(57)【要約】  本開示は、一般に、実質的に疎水性の塩基、酸性治療剤およびポリマーを含むナノ粒子に関する。他の態様は、そのようなナノ粒子を作製および使用する方法を含む。【図１】2018533574.tif 000028
2018533574.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
治療用ナノ粒子であって、
約０．０５〜約３０重量パーセントの実質的に疎水性の塩基；
約０．２〜約２０重量パーセントの酸性治療剤；ここで、前記疎水性の塩基のｐＫａは前記酸性治療剤のｐＫａより少なくとも約１．０ｐＫａ単位大きい；および
約５０〜約９９．７５重量パーセントのジブロックポリ（乳）酸−ポリ（エチレン）グリコールコポリマーまたはジブロックポリ（乳酸−ｃｏ−グリコール酸）−ポリ（エチレン）グリコールコポリマー；ここで、治療用ナノ粒子は約１０〜約３０重量パーセントのポリ（エチレン）グリコールを含む；
を含む治療用ナノ粒子。
【請求項２】
治療用ナノ粒子であって、
実質的に疎水性の塩基；
約０．２〜約２０重量パーセントの酸性治療剤；ここで、前記酸性治療剤のｐＫａは前記疎水性の塩基のｐＫａより少なくとも約１．０ｐＫａ単位大きい；および
約５０〜約９９．７５重量パーセントのジブロックポリ（乳）酸−ポリ（エチレン）グリコールコポリマーまたはジブロックポリ（乳酸−ｃｏ−グリコール酸）−ポリ（エチレン）グリコールコポリマー；ここで、前記実質的に疎水性の塩基の前記酸性治療剤に対するモル比は約０．２５：１〜約２：１であり、治療用ナノ粒子は約１０〜約３０重量パーセントのポリ（エチレン）グリコールを含む；
を含む治療用ナノ粒子。
【請求項３】
前記実質的に疎水性の塩基の前記酸性治療剤に対するモル比が、約０．５：１〜約１．５：１である、請求項２に記載の治療用ナノ粒子。
【請求項４】
前記実質的に疎水性の塩基の前記酸性治療剤に対するモル比が、約０．７５：１〜約１．２５：１である、請求項２に記載の治療用ナノ粒子。
【請求項５】
前記酸性治療剤のｐＫａが、前記疎水性の塩基のｐＫａより少なくとも約２．０ｐＫａ単位大きい、請求項１から４のいずれか一項に記載の治療用ナノ粒子。
【請求項６】
前記酸性治療剤のｐＫａが、前記疎水性の塩基のｐＫａより少なくとも約４．０ｐＫａ単位大きい、請求項１から４のいずれか一項に記載の治療用ナノ粒子。
【請求項７】
治療用ナノ粒子であって、
疎水性の塩基および少なくとも１つのイオン化可能な酸部分を有する治療剤を含む疎水性イオン対；ここで、前記酸性治療剤と前記疎水性の塩基のｐＫａの差は少なくとも約１．０ｐＫａ単位である；および
約５０〜約９９．７５重量パーセントのジブロックポリ（乳）酸−ポリ（エチレン）グリコールコポリマー；ここで、前記ポリ（乳）酸−ポリ（エチレン）グリコールコポリマーは約１５ｋＤａ〜約２０ｋＤａの数平均分子量のポリ（乳酸）および約４ｋＤａ〜約６ｋＤａの数平均分子量のポリ（エチレン）グリコールを有する；
を含む治療用ナノ粒子。
【請求項８】
前記酸性治療剤と前記疎水性の塩基のｐＫａの差が、少なくとも約２．０ｐＫａ単位である、請求項７に記載の治療用ナノ粒子。
【請求項９】
前記酸性治療剤と前記疎水性の塩基のｐＫａの差が、少なくとも約４．０ｐＫａ単位である、請求項７に記載の治療用ナノ粒子。
【請求項１０】
約０．０５〜約２０重量パーセントの前記疎水性の塩基を含む、請求項７から９のいずれか一項に記載の治療用ナノ粒子。
【請求項１１】
前記実質的に疎水性の塩基が、約２〜約７のｌｏｇＰを有する、請求項１から１０のいずれか一項に記載の治療用ナノ粒子。
【請求項１２】
前記実質的に疎水性の塩基が、水中で約５〜約１４のｐＫａを有する、請求項１から１１のいずれか一項に記載の治療用ナノ粒子。
【請求項１３】
前記実質的に疎水性の塩基が、水中で約９〜約１４のｐＫａを有する、請求項１から１１のいずれか一項に記載の治療用ナノ粒子。
【請求項１４】
前記実質的に疎水性の塩基と前記酸性治療剤が、前記治療用ナノ粒子中で疎水性イオン対を形成する、請求項１から１３のいずれか一項に記載の治療用ナノ粒子。
【請求項１５】
前記疎水性の塩基が疎水性のアミンである、請求項１から１４のいずれか一項に記載の治療用ナノ粒子。
【請求項１６】
前記疎水性のアミンが、オクチルアミン、ドデシルアミン、テトラデシルアミン、オレイルアミン、トリオクチルアミン、Ｎ−（フェニルメチル）ベンゼンエタンアミン、Ｎ，Ｎ’−ジベンジルエチレンジアミン、およびＮ−エチルジシクロヘキシルアミン、ならびにこれらの組合せからなる群から選択される、請求項１５に記載の治療用ナノ粒子。
【請求項１７】
前記疎水性の塩基が、アミン、イミン、含窒素ヘテロアリール塩基、ホスファゼン、ヒドラジン、およびグアニジンからなる群から選択されるプロトン化可能な官能基を含む、請求項１から１４のいずれか一項に記載の治療用ナノ粒子。
【請求項１８】
前記酸性治療剤がカルボン酸官能基を含む、請求項１から１７のいずれか一項に記載の治療用ナノ粒子。
【請求項１９】
前記酸性治療剤が、含硫黄酸性官能基を含む、請求項１から１７のいずれか一項に記載の治療用ナノ粒子。
【請求項２０】
前記含硫黄酸性官能基が、スルフェン酸、スルフィン酸、スルホン酸、および硫酸からなる群から選択される、請求項１９に記載の治療用ナノ粒子。
【請求項２１】
前記酸性治療剤が、約−３〜約７の間のｐＫａを有する、請求項１から２０のいずれか一項に記載の治療用ナノ粒子。
【請求項２２】
前記酸性治療剤が、約１〜約５の間のｐＫａを有する、請求項１から２０のいずれか一項に記載の治療用ナノ粒子。
【請求項２３】
約１〜約１５重量パーセントの前記酸性治療剤を含む、請求項１から２２のいずれか一項に記載の治療用ナノ粒子。
【請求項２４】
約２〜約１５重量パーセントの前記酸性治療剤を含む、請求項１から２２のいずれか一項に記載の治療用ナノ粒子。
【請求項２５】
約４〜約１５重量パーセントの前記酸性治療剤を含む、請求項１から２２のいずれか一項に記載の治療用ナノ粒子。
【請求項２６】
約５〜約１０重量パーセントの前記酸性治療剤を含む、請求項１から２２のいずれか一項に記載の治療用ナノ粒子。
【請求項２７】
約２〜約５重量パーセントの前記酸性治療剤を含む、請求項１から２２のいずれか一項に記載の治療用ナノ粒子。
【請求項２８】
前記治療剤が非ステロイド性抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）である、請求項１から２７のいずれか一項に記載の治療用ナノ粒子。
【請求項２９】
前記非ステロイド性抗炎症薬が、ジクロフェナク、ケトロラク、ロフェコキシブ、セレコキシブ、およびこれらの薬学的に許容できる塩からなる群から選択される、請求項２８に記載の治療用ナノ粒子。
【請求項３０】
流体力学的直径が約６０〜約１５０ｎｍである、請求項１から２９のいずれか一項に記載の治療用ナノ粒子。
【請求項３１】
流体力学的直径が約９０〜約１４０ｎｍである、請求項１から２９のいずれか一項に記載の治療用ナノ粒子。
【請求項３２】
３７℃のリン酸緩衝溶液に入れたとき、前記治療剤を少なくとも１分間実質的に保持する、請求項１から３１のいずれか一項に記載の治療用ナノ粒子。
【請求項３３】
３７℃のリン酸緩衝溶液に入れたとき、約３０％未満の前記治療剤しか実質的に直ちに放出しない、請求項１から３２のいずれか一項に記載の治療用ナノ粒子。
【請求項３４】
３７℃のリン酸緩衝溶液に入れたとき、２時間後に、約６０％未満の前記治療剤しか実質的に直ちに放出しない、請求項１から３２のいずれか一項に記載の治療用ナノ粒子。
【請求項３５】
３７℃のリン酸緩衝溶液に入れたとき、前記治療剤の約１０〜約４５％を約１時間かけて放出する、請求項１から３２のいずれか一項に記載の治療用ナノ粒子。
【請求項３６】
前記実質的に疎水性の塩基を含有しないことを除き、前記治療用ナノ粒子と実質的に同じである対照ナノ粒子についての放出プロファイルと実質的に同じである放出プロファイルを有する、請求項１から３５のいずれか一項に記載の治療用ナノ粒子。
【請求項３７】
前記ポリ（乳）酸−ポリ（エチレン）グリコールコポリマーが、約０．６〜約０．９５のポリ（乳）酸数平均分子量分率を有する、請求項１から３６のいずれか一項に記載の治療用ナノ粒子。
【請求項３８】
前記ポリ（乳）酸−ポリ（エチレン）グリコールコポリマーが、約０．６〜約０．８のポリ（乳）酸数平均分子量分率を有する、請求項１から３６のいずれか一項に記載の治療用ナノ粒子。
【請求項３９】
前記ポリ（乳）酸−ポリ（エチレン）グリコールコポリマーが、約０．７５〜約０．８５のポリ（乳）酸数平均分子量分率を有する、請求項１から３６のいずれか一項に記載の治療用ナノ粒子。
【請求項４０】
前記ポリ（乳）酸−ポリ（エチレン）グリコールコポリマーが、約０．７〜約０．９のポリ（乳）酸数平均分子量分率を有する、請求項１から３６のいずれか一項に記載の治療用ナノ粒子。
【請求項４１】
約１０〜約２５重量パーセントのポリ（エチレン）グリコールを含む、請求項１から４０のいずれか一項に記載の治療用ナノ粒子。
【請求項４２】
約１０〜約２０重量パーセントのポリ（エチレン）グリコールを含む、請求項１から４０のいずれか一項に記載の治療用ナノ粒子。
【請求項４３】
約１５〜約２５重量パーセントのポリ（エチレン）グリコールを含む、請求項１から４０のいずれか一項に記載の治療用ナノ粒子。
【請求項４４】
約２０〜約３０重量パーセントのポリ（エチレン）グリコールを含む、請求項１から４０のいずれか一項に記載の治療用ナノ粒子。
【請求項４５】
前記ポリ（乳）酸−ポリ（エチレン）グリコールコポリマーが、約１５ｋＤａ〜約２０ｋＤａの数平均分子量のポリ（乳酸）および約４ｋＤａ〜約６ｋＤａの数平均分子量のポリ（エチレン）グリコールを有する、請求項１から４４のいずれか一項に記載の治療用ナノ粒子。
【請求項４６】
約０．２〜約３０重量パーセントの、標的化リガンドで官能化されたポリ（乳）酸−ポリ（エチレン）グリコールコポリマーをさらに含む、請求項１から４５のいずれか一項に記載の治療用ナノ粒子。
【請求項４７】
約０．２〜約３０重量パーセントの、標的化リガンドで官能化されたポリ（乳）酸−ｃｏ−ポリ（グリコール）酸−ポリ（エチレン）グリコールコポリマーをさらに含む、請求項１から４６のいずれか一項に記載の治療用ナノ粒子。
【請求項４８】
前記標的化リガンドが、前記ポリ（エチレン）グリコールに共有結合している、請求項４６または４７に記載の治療用ナノ粒子。
【請求項４９】
前記疎水性の塩基が多価電解質である、請求項１から４８のいずれか一項に記載の治療用ナノ粒子。
【請求項５０】
前記多価電解質が、ポリアミンおよびポリピリジンからなる群から選択される、請求項４９に記載の治療用ナノ粒子。
【請求項５１】
前記ポリアミンが、ポリエチレンイミン、ポリリシン、ポリアリルアミン、およびキトサンからなる群から選択される、請求項５０に記載の治療用ナノ粒子。
【請求項５２】
第１のポリマー、酸性治療剤および実質的に疎水性の塩基を含む第１の有機相を乳化し、それによってエマルジョン相を形成するステップ；
前記エマルジョン相をクエンチし、それによって、クエンチされた相を形成するステップ；および
前記クエンチされた相を濾過して治療用ナノ粒子を回収するステップ
により調製される治療用ナノ粒子。
【請求項５３】
請求項１から５２のいずれかに記載の複数の治療用ナノ粒子および薬学的に許容できる賦形剤を含む薬学的に許容できる組成物。
【請求項５４】
糖類をさらに含む、請求項５３に記載の薬学的に許容できる組成物。
【請求項５５】
シクロデキストリンをさらに含む、請求項５３または５４に記載の薬学的に許容できる組成物。
【請求項５６】
前記糖類が、スクロースもしくはトレハロースまたはこれらの混合物からなる群から選択される二糖類である、請求項５４に記載の薬学的に許容できる組成物。
【請求項５７】
前記シクロデキストリンが、α−シクロデキストリン、β−シクロデキストリン、γ−シクロデキストリン、ヘプタキス−（２，３，６−トリ−Ｏ−ベンジル）−β−シクロデキストリン、およびこれらの混合物からなる群から選択される、請求項５５に記載の薬学的に許容できる組成物。
【請求項５８】
それを必要とする患者においてがんを処置する方法であって、請求項１から５２のいずれか一項に記載の治療用ナノ粒子を含む治療有効量の組成物を前記患者に投与することを含む方法。
【請求項５９】
前記がんが慢性骨髄性白血病である、請求項５８に記載の方法。
【請求項６０】
前記がんが、慢性骨髄単球性白血病、好酸球増加症候群、腎細胞癌、肝細胞癌、フィラデルフィア染色体陽性急性リンパ芽球性白血病、非小細胞肺がん、膵臓がん、乳がん、固形腫瘍、およびマントル細胞リンパ腫からなる群から選択される、請求項５８に記載の方法。
【請求項６１】
それを必要とする患者において胃腸間質腫瘍を処置する方法であって、請求項１から５２のいずれか一項に記載の治療用ナノ粒子を含む治療有効量の組成物を前記患者に投与することを含む方法。
【請求項６２】
それを必要とする患者において疼痛を処置する方法であって、請求項１から５２のいずれか一項に記載の治療用ナノ粒子を含む治療有効量の組成物を前記患者に投与することを含む方法。
【請求項６３】
治療用ナノ粒子を調製するための方法であって、
第１の有機相を第１の水溶液と合わせて第２の相を形成するステップ；
前記第２の相を乳化してエマルジョン相を形成するステップ；ここで、前記エマルジョン相は第１のポリマー、酸性治療剤および実質的に疎水性の塩基を含む；
前記エマルジョン相をクエンチし、それによって、クエンチされた相を形成するステップ；および
前記クエンチされた相を濾過して、治療用ナノ粒子を回収するステップ
を含む方法。
【請求項６４】
前記酸性治療剤と前記実質的に疎水性の塩基を、前記第２の相を乳化する前に、前記第２の相において合わせるステップをさらに含む、請求項６３に記載の方法。
【請求項６５】
前記第２の相を乳化する前に、前記酸性治療剤と前記実質的に疎水性の塩基によって疎水性イオン対が形成される、請求項６４に記載の方法。
【請求項６６】
前記第２の相が乳化される間に、前記酸性治療剤と前記実質的に疎水性の塩基によって疎水性イオン対が形成される、請求項６４に記載の方法。
【請求項６７】
前記酸性治療剤と前記実質的に疎水性の塩基を、前記第２の相を乳化するのと実質的に同時に、前記第２の相において合わせるステップをさらに含む、請求項６３に記載の方法。
【請求項６８】
前記第１の有機相が前記酸性治療剤を含み、前記第１の水溶液が、前記実質的に疎水性の塩基を含む、請求項６７に記載の方法。
【請求項６９】
前記酸性治療剤が第１のｐＫａを有し、前記実質的に疎水性の塩基が、プロトン化されているとき、第２のｐＫａを有し、前記エマルジョン相が、前記第１のｐＫａと前記第２のｐＫａの間のｐＫａ単位に等しいｐＨを有する水溶液でクエンチされる、請求項６３から６８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７０】
前記クエンチされた相が、前記第１のｐＫａと前記第２のｐＫａの間のｐＫａ単位に等しいｐＨを有する、請求項６９に記載の方法。
【請求項７１】
前記酸性治療剤が第１のｐＫａを有し、前記実質的に疎水性の塩基が、プロトン化されているとき、第２のｐＫａを有し、前記第１の水溶液が、前記第１のｐＫａと前記第２のｐＫａの間のｐＫａ単位に等しいｐＨを有する、請求項６３から６９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７２】
ｐＨが、前記第１のｐＫａと前記第２のｐＫａの間に約等距離にあるｐＫａ単位に等しい、請求項６９から７１のいずれか一項に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願への相互参照
本出願は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれている、２０１５年１０月３０日出願の米国仮出願第６２／２４８，５５１号の優先権および利益を主張する。
【背景技術】
【０００２】
患者へのある種の薬物を送達する（例えば、特定の組織もしくは細胞型を標的とするか、または正常組織ではなく特定の患部組織を標的とする）か、または薬物の放出を制御する系は、有益であると長い間認識されてきた。例えば、活性薬物を含み、かつ例えば、特定の組織もしくは細胞型を標的とするか、または正常組織ではなく特定の患部組織を標的とする治療法は、標的とされていない体の組織における薬物の量を低減し得る。周囲の非がん組織を死滅させることなしに細胞毒性用量の薬物ががん細胞に送達されることが望ましい状態、例えば、がんを処置するときに、これは特に重要である。有効な薬物標的化は、抗がん療法においては一般的である、望ましくなく、時には生命を危うくする副作用を低減し得る。さらに、このような治療法は、薬物がその他の治療法では到達することができないある種の組織に到達することを可能にし得る。
【０００３】
制御放出および／または標的療法を実現する治療法はまた、有効量の薬物を送達できなければならないが、これは他のナノ粒子送達系において公知の制限である。例えば、ナノ粒子のサイズを、有利な送達特性を有するのに十分に小さく保つ一方で、各ナノ粒子と会合する適当な量の薬物を有するナノ粒子系を調製することは挑戦であり得る。
【０００４】
少なくとも１つの酸性基を含有する治療剤は、重要な一群の治療剤となる。しかし、このクラスの薬物のナノ粒子製剤では、往々にして、望ましくない特性、例えば、バースト放出プロファイルおよび不十分な薬物添加量が妨げとなる。
【０００５】
したがって、ナノ粒子治療法、および治療レベルの酸性治療剤を送達して疾患を処置し、その間患者の副作用も軽減することができるナノ粒子を作製する方法が求められている。例えば、非ステロイド性抗炎症薬（ＮＳＡＩＤＳ）の製剤は、不十分な薬物添加量および／または不良な放出特徴を欠点として有する。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
本明細書では、少なくとも１つの酸性基を含有する治療剤を含むポリマーナノ粒子、ならびにそのような治療用ナノ粒子を作製および使用する方法を記載する。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
一態様では、治療用ナノ粒子を提供する。治療用ナノ粒子は、約０．０５〜約３０重量パーセントの実質的に疎水性の塩基；約０．２〜約２０重量パーセントの酸性治療剤；ここで、前記疎水性の塩基のｐＫａは前記酸性治療剤のｐＫａより少なくとも約１．０ｐＫａ単位大きい；および約５０〜約９９．７５重量パーセントのジブロックポリ（乳）酸−ポリ（エチレン）グリコールコポリマーまたはジブロックポリ（乳酸−ｃｏ−グリコール酸）−ポリ（エチレン）グリコールコポリマー；ここで、治療用ナノ粒子は約１０〜約３０重量パーセントのポリ（エチレン）グリコールを含む；を含む。
【０００８】
別の態様では、治療用ナノ粒子を提供する。治療用ナノ粒子は、実質的に疎水性の塩基；約０．２〜約２０重量パーセントの酸性治療剤；ここで、前記酸性治療剤のｐＫａは前記疎水性の塩基のｐＫａより少なくとも約１．０ｐＫａ単位大きい；および約５０〜約９９．７５重量パーセントのジブロックポリ（乳）酸−ポリ（エチレン）グリコールコポリマーまたはジブロックポリ（乳酸−ｃｏ−グリコール酸）−ポリ（エチレン）グリコールコポリマー；ここで、前記実質的に疎水性の塩基の前記酸性治療剤に対するモル比は約０．２５：１〜約２：１であり、治療用ナノ粒子は約１０〜約３０重量パーセントのポリ（エチレン）グリコールを含む；を含む。
【０００９】
一部の実施形態では、実質的に疎水性の塩基の酸性治療剤に対するモル比は、約０．５：１〜約１．５：１または約０．７５：１〜約１．２５：１である。
【００１０】
一部の実施形態では、酸性治療剤のｐＫａは、疎水性の塩基のｐＫａより少なくとも約２．０ｐＫａ単位大きい、または疎水性の塩基のｐＫａより少なくとも約４．０ｐＫａ単位大きい。
【００１１】
また別の態様では、治療用ナノ粒子を提供する。治療用ナノ粒子は、疎水性の塩基および少なくとも１つのイオン化可能な酸部分を有する治療剤を含む疎水性イオン対；ここで、前記酸性治療剤と前記疎水性の塩基のｐＫａの差は少なくとも約１．０ｐＫａ単位である；および約５０〜約９９．７５重量パーセントのジブロックポリ（乳）酸−ポリ（エチレン）グリコールコポリマー；ここで、前記ポリ（乳）酸−ポリ（エチレン）グリコールコポリマーは約１５ｋＤａ〜約２０ｋＤａの数平均分子量のポリ（乳酸）および約４ｋＤａ〜約６ｋＤａの数平均分子量のポリ（エチレン）グリコールを有する；を含む。
【００１２】
一部の実施形態では、酸性治療剤と疎水性の塩基のｐＫａの差は、少なくとも約２．０ｐＫａ単位または少なくとも約４．０ｐＫａ単位である。
【００１３】
一部の実施形態では、企図される治療用ナノ粒子は、約０．０５〜約２０重量パーセントの疎水性の塩基をさらに含む。
【００１４】
一部の実施形態では、実質的に疎水性の塩基は、約２〜約７のｌｏｇＰを有する。
【００１５】
一部の実施形態では、実質的に疎水性の塩基は、水中で約５〜約１４または約９〜約１４のｐＫａを有する。
【００１６】
一部の実施形態では、実質的に疎水性の塩基と酸性治療剤は、治療用ナノ粒子中で疎水性イオン対を形成する。
【００１７】
一部の実施形態では、疎水性の塩基は、疎水性のアミンである。例えば、ある特定の実施形態では、疎水性のアミンは、オクチルアミン、ドデシルアミン、テトラデシルアミン、オレイルアミン、トリオクチルアミン、Ｎ−（フェニルメチル）ベンゼンエタンアミン、Ｎ，Ｎ’−ジベンジルエチレンジアミン、およびＮ−エチルジシクロヘキシルアミン、ならびにこれらの組合せからなる群から選択される。一部の実施形態では、疎水性の塩基は、アミン、イミン、含窒素ヘテロアリール塩基、ホスファゼン、ヒドラジン、およびグアニジンからなる群から選択されるプロトン化可能な官能基を含む。
【００１８】
一部の実施形態では、酸性治療剤は、カルボン酸官能基を含む。一部の実施形態では、酸性治療剤は、含硫黄酸性官能基を含む。例えば、ある特定の実施形態では、含硫黄酸性官能基は、スルフェン酸、スルフィン酸、スルホン酸、および硫酸からなる群から選択される。一部の実施形態では、酸性の治療用の酸は、約−３〜約７の間または約１〜約５の間のｐＫａを有する。
【００１９】
一部の実施形態では、企図される治療用ナノ粒子は、約１〜約１５重量パーセントの酸性治療剤、または約２〜約１５重量パーセントの酸性治療剤、または約４〜約１５重量パーセントの酸性治療剤、または約５〜約１０重量パーセントの酸性治療剤、または約２〜約５重量パーセントの酸性治療剤をさらに含む。
【００２０】
一部の実施形態では、治療剤は、非ステロイド性抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）である。例えば、ある特定の実施形態では、非ステロイド性抗炎症薬は、ジクロフェナク、ケトロラク、ロフェコキシブ、セレコキシブ、およびこれらの薬学的に許容できる塩からなる群から選択される。
【００２１】
一部の実施形態では、企図される治療用ナノ粒子の流体力学的直径は、約６０〜約１５０ｎｍまたは約９０〜約１４０ｎｍである。
【００２２】
一部の実施形態では、企図される治療用ナノ粒子は、３７℃のリン酸緩衝溶液に入れたとき、治療剤を少なくとも１分間実質的に保持する。一部の実施形態では、企図される治療用ナノ粒子は、３７℃のリン酸緩衝溶液に入れたとき、約３０％未満の治療剤しか実質的に直ちに放出しない。一部の実施形態では、企図される治療用ナノ粒子は、３７℃のリン酸緩衝溶液に入れたとき、２時間後に、約６０％未満の治療剤しか実質的に直ちに放出しない。一部の実施形態では、企図される治療用ナノ粒子は、３７℃のリン酸緩衝溶液に入れたとき、治療剤の約１０〜約４５％を約１時間かけて放出する。一部の実施形態では、企図される治療用ナノ粒子は、実質的に疎水性の塩基を含有しないことを除き、治療用ナノ粒子と実質的に同じである対照ナノ粒子についての放出プロファイルと実質的に同じである放出プロファイルを有する。
【００２３】
一部の実施形態では、ポリ（乳）酸−ポリ（エチレン）グリコールコポリマーは、約０．６〜約０．９５、または約０．６〜約０．８、または約０．７５〜約０．８５、または約０．７〜約０．９のポリ（乳）酸数平均分子量分率を有する。
