測及び疾患予後のバイオマーカーとして評価しようとした。
【０３１８】
レブリキズマブの第ＩＩｂ相臨床試験
無作為化、多施設、二重盲検、プラセボ対照試験である第２相ＩＩｂ試験を実施した。患者は、１：１：１：１の比で無作為化され、レブリキズマブを３７．５ｍｇ、１２５ｍｇ、２５０ｍｇ、又はプラセボを４週間毎に皮下投与された。無作為化は、ベースラインの血清ペリオスチン、過去１２ヶ月以内の喘息増悪の病歴及びベースラインの喘息薬によって層別化された。全ての患者は、５００〜２０００μｇ／日のＩＣＳ療法（プロピオン酸フルチカゾンＤＰＩ又は同等物）及び第２の適格な喘息コントローラー薬からなるケア療法の標準を維持しなければならなかった。この試験は、Hanania et al., Journal of Allergy and Clinical Immunology , Volume 133 , Issue 2, AB402 (2014)（要旨）の結果とともに、更に詳細に記載される。
【０３１９】
５００〜２０００μｇ／日のプロピオン酸フルチカゾンＤＰＩ又は同等物及び第２の喘息コントローラー薬を毎日使用するにもかかわらず、コントロール不良のままであった喘息患者１８〜７５歳は、試験に含めるのに適格であった。適格な第２のコントローラーは、長時間作用型β作動薬、ロイコトリエン受容体拮抗薬、長時間作用性ムスカリン性拮抗薬、又はテオフィリンを含んでいた。
【０３２０】
包含基準には以下が含まれる：喘息の診断≧１２ヶ月；気管支拡張薬応答（≧１２％の相対的改善）；前気管支拡張薬ＦＥＶ１が予測の４０〜８０％。コントロール不良喘息は、喘息コントロール質問票−５（ＡＣＱ−５）スコア≧１．５で、以下のうちの少なくとも１つと定義された：症状＞２日／週；夜間覚醒≧１週間／週；短期作用性βアゴニストの救急薬としての使用＞２日／週；又は日常の正常な活動の障害。患者は、何らかの理由で前の３ヶ月以内に維持経口コルチコステロイド治療を受けた場合、又は過去４週間以内に全身性コルチコステロイドで治療を受けた場合には除外された。排除基準には、重度のアレルギー反応又は生物学的薬剤に対するアナフィラキシー反応又はレブリキズマブ注射の何れかの成分に対する既知の過敏症の病歴；訪問１の前の３ヶ月以内に毎日又は隔日の経口コルチコステロイド維持療法として定義される維持経口コルチコステロイド療法；訪問１の前の４週間以内又は急性増悪事象を含む何らかの理由でスクリーニング期間中の任意の時点で全身性（例えば、経口、ＩＶ、又はＩＭ）コルチコステロイドによる治療、又は訪問１の前の４週間以内又はスクリーニング期間中の任意の時点で関節内コルチコステロイドによる治療；感染の主要なエピソード；限定されるものではないが、ＨＩＶ感染を含む既知の免疫不全；急性又は慢性肝炎又は既知の肝硬変の証拠；嚢胞性線維症、ＣＯＰＤ、及び／又は喘息以外の他の臨床的に有意な肺疾患の病歴；既知の現在の悪性腫瘍又は潜在的な悪性腫瘍の現在の評価；現在喫煙者、又は喫煙歴が１０パック年を超える元喫煙者；免疫調節／免疫抑制療法の現在の使用又は訪問１の前の３ヶ月以内又は訪問１の前の５つの薬物半減期以内の過去の使用；訪問１の前の６ヶ月の間の任意の時点でオマリツマブを含む生物学的療法の使用；訪問１の前の４週間の間の任意の時点でジロートン又はロフルミラストの使用；訪問１の前の３ヶ月以内にアレルギー疾患又は喘息の治療のための伝統的な生薬療法；訪問１の前の３ヶ月以内のアレルゲン免疫療法の開始又は変更；訪問１の前の３０日（又は治験薬の５つの半減期、何れか長い方）以内に治験薬による治療；訪問１の前の４週間以内に生弱毒化ワクチンの接種；体重指数＞３８ｋｇ／ｍ２；体重＜４０ｋｇが含まれる。
