(57)【要約】本発明は、癌、特にＨＥＲ２発現癌を患っている患者の治療のための、抗ＨＥＲ２抗体−薬物複合体及び選択的Ｂｃｌ−２阻害剤を含有する、併用療法に関する。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
それを必要とするヒトの癌治療のための方法であって、抗ＨＥＲ２抗体−薬物複合体及び選択的Ｂｃｌ−２阻害剤の有効量を前記ヒトに投与することを含む、前記方法。
【請求項２】
前記癌がＨＥＲ２陽性である、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記癌がＨＥＲ２陽性乳癌または胃癌である、請求項２に記載の方法。
【請求項４】
前記ＨＥＲ２陽性乳癌または胃癌が、２＋もしくは３＋の免疫組織化学（ＩＨＣ）スコア、及び／または２．０以上のｉｎ  ｓｉｔｕハイブリダイゼーション（ＩＳＨ）増幅率を有する、請求項３に記載の方法。
【請求項５】
前記ＨＥＲ２陽性癌が、単剤として投与される前記抗ＨＥＲ２抗体−薬物複合体による治療に耐性がある、請求項１〜４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６】
前記ＨＥＲ２陽性癌が、単剤として投与される前記抗ＨＥＲ２抗体−薬物複合体による治療に感受性がある、請求項１〜４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７】
前記抗ＨＥＲ２抗体−薬物複合体及び前記選択的Ｂｃｌ−２阻害剤が相乗的な活性を示す、請求項５または請求項６に記載の方法。
【請求項８】
前記抗ＨＥＲ２抗体−薬物複合体がトラスツズマブ−ＭＣＣ−ＤＭ１である、請求項１〜７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９】
前記選択的Ｂｃｌ−２阻害剤が、２−（１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−５−イルオキシ）−４−（４−（（２−（４−クロロフェニル）−４，４−ジメチルシクロヘキサ−１−エニル）メチル）ピペラジン−１−イル）−Ｎ−（３−ニトロ−４−（（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−イル）メチルアミノ）フェニルスルホニル）ベンズアミド、またはその薬学的に許容される塩である、請求項１〜８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０】
前記抗ＨＥＲ２抗体−薬物複合体及び前記選択的Ｂｃｌ−２阻害剤が、組み合わせ製剤としてまたは交互に投与される、請求項１〜９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１１】
それを必要とするヒトのＨＥＲ２陽性癌治療のための方法であって、前記ヒトに有効量のトラスツズマブ−ＭＣＣ−ＤＭ１及び２−（１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−５−イルオキシ）−４−（４−（（２−（４−クロロフェニル）−４，４−ジメチルシクロヘキサ−１−エニル）メチル）ピペラジン−１−イル）−Ｎ−（３−ニトロ−４−（（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−イル）メチルアミノ）フェニルスルホニル）ベンズアミド、またはその薬学的に許容される塩を投与することを含む、前記方法。
【請求項１２】
前記癌がＨＥＲ２陽性乳癌または胃癌である、請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
前記ＨＥＲ２陽性乳癌または胃癌が、２＋もしくは３＋の免疫組織化学（ＩＨＣ）スコア、及び／または２．０以上のｉｎ  ｓｉｔｕハイブリダイゼーション（ＩＳＨ）増幅率を有する、請求項１２に記載の方法。
【請求項１４】
前記ＨＥＲ２陽性癌が、単剤として投与される前記トラスツズマブ−ＭＣＣ−ＤＭ１による治療に耐性がある、請求項１１〜１３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１５】