【００２４】
一部の実施形態では、企図される治療用ナノ粒子は、約１０〜約２５重量パーセントのポリ（エチレン）グリコール、または約１０〜約２０重量パーセントのポリ（エチレン）グリコール、または約１５〜約２５重量パーセントのポリ（エチレン）グリコール、または約２０〜約３０重量パーセントのポリ（エチレン）グリコールをさらに含む。
【００２５】
一部の実施形態では、ポリ（乳）酸−ポリ（エチレン）グリコールコポリマーは、約１５ｋＤａ〜約２０ｋＤａの数平均分子量のポリ（乳酸）および約４ｋＤａ〜約６ｋＤａの数平均分子量のポリ（エチレン）グリコールを有する。
【００２６】
一部の実施形態では、企図される治療用ナノ粒子は、約０．２〜約３０重量パーセントの、標的化リガンドで官能化されたポリ（乳）酸−ポリ（エチレン）グリコールコポリマーをさらに含む。一部の実施形態では、企図される治療用ナノ粒子は、約０．２〜約３０重量パーセントの、標的化リガンドで官能化されたポリ（乳）酸−ｃｏ−ポリ（グリコール）酸−ポリ（エチレン）グリコールコポリマーをさらに含む。例えば、一部の実施形態では、標的化リガンドは、ポリ（エチレン）グリコールに共有結合している。
【００２７】
一部の実施形態では、疎水性の塩基は、多価電解質である。
【００２８】
一部の実施形態では、多価電解質は、ポリアミンおよびポリピリジンからなる群から選択される。
【００２９】
一部の実施形態では、ポリアミンは、ポリエチレンイミン、ポリリシン、ポリアリルアミン、およびキトサンからなる群から選択される。
【００３０】
別の態様では、治療用ナノ粒子を提供する。治療用ナノ粒子は、第１のポリマー、酸性治療剤および実質的に疎水性の塩基を含む第１の有機相を乳化し、それによってエマルジョン相を形成するステップ；エマルジョン相をクエンチし、それによって、クエンチされた相を形成するステップ；およびクエンチされた相を濾過して治療用ナノ粒子を回収するステップによって調製される。
【００３１】
さらに別の態様では、薬学的に許容できる組成物を提供する。薬学的に許容できる組成物は、複数の企図される治療用ナノ粒子および薬学的に許容できる賦形剤を含む。
【００３２】
一部の実施形態では、企図される薬学的に許容できる組成物は、糖類をさらに含む。例えば、一部の実施形態では、糖類は、スクロースもしくはトレハロースまたはこれらの混合物からなる群から選択される二糖類である。
【００３３】
一部の実施形態では、企図される薬学的に許容できる組成物は、シクロデキストリンをさらに含む。例えば、一部の実施形態では、シクロデキストリンは、α−シクロデキストリン、β−シクロデキストリン、γ−シクロデキストリン、ヘプタキス−（２，３，６−トリ−Ｏ−ベンジル）−β−シクロデキストリン、およびこれらの混合物からなる群から選択される。
【００３４】
また別の態様では、それを必要とする患者においてがんを処置する方法を提供する。この方法は、患者に、企図される治療用ナノ粒子を含む治療有効量の組成物を投与することを含む。
【００３５】
一部の実施形態では、がんは、慢性骨髄性白血病である。例えば、一部の実施形態では、がんは、慢性骨髄単球性白血病、好酸球増加症候群、腎細胞癌、肝細胞癌、フィラデルフィア染色体陽性急性リンパ芽球性白血病、非小細胞肺がん、膵臓がん、乳がん、固形腫瘍、およびマントル細胞リンパ腫からなる群から選択される。
【００３６】
さらに別の態様では、それを必要とする患者において胃腸間質腫瘍を処置する方法を提供する。この方法は、患者に、企図される治療用ナノ粒子を含む治療有効量の組成物を投与することを含む。
【００３７】
また別の態様では、それを必要とする患者において疼痛を処置する方法を提供する。この方法は、患者に、企図される治療用ナノ粒子を含む治療有効量の組成物を投与することを含む。
【００３８】
さらに別の態様では、治療用ナノ粒子の調製するための方法を提供する。この方法は、第１の有機相を第１の水溶液と合わせて第２の相を形成するステップ；第２の相を乳化してエマルジョン相を形成するステップ；ここで、エマルジョン相は、第１のポリマー、酸性治療剤および実質的に疎水性の塩基を含む；エマルジョン相をクエンチし、それによって、クエンチされた相を形成するステップ；およびクエンチされた相を濾過して、治療用ナノ粒子を回収するステップを含む。
【００３９】
一部の実施形態では、企図される方法は、酸性治療剤と実質的に疎水性の塩基を、第２の相を乳化する前に、第２の相において合わせるステップをさらに含む。一部の実施形態では、第２の相を乳化する前に、酸性治療剤と実質的に疎水性の塩基によって疎水性イオン対が形成される。一部の実施形態では、第２の相が乳化される間に、酸性治療剤と実質的に疎水性の塩基によって疎水性イオン対が形成される。
【００４０】
一部の実施形態では、企図される方法は、酸性治療剤と実質的に疎水性の塩基を、第２の相を乳化するのと実質的に同時に、第２の相において合わせるステップをさらに含む。例えば、一部の実施形態では、第１の有機相が酸性治療剤を含み、第１の水溶液が、実質的に疎水性の塩基を含む。
【００４１】
一部の実施形態では、酸性治療剤は、第１のｐＫａを有し、実質的に疎水性の塩基は、プロトン化されているとき、第２のｐＫａを有し、エマルジョン相は、第１のｐＫａと第２のｐＫａの間のｐＫａ単位に等しいｐＨを有する水溶液でクエンチされる。例えば、一部の実施形態では、クエンチされた相が、第１のｐＫａと第２のｐＫａの間のｐＫａ単位に等しいｐＨを有する。一部の実施形態では、酸性治療剤は、第１のｐＫａを有し、実質的に疎水性の塩基は、プロトン化されているとき、第２のｐＫａを有し、第１の水溶液は、第１のｐＫａと第２のｐＫａの間のｐＫａ単位に等しいｐＨを有する。例えば、一部の実施形態では、ｐＨは、第１のｐＫａと第２のｐＫａの間に約等距離にあるｐＫａ単位に等しい。
【図面の簡単な説明】
【００４２】
【図１】開示されているナノ粒子を形成するためのエマルジョンプロセスについてのフローチャートである。
【図２Ａ】開示されているエマルジョンプロセスについての流れ図である。
【図２Ｂ】開示されているエマルジョンプロセスについての流れ図である。
【図３】本明細書において開示される種々のナノ粒子からのジクロフェナクのｉｎ−ｖｉｔｒｏ放出を示すグラフである。
【図４】本明細書において開示される種々のナノ粒子からのジクロフェナクのｉｎ−ｖｉｔｒｏ放出を示すグラフである。
【図５】本明細書において開示される種々のナノ粒子からのジクロフェナクのｉｎ−ｖｉｔｒｏ放出を示すグラフである。
【図６】本明細書において開示される種々のナノ粒子からのジクロフェナクのｉｎ−ｖｉｔｒｏ放出を示すグラフである。
【図７】本明細書において開示される種々のナノ粒子からのジクロフェナクのｉｎ−ｖｉｔｒｏ放出を示すグラフである。
【図８】本明細書において開示される種々のナノ粒子からのケトロラクのｉｎ−ｖｉｔｒｏ放出を示すグラフである。
【図９】本明細書において開示される種々のナノ粒子からのケトロラクのｉｎ−ｖｉｔｒｏ放出を示すグラフである。
【図１０】本明細書において開示される種々のナノ粒子からのケトロラクのｉｎ−ｖｉｔｒｏ放出を示すグラフである。
【図１１】本明細書において開示される種々のナノ粒子からのケトロラクのｉｎ−ｖｉｔｒｏ放出を示すグラフである。
【図１２】本明細書において開示される種々のナノ粒子からのケトロラクのｉｎ−ｖｉｔｒｏ放出を示すグラフである。
【図１３】本明細書において開示される種々のナノ粒子からのケトロラクのｉｎ−ｖｉｔｒｏ放出を示すグラフである。
【図１４】本明細書において開示される種々のナノ粒子からのロフェコキシブのｉｎ  ｖｉｔｒｏ放出を示すグラフである。
【図１５】本明細書において開示されるシクロデキストリンを用いた種々のナノ粒子からのロフェコキシブのｉｎ  ｖｉｔｒｏ放出および薬物添加量の影響を示すグラフである。
【図１６】ナノ沈殿に種々の溶媒を使用して調製した本明細書において開示される種々のナノ粒子からのセレコキシブのｉｎ  ｖｉｔｒｏ放出を示すグラフである。
【発明を実施するための形態】
【００４３】
本明細書では、酸性治療剤を含むポリマーナノ粒子、ならびにそのような治療用ナノ粒子を作製および使用する方法を記載する。一部の実施形態では、実質的に疎水性の塩基（例えば、プロトン化可能な含窒素疎水性化合物）を、開示されるナノ粒子に含める（すなわち、ドープする）および／またはナノ粒子調製プロセスに含めることで、薬物添加量が改善されたナノ粒子を得ることができる。さらに、ある特定の実施形態では、疎水性の塩基を含む、かつ／またはその存在下で調製されているナノ粒子は、改善された制御放出特性を示し得る。例えば、開示されるナノ粒子は、疎水性の塩基なしで調製されたナノ粒子に比べて、酸性治療剤をよりゆっくりと放出し得る。
【００４４】
理論に束縛されるものではないが、疎水性の塩基（例えば、プロトン化可能な含窒素疎水性化合物）を含む開示されるナノ粒子製剤は、例えばカルボン酸を有する酸性治療剤と、例えばプロトン化可能なアミンを有する疎水性の塩基間に疎水性イオン対（ＨＩＰ）が形成されることで、かなり改善された製剤特性（例えば、薬物添加量および／または放出プロファイル）を備えると考えられる。本明細書において使用する場合、ＨＩＰとは、クーロン引力によってまとまった、逆の電荷を帯びた一対のイオンである。ここでも理論に束縛されるものではないが、一部の実施形態では、ＨＩＰを使用して、イオン化可能な基（例えば、カルボン酸、含硫黄酸、および酸性アルコール）を含有する酸性治療剤の疎水性を増大させることができる。一部の実施形態では、疎水性が増大した酸性治療剤は、ナノ粒子製剤にとって有益となり、酸性治療剤の有機溶媒への溶解性をより高くし得るＨＩＰ形成をもたらす場合がある。本明細書で企図されるＨＩＰ形成によって、例えば、薬物添加量が増加しているナノ粒子を得ることができる。例えば一部の実施形態では、水溶液への治療剤の溶解性が低下するために、ナノ粒子からの治療剤の放出をより緩徐にすることもできる。さらに、治療剤を大きい疎水性対イオンと複合させることで、治療剤のポリマーマトリックス内での拡散を緩やかにすることもできる。有利なことに、ＨＩＰ形成は、疎水性基の治療剤への共有結合によるコンジュゲーションを必要とせずに起こる。
【００４５】
理論に束縛されるものではないが、ＨＩＰの強度は、企図されるナノ粒子の薬物添加量および放出速度に影響すると考えられる。例えば、ＨＩＰの強度は、以下でより詳細に論じるとおり、酸性治療剤のｐＫａと疎水性の塩基のｐＫａの差の大きさを広げることにより高めることができる。また、理論に束縛されるものではないが、イオン対形成の条件も、企図されるナノ粒子の薬物添加量および放出速度に影響すると考えられる。
【００４６】
本明細書において開示されているナノ粒子は、１種、２種、３種またはそれ超の生体適合性および／または生分解性ポリマーを含み得る。例えば、企図されるナノ粒子は、約３５〜約９９．７５重量パーセント、一部の実施形態では、約５０〜約９９．７５重量パーセント、一部の実施形態では、約５０〜約９９．５重量パーセント、一部の実施形態では、約５０〜約９９重量パーセント、一部の実施形態では、約５０〜約９８重量パーセント、一部の実施形態では、約５０〜約９７重量パーセント、一部の実施形態では、約５０〜約９６重量パーセント、一部の実施形態では、約５０〜約９５重量パーセント、一部の実施形態では、約５０〜約９４重量パーセント、一部の実施形態では、約５０〜約９３重量パーセント、一部の実施形態では、約５０〜約９２重量パーセント、一部の実施形態では、約５０〜約９１重量パーセント、一部の実施形態では、約５０〜約９０重量パーセント、一部の実施形態では、約５０〜約８５重量パーセント、および一部の実施形態では、約５０〜約８０重量パーセントの生分解性ポリマーおよびポリエチレングリコール（ＰＥＧ）を含む１種または複数のブロックコポリマー、ならびに約０〜約５０重量パーセントの生分解性ホモポリマーを含み得る。
【００４７】
開示されるナノ粒子は、酸性治療剤を含み得る。本明細書において使用する場合、「酸性治療剤」は、プロトンを供与することができる少なくとも１つの官能基を含有する薬学的に活性があるいずれかの薬剤を含む。酸性治療剤は、プロトンを供与することができる１つ、２つ、３つ、またはより多くの官能基を含有する場合がある。プロトンを供与することができる官能基の非限定的な例としては、カルボン酸基および含硫黄酸性基（例えば、スルフェン酸、スルフィン酸、スルホン酸、または硫酸）が挙げられる。一部の実施形態では、酸性治療剤は、約−３〜約７の間、一部の実施形態では、約１〜約５の間、一部の実施形態では、約−３〜約３の間、一部の実施形態では、約３〜約７の間のｐＫａを有する。
【００４８】
一部の実施形態では、開示されているナノ粒子は、約０．２〜約３５重量パーセント、約０．２〜約２０重量パーセント、約０．２〜約１０重量パーセント、約０．２〜約５重量パーセント、約０．５〜約５重量パーセント、約０．７５〜約５重量パーセント、約１〜約５重量パーセント、約２〜約５重量パーセント、約３〜約５重量パーセント、約１〜約２０重量パーセント、約２〜約２０重量パーセント、約５〜約２０重量パーセント、約１〜約１５重量パーセント、約２〜約１５重量パーセント、約３〜約１５重量パーセント、約４〜約１５重量パーセント、約５〜約１５重量パーセント、約１〜約１０重量パーセント、約２〜約１０重量パーセント、約３〜約１０重量パーセント、約４〜約１０重量パーセント、約５〜約１０重量パーセント、約１０〜約３０重量パーセント、または約１５〜約２５重量パーセントの酸性治療剤を含み得る。
【００４９】
ある特定の実施形態では、開示されるナノ粒子は、疎水性の塩基を含む、かつ／または疎水性の塩基を含む方法によって調製される。そのようなナノ粒子は、疎水性の塩基なしの方法によって調製されたナノ粒子より高い薬物添加量を備え得る。例えば、疎水性の塩基を含む方法によって調製された開示されるナノ粒子の（例えば重量による）薬物添加量は、疎水性の塩基なしの方法によって調製された開示されるナノ粒子より約２倍〜約１０倍高い、またはなおより高い場合もある。一部の実施形態では、疎水性の塩基を含む第１の方法によって調製された開示されるナノ粒子の（重量による）薬物添加量は、疎水性の塩基を含まないことを除き、第１の方法と同一である第２の方法によって調製された開示されるナノ粒子より少なくとも約２倍高い、少なくとも約３倍高い、少なくとも約４倍高い、少なくとも約５倍高い、または少なくとも約１０倍高い場合がある。
【００５０】
適切ないかなる疎水性の塩基（すなわち、疎水性イオン対形成添加剤）も企図される。ある特定の実施形態では、疎水性の塩基は、脂肪族部分（すなわち、疎水性部分）およびプロトン化可能な部分を有する場合がある。例えば、疎水性の塩基は、疎水性のアミンでよい。一部の実施形態では、疎水性の塩基は、薬物放出速度を減少させるのに特に有利となり得る。例えば、疎水性の塩基は、分子量が約５００ｇ／ｍｏｌ未満、約４００ｇ／ｍｏｌ未満、または３００ｇ／ｍｏｌ未満である薬物の薬物放出速度を減少させ得る。他の実施形態では、疎水性の塩基は、水への溶解度が少なくとも約５ｍｇ／ｍＬ、少なくとも約１０ｍｇ／ｍＬ、少なくとも約２０ｍｇ／ｍＬ、少なくとも約５０ｍｇ／ｍＬ、または少なくとも約１００ｍｇ／ｍＬである薬物などの水溶性薬物の薬物放出速度を減少させるのに特に有利となり得る。場合によって、疎水性の塩基の塩を製剤中に使用してもよい。
【００５１】
理論に束縛されるものではないが、ナノ粒子からの薬物放出が、主として、ポリマーの網状結合を介した拡散プロセスによって制御されるとき、薬物拡散には、薬物の分子量および流体力学的サイズという特徴が影響し得、したがって、薬物の見かけの流体力学的サイズおよび／または見かけの疎水性を増大させることによって、薬物（例えば酸性治療剤）の放出を遅くすることができると考えられる。再び理論に束縛されるものではないが、薬物を疎水性イオン対形成添加剤（すなわち、疎水性の塩基）と複合させることで、薬物の流体力学的サイズを増大させ、薬物を疎水性のより強い薬物のように挙動させることができると考えられる。
【００５２】
場合によって、疎水性の塩基の疎水性部分は、環式または非環式脂肪族基、環式または非環式ヘテロ脂肪族基、アリール基、ヘテロアリール基、およびこれらの組合せを含む場合もある。一部の実施形態では、疎水性部分は、少なくとも６個の炭素原子、少なくとも７個の炭素原子、少なくとも８個の炭素原子、少なくとも９個の炭素原子、少なくとも１０個の炭素原子、少なくとも１１個の炭素原子、少なくとも１２個の炭素原子、少なくとも１４個の炭素原子、少なくとも１６個の炭素原子、少なくとも１８個の炭素原子、少なくとも２０個の炭素原子、少なくとも２２個の炭素原子、または少なくとも２４個の炭素原子を含む場合がある。疎水性の塩基のプロトン化可能な部分は、酸性治療剤とイオン対複合体を形成することもできるいずれかの官能基でよい。例えば、プロトン化可能な部分は、それぞれ負電荷または陽電荷をなす基とイオン対を形成することができる陽電荷または負電荷をなす基を薬物上に含む場合がある。
【００５３】
プロトン化可能な含窒素官能基の非限定的な例としては、アミン（例えば、第一級、第二級、および第三級アミン）、イミン、含窒素ヘテロアリール塩基（例えば、ピリジン、イミダゾール、トリアゾール、テトラゾールなど）、ホスファゼン、ヒドラジン、およびグアニジンが挙げられる。
【００５４】
一例では、アミン基は、カルボン酸を含む薬物とイオン対複合体を形成することができる。つまり、アミン基は、プロトン化されてアンモニウム基となることができ、カルボン酸基は、脱プロトン化して、アンモニウム基と複合するカルボン酸イオンとなる。官能基の他の例としては、第一級アミン、第二級アミン、第三級アミン、第四級アミン、およびイミン（イミニウムイオンを形成し得る）が挙げられる。疎水性のアミンの非限定的な例としては、オクチルアミン、ドデシルアミン（ｐＫａ＝１０．２１、ｌｏｇＰ＝４．２５）、テトラデシルアミン、オレイルアミン、トリオクチルアミン、Ｎ−（フェニルメチル）ベンゼンエタンアミン（すなわち、ベネタミン）（ｐＫａ＝９．８８、ｌｏｇＰ＝３．５４）、Ｎ，Ｎ’−ジベンジルエチレンジアミン（すなわち、ベンザチン）（ｐＫａ１＝９．２４、ｐＫａ２＝６．３６、ｌｏｇＰ＝２．８９）、およびＮ−エチルジシクロヘキシルアミンが挙げられる。
【００５５】
ある特定の実施形態では、疎水性の塩基は、多価電解質でもよい。例えば、多価電解質は、ポリアミン（例えば、ポリエチレンイミン、ポリリシン、ポリアリルアミン、キトサンなど）またはポリピリジン（例えば、ポリ（２−ビニルピリジン）、ポリ（４−ビニルピリジン）など）である場合がある。
【００５６】
疎水性イオン対形成添加剤の他の例は、「Ｈａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｌｙ  Ａｃｃｅｐｔａｂｌｅ  Ｓａｌｔｓ」において見ることができる。
【００５７】
場合によって、企図される塩基は、分子量が約１０００Ｄａ未満、一部の実施形態では、約５００Ｄａ未満、一部の実施形態では、約４００Ｄａ未満、一部の実施形態では、約３００Ｄａ未満、一部の実施形態では、約２５０Ｄａ未満、一部の実施形態では、約２００Ｄａ未満、一部の実施形態では、約１５０Ｄａ未満である場合がある。場合によって、酸は、約１００Ｄａ〜約１０００Ｄａの間、一部の実施形態では、約２００Ｄａ〜約８００Ｄａの間、一部の実施形態では、約２００Ｄａ〜約６００Ｄａの間、一部の実施形態では、約１００Ｄａ〜約３００Ｄａの間、一部の実施形態では、約２００Ｄａ〜約４００Ｄａの間、一部の実施形態では、約３００Ｄａ〜約５００Ｄａの間、一部の実施形態では、約３００Ｄａ〜約１０００Ｄａの間の分子量を有することがある。ある特定の実施形態では、企図される酸は、分子量が、約３００Ｄａより大きい、一部の実施形態では、４００Ｄａより大きい、一部の実施形態では、５００Ｄａより大きい場合がある。ある特定の実施形態では、ナノ粒子からの治療剤の放出速度は、ナノ粒子製剤中に使用される疎水性の塩基の分子量を増大させることにより遅くすることができる。
【００５８】
一部の実施形態では、疎水性の塩基は、少なくとも部分的に、塩基の強度に基づいて選択することができる。例えば、プロトン化した疎水性の塩基は、２５℃で求められる水中での酸解離定数（ｐＫａ）が、約５〜約１４、一部の実施形態では、約６〜約１４、一部の実施形態では、約７〜約１４、一部の実施形態では、約８〜約１４、一部の実施形態では、約９〜約１４、一部の実施形態では、約１０〜約１４、一部の実施形態では、約１１〜約１４、一部の実施形態では、約５〜約７、一部の実施形態では、約６〜約８、一部の実施形態では、約７〜約９、一部の実施形態では、約８〜約１０、一部の実施形態では、約９〜約１１、一部の実施形態では、約１０〜約１２、一部の実施形態では、約１１〜約１３、一部の実施形態では、約１２〜約１４である場合がある。一部の実施形態では、プロトン化した塩基は、２５℃で求められるｐＫａが、約５より大きい、約７より大きい、約９より大きい、または約１１より大きい場合がある。
【００５９】
ある特定の実施形態では、疎水性の塩基は、少なくとも部分的に、プロトン化した形態の疎水性の塩基のｐＫａと酸性治療剤のｐＫａの差に基づいて選択することができる。例えば、一部の例において、２５℃で求められる、プロトン化した疎水性の塩基のｐＫａと酸性治療剤のｐＫａの差は、約１ｐＫａ単位〜約１５ｐＫａ単位の間、一部の実施形態では、約１ｐＫａ単位〜約１０ｐＫａ単位の間、一部の実施形態では、約１ｐＫａ単位〜約５ｐＫａ単位の間、一部の実施形態では、約１ｐＫａ単位〜約３ｐＫａ単位の間、一部の実施形態では、約１ｐＫａ単位〜約２ｐＫａ単位の間、一部の実施形態では、約２ｐＫａ単位〜約１５ｐＫａ単位の間、一部の実施形態では、約２ｐＫａ単位〜約１０ｐＫａ単位の間、一部の実施形態では、約２ｐＫａ単位〜約５ｐＫａ単位の間、一部の実施形態では、約２ｐＫａ単位〜約３ｐＫａ単位の間、一部の実施形態では、約３ｐＫａ単位〜約１５ｐＫａ単位の間、一部の実施形態では、約３ｐＫａ単位〜約１０ｐＫａ単位の間、一部の実施形態では、約３ｐＫａ単位〜約５ｐＫａ単位の間、一部の実施形態では、約４ｐＫａ単位〜約１５ｐＫａ単位の間、一部の実施形態では、約４ｐＫａ単位〜約１０ｐＫａ単位の間、一部の実施形態では、約４ｐＫａ単位〜約６ｐＫａ単位の間、一部の実施形態では、約５ｐＫａ単位〜約１５ｐＫａ単位の間、一部の実施形態では、約５ｐＫａ単位〜約１０ｐＫａ単位の間、一部の実施形態では、約５ｐＫａ単位〜約７ｐＫａ単位の間、一部の実施形態では、約７ｐＫａ単位〜約１５ｐＫａ単位の間、一部の実施形態では、約７ｐＫａ単位〜約９ｐＫａ単位の間、一部の実施形態では、約９ｐＫａ単位〜約１５ｐＫａ単位の間、一部の実施形態では、約９ｐＫａ単位〜約１１ｐＫａ単位の間、一部の実施形態では、約１１ｐＫａ単位〜約１３ｐＫａ単位の間、一部の実施形態では、約１３ｐＫａ単位〜約１５ｐＫａ単位の間である場合がある。
【００６０】
場合によって、２５℃で求められる、プロトン化した疎水性の塩基のｐＫａと酸性治療剤のｐＫａの差は、少なくとも約１ｐＫａ単位、一部の実施形態では、少なくとも約２ｐＫａ単位、一部の実施形態では、少なくとも約３ｐＫａ単位、一部の実施形態では、少なくとも約４ｐＫａ単位、一部の実施形態では、少なくとも約５ｐＫａ単位、一部の実施形態では、少なくとも約６ｐＫａ単位、一部の実施形態では、少なくとも約７ｐＫａ単位、一部の実施形態では、少なくとも約８ｐＫａ単位、一部の実施形態では、少なくとも約９ｐＫａ単位、一部の実施形態では、少なくとも約１０ｐＫａ単位、一部の実施形態では、少なくとも約１５ｐＫａ単位である場合がある。
【００６１】
一部の実施形態では、疎水性の塩基は、ｌｏｇＰが、約２〜約１５の間、一部の実施形態では、約５〜約１５の間、一部の実施形態では、約５〜約１０の間、一部の実施形態では、約２〜約８の間、一部の実施形態では、約４〜約８の間、一部の実施形態では、約２〜約７の間、または一部の実施形態では、約４〜約７の間となり得る。場合によって、疎水性の塩基は、約２を超える、約４を超える、約５を超える、または６を超えるｌｏｇＰを示し得る。
【００６２】
