(57)【要約】本発明は、好ましくは、疾患関連抗原またはハプテンに対するｓｃＦｖ抗体断片を含むＣＡＲ、ＣＡＲ−Ｔ、及びＣＡＲ−ＮＫコンストラクトに関する。より好ましくは、抗原は、ＴＡＡ、例えば、Ｔｒｏｐ−２である。コンストラクトは、疾患関連細胞に対する免疫反応を誘導するために、癌、自己免疫疾患、または免疫不全疾患などの疾患を有する対象に投与してもよい。コンストラクトがハプテンに結合する場合、対象を、疾患関連抗原に結合するハプテン複合化抗体でまず治療する。療法を、減量手順（例えば、手術、化学療法、放射線療法）または他の薬剤の共投与などの他の治療で補ってもよい。より好ましくは、コンストラクトの投与が、同じ疾患関連抗原に結合する非複合化抗体を前投与することによって先行される。最も好ましくは、ＣＤ７４またはＨＬＡ−ＤＲに対する抗体を投与して、コンストラクトによって誘導された全身免疫毒性を減少させる。【選択図】図７
2018522833.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
疾患に対する免疫反応の誘導方法であって、
ａ）対象に、疾患関連抗原に対する非複合化抗体を前投与すること；及び
ｂ）前記対象に、キメラ抗原受容体トランスフェクトＴ細胞（ＣＡＲ−Ｔ）、またはキメラ抗原受容体トランスフェクトＮＫ細胞（ＣＡＲ−ＮＫ）を投与すること、前記キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）は、同じ抗原に対する標的化抗体断片を含む
を含む、前記方法。
【請求項２】
前記非複合化抗体と前記標的化抗体断片は、前記抗原の同じエピトープに結合する、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記同じ抗体を、前記標的化抗体断片、及び前記非複合化抗体に使用する、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
前記抗原が、Ｂ細胞抗原であり、前記疾患が、造血器癌、自己免疫疾患、及び免疫系の機能不全からなる群から選択される、請求項１に記載の方法。
【請求項５】
前記Ｂ細胞抗原が、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２１、ＣＤ２２、ＣＤ４４、ＣＤ６２Ｌ、ＣＤ７４、ＣＤ７９ｂ、ＨＬＡ−ＤＲ、β７−インテグリン、及びＢＣＲからなる群から選択される、請求項４に記載の方法。
【請求項６】
前記抗原が、腫瘍関連抗原（ＴＡＡ）であり、前記疾患が、癌である、請求項１に記載の方法。
【請求項７】
前記ＴＡＡが、アルファ−フェトプロテイン（ＡＦＰ）、α−アクチニン−４、Ａ３、Ａ３３抗体に特異的な抗原、ＡＲＴ−４、Ｂ７、Ｂａ７３３、ＢＡＧＥ、ＢｒＥ３−抗原、ＣＡ１２５、ＣＡＭＥＬ、ＣＡＰ−１、炭酸脱水酵素ＩＸ、ＣＡＳＰ−８／ｍ、ＣＣＬ１９、ＣＣＬ２１、ＣＤ１、ＣＤｌａ、ＣＤ２、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ８、ＣＤ１１Ａ、ＣＤ１４、ＣＤ１５、ＣＤ１６、ＣＤ１８、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２１、ＣＤ２２、ＣＤ２３、ＣＤ２５、ＣＤ２９、ＣＤ３０、ＣＤ３２ｂ、ＣＤ３３、ＣＤ３７、ＣＤ３８、ＣＤ４０、ＣＤ４０Ｌ、ＣＤ４４、ＣＤ４５、ＣＤ４６、ＣＤ５２、ＣＤ５４、ＣＤ５５、ＣＤ５９、ＣＤ６４、ＣＤ６６ａ−ｅ、ＣＤ６７、ＣＤ７０、ＣＤ７０Ｌ、ＣＤ７４、ＣＤ７９ａ、ＣＤ７９ｂ、ＣＤ８０、ＣＤ８３、ＣＤ９５、ＣＤ１２６、ＣＤ１３２、ＣＤ１３３、ＣＤ１３８、ＣＤ１４７、ＣＤ１５４、ＣＤＣ２７、ＣＤＫ−４／ｍ、ＣＤＫＮ２Ａ、ＣＴＬＡ４、ＣＸＣＲ４、ＣＸＣＲ７、ＣＸＣＬ１２、ＨＩＦ−１α、結腸特異的抗原−ｐ（ＣＳＡｐ）、ＣＥＡ（ＣＥＡＣＡＭ−５）、ＣＥＡＣＡＭ−６、ｃ−Ｍｅｔ、ＤＡＭ、ＥＧＦＲ、ＥＧＦＲｖＩＩＩ、ＥＧＰ−１（ＴＲＯＰ−２）、ＥＧＰ−２、ＥＬＦ２−Ｍ、Ｅｐ−ＣＡＭ、線維芽細胞増殖因子（ＦＧＦ）、Ｆｉｔ−１、Ｆｌｔ−３、葉酸受容体、Ｇ２５０抗原、ＧＡＧＥ、ｇｐ１００、ＧＲＯ−β、ＨＬＡ−ＤＲ、ＨＭ１．２４、ヒト絨毛性ゴナドトロピン（ＨＣＧ）及びそのサブユニット、ＨＥＲ２／ｎｅｕ、ＨＭＧＢ−１、低酸素誘導因子（ＨＩＦ−１）、ＨＳＰ７０−２Ｍ、ＨＳＴ−２、Ｉａ、ＩＧＦ−１Ｒ、ＩＦＮ−γ、ＩＦＮ−α、ＩＦＮ−β、ＩＦＮ−λ、ＩＬ−４Ｒ、ＩＬ−６Ｒ、ＩＬ−１３Ｒ、ＩＬ−１５Ｒ、ＩＬ−１７Ｒ、ＩＬ−１８Ｒ、ＩＬ−２、ＩＬ−６、ＩＬ−８、ＩＬ−１２、ＩＬ−１５、ＩＬ−１７、ＩＬ−１８、ＩＬ−２３、ＩＬ−２５、インスリン様成長因子−１（ＩＧＦ−１）、ＫＣ４−抗原、ＫＳ−１−抗原、ＫＳ１−４、Ｌｅ−Ｙ、ＬＤＲ／ＦＵＴ、マクロファージ遊走阻止因子（ＭＩＦ）、ＭＡＧＥ、ＭＡＧＥ−３、ＭＡＲＴ−１、ＭＡＲＴ−２、ＮＹ−ＥＳＯ−１、ＴＲＡＧ−３、ｍＣＲＰ、ＭＣＰ−１、ＭＩＰ−１Ａ、ＭＩＰ−１Ｂ、ＭＩＦ、ＭＵＣ１、ＭＵＣ２、ＭＵＣ３、ＭＵＣ４、ＭＵＣ５ａｃ、ＭＵＣ１３、ＭＵＣ１６、ＭＵＭ−１／２、ＭＵＭ−３、ＮＣＡ６６、ＮＣＡ９５、ＮＣＡ９０、膵臓癌ムチン、ＰＤ１受容体、胎盤成長因子、ｐ５３、ＰＬＡＧＬ２、前立腺酸性フォスファターゼ、ＰＳＡ、ＰＲＡＭＥ、ＰＳＭＡ、Ｐ１ＧＦ、ＩＬＧＦ、ＩＬＧＦ−１Ｒ、ＩＬ−６、ＩＬ−２５、ＲＳ５、ＲＡＮＴＥＳ、Ｔ１０１、ＳＡＧＥ、Ｓ１００、スルビビン、スルビビン−２Ｂ、ＴＡＣ、ＴＡＧ−７２、テネイシン、ＴＲＡＩＬ受容体、ＴＮＦ−α、Ｔｎ抗原、Ｔｈｏｍｓｏｎ−Ｆｒｉｅｄｅｎｒｅｉｃｈ抗原、腫瘍壊死抗原、ＶＥＧＦＲ、ＥＤ−Ｂフィブロネクチン、ＷＴ−１、１７−１Ａ−抗原、補体因子Ｃ３、Ｃ３ａ、Ｃ３ｂ、Ｃ５ａ、Ｃ５、血管形成マーカー、ｂｃｌ−２、ｂｃｌ−６、Ｋｒａｓ、癌遺伝子マーカー、及び癌遺伝子産物からなる群から選択される、請求項６に記載の方法。
【請求項８】
前記抗体が、ｈＲ１（抗ＩＧＦ−１Ｒ）、ｈＰＡＭ４（抗ムチン）、ＫＣ４（抗ムチン）、ｈＡ２０（抗ＣＤ２０）、ｈＡ１９（抗ＣＤ１９）、ｈＩＭＭＵ３１（抗ＡＦＰ）、ｈＬＬ１（抗ＣＤ７４）、ｈＬＬ２（抗ＣＤ２２）、ＲＦＢ４（抗ＣＤ２２）、ｈＭｕ−９（抗ＣＳＡｐ）、ｈＬ２４３（抗ＨＬＡ−ＤＲ）、ｈＭＮ−１４（抗ＣＥＡＣＡＭ−５）、ｈＭＮ−１５（抗ＣＥＡＣＡＭ−６）、ｈＲＳ７（抗ＴＲＯＰ−２）、ｈＭＮ−３（抗ＣＥＡＣＡＭ−６）、ＣＣ４９（抗ＴＡＧ−７２）、Ｊ５９１（抗ＰＳＭＡ）、Ｄ２／Ｂ（抗ＰＳＭＡ）、Ｇ２５０（抗炭酸脱水酵素ＩＸ）、インフリキシマブ（抗ＴＮＦ−α）、セルトリズマブペゴル（抗ＴＮＦ−α）、アダリムマブ（抗ＴＮＦ−α）、アレムツズマブ（抗ＣＤ５２）、ベバシズマブ（抗ＶＥＧＦ）、セツキシマブ（抗ＥＧＦＲ）、ゲムツズマブ（抗ＣＤ３３）、イブリツモマブチウキセタン（抗ＣＤ２０）、パニツムマブ（抗ＥＧＦＲ）、リツキシマブ（抗ＣＤ２０）、トシツモマブ（抗ＣＤ２０）、ＧＡ１０１（抗ＣＤ２０）、トラスツズマブ（抗ＨＥＲ２／ｎｅｕ）、トシリズマブ（抗ＩＬ−６受容体）、バシリキシマブ（抗ＣＤ２５）、ダクリズマブ（抗ＣＤ２５）、エファリズマブ（抗ＣＤ１１ａ）、ムロモナブ−ＣＤ３（抗ＣＤ３受容体）、ナタリズマブ（抗α４インテグリン）、ＢＷＡ−３（抗ヒストンＨ２Ａ／Ｈ４）、ＬＧ２−１（抗ヒストンＨ３）、ＭＲＡ１２（抗抗ヒストンＨ１）、ＰＲ１−１（抗ヒストンＨ２Ｂ）、ＬＧ１１−２（抗ヒストンＨ２Ｂ）、及びＬＧ２−２（抗ヒストンＨ２Ｂ）からなる群から選択される、請求項３に記載の方法。
【請求項９】
前記ＣＡＲが、リーダーペプチド、リンカー配列、膜貫通ドメイン、エンドドメイン、及び共刺激ドメインからなる群から選択される１つ以上の要素をさらに含む、請求項１に記載の方法。
【請求項１０】
前記リーダーペプチドが、ＣＤ８αリーダーペプチドである、請求項９に記載の方法。
【請求項１１】
前記リーダーペプチドが、配列番号１８のアミノ酸配列を有する、請求項９に記載の方法。
【請求項１２】
前記リンカー配列が、ＣＤ８αヒンジを含む、請求項９に記載の方法。
【請求項１３】
前記エンドドメインが、ＣＤ２８エンドドメイン、及びＣＤ３ζエンドドメインからなる群から選択される、請求項９に記載の方法。
【請求項１４】
前記共刺激ドメインが、４−１ＢＢ、ＯＸ４０、Ｌｃｋ、ＤＡＰ１０、及びＩＣＯＳからなる群から選択される、請求項９に記載の方法。
【請求項１５】
前記対象に、（ｉ）インターフェロン；（ｉｉ）チェックポイント阻害剤抗体；（ｉｉｉ）抗体−薬物複合体（ＡＤＣ）；（ｉｖ）抗ＨＬＡ−ＤＲ抗体；及び（ｖ）抗ＣＤ７４抗体からなる群から選択される少なくとも１つの治療薬剤を投与することをさらに含む、請求項１に記載の方法。
【請求項１６】
前記インターフェロンが、インターフェロン−αである、請求項１５に記載の方法。
【請求項１７】
前記チェックポイント阻害剤抗体が、ラムブロリズマブ（ＭＫ−３４７５）、ニボルマブ（ＢＭＳ−９３６５５８）、ピジリズマブ（ＣＴ−０１１）、ＡＭＰ−２２４、ＭＤＸ−１１０５、ＭＥＤＩ４７３６、ＭＰＤＬ３２８０Ａ、ＢＭＳ−９３６５５９、イピリムマブ、リルルマブ、ＩＰＨ２１０１、及びトレメリムマブからなる群から選択される、請求項１５に記載の方法。
【請求項１８】
前記抗体−薬物複合体が、ｈＬＬ１−ドキソルビシン、ｈＲＳ７−ＳＮ−３８、ｈＭＮ−１４−ＳＮ−３８、ｈＬＬ２−ＳＮ−３８、ｈＡ２０−ＳＮ−３８、ｈＰＡＭ４−ＳＮ−３８、ｈＬＬ１−ＳＮ−３８、ｈＲＳ７−Ｐｒｏ−２−Ｐ−Ｄｏｘ、ｈＭＮ−１４−Ｐｒｏ−２−Ｐ−Ｄｏｘ、ｈＬＬ２−Ｐｒｏ−２−Ｐ−Ｄｏｘ、ｈＡ２０−Ｐｒｏ−２−Ｐ−Ｄｏｘ、ｈＰＡＭ４−Ｐｒｏ−２−Ｐ−Ｄｏｘ、ｈＬＬ１−Ｐｒｏ−２−Ｐ−Ｄｏｘ、Ｐ４／Ｄ１０−ドキソルビシン、ゲムツズマブオゾガマイシン、ブレンツキシマブベドチン、トラスツズマブエムタンシン、イノツズマブオゾガマイシン、グレムバツモマブベドチン、ＳＡＲ３４１９、ＳＡＲ５６６６５８、ＢＩＩＢ０１５、ＢＴ０６２、ＳＧＮ−７５、ＳＧＮ−ＣＤ１９Ａ、ＡＭＧ−１７２、ＡＭＧ−５９５、ＢＡＹ−９４−９３４３、ＡＳＧ−５ＭＥ、ＡＳＧ−２２ＭＥ、ＡＳＧ−１６Ｍ８Ｆ、ＭＤＸ−１２０３、ＭＬＮ−０２６４、抗ＰＳＭＡ  ＡＤＣ、ＲＧ−７４５０、ＲＧ−７４５８、ＲＧ−７５９３、ＲＧ−７５９６、ＲＧ−７５９８、ＲＧ−７５９９、ＲＧ−７６００、ＲＧ−７６３６、ＡＢＴ−４１４、ＩＭＧＮ−８５３、ＩＭＧＮ−５２９、ボルセツズマブマホドチン、及びロルボツズマブメルタンシンからなる群から選択される、請求項１５に記載の方法。
【請求項１９】
前記抗ＣＤ７４抗体が、ｈＬＬ１（ミラツズマブ）であるかまたは、前記抗ＨＬＡ−ＤＲ抗体が、ｈＬ２４３である、請求項１５に記載の方法。
【請求項２０】
前記造血器癌が、Ｂ細胞白血病、Ｂ細胞リンパ腫、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫、バーキットリンパ腫、マントル細胞リンパ腫、急性リンパ性白血病、慢性リンパ性白血病、ヘアリー細胞白血病、多発性骨髄腫、及びワルデンシュトレームマクログロブリン血症からなる群から選択される、請求項４に記載の方法。
【請求項２１】
前記造血器癌が、非ホジキンリンパ腫または慢性リンパ性白血病である、請求項２０に記載の方法。
【請求項２２】
前記自己免疫疾患が、急性特発性血小板減少性紫斑病、慢性特発性血小板減少性紫斑病、皮膚筋炎、シデナム舞踏病、重症筋無力症、全身性エリテマトーデス、ループス腎炎、リウマチ熱、多腺性症候群、水疱性類天疱瘡、糖尿病、ヘノッホ・シェーンライン紫斑病、連鎖球菌感染後腎炎、結節性紅斑、高安動脈炎、ＡＮＣＡ関連血管炎、アジソン病、関節リウマチ、多発性硬化症、サルコイドーシス、潰瘍性大腸炎、多形性紅斑、ＩｇＡ腎症、結節性多発動脈炎、強直性脊椎炎、グッドパスチャー症候群、閉塞性血栓血管炎、シェーグレン症候群、原発性胆汁性肝硬変、橋本甲状腺炎、甲状腺中毒症、強皮症、慢性活動性肝炎、多発性筋炎／皮膚筋炎、多発性軟骨炎、水疱性類天疱瘡、尋常性天疱瘡、ヴェーゲナー肉芽腫症、膜性腎症、筋萎縮性側索硬化症、脊髄癆、巨細胞性動脈炎／多発性筋痛、悪性貧血、急速進行性糸球体腎炎、乾癬、及び線維化性肺胞炎からなる群から選択される、請求項４に記載の方法。
【請求項２３】
前記自己免疫疾患が、ＳＬＥ（全身性エリテマトーデス）である、請求項４に記載の方法。
【請求項２４】
前記免疫不全疾患が、移植片対宿主病、臓器移植拒絶、敗血症（ｓｅｐｔｉｃｅｍｉａ）、敗血症（ｓｅｐｓｉｓ）、及び炎症からなる群から選択される、請求項４に記載の方法。
【請求項２５】
前記癌が、Ｂ細胞リンパ腫、Ｂ細胞白血病、大腸癌、胃癌、食道癌、甲状腺髄様癌、腎臓癌、乳癌、肺癌、膵臓癌、膀胱癌、卵巣癌、子宮癌、子宮頸癌、精巣癌、前立腺癌、肝臓癌、皮膚癌、骨癌、脳癌、直腸癌、及び黒色腫からなる群から選択される、請求項６に記載の方法。
【請求項２６】
前記対象に、第２抗体またはその抗原結合断片、薬物、毒素、酵素、細胞毒性薬剤、抗血管形成薬剤、プロアポトーシス薬剤、抗生物質、ホルモン、免疫賦活剤、サイトカイン、ケモカイン、アンチセンスオリゴヌクレオチド、小分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）、ホウ素化合物、及び放射性同位体からなる群から選択される治療薬剤を投与することをさらに含む、請求項１に記載の方法。
【請求項２７】
非複合化抗体を前投与することが、正常細胞に対する細胞毒性を減少させるが、疾患関連細胞に対する免疫反応を防止しない、請求項１に記載の方法。
【請求項２８】
前記前投与を、ＣＡＲ−ＴまたはＣＡＲ−ＮＫの投与の１〜１０日前に投与する、請求項１に記載の方法。
【請求項２９】
前記前投与を、ＣＡＲ−ＴまたはＣＡＲ−ＮＫの投与の３〜７日前に投与する、請求項２８に記載の方法。
【請求項３０】
前記前投与を、ＣＡＲ−ＴまたはＣＡＲ−ＮＫの投与の４〜６日前に投与する、請求項２６に記載の方法。
【請求項３１】
前記前投与の投与を、最長７日間の遅延の後に繰り返す、請求項２８に記載の方法。
【請求項３２】
前記非複合化抗体が、キメラ、ヒト化、またはヒト抗体である、請求項１に記載の方法。
【請求項３３】
前記非複合化抗体が、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、またはＩｇＧ４定常領域配列を有する、請求項１に記載の方法。
【請求項３４】
前記非複合化抗体が、ＩｇＧ４定常領域、及びＳｅｒ２４１Ｐｒｏヒンジ突然変異を有する、請求項１に記載の方法。
【請求項３５】
前記抗体断片が、ｓｃＦｖまたはＦａｂ抗体断片である、請求項１に記載の方法。
【請求項３６】
前記ＣＡＲ−Ｔが、トランスフェクトＣＤ８＋Ｔ細胞及び／またはＣＤ８＋メモリーＴ細胞を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項３７】
前記ＣＡＲ−ＮＫが、初代ＮＫ細胞、ＮＫ−９２、ＮＫ−９２．２６．５、ＮＫ  ９２．ＭＩ、ＮＫ−９２Ｃｉ、ＮＫ−９２Ｆｃ、ＮＫ３．３、ＮＫＬ、ＮＫＧ、ＮＫ−ＹＴ、ＮＫ−ＹＴＳ、ＫＨＹＧ−１、及びＨＡＴＡＫ細胞からなる群から選択されるＮＫ細胞を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項３８】
疾患に対する免疫反応の誘導方法であって、
ａ）対象に、疾患関連抗原に対する非複合化抗体を前投与すること；
ｂ）前記対象に、同じ抗原に対するハプテン複合体抗体を投与すること；及び
ｃ）前記対象に、ＣＡＲ−ＴまたはＣＡＲ−ＮＫを投与すること、前記キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）が、抗ハプテン抗体断片を含む
を含む、前記方法。
【請求項３９】
前記ハプテンが、ＨＳＧまたはＩｎ−ＤＴＰＡである、請求項３８に記載の方法。
【請求項４０】
前記抗ハプテン抗体が、ｈ６７９またはｈ７３４である、請求項３９に記載の方法。
【請求項４１】
前記非複合化抗体と前記ハプテン複合化抗体断片が、前記疾患関連抗原の同じエピトープに結合する、請求項３８に記載の方法。
【請求項４２】
前記同じ抗体を、前記ハプテン複合化抗体断片、及び前記非複合化抗体に使用する、請求項３８に記載の方法。
【請求項４３】
前記抗原が、Ｂ細胞抗原であり、前記疾患が、造血器癌、自己免疫疾患、及び免疫系の機能不全からなる群から選択される、請求項３８に記載の方法。
【請求項４４】
前記Ｂ細胞抗原が、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２１、ＣＤ２２、ＣＤ４４、ＣＤ６２Ｌ、ＣＤ７４、ＣＤ７９ｂ、ＨＬＡ−ＤＲ、β７−インテグリン、及びＢＣＲからなる群から選択される、請求項４３に記載の方法。
【請求項４５】
前記抗原が、腫瘍関連抗原（ＴＡＡ）であり、前記疾患が、癌である、請求項３８に記載の方法。
【請求項４６】
前記ＴＡＡが、アルファ−フェトプロテイン（ＡＦＰ）、α−アクチニン−４、Ａ３、Ａ３３抗体に特異的な抗原、ＡＲＴ−４、Ｂ７、Ｂａ７３３、ＢＡＧＥ、ＢｒＥ３−抗原、ＣＡ１２５、ＣＡＭＥＬ、ＣＡＰ−１、炭酸脱水酵素ＩＸ、ＣＡＳＰ−８／ｍ、ＣＣＬ１９、ＣＣＬ２１、ＣＤ１、ＣＤ１ａ、ＣＤ２、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ８、ＣＤ１１Ａ、ＣＤ１４、ＣＤ１５、ＣＤ１６、ＣＤ１８、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２１、ＣＤ２２、ＣＤ２３、ＣＤ２５、ＣＤ２９、ＣＤ３０、ＣＤ３２ｂ、ＣＤ３３、ＣＤ３７、ＣＤ３８、ＣＤ４０、ＣＤ４０Ｌ、ＣＤ４４、ＣＤ４５、ＣＤ４６、ＣＤ５２、ＣＤ５４、ＣＤ５５、ＣＤ５９、ＣＤ６４、ＣＤ６６ａ−ｅ、ＣＤ６７、ＣＤ７０、ＣＤ７０Ｌ、ＣＤ７４、ＣＤ７９ａ、ＣＤ７９ｂ、ＣＤ８０、ＣＤ８３、ＣＤ９５、ＣＤ１２６、ＣＤ１３２、ＣＤ１３３、ＣＤ１３８、ＣＤ１４７、ＣＤ１５４、ＣＤＣ２７、ＣＤＫ−４／ｍ、ＣＤＫＮ２Ａ、ＣＴＬＡ４、ＣＸＣＲ４、ＣＸＣＲ７、ＣＸＣＬ１２、ＨＩＦ−１α、結腸特異的抗原−ｐ（ＣＳＡｐ）、ＣＥＡ（ＣＥＡＣＡＭ−５）、ＣＥＡＣＡＭ−６、ｃ−Ｍｅｔ、ＤＡＭ、ＥＧＦＲ、ＥＧＦＲｖＩＩＩ、ＥＧＰ−１（ＴＲＯＰ−２）、ＥＧＰ−２、ＥＬＦ２−Ｍ、Ｅｐ−ＣＡＭ、線維芽細胞増殖因子（ＦＧＦ）、Ｆｌｔ−１、Ｆｌｔ−３、葉酸受容体、Ｇ２５０抗原、ＧＡＧＥ、ｇｐ１００、ＧＲＯ−β、ＨＬＡ−ＤＲ、ＨＭ１．２４、ヒト絨毛性ゴナドトロピン（ＨＣＧ）及びそのサブユニット、ＨＥＲ２／ｎｅｕ、ＨＭＧＢ−１、低酸素誘導因子（ＨＩＦ−１）、ＨＳＰ７０−２Ｍ、ＨＳＴ−２、Ｉａ、ＩＧＦ−１Ｒ、ＩＦＮ−γ、ＩＦＮ−α、ＩＦＮ−β、ＩＦＮ−λ、ＩＬ−４Ｒ、ＩＬ−６Ｒ、ＩＬ−１３Ｒ、ＩＬ−１５Ｒ、ＩＬ−１７Ｒ、ＩＬ−１８Ｒ、ＩＬ−２、ＩＬ−６、ＩＬ−８、ＩＬ−１２、ＩＬ−１５、ＩＬ−１７、ＩＬ−１８、ＩＬ−２３、ＩＬ−２５、インスリン様成長因子−１（ＩＧＦ−１）、ＫＣ４−抗原、ＫＳ−１−抗原、ＫＳ１−４、Ｌｅ−Ｙ、ＬＤＲ／ＦＵＴ、マクロファージ遊走阻止因子（ＭＩＦ）、ＭＡＧＥ、ＭＡＧＥ−３、ＭＡＲＴ−１、ＭＡＲＴ−２、ＮＹ−ＥＳＯ−１、ＴＲＡＧ−３、ｍＣＲＰ、ＭＣＰ−１、ＭＩＰ−１Ａ、ＭＩＰ−１Ｂ、ＭＩＦ、ＭＵＣ１、ＭＵＣ２、ＭＵＣ３、ＭＵＣ４、ＭＵＣ５ａｃ、ＭＵＣ１３、ＭＵＣ１６、ＭＵＭ−１／２、ＭＵＭ−３、ＮＣＡ６６、ＮＣＡ９５、ＮＣＡ９０、膵臓癌ムチン、ＰＤ１受容体、胎盤成長因子、ｐ５３、ＰＬＡＧＬ２、前立腺酸性フォスファターゼ、ＰＳＡ、ＰＲＡＭＥ、ＰＳＭＡ、ＰｌＧＦ、ＩＬＧＦ、ＩＬＧＦ−１Ｒ、ＩＬ−６、ＩＬ−２５、ＲＳ５、ＲＡＮＴＥＳ、Ｔ１０１、ＳＡＧＥ、Ｓ１００、スルビビン、スルビビン−２Ｂ、ＴＡＣ、ＴＡＧ−７２、テネイシン、ＴＲＡＩＬ受容体、ＴＮＦ−α、Ｔｎ抗原、Ｔｈｏｍｓｏｎ−Ｆｒｉｅｄｅｎｒｅｉｃｈ抗原、腫瘍壊死抗原、ＶＥＧＦＲ、ＥＤ−Ｂフィブロネクチン、ＷＴ−１、１７−１Ａ−抗原、補体因子Ｃ３、Ｃ３ａ、Ｃ３ｂ、Ｃ５ａ、Ｃ５、血管形成マーカー、ｂｃｌ−２、ｂｃｌ−６、Ｋｒａｓ、癌遺伝子マーカー、及び癌遺伝子産物からなる群から選択される、請求項４５に記載の方法。
【請求項４７】
前記抗体が、ｈＲ１（抗ＩＧＦ−１Ｒ）、ｈＰＡＭ４（抗ムチン）、ＫＣ４（抗ムチン）、ｈＡ２０（抗ＣＤ２０）、ｈＡ１９（抗ＣＤ１９）、ｈＩＭＭＵ３１（抗ＡＦＰ）、ｈＬＬ１（抗ＣＤ７４）、ｈＬＬ２（抗ＣＤ２２）、ＲＦＢ４（抗ＣＤ２２）、ｈＭｕ−９（抗ＣＳＡｐ）、ｈＬ２４３（抗ＨＬＡ−ＤＲ）、ｈＭＮ−１４（抗ＣＥＡＣＡＭ−５）、ｈＭＮ−１５（抗ＣＥＡＣＡＭ−６）、ｈＲＳ７（抗ＴＲＯＰ−２）、ｈＭＮ−３（抗ＣＥＡＣＡＭ−６）、ＣＣ４９（抗ＴＡＧ−７２）、Ｊ５９１（抗ＰＳＭＡ）、Ｄ２／Ｂ（抗ＰＳＭＡ）、Ｇ２５０（抗炭酸脱水酵素ＩＸ）、インフリキシマブ（抗ＴＮＦ−α）、セルトリズマブペゴル（抗ＴＮＦ−α）、アダリムマブ（抗ＴＮＦ−α）、アレムツズマブ（抗ＣＤ５２）、ベバシズマブ（抗ＶＥＧＦ）、セツキシマブ（抗ＥＧＦＲ）、ゲムツズマブ（抗ＣＤ３３）、イブリツモマブチウキセタン（抗ＣＤ２０）、パニツムマブ（抗ＥＧＦＲ）、リツキシマブ（抗ＣＤ２０）、トシツモマブ（抗ＣＤ２０）、ＧＡ１０１（抗ＣＤ２０）、トラスツズマブ（抗ＨＥＲ２／ｎｅｕ）、トシリズマブ（抗ＩＬ−６受容体）、バシリキシマブ（抗ＣＤ２５）、ダクリズマブ（抗ＣＤ２５）、エファリズマブ（抗ＣＤ１１ａ）、ムロモナブ−ＣＤ３（抗ＣＤ３受容体）、ナタリズマブ（抗α４インテグリン）、ＢＷＡ−３（抗ヒストンＨ２Ａ／Ｈ４）、ＬＧ２−１（抗ヒストンＨ３）、ＭＲＡ１２（抗抗ヒストンＨ１）、ＰＲ１−１（抗ヒストンＨ２Ｂ）、ＬＧ１１−２（抗ヒストンＨ２Ｂ）、及びＬＧ２−２（抗ヒストンＨ２Ｂ）からなる群から選択される、請求項４２に記載の方法。
【請求項４８】
前記対象に、（ｉ）インターフェロン；（ｉｉ）チェックポイント阻害剤抗体；及び（ｉｉｉ）抗体−薬物複合体（ＡＤＣ）からなる群から選択される少なくとも１つの治療薬剤を投与することをさらに含む、請求項３８に記載の方法。
【請求項４９】
前記対象に、薬物、毒素、酵素、細胞毒性薬剤、抗血管形成薬剤、プロアポトーシス薬剤、抗生物質、ホルモン、免疫賦活剤、サイトカイン、ケモカイン、アンチセンスオリゴヌクレオチド、小分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）、ホウ素化合物、及び放射性同位体からなる群から選択される治療薬剤を投与することをさらに含む、請求項３８に記載の方法。
【請求項５０】
非複合化抗体を前投与することが、正常細胞に対する細胞毒性を減少させるが、疾患関連細胞に対する免疫反応を防止しない、請求項３８に記載の方法。
【請求項５１】
前記前投与を、ＣＡＲ−ＴまたはＣＡＲ−ＮＫの投与の１〜１０日前に投与する、請求項３８に記載の方法。
【請求項５２】
前記前投与を、ＣＡＲ−ＴまたはＣＡＲ−ＮＫの投与の３〜７日前に投与する、請求項５１に記載の方法。
【請求項５３】
前記前投与を、ＣＡＲ−ＴまたはＣＡＲ−ＮＫの投与の４〜６日前に投与する、請求項５１に記載の方法。
【請求項５４】
前記前投与の投与を、最長７日間の遅延の後に繰り返す、請求項３８に記載の方法。
【請求項５５】
前記非複合化抗体が、キメラ、ヒト化、またはヒト抗体である、請求項３８に記載の方法。
【請求項５６】
前記非複合化抗体が、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、またはＩｇＧ４定常領域配列を有する、請求項３８に記載の方法。
【請求項５７】
前記非複合化抗体が、ＩｇＧ４定常領域、及びＳｅｒ２４１Ｐｒｏヒンジ突然変異を有する、請求項３８に記載の方法。
【請求項５８】
抗ハプテン抗体断片を含む、ＣＡＲコンストラクト。
【請求項５９】
請求項５８に記載のＣＡＲコンストラクトで形質導入されたＴ細胞（ＣＡＲ−Ｔ）またはＮＫ細胞（ＣＡＲ−ＮＫ）。
【請求項６０】
請求項５６に記載のＣＡＲ−ＴまたはＣＡＲ−ＮＫを含む、医薬組成物。
【請求項６１】
前記ＣＡＲが、リーダーペプチド、リンカー配列、膜貫通ドメイン、エンドドメイン、及び共刺激ドメインからなる群から選択される１つ以上の要素をさらに含む、請求項３８に記載の方法。
【請求項６２】
前記リーダーペプチドが、ＣＤ８αリーダーペプチドであり、前記リンカー配列が、ＣＤ８αヒンジを含み、前記エンドドメインが、ＣＤ２８エンドドメイン、及びＣＤ３ζエンドドメインからなる群から選択され、及び／または前記共刺激ドメインが、４−１ＢＢ、ＯＸ４０、Ｌｃｋ、ＤＡＰ１０、及びＩＣＯＳからなる群から選択される、請求項６１に記載の方法。
【請求項６３】
Ｔｒｏｐ−２を発現する癌に対する免疫反応の誘導方法であって、
Ｔｒｏｐ−２を発現する癌を有する対象に、ＣＡＲ−ＴまたはＣＡＲ−ＮＫを投与することを含み、
前記キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）が、抗Ｔｒｏｐ−２抗体断片を含む、前記方法。
【請求項６４】
前記対象に、（ｉ）インターフェロン；（ｉｉ）チェックポイント阻害剤抗体；（ｉｉｉ）抗体−薬物複合体（ＡＤＣ）；（ｉｖ）抗ＨＬＡ−ＤＲ抗体；及び（ｖ）抗ＣＤ７４抗体からなる群から選択される少なくとも１つの治療薬剤を投与することをさらに含む、請求項６３に記載の方法。
【請求項６５】
前記インターフェロンが、インターフェロン−αであり、前記チェックポイント阻害剤抗体が、ラムブロリズマブ（ＭＫ−３４７５）、ニボルマブ（ＢＭＳ−９３６５５８）、ピジリズマブ（ＣＴ−０１１）、ＡＭＰ−２２４、ＭＤＸ−１１０５、ＭＥＤＩ４７３６、ＭＰＤＬ３２８０Ａ、ＢＭＳ−９３６５５９、イピリムマブ、リルルマブ、ＩＰＨ２１０１、及びトレメリムマブからなる群から選択され、及び／または前記抗体−薬物複合体が、ｈＬＬ１−ドキソルビシン、ｈＲＳ７−ＳＮ−３８、ｈＭＮ−１４−ＳＮ−３８、ｈＬＬ２−ＳＮ−３８、ｈＡ２０−ＳＮ−３８、ｈＰＡＭ４−ＳＮ−３８、ｈＬＬ１−ＳＮ−３８、ｈＲＳ７−Ｐｒｏ−２−Ｐ−Ｄｏｘ、ｈＭＮ−１４−Ｐｒｏ−２−Ｐ−Ｄｏｘ、ｈＬＬ２−Ｐｒｏ−２−Ｐ−Ｄｏｘ、ｈＡ２０−Ｐｒｏ−２−Ｐ−Ｄｏｘ、ｈＰＡＭ４−Ｐｒｏ−２−Ｐ−Ｄｏｘ、ｈＬＬ１−Ｐｒｏ−２−Ｐ−Ｄｏｘ、Ｐ４／Ｄ１０−ドキソルビシン、ゲムツズマブオゾガマイシン、ブレンツキシマブベドチン、トラスツズマブエムタンシン、イノツズマブオゾガマイシン、グレムバツモマブベドチン、ＳＡＲ３４１９、ＳＡＲ５６６６５８、ＢＩＩＢ０１５、ＢＴ０６２、ＳＧＮ−７５、ＳＧＮ−ＣＤ１９Ａ、ＡＭＧ−１７２、ＡＭＧ−５９５、ＢＡＹ−９４−９３４３、ＡＳＧ−５ＭＥ、ＡＳＧ−２２ＭＥ、ＡＳＧ−１６Ｍ８Ｆ、ＭＤＸ−１２０３、ＭＬＮ−０２６４、抗ＰＳＭＡ  ＡＤＣ、ＲＧ−７４５０、ＲＧ−７４５８、ＲＧ−７５９３、ＲＧ−７５９６、ＲＧ−７５９８、ＲＧ−７５９９、ＲＧ−７６００、ＲＧ−７６３６、ＡＢＴ−４１４、ＩＭＧＮ−８５３、ＩＭＧＮ−５２９、ボルセツズマブマホドチン、及びロルボツズマブメルタンシンからなる群から選択される、請求項６４に記載の方法。
【請求項６６】
前記抗ＣＤ７４抗体が、ｈＬＬ１（ミラツズマブ）であるかまたは、前記抗ＨＬＡ−ＤＲ抗体が、ｈＬ２４３である、請求項６４に記載の方法。
【請求項６７】
前記Ｔｒｏｐ−２を発現する癌が、食道、膵臓、肺、胃、結腸、直腸、膀胱、乳房、卵巣、子宮、腎臓、または前立腺の癌腫である、請求項６３に記載の方法。
【請求項６８】
前記対象に、第２抗体またはその抗原結合断片、薬物、毒素、酵素、細胞毒性薬剤、抗血管形成薬剤、プロアポトーシス薬剤、抗生物質、ホルモン、免疫賦活剤、サイトカイン、ケモカイン、アンチセンスオリゴヌクレオチド、小分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）、ホウ素化合物、及び放射性同位体からなる群から選択される治療薬剤を投与することをさらに含む、請求項６３に記載の方法。
【請求項６９】
抗Ｔｒｏｐ−２抗体断片を含む、ＣＡＲコンストラクト。
【請求項７０】
前記ＣＡＲが、リーダーペプチド、リンカー配列、膜貫通ドメイン、エンドドメイン、及び共刺激ドメインからなる群から選択される１つ以上の要素をさらに含む、請求項６９に記載のＣＡＲコンストラクト。
【請求項７１】
請求項７０に記載のＣＡＲコンストラクトで形質導入されたＴ細胞（ＣＡＲ−Ｔ）またはＮＫ細胞（ＣＡＲ−ＮＫ）。
【請求項７２】
請求項７０に記載のＣＡＲ−ＴまたはＣＡＲ−ＮＫを含む、医薬組成物。
【請求項７３】
腫瘍関連抗原（ＴＡＡ）を発現する癌に対する免疫反応の誘導方法であって、
ａ）癌を有する対象に、ハプテン複合化抗ＴＡＡ抗体を投与すること；及び
ｂ）前記対象に、ＣＡＲ−ＴまたはＣＡＲ−ＮＫを投与することを含み、
前記キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）が、抗ハプテン抗体断片を含む、前記方法。
【請求項７４】
前記ハプテンが、ＨＳＧまたはＩｎ−ＤＴＰＡである、請求項７３に記載の方法。
【請求項７５】
前記抗ハプテン抗体が、ｈ６７９またはｈ７３４である、請求項７４に記載の方法。
【請求項７６】
前記ＴＡＡが、炭酸脱水酵素ＩＸ、アルファ−フェトプロテイン、α−アクチニン−４、Ａ３、Ａ３３抗体に特異的な抗原、ＡＲＴ−４、Ｂ７、Ｂａ７３３、ＢＡＧＥ、ＢｒＥ３−抗原、ＣＡ１２５、ＣＡＭＥＬ、ＣＡＰ−１、ＣＡＳＰ−８／ｍ，、ＣＣＣＬ１９、ＣＣＣＬ２１、ＣＤ１、ＣＤ１ａ、ＣＤ２、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ８、ＣＤ１１Ａ、ＣＤ１４、ＣＤ１５、ＣＤ１６、ＣＤ１８、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２１、ＣＤ２２、ＣＤ２３、ＣＤ２５、ＣＤ２９、ＣＤ３０、ＣＤ３２ｂ、ＣＤ３３、ＣＤ３７、ＣＤ３８、ＣＤ４０、ＣＤ４０Ｌ、ＣＤ４５、ＣＤ４６、ＣＤ５２、ＣＤ５４、ＣＤ５５、ＣＤ５９、ＣＤ６４、ＣＤ６６ａ−ｅ、ＣＤ６７、ＣＤ７０、ＣＤ７０Ｌ、ＣＤ７４、ＣＤ７９ａ、ＣＤ７９ｂ、ＣＤ８０、ＣＤ８３、ＣＤ９５、ＣＤ１２６、ＣＤ１３２、ＣＤ１３３、ＣＤ１３８、ＣＤ１４７、ＣＤ１５４、ＣＤＣ２７、ＣＤＫ−４／ｍ、ＣＤＫＮ２Ａ、ＣＸＣＲ４、ＣＸＣＲ７、ＣＸＣＬ１２、ＨＩＦ−１α、結腸特異的抗原−ｐ（ＣＳＡｐ）、ＣＥＡ（ＣＥＡＣＡＭ−５）、ＣＥＡＣＡＭ−６、ｃ−ｍｅｔ、ＤＡＭ、ＥＧＦＲ、ＥＧＦＲｖＩＩＩ、ＥＧＰ−１、ＥＧＰ−２、ＥＬＦ２−Ｍ、Ｅｐ−ＣＡＭ、Ｆｌｔ−１、Ｆｌｔ−３、葉酸受容体、Ｇ２５０抗原、ＧＡＧＥ、ｇｐ１００、ＧＲＯＢ、ＨＬＡ−ＤＲ、ＨＭ１．２４、ヒト絨毛性ゴナドトロピン（ＨＣＧ）及びそのサブユニット、ＨＥＲ２／ｎｅｕ、ＨＭＧＢ−１、低酸素誘導因子（ＨＩＦ−１）、ＨＳＰ７０−２Ｍ、ＨＳＴ−２、ｌａ、ＩＧＦ−１Ｒ、ＩＦＮ−γ、ＩＦＮ−α、ＩＦＮ−β、ＩＬ−２、ＩＬ−４Ｒ、ＩＬ−６Ｒ、ＩＬ−１３Ｒ、ＩＬ−１５Ｒ、ＩＬ−１７Ｒ、ＩＬ−１８Ｒ、ＩＬ−６、ＩＬ−８、ＩＬ−１２、ＩＬ−１５、ＩＬ−１７、ＩＬ−１８、ＩＬ−２３、ＩＬ−２５、インスリン様成長因子−１（ＩＧＦ−１）、ＫＣ４−抗原、ＫＳ−１−抗原、ＫＳ１−４、Ｌｅ−Ｙ、ＬＤＲ／ＦＵＴ、マクロファージ遊走阻止因子（ＭＩＦ）、ＭＡＧＥ、ＭＡＧＥ−３、ＭＡＲＴ−１、ＭＡＲＴ−２、ＮＹ−ＥＳＯ−１、ＴＲＡＧ−３、ｍＣＲＰ、ＭＣＰ−１、ＭＩＰ−１Ａ、ＭＩＰ−１Ｂ、ＭＩＦ、ＭＵＣ１、ＭＵＣ２、ＭＵＣ３、ＭＵＣ４、ＭＵＣ５ａｃ、ＭＵＣ１３、ＭＵＣ１６、ＭＵＭ−１／２、ＭＵＭ−３、ＮＣＡ６６、ＮＣＡ９５、ＮＣＡ９０、膵臓癌ムチン、胎盤成長因子、ｐ５３、ＰＬＡＧＬ２、前立腺酸性フォスファターゼ、ＰＳＡ、ＰＲＡＭＥ、ＰＳＭＡ、ＰｌＧＦ、ＩＬＧＦ、ＩＬＧＦ−１Ｒ、ＩＬ−６、ＩＬ−２５、ＲＳ５、ＲＡＮＴＥＳ、Ｔ１０１、ＳＡＧＥ、Ｓ１００、スルビビン、スルビビン−２Ｂ、ＴＡＣ、ＴＡＧ−７２、テネイシン、ＴＲＡＩＬ受容体、ＴＮＦ−α、Ｔｎ抗原、Ｔｈｏｍｓｏｎ−Ｆｒｉｅｄｅｎｒｅｉｃｈ抗原、腫瘍壊死抗原、ＴＲＯＰ−２、ＶＥＧＦＲ、ＥＤ−Ｂフィブロネクチン、ＷＴ−１、１７−１Ａ−抗原、補体因子Ｃ３、Ｃ３ａ、Ｃ３ｂ、Ｃ５ａ、Ｃ５、血管形成マーカー、ｂｃｌ−２、ｂｃｌ−６、Ｋｒａｓ、ｃＭＥＴ、及び癌遺伝子産物からなる群から選択される、請求項７３に記載の方法。
【請求項７７】
前記抗ＴＡＡ抗体が、ｈＲ１（抗ＩＧＦ−１Ｒ）、ｈＰＡＭ４（抗ムチン）、ＫＣ４（抗ムチン）、ｈＡ２０（抗ＣＤ２０）、ｈＡ１９（抗ＣＤ１９）、ｈＩＭＭＵ３１（抗ＡＦＰ）、ｈＬＬ１（抗ＣＤ７４）、ｈＬＬ２（抗ＣＤ２２）、ＲＦＢ４（抗ＣＤ２２）、ｈＭｕ−９（抗ＣＳＡｐ）、ｈＬ２４３（抗ＨＬＡ−ＤＲ）、ｈＭＮ−１４（抗ＣＥＡＣＡＭ−５）、ｈＭＮ−１５（抗ＣＥＡＣＡＭ−６）、ｈＲＳ７（抗ＴＲＯＰ−２）、ｈＭＮ−３（抗ＣＥＡＣＡＭ−６）、ＣＣ４９（抗ＴＡＧ−７２）、Ｊ５９１（抗ＰＳＭＡ）、Ｄ２／Ｂ（抗ＰＳＭＡ）、Ｇ２５０（抗炭酸脱水酵素ＩＸ）、インフリキシマブ（抗ＴＮＦ−α）、セルトリズマブペゴル（抗ＴＮＦ−α）、アダリムマブ（抗ＴＮＦ−α）、アレムツズマブ（抗ＣＤ５２）、ベバシズマブ（抗ＶＥＧＦ）、セツキシマブ（抗ＥＧＦＲ）、ゲムツズマブ（抗ＣＤ３３）、イブリツモマブチウキセタン（抗ＣＤ２０）、パニツムマブ（抗ＥＧＦＲ）、リツキシマブ（抗ＣＤ２０）、トシツモマブ（抗ＣＤ２０）、ＧＡ１０１（抗ＣＤ２０）、トラスツズマブ（抗ＨＥＲ２／ｎｅｕ）、トシリズマブ（抗ＩＬ−６受容体）、バシリキシマブ（抗ＣＤ２５）、ダクリズマブ（抗ＣＤ２５）、エファリズマブ（抗ＣＤ１１ａ）、ムロモナブ−ＣＤ３（抗ＣＤ３受容体）、ナタリズマブ（抗α４インテグリン）、ＢＷＡ−３（抗ヒストンＨ２Ａ／Ｈ４）、ＬＧ２−１（抗ヒストンＨ３）、ＭＲＡ１２（抗抗ヒストンＨ１）、ＰＲ１−１（抗ヒストンＨ２Ｂ）、ＬＧ１１−２（抗ヒストンＨ２Ｂ）、及びＬＧ２−２（抗ヒストンＨ２Ｂ）からなる群から選択される、請求項７６に記載の方法。
【請求項７８】
前記対象に、（ｉ）インターフェロン；（ｉｉ）チェックポイント阻害剤抗体；（ｉｉｉ）抗体−薬物複合体（ＡＤＣ）；（ｉｖ）抗ＨＬＡ−ＤＲ抗体；及び（ｖ）抗ＣＤ７４抗体からなる群から選択される少なくとも１つの治療薬剤を投与することをさらに含む、請求項７３に記載の方法。
【請求項７９】
前記対象に、薬物、毒素、酵素、細胞毒性薬剤、抗血管形成薬剤、プロアポトーシス薬剤、抗生物質、ホルモン、免疫賦活剤、サイトカイン、ケモカイン、アンチセンスオリゴヌクレオチド、小分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）、ホウ素化合物、及び放射性同位体からなる群から選択される治療薬剤を投与することをさらに含む、請求項７３に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、様々な疾患状態を治療するのに有用な、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）コンストラクト、及びそのようなＣＡＲコンストラクトを発現するように操作されたＴ細胞（ＣＡＲ−Ｔ）またはＮＫ細胞（ＣＡＲ−ＮＫ）に関する。ＣＡＲコンストラクトは、標的細胞により発現された抗原に対する抗体を組み込むことによって標的細胞に直接結合する、またはハプテンに対する抗体を組み込むことによって標的細胞に間接的に結合するように設計されている。ハプテンは、標的細胞により発現された抗原に対するハプテン複合化抗体を用いて、標的細胞と会合し得る。ある特定の好ましい実施形態において、標的細胞抗原は、Ｔｒｏｐ−２であってもよく、治療される疾患は、Ｔｒｏｐ−２を発現する癌であってもよい。しかしながら、当業者であれば、多くの異なる疾患状態と関連する標的細胞により発現された抗原が知られており、任意のそのような抗原は、本明細書において開示されるＣＡＲコンストラクトにより標的化され得ることが認識されるであろう。好ましい実施形態において、ＣＡＲは、ｓｃＦｖまたはＦａｂ抗体断片、ＣＤ８ヒンジ、ＣＤ２８膜貫通ドメイン、ＣＤ２８の共刺激シグナル伝達ドメイン、４−１ＢＢ（ＣＤ１３７）の共刺激シグナル伝達ドメイン、及び／またはＣＤ３ζの細胞質シグナル伝達ドメインを含み得る。さらに好ましい実施形態において、ｓｃＦｖまたはＦａｂは、抗体ｈ６７９（抗ＨＳＧ）、ｈ７３４（抗Ｉｎ−ＤＴＰＡ）、ｈＲＳ７（抗Ｔｒｏｐ−２）、またはｈＭＮ−１５（抗ＣＥＡＣＡＭ−６）から得られ得る。一実施形態において、ＣＡＲ−ＴまたはＣＡＲ−ＮＫコンストラクトを生成するために使用したＴ細胞またはＮＫ細胞は、治療される患者から得られた自己細胞である。より好ましくは、コンストラクトを生成するために使用したＴ細胞またはＮＫ細胞は、同種細胞である。ＣＡＲ−ＴまたはＣＡＲ−ＮＫ治療用コンストラクトをインビボで投与し、疾患関連標的細胞に対する免疫反応を誘導する。ＣＡＲ−ＴまたはＣＡＲ−ＮＫコンストラクトは、ハプテン複合化抗体と共に、またはハプテン複合化抗体無しで投与してもよく、これは、サイトカイン、インターフェロン、抗体−薬物複合体（ＡＤＣ）またはチェックポイント阻害剤抗体などの１つ以上の他の治療薬剤と併用して使用してもよい。組み合わせをまたは逐次的に投与してもよい。さらに好ましい実施形態において、ＣＡＲ−ＴまたはＣＡＲ−ＮＫは、抗ＣＤ７４または抗ＨＬＡ−ＤＲ抗体と共に投与し、コンストラクトによって誘導された免疫毒性を減少させてもよい。
【背景技術】
【０００２】
キメラ抗原受容体（ＣＡＲ、キメラＴ細胞受容体としても知られる）は、宿主Ｔ細胞またはＮＫ細胞で発現されて、特定の標的抗原及びその抗原を発現する細胞に対する免疫反応を誘導するように設計される合成コンストラクトである。ＣＡＲは、典型的に、ＣＤ３−ζまたはＣＤ２８膜貫通ドメイン、ならびにＣＤ３−ζ、ＣＤ２８、ＯＸ４０、４−１ＢＢ、Ｌｃｋ、及び／またはＩＣＯＳのエンドドメインを含む、選択的Ｔ細胞活性化部分などの追加成分も含む融合タンパク質に組み込まれたｓｃＦｖまたはＦａｂ断片などの抗体断片を含む。そのような要素の様々な組み合わせが使用されている。
【０００３】
ＣＡＲ及びＣＡＲ−Ｔの構築及び使用は、Ｓａｄｅｌａｉｎ  ｅｔ  ａｌ．（Ｃａｎｃｅｒ  Ｄｉｓｃｏｖ  ３：３８８−９８，２０１３）が検討した。Ｓａｄｅｌａｉｎ  ｅｔ  ａｌ．（２０１３）に記載されるように、ＣＡＲコンストラクトの設計は、何世代も通じて進化している。第一世代ＣＡＲは、細胞内ＣＤ３−ζまたはＦｃＲγエンドドメインを有するＣＤ３−ζ膜貫通ドメインに結合したｓｃＦｖを含んだ。そのような早期のコンストラクトは、Ｔ細胞活性化のみに提供され、ヒト対象で試験すると臨床的に有効ではないことが一般的に判明している（Ｓａｄｅｌａｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，２０１３）。第二世代ＣＡＲコンストラクトは、Ｔ細胞活性化をサイトカイン（例えば、ＩＬ−２、ＩＬ−７、ＩＬ−１５、ＩＬ−２１）放出などの共刺激シグナルと組み合わせるための二重シグナル伝達機能をもたらした（Ｓａｄｅｌａｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，２０１３）。第二世代のコンストラクトは、ＣＤ２８エンドドメイン、ＣＤ３−ζエンドドメイン、ＩＣＯＳ、４−１ＢＢ、ＤＡＰ１０、及びＯＸ４０から選択された２つ以上の細胞内エフェクターに結合したＣＤ２８またはＣＤ３−ζ膜貫通ドメインを含んだ。第三世代ＣＡＲは、典型的には、４−１ＢＢ、ＯＸ−４０またはＬｃｋのシグナル伝達サブユニット、及びＣＤ３−ζの細胞質ドメインに結合したＣＤ２８膜貫通及びエンドドメインを組み込む３つ以上のシグナル伝達機能を含んだ。第二世代または第三世代ＣＡＲ−Ｔによるより最近の臨床試験は、いくつかの有望な結果を示している。抗ＣＤ１９  ＣＡＲ−Ｔ療法は、Ｂ細胞悪性腫瘍の治療に効果的であることが報告されており、予備試験で治療した４名のＣＬＬ患者のうち１名の完全奏効（ＣＲ）及び１名の安定をもたらした（Ｋｏｃｈｅｎｄｏｒｆｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ  １１９：２７０９−２０、２０１２）。Ｒａｍｏｓ  ｅｔ  ａｌ．（Ｃａｎｃｅｒ  Ｊ  ２０：１１２−１８，２０１４）は、Ｂ細胞悪性腫瘍を再発した患者における抗ＣＤ１９  ＣＡＲ−Ｔの公開フェーズ１治験を検討した。第二世代の抗ＣＤ１９  ＣＡＲ−Ｔを使用する１つの治験により、難治性のＢ細胞ＡＬＬを有する５名の患者のうち、５名全員がシクロホスファミド及びＣＡＲ−Ｔ注入による治療後に完全寛解（ネガティブ最小残存疾患）に達したことが報告された（Ｒａｍｏｓ  ｅｔ  ａｌ．，２０１４）。寛解の潜在的な持続期間は分からなかった。Ｒｉｔｃｈｉｅ  ｅｔ  ａｌ．（Ｍｏｌ  Ｔｈｅｒ  ２１：２１２２−２９，２０１３）は、フルダラビンで事前調整した後に第二世代の抗ＬｅＹ  ＣＡＲ−ＴをＡＭＬ患者に施したフェーズ１治験を報告した。４名の患者のうち１名が細胞遺伝学的寛解を達成した一方、残りは最長で２３ヶ月間の長期寛解を示した。
【０００４】
より最近では、ＣＡＲコンストラクトは、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞活性を指向させるために使用され、Ｈｅｒｍａｎｓｏｎ  ＆  Ｋａｕｆｍａｎ（２０１５、Ｆｒｏｎｔ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ６：１９５）及びＣａｒｌｓｔｅｎ  ＆  Ｃｈｉｌｄｓ（２０１５、Ｆｒｏｎｔ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ６：２６６）で検討されている。Ｔ細胞と同様、ＮＫ細胞は、ＣＡＲ発現コンストラクトでトランスフェクトされ、免疫反応を誘導するために使用することができる。ＮＫ細胞はＨＬＡマッチングを要しないため、同種エフェクター細胞として使用することができる（Ｈａｒｍａｎｓｏｎ  ＆  Ｋａｕｆｍａｎ、２０１５）。また、治療に有用な末梢血ＮＫ細胞（ＰＢ−ＮＫ）は、簡単な採血でドナーから単離され得る。有用なＣＡＲコンストラクトは、ＣＡＲ−Ｔ細胞を作製するために使用した要素と同様の要素を含有し得る。ＣＡＲ−ＮＫ細胞は、腫瘍関連抗原（ＴＡＡ）などの疾患関連抗原、または標的可能なコンストラクト上のハプテンに結合するｓｃＦＶまたはＦａｂなどの標的化分子を含有し得る。これにより、ＮＫ細胞が、Ｔ細胞とは異なり、殺される標的化細胞に対する抗原特異性が欠けているという問題が回避される。細胞標的化ｓｃＦｖまたはＦａｂは、膜貫通ドメインを介して１つ以上の細胞内シグナル伝達ドメインに連結されて、リンパ球活性化をもたらし得る。ＣＡＲ−ＮＫ細胞と共に使用されたシグナル伝達ドメインには、ＣＤ３−ζ、ＣＤ２８、４−１ＢＢ、ＤＡＰ１０、及びＯＸ４０が含まれている。有用なＮＫ細胞株には、ＮＫ−９２、ＮＫＧ、ＹＴ、ＮＫ−ＹＳ、ＨＡＮＫ−１、ＹＴＳ、及びＮＫＬ細胞が含まれている。ＩＬ−２及び／またはＩＬ−１５をコードする遺伝子によるトランスフェクションは、インビボ持続性及び細胞集団の拡張に対する外因性サイトカインの必要性への依存度を低減することが提案されている。ハプロタイプ一致ドナーからのＮＫ細胞を用いた臨床試験は、難治性の急性骨髄性白血病を有する患者における長期寛解が実証されている（Ｍｉｌｌｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，２００４，Ｂｌｏｏｄ  １０５：３０５１−５７）。乳癌及び卵巣癌に対する効力も実証されている（Ｇｅｌｌｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，２０１１，Ｃｙｔｏｔｈｅｒａｐｙ  １３：９８−１０７）。
