(57)【要約】がんおよび他の疾患の処置のための併用療法を、本明細書に記載する。一局面において、がんおよび他の疾患の処置のための本明細書に記載する方法は、RSPO-LGR経路インヒビターを有糸分裂インヒビターと併用して投与する工程を含む。本発明は、治療有効量のRSPO-LGR経路インヒビター、例えば抗RSP03抗体または抗LGR5抗体を対象に投与する工程を含む、がんを処置する方法に関連する。特定の態様では、方法は、患者への有糸分裂インヒビターの投与をさらに含む。特定の態様では、RSPO-LGR経路インヒビターは、有糸分裂インヒビターの約1日、約2日、または約3日前に投与される。【特許請求の範囲】
【請求項１】
治療有効量のRSPO-LGR経路インヒビターおよび治療有効量の有糸分裂インヒビターを対象に投与する工程を含む、がんを処置する方法であって、
RSPO-LGRインヒビターおよび有糸分裂インヒビターが時間差投薬スケジュールを用いて投与され、RSPO-LGRインヒビターが最初に投与され、かつRSPO-LGRインヒビターが、
（a）少なくとも1種のヒトRSPOタンパク質に特異的に結合する抗体、
（b）少なくとも1種のヒトLGRタンパク質に特異的に結合する抗体、または
（c）少なくとも1種のヒトRSPOタンパク質に結合することができるヒトLGRタンパク質の細胞外ドメインを含む可溶性受容体
である、方法。
【請求項２】
有糸分裂インヒビターが、RSPO-LGR経路インヒビターまたは抗体が投与されてから約1、2、3、4、5、または6日後に投与される、請求項1記載の方法。
【請求項３】
RSPO-LGR経路インヒビターまたは抗体が、約1週間に1回、約2週間に1回、約3週間に1回、または約4週間に1回投与される、請求項1または2記載の方法。
【請求項４】
有糸分裂インヒビターが、約1週間に1回、約2週間に1回、約3週間に1回、または4週間サイクルのうち3週間にわたって約1週間に1回投与される、請求項1〜3のいずれか一項記載の方法。
【請求項５】
RSPO-LGR経路インヒビターまたは抗体が、2、3、4、5、6、7、8サイクル、またはそれより多いサイクルにわたって投与され、かつ／または有糸分裂インヒビターが、2、3、4、5、6、7、8サイクル、またはそれより多いサイクルにわたって投与される、請求項1〜4のいずれか一項記載の方法。
【請求項６】
RSPO-LGR経路インヒビターが、RSPO1、RSPO2、およびRSPO3からなる群より選択される少なくとも1種のヒトRSPOタンパク質に特異的に結合する抗体である、請求項1〜5のいずれか一項記載の方法。
【請求項７】
前記抗体が、
（a）ヒトRSPO1に特異的に結合し、
TGYTMH（SEQ ID NO:5）を含む重鎖CDR1、
2018502833.tif 000107
を含む重鎖CDR2、および
2018502833.tif 000108
を含む重鎖CDR3；ならびに
2018502833.tif 000109
を含む軽鎖CDR1、WASTRHT（SEQ ID NO:9）を含む軽鎖CDR2、およびQQHYSTPW（SEQ ID NO:10）を含む軽鎖CDR3を含むか；
（b）ヒトRSPO2に特異的に結合し、
SSYAMS（SEQ ID NO:17）を含む重鎖CDR1、
2018502833.tif 000110
を含む重鎖CDR2、および
2018502833.tif 000111
を含む重鎖CDR3；ならびに
2018502833.tif 000112
を含む軽鎖CDR1、WASTRHT（SEQ ID NO:21）を含む軽鎖CDR2、およびQQHYSTP（SEQ ID NO:22）を含む軽鎖CDR3を含むか；または
（c）ヒトRSPO3に特異的に結合し、
DYSIH（SEQ ID NO:29）を含む重鎖CDR1、
2018502833.tif 000113
を含む重鎖CDR2、および
2018502833.tif 000114
を含む重鎖CDR3；ならびに
2018502833.tif 000115
を含む軽鎖CDR1、
2018502833.tif 000116
を含む軽鎖CDR2、および
2018502833.tif 000117
を含む軽鎖CDR3を含む、
請求項6記載の方法。
【請求項８】
前記抗体が、
（a）ヒトRSPO1に特異的に結合し、
SEQ ID NO:11を含む重鎖可変領域およびSEQ ID NO:12を含む軽鎖可変領域、もしくはSEQ ID NO:44を含む重鎖可変領域およびSEQ ID NO:45を含む軽鎖可変領域を含むか；
（b）ヒトRSPO2に特異的に結合し、
SEQ ID NO:23を含む重鎖可変領域およびSEQ ID NO:24を含む軽鎖可変領域を含むか；または
（c）ヒトRSPO3に特異的に結合し、
SEQ ID NO:38を含む重鎖可変領域およびSEQ ID NO:39を含む軽鎖可変領域を含む、
請求項6記載の方法。
【請求項９】
RSPO-LGR経路インヒビターが、LGR4、LGR5、およびLRG6からなる群より選択される少なくとも1種のヒトLGRタンパク質に特異的に結合する抗体である、請求項1〜5のいずれか一項記載の方法。
【請求項１０】
前記抗体が、モノクローナル抗体、組換え抗体、キメラ抗体、ヒト化抗体、ヒト抗体、または抗原結合部位を含む抗体フラグメント、単一特異性抗体、二重特異性抗体、IgG1抗体、またはIgG2抗体である、請求項1〜9のいずれか一項記載の方法。
【請求項１１】
RSPO-LGR経路インヒビターが抗RSPO3抗体OMP-131R010である、請求項1〜8または10のいずれか一項記載の方法。
【請求項１２】
RSPO-LGR経路インヒビターが、ヒトLGRタンパク質の細胞外ドメインを含む可溶性受容体であり、該細胞外ドメインがヒトRSPOタンパク質に結合することができ、任意で該ヒトLGRタンパク質がLGR5である、請求項1〜5のいずれか一項記載の方法。
【請求項１３】
有糸分裂インヒビターが、タキサン、ビンカアルカロイド、エポチロン、またはエリブリンメシラートである、請求項1〜12のいずれか一項記載の方法。
【請求項１４】
有糸分裂インヒビターが、パクリタキセル、nab-パクリタキセル、ドセタキセル、およびそれらの誘導体からなる群より選択されるタキサンである、請求項13記載の方法。
【請求項１５】
有糸分裂インヒビターが、ビンブラスチン、ビンクリスチン、ビノレルビン、およびそれらの誘導体からなる群より選択されるビンカアルカロイドである、請求項13記載の方法。
【請求項１６】
がんが、結腸直腸がん、乳がん、卵巣がん、肺がん、または膵臓がんである、請求項1〜15のいずれか一項記載の方法。
【請求項１７】
少なくとも1種の追加の治療剤を投与する工程をさらに含む、請求項1〜16のいずれか一項記載の方法。
【請求項１８】
追加の治療剤が化学療法剤である、請求項17記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願の相互参照
本願は、2014年12月2日に出願された米国仮出願第62/086,435号および2015年8月27日に出願された米国仮出願第62/210,545号の優先権の恩典を主張し、前記仮出願の各々はこれにより、その全体が参照により本明細書に組み入れられる。
【０００２】
発明の分野
がんおよび他の疾患の処置ための併用療法を、本明細書に記載する。一局面において、がんおよび他の疾患の処置のための本明細書に記載する方法は、RSPO-LGR経路インヒビターを有糸分裂インヒビターと併用して投与する工程を含む。
【背景技術】
【０００３】
発明の背景
R-スポンジン（RSPO）ファミリーのタンパク質は、脊椎動物の間で保存されており、4種のメンバー、RSPO1、RSPO2、RSPO3、およびRSPO4を含む。これらのタンパク質は、蓋板特異的スポンジン、hPWTSR（hRSPO3）、THS2D（RSPO3）、クリスチン（Cristin）1〜4、およびフツリン（Futrin）1〜4を含むさまざまな名称で呼ばれている。RSPOは、小さな分泌タンパク質であり、全体的におよそ40〜60％の配列相同性およびドメイン構成を共有している。すべてのRSPOタンパク質は、N末端の2つのフリン（furin）様システインリッチドメイン、それに続くトロンボスポンジンドメイン、および塩基性の荷電したC末端尾部を含有する（Kim et al., 2006, Cell Cycle, 5:23-26（非特許文献1））。
【０００４】
研究により、RSPOタンパク質が、脊椎動物の発生中（Kamata et al., 2004, Biochim. Biophys Acta, 1676:51-62（非特許文献2））およびアフリカツメガエルの筋形成において（Kazanskaya et al., 2004, Dev. Cell, 7:525-534（非特許文献3））役割を有することが示されている。RSPO1はまた、胃腸上皮細胞に対して強力な有糸分裂促進物質として機能することも示されている（Kim et al., 2005, Science, 309:1256-1259（非特許文献4））。RSPO3は、アフリカツメガエルおよびマウスにおいて、内皮細胞およびその細胞前駆体にまたはその近くに、顕著に発現していることが報告されている。さらにまた、RSPO3は、胚発生において血管新生因子として作用できることが示唆されている（Kazanskaya et al., 2008, Development, 135:3655-3664（非特許文献5））。
【０００５】
WntリガンドおよびR-スポンジン（RSPO）タンパク質は、相乗的に作用して古典的Wnt経路を活性化することが示されている。RSPOタンパク質は、Wntシグナル伝達と同様にβ-カテニンシグナル伝達を活性化することが知られているが、RSPOタンパク質とWntシグナル伝達との間の関係は、まだ調査中である。RSPOタンパク質は、Wntリガンドに対して正の調節活性を保有することが報告されている（Nam et al., 2006, JBC 281:13247-57（非特許文献6））。この研究はまた、RSPOタンパク質が、Frizzled8およびLRP6受容体リガンドとして機能でき、β-カテニンシグナル伝達を誘発できることも報告した（Nam et al., 2006, JBC 281:13247-57（非特許文献6））。最近の研究により、RSPOタンパク質とLGR（ロイシンリッチリピート含有Gタンパク質連結受容体）タンパク質、例えばLGR5（米国特許出願公開第2009/0074782号（特許文献1）および米国特許出願公開第2009/0191205号（特許文献2））との間の相互作用が特定されており、これらのデータは、β-カテニンシグナル伝達の活性化についての代替経路を提示する。
【０００６】
β-カテニンシグナル伝達を分断させるRSPOおよびLGRのアンタゴニスト（例えば、抗RSPO3抗体）は、がん、ならびに他のβ-カテニン関連疾患のための新たな治療剤の可能性のある供給源である。例えば、米国特許第8,158,757号（特許文献3）、米国特許第8,540,989号（特許文献4）、米国特許第8,802,097号（特許文献5）、および米国特許出願公開第20140017253号（特許文献6）を参照されたい。
【０００７】
Wnt経路の活性化は、結腸直腸がんと関連している。全結腸直腸がんのおよそ5〜10％が遺伝性であり、その主要形態の1つは家族性大腸腺腫症（FAP）である。これは、常染色体優性疾患であり、罹患個体の約80％が、大腸腺腫症（APC）遺伝子中に生殖細胞系変異を含有している。変異はまた、アキシンおよびβ-カテニンを含む他のWnt経路構成要素においても同定されている。個々の腺腫は、第2の不活性化アレルを含有する上皮細胞のクローン増殖物であり、多数のFAP腺腫は、がん遺伝子および／または腫瘍抑制遺伝子中の付加的変異により、不可避的に腺癌の発生をもたらす。さらにまた、APC中の機能喪失型変異およびβ-カテニン中の安定化型変異を含む、Wntシグナル伝達経路の活性化は、マウスモデルにおいて過形成発生および腫瘍成長を誘発することができる（Oshima et al., 1997, Cancer Res., 57:1644-9（非特許文献7）；Harada et al., 1999, EMBO J., 18:5931-42（非特許文献8））。
【０００８】
がん処置のための改善された方法、特に、RSPO-LGR経路インヒビターを有糸分裂インヒビターと組み合わせて用いる、戦略的に時間の間隔をあけた（すなわち、時間差）投薬レジメンを提供することが、本発明の目的の1つである。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００９】
【特許文献１】米国特許出願公開第2009/0074782号
【特許文献２】米国特許出願公開第2009/0191205号
【特許文献３】米国特許第8,158,757号
【特許文献４】米国特許第8,540,989号
【特許文献５】米国特許第8,802,097号
【特許文献６】米国特許出願公開第20140017253号
【非特許文献】
【００１０】
【非特許文献１】Kim et al., 2006, Cell Cycle, 5:23-26
【非特許文献２】Kamata et al., 2004, Biochim. Biophys Acta, 1676:51-62
【非特許文献３】Kazanskaya et al., 2004, Dev. Cell, 7:525-534
【非特許文献４】Kim et al., 2005, Science, 309:1256-1259
【非特許文献５】Kazanskaya et al., 2008, Development, 135:3655-3664
【非特許文献６】Nam et al., 2006, JBC 281:13247-57
【非特許文献７】Oshima et al., 1997, Cancer Res., 57:1644-9
【非特許文献８】Harada et al., 1999, EMBO J., 18:5931-42
【発明の概要】
【００１１】
発明の簡単な概要
本発明は、対象に治療有効量のRSPO-LGR経路インヒビター、例えば抗RSPO3抗体または抗LGR5抗体を投与する工程を含む、がんを処置する方法に関連する。一定の態様では、方法が、患者への有糸分裂インヒビターの投与をさらに含む。一定の態様では、RSPO-LGR経路インヒビターが、有糸分裂インヒビターの約1日、約2日、または約3日前に投与される。いくつかの態様では、がんが肺がんである。一定の他の態様では、がんが、大腸腺腫症（APC）遺伝子中の不活性化変異またはβ-カテニン遺伝子中の活性化変異を含む結腸直腸がんを非限定的に含む、結腸直腸がんである。
【００１２】
本発明はさらに、対象に、治療有効量のRSPO-LGR経路インヒビターおよび治療有効量の有糸分裂インヒビターを投与する工程を含む、がんを処置する方法であって、RSPO-LGR経路インヒビターおよび有糸分裂インヒビターが時間差投薬スケジュールを用いて投与され、RSPO-LGR経路インヒビターが最初に投与され；かつRSPO-LGR経路インヒビターが、（a）少なくとも1種のヒトRSPOタンパク質に特異的に結合する抗体、（b）少なくとも1種のヒトLGRタンパク質に特異的に結合する抗体、または（c）少なくとも1種のヒトRSPOタンパク質に結合する能力を有するヒトLGRタンパク質の細胞外ドメインを含む可溶性受容体である方法に関連する。
【００１３】
本発明はまた、対象に、治療有効量の、少なくとも1種のヒトRSPOタンパク質に特異的に結合する抗体、および治療有効量の有糸分裂インヒビターを投与する工程を含む、がんを処置する方法であって、抗体および有糸分裂インヒビターが時間差投薬スケジュールを用いて投与され、抗体が最初に投与される方法にも関連する。
【００１４】
本発明はまた、対象に、治療有効量の、ヒトRSPO3に特異的に結合する抗体、および治療有効量の有糸分裂インヒビターを投与する工程を含む、がんを処置する方法であって、抗体および有糸分裂インヒビターが時間差投薬スケジュールを用いて投与され、抗体が最初に投与される方法にも関連する。1つの態様では、有糸分裂インヒビターが、RSPO-LGR経路インヒビターまたは抗体が投与された約1、2、3、4、5、または6日後に投与される。
【００１５】
本発明はまた、対象に治療有効量のRSPO-LGR経路インヒビターを投与する工程を含む、対象においてがんを処置する方法であって、RSPO-LGR経路インヒビターが、（a）少なくとも1種のヒトRSPOタンパク質に特異的に結合する抗体、（b）少なくとも1種のヒトLGRタンパク質に特異的に結合する抗体、または（c）少なくとも1種のヒトRSPOタンパク質に結合する能力を有するヒトLGRタンパク質の細胞外ドメインを含む可溶性受容体であり、対象が、RSPO-LGR経路インヒビターの投与の約1、2、3、4、5、または6日後に、治療有効量の有糸分裂インヒビターを受けるようにスケジュール設定されている方法にも関連する。
【００１６】
本発明はまた、対象に、治療有効量の、少なくとも1種のヒトRSPOタンパク質に特異的に結合する抗体を投与する工程を含む、対象においてがんを処置する方法であって、対象が、抗体の投与の約1、2、3、4、5、または6日後に、治療有効量の有糸分裂インヒビターを受けるようにスケジュール設定されている方法にも関連する。
【００１７】
本発明はまた、対象に、治療有効量の、ヒトRSPO3に特異的に結合する抗体を投与する工程を含む、対象においてがんを処置する方法であって、対象が、抗体の投与の約1、2、3、4、5、または6日後に、治療有効量の有糸分裂インヒビターを受けるようにスケジュール設定されている方法にも関連する。
【００１８】
本発明はまた、対象におけるがんの処置において有糸分裂インヒビターの有効性を増大させる方法であって、対象に有糸分裂インヒビターを、RSPO-LGR経路インヒビターが投与された約1、2、3、4、5、または6日後に投与する工程を含み、RSPO-LGR経路インヒビターが、（a）少なくとも1種のヒトRSPOタンパク質に特異的に結合する抗体、（b）少なくとも1種のヒトLGRタンパク質に特異的に結合する抗体、または（c）少なくとも1種のヒトRSPOタンパク質に結合する能力を有するヒトLGRタンパク質の細胞外ドメインを含む可溶性受容体である方法にも関連する。
【００１９】
本発明はまた、対象におけるがんの処置において有糸分裂インヒビターの有効性を増大させる方法であって、対象に有糸分裂インヒビターを、少なくとも1種のヒトRSPOタンパク質に特異的に結合する抗体が投与された約1、2、3、4、5、または6日後に投与する工程を含む方法にも関連する。
【００２０】
本発明はまた、対象におけるがんの処置において有糸分裂インヒビターの有効性を増大させる方法であって、対象に有糸分裂インヒビターを、ヒトRSPO3に特異的に結合する抗体が投与された約1、2、3、4、5、または6日後に投与する工程を含む方法にも関連する。
【００２１】
本発明はまた、対象におけるがんの処置において有糸分裂インヒビターの有効性を増大させる方法であって、（a）対象にRSPO-LGR経路インヒビターを投与する工程、および（b）対象に有糸分裂インヒビターを、RSPO-LGR経路インヒビターが投与された約1、2、3、4、5、または6日後に投与する工程を含み、RSPO-LGR経路インヒビターが、（i）少なくとも1種のヒトRSPOタンパク質に特異的に結合する抗体、（ii）少なくとも1種のヒトLGRタンパク質に特異的に結合する抗体、または（iii）少なくとも1種のヒトRSPOタンパク質に結合する能力を有するヒトLGRタンパク質の細胞外ドメインを含む可溶性受容体である方法にも関連する。
【００２２】
本発明はまた、対象におけるがんの処置において有糸分裂インヒビターの有効性を増大させる方法であって、（a）対象に、少なくとも1種のヒトRSPOタンパク質に特異的に結合する抗体を投与する工程；および（b）対象に有糸分裂インヒビターを、抗体が投与された約1、2、3、4、5、または6日後に投与する工程を含む方法にも関連する。
【００２３】
本発明はまた、対象におけるがんの処置において有糸分裂インヒビターの有効性を増大させる方法であって、（a）対象に、ヒトRSPO3に特異的に結合する抗体を投与する工程；および（b）対象に有糸分裂インヒビターを、抗体が投与された約1、2、3、4、5、または6日後に投与する工程を含む方法にも関連する。
【００２４】
前述した方法のいくつかの態様では、有糸分裂インヒビターが、RSPO-LGR経路インヒビターまたは抗体の投与の約1日後に投与される。1つの態様では、有糸分裂インヒビターが、RSPO-LGR経路インヒビターまたは抗体の投与の約2日後に投与される。別の態様では、有糸分裂インヒビターが、RSPO-LGR経路インヒビターまたは抗体の投与の約3日後に投与される。
【００２５】
前述した方法のいくつかの態様では、RSPO-LGR経路インヒビターまたは抗体および有糸分裂インヒビターが相乗的に作用する。
【００２６】
本発明のいくつかの態様では、RSPO-LGR経路インヒビターまたは抗体が、1週間に1回投与される。本発明のいくつかの態様では、RSPO-LGR経路インヒビターまたは抗体が、2週間に1回投与される。本発明のいくつかの態様では、RSPO-LGR経路インヒビターまたは抗体が、3週間に1回投与される。
【００２７】
本発明のいくつかの態様では、RSPO-LGR経路インヒビターまたは抗体が、約2週間に1回投与され、有糸分裂インヒビターが、約1週間に1回投与される。別の態様では、有糸分裂インヒビターが、約2週間に1回、約3週間に1回、または4週間（28日）サイクルのうち3週間にわたって1週間に1回投与される。別の態様では、RSPO-LGR経路インヒビターまたは抗体が、2、3、4、5、6、7、8サイクル、またはそれより多いサイクルにわたって投与される。別の態様では、有糸分裂インヒビターが、2、3、4、5、6、7、8サイクル、またはそれより多いサイクルにわたって投与される。
【００２８】
本発明のいくつかの態様では、RSPO-LGR経路インヒビターまたは抗体が、約3週間に1回投与され、有糸分裂インヒビターが、約1週間に1回投与される。別の態様では、RSPO-LGR経路インヒビターまたは抗体が、約4週間に1回投与される。別の態様では、有糸分裂インヒビターが、約1週間に1回、約2週間に1回、または約3週間に1回投与される。別の態様では、RSPO-LGR経路インヒビターまたは抗体が、約4週間に1回投与され、有糸分裂インヒビターが、約1週間に1回投与される。別の態様では、RSPO-LGR経路インヒビターまたは抗体が、2、3、4、5、6、7、8サイクル、またはそれより多いサイクルにわたって投与される。別の態様では、有糸分裂インヒビターが、2、3、4、5、6、7、8サイクル、またはそれより多いサイクルにわたって投与される。
【００２９】
本発明のいくつかの態様では、RSPO-LGR経路インヒビターが、対象に、約2mg/kg〜約20mg/kgの投薬量で投与される。いくつかの態様では、RSPO-LGR経路インヒビターまたは抗体が、対象に、約2mg/kg〜約10mg/kgの投薬量で投与される。いくつかの態様では、RSPO-LGR経路インヒビターまたは抗体が、対象に、約2.5mg/kg〜約10mg/kgの投薬量で投与される。いくつかの態様では、RSPO-LGR経路インヒビターまたは抗体が、対象に、約5mg/kg〜約20mg/kgの投薬量で投与される。
【００３０】
別の態様では、RSPO-LGR経路インヒビターまたは抗体が、約2mg/kg〜約20mg/kgの投薬量で1週間に1回投与される。別の態様では、RSPO-LGR経路インヒビターまたは抗体が、約2mg/kg〜約20mg/kgの投薬量で2週間に1回投与される。別の態様では、RSPO-LGR経路インヒビターまたは抗体が、約2mg/kg〜約20mg/kgの投薬量で3週間に1回投与される。別の態様では、RSPO-LGR経路インヒビターまたは抗体が、約2mg/kg〜約20mg/kgの投薬量で4週間に1回投与される。別の態様では、RSPO-LGR経路インヒビターまたは抗体が、約2mg/kg〜約5mg/kgの投薬量で3週間ごとに投与される。別の態様では、RSPO-LGR経路インヒビターまたは抗体が、約3mg/kg〜約7.5mg/kgの投薬量で4週間ごとに投与される。
【００３１】
本発明のいくつかの態様では、本発明のRSPO-LGR経路インヒビターが、少なくとも1種のヒトRSPOタンパク質に特異的に結合する抗体である。1つの態様では、抗体が、RSPO1、RSPO2、およびRSPO3からなる群より選択される少なくとも1種のヒトRSPOタンパク質に特異的に結合する。別の態様では、抗体が、少なくともヒトRSPO1に特異的に結合する。別の態様では、抗体が、（a）TGYTMH（SEQ ID NO:5）を含む重鎖CDR1、GINPNNGGTTYNQNFKG（SEQ ID NO:6）を含む重鎖CDR2、およびKEFSDGYYFFAY（SEQ ID NO:7）を含む重鎖CDR3；ならびに（b）KASQDVIFAVA（SEQ ID NO:8）を含む軽鎖CDR1、WASTRHT（SEQ ID NO:9）を含む軽鎖CDR2、およびQQHYSTPW（SEQ ID NO:10）を含む軽鎖CDR3を含む。別の態様では、抗体が、SEQ ID NO:11またはSEQ ID NO:44を含む重鎖可変領域、およびSEQ ID NO:12またはSEQ ID NO:45を含む軽鎖可変領域を含む。別の態様では、抗体が、SEQ ID NO:11を含む重鎖可変領域、およびSEQ ID NO:12を含む軽鎖可変領域を含む。別の態様では、抗体が、SEQ ID NO:44を含む重鎖可変領域、およびSEQ ID NO:45を含む軽鎖可変領域を含む。
【００３２】
本発明のいくつかの態様では、本発明の抗体が、少なくともヒトRSPO2に特異的に結合する。別の態様では、抗体が、（a）SSYAMS（SEQ ID NO:17）を含む重鎖CDR1、
2018502833.tif 000002
を含む重鎖CDR2、および
2018502833.tif 000003
を含む重鎖CDR3；ならびに（b）
2018502833.tif 000004
を含む軽鎖CDR1、WASTRHT（SEQ ID NO:21）を含む軽鎖CDR2、およびQQHYSTP（SEQ ID NO:22）を含む軽鎖CDR3を含む。別の態様では、抗体が、SEQ ID NO:23を含む重鎖可変領域、およびSEQ ID NO:24を含む軽鎖可変領域を含む。
【００３３】
本発明のいくつかの態様では、本発明の抗体が、少なくともヒトRSPO3に特異的に結合する。別の態様では、抗体が、（a）DYSIH（SEQ ID NO:29）を含む重鎖CDR1、
2018502833.tif 000005
を含む重鎖CDR2、および
2018502833.tif 000006
を含む重鎖CDR3；ならびに（b）
2018502833.tif 000007
を含む軽鎖CDR1、AASNLES（SEQ ID NO:34）またはAAS（SEQ ID NO:35）を含む軽鎖CDR2、および
2018502833.tif 000008
を含む軽鎖CDR3を含む。別の態様では、抗体が、（a）DYSIH（SEQ ID NO:29）を含む重鎖CDR1、
2018502833.tif 000009
を含む重鎖CDR2、およびTYFANNFD（SEQ ID NO:31）を含む重鎖CDR3；ならびに（b）
2018502833.tif 000010
を含む軽鎖CDR1、AASNLES（SEQ ID NO:34）を含む軽鎖CDR2、およびQQSNEDPLT（SEQ ID NO:36）を含む軽鎖CDR3を含む。別の態様では、抗体が、SEQ ID NO:38を含む重鎖可変領域、およびSEQ ID NO:39を含む軽鎖可変領域を含む。
【００３４】
本発明のいくつかの態様では、RSPO-LGR経路インヒビターが、少なくとも1種のヒトLGRタンパク質に特異的に結合する抗体である。別の態様では、抗体が、LGR4、LGR5、およびLGR6からなる群より選択される少なくとも1種のヒトLGRタンパク質に特異的に結合する。別の態様では、抗体が、少なくともヒトLGR5に特異的に結合する。別の態様では、抗体が、（a）ATCC寄託番号PTA-9342を有する88M1ハイブリドーマによって産生されるモノクローナル抗体の重鎖CDR1、CDR2、およびCDR3配列；ならびに（b）ATCC寄託番号PTA-9342を有する88M1ハイブリドーマによって産生されるモノクローナル抗体の軽鎖CDR1、CDR2、およびCDR3配列を含む。別の態様では、抗体が、ATCC寄託番号PTA-9342を有する88M1ハイブリドーマによって産生されるモノクローナル抗体の重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含む。
【００３５】
前述した方法のいくつかの態様では、抗体が、モノクローナル抗体、組換え抗体、キメラ抗体、ヒト化抗体、ヒト抗体、または抗原結合部位を含む抗体フラグメントである。別の態様では、抗体が、単一特異性抗体または二重特異性抗体である。別の態様では、抗体が、IgG1抗体、IgG2抗体、またはIgG4抗体である。
【００３６】
本発明の1つの態様では、RSPO-LGR経路インヒビターがOMP-131R010である。
【００３７】
本発明のいくつかの態様では、RSPO-LGR経路インヒビターが、ヒトLGRタンパク質の細胞外ドメインまたはそのフラグメントを含む可溶性受容体であり、該細胞外ドメインは、ヒトRSPOタンパク質に結合する能力を有する。別の態様では、ヒトLGRタンパク質がLGR5である。別の態様では、ヒトLGRタンパク質の細胞外ドメインが、ヒトLGR5のアミノ酸22〜564（SEQ ID NO:56）を含む。別の態様では、可溶性受容体が非LGRポリペプチドを含む。別の態様では、非LGRポリペプチドが、ヒトLGRタンパク質の細胞外ドメインに直接連結される。別の態様では、非LGRポリペプチドが、リンカーによってヒトLGRタンパク質の細胞外ドメインに接続される。別の態様では、非LGRポリペプチドがヒトFc領域を含む。別の態様では、非LGRポリペプチドが、SEQ ID NO:58、SEQ ID NO:59、SEQ ID NO:60、SEQ ID NO:61、またはSEQ ID NO:62を含む。
【００３８】
前述した方法のいくつかの態様では、本発明の有糸分裂インヒビターが、タキサン、ビンカアルカロイド、エポチロン、またはエリブリンメシラートである。別の態様では、有糸分裂インヒビターが、パクリタキセル、ドセタキセル、およびそれらの誘導体からなる群より選択されるタキサンである。別の態様では、有糸分裂インヒビターが、パクリタキセルまたはnab-パクリタキセルである。別の態様では、有糸分裂インヒビターがドセタキセルである。別の態様では、有糸分裂インヒビターが、ビンブラスチン、ビンクリスチン、ビノレルビン、およびそれらの誘導体からなる群より選択されるビンカアルカロイドである。
【００３９】
前述した方法のいくつかの態様では、本発明のがんが、結腸直腸がん、乳がん、卵巣がん、肺がん、または膵臓がんである。別の態様では、がんが結腸直腸がんである。いくつかの態様では、Wntシグナル伝達が、（例えば、APC遺伝子中の不活性化変異またはβ-カテニン遺伝子中の活性化変異によって）活性化される。一定の態様では、結腸直腸がんが、サードライン結腸直腸がんである。いくつかの態様では、結腸直腸がんが、5-フルオロウラシル、イリノテカン、および／またはオキサリプラチンを含む化学療法での処置に対して耐性である。
【００４０】
いくつかの態様では、本発明の前述した方法が、少なくとも1種の追加の治療剤を投与する工程をさらに含む。別の態様では、追加の治療剤が化学療法剤である。
【００４１】
本発明はまた、がんを処置する方法であって、対象に、治療有効量のOMP-131 R010および治療有効量の、パクリタキセル、nab-パクリタキセル、およびドセタキセルからなる群より選択されるタキサンを投与する工程を含み、タキサンが、OMP-131R010が投与された約1、2、3、4、5、または6日後に投与される方法にも関連する。本発明の1つの態様では、OMP-131R010が、約3週間に1回投与される。別の態様では、OMP-131R010が、約4週間に1回投与される。別の態様では、タキサンが、約1週間に1回投与される。別の態様では、タキサンが、約2週間に1回投与される。別の態様では、タキサンが、約3週間に1回投与される。
【００４２】
前述した方法のいくつかの態様では、追加の治療剤もまた投与される。1つの態様では、追加の治療剤が化学療法剤である。
【００４３】
前述した方法のいくつかの態様では、がんが、結腸直腸がん、乳がん、卵巣がん、肺がん、または膵臓がんである。いくつかの態様では、がんがRSPO遺伝子融合物を含む。いくつかの態様では、がんがRSPO2遺伝子融合物を含む。いくつかの態様では、がんがRSPO3遺伝子融合物を含む。本発明の1つの態様では、がんが結腸直腸がんである。別の態様では、結腸直腸がんが、大腸腺腫症（APC）遺伝子中に不活性化変異を含む。別の態様では、結腸直腸がんが、APC遺伝子中に不活性化変異を含まない。別の態様では、結腸直腸がんが野生型APC遺伝子を含む。別の態様では、結腸直腸がんが、β-カテニン遺伝子中に活性化変異を含む。別の態様では、結腸直腸がんが、β-カテニン遺伝子中に活性化変異を含まない。別の態様では、結腸直腸がんがRSPO遺伝子融合物を含む。別の態様では、RSPO遺伝子融合物がRSPO2遺伝子融合物である。別の態様では、RSPO遺伝子融合物がRSPO3遺伝子融合物である。
【００４４】
本発明のいくつかの態様では、がんのAPC遺伝子中の不活性化変異の存在が判定される。別の態様では、腫瘍またはがんのβ-カテニン遺伝子中の活性化変異の存在が判定される。別の態様では、腫瘍またはがんにおけるRSPO遺伝子融合物の存在が判定される。別の態様では、RSPO遺伝子融合物がRSPO2遺伝子融合物である。別の態様では、RSPO遺伝子融合物がRSPO3遺伝子融合物である。別の態様では、RSPO遺伝子融合物の存在が、PCRベースのアッセイ、マイクロアレイ解析、またはヌクレオチド配列決定によって判定される。
【００４５】
本発明のいくつかの態様では、がんが、それぞれ、RSPO1、RSPO2、RSPO3、および／またはRSPO4の発現のあらかじめ決定されたレベルと比較して高い、RSPO1、RSPO2、RSPO3、および／またはRSPO4レベルを発現する。別の態様では、あらかじめ決定されたRSPO1、RSPO2、RSPO3、またはRSPO4の発現レベルが、同じ組織タイプの腫瘍または腫瘍の群におけるRSPO1、RSPO2、RSPO3、またはRSPO4の発現レベルである。別の態様では、あらかじめ決定されたRSPO1、RSPO2、RSPO3、またはRSPO4の発現レベルが、同じ組織タイプの正常組織におけるRSPO1、RSPO2、RSPO3、またはRSPO4の発現レベルである。
【００４６】
本発明の1つの態様では、がんにおけるRSPO1、RSPO2、RSPO3、およびRSPO4のうちの1つまたは複数の発現レベルもまた決定される。別の態様では、RSPO1、RSPO2、RSPO3、およびRSPO4のうちの1つまたは複数の発現レベルが、PCRベースのアッセイ、マイクロアレイ解析、またはヌクレオチド配列決定によって決定される。
【００４７】
局面または態様が、マーカッシュ群または他の選択肢の群の形で記載されている場合、本発明は、列挙された群全体をまとめて包含するだけではなく、その群の各メンバーも個別に包含し、主群の考えうる部分群もすべて包含し、群のメンバーの1つまたは複数を欠く主群も包含する。本発明はまた、請求項に係る発明における群メンバーのいずれかの1つまたは複数の明示的な排除も、想定している。
【図面の簡単な説明】
【００４８】
【図１】化学療法剤と併用したRSPO-LGR経路インヒビターによるインビボでの卵巣腫瘍成長の阻害。OMP-OV19卵巣腫瘍細胞を、NOD/SCIDマウスに皮下注射した。図1A．マウスを、対照抗体（-●-）、パクリタキセル（-■-）、同じ日に投与したパクリタキセル＋抗RSPO3抗体131R010（OMP-131R10とも呼ばれる）の併用（-▲-）、または、パクリタキセル＋131R010の併用（131R010はパクリタキセルの2日前に投与した）（-▼-）で処置した。抗体を25mg/kgで調薬し、1週間おきに投与した。パクリタキセルを20mg/kgで調薬し、1週間おきに投与した。腫瘍体積を処置後の表示した日に測定し、平均±標準誤差として示した。図1B．61日目の2種の併用処置群における個々の動物の腫瘍体積。
【図２】化学療法剤と併用したRSPO-LGR経路インヒビターによるインビボでの肺腫瘍成長の阻害。OMP-LU77肺腫瘍細胞を、NOD/SCIDマウスに皮下注射した。マウスを、対照抗体（-■-）、パクリタキセル（-▲-）、同じ日に投与したパクリタキセルおよび抗RSPO3抗体131R010（OMP-131R10とも呼ばれる）の併用（-▼-）、または、パクリタキセル＋抗RSPO3抗体131R010の併用（131R010はパクリタキセルの2日前に投与した）（-●-）で処置した。抗体を3週間ごとに25mg/kgで投薬した。Taxolを3週間ごとに20mg/kgで投薬した。腫瘍体積を処置後の表示した日に測定した。
【図３】化学療法剤と併用したRSPO-LGR経路インヒビターによるインビボでの結腸直腸腫瘍成長の阻害。OMP-C8結腸直腸腫瘍細胞を、NOD/SCIDマウスに皮下注射した。図3A．マウスを、対照抗体（-■-）、nab-パクリタキセル（ABRAXANE）（-△-）、同じ日に投与したnab-パクリタキセルおよび抗RSPO3抗体131R010の併用（-●-）、または、nab-パクリタキセル＋抗RSPO3抗体131R010の併用（131R010はnab-パクリタキセルの2日前に投与した）（-▼-）で処置した。抗体を1週間おきに25mg/kgで投薬した。nab-パクリタキセルを1週間に1回、30mg/kgで投薬した。腫瘍体積を処置後の表示した日に測定した。図3B．マウスを、対照抗体（-■-）、5-FUおよびイリノテカン（-○-）、同じ日に投与した5-FU、イリノテカン、および抗RSPO3抗体131R010の併用（-▲-）、または、5-FUおよびイリノテカン＋抗RSPO3抗体131R010の併用（131R010は5-FUおよびイリノテカンの2日前に投与した）（-◇-）で処置した。抗体を1週間おきに25mg/kgで投薬した。5-FUおよびイリノテカンを、それぞれ50mg/kgおよび5mg/kgで、1週間に1回投薬した。腫瘍体積を処置後の表示した日に測定した。
【発明を実施するための形態】
【００４９】
発明の詳細な説明
腫瘍成長を阻害する方法、腫瘍サイズを低減させる方法、およびがんを処置する方法を、本明細書に記載する。本明細書において提供する方法は、対象に、治療有効量のRSPO-LGR経路インヒビターを治療有効量の有糸分裂インヒビターと併用して、時間差投薬スケジュールを用いて投与する工程を含む。いくつかの態様では、RSPO-LGR経路インヒビターが抗体である。いくつかの態様では、RSPO-LGR経路インヒビターが、少なくとも1種のRSPOタンパク質に特異的に結合する抗体である。いくつかの態様では、RSPO-LGR経路インヒビターが、少なくとも1種のLGRタンパク質に特異的に結合する抗体である。いくつかの態様では、RSPO-LGR経路インヒビターが可溶性受容体である。いくつかの態様では、RSPO-LGR経路インヒビターが、LGRタンパク質の細胞外ドメインまたはそのフラグメントを含む可溶性受容体である。いくつかの態様では、有糸分裂インヒビターが、タキサン、ビンカアルカロイド、エポチロン、またはエリブリンメシラートである。
【００５０】
RSPO-LGR経路インヒビターである抗RSPO3抗体OMP-131R010（OMP-131R10とも呼ばれる）およびタキサンの併用での処置は、いくつかの異種移植モデルにおいて腫瘍成長の阻害に有効であった。驚くべきことに、抗RSPO3抗体およびタキサンを送達する順序が、薬物併用の有効性に影響を及ぼした。タキサンの投与の前の、RSPO-LGR経路インヒビターである抗RSPO3抗体OMP-131R010の投与（時間差または逐次様式の投薬）は、異種移植モデルにおける腫瘍成長の阻害が、OMP-131R010およびタキサンの共投与よりも良好であった（例えば、実施例1〜3；図1、2、および3A）。実際に、OMP-131R010およびタキサンの時間差投与は、腫瘍成長を阻害しただけではなく、処置の経過にわたって事実上腫瘍サイズを減少させた。
【００５１】
I．定義
詳細な説明の理解を容易にするために、いくつかの用語および表現を以下に定義する。
【００５２】
本明細書において使用する「アンタゴニスト」および「アンタゴニスト性」という用語は、標的および／またはシグナル伝達経路（例えば、RSPO-LGR経路）の生物学的活性を部分的にまたは完全に遮断するか、阻害するか、低減させるか、または中和する任意の分子を指す。「アンタゴニスト」という用語は、本明細書において、タンパク質（例えば、RSPOタンパク質またはLGRタンパク質）の活性を部分的にまたは完全に遮断するか、阻害するか、低減させるか、または中和する任意の分子を含むように使用される。適切なアンタゴニスト分子には、具体的に、アンタゴニスト抗体、抗体フラグメント、可溶性受容体、または小分子が含まれるが、それらに限定されるわけではない。
【００５３】