一部の実施形態では、企図される疎水性の塩基は、例えば、治療用ナノ粒子の特性を改善するのに有利である相転移温度を有する場合がある。例えば、塩基は、約３００℃未満、場合によって、約１００℃未満、場合によって、約５０℃未満、場合によって、約２５℃未満である融点を有することがある。ある特定の実施形態では、塩基は、約５℃〜約２５℃の間、場合によって、約１５℃〜約５０℃の間、場合によって、約３０℃〜約１００℃の間、場合によって、約７５℃〜約１５０℃の間、場合によって、約１２５℃〜約２００℃の間、場合によって、約１５０℃〜約２５０℃の間、場合によって、約２００℃〜約３００℃の間の融点を有することがある。場合によって、塩基は、約１５℃未満、場合によって、約１０℃未満、または場合によって、約０℃未満の融点を有することがある。ある特定の実施形態では、塩基は、約−３０℃〜約０℃の間、または場合によって、約−２０℃〜約−１０℃の間の融点を有することがある。
【００６３】
例えば、本明細書で開示される方法およびナノ粒子において使用する疎水性の塩基は、少なくとも部分的に、疎水性の塩基を含む溶媒への酸性治療剤の溶解度に基づいて選択することができる。例えば、一部の実施形態では、疎水性の塩基を含む溶媒に溶解した酸性治療剤は、約１５ｍｇ／ｍＬ〜約２００ｍｇ／ｍＬの間、約２０ｍｇ／ｍＬ〜約２００ｍｇ／ｍＬの間、約２５ｍｇ／ｍＬ〜約２００ｍｇ／ｍＬの間、約５０ｍｇ／ｍＬ〜約２００ｍｇ／ｍＬの間、約７５ｍｇ／ｍＬ〜約２００ｍｇ／ｍＬの間、約１００ｍｇ／ｍＬ〜約２００ｍｇ／ｍＬの間、約１２５ｍｇ／ｍＬ〜約１７５ｍｇ／ｍＬの間、約１５ｍｇ／ｍＬ〜約５０ｍｇ／ｍＬの間、約２５ｍｇ／ｍＬ〜約７５ｍｇ／ｍＬの間の溶解度を有する場合がある。一部の実施形態では、塩基を含む溶媒に溶解した酸性治療剤は、約１０ｍｇ／ｍＬを超える、約５０ｍｇ／ｍＬを超える、または約１００ｍｇ／ｍＬを超える溶解度を有する場合がある。一部の実施形態では、疎水性の塩基を含む溶媒に溶解した酸性治療剤（例えば、酸性治療剤と溶媒と疎水性の塩基とからなる第１の溶液）は、酸性治療剤が、疎水性の塩基を含有しない溶媒（例えば、酸性治療剤と溶媒とからなる第２の溶液）に溶解している場合の、少なくとも約２倍高い、一部の実施形態では、少なくとも約５倍高い、一部の実施形態では、少なくとも約１０倍高い、一部の実施形態では、少なくとも約２０倍高い、一部の実施形態では、約２倍〜約２０倍高い、または一部の実施形態では、約１０倍〜約２０倍高い溶解度を有する場合がある。
【００６４】
場合によって、薬剤溶液（すなわち酸性治療剤溶液）中の疎水性の塩基の濃度は、約１重量パーセント〜約３０重量パーセントの間、一部の実施形態では、約２重量パーセント〜約３０重量パーセントの間、一部の実施形態では、約３重量パーセント〜約３０重量パーセントの間、一部の実施形態では、約４重量パーセント〜約３０重量パーセントの間、一部の実施形態では、約５重量パーセント〜約３０重量パーセントの間、一部の実施形態では、約６重量パーセント〜約３０重量パーセントの間、一部の実施形態では、約８重量パーセント〜約３０重量パーセントの間、一部の実施形態では、約１０重量パーセント〜約３０重量パーセントの間、一部の実施形態では、約１２重量パーセント〜約３０重量パーセントの間、一部の実施形態では、約１４重量パーセント〜約３０重量パーセントの間、一部の実施形態では、約１６重量パーセント〜約３０重量パーセントの間、一部の実施形態では、約１重量パーセント〜約５重量パーセントの間、一部の実施形態では、約３重量パーセント〜約９重量パーセントの間、一部の実施形態では、約６重量パーセント〜約１２重量パーセントの間、一部の実施形態では、約９重量パーセント〜約１５重量パーセントの間、一部の実施形態では、約１２重量パーセント〜約１８重量パーセントの間、および一部の実施形態では、約１５重量パーセント〜約２１重量パーセントの間でよい。ある特定の実施形態では、薬剤溶液中の疎水性の塩基の濃度は、少なくとも約１重量パーセント、一部の実施形態では、少なくとも約２重量パーセント、一部の実施形態では、少なくとも約３重量パーセント、一部の実施形態では、少なくとも約５重量パーセント、一部の実施形態では、少なくとも約１０重量パーセント、一部の実施形態では、少なくとも約１５重量パーセント、および一部の実施形態では、少なくとも約２０重量パーセントでよい。
【００６５】
ある特定の実施形態では、疎水性の塩基の酸性治療剤に対する（例えば、ナノ粒子を製剤化する際の初期、および／またはナノ粒子中の）モル比は、約０．２５：１〜約６：１の間、一部の実施形態では、約０．２５：１〜約５：１の間、一部の実施形態では、約０．２５：１〜約４：１の間、一部の実施形態では、約０．２５：１〜約３：１の間、一部の実施形態では、約０．２５：１〜約２：１の間、一部の実施形態では、約０．２５：１〜約１．５：１の間、一部の実施形態では、約０．２５：１〜約１：１の間、一部の実施形態では、約０．２５：１〜約０．５：１の間、一部の実施形態では、約０．５：１〜約６：１の間、一部の実施形態では、約０．５：１〜約５：１の間、一部の実施形態では、約０．５：１〜約４：１の間、一部の実施形態では、約０．５：１〜約３：１の間、一部の実施形態では、約０．５：１〜約２：１の間、一部の実施形態では、約０．５：１〜約１．５：１の間、一部の実施形態では、約０．５：１〜約１：１の間、一部の実施形態では、約０．５：１〜約０．７５：１の間、一部の実施形態では、約０．７５：１〜約２：１の間、一部の実施形態では、約０．７５：１〜約１．５：１の間、一部の実施形態では、約０．７５：１〜約１．２５：１の間、一部の実施形態では、約０．７５：１〜約１：１の間、一部の実施形態では、約１：１〜約６：１の間、一部の実施形態では、約１：１〜約５：１の間、一部の実施形態では、約１：１〜約４：１の間、一部の実施形態では、約１：１〜約３：１の間、一部の実施形態では、約１：１〜約２：１の間、一部の実施形態では、約１：１〜約１．５：１の間、一部の実施形態では、約１．５：１〜約６：１の間、一部の実施形態では、約１．５：１〜約５：１の間、一部の実施形態では、約１．５：１〜約４：１の間、一部の実施形態では、約１．５：１〜約３：１の間、一部の実施形態では、約２：１〜約６：１の間、一部の実施形態では、約２：１〜約４：１の間、一部の実施形態では、約３：１〜約６：１の間、一部の実施形態では、約３：１〜約５：１の間、一部の実施形態では、約４：１〜約６：１の間でよい。
【００６６】
場合によって、疎水性の塩基の酸性治療剤に対する初期のモル比（すなわち、ナノ粒子を形成する際）は、ナノ粒子中での、疎水性の塩基の酸性治療剤に対するモル比（すなわち、カプセル化されていない疎水性の塩基および酸性治療剤を除去した後）と異なることもある。他の例では、疎水性の塩基の酸性治療剤に対する初期のモル比（すなわち、ナノ粒子を形成する際）は、ナノ粒子中での、疎水性の塩基の酸性治療剤に対するモル比（すなわち、カプセル化されていない疎水性の塩基および酸性治療剤を除去した後）と本質的に同じであることもある。
【００６７】
場合によって、酸性治療剤を含有する溶液は、ポリマーを含有する溶液と別々に調製してもよく、次いで、２種の溶液を、ナノ粒子の製剤化前に合わせてもよい。例えば、一実施形態では、第１の溶液が、酸性治療剤および疎水性の塩基を含有し、第２の溶液が、ポリマーおよび場合により疎水性の塩基を含有する。第２の溶液が疎水性の塩基を含有しない製剤は、例えば、プロセスにおける疎水性の塩基の使用量を最小限にする、または一部の場合では、疎水性の塩基と、例えば、疎水性の塩基の存在下で分解し得るポリマーとの接触時間を最小限にするのに有利となり得る。他の場合では、酸性治療剤、ポリマーおよび塩基を含有する単一溶液を調製することもある。
【００６８】
一部の実施形態では、疎水性イオン対を、ナノ粒子の製剤化前に形成させてよい。例えば、（例えば、適切な量の酸性治療剤およびの塩基を含有する溶液を調製することによって、）疎水性イオン対を含有する溶液を、企図されるナノ粒子を製剤化する前に調製することができる。他の実施形態では、ナノ粒子を製剤化する間に疎水性イオン対を形成させてもよい。例えば、ナノ粒子を調製するプロセスステップの間（例えば、エマルジョン形成より前および／またはエマルジョン形成中）に、酸性治療剤薬を含有する第１の溶液と、疎水性の塩基を含有する第２の溶液とを合わせることができる。ある特定の実施形態では、酸性治療剤および疎水性の塩基が企図されるナノ粒子にカプセル化される前に、疎水性イオン対を形成させてもよい。他の実施形態では、例えば、酸性治療剤および疎水性の塩基がカプセル化された後に、ナノ粒子中で疎水性イオン対を形成させてもよい。
【００６９】
ある特定の実施形態では、疎水性の塩基は、２５℃で求められる溶解度が、水１００ｍＬあたり約２ｇ未満、一部の実施形態では、水１００ｍＬあたり約１ｇ未満、一部の実施形態では、水１００ｍＬあたり約１００ｍｇ未満、一部の実施形態では、水１００ｍＬあたり約１０ｍｇ未満、および一部の実施形態では、水１００ｍＬあたり約１ｍｇ未満となり得る。他の実施形態では、疎水性の塩基は、２５℃で求められる溶解度が、水１００ｍＬあたり約１ｍｇ〜水１００ｍＬあたり約２ｇの間、一部の実施形態では、水１００ｍＬあたり約１ｍｇ〜水１００ｍＬあたり約１ｇの間、一部の実施形態では、水１００ｍＬあたり約１ｍｇ〜水１００ｍＬあたり約５００ｍｇの間、および一部の実施形態では、水１００ｍＬあたり約１ｍｇ〜水１００ｍＬあたり約１００ｍｇの間となり得る。一部の実施形態では、疎水性の塩基は、２５℃において水に本質的に不溶性でよい。
【００７０】
一部の実施形態では、開示されるナノ粒子は、ナノ粒子を調製する際に、疎水性の塩基が本質的に使用されていなくてもよい。他の実施形態では、開示されるナノ粒子は疎水性の塩基を含んでもよい。例えば、一部の実施形態では、疎水性の塩基の、開示されるナノ粒子中の含有量は、約０．０５重量パーセント〜約３０重量パーセントの間、一部の実施形態では、約０．５重量パーセント〜約３０重量パーセントの間、一部の実施形態では、約１重量パーセント〜約３０重量パーセントの間、一部の実施形態では、約２重量パーセント〜約３０重量パーセントの間、一部の実施形態では、約３重量パーセント〜約３０重量パーセントの間、一部の実施形態では、約５重量パーセント〜約３０重量パーセントの間、一部の実施形態では、約７重量パーセント〜約３０重量パーセントの間、一部の実施形態では、約１０重量パーセント〜約３０重量パーセントの間、一部の実施形態では、約１５重量パーセント〜約３０重量パーセントの間、一部の実施形態では、約２０重量パーセント〜約３０重量パーセントの間、一部の実施形態では、約０．０５重量パーセント〜約０．５重量パーセントの間、一部の実施形態では、約０．０５重量パーセント〜約５重量パーセントの間、一部の実施形態では、約１重量パーセント〜約５重量パーセントの間、一部の実施形態では、約３重量パーセント〜約１０重量パーセントの間、一部の実施形態では、約５重量パーセント〜約１５重量パーセントの間、一部の実施形態では、約１０重量パーセント〜約２０重量パーセントの間でよい。
【００７１】
一部の実施形態では、開示されるナノ粒子は、例えば、室温（例えば２５℃）および／または３７℃のリン酸緩衝溶液に入れたとき、（例えば、約１分〜約３０分、約１分〜約２５分、約５分〜約３０分、約５分〜約１時間、約１時間、または約２４時間かけて、）約２％未満、約５％未満、約１０％未満、約１５％未満、約２０％未満、約２５％未満、約３０％未満、もしくは４０％未満の酸性治療剤しか実質的に直ちに放出しない。ある特定の実施形態では、酸性治療剤を含むナノ粒子は、例えば２５℃および／または３７℃の水溶液（例えばリン酸緩衝溶液）に入れたとき、酸性治療剤の約０．０１〜約５０％、一部の実施形態では約０．０１〜約２５％、一部の実施形態では約０．０１〜約１５％、一部の実施形態では約０．０１〜約１０％、一部の実施形態では約１〜約４０％、一部の実施形態では約５〜約４０％、および一部の実施形態では約１０〜約４０％が約１時間かけて放出されるのに実質的に相当する速度で、酸性治療剤を放出し得る。一部の実施形態では、酸性治療剤を含むナノ粒子は、水溶液（例えば、リン酸緩衝溶液）中に、例えば、２５℃にて、および／または３７℃にて置かれたとき、酸性治療剤の約１０〜約７０％、一部の実施形態では、約１０〜約４５％、一部の実施形態では、約１０〜約３５％、または一部の実施形態では、約１０〜約２５％が約４時間にわたり放出されることに実質的に対応する速度で、酸性治療剤を放出し得る。
【００７２】
一部の実施形態では、開示されているナノ粒子は、リン酸緩衝溶液中に３７℃にて置かれたとき、酸性治療剤を、例えば、少なくとも約１分間、少なくとも約１時間、またはそれ超の間実質的に保持し得る。
【００７３】
一実施形態では、開示されている治療用ナノ粒子は、標的化リガンド、例えば、低分子量リガンドを含み得る。ある特定の実施形態では、低分子量リガンドはポリマーにコンジュゲートしており、ナノ粒子は、特定の比のリガンドがコンジュゲートしたポリマー（例えば、ＰＬＡ−ＰＥＧ−リガンド）および非官能化ポリマー（例えば、ＰＬＡ−ＰＥＧまたはＰＬＧＡ−ＰＥＧ）を含む。有効量のリガンドが、疾患または障害、例えば、がんの処置のためのナノ粒子と会合するように、ナノ粒子は、最適化された比のこれらの２種のポリマーを有することができる。例えば、リガンド密度の増加は、標的結合（細胞結合／標的取込み）を増加させ、ナノ粒子を「標的特異的」とし得る。代わりに、ナノ粒子における非官能化ポリマー（例えば、非官能化ＰＬＧＡ−ＰＥＧコポリマー）のある特定の濃度は、炎症および／または免疫原性（すなわち、免疫応答を誘発する能力）を制御し、かつナノ粒子が、疾患または障害の処置のために適した循環半減期を有することを可能とする。さらに、非官能化ポリマーは、一部の実施形態では、細網内皮系（ＲＥＳ）を介した循環器系からのクリアランスの速度を低下し得る。このように、非官能化ポリマーは、投与によって粒子が体内を移動することを可能とし得る特徴を有するナノ粒子を提供し得る。一部の実施形態では、非官能化ポリマーは、それ以外の場合では高濃度になってしまうリガンドを相殺することができる。リガンドが高濃度であったなら、対象によるクリアランスが加速され、標的細胞への送達が低下してしまっていた可能性がある。
【００７４】
一部の実施形態では、本明細書において開示されているナノ粒子は、ナノ粒子の全ポリマー組成物（すなわち、官能化＋非官能化ポリマー）の概ね０．１〜５０モルパーセント、例えば、０．１〜３０モルパーセント、例えば、０．１〜２０モルパーセント、例えば、０．１〜１０モルパーセントを構成する、リガンドにコンジュゲートした官能化ポリマーを含み得る。別の実施形態では、１種または複数の低分子量リガンドとコンジュゲート（すなわち、共有結合（例えば、リンカー（例えば、アルキレンリンカー）を介した）または結合）したポリマーを含むナノ粒子が本明細書においてまた開示され、総ポリマーに対する低分子量リガンドの重量パーセントは、約０．００１〜５、例えば、約０．００１〜２、例えば、約０．００１〜１である。
【００７５】
一部の実施形態では、開示されているナノ粒子は、生物学的実体、例えば、特定の膜成分もしくは細胞表面受容体と効率的に結合するか、そうでなければ会合することができる場合がある。（例えば、特定の組織もしくは細胞型への、正常組織ではなく特定の患部組織などへの）治療剤の標的化は、組織特異的疾患、例えば、固形腫瘍がん（例えば、前立腺がん）の処置のために望ましい。例えば、細胞毒性抗がん剤の全身的送達と対照的に、本明細書において開示されているナノ粒子は、この薬剤が健康な細胞を死滅させることを実質的に防止し得る。さらに、開示されているナノ粒子は、（開示されているナノ粒子または製剤を伴わずに投与された有効量の薬剤と比較して）薬剤のより低い用量の投与を可能としてもよく、これは伝統的な化学療法と一般に関連する望ましくない副作用を低減し得る。
【００７６】
一般に、「ナノ粒子」は、１０００ｎｍ未満、例えば、約１０ｎｍ〜約２００ｎｍの直径を有する任意の粒子を指す。開示されている治療用ナノ粒子は、約６０〜約１２０ｎｍ、または約７０〜約１２０ｎｍ、または約８０〜約１２０ｎｍ、または約９０〜約１２０ｎｍ、または約１００〜約１２０ｎｍ、または約６０〜約１３０ｎｍ、または約７０〜約１３０ｎｍ、または約８０〜約１３０ｎｍ、または約９０〜約１３０ｎｍ、または約１００〜約１３０ｎｍ、または約１１０〜約１３０ｎｍ、または約６０〜約１４０ｎｍ、または約７０〜約１４０ｎｍ、または約８０〜約１４０ｎｍ、または約９０〜約１４０ｎｍ、または約１００〜約１４０ｎｍ、または約１１０〜約１４０ｎｍ、または約６０〜約１５０ｎｍ、または約７０〜約１５０ｎｍ、または約８０〜約１５０ｎｍ、または約９０〜約１５０ｎｍ、または約１００〜約１５０ｎｍ、または約１１０〜約１５０ｎｍ、または約１２０〜約１５０ｎｍの直径を有するナノ粒子を含み得る。
【００７７】
ポリマー
一部の実施形態では、ナノ粒子は、ポリマーのマトリックスおよび治療剤を含んでいてもよい。一部の実施形態では、治療剤および／または標的化部分（すなわち、低分子量リガンド）は、ポリマーマトリックスの少なくとも一部と会合させることができる。例えば、一部の実施形態では、標的化部分（例えば、リガンド）は、ポリマーマトリックスの表面と共有結合的に会合させることができる。一部の実施形態では、共有結合的会合は、リンカーによって媒介される。治療剤は、ポリマーマトリックスの表面と会合するか、ポリマーマトリックス内にカプセル化されるか、ポリマーマトリックスによって囲まれるか、かつ／またはポリマーマトリックスにわたって分散し得る。
【００７８】
多種多様のポリマーおよびそこから粒子を形成する方法は、薬物送達の当技術分野において公知である。一部の実施形態では、本開示は、少なくとも２つの巨大分子を有するナノ粒子を対象とし、第１の巨大分子は、低分子量リガンド（例えば、標的化部分）に結合した第１のポリマーを含み、第２の巨大分子は、標的化部分に結合していない第２のポリマーを含む。ナノ粒子は、１種または複数のさらなる非官能化ポリマーを場合により含むことができる。
【００７９】
任意の適切なポリマーを、開示されているナノ粒子において使用することができる。ポリマーは、天然または非天然（合成）のポリマーでよい。ポリマーは、２種またはそれ超のモノマーを含むホモポリマーまたはコポリマーでよい。配列に関して、コポリマーは、ランダム、ブロックでよいか、またはランダムおよびブロック配列の組合せを含むことができる。典型的には、ポリマーは、有機ポリマーである。
【００８０】
用語「ポリマー」は、本明細書において使用する場合、当技術分野で使用されるようなその通常の意味を与えられ、すなわち、分子構造は、共有結合によって連結した１つまたは複数の繰り返し単位（モノマー）を含む。繰り返し単位は、全て同一であり得るか、または場合によって、ポリマー内に存在する２種以上のタイプの繰り返し単位があり得る。場合によって、ポリマーは、生物学的に由来するもの、すなわち、生体ポリマーでよい。非限定的例には、ペプチドまたはタンパク質が含まれる。場合によって、さらなる部分、例えば、生物学的部分、例えば、下記に記載したものがまた、ポリマー中に存在し得る。２種以上のタイプの繰り返し単位がポリマー内に存在する場合、ポリマーは、「コポリマー」と言われる。ポリマーを用いる任意の実施形態では、用いられるポリマーは、場合によって、コポリマーであり得ることを理解すべきである。コポリマーを形成する繰り返し単位は、任意の様式で配置し得る。例えば、繰り返し単位は、ランダムな順序で、交互の順序で、またはブロックコポリマーとして配置してもよく、すなわち、それぞれが第１の繰り返し単位（例えば、第１のブロック）を含む１つまたは複数の領域、およびそれぞれが第２の繰り返し単位（例えば、第２のブロック）を含む１つまたは複数の領域などを含む。ブロックコポリマーは、２つ（ジブロックコポリマー）、３つ（トリブロックコポリマー）、またはそれ超の数の別個のブロックを有し得る。
【００８１】
開示されている粒子は、コポリマーを含むことができ、これは一部の実施形態では、通常、２種またはそれ超のポリマーが一緒の共有結合によって互いに会合している、２種またはそれ超のポリマー（例えば、本明細書に記載されているもの）を説明する。このように、コポリマーは、第１のポリマーおよび第２のポリマーを含んでいてもよく、これらは一緒にコンジュゲートされて、ブロックコポリマーを形成し、第１のポリマーは、ブロックコポリマーの第１のブロックでよく、第２のポリマーは、ブロックコポリマーの第２のブロックでよい。当然ながら、ブロックコポリマーは、場合によって、ポリマーの複数のブロックを含有してもよく、「ブロックコポリマー」は、本明細書において使用する場合、単一の第１のブロックおよび単一の第２のブロックのみを有するブロックコポリマーのみに限定されないことを当業者は理解する。例えば、ブロックコポリマーは、第１のポリマーを含む第１のブロック、第２のポリマーを含む第２のブロック、および第３のポリマーまたは第１のポリマーなどを含む第３のブロックを含み得る。場合によって、ブロックコポリマーは、任意の数の第１のポリマーの第１のブロック、および第２のポリマーの第２のブロック（およびある特定の場合では、第３のブロック、第４のブロックなど）を含有することができる。さらに、ブロックコポリマーはまた、場合によって、他のブロックコポリマーから形成することができることに留意すべきである。例えば、第１のブロックコポリマーは、別のポリマー（ホモポリマー、生体ポリマー、別のブロックコポリマーなどでよい）にコンジュゲートして複数のタイプのブロックを含有する新規なブロックコポリマーを形成し、かつ／または他の部分（例えば、非ポリマー部分）にコンジュゲートし得る。
【００８２】
一部の実施形態では、ポリマー（例えば、コポリマー、例えば、ブロックコポリマー）は、両親媒性でよく、すなわち、親水性部分および疎水性部分、または相対的に親水性部分および相対的に疎水性部分を有する。親水性ポリマーは、一般に水を引きつけるものでよく、疎水性ポリマーは、一般に水をはねかえすものでよい。親水性または疎水性ポリマーは、例えば、ポリマーの試料を調製し、水とのその接触角を測定する（典型的には、ポリマーは、６０°未満の接触角を有し、一方、疎水性ポリマーは、約６０°超の接触角を有する）ことによって同定することができる。場合によって、２種またはそれ超のポリマーの親水性は、互いに対して測定してもよく、すなわち、第１のポリマーは、第２のポリマーより親水性であり得る。例えば、第１のポリマーは、第２のポリマーより小さな接触角を有し得る。
【００８３】
一組の実施形態では、本明細書において企図されるポリマー（例えば、コポリマー、例えば、ブロックコポリマー）は、生体適合性ポリマー、すなわち、典型的には、生きている対象中に挿入または注射されたとき、例えば、Ｔ細胞応答によるかなりの炎症および／または免疫系によるポリマーの急性拒絶を伴わずに有害な応答を惹起しないポリマーを含む。したがって、本明細書において企図される治療用粒子は、非免疫原性であり得る。「非免疫原性」という用語は、本明細書において使用する場合、循環抗体、Ｔ細胞、もしくは反応性免疫細胞を通常引き起こさないか、または最小レベルのみを引き起こし、個体においてそれ自体に対する免疫応答を通常引き起こさない、その天然状態における内在性成長因子を指す。
【００８４】
生体適合性は典型的には、免疫系の少なくとも一部による材料の急性拒絶を指し、すなわち、対象中に植え込んだ非生体適合性材料が、対象において十分に重大であり得る免疫応答を誘発し、免疫系による材料の拒絶は、適当に制御することができず、材料を対象から除去しなくてはならないような程度であることが多い。生体適合性を決定するための１つの単純な試験は、ポリマーを細胞へとｉｎ  ｖｉｔｒｏで曝露させることでよい。生体適合性ポリマーは、典型的には中程度の濃度で、例えば、５０マイクログラム／１０６個の細胞の濃度でかなりの細胞死をもたらさないポリマーである。例えば、生体適合性ポリマーは、細胞、例えば、線維芽細胞または上皮細胞に曝露したとき、たとえこのような細胞によって貪食されるか、そうでなければ取り込まれるかしても、約２０％未満の細胞死をもたらし得る。様々な実施形態において有用であり得る生体適合性ポリマーの非限定的例には、ポリジオキサノン（ＰＤＯ）、ポリヒドロキシアルカノエート、ポリヒドロキシブチレート、ポリ（グリセロールセバシン酸）、ポリグリコリド（すなわち、ポリ（グリコール）酸）（ＰＧＡ）、ポリラクチド（すなわち、ポリ（乳）酸）（ＰＬＡ）、ポリ（乳）酸−ｃｏ−ポリ（グリコール）酸（ＰＬＧＡ）、ポリカプロラクトン、またはこれらおよび／もしくは他のポリマーを含めたコポリマーまたは誘導体が含まれる。