前記ＨＥＲ２陽性癌が、単剤として投与される前記抗ＨＥＲ２抗体−薬物複合体による治療に感受性がある、請求項１１〜１３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１６】
前記トラスツズマブ−ＭＣＣ−ＤＭ１及び前記２−（１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−５−イルオキシ）−４−（４−（（２−（４−クロロフェニル）−４，４−ジメチルシクロヘキサ−１−エニル）メチル）ピペラジン−１−イル）−Ｎ−（３−ニトロ−４−（（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−イル）メチルアミノ）フェニルスルホニル）ベンズアミド、またはその薬学的に許容される塩が、相乗的な活性を示す、請求項１１〜１５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１７】
前記トラスツズマブ−ＭＣＣ−ＤＭ１及び前記２−（１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−５−イルオキシ）−４−（４−（（２−（４−クロロフェニル）−４，４−ジメチルシクロヘキサ−１−エニル）メチル）ピペラジン−１−イル）−Ｎ−（３−ニトロ−４−（（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−イル）メチルアミノ）フェニルスルホニル）ベンズアミド、またはその薬学的に許容される塩が、併用投与される、請求項１１〜１６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１８】
前記トラスツズマブ−ＭＣＣ−ＤＭ１及び前記２−（１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−５−イルオキシ）−４−（４−（（２−（４−クロロフェニル）−４，４−ジメチルシクロヘキサ−１−エニル）メチル）ピペラジン−１−イル）−Ｎ−（３−ニトロ−４−（（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−イル）メチルアミノ）フェニルスルホニル）ベンズアミド、またはその薬学的に許容される塩が、一製剤でまたは交互に投与される、請求項１７に記載の方法。
【請求項１９】
前記トラスツズマブ−ＭＣＣ−ＤＭ１及び前記２−（１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−５−イルオキシ）−４−（４−（（２−（４−クロロフェニル）−４，４−ジメチルシクロヘキサ−１−エニル）メチル）ピペラジン−１−イル）−Ｎ−（３−ニトロ−４−（（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−イル）メチルアミノ）フェニルスルホニル）ベンズアミド、またはその薬学的に許容される塩が、同時に投与される、請求項１８に記載の方法。
【請求項２０】
前記トラスツズマブ−ＭＣＣ−ＤＭ１及び前記２−（１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−５−イルオキシ）−４−（４−（（２−（４−クロロフェニル）−４，４−ジメチルシクロヘキサ−１−エニル）メチル）ピペラジン−１−イル）−Ｎ−（３−ニトロ−４−（（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−イル）メチルアミノ）フェニルスルホニル）ベンズアミド、またはその薬学的に許容される塩が、連続して投与される、請求項１８に記載の方法。
【請求項２１】
癌治療のための薬剤の調製における、抗ＨＥＲ２抗体−薬物複合体及び選択的Ｂｃｌ−２阻害剤の組み合わせの使用。
【請求項２２】
癌治療のための薬剤の調製における、トラスツズマブ−ＭＣＣ−ＤＭ１及び２−（１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−５−イルオキシ）−４−（４−（（２−（４−クロロフェニル）−４，４−ジメチルシクロヘキサ−１−エニル）メチル）ピペラジン−１−イル）−Ｎ−（３−ニトロ−４−（（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−イル）メチルアミノ）フェニルスルホニル）ベンズアミド、またはその薬学的に許容される塩の組み合わせの使用。
