(57)【要約】  本発明は、Ｔ細胞免疫グロブリン及びムチンタンパク質−３（ＴＩＭ（ＨＭ）−３）によってコードされるタンパク質に結合する、単離された免疫グロブリン重鎖ポリペプチド及び単離された免疫グロブリン軽鎖ポリペプチドに関する。本発明は、前記免疫グロブリン重鎖ポリペプチド及び免疫グロブリン軽鎖ポリペプチドを含むＴＩＭ−３結合剤を提供する。本発明は、ＴＩＭ−３阻害に応答する病気又は疾患、例えば、がん、感染症又は自己免疫疾患を治療するために、関連するベクター、組成物及びＴＩＭ−３結合剤の使用方法も提供する。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
単離された免疫グロブリン重鎖ポリペプチドであって、
アミノ酸配列Ｇｌｕ  Ｖａｌ  Ｇｌｎ  Ｌｅｕ  Ｌｅｕ  Ｇｌｕ  Ｓｅｒ  Ｇｌｙ  Ｇｌｙ  Ｇｌｙ  Ｌｅｕ  Ｖａｌ  Ｇｌｎ  Ｐｒｏ  Ｇｌｙ  Ｇｌｙ  Ｓｅｒ  Ｌｅｕ  Ａｒｇ  Ｌｅｕ  Ｓｅｒ  Ｃｙｓ  Ｘａａ１  Ａｌａ  Ｘａａ２  Ｓｅｒ  Ｇｌｙ  Ｐｈｅ  Ｘａａ３  Ｘａａ４  Ｘａａ５  Ｔｈｒ  Ｐｈｅ  Ｓｅｒ  Ｘａａ６  Ｔｙｒ  Ｘａａ７  Ｍｅｔ  Ｘａａ８  Ｔｒｐ  Ｖａｌ  Ａｒｇ  Ｇｌｎ  Ａｌａ  Ｘａａ９  Ｇｌｙ  Ｌｙｓ  Ｇｌｙ  Ｌｅｕ  Ｘａａ１０  Ｔｒｐ  Ｖａｌ  Ｓｅｒ  Ｘａａ１１  Ｉｌｅ  Ｓｅｒ  Ｘａａ１２  Ｇｌｙ  Ｇｌｙ  Ｘａａ１３  Ｔｙｒ  Ｔｈｒ  Ｔｙｒ  Ｔｙｒ  Ｇｌｎ  Ａｓｐ  Ｓｅｒ  Ｖａｌ  Ｌｙｓ  Ｇｌｙ  Ａｒｇ  Ｐｈｅ  Ｔｈｒ  Ｉｌｅ  Ｓｅｒ  Ａｒｇ  Ａｓｐ  Ａｓｎ  Ｓｅｒ  Ｌｙｓ  Ａｓｎ  Ｔｈｒ  Ｌｅｕ  Ｔｙｒ  Ｌｅｕ  Ｇｌｎ  Ｍｅｔ  Ａｓｎ  Ｓｅｒ  Ｌｅｕ  Ａｒｇ  Ｘａａ１４  Ｇｌｕ  Ａｓｐ  Ｔｈｒ  Ａｌａ  Ｖａｌ  Ｔｙｒ  Ｔｙｒ  Ｃｙｓ  Ｘａａ１５  Ｓｅｒ  Ｘａａ１６  Ｘａａ１７  Ｘａａ１８  Ｘａａ１９  Ｍｅｔ  Ａｓｐ  Ｔｙｒ  Ｔｒｐ  Ｇｌｙ  Ｇｌｎ  Ｇｌｙ  Ｔｈｒ  Ｔｈｒ  Ｖａｌ  Ｔｈｒ  Ｖａｌ  Ｓｅｒ  Ｓｅｒ  Ａｌａ（配列番号１）を含み、
（ａ）Ｘａａ１は欠失しているか又はアラニン（Ａｌａ）であり、
（ｂ）Ｘａａ２はアラニン（Ａｌａ）、プロリン（Ｐｒｏ）、アスパラギン酸（Ａｓｐ）、グリシン（Ｇｌｙ）、スレオニン（Ｔｈｒ）又はバリン（Ｖａｌ）であり、
（ｃ）内部配列Ｘａａ３  Ｘａａ４  Ｘａａ５は欠失しているか又はＴｈｒ−Ｐｈｅ−Ｉｌｅであり、
（ｄ）Ｘａａ６はセリン（Ｓｅｒ）、アスパラギン（Ａｓｎ）、アルギニン（Ａｒｇ）又はスレオニン（Ｔｈｒ）であり、
（ｅ）Ｘａａ７はアスパラギン酸（Ａｓｐ）又はアラニン（Ａｌａ）であり、
（ｆ）Ｘａａ８はセリン（Ｓｅｒ）又はスレオニン（Ｔｈｒ）であり、
（ｇ）Ｘａａ９はプロリン（Ｐｒｏ）又はロイシン（Ｌｅｕ）であり、
（ｈ）Ｘａａ１０はアスパラギン酸（Ａｓｐ）又はグルタミン酸（Ｇｌｕ）であり、
（ｉ）Ｘａａ１１はスレオニン（Ｔｈｒ）又はアラニン（Ａｌａ）であり、
（ｊ）Ｘａａ１２はグリシン（Ｇｌｙ）又はセリン（Ｓｅｒ）であり、
（ｋ）Ｘａａ１３はセリン（Ｓｅｒ）、スレオニン（Ｔｈｒ）、アスパラギン酸（Ａｓｐ）、グリシン（Ｇｌｙ）、アスパラギン（Ａｓｎ）又はリジン（Ｌｙｓ）であり、
（ｌ）Ｘａａ１４はアラニン（Ａｌａ）又はバリン（Ｖａｌ）であり、
（ｍ）Ｘａａ１５はアラニン（Ａｌａ）又はスレオニン（Ｔｈｒ）であり、及び
（ｎ）内部配列Ｘａａ１６  Ｘａａ１７  Ｘａａ１８  Ｘａａ１９は欠失しているか又はＰｒｏ−Ｔｙｒ−Ｔｙｒ−Ａｌａである、
ポリペプチド。
【請求項２】
内部配列Ｘａａ３  Ｘａａ４  Ｘａａ５が欠失している、請求項１に記載の単離された免疫グロブリン重鎖ポリペプチド。
【請求項３】
配列番号２、配列番号３、配列番号５〜配列番号８、配列番号１０〜配列番号１２、配列番号１４〜配列番号２７又は配列番号２９〜配列番号４４のいずれか１つのアミノ酸配列を含む、請求項２に記載の単離された免疫グロブリン重鎖ポリペプチド。
【請求項４】
内部配列Ｘａａ３  Ｘａａ４  Ｘａａ５がＴｈｒ−Ｐｈｅ−Ｉｌｅである、請求項１に記載の単離された免疫グロブリン重鎖ポリペプチド。
【請求項５】
配列番号４、配列番号９、配列番号１３及び配列番号２８のいずれか１つのアミノ酸配列を含む、請求項４に記載の単離された免疫グロブリン重鎖ポリペプチド。
【請求項６】
内部配列Ｘａａ１６  Ｘａａ１７  Ｘａａ１８  Ｘａａ１９が欠失している、請求項１に記載の単離された免疫グロブリン重鎖ポリペプチド。
【請求項７】
配列番号３〜配列番号４４のいずれか１つのアミノ酸配列を含む、請求項６に記載の単離された免疫グロブリン重鎖ポリペプチド。
【請求項８】
内部配列Ｘａａ１６  Ｘａａ１７  Ｘａａ１８  Ｘａａ１９がＰｒｏ−Ｔｙｒ−Ｔｙｒ−Ａｌａである、請求項１に記載の単離された免疫グロブリン重鎖ポリペプチド。
【請求項９】
配列番号２のアミノ酸配列を含む、請求項８に記載の単離された免疫グロブリン重鎖ポリペプチド。
【請求項１０】
単離された免疫グロブリン軽鎖ポリペプチドであって、アミノ酸配列Ａｓｐ  Ｉｌｅ  Ｇｌｎ  Ｍｅｔ  Ｔｈｒ  Ｘａａ１  Ｓｅｒ  Ｐｒｏ  Ｓｅｒ  Ｓｅｒ  Ｌｅｕ  Ｓｅｒ  Ａｌａ  Ｓｅｒ  Ｖａｌ  Ｇｌｙ  Ａｓｐ  Ａｒｇ  Ｖａｌ  Ｔｈｒ  Ｉｌｅ  Ｔｈｒ  Ｃｙｓ  Ａｒｇ  Ｘａａ２  Ｓｅｒ  Ｇｌｎ  Ｓｅｒ  Ｉｌｅ  Ｘａａ３  Ｘａａ４  Ｔｙｒ  Ｌｅｕ  Ａｓｎ  Ｔｒｐ  Ｔｙｒ  Ｘａａ５  Ｇｌｎ  Ｌｙｓ  Ｘａａ６  Ｘａａ７  Ｌｙｓ  Ａｌａ  Ｐｒｏ  Ｌｙｓ  Ｌｅｕ  Ｌｅｕ  Ｘａａ８  Ｔｙｒ  Ｘａａ９  Ａｌａ  Ｓｅｒ  Ｘａａ１０  Ｌｅｕ  Ｇｌｎ  Ｓｅｒ  Ｇｌｙ  Ｖａｌ  Ｐｒｏ  Ｓｅｒ  Ａｒｇ  Ｐｈｅ  Ｓｅｒ  Ｇｌｙ  Ｓｅｒ  Ｇｌｙ  Ｓｅｒ  Ｇｌｙ  Ｔｈｒ  Ａｓｐ  Ｐｈｅ  Ｔｈｒ  Ｌｅｕ  Ｔｈｒ  Ｉｌｅ  Ｓｅｒ  Ｓｅｒ  Ｌｅｕ  Ｇｌｎ  Ｐｒｏ  Ｇｌｕ  Ａｓｐ  Ｐｈｅ  Ａｌａ  Ｘａａ１１  Ｔｙｒ  Ｔｙｒ  Ｃｙｓ  Ｇｌｎ  Ｇｌｎ  Ｘａａ１２  Ｘａａ１３  Ｘａａ１４  Ｘａａ１５  Ｐｒｏ  Ｘａａ１６  Ｔｈｒ  Ｐｈｅ  Ｇｌｙ  Ｘａａ１７  Ｇｌｙ  Ｔｈｒ  Ｌｙｓ  Ｘａａ１８  Ｇｌｕ  Ｉｌｅ  Ｌｙｓ  Ａｒｇ（配列番号４５）を含み、
（ａ）Ｘａａ１はグルタミン（Ｇｌｎ）又はヒスチジン（Ｈｉｓ）であり、
（ｂ）Ｘａａ２はアラニン（Ａｌａ）又はスレオニン（Ｔｈｒ）であり、
（ｃ）Ｘａａ３はセリン（Ｓｅｒ）、アルギニン（Ａｒｇ）、アスパラギン（Ａｓｎ）又はスレオニン（Ｔｈｒ）であり、
（ｄ）Ｘａａ４はセリン（Ｓｅｒ）、アルギニン（Ａｒｇ）、アスパラギン酸（Ａｓｐ）、スレオニン（Ｔｈｒ）又はグリシン（Ｇｌｙ）であり、
（ｅ）Ｘａａ５はグルタミン（Ｇｌｎ）又はヒスチジン（Ｈｉｓ）であり、
（ｆ）Ｘａａ６はプロリン（Ｐｒｏ）又はアラニン（Ａｌａ）であり、
（ｇ）Ｘａａ７はグリシン（Ｇｌｙ）、リジン（Ｌｙｓ）又はアルギニン（Ａｒｇ）であり、
（ｈ）Ｘａａ８はイソロイシン（Ｉｌｅ）又はメチオニン（Ｍｅｔ）であり、
（ｉ）Ｘａａ９はアラニン（Ａｌａ）、グリシン（Ｇｌｙ）、アスパラギン酸（Ａｓｐ）、スレオニン（Ｔｈｒ）、セリン（Ｓｅｒ）、バリン（Ｖａｌ）又はイソロイシン（Ｉｌｅ）であり、
（ｊ）Ｘａａ１０はセリン（Ｓｅｒ）又はスレオニン（Ｔｈｒ）であり、
（ｋ）Ｘａａ１１はバリン（Ｖａｌ）、メチオニン（Ｍｅｔ）又はアラニン（Ａｌａ）であり、
（ｌ）Ｘａａ１２はセリン（Ｓｅｒ）又はアルギニン（Ａｒｇ）であり、
（ｍ）Ｘａａ１３はチロシン（Ｔｙｒ）、ヒスチジン（Ｈｉｓ）、フェニルアラニン（Ｐｈｅ）、アスパラギン酸（Ａｓｐ）、セリン（Ｓｅｒ）又はアスパラギン（Ａｓｎ）であり、
（ｎ）Ｘａａ１４はセリン（Ｓｅｒ）又はアスパラギン（Ａｓｎ）であり、
（ｏ）Ｘａａ１５はスレオニン（Ｔｈｒ）、セリン（Ｓｅｒ）、アラニン（Ａｌａ）又はプロリン（Ｐｒｏ）であり、
（ｐ）Ｘａａ１６はロイシン（Ｌｅｕ）又はヒスチジン（Ｈｉｓ）であり、
（ｑ）Ｘａａ１７はグリシン（Ｇｌｙ）、アルギニン（Ａｒｇ）又はグルタミン酸（Ｇｌｕ）であり、及び
（ｒ）Ｘａａ１８はバリン（Ｖａｌ）又はロイシン（Ｌｅｕ）である、
ポリペプチド。
【請求項１１】
配列番号４６〜配列番号１２５のいずれか１つのアミノ酸配列を含む、請求項１０に記載の単離された免疫グロブリン軽鎖ポリペプチド。
【請求項１２】
単離された免疫グロブリン重鎖ポリペプチドであって、アミノ酸配列Ｇｌｕ  Ｖａｌ  Ｇｌｎ  Ｘａａ１  Ｌｅｕ  Ｘａａ２  Ｘａａ３  Ｘａａ４  Ｘａａ５  Ｓｅｒ  Ｇｌｙ  Ｇｌｙ  Ｘａａ６  Ｌｅｕ  Ｘａａ７  Ｇｌｎ  Ｐｒｏ  Ｇｌｙ  Ｇｌｙ  Ｓｅｒ  Ｌｅｕ  Ａｒｇ  Ｌｅｕ  Ｘａａ８  Ｃｙｓ  Ｘａａ９  Ａｌａ  Ｓｅｒ  Ｇｌｙ  Ｐｈｅ  Ｔｈｒ  Ｐｈｅ  Ｘａａ１０  Ｘａａ１１  Ｓｅｒ  Ｔｙｒ  Ｘａａ１２  Ｍｅｔ  Ｘａ１３  Ｔｒｐ  Ｖａｌ  Ａｒｇ  Ｇｌｎ  Ａｌａ  Ｐｒｏ  Ｇｌｙ  Ｌｙｓ  Ｇｌｙ  Ｌｅｕ  Ｇｌｕ  Ｔｒｐ  Ｖａｌ  Ｓｅｒ  Ｘａａ１４  Ｉｌｅ  Ｓｅｒ  Ｇｌｙ  Ｓｅｒ  Ｇｌｙ  Ｇｌｙ  Ｘａａ１５  Ｔｈｒ  Ｔｙｒ  Ｔｙｒ  Ｘａａ１６  Ａｓｐ  Ｓｅｒ  Ｖａｌ  Ｌｙｓ  Ｇｌｙ  Ｘａａ１７  Ｐｈｅ  Ｔｈｒ  Ｉｌｅ  Ｓｅｒ  Ｘａａ１８  Ａｓｐ  Ａｓｎ  Ｓｅｒ  Ｘａａ１９  Ａｓｎ  Ｔｈｒ  Ｘａａ２０  Ｔｙｒ  Ｌｅｕ  Ｇｌｎ  Ｍｅｔ  Ａｓｎ  Ｘａａ２１  Ｌｅｕ  Ａｒｇ  Ａｌａ  Ｇｌｕ  Ａｓｐ  Ｔｈｒ  Ａｌａ  Ｖａｌ  Ｔｙｒ  Ｔｙｒ  Ｃｙｓ  Ｘａａ２２  Ｌｙｓ  Ｌｙｓ  Ｔｙｒ  Ｔｙｒ  Ｘａａ２３  Ｘａａ２４  Ｐｒｏ  Ａｌａ  Ａｓｐ  Ｔｙｒ  Ｔｒｐ  Ｘａａ２５  Ｇｌｎ  Ｇｌｙ  Ｔｈｒ  Ｌｅｕ  Ｖａｌ  Ｔｈｒ  Ｖａｌ  Ｓｅｒ  Ｓｅｒ  Ｇｌｙ（配列番号１２６）を含み、
（ａ）Ｘａａ１はロイシン（Ｌｅｕ）、バリン（Ｖａｌ）又はメチオニン（Ｍｅｔ）であり、
（ｂ）内部配列Ｘａａ２  Ｘａａ３  Ｘａａ４は欠失しているか又はＧｌｕ−Ｓｅｒ−Ｌｅｕであり、
（ｃ）Ｘａａ５は欠失しているか又はグルタミン酸（Ｇｌｕ）であり、
（ｄ）Ｘａａ６はグリシン（Ｇｌｙ）又はアスパラギン酸（Ａｓｐ）であり、
（ｄ）Ｘａａ７はバリン（Ｖａｌ）又はイソロイシン（Ｉｌｅ）であり、
（ｅ）Ｘａａ８はセリン（Ｓｅｒ）又はチロシン（Ｔｙｒ）であり、
（ｆ）Ｘａａ９はアラニン（Ａｌａ）又はバリン（Ｖａｌ）であり、
（ｇ）Ｘａａ１０はセリン（Ｓｅｒ）、アスパラギン（Ａｓｎ）、アルギニン（Ａｒｇ）、スレオニン（Ｔｈｒ）、アスパラギン酸（Ａｓｐ）又はグリシン（Ｇｌｙ）であり、
（ｈ）Ｘａａ１１は欠失しているか又はグリシン（Ｇｌｙ）であり、
（ｉ）Ｘａａ１２はアラニン（Ａｌａ）又はスレオニン（Ｔｈｒ）であり、
（ｊ）Ｘａａ１３はセリン（Ｓｅｒ）又はアスパラギン（Ａｓｎ）であり、
（ｋ）Ｘａａ１４はアラニン（Ａｌａ）、グリシン（Ｇｌｙ）、バリン（Ｖａｌ）、セリン（Ｓｅｒ）、フェニルアラニン（Ｐｈｅ）、イソロイシン（Ｉｌｅ）、スレオニン（Ｔｈｒ）又はアスパラギン酸（Ａｓｐ）であり、
（ｌ）Ｘａａ１５はセリン（Ｓｅｒ）又はアスパラギン（Ａｓｎ）であり、
（ｍ）Ｘａａ１６はアラニン（Ａｌａ）、バリン（Ｖａｌ）又はアスパラギン（Ａｓｎ)であり、
（ｎ）Ｘａａ１７はアルギニン（Ａｒｇ）又はグルタミン（Ｇｌｎ）であり、
（ｏ）Ｘａａ１８はアルギニン（Ａｒｇ）又はリジン（Ｌｙｓ）であり、
（ｐ）Ｘａａ１９はリジン（Ｌｙｓ）又はアスパラギン（Ａｓｎ）であり、
（ｑ）Ｘａａ２０はロイシン（Ｌｅｕ）、バリン（Ｖａｌ）、スレオニン（Ｔｈｒ）、メチオニン（Ｍｅｔ）又はプロリン（Ｐｒｏ）であり、
（ｒ）Ｘａａ２１はセリン（Ｓｅｒ）又はアスパラギン（Ａｓｎ）であり、
（ｓ）Ｘａａ２２はアラニン（Ａｌａ）又はグリシン（Ｇｌｙ）であり、
（ｔ）Ｘａａ２３はグリシン（Ｇｌｙ）、バリン（Ｖａｌ）、アスパラギン酸（Ａｓｐ）、アラニン（Ａｌａ）、スレオニン（Ｔｈｒ）又はアスパラギン（Ａｓｎ）であり、
（ｕ）Ｘａａ２４はグリシン（Ｇｌｙ）、セリン（Ｓｅｒ）、バリン（Ｖａｌ）、アスパラギン酸（Ａｓｐ）、アスパラギン（Ａｓｎ）又はスレオニン（Ｔｈｒ）であり、及び
（ｖ）Ｘａａ２５はグリシン（Ｇｌｙ）又はアスパラギン酸（Ａｓｐ）である、
ポリペプチド。
【請求項１３】
内部配列Ｘａａ２  Ｘａａ３  Ｘａａ４が欠失している、請求項１２に記載の単離された免疫グロブリン重鎖ポリペプチド。
【請求項１４】
配列番号１２７〜配列番号２２７、配列番号２２９〜配列番号２３１、配列番号２３３〜配列番号２３５、配列番号２３７〜配列番号２４３又は配列番号２４５〜配列番号２５９のいずれか１つのアミノ酸配列を含む、請求項１３に記載の単離された免疫グロブリン重鎖ポリペプチド。
【請求項１５】
内部配列Ｘａａ２  Ｘａａ３  Ｘａａ４がＧｌｕ−Ｓｅｒ−Ｌｅｕである、請求項１２に記載の単離された免疫グロブリン重鎖ポリペプチド。
【請求項１６】
配列番号２２８、配列番号２３２、配列番号２３６又は配列番号２４４のアミノ酸配列を含む、請求項１５に記載の単離された免疫グロブリン重鎖ポリペプチド。
【請求項１７】
Ｘａａ５が欠失している、請求項１２に記載の単離された免疫グロブリン重鎖ポリペプチド。
【請求項１８】
配列番号２２２、配列番号２３１、配列番号２３５又は配列番号２４３のいずれか１つのアミノ酸配列を含む、請求項１７に記載の単離された免疫グロブリン重鎖ポリペプチド。
【請求項１９】
Ｘａａ５がグルタミン酸（Ｇｌｕ）である、請求項１２に記載の単離された免疫グロブリン重鎖ポリペプチド。
【請求項２０】
配列番号１２６〜配列番号２２１、配列番号２２３〜配列番号２３０、配列番号２３２〜配列番号２３４、配列番号２３６〜配列番号２４２又は配列番号２４４〜配列番号２５９のいずれか１つのアミノ酸配列を含む、請求項１９に記載の単離された免疫グロブリン重鎖ポリペプチド。
【請求項２１】
単離された免疫グロブリン軽鎖ポリペプチドであって、アミノ酸配列Ａｓｐ  Ｉｌｅ  Ｖａｌ  Ｍｅｔ  Ｔｈｒ  Ｇｌｎ  Ｓｅｒ  Ｐｒｏ  Ａｓｐ  Ｓｅｒ  Ｌｅｕ  Ａｌａ  Ｖａｌ  Ｓｅｒ  Ｌｅｕ  Ｇｌｙ  Ｇｌｕ  Ａｒｇ  Ａｌａ  Ｔｈｒ  Ｉｌｅ  Ａｓｎ  Ｃｙｓ  Ｌｙｓ  Ｓｅｒ  Ｓｅｒ  Ｇｌｎ  Ｓｅｒ  Ｖａｌ  Ｌｅｕ  Ｔｙｒ  Ｓｅｒ  Ｓｅｒ  Ａｓｎ  Ａｓｎ  Ｌｙｓ  Ａｓｎ  Ｔｙｒ  Ｌｅｕ  Ｘａａ１  Ｔｒｐ  Ｔｙｒ  Ｘａａ２  Ｘａａ３  Ｌｙｓ  Ｐｒｏ  Ｇｌｙ  Ｇｌｎ  Ｐｒｏ  Ｐｒｏ  Ｌｙｓ  Ｌｅｕ  Ｌｅｕ  Ｉｌｅ  Ｔｙｒ  Ｔｒｐ  Ａｌａ  Ｓｅｒ  Ｔｈｒ  Ａｒｇ  Ｇｌｕ  Ｘａａ４  Ｇｌｙ  Ｖａｌ  Ｐｒｏ  Ａｓｐ  Ａｒｇ  Ｐｈｅ  Ｘａａ５  Ｇｌｙ  Ｓｅｒ  Ｘａａ６  Ｓｅｒ  Ｇｌｙ  Ｔｈｒ  Ａｓｐ  Ｐｈｅ  Ｔｈｒ  Ｌｅｕ  Ｘａａ７  Ｉｌｅ  Ｘａａ８  Ｓｅｒ  Ｌｅｕ  Ｇｌｎ  Ａｌａ  Ｇｌｕ  Ａｓｐ  Ｖａｌ  Ａｌａ  Ｖａｌ  Ｔｙｒ  Ｔｙｒ  Ｃｙｓ  Ｘａａ  Ｇｌｎ  Ｔｙｒ  Ｔｙｒ  Ｘａａ１０  Ｓｅｒ  Ｐｒｏ  Ｘａａ１１  Ｔｈｒ  Ｐｈｅ  Ｇｌｙ  Ｇｌｙ  Ｇｌｙ  Ｔｈｒ  Ｌｙｓ  Ｉｌｅ  Ｇｌｕ  Ｘａａ１２  Ｌｙｓ（配列番号２６０）を含み、
（ａ）Ｘａａ１はアラニン（Ａｌａ）又はスレオニン（Ｔｈｒ）であり、
（ｂ）Ｘａａ２はグルタミン（Ｇｌｎ）又はヒスチジン（Ｈｉｓ）であり、
（ｃ）Ｘａａ３はグルタミン（Ｇｌｎ）又はヒスチジン（Ｈｉｓ）であり、
（ｄ）Ｘａａ４はセリン（Ｓｅｒ）、チロシン（Ｔｙｒ）、アスパラギン酸（Ａｓｐ）、グリシン（Ｇｌｙ）、スレオニン（Ｔｈｒ）、アスパラギン（Ａｓｎ）、リジン（Ｌｙｓ）、グルタミン酸（Ｇｌｕ）、ロイシン（Ｌｅｕ）、プロリン（Ｐｒｏ）又はバリン（Ｖａｌ）であり、
（ｅ）Ｘａａ５はセリン（Ｓｅｒ）又はアスパラギン（Ａｓｎ）であり、
（ｆ）Ｘａａ６はグリシン（Ｇｌｙ）、グルタミン酸（Ｇｌｕ）、アラニン（Ａｌａ）、アスパラギン酸（Ａｓｐ）、アスパラギン（Ａｓｎ）、セリン（Ｓｅｒ）、スレオニン（Ｔｈｒ）又はバリン（Ｖａｌ）であり、
（ｇ）Ｘａａ７はスレオニン（Ｔｈｒ）又はイソロイシン（Ｉｌｅ）であり、
（ｈ）Ｘａａ８はセリン（Ｓｅｒ）又はイソロイシン（Ｉｌｅ）であり、
（ｉ）Ｘａａ９はグルタミン（Ｇｌｎ）又はヒスチジン（Ｈｉｓ）であり、
（ｊ）Ｘａａ１０はセリン（Ｓｅｒ）、アスパラギン（Ａｓｎ）、アルギニン（Ａｒｇ）、グリシン（Ｇｌｙ）又はスレオニン（Ｔｈｒ）であり、
（ｋ）Ｘａａ１１はロイシン（Ｌｅｕ）又はイソロイシン（Ｉｌｅ）であり、及び
（ｌ）Ｘａａ１２はロイシン（Ｌｅｕ）又はバリン（Ｖａｌ）である、
ポリペプチド。
【請求項２２】
配列番号２６１〜配列番号３２８のいずれか１つのアミノ酸配列を含む、請求項２１に記載の単離された免疫グロブリン軽鎖ポリペプチド。
【請求項２３】
請求項１〜９又は１２〜２０のいずれか１項に記載の免疫グロブリン重鎖ポリペプチドをコードする、単離された核酸配列。
【請求項２４】
請求項１０、１１、２１又は２２のいずれか１項に記載の免疫グロブリン軽鎖ポリペプチドをコードする、単離された核酸配列。
【請求項２５】
請求項２３又は請求項２４に記載の単離された核酸配列を含むベクター。
【請求項２６】
請求項１〜９又は１２〜２０のいずれか１項に記載の免疫グロブリン重鎖ポリペプチド及び／又は請求項１０、１１、２１又は２２のいずれか１項に記載の免疫グロブリン軽鎖ポリペプチドを含む、Ｔ細胞免疫グロブリン及びムチンタンパク質３（ＴＩＭ−３）結合剤。
【請求項２７】
請求項１〜９又は１２〜２０のいずれか１項に記載の免疫グロブリン重鎖ポリペプチド及び請求項１０、１１、２１又は２２のいずれか１項に記載の免疫グロブリン軽鎖ポリペプチドを含む、請求項２６に記載のＴＩＭ−３結合剤。
【請求項２８】
請求項１〜９若しくは１２〜２０のいずれか１項に記載の免疫グロブリン重鎖ポリペプチド又は請求項１０、１１、２１若しくは２２のいずれか１項に記載の免疫グロブリン軽鎖ポリペプチドを含む、請求項２６に記載のＴＩＭ−３結合剤。
【請求項２９】
抗体、抗体複合体又はその抗原結合断片である、請求項２６〜２８のいずれか１項に記載のＴＩＭ−３結合剤。
【請求項３０】