【００８５】
ある特定の実施形態では、企図される生体適合性ポリマーは、生分解性でよく、すなわち、ポリマーは、生理学的環境内、例えば、体内で、化学的および／または生物学的に分解することができる。本明細書において使用する場合、「生分解性」ポリマーは、細胞中に導入されるとき、細胞の機構によって（生物学的に分解可能）、および／または化学プロセス、例えば、加水分解によって（化学的に分解可能）、細胞に対してかなりの毒性効果を伴わずに細胞が再使用または処分することができる成分へと分解されるものである。一実施形態では、生分解性ポリマーおよびこれらの分解副生成物は、生体適合性であり得る。
【００８６】
本明細書において開示されている粒子は、ＰＥＧを含有してもよいか、またはしなくてもよい。さらに、ある特定の実施形態は、ポリ（エステル−エーテル）を含有するコポリマー、例えば、エステル結合（例えば、Ｒ−Ｃ（Ｏ）−Ｏ−Ｒ’結合）およびエーテル結合（例えば、Ｒ−Ｏ−Ｒ’結合）によって結合した繰り返し単位を有するポリマーを対象とすることができる。一部の実施形態では、生分解性ポリマー、例えば、カルボン酸基を含有する加水分解性ポリマーは、ポリ（エチレングリコール）繰り返し単位とコンジュゲートして、ポリ（エステル−エーテル）を形成し得る。ポリ（エチレングリコール）繰り返し単位を含有するポリマー（例えば、コポリマー、例えば、ブロックコポリマー）はまた、「ペグ化」ポリマーと称することができる。
【００８７】
例えば、企図されるポリマーは、（例えば、対象内で）水への曝露によって自発的に加水分解するものでよいか、またはポリマーは、（例えば、約３７℃の温度での）熱への曝露によって分解し得る。ポリマーの分解は、使用するポリマーまたはコポリマーによって様々な速度で起こり得る。例えば、ポリマーの半減期（ポリマーの５０％がモノマーおよび／または他の非ポリマー部分に分解することができる時間）は、ポリマーによって数日、数週間、数カ月、または数年程度であり得る。ポリマーは、例えば、酵素活性または細胞の機構によって、場合によって、例えば、リゾチーム（例えば、相対的に低ｐＨを有する）への曝露によって、生物学的に分解し得る。場合によって、ポリマーは、細胞に対して有意な毒性効果を伴わずに、細胞が再使用するか、または処分することができる、モノマーおよび／または他の非ポリマー部分に分解し得る（例えば、ポリラクチドは加水分解して、乳酸を形成し得、ポリグリコリドは加水分解して、グリコール酸などを形成し得る）。
【００８８】
一部の実施形態では、ポリマーは、本明細書において「ＰＬＧＡ」と集団的に称される、乳酸およびグリコール酸単位を含むコポリマー、例えば、ポリ（乳酸−ｃｏ−グリコール酸）およびポリ（ラクチド−ｃｏ−グリコリド）；ならびに本明細書において「ＰＧＡ」と称される、グリコール酸単位、ならびに本明細書において「ＰＬＡ」と集団的に称される、乳酸単位、例えば、ポリ−Ｌ−乳酸、ポリ−Ｄ−乳酸、ポリ−Ｄ，Ｌ−乳酸、ポリ−Ｌ−ラクチド、ポリ−Ｄ−ラクチド、およびポリ−Ｄ，Ｌ−ラクチドを含むホモポリマーを含めた、ポリエステルであり得る。一部の実施形態では、例示的なポリエステルには、例えば、ポリヒドロキシ酸；ラクチドおよびグリコリドのペグ化ポリマーおよびコポリマー（例えば、ペグ化ＰＬＡ、ペグ化ＰＧＡ、ペグ化ＰＬＧＡ、およびその誘導体）が含まれる。一部の実施形態では、ポリエステルは、例えば、ポリ無水物、ポリ（オルトエステル）、ペグ化ポリ（オルトエステル）、ポリ（カプロラクトン）、ペグ化ポリ（カプロラクトン）、ポリリシン、ペグ化ポリリシン、ポリ（エチレンイミン）、ペグ化ポリ（エチレンイミン）、ポリ（Ｌ−ラクチド−ｃｏ−Ｌ−リシン）、ポリ（セリンエステル）、ポリ（４−ヒドロキシ−Ｌ−プロリンエステル）、ポリ［α−（４−アミノブチル）−Ｌ−グリコール酸］、およびその誘導体を含む。
【００８９】
一部の実施形態では、ポリマーは、ＰＬＧＡであり得る。ＰＬＧＡは、乳酸およびグリコール酸の生体適合性および生分解性コポリマーであり、様々な形態のＰＬＧＡは、乳酸：グリコール酸の比によって特性決定することができる。乳酸は、Ｌ−乳酸、Ｄ−乳酸、またはＤ，Ｌ−乳酸でよい。ＰＬＧＡの分解速度は、乳酸−グリコール酸の比を変化させることによって調節することができる。一部の実施形態では、ＰＬＧＡは、概ね８５：１５、概ね７５：２５、概ね６０：４０、概ね５０：５０、概ね４０：６０、概ね２５：７５、または概ね１５：８５の乳酸：グリコール酸比によって特性決定することができる。
【００９０】
一部の実施形態では、粒子のポリマー（例えば、ＰＬＧＡブロックコポリマーまたはＰＬＧＡ−ＰＥＧブロックコポリマー）中の乳酸のグリコール酸モノマーに対する比を選択して、様々なパラメータ、例えば、水の取込み、治療剤の放出および／またはポリマー分解の反応速度について最適化し得る。
【００９１】
一部の実施形態では、ポリマーは、１種または複数のアクリルポリマーであり得る。ある特定の実施形態では、アクリルポリマーは、例えば、アクリル酸およびメタクリル酸コポリマー、メタクリル酸メチルコポリマー、メタクリル酸エトキシエチル、メタクリル酸シアノエチル、メタクリル酸アミノアルキルコポリマー、ポリ（アクリル酸）、ポリ（メタクリル酸）、メタクリル酸アルキルアミドコポリマー、ポリ（メタクリル酸メチル）、ポリ（メタクリル酸）、ポリアクリルアミド、メタクリル酸アミノアルキルコポリマー、メタクリル酸グリシジルコポリマー、ポリシアノアクリレート、および上記のポリマーの１つまたは複数を含む組合せを含む。アクリルポリマーは、低含量の第四級アンモニウム基を有するアクリル酸およびメタクリル酸エステルの完全に重合されたコポリマーを含み得る。
【００９２】
一部の実施形態では、ポリマーは、カチオン性ポリマーでよい。一般に、カチオン性ポリマーは、負に帯電している核酸鎖（例えば、ＤＮＡ、ＲＮＡ、またはその誘導体）を凝縮および／または保護することができる。アミン含有ポリマー、例えば、ポリ（リシン）、ポリエチレンイミン（ＰＥＩ）、およびポリ（アミドアミン）デンドリマーは、一部の実施形態では、開示されている粒子における使用のために企図される。
【００９３】
一部の実施形態では、ポリマーは、カチオン性側鎖を担持する分解性ポリエステルでよい。これらのポリエステルの例には、ポリ（Ｌ−ラクチド−ｃｏ−Ｌ−リシン）、ポリ（セリンエステル）、およびポリ（４−ヒドロキシ−Ｌ−プロリンエステル）が含まれる。
【００９４】
例えば、ＰＥＧがリガンドにコンジュゲートしていないとき、ＰＥＧは、終端しており、末端基を含んでいてもよいことが企図されている。例えば、ＰＥＧは、ヒドロキシル、メトキシもしくは他のアルコキシル基、メチルもしくは他のアルキル基、アリール基、カルボン酸、アミン、アミド、アセチル基、グアニジノ基、またはイミダゾールで終端し得る。他の企図される末端基には、アジド、アルキン、マレイミド、アルデヒド、ヒドラジド、ヒドロキシルアミン、アルコキシアミン、またはチオール部分が含まれる。
【００９５】
当業者は、例えば、開環重合技術（ＲＯＭＰ）などによって、ポリマーをアミンで終端しているＰＥＧ基に反応させるＥＤＣ（１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド塩酸塩）およびＮＨＳ（Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド）を使用することによって、ポリマーをペグ化するための方法および技術について知っている。
【００９６】
一実施形態では、ポリマーの分子量（または、例えば、コポリマーの異なるブロックの分子量の比）は、本明細書に開示されている有効な処置のために最適化することができる。例えば、ポリマーの分子量は、粒子分解速度（例えば、生分解性ポリマーの分子量を調節することができるとき）、溶解度、水の取込み、および薬物放出動態に影響を与えてもよい。例えば、ポリマーの分子量（または、例えば、コポリマーの異なるブロックの分子量の比）は、粒子が合理的な期間（数時間から１〜２週間、３〜４週間、５〜６週間、７〜８週間などの範囲）内で、処置される対象において生分解するように調節することができる。
【００９７】
開示されている粒子は、例えば、ＰＥＧおよびＰＬ（Ｇ）Ａのジブロックコポリマーを含むことができ、例えば、ＰＥＧ部分は、約１，０００〜２０，０００、例えば、約２，０００〜２０，０００、例えば、約２〜約１０，０００の数平均分子量を有してもよく、ＰＬ（Ｇ）Ａ部分は、約５，０００〜約２０，０００、または約５，０００〜１００，０００、例えば、約２０，０００〜７０，０００、例えば、約１５，０００〜５０，０００の数平均分子量を有してもよい。
【００９８】
例えば、約１０〜約９９重量パーセントのポリ（乳）酸−ポリ（エチレン）グリコールコポリマーまたはポリ（乳）酸−ｃｏ−ポリ（グリコール）酸−ポリ（エチレン）グリコールコポリマー、または約２０〜約８０重量パーセント、約４０〜約８０重量パーセント、もしくは約３０〜約５０重量パーセント、もしくは約７０〜約９０重量パーセントのポリ（乳）酸−ポリ（エチレン）グリコールコポリマーまたはポリ（乳）酸−ｃｏ−ポリ（グリコール）酸−ポリ（エチレン）グリコールコポリマーを含む例示的な治療用ナノ粒子が本明細書において開示される。例示的なポリ（乳）酸−ポリ（エチレン）グリコールコポリマーは、約１５〜約２０ｋＤａ、または約１０〜約２５ｋＤａの数平均分子量のポリ（乳）酸および約４〜約６ｋＤａ、または約２〜約１０ｋＤａの数平均分子量のポリ（エチレン）グリコールを含むことができる。
【００９９】
一部の実施形態では、ポリ（乳）酸−ポリ（エチレン）グリコールコポリマーは、約０．６〜約０．９５、一部の実施形態では、約０．７〜約０．９、一部の実施形態では、約０．６〜約０．８、一部の実施形態では、約０．７〜約０．８、一部の実施形態では、約０．７５〜約０．８５、一部の実施形態では、約０．８〜約０．９、および一部の実施形態では、約０．８５〜約０．９５の数平均分子量比率のポリ（乳）酸を有し得る。ポリ（乳）酸の数平均分子量比率は、コポリマーのポリ（乳）酸成分の数平均分子量を、ポリ（乳）酸成分の数平均分子量およびポリ（エチレン）グリコール成分の数平均分子量の合計で除することによって計算し得ることを理解すべきである。
【０１００】
開示されているナノ粒子は、約１〜約５０重量パーセントのポリ（乳）酸またはポリ（乳）酸−ｃｏ−ポリ（グリコール）酸（ＰＥＧを含まない）を場合により含んでいてもよいか、または約１〜約５０重量パーセント、もしくは約１０〜約５０重量パーセントもしくは約３０〜約５０重量パーセントのポリ（乳）酸もしくはポリ（乳）酸−ｃｏ−ポリ（グリコール）酸を場合により含んでいてもよい。例えば、ポリ（乳）酸またはポリ（乳）酸−ｃｏ−ポリ（グリコール）酸は、約５〜約１５ｋＤａ、または約５〜約１２ｋＤａの数平均分子量を有し得る。例示的なＰＬＡは、約５〜約１０ｋＤａの数平均分子量を有し得る。例示的なＰＬＧＡは、約８〜約１２ｋＤａの数平均分子量を有し得る。
【０１０１】
治療用ナノ粒子は、一部の実施形態では、約１０〜約３０重量パーセント、一部の実施形態では、約１０〜約２５重量パーセント、一部の実施形態では、約１０〜約２０重量パーセント、一部の実施形態では、約１０〜約１５重量パーセント、一部の実施形態では、約１５〜約２０重量パーセント、一部の実施形態では、約１５〜約２５重量パーセント、一部の実施形態では、約２０〜約２５重量パーセント、一部の実施形態では、約２０〜約３０重量パーセント、または一部の実施形態では、約２５〜約３０重量パーセントのポリ（エチレン）グリコールを含有してもよく、ポリ（エチレン）グリコールは、ポリ（乳）酸−ポリ（エチレン）グリコールコポリマー、ポリ（乳）酸−ｃｏ−ポリ（グリコール）酸−ポリ（エチレン）グリコールコポリマー、またはポリ（エチレン）グリコールホモポリマーとして存在し得る。ある特定の実施形態では、ナノ粒子のポリマーは、脂質にコンジュゲートすることができる。ポリマーは、例えば、脂質末端ＰＥＧでよい。
【０１０２】
標的化部分
一部の実施形態では、任意選択の標的化部分、すなわち、生物学的実体、例えば、膜成分、細胞表面受容体、抗原などに結合するか、そうでなければ会合することができる部分を含み得るナノ粒子が本明細書において提供される。粒子の表面上に存在する標的化部分は、粒子が特定の標的化部位、例えば、腫瘍、疾患部位、組織、器官、細胞のタイプなどにおいて局在化することを可能とし得る。したがって、ナノ粒子は、「標的特異的」であり得る。次いで、薬物または他のペイロードは、場合によって、粒子から放出され、特定の標的化部位と局所的に相互作用することを可能とし得る。
【０１０３】
一実施形態では、開示されているナノ粒子は、低分子量リガンドである標的化部分を含む。用語「結合」または「結合すること」は、本明細書において使用する場合、典型的には、これらに限定されないが、生化学的、生理的、および／または化学的相互作用を含めた特異的または非特異的な結合または相互作用による、相互親和性または結合能力を示す、対応する分子の対またはその部分の間の相互作用を指す。「生物学的結合」は、タンパク質、核酸、糖タンパク質、炭水化物、ホルモンなどを含めた分子の対の間に起こる相互作用のタイプを定義する。用語「結合パートナー」は、特定の分子と結合することができる分子を指す。「特異的結合」は、他の同様の生物学的実体に対してより実質的により高い程度まで結合パートナー（または限定された数の結合パートナー）に結合するか、認識することができる分子、例えば、ポリヌクレオチドを指す。一組の実施形態では、標的化部分は、約１マイクロモル未満、少なくとも約１０マイクロモル、または少なくとも約１００マイクロモルの親和性（解離定数によって測定すると）を有する。
【０１０４】
例えば、標的化部は、粒子が、使用する標的化部分によって、対象の体内の腫瘍（例えば、固形腫瘍）、疾患の部位、組織、器官、あるタイプの細胞などへと局在化することをもたらし得る。例えば、低分子量リガンドは、固形腫瘍、例えば、乳房腫瘍もしくは前立腺腫瘍またはがん細胞に局在化し得る。対象は、ヒトまたはヒトではない動物であり得る。対象の例には、これらに限定されないが、哺乳動物、例えば、イヌ、ネコ、ウマ、ロバ、ウサギ、ウシ、ブタ、ヒツジ、ヤギ、ラット、マウス、モルモット、ハムスター、霊長類、ヒトなどが含まれる。
【０１０５】
企図される標的化部分は、低分子を含み得る。ある特定の実施形態では、用語「低分子」は、天然に生じたか、または人工的に創出した（例えば、化学合成による）、相対的に低分子量を有し、かつタンパク質、ポリペプチド、または核酸でない有機化合物を指す。低分子は典型的には、複数の炭素−炭素結合を有する。ある特定の実施形態では、低分子は、サイズが約２０００ｇ／ｍｏｌ未満である。一部の実施形態では、低分子は、約１５００ｇ／ｍｏｌ未満または約１０００ｇ／ｍｏｌ未満である。一部の実施形態では、低分子は、約８００ｇ／ｍｏｌ未満または約５００ｇ／ｍｏｌ未満、例えば、約１００ｇ／ｍｏｌ〜約６００ｇ／ｍｏｌ、または約２００ｇ／ｍｏｌ〜約５００ｇ／ｍｏｌである。
【０１０６】
一部の実施形態では、低分子量リガンドは、式Ｉ、ＩＩ、ＩＩＩまたはＩＶのもの：
【０１０７】
【化１】
2018533574.tif 000003
およびエナンチオマー、立体異性体、回転異性体、互変異性体、ジアステレオマー、またはそのラセミ化合物であり、
式中、ｍおよびｎは、それぞれ独立に、０、１、２または３であり、ｐは、０または１であり、
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ４、およびＲ５は、それぞれ独立に、置換もしくは非置換アルキル（例えば、Ｃ１〜１０−アルキル、Ｃ１〜６−アルキル、またはＣ１〜４−アルキル）、置換もしくは非置換アリール（例えば、フェニルまたはピリジニル）、および任意のこれらの組合せからなる群から選択され、Ｒ３は、ＨまたはＣ１〜６−アルキル（例えば、ＣＨ３）である。
【０１０８】
式Ｉ、ＩＩ、ＩＩＩおよびＩＶの化合物について、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ４またはＲ５は、ナノ粒子への結合点、例えば、開示されているナノ粒子の一部を形成するポリマー、例えば、ＰＥＧへの結合点を含む。結合点は、共有結合、イオン結合、水素結合、化学的吸着および物理的吸着を含めた吸着によって形成される結合、ファンデルワールス結合によって形成される結合、または分散力によって形成し得る。例えば、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ４、またはＲ５が、アニリンまたはＣ１〜６−アルキル−ＮＨ２基と定義されている場合、これらの官能基の任意の水素（例えば、アミノ水素）は、除去することができ、低分子量リガンドが、ナノ粒子のポリマーマトリックス（例えば、ポリマーマトリックスのＰＥＧ−ブロック）に共有結合している。本明細書において使用する場合、用語「共有結合」は、少なくとも一対の電子を共有することによって形成される２個の原子の間の結合を指す。
【０１０９】
式Ｉ、ＩＩ、ＩＩＩまたはＩＶの特定の実施形態では、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ４、およびＲ５は、それぞれ独立に、Ｃ１〜６−アルキルもしくはフェニル、またはＣ１〜６−アルキルもしくはフェニルの任意の組合せであり、これらはＯＨ、ＳＨ、ＮＨ２、またはＣＯ２Ｈで１回または複数回独立に置換されており、アルキル基は、Ｎ（Ｈ）、Ｓ、またはＯによって中断し得る。別の実施形態では、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ４、およびＲ５は、それぞれ独立に、ＣＨ２−Ｐｈ、（ＣＨ２）２−ＳＨ、ＣＨ２−ＳＨ、（ＣＨ２）２Ｃ（Ｈ）（ＮＨ２）ＣＯ２Ｈ、ＣＨ２Ｃ（Ｈ）（ＮＨ２）ＣＯ２Ｈ、ＣＨ（ＮＨ２）ＣＨ２ＣＯ２Ｈ、（ＣＨ２）２Ｃ（Ｈ）（ＳＨ）ＣＯ２Ｈ、ＣＨ２−Ｎ（Ｈ）−Ｐｈ、Ｏ−ＣＨ２−Ｐｈ、またはＯ−（ＣＨ２）２−Ｐｈであり、各Ｐｈは、独立に、ＯＨ、ＮＨ２、ＣＯ２Ｈ、またはＳＨで１回または複数回置換し得る。これらの式について、ＮＨ２、ＯＨまたはＳＨ基は、ナノ粒子（例えば、−Ｎ（Ｈ）−ＰＥＧ、−Ｏ−ＰＥＧ、または−Ｓ−ＰＥＧ）への共有結合点としての役割を果たす。
【０１１０】
例示的なリガンドは、
【０１１１】
【化２】
2018533574.tif 000004
およびエナンチオマー、立体異性体、回転異性体、互変異性体、ジアステレオマー、またはそのラセミ化合物を含み、式中、ＮＨ２、ＯＨ、またはＳＨ基は、ナノ粒子（例えば、−Ｎ（Ｈ）−ＰＥＧ、−Ｏ−ＰＥＧ、もしくは−Ｓ−ＰＥＧ）への共有結合点としての役割を果たすか、または
【０１１２】
【化３】
2018533574.tif 000005
は、ナノ粒子への結合点を示し、式中、ｎは、１、２、３、４、５、または６であり、Ｒは、ＮＨ２、ＳＨ、ＯＨ、もしくはＣＯ２Ｈで置換されているＮＨ２、ＳＨ、ＯＨ、ＣＯ２Ｈ、Ｃ１〜６−アルキル、およびＮＨ２、ＳＨ、ＯＨ、もしくはＣＯ２Ｈで置換されているフェニルからなる群から独立に選択され、Ｒは、ナノ粒子（例えば、−Ｎ（Ｈ）−ＰＥＧ、−Ｓ−ＰＥＧ、−Ｏ−ＰＥＧ、またはＣＯ２−ＰＥＧ）への共有結合点としての役割を果たす。これらの化合物は、ＮＨ２、ＳＨ、ＯＨ、もしくはＣＯ２Ｈで置換されているＮＨ２、ＳＨ、ＯＨ、ＣＯ２Ｈ、Ｃ１〜６−アルキル、またはＮＨ２、ＳＨ、ＯＨ、もしくはＣＯ２Ｈで置換されているフェニルでさらに置換されていてもよく、これらの官能基はまた、ナノ粒子への共有結合点としての役割を果たすことができる。
【０１１３】
一部の実施形態では、固形腫瘍、例えば、前立腺または乳がん腫瘍と関連する細胞を標的とするために使用し得る低分子標的化部分は、ＰＳＭＡペプチダーゼ阻害剤、例えば、２−ＰＭＰＡ、ＧＰＩ５２３２、ＶＡ−０３３、フェニルアルキルホスホンアミデートならびに／またはその類似体および誘導体を含む。一部の実施形態では、前立腺がん腫瘍と関連する細胞を標的とするために使用し得る低分子標的化部分は、チオールおよびインドールチオール誘導体、例えば、２−ＭＰＰＡおよび３−（２−メルカプトエチル）−１Ｈ−インドール−２−カルボン酸誘導体を含む。一部の実施形態では、前立腺がん腫瘍と関連する細胞を標的とするために使用し得る低分子標的化部分は、ヒドロキサメート誘導体を含む。一部の実施形態では、前立腺がん腫瘍と関連する細胞を標的とするために使用し得る低分子標的化部分は、ＰＢＤＡおよび尿素をベースとする阻害剤、例えば、ＺＪ４３、ＺＪ１１、ＺＪ１７、ＺＪ３８ならびに／またはその類似体および誘導体、アンドロゲン受容体標的化剤（ＡＲＴＡ）、ポリアミン、例えば、プトレシン、スペルミン、およびスペルミジン、ならびにＮＡＡＧペプチダーゼまたはＮＡＡＬＡＤアーゼとしてもまた公知である酵素グルタミン酸カルボキシラーゼＩＩ（ＧＣＰＩＩ）の阻害剤を含む。
【０１１４】
別の実施形態では、標的化部分は、Ｈｅｒ２、ＥＧＦＲ、葉酸受容体、またはｔｏｌｌ受容体を標的とするリガンドでよい。別の実施形態では、標的化部分は、ホレート、葉酸、またはＥＧＦＲ結合分子である。
【０１１５】
例えば、企図される標的化部分は、核酸、ポリペプチド、糖タンパク質、炭水化物、または脂質を含み得る。例えば、標的化部分は、細胞型特異的マーカーに結合する核酸標的化部分（例えば、アプタマー、例えば、Ａ１０アプタマー）でよい。一般に、アプタマーは、特定の標的、例えば、ポリペプチドに結合するオリゴヌクレオチド（例えば、ＤＮＡ、ＲＮＡ、またはその類似体もしくは誘導体）である。一部の実施形態では、標的化部分は、細胞表面受容体のための天然または合成リガンド、例えば、成長因子、ホルモン、ＬＤＬ、トランスフェリンなどでよい。標的化部分は抗体でよく、この用語は抗体フラグメントを含むものとする。単鎖標的化部分などの抗体の特徴的部分は、例えば、手順、例えば、ファージディスプレイを使用して同定することができる。
【０１１６】
標的化部分は、約５０残基までの長さを有する標的化ペプチドまたは標的化ペプチド模倣物であり得る。例えば、標的化部分は、アミノ酸配列ＡＫＥＲＣ、ＣＲＥＫＡ、ＡＲＹＬＱＫＬＮ、またはＡＸＹＬＺＺＬＮを有してもよく、ＸおよびＺは、可変のアミノ酸、またはその保存的バリアントもしくはペプチド模倣物である。特定の実施形態では、標的化部分は、アミノ酸配列ＡＫＥＲＣ、ＣＲＥＫＡ、ＡＲＹＬＱＫＬＮ、またはＡＸＹＬＺＺＬＮを含むペプチドであり、ＸおよびＺは、可変のアミノ酸であり、２０個未満、５０個未満または１００個未満の残基の長さを有する。ＣＲＥＫＡ（Ｃｙｓ  Ａｒｇ  Ｇｌｕ  Ｌｙｓ  Ａｌａ）ペプチドもしくはそのペプチド模倣物、またはオクタペプチドＡＸＹＬＺＺＬＮはまた、コラーゲンＩＶに結合するか、もしくはコラーゲンＩＶと複合体を形成するか、または組織基底膜（例えば、血管の基底膜）を標的とする、標的化部分、およびペプチド、またはその保存的バリアントもしくはペプチド模倣物として企図される。例示的な標的化部分は、ＩＣＡＭ（細胞間接着分子、例えば、ＩＣＡＭ−１）を標的とするペプチドを含む。
【０１１７】
本明細書において開示されている標的化部分は、一部の実施形態では、開示されているポリマーまたはコポリマー（例えば、ＰＬＡ−ＰＥＧ）にコンジュゲートすることができ、このようなポリマーコンジュゲートは、開示されているナノ粒子の一部を形成し得る。一部の実施形態では、治療用ナノ粒子は、ポリマー−薬物コンジュゲートを含み得る。例えば、薬物は、開示されているポリマーまたはコポリマー（例えば、ＰＬＡ−ＰＥＧ）にコンジュゲートしていてもよく、このようなポリマー−薬物コンジュゲートは、開示されているナノ粒子の一部を形成し得る。例えば、開示されている治療用ナノ粒子は、約０．２〜約３０重量パーセントのＰＬＡ−ＰＥＧまたはＰＬＧＡ−ＰＥＧを場合により含んでいてもよく、ＰＥＧは、薬物（例えば、ＰＬＡ−ＰＥＧ−薬物）で官能化されている。