【請求項２３】
癌治療で使用するための、抗ＨＥＲ２抗体−薬物複合体及び選択的Ｂｃｌ−２阻害剤の組み合わせ。
【請求項２４】
癌治療に使用するための、トラスツズマブ−ＭＣＣ−ＤＭ１及び２−（１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−５−イルオキシ）−４−（４−（（２−（４−クロロフェニル）−４，４−ジメチルシクロヘキサ−１−エニル）メチル）ピペラジン−１−イル）−Ｎ−（３−ニトロ−４−（（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−イル）メチルアミノ）フェニルスルホニル）ベンズアミド、またはその薬学的に許容される塩の組み合わせ。
【請求項２５】
医薬組成物である、請求項２４に記載の組み合わせ。
【請求項２６】
前記癌がＨＥＲ２陽性癌である、請求項２１もしくは２２に記載の使用、または請求項２３もしくは２５に記載の組み合わせ。
【請求項２７】
前記癌がＨＥＲ２陽性乳癌または胃癌である、請求項２６に記載の使用または組み合わせ。
【請求項２８】
前記癌が、単剤として投与されるとき、前記抗ＨＥＲ２抗体−薬物複合体または前記トラスツズマブ−ＭＣＣ−ＤＭ１による治療に耐性がある、請求項２６に記載の使用または組み合わせ。
【請求項２９】
前記癌が、単剤として投与されるとき、前記抗ＨＥＲ２抗体−薬物複合体または前記トラスツズマブ−ＭＣＣ−ＤＭ１による治療に感受性がある、請求項２６に記載の使用または組み合わせ。
【請求項３０】
ＨＥＲ２発現癌に罹患したヒトの前記治療のための、抗ＨＥＲ２抗体−薬物複合体及び選択的Ｂｃｌ−２阻害剤の組み合わせを含む、キット。
【請求項３１】
前記抗ＨＥＲ２抗体−薬物複合体及び前記選択的Ｂｃｌ−２阻害剤が別個の製剤内にある、請求項３０に記載のキット。
【請求項３２】
前記抗ＨＥＲ２抗体−薬物複合体及び前記選択的Ｂｃｌ−２阻害剤が同じ製剤内にある、請求項３０に記載のキット。
【請求項３３】
ＨＥＲ２発現癌に罹患したヒトへの前記抗ＨＥＲ２抗体−薬物複合体及び前記選択的Ｂｃｌ−２阻害剤の投与を指示する使用説明書入りの添付文書を更に含む、請求項３０〜３２のいずれか一項に記載のキット。
【請求項３４】
前記癌が、単剤として投与されるとき、前記抗ＨＥＲ２抗体−薬物複合体または前記トラスツズマブ−ＭＣＣ−ＤＭ１による治療に耐性がある、請求項３３に記載のキット。
【請求項３５】
前記癌が、単剤として投与されるとき、前記抗ＨＥＲ２抗体−薬物複合体または前記トラスツズマブ−ＭＣＣ−ＤＭ１による治療に感受性がある、請求項３３に記載のキット。
【請求項３６】
ＨＥＲ２陽性癌患者から得られた腫瘍試料において、対照試料の発現レベルと比較してＢｃｌ−２遺伝子またはその生成物の発現レベルを測定すること、及び前記腫瘍試料の発現レベルが、前記対照試料の発現レベルより大きく、少なくとも２倍のとき、前記抗ＨＥＲ２抗体−薬物複合体による治療に対する耐性について前記癌を診断すること、を含む、抗ＨＥＲ２抗体−薬物複合体による治療に耐性があるＨＥＲ２陽性腫瘍の前記診断のための方法。
【請求項３７】
ＨＥＲ２陽性癌患者から得られた腫瘍試料において、対照試料の発現レベルと比較してＢｃｌ−２遺伝子またはその生成物の発現レベルを測定すること、及び前記腫瘍試料の発現レベルが、前記対照試料の発現レベルより大きく、２倍未満のとき、前記抗ＨＥＲ２抗体−薬物複合体による治療への感受性について前記癌を診断すること、を含む、抗ＨＥＲ２抗体−薬物複合体による治療に感受性があるＨＥＲ２陽性腫瘍の前記診断のための方法。
【請求項３８】
（ｉ）前記対象から腫瘍試料を得ること、（ｉｉ）対照試料と比較して、前記腫瘍試料のＢｃｌ−２遺伝子またはその生成物の発現レベルを測定すること、及び（ｉｉｉ）前記腫瘍試料のＢｃｌ−２の測定した発現レベルが、前記対照試料の発現レベルより大きく、少なくとも２倍であるとき、抗ＨＥＲ２抗体−薬物複合体による治療に対する耐性について前記腫瘍を診断すること、または前記腫瘍試料のＢｃｌ−２の測定した発現レベルが、前記対照試料の発現レベルより大きく、２倍未満のとき、抗ＨＥＲ２抗体−薬物複合体による治療への感受性について前記腫瘍を診断すること、を含む、抗ＨＥＲ２抗体−薬物複合体による治療に耐性があるまたはそれへの感受性が高い、ＨＥＲ２陽性腫瘍を有する対象の前記診断のための方法。