【０３２１】
これらの試験では、以下の有効性及び安全性評価が評価された。主要エンドポイントは、プラセボ対照期間中の喘息増悪の割合であった。喘息の増悪は、全身性コルチコステロイドによる治療又は入院に至った新規又は増加した喘息症状として定義された。全身性コルチコステロイドによる治療は、３日間以上の経口、静脈内（ＩＶ）、又は筋肉内（ＩＭ）コルチコステロイド治療、又は１用量以上のＩＶ又はＩＭコルチコステロイド投与を伴う救急外来受診として定義された。最後の訪問以来、患者が喘息増悪を経験したかどうかを評価するために、指導された質問を用いて、喘息増悪を各試験訪問時に研究者が評価した。一次エンドポイント及び全ての二次エンドポイントは、ペリオスチン高及びペリオスチン低群（５０ｎｇ／ｍＬ血清ペリオスチンのカットポイントに基づく）で別々に評価されるであろうことがあらかじめ指定されていた。肺活量測定（気管支拡張薬投与前及び気管支拡張薬投与後）を本試験を通して評価した。測定された肺活量測定値には、ＦＥＶ１、ＦＶＣ（リットル単位の体積）及びＰＥＦ（リットル毎分）が含まれた。予測されるＦＥＶ１とＦＶＣの割合は、Hankinson et al., Am J Respir Crit Care Med 159:179-87 (1999)に記載されている国民健康栄養調査のデータセットから得られた式を使用して、これらの体積測定から導かれた。手技のグラフィック表現を含むデータの許容性は、盲検オーバーリーダー（ｂｌｉｎｄｅｄ  ｏｖｅｒ−ｒｅａｄｅｒ）によって決定された。許容可能な手技の再現性の計算をプログラム化した。短時間作用性気管支拡張薬の最終投与量は、試験の少なくとも４時間前でなければならず、ＬＡＢＡの最終投与量は試験の少なくとも１２時間前でなければならず、ＬＡＭＡの最終投与量は試験の少なくとも２４時間前でなければならなかった。試験のために適切に準備されていない患者（例えば、到着前に気管支拡張剤を服用していた患者）については、訪問は再スケジューリングされた。肺活量測定の測定は、試験の必要条件に合わせて設定された６８００ Ｓｐｉｒｏｍｅｔｅｒ（Ｖｉｔａｌｏｇｒａｐｈ；Ｅｎｎｉｓ、Ｉｒｅｌａｎｄ）を用いたコンピューター式肺活量測定システムＶｉｔａｌｏｇｒａｐｈ（登録商標）Ｓｐｉｒｏｔｒａｃ（登録商標）において肺活量測定のＡＴＳ／ＥＲＳ標準化（Miller et al., Eur Respir J 26:319-38 [2005]）によって公表されたガイドラインに従って行った。ピークフロー／ｅＤｉａｒｙ装置を、最大呼気流量（ＰＥＦ）（午前５時〜午前１１時）の１日１回の測定と喘息救急薬及びコントローラー使用の記録のために使用した。患者には携帯型最大流量／日記装置、Ｖｉｔａｌｏｇｒａｐｈ（登録商標）２１２０ Ｉｎ２ｉｔｉｖｅ ｅ−Ｄｉａｒｙ（Ｖｉｔａｌｏｇｒａｐｈ）が、１日１回のＰＥＦ測定と試験中の喘息救急薬及びコントローラー薬の使用のｅ−Ｄｉａｒｙ記録のために提供された。
【０３２２】
既定の二次エンドポイントは、気管支拡張薬投与前ＦＥＶ１のベースラインから第５２週までの相対的な変化、プラセボ対照期間中の最初の喘息増悪までの時間、喘息に特有の健康関連ＱＯＬ（生活習慣）指標のベースラインから第５２週までの変化、喘息ＱＯＬアンケート（標準化、［ＡＱＬＱ（Ｓ）］）、ベースラインから第５２週までの喘息救済薬の使用の変化、プラセボ対照期間中の喘息関連の緊急医療利用率（すなわち、入院、救急診療所訪問、及び急性期ケア訪問）であった。安全性エンドポイントは、プラセボ対照期間及びフォローアップ期間中の有害事象（ＡＥ）の割合及び重症度、並びにベースラインと比較した試験中の抗治療抗体（ＡＴＡ）の出現率であった。レブリキズマブの免疫原性は、段階的ＡＴＡ分析法を用いて評価した。
