(57)【要約】本開示は、一般的に、フコシダーゼ酵素の阻害剤として有用な化合物、ならびに本明細書で開示されている化合物を用いた、腫瘍またはがん、例えば、肝臓障害および肝臓腫瘍（例えば、肝細胞癌）の処置のための方法および組成物に関する。本明細書中に記載されている腫瘍またはがんのいずれかの処置のための医薬の調製における、本明細書で開示されている前述の化合物のいずれかの使用もまた想定されている。腫瘍またはがんの処置における使用のための本明細書中に記載されている化合物を含む組成物もまた想定されている。【特許請求の範囲】
【請求項１】
式Ｉの化合物：
【化２７】
2018522023.tif 000038
（式中、
Ｘ１、Ｘ２、およびＸ３は、独立して、ＯＨ、ハロ、およびＯ（Ｃ）ＯＣＨ３からなる群から選択され、
Ｒは、Ｃ１〜３アルキルおよびＣ１〜３ハロアルキルからなる群から選択され、
Ｒ１は、Ｈ、Ｃ１〜３アルキル、ＯＨ、−ＣＯ２Ｃ１〜３アルキルからなる群から選択され、
Ｒ２は、−ＮＲｂＣ（Ｏ）Ｒａ、−ＮＲｂＣ（Ｏ）ＯＲａ、−ＮＲｂＣ（Ｏ）ＮＲｃＲａ、−ＮＲｂＣ（Ｏ）ＳＲａ、−Ｃ（Ｏ）Ｒａ、および−Ｃ（Ｏ）ＮＲｂＲａからなる群から選択され、
Ｒａは−Ｃ０〜３アルキレン−Ｇであり、
Ｇは、アリール、ヘテロアリール、シクロアルキル、およびヘテロシクロアルキルからなる群から選択され、
ＲｂおよびＲｃは、独立して、ＨおよびＣ１〜３アルキルからなる群から選択される）。
【請求項２】
Ｘ１、Ｘ２、およびＸ３がＯＨである、請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
Ｒがメチルである、請求項１または２に記載の化合物。
【請求項４】
Ｒ１がＨである、先行する請求項のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項５】
Ｒ２が−ＮＲｂＣ（Ｏ）Ｒａである、先行する請求項のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項６】
Ｒ２が−Ｃ（Ｏ）ＮＲｂＲａである、先行する請求項のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項７】
ＲｂがＨである、先行する請求項のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項８】
Ｇが、任意選択で置換されているインドリル、ベンゾチオフェニル、フルオレニル、インデニル、ジヒドロインデニル、およびフェニルからなる群から選択される、先行する請求項のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項９】
Ｇが、任意選択で置換されているフェニルおよび
【化２８】
2018522023.tif 000039
（式中、Ａは、５、６、７、８、９または１０員の炭素環式または複素環式環系である）からなる群から選択される、先行する請求項のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項１０】
Ｇが、
【化２９】
2018522023.tif 000040
からなる群から選択され、
ＲｄおよびＲｅが、独立して、Ｈ、ＯＲｆ、ＮＲｆＲｇ、Ｃ１〜３アルキル、およびＣ１〜５シクロアルキルからなる群から選択されるか、または
ＲｄおよびＲｅが、これらが結合している炭素原子と一緒になって、Ｃ＝Ｏを形成し、
ＲｆおよびＲｇが、独立して、ＨおよびＣ１〜３アルキルからなる群から選択され、
Ｙが、ＮＨ、Ｎ−Ｃ１〜３アルキル、Ｓ、ＳＯ、ＳＯ２、およびＯからなる群から選択される、先行する請求項のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項１１】
Ｇが、
【化３０】
2018522023.tif 000041
からなる群から選択される、先行する請求項のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項１２】
Ｒａが、
【化３１】
2018522023.tif 000042
からなる群から選択される、先行する請求項のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項１３】
Ｒａが
【化３２】
2018522023.tif 000043
である、先行する請求項のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項１４】
前記式Ｉの化合物が、以下の構造：
【化３３】
2018522023.tif 000044
を有する、先行する請求項のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項１５】
前記式Ｉの化合物が、以下の構造：
【化３４】
2018522023.tif 000045
を有する、請求項１から１３のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項１６】
前記化合物が、
【化３５】
2018522023.tif 000046
からなる群から選択される、請求項１から１４のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項１７】
前記化合物が、
【化３６】
2018522023.tif 000047
からなる群から選択される、請求項１から１４のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項１８】
前記化合物が、
【化３７】
2018522023.tif 000048
からなる群から選択される、請求項１から１４のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項１９】
腫瘍またはがんを処置することを必要とする被験体において腫瘍またはがんを処置するための方法であって、請求項１から１８のいずれか一項に記載の化合物、化合物ＩＩ、または化合物ＩＩＩ：
【化３８】
2018522023.tif 000049
を治療有効量で投与することを含む、方法。
【請求項２０】
前記腫瘍またはがんが、肝がん、乳がん、黒色腫、肺がん、白血病、膵臓がん、胃がん、直腸結腸がん、および頭頸部がんである、請求項１９に記載の方法。
【請求項２１】
前記化合物が被験体において腫瘍転移を減少させる、請求項１９から２０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２２】
前記腫瘍が、肝細胞癌、肝炎ウイルス感染症、硬変症、有毒性肝臓損傷、および遺伝性ヘモクロマトーシスの結果である、請求項１９に記載の方法。
【請求項２３】
前記腫瘍が肝細胞癌の結果である、請求項２２に記載の方法。
【請求項２４】
前記処置が、前記被験体において腫瘍サイズの低減をもたらす、請求項１９から２３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２５】
前記処置が、処置前のレベルと比較して、前記被験体のアルファ−フェトプロテインの血中レベルの減少をもたらす、請求項１９から２４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２６】
前記化合物が静脈内投与される、請求項１９から２５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２７】
前記化合物が肝臓動脈を介して投与される、請求項２６に記載の方法。
【請求項２８】
前記化合物が、第２の薬剤と組み合わせて投与される、請求項１９から２５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２９】
前記第２の薬剤が、化学療法剤、細胞傷害性剤、ラジオアイソトープ、抗ウイルス剤、抗真菌剤、抗炎症剤および抗体からなる群から選択される、請求項２８に記載の方法。
【請求項３０】
前記化学療法剤が、ドキソルビシンおよび５−フルオロウラシルからなる群から選択される、請求項２９に記載の方法。
【請求項３１】
前記第２の薬剤が細胞傷害性剤である、請求項２９に記載の方法。
【請求項３２】
前記細胞傷害性剤が、メクロレタミン塩酸塩、シクロホスファミド、イホスファミド、クロラムブシル、メルファラン、ブスルファン、チオテパ、カルムスチン、ロムスチン、ダカルバジンおよびストレプトゾシンからなる群から選択される、請求項３１に記載の方法。
【請求項３３】
前記第２の薬剤がラジオアイソトープである、請求項２９に記載の方法。
【請求項３４】
前記ラジオアイソトープが、１３１Ｉ、１２５Ｉ、１１１Ｉｎ、９０Ｙ、６７Ｃｕ、１２７Ｌｕ、２１２Ｂｉ、２１３Ｂｉ、２５５Ｆｍ、１４９Ｔｂ、２２３Ｒｄ、２１３Ｐｂ、２１２Ｐｂ、２１１Ａｔ、８９Ｓｒ、１５３Ｓｍ、１６６Ｈｏ、２２５Ａｃ、１８６Ｒｅ、６７Ｇａ、６８Ｇａおよび９９ｍＴｃからなる群から選択される、請求項３３に記載の方法。
【請求項３５】
前記腫瘍が、肝炎ウイルス感染症に関連し、前記第２の薬剤が抗ウイルス剤である、請求項２９に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願への相互参照
本出願は、２０１５年７月３０日に出願された米国仮特許出願第62/199,194号の利益を主張し、この出願は本明細書においてその全体が参照として援用される。
【０００２】
本発明の開示
本発明の開示は、一般的に、フコシダーゼ酵素の阻害剤として有用な化合物、ならびに本明細書で開示されている化合物を用いた、腫瘍またはがん、例えば、肝臓障害および肝臓腫瘍（例えば、肝細胞癌）の処置のための方法および組成物に関する。
【背景技術】
【０００３】
背景
タンパク質グリコシル化における差異は、正常細胞と腫瘍細胞との間で認められており、腫瘍選択的抗体の開発の基礎となっている（Hakomori,  S.、Adv  Exp.  Med.  Biol.、４９１巻：３６９〜４０２頁、２００１年）。肝細胞癌（ＨＣＣ）細胞は、正常な肝細胞と比べて、これらの糖タンパク質を有意におよび不適切にフコシル化することが観察されている（Block,  T.M.ら、Proc.  Natl.  Acad.  Sci.  U  S  A、１０２巻：７７９〜８４頁、２００５年；Comunale,  M.Aら、J.  Proteome  Res.、８巻：５９５〜６０２頁、２００９年；Mehta,  A.ら、Dis.  Markers、２５巻：２５９〜６５頁、２００８年；Noda,  K.  ら、Cancer  Res.、６３巻：６２８２〜９頁、２００３年；Norton,  P.A.ら、J.  Cell.  Biochem.  １０４巻：１３６〜４９頁、２００８年）。これらの糖タンパク質の大部分は、最終的には腫瘍リソソームとなり、そこで分解される。ある報告では、リソソームアルファ−Ｌ−フコシダーゼの血清レベルの増加は、ＨＣＣの前兆であり、生合成経路における糖タンパク質フコシル化レベルの増加を受け入れるために、前がん状態の肝細胞によりこの酵素が上方調節されている可能性を示すことが示唆されている（Giardina,  M.G.ら、Cancer、８３巻：２４６８〜７４頁、１９９８年）。ヒト肝臓アルファ−Ｌ−フコシダーゼの触媒機序は調査されている（White,  W.J.ら、Biochim.  Biophys.  Acta.、９１２巻：１３２〜８頁（１９８７年））。