【０１１８】
開示されているポリマーコンジュゲート（例えば、ポリマー−リガンドコンジュゲート）は、任意の適切なコンジュゲーション技術を使用して形成し得る。例えば、２種の化合物、例えば、標的化部分または薬物および生体適合性ポリマー（例えば、生体適合性ポリマーおよびポリ（エチレングリコール））は、ＥＤＣ−ＮＨＳ化学反応（１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド塩酸塩およびＮ−ヒドロキシスクシンイミド）などの技術、またはチオール、アミン、または同様に官能化されたポリエーテルの１つの末端にコンジュゲートすることができるマレイミドもしくはカルボン酸が関与する反応を使用して一緒にコンジュゲートし得る。ポリマー−標的化部分コンジュゲートまたはポリマー−薬物コンジュゲートを形成させる標的化部分または薬物およびポリマーのコンジュゲーションは、これらに限定されないが、ジクロロメタン、アセトニトリル、クロロホルム、ジメチルホルムアミド、テトラヒドロフラン、アセトンなどなどの有機溶媒中で行うことができる。特定の反応条件は、単に通例の実験法を使用して当業者が決定することができる。別の組の実施形態では、コンジュゲーション反応は、カルボン酸官能基（例えば、ポリ（エステル−エーテル）化合物）を含むポリマーと、アミンを含むポリマーまたは他の部分（例えば、標的化部分または薬物）とを反応させることによって行い得る。例えば、標的化部分、例えば、低分子量リガンド、または薬物、例えば、ダサチニブは、アミンと反応して、アミン含有部分を形成してもよく、これは次いで、ポリマーのカルボン酸にコンジュゲートすることができる。このような反応は、単一ステップの反応として起こり得、すなわち、コンジュゲーションは、中間体、例えば、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドまたはマレイミドを使用することなく行われる。一部の実施形態では、薬物は、アミン含有リンカーと反応して、アミン含有薬物を形成してもよく、次いで、これは上記のようなポリマーのカルボン酸にコンジュゲートすることができる。アミン含有部分およびカルボン酸末端ポリマー（例えば、ポリ（エステル−エーテル）化合物）の間のコンジュゲーション反応は、一組の実施形態では、（これらに限定されないが）ジクロロメタン、アセトニトリル、クロロホルム、テトラヒドロフラン、アセトン、ホルムアミド、ジメチルホルムアミド、ピリジン、ジオキサン、またはジメチルスルホキシドなどの有機溶媒に可溶化したアミン含有部分を、カルボン酸末端ポリマーを含有する溶液に加えることによって達成し得る。カルボン酸末端ポリマーは、これらに限定されないが、ジクロロメタン、アセトニトリル、クロロホルム、ジメチルホルムアミド、テトラヒドロフラン、またはアセトンなどの有機溶媒中に含有し得る。アミン含有部分およびカルボン酸末端ポリマーの間の反応は、場合によって、自発的に起こり得る。コンジュゲートしていない反応物は、このような反応の後に洗い流してもよく、ポリマーは、溶媒、例えば、エチルエーテル、ヘキサン、メタノール、またはエタノール中で沈殿し得る。ある特定の実施形態では、コンジュゲートは、ポリマーのアルコール含有部分およびカルボン酸官能基の間に形成してもよく、これはアミンおよびカルボン酸のコンジュゲートについて上で記載したのと同様に達成することができる。
【０１１９】
ナノ粒子の調製
本開示の別の態様は、開示されているナノ粒子を作製する系および方法を対象とする。異なる比の２種またはそれ超の異なるポリマー（例えば、コポリマー、例えば、ブロックコポリマー）を使用し、かつポリマー（例えば、コポリマー、例えば、ブロックコポリマー）から粒子を生成する一部の実施形態では、粒子の特性は制御される。例えば、１種のポリマー（例えば、コポリマー、例えば、ブロックコポリマー）は、低分子量リガンドを含んでいてもよく、一方、別のポリマー（例えば、コポリマー、例えば、ブロックコポリマー）は、その生体適合性および／または生成した粒子の免疫原性を制御するその能力のために選択し得る。
【０１２０】
一部の実施形態では、ナノ粒子調製プロセス（例えば、以下で論じるとおりのナノ沈殿プロセスまたはナノエマルジョンプロセス）において使用する溶媒は、プロセスを使用して調製されたナノ粒子に有利な特性を付与し得る、疎水性の塩基を含んでいてもよい。上で論じたとおり、場合によって、疎水性の塩基は、開示されるナノ粒子の薬物添加量を改善し得る。さらに、場合によって、開示されるナノ粒子の制御放出特性も、疎水性の塩基の使用によって改善し得る。疎水性の塩基は、場合によって、例えば、プロセスにおいて使用する有機溶液または水溶液中に含まれていてもよい。一実施形態では、薬物が、有機溶液および疎水性の塩基、ならびに１種または複数のポリマーと任意選択により合わせられる。薬物を溶解させるのに使用する溶液中の疎水性の塩基の濃度は、上で論じており、例えば、約１重量パーセント〜約３０重量パーセントの間などでよい。
【０１２１】
一組の実施形態では、１種または複数のポリマーを含む溶液を提供し、この溶液をポリマー非溶媒と接触させ、粒子を生成させることによって、粒子が形成される。溶液は、ポリマー非溶媒と混和性または不混和性であり得る。例えば、水混和性液体、例えば、アセトニトリルは、ポリマーを含有してもよく、例えば、アセトニトリルを水中に制御された速度で注ぐことによって、アセトニトリルが水、ポリマー非溶媒と接触すると、粒子が形成される。溶液内に含有されるポリマーは、ポリマー非溶媒との接触によって、沈殿し、粒子、例えば、ナノ粒子を形成し得る。２種の液体は、周囲温度および周囲圧力で、一方が他方中で少なくとも１０重量％のレベルまで可溶性でないとき、互いに「不混和性」または混和性でないと言われる。典型的には、有機溶液（例えば、ジクロロメタン、アセトニトリル、クロロホルム、テトラヒドロフラン、アセトン、ホルムアミド、ジメチルホルムアミド、ピリジン、ジオキサン、ジメチルスルホキシドなど）および水性液体（例えば、水、または溶解した塩もしくは他の種を含有する水、細胞もしくは生体媒体、エタノールなど）は、互いに関して不混和性である。例えば、第１の溶液を、第２の溶液中に注いでもよい（適切な速度またはスピードで）。場合によって、例えば、第１の溶液が、不混和性の第２の液体に接触するにつれ、粒子、例えば、ナノ粒子が形成し得、例えば、接触によるポリマーの沈殿は、第１の溶液が第２の液体中に注がれる間、ポリマーがナノ粒子の形成をもたらし、場合によって、例えば、導入の速度が相対的に遅い速度で注意深く制御および維持されるとき、ナノ粒子を形成し得る。このような粒子形成の制御は、通例の実験法のみを使用して当業者が容易に最適化することができる。
【０１２２】
表面機能性、表面電荷、サイズ、ゼータ（ζ）電位、疎水性、免疫原性を制御する能力などの特性は、開示されているプロセスを使用して高度に制御し得る。例えば、粒子のライブラリーを合成、およびスクリーニングして、粒子が、粒子の表面上に存在する特定の密度の部分（例えば、低分子量リガンド）を有することを可能とする、特定の比のポリマーを有する粒子を同定し得る。これによって、過度の程度の労力を伴わずに、１つまたは複数の特定の特性、例えば、特定のサイズおよび特定の表面密度の部分を有する粒子を調製することを可能とする。したがって、ある特定の実施形態は、このようなライブラリーを使用したスクリーニング技術、およびこのようなライブラリーを使用して同定された任意の粒子を対象とする。さらに、同定は、任意の適切な方法によって行い得る。例えば、同定は直接的もしくは間接的でよいか、または定量的にもしくは定性的に進行し得る。
【０１２３】
一部の実施形態では、既に形成されたナノ粒子は、リガンド−官能化ポリマーコンジュゲートを生成するために記載されたものと類似の手順を使用して、標的化部分で官能化される。例えば、第１のコポリマー（ＰＬＧＡ−ＰＥＧ、ポリ（ラクチド−ｃｏ−グリコリド）およびポリ（エチレングリコール））を酸性治療剤と混合して、粒子を形成させる。次いで、粒子を低分子量リガンドと会合させて、がんの処置のために使用することができるナノ粒子を形成させる。粒子は、ナノ粒子のリガンド表面密度を制御し、それによってナノ粒子の治療の特徴を変化させるために、様々な量の低分子量リガンドと会合させることができる。さらに、例えば、パラメータ、例えば、分子量、ＰＥＧの分子量、およびナノ粒子の表面電荷を制御することによって、非常に正確に制御された粒子を得てもよい。
【０１２４】
別の実施形態では、ナノエマルジョンプロセス、例えば、図１、２Ａ、および２Ｂにおいて表すプロセスを提供する。例えば、酸性治療剤、疎水性の塩基、第１のポリマー（例えば、どちらもリガンドに場合により結合し得るＰＬＡ−ＰＥＧまたはＰＬＧＡ−ＰＥＧなどのジブロックコポリマー）、および任意選択の第２のポリマー（例えば、（ＰＬ（Ｇ）Ａ−ＰＥＧまたはＰＬＡ）を、有機溶液と合わせて、第１の有機相を形成することができる。このような第１の相は、約１〜約５０重量％の固体、約５〜約５０重量％の固体、約５〜約４０重量％の固体、約１〜約１５重量％の固体、または約１０〜約３０重量％の固体を含み得る。第１の有機相は、第１の水溶液と合わせて、第２の相を形成し得る。有機溶液は、例えば、トルエン、メチルエチルケトン、アセトニトリル、テトラヒドロフラン、酢酸エチル、イソプロピルアルコール、酢酸イソプロピル、ジメチルホルムアミド、塩化メチレン、ジクロロメタン、クロロホルム、アセトン、ベンジルアルコール、Ｔｗｅｅｎ８０、Ｓｐａｎ８０など、およびこれらの組合せを含むことができる。ある実施形態では、有機相は、ベンジルアルコール、酢酸エチル、およびこれらの組合せを含み得る。第２の相は、約０．１〜５０重量％、約１〜５０重量％、約５〜４０重量％、または約１〜１５重量％の固体でよい。水溶液は、コール酸ナトリウム、酢酸エチル、ポリ酢酸ビニルおよびベンジルアルコールの１つまたは複数と組み合わせてもよい水であり得る。一部の実施形態では、水相のｐＨは、酸性治療剤のｐＫａおよび／または疎水性の塩基のｐＫａに基づいて選択することができる。例えば、ある特定の実施形態では、酸性治療剤は、第１のｐＫａを有する場合があり、疎水性の塩基は、プロトン化されているとき、第２のｐＫａを有する場合があり、水相は、第１のｐＫａと第２のｐＫａとの間のｐＫａ単位に等しいｐＨを有する場合がある。特定の実施形態では、水相のｐＨは、第１のｐＫａおよび第２のｐＫａの間の約等距離であるｐＫａ単位と等しくてもよい。
【０１２５】
例えば、油または有機相は、非溶媒（水）と部分的にのみ混和性である溶媒を使用し得る。したがって、十分に低い比で混合したとき、および／または有機溶媒で事前飽和された水を使用するとき、油相は液体のままである。例えば、高エネルギー分散システム、例えば、ホモジナイザーまたはソニケーターを使用して、油相を、水溶液に乳化し、液滴として、ナノ粒子に剪断し得る。エマルジョンの水性部分は、場合によっては「水相」としても公知であるが、これはコール酸ナトリウムからなり、酢酸エチルおよびベンジルアルコールで事前飽和されている界面活性剤溶液でよい。他の実施形態では、酸性治療剤と、実質的に疎水性の塩基の両方を、有機相に溶解させることができる。
【０１２６】
第２の相を乳化して、例えば、１つまたは２つの乳化ステップにおいてエマルジョン相を形成することを行い得る。例えば、一次エマルジョンを調製し、次いで、乳化して、微細エマルジョンを形成し得る。例えば、単純な混合、高圧ホモジナイザー、プローブソニケーター、撹拌棒、またはローターステーターホモジナイザーを使用して、一次エマルジョンを形成することができる。例えば、プローブソニケーターまたは高圧ホモジナイザーの使用によって、例えば、ホモジナイザーを通す１、２、３、またはそれ超のパスを使用することによって、一次エマルジョンを微細エマルジョンに形成し得る。例えば、高圧ホモジナイザーが使用されるとき、使用される圧力は、約３０〜約６０ｐｓｉ、約４０〜約５０ｐｓｉ、約１０００〜約８０００ｐｓｉ、約２０００〜約４０００ｐｓｉ、約４０００〜約８０００ｐｓｉ、または約４０００〜約５０００ｐｓｉ、例えば、約２０００、２５００、４０００または５０００ｐｓｉであり得る。
【０１２７】
場合によって、エマルジョンにおける液滴の表面対体積比が非常に高いことを特徴とし得る微細エマルジョン条件を選択して、酸性治療剤および疎水性の塩基の溶解度を最大にし、所望のＨＩＰを形成させてもよい。ある特定の実施形態では、微細エマルジョン条件下で、溶解した成分の平衡が、非常に迅速に、すなわち、ナノ粒子の凝固より急速に起こり得る。したがって、ＨＩＰを、例えば、酸性治療剤と疎水性の塩基との間のｐＫａ差に基づいて選択する、または微細エマルジョンのｐＨおよび／またはクエンチ溶液のｐＨなどの他のパラメータを調節することで、例えば、ナノ粒子の外では酸性治療剤および／または疎水性の塩基が拡散するのとは対照的に、ナノ粒子中ではＨＩＰの形成が決定づけられることにより、ナノ粒子の薬物添加量および放出特性に有意な影響を及ぼすことができる。
【０１２８】
一部の実施形態では、酸性治療剤と実質的に疎水性の塩基は、第２の相を乳化する前に、第２の相において合わせることができる。場合によって、第２の相を乳化する前に、酸性治療剤と実質的に疎水性の塩基が、疎水性イオン対を形成することもある。他の実施形態では、酸性治療剤と実質的に疎水性の塩基は、第２の相を乳化している間に、疎水性イオン対を形成し得る。例えば、酸性治療剤と実質的に疎水性の塩基は、第２の相を乳化するのと実質的に同時に、第２の相において合わせることができ、例えば、酸性治療剤と実質的に疎水性の塩基を、別個の溶液（例えば、２種の実質的に不混和性の溶液）に溶解させ、次いでこれを、乳化の際に合わせることができる。別の例では、酸性治療剤と実質的に疎水性の塩基を、別個の不混和性の溶液に溶解させ、次いでこれを、乳化の際に、第２の相に送ることができる。
【０１２９】
溶媒の抽出を完了し、粒子を凝固するために、溶媒蒸発または希釈を必要とし得る。抽出の反応速度およびよりスケーラブルなプロセスのより良好な制御のために、水性クエンチによる溶媒希釈を使用し得る。例えば、エマルジョンは、有機溶媒の全てを溶解するのに十分な濃度まで冷水に希釈して、クエンチされた相を形成することができる。一部の実施形態では、クエンチを約５℃またはそれ未満の温度で少なくとも部分的に行い得る。例えば、クエンチにおいて使用される水は、室温未満（例えば、約０〜約１０℃、または約０〜約５℃）である温度であり得る。ある特定の実施形態では、エマルジョン相をクエンチするのに有利なｐＨを有するクエンチは、例えば、ナノ粒子の特性、例えば、放出プロファイルを改善するか、またはナノ粒子のパラメータ、例えば、薬物添加量を改善することによって選択し得る。クエンチのｐＨは、例えば、酸もしくは塩基滴定によって、または緩衝液の適当な選択によって調節し得る。一部の実施形態では、クエンチのｐＨは、酸性治療剤のｐＫａおよび／またはプロトン化した疎水性の塩基のｐＫａに基づいて選択することができる。例えば、ある特定の実施形態では、酸性治療剤は、第１のｐＫａを有する場合があり、疎水性の塩基は、プロトン化されているとき、第２のｐＫａを有する場合があり、エマルジョン相は、第１のｐＫａと第２のｐＫａとの間のｐＫａ単位に等しいｐＨを有する水溶液でクエンチすることができる。一部の実施形態では、得られるクエンチされた相も、第１のｐＫａおよび第２のｐＫａとの間のｐＫａ単位と等しいｐＨを有することがある。特定の実施形態では、ｐＨは、第１のｐＫａと第２のｐＫａとの間の約等距離にあるｐＫａ単位と等しい場合もある。
【０１３０】
ある特定の実施形態では、乳化の間または後に、例えば、微細エマルジョンにおける平衡条件の結果として、ＨＩＰ形成が生じる場合がある。理論に束縛されるものではないが、有機物に可溶性の対イオン（すなわち、疎水性の塩基）は、ＨＩＰ形成の結果として、親水性治療剤の、エマルジョンのナノ粒子への拡散を促進し得ると考えられる。理論に束縛されるものではないが、ＨＩＰのナノ粒子への溶解度は、ＨＩＰの、エマルジョンおよび／またはクエンチの水相への溶解度より高いため、ＨＩＰは、ナノ粒子が凝固する前に、ナノ粒子中にとどまることができる。例えば、クエンチするのに、酸性治療剤のｐＫａと疎水性の塩基のｐＫａとの間にあるｐＨを選択することにより、イオン酸性治療剤と疎水性の塩基の形成を最適化することができる。しかし、高すぎるｐＨを選択すると、酸性治療剤をナノ粒子の外に拡散させる結果につながりかねず、一方、低すぎるｐＨを選択すると、疎水性の塩基をナノ粒子の外に拡散させる結果につながりかねない。
【０１３１】
一部の実施形態では、ナノ粒子形成プロセスにおいて使用する水溶液（例えば、限定はしないが、水相、エマルジョン相、クエンチ、およびクエンチされた相を含める）のｐＨは、独立に選択することができ、約１〜約３の間、一部の実施形態では、約２〜約４の間、一部の実施形態では、約３〜約５の間、一部の実施形態では、約４〜約６の間、一部の実施形態では、約５〜約７の間、一部の実施形態では、約６〜約８の間、一部の実施形態では、約７〜約９の間、および一部の実施形態では、約８〜約１０の間でよい。ある特定の実施形態では、ナノ粒子形成プロセスにおいて使用する水溶液のｐＨは、約３〜約４の間、一部の実施形態では、約４〜約５の間、一部の実施形態では、約５〜約６の間、一部の実施形態では、約６〜約７の間、一部の実施形態では、約７〜約８の間、一部の実施形態では、約８〜約９の間でよい。
【０１３２】
一部の実施形態では、この段階において酸性治療剤の全ては粒子中にカプセル化されておらず、薬物可溶化剤をクエンチされた相に加え、可溶化した相を形成させる。薬物可溶化剤は、例えば、Ｔｗｅｅｎ８０、Ｔｗｅｅｎ２０、ポリビニルピロリドン、シクロデキストラン、ドデシル硫酸ナトリウム、コール酸ナトリウム、ジエチルニトロサミン、酢酸ナトリウム、尿素、グリセリン、プロピレングリコール、グリコフロール、ポリ（エチレン）グリコール、ビス（ポリオキシエチレングリコールドデシル）エーテル、安息香酸ナトリウム、サリチル酸ナトリウム、またはこれらの組合せであり得る。例えば、Ｔｗｅｅｎ−８０をクエンチしたナノ粒子懸濁液に加えて、遊離薬物を可溶化し、薬物結晶の形成を防止し得る。一部の実施形態では、薬物可溶化剤の酸性治療剤に対する比は、約２００：１〜約１０：１であり、または一部の実施形態では、約１００：１〜約１０：１である。
【０１３３】
可溶化した相を濾過して、ナノ粒子を回収し得る。例えば、限外濾過膜を使用して、ナノ粒子懸濁液を濃縮し、有機溶媒、遊離薬物（すなわち、カプセル化されていない治療剤）、薬物可溶化剤、および他の処理助剤（界面活性剤）を実質的に排除し得る。例示的な濾過は、タンジェンシャルフロー濾過系を使用して行い得る。例えば、溶質、ミセル、および有機溶媒が通過することを可能とする一方で、ナノ粒子を保持するのに適切な孔径を有する膜を使用することによって、ナノ粒子は、選択的に分離することができる。約３００〜５００ｋＤａ（約５〜２５ｎｍ）の分画分子量を有する例示的な膜を使用し得る。
【０１３４】
一定容量アプローチを使用してダイアフィルトレーションを行ってもよく、これは濾液が懸濁液から除去されるのと同じ速度で、ダイア濾液（冷たい脱イオン水、例えば、約０〜約５℃、または０〜約１０℃）を、供給懸濁液に加えてもよいことを意味する。一部の実施形態では、フィルタリングは、約０〜約５℃、または０〜約１０℃の第１の温度、および約２０〜約３０℃、または１５〜約３５℃の第２の温度を使用した第１のフィルタリングを含み得る。一部の実施形態では、フィルタリングは、約１〜約３０、場合によって、約１〜約１５、または場合によって、１〜約６ダイア容量を処理することを含み得る。例えば、フィルタリングは、約０〜約５℃にて、約１〜約３０、または場合によって、約１〜約６ダイア容量を処理し、約２０〜約３０℃にて、少なくとも１ダイア容量（例えば、約１〜約１５、約１〜約３、または約１〜約２ダイア容量）を処理することを含み得る。一部の実施形態では、フィルタリングは、異なる別個の温度にて異なるダイア容量を処理することを含む。
【０１３５】
ナノ粒子懸濁液を精製および濃縮した後、粒子は、例えば、約０．２μｍのデプスプレフィルターを使用した、１つ、２つまたはそれ超の無菌化および／またはデプスフィルターを通して通過させ得る。例えば、除菌濾過ステップは、制御された速度で濾過トレインを使用して治療用ナノ粒子をフィルタリングすることを含み得る。一部の実施形態では、濾過トレインは、デプスフィルターおよび無菌フィルターを含み得る。
【０１３６】
ナノ粒子を調製する別の実施形態では、酸性治療剤とポリマー（ホモポリマー、コポリマー、およびリガンドを有するコポリマー）の混合物から構成される有機相が形成される。この有機相を、界面活性剤およびいくらかの溶解した溶媒から構成される水相と、概ね１：５の比（油相：水相）で混合する。一次エマルジョンは、単純に混合しながら、またはローターステーターホモジナイザーの使用によって、２つの相の組合せによって形成される。次いで、一次エマルジョンを、高圧ホモジナイザーの使用によって、微細エマルジョンに形成する。次いで、混合しながら脱イオン水を加えて、微細エマルジョンをクエンチする。一部の実施形態では、クエンチ：エマルジョン比は、約２：１〜約４０：１、または一部の実施形態では、約５：１〜約１５：１でよい。一部の実施形態では、クエンチ：エマルジョン比は、概ね８．５：１である。次いで、クエンチにＴｗｅｅｎ（例えば、Ｔｗｅｅｎ８０）の溶液を加えて、Ｔｗｅｅｎを全体で概ね２％を達成する。これは、カプセル化されていない遊離の治療剤を溶解させるのに役立つ。次いで、遠心分離または限外濾過／ダイアフィルトレーションのいずれかによってナノ粒子を単離する。
【０１３７】
製剤の調製において使用されるポリマー、酸性治療剤、および疎水性の塩基の量は、最終製剤と異なる場合もあると理解される。例えば、治療剤のいくらかは、ナノ粒子に完全には組み込まれず、そのような遊離治療剤は、例えば、濾別される場合もある。例えば、一実施形態では、約９％の第１の疎水性の塩基を含有する第１の有機溶液中に約１１重量パーセント理論添加量の治療剤を含有する第１の有機溶液、約８９重量パーセントのポリマー（例えば、ポリマーは、ポリマーにコンジュゲートされた約２．５モルパーセントの標的化部分と、約９７．５モルパーセントのＰＬＡ−ＰＥＧとを含む場合がある）を含有する第２の有機溶液、および約０．１２％の第２の疎水性の塩基を含有する水溶液を、例えば、約２重量パーセントの治療剤と、約９７．５重量パーセントのポリマー（ポリマーは、ポリマーにコンジュゲートされた約１．２５モルパーセントの標的化部分と、約９８．７５モルパーセントのＰＬＡ−ＰＥＧとを含む場合がある）と、約０．５％の総疎水性の塩基とを含む最終ナノ粒子となる製剤の調製において使用することができる。このようなプロセスは、約１〜約２０重量パーセントの治療剤、例えば、約１、約２、約３、約４、約５、約８、約１０、または約１５重量パーセントの酸性治療剤を含む、患者への投与に適する最終ナノ粒子を提供することができる。
【０１３８】
治療剤
酸性治療剤は、薬学的に許容できるその塩形態、遊離塩基形態、水和物、異性体、およびプロドラッグなどの別の形態を包含し得る。一部の実施形態では、酸性治療剤は、既知の薬剤のリスト、例えば、以前より合成されている薬剤のリスト；対象、例えば、ヒト対象もしくは哺乳動物対象に以前より投与されている薬剤のリスト；ＦＤＡに承認されている薬剤のリスト；または薬剤の歴史的なリスト、例えば、製薬会社の歴史的なリストなどから選択することができる。既知の薬剤の適切なリストは、当業者によく知られており、そうしたリストとして、限定はしないが、それらのそれぞれが参照により本明細書に組み込まれるｔｈｅ  Ｍｅｒｃｋ  Ｉｎｄｅｘおよびｔｈｅ  ＦＤＡ  Ｏｒａｎｇｅ  Ｂｏｏｋが挙げられる。場合によって、２種以上の酸性治療剤（例えば、２種、３種、またはより多種の酸性治療剤）の組合せを、開示されるナノ粒子製剤中に使用してもよい。
【０１３９】