【０３２３】
バイオマーカー評価は以下のように行った。ＦｅＮＯは、Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｈｏｒａｃｉｃ  Ｓｏｃｉｅｔｙのガイドライン（ＡＴＳ／ＥＲＳ勧告、Am J Respir Crit Care Med 171:912-30 [2005]）に準拠して、手持ち式携帯装置（ＮＩＯＸ  ＭＩＮＯ（登録商標）、Ａｅｒｏｃｒｉｎｅ；Ｓｏｌｎａ、Ｓｗｅｄｅｎ）を用いて、ベースライン時及びその後の試験訪問時に評価された。ペリオスチンレベルを評価するための血清を、スクリーニング、ベースライン、及びその後の試験訪問時に収集した。ペリオスチンは、サンドイッチ原理を用いた電気化学発光イムノアッセイであるＣｏｂａｓ  ｅ６０１プラットフォーム上のＲｏｃｈｅ  Ｅｌｅｃｓｙｓ（登録商標）Ｐｅｒｉｏｓｔｉｎアッセイ（Ｒｏｃｈｅ  Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ、Ｐｅｎｚｂｅｒｇ  Ｇｅｒｍａｎｙ）を用いて測定した。患者、医師、及び現場スタッフは試験期間中、ＦｅＮＯ値及びペリオスチン値を知らされなかった。末梢血好酸球数及び血清ＩｇＥレベルを含む血液学的評価は、スクリーニング時、ベースライン時、及び第４週目に開始する続く各試験の訪問時に中央検査室を使用して標準的な臨床検査手順に従って実施され、場所は無作為化により盲検化された。
【０３２４】
Hanania et al., Journal of Allergy and Clinical Immunology , Volume 133 , Issue 2, AB402 (2014)（要旨）に報告されているように、吸入コルチコステロイド療法と追加のコントローラーを受けたにもかかわらずコントロール不良の重度の喘息を有する患者において、４週間毎に皮下投与されたレブリキズマブは、ペリオスチン高の患者ではプラセボと比較して６０％（９５％ ＣＩ １８、８０）、ペリオスチン低の患者では５％（９５％ ＣＩ−８１、４７）喘息増悪率を低下させた。更に、レブリキズマブは、ＦＥＶ１の変化によって測定されるように、ペリオスチン高の患者において肺機能に良い影響を与えた。レブリキズマブは一般的に良好な耐容性を示し、臨床的に重要な安全性のシグナルは観察されなかった。これらの結果は、以前に記載された知見を拡張し、ベースラインのペリオスチンレベルがレブリキズマブ治療の利益を予測することができるという知見を裏付けている。
【０３２５】
バイオマーカーであるＦｅＮＯ、末梢血好酸球、及び血清ペリオスチンに関して、以下の結果が報告された。ベースラインのＦｅＮＯレベルは、プラセボ及びレブリキズマブ３７．５ｍｇ群並びにペリオスチン低の患者においてより低かった。ペリオスチン高の患者における第１２週目でのプラセボに対する変化は、異なるレブリキズマブ用量群にわたって−３．９〜−１２．５ｐｐｂであった。第１２週目でペリオスチン低の患者では、ＦｅＮＯの平均値間の差は、プラセボと比較してレブリキズマブ用量群にわたって−８．９〜−１１．０ｐｐｂであった。末梢血好酸球のベースラインレベルは、異なる治療群にわたって良好にバランスしていた。第１２週目で、特にペリオスチン高の被験者において、レブリキズマブでの絶対血中好酸球レベルがわずかに上昇した。プラセボ補正された変化はペリオスチン高の患者では０．２９〜０．５６×１０３／μＬの範囲であり、ペリオスチン低群では−０．０１〜０．０７×１０３／μＬの範囲であった。ペリオスチン高群では、末梢血好酸球の増加は用量依存的であるようであり、３７．