例えば、遺伝子における遺伝性変異によるリソソームアルファ−Ｌ−フコシダーゼ（ＦＵＣＡ１）の不活化は、フコシド蓄積症と呼ばれるリソソーム蓄積症（ＬＳＤ）をもたらす（Willems,  P.Jら、Eur.  J.  Hum.  Genet.、７巻：６０〜７頁、１９９９年；Intra,  J.ら、Gene、３９２巻：３４〜４６頁、２００７年）。フコシド蓄積症を呈している患者は、末端およびコア−フコシル化オリゴ糖をリソソームで分解することができないので、未分解物質のリソソーム蓄積を示し、６歳を超える生存はほとんどない（Willems,  P.J.ら、Am.  J.  Med.  Genet.、３８巻：１１１〜３１頁、１９９１年）。
米国特許第５，２４０，７０７号は、免疫調節物質としておよび抗転移性薬剤として有用であると推測されるアルファ−マンノシダーゼおよびフコシダーゼ阻害剤を開示している。他の公知のフコシダーゼ阻害剤は、古典的なノジリマイシンイミノ糖構造に基づき、リソソームフコシダーゼに対して１０ｎＭの阻害定数を有するＬ−デオキシフコノジリマイシン（ＤＦＪ）を含む（Winchester,  B.ら、Biochem.  J.、２６５巻：２７７〜８２頁、１９９０年）。デオキシフコノジリマイシン（ＤＦＪまたはＤＮＪ）に基づくさらなる阻害剤、例えば、ベータ−Ｌ−ホモフコノジリマイシン（homofucononojirimycin）および１−ベータ−Ｃ−置換デオキシマンノジリマイシンを開示している米国特許第５，１００，７９７号もまた参照されたい。別の強力なフコシダーゼ阻害剤は、７員アゼパンクラスのメンバー（（３Ｒ，４Ｒ，５Ｓ，６Ｓ）−１−ブチル−４，５，６−トリヒドロキシアゼパン−３−カルボン酸、「Ｆａｚ」としても公知）である。イズロネート糖のヒドロキシル配置およびカルボキシル官能基を有するにもかかわらず、この新規分子はまた低いナノモル範囲での潜在能力を用いてフコシダーゼを阻害する（Li,  H.ら、Chembiochem、９巻：２５３〜６０頁、２００８年）。アミンのアルキル修飾を有するイミノ糖阻害剤もまた調査されてきた（McCormack,  P.L.ら、Drugs、６３巻：２４２７〜３４頁；discussion、２４３５〜６頁、２００３年；Bause,  E.ら、FEBS  Lett.、２７８巻：１６７〜７０頁、１９９１年）。フコシダーゼ阻害剤は米国特許第５，３８２，７０９号、第５，２４０，７０７号、第５，１５３，３２５号、第５，１００，７９７号、第５，０９６，９０９号および第５，０１７，７０４号、米国特許出願公開第２０１１／０１８９０８４号、ならびにWuら、Angew.  Chem.  Int.編、４９巻：３３７〜４０頁（２０１０年）においてさらに記載されている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００４】
【特許文献１】米国特許第５，２４０，７０７号明細書
【特許文献２】米国特許第５，１００，７９７号明細書
【特許文献３】米国特許第５，３８２，７０９号明細書
【特許文献４】米国特許第５，１５３，３２５号明細書
【特許文献５】米国特許第５，０９６，９０９号明細書
【特許文献６】米国特許第５，０１７，７０４号明細書
【特許文献７】米国特許出願公開第２０１１／０１８９０８４号明細書
【非特許文献】
【０００５】
【非特許文献１】Hakomori,  S.、Adv  Exp.  Med.  Biol.、４９１巻：３６９〜４０２頁、２００１年
【非特許文献２】Block,  T.M.ら、Proc.  Natl.  Acad.  Sci.  U  S  A、１０２巻：７７９〜８４頁、２００５年
【非特許文献３】Comunale,  M.Aら、J.  Proteome  Res.、８巻：５９５〜６０２頁、２００９年
【非特許文献４】Mehta,  A.ら、Dis.  Markers、２５巻：２５９〜６５頁、２００８年
【非特許文献５】Noda,  K.  ら、Cancer  Res.、６３巻：６２８２〜９頁、２００３年
【非特許文献６】Norton,  P.A.ら、J.  Cell.  Biochem.  １０４巻：１３６〜４９頁、２００８年
【非特許文献７】Giardina,  M.G.ら、Cancer、８３巻：２４６８〜７４頁、１９９８年
【非特許文献８】White,  W.J.ら、Biochim.  Biophys.  Acta.、９１２巻：１３２〜８頁（１９８７年）
【非特許文献９】Willems,  P.Jら、Eur.  J.  Hum.  Genet.、７巻：６０〜７頁、１９９９年
【非特許文献１０】Intra,  J.ら、Gene、３９２巻：３４〜４６頁、２００７年
【非特許文献１１】Willems,  P.J.ら、Am.  J.  Med.  Genet.、３８巻：１１１〜３１頁、１９９１年
【非特許文献１２】Winchester,  B.ら、Biochem.  J.、２６５巻：２７７〜８２頁、１９９０年
【非特許文献１３】Li,  H.ら、Chembiochem、９巻：２５３〜６０頁、２００８年
【非特許文献１４】McCormack,  P.L.ら、Drugs、６３巻：２４２７〜３４頁；discussion、２４３５〜６頁、２００３年
【非特許文献１５】Bause,  E.ら、FEBS  Lett.、２７８巻：１６７〜７０頁、１９９１年
【非特許文献１６】Wuら、Angew.  Chem.  Int.編、４９巻：３３７〜４０頁（２０１０年）
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００６】
本発明の開示は、一般的に、肝細胞癌などの肝臓障害を含む腫瘍またはがんを処置するための化合物、組成物、および方法を対象とする。想定されている組成物は本明細書で開示されている化合物を含む。
【０００７】
一態様では、本開示は、式Ｉの化合物：
【化１】
2018522023.tif 000002
（式中、
Ｘ１、Ｘ２、およびＸ３は、独立して、ＯＨ、ハロ、およびＯ（Ｃ）ＯＣＨ３からなる群から選択され、
Ｒは、Ｃ１〜３アルキルおよびＣ１〜３ハロアルキルからなる群から選択され、
Ｒ１は、Ｈ、Ｃ１〜３アルキル、ＯＨ、−ＣＯ２Ｃ１〜３アルキルからなる群から選択され、
Ｒ２は、−ＮＲｂＣ（Ｏ）Ｒａ、−ＮＲｂＣ（Ｏ）ＯＲａ、−ＮＲｂＣ（Ｏ）ＮＲｃＲａ、−ＮＲｂＣ（Ｏ）ＳＲａ、−Ｃ（Ｏ）Ｒａ、および−Ｃ（Ｏ）ＮＲｂＲａからなる群から選択され、
Ｒａは−Ｃ０〜３アルキレン−Ｇであり、
Ｇは、アリール、ヘテロアリール、シクロアルキル、およびヘテロシクロアルキルからなる群から選択され、
ＲｂおよびＲｃは、独立して、ＨおよびＣ１〜３アルキルからなる群から選択される）
を提供する。
【０００８】
一部の実施形態では、Ｘ１、Ｘ２、およびＸ３はＯＨである。
【０００９】
一部の実施形態では、Ｒはメチルである。
【００１０】
一部の実施形態では、Ｒ１はＨである。
【００１１】
一部の実施形態では、Ｒ２は−ＮＲｂＣ（Ｏ）Ｒａである。
【００１２】
一部の実施形態では、Ｒ２は−Ｃ（Ｏ）ＮＲｂＲａである。
【００１３】
一部の実施形態では、ＲｂはＨである。
【００１４】
一部の実施形態では、Ｇは、任意選択で置換されているインドリル、ベンゾチオフェニル、フルオレニル、インデニル、ジヒドロインデニル、およびフェニルからなる群から選択される。
【００１５】
一部の実施形態では、Ｇは、任意選択で置換されているフェニルおよび
【化２】
2018522023.tif 000003
からなる群から選択され、式中、Ａは、５、６、７、８、９または１０員の炭素環式または複素環式環系である。
【００１６】
一部の実施形態では、Ｇは、
【化３】
2018522023.tif 000004
からなる群から選択され、ＲｄおよびＲｅは、独立して、Ｈ、ＯＲｆ、ＮＲｆＲｇ、Ｃ１〜３アルキル、およびＣ１〜５シクロアルキルからなる群から選択されるか、または
ＲｄおよびＲｅは、これらが結合している炭素原子と一緒になって、Ｃ＝Ｏを形成し、
ＲｆおよびＲｇは、独立して、ＨおよびＣ１〜３アルキルからなる群から選択され、
Ｙは、ＮＨ、Ｎ−Ｃ１〜３アルキル、Ｓ、ＳＯ、ＳＯ２、およびＯからなる群から選択される。
【００１７】
一部の実施形態では、Ｇは、
【化４】
2018522023.tif 000005
からなる群から選択される。
【００１８】
一部の実施形態では、Ｒａは、
【化５】
2018522023.tif 000006
からなる群から選択される。
【００１９】
一部の実施形態では、Ｒａは、
【化６】
2018522023.tif 000007
である。
【００２０】
一部の実施形態では、式Ｉの化合物は、以下の構造：
【化７】
2018522023.tif 000008
を有する。
【００２１】
一部の実施形態では、式Ｉの化合物は、以下の構造：
【化８】
2018522023.tif 000009
を有する。
【００２２】
一部の実施形態では、化合物は、
【化９】
2018522023.tif 000010
からなる群から選択される。
【００２３】
一部の実施形態では、化合物は、
【化１０】
2018522023.tif 000011
からなる群から選択される。
【００２４】
一部の実施形態では、化合物は、
【化１１】
2018522023.tif 000012
からなる群から選択される。
【００２５】
別の態様では、本開示は、腫瘍またはがんを処置することを必要とする被験体において腫瘍またはがんを処置するための方法であって、本明細書中に記載されている化合物を治療有効量で投与することを含む方法を提供する。様々な実施形態では、化合物は、化合物ＩＩまたは化合物ＩＩＩ：
【化１２】
2018522023.tif 000013
である。
【００２６】
様々な実施形態では、腫瘍またはがんは、肝がん、乳がん、黒色腫、肺がん、白血病、膵臓がん、胃がん、直腸結腸がん、および頭頸部がんである。
【００２７】
様々な実施形態では、化合物は被験体において腫瘍転移を減少させる。さらなる実施形態では、処置は、被験体において腫瘍サイズの低減をもたらす。
【００２８】
一部の実施形態では、腫瘍は肝臓腫瘍であり、肝細胞癌、肝炎ウイルス感染症、硬変症、有毒性肝臓損傷、および遺伝性ヘモクロマトーシスの結果である。
【００２９】
関連する実施形態では、肝臓腫瘍は肝細胞癌の結果である。
【００３０】
別の実施形態では、処置は、処置前のレベルと比較して、被験体の血中のアルファ−フェトプロテインレベルの減少をもたらす。