本明細書において使用する「抗体」という用語は、免疫グロブリン分子の可変領域内の少なくとも1つの抗原結合部位によって、タンパク質、ポリペプチド、ペプチド、糖質、ポリヌクレオチド、脂質、または前述の組み合わせなどの標的を認識して特異的に結合する、免疫グロブリン分子を指す。本明細書において使用する場合、この用語は、インタクトなポリクローナル抗体、インタクトなモノクローナル抗体、抗原結合部位を含む抗体フラグメント（例えば、Fab、Fab'、F(ab')2、およびFvフラグメント）、一本鎖Fv（scFv）抗体、二重特異性抗体などの多重特異性抗体、単一特異性抗体、一価抗体、キメラ抗体、ヒト化抗体、ヒト抗体、抗体の抗原結合部位を含む融合タンパク質、および、その抗体が所望の生物学的活性を呈する限り、抗原結合部位を含む任意の他の修飾免疫グロブリン分子を包含する。抗体は、それぞれアルファ、デルタ、イプシロン、ガンマ、およびミューと呼ばれる重鎖定常ドメインの独自性に基づく5種の主要な免疫グロブリンクラス：IgA、IgD、IgE、IgG、およびIgM、またはそれらのサブクラス（アイソタイプ）（例えば、IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1およびIgA2）のいずれかであることができる。異なるクラスの免疫グロブリンは、異なる周知のサブユニット構造および三次元配置を有する。抗体は、そのままであることができ、または、毒素および放射性同位体を含むがそれらに限定されるわけではない、他の分子にコンジュゲートすることができる。
【００５４】
本明細書において使用する「抗体フラグメント」という用語は、インタクトな抗体の一部分を指し、一般に、インタクトな抗体の抗原決定可変領域または抗原結合部位を含む。抗体フラグメントの例には、Fab、Fab'、F(ab')2、およびFvフラグメント、線状抗体（linear antibody）、一本鎖抗体、および抗体フラグメントから形成された多重特異性抗体が含まれるが、それらに限定されるわけではない。本明細書において使用する「抗体フラグメント」は、少なくとも1つの抗原結合部位またはエピトープ結合部位を含む。
【００５５】
本明細書において使用する抗体の「可変領域」という用語は、単独または組み合わせのいずれかの、抗体軽鎖の可変領域または抗体重鎖の可変領域を指す。重鎖または軽鎖の可変領域は一般に、「超可変領域」としても知られる3つの相補性決定領域（CDR）によって接続された4つのフレームワーク領域からなる。各鎖中のCDRは、フレームワーク領域によって近接した状態にまとめられており、他方の鎖からのCDRと共に、抗体の抗原結合部位の形成に寄与する。CDRを決定するための技法は少なくとも2つある：（1）異種間の配列可変性に基づくアプローチ（すなわち、Kabat et al., 1991, Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Edition, National Institutes of Health, Bethesda MD）、および（2）抗原-抗体複合体の結晶学的研究に基づくアプローチ（Al-Lazikani et al., 1997, J. Mol. Biol., 273:927-948）。加えて、当技術分野では、これら2つのアプローチの組み合わせを用いて、CDRを決定することがある。
【００５６】
本明細書において使用する「モノクローナル抗体」という用語は、単一の抗原決定基またはエピトープの著しく特異的な認識および結合に関わる均一な抗体集団を指す。これは、典型的には異なる抗原決定基に対する異なる抗体の混合物を含むポリクローナル抗体とは対照的である。「モノクローナル抗体」という用語は、インタクトな抗体と完全長抗体の両方、ならびに抗体フラグメント（例えば、Fab、Fab'、F(ab')2、Fv）、一本鎖（scFv）抗体、抗体の一部分を含む融合タンパク質、および少なくとも1つの抗原結合部位を含む任意の他の修飾免疫グロブリン分子を包含する。さらにまた、「モノクローナル抗体」は、ハイブリドーマ生産、ファージ選択、組換え発現、およびトランスジェニック動物を含むがそれらに限定されるわけではない、任意の数の技法によって作製される、そのような抗体を指す。
【００５７】
本明細書において使用する「ヒト化抗体」という用語は、最小限の非ヒト配列を含有する特異的な免疫グロブリン鎖、キメラ免疫グロブリン、またはそのフラグメントである抗体を指す。典型的には、ヒト化抗体は、CDRのアミノ酸残基が、所望の特異性、親和性、および／または結合能を有する非ヒト種（例えば、マウス、ラット、ウサギ、またはハムスター）のCDR由来のアミノ酸残基により置き換えられているヒト免疫グロブリンである。
【００５８】
本明細書において使用する「ヒト抗体」という用語は、ヒトによって産生される抗体、または、当技術分野において公知の技法のいずれかを用いて作製される、ヒトによって産生される抗体に対応するアミノ酸配列を有する抗体を指す。
【００５９】
本明細書において使用する「キメラ抗体」という用語は、免疫グロブリン分子のアミノ酸配列が2つ以上の種に由来する抗体を指す。典型的には、軽鎖と重鎖の両方の可変領域が、所望の特異性、親和性、および／または結合能を有する1つの哺乳動物種（例えば、マウス、ラット、ウサギなど）に由来する抗体の可変領域に対応し、一方、定常領域は、別の種（通常はヒト）に由来する抗体中の配列に相同である。
【００６０】
本明細書において使用する「親和性成熟抗体」という用語は、1つまたは複数のCDR中に、改変を持たない親抗体と比較して抗原に対する抗体の親和性の改善をもたらす1つまたは複数の改変を有する抗体を指す。好ましい親和性成熟抗体は、標的抗原に対してナノモルの親和性、またはさらにピコモルの親和性を有することになる。親和性成熟抗体は、重鎖および軽鎖可変領域シャッフリング、CDRおよび／もしくはフレームワーク残基のランダム変異導入法、またはCDRおよび／もしくはフレームワーク残基の部位指定変異導入法を含む、当技術分野において公知の手法によって生産される。
【００６１】
「エピトープ」および「抗原決定基」という用語は、本明細書において互換的に使用され、特定の抗体により認識されて特異的に結合される能力を有する抗原の一部分を指す。抗原がポリペプチドである場合、エピトープは、連続するアミノ酸からも、タンパク質の三次フォールディングによって並置される不連続なアミノ酸からも形成されうる。連続するアミノ酸から形成されるエピトープ（線状エピトープとも呼ばれる）は、典型的には、タンパク質変性時に保たれるのに対し、三次フォールディングによって形成されるエピトープ（コンフォメーショナルエピトープとも呼ばれる）は、典型的には、タンパク質変性時に失われる。エピトープは、典型的には、特有の空間的コンフォメーションにおいて少なくとも3個、より通常は少なくとも5個、または8〜10個のアミノ酸を含む。
【００６２】
本明細書において使用する「選択的に結合する」または「特異的に結合する」という用語は、結合作用物質または抗体が、エピトープ、タンパク質、または標的分子に、無関連のタンパク質または関連するタンパク質を含む代替物質よりも、より高い頻度で、より迅速に、より長い持続時間で、より強い親和性で、または上記のいくつかの組み合わせで、反応または会合することを意味する。一定の態様では、「特異的に結合する」が、例えば、抗体が、約0.1 mM以下、しかしより通常は約1μM未満のKDで標的に結合することを意味する。一定の態様では、「特異的に結合する」が、抗体が、少なくとも約0.1μM以下、少なくとも約0.01μM以下、または少なくとも約1 nM以下のKDで標的に結合することを意味する。異なる種における相同タンパク質間の配列同一性のために、特異的結合は、2つ以上の種のタンパク質（例えば、ヒトRSPOタンパク質およびマウスRSPOタンパク質）を認識する抗体を含むことができる。同様に、異なるタンパク質のポリペプチド配列の一定領域内の相同性のために、特異的結合は、2種以上のタンパク質（例えば、ヒトRSPO1およびヒトRSPO3）を認識する抗体（または他のポリペプチドもしくは結合作用物質）を含むことができる。一定の態様では、第1の標的に特異的に結合する抗体または結合作用物質が、第2の標的に特異的に結合できるかまたはできないことが理解される。そのように、「特異的結合」は、排他的結合、すなわち単一標的への結合を（含むことはできるものの）必ずしも必要とはしない。したがって、抗体は、一定の態様では、2つ以上の標的に特異的に結合することができる。一定の態様では、複数の標的に、抗体上の同じ抗原結合部位が結合することができる。例えば、抗体は、ある例では、その各々が2種以上のタンパク質（例えば、RSPO1およびRSPO3）上の同じエピトープに特異的に結合する2つの同一抗原結合部位を含むことができる。一定の代替態様では、抗体が二重特異性であり、特異性が異なる少なくとも2つの抗原結合部位を含むことができる。非限定的な例として、二重特異性抗体は、1つのタンパク質（例えば、ヒトRSPOタンパク質）上のエピトープを認識する1つの抗原結合部位を含み、さらに、第2のタンパク質上の異なるエピトープを認識する第2の異なる抗原結合部位を含むことができる。一般に、結合への言及は特異的結合を意味するが、必ずしもそうとは限らない。
【００６３】
本明細書において使用する「可溶性受容体」という用語は、可溶型で細胞から分泌されうる、受容体の第1膜貫通ドメインの前にある受容体タンパク質の細胞外フラグメント（またはその一部分）を指す。
【００６４】
本明細書において使用する「LGR可溶性受容体」という用語は、可溶型で細胞から分泌されうる、受容体の第1膜貫通ドメインの前にあるLGR受容体タンパク質（例えば、LGR5）の細胞外フラグメントを指す。細胞外ドメイン（ECD）全体およびより小さいECDのフラグメントを含むLGR可溶性受容体が、この用語によって包含される。一定の態様では、細胞外ドメインが、ヒトLGR5のアミノ酸22〜564（SEQ ID NO:56）を含む。一定の態様では、細胞外フラグメントが、少なくとも1種のヒトRSPOタンパク質に結合する能力を有する。
【００６５】
「ポリペプチド」および「ペプチド」および「タンパク質」という用語は、本明細書において互換的に使用され、任意の長さのアミノ酸のポリマーを指す。ポリマーは、線状または分岐状であることができ、修飾アミノ酸を含むことができ、非アミノ酸により中断されることができる。これらの用語はまた、天然に修飾されているか、または介入、例えば、ジスルフィド結合形成、グリコシル化、脂質付加、アセチル化、リン酸化、または任意の他の操作もしくは修飾、例えば標識構成要素とのコンジュゲーションによって修飾されている、アミノ酸ポリマーも包含する。この定義には、例えば、1つまたは複数のアミノ酸類似体（例えば、非天然アミノ酸を含む）、および当技術分野において公知の他の修飾を含有するポリペプチドも含まれる。本明細書に記載する方法において使用するポリペプチドは抗体に基づきうるため、一定の態様では、ポリペプチドは一本鎖または会合した鎖として存在しうることが理解される。
【００６６】
本明細書において使用する「アミノ酸」という用語は、天然アミノ酸および合成アミノ酸、ならびに、天然アミノ酸と同様に機能するアミノ酸類似体およびアミノ酸模倣薬を指す。天然アミノ酸は、遺伝コードによってコードされるもの、ならびに、後に修飾されているアミノ酸、例えば、ヒドロキシプロリン、γ-カルボキシグルタマート、およびO-ホスホセリンである。「アミノ酸類似体」という表現は、天然アミノ酸と同じ基本化学構造、例えば、水素、カルボキシル基、アミノ基、およびR基に結合しているα炭素を有する化合物、例えば、ホモセリン、ノルロイシン、メチオニンスルホキシド、メチオニンメチルスルホニウムを指す。そのような類似体は、修飾されたR基を有しうる（例えば、ノルロイシン）か、または修飾されたペプチドバックボーンを有しうるが、天然アミノ酸と同じ基本化学構造を保つ。「アミノ酸模倣薬」という表現は、アミノ酸の一般化学構造とは異なる構造を有するが、天然アミノ酸と同様に機能する化学化合物を指す。
【００６７】
「ポリヌクレオチド」および「核酸」という用語は、本明細書において互換的に使用され、任意の長さのヌクレオチドのポリマーを指し、DNAおよびRNAを含む。ヌクレオチドは、デオキシリボヌクレオチド、リボヌクレオチド、修飾ヌクレオチドもしくは修飾塩基、および／またはそれらの類似体、またはDNAポリメラーゼもしくはRNAポリメラーゼによってポリマー中に組み込まれうる任意の基質であることができる。
【００６８】
2つ以上の核酸またはポリペプチドの文脈における「同一」またはパーセント「同一性」という用語は、どの保存的アミノ酸置換も配列同一性の一部とみなさずに一致度が最大になるように、比較して（必要であればギャップを導入して）整列させた時に、同じであるか、または指定したパーセンテージの同じヌクレオチド残基もしくはアミノ酸残基を有する、2つ以上の配列または部分配列を指す。パーセント同一性は、配列比較のソフトウェアもしくはアルゴリズムを用いて、または目視検査によって測定することができる。アミノ酸配列またはヌクレオチド配列のアラインメントを得るために使用することができる種々のアルゴリズムおよびソフトウェアが、当技術分野において周知である。これらには、BLASTおよびBLASTバリエーション、ALIGNおよびALIGNバリエーション、Megalign、BestFit、GCG Wisconsin Packageなどが含まれるが、それらに限定されるわけではない。いくつかの態様では、2つの核酸またはポリペプチドが実質的に同一であり、これは、それらが、配列比較アルゴリズムを用いて、または目視検査によって測定した際、一致度が最大になるように比較して整列させた時に、少なくとも70％、少なくとも75％、少なくとも80％、少なくとも85％、少なくとも90％、およびいくつかの態様では、少なくとも95％、96％、97％、98％、99％のヌクレオチド残基同一性またはアミノ酸残基同一性を有することを意味する。いくつかの態様では、同一性が、配列のうち、少なくとも約10、少なくとも約20、少なくとも約40〜60ヌクレオチドもしくは残基長、少なくとも約60〜80ヌクレオチドもしくは残基長、またはそれらの間の任意の整数値である領域にわたって存在する。いくつかの態様では、同一性が、60〜80ヌクレオチドもしくは残基より長い領域、例えば少なくとも約80〜100ヌクレオチドもしくは残基の領域にわたって存在し、いくつかの態様では、配列が、比較されている配列、例えばヌクレオチド配列のコード領域の全長にわたって、実質的に同一である。
【００６９】
本明細書において使用する「保存的アミノ酸置換」という用語は、あるアミノ酸残基が、類似する側鎖を有する別のアミノ酸残基で置き換えられる置換を指す。類似する側鎖を有するアミノ酸残基のファミリーが、当技術分野において規定されており、これには、塩基性側鎖（例えば、リジン、アルギニン、ヒスチジン）、酸性側鎖（例えば、アスパラギン酸、グルタミン酸）、非荷電極性側鎖（例えば、グリシン、アスパラギン、グルタミン、セリン、スレオニン、チロシン、システイン）、非極性側鎖（例えば、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、フェニルアラニン、メチオニン、トリプトファン）、β-分岐側鎖（例えば、スレオニン、バリン、イソロイシン）、および芳香族側鎖（例えば、チロシン、フェニルアラニン、トリプトファン、ヒスチジン）が含まれる。例えば、フェニルアラニンによるチロシンの置換は保存的置換である。好ましくは、ポリペプチドおよび抗体の配列における保存的置換は、そのアミノ酸配列を含有するポリペプチドまたは抗体の、抗原への結合を抑止しない。抗原結合を排除しないアミノ酸保存的置換を特定する方法は、当技術分野において周知である。
【００７０】
本明細書において使用する「ベクター」という用語は、宿主細胞に、1つまたは複数の関心対象の遺伝子または配列を送達し、通常は、それを発現させる能力を有する、コンストラクトを意味する。ベクターの例には、ウイルスベクター、裸のDNAまたはRNA発現ベクター、プラスミド、コスミド、またはファージベクター、カチオン性凝集剤と会合したDNAまたはRNA発現ベクター、およびリポソームに封入されたDNAまたはRNA発現ベクターが含まれるが、それらに限定されるわけではない。
【００７１】
本明細書において使用する場合、「単離された」ポリペプチド、抗体、ポリヌクレオチド、ベクター、細胞、または組成物とは、天然には見いだされない形態にあるポリペプチド、抗体、ポリヌクレオチド、ベクター、細胞、または組成物である。単離されたポリペプチド、抗体、ポリヌクレオチド、ベクター、細胞、または組成物には、それらがもはや天然に見いだされる形態にはない程度にまで精製されたものが含まれる。いくつかの態様では、単離されたポリペプチド、抗体、ポリヌクレオチド、ベクター、細胞、または組成物が、実質的に純粋である。
【００７２】
本明細書において使用する「実質的に純粋」という用語は、少なくとも50％純粋（すなわち、汚染物質を含まない）、少なくとも90％純粋、少なくとも95％純粋、少なくとも98％純粋、または少なくとも99％純粋である材料を指す。
【００７３】
本明細書において使用する「がん」および「がん性」という用語は、細胞の集団が無調節の細胞成長を特徴とする、哺乳動物における生理的状態を指すか、または記述する。がんの例には、癌腫、芽細胞腫、肉腫、ならびにリンパ腫および白血病などの血液がんが含まれるが、それらに限定されるわけではない。
【００７４】
本明細書において使用する「増殖性障害」および「増殖性疾患」という用語は、がんのような異常な細胞増殖と関連する障害を指す。
【００７５】
本明細書において使用する「腫瘍」および「新生物」という用語は、前がん性病巣を含む、良性（非がん性）または悪性（がん性）いずれかの、過剰な細胞成長または細胞増殖がもたらす任意の組織塊を指す。
【００７６】
本明細書において使用する「転移」という用語は、がんが元の部位から身体の他の領域に伝播または移行して、類似するがん性病巣を新しい場所に発生させる過程を指す。「転移」細胞または「転移性」細胞は、一般に、隣接細胞との接着性接触を失って疾患の原発部位から移動することで、隣接した体構造に侵入するものである。
【００７７】
「がん幹細胞」および「CSC」および「腫瘍幹細胞」および「腫瘍始原細胞」という用語は、本明細書において互換的に使用され、（1）高い増殖能を有し、（2）非対称細胞分裂を起こして増殖能または発生能が低減している1タイプまたは複数タイプの分化型細胞の子孫を生成させる能力を有し、かつ（3）自己再生または自己維持のために対称細胞分裂を起こす能力を有する、がんまたは腫瘍由来の細胞を指す。これらの性質は、免疫不全宿主（例えば、マウス）への累代移植時に、腫瘍を形成しえない腫瘍細胞の大部分と比較して、腫瘍またはがんを形成または確立する能力を、がん幹細胞に付与する。がん幹細胞は、自己再生と分化とを無秩序に起こすことで、変異が発生するにつれて経時的に変化しうる異常な細胞タイプを伴う腫瘍を形成する。
【００７８】
本明細書において使用する「がん細胞」および「腫瘍細胞」という用語は、がん細胞集団の大部分を構成する非腫瘍形成性細胞と、腫瘍形成性細胞（がん幹細胞）の両方を包む、がんまたは腫瘍または前がん性病巣に由来する細胞の全集団を指す。本明細書において使用する場合、「がん細胞」または「腫瘍細胞」という用語は、それらの腫瘍細胞をがん幹細胞とは区別するために、再生し分化する能力を欠く細胞をもっぱら指す時には、「非腫瘍形成性」という用語によって修飾される。
【００７９】
本明細書において使用する「腫瘍形成性」という用語は、自己再生の（追加の腫瘍形成性がん幹細胞を生じさせる）性質と、増殖してすべての他の腫瘍細胞を生成する（分化した、したがって非腫瘍形成性の腫瘍細胞を生じさせる）性質とを含む、がん幹細胞の機能的特色を指す。
【００８０】
本明細書において使用する「腫瘍形成能」という用語は、免疫不全宿主（例えば、マウス）への累代移植時に触知可能な腫瘍を形成するという、腫瘍由来の細胞試料の能力を指す。
【００８１】
本明細書において使用する「対象」という用語は、特定の処置の受容者となる任意の動物（例えば、哺乳動物）を指し、ヒト、非ヒト霊長類、イヌ、ネコ、齧歯類動物などを含むが、それらに限定されるわけではない。典型的には、「対象」および「患者」という用語は、ヒト対象に関して、本明細書において互換的に使用される。
【００８２】
「薬学的に許容される」という用語は、ヒトを含む動物における使用について、連邦政府もしくは州政府の規制当局によって承認されたかもしくは承認されうる、または、米国薬局方もしくは他の一般に認識されている薬局方に掲載されている、作用物質、化合物、分子などを指す。
【００８３】
「薬学的に許容される賦形剤、担体、またはアジュバント」および「許容される薬学的担体」という表現は、治療剤と一緒に対象に投与することができて、その薬理学的活性を破壊せず、治療効果を送達するのに十分な用量で投与した時に非毒性である、賦形剤、担体、またはアジュバントを指す。一般に、当業者およびFDAは、薬学的に許容される賦形剤、担体、またはアジュバントを、任意の製剤または薬学的組成物の不活性成分であると考える。
【００８４】
本明細書において使用する「有効量」および「治療有効量」および「治療効果」という用語は、対象または哺乳動物における疾患または障害を「処置する」のに有効な結合作用物質、抗体、ポリペプチド、ポリヌクレオチド、小分子、または他の治療剤の量を指す。がんの場合、作用物質（例えば、抗体）の治療有効量は、治療効果を有し、したがって、がん細胞の数を低減させ、腫瘍形成能、腫瘍形成頻度、または腫瘍形成の能力を減少させ、がん幹細胞の数または頻度を低減させ、腫瘍サイズを低減させ、がん細胞集団を低減させ、例えば、軟組織および骨へのがんの伝播を含む、周辺臓器へのがん細胞の浸潤を阻害および／または停止し、腫瘍またはがん細胞の転移を阻害および停止し、腫瘍またはがん細胞の成長を阻害および／または停止し、がんと関連する症状の1つまたは複数をある程度まで除去し、罹病率および死亡率を低減させ、生活の質を改善することができるか、またはそのような効果の組み合わせを起こすことができる。作用物質が、成長を防止し、かつ／または既存のがん細胞を殺傷する限りにおいて、それを、細胞増殖抑制性および／または細胞傷害性と呼ぶことができる。
【００８５】
「処置する」および「処置」および「処置すること」および「軽減する」および「軽減すること」という用語は、1）診断された病的状態または障害を治し、減退させ、その症状を減らし、かつ／またはその進行を休止させる治療的手段と、2）標的とする病的状態または障害の発生を防止するか、または遅らせる予防的または防止的手段との両方を指す。したがって、処置を必要とする者には、すでに障害を有する者、障害を患いやすい者、および障害を防止すべき者が含まれる。いくつかの態様では、患者が以下のうちの1つまたは複数を示すのであれば、対象は本明細書に記載する方法によってうまく「処置され」ている：がん細胞の数の低減またはがん細胞の完全な欠如；腫瘍サイズの低減；軟組織および骨へのがん細胞の伝播を含む、周辺臓器へのがん細胞の浸潤の阻害または欠如；腫瘍またはがん細胞の転移の阻害または欠如；がん成長の阻害または欠如；特定のがんと関連する1つまたは複数の症状の除去；罹病率および死亡率の低減；生活の質の改善；腫瘍形成能の低減；がん幹細胞の数または頻度の低減；または効果のいくつかの組み合わせ。
【００８６】
本開示および特許請求の範囲において使用する場合、単数形「1つの（a）」、「1つの（an）」、および「その（the）」は、文脈上そうでないことが明らかな場合を除き、複数形を含む。
【００８７】
本明細書において「を含む（comprising）」という言葉で態様が説明されている場合は常に、「からなる（consisting of）」および／または「から本質的になる（consisting essentially of）」という用語で説明される、それ以外の点では類似する態様も提供されると理解される。また、本明細書において「から本質的になる」という言葉で態様が説明されている場合は常に、「からなる」という用語で説明される、それ以外の点では類似する態様も提供されると理解される。
【００８８】
本明細書において「Aおよび／またはB」などの表現で使用される「および／または」という用語は、AとBの両方、AまたはB、A（のみ）、およびB（のみ）を含むものとする。同様に、「A、B、および／またはC」などの表現で使用される「および／または」という用語は、以下の態様の各々を包含するものとする：A、B、およびC；A、B、またはC；AまたはC；AまたはB；BまたはC；AおよびC；AおよびB；BおよびC；A（のみ）；B（のみ）；ならびにC（のみ）。
【００８９】
II．使用方法および薬学的組成物
有糸分裂インヒビターと併用したRSPO-LGR経路インヒビター（例えば、RSPO結合作用物質およびLGR結合作用物質）は、特に時間差または逐次投薬レジメンで使用する時に、がんの処置などの治療的処置法を含むがそれらに限定されるわけではない、さまざまな適用に有用である。一定の態様では、RSPO-LGR経路インヒビターおよび有糸分裂インヒビターの併用が、特に時間差または逐次投薬レジメンで使用する時に、β-カテニンシグナル伝達を阻害する、有糸分裂を阻害する、腫瘍成長を阻害する、腫瘍サイズを低減させる、腫瘍細胞分化を誘発する、アポトーシスを誘発する、腫瘍細胞死を誘発する、腫瘍細胞分化を増加させる、アポトーシスを増加させる、腫瘍細胞死を増加させる、腫瘍体積を低減させる、がん幹細胞頻度を低減させる、および／または腫瘍の腫瘍形成能を低減させる方法に有用である。使用方法は、インビトロ、エクスビボ、またはインビボの方法であることができる。
【００９０】
本明細書において使用する場合、「時間差または逐次投薬レジメン」という用語および「時間差投薬スケジュール」などの関連する用語法または表現法は、一般に、各作用物質の使用または投与が時間をかけて時間差である、有糸分裂インヒビターと併用したRSPO-LGR経路インヒビターの使用を指す。いくつかの態様では、第1の作用物質が、第2の作用物質の投与の少なくとも約12、24、36、48、60、72、84、または96時間前に投与される。いくつかの態様では、第1の作用物質が、第2の作用物質の投与の少なくとも約1日、約2日、約3日、約4日、約5日、約6日、または約7日前に投与される。いくつかの態様では、2種の作用物質の時間差投与が、投薬量のバリエーションを含む。本明細書において使用する場合、この定義は、追加の治療剤の投与を妨げない。
【００９１】
いくつかの態様では、有糸分裂インヒビターと併用したRSPO-LGR経路インヒビター（例えば、RSPO結合作用物質またはLGR結合作用物質）を、特に時間差または逐次投薬レジメンで使用する時に、β-カテニンシグナル伝達と関連する疾患を処置する方法において使用する。いくつかの態様では、疾患が、β-カテニンシグナル伝達に依存している。
【００９２】
いくつかの態様では、RSPO-LGR経路インヒビター（例えば、RSPO結合作用物質またはLGR結合作用物質）および有糸分裂インヒビターの併用で処置され、治療剤が時間差投薬レジメンを用いて投与される疾患が、がんである。一定の態様では、がんが、β-カテニンシグナル伝達依存性腫瘍細胞、またはβ-カテニンシグナル伝達依存性腫瘍細胞のサブセットを含む。一定の態様では、がんが、β-カテニンを発現または過剰発現する腫瘍細胞、または腫瘍細胞のサブセットを特徴とする。一定の態様では、がんが、1種または複数種のRSPOタンパク質を発現または過剰発現する腫瘍細胞、または腫瘍細胞のサブセットを特徴とする。一定の態様では、がんが、1種または複数種のLGRタンパク質を発現または過剰発現する腫瘍細胞、または腫瘍細胞のサブセットを特徴とする。
【００９３】
対象に、治療有効量のRSPO-LGR経路インヒビターおよび治療有効量の有糸分裂インヒビターを投与する工程を含む、がんを処置する方法であって、RSPO-LGR経路インヒビターが最初に投与され、有糸分裂インヒビターが2番目に投与される方法を、本明細書に記載する。対象に、治療有効量のRSPO-LGR経路インヒビターおよび治療有効量の有糸分裂インヒビターを投与する工程を含む、がんを処置する方法であって、RSPO-LGR経路インヒビターおよび有糸分裂インヒビターが時間差投薬スケジュールを用いて投与され、RSPO-LGR経路インヒビターが最初に投与される方法を、本明細書に記載する。いくつかの態様では、有糸分裂インヒビターが、RSPO-LGR経路インヒビターが投与された約1日、約2日、約3日、約4日、約5日、約6日、または約7日後に投与される。また、対象におけるがんの処置において有糸分裂インヒビターの有効性を増大させる方法であって、対象に治療有効量の有糸分裂インヒビターを、治療有効量のRSPO-LGR経路インヒビターが投与された約1日、約2日、約3日、約4日、約5日、または約6日後に投与する工程を含む方法も、本明細書に記載する。さらに、対象におけるがんの処置において有糸分裂インヒビターの有効性を増大させる方法であって、対象に治療有効量のRSPO-LGR経路インヒビターを投与する工程を含み、対象が、RSPO-LGR経路インヒビターが投与された約1日、約2日、約3日、約4日、約5日、または約6日後に、治療有効量の有糸分裂インヒビターを投与されるようにスケジュール設定されている方法を、本明細書に記載する。いくつかの態様では、がんの処置における有糸分裂インヒビターの有効性の増大が、RSPO-LGR経路インヒビターを伴わずに使用される有糸分裂インヒビターの有効性に対するものである。いくつかの態様では、がんの処置における有糸分裂インヒビターの有効性の増大が、有糸分裂インヒビターおよびRSPO-LGR経路インヒビターが実質的に同時に、例えば、同じ日に患者に投与される時に観察される有効性に対するものである。いくつかの態様では、がんを処置する方法が、対象に、治療有効量のRSPO-LGR経路インヒビターおよび治療有効量の有糸分裂インヒビターを投与する工程を含み、ここで、RSPO-LGR経路インヒビターおよび有糸分裂インヒビターは時間差投薬スケジュールを用いて投与され、RSPO-LGR経路インヒビターが最初に投与され；かつRSPO-LGR経路インヒビターは、少なくとも1種のヒトRSPOタンパク質に特異的に結合する抗体、少なくとも1種のヒトLGRタンパク質に特異的に結合する抗体、またはヒトLGRタンパク質の細胞外ドメインもしくはそのフラグメントを含む可溶性受容体である。いくつかの態様では、有糸分裂インヒビターが、RSPO-LGR経路インヒビターが投与された約1、2、3、4、5、6、または7日後に投与される。いくつかの態様では、有糸分裂インヒビターが、RSPO-LGR経路インヒビターが投与された約2日後に投与される。いくつかの態様では、有糸分裂インヒビターが、RSPO-LGR経路インヒビターが投与された約3日後に投与される。
【００９４】
いくつかの態様では、方法が、がんの処置のためのRSPO-LGR経路インヒビターおよび有糸分裂インヒビターの使用を含み、ここで、RSPO-LGR経路インヒビターおよび有糸分裂インヒビターは時間差投薬スケジュールで使用され、RSPO-LGR経路インヒビターが最初に使用され；かつRSPO-LGR経路インヒビターは、少なくとも1種のヒトRSPOタンパク質に特異的に結合する抗体、少なくとも1種のヒトLGRタンパク質に特異的に結合する抗体、またはヒトLGRタンパク質の細胞外ドメインもしくはそのフラグメントを含む可溶性受容体である。
【００９５】
対象におけるがんの処置において有糸分裂インヒビターの有効性を増大させる方法であって、（a）対象にRSPO-LGR経路インヒビターを投与する工程；および（b）対象に有糸分裂インヒビターを、RSPO-LGR経路インヒビターが投与された約1日、約2日、約3日、約4日、約5日、または約6日後に投与する工程を含む方法を、本明細書に記載する。いくつかの態様では、対象におけるがんの処置において有糸分裂インヒビターの有効性を増大させる方法が、対象に有糸分裂インヒビターを、RSPO-LGR経路インヒビターが投与された約1、2、3、4、5、または6日後に投与する工程を含み、ここで、RSPO-LGR経路インヒビターは、少なくとも1種のヒトRSPOタンパク質に特異的に結合する抗体、少なくとも1種のヒトLGRタンパク質に特異的に結合する抗体、またはヒトLGRタンパク質の細胞外ドメインもしくはそのフラグメントを含む可溶性受容体である。いくつかの態様では、対象におけるがんの処置において有糸分裂インヒビターの有効性を増大させる方法が、（a）対象にRSPO-LGR経路インヒビターを投与する工程であって、該RSPO-LGR経路インヒビターが、（i）少なくとも1種のヒトRSPOタンパク質に特異的に結合する抗体、（ii）少なくとも1種のヒトLGRタンパク質に特異的に結合する抗体、または（iii）ヒトLGRタンパク質の細胞外ドメインもしくはそのフラグメントを含む可溶性受容体である工程；および（b）対象に有糸分裂インヒビターを、RSPO-LGR経路インヒビターが投与された約1、2、3、4、5、または6日後に投与する工程を含む。いくつかの態様では、がんの処置における有糸分裂インヒビターの有効性の増大が、RSPO-LGR経路インヒビターを伴わずに使用される有糸分裂インヒビターの有効性に対するものである。いくつかの態様では、がんの処置における有糸分裂インヒビターの有効性の増大が、有糸分裂インヒビターおよびRSPO-LGR経路インヒビターが実質的に同時に、例えば、同じ日に患者に投与される時に観察される有効性に対するものである。
【００９６】
いくつかの態様では、がんの処置のために有糸分裂インヒビターの有効性を増大させる方法が、RSPO-LGR経路インヒビターが使用された約1，2、3、4、5、または6日後の有糸分裂インヒビターの使用を含み、ここで、RSPO-LGR経路インヒビターは、少なくとも1種のヒトRSPOタンパク質に特異的に結合する抗体、少なくとも1種のヒトLGRタンパク質に特異的に結合する抗体、またはヒトLGRタンパク質の細胞外ドメインもしくはそのフラグメントを含む可溶性受容体である。いくつかの態様では、がんの処置における有糸分裂インヒビターの有効性の増大が、RSPO-LGR経路インヒビターを伴わずに使用される有糸分裂インヒビターの有効性に対するものである。いくつかの態様では、がんの処置における有糸分裂インヒビターの有効性の増大が、有糸分裂インヒビターおよびRSPO-LGR経路インヒビターが実質的に同時に、例えば、同じ日に患者に投与される時に観察される有効性に対するものである。
【００９７】
RSPO-LGR経路インヒビターおよび有糸分裂インヒビターを用いる併用療法の有効性を改善する方法であって、RSPO-LGR経路インヒビターがその標的に達するのに十分な時間を可能にした後に有糸分裂インヒビターを投与する工程を含む方法を、本明細書に記載する。いくつかの態様では、有効性を改善する方法が、RSPO-LGR経路インヒビターがその標的で蓄積するのに十分な時間を可能にした後に有糸分裂インヒビターを投与する工程を含む。いくつかの態様では、標的がRSPOタンパク質である。いくつかの態様では、標的がLGRタンパク質である。いくつかの態様では、標的が腫瘍と関連して見いだされる。
【００９８】
本明細書に記載する方法のいくつかの態様では、有糸分裂インヒビターが、RSPO-LGR経路インヒビターが投与された約1日後に投与される。いくつかの態様では、有糸分裂インヒビターが、RSPO-LGR経路インヒビターが投与された約2日後に投与される。いくつかの態様では、有糸分裂インヒビターが、RSPO-LGR経路インヒビターが投与された約3日後に投与される。
【００９９】
本明細書に記載する方法のいくつかの態様では、RSPO-LGR経路インヒビターおよび有糸分裂インヒビターが、相乗的に作用する。いくつかの態様では、RSPO-LGR経路インヒビターが、がん細胞を有糸分裂インヒビターに対して敏感にする。いくつかの態様では、RSPO-LGR経路インヒビターが、がん幹細胞を有糸分裂インヒビターに対して敏感にする。いくつかの態様では、RSPO-LGR経路インヒビターが、細胞周期進行を有糸分裂（M）期中に抑制または停止する。いくつかの態様では、RSPO-LGR経路インヒビターが、細胞周期進行をG2/Mチェックポイントで抑制または停止する。いくつかの態様では、RSPO-LGR経路インヒビターが、細胞周期進行をG2/Mチェックポイントで抑制または停止して、有糸分裂インヒビターの有効性を増大させる。いくつかの態様では、RSPO-LGR経路インヒビターが、細胞周期進行をM期で抑制または停止して、有糸分裂インヒビターの有効性を増大させる。いくつかの態様では、時間差投薬が、β-カテニンシグナル伝達の阻害の持続および有糸分裂インヒビターの有効性の増大を可能にする。
【０１００】
本明細書に記載する方法のいくつかの態様では、有糸分裂インヒビターと併用したRSPO-LGR経路インヒビターの時間差投薬スケジュールが、腫瘍細胞のアポトーシスを増加させる。いくつかの態様では、有糸分裂インヒビターと併用したRSPO-LGR経路インヒビターの時間差投薬スケジュールが、腫瘍部位でのRSPO-LGR経路インヒビターの蓄積を可能にする。いくつかの態様では、有糸分裂インヒビターと併用したRSPO-LGR経路インヒビターの時間差投薬スケジュールが、RSPO-LGR経路インヒビターおよび有糸分裂インヒビターの抗腫瘍活性の同調を可能にする。
【０１０１】
本明細書に記載する方法のいくつかの態様では、RSPO-LGR経路インヒビターが、1週間に1回投与される。いくつかの態様では、RSPO-LGR経路インヒビターが、2週間に1回投与される。いくつかの態様では、RSPO-LGR経路インヒビターが、3週間に1回投与される。いくつかの態様では、RSPO-LGR経路インヒビターが、4週間に1回投与される。いくつかの態様では、有糸分裂インヒビターが、約1週間に1回、約2週間に1回、約3週間に1回、約4週間に1回、または、4週間サイクルのうち約3週間に1回投与される。いくつかの態様では、RSPO-LGR経路インヒビターが、約2週間に1回投与され、有糸分裂インヒビターが、1週間に1回、または4週間サイクルのうち3週間にわたって1週間に1回投与される。いくつかの態様では、RSPO-LGR経路インヒビターが、約3週間に1回投与され、有糸分裂インヒビターが、1週間に1回、または4週間サイクルのうち3週間にわたって1週間に1回投与される。いくつかの態様では、RSPO-LGR経路インヒビターが、4週間に1回投与される。いくつかの態様では、有糸分裂インヒビターが、約1週間に1回、約2週間に1回、約3週間に1回、または約4週間に1回投与される。いくつかの態様では、RSPO-LGR経路インヒビターが、4週間に1回投与され、有糸分裂インヒビターが、1週間に1回、または4週間サイクルのうち3週間にわたって1週間に1回投与される。
【０１０２】
いくつかの態様では、処置または投薬レジメンを、特定の数の投与または「サイクル」に限定することができる。「サイクル」とは、標準治療の治療剤について周知であるか、または当業者によってよく使用される投薬スケジュールであることができる。例えば、パクリタキセルのサイクルは、4週間（28日）サイクルのうち3週間にわたって1週間に1回の投与（4週間ごとに投与のない1週間がある）であることができる。いくつかの態様では、RSPO-LGR経路インヒビターが、2、3、4、5、6、7、8サイクル、またはそれより多いサイクルにわたって投与される。いくつかの態様では、有糸分裂インヒビターが、2、3、4、5、6、7、8サイクル、またはそれより多いサイクルにわたって投与される。いくつかの態様では、1つの作用物質が1サイクルまたはそれより多いサイクルに抑えられ、一方、第2の作用物質の投与が継続される。
【０１０３】
本明細書に記載する方法のいくつかの態様では、がんが、結腸直腸がん、膵臓がん、肺がん、卵巣がん、肝臓がん、乳がん、腎臓がん、前立腺がん、胃腸がん、メラノーマ、子宮頸がん、膀胱がん、神経膠芽腫、および頭頸部がんからなる群より選択されるがんである。いくつかの態様では、がんがRSPO遺伝子融合物を含有する。いくつかの態様では、がんがRSPO2遺伝子融合物を含有する。いくつかの態様では、がんがRSPO3遺伝子融合物を含有する。一定の態様では、がんが乳がんである。いくつかの態様では、がんが卵巣がんである。一定の態様では、がんが膵臓がんである。一定の態様では、がんが肺がんである。本明細書において使用する場合、「肺がん」は、小細胞肺がんおよび非小細胞肺がん（NSCLC）を含むが、それらに限定されるわけではない。一定の態様では、がんが結腸直腸がんである。いくつかの態様では、がんが、APC遺伝子中に不活性化変異を含む結腸直腸がんである。いくつかの態様では、がんが、APC遺伝子中に不活性化変異を含まない結腸直腸がんである。いくつかの態様では、がんが、β-カテニン遺伝子中に活性化変異を含む。いくつかの態様では、がんが、β-カテニン遺伝子中に活性化変異を含まない。いくつかの態様では、腫瘍が、β-カテニン遺伝子中に活性化変異を含む。いくつかの態様では、がんが、RSPO遺伝子融合物を含有する結腸直腸がんである。いくつかの態様では、がんが、RSPO2遺伝子融合物を含有する結腸直腸がんである。いくつかの態様では、がんが、RSPO3遺伝子融合物を含有する結腸直腸がんである。いくつかの態様では、がんが、RSPOポリペプチドの上昇した発現レベルを有する。いくつかの態様では、がんが、RSPO1、RSPO2、RSPO3、および／またはRSPO4の上昇した発現レベルを有する。いくつかの態様では、がんが、RSPO3の上昇した発現レベルを有する結腸直腸がんである。いくつかの態様では、がんが、RSPO2の上昇した発現レベルを有する結腸直腸がんである。いくつかの態様では、がんが、RSPOポリペプチドの上昇した発現レベルを有さない。いくつかの態様では、がんが、RSPO1、RSPO2、RSPO3、および／またはRSPO4の上昇した発現レベルを有さない。いくつかの態様では、がんが、RSPO3の上昇した発現レベルを有さない結腸直腸がんである。いくつかの態様では、がんが、RSPO2の上昇した発現レベルを有さない結腸直腸がんである。いくつかの態様では、がんが、同じ組織タイプの正常組織と実質的に同じ、RSPOポリペプチドの発現レベルを有する。いくつかの態様では、がんが、同じ組織タイプの正常組織と実質的に同じ、RSPO1、RSPO2、RSPO3、および／またはRSPO4の発現レベルを有する。いくつかの態様では、がんが、同じ組織タイプの正常組織と実質的に同じ、RSPO3の発現レベルを有する結腸直腸がんである。いくつかの態様では、がんが、同じ組織タイプの正常組織と実質的に同じ、RSPO2の発現レベルを有する結腸直腸がんである。