【０００５】
ＣＡＲコンストラクトのｃＤＮＡをコードするヌクレオチド配列は、Ｔ細胞またはＮＫ細胞に移すために、レトロウイルスまたはレンチウイルスベクターなどの発現ベクターに組み込まれる。感染、トランスフェクション、リポフェクション、またはベクターを宿主細胞（ＣＡＲ−ＴまたはＣＡＲ−ＮＫ）に導入する代替手段の後、細胞を対象に投与して、抗原を発現する標的細胞に対する免疫反応を誘導させる。標的細胞により発現された抗原に対する、形質導入されたＴ細胞またはＮＫ細胞の表面上のＣＡＲの結合は、Ｔ細胞またはＮＫ細胞を活性化させる。ＣＡＲによるＴ細胞またはＮＫ細胞の活性化は、ＨＬＡ系による抗原プロセシング及びプレゼンテーションを必要としない。
【０００６】
様々なＣＡＲ−ＴまたはＣＡＲ−ＮＫ細胞が、疾患状態、主に造血器癌またはいくつかの固体腫瘍の治療に使用されている。標的化される抗原には、α−葉酸受容体（卵巣及び上皮癌）、ＣＡＩＸ（腎臓癌）、ＣＤ１９（Ｂ細胞悪性腫瘍、ＣＬＬ、ＡＬＬ）、ＣＤ２０（Ｂ細胞悪性腫瘍、リンパ腫）、ＣＤ２２（Ｂ細胞悪性腫瘍）、ＣＤ２３（ＣＬＬ）、ＣＤ２４（膵臓ＣＡ）、ＣＤ３０（リンパ腫）、ＣＤ３３（ＡＭＬ）、ＣＤ３８（ＮＨＬ）、ＣＤ４４ｖ７／８（子宮頸ＣＡ）、ＣＥＡ（大腸ＣＡ）、ＥＧＦＲｖＩＩＩ（神経膠芽腫）、ＥＧＰ−２（複数の悪性腫瘍）、ＥＧＰ−４０（大腸ＣＡ）、ＥｐｈＡ２（神経膠芽腫）、Ｅｒｂ−Ｂ２（乳房、前立腺、大腸ＣＡ）、ＦＢＰ（卵巣ＣＡ）、ＧＤ２（神経芽細胞腫、黒色腫）、ＧＤ３（黒色腫）、ＨＥＲ２（膵臓ＣＡ、卵巣ＣＡ、神経膠芽腫、骨肉腫）、ＨＭＷ−ＭＡＡ（黒色腫）、ＩＬ−１１Ｒα（骨肉腫）、ＩＬ−１３Ｒα２（神経膠腫、神経膠芽腫）、ＫＤＲ（腫瘍血管系）、κ−軽鎖（Ｂ細胞悪性腫瘍）、Ｌｅｗｉｓ  Ｙ（様々な癌腫）、Ｌ１（神経芽細胞腫）、ＭＡＧＥ−Ａ１（黒色腫）、メソテリン（中皮腫）、ＭＵＣ１（乳癌及び卵巣ＣＡ）、ＭＵＣ１６（卵巣ＣＡ）、ＮＫＧ２Ｄ（骨髄腫、卵巣ＣＡ）、ＮＹ−ＥＳＯ−１（多発性骨髄腫）、癌胎児性抗原（様々な腫瘍）、ＰＳＣＡ（前立腺ＣＡ）、ＰＳＭＡ（前立腺ＣＡ）、ＲＯＲ１（Ｂ−ＣＬＬ）、ＴＡＧ−７２（腺癌）、及びＶＥＧＦ−Ｒ２（腫瘍新生血管）が含まれている。（Ｓａｄｅｌａｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｅｒ  Ｄｉｓｃｏｖ  ３：３８８−９８，２０１３）。
【０００７】
ＣＡＲ−Ｔ療法による大きな関心事は、多数の活性化Ｔ細胞により仲介される強烈な抗腫瘍反応と関連する「サイトカインストーム」の危険性である（Ｓａｄｅｌａｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ  Ｄｉｓｃｏｖ  ３：３８８−９８，２０１３）。副作用には、高熱、低血圧及び／または臓器不全が含まれ、潜在的には死をもたらし得る。ＣＡＲ−ＮＫ細胞により産生されたサイトカインは、ＣＡＲ−Ｔ細胞と異なり、有害なサイトカイン媒介反応のリスクを減少させる。それにも関わらず、効力がより良く、全身毒性が減少した、改善されたＣＡＲ、ＣＡＲ−Ｔ、及びＣＡＲ−ＮＫコンストラクト、及びサイトカインストームまたは他の全身毒性のリスクを減少するためのアジュバント療法に対する必要性が存在する。ＣＥＡ標的化Ｔ細胞を受容した、転移性大腸癌を有する３名全員の癌患者における大きな過渡炎症性大腸炎の誘導によって例示されるように、標的抗原を発現する正常組織が、これらの細胞も含むＣＡＲ−ＴまたはＣＡＲ−ＮＫ療法による毒性により影響を受ける非腫瘍オンターゲット毒性を防止または軽減する必要性もまた存在する（Ｐａｒｋｈｕｒｓｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｌ  Ｔｈｅｒ，１９：６２０−６，２０１０）。
【発明の概要】
【０００８】
本発明は、新規ＣＡＲ、ＣＡＲ−Ｔ、及びＣＡＲ−ＮＫコンストラクトの治療的用途のための組成物及び方法を提供する。コンストラクトは、リンカーを介して膜貫通ドメインに結合した抗体部分、好ましくは、ｓｃＦｖまたはＦａｂ、及び２つ以上の細胞内シグナル伝達ドメイン、例えば、ＣＤ２８エンドドメイン、ＣＤ３−ζエンドドメイン、ならびにＩＣＯＳ、４−１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＤＡＰ１０、及び／またはＯＸ４０のシグナル伝達部分を含む。ＣＡＲコンストラクトの好ましい実施形態の例を図１及び図２に示す。他の例示的構造には、ｓｃＦｖ／ＣＤ２８／ＣＤ３−ζ、またはｓｃＦｖ／ＣＤ２８／ＣＤ１３７／ＣＤ３−ζを含み得る。融合タンパク質は、抗体とＣＡＲの残りとの間にリンカー配列を含み、抗原、ならびにｓｃＦｖまたはＦａｂ及び細胞内エフェクターに接続する膜貫通ドメイン（典型的には、ＣＤ２８）への結合の柔軟性を増加させることができる。図１及び図２に示されるように、融合タンパク質は、ｓｃＦｖのＶＨ及びＶＬ部分と、ｓｃＦｃを膜貫通ドメインに結合するＣＤ８αヒンジなどのヒンジとの間に短リンカー（例えば、ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ、配列番号１８）を含み得る。細胞内エフェクターは、ＣＤ２８細胞内ドメイン（エンドドメイン）、ＣＤ３−ζ細胞内ドメイン（エンドドメイン）、及び４−１ＢＢ細胞内ドメイン（図１、図２）の２つ以上を含み得る。ＣＡＲ−Ｔ及びＣＡＲ−ＮＫコンストラクトに対する当該技術分野において知られている他の細胞内エフェクターもまた、本出願の他の場所で説明するように、使用してもよい。
【０００９】
様々な実施形態において、ＣＡＲ、ＣＡＲ−Ｔ、及びＣＡＲ−ＮＫは、ｓｃＦｖ、Ｆａｂ、または他の抗体部分が、標的細胞により発現された細胞表面抗原に直接結合するように設計してもよい。代替の実施形態において、ＣＡＲ、ＣＡＲ−Ｔ、及びＣＡＲ−ＮＫは、標的細胞に付着したハプテンに結合するｓｃＦｖを含有し、ＣＡＲ、ＣＡＲ−Ｔ、及びＣＡＲ−ＮＫが標的細胞に間接的に結合することを可能にする。後者の場合では、ハプテンは、標的細胞抗原に結合する異なる抗体または抗体断片に複合化されてもよい。好ましいハプテンとしては、ＨＳＧ（ヒスタミン−スクシニル−グリシン）またはＩｎ−ＤＴＰＡ（インジウム−ジエチレントリアミン五酢酸）が挙げられる。ＤＴＰＡまたはＨＳＧで標識された抗体の投与後、標識された抗体は、標的細胞または組織に局在化することができる。ＣＡＲ−ＴまたはＣＡＲ−ＮＫコンストラクトが添加され、ＨＳＧまたはＩｎ−ＤＴＰＡに結合し、ＨＳＧ−またはＩｎ−ＤＴＰＡ−で標識された抗体と共局在化し、標的細胞に対する免疫反応を誘導する。任意の既知の抗ハプテン抗体が利用され得るが、好ましい実施形態において、抗ＨＳＧ抗体は、ｈ６７９（例えば、米国特許第号７，５６３，４３９を参照されたく、図面及び実施例の項は、参照により本明細書に組み込まれる）であり、または抗Ｉｎ−ＤＴＰＡ抗体は、ｈ７３４（例えば、公開ＰＣＴ出願第ＷＯ９９／６６９５１号または米国特許第７，５３４，４３１号を参照されたく、それぞれの図面及び実施例の項は、参照により本明細書に組み込まれる）。ＨＳＧまたはＩｎ−ＤＴＰＡに複合化された標的化抗体は、以下の実施例に記載のように調製してもよい。
【００１０】
代替の実施形態において、疾患標的化ＣＡＲ−ＴまたはＣＡＲ−ＮＫコンストラクト、または疾患標的化抗体−ハプテン複合体（ハプテン結合ＣＡＲ−ＴまたはＣＡＲ−ＮＫに続く）を添加する前に、所定量の親の非複合化抗体を少なくとも１日、好ましくは１〜１０日投与する。そのような前投与プロトコルは、ＣＡＲ−Ｔ、ＣＡＲ−ＮＫ、または抗体−ハプテン複合物において疾患標的化抗体によって認識された同じ抗原を発現する正常組織に対する腫瘍外のオンターゲット毒性を減少または排除するように設計される。前投与は、最長７日間の遅延の後に繰り返してもよい。ＧＷ−３９ヒト結腸癌の異種移植を持つヌードマウスで実施した前臨床試験により、ＩＭＭＵ−１３０（抗ＣＥＡＣＡＭ５  ｍＡｂ  ｈＭＮ−１４に複合化したＳＮ−３８を含むＡＤＣ）の抗腫瘍活性が、ＩＭＭＵ−１３０による治療前に様々な用量の裸のｈＭＮ−１４を投与することによる影響をほとんど受けないことが示され、親の抗体の前投与が、腫瘍上の同じ抗原または他の疾患細胞を認識する薬剤のその後の標的化を減少させないことが示された（図３）。しかしながら、そのような前投与は、正常組織に結合するＣＡＲ−Ｔ、ＣＡＲ−ＮＫまたはハプテン−ｍＡｂ／ＣＡＲ−ＴまたはＣＡＲ−ＮＫの細胞毒性効果を軽減し得る。腫瘍関連抗原などの疾患関連抗原は、疾患細胞に特異的であり得るが、より一般的には、抗原は、典型的には正常細胞中ではより低い発現レベルであるが、いくつかの正常組織ならびに疾患細胞中で発現される。同じ疾患関連抗原に対する非複合化抗体による前投与は、より低い抗原発現レベルで正常組織を飽和し得る一方、腫瘍細胞などの疾患細胞で見られるより高い抗原レベルに対する細胞毒性効果がまだ可能になる。好ましくは、非複合化抗体は、１〜２回の前投与注射で、１〜１６ｍｇ／ｋｇ、より好ましくは、約１０ｍｇ／ｋｇの用量で投与される。２回の前投与注射を施す場合、それらは、約１週間離して投与してもよく、ＣＡＲ−ＴまたはＣＡＲ−ＮＫコンストラクトは、２回目の前投与注射の４〜６日後に投与してもよい。
【００１１】
前投与がない場合には、Ｔ細胞ベースの標的化療法は、大腸炎などの全身毒性をもたらし得る。Ｂｏｓ  ｅｔ  ａｌ．（Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ  ６８：８４４６−５５、２００８）は、大腸癌を治療するためのＣＥＡ標的化組み換えＴ細胞受容体で形質導入された自己Ｔ細胞の使用について報告した。Ｂｏｓ  ｅｔ  ａｌ．（２００８）によれば、「ＣＥＡ［ＣＥＡＣＡＭ５］は、大腸癌で過剰発現されるが、この抗原のかなりのレベルは、正常な腸の上皮に存在する」。著者らは、ＣＥＡ標的化免疫治療が自己免疫大腸炎を伴い、著しい体重減少が対象マウスに死を時にはもたらしたことを観察した。Ｐａｒｋｈｕｒｓｔ  ｅｔ  ａｌ．（Ｍｏｌ  Ｔｈｅｒ  １９：６２０−２６、２０１１）は、難治性の転移性大腸癌を有する３名のヒト患者に投与した場合、組み換えＴ細胞受容体で形質導入されたＣＥＡ標的化Ｔ細胞の同様の毒性を観察した。３名全ての患者は、用量制限毒性を表す大きな過渡炎症性大腸炎を示した。１名の患者は、肺及び肝臓への癌転移の客観的な退縮を示した。Ｋａｔｚ  ｅｔ  ａｌ．（Ｃｌｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ，Ｅｐｕｂ  ａｈｅａｄ  ｏｆ  ｐｒｉｎｔ，Ａｐｒｉｌ  ７，２０１５）は、ＣＥＡ陽性肝臓転移の治療に使用した抗ＣＥＡ  ＣＡＲ−ＴのフェーズＩ治験の結果について報告した。肝外毒性を制限しようと試みて肝動脈注入（ＨＡＩ）を使用した。６名の患者のうち１名は、ＣＡＲ−Ｔ療法の２３ヶ月後に疾患が安定して、生存した。ＣＡＲ−Ｔ療法に関するグレード３または４の有害事象に苦しんだ患者はいなかったが、熱性ＡＥ（有害事象）が４名の患者で観察され、１名の患者は、全身ＩＬ２注入に明らかに関連するグレード３の発熱及び頻脈を経験した。ＩＬ２及びＣＡＲ−Ｔ療法の両方を受けた１名の患者は、大腸炎を発症し、ＩＬ２用量の低減に至った。
【００１２】
マウスモデル中で抗ＣＥＡ  ＣＡＲ−Ｔの抗腫瘍効果を減少させずに大腸炎を抑制するための別のアプローチは、ＣＡＲ−Ｔ療法の全身毒性を減らそうと試みて抗ＣＥＡ−ＣＡＲ−Ｔｒｅｇ細胞を使用したＢｌａｔ  ｅｔ  ａｌ．（Ｍｏｌ  Ｔｈｅｒ  ２２：１０１８−２８、２０１４）によって報告された。ＣＥＡ特異的ＣＡＲ  Ｔｒｅｇは、対照Ｔｒｅｇと比較して大腸炎の重篤度を著しく減少させる一方、ＣＥＡ特異的ＣＡＲ  Ｔｒｅｇは、大腸全身腫瘍組織量を著しく減少させたことが報告された。
【００１３】
ＣＡＲ−ＴまたはＣＡＲ−ＮＫ細胞の正常組織毒性を開示している研究において、同じ標的抗原に対して非複合化抗体を前投与することで全身毒性を減らそうと試みたものはない。疾患関連抗原も発現する正常細胞に対する毒性を減らすために非複合化抗体の前投与を組み込んだ、ＣＡＲ−ＴまたはＣＡＲ−ＮＫベース療法のより良い方法に対する必要性が、当該技術分野において存在する。
【００１４】
ＣＡＲ−ＴまたはＣＡＲ−ＮＫコンストラクトの全身毒性を減らすための別の代替アプローチは、ＣＡＲ−Ｔ、ＣＡＲ−ＮＫ、またはチェックポイント阻害剤療法で頻繁に見られる超活性化Ｔ細胞応答を減少または防止する抗体を投与することである（例えば、Ｗｅｂｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，２０１５，Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｏｎｃｏｌ  ３３：２０９２−９９を参照されたい）。そのような全身免疫反応は、以下で説明するように、ｈＬ２４３またはｈＬＬ１（ミラツズマブ）などの抗ＣＤ７４または抗ＨＬＡ−ＤＲ抗体を投与することによって減少または排除され得る。当業者には、特許請求の範囲が、本明細書において開示される具体的な実施形態に限定されず、他の既知の抗ＣＤ７４または抗ＨＬＡ−ＤＲ抗体が利用され得ることが理解される。
【００１５】
抗ＣＤ７４抗体の多くの例が、当該技術分野において知られており、任意のそのような既知の抗体、断片、免疫抱合体、またはそれらの融合タンパク質が利用され得る。好ましい実施形態において、抗ＣＤ７４抗体は、ｈＬＬ１抗体（ミラツズマブとしても知られる）である。使用に好適なヒト化ＬＬ１（ｈＬＬ１）抗ＣＤ７４抗体は、米国特許第７，３１２，３１８号に開示されており、３５列目の１行目乃至４２列目の２７行目、及び図１乃至図４からの参照により本明細書に組み込まれる。しかしながら、代替の実施形態において、当該技術分野において知られているＬＳ−Ｂ１９６３、ＬＳ−Ｂ２５９４、ＬＳ−Ｂ１８５９、ＬＳ−Ｂ２５９８、ＬＳ−０５５２５、ＬＳ−Ｃ４４９２９など（ＬＳＢｉｏ、Ｓｅａｔｔｌｅ、Ｗａｓｈ．）；ＬＮ２（ＢＩＯＬＥＧＥＮＤ（登録商標）、Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ、Ｃａｌｉｆ．）；ＰＩＮ．１、ＳＰＭ５２３、ＬＮ３、ＣｅｒＣＬＩＰ．１（ＡＢＣＡＭ（登録商標）、Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ、Ｍａｓｓ．）；Ａｔｌ４／１９、Ｂｕ４５（ＳＥＲＯＴＥＣ（登録商標）、Ｒａｌｅｉｇｈ、Ｎ．Ｃ．）；１Ｄ１（ＡＢＮＯＶＡ（登録商標）、Ｔａｉｐｅｉ  Ｃｉｔｙ、Ｔａｉｗａｎ）；５−３２９（ＥＢＩＯＳＣＩＥＮＣＥ（登録商標）、Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ、Ｃａｌｉｆ．）；及び任意の他の抗ＣＤ７４抗体などの他の既知の抗ＣＤ７４抗体が利用され得る。
【００１６】
好ましい実施形態において、抗ＨＬＡ−ＤＲ抗体は、ｈＬ２４３抗体（ＩＭＭＵ−１１４としても知られる）である。使用に好適なヒト化Ｌ２４３抗ＨＬＡ−ＤＲ抗体は、米国特許第７，６１２，１８０号に開示されており、４６列目の４５行目乃至６０列目の５０行目、及び図１乃至図６からの参照により本明細書に組み込まれる。しかしながら、代替の実施形態において、１Ｄ１０（ａｐｏｌｉｚｕｍａｂ）（Ｋｏｓｔｅｌｎｙ  ｅｔ  ａｌ．，２００１，Ｉｎｔ  Ｊ  Ｃａｎｃｅｒ  ９３：５５６−６５）；ＭＳ−ＧＰＣ−１、ＭＳ−ＧＰＣ−６、ＭＳ−ＧＰＣ−８、ＭＳ−ＧＰＣ−１０など（米国特許第７，５２１，０４７号）；Ｌｙｍ−１、ＴＡＬ８．１、５２０Ｂ、ＭＬ１１Ｃ１１、ＳＰＭ２８９、ＭＥＭ−２６７、ＴＡＬ１５．１、ＴＡＬ  １Ｂ５、Ｇ−７、４Ｄ１２、Ｂｒａ３０など（Ｓａｎｔａ  Ｃｒｕｚ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、Ｉｎｃ．、Ｓａｎｔａ  Ｃｒｕｚ、Ｃａｌｉｆ．）；ＴＡＬ  １６．１、ＴＵ３６、Ｃ１２０（ＡＢＣＡＭ（登録商標）、Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ、Ｍａｓｓ．）；及び当該技術分野において知られている任意の他の抗ＨＬＡ−ＤＲ抗体などの他の既知の抗ＨＬＡ−ＤＲ抗体が利用され得る。
【００１７】
疾患と関連する細胞に結合する任意の標的化抗体が、ＣＡＲ−ＴまたはＣＡＲ−ＮＫコンストラクトで利用され得るが、好ましい実施形態において、抗体は、後述されるように、抗腫瘍関連抗原（ＴＡＡ）抗体である。より好ましい実施形態において、ＣＡＲ、ＣＡＲ−Ｔ、及びＣＡＲ−ＮＫで利用される抗体は、ｈＲＳ７などの抗Ｔｒｏｐ−２抗体である。しかしながら、疾患関連細胞で発現される多くの他の抗原は知られており、利用され得る。好ましくは、腫瘍関連抗原は、アルファ−フェトプロテイン（ＡＦＰ）、α−アクチニン−４、Ａ３、Ａ３３抗体に特異的な抗原、ＡＲＴ−４、Ｂ７、Ｂａ７３３、ＢＡＧＥ、ＢｒＥ３−抗原、ＣＡ１２５、ＣＡＭＥＬ、ＣＡＰ−１、炭酸脱水酵素ＩＸ、ＣＡＳＰ−８／ｍ、ＣＣＬ１９、ＣＣＬ２１、ＣＤ１、ＣＤ１ａ、ＣＤ２、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ８、ＣＤ１１Ａ、ＣＤ１４、ＣＤ１５、ＣＤ１６、ＣＤ１８、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２１、ＣＤ２２、ＣＤ２３、ＣＤ２５、ＣＤ２９、ＣＤ３０、ＣＤ３２ｂ、ＣＤ３３、ＣＤ３７、ＣＤ３８、ＣＤ４０、ＣＤ４０Ｌ、ＣＤ４４、ＣＤ４５、ＣＤ４６、ＣＤ５２、ＣＤ５４、ＣＤ５５、ＣＤ５９、ＣＤ６４、ＣＤ６６ａ−ｅ、ＣＤ６７、ＣＤ７０、ＣＤ７０Ｌ、ＣＤ７４、ＣＤ７９ａ、ＣＤ７９ｂ、ＣＤ８０、ＣＤ８３、ＣＤ９５、ＣＤ１２６、ＣＤ１３２、ＣＤ１３３、ＣＤ１３８、ＣＤ１４７、ＣＤ１５４、ＣＤＣ２７、ＣＤＫ−４／ｍ、ＣＤＫＮ２Ａ、ＣＴＬＡ４、ＣＸＣＲ４、ＣＸＣＲ７、ＣＸＣＬ１２、ＨＩＦ−１α、結腸特異的抗原−ｐ（ＣＳＡｐ）、ＣＥＡ（ＣＥＡＣＡＭ−５）、ＣＥＡＣＡＭ−６、ｃ−Ｍｅｔ、ＤＡＭ、ＥＧＦＲ、ＥＧＦＲｖＩＩＩ、ＥＧＰ−１（ＴＲＯＰ−２）、ＥＧＰ−２、ＥＬＦ２−Ｍ、Ｅｐ−ＣＡＭ、線維芽細胞増殖因子（ＦＧＦ）、Ｆｌｔ−１、Ｆｌｔ−３、葉酸受容体、Ｇ２５０抗原、ＧＡＧＥ、ｇｐ１００、ＧＲＯ−β、ＨＬＡ−ＤＲ、ＨＭ１．２４、ヒト絨毛性ゴナドトロピン（ＨＣＧ）及びそのサブユニット、ＨＥＲ２／ｎｅｕ、ＨＭＧＢ−１、低酸素誘導因子（ＨＩＦ−１）、ＨＳＰ７０−２Ｍ、ＨＳＴ−２、Ｉａ、ＩＧＦ−１Ｒ、ＩＦＮ−γ、ＩＦＮ−α、ＩＦＮ−β、ＩＦＮ−λ、ＩＬ−４Ｒ、ＩＬ−６Ｒ、ＩＬ−１３Ｒ、ＩＬ−１５Ｒ、ＩＬ−１７Ｒ、ＩＬ−１８Ｒ、ＩＬ−２、ＩＬ−６、ＩＬ−８、ＩＬ−１２、ＩＬ−１５、ＩＬ−１７、ＩＬ−１８、ＩＬ−２３、ＩＬ−２５、インスリン様成長因子−１（ＩＧＦ−１）、ＫＣ４−抗原、ＫＳ−１−抗原、ＫＳ１−４、Ｌｅ−Ｙ、ＬＤＲ／ＦＵＴ、マクロファージ遊走阻止因子（ＭＩＦ）、ＭＡＧＥ、ＭＡＧＥ−３、ＭＡＲＴ−１、ＭＡＲＴ−２、ＮＹ−ＥＳＯ−１、ＴＲＡＧ−３、ｍＣＲＰ、ＭＣＰ−１、ＭＩＰ−１Ａ、ＭＩＰ−１Ｂ、ＭＩＦ、ＭＵＣ１、ＭＵＣ２、ＭＵＣ３、ＭＵＣ４、ＭＵＣ５ａｃ、ＭＵＣ１３、ＭＵＣ１６、ＭＵＭ−１／２、ＭＵＭ−３、ＮＣＡ６６、ＮＣＡ９５、ＮＣＡ９０、膵臓癌ムチン、ＰＤ１受容体、胎盤成長因子、ｐ５３、ＰＬＡＧＬ２、前立腺酸性フォスファターゼ、ＰＳＡ、ＰＲＡＭＥ、ＰＳＭＡ、ＰｌＧＦ、ＩＬＧＦ、ＩＬＧＦ−１Ｒ、ＩＬ−６、ＩＬ−２５、ＲＳ５、ＲＡＮＴＥＳ、Ｔ１０１、ＳＡＧＥ、Ｓ１００、スルビビン、スルビビン−２Ｂ、ＴＡＣ、Ｔ���Ｇ−７２、テネイシン、ＴＲＡＩＬ受容体、ＴＮＦ−α、Ｔｎ抗原、Ｔｈｏｍｓｏｎ−Ｆｒｉｅｄｅｎｒｅｉｃｈ抗原、腫瘍壊死抗原、ＶＥＧＦＲ、ＥＤ−Ｂフィブロネクチン、ＷＴ−１、１７−１Ａ−抗原、補体因子Ｃ３、Ｃ３ａ、Ｃ３ｂ、Ｃ５ａ、Ｃ５、血管形成マーカー、ｂｃｌ−２、ｂｃｌ−６、Ｋｒａｓ、癌遺伝子マーカー、または癌遺伝子産物である（例えば、Ｓｅｎｓｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｌｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ２００６，１２：５０２３−３２；Ｐａｒｍｉａｎｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ２００７，１７８：１９７５−７９；Ｎｏｖｅｌｌｉｎｏ  ｅｔ  ａｌ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ  ２００５，５４：１８７−２０７を参照されたい）。
【００１８】
ＴＡＡに対する例示的な抗体としては、ｈＡ１９（抗ＣＤ１９、米国特許第７，１０９，３０４号）、ｈＲ１（抗ＩＧＦ−１Ｒ、米国特許出願第１３／６８８，８１２号、３／１２／１０出願）、ｈＰＡＭ４（抗ＭＵＣ５ａｃ、米国特許第７，２８２，５６７号）、ｈＡ２０（抗ＣＤ２０、米国特許第７，１５１，１６４号）、ｈＩＭＭＵ３１（抗ＡＦＰ、米国特許第７，３００，６５５号）、ｈＬＬ１（抗ＣＤ７４、米国特許第７，３１２，３１８号）、ｈＬＬ２（抗ＣＤ２２、米国特許第５，７８９，５５４号）、ｈＭｕ−９（抗ＣＳＡｐ、米国特許第７，３８７，７７３号）、ｈＬ２４３（抗ＨＬＡ−ＤＲ、米国特許第７，６１２，１８０号）、ｈＭＮ−１４（抗ＣＥＡＣＡＭ−５、米国特許第６，６７６，９２４号）、ｈＭＮ−１５（抗ＣＥＡＣＡＭ−６、米国特許第８，２８７，８６５号）、ｈＲＳ７（抗ＥＧＰ−１、米国特許第７，２３８，７８５号）、ｈＭＮ−３（抗ＣＥＡＣＡＭ−６、米国特許第７，５４１，４４０号）、ｈＲＦＢ４（抗ＣＤ２２、米国特許第９，１３９，６４９号）、Ａｂ１２４、及びＡｂ１２５（抗ＣＸＣＲ４、米国特許第７，１３８，４９６号）が挙げられるが、これらに限定されず、それぞれの引用された特許または特許出願の実施例の項は、参照により本明細書に組み込まれる。
【００１９】
有用な抗体は、様々なアイソタイプのもの、好ましくは、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４、より好ましくは、ヒトＩｇＧ１ヒンジ、及び定常領域配列を含むものであってもよい。抗体またはその断片は、ｖａｎ  ｄｅｒ  Ｎｅｕｔ  Ｋｏｌｆｓｃｈｏｔｅｎ  ｅｔ  ａｌ．（Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２００７；３１７：１５５４−１５５７）に記載されたように、キメラヒト−マウス、ヒト化（ヒトフレームワーク及びマウス超可変（ＣＤＲ）領域）、または完全ヒトならびにそれが変化したもの、例えば半−ＩｇＧ４抗体（「ユニボディ」と呼ばれる）であってもよい。より好ましくは、抗体またはその断片は、ヒト対象に投与された場合に低減された免疫原性をもたらし得る、特定のアロタイプに属するヒト定常領域配列を含むように設計または選択されてもよい。投与に好ましいアロタイプとしては、Ｇ１ｍ３、Ｇ１ｍ３，１、Ｇ１ｍ３，２、またはＧ１ｍ３，１，２などの非Ｇ１ｍ１アロタイプ（ｎＧ１ｍ１）が挙げられる。より好ましくは、アロタイプは、ｎＧ１ｍ１、Ｇ１ｍ３、ｎＧ１ｍ１，２、及びＫｍ３アロタイプからなる群から選択される。
【００２０】
他の実施形態は、サイトカイン治療、例えば、インターフェロン−α、インターフェロン−βまたはインターフェロン−λ（最も好ましくは、インターフェロン−α）とＣＡＲ−ＴまたはＣＡＲ−ＮＫ療法の組み合わせに関する。インターフェロンは、ＮＫ細胞及びマクロファージを活性化することにより免疫系機能を高めることができるサイトカイン型免疫賦活剤である。インターフェロンはまた、抗病原性薬剤としての直接的効果を有し、１つには標的抗原または他のエフェクタータンパク質の発現を誘導することにより作用する。主題のインターフェロンは、遊離インターフェロン、ＰＥＧ化インターフェロン、インターフェロン融合タンパク質、または抗体に複合化したインターフェロンとして投与され得る。
【００２１】
免疫治療の別の有望なアプローチは、免疫チェックポイントタンパク質に対するアンタゴニスト抗体の使用に関する（例えば、Ｐａｒｄｏｌｌ，Ｎａｔｕｒｅ  Ｒｅｖｉｅｗｓ  Ｃａｎｃｅｒ  １２：２５２−６４，２０１２）。免疫チェックポイントは、自己寛容を維持する、ならびに抗原刺激に対する免疫反応の期間及び程度を調整するように作用する、免疫系機能の外因性阻害経路として機能する（Ｐａｒｄｏｌｌ，２０１２）。しかしながら、腫瘍組織、及びおそらくはある特定の病原体が、チェックポイント系を共選択（ｃｏ−ｏｐｔ）して、宿主免疫反応の有効性を低減し、腫瘍成長及び／または慢性感染症をもたらすと思われる（例えば、Ｐａｒｄｏｌｌ，Ｎａｔｕｒｅ  Ｒｅｖｉｅｗｓ  Ｃａｎｃｅｒ  １２：２５２−６４，２０１２；Ｎｉｒｓｃｈｌ＆Ｄｒａｋｅ，Ｃｌｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ  １９：４９１７−２４，２０１３を参照されたい）。チェックポイント分子としては、ＣＴＬＡ４（細胞毒性Ｔリンパ球抗原−４）、ＰＤ１（プログラム細胞死タンパク質１）、ＰＤ−Ｌ１（プログラム細胞死リガンド１）、ＬＡＧ−３（リンパ球活性化遺伝子−３）、ＴＩＭ−３（Ｔ細胞免疫グロブリン及びムチンタンパク質−３）、及び他のいくつかが挙げられる（Ｐａｒｄｏｌｌ，Ｎａｔｕｒｅ  Ｒｅｖｉｅｗｓ  Ｃａｎｃｅｒ  １２：２５２−６４，２０１２；Ｎｉｒｓｃｈｌ＆Ｄｒａｋｅ，Ｃｌｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ  １９：４９１７−２４，２０１３）。ラムブロリズマブ（ＭＫ−３４７５、Ｍｅｒｃｋ）、ニボルマブ（ＢＭＳ−９３６５５８、Ｂｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ  Ｓｑｕｉｂｂ）、ピジリズマブ（ＣＴ−０１１、ＣｕｒｅＴｅｃｈ  Ｌｔｄ．）、ＡＭＰ−２２４（Ｍｅｒｃｋ）、ＭＤＸ−１１０５（Ｍｅｄａｒｅｘ）、ＭＥＤＩ４７３６（ＭｅｄＩｍｍｕｎｅ）、ＭＰＤＬ３２８０Ａ（Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ）、ＢＭＳ−９３６５５９（Ｂｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ  Ｓｑｕｉｂｂ）、イピリムマブ（Ｂｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ  Ｓｑｕｉｂｂ）、及びトレメリムマブ（Ｐｆｉｚｅｒ）などの多くのそのような抗体が、当該技術分野において知られている。いかなる既知のチェックポイント阻害剤抗体も、ＣＡＲ−ＴまたはＣＡＲ−ＮＫ療法と組み合わせて使用されてもよい。チェックポイントタンパク質のいくつかに対する抗体が臨床試験中であり、標準治療に対し耐性を有していた腫瘍に対する予想外の効力を示した。ＣＴＬＡ４（ＣＤ１５２としても知られる）、ＰＤ１（ＣＤ２７９としても知られる）、ＰＤ−Ｌ１（ＣＤ２７４としても知られる）に対する例示的チェックポイント阻害剤抗体は、以下に記載されるが、疾患細胞、組織、または病原体に対する免疫反応の有効性を高めるために、ＣＡＲ−ＴまたはＣＡＲ−ＮＫと組み合わせて使用されてもよい。
【００２２】
疾患治療における免疫系誘導の効用は、例えば、ＣＡＲ−ＴまたはＣＡＲ−ＮＫの投与前に全身腫瘍組織量を低減する他の薬剤との組み合わせにより高めることができる。抗体−薬物複合体（ＡＤＣ）は、ＴＮＢＣのネオアジュバント療法における病理学的完全奏効（ｐＣＲ）で文書化されるように、多くの種類の癌において全身腫瘍組織量を効果的に低減することができる。後述されるように、ＩＭＭＵ−１３０（ラベツズマブ−ＳＮ−３８）、ＩＭＭＵ−１３２（ｈＲＳ７−ＳＮ−３８）及びミラツズマブ−ドキソルビシン、またはｐｒｏ−２−ピロリノドキソルビシン（Ｐｒｏ２ＰＤｏｘ）の抗体複合体などの数々の例示的ＡＤＣが、当該技術分野において知られている。他の例示的な有用なＡＤＣとしては、ＡＭＬに対するゲムツズマブオゾガマイシン（後に市場から回収された）、ＡＬＣＬ及びホジキンリンパ腫に対するブレンツキシマブベドチン、ならびにＨＥＲ２陽性転移乳癌に対するトラスツズマブエムタンシンが挙げられ得る（Ｖｅｒｍａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎ  Ｅｎｇｌ  Ｊ  Ｍｅｄ  ３６７：１７８３−９１，２０１２；Ｂｒｏｓｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｌｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ  ７：１４９０−９６，２００１；Ｆｒａｎｃｉｓｃｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ  １０２：１４５８−６５，２００３）。イノツズマブオゾガマイシン（Ｐｆｉｚｅｒ）、グレムバツモマブベドチン（Ｃｅｌｌｄｅｘ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ）、ＳＡＲ３４１９（Ｓａｎｏｆｉ−Ａｖｅｎｔｉｓ）、ＳＡＲ５６６５８（Ｓａｎｏｆｉ−Ａｖｅｎｔｉｓ）、ＡＭＧ−１７２（Ａｍｇｅｎ）、ＡＭＧ−５９５（Ａｍｇｅｎ）、ＢＡＹ−９４−９３４３（Ｂａｙｅｒ）、ＢＩＩＢ０１５（Ｂｉｏｇｅｎ  Ｉｄｅｃ）、ＢＴ０６２（Ｂｉｏｔｅｓｔ）、ＳＧＮ−７５（Ｓｅａｔｔｌｅ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ）、ＳＧＮ−ＣＤ１９Ａ（Ｓｅａｔｔｌｅ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ）、ボルセツズマブマホドチン（Ｓｅａｔｔｌｅ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ）、ＡＢＴ−４１４（ＡｂｂＶｉｅ）、ＡＳＧ−５ＭＥ（Ａｇｅｎｓｙｓ）、ＡＳＧ−２２ＭＥ（Ａｇｅｎｓｙｓ）、ＡＳＧ−１６Ｍ８Ｆ（Ａｇｅｎｓｙｓ）、ＩＭＧＮ−５２９（ＩｍｍｕｎｏＧｅｎ）、ＩＭＧＮ−８５３（ＩｍｍｕｎｏＧｅｎ）、ＭＤＸ−１２０３（Ｍｅｄａｒｅｘ）、ＭＬＮ−０２６４（Ｍｉｌｌｅｎｉｕｍ）、ＲＧ−７４５０（Ｒｏｃｈｅ／Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ）、ＲＧ−７４５８（Ｒｏｃｈｅ／Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ）、ＲＧ−７５９３（Ｒｏｃｈｅ／Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ）、ＲＧ−７５９６（Ｒｏｃｈｅ／Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ）、ＲＧ−７５９８（Ｒｏｃｈｅ／Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ）、ＲＧ−７５９９（Ｒｏｃｈｅ／Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ）、ＲＧ−７６００（Ｒｏｃｈｅ／Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ）、ＲＧ−７６３６（Ｒｏｃｈｅ／Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ）、抗ＰＳＭＡ  ＡＤＣ（Ｐｒｏｇｅｎｉｃｓ）、ロルボツズマブメルタンシン（ＩｍｍｕｎｏＧｅｎ）、ミラツズマブ−ドキソルビシン（Ｉｍｍｕｎｏｍｅｄｉｃｓ）、ＩＭＭＵ−１３０（Ｉｍｍｕｎｏｍｅｄｉｃｓ）及びＩＭＭＵ−１３２（Ｉｍｍｕｎｏｍｅｄｉｃｓ）などの、他の多くの候補ＡＤＣが現在臨床試験中である。（例えば、Ｌｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｄｒｕｇ  Ｄｉｓｃ  Ｔｈｅｒ  ７：１７８−８４，２０１３；Ｆｉｒｅｒ���Ｇｅｌｌｅｒｍａｎ，Ｊ  Ｈｅｍａｔｏｌ  Ｏｎｃｏｌ  ５：７０，２０１２；Ｂｅｃｋ  ｅｔ  ａｌ．，Ｄｉｓｃｏｖ  Ｍｅｄ１０：３２９−３９，２０１０；Ｍｕｌｌａｒｄ，Ｎａｔｕｒｅ  Ｒｅｖ  Ｄｒｕｇ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ  １２：３２９，２０１３を参照されたい。）任意のそのような公知のＡＤＣは、本明細書に記載されるように、ＣＡＲ−ＴまたはＣＡＲ−ＮＫコンストラクトと組み合わせて使用されてもよい。好ましくは、ＡＤＣがＣＡＲ−ＴまたはＣＡＲ−ＮＫと組み合わせて使用される場合、ＡＤＣは、ＣＡＲ−ＴまたはＣＡＲ−ＮＫの前に投与される。
【００２３】
ある特定の実施形態において、ＣＡＲ−ＴまたはＣＡＲ−ＮＫ療法は、癌の治療に有用となり得る。任意の種類の腫瘍及び任意の種類の腫瘍抗原も標的化され得ると予測される。標的化され得る癌の例示的な種類としては、急性リンパ芽球性白血病、急性骨髄性白血病、胆嚢癌、乳癌、子宮頸癌、慢性リンパ球性白血病、慢性骨髄性白血病、結腸直腸癌、子宮内膜癌、食道、胃、頭頸部癌、ホジキンリンパ腫、肺癌、甲状腺髄様癌、非ホジキンリンパ腫、多発性骨髄腫、腎臓癌、卵巣癌、膵臓癌、神経膠腫、黒色腫、肝臓癌、前立腺癌、及び膀胱癌が挙げられる。しかしながら、当業者には、事実上任意の種類の癌に対して腫瘍関連抗原が知られていることが理解される。
【００２４】
免疫刺激抗体との併用療法は、例えば、腫瘍細胞に対する効力を高めることが報告されている。Ｍｏｒａｌｅｓ−Ｋａｓｔｒｅｓａｎａ  ｅｔ  ａｌ．（Ｃｌｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ  １９：６１５１−６２，２０１３）は、抗ＰＤ−Ｌ１（１０Ｂ５）抗体と抗ＣＤ１３７（１Ｄ８）及び抗ＯＸ４０（ＯＸ８６）抗体との組み合わせが、肝細胞癌のトランスジェニックマウスモデルにおいて効力の向上を提供することを示した。抗ＣＴＬＡ４及び抗ＰＤ１抗体の組み合わせもまた、極めて有効であることが報告されている（Ｗｏｌｃｈｏｋ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎ  Ｅｎｇｌ  Ｊ  Ｍｅｄ  ３６９：１２２−３３，２０１３）。リツキシマブとリルルマブ（Ｉｎｎａｔｅ  Ｐｈａｒｍａ）またはＩＰＨ２１０１（Ｉｎｎａｔｅ  Ｐｈａｒｍａ）などの抗ＫＩＲ抗体との組み合わせもまた、造血器腫瘍に対してより有効であった（Ｋｏｈｒｔ  ｅｔ  ａｌ．，２０１２）。当業者には、主題の併用療法が、免疫刺激、抗腫瘍、または抗感染薬剤である複数の抗体との組み合わせを含んでもよいことが理解される。
【００２５】
様々な疾患状態の治療に使用され得る代替の抗体としては、アブシキシマブ（抗糖タンパク質ＩＩｂ／ＩＩＩａ）、アレムツズマブ（抗ＣＤ５２）、ベバシズマブ（抗ＶＥＧＦ）、セツキシマブ（抗ＥＧＦＲ）、ゲムツズマブ（抗ＣＤ３３）、イブリツモマブ（抗ＣＤ２０）、パニツムマブ（抗ＥＧＦＲ）、リツキシマブ（抗ＣＤ２０）、トシツモマブ（抗ＣＤ２０）、トラスツズマブ（抗ＥｒｂＢ２）、ラムブロリズマブ（抗ＰＤ１受容体）、ニボルマブ（抗ＰＤ１受容体）、イピリムマブ（抗ＣＴＬＡ４）、アバゴボマブ（抗ＣＡ−１２５）、アデカツムマブ（抗ＥｐＣＡＭ）、アトリズマブ（抗ＩＬ−６受容体）、ベンラリズマブ（抗ＣＤ１２５）、オビヌツズマブ（ＧＡ１０１、抗ＣＤ２０）、ＣＣ４９（抗ＴＡＧ−７２）、ＡＢ−ＰＧ１−ＸＧ１−０２６（抗ＰＳＭＡ、米国特許出願第１１／９８３，３７２号、ＡＴＣＣＰＴＡ−４４０５及びＰＴＡ−４４０６として寄託）、Ｄ２／Ｂ（抗ＰＳＭＡ、ＷＯ２００９／１３０５７５）、トシリズマブ（抗ＩＬ−６受容体）、バシリキシマブ（抗ＣＤ２５）、ダクリズマブ（抗ＣＤ２５）、エファリズマブ（抗ＣＤ１１ａ）、ＧＡ１０１（抗ＣＤ２０；Ｇｌｙｃａｒｔ  Ｒｏｃｈｅ）、アタリズマブ（抗α４インテグリン）、オマリズマブ（抗ＩｇＥ）；抗ＴＮＦ−α抗体、例えば、ＣＤＰ５７１（Ｏｆｅｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｄｉａｂｅｔｅｓ  ４５：８８１−８５，２０１１）、ＭＴＮＦＡＩ、Ｍ２ＴＮＦＡＩ、Ｍ３ＴＮＦＡＩ、Ｍ３ＴＮＦＡＢＩ、Ｍ３０２Ｂ、Ｍ３０３（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、Ｒｏｃｋｆｏｒｄ、ＩＬ）、インフリキシマブ（Ｃｅｎｔｏｃｏｒ、Ｍａｌｖｅｒｎ、ＰＡ）、セルトリズマブペゴル（ＵＣＢ、Ｂｒｕｓｓｅｌｓ、Ｂｅｌｇｉｕｍ）、抗ＣＤ４０Ｌ（ＵＣＢ、Ｂｒｕｓｓｅｌｓ、Ｂｅｌｇｉｕｍ）、アダリムマブ（Ａｂｂｏｔｔ、Ａｂｂｏｔｔ  Ｐａｒｋ、ＩＬ）、ベリムマブ（Ｈｕｍａｎ  Ｇｅｎｏｍｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）；抗ＣＤ３８抗体、例えば、ＭＯＲ０３０８７（ＭｏｒｐｈｏＳｙｓ  ＡＧ）、ＭＯＲ２０２（Ｃｅｌｇｅｎｅ）、ＨｕＭａｘ−ＣＤ３８（Ｇｅｎｍａｂ）、またはダラツムマブ（Ｊｏｈｎｓｏｎ＆Ｊｏｈｎｓｏｎ）；抗ＨＩＶ抗体、例えば、Ｐ４／Ｄ１０（米国特許第８，３３３，９７１号）、Ａｂ７５、Ａｂ７６、Ａｂ７７（Ｐａｕｌｉｋ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｅｍ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ  ５８：１７８１−９０，１９９９）、さらに、Ｐｏｌｙｍｕｎ（Ｖｉｅｎｎａ，Ａｕｓｔｒｉａ）により説明及び販売されている、また米国特許第５，８３１，０３４号、米国特許第５，９１１，９８９号、ならびにＶｃｅｌａｒ  ｅｔ  ａｌ．，ＡＩＤＳ  ２００７；２１（１６）：２１６１−２１７０及びＪｏｏｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂ．Ａｇｅｎｔｓ  Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ．２００６；５０（５）：１７７３−９にも記載されている抗ＨＩＶ抗体が挙げられるが、これらに限定されない。
【００２６】
他の実施形態において、ＣＡＲ−ＴまたはＣＡＲ−ＮＫ療法は、細菌、ウイルス、または真菌などの病原生物に感染した対象を治療するために有用となり得る。治療され得る例示的な真菌としては、小胞子菌、白癬菌、表皮菌、スポロトリクス・シェンキィ、クリプトコックス・ネオフォルマンス、コクシジオイデス・イミチス、ヒストプラズマ・カプスラタム、ブラストミセス・デルマティティディス、またはカンジダ・アルビカンスが挙げられる。例示的なウイルスとしては、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）、ヘルペスウイルス、サイトメガロウイルス、狂犬病ウイルス、インフルエンザウイルス、ヒト乳頭腫ウイルス、Ｂ型肝炎ウイルス、Ｃ型肝炎ウイルス、センダイウイルス、ネコ白血病ウイルス、レオウイルス、ポリオウイルス、ヒト血清パルボ様ウイルス、シミアンウイルス４０、呼吸器合胞体ウイルス、マウス乳癌ウイルス、Ｖａｒｉｃｅｌｌａ−Ｚｏｓｔｅｒウイルス、デングウイルス、風疹ウイルス、麻疹ウイルス、アデノウイルス、ヒトＴ細胞白血病ウイルス、Ｅｐｓｔｅｉｎ−Ｂａｒｒウイルス、マウス白血病ウイルス、ムンプスウイルス、水疱性口内炎ウイルス、シンドビスウイルス、リンパ球性脈絡髄膜炎ウイルスまたはブルータングウイルスが挙げられる。例示的な細菌としては、炭疽菌、ストレプトコッカス・アガラクチア、レジオネラ・ニューモフィリア、ストレプトコッカス・ピオゲネス、大腸菌、ナイセリア・ゴノレー、ナイセリア・メニンギティディス、肺炎球菌種、ヘモフィリスインフルエンザＢ、梅毒トレポネーマ、ライム病スピロヘータ、緑膿菌、らい菌、ウシ流産菌、結核菌、またはマイコプラズマ（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ）が挙げられる。感染性物質に対するＡＤＣの例示的な使用は、Ｊｏｈａｎｎｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．（ＡＩＤＳ２０：１９１１−１５，２００６）及びＣｈａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，ＰＬｏｓ  Ｏｎｅ  ７：ｅ４１２３５，２０１２において開示されている。
【００２７】
病原体に対する既知の抗体としては、Ｐ４Ｄ１０（抗ＨＩＶ）、ＣＲ６２６１（抗インフルエンザ）、エクスビビルマブ（抗Ｂ型肝炎）、フェルビズマブ（抗呼吸器合胞体ウイルス）、フォラビルマブ（抗狂犬病ウイルス）、モタビズマブ（抗呼吸器合胞体ウイルス）、パリビズマブ（抗呼吸器合胞体ウイルス）、パノバクマブ（抗シュードモナス菌）、ラフィビルマブ（抗狂犬病ウイルス）、レガビルマブ（抗サイトメガロウイルス）、セビルマブ（抗サイトメガロウイルス）、チビルマブ（抗Ｂ型肝炎）、及びウルトキサズマブ（抗大腸菌）が挙げられるが、これらに限定されない。