【００３１】
一部の実施形態では、化合物は静脈内に投与される。関連した実施形態では、化合物は肝臓動脈を介して投与される。一部の実施形態では、化合物は、０．０２〜２０００ｍｇ／ｋｇまたは０．１〜１００ｍｇ／ｋｇの範囲、例えば、１〜１５００ｍｇ／ｋｇ、１０〜１０００ｍｇ／ｋｇ、２５〜５００ｍｇ／ｋｇ、５０〜２５０ｍｇ／ｋｇ、７５〜２００ｍｇ／ｋｇ、５０〜１５０ｍｇ／ｋｇ、６０〜１３０ｍｇ／ｋｇ、７０〜１１０ｍｇ／ｋｇ、７５〜１００ｍｇ／ｋｇ、８０〜９５ｍｇ／ｋｇ、８５〜９０ｍｇ／ｋｇ、１００〜２５０ｍｇ／ｋｇ、１２０〜２３０ｍｇ／ｋｇ、１３０〜２２０ｍｇ／ｋｇ、１４０〜２１０ｍｇ／ｋｇ、１５０〜２００ｍｇ／ｋｇ、１６０〜１９０ｍｇ／ｋｇ、１７０〜１８０ｍｇ／ｋｇ、約８７．５ｍｇ／ｋｇ、または約１７５ｍｇ／ｋｇの用量で投与される。
【００３２】
一部の実施形態では、化合物は第２の薬剤と組み合わせて投与される。ある特定の実施形態では、第２の薬剤は、化学療法剤、細胞傷害性剤、ラジオアイソトープ、抗ウイルス剤、抗真菌剤、抗炎症剤および抗体からなる群から選択される。関連する実施形態では、化学療法剤は、ドキソルビシンおよび５−フルオロウラシルからなる群から選択される。
【００３３】
さらなる実施形態では、第２の薬剤は細胞傷害性剤である。一部の実施形態では、細胞傷害性剤は、メクロレタミン塩酸塩、シクロホスファミド、イホスファミド、クロラムブシル、メルファラン、ブスルファン、チオテパ、カルムスチン、ロムスチン、ダカルバジンおよびストレプトゾシンからなる群から選択される。
【００３４】
別の実施形態では、第２の薬剤はラジオアイソトープである。一部の実施形態では、ラジオアイソトープは、１３１Ｉ、１２５Ｉ、１１１Ｉｎ、９０Ｙ、６７Ｃｕ、１２７Ｌｕ、２１２Ｂｉ、２１３Ｂｉ、２５５Ｆｍ、１４９Ｔｂ、２２３Ｒｄ、２１３Ｐｂ、２１２Ｐｂ、２１１Ａｔ、８９Ｓｒ、１５３Ｓｍ、１６６Ｈｏ、２２５Ａｃ、１８６Ｒｅ、６７Ｇａ、６８Ｇａおよび９９ｍＴｃからなる群から選択される。
【００３５】
一実施形態では、腫瘍は肝炎ウイルス感染症に関連し、第２の薬剤は抗ウイルス剤である。
【００３６】
本明細書中に記載されている腫瘍またはがんのいずれかの処置のための医薬の調製における、本明細書で開示されている前述の化合物のいずれかの使用もまた想定されている。腫瘍またはがんの処置における使用のための本明細書中に記載されている化合物を含む組成物もまた想定されている。シリンジ、例えば、単回使用のまたは予備充填したシリンジ、滅菌の密閉容器、例えばバイアル、ビン、管、および／または前述の化合物のいずれかを、任意選択で使用のための適切な説明書と共に含むキットもしくはパッケージもまた想定されている。
【００３７】
本明細書中に記載されている前述の化合物のいずれかは、補助療法として、当技術分野で公知のまたは本明細書中に記載されている腫瘍またはがんを処置するのに有用な任意の薬剤と共に、同時投与されてもよい。前述の化合物のいずれかを、他の治療剤（例えば、肝臓の療法剤）と一緒に含む組成物もまた想定されている。
【００３８】
本明細書中に記載されている各特色もしくは実施形態、または組合せは、本発明の態様の任意のものの非限定的な、例証的な例であり、よって、本明細書中に記載されている任意の他の特色もしくは実施形態、または組合せと組み合わせ可能であることが意図されていることが理解されている。例えば、「一実施形態」、「一部の実施形態」、「さらなる実施形態」、「具体的な例示的な実施形態」、および／または「別の実施形態」などの言語を用いて特色が記載されている場合、これらのタイプの実施形態のそれぞれは、すべての可能な組合せを列挙することを必要とすることなく、本明細書中に記載されている任意の他の特色、または特色の組合せと組み合わせることが意図されている特色の非限定的な例である。このような特色または特色の組合せは本発明の態様の任意のもの当てはまる。範囲内に含まれる値の例が開示されている場合、これらの例の任意のものが範囲の可能な端点として想定され、このような端点の間の任意のおよびすべての数値が想定され、上側と下側の端点の任意のおよびすべての組合せが想定されている。
【図面の簡単な説明】
【００３９】
【図１】図１は、化合物ＩＩ、ＩＩＩ、およびＩＶと共にインキュベートしたＨｅｐＧ２細胞における糖タンパク質代謝の摂動を示すグラフである。
【００４０】
【図２】図２は、処置から２４時間後のＨｅｐＧ２細胞における化合物ＩＩおよびＩＶの細胞傷害性を示すグラフである。
【００４１】
【図３】図３は、処置から４８時間後のＨｅｐＧ２細胞における化合物ＩＩおよびＩＶの細胞傷害性を示すグラフである。
【発明を実施するための形態】
【００４２】
詳細な説明
本発明は、フコシダーゼ阻害剤としての（例えば、糖タンパク質からフコース残基を切断するアルファ−Ｌ−フコシダーゼの活性を阻害する化合物としての）化合物およびこのような化合物の使用に関する。本発明はまた、腫瘍またはがん、例えば、肝臓腫瘍、特に肝細胞癌を処置するためのこのような化合物の使用に関する。本発明の理論に拘束されることなく、フコシダーゼ阻害剤は、肝臓細胞中のリソソーム蓄積症の効果と同様の、リソソーム内での糖タンパク質由来のオリゴ糖蓄積を誘発し、これによって、細胞内での細胞傷害性事象を誘発する。
【００４３】
定義
本明細書および添付の特許請求の範囲で使用される場合、単数形「ａ」、「ａｎ」、および「ｔｈｅ」は、特に文脈上明確に指示されていない限り複数の指示対象を含む。したがって、例えば、「誘導体」についての言及は、複数のこのような誘導体を含み、「患者」についての言及は、１人または複数人の患者についての言及を含むなどである。
【００４４】
また、「または」の使用は、別途述べられていない限り、「および／または」を意味する。同様に、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅ）」、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ）」、「含んでいる（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」、「含む（ｉｎｃｌｕｄｅ）」、「含む（ｉｎｃｌｕｄｅｓ）」、および「含んでいる（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」は交換可能であり、限定することを意図するものではない。
【００４５】
様々な実施形態の記載が、「含んでいる（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」という用語を使用している場合、当業者であれば、一部の特定の事例において、実施形態は、「から本質的になる」または「からなる」という言語を使用して代わりに記載され得ることを理解していることをさらに理解されたい。
【００４６】
特に定義されていない限り、本明細書で使用されているすべての技術的および科学的用語は、本開示が属する技術分野の当業者が一般的に理解しているものと同じ意味を有する。本明細書中に記載されているものと同様のまたは等しい方法および物質を、開示された方法および製品の実施において使用することができるが、例示的な方法、デバイスおよび物質は本明細書中に記載されている。
【００４７】
上記およびテキスト全体にわたり考察された文献は、本出願の出願日より前に、これらの開示のためだけに提供されている。本明細書のいかなる記載においても、これより前の開示により、このような開示に先行する権利を発明者らが有さないと認めるとは解釈されない。各文献は、それが引用されている本開示に特定の注目が向けられ、その全体が参照により組み込まれている。
【００４８】
以下の参考文献は、本開示において使用されている用語の多くの一般的な定義を当業者に提供する：Singletonら、DICTIONARY  OF  MICROBIOLOGY  AND  MOLECULAR  BIOLOGY（第２版、１９９４年）；THE  CAMBRIDGE  DICTIONARY  OF  SCIENCE  AND  TECHNOLOGY（Walker編、１９８８年）；THE  GLOSSARY  OF  GENETICS、第５版、R.  Riegerら（編）、Springer  Verlag（１９９１年）；ならびにHaleおよびMarham、THE  HARPER  COLLINS  DICTIONARY  OF  BIOLOGY  （１９９１年）。
【００４９】
本明細書で使用される場合、「治療有効量」または「有効量」とは、症状の回復、例えば、処置した患者集団において統計学的に有意な改善を通常提供する、関連する医学的状態の処置、治癒、予防もしくは回復、またはこのような状態の処置、治癒、予防もしくは回復の速度における増加をもたらすのに十分な化合物の量を指す。単独で投与される個々の活性成分について言及している場合、治療有効用量はその成分だけを指す。組合せについて言及している場合、治療有効用量は、連続的または同時投与を含めて、組み合わせて投与されるかどうかに関わらず、治療効果をもたらす活性成分の総量を指す。一部の実施形態では、脂肪肝疾患などに対して、治療有効量の化合物は、これらに限定されないが、肝線維症、肝臓の脂肪含有量、硬変症の発症率または進行度、肝細胞癌の発症率、ＡＬＴおよびＡＳＴなどの肝臓のアミノトランスフェラーゼレベルの増加、血清フェリチンの増加、ガンマ−グルタミルトランスフェラーゼ（ガンマ−ＧＴ）のレベルの上昇、ならびに血漿インスリン、コレステロールおよびトリグリセリドのレベルの上昇を含めた、１つまたは１つより多くの症状を回復させる。
【００５０】
「肝臓腫瘍」は、本明細書で使用される場合、肝臓内もしくは肝臓上に生じる、または肝臓に物理的に関連する原発性腫瘍および／または新生物および／または転移を含む。肝臓腫瘍はまた、体内の他の箇所に移動するが、本明細書で開示されている化合物に対する応答性が依然としてある肝臓腫瘍の転移も含む。多くのタイプのこのような腫瘍および新生物が公知である。原発性肝臓腫瘍は、肝細胞癌および他の当技術分野で公知のものを含む。このような腫瘍は一般的に固形腫瘍であるか、またはこれらの腫瘍は、肝臓に限局して蓄積するびまん性腫瘍である。本発明による処置に対する腫瘍または新生物は悪性であっても、良性であってもよく、以前に化学療法、照射および／または他の処置で処置されていてもよい。
【００５１】
「腫瘍」または「新生物」または「がん」は、本明細書で使用される場合、原発性腫瘍および／または転移を含む。腫瘍は、例えば、卵巣、子宮頸部、前立腺、乳房、肺、結腸または胃の癌および肝臓へのその転移を含む。
【００５２】
「処置」とは、予防的処置または治療的処置を指す。ある特定の実施形態では、「処置」とは、治療的または予防的目的のために、化合物または組成物を被験体に投与することを指す。
【００５３】