Ｆ（ａｂ’）２断片、Ｆａｂ’断片、Ｆａｂ断片、Ｆｖ断片、ｓｃＦｖ断片、ｄｓＦｖ断片、ｄＡｂ断片又は一本鎖結合ポリペプチドである、請求項２９に記載のＴＩＭ−３結合剤。
【請求項３１】
請求項２６〜３０のいずれか１項に記載のＴＩＭ−３結合剤をコードする単離された核酸配列。
【請求項３２】
請求項３１に記載の単離された核酸配列を含むベクター。
【請求項３３】
請求項３２に記載のベクターを含む単離された細胞。
【請求項３４】
（ａ）請求項２６〜３０のいずれか１項に記載のＴＩＭ−３結合剤又は請求項３２に記載のベクター及び（ｂ）医薬的に許容される担体を含む、組成物。
【請求項３５】
ＴＩＭ−３阻害に応答する、哺乳動物における病気の治療方法であって、ＴＩＭ−３阻害に応答する病気を有する哺乳動物に、請求項３４の組成物を有効量投与することを含み、それにより哺乳動物における病気が治療される、方法。
【請求項３６】
前記病気ががんである、請求項３５に記載の方法。
【請求項３７】
前記がんが、メラノーマ、腎臓細胞がん、肺がん、膀胱がん、乳がん、子宮頸がん、結腸がん、胆嚢がん、喉頭がん、肝臓がん、甲状腺がん、胃がん、唾液腺がん、前立腺がん、膵臓がん又はメルケル細胞がんである、請求項３６に記載の方法。
【請求項３８】
前記病気が感染症である、請求項３５に記載の方法。
【請求項３９】
前記感染症が、ウイルス又は細菌によって引き起こされる、請求項３８に記載の方法。
【請求項４０】
前記ウイルスが、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）、呼吸器合胞体ウイルス（ＲＳＶ）、インフルエンザウイルス、デング熱ウイルス又はＢ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ）である、請求項３９に記載の方法。
【請求項４１】
前記病気が自己免疫疾患である、請求項３５に記載の方法。
【請求項４２】
前記自己免疫疾患が、多発性硬化症、１型真性糖尿病、関節リウマチ、強皮症、クローン病、乾癬、全身性エリトマトーデス（ＳＬＥ）又は潰瘍性大腸炎である、請求項４１に記載の方法。
【請求項４３】
哺乳動物におけるＴＩＭ−３結合剤の半減期が、３０分〜４５日の間である、請求項３５〜４２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項４４】
前記ＴＩＭ−３結合剤が、約１ピコモーラー（ｐＭ）〜約１００マイクロモーラー（μＭ）の間のＫＤでＴＩＭ−３に結合する、請求項３５〜４３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項４５】
哺乳動物にＰＤ−１結合剤を投与することを、更に含む、請求項３５〜４４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項４６】
前記ＰＤ−１結合剤が、抗体、抗体複合体又はその抗原結合断片である、請求項４５に記載の方法。
【請求項４７】
哺乳動物にＬＡＧ−３結合剤を投与することを、更に含む、請求項３５〜４６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項４８】
前記ＬＡＧ−３結合剤が、抗体、抗体複合体又はその抗原結合断片である、請求項４７に記載の方法。
【請求項４９】
単離された免疫グロブリン重鎖ポリペプチドであって、配列番号３２９のアミノ酸配列からなる相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号３３０のアミノ酸配列からなるＣＤＲ２及び／又は配列番号３３１のアミノ酸配列からなるＣＤＲ３を含む、ポリペプチド。
【請求項５０】
単離された免疫グロブリン軽鎖ポリペプチドであって、配列番号３３２のアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、配列番号３３３のアミノ酸配列からなるＣＤＲ２及び／又は配列番号３３４のアミノ酸配列からなるＣＤＲ３を含む、ポリペプチド。
【請求項５１】
単離された免疫グロブリン重鎖ポリペプチドであって、配列番号３３５のアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、配列番号３３６のアミノ酸配列からなるＣＤＲ２及び／又は配列番号３３７のアミノ酸配列からなるＣＤＲ３を含む、ポリペプチド。
【請求項５２】
単離された免疫グロブリン軽鎖ポリペプチドであって、配列番号３３８のアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、配列番号３３９のアミノ酸配列からなるＣＤＲ２及び／又は配列番号３４０のアミノ酸配列からなるＣＤＲ３を含む、ポリペプチド。
【請求項５３】
請求項４９若しくは５１に記載の免疫グロブリン重鎖ポリペプチド及び／又は請求項５０若しくは５２に記載の免疫グロブリン軽鎖ポリペプチドを含む、ＴＩＭ−３結合剤。
【請求項５４】
請求項４９又は５１に記載の免疫グロブリン重鎖ポリペプチド及び請求項５０又は５２に記載の免疫グロブリン軽鎖ポリペプチドを含む、請求項５３に記載のＴＩＭ−３結合剤。
【請求項５５】
請求項４９に記載の免疫グロブリン重鎖ポリペプチド及び請求項５０に記載の免疫グロブリン軽鎖ポリペプチド、又は請求項５１に記載の免疫グロブリン重鎖ポリペプチド及び請求項５２に記載の免疫グロブリン軽鎖ポリペプチドを含む、請求項５３に記載のＴＩＭ−３結合剤。
【請求項５６】
抗体、抗体複合体又はその抗原結合断片である、請求項５３〜５５のいずれか１項に記載のＴＩＭ−３結合剤。
【請求項５７】
Ｆ（ａｂ’）２断片、Ｆａｂ’断片、Ｆａｂ断片、Ｆｖ断片、ｓｃＦｖ断片、ｄｓＦｖ断片、ｄＡｂ断片又は一本鎖結合ポリペプチドである、請求項５６に記載のＴＩＭ−３結合剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
電子的に提出された資料の参照による援用
本明細書と同時に提出され、コンピューターで読み取り可能な、以下の通り識別されるヌクレオチド／アミノ酸の配列表は、その全体が本明細書に参照により援用される：２０１６年３月３１日付け作成の「723697_ST25.TXT」という名前の369,646バイトのＡＳＣＩＩ（テキスト）ファイル１件
【背景技術】
【０００２】
Ａ型肝炎ウイルス細胞受容体２（ＨＡＶＣＲ２）としても知られるＴ細胞免疫グロブリン及びムチンドメイン−３タンパク質（ＴＩＭ−３）は、マクロファージの活性化を調節し、マウスにおける実験的な自己免疫脳脊髄炎の重症度を促進する、Ｔｈ１特異的細胞表面タンパク質である。ＴＩＭ−３は、例えば、Ｔｈ１  ＩＦＮ−γ＋細胞、Ｔｈ１７細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、単球及び腫瘍関連樹状細胞（ＤＣｓ）（例えば、Claytonら、J. Immunol., 192(2): 782-791 (2014)、Jonesら、J. Exp. Med., 205: 2763-2779 (2008)、Monneyら、Nature, 415: 536-541 (2002)、Hastingsら、Eur. J. Immunol., 39: 2492-2501 (2009)、Sekiら、Clin. Immunol., 127: 78-88 (2008)、Juら、B. J. Hepatol., 52: 322-329 (2010)、Andersonら、Science, 318: 1141-1143 (2007)、Baitschら、PLoS ONE, 7: e30852 (2012)、Ndhlovuら、Blood, 119: 3734-3743 (2012)を参照）を含む、複数の型の免疫細胞の表面に高度に発現している。ＴＩＭ−３はまた、様々な慢性的ウイルス感染（例えば、ＨＩＶ、ＨＣＶ及びＨＢＶ）及び幾つかのがんにおける「疲弊した（exhausted）」又は障害されたＣＤ８＋Ｔ細胞において高度に発現している（例えば、McMahanら、J. Clin. Invest., 120(12): 4546-4557 (2010)、Jinら、Proc Natl Acad Sci USA, 107(33): 14733-14738 (2010)、Golden-Masonら、J. Virol., 83(18): 9122-9130 (2009)、Jonesら（上記）、Fourcadeら、J. Exp. Med., 207(10): 2175-2186 (2010)、Sakuishiら、J. Exp. Med., 207(10):2187-2194 (2010)、Zhouら、Blood, 117(17): 4501-4510 (2011)、Ngiowら、Cancer Res., 71(10): 3540-3551 (2011)を参照）。
【０００３】
ＴＩＭ−３の想定されるリガンドとしては、フォスファチジルセリン（Nakayamaら、Blood, 113: 3821-3830 (2009)）、ガレクチン−９（Zhuら、Nat. Immunol., 6: 1245-1252 (2005)）、高移動度群タンパク質１（ＨＭＧＢ１）（Chibaら、Nature Immunology, 13: 832-842 (2012)）及びがん胎児性抗原細胞接着分子１（ＣＥＡＣＡＭ１）（Huangら、Nature, 517(7534): 386-90 (2015)）が挙げられる。
【０００４】
ＴＩＭ−３は、免疫応答の様々な局面を調節するよう機能する。ＴＩＭ−３及びガレクチン−９（Ｇａｌ−９）の相互作用は、細胞死を誘導し、ｉｎ  ｖｉｖｏにおけるこの相互作用の妨害は、自己免疫を悪化させ、実験モデルにおける寛容を無効にする。このことは、ＴＩＭ−３がネガティブ調節分子であることを強く示唆している。Ｔ細胞におけるその効果に反して、ＴＩＭ−３−Ｇａｌ−９相互作用は、細胞内病原体のマクロファージによるクリアランスを促進することによって、抗菌効果を示す（例えば、Sakuishiら、Trends in Immunology, 32(8): 345-349 (2011)を参照）。ｉｎ  ｖｉｖｏでは、ＴＩＭ−３の抑制が、実験的な自己免疫脳脊髄炎の病的な深刻度を促進することが示されている（Monneyら（上記）及びAnderson, A. C. and Anderson, D. E., Curr. Opin. Immunol., 18: 665-669 (2006)）。研究結果は、ＴＩＭ−３−ガレクチン−９経路の調節異常が、例えば多発性硬化症等の慢性的な自己免疫疾患において、役割を果たし得ることも示唆している（Anderson and Anderson（上記））。ＴＩＭ−３は、そのユニークな結合クレフト（cleft）を介して、フォスファチジルセリンを結合することによって、アポトーシス細胞のクリアランスを促進する（例えば、DeKruyffら、J. Immunol., 184(4):1918-1930 (2010)を参照）。
【０００５】
例えば、モノクローナル抗体の使用による等の、ＴＩＭ−３活性の阻害は、前臨床試験に基づく腫瘍に対する免疫療法として、現在調査されている（例えば、Ngiow ら、Cancer Res., 71(21): 1-5 (2011)、Guoら、Journal of Translational Medicine, 11: 215 (2013)及びNgiowら、Cancer Res., 71(21): 6567-6571 (2011)を参照）。
【０００６】
高い親和性をもってＴＩＭ−３に結合し、ＴＩＭ−３活性を効果的に中和する、ＴＩＭ−３の追加的なアンタゴニスト（例えば、抗体）についてのニ−ズがある。本発明は、そのようなＴＩＭ−３結合剤を提供する。
【発明の概要】
【０００７】
本発明は、単離された免疫グロブリン重鎖ポリペプチドであって、アミノ酸配列Ｇｌｕ  Ｖａｌ  Ｇｌｎ  Ｌｅｕ  Ｌｅｕ  Ｇｌｕ  Ｓｅｒ  Ｇｌｙ  Ｇｌｙ  Ｇｌｙ  Ｌｅｕ  Ｖａｌ  Ｇｌｎ  Ｐｒｏ  Ｇｌｙ  Ｇｌｙ  Ｓｅｒ  Ｌｅｕ  Ａｒｇ  Ｌｅｕ  Ｓｅｒ  Ｃｙｓ  Ｘａａ１  Ａｌａ  Ｘａａ２  Ｓｅｒ  Ｇｌｙ  Ｐｈｅ  Ｘａａ３  Ｘａａ４  Ｘａａ５  Ｔｈｒ  Ｐｈｅ  Ｓｅｒ  Ｘａａ６  Ｔｙｒ  Ｘａａ７  Ｍｅｔ  Ｘａａ８  Ｔｒｐ  Ｖａｌ  Ａｒｇ  Ｇｌｎ  Ａｌａ  Ｘａａ９  Ｇｌｙ  Ｌｙｓ  Ｇｌｙ  Ｌｅｕ  Ｘａａ１０  Ｔｒｐ  Ｖａｌ  Ｓｅｒ  Ｘａａ１１  Ｉｌｅ  Ｓｅｒ  Ｘａａ１２  Ｇｌｙ  Ｇｌｙ  Ｘａａ１３  Ｔｙｒ  Ｔｈｒ  Ｔｙｒ  Ｔｙｒ  Ｇｌｎ  Ａｓｐ  Ｓｅｒ  Ｖａｌ  Ｌｙｓ  Ｇｌｙ  Ａｒｇ  Ｐｈｅ  Ｔｈｒ  Ｉｌｅ  Ｓｅｒ  Ａｒｇ  Ａｓｐ  Ａｓｎ  Ｓｅｒ  Ｌｙｓ  Ａｓｎ  Ｔｈｒ  Ｌｅｕ  Ｔｙｒ  Ｌｅｕ  Ｇｌｎ  Ｍｅｔ  Ａｓｎ  Ｓｅｒ  Ｌｅｕ  Ａｒｇ  Ｘａａ１４  Ｇｌｕ  Ａｓｐ  Ｔｈｒ  Ａｌａ  Ｖａｌ  Ｔｙｒ  Ｔｙｒ  Ｃｙｓ  Ｘａａ１５  Ｓｅｒ  Ｘａａ１６  Ｘａａ１７  Ｘａａ１８  Ｘａａ１９  Ｍｅｔ  Ａｓｐ  Ｔｙｒ  Ｔｒｐ  Ｇｌｙ  Ｇｌｎ  Ｇｌｙ  Ｔｈｒ  Ｔｈｒ  Ｖａｌ  Ｔｈｒ  Ｖａｌ  Ｓｅｒ  Ｓｅｒ  Ａｌａ（配列番号１）を含み、（ａ）Ｘａａ１は欠失している（即ち、存在しない）か又はアラニン（Ａｌａ）であり、（ｂ）Ｘａａ２はアラニン（Ａｌａ）、プロリン（Ｐｒｏ）、アスパラギン酸（Ａｓｐ）、グリシン（Ｇｌｙ）、スレオニン（Ｔｈｒ）又はバリン（Ｖａｌ）であり、（ｃ）内部配列Ｘａａ３  Ｘａａ４  Ｘａａ５は欠失しているか又はＴｈｒ−Ｐｈｅ−Ｉｌｅであり、（ｄ）Ｘａａ６はセリン（Ｓｅｒ）、アスパラギン（Ａｓｎ）、アルギニン（Ａｒｇ）又はスレオニン（Ｔｈｒ）であり、（ｅ）Ｘａａ７はアスパラギン酸（Ａｓｐ）又はアラニン（Ａｌａ）であり、（ｆ）Ｘａａ８はセリン（Ｓｅｒ）又はスレオニン（Ｔｈｒ）であり、（ｇ）Ｘａａ９はプロリン（Ｐｒｏ）又はロイシン（Ｌｅｕ）であり、（ｈ）Ｘａａ１０はアスパラギン酸（Ａｓｐ）又はグルタミン酸（Ｇｌｕ）であり、（ｉ）Ｘａａ１１はスレオニン（Ｔｈｒ）又はアラニン（Ａｌａ）であり、（ｊ）Ｘａａ１２はグリシン（Ｇｌｙ）又はセリン（Ｓｅｒ）であり、（ｋ）Ｘａａ１３はセリン（Ｓｅｒ）、スレオニン（Ｔｈｒ）、アスパラギン酸（Ａｓｐ）、グリシン（Ｇｌｙ）、アスパラギン（Ａｓｎ）又はリジン（Ｌｙｓ）であり、（ｌ）Ｘａａ１４はアラニン（Ａｌａ）又はバリン（Ｖａｌ）であり、（ｍ）Ｘａａ１５はアラニン（Ａｌａ）又はスレオニン（Ｔｈｒ）であり、及び（ｎ）内部配列Ｘａａ１６  Ｘａａ１７  Ｘａａ１８  Ｘａａ１９は欠失しているか又はＰｒｏ−Ｔｙｒ−Ｔｙｒ−Ａｌａである、ポリペプチドを提供する。
【０００８】
本発明は、単離された免疫グロブリン軽鎖ポリペプチドであって、アミノ酸配列Ａｓｐ  Ｉｌｅ  Ｇｌｎ  Ｍｅｔ  Ｔｈｒ  Ｘａａ１  Ｓｅｒ  Ｐｒｏ  Ｓｅｒ  Ｓｅｒ  Ｌｅｕ  Ｓｅｒ  Ａｌａ  Ｓｅｒ  Ｖａｌ  Ｇｌｙ  Ａｓｐ  Ａｒｇ  Ｖａｌ  Ｔｈｒ  Ｉｌｅ  Ｔｈｒ  Ｃｙｓ  Ａｒｇ  Ｘａａ２  Ｓｅｒ  Ｇｌｎ  Ｓｅｒ  Ｉｌｅ  Ｘａａ３  Ｘａａ４  Ｔｙｒ  Ｌｅｕ  Ａｓｎ  Ｔｒｐ  Ｔｙｒ  Ｘａａ５  Ｇｌｎ  Ｌｙｓ  Ｘａａ６  Ｘａａ７  Ｌｙｓ  Ａｌａ  Ｐｒｏ  Ｌｙｓ  Ｌｅｕ  Ｌｅｕ  Ｘａａ８  Ｔｙｒ  Ｘａａ９  Ａｌａ  Ｓｅｒ  Ｘａａ１０  Ｌｅｕ  Ｇｌｎ  Ｓｅｒ  Ｇｌｙ  Ｖａｌ  Ｐｒｏ  Ｓｅｒ  Ａｒｇ  Ｐｈｅ  Ｓｅｒ  Ｇｌｙ  Ｓｅｒ  Ｇｌｙ  Ｓｅｒ  Ｇｌｙ  Ｔｈｒ  Ａｓｐ  Ｐｈｅ  Ｔｈｒ  Ｌｅｕ  Ｔｈｒ  Ｉｌｅ  Ｓｅｒ  Ｓｅｒ  Ｌｅｕ  Ｇｌｎ  Ｐｒｏ  Ｇｌｕ  Ａｓｐ  Ｐｈｅ  Ａｌａ  Ｘａａ１１  Ｔｙｒ  Ｔｙｒ  Ｃｙｓ  Ｇｌｎ  Ｇｌｎ  Ｘａａ１２  Ｘａａ１３  Ｘａａ１４  Ｘａａ１５  Ｐｒｏ  Ｘａａ１６  Ｔｈｒ  Ｐｈｅ  Ｇｌｙ  Ｘａａ１７  Ｇｌｙ  Ｔｈｒ  Ｌｙｓ  Ｘａａ１８  Ｇｌｕ  Ｉｌｅ  Ｌｙｓ  Ａｒｇ（配列番号４５）を含み、（ａ）Ｘａａ１はグルタミン（Ｇｌｎ）又はヒスチジン（Ｈｉｓ）であり、（ｂ）Ｘａａ２はアラニン（Ａｌａ）又はスレオニン（Ｔｈｒ）であり、（ｃ）Ｘａａ３はセリン（Ｓｅｒ）、アルギニン（Ａｒｇ）、アスパラギン（Ａｓｎ）又はスレオニン（Ｔｈｒ）であり、（ｄ）Ｘａａ４はセリン（Ｓｅｒ）、アルギニン（Ａｒｇ）、アスパラギン酸（Ａｓｐ）、スレオニン（Ｔｈｒ）又はグリシン（Ｇｌｙ）であり、（ｅ）Ｘａａ５はグルタミン（Ｇｌｎ）又はヒスチジン（Ｈｉｓ）であり、（ｆ）Ｘａａ６はプロリン（Ｐｒｏ）又はアラニン（Ａｌａ）であり、（ｇ）Ｘａａ７はグリシン（Ｇｌｙ）、リジン（Ｌｙｓ）又はアルギニン（Ａｒｇ）であり、（ｈ）Ｘａａ８はイソロイシン（Ｉｌｅ）又はメチオニン（Ｍｅｔ）であり、（ｉ）Ｘａａ９はアラニン（Ａｌａ）、グリシン（Ｇｌｙ）、アスパラギン酸（Ａｓｐ）、スレオニン（Ｔｈｒ）、セリン（Ｓｅｒ）、バリン（Ｖａｌ）又はイソロイシン（Ｉｌｅ）であり、（ｊ）Ｘａａ１０はセリン（Ｓｅｒ）又はスレオニン（Ｔｈｒ）であり、（ｋ）Ｘａａ１１はバリン（Ｖａｌ）、メチオニン（Ｍｅｔ）又はアラニン（Ａｌａ）であり、（ｌ）Ｘａａ１２はセリン（Ｓｅｒ）又はアルギニン（Ａｒｇ）であり、（ｍ）Ｘａａ１３はチロシン（Ｔｙｒ）、ヒスチジン（Ｈｉｓ）、フェニルアラニン（Ｐｈｅ）、アスパラギン酸（Ａｓｐ）、セリン（Ｓｅｒ）又はアスパラギン（Ａｓｎ）であり、（ｎ）Ｘａａ１４はセリン（Ｓｅｒ）又はアスパラギン（Ａｓｎ）であり、（ｏ）Ｘａａ１５はスレオニン（Ｔｈｒ）、セリン（Ｓｅｒ）、アラニン（Ａｌａ）又はプロリン（Ｐｒｏ）であり、（ｐ）Ｘａａ１６はロイシン（Ｌｅｕ）又はヒスチジン（Ｈｉｓ）であり、（ｑ）Ｘａａ１７はグリシン（Ｇｌｙ）、アルギニン（Ａｒｇ）又はグルタミン酸（Ｇｌｕ）であり、及び（ｒ）Ｘａａ１８はバリン（Ｖａｌ）又はロイシン（Ｌｅｕ）である、ポリペプチドを提供する。
【０００９】