特定の実施形態では、酸性治療剤または薬物、例えば、ジクロフェナク、ケトロラクなどを、制御放出の要領で粒子から放出させ、特定の患者部位（例えば、腫瘍）との局所的な相互作用を可能にすることができる。用語「制御放出」は、一般に、選択された部位での、またはそうでなく速度、間隔、および／もしくは量が制御可能である、物質（例えば、薬物）の放出を包含するものとする。制御放出は、必ずしも限定はしないが、実質的に継続的な送達、パターン化された送達（例えば、規則的または不規則な時間間隔で中断される一定期間にかけての間欠的な送達）、および選択された物質の（例えば、予め決められた別個の量の物質として、比較的短時間（例えば、数秒または数分）での）ボーラスの送達を包含する。
【０１４０】
活性薬剤または薬物は、ＮＳＡＩＤまたは薬学的に許容できるその塩である場合がある。例えば、ＮＳＡＩＤは、酢酸誘導体、プロピオン酸誘導体、サリチル酸、選択的ＣＯＸ−２阻害剤、スルホンアニリド、フェナム酸誘導体、またはエノール酸誘導体である場合がある。ＮＳＡＩＤの非限定的な例としては、ジクロフェナク、ケトロラク、アスピリン、ジフルニサル、サルサレート、イブプロフェン、ナプロキセン、フェノプロフェン、ケトプロフェン、フルルビプロフェン、オキサプロジン、ロキソプロフェン、インドメタシン、スリンダク、エトドラク、ケトロラク、ジクロフェナク、ナブメトン、ピロキシカム、メロキシカム、テノキシカム、ドロキシカム、ロルノキシカム、イソキシカム、メフェナム酸、メクロフェナム酸、フルフェナム酸、トルフェナム酸、セレコキシブ、ロフェコキシブ、バルデコキシブ、パレコキシブ、ルミラコキシブ、エトリコキシブ、フィロコキシブ、ニメスリド、およびリコフェロン（ｌｉｃｏｆｅｌｏｎｅ）が挙げられる。
【０１４１】
一組の実施形態では、ペイロードは、薬物、または１種を超える薬物の組合せである。そのような粒子は、例えば、薬物を含有する粒子を対象内の特定の限局された場所に向かわせるのに標的化部分を使用して、例えば、薬物の局所的な送達がなされるのを可能にし得る実施形態において有用となり得る。
【０１４２】
医薬製剤
本明細書において開示されているナノ粒子は、薬学的に許容できる担体と合わさり、医薬組成物を形成し得る。当業者が理解するように、担体は、下記のような投与経路、標的組織の場所、送達される薬物、薬物の送達の時間経過などに基づいて選択し得る。
【０１４３】
医薬組成物は、経口および非経口経路を含めた当技術分野において公知の任意の手段によって患者に投与することができる。用語「患者」は、本明細書において使用する場合、ヒト、ならびに例えば、哺乳動物、鳥、爬虫類、両生類、および魚を含めた非ヒトを指す。例えば、非ヒトは、哺乳動物（例えば、げっ歯類、マウス、ラット、ウサギ、サル、イヌ、ネコ、霊長類、またはブタ）であり得る。ある特定の実施形態では、非経口経路が、消化管において見出される消化酵素との接触を回避するために望ましい。このような実施形態によると、本発明の組成物は、注射（例えば、静脈内、皮下または筋内、腹腔内注射）、直腸、経膣的、局所的（散剤、クリーム剤、軟膏剤、もしくは点眼剤によるなど）によって、または吸入（スプレーによるなど）によって投与し得る。
【０１４４】
特定の実施形態では、ナノ粒子は、それを必要とする対象に全身的に、例えば、ＩＶ注入または注射によって投与される。
【０１４５】
注射可能な調製物、例えば、無菌の注射可能な水性または油性懸濁液は、適切な分散化剤または湿潤剤および懸濁化剤を使用して公知技術によって製剤化し得る。無菌の注射可能な調製物はまた、無毒性の非経口的に許容できる希釈剤または溶媒中の無菌の注射可能な溶液、懸濁液、またはエマルジョン、例えば、１，３−ブタンジオール中の溶液でよい。用いることができる許容できるビヒクルおよび溶媒の中には、水、リンゲル液、Ｕ．Ｓ．Ｐ．、および等張食塩液がある。さらに、無菌の不揮発性油は、溶媒または懸濁媒として従来用いられる。この目的のために、合成のモノまたはジグリセリドを含めた任意の刺激の少ない不揮発性油を用いることができる。さらに、脂肪酸、例えば、オレイン酸は、注射剤の調製において使用される。一実施形態では、本発明のコンジュゲートを、１％（ｗ／ｖ）のカルボキシメチルセルロースナトリウムおよび０．１％（ｖ／ｖ）のＴＷＥＥＮ（商標）８０を含む担体液に懸濁させる。注射用製剤は、例えば、細菌保持フィルターを通す濾過によって、または使用前に滅菌水もしくは他の無菌の注射可能な媒体に溶解もしくは分散させることができる無菌の固体組成物の形態の滅菌剤を組み込むことによって、無菌化することができる。
【０１４６】
経口投与のための固体剤形は、カプセル剤、錠剤、丸剤、散剤、および顆粒剤を含む。このような固体剤形において、カプセル化されたか、またはカプセル化されていないコンジュゲートを、少なくとも１種の不活性な薬学的に許容できる添加剤または担体、例えば、クエン酸ナトリウムまたは第二リン酸カルシウム、ならびに／または（ａ）充填剤もしくは増量剤、例えば、デンプン、ラクトース、スクロース、グルコース、マンニトール、およびケイ酸、（ｂ）結合剤、例えば、カルボキシメチルセルロース、アルギネート、ゼラチン、ポリビニルピロリジノン、スクロース、およびアカシア、（ｃ）保湿剤、例えば、グリセロール、（ｄ）崩壊剤、例えば、寒天、炭酸カルシウム、ジャガイモもしくはタピオカデンプン、アルギン酸、ある種のシリケート、および炭酸ナトリウム、（ｅ）溶解遅延剤、例えば、パラフィン、（ｆ）吸収促進剤、例えば、第四級アンモニウム化合物、（ｇ）湿潤剤、例えば、セチルアルコールおよびモノステアリン酸グリセロール、（ｈ）吸収剤、例えば、カオリンおよびベントナイトクレイ、ならびに（ｉ）滑沢剤、例えば、タルク、ステアリン酸カルシウム、ステアリン酸マグネシウム、固体ポリエチレングリコール、ラウリル硫酸ナトリウム、およびこれらの混合物と混合する。カプセル剤、錠剤、および丸剤の場合、剤形はまた、緩衝剤を含む。
【０１４７】
酸性治療剤を含有するナノ粒子の正確な投与量は、処置される患者を考慮して個々の医師によって選択され、一般に、投与量および投与は、有効量の酸性治療剤ナノ粒子を処置される患者に提供するように調節されることを認識されたい。本明細書において使用する場合、酸性治療剤を含有するナノ粒子の「有効量」は、所望の生物学的応答を引き出すのに必要な量を指す。当業者が理解するように、酸性治療剤を含有するナノ粒子の有効量は、所望の生物学的エンドポイント、送達される薬物、標的組織、投与経路などの要因によって変わり得る。例えば、酸性治療剤を含有するナノ粒子の有効量は、所望の期間にわたり所望の量の腫瘍サイズの低減をもたらす量であり得る。考慮し得るさらなる要因は、病態の重症度；処置される患者の年齢、体重および性別；食事、投与の時間および頻度；薬物の組合せ；反応感受性；ならびに治療に対する耐性／応答を含む。
【０１４８】
開示されるナノ粒子は、投与の容易さおよび投与量の均一性のために投与量単位形態で製剤化し得る。「投与量単位形態」という表現は、本明細書において使用する場合、処置される患者に適当なナノ粒子の物理的個別単位を指す。しかし、組成物の一日の総使用量は、正しい医学的判断の範囲内で主治医によって決められることが理解される。任意のナノ粒子について、治療有効用量は、細胞培養アッセイにおいて、または動物モデル、通常、マウス、ウサギ、イヌ、もしくはブタにおいて最初に推定することができる。動物モデルをまた使用して、望ましい濃度範囲および投与経路を達成する。次いで、このような情報を使用して、ヒトにおける投与のための有用な用量および経路を決定することができる。ナノ粒子の治療有効性および毒性、例えば、ＥＤ５０（用量は集団の５０％において治療的に有効である）およびＬＤ５０（用量は集団の５０％まで致死的である）は、細胞培養物または実験動物において標準的な医薬手順によって決定することができる。毒性効果の治療効果に対する用量比は治療指数であり、これは、ＬＤ５０／ＥＤ５０の比として表すことができる。大きな治療指数を示す医薬組成物は、一部の実施形態では有用であり得る。細胞培養アッセイおよび動物試験から得たデータは、ヒト使用のための投与量範囲の配合において使用することができる。
【０１４９】
ある実施形態では、本明細書において開示されている組成物は、約１０ｐｐｍ未満のパラジウム、または約８ｐｐｍ未満、または約６ｐｐｍ未満のパラジウムを含み得る。例えば、ポリマーコンジュゲートを有するナノ粒子を含む組成物が本明細書において提供され、組成物は、約１０ｐｐｍ未満のパラジウムを有する。
【０１５０】
一部の実施形態では、本明細書において開示されているナノ粒子を含む冷凍に適した組成物が企図され、冷凍に適した溶液、例えば、糖、例えば、単糖類、二糖類、もしくは多糖類、例えば、スクロースおよび／もしくはトレハロース、ならびに／または塩および／もしくはシクロデキストリン溶液を、ナノ粒子懸濁液に加える。糖（例えば、スクロースまたはトレハロース）は、例えば、粒子が冷凍によって凝集することを防止する凍結防止剤として作用し得る。例えば、複数の開示されているナノ粒子、スクロース、イオン性ハロゲン化物、および水を含むナノ粒子製剤であり、ナノ粒子／スクロース／水／イオン性ハロゲン化物は、約３〜４０％／１０〜４０％／２０〜９５％／０．１〜１０％（ｗ／ｗ／ｗ／ｗ）または約５〜１０％／１０〜１５％／８０〜９０％／１〜１０％（ｗ／ｗ／ｗ／ｗ）が本明細書において提供される。例えば、このような溶液は、本明細書に開示されているナノ粒子、約５重量％〜約２０重量％のスクロースおよび約１０〜１００ｍＭの濃度のイオン性ハロゲン化物、例えば、塩化ナトリウムを含み得る。別の例では、複数の開示されているナノ粒子、トレハロース、シクロデキストリン、および水を含むナノ粒子製剤が本明細書において提供され、ナノ粒子／トレハロース／水／シクロデキストリンは、約３〜４０％／１〜２５％／２０〜９５％／１〜２５％（ｗ／ｗ／ｗ／ｗ）または約５〜１０％／１〜２５％／８０〜９０％／１０〜１５％（ｗ／ｗ／ｗ／ｗ）である。
【０１５１】
例えば、企図される溶液は、本明細書に開示されているナノ粒子、約１重量％〜約２５重量％の二糖類、例えば、トレハロースもしくはスクロース（例えば、約５重量％〜約２５重量％のトレハロースもしくはスクロース、例えば、約１０重量％のトレハロースもしくはスクロース、または約１５重量％のトレハロースもしくはスクロース、例えば、約５重量％のスクロース）、および約１重量％〜約２５重量％の濃度のシクロデキストリン、例えば、β−シクロデキストリン（例えば、約５重量％〜約２０重量％、例えば、１０重量％もしくは約２０重量％、または約１５重量％〜約２０重量％のシクロデキストリン）を含み得る。企図される製剤は、複数の開示されているナノ粒子（例えば、ＰＬＡ−ＰＥＧおよび活性剤を有するナノ粒子）、および約２重量％〜約１５重量％（または約４重量％〜約６重量％、例えば、約５重量％）のスクロースおよび約５重量％〜約２０重量％（例えば、約７重量パーセント〜約１２重量％、例えば、約１０重量％）のシクロデキストリン、例えば、ＨＰｂＣＤを含み得る。
【０１５２】
本開示は、復元されたとき、最小量の大きな凝集体を有する凍結乾燥した医薬組成物に部分的に関する。このような大きな凝集体は、約０．５μｍ超、約１μｍ超、または約１０μｍ超のサイズを有してもよく、復元された溶液中で望ましくないことがあり得る。凝集体サイズは、参照により本明細書に組み込まれている米国薬局方の３２＜７８８＞において示されるものを含めた種々の技術を使用して測定することができる。ＵＳＰ３２＜７８８＞において概略が述べられている試験は、光遮蔽粒子計数試験、顕微鏡粒子計数試験、レーザー回折、および単一粒子光学検知を含む。一実施形態では、所与の試料中の粒径は、レーザー回折および／または単一粒子光学検知を使用して測定される。
【０１５３】
光遮蔽粒子計数試験によるＵＳＰ３２＜７８８＞は、懸濁液中の粒径のサンプリングのためのガイドラインを規定する。１００ｍＬと等しい、またはこれ未満を有する溶液について、存在する粒子の平均数が、容器毎に≧１０μｍである６０００個および容器毎に≧２５μｍである６００個を超えない場合、調製は試験に準拠する。
【０１５４】
ＵＳＰ３２＜７８８＞において概略が述べられているように、顕微鏡粒子計数試験は、接眼マイクロメーターを有する１００±１０×の拡大率に調節した双眼顕微鏡を使用して粒子量を決定するためのガイドラインを規定する。接眼マイクロメーターは、１００×の拡大率で見たとき、１０μｍおよび２５μｍを表す黒の基準円を有する象限に分割された円からなる円形直径グラティキュールである。直線状スケールは、グラティキュールの下に提供される。１０μｍおよび２５μｍに関する粒子の数を視覚的に符合させる。１００ｍＬと等しい、またはこれ未満を有する溶液について、存在する粒子の平均数が、容器毎に≧１０μｍである３０００個、および容器毎に≧２５μｍである３００個を超えない場合、調製は試験に準拠する。
【０１５５】
一部の実施形態では、開示されている組成物の復元による１０ｍＬの水性試料は、１ｍｌ毎に６００個未満の１０ミクロンと等しい、もしくはこれ超のサイズを有する粒子；および／または１ｍｌ毎に６０個未満の２５ミクロンと等しい、もしくはこれ超のサイズを有する粒子を含む。
【０１５６】
動的光散乱（ＤＬＳ）を使用して、粒径を測定し得るが、これはブラウン運動に依存し、そのためこの技術は、いくつかのより大きな粒子を検出し得ない。レーザー回折は、粒子および懸濁培地の間の屈折率における差異に依存する。この技術は、サブミクロンからミリメートル範囲にて粒子を検出することができる。相対的に少（例えば、約１〜５重量％）量のより大きな粒子を、ナノ粒子懸濁液中で決定することができる。単一粒子光学検知（ＳＰＯＳ）は、約０．５μｍの個々の粒子を計数する希薄な懸濁液の光遮蔽を使用する。測定した試料の粒子濃度を知ることによって、凝集体の重量パーセントまたは凝集体濃度（粒子／ｍＬ）を計算することができる。
【０１５７】
凝集体の形成は、粒子の表面の脱水によって凍結乾燥の間に起こり得る。この脱水は、凍結乾燥の前に懸濁液中で凍結保護剤、例えば、二糖類を使用することによって回避することができる。適切な二糖類は、スクロース、ラクツロース、ラクトース、マルトース、トレハロース、またはセロビオース、および／またはこれらの混合物を含む。他の企図される二糖類は、コウジビオース、ニゲロース、イソマルトース、β，β−トレハロース、α，β−トレハロース、ソホロース、ラミナリビオース、ゲンチオビオース、ツラノース、マルツロース、パラチノーゼ、ゲンチオビオース、マンノビオース、メリビオース、メリビウロース、ルチノース、ルチヌノース、およびキシロビオースを含む。復元は、開始懸濁液と比較したときの等しいＤＬＳサイズ分布を示す。しかし、レーザー回折は、いくらかの復元された溶液中でサイズが＞１０μｍの粒子を検出することができる。さらに、ＳＰＯＳはまた、ＦＤＡガイドラインの濃度超の濃度（＞１０μｍの粒子について１０４〜１０５個の粒子／ｍＬ）で＞１０μｍサイズの粒子を検出し得る。
【０１５８】
一部の実施形態では、１種または複数のイオン性ハロゲン化塩は、糖、例えば、スクロース、トレハロースまたはこれらの混合物に対するさらなる凍結保護剤として使用し得る。糖は、二糖類、単糖類、三糖類、および／または多糖類を含んでいてもよく、かつ他の添加剤、例えば、グリセロールおよび／または界面活性剤を含んでいてもよい。場合により、シクロデキストリンを、さらなる凍結保護剤として含んでいてもよい。シクロデキストリンは、イオン性ハロゲン化塩の代わりに加え得る。代わりに、シクロデキストリンを、イオン性ハロゲン化塩に加え得る。
【０１５９】
適切なイオン性ハロゲン化塩は、塩化ナトリウム、塩化カルシウム、塩化亜鉛、またはこれらの混合物を含み得る。さらなる適切なイオン性ハロゲン化塩は、塩化カリウム、塩化マグネシウム、塩化アンモニウム、臭化ナトリウム、臭化カルシウム、臭化亜鉛、臭化カリウム、臭化マグネシウム、臭化アンモニウム、ヨウ化ナトリウム、ヨウ化カルシウム、ヨウ化亜鉛、ヨウ化カリウム、ヨウ化マグネシウム、またはヨウ化アンモニウム、および／またはこれらの混合物を含む。一実施形態では、約１〜約１５重量パーセントのスクロースを、イオン性ハロゲン化塩と共に使用し得る。一実施形態では、凍結乾燥した医薬組成物は、約１０〜約１００ｍＭの塩化ナトリウムを含み得る。別の実施形態では、凍結乾燥した医薬組成物は、約１００〜約５００ｍＭの二価のイオン性塩化物塩、例えば、塩化カルシウムまたは塩化亜鉛を含み得る。さらに別の実施形態では、凍結乾燥される懸濁液は、シクロデキストリンをさらに含み得、例えば、約１〜約２５重量パーセントのシクロデキストリンを使用し得る。
【０１６０】
適切なシクロデキストリンは、α−シクロデキストリン、β−シクロデキストリン、γ−シクロデキストリン、またはこれらの混合物を含み得る。本明細書において開示されている組成物における使用のために企図される例示的なシクロデキストリンには、ヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリン（ＨＰｂＣＤ）、ヒドロキシエチル−β−シクロデキストリン、スルホブチルエーテル−β−シクロデキストリン、メチル−β−シクロデキストリン、ジメチル−β−シクロデキストリン、カルボキシメチル−β−シクロデキストリン、カルボキシメチルエチル−β−シクロデキストリン、ジエチル−β−シクロデキストリン、トリ−Ｏ−アルキル−β−シクロデキストリン、グルコシル−β−シクロデキストリン、およびマルトシル−β−シクロデキストリンが含まれる。一実施形態では、約１〜約２５重量パーセントのトレハロース（例えば、約１０重量％〜約１５重量％、例えば、５〜約２０重量％）を、シクロデキストリンと共に使用し得る。一実施形態では、凍結乾燥した医薬組成物は、約１〜約２５重量パーセントのβ−シクロデキストリンを含み得る。例示的な組成物は、ＰＬＡ−ＰＥＧ、活性／治療剤、約４％〜約６％（例えば、約５重量パーセント）のスクロース、および約８〜約１２重量パーセント（例えば、約１０重量％）のＨＰｂＣＤを含むナノ粒子を含み得る。
【０１６１】
一態様では、開示されているナノ粒子を含む凍結乾燥した医薬組成物を提供し、１００ｍＬ未満または約１００ｍＬの水性媒体中で約５０ｍｇ／ｍＬのナノ粒子濃度での凍結乾燥した医薬組成物の復元によって、非経口投与に適した復元された組成物は、６０００個未満、例えば、３０００個未満の１０ミクロンと等しい、もしくはこれ超の微粒子；および／または６００個未満、例えば、３００個未満の２５ミクロンと等しい、もしくはこれ超の微粒子を含む。
【０１６２】
微粒子の数は、例えば、光遮蔽粒子計数試験によるＵＳＰ３２＜７８８＞、顕微鏡粒子計数試験によるＵＳＰ３２＜７８８＞、レーザー回折、および単一粒子光学検知などの手段によって決定することができる。
【０１６３】
ある態様では、それぞれが疎水性ポリマーセグメントおよび親水性ポリマーセグメント；活性剤；糖；ならびにシクロデキストリンを有するコポリマーを含む複数種の治療用粒子を含む、復元による非経口使用に適した医薬組成物を提供する。
【０１６４】
例えば、コポリマーは、ポリ（乳）酸−ブロック−ポリ（エチレン）グリコールコポリマーであり得る。復元によって、１００ｍＬの水性試料は、６０００個未満の１０ミクロンと等しい、もしくはこれ超のサイズを有する粒子；および６００個未満の２５ミクロンと等しい、もしくはこれ超のサイズを有する粒子を含み得る。
【０１６５】
二糖類およびイオン性ハロゲン化塩を加えるステップは、約５〜約１５重量パーセントのスクロースまたは約５〜約２０重量パーセントのトレハロース（例えば、約１０〜約２０重量パーセントのトレハロース）、および約１０〜約５００ｍＭのイオン性ハロゲン化塩を加えることを含み得る。イオン性ハロゲン化塩は、塩化ナトリウム、塩化カルシウム、および塩化亜鉛、またはこれらの混合物から選択し得る。ある実施形態では、約１〜約２５重量パーセントのシクロデキストリンをまた加える。
【０１６６】
別の実施形態では、二糖類およびシクロデキストリンを加えるステップは、約５〜約１５重量パーセントのスクロースまたは約５〜約２０重量パーセントのトレハロース（例えば、約１０〜約２０重量パーセントのトレハロース）、および約１〜約２５重量パーセントのシクロデキストリンを加えることを含み得る。ある実施形態では、約１０〜約１５重量パーセントのシクロデキストリンを加える。シクロデキストリンは、α−シクロデキストリン、β−シクロデキストリン、γ−シクロデキストリン、またはこれらの混合物から選択し得る。
【０１６７】
別の態様では、糖および塩を凍結乾燥した製剤に加え、復元によるナノ粒子の凝集を防止することを含む、医薬ナノ粒子組成物中で粒子の実質的な凝集を防止する方法を提供する。ある実施形態では、シクロデキストリンをまた、凍結乾燥した製剤に加える。さらに別の態様では、糖およびシクロデキストリンを凍結乾燥した製剤に加えて、復元によるナノ粒子の凝集を防止することを含む、医薬ナノ粒子組成物中の粒子の実質的な凝集を防止する方法を提供する。
【０１６８】
企図される凍結乾燥した組成物は、約４０ｍｇ／ｍＬ超の治療用粒子濃度を有し得る。非経口投与に適した製剤は、１０ｍＬの用量中に１０ミクロン超のサイズを有する約６００個未満の粒子を有し得る。凍結乾燥は、組成物を約−４０℃超、または例えば、約−３０℃未満の温度で冷凍し、冷凍した組成物を形成させ、冷凍した組成物を乾燥させ、凍結乾燥した組成物を形成することを含み得る。乾燥のステップは、約５０ｍＴｏｒｒで約−２５〜約−３４℃、または約−３０〜約−３４℃の温度にて起こり得る。
【０１６９】
処置方法
一部の実施形態では、本明細書に開示される治療用粒子は、疾患、障害、および／または状態を処置し、緩和し、回復させ、軽減し、その発生を遅延させ、その進行を阻害し、その重症度を低減し、かつ／またはその１つもしくは複数の症状または特色の発生率を低減するのに使用することができる。例えば、開示される治療用粒子は、疼痛および炎症が存在する急性および／または慢性の状態の処置に使用することができる。場合によって、開示される治療用粒子は、がん（例えば、結腸直腸がん）、心血管疾患、および急性または慢性の炎症が疾患になる危険因子となり得るいずれかの疾患などの疾患を予防する予防的治療として使用される場合もある。ある特定の実施形態では、開示される治療用粒子は、心血管疾患、リウマチ様関節炎、骨関節炎、炎症性関節症（例えば、強直性脊椎炎、乾癬性関節炎、およびライター症候群）、急性痛風、月経困難症（すなわち、月経痛）、転移部骨痛、頭痛および偏頭痛、術後疼痛、炎症および組織傷害による軽度〜中程度の疼痛、発熱（ｐｙｒｅｘｉａ）（すなわち、発熱（ｆｅｖｅｒ））、イレウス、ならびに腎疝痛の処置に使用することができる。
【０１７０】
他の例では、ＮＳＡＩＤ、例えば、ジクロフェナク、ケトロラクなどを含む開示治療用粒子を使用して、乳房、前立腺、結腸などのがん、神経膠芽腫、急性リンパ芽球性白血病、骨肉腫、非ホジキンリンパ腫、または非小細胞肺がんなどの肺がんを、それを必要とする患者において処置することができる。がん（例えば、乳がんや前立腺がん）の処置のための開示される方法は、それを必要とする対象に治療有効量の開示治療用粒子を、所望の結果を得るのに必要となるような量で、そのような時間をかけて投与することを含む。本発明のある特定の実施形態では、「治療有効量」とは、例えば、処置対象であるがんを処置し、緩和し、回復させ、軽減し、その発生を遅延させ、その進行を阻害し、その重症度を低減し、かつ／またはその１つもしくは複数の症状または特色の発生率を低減するのに有効な量である。
【０１７１】
本明細書では、健康な個体（すなわち、がんのいずれの症状も示していない、かつ／またはがんと診断されたことがない対象）に、治療有効量の開示される治療用粒子を投与することを含む治療プロトコルも提供される。例えば、健康な個体は、がんの発病および／またはがんの症状の発症より前に、発明の標的化粒子で「免疫化」することもでき、リスクがある個体（例えば、がんの家族歴を有する患者、がんの発病と関連する１つまたは複数の遺伝子変異を有する患者、がんの発病と関連する遺伝的多型を有する患者、がんの発病と関連するウイルスに感染した患者、がんの発病と関連する習慣および／または生活様式を有する患者など）は、がんの症状の発症と実質的に同時（例えば、その４８時間以内、２４時間以内、または１２時間以内）に処置することができる。当然のことながら、がんを有することがわかっている個体は、いつでも発明の処置を受けることができる。