「治療的」処置とは、それらの兆しまたは症状を減退させるまたは排除する目的で、病理の兆しまたは症状を示す被験体に施される処置である。兆しまたは症状は、生化学的、細胞の、組織学的、機能的または肉体的、主観的または客観的であってよい。
【００５４】
「予防的」処置とは、病理を発症する危険性を低減させる目的で、疾患の兆しを示さない、または疾患の早期兆しのみを示す被験体に施される処置である。本開示の化合物または組成物は、病理を発症する可能性を減少させる、または発症した場合、病理の重症度を最小限に抑えるための予防的処置として付与することができる。
【００５５】
「診断用」とは、病的状態の存在、程度および／または性質を特定することを意味する。診断法は、これらの特異性および選択性において異なる。特定の診断法は状態の明確な診断を提供しないこともあるが、方法が診断を補助するポジティブな指標を提供するのであれば、それで十分である。
【００５６】
「医薬組成物」とは、ヒトおよび哺乳動物を含めた被験体動物における薬学的使用に対して適切な組成物を指す。医薬組成物は、治療有効量の本開示の化合物、任意選択で別の生物活性物質、および任意選択で薬学的に許容される添加剤、担体または賦形剤を含む。ある実施形態では、医薬組成物は、活性成分（複数可）、および担体を構成する不活性成分（複数可）、ならびに任意の生成物（成分の任意の２種もしくは２種より多くの組合せ、複合体形成もしくは凝集から、または１つもしくは１つより多くの成分の解離から、または１つもしくは１つより多くの成分の他の種類の反応もしくは相互作用から、直接的または間接的に生じる）を含む組成物を包含する。したがって、本開示の医薬組成物は、本開示の化合物と、薬学的に許容される添加剤、担体または賦形剤とを混和することによって作製される任意の組成物を包含する。
【００５７】
「薬学的に許容される担体」とは、標準的な薬学的担体、緩衝液、例えば、リン酸緩衝食塩水溶液、ブドウ糖の５％水溶液、および乳剤（例えば、油／水または水／油乳剤）などのいずれかを指す。添加剤の非限定的な例として、アジュバント、結合剤、充填剤、賦形剤、崩壊剤、乳化剤、湿潤剤、滑沢剤、流動促進剤、甘味剤、香味剤、および着色剤が挙げられる。適切な薬学的担体、添加剤および賦形剤は、Remington's  Pharmaceutical  Sciences、第１９版（Mack  Publishing  Co.、Easton、１９９５年）に記載されている。好ましい薬学的担体は、活性剤の意図する投与モードに依存する。投与の典型的モードとして、経腸（例えば、経口）または非経口（例えば、皮下、筋肉内、静脈内もしくは腹腔内注射；または局所的、経皮的、もしくは経粘膜的投与）が挙げられる。
【００５８】
「薬学的に許容される塩」とは、薬学的使用のために化合物に配合することができる塩であり、これらに限定されないが、金属塩（例えば、ナトリウム、カリウム、マグネシウム、カルシウムなど）およびアンモニアまたは有機アミンの塩を含む。
【００５９】
本明細書で使用される場合「薬学的に許容される」または「薬理学的に許容される」とは、生物学的、またはその他の点で望ましくない物質、すなわち、任意の望ましくない生物学的効果を引き起こすことなく、あるいはこれが含有されている組成物の構成成分のいずれかと、または個体の体の上もしくは体内に存在する任意の構成成分と有毒な方式で相互作用することなく、個体に投与され得る物質を意味する。
【００６０】
本明細書で使用される場合、「単位剤形」という用語は、ヒトおよび動物被験体に対して単位投薬量として適切な物理的に別個の単位を指し、各単位は、所望の効果を生じるのに十分な量で、計算された既定量の本開示の化合物を、任意選択で薬学的に許容される添加剤、賦形剤、担体またはビヒクルと共に含有する。本開示の新規の単位剤形に対する仕様は、用いられる特定の化合物および達成されるべき効果、ならびに宿主における各化合物に関連する薬力学に依存する。
【００６１】
本明細書で使用される場合、「被験体」という用語は哺乳動物を包含する。哺乳動物の例として、これらに限定されないが、哺乳動物の分類の任意のメンバー：ヒト、非ヒト霊長類、例えば、チンパンジー、ならびに他の類人猿およびサル種；家畜、例えば、ウシ、ウマ、ヒツジ、ヤギ、ブタ；飼育動物、例えば、ウサギ、イヌ、およびネコ；実験動物（例えば、ラット、マウスおよびモルモットなどのげっ歯類を含む）が挙げられる。この用語は、特定の年齢または性別を表さない。様々な実施形態では、被験体はヒトである。様々な実施形態では、被験体は小児または青年である。
アルファ−Ｌ−フコシダーゼ
【００６２】
アルファ−Ｌ−フコシダーゼ酵素（Ｇｅｎｂａｎｋ受託番号ＮＰ＿０００１３８）（本明細書中に参照により組み込まれている）は、リソソーム内の長い糖鎖（オリゴ糖）の切断に通常関与している。酵素が不在である場合、糖鎖が蓄積し、最終的にはフコシド蓄積症の臨床的特色をもたらす。フコシド蓄積症は、組織内の糖フコースの蓄積を伴う、欠陥性アルファ−Ｌ−フコシダーゼにより引き起こされる常染色体劣性リソソーム蓄積症である。例えば、Johnsonら、Biochem.  Biophys.  Res.  Commun、１３３巻：９０〜７頁、１９８６年を参照されたい。異なる表現型には、臨床的特色、例えば神経機能悪化、発育遅延、内臓巨大症、および重症早期形態における発作；粗い顔面特徴、びまん性体幹角化血管腫、痙攣およびより長く残存する形態の精神運動性発達遅延が挙げられる。
【００６３】
フコシド蓄積症は、フコシダーゼ遺伝子における変異を同定する遺伝的試験を使用して検出できる。フコシダーゼはまた、フコシド蓄積症患者の尿中のフコシル化タンパク質の増加したレベルの存在により診断される（Michalskiら、Eur  J  Biochem、２０１巻：４３９〜５８頁、１９９１年）。
【００６４】
アルファ−Ｌ−フコシダーゼは、肝細胞癌中で増加したレベルで検出されており、ＨＣＣに対するマーカーとして提案されている（Giardinaら、Cancer、７０巻：１０４４〜４８頁、１９９２年）。
フコシダーゼ阻害剤
【００６５】
本開示は、炭水化物結合のフコシダーゼ加水分解の酵素活性を妨げる化合物を提供する。化合物は、式Ｉ：
【化１３】
2018522023.tif 000014
において提供されるような構造を有し、
式中、
Ｘ１、Ｘ２、およびＸ３は、独立して、ＯＨ、ハロ、およびＯ（Ｃ）ＯＣＨ３からなる群から選択され、
Ｒは、Ｃ１〜３アルキルおよびＣ１〜３ハロアルキルからなる群から選択され、
Ｒ１は、Ｈ、Ｃ１〜３アルキル、ＯＨ、−ＣＯ２Ｃ１〜３アルキルからなる群から選択され、
Ｒ２は、−ＮＲｂＣ（Ｏ）Ｒａ、−ＮＲｂＣ（Ｏ）ＯＲａ、−ＮＲｂＣ（Ｏ）ＮＲｃＲａ、−ＮＲｂＣ（Ｏ）ＳＲａ、−Ｃ（Ｏ）Ｒａ、および−Ｃ（Ｏ）ＮＲｂＲａからなる群から選択され、
Ｒａは−Ｃ０〜３アルキレン−Ｇであり、
Ｇは、アリール、ヘテロアリール、シクロアルキル、およびヘテロシクロアルキルからなる群から選択され、
ＲｂおよびＲｃは、独立して、ＨおよびＣ１〜３アルキルからなる群から選択される。
【００６６】
ある場合には、Ｘ１、Ｘ２、およびＸ３はＯＨであり、Ｒはメチルであり、および／またはＲ１はＨである。ある場合には、Ｒ２は−ＮＲｂＣ（Ｏ）Ｒａまたは−Ｃ（Ｏ）ＮＲｂＲａである。ある場合には、ＲｂはＨである。
【００６７】
適切なＧ基には、限定されないが、任意選択で置換されているインドリル、ベンゾチオフェニル、フルオレニル、インデニル、ジヒドロインデニル、およびフェニルが挙げられる。例えば、Ｇ基は、任意選択で置換されているフェニルおよび
【化１４】
2018522023.tif 000015
を含み、式中、Ａは、５、６、７、８、９または１０員の炭素環式または複素環式環系である。
【００６８】
Ｇ基はまた、これらに限定されないが、
【化１５】
2018522023.tif 000016
を含み、
式中、ＲｄおよびＲｅは、独立して、Ｈ、ＯＲｆ、ＮＲｆＲｇ、Ｃ１〜３アルキル、およびＣ１〜５シクロアルキルからなる群から選択されるか、または
ＲｄおよびＲｅは、これらが結合している炭素原子と一緒になって、Ｃ＝Ｏを形成し、
ＲｆおよびＲｇは、独立して、ＨおよびＣ１〜３アルキルからなる群から選択され、
Ｙは、ＮＨ、Ｎ−Ｃ１〜３アルキル、Ｓ、ＳＯ、ＳＯ２、およびＯからなる群から選択される。
【００６９】
Ｇ基の例として、これらに限定されないが、以下：
【化１６】
2018522023.tif 000017
が挙げられる。
【００７０】
Ｒａ基の例として、これらに限定されないが、以下：
【化１７】
2018522023.tif 000018
が挙げられる。
【００７１】
ある場合には、式Ｉの化合物は、以下の構造：
【化１８】
2018522023.tif 000019
を有する。
【００７２】
ある場合には、式Ｉの化合物は、以下の構造：
【化１９】
2018522023.tif 000020
を有する。
【００７３】
適切な化合物として、これらに限定されないが、
【化２０】
2018522023.tif 000021
が挙げられる。
【００７４】
化合物の例としてまた、これらに限定されないが、
【化２１】
2018522023.tif 000022
が挙げられる。
使用方法、医薬組成物、および投与
【００７５】
化合物は、水性または非水性の溶媒、例えば、植物油もしくは他の同様の油、合成脂肪酸グリセリド、高級脂肪酸のエステルまたはプロピレングリコール中に、これらの化合物を溶解、懸濁化または乳化させることによって、所望する場合、従来の添加物、例えば、可溶化剤、等張剤、懸濁化剤、乳化剤、安定剤および保存剤と共に、注射のための調製物へと製剤化することができる。
【００７６】
化合物は、吸入を介して投与されるエアゾール製剤で利用することができる。本発明の化合物は、許容される、加圧された噴霧剤、例えば、ジクロロジフルオロメタン、プロパン、窒素などへと製剤化することができる。
【００７７】
注射または静脈内投与用の単位剤形は、滅菌水、滅菌通常食塩水または別の滅菌の薬学的に許容される担体中の溶液として、組成物中の化合物を含むことができる。
【００７８】
実使用では、本明細書中に記載されている化合物は、従来の薬学的配合技術に従い、薬学的担体と共に密接な混和物中の活性成分として組み合わせることができる。担体は、例えば、経口または非経口投与（静脈内を含む）の投与のための所望の調製物の形態に応じて多種多様な形態を取ることができる。
【００７９】
投与の経皮的経路に関して、薬物の経皮的投与のための方法がRemington's  Pharmaceutical  Sciences、第１７版（Gennaroら編、Mack  Publishing  Co.、１９８５年）に開示されている。経皮または皮膚パッチは、本発明の方法において有用な化合物の経皮的送達のための１つの手段である。パッチは好ましくは、化合物の吸収を増加させる、ＤＭＳＯなどの吸収促進剤を提供する。経皮的薬物送達のための他の方法は、それぞれがその全体において参照により組み込まれている、米国特許第５，９６２，０１２号、第６，２６１，５９５号、および第６，２６１，５９５号に開示されている。