【００２８】
主題の薬剤は、免疫反応を高めるために、１つ以上の他の免疫賦活剤と組み合わせて投与されてもよい。免疫賦活剤は、サイトカイン、ケモカイン、幹細胞成長因子、リンホトキシン、造血因子、コロニー刺激因子（ＣＳＦ）、エリスロポエチン、トロンボポエチン、腫瘍壊死因子−α（ＴＮＦ）、ＴＮＦ−β、顆粒球−コロニー刺激因子（Ｇ−ＣＳＦ）、顆粒球マクロファージ−コロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ）、インターフェロン−α、インターフェロン−β、インターフェロン−γ、インターフェロン−λ、「Ｓ１因子」と指定される幹細胞成長因子、ヒト成長ホルモン、Ｎ−メチオニルヒト成長ホルモン、ウシ成長ホルモン、副甲状腺ホルモン、チロキシン、インスリン、プロインスリン、リラキシン、プロリラキシン、卵胞刺激ホルモン（ＦＳＨ）、甲状腺刺激ホルモン（ＴＳＨ）、黄体形成ホルモン（ＬＨ）、肝臓成長因子、プロスタグランジン、線維芽細胞成長因子、プロラクチン、胎盤性ラクトゲン、ＯＢタンパク質、ミュラー管抑制物質、マウスゴナドトロピン関連ペプチド、インヒビン、アクチビン、血管内皮成長因子、インテグリン、ＮＧＦ−β、血小板成長因子、ＴＧＦ−α、ＴＧＦ−β、インスリン様成長因子−Ｉ、インスリン様成長因子−ＩＩ、マクロファージ−ＣＳＦ（Ｍ−ＣＳＦ）、ＩＬ−１、ＩＬ−１α、ＩＬ−２、ＩＬ−３、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＩＬ−８、ＩＬ−９、ＩＬ−１０、ＩＬ−１１、ＩＬ−１２、ＩＬ−１３、ＩＬ−１４、ＩＬ−１５、ＩＬ−１６、ＩＬ−１７、ＩＬ−１８、ＩＬ−２１、ＩＬ−２５、ＬＩＦ、ＦＬＴ−３、アンギオスタチン、トロンボスポンジン、エンドスタチン、またはリンホトキシンが挙げられ得るが、これらに限定されない。
【００２９】
以下の図面は、本明細書の一部を成し、本発明のある特定の実施形態をさらに示すために含まれる。実施形態は、本明細書に示される具体的な実施形態の詳細な説明と組み合わせてこれらの図面の１つ以上を参照することにより、より良く理解され得る。
【図面の簡単な説明】
【００３０】
【図１】例示的なＣＡＲの概略図である。図は、配列番号１８として「（ＧＧＧＧＳ）３」を開示する。
【図２】別の例示的なＣＡＲの概略図である。
【図３】非複合化ラベツズマブ（抗ＣＥＡＣＡＭ５）による前投与後の、ＩＭＭＵ−１３０（ＳＮ−３８及びラベツズマブを含むＡＤＣ）の抗腫瘍活性への影響の欠如を示す。ヌードマウス（Ｎ＝１０）におけるヒト結腸癌のＧＷ−３９肺転移モデルにおいて週２回×２週間の投薬計画で固定用量（１２．５ｍｇ／ｋｇ）のＩＭＭＵ−１３０をそれぞれ投与する１日前に、非複合化ラベツズマブを様々な用量（６．２５、１２．５、２５ｍｇ／ｋｇ）で添加した。Ｇｏｖｉｎｄａｎ  ｅｔ  ａｌ，２０１５，Ｍｏｌ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃｓ，１２：１８３６−４７から適応した。
【図４Ａ】抗体を複数のＨＳＧハプテン部分で標識するために有用な例示的なマレイミド−（ＰＥＧ）ｎ−（ＨＳＧ）ペプチド（配列番号２３）の構造である。
【図４Ｂ】抗体を複数のハプテン部分で標識するために有用な例示的なＳＭ−（ＰＥＧ）ｎ部分の構造である。
【図５】ｈＲＳ７−ＣＡＲのアミノ酸配列である。コード配列内の要素の組織を図の上部に示す。完全配列（配列番号２６）は、ＣＤ８αのシグナルペプチド（配列番号１）、ｈＲＳ７のＶｋ領域（抗Ｔｒｏｐ−２）（配列番号２８）、リンカー配列（配列番号１８）、ｈＲＳ７のＶＨ領域（配列番号１２）、ＣＤ８αのヒンジ領域（配列番号２）、ＣＤ８αの膜貫通領域（配列番号３）、４−１ＢＢの細胞内ドメイン（配列番号７）、及びＣＤ３ζの細胞内ドメイン（配列番号５）を含む。代替の実施形態において、Ｓｃｈｏｎｆｅｌｄ  ｅｔ  ａｌ．，ＵＳ２０１３０２８０２８５に開示される最適化ＣＤ８αヒンジ領域が利用され得る（ＴＴＴＰＡＰＲＰＰＴＰＡＰＴＩＡＳＱＰＬＳＬＲＰＥＡＣＲＰＡＡＧＧＡＶＨＴＲＧＬＤ、配列番号２９）。
【図６】ｈＲＳ７−ＣＡＲ鋳型（配列番号２７）のＤＮＡ配列である。
【図７】ｐＬＶＸ−ｐｕｒｏ−ｈＲＳ７−ＣＡＲレンチウイルスベクターの概略図である。
【図８】ｈＲＳ７−ＣＡＲ  ｍＲＮＡでトランスフェクトされたＮＫ−９２ＭＬ上のｈＲＳ７の発現である。
【図９】ｈＲＳ７−ＣＡＲ  ｍＲＮＡでトランスフェクトされたＮＫ−９２ＭＩによる、Ｔｒｏｐ−２を発現するＨＣＣ１８０６細胞の有意な殺傷である。
【図１０】ｈＲＳ７−ＣＡＲ  ｍＲＮＡでトランスフェクトされたＮＫ−９２ＭＩによって誘導された細胞毒性の増強である。
【図１１】ＮＫ−９２ＭＩ上のｈＲＳ７の発現である。レンチウイルス粒子は、レンチ−Ｘ  ２９３Ｔ細胞から産生され、上清を使用して、ＮＫ−９２ＭＩを形質導入した。３７℃、５％ＣＯ２で４８時間のインキュベーション後、ＷＵ−ＡＦ６４７によるｈＲＳ７の発現について細胞をＢＤ  ＦＡＣＳＣＡＮＴＯフローサイトメーターで評価した。２つの実験結果を示す。
【図１２】ｐＶＬＸ−ｐｕｒｏ−ｈＲＳ７−ＣＡＲで形質導入されたＮｋ−９２ＭＩ細胞のヒストグラムである。
【発明を実施するための形態】
【００３１】
定義
別段に指定されない限り、「ａ」または「ａｎ」は、「１つ以上」を意味する。
【００３２】
本明細書で使用される場合、「及び」及び「または」という用語は、接続語または離接語のいずれかを意味するように使用され得る。つまり、両方の用語は、別段に指定されない限り、「及び／または」と同等として理解されるべきである。
【００３３】
「治療薬剤」は、疾患の治療において有用である原子、分子、または化合物である。治療薬剤の例としては、抗体、抗体断片、ペプチド、薬物、毒素、酵素、ヌクレアーゼ、ホルモン、免疫賦活剤、アンチセンスオリゴヌクレオチド、小分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）、キレート剤、ホウ素化合物、光活性薬剤、染料、及び放射性同位体が挙げられる。
【００３４】
「抗体」は、本明細書で使用される場合、全長（すなわち、自然発生的である、または正常な免疫グロブリン遺伝子断片組換えプロセスにより形成される）免疫グロブリン分子（例えば、ＩｇＧ抗体）、または免疫グロブリン分子の免疫学的に活性な（すなわち、特異的結合）部分、例えば、抗体断片を指す。「抗体」は、モノクローナル、ポリクローナル、二重特異性、多重特異性、マウス、キメラ、ヒト化、及びヒト抗体を含む。
【００３５】
「裸の抗体」は、治療または診断薬剤に結合していない抗体またはその抗原結合断片である。無傷の裸の抗体のＦｃ部分は、補体結合及びＡＤＣＣなどのエフェクター機能を提供し得る（例えば、Ｍａｒｋｒｉｄｅｓ，Ｐｈａｒｍａｃｏｌ  Ｒｅｖ  ５０：５９−８７，１９９８を参照されたい）。裸の抗体が細胞死を誘導する他の機構は、アポトーシスを含み得る。（Ｖａｓｗａｎｉ  ａｎｄ  Ｈａｍｉｌｔｏｎ，Ａｎｎ  Ａｌｌｅｒｇｙ  Ａｓｔｈｍａ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ８１：１０５−１１９，１９９８。）
【００３６】
「抗体断片」は、例えば、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆ（ａｂ）２、Ｆａｂ’、Ｆａｂ、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、ｄＡｂなどの無傷抗体の一部である。構造に関わらず、抗体断片は、本明細書で使用される場合、全長抗体により認識される同じ抗原と結合する。例えば、抗体断片は、可変領域からなる単離された断片、例えば、重鎖及び軽鎖の可変領域からなる「Ｆｖ」断片、または軽鎖及び重鎖可変領域がペプチドリンカーにより接続された組換え単鎖ポリペプチド分子（「ｓｃＦｖタンパク質」）を含む。しばしば「ｓｃＦｖ」と省略される「単鎖抗体」は、相互作用して抗原結合部位を形成するＶＨ及びＶＬドメインの両方を含むポリペプチド鎖からなる。ＶＨ及びＶＬドメインは、通常、１〜２５アミノ酸残基のペプチドにより連結される。抗体断片はまた、ジアボディ、トリアボディ、及び単一ドメイン抗体（ｄＡｂ）を含む。
【００３７】
「キメラ抗体」は、１つの種、好ましくは、げっ歯類抗体由来の抗体の相補性決定領域（ＣＤＲ）を含む可変ドメインを含有する組換えタンパク質であり、一方、抗体分子の定常ドメインは、ヒト抗体の定常ドメインから得られる。獣医学的用途において、キメラ抗体の定常ドメインは、ネコまたはイヌなどの他の種の定常ドメインから得られてもよい。
【００３８】
「ヒト化抗体」は、１つの種からの抗体、例えば、げっ歯類抗体からのＣＤＲが、げっ歯類抗体の可変重鎖及び軽鎖から、ヒトフレームワーク領域（ＦＲ）配列を含むヒト重鎖及び軽鎖可変ドメインに移された組換えタンパク質である。抗体分子の定常ドメインは、ヒト抗体の定常ドメインから得られる。結合活性を維持するために、親（例えば、マウス）抗体からの限定された数のＦＲアミノ酸残基が、対応するヒトＦＲ残基に置換され得る。
【００３９】
「ヒト抗体」は、抗原負荷に応答して特定のヒト抗体を産生するように遺伝子操作されたトランスジェニックマウス由来の抗体である。この技術において、ヒト重鎖及び軽鎖遺伝子座の要素は、内在性重鎖及び軽鎖遺伝子座の標的化された断絶を含有する胚幹細胞株から得られたマウスの株に導入される。トランスジェニックマウスは、ヒト抗原に特異的なヒト抗体を合成することができ、マウスを使用して、ヒト抗体分泌ハイブリドーマを産生することができる。トランスジェニックマウスからヒト抗体を得るための方法は、Ｇｒｅｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  Ｇｅｎｅｔ．７：１３（１９９４）、Ｌｏｎｂｅｒｇ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  ３６８：８５６（１９９４）、及びＴａｙｌｏｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｉｎｔ．Ｉｍｍｕｎ．６：５７９（１９９４）により説明されている。ヒト抗体はまた、遺伝子または染色体トランスフェクション法、及びファージディスプレイ技術により構築することができ、これらは全て、当該技術分野において知られている。（例えば、非免疫化ドナーからの免疫グロブリン可変ドメイン遺伝子レパートリーからの、インビトロでのヒト抗体及びその断片の産生に関して、ＭｃＣａｆｆｅｒｔｙ  ｅｔ  ａｌ．，１９９０，Ｎａｔｕｒｅ  ３４８：５５２−５５３を参照されたい）。この技術において、抗体可変ドメイン遺伝子は、繊維状バクテリオファージの主要または微量外被タンパク質遺伝子にインフレームでクローニングされ、ファージ粒子の表面上に機能性抗体断片として表示される。繊維状粒子はファージゲノムの一本鎖ＤＮＡコピーを含有するため、抗体の機能的特性に基づく選択はまた、それらの特性を示す抗体をコードする遺伝子の選択をもたらす。このようにして、ファージは、Ｂ細胞の特性のいくつかを模倣する。ファージディスプレイは、様々な形式で行うことができるが、それらの検討については、例えば、Ｊｏｈｎｓｏｎ  ａｎｄ  Ｃｈｉｓｗｅｌｌ，Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｏｐｉｎｉｏｎ  ｉｎ  Ｓｔｒｕｃｔｕｒａｌ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  ３：５５６４−５７１（１９９３）を参照されたい。ヒト抗体はまた、インビトロ活性化Ｂ細胞により生成されてもよい。（米国特許第５，５６７，６１０号及び同第５，２２９，２７５号を参照されたい）。
【００４０】
本明細書で使用される場合、「抗体融合タンパク質」という用語は、抗体または抗体断片が別のタンパク質またはペプチド、例えば、同じまたは異なる抗体若しくは抗体断片または別のペプチドまたはタンパク質に連結した、組換えにより産生された抗原結合分子である。融合タンパク質は、単一の抗体成分、多価若しくは多重特異性の異なる抗体成分の組み合わせ、または同じ抗体成分の複数のコピーを含んでもよい。融合タンパク質は、抗体または抗体断片及び治療薬剤を追加的に含んでもよい。
【００４１】
本明細書に記載の抗体調製物または組成物は、投与される量が生理学的に重要である場合、「治療上効果的な量」で投与されると言われる。薬剤は、その存在が受容対象の生理学に検出可能な変化をもたらす場合、生理学的に重要である。具体的実施形態において、抗体調製物は、その存在が抗腫瘍反応を惹起する、または感染性疾患状態の兆候及び症状を軽減する場合、生理学的に重要である。生理学的に重要な効果はまた、標的細胞の成長阻害または死滅をもたらす、受容対象における体液性及び／または細胞性免疫反応の誘起であってもよい。
【００４２】
ＣＡＲ、ＣＡＲ−Ｔ、及びＣＡＲ−ＮＫコンストラクト
ＣＡＲコンストラクトは、以下の実施例で開示されるように生成され、使用され得る。一般的に、コンストラクトは、ｓｃＦｖと膜貫通ドメインとの間にヒンジまたは他のリンカーを一般に有する、ｓｃＦｖ、Ｆａｂ、または他の抗体部分に連結するリーダー配列を含み得る。膜貫通ドメインは、ＣＤ２８またはＣＤ３−ζなどの細胞内シグナル伝達ドメインに結合し、典型的には、後述されるように、１つ以上の共刺激ドメインを含む。
【００４３】
有用なＣＡＲ、ＣＡＲ−Ｔ、及びＣＡＲ−ＮＫコンストラクトは、当該技術分野において知られている任意のそのようなコンストラクトを含み得る。幅広いＣＡＲコンストラクトが報告されている。Ｒｅｎ−Ｈｅｉｄｅｎｒｅｉｃｈ  ｅｔ  ａｌ．（２０００、Ｈｕｍ  Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒ  １１：９−１９）は、ＦｃＲＩγの膜貫通／細胞質部分に直接融合した、またはｓｃＦｖとγ鎖との間にＣＤ８αヒンジを有するのいずれかの、ＧＡ７３３．２（抗ＥＧＰ−２）抗体由来のｓｃＦｖを含むキメラＴ細胞受容体を開示した。患者からの活性化Ｔ細胞は、エクスビボにて抗ＣＤ３抗体で刺激した後、キメラ受容体をコードする組換えレトロウイルスで形質導入された。
【００４４】
Ｕｒｂａｎｓｋａ  ｅｔ  ａｌ．（２０１２、Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ  ７２：１８４４−５２）は、抗腫瘍抗体の代わりにアビジンを組み込んだビオチン結合免疫受容体（ＢＢＩＲ）を含むＣＡＲコンストラクトを報告した。ビオチン化された抗ＥｐＣＡＭ抗体で腫瘍細胞を標識後、ＣＡＲ−Ｔ細胞を投与し、アビジン−ビオチン結合によって標的細胞に局在化させた。ＣＡＲコンストラクトは、レンチウイルスベクターに組み込まれ、ＣＤ８ａヒンジ、及び膜貫通配列を含んだＢＢＩＲに加えて、ＣＤ３−ζのみ、またはＣＤ２８細胞内ドメインと組み合わされたＣＤ３−ζの細胞内ドメインに結合した。ヒト卵巣癌のマウス異種移植モデルにおけるＢＢＩＲ−ＣＡＲ−Ｔ細胞及びビオチン化抗体の直接の腫瘍内注射は、腫瘍成長の減少をもたらした。これらのコンストラクトは、ＷＯ２０１３／０４４２２５にさらに記載されている。有用な追加の共刺激細胞内ドメインとしは、ＣＤ２７、ＣＤ２、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＰＤ−１、ＬＦＡ−１、ＣＤ７、ＬＩＧＨＴ、ＮＫＧ２Ｃ、及びＢ７−Ｈ３が挙げられた。有用な追加の膜貫通ドメインは、Ｔ細胞受容体、ＣＤ２８、ＣＤ３イプシロン、ＣＤ４５、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ８、ＣＤ９、ＣＤ１６、ＣＤ２２、ＣＤ３３、ＣＤ３７、ＣＤ６４、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ１３４、ＣＤ１３７、またはＣＤ１５４のアルファ、ベータ、またはゼータ鎖から得ることができた。
【００４５】
Ｓａｄｅｌａｉｎ  ｅｔ  ａｌ．（２０１３、Ｃａｎｃｅｒ  Ｄｉｓｃｏｖ  ３：３８８−９８）は、スペーサー配列を介してＣＤ３−ζまたはＣＤ２８膜貫通ドメインに結合したｓｃＦｖ結合部分を、及びＣＤ３−ζエンドドメイン、ＣＤ２８エンドドメイン、ＯＸ４０、４−１ＢＢ、Ｌｃｋ及び／またはＩＣＯＳなどの１つ以上の細胞内エフェクターを含む、当該技術分野において知られている多数のＣＡＲ及びＣＡＲ−Ｔコンストラクトを記載した。
【００４６】
Ｓｈｉｒａｓｕ  ｅｔ  ａｌ．（Ｊ  Ｂｉｏｍｅｄ  Ｂｉｏｔｅｃｈ  ２０１２：８５３８７９）は、ＣＤ８リーダー配列、完全ヒト抗体から得られた抗ＥｐＣＡＭ  ｓｃＦｖ、ＣＤ８ヒンジ、ＣＤ２８膜貫通、及び細胞内ドメイン、及びＣＤ３−ζ細胞内ドメインを組み込んだレンチウイルスＣＡＲ及びＣＡＲ−Ｔコンストラクトを生成した。
【００４７】
Ｈｅｒｍａｎｓｏｎ  ＆  Ｋａｕｆｍａｎ（２０１５、Ｆｒｏｎｔ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ６：１９５）は、抗ＨＥＲ−２／ｍＣＤ８αヒンジ／ＣＤ３ζ；抗ＣＤ２０／ｍＣＤ８αヒンジ／ＣＤ３ζ；抗ＣＤ１９／ＣＤ８α  ＴＭ／ＣＤ３ζ；抗ＥｐＣＡＭ／ＣＤ８αヒンジ／ＣＤ２８／ＣＤ３ζ；抗ＨＬＡ−Ａ２  ＥＢＮＡ３Ｃ／ＣＤ８αヒンジ／ＣＤ２８／ＣＤ３ζ；抗ＧＤ２／ｍＣＤ８αヒンジ／ＣＤ３ζ；抗ＣＳ１／ＣＤ２８  ＴＭ／ＣＤ２８／ＣＤ３ζ；抗ＣＤ１３８／ＣＤ８αヒンジ／ＣＤ３ζ；抗ＨＥＲ−２／ＣＤ８αヒンジ／ＣＤ１３７／ＣＤ３ζ；抗ＰＳＣＡ／ＣＤ２８ヒンジ／ＣＤ２８  ＴＭ／ＣＤ３ζ；及び抗ＰＳＣＡ／ＤＡＰ１２  ＴＭ、及びシグナル伝達を含む、ＣＡＲ−ＮＫ細胞株で使用される多数のＣＡＲコンストラクトを報告した。当業者には、ＣＡＲコンストラクトの既知の成分のいずれかをＴ細胞またはＮＫ細胞に組み込んで、本発明の範囲内のＣＡＲ−ＴまたはＣＡＲ−ＮＫ細胞を産生することが理解される。
【００４８】
ＣＤ２８、ＩＣＯＳ、ＣＴＬＡ４、ＰＤ１、ＰＴＬＡ、ＨＶＥＭ、ＣＤ２７、４−１ＢＢ、ＯＸ４０、ＤＲ３、ＤｃＲ３、ＦＡＳ（ＣＤ９５）、ＧＩＴＲ、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＳＬＡＭ、ＣＤ２、２Ｂ４、ＴＩＭ１、ＴＩＭ２、ＴＩＭ３、ＴＩＭ４、ＴＮＦＲ１（ＣＤ１２０ａ）、ＴＮＦＲ２（ＣＤ１２０ｂ）、ＬＴβＲ、Ｌｙｌ０８、ＣＤ８４、Ｌｙ９、ＣＲＡＣＣ、ＢＴＮ１、ＢＴＮ２、ＢＴＮ３、ＴＩＧＩＴ、ＣＤ２２６、ＣＲＴＡＭ（ＣＤ３５５）、ＣＤ９６、ＣＤ１６０、ＬＡＧ３、ＬＡＩＲ１、Ｂ７−１、ＲＡＮＫ（ＣＤ２６５）、ＴＡＣＩ、ＢＡＦＦＲ、ＢＣＭＡ、ＴＷＥＡＫＲ、ＥＤＡＲ、ＸＥＤＡＲ、ＲＥＬＴ、ＤＲ６、ＴＲＯＹ、ＮＧＦＲ、ＯＰＧ、ＴＲＡＩＬＲ１−４、及びＢ７−Ｈ１を含む、他の共刺激及び共阻害受容体が報告されている（例えば、Ｃｈｅｎ  ＆  Ｆｌｉｅｓ，Ｎａｔ  Ｒｅｖ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １２：２２７−４２，２０１３を参照されたい）。Ｔ細胞依存性の免疫反応に対するこれらまたは他の既知の補助因子を主題のＣＡＲ、ＣＡＲ−Ｔ、及びＣＡＲ−ＮＫに組み込んでもよく、あるいは、ＣＡＲ−ＴまたはＣＡＲ−ＮＫ免疫治療のアジュバントとして投与されてもよい。
【００４９】
ＣＡＲ、ＣＡＲ−Ｔ、及びＣＡＲ−ＮＫコンストラクトの大半は、疾患細胞標的化のためのｓｃＦｖ抗体断片に基づいているが、この目的のための他の抗体断片の使用も開示されている。例示的な開示において、Ｎｏｌａｎ  ｅｔ  ａｌ．（１９９９、Ｃｌｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ  ５：３９２８−４１）は、キメラ免疫グロブリン−Ｔ細胞受容体を作製するための抗ＣＥＡ  Ｆａｂ抗体断片の使用を開示した。直接の比較により、Ｆａｂ断片は、発現及び抗原結合についてｓｃＦｖ断片と同じく効果的であることが示された。Ｆａｂ断片は、抗原結合親和性の安定性の面においてｓｃＦｖ断片を上回って有利であり得る。
【００５０】
ＣＡＲ配列は、発現ベクターに組み込まれる。様々な発現ベクターが当該技術分野において知られており、任意のそのようなベクターが利用され得る。好ましい実施形態において、ベクターは、レトロウイルスまたはレンチウイルスベクターである。癌免疫治療用のＮＫ細胞の遺伝子操作技術は、Ｃａｒｌｓｔｅｎ  ＆  Ｃｈｉｌｄｓによって記載されている（２０１５、Ｆｒｏｎｔ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ６：２６６）。ＮＫ細胞感染に使用されるウイルスベクターには主に、レトロウイルス、及びレンチウイルスベクターが含まれる（Ｃａｒｌｓｔｅｎ  ＆  Ｃｈｉｌｄｓ、２０１５）。しかしながら、レトロウイルス形質導入を受けた初代ＮＫ細胞の生存率の減少は、このアプローチを制限し得る（Ｃａｒｌｓｔｅｎ  ＆  Ｃｈｉｌｄｓ、２０１５）。レンチウイルス形質導入は、ある程度有効であり、１５〜４０％の効率であった（Ｃａｒｌｓｔｅｎ  ＆  Ｃｈｉｌｄｓ、２０１５）。エレクトロポレーションまたはリポフェクションによるトランスフェクションは、ウイルス形質導入よりもアポトーシスの誘導がより低くなり、導入遺伝子（複数可）のより急速であるが一過性の発現をもたらすことを報告した（Ｃａｒｌｓｔｅｎ  ＆  Ｃｈｉｌｄｓ、２０１５）。効力を増すために使用戦略には、移動を改善するための（クローン持続性及び拡張を促進する）ＩＬ−２またはＩＬ−１５、ＣＣＲ７、及びＣＸＣＲ３、ならびに細胞毒性を増すためのＣＡＲ、ＣＤ１７、ＩＬ−２、ＩＬ−１５、ＮＫＧ２Ａ、及び二重陰性ＴＧＦ−β  ＩＩ受容体などの様々な遺伝子が含まれている。当業者には、ＣＡＲ、ＣＡＲ−Ｔ、及びＣＡＲ−ＮＫコンストラクトに対して有用であると知られているこれら及び他のエフェクターが、本発明の方法及び組成物で利用され得ることが理解される。
【００５１】
インターフェロン療法
様々な実施形態において、ＣＡＲ−ＴまたはＣＡＲ−ＮＫコンストラクトは、インターフェロン−α、インターフェロン−β、またはインターフェロン−λなどの１つ以上のインターフェロンと組み合わせて使用され得る。ヒトインターフェロンは、当該技術分野において周知であり、ヒトインターフェロンのアミノ酸配列は、公開データベース（例えば、ＧｅｎＢａｎｋ  Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ  Ｎｏｓ．ＡＡＡ５２７１６．１；ＡＡＡ５２７２４；ＡＡＣ４１７０２．１；ＥＡＷ５６８７１．１；ＥＡＷ５６８７０．１；ＥＡＷ５６８６９．１）から容易に入手することができる。ヒトインターフェロンはまた、様々な販売会社（例えば、Ｃｅｌｌ  Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｉｎｃ．、Ｄａｎｖｅｒｓ、ＭＡ；Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ、Ｓｏｕｔｈ  Ｓａｎ  Ｆｒａｎｃｉｓｃｏ、ＣＡ；ＥＭＤ  Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ、Ｂｉｌｌｅｒｉｃａ、ＭＡ）から商業的に入手することができる。
【００５２】
インターフェロン−α（ＩＦＮα）は、癌の動物モデル（Ｆｅｒｒａｎｔｉｎｉ  ｅｔ  ａｌ．，１９９４，Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １５３：４６０４−１５）及びヒト癌患者（Ｇｕｔｔｅｒｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９８０，Ａｎｎ  Ｉｎｔｅｒｎ  Ｍｅｄ９３：３９９−４０６）において抗腫瘍活性を有することが報告されている。ＩＦＮαは、癌遺伝子の下方制御、腫瘍抑制因子の上方制御、腫瘍表面ＭＨＣクラスＩタンパク質の発現の増加による免疫認識の向上、アポトーシスの増強、及び化学療法薬に対する感作を含む、様々な直接的抗腫瘍効果を発揮することができる（Ｇｕｔｔｅｒｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９９４，ＰＮＡＳ  ＵＳＡ  ９１：１１９８−２０５；Ｍａｔａｒｒｅｓｅ  ｅｔ  ａｌ．，２００２，Ａｍ  Ｊ  Ｐａｔｈｏｌ  １６０：１５０７−２０；Ｍｅｃｃｈｉａ  ｅｔ  ａｌ．，２０００，Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒ  ７：１６７−７９；Ｓａｂａａｗｙ  ｅｔ  ａｌ．，１９９９，Ｉｎｔ  Ｊ  Ｏｎｃｏｌ  １４：１１４３−５１；Ｔａｋａｏｋａ  ｅｔ  ａｌ，２００３，Ｎａｔｕｒｅ  ４２４：５１６−２３）。いくつかの腫瘍に対しては、ＩＦＮαは、ＳＴＡＴ１の活性化による直接的及び強力な抗増殖効果を有し得る（Ｇｒｉｍｌｅｙ  ｅｔ  ａｌ．，１９９８  Ｂｌｏｏｄ  ９１：３０１７−２７）。インターフェロン−α２ｂは、ｈＬ２４３抗ＨＬＡ−ＤＲ抗体などの抗腫瘍抗体に複合化されており、インビトロ及びインビボでリンパ腫及び黒色腫細胞を枯渇させる（Ｒｏｓｓｉ  ｅｔ  ａｌ．，２０１１，Ｂｌｏｏｄ  １１８：１８７７−８４）。
【００５３】
間接的には、ＩＦＮαは、血管形成を阻害し得（Ｓｉｄｋｙ  ａｎｄ  Ｂｏｒｄｅｎ，１９８７，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ  ４７：５１５５−６１）、宿主免疫細胞を刺激し得るが、これは、全体的な抗腫瘍反応に不可欠となり得るがほとんど正当に評価されていない（Ｂｅｌａｒｄｅｌｌｉ  ｅｔ  ａｌ．，１９９６，Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｔｏｄａｙ  １７：３６９−７２）。ＩＦＮαは、骨髄細胞（Ｒａｅｆｓｋｙ  ｅｔ  ａｌ，１９８５，Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １３５：２５０７−１２；Ｌｕｆｔ  ｅｔ  ａｌ，１９９８，Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １６１：１９４７−５３）、Ｔ細胞（Ｃａｒｒｅｒｏ  ｅｔ  ａｌ，２００６，Ｊ  Ｅｘｐ  Ｍｅｄ  ２０３：９３３−４０；Ｐｉｌｌｉｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，１９９９，Ｅｕｒ  Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ２９：１０４１−５０）、及びＢ細胞（Ｌｅ  ｅｔ  ａｌ，２００１，Ｉｍｍｕｎｉｔｙ  １４：４６１−７０）に対する効果を通して、免疫反応に対し多面的な影響を有する。自然免疫系の重要な調整因子として、ＩＦＮαは、樹状細胞の急速な分化及び活性化を誘導し（Ｂｅｌａｒｄｅｌｌｉ  ｅｔ  ａｌ，２００４，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ  ６４：６８２７−３０；Ｐａｑｕｅｔｔｅ  ｅｔ  ａｌ．，１９９８，Ｊ  Ｌｅｕｋｏｃ  Ｂｉｏｌ  ６４：３５８−６７；Ｓａｎｔｉｎｉ  ｅｔ  ａｌ．，２０００，Ｊ  Ｅｘｐ  Ｍｅｄ  １９１：１７７７−８８）、ＮＫ細胞の細胞毒性、遊走、サイトカイン産生及び抗体依存性細胞毒性（ＡＤＣＣ）を高める（Ｂｉｒｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９９９，Ａｎｎ  Ｒｅｖ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １７：１８９−２２０；Ｂｒｕｎｄａ  ｅｔ  ａｌ．１９８４，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ  ４４：５９７−６０１）。
【００５４】
インターフェロン−βは、様々な固形腫瘍の治療に有効であることが報告されている。ＨＣＶ関連肝臓癌を有する患者における原発腫瘍の完全切除またはアブレーション後、６００万単位のＩＦＮ−βで週２回３６ヶ月間治療された患者は、肝細胞癌の再発の低下を示した（Ｉｋｅｄａ  ｅｔ  ａｌ．，２０００，Ｈｅｐａｔｏｌｏｇｙ  ３２：２２８−３２）。インターフェロン−βによる遺伝子治療は、神経膠腫、黒色腫、及び腎細胞癌のアポトーシスを誘導した（Ｙｏｓｈｉｄａ  ｅｔ  ａｌ．，２００４，Ｃａｎｃｅｒ  Ｓｃｉ  ９５：８５８−６５）。内因性のＩＦＮ−βは、インビボで血管形成を阻害することにより、腫瘍成長を阻害することが観察されている（Ｊａｂｌｏｎｓｋａ  ｅｔ  ａｌ．，２０１０，Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｉｎｖｅｓｔ．１２０：１１５１−６４）。
【００５５】
ＩＩＩ型インターフェロンと指定されるＩＦＮ−λは、ＩＦＮ−λ１、２、３からなるサイトカイン（それぞれインターロイキン−２９、２８Ａ、及び２８Ｂとも呼ばれる）の新しく説明された群であり、それらは染色体１９上に位置する３つの異なる遺伝子により遺伝的にコードされている（Ｋｏｔｅｎｋｏ  ｅｔ  ａｌ．，２００３，Ｎａｔ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ４：６９−７７；Ｓｈｅｐｐａｒｄ  ｅｔ  ａｌ．，２００３，Ｎａｔ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ４：６３−８）。タンパク質レベルでは、ＩＦＮ−λ２及びＩＦＮ−λ３は極めて相同性であり、９６％のアミノ酸同一性を有し、一方、ＩＦＮ−λ１は、ＩＦＮ−λ２及びＩＦＮ−λ３と約８１％の相同性を共有している（Ｓｈｅｐｐａｒｄ  ｅｔ  ａｌ．，２００３，Ｎａｔ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ４：６３−８）。ＩＦＮ−λは、ＪＡＫ１及びＴＹＫ２キナーゼの活性化、ＳＴＡＴタンパク質のリン酸化、ならびにＩＦＮ刺激遺伝子因子３（ＩＳＧＦ３）の転写複合物の活性化を含む、Ｉ型ＩＦＮにより誘導されるものと同様のＪＡＫ／ＳＴＡＴ経路を介してシグナル伝達を活性化する（Ｗｉｔｔｅ  ｅｔ  ａｌ．，２０１０，Ｃｙｔｏｋｉｎｅ  Ｇｒｏｗｔｈ  Ｆａｃｔｏｒ  Ｒｅｖ  ２１：２３７−５１；Ｚｈｏｕ  ｅｔ  ａｌ．，２００７，Ｊ  Ｖｉｒｏｌ  ８１：７７４９−５８）。
【００５６】
ＩＩＩ型ＩＦＮ系とＩ型ＩＦＮ系との間の大きな違いは、それぞれの受容体複合物の分布である。ＩＦＮ−α／βは、２つの広範囲に発現したＩ型インターフェロン受容体を介してシグナル伝達し、ＩＦＮ−α／β投与に関連した結果的な全身毒性が、その治療薬剤としての使用を制限している（Ｐｅｓｔｋａ  ｅｔ  ａｌ．，２００７，Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ  ２８２：２００４７−５１）。対照的に、ＩＦＮ−λは、固有のＩＦＮ−λ受容体１（ＩＦＮ−λＲ１）及びＩＬ−１０受容体２（ＩＬ−１０Ｒ２）からなるヘテロ二量体受容体複合物を介してシグナル伝達する。以前に報告されたように（Ｗｉｔｔｅ  ｅｔ  ａｌ．，２００９，Ｇｅｎｅｓ  Ｉｍｍｕｎ  １０：７０２−１４）、ＩＦＮ−λＲ１は、非常に制限された発現パターンを有し、上皮細胞、メラニン細胞、及び肝細胞において最も高いレベルであり、原発中枢神経系（ＣＮＳ）細胞において最も低いレベルである。血液免疫系細胞は、ＩＦＮ−λ作用を阻害する、高レベルの短いＩＦＮ−λ受容体スプライス変異（ｓＩＦＮ−λＲ１）を発現する。神経細胞及び免疫細胞の制限された反応性は、ＩＦＮ−α療法に関連することの多い重度の毒性が、ＩＦＮ−λにより存在しない、または大幅に低減され得ることを示唆している（Ｗｉｔｔｅ  ｅｔ  ａｌ．，２００９，Ｇｅｎｅｓ  Ｉｍｍｕｎ  １０：７０２−１４；Ｗｉｔｔｅ  ｅｔ  ａｌ．，２０１０，Ｃｙｔｏｋｉｎｅ  Ｇｒｏｗｔｈ  Ｆａｃｔｏｒ  Ｒｅｖ  ２１：２３７−５１）。最近の出版物によれば、ＩＦＮ−α及びＩＦＮ−λは肝細胞においてＩＳＧ（インターフェロン刺激遺伝子）の共通の組の発現を誘導するが、ＩＦＮ−αとは異なり、ＩＦＮ−λの投与は、精製されたリンパ球または単球において、ＳＴＡＴ活性化またはＩＳＧ発現を誘導しないことが報告されている（Ｄｉｃｋｅｎｓｈｅｅｔｓ  ｅｔ  ａｌ．，２０１３，Ｊ  Ｌｅｕｋｏｃ  Ｂｉｏｌ．９３、１２／２０／１２にオンラインで公開）。ＩＦＮ−λは、ＩＦＮ−α療法に関連することの多い白血球減少症を誘導する可能性が低いため、慢性ＨＣＶ感染の治療においてＩＦＮ−αよりも優れている可能性があることが示唆された（Ｄｉｃｋｅｎｓｈｅｅｔｓ  ｅｔ  ａｌ．，２０１３）。
【００５７】
ＩＦＮ−λは、ＩＬ−１０関連サイトカインに類似した構造的特徴を示すが、機能的にはＩ型ＩＦＮ様抗ウイルス及び抗増殖活性を有する（Ｗｉｔｔｅ  ｅｔ  ａｌ．，２００９，Ｇｅｎｅｓ  Ｉｍｍｕｎ  １０：７０２−１４；Ａｎｋ  ｅｔ  ａｌ．，２００６，Ｊ  Ｖｉｒｏｌ  ８０：４５０１−９；Ｒｏｂｅｋ  ｅｔ  ａｌ．，２００５，Ｊ  Ｖｉｒｏｌ  ７９：３８５１−４）。ＩＦＮ−λ１及びＩＦＮ−λ２は、ＤＮＡウイルス（Ｂ型肝炎ウイルス（Ｒｏｂｅｋ  ｅｔ  ａｌ．，２００５，Ｊ  Ｖｉｒｏｌ  ７９：３８５１−４、Ｄｏｙｌｅ  ｅｔ  ａｌ．，２００６，Ｈｅｐａｔｏｌｏｇｙ  ４４：８９６−９０６）及び単純ヘルペスウイルス２型（Ａｎｋ  ｅｔ  ａｌ．，２００８，Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １８０：２４７４−８５））、ｓｓ（＋）ＲＮＡウイルス（ＥＭＣＶ；Ｓｈｅｐｐａｒｄ  ｅｔ  ａｌ．，２００３，Ｎａｔ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ４：６３−８）及びＣ型肝炎ウイルス（Ｒｏｂｅｋ  ｅｔ  ａｌ．，２００５，Ｊ  Ｖｉｒｏｌ  ７９：３８５１−４、Ｄｏｙｌｅ  ｅｔ  ａｌ．，２００６，Ｈｅｐａｔｏｌｏｇｙ  ４４：８９６−９０６；Ｍａｒｃｅｌｌｏ  ｅｔ  ａｌ．，２００６，Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌ  １３１：１８８７−９８；Ｐａｇｌｉａｃｃｅｔｔｉ  ｅｔ  ａｌ．，２００８，Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ  ２８３：３００７９−８９）、ｓｓ（−）ＲＮＡウイルス（水疱性口内炎ウイルス；Ｐａｇｌｉａｃｃｅｔｔｉ  ｅｔ  ａｌ．，２００８，Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ  ２８３：３００７９−８９）及びインフルエンザＡウイルス（Ｊｅｗｅｌｌ  ｅｔ  ａｌ．，２０１０，Ｊ  Ｖｉｒｏｌ  ８４：１１５１５−２２）及び二本鎖ＲＮＡウイルス、例えばロタウイルス（Ｐｏｔｔ  ｅｔ  ａｌ．，２０１１，ＰＮＡＳ  ＵＳＡ  １０８：７９４４０４９）を含む、様々なウイルスのウイルス複製または細胞変性効果を低減することが実証されている。ＩＦＮ−λ３は、遺伝子研究から、ＨＣＶ感染における重要なサイトカインとして同定されており（Ｇｅ  ｅｔ  ａｌ．，２００９，Ｎａｔｕｒｅ  ４６１：３９９−４０１）、またＥＭＣＶに対する強力な活性を示している（Ｄｅｌｌｇｒｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，２００９，Ｇｅｎｅｓ  Ｉｍｍｕｎ  １０：１２５−３１）。ライノウイルス誘導ＩＦＮ−λ産生の欠如が、ライノウイルス誘導喘息増悪の重症度と極めて相関することが報告され（Ｃｏｎｔｏｌｉ  ｅｔ  ａｌ．，２００６，Ｎａｔｕｒｅ  Ｍｅｄ  １２：１０２３−２６）、ＩＦＮ−λ療法は、アレルギー性喘息の治療の新たなアプローチとして示唆されている（Ｅｄｗａｒｄｓ  ａｎｄ  Ｊｏｈｎｓｔｏｎ，２０１１，ＥＭＢＯ  Ｍｏｌ  Ｍｅｄ  ３：３０６−８；Ｋｏｌｔｓｉｄａ  ｅｔ  ａｌ．，２０１１，ＥＭＢＯ  Ｍｏｌ  Ｍｅｄ  ３：３４８−６１）。
【００５８】
ＩＦＮ−λの抗増殖活性が、神経内分泌癌ＢＯＮ１（Ｚｉｔｚｍａｎｎ  ｅｔ  ａｌ．，２００６，Ｂｉｏｃｈｅｍ  Ｂｉｏｐｈｙｓ  Ｒｅｓ  Ｃｏｍｍｕｎ  ３４４：１３３４−４１）、膠芽腫ＬＮ３１９（Ｍｅａｇｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，２００５，Ｃｙｔｏｋｉｎｅ  ３１：１０９−１８）、不死化ケラチノサイトＨａＣａＴ（Ｍａｈｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，２００８，Ｃａｎｃｅｒ  Ｂｉｏｌ  Ｔｈｅｒ  ７：１１０９−１５）、黒色腫Ｆ０１（Ｇｕｅｎｔｅｒｂｅｒｇ  ｅｔ  ａｌ．，２０１０，Ｍｏｌ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｈｅｒ  ９：５１０−２０）、及び食道癌ＴＥ−１１（Ｌｉ  ｅｔ  ａｌ．，２０１０，Ｅｕｒ  Ｊ  Ｃａｎｃｅｒ  ４６：１８０−９０）を含むいくつかのヒト癌細胞株において確立されている。動物モデルにおいて、ＩＦＮ−λは、自然及び適応免疫反応を通して腫瘍のアポトーシスと破壊の両方を誘導し、ＩＦＮ−λの局所送達がヒト悪性腫瘍の治療において有用な付加的戦略となり得ることが示唆されている（Ｎｕｍａｓａｋｉ  ｅｔ  ａｌ．，２００７，Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １７８：５０８６−９８）。Ｆａｂ連結インターフェロン−λは、標的細胞において強力な抗腫瘍及び抗ウイルス活性を有することが実証されている（Ｌｉｕ  ｅｔ  ａｌ．，２０１３，ＰＬｏＳ  Ｏｎｅ  ８：ｅ６３９４０）。
【００５９】
臨床設定において、ＰＥＧ化ＩＦＮ−λ１（ＰＥＧ−ＩＦＮ−λ１）は、慢性Ｃ型肝炎ウイルス感染患者に対して暫定的に使用されている。第Ｉｂ相試験（ｎ＝５６）において、ＩＦＮ−α療法後に再発した遺伝子型１型ＨＣＶ患者にＰＥＧ−ＩＦＮ−λ１を投与すると、抗ウイルス活性が、全ての用量レベル（０．５〜３．０μｇ／ｋｇ）で観察され、ウイルス量が２．３ｌｏｇから４．０ｌｏｇに低下した（Ｍｕｉｒ  ｅｔ  ａｌ．，２０１０，Ｈｅｐａｔｏｌｏｇｙ  ５２：８２２−３２）。第ＩＩｂ相試験（ｎ＝５２６）では、ＨＣＶ遺伝子型１及び４型の患者が、ＰＥＧ−ＩＦＮ−αと比較して、ＰＥＧ−ＩＦＮ−λ１による治療に対する大幅に高い反応率を有することが示された。同時に、Ｉ型インターフェロン治療に一般的に関連する有害事象の割合が、ＰＥＧ−ＩＦＮ−αよりもＰＥＧ−ＩＦＮ−λ１において低かった。好中球減少症及び血小板減少症は稀にしか観察されず、インフルエンザ様症状、貧血、及び骨格筋症状の割合が、ＰＥＧ−ＩＦＮ−α処理で観察された割合の約１／３に減少した。しかしながら、重篤な有害事象、うつ病、及び他の一般的な有害事象の割合（≧１０％）は、ＰＥＧ−ＩＦＮ−λ１とＰＥＧ−ＩＦＮ−αとの間で同様であった。ＰＥＧ−ＩＦＮ−αと比較して、より高い割合の肝毒性が、最高用量のＰＥＧ−ＩＦＮ−λ１で観察された（「Ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎａｌ  Ｃｏｍｐｏｕｎｄ  ＰＥＧ−Ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ  Ｌａｍｂｄａ  Ａｃｈｉｅｖｅｄ  Ｈｉｇｈｅｒ  Ｒｅｓｐｏｎｓｅ  Ｒａｔｅｓ  ｗｉｔｈ  Ｆｅｗｅｒ  Ｆｌｕ−ｌｉｋｅ  ａｎｄ  Ｍｕｓｃｕｌｏｓｋｅｌｅｔａｌ  Ｓｙｍｐｔｏｍｓ  ａｎｄ  Ｃｙｔｏｐｅｎｉａｓ  Ｔｈａｎ  ＰＥＧ−Ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ  Ａｌｆａ  ｉｎ  Ｐｈａｓｅ  ＩＩｂ  Ｓｔｕｄｙ  ｏｆ  ５２６  Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ−Ｎａｉｖｅ  Ｈｅｐａｔｉｔｉｓ  Ｃ  Ｐａｔｉｅｎｔｓ，」Ａｐｒｉｌ  ２，２０１１，Ｐｒｅｓｓ  Ｒｅｌｅａｓｅ  ｆｒｏｍ  Ｂｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ  Ｓｑｕｉｂｂ）。
【００６０】
ＩＦＮの治療有効性は、現在まで、ヘアリー細胞白血病、慢性骨髄性白血病、悪性黒色腫、濾胞性リンパ腫、尖圭コンジローム、ＡＩＤｓ関連カポジ肉腫、及び慢性Ｂ型及びＣ型肝炎の治療のためのＩＦＮ−α２、多発性硬化症の処置のためのＩＦＮ−β、ならびに慢性肉芽腫症及び悪性大理石骨病の治療のためのＩＦＮ−γの承認により検証されている。ＣＡＲ−ＴまたはＣＡＲ−ＮＫ及び／または他の薬剤と使用される場合、インターフェロンは、他の薬剤の前に、それと同時に、またはその後に投与され得る。同時に投与される場合、インターフェロンは、他の薬剤に複合化していてもよく、またはそれとは別個であってもよい。
【００６１】
チェックポイント阻害剤抗体