５ｍｇは最小変化を示した。末梢血好酸球数の変化はこれまでに報告されており（Corren J, et al., N Engl J Med 365:1088-98 [2011]; Scheerens H, et al., [abstract] Am J Respir Crit Care Med 185:PA3960 [2012]）、ＩＬ−１３活性の遮断を反映し得る。血液中の好酸球数の増加は、走化性の低下による血液から気道への移入の減少によるものであろう（Blanchard C, et al., Mucosal Immunol 1:289-96 [2008]; Johansson MW, et al., Am J Respir Cell Mol Biol 48:503-10 [2013]）。血清ペリオスチンのベースラインレベルもまた、４７．９ｎｇ／ｍＬの全群にわたり中央値（第−７日）で、異なる治療群にわたって良好にバランスしていた。第１２週目で、レブリキズマブ治療後、ペリオスチン高の被験者ではペリオスチンのプラセボ補正された３．７〜８．３％の減少が見られ、ペリオスチン低の被験者ではほとんど変化はなかった。ペリオスチンレベルの用量依存的変化の明確な証拠はなかった。
【０３２６】
血清ＩＬ−１３の測定及び分析
ＩＭＰＡＣＴ  ＩＬ−１３アッセイを使用して、上記第ＩＩｂ相試験からの合計３２９の患者の血清試料中のベースライン（０週目）における血清ＩＬ−１３レベルを決定した。上記のＩＭＰＡＣＴ  ＩＬ−１３アッセイ法に従って、各血清試料を二重に測定した。各試料の最終ＩＬ−１３レベルは、パーセント変動係数（％ＣＶ）≦１５％を有する二重測定の平均濃度として報告された。％ＣＶ＞１５％の二重測定は無効とみなされ、分析から除外された。更に、各試料の添加回収率（spike recovery）を評価した。アッセイ手順の前に、組み換えヒトＩＬ−１３の３０ｐｇ／ｍＬを各内因性試料のアリコートに添加した。＜８０％の添加回収率を有する試料は測定無効と見なされ、分析から除外された。
【０３２７】
以下の統計分析を行った。ＪＭＰ １０．０．２（ＳＡＳ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ、Ｃａｒｙ、ＮＣ）を用いて、血清ＩＬ−１３、血中好酸球、血清ペリオスチン、ＦｅＮＯ、及び血清ＩｇＥレベルのノンパラメトリックなスピアマン順位相関分析を行った。ＩＬ−１３高のサブグループ及びＩＬ−１３低のサブグループは、測定された第ＩＩｂ相患者の試料中の血清ＩＬ−１３の中央値レベルによって層別化された。ＦＥＶ１のベースラインからの平均（ＳＥ）変化率は、第１週目、第４週目、第８週目、及び第１２週目に試験群に従って算出された。第１２週目の分析をＦＥＶ１の有効性評価に用いた。ベースラインからの平均変化率を、不等分散を仮定して、ｔ検定により、それぞれの処置群とプラセボ群との間で比較した。平均値と関連する両側９５％信頼区間との間の差異をそれに応じて計算した。プラセボ対照治療期間中のプロトコールで定義された喘息の増悪率は、治療期間にわたるそのような増悪の総数を各群の治療期間の合計時間（年）で割ることによって推定された。それぞれの治療群間とプラセボ群の間の増悪率は、過分散を有するポアソン回帰モデルを用いて比較した。治療群とプラセボ群との間の増悪率の低下に対する両側９５％信頼区間が報告された。予後分析のために、ＩＬ−１３をプラセボ患者からのデータに適合するポアソン回帰モデルへの連続共変量として加えた。この分析のため、過度の影響を避けるために４２．９３ｐｇ／ｍＬのＩＬ１３の極端な観察を除去した。８．５ｐｇ／ｍＬの別の影響力のある値を除いた感度分析により、一貫した結果が得られた。