【００８０】
薬学的に許容される添加剤、例えば、ビヒクル、アジュバント、担体または賦形剤は市販されている。さらに、薬学的に許容される補助物質、例えば、ｐＨ調節剤および緩衝化剤、等張性調整剤、安定剤、湿潤剤などは市販されている。
【００８１】
当業者であれば、用量レベルは、具体的な化合物、症状の重症度および被験体の副作用への感受性の関数として変動し得ることを容易に認識している。所与の化合物に対する好ましい投与量は、これらに限定されないが、患者、試験動物において、およびｉｎ  ｖｉｔｒｏにおいて行われる用量応答および薬物動態学的評価を含めた様々な手段により、当業者により容易に決定可能である。
【００８２】
これらの態様のそれぞれにおいて、組成物は、これらに限定されないが、経口、直腸、局所的、非経口（皮下、筋肉内、および静脈内を含む）、経肺（経鼻または口腔内頬側での吸入）、または経鼻投与に対して適切な組成物を含むが、任意の所与の場合における最も適切な経路は、処置を受けている状態の性質および重症度、ならびに活性成分の性質に部分的に依存する。例示的な投与経路は経口および静脈内経路である。組成物は、単位剤形で便利に提示され、薬学の技術分野で周知の方法のいずれかで調製することができる。
【００８３】
本発明の組成物は、ウイルス外皮もしくはベシクルにカプセル化もしくは結合させて、または細胞に組み込んで投与することができる。ベシクルは、普通球状であり、多くの場合脂質であるミセル状粒子である。リポソームは、二層膜から形成されるベシクルである。適切なベシクルとして、これらに限定されないが、単層ベシクルおよび多層脂質ベシクルまたはリポソームが挙げられる。このようなベシクルおよびリポソームは、広範囲な脂質またはリン脂質化合物、例えば、ホスファチジルコリン、ホスファチジン酸、ホスファチジルセリン、ホスファチジルエタノールアミン、スフィンゴミエリン、糖脂質、ガングリオシドなどから、標準的な技術、例えば、米国特許第４，３９４，４４８号に記載されているものなどを使用して作製することができる。このようなベシクルまたはリポソームを使用して、化合物を細胞内に投与し、化合物を標的器官に送達することができる。目的の組成物の制御放出はまた、カプセル化を使用して達成することもできる（例えば、米国特許第５，１８６，９４１号を参照されたい）。
【００８４】
化合物を血流に送達する任意の投与経路を使用することができる。好ましくは、組成物は、非経口的に、最も好ましくは静脈内投与される。一部の実施形態では、組成物は、門脈を介して投与される。頸静脈内および頸動脈内注射もまた有用である。組成物は、局在的にまたは局部的に、例えば、腹腔内、または皮下、または筋肉内に投与されてもよい。一態様では、組成物は、適切な薬学的賦形剤または担体と共に投与される。
【００８５】
投与される投与量は、個々の必要性、所望の効果、使用される活性剤、および選択された投与経路に依存する。化合物の好ましい投与量は、約０．２ｐｍｏｌ／ｋｇ〜約２５ｎｍｏｌ／ｋｇの範囲であり、特に好ましい投与量は、２〜２５０ｐｍｏｌ／ｋｇの範囲であり、あるいは、化合物の好ましい用量は、０．０２〜２０００ｍｇ／ｋｇまたは０．１〜１００ｍｇ／ｋｇの範囲、例えば、１〜１５００ｍｇ／ｋｇ、１０〜１０００ｍｇ／ｋｇ、２５〜５００ｍｇ／ｋｇ、５０〜２５０ｍｇ／ｋｇ、７５〜２００ｍｇ／ｋｇ、５０〜１５０ｍｇ／ｋｇ、６０〜１３０ｍｇ／ｋｇ、７０〜１１０ｍｇ／ｋｇ、７５〜１００ｍｇ／ｋｇ、８０〜９５ｍｇ／ｋｇ、８５〜９０ｍｇ／ｋｇ、１００〜２５０ｍｇ／ｋｇ、１２０〜２３０ｍｇ／ｋｇ、１３０〜２２０ｍｇ／ｋｇ、１４０〜２１０ｍｇ／ｋｇ、１５０〜２００ｍｇ／ｋｇ、１６０〜１９０ｍｇ／ｋｇ、１７０〜１８０ｍｇ／ｋｇ、約８７．５ｍｇ／ｋｇ、または約１７５ｍｇ／ｋｇであってよい。
【００８６】
本発明の化合物は、動物、例えば哺乳動物、および特にヒトにおける治療的、予防的および診断的介入に対して有用である。
【００８７】
本発明の方法は、様々な異なる疾患状態の処置における使用を見出している。本発明の化合物で処置可能な具体的な疾患状態は様々である。したがって、肝臓に影響を与え、本発明の方法で処置可能な疾患状態として、肝臓腫瘍の成長をもたらし得る、細胞の増殖性疾患、例えば、新生物疾患、自己免疫疾患、ホルモン異常の疾患、変性疾患、加齢による疾患などが挙げられる。
【００８８】
処置は、疾患を罹患する可能性の減少、疾患の予防、疾患の進行を遅らせる、停止するもしくは逆転する、または宿主を苦しめている病状に関連する症状の回復を含めた、化合物の投与に関連する被験体への任意の有益な成果を包含することが意図されており、ここで、回復または有益性は、少なくとも、パラメーターの大きさ（例えば、炎症およびこれに関連する疼痛などの処置を受けている病態に関連する症状（における減少を指すように広範な意味で使用されている。よって、処置はまた、病態、または少なくともこれに関連する症状が完全に阻害される、例えば、発症が予防される、または停止する、例えば、終端していることによって、宿主が、病態、または少なくとも病態を特徴付ける症状をもはや患っていないような状況も含む。
がん
【００８９】
フコシダーゼの阻害剤は、フコシダーゼ阻害剤を用いた処置に感受性があると決定されたがんを処置するのに有用であることが本明細書で想定されている。本明細書の方法は、フコシダーゼ阻害剤を用いた処置に耐性があるがんを同定するのに有用であることが想定される。例示的ながんとして、これらに限定されないが、副腎皮質癌、ＡＩＤＳ関連がん、ＡＩＤＳ関連リンパ腫、肛門がん、肛門直腸がん、肛門管のがん、虫垂がん、小児小脳星状細胞腫、小児大脳星状細胞腫、基底細胞癌、皮膚がん（非黒色腫）、胆道がん、肝外胆管がん、肝内胆管がん、膀胱がん、泌尿器膀胱がん、骨関節がん、骨肉腫および悪性線維性組織球腫、脳がん、脳腫瘍、脳幹神経膠腫、小脳星状細胞腫、大脳星状細胞腫／悪性神経膠種、上衣細胞腫、髄芽腫、テント上原始神経外胚葉性（neuroectodeimal）腫瘍、視覚路および視床下部神経膠腫、乳がん（トリプルネガティブ乳がんを含む）、気管支腺腫／カルチノイド、カルチノイド腫瘍、胃腸の、神経系がん、神経系リンパ腫、中枢神経系がん、中枢神経系リンパ腫、子宮頸がん、小児がん、慢性リンパ球性白血病、慢性骨髄性白血病、慢性骨髄増殖性疾患、結腸がん、直腸結腸がん、皮膚Ｔ細胞リンパ腫、リンパ新生物、菌状息肉腫、セザリー（Seziary）症候群、子宮内膜がん、食道がん、頭蓋外胚細胞腫瘍、性腺外胚細胞腫瘍、肝外胆管がん、眼のがん（eye  cancer）、眼内黒色腫、網膜芽腫、胆嚢がん、胃（胃の）がん（gastric  (stomach)  cancer）、胃腸カルチノイド腫瘍、消化管間質腫瘍（ＧＩＳＴ）、胚細胞腫瘍、卵巣胚細胞腫瘍、妊娠性絨毛腫瘍神経膠腫（gestational  trophoblastic  tumor  glioma）、頭頸部がん、肝細胞（肝臓）がん、ホジキンリンパ腫、下咽頭がん、眼内黒色腫、眼がん（ocular  cancer）、島細胞腫瘍（膵臓内分泌腺）、カポジ肉腫、腎臓がん、腎がん、喉頭がん、急性リンパ芽球性白血病、急性骨髄性白血病、慢性リンパ球性白血病、慢性骨髄性白血病、有毛細胞白血病、唇および口腔がん、肝がん、肺がん、非小細胞肺がん、小細胞肺がん、ＡＩＤＳ関連リンパ腫、非ホジキンリンパ腫、原発性中枢神経系リンパ腫、ワルデンシュトレーム型（Waldenstram）マクログロブリン血症、髄芽腫、黒色腫、眼内の（眼の）黒色腫、メルケル細胞癌、悪性中皮腫、中皮腫、転移性扁平上皮性頸部がん、口部のがん（mouth  cancer）、舌のがん、多発性内分泌腫瘍症候群、菌状息肉腫、骨髄異形成症候群、骨髄異形成／骨髄増殖性疾患、慢性骨髄性白血病、急性骨髄性白血病、多発性骨髄腫、慢性骨髄増殖性障害、鼻咽頭がん、神経芽細胞腫、口のがん（oral  cancer）、口腔がん（oral  cavity  cancer）、口腔咽頭がん、卵巣がん、卵巣上皮がん、悪性である可能性が低い卵巣腫瘍、膵臓がん、島細胞膵臓がん、副鼻腔および鼻腔がん、副甲状腺がん、陰茎がん、咽頭がん、褐色細胞腫、松果体芽腫およびテント上原始神経外胚葉性腫瘍、下垂体腫瘍、形質細胞新生物／多発性骨髄腫、胸膜肺芽腫、前立腺がん、直腸がん、腎孟尿管、移行性細胞がん、網膜芽腫、横紋筋肉腫、唾液腺がん、ユーイングファミリーの肉腫腫瘍、軟組織肉腫、子宮がん、子宮肉腫、皮膚がん（非黒色腫）、皮膚がん（黒色腫）、メルケル細胞皮膚癌、小腸がん、軟組織肉腫、扁平上皮癌、胃（胃の）がん、テント上原始神経外胚葉���腫瘍、精巣がん、咽喉がん、胸腺腫、胸腺腫および胸腺癌、甲状腺がん、腎孟尿管および他の泌尿器官の移行性細胞がん、妊娠性絨毛腫瘍、尿道がん、子宮内膜性子宮がん、子宮肉腫、子宮体部がん、膣がん、外陰がん、およびウィルムス腫瘍が挙げられる。一部の実施形態では、がんは、黒色腫、直腸結腸がん、膵臓がん、膀胱がん、乳がん、トリプルネガティブ乳がん、卵巣がんおよび肺がんからなる群から選択される。
【００９０】
様々な実施形態では、腫瘍またはがんは、肝がん、乳がん、黒色腫、肺がん、白血病、膵臓がん、胃がん、直腸結腸がん、または頭頸部がんである。
肝臓障害
【００９１】
本発明で想定されている肝疾患または肝臓障害には、これらに限定されないが、以下に論じられているような障害が含まれる。肝細胞癌、または肝癌は、世界で５番目に多いがんであり、発症率は着実に上がっている。腫瘍原性肝細胞は、高レベルのＬＲＰ１の発現を保持している。肝細胞癌は化学療法に十分に応答しないが、これは、腫瘍細胞が、高い率の薬物耐性を示すからであり、使用される化学療法が、全身性（静脈内）投与により特に心臓および腎臓において重篤な毒性を有するからである。
【００９２】
肝炎は肝臓の炎症に対する一般的な用語である。肝炎は急性であっても、慢性であってもよく、急性または慢性の肝不全、例えば、ウイルス（例えば、Ａ型、Ｂ型、Ｃ型、Ｄ型またはＥ型または非ＡＢＣＤＥ型の肝炎、ＣＭＶ、エプスタイン−バー）、真菌、リケッチアまたは寄生虫の感染症、アルコール、化学的毒素、薬物によるもの（例えばアセトアミノフェン、アミオダロン、イソニアジド、ハロタン、クロルプロマジン、エリスロマイシン）、代謝性肝疾患（例えば、ウィルソン病、アルファ１−アンチトリプシン欠損症）、がん、特発性自己免疫性肝疾患、硬変症（例えば原発性胆汁性肝硬変）、胆道閉塞を含む。Ａ型、Ｂ型および／またはＣ型ウイルス肝炎による肝臓の感染症は、ゆっくりと肝疾患へと進行し、肝不全をもたらす可能性がある。急性肝炎感染症はＡ型肝炎により最も一般的に引き起こされている。Ｂ型肝炎とＣ型肝炎の両感染症は、体内に残留し、長期にわたる感染症（慢性）となる可能性がある。Ｃ型肝炎は、硬変症およびがんを含む生命が危険な状態を引き起こす可能性がある。
【００９３】