【０１０４】
いくつかの態様では、がんが、Wntシグナル伝達経路の構成要素をコードする遺伝子中に変異を含む結腸直腸がんである。例えば、これによりすべての目的でその全体が参照により本明細書に組み入れられる、米国特許出願公開第20130209473号を参照されたい。いくつかの態様では、がんが、Wnt（例えば、WNT1、WNT2、WNT2B、WNT3、WNT3A、WNT4、WNT5A、WNT5B、WNT6、WNT7A、WNT7B、WNT8A、WNT8B、WNT9A、WNT9B、WNT10A、WNT10B、WNT11、WNT16）、Frizzled（例えば、FZD1〜FZD10）、RSPO（例えば、RSPO1、RSPO2、RSPO3、RSPO4）、LGR（例えば、LGR4、LGR5、LGR6）、WTX、WISP（例えば、WISP1、WISP2、WISP3）、β-TrCp、STRA6、LRP（例えば、LRP5、LRP6）、アキシン（例えば、AXIN1、AXIN2）、Dishevelled、sFRP、WIF-1、Dkk、Krn、GSK3β、CKIα、PP2A、pygopus、bcl9/legless、TCF/LEF、Groucho、CTNNB1、CBP/p300、Brg-1遺伝子、TCFL2、PPN、CDH17、EZH2、HMGA1、HMGA2、YY1、および／またはTC1遺伝子中に変異を含む結腸直腸がんである。一定の態様では、Wntシグナル伝達経路が、変異を含む結腸直腸がんにおいて活性化されている。
【０１０５】
いくつかの態様では、RSPO-LGR経路インヒビター（例えば、抗RSPO3または抗LGR5抗体）および有糸分裂インヒビターで処置される結腸直腸がんが、セカンドラインまたはサードラインの結腸直腸がんである。一定の態様では、結腸直腸がんが、化学療法レジメンでの処置に対して耐性である。一定の態様では、結腸直腸がんが、5-フルオロウラシル（5-FU）、イリノテカン、および／またはオキサリプラチンのうちの1つまたは複数を含む化学療法処置に対して耐性である。いくつかの態様では、結腸直腸がんが、イリノテカン／5-FU／ロイコボリン（FOLFIRI）および／またはオキサリプラチン／5-FU／ロイコボリン（FOLFOX）に対して耐性である。一定の代替態様では、結腸直腸がんが、ベバシズマブでの処置に対して耐性である。一定の態様では、RSPO-LGR経路インヒビターおよび有糸分裂インヒビターで処置される患者が、1つの事前の処置レジメンに失敗している。別の態様では、RSPO-LGR経路インヒビターおよび有糸分裂インヒビターで処置される患者が、2つの事前の処置レジメンに失敗している。一定の態様では、1つまたは複数の事前の処置レジメンが、5-フルオロウラシル（5-FU）、イリノテカン、オキサリプラチン、および／またはベバシズマブのうちの1つまたは複数での処置を含む。
【０１０６】
いくつかの態様では、がんを処置する方法が、対象に、治療有効量の抗RSPO3抗体OMP-131R010ならびに治療有効量の、パクリタキセル、nab-パクリタキセル、およびドセタキセルからなる群より選択されるタキサンを投与する工程を含み、ここで、タキサンは、OMP-131R010が投与された約1、2、3、4、5、6、または7日後に投与される。いくつかの態様では、OMP-131R010が、約1週間に1回投与される。いくつかの態様では、OMP-131R010が、約2週間に1回投与される。いくつかの態様では、OMP-131R010が、約3週間に1回投与される。いくつかの態様では、OMP-131R010が、約4週間に1回投与される。いくつかの態様では、タキサンが、1週間に1回投与される。いくつかの態様では、タキサンが、2週間に1回投与される。いくつかの態様では、タキサンが、3週間に1回投与される。いくつかの態様では、タキサンが、4週間サイクルのうち3週間にわたって1週間に1回投与される。いくつかの態様では、がんを処置する方法が、対象に、治療有効量のOMP-131R010および治療有効量のドセタキセルを投与する工程を含み、ここで、ドセタキセルは、OMP-131R010が投与された約2または3日後に投与される。いくつかの態様では、がんを処置する方法が、対象に、治療有効量のOMP-131R010、治療有効量のnab-パクリタキセル、および治療有効量のゲムシタビンを投与する工程を含み、ここで、nab-パクリタキセルは、OMP-131R010が投与された約2または3日後に投与される。いくつかの態様では、がんを処置する方法が、対象に、治療有効量のOMP-131R010、治療有効量のnab-パクリタキセル、および治療有効量のゲムシタビンを投与する工程を含み、ここで、nab-パクリタキセルおよびゲムシタビンは、OMP-131R010が投与された約2または3日後に投与される。いくつかの態様では、がんを処置する方法が、対象に、治療有効量のOMP-131R010および治療有効量のパクリタキセルを投与する工程を含み、ここで、パクリタキセルは、OMP-131R010が投与された約2または3日後に投与される。
【０１０７】
腫瘍成長を阻害するかまたは腫瘍サイズを低減させる方法であって、腫瘍細胞を、有効量のRSPO-LGR経路インヒビターおよび有効量の有糸分裂インヒビターと接触させる工程を含み、ここで、RSPO-LGR経路インヒビターが最初に細胞に投与され、有糸分裂インヒビターが2番目に細胞に投与される方法を、本明細書に記載する。腫瘍成長を阻害するかまたは腫瘍サイズを低減させる方法であって、腫瘍細胞を、有効量のRSPO-LGR経路インヒビターおよび有効量の有糸分裂インヒビターと接触させる工程を含み、ここで、RSPO-LGR経路インヒビターおよび有糸分裂インヒビターが時間差投薬スケジュールを用いて細胞に投与され、RSPO-LGR経路インヒビターが最初に細胞に投与される方法を、本明細書に記載する。いくつかの態様では、有糸分裂インヒビターが、RSPO-LGR経路インヒビターが投与された約12、24、36、48、60、72、84、または96時間後に投与される。いくつかの態様では、有糸分裂インヒビターが、RSPO-LGR経路インヒビターが投与された約1日、約2日、約3日、約4日、約5日、約6日、または約7日後に投与される。腫瘍成長の阻害または腫瘍サイズの低減において有糸分裂インヒビターの有効性を増大させる方法であって、（a）腫瘍細胞をRSPO-LGR経路インヒビターと接触させる工程；および（b）RSPO-LGR経路インヒビターが投与された約1日、約2日、約3日、約4日、約5日、約6日、または約7日後に腫瘍細胞を有糸分裂インヒビターと接触させる工程を含む方法を、本明細書に記載する。いくつかの態様では、がんの処置における有糸分裂インヒビターの有効性の増大が、RSPO-LGR経路インヒビターを伴わずに使用される有糸分裂インヒビターの有効性に対するものである。いくつかの態様では、がんの処置における有糸分裂インヒビターの有効性の増大が、有糸分裂インヒビターおよびRSPO-LGR経路インヒビターが実質的に同時に、例えば、同じ日に患者に投与される時に観察される有効性に対するものである。
【０１０８】
本明細書に記載する方法の一定の態様では、腫瘍成長を阻害するかまたは腫瘍サイズを低減させる方法が、腫瘍または腫瘍細胞を、RSPO-LGR経路インヒビターおよび有糸分裂経路インヒビターとインビトロで接触させる工程を含む。例えば、いくつかの態様では、不死化細胞株またはがん細胞株を培地中で培養し、それに対して、腫瘍細胞成長を阻害するためにRSPO-LGR経路インヒビターを添加し、その後有糸分裂インヒビターの添加を行う。いくつかの態様では、腫瘍細胞を、例えば、組織生検材料、胸水、または血液試料などの患者試料から単離して、培地中で培養し、それに対して、腫瘍細胞成長を阻害するためにRSPO-LGR経路インヒビターおよび有糸分裂インヒビターを添加する。
【０１０９】
いくつかの態様では、腫瘍成長を阻害するかまたは腫瘍サイズを低減させる方法が、腫瘍または腫瘍細胞を、RSPO-LGR経路インヒビターおよび有糸分裂インヒビターとインビボで接触させる工程を含む。一定の態様では、腫瘍または腫瘍細胞をRSPO-LGR経路インヒビターおよび有糸分裂インヒビターと接触させる工程が、動物モデルにおいて着手される。例えば、RSPO-LGR経路インヒビターおよび有糸分裂インヒビターを、腫瘍の成長を阻害するために、異種移植腫瘍を有する免疫不全マウス（例えば、NOD/SCIDマウス）に時間差投薬様式で投与することができる。一定の態様では、がん幹細胞を、例えば、組織生検材料、胸水、または血液試料などの患者試料から単離して、免疫不全マウス中に注射し、次いで、腫瘍細胞成長を阻害するために、時間差投薬様式でRSPO-LGR経路インヒビターを投与し、その後有糸分裂インヒビターの投与を行う。いくつかの態様では、RSPO-LGR経路インヒビターおよび有糸分裂インヒビターが、腫瘍成長を防止するために（防止的モデル）、細胞の動物中への導入と同時または直後に、時間差投薬様式で投与される。いくつかの態様では、RSPO-LGR経路インヒビターおよび有糸分裂インヒビターが、腫瘍成長を阻害するためおよび／または低減させるために（治療的モデル）、細胞が特定のサイズの腫瘍に成長した後に、時間差投薬様式で投与される。
【０１１０】
対象において腫瘍成長を阻害するかまたは腫瘍サイズを低減させる方法であって、対象に、治療有効量のRSPO-LGR経路インヒビターおよび治療有効量の有糸分裂インヒビターを時間差投薬様式で投与する工程を含み、RSPO-LGR経路インヒビターが有糸分裂インヒビターの投与の前に投与される方法を、本明細書に記載する。一定の態様では、対象がヒトである。一定の態様では、対象が腫瘍を有するか、または腫瘍が除去されている。いくつかの態様では、対象が、転移している腫瘍を有する。いくつかの態様では、対象が、事前の治療的処置を受けたことがある。
【０１１１】
対象において腫瘍の侵襲性を阻害する方法であって、対象に、治療有効量のRSPO-LGR経路インヒビターおよび治療有効量の有糸分裂インヒビターを時間差投薬様式で投与する工程を含み、RSPO-LGR経路インヒビターが有糸分裂インヒビターの投与の前に投与される方法を、本明細書に記載する。いくつかの態様では、侵襲性の阻害が、腫瘍細胞のE-カドヘリン発現を増加させることを含む。一定の態様では、対象がヒトである。一定の態様では、対象が腫瘍を有するか、または腫瘍が除去されている。
【０１１２】
対象において転移を低減させるかまたは防止する方法であって、対象に、治療有効量のRSPO-LGR経路インヒビターおよび治療有効量の有糸分裂インヒビターを時間差投薬様式で投与する工程を含み、RSPO-LGR経路インヒビターが有糸分裂インヒビターの投与の前に投与される方法を、本明細書に記載する。いくつかの態様では、転移の低減または防止が、腫瘍の侵襲性の阻害を含む。いくつかの態様では、転移の低減または防止が、腫瘍細胞のE-カドヘリン発現を増加させることによる腫瘍の侵襲性の阻害を含む。一定の態様では、対象がヒトである。一定の態様では、対象が腫瘍を有するか、または腫瘍が除去されている。
【０１１３】
細胞においてβ-カテニンシグナル伝達を阻害する方法であって、細胞を、有効量のRSPO-LGR経路インヒビターおよび有効量の有糸分裂インヒビターと時間差投薬様式で接触させる工程を含み、RSPO-LGR経路インヒビターが有糸分裂インヒビターの投与の前に投与される方法を、本明細書に記載する。一定の態様では、細胞が腫瘍細胞である。一定の態様では、方法が、細胞をインヒビターと接触させる工程が治療有効量のインヒビターの対象への投与を含む、インビボの方法である。いくつかの態様では、方法が、インビトロまたはエクスビボの方法である。
【０１１４】
加えて、対象において腫瘍の腫瘍形成能を低減させる方法であって、対象に、治療有効量のRSPO-LGR経路インヒビターおよび治療有効量の有糸分裂インヒビターを時間差投薬様式で投与する工程を含み、RSPO-LGR経路インヒビターが有糸分裂インヒビターの投与の前に投与される方法を、本明細書に記載する。一定の態様では、腫瘍ががん幹細胞を含む。いくつかの態様では、腫瘍の腫瘍形成能が、腫瘍におけるがん幹細胞の頻度を低減させることによって低減される。一定の態様では、腫瘍におけるがん幹細胞の頻度が、RSPO-LGR経路インヒビターの投与によって低減される。いくつかの態様では、腫瘍の腫瘍形成能が、腫瘍細胞の分化を誘発することによって低減される。いくつかの態様では、腫瘍の腫瘍形成能が、腫瘍細胞のアポトーシスを誘発することによって低減される。いくつかの態様では、腫瘍の腫瘍形成能が、腫瘍細胞のアポトーシスを増加させることによって低減される。
【０１１５】
がん幹細胞を含む腫瘍においてがん幹細胞頻度を低減させる方法であって、対象に、治療有効量のRSPO-LGR経路インヒビターおよび治療有効量の有糸分裂インヒビターを時間差投薬様式で投与する工程を含み、RSPO-LGR経路インヒビターが有糸分裂インヒビターの投与の前に投与される方法を、本明細書に記載する。一定の態様では、有糸分裂インヒビターと併用したRSPO-LGR経路インヒビターが、マウス異種移植モデルなどの動物モデルにおいてがん幹細胞を含む腫瘍の腫瘍形成能を低減させる能力を有する。一定の態様では、処置された腫瘍におけるがん幹細胞の数または頻度が、処置されていない腫瘍におけるがん幹細胞の数または頻度と比較して、少なくとも約2分の1、約3分の1、約5分の1、約10分の1、約50分の1、約100分の1、または約1000分の1に低減される。一定の態様では、がん幹細胞の数または頻度の低減が、動物モデルを用いた限界希釈アッセイによって決定される。
【０１１６】
一定の態様では、腫瘍が、β-カテニンシグナル伝達が活性を有する腫瘍である。一定の態様では、腫瘍が、β-カテニンシグナル伝達依存性腫瘍である。いくつかの態様では、腫瘍が、β-カテニンシグナル伝達が異常である腫瘍である。一定の態様では、腫瘍が、APC腫瘍抑制遺伝子中に不活性化変異（例えば、切断型変異）を含む。一定の態様では、腫瘍が、APC腫瘍抑制遺伝子中に不活性化変異を含まない。いくつかの態様では、腫瘍が野生型APC遺伝子を含む。いくつかの態様では、腫瘍が、β-カテニン遺伝子中に活性化変異を含む。いくつかの態様では、腫瘍が、β-カテニン遺伝子中に活性化変異を含まない。一定の態様では、そのために対象が処置されているがんが、そのような腫瘍を含む。
【０１１７】
いくつかの態様では、腫瘍がRSPO遺伝子融合物を含む。いくつかの態様では、腫瘍がRSPO2遺伝子融合物を含む。いくつかの態様では、腫瘍がRSPO3遺伝子融合物を含む。一定の態様では、そのために対象が処置されているがんが、そのような腫瘍を含む。
【０１１８】
本明細書に記載する方法の一定の態様では、腫瘍が、RSPO結合作用物質が結合する1種または複数種のヒトRSPOタンパク質を発現する。一定の態様では、腫瘍が、1種または複数種のヒトRSPOタンパク質を過剰発現する。一定の態様では、腫瘍が、同じ組織タイプの正常組織におけるRSPOタンパク質発現と比較して、1種または複数種のヒトRSPOタンパク質を過剰発現する。一定の態様では、腫瘍が、少なくとも1つの他の腫瘍におけるRSPOタンパク質発現と比較して、1種または複数種のヒトRSPOタンパク質を過剰発現する。いくつかの態様では、腫瘍が、RSPO1、RSPO2、RSPO3、および／またはRSPO4を過剰発現する。いくつかの態様では、腫瘍が、RSPO1またはRSPO3を過剰発現する。一定の態様では、腫瘍が、1種または複数種のヒトRSPOタンパク質を過剰発現しない。一定の態様では、腫瘍が、同じ組織タイプの正常組織におけるRSPOタンパク質発現と比較して、1種または複数種のヒトRSPOタンパク質を過剰発現しない。いくつかの態様では、腫瘍が、RSPO1、RSPO2、RSPO3、および／またはRSPO4を過剰発現しない。いくつかの態様では、腫瘍が、同じ組織タイプの正常組織と実質的に同じレベルで、RSPO1、RSPO2、RSPO3、および／またはRSPO4を発現する。いくつかの態様では、腫瘍が、あらかじめ決定された発現レベルと比較して低い、RSPO1、RSPO2、RSPO3、および／またはRSPO4レベルを発現する。いくつかの態様では、腫瘍が、あらかじめ決定された発現レベルと比較して高い、RSPO1、RSPO2、RSPO3、および／またはRSPO4レベルを発現する。いくつかの態様では、RSPO1、RSPO2、RSPO3、またはRSPO4のあらかじめ決定された発現レベルが、同じ組織タイプの腫瘍または腫瘍の群におけるRSPO1、RSPO2、RSPO3、またはRSPO4の発現レベルである。いくつかの態様では、あらかじめ決定されたRSPO1、RSPO2、RSPO3、またはRSPO4の発現レベルが、異なる組織タイプの腫瘍または腫瘍の群におけるRSPO1、RSPO2、RSPO3、またはRSPO4の発現レベルである。一定の態様では、そのために対象が処置されているがんが、そのような腫瘍を含む。
【０１１９】
一定の態様では、腫瘍が、LGR結合作用物質が結合する1種または複数種のヒトLGRタンパク質を発現する。一定の態様では、腫瘍が、1種または複数種のヒトLGRタンパク質を過剰発現する。一定の態様では、腫瘍がヒトLGR5を過剰発現する。
【０１２０】
本明細書に記載する方法のいくつかの態様では、腫瘍が、結腸直腸腫瘍、膵臓腫瘍、肺腫瘍、卵巣腫瘍、肝臓腫瘍、乳房腫瘍、腎臓腫瘍、前立腺腫瘍、胃腸腫瘍、メラノーマ、子宮頸部腫瘍、膀胱腫瘍、神経膠芽腫、および頭頸部腫瘍からなる群より選択される腫瘍である。いくつかの態様では、腫瘍がRSPO遺伝子融合物を含有する。いくつかの態様では、腫瘍がRSPO2遺伝子融合物を含有する。いくつかの態様では、腫瘍がRSPO3遺伝子融合物を含有する。一定の態様では、腫瘍が乳房腫瘍である。いくつかの態様では、腫瘍が卵巣腫瘍である。一定の態様では、腫瘍が肺腫瘍である。一定の態様では、腫瘍が膵臓腫瘍である。一定の態様では、腫瘍が結腸直腸腫瘍である。いくつかの態様では、腫瘍が、（例えば、Wntシグナル伝達経路の構成要素における変異によって）Wntシグナル伝達が活性化されている結腸直腸腫瘍である。いくつかの態様では、腫瘍が、APC遺伝子中に不活性化変異を含む結腸直腸腫瘍である。いくつかの態様では、腫瘍が、APC遺伝子中に不活性化変異を含まない結腸直腸腫瘍である。いくつかの態様では、腫瘍が、β-カテニン遺伝子中に活性化変異を含む。いくつかの態様では、腫瘍が、RSPO遺伝子融合物を含有する結腸直腸腫瘍である。いくつかの態様では、腫瘍が、RSPO2遺伝子融合物を含有する結腸直腸腫瘍である。いくつかの態様では、腫瘍が、RSPO3遺伝子融合物を含有する結腸直腸腫瘍である。いくつかの態様では、腫瘍が、RSPOポリペプチドの上昇した発現レベルを有する。いくつかの態様では、腫瘍が、RSPO1、RSPO2、RSPO3、および／またはRSPO4の上昇した発現レベルを有する。いくつかの態様では、腫瘍が、RSPO3の上昇した発現レベルを有する結腸直腸腫瘍である。いくつかの態様では、腫瘍が、RSPO2の上昇した発現レベルを有する結腸直腸腫瘍である。いくつかの態様では、腫瘍が、RSPOポリペプチドの上昇した発現レベルを有さない。いくつかの態様では、腫瘍が、RSPO1、RSPO2、RSPO3、および／またはRSPO4の上昇した発現レベルを有さない。いくつかの態様では、腫瘍が、RSPO3の上昇した発現レベルを有さない結腸直腸腫瘍である。いくつかの態様では、腫瘍が、RSPO2の上昇した発現レベルを有さない結腸直腸腫瘍である。いくつかの態様では、腫瘍が、同じ組織タイプの正常組織と実質的に同じ、RSPOポリペプチドの発現レベルを有する。いくつかの態様では、腫瘍が、同じ組織タイプの正常組織と実質的に同じ、RSPO1、RSPO2、RSPO3、および／またはRSPO4の発現レベルを有する。いくつかの態様では、腫瘍が、同じ組織タイプの正常組織と実質的に同じ、RSPO3の発現レベルを有する結腸直腸腫瘍である。いくつかの態様では、腫瘍が、同じ組織タイプの正常組織と実質的に同じ、RSPO2の発現レベルを有する結腸直腸腫瘍である。いくつかの態様では、腫瘍が、あらかじめ決定された発現レベルと比較して低い、RSPO1、RSPO2、RSPO3、および／またはRSPO4レベルを発現する結腸直腸腫瘍である。いくつかの態様では、腫瘍が、あらかじめ決定された発現レベルと比較して高い、RSPO1、RSPO2、RSPO3、および／またはRSPO4レベルを発現する結腸直腸腫瘍である。いくつかの態様では、あらかじめ決定されたRSPO1、RSPO2、RSPO3、またはRSPO4発現レベルが、同じ組織タイプの正常組織におけるRSPO1、RSPO2、RSPO3、またはRSPO4の発現レベルである。いくつかの態様では、あらかじめ決定されたRSPO1、RSPO2、RSPO3、またはRSPO4発現レベルが、同じ組織タイプの腫瘍または腫瘍の群におけるRSPO1、RSPO2、RSPO3、またはRSPO4の発現レベルである。いくつかの態様では、あらかじめ決定されたRSPO1、RSPO2、RSPO3、またはRSPO4発現レベルが、異なる組織タイプの腫瘍または腫瘍の群におけるRSPO1、RSPO2、RSPO3、またはRSPO4の発現レベルである。
【０１２１】
「腫瘍が〜の上昇した発現レベルを有する」、「腫瘍が同じ組織タイプの正常組織と実質的に同じ発現レベルを有する」、「腫瘍が低いRSPO3発現を有する」、または「腫瘍が高いRSPO3発現を有する」という表現は、タンパク質の発現レベルまたは核酸の発現レベルを指しうる。一般に、「腫瘍がタンパク質または遺伝子の上昇した発現レベルを有する」、「腫瘍がタンパク質または遺伝子の高い発現レベルを有する」、「腫瘍がタンパク質または遺伝子の低い発現レベルを有する」、または「腫瘍がタンパク質または遺伝子の実質的に同じ発現レベルを有する」という表現（または類似した表現）は、参照試料における同じタンパク質または同じ遺伝子の発現レベル、またはあらかじめ決定された発現レベルと比較した、腫瘍におけるタンパク質または遺伝子の発現レベルを指す。いくつかの態様では、参照試料が、同じ組織タイプの正常組織である。いくつかの態様では、参照試料が、組織タイプの群の正常組織である。いくつかの態様では、参照試料が、同じ組織タイプの腫瘍または腫瘍の群である。いくつかの態様では、参照試料が、異なる組織タイプの腫瘍または腫瘍の群である。したがって、いくつかの態様では、腫瘍におけるタンパク質または遺伝子の発現レベルが、組織タイプの群内のタンパク質または遺伝子の平均発現レベルと比較して、「上昇している」か、「高い」か、「低い」か、または「実質的に同じである」。いくつかの態様では、腫瘍におけるタンパク質または遺伝子の発現レベルが、同じ組織タイプまたは異なる組織タイプの他の腫瘍におけるタンパク質または遺伝子の発現レベルと比較して、「上昇している」か、「高い」か、「低い」か、または「実質的に同じである」。いくつかの態様では、腫瘍が、同じ組織タイプの正常組織において発現するRSPOレベルと比較して、「上昇した」レベル、「高い」レベル、「低い」レベル、または「実質的に同じ」レベルのRSPO1、RSPO2、RSPO3、および／またはRSPO4を発現する。いくつかの態様では、腫瘍が、あらかじめ決定されたレベルと比較して、「上昇した」レベル、「高い」レベル、または「実質的に同じ」レベルのRSPO1、RSPO2、RSPO3、および／またはRSPO4を発現する。
【０１２２】
一定の態様では、本明細書に記載する方法が、腫瘍またはがんにおける少なくとも1種のRSPO（すなわち、タンパク質または核酸）の発現レベルを決定する工程をさらに含む。いくつかの態様では、腫瘍またはがんにおけるRSPOの発現レベルを決定する工程が、RSPO1、RSPO2、RSPO3、およびRSPO4のうちの1種または複数種の発現レベルの決定を含む。いくつかの態様では、腫瘍またはがんにおけるRSPO1、RSPO2、RSPO3、およびRSPO4のうちの1種または複数種の発現レベルを、参照試料におけるRSPO1、RSPO2、RSPO3、およびRSPO4のうちの1種または複数種の発現レベルと比較する。いくつかの態様では、腫瘍またはがんにおけるRSPO1、RSPO2、RSPO3、およびRSPO4のうちの1種または複数種の発現レベルを、同じ組織タイプの正常組織における、それぞれ、RSPO1、RSPO2、RSPO3、およびRSPO4の発現レベルと比較する。いくつかの態様では、腫瘍またはがんにおけるRSPO1、RSPO2、RSPO3、およびRSPO4のうちの1種または複数種の発現のレベルを、それぞれ、RSPO1、RSPO2、RSPO3、およびRSPO4の発現のあらかじめ決定されたレベルと比較する。いくつかの態様では、腫瘍またはがんにおけるRSPO1、RSPO2、RSPO3、およびRSPO4のうちの1種または複数種の発現のレベルを、同じ組織タイプの正常組織における、それぞれ、RSPO1、RSPO2、RSPO3、およびRSPO4の発現のあらかじめ決定されたレベルと比較する。いくつかの態様では、腫瘍またはがんが、RSPO1、RSPO2、RSPO3、およびRSPO4のうちの1種または複数種の上昇した発現を有する。いくつかの態様では、腫瘍またはがんが、RSPO1、RSPO2、RSPO3、およびRSPO4のうちの1種または複数種の上昇した発現を有さない。いくつかの態様では、腫瘍またはがんが、参照試料と実質的に同じレベルで、RSPO1、RSPO2、RSPO3、およびRSPO4のうちの1種または複数種を発現する。一般に、RSPO（すなわち、タンパク質または核酸）の発現レベルを、同じ組織タイプの正常組織におけるRSPO（すなわち、タンパク質または核酸）の発現レベルと比較する。しかし、いくつかの態様では、RSPO（すなわち、タンパク質または核酸）の発現レベルを、組織タイプの群内のRSPO（すなわち、タンパク質または核酸）の平均発現レベルと比較する。いくつかの態様では、腫瘍におけるRSPO（すなわち、タンパク質または核酸）の発現レベルを、同じ組織タイプまたは異なる組織タイプの他の腫瘍におけるRSPO（すなわち、タンパク質または核酸）の発現レベルと比較する。いくつかの態様では、RSPO発現のレベルを決定する工程を、RSPO-LGR経路インヒビターでの処置の前に行う。
【０１２３】
一定の態様では、本明細書に記載する方法が、腫瘍またはがんがAPC遺伝子中に不活性化変異を有するかどうかを判定する工程をさらに含む。いくつかの態様では、本明細書に記載する方法が、腫瘍またはがんがβ-カテニン遺伝子中に活性化変異を有するかどうかを判定する工程をさらに含む。いくつかの態様では、本明細書に記載する方法が、腫瘍またはがんがWntシグナル伝達経路の構成要素をコードする遺伝子中に変異を有するかどうかを判定する工程をさらに含む。例えば、これにより各々がすべての目的でその全体が参照により本明細書に組み入れられる、Seahgiri et al., Nature, 488: 660-664 (2012)および米国特許出願公開第20130209473号を参照されたい。いくつかの態様では、本明細書に記載する方法が、腫瘍またはがんがWnt（例えば、WNT1、WNT2、WNT2B、WNT3、WNT3A、WNT4、WNT5A、WNT5B、WNT6、WNT7A、WNT7B、WNT8A、WNT8B、WNT9A、WNT9B、WNT10A、WNT10B、WNT11、WNT16）、Frizzled（例えば、Frz 1〜10）、RSPO（例えば、RSPO1、RSPO2、RSPO3、RSPO4）、LGR（例えば、LGR4、LGR5、LGR6）、WTX、WISP（例えば、WISP1、WISP2、WISP3）、β-TrCp、STRA6、LRP（例えば、LRP5、LRP6）、アキシン（AXIN1、AXIN2）、Dishevelled、sFRP、WIF-1、Dkk、Krn、GSK3β、CKIα、PP2A、pygopus、bcl9/legless、TCF/LEF、Groucho、CTNNB1、CBP/p300、Brg-1遺伝子、TCFL2、PPN、CDH17、EZH2、HMGA1、HMGA2、YY1、および／またはTC1遺伝子中に変異を有するかどうかを判定する工程をさらに含む。
【０１２４】
一定の態様では、本明細書に記載する方法が、腫瘍またはがんがRSPO遺伝子融合物を有するかどうかを判定する工程をさらに含む。
【０１２５】
一定の態様では、本明細書に記載する方法が、腫瘍またはがんにおけるRSPO1、RSPO2、RSPO3、および／またはRSPO4発現のレベルを決定する工程をさらに含む。いくつかの態様では、RSPO発現のレベルを決定する工程を、RSPO-LGR経路インヒビターでの処置の前に行う。いくつかの態様では、腫瘍またはがんがAPC遺伝子中に不活性化変異を有するのであれば、対象に、RSPO-LGR経路インヒビターを投与する。
【０１２６】
細胞、腫瘍、またはがんにおけるRSPO発現のレベルを決定するための方法は、当業者により公知である。核酸発現について、これらの方法には、PCRベースのアッセイ、マイクロアレイ解析、およびヌクレオチド配列決定（例えば、NextGen配列決定）が含まれるが、それらに限定されるわけではない。タンパク質発現について、これらの方法には、ウェスタンブロット解析、タンパク質アレイ、ELISA、免疫組織化学（IHC）アッセイ、およびFACSが含まれるが、それらに限定されるわけではない。
【０１２７】
腫瘍が、RSPO遺伝子融合物、またはRSPO-LGR経路構成要素をコードする遺伝子中の変異を有するか否かを判定するための方法は、当業者により公知である。方法には、PCRベースのアッセイ、マイクロアレイ解析、およびヌクレオチド配列決定（例えば、NextGen配列決定、全ゲノム配列決定（WGS））が含まれうるが、それらに限定されるわけではない。
【０１２８】
RSPO発現のレベル、RSPO遺伝子融合物の存在、またはRSPO-LGR経路構成要素をコードする遺伝子中の変異の存在を判定するための方法は、さまざまな試料を使用することができる。いくつかの態様では、試料を、腫瘍またはがんを有する対象から採取する。いくつかの態様では、試料が新鮮腫瘍／がん試料である。いくつかの態様では、試料が凍結腫瘍／がん試料である。いくつかの態様では、試料がホルマリン固定パラフィン包埋試料である。いくつかの態様では、試料を加工処理して細胞溶解物にする。いくつかの態様では、試料を加工処理してDNAまたはRNAにする。
【０１２９】
本明細書に記載する方法のいずれかのいくつかの態様では、RSPO-LGR経路インヒビターがRSPO結合作用物質である。いくつかの態様では、RSPO-LGR経路インヒビターがLGR結合作用物質である。いくつかの態様では、RSPO-LGR経路インヒビターが抗体である。いくつかの態様では、RSPO-LGR経路インヒビターが抗RSPO抗体である。いくつかの態様では、RSPO-LGR経路インヒビターが抗RSPO3抗体である。いくつかの態様では、RSPO-LGR経路インヒビターが抗LGR抗体である。いくつかの態様では、RSPO-LGR経路インヒビターが抗LGR5抗体である。いくつかの態様では、RSPO-LGR経路インヒビターが抗体OMP-131R010である。いくつかの態様では、RSPO-LGR経路インヒビターが可溶性受容体である。いくつかの態様では、RSPO-LGR経路インヒビターがLGR可溶性受容体である。いくつかの態様では、RSPO-LGR経路インヒビターがLGR-Fc可溶性受容体である。いくつかの態様では、RSPO-LGR経路インヒビターがLGR5-Fc可溶性受容体である。一定の態様では、LGR5-Fc可溶性受容体が、SEQ ID NO:63のアミノ酸配列を含む。
【０１３０】
本明細書に記載する方法のいずれかのいくつかの態様では、RSPO-LGR経路インヒビターが、少なくとも1種のRSPOタンパク質またはそのフラグメントに特異的に結合する抗体である。いくつかの態様では、抗体が、RSPO1、RSPO2、RSPO3、およびRSPO4からなる群より選択される少なくとも1種のヒトRSPOタンパク質に特異的に結合する。いくつかの態様では、抗体がヒトRSPO3に特異的に結合する。いくつかの態様では、RSPO-LGR経路インヒビターが、RSPO3に特異的に結合し、（a）DYSIH（SEQ ID NO:29）を含む重鎖CDR1、
2018502833.tif 000011
を含む重鎖CDR2、および
2018502833.tif 000012
を含む重鎖CDR3；ならびに（b）
2018502833.tif 000013
を含む軽鎖CDR1、AASNLES（SEQ ID NO:34）を含む軽鎖CDR2、およびQQSNEDPLT（SEQ ID NO:36）を含む軽鎖CDR3を含む抗体である。
【０１３１】
本明細書に記載する方法のいずれかの一定の態様では、RSPO-LGR経路インヒビターが、（a）DYSIH（SEQ ID NO:29）を含む重鎖CDR1、
2018502833.tif 000014
を含む重鎖CDR2、および
2018502833.tif 000015
を含む重鎖CDR3；ならびに（b）
2018502833.tif 000016
を含む軽鎖CDR1、AASNLES（SEQ ID NO:34）を含む軽鎖CDR2、およびQQSNEDPLT（SEQ ID NO:36）を含む軽鎖CDR3を含む抗体であり、有糸分裂インヒビターと併用して時間差投薬様式で投与される。
【０１３２】
本明細書に記載する方法のいずれかの一定の態様では、RSPO-LGR経路インヒビターが、（a）DYSIH（SEQ ID NO:29）を含む重鎖CDR1、
2018502833.tif 000017
を含む重鎖CDR2、および
2018502833.tif 000018
を含む重鎖CDR3；ならびに（b）
2018502833.tif 000019
を含む軽鎖CDR1、AASNLES（SEQ ID NO:34）を含む軽鎖CDR2、およびQQSNEDPLT（SEQ ID NO:36）を含む軽鎖CDR3を含む抗体であり、タキサンと併用して時間差投薬様式で投与される。
【０１３３】
本明細書に記載する方法のいずれかの一定の態様では、RSPO-LGR経路インヒビターが、（a）DYSIH（SEQ ID NO:29）を含む重鎖CDR1、
2018502833.tif 000020
を含む重鎖CDR2、および
2018502833.tif 000021
を含む重鎖CDR3；ならびに（b）
2018502833.tif 000022
を含む軽鎖CDR1、AASNLES（SEQ ID NO:34）を含む軽鎖CDR2、およびQQSNEDPLT（SEQ ID NO:36）を含む軽鎖CDR3を含む抗体であり、パクリタキセル、nab-パクリタキセル、またはドセタキセルと併用して時間差投薬様式で投与される。
【０１３４】
本明細書に記載する方法のいずれかの一定の態様では、RSPO-LGR経路インヒビターが、SEQ ID NO:38を含む重鎖可変領域およびSEQ ID NO:39を含む軽鎖可変領域を含む抗体であり、有糸分裂インヒビターと併用して時間差投薬様式で投与される。
【０１３５】
本明細書に記載する方法のいずれかの一定の態様では、RSPO-LGR経路インヒビターが、SEQ ID NO:38を含む重鎖可変領域およびSEQ ID NO:39を含む軽鎖可変領域を含む抗体であり、タキサンと併用して時間差投薬様式で投与される。
【０１３６】
本明細書に記載する方法のいずれかの一定の態様では、RSPO-LGR経路インヒビターが、SEQ ID NO:38を含む重鎖可変領域およびSEQ ID NO:39を含む軽鎖可変領域を含む抗体であり、パクリタキセル、nab-パクリタキセル、またはドセタキセルと併用して時間差投薬様式で投与される。
【０１３７】
いくつかの態様では、抗体が、モノクローナル抗体、組換え抗体、キメラ抗体、ヒト化抗体、ヒト抗体、または抗原結合部位を含む抗体フラグメントである。いくつかの態様では、抗体が、単一特異性抗体または二重特異性抗体である。いくつかの態様では、抗体が、IgG1抗体、IgG2抗体、またはIgG4抗体である。いくつかの態様では、RSPO-LGR経路インヒビターが抗体OMP-131R010である。
【０１３８】
本明細書に記載する方法のいずれかの一定の態様では、RSPO-LGR経路インヒビターが可溶性受容体である。いくつかの態様では、可溶性受容体が、LGRタンパク質の細胞外ドメインまたはそのフラグメントを含む。いくつかの態様では、LGRタンパク質がLGR5である。一定の態様では、細胞外ドメインがヒトLGR5のアミノ酸22〜564（SEQ ID NO:56）を含む。
【０１３９】
本明細書に記載する方法のいずれかの一定の態様では、RSPO-LGR経路インヒビターが、ヒトLGR5のアミノ酸22〜564を含むLGR-Fc可溶性受容体であり、有糸分裂インヒビターと併用して時間差投薬様式で投与される。いくつかの態様では、有糸分裂インヒビターがタキサンである。いくつかの態様では、タキサンが、パクリタキセル、nab-パクリタキセル、またはドセタキセルである。
【０１４０】
RSPO-LGR経路インヒビターおよび／または有糸分裂インヒビターを含む組成物を、本明細書に記載する。いくつかの態様では、組成物が、本明細書に記載するRSPO結合作用物質またはポリペプチドを含む。いくつかの態様では、組成物が、本明細書に記載するLGR結合作用物質またはポリペプチドを含む。いくつかの態様では、組成物が、本明細書に記載する有糸分裂インヒビターを含む。いくつかの態様では、組成物が、RSPO-LGR経路インヒビターおよび薬学的に許容されるビヒクルを含む薬学的組成物である。いくつかの態様では、組成物が、有糸分裂インヒビターおよび薬学的に許容されるビヒクルを含む薬学的組成物である。薬学的組成物は、腫瘍細胞成長の阻害、腫瘍サイズの低減、およびヒト患者におけるがんの処置において用途を見いだす。いくつかの態様では、本明細書に記載するRSPO結合作用物質が、有糸分裂インヒビターと併用したがんの処置用の薬剤の製造において用途を見いだす。いくつかの態様では、本明細書に記載するLGR結合作用物質が、有糸分裂インヒビターと併用したがんの処置用の薬剤の製造において用途を見いだす。いくつかの態様では、有糸分裂インヒビターがタキサンである。
【０１４１】
製剤を、治療剤を薬学的に許容される担体、賦形剤、および／または安定剤と、滅菌凍結乾燥粉末、水溶液などとして組み合わせることによって、保存および使用のために調製する（Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 22nd Edition, 2012, Pharmaceutical Press, London）。当業者は、一般に、薬学的に許容される担体、賦形剤、および／または安定剤を、製剤または薬学的組成物の不活性成分であると考える。
【０１４２】
適切な担体、賦形剤、または安定剤は、リン酸、クエン酸、および他の有機酸などの非毒性緩衝剤；塩化ナトリウムなどの塩；アスコルビン酸およびメチオニンを含む抗酸化剤；保存剤（例えば、オクタデシルジメチルベンジルアンモニウムクロリド；ヘキサメトニウムクロリド；ベンザルコニウムクロリド；ベンゼトニウムクロリド；フェノール、ブチルもしくはベンジルアルコール；メチルもしくはプロピルパラベンなどのアルキルパラベン；カテコール；レゾルシノール；シクロヘキサノール；3-ペンタノール；およびm-クレゾール）；低分子量ポリペプチド（約10アミノ酸残基未満など）；血清アルブミン、ゼラチン、もしくは免疫グロブリンなどのタンパク質；ポリビニルピロリドンなどの親水性ポリマー；グリシン、グルタミン、アスパラギン、ヒスチジン、アルギニン、もしくはリジンなどのアミノ酸；単糖、二糖、グルコース、マンノース、もしくはデキストリンなどの糖質；EDTAなどのキレート剤；スクロース、マンニトール、トレハロース、もしくはソルビトールなどの糖；ナトリウムなどの塩形成対イオン；金属複合体（例えばZnタンパク質複合体）；ならびに／またはポリソルバート（TWEEN）もしくはポリエチレングリコール（PEG）などの非イオン性界面活性剤を含む。
【０１４３】