ある特定の実施形態において、ＣＡＲ−ＴまたはＣＡＲ−ＮＫコンストラクトは、チェックポイント阻害剤抗体などの１つ以上のチェックポイント阻害剤と組み合わせて利用され得る。癌治療のためのチェックポイント阻害剤抗体に関する研究は、以前は癌治療に抵抗性であると考えられていた癌において、前例のない反応率をもたらした（例えば、Ｏｔｔ＆Ｂｈａｒｄｗａｊ，２０１３，Ｆｒｏｎｔｉｅｒｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  ４：３４６；Ｍｅｎｚｉｅｓ＆Ｌｏｎｇ，２０１３，Ｔｈｅｒ  Ａｄｖ  Ｍｅｄ  Ｏｎｃｏｌ  ５：２７８−８５；Ｐａｒｄｏｌｌ，２０１２，Ｎａｔｕｒｅ  Ｒｅｖｉｅｗｓ  Ｃａｎｃｅｒ  １２：２５２−６４；Ｍａｖｉｌｉｏ＆Ｌｕｇｌｉを参照されたい）。ＣＴＬＡ４、ＰＤ１、及びＰＤ−Ｌ１などの免疫系チェックポイントに対するアンタゴニストチェックポイント遮断抗体による治療は、癌及び他の疾患に対する、最も有望な新しい免疫治療手段の１つである。
【００６２】
抗癌剤の大部分と対照的に、チェックポイント阻害剤は、腫瘍細胞を直接的には標的化しないが、むしろ免疫系の内因性抗癌活性を高めるために、リンパ球受容体またはそのリガンドを標的化する。（Ｐａｒｄｏｌｌ，２０１２，Ｎａｔｕｒｅ  Ｒｅｖｉｅｗｓ  Ｃａｎｃｅｒ  １２：２５２−２６４。）そのような抗体は、主に疾患細胞、組織、または病原体に対する免疫反応を制御することにより作用するため、それらは、他の治療法、例えば、主題のＣＡＲ−ＴまたはＣＡＲ−ＮＫと組み合わせて使用されて、そのような薬剤の抗腫瘍効果を高めることができる。チェックポイント活性化はまた、慢性感染症とも関連し得るため（Ｎｉｒｓｃｈｌ＆Ｄｒａｋｅ，２０１３，Ｃｌｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ  １９：４９１７−２４）、そのような併用療法はまた、感染性疾患の治療に有用となり得る。
【００６３】
現在、腫瘍は、特に、腫瘍抗原に特異的なＴ細胞において、ある特定の免疫チェックポイント経路を共選択（ｃｏ−ｏｐｔ）することにより免疫学的監視を回避することができることが明らかである（Ｐａｒｄｏｌｌ，２０１２，Ｎａｔｕｒｅ  Ｒｅｖｉｅｗｓ  Ｃａｎｃｅｒ  １２：２５２−２６４）。多くのそのような免疫チェックポイントは、リガンド−受容体相互作用により開始されるため、それらは、リガンド及び／またはそれらの受容体に対する抗体により容易にブロックされ得る（Ｐａｒｄｏｌｌ，２０１２，Ｎａｔｕｒｅ  Ｒｅｖｉｅｗｓ  Ｃａｎｃｅｒ  １２：２５２−２６４）。ＣＴＬＡ４、ＰＤ１、及びＰＤ−Ｌ１に対するチェックポイント阻害剤抗体が最も臨床的に進んでいるが、ＬＡＧ３、Ｂ７−Ｈ３、Ｂ７−Ｈ４、及びＴＩＭ３などの他の潜在的なチェックポイント抗原が知られており、治療抗体の標的として使用され得る（Ｐａｒｄｏｌｌ，２０１２，Ｎａｔｕｒｅ  Ｒｅｖｉｅｗｓ  Ｃａｎｃｅｒ  １２：２５２−２６４）。
【００６４】
プログラム細胞死タンパク質１（ＰＤ１、ＣＤ２７９としても知られる）は、Ｂ細胞及びＮＫ細胞上に発現する、免疫グロブリンスーパーファミリーの細胞表面膜タンパク質をコードする（Ｓｈｉｎｏｈａｒａ  ｅｔ  ａｌ．，１９９５，Ｇｅｎｏｍｉｃｓ  ２３：７０４−６；Ｂｌａｎｋ  ｅｔ  ａｌ．，２００７，Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ  ５６：７３９−４５；Ｆｉｎｇｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，１９９７，Ｇｅｎｅ  １９７：１７７−８７；Ｐａｒｄｏｌｌ，２０１２，Ｎａｔｕｒｅ  Ｒｅｖｉｅｗｓ  Ｃａｎｃｅｒ  １２：２５２−２６４）。ＰＤ１の主要な役割は、感染に応答した炎症中の周辺組織におけるＴ細胞の活性を制限すること、及び自己免疫を制限することである（Ｐａｒｄｏｌｌ，２０１２，Ｎａｔｕｒｅ  Ｒｅｖｉｅｗｓ  Ｃａｎｃｅｒ  １２：２５２−２６４）。ＰＤ１発現は、活性化されたＴ細胞において誘導され、その内因性リガンドの１つに対するＰＤ１の結合は、刺激性キナーゼを阻害することによりＴ細胞活性化を阻害するように作用する（Ｐａｒｄｏｌｌ，２０１２，Ｎａｔｕｒｅ  Ｒｅｖｉｅｗｓ  Ｃａｎｃｅｒ  １２：２５２−２６４）。ＰＤ１はまた、ＴＣＲ「停止シグナル」を阻害するように作用する（Ｐａｒｄｏｌｌ，２０１２，Ｎａｔｕｒｅ  Ｒｅｖｉｅｗｓ  Ｃａｎｃｅｒ  １２：２５２−２６４）。ＰＤ１は、Ｔｒｅｇ細胞上に高度に発現し、リガンドの存在下でその増殖を増強し得る（Ｐａｒｄｏｌｌ，２０１２，Ｎａｔｕｒｅ  Ｒｅｖｉｅｗｓ  Ｃａｎｃｅｒ  １２：２５２−２６４）。
【００６５】
抗ＰＤ１抗体は、黒色腫、非小細胞肺癌、膀胱癌、前立腺癌、結腸直腸癌、頭頸部癌、トリプルネガティブ乳癌、白血病、リンパ腫及び腎細胞癌の治療に使用されている（Ｔｏｐａｌｉａｎ  ｅｔ  ａｌ．，２０１２，Ｎ  Ｅｎｇｌ  Ｊ  Ｍｅｄ  ３６６：２４４３−５４；Ｌｉｐｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，２０１３，Ｃｌｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ  １９：４６２−８；Ｂｅｒｇｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，２００８，Ｃｌｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ  １４：３０４４−５１；Ｇｉｌｄｅｎｅｒ−Ｌｅａｐｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．，２０１３，Ｏｒａｌ  Ｏｎｃｏｌ  ４９：１０８９−９６；Ｍｅｎｚｉｅｓ＆Ｌｏｎｇ，２０１３，Ｔｈｅｒ  Ａｄｖ  Ｍｅｄ  Ｏｎｃｏｌ  ５：２７８−８５）。ＰＤ１／ＰＤ−Ｌ１及びＣＴＬＡ４は、異なる経路により作用するため、それぞれに対するチェックポイント阻害剤抗体との併用療法が、免疫反応の向上を提供し得ることが可能である。
【００６６】
例示的な抗ＰＤ１抗体としては、ラムブロリズマブ（ＭＫ−３４７５、ＭＥＲＣＫ）、ニボルマブ（ＢＭＳ−９３６５５８、ＢＲＩＳＴＯＬ−ＭＹＥＲＳ  ＳＱＵＩＢＢ）、ＡＭＰ−２２４（ＭＥＲＣＫ）、及びピジリズマブ（ＣＴ−０１１、ＣＵＲＥＴＥＣＨ  ＬＴＤ．）が挙げられる。抗ＰＤ１抗体は、例えば、ＡＢＣＡＭ（登録商標）（ＡＢ１３７１３２）、ＢＩＯＬＥＧＥＮＤ（登録商標）（ＥＨ１２．２Ｈ７、ＲＭＰ１−１４）、及びＡＦＦＹＭＥＴＲＩＸ  ＥＢＩＯＳＣＩＥＮＣＥ（Ｊ１０５、Ｊ１１６、ＭＩＨ４）から市販されている。
【００６７】
プログラム細胞死１リガンド１（ＰＤ−Ｌ１、ＣＤ２７４及びＢ７−Ｈ１としても知られる）は、活性化されたＴ細胞、Ｂ細胞、骨髄細胞、及びマクロファージ上に見られるＰＤ１のリガンドである。ＰＤ１には２つの内因性リガンド、ＰＤ−Ｌ１及びＰＤ−Ｌ２が存在するが、抗腫瘍療法は、抗ＰＤ−Ｌ１抗体に重点を置いている。ＰＤ１及びＰＤ−Ｌ１の複合物は、ＣＤ８＋Ｔ細胞の増殖を阻害し、免疫反応を低減させる（Ｔｏｐａｌｉａｎ  ｅｔ  ａｌ．，２０１２，Ｎ  Ｅｎｇｌ  Ｊ  Ｍｅｄ  ３６６：２４４３−５４；Ｂｒａｈｍｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，２０１２，Ｎ  Ｅｎｇ  Ｊ  Ｍｅｄ  ３６６：２４５５−６５）。抗ＰＤ−Ｌ１抗体は、非小細胞肺癌、黒色腫、結腸直腸癌、腎細胞癌、膵臓癌、胃癌、卵巣癌、乳癌、及び血液悪性腫瘍の治療に使用されている（Ｂｒａｈｍｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎ  Ｅｎｇ  Ｊ  Ｍｅｄ  ３６６：２４５５−６５；Ｏｔｔ  ｅｔ  ａｌ．，２０１３，Ｃｌｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ  １９：５３００−９；Ｒａｄｖａｎｙｉ  ｅｔ  ａｌ．，２０１３，Ｃｌｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ  １９：５５４１；Ｍｅｎｚｉｅｓ＆Ｌｏｎｇ，２０１３，Ｔｈｅｒ  Ａｄｖ  Ｍｅｄ  Ｏｎｃｏｌ  ５：２７８−８５；Ｂｅｒｇｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，２００８，Ｃｌｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ  １４：１３０４４−５１）。
【００６８】
例示的な抗ＰＤ−Ｌ１抗体としては、ＭＤＸ−１１０５（ＭＥＤＡＲＥＸ）、ＭＥＤＩ４７３６（ＭＥＤＩＭＭＵＮＥ）ＭＰＤＬ３２８０Ａ（ＧＥＮＥＮＴＥＣＨ）、及びＢＭＳ−９３６５５９（ＢＲＩＳＴＯＬ−ＭＹＥＲＳ  ＳＱＵＩＢＢ）が挙げられる。抗ＰＤ−Ｌ１抗体はまた、例えば、ＡＦＦＹＭＥＴＲＩＸ  ＥＢＩＯＳＣＩＥＮＣＥ（ＭＩＨ１）から市販されている。
【００６９】
細胞毒性Ｔリンパ球抗原４（ＣＴＬＡ４、ＣＤ１５２としても知られる）もまた、Ｔ細胞上にのみ発現する免疫グロブリンスーパーファミリーのメンバーである。ＣＴＬＡ４は、Ｔ細胞活性化を阻害するように作用し、ヘルパーＴ細胞活性を阻害し、調節性Ｔ細胞免疫抑制活性を高めることが報告されている（Ｐａｒｄｏｌｌ，２０１２，Ｎａｔｕｒｅ  Ｒｅｖｉｅｗｓ  Ｃａｎｃｅｒ  １２：２５２−２６４）。ＣＴＬ４Ａの正確な作用機序は未だ調査中であるが、ＣＤ８０及びＣＤ８６への結合においてＣＤ２８を打ち負かすことにより、ならびにＴ細胞に阻害剤シグナルを活発に送達することによりＴ細胞活性化を阻害することが示唆されている（Ｐａｒｄｏｌｌ，２０１２，Ｎａｔｕｒｅ  Ｒｅｖｉｅｗｓ  Ｃａｎｃｅｒ  １２：２５２−２６４）。抗ＣＴＬ４Ａ抗体は、黒色腫、前立腺癌、小細胞肺癌、非小細胞肺癌の治療のための臨床試験において使用されている（Ｒｏｂｅｒｔ＆Ｇｈｉｒｉｎｇｈｅｌｌｉ，２００９，Ｏｎｃｏｌｏｇｉｓｔ  １４：８４８−６１；Ｏｔｔ  ｅｔ  ａｌ．，２０１３，Ｃｌｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ  １９：５３００；Ｗｅｂｅｒ，２００７，Ｏｎｃｏｌｏｇｉｓｔ  １２：８６４−７２；Ｗａｄａ  ｅｔ  ａｌ．，２０１３，Ｊ  Ｔｒａｎｓｌ  Ｍｅｄ  １１：８９）。抗ＣＴＬ４Ａの顕著な特徴は、抗腫瘍効果の反応速度論であり、生理学的反応に必要な最初の処理後６ヶ月までの遅延期間を有する（Ｐａｒｄｏｌｌ，２０１２，Ｎａｔｕｒｅ  Ｒｅｖｉｅｗｓ  Ｃａｎｃｅｒ  １２：２５２−２６４）。いくつかの場合において、腫瘍は、治療開始後、減少が見られる前に実際にはサイズが増加し得る（Ｐａｒｄｏｌｌ，２０１２，Ｎａｔｕｒｅ  Ｒｅｖｉｅｗｓ  Ｃａｎｃｅｒ  １２：２５２−２６４）。
【００７０】
例示的な抗ＣＴＬＡ４抗体としては、イピリムマブ（Ｂｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ  Ｓｑｕｉｂｂ）及びトレメリムマブ（ＰＦＩＺＥＲ）が挙げられる。抗ＰＤ１抗体は、例えば、ＡＢＣＡＭ（登録商標）（ＡＢ１３４０９０）、ＳＩＮＯ  ＢＩＯＬＯＧＩＣＡＬ  ＩＮＣ．（１１１５９−Ｈ０３Ｈ、１１１５９−Ｈ０８Ｈ）、及びＴＨＥＲＭＯ  ＳＣＩＥＮＴＩＦＩＣ  ＰＩＥＲＣＥ（ＰＡ５−２９５７２、ＰＡ５−２３９６７、ＰＡ５−２６４６５、ＭＡ１−１２２０５、ＭＡ１−３５９１４）から市販されている。イピリムマブは、最近、ＦＤＡにより転移黒色腫の治療に対する認可を受けた（Ｗａｄａ  ｅｔ  ａｌ．，２０１３，Ｊ  Ｔｒａｎｓｌ  Ｍｅｄ  １１：８９）。
【００７１】
当業者には、それを必要とする患者に、単独で、または１つ以上の他の薬剤と組み合わせて投与するチェックポイント阻害剤抗体の最適な用量を決定する方法が、当該技術分野において周知である標準的な用量−反応及び毒性試験により決定され得ることが理解される。例示的実施形態において、チェックポイント阻害剤抗体は、好ましくは、約３週間毎または約６週間毎の投与により、約０．３〜１０ｍｇ／ｋｇで、または最大耐量で投与され得る。代替として、チェックポイント阻害剤抗体は、約３ｍｇ／ｋｇの第１の用量、約５ｍｇ／ｋｇの第２の用量、及び約９ｍｇ／ｋｇの第３の用量での投与を含む増量投薬計画により投与され得る。代替として、増量投薬計画は、チェックポイント阻害剤抗体の約５ｍｇ／ｋｇの第１の用量及び約９ｍｇ／ｋｇの第２の用量での投与を含む。別の段階的増量投薬計画は、チェックポイント阻害剤抗体の約３ｍｇ／ｋｇの第１の用量、約３ｍｇ／ｋｇの第２の用量、約５ｍｇ／ｋｇの第３の用量、約５ｍｇ／ｋｇの第４の用量、及び約９ｍｇ／ｋｇの第５の用量での投与を含んでもよい。別の態様において、段階的増量投薬計画は、５ｍｇ／ｋｇの第１の用量、５ｍｇ／ｋｇの第２の用量、及び９ｍｇ／ｋｇの第３の用量での投与を含んでもよい。チェックポイント阻害剤ｍＡｂの例示的な報告されている用量としては、４回の投薬にわたる３週間毎に投与される３ｍｇ／ｋｇのイピリムマブ；８サイクルにわたる３週間毎の１０ｍｇ／ｋｇのイピリムマブ；４サイクルにわたる３週間毎の、次いで合計３年にわたる１２週間毎の１０ｍｇ／ｋｇ；２週間または３週間毎の１０ｍｇ／ｋｇのＭＫ−３４７５；３週間毎の２ｍｇ／ｋｇのＭＫ−３４７５；３ヶ月毎の１５ｍｇ／ｋｇのトレメリムマブ；９６週間までの２週間毎の０．１、０．３、１、３、または１０ｍｇ／ｋｇのニボルマブ；９６週間までの２週間毎の０．３、１、３、または１０ｍｇ／ｋｇのＢＭＳ−９３６５５９が挙げられる（Ｋｙｉ＆Ｐｏｓｔｏｗ，Ｏｃｔｏｂｅｒ  ２３，２０１３，ＦＥＢＳ  Ｌｅｔｔ  ［Ｅｐｕｂ  ａｈｅａｄ  ｏｆ  ｐｒｉｎｔ］；Ｃａｌｌａｈａｎ＆Ｗｏｌｃｈｏｋ，２０１３，Ｊ  Ｌｅｕｋｏｃ  Ｂｉｏｌ  ９４：４１−５３）。
【００７２】
腫瘍及び／または病原体に対する免疫反応を刺激するこれらの、及び他の既知の薬剤は、改善された癌治療のために、ＣＡＲ−ＴまたはＣＡＲ−ＮＫのみと組み合わせて、またはさらにインターフェロン−αなどのインターフェロン、及び／または抗体−薬物複合体と組み合わせて使用され得る。組み合わせて使用され得る他の既知の共刺激経路調整因子は、アガトリモド、ベラタセプト、ブリナツモマブ、ＣＤ４０リガンド、抗Ｂ７−１抗体、抗Ｂ７−２抗体、抗Ｂ７−Ｈ４抗体、ＡＧ４２６３、エリトラン、抗ＯＸ４０抗体、ＩＳＦ−１５４、及びＳＧＮ−７０；Ｂ７−１、Ｂ７−２、ＩＣＡＭ−１、ＩＣＡＭ−２、ＩＣＡＭ−３、ＣＤ４８、ＬＦＡ−３、ＣＤ３０リガンド、ＣＤ４０リガンド、熱安定性抗原、Ｂ７ｈ、ＯＸ４０リガンド、ＬＩＧＨＴ、ＣＤ７０、及びＣＤ２４が挙げられるが、これらに限定されない。
【００７３】
ある特定の実施形態において、抗ＫＩＲ抗体はまた、ＣＡＲ−ＴまたはＣＡＲ−ＮＫ、インターフェロン、ＡＤＣ、及び／またはチェックポイント阻害剤抗体と組み合わせて使用され得る。ＮＫ細胞は、自然の細胞毒性により、及び抗体により活性された場合のＡＤＣＣにより、抗腫瘍及び抗感染薬剤活性を媒介する（Ｋｏｈｒｔ  ｅｔ  ａｌ．，２０１４，Ｂｌｏｏｄ，１２３：６７８−８６）。細胞毒性反応の程度は、ＮＫ細胞により受容される阻害及び活性化シグナルのバランスにより決定される（Ｋｏｈｒｔ  ｅｔ  ａｌ．，２０１３）。キラー細胞免疫グロブリン様受容体（ＫＩＲ）は、ＮＫ細胞反応を減少させる阻害シグナルを媒介する。リルルマブ（Ｉｎｎａｔｅ  Ｐｈａｒｍａ）及びＩＰＨ２１０１（Ｉｎｎａｔｅ  Ｐｈａｒｍａ）などの抗ＫＩＲ抗体は、多発性骨髄腫における抗腫瘍活性を示している（Ｂｅｎｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，２０１２，Ｂｌｏｏｄ  １２０：４３２４−３３）。インビトロにおいて、抗ＫＩＲ抗体は、ＮＫ細胞と標的細胞との寛容原性相互作用を防止し、腫瘍細胞に対するＮＫ細胞の細胞毒性反応を強化する（Ｋｏｈｒｔ  ｅｔ  ａｌ．，２０１４，Ｂｌｏｏｄ，１２３：６７８−８６）。インビボにおいて、リツキシマブ（抗ＣＤ２０）と組み合わせると、抗ＫＩＲ抗体は、０．５ｍｇ／ｋｇの用量で、リンパ腫腫瘍に対するＮＫ細胞媒介性のリツキシマブ依存性細胞毒性の向上を誘導した（Ｋｏｈｒｔ  ｅｔ  ａｌ．，２０１４，Ｂｌｏｏｄ，１２３：６７８−８６）。抗ＫＩＲ  ｍＡｂは、腫瘍細胞または病原生物に対する細胞毒性を増強するために、ＡＤＣ、ＣＡＲ−ＴまたはＣＡＲ−ＮＫ、インターフェロン、及び／またはチェックポイント阻害剤抗体と組み合わされてもよい。
【００７４】
抗体−薬物複合体
主題のＣＡＲ−ＴまたはＣＡＲ−ＮＫコンストラクトは、手術、放射線療法、化学療法などの１つ以上の標準的な抗癌治療と併用して利用され得る。具体的な実施形態において、ＣＡＲ−ＴまたはＣＡＲ−ＮＫは、手術、化学療法、または免疫治療などの腫瘍減量療法の使用後に投与され得る。好ましい実施形態は、抗体−薬物複合体（ＡＤＣ）と併用してＣＡＲ−ＴまたはＣＡＲ−ＮＫを利用する。
【００７５】
ＡＤＣは、癌細胞などの標的細胞への細胞毒性薬剤の標的化送達を可能とする、強力なクラスの治療コンストラクトである。標的化機能のために、これらの化合物は、同じ全身送達薬剤と比較してはるかに高い治療指数を示す。ＡＤＣは、無傷抗体または抗体断片、例えば、ｓｃＦｖとして開発された。抗体または断片は、生理学的条件下で安定であるが標的細胞内に入ると切断され得るリンカーを介して、薬物の１つ以上のコピーに連結する。治療用途に承認されたＡＤＣとしては、ＡＭＬに対するゲムツズマブオゾガマイシン（後に市場から回収された）、ＡＬＣＬ及びホジキンリンパ腫に対するブレンツキシマブベドチン、ならびにＨＥＲ２陽性転移乳癌に対するトラスツズマブエムタンシンが挙げられる（Ｖｅｒｍａ  ｅｔ  ａｌ．，２０１２，Ｎ  Ｅｎｇｌ  Ｊ  Ｍｅｄ  ３６７：１７８３−９１；Ｂｒｏｓｓ  ｅｔ  ａｌ．，２００１，Ｃｌｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ  ７：１４９０−９６；Ｆｒａｎｃｉｓｃｏ  ｅｔ  ａｌ．，２００３，Ｂｌｏｏｄ  １０２：１４５８−６５）。イノツズマブオゾガマイシン（Ｐｆｉｚｅｒ）、グレムバツモマブベドチン（Ｃｅｌｌｄｅｘ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ）、ＳＡＲ３４１９（Ｓａｎｏｆｉ−Ａｖｅｎｔｉｓ）、ＳＡＲ５６６５８（Ｓａｎｏｆｉ−Ａｖｅｎｔｉｓ）、ＡＭＧ−１７２（Ａｍｇｅｎ）、ＡＭＧ−５９５（Ａｍｇｅｎ）、ＢＡＹ−９４−９３４３（Ｂａｙｅｒ）、ＢＩＩＢ０１５（Ｂｉｏｇｅｎ  Ｉｄｅｃ）、ＢＴ０６２（Ｂｉｏｔｅｓｔ）、ＳＧＮ−７５（Ｓｅａｔｔｌｅ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ）、ＳＧＮ−ＣＤ１９Ａ（Ｓｅａｔｔｌｅ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ）、ボルセツズマブマホドチン（Ｓｅａｔｔｌｅ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ）、ＡＢＴ−４１４（ＡｂｂＶｉｅ）、ＡＳＧ−５ＭＥ（Ａｇｅｎｓｙｓ）、ＡＳＧ−２２ＭＥ（Ａｇｅｎｓｙｓ）、ＡＳＧ−１６Ｍ８Ｆ（Ａｇｅｎｓｙｓ）、ＩＭＧＮ−５２９（ＩｍｍｕｎｏＧｅｎ）、ＩＭＧＮ−８５３（ＩｍｍｕｎｏＧｅｎ）、ＭＤＸ−１２０３（Ｍｅｄａｒｅｘ）、ＭＬＮ−０２６４（Ｍｉｌｌｅｎｉｕｍ）、ＲＧ−７４５０（Ｒｏｃｈｅ／Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ）、ＲＧ−７４５８（Ｒｏｃｈｅ／Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ）、ＲＧ−７５９３（Ｒｏｃｈｅ／Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ）、ＲＧ−７５９６（Ｒｏｃｈｅ／Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ）、ＲＧ−７５９８（Ｒｏｃｈｅ／Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ）、ＲＧ−７５９９（Ｒｏｃｈｅ／Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ）、ＲＧ−７６００（Ｒｏｃｈｅ／Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ）、ＲＧ−７６３６（Ｒｏｃｈｅ／Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ）、抗ＰＳＭＡ  ＡＤＣ（Ｐｒｏｇｅｎｉｃｓ）、ロルボツズマブメルタンシン（ＩｍｍｕｎｏＧｅｎ）、ミラツズマブ−ドキソルビシン（Ｉｍｍｕｎｏｍｅｄｉｃｓ）、ＩＭＭＵ−１３０（Ｉｍｍｕｎｏｍｅｄｉｃｓ）、ＩＭＭＵ−１３２（Ｉｍｍｕｎｏｍｅｄｉｃｓ）、及びｐｒｏ−２−ピロリノドキソルビシンの抗体複合体などの、他の多くの候補ＡＤＣが現在臨床試験中である。（例えば、Ｌｉ  ｅｔ  ａｌ．，２０１３，Ｄｒｕｇ  Ｄｉｓｃ  Ｔｈｅｒ  ７：１７８−８４；Ｆｉｒｅｒ＆Ｇｅｌｌｅｒｍａｎ，Ｊ  Ｈｅｍａｔｏｌ  Ｏｎｃｏｌ  ５：７０；Ｂｅｃｋ  ｅｔ  ａｌ．，２０１０，Ｄｉｓｃｏｖ  Ｍｅｄ  １０：３２９−３９；Ｍｕｌｌａｒｄ，２０１３��Ｎａｔｕｒｅ  Ｒｅｖ  Ｄｒｕｇ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ  １２：３２９、米国特許第８，８７７，２０２号；同第９，０９５，６２８号を参照されたい。）低減された全身毒性で強力な抗癌剤として作用するＡＤＣの可能性のために、それらは、全身腫瘍組織量を低減するために単独で、または補助療法として使用され得る。
【００７６】
特に好ましい実施形態において、有用なＡＤＣは、ＩＭＭＵ−１３０（ｈＭＮ−１４−ＳＮ−３８）、ＩＭＭＵ−１３２（ｈＲＳ７−ＳＮ−３８）、他の抗体−ＳＮ−３８複合体、または２−ピロリノドキソルビシン（Ｐ２ＰＤＯＸ）のプロドラッグ形態の抗体複合体からなる群から選択され得る。（例えば、米国特許第７，９９９，０８３号；同第８，０８０，２５０号；同第８，７４１，３００号；同第８，７５９，４９６号；同第８，９９９，３４４号；同第８，８７７，２０２号、及び同第９，０２８，８３３号を参照されたく、それぞれの図面及び実施例の項は、参照により本明細書に組み込まれる。）
【００７７】
一般的な抗体技術
事実上任意の標的抗原に対するモノクローナル抗体を調製するための技術は、当該技術分野において周知である。例えば、Ｋｏｈｌｅｒ  ａｎｄ  Ｍｉｌｓｔｅｉｎ，Ｎａｔｕｒｅ  ２５６：４９５（１９７５）、及びＣｏｌｉｇａｎ  ｅｔ  ａｌ．（ｅｄｓ．），ＣＵＲＲＥＮＴ  ＰＲＯＴＯＣＯＬＳ  ＩＮ  ＩＭＭＵＮＯＬＯＧＹ，ＶＯＬ．１，ｐａｇｅｓ  ２．５．１−２．６．７（Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ１９９１）を参照されたい。簡潔に説明すると、モノクローナル抗体は、抗原を含む組成物をマウスに注射し、脾臓を取り出してＢリンパ球を得、Ｂリンパ球を骨髄腫細胞と融合させてハイブリドーマを産生し、ハイブリドーマをクローニングし、抗原に対する抗体を産生する陽性クローンを選択し、抗原に対する抗体を産生するクローンを培養し、ハイブリドーマ培養物から抗体を単離することにより得ることができる。
【００７８】
ＭＡｂは、十分に確立された様々な技術により、ハイブリドーマ培養物から単離及び精製され得る。そのような単離技術としては、タンパク質−Ａセファロースによる親和性クロマトグラフィー、サイズ排除クロマトグラフィー、及びイオン交換クロマトグラフィーが挙げられる。例えば、Ｃｏｌｉｇａｎの２．７．１〜２．７．１２ページ及び２．９．１〜２．９．３ページを参照されたい。また、Ｂａｉｎｅｓ  ｅｔ  ａｌ．，“Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎ  Ｇ（ＩｇＧ），”ｉｎ  ＭＥＴＨＯＤＳ  ＩＮ  ＭＯＬＥＣＵＬＡＲ  ＢＩＯＬＯＧＹ，ＶＯＬ．１０，ｐａｇｅｓ  ７９−１０４（Ｔｈｅ  Ｈｕｍａｎａ  Ｐｒｅｓｓ，Ｉｎｃ．１９９２）を参照されたい。
【００７９】
免疫原に対する抗体の最初の惹起後、抗体を配列決定し、続いて組み換え技術により調製することができる。マウス抗体及び抗体断片のヒト化及びキメラ化は、当業者に周知である。ヒト化、キメラまたはヒト抗体由来の抗体成分の使用は、マウス定常領域の免疫原性と関連した潜在的問題を排除する。当業者には、ヒト治療的用途において、ヒト抗原に結合する抗体は、動物ホモログとは対照的に好ましいことが理解される。
【００８０】
キメラ抗体
キメラ抗体は、ヒト抗体の可変領域が、例えば、マウス抗体の相補性決定領域（ＣＤＲ）を含むマウス抗体の可変領域により置き換えられている組換えタンパク質である。キメラ抗体は、対象に投与されると、減少した免疫原性及び増加した安定性を示す。マウス免疫グロブリン可変ドメインをクローニングするための一般的技術は、例えば、Ｏｒｌａｎｄｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ  Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８６：３８３３（１９８９）において開示されている。キメラ抗体を構築するための技術は、当業者に周知である。一例として、Ｌｅｕｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，Ｈｙｂｒｉｄｏｍａ  １３：４６９（１９９４）は、抗ＣＤ２２モノクローナル抗体であるマウスＬＬ２のＶκ及びＶＨドメインをコードするＤＮＡ配列を、それぞれのヒトκ及びＩｇＧ１定常領域ドメインに組み合わせることにより、ＬＬ２キメラを産生した。
【００８１】
ヒト化抗体
ヒト化ＭＡｂを産生するための技術は、当該技術分野において周知である（例えば、Ｊｏｎｅｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  ３２１：５２２（１９８６）、Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  ３３２：３２３（１９８８）、Ｖｅｒｈｏｅｙｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２３９：１５３４（１９８８）、Ｃａｒｔｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ  Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８９：４２８５（１９９２）、Ｓａｎｄｈｕ，Ｃｒｉｔ．Ｒｅｖ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．１２：４３７（１９９２）、及びＳｉｎｇｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎ．１５０：２８４４（１９９３）を参照されたい）。キメラまたはマウスモノクローナル抗体は、マウス免疫グロブリンからの可変重鎖または軽鎖から、対応するヒト抗体の可変ドメインにマウスＣＤＲを移入することによりヒト化され得る。キメラモノクローナル抗体内のマウスフレームワーク領域（ＦＲ）もまた、ヒトＦＲ配列で置き換えられる。ヒトＦＲへのマウスＣＤＲの移入だけでは、多くの場合抗体親和性の低減またはさらに損失がもたらされるため、マウス抗体の元の親和性を修復するために、追加的な改質が必要となり得る。これは、そのエピトープへの良好な結合親和性を有する抗体を得るための、ＦＲ領域における１つ以上のヒト残基のそれらのマウス相当物での置き換えにより達成され得る。例えば、Ｔｅｍｐｅｓｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ９：２６６（１９９１）及びＶｅｒｈｏｅｙｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２３９：１５３４（１９８８）を参照されたい。一般的に、そのマウス相当物と異なり、また１つ以上のＣＤＲアミノ酸残基に近接して、または接触して位置するそれらのヒトＦＲアミノ酸残基が、置換の候補となる。
【００８２】
ヒト抗体
組み合わせアプローチまたはヒト免疫グロブリン遺伝子座で形質転換されたトランスジェニック動物を使用して完全ヒト抗体を産生するための方法は、当該技術分野において知られている（例えば、Ｍａｎｃｉｎｉ  ｅｔ  ａｌ．，２００４，Ｎｅｗ  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．２７：３１５−２８；Ｃｏｎｒａｄ  ａｎｄ  Ｓｃｈｅｌｌｅｒ，２００５，Ｃｏｍｂ．Ｃｈｅｍ．Ｈｉｇｈ  Ｔｈｒｏｕｇｈｐｕｔ  Ｓｃｒｅｅｎ．８：１１７−２６；Ｂｒｅｋｋｅ  ａｎｄ  Ｌｏｓｅｔ，２００３，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｐｈａｍａｃｏｌ．３：５４４−５０）。完全ヒト抗体はまた、遺伝子または染色体トランスフェクション法、及びファージディスプレイ技術により構築することができ、これらは全て、当該技術分野において知られている。例えば、ＭｃＣａｆｆｅｒｔｙ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  ３４８：５５２−５５３（１９９０）を参照されたい。そのような完全ヒト抗体は、キメラまたはヒト化抗体よりもさらに少ない副作用を示し、またインビボで本質的に内因性のヒト抗体として機能することが予測される。ある特定の実施形態において、特許請求される方法及び手順は、そのような技術により産生されたヒト抗体を利用することができる。
【００８３】
一代替例において、ファージディスプレイ技術を使用してヒト抗体が生成され得る（例えば、Ｄａｎｔａｓ−Ｂａｒｂｏｓａ  ｅｔ  ａｌ．，２００５，Ｇｅｎｅｔ．Ｍｏｌ．Ｒｅｓ．４：１２６−４０）。ヒト抗体は、正常なヒトから、または癌などの特定の疾患状態を示すヒトから生成され得る（Ｄａｎｔａｓ−Ｂａｒｂｏｓａ  ｅｔ  ａｌ．，２００５）。疾患を有する個人からヒト抗体を構築することの利点は、循環抗体レパートリーが、疾患関連抗原に対する抗体に向けてバイアスされ得ることである。
【００８４】
この方法の１つの限定されない例において、Ｄａｎｔａｓ−Ｂａｒｂｏｓａ  ｅｔ  ａｌ．（２００５）は、骨肉腫患者からヒトＦａｂ抗体断片のファージディスプレイライブラリを構築した。一般に、全ＲＮＡが循環血液リンパ球から得られた（同上）。組換えＦａｂは、μ、γ、及びκ鎖抗体レパートリーからクローニングされ、ファージディスプレイに挿入された（同上）。ＲＮＡは、ｃＤＮＡに変換され、重鎖及び軽鎖免疫グロブリン配列に対する特定のプライマーを使用してＦａｂ  ｃＤＮＡライブラリを作製するために使用された（Ｍａｒｋｓ  ｅｔ  ａｌ．，１９９１，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２２：５８１−９７）。ライブラリ構築は、Ａｎｄｒｉｓ−Ｗｉｄｈｏｐｆ  ｅｔ  ａｌ．（２０００，Ｉｎ：  ＰＨＡＧＥ  ＤＩＳＰＬＡＹ  ＬＡＢＯＲＡＴＯＲＹ  ＭＡＮＵＡＬ，Ｂａｒｂａｓ  ｅｔ  ａｌ．（ｅｄｓ），１ｓｔ  ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ，ＮＹ  ｐｐ．９．１〜９．２２）に従って行われた。最終Ｆａｂ断片は、制限エンドヌクレアーゼで消化され、バクテリオファージゲノムに挿入されて、ファージディスプレイライブラリが作製された。そのようなライブラリは、当該技術分野において知られているように、標準的ファージディスプレイ法によりスクリーニングされ得る（例えば、Ｐａｓｑｕａｌｉｎｉ  ａｎｄ  Ｒｕｏｓｌａｈｔｉ，１９９６，Ｎａｔｕｒｅ  ３８０：３６４−３６６；Ｐａｓｑｕａｌｉｎｉ，１９９９，Ｔｈｅ  Ｑｕａｒｔ．Ｊ．Ｎｕｃｌ．Ｍｅｄ．４３：１５９−１６２を参照されたい）。
【００８５】
ファージディスプレイは、様々な形式で行うことができるが、それらの検討については、例えば、Ｊｏｈｎｓｏｎ  ａｎｄ  Ｃｈｉｓｗｅｌｌ，Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｏｐｉｎｉｏｎ  ｉｎ  Ｓｔｒｕｃｔｕｒａｌ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  ３：５５６４−５７１（１９９３）を参照されたい。ヒト抗体はまた、インビトロ活性化Ｂ細胞により生成されてもよい。参照によりそれら全体が本明細書に組み込まれる、米国特許第５，５６７，６１０号及び同第５，２２９，２７５号を参照されたい。当業者には、これらの技術が例示的であり、ヒト抗体または抗体断片を作製及びスクリーニングするための任意の既知の方法が利用され得ることが理解される。
【００８６】
別の代替例において、標準的免疫化プロトコルを使用して、本質的に任意の免疫原性標的に対する抗体を生成するために、ヒト抗体を産生するように遺伝子操作されたトランスジェニック動物を使用することができる。トランスジェニックマウスからヒト抗体を得るための方法は、Ｇｒｅｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  Ｇｅｎｅｔ．７：１３（１９９４）、Ｌｏｎｂｅｒｇ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  ３６８：８５６（１９９４）、及びＴａｙｌｏｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｉｎｔ．Ｉｍｍｕｎ．６：５７９（１９９４）により開示されている。そのような系の限定されない例は、Ａｂｇｅｎｉｘ（Ｆｒｅｍｏｎｔ、ＣＡ）からのＸＥＮＯＭＯＵＳＥ（登録商標）（例えば、Ｇｒｅｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９９９，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ  ２３１：１１−２３）である。ＸＥＮＯＭＯＵＳＥ（登録商標）及び同様の動物において、マウス抗体遺伝子は不活性化され、機能性ヒト抗体遺伝子により置き換えられており、一方マウス免疫系の残りは無傷のままである。
【００８７】
ＸＥＮＯＭＯＵＳＥ（登録商標）は、アクセサリー遺伝子及び調節配列に沿って、可変領域配列の大部分を含むヒトＩｇＨ及びＩｇκ遺伝子座の一部を含有する生殖細胞系列構成ＹＡＣ（酵母人工染色体）で形質転換された。ヒト可変領域レパートリーを使用して、既知の技術によりハイブリドーマに処理されていてもよい抗体産生Ｂ細胞を生成することができる。標的抗原により免疫化されたＸＥＮＯＭＯＵＳＥ（登録商標）は、正常な免疫反応によりヒト抗体を産生し、これは、上述の標準的技術により採取及び／または産生され得る。ＸＥＮＯＭＯＵＳＥ（登録商標）の様々な株が利用可能であり、そのそれぞれは、異なるクラスの抗体を産生することができる。トランスジェニック動物により産生されたヒト抗体は、正常ヒト抗体の薬物動態特性を保持する一方で、治療可能性を有することが示されている（Ｇｒｅｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９９９）。当業者には、特許請求される組成物及び方法がＸＥＮＯＭＯＵＳＥ（登録商標）系の使用に限定されず、ヒト抗体を産生するように遺伝子操作された任意のトランスジェニック動物を利用してもよいことが理解される。
【００８８】
抗体のクローニング及び産生
キメラまたはヒト化抗体の産生などの様々な技術は、抗体のクローニング及び構築の手順を含み得る。対象となる抗体の抗原結合Ｖκ（可変軽鎖）及びＶＨ（可変重鎖）配列は、ＲＴ−ＰＣＲ、５’−ＲＡＣＥ、及びｃＤＮＡライブラリスクリーニングなどの様々な分子クローニング手順により得ることができる。マウス抗体を発現する細胞からの抗体のＶ遺伝子は、ＰＣＲ増幅によりクローニング及び配列決定され得る。それらの信頼性を確実とするために、クローニングされたＶＬ及びＶＨ遺伝子は、Ｏｒｌａｎｄｉ  ｅｔ  ａｌ．（Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８６：３８３３（１９８９））により説明されているように、キメラＡｂとして細胞培養物中で発現され得る。Ｖ遺伝子配列に基づいて、ヒト化抗体は、次いでＬｅｕｎｇ  ｅｔ  ａｌ．（Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，３２：１４１３（１９９５））により説明されるように設計及び構築され得る。
【００８９】
ｃＤＮＡは、一般的な分子クローニング技術により、任意の既知のハイブリドーマ株またはマウス抗体を産生するトランスフェクトされた細胞株から調製され得る（Ｓａｍｂｒｏｏｋ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ，Ａ  ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  ｍａｎｕａｌ，２ｎｄ  Ｅｄ（１９８９））。抗体のＶκ配列は、プライマーＶＫ１ＢＡＣＫ及びＶＫ１ＦＯＲ（Ｏｒｌａｎｄｉ  ｅｔ  ａｌ．，１９８９）、またはＬｅｕｎｇ  ｅｔ  ａｌ．（ＢｉｏＴｅｃｈｎｉｑｕｅｓ，１５：２８６（１９９３））により説明される拡張プライマーセットを使用して増幅され得る。ＶＨ配列は、プライマー対ＶＨ１ＢＡＣＫ／ＶＨ１ＦＯＲ（Ｏｒｌａｎｄｉ  ｅｔ  ａｌ．，１９８９）またはＬｅｕｎｇ  ｅｔ  ａｌ．（Ｈｙｂｒｉｄｏｍａ，１３：４６９（１９９４））により説明されるマウスＩｇＧの定常領域にアニールするプライマーを使用して増幅され得る。ヒト化Ｖ遺伝子は、Ｌｅｕｎｇ  ｅｔ  ａｌ．（Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，３２：１４１３（１９９５））により説明されるような長鎖オリゴヌクレオチド鋳型合成及びＰＣＲ増幅の組み合わせにより構築され得る。
【００９０】
ＶκのＰＣＲ産物は、Ｉｇプロモーター、シグナルペプチド配列、及び好都合な制限部位を含有するｐＢＲ３２７系段階化ベクターＶＫｐＢＲなどの段階化ベクターにサブクローニングされ得る。ＶＨのＰＣＲ産物は、ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔ系ＶＨｐＢＳなどの同様の段階化ベクターにサブクローニングされ得る。プロモーター及びシグナルペプチド配列と共にＶκ及びＶＨ配列を含有する発現カセットは、ＶＫｐＢＲ及びＶＨｐＢＳから切り出され、それぞれｐＫｈ及びｐＧ１ｇなどの適切な発現ベクターにライゲーションされ得る（Ｌｅｕｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，Ｈｙｂｒｉｄｏｍａ，１３：４６９（１９９４））。発現ベクターは、適切な細胞に共トランスフェクトされ得、上澄み液が、キメラ、ヒト化、またはヒト抗体の産生について監視され得る。代替として、Ｖκ及びＶＨ発現カセットが切り出され、Ｇｉｌｌｉｅｓ  ｅｔ  ａｌ．（Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ１２５：１９１（１９８９）、またＬｏｓｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ，８０：２６６０（１９９７）にも示されている）により説明されるように、ｐｄＨＬ２などの単一発現ベクターにサブクローニングされ得る。
【００９１】
代替の実施形態において、発現ベクターは、無血清培地中でトランスフェクション、成長、及び発現に対し事前に適応された宿主細胞にトランスフェクトされ得る。使用され得る例示的細胞株は、Ｓｐ／ＥＥＥ、Ｓｐ／ＥＳＦ、及びＳｐ／ＥＳＦ−Ｘ細胞株を含む（例えば、米国特許第７，５３１，３２７号；同第７，５３７，９３０号、及び同第７，６０８，４２５号を参照されたく；それらのそれぞれの実施例の項は、参照により本明細書に組み込まれる）。これらの例示的細胞株は、Ｓｐ２／０骨髄腫細胞株に基づき、突然変異Ｂｃｌ−ＥＥＥ遺伝子でトランスフェクトされ、トランスフェクトされた遺伝子配列を増幅するためにメトトレキセートに曝露され、タンパク質発現のために無血清細胞株に対して事前に適応される。
【００９２】
抗体断片
特定のエピトープを認識する抗体断片は、既知の技術により生成され得る。抗体断片は、例えば、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ）２、Ｆａｂ、Ｆｖ、ｓｃＦｖなどの抗体の抗原結合部分である。Ｆ（ａｂ’）２断片は、抗体分子のペプシン消化により産生され得、Ｆａｂ’断片は、Ｆ（ａｂ’）２断片のジスルフィド架橋を還元することにより産生され得る。代替として、Ｆａｂ’発現ライブラリを構築して（Ｈｕｓｅ  ｅｔ  ａｌ．，１９８９，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２４６：１２７４−１２８１）、所望の特異性を有するモノクローナルＦａｂ’断片の迅速及び容易な同定を可能とすることができる。Ｆ（ａｂ）２断片は、抗体のパパイン消化により生成され得る。
【００９３】
単鎖Ｆｖ分子（ｓｃＦｖ）は、ＶＬドメイン及びＶＨドメインを含む。ＶＬ及びＶＨドメインは、結合して標的結合部位を形成する。これらの２つのドメインは、ペプチドリンカー（Ｌ）によりさらに共有結合する。ｓｃＦｖ分子を作製するため、及び好適なペプチドリンカーを設計するための方法は、米国特許第４，７０４，６９２号；同第４，９４６，７７８号；Ｒａａｇ  ａｎｄ  Ｗｈｉｔｌｏｗ，ＦＡＳＥＢ  ９：７３−８０（１９９５）及びＢｉｒｄ  ａｎｄ  Ｗａｌｋｅｒ，ＴＩＢＴＥＣＨ，９：１３２−１３７（１９９１）に記載されている。
【００９４】