本発明はまた、単離された免疫グロブリン重鎖ポリペプチドであって、アミノ酸配列Ｇｌｕ  Ｖａｌ  Ｇｌｎ  Ｘａａ１  Ｌｅｕ  Ｘａａ２  Ｘａａ３  Ｘａａ４  Ｘａａ５  Ｓｅｒ  Ｇｌｙ  Ｇｌｙ  Ｘａａ６  Ｌｅｕ  Ｘａａ７  Ｇｌｎ  Ｐｒｏ  Ｇｌｙ  Ｇｌｙ  Ｓｅｒ  Ｌｅｕ  Ａｒｇ  Ｌｅｕ  Ｘａａ８  Ｃｙｓ  Ｘａａ９  Ａｌａ  Ｓｅｒ  Ｇｌｙ  Ｐｈｅ  Ｔｈｒ  Ｐｈｅ  Ｘａａ１０  Ｘａａ１１  Ｓｅｒ  Ｔｙｒ  Ｘａａ１２  Ｍｅｔ  Ｘａ１３  Ｔｒｐ  Ｖａｌ  Ａｒｇ  Ｇｌｎ  Ａｌａ  Ｐｒｏ  Ｇｌｙ  Ｌｙｓ  Ｇｌｙ  Ｌｅｕ  Ｇｌｕ  Ｔｒｐ  Ｖａｌ  Ｓｅｒ  Ｘａａ１４  Ｉｌｅ  Ｓｅｒ  Ｇｌｙ  Ｓｅｒ  Ｇｌｙ  Ｇｌｙ  Ｘａａ１５  Ｔｈｒ  Ｔｙｒ  Ｔｙｒ  Ｘａａ１６  Ａｓｐ  Ｓｅｒ  Ｖａｌ  Ｌｙｓ  Ｇｌｙ  Ｘａａ１７  Ｐｈｅ  Ｔｈｒ  Ｉｌｅ  Ｓｅｒ  Ｘａａ１８  Ａｓｐ  Ａｓｎ  Ｓｅｒ  Ｘａａ１９  Ａｓｎ  Ｔｈｒ  Ｘａａ２０  Ｔｙｒ  Ｌｅｕ  Ｇｌｎ  Ｍｅｔ  Ａｓｎ  Ｘａａ２１  Ｌｅｕ  Ａｒｇ  Ａｌａ  Ｇｌｕ  Ａｓｐ  Ｔｈｒ  Ａｌａ  Ｖａｌ  Ｔｙｒ  Ｔｙｒ  Ｃｙｓ  Ｘａａ２２  Ｌｙｓ  Ｌｙｓ  Ｔｙｒ  Ｔｙｒ  Ｘａａ２３  Ｘａａ２４  Ｐｒｏ  Ａｌａ  Ａｓｐ  Ｔｙｒ  Ｔｒｐ  Ｘａａ２５  Ｇｌｎ  Ｇｌｙ  Ｔｈｒ  Ｌｅｕ  Ｖａｌ  Ｔｈｒ  Ｖａｌ  Ｓｅｒ  Ｓｅｒ  Ｇｌｙ（配列番号１２６）を含み、（ａ）Ｘａａ１はロイシン（Ｌｅｕ）、バリン（Ｖａｌ）又はメチオニン（Ｍｅｔ）であり、（ｂ）内部配列Ｘａａ２  Ｘａａ３  Ｘａａ４は欠失しているか又はＧｌｕ−Ｓｅｒ−Ｌｅｕであり、（ｃ）Ｘａａ５は欠失しているか又はグルタミン酸（Ｇｌｕ）であり、（ｄ）Ｘａａ６はグリシン（Ｇｌｙ）又はアスパラギン酸（Ａｓｐ）であり、（ｄ）Ｘａａ７はバリン（Ｖａｌ）又はイソロイシン（Ｉｌｅ）であり、（ｅ）Ｘａａ８はセリン（Ｓｅｒ）又はチロシン（Ｔｙｒ）であり、（ｆ）Ｘａａ９はアラニン（Ａｌａ）又はバリン（Ｖａｌ）であり、（ｇ）Ｘａａ１０はセリン（Ｓｅｒ）、アスパラギン（Ａｓｎ）、アルギニン（Ａｒｇ）、スレオニン（Ｔｈｒ）、アスパラギン酸（Ａｓｐ）又はグリシン（Ｇｌｙ）であり、（ｈ）Ｘａａ１１は欠失しているか又はグリシン（Ｇｌｙ）であり、（ｉ）Ｘａａ１２はアラニン（Ａｌａ）又はスレオニン（Ｔｈｒ）であり、（ｊ）Ｘａａ１３はセリン（Ｓｅｒ）又はアスパラギン（Ａｓｎ）であり、（ｋ）Ｘａａ１４はアラニン（Ａｌａ）、グリシン（Ｇｌｙ）、バリン（Ｖａｌ）、セリン（Ｓｅｒ）、フェニルアラニン（Ｐｈｅ）、イソロイシン（Ｉｌｅ）、スレオニン（Ｔｈｒ）又はアスパラギン酸（Ａｓｐ）であり、（ｌ）Ｘａａ１５はセリン（Ｓｅｒ）又はアスパラギン（Ａｓｎ）であり、（ｍ）Ｘａａ１６はアラニン（Ａｌａ）、バリン（Ｖａｌ）又はアスパラギン（Ａｓｎ)であり、（ｎ）Ｘａａ１７はアルギニン（Ａｒｇ）又はグルタミン（Ｇｌｎ）であり、（ｏ）Ｘａａ１８はアルギニン（Ａｒｇ）又はリジン（Ｌｙｓ）であり、（ｐ）Ｘａａ１９はリジン（Ｌｙｓ）又はアスパラギン（Ａｓｎ）であり、（ｑ）Ｘａａ２０はロイシン（Ｌｅｕ）、バリン（Ｖａｌ）、スレオニン（Ｔｈｒ）、メチオニン（Ｍｅｔ）又はプロリン（Ｐｒｏ）であり、（ｒ）Ｘａａ２１はセリン（Ｓｅｒ）又はアスパラギン（Ａｓｎ）であり、（ｓ）Ｘａａ２２はアラニン（Ａｌａ）又はグリシン（Ｇｌｙ）であり、（ｔ）Ｘａａ２３はグリシン（Ｇｌｙ）、バリン（Ｖａｌ）、アスパラギン酸（Ａｓｐ）、アラニン（Ａｌａ）、スレオニン（Ｔｈｒ）又はアスパラギン（Ａｓｎ）であり、（ｕ）Ｘａａ２４はグリシン（Ｇｌｙ）、セリン（Ｓｅｒ）、バリン（Ｖａｌ）、アスパラギン酸（Ａｓｐ）、アスパラギン（Ａｓｎ）又はスレオニン（Ｔｈｒ）であり、及び（ｖ）Ｘａａ２５はグリシン（Ｇｌｙ）又はアスパラギン酸（Ａｓｐ）である、ポリペプチドを提供する。
【００１０】
本発明はまた、単離された免疫グロブリン軽鎖ポリペプチドであって、アミノ酸配列Ａｓｐ  Ｉｌｅ  Ｖａｌ  Ｍｅｔ  Ｔｈｒ  Ｇｌｎ  Ｓｅｒ  Ｐｒｏ  Ａｓｐ  Ｓｅｒ  Ｌｅｕ  Ａｌａ  Ｖａｌ  Ｓｅｒ  Ｌｅｕ  Ｇｌｙ  Ｇｌｕ  Ａｒｇ  Ａｌａ  Ｔｈｒ  Ｉｌｅ  Ａｓｎ  Ｃｙｓ  Ｌｙｓ  Ｓｅｒ  Ｓｅｒ  Ｇｌｎ  Ｓｅｒ  Ｖａｌ  Ｌｅｕ  Ｔｙｒ  Ｓｅｒ  Ｓｅｒ  Ａｓｎ  Ａｓｎ  Ｌｙｓ  Ａｓｎ  Ｔｙｒ  Ｌｅｕ  Ｘａａ１  Ｔｒｐ  Ｔｙｒ  Ｘａａ２  Ｘａａ３  Ｌｙｓ  Ｐｒｏ  Ｇｌｙ  Ｇｌｎ  Ｐｒｏ  Ｐｒｏ  Ｌｙｓ  Ｌｅｕ  Ｌｅｕ  Ｉｌｅ  Ｔｙｒ  Ｔｒｐ  Ａｌａ  Ｓｅｒ  Ｔｈｒ  Ａｒｇ  Ｇｌｕ  Ｘａａ４  Ｇｌｙ  Ｖａｌ  Ｐｒｏ  Ａｓｐ  Ａｒｇ  Ｐｈｅ  Ｘａａ５  Ｇｌｙ  Ｓｅｒ  Ｘａａ６  Ｓｅｒ  Ｇｌｙ  Ｔｈｒ  Ａｓｐ  Ｐｈｅ  Ｔｈｒ  Ｌｅｕ  Ｘａａ７  Ｉｌｅ  Ｘａａ８  Ｓｅｒ  Ｌｅｕ  Ｇｌｎ  Ａｌａ  Ｇｌｕ  Ａｓｐ  Ｖａｌ  Ａｌａ  Ｖａｌ  Ｔｙｒ  Ｔｙｒ  Ｃｙｓ  Ｘａａ  Ｇｌｎ  Ｔｙｒ  Ｔｙｒ  Ｘａａ１０  Ｓｅｒ  Ｐｒｏ  Ｘａａ１１  Ｔｈｒ  Ｐｈｅ  Ｇｌｙ  Ｇｌｙ  Ｇｌｙ  Ｔｈｒ  Ｌｙｓ  Ｉｌｅ  Ｇｌｕ  Ｘａａ１２  Ｌｙｓ（配列番号２６０）を含み、（ａ）Ｘａａ１はアラニン（Ａｌａ）又はスレオニン（Ｔｈｒ）であり、（ｂ）Ｘａａ２はグルタミン（Ｇｌｎ）又はヒスチジン（Ｈｉｓ）であり、（ｃ）Ｘａａ３はグルタミン（Ｇｌｎ）又はヒスチジン（Ｈｉｓ）であり、（ｄ）Ｘａａ４はセリン（Ｓｅｒ）、チロシン（Ｔｙｒ）、アスパラギン酸（Ａｓｐ）、グリシン（Ｇｌｙ）、スレオニン（Ｔｈｒ）、アスパラギン（Ａｓｎ）、リジン（Ｌｙｓ）、グルタミン酸（Ｇｌｕ）、ロイシン（Ｌｅｕ）、プロリン（Ｐｒｏ）又はバリン（Ｖａｌ）であり、（ｅ）Ｘａａ５はセリン（Ｓｅｒ）又はアスパラギン（Ａｓｎ）であり、（ｆ）Ｘａａ６はグリシン（Ｇｌｙ）、グルタミン酸（Ｇｌｕ）、アラニン（Ａｌａ）、アスパラギン酸（Ａｓｐ）、アスパラギン（Ａｓｎ）、セリン（Ｓｅｒ）、スレオニン（Ｔｈｒ）又はバリン（Ｖａｌ）であり、（ｇ）Ｘａａ７はスレオニン（Ｔｈｒ）又はイソロイシン（Ｉｌｅ）であり、（ｈ）Ｘａａ８はセリン（Ｓｅｒ）又はイソロイシン（Ｉｌｅ）であり、（ｉ）Ｘａａ９はグルタミン（Ｇｌｎ）又はヒスチジン（Ｈｉｓ）であり、（ｊ）Ｘａａ１０はセリン（Ｓｅｒ）、アスパラギン（Ａｓｎ）、アルギニン（Ａｒｇ）、グリシン（Ｇｌｙ）又はスレオニン（Ｔｈｒ）であり、（ｋ）Ｘａａ１１はロイシン（Ｌｅｕ）又はイソロイシン（Ｉｌｅ）であり、及び（ｌ）Ｘａａ１２はロイシン（Ｌｅｕ）又はバリン（Ｖａｌ）である、ポリペプチドを提供する。
【００１１】
また、本発明は、前記免疫グロブリン・ポリペプチドをコードする、単離又は精製された核酸配列、そのような核酸配列を含むベクター、前記免疫グロブリン・ポリペプチドを含むＴＩＭ−３結合剤、そのようなＴＩＭ−３結合剤をコードする核酸配列、そのような核酸配列を含むベクター、そのようなベクターを含む単離された細胞、医薬的に許容される担体を含み、そのようなＴＩＭ−３結合剤又はそのようなベクターを含む、組成物、及び哺乳動物にそのような組成物を有効量投与することによって、哺乳動物におけるがん、感染症又は自己免疫疾患を治療する方法を提供する。
【図面の簡単な説明】
【００１２】
【図１】図１Ａは、実施例２に記載された混合リンパ球反応において、リード抗ＴＩＭ−３抗体によって、ＩＬ−２分泌が誘導されることを実証する実験結果を表わすグラフである。図１Ｂは、実施例２に記載された活性化ＣＤ４＋Ｔ細胞において、リード抗ＴＩＭ−３抗体によってＩＬ−２分泌が誘導されることを実証する実験結果を表わすグラフである。図１Ｃは、実施例２に記載された混合リンパ球反応において、リード抗ＴＩＭ−３抗体を抗ＰＤ−１抗体と組み合わせたことにより、ＩＬ−２分泌が誘導されることを実証する実験結果を表わすグラフである。図１Ｄは、実施例２に記載された活性化ＣＤ４＋Ｔ細胞において、リード抗ＴＩＭ−３抗体を抗ＰＤ−１抗体と組み合わせたことにより、ＩＬ−２分泌が誘導されることを実証する実験結果を表わすグラフである。
【図２】図２Ａは、実施例３に記載されたＭＣ３８同系腫瘍モデルにおける、腫瘍体積へのＰＢＳ処置の効果を実証する実験結果を表わすグラフである。矢印は、投与日を示す。図２Ｂは、実施例３に記載されたＭＣ３８同系腫瘍モデルにおける、腫瘍体積への抗ＴＩＭ−３抗体治療の効果を実証する実験結果を表わすグラフである。矢印は、投与日を示す。図２Ｃは、実施例３に記載されたＭＣ３８同系腫瘍モデルにおける、腫瘍体積への抗ＰＤ−１抗体治療の効果を実証する実験結果を表わすグラフである。矢印は、投与日を示す。図２Ｄは、実施例３に記載されたＭＣ３８同系腫瘍モデルにおける、腫瘍体積への抗ＴＩＭ−３抗体を抗ＰＤ−１抗体と組み合わせた治療の効果を実証する実験結果を表わすグラフである。矢印は、投与日を示す。
【図３】図３は、実施例４に記載されたＭＣ３８同系腫瘍モデルにおける、腫瘍体積への、様々なアイソタイプのサロゲート抗ＴＩＭ−３及び抗ＰＤ−１抗体の効果を実証する実験結果を表わすグラフである。矢印は、投与日を示す。
【発明を実施するための形態】
【００１３】
発明の詳細な説明
本発明は、単離された免疫グロブリン重鎖ポリペプチド及び／又は単離された免疫グロブリン軽鎖ポリペプチド、又はその断片(例えば、抗原結合断片)を提供する。本明細書で使用される場合、用語「免疫グロブリン」又は「抗体」は、脊椎動物の血液又はその他の体液においてみられるタンパク質を指し、それは、例えば、細菌及びウイルス等の外来の異物を見つけ出し、中和する免疫システムによって用いられる。該ポリペプチドは、天然環境から取り出されることにおいて、「単離」される。好ましい実施形態においては、免疫グロブリン又は抗体は、少なくとも１つの相補性決定領域（ＣＤＲ）を含むタンパク質である。該ＣＤＲは、抗体の抗原結合を担う「超可変領域」を形成する（更に以下において検討する）。免疫グロブリン全体は、典型的には４本のポリペプチド：２コピーの同一な重（Ｈ）鎖ポリペプチド及び２コピーの同一な軽（Ｌ）鎖ポリペプチドからなる。各重鎖は１つのＮ末端可変（ＶＨ）領域及び３つのＣ末端定常（ＣＨ１、ＣＨ２及びＣＨ３）領域を含有し、各軽鎖は１つのＮ末端可変（ＶＬ）領域及び１つのＣ末端定常（ＣＬ）領域を含有する。抗体の軽鎖は、それらの定常ドメインのアミノ酸配列に基づいて、２つの異なる型のカッパ（κ）又はラムダ（λ）のいずれか一方に割り当てられ得る。典型的な免疫グロブリンにおいては、各軽鎖は重鎖とジスルフィド結合によって結びつき、２本の該重鎖は互いにジスルフィド結合によって結びついている。軽鎖の可変領域は、該重鎖の可変領域と整列し、軽鎖の定常領域は、重鎖の最初の定常領域と整列する。重鎖の残りの定常領域は互いに整列する。
【００１４】
軽鎖及び重鎖の各組の可変領域は、抗体の抗原結合部位を形成する。ＶＨ及びＶＬ領域は、４つのフレームワーク（ＦＷ又はＦＲ）領域を含む各領域と、同じ一般的構造を有する。本明細書において用いられる場合、用語「フレームワーク領域」は、超可変又は相補性決定領域（ＣＤＲｓ）の間に位置する、可変領域内部の比較的保存されたアミノ酸配列を指す。各可変ドメインには４つのフレームワーク領域があり、ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３及びＦＲ４と名付けられている。フレームワーク領域は、可変領域の構造フレームワークを提供するβシートを形成する（例えば、C.A. Janewayら編、Immunobiology, 5th Ed., Garland Publishing, New York, NY (2001)を参照）。
【００１５】
フレームワーク領域は、３つの相補性決定領域（ＣＤＲｓ）によって接続されている。上記のように、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３として知られる３つのＣＤＲは、抗体の「超可変領域」を形成し、抗原結合を担う。ＣＤＲは、フレームワーク領域によって形成されるβシート構造を接続し、いくつかの例においては、その一部を含むループを形成する。軽鎖及び重鎖の定常領域が、抗原に対する抗体の結合に直接関与しない一方で、定常領域は可変領域の配置に影響を与え得る。定常領域はまた、例えば、エフェクター分子や細胞との相互作用を介した、抗体依存性補体媒介性溶解又は抗体依存性細胞毒性に関与する等の、様々なエフェクター機能も示す。
【００１６】
本発明の単離された免疫グロブリン重鎖ポリペプチド及び単離された免疫グロブリン軽鎖ポリペプチドは、望ましくは、Ｔ細胞免疫グロブリン及びムチンタンパク質３（ＴＩＭ−３）に結合する。ＴＩＭ−３は、６０ｋＤａの１型膜貫通タンパク質であり、３つのドメイン：Ｎ末端Ｉｇ可変（ＩｇＶ）様ドメイン、中心Ｓｅｒ／Ｔｈｒリッチ・ムチンドメイン及び短い細胞内テイルを有する膜貫通ドメインからなる（例えば、Kane, L.P., Journal of Immunology, 184(6): 2743-2749 (2010)を参照）。ＴＩＭ−３は、最初、最終的に分化したＴｈ１細胞において同定され、Ｔ細胞のアポトーシスを誘導することによって、Ｔ細胞による応答をネガティブに調節する（例えば、Hastingsら、Eur. J. Immunol., 39(9): 2492-2501 (2009)を参照）。ＴＩＭ−３はまた、活性化したＴｈ１７及びＴｃ１細胞において発現し、ＣＤ４＋Ｔ細胞及びＣＤ８＋Ｔ細胞におけるＴｉｍ−３発現の調節異常は、幾つかの自己免疫疾患、ウイルス感染及びがんと関連する（例えば、Liberalら、Hepatology, 56(2): 677-686 (2012)、Wuら、Eur. J. Immunol., 42(5): 1180-1191 (2012)、Anderson, A.C., Curr. Opin. Immunol., 24(2): 213-216 (2012)、及びHanら、Frontiers in Immunology, 4: 449 (2013)を参照）。
【００１７】
本発明の単離された免疫グロブリン重鎖ポリペプチド及び本発明の単離された免疫グロブリン軽鎖ポリペプチドは、ＴＩＭ−３と他の抗原に結合する剤を形成することができ、結果として、「二重反応性」結合剤（例えば、二重反応性抗体）となる。例えば、該剤はＴＩＭ−３、及び、例えば、プログラムド・デス１（programmed death 1：ＰＤ−１）及び／又はリンパ球活性化遺伝子３タンパク質（ＬＡＧ−３）等の、免疫システムの別のネガティブ調節因子に結合し得る。
【００１８】
ＴＩＭ−３に結合する幾つかの他の抗体及びその構成要素は、当該技術分野において公知である（例えば、米国特許第8,101,176号、米国特許第8,552,156号及び米国特許第8,841,418号を参照）。抗ＴＩＭ−３抗体はまた、例えば、アブカム（Cambridge, MA）及びＲ＆Ｄシステムズ社（Minneapolis, MN）等の販売元からも市販されている。
【００１９】
本発明は、免疫グロブリン重鎖ポリペプチドであって、アミノ酸配列Ｇｌｕ  Ｖａｌ  Ｇｌｎ  Ｌｅｕ  Ｌｅｕ  Ｇｌｕ  Ｓｅｒ  Ｇｌｙ  Ｇｌｙ  Ｇｌｙ  Ｌｅｕ  Ｖａｌ  Ｇｌｎ  Ｐｒｏ  Ｇｌｙ  Ｇｌｙ  Ｓｅｒ  Ｌｅｕ  Ａｒｇ  Ｌｅｕ  Ｓｅｒ  Ｃｙｓ  Ｘａａ１  Ａｌａ  Ｘａａ２  Ｓｅｒ  Ｇｌｙ  Ｐｈｅ  Ｘａａ３  Ｘａａ４  Ｘａａ５  Ｔｈｒ  Ｐｈｅ  Ｓｅｒ  Ｘａａ６  Ｔｙｒ  Ｘａａ７  Ｍｅｔ  Ｘａａ８  Ｔｒｐ  Ｖａｌ  Ａｒｇ  Ｇｌｎ  Ａｌａ  Ｘａａ９  Ｇｌｙ  Ｌｙｓ  Ｇｌｙ  Ｌｅｕ  Ｘａａ１０  Ｔｒｐ  Ｖａｌ  Ｓｅｒ  Ｘａａ１１  Ｉｌｅ  Ｓｅｒ  Ｘａａ１２  Ｇｌｙ  Ｇｌｙ  Ｘａａ１３  Ｔｙｒ  Ｔｈｒ  Ｔｙｒ  Ｔｙｒ  Ｇｌｎ  Ａｓｐ  Ｓｅｒ  Ｖａｌ  Ｌｙｓ  Ｇｌｙ  Ａｒｇ  Ｐｈｅ  Ｔｈｒ  Ｉｌｅ  Ｓｅｒ  Ａｒｇ  Ａｓｐ  Ａｓｎ  Ｓｅｒ  Ｌｙｓ  Ａｓｎ  Ｔｈｒ  Ｌｅｕ  Ｔｙｒ  Ｌｅｕ  Ｇｌｎ  Ｍｅｔ  Ａｓｎ  Ｓｅｒ  Ｌｅｕ  Ａｒｇ  Ｘａａ１４  Ｇｌｕ  Ａｓｐ  Ｔｈｒ  Ａｌａ  Ｖａｌ  Ｔｙｒ  Ｔｙｒ  Ｃｙｓ  Ｘａａ１５  Ｓｅｒ  Ｘａａ１６  Ｘａａ１７  Ｘａａ１８  Ｘａａ１９  Ｍｅｔ  Ａｓｐ  Ｔｙｒ  Ｔｒｐ  Ｇｌｙ  Ｇｌｎ  Ｇｌｙ  Ｔｈｒ  Ｔｈｒ  Ｖａｌ  Ｔｈｒ  Ｖａｌ  Ｓｅｒ  Ｓｅｒ  Ａｌａ（配列番号１）を含み、それからなり又は本質的にそれからなり、（ａ）Ｘａａ１は欠失しているか又はアラニン（Ａｌａ）であり、（ｂ）Ｘａａ２はアラニン（Ａｌａ）、プロリン（Ｐｒｏ）、アスパラギン酸（Ａｓｐ）、グリシン（Ｇｌｙ）、スレオニン（Ｔｈｒ）又はバリン（Ｖａｌ）であり、（ｃ）内部配列Ｘａａ３  Ｘａａ４  Ｘａａ５は欠失しているか又はＴｈｒ−Ｐｈｅ−Ｉｌｅであり、（ｄ）Ｘａａ６はセリン（Ｓｅｒ）、アスパラギン（Ａｓｎ）、アルギニン（Ａｒｇ）又はスレオニン（Ｔｈｒ）であり、（ｅ）Ｘａａ７はアスパラギン酸（Ａｓｐ）又はアラニン（Ａｌａ）であり、（ｆ）Ｘａａ８はセリン（Ｓｅｒ）又はスレオニン（Ｔｈｒ）であり、（ｇ）Ｘａａ９はプロリン（Ｐｒｏ）又はロイシン（Ｌｅｕ）であり、（ｈ）Ｘａａ１０はアスパラギン酸（Ａｓｐ）又はグルタミン酸（Ｇｌｕ）であり、（ｉ）Ｘａａ１１はスレオニン（Ｔｈｒ）又はアラニン（Ａｌａ）であり、（ｊ）Ｘａａ１２はグリシン（Ｇｌｙ）又はセリン（Ｓｅｒ）であり、（ｋ）Ｘａａ１３はセリン（Ｓｅｒ）、スレオニン（Ｔｈｒ）、アスパラギン酸（Ａｓｐ）、グリシン（Ｇｌｙ）、アスパラギン（Ａｓｎ）又はリジン（Ｌｙｓ）であり、（ｌ）Ｘａａ１４はアラニン（Ａｌａ）又はバリン（Ｖａｌ）であり、（ｍ）Ｘａａ１５はアラニン（Ａｌａ）又はスレオニン（Ｔｈｒ）であり、及び（ｎ）内部配列Ｘａａ１６  Ｘａａ１７  Ｘａａ１８  Ｘａａ１９は欠失しているか又はＰｒｏ−Ｔｙｒ−Ｔｙｒ−Ａｌａである、ポリペプチドを提供する。
【００２０】
本発明の重鎖ポリペプチドは、任意の好適な組合せで、前記アミノ酸置換及びアミノ酸の欠失のいずれか１つを含む配列番号１のアミノ酸配列を含み得、それからなり得又は本質的にそれからなり得る。一実施形態においては、該免疫グロブリン重鎖ポリペプチドは、配列番号２、配列番号３、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、配列番号９、配列番号１０、配列番号１１、配列番号１２、配列番号１３、配列番号１４、配列番号１５、配列番号１６、配列番号１７、配列番号１８、配列番号１９、配列番号２０、配列番号２１、配列番号２２、配列番号２３、配列番号２４、配列番号２５、配列番号２６、配列番号２７、配列番号２８、配列番号２９、配列番号３０、配列番号３１、配列番号３２、配列番号３３、配列番号３４、配列番号３５、配列番号３６、配列番号３７、配列番号３８、配列番号３９、配列番号４０、配列番号４１、配列番号４２、配列番号４３及び配列番号４４のいずれか１つのアミノ酸配列を含むか、それからなるか又は本質的にそれからなる。