治療用製剤は、単位剤形であることができる。そのような製剤には、経口、非経口、もしくは直腸投与のため、または吸入による投与のための、錠剤、丸剤、カプセル剤、粉末剤、顆粒剤、水もしくは非水性媒体中の溶液もしくは懸濁液、または坐剤が含まれる。錠剤などの固体組成物において、主要な活性成分は薬学的担体と混合されている。本明細書に記載する場合、薬学的担体は、製剤または組成物の不活性成分であると考えられる。従来の錠剤化成分には、コーンスターチ、ラクトース、スクロース、ソルビトール、タルク、ステアリン酸、ステアリン酸マグネシウム、リン酸二カルシウムまたはガム、および、化合物またはその非毒性の薬学的に許容される塩の均一混合物を含有する固体の製剤前（pre-formulation）組成物を形成するための他の希釈剤（例えば水）が含まれる。次いで、固体の製剤前組成物を、上記のタイプの単位剤形に細分する。新規組成物の錠剤、丸剤などは、長期の作用の利点をもたらす剤形を提供するために、コーティングするかまたは他の形で調合することができる。例えば、錠剤または丸剤は、外部構成要素によって覆われた内部組成物を含むことができる。さらにまた、2つの構成要素を、崩壊に抵抗するように働き、内部構成要素が無傷で胃を通過するかまたは放出が遅延されることを可能にする腸溶層によって分離することができる。いくつかのポリマー酸、ならびに、ポリマー酸とシェラック、セチルアルコール、および酢酸セルロースなどの材料との混合物を含むさまざまな材料を、そのような腸溶層またはコーティングのために使用することができる。
【０１４４】
薬学的製剤は、リポソームと複合体化されたRSPO-LGR経路インヒビターおよび／または有糸分裂インヒビターを含むことができる。リポソームは、ホスファチジルコリン、コレステロール、およびPEG誘導体化ホスファチジルエタノールアミン（PEG-PE）を含む脂質組成物との逆相蒸発によって生成することができる。リポソームは、所望の直径を有するリポソームを生じるために、画定された孔サイズのフィルターを通して押し出し成形される。
【０１４５】
RSPO-LGR経路インヒビターおよび／または有糸分裂インヒビターはまた、マイクロカプセルに封入することもできる。そのようなマイクロカプセルは、例えば、コアセルベーション技法によって、または界面重合、例えば、ヒドロキシメチルセルロースまたはゼラチン-マイクロカプセルおよびポリ-(メチルメタクリラート)マイクロカプセルによって、それぞれ、Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 22nd Edition, 2012, Pharmaceutical Press, Londonに記載されているようなコロイド状薬物送達システム（例えば、リポソーム、アルブミンマイクロスフェア、マイクロエマルジョン、ナノ粒子、およびナノカプセル）においてまたはマクロエマルジョンにおいて、調製される。
【０１４６】
加えて、RSPO-LGR経路インヒビターおよび／または有糸分裂インヒビターを含む徐放性調製物を調製することができる。徐放性調製物の適切な例は、作用物質を含有する固体疎水性ポリマーの半透過性マトリクスを含み、該マトリクスは、成形物品（例えば、フィルムまたはマイクロカプセル）の形態である。徐放性マトリクスの例には、ポリエステル、ポリ(2-ヒドロキシエチル-メタクリラート)またはポリ(ビニルアルコール)などのヒドロゲル、ポリラクチド、L-グルタミン酸および7エチル-L-グルタマートのコポリマー、非分解性エチレン-酢酸ビニル、LUPRON DEPOT（商標）（乳酸-グリコール酸コポリマーおよび酢酸ロイプロリドで構成されている注射可能なマイクロスフェア）などの分解性乳酸-グリコール酸コポリマー、スクロースアセタートイソブチラート、およびポリ-D-(-)-3-ヒドロキシブチル酸が含まれる。
【０１４７】
RSPO-LGR経路インヒビターおよび有糸分裂インヒビターは、公知の方法にしたがって、適当な薬学的組成物としてヒト患者に投与される。薬学的組成物は、局所処置または全身処置のいずれかのための任意の数のやり方で投与することができる。投与の適切な方法には、静脈内（ボーラスとしてのもしくはある期間にわたる連続注入による投与）、動脈内、筋肉内（注射もしくは注入）、腫瘍内、腹腔内、脳脊髄内、皮下、関節内、滑液包内、頭蓋内（例えば、クモ膜下腔内もしくは脳室内）、または経口が含まれるが、それらに限定されるわけではない。加えて、投与は、局所（例えば、経皮貼付剤、軟膏剤、ローション剤、クリーム剤、ゲル剤、滴剤、坐剤、スプレー剤、液体および粉末剤）、または肺（例えば、ネブライザーによるものを含む、粉末剤もしくはエアロゾルの吸入または吹送による；気管内、鼻内、表皮性および経皮）であることができる。
【０１４８】
疾患の処置のために、有糸分裂インヒビターと併用するRSPO-LGR経路インヒビターの適当な投薬量は、処置されるべき疾患のタイプ、疾患の重篤度および経過、疾患の応答性、インヒビターが治療目的で投与されるかまたは予防目的で投与されるか、事前の療法、患者の臨床歴などに依存し、すべてが処置する医師の自由裁量である。RSPO-LGR経路インヒビターは、一度にもしくは数日から数か月にわたる一連の処置として、または、治癒がもたらされるかもしくは疾患状態の減退が達成される（例えば、腫瘍サイズの低減）まで投与することができる。有糸分裂インヒビターは、一度にもしくは数日から数か月にわたる一連の処置として、または、治癒がもたらされるかもしくは疾患状態の減退が達成される（例えば、腫瘍サイズの低減）まで投与することができる。各作用物質のための最適な投薬スケジュールは、患者の身体における薬物蓄積の測定値から算出することができ、個々の作用物質の相対的な効力に依存して変動することになる。投与する医師は、最適投薬量、投薬方法論、および反復率を決定することができる。
【０１４９】
いくつかの態様では、併用投与が、単一の薬学的製剤における共投与を含む。いくつかの態様では、併用投与が、別個の製剤の使用、および、いずれかの順序であるが、一般にすべての活性作用物質がその生物学的活性を同時に発揮することができる期間内での連続的投与を含む。いくつかの態様では、併用投与が、別個の製剤の使用および時間差投薬レジメンを含む。いくつかの態様では、併用投与が、別個の製剤の使用および特定の順序での投与を含む。いくつかの態様では、併用投与が、別個の製剤の使用、ならびに、特定の順序および時間差投薬レジメンでの作用物質の投与を含む。例えば、いくつかの態様では、有糸分裂インヒビターが、RSPO-LGR経路インヒビターが投与された約1日、約2日、約3日、約4日、約5日、約6日、または約7日後に投与される。
【０１５０】
一定の態様では、RSPO-LGR経路インヒビターの投薬量が、約0.01μg〜約100mg/kg体重、約0.1μg〜約100mg/kg体重、約1μg〜約100mg/kg体重、約1mg〜約100mg/kg体重、約1mg〜約80mg/kg体重、約10mg〜約100mg/kg体重、約10mg〜約75mg/kg体重、または約10mg〜約50mg/kg体重である。一定の態様では、RSPO-LGR経路インヒビターの投薬量が約0.1mg〜約20mg/kg体重である。いくつかの態様では、RSPO-LGR経路インヒビターが、約2mg/kg〜約10mg/kgの投薬量で対象に投与される。一定の態様では、RSPO-LGR経路インヒビターが、毎日、毎週、毎月、または毎年、1回またはそれより多く投与される。一定の態様では、RSPO-LGR経路インヒビターが、1週間に1回、2週間に1回、3週間に1回、または4週間に1回投与される。
【０１５１】
本発明のいくつかの態様では、RSPO-LGR経路インヒビターが、約2mg/kg〜約20mg/kgの投薬量で対象に投与される。いくつかの態様では、RSPO-LGR経路インヒビターまたは抗体が、約2mg/kg〜約10mg/kgの投薬量で対象に投与される。いくつかの態様では、RSPO-LGR経路インヒビターまたは抗体が、約2.5mg/kg〜約10mg/kgの投薬量で対象に投与される。いくつかの態様では、RSPO-LGR経路インヒビターまたは抗体が、約5mg/kg〜約20mg/kgの投薬量で対象に投与される。
【０１５２】
別の態様では、RSPO-LGR経路インヒビターまたは抗体が、約2mg/kg〜約20mg/kgの投薬量で1週間に1回投与される。別の態様では、RSPO-LGR経路インヒビターまたは抗体が、約2mg/kg〜約20mg/kgの投薬量で2週間に1回投与される。別の態様では、RSPO-LGR経路インヒビターまたは抗体が、約2mg/kg〜約20mg/kgの投薬量で3週間に1回投与される。別の態様では、RSPO-LGR経路インヒビターまたは抗体が、約2mg/kg〜約20mg/kgの投薬量で4週間に1回投与される。別の態様では、RSPO-LGR経路インヒビターまたは抗体が、約2mg/kg〜約5mg/kgの投薬量で3週間ごとに投与される。別の態様では、RSPO-LGR経路インヒビターまたは抗体が、約3mg/kg〜約7.5mg/kgの投薬量で4週間ごとに投与される。
【０１５３】
一定の態様では、有糸分裂インヒビターの投薬量が、約20mg/m2〜約3000mg/m2、約20mg/m2〜約2000mg/m2、約20mg/m2〜約1000mg/m2、約20mg/m2〜約500mg/m2、または約20mg/m2〜約250mg/m2である。一定の態様では、有糸分裂インヒビターの投薬量が約20mg/m2〜約150mg/m2である。一定の態様では、有糸分裂インヒビターの投薬量が約50mg/m2である。一定の態様では、有糸分裂インヒビターの投薬量が約75mg/m2である。一定の態様では、有糸分裂インヒビターの投薬量が約90mg/m2である。一定の態様では、有糸分裂インヒビターの投薬量が約125mg/m2である。一定の態様では、有糸分裂インヒビターが、毎日、毎週、毎月、または毎年、1回またはそれより多く投与される。一定の態様では、有糸分裂インヒビターが、1日に2回またはそれより多く、1日に1回、2日に1回、3日に1回、4日に1回、5日に1回、1週間に1回、2週間に1回、3週間に1回、4週間に1回、または4週間サイクルのうち3週間にわたって1週間に1回投与される。いくつかの態様では、有糸分裂インヒビターが、標準治療の治療剤について確立された投薬スケジュールにしたがって投与される。
【０１５４】
いくつかの態様では、RSPO-LGR経路インヒビターおよび／または有糸分裂インヒビターを、その後に1回または複数回のより低い用量が続く、初回のより高い「負荷」用量で投与することができる。いくつかの態様では、投与の頻度もまた、変化することができる。いくつかの態様では、投薬レジメンが、その後に1週間に1回、2週間に1回、3週間に1回、または1か月に1回の追加用量（または「維持」用量）が続く、初回用量の投与を含むことができる。例えば、投薬レジメンは、その後に例えば初回用量の半分の毎週の維持用量が続く、初回負荷用量の投与を含むことができる。いくつかの態様では、投薬レジメンが、その後に例えば1週間おきの初回用量の半分の維持用量が続く、初回負荷用量の投与を含むことができる。いくつかの態様では、投薬レジメンが、その後に例えば1週間おきの同じ量の維持用量が続く、3週間にわたる3回の初回用量の投与を含むことができる。
【０１５５】
当業者に公知であるように、いずれの治療剤の投与も、副作用および／または毒性につながる場合がある。いくつかの場合には、副作用および／または毒性があまりに重篤であるために、治療有効用量での特定の作用物質の投与ができない。いくつかの場合には、薬物療法を中断しなければならず、他の作用物質を試すことができる。しかし、同じ治療クラスの多くの作用物質は、類似する副作用および／または毒性を示すことが多く、患者は、治療を停止するか、またはもし可能であれば、治療剤に伴う不快な副作用を辛抱するかのいずれかでなければならないことになる。
【０１５６】
対象においてがんを処置する方法であって、2種以上の作用物質を投与するための投薬戦略を使用する工程を含み、それが、RSPO-LGR経路インヒビターおよび／または有糸分裂インヒビターの投与に伴う副作用および／または毒性を低減させることができる方法を、本明細書に記載する。いくつかの態様では、ヒト対象においてがんを処置するための方法が、対象に、治療有効用量のRSPO-LGR経路インヒビターを治療有効用量の有糸分裂インヒビターと併用して投与する工程を含み、ここで、インヒビターの1つまたは両方は、間欠的投薬戦略にしたがって投与される。いくつかの態様では、間欠的投薬戦略が、初回用量のRSPO-LGR経路インヒビターを対象に投与する工程、および、後続用量のRSPO-LGR経路インヒビターを約2週間に1回投与する工程を含む。いくつかの態様では、間欠的投薬戦略が、初回用量のRSPO-LGR経路インヒビターを対象に投与する工程、および、後続用量のRSPO-LGR経路インヒビターを約3週間に1回投与する工程を含む。いくつかの態様では、間欠的投薬戦略が、初回用量のRSPO-LGR経路インヒビターを対象に投与する工程、および、後続用量のRSPO-LGR経路インヒビターを約4週間に1回投与する工程を含む。いくつかの態様では、RSPO-LGR経路インヒビターが、間欠的投薬戦略を用いて投与され、有糸分裂インヒビターが、毎週、または4週間サイクルのうち3週間にわたって1週間ごとに投与される。
【０１５７】
2種以上の治療剤での併用療法は、異なる作用機序によって働く作用物質を使用することが多いが、これが必要なわけではない。異なる作用機序を有する作用物質を用いる併用療法は、相加的または相乗的な効果をもたらすことができる。併用療法では、各作用物質の用量を、単剤療法で使用される用量より低くすることが可能になり、それによって毒性の副作用が低減し、および／または作用物質の治療係数が増大しうる。併用療法は、耐性がん細胞が発生する可能性を減少させることができる。いくつかの態様では、併用療法が、非腫瘍形成性細胞に影響を及ぼす（例えば、阻害するかまたは殺傷する）治療剤と、腫瘍形成性CSCに影響を及ぼす（例えば、阻害するかまたは殺傷する）治療剤とを含む。
【０１５８】
いくつかの態様では、RSPO-LGR経路インヒビターおよび有糸分裂インヒビターの併用が、相加的または相乗的な結果をもたらす。いくつかの態様では、併用療法が、RSPO-LGR経路インヒビターの治療係数の増大をもたらす。いくつかの態様では、併用療法が、有糸分裂インヒビターの治療係数の増大をもたらす。いくつかの態様では、併用療法が、RSPO-LGR経路インヒビターの毒性および／または副作用の減少をもたらす。いくつかの態様では、併用療法が、有糸分裂インヒビターの毒性および／または副作用の減少をもたらす。
【０１５９】
処置する医師は、測定された滞留時間および体液または組織中の薬物の濃度に基づいて、投薬についての反復率を見積もることができる。治療の進捗は、従来の技法およびアッセイによってモニタリングすることができる。
【０１６０】
一定の態様では、RSPO-LGR経路インヒビターを有糸分裂インヒビターと併用して投与する工程に加えて、処置法が、RSPO-LGR経路インヒビターおよび／または有糸分裂インヒビターの投与の前に、それと並行して、および／またはその後に少なくとも1種の追加の治療剤を投与する工程を、さらに含むことができる。
【０１６１】
いくつかの態様では、追加の治療剤が、RSPO-LGR経路インヒビターまたは有糸分裂インヒビターと実質的に同時にまたは並行して投与されることになる。例えば、対象は、追加の治療剤（例えば、追加の化学療法剤）での処置クールを受けながら、RSPO-LGR経路インヒビターおよび有糸分裂インヒビターを与えられることができる。一定の態様では、RSPO-LGR経路インヒビターおよび有糸分裂インヒビターが、追加の治療剤での処置の1年以内に投与されることになる。一定の代替態様では、RSPO-LGR経路インヒビターおよび有糸分裂インヒビターが、追加の治療剤での任意の処置の10、8、6、4、または2か月以内に投与されることになる。一定の他の態様では、RSPO-LGR経路インヒビターおよび有糸分裂インヒビターが、追加の治療剤での任意の処置の4、3、2、または1週間以内に投与されることになる。いくつかの態様では、RSPO-LGR経路インヒビターおよび有糸分裂インヒビターが、追加の治療剤での任意の処置の5、4、3、2、または1日以内に投与されることになる。作用物質または処置を、RSPO-LGR経路インヒビターまたは有糸分裂インヒビターとほんの数時間または数分のうちに（すなわち、実質的に同時に）対象に投与できることが、さらに理解されるであろう。
【０１６２】
有用なクラスの追加の治療（例えば、抗がん）剤には、例えば、アウリスタチン、DNA副溝結合剤、DNA複製インヒビター、アルキル化剤（例えば、シスプラチン、一（白金）、二（白金）、および三核白金錯体、ならびにカルボプラチンなどの白金錯体）、アントラサイクリン、抗生物質、葉酸拮抗物質、代謝拮抗物質、化学療法増感剤、デュオカルマイシン、エトポシド、フッ化ピリミジン、イオノフォア、レキシトロプシン、ニトロソウレア、platinol、プリン代謝拮抗物質、ピューロマイシン、放射線増感剤、ステロイド、トポイソメラーゼインヒビターなどが含まれる。一定の態様では、追加の治療剤が、代謝拮抗物質、トポイソメラーゼインヒビター、または血管新生インヒビターである。
【０１６３】
RSPO-LGR経路インヒビターおよび有糸分裂インヒビターと併用して投与することができる治療剤は、化学療法剤を含む。したがって、いくつかの態様では、方法または処置が、化学療法剤または複数の異なる化学療法剤のカクテルと併用した、RSPO-LGR経路インヒビターおよび有糸分裂インヒビターの投与を含む。RSPO-LGR経路インヒビターおよび有糸分裂インヒビターでの処置は、化学療法の施与の前に、それと並行して、またはその後に行うことができる。企図される化学療法には、当技術分野において公知であり、市販されている化学物質または薬物、例えば、ゲムシタビン、イリノテカン、ドキソルビシン、5-フルオロウラシル、シトシンアラビノシド（「Ara-C」）、シクロホスファミド、チオテパ、ブスルファン、サイトキシン（cytoxin）、メトトレキサート、シスプラチン、メルファラン、およびカルボプラチンが含まれる。併用投与は、単一の薬学的製剤におけるかもしくは別個の製剤を用いるかのいずれかでの共投与、または、いずれかの順序であるが、一般にすべての活性作用物質がその生物学的活性を同時に発揮することができる期間内での連続的投与を含むことができる。そのような化学療法剤についての調製および投薬スケジュールは、製造者の説明書にしたがって、または熟練した医療実務者が経験的に決定するように使用することができる。そのような化学療法についての調製および投薬スケジュールは、Chemotherapy Service, 1992, M. C. Perry, Editor, Williams & Wilkins, Baltimore, MDにも記載されている。
【０１６４】
本明細書に記載する方法において有用な化学療法剤にはまた、アルキル化剤、例えばチオテパおよびシクロホスファミド；アルキルスルホナート、例えばブスルファン、インプロスルファン、およびピポスルファン；アジリジン、例えばベンゾドパ（benzodopa）、カルボコン、メツレドパ（meturedopa）、およびウレドパ（uredopa）; アルトレタミン、トリエチレンメラミン、トリエチレンホスホラミド、トリエチレンチオホスホラミド、およびトリメチロールメラミンを含むエチレンイミンおよびメチラメラミン（methylamelamine）；ナイトロジェンマスタード、例えばクロラムブシル、クロルナファジン、コロホスファミド（cholophosphamide）、エストラムスチン、イホスファミド、メクロレタミン、メクロレタミンオキシド塩酸塩、メルファラン、ノブエンビキン、フェネステリン、プレドニムスチン、トロホスファミド、ウラシルマスタード；ニトロソウレア、例えばカルムスチン、クロロゾトシン、フォテムスチン、ロムスチン、ニムスチン、ラニムスチン；抗生物質、例えばアクラシノマイシン、アクチノマイシン、アウトラマイシン（authramycin）、アザセリン、ブレオマイシン、カクチノマイシン、カリケアマイシン、カラビシン（carabicin）、カミノマイシン（caminomycin）、カルジノフィリン、クロモマイシン、ダクチノマイシン、ダウノルビシン、デトルビシン、6-ジアゾ-5-オキソ-L-ノルロイシン、ドキソルビシン、エピルビシン、エソルビシン、イダルビシン、マルセロマイシン、マイトマイシン、ミコフェノール酸、ノガラマイシン、オリボマイシン、ペプロマイシン、ポトフィロマイシン（potfiromycin）、ピューロマイシン、クエラマイシン（quelamycin）、ロドルビシン（rodorubicin）、ストレプトニグリン、ストレプトゾシン、ツベルシジン、ウベニメクス、ジノスタチン、ゾルビシン；代謝拮抗物質、例えばメトトレキサートおよび5-フルオロウラシル（5-FU）；葉酸類似体、例えばデノプテリン、メトトレキサート、プテロプテリン、トリメトレキサート；プリン類似体、例えばフルダラビン、6-メルカプトプリン、チアミプリン、チオグアニン；ピリミジン類似体、例えばアンシタビン、アザシチジン、6-アザウリジン、カルモフール、シタラビン、ジデオキシウリジン、ドキシフルリジン、エノシタビン、フロクスウリジン、5-FU；アンドロゲン、例えばカルステロン、ドロモスタノロンプロピオナート、エピチオスタノール、メピチオスタン、テストラクトン；抗副腎薬（anti-adrenal）、例えばアミノグルテチミド、ミトタン、トリロスタン；葉酸補充薬、例えばフロリン酸（frolinic acid）；アセグラトン；アルドホスファミドグリコシド；アミノレブリン酸；アムサクリン；ベストラブシル；ビサントレン；エダトラキサート；デフォファミン（defofamine）；デメコルチン；ジアジコン；エルフォルミチン（elformithine）；酢酸エリプチニウム；エトグルシド；硝酸ガリウム；ヒドロキシウレア；レンチナン；ロニダミン；ミトグアゾン；ミトキサントロン；モピダモール；ニトラクリン；ペントスタチン；フェナメット；ピラルビシン；ポドフィリン酸；2-エチルヒドラジド；プロカルバジン；PSK.；ラゾキサン；シゾフラン（sizofuran）；スピロゲルマニウム；テヌアゾン酸；トリアジコン；2,2',2''-トリクロロトリエチルアミン；ウレタン；ビンデシン；ダカルバジン；マンノムスチン；ミトブロニトール；ミトラクトール；ピポブロマン；ガシトシン（gacytosine）；アラビノシド（「Ara-C」）；シクロホスファミド；チオテパ；クロラムブシル；ゲムシタビン；6-チオグアニン；メルカプトプリン；メトトレキサート；白金類似体、例えばシスプラチンおよびカルボプラチン；白金；エトポシド（VP-16）；イホスファミド；マイトマイシンC；ミトキサントロン；ノバントロン；テニポシド；ダウノマイシン；アミノプテリン；xeloda；イバンドロナート；CPT11；トポイソメラーゼインヒビターRFS 2000；ジフルオロメチルオルニチン（DMFO）；レチノイン酸；エスペラミシン；カペシタビン；および上記のいずれかの薬学的に許容される塩、酸または誘導体も含まれるが、それらに限定されるわけではない。化学療法剤にはまた、腫瘍に対するホルモン作用を調節または阻害するように作用する抗ホルモン剤、例えば、タモキシフェン、ラロキシフェン、アロマターゼ阻害性4(5)-イミダゾール、4-ヒドロキシタモキシフェン、トリオキシフェン、ケオキシフェン、LY117018、オナプリストン、およびトレミフェンを例えば含む抗エストロゲン；ならびに、抗アンドロゲン、例えばフルタミド、ニルタミド、ビカルタミド、ロイプロリド、およびゴセレリン；ならびに上記のいずれかの薬学的に許容される塩、酸または誘導体も含まれる。
【０１６５】
一定の態様では、化学療法剤がトポイソメラーゼインヒビターである。トポイソメラーゼインヒビターは、トポイソメラーゼ酵素（例えば、トポイソメラーゼIまたはII）の作用を妨害する化学療法剤である。トポイソメラーゼインヒビターには、ドキソルビシンHCl、クエン酸ダウノルビシン、ミトキサントロンHCl、アクチノマイシンD、エトポシド、トポテカンHCl、テニポシド（VM-26）、およびイリノテカンが含まれるが、それらに限定されるわけではない。
【０１６６】
一定の態様では、化学療法剤が代謝拮抗物質である。代謝拮抗物質は、正常な生化学反応に必要とされる代謝産物に類似しているが、細胞分裂などの1つまたは複数の正常な細胞の機能を妨害しうるほどに異なる構造を有する化学物質である。代謝拮抗物質には、ゲムシタビン、フルオロウラシル、カペシタビン、メトトレキサートナトリウム、ラリトレキセド（ralitrexed）、ペメトレキセド、テガフル、シトシンアラビノシド、チオグアニン、5-アザシチジン、6-メルカプトプリン、アザチオプリン、6-チオグアニン、ペントスタチン、リン酸フルダラビン、およびクラドリビン、ならびにこれらのいずれかの薬学的に許容される塩、酸、または誘導体が含まれるが、それらに限定されるわけではない。いくつかの態様では、RSPO-LGR経路インヒビターおよび有糸分裂インヒビターが、ゲムシタビンと組み合わせて使用される。いくつかの態様では、RSPO-LGR経路インヒビターおよび有糸分裂インヒビターが、膵臓がんの処置のためにゲムシタビンと組み合わせて使用され、ここで、RSPO-LGR経路インヒビターはOMP-131R010であり、有糸分裂インヒビターはパクリタキセルまたはnab-パクリタキセル（ABRAXANE）である。
【０１６７】
いくつかの態様では、処置が、1種または複数種のサイトカイン（例えば、リンホカイン、インターロイキン、腫瘍壊死因子、および／または成長因子）の投与を含むことができるか、または、腫瘍もしくはがん細胞の外科的除去、または処置する医師が必要とみなす任意の他の療法を伴うことができる。
【０１６８】
一定の態様では、処置が、放射線療法と併用したRSPO-LGR経路インヒビターおよび有糸分裂インヒビターの投与を含む。RSPO-LGR経路インヒビターおよび有糸分裂インヒビターでの処置は、放射線療法の前に、それと並行して、またはその後に行うことができる。そのような放射線療法についての施行スケジュールは、熟練した医療実務者が決定することができる。
【０１６９】
いくつかの態様では、Wnt経路インヒビターを、RSPO-LGR経路インヒビターおよび有糸分裂インヒビターと併用して投与することができる。RSPO-LGR経路インヒビターおよび有糸分裂インヒビターでの処置は、Wnt経路インヒビターの投与の前に、それと併用して、またはその後に行うことができる。いくつかの態様では、Wnt経路インヒビターを、RSPO-LGR経路インヒビターまたは有糸分裂インヒビターとほんの数時間または数分のうちに（すなわち、実質的に同時に）対象に投与することができる。Wnt経路インヒビターは、例えば、米国特許第7,723,477号、第8,324,361号、第8,765,913号、第7,982,013号、第8,507,442号、ならびに米国特許出願公開第2013/0034551号および第2013/0045209号に記載されており、これらの各々はこれにより、すべての目的でその全体が参照により本明細書に組み入れられる。一定の態様では、Wnt経路インヒビターが抗Wnt抗体である。一定の態様では、Wnt経路インヒビターが抗FZD抗体である。一定の態様では、Wnt経路インヒビターが、FZD1、FZD2、FZD3、FZD4、FZD5、FZD6、FZD7、FZD8、FZD9、およびFZD10から選択される少なくとも1種のFZD受容体に特異的に結合する抗FZD抗体である。一定の態様では、Wnt経路インヒビターが、FZD1、FZD2、FZD5、FZD7、およびFZD8から選択される少なくとも1種のFZD受容体に特異的に結合する抗FZD抗体である。一定の態様では、Wnt経路インヒビターがバンチクツマブ（OMP-18R5）である。一定の態様では、Wnt経路インヒビターがFZD-Fc可溶性受容体である。一定の態様では、Wnt経路インヒビターがFZD8-Fc可溶性受容体である。一定の態様では、Wnt経路インヒビターがイパフリセプト（OMP-54F28）である。
【０１７０】
III．RSPO-LGR経路インヒビター
RSPO-LGR経路インヒビターを有糸分裂インヒビターと併用して投与する工程を含む、例えば、腫瘍成長を阻害するか、腫瘍サイズを低減させるか、またはがんを処置する方法を含む方法を、本明細書に記載する。いくつかの態様では、RSPO-LGR経路インヒビターが、逐次または時間差投薬スケジュールにしたがって有糸分裂インヒビターと組み合わせて使用され、ここで、RSPO-LGR経路インヒビターは有糸分裂インヒビターの前に投与される。
【０１７１】
一定の態様では、RSPO-LGR経路インヒビターが、RSPO-LGR経路の1種または複数種の可溶性細胞外構成要素に結合する作用物質である。一定の態様では、RSPO-LGR経路インヒビターが、RSPO-LGR経路の膜結合構成要素の1種または複数種の細胞外領域に結合する作用物質である。一定の態様では、RSPO-LGR経路インヒビターが、RSPO-LGR経路の1種または複数種の可溶性細胞外構成要素を直接調整する作用物質である。一定の態様では、RSPO-LGR経路インヒビターが、RSPO-LGR経路の膜結合構成要素の1種または複数種の細胞外領域を直接調整する作用物質である。
【０１７２】
一定の態様では、RSPO-LGR経路インヒビターが、Wntシグナル伝達経路の構成要素を直接的にまたは間接的に調整する作用物質である。一定の態様では、RSPO-LGR経路インヒビターが、β-カテニンシグナル伝達を阻害する作用物質である。一定の態様では、RSPO-LGR経路インヒビターが、Wnt媒介性β-カテニンシグナル伝達を調整する作用物質である。
【０１７３】
一定の態様では、RSPO-LGR経路インヒビターが、1種または複数種のヒトRSPOタンパク質に結合する作用物質である。これらの作用物質を、本明細書において「RSPO結合作用物質」と呼ぶ。RSPO結合作用物質の非限定的な例は、米国特許第8158758号、第8158757号、第8802097号、第8088374号、ならびに米国特許出願公開第2014/0017253号、第2014/0134703号、第2013/0337533号、第2014/0186917号、第2012/0263730号、第2012/0039912号、第2009/0220495号、第2012/0088727号、第2014/0056894号、および第20150147333号に見いだすことができ、これらの各々はこれにより、すべての目的でその全体が参照により本明細書に組み入れられる。
【０１７４】
いくつかの態様では、RSPO結合作用物質が抗体である。いくつかの態様では、RSPO結合作用物質がポリペプチドである。一定の態様では、RSPO結合作用物質がRSPO1に結合する（「RSPO1結合作用物質」）。一定の態様では、RSPO結合作用物質がRSPO2に結合する（「RSPO2結合作用物質」）。一定の態様では、RSPO結合作用物質がRSPO3に結合する（「RSPO3結合作用物質」）。一定の態様では、RSPO結合作用物質が、1種または複数種のヒトRSPOタンパク質に特異的に結合する。ヒトRSPO1、RSPO2、RSPO3、およびRSPO4の完全長アミノ酸（aa）配列は、当技術分野において公知であり、SEQ ID NO:1（RSPO1）、SEQ ID NO:2（RSPO2）、SEQ ID NO:3（RSPO3）、およびSEQ ID NO:4（RSPO4）として本明細書において提供される。
【０１７５】
一定の態様では、本明細書に記載するRSPO結合作用物質（例えば、抗体または二重特異性抗体）の抗原結合部位が、1、2、3、または4種のRSPOに結合する能力を有する（または結合する）。一定の態様では、本明細書に記載するRSPO結合作用物質（例えば、抗体または二重特異性抗体）の抗原結合部位が、第1のRSPOタンパク質（例えば、RSPO1）、ならびに1、2、または3種の他のRSPO（例えば、RSPO2、RSPO3、および／またはRSPO4）に結合する能力を有する（または結合する）。いくつかの態様では、RSPO結合作用物質（例えば、抗体）が、ヒトRSPOおよびマウスRSPOの両方に特異的に結合する。
【０１７６】
本明細書に記載する方法の一定の態様では、RSPO結合作用物質が、ヒトRSPO1（SEQ ID NO:1）のアミノ酸21〜263内に特異的に結合する抗体である。一定の態様では、RSPO結合作用物質が、ヒトRSPO1（SEQ ID NO:1）のアミノ酸31〜263内に特異的に結合する抗体である。一定の態様では、RSPO結合作用物質が、ヒトRSPO1（SEQ ID NO:1）のアミノ酸34〜135内に特異的に結合する抗体である。一定の態様では、RSPO結合作用物質が、ヒトRSPO1（SEQ ID NO:1）のアミノ酸34〜85内に特異的に結合する抗体である。一定の態様では、RSPO結合作用物質が、ヒトRSPO1（SEQ ID NO:1）のアミノ酸91〜135内に特異的に結合する抗体である。一定の態様では、RSPO結合作用物質が、ヒトRSPO1（SEQ ID NO:1）のアミノ酸147〜207内に特異的に結合する抗体である。一定の態様では、RSPO結合作用物質が、RSPO1のフリン様システインリッチドメインに結合する。いくつかの態様では、RSPO結合作用物質が、RSPO1のフリン様システインリッチドメイン内の少なくとも1個のアミノ酸に結合する。いくつかの態様では、RSPO結合作用物質が、RSPO1のトロンボスポンジンドメインに結合する。いくつかの態様では、RSPO結合作用物質が、RSPO1のトロンボスポンジンドメイン内の少なくとも1個のアミノ酸に結合する。
【０１７７】
一定の態様では、RSPO結合作用物質が、ヒトRSPO2（SEQ ID NO:2）のアミノ酸22〜243内に特異的に結合する抗体である。一定の態様では、RSPO結合作用物質が、ヒトRSPO2（SEQ ID NO:2）のアミノ酸22〜205内に特異的に結合する抗体である。一定の態様では、RSPO結合作用物質が、ヒトRSPO2（SEQ ID NO:2）のアミノ酸35〜134内に特異的に結合する抗体である。一定の態様では、RSPO結合作用物質が、ヒトRSPO2（SEQ ID NO:2）のアミノ酸34〜84内に特異的に結合する抗体である。一定の態様では、RSPO結合作用物質が、ヒトRSPO2（SEQ ID NO:2）のアミノ酸90〜134内に特異的に結合する抗体である。一定の態様では、RSPO結合作用物質が、RSPO2のフリン様システインリッチドメインに結合する。いくつかの態様では、RSPO結合作用物質が、RSPO2のフリン様システインリッチドメイン内の少なくとも1個のアミノ酸に結合する。いくつかの態様では、RSPO結合作用物質が、RSPO2のトロンボスポンジンドメインに結合する。いくつかの態様では、RSPO結合作用物質が、RSPO2のトロンボスポンジンドメイン内の少なくとも1個のアミノ酸に結合する。
【０１７８】
一定の態様では、RSPO結合作用物質が、ヒトRSPO3（SEQ ID NO:3）のアミノ酸22〜272内に特異的に結合する抗体である。一定の態様では、RSPO結合作用物質が、ヒトRSPO3（SEQ ID NO:3）のアミノ酸22〜207内に特異的に結合する抗体である。一定の態様では、RSPO結合作用物質が、ヒトRSPO3（SEQ ID NO:3）のアミノ酸35〜135内に特異的に結合する抗体である。一定の態様では、RSPO結合作用物質が、ヒトRSPO3（SEQ ID NO:3）のアミノ酸35〜86内に特異的に結合する抗体である。一定の態様では、RSPO結合作用物質が、ヒトRSPO3（SEQ ID NO:3）のアミノ酸92〜135内に特異的に結合する抗体である。一定の態様では、RSPO結合作用物質が、RSPO3のフリン様システインリッチドメインに結合する。いくつかの態様では、RSPO結合作用物質が、RSPO3のフリン様システインリッチドメイン内の少なくとも1個のアミノ酸に結合する。いくつかの態様では、RSPO結合作用物質が、RSPO3のトロンボスポンジンドメインに結合する。いくつかの態様では、RSPO結合作用物質が、RSPO3のトロンボスポンジンドメイン内の少なくとも1個のアミノ酸に結合する。
【０１７９】
一定の態様では、RSPO結合作用物質または抗体が、少なくとも1種のRSPOタンパク質に、約1μM以下、約100nM以下、約40nM以下、約20nM以下、約10nM以下、約1nM以下、または約0.1nM以下の解離定数（KD）で結合する。一定の態様では、RSPO結合作用物質または抗体が、少なくとも1種のRSPOタンパク質に、約1μM以下、約100nM以下、約40nM以下、約20nM以下、約10nM以下、約1nM以下、または約0.1nM以下の解離定数（KD）で結合する。いくつかの態様では、RSPO結合作用物質または抗体が、少なくとも1種のRSPOタンパク質に約20nM以下のKDで結合する。いくつかの態様では、RSPO結合作用物質または抗体が、少なくとも1種のRSPOタンパク質に約10nM以下のKDで結合する。いくつかの態様では、RSPO結合作用物質または抗体が、少なくとも1種のRSPOタンパク質に約1nM以下のKDで結合する。いくつかの態様では、RSPO結合作用物質または抗体が、少なくとも1種のRSPOタンパク質に約0.5nM以下のKDで結合する。いくつかの態様では、RSPO結合作用物質または抗体が、少なくとも1種のRSPOタンパク質に約0.1nM以下のKDで結合する。一定の態様では、本明細書に記載するRSPO結合作用物質または抗体が、少なくとも2種のRSPOタンパク質に結合する。いくつかの態様では、RSPO結合作用物質が、ヒトRSPOおよびマウスRSPOの両方に約10nM以下のKDで結合する。いくつかの態様では、RSPO結合作用物質が、ヒトRSPOおよびマウスRSPOの両方に約1nM以下のKDで結合する。いくつかの態様では、RSPO結合作用物質が、ヒトRSPOおよびマウスRSPOの両方に約0.1nM以下のKDで結合する。いくつかの態様では、RSPOタンパク質に対する結合作用物質（例えば、抗体）の解離定数が、Biacoreチップ上に固定化されたRSPOタンパク質の少なくとも一部分を含むRSPO融合タンパク質を用いて決定される解離定数である。いくつかの態様では、RSPOタンパク質に対する結合作用物質（例えば、抗体）の解離定数が、Biacoreチップ上の抗ヒトIgG抗体によって補足された結合作用物質およびRSPOタンパク質を用いて決定される解離定数である。
【０１８０】
一定の態様では、RSPO結合作用物質（例えば、抗体）が、少なくとも1種のヒトRSPOタンパク質に、約1μM以下、約100nM以下、約40nM以下、約20nM以下、約10nM以下、約1nM以下、または約0.1nM以下の最大半減有効濃度（EC50）で結合する。一定の態様では、RSPO結合作用物質（例えば、抗体）が、少なくとも1種のヒトRSPOに、約1μM以下、約100nM以下、約40nM以下、約20nM以下、約10nM以下、約1nM以下、または約0.1nM以下の最大半減有効濃度（EC50）で結合する。
【０１８１】
一定の態様では、RSPO結合作用物質が、ヒトRSPO1に特異的に結合するRSPO1結合作用物質（例えば、抗体）であり、該RSPO1結合作用物質（例えば、抗体）は、抗体89M5のCDRのうちの1つ、2つ、3つ、4つ、5つ、および／または6つを含む（表1を参照されたい）。
【０１８２】
【表１】
2018502833.tif 000023
【０１８３】
一定の態様では、RSPO結合作用物質が、ヒトRSPO1に特異的に結合するRSPO1結合作用物質（例えば、抗体）であり、該RSPO1結合作用物質は、TGYTMH（SEQ ID NO:5）を含む重鎖CDR1、
2018502833.tif 000024
を含む重鎖CDR2、および
2018502833.tif 000025
を含む重鎖CDR3を含む。いくつかの態様では、RSPO1結合作用物質が、さらに、
2018502833.tif 000026
を含む軽鎖CDR1、WASTRHT（SEQ ID NO:9）を含む軽鎖CDR2、およびQQHYSTPW（SEQ ID NO:10）を含む軽鎖CDR3を含む。いくつかの態様では、RSPO1結合作用物質が、
2018502833.tif 000027
を含む軽鎖CDR1、WASTRHT（SEQ ID NO:9）を含む軽鎖CDR2、およびQQHYSTPW（SEQ ID NO:10）を含む軽鎖CDR3を含む。一定の態様では、RSPO1結合作用物質が、（a）TGYTMH（SEQ ID NO:5）を含む重鎖CDR1、
2018502833.tif 000028
を含む重鎖CDR2、および
2018502833.tif 000029
を含む重鎖CDR3；ならびに（b）
2018502833.tif 000030
を含む軽鎖CDR1、WASTRHT（SEQ ID NO:9）を含む軽鎖CDR2、およびQQHYSTPW（SEQ ID NO:10）を含む軽鎖CDR3を含む。
【０１８４】
一定の態様では、RSPO結合作用物質が、ヒトRSPO1に特異的に結合するRSPO1結合作用物質（例えば、抗体または二重特異性抗体）であり、該RSPO1結合作用物質は、（a）TGYTMH（SEQ ID NO:5）を含む重鎖CDR1、または1、2、3、もしくは4個のアミノ酸置換を含むそのバリアント；（b）
2018502833.tif 000031
を含む重鎖CDR2、または1、2、3、もしくは4個のアミノ酸置換を含むそのバリアント；（c）
2018502833.tif 000032
を含む重鎖CDR3、または1、2、3、もしくは4個のアミノ酸置換を含むそのバリアント；（d）
2018502833.tif 000033