【０１７２】
他の実施形態では、開示されるナノ粒子を使用して、がん細胞、例えば、乳がん細胞の成長を阻害することができる。本明細書において使用する場合、「がん細胞の成長を阻害する」または「がん細胞の成長を阻害すること」という用語は、がん細胞成長の速度が、未処置対照がん細胞の観察または予想された成長速度と比べて低減されるような、がん細胞増殖および／もしくは遊走の速度のいずれかの緩慢化、がん細胞増殖および／もしくは遊走の抑止、またはがん細胞の死滅を指す。「増殖を阻害する」という用語は、がん細胞または腫瘍のサイズの縮小または消失、ならびにその転移の可能性の低減も指す場合がある。細胞レベルでのこのような阻害が、患者において、がんのサイズを縮小し、その成長を阻止し、その侵襲性を低減し、またはその転移を予防もしくは阻害し得ることが好ましい。がん細胞成長が阻害されているかどうかは、適切な様々な徴候のいずれかによって、当業者が容易に判定することができる。
【０１７３】
がん細胞成長の阻害は、例えば、がん細胞の細胞周期の特定の期における停止、例えば、細胞周期のＧ２／Ｍ期における停止によって証明することができる。がん細胞成長の阻害は、がん細胞または腫瘍サイズの直接的または間接的測定によって証明することもできる。ヒトがん患者では、このような測定は、一般に、磁気共鳴画像診断、コンピュータ体軸断層撮影、Ｘ線などの、周知の画像診断法を使用してなされる。がん細胞成長は、循環している癌胎児性抗原、前立腺特異的抗原、またはがん細胞成長と互いに関係付けられる他のがん特異的抗原のレベルを決定することなどにより、間接的に判定することもできる。がん成長の阻害は、一般に、対象の生存期間の延長および／または健康および幸福の増進とも互いに関係付けられる。
【０１７４】
本明細書において企図される他の方法としては、それを必要とする患者においてアルツハイマー病などの神経変性病を処置する方法であって、開示されるナノ粒子、例えば、ジクロフェナク、ケトロラクなどを有する開示されるナノ粒子を投与することを含む方法が挙げられる。
【０１７５】
本明細書では、活性剤を含む、本明細書で開示するナノ粒子を患者に投与する方法であって、患者への投与の際、このようなナノ粒子が、薬剤単独の投与（すなわち、開示されるナノ粒子としてでない）に比べて、分布体積を実質的に縮小し、かつ／または遊離Ｃｍａｘを実質的に低減する方法も提供される。
【０１７６】
「Ｄｒｕｇ  Ｌｏａｄｅｄ  Ｐｏｌｙｍｅｒｉｃ  Ｎａｎｏｐａｒｔｉｃｌｅｓ  ａｎｄ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｏｆ  Ｍａｋｉｎｇ  ａｎｄ  Ｕｓｉｎｇ  Ｓａｍｅ」と題された２０１２年６月２６日発行の米国特許第８，２０６，７４７号は、その全体が参照により本明細書に組み込まれている。
【実施例】
【０１７７】
本発明について、ここまでは大まかに述べており、以下の実施例を参照することで、これについてより容易に理解されるところとなるが、実施例は、ある特定の態様および実施形態を説明する目的で含めているにすぎず、本発明を一切限定するものでない。
【０１７８】
（実施例１）
ＰＬＡ−ＰＥＧの調製
合成は、以下に示すとおり、ｄ，ｌ−ラクチドの、マクロ開始剤としてのα−ヒドロキシ−ω−メトキシポリ（エチレングリコール）との開環重合によって遂行し、２−エチルヘキサン酸スズ（ＩＩ）を触媒として使用して高温で実施する（ＰＥＧ  Ｍｎ≒５，０００Ｄａ、ＰＬＡ  Ｍｎ≒１６，０００Ｄａ、ＰＥＧ−ＰＬＡ  Ｍｎ≒２１，０００Ｄａ）。
【０１７９】
【化４】
2018533574.tif 000006
【０１８０】
ポリマーは、ポリマーをジクロロメタンに溶解させ、それをヘキサンとジエチルエーテルの混合物中で沈殿させることにより精製する。このステップから回収されたポリマーを、オーブンで乾燥させる。
【０１８１】
（実施例３）
ジクロフェナクナノ粒子の調製
【０１８２】
【表１】
2018533574.tif 000007
【０１８３】
図３に、表１におけるナノ粒子からのジクロフェナクのｉｎ  ｖｉｔｒｏ放出を示す。ジクロフェナクの放出は、概ね１〜２時間以内に完了した。
【０１８４】
（実施例２）
ジクロフェナクアミンナノ粒子の調製
アミンを含有するジクロフェナクナノ粒子を、以下のものを使用して製造した。
理論上２５％（ｗ／ｗ）の薬物
９０％（ｗ／ｗ）のポリマー−ＰＥＧ、１６−５  ＰＬＡ−ＰＥＧ、３０−５  ＰＬＡ−ＰＥＧ、または５０−５  ＰＬＡ−ＰＥＧ総固体％＝１０％
溶媒：２１％のベンジルアルコール、７９％の酢酸エチル（ｗ／ｗ）
ジクロフェナク：アミン＝１：１の等モル濃度、またはジクロフェナク：アミン＝１：０．５のモル濃度
【０１８５】
１グラムのバッチサイズについて、２５０ｍｇの薬物と、１：１または１：０．５のいずれかのモル比に従う適量のアミンを、第１のバイアルに加えた。第２のバイアルに、７５０ｍｇのポリマー−ＰＥＧ：１６−５、３０−５、または５０−５  ＰＬＡ−ＰＥＧを加えた。
【０１８６】
有機相を調製するために、２１：７９の重量比のベンジルアルコール対酢酸エチル４．５ｇを、第１のバイアルおよび第２のバイアルにそれぞれ加えた。混合物を、薬物およびアミンが溶解するまで、ならびにポリマーが溶解するまで、ボルテックス撹拌した。次いで、薬物／アミン溶液とポリマー溶液を合わせ、数分間ボルテックス撹拌した。
【０１８７】
１６−５  ＰＬＡ−ＰＥＧ製剤、３０−５  ＰＬＡ−ＰＥＧ製剤、または５０−５  ＰＬＡ−ＰＥＧ製剤についての水溶液を調製した。１６−５  ＰＬＡ−ＰＥＧ製剤は、水中に０．００２５％のコール酸ナトリウム、２％のベンジルアルコール、および４％の酢酸エチルを含有した。３０−５  ＰＬＡ−ＰＥＧ製剤は、水中に０．１２５％のコール酸ナトリウム、２％のベンジルアルコール、および４％の酢酸エチルを含有した。５０−５  ＰＬＡ−ＰＥＧ製剤は、水中に０．２５％のコール酸ナトリウム、２％のベンジルアルコール、および４％の酢酸エチルを含有した。
【０１８８】
５：１（水層：油相）の比で有機相を水溶液に合わせることにより、エマルジョンを形成した。有機相は、水溶液中に注ぎ、手持ち式ホモジナイザーを使用して室温で１０秒間均質化して、粗エマルジョンを形成した。引き続いて溶液を高圧ホモジナイザー（１１０Ｓ）に通した。１６−５  ＰＬＡ−ＰＥＧ製剤については、圧力を計器上で２５ｐｓｉに設定して慎重に１回通過させて、ナノエマルジョンを形成した。３０−５  ＰＬＡ−ＰＥＧ製剤については、圧力を計器上で２５ｐｓｉに設定して慎重に２回通過させて、ナノエマルジョンを形成した。５０−５  ＰＬＡ−ＰＥＧ製剤については、圧力を計器上で４５ｐｓｉに設定して慎重に２回通過させて、ナノエマルジョンを形成した。
【０１８９】
撹拌プレート上で撹拌しながら、エマルジョンを５℃未満の冷たいＤＩ水に入れてクエンチした。クエンチ対エマルジョンの比は、８：１であった。次いで、クエンチされたエマルジョンに、３５％（ｗ／ｗ）の水中Ｔｗｅｅｎ８０を、１００：１（Ｔｗｅｅｎ  ８０：薬物）の比で加えた。
【０１９０】
ナノ粒子を、タンジェンシャルフロー濾過（ＴＦＦ）に続くダイアフィルトレーションによって濃縮して、溶媒、カプセル化されていない薬物、および可溶化剤を除去した。最初に、クエンチされたエマルジョンを、３００ｋＤａ  Ｐａｌｌカセット（２枚膜）を使用するＴＦＦによって、概ね１００ｍＬの体積に濃縮した。この後、概ね２０ダイア体積（２Ｌ）の冷たいＤＩ水を使用してダイアフィルトレーションにかけた。１００ｍＬの冷水を槽に加え、ポンプで膜に通してすすぐことにより、体積を最小限に抑えた。概ね１００〜１８０ｍＬの材料をガラスバイアルに集め、より小規模のＴＦＦを使用して、１０〜２０ｍＬの最終体積にさらに濃縮した。
【０１９１】
風袋を計った２０ｍＬのシンチレーションバイアルに、一定体積の最終スラリーを加え、次いでこれを、凍結乾燥器において、加熱しながら減圧下で乾燥させた。次いで、乾燥したスラリーの体積においてナノ粒子の重量を求めた。最終スラリー試料に、濃スクロース（０．６６６ｇ／ｇ）を加えて、１０％スクロース溶液を得た。
【０１９２】
スクロースを加える前の最終スラリー試料の一部分を、０．４５μｍのシリンジフィルターで濾過することにより、０．４５μｍで濾過された最終スラリーの固体濃度を求めた。風袋を計った２０ｍＬのシンチレーションバイアルに、一定体積の濾過した試料を加え、次いでこれを、凍結乾燥器において、加熱しながら減圧下で乾燥させた。
【０１９３】
残存する濾過されなかった最終スラリー試料を、スクロースと共に凍結させた。
【０１９４】
【表２】
2018533574.tif 000008
【０１９５】
（実施例３）
ジクロフェナクアミンナノ粒子の粒径および薬物添加量分析
粒径は、動的光散乱（ＤＬＳ）およびレーザー回折の２つの技術によって分析した。ＤＬＳは、Ｂｒｏｏｋｈａｖｅｎ  ＺｅｔａＰａｌｓ機器を使用し、９０°で散乱させた６６０ｎｍのレーザーを使用して、希薄な水性懸濁液中にて２５℃で行い、Ｃｕｍｕｌａｎｔｓ法およびＮＮＬＳ法を使用して分析した。レーザー回折は、Ｈｏｒｉｂａ  ＬＳ９５０機器を用い、９０°で散乱させた６３３ｎｍのＨｅＮｅレーザーおよび４０５ｎｍのＬＥＤを使用して、希薄な水性懸濁液中で実施し、Ｍｉｅ光学モデルを使用して分析した。ＤＬＳからの出力は、ＰＥＧ「コロナ」を含む、粒子の流体力学的半径と対応付けられ、レーザー回折機器は、ＰＬＡ粒子「コア」の幾何学的サイズとより近い対応があった。
【０１９６】
表３、４、および５に、上述の粒子の粒径および薬物添加量を示す。
【０１９７】
【表３】
2018533574.tif 000009
【０１９８】
【表４】
2018533574.tif 000010
【０１９９】
【表５】
2018533574.tif 000011
【０２００】
（実施例４）
ジクロフェナクのｉｎ  ｖｉｔｒｏ放出
ナノ粒子からのジクロフェナクのｉｎ  ｖｉｔｒｏ放出を明らかにするために、ナノ粒子を、ＰＢＳ中１０％Ｔｗｅｅｎ２０である放出媒体に懸濁させ、シンク条件下で３７℃の水浴においてインキュベートした。特定の時点で試料を集めた。超遠心分離法を使用して、放出された薬物をナノ粒子から分離した。
【０２０１】
図４に、ドデシルアミン（ＤＤＡ）、テトラデシルアミン、またはトリオクチルアミンを含有する１６−５  ＰＬＡ−ＰＥＧ製剤でのｉｎ  ｖｉｔｒｏ放出研究の結果を示す。ジクロフェナクと共にアミンが組み込まれると、ジクロフェナク遊離酸ナノ粒子（図３）に比べて、Ｔ＝０時点におけるナノ粒子からの薬物放出が遅くなった。しかし、図４に示されるとおり、Ｔ＝２時間の第２の時点までに、９０％を超える薬物が放出された。
【０２０２】
図５に、ドデシルアミンを用いた３０−５  ＰＬＡ−ＰＥＧ製剤でのｉｎ  ｖｉｔｒｏ放出研究の結果を示す。ジクロフェナクにドデシルアミンを加えることは、ナノ粒子からのジクロフェナク放出に明らかに影響を与え、ナノ粒子は、Ｔ＝０の時点で、もはや薬物のほとんどすべてを保持し、Ｔ＝４時間の時点までに約３０％のジクロフェナク、Ｔ＝２４時間の時点までに約８０％のジクロフェナクを放出した。
【０２０３】
図６に、ドデシルアミンを含有する５０−５  ＰＬＡ−ＰＥＧ製剤でのｉｎ  ｖｉｔｒｏ放出研究の結果を示す。図６に示されるとおり、ジクロフェナクにドデシルアミンを加えて、５０−５  ＰＬＡ／ＰＥＧポリマー使用ナノ粒子を形成させると、ジクロフェナク放出は、５０／５  ＰＬＡ／ＰＥＧナノ粒子中にジクロフェナクのみのもの（図３のｉｎ  ｖｉｔｒｏ放出を参照されたい）に比べて有意に遅くなり、ナノ粒子は、Ｔ＝４時間の時点までに約３０％のジクロフェナク、Ｔ＝２４時間の時点までに約７０％のジクロフェナクを放出した。
【０２０４】
図７に、ドデシルアミンを含有する１６−５  ＰＬＡ−ＰＥＧ、３０−５  ＰＬＡ−ＰＥＧ、および５０−５  ＰＬＡ／ＰＥＧ製剤でのｉｎ  ｖｉｔｒｏ放出研究の結果を示す。図７に示されるとおり、３０−５および５０−５  ＰＬＡ−ＰＥＧナノ粒子は、１６−５  ＰＬＡ−ＰＥＧナノ粒子よりゆっくりとジクロフェナクを放出し、３０−５および５０−５  ＰＬＡ−ＰＥＧナノ粒子は、Ｔ＝４時間の時点までに約３０％のジクロフェナク、Ｔ＝２４時間の時点までに約７０％のジクロフェナク、Ｔ＝４８時間の時点までに約９０％のジクロフェナクを放出した。比較すると、１６−５  ＰＬＡ−ＰＥＧナノ粒子は、Ｔ＝４時間の時点までに概ね全部のジクロフェナクを放出した。
【０２０５】
（実施例５）
ケトロラクナノ粒子の調製
【０２０６】
【表６】
2018533574.tif 000012
【０２０７】
ＰＬＡとＰＥＧのコポリマーでできているポリマーナノ粒子を、３０％ｗ／ｗまでのケトロラク（遊離酸）が閉じ込められる担体として使用して、製剤を作製した。表１からわかるとおり、薬物添加量は、１６／５  ＰＬＡ／ＰＥＧポリマー製剤については約４．５％であることが判明し、薬物を閉じ込める効率がわずか１５〜２４％であることが示唆された。ナノ粒子を５０／５  ＰＬＡ／ＰＥＧで製剤化すると、ケトロラクを閉じ込める効率は、わずか０．１３％の薬物添加量、したがって０．４３％のカプセル化効率であった。１６／５  ＰＬＡ／ＰＥＧに高分子量ＰＬＡホモポリマー（８０ｋＤａ）をドープしても、０．１７％の薬物添加量しか示されなかった。図８に、表６におけるナノ粒子からのケトロラクのｉｎ  ｖｉｔｒｏ放出を示す。ケトロラクの放出は、概ね２時間以内に完了した。
【０２０８】
【表７】
2018533574.tif 000013
【０２０９】
固体濃度が１０％、１５％、および２０％であり、薬物対ポリマー比（３０：７０）が一定である製剤を調製して、薬物添加量に対する固体濃度の影響を調査した（表７）。固体を減らすのと共に、コール酸ナトリウム（ＳＣ）のレベルも低下させて、適切な粒径を実現した。固体濃度が１０％であり、ＳＣのより少ない製剤において、１５および２０％の固体を有する製剤より薬物添加量が高くなった。
【０２１０】
（実施例６）
ケトロラクアミンナノ粒子の調製
アミンを含有するケトロラククナノ粒子を、以下のものを使用して製造した。
理論上１０％、２０％、および３０％（ｗ／ｗ）の薬物
７０％、８０％、および９０％（ｗ／ｗ）のポリマー−ＰＥＧ、１６−５  ＰＬＡ−ＰＥＧ、３０−５  ＰＬＡ−ＰＥＧ、または５０−５  ＰＬＡ−ＰＥＧ
総固体％＝１０％、２０％、または３０％
溶媒：２１％のベンジルアルコール、７９％の酢酸エチル（ｗ／ｗ）
ケトロラク：アミン＝１：１の等モル濃度、またはケトロラク：アミン＝１：０．５のモル濃度
【０２１１】
１グラムのバッチサイズについて、３００ｍｇの薬物と、１：１のモル比に従う適量のアミンを、第１のバイアルに加えた。第２のバイアルに、７００ｍｇのポリマー−ＰＥＧ：１６−５、３０−５、または５０−５  ＰＬＡ−ＰＥＧを加えた。
【０２１２】
有機相を調製するために、２１：７９の重量比のベンジルアルコール対酢酸エチル４．５ｇを、第１のバイアルおよび第２のバイアルにそれぞれ加えた。混合物を、薬物およびアミンが溶解するまで、ならびにポリマーが溶解するまで、ボルテックス撹拌した。次いで、薬物／アミン溶液とポリマー溶液を合わせ、数分間ボルテックス撹拌した。
【０２１３】
１６−５  ＰＬＡ−ＰＥＧ製剤、３０−５  ＰＬＡ−ＰＥＧ製剤、または５０−５  ＰＬＡ−ＰＥＧ製剤についての水溶液を調製した。１６−５  ＰＬＡ−ＰＥＧ製剤は、水中に０．００２５％のコール酸ナトリウム、２％のベンジルアルコール、および４％の酢酸エチルを含有した。３０−５  ＰＬＡ−ＰＥＧ製剤は、水中に０．１２５％のコール酸ナトリウム、２％のベンジルアルコール、および４％の酢酸エチルを含有した。５０−５  ＰＬＡ−ＰＥＧ製剤は、水中に０．２５％のコール酸ナトリウム、２％のベンジルアルコール、および４％の酢酸エチルを含有した。
【０２１４】
５：１（水層：油相）の比で有機相を水溶液に合わせることにより、エマルジョンを形成した。有機相を、水溶液中に注ぎ、手持ち式ホモジナイザーを使用して室温で１０秒間均質化して、粗エマルジョンを形成した。引き続いて溶液を高圧ホモジナイザー（１１０Ｓ）に通した。１６−５  ＰＬＡ−ＰＥＧ製剤については、圧力を計器上で２５ｐｓｉに設定して慎重に１回通過させて、ナノエマルジョンを形成した。３０−５  ＰＬＡ−ＰＥＧ製剤については、圧力を計器上で２５ｐｓｉに設定して慎重に２回通過させて、ナノエマルジョンを形成した。５０−５  ＰＬＡ−ＰＥＧ製剤については、圧力を計器上で４５ｐｓｉに設定して慎重に２回通過させて、ナノエマルジョンを形成した。
【０２１５】
撹拌プレート上で撹拌しながら、エマルジョンを５℃未満の冷たいＤＩ水に入れてクエンチした。クエンチ対エマルジョンの比は、８：１であった。次いで、クエンチされたエマルジョンに、３５％（ｗ／ｗ）の水中Ｔｗｅｅｎ８０を、１００：１（Ｔｗｅｅｎ  ８０：薬物）の比で加えた。
【０２１６】
ナノ粒子を、タンジェンシャルフロー濾過（ＴＦＦ）に続くダイアフィルトレーションによって濃縮して、溶媒、カプセル化されていない薬物、および可溶化剤を除去した。最初に、クエンチされたエマルジョンを、３００ｋＤａ  Ｐａｌｌカセット（２枚膜）を使用するＴＦＦによって、概ね１００ｍＬの体積に濃縮した。この後、概ね２０ダイア体積（２Ｌ）の冷たいＤＩ水を使用してダイアフィルトレーションにかけた。１００ｍＬの冷水を槽に加え、ポンプで膜に通してすすぐことにより、体積を最小限に抑えた。概ね１００〜１８０ｍＬの材料をガラスバイアルに集め、より小規模のＴＦＦを使用して、１０〜２０ｍＬの最終体積にさらに濃縮した。
【０２１７】
風袋を計った２０ｍＬのシンチレーションバイアルに、一定体積の最終スラリーを加え、次いでこれを、凍結乾燥器において、加熱しながら減圧下で乾燥させた。次いで、乾燥したスラリーの体積においてナノ粒子の重量を求めた。最終スラリー試料に、濃スクロース（０．６６６ｇ／ｇ）を加えて、１０％スクロース溶液を得た。
【０２１８】
スクロースを加える前の最終スラリー試料の一部分を、０．４５μｍのシリンジフィルターで濾過することにより、０．４５μｍで濾過された最終スラリーの固体濃度を求めた。風袋を計った２０ｍＬのシンチレーションバイアルに、一定体積の濾過した試料を加え、次いでこれを、凍結乾燥器において、加熱しながら減圧下で乾燥させた。
【０２１９】
残存する濾過されなかった最終スラリー試料を、スクロースと共に凍結させた。
【０２２０】
【表８】
2018533574.tif 000014
【０２２１】
（実施例７）
ケトロラクアミンナノ粒子の粒径および薬物添加量分析
粒径は、動的光散乱（ＤＬＳ）およびレーザー回折の２つの技術によって分析した。ＤＬＳは、Ｂｒｏｏｋｈａｖｅｎ  ＺｅｔａＰａｌｓ機器を使用し、９０°で散乱させた６６０ｎｍのレーザーを使用しながら、希薄な水性懸濁液中にて２５℃で行い、Ｃｕｍｕｌａｎｔｓ法およびＮＮＬＳ法を使用して分析した。レーザー回折は、Ｈｏｒｉｂａ  ＬＳ９５０機器を用い、９０°で散乱させた６３３ｎｍのＨｅＮｅレーザーおよび４０５ｎｍのＬＥＤを使用して、希薄な水性懸濁液中で実施し、Ｍｉｅ光学モデルを使用して分析した。ＤＬＳからの出力は、ＰＥＧ「コロナ」を含む、粒子の流体力学的半径と対応付けられ、レーザー回折機器は、ＰＬＡ粒子「コア」の幾何学的サイズとより近い対応があった。
【０２２２】
表９に、上述の粒子の粒径および薬物添加量を示す。
【０２２３】
【表９】
2018533574.tif 000015
【０２２４】
（実施例８）
ケトロラクのｉｎ  ｖｉｔｒｏ放出
ナノ粒子からのケトロラクのｉｎ  ｖｉｔｒｏ放出を明らかにするために、ナノ粒子を、ＰＢＳ中１０％Ｔｗｅｅｎ２０である放出媒体に懸濁させ、シンク条件下で３７℃の水浴においてインキュベートした。特定の時点で試料を集めた。超遠心分離法を使用して、放出された薬物をナノ粒子から分離した。
【０２２５】
図９に、ドデシルアミン（ＤＤＡ）を含有する１６−５  ＰＬＡ−ＰＥＧ製剤でのｉｎ  ｖｉｔｒｏ放出研究の結果を示す。ケトロラクと共にアミンが組み込まれると、ケトロラク遊離酸ナノ粒子（図８）に比べて、Ｔ＝０時点でのナノ粒子からの放出が遅くなり、バースト放出が約７０％から約３０％に減少した。しかし、図９に示されるとおり、Ｔ＝１時間の第２の時点までに、９０％を超える薬物が放出された。
【０２２６】
図１０に、ドデシルアミン（ＤＤＡ）を有する３０−５  ＰＬＡ−ＰＥＧ製剤でのｉｎ  ｖｉｔｒｏ放出研究の結果を示す。ケトロラクにドデシルアミンを加えることは、ナノ粒子からのケトロラク放出に明らかに影響を与え、ナノ粒子は、Ｔ＝０の時点で、もはや薬物のほとんどすべてを保持し、Ｔ＝２時間の時点までに約４５％〜約６５％の間のケトロラク、Ｔ＝４時間の時点までに約７０％〜約８０％の間のケトロラクを放出した。
【０２２７】
図１１に、ドデシルアミン（ＤＤＡ）、テトラデシルアミン、またはトリオクチルアミンを含有する５０−５  ＰＬＡ−ＰＥＧ製剤でのｉｎ  ｖｉｔｒｏ放出研究の結果を示す。図１１に示されるとおり、ケトロラクにドデシルアミンまたはテトラデシルアミンを加えて、５０−５  ＰＬＡ／ＰＥＧポリマー使用ナノ粒子を形成させると、ケトロラク放出は、５０／５  ＰＬＡ／ＰＥＧナノ粒子中にケトロラクのみのもの（図８のｉｎ  ｖｉｔｒｏ放出を参照されたい）に比べて有意に遅くなり、ナノ粒子は、Ｔ＝４時間の時点までに約２５％〜約４５％のケトロラク、Ｔ＝２４時間の時点までに約８５％〜９５％の間のケトロラクを放出した。
【０２２８】
図１２に、ドデシルアミン（ＤＤＡ）、ベネタミン、またはベンザチンを含有する５０−５  ＰＬＡ／ＰＥＧ製剤でのｉｎ  ｖｉｔｒｏ放出研究の結果を示す。図１２に示されるとおり、ドデシルアミン含有ナノ粒子は、ベンザチン含有ナノ粒子よりゆっくりとケトロラクを放出し、ベンザチン含有ナノ粒子は、ベネタミン含有ナノ粒子よりゆっくりとケトロラクを放出し、ベンザチン含有ナノ粒子は、Ｔ＝４時間の時点までに約５２％のケトロラクを放出し、ベネタミン含有ナノ粒子は、Ｔ＝４時間の時点までに約７２％のケトロラクを放出した。
【０２２９】
図１３に、ドデシルアミン（ＤＤＡ）を含有する１６−５  ＰＬＡ／ＰＥＧ、３０−５  ＰＬＡ／ＰＥＧ、および５０−５  ＰＬＡ／ＰＥＧ製剤でのｉｎ  ｖｉｔｒｏ放出研究の結果を示す。図１３に示されるとおり、より大きいポリマー分子量が、よりゆっくりとしたケトロラクの放出と相互に関連した傾向が認められた。
【０２３０】
（実施例９）
エマルジョン調製
水性懸濁液中の薬物添加ナノ粒子（スクロース中１０ｗｔ．％、粒子重量に対して約１０ｗｔ．％の薬物を含有する３〜５ｗｔ．％のポリマーナノ粒子）を調製する一般エマルジョン手順を次のとおり要約する。２４％のポリマーと６％の活性薬剤とを含む３０％の固体（ｗｔ％）から構成された有機相を形成する。有機溶媒は、酢酸エチル（ＥＡ）およびベンジルアルコール（ＢＡ）であり、ＢＡが有機相の２１％（ｗｔ％）を占める。有機相を、水中に０．２５％のコール酸ナトリウムと２％のＢＡと４％のＥＡ（ｗｔ％）とから構成されている水相と、概ね１：２の比（油相：水相）で混合する。２つの相を、単純に混合しながら、またはローターステーターホモジナイザーを使用して混ぜ合わせることにより、一次エマルジョンを形成させる。次いで、高圧ホモジナイザーを使用して、一次エマルジョンを微細エマルジョンとする。次いで、微細エマルジョンを、脱イオン水である冷えたクエンチ（０〜５℃）に混合しながら加えることによりクエンチする。クエンチ：エマルジョン比は、概ね１０：１である。次いで、クエンチにＴｗｅｅｎ−８０の３５％（ｗｔ％）溶液を加えて、Ｔｗｅｅｎ−８０を全体で概ね４％とする。次いで、限外濾過／ダイアフィルトレーションによって、ナノ粒子を単離および濃縮する。
【０２３１】
Ｔｇが抑制された急速放出型ナノ粒子を作製する例示的な手順では、ポリマーの５０％は、ポリラクチド−ポリ（エチレングリコール）ジブロックコポリマー（ＰＬＡ−ＰＥＧ；１６ｋＤａ−５ｋＤａ）であり、ポリマーの５０％は、ポリ（Ｄ，Ｌ−ラクチド）（ＰＬＡ；８．５ｋＤａ）である。
【０２３２】
Ｔｇを増大させた通常放出型ナノ粒子を作製する例示的な手順では、ポリマーの１００％が、ポリラクチド−ポリ（エチレングリコール）ジブロックコポリマー（ＰＬＡ−ＰＥＧ；１６ｋＤａ−５ｋＤａ）である。