単一ドメイン抗体（ＤＡＢまたはＶＨＨ）を産生するための技術もまた、例えば、参照により本明細書に組み込まれるＣｏｓｓｉｎｓ  ｅｔ  ａｌ．（２００６，Ｐｒｏｔ  Ｅｘｐｒｅｓｓ  Ｐｕｒｉｆ  ５１：２５３−２５９）において開示されるように、当該技術分野において知られている。単一ドメイン抗体は、標準的な免疫化技術により、例えば、ラクダ、アルパカ、またはラマから得ることができる。（例えば、Ｍｕｙｌｄｅｒｍａｎｓ  ｅｔ  ａｌ．，ＴＩＢＳ  ２６：２３０−２３５，２００１；Ｙａｕ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ２８１：１６１−７５，２００３；Ｍａａｓｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ３２４：１３−２５，２００７を参照されたい。）ＶＨＨは、強力な抗原結合能力を有することができ、従来のＶＨ−ＶＬ対にアクセス不可能な新規エピトープと相互作用し得る。（Ｍｕｙｌｄｅｒｍａｎｓ  ｅｔ  ａｌ．，２００１）。アルパカ血清ＩｇＧは、約５０％のラクダ科重鎖のみのＩｇＧ抗体（ＨＣＡｂ）を含有する（Ｍａａｓｓ  ｅｔ  ａｌ．，２００７）。アルパカは、ＴＮＦ−αなどの既知の抗原で免疫化され得、標的抗原に結合して中性化するＶＨＨが単離され得る（Ｍａａｓｓ  ｅｔ  ａｌ．，２００７）。事実上全てのアルパカＶＨＨコード配列を増幅するＰＣＲプライマーが同定されており、当該技術分野において周知の標準的バイオパニング技術による抗体断片単離に使用され得る、アルパカＶＨＨファージディスプレイライブラリを構築するために使用され得る（Ｍａａｓｓ  ｅｔ  ａｌ．，２００７）。ある特定の実施形態において、抗膵臓癌ＶＨＨ抗体断片が、特許請求される組成物及び方法において利用され得る。
【００９５】
抗体断片は、全長抗体のタンパク質分解的加水分解により、または大腸菌若しくは断片のＤＮＡコードの別の宿主における発現により調製され得る。抗体断片は、従来の方法による全長抗体のペプシンまたはパパイン消化により得ることができる。これらの方法は、例えば、Ｇｏｌｄｅｎｂｅｒｇ、米国特許第４，０３６，９４５号及び同第４，３３１，６４７号、ならびにそれらに含まれる参考文献により説明されている。また、Ｎｉｓｏｎｏｆｆ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｒｃｈ  Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．８９：２３０（１９６０）；Ｐｏｒｔｅｒ，Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｊ．７３：１１９（１９５９）、Ｅｄｅｌｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．，ｉｎ  ＭＥＴＨＯＤＳ  ＩＮ  ＥＮＺＹＭＯＬＯＧＹ  ＶＯＬ．１，ｐａｇｅ  ４２２（Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ  １９６７）、ならびにＣｏｌｉｇａｎの２．８．１〜２．８．１０ページ及び２．１０．〜２．１０．４ページを参照されたい。
【００９６】
抗体アロタイプ
治療抗体の免疫原性は、注入反応のリスクの増加、及び治療反応の期間の減少に関連する（Ｂａｅｒｔ  ｅｔ  ａｌ．，２００３，Ｎ  Ｅｎｇｌ  Ｊ  Ｍｅｄ  ３４８：６０２−０８）。治療抗体が宿主における免疫反応を誘導する程度は、１つには、抗体のアロタイプにより決定され得る（Ｓｔｉｃｋｌｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，２０１１，Ｇｅｎｅｓ  ａｎｄ  Ｉｍｍｕｎｉｔｙ  １２：２１３−２１）。抗体アロタイプは、抗体の定常領域配列における特定の位置でのアミノ酸配列変異に関連する。重鎖γ型定常領域を含有するＩｇＧ抗体のアロタイプは、Ｇｍアロタイプと指定される（１９７６，Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １１７：１０５６−５９）。
【００９７】
一般的なＩｇＧ１ヒト抗体において、最も支配的なアロタイプは、Ｇ１ｍ１である（Ｓｔｉｃｋｌｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，２０１１，Ｇｅｎｅｓ  ａｎｄ  Ｉｍｍｕｎｉｔｙ  １２：２１３−２１）。しかしながら、白人においてはＧ１ｍ３アロタイプもまた頻繁に存在する（Ｓｔｉｃｋｌｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，２０１１）。Ｇ１ｍ１抗体は、Ｇ１ｍ３患者などの非Ｇ１ｍ１（ｎＧ１ｍ１）受容者に投与された場合、免疫反応を誘導する傾向があるアロタイプ配列を含有することが報告されている（Ｓｔｉｃｋｌｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，２０１１）。非Ｇ１ｍ１アロタイプ抗体は、Ｇ１ｍ１患者に投与された場合、それほど免疫原性ではない（Ｓｔｉｃｋｌｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，２０１１）。
【００９８】
ヒトＧ１ｍ１アロタイプは、重鎖ＩｇＧ１のＣＨ３配列におけるＫａｂａｔ位置３５６にアミノ酸であるアスパラギン酸を、またＫａｂａｔ位置３５８にロイシンを含む。ｎＧ１ｍ１アロタイプは、Ｋａｂａｔ位置３５６にグルタミン酸を、またＫａｂａｔ位置３５８にメチオニンを含む。Ｇ１ｍｌ及びｎＧ１ｍｌアロタイプは共に、Ｋａｂａｔ位置３５７にグルタミン酸残基を含み、アロタイプは時折、ＤＥＬ及びＥＥＭアロタイプと呼ばれる。Ｇ１ｍ１及びｎＧ１ｍ１アロタイプ抗体の重鎖定常領域配列の限定されない例を、例示的抗体リツキシマブ（配列番号１９）及びベルツズマブ（配列番号２０）に対して示す。
リツキシマブ重鎖可変領域配列（配列番号１９）
ＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＫＡＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ
ベルツズマブ重鎖可変領域（配列番号２０）
ＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＲＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ
【００９９】
Ｊｅｆｆｅｒｉｓ及びＬｅｆｒａｎｃ（２００９，ｍＡｂｓ１：１−７）は、ＩｇＧアロタイプの配列変異特性及びその免疫原性に対する効果を検討した。彼らは、Ｇ１ｍ３アロタイプが、Ｇ１ｍ１７アロタイプのＫａｂａｔ２１４におけるリシン残基と比較して、Ｋａｂａｔ位置２１４におけるアルギニン残基により特徴付けられることを報告した。ｎＧ１ｍ１，２アロタイプは、Ｋａｂａｔ位置３５６におけるグルタミン酸、Ｋａｂａｔ位置３５８におけるメチオニン、及びＫａｂａｔ位置４３１におけるアラニンにより特徴付けられた。Ｇ１ｍ１，２アロタイプは、Ｋａｂａｔ位置３５６におけるアスパラギン酸、Ｋａｂａｔ位置３５８におけるロイシン、及びＫａｂａｔ位置４３１におけるグリシンにより特徴付けられた。重鎖定常領域配列変異に加えて、Ｊｅｆｆｅｒｉｓ及びＬｅｆｒａｎｃ（２００９）は、カッパ軽鎖定常領域におけるアロタイプ変異を報告したが、Ｋｍ１アロタイプはＫａｂａｔ位置１５３におけるバリン、及びＫａｂａｔ位置１９１におけるロイシンにより特徴付けられ、Ｋｍ１，２アロタイプは、Ｋａｂａｔ位置１５３におけるアラニン、及びＫａｂａｔ位置１９１におけるロイシンにより特徴付けられ、Ｋｍ３アロタイプは、Ｋａｂａｔ位置１５３におけるアラニン、及びＫａｂａｔ位置１９１におけるバリンにより特徴付けられた。
【０１００】
治療抗体に関して、ベルツズマブ及びリツキシマブは、それぞれ、広範な血液悪性腫瘍及び／または自己免疫疾患の治療に有用なＣＤ２０に対するヒト化及びキメラＩｇＧ１抗体である。表１は、リツキシマブ対ベルツズマブのアロタイプ配列を比較している。表１に示されるように、リツキシマブ（Ｇ１ｍ１７，１）は、ＤＥＬアロタイプＩｇＧ１であり、ベルツズマブのアルギニンに対して、リツキシマブのリシンのＫａｂａｔ位置２１４（重鎖ＣＨ１）における追加的な配列変異を有する。ベルツズマブは、リツキシマブよりも対象において免疫原性が低いことが報告されており（例えば、Ｍｏｒｃｈｈａｕｓｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，２００９，Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｏｎｃｏｌ  ２７：３３４６−５３；Ｇｏｌｄｅｎｂｅｒｇ  ｅｔ  ａｌ．，２００９，Ｂｌｏｏｄ  １１３：１０６２−７０；Ｒｏｂａｋ＆Ｒｏｂａｋ，２０１１，ＢｉｏＤｒｕｇｓ  ２５：１３−２５を参照されたい）、これはヒト化抗体とキメラ抗体との間の差に起因した効果である。しかしながら、ＥＥＭアロタイプとＤＥＬアロタイプとの間のアロタイプの差もまた、ベルツズマブのより低い免疫原性を説明し得る。
【表１】
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【０１０１】
ｎＧ１ｍ１遺伝子型の個人における治療抗体の免疫原性を低減するためには、Ｋａｂａｔ２１４におけるアルギニンにより特徴付けられるＧ１ｍ３アロタイプ、ならびに、Ｋａｂａｔ位置３５６におけるグルタミン酸、Ｋａｂａｔ位置３５８におけるメチオニン、及びＫａｂａｔ位置４３１におけるアラニンにより特徴付けられるｎＧ１ｍ１，２ヌルアロタイプに対応するように抗体のアロタイプを選択することが望ましい。驚くべきことに、長期間にわたるＧ１ｍ３抗体の反復皮下投与は、大きな免疫反応をもたらさないことが判明した。代替の実施形態において、ヒトＩｇＧ４重鎖は、Ｇ１ｍ３アロタイプと共通して、Ｋａｂａｔ２１４におけるアルギニン、Ｋａｂａｔ３５６におけるグルタミン酸、Ｋａｂａｔ３５９におけるメチオニン、及びＫａｂａｔ４３１におけるアラニンを有する。免疫原性は、それらの位置における残基に少なくとも部分的に関連すると思われるため、ヒトＩｇＧ４重鎖定常領域配列の治療抗体への使用もまた、好ましい実施形態である。Ｇ１ｍ３ＩｇＧ１抗体とＩｇＧ４抗体との組み合わせもまた、治療的投与に有用となり得る。
【０１０２】
既知の抗体
標的抗原、及び例示的抗体
好ましい実施形態において、抗体は、標的細胞に対して高レベルで発現する抗原を認識及び／またはそれに結合し、正常組織に対して、主に、または排他的に疾患細胞上に発現する抗体が使用される。例えば、癌の治療に有用な例示的抗体は、ＬＬ１（抗ＣＤ７４）、ＬＬ２またはＲＦＢ４（抗ＣＤ２２）、ベルツズマブ（ｈＡ２０、抗ＣＤ２０）、リツキシマブ（抗ＣＤ２０）、オビヌツズマブ（ＧＡ１０１、抗ＣＤ２０）、ラムブロリズマブ（抗ＰＤ１）、ニボルマブ（抗ＰＤ１）、ＭＫ−３４７５（抗ＰＤ１）、ＡＭＰ−２２４（抗ＰＤ１）、ピジリズマブ（抗ＰＤ１）、ＭＤＸ−１１０５（抗ＰＤ−Ｌ１）、ＭＥＤＩ４７３６（抗ＰＤ−Ｌ１）、ＭＰＤＬ３２８０Ａ（抗ＰＤ−Ｌ１）、ＢＭＳ−９３６５５９（抗ＰＤ−Ｌ１）、イピリムマブ（抗ＣＴＬＡ４）、トレビリズマブ（抗ＣＴＬ４Ａ）、ＲＳ７（抗上皮糖タンパク質−１（ＥＧＰ−１、ＴＲＯＰ−２としても知られる））、ＰＡＭ４またはＫＣ４（どちらも抗ムチン）、ＭＮ−１４（抗癌胎児性抗原（ＣＥＡ、ＣＤ６６ｅまたはＣＥＡＣＡＭ５としても知られる）、ＭＮ−１５またはＭＮ−３（抗ＣＥＡＣＡＭ６）、Ｍｕ−９（抗結腸特異的抗原−ｐ）、Ｉｍｍｕ３１（抗アルファ−フェトプロテイン）、Ｒ１（抗ＩＧＦ−１Ｒ）、Ａ１９（抗ＣＤ１９）、ＴＡＧ−７２（例えば、ＣＣ４９）、Ｔｎ、Ｊ５９１またはＨｕＪ５９１（抗ＰＳＭＡ（前立腺特異的膜抗原））、ＡＢ−ＰＧ１−ＸＧ１−０２６（抗ＰＳＭＡ二量体）、Ｄ２／Ｂ（抗ＰＳＭＡ）、Ｇ２５０（抗炭酸脱水酵素ＩＸ  ＭＡｂ）、Ｌ２４３（抗ＨＬＡ−ＤＲ）アレムツズマブ（抗ＣＤ５２）、ベバシズマブ（抗ＶＥＧＦ）、セツキシマブ（抗ＥＧＦＲ）、ゲムツズマブ（抗ＣＤ３３）、イブリツモマブチウキセタン（抗ＣＤ２０）；パニツムマブ（抗ＥＧＦＲ）；トシツモマブ（抗ＣＤ２０）；ＰＡＭ４（クリバツズマブとしても知られる、抗ムチン）、ＢＷＡ−３（抗ヒストンＨ２Ａ／Ｈ４）、ＬＧ２−１（抗ヒストンＨ３）、ＭＲＡ１２（抗ヒストンＨ１）、ＰＲ１−１（抗ヒストンＨ２Ｂ）、ＬＧ１１−２（抗ヒストンＨ２Ｂ）、ＬＧ２−２（抗ヒストンＨ２Ｂ）、及びトラツズマブ（抗ＥｒｂＢ２）が挙げられるが、これらに限定されない。そのような抗体は、当該技術分野において知られている（例えば、米国特許第５，６８６，０７２号；同第５，８７４，５４０号；同第６，１０７，０９０号；同第６，１８３，７４４号；同第６，３０６，３９３号；同第６，６５３，１０４号；同第６，７３０，３００号；同第６，８９９，８６４号；同第６，９２６，８９３号；同第６，９６２，７０２号；同第７，０７４，４０３号；同第７，２３０，０８４号；同第７，２３８，７８５号；同第７，２３８，７８６号；同第７，２５６，００４号；同第７，２８２，５６７号；同第７，３００，６５５号；同第７，３１２，３１８号；同第７，５８５，４９１号；同第７，６１２，１８０号；同第７，６４２，２３９号；及び米国特許出願公開第２００５０２７１６７１号；同第２００６０１９３８６５号；同第２００６０２１０４７５号；同第２００７００８７００１；それぞれの実施例の項は、参照により本明細書に組み込まれる）。有用な特定の既知の抗体としては、ｈＰＡＭ４（���国特許第７，２８２，５６７号）、ｈＡ２０（米国特許第７，１５１，１６４号）、ｈＡ１９（米国特許第７，１０９，３０４号）、ｈＩＭＭＵ−３１（米国特許第７，３００，６５５号）、ｈＬＬ１（米国特許第７，３１２，３１８号）、ｈＬＬ２（米国特許第５，７８９，５５４号）、ｈＭｕ−９（米国特許第７，３８７，７７３号）、ｈＬ２４３（米国特許第７，６１２，１８０号）、ｈＭＮ−１４（米国特許第６，６７６，９２４号）、ｈＭＮ−１５（米国特許第８，２８７，８６５号）、ｈＲ１（米国特許出願第１３／６８８，８１２号）、ｈＲＳ７（米国特許第７，２３８，７８５号）、ｈＭＮ−３（米国特許第７，５４１，４４０号）、ＡＢ−ＰＧ１−ＸＧ１−０２６（米国特許出願第１１／９８３，３７２号、ＡＴＣＣ  ＰＴＡ−４４０５及びＰＴＡ−４４０６として寄託）、ならびにＤ２／Ｂ（ＷＯ２００９／１３０５７５）が挙げられ、それぞれの列挙された特許または特許出願の文章は、図面及び実施例の項に関して、参照により本明細書に組み込まれる。
【０１０３】
説明された複合体を使用して標的化され得る他の有用な抗原としては、炭酸脱水酵素ＩＸ、Ｂ７、ＣＣＬ１９、ＣＣＬ２１、ＣＳＡｐ、ＨＥＲ−２／ｎｅｕ、ＢｒＥ３、ＣＤ１、ＣＤ１ａ、ＣＤ２、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ８、ＣＤ１１Ａ、ＣＤ１４、ＣＤ１５、ＣＤ１６、ＣＤ１８、ＣＤ１９、ＣＤ２０（例えば、Ｃ２Ｂ８、ｈＡ２０、１Ｆ５ＭＡｂｓ）、ＣＤ２１、ＣＤ２２、ＣＤ２３、ＣＤ２５、ＣＤ２９、ＣＤ３０、ＣＤ３２ｂ、ＣＤ３３、ＣＤ３７、ＣＤ３８、ＣＤ４０、ＣＤ４０Ｌ、ＣＤ４４、ＣＤ４５、ＣＤ４６、ＣＤ５２、ＣＤ５４、ＣＤ５５、ＣＤ５９、ＣＤ６４、ＣＤ６７、ＣＤ７０、ＣＤ７４、ＣＤ７９ａ、ＣＤ８０、ＣＤ８３、ＣＤ９５、ＣＤ１２６、ＣＤ１３３、ＣＤ１３８、ＣＤ１４７、ＣＤ１５４、ＣＥＡＣＡＭ−５、ＣＥＡＣＡＭ−６、ＣＴＬＡ４、アルファ−フェトプロテイン（ＡＦＰ）、ＶＥＧＦ（例えば、ＡＶＡＳＴＩＮ（登録商標）、フィブロネクチンスプライス変異）、ＥＤ−Ｂフィブロネクチン（例えば、Ｌ１９）、ＥＧＰ−１（ＴＲＯＰ−２）、ＥＧＰ−２（例えば、１７−１Ａ）、ＥＧＦ受容体（ＥｒｂＢ１）（例えば、ＥＲＢＩＴＵＸ（登録商標））、ＥｒｂＢ２、ＥｒｂＢ３、Ｈ因子、ＦＨＬ−１、Ｆｌｔ−３、葉酸受容体、Ｇａ７３３、ＧＲＯ−β、ＨＭＧＢ−１、低酸素誘導因子（ＨＩＦ）、ＨＭ１．２４、ＨＥＲ−２／ｎｅｕ、インスリン様成長因子（ＩＬＧＦ）、ＩＦＮ−γ、ＩＦＮ−α、ＩＦＮ−β、ＩＦＮ−λ、ＩＬ−２Ｒ、ＩＬ−４Ｒ、ＩＬ−６Ｒ、ＩＬ−１３Ｒ、ＩＬ−１５Ｒ、ＩＬ−１７Ｒ、ＩＬ−１８Ｒ、ＩＬ−２、ＩＬ−６、ＩＬ−８、ＩＬ−１２、ＩＬ−１５、ＩＬ−１７、ＩＬ−１８、ＩＬ−２５、ＩＰ−１０、ＩＧＦ−１Ｒ、Ｉａ、ＨＭ１．２４、ガングリオシド、ＨＣＧ、Ｌ２４３が結合するＨＬＡ−ＤＲ抗原、ＣＤ６６抗原、すなわち、ＣＤ６６ａ−ｄまたはそれらの組み合わせ、ＭＡＧＥ、ｍＣＲＰ、ＭＣＰ−１、ＭＩＰ−１Ａ、ＭＩＰ−１Ｂ、マクロファージ遊走阻止因子（ＭＩＦ）、ＭＵＣ１、ＭＵＣ２、ＭＵＣ３、ＭＵＣ４、ＭＵＣ５ａｃ、胎盤成長因子（ＰｌＧＦ）、ＰＳＡ（前立腺特異的抗原）、ＰＳＭＡ、ＰＡＭ４抗原、ＰＤ１受容体、ＮＣＡ−９５、ＮＣＡ−９０、Ａ３、Ａ３３、Ｅｐ−ＣＡＭ、ＫＳ−１、Ｌｅ（ｙ）、メソテリン、Ｓ１００、テネイシン、ＴＡＣ、Ｔｎ抗原、Ｔｈｏｍａｓ−Ｆｒｉｅｄｅｎｒｅｉｃｈ抗原、腫瘍壊死抗原、腫瘍血管形成抗原、ＴＮＦ−α、ＴＲＡＩＬ受容体（Ｒ１及びＲ２）、ＴＲＯＰ−２、ＶＥＧＦＲ、ＲＡＮＴＥＳ、Ｔ１０１、及び癌幹細胞抗原、補体因子Ｃ３、Ｃ３ａ、Ｃ３ｂ、Ｃ５ａ、Ｃ５、ならびに癌遺伝子産物が挙げられる。
【０１０４】
フローサイトメトリーにより示されるような、また免疫治療に好適な抗体を選択するための指針となり得る、造血悪性細胞に対する好適な抗原（クラスター指定、またはＣＤ）標的の総合的分析は、Ｃｒａｉｇ  ａｎｄ  Ｆｏｏｎ，Ｂｌｏｏｄ  ｐｒｅｐｕｂｌｉｓｈｅｄ  ｏｎｌｉｎｅ  Ｊａｎｕａｒｙ  １５，２００８；ＤＯＬ  １０．１１８２／ｂｌｏｏｄ−２００７−１１−１２０５３５である。
【０１０５】
ＣＤ６６抗原は、癌胎児性抗原（ＣＥＡ）遺伝子ファミリーメンバー、ＢＣＧ、ＣＧＭ６、ＮＣＡ、ＣＧＭ１、及びＣＥＡによりそれぞれコードされた、同様の構造を有する５つの異なる糖タンパク質ＣＤ６６ａ〜ｅからなる。これらのＣＤ６６抗原（例えば、ＣＥＡＣＡＭ−６）は、顆粒球、消化管の正常上皮細胞、及び様々な組織の腫瘍細胞において主に発現する。また、癌の好適な標的として含まれるのは、癌精巣抗原、例えば、ＮＹ−ＥＳＯ−１（Ｔｈｅｕｒｉｌｌａｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｉｎｔ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ  ２００７；１２０（１１）：２４１１−７）だけでなく、骨髄性白血病（Ｋｏｚｌｏｖ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ  Ｇｅｎｅｔ．Ｃｙｔｏｇｅｎｅｔ．２００５；１６３（１）：６２−７）及びＢ細胞疾患におけるＣＤ７９ａ、ならびに非ホジキンリンパ腫（Ｐｏｉｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ  １１０（２）：６１６−６２３）のＣＤ７９ｂである。多くの上述の抗原が、２００２年１１月１５日に出願された米国仮特許出願第６０／４２６，３７９、名称「Ｕｓｅ  ｏｆ  Ｍｕｌｔｉ−ｓｐｅｃｉｆｉｃ，Ｎｏｎ−ｃｏｖａｌｅｎｔ  Ｃｏｍｐｌｅｘｅｓ  ｆｏｒ  Ｔａｒｇｅｔｅｄ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  ｏｆ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ」において開示されている。より治療抵抗性の前駆体悪性細胞集団とみなされる癌幹細胞（Ｈｉｌｌ  ａｎｄ  Ｐｅｒｒｉｓ，Ｊ．Ｎａｔｌ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｎｓｔ．２００７；９９：１４３５−４０）は、ある特定の癌の種類において標的化され得る抗原、例えば、前立腺癌（Ｍａｉｔｌａｎｄ  ｅｔ  ａｌ．，Ｅｒｎｓｔ  Ｓｃｈｅｒｉｎｇ  Ｆｏｕｎｄ．Ｓｙｍｐｏｓ．Ｐｒｏｃ．２００６；５：１５５−７９）、非小細胞肺癌（Ｄｏｎｎｅｎｂｅｒｇ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｃｏｎｔｒｏｌ  Ｒｅｌｅａｓｅ２００７；１２２（３）：３８５−９１）、及び膠芽腫（Ｂｅｉｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．２００７；６７（９）：４０１０−５）におけるＣＤ１３３、ならびに結腸直腸癌（Ｄａｌｅｒｂａ  ｅｒ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ２００７；１０４（２４）１０１５８−６３）、膵臓癌（Ｌｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．２００７；６７（３）：１０３０−７）、及び頭頸部扁平上皮癌（Ｐｒｉｎｃｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ２００７；１０４（３）９７３−８）におけるＣＤ４４を有する。
【０１０６】
抗癌抗体は、いくつかの場合において、ヒストンに結合することが示されている。Ｋａｔｏ  ｅｔ  ａｌ．（１９９１，Ｈｕｍ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  Ｈｙｂｒｉｄｏｍａｓ  ２：９４−１０１）は、肺癌特異的ヒトモノクローナル抗体ＨＢ４Ｃ５がヒストンＨ２Ｂに結合することを報告した。Ｇａｒｚｅｌｌｉ  ｅｔ  ａｌ．（１９９４，Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｌｅｔｔ  ３９：２７７−８２）は、Ｅｐｓｔｅｉｎ−Ｂａｒｒウイルス形質転換ヒトＢリンパ細胞が、ヒストンに対する自然抗体を産生することを観察した。ある特定の実施形態において、ヒストンに対する抗体は、主題の組み合わせにおいて有用となり得る。既知の抗ヒストン抗体としては、ＢＷＡ−３（抗ヒストンＨ２Ａ／Ｈ４）、ＬＧ２−１（抗ヒストンＨ３）、ＭＲＡ１２（抗ヒストンＨ１）、ＰＲ１−１（抗ヒストンＨ２Ｂ）、ＬＧ１１−２（抗ヒストンＨ２Ｂ）、及びＬＧ２−２（抗ヒストンＨ２Ｂ）が挙げられるが、これらに限定されない（例えば、Ｍｏｎｅｓｔｉｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，１９９１，Ｅｕｒ  Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ２１：１７２５−３１；Ｍｏｎｅｓｔｉｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，１９９３，Ｍｏｌｅｃ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ３０：１０６９−７５を参照されたい）。
【０１０７】
多発性骨髄腫治療に関して、例えば、ＣＤ３８及びＣＤ１３８（Ｓｔｅｖｅｎｓｏｎ，Ｍｏｌ  Ｍｅｄ  ２００６；１２（１１−１２）：３４５−３４６；Ｔａｓｓｏｎｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ  ２００４；１０４（１２）：３６８８−９６）、ＣＤ７４（Ｓｔｅｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，同書）、ＣＳ１（Ｔａｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ  ２００８；１１２（４）：１３２９−３７）、及びＣＤ４０（Ｔａｉ  ｅｔ  ａｌ．，２００５；Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．６５（１３）：５８９８−５９０６）に対する好適な標的化抗体が説明されている。
【０１０８】
マクロファージ遊走阻止因子（ＭＩＦ）は、自然及び適応免疫及びアポトーシスの重要な制御因子である。ＣＤ７４は、ＭＩＦの内因性受容体であることが報告されている（Ｌｅｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，２００３，Ｊ  Ｅｘｐ  Ｍｅｄ  １９７：１４６７−７６）。ＭＩＦ媒介細胞内経路に対するアンタゴニスト抗ＣＤ７４抗体の治療効果は、広範な疾患状態、例えば、膀胱、前立腺、乳房、肺、結腸の癌、及び慢性リンパ性白血病の治療に有用となり得る（例えば、Ｍｅｙｅｒ−Ｓｉｅｇｌｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，２００４，ＢＭＣ  Ｃａｎｃｅｒ  １２：３４；Ｓｈａｃｈａｒ＆Ｈａｒａｎ，２０１１，Ｌｅｕｋ  Ｌｙｍｐｈｏｍａ  ５２：１４４６−５４）。ミラツズマブ（ｈＬＬ１）は、ＭＩＦ媒介疾患の治療のための治療用途の例示的な抗ＣＤ７４抗体である。
【０１０９】
最も好ましい抗体／抗原対の例は、抗ＣＤ７４ＭＡｂ（不変鎖、クラスＩＩ特異的シャペロン、Ｉｉ）であるＬＬ１である（例えば、米国特許第６，６５３，１０４号；同第７，３１２，３１８号を参照されたく；それぞれの実施例の項は、参照により本明細書に組み込まれる）。ＣＤ７４抗原は、Ｂ細胞リンパ腫（多発性骨髄腫を含む）及び白血病、ある特定のＴ細胞リンパ腫、黒色腫、結腸、肺、及び腎臓癌、膠芽腫、ならびにある特定の他の癌に対して高度に発現する（Ｏｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  ９８：２９６−３０２（１９９９））。癌におけるＣＤ７４抗体の使用の検討は、参照により本明細書に組み込まれる、Ｓｔｅｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｌｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．２００７  Ｓｅｐ  １５；１３（１８Ｐｔ２）：５５５６ｓ−５５６３ｓに含まれている。抗ＣＤ７４抗体により好ましく治療される疾患としては、非ホジキンリンパ腫、ホジキン病、黒色腫、肺、腎臓、結腸癌、多形性膠芽腫、組織球腫、骨髄性白血病、及び多発性骨髄腫が挙げられるが、これらに限定されない。
【０１１０】
別の好ましい実施形態において、病原体に対する抗体が既知であるため、病原体に対して治療の組み合わせを使用することができる。例えば、例として細菌、リケッチア、マイコプラズマ、原虫、真菌、及びウイルスなどの病原体、ならびにそのような微生物に関連した抗原及び生成物により引き起こされる、ウイルス、細菌、真菌、及び寄生虫感染を含む感染病巣により生成された、またはそれに関連したマーカーに特異的に結合する抗体及び抗体断片が、とりわけ、それぞれの実施例の項が参照により本明細書に組み込まれる、Ｈａｎｓｅｎ  ｅｔ  ａｌ．、米国特許第３，９２７，１９３号及びＧｏｌｄｅｎｂｅｒｇ、米国特許第４，３３１，６４７号、同第４，３４８，３７６号、同第４，３６１，５４４号、同第４，４６８，４５７号、同第４，４４４，７４４号、同第４，８１８，７０９号、及び同第４，６２４，８４６号において、ならびにＲｅｉｃｈｅｒｔ及びＤｅｗｉｔｚ（Ｎａｔ  Ｒｅｖ  Ｄｒｕｇ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ  ２００６；５：１９１−１９５）において開示されている。感染性生物に対する抗体（抗毒素及び抗ウイルス抗体）ならびに他の標的を列挙した検討は、参照により本明細書に組み込まれるＣａｓａｄｅｖａｌｌ，Ｃｌｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １９９９；９３（１）：５−１５に含まれている。黄色ブドウ球菌（カタログ番号０１１−９０−０５）、ストレプトコッカス・アガラクチア（カタログ番号０１１−９０−０８）、ストレプトコッカス・ピオゲネス（カタログ番号０１−９０−０７）、ヘリコバクター・ピロリ（カタログ番号０１−９３−９４）、ライム病ボレリア（カタログ番号０５−９７−９１）、大腸菌（カタログ番号０１−９５−９１；０１−９５−９６）、レジオネラ種（カタログ番号０１−９０−０３）、リステリア種（カタログ番号０１−９０−９０）、コレラ菌（カタログ番号０１−９０−５０）、シゲラ種（カタログ番号１６−９０−０１）、及びカンピロバクター種（カタログ番号０１−９２−９３）を含む、広範なヒト病原体に対する抗体（例えば、ＫＰＬ，Ｉｎｃ．、Ｇａｉｔｈｅｒｓｂｕｒｇ、ＭＤ）が市販されている。
【０１１１】
好ましい実施形態において、病原体は、その実施例の項が参照により本明細書に組み込まれる米国特許第６，４４０，４１６号において開示されるように、ＨＩＶウイルス、結核菌、ストレプトコッカス・アガラクチア、メチシリン耐性黄色ブドウ球菌、レジオネラ・ニューモフィリア、ストレプトコッカス・ピオゲネス、大腸菌、ナイセリア・ゴノレー、ナイセリア・メニンギティディス、肺炎球菌、クリプトコックス・ネオフォルマンス、ヒストプラスマ・カプスラーツム、ヘモフィリスインフルエンザＢ、梅毒トレポネーマ、ライム病スピロヘータ、緑膿菌、らい菌、ウシ流産菌、狂犬病ウイルス、インフルエンザウイルス、サイトメガロウイルス、単純ヘルペスウイルスＩ、単純ヘルペスウイルスＩＩ、ヒト血清パルボ様ウイルス、呼吸器合胞体ウイルス、水痘帯状疱疹ウイルス、Ｂ型肝炎ウイルス、Ｃ型肝炎ウイルス、麻疹ウイルス、アデノウイルス、ヒトＴ細胞白血病ウイルス、Ｅｐｓｔｅｉｎ−Ｂａｒｒウイルス、マウス白血病ウイルス、ムンプスウイルス、水疱性口内炎ウイルス、シンドビスウイルス、リンパ球性脈絡髄膜炎ウイルス、疣ウイルス、ブルータングウイルス、センダイウイルス、ネコ白血病ウイルス、レオウイルス、ポリオウイルス、シミアンウイルス４０、マウス乳癌ウイルス、デングウイルス、風疹ウイルス、西ナイルウイルス、熱帯熱マラリア原虫、三日熱マラリア原虫、トキソプラズマ原虫、ランゲルトリパノソーマ、クルーズトリパノソーマ、ローデシアトリパノソーマ、ブルーストリパノソーマ、マンソン住血吸虫、日本住血吸虫、ウシバベシア、鶏盲腸コクシジウム、回旋糸状虫、熱帯リーシュマニア、旋毛虫、タイレリア・パルバ、胞状条虫、ヒツジ条虫、無鉤条虫、単包条虫、メソセストイドコルチ、マイコプラズマ・アルスリチジス、マイコプラズマ・ヒオルヒニス、マイコプラズマ・オラレ、マイコプラズマ・アルギニニ、アコレプラズマ・ライドラウィー、マイコプラズマ・サリバリウム、ならびに肺炎マイコプラズマからなる群から選択される。
【０１１２】
様々な実施形態において、特許請求される方法及び組成物は、当該技術分野において知られている様々な抗体のいずれかを利用し得る。有用な抗体は、いくつかの知られた供給元から商業的に得ることができる。例えば、様々な抗体分泌ハイブリドーマ株が、Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ、Ｍａｎａｓｓａｓ、ＶＡ）から入手可能である。腫瘍関連抗原を含むがこれに限定されない様々な疾患標的に対する多数の抗体が、ＡＴＣＣに寄託されており、及び／または可変領域配列を公開しており、特許請求される方法及び組成物における使用に利用可能である。例えば、米国特許第７，３１２，３１８号；同第７，２８２，５６７号；同第７，１５１，１６４号；同第７，０７４，４０３号；同第７，０６０，８０２号；同第７，０５６，５０９号；同第７，０４９，０６０号；同第７，０４５，１３２号；同第７，０４１，８０３号；同第７，０４１，８０２号；同第７，０４１，２９３号；同第７，０３８，０１８号；同第７，０３７，４９８号；同第７，０１２，１３３号；同第７，００１，５９８号；同第６，９９８，４６８号；同第６，９９４，９７６号；同第６，９９４，８５２号；同第６，９８９，２４１号；同第６，９７４，８６３号；同第６，９６５，０１８号；同第６，９６４，８５４号；同第６，９６２，９８１号；同第６，９６２，８１３号；同第６，９５６，１０７号；同第６，９５１，９２４号；同第６，９４９，２４４号；同第６，９４６，１２９号；同第６，９４３，０２０号；同第６，９３９，５４７号；同第６，９２１，６４５号；同第６，９２１，６４５号；同第６，９２１，５３３号；同第６，９１９，４３３号；同第６，９１９，０７８号；同第６，９１６，４７５号；同第６，９０５，６８１号；同第６，８９９，８７９号；同第６，８９３，６２５号；同第６，８８７，４６８号；同第６，８８７，４６６号；同第６，８８４，５９４号；同第６，８８１，４０５号；同第６，８７８，８１２号；同第６，８７５，５８０号；同第６，８７２，５６８号；同第６，８６７，００６号；同第６，８６４，０６２号；同第６，８６１，５１１号；同第６，８６１，２２７号；同第６，８６１，２２６号；同第６，８３８，２８２号；同第６，８３５，５４９号；同第６，８３５，３７０号；同第６，８２４，７８０号；同第６，８２４，７７８号；同第６，８１２，２０６号；同第６，７９３，９２４号；同第６，７８３，７５８号；同第６，７７０，４５０号；同第６，７６７，７１１号；同第６，７６４，６８８号；同第６，７６４，６８１号；同第６，７６４，６７９号；同第６，７４３，８９８号；同第６，７３３，９８１号；同第６，７３０，３０７号；同第６，７２０，１５５号；同第６，７１６，９６６号；同第６，７０９，６５３号；同第６，６９３，１７６号；同第６，６９２，９０８号；同第６，６８９，６０７号；同第６，６８９，３６２号；同第６，６８９，３５５号；同第６，６８２，７３７号；同第６，６８２，７３６号；同第６，６８２，７３４号；同第６，６７３，３４４号；同第６，６５３，１０４号；同第６，６５２，８５２号；同第６，６３５，４８２号；同第６，６３０，１４４号；同第６，６１０，８３３号；同第６，６１０，２９４号；同第６，６０５，４４１号；同第６，６０５，２７９号；同第６，５９６，８５２号；同第６，５９２，８６８号；同第６，５７６，７４５号；同第６，５７２；８５６号；同第６，５６６，０７６号；同第６，５６２，６１８号；同第６，５４５，１３０号；同第６，５４４，７４９号；同第６，５３４，０５８号；同第６，５２８，６２５号；同第６，５２８，２６９号；同第６，５２１，２２７号；同第６，５１８，４０４号；同第６，５１１，６６５号；同第６，４９１，９１５号；同第６，４８８，９３０号；同第６，４８２，５９８号；同第６，４８２，４０８号；同第６，４７９，２４７号；同第６，４６８，５３１号；同第６，４６８，５２９号；同第６，４６５，１７３号；同第６，４６１，８２３号；同第６，４５８，３５６号；同第６，４５５，０４４号；同第６，４５５，０４０号；同第６，４５１，３１０号；同第６，４４４，２０６号；同第６，４４１，１４３号；同第６，４３２，４０４号；同第６，４３２，４０２号；同第６，４１９，９２８号；同第６，４１３，７２６号；同第６，４０６，６９４号；同第６，４０３，７７０号；同第６，４０３，０９１号；同第６，３９５，２７６号；同第６，３９５，２７４号；同第６，３８７，３５０号；同第６，３８３，７５９号；同第６，３８３，４８４号；同第６，３７６，６５４号；同第６，３７２，２１５号；同第６，３５９，１２６号；同第６，３５５，４８１号；同第６，３５５，４４４号；同第６，３５５，２４５号；同第６，３５５，２４４号；同第６，３４６，２４６号；同第６，３４４，１９８号；同第６，３４０，５７１号；同第６，３４０，４５９号；同第６，３３１，１７５号；同第６，３０６，３９３号；同第６，２５４，８６８号；同第６，１８７，２８７号；同第６，１８３，７４４号；同第６，１２９，９１４号；同第６，１２０，７６７号；同第６，０９６，２８９号；同第６，０７７，４９９号；同第５，９２２，３０２号；同第５，８７４，５４０号；同第５，８１４，４４０号；同第５，７９８，２２９号；同第５，７８９，５５４号；同第５，７７６，４５６号；同第５，７３６，１１９号；同第５，７１６，５９５号；同第５，６７７，１３６号；同第５，５８７，４５９号；同第５，４４３，９５３、米国特許第５，５２５，３３８を参照されたく、これらのそれぞれの実施例の項は、参照により本明細書に組み込まれる。これらは単なる例であり、広範な他の抗体及びそれらのハイブリドーマが当該技術分野において知られている。当業者には、ＡＴＣＣ、ＮＣＢＩ、及び／またはＵＳＰＴＯデータベースにおける選択された対象疾患関連標的に対する抗体の単純な検索により、ほぼあらゆる疾患関連抗原に対する抗体配列または抗体分泌ハイブリドーマを得ることができることが理解される。クローニングされた抗体の抗原結合ドメインは、当該技術分野において周知の標準的技術を使用して、増幅され、切断され、発現ベクター内にライゲーションされ、適応宿主細胞内にトランスフェクトされ、タンパク質産生に使用され得る（例えば、米国特許第７，５３１，３２７号；同第７，５３７，９３０号；同第７，６０８，４２５号、及び同第７，７８５，８８０号を参照されたく、これらのそれぞれの実施例の項は、参照により本明細書に組み込まれる）。
【０１１３】
他の実施例において、抗体複合物は、ＭＨＣクラスＩ、ＭＨＣクラスＩＩ、またはアクセサリー分子、例えば、ＣＤ４０、ＣＤ５４、ＣＤ８０、またはＣＤ８６に結合する。また、抗体複合物は、白血球活性化サイトカイン、またはサイトカインメディエーター、例えば、ＮＦ−κＢに結合し得る。
【０１１４】
ある特定の実施形態において、２つの異なる標的のうちの１つは、癌細胞受容体または癌関連抗原、特に、Ｂ細胞系統抗原（ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２１、ＣＤ２２、ＣＤ２３など）、ＶＥＧＦ、ＶＥＧＦＲ、ＥＧＦＲ、癌胎児性抗原（ＣＥＡ）、胎盤成長因子（ＰｌＧＦ）、テネイシン、ＨＥＲ−２／ｎｅｕ、ＥＧＰ−１、ＥＧＰ−２、ＣＤ２５、ＣＤ３０、ＣＤ３３、ＣＤ３８、ＣＤ４０、ＣＤ４５、ＣＤ５２、ＣＤ７４、ＣＤ８０、ＣＤ１３８、ＮＣＡ６６、ＣＥＡＣＡＭ−１、ＣＥＡＣＡＭ−５、ＣＥＡＣＡＭ−６（癌胎児性抗原関連細胞接着分子６）、ＭＵＣ１、ＭＵＣ２、ＭＵＣ３、ＭＵＣ４、ＭＵＣ１６、ＩＬ−６、α−フェトプロテイン（ＡＦＰ）、Ａ３、ＣＡ１２５、結腸特異的抗原−ｐ（ＣＳＡｐ）、葉酸受容体、ＨＬＡ−ＤＲ、ヒト絨毛性ゴナドトロピン（ＨＣＧ）、Ｉａ、ＥＬ−２、インスリン様成長因子（ＩＧＦ）及びＩＧＦ受容体、ＫＳ−１、Ｌｅ（ｙ）、ＭＡＧＥ、壊死抗原、ＰＡＭ−４、前立腺酸性フォスファターゼ（ＰＡＰ）、Ｐｒ１、前立腺特異的抗原（ＰＳＡ）、前立腺特異的膜抗原（ＰＳＭＡ）、Ｓ１００、Ｔ１０１、ＴＡＣ、ＴＡＧ７２、ＴＲＡＩＬ受容体、ならびに炭酸脱水酵素ＩＸからなる群から選択されるものであってもよい。
【０１１５】
使用され得る他の抗体は、細菌、ウイルス、マイコプラズマ、または他の病原体などの感染性疾患物質に対する抗体を含む。そのような感染性物質に対する多くの抗体が当該技術分野において知られており、任意のそのような既知の抗体が、特許請求される方法及び組成物において使用され得る。例えば、ヒト免疫不全ウイルスＩ（ＨＩＶ−１）のｇｐ１２０糖タンパク質抗原に対する抗体が知られており、そのような抗体のいくつかは、ヒトにおける免疫防御的役割を有し得る。例えば、Ｒｏｓｓｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ．８６：８０５５−８０５８，１９９０を参照されたい。既知の抗ＨＩＶ抗体は、Ｊｏｈａｎｓｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．（ＡＩＤＳ，２００６  Ｏｃｔ  ３；２０（１５）：１９１１−５）により説明されるような抗エンベロープ抗体、ならびにＰｏｌｙｍｕｎ（Ｖｉｅｎｎａ、Ａｕｓｔｒｉａ）により説明及び販売され、また全て参照により本明細書に組み込まれる米国特許第５，８３１，０３４号、米国特許第５，９１１，９８９号、及びＶｃｅｌａｒ  ｅｔ  ａｌ．，ＡＩＤＳ  ２００７；２１（１６）：２１６１−２１７０及びＪｏｏｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂ．Ａｇｅｎｔｓ  Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ．２００６；５０（５）：１７７３−９にも記載されている抗ＨＩＶ抗体を含む。
【０１１６】
マラリア原虫に対する抗体は、スポロゾイト、メロゾイト、シゾント、及び生殖母細胞段階に対して指向性であってもよい。スポロゾイトに対するモノクローナル抗体が生成されており（スポロゾイト周囲抗原）、インビトロで、及びげっ歯類においてスポロゾイトを中和することが示されている（Ｎ．Ｙｏｓｈｉｄａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２０７：７１−７３，１９８０）。いくつかのグループは、トキソプラズマ症に関与する寄生原虫であるトキソプラズマ原虫に対する抗体を開発した（Ｋａｓｐｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１２９：１６９４−１６９９，１９８２；同上，３０：２４０７−２４１２，１９８３）。幼住血吸虫表面抗原に対する抗体が開発されており、インビボまたはインビトロで幼住血吸虫に対し作用することが判明している（Ｓｉｍｐｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐａｒａｓｉｔｏｌｏｇｙ，８３：１６３−１７７，１９８１；Ｓｍｉｔｈ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐａｒａｓｉｔｏｌｏｇｙ，８４：８３−９１，１９８２：Ｇｒｙｚｃｈ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１２９：２７３９−２７４３，１９８２；Ｚｏｄｄａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１２９：２３２６−２３２８，１９８２；Ｄｉｓｓｏｕｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１２９：２２３２−２２３４，１９８２）。
【０１１７】