を含む軽鎖CDR1、または1、2、3、もしくは4個のアミノ酸置換を含むそのバリアント；（e）WASTRHT（SEQ ID NO:9）を含む軽鎖CDR2、または1、2、3、もしくは4個のアミノ酸置換を含むそのバリアント；および（f）QQHYSTPW（SEQ ID NO:10）を含む軽鎖CDR3、または1、2、3、もしくは4個のアミノ酸置換を含むそのバリアントを含む。一定の態様では、アミノ酸置換が保存的置換である。いくつかの態様では、置換が、生殖細胞系ヒト化プロセスの一部として行われる。
【０１８５】
一定の態様では、RSPO結合作用物質が、RSPO1に特異的に結合するRSPO1結合作用物質（例えば、抗体）であり、該RSPO1結合作用物質は、SEQ ID NO:11に対して少なくとも約80％の配列同一性を有する重鎖可変領域、および／またはSEQ ID NO:12に対して少なくとも80％の配列同一性を有する軽鎖可変領域を含む。一定の態様では、RSPO1結合作用物質が、SEQ ID NO:11に対して少なくとも約85％、少なくとも約90％、少なくとも約95％、少なくとも約97％、または少なくとも約99％の配列同一性を有する重鎖可変領域を含む。一定の態様では、RSPO1結合作用物質が、SEQ ID NO:12に対して少なくとも約85％、少なくとも約90％、少なくとも約95％、少なくとも約97％、または少なくとも約99％の配列同一性を有する軽鎖可変領域を含む。一定の態様では、RSPO1結合作用物質が、SEQ ID NO:11に対して少なくとも約95％の配列同一性を有する重鎖可変領域、および／またはSEQ ID NO:12に対して少なくとも約95％の配列同一性を有する軽鎖可変領域を含む。一定の態様では、RSPO1結合作用物質が、SEQ ID NO:11を含む重鎖可変領域、および／またはSEQ ID NO:12を含む軽鎖可変領域を含む。一定の態様では、RSPO1結合作用物質が、SEQ ID NO:11を含む重鎖可変領域、およびSEQ ID NO:12を含む軽鎖可変領域を含む。一定の態様では、RSPO1結合作用物質が、SEQ ID NO:11からなる重鎖可変領域、およびSEQ ID NO:12からなる軽鎖可変領域を含む。
【０１８６】
一定の態様では、RSPO結合作用物質が、RSPO1に特異的に結合するRSPO1結合作用物質（例えば、抗体）であり、該RSPO1結合作用物質は、SEQ ID NO:44に対して少なくとも約80％の配列同一性を有する重鎖可変領域、および／またはSEQ ID NO:45に対して少なくとも80％の配列同一性を有する軽鎖可変領域を含む。一定の態様では、RSPO1結合作用物質が、SEQ ID NO:44に対して少なくとも約85％、少なくとも約90％、少なくとも約95％、少なくとも約97％、または少なくとも約99％の配列同一性を有する重鎖可変領域を含む。一定の態様では、RSPO1結合作用物質が、SEQ ID NO:45に対して少なくとも約85％、少なくとも約90％、少なくとも約95％、少なくとも約97％、または少なくとも約99％の配列同一性を有する軽鎖可変領域を含む。一定の態様では、RSPO1結合作用物質が、SEQ ID NO:44に対して少なくとも約95％の配列同一性を有する重鎖可変領域、および／またはSEQ ID NO:45に対して少なくとも約95％の配列同一性を有する軽鎖可変領域を含む。一定の態様では、RSPO1結合作用物質が、SEQ ID NO:44を含む重鎖可変領域、および／またはSEQ ID NO:45を含む軽鎖可変領域を含む。一定の態様では、RSPO1結合作用物質が、SEQ ID NO:44を含む重鎖可変領域、およびSEQ ID NO:45を含む軽鎖可変領域を含む。一定の態様では、RSPO1結合作用物質が、SEQ ID NO:44からなる重鎖可変領域、およびSEQ ID NO:45からなる軽鎖可変領域を含む。
【０１８７】
一定の態様では、RSPO結合作用物質が、RSPO1に特異的に結合するRSPO1結合作用物質（例えば、抗体）であり、該RSPO1結合作用物質は、（a）SEQ ID NO:13もしくはSEQ ID NO:14に対して少なくとも90％の配列同一性を有する重鎖；および／または（b）SEQ ID NO:15もしくはSEQ ID NO:16に対して少なくとも90％の配列同一性を有する軽鎖を含む。いくつかの態様では、RSPO1結合作用物質が、（a）SEQ ID NO:13もしくはSEQ ID NO:14に対して少なくとも95％の配列同一性を有する重鎖；および／または（b）SEQ ID NO:15もしくはSEQ ID NO:16に対して少なくとも95％の配列同一性を有する軽鎖を含む。いくつかの態様では、RSPO1結合作用物質が、SEQ ID NO:14を含む重鎖、および／またはSEQ ID NO:16を含む軽鎖を含む。いくつかの態様では、RSPO1結合作用物質が、SEQ ID NO:14を含む重鎖、およびSEQ ID NO:16を含む軽鎖を含む。
【０１８８】
一定の態様では、RSPO結合作用物質が、RSPO1に特異的に結合するRSPO1結合作用物質（例えば、抗体）であり、該RSPO1結合作用物質は、（a）SEQ ID NO:46もしくはSEQ ID NO:47に対して少なくとも90％の配列同一性を有する重鎖；および／または（b）SEQ ID NO:48もしくはSEQ ID NO:49に対して少なくとも90％の配列同一性を有する軽鎖を含む。いくつかの態様では、RSPO1結合作用物質が、（a）SEQ ID NO:46もしくはSEQ ID NO:47に対して少なくとも95％の配列同一性を有する重鎖；および／または（b）SEQ ID NO:48もしくはSEQ ID NO:49に対して少なくとも95％の配列同一性を有する軽鎖を含む。いくつかの態様では、RSPO1結合作用物質が、SEQ ID NO:47を含む重鎖、および／またはSEQ ID NO:49を含む軽鎖を含む。いくつかの態様では、RSPO1結合作用物質が、SEQ ID NO:47を含む重鎖、およびSEQ ID NO:49を含む軽鎖を含む。
【０１８９】
一定の態様では、RSPO1結合作用物質が、抗体h89M5-H8L5の重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含む。一定の態様では、RSPO1結合作用物質が、抗体h89M5-H8L5の重鎖および軽鎖（リーダー配列ありまたはリーダー配列なし）を含む。一定の態様では、RSPO1結合作用物質が抗体h89M5-H8L5である。一定の態様では、RSPO1結合作用物質が、抗体h89M5-H8L5の重鎖可変領域および／または軽鎖可変領域を、抗体のキメラ形態で含む。いくつかの態様では、抗RSPO1抗体がh89M5-H8L5である。
【０１９０】
一定の態様では、RSPO1結合作用物質が、抗体h89M5-H2L2の重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含む。一定の態様では、RSPO1結合作用物質が、抗体h89M5-H2L2の重鎖および軽鎖（リーダー配列ありまたはリーダー配列なし）を含む。一定の態様では、RSPO1結合作用物質が抗体h89M5-H2L2である。一定の態様では、RSPO1結合作用物質が、抗体h89M5-H2L2の重鎖可変領域および／または軽鎖可変領域を、抗体のキメラ形態で含む。いくつかの態様では、抗RSPO1抗体がh89M5-H2L2である。
【０１９１】
一定の態様では、RSPO1結合作用物質が、抗体89M5の重鎖CDRおよび／または軽鎖CDRを含む。89M5抗体を産生するハイブリドーマ細胞株は、2011年6月30日にブタペスト条約の条件下で10801 University Boulevard, Manassas, VA, USAのAmerican Type Culture Collection（ATCC）に寄託され、ATCC寄託指定番号PTA-11970が割り当てられた。
【０１９２】
抗体h89M5-H8L5の重鎖および軽鎖をコードするプラスミドは、2014年8月15日にブタペスト条約の条件下で10801 University Boulevard, Manassas, VA, USAのATCCに寄託され、ATCC寄託指定番号PTA-121494およびPTA-121495が割り当てられた。いくつかの態様では、RSPO1結合作用物質が、ATCCに寄託されてPTA-121494と指定されたプラスミドによってコードされる重鎖可変領域を含む。いくつかの態様では、RSPO1結合作用物質が、ATCCに寄託されてPTA-121495と指定されたプラスミドによってコードされる軽鎖可変領域を含む。いくつかの態様では、RSPO1結合作用物質が、ATCCに寄託されてPTA-121494と指定されたプラスミドによってコードされる重鎖可変領域、およびATCCに寄託されてPTA-121495と指定されたプラスミドによってコードされる軽鎖可変領域を含む。いくつかの態様では、RSPO1結合作用物質が、ATCCに寄託されてPTA-121494と指定されたプラスミドによってコードされる重鎖を含む。いくつかの態様では、RSPO1結合作用物質が、ATCCに寄託されてPTA-121495と指定されたプラスミドによってコードされる軽鎖を含む。いくつかの態様では、RSPO1結合作用物質が、ATCCに寄託されてPTA-121494と指定されたプラスミドによってコードされる重鎖、およびATCCに寄託されてPTA-121495と指定されたプラスミドによってコードされる軽鎖を含む。
【０１９３】
一定の態様では、RSPO1結合作用物質が、抗体h89M5-H8L5を含むか、それから本質的になるか、またはそれからなる。一定の態様では、RSPO1結合作用物質が、抗体89M5のバリアントを含むか、それから本質的になるか、またはそれからなる。一定の態様では、RSPO1結合作用物質が、抗体h89M5-H8L5のバリアントを含むか、それから本質的になるか、またはそれからなる。
【０１９４】
一定の態様では、RSPO1結合作用物質が、抗体h89M5-H2L2を含むか、それから本質的になるか、またはそれからなる。一定の態様では、RSPO1結合作用物質が、抗体89M5のバリアントを含むか、それから本質的になるか、またはそれからなる。一定の態様では、RSPO1結合作用物質が、抗体h89M5-H2L2のバリアントを含むか、それから本質的になるか、またはそれからなる。
【０１９５】
本明細書に記載する方法の一定の態様では、RSPO結合作用物質が、ヒトRSPO2に特異的に結合するRSPO2結合作用物質（例えば、抗体）であり、該RSPO2結合作用物質（例えば、抗体）は、抗体130M23のCDRのうちの1つ、2つ、3つ、4つ、5つ、および／または6つを含む（表1を参照されたい）。
【０１９６】
一定の態様では、RSPO結合作用物質が、ヒトRSPO2に特異的に結合するRSPO2結合作用物質（例えば、抗体）であり、該RSPO2結合作用物質は、SSYAMS（SEQ ID NO:17）を含む重鎖CDR1、
2018502833.tif 000034
を含む重鎖CDR2、および
2018502833.tif 000035
を含む重鎖CDR3を含む。いくつかの態様では、RSPO2結合作用物質が、さらに、
2018502833.tif 000036
を含む軽鎖CDR1、WASTRHT（SEQ ID NO:21）を含む軽鎖CDR2、およびQQHYSTP（SEQ ID NO:22）を含む軽鎖CDR3を含む。いくつかの態様では、RSPO2結合作用物質が、
2018502833.tif 000037
を含む軽鎖CDR1、WASTRHT（SEQ ID NO:21）を含む軽鎖CDR2、およびQQHYSTP（SEQ ID NO:22）を含む軽鎖CDR3を含む。一定の態様では、RSPO2結合作用物質が、（a）SSYAMS（SEQ ID NO:17）を含む重鎖CDR1、
2018502833.tif 000038
を含む重鎖CDR2、および
2018502833.tif 000039
を含む重鎖CDR3；ならびに（b）
2018502833.tif 000040
を含む軽鎖CDR1、WASTRHT（SEQ ID NO:21）を含む軽鎖CDR2、およびQQHYSTP（SEQ ID NO:22）を含む軽鎖CDR3を含む。
【０１９７】
一定の態様では、RSPO結合作用物質が、ヒトRSPO2に特異的に結合するRSPO2結合作用物質（例えば、抗体または二重特異性抗体）であり、該RSPO2結合作用物質は、（a）SSYAMS（SEQ ID NO:17）を含む重鎖CDR1、または1、2、3、もしくは4個のアミノ酸置換を含むそのバリアント；（b）
2018502833.tif 000041
を含む重鎖CDR2、または1、2、3、もしくは4個のアミノ酸置換を含むそのバリアント；（c）
2018502833.tif 000042
を含む重鎖CDR3、または1、2、3、もしくは4個のアミノ酸置換を含むそのバリアント；（d）
2018502833.tif 000043
を含む軽鎖CDR1、または1、2、3、もしくは4個のアミノ酸置換を含むそのバリアント；（e）WASTRHT（SEQ ID NO:21）を含む軽鎖CDR2、または1、2、3、もしくは4個のアミノ酸置換を含むそのバリアント；および（f）QQHYSTP（SEQ ID NO:22）を含む軽鎖CDR3、または1、2、3、もしくは4個のアミノ酸置換を含むそのバリアントを含む。一定の態様では、アミノ酸置換が保存的置換である。いくつかの態様では、置換が、生殖細胞系ヒト化プロセスの一部として行われる。
【０１９８】
一定の態様では、RSPO結合作用物質が、RSPO2に特異的に結合するRSPO2結合作用物質（例えば、抗体）であり、該RSPO2結合作用物質は、SEQ ID NO:23に対して少なくとも約80％の配列同一性を有する重鎖可変領域、および／またはSEQ ID NO:24もしくはSEQ ID NO:50に対して少なくとも80％の配列同一性を有する軽鎖可変領域を含む。一定の態様では、RSPO2結合作用物質が、SEQ ID NO:23に対して少なくとも約85％、少なくとも約90％、少なくとも約95％、少なくとも約97％、または少なくとも約99％の配列同一性を有する重鎖可変領域を含む。一定の態様では、RSPO2結合作用物質が、SEQ ID NO:24に対して少なくとも約85％、少なくとも約90％、少なくとも約95％、少なくとも約97％、または少なくとも約99％の配列同一性を有する軽鎖可変領域を含む。一定の態様では、RSPO2結合作用物質が、SEQ ID NO:50に対して少なくとも約85％、少なくとも約90％、少なくとも約95％、少なくとも約97％、または少なくとも約99％の配列同一性を有する軽鎖可変領域を含む。一定の態様では、RSPO2結合作用物質が、SEQ ID NO:23に対して少なくとも約95％の配列同一性を有する重鎖可変領域、および／またはSEQ ID NO:24もしくはSEQ ID NO:50に対して少なくとも約95％の配列同一性を有する軽鎖可変領域を含む。一定の態様では、RSPO2結合作用物質が、SEQ ID NO:23を含む重鎖可変領域、および／またはSEQ ID NO:24もしくはSEQ ID NO:50を含む軽鎖可変領域を含む。一定の態様では、RSPO2結合作用物質が、SEQ ID NO:23を含む重鎖可変領域、およびSEQ ID NO:24を含む軽鎖可変領域を含む。一定の態様では、RSPO2結合作用物質が、SEQ ID NO:23を含む重鎖可変領域、およびSEQ ID NO:50を含む軽鎖可変領域を含む。一定の態様では、RSPO2結合作用物質が、SEQ ID NO:23からなる重鎖可変領域、およびSEQ ID NO:24からなる軽鎖可変領域を含む。一定の態様では、RSPO2結合作用物質が、SEQ ID NO:23からなる重鎖可変領域、およびSEQ ID NO:50からなる軽鎖可変領域を含む。
【０１９９】
一定の態様では、RSPO結合作用物質が、RSPO2に特異的に結合するRSPO2結合作用物質（例えば、抗体）であり、該RSPO2結合作用物質は、（a）SEQ ID NO:25もしくはSEQ ID NO:26に対して少なくとも90％の配列同一性を有する重鎖；および／または（b）SEQ ID NO:27もしくはSEQ ID NO:28に対して少なくとも90％の配列同一性を有する軽鎖を含む。いくつかの態様では、RSPO2結合作用物質が、（a）SEQ ID NO:25もしくはSEQ ID NO:26に対して少なくとも95％の配列同一性を有する重鎖；および／または（b）SEQ ID NO:27もしくはSEQ ID NO:28に対して少なくとも95％の配列同一性を有する軽鎖を含む。いくつかの態様では、RSPO2結合作用物質が、SEQ ID NO:26を含む重鎖、および／またはSEQ ID NO:28を含む軽鎖を含む。いくつかの態様では、RSPO2結合作用物質が、SEQ ID NO:26を含む重鎖、およびSEQ ID NO:28を含む軽鎖を含む。
【０２００】
一定の態様では、RSPO結合作用物質が、RSPO2に特異的に結合するRSPO2結合作用物質（例えば、抗体）であり、該RSPO2結合作用物質は、（a）SEQ ID NO:25もしくはSEQ ID NO:26に対して少なくとも90％の配列同一性を有する重鎖；および／または（b）SEQ ID NO:51もしくはSEQ ID NO:52に対して少なくとも90％の配列同一性を有する軽鎖を含む。いくつかの態様では、RSPO2結合作用物質が、（a）SEQ ID NO:25もしくはSEQ ID NO:26に対して少なくとも95％の配列同一性を有する重鎖；および／または（b）SEQ ID NO:51もしくはSEQ ID NO:52に対して少なくとも95％の配列同一性を有する軽鎖を含む。いくつかの態様では、RSPO2結合作用物質が、SEQ ID NO:26を含む重鎖、および／またはSEQ ID NO:52を含む軽鎖を含む。いくつかの態様では、RSPO2結合作用物質が、SEQ ID NO:26を含む重鎖、およびSEQ ID NO:52を含む軽鎖を含む。
【０２０１】
一定の態様では、RSPO2結合作用物質が、抗体h130M23-H1L6の重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含む。一定の態様では、RSPO2結合作用物質が、抗体h130M23-H1L6の重鎖および軽鎖（リーダー配列ありまたはリーダー配列なし）を含む。一定の態様では、RSPO2結合作用物質が抗体h130M23-H1L6である。一定の態様では、RSPO2結合作用物質が、抗体h130M23-H1L6の重鎖可変領域および／または軽鎖可変領域を、抗体のキメラ形態で含む。いくつかの態様では、抗RSPO2抗体がh130M23-H1L6である。
【０２０２】
一定の態様では、RSPO2結合作用物質が、抗体h130M23-H1L2の重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含む。一定の態様では、RSPO2結合作用物質が、抗体h130M23-H1L2の重鎖および軽鎖（リーダー配列ありまたはリーダー配列なし）を含む。一定の態様では、RSPO2結合作用物質が抗体h130M23-H1L2である。一定の態様では、RSPO2結合作用物質が、抗体h130M23-H1L2の重鎖可変領域および／または軽鎖可変領域を、抗体のキメラ形態で含む。いくつかの態様では、抗RSPO2抗体がh130M23-H1L2である。
【０２０３】
本明細書に記載する方法の一定の態様では、RSPO2結合作用物質が、抗体130M23の重鎖CDRおよび／または軽鎖CDRを含む。130M23抗体を産生するハイブリドーマ細胞株は、2011年8月10日にブタペスト条約の条件下で10801 University Boulevard, Manassas, VA, USAのATCCに寄託され、ATCC寄託指定番号PTA-12021が割り当てられた。
【０２０４】
一定の態様では、RSPO2結合作用物質が、抗体h130M23-H1L6を含むか、それから本質的になるか、またはそれからなる。一定の態様では、RSPO2結合作用物質が、抗体130M23のバリアントを含むか、それから本質的になるか、またはそれからなる。一定の態様では、RSPO2結合作用物質が、抗体h130M23-H1L6のバリアントを含むか、それから本質的になるか、またはそれからなる。
【０２０５】
一定の態様では、RSPO2結合作用物質が、抗体h130M23-H1L2を含むか、それから本質的になるか、またはそれからなる。一定の態様では、RSPO2結合作用物質が、抗体130M23のバリアントを含むか、それから本質的になるか、またはそれからなる。一定の態様では、RSPO2結合作用物質が、抗体h130M23-H1L2のバリアントを含むか、それから本質的になるか、またはそれからなる。
【０２０６】
本明細書に記載する方法の一定の態様では、RSPO結合作用物質が、ヒトRSPO3に特異的に結合するRSPO3結合作用物質（例えば、抗体）であり、該RSPO3結合作用物質（例えば、抗体）は、抗体131R010のCDRのうちの1つ、2つ、3つ、4つ、5つ、および／または6つを含む（本明細書における表1を参照されたい）。
【０２０７】
一定の態様では、RSPO結合作用物質が、ヒトRSPO3に特異的に結合するRSPO3結合作用物質（例えば、抗体）であり、該RSPO3結合作用物質は、DYSIH（SEQ ID NO:29）を含む重鎖CDR1、
2018502833.tif 000044
を含む重鎖CDR2、および
2018502833.tif 000045
を含む重鎖CDR3を含む。いくつかの態様では、RSPO3結合作用物質が、さらに、
2018502833.tif 000046
を含む軽鎖CDR1、
2018502833.tif 000047
を含む軽鎖CDR2、および
2018502833.tif 000048
を含む軽鎖CDR3を含む。いくつかの態様では、RSPO3結合作用物質が、
2018502833.tif 000049
を含む軽鎖CDR1、
2018502833.tif 000050
を含む軽鎖CDR2、および
2018502833.tif 000051
を含む軽鎖CDR3を含む。一定の態様では、RSPO3結合作用物質が、（a）DYSIH（SEQ ID NO:29）を含む重鎖CDR1、
2018502833.tif 000052
を含む重鎖CDR2、およびTYFANNFD（SEQ ID NO:31）を含む重鎖CDR3；ならびに（b）
2018502833.tif 000053
を含む軽鎖CDR1、AASNLES（SEQ ID NO:34）を含む軽鎖CDR2、およびQQSNEDPLT（SEQ ID NO:36）を含む軽鎖CDR3を含む。一定の態様では、RSPO3結合作用物質が、（a）DYSIH（SEQ ID NO:29）を含む重鎖CDR1、
2018502833.tif 000054
を含む重鎖CDR2、および
2018502833.tif 000055
を含む重鎖CDR3；ならびに（b）
2018502833.tif 000056
を含む軽鎖CDR1、AASNLES（SEQ ID NO:34）を含む軽鎖CDR2、およびQQSNEDPLT（SEQ ID NO:36）を含む軽鎖CDR3を含む。
【０２０８】
一定の態様では、RSPO結合作用物質が、ヒトRSPO3に特異的に結合するRSPO3結合作用物質（例えば、抗体または二重特異性抗体）であり、該RSPO3結合作用物質は、（a）DYSIH（SEQ ID NO:29）を含む重鎖CDR1、または1、2、3、もしくは4個のアミノ酸置換を含むそのバリアント；（b）
2018502833.tif 000057
を含む重鎖CDR2、または1、2、3、もしくは4個のアミノ酸置換を含むそのバリアント；（c）
2018502833.tif 000058
を含む重鎖CDR3、または1、2、3、もしくは4個のアミノ酸置換を含むそのバリアント；（d）
2018502833.tif 000059
を含む軽鎖CDR1、または1、2、3、もしくは4個のアミノ酸置換を含むそのバリアント；（e）
2018502833.tif 000060
を含む軽鎖CDR2、または1、2、3、もしくは4個のアミノ酸置換を含むそのバリアント；および（f）
2018502833.tif 000061
を含む軽鎖CDR3、または1、2、3、もしくは4個のアミノ酸置換を含むそのバリアントを含む。一定の態様では、アミノ酸置換が保存的置換である。いくつかの態様では、置換が、生殖細胞系ヒト化プロセスの一部として行われる。
【０２０９】
一定の態様では、RSPO結合作用物質が、RSPO3に特異的に結合するRSPO3結合作用物質（例えば、抗体）であり、該RSPO3結合作用物質は、SEQ ID NO:38に対して少なくとも約80％の配列同一性を有する重鎖可変領域、および／またはSEQ ID NO:39に対して少なくとも80％の配列同一性を有する軽鎖可変領域を含む。一定の態様では、RSPO3結合作用物質が、SEQ ID NO:38に対して少なくとも約85％、少なくとも約90％、少なくとも約95％、少なくとも約97％、または少なくとも約99％の配列同一性を有する重鎖可変領域を含む。一定の態様では、RSPO3結合作用物質が、SEQ ID NO:39に対して少なくとも約85％、少なくとも約90％、少なくとも約95％、少なくとも約97％、または少なくとも約99％の配列同一性を有する軽鎖可変領域を含む。一定の態様では、RSPO3結合作用物質が、SEQ ID NO:38に対して少なくとも約95％の配列同一性を有する重鎖可変領域、および／またはSEQ ID NO:39に対して少なくとも約95％の配列同一性を有する軽鎖可変領域を含む。一定の態様では、RSPO3結合作用物質が、SEQ ID NO:38を含む重鎖可変領域、および／またはSEQ ID NO:39を含む軽鎖可変領域を含む。一定の態様では、RSPO3結合作用物質が、SEQ ID NO:38を含む重鎖可変領域、およびSEQ ID NO:39を含む軽鎖可変領域を含む。一定の態様では、RSPO3結合作用物質が、SEQ ID NO:38からなる重鎖可変領域、およびSEQ ID NO:39からなる軽鎖可変領域を含む。
【０２１０】
一定の態様では、RSPO結合作用物質が、RSPO3に特異的に結合するRSPO3結合作用物質（例えば、抗体）であり、該RSPO3結合作用物質は、（a）SEQ ID NO:40もしくはSEQ ID NO:41に対して少なくとも90％の配列同一性を有する重鎖；および／または（b）SEQ ID NO:42もしくはSEQ ID NO:43に対して少なくとも90％の配列同一性を有する軽鎖を含む。いくつかの態様では、RSPO3結合作用物質が、（a）SEQ ID NO:40もしくはSEQ ID NO:41に対して少なくとも95％の配列同一性を有する重鎖；および／または（b）SEQ ID NO:42もしくはSEQ ID NO:43に対して少なくとも95％の配列同一性を有する軽鎖を含む。いくつかの態様では、RSPO3結合作用物質が、SEQ ID NO:41を含む重鎖、および／またはSEQ ID NO:43を含む軽鎖を含む。いくつかの態様では、RSPO3結合作用物質が、SEQ ID NO:41を含む重鎖、およびSEQ ID NO:43を含む軽鎖を含む。
【０２１１】
一定の態様では、RSPO3結合作用物質が、抗体131R010の重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含む。一定の態様では、RSPO3結合作用物質が、抗体131R010の重鎖および軽鎖（リーダー配列ありまたはリーダー配列なし）を含む。一定の態様では、RSPO3結合作用物質が抗体131R010である。一定の態様では、RSPO3結合作用物質が、抗体131R010の重鎖可変領域および／または軽鎖可変領域を、抗体のキメラ形態で含む。一定の態様では、RSPO3結合作用物質が、抗体131R010 の重鎖CDRおよび／または軽鎖CDRを含む。いくつかの態様では、抗RSPO3抗体が131R010である。
【０２１２】
抗体131R010の重鎖および軽鎖をコードするプラスミドは、2013年6月18日にブタペスト条約の条件下で10801 University Boulevard, Manassas, VA, USAのAmerican Type Culture Collection（ATCC）に寄託され、ATCC寄託指定番号PTA-120420およびPTA-120421が割り当てられた。いくつかの態様では、RSPO3結合作用物質が、ATCCに寄託されてPTA-120420と指定されたプラスミドによってコードされる重鎖可変領域を含む。いくつかの態様では、RSPO3結合作用物質が、ATCCに寄託されてPTA-120421と指定されたプラスミドによってコードされる軽鎖可変領域を含む。いくつかの態様では、RSPO3結合作用物質が、ATCCに寄託されてPTA-120420と指定されたプラスミドによってコードされる重鎖可変領域、およびATCCに寄託されてPTA-120421と指定されたプラスミドによってコードされる軽鎖可変領域を含む。いくつかの態様では、RSPO3結合作用物質が、ATCCに寄託されてPTA-120420と指定されたプラスミドによってコードされる重鎖を含む。いくつかの態様では、RSPO3結合作用物質が、ATCCに寄託されてPTA-120421と指定されたプラスミドによってコードされる軽鎖を含む。いくつかの態様では、RSPO3結合作用物質が、ATCCに寄託されてPTA-120420と指定されたプラスミドによってコードされる重鎖、およびATCCに寄託されてPTA-120421と指定されたプラスミドによってコードされる軽鎖を含む。
【０２１３】
一定の態様では、RSPO3結合作用物質が、抗体131R010を含むか、それから本質的になるか、またはそれからなる。一定の態様では、RSPO3結合作用物質が、抗体131R010のバリアントを含むか、それから本質的になるか、またはそれからなる。
【０２１４】
少なくとも1種のヒトRSPOタンパク質に特異的に結合する抗体を含むが、それらに限定されるわけではないポリペプチドを含む方法を、本明細書に記載する。いくつかの態様では、ポリペプチドがヒトRSPO1に結合する。いくつかの態様では、ポリペプチドがヒトRSPO2に結合する。いくつかの態様では、ポリペプチドがヒトRSPO3に結合する。
【０２１５】
一定の態様では、ポリペプチドが、抗体89M5のCDRのうちの1つ、2つ、3つ、4つ、5つ、および／または6つを含む（本明細書における表1を参照されたい）。一定の態様では、ポリペプチドが、抗体130M23のCDRのうちの1つ、2つ、3つ、4つ、5つ、および／または6つを含む（本明細書における表1を参照されたい）。一定の態様では、ポリペプチドが、抗体131R010のCDRのうちの1つ、2つ、3つ、4つ、5つ、および／または6つを含む（本明細書における表1を参照されたい）。いくつかの態様では、ポリペプチドが、CDRあたり4個まで（すなわち0、1、2、3、または4個）のアミノ酸置換を有するCDRを含む。一定の態様では、重鎖CDRが重鎖可変領域内に含有される。一定の態様では、軽鎖CDRが軽鎖可変領域内に含有される。
【０２１６】
いくつかの態様では、RSPO結合作用物質が、ヒトRSPO1に特異的に結合するポリペプチドであり、該ポリペプチドは、SEQ ID NO:11および／またはSEQ ID NO:12に対して少なくとも約80％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの態様では、ポリペプチドが、SEQ ID NO:13に対して少なくとも約80％の配列同一性を有するアミノ酸配列、および／またはSEQ ID NO:15に対して少なくとも約80％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの態様では、ポリペプチドが、SEQ ID NO:14に対して少なくとも約80％の配列同一性を有するアミノ酸配列、および／またはSEQ ID NO:16に対して少なくとも約80％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。一定の態様では、ポリペプチドが、SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:12、SEQ ID NO:13、SEQ ID NO:14、SEQ ID NO:15、またはSEQ ID NO:16に対して少なくとも約85％、少なくとも約90％、少なくとも約95％、少なくとも約97％、または少なくとも約99％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。一定の態様では、ポリペプチドが、SEQ ID NO:11に対して少なくとも約95％の配列同一性を有するアミノ酸配列、および／またはSEQ ID NO:12に対して少なくとも約95％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。一定の態様では、ポリペプチドが、SEQ ID NO:13に対して少なくとも約95％の配列同一性を有するアミノ酸配列、および／またはSEQ ID NO:15に対して少なくとも約95％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。一定の態様では、ポリペプチドが、SEQ ID NO:14に対して少なくとも約95％の配列同一性を有するアミノ酸配列、および／またはSEQ ID NO:16に対して少なくとも約95％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。一定の態様では、ポリペプチドが、SEQ ID NO:11のアミノ酸配列、および／またはSEQ ID NO:12のアミノ酸配列を含む。一定の態様では、ポリペプチドが、SEQ ID NO:13のアミノ酸配列、および／またはSEQ ID NO:15のアミノ酸配列を含む。一定の態様では、ポリペプチドが、SEQ ID NO:14のアミノ酸配列、および／またはSEQ ID NO:16のアミノ酸配列を含む。
【０２１７】
いくつかの態様では、RSPO結合作用物質が、ヒトRSPO1に特異的に結合するポリペプチドであり、該ポリペプチドは、SEQ ID NO:44および／またはSEQ ID NO:45に対して少なくとも約80％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの態様では、ポリペプチドが、SEQ ID NO:46に対して少なくとも約80％の配列同一性を有するアミノ酸配列、および／またはSEQ ID NO:48に対して少なくとも約80％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの態様では、ポリペプチドが、SEQ ID NO:47に対して少なくとも約80％の配列同一性を有するアミノ酸配列、および／またはSEQ ID NO:49に対して少なくとも約80％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。一定の態様では、ポリペプチドが、SEQ ID NO:44、SEQ ID NO:45、SEQ ID NO:46、SEQ ID NO:47、SEQ ID NO:48、またはSEQ ID NO:49に対して少なくとも約85％、少なくとも約90％、少なくとも約95％、少なくとも約97％、または少なくとも約99％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。一定の態様では、ポリペプチドが、SEQ ID NO:44に対して少なくとも約95％の配列同一性を有するアミノ酸配列、および／またはSEQ ID NO:45に対して少なくとも約95％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。一定の態様では、ポリペプチドが、SEQ ID NO:46に対して少なくとも約95％の配列同一性を有するアミノ酸配列、および／またはSEQ ID NO:48に対して少なくとも約95％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。一定の態様では、ポリペプチドが、SEQ ID NO:47に対して少なくとも約95％の配列同一性を有するアミノ酸配列、および／またはSEQ ID NO:49に対して少なくとも約95％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。一定の態様では、ポリペプチドが、SEQ ID NO:44のアミノ酸配列、および／またはSEQ ID NO:45のアミノ酸配列を含む。一定の態様では、ポリペプチドが、SEQ ID NO:46のアミノ酸配列、および／またはSEQ ID NO:48のアミノ酸配列を含む。一定の態様では、ポリペプチドが、SEQ ID NO:47のアミノ酸配列、および／またはSEQ ID NO:49のアミノ酸配列を含む。
【０２１８】
いくつかの態様では、RSPO結合作用物質が、ヒトRSPO2に特異的に結合するポリペプチドであり、該ポリペプチドは、SEQ ID NO:23および／またはSEQ ID NO:24に対して少なくとも約80％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの態様では、RSPO結合作用物質が、ヒトRSPO2に特異的に結合するポリペプチドであり、該ポリペプチドは、SEQ ID NO:23および／またはSEQ ID NO:50に対して少なくとも約80％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの態様では、ポリペプチドが、SEQ ID NO:25に対して少なくとも約80％の配列同一性を有するアミノ酸配列、および／またはSEQ ID NO:27もしくはSEQ ID NO:51に対して少なくとも約80％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの態様では、ポリペプチドが、SEQ ID NO:26に対して少なくとも約80％の配列同一性を有するアミノ酸配列、および／またはSEQ ID NO:28もしくはSEQ ID NO:52に対して少なくとも約80％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。一定の態様では、ポリペプチドが、SEQ ID NO:23、SEQ ID NO:24、SEQ ID NO:25、SEQ ID NO:26、SEQ ID NO:27、SEQ ID NO:28、SEQ ID NO:50、SEQ ID NO:51、またはSEQ ID NO:52に対して少なくとも約85％、少なくとも約90％、少なくとも約95％、少なくとも約97％、または少なくとも約99％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。一定の態様では、ポリペプチドが、SEQ ID NO:23に対して少なくとも約95％の配列同一性を有するアミノ酸配列、および／またはSEQ ID NO:24もしくはSEQ ID NO:50に対して少なくとも約95％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。一定の態様では、ポリペプチドが、SEQ ID NO:25に対して少なくとも約95％の配列同一性を有するアミノ酸配列、および／またはSEQ ID NO:27もしくはSEQ ID NO:51に対して少なくとも約95％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。一定の態様では、ポリペプチドが、SEQ ID NO:26に対して少なくとも約95％の配列同一性を有するアミノ酸配列、および／またはSEQ ID NO:28もしくはSEQ ID NO:52に対して少なくとも約95％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。一定の態様では、ポリペプチドが、SEQ ID NO:23のアミノ酸配列、および／またはSEQ ID NO:24のアミノ酸配列を含む。一定の態様では、ポリペプチドが、SEQ ID NO:23のアミノ酸配列、および／またはSEQ ID NO:50のアミノ酸配列を含む。一定の態様では、ポリペプチドが、SEQ ID NO:25のアミノ酸配列、および／またはSEQ ID NO:27のアミノ酸配列を含む。一定の態様では、ポリペプチドが、SEQ ID NO:25のアミノ酸配列、および／またはSEQ ID NO:51のアミノ酸配列を含む。一定の態様では、ポリペプチドが、SEQ ID NO:26のアミノ酸配列、および／またはSEQ ID NO:28のアミノ酸配列を含む。一定の態様では、ポリペプチドが、SEQ ID NO:26のアミノ酸配列、および／またはSEQ ID NO:52のアミノ酸配列を含む。
【０２１９】