本明細書で開示されている化合物を使用して処置可能な、想定されている追加の肝臓障害または状態として、肝臓脂肪症（hepatic  steatitis）、胆汁うっ滞、肝硬変、有毒性肝臓損傷（例えば、薬物毒性または環境毒性によるもの、例えば、アフラトキシンＢ１に関連するがん）および遺伝性ヘモクロマトーシスに関連するまたはこれらから生じる腫瘍が挙げられる。
【００９４】
本明細書で開示されている化合物の、肝臓腫瘍を有する被験体への投与は、これらに限定されないが、化学療法剤、細胞傷害性剤、ラジオアイソトープ、抗ウイルス薬、抗真菌薬、抗炎症薬、抗体、および肝臓腫瘍または肝臓腫瘍の発症に関連する他の肝疾患を処置するのに有用な他の治療法を含めた、第２の薬剤と組み合わせて行われることが想定されている。
【００９５】
肝臓癌の処置のために、本明細書で開示されている化合物と組み合わせてＨＣＣ患者に投与するための候補薬物として、これらに限定されないが、５−フルオロウラシル、ドキソルビシン（アドリアマイシン）、マイトマイシンＣ、シスプラチン、エピルビシン、ダウノルビシン、エトポシド、および表１に提示されている他の化学療法剤、アデフォビル、ラミブジン、エンテカビル、リバビリン、インターフェロンアルファ、ペグ化インターフェロンアルファ−２ａ、インターフェロンアルファ−２ｂおよび他の抗ウイルス剤、ビタミンＥ、ウルソデオキシコール酸、ならびに肝臓障害を処置するために使用される他の薬剤が挙げられる。追加の薬剤は表１に示されている。
【表１−１】
2018522023.tif 000023
【表１−２】
2018522023.tif 000024
【００９６】
腫瘍を処置するのに有用な細胞傷害性剤として、これらに限定されないが、メクロレタミン塩酸塩、シクロホスファミド、イホスファミド、クロラムブシル、メルファラン、ブスルファン、チオテパ、カルムスチン、ロムスチン、ダカルバジンおよびストレプトゾシンが挙げられる。
【００９７】
腫瘍を処置するのに有用なラジオアイソトープ（Radioisoptoes）として、これらに限定されないが、１３１Ｉ、１２５Ｉ、１１１Ｉｎ、９０Ｙ、６７Ｃｕ、１２７Ｌｕ、２１２Ｂｉ、２１３Ｂｉ、２５５Ｆｍ、１４９Ｔｂ、２２３Ｒｄ、２１３Ｐｂ、２１２Ｐｂ、２１１Ａｔ、８９Ｓｒ、１５３Ｓｍ、１６６Ｈｏ、２２５Ａｃ、１８６Ｒｅ、６７Ｇａ、６８Ｇａおよび９９ｍＴｃが挙げられる。
【００９８】
本方法における使用に想定されている抗体として、これらに限定されないが、抗上皮増殖因子受容体（ＥＧＦＲ）（セツキシマブ（cituximab）、パニツムマブ（panitumamab））、抗血小板由来の増殖因子受容体アルファ（ＰＤＧＦＲａｌｐｈａ）、抗グリピカン３（ＧＰＣ３）、ならびにがんまたは肝臓および身体の他のエリアへ転移したがんを処置するのに有用な他の抗体を含めた、がんおよび他の障害を処置するのに使用されるものが挙げられる。
キット
【００９９】
追加の態様として、本発明は、本発明の方法を実施するためのこれらの使用を促進する方式でパッケージされた本明細書中に記載されている１つまたは１つより多くの化合物または組成物を含むキットを含む。一実施形態では、このようなキットは、密閉されたビンまたは管などの容器内にパッケージされた、本明細書中に記載されている化合物または組成物（例えば、化合物を単独でまたは第２の薬剤と組み合わせて含む組成物）を含み、本方法を実施する上での化合物または組成物の使用について記載しているラベルが容器に取り付けられているか、またはパッケージ内に含まれる。好ましくは、化合物または組成物は単位剤形にパッケージされる。キットは、具体的な投与経路に従い組成物を投与するのに適切なデバイスをさらに含んでもよい。好ましくは、キットは、組成物の使用について記載しているラベルを含有する。
【０１００】
上記の例証的な例に示された本発明における多くの改変および変動が、当業者に生じることが予想されている。結果的に、添付の特許請求の範囲に出現するようなこのような制限のみが本発明に課されるべきである。
【実施例】
【０１０１】
（実施例１）
化合物の合成
本明細書で開示されている化合物は、開始試薬への適切な修飾を使用して、以下の方法に従い調製することができる。当業者であれば、以下の教示を考慮して、および典型的な有機化学技術を使用して、本明細書で開示されている化合物を合成することができる。
【０１０２】
中間体Ａの合成：スキーム１に示されている通り、中間体ＡをＤ−グルコースから調製した。
【化２２】
2018522023.tif 000025
【０１０３】
中間体Ａの脱ベンジル化は、化合物１３をもたらし、これを保護された化合物１４ａに変換することができる。
【０１０４】
式Ｉの化合物の合成：式Ｉの化合物は、スキーム２に示されている通り、エナミン（化合物１６）への変換、これに続く活性化した適当なカルボン酸とのカップリングにより、化合物１３から調製される。
【化２３】
2018522023.tif 000026
【０１０５】
式Ｉの化合物はまた、スキーム３に示されている通り、チオラクタム（化合物２９）への変換、これに続く適当なα−ブロモアミド（化合物３’）とのカップリングおよび式Ｉの化合物への変換により、化合物１３から調製される。
【化２４】
2018522023.tif 000027
（実施例２）
ｉｎ  ｖｉｔｒｏでのフコシダーゼ阻害
【０１０６】
５０ｍＭホスフェート−シトレートｐＨ４．５、５ｍＭ  ＭｇＣｌ２、６４０ｎＭ  ４−メチルウンベリフェリル−アルファ−Ｌ−フコピラノシド（４ＭＵ−ＦＵＣ）、１ｎｇ／ｍＬ  ｒｈＦＵＣＡ１（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ）、および化合物ＩＩ、ＩＩＩ、またはＩＶ：
【化２５】
2018522023.tif 000028
【化２６】
2018522023.tif 000029
の反応混合物を調製することにより、フコシダーゼ阻害を評価した。反応物（１００μＬ）を、３７℃で３０分間インキュベートし、次いで同量の６００ｍＭシトレート−カーボネート緩衝液、ｐＨ９でクエンチした。３６０ｎｍでの励起および４５０ｎｍでの発光により蛍光を測定した。表２に結果が提供されている。
【表２】
2018522023.tif 000030
【０１０７】
結果は、化合物ＩＩ、ＩＩＩおよびＩＶによるフコシダーゼ活性の有効な阻害を実証している。
（実施例３）
タグ付フコースでの代謝性標識
【０１０８】
ＨｅｐＧ２細胞を、フコシダーゼ阻害剤なしで、または化合物ＩＩ、ＩＩＩ、もしくはＩＶと共に（実施例２を参照）２４時間成長させ、次いで（３Ｓ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｓ）−６−エチニルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２，３，４，５−テトライルテトラアセテート、５’−メチル基の代わりにアルキン部分を含有するフコースのｐｅｒ−アセチル化類似体（Ｃｌｉｃｋ−ｉＴ（商標）Ｆｕｃｏｓｅ  Ａｌｋｙｎｅ、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｒｏｂｅｓ、Ｅｕｇｅｎｅ、Ｏｒｅｇｏｎ）をさらに４８時間で加えることによって、糖タンパク質代謝における摂動をアッセイした。細胞を固定し、透過処理し、洗浄し、Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ４８８アジドで着色して、フコース類似体を組み込んでいる糖タンパク質を直交に標識した。次いで、Ｇｕａｖａ  ６ＨＴ−２Ｌフローサイトメーター（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ）を使用して、蛍光について細胞を分析した。結果は、図１および表３に提供されており、化合物ＩＩおよびＩＶでの処理による細胞中のフコシル化物質の増加したレベルを実証し、これはフコシダーゼ阻害と一致する。結果はまた、化合物ＩＩＩで処理した細胞中のフコシル化物質の低減したレベルを実証し、これは、フコシル化の阻害の可能性を示唆している。さらに、ＨｅｐＧ２細胞の代わりに健康な線維芽細胞を使用した同様のアッセイにおいて、化合物ＩＩでの処置は、フコシル化物質のレベルに対する最小の効果を実証した。
【表３】
2018522023.tif 000031
（実施例４）
ＨｅｐＧ２細胞における細胞傷害性
【０１０９】
細胞中の化合物の細胞傷害性を評価するために、ＨｅｐＧ２細胞を、９６−ウェルプレートに、１．５ｅ４細胞／ウェルで、Ｍｉｎｉｍｕｍ  Ｅｓｓｅｎｔｉａｌ  Ｍｅｄｉａ、１０％ＦＢＳおよび２ｍＭ  Ｌ−グルタミンに三連で播種した。プレーティングした細胞は、４８時間回復させた。次いで培地を、化合物ＩＩまたはＩＶ（実施例２を参照）の希釈物を含有する同じ培地に置き換え、２４または４８時間インキュベートし、ＸＴＴアッセイに供して、生存度（ＡＴＣＣ）を測定した。結果は図２および図３に提供されており、化合物ＩＶは、化合物ＩＩと比較して、より高い阻害剤濃度で低下した細胞傷害性を実証していることを示す。
（実施例５）
化合物ＩＩの細胞傷害性
【０１１０】
多重化した細胞傷害性アッセイ：がんおよび正常細胞における化合物ＩＩ（実施例２を参照）の細胞傷害性を評価するために、ＲＰＭＩ１６４０、１０％ＦＢＳ、２ｍＭ  Ｌ−アラニル−Ｌ−グルタミン、１ｍＭ  Ｎａピルベートまたは特別な培地内で、５％ＣＯ２の加湿雰囲気下、３７℃で細胞を成長させた。細胞を３８４−ウェルプレートに播種し、５％ＣＯ２の加湿雰囲気下、３７℃でインキュベートした。細胞の播種の２４時間後、化合物ＩＩを加えた。同時に、時間ゼロの未処置の細胞プレートを生成した。
【０１１１】
７２時間のインキュベーション期間後、細胞を固定し、蛍光標識した抗体および核染料で着色して、核、アポトーシス細胞および有糸分裂細胞の可視化を可能にした。抗活性のカスパーゼ−３抗体を使用して、アポトーシス細胞を検出した。抗ホスホ−ヒストン−３抗体を使用して、有糸分裂細胞を検出した。
【０１１２】
化合物ＩＩを３．１６倍に連続希釈し、９つの濃度にわたりアッセイした。ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ  ＩＮ  Ｃｅｌｌ  Ａｎａｌｙｚｅｒ  １０００を使用して自動化蛍光顕微鏡法を行い、４倍対物レンズを用いて画像を収集した。
【０１１３】
データ分析：ＩｎＣｅｌｌ  Ａｎａｌｙｚｅｒ  １０００  ３．２を使用して、１２ビットｔｉｆｆ画像を取得し、Ｄｅｖｅｌｏｐｅｒ  Ｔｏｏｌｂｏｘ  １．６ソフトウエアで分析した。データをシグモイドの４ポイント、４パラメーターＯｎｅ−Ｓｉｔｅ用量応答モデル（ここで、ｙ（フィット）＝Ａ＋［（Ｂ−Ａ）／（１＋（（Ｃ／ｘ）＾Ｄ））］にフィットさせるための非線形回帰を使用して、ＥＣ５０およびＩＣ５０値を計算した。特注のデータリダクションエンジンＭａｔｈＩＱベースソフトウエア（ＡＩＭ）を使用して、曲線−フィッティング、ＥＣ５０／ＩＣ５０計算および報告の作成を実施した。
【０１１４】