【請求項３９】
前記対象がヒト患者である、請求項３８に記載の方法。
【請求項４０】
前記対照試料が、前記抗ＨＥＲ２抗体−薬物複合体による治療に対する耐性がない、同じ種類の細胞の腫瘍試料である、請求項３６〜３９のいずれかに記載の方法。
【請求項４１】
前記腫瘍が乳癌または胃癌である、請求項３６〜３９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４２】
前記腫瘍試料が、ホルマリン固定パラフィン包埋腫瘍試料である、請求項３６〜３９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４３】
前記腫瘍試料の前記ＨＥＲ２遺伝子またはその生成物の前記発現レベルを測定する工程を更に含む、請求項３６〜４２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４４】
前記腫瘍試料のＢｃｌ−２の測定した発現レベルが、前記対照試料の発現レベルより大きく、少なくとも２倍であるとき、抗ＨＥＲ２抗体−薬物複合体と選択的Ｂｃｌ−２阻害剤で前記対象を治療する工程を更に含む、請求項３６〜４３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４５】
前記腫瘍試料のＢｃｌ−２の測定した発現レベルが、前記対照試料の発現レベルより大きく、２倍未満であるとき、抗ＨＥＲ２抗体−薬物複合体と選択的Ｂｃｌ−２阻害剤で前記患者を治療する工程を更に含む、請求項３６〜４３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４６】
前記抗ＨＥＲ２抗体−薬物複合体がトラスツズマブ−ＭＣＣ−ＤＭ１である、請求項４４または４５に記載の方法。
【請求項４７】
前記選択的Ｂｃｌ−２阻害剤が、２−（１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−５−イルオキシ）−４−（４−（（２−（４−クロロフェニル）−４，４−ジメチルシクロヘキサ−１−エニル）メチル）ピペラジン−１−イル）−Ｎ−（３−ニトロ−４−（（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−イル）メチルアミノ）フェニルスルホニル）ベンズアミド、またはその薬学的に許容される塩である、請求項４４または４６に記載の方法。
【請求項４８】
患者から得た生体試料の抗ＨＥＲ２抗体−薬物複合体による治療に対する耐性があるＨＥＲ２陽性腫瘍のｉｎ  ｖｉｔｒｏ診断またはその予後のためのキットであって、前記Ｂｃｌ−２遺伝子またはその発現生成物の特異的結合パートナーを含む、前記キット。
【請求項４９】
前記結合パートナーが抗Ｂｃｌ−２抗体である、請求項４８に記載のキット。
【請求項５０】
前記結合パートナーが前記Ｂｃｌ−２遺伝子にハイブリダイズする核酸である、請求項４９に記載のキット。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
配列表
本出願は、ＡＳＣＩＩ形式で電子的に提出された配列表を含み、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。２０１６年６月２８日に作成された上記ＡＳＣＩＩコピーは、ＧＮＥ−０４１６−ＷＯ．ｔｘｔという名称であり、６，２９８バイトのサイズである。
【０００２】
本発明は、癌治療のための抗ＨＥＲ２抗体−薬物複合体及びＢｃｌ−２阻害剤を含有する併用療法に関する。特定の実施形態で、本発明は、ＨＥＲ２陽性癌（例えばＨＥＲ２陽性乳癌または胃癌）の治療のために、トラスツズマブ−ＭＣＣ−ＤＭ１（トラスツズマブエムタンシン、ＫＡＤＣＹＬＡ（登録商標））及び選択的Ｂｃｌ−２阻害剤を使用する方法に関する。
【背景技術】
【０００３】
抗ＨＥＲ２抗体−薬物複合体
ＨＥＲ２（ＥｒｂＢ２）受容体チロシンキナーゼは、膜貫通受容体の上皮成長因子受容体（ＥＧＦＲ）ファミリーのメンバーである。ＨＥＲ２の過剰発現は、ヒト乳癌（以下「ＨＥＲ陽性乳癌」という）のおよそ２０％に観察され、これらの腫瘍に関連する侵攻性の成長及び臨床転帰不良に関連付けられている（Ｓｌａｍｏｎ  ｅｔ  ａｌ（１９８７）Ｓｃｉｅｎｃｅ２３５：１７７−１８２）。ＨＥＲ２タンパク質過剰発現は、固定腫瘍ブロックの免疫組織化学に基づく評価を使用して決定され得る（Ｐｒｅｓｓ  ＭＦ，ｅｔ  ａｌ（１９９３）Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ５３：４９６０−７０）。