【０３２８】
血清ＩＬ−１３の結果及び他のＴｈ２バイオマーカーとの相関
上記のように、３２９例の患者試料の血清ＩＬ−１３レベルを測定した。４つの試料は無効な測定値を有し、具体的には検出不能レベルを有するもの、二重測定の間に％ＣＶが１５％を超えるもの、及び添加回収率が８０％未満の２つが更なる分析から除外された。従って、ＩＬ−１３検出率は９８．５％（３２９例のうち３２４例）と考えられた。これらの３２４例の患者試料の血清ＩＬ−１３濃度は、０．０５３〜４２．９３５ｐｇ／ｍＬの範囲であり、中央値は０．７８５ｐｇ／ｍＬであった。平均（９５％ＣＩ）レベルは１．１７２ｐｇ／ｍＬ（０．８９８、１．４４６）であった。（表５）。
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【０３２９】
次に、血清ＩＬ−１３レベルと他のＴｈ２バイオマーカー、具体的には、血中好酸球、血清ペリオスチン、ＦｅＮＯ、血清ＩｇＥとの相関を評価した。図６に示すように、ベースライン（第０週目）では、血清ＩＬ−１３レベルは血中好酸球数と強く相関したが、血清ペリオスチンレベル、ＦｅＮＯレベル及び血清ＩｇＥレベルとは弱く相関した。血清ＩＬ−１３と血中好酸球との間のスピアマン順位相関係数（ρ）は０．６６であり、ＩＬ−１３と血清ペリオスチン、ＦｅＮＯと血清ＩｇＥとの間のスピアマンρはそれぞれ０．３６、０．３１、及び０．３６であった。好酸球、ペリオスチン、ＦｅＮＯ、及び血清ＩｇＥの間の弱い相関は以前に記載されており、従って予測されたが、血清ＩＬ−１３レベルと血中好酸球レベルとの間に強い相関があったことは驚くべきことであり、予期せぬことであり、我々が知る限りこれまでに記載されていない。この強い相関は、血清ＩＬ−１３レベルと血中好酸球レベルの組み合わせが、各バイオマーカー単独に加えて、Ｔｈ２経路を標的とするＴｈ２関連疾患及び治療を研究するための特に有益なバイオマーカーであることを示している。
【０３３０】
ベースライン血清ＩＬ−１３レベルは、レブリキズマブ治療に対する応答性を予測する
０．７８５ｐｇ／ｍＬの血清ＩＬ−１３中央値を用いて、患者を血清ＩＬ−１３高（血清ＩＬ−１３＞０．７８５ｐｇ／ｍＬ）又は血清ＩＬ−１３低（血清ＩＬ−１３＜０．７８５ｐｇ／ｍＬ）として層別化した。図７Ａ（血清ＩＬ−１３高）及び図７Ｂ（血清ＩＬ−１３低）は、ＦＥＶ１のベースラインと比較して第１２週目でのＦＥＶ１の平均変化率を示す。第１２週目で、３７．５ｍｇ及び２５０ｍｇのレブリキズマブ群におけるベースラインＦＥＶ１からのプラセボ標準化平均増加は、血清ＩＬ−１３高群では血清ＩＬ−１３低群よりも大きかった。３７．５ｍｇのレブリキズマブ治療群については、改善は、血清ＩＬ−１３高群では３．５１％（−４．９８、１２．００）に対して血清ＩＬ−１３低群では−５．１１％（−１１．９９、１．７７）であった。２５０ｍｇのレブリキズマブ治療群については、改善は、血清ＩＬ−１３高群では９．０４％（−０．５４、１８．６２）に対して血清ＩＬ−１３低群では１．０５％（−７．００、９．１１）であった。１２５ｍｇのレブリキズマブ治療群におけるＦＥＶ１の改善は、血清ＩＬ−１３高値群と血清ＩＬ−１３低群とで同様であった。（図７Ａ及び図７Ｂ、表６）。
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【０３３１】