【０２３３】
Ｔｇを増大させた緩徐放出型ナノ粒子を作製する例示的な手順では、ポリマーの５０％は、ポリラクチド−ポリ（エチレングリコール）ジブロックコポリマー（ＰＬＡ−ＰＥＧ；１６ｋＤａ−５ｋＤａ）であり、ポリマーの５０％は、ポリ（Ｄ，Ｌ−ラクチド）（ＰＬＡ；７５ｋＤａ）である。
【０２３４】
（実施例１０）
ロフェコキシブナノ粒子
上記手順を使用して、ロフェコキシブをカプセル化する。表１０および図１４は、１６／５  ＰＬＡ／ＰＥＧ、５０／５  ＰＬＡ／ＰＥＧ、６５／５  ＰＬＡ／ＰＥＧ、および８０ｋＤａのＰＬＡを加えた６５／５  ＰＬＡ／ＰＥＧでできているナノ粒子からの薬物放出を示すものである。ｉｎ  ｖｉｔｒｏ放出試験は、ＰＢＳ中１０％Ｔ２０放出媒体において、遠心法を使用して行った。
【０２３５】
【表１０】
2018533574.tif 000016
【０２３６】
ロフェコキシブの急速放出を調節する別の手法は、有効なより大きいサイズの薬物を作製すること、ならびにロフェコキシブを疎水性シクロデキストリンに複合させることによって、より疎水性の存在を作製することであった。ＢＡ／ＥＡへの高い溶解性ならびに大きい分子量のシクロデキストリンであることを根拠に、ヘプタキス（２，３，６−トリ−Ｏ−ベンゾイル）−β−シクロデキストリン、トリアセチル−β−シクロデキストリン、およびブチル−β−シクロデキストリンを選択した。
【０２３７】
疎水性シクロデキストリンを用いたロフェコキシブ製剤は、理論上５％（ｗ／ｗ）の薬物；３５％（ｗ／ｗ）の疎水性シクロデキストリン：ヘプタキス（２，３，６−トリ−Ｏ−ベンゾイル）−β−シクロデキストリン、トリアセチル−シクロデキストリン、およびブチル−β−シクロデキストリン；６０％（ｗ／ｗ）のポリマー−ＰＥＧ（４７−５  ＰＬＡ−ＰＥＧ）；総固体％＝１０％；溶媒：２１％のベンジルアルコール、７９％の酢酸エチル（ｗ／ｗ）である。
【０２３８】
１グラムのバッチサイズ：５０ｍｇのロフェコキシブ＋３５０ｍｇの適切な疎水性［ＣＤ］＋６００ｍｇの４７／５  ＰＬＡ−ＰＥＧを、９グラムの予め混合したベンジルアルコールと酢酸エチル（１．８９グラムのＢＡ＋７．１１グラムのＥＡ）に終夜溶解させた。ナノ粒子を次のとおりに調製した。
【０２３９】
有機溶液の調製
１．１  有機溶液調製物
１．１．１  ２０ｍＬのガラスバイアルに、ロフェコキシブ５０ｍｇを量り入れた。
１．１．２  異なるそれぞれの疎水性シクロデキストリンについて、３００ｍｇの適切な疎水性シクロデキストリンをロフェコキシブに加えた。
１．１．３  ６００ｍｇの４７／５  ＰＬＡ／ＰＥＧもバイアルに量り入れた。
１．１．４  ９グラムのＢＡ／ＥＡ混合物（２１／７９の重量比）を加え、すべての成分が溶解するまで（終夜）ボルテックス撹拌した。
【０２４０】
水溶液の調製：
１．２  ４７／５  ＰＬＡ−ＰＥＧ製剤：水中に０．３％のコール酸ナトリウム、２％のベンジルアルコール、４％の酢酸エチルについて
１．２．１  １Ｌのボトルに、３ｇのコール酸ナトリウムおよび９３７ｇのＤＩ水を加え、溶解するまで撹拌プレート上で混合する。
１．２．２  コール酸ナトリウム／水に、２０ｇのベンジルアルコールおよび４０ｇの酢酸エチルを加え、溶解するまで撹拌プレート上で混合する。
【０２４１】
エマルジョンの形成。水相対油相の比は、５：１である。
１．３  有機相を水溶液中に注ぎ、手持ち式ホモジナイザーを使用して室温で１０秒間均質化して、粗エマルジョンを形成する。
１．３．１  溶液を高圧ホモジナイザー（１１０Ｓ）に通す。
１．３．２  ４７−５  ＰＬＡ−ＰＥＧ製剤については、圧力を計器上で４５ｐｓｉに設定して慎重に３回通過させて、ナノエマルジョンを形成する。
【０２４２】
ナノ粒子の形成
１．４  撹拌プレート上で撹拌しながら、エマルジョンを５℃未満のクエンチ（Ｄ．Ｉ．水）中に注ぐ。クエンチ対エマルジョンの比は、１０：１である。
１．５  クエンチに、水中３５％（ｗ／ｗ）のＴｗｅｅｎ  ８０を、１００：１のＴｗｅｅｎ８０対薬物の比で加える。
１．６  ナノ粒子をＴＦＦで濃縮する。
１．７  ３００ｋＤａ  Ｐａｌｌカセット（２枚膜）を用いたＴＦＦにおいて、クエンチを約１００ｍＬに濃縮する。
１．８  約２０体積（２リットル）の冷たいＤＩ水をダイアフィルトレーションにかける。体積を最小体積に減らす。
１．９  １００ｍＬの冷水を槽に加え、ポンプで膜に通してすすぐ。
１．１０  材料１００〜１８０ｍＬをガラスバイアルに集める。
１．１１  ナノ粒子をより小規模のＴＦＦでさらに濃縮して、最終体積を１０〜２０ｍＬとする。
【０２４３】
濾過されなかった最終スラリーの固体濃度の決定：
１．１２  風袋を量った２０ｍＬのシンチレーションバイアルに、一定体積の最終スラリーを加え、凍結乾燥／オーブンで真空乾燥する。
１．１３  乾燥して減ったスラリー体積においてナノ粒子の重量を求める。
２．最終スラリー試料にスクロース粉末を加えて、１０％のスクロースとする。
３．０．４５ｕｍで濾過された最終スラリーの固体濃度の決定：
３．１  スクロースを加える前の最終スラリー試料の一部分について、０．４５μｍのシリンジフィルターで濾過する。
３．２  風袋を量った２０ｍＬのシンチレーションバイアルに、一定体積の濾過した試料を加え、真空オーブンで乾燥させる。
【０２４４】
残存する、濾過されなかった最終スラリーの試料を、スクロースと共に凍結させる。表１１に、３種の異なる疎水性シクロデキストリンを用いたナノ粒子のロフェコキシブ添加量およびサイズを示す。
【０２４５】
【表１１】
2018533574.tif 000017
【０２４６】
ｉｎ  ｖｉｔｒｏ放出試験は、選択された製剤について、ＰＢＳ中１０％Ｔ２０放出媒体において、遠心法を使用して行っており、図１５に示すとおりである。図１５からわかるとおり、７（トリ−Ｏ−ベンゾイル）−β−ＣＤおよび７（トリアセチル）−β−ＣＤをロフェコキシブと共にナノ粒子に組み込むことで、ＮＰからのロフェコキシブ放出が明らかに減速するのに対し、ブチル−β−ＣＤは、ロフェコキシブ放出を減速させない可能性がある。ナノ粒子中にロフェコキシブ単独（図１４）と比べると、ある特定の疎水性［ＣＤ］をロフェコキシブと共に組み込むことで、ロフェコキシブの制御された放出が示された（図１５）。疎水性［ＣＤ］のこの明らかな影響は、７（トリ−Ｏ−ベンゾイル）−β−ＣＤおよび７（トリアセチル）−β−ＣＤのロフェコキシブとの起こり得る相互作用、例えば、包接／錯化を示唆している可能性がある。
【０２４７】
（実施例１１）
セレコキシブナノ粒子
上述の手順を使用し、理論上２０％〜３０％（ｗ／ｗ）の薬物ｗｔ．％、７０〜８０％（ｗ／ｗ）のポリマー−ＰＥＧおよび／またはホモポリマー（Ｄ，Ｌ型）ｗｔ．％を用いて、セレコキシブナノ粒子をカプセル化する。総固体％＝２０％および３０％ｗｔ．％；溶媒：２１％の（ＢＡ）ベンジルアルコール、７９％の（ＥＡ）酢酸エチル（ｗ／ｗ）、特に言及する場合を除き、（ＭｅＣｌ２）塩化メチレンｗｔ．％。表１２は、ＰＬＡ（ポリ乳酸）分子量およびＰＬＡ／ＰＬＡ−ＰＥＧブレンドを加えることが薬物添加量およびｉｎ  ｖｉｔｒｏ放出に与える影響を示すものである。
【０２４８】
【表１２】
2018533574.tif 000018
【０２４９】
種々の分子量のＰＬＡ−ＰＥＧ、１６ｋ−５ｋ  ＰＬＡ−ＰＥＧ、５０ｋ−５ｋ  ＰＬＡ−ＰＥＧ、８０ｋ  ＰＬＡのブレンドを製剤に加えた結果、薬物添加量は１３〜１８％となり、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ放出は、シンク条件下で旋回振盪しながら３７℃で１時間インキュベートした後、７０〜９８％の薬物放出であった。
【０２５０】
ベンジルアルコール：塩化メチレン（２１：７９ｗ／ｗ）比の溶媒ブレンドを用いて作製された、Ｌ型の１６ｋ−５ｋ  ＰＬＡ−ＰＥＧ（すなわち、ポリ（ｌ−乳）酸−ＰＥＧ）で製造した製剤は、薬物添加量が２．５８％と有意に少なくなり、１時間の時点でのｉｎ  ｖｉｔｒｏ放出は、９４．９％となった。非晶質であるＤ，Ｌ型に比べて結晶質であるＬ型の１６ｋ−５ｋ  ＰＬＡ−ＰＥＧを加えると、薬物のカプセル化は大幅に減少した。
【０２５１】
理論上５〜３０％（ｗ／ｗ）の薬物ｗｔ．％、７０〜９５％（ｗ／ｗ）のポリマー−ＰＥＧおよび／またはホモポリマー（Ｄ，Ｌ型）ｗｔ．％を使用して、種々の薬物添加ナノ粒子を調製した。表１３に示すとおり、総固体％＝２０％および３０％ｗｔ．％；溶媒：２１％の（ＢＡ）ベンジルアルコール、７９％の（ＥＡ）酢酸エチル（ｗ／ｗ）ｗｔ．％。
【０２５２】
【表１３】
2018533574.tif 000019
【０２５３】
表１３は、ナノ粒子の薬物添加量が薬物放出に影響を与えることを示している。５０−５および６５−５／７５−５  ＰＬＡ−ＰＥＧポリマー−ＰＥＧは、薬物添加量の影響を受けたが、１６−５  ＰＬＡ−ＰＥＧでは、薬物添加量が放出に影響しなかった。粒径が１２２および１２９ｎｍとより小さい１６−５  ＰＬＡ−ＰＥＧポリマーでは、薬物放出が、薬物添加量にかかわらず９８〜９９％となった。どちらも同様の粒径である５０−５  ＰＬＡ−ＰＥＧポリマーでは、少ない方の添加量３．４８％において、１時間の時点で７９％の薬物放出となったが、多い方の添加量１８．３％では、薬物放出が９６％であった。薬物添加量がそれぞれ１４．４９％および４．４７％であり、薬物放出がそれぞれ７１％および４４％である、６５−５および７５−５  ＰＬＡ−ＰＥＧを用いた製剤では、薬物放出が最も遅くなり、粒径は、これらのバッチの中では大きめであった。理論上５％（ｗ／ｗ）の薬物ｗｔ．％；９５％（ｗ／ｗ）のポリマー−ＰＥＧおよび／またはホモポリマーｗｔ．％、総固体％＝２０〜３０％ｗｔ．％、溶媒：２１％（ＢＡ）のベンジルアルコール、７９％（ＥＡ）の酢酸エチル（ｗ／ｗ）ｗｔ．％から、低薬物添加ナノ粒子も形成された。
【０２５４】
【表１４】
2018533574.tif 000020
【０２５５】
表１４は、粒径が薬物の放出に影響を与え、同様の薬物添加量では、粒径が増すにつれてｉｎ  ｖｉｔｒｏ放出が減速することを示している。５０−５  ＰＬＡ−ＰＥＧポリマーについて、粒径が１４６ｎｍから３１０ｎｍに増大するにつれて、１時間の時点での薬物放出は、７９％から２８％に減少した。加えて、この傾向は、１６−５  ＰＬＡ−ＰＥＧでも認められた。１６４ｎｍの粒子では、１時間薬物放出が９６％であったが、３７０ｎｍの粒子では、薬物放出が７６％である。
【０２５６】
理論上２０％（ｗ／ｗ）の薬物ｗｔ．％、８０％（ｗ／ｗ）のポリマー−ＰＥＧおよび／またはホモポリマーｗｔ．％、総固体％＝２０％ｗｔ．％、溶媒：２１％の（ＢＡ）ベンジルアルコール、７９％（ＥＡ）の、特に言及する場合を除き酢酸エチル（ｗ／ｗ）、（ＭｅＣｌ２）塩化メチレン、１００％ｗｔ．％で、ポリカプロラクトンを用いた別の製剤を調製した。表１５は、ＰＣＬ（ポリカプロラクトン）分子量およびＰＬＡ／ＰＬＡ−ＰＥＧブレンドを加えることが薬物添加量およびｉｎ  ｖｉｔｒｏ放出に与える影響を示すものである。
【０２５７】
【表１５】
2018533574.tif 000021
【０２５８】
種々の分子量のＰＣＬ（ポリカプロラクトン）、１６．３ｋ−５ｋ  ＰＣＬ−ＰＥＧ、８ｋ、３０ｋ、６０ｋ、９２ｋ  ＰＣＬの４５ｋ−５ｋ  ＰＬＡ−ＰＥＧとのブレンドを加えた結果、薬物添加量は、０．８％〜１３％となり、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ放出は、シンク条件下で旋回振盪しながら３７℃で１時間インキュベートした後、７０〜９８％の薬物放出であった。
【０２５９】
ポリマーマトリックスと水素結合し、薬物添加量およびｉｎ  ｖｉｔｒｏ放出に影響を及ぼし得る疎水性薬剤を用いた別の製剤を、理論上２０％（ｗ／ｗ）の薬物ｗｔ．％；６０％（ｗ／ｗ）のポリマー−ＰＥＧ  ｗｔ．％；２０％（ｗ／ｗ）の添加剤ｗｔ．％；総固体％＝２０％ｗｔ．％；溶媒：２１％の（ＢＡ）ベンジルアルコール、７９％の（ＥＡ）酢酸エチル（ｗ／ｗ）ｗｔ．％で調製した。
【０２６０】
ポリマーマトリックスと水素結合することができる疎水性分子を加えることが薬物添加量およびｉｎ  ｖｉｔｒｏ放出に与える影響を、表１６に示す。
【０２６１】
【表１６】
2018533574.tif 000022
【０２６２】
ｎ−アセチル−Ｌ−チロシンエチルエステル、ビタミンＥコハク酸エステル、またはパモ酸を加えた結果、９〜１８％という許容できる薬物添加量となった。１時間の時点までに、８３〜９７％の薬物が放出された。
【０２６３】
表１７に示すとおり、理論上２０％〜３０％（ｗ／ｗ）の薬物ｗｔ％；３５％〜６０％（ｗ／ｗ）のポリマー−ＰＥＧ  ｗｔ．％；５％〜３５％（ｗ／ｗ）の添加剤ｗｔ．％；総固体％＝１４〜２０％ｗｔ．％；溶媒：２１％（ＢＡ）のベンジルアルコール、７９％（ＥＡ）の酢酸エチル（ｗ／ｗ）ｗｔ．％、ベンジルアルコール：酢酸エチルのブレンドに等価な割合で加えられるジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）を使用して、親水性および疎水性の薬剤を用いた製剤を調製した。
【０２６４】
【表１７】
2018533574.tif 000023
【０２６５】
親水性シクロデキストリン、すなわち、ヒドロキシプロピル−ベータ−シクロデキストリン、ベータ−シクロデキストリン、またはガンマ−シクロデキストリンを加えた結果、１２〜１５％という許容できる薬物添加量となり、１時間までに９４〜９８％の薬物が放出された。（薬物とのパイ−パイ相互作用の形成の可能性を伴う）カフェインを組み込んだ結果、薬物添加量は１５％となり、１時間の時点で９３％の薬物が放出された。ヒドロキシル基を有する線状でかさ高な疎水性分子、すなわち、ドデカンジオール、ラウロイル脂質、および没食子酸プロピルについて、ポリマーと水素結合を形成する、またはマトリックスに疎水性を付加する可能性を評価し、結果として薬物添加量は１０〜２０％となったが、１時間の時点で９０％を超える薬物が放出された。
【０２６６】
理論上６％〜２６％（ｗ／ｗ）の薬物ｗｔ％；４０％〜６０％（ｗ／ｗ）のポリマー−ＰＥＧ  ｗｔ．％；０．１０〜１のモル比のベータ−シクロデキストリン対１のモル比の薬物；溶媒：２１％の（ＢＡ）ベンジルアルコール、７９％（ＥＡ）の酢酸エチル（ｗ／ｗ）ｗｔ．％を使用して、ベータ−シクロデキストリンを用いた製剤を調製した。疎水性のベータ−シクロデキストリンを加えることが薬物添加量およびｉｎ  ｖｉｔｒｏ放出に与える影響を、表１８に示す。
【０２６７】
【表１８】
2018533574.tif 000024
【０２６８】
疎水性シクロデキストリン、すなわち、２，３，６トリ−ｏ−ベンゾイル−ｂ−ＣＤ、トリアセチル−ｂ−ＣＤ、およびブチル−ｂ−ＣＤを加えた結果、薬物添加量は１．６〜１７％となり、ターゲット薬物添加量に応じて、１時間までに５６〜９３％の薬物が放出された。２，３，６トリ−ｏ−ベンゾイル−ｂ−シクロデキストリンが、０．３５：１のモル比のｂ−ＣＤで、３．２６％の添加量という少ない薬物添加量で薬物に加えられた結果、薬物放出は最も遅くなった。薬物添加量を５．４〜１６．７８％と増加させて仕込んだ追加のバッチでは、放出がより急速となり、１時間の時点で７７〜９２％の薬物が放出された。他のベータ−シクロデキストリンであるトリアセチル−ｂ−ＣＤおよびブチル−ｂ−ＣＤをより少ない薬物添加量で加えても、２，３，６トリ−ｏ−ベンゾイル−ｂ−ＣＤよりゆっくりとした薬物放出は示されなかった。
【０２６９】
（実施例１２）
水混和性溶媒を加えたＢＡ／ＥＡ混合物を有機相溶媒として使用するセレコキシブナノ粒子調製
ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）およびジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）は、ナノ粒子を作製するためのナノ沈殿用の溶媒として分類され、その水混和性の特性のために、ナノ粒子を水中油ナノエマルジョン法によって調製する際は、一般に、溶媒の一部として使用されていない。ＢＡまたはＢＡ／ＥＡ混合物を、水混和性溶媒であるジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）およびジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）と共に使用し、ナノエマルジョン法を使用してナノ粒子を形成する。１００ｍｇの薬物および９００ｍｇのポリマーを使用して、１グラムバッチで製剤を製造した。１０％（ｗ／ｗ）の理論薬物添加量、９０％（ｗ／ｗ）の４５−５  ＰＬＡ−ＰＥＧ、および１０％の総固体（ロット１３１−１５０−２を除く）をすべての製剤に使用した。セレコキシブをモデル薬物として使用した。
【０２７０】
２１／７９  ＢＡ／ＥＡのみを有機相溶媒として使用するナノエマルジョンプロセスで調製したナノ粒子（ロット１３１−１３３−６）を、対照とした。
【０２７１】
ロット１３１−１３３−１、２、３、４、５は、２１／７９のＢＡ／ＥＡの混合物をＤＭＳＯと共に有機相溶媒として使用して製造され、ＢＡ／ＥＡ含有量は、９８％〜５０％の範囲とした。ロット１３１−１５０−４、５、６、２は、２１／７９のＢＡ／ＥＡの混合物をＤＭＦと共に有機相溶媒として使用して製造され、ＢＡ／ＥＡ含有量は、９８％〜３３％の範囲とした。製剤条件を表１９に示す。すべての製剤の粒径、薬物添加量、および固体濃度に関する特徴付けデータを、表２０にまとめた。対照バッチ、およびＤＭＳＯを加えた（ＢＡ／ＥＡ）混合物を有機相溶媒として使用するバッチのｉｎ  ｖｉｔｒｏ放出を、表２１および図１６に示した。
【０２７２】
【表１９】
2018533574.tif 000025
【０２７３】
【表２０】
2018533574.tif 000026
【０２７４】
【表２１】
2018533574.tif 000027
【０２７５】
ＤＭＳＯまたはＤＭＦを加えた後、すべての製剤を上述のとおりに加工処理した。ナノエマルジョンプロセスを使用するナノ粒子の製造手順（ロット１３１−１３３−３）：
【０２７６】
薬物／ポリマー溶液の調製
１．１  ２０ｍＬのガラスバイアルに、セレコキシブ１００ｍｇを加える。
１．２  薬物に９９０ｍｇのジメチルスルホキシドを加え、透明になるまでボルテックス撹拌する。
１．３  ２１ｇのＢＡと７９ｇのＥＡを計量することにより、２１／７９のＢＡ／ＥＡ混合物を調製する。１．４  新たな２０ｍＬガラスバイアルに、９００ｍｇのポリマー−ＰＥＧを加える。
１．５  ポリマーに、８０１０ｍｇの２１／７９  ＢＡ／ＥＡ混合物を加え、溶解するまでボルテックス撹拌する。
１．６  薬物およびポリマー溶液を混合した後、ポリマー溶液を薬物溶液に加え、ボルテックス撹拌することにより製剤化する。
【０２７７】
水溶液：水中に０．４％のコール酸ナトリウム、２％のベンジルアルコール、および４％の酢酸エチルの調製：
１．７  １Ｌのボトルに、４ｇのコール酸ナトリウムおよび９５６ｇのＤＩ水を加え、溶解するまで撹拌プレート上で混合する。
１．８  コール酸ナトリウム／水に、２０ｇのベンジルアルコールおよび４０ｇの酢酸エチルを加え、溶解するまで撹拌プレート上で混合する。
【０２７８】
エマルジョンの形成。水相対油相の比は、５：１である。
１．９  有機相を水溶液中に注ぎ、手持ち式ホモジナイザーを使用して室温で１０秒間均質化して、粗エマルジョンを形成する。
１．１０  溶液を、圧力を計器上で２５ｐｓｉに設定した高圧ホモジナイザー（１１０Ｓ）に送って１回通過させる。
【０２７９】
ナノ粒子の形成
１．１１  撹拌プレート上で撹拌しながら、エマルジョンを５℃未満のクエンチ（Ｄ．Ｉ．水）中に注ぐ。クエンチ対エマルジョンの比は、５：１である。
【０２８０】
ナノ粒子をＴＦＦで濃縮する。
１．１２  ３００ｋＤａ  Ｐａｌｌカセット（２枚膜）を用いたＴＦＦにおいて、クエンチを約２００ｍＬに濃縮する。
１．１３  約２０体積（４リットル）の冷たいＤＩ水をダイアフィルトレーションにかける。体積を最小体積に減らす。
１．１４  １００ｍＬの冷水を槽に加え、ポンプで膜に通してすすぐ。
【０２８１】
材料５０〜１００ｍＬをガラスバイアルに集める。
【０２８２】
濾過されなかった最終スラリーの固体濃度の決定：
１．１５  風袋を量った２０ｍＬのシンチレーションバイアルに、一定体積の最終スラリーを加え、真空オーブンにおいて８０℃で真空乾燥する。
１．１６  乾燥して減ったスラリー体積においてナノ粒子の重量を求める。
【０２８３】
最終スラリー試料に濃スクロース（０．１１１ｇ／ｇ）を加えて、１０％のスクロースとする。
【０２８４】
０．４５ｕｍで濾過された最終スラリーの固体濃度の決定：
１．１７  スクロースを加える前の最終スラリー試料の一部分について、０．４５μｍのシリンジフィルターで濾過する。
１．１８  風袋を量った２０ｍＬのシンチレーションバイアルに、一定体積の濾過した試料を加え、真空オーブンにおいて８０℃で真空乾燥する。
【０２８５】
残存する、濾過されなかった最終スラリーの試料を、スクロースと共に凍結させる。
【０２８６】
すべての製剤について、ＴＦＦ後、ナノ粒子の収率は十分であり、収集し、固体濃度は、５〜８ｍｇ／ｍＬの範囲であった。ＮＰ収率は、（ＢＡ／ＥＡ）含有量の少ない２つのバッチ、５０％（ＢＡ／ＥＡ）のロット１３１−１３３−５および３３％（ＢＡ／ＥＡ）のロット１３１−１５０−２を除き、すべて５０％を上回っている。ＢＡ／ＥＡ含有量が５０％以上であるすべてのバッチについて、粒径は、１４０〜１６０ｎｍの範囲に申し分なく制御された。すべての製剤の薬物添加量が、対照と等しいかそれより高かった。これらの結果は、薬物添加量を向上させるのにこうした混合物を使用することの潜在的可能性を証明している。（ＢＡ／ＥＡ）混合物をＤＭＳＯと共に使用するバッチからのｉｎ  ｖｉｔｒｏ  放出プロファイルは、対照バッチであるロット１３１−１３３−６からの放出と重なり合う。有機相に水混和性溶媒を加えることは、ナノ粒子のｉｎ  ｖｉｔｒｏ放出に影響を及ぼさない。全体として、有機相に水混和性溶媒であるＤＭＳＯまたはＤＭＦを５０％まで加えることにより、ナノ粒子のｉｎ  ｖｉｔｒｏ放出を変化させずに、ナノエマルジョン法を使用してナノ粒子を調製することができた。カプセル化することができなかった、またはこれまでカプセル化効率が低くなっている薬物は、こうした改質された有機相溶媒を使用してカプセル化することができる可能性がある。
【０２８７】
均等物
当業者は、単に通例の実験法を使用して、本明細書に記載されている本発明の特定の実施形態に対する多くの均等物を認識するか、確認することができる。このような均等物は、下記の特許請求の範囲によって包含されるものとする。
【０２８８】
参照による組込み
本明細書において引用した全ての特許、公開された特許出願、ウェブサイト、および他の参照文献の全内容は、参照によりその全体が明確に本明細書において組み込まれている。
【図１】
2018533574.tif 000029
【図２−１】
2018533574.tif 000030
【図２−２】
2018533574.tif 000031
【図３】
2018533574.tif 000032
【図４】
2018533574.tif 000033
【図５】
2018533574.tif 000034
【図６】
2018533574.tif 000035
【図７】
2018533574.tif 000036
【図８】
2018533574.tif 000037
【図９】
2018533574.tif 000038
【図１０】
2018533574.tif 000039
【図１１】
2018533574.tif 000040
【図１２】
2018533574.tif 000041
【図１３】
2018533574.tif 000042
【図１４】
2018533574.tif 000043
【図１５】
2018533574.tif 000044
【図１６】
2018533574.tif 000045
【国際調査報告】
2018533574.tif 000046
2018533574.tif 000047