いくつかの態様では、RSPO結合作用物質が、ヒトRSPO3に特異的に結合するポリペプチドであり、該ポリペプチドは、SEQ ID NO:38および／またはSEQ ID NO:39に対して少なくとも約80％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの態様では、ポリペプチドが、SEQ ID NO:40に対して少なくとも約80％の配列同一性を有するアミノ酸配列、および／またはSEQ ID NO:42に対して少なくとも約80％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの態様では、ポリペプチドが、SEQ ID NO:41に対して少なくとも約80％の配列同一性を有するアミノ酸配列、および／またはSEQ ID NO:43に対して少なくとも約80％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。一定の態様では、ポリペプチドが、SEQ ID NO:38、SEQ ID NO:39、SEQ ID NO:40、SEQ ID NO: 41、SEQ ID NO:42、またはSEQ ID NO:43に対して少なくとも約85％、少なくとも約90％、少なくとも約95％、少なくとも約97％、または少なくとも約99％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。一定の態様では、ポリペプチドが、SEQ ID NO:38に対して少なくとも約95％の配列同一性を有するアミノ酸配列、および／またはSEQ ID NO:39に対して少なくとも約95％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。一定の態様では、ポリペプチドが、SEQ ID NO:40に対して少なくとも約95％の配列同一性を有するアミノ酸配列、および／またはSEQ ID NO:42に対して少なくとも約95％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。一定の態様では、ポリペプチドが、SEQ ID NO: 41に対して少なくとも約95％の配列同一性を有するアミノ酸配列、および／またはSEQ ID NO:43に対して少なくとも約95％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。一定の態様では、ポリペプチドが、SEQ ID NO:38のアミノ酸配列、および／またはSEQ ID NO:39のアミノ酸配列を含む。一定の態様では、ポリペプチドが、SEQ ID NO:40のアミノ酸配列、および／またはSEQ ID NO:42のアミノ酸配列を含む。一定の態様では、ポリペプチドが、SEQ ID NO: 41のアミノ酸配列、および／またはSEQ ID NO:43のアミノ酸配列を含む。
【０２２０】
一定の態様では、RSPO結合作用物質が、RSPO1への特異的結合について、抗体89M5のCDRを含む抗体と競合するRSPO1結合作用物質（例えば、抗体）である。一定の態様では、RSPO結合作用物質が、RSPO2への特異的結合について、抗体130M23のCDRを含む抗体と競合するRSPO2結合作用物質（例えば、抗体）である。一定の態様では、RSPO結合作用物質が、RSPO3への特異的結合について、抗体131R010のCDRを含む抗体と競合するRSPO3結合作用物質（例えば、抗体）である。
【０２２１】
一定の態様では、RSPO結合作用物質が、RSPO1上の、抗体89M5のCDRを含む抗体と同じエピトープ、または本質的に同じエピトープに結合するRSPO1結合作用物質（例えば、抗体）である。一定の態様では、RSPO結合作用物質が、RSPO2上の、抗体130M23のCDRを含む抗体と同じエピトープ、または本質的に同じエピトープに結合するRSPO2結合作用物質（例えば、抗体）である。一定の態様では、RSPO結合作用物質が、RSPO3上の、抗体131R010のCDRを含む抗体と同じエピトープ、または本質的に同じエピトープに結合するRSPO3結合作用物質（例えば、抗体）である。
【０２２２】
一定の態様では、RSPO結合作用物質が、抗体89M5のCDRを含む抗体が結合するRSPO1上のエピトープとオーバーラップする、RSPO1上のエピトープに結合するRSPO1結合作用物質（例えば、抗体）である。一定の態様では、RSPO結合作用物質が、抗体130M23のCDRを含む抗体が結合するRSPO2上のエピトープとオーバーラップする、RSPO2上のエピトープに結合するRSPO2結合作用物質（例えば、抗体）である。一定の態様では、RSPO結合作用物質が、抗体131R010のCDRを含む抗体が結合するRSPO3上のエピトープとオーバーラップする、RSPO3上のエピトープに結合するRSPO3結合作用物質（例えば、抗体）である。
【０２２３】
一定の態様では、RSPO結合作用物質が、これにより各々がすべての目的でその全体が参照により本明細書に組み入れられる、米国特許出願公開第20150147333号において開示されるRSPO3結合作用物質（例えば、抗体）である。一定の態様では、RSPO結合作用物質が、米国特許出願公開第20150147333号において開示される抗RSPO3抗体4H1、4D4、5C2、5D6、5E11、6E9、21C2、または26E11である。一定の態様では、RSPO結合作用物質が、抗RSPO3抗体4H1、4D4、5C2、5D6、5E11、6E9、21C2、または26E11の6つのCDRを含む抗RSPO3抗体である。一定の態様では、RSPO結合作用物質が、抗RSPO3抗体4H1、4D4、5C2、5D6、5E11、6E9、21C2、または26E11のVH領域および／またはVL領域を含む抗RSPO3抗体である。一定の態様では、RSPO結合作用物質が、RSPO3上の、抗RSPO3抗体4H1、4D4、5C2、5D6、5E11、6E9、21C2、または26E11と同じエピトープ、または本質的に同じエピトープに結合するRSPO3結合作用物質（例えば、抗体）である。
【０２２４】
一定の態様では、RSPO結合作用物質が、これによりすべての目的でその全体が参照により本明細書に組み入れられる、米国特許出願公開第20150147333号において開示されるRSPO2結合作用物質（例えば、抗体）である。一定の態様では、RSPO結合作用物質が、米国特許出願公開第20150147333号において開示される抗RSPO2抗体1A1、11F11、26E11、36D2、または49G5である。一定の態様では、RSPO結合作用物質が、抗RSPO2抗体1A1、11F11、26E11、36D2、または49G5の6つのCDRを含む抗RSPO2抗体である。一定の態様では、RSPO結合作用物質が、抗RSPO2抗体1A1、11F11、26E11、36D2、または49G5のVH領域および／またはVL領域を含む抗RSPO2抗体である。一定の態様では、RSPO結合作用物質が、RSPO2上の、抗RSPO2抗体1A1、11F11、26E11、36D2、または49G5と同じエピトープ、または本質的に同じエピトープに結合するRSPO2結合作用物質（例えば、抗体）である。
【０２２５】
本明細書に記載する方法の一定の態様では、RSPO結合作用物質（例えば、抗体）が、少なくとも1種のヒトRSPOタンパク質に結合し、RSPO活性を調整する。いくつかの態様では、RSPO結合作用物質が、RSPOアンタゴニストであり、RSPO活性を減少させる。いくつかの態様では、RSPO結合作用物質が、RSPOアンタゴニストであり、β-カテニン活性を減少させる。
【０２２６】
一定の態様では、RSPO1結合作用物質（例えば、抗体）が、ヒトRSPO1に結合し、RSPO1活性を調整する。いくつかの態様では、RSPO1結合作用物質が、RSPO1アンタゴニストであり、RSPO1活性を減少させる。いくつかの態様では、RSPO1結合作用物質が、RSPO1アンタゴニストであり、β-カテニン活性を減少させる。一定の態様では、RSPO2結合作用物質（例えば、抗体）が、ヒトRSPO2に結合し、RSPO2活性を調整する。いくつかの態様では、RSPO2結合作用物質が、RSPO2アンタゴニストであり、RSPO2活性を減少させる。いくつかの態様では、RSPO2結合作用物質が、RSPO2アンタゴニストであり、β-カテニン活性を減少させる。一定の態様では、RSPO3結合作用物質（例えば、抗体）が、ヒトRSPO3に結合し、RSPO3活性を調整する。いくつかの態様では、RSPO3結合作用物質が、RSPO3アンタゴニストであり、RSPO3活性を減少させる。いくつかの態様では、RSPO3結合作用物質が、RSPO3アンタゴニストであり、β-カテニン活性を減少させる。
【０２２７】
一定の態様では、RSPO結合作用物質（例えば、抗体）が、少なくとも1種のヒトRSPOタンパク質のアンタゴニストである。いくつかの態様では、RSPO結合作用物質が、少なくとも1種のRSPOのアンタゴニストであり、RSPO活性を阻害する。一定の態様では、RSPO結合作用物質が、RSPO活性を、少なくとも約10％、少なくとも約20％、少なくとも約30％、少なくとも約50％、少なくとも約75％、少なくとも約90％、または約100％阻害する。いくつかの態様では、RSPO結合作用物質が、1、2、3、または4種のRSPOタンパク質の活性を阻害する。いくつかの態様では、RSPO結合作用物質が、ヒトRSPO1、RSPO2、RSPO3、および／またはRSPO4の活性を阻害する。
【０２２８】
一定の態様では、RSPO結合作用物質（例えば、抗体）が、少なくとも1種のヒトRSPOタンパク質のアンタゴニストである。一定の態様では、RSPO結合作用物質が、RSPOシグナル伝達を、少なくとも約10％、少なくとも約20％、少なくとも約30％、少なくとも約50％、少なくとも約75％、少なくとも約90％、または約100％阻害する。いくつかの態様では、RSPO結合作用物質が、1、2、3、または4種のRSPOタンパク質によるシグナル伝達を阻害する。いくつかの態様では、RSPO結合作用物質が、ヒトRSPO1、RSPO2、RSPO3、および／またはRSPO4のシグナル伝達を阻害する。
【０２２９】
一定の態様では、RSPO結合作用物質（例えば、抗体）が、β-カテニンシグナル伝達のアンタゴニストである。一定の態様では、RSPO結合作用物質が、β-カテニンシグナル伝達を、少なくとも約10％、少なくとも約20％、少なくとも約30％、少なくとも約50％、少なくとも約75％、少なくとも約90％、または約100％阻害する。
【０２３０】
一定の態様では、RSPO結合作用物質（例えば、抗体）が、少なくとも1種のRSPOタンパク質の受容体への結合を阻害する。一定の態様では、RSPO結合作用物質が、ヒトRSPOタンパク質のその受容体の1種または複数種への結合を阻害する。いくつかの態様では、RSPO結合作用物質が、RSPOタンパク質の少なくとも1種のLGRタンパク質への結合を阻害する。いくつかの態様では、RSPO結合作用物質が、RSPOタンパク質のLGR4（SEQ ID NO:53）、LGR5（SEQ ID NO:54）、および／またはLGR6（SEQ ID NO:55）への結合を阻害する。一定の態様では、RSPO結合作用物質の少なくとも1種のLGRタンパク質への結合の阻害が、少なくとも約10％、少なくとも約25％、少なくとも約50％、少なくとも約75％、少なくとも約90％、または少なくとも約95％である。一定の態様では、少なくとも1種のRSPOの少なくとも1種のLGRタンパク質への結合を阻害するRSPO結合作用物質が、さらに、β-カテニンシグナル伝達を阻害する。
【０２３１】
一定の態様では、RSPO結合作用物質（例えば、抗体）が、少なくとも1種のRSPOの受容体への結合を遮断する。一定の態様では、RSPO結合作用物質が、ヒトRSPOタンパク質のその受容体の1種または複数種への結合を遮断する。いくつかの態様では、RSPO結合作用物質が、RSPOの少なくとも1種のLGRタンパク質への結合を遮断する。いくつかの態様では、RSPO結合作用物質が、少なくとも1種のRSPOタンパク質のLGR4（SEQ ID NO:53）、LGR5（SEQ ID NO:54）、および／またはLGR6（SEQ ID NO:55）への結合を遮断する。一定の態様では、RSPO結合作用物質の少なくとも1種のLGRタンパク質への結合の遮断が、少なくとも約10％、少なくとも約25％、少なくとも約50％、少なくとも約75％、少なくとも約90％、または少なくとも約95％である。一定の態様では、少なくとも1種のRSPOタンパク質の少なくとも1種のLGRタンパク質への結合を遮断するRSPO結合作用物質が、さらに、β-カテニンシグナル伝達を阻害する。
【０２３２】
一定の態様では、RSPO結合作用物質（例えば、抗体）が、β-カテニンシグナル伝達を阻害する。β-カテニンシグナル伝達を阻害するRSPO結合作用物質は、一定の態様では、β-カテニンシグナル伝達経路における1種または複数種の受容体によるシグナル伝達を阻害できるが、必ずしもすべての受容体によるシグナル伝達を阻害できるわけではないことが理解される。一定の代替態様では、すべてのヒト受容体によるβ-カテニンシグナル伝達を阻害することができる。一定の態様では、LGR4（SEQ ID NO:53）、LGR5（SEQ ID NO:54）、および／またはLGR6（SEQ ID NO:55）からなる群より選択される1種または複数種の受容体によるβ-カテニンシグナル伝達が阻害される。一定の態様では、RSPO結合作用物質によるβ-カテニンシグナル伝達の阻害が、少なくとも約10％、少なくとも約25％、少なくとも約50％、少なくとも約75％、少なくとも約90％、または少なくとも約95％の、β-カテニンシグナル伝達のレベルの低減である。
【０２３３】
一定の態様では、RSPO結合作用物質（例えば、抗体）が、β-カテニンの活性化を阻害する。β-カテニンの活性化を阻害するRSPO結合作用物質は、一定の態様では、1種または複数種の受容体によるβ-カテニンの活性化を阻害できるが、必ずしもすべての受容体によるβ-カテニンの活性化を阻害できるわけではないことが理解される。一定の代替態様では、すべてのヒト受容体によるβ-カテニンの活性化を阻害することができる。一定の態様では、LGR4（SEQ ID NO:53）、LGR5（SEQ ID NO:54）、およびLGR6（SEQ ID NO:55）からなる群より選択される1種または複数種の受容体によるβ-カテニンの活性化が阻害される。一定の態様では、RSPO結合作用物質によるβ-カテニンの活性化の阻害が、少なくとも約10％、少なくとも約25％、少なくとも約50％、少なくとも約75％、少なくとも約90％、または少なくとも約95％の、β-カテニンの活性化のレベルの低減である。
【０２３４】
一定の態様では、RSPO-LGR経路インヒビターが、1種または複数種のヒトLGRタンパク質に結合する作用物質である。これらの作用物質を、本明細書において「LGR結合作用物質」と呼ぶ。LGR結合作用物質の非限定的な例は、米国特許第8158758号、第8158757号、第8802097号、および米国特許出願公開第2012/0135422号、第2013/0209473号、第2014/0044713号に見いだすことができ、これらの各々はこれにより、すべての目的でその全体が参照により本明細書に組み入れられる。
【０２３５】
いくつかの態様では、LGR結合作用物質が、少なくとも1種のヒトLGRタンパク質に結合する。代替態様では、LGR結合作用物質が、2種以上のヒトLGRタンパク質に結合する。いくつかの態様では、LGR結合作用物質が抗体である。いくつかの態様では、LGR結合作用物質が、少なくとも1種のRSPOタンパク質（例えば、RSPO1、RSPO2、RSPO3、および／またはRSPO4）の少なくとも1種のLGRタンパク質（例えば、LGR4、LGR5、および／またはLGR6）への結合を（部分的にまたは全面的に）阻害する。一定の態様では、LGR結合作用物質が、LGR5シグナル伝達などのRSPO活性化LGRシグナル伝達を阻害する。一定の態様では、LGR結合作用物質が、β-カテニンシグナル伝達を阻害する。
【０２３６】
一定の態様では、LGR結合作用物質が、抗体、例えば、少なくとも1種のLGRタンパク質に結合する抗体である。したがって、LGR結合作用物質は、LGR5に特異的に結合する抗体であることができる。一定の代替態様では、LGR結合作用物質が、LGR4またはLGR6に特異的に結合する抗体である。
【０２３７】
一定の態様では、LGR結合作用物質が、少なくとも1種のヒトLGRタンパク質に特異的に結合する抗体である。一定の態様では、抗体が、LGR4、LGR5、およびLGR6からなる群より選択される少なくとも1種のヒトLGRタンパク質に特異的に結合する。一定の態様では、抗体がLGR5に特異的に結合する。一定の態様では、抗体が、LGR4、LGR5、およびLGR6からなる群より選択される2種以上のヒトLGRタンパク質に特異的に結合する。一定の態様では、少なくとも1種のヒトLGRタンパク質に特異的に結合する抗体がまた、少なくとも1種のRSPOタンパク質（例えば、RSPO1、RSPO2、RSPO3、および／またはRSPO4）の少なくとも1種のヒトLGRタンパク質（例えば、LGR5）への結合を阻害する。一定の態様では、少なくとも1種のヒトLGRタンパク質に特異的に結合する抗体が、LGRシグナル伝達のRSPO活性化を阻害する能力、および／またはβ-カテニンシグナル伝達を阻害する能力を特徴とする。一定の態様では、少なくとも1種のヒトLGRタンパク質に特異的に結合する抗体が、固形腫瘍の成長などの腫瘍成長を阻害する能力を特徴とする。一定の態様では、少なくとも1種のヒトLGRタンパク質に特異的に結合する抗体が、固形腫瘍幹細胞を含む固形腫瘍の成長などの腫瘍成長を阻害する能力を特徴とする。例えば、いくつかの態様では、少なくとも1種のヒトLGRタンパク質に特異的に結合する抗体が、LGRへのRSPO結合を分断または阻害し、腫瘍成長を阻害する。一定の代替態様では、少なくとも1種のLGRタンパク質に特異的に結合する抗体がまた、LGRシグナル伝達のRSPO活性化を分断し、腫瘍成長を阻害する。一定の代替態様では、少なくとも1種のLGRタンパク質に特異的に結合する抗体がまた、LGRシグナル伝達および／またはβ-カテニンシグナル伝達のRSPO活性化を阻害し、腫瘍成長を阻害する。
【０２３８】
一定の態様では、RSPOタンパク質のLGRタンパク質への結合を阻害するLGR結合作用物質が、インビトロまたはインビボのアッセイにおけるRSPOタンパク質のLGRタンパク質への結合の少なくとも約25％、少なくとも約50％、少なくとも約60％、少なくとも約70％、少なくとも約80％、または少なくとも約90％を阻害する。
【０２３９】
同様に、一定の態様では、（a）LGRシグナル伝達のRSPO活性化および／または（b）β-カテニンシグナル伝達を阻害するLGR結合作用物質が、インビトロまたはインビボのアッセイにおけるシグナル伝達の少なくとも約25％、少なくとも約50％、少なくとも約60％、少なくとも約70％、少なくとも約80％、または少なくとも約90％を阻害する。
【０２４０】
一定の態様では、LGR結合作用物質が、ヒトLGRタンパク質の細胞外ドメインに特異的に結合し、固形腫瘍の成長を阻害する単離された抗体である。一定の態様では、LGR結合作用物質が、ヒトLGRタンパク質の細胞外ドメインに特異的に結合し、固形腫瘍幹細胞を含む固形腫瘍の成長を阻害する単離された抗体である。一定の態様では、細胞外ドメインが、ヒトLGR5のアミノ酸22〜564（SEQ ID NO:56）を含む。一定の態様では、抗体がモノクローナル抗体である。一定の態様では、抗体がヒト化抗体またはヒト抗体である。
【０２４１】
一定の態様では、LGR結合作用物質が、ヒトLGRタンパク質の細胞外ドメインに特異的に結合し、LGRシグナル伝達のRSPO活性化を分断する単離された抗体である。一定の態様では、細胞外ドメインが、ヒトLGR5のアミノ酸22〜564（SEQ ID NO:56）を含む。一定の態様では、抗体がモノクローナル抗体である。一定の態様では、抗体がヒト化抗体またはヒト抗体である。
【０２４２】
一定の態様では、LGR結合作用物質がモノクローナル抗LGR5抗体88M1である。88M1モノクローナル抗体は、ブタペスト条約にしたがって2008年7月2日に10801 University Blvd, Manassas, Virginia, 20110, USAのAmerican Type Culture collection（ATCC）に寄託された、ATCC寄託番号PTA-9342のハイブリドーマ細胞株により産生される。一定の態様では、LGR結合作用物質が、ヒトLGR5に特異的に結合し、（a）88M1の重鎖可変領域に対して少なくとも約95％の配列同一性（例えば、少なくとも約98％または約100％の配列同一性）を有する重鎖可変領域含む；（b）88M1の軽鎖可変領域に対して少なくとも約95％の配列同一性（例えば、少なくとも約98％または約100％の配列同一性）を有する軽鎖可変領域を含む；（c）88M1の重鎖CDRを含む；（d）88M1の軽鎖CDRを含む；（e）88M1が結合するエピトープに結合する；および／または（f）競合結合アッセイにおいて88M1と競合する抗体である。
【０２４３】
一定の態様では、RSPO結合作用物質またはLGR結合作用物質が抗体である。いくつかの態様では、抗体が組換え抗体である。いくつかの態様では、抗体がモノクローナル抗体である。いくつかの態様では、抗体がキメラ抗体である。いくつかの態様では、抗体がヒト化抗体である。いくつかの態様では、抗体がヒト抗体である。いくつかの態様では、抗体が、IgA、IgD、IgE、IgG、またはIgM抗体である。一定の態様では、抗体がIgG1抗体である。一定の態様では、抗体がIgG2抗体である。いくつかの態様では、抗体がIgG4抗体である。一定の態様では、抗体が、抗原結合部位を含む抗体フラグメントである。いくつかの態様では、抗体が、二重特異性抗体または多重特異性抗体である。いくつかの態様では、抗体が一価抗体である。いくつかの態様では、抗体が単一特異性抗体である。いくつかの態様では、抗体が二価抗体である。いくつかの態様では、抗体が細胞傷害性部分にコンジュゲートされている。いくつかの態様では、抗体が単離されている。いくつかの態様では、抗体が実質的に純粋である。
【０２４４】
RSPO結合作用物質およびLGR結合作用物質（例えば、抗体）は、当技術分野において公知である任意の方法により、特異的結合についてアッセイすることができる。使用することができるイムノアッセイには、Biacore解析、FACS解析、免疫蛍光、免疫細胞化学、ウェスタンブロット解析、ラジオイムノアッセイ、ELISA、「サンドイッチ」イムノアッセイ、免疫沈降アッセイ、沈降反応、ゲル拡散沈降素反応、免疫拡散アッセイ、凝集アッセイ、補体結合アッセイ、免疫放射線アッセイ、蛍光イムノアッセイ、およびプロテインAイムノアッセイなどの技法を用いる競合アッセイ系および非競合アッセイ系が含まれるが、それらに限定されるわけではない。そのようなアッセイは、当技術分野においてルーチンであり、周知である（例えば、Ausubel et al.編, 1994〜現在, Current Protocols in Molecular Biology, John Wiley & Sons, Inc., New York, NYを参照されたい）。
【０２４５】
例えば、ヒトRSPOタンパク質またはヒトLGRタンパク質に対する作用物質（例えば、RSPO結合作用物質またはLGR結合作用物質）の特異的結合は、ELISAを用いて決定することができる。ELISAアッセイは、抗原を調製する工程、96ウェルマイクロタイタープレートのウェルを抗原でコーティングする工程、ウェルに、酵素基質（例えば、セイヨウワサビペルオキシダーゼまたはアルカリホスファターゼ）などの検出可能な化合物にコンジュゲートされたRSPO結合作用物質またはLGR結合作用物質を添加する工程、ある期間にわたってインキュベートする工程、および抗原に結合した作用物質の存在を検出する工程を含む。いくつかの態様では、RSPO結合作用物質またはLGR結合作用物質が、検出可能な化合物にコンジュゲートされていないが、その代わりに、RSPO結合作用物質またはLGR結合作用物質を認識し（例えば、抗Fc抗体）、検出可能な化合物にコンジュゲートされた第2の抗体を、ウェルに添加する。いくつかの態様では、ウェルを抗原でコーティングする代わりに、RSPO結合作用物質またはLGR結合作用物質をウェルにコーティングすることができ、検出可能な化合物にコンジュゲートされた第2の抗体を、コーティングされたウェルへの抗原の添加後に、添加することができる。当業者は、検出されるシグナルを増大させるために変更することができるパラメータ、および当技術分野において公知であるELISAの他のバリエーションについて熟知しているであろう。
【０２４６】
別の例において、ヒトRSPOタンパク質またはヒトLGRタンパク質に対する作用物質（例えば、RSPO結合作用物質またはLGR結合作用物質）の特異的結合は、FACSを用いて決定することができる。FACSスクリーニングアッセイは、抗原（例えば、RSPOまたはLGR）を、任意で融合タンパク質（例えば、RSPO-CD4TMまたはLGR-CD4TM）として発現させるcDNAコンストラクトを生成させる工程、コンストラクトを細胞中にトランスフェクトする工程、抗原を細胞の表面上に発現させる工程、RSPO結合作用物質またはLGR結合作用物質をトランスフェクト細胞と混合する工程、およびある期間にわたってインキュベートする工程を含むことができる。RSPO結合作用物質またはLGR結合作用物質が結合した細胞は、検出可能な化合物にコンジュゲートされた二次抗体（例えば、PEコンジュゲート抗Fc抗体）およびフローサイトメーターを用いて同定することができる。当業者は、検出されるシグナルを最適化するために変更することができるパラメータ、およびスクリーニング（例えば、遮断抗体のスクリーニング）を強化することができるFACSの他のバリエーションについて熟知しているであろう。
【０２４７】
抗原に対する作用物質（例えば、RSPO結合作用物質またはLGR結合作用物質）の結合親和性および作用物質-抗原相互作用のオフ速度は、競合結合アッセイによって決定することができる。競合結合アッセイの1つの例は、標識抗原（例えば、3Hまたは125Iで標識された）またはそのフラグメントもしくはバリアントと関心対象の結合作用物質との、増加する量の非標識抗原の存在下でのインキュベーション、およびその後の、標識抗原に結合した作用物質の検出を含む、ラジオイムノアッセイである。抗原に対する作用物質の親和性および結合オフ速度は、データからスキャッチャードプロット解析によって決定することができる。いくつかの態様では、Biacore速度論解析が、抗原に結合する作用物質の結合オン速度および結合オフ速度を決定するために使用される。いくつかの態様では、Biacore速度論解析が、表面上に固定化された抗原を有するチップから、抗体の結合および解離を解析する工程を含む。いくつかの態様では、Biacore速度論解析が、表面上に固定化された結合作用物質を有するチップから、抗原の結合および解離を解析する工程を含む。
【０２４８】
RSPO結合作用物質またはLGR結合作用物質がβ-カテニンシグナル伝達を阻害するかどうかを判定するためのインビボおよびインビトロのアッセイは、当技術分野において公知である。例えば、ホタルルシフェラーゼレポーター遺伝子の上流に複数コピーのTCF結合ドメインを含有するTCF/Lucレポーターベクターを利用する細胞ベースのルシフェラーゼレポーターアッセイを、インビトロでβ-カテニンシグナル伝達レベルを測定するために使用することができる（Gazit et al., 1999, Oncogene, 18; 5959-66; TOPflash, Millipore, Billerica MA）。RSPO結合作用物質またはLGR結合作用物質の存在下での、RSPOタンパク質またはRSPO調整培地を伴うかまたは伴わない、1種または複数種のWnt（例えば、トランスフェクト細胞が発現するかまたはWnt調整培地が提供するWnt）の存在下でのβ-カテニンシグナル伝達のレベルを、RSPO結合作用物質またはLGR結合作用物質が存在しないシグナル伝達のレベルと比較する。TCF/Lucレポーターアッセイに加えて、β-カテニンシグナル伝達に対するRSPO結合作用物質またはLGR結合作用物質の効果を、c-myc（He et al., 1998, Science, 281:1509-12）、サイクリンD1（Tetsu et al., 1999, Nature, 398:422-6）、および／またはフィブロネクチン（Gradl et al. 1999, Mol. Cell Biol., 19:5576-87）などのβ-カテニン調節遺伝子の発現のレベルに対する作用物質の効果を測定することによって、インビトロまたはインビボで測定することができる。一定の態様では、β-カテニンシグナル伝達に対するRSPO結合作用物質またはLGR結合作用物質の効果をまた、Dishevelled-1、Dishevelled-2、Dishevelled-3、LRP5、LRP6、および／またはβ-カテニンのリン酸化状態に対する作用物質の効果を測定することによっても評価することができる。
【０２４９】
いくつかの態様では、RSPO-LGR経路インヒビター（例えば、RSPO結合作用物質およびLGR結合作用物質）が、ポリクローナル抗体である。ポリクローナル抗体は、任意の公知の方法によって調製することができる。いくつかの態様では、ポリクローナル抗体を、関連する抗原（例えば、精製されたペプチドフラグメント、完全長組換えタンパク質、または融合タンパク質）を皮下または腹腔内に複数回注射することで動物（例えば、ウサギ、ラット、マウス、ヤギ、ロバ）を免疫することによって生成させる。抗原は、任意で、キーホールリンペットヘモシアニン（KLH）または血清アルブミンなどの担体にコンジュゲートすることができる。抗原（担体タンパク質ありまたは担体タンパク質なし）を滅菌食塩水に希釈し、通常はアジュバント（例えば、完全フロイントアジュバントまたは不完全フロイントアジュバント）と組み合わせて、安定なエマルジョンを形成させる。十分な期間の後、ポリクローナル抗体を、免疫された動物の血液および／または腹水から回収する。ポリクローナル抗体は、アフィニティークロマトグラフィー、イオン交換クロマトグラフィー、ゲル電気泳動、および透析を含むがそれらに限定されるわけではない、当技術分野における標準的方法にしたがって、血清または腹水から精製することができる。
【０２５０】
いくつかの態様では、RSPO-LGR経路インヒビター（例えば、RSPO結合作用物質またはLGR結合作用物質）が、モノクローナル抗体である。モノクローナル抗体は、当業者に公知のハイブリドーマ法を用いて調製することができる。ハイブリドーマ法を使用するいくつかの態様では、マウス、ハムスター、または他の適当な宿主動物を上述のように免疫して、リンパ球からの、免疫抗原に特異的に結合するであろう抗体の産生を惹起する。いくつかの態様では、リンパ球をインビトロで免疫することができる。いくつかの態様では、免疫抗原が、ヒトタンパク質またはその一部分であることができる。いくつかの態様では、免疫抗原が、マウスタンパク質またはその一部分であることができる。
【０２５１】
免疫後に、リンパ球を単離し、例えば、ポリエチレングリコールを用いて適切な骨髄腫細胞株と融合させてハイブリドーマ細胞を形成させ、次いでそれを、未融合のリンパ球および骨髄腫細胞から選び出すことができる。選んだ抗原を特異的に指向するモノクローナル抗体を産生するハイブリドーマは、免疫沈降、免疫ブロッティング、およびインビトロ結合アッセイ（例えば、フローサイトメトリー、FACS、ELISA、およびラジオイムノアッセイ）を含むがそれらに限定されるわけではない、さまざまな方法によって同定することができる。ハイブリドーマは、標準的方法を用いてインビトロ培養において、または動物における腹水腫瘍としてインビボでのいずれかで増殖させることができる。モノクローナル抗体は、アフィニティークロマトグラフィー、イオン交換クロマトグラフィー、ゲル電気泳動、および透析を含むがそれらに限定されるわけではない、当技術分野における標準的方法にしたがって、培養培地または腹水から精製することができる。
【０２５２】
一定の態様では、モノクローナル抗体を、当業者に公知の組換えDNA技法を用いて作製することができる。モノクローナル抗体をコードするポリヌクレオチドを、成熟B細胞またはハイブリドーマ細胞から、例えば、抗体の重鎖および軽鎖をコードする遺伝子を特異的に増幅するオリゴヌクレオチドプライマーを用いたRT-PCRによって単離し、それらの配列を、従来の技法を用いて決定する。次いで、重鎖および軽鎖をコードする単離されたポリヌクレオチドを、本来であれば免疫グロブリンタンパク質を産生しない、大腸菌（E. coli）、サルCOS細胞、チャイニーズハムスター卵巣（CHO）細胞、または骨髄腫細胞などの宿主細胞にトランスフェクトした時にモノクローナル抗体を産生する、適切な発現ベクターにクローニングする。他の態様では、組換えモノクローナル抗体、またはそのフラグメントを、ファージディスプレイライブラリーから単離することができる。
【０２５３】
モノクローナル抗体をコードするポリヌクレオチドは、代替抗体を生成させるために、組換えDNA技術を用いていくつかの異なる方法で、さらに修飾することができる。いくつかの態様では、例えば、マウスモノクローナル抗体の軽鎖および重鎖の定常ドメインを、例えば、ヒト抗体のそれらの領域に置換してキメラ抗体を生成させるか、または非免疫グロブリンポリペプチドに置換して融合抗体を生成させることができる。いくつかの態様では、定常領域を切り詰めるかまたは除去して、モノクローナル抗体の所望の抗体フラグメントを生成させる。いくつかの態様では、可変領域の部位指定変異導入法または高密度変異導入法を使用して、モノクローナル抗体の特異性、親和性などを最適化することができる。
【０２５４】
いくつかの態様では、RSPO-LGR経路インヒビター（例えば、RSPO結合作用物質またはLGR結合作用物質）が、ヒト化抗体である。典型的には、ヒト化抗体は、当業者に公知の方法を用いて、CDR由来の残基が、所望の特異性、親和性、および／または結合能を有する非ヒト種（例えば、マウス、ラット、ウサギ、ハムスターなど）のCDR由来の残基により置き換えられているヒト免疫グロブリンである。いくつかの態様では、ヒト免疫グロブリンのフレームワーク領域残基が、非ヒト種由来の抗体における対応する残基で置き換えられる。いくつかの態様では、ヒト化抗体を、抗体の特異性、親和性、および／または能力を精密化し、最適化するために、フレームワーク領域中および／または置き換えられた非ヒト残基内のいずれかの追加の残基の置換によって、さらに修飾することができる。一般に、ヒト化抗体は、非ヒト免疫グロブリンに対応するCDRのすべてまたは実質的にすべてを含有する可変ドメイン領域を含むことになるのに対して、フレームワーク領域のすべてまたは実質的にすべては、ヒト免疫グロブリン配列のものである。いくつかの態様では、ヒト化抗体がまた、免疫グロブリン定常領域または定常ドメイン（Fc）の少なくとも一部分、典型的にはヒト免疫グロブリンのものも含むことができる。一定の態様では、そのようなヒト化抗体が治療に使用される。なぜなら、それらは、ヒト対象に投与された時に、抗原性およびHAMA（ヒト抗マウス抗体）応答を低減させることができるためである。
【０２５５】
一定の態様では、RSPO-LGR経路インヒビター（例えば、RSPO結合作用物質またはLGR結合作用物質）が、ヒト抗体である。ヒト抗体は、当技術分野において公知である種々の技法を用いて、直接的に調製することができる。いくつかの態様では、標的抗原に対する抗体を産生する、インビトロで免疫したかまたは免疫個体から単離した不死化ヒトBリンパ球を、生成させることができる。いくつかの態様では、ヒト抗体を、ヒト抗体を発現するファージライブラリーから選択することができる。あるいは、免疫されていないドナー由来の免疫グロブリン可変ドメイン遺伝子レパートリーから、ヒト抗体および抗体フラグメントをインビトロで生産するために、ファージディスプレイ技術を使用することができる。抗体ファージライブラリーの生成および使用のための技法は、当技術分野において周知であり、抗体ファージライブラリーは市販されている。鎖シャッフリングおよび部位指定変異導入法を含むがそれらに限定されるわけではない親和性成熟戦略が、当技術分野において公知であり、高親和性ヒト抗体を生成させるために使用することができる。
【０２５６】
いくつかの態様では、ヒト抗体を、ヒト免疫グロブリン座を含有するトランスジェニックマウスにおいて作製することができる。これらのマウスは、免疫時に、内在性免疫グロブリン産生がなく、完全レパートリーのヒト抗体を産生する能力を有する。
【０２５７】
一定の態様では、RSPO-LGR経路インヒビター（例えば、RSPO結合作用物質またはLGR結合作用物質）が、少なくとも1種のヒトRSPOタンパク質または少なくとも1種のLGRタンパク質を特異的に認識する二重特異性抗体である。二重特異性抗体は、少なくとも2つの異なるエピトープを特異的に認識して結合する能力を有する。異なるエピトープは、同じ分子内にある（例えば、ヒトRSPO3上の2つの異なるエピトープ）か、または異なる分子上にある（例えば、RSPO3上の1つのエピトープおよび第2のタンパク質上の異なるエピトープ）かのいずれかであることができる。いくつかの態様では、二重特異性抗体が、モノクローナルヒト抗体またはモノクローナルヒト化抗体である。いくつかの態様では、二重特異性抗体がインタクトな抗体である。いくつかの態様では、二重特異性抗体が抗体フラグメントである。一定の態様では、抗体が多重特異性である。いくつかの態様では、抗体が、第1抗原標的を発現する細胞に細胞性防御機構を集中させるために、第1抗原標的（例えば、LGRタンパク質）、および第2抗原標的、例えば、白血球上のエフェクター分子（例えば、CD2、CD3、CD28、CD80、もしくはCD86）またはFc受容体（例えば、CD64、CD32、もしくはCD16）を特異的に認識して結合することができる。いくつかの態様では、抗体を、特定の標的抗原を発現する細胞に細胞傷害性作用物質を向かわせるために使用することができる。これらの抗体は、抗原結合アーム、および細胞傷害性作用物質または放射性核種キレーター、例えば、EOTUBE、DPTA、DOTA、またはTETAに結合するアームを保有する。二重特異性抗体または多重特異性抗体を作製するための技法は、当業者に公知である。
【０２５８】
一定の態様では、RSPO-LGR経路インヒビター（例えば、RSPO結合作用物質またはLGR結合作用物質）が、単一特異性抗体である。例えば、一定の態様では、抗体が含有する1つまたは複数の抗原結合部位の各々が、異なるタンパク質上の相同エピトープに結合する能力を有する（または結合する）。
【０２５９】
一定の態様では、RSPO-LGR経路インヒビターが、抗原結合部位を含む抗体フラグメントである。抗体フラグメントは、インタクトな抗体とは異なる機能または能力を有することができ、例えば、抗体フラグメントは、増大した腫瘍浸透性を有することができる。抗体フラグメントの生産のために、インタクトな抗体のタンパク質分解消化を含むがそれに限定されるわけではない、種々の技法が公知である。いくつかの態様では、抗体フラグメントに、抗体分子のペプシン消化によって生産されるF(ab')2フラグメントが含まれる。いくつかの態様では、抗体フラグメントに、F(ab')2フラグメントのジスルフィド橋を還元することによって生成されるFabフラグメントが含まれる。他の態様では、抗体フラグメントに、パパインおよび還元剤での抗体分子の処理によって生成されるFabフラグメントが含まれる。一定の態様では、抗体フラグメントが組換え生産される。いくつかの態様では、抗体フラグメントに、Fvフラグメントまたは一本鎖Fv（scFv）フラグメントが含まれる。Fab、Fv、およびscFv抗体フラグメントは、大腸菌または他の宿主細胞において発現させ、そこから分泌させることができ、それにより、これらのフラグメントを大量に生産することが可能になる。いくつかの態様では、抗体フラグメントを、本明細書において議論する抗体ファージライブラリーから単離する。例えば、RSPOタンパク質もしくはLGRタンパク質またはそれらの誘導体、フラグメント、類似体もしくは相同体に対して所望の特異性を有するモノクローナルFabフラグメントの迅速かつ有効な同定を可能にするために、Fab発現ライブラリーを構築するための方法を使用することができる。いくつかの態様では、抗体フラグメントが線状抗体フラグメントである。一定の態様では、抗体フラグメントが、単一特異性または二重特異性である。一定の態様では、RSPO-LGR経路インヒビターがscFvである。1種もしくは複数種のヒトRSPOタンパク質または1種もしくは複数種のヒトLGRタンパク質に特異的な一本鎖抗体の生産のために、種々の技法を使用することができる。
【０２６０】
さらに、抗体をその血清中半減期を増大させるために修飾することが、抗体フラグメントの場合は特に、望ましい場合がある。これは、例えば、抗体フラグメント中の適当な領域の変異により抗体フラグメント中にサルベージ受容体結合エピトープを組み込むことによって、または、エピトープをペプチドタグ中に組み込み、次いで、それをいずれかの端または中央で（例えば、DNA合成またはペプチド合成により）抗体フラグメントに融合させることによって、達成することができる。いくつかの態様では、抗体が、その血清中半減期が減少するように修飾される。
【０２６１】
一定の態様では、RSPO-LGR経路インヒビターが、ヘテロコンジュゲート抗体である。ヘテロコンジュゲート抗体は、共有結合で接合された2つの抗体から構成される。そのような抗体は、例えば、望ましくない細胞に免疫細胞を標的化するために提唱されている。ヘテロコンジュゲート抗体を、架橋剤を必要とするものを含む、合成タンパク質化学において公知の方法を用いて、インビトロで調製できることもまた企図される。例えば、イムノトキシンは、ジスルフィド交換反応を用いて、またはチオエーテル結合を形成させることによって、構築することができる。この目的に適した試薬の例には、イミノチオラートおよびメチル-4-メルカプトブチルイミダートが含まれる。