クルーズトリパノソーマは、シャーガス病の原因物質であり、吸血性昆虫サシガメにより伝染する。インビトロで寄生虫の１つの形態から別の形態への（上鞭毛型から錐鞭毛期への）分化を特異的に阻害する抗体が生成されており、これは細胞表面糖タンパク質と反応するが、この抗原は、哺乳動物（血流）形態の寄生虫には存在しない（Ｓｈｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，３００：６３９−６４０，１９８２）。
【０１１８】
抗菌核病菌抗体（米国特許第７，９１０，７０２号）；抗グルクロノキシロマンナン抗体（Ｚｈｏｎｇ  ａｎｄ  Ｐｒｉｏｆｓｋｉ，１９９８，Ｃｌｉｎ  Ｄｉａｇ  Ｌａｂ  Ｉｍｍｕｎｏｌ５：５８−６４）；抗カンジダ抗体（Ｍａｔｔｈｅｗｓ  ａｎｄ  Ｂｕｒｎｉｅ，２００１，Ｃｕｒｒ  Ｏｐｉｎ  Ｉｎｖｅｓｔｉｇ  Ｄｒｕｇｓ  ２：４７２−７６）；及び抗スフィンゴ糖脂質抗体（Ｔｏｌｅｄｏ  ｅｔ  ａｌ．，２０１０，ＢＭＣ  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ  １０：４７）などの抗真菌抗体が、当該技術分野において知られている。
【０１１９】
ヒトにおける感染症の大多数に関与する微生物（細菌、ウイルス、原虫、真菌、他の寄生虫）のほとんどに対して好適な抗体が開発されており、多くが以前にインビトロ診断目的で使用されている。従来の方法により生成され得るこれらの抗体、及びより新しい抗体は、本発明における使用に好適である。
【０１２０】
免疫抱合体
ある特定の実施形態において、抗体またはその断片は、１つ以上の治療または診断薬剤に複合化されてもよい。治療薬剤は、同じである必要はなく、異なっていてもよく、例えば、薬物及び放射性同位体であってもよい。例えば、１３１Ｉは、抗体または融合タンパク質のチロシンに組み込まれてもよく、また薬物がリシン残基のイプシロンアミノ基に結合してもよい。治療及び診断薬剤はまた、例えば、還元されたＳＨ基及び／または炭水化物側鎖に結合してもよい。治療または診断薬剤の抗体または融合タンパク質との共有結合的または非共有結合的複合体を作製するための多くの方法が、当該技術分野において知られており、任意のそのような知られた方法が利用され得る。
【０１２１】
治療または診断薬剤は、ジスルフィド結合形成により、還元された抗体成分のヒンジ領域に結合し得る。代替として、そのような薬剤は、Ｎ−スクシニル３−（２−ピリジルジチオ）プロピオネート（ＳＰＤＰ）などのヘテロ二機能性架橋剤を使用して結合し得る。Ｙｕ  ｅｔ  ａｌ．，Ｉｎｔ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ  ５６：２４４（１９９４）。そのような複合化のための一般的技術は、当該技術分野において周知である。例えば、Ｗｏｎｇ，ＣＨＥＭＩＳＴＲＹ  ＯＦ  ＰＲＯＴＥＩＮ  ＣＯＮＪＵＧＡＴＩＯＮ  ＡＮＤ  ＣＲＯＳＳ−ＬＩＮＫＩＮＧ（ＣＲＣ  Ｐｒｅｓｓ１９９１）；Ｕｐｅｓｌａｃｉｓ  ｅｔ  ａｌ．，“Ｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ｂｙ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｍｅｔｈｏｄｓ，”ｉｎ  ＭＯＮＯＣＬＯＮＡＬ  ＡＮＴＩＢＯＤＩＥＳ：ＰＲＩＮＣＩＰＬＥＳ  ＡＮＤ  ＡＰＰＬＩＣＡＴＩＯＮＳ，Ｂｉｒｃｈ  ｅｔ  ａｌ．（ｅｄｓ．），ｐａｇｅｓ  １８７−２３０（Ｗｉｌｅｙ−Ｌｉｓｓ，Ｉｎｃ．１９９５）；Ｐｒｉｃｅ，“Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｓｙｎｔｈｅｔｉｃ  Ｐｅｐｔｉｄｅ−Ｄｅｒｉｖｅｄ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，”ｉｎ  ＭＯＮＯＣＬＯＮＡＬ  ＡＮＴＩＢＯＤＩＥＳ：ＰＲＯＤＵＣＴＩＯＮ，ＥＮＧＩＮＥＥＲＩＮＧ  ＡＮＤ  ＣＬＩＮＩＣＡＬ  ＡＰＰＬＩＣＡＴＩＯＮ，Ｒｉｔｔｅｒ  ｅｔ  ａｌ．（ｅｄｓ．），ｐａｇｅｓ  ６０−８４（Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｐｒｅｓｓ  １９９５）を参照されたい。代替として、治療または診断薬剤は、抗体のＦｃ領域における炭水化物部分を介して複合化し得る。炭水化物基は、チオール基に結合した同じ薬剤の投入量を増加させるために使用されてもよく、または、炭水化物部分は、異なる治療または診断薬剤を結合させるために使用されてもよい。
【０１２２】
抗体炭水化物部分を介してペプチドを抗体成分に複合化するための方法は、当業者に周知である。例えば、参照によりそれらの全体が本明細書に組み込まれる、Ｓｈｉｈ  ｅｔ  ａｌ．，Ｉｎｔ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ  ４１：８３２（１９８８）；Ｓｈｉｈ  ｅｔ  ａｌ．，Ｉｎｔ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ  ４６：１１０１（１９９０）；及びＳｈｉｈ  ｅｔ  ａｌ．の米国特許第５，０５７，３１３号を参照されたい。一般的方法は、酸化された炭水化物部分を有する抗体成分を、少なくとも１つの遊離アミン基を有する担体ポリマーと反応させることを含む。この反応は、最初のＳｃｈｉｆｆ塩基（イミン）結合をもたらし、これは、最終複合体を形成する２級アミンへの還元により安定化され得る。
【０１２３】
免疫抱合体の抗体成分として使用される抗体が抗体断片である場合、Ｆｃ領域は存在しなくてもよい。しかしながら、炭水化物部分を、全長抗体または抗体断片の軽鎖可変領域に導入することが可能である。例えば、参照によりそれらの全体が本明細書に組み込まれる、Ｌｅｕｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５４：５９１９（１９９５）；Ｈａｎｓｅｎ  ｅｔ  ａｌ．、米国特許第５，４４３，９５３号（１９９５）、Ｌｅｕｎｇ  ｅｔ  ａｌ．、米国特許第６，２５４，８６８号を参照されたい。治療または診断薬剤を結合させるために、操作された炭水化物部分が使用される。
【０１２４】
いくつかの実施形態において、キレート剤が、抗体、抗体断片または融合タンパク質に結合してもよく、治療または診断薬剤、例えば、放射性核種をキレート化するために使用されてもよい。例示的なキレート剤としては、ＤＴＰＡ（例えば、Ｍｘ−ＤＴＰＡ）、ＤＯＴＡ、ＴＥＴＡ、ＮＥＴＡ、またはＮＯＴＡが挙げられるが、これらに限定されない。金属または他のリガンドをタンパク質に結合させるための複合化の方法及びキレート剤の使用は、当該技術分野において周知である（例えば、米国特許第７，５６３，４３３号を参照されたく、その実施例の項は、参照により本明細書に組み込まれる）。
【０１２５】
ある特定の実施形態において、イオンを結合させるための複数のキレート基が結合し得る長いテールを有する試薬との反応により、放射性金属または常磁性イオンがタンパク質またはペプチドに結合してもよい。そのようなテールは、ポリマー、例えば、ポリリシン、ポリサッカリド、またはキレート基が結合し得るペンダント基を有する他の誘導体化若しくは誘導可能な鎖、例えば、エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）、ジエチレントリアミン五酢酸（ＤＴＰＡ）、ポルフィリン、ポリアミン、クラウンエーテル、ビス−チオセミカルバゾン、ポリオキシム、及びこの目的に有用であることが知られている同様の基であってもよい。
【０１２６】
キレートは、例えば、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる米国特許第４，８２４，６５９号において開示されるように、抗体またはペプチドに直接連結してもよい。特に有用な金属−キレートの組み合わせは、放射性画像化法のための６０〜４，０００ｋｅＶの一般的なエネルギー範囲内の診断用同位体、例えば、１２５Ｉ、１３１Ｉ、１２３Ｉ、１２４Ｉ、６２Ｃｕ、６４Ｃｕ、１８Ｆ、１１１Ｉｎ、６７Ｇａ、６８Ｇａ、９９ｍＴｃ、９４ｍＴｃ、１１Ｃ、１３Ｎ、１５Ｏ、７６Ｂｒと共に使用される、２−ベンジル−ＤＴＰＡ、ならびにそのモノメチル及びシクロヘキシル類似体を含む。マンガン、鉄、及びガドリニウムなどの非放射性金属と錯化した場合、同じキレートがＭＲＩに有用である。ＮＯＴＡ、ＤＯＴＡ、及びＴＥＴＡなどの大環状キレートは、様々な金属及び放射性金属と共に、最も具体的にはそれぞれガリウム、イットリウム、及び銅の放射性核種と共に使用される。そのような金属−キレート錯体は、対象となる金属に対し環サイズを調整することにより非常に安定とすることができる。ＲＡＩＴのための２２３Ｒａなどの核種を安定に結合させるのに興味深い大環状ポリエーテルなどの他の環型キレートが包含される。
【０１２７】
より最近では、例えば、Ｆ−１８と金属または他の原子、例えば、アルミニウムとの反応による、ＰＥＴスキャニング技術において有用な１８Ｆ−標識化の方法が開示されている。１８Ｆ−Ａｌ複合体は、抗体に直接結合する、または事前標的化方法において標的化可能なコンストラクトを標識化するために使用されるＤＯＴＡ、ＮＯＴＡ、またはＮＥＴＡなどのキレート基と錯化され得る。そのようなＦ−１８標識化技術は、米国特許第７，５６３，４３３号において開示されており、その実施例の項は、参照により本明細書に組み込まれる。
【０１２８】
別の例示的な免疫抱合体は、Ｊｏｈａｎｎｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．（２００６，ＡＩＤＳ  ２０：１９１１−１５）において開示されたが、ドキソルビシン複合化Ｐ４／Ｄ１０（抗ｇｐ１２０）抗体は、ＨＩＶに感染した細胞の治療に極めて有効であることが判明した。
【０１２９】
カンプトテシン複合体
ある特定の好ましい実施形態において、免疫抱合体は、ＳＮ−３８などのカンプトテシン薬を含んでもよい。カンプトテシン（ＣＰＴ）及びその誘導体は、強力な抗腫瘍薬剤のクラスである。イリノテカン（ＣＰＴ−１１とも呼ばれる）及びトポテカンは、承認された癌治療薬であるＣＰＴ類似体である（Ｉｙｅｒ  ａｎｄ  Ｒａｔａｉｎ，Ｃａｎｃｅｒ  Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ．Ｐｈａｍａｃｏｌ．４２：Ｓ３１−Ｓ４３（１９９８））。ＣＰＴは、トポイソメラーゼＩ−ＤＮＡ複合物を安定化することによりトポイソメラーゼＩ酵素を阻害することによって作用する（Ｌｉｕ，ｅｔ  ａｌ．ｉｎ  Ｔｈｅ  Ｃａｍｐｔｏｔｈｅｃｉｎｓ：Ｕｎｆｏｌｄｉｎｇ  Ｔｈｅｉｒ  Ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ  Ｐｏｔｅｎｔｉａｌ，Ｌｉｅｈｒ  Ｊ．Ｇ．，Ｇｉｏｖａｎｅｌｌａ，Ｂ．Ｃ．ａｎｄ  Ｖｅｒｓｃｈｒａｅｇｅｎ（ｅｄｓ），ＮＹ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ．，ＮＹ  ９２２：１−１０（２０００））。
【０１３０】
免疫抱合体の好ましい至適投与量は、好ましくは週１回、週２回、または１週間おきに投与される、３ｍｇ／ｋｇから２０ｍｇ／ｋｇ、より好ましくは４〜１８ｍｇ／ｋｇ、より好ましくは６〜１２ｍｇ／ｋｇ、より好ましくは８〜１０ｍｇ／ｋｇの間の用量を含み得る。最適な投薬スケジュールは、２週連続の治療に続く１週間、２週間、３週間若しくは４週間の休息、または１週間交代の治療及び休息、または１週間の治療に続く２週間、３週間若しくは４週間の休息、または３週間の治療に続く１週間、２週間、３週間若しくは４週間の休息、または４週間の治療に続く１週間、２週間、３週間若しくは４週間の休息、または５週間の治療に続く１週間、２週間、３週間、４週間若しくは５週間の休息、または２週間に１回、３週間に１回若しくは１ヶ月に１回の投与の治療サイクルを含み得る。治療は、任意の数のサイクル、好ましくは少なくとも２、少なくとも４、少なくとも６、少なくとも８、少なくとも１０、少なくとも１２、少なくとも１４、または少なくとも１６サイクルだけ延長されてもよい。有用な例示的用量は、１ｍｇ／ｋｇ、２ｍｇ／ｋｇ、３ｍｇ／ｋｇ、４ｍｇ／ｋｇ、５ｍｇ／ｋｇ、６ｍｇ／ｋｇ、７ｍｇ／ｋｇ、８ｍｇ／ｋｇ、９ｍｇ／ｋｇ、１０ｍｇ／ｋｇ、１１ｍｇ／ｋｇ、１２ｍｇ／ｋｇ、１３ｍｇ／ｋｇ、１４ｍｇ／ｋｇ、１５ｍｇ／ｋｇ、１６ｍｇ／ｋｇ、１７ｍｇ／ｋｇ、及び１８ｍｇ／ｋｇを含み得る。好ましい用量は、４、６、８、９、１０、１２、１４、１６、または１８ｍｇ／ｋｇである。当業者には、年齢、全体的な健康、特定の器官機能または重量、及び特定の器官系（例えば、骨髄）に対する以前の治療の効果などの様々な因子が、免疫抱合体の最適な用量の選択において考慮され得ること、ならびに、用量及び／または投与頻度が、治療の間に増加または減少され得ることが理解される。投薬は、必要に応じて反復され、わずか４〜８回の投薬後に腫瘍収縮の痕跡が観察されてもよい。本明細書において開示される最適化された用量及び投与スケジュールは、ヒト対象における予想外の著しい効力及び低減された毒性を示し、これは動物モデル試験から予測され得なかった。驚くべきことに、著しい効力によって、ＳＮ−３８がインビボで得られる親化合物ＣＰＴ−１１を含む１つ以上の標準的抗癌治療に対して抵抗性であることが以前に判明した腫瘍の治療が可能となる。
【０１３１】
ＭＡｂ−ＣＬ２Ａ−ＳＮ−３８と呼ばれる免疫抱合体の例を以下に示す。ＣＬ２Ａ−ＳＮ−３８を調製する方法、ならびにその抗体複合体を作製及び使用するための方法は、当該技術分野において知られている（例えば、米国特許第７，９９９，０８３号及び同第８，０８０，２５０号を参照されたく、それぞれの実施例の項は、参照により本明細書に組み込まれる）。
【化１】
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【０１３２】
Ｐｒｏ−２−ピロリノドキソルビシン複合体
化合物２−ピロリノドキソルビシンは、１９９６年、Ｓｃｈａｌｌｙのグループにより初めて説明され、彼らは後に、それを臨床前調査のための多くの受容体標的化ペプチドの複合化に使用した（Ｎａｇｙ  ｅｔ  ａｌ．，１９９６，Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ  ９３：７２６９−７３；Ｎａｇｙ  ｅｔ  ａｌ．，１９９６，Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ  ９６：２４６４−２９）。これは、ダウノサミン窒素が５員エナミンに組み込まれたドキソルビシンの誘導体であり、そのため極めて強力なアルキル化剤であり、ドキソルビシンの５００〜１０００倍の細胞毒性を有する。その薬物の極めて高い毒性により、安全性のためにアイソレーターにおいて特別な取り扱いが必要である。この薬物のプロドラッグ形態は、Ｎ−（４，４−ジアセトキシブチル）ドキソルビシンであり、これはインビボで２−ピロリノドキソルビシンに変換される。Ｐｒｏ−２−ピロリノドキソルビシン（Ｐｒｏ−２−Ｐ−Ｄｏｘ）は、本明細書において開示されるように調製され、ＡＤＣ治療における使用のために抗体または抗体断片に複合化され得る。
【０１３３】
以下のスキームは、Ｄｏｘ、２−ＰＤｏｘ、Ｐｒｏ−２−Ｐ−Ｄｏｘ（Ｐ２ＰＤｏｘ）、及び活性化Ｐｒｏ−２−Ｐ−Ｄｏｘの構造を示す。ＩｇＧへのカップリングのために、Ｐｒｏ−２−Ｐ−Ｄｏｘは、ＳＭＣＣ−ヒドラジドで活性化されてもよく、これは、酸に不安定なヒドラゾン及びマレイミド基を導入する手順であり、後者は、穏やかに還元された抗体のチオールへの複合化のためのものである。
【化２】
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【０１３４】
現在臨床的に試験されているＡＤＣのほとんどは、チューブリン作用性の極めて毒性のメイタンシノイド及びオーリスタチンを組み込んでいるが、これは細胞周期段階特異的である。ちなみに、トラツズマブ−ＤＭ１を除き、これらのＡＤＣは、固形癌において臨床的に比較的狭い治療指数を示すようである。２−ＰＤｏｘなどのＤＮＡアルキル化剤は、細胞周期段階非特異的であり、改善された治療指数を提供するはずである。膵臓癌及び胃癌の２つの進行性異種移植片モデルにおける予備的試験（不図示）では、ｈＲＳ７−６複合体が低い安全な用量（例えば、２．２５ｍｇ／ｋｇのタンパク質用量、または０．０６４ｍｇ／ｋｇの薬物用量）で非常に活性であり、完全退縮をもたらすことが示された。
【０１３５】
シアノ水素化ホウ素ナトリウムを用いた４，４−ジアセトキシブチルアルデヒドによるドキソルビシンの還元的アルキル化により、Ｐ２ＰＤｏｘが得られる（以下のスキーム）。市販の４−ベンジルオキシブチルアルデヒドのジアセトキシル化に続く水素化分解及び酸化により、アルデヒドがもたらされ、これが還元的にドキソルビシンにカップリングされてＰ２ＰＤｏｘが得られた。後者は、ＳＭＣＣ−ヒドラジドで活性化された。
【化３】
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【０１３６】
複合体調製物を穏やかに混合してＰＢＳ中のＩｇＧとＴＣＥＰとの鎖間ジスルフィドを還元し、続いて１０倍過剰の活性化Ｐ２ＰＤｏｘにカップリングさせた。複合体は、２５ｍＭヒスチジン、ｐＨ７中で平衡化されたＳＥＰＨＡＤＥＸ（登録商標）上の遠心分離されたＳＥＣ上で精製され、続いて疎水性カラム上を通過させた。生成物をトレハロース及びＴｗｅｅｎ８０と配合し、凍結乾燥させた。６〜７薬物／ＩｇＧの典型的な置換を有する複合化生成物は、サイズ排除ＨＰＬＣにより単一ピークとして溶出し、逆相ＨＰＬＣにより、典型的に１％未満の非複合化遊離薬剤を含有していた。
【０１３７】
当業者には、腫瘍及び／または感染性疾患のＡＤＣ治療における使用のために、Ｐ２ＰＤｏｘが、本明細書において議論された免疫賦活剤と組み合わせて、任意の既知の抗体またはその断片に複合化されてもよいことが理解される。
【０１３８】
治療薬剤
代替の実施形態において、ＡＤＣ及び／または他の抗体に複合化した、または、別個に投与される、細胞毒性薬剤、抗血管形成薬剤、プロアポトーシス薬剤、抗生物質、ホルモン、ホルモンアンタゴニスト、ケモカイン、薬物、プロドラッグ、毒素、酵素、または他の薬剤などの治療薬剤が使用されてもよい。有用な薬物は、抗有糸分裂、抗キナーゼ、アルキル化、抗代謝、抗生物質、アルカロイド、抗血管形成、プロアポトーシス薬剤、及びそれらの組み合わせからなる群から選択される薬学的特性を有し得る。
【０１３９】
有用な例示的薬物としては、５−フルオロウラシル、アファチニブ、アプリジン、アザリビン、アナストロゾール、アントラサイクリン、アキシチニブ、ＡＶＬ−１０１、ＡＶＬ−２９１、ベンダムスチン、ブレオマイシン、ボルテゾミブ、ボスチニブ、ブリオスタチン−１、ブスルファン、カリケアミシン、カンプトテシン、カルボプラチン、１０−ヒドロキシカンプトテシン、カルムスチン、セレコキシブ、クロランブシル、シスプラチン、Ｃｏｘ−２阻害剤、イリノテカン（ＣＰＴ−１１）、ＳＮ−３８、カルボプラチン、クラドリビン、カンプトテカン、クリゾチニブ、シクロホスファミド、シタラビン、ダカルバジン、ダサチニブ、ジナシクリブ、ドセタキセル、ダクチノマイシン、ダウノルビシン、ドキソルビシン、２−ピロリノドキソルビシン（２Ｐ−ＤＯＸ）、シアノ−モルホリノドキソルビシン、ドキソルビシングルクロニド、エピルビシングルクロニド、エルロチニブ、エストラムスチン、エピドフィロトキシン、エルロチニブ、エンチノスタット、エストロゲン受容体結合剤、エトポシド（ＶＰ１６）、エトポシドグルクロニド、リン酸エトポシド、エキセメスタン、フィンゴリモド、フロクスウリジン（ＦＵｄＲ）、３’，５’−Ｏ−ジオレイル−ＦｕｄＲ（ＦＵｄＲ−ｄＯ）、フルダラビン、フルタミド、ファルネシル−タンパク質トランスフェラーゼ阻害剤、フラボピリドール、ホスタマチニブ、ガネテスピブ、ＧＤＣ−０８３４、ＧＳ−１１０１、ゲフェチニブ、ゲムシタビン、ヒドロキシ尿素、イブルチニブ、イダルビシン、イデラリシブ、イホスファミド、イマチニブ、Ｌ−アスパラギナーゼ、ラパチニブ、レノリダミド、ロイコボリン、ＬＦＭ−Ａ１３、ロムスチン、メクロレタミン、メルファラン、メルカプトプリン、６−メルカプトプリン、メトトレキセート、ミトキサントロン、ミトラマイシン、マイトマイシン、ミトタン、ナベルビン、ネラチニブ、ニロチニブ、ニトロソ尿素、オラパリブ、プリコマイシン、プロカルバジン、ＰＣＩ−３２７６５、ペントスタチン、ＰＳＩ−３４１、ラロキシフェン、セムスチン、ソレフェニブ、ストレプトゾシン、ＳＵ１１２４８、スニチニブ、タモキシフェン、テマゾロミド、トランス白金、サリドマイド、チオグアニン、チオテパ、テニポシド、トポテカン、ウラシルマスタード、バタラニブ、ビノレルビン、ビンブラスチン、ビンクリスチン、ビンカアルカノイド、及びＺＤ１８３９が挙げられ得るが、これらに限定されない。
【０１４０】
有用な毒素は、リシン、アブリン、アルファ毒素、サポリン、リボヌクレアーゼ（ＲＮａｓｅ）、例えば、オンコナーゼ、ＤＮａｓｅ  Ｉ、ブドウ球菌エンテロトキシン−Ａ、ヤマゴボウ抗ウイルスタンパク質、ゲロニン、ジフテリア毒素、シュードモナス外毒素、及びシュードモナス内毒素を含み得る。
【０１４１】
有用なケモカインは、ＲＡＮＴＥＳ、ＭＣＡＦ、ＭＩＰ１−アルファ、ＭＩＰ１−ベータ、及びＩＰ−１０を含み得る。
【０１４２】
ある特定の実施形態において、抗血管形成薬剤、例えば、アンギオスタチン、バキュロスタチン、カンスタチン、マスピン、抗ＶＥＧＦ抗体、抗ＰｌＧＦペプチド及び抗体、抗血管成長因子抗体、抗Ｆｌｋ−１抗体、抗Ｆｌｔ−１抗体及びペプチド、抗Ｋｒａｓ抗体、抗ｃＭＥＴ抗体、抗ＭＩＦ（マクロファージ遊走阻止因子）抗体、ラミニンペプチド、フィブロネクチンペプチド、プラスミノーゲン活性化因子阻害剤、組織金属プロテイナーゼ阻害剤、インターフェロン、インターロイキン−１２、ＩＰ−１０、Ｇｒｏ−β、トロンボスポンジン、２−メトキシオエストラジオール、プロリフェリン関連タンパク質、カルボキシアミドトリアゾール、ＣＭ１０１、マリマスタット、ペントサンポリ硫酸、アンジオポイエチン−２、インターフェロン−アルファ、ハービマイシンＡ、ＰＮＵ１４５１５６Ｅ、１６Ｋプロラクチン断片、リノミド（ロキニメックス）、サリドマイド、ペントキシフィリン、ゲニステイン、ＴＮＰ−４７０、エンドスタチン、パクリタキセル、アキュチン、アンギオスタチン、シドフォビル、ビンクリスチン、ブレオマイシン、ＡＧＭ−１４７０、血小板因子４、またはミノサイクリンが有用となり得る。
【０１４３】
有用な免疫賦活剤は、サイトカイン、幹細胞成長因子、リンホトキシン、造血因子、コロニー刺激因子（ＣＳＦ）、インターフェロン（ＩＦＮ）、エリスロポエチン、トロンボポエチン、及びそれらの組み合わせから選択され得る。特に有用なのは、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）などのリンホトキシン、インターロイキン（ＩＬ）などの造血因子、顆粒球−コロニー刺激因子（Ｇ−ＣＳＦ）または顆粒球マクロファージ−コロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ）などのコロニー刺激因子、インターフェロン−α、−βまたは−λなどのインターフェロン、及び「Ｓ１因子」と指定されるものなどの幹細胞成長因子である。サイトカインに含まれるのは、成長ホルモン、例えば、ヒト成長ホルモン、Ｎ−メチオニルヒト成長ホルモン及びウシ成長ホルモン；副甲状腺ホルモン；チロキシン；インスリン；プロインスリン；リラキシン；プロリラキシン；糖タンパク質ホルモン、例えば、卵胞刺激ホルモン（ＦＳＨ）、甲状腺刺激ホルモン（ＴＳＨ）及び黄体形成ホルモン（ＬＨ）；肝臓成長因子；プロスタグランジン、線維芽細胞成長因子；プロラクチン；胎盤性ラクトゲン、ＯＢタンパク質；腫瘍壊死因子−α及び−β；ミュラー管抑制物質；マウスゴナドトロピン関連ペプチド；インヒビン；アクチビン；血管内皮成長因子；インテグリン；トロンボポエチン（ＴＰＯ）；神経成長因子、例えば、ＮＧＦ−β；血小板成長因子；形質転換成長因子（ＴＧＦ）、例えば、ＴＧＦ−α及びＴＧＦ−β；インスリン様成長因子−Ｉ及び−ＩＩ；エリスロポエチン（ＥＰＯ）；骨誘導因子；インターフェロン、例えば、インターフェロン−α、−β、及び−γ；コロニー刺激因子（ＣＳＦ）、例えば、マクロファージ−ＣＳＦ（Ｍ−ＣＳＦ）；インターロイキン（ＩＬ）、例えば、ＩＬ−１、ＩＬ−１α、ＩＬ−２、ＩＬ−３、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＩＬ−８、ＩＬ−９、ＩＬ−１０、ＩＬ−１１、ＩＬ−１２；ＩＬ−１３、ＩＬ−１４、ＩＬ−１５、ＩＬ−１６、ＩＬ−１７、ＩＬ−１８、ＩＬ−２１、ＩＬ−２５、ＬＩＦ、ｋｉｔ−リガンドまたはＦＬＴ−３、アンギオスタチン、トロンボスポンジン、エンドスタチン、腫瘍壊死因子、及びＬＴである。
【０１４４】
有用な放射性核種としては、１１１Ｉｎ、１７７Ｌｕ、２１２Ｂｉ、２１３Ｂｉ、２１１Ａｔ、６２Ｃｕ、６７Ｃｕ、９０Ｙ、１２５Ｉ、１３１Ｉ、３２Ｐ、３３Ｐ、４７Ｓｃ、１１１Ａｇ、６７Ｇａ、１４２Ｐｒ、１５３Ｓｍ、１６１Ｔｂ、１６６Ｄｙ、１６６Ｈｏ、１８６Ｒｅ、１８８Ｒｅ、１８９Ｒｅ、２１２Ｐｂ、２２３Ｒａ、２２５Ａｃ、５９Ｆｅ、７５Ｓｅ、７７Ａｓ、８９Ｓｒ、９９Ｍｏ、１０５Ｒｈ、１０９Ｐｄ、１４３Ｐｒ、１４９Ｐｍ、１６９Ｅｒ、１９４Ｉｒ、１９８Ａｕ、１９９Ａｕ、２１１Ｐｂ、及び２２７Ｔｈが挙げられるが、これらに限定されない。治療用放射性核種は、好ましくは、２０〜６，０００ｋｅＶの範囲内、好ましくはオージェ放射体の場合６０〜２００ｋｅＶ、ベータ放射体の場合１００〜２，５００ｋｅＶ、アルファ放射体の場合４，０００〜６，０００ｋｅＶの範囲内の崩壊エネルギーを有する。有用なベータ粒子放出核種の最大崩壊エネルギーは、好ましくは２０〜５，０００ｋｅＶ、より好ましくは１００〜４，０００ｋｅＶ、最も好ましくは５００〜２，５００ｋｅＶである。また、オージェ放出粒子と共に実質的に崩壊する放射性核種が好ましい。例えば、Ｃｏ−５８、Ｇａ−６７、Ｂｒ−８０ｍ、Ｔｃ−９９ｍ、Ｒｈ−１０３ｍ、Ｐｔ−１０９、Ｉｎ−１１１、Ｓｂ−１１９、１−１２５、Ｈｏ−１６１、Ｏｓ−１８９ｍ、及びＩｒ−１９２である。有用なベータ粒子放出核種の崩壊エネルギーは、好ましくは１，０００ｋｅＶ未満、より好ましくは１００ｋｅＶ未満、最も好ましくは７０ｋｅＶ未満である。また、アルファ粒子の生成と共に実質的に崩壊する放射性核種が好ましい。そのような放射性核種としては、Ｄｙ−１５２、Ａｔ−２１１、Ｂｉ−２１２、Ｒａ−２２３、Ｒｎ−２１９、Ｐｏ−２１５、Ｂｉ−２１１、Ａｃ−２２５、Ｆｒ−２２１、Ａｔ−２１７、Ｂｉ−２１３、Ｔｈ−２２７、及びＦｍ−２５５が挙げられるが、これらに限定されない。有用なアルファ粒子放出核種の崩壊エネルギーは、好ましくは２，０００〜１０，０００ｋｅＶ、より好ましくは３，０００〜８，０００ｋｅＶ、最も好ましくは４，０００〜７，０００ｋｅＶである。追加的な有用な潜在的放射性核種としては、１１Ｃ、１３Ｎ、１５Ｏ、７５Ｂｒ、１９８Ａｕ、２２４Ａｃ、１２６Ｉ、１３３Ｉ、７７Ｂｒ、１１３ｍＩｎ、９５Ｒｕ、９７Ｒｕ、１０３Ｒｕ、１０５Ｒｕ、１０７Ｈｇ、２０３Ｈｇ、１２１ｍＴｅ、１２２ｍＴｅ、１２５ｍＴｅ、１６５Ｔｍ、１６７Ｔｍ、１６８Ｔｍ、１９７Ｐｔ、１０９Ｐｄ、１０５Ｒｈ、１４２Ｐｒ、１４３Ｐｒ、１６１Ｔｂ、１６６Ｈｏ、１９９Ａｕ、５７Ｃｏ、５８Ｃｏ、５１Ｃｒ、５９Ｆｅ、７５Ｓｅ、２０１Ｔｌ、２２５Ａｃ、７６Ｂｒ、１６９Ｙｂなどが挙げられる。いくつかの有用な診断用核種としては、１８Ｆ、５２Ｆｅ、６２Ｃｕ、６４Ｃｕ、６７Ｃｕ、６７Ｇａ、６８Ｇａ、８６Ｙ、８９Ｚｒ、９４Ｔｃ、９４ｍＴｃ、９９ｍＴｃ、または１１１Ｉｎが挙げられ得る。
【０１４５】
治療薬剤は、光活性薬剤または染料であってもよい。蛍光組成物、例えば、蛍光色素、及び他の色原体または染料、例えば、可視光に感受性のポルフィリンが、好適な光を病変に導くことにより病変を検出及び治療するために使用されている。治療において、これは光線照射、光線療法、または光線力学的療法と呼ばれている。Ｊｏｒｉ  ｅｔ  ａｌ．（ｅｄｓ．），ＰＨＯＴＯＤＹＮＡＭＩＣ  ＴＨＥＲＡＰＹ  ＯＦ  ＴＵＭＯＲＳ  ＡＮＤ  ＯＴＨＥＲ  ＤＩＳＥＡＳＥＳ（Ｌｉｂｒｅｒｉａ  Ｐｒｏｇｅｔｔｏ  １９８５）；ｖａｎ  ｄｅｎ  Ｂｅｒｇｈ，Ｃｈｅｍ．Ｂｒｉｔａｉｎ（１９８６），２２：４３０を参照されたい。さらに、光線療法を達成するために、モノクローナル抗体が光活性化染料とカップリングされている。Ｍｅｗ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．（１９８３），１３０：１４７３；同上．，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．（１９８５），４５：４３８０；Ｏｓｅｒｏｆｆ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ（１９８６），８３：８７４４；同上，Ｐｈｏｔｏｃｈｅｍ．Ｐｈｏｔｏｂｉｏｌ．（１９８７），４６：８３；Ｈａｓａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｇ．Ｃｌｉｎ．Ｂｉｏｌ．Ｒｅｓ．（１９８９），２８８：４７１；Ｔａｔｓｕｔａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｌａｓｅｒｓ  Ｓｕｒｇ．Ｍｅｄ．（１９８９），９：４２２；Ｐｅｌｅｇｒｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ（１９９１），６７：２５２９を参照されたい。
【０１４６】
他の有用な治療薬剤は、オリゴヌクレオチド、特に、好ましくは癌遺伝子及び癌遺伝子産物、例えば、ｂｃｌ−２またはｐ５３に対して指向されるアンチセンスオリゴヌクレオチドを含んでもよい。治療オリゴヌクレオチドの好ましい形態は、ｓｉＲＮＡである。当業者には、ｓｉＲＮＡまたは干渉ＲＮＡ種が、標的化組織への送達のために抗体またはその断片に結合してもよいことが理解される。広範な標的に対する多くのｓｉＲＮＡ種が当該技術分野において知られており、任意のそのような既知のｓｉＲＮＡが、特許請求される方法及び組成物において利用され得る。
【０１４７】
有用となり得る既知のｓｉＲＮＡ種としては、ＩＫＫ−ガンマ（米国特許第７，０２２，８２８号）；ＶＥＧＦ、Ｆｌｔ−１及びＦｌｋ−１／ＫＤＲ（米国特許第７，１４８，３４２号）；Ｂｃｌ２及びＥＧＦＲ（米国特許第７，５４１，４５３号）；ＣＤＣ２０（米国特許第７，５５０，５７２号）；トランスデューシン（ベータ）様３（米国特許第７，５７６，１９６号）；ＫＲＡＳ（米国特許第７，５７６，１９７号）；炭酸脱水酵素ＩＩ（米国特許第７，５７９，４５７号）；補体成分３（米国特許第７，５８２，７４６号）；インターロイキン−１受容体関連キナーゼ４（ＩＲＡＫ４）（米国特許第７，５９２，４４３）；スルビビン（米国特許第７，６０８，７０７０号）；スーパーオキシドジスムターゼ１（米国特許第７，６３２，９３８号）；ＭＥＴ癌原遺伝子（米国特許第７，６３２，９３９号）；アミロイドベータ前駆体タンパク質（ＡＰＰ）（米国特許第７，６３５，７７１号）；ＩＧＦ−１Ｒ（米国特許第７，６３８，６２１号）；ＩＣＡＭ１（米国特許第７，６４２，３４９号）；補体因子Ｂ（米国特許第７，６９６，３４４号）；ｐ５３（７，７８１，５７５号）、及びアポリポタンパク質Ｂ（７，７９５，４２１号）に特異的なものが挙げられ、それぞれの参照された特許の実施例の項は、参照により本明細書に組み込まれる。
【０１４８】
追加的なｓｉＲＮＡ種は、既知の商業的供給元、例えば、多くの他の供給元の中でも、Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ（Ｓｔ  Ｌｏｕｉｓ、ＭＯ）、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ（Ｃａｒｌｓｂａｄ、ＣＡ）、Ｓａｎｔａ  Ｃｒｕｚ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ（Ｓａｎｔａ  Ｃｒｕｚ、ＣＡ）、Ａｍｂｉｏｎ（Ａｕｓｔｉｎ、ＴＸ）、Ｄｈａｒｍａｃｏｎ（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、Ｌａｆａｙｅｔｔｅ、ＣＯ）、Ｐｒｏｍｅｇａ（Ｍａｄｉｓｏｎ、ＷＩ）、Ｍｉｒｕｓ  Ｂｉｏ（Ｍａｄｉｓｏｎ、ＷＩ）、及びＱｉａｇｅｎ（Ｖａｌｅｎｃｉａ、ＣＡ）から入手可能である。ｓｉＲＮＡ種の他の公的に利用可能なソースとしては、Ｓｔｏｃｋｈｏｌｍ  Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ  ＣｅｎｔｒｅのｓｉＲＮＡｄｂデータベース、ＭＩＴ／ＩＣＢＰ  ｓｉＲＮＡ  Ｄａｔａｂａｓｅ、Ｂｒｏａｄ  ＩｎｓｔｉｔｕｔｅのＲＮＡｉ  Ｃｏｎｓｏｒｔｉｕｍ  ｓｈＲＮＡ  Ｌｉｂｒａｒｙ、及びＮＣＢＩのＰｒｏｂｅデータベースが挙げられる。例えば、ＮＣＢＩ  Ｐｒｏｂｅデータベースには３０，８５２のｓｉＲＮＡ種がある。当業者には、対象となる任意の遺伝子に対して、ｓｉＲＮＡ種がすでに設計されている、または公的に利用可能なソフトウェアツールを使用して容易に設計され得ることが理解される。
【０１４９】
治療処置の方法
様々な実施形態は、ヒト、家畜またはコンパニオンペット、例えば、イヌ及びネコを含む哺乳動物などの対象における癌を治療する方法であって、治療上効果的な量の細胞毒性及び／または免疫賦活剤の組み合わせを対象に投与することを含む方法に関する。
【０１５０】
ＣＡＲ−Ｔ、ＣＡＲ−ＮＫ、インターフェロン、ＡＤＣ、及び／またはチェックポイント阻害剤抗体の投与は、標的細胞の表面上の別の抗原に結合する、またはそれと反応性である、治療上効果的な量の別の抗体を同時または逐次的に投与することにより補完されてもよい。好ましい追加のＭＡｂは、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ８、ＣＤ１４、ＣＤ１５、ＣＤ１６、ＣＤ１９、ＩＧＦ−１Ｒ、ＣＤ２０、ＣＤ２１、ＣＤ２２、ＣＤ２３、ＣＤ２５、ＣＤ３０、ＣＤ３２ｂ、ＣＤ３３、ＣＤ３７、ＣＤ３８、ＣＤ４０、ＣＤ４０Ｌ、ＣＤ４５、ＣＤ４６、ＣＤ５２、ＣＤ５４、ＣＤ７０、ＣＤ７４、ＣＤ７９ａ、ＣＤ７９ｂ、ＣＤ８０、ＣＤ９５、ＣＤ１２６、ＣＤ１３３、ＣＤ１３８、ＣＤ１５４、ＣＥＡＣＡＭ−５、ＣＥＡＣＡＭ−６、Ｂ７、ＡＦＰ、ＰＳＭＡ、ＥＧＰ−１、ＥＧＰ−２、炭酸脱水酵素ＩＸ、ＰＡＭ４抗原、ＭＵＣ１、ＭＵＣ２、ＭＵＣ３、ＭＵＣ４、ＭＵＣ５、Ｉａ、ＭＩＦ、ＨＭ１．２４、ＨＬＡ−ＤＲ、テネイシン、Ｆｌｔ−３、ＶＥＧＦＲ、ＰｌＧＦ、ＩＬＧＦ、ＩＬ−６、ＩＬ−２５、テネイシン、ＴＲＡＩＬ−Ｒ１、ＴＲＡＩＬ−Ｒ２、補体因子Ｃ５、癌遺伝子産物、またはそれらの組み合わせと反応性のＭＡｂからなる群から選択される、少なくとも１つのヒト化、キメラ、またはヒトＭＡｂを含む。抗ＣＤ１９、抗ＣＤ２０、及び抗ＣＤ２２抗体などの様々な有用な抗体が、当該技術分野において知られている。例えば、Ｇｈｅｔｉｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．４８：２６１０（１９８８）；Ｈｅｋｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．３２：３６４（１９９１）；Ｌｏｎｇｏ，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｏｎｃｏｌ．８：３５３（１９９６）、米国特許第５，７９８，５５４号；同第６，１８７，２８７号；同第６，３０６，３９３号；同第６，６７６，９２４号；同第７，１０９，３０４号；同第７，１５１，１６４号；同第７，２３０，０８４号；同第７，２３０，０８５号；同第７，２３８，７８５号；同第７，２３８，７８６号；同第７，２８２，５６７号；同第７，３００，６５５号；同第７，３１２，３１８号；同第７，５０１，４９８号；同第７，６１２，１８０号；同第７，６７０，８０４号；ならびに米国特許出願公開第２００８０１３１３６３号；同第２００７０１７２９２０号；同第２００６０１９３８６５号；及び同第２００８０１３８３３３を参照されたく、それぞれの実施例の項は、参照により本明細書に組み込まれる。
【０１５１】
併用療法は、少なくとも１つの治療薬剤の同時または逐次的な投与でさらに補完されてもよい。例えば、「ＣＶＢ」（１．５ｇ／ｍ２のシクロホスファミド、２００〜４００ｍｇ／ｍ２のエトポシド、及び１５０〜２００ｍｇ／ｍ２のカルムスチン）は、非ホジキンリンパ腫を治療するために使用される投薬計画である。Ｐａｔｔｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｅｕｒ．Ｊ．Ｈａｅｍａｔｏｌ．５１：１８（１９９３）。他の好適な併用化学療法計画は、当業者に周知である。例えば、Ｆｒｅｅｄｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．，“Ｎｏｎ−Ｈｏｄｇｋｉｎ’ｓ  Ｌｙｍｐｈｏｍａｓ，”ｉｎ  ＣＡＮＣＥＲ  ＭＥＤＩＣＩＮＥ，ＶＯＬＵＭＥ  ２，３ｒｄ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｈｏｌｌａｎｄ  ｅｔ  ａｌ．（ｅｄｓ．），ｐａｇｅｓ  ２０２８−２０６８（Ｌｅａ＆Ｆｅｂｉｇｅｒ  １９９３）を参照されたい。例示として、中悪性度の非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）の治療のための第一世代の化学療法計画としては、Ｃ−ＭＯＰＰ（シクロホスファミド、ビンクリスチン、プロカルバジン、及びプレドニゾン）ならびにＣＨＯＰ（シクロホスファミド、ドキソルビシン、ビンクリスチン、及びプレドニゾン）が挙げられる。有用な第二世代の化学療法計画は、ｍ−ＢＡＣＯＤ（メトトレキセート、ブレオマイシン、ドキソルビシン、シクロホスファミド、ビンクリスチン、デキサメタゾン、及びロイコボリン）であり、一方好適な第三世代の投薬計画は、ＭＡＣＯＰ−Ｂ（メトトレキセート、ドキソルビシン、シクロホスファミド、ビンクリスチン、プレドニゾン、ブレオマイシン、及びロイコボリン）である。追加の有用な薬物としては、酪酸フェニル、ベンダムスチン、及びブリオスタチン−１が挙げられる。
【０１５２】
治療薬剤の組み合わせは、薬学的に有用な組成物を調製するための既知の方法に従って製剤化され得、ＣＡＲ−ＴまたはＣＡＲ−ＮＫ、ＡＤＣ、インターフェロン、及び／またはチェックポイント阻害剤抗体が、薬学的に好適な賦形剤との混合物として組み合わされる。無菌リン酸緩衝生理食塩水が、薬学的に好適な賦形剤の一例である。他の好適な賦形剤が、当業者に周知である。例えば、Ａｎｓｅｌ  ｅｔ  ａｌ．，ＰＨＡＲＭＡＣＥＵＴＩＣＡＬ  ＤＯＳＡＧＥ  ＦＯＲＭＳ  ＡＮＤ  ＤＲＵＧ  ＤＥＬＩＶＥＲＹ  ＳＹＳＴＥＭＳ，５ｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ（Ｌｅａ＆Ｆｅｂｉｇｅｒ  １９９０）、及びＧｅｎｎａｒｏ（ｅｄ．），ＲＥＭＩＮＧＴＯＮ’Ｓ  ＰＨＡＲＭＡＣＥＵＴＩＣＡＬ  ＳＣＩＥＮＣＥＳ，１８ｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ（Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏｍｐａｎｙ  １９９０）、ならびにそれらの改訂版を参照されたい。
【０１５３】
主題のＣＡＲ−Ｔ、ＣＡＲ−ＮＫ、ＡＤＣ、インターフェロン、及び／または抗体は、例えば、ボーラス注射または持続注入による静脈内投与用に製剤化されてもよい。好ましくは、ＣＡＲ−ＴまたはＣＡＲ−ＮＫ、ＡＤＣ、及び／または抗体は、約４時間未満の期間にわたり、より好ましくは約３時間未満の期間にわたり注入される。例えば、第１のボーラスは、３０分以内、好ましくはさらに１５分以内に注入され、残りは次の２〜３時間にわたり注入され得る。注射用製剤は、保存剤が添加された単位投薬形態として、例えば、アンプルまたは複数投薬容器内に存在してもよい。組成物は、懸濁液、溶液、または油性若しくは水性ビヒクル中のエマルションなどの形態をとってもよく、また懸濁剤、安定剤、及び／または分散剤などの調合剤を含有してもよい。代替として、活性成分は、使用前に好適なビヒクル、例えば、無菌発熱性物質除去蒸留水により再構成するための粉末形態であってもよい。
【０１５４】
追加的な薬学的方法を使用して、治療の組み合わせの作用期間が制御され得る。制御放出調製物は、投与される薬剤を錯化または吸着するためのポリマーの使用により調製され得る。例えば、生体適合性ポリマーは、ポリ（エチレン−ｃｏ−酢酸ビニル）のマトリックス、ならびにステアリン酸二量体及びセバシン酸のポリ無水物コポリマーのマトリックスを含む。Ｓｈｅｒｗｏｏｄ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  １０：１４４６（１９９２）。そのようなマトリックスからの放出速度は、治療薬剤の分子量、マトリックス中の薬剤の量、及び分散した粒子のサイズに依存する。Ｓａｌｔｚｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｊ．５５：１６３（１９８９）；Ｓｈｅｒｗｏｏｄ  ｅｔ  ａｌ．，上記参照。他の固体投薬形態は、Ａｎｓｅｌ  ｅｔ  ａｌ．，ＰＨＡＲＭＡＣＥＵＴＩＣＡＬ  ＤＯＳＡＧＥ  ＦＯＲＭＳ  ＡＮＤ  ＤＲＵＧ  ＤＥＬＩＶＥＲＹ  ＳＹＳＴＥＭＳ，５ｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ（Ｌｅａ＆Ｆｅｂｉｇｅｒ  １９９０）、及びＧｅｎｎａｒｏ（ｅｄ．），ＲＥＭＩＮＧＴＯＮ’Ｓ  ＰＨＡＲＭＡＣＥＵＴＩＣＡＬ  ＳＣＩＥＮＣＥＳ，１８ｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ（Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏｍｐａｎｙ  １９９０）、ならびにそれらの改訂版に記載されている。