【００２１】
本発明はまた、免疫グロブリン重鎖ポリペプチドであって、アミノ酸配列Ｇｌｕ  Ｖａｌ  Ｇｌｎ  Ｘａａ１  Ｌｅｕ  Ｘａａ２  Ｘａａ３  Ｘａａ４  Ｘａａ５  Ｓｅｒ  Ｇｌｙ  Ｇｌｙ  Ｘａａ６  Ｌｅｕ  Ｘａａ７  Ｇｌｎ  Ｐｒｏ  Ｇｌｙ  Ｇｌｙ  Ｓｅｒ  Ｌｅｕ  Ａｒｇ  Ｌｅｕ  Ｘａａ８  Ｃｙｓ  Ｘａａ９  Ａｌａ  Ｓｅｒ  Ｇｌｙ  Ｐｈｅ  Ｔｈｒ  Ｐｈｅ  Ｘａａ１０  Ｘａａ１１  Ｓｅｒ  Ｔｙｒ  Ｘａａ１２  Ｍｅｔ  Ｘａ１３  Ｔｒｐ  Ｖａｌ  Ａｒｇ  Ｇｌｎ  Ａｌａ  Ｐｒｏ  Ｇｌｙ  Ｌｙｓ  Ｇｌｙ  Ｌｅｕ  Ｇｌｕ  Ｔｒｐ  Ｖａｌ  Ｓｅｒ  Ｘａａ１４  Ｉｌｅ  Ｓｅｒ  Ｇｌｙ  Ｓｅｒ  Ｇｌｙ  Ｇｌｙ  Ｘａａ１５  Ｔｈｒ  Ｔｙｒ  Ｔｙｒ  Ｘａａ１６  Ａｓｐ  Ｓｅｒ  Ｖａｌ  Ｌｙｓ  Ｇｌｙ  Ｘａａ１７  Ｐｈｅ  Ｔｈｒ  Ｉｌｅ  Ｓｅｒ  Ｘａａ１８  Ａｓｐ  Ａｓｎ  Ｓｅｒ  Ｘａａ１９  Ａｓｎ  Ｔｈｒ  Ｘａａ２０  Ｔｙｒ  Ｌｅｕ  Ｇｌｎ  Ｍｅｔ  Ａｓｎ  Ｘａａ２１  Ｌｅｕ  Ａｒｇ  Ａｌａ  Ｇｌｕ  Ａｓｐ  Ｔｈｒ  Ａｌａ  Ｖａｌ  Ｔｙｒ  Ｔｙｒ  Ｃｙｓ  Ｘａａ２２  Ｌｙｓ  Ｌｙｓ  Ｔｙｒ  Ｔｙｒ  Ｘａａ２３  Ｘａａ２４  Ｐｒｏ  Ａｌａ  Ａｓｐ  Ｔｙｒ  Ｔｒｐ  Ｘａａ２５  Ｇｌｎ  Ｇｌｙ  Ｔｈｒ  Ｌｅｕ  Ｖａｌ  Ｔｈｒ  Ｖａｌ  Ｓｅｒ  Ｓｅｒ  Ｇｌｙ（配列番号１２６）を含み、それからなり又は本質的にそれからなり、（ａ）Ｘａａ１はロイシン（Ｌｅｕ）、バリン（Ｖａｌ）又はメチオニン（Ｍｅｔ）であり、（ｂ）内部配列Ｘａａ２  Ｘａａ３  Ｘａａ４は欠失しているか又はＧｌｕ−Ｓｅｒ−Ｌｅｕであり、（ｃ）Ｘａａ５は欠失しているか又はグルタミン酸（Ｇｌｕ）であり、（ｄ）Ｘａａ６はグリシン（Ｇｌｙ）又はアスパラギン酸（Ａｓｐ）であり、（ｄ）Ｘａａ７はバリン（Ｖａｌ）又はイソロイシン（Ｉｌｅ）であり、（ｅ）Ｘａａ８はセリン（Ｓｅｒ）又はチロシン（Ｔｙｒ）であり、（ｆ）Ｘａａ９はアラニン（Ａｌａ）又はバリン（Ｖａｌ）であり、（ｇ）Ｘａａ１０はセリン（Ｓｅｒ）、アスパラギン（Ａｓｎ）、アルギニン（Ａｒｇ）、スレオニン（Ｔｈｒ）、アスパラギン酸（Ａｓｐ）又はグリシン（Ｇｌｙ）であり、（ｈ）Ｘａａ１１は欠失しているか又はグリシン（Ｇｌｙ）であり、（ｉ）Ｘａａ１２はアラニン（Ａｌａ）又はスレオニン（Ｔｈｒ）であり、（ｊ）Ｘａａ１３はセリン（Ｓｅｒ）又はアスパラギン（Ａｓｎ）であり、（ｋ）Ｘａａ１４はアラニン（Ａｌａ）、グリシン（Ｇｌｙ）、バリン（Ｖａｌ）、セリン（Ｓｅｒ）、フェニルアラニン（Ｐｈｅ）、イソロイシン（Ｉｌｅ）、スレオニン（Ｔｈｒ）又はアスパラギン酸（Ａｓｐ）であり、（ｌ）Ｘａａ１５はセリン（Ｓｅｒ）又はアスパラギン（Ａｓｎ）であり、（ｍ）Ｘａａ１６はアラニン（Ａｌａ）、バリン（Ｖａｌ）又はアスパラギン（Ａｓｎ)であり、（ｎ）Ｘａａ１７はアルギニン（Ａｒｇ）又はグルタミン（Ｇｌｎ）であり、（ｏ）Ｘａａ１８はアルギニン（Ａｒｇ）又はリジン（Ｌｙｓ）であり、（ｐ）Ｘａａ１９はリジン（Ｌｙｓ）又はアスパラギン（Ａｓｎ）であり、（ｑ）Ｘａａ２０はロイシン（Ｌｅｕ）、バリン（Ｖａｌ）、スレオニン（Ｔｈｒ）、メチオニン（Ｍｅｔ）又はプロリン（Ｐｒｏ）であり、（ｒ）Ｘａａ２１はセリン（Ｓｅｒ）又はアスパラギン（Ａｓｎ）であり、（ｓ）Ｘａａ２２はアラニン（Ａｌａ）又はグリシン（Ｇｌｙ）であり、（ｔ）Ｘａａ２３はグリシン（Ｇｌｙ）、バリン（Ｖａｌ）、アスパラギン酸（Ａｓｐ）、アラニン（Ａｌａ）、スレオニン（Ｔｈｒ）又はアスパラギン（Ａｓｎ）であり、（ｕ）Ｘａａ２４はグリシン（Ｇｌｙ）、セリン（Ｓｅｒ）、バリン（Ｖａｌ）、アスパラギン酸（Ａｓｐ）、アスパラギン（Ａｓｎ）又はスレオニン（Ｔｈｒ）であり、及び（ｖ）Ｘａａ２５はグリシン（Ｇｌｙ）又はアスパラギン酸（Ａｓｐ）である、ポリペプチドを提供する。
【００２２】
本発明の重鎖ポリペプチドは、任意の好適な組合せで、前記アミノ酸置換及びアミノ酸の欠失の１つを含む配列番号１２６のアミノ酸配列を含み得、それからなり得又は本質的にそれからなり得る。一実施形態においては、該免疫グロブリン重鎖ポリペプチドは、配列番号１２７、配列番号１２８、配列番号１２９、配列番号１３０、配列番号１３１、配列番号１３２、配列番号１３３、配列番号１３４、配列番号１３５、配列番号１３６、配列番号１３７、配列番号１３８、配列番号１３９、配列番号１４０、配列番号１４１、配列番号１４２、配列番号１４３、配列番号１４４、配列番号１４５、配列番号１４６、配列番号１４７、配列番号１４８、配列番号１４９、配列番号１５０、配列番号１５１、配列番号１５２、配列番号１５３、配列番号１５４、配列番号１５５、配列番号１５６、配列番号１５７、配列番号１５８、配列番号１５９、配列番号１６０、配列番号１６１、配列番号１６２、配列番号１６３、配列番号１６４、配列番号１６５、配列番号１６６、配列番号１６７、配列番号１６８、配列番号１６９、配列番号１７０、配列番号１７１、配列番号１７２、配列番号１７３、配列番号１７４、配列番号１７５、配列番号１７６、配列番号１７７、配列番号１７８、配列番号１７９、配列番号１８０、配列番号１８１、配列番号１８２、配列番号１８３、配列番号１８４、配列番号１８５、配列番号１８６、配列番号１８７、配列番号１８８、配列番号１８９、配列番号１９０、配列番号１９１、配列番号１９２、配列番号１９３、配列番号１９４、配列番号１９５、配列番号１９６、配列番号１９７、配列番号１９８、配列番号１９９、配列番号２００、配列番号２０１、配列番号２０２、配列番号２０３、配列番号２０４、配列番号２０５、配列番号２０６、配列番号２０７、配列番号２０８、配列番号２０９、配列番号２１０、配列番号２１１、配列番号２１２、配列番号２１３、配列番号２１４、配列番号２１５、配列番号２１６、配列番号２１７、配列番号２１８、配列番号２１９、配列番号２２０、配列番号２２１、配列番号２２２、配列番号２２３、配列番号２２４、配列番号２２５、配列番号２２６、配列番号２２７、配列番号２２８、配列番号２２９、配列番号２３０、配列番号２３１、配列番号２３２、配列番号２３３、配列番号２３４、配列番号２３５、配列番号２３６、配列番号２３７、配列番号２３８、配列番号２３９、配列番号２４０、配列番号２４１、配列番号２４２、配列番号２４３、配列番号２４４、配列番号２４５、配列番号２４６、配列番号２４７、配列番号２４８、配列番号２４９、配列番号２５０、配列番号２５１、配列番号２５２、配列番号２５３、配列番号２５４、配列番号２５５、配列番号２５６、配列番号２５７、配列番号２５８及び配列番号２５９のいずれか１つのアミノ酸配列を含むか、それからなるか又は本質的にそれからなる。
【００２３】
本発明の免疫グロブリン重鎖ポリペプチドが、配列番号１〜配列番号４４又は配列番号１２６〜配列番号２５９のいずれか１つのアミノ酸配列から本質的になるとき、追加的な構成要素が、前記ポリペプチドに実質的に、例えば、ＴＩＭ−３に対する本発明の重鎖ポリペプチドの親和性に影響することによって、影響しない、ポリペプチドに含められ得る。そのような構成要素の例としては、例えば、精製又は単離を手助けするビオチン等のタンパク質部分、パッセンジャー変異、問題のある部位（遊離システイン、追加的なグリコシル化部位、及び脱アミド化又は異性化の頻出部位を含む）を含まない配列が挙げられる。
【００２４】
本発明の免疫グロブリン重鎖ポリペプチドが、配列番号１〜配列番号４４又は配列番号１２６〜配列番号２５９のいずれか１つのアミノ酸配列からなるとき、該ポリペプチドは任意の追加的な構成要素（即ち、本発明の免疫グロブリン重鎖ポリペプチドに内在的でない構成要素）を含まない。
【００２５】
本発明は、配列番号１〜配列番号４４又は配列番号１２６〜配列番号２５９のいずれか１つと少なくとも９０％同一（例えば、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％又は１００％同一）のアミノ酸配列を含む、単離された免疫グロブリン重鎖ポリペプチドを提供する。本明細書において記載されている、核酸配列又はアミノ酸配列の「同一性」は、所望の（interest）核酸配列又はアミノ酸配列を、比較対照となる核酸配列又はアミノ酸配列と比較することによって決定し得る。同一性の割合は、所望の配列と比較対照の配列との間で同じである（即ち、同一である）ヌクレオチド又はアミノ酸の残基数を、最も長い配列長(即ち、所望の配列と比較対照の配列のどちらかの長い方の配列長)で割ったものである。２以上の配列の間で、最適なアライメントを得るため及び同一性を計算するために、多くの数学的アルゴリズムが知られており、多くの利用可能なソフトウェア・プログラムに取り込まれている。そのようなプログラムの例としては、ＣＬＵＳＴＡＬ−Ｗ、Ｔ−Ｃｏｆｆｅｅ及びＡＬＩＧＮ（核酸配列及びアミノ酸配列のアライメント用）、ＢＬＡＳＴプログラム（例えば、ＢＬＡＳＴ２．１、ＢＬ２ＳＥＱ及びそれ以降のバージョン）及びＦＡＳＴＡプログラム（例えば、ＦＡＳＴＡ３ｘ、ＦＡＳＴＭ及びＳＳＥＡＲＣＨ）（配列アライメント及び配列類似性探索用）が挙げられる。配列アライメント・アルゴリズムはまた、例えば、Altschulら、J. Molecular Biol., 215(3): 403-410 (1990)、Beigertら、Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 106(10): 3770-3775 (2009)、Durbinら編、Biological Sequence Analysis: Probalistic Models of Proteins and Nucleic Acids, Cambridge University Press, Cambridge, UK (2009)、Soding, Bioinformatics, 21(7): 951-960 (2005)、Altschulら、Nucleic Acids Res., 25(17): 3389-3402 (1997)及びGusfield, Algorithms on Strings, Trees and Sequences, Cambridge University Press, Cambridge UK (1997)に開示されている。
【００２６】
別の実施形態においては、本発明は、免疫グロブリン軽鎖ポリペプチドであって、アミノ酸配列Ａｓｐ  Ｉｌｅ  Ｇｌｎ  Ｍｅｔ  Ｔｈｒ  Ｘａａ１  Ｓｅｒ  Ｐｒｏ  Ｓｅｒ  Ｓｅｒ  Ｌｅｕ  Ｓｅｒ  Ａｌａ  Ｓｅｒ  Ｖａｌ  Ｇｌｙ  Ａｓｐ  Ａｒｇ  Ｖａｌ  Ｔｈｒ  Ｉｌｅ  Ｔｈｒ  Ｃｙｓ  Ａｒｇ  Ｘａａ２  Ｓｅｒ  Ｇｌｎ  Ｓｅｒ  Ｉｌｅ  Ｘａａ３  Ｘａａ４  Ｔｙｒ  Ｌｅｕ  Ａｓｎ  Ｔｒｐ  Ｔｙｒ  Ｘａａ５  Ｇｌｎ  Ｌｙｓ  Ｘａａ６  Ｘａａ７  Ｌｙｓ  Ａｌａ  Ｐｒｏ  Ｌｙｓ  Ｌｅｕ  Ｌｅｕ  Ｘａａ８  Ｔｙｒ  Ｘａａ９  Ａｌａ  Ｓｅｒ  Ｘａａ１０  Ｌｅｕ  Ｇｌｎ  Ｓｅｒ  Ｇｌｙ  Ｖａｌ  Ｐｒｏ  Ｓｅｒ  Ａｒｇ  Ｐｈｅ  Ｓｅｒ  Ｇｌｙ  Ｓｅｒ  Ｇｌｙ  Ｓｅｒ  Ｇｌｙ  Ｔｈｒ  Ａｓｐ  Ｐｈｅ  Ｔｈｒ  Ｌｅｕ  Ｔｈｒ  Ｉｌｅ  Ｓｅｒ  Ｓｅｒ  Ｌｅｕ  Ｇｌｎ  Ｐｒｏ  Ｇｌｕ  Ａｓｐ  Ｐｈｅ  Ａｌａ  Ｘａａ１１  Ｔｙｒ  Ｔｙｒ  Ｃｙｓ  Ｇｌｎ  Ｇｌｎ  Ｘａａ１２  Ｘａａ１３  Ｘａａ１４  Ｘａａ１５  Ｐｒｏ  Ｘａａ１６  Ｔｈｒ  Ｐｈｅ  Ｇｌｙ  Ｘａａ１７  Ｇｌｙ  Ｔｈｒ  Ｌｙｓ  Ｘａａ１８  Ｇｌｕ  Ｉｌｅ  Ｌｙｓ  Ａｒｇ（配列番号４５）を含み、それからなり又は本質的にそれからなり、（ａ）Ｘａａ１はグルタミン（Ｇｌｎ）又はヒスチジン（Ｈｉｓ）であり、（ｂ）Ｘａａ２はアラニン（Ａｌａ）又はスレオニン（Ｔｈｒ）であり、（ｃ）Ｘａａ３はセリン（Ｓｅｒ）、アルギニン（Ａｒｇ）、アスパラギン（Ａｓｎ）又はスレオニン（Ｔｈｒ）であり、（ｄ）Ｘａａ４はセリン（Ｓｅｒ）、アルギニン（Ａｒｇ）、アスパラギン酸（Ａｓｐ）、スレオニン（Ｔｈｒ）又はグリシン（Ｇｌｙ）であり、（ｅ）Ｘａａ５はグルタミン（Ｇｌｎ）又はヒスチジン（Ｈｉｓ）であり、（ｆ）Ｘａａ６はプロリン（Ｐｒｏ）又はアラニン（Ａｌａ）であり、（ｇ）Ｘａａ７はグリシン（Ｇｌｙ）、リジン（Ｌｙｓ）又はアルギニン（Ａｒｇ）であり、（ｈ）Ｘａａ８はイソロイシン（Ｉｌｅ）又はメチオニン（Ｍｅｔ）であり、（ｉ）Ｘａａ９はアラニン（Ａｌａ）、グリシン（Ｇｌｙ）、アスパラギン酸（Ａｓｐ）、スレオニン（Ｔｈｒ）、セリン（Ｓｅｒ）、バリン（Ｖａｌ）又はイソロイシン（Ｉｌｅ）であり、（ｊ）Ｘａａ１０はセリン（Ｓｅｒ）又はスレオニン（Ｔｈｒ）であり、（ｋ）Ｘａａ１１はバリン（Ｖａｌ）、メチオニン（Ｍｅｔ）又はアラニン（Ａｌａ）であり、（ｌ）Ｘａａ１２はセリン（Ｓｅｒ）又はアルギニン（Ａｒｇ）であり、（ｍ）Ｘａａ１３はチロシン（Ｔｙｒ）、ヒスチジン（Ｈｉｓ）、フェニルアラニン（Ｐｈｅ）、アスパラギン酸（Ａｓｐ）、セリン（Ｓｅｒ）又はアスパラギン（Ａｓｎ）であり、（ｎ）Ｘａａ１４はセリン（Ｓｅｒ）又はアスパラギン（Ａｓｎ）であり、（ｏ）Ｘａａ１５はスレオニン（Ｔｈｒ）、セリン（Ｓｅｒ）、アラニン（Ａｌａ）又はプロリン（Ｐｒｏ）であり、（ｐ）Ｘａａ１６はロイシン（Ｌｅｕ）又はヒスチジン（Ｈｉｓ）であり、（ｑ）Ｘａａ１７はグリシン（Ｇｌｙ）、アルギニン（Ａｒｇ）又はグルタミン酸（Ｇｌｕ）であり、及び（ｒ）Ｘａａ１８はバリン（Ｖａｌ）又はロイシン（Ｌｅｕ）である、ポリペプチドを提供する。
【００２７】
一実施形態において、単離された免疫グロブリン軽鎖ポリペプチドは、配列番号４６、配列番号４７、配列番号４８、配列番号４９、配列番号５０、配列番号５１、配列番号５２、配列番号５３、配列番号５４、配列番号５５、配列番号５６、配列番号５７、配列番号５８、配列番号５９、配列番号６０、配列番号６１、配列番号６２、配列番号６３、配列番号６４、配列番号６５、配列番号６６、配列番号６７、配列番号６８、配列番号６９、配列番号７０、配列番号７１、配列番号７２、配列番号７３、配列番号７４、配列番号７５、配列番号７６、配列番号７７、配列番号７８、配列番号７９、配列番号８０、配列番号８１、配列番号８２、配列番号８３、配列番号８４、配列番号８５、配列番号８６、配列番号８７、配列番号８８、配列番号８９、配列番号９０、配列番号９１、配列番号９２、配列番号９３、配列番号９４、配列番号９５、配列番号９６、配列番号９７、配列番号９８、配列番号９９、配列番号１００、配列番号１０１、配列番号１０２、配列番号１０３、配列番号１０４、配列番号１０５、配列番号１０６、配列番号１０７、配列番号１０８、配列番号１０９、配列番号１１０、配列番号１１１、配列番号１１２、配列番号１１３、配列番号１１４、配列番号１１５、配列番号１１６、配列番号１１７、配列番号１１８、配列番号１１９、配列番号１２０、配列番号１２１、配列番号１２２、配列番号１２３、配列番号１２４及び配列番号１２５のいずれか１つのアミノ酸配列を含むか、それからなるか又は本質的にそれからなる。
【００２８】
本発明はまた、免疫グロブリン軽鎖ポリペプチドであって、アミノ酸配列Ａｓｐ  Ｉｌｅ  Ｖａｌ  Ｍｅｔ  Ｔｈｒ  Ｇｌｎ  Ｓｅｒ  Ｐｒｏ  Ａｓｐ  Ｓｅｒ  Ｌｅｕ  Ａｌａ  Ｖａｌ  Ｓｅｒ  Ｌｅｕ  Ｇｌｙ  Ｇｌｕ  Ａｒｇ  Ａｌａ  Ｔｈｒ  Ｉｌｅ  Ａｓｎ  Ｃｙｓ  Ｌｙｓ  Ｓｅｒ  Ｓｅｒ  Ｇｌｎ  Ｓｅｒ  Ｖａｌ  Ｌｅｕ  Ｔｙｒ  Ｓｅｒ  Ｓｅｒ  Ａｓｎ  Ａｓｎ  Ｌｙｓ  Ａｓｎ  Ｔｙｒ  Ｌｅｕ  Ｘａａ１  Ｔｒｐ  Ｔｙｒ  Ｘａａ２  Ｘａａ３  Ｌｙｓ  Ｐｒｏ  Ｇｌｙ  Ｇｌｎ  Ｐｒｏ  Ｐｒｏ  Ｌｙｓ  Ｌｅｕ  Ｌｅｕ  Ｉｌｅ  Ｔｙｒ  Ｔｒｐ  Ａｌａ  Ｓｅｒ  Ｔｈｒ  Ａｒｇ  Ｇｌｕ  Ｘａａ４  Ｇｌｙ  Ｖａｌ  Ｐｒｏ  Ａｓｐ  Ａｒｇ  Ｐｈｅ  Ｘａａ５  Ｇｌｙ  Ｓｅｒ  Ｘａａ６  Ｓｅｒ  Ｇｌｙ  Ｔｈｒ  Ａｓｐ  Ｐｈｅ  Ｔｈｒ  Ｌｅｕ  Ｘａａ７  Ｉｌｅ  Ｘａａ８  Ｓｅｒ  Ｌｅｕ  Ｇｌｎ  Ａｌａ  Ｇｌｕ  Ａｓｐ  Ｖａｌ  Ａｌａ  Ｖａｌ  Ｔｙｒ  Ｔｙｒ  Ｃｙｓ  Ｘａａ  Ｇｌｎ  Ｔｙｒ  Ｔｙｒ  Ｘａａ１０  Ｓｅｒ  Ｐｒｏ  Ｘａａ１１  Ｔｈｒ  Ｐｈｅ  Ｇｌｙ  Ｇｌｙ  Ｇｌｙ  Ｔｈｒ  Ｌｙｓ  Ｉｌｅ  Ｇｌｕ  Ｘａａ１２  Ｌｙｓ（配列番号２６０）を含み、それからなり又は本質的にそれからなり、（ａ）Ｘａａ１はアラニン（Ａｌａ）又はスレオニン（Ｔｈｒ）であり、（ｂ）Ｘａａ２はグルタミン（Ｇｌｎ）又はヒスチジン（Ｈｉｓ）であり、（ｃ）Ｘａａ３はグルタミン（Ｇｌｎ）又はヒスチジン（Ｈｉｓ）であり、（ｄ）Ｘａａ４はセリン（Ｓｅｒ）、チロシン（Ｔｙｒ）、アスパラギン酸（Ａｓｐ）、グリシン（Ｇｌｙ）、スレオニン（Ｔｈｒ）、アスパラギン（Ａｓｎ）、リジン（Ｌｙｓ）、グルタミン酸（Ｇｌｕ）、ロイシン（Ｌｅｕ）、プロリン（Ｐｒｏ）又はバリン（Ｖａｌ）であり、（ｅ）Ｘａａ５はセリン（Ｓｅｒ）又はアスパラギン（Ａｓｎ）であり、（ｆ）Ｘａａ６はグリシン（Ｇｌｙ）、グルタミン酸（Ｇｌｕ）、アラニン（Ａｌａ）、アスパラギン酸（Ａｓｐ）、アスパラギン（Ａｓｎ）、セリン（Ｓｅｒ）、スレオニン（Ｔｈｒ）又はバリン（Ｖａｌ）であり、（ｇ）Ｘａａ７はスレオニン（Ｔｈｒ）又はイソロイシン（Ｉｌｅ）であり、（ｈ）Ｘａａ８はセリン（Ｓｅｒ）又はイソロイシン（Ｉｌｅ）であり、（ｉ）Ｘａａ９はグルタミン（Ｇｌｎ）又はヒスチジン（Ｈｉｓ）であり、（ｊ）Ｘａａ１０はセリン（Ｓｅｒ）、アスパラギン（Ａｓｎ）、アルギニン（Ａｒｇ）、グリシン（Ｇｌｙ）又はスレオニン（Ｔｈｒ）であり、（ｋ）Ｘａａ１１はロイシン（Ｌｅｕ）又はイソロイシン（Ｉｌｅ）であり、及び（ｌ）Ｘａａ１２はロイシン（Ｌｅｕ）又はバリン（Ｖａｌ）である、ポリペプチドを提供する。
【００２９】