【０２６２】
修飾抗体は、抗体と標的（すなわち、ヒトRSPOタンパク質またはヒトLGRタンパク質）との会合をもたらす任意のタイプの可変領域を含むことができると、理解されるはずである。これに関連して、可変領域は、体液性応答を開始し、所望の腫瘍関連抗原に対する免疫グロブリンを生成するように誘発することができる任意のタイプの哺乳動物を含むか、またはそれに由来することができる。そのように、修飾抗体の可変領域は、例えば、ヒト、マウス、非ヒト霊長類（例えば、カニクイザル、マカクなど）、またはウサギ起源であることができる。いくつかの態様では、修飾免疫グロブリンの可変領域および定常領域の両方が、ヒトである。他の態様では、適合する抗体（通常は非ヒト供給源に由来するもの）の可変領域を、分子の結合特性を改善し、またはその免疫原性を低減させるために、工学的に操作するかまたは特異的に加工することができる。この点で、可変領域を、インポートされたアミノ酸配列を含めることにより、ヒト化するか、または他の形で改変することができる。
【０２６３】
一定の態様では、重鎖および軽鎖の両方における可変ドメインを、1つまたは複数のCDRの少なくとも部分的な置き換えによって、そして必要であれば、部分的なフレームワーク領域の置き換えならびに配列修飾および／または配列改変によって、改変する。CDRは、フレームワーク領域が由来する抗体と同じクラス、またはさらに同じサブクラスの抗体に由来することができるが、CDRは、好ましくは、異なる種からの抗体に由来するであろうと考えられる。1つの可変ドメインの抗原結合能をもう1つの可変ドメインに移すために、CDRのすべてをドナー可変領域由来のCDRのすべてで置き換える必要はないであろう。むしろ、抗原結合部位の活性を維持するために必要である残基を移すことが、必要なだけであろう。
【０２６４】
可変領域への改変とは別に、修飾抗体が、ネイティブの、すなわち改変されていない定常領域を含むほぼ同じ免疫原性の抗体と比較した時に、所望の生化学的特徴、例えば増大した腫瘍局在および／または増大した血清中半減期を提供するために、定常領域ドメインの1つまたは複数の少なくとも断片が欠失しているかまたは他の形で改変されている抗体（例えば、完全長抗体またはその免疫反応性フラグメント）を含むであろうことを、当業者は理解するであろう。いくつかの態様では、修飾抗体の定常領域が、ヒト定常領域を含むであろう。定常領域への修飾は、1つまたは複数のドメインにおける1個または複数個のアミノ酸の付加、欠失、または置換を含む。本明細書において開示する修飾抗体は、3つの重鎖定常ドメイン（CH1、CH2、またはCH3）のうちの1つまたは複数への、および／または軽鎖定常ドメイン（CL）への改変または修飾を含むことができる。いくつかの態様では、1つまたは複数のドメインを、修飾抗体の定常領域から部分的にまたは全体的に欠失させる。いくつかの態様では、修飾抗体が、CH2ドメイン全体が除去されたドメイン欠失コンストラクトまたはドメイン欠失バリアント（ΔCH2コンストラクト）を含むであろう。いくつかの態様では、省かれた定常領域ドメインが、欠如している定常領域によって通例付与されている分子可動性のいくらかを提供する短いアミノ酸スペーサー（例えば、10アミノ酸残基）により置き換えられる。
【０２６５】
いくつかの態様では、修飾抗体が、CH3ドメインを抗体のヒンジ領域に直接融合させるように工学的に操作される。他の態様では、ペプチドスペーサーが、ヒンジ領域と修飾CH2および／またはCH3ドメインとの間に挿入される。例えば、CH2ドメインが欠失していて、残ったCH3ドメイン（修飾または無修飾）が5〜20アミノ酸のスペーサーでヒンジ領域に接合されているコンストラクトを、発現させることができる。そのようなスペーサーは、定常ドメインの調節要素が自由かつアクセス可能な状態を保っていること、またはヒンジ領域が可動性を保っていることを保証するために、付加することができる。しかし、アミノ酸スペーサーは、いくつかの場合に、免疫原性であり、コンストラクトに対する望ましくない免疫応答を惹起することになりうる点に注意すべきである。したがって、一定の態様では、コンストラクトに付加されるスペーサーはいずれも、修飾抗体の望ましい生物学的品質を維持するように、比較的非免疫原性であろう。
【０２６６】
いくつかの態様では、修飾抗体が、定常ドメインの部分的欠失のみ、または、数個の、もしくはさらに単一のアミノ酸の置換のみを有することができる。例えば、CH2ドメインの選択された区域における単一アミノ酸の変異は、Fc結合を実質的に低減させ、それによりがん細胞局在および／または腫瘍浸透を増大させるのに十分であることができる。同様に、1つまたは複数の定常領域ドメインのうち、特異的エフェクター機能（例えば、補体C1q結合）を制御する部分を単純に欠失させることが、望ましい場合もある。そのような定常領域の部分的欠失は、対象の定常領域ドメインと関連する他の望ましい機能を損なわずに残したまま、抗体の選択された特徴（血清中半減期）を改善することができる。そのうえ、上記で言及したように、本開示の抗体の定常領域は、結果として得られるコンストラクトのプロファイルを増強する1個または複数個のアミノ酸の変異または置換によって修飾することができる。この点で、修飾抗体の立体配置および免疫原性プロファイルを実質的に維持したまま、保存された結合部位により提供される活性（例えば、Fc結合）を分断することが可能になりうる。一定の態様では、修飾抗体が、エフェクター機能の減少もしくは増大などの望ましい特徴を増強するために、またはより多くの細胞毒もしくは糖質付着部位を提供するために、定常領域への1個または複数個のアミノ酸の付加を含む。
【０２６７】
定常領域が数種類のエフェクター機能を媒介することは、当技術分野において公知である。例えば、（抗原に結合した）IgG抗体またはIgM抗体のFc領域への補体のC1構成要素の結合は、補体系を活性化する。補体の活性化は、細胞病原体のオプソニン化および溶解において重要である。補体の活性化はまた、炎症応答も刺激し、自己免疫過敏症に関与する場合もある。加えて、抗体のFc領域は、Fc受容体（FcR）を発現する細胞に結合することができる。IgG（ガンマ受容体）、IgE（イプシロン受容体）、IgA（アルファ受容体）、およびIgM（ミュー受容体）を含む、異なる抗体のクラスに特異的ないくつかのFc受容体がある。細胞表面上のFc受容体への抗体の結合は、抗体被覆粒子の貪食と破壊、免疫複合体のクリアランス、キラー細胞による抗体被覆標的細胞の溶解、炎症性メディエーターの放出、胎盤移行、および免疫グロブリン産生の制御を含む、いくつかの重要かつ多様な生物学的応答を引き起こす。
【０２６８】
一定の態様では、RSPO-LGR経路インヒビターが、改変されたエフェクター機能を提供する抗体である。これらの改変されたエフェクター機能は、投与された抗体の生物学的プロファイルに影響を及ぼす場合がある。例えば、いくつかの態様では、定常領域ドメインの欠失または（点変異もしくは他の手段による）不活化が、循環修飾抗体（例えば、抗RSPO抗体）のFc受容体結合を低減させ、それによりがん細胞局在および／または腫瘍浸透を増大させる場合がある。他の態様では、定常領域修飾が、抗体の血清中半減期を増大または低減させる。いくつかの態様では、定常領域が、ジスルフィド連結またはオリゴ糖部分を排除するように修飾される。定常領域への修飾は、当業者によく理解されている周知の生化学的技法または分子工学的手法を用いて、容易に行うことができる。
【０２６９】
一定の態様では、RSPO-LGR経路インヒビターが、1つまたは複数のエフェクター機能を有さない抗体である。例えば、いくつかの態様では、抗体が、ADCC活性および／またはCDC活性を有さない。一定の態様では、抗体が、Fc受容体および／または補体因子に結合しない。一定の態様では、抗体がエフェクター機能を有さない。
【０２７０】
本明細書に示す、キメラ抗体、ヒト化抗体、およびヒト抗体、またはそれらの抗体フラグメントに実質的に相同であるバリアントおよび等価物もまた、本明細書に記載する方法において使用することができる。これらは、例えば、保存的置換変異を含有することができる。
【０２７１】
一定の態様では、本明細書に記載する抗体が単離されている。一定の態様では、本明細書に記載する抗体が実質的に純粋である。
【０２７２】
いくつかの態様では、RSPO-LGR経路インヒビターが可溶性受容体である。一定の態様では、RSPO結合作用物質が可溶性受容体である。一定の態様では、可溶性受容体が、LGRタンパク質の細胞外ドメインまたはLGRタンパク質の細胞外ドメインのフラグメントを含む。一定の態様では、LGRタンパク質がLGR5である。例えば、いくつかの態様では、RSPO結合作用物質が、LGR5受容体のフラグメントを含む融合タンパク質である。いくつかの態様では、RSPO結合作用物質が、LGR5受容体のフラグメントおよび抗体のFc部分を含む融合タンパク質である。
【０２７３】
一定の態様では、RSPO結合作用物質が、固形腫瘍幹細胞を含む固形腫瘍の成長を阻害する、ヒトLGRタンパク質の細胞外ドメインまたはそのフラグメントを含む可溶性受容体である。一定の態様では、細胞外ドメインが、ヒトLGR5のアミノ酸22〜564（SEQ ID NO:56）を含む。一定の態様では、ヒトLGR5の細胞外ドメインが、非LGRタンパク質配列に対してインフレームで連結される。一定の態様では、非LGRタンパク質がヒトFcである。
【０２７４】
一定の態様では、RSPO結合作用物質が、LGRシグナル伝達のRSPO活性化を阻害する、ヒトLGRタンパク質の細胞外ドメインまたはそのフラグメントを含む可溶性受容体である。一定の態様では、細胞外ドメインが、ヒトLGR5のアミノ酸22〜564（SEQ ID NO:56）を含む。一定の態様では、ヒトLGR5の細胞外ドメインが、非LGRタンパク質配列に対してインフレームで連結される。一定の態様では、非LGRタンパク質がヒトFcである。可溶性LGR受容体の非限定的な例は、これにより各々がすべての目的でその全体が参照により本明細書に組み入れられる、米国特許第8158758号および第8158757号に見いだすことができる。
【０２７５】
一定の態様では、RSPO結合作用物質が、固形腫瘍の成長を阻害する、ヒトLGRタンパク質の細胞外ドメインを含む可溶性受容体である。一定の態様では、RSPO結合作用物質が、固形腫瘍幹細胞を含む固形腫瘍の成長を阻害する、ヒトLGRタンパク質の細胞外ドメインを含む可溶性受容体である。一定の態様では、細胞外ドメインが、ヒトLGR5のアミノ酸22〜564（SEQ ID NO:56）を含む。一定の態様では、細胞外ドメインが、ヒトLGR5のアミノ酸22〜564（SEQ ID NO:56）のフラグメントを含む。一定の態様では、ヒトLGR5の細胞外ドメインまたはそのフラグメントが、非LGRタンパク質配列に対してインフレームで連結される。一定の態様では、非LGRタンパク質がヒトFcである。
【０２７６】
一定の態様では、可溶性受容体が、1個または複数個（例えば、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10個など）の保存的置換を含み、かつRSPOタンパク質に結合する能力を有する、前述のヒトLGRタンパク質の細胞外ドメインのバリアントを含む。
【０２７７】
一定の態様では、可溶性受容体、例えばヒトLGRタンパク質の細胞外ドメインを含む作用物質が、さらに、非LGR（例えば、異種）ポリペプチドを含む。いくつかの態様では、可溶性受容体が、ヒトFc領域、少なくとも1つのタンパク質タグ（例えば、myc、FLAG、GST、GFP）、他の内在性タンパク質もしくはタンパク質フラグメント、または、LGR ECDと第2ポリペプチドとの間の任意のリンカー領域を含む任意の他の有用タンパク質配列を含むがそれらに限定されるわけではない、他の非LGRの機能ポリペプチドおよび構造ポリペプチドに連結された、LGR ECDを含むことができる。一定の態様では、非LGRポリペプチドがヒトFc領域を含む。Fc領域は、免疫グロブリンのクラス、IgG、IgA、IgM、IgD、およびIgEのいずれかから得ることができる。いくつかの態様では、Fc領域がヒトIgG1 Fc領域である。いくつかの態様では、Fc領域がヒトIgG2 Fc領域である。いくつかの態様では、Fc領域が野生型Fc領域である。いくつかの態様では、Fc領域が変異型Fc領域である。いくつかの態様では、Fc領域が、N末端側で1、2、3、4、5、6、7、8、9、または10アミノ酸分（例えば、ヒンジドメインにおいて）切り詰められる。いくつかの態様では、望ましくないジスルフィド結合形成を妨げるために、ヒンジドメイン中のアミノ酸が変更される。いくつかの態様では、望ましくないジスルフィド結合形成を妨げるために、システインがセリンで置き換えられる。いくつかの態様では、Fc領域が、C末端側で1、2、3アミノ酸分またはそれより多く、切り詰められる。いくつかの態様では、Fc領域が、C末端側で1アミノ酸分切り詰められる。一定の態様では、非LGRポリペプチドが、SEQ ID NO:58、SEQ ID NO:59、SEQ ID NO:60、SEQ ID NO:61、またはSEQ ID NO:62を含む。一定の態様では、非LGRポリペプチドが、SEQ ID NO:58、SEQ ID NO:59、SEQ ID NO:60、SEQ ID NO:61、またはSEQ ID NO:62から本質的になる。一定の態様では、非LGRポリペプチドがSEQ ID NO:61を含む。一定の態様では、非LGRポリペプチドがSEQ ID NO:61から本質的になる。
【０２７８】
一定の態様では、可溶性受容体が、RSPOタンパク質に結合する能力を有するLGRポリペプチドの細胞外ドメインおよびFc領域を含む、融合タンパク質である。本明細書において使用する場合、「融合タンパク質」とは、少なくとも2種の遺伝子のヌクレオチド配列を含む核酸分子によって発現されるハイブリッドタンパク質である。いくつかの態様では、第1ポリペプチドのC末端が、免疫グロブリンFc領域のN末端に連結される。いくつかの態様では、第1ポリペプチド（例えば、LGRポリペプチドの細胞外ドメイン）が、Fc領域に直接（すなわち、介在ペプチドリンカーなしで）連結される。いくつかの態様では、第1ポリペプチドが、リンカーを介してFc領域に連結される。
【０２７９】
いくつかの態様では、融合タンパク質がSEQ ID NO:57を含む。いくつかの態様では、融合タンパク質がSEQ ID NO:63を含む。いくつかの態様では、可溶性受容体がSEQ ID NO:63を含む。いくつかの態様では、RSPO結合作用物質がSEQ ID NO:63を含む。
【０２８０】
本明細書において使用する場合、「リンカー」という用語は、第1ポリペプチド（例えば、LGR構成要素）と第2ポリペプチド（例えば、Fc領域）との間に挿入されるリンカーを指す。いくつかの態様では、リンカーがペプチドリンカーである。リンカーは、ポリペプチドの発現、分泌、または生物活性に有害な影響を及ぼしてはならない。リンカーは、抗原性であってはならず、免疫応答を惹起してはならない。適切なリンカーは、当業者に公知であり、グリシン残基とセリン残基との混合物を含むことが多く、立体的に妨げられていないアミノ酸を含むことが多い。有用なリンカー中に組み込むことができる他のアミノ酸には、スレオニン残基およびアラニン残基が含まれる。リンカーは、長さが、例えば1〜50アミノ酸長、1〜22アミノ酸長、1〜10アミノ酸長、1〜5アミノ酸長、または1〜3アミノ酸長の範囲にわたることができる。本明細書において使用する場合、「リンカー」は、第1ポリペプチド（例えば、LGR構成要素）のC末端または第2ポリペプチド（例えば、Fc領域）のN末端のいずれ由来のアミノ酸残基も含まない、介在ペプチド配列である。
【０２８１】
一定の態様では、RSPO結合作用物質（例えば、可溶性受容体）が、免疫グロブリンのFc領域を含む。結合作用物質のいくつかが、ネイティブの、すなわち改変されていない定常領域を含むほぼ同じ免疫原性の融合タンパク質と比較した時に、所望の生化学的特徴、例えば増大したがん細胞局在、増大した腫瘍浸透性、低減した血清中半減期、または増大した血清中半減期を提供するために、Fc領域の少なくとも一部分が欠失しているかまたは他の形で改変されている融合タンパク質を含むであろうことを、当業者は理解するであろう。Fc領域への修飾は、1つまたは複数のドメインにおける1個または複数個のアミノ酸の付加、欠失、または置換を含むことができる。本明細書において開示する修飾融合タンパク質は、2つの重鎖定常ドメイン（CH2またはCH3）のうちの1つまたは複数への、またはヒンジ領域への改変または修飾を含むことができる。他の態様では、CH2ドメイン全体を除去することができる（ΔCH2コンストラクト）。いくつかの態様では、省かれた定常領域ドメインが、欠如している定常領域ドメインによって通例付与されている分子可動性のいくらかを提供する短いアミノ酸スペーサー（例えば、10残基）により置き換えられる。
【０２８２】
いくつかの態様では、修飾融合タンパク質が、CH3ドメインをヒンジ領域に直接連結するように工学的に操作される。他の態様では、ペプチドスペーサーが、ヒンジ領域と修飾CH2および／またはCH3ドメインとの間に挿入される。例えば、CH2ドメインが欠失していて、残ったCH3ドメイン（修飾または無修飾）が5〜20アミノ酸のスペーサーでヒンジ領域に接合されているコンストラクトを、発現させることができる。そのようなスペーサーは、定常ドメインの調節要素が自由かつアクセス可能な状態を保っていること、またはヒンジ領域が可動性を保っていることを保証するために、付加することができる。しかし、アミノ酸スペーサーは、いくつかの場合に、免疫原性であり、コンストラクトに対する望ましくない免疫応答を惹起することになりうる点に注意すべきである。したがって、一定の態様では、コンストラクトに付加されるスペーサーはいずれも、融合タンパク質の望ましい生物学的品質を維持するように、比較的非免疫原性であろう。
【０２８３】
いくつかの態様では、修飾融合タンパク質が、定常ドメインの部分的欠失のみ、または、数個の、もしくはさらに単一のアミノ酸の置換のみを有することができる。例えば、CH2ドメインの選択された区域における単一アミノ酸の変異は、Fc結合を実質的に低減させ、それによりがん細胞局在および／または腫瘍浸透を増大させるのに十分であることができる。同様に、1つまたは複数の定常領域ドメインのうち、特異的エフェクター機能（例えば、補体C1q結合）を制御する部分を単純に欠失させることが、望ましい場合もある。そのような定常領域の部分的欠失は、対象の定常領域ドメインと関連する他の望ましい機能を損なわずに残したまま、結合作用物質の選択された特徴（例えば、血清中半減期）を改善することができる。そのうえ、上記で言及したように、本開示の融合タンパク質の定常領域は、結果として得られるコンストラクトのプロファイルを増強する1個または複数個のアミノ酸の変異または置換によって修飾することができる。この点で、修飾融合タンパク質の立体配置および免疫原性プロファイルを実質的に維持したまま、保存された結合部位により提供される活性（例えば、Fc結合）を分断することが可能になりうる。一定の態様では、修飾融合タンパク質が、エフェクター機能の減少もしくは増大などの望ましい特徴を増強するために、またはより多くの細胞毒もしくは糖質付着部位を提供するために、定常領域への1個または複数個のアミノ酸の付加を含む。
【０２８４】
定常領域が数種類のエフェクター機能を媒介することは、当技術分野において公知である。例えば、（抗原に結合した）IgG抗体またはIgM抗体のFc領域への補体のC1構成要素の結合は、補体系を活性化する。補体の活性化は、細胞病原体のオプソニン化および溶解において重要である。補体の活性化はまた、炎症応答も刺激し、自己免疫過敏症に関与する場合もある。加えて、免疫グロブリンのFc領域は、Fc受容体（FcR）を発現する細胞に結合することができる。IgG（ガンマ受容体）、IgE（イプシロン受容体）、IgA（アルファ受容体）、およびIgM（ミュー受容体）を含む、異なる抗体のクラスに特異的ないくつかのFc受容体がある。細胞表面上のFc受容体への抗体の結合は、抗体被覆粒子の貪食と破壊、免疫複合体のクリアランス、キラー細胞による抗体被覆標的細胞の溶解、炎症性メディエーターの放出、胎盤移行、および免疫グロブリン産生の制御を含む、いくつかの重要かつ多様な生物学的応答を引き起こす。
【０２８５】
いくつかの態様では、修飾融合タンパク質が、改変されたエフェクター機能を提供し、それが次に、投与された作用物質の生物学的プロファイルに影響を及ぼす。例えば、いくつかの態様では、定常領域ドメインの欠失または（点変異もしくは他の手段による）不活化が、循環修飾作用物質のFc受容体結合を低減させ、それによりがん細胞局在および／または腫瘍浸透を増大させる場合がある。他の態様では、定常領域修飾が、作用物質の血清中半減期を増大または低減させる。いくつかの態様では、定常領域が、ジスルフィド連結またはオリゴ糖部分を排除するように修飾される。
【０２８６】
一定の態様では、修飾融合タンパク質が、通常はFc領域と関連する1つまたは複数のエフェクター機能を有さない。いくつかの態様では、作用物質が、抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（ADCC）活性、および／または補体依存性細胞傷害（CDC）活性を有さない。一定の態様では、作用物質が、Fc受容体および／または補体因子に結合しない。一定の態様では、作用物質がエフェクター機能を有さない。
【０２８７】
いくつかの態様では、本明細書に記載するRSPO結合作用物質（例えば、可溶性受容体）が、免疫原性を低減させるように修飾される。一般に、完全に正常なヒトタンパク質に対する免疫応答は、それらのタンパク質を治療薬として使用する時には稀である。しかし、多くの融合タンパク質は、天然に見いだされる配列と同じポリペプチド配列を含むものの、いくつかの治療用融合タンパク質は、哺乳動物において免疫原性であることが示されている。いくつかの研究では、リンカーを含む融合タンパク質は、リンカーを含有しない融合タンパク質より免疫原性が高いことが見いだされている。したがって、いくつかの態様では、ポリペプチドが、免疫原性を予測するために、計算的手法によって解析される。いくつかの態様では、ポリペプチドが、T細胞エピトープおよび／またはB細胞エピトープの存在について解析される。いずれかのT細胞エピトープまたはB細胞エピトープが同定および／または予測される場合には、そのエピトープを分断または破壊するために、それらの領域に修飾（例えば、アミノ酸置換）を行うことができる。T細胞エピトープおよび／またはB細胞エピトープを予測するために使用することができる種々のアルゴリズムおよびソフトウェアが、当技術分野において公知である。例えば、ソフトウェアプログラムSYFPEITHI、HLA Bind、PEPVAC、RANKPEP、DiscoTope、ElliPro、およびAntibody Epitope Predictionは、すべて公的に利用可能である。
【０２８８】
いくつかの態様では、RSPO-LGR経路インヒビターがポリペプチドである。ポリペプチドは、少なくとも1種のヒトRSPOタンパク質または少なくとも1種のLGRタンパク質に結合する、抗体またはそのフラグメントを含む、組換えポリペプチド、天然ポリペプチド、または合成ポリペプチドであることができる。いくつかのアミノ酸配列を、タンパク質の構造または機能に有意な影響を及ぼさずに変動できることは、当技術分野において認識されているであろう。したがって、本明細書に記載する方法は、さらに、ヒトRSPOタンパク質またはLGRタンパク質に対する抗体またはそのフラグメントの実質的活性を示すか、または、同抗体またはそのフラグメントの領域を含む、ポリペプチドのバリエーションを使用することを包含する。いくつかの態様では、RSPO結合ポリペプチドまたはLGR結合ポリペプチドのアミノ酸配列バリエーションが、欠失、挿入、逆位、反復、および／または他のタイプの置換を含むことができる。
【０２８９】
ポリペプチド、その類似体およびバリアントは、さらに、通常はポリペプチドの一部ではない追加の化学部分を含有するように修飾することができる。誘導体化された部分は、ポリペプチドの溶解度、生物学的半減期、および／または吸収を改善することができる。それらの部分はまた、ポリペプチドおよびバリアントのいずれかの望ましくない副作用を低減させるかまたは排除することもできる。化学部分についての総説は、Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 22nd Edition, 2012, Pharmaceutical Press, Londonに見いだすことができる。
【０２９０】
抗体および可溶性受容体を含む多くのタンパク質は、種々の位置へのタンパク質の輸送を指示するシグナル配列を含有する。シグナル配列（シグナルペプチドまたはリーダー配列とも呼ばれる）は、新生ポリペプチドのN末端に位置する（例えば、ヒトLGR5（SEQ ID NO:54）のアミノ酸1〜21）。それらはポリペプチドを小胞体に向かわせ、タンパク質はそれらの行き先に、例えば、細胞小器官の内部空間に、内膜に、細胞外膜に、または分泌を介して細胞外部に分別される。大半のシグナル配列は、タンパク質が小胞体に輸送された後に、シグナルペプチダーゼによってタンパク質から切断される。ポリペプチドからのシグナル配列の切断は、通常、アミノ酸配列中の特異的部位で起こり、シグナル配列内のアミノ酸残基に依存する。通常は1つの特異的切断部位があるが、2つ以上の切断部位が、シグナルペプチダーゼによって認識され、かつ／または使用されて、ポリペプチドの不均一なN末端をもたらす場合がある。例えば、シグナル配列内の異なる切断部位の使用は、発現されるポリペプチドが異なるN末端アミノ酸を有することをもたらす場合がある。したがって、いくつかの態様では、本明細書に記載するポリペプチドが、異なるN末端を有するポリペプチドの混合物を含むことができる。いくつかの態様では、N末端が、1、2、3、4、または5アミノ酸分、長さが異なる。いくつかの態様では、ポリペプチドが実質的に均一であり、すなわち、ポリペプチドが同じN末端を有する。いくつかの態様では、ポリペプチドのシグナル配列が、「ネイティブの」または「親の」シグナル配列と比較して1個または複数個（例えば、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10個など）のアミノ酸置換および／またはアミノ酸欠失を含む。いくつかの態様では、ポリペプチドのシグナル配列が、1つの切断部位を優勢にし、それにより1つのN末端を有する実質的に均一なポリペプチドをもたらすことを可能にする、アミノ酸置換および／またはアミノ酸欠失を含む。いくつかの態様では、ポリペプチドのシグナル配列が、ポリペプチドの発現レベル、例えば、発現の増大または発現の減少に影響を及ぼす。
【０２９１】
本明細書に記載する単離されたポリペプチドは、当技術分野において公知の任意の適切な方法によって生産することができる。そのような方法は、直接タンパク質合成法から、ポリペプチド配列をコードするDNA配列を構築してその配列を適切な宿主中で発現させる方法までにわたる。いくつかの態様では、DNA配列を、関心対象の野生型タンパク質をコードするDNA配列を単離するかまたは合成することにより、組換え技術を用いて構築する。任意で、配列に、部位特異的変異導入法により変異を導入して、その機能的類似体を提供することができる。
【０２９２】
いくつかの態様では、関心対象のポリペプチドをコードするDNA配列を、オリゴヌクレオチド合成装置を用いた化学合成によって構築することができる。オリゴヌクレオチドは、所望のポリペプチドのアミノ酸配列に基づき、関心対象の組換えポリペプチドが生産されることになる宿主細胞において好まれるコドンを選択して、設計することができる。標準的方法を適用して、単離された関心対象のポリペプチドをコードするポリヌクレオチド配列を合成することができる。例えば、完全なアミノ酸配列を用いて、逆翻訳遺伝子を構築することができる。さらに、特定の単離されたポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含有するDNAオリゴマーを、合成することができる。例えば、所望のポリペプチドの一部分をコードするいくつかの小さなオリゴヌクレオチドを合成し、次いでライゲートすることができる。個々のオリゴヌクレオチドは、典型的には、相補的アセンブリのために、5'オーバーハングまたは3'オーバーハングを含有する。
【０２９３】
（合成、部位指定変異導入法、または別の方法による）アセンブリが終わったら、関心対象の特定のポリペプチドをコードするポリヌクレオチド配列を、発現ベクターに挿入して、望ましい宿主におけるタンパク質の発現に適した発現制御配列に作動的に連結することができる。適正なアセンブリは、ヌクレオチド配列決定、制限酵素マッピング、および／または適切な宿主における生物学的に活性なポリペプチドの発現によって確認することができる。当技術分野において周知であるように、宿主においてトランスフェクトされた遺伝子の高い発現レベルを得るためには、遺伝子が、選んだ発現宿主において機能的である転写および翻訳発現制御配列に作動的に連結されていなければならない。
【０２９４】
組換え発現ベクターを用いて、ヒトRSPOタンパク質またはヒトLGRタンパク質に結合する作用物質（例えば、抗体または可溶性受容体）またはそのフラグメントをコードするDNAを増幅し、発現させることができる。例えば、組換え発現ベクターは、哺乳動物遺伝子、微生物遺伝子、ウイルス遺伝子、または昆虫遺伝子に由来する適切な転写および／または翻訳調節要素に作動的に連結された、RSPO結合作用物質、LGR結合作用物質、抗RSPO抗体もしくはそのフラグメント、抗LGR抗体もしくはそのフラグメント、またはLGR-Fc可溶性受容体のポリペプチド鎖をコードする、合成DNAフラグメントまたはcDNA由来のDNAフラグメントを有する、複製可能なDNAコンストラクトであることができる。転写単位は、一般に、（1）遺伝子発現において調節的役割を有する1つまたは複数の遺伝要素、例えば、転写プロモーターまたはエンハンサー、（2）mRNAに転写され、タンパク質に翻訳される、構造配列またはコード配列、および（3）適当な転写および翻訳開始および終結配列のアセンブリを含む。調節要素には、転写を制御するためのオペレーター配列を含めることができる。通常は複製起点によって付与される、宿主中で複製する能力、および、形質転換体の認識を容易にするための選択遺伝子を、追加的に組み込むことができる。DNA領域は、それらが互いに機能的な関係にある時に、「作動的に連結」されている。例えば、シグナルペプチド（分泌リーダー）のDNAは、それがあるポリペプチドの分泌に関与する前駆体として発現されるのであれば、そのポリペプチドのDNAに作動的に連結されており、プロモーターは、それがあるコード配列の転写を制御するのであれば、そのコード配列に作動的に連結されており、または、リボソーム結合部位は、それが翻訳を可能にするような位置にあるのであれば、コード配列に作動的に連結されている。酵母発現系における使用を意図した構造要素は、宿主酵母細胞による翻訳されたタンパク質の細胞外分泌を可能にするリーダー配列を含むことができる。組換えタンパク質がリーダー配列または輸送配列なしで発現される場合、それはN末端メチオニン残基を含むことができる。この残基は、任意で、最終産物を提供するために、発現された組換えタンパク質からその後切断される場合がある。
【０２９５】
発現制御配列および発現ベクターの選択は、宿主の選択に依存する。多種多様の発現宿主／ベクターの組み合わせを使用することができる。真核宿主用の有用な発現ベクターには、例えば、SV40、ウシパピローマウイルス、アデノウイルス、およびサイトメガロウイルス由来の発現制御配列を含むベクターが含まれる。細菌宿主用の有用な発現ベクターには、公知の細菌プラスミド、例えば、pCR1、pBR322、pMB9、およびそれらの誘導体を含む大腸菌由来のプラスミド、ならびに、宿主域がより広いプラスミド、例えば、M13ファージおよび他の線維状一本鎖DNAファージが含まれる。
【０２９６】
RSPO結合作用物質またはLGR結合作用物質（または抗原として使用するためのタンパク質）を発現させるための適切な宿主細胞には、原核生物、酵母細胞、昆虫細胞、または高等真核細胞が含まれる。原核生物には、グラム陰性生物またはグラム陽性生物、例えば、大腸菌またはバチルス（Bacillus）が含まれる。高等真核細胞には、後述する哺乳動物起源の樹立細胞株が含まれる。無細胞翻訳系もまた、使用することができる。細菌宿主、真菌宿主、酵母宿主、および哺乳動物細胞宿主と共に使用するための適当なクローニングベクターおよび発現ベクターは、当業者に公知である。
【０２９７】
種々の哺乳動物細胞培養系が、組換えポリペプチドを発現させるために使用される。哺乳動物細胞における組換えタンパク質の発現は、そのようなタンパク質が一般に正しくフォールディングされ、適切に修飾され、かつ生物学的に機能的であることから、好まれうる。適切な哺乳動物宿主細胞株の例には、COS-7（サル腎臓由来）細胞株、L-929（マウス線維芽細胞由来）細胞株、C127（マウス乳房腫瘍由来）細胞株、3T3（マウス線維芽細胞由来）細胞株、CHO（チャイニーズハムスター卵巣由来）細胞株、HeLa（ヒト子宮頸がん由来）細胞株、BHK（ハムスター腎臓線維芽細胞由来）細胞株、HEK-293（ヒト胎児腎臓由来）細胞株、およびそれらのバリアントが含まれる。哺乳動物発現ベクターは、非転写要素、例えば複製起点、発現させようとする遺伝子に連結された適切なプロモーターおよびエンハンサー、ならびに他の5'または3'隣接非転写配列、ならびに5'または3'非翻訳配列、例えば必要なリボソーム結合部位、ポリアデニル化部位、スプライス供与部位およびスプライス受容部位、ならびに転写終結配列を含むことができる。
【０２９８】
昆虫細胞培養系（例えば、バキュロウイルス）における組換えタンパク質の発現もまた、正しくフォールディングされた生物学的に機能的なタンパク質を生産するための堅牢な方法になる。昆虫細胞において異種タンパク質を生産するためのバキュロウイルス系は、当業者に周知である。
【０２９９】
形質転換宿主によって生産されるタンパク質は、任意の適切な方法にしたがって精製することができる。標準的方法には、クロマトグラフィー（例えば、イオン交換クロマトグラフィー、アフィニティークロマトグラフィー、およびサイズ分画カラムクロマトグラフィー）、遠心分離、溶解度差（differential solubility）、または、タンパク質精製のための任意の他の標準的な技法によるものが含まれる。適当なアフィニティーカラムを通すことによる安易な精製を可能にするために、ヘキサ-ヒスチジン、マルトース結合ドメイン、インフルエンザコート配列、およびグルタチオン-S-トランスフェラーゼなどのアフィニティータグを、タンパク質に付着することができる。単離されたタンパク質はまた、タンパク質分解、質量分析（MS）、核磁気共鳴（NMR）、高速液体クロマトグラフィー（HPLC）、およびx線結晶解析などの技法を用いて、物理的に特徴決定することもできる。
【０３００】
いくつかの態様では、培養培地中に組換えタンパク質を分泌する発現系由来の上清を、最初に、市販のタンパク質濃縮フィルター、例えば、AmiconまたはMillipore Pellicon限外濾過ユニットを用いて濃縮することができる。濃縮工程に続いて、濃縮物を適切な精製マトリックスに適用することができる。いくつかの態様では、アニオン交換樹脂、例えば、ペンダントジエチルアミノエチル（DEAE）基を有するマトリックスまたは基材を使用することができる。マトリックスは、アクリルアミド、アガロース、デキストラン、セルロース、またはタンパク質精製によく使用される他のタイプであることができる。いくつかの態様では、カチオン交換工程を使用することができる。適切なカチオン交換体には、スルホプロピル基またはカルボキシメチル基を含む種々の不溶性マトリックスが含まれる。いくつかの態様では、セラミックヒドロキシアパタイト（CHT）を含むがそれに限定されるわけではない、ヒドロキシアパタイト媒体を使用することができる。一定の態様では、疎水性RP-HPLC媒体、例えば、ペンダントメチル基または他の脂肪族基を有するシリカゲルを使用する1つまたは複数の逆相HPLC工程を、結合作用物質をさらに精製するために使用することができる。前述の精製工程のいくつかまたはすべてを、種々の組み合わせで、均一な組換えタンパク質を提供するために使用することもできる。
【０３０１】
いくつかの態様では、細菌培養において生産された組換えタンパク質を、例えば、細胞ペレットからの初回抽出、およびその後の、1つまたは複数の濃縮工程、塩析工程、水性イオン交換クロマトグラフィー工程、またはサイズ排除クロマトグラフィー工程によって単離することができる。HPLCを、最終精製工程に使用することができる。組換えタンパク質の発現に使用される微生物細胞は、凍結融解サイクリング、超音波処理、機械的破砕、または細胞溶解剤の使用を含む任意の従来法によって破砕することができる。
【０３０２】
一定の態様では、結合作用物質を、いくつかのコンジュゲート（すなわち、イムノコンジュゲートまたはラジオコンジュゲート）形態または非コンジュゲート形態のいずれか1つで使用することができる。一定の態様では、補体依存性細胞傷害および抗体依存性細胞傷害を含む対象の自然防御機構を利用して、悪性細胞またはがん細胞を排除するために、抗体を、非コンジュゲート形態で使用することができる。
【０３０３】
いくつかの態様では、結合作用物質が、細胞傷害性作用物質にコンジュゲートされる。いくつかの態様では、細胞傷害性作用物質が、メトトレキサート、アドリアマイシン（adriamicin）、ドキソルビシン、メルファラン、マイトマイシンC、クロラムブシル、ダウノルビシン、または他の挿入剤を含むがそれらに限定されるわけではない、化学療法剤である。いくつかの態様では、細胞傷害性作用物質が、ジフテリアA鎖、ジフテリア毒素の非結合性活性フラグメント、外毒素A鎖、リシンA鎖、アブリンA鎖、モデシンA鎖、アルファ-サルシン、シナアブラギリ（Aleurites fordii）タンパク質、ジアンチンタンパク質、ヨウシュヤマゴボウ（Phytolaca americana）タンパク質（PAPI、PAPII、およびPAP-S）、ニガウリ（Momordica charantia）インヒビター、クルシン、クロチン、サボウソウ（Sapaonaria officinalis）インヒビター、ゲロニン、ミトゲリン（mitogellin）、レストリクトシン、フェノマイシン（phenomycin）、エノマイシン（enomycin）、およびトリコテセン類を含むがそれらに限定されるわけではない、細菌起源、真菌起源、植物起源、または動物起源の酵素的に活性な毒素、またはそのフラグメントである。いくつかの態様では、細胞傷害性作用物質が、ラジオコンジュゲートまたはラジオコンジュゲート抗体を生産するための放射性同位体である。90Y、125I、131I、123I、111In、131In、105Rh、153Sm、67Cu、67Ga、166Ho、177Lu、186Re、188Reおよび212Biを含むがそれらに限定されるわけではない、さまざまな放射性核種を、ラジオコンジュゲート抗体の生産のために利用可能である。いくつかの態様では、抗体と、1つまたは複数の小分子毒素、例えば、カリケアマイシン、メイタンシノイド、トリコテン（trichothene）、およびCC1065、ならびに毒素活性を有するこれらの毒素の誘導体とのコンジュゲートを、生産することができる。一定の態様では、抗体と細胞傷害性作用物質とのコンジュゲートが、さまざまな二官能性タンパク質カップリング剤、例えばN-スクシンイミジル-3-(2-ピリジルジチオール)プロピオナート（SPDP）、イミノチオラン（IT）、イミドエステルの二官能性誘導体（例えばジメチルアジポイミダートHCL）、活性エステル（例えばスベリン酸ジスクシンイミジル）、アルデヒド（例えばグルタルアルデヒド）、ビス-アジド化合物（例えばビス(p-アジドベンゾイル）ヘキサンジアミン）、ビス-ジアゾニウム誘導体（例えばビス-(p-ジアゾニウムベンゾイル)-エチレンジアミン）、ジイソシアナート（例えばトルエン2,6-ジイソシアナート）、およびビス活性フッ素化合物（例えば1,5-ジフルオロ-2,4-ジニトロベンゼン）を用いて作製される。
【０３０４】
一定の態様では、RSPO-LGR経路インヒビター（例えば、抗体または可溶性受容体）が、少なくとも1種のRSPOタンパク質（すなわち、1、2、3、または4種のRSPOタンパク質）のアンタゴニストである。一定の態様では、RSPO-LGR経路インヒビターが、それが結合するRSPOタンパク質の活性を阻害する。一定の態様では、RSPO-LGR経路インヒビターが、それが結合するヒトRSPOタンパク質の活性の少なくとも約10％、少なくとも約20％、少なくとも約30％、少なくとも約50％、少なくとも約75％、少なくとも約90％、または約100％を阻害する。一定の態様では、RSPO-LGR経路インヒビターがRSPO3の活性を阻害する。
【０３０５】