多重化した細胞傷害性アッセイは細胞画像ベースの分析技術を使用するが、ここでは、細胞を固定し、蛍光標識した抗体および核染料で着色して、核、ならびにアポトーシス細胞および有糸分裂細胞を視覚化する。抗活性のカスパーゼ−３抗体を使用して、アポトーシス細胞を検出する。抗ホスホ−ヒストン−３抗体を使用して、有糸分裂細胞を検出する。組み込まれた核染料のシグナル強度により細胞増殖を測定する。細胞増殖アッセイ出力は、相対細胞カウントと称する。細胞増殖エンドポイントを決定するため、以下の式を使用して、細胞増殖データ出力を対照（ＰＯＣ）のパーセントへと変換する：
【０１１５】
ＰＯＣ＝相対細胞カウント（化合物のウェル）／相対細胞カウント（ビヒクルのウェル）×１００。
【０１１６】
相対細胞カウントＩＣ５０は、最大可能応答の５０％での試験化合物濃度である。相対細胞カウントＥＣ５０は、曲線屈曲点または有効応答の半分での試験化合物濃度である（フィットした曲線解法のパラメーターＣ）。ＧＩ５０は、観察された成長を半分に減少させるのに必要とされる濃度である。これは、未処理の細胞（時間ゼロ値）と、ウェル内に播種された細胞の数との中間で成長を阻害する濃度である。
【０１１７】
時間ゼロでの未処理プレートを使用して、７２時間のアッセイ期間での倍加の数を決定する：７２時間での倍加の数＝ＬＮ［細胞数（７２時間エンドポイント）＊細胞数（時間ゼロ）］／ＬＮ（２）
【０１１８】
各バイオマーカーの出力は、各ウェル内の相対細胞カウントに対して正規化したビヒクルバックグランドに対する増加倍数である。
【０１１９】
活性化したカスパーゼ−３マーカーは、早期から後期のアポトーシス細胞を標識する。出力は、各ウェル内の相対細胞カウントに対して正規化したビヒクルバックグランドに対するアポトーシス細胞の増加倍数として示されている。カスパーゼ−３シグナルにおいて５倍の誘導を引き起こす試験化合物の濃度は、有意なアポトーシス誘導を示す。相対細胞カウントＩＣ９５より高い濃度を有するウェルは、カスパーゼ３誘導分析から排除する。
【０１２０】
ホスホ−ヒストン−３マーカーは有糸分裂細胞を標識する。出力は、各ウェル内の相対細胞カウントに対して正規化したビヒクルバックグランドに対する有糸分裂細胞の誘導倍数として示されている。バックグランドに対する有糸分裂細胞シグナルの誘導倍数が約１である場合、細胞周期に対して「効果なし」である。ビヒクルバックグランドに対するホスホ−ヒストン−３シグナルの２倍またはそれより大きい増加は、試験化合物の有意な有糸分裂阻止の誘導を示している。
【０１２１】
細胞傷害性レベルが測定された相対細胞カウントＩＣ９５未満の場合にのみ、ホスホ−ヒストン−３シグナルにおける２分の１またはそれ未満の低減（two  or  more  fold  decrease）はＧ１／Ｓ阻止を示し得る。ホスホ−ヒストン−３シグナルの２分の１またはそれ未満の低減が相対細胞カウントＩＣ９５より高い濃度で観察された場合、有糸分裂細胞カウントの低減は、真のＧ１／Ｓ期阻止ではなく、より一般的な細胞傷害性効果に起因する可能性が最も高い。相対細胞カウントＩＣ９５より高い濃度を有するウェルはホスホ−ヒストン−３の分析から排除する。
【０１２２】
これらの研究の結果は表４に提供されており、細胞内のリソソームフコシダーゼを阻害する化合物ＩＩは、結腸および前立腺細胞系を含むいくつかの腫瘍細胞系に対して毒性であることを示している。結果はまた、化合物ＩＩが一部の正常な（非腫瘍）初代系において成長停止を誘発するが、これらを死滅させないことも実証している。
【表４】
2018522023.tif 000032
（実施例６）
化合物ＩＩの薬物動態および生体分布
【０１２３】
マウス血漿中の化合物ＩＩ（実施例２を参照）の薬物動態を評価するために、化合物ＩＩを１ｍｇ／ｋｇの投与量で静脈内投与した。投与後２４時間までの様々な時間点において化合物ＩＩ濃度を測定し、結果は表５に提供されている。
【表５】
2018522023.tif 000033
【０１２４】
マウス肝臓および結腸中の化合物ＩＩ（実施例２を参照）の生体分布を評価するために、化合物ＩＩを、１ｍｇ／ｋｇの投与量で静脈内投与した。化合物ＩＩ濃度を、投与後１時間および８時間において測定し、結果は表６および７に提供されている。
【表６】
2018522023.tif 000034
【表７】
2018522023.tif 000035
【０１２５】
これらの結果は、マウス血漿からのフコシダーゼ阻害剤の急速なクリアランスを実証しているが、組織、特に結腸への化合物の分布を反映している。
（実施例７）
ヒト肝細胞癌の同所性モデルにおけるｉｎ  ｖｉｖｏでの効力
【０１２６】
ｉｎ  ｖｉｖｏでの化合物を評価するために、ヒト肝細胞癌の同所性モデルを使用した。ヒト肝臓癌細胞系ＨｅｐＧ２をヌードマウスに移植し、腫瘍細胞をｉｎ  ｖｉｖｏで成長させることによって、同所性腫瘍モデルを生成した。
【０１２７】
１群当たり１０匹のマウスおよび２つの投与量レジメンを使用して効力研究を行った。化合物ＩＩ（実施例２を参照）は、強制経口投与（ｐｏ）で、１７５ｍｇ／ｋｇの投与量を１日１回３週間（ＱＤ×２１）または８７．５ｍｇ／ｋｇの投与量を１日２回３週間（ＢＩＤ×２１）投与した。ビヒクル（１００μＬ）を対照動物に投与した。
【０１２８】
次いで、体重および腫瘍容積における変化に対して、動物を評価し、結果が表８および９に提供されている。
【表８】
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【表９】
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【０１２９】
化合物ＩＩは、両方の投与量レジメンに対して、動物モデルの腫瘍容積における効率的な減少を実証し、８７．５ｍｇ／ｋｇ、１日２回の用量に対してより大きな減少が観察された。これらのデータは、肝臓癌または他の肝臓状態を患っているヒトにおいて、腫瘍細胞を標的とすることに対するフコシダーゼ阻害剤の適性を支持している。
（実施例８）
化合物の特徴付け
【０１３０】
上記実施例に加えて、本明細書の化合物の活性は、これらに限定されないが以下に記載されているものを含む、当分野で公知の他のアッセイによって測定することができる。
【０１３１】
ＨｅｐＧ２細胞における生化学的効力：もともとＨＣＣ腫瘍から誘導されたＨｅｐＧ２細胞は、過剰フコシル化糖タンパク質を生成する。肝細胞内での化合物の生化学的効力を評価するために、標準的条件を使用してＨｅｐＧ２細胞を培養し、緩衝液のみと、１種または１種より多くの公知のフコシダーゼ阻害剤と、または試験化合物と共に、マルチ−ウェルプレート内でインキュベートする。一晩インキュベートした後、細胞を冷たいＰＢＳですすぎ、５０ｍＭクエン酸ナトリウムｐＨ４．８へと凍結融解により溶解する。細胞溶解物を遠心分離で浄化し、４−メチルウンベリフェリル−アルファ−Ｌ−フコースアッセイ（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈから入手可能、参照番号ＰＭＩＤ  ２１３７３３０）を使用して、製造業者プロトコールに従いフコシダーゼ活性をアッセイする。細胞数およびリソソーム関数に対する正規化のために、標準的手順を使用して、β−グルクロニダーゼレベルもまたアッセイする。
【０１３２】
ＨｅｐＧ２細胞における機能的効力の研究：ＨｅｐＧ２細胞は、１２−ウェルプレート内、１ウェル当たり１×１０５細胞を播種し、２４時間回復させておく。次いで、細胞を試験化合物と共に７２時間インキュベートする。次いで、細胞の状態をＭＴＴ増殖アッセイで評価する。
【０１３３】
ＨｅｐＧ２細胞内のフコシダーゼ活性の阻害は、細胞内のフコシル化タンパク質の蓄積を引き起こし、細胞死をもたらす、または少なくとも細胞増殖を遅らせるもしくは停止させることが予想される。
【０１３４】
同所性腫瘍異種移植片モデルにおける機能的効力：以前に記載されている通り、同所性肝内異種移植片モデルにおいて化合物の効力をアッセイする（Ong,  L.C.ら、Mol.  Imaging  Biol.、１１巻：３３４〜４２頁（２００９年）；Aihara,  A.ら、J.  Hepatol.、５２巻：６３〜７１頁（２０１０年））。簡単に説明すると、週齢６〜８週の、重症複合免疫不全（ＳＣＩＤ）マウスを、適当な麻酔剤、例えば、ケタミン、ジアゼパムまたはそれらの組合せで麻酔し、上腹部正中開腹を実施することによって、腹部の正中切開を介してマウスの門脈を曝露させる。次いで、３０ゲージ針を使用して、１０６  ＨｅｐＧ２細胞の懸濁液を、門脈に１分間にわたり注入する。次いで、切開を縫合して閉じ、動物が完全に覚醒するまで保温しておく。
【０１３５】
化合物処置の効力を測定するために、適当な放射標識薬剤、例えば、２−デオキシ−２−（Ｆ−１８）−フルオロ−Ｄ−グルコース（１８Ｆ−ＦＤＧ）を使用してポジトロン放出断層撮影（ＰＥＴ）を行うことによって（Ong,  L.C.ら、Mol.  Imaging  Biol.、１１巻：３３４〜４２頁（２００９年））、非侵襲的方法を介して処置マウスおよび対照マウスにおけるＨｅｐＧ２誘発性腫瘍の進行をフォローする。化合物処置の効力はまた、処置動物および対照動物における腫瘍エリアの組織学的分析によりｉｎ  ｖｉｖｏで測定する。
【０１３６】
リソソーム、尿および血液中のグリコサミノグリカン（ＧＡＧ）レベルを含めた、リソソーム蓄積症指標の測定もまた同所性腫瘍モデルにおいてアッセイする。
【０１３７】
化合物の投与は、化合物を与えていない被験体と比較して、腫瘍サイズを低減させる、または腫瘍成長の進行を遅延させることが予想される。化合物の投与は、ＧＡＧアッセイで測定した場合、化合物を取り込んだ細胞のリソソーム中のフコシル化タンパク質のレベルを増加させることもまた予想される。
（実施例９）
化合物の特徴付け
【０１３８】
上記実施例に加えて、本明細書の化合物のｉｎ  ｖｉｖｏ活性は、これらに限定されないが、以下に記載されているものを含めた、当分野で公知の他の動物モデルにより測定することができる。
【０１３９】
皮下腫瘍異種移植片モデルにおける機能的効力：皮下異種移植片モデルにおける化合物の効力をアッセイする。適切な皮下異種移植片モデルは、週齢６〜８週の重症複合免疫不全（ＳＣＩＤ）マウスを使用して、適当な麻酔剤、例えば、ケタミン、ジアゼパムまたはそれらの組合せで麻酔し、次いで、肝細胞癌に対するＨｕｈ−７、ＳＫ−Ｈｅｐ１、ＨＡ２２Ｔ／ＶＧＨ、またはＰＬＣ／ＰＲＦ／５細胞；乳がんに対するＢＴ−４７４、ＭＤＡ−ＭＢ−４５３、ＭＣＦ−７、またはＭＤＡ−ＭＢ−２３１細胞；肺がんに対するＮＣＩ−Ｈ４６０、Ａ５４９、ＮＣＩ−１７０３、またはＮＣＩ−Ｈ２２６細胞；胃がんに対するＳＮＵ−１、ＮＣＩ−Ｎ８７、ＴＭＣ−１、ＴＳＧＨ、またはＴＳＧＨ−Ｓ３細胞；急性骨髄性白血病に対するＭＶ４−１１、ＲＳ４−１１、またはＭＯＬＭ−１３細胞；結腸がんに対するＣＯＬＯ２０５またはＨＴ−２９細胞；鼻癌に対するＲＰＭＩ２６５０細胞；膵臓癌に対するＰＡＮＣ１またはＭＩＡ−ＰａＣａ２細胞；頭頸部がんに対するＲＰＭＩ−２６５０、Ｄｅｔｒｏｉｔ５６２、ＦａＤｕ、またはＨＳＣ−３細胞；および甲状腺癌に対するＴＴ細胞などの細胞の適当な懸濁液を注入することにより得ることができる。次いで、切開を縫合して閉じ、動物が完全に覚醒するまで保温しておく。