【０００４】
トラスツズマブ（ＣＡＳ１８０２８８−６９−１、ＨＥＲＣＥＰＴＩＮ（登録商標）、ｈｕＭＡｂ４Ｄ５−８、ｒｈｕＭＡｂ  ＨＥＲ２、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ）は、細胞ベースのアッセイにおいて、ＨＥＲ２の細胞外ドメインに高親和性で選択的に結合する（Ｋｄ＝５ｎＭ）マウス抗ＨＥＲ２抗体（４Ｄ５）のヒト化バージョンである、組換えＤＮＡ由来のＩｇＧ１κ、モノクローナル抗体である（米国特許第５６７７１７１号、同第５８２１３３７号、同第６０５４２９７号、同第６１６５４６４号、同第６３３９１４２号、同第６４０７２１３号、同第６６３９０５５号、同第６７１９９７１号、同第６８００７３８号、同第７０７４４０４号、Ｃｏｕｓｓｅｎｓ  ｅｔ  ａｌ（１９８５）Ｓｃｉｅｎｃｅ２３０：１１３２−９、Ｓｌａｍｏｎ  ｅｔ  ａｌ（１９８９）Ｓｃｉｅｎｃｅ２４４：７０７−１２、Ｓｌａｍｏｎ  ｅｔ  ａｌ（２００１）Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３４４：７８３−７９２）。トラスツズマブは、ｉｎ  ｖｉｔｒｏアッセイ及び動物の両方において、ＨＥＲ２を過剰発現するヒト腫瘍細胞の増殖を阻害することが示された（Ｈｕｄｚｉａｋ  ｅｔ  ａｌ（１９８９）Ｍｏｌ  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ９：１１６５−７２、Ｌｅｗｉｓ  ｅｔ  ａｌ（１９９３）Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ；３７：２５５−６３、Ｂａｓｅｌｇａ  ｅｔ  ａｌ（１９９８）Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．５８：２８２５−２８３１）。トラスツズマブは、抗体依存的細胞性細胞傷害性、ＡＤＣＣの媒介因子である（Ｌｅｗｉｓ  ｅｔ  ａｌ（１９９３）Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ３７（４）：２５５−２６３、Ｈｏｔａｌｉｎｇ  ｅｔ  ａｌ（１９９６）［ａｂｓｔｒａｃｔ］．Ｐｒｏｃ．Ａｎｎｕａｌ  Ｍｅｅｔｉｎｇ  Ａｍ  Ａｓｓｏｃ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ；３７：４７１、Ｐｅｇｒａｍ  ＭＤ，ｅｔ  ａｌ（１９９７）［ａｂｓｔｒａｃｔ］．Ｐｒｏｃ  Ａｍ  Ａｓｓｏｃ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ；３８：６０２、Ｓｌｉｗｋｏｗｓｋｉ  ｅｔ  ａｌ（１９９９）Ｓｅｍｉｎａｒｓ  ｉｎ  Ｏｎｃｏｌｏｇｙ２６（４），Ｓｕｐｐｌ１２：６０−７０、Ｙａｒｄｅｎ  Ｙ．  ａｎｄ  Ｓｌｉｗｋｏｗｓｋｉ，Ｍ．（２００１）Ｎａｔｕｒｅ  Ｒｅｖｉｅｗｓ：Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｍａｃｍｉｌｌａｎ  Ｍａｇａｚｉｎｅｓ，Ｌｔｄ．，Ｖｏｌ．２：１２７−１３７）。
【０００５】
ＨＥＲＣＥＰＴＩＮ（登録商標）は、ＨＥＲ２を過剰発現する転移性乳癌を有する、広範な前抗癌療法を受けた患者の治療のために１９９８年に承認され（Ｂａｓｅｌｇａ  ｅｔ  ａｌ，（１９９６）Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｏｎｃｏｌ．１４：７３７−７４４）、それ以来３００，０００名を超える患者において使用されてきた（Ｓｌａｍｏｎ  ＤＪ，ｅｔ  ａｌ．Ｎ  Ｅｎｇｌ  Ｊ  Ｍｅｄ２００１；３４４：７８３−９２、Ｖｏｇｅｌ  ＣＬ，ｅｔ  ａｌ．Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｏｎｃｏｌ２００２；２０：７１９２６、Ｍａｒｔｙ  Ｍ，ｅｔ  ａｌ．Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｏｎｃｏｌ２００５；２３：４２６５７４、Ｒｏｍｏｎｄ  ＥＨ，ｅｔ  ａｌ．Ｔ  Ｎ  Ｅｎｇｌ  Ｊ  Ｍｅｄ２００５；３５３：１６７３−８４、Ｐｉｃｃａｒｔ−Ｇｅｂｈａｒｔ  ＭＪ，ｅｔ  ａｌ．Ｎ  Ｅｎｇｌ  Ｊ  Ｍｅｄ  ２００５；３５３：１６５９７２、Ｓｌａｍｏｎ  Ｄ，ｅｔ  ａｌ．［ａｂｓｔｒａｃｔ］．Ｂｒｅａｓｔ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ  Ｔｒｅａｔ２００６，１００（Ｓｕｐｐｌ１）：５２）。２００６年にＦＤＡは、ＨＥＲＣＥＰＴＩＮ（登録商標）（トラスツズマブ、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ  Ｉｎｃ．）を、ＨＥＲ２陽性、リンパ節転移陽性乳癌を有する患者のアジュバント治療のためのドキソルビシン、シクロホスファミド、及びパクリタキセルを含む治療レジメンの一部として承認した。
【０００６】
抗体標的療法に対する代替方法は、抗原発現癌細胞への細胞毒性薬の特異的送達のために抗体を利用することである。抗体−薬物複合体またはＡＤＣは、極めて強力な細胞毒性剤が共役結合したモノクローナル抗体である。ＡＤＣは、全身に投与される抗腫瘍治療に腫瘍選択性を付与する新規な方法を表す。腫瘍特異的及び／または過剰発現する表面抗原を利用して、ＡＤＣは、非常に強力な細胞毒性剤の腫瘍細胞への送達に集中するように設計されている。この方法の可能性は、遊離薬剤としての投与によって得られることができるものより、このような薬剤は好ましい治療濃度域を作成することである。
【０００７】
メイタンシノイド（細胞分裂阻害薬メインシンの誘導体）は、ビンカアルカロイド薬と類似のやり方で微小管と結合する（Ｉｓｓｅｌｌ  ＢＦ  ｅｔ  ａｌ（１９７８）Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｒｅａｔ．Ｒｅｖ．５：１９９−２０７；Ｃａｂａｎｉｌｌａｓ  Ｆ  ｅｔ  ａｌ．（１９７９）Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｒｅａｔ  Ｒｅｐ，６３：５０７−９）。ＤＭ１は、天然起源のエステルアンサマイトシンＰ３に由来する、チオール含有メイタンシノイドである（Ｒｅｍｉｌｌａｒｄ  Ｓ，Ｒｅｂｈｕｎ  ＬＩ，Ｈｏｗｉｅ  ＧＡ，ｅｔ  ａｌ．（１９７５）Ｓｃｉｅｎｃｅ１８９（４２０７）：１００２−１００５．３、Ｃａｓｓａｄｙ  ＪＭ，Ｃｈａｎ  ＫＫ，Ｆｌｏｓｓ  ＨＧ．（２００４）Ｃｈｅｍ  Ｐｈａｒｍ  Ｂｕｌｌ５２（１）：１−２６．４）。関連する植物エステル（メイタンシン）は、約８００人の患者の化学療法薬として試験され、単回投与でまたは３日連続で、３週毎に２．０ｍｇ／ｍ２の投与量で投与された（Ｉｓｓｅｌｌ  ＢＦ，Ｃｒｏｏｋｅ  ＳＴ．（１９７８）Ｍａｙｔａｎｓｉｎｅ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｒｅａｔ  Ｒｅｖ５：１９９−２０７）。前臨床活性にもかかわらず、診療所でのメイタンシンの活性は、安全に送達されることができる投与量で適度であった。用量制限毒性（ＤＬＴ）は、悪心、嘔吐及び下痢（多くの場合、便秘が続く）からなる消化管であった。この毒性は、スケジュール依存性でなく、用量依存性であった。末梢神経障害（主に感覚性）が報告され、既存の神経障害患者において最も明らかだった。肝トランスアミナーゼ、アルカリホスファターゼ及び総ビリルビンの無症状の一過性上昇が報告された。虚弱、嗜眠、不快及び不眠症を含有する体質性毒性は一般的であった。より一般的ではない毒性は、注入部位静脈炎及び中程度の骨髄抑制を含んだ。薬剤の更なる開発は、狭い治療濃度域のため、１９８０年代に断念された。
【０００８】
ＨＥＲ２陽性乳癌の治療のための新規の抗体−薬物複合体（ＡＤＣ）である、トラスツズマブ−ＭＣＣ−ＤＭ１（Ｔ−ＤＭ１、トラスツズマブエムタンシン、アド−トラスツズマブエムタンシン、ＫＡＤＣＹＬＡ（登録商標））は、ＭＣＣリンカーを介してリジン側鎖においてトラスツズマブにコンジュゲートされた細胞傷害性薬剤ＤＭ１（チオール含有マイタンシノイド抗微小管剤）で構成され、３．５の平均薬物負荷（薬物対抗体比）を有する。腫瘍細胞上で発現したＨＥＲ２に結合した後、Ｔ−ＤＭ１は、受容体媒介性内部移行を経て、ＤＭ１を含有する細胞傷害性カタボライトの細胞内放出、及びその後細胞死がもたらされる。