【０１５５】
ＣＡＲ−Ｔ、ＣＡＲ−ＮＫ、インターフェロン、及び／またはチェックポイント阻害剤抗体は、皮下で、またはさらに他の非経口経路により、例えば、静脈内、筋肉内、腹腔内、若しくは経脈管的に、哺乳動物に投与され得る。ＡＤＣは、静脈内、腹腔内、または経脈管的に投与され得る。さらに、投与は、持続注入により、または単回若しくは複数回ボーラスによるものであってもよい。好ましくは、ＣＡＲ−ＴまたはＣＡＲ−ＮＫ、ＡＤＣ、インターフェロン、及び／またはチェックポイント阻害剤抗体は、約４時間未満の期間にわたり、より好ましくは約３時間未満の期間にわたり注入される。
【０１５６】
より一般的には、ヒトに投与されるＣＡＲ−ＴまたはＣＡＲ−ＮＫ、ＡＤＣ、インターフェロン、及び／またはチェックポイント阻害剤抗体の用量は、患者の年齢、体重、身長、性別、全体的な医学的状態、及び既往歴などの要因に依存して変動する。単回静脈内注入として約１ｍｇ／ｋｇ〜２５ｍｇ／ｋｇの範囲内のＣＡＲ−ＴまたはＣＡＲ−ＮＫ、ＡＤＣ、及び／または抗体の用量を受容者に提供することが望ましくなり得るが、状況により決定されるように、より低い、またはより高い用量が投与されてもよい。例えば、７０ｋｇの患者に対する１〜２０ｍｇ／ｋｇの用量は、７０〜１，４００ｍｇであり、または、１．７ｍの患者に対して４１〜８２４ｍｇ／ｍ２である。投薬は、必要に応じて反復されてもよく、例えば、４〜１０週間の間週１回、８週間の間週１回、または４週間の間週１回であってもよい。また、維持療法において必要に応じて、より少ない頻度で、例えば、数ヶ月の間１週間おきに、または何ヶ月もの間月１回若しくは３ヶ月に１回で与えられてもよい。
【０１５７】
代替として、ＣＡＲ−ＴまたはＣＡＲ−ＮＫ、ＡＤＣ、及び／またはチェックポイント阻害剤抗体は、２週間または３週間おきに１回の投薬として投与され、合計で少なくとも３回の投薬分繰り返されてもよい。または、組み合わせは、４〜６週間の間週２回投与されてもよい。用量が約２００〜３００ｍｇ／ｍ２（１．７ｍの患者に対して投薬当たり３４０ｍｇ、または７０ｋｇの患者に対して４．９ｍｇ／ｋｇ）に低下された場合、４〜１０週間の間週１回、さらには週２回投与されてもよい。代替として、投薬スケジュールは、減少されてもよく、すなわち、２〜３ヶ月の間２週間または３週間毎であってもよい。しかしながら、より高い用量、例えば、週１回または２〜３週間毎に１回２０ｍｇ／ｋｇであっても、繰り返し投薬サイクルでゆっくりとした静脈内注入により投与され得ることが断定されている。投薬スケジュールは、随意に、他の間隔で繰り返されてもよく、投薬は、用量及びスケジュールを適切に調節して様々な非経口経路で行われてもよい。
【０１５８】
当業者には、上で議論された投薬スケジュールはＡＤＣ、ＣＡＲ−Ｔ、ＣＡＲ−ＮＫ、及び／またはｍＡｂに関連しているが、全身毒性を回避するために、インターフェロン薬剤は、実質的により低い用量で投与されるべきであることが理解される。ヒトに対するインターフェロン（例えば、ペグインターフェロン）の用量は、より典型的にはマイクログラム範囲内であり、例えば、インターフェロンの種類に依存して、皮下投与で１８０μｇを週１回、または皮下投与で１日おきに１００〜１８０μｇ、または１３５μｇ、または１３５μｇ／１．７３ｍ２、または９０μｇ／１．７３ｍ２、または２５０μｇが有用となり得る。
【０１５９】
ＣＡＲ−Ｔ、ＣＡＲ−ＮＫ、インターフェロン、ＡＤＣ、及び／またはチェックポイント阻害剤抗体は、定期的なボーラス注射として投与されてもよいが、代替の実施形態において、ＣＡＲ−Ｔ、ＣＡＲ−ＮＫ、ＡＤＣ、インターフェロン、及び／またはチェックポイント阻害剤抗体は、持続注入により投与されてもよい。Ｃｍａｘを増加させ、血液中の治療薬剤のＰＫを延長するために、持続注入は、例えば、留置カテーテルにより投与されてもよい。そのようなデバイスは、ＨＩＣＫＭＡＮ（登録商標）、ＢＲＯＶＩＡＣ（登録商標）、またはＰＯＲＴ−Ａ−ＣＡＴＨ（登録商標）カテーテルなど、当該技術分野において知られており（例えば、Ｓｋｏｌｎｉｋ  ｅｔ  ａｌ．，Ｔｈｅｒ  Ｄｒｕｇ  Ｍｏｎｉｔ  ３２：７４１−４８，２０１０を参照されたい）、任意のそのような知られた留置カテーテルが使用され得る。また、様々な持続注入ポンプも当該技術分野において知られており、任意のそのような知られたポンプが使用され得る。持続注入のための用量範囲は、１日当たり０．１〜３．０ｍｇ／ｋｇの間であってもよい。より好ましくは、ＣＡＲ−Ｔ、ＣＡＲ−ＮＫ、ＡＤＣ、インターフェロン、及び／またはチェックポイント阻害剤抗体は、２〜５時間、より好ましくは２〜３時間の比較的短い期間にわたり、静脈内注入により投与され得る。
【０１６０】
好ましい実施形態において、薬剤の組み合わせは、癌の治療に有用である。癌の例としては、癌腫、リンパ腫、膠芽腫、黒色腫、肉腫、及び白血病、骨髄腫、またはリンパ性悪性疾患が挙げられるが、これらに限定されない。そのような癌のより具体的な例は、以下に示されるが、扁平上皮癌（例えば、上皮性扁平上皮癌）、ユーイング肉腫、ウィルムス腫瘍、星状細胞腫、小細胞肺癌、非小細胞肺癌、肺の腺癌及び肺の扁平上皮癌を含む肺癌、腹膜の癌、肝細胞癌、消化管癌を含む胃癌、膵臓癌、多形性膠芽腫、子宮頸癌、卵巣癌、肝臓癌、膀胱癌、肝癌、肝細胞癌、神経内分泌腫瘍、甲状腺髄様癌、分化甲状腺癌、乳癌、卵巣癌、結腸癌、直腸癌、子宮内膜癌または子宮癌、唾液腺癌、腎臓癌または腎癌、前立腺癌、外陰癌、肛門癌、陰茎癌、ならびに頭頸部癌が挙げられる。「癌」という用語は、原発性悪性細胞または腫瘍（例えば、その細胞が対象の身体における元の悪性腫瘍若しくは腫瘍の部位以外の部位に移動していないもの）、及び続発性悪性細胞または腫瘍（例えば、転移、元の腫瘍の部位とは異なる二次的部位への悪性細胞または腫瘍細胞の移動から生じるもの）を含む。本発明の治療方法につながる癌は、ＩＧＦ−１Ｒを発現、過剰発現、または異常発現する細胞を含む。
【０１６１】
癌または悪性腫瘍の他の例としては、急性小児リンパ性白血病、急性リンパ性白血病、急性リンパ球性白血病、急性骨髄性白血病、副腎皮質癌、成人（原発性）肝細胞癌、成人（原発性）肝臓癌、成人急性リンパ球性白血病、成人急性骨髄性白血病、成人ホジキンリンパ腫、成人リンパ急性白血病、成人非ホジキンリンパ腫、成人原発性肝臓癌、成人軟部肉腫、ＡＩＤＳ関連リンパ腫、ＡＩＤＳ関連悪性腫瘍、肛門癌、星状細胞腫、胆管癌、膀胱癌、骨癌、脳幹グリオーマ、脳腫瘍、乳癌、腎盂及び尿管の癌、中枢神経系（原発性）リンパ腫、中枢神経系リンパ腫、小脳星状細胞腫、大脳星状細胞腫、子宮頸癌、小児（原発性）肝細胞癌、小児（原発性）肝臓癌、小児急性リンパ性白血病、小児急性骨髄性白血病、小児脳幹グリオーマ、小児小脳星状細胞腫、小児大脳星状細胞腫、小児頭蓋外胚細胞腫瘍、小児ホジキン病、小児ホジキンリンパ腫、小児視経路及び視床下部膠腫、小児リンパ性白血病、小児髄芽細胞腫、小児非ホジキンリンパ腫、小児テント上原始神経外胚葉性腫瘍、小児原発性肝臓癌、小児横紋筋肉腫、小児軟部肉腫、小児視経路及び視床下部膠腫、慢性リンパ球性白血病、慢性骨髄性白血病、直腸癌、皮膚Ｔ細胞性リンパ腫、内分泌膵島細胞癌、子宮内膜癌、上衣腫、上皮癌、食道癌、ユーイング肉腫及び関連腫瘍、外分泌膵臓癌、頭蓋外胚細胞腫瘍、性腺外胚細胞腫瘍、肝外胆管癌、眼癌、乳癌、ゴーシェ病、胆嚢癌、胃癌、消化管カルチノイド腫瘍、消化管腫瘍、胚細胞腫瘍、妊娠性絨毛腫瘍、ヘアリー細胞白血病、頭頸部癌、肝細胞癌、ホジキンリンパ腫、高ガンマグロブリン血、下咽頭癌、腸癌、眼内黒色腫、島細胞癌、島細胞膵臓癌、カポジ肉腫、腎臓癌、喉頭癌、口唇及び口腔癌、肝臓癌、肺癌、リンパ増殖性疾患、マクログロブリン血症、悪性中皮腫、悪性胸腺腫、髄芽細胞腫、黒色腫、中皮腫、転移性の原発不明頸部扁平上皮癌、転移性原発性頸部扁平上皮癌、転移性頸部扁平上皮癌、多発性骨髄腫、多発性骨髄腫／形質細胞腫、骨髄異形成症候群、骨髄性白血病、骨髄性白血病（Ｍｙｅｌｏｉｄ  Ｌｅｕｋｅｍｉａ）、骨髄増殖性障害、副鼻腔及び鼻腔癌、鼻咽腔癌、神経芽細胞腫、非ホジキンリンパ腫、非黒色腫皮膚癌、非小細胞肺癌、原発不明の転移性頸部扁平上皮癌、口腔咽頭癌、骨肉腫／悪性線維性肉腫、骨肉腫／悪性線維性組織球腫、骨肉腫／骨の悪性線維性組織球腫、上皮性卵巣癌、卵巣胚細胞腫瘍、卵巣低悪性度腫瘍、膵臓癌、異常タンパク血症、真性赤血球増加症、副甲状腺癌、陰茎癌、褐色細胞腫、下垂体部腫瘍、原発性中枢神経系リンパ腫、原発性肝臓癌、前立腺癌、直腸癌、腎細胞癌、腎盂及び尿管癌、網膜芽細胞腫、横紋筋肉腫、唾液腺癌、サルコイドーシス肉腫、セザリー症候群、皮膚癌、小細胞肺癌、小腸癌、軟部肉腫、頸部扁平上皮癌、胃癌、テント上原始神経外胚葉腫瘍及び松果体腫瘍、Ｔ細胞リンパ腫、精巣癌、胸腺腫、甲状腺癌、腎盂及び尿管の移行細胞癌、移行性腎盂及び尿管癌、絨毛性腫瘍、尿管及び腎盂細胞癌、尿道癌、子宮癌、子宮肉腫、膣癌、視覚伝導路及び視床下部グリオーマ、外陰癌、ワルデンシュトレームマクログロブリン血症、ウィルムス腫瘍、ならびに、上に列挙された器官系に位置する新生組織形成以外の任意の他の過剰増殖性疾���が挙げられるが、これらに限定されない。
【０１６２】
本明細書において説明及び特許請求される方法及び組成物は、悪性または前癌状態を治療するために、及び、上述のような障害を含むがそれらに限定されない新生物または悪性状態への進行を予防するために使用され得る。そのような使用は、特に、過形成、化生、または最も具体的には異形成からなる非腫瘍性細胞成長が生じている、新生組織形成または癌への進行に先立って知られている、または疑われる状態に適応される（そのような異常成長状態の検討に関しては、Ｒｏｂｂｉｎｓ  ａｎｄ  Ａｎｇｅｌｌ，ＢＡＳＩＣ  ＰＡＴＨＯＬＯＧＹ，２ｄ  Ｅｄ．，Ｗ．Ｂ．Ｓａｕｎｄｅｒｓ  Ｃｏ．，Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ，ｐｐ．６８−７９（１９７６）を参照されたい）。
【０１６３】
異形成は、多くの場合、癌の前兆であり、主に上皮に見られる。これは、非腫瘍性細胞成長の最も無秩序な形態であり、個々の細胞均一性及び細胞の構造的配向の損失が関与する。異形成は、慢性的な刺激または炎症が存在する場合に特徴的に生じる。治療され得る異形成障害としては、無汗性外胚葉性異形成、前後異形成、窒息性胸郭異形成、心房指異形成、気管支肺異形成、脳異形成、子宮頸部異形成、軟骨外胚葉異形成、鎖骨頭蓋骨異形成、先天性外胚葉異形成、頭蓋骨幹異形成、頭蓋手根足根骨異形成、頭蓋骨幹端異形成、象牙質異形成、骨幹異形成、外胚葉異形成、エナメル質異形成、脳眼異形成、骨端半肢性異形成、多発性骨端異形成、点状骨端異形成、上皮異形成、顔面指趾生殖器異形成、家族性線維性顎異形成、家族性白色襞性異形成、線維筋性異形成、線維性骨異形成、開花性骨性異形成、遺伝性腎網膜異形成、発汗性外胚葉異形成、発汗低下性外胚葉異形成、リンパ性減少性胸腺異形成、乳腺異形成、下顎顔面異形成、骨幹端異形成、モンディーニ異形成、単骨性線維性骨異形成、粘膜上皮異形成、多発性骨端異形成、眼耳脊椎異形成、眼歯指異形成、眼脊椎異形成、歯牙異形成、眼下顎四肢形成不全、根尖性セメント質異形成、多骨性線維性骨異形成、偽軟骨発育不全脊椎骨端異形成、網膜異形成、中隔視神経異形成、脊椎骨端異形成、及び心室橈骨異形成が挙げられるが、これらに限定されない。
【０１６４】
治療され得る追加の前腫瘍性障害としては、良性の非増殖性疾患（例えば、良性腫瘍、線維嚢胞性状態、組織肥大、腸ポリープまたは腺腫、及び食道異形成）、白斑症、角化症、ボーエン病、農夫皮膚、日光口唇炎、ならびに日光角化症が挙げられるが、これらに限定されない。
【０１６５】
好ましい実施形態において、本発明の方法は、癌、特に上に列挙されたものの成長、進行、及び／または転移を阻害するために使用される。
【０１６６】
追加の過剰増殖性疾患、障害、及び／または状態としては、白血病（急性白血病（例えば、急性リンパ球性白血病、急性骨髄性白血病（骨髄芽球性、前骨髄球性、骨髄単球性、単球性、及び赤白血病を含む））及び慢性白血病（例えば、慢性骨髄性（顆粒球性）白血病及び慢性リンパ球性白血病）を含む）、真性多血症、リンパ腫（例えば、ホジキン病及び非ホジキン病）、多発性骨髄腫、ワルデンシュトレームマクログロブリン血症、重鎖病、ならびに線維肉腫、粘液肉腫、脂肪肉腫、軟骨肉腫、骨肉腫、脊索腫、血管肉腫、内皮肉腫、リンパ管肉腫、リンパ管内皮肉腫、滑膜腫、中皮腫、ユーイング腫瘍、平滑筋肉腫、横紋筋肉腫、結腸癌、膵臓癌、乳癌、卵巣癌、前立腺癌、扁平上皮癌、基底細胞癌、腺癌、汗腺癌、皮脂腺癌、乳頭部癌、乳頭腺癌、嚢胞腺癌、髄様癌、気管支原性肺癌、腎細胞癌、肝細胞癌、胆管癌、絨毛癌、精上皮腫、胚性癌、ウィルムス腫瘍、子宮頸癌、精巣腫瘍、肺癌、小細胞肺癌、膀胱癌、上皮性癌、神経膠腫、星状細胞腫、髄芽腫、頭蓋咽頭腫、上衣腫、松果体腫、血管芽腫、聴神経腫瘍、乏突起神経膠腫、髄膜腫、黒色腫、神経芽腫、及び網膜芽腫などの肉腫及び癌腫を含むがこれらに限定されない固形腫瘍などの悪性腫瘍及び関連障害の進行及び／または転移が挙げられるが、これらに限定されない。
【０１６７】
キット
様々な実施形態は、患者における疾患組織の治療または診断に好適な成分を含有するキットに関連し得る。例示的なキットは、本明細書に記載のような１つ以上のＣＡＲ−ＴまたはＣＡＲ−ＮＫ、ＡＤＣ、インターフェロン、及び／またはチェックポイント阻害剤抗体を含有し得る。投与用の成分を含有する組成物が、例えば、経口送達による消化管からの送達用に製剤化されていない場合、いくつかの他の経路を介してキット成分を送達することができるデバイスが含まれてもよい。非経口送達などの用途のためのデバイスの１つの種類は、組成物を対象の身体内に注射するために使用されるシリンジである。吸入デバイスもまた使用され得る。ある特定の実施形態において、治療薬剤は、無菌液体製剤または凍結乾燥調製物を含有する、事前に充填されたシリンジまたはオートインジェクションペンの形態で提供されてもよい。
【０１６８】
キット成分は、一緒に包装されてもよく、または、２つ以上の容器内に分けられてもよい。いくつかの実施形態において、容器は、再構成に好適な組成物の無菌凍結乾燥製剤を含有するバイアルであってもよい。キットはまた、他の試薬の再構成及び／または希釈に好適な１つ以上の緩衝剤を含有してもよい。使用され得る他の容器は、パウチ、トレイ、箱、管などを含むが、これらに限定されない。キット成分は、容器内に包装され、滅菌状態で維持されてもよい。含まれてもよい別の成分は、キットを使用する者に対する、その使用に関する指示である。
【実施例】
【０１６９】
以下の実施例は、本発明の特許請求の範囲を例示するために提供され、それを制限するために提供されるのではない。
【０１７０】
実施例１．キメラ抗原受容体産生のためのアミノ酸配列
それぞれが、ヒスタミン−スクシニル−グリシン（ＨＳＧ）、ＤＴＰＡ標識インジウム（ＤＴＰＡ−Ｉｎ）、またはＴｒｏｐ−２に結合することができるキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）で操作された新規のＴ細胞またはＮＫ細胞のいくつかのファミリーの設計、組成物、及び使用を以下に記載する。そのようなＣＡＲ−ＴまたはＣＡＲ−ＮＫ細胞の１つの好ましい実施形態は、例えば、ＣＤ８αヒンジ由来のスペーサーと、ＣＤ２８由来の膜貫通ドメインとを介してＣＤ２８、４−１ＢＢ（ＣＤ１３７）、及びＣＤ３ζの細胞内位置シグナル伝達ドメインに連結した細胞外位置単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）を含む第三世代ＣＡＲ（Ｓａｄｅｌａｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，２０１３，Ｃａｎｃｅｒ  Ｄｉｓｃｏｖ  ３：３８８−９８）に関する。別の好ましい実施形態は、例えば、ＣＤ８αヒンジ由来のスペーサーと、ＣＤ２８由来の膜貫通ドメインとを介してＣＤ２８及びＣＤ３ζの細胞内位置シグナル伝達ドメインに連結した細胞外位置ｓｃＦｖを含む第二世代ＣＡＲ（Ｓａｄｅｌａｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，２０１３）に関する。第二世代または第三世代のいずれかのそのようなＣＡＲ−Ｔ細胞またはＣＡＲ−ＮＫ細胞に適当なｓｃＦｖは、ｈ６７９（抗ＨＳＧ）、ｈ７３４（抗Ｉｎ−ＤＴＰＡ）、ｈＲＳ７（抗Ｔｒｏｐ−２）、ｈＭＮ−１５（抗ＣＥＡＣＡＭ６）、ｈＭＮ−３（抗ＣＥＡＣＡＭ６）、ｈＭＮ−１４（抗ＣＥＡＣＡＭ５）、ｈＲ１（抗ＩＧＦ−１Ｒ）、ｈＰＡＭ４（抗ムチン）、ＫＣ４（抗ムチン）、ｈＡ２０（抗ＣＤ２０）、ｈＡ１９（抗ＣＤ１９）、ｈＩＭＭＵ３１（抗ＡＦＰ）、ｈＬＬ１（抗ＣＤ７４）、ｈＬＬ２（抗ＣＤ２２）、ＲＦＢ４（抗ＣＤ２２）、ｈＭｕ−９（抗ＣＳＡｐ）、及びｈＬ２４３（抗ＨＬＡ−ＤＲ）から得られ得る。
【０１７１】
有用なアミノ酸配列を以下に提供する。有用な追加の配列は、上記の段落［００１８］、及び［００９３］に開示されるように、当該技術分野において知られている。
リーダーペプチド（配列番号ｌ）
Ｍｅｔ  Ａｌａ  Ｌｅｕ  Ｐｒｏ  Ｖａｌ  Ｔｈｒ  Ａｌａ  Ｌｅｕ  Ｌｅｕ  Ｌｅｕ  Ｐｒｏ  Ｌｅｕ  Ａｌａ  Ｌｅｕ  Ｌｅｕ  Ｌｅｕ  Ｈｉｓ  Ａｌａ  Ａｌａ  Ａｒｇ  Ｐｒｏ
ＣＤ８αヒンジ（配列番号２）
Ｔｈｒ  Ｔｈｒ  Ｔｈｒ  Ｐｒｏ  Ａｌａ  Ｐｒｏ  Ａｒｇ  Ｐｒｏ  Ｐｒｏ  Ｔｈｒ  Ｐｒｏ  Ａｌａ  Ｐｒｏ  Ｔｈｒ  Ｉｌｅ  Ａｌａ  Ｓｅｒ  Ｇｌｎ  Ｐｒｏ  Ｌｅｕ  Ｓｅｒ  Ｌｅｕ  Ａｒｇ  Ｐｒｏ  Ｇｌｕ  ＡｌａＣｙｓ  ＡｒｇＰｒｏ  Ａｌａ  Ａｌａ  Ｇｌｙ  Ｇｌｙ  Ａｌａ  Ｖａｌ  Ｈｉｓ  Ｔｈｒ  Ａｒｇ  Ｇｌｙ  Ｌｅｕ  Ａｓｐ  Ｐｈｅ  ＡｌａＣｙｓ  Ａｓｐ
ＣＤ８  ＴＭ（配列番号３）
Ｉｌｅ  Ｔｙｒ  Ｉｌｅ  Ｔｒｐ  Ａｌａ  Ｐｒｏ  Ｌｅｕ  Ａｌａ  Ｇｌｙ  Ｔｈｒ  Ｃｙｓ  Ｇｌｙ  Ｖａｌ  Ｌｅｕ  Ｌｅｕ  Ｌｅｕ  Ｓｅｒ  Ｌｅｕ  Ｖａｌ  Ｉｌｅ  Ｔｈｒ  Ｌｅｕ  Ｔｙｒ  Ｃｙｓ
ＣＤ２８  ＴＭ（配列番号４）
Ｐｈｅ  Ｔｒｐ  Ｖａｌ  Ｌｅｕ  Ｖａｌ  Ｖａｌ  Ｖａｌ  Ｇｌｙ  Ｇｌｙ  Ｖａｌ  Ｌｅｕ  Ａｌａ  Ｃｙｓ  Ｔｙｒ  Ｓｅｒ  Ｌｅｕ  Ｌｅｕ  Ｖａｌ  Ｔｈｒ  Ｖａｌ  ＡｌａＰｈｅ  Ｉｌｅ  Ｉｌｅ  Ｐｈｅ  Ｔｒｐ  Ｖａｌ
ＣＤ３ζ  ＩＣＤ（配列番号５）
Ａｒｇ  Ｖａｌ  Ｌｙｓ  Ｐｈｅ  Ｓｅｒ  Ａｒｇ  Ｓｅｒ  Ａｌａ  Ａｓｐ  Ａｌａ  Ｐｒｏ  Ａｌａ  Ｔｙｒ  Ｇｌｎ  Ｇｌｎ  Ｇｌｙ  Ｇｌｎ  Ａｓｎ  Ｇｌｎ  Ｌｅｕ  Ｔｙｒ  Ａｓｎ  Ｇｌｕ  Ｌｅｕ  Ａｓｎ  Ｌｅｕ  Ｇｌｙ  Ａｒｇ  Ａｒｇ  Ｇｌｕ  Ｇｌｕ  Ｔｙｒ  Ａｓｐ  Ｖａｌ  Ｌｅｕ  Ａｓｐ  Ｌｙｓ  Ａｒｇ  Ａｒｇ  Ｇｌｙ  Ａｒｇ  Ａｓｐ  Ｐｒｏ  Ｇｌｕ  Ｍｅｔ  Ｇｌｙ  Ｇｌｙ  Ｌｙｓ  Ｐｒｏ  Ａｒｇ  Ａｒｇ  Ｌｙｓ  Ａｓｎ  Ｐｒｏ  Ｇｌｎ  Ｇｌｕ  Ｇｌｙ  Ｌｅｕ  Ｔｙｒ  Ａｓｎ  Ｇｌｕ  Ｌｅｕ  Ｇｌｎ  Ｌｙｓ  Ａｓｐ  Ｌｙｓ  Ｍｅｔ  Ａｌａ  Ｇｌｕ  Ａｌａ  Ｔｙｒ  Ｓｅｒ  Ｇｌｕ  Ｉｌｅ  Ｇｌｙ  Ｍｅｔ  Ｌｙｓ  Ｇｌｙ  Ｇｌｕ  Ａｒｇ  Ａｒｇ  Ａｒｇ  Ｇｌｙ  Ｌｙｓ  Ｇｌｙ  Ｈｉｓ  Ａｓｐ  Ｇｌｙ  Ｌｅｕ  Ｔｙｒ  Ｇｌｎ  Ｇｌｙ  Ｌｅｕ  Ｓｅｒ  Ｔｈｒ  Ａｌａ  Ｔｈｒ  Ｌｙｓ  Ａｓｐ  Ｔｈｒ  Ｔｙｒ  Ａｓｐ  Ａｌａ  Ｌｅｕ  Ｈｉｓ  Ｍｅｔ  Ｇｌｎ  Ａｌａ  Ｌｅｕ  Ｐｒｏ  Ｐｒｏ  Ａｒｇ
ＣＤ２８  ＩＣＤ（配列番号６）
Ａｒｇ  Ｓｅｒ  Ｌｙｓ  Ａｒｇ  Ｓｅｒ  Ａｒｇ  Ｌｅｕ  Ｌｅｕ  Ｈｉｓ  Ｓｅｒ  Ａｓｐ  Ｔｙｒ  Ｍｅｔ  Ａｓｎ  Ｍｅｔ  Ｔｈｒ  Ｐｒｏ  Ａｒｇ  Ａｒｇ  Ｐｒｏ  Ｇｌｙ  Ｐｒｏ  Ｔｈｒ  Ａｒｇ  Ｌｙｓ  Ｈｉｓ  Ｔｙｒ  Ｇｌｎ  Ｐｒｏ  Ｔｙｒ  Ａｌａ  Ｐｒｏ  Ｐｒｏ  Ａｒｇ  Ａｓｐ  Ｐｈｅ  Ａｌａ  Ａｌａ  Ｔｙｒ  Ａｒｇ  Ｓｅｒ  Ｉｌｅ  Ａｓｐ
４−１ＢＢ  ＩＣＤ（配列番号７）
Ｌｙｓ  Ａｒｇ  Ｇｌｙ  Ａｒｇ  Ｌｙｓ  Ｌｙｓ  Ｌｅｕ  Ｌｅｕ  Ｔｙｒ  Ｉｌｅ  Ｐｈｅ  Ｌｙｓ  Ｇｌｎ  Ｐｒｏ  Ｐｈｅ  Ｍｅｔ  Ａｒｇ  Ｐｒｏ  Ｖａｌ  Ｇｌｎ  Ｔｈｒ  Ｔｈｒ  Ｇｌｎ  Ｇｌｕ  Ｇｌｕ  Ａｓｐ  Ｇｌｙ  Ｃｙｓ  Ｓｅｒ  Ｃｙｓ  Ａｒｇ  Ｐｈｅ  Ｐｒｏ  Ｇｌｕ  Ｇｌｕ  Ｇｌｕ  Ｇｌｕ  Ｇｌｙ  Ｇｌｙ  Ｃｙｓ  Ｇｌｕ  Ｌｅｕ
ｈ７３４−ＶＨ（配列番号８）
ＱＶＱＬＱＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＨＹＴＭＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＴＹＩＴＮＧＧＶＳＳＹＨＰＤＴＶＫＧＲＦＴＶＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＦＣＴＲＨＡＶＹＡＦＡＹＷＧＱＧＳＬＶＴＶＳＳ
ｈ７３４−ＶＬ（配列番号９）
ＤＩＱＬＶＶＴＱＥＰＳＦＳＶＳＰＧＧＴＶＴＦＴＣＲＳＳＡＧＡＶＴＴＳＮＹＡＮＷＶＱＥＫＰＧＱＡＰＲＧＬＩＧＧＴＴＮＲＡＰＧＶＰＡＲＦＳＧＳＩＬＧＮＫＡＡＬＴＩＴＧＡＱＡＤＤＥＳＩＹＦＣＶＬＷＹＳＤＲＷＶＦＧＧＧＴＫＬＫＩＫＲ
ｈ６７９−ＶＨ（配列番号１０）
ＱＶＱＬＱＥＳＧＧＤＬＶＫＰＧＧＳＬＫＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＩＹＴＭＳＷＬＲＱＴＰＧＫＧＬＥＷＶＡＴＬＳＧＤＧＤ
ＤＩＹＹＰＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＳＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＬＹＹＣＡＲＶＲＬＧＤＷＤＦＤＶＷＧＱ
ＧＴＴＶＴＶＳＳ
ｈ６７９−ＶＬ（配列番号１１）
ＤＩＱＬＴＱＳＰＳＳＬＡＶＳＰＧＥＲＶＴＬＴＣＫＳＳＱＳＬＦＮＳＲＴＲＫＮＹＬＧＷＹＱＱＫＰＧＱＳＰＫＬＬＩＹＷＡＳＴＲＥＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＮＳＬＱＡＥＤＶＡＶＹＹＣＴＱＶＹＹＬＣＴＦＧＡＧＴＫＬＥＩＫＲ
ｈＲＳ７−ＶＨ（配列番号１２）ＱＶＱＬＱＱＳＧＳＥＬＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＮＹＧＭＮＷＶＫＱＡＰＧＱＧＬＫＷＭＧＷＩＮＴＹＴＧＥＰＴＹＴＤＤＦＫＧＲＦＡＦＳＬＤＴＳＶＳＴＡＹＬＱＩＳＳＬＫＡＤＤＴＡＶＹＦＣＡＲＧＧＦＧＳＳＹＷＹＦＤＶＷＧＱＧＳＬＶＴＶＳＳ
ｈＲＳ７−ＶＬ（配列番号１３）
ＤＩＱＬＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＳＩＴＣＫＡＳＱＤＶＳＩＡＶＡＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＳＡＳＹＲＹＴＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＶＹＹＣＱＱＨＹＩＴＰＬＴＦＧＡＧＴＫＶ
ｈＭＮ−１５−ＶＨ（配列番号１４）
ＱＶＱＬＱＥＳＧＧＧＶＶＱＰＧＲＳＬＲＬＳＣＳＳＳＧＦＡＬＴＤＹＹＭＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＬＧＦＩＡＮＫＡＮＧＨＴＴＤＹＳＰＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＦＬＱＭＤＳＬＲＰＥＤＴＧＶＹＦＣＡＲＤＭＧＩＲＷＮＦＤＶＷＧＱＧＴＰＶＴＶＳＳ
ｈＭＮ−１５−ＶＬ（配列番号１５）
ＤＩＱＬＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＭＴＣＳＡＳＳＲＶＳＹＩＨＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＲＷＩＹＧＴＳＴＬＡＳＧＶＰＡＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＦＴＩＳＳＬＱＰＥＤＩＡＴＹＹＣＱＱＷＳＹＮＰＰＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫＲ
ｈＭＮ−１４−ＶＨ（配列番号１６）
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＶＶＱＰＧＲＳＬＲＬＳＣＳＡＳＧＦＤＦＴＴＹＷＭＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＩＧＥＩＨＰＤＳＳＴＩＮＹＡＰＳＬＫＤＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＴＬＦＬＱＭＤＳＬＲＰＥＤＴＧＶＹＦＣＡＳＬＹＦＧＦＰＷＦＡＹＷＧＱＧＴＰＶＴＶＳＳ
ｈＭＮ−１４−ＶＬ（配列番号１７）
ＤＩＱＬＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＫＡＳＱＤＶＧＴＳＶＡＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＷＴＳＴＲＨＴＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＦＴＩＳＳＬＱＰＥＤＩＡＴＹＹＣＱＱＹＳＬＹＲＳＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫＲ
【０１７２】
実施例２．第三世代ＣＡＲを発現するレンチウイルスベクターの構築
ＨＳＧ結合ＣＡＲ
例示的な第三世代ＣＡＲコンストラクトを示す概略図を図１に提供する。ＣＡＲコンストラクトは、以下のように生成される。タンデム連結したｈ６７９−ｓｃＦｖ、ＣＤ８αヒンジ、ＣＤ２８  ＴＭ、ＣＤ２８  ＩＣＤ、４−１ＢＢ  ＩＣＤ、及びＣＤ３ζ  ＩＣＤのアミノ酸配列（ｈ６７９−２８−ＢＢ−ｚ、図１）を含む、融合タンパク質ＣＡＲをコードするｃＤＮＡのヌクレオチド配列は、標準的技術で合成され、ＰＣＲ増幅され、ｐＲＲＬ−ＳＩＮ−ＣＭＶ−ｅＧＦＰ−ＷＰＲＥ（Ｄｕｌｌ  ｅｔ  ａｌ，１９９８，Ｊ  Ｖｉｒｏｌ  ７２：８４６３−７１）またはｐＥＬＮＳ（Ｃａｒｐｅｎｉｔｏ  ｅｔ  ａｌ，２００９，Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ  １０６：３３６０−５）に基づいて、第三世代の自己不活性化レンチウイルスベクターであるｐＣＬＰＳにライゲーションされ、これは、導入遺伝子発現のプロモーターとしてＣＭＶをＥＦ−１αに置き換えることでｐＣＬＰＳとは異なる。コードされたＣＡＲは、ＨＳＧに結合するためのｈ６７９  ｓｃＦｖを含む。
【０１７３】
Ｉｎ−ＤＴＰＡ結合ＣＡＲ
タンデム連結したｈ７３４−ｓｃＦｖ、ＣＤ８αヒンジ、ＣＤ２８  ＴＭ、ＣＤ２８  ＩＣＤ、４−１ＢＢ  ＩＣＤ、及びＣＤ３ζＩＣＤを含むＣＡＲを発現するレンチウイルスベクター（ｈ７３４−２８−ＢＢ−ｚ、図１）は、ｈ６７９−ｓｃＦｖをコードするヌクレオチド配列をｈ７３４−ｓｃＦｖのものと置き換える以外は、上記のように構築される。
【０１７４】
抗Ｔｒｏｐ−２  ＣＡＲ
タンデム連結したｈＲＳ７−ｓｃＦｖ、ＣＤ８αヒンジ、ＣＤ２８  ＴＭ、ＣＤ２８  ＩＣＤ、４−１ＢＢ  ＩＣＤ、及びＣＤ３ζ  ＩＣＤを含むＣＡＲを発現するレンチウイルスベクター（ｈＲＳ７−２８−ＢＢ−ｚ、図１）は、ｈ６７９−ｓｃＦｖをコードするヌクレオチド配列をｈＲＳ７−ｓｃＦｖのものと置き換える以外は、上記のように構築される。
【０１７５】
抗ＣＥＡＣＡＭ６  ＣＡＲ
タンデム連結したｈＭＮ−１５−ｓｃＦｖ、ＣＤ８αヒンジ、ＣＤ２８  ＴＭ、ＣＤ２８  ＩＣＤ、４−１ＢＢ  ＩＣＤ、及びＣＤ３ζ  ＩＣＤを含むＣＡＲを発現するレンチウイルスベクター（ｈＭＮ−１５−２８−ＢＢ−ｚ、図１）は、ｈ６７９−ｓｃＦｖをコードするヌクレオチド配列をｈＭＮ−１５−ｓｃＦｖのものと置き換える以外は、上記のように構築される。
【０１７６】
抗ＣＥＡＣＡＭ５  ＣＡＲ
タンデム連結したｈＭＮ−１４−ｓｃＦｖ、ＣＤ８αヒンジ、ＣＤ２８  ＴＭ、ＣＤ２８  ＩＣＤ、４−１ＢＢ  ＩＣＤ、及びＣＤ３ζ  ＩＣＤを含むＣＡＲを発現するレンチウイルスベクター（ｈＭＮ−１４−２８−ＢＢ−ｚ、図１）は、ｈ６７９−ｓｃＦｖをコードするヌクレオチド配列をｈＭＮ−１４−ｓｃＦｖのものと置き換える以外は、上記のように構築される。
【０１７７】
実施例３．第二世代ＣＡＲを発現するレンチウイルスベクターの構築
ＨＳＧ結合ＣＡＲ
例示的な第二世代ＣＡＲコンストラクトを示す概略図を図２に提供する。ＣＡＲコンストラクトは、以下のように生成される。タンデム連結したｈ６７９−ｓｃＦｖ、ＣＤ８αヒンジ、ＣＤ２８  ＴＭ、ＣＤ２８  ＩＣＤ、及びＣＤ３Ｃζ  ＩＣＤを含むＣＡＲをコードするｃＤＮＡのヌクレオチド配列（ｈ６７９−２８−ｚ、図２）は、標準的技術で合成され、ＰＣＲ増幅され、ｐＲＲＬ−ＳＩＮ−ＣＭＶ−ｅＧＦＰ−ＷＰＲＥ（Ｄｕｌｌ  ｅｔ  ａｌ，１９９８，Ｊ  Ｖｉｒｏｌ  ７２：８４６３−７１）に基づいて、自己不活性化レンチウイルスベクターであるｐＥＬＮＳにライゲーションされ、導入遺伝子発現は、ＥＦ−１αプロモーターによって駆動される。
【０１７８】
Ｉｎ−ＤＴＰＡ結合ＣＡＲ
タンデム連結したｈ７３４−ｓｃＦｖ、ＣＤ８αヒンジ、ＣＤ２８  ＴＭ、ＣＤ２８  ＩＣＤ、及びＣＤ３ζ  ＩＣＤを含むＣＡＲを発現するレンチウイルスベクター（ｈ７３４−２８−ｚ、図２）は、ｈ６７９−ｓｃＦｖをコードするヌクレオチド配列をｈ７３４−ｓｃＦｖのものと置き換える以外は、上記のように構築される。
【０１７９】
抗Ｔｒｏｐ−２  ＣＡＲ
タンデム連結したｈＲＳ７−ｓｃＦｖ、ＣＤ８αヒンジ、ＣＤ２８  ＴＭ、ＣＤ２８  ＩＣＤ、及びＣＤ３ζ  ＩＣＤを含むＣＡＲを発現するレンチウイルスベクター（ｈＲＳ７−２８−ｚ、図２）は、ｈ６７９−ｓｃＦｖをコードするヌクレオチド配列をｈＲＳ７−ｓｃＦｖのものと置き換える以外は、上記のように構築される。
【０１８０】
抗ＣＥＡＣＡＭ６  ＣＡＲ
タンデム連結したｈＭＮ−１５−ｓｃＦｖ、ＣＤ８αヒンジ、ＣＤ２８  ＴＭ、ＣＤ２８  ＩＣＤ、及びＣＤ３ζ  ＩＣＤを含むＣＡＲを発現するレンチウイルスベクター（ｈＭＮ−１５−２８−ｚ、図２）は、ｈ６７９−ｓｃＦｖをコードするヌクレオチド配列をｈＭＮ−１５−ｓｃＦｖのものと置き換える以外は、上記のように構築される。
【０１８１】
実施例４．レンチウイルス粒子の生成
上記の実施例に記載のように構築した高力価の複製欠損レンチウイルスベクターを生成し、Ｐａｒｒｙ  ＲＶ  ｅｔ  ａｌ．（２００３，Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ，１７１：１６６−７４）に記載のように濃縮した。簡単に言うと、ＨＥＫ２９３Ｔ細胞（ＡＴＣＣ  ＣＲＬ−３２１６）を、ＲＰＭＩ  １６４０、１０％熱不活性化ＦＣＳ、２ｍＭグルタミン、１００Ｕ／ｍＬペニシリン、及び１００μｇ／ｍＬ硫酸ストレプトマイシンで培養した。Ｔ１５０組織培養フラスコ当たり５×１０６個で細胞を播種し、Ｆｕｇｅｎｅ６を用いて、７μｇのｐＭＤＧ．ｌ（ＶＳＶ−Ｇエンベロープ）、１８μｇのｐＲＳＶ．ｒｅｖ（プラスミドをコードするＨＩＶ−１  Ｒｅｖ）、１８μｇのｐＭＤＬｇ／ｐ．ＲＲＥ（パッケージングプラスミド）、及び１５μｇの対象となるレンチウイルスベクターを２４時間トランスフェクションする（Ｒｏｃｈｅ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌｓ）。トランスフェクションの６時間後に培地を変え、トランスフェクションの２４時間及び４８時間後にウイルス上清を採取する。Ｂｅｃｋｍａｎ  ＳＷ２８ローターにより２８，０００ｒｐｍで３時間超遠心分離によってウイルス粒子を１０倍に濃縮する。
【０１８２】
実施例５．Ｔ細胞の形質導入
特定の目的のために、正常個体からのＴ細胞を、コンストラクト試験及び設計のための主題のＣＡＲコンストラクトと共に使用してもよい。ＲｏｓｅｔｔｅＳｅｐキット（Ｓｔｅｍ  Ｃｅｌｌ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）での陰性選択による白血球除去輸血後に、健康被験者ドナーのＰＢＭＣから初代ヒトＣＤ４＋及びＣＤ８＋Ｔ細胞を単離する。完全培地（１０％熱不活性化ＦＣＳ、２ｍＭグルタミン、１００Ｕ／ｍＬペニシリン、１００μｇ／ｍＬ硫酸ストレプトマイシン、及び１０ｍＭ  ＨＥＰＥＳで補完されたＲＰＭＩ  １６４０）中でＴ細胞を培養し、モノクローナル抗ＣＤ３及び抗ＣＤ２８被覆ビーズで１２〜２４時間刺激し、対象となるレンチウイルスベクターで５〜１０のＭＯＩ（感染多重度）で形質導入する。ヒト組換えＩＬ−２を１日置きに５０Ｕ／ｍＬの最終濃度に添加し、０．５〜１．０×１０６／ｍＬの細胞密度を維持する。
【０１８３】
実施例６．癌患者からの自己ＣＡＲ−Ｔ細胞の生成及び評価
Ｂｒｅｎｔｊｅｎｓ  ｅｔ  ａｌ（２０１３，Ｓｃｉ  Ｔｒａｎｓｌ  Ｍｅｄ  ５：１７７ｒａ３８）に記載された方法に従う。簡単に言うと、白血球除去輸血によって癌患者からＰＢＭＣを入手し、洗浄し、凍結保存する。解凍した白血球除去輸血産物からＴ細胞を単離し、ダイナビーズヒトＴ活性化因子ＣＤ３／ＣＤ２８磁気ビーズ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）で活性化し、対象となるレンチウイルスベクターで形質導入する。形質導入されたＴ細胞をＷＡＶＥバイオリアクターでさらに拡張し、所望の改変Ｔ細胞用量を達成する。
【０１８４】
ＦＡＣＳによって患者の末梢血及び骨髄の持続性、抗原陽性癌細胞のインビトロ殺傷による抗腫瘍活性、改変Ｔ細胞の注入前及び注入後に得られた一連の血清試料をＬｕｍｉｎｅｘ  ＩＳ１００  Ｓｙｓｔｅｍ及び市販の３９−ｐｌｅｘサイトカイン検出アッセイで分析することによってサイトカインプロファイルについて改変Ｔ細胞を評価する（Ｂｒｅｎｔｊｅｎｓ  ＲＬ  ｅｔ  ａｌ．，２０１１，Ｂｌｏｏｄ  １１８：４８１７−２８）。
【０１８５】
実施例７．無関係の第三者ドナーからの同種ＣＡＲ−Ｔ細胞の生成
白血球除去輸血によって無関係の第三者ドナーからＰＢＭＣを入手し、洗浄し、凍結保存する。解凍した白血球除去輸血産物からＴ細胞を単離し、ＴＣＲαコンスタント（ＴＲＡＣ）遺伝子を転写活性化因子様エフェクターヌクレアーゼ（ＴＡＬＥＮＴＭ）遺伝子編集技術（Ｃｅｌｌｅｃｔｉｓ）を用いて不活性化し、ＴＣＲ欠損Ｔ細胞を生成する。これをダイナビーズヒトＴ活性化因子ＣＤ３／ＣＤ２８磁気ビーズ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）で活性化し、対象となるレンチウイルスベクターで形質導入する。形質導入されたＴＣＲ欠損Ｔ細胞をＷＡＶＥバイオリアクターでさらに拡張し、所望の改変Ｔ細胞用量を達成する。
【０１８６】
実施例８．ＨＳＧ複合化ＩｇＧの調製
ある特定の実施形態において、抗ＴＡＡ抗体などの抗体を、ＨＳＧまたはＩｎ−ＤＴＰＡなどのハプテンに複合化し、腫瘍または他の疾患標的へのＣＡＲ−ＴまたはＣＡＲ−ＮＫ細胞の間接標的化に使用してもよい。ハプテン標識抗体により、標的（例えば、腫瘍）細胞に局在化することが可能になる。その後、ハプテンに対する結合部位を含むＣＡＲ−ＴまたはＣＡＲ−ＮＫコンストラクトを患者に投与し、ハプテン標識抗体と共局在化する。このアプローチの利点は、同じＣＡＲ−ＴまたはＣＡＲ−ＮＫコンストラクトが、ハプテンで標識された抗体の特異性を単に変更するだけで多種多様の異なる標的細胞抗原に標的化され得ることである。
【０１８７】
ＨＳＧハプテンで標識された抗体を生成するために、ヒト化モノクローナルＩｇＧ１を７５ｍＭ酢酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ６．５）中のＴＣＥＰで穏やかに還元した後に、室温にて２０分間で１０−１５倍のモル過剰のマレイミド−ＰＥＧ４−Ａｌａ−ｄＬｙｓ（ＨＳＧ）−ｄＴｙｒ−ｄＬｙｓ（ＨＳＧ）−ＮＨ２（図４Ａ）にインサイチュ複合化し、脱塩カラムを用いて精製する。Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃから入手可能なＳＭ（ＰＥＧ）ｎファミリー（図４Ｂ）の架橋剤であるＳＭ（ＰＥＧ）４をＡｌａ−ｄＬｙｓ（ＨＳＧ）−ｄＴｙｒ−ｄＬｙｓ（ＨＳＧ）−ＮＨ２と反応させることで、ｄｉ−ＨＳＧ−部分を調製する。
【０１８８】
実施例９．ＤＴＰＡ−Ｉｎ複合化ＩｇＧの調製
ヒト化モノクローナルＩｇＧ１を７５ｍＭ酢酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ６．５）中のＴＣＥＰで穏やかに還元した後に、室温にて２０分間で１０−１５倍のモル過剰のインジウム錯体マレイミド−ＰＥＧ４−ｄＰｈｅ−ｄＬｙｓ（ＤＴＰＡ）−ｄＴｙｒ−ｄＬｙｓ（ＤＴＰＡ）−ＮＨ２にインサイチュ複合化し、脱塩カラムを用いて精製する。ＳＭ（ＰＥＧ）４（図４Ｂ）をｄＰｈｅ−ｄＬｙｓ（ＤＴＰＡ）−ｄＴｙｒ−ｄＬｙｓ（ＤＴＰＡ）−ＮＨ２と反応させることで、ｄｉ−ＤＴＰＡ−Ｉｎ−部分を調製する。
【０１８９】
実施例１０．ｈＲＳ７−２８−ＢＢ−ｚを発現するように形質導入されたＣＡＲ−Ｔ細胞を用いたＴｒｏｐ−２−陽性ヒト癌異種移植の治療
Ｔｒｏｐ−２−陽性異種移植モデルは、ＮＯＧマウスの脇腹にＢｘＰＣ−３膵臓癌細胞を埋め込むことで確立される。腫瘍体積が約５００ｍｍ３に到達後、１５×１０６個のＣＡＲ−Ｔ細胞（約７０〜８０％導入遺伝子陽性）の２回の腫瘍内注射を一週間間隔で行い、マウスを処置する。関連ＣＡＲ−Ｔ細胞を受けた全てのマウスで強力な抗腫瘍効果が観察されるが、関係のないＣＡＲ−Ｔ細胞では観察されない。
【０１９０】
実施例１１．ＨＳＧ複合化ｈＭＮ−１４  ＩｇＧと、ｈ６７９−２８−ＢＢ−ｚを発現するように形質導入されたＣＡＲ−Ｔ細胞との連続的な標的化を介したＣＥＡＣＡＭ５−陽性ヒト癌異種移植の治療
ＣＥＡＣＡＭ５−陽性異種移植モデルは、ＮＯＧマウスの脇腹にＢｘＰＣ−３膵臓癌細胞を埋め込むことで確立される。腫瘍体積が〜２５０ｍｍ３に到達後、マウスにＨＳＧ複合化ｈＭＮ−１４  ＩｇＧを静脈内注射し、次いで、３日目及び１０日目に１５×１０６個のＣＡＲ−Ｔ細胞（約７０〜８０％導入遺伝子陽性）を腫瘍内注射する。連続治療を受けた全てのマウスで強力な抗腫瘍効果が観察されるが、ＣＡＲ−Ｔ細胞のみを受けたマウスでは観察されない。
【０１９１】
実施例１２．
非複合化ｈＭＮ−１４  ＩｇＧによる前投与後、ＨＳＧ複合化ｈＭＮ−１４  ＩｇＧと、ｈ６７９−２８−ＢＢ−ｚを発現するように形質導入されたＣＡＲ−Ｔ細胞との連続的な標的化によるＣＥＡＣＡＭ５−陽性ヒト癌異種移植の治療
ＣＥＡＣＡＭ５−陽性異種移植モデルは、ＮＯＧマウスの脇腹にＢｘＰＣ−３膵臓癌細胞を埋め込むことで確立される。腫瘍体積が約２５０ｍｍ３に到達後、マウスを２つのグループに分ける。一方のグループは、ＨＳＧ複合化ｈＭＮ−１４  ＩｇＧの投与１日前に、１２．５ｍｇ／ｋｇの非複合化ｈＭＮ−１４  ＩｇＧの前投与を受け、次いで、３日目及び１０日目に１５×１０６個のＨＳＧ結合ＣＡＲ−Ｔ細胞（約７０〜８０％導入遺伝子陽性）を静脈内注射する。他方のグループは、前投与工程を除く以外は、同じ治療を受ける。強力な抗腫瘍効果が両方のグループで観察され、これは、前投与が、ＨＳＧ複合化ｈＭＮ−１４で標識されたＣＥＡ発現腫瘍へのＣＡＲ−Ｔのその後の標的化に影響を及ぼさないことが示唆される。前投与は、ＣＥＡＣＡＭ５を発現する正常組織を防御し、ＣＡＲ−Ｔ投与の全身毒性を減少させる。
【０１９２】
実施例１３．ＨＳＧ結合ＣＡＲによる、遺伝子操作されたＮＫ細胞の生成
ＨＳＧ結合ＣＡＲまたは対象となる他のＣＡＲによる遺伝子操作の影響を受けやすいＮＫ細胞としては、初代ＮＫ細胞、及びいくつかのＮＫ様ヒト細胞株、例えば、ＮＫ−９２（Ｇｏｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，Ｌｅｕｋｅｍｉａ  ８：６５２−８，１９９４）、ＮＫ−９２ＭＩ（Ｔａｍ  ｅｔ  ａｌ．，Ｈｕｍ  Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒ  １０：１３５９−７３，１９９９）、ＮＫ−９２ｆｃ（Ｂｉｎｙａｍｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １８０：６３９２−６４０１，２００８）、ＮＫＬ（Ｒｏｂｅｒｔｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｅｘｐ  Ｈｅｍａｔｏｌ  ２４：４０６−１５，１９９６）、ＮＫＧ（Ｃｈｅｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｅｌｌ  ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ  ２０：１７３１−４６，２０１１）、ＮＫ−ＹＳ（Ｔｓｕｃｈｉｙａｍａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ  ９２：１３７４−８３，１９９８）、ＫＨＹＧ−１（Ｙａｇｉｔａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｌｅｕｋｅｍｉａ  １４：９２２−３０，２０００）、及びＹＴ（Ｙｏｄｏｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １３４：１６２３−３０，１９８５）が挙げられる。