【０１４０】
化合物処置の効力を測定するために、適当な放射標識薬剤、例えば、２−デオキシ−２−（Ｆ−１８）−フルオロ−Ｄ−グルコース（１８Ｆ−ＦＤＧ）を使用して、ポジトロン放出断層撮影（ＰＥＴ）を行うことによって（Ong,  L.C.ら、Mol.  Imaging  Biol.、１１巻：３３４〜４２頁（２００９年））、非侵襲的方法を介して処置マウスおよび対照マウスにおける誘発性腫瘍の進行をフォローする。化合物処置の効力はまた、処置動物および対照動物における腫瘍エリアの組織学的分析によりｉｎ  ｖｉｖｏで測定する。
【０１４１】
リソソーム、尿および血液中のグリコサミノグリカン（ＧＡＧ）レベルを含めた、リソソーム蓄積症指標の測定もまた皮下の腫瘍モデルにおいてアッセイする。
【０１４２】
化合物の投与は、化合物を与えていない被験体と比較して、腫瘍サイズを低減させる、または腫瘍成長の進行を遅延させることが予想される。化合物の投与は、ＧＡＧアッセイで測定した場合、化合物を取り込んだ細胞のリソソーム中のフコシル化タンパク質のレベルを増加させることもまた予想される。
【０１４３】
同所性腫瘍異種移植片モデルにおける機能的効力：同所異種移植モデルにおける化合物の効力をアッセイする。適切な同所異種移植モデルは、週齢６〜８週の重症複合免疫不全（ＳＣＩＤ）マウスを使用して、適当な麻酔剤、例えば、ケタミン、ジアゼパムまたはそれらの組合せで麻酔し、次いで、肝細胞癌に対するＨｕｈ−７、ＰＬＣ／ＰＲＦ／５、またはＢＮＬ１ＭＥＡ．７Ｒ．１−ｌｕｃ細胞；例えば、患者由来の異種移植片（ＰＤＸ）モデルのための肝細胞癌患者からの患者由来の細胞；頭頸部がんに対するＤｅｔｒｏｉｔ５６２またはＨＳＣ−３細胞；および黒色腫に対するＢ１６−Ｆ１０細胞などの細胞の適当な懸濁液を注入することにより得ることができる。次いで、切開を縫合して閉じ、動物が完全に覚醒するまで保温しておく。
【０１４４】
追加的に、黒色腫の自然発症のリンパモード転移モデルは、Ｂ１６−Ｆ１０−ｌｕｃ２ネズミ黒色腫細胞を、免疫能力がある同系Ｃ５７Ｂｌ／６マウスの後足パッドに接種することによって得ることができる。
【０１４５】
化合物処置の効力を測定するために、適当な放射標識薬剤、例えば、２−デオキシ−２−（Ｆ−１８）−フルオロ−Ｄ−グルコース（１８Ｆ−ＦＤＧ）を使用して、ポジトロン放出断層撮影（ＰＥＴ）を行うことによって（Ong,  L.C.ら、Mol.  Imaging  Biol.、１１巻：３３４〜４２頁（２００９年））、非侵襲的方法を介して、処置マウスおよび対照マウスにおける誘発性腫瘍の進行をフォローする。化合物処置の効力はまた、処置動物および対照動物における腫瘍エリアの組織学的分析によりｉｎ  ｖｉｖｏで測定する。
【０１４６】
リソソーム、尿および血液中のグリコサミノグリカン（ＧＡＧ）レベルを含めた、リソソーム蓄積症指標の測定もまた皮下の腫瘍モデルにおいてアッセイする。
【０１４７】
化合物の投与は、化合物を与えていない被験体と比較して、腫瘍サイズを低減させる、または腫瘍成長の進行を遅延させることが予想される。化合物の投与は、ＧＡＧアッセイで測定した場合、化合物を取り込んだ細胞のリソソーム中のフコシル化タンパク質のレベルを増加させることもまた予想される。
（実施例１０）
ｉｎ  ｖｉｖｏでの化合物の投与
【０１４８】
ＨＣＣは、５番目に最も多く診断されている悪性腫瘍であり、世界中で年間ほぼ５００，０００件の死亡の原因となっている。腫瘍組織の外科切除、移植および物理的破壊が処置に対する第１の選択であるが、これらの手法に対して適切な腫瘍の症状を示すのは５〜１０％の患者のみである（Ribero,  D.ら、  Expert  Rev.  Anticancer  Ther.、６巻：５６７〜５７９頁（２００６年）；Lau,  W.  Y.ら、J.  Am.  Coll.  Surg.、２０２巻：１５５〜１６８頁（２００６年）；Lin,  X.  D.ら、Hepatobiliary  Pancreat.  Dis.  Int.、５巻：１６〜２１頁（２００６年））。さらに、全身性化学療法は、化学療法薬の毒性と腫瘍細胞耐性の両方により、１５〜２０％という低い応答率を生じる（Chan,  J.  Y.ら、Life  Sci.  ６７巻：２１１７〜２１２４頁（２０００年）；Plosker,  G.  Lら、Drugs、４５巻：７８８〜８５６頁（１９９３年））。
【０１４９】
例えば、ドキソルビシンは、多種多様な腫瘍に対して高い効率を有するがん化学療法薬であり、特に、腫瘍細胞を含めて、急速な成長を遂げている細胞に対して毒性である。しかし、肝細胞癌の処置におけるドキソルビシンの使用は、重大な肝臓および心臓毒性ならびに血液細胞産生の抑制により制限される（Danesi,  R.ら、Clin.  Pharmacokinet.、４１巻：４３１〜４４４頁（２００２年））。加えて、肝細胞癌細胞は、薬物耐性タイプへの高い変換率を示す（Hu,  Y.ら、  Int.  J.  Oncol.、２５巻：１３５７〜１３６４頁（２００４年））。
【０１５０】
代替の治療手法は照射を利用する。例えば、現在試験されている肝がんに対する新しい処置は、放射性物質（９０Ｙ）で標識されている微細なガラスビーズを主要肝臓動脈へ注入し、ここから、腫瘍組織を潅流している小さな血管を送ることを含む。次いで、照射により腫瘍組織を破壊する。しかし、肝臓動脈から肺への血液の大幅なシャントは、多くの患者においてガラスビーズの使用を妨げる。消化管に血液供給している動脈へのビーズの大幅な逆流はまた重篤な副作用を引き起こす可能性がある。したがって、腫瘍組織への治療の有効な送達は、血管に捕捉されることになる大きな物質に依存しない、より方向づけられた手法を必要とする。
【０１５１】
化合物をｉｎ  ｖｉｖｏで評価するために、ヒト肝細胞癌の同所性モデルが使用される。
【０１５２】
動物において同所性腫瘍を生成するため、ヒト肝臓癌細胞系をヌードマウス、ラット、または他の適当な動物に移植し、腫瘍細胞をｉｎ  ｖｉｖｏで成長させる。同所性モデルに対して有用なＨＣＣ細胞系は、これらに限定されないが、上に記載されているような細胞系、例えば、Ｈｅｐ３Ｂ、ＨｅｐＧ２、ＳＫ−Ｈｅｐ１、ＨＡ２２Ｔ／ＶＧＨ、ＰＬＣ／ＰＲＦ／５、およびＨｕｈ−７を含む。ＨＣＣの同所性腫瘍モデルは当技術分野で公知であり、例えば、Okuboら（J  Gastroenterol  Hepatol.、２００７年、２２巻：４２３〜８頁）；Armengolら、（Clin  Cancer  Res.、２００４年、１０巻：２１５０〜７頁）および  Yaoら、(Clin  Cancer  Res.、２００３年、９巻：２７１９〜２６頁）に記載されている。
【０１５３】
最初に、ｉｎ  ｖｉｖｏで化合物および対照の投与のための用量範囲を確立するために、化合物（例えば、２００ｍｇ／ｋｇ／日まで）を与えている、１群当たり５匹のマウスを使用して、低用量の範囲で研究を行う。試験薬剤は、毎日２週間（ＱＤ×１４）静脈内または腹腔内のいずれかで投与し、研究のエンドポイントにおいて、体重における変化、任意の臨床的観察、ならびに臨床的病理および組織病理について被験体動物を試験する。
【０１５４】
効力研究を行うために、１群当たり８〜１０匹のマウスを使用し、ヒトＨＣＣ細胞が与えられている動物、および対照動物に上記化合物の３つの試験用量範囲を投与する。試験薬剤は、静脈内または腹腔内のいずれかに投与し、適当な頻度、例えば、毎日４週間（ＱＤ×２８）、毎日３週間（ＱＤ×２１）または毎日２週間（ＱＤ×１４）投与する。次いで、当技術分野で公知の技術を使用して、被験体動物を、体重における任意の変化、臨床的観察、およびｉｎ  ｖｉｖｏでの効力の測定、例えば、腫瘍容積、肝臓組織病理、および一般的な臨床的病理について評価する。
【０１５５】
ｉｎ  ｖｉｖｏで肝細胞癌細胞の成長を減少させる化合物の能力は、化合物が肝臓細胞に有効に送達され、生物学的に測定可能な効果をもたらすことを実証している。動物モデルにおける効率的な腫瘍死の実証は、化合物が、肝臓癌または他の肝臓状態を患っているヒトにおいて、腫瘍細胞を標的とするのに有効であることを示唆している。
【０１５６】
治療薬の生体分布および効力を試験するための肝細胞癌（ＨＣＣ）に対する別の関連動物モデルは、ウッドチャック肝炎ウイルス（ＷＨＶ）に感染したイースタンウッドチャックである（Tennant,  B.  C.,ら、Gastroenterology、１２７巻：Ｓ２８３〜２９３頁（２００４年））。ウイルスに新生児感染させたほぼすべてのウッドチャックは、平均２４カ月の間隔でＨＣＣを発症する。平均推定寿命は３０カ月であるが、ＷＨＶに感染したウッドチャックは、ＨＣＣ患者の大部分に存在する状態である硬変症を発症しない。ウッドチャック肝炎ウイルスおよびヒトＢ型肝炎ウイルスは構造、遺伝学、伝染の方法、感染過程および肝細胞癌への進行が同様である。このモデルの重要性を強調する重大な類似点が存在する。ヒトと同様に、生後直ちに肝炎ウイルスに曝露されたすべてのウッドチャックの半分より多くが慢性感染症を発症し、ほぼすべての慢性的に感染したウッドチャックは、曝露後約２０〜２８カ月で肝細胞癌を発症する。接種を行った残りの新生児ウッドチャックは多くの場合急性肝炎を発症するが、ウイルスに対する抗体を生み出し、回復する。これらの「回復した」動物の１７〜２５％の間は、曝露後２９〜５６カ月の間にＨＣＣを発症する。肝炎感染症から明らかに回復した後のＨＣＣの発症はヒトにも見られる。
【０１５７】
肝臓腫瘍細胞に対する化合物の有効性を決定するために、対照および試験化合物の取り込みおよび毒性をウッドチャックＨＣＣモデルで研究する。一実施形態では、６匹の慢性的に感染させたウッドチャックおよび４匹の未感染ウッドチャック、約１．５〜２歳を使用する。
【０１５８】
有用な化合物は以下の特徴を一般的に示す：１）すでに障害が起きた肝臓機能に悪影響を及ぼさない、２）肝臓および悪性肝臓組織による測定可能な取り込み、３）ならびに取り込みにより、腫瘍細胞に対して毒性であり、腫瘍退縮を引き起こす。
【０１５９】
リソソーム、尿および血液中のオリゴ糖レベルを含めた、リソソーム蓄積症指標の測定もまた腫瘍モデルにおいてアッセイする。
【０１６０】
上記の例証的な例に示された本発明における多くの改変および変動が、当業者に生じることが予想されている。結果的に、添付の特許請求の範囲に出現するようなこのような制限のみが本発明に課されるべきである。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【国際調査報告】
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