【０００９】
Ｔ−ＤＭ１（ＴＤＭ３５６９ｇ）のフェーズＩ試験において、ＩＶ注入によって３週毎（ｑ３ｗ）に投与されるＴ−ＤＭ１の最大耐用量（ＭＴＤ）は、３．６ｍｇ／ｋｇであった。ＤＬＴ（用量制限毒性）は、４．８ｍｇ／ｋｇで治療した患者の一過性血小板減少からなった。ｑ３ｗで３．６ｍｇ／ｋｇによる治療は良好な忍容性があり、及び著しい臨床活性と関連した（Ｋｒｏｐ（２０１０）Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｏｎｃｏｌ．２８（１６）：２６９８−２７０４）。毎週の２．４ｍｇ／ｋｇの投与も良好な忍容性があり、抗腫瘍活性も有することを、その同じ試験は示した（Ｂｅｅｒａｍ（２０１２）Ｃａｎｃｅｒ１１８（２３）：５７３３−５７４０）。
【００１０】
Ｔ−ＤＭ１（ｑ３ｗで３．６ｍｇ／ｋｇ投与）が、ＨＥＲ２陽性転移性乳癌を有する、たくさんの前治療を受けた患者集団において、単独抗腫瘍活性をすることを、フェーズＩＩ試験（ＴＤＭ４３７４ｇ）は実証した（Ｋｒｏｐ（２０１２）３０（２６）：３２３４−３２４１）。Ｔ−ＤＭ１（ｑ３ｗで３．６ｍｇ／ｋｇ投与）が、以前にトラスツズマブ及びタキサンで治療したＨＥＲ２陽性進行性乳癌の患者において、ラパチニブ及びカペシタビンによる治療と比較してより少ない毒性で、無憎悪生存期間及び全生存期間を著しく延長したことを、Ｐｈａｓｅ  ＩＩＩ研究（ＴＤＭ４３７０ｇ）は実証した（Ｖｅｒｍａ（２０１２）Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌａｎｄ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ３６７：１７８３−１７９１）。
【００１１】
米国食品医薬品局は、２０１３年２月２２日、トラスツズマブ及びタキサンによる治療を以前に受けたＨＥＲ２陽性転移性乳癌を有する患者の治療のために、商品名ＫＡＤＣＹＬＡ（登録商標）で市販されるアドトラスツズマブエムタンシンを承認した。
【００１２】
Ｂｃｌ−２阻害剤
タンパク質のＢｃｌ−２ファミリーは、発生の合図によって及び複数のストレス信号に反応して誘発されるプログラムされた細胞死を調節する（Ｃｏｒｙ．Ｓ．，ａｎｄ  Ａｄａｍｓ，Ｊ．Ｍ．，Ｎａｔｕｒｅ  Ｒｅｖｉｅｗｓ  Ｃａｎｃｅｒ２（２００２）６４７−６５６、Ａｄａｍｓ，Ｇｅｎｅｓ  ｕｎｄ  Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ１７（２００３）２４８１−２４９５、Ｄａｎｉａｌ，Ｎ．Ｎ．，ａｎｄ  Ｋｏｒｓｍｅｙｅｒ，Ｓ．Ｊ．，Ｃｅｌｌ１１６（２００４）２０５−２１９）。細胞生存は、Ｂｃｌ−２それ自体及び複数の近親体（Ｂｃｌ−ｘＬ、Ｂｃｌ−Ｗ、Ｍｃｌ−１及びＡｌ）（それは３つまたは４つの保存Ｂｃｌ−２相同性（ＢＨ）領域を含有する）によって促進されるのに対して、アポトーシスは２つのサブファミリーによって引き起こされる。細胞死における最初の信号は、Ｂａｄ、Ｂｉｄ、Ｂｉｍ、Ｐｕｍａ及びＮｏｘａを含有する、ＢＨ３のみのタンパク質の多様な群によって伝達されて、それは共通して小さなＢＨ３相互作用ドメインだけを有する（Ｈｕａｎｇ  ａｎｄ  Ｓｔｒａｓｓｅｒ，Ｃｅ１１１０３（２０００）８３９−８４２）。しかし、ＢａｘまたはＢａｋ（ＢＨ１〜ＢＨ３を含有するマルチドメインタンパク質）は、細胞死への関与に必要である（Ｃｈｅｎｇ，  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｅｌｌ８（２００１）７０５−７１１、Ｗｅｉ，Ｍ．Ｃ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ２９２（２００１）７２７−７３０、Ｚｏｎｇ，Ｗ．Ｘ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｇｅｎｅｓ  ａｎｄ  Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ１５  １４８（２００１）１−１４８６）。活性化したとき、それらはミトコンドリアの外膜を透過性にすることができ、細胞を分解するカスパーゼを活性化するのに必要なアポトーシス促進性因子（例えばシトクロムＣ）を放出できる（Ｗａｎｇ，Ｋ．，Ｇｅｎｅｓ  ａｎｄ  Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ１５（２００１）２９２２−２９３３、（Ａｄａｍｓ，２００３ｓｕｐｒａ）、Ｇｒｅｅｎ，Ｄ．Ｒ．，ａｎｄ  Ｋｒｏｅｍｅｒ，Ｇ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ３０５（２００４）６２６−６２９）。