図８は、プラセボ対照治療期間中の推定悪化率の低下が、血清ＩＬ−１３高群では血清ＩＬ−１３低群よりも大きいことを示している。血清ＩＬ−１３高群では、増悪率の低下は、３７．５ｍｇ、１２５ｍｇ及び２５０ｍｇのレブリキズマブ治療群のぞれぞれにおいて、７０％（９５％ ＣＩ：−１％〜９３％）、３８％（９５％ ＣＩ：−７５％〜８０％）及び１１％（９５％ ＣＩ：−１３１％〜６７％）であった。一方、血清ＩＬ−１３低群では、増悪率の低下は、３７．５ｍｇ、１２５ｍｇ及び２５０ｍｇのレブリキズマブ治療群のぞれぞれにおいて、１０％（９５％ ＣＩ：−２００％〜７４％）、−１７％（９５％ ＣＩ：−２６３％〜６１％）及び３％（９５％ ＣＩ：−２２３％〜７２％）であった。
【０３３２】
我々はまた、血清ＩＬ−１３レベルが喘息増悪の予後因子であるかどうかについても検討した。プラセボ群における増悪率は、血清ＩＬ−１３高群で０．７６、血清ＩＬ−１３低群で０．３８であった（図８）。この結果は、標準治療にもかかわらずコントロール不良の喘息を有する患者において血清ＩＬ−１３のベースラインレベルが増悪の予後バイオマーカーであることを示唆している。この結論を確認するために、過剰分散を可能にするポアソン回帰を、プラセボ患者からのデータに適合させた。この分析は、ＩＬ−１３の０．１ｐｇ／ｍＬ増加に対する年間増悪率の増加について１．０３（９５％ＣＩ：１．０１〜１．０５）の因子をもたらし、血清ＩＬ−１３レベルが増悪の予後因子であるという結論を更に支持した。
【０３３３】
要約すると、ＩＭＰＡＣＴ  ＩＬ−１３アッセイを使用して、レブリキズマブの第ＩＩｂ臨床試験における３２９例の喘息患者からの血清ＩＬ１３のベースラインレベルを測定した。これらの血清試料におけるＩＬ−１３検出率は９８．５％（３２９例のうち３２４例）と考えられた。中央値レベルは０．７８５ｐｇ／ｍＬであった。上記のように。血清ＩＬ−１３のベースラインレベルは血中好酸球数と強く相関し、血清ペリオスチンレベル、ＦｅＮＯレベル及び血清ＩｇＥレベルとは弱く相関した。更に、血清ＩＬ−１３レベルは、レブリキズマブ治療に対する患者の応答性を予測した：高血清ＩＬ−１３群の患者は、低血清ＩＬ−１３群の患者よりも増悪率の低下及びＦＥＶ１の改善によって評価されるように、レブリキズマブ治療からの大きな臨床的有用性を実証した。最後に、血清ＩＬ−１３レベルはプラセボ治療群の患者では喘息増悪の予後バイオマーカーであり、高血清ＩＬ−１３群は、プラセボ治療群、低血清ＩＬ−１３群の患者と比較してより高い増悪率を示している。
【０３３４】
以前に記載されたＴｈ２バイオマーカー評価に関連する特定の制限及び不都合を考慮して、本明細書に記載されるような高感度及び高特異性の両方を有する血清ＩＬ−１３アッセイの開発、及び血清ＩＬ−１３レベルが、Ｔｈ２経路を標的とする治療剤による治療的有用性を予測し、喘息増悪の予後を予測するという本明細書における実証は、この分野における重要な進歩を表している。
【図１】
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【図２Ａ】
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【図２Ｂ】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７Ａ】
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【図７Ｂ】
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【図８】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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