一定の態様では、RSPO-LGR経路インヒビター（例えば、抗体または可溶性受容体）が、少なくとも1種のヒトRSPOの適当な受容体への結合を阻害する。一定の態様では、RSPO-LGR経路インヒビターが、少なくとも1種のヒトRSPOタンパク質の、1種または複数種のヒトLGRタンパク質への結合を阻害する。いくつかの態様では、少なくとも1種のRSPOタンパク質が、RSPO1、RSPO2、RSPO3、およびRSPO4からなる群より選択される。いくつかの態様では、少なくとも1種のRSPOタンパク質がRSPO3である。いくつかの態様では、1種または複数種のヒトLGRタンパク質が、LGR4、LGR5、およびLGR6からなる群より選択される。一定の態様では、RSPO-LGR経路インヒビターが、1種または複数種のRSPOタンパク質のLGR4、LGR5、および／またはLGR6への結合を阻害する。一定の態様では、RSPO-LGR経路インヒビターによる特定のRSPOのLGRタンパク質への結合の阻害が、少なくとも約10％、少なくとも約25％、少なくとも約50％、少なくとも約75％、少なくとも約90％、または少なくとも約95％である。一定の態様では、RSPOのLGRタンパク質への結合を阻害するRSPO-LGR経路インヒビターがまた、RSPO-LGR経路シグナル伝達も阻害する。一定の態様では、ヒトRSPO経路シグナル伝達を阻害するRSPO-LGR経路インヒビターが、抗体である。一定の態様では、ヒトRSPO-LGR経路シグナル伝達を阻害するRSPO-LGR経路インヒビターが、抗RSPO抗体である。一定の態様では、ヒトRSPO-LGR経路シグナル伝達を阻害するRSPO-LGR経路インヒビターが、抗RSPO3抗体である。一定の態様では、ヒトRSPO-LGR経路シグナル伝達を阻害するRSPO-LGR経路インヒビターが、OMP-131R010である。一定の態様では、ヒトRSPO-LGR経路シグナル伝達を阻害するRSPO-LGR経路インヒビターが、OMP-131R010の6つのCDRを含む抗体である。一定の態様では、ヒトRSPO-LGR経路シグナル伝達を阻害するRSPO-LGR経路インヒビターが、抗LGR抗体である。一定の態様では、ヒトRSPO-LGR経路シグナル伝達を阻害するRSPO-LGR経路インヒビターが、LGR-Fc可溶性受容体である。一定の態様では、ヒトRSPO-LGR経路シグナル伝達を阻害するRSPO-LGR経路インヒビターが、LGR5-Fc可溶性受容体である。一定の態様では、LGR5-Fc可溶性受容体が、SEQ ID NO:57のアミノ酸配列を含む。一定の態様では、LGR5-Fc可溶性受容体が、SEQ ID NO:63のアミノ酸配列を含む。
【０３０６】
一定の態様では、本明細書に記載するRSPO-LGR経路インヒビター（例えば、抗体または可溶性受容体）が、少なくとも1種のヒトRSPOタンパク質のアンタゴニストであり、RSPO活性を阻害する。一定の態様では、RSPO-LGR経路インヒビターが、RSPO活性を、少なくとも約10％、少なくとも約20％、少なくとも約30％、少なくとも約50％、少なくとも約75％、少なくとも約90％、または約100％阻害する。いくつかの態様では、RSPO-LGR経路インヒビターが、1、2、3、または4種のRSPOタンパク質の活性を阻害する。いくつかの態様では、RSPO-LGR経路インヒビターが、RSPO1、RSPO2、RSPO3、およびRSPO4からなる群より選択される少なくとも1種のヒトRSPOタンパク質の活性を阻害する。いくつかの態様では、RSPO結合作用物質が、少なくともRSPO3に結合する。一定の態様では、ヒトRSPO活性を阻害するRSPO-LGR経路インヒビターが、抗体である。一定の態様では、ヒトRSPO活性を阻害するRSPO-LGR経路インヒビターが、抗RSPO抗体である。一定の態様では、ヒトRSPO活性を阻害するRSPO-LGR経路インヒビターが、抗RSPO3抗体である。一定の態様では、ヒトRSPO活性を阻害するRSPO-LGR経路インヒビターが、OMP-131R010である。一定の態様では、ヒトRSPO活性を阻害するRSPO-LGR経路インヒビターが、OMP-131R010の6つのCDRを含む抗体である。一定の態様では、ヒトRSPO活性を阻害するRSPO-LGR経路インヒビターが、LGR-Fc可溶性受容体である。一定の態様では、ヒトRSPO活性を阻害するRSPO-LGR経路インヒビターが、LGR5-Fc可溶性受容体である。一定の態様では、LFR5-Fc可溶性受容体が、SEQ ID NO:57のアミノ酸配列を含む。一定の態様では、LGR5-Fc可溶性受容体が、SEQ ID NO:63のアミノ酸配列を含む。
【０３０７】
一定の態様では、本明細書に記載するRSPO-LGR経路インヒビターが、少なくとも1種のヒトLGRタンパク質のアンタゴニストであり、LGR活性を阻害する。一定の態様では、RSPO-LGR経路インヒビターが、LGR活性を、少なくとも約10％、少なくとも約20％、少なくとも約30％、少なくとも約50％、少なくとも約75％、少なくとも約90％、または約100％阻害する。いくつかの態様では、RSPO-LGR経路インヒビターが、LGR4、LGR5、およびLGR6からなる群より選択される少なくとも1種のヒトLGRタンパク質の活性を阻害する。一定の態様では、RSPO-LGR経路インヒビターが、LGR5の活性を阻害する。いくつかの態様では、RSPO-LGR経路インヒビターが、抗LGR抗体である。一定の態様では、RSPO-LGR経路インヒビターが、88M1の3つの重鎖CDR、および／または88M1の3つの軽鎖CDRを含む抗LGR抗体である。いくつかの態様では、抗LGR抗体が、88M1の重鎖可変領域、および／または88M1の軽鎖可変領域を含む。
【０３０８】
一定の態様では、本明細書に記載するRSPO-LGR経路インヒビターが、少なくとも1種のヒトRSPOタンパク質のアンタゴニストであり、RSPOシグナル伝達を阻害する。一定の態様では、RSPO-LGR経路インヒビターが、RSPOシグナル伝達を、少なくとも約10％、少なくとも約20％、少なくとも約30％、少なくとも約50％、少なくとも約75％、少なくとも約90％、または約100％阻害する。いくつかの態様では、RSPO-LGR経路インヒビターが、1、2、3、または4種のRSPOタンパク質によるシグナル伝達を阻害する。いくつかの態様では、RSPO-LGR経路インヒビターが、RSPO1、RSPO2、RSPO3、およびRSPO4からなる群より選択される少なくとも1種のRSPOタンパク質のシグナル伝達を阻害する。いくつかの態様では、RSPO-LGR経路インヒビターが、少なくともRSPO3のシグナル伝達を阻害する。一定の態様では、RSPOシグナル伝達を阻害するRSPO-LGR経路インヒビターが、抗体である。一定の態様では、RSPOシグナル伝達を阻害するRSPO-LGR経路インヒビターが、抗RSPO抗体である。一定の態様では、RSPOシグナル伝達を阻害するRSPO-LGR経路インヒビターが、抗RSPO3抗体である。一定の態様では、RSPOシグナル伝達を阻害するRSPO-LGR経路インヒビターが、OMP-131R010である。一定の態様では、RSPOシグナル伝達を阻害するRSPO-LGR経路インヒビターが、OMP-131R010の6つのCDRを含む抗体である。一定の態様では、RSPOシグナル伝達を阻害するRSPO-LGR経路インヒビターが、可溶性受容体である。一定の態様では、RSPOシグナル伝達を阻害するRSPO-LGR経路インヒビターが、LGR-Fc可溶性受容体である。一定の態様では、RSPOシグナル伝達を阻害するRSPO-LGR経路インヒビターが、LGR5-Fc可溶性受容体である。一定の態様では、LGR5-Fc可溶性受容体が、SEQ ID NO:57のアミノ酸配列を含む。一定の態様では、LGR5-Fc可溶性受容体が、SEQ ID NO:63のアミノ酸配列を含む。
【０３０９】
一定の態様では、本明細書に記載するRSPO-LGR経路インヒビターが、β-カテニンシグナル伝達のアンタゴニストである。一定の態様では、RSPO-LGR経路インヒビターが、β-カテニンシグナル伝達を、少なくとも約10％、少なくとも約20％、少なくとも約30％、少なくとも約50％、少なくとも約75％、少なくとも約90％、または約100％阻害する。一定の態様では、β-カテニンシグナル伝達を阻害するRSPO-LGR経路インヒビターが、抗体である。一定の態様では、β-カテニンシグナル伝達を阻害するRSPO-LGR経路インヒビターが、抗RSPO抗体である。一定の態様では、β-カテニンシグナル伝達を阻害するRSPO-LGR経路インヒビターが、抗RSPO3抗体である。一定の態様では、β-カテニンシグナル伝達を阻害するRSPO-LGR経路インヒビターが、OMP-131R010である。一定の態様では、β-カテニンシグナル伝達を阻害するRSPO-LGR経路インヒビターが、OMP-131R010の6つのCDRを含む抗体である。一定の態様では、β-カテニンシグナル伝達を阻害するRSPO-LGR経路インヒビターが、抗LGR抗体である。一定の態様では、β-カテニンシグナル伝達を阻害するRSPO-LGR経路インヒビターが、88M1の3つの重鎖CDR、および／または88M1の3つの軽鎖CDRを含む抗LGR抗体である。いくつかの態様では、抗LGR抗体が、88M1の重鎖可変領域、および／または88M1の軽鎖可変領域を含む。一定の態様では、β-カテニンシグナル伝達を阻害するRSPO-LGR経路インヒビターが、可溶性受容体である。一定の態様では、β-カテニンシグナル伝達を阻害するRSPO-LGR経路インヒビターが、LGR-Fc可溶性受容体である。一定の態様では、β-カテニンシグナル伝達を阻害するRSPO-LGR経路インヒビターが、LGR5-Fc可溶性受容体である。一定の態様では、LGR5-Fc可溶性受容体が、SEQ ID NO:57のアミノ酸配列を含む。一定の態様では、LGR5-Fc可溶性受容体が、SEQ ID NO:63のアミノ酸配列を含む。
【０３１０】
一定の態様では、本明細書に記載するRSPO-LGR経路インヒビターが、少なくとも1種のRSPOタンパク質の受容体への結合を阻害する。一定の態様では、RSPO-LGR経路インヒビターが、少なくとも1種のヒトRSPOタンパク質の、その受容体のうちの1種または複数種への結合を阻害する。いくつかの態様では、RSPO-LGR経路インヒビターが、少なくとも1種のRSPOタンパク質の少なくとも1種のLGRタンパク質への結合を阻害する。いくつかの態様では、RSPO結合作用物質が、少なくとも1種のRSPOタンパク質の、LGR4、LGR5、および／またはLGR6への結合を阻害する。一定の態様では、少なくとも1種のRSPOの少なくとも1種のLGRタンパク質への結合の阻害が、少なくとも約10％、少なくとも約25％、少なくとも約50％、少なくとも約75％、少なくとも約90％、または少なくとも約95％である。一定の態様では、少なくとも1種のRSPOの少なくとも1種のLGRタンパク質への結合を阻害するRSPO-LGR経路インヒビターがさらに、RSPO-LGR経路シグナル伝達および／またはβ-カテニンシグナル伝達を阻害する。一定の態様では、少なくとも1種のヒトRSPOの少なくとも1種のLGRタンパク質への結合を阻害するRSPO-LGR経路インヒビターが、抗体である。一定の態様では、少なくとも1種のヒトRSPOの少なくとも1種のLGRタンパク質への結合を阻害するRSPO-LGR経路インヒビターが、抗LGR抗体である。一定の態様では、少なくとも1種のヒトRSPOの少なくとも1種のLGRタンパク質への結合を阻害するRSPO-LGR経路インヒビターが、88M1の3つの重鎖CDR、および／または88M1の3つの軽鎖CDRを含む抗LGR抗体である。いくつかの態様では、抗LGR抗体が、88M1の重鎖可変領域、および／または88M1の軽鎖可変領域を含む。一定の態様では、少なくとも1種のヒトRSPOの少なくとも1種のLGRタンパク質への結合を阻害するRSPO-LGR経路インヒビターが、可溶性受容体である。一定の態様では、少なくとも1種のヒトRSPOの少なくとも1種のLGRタンパク質への結合を阻害するRSPO-LGR経路インヒビターが、LGR-Fc可溶性受容体である。一定の態様では、少なくとも1種のヒトRSPOの少なくとも1種のLGRタンパク質への結合を阻害するRSPO-LGR経路インヒビターが、LGR5-Fc可溶性受容体である。一定の態様では、LGR5-Fc可溶性受容体が、SEQ ID NO:57のアミノ酸配列を含む。一定の態様では、LGR5-Fc可溶性受容体が、SEQ ID NO:63のアミノ酸配列を含む。
【０３１１】
一定の態様では、本明細書に記載するRSPO-LGR経路インヒビターが、少なくとも1種のRSPOの受容体への結合を遮断する。一定の態様では、RSPO-LGR経路インヒビターが、少なくとも1種のヒトRSPOタンパク質の、その受容体のうちの1種または複数種への結合を遮断する。いくつかの態様では、RSPO-LGR経路インヒビターが、少なくとも1種のRSPOの少なくとも1種のLGRタンパク質への結合を遮断する。いくつかの態様では、RSPO-LGR経路インヒビターが、少なくとも1種のRSPOタンパク質の、LGR4、LGR5、および／またはLGR6への結合を遮断する。一定の態様では、少なくとも1種のRSPOの少なくとも1種のLGRタンパク質への結合の遮断が、少なくとも約10％、少なくとも約25％、少なくとも約50％、少なくとも約75％、少なくとも約90％、または少なくとも約95％である。一定の態様では、少なくとも1種のRSPOタンパク質の少なくとも1種のLGRタンパク質への結合を遮断するRSPO-LGR経路インヒビターがさらに、RSPO-LGR経路シグナル伝達および／またはβ-カテニンシグナル伝達を阻害する。一定の態様では、少なくとも1種のヒトRSPOの少なくとも1種のLGRタンパク質への結合を遮断するRSPO-LGR経路インヒビターが、抗体である。一定の態様では、少なくとも1種のヒトRSPOの少なくとも1種のLGRタンパク質への結合を遮断するRSPO-LGR経路インヒビターが、抗LGR抗体である。一定の態様では、少なくとも1種のヒトRSPOの少なくとも1種のLGRタンパク質への結合を遮断するRSPO-LGR経路インヒビターが、88M1の3つの重鎖CDR、および／または88M1の3つの軽鎖CDRを含む抗LGR抗体である。いくつかの態様では、抗LGR抗体が、88M1の重鎖可変領域、および／または88M1の軽鎖可変領域を含む。一定の態様では、少なくとも1種のヒトRSPOの少なくとも1種のLGRタンパク質への結合を遮断するRSPO-LGR経路インヒビターが、可溶性受容体である。一定の態様では、少なくとも1種のヒトRSPOの少なくとも1種のLGRタンパク質への結合を遮断するRSPO-LGR経路インヒビターが、LGR-Fc可溶性受容体である。一定の態様では、少なくとも1種のヒトRSPOの少なくとも1種のLGRタンパク質への結合を遮断するRSPO-LGR経路インヒビターが、LGR5-Fc可溶性受容体である。一定の態様では、LGR5-Fc可溶性受容体が、SEQ ID NO:57のアミノ酸配列を含む。一定の態様では、LGR5-Fc可溶性受容体が、SEQ ID NO:63のアミノ酸配列を含む。
【０３１２】
一定の態様では、本明細書に記載するRSPO-LGR経路インヒビターが、RSPO経路シグナル伝達を阻害する。RSPO-LGR経路シグナル伝達を阻害するRSPO-LGR経路インヒビターは、一定の態様では、RSPO-LGRシグナル伝達経路における1種または複数種の受容体によるシグナル伝達を阻害できるが、必ずしもすべての受容体によるシグナル伝達を阻害できるわけではないことが、理解される。一定の代替態様では、すべてのヒト受容体によるRSPO経路シグナル伝達を阻害することができる。一定の態様では、LGR4、LGR5、およびLGR6からなる群より選択される1種または複数種の受容体によるRSPO経路シグナル伝達が、阻害される。一定の態様では、RSPO-LGR経路インヒビターによるRSPO-LGR経路シグナル伝達の阻害が、少なくとも約10％、少なくとも約25％、少なくとも約50％、少なくとも約75％、少なくとも約90％、または少なくとも約95％の、RSPO-LGR経路シグナル伝達のレベルの低減である。いくつかの態様では、RSPO-LGR経路シグナル伝達を阻害するRSPO-LGR経路インヒビターが、抗体である。いくつかの態様では、RSPO-LGR経路シグナル伝達を阻害するRSPO-LGR経路インヒビターが、抗LGR抗体である。いくつかの態様では、RSPO-LGR経路シグナル伝達を阻害するRSPO-LGR経路インヒビターが、88M1の3つの重鎖CDR、および／または88M1の3つの軽鎖CDRを含む抗LGR抗体である。いくつかの態様では、抗LGR抗体が、88M1の重鎖可変領域、および／または88M1の軽鎖可変領域を含む。いくつかの態様では、RSPO-LGR経路シグナル伝達を阻害するRSPO-LGR経路インヒビターが、可溶性受容体である。いくつかの態様では、RSPO-LGR経路シグナル伝達を阻害するRSPO-LGR経路インヒビターが、LGR-Fc可溶性受容体である。いくつかの態様では、RSPO-LGR経路シグナル伝達を阻害するRSPO-LGR経路インヒビターが、LGR5-Fc可溶性受容体である。一定の態様では、LGR5-Fc可溶性受容体が、SEQ ID NO:57のアミノ酸配列を含む。一定の態様では、LGR5-Fc可溶性受容体が、SEQ ID NO:63のアミノ酸配列を含む。
【０３１３】
一定の態様では、本明細書に記載するRSPO-LGR経路インヒビターが、β-カテニンの活性化を阻害する。β-カテニンの活性化を阻害するRSPO-LGR経路インヒビターは、一定の態様では、1種または複数種の受容体によるβ-カテニンの活性化を阻害できるが、必ずしもすべての受容体によるβ-カテニンの活性化を阻害できるわけではないことが、理解される。一定の代替態様では、すべてのヒト受容体によるβ-カテニンの活性化を阻害することができる。一定の態様では、LGR4、LGR5、およびLGR6からなる群より選択される1種または複数種の受容体によるβ-カテニンの活性化が、阻害される。一定の態様では、RSPO結合作用物質またはLGR結合作用物質によるβ-カテニンの活性化の阻害が、少なくとも約10％、少なくとも約25％、少なくとも約50％、少なくとも約75％、少なくとも約90％、または少なくとも約95％の、β-カテニンの活性化のレベルの低減である。いくつかの態様では、β-カテニンの活性化を阻害するRSPO-LGR経路インヒビターが、抗体である。いくつかの態様では、β-カテニンの活性化を阻害するRSPO-LGR経路インヒビターが、抗LGR抗体である。いくつかの態様では、β-カテニンの活性化を阻害するRSPO-LGR経路インヒビターが、88M1の3つの重鎖CDR、および／または88M1の3つの軽鎖CDRを含む抗LGR抗体である。いくつかの態様では、抗LGR抗体が、88M1の重鎖可変領域、および／または88M1の軽鎖可変領域を含む。いくつかの態様では、β-カテニンの活性化を阻害するRSPO-LGR経路インヒビターが、可溶性受容体である。いくつかの態様では、β-カテニンの活性化を阻害するRSPO-LGR経路インヒビターが、LGR-Fc可溶性受容体である。いくつかの態様では、β-カテニンの活性化を阻害するRSPO-LGR経路インヒビターが、LGR5-Fc可溶性受容体である。一定の態様では、LGR5-Fc可溶性受容体が、SEQ ID NO:57のアミノ酸配列を含む。一定の態様では、LGR5-Fc可溶性受容体が、SEQ ID NO:63のアミノ酸配列を含む。
【０３１４】
一定の態様では、RSPO-LGR経路インヒビターが、以下の効果のうちの1つまたは複数を有する：腫瘍細胞の増殖を阻害する、腫瘍成長を阻害する、腫瘍におけるがん幹細胞の頻度を低減させる、腫瘍の腫瘍形成能を低減させる、腫瘍におけるがん幹細胞の頻度を低減させることによって腫瘍の腫瘍形成能を低減させる、腫瘍細胞の細胞死を引き起こす、腫瘍中の細胞の分化を誘発する、腫瘍形成性細胞を非腫瘍形成性状態へと分化させる、腫瘍細胞における分化マーカーの発現を誘発する、腫瘍細胞の転移を防止する、または腫瘍細胞の生存を減少させる。
【０３１５】
一定の態様では、RSPO-LGR経路インヒビターが、腫瘍成長を阻害する、および／または腫瘍サイズを低減させる能力を有する。一定の態様では、RSPO-LGR経路インヒビターが、インビボで（例えば、異種移植マウスモデルにおいて、および／またはがんを有するヒトにおいて）腫瘍成長を阻害する、および／または腫瘍サイズを低減させる能力を有する。いくつかの態様では、腫瘍が、結腸直腸腫瘍、結腸腫瘍、膵臓腫瘍、肺腫瘍、卵巣腫瘍、肝臓腫瘍、乳房腫瘍、腎臓腫瘍、前立腺腫瘍、胃腸腫瘍、メラノーマ、子宮頸部腫瘍、膀胱腫瘍、神経膠芽腫、および頭頸部腫瘍からなる群より選択される腫瘍である。一定の態様では、腫瘍が乳房腫瘍である。一定の態様では、腫瘍が卵巣腫瘍である。一定の態様では、腫瘍が肺腫瘍である。一定の態様では、腫瘍が膵臓腫瘍である。一定の態様では、腫瘍が、RSPO依存性腫瘍、LGR依存性腫瘍、またはβ-カテニン依存性腫瘍である。
【０３１６】
一定の態様では、RSPO-LGR経路インヒビターが、腫瘍の腫瘍形成能を低減させる能力を有する。一定の態様では、RSPO-LGR経路インヒビターが、動物モデル、例えばマウス異種移植モデルにおいて、がん幹細胞を含む腫瘍の腫瘍形成能を低減させる能力を有する。一定の態様では、腫瘍におけるがん幹細胞の数または頻度が、少なくとも約2分の1、約3分の1、約5分の1、約10分の1、約50分の1、約100分の1、または約1000分の1に低減される。一定の態様では、がん幹細胞の数または頻度の低減が、動物モデルを用いた限界希釈アッセイによって決定される。腫瘍におけるがん幹細胞の数または頻度の低減を決定するための限界希釈アッセイの使用に関する追加の例および指針は、例えば、国際公開公報第2008/042236号、ならびに米国特許出願公開第2008/0064049号および第2008/0178305号に見いだすことができ、これらの各々はこれにより、すべての目的でその全体が参照により本明細書に組み入れられる。
【０３１７】
一定の態様では、RSPO-LGR経路インヒビターが、少なくとも1時間、少なくとも約2時間、少なくとも約5時間、少なくとも約10時間、少なくとも約24時間、少なくとも約2日間、少なくとも約3日間、少なくとも約1週間、または少なくとも約2週間、インビボで活性である。一定の態様では、RSPO-LGR経路インヒビターが、少なくとも1時間、少なくとも約2時間、少なくとも約5時間、少なくとも約10時間、少なくとも約24時間、少なくとも約2日間、少なくとも約3日間、少なくとも約1週間、または少なくとも約2週間、インビボで活性なIgG（例えば、IgG1またはIgG2）抗体である。一定の態様では、RSPO-LGR経路インヒビターが、少なくとも1時間、少なくとも約2時間、少なくとも約5時間、少なくとも約10時間、少なくとも約24時間、少なくとも約2日間、少なくとも約3日間、少なくとも約1週間、または少なくとも約2週間、インビボで活性な融合タンパク質である。
【０３１８】
一定の態様では、RSPO-LGR経路インヒビターが、マウス、カニクイザル、またはヒトにおいて、少なくとも約5時間、少なくとも約10時間、少なくとも約24時間、少なくとも約2日間、少なくとも約3日間、少なくとも約1週間、または少なくとも約2週間の循環半減期を有する。一定の態様では、RSPO-LGR経路インヒビターが、マウス、カニクイザル、またはヒトにおいて、少なくとも約5時間、少なくとも約10時間、少なくとも約24時間、少なくとも約2日間、少なくとも約3日間、少なくとも約1週間、または少なくとも約2週間の循環半減期を有するIgG（例えば、IgG1またはIgG2）抗体である。一定の態様では、RSPO-LGR経路インヒビターが、マウス、カニクイザル、またはヒトにおいて、少なくとも約5時間、少なくとも約10時間、少なくとも約24時間、少なくとも約2日間、少なくとも約3日間、少なくとも約1週間、または少なくとも約2週間の循環半減期を有する融合タンパク質である。ポリペプチドおよび抗体などの作用物質の半減期を増大（または減少）させる方法は、当技術分野において公知である。例えば、IgG抗体の循環半減期を増大させる公知の方法には、抗体の新生児型Fc受容体（FcRn）へのpH依存性結合を増大させるFc領域への変異の導入が含まれる。Fc領域を欠く抗体フラグメントの循環半減期を増大させる公知の方法には、PEG化などの技法が含まれる。
【０３１９】
IV．有糸分裂インヒビター
RSPO-LGR経路インヒビターを有糸分裂インヒビターと併用して投与する工程を含む、腫瘍成長を阻害するため、腫瘍サイズを低減させるため、および／またはがんの処置のための方法を、本明細書に記載する。有糸分裂インヒビターまたは抗有糸分裂作用物質には、微小管結合剤、微小管酵素インヒビター、有糸分裂チェックポイントキナーゼ（CHK）インヒビター、および有糸分裂酵素インヒビターが含まれるが、それらに限定されるわけではない。微小管結合剤には、タキサン、タキソイド、ビンカアルカロイド、アルカロイド、エポチロン、およびハリコンドリンが含まれるが、それらに限定されるわけではない。
【０３２０】
いくつかの態様では、有糸分裂インヒビターが、タキサン、ビンカアルカロイド、エポチロン、またはハリコンドリンからなる群より選択される。いくつかの態様では、有糸分裂インヒビターがタキサンである。タキサンは、微小管脱重合の阻害（すなわち、微小管ポリマーの安定化）により有糸分裂細胞周期遮断を誘発する。有糸分裂細胞周期遮断は、有糸分裂の阻止およびアポトーシスをもたらす。いくつかの態様では、タキサンが、パクリタキセル（TAXOL）、nab-パクリタキセル（ABRAXANE）、ドセタキセル（TAXOTERE）、カバジタキセル（JEVTANA）、テセタキセル、ラロタキセル、オルタタキセル、DHA-パクリタキセル、PG-パクリタキセル、およびそれらの薬学的に許容される塩、酸、または誘導体からなる群より選択される。いくつかの態様では、タキサンがパクリタキセルである。いくつかの態様では、タキサンがnab-パクリタキセルである。いくつかの態様では、有糸分裂インヒビターがビンカアルカロイドである。いくつかの態様では、ビンカアルカロイドが、ビンブラスチン（VELBAN）、ビンクリスチン（MARQIBO）、ビノレルビン（NAVELBINE）、ビンカジホルミン、ビンデシン、ビンフルニン、ミノビンシン、およびそれらの薬学的に許容される塩、酸、または誘導体からなる群より選択される。いくつかの態様では、有糸分裂インヒビターが、ネオキサリンなどのアルカロイドである。いくつかの態様では、有糸分裂インヒビターがエポチロンである。いくつかの態様では、エポチロンがイクサベピロン（IXEMPRA）である。いくつかの態様では、有糸分裂インヒビターがハリコンドリンBである。いくつかの態様では、ハリコンドリンが類似体エリブリンメシラート（HALAVEN）である。いくつかの態様では、有糸分裂インヒビターが微小管酵素インヒビターである。いくつかの態様では、微小管酵素インヒビターが、ARQ 621、EMD 534085、およびLY2523355からなる群より選択される。いくつかの態様では、有糸分裂インヒビターが有糸分裂チェックポイントキナーゼインヒビターである。いくつかの態様では、有糸分裂チェックポイントキナーゼインヒビターがLY2603618である。いくつかの態様では、有糸分裂インヒビターが有糸分裂酵素インヒビターである。いくつかの態様では、有糸分裂酵素インヒビターがAurora AまたはPLK1のインヒビターである。いくつかの態様では、有糸分裂酵素インヒビターが、MLN8237、ENMD-0276、AZD1152、GSK1070916A、PHA-739358、SNS-314、CYC116、PF-03814735、AT9238、AS703569、およびBI 6727からなる群より選択される。
【実施例】
【０３２１】
実施例1
インビボ卵巣腫瘍モデルにおける、化学療法剤と併用した抗RSPO3抗体OMP-131R010の活性
本明細書に記載するOncoMed異種移植モデルは、最小限継代された患者由来の腫瘍検体からOncoMed Pharmaceuticalsで確立された。腫瘍検体を、病理学者が検査し、特定の腫瘍タイプとして分類した。任意の特定の腫瘍に対してさらなる解析が行われ、再分類が必要であるとみなされない限り、OncoMedは、これらの分類に依拠する。
【０３２２】
異種移植OMP-OV19卵巣腫瘍細胞（1×105細胞）の単一細胞懸濁液を、NOD/SCIDマウスに皮下注射した。腫瘍を、およそ120mm3の平均体積に達するまで、39日成長させた。腫瘍を有するマウスを、無作為化して4群に分けた（群あたりn＝8〜9の動物）。腫瘍を有するマウスを、（i）対照抗体、（ii）パクリタキセルのみ、（iii）同じ日に投薬した抗RSPO3抗体OMP-131R010＋パクリタキセル、または（iv）抗RSPO3抗体OMP-131R010＋パクリタキセル（該抗体はパクリタキセルの2日前に投与した）のいずれかで処置した。抗体を25mg/kgで調薬し、1週間おきに投与した。パクリタキセルを20mg/kgで調薬し、1週間おきに投与した。腫瘍体積を処置後の表示した日に測定し、図1Aに平均±標準誤差として示す。61日目の2種の併用処置群における個々の動物の腫瘍体積を、図1Bに示す。驚くべきことに、OMP-131R010をパクリタキセルの投与前に投与するOMP-131R010およびパクリタキセルの時間差投与は、同じ日の投薬よりも大きな腫瘍成長阻害をもたらした。実際に、OMP-131R010およびパクリタキセルの時間差投与は、腫瘍成長を阻害しただけではなく、処置の経過にわたって事実上腫瘍サイズを減少させた。
【０３２３】
実施例2
インビボ肺がんモデルにおける、化学療法剤と併用した抗RSPO3抗体OMP-131R010の活性
異種移植OMP-LU77肺腫瘍細胞（5×104細胞）の単一細胞懸濁液を、NOD/SCIDマウスに皮下注射した。腫瘍を、およそ125mm3の平均体積に達するまで、34日成長させた。腫瘍を有するマウスを、無作為化して4群に分けた（群あたりn＝9の動物）。腫瘍を有するマウスを、（i）対照抗体、（ii）パクリタキセルのみ、（iii）同じ日に投薬した抗RSPO3抗体OMP-131R010＋パクリタキセル、または（iv）抗RSPO3抗体OMP-131R010＋パクリタキセル（該抗体はパクリタキセルの2日前に投与した）で処置した。抗体を25mg/kgで調薬し、パクリタキセルを20mg/kgで調薬し、両作用物質を3週間に1回投与した。腫瘍体積を処置後の表示した日に測定した。結果を図2に示す。実施例1における卵巣腫瘍モデルで見られるように、OMP-131R010をパクリタキセルの投与前に投与するOMP-131R010およびパクリタキセルの時間差投与は、同じ日の投薬よりも大きな腫瘍成長阻害をもたらした。実際に、OMP-131R010およびパクリタキセルの時間差投与は、腫瘍成長を阻害しただけではなく、処置の経過にわたって事実上腫瘍サイズを減少させた。
【０３２４】
実施例3
インビボ結腸直腸がんモデルにおける、化学療法剤と併用した抗RSPO3抗体OMP-131R010の活性
異種移植OMP-C8結腸腫瘍細胞（5×104細胞）の単一細胞懸濁液を、NOD/SCIDマウスに皮下注射した。OMP-C8結腸腫瘍細胞は、APC遺伝子中に不活性化変異を含み、低レベルのRSPO3を発現する（データは示していない）。腫瘍を、およそ100mm3の平均体積に達するまで、23日成長させた。腫瘍を有するマウスを、無作為化して4群に分けた（群あたりn＝9の動物）。腫瘍を有するマウスを、（i）対照抗体、（ii）nab-パクリタキセル（ABRAXANE）のみ、（iii）同じ日に投薬した抗RSPO3抗体OMP-131R010＋nab-パクリタキセル、（iv）抗RSPO3抗体OMP-131R010＋nab-パクリタキセル（該抗体はパクリタキセルの2日前に投与した）、（v）フルオロウラシルおよびイリノテカン、（vi）同じ日に投薬した抗RSPO3抗体OMP-131R010＋フルオロウラシルおよびイリノテカン、または（vii）抗RSPO3抗体OMP-131R010＋フルオロウラシルおよびイリノテカン（該抗体はフルオロウラシルおよびイリノテカンの2日前に投与した）で処置した。抗体を25mg/kgで毎週投薬し、nab-パクリタキセルを30mg/kgで投薬し、フルオロウラシルを50mg/kgで投薬し、イリノテカンを5mg/kgで投薬した。抗体は1週間おきに投与し、化学療法は毎週施与した。腫瘍体積を処置後の表示した日に測定した。
【０３２５】
結果を、図3Aおよび図3Bに示す。OMP-131R010をnab-パクリタキセルの投与前に投与するOMP-131R010およびnab-パクリタキセルの時間差投与は、同じ日の投薬よりも大きな腫瘍成長阻害をもたらした。対照的に、フルオロウラシルおよびイリノテカンと併用したOMP-131R010の時間差投与は、同じ日の投薬よりも大きな腫瘍成長阻害をもたらさなかった。さらにまた、逐次様式で投与したOMP-131R010およびnab-パクリタキセルの併用は、腫瘍成長の阻害において、OMP-131R010の有糸分裂インヒビターではない化学療法剤との併用よりも大きい有効性を有していた。
【０３２６】
これらの研究は、特にRSPO-LGR経路インヒビターおよびパクリタキセルを逐次的に投与する場合に、投薬の順序が、腫瘍成長阻害の程度に有意な影響を及ぼしうることを示唆する。加えて、これらの研究は、タキサンは一般に、結腸がん処置または結腸直腸がん処置用の標準治療の治療剤と考えられていないが、抗RSPO3抗体と併用したタキサンは、結腸がんのための新たな処置選択肢でありうることを示唆する。
【０３２７】
本明細書に記載する実施例および態様は例示のために過ぎないこと、ならびに、それらに照らして種々の修飾または変更が、当業者には示唆され、それらは本願の本旨および範囲内に含まれるべきものであることが、理解される。
【０３２８】
本明細書において引用するすべての刊行物、特許、特許出願、インターネットサイト、ならびに、ポリヌクレオチド配列およびポリペプチド配列の両方を含むアクセッション番号／データベース配列は、これにより、各個々の刊行物、特許、特許出願、インターネットサイト、またはアクセッション番号／データベース配列が参照によりそのように組み入れられることを具体的にかつ個別に示した場合と同じ程度に、すべての目的でその全体が参照により本明細書に組み入れられる。
【０３２９】
以下は、本願において開示される配列である。
ヒトRSPO1アミノ酸配列（シグナル配列あり）（SEQ ID NO:1）
2018502833.tif 000062
ヒトRSPO2アミノ酸配列（シグナル配列あり）（SEQ ID NO:2）
2018502833.tif 000063
ヒトRSPO3アミノ酸配列（シグナル配列あり）（SEQ ID NO:3）
2018502833.tif 000064
ヒトRSPO4アミノ酸配列（シグナル配列あり）（SEQ ID NO:4）
2018502833.tif 000065
2018502833.tif 000066
h89M5-H8L5重鎖可変領域アミノ酸配列（SEQ ID NO:11）
2018502833.tif 000067
h89M5-H8L5軽鎖可変領域アミノ酸配列（SEQ ID NO:12）
2018502833.tif 000068
h89M5-H8L5重鎖アミノ酸配列（下線部は予測シグナル配列）（SEQ ID NO:13）
2018502833.tif 000069
h89M5-H8L5重鎖アミノ酸配列（予測シグナル配列なし）（SEQ ID NO:14）
2018502833.tif 000070
h89M5-H8L5軽鎖アミノ酸配列（下線部は予測シグナル配列）（SEQ ID NO:15）
2018502833.tif 000071
h89M5-H8L5軽鎖アミノ酸配列（予測シグナル配列なし）（SEQ ID NO:16）
2018502833.tif 000072
2018502833.tif 000073
h130M23-H1L6重鎖可変領域アミノ酸配列（SEQ ID NO:23）
2018502833.tif 000074
h130M23-H1L6軽鎖可変領域アミノ酸配列（SEQ ID NO:24）
2018502833.tif 000075
h130M23-H1L6重鎖アミノ酸配列（下線部は予測シグナル配列）（SEQ ID NO:25）
2018502833.tif 000076
h130M23-H1L6重鎖アミノ酸配列（予測シグナル配列なし）（SEQ ID NO:26）
2018502833.tif 000077
h130M23-H1L6軽鎖アミノ酸配列（下線部は予測シグナル配列）（SEQ ID NO:27）
2018502833.tif 000078
h130M23-H1L6軽鎖アミノ酸配列（予測シグナル配列なし）（SEQ ID NO:28）
2018502833.tif 000079
2018502833.tif 000080
131R010重鎖可変領域アミノ酸配列（SEQ ID NO:38）
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131R010軽鎖可変領域アミノ酸配列（SEQ ID NO:39）
2018502833.tif 000082
131R010重鎖アミノ酸配列（下線部は予測シグナル配列）（SEQ ID NO:40）
2018502833.tif 000083
131R010重鎖アミノ酸配列（予測シグナル配列なし）（SEQ ID NO:41）
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131R010軽鎖アミノ酸配列（下線部は予測シグナル配列）（SEQ ID NO:42）
2018502833.tif 000085
131R010軽鎖アミノ酸配列（予測シグナル配列なし）（SEQ ID NO:43）
2018502833.tif 000086
h89M5-H2L2重鎖可変領域アミノ酸配列（SEQ ID NO:44）
2018502833.tif 000087
h89M5-H2L2軽鎖可変領域アミノ酸配列（SEQ ID NO:45）
2018502833.tif 000088
h89M5-H2L2重鎖アミノ酸配列（下線部は予測シグナル配列）（SEQ ID NO:46）
2018502833.tif 000089
h89M5-H2L2重鎖アミノ酸配列（予測シグナル配列なし）（SEQ ID NO:47）
2018502833.tif 000090
h89M5-H2L2軽鎖アミノ酸配列（下線部は予測シグナル配列）（SEQ ID NO:48）
2018502833.tif 000091
h89M5-H2L2軽鎖アミノ酸配列（予測シグナル配列なし）（SEQ ID NO:49）
2018502833.tif 000092
h130M23-H1L2軽鎖可変領域アミノ酸配列（SEQ ID NO:50）
2018502833.tif 000093
h130M23-H1L2軽鎖アミノ酸配列（下線部は予測シグナル配列）（SEQ ID NO:51）
2018502833.tif 000094
h130M23-H1L2軽鎖アミノ酸配列（予測シグナル配列なし）（SEQ ID NO:52）
2018502833.tif 000095
ヒトLGR4タンパク質配列（NM_018490；SEQ ID NO:53）
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ヒトLGR5タンパク質配列（SEQ ID NO:54）
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ヒトLGR6タンパク質配列（BC047905；SEQ ID NO:55）
2018502833.tif 000098
LGR5 ECDアミノ酸22〜564（SEQ ID NO:56）
2018502833.tif 000099
LGR5-Fcタンパク質配列（SEQ ID NO:57）
2018502833.tif 000100
ヒトIgG1 Fc領域（SEQ ID NO:58）
2018502833.tif 000101
ヒトIgG1 Fc領域（SEQ ID NO:59）
2018502833.tif 000102
ヒトIgG1 Fc領域（SEQ ID NO:60）
2018502833.tif 000103
ヒトIgG1 Fc領域（SEQ ID NO:61）
2018502833.tif 000104
ヒトIgG2 Fc領域（SEQ ID NO:62）
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LGR5-Fcタンパク質配列（予測シグナル配列なし）（SEQ ID NO:63）
2018502833.tif 000106
【図１】
2018502833.tif 000118
【図２】
2018502833.tif 000119
【図３】
2018502833.tif 000120
【手続補正書】
【提出日】平成29年8月2日(2017.8.2)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】配列表
【補正方法】追加
【補正の内容】
【配列表】
2018502833000001.app
【国際調査報告】
2018502833.tif 000121
2018502833.tif 000122