一実施形態において、単離された免疫グロブリン軽鎖ポリペプチドは、配列番号２６１、配列番号２６２、配列番号２６３、配列番号２６４、配列番号２６５、配列番号２６６、配列番号２６７、配列番号２６８、配列番号２６９、配列番号２７０、配列番号２７１、配列番号２７２、配列番号２７３、配列番号２７４、配列番号２７５、配列番号２７６、配列番号２７７、配列番号２７８、配列番号２７９、配列番号２８０、配列番号２８１、配列番号２８２、配列番号２８３、配列番号２８４、配列番号２８５、配列番号２８６、配列番号２８７、配列番号２８８、配列番号２８９、配列番号２９０、配列番号２９１、配列番号２９２、配列番号２９３、配列番号２９４、配列番号２９５、配列番号２９６、配列番号２９７、配列番号２９８、配列番号２９９、配列番号３００、配列番号３０１、配列番号３０２、配列番号３０３、配列番号３０４、配列番号３０５、配列番号３０６、配列番号３０７、配列番号３０８、配列番号３０９、配列番号３１０、配列番号３１１、配列番号３１２、配列番号３１３、配列番号３１４、配列番号３１５、配列番号３１６、配列番号３１７、配列番号３１８、配列番号３１９、配列番号３２０、配列番号３２１、配列番号３２２、配列番号３２３、配列番号３２４、配列番号３２５、配列番号３２６、配列番号３２７及び配列番号３２８のいずれか１つのアミノ酸配列を含むか、それからなるか又は本質的にそれからなる。
【００３０】
本発明の免疫グロブリン軽鎖ポリペプチドが、配列番号４５〜配列番号１２５又は配列番号２６０〜配列番号３２８のいずれか１つのアミノ酸配列から本質的になるとき、ポリペプチドに実質的に影響しない、例えば、本明細書に記載された構成要素等の、追加的な構成要素がポリペプチドに含められ得る。本発明の免疫グロブリン軽鎖ポリペプチドが、配列番号４５〜配列番号１２５又は配列番号２６０〜配列番号３２８のいずれか１つのアミノ酸配列からなるとき、該ポリペプチドは、いかなる追加的な構成要素（即ち、本発明の免疫グロブリン軽鎖ポリペプチドに内在的でない構成要素）も含まない。
【００３１】
本発明は、配列番号４５〜配列番号１２５及び配列番号２６０〜配列番号３２８のいずれか１つと、少なくとも９０％同一（例えば、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％又は１００％同一）のアミノ酸配列を含む、単離された免疫グロブリン軽鎖ポリペプチドを提供する。核酸又はアミノ酸配列の「同一性」は、本明細書に記載された方法を用いて、決定し得る。
【００３２】
上記の免疫グロブリン重鎖ポリペプチド及び／又は軽鎖ポリペプチドの１以上のアミノ酸は、異なるアミノ酸で置き換え得るか（replaced）又は置換（substituted）し得る。アミノ酸の「置き換え」又は「置換」は、ある部位又は残基の１アミノ酸の、ポリペプチド配列内部の同じ部位、又は残基での別のアミノ酸残基による置き換えを指す。
【００３３】
アミノ酸は大きく、「芳香族」又は「脂肪族」にグループ分けされる。芳香族アミノ酸は、芳香環を含む。「芳香族」アミノ酸の例としては、ヒスチジン（Ｈ又はＨｉｓ）、フェニルアラニン（Ｆ又はＰｈｅ）、チロシン（Ｙ又はＴｙｒ）及びトリプトファン（Ｗ又はＴｒｐ）が挙げられる。非芳香族アミノ酸は大きく、「脂肪族」としてグループ分けされる。「脂肪族」アミノ酸の例としては、グリシン（Ｇ又はＧｌｙ）、アラニン（Ａ又はＡｌａ）、バリン（Ｖ又はＶａｌ）、ロイシン（Ｌ又はＬｅｕ）、イソロイシン（Ｉ又はＩｌｅ）、メチオニン（Ｍ又はＭｅｔ）、セリン（Ｓ又はＳｅｒ）、スレオニン（Ｔ又はＴｈｒ）、システイン（Ｃ又はＣｙｓ）、プロリン（Ｐ又はＰｒｏ）、グルタミン酸（Ｅ又はＧｌｕ）、アスパラギン酸（Ｄ又はＡｓｐ）、アスパラギン（Ｎ又はＡｓｎ）、グルタミン（Ｑ又はＧｌｎ）、リジン（Ｋ又はＬｙｓ）及びアルギニン（Ｒ又はＡｒｇ）が挙げられる。
【００３４】
脂肪族アミノ酸は、４つのサブグループに細分類してもよい。「非極性の大きい脂肪族サブグループ」はバリン、ロイシン及びイソロイシンからなる。「弱い極性の脂肪族サブグループ」はメチオニン、セリン、スレオニン及びシステインからなる。「極性／帯電した脂肪族サブグループ」はグルタミン酸、アスパラギン酸、アスパラギン、グルタミン、リジン及びアルギニンからなる。「小さい残基サブグループ」はグリシン及びアラニンからなる。帯電した／極性アミノ酸のグループは、３つのサブグループ：リジン及びアルギニンからなる「正電荷を有するサブグループ」、グルタミン酸及びアスパラギン酸からなる「負電荷を有するサブグループ」並びにアスパラギン及びグルタミンからなる「極性サブグループ」に細分類される場合がある。
【００３５】
芳香族アミノ酸は、２つのサブグループ：ヒスチジン及びトリプトファンからなる「窒素環サブグループ」並びにフェニルアラニン及びチロシンからなる「フェニルサブグループ」に細分類される場合がある。
【００３６】
アミノ酸の置き換え（replacement）又は置換（substitution）は、保存的なもの、準保存的なもの、又は非保存的なものであり得る。「保存的なアミノ酸置換」又は「保存的な変異」という表現は、性質の共通する別のアミノ酸で、１つのアミノ酸を置き換えることを指す。個々のアミノ酸の間で共通する性質を定義する機能的な方法は、同種生物の対応するタンパク質の間での、アミノ酸変化の標準化された頻度（normalized frequencies）を分析することである（Schulz and Schirmer, Principles of Protein Structure, Springer-Verlag, New York (1979)）。そのような分析によれば、アミノ酸のグループは、グループ内のアミノ酸が互いに、優先的に交換され、それゆえ、タンパク質構造全体に与える影響が互いに最も似ているものとして定義され得る（Schulz and Schirmer（上記）を参照）。
【００３７】
保存的なアミノ酸置換の例としては、例えば、正電荷が維持され得るようにアルギニンをリジンに、及びその逆に、負電荷が維持され得るようにアスパラギン酸をグルタミン酸に、及びその逆に、自由な−ＯＨ基が維持され得るようにスレオニンをセリンに、自由な−ＮＨ２基が維持され得るようにアスパラギンをグルタミンに、というように、上述したサブグループ内でのアミノ酸の置換が挙げられる。
【００３８】
「準保存的な変異」は、上で列記した同じグループ内でのアミノ酸のアミノ酸置換を含むが、同じサブグループ内での置換を含まない。例えば、アスパラギンをアスパラギン酸に、又はリジンをアスパラギンに置換することは、同じグループ内であるが、異なるサブグループ内のアミノ酸を含む。「非保存的な変異」は異なるグループ間、例えば、トリプトファンをリジンに、又はセリンをフェニルアラニンに、等のアミノ酸置換を含む。
【００３９】
更に、上記の免疫グロブリン重鎖ポリペプチド及び／又は軽鎖ポリペプチドに、１以上のアミノ酸を挿入し得る。任意の好適なアミノ酸を、任意の数で、免疫グロブリン重鎖ポリペプチド及び／又は軽鎖ポリペプチドのアミノ酸配列に挿入し得る。この点、少なくとも１つのアミノ酸（例えば、２以上、５以上、又は１０以上のアミノ酸）であるが、２０を超えないアミノ酸（例えば、１８以下、１５以下、又は１２以下のアミノ酸）を、免疫グロブリン重鎖ポリペプチド及び／又は軽鎖ポリペプチドのアミノ酸配列に挿入し得る。幾つかの実施形態においては、１〜１０のアミノ酸（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９又は１０アミノ酸）を、免疫グロブリン重鎖ポリペプチド及び／又は軽鎖ポリペプチドのアミノ酸配列に挿入する。この点、該アミノ酸（複数可）は、任意の好適な部位において、上記の免疫グロブリン重鎖ポリペプチド及び／又は軽鎖ポリペプチドのいずれか１つに挿入し得る。例えば、該アミノ酸（複数可）は、免疫グロブリン重鎖ポリペプチド及び／又は軽鎖ポリペプチドのＣＤＲ（例えば、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２又はＣＤＲ３）に挿入され得る。
【００４０】
本発明の単離された免疫グロブリン重鎖ポリペプチド及び軽鎖ポリペプチドは、本明細書に記載された具体的なアミノ酸配列を含むポリペプチドに限定されない。免疫グロブリン重鎖ポリペプチド又は軽鎖ポリペプチドは、ＴＩＭ−３への結合に関して、上で記載した配列の免疫グロブリン重鎖ポリペプチド又は軽鎖ポリペプチドと競合する、任意の重鎖ポリペプチド又は軽鎖ポリペプチドであり得る。例えば、免疫グロブリン重鎖ポリペプチド又は軽鎖ポリペプチドは、本明細書に記載の重鎖及び軽鎖ポリペプチドによって認識される、ＴＩＭ−３の同じエピトープに結合する、任意の重鎖ポリペプチド又は軽鎖ポリペプチドであり得る。抗体の競合は、ＥＬＩＳＡ、ウェスタンブロット又は免疫組織化学法を利用する、通常のペプチド競合アッセイを用いて、分析し得る（例えば、米国特許第4,828,981号及び第8,568,992号、及びBraitbardら、Proteome Sci., 4: 12 (2006)を参照）。
【００４１】
本発明は、本明細書に記載された、１以上の本発明の単離されたアミノ酸配列を含む、本質的にそれからなる又はそれからなる、ＴＩＭ−３結合剤を提供する。「ＴＩＭ−３結合剤」は、ＴＩＭ−３タンパク質に特異的に結合する分子、好ましくはタンパク質分子を意味する。好ましくは、該ＴＩＭ−３結合剤は抗体又はその断片（例えば、抗原結合断片）である。本発明のＴＩＭ−３結合剤は、本発明の免疫グロブリン重鎖ポリペプチド及び／又は本発明の免疫グロブリン軽鎖ポリペプチドを含む、本質的にそれからなる又はそれからなる。一実施形態においては、ＴＩＭ−３結合剤は、本発明の免疫グロブリン重鎖ポリペプチド又は本発明の免疫グロブリン軽鎖ポリペプチドを含む、本質的にそれからなる又はそれからなる。別の実施形態においては、ＴＩＭ−３結合剤は、本発明の免疫グロブリン重鎖ポリペプチド及び本発明の免疫グロブリン軽鎖ポリペプチドを含む、本質的にそれからなる又はそれからなる。
【００４２】
本発明の免疫グロブリン重鎖ポリペプチド及び／又は本発明の免疫グロブリン軽鎖ポリペプチドの任意のアミノ酸残基は、アミノ酸の置き換え、挿入及び／若しくは欠失の結果、ＴＩＭ−３結合剤の生物学的活性が実質的に減退しない（例えば、促進されるか又は改善する）限り、任意の組合せで、異なるアミノ酸残基で置き換え得るか、又は欠失若しくは挿入し得る。ＴＩＭ−３結合剤の「生物学的活性」は、例えば、特定のＴＩＭ−３エピトープへの結合親和性、その受容体（複数可）へのＴＩＭ−３結合の中和又は阻害、ｉｎ  ｖｉｖｏにおけるＴＩＭ−３活性の中和又は阻害(例えば、ＩＣ５０)、薬物動態、及び交差反応性（例えば、ＴＩＭ−３タンパク質の非ヒト・ホモログ又はオルソログとの、又は、他のタンパク質若しくは組織との交差反応性)を指す。当該技術分野において認識される抗原結合剤の他の生物学的特性又は特徴は、例えば、アビディティ（avidity）、選択性、溶解性、フォールディング（folding）、免疫毒性、発現及び製剤化が挙げられる。上記の特性又は特徴は、ＥＬＩＳＡ、競合ＥＬＩＳＡ、表面プラズモン共鳴分析（ＢＩＡＣＯＲＥＴＭ）又はＫＩＮＥＸＡＴＭ、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ又はｉｎ  ｖｉｖｏでの中和アッセイ、受容体−リガンド結合アッセイ、サイトカイン又は成長因子の産生及び／又は分泌アッセイ、及びシグナル伝達及び免疫組織化学アッセイを含むが、これらに限定されない、標準的な技術を用いて観察、測定及び／又は評価することができる。
【００４３】
本明細書において使用される場合、用語「阻害」又は「中和」は、ＴＩＭ−３結合剤の活性に関して、例えば、ＴＩＭ−３の生物学的活性又はＴＩＭ−３と関連した疾患又は状態の進行又は重篤度を、実質的に拮抗し（antagonize）、妨げ（prohibit）、阻み（prevent）、抑制し（restrain）、遅くらせ（slow）、中断し（disrupt）、変更し（alter）、削除し（eliminate）、停止し（stop）又は反転する（reverse）能力を指す。本発明のＴＩＭ−３結合剤は、好ましくは、ＴＩＭ−３活性を、少なくとも約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、約９５％、約１００％又は前記値の任意の２つによって定義される範囲で、阻害するか又は中和する。
【００４４】
本発明のＴＩＭ−３結合剤は、本明細書に記載されたように、抗体そのもの又は抗体断片であり得る。用語「抗体の断片」、「抗体断片」及び「抗体の機能的な断片」等は、抗原に特異的に結合する能力を維持している抗体の１以上の断片を意味するよう、本明細書において相互に交換可能なものとして用いられる（一般には、Holligerら、Nat. Biotech., 23(9): 1126-1129 (2005)を参照）。ＴＩＭ−３結合剤は、任意のＴＩＭ−３結合抗体断片を含有し得る。該抗体断片は、望ましくは、例えば１以上のＣＤＲ、可変領域（若しくはその部分）、定常領域（若しくはその部分）又はそれらの組合せを含む。抗体断片の例としては、（ｉ）ＶＬ、ＶＨ、ＣＬ及びＣＨ１ドメインからなる１価の断片であるＦａｂ断片、（ｉｉ）ヒンジ領域でジスルフィド架橋によって結びついた２つのＦａｂ断片を含む２価の断片であるＦ（ａｂ’）２断片、（ｉｉｉ）抗体のシングルアーム（single arm）のＶＬ及びＶＨドメインからなるＦｖ断片、（ｉｖ）温和な還元条件を用いてＦ（ａｂ’）２断片のジスルフィド架橋を破壊して得られるＦａｂ’断片、（ｖ）ジスルフィドで安定化したＦｖ断片（ｄｓＦｖ）及び（ｖｉ）抗原に特異的に結合する抗体の単一な可変領域ドメイン（ＶＨ若しくはＶＬ）ポリペプチドであるドメイン抗体（ｄＡｂ）が挙げられるが、これらに限定されない。
【００４５】
ＴＩＭ−３結合剤が免疫グロブリン重鎖又は軽鎖ポリペプチドの断片を含む実施形態においては、該断片はＴＩＭ−３に結合し、好ましくはＴＩＭ−３の活性を阻害する限り、任意のサイズであり得る。この点、免疫グロブリン重鎖ポリペプチドの断片は、望ましくは、約５と１８の間（例えば、約５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８又は前記値の任意の２つで定義される範囲）のアミノ酸を含む。同様に、免疫グロブリン軽鎖ポリペプチドの断片は、望ましくは、約５と１８の間（例えば、約５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８又は前記値の任意の２つで定義される範囲）のアミノ酸を含む。
【００４６】
ＴＩＭ−３結合剤が抗体又は抗体断片であるとき、抗体又は抗体断片は、望ましくは、任意の好適なクラスの重鎖定常領域（Ｆｃ）を含む。好ましくは、抗体又は抗体断片は、野生型ＩｇＧ１、ＩｇＧ２若しくはＩｇＧ４の抗体又はそれらの変異体に基づく重鎖定常領域を含む。各抗体のクラス又はアイソタイプが、一度認識した抗原を処理するか又は中和する、エフェクター機構の異なったセットに関与することは理解されるであろう。そうであるから、幾つかの実施形態においては、ＴＩＭ−３結合剤が抗体又は抗体断片であるとき、それは、例えば、エフェクター分子と細胞の相互作用を介した抗体依存性補体媒介性溶解又は抗体依存性細胞毒性（例えば、補体システムの活性化）に関与する等の、１以上のエフェクター機能を示し得る。
【００４７】
ＴＩＭ−３結合剤はまた、一本鎖抗体断片であり得る。一本鎖抗体断片の例としては、（ｉ）２つのドメインをポリペプチド一本鎖として合成できるようにする、合成リンカーによって連結されたＦｖ断片（即ちＶＬ及びＶＨ）の２つのドメインからなる一価の分子である一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）（例えば、Birdら、Science, 242: 423-426 (1988)、Hustonら、Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 85: 5879-5883 (1988)、及びOsbournら、Nat. Biotechnol., 16: 778 (1998)を参照）、及び（ｉｉ）各ポリペプチド鎖が、同じポリペプチド鎖上でＶＨ及びＶＬ間のペアリングができないほど短いペプチドリンカーによってＶＬに接続したＶＨを含み、それによって、２つの機能的な抗原結合部位を有する二量体分子を生成するために、異なるＶＨ−ＶＬポリペプチド鎖において、相補的なドメイン間でペアリングを促進する、二量体ポリペプチド鎖であるダイアボディ（diabody）が挙げれるが、これらに限定されない。抗体断片は、当該技術分野において公知であり、例えば、米国特許出願公開第2009/0093024 A1号においてより詳細に記載されている。
【００４８】
ＴＩＭ−３結合剤はまた、細胞内発現抗体（intrabody）又はその断片であり得る。細胞内発現抗体は、細胞内において発現し機能する抗体である。細胞内発現抗体は、典型的にはジスルフィド結合を欠き、その特異的な結合活性によって標的遺伝子の発現又は活性を調節することができる。細胞内発現抗体としては、例えば、単離されたＶＨ及びＶＬドメイン並びにｓｃＦｖｓ等の単一ドメイン断片が挙げられる。細胞内発現抗体は、標的タンパク質が位置する細胞内区画において高い濃度で発現することができるよう、細胞内発現抗体のＮ又はＣ末端に付加した細胞内情報輸送シグナル（sub-cellular trafficking signals）を含み得る。標的遺伝子との相互作用において、細胞内発現抗体は、標的タンパク質機能を調節し、及び／又は標的タンパク質の分解を促進し、標的タンパク質を細胞内の生理的でない区画に隔離する等の機構によって、表現型／機能的ノックアウトを達成する。細胞内発現抗体によって媒介される遺伝子の不活性化のその他の機構は、例えば、標的タンパク質上の触媒活性部位に結合するか、又はタンパク質−タンパク質相互作用、タンパク質−ＤＮＡ相互作用若しくはタンパク質−ＲＮＡ相互作用に関与するエピトープに結合する等、細胞内発現抗体が指向する、エピトープに依存し得る。
【００４９】
ＴＩＭ−３結合剤はまた、抗体複合体であり得る。この点、ＴＩＭ−３結合剤は、（１）抗体、代替となる足場又はその断片の複合体、及び（２）ＴＩＭ−３結合剤を含むタンパク質部分又は非タンパク質部分の複合体であり得る。例えば、ＴＩＭ−３結合剤は、ペプチド、蛍光分子又は化学療法剤に複合体化した抗体の全部又は一部であり得る。
【００５０】