【０１９３】
ｍＲＮＡエレクトロポレーションによる初代ＮＫ細胞の形質導入。
白血球除去輸血によって健常なドナーからＰＢＭＣを入手し、洗浄し、使用するまで凍結保存する。ミルテニーＮＫ細胞単離キット（Ａｕｂｕｒｎ、ＣＡ）を用いて、解凍したＰＢＭＣから非ＮＫ細胞を枯渇させることによって初代ＮＫ細胞を精製し、拡張し、Ｌｉ  ｅｔ  ａｌ（Ｃａｎｃｅｒ  Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒ  １７：１４７−５４，２０１０）に記載のようにエレクトロポレーション（１〜３×１０８細胞／ｍＬ当たり１００μｇ／ｍＬ）によって、実施例２のＨＳＧ結合ＣＡＲをコードする導入遺伝子から転写されたｍＲＮＡでトランスフェクトする。エレクトロポレーション直後、細胞を処理チャンバから回収し、３７℃、５％ＣＯ２で２０分間載置し、１０％ＦＢＳ及び１００ＩＵ／ｍＬ  ＩＬ−２を有するＲＰＭＩ−１６４０培地中で再懸濁し、ＨＳＧ結合ＣＡＲの発現、生存率、ＩＦＮ−γ産生、及び細胞毒性の分析まで３７℃、５％ＣＯ２で培養する。
【０１９４】
レンチウイルスベクターによるＮＫ−９２細胞の形質導入。
ＮＫ−９２細胞株をＡＴＣＣ（ＣＲＬ−２４０７）から購入し、５００Ｕ／ｍＬプロロイキン（Ｃｈｉｒｏｎ、Ｅｍｅｒｙｖｉｌｌｅ、ＣＡ）が補充されたＭｙｅｌｏＣｕｌｔ培地（Ｓｔｅｍ  Ｃｅｌｌ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、Ｖａｎｃｏｕｖｅｒ、Ｃａｎａｄａ）中で維持する。Ｂｏｉｓｓｅｌ  ｅｔ  ａｌ（Ｌｅｕｋ  Ｌｙｍｐｈｏｍａ  ５３：９５８−６５、２０１２）に記載されたスピンフェクションプロトコルを用いて、ＮＫ−９２細胞をｐ−ＣＬＰＳ−ｈ６７９−２８−ＢＢ−ｚ（実施例２）で形質導入し、形質導入された細胞を、１０００Ｕ／ｍＬプロロイキンが補充されたＭｙｅｌｏＣｕｌｔ培地で４８〜７２時間拡張し、形質導入効率、ＨＳＧ結合ＣＡＲの発現、及び細胞毒性について分析した。
【０１９５】
ＣＡＲ−ＮＫ療法。
ＣＥＡＣＡＭ５陽性大腸癌患者には、ＨＳＧ複合化ｈＭＮ−１４  ＩｇＧの投与１日前に、１２．５ｍｇ／ｋｇの非複合化ｈＭＮ−１４  ＩｇＧを前投与し、次いで、３日目及び１０日目に１５×１０７個のＨＳＧ結合ＣＡＲ−ＮＫ細胞（約７０〜８０％導入遺伝子陽性）を静脈内注射する。強力な抗腫瘍効果が観察され、これは、前投与が、ＨＳＧ複合化ｈＭＮ−１４で標識されたＣＥＡ発現腫瘍へのＣＡＲ−ＮＫのその後の標的化に影響を及ぼさないことが示唆される。前投与は、ＣＥＡＣＡＭ５を発現する正常組織を防御し、ＣＡＲ−Ｔ投与の全身毒性を減少させる。
【０１９６】
ＮＫ細胞トランスフェクションの追加のＣＡＲ配列を以下に示す。
ＮＫ−９２のＨＳＧ標的化第二世代ＣＡＲ（４９１ＡＡｓ）
ＳＰＣＤ８α−ＶＫｈ６７９−（ＧＧＧＧＳ）３−ＶＨｈ６７９−ヒンジＣＤ８α−ＴＭＣＤ８α−ＩＣＤ４−１ＢＢ−ＩＣＤＣＤ３ζ（配列番号１８として開示された「ＧＧＧＧＳ」３）
ＭＡＬＰＶＴＡＬＬＬＰＬＡＬＬＬＨＡＡＲＰＤＩＱＬＴＱＳＰＳＳＬＡＶＳＰＧＥＲＶＴＬＴＣＫＳＳＱＳＬＦＮＳＲＴＲＫＮＹＬＧＷＹＱＱＫＰＧＱＳＰＫＬＬＩＹＷＡＳＴＲＥＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＮＳＬＱＡＥＤＶＡＶＹＹＣＴＱＶＹＹＬＣＴＦＧＡＧＴＫＬＥＩＫＲＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＱＶＱＬＱＥＳＧＧＤＬＶＫＰＧＧＳＬＫＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＩＹＴＭＳＷＬＲＱＴＰＧＫＧＬＥＷＶＡＴＬＳＧＤＧＤＤＩＹＹＰＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＳＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＬＹＹＣＡＲＶＲＬＧＤＷＤＦＤＶＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳＴＴＴＰＡＰＲＰＰＴＰＡＰＴＩＡＳＱＰＬＳＬＲＰＥＡＣＲＰＡＡＧＧＡＶＨＴＲＧＬＤＦＡＣＤＩＹＩＷＡＰＬＡＧＴＣＧＶＬＬＬＳＬＶＩＴＬＹＣＫＲＧＲＫＫＬＬＹＩＦＫＱＰＦＭＲＰＶＱＴＴＱＥＥＤＧＣＳＣＲＦＰＥＥＥＥＧＧＣＥＬＲＶＫＦＳＲＳＡＤＡＰＡＹＱＱＧＱＮＱＬＹＮＥＬＮＬＧＲＲＥＥＹＤＶＬＤＫＲＲＧＲＤＰＥＭＧＧＫＰＲＲＫＮＰＱＥＧＬＹＮＥＬＱＫＤＫＭＡＥＡＹＳＥＩＧＭＫＧＥＲＲＲＧＫＧＨＤＧＬＹＱＧＬＳＴＡＴＫＤＴＹＤＡＬＨＭＱＡＬＰＰＲ（配列番号２１）
ＮＫ−９２ＭＩのＨＳＧ標的化第三世代ＣＡＲ（５３７ＡＡｓ）
ＳＰＣＤ８α−ＶＫｈ６７９−（ＧＧＧＧＳ）３−ＶＨｈ６７９−ヒンジＣＤ８α−ＴＭＣＤ２８−ＩＣＤＣＤ２８−ＩＣＤ４−１ＢＢ−ＩＣＤＣＤ３ζ（配列番号１８として開示された「（ＧＧＧＧＳ）３」
ＭＡＬＰＶＴＡＬＬＬＰＬＡＬＬＬＨＡＡＲＰＤＩＱＬＴＱＳＰＳＳＬＡＶＳＰＧＥＲＶＴＬＴＣＫＳＳＱＳＬＦＮＳＲＴＲＫＮＹＬＧＷＹＱＱＫＰＧＱＳＰＫＬＬＩＹＷＡＳＴＲＥＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＮＳＬＱＡＥＤＶＡＶＹＹＣＴＱＶＹＹＬＣＴＦＧＡＧＴＫＬＥＩＫＲＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＱＶＱＬＱＥＳＧＧＤＬＶＫＰＧＧＳＬＫＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＩＹＴＭＳＷＬＲＱＴＰＧＫＧＬＥＷＶＡＴＬＳＧＤＧＤＤＩＹＹＰＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＳＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＬＹＹＣＡＲＶＲＬＧＤＷＤＦＤＶＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳＴＴＴＰＡＰＲＰＰＴＰＡＰＴＩＡＳＱＰＬＳＬＲＰＥＡＣＲＰＡＡＧＧＡＶＨＴＲＧＬＤＦＡＣＤＦＷＶＬＶＶＶＧＧＶＬＡＣＹＳＬＬＶＴＶＡＦＩＩＦＷＶＲＳＫＲＳＲＬＬＨＳＤＹＭＮＭＴＰＲＲＰＧＰＴＲＫＨＹＱＰＹＡＰＰＲＤＦＡＡＹＲＳＩＤＫＲＧＲＫＫＬＬＹＩＦＫＱＰＦＭＲＰＶＱＴＴＱＥＥＤＧＣＳＣＲＦＰＥＥＥＥＧＧＣＥＬＲＶＫＦＳＲＳＡＤＡＰＡＹＱＱＧＱＮＱＬＹＮＥＬＮＬＧＲＲＥＥＹＤＶＬＤＫＲＲＧＲＤＰＥＭＧＧＫＰＲＲＫＮＰＱＥＧＬＹＮＥＬＱＫＤＫＭＡＥＡＹＳＥＩＧＭＫＧＥＲＲＲＧＫＧＨＤＧＬＹＱＧＬＳＴＡＴＫＤＴＹＤＡＬＨＭＱＡＬＰＰＲ（配列番号２２）
【０１９７】
実施例１４．治療不応性転移性結腸癌（ｍＣＲＣ）を治療するためのＡＤＣ（ＩＭＭＵ−１３２またはｈＲＳ７−ＳＮ−３８）の使用
患者は、元々は２０１２年１月に転移疾患を示したｍＣＲＣを有する６２歳の女性であった。彼女は、診断から数週間後に第１の治療として腹腔鏡下回腸横行結腸切除を受け、次いでネオアジュバントの設定で４サイクルのＦＯＬＦＯＸ（ロイコボリン、５−フルオロウラシル、オキサリプラチン）化学療法を受けてから、肝臓の右葉における転移性病変を除去するために、２０１２年３月に肝右葉切除を受けた。これに続いて、全体で１２サイクルのＦＯＬＦＯＸのアジュバントＦＯＬＦＯＸ投薬計画を２０１２年６月に再開した。８月に、神経毒性の悪化によりオキサリプラチンを計画から除外した。彼女の５−ＦＵの最後のサイクルは、０９／２５／１２であった。
【０１９８】
２０１３年１月に行われたＣＴは、肝臓への転移を示した。次いで、彼女は、ＩＭＭＵ−１３２（ｈＲＳ７−ＳＮ−３８）治験への参加にふさわしい候補として評価された。彼女の病歴における併存疾患は、喘息、糖尿病、高血圧、高コレステロール血症、心雑音、裂孔ヘルニア、甲状腺機能低下、手根管症候群、緑内障、うつ病、むずむず脚症候群、及び神経障害を含む。彼女の手術歴は、卵管結紮（１９７５）、甲状腺摘出（１９８３）、胆嚢摘出（２００１）、手根管開放術（２００８）、及び緑内障手術を含む。
【０１９９】
この治療を開始する時点で、彼女の標的病変は、肝臓の左葉における３．１ｃｍの腫瘍であった。非標的病変は、肝臓におけるいくつかの低弱毒化腫瘤を含んでいた。彼女のベースラインＣＥＡは、７８１ｎｇ／ｍＬであった。
【０２００】
ＩＭＭＵ−１３２は、週１回のスケジュールで２週間連続して注入により与えられ、次いで１週間おき、これが処理サイクルを構成した。これらのサイクルを、耐えられる限り反復した。ＩＭＭＵ−１３２（８ｍｇ／ｋｇ）の第１の注入は、２０１３年２月１５日に開始し、注目されるイベントのないまま完了した。彼女は、第１のサイクルの間、吐き気（グレード２）及び疲労（グレード２）を経験し、それ以降大きな有害事象のないまま治療を継続した。彼女は、２０１３年３月に脱毛及び便秘を報告した。０４／０８／２０１３に行われた（６回の投薬後）最初の反応評価は、コンピューター断層撮影（ＣＴ）により、２９％の標的病変の収縮を示した。彼女のＣＥＡレベルは、２０１３年３月２５日に２３０ｎｇ／ｍＬに低下した。２０１３年５月２３日の第２の反応評価（１０回の投薬後）では、標的病変は３９％収縮し、このようにしてＲＥＣＩＳＴ基準による部分反応に相当した。彼女は、処理を継続し、ｈＲＳ７−ＳＮ−３８（ＩＭＭＵ−１３２）の８ｍｇ／ｋｇでの１２回の投薬を構成する６サイクルを受けた。彼女の全体的な健康及び臨床症状は、この治験中の治療の開始以降、顕著に改善した。
【０２０１】
実施例１５．転移性固形癌に対するＩＭＭＵ−１３２によるＡＤＣ治療
ＩＭＭＵ−１３２は、ｐＨ感受性リンカー（平均薬物−抗体比＝７．６）によりｈＲＳ７抗Ｔｒｏｐ−２ヒト化モノクローナル抗体に複合化された、ＣＰＴ−１１の活性代謝物ＳＮ−３８を含むＡＤＣであり、Ｔｒｏｐ−２に結合すると急速な内在化を示す。ＩＭＭＵ−１３２は、多くの癌により高い発生率及び特異性で発現するＩ型膜貫通タンパク質であるＴｒｏｐ−２を標的化する。この実施例は、平均３回の以前の治療（一部は、トポイソメラーゼ−Ｉ及び−ＩＩ阻害薬を含む）に失敗した後の、異なる転移性癌を有する２５名の患者（膵臓癌、７名；三重陰性乳癌［ＴＮＢＣ］、４名；結腸直腸癌［ＣＲＣ］、３名；胃癌、３名、食道癌、前立腺癌、卵巣癌、非小細胞肺癌、小細胞が肺癌［ＳＣＬＣ］、腎臓癌、へんとう癌、膀胱癌、それぞれ１名）の第Ｉ相臨床試験を報告する。
【０２０２】
ＩＭＭＵ−１３２を、反復２１日サイクルで投与し、各治療は、１日目及び８日目に行われた。投薬は、８ｍｇ／ｋｇ／投薬（すなわち、１６ｍｇ／ｋｇ／サイクル）で開始し、３＋３試験設計で、用量制限好中球減少が生じる前に１８ｍｇ／ｋｇに上昇させた。疲労、脱毛、及び時折の軽度〜中程度の下痢が、より一般的な非血液学的毒性のいくつかであり、２名の患者はまた発疹を報告した。２４名の評価可能な患者の８０％超が、ＣＴによる最善の反応として、様々な転移性癌の中で安定な疾患または腫瘍収縮（ＳＤ及びＰＲ）を有した。３名の患者（ＣＲＣ、ＴＮＢＣ、ＳＣＬＣ）は、ＲＥＣＩＳＴによるＰＲを有し；全ての患者に対する中央ＴＴＰは、膵臓癌を有する患者を除いて１８週間超である。好中球減少は、８〜１０ｍｇ／ｋｇ／投薬（１６〜２０ｍｇ／ｋｇ／サイクル）までの用量低減により制御された。
【０２０３】
免疫組織化学は、ほとんどの記録された患者の腫瘍におけるＴｒｏｐ−２の強力な発現を示したが、血清においては検出されない。血液腫瘍マーカー力価（例えば、ＣＥＡ、ＣＡ１９−９）における対応する低減は、腫瘍反応を反映した。反復投薬にもかかわらず、抗抗体または抗ＳＮ−３８抗体は検出されなかった。血清中のＩＭＭＵ−１３２濃度のピーク及びトラフ値の評価は、複合体が７日以内に完全に除去され、インビトロ試験に基づく予測される所見は、ＳＮ−３８の５０％が毎日血清中に放出されることを示している。これらの結果は、この新規なＡＤＣが、サイクル当たり１６〜２４ｍｇ／ｋｇの範囲の用量で投与されると、多様な転移性固形癌において高い治療指数を示すことを示している。
【０２０４】
実施例１６．ＣＥＡＣＡＭ５を標的化するＳＮ−３８ＡＤＣであるＩＭＭＵ−１３０は、転移性結腸直腸癌（ｍＣＲＣ）において治療活性を有する
ｐＨ感受性リンカー（７．６の平均薬物−抗体比）によりヒト化抗ＣＥＡＣＡＭ５抗体（ラベツズマブ）に複合化された、ＳＮ−３８のＡＤＣであるＩＭＭＵ−１３０は、２つの第Ｉ相試験を完了している。両方において、進行性ｍＣＲＣを有する適格患者は、標準的治療（１つはトポイソメラーゼ−Ｉ阻害薬、ＣＰＴ−１１（イリノテカン））に失敗／再発している、及び高血漿ＣＥＡ（＞５ｎｇ／ｍＬ）を有する必要があった。
【０２０５】
ＩＭＭＵ−１３０は、第１のプロトコル（ＩＭＭＵ−１３０−０１）において、２．０ｍｇ／ｋｇから出発する用量で１４日おきに投与された（ＥＯＷ）。２４ｍｇ／ｋｇで３名の患者のうち２名に発熱性好中球減少が生じ；それ以外は、１６ｍｇ／ｋｇ以下において、好中球減少（≧グレード２）が７名の患者に観察され、１名はまた、血小板減少を経験した。［４回（２サイクル）以上の投薬を受けた８名の患者のうち］１名の患者は、４．７ヶ月の間肝臓（７ｃｍで開始）及び肺標的病変（ＲＥＣＩＳＴによるＰＲ）において４０．６％の減少を示し、大きな毒性は見られず、全部で１６ｍｇ／ｋｇで１８回の投薬に耐えた。試験は、１２ｍｇ／ｋｇ  ＥＯＷで継続した。
【０２０６】
ＳＮ−３８は、Ｓ期細胞において最も効果的であるため、より長期化した曝露が効力を改善し得る。したがって、第２の第Ｉ相試験（ＩＭＭＵ−１３０−０２）において、３＋３試験設計で、治療サイクルとして、６ｍｇ／ｋｇ／投薬で開始して週２回２週間（４回投薬）まで投薬を増加させ、１週間おいた。４．０ｍｇ／ｋｇで週２回への用量低減まで、好中球減少及び管理可能な下痢が主な副作用であったが、初期の結果は、複数サイクルが十分耐えられることを示している。現在、３名の患者に腫瘍収縮が生じ、４回（１サイクル）以上の投薬を完了した６名の患者のうち、１名はＲＥＣＩＳＴによるＰＲ（−４６％）が継続中である。両方の試験において、ＣＥＡ血液力価は、腫瘍反応と相関し、高レベルは治療に干渉しなかった。ＥＬＩＳＡ試験に基づき、抗抗体または抗ＳＮ−３８抗体反応はなかった。各試験において、ＡＤＣは、最初の２４時間以内に５０％除去され、これは、非経口分子ＣＰＴ−１１の典型的な用量よりもはるかに長い曝露である。これらの結果は、この新規なＡＤＣが、平均約１６〜２４ｍｇ／ｋｇ／サイクルの異なる投薬計画で投与されると、進行性ｍＣＲＣ患者において高い治療指数を示すことを示している。ＣＥＡＣＡＭ−５は、乳癌及び肺癌、ならびに他の上皮腫瘍において高い発現を有するため、他の癌においても有用な標的となり得る。
【０２０７】
実施例１７．チェックポイント阻害剤抗体単独、またはＣＡＲ−Ｔとの組み合わせの抗腫瘍活性
例示的なチェックポイント阻害剤抗体イピリムマブ（抗ＣＴＬＡ４）の抗腫瘍活性が、ＣＡＲ−Ｔ療法の添加と相乗的である、またはそれにより阻害されるかどうかを決定するために、ＣＴＬＡ４  ｍＡｂを単独で、または上の実施例２または実施例３で開示した例示的な抗Ｔｒｏｐ−２  ＣＡＲ−Ｔと組み合わせて評価した。Ｍ１０９肺癌、ＳＡ１Ｎ線維肉腫、及びＣＴ２６結腸癌モデルは、様々な薬剤及びＣＴＬＡ４遮断への異なる感受性に基づいて選択される。
【０２０８】
全ての化合物は、それらの最適用量及びスケジュールで試験される。組み合わせて使用される場合、ＣＴＬＡ４  ｍＡｂは、ＣＡＲ−Ｔの最初の投薬から１日後に開始される。腫瘍成長阻害パーセント及び標的腫瘍サイズに達するまでの日数を使用して、効力を評価する。抗腫瘍活性は、完全退縮（ＣＲ；触知不能腫瘍）または部分退縮（ＰＲ；腫瘍体積の５０％低減）としてスコア化される。相乗効果は、各薬剤による単剤療法の活性に対して有意に優れた（ｐ＜０．０５）抗腫瘍活性として定義される。
【０２０９】
ＣＴＬＡ４遮断に感受性であり、抗Ｔｒｏｐ−２  ＣＡＲ−Ｔにやや感受性であるＳＡ１Ｎ線維肉腫腫瘍モデルにおいて、ＣＴＬＡ４  ｍＡｂ及び抗Ｔｒｏｐ−２  ＣＡＲ−Ｔの組み合わせによるボーダーラインの相乗効果が明らかである。Ｍ１０９肺転移モデル及びＣＴ２６結腸癌モデルにおいて、抗Ｔｒｏｐ−２  ＣＡＲ−Ｔと組み合わされたＣＴＬＡ４  ｍＡｂに対して相乗効果が検出される。
【０２１０】
要約すると、抗Ｔｒｏｐ−２  ＣＡＲ−ＴへのＣＴＬＡ４ｍＡｂの添加は、モデル依存的相乗活性をもたらす。相乗効果は、腫瘍の免疫原性とは無関係に、及び治療薬の少なくとも１つが活性である場合にのみ観察される。組み合わせの投薬計画は、十分な耐性を示し、ＣＴＬＡ４  ｍＡｂ活性を阻害しないようである。ＣＴＬＡ４  ｍＡｂ単独には反応しない腫瘍において相乗効果が観察され、これは、ＣＡＲ−Ｔの添加が免疫原性細胞死を誘導し得ることを示唆している。
【０２１１】
実施例１８．不応性転移性非小細胞肺癌を治療するための、ＡＤＣ（ＩＭＭＵ−１３２）及びインターフェロン−α（ＰＥＧＩＮＴＥＲＦＥＲＯＮ（登録商標））との併用療法
患者は、非小細胞肺癌と診断された６０歳の男性である。患者は、６ヶ月間のカルボプラチン、ベバシズマブの化学療法計画を受けて反応を示し、次いで、進行後、次の２年間にわたりカルボプラチン、エトポシド、ＴＡＸＯＴＥＲＥ（登録商標）、ゲムシタビンによる化学療法のさらなる工程を受け、時折の反応は、２ヶ月以内の間続く。次いで、患者は、６．５×４ｃｍの寸法の左縦隔腫瘤及び胸水を示す。
【０２１２】
インフォームド・コンセントへの署名後、患者に、ＩＭＭＵ−１３２を２１日サイクルの１日目及び８日目に１０ｍｇ／ｋｇの用量で投与する。治療の第１週目の後、患者に、ＩＭＭＵ−１３２及びＰＥＧＩＮＴＥＲＦＥＲＯＮ（登録商標）の併用療法を施す。最初の２回の注射の間、短期間の好中球減少及び下痢を経験し、４時間以内に４回の排便があるが、これらは２日以内に解消する、または症状に対する医薬に反応する。全６回のＩＭＭＵ−１３２注入及び５回のＰＥＧＩＮＴＥＲＦＥＲＯＮ（登録商標）注入の後、指標病状のＣＴ評価は、２２％の低減を示し、部分的反応をわずかに下回るが、確かな腫瘍収縮を見せる。患者に対してさらに３ヶ月間この治療を継続すると、指標病状の直径の合計の４５％腫瘍収縮の部分的反応がＣＴにより認められ、このようにしてＲＥＣＩＳＴ基準による部分的反応に相当する。併用療法は、２つの薬剤を別個に投与した場合と比較して、相乗反応を提供するようである。
【０２１３】
実施例１９．進行性結腸癌を治療するためのＡＤＣ（ＩＭＭＵ−１３０）及び抗ＣＥＡＣＡＭ５  ＣＡＲ−Ｔによる併用療法
患者は、最初に転移性結腸癌（第ＩＶ期）と診断された７５歳の女性である。彼女は、右側の部分的半結腸切除及び小腸の部分切除を受け、次いでＦＯＬＦＯＸ、ＦＯＬＦＯＸ＋ベバシズマブ、ＦＯＬＦＩＲＩ＋ラムシルマブ、及びＦＯＬＦＩＲＩ＋セツキシマブ治療を１年半受けるが、彼女は疾患の進行を示し、疾患は後盲嚢、網に広がり、骨盤内の腹水及び胸腔の右側の胸水を見せる。この治療直前の彼女のベースラインＣＥＡ力価は、１５ｎｇ／ｍＬである。彼女に、６ｍｇ／ｋｇのＩＭＭＵ−１３０（抗ＣＥＡＣＡＭ５−ＳＮ−３８）を週２回連続２週間投与し、次いで１週間おく（３週間サイクル）。第１のサイクル後、患者にＩＭＭＵ−１３２及び抗Ｔｒｏｐ−２  ＣＡＲ−Ｔによる併用療法を施すが、これは同じ３週間サイクルで持続注入により投与される。いかなる大きな血液学的または非血液学的毒性もなく非常に良く耐えられた５サイクルの後、彼女の血漿ＣＥＡ力価は、１．３ｎｇ／ｍＬまでやや縮まるが、８週間の評価では、指標腫瘍病変の２１％の収縮を示し、これは１３週間で２７％の収縮に増加する。驚くべきことに、この時点で患者の腹水及び胸水は共に減少し（後者は消失する）、このように患者の全体的状態が顕著に改善される。併用療法は、２つの薬剤を別個に投与した場合と比較して、相乗反応を提供するようである。
【０２１４】
実施例２０．第ＩＶ期転移性疾患を有する胃癌患者を治療するための、ＡＤＣ（ＩＭＭＵ−１３０）、抗Ｔｒｏｐ−２  ＣＡＲ−Ｔ、及びインターフェロン−αによる併用療法
患者は、約６年間の胃の不快感及び摂食に関連する痛み、ならびに過去１２ヶ月の間の体重減少のために医学的処置を求めた５２歳の男性である。腹部の触診では硬いしこりを示し、次いでこれを胃カメラ検査すると、胃の下部における潰瘍腫瘤を示す。これは生検され、胃腺癌と診断される。臨床検査では特定の異常変化は見られないが、肝機能試験では、ＬＤＨ及びＣＥＡが上昇し、後者は１０．２ｎｇ／ｍＬである。次いで患者は、全身ＰＥＴスキャンを受け、これは、胃の腫瘍だけでなく、左腋窩及び肝臓の右葉における転移性疾患（２つの小転移）を明らかとする。患者は、胃の腫瘍を切除され、次いで転移腫瘍のベースラインＣＴ測定を受ける。手術から４週間後、彼は、シスプラチン及び５−フルオロウラシル（ＣＦ）の投薬計画からなる併用化学療法を３回受けるが、これには良好な耐性を示さないため、ドセタキセルによる治療に切り替えられる。ＣＴスキャンによれば、疾患は約４ヶ月間安定であるようであるが、さらなる体重減少、腹痛、食欲減退、及び極度の疲労という患者の病状により、繰り返しＣＴ検査が行われ、これは、合計で２０％の転移のサイズの増加、及び元の胃切除部位における疑わしい病変を示す。
【０２１５】
次いで、患者は、８ｍｇ／ｋｇの週１回のスケジュールでのＩＭＭＵ−１３０（抗ＣＥＡＣＡＭ５−ＳＮ−３８）による実験的治療を受ける。第１週目の後、ＩＭＭＵ−１３０、抗Ｔｒｏｐ−２  ＣＡＲ−Ｔ、及びインターフェロン−αの併用療法を開始する。患者は、その後４週間にわたり、下痢または好中球減少の兆候を示さない。次いで、患者は、転移性腫瘍サイズを測定するため、及び元の胃切除領域を観察するためにＣＴ検査を受ける。放射線科医は、ＲＥＣＩＳＴ基準に従い、治療前のベースラインである２３％と比較して、転移性病変の合計の減少を測定する。元の胃切除領域にはいかなる明確な病変も見られないようである。この時点での患者のＣＥＡ力価は、７．２ｎｇ／ｍＬであり、これは１４．５ｎｇ／ｍＬのベースライン値から大きく低減されている。患者は週１回の併用療法を継続し、合計１３回の注入後、彼のＣＴ検査は、１つの肝臓転移が消失し、全ての転移性病変の合計が４１％減少し、ＲＥＣＩＳＴによる部分的反応に相当することを示している。患者の全体的な状態は改善し、彼は通常の活動を再開する一方で、３週間毎に維持療法を受ける。血液ＣＥＡの最後の測定の時点で、値は４．８ｎｇ／ｍＬであり、これはこの患者に該当する喫煙者の正常範囲内である。
【０２１６】
実施例２１．進行性結腸癌を治療するための抗ＨＬＡ−ＤＲ抗体及び抗ＣＥＡＣＡＭ５  ＣＡＲ−Ｔの組み合わせ
患者は、最初に転移性結腸癌（第ＩＶ期）と診断された７０歳の男性である。彼は、右側の部分的半結腸切除及び小腸の部分切除を受け、次いでＦＯＬＦＯＸ、ＦＯＬＦＯＸ＋ベバシズマブ、ＦＯＬＦＩＲＩ＋ラムシルマブ、及びＦＯＬＦＩＲＩ＋セツキシマブ治療を１年半受けるが、彼は疾患の進行を示し、疾患は後盲嚢、網に広がり、骨盤内の腹水及び胸腔の右側の胸水を見せる。この治療直前の彼のベースラインＣＥＡ力価は、１５ｎｇ／ｍＬである。彼に、抗Ｔｒｏｐ−２  ＣＡＲ−Ｔを週２回連続２週間持続注入により投与し、次いで１週間おく（３週間サイクル）。各サイクルにおけるＣＡＲ−Ｔの第１のサイクル後、５ｍｇ／ｋｇの用量の抗ＨＬＡ  ＤＲ  ｈＬ２４３抗体を投与して、サイトカインストームの発症を防止する。いかなる大きな血液学的または非血液学的毒性もなく非常に良く耐えられた５サイクルの後、彼の血漿ＣＥＡ力価は、１．３ｎｇ／ｍＬまで減少する。８週間の評価では、彼は指標腫瘍病変の３１％の収縮を示し、これは１３週間で４０％の収縮に増加する。驚くべきことに、この時点で患者の腹水及び胸水は共に減少し（後者は消失する）、このように患者の全体的状態が顕著に改善される。抗ＨＬＡ−ＤＲ抗体の使用は、ＣＡＲ−Ｔ投与によって誘導された免疫毒性を防止するのに有効である。
【０２１７】
実施例２２．ＨＳＧ結合ＣＡＲによる、遺伝子操作されたＮＫ細胞の生成
ある特定の実施形態において、ＣＡＲ−ＮＫまたはＣＡＲ−Ｔ細胞は、ＨＳＧなどのハプテンに結合する抗体部分で操作してもよい。ＨＳＧ結合部分を使用して、ハプテン標識抗体で予め標識された細胞を標的化してもよい。このように、単一ＣＡＲコンストラクトは、適切な標的細胞を標識するように異なるＨＳＧ標識抗体を使用することで、異なる抗原を発現する複数の標的細胞に標的化され得る。
【０２１８】
ＨＳＧ結合ＣＡＲまたは対象となる他のＣＡＲによる遺伝子操作の影響を受けやすいＮＫ細胞としては、初代ＮＫ細胞、及びいくつかのＮＫ様ヒト細胞株、例えば、ＮＫ−９２（Ｇｏｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，Ｌｅｕｋｅｍｉａ  ８：６５２−８，１９９４）、ＮＫ−９２ＭＩ（Ｔａｍ  ｅｔ  ａｌ．，Ｈｕｍ  Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒ  １０：１３５９−７３，１９９９）、ＮＫ−９２ｆｃ（Ｂｉｎｙａｍｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １８０：６３９２−６４０１，２００８）、ＮＫＬ（Ｒｏｂｅｒｔｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｅｘｐ  Ｈｅｍａｔｏｌ  ２４：４０６−１５，１９９６）、ＮＫＧ（Ｃｈｅｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｅｌｌ  ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ  ２０：１７３１−４６，２０１１）、ＮＫ−ＹＳ（Ｔｓｕｃｈｉｙａｍａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ  ９２：１３７４−８３，１９９８）、ＫＨＹＧ−１（Ｙａｇｉｔａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｌｅｕｋｅｍｉａ  １４：９２２−３０，２０００）、及びＹＴ（Ｙｏｄｏｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １３４：１６２３−３０，１９８５）が挙げられる。
【０２１９】
ｍＲＮＡエレクトロポレーションによる初代ＮＫ細胞の形質導入。
白血球除去輸血によって健常なドナーからＰＢＭＣを入手し、洗浄し、使用するまで凍結保存する。ミルテニーＮＫ細胞単離キット（Ａｕｂｕｒｎ、ＣＡ）を用いて、解凍したＰＢＭＣから非ＮＫ細胞を枯渇させることによって初代ＮＫ細胞を精製し、拡張し、Ｌｉ  ｅｔ  ａｌ（Ｃａｎｃｅｒ  Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒ  １７：１４７−５４，２０１０）に記載のようにエレクトロポレーション（１〜３×１０８細胞／ｍＬ当たり１００μｇ／ｍＬ）によって、ＨＳＧ結合ＣＡＲをコードする導入遺伝子から転写されたｍＲＮＡでトランスフェクトする。エレクトロポレーション直後、細胞を処理チャンバから回収し、３７℃、５％ＣＯ２で２０分間載置し、１０％ＦＢＳ及び１００ＩＵ／ｍＬ  ＩＬ−２を有するＲＰＭＩ−１６４０培地中で再懸濁し、ＨＳＧ結合ＣＡＲの発現、生存率、ＩＦＮ−γ産生、及び細胞毒性の分析まで３７℃、５％ＣＯ２で培養する。
【０２２０】
レンチウイルスベクターによるＮＫ−９２細胞の形質導入。
ＮＫ−９２細胞株をＡＴＣＣ（ＣＲＬ−２４０７）から購入し、５００Ｕ／ｍＬプロロイキン（Ｃｈｉｒｏｎ、Ｅｍｅｒｙｖｉｌｌｅ、ＣＡ）が補充されたＭｙｅｌｏＣｕｌｔ培地（Ｓｔｅｍ  Ｃｅｌｌ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、Ｖａｎｃｏｕｖｅｒ、Ｃａｎａｄａ）中で維持する。Ｂｏｉｓｓｅｌ  ｅｔ  ａｌ（Ｌｅｕｋ  Ｌｙｍｐｈｏｍａ  ５３：９５８−６５、２０１２）に記載されたスピンフェクションプロトコルを用いて、ＮＫ−９２細胞をｐ−ＣＬＰＳ−ｈ６７９−２８−ＢＢ−ｚ（実施例２）で形質導入し、形質導入された細胞を、１０００Ｕ／ｍＬプロロイキンが補充されたＭｙｅｌｏＣｕｌｔ培地で４８〜７２時間拡張し、形質導入効率、ＨＳＧ結合ＣＡＲの発現、及び細胞毒性について分析した。
【０２２１】
実施例２３．ｈＲＳ７−ＣＡＲの設計及び構築
ｈＲＳ７−ＣＡＲ、ヒトＴｒｏｐ−２−標的化ＣＡＲの設計を示す概略図を以下に提供し、対応するアミノ酸配列を図５に提供する。
ＳＰＣＤ８α−ＶＫｈＲＳ７−（ＧＧＧＧＳ）３−ＶＨｈＲＳ７−ヒンジＣＤ８α−ＴＭＣＤ８α−ＩＣＤ４−１ＢＢ−ＩＣＤＣＤ３（配列番号１８に開示された「（ＧＧＧＧＳ）３」）
【０２２２】
ｈＲＳ７−ＣＡＲコンストラクトは、ＣＤ８αシグナルペプチド配列、ｈＲＳ７（ヒト化抗ヒトＴｒｏｐ−２  ｍＡｂ）のＶＫ及びＶＨ、ＣＤ８αのヒンジ領域及び膜貫通ドメイン、４−１ＢＢの細胞内ドメイン、及びＣＤ３ζの細胞内ドメインからなる。ｈＲＳ７−ＣＡＲ  ｍＲＮＡのインビトロ合成のためのＤＮＡ鋳型を示す概略図を以下に提供し、対応するヌクレオチド配列を図６に提供する。
【０２２３】
ＸｂａＩ−Ｔ７プロモーター−５’−ＵＴＲ−Ｋｏｚａｋ配列−ｈＲＳ７−ＣＡＲ−３’−ＵＴＲ−ＨｉｎｄＩＩＩ
鋳型は、ｈＲＳ７−ＣＡＲをコードするＤＮＡ配列を含み、ヒトグロビン遺伝子の５’末端、Ｔ７プロモーター、５’−非翻訳領域（ＵＴＲ）配列、及びＫｏｚａｋ配列、ならびにヒトグロビン遺伝子の３’末端、３’−ＵＴＲ配列に添加される。クローニングを容易にするため、ＸｂａＩ及びＨｉｎｄＩＩＩ制限部位を５’末端及び３’末端にそれぞれ添加する。全てのＤＮＡ配列は、Ｇｅｎｓｃｒｉｐｔ（Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ、ＮＪ）で合成した。
【０２２４】
ｈＲＳ７−ＣＡＲ  ｍＲＮＡの合成
ｈＲＳ７−ＣＡＲのＤＮＡ鋳型を、ＰＵＣ５７のＸｂａＩ及びＨｉｎｄＩＩＩ部位にクローニングした。得られたベクター（ＰＵＣ５７−ｈＲＳ７−ＣＡＲ）をＨｉｎｄＩＩＩ部位で線形化し、製造者の指示に従って、ｍＭＥＳＳＡＧＥ  ｍＭＡＣＨＩＮＥ（登録商標）Ｔ７ウルトラキット（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、Ｃａｒｌｓｂａｄ、ＣＡ）を用いてインビトロｍＲＮＡ合成を行った。ｍＲＮＡ安定性及び翻訳を増すために、このキットを、インビトロ転写で、５’−キャッピング及び３’−ポリアデニル化とカップリングさせる。Ｎａｎｏｄｒｏｐ  ＵＶ−Ｖｉｓ分光光度計（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、Ｗｉｌｍｉｎｇｔｏｎ、ＤＥ）によって収率を決定し、最終ｍＲＮＡ産物の完全性をゲル電気泳動によって調べ、本質的に単一のバンドを示した（不図示）。
【０２２５】
レンチウイルスベクター構築
ハイファイフュージョンＤＮＡポリメラーゼ（Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌａｎｄ  Ｂｉｏｌａｂｓ、Ｉｐｓｗｉｃｈ、ＭＡ）、及び以下のプライマー：フォワード：５’−ＴＣＡＡＣＴＣＧＡＧＣＧＣＣＧＣＣＡＣＣＡＴＧＧＣＣ−３’（配列番号２４）、リバース：５’−ＣＴＧＧＴＣＴＡＧＡＧＧＴＡＡＣＣＣＴＡＣＣＧＴＧＧＴＧＧ−３’（配列番号２５）を用いて、ｈＲＳ７−ＣＡＲをコードするＤＮＡ配列を、ＰＣＲによってＰＵＣ５７−ｈＲＳ７−ＣＡＲから増幅した。ＰＣＲ産物を制限部位Ｘｈｏｌ及びＸｂａｌでｐＬＶＸ−プロベクター（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、Ｍｏｕｎｔａｉｎ  Ｖｉｅｗ、ＣＡ）にクローニングし、得られたベクター（ｐＬＶＸ−ｐｕｒｏ−ｈＲＳ７−ＣＡＲ）の正確な配列決定を行った。ｐＬＶＸ−ｐｕｒｏ−ｈＲＳ７−ＣＡＲの概略図を図７に提供する。
【０２２６】
ＸｂａＩ及びＸｈｏＩの制限酵素による消化、及びゲル電気泳動（不図示）によって、ｐＬＶＸ−Ｐｕｒｏ−ｈＲＳ７−ＣＡＲ（１４９３ｂｐ）の新規コンストラクトを確認し、ｍａｘｉｐｒｅｐ後に配列決定した。
【０２２７】
実施例２４．ｍＲＮＡエレクトロポレーションを用いたｈＲＳ７−ＣＡＲ−ＮＫ−９２ＭＩの生成
ｈＲＳ７−ＣＡＲ  ｍＲＮＡのエレクトロポレーション
ＮＫ−９２ＭＩ細胞をＭｙｅｌｏｃｕｌｔ培地（ＳＴＥＭＣＥＬＬ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、Ｖａｎｃｏｕｖｅｒ、Ｃａｎａｄａ）中で対数期まで成長させ、洗浄し、無血清ＭＥＭ培地（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）中で１．６７×１０７細胞／ｍｌの濃度で再懸濁した。６００μｌのＭＥＭ培地中の１×１０７個の細胞と１００μｌの水中の３０μｇのｍＲＮＡの混合物を４−ｍｍエレクトロポレーションキュベット（ＢｉｏＲａｄ、Ｈｅｒｃｕｌｅｓ、ＣＡ）に移した。氷上で１０分間のインキュベーション後、３００Ｖ、１５０μＦ、及び２００モーの条件を用いて、エレクトロポレーションを行った。細胞をさらに１０分間インキュベートした後、Ｍｙｅｌｏｃｕｌｔ培地中に戻し、３７℃、５％ＣＯ２で２４〜４８時間培養し、ＷＵによってｈＲＳ７の発現（ｈＲＳ７に対するラット抗ｉｄ  ｍＡｂ）について分析した。
【０２２８】
ｈＲＳ７−ＣＡＲ−ＮＫ−９２ＭＩ上のｈＲＳ７−ＣＡＲの発現
ＮＫ−９２ＭＩ細胞をｈＲＳ７−ＣＡＲ  ｍＲＮＡまたは緩衝液のみ（モック）でトランスフェクトした。全てのタンパク質をＲＩＰＡ緩衝液から抽出し、ＳＤＳ−ＰＡＧＥ上で分離し、ウェスタンブロット（不図示）によってＷＵ−ＨＲＰでプローブした。ｈＲＳ７−ＣＡＲ  ｍＲＮＡでトランスフェクトされたＮＫ−９２ＭＩの細胞溶解物では、約５０ｋＤａの異なるバンドが観察されたが、モックトランスフェクトされたＮＫ−９２ＭＩでは観察されなかった。ｈＲＳ７−ＣＡＲの算出分子量は約５１ｋＤａであるため、これらの結果により、ｈＲＳ７−ＣＡＲがｈＲＳ７−ＣＡＲ  ｍＲＮＡでトランスフェクトされたＮＫ−９２ＭＩ細胞で産生されたことが確認される。生のｈＲＳ７−ＣＡＲ−ＮＫ−９２ＭＩの細胞表面上のｈＲＳ７の発現は、図８のフローサイトメトリーによっても実証され、エレクトロポレーションによってｈＲＳ７−ＣＡＲでトランスフェクトされたＮＫ−９２ＭＩ細胞の約４１％が分析時に生きており、この亜集団の２５％がｈＲＳ７を発現することを示している。
【０２２９】
実施例２５．ＭＴＳによる細胞毒性アッセイ
ＮＫ−９２ＭＩ細胞を、（モック）ｈＲＳ７−ＣＡＲ  ｍＲＮＡで、または（モック）ｈＲＳ７−ＣＡＲ  ｍＲＮＡ無しでトランスフェクトした。２４時間のインキュベーション後、それらを、３つの異なるエフェクター対標的比（１：１、２：１、または４：１）で、９６ウェルプレート中のＴｒｏｐ−２を発現するＨＣＣ１８０６（４，５００細胞／ウェル）と混合し、一晩インキュベートした。翌日、ＮＫ−９２ＭＩ及び死滅したＨＣＣ１８０６細胞は、両方とも非付着であり、洗い落とした。付着したＨＣＣ１８０６生細胞をさらに２日間培養し、ＭＴＳアッセイによって生存率を決定した。図９にまとめた結果は、ｈＲＳ７−ＣＡＲ  ｍＲＮＡでトランスフェクトされたＮＫ−９２ＭＩ細胞が、モックトランスフェクトされたＮＫ−９２ＭＩと比較して、２：１または４：１のエフェクター対標的比でＨＣＣ１８０６細胞をより有意に殺傷したことを示している。
【０２３０】
実施例２６．フローサイトメトリーによる細胞毒性
標的細胞上でｈＲＳ７−ＣＡＲ  ｍＲＮＡでトランスフェクトされたＮＫ−９２ＭＩの細胞毒性の増強をさらに実証するために、ＣｅｌｌＶｕｅ  Ｃｌａｒｅｔ  Ｆａｒ  Ｒｅｄ  Ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔ  Ｃｅｌｌ  Ｌｉｎｋｅｒ  Ｋｉｔ（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ、Ｌｏｕｉｓ、ＭＯ）でＨＣＣ１８０６細胞を標識し、３：１のエフェクター対標的比で、３時間３７℃にてＮＫ−９２ＭＩ細胞でインキュベートした。その後、細胞をＢＤ  Ｖ４５０で染色し、フローサイトメトリーによってＨＣＣ１８０６の生存率について分析した。図１０に示されるように、モックトランスフェクトされたＮＫ−９２ＭＩ細胞による約２５％と比較して、約４２％のＨＣＣ１８０６細胞が、ｈＲＳ７−ＣＡＲ  ｍＲＮＡでトランスフェクトされたＮＫ−９２ＭＩ細胞によって殺傷した。約１０％の未処理ＨＣＣ１８０６細胞は同じ実験で生きないことが判明したため、ｈＲＳ７−ＣＡＲ  ｍＲＮＡでトランスフェクトされたＮＫ−９２ＭＩ細胞によるＨＣＣ１８０６細胞の特異的溶解は、モックトランスフェクトされたＮＫ−９２ＭＩにおいて観察されたものよりも約２倍高かった。
【０２３１】
実施例２７．レンチウイルス形質導入を用いたｈＲＳ７−ＣＡＲ−ＮＫ−９２ＭＬの生成
レンチウイルスパッケージング及び形質導入
レンチ−Ｘ  ２９３Ｔ細胞を８ｍｌの成長培地中の５×１０６個の細胞／１０ｃｍ皿で一晩播種し、トランスフェクション時に８０〜９０％のコンフルエントに到達した。レンチウイルスベクター、ｐＬＶＸ−ｐｕｒｏ−ｈＲＳ７−ＣＡＲ、またはｐＬＶＸ−ｐｕｒｏの溶液は、６００μｌ中に７μｇのＤＮＡを含有するように滅菌水中で調製し、Ｌｅｎｔｉ−Ｘ  Ｐａｃｋａｇｉｎｇ  Ｓｉｎｇｌｅ  Ｓｈｏｔｓ（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）の管に添加した。試料をボルテックスし、室温で１０分間インキュベートし、２秒間遠心分離した後、８ｍｌの細胞培養物に滴下して加えた。３７℃／５％ＣＯ２で４時間から一晩インキュベーションした後、６ｍｌの新鮮な完全成長培地を添加し、ウイルスベクターを添加した４８時間後に上清を採取した。
【０２３２】
ＮＫ−９２ＭＩ細胞を形質導入するために、採取したレンチウイルス上清を１／４容量のレンチ−Ｘ濃縮器と混合し、４℃で一晩インキュベートし、翌日の対数期に１ｍｌのＮＫ−９２ＭＬ細胞（２×１０５）を添加した。細胞−ウイルス混合物を３，０００ｒｐｍで１５分間遠心分離し、４μｇ／ｍｌレトロネクチン（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）が補充された１ｍｌのＭｙｅｌｏｃｕｌｔ培地中で懸濁し、３７℃／５％ＣＯ２で２４時間インキュベートした後、１ｍｌの新鮮なＭｙｅｌｏｃｕｌｔ培地を添加した。さらに２４時間インキュベーションした後、使用済みの培地を廃棄し、８ｍｌの新鮮な培地と交換し、そこから細胞の一部を除去し、ＢＤ  Ｖ４５０（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ、Ｓａｎ  Ｊｏｓｅ、ＣＡ）及びＷＵ−ＡＦ−６４７で順次染色し、ＰＢＳ＋１％ＢＳＡで洗浄し、フローサイトメトリーによってｈＲＳ７の生存率及び発現を評価した。２つの形質導入の結果を図１１にまとめる。ｐＬＶＸ−ｐｕｒｏ−ｈＲＳ７−ＣＡＲで形質導入されたＮＫ−９２ＭＩ細胞の生存率は、両方の実験で約７０％であり、ｐＬＶＸ−ｐｕｒｏで形質導入されたＮＫ−９２ＭＩ細胞（６１％、実験１）と形質導入されなかったＮＫ−９２ＭＩ細胞（６７％、実験１；８４％、実験２）（データ不図示）について同様の生存率が観察された。図１２に提示したヒストグラムは、ｈＲＳ７が、ｐＬＶＸ−ｐｕｒｏ−ｈＲＳ７−ＣＡＲで形質導入されたＮＫ−９２ＭＩ細胞の生集団中で発現された（ＭＦＩ＞５，０００）が、ｐＬＶＸ−ｐｕｒｏで形質導入されたＮＫ−９２ＭＩ細胞または形質導入されなかったＮＫ−９２ＭＩ細胞の生集団中で発現されなかったことを示す。
【０２３３】
本明細書で開示し、特許請求した全ての組成物及び方法は、本開示を鑑みると必要以上の実験無しに作製し、使用することができる。組成物及び方法は、好ましい実施形態の観点から説明したが、当業者であれば、本発明の概念、趣旨、及び範囲から逸脱すること無く、本明細書で説明した組成物及び方法に対し、かつ方法の工程または工程の順序において、その変形を適用し得ることが明らかである。より具体的には、化学的にも生理学的にも関連する特定の薬剤は、同一または類似する結果を達成させながら、本明細書で説明した薬剤と置換されてよい。当業者には明らかな、そのように類似する全ての置換及び修飾は、付属する特許請求の範囲により定義するように、本発明の趣旨、範囲、及び概念内にあるとみなされる。
【０２３４】
（関連出願）
本出願は、米国特許法３５条１１９（ｅ）に基づき、２０１５年６月１２日に出願された米国特許仮出願番号第６２／１７４，８９４号、及び２０１５年７月１７日に出願された米国特許仮出願番号第６２／１９３，８５３号の優先権を主張し、それぞれの出願は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
（配列表）
本出願は、ＥＦＳ−ＷｅｂによりＡＳＣＩＩ形式で提出された配列表を含有し、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。２０１６年６月７日に作成された前記ＡＳＣＩＩコピーは、ＩＭＭ３６１ＷＯ１＿ＳＬという名前であり、３９，６７８バイトのサイズである。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４Ａ】
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【図４Ｂ】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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