ＴＩＭ−３結合剤は、ヒト抗体、非ヒト抗体又はキメラ抗体であり得るか、又はそれらから獲得し得る。「キメラ」は、ヒト領域及び非ヒト領域の両方を含む抗体又はその断片を意味する。好ましくは、ＴＩＭ−３結合剤はヒト化抗体である。「ヒト化」抗体は、ヒト抗体の足場及び非ヒト抗体から得られたか、又はそれに由来する少なくとも１つのＣＤＲを含むモノクローナル抗体である。非ヒト抗体としては、例えば、げっ歯類（例えば、マウス又はラット）等の任意の非ヒト動物から単離された抗体が挙げられる。ヒト化抗体は、非ヒト抗体から得られたか、又はそれに由来する、１、２又は３のＣＤＲを含み得る。本発明の一実施形態において、本発明のＴＩＭ−３結合剤のＣＤＲＨ３は、マウスモノクローナル抗体から得られるか、又はそれに由来する。一方で、本発明のＴＩＭ−３結合剤の残りの可変領域及び定常領域は、ヒト・モノクローナル抗体から得られるか、又はそれに由来する。
【００５１】
ヒト抗体、非ヒト抗体、キメラ抗体又はヒト化抗体は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏの供給源（例えば、ハイブリドーマ又は組換で抗体を産生する細胞株）及びｉｎ  ｖｉｖｏの供給源（例えば、げっ歯類）を含む、任意の方法で獲得し得る。抗体を生成する方法は、当該技術分野において公知であり、例えば、Koehler and Milstein, Eur. J. Immunol., 5: 511-519 (1976)、Harlow and Lane編、Antibodies: A Laboratory Manual, CSH Press (1988)及びJanewayら編、Immunobiology, 5th Ed., Garland Publishing, New York, NY (2001)に記載されている。ある実施形態においては、ヒト抗体又はキメラ抗体は、１以上の内在免疫グロブリン遺伝子が、１以上のヒト免疫グロブリン遺伝子で置き換えられる、トランスジェニック動物（例えば、マウス）を用いて生成し得る。内在抗体遺伝子が効果的にヒト抗体遺伝子に置き換えられたトランスジェニックマウスの例としては、Ｍｅｄａｒｅｘ  ＨＵＭＡＢ−ＭＯＵＳＥＴＭ、Ｋｉｒｉｎ  ＴＣ  ＭＯＵＳＥＴＭ及びＫｙｏｗａ  Ｋｉｒｉｎ  ＫＭ−ＭＯＵＳＥＴＭ（例えば、Lonberg, Nat. Biotechnol., 23(9): 1117-25 (2005)及びLonberg, Handb. Exp. Pharmacol., 181: 69-97 (2008)を参照）が挙げられるが、これらに限定されない。ヒト化抗体は、例えば、ヒト抗体の足場への非ヒトＣＤＲの移植（例えば、Kashmiriら、Methods, 36(1): 25-34 (2005)、及びHouら、J. Biochem., 144(1): 115-120 (2008)を参照）を含む、当該技術分野において公知である、任意の好適な方法（例えば、An, Z. (ed.), Therapeutic Monoclonal Antibodies: From Bench to Clinic, John Wiley & Sons, Inc., Hoboken, New Jersey (2009)を参照）を用いて生成し得る。一実施形態においては、ヒト化抗体は、例えば、米国特許出願公開第2011/0287485 A1号に記載されている方法を用いて生産し得る。
【００５２】
一実施形態においては、本明細書に記載された、免疫グロブリン重鎖ポリペプチド及び／又は免疫グロブリン軽鎖ポリペプチドのＣＤＲ（例えば、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２若しくはＣＤＲ３）又は可変領域は、タンパク質化学又は組換えＤＮＡ技術のいずれかを用いて、例えば、抗体又は非抗体ポリペプチド等の別の分子に移植（transplanted）（即ち、移植（grafted））し得る。この点、本発明は、本明細書に記載されている免疫グロブリン重鎖及び／又は軽鎖ポリペプチドの少なくとも１つのＣＤＲを含む、ＴＩＭ−３結合剤を提供する。ＴＩＭ−３結合剤は、本明細書に記載されている免疫グロブリン重鎖及び／又は軽鎖可変領域の１、２又は３つのＣＤＲを含み得る。
【００５３】
好ましい実施形態においては、ＴＩＭ−３結合剤は、ＴＩＭ−３のエピトープに結合し、想定されるいずれかのリガンド（例えば、ホスファチジルセリン、ガレクチン−９、高移動度群タンパク質１（ＨＭＧＢ１）及びがん胎児性抗原細胞接着分子１（ＣＥＡＣＡＭ１））に対して、ＴＩＭ−３が結合することを妨害し、及びＴＩＭ−３媒介シグナル伝達を阻害する。本発明は、間接的であるか又はアロステリックな様式で、想定されるいずれかのリガンドに対してＴＩＭ−３が結合することを妨害する、単離又は精製されたＴＩＭ−３のエピトープも提供する。
【００５４】
本発明はまた、本発明の免疫グロブリン重鎖ポリペプチド、本発明の免疫グロブリン軽鎖ポリペプチド及び本発明のＴＩＭ−３結合剤をコードする、１以上の単離された又は精製された核酸配列を提供する。
【００５５】
用語「核酸配列」はＤＮＡ又はＲＮＡのポリマー、即ち、一本鎖又は二本鎖であり得、非天然又は改変したヌクレオチドを含有し得るポリヌクレオチドを含むことを意図する。本明細書において使用される場合、用語「核酸」及び「ポリヌクレオチド」は、リボヌクレオチド（ＲＮＡ）又はデオキシリボヌクレオチド（ＤＮＡ）のいずれかである、任意の長さのヌクレオチドのポリマー形態を指す。これらの用語は、分子の一次構造を指し、そのため、二本鎖及び一本鎖ＤＮＡ、並びに二本鎖及び一本鎖ＲＮＡを含む。これらの用語は、均等物として、例えば、メチル化された及び／又はキャップ化されたポリヌクレオチド等であるが、これらに限定されない、ヌクレオチド類似体及び修飾ポリヌクレオチドから作製された、ＲＮＡ又はＤＮＡのいずれかの類似体を含む。核酸は典型的には、核酸配列又はポリヌクレオチドを形成するために、リン酸結合を介して連結しているが、多くの他の結びつきが当該技術分野において公知である（例えば、ホスホロチオエート、ボラノホスフェート等）。
【００５６】
本発明は更に、本発明の免疫グロブリン重鎖ポリペプチド、本発明の免疫グロブリン軽鎖ポリペプチド及び／又は本発明のＴＩＭ−３結合剤をコードする、１以上の核酸配列を含むベクターを提供する。該ベクターは、例えば、プラスミド、エピソーム、コスミド、ウイルス・ベクター（例えば、レトロウイルス又はアデノウイルス）又はファージであり得る。好適なベクター及びベクター調製の方法は、当該技術分野において周知である（例えば、Sambrookら、Molecular Cloning, a Laboratory Manual, 3rd edition, Cold Spring Harbor Press, Cold Spring Harbor, N.Y. (2001)、及びAusubelら、Current Protocols in Molecular Biology, Greene Publishing Associates and John Wiley & Sons, New York, N.Y. (1994)を参照）。
【００５７】
本発明の免疫グロブリン重（heavy）ポリペプチド、本発明の免疫グロブリン軽鎖ポリペプチド及び／又は本発明のＴＩＭ−３結合剤をコードする核酸配列に加えて、該ベクターは、好ましくは、宿主細胞におけるコードされた配列の発現を提供する、例えば、プロモーター、エンハンサー、ポリアデニル化シグナル、転写ターミネーター、シグナルペプチド（例えば、オステオネクチン・シグナルペプチド）、配列内リボソーム進入部位（internal ribosome entry sites (IRES)）等の発現調節配列を含む。典型的な発現調節配列は、当該技術分野において公知であり、例えば、Goeddel, Gene Expression Technology: Methods in Enzymology, Vol. 185, Academic Press, San Diego, Calif. (1990)に記載されている。
【００５８】
多様な異なる供給源に由来する構成的、誘導性及び抑制性プロモーターを含む多数のプロモーターは、当該技術分野において周知である。プロモーターの代表的な供給源としては、例えば、ウイルス、哺乳類、昆虫、植物、酵母菌及び細菌が挙げられ、これらの供給源に由来する、好適なプロモーターは容易に利用可能であるか、又は公に利用できる、例えば、他の商業的若しくは個人的な供給源と同様、ＡＴＣＣ等の寄託機関に由来する配列に基づいて、合成によって産生し得る。プロモーターは１方向性（即ち、１方向に転写を開始する）又は２方向性（即ち、３’又は５’方向のいずれにも転写を開始する）であり得る。プロモーターの限定されない例としては、例えば、Ｔ７細菌発現システム、ｐＢＡＤ（ａｒａＡ）細菌発現システム、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）プロモーター、ＳＶ４０プロモーター、ＲＳＶプロモーターが挙げられる。誘導性プロモーターとしては、例えば、Ｔｅｔシステム（米国特許第5,464,758号及び第5,814,618号）、エクジソン誘導システム（Noら、Proc. Natl. Acad. Sci., 93: 3346-3351 (1996)）、Ｔ−ＲＥＸＴＭシステム（インビトロジェン, Carlsbad, CA）、ＬＡＣＳＷＩＴＣＨＴＭシステム（ストラタジーン、San Diego, CA）及びＣｒｅ−ＥＲＴタモキシフェン誘導性リコンビナーゼ・システム（Indraら、Nuc. Acid. Res., 27: 4324-4327 (1999) 、Nuc. Acid. Res., 28: e99 (2000) 、米国特許第7,112,715号、及びKramer & Fussenegger, Methods Mol. Biol., 308: 123-144 (2005)）が挙げられる。
【００５９】
本明細書において用いられる場合、用語「エンハンサー」は、例えば、作動可能に連結した核酸配列の転写を増加する、ＤＮＡ配列を指す。エンハンサーは、核酸配列のコード領域から何キロベースも離れて位置することができ、調節性因子の結合、ＤＮＡメチル化のパターン又はＤＮＡ構造の変化を仲介し得る。多様な異なる供給源に由来する多数のエンハンサーは、当該技術分野において周知であり、クローン化されたポリヌクレオチド（例えば、他の商業的又は個人的供給源と同様、ＡＴＣＣ等の寄託機関に由来）としてか、又はそれに含まれるものとして利用できる。プロモーター（例えば、一般に用いられているＣＭＶプロモーター等）を含む、多くのポリヌクレオチドはまた、エンハンサー配列を含む。エンハンサーはコード配列の上流、内部又は下流に位置し得る。
【００６０】
ベクターはまた、「選択マーカー遺伝子」を含み得る。本明細書において用いられる場合、用語「選択マーカー遺伝子」は、対応する選択試薬の存在下において、該核酸配列を発現する細胞が、特異的に、正又は負に選択されることを可能にする核酸配列を指す。好適な選択マーカー遺伝子は、当該技術分野において公知であり、例えば、国際特許出願公開第1992/008796号及び第1994/028143号、Wiglerら、Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 77: 3567-3570 (1980)、O'Hareら、Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 78: 1527-1531 (1981)、Mulligan & Berg, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 78: 2072-2076 (1981)、Colberre-Garapinら、J. Mol. Biol., 150: 1-14 (1981)、Santerreら、Gene, 30: 147-156 (1984) 、Kentら、Science, 237: 901-903 (1987)、Wiglerら、Cell, 11: 223-232 (1977)、Szybalska & Szybalski, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 48: 2026-2034 (1962)、Lowyら、Cell, 22: 817-823 (1980)、及び米国特許第5,122,464号及び第5,770,359号に記載されている。
【００６１】
いくつかの実施形態においては、ベクターは宿主細胞において複製することができる「エピソーマル発現ベクター」又は「エピソーム」であり、適切な選択圧の存在下で、宿主細胞内でＤＮＡの染色体外部分（segment）として存続する（例えば、Coneseら、Gene Therapy, 11: 1735-1742 (2004)を参照）。市販されているエピソーマル発現ベクターの代表例としては、エプステイン・バー（Epstein Barr）核抗原１（ＥＢＮＡ１）及びエプステイン・バー・ウイルス（ＥＢＶ）複製起点（ｏｒｉＰ）を利用するエピソーマル・プラスミドが挙げられるが、これに限定されない。インビトロジェン（Carlsbad, CA）のベクターｐＲＥＰ４、ｐＣＥＰ４、ｐＲＥＰ７及びｐｃＤＮＡ３．１、及びストラタジーン（La Jolla, CA）のベクターｐＢＫ−ＣＭＶは、ＥＢＮＡ１及びｏｒｉＰのかわりに、Ｔ抗原及びＳＶ４０複製起点を使用するエピソーマル・ベクターの限定されない例である。
【００６２】
他の好適なベクターとしては、宿主細胞のＤＮＡにランダムに取り込まれ（integrate into）得るか、又は発現ベクターと宿主細胞の染色体の間の特異的組換えを可能にする組換部位を含み得る、インテグレーティング（integrating）発現ベクターが挙げられる。そのようなインテグレーティング発現ベクターは、所望のタンパク質の発現をもたらすために、宿主細胞の染色体の内在発現調節配列を利用しても良い。部位特異的な様式で取り込まれるベクターの例としては、例えば、インビトロジェン（Carlsbad, CA）のｆｌｐ−ｉｎシステムの構成要素(例えば、ｐｃＤＮＡＴＭ５／ＦＲＴ）又はストラタジーン（La Jolla, CA）のｐＥｘｃｈａｎｇｅ−６  Ｃｏｒｅ  Ｖｅｃｔｏｒｓにおいて見出し得るようなｃｒｅ−ｌｏｘシステムが挙げられる。宿主細胞の染色体にランダムに取り込まれるベクターの例としては、例えば、ライフテクノロジーズ（Carlsbad, CA）のｐｃＤＮＡ３．１（Ｔ抗原の非存在下で導入されるとき）、ミリポア（Billerica, MA）のＵＣＯＥ及びプロメガ（Madison, WI）のｐＣＩ又はｐＦＮ１０Ａ（ＡＣＴ）ＦＬＥＸＩＴＭが挙げられる。
【００６３】
ウイルス・ベクターもまた使用し得る。市販されているウイルス発現ベクターの代表例としては、クルーセル社（Leiden, The Netherlands）から市販されているアデノウイルス・ベースのＰｅｒ．Ｃ６システム、インビトロジェン（Carlsbad, CA）のレンチウイルス・ベースのｐＬＰ１、及びストラタジーン（La Jolla, CA）のレトロウイルス・ベクターｐＦＢ−ＥＲＶとｐＣＦＢ−ＥＧＳＨが挙げられるが、これらに限定されない。
【００６４】
本発明のアミノ酸配列をコードする核酸配列は、同じベクター上（即ち、in cis）で、細胞に提供され得る。一方向性のプロモーターが、各々の核酸配列の発現を調節するために使用され得る。別の実施形態においては、二方向性と一方向性のプロモーターの組合せが、複数の核酸配列の発現を調節するために使用され得る。本発明のアミノ酸配列をコードする核酸配列は、別のベクターに載せて（即ち、in trans）、細胞集団に、代替的に提供され得る。それぞれの別のベクターにおいて、各々の核酸配列は、同じか又は異なる発現調節配列を含み得る。別のベクターは、同時に又は順番に細胞に提供され得る。
【００６５】
本発明のアミノ酸配列をコードする核酸（複数可）を含むベクター（複数可）は、コードされるポリペプチドを発現することができる宿主細胞であって、任意の好適な原核細胞又は真核細胞を含む、宿主細胞に導入され得る。そういうものとして、本発明は、本発明のベクターを含む単離された細胞を提供する。好ましい宿主細胞は、容易に、かつ確実に増殖し得る細胞であり、合理的な速い増殖速度を有し、良く特性が明らかにされている発現システムを有し、そして容易にかつ効率的に形質転換又はトランスフェクトし得るものである。
【００６６】
好適な原核細胞の例としては、バチラス属（例えば、バチラス・サチリス（Bacillus subtilis）及びバチラス・ブレビス（Bacillus brevis））、エシェリヒア属（例えば、大腸菌（E. coli））、シュードモナス属、ストレプトマイセス属、サルモネラ属、及びエルウィニア属が挙げられるが、これらに限定されない。特に有用な原核細胞は、大腸菌（例えば、Ｋ１２、ＨＢ１０１（ＡＴＣＣ番号：33694）、ＤＨ５α、ＤＨ１０、ＭＣ１０６１（ＡＴＣＣ番号：53338）及びＣＣ１０２）の様々な株を含む。
【００６７】
好ましくは、該ベクターは真核細胞に導入される。好適な真核細胞は、当該技術分野において公知であり、例えば、酵母菌細胞、昆虫細胞及び哺乳動物細胞が挙げられる。好適な酵母菌細胞の例としては、クリベロマイセス属（Kluyveromyces）、ピキア属、リノ−スポリジウム属（Rhino-sporidium）、サッカロマイセス属、及びシゾサッカロマイセス属に由来するものが挙げられる。好ましくは、酵母菌細胞は、例えば、サッカロマイセス・セレビシー（Saccharomyces cerivisae）、及びピキア・パストリス（Pichia pastoris）が挙げられる。
【００６８】
好適な昆虫細胞は、例えば、Kittsら、Biotechniques, 14: 810-817 (1993) 、Lucklow, Curr. Opin. Biotechnol., 4: 564-572 (1993)、及びLucklowら、J. Virol., 67: 4566-4579 (1993)に記載されている。好ましい昆虫細胞は、Ｓｆ−９及びＨＩ５（インビトロジェン、Carlsbad, CA）が挙げられる。
【００６９】
好ましくは、哺乳動物細胞が、本発明において利用される。多くの好適な哺乳動物宿主細胞は、当該技術分野において公知であり、多くはアメリカン・タイプカルチャー・コレクション（ＡＴＣＣ、Manassas, VA）から入手可能である。好適な哺乳動物細胞の例としては、チャイニーズ・ハムスター卵巣細胞（ＣＨＯ）（ＡＴＣＣ番号：CCL61）、ＣＨＯ  ＤＨＦＲ細胞（Urlaubら、Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 97: 4216-4220 (1980))、ヒト胎児腎臓（ＨＥＫ）２９３又は２９３Ｔ細胞（ＡＴＣＣ番号：CRL1573）及び３Ｔ３細胞（ＡＴＣＣ番号：CCL92）が挙げられるが、これらに限定されない。他の好適な哺乳動物細胞株は、サルＣＯＳ−１（ＡＴＣＣ番号：CRL1650）及びＣＯＳ−７細胞株（ＡＴＣＣ番号：CRL1651）及びＣＶ−１細胞株（ＡＴＣＣ番号：CCL70）である。更なる哺乳動物宿主細胞の例としては、形質転換された細胞株を含む、霊長類細胞株及びげっ歯類細胞株が挙げられる。通常の２倍体細胞、即ち、初代の移植片と同様に、ｉｎ  ｖｉｔｒｏでの組織の初代培養に由来する細胞株もまた適している。他の好適な哺乳動物細胞株は、いずれもＡＴＣＣから入手可能であるマウス神経芽細胞腫Ｎ２Ａ細胞、ＨｅＬａ、マウスＬ−９２９細胞、及びＢＨＫ又はＨａＫハムスター細胞株が挙げられるが、これらに限定されない。好適な哺乳動物宿主細胞を選択する方法、及び細胞を形質転換、培養、増幅（amplification）、スクリーニング及び精製する方法は、当該技術分野において公知である。
【００７０】
一実施形態においては、哺乳動物細胞はヒト細胞である。例えば、哺乳動物細胞は、Ｂリンパ球前駆細胞（pre-B lymphocyte origin）株等の、ヒトのリンパ細胞又はリンパ細胞に由来する細胞株であり得る。ヒトのリンパ細胞株の例としては、制限がなく、ＲＡＭＯＳ（ＣＲＬ−１５９６）、Ｄａｕｄｉ（ＣＣＬ−２１３）、ＥＢ−３（ＣＣＬ−８５）、ＤＴ４０（ＣＲＬ−２１１１）、１８−８１（Jackら、Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 85: 1581-1585 (1988)）、Ｒａｊｉ細胞（ＣＣＬ−８６）、ＰＥＲ．Ｃ６細胞（Crucell Holland B.V., Leiden, The Netherlands）及びその派生細胞が挙げられる。
【００７１】
本発明のアミノ酸配列をコードする核酸配列は、「トランスフェクション」、「形質転換」又は「形質導入」によって細胞に導入し得る。本明細書で用いられる場合、「トランスフェクション」、「形質転換」又は「形質導入」は、物理的又は化学的方法を用いることによって、宿主細胞に１以上の外来のポリヌクレオチドを導入することを指す。多くのトランスフェクション技術は、当該技術分野において公知であり、例えば、リン酸カルシウムＤＮＡ共沈殿法（例えば、Murray E.J. (ed.), Methods in Molecular Biology, Vol. 7, Gene Transfer and Expression Protocols, Humana Press (1991)を参照)、ＤＥＡＥ−デキストラン法、エレクトロポレーション法、カチオン性リポソーム媒介性（cationic liposome-mediated）トランスフェクション法、タングステン粒子促進微小粒子衝撃法（tungsten particle-facilitated microparticle bombardment）（Johnston, Nature, 346: 776-777 (1990)）、及びリン酸ストロンチウムＤＮＡ共沈殿法（Brashら、Mol. Cell Biol., 7: 2031-2034 (1987)）が挙げられる。ファージ又はウイルス・ベクターは、多くが市販されている、好適なパッケージ細胞において感染性粒子を増殖後、宿主細胞に導入し得る。
【００７２】
本発明は、本発明の免疫グロブリン重鎖ポリペプチド、本発明の免疫グロブリン軽鎖ポリペプチド、本発明のＴＩＭ−３結合剤、上記のいずれかをコードする本発明の核酸配列、又は本発明の核酸配列を含む本発明のベクターを、有効量含む組成物を提供する。好ましくは、該組成物は医薬的に許容される（例えば、生理学的に許容される）組成物であり、それは担体、好ましくは医薬的に許容される（例えば、生理学的に許容される）担体、及び本発明のアミノ酸配列、抗原結合剤、又はベクターを含む。任意の好適な担体は、本発明の文脈において使用され得ると共に、そのような担体は当該技術分野において周知である。担体の選択は、該組成物が投与され得る特定の部位、及び該組成物を投与するために用いられる特定の方法によってある程度決定される。該組成物は、任意で滅菌され得る。該組成物は、保管のために凍結又は凍結乾燥され得ると共に、使用の前に好適な滅菌担体中で、再構成し得る。該組成物は、例えば、Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 21st Edition, Lippincott Williams & Wilkins, Philadelphia, PA (2001)に記載されている従来技術に従って、生成し得る。
【００７３】
本発明は更に、ＴＩＭ−３の阻害又は中和に応答する哺乳動物において病気（disorder）を治療する方法を提供する。該方法は、ＴＩＭ−３の阻害又は中和に応答する、病気を有する哺乳動物に上述した組成物を投与することを含み、それによって哺乳動物における病気が治療される。「ＴＩＭ−３の阻害に応答する」又は「ＴＩＭ−３の中和に応答する」病気は、ＴＩＭ−３の水準若しくは活性を低下させることが、哺乳動物、好ましくはヒトにおいて治療上のメリットを有する、又は、ＴＩＭ−３の不適切な発現（例えば、過剰発現）若しくはＴＩＭ−３の上昇した活性が、疾患又は病気の病的な影響を引き起こす又はそれに貢献する、任意の疾患又は病気を指す。ＴＩＭ−３の阻害に応答する病気は、例えば、がん、感染症及び自己免疫疾患が挙げられる。本発明の方法は、当該技術分野において公知である、任意の型のがん、例えば、メラノーマ、腎臓細胞がん、肺がん、膀胱がん、乳がん、子宮頸がん、結腸がん、胆嚢がん、喉頭がん、肝臓がん、甲状腺がん、胃がん、唾液腺がん、前立腺がん、膵臓がん、白血病、リンパ腫又はメルケル細胞がん等（例えば、Bhatiaら、Curr. Oncol. Rep., 13(6):488-497(2011)を参照）を治療するために使用され得る。本発明の方法は、任意の型の感染症（即ち、細菌、ウイルス、真菌又は寄生虫によって引き起こされる疾患又は病気）を治療するために使用され得る。本発明の方法によって治療され得る感染症の例としては、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）、呼吸器合胞体ウイルス（ＲＳＶ）、インフルエンザウイルス、デング熱ウイルス、Ｂ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ）又はＣ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）によって引き起こされる疾患が挙げられるが、これらに限定されない。本発明の方法は、例えば、MacKay I.R. and Rose N.R.編、The autoimmune diaseases, Fifth Edition, Academic Press, Waltham, MA (2014)に記載されている疾患又は病気等、任意の型の自己免疫疾患（即ち、免疫システムの過剰活動によって引き起こされる疾患又は病気であり、身体が自身の組織を攻撃し、損傷を与えるような）を治療するために使用し得る。本発明の方法によって治療し得る自己免疫疾患の例としては、多発性硬化症、１型真性糖尿病、関節リウマチ、強皮症、クローン病、乾癬、全身性エリトマトーデス（ＳＬＥ）及び潰瘍性大腸炎が挙げられるが、これらに限定されない。
【００７４】
本発明の免疫グロブリン重鎖ポリペプチド、本発明の免疫グロブリン軽鎖ポリペプチド、本発明のＴＩＭ−３結合剤、上記のいずれかをコードする本発明の核酸配列又は本発明の核酸配列を含む本発明のベクターを含む組成物を投与することで、哺乳動物における、がん又は感染症に対する免疫応答が誘導される。「免疫応答」は、例えば、抗体産生及び／又は免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞）の活性化を、必然的に伴い得る。
【００７５】
本明細書において用いられる場合、用語「治療」、「治療する」等は、所望の薬理学的及び／又は生理学的効果を得ることを指す。好ましくは、該効果は、治療、即ち、該効果が疾患及び／又は該疾患に起因する有害症状を、部分的又は完全に治す。この目的を達成するために、本発明の方法は、ＴＩＭ−３結合剤の「治療有効量」を投与することを含む。「治療有効量」は、必要な投与量及び期間において、所望の治療結果を達成するのに、効果的である量を指す。例えば、個人の疾患の状態、年齢、性別、及び体重、並びに個人において所望の応答を誘発するためのＴＩＭ−３結合剤の能力等の要因によって、治療有効量は変化し得る。例えば、本発明のＴＩＭ−３結合剤の治療有効量は、ヒトにおけるＴＩＭ−３の生物活性を低減する量である。
【００７６】
或いは、薬理学的及び／又は生理学的効果は予防的、即ち、疾患又はその症状を完全に又は部分的に予防する効果であっても良い。この点、本発明の方法は、ＴＩＭ−３結合剤の「予防有効量」を投与すること含む。「予防有効量」は、必要な投与量及び期間において、所望の予防結果（例えば、疾患発症の予防）を達成するのに、効果的である量を指す。
【００７７】
典型的な投与量は、例えば、動物又はヒトの体重で１ｐｇ／ｋｇ〜２０ｍｇ／ｋｇの範囲であり得る；但し、この例示する範囲よりも小さい又はそれを超える投与量は、本発明の範囲内にある。毎日の非経口投与量は、総体重の約０．００００１μｇ／ｋｇ〜約２０ｍｇ／ｋｇ（例えば、約０．００１μｇ／ｋｇ、約０．１μｇ／ｋｇ、約１μｇ／ｋｇ、約５μｇ／ｋｇ、約１０μｇ／ｋｇ、約１００μｇ／ｋｇ、約５００μｇ／ｋｇ、約１ｍｇ／ｋｇ、約５ｍｇ／ｋｇ、約１０ｍｇ／ｋｇ又はこれらの数値の任意の２つによって定義される範囲）であり得る。好ましくは、総体重の約０．１μｇ／ｋｇ〜約１０ｍｇ／ｋｇ（例えば、約０．５μｇ／ｋｇ、約１μｇ／ｋｇ、約５０μｇ／ｋｇ、約１５０μｇ／ｋｇ、約３００μｇ／ｋｇ、約７５０μｇ／ｋｇ、約１．５ｍｇ／ｋｇ、約５ｍｇ／ｋｇ又はこれらの数値の任意の２つによって定義される範囲）であり得る。より好ましくは、総体重の１μｇ／ｋｇ〜５ｍｇ／ｋｇ（例えば、約３μｇ／ｋｇ、約１５μｇ／ｋｇ、約７５μｇ／ｋｇ、約３００μｇ／ｋｇ、約９００μｇ／ｋｇ、約２ｍｇ／ｋｇ、約４ｍｇ／ｋｇ又はこれらの数値の任意の２つによって定義される範囲）であり得る。より更に好ましくは、１日当たり約０．５〜１５ｍｇ／ｋｇ体重（例えば、約１ｍｇ／ｋｇ、約２．５ｍｇ／ｋｇ、約３ｍｇ／ｋｇ、約６ｍｇ／ｋｇ、約９ｍｇ／ｋｇ、約１１ｍｇ／ｋｇ、約１３ｍｇ／ｋｇ又はこれらの数値の任意の２つによって定義される範囲）であり得る。治療した患者を定期的に評価することにより、治療又は予防効果を観察し得る。数日以上にわたる反復投与のために、状態に依存して、疾患の症状が所望の程度抑制されるまで治療を繰り返し得る。また、代替的に、治療は患者の寿命まで継続され得る。しかし、他の投与計画が有用であり得、それらは本発明の範囲内にある。所望の投与量は、組成物の１回の急速静注によって、組成物の複数回の急速静注によって、又は組成物の連続注入投与によって、送達され得る。
【００７８】
本発明の免疫グロブリン重鎖ポリペプチド、本発明の免疫グロブリン軽鎖ポリペプチド、本発明のＴＩＭ−３結合剤、上述した任意の物をコードする本発明の核酸配列又は本発明の核酸配列を含む本発明のベクターを有効量含む組成物は、経口、静脈内、腹腔内、皮下、経肺、経皮、筋肉内、鼻腔内、口腔、舌下又は坐剤投与を含む標準的な投与技術を用いて、哺乳動物に投与し得る。該組成物は、好ましくは、非経口投与に適している。本明細書において用いられる場合、用語「非経口」は、静脈内、筋肉内、皮下、直腸、膣内及び腹腔内投与を含む。より好ましくは、該組成物は、静脈内、腹腔内、又は皮下注射による末梢全身送達によって哺乳動物に投与される。
【００７９】
一旦、哺乳動物（例えば、ヒト）に投与されると、本発明のＴＩＭ−３結合剤の生物学的活性は、当該技術分野において公知の好適な任意の方法で測定し得る。例えば、該生物学的活性は、特定のＴＩＭ−３結合剤の安定性を決定することにより、評価し得る。本発明の一実施形態においては、ＴＩＭ−３結合剤（例えば、抗体）のｉｎ  ｖｉｖｏにおける半減期は、約３０分〜４５日の間（例えば、約３０分、約４５分、約１時間、約２時間、約４時間、約６時間、約１０時間、約１２時間、約１日、約５日、約１０日、約１５日、約２５日、約３５日、約４０日、約４５日又はこれらの数値の任意の２つによって定義される範囲）である。別の実施形態においては、ＴＩＭ−３結合剤のｉｎ  ｖｉｖｏにおける半減期は、約２時間〜２０日の間（例えば、約５時間、約１０時間、約１５時間、約２０時間、約２日、約３日、約７日、約１２日、約１４日、約１７日、約１９日又はこれらの数値の任意の２つによって定義される範囲）である。別の実施形態においては、ＴＩＭ−３結合剤のｉｎ  ｖｉｖｏにおける半減期は、約１０日〜約４０日の間（例えば、約１０日、約１３日、約１６日、約１８日、約２０日、約２３日、約２６日、約２９日、約３０日、約３３日、約３７日、約３８日、約３９日、約４０日又はこれらの数値の任意の２つによって定義される範囲）である。
【００８０】
本発明のＴＩＭ−３結合剤の安定性は、当該技術分野において公知である、任意の他の好適なアッセイ、例えば、血清の半減期の測定、示差走査熱量測定（ＤＳＣ）、サーマルシフト・アッセイ、及びパルスチェイス・アッセイ等を用いて測定し得る。本発明の文脈において使用され得る、ｉｎ  ｖｉｖｏ及びｉｎ  ｖｉｔｒｏでの、タンパク質の安定性を測定する他の方法は、例えば、Protein Stability and Folding, B.A. Shirley (ed.), Human Press, Totowa, New Jersey (1995)、Protein Structure, Stability, and interactions (Methods in Molecular Biology), Shiver J.W. (ed.), Humana Press, New York, NY (2010)及びIgnatova, Microb. Cell Fact., 4: 23 (2005)に記載されている。
【００８１】
本発明のＴＩＭ−３結合剤の安定性は、アミノ酸配列の５０％がネイティブ構造にあり、その他の５０％が変性している温度である、転移中点値（Ｔｍ）の観点から測定し得る。一般的に、Ｔｍが高いほど、そのタンパク質はより安定である。本発明の一実施形態においては、本発明のＴＩＭ−３結合剤は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏで、約６０〜１００℃の転移中点値（Ｔｍ）を含む。例えば、本発明のＴＩＭ−３結合剤は、約６５〜８０℃（例えば、６６℃、６８℃、７０℃、７１℃、７５℃又は７９℃）、約８０〜９０℃（例えば、約８１℃、８５℃又は８９℃）又は約９０〜１００℃（例えば、約９１℃、約９５℃又は約９９℃）のＴｍを含み得る。
【００８２】
特定のＴＩＭ−３結合剤の生物学的活性は、ＴＩＭ−３又はそのエピトープへの結合親和性を決定することによってもまた評価し得る。用語「親和性」は、２つの試薬の可逆的結合の平衡定数を指し、解離定数（ＫＤ）として表される。例えば、エピトープに対する抗体の親和性等の、リガンドへの結合剤の親和性は、例えば、約１ピコモーラー（ｐＭ）〜約１００マイクロモーラー（μＭ）（例えば、約１ｐＭ〜約１ｎＭ、約１ｎＭ〜約１μＭ又は約１μＭ〜約１００μＭ）であり得る。一実施形態においては、ＴＩＭ−３結合剤は１ｎＭよりも小さいか又はそれと同等（例えば、０．９ｎＭ、０．８ｎＭ、０．７ｎＭ、０．６ｎＭ、０．５ｎＭ、０．４ｎＭ、０．３ｎＭ、０．２ｎＭ、０．１ｎＭ、０．０５ｎＭ、０．０２５ｎＭ、０．０１ｎＭ、０．００１ｎＭ又はこれらの数値の任意の２つによって定義される範囲）のＫＤでＴＩＭ−３タンパク質に結合し得る。別の実施形態においては、ＴＩＭ−３結合剤は２００ｐＭよりも小さいか又はそれと同等（例えば、１９０ｐＭ、１７５ｐＭ、１５０ｐＭ、１２５ｐＭ、１１０ｐＭ、１００ｐＭ、９０ｐＭ、８０ｐＭ、７５ｐＭ、６０ｐＭ、５０ｐＭ、４０ｐＭ、３０ｐＭ、２５ｐＭ、２０ｐＭ、１５ｐＭ、１０ｐＭ、５ｐＭ、１ｐＭ又はこれらの数値の任意の２つによって定義される範囲）のＫＤでＴＩＭ−３に結合し得る。目的の抗原又はエピトープに対する免疫グロブリンの親和性は、任意の当該技術分野で認められたアッセイを用いて測定し得る。そのような方法としては、例えば、蛍光活性化細胞選別（ＦＡＣＳ）、分離可能ビーズ（例えば、磁気ビーズ）、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）、溶液相競合（ＫＩＮＥＸＡＴＭ）、抗原パニング（panning）、競合結合アッセイ及び／又はＥＬＩＳＡが挙げられる（例えば、Janewayら編、Immunobiology, 5th ed., Garland Publishing, New York, NY, 2001を参照)。
【００８３】
本発明のＴＩＭ−３結合剤は、単独で又は他の薬剤と組合せて投与し得る。例えば、ＴＩＭ−３結合剤は、本明細書において開示された疾患の治療又は予防のための、他の剤、例えば、がん細胞に対して細胞毒性があるか、がん細胞の免疫原性を調節するか、又はがん細胞に対する免疫応答を促進する剤等、と組み合わせて投与され得る。この点、ＴＩＭ−３結合剤は、例えば、当該技術分野において公知である任意の化学療法剤を含む、少なくとも１つの他の抗がん剤、電離放射線、小分子抗がん剤、がんワクチン、生物療法（例えば、他のモノクローナル抗体、がん死滅（cancer-killing）ウイルス、遺伝子治療、及び養子Ｔ細胞移植）及び／又は手術との組合せで使用し得る。本発明の方法が感染症を治療するとき、ＴＩＭ−３結合剤は、少なくとも１つの抗細菌剤又は少なくとも１つの抗ウイルス剤との組合せで投与し得る。この点、該抗細菌剤は当該技術分野において公知である、任意の好適な抗生物質であり得る。抗ウイルス剤は、特定のウイルスを特異的な標的とする、任意の好適な型の、任意のワクチン（例えば、弱毒化生ワクチン、サブユニットワクチン、組換えベクターワクチン、及び小分子抗ウイルス療法（例えば、ウイルス複製阻害剤及びヌクレオシド類似体））であり得る。本発明の方法が自己免疫疾患を治療するとき、ＴＩＭ−３結合剤は、例えば、コルチコステロイド（例えば、プレドニゾン（prednisone）及びフルチカゾン（fluticasone））並びに非ステロイド系抗炎症薬（ＮＳＡＩＤｓ）（例えば、アスピリン（aspirin）、イブプロフェン（ibuprofen）及びナプロキセン（naproxen））を含む抗炎症剤との組合せで使用し得る。
【００８４】
別の実施形態においては、本発明のＴＩＭ−３結合剤が、がん又は感染症を治療するために用いられるとき、該ＴＩＭ−３結合剤は、免疫チェックポイント経路を阻害する、他の剤との組合せで投与し得る。例えば、本発明のＴＩＭ−３結合剤は、プログラムド・デス１タンパク質（ＰＤ−１）、リンパ球活性化遺伝子−３タンパク質（ＬＡＧ−３）及び／又は細胞障害性Ｔリンパ球関連タンパク質４（ＣＴＬＡ−４）経路を、阻害するか又はそれに拮抗する（antagonize）剤との組合せで投与し得る。これらの免疫チェックポイント経路の２以上を同時に標的とする組合せ治療は、改善された及び潜在的に相乗的な抗腫瘍活性を実証している（例えば、Sakuishiら、J. Exp. Med., 207: 2187-2194 (2010)、Ngiowら、Cancer Res., 71: 3540-3551 (2011)及びWooら、Cancer Res., 72: 917-927 (2012)を参照)。一実施形態においては、本発明のＴＩＭ−３結合剤は、ＬＡＧ−３に結合する抗体及び／又はＰＤ−１に結合する抗体との組合せで投与される。この点、哺乳動物における、ＴＩＭ−３阻害に応答する病気（例えば、がん又は感染症）を治療する本発明の方法は、更に、（ｉ）ＴＩＭ−３タンパク質に結合する抗体及び（ｉｉ）医薬的に許容される担体を含む組成物、又は（ｉ）ＰＤ−１タンパク質に結合する抗体及び（ｉｉ）医薬的に許容される担体を含む組成物を、哺乳動物に投与することを含み得る。
【００８５】
治療用途に加え、本明細書に記載のＴＩＭ−３結合剤は、診断又は研究用途として使用し得る。この点、ＴＩＭ−３結合剤は、ＴＩＭ−３の不適切な発現（例えば、過剰発現）又は上昇したＴＩＭ−３活性が、疾患又は病気の病理学的効果を、引き起こすか又はそれに寄与する、病気又は疾患を診断するための方法において使用し得る。同様にして、ＴＩＭ−３結合剤は、ＴＩＭ−３阻害に応答する疾患又は病気について試験された被検体における、ＴＩＭ−３タンパク質レベルを観察するためのアッセイにおいて使用され得る。研究用途としては、例えば、ＴＩＭ−３結合剤、及び試料中、例えば、ヒト体液又は細胞若しくは組織抽出物中で、ＴＩＭ−３タンパク質を検出するための標識を利用する方法が挙げられる。ＴＩＭ−３結合剤は、例えば、検出可能な部分による共有又は非共有標識等の修飾と共に又は修飾なしで使用し得る。例えば、検出可能な部分は、放射性同位体（例えば、３Ｈ、１４Ｃ、３２Ｐ、３５Ｓ又は１２５Ｉ）、蛍光若しくは化学発光化合物（例えば、フルオレセイン・イソチオシアネート、ローダミン又はルシフェリン）、酵素（例えば、アルカリホスファターゼ、β−ガラクトシダーゼ又は西洋ワサビ・ペルオキシダーゼ）又は補欠分子族であり得る。検出可能な部分に対して抗原結合剤（例えば、抗体）を別々に複合体化するために、当該技術分野で公知の任意の方法を、本発明の文脈において採用しても良い（例えば、Hunterら、Nature, 194: 495-496 (1962)、Davidら、Biochemistry, 13: 1014-1021 (1974)、Painら、J. Immunol. Meth., 40: 219-230 (1981)及びNygren, J. Histochem. and Cytochem., 30: 407-412 (1982)を参照）。
【００８６】
ＴＩＭ−３タンパク質レベルは、当該技術分野で公知の任意の好適な方法によって、本発明のＴＩＭ−３結合剤を用いて測定し得る。そのような方法としては、例えば、ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）及びＦＡＣＳが挙げられる。ＴＩＭ−３の通常又は標準的な発現値は、任意の好適な技術を用いて、例えば抗原・抗体複合体を形成するのに適した条件下で、ＴＩＭ−３を含むか又は含むと疑われる試料と、ＴＩＭ−３特異的抗体とを、混合することによって設定し得る。抗体は、結合した又は結合していない抗体の検出を容易にするために、検出可能な物質で、直接又は間接的に標識される。好適な検出可能な物質としては、様々な酵素、補欠分子族、蛍光物質、発光物質、及び放射性物質が挙げられる（例えば、Zola, Monoclonal Antibodies: A Manual of Techniques, CRC Press, Inc. (1987)を参照）。次いで、試料において発現しているＴＩＭ−３ポリペプチドの量は、基準値と比較される。
【００８７】
ＴＩＭ−３結合剤は、キット、即ち、所定量の試薬と診断アッセイを行うための説明書とが、組み合わされたパッケージで提供され得る。ＴＩＭ−３結合剤が酵素で標識されている場合、該キットは望ましくは、酵素によって必要とされる基質及び補因子（例えば、検出可能な発色団又はフルオロフォアを提供する基質前駆体）を含む。加えて、例えば、安定化剤、緩衝剤（例えば、ブロッキング・バッファー又は溶解バッファー）等の他の添加物をキットに含み得る。種々の試薬の相対量は、アッセイの感度を実質的に最適化する、試薬の溶液中の濃度を提供するために変更し得る。該試薬は、溶解により適切な濃度の試薬溶液が得られる賦形剤を含む、乾燥粉末（典型的には、凍結乾燥したもの）として提供され得る。
【００８８】
以下の実施例は、本発明を更に説明するが、当然のことながら、決して、本発明の範囲を限定するものとして解釈されるべきではない。
【実施例】
【００８９】
実施例１
本実施例は、進化可能ライブラリー（evolvable library）からヒトＴＩＭ−３に対する抗体を同定する方法及び同定した抗体の親和性成熟を実証する。
【００９０】
ヒト・ドナー由来の再結合（Ｄ）Ｊ領域に連結した生殖細胞系列Ｖ遺伝子断片配列に基づくＩｇＧ進化可能ライブラリーを、Bowersら、Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 108(51): 20455-20460 (2011)に記載されているように構築した。ＩｇＧ重鎖（ＨＣ）及び軽鎖（ＬＣ）は、別々のエピソーマル・ベクター（各ベクターは異なる抗生物質選択マーカーをコードする）にクローニングした（Horlickら、Gene, 243(1-2): 187-194 (2000)）。ヒトＴＩＭ−３に結合する完全ヒト抗体（表面に提示）を発現している細胞を、ヒトＴＩＭ−３細胞外ドメインでコートした磁気ビーズを用いて、進化可能ライブラリーのスクリーニング・キャンペーン（screening campaign）から同定した。ＴＩＭ−３に特異的に結合した、抗体の１団が単離された。
【００９１】
上記した進化可能ライブラリーを用いて同定した、各抗体のＨＣ及びＬＣを共発現している安定な細胞株を、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ  ＳＨＭを開始するために、活性化誘導シチジン・デアミナーゼ（ＡＩＤ）でトランスフェクトした。ライブラリーのスクリーンから増幅した（expanded）オリジナルの混合細胞集団にも、ＡＩＤを直接的にトランスフェクトした。全てのケースにおいて、ＩｇＧ発現と抗原への結合の両方に関して、細胞集団を染色し、バルク集団としてフローサイトメトリーによって回収し、次いで、次世代シーケンシング（ＮＧＳ）によるシーケンス分析のために増幅した（expanded）。各ストラテジー（strategy）について、重鎖及び軽鎖の両方の可変領域、並びにそれらの派生物における、ＳＨＭに由来する変異を集積するために、本工程を繰り返し行った。ＢＩＡＣＯＲＥＴＭを用いた結合研究によって、及びＣＨＯ細胞株の表面に提示されたＴＩＭ−３に結合することによって、最初のライブラリーのヒット（hit）抗体の成熟が実証された。
【００９２】
成熟した抗体は、治療用抗体開発に対する厳粛な要求（「開発可能性」基準の査定及びアッセイ間の機能的有効性を含む）を満たすために、性状を調べた。開発可能性基準としては、熱安定性、発現レベル、問題のある配列モチーフ（例えば、可変領域Ｎ−結合グリコシル化部位、遊離システイン、脱アミド化、異性化等の頻出部位等）が挙げられた。更に、カニクイザルＴＩＭ−３に高い親和性で結合するものを、前臨床試験を容易にするために選択した。強力なアンタゴニスト活性を有するリード抗体及びバックアップ抗体が、更なる開発のための全ての基準を満たすことを確認した。リード抗体は、配列番号３４を含む重鎖免疫グロブリン・ポリペプチド及び配列番号１１５を含む軽鎖免疫グロブリン・ポリペプチドを含有し、ＡＰＥ５１３７と名付けた。ＡＰＥ５１３７重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３は、それぞれ配列番号３２９、３３０及び３３１を含んでいた。ＡＰＥ５１３７軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３は、それぞれ配列番号３３２、３３３及び３３４を含んでいた。バックアップ抗体は、配列番号２３８を含む重鎖免疫グロブリン・ポリペプチド及び配列番号３２７を含む軽鎖免疫グロブリン・ポリペプチドを含有し、ＡＰＥ５１２１と名付けた。ＡＰＥ５１２１重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３は、それぞれ配列番号３３５、３３６及び３３７を含んでいた。ＡＰＥ５１２１軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３は、それぞれ配列番号３３８、３３９及び３４０を含んでいた。
【００９３】
リード及びバックアップの抗ＴＩＭ−３抗体の性状は、表１に記載されている。
【００９４】
【表１】
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【００９５】
本実施例の結果は、進化可能ライブラリーを用いて同定した、ＴＩＭ−３に対するモノクローナル抗体の親和性成熟法を確認する。
【００９６】
実施例２
本実施例は、本発明の抗ＴＩＭ−３モノクローナル抗体が、ｉｎ  ｖｉｔｒｏにおいて、単独で及び抗ＰＤ−１抗体との組合せで、ＴＩＭ−３シグナル伝達を阻害できること、及びＴ細胞の活性化を促進できることを実証する。
【００９７】
改良されたＴＩＭ−３結合特性（実施例１に記載されている）を示す抗体の機能的アンタゴニスト活性を、ヒトＣＤ４＋Ｔ細胞混合リンパ球反応（ＭＬＲ）アッセイで試験した。そこでは、抗ＴＩＭ−３抗体の存在下で、ＩＬ−２分泌を測定することによって、ＣＤ４＋Ｔ細胞の活性化を評価する。抗ＴＩＭ−３抗体は、単独で又は２ｎｇ／ｍＬ若しくは２０ｎｇ／ｍＬのアンタゴニスト抗ＰＤ−１抗体との組合せで、試験した。具体的には、ヒト・ドナー由来の単離された末梢血単球を樹状細胞（ＤＣｓ）に分化させ、次いで、２人目のドナーから単離されたＣＤ４＋Ｔ細胞と混合した。ＩＬ−２レベルは４８時間後に測定した。ＴＩＭ−３の拮抗作用は単独で、及びＰＤ−１の拮抗作用との組合せで、ＩＬ−２産生の増加によって測定されるような、Ｔ細胞活性化の上昇に繋がると期待された。抗ＰＤ−１抗体との組合せで増加した活性を示す抗ＴＩＭ−３抗体を用いて、ＭＬＲアッセイにおいて、４８時間で、抗ＴＩＭ−３抗体は、単独及び抗ＰＤ１抗体との組合せの両方で、ＩＬ−２分泌を増加させた（図１Ａ〜１Ｄに示されている）。
【００９８】
本実施例の結果は、本発明のＴＩＭ−３結合剤は、単独で及び免疫システムの他のネガティブ調節因子のアンタゴニストとの組合せで、ＴＩＭ−３の生物学的活性を阻害し得ることを実証する。
【００９９】
実施例３
本実施例は、同系マウス腫瘍モデルにおいて、抗ＴＩＭ−３抗体がＴＩＭ−３活性を拮抗することを実証する。
【０１００】
マウスＰＤ−１及びマウスＴＩＭ−３を認識するサロゲート・ラット抗体（ＲＭＰ１−１４及びＲＭＴ３−２３）を、Ｂｉｏ  Ｘ  Ｃｅｌｌ（West Lebanon, NH）から購入し、ＭＣ３８同系腫瘍モデルにおいて、単独で及び組合せで試験した。具体的に、ＭＣ３８結腸腺がん細胞（１×１０６ｓ．ｃ．）を、Ｃ５７Ｂｌ／６マウスに移植し、１０日間増殖させた。４０〜９０ｍｍ３と計測された腫瘍を有するマウスを、１群当たり１０動物の４群に、無作為で分け（無作為群分け日を１日目とする）、各抗体を１０ｍｇ／ｋｇで、１、４、８及び１１日目に投与した。ＰＢＳを注射したマウスを、対照として用いた。マウスが犠牲になるエンドポイントとして指定した２０００ｍｍ３に到達するまで、腫瘍体積を１週間に２回測定した。本実験の結果は図２Ａ〜２Ｄに示しており、マウスモデルにおいて、サロゲート抗ＰＤ−１及び抗ＴＩＭ−３抗体の組合せが、腫瘍の増殖を阻害し得ることを実証する。このことは、免疫チェックポイント経路の２重の妨害が、臨床効果の増進を導き得ることを示唆している。
【０１０１】
実施例４
本実施例は、同系マウス腫瘍モデルにおいて、抗ＴＩＭ−３抗体単独での又は抗ＰＤ−１抗体との組合せでの抗腫瘍活性における、抗体アイソタイプの特定の効果を実証する。
【０１０２】
マウスＩｇＧ１（Ｄ２６５Ａ）及びマウスＩｇＧ２ａアイソタイプのマウスＰＤ−１及びマウスＴＩＭ−３を認識する、サロゲート・ラット／マウスキメラ抗体を、実施例３で試験したラット抗体から構築した。ＭＣ３８同系腫瘍モデルにおいて、これらの抗体単独で及びマウスＩｇＧ１（Ｄ２６５Ａ）アイソタイプの抗ＰＤ−１抗体との組合せで試験した。具体的に、ＭＣ３８結腸腺がん細胞（１×１０６ｓ．ｃ．）を、Ｃ５７Ｂｌ／６マウスに移植し、８日間増殖させた。４０〜８０ｍｍ３と計測された腫瘍を有するマウスを、１群当たり１０動物の７群に、無作為で分け（無作為群分け日を１日目とする）、表２に記載のように、各抗体又は抗体の組合せを、１、４、８及び１１日目に投与した。マウス抗体を何ら認識しない、アイソタイプが一致している対照抗体を注射したマウスを、対照として用いた（群１及び２）。マウスが犠牲になるエンドポイントとして指定した２０００ｍｍ３に到達するまで、腫瘍体積を１週間に２回測定した。
【０１０３】
【表２】
2018512138.tif 000003
【０１０４】
本実験の中間的な結果を図３に示している。図３は、最小のエフェクター機能を有する抗マウスＴＩＭ−３抗体（即ち、ＩｇＧ１（Ｄ２６５Ａ））と比較して、エフェクター機能を有する抗マウスＴＩＭ−３抗体（即ち、ＩｇＧ２ａ）の単剤が増進した抗腫瘍活性を有することを実証する。更に、抗マウスＰＤ−１  ＩｇＧ１（Ｄ２６５Ａ）抗体単独と比べると、最小のエフェクター機能を有する抗マウスＴＩＭ−３抗体（即ち、ＩｇＧ１（Ｄ２６５Ａ））と、抗マウスＰＤ−１  ＩｇＧ１（Ｄ２６５Ａ）抗体の投薬計画との組合せで、僅かに増進した抗腫瘍活性を示した。完全なエフェクター機能を有する抗マウスＴＩＭ−３抗体（ＩｇＧ２ａ）と、抗マウスＰＤ−１  ＩｇＧ１（Ｄ２６５Ａ）抗体との組合せは、抗マウスＰＤ−１  ＩｇＧ１（Ｄ２６５Ａ）抗体単独でのものと、同様の抗腫瘍活性を示した。
【０１０５】
本実施例の結果は、様々なアイソタイプの、その上、様々なレベルのエフェクター機能を有する、抗マウスＴＩＭ−３及び抗マウスＰＤ−１抗体は、単独で及び組合せで、マウスモデルにおける腫瘍の増殖を阻害し得ることを実証する。幾つかの実施形態においては、該データは更に、単独で又は他の抗体（又は、その断片であり、有意なエフェクター機能を示す若しくは示さない場合がある）との組合せで投与された、最小のエフェクター機能しか有さない抗体（又はその断片）は、効果的な治療を提供し得ることを実証する。
【０１０６】
本明細書において引用した刊行物、特許出願及び特許を含む全ての参考文献は、各参考文献が個別に、具体的に、参照によって取り込まれることが示されるように、かつ全体が本明細書に記載されているように、それと同程度の事項が、文献を参照することによって本明細書に取り込まれる。
【０１０７】
本発明を記載する文脈（特に、以下の特許請求の範囲の文脈）における用語「ａ」及び「ａｎ」及び「ｔｈｅ」及び「少なくとも１つ」並びに同様の指示対象の使用は、本明細書中で別段の指示がない限り、又は文脈によって明確に矛盾しない限り、単数及び複数形の両方を含むものとして解釈されるべきである。１以上の項目の列記が続く、用語「少なくとも１つ」の使用（例えば、「Ａ及びＢの少なくとも１つ」）は、本明細書に別段の記載がない限り、又は文脈によって明確に矛盾しない限り、列記された項目（Ａ又はＢ）から選択された１つの項目、又は列記された項目（Ａ及びＢ）の２以上の任意の組合せを意味するものとして解釈されるべきである。「含む（comprising）」、「有する（having）」、「含む（including）」及び「含有する（containing）」という用語は、別段の記載がない限り、制限のない用語（open-ended terms）（すなわち、「含むが、これに限定されない（including, but not limited to）」を意味する）として解釈されるべきである。本明細書中の値の範囲の列挙は、本明細書中に別段の指示がない限り、単に範囲内の各別個の値を個別に指す簡略方法として役立つことを意図しており、本明細書において個々の値はそれぞれ個別に列挙されているかのように、個々の値は明細書に取り込まれる。本明細書中に記載された全ての方法は、本明細書中で他に指示されない限り、又は文脈によって明らかに矛盾しない限り、任意の適切な順序で実施し得る。本明細書で提供される任意の及び全ての例、又は例示的な言語（例えば「など（such as）」）の使用は、単に本発明をよりよく示すことを意図しており、特段特許請求されない限り、本発明の範囲を限定するものではない。本明細書中のいかなる言葉も、本発明の実施に不可欠であるとして、特許請求されていない任意の要素を示すものと解釈されるべきではない。
【０１０８】
本発明の好ましい実施形態は、本発明を実施するために、本発明者らに知られている最良の形態を含め、本明細書に記載する。これらの好ましい実施形態の変形形態は、上記の記載を読めば、当業者にとって明らかになり得る。本発明者らは、当業者がこのような変形を適宜使用することを予期しており、本発明者らは本発明が本明細書に具体的に記載されたものとは別の方法で実施されることを意図する。従って、本発明は、適用法によって許容されるように、本明細書に添付した特許請求の範囲に列挙された主題の全ての改変及び均等物を含む。更に、本明細書中で他に指示されない限り、又は文脈によって明確に矛盾しない限り、それらの全ての可能な変形例における上記要素の任意の組み合わせが本発明に包含される。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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