【００１３】
Ｂｃｌ−２ファミリーのこの３つの小グループのメンバー間の相互作用は、細胞が生存するまたは死滅するかを決定する。ＢＨ３のみのタンパク質が活性化したとき、例えばＤＮＡの損傷に反応して、それらは生存促進性近親体の溝にＢＨ３ドメインを介して結合できる（Ｓａｔｔｌｅｒ，  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ２７５（１９９７）９８３−９８６）。しかし、ＢＨ３のみ及びＢｃｌ−２様タンパク質がＢａｘ及びＢａｋの活性を制御する方法は、いまだに十分は理解されていない（上述のＡｄａｍｓ，２００３）。大部分の注意はＢａｘに集中してきた。この可溶性モノマータンパク質（Ｈｓｕ，Ｙ．Ｔ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ２７２（１９９７）１３２８９−１  ３８３４、Ｗｏｌｔｅｒ，Ｋ．Ｇ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌｏｇｙ１３９（１９９７）１２８１−９２）は通常、おそらくそのサイトゾル局在化の原因となる、その溝内に挿入されるその膜標的化ドメインを有する（Ｎｅｃｈｕｓｈｔａｎ，Ａ．，ｅｔ  ａｌ．，ＥＭＢＯ  Ｊｏｕｒｎａｌ１８（１９９９）２３３０−２３４１、Ｓｕｚｕｋｉ，ｅｔ  ａｌ．，Ｃｅｌｌ１０３（２０００）６４５−６５４、Ｓｃｈｉｎｚｅｌ，Ａ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ１６４（２００４）１０２１−１０３２）。いくつかの無関係なペプチド／タンパク質がＢａｘ活性を調節するために提案されてきたが（Ｌｕｃｋｅｎ−Ａｒｄｊｏｍａｎｄｅ，Ｓ．，ａｎｄ  Ｍａｒｔｉｎｏｕ，Ｊ．Ｃ．，Ｊ  Ｃｅｌｌ  Ｓｃｉ１１８（２００５）４７３−４８３で概説）、その生理的関連性はわかっていないことが多い。あるいはＢａｘは、特定のＢＨ３のみのタンパク質による直接的な関与を介して活性化され得て（前述のＬｕｃｋｅｎ−Ａｒｄｊｏｍａｎｄｅ，Ｓ．，ａｎｄ  Ｍａｒｔｉｎｏｕ，Ｊ．Ｃ，２００５）、最も良く知られているのは、Ｂｉｄの切断型、ｔＢｉｄである（Ｗｅｉ，Ｍ．Ｃ，ｅｔ  ａｌ．，Ｇｅｎｅｓ  ｕｎｄ  Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ１４（２０００）２０６０−２０７１、Ｋｕｗａｎａ，Ｔ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｃｅｌｌ  １１１（２００２）３３１−３４２、Ｒｏｕｃｏｕ，Ｘ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｊｏｕｒｎａｌ３６８（２００２）９１５−９２１、Ｃａｒｔｒｏｎ，Ｐ．Ｆ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｌ  Ｃｅｌｌ１６（２００４）８０７−８１８）。別に論じられているように（前述のＡｄａｍｓ２００３）、Ｂｃｌ−２がＢａｘに直接関与する最も古いモデル（Ｏｌｔｖａｉ，Ｚ．Ｎ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｃｅｌｌ７４（１９９３）６０９−６１９）は、Ｂｃｌ−２が膜結合される一方で、Ｂａｘはサイトゾルであり、その相互作用は細胞分解に使用される界面活性剤に非常に依存すると思われるので、問題となってきている（前述のＨｓｕ，Ｙ．Ｔ．，ａｎｄ  Ｙｏｕｌｅ，１９９７）。それにもかかわらず、ＢａｘのＢＨ３領域はＢｃｌ−２との結合を介在することができ（Ｚｈａ，Ｈ．，ａｎｄ  Ｒｅｅｄ，Ｊ．，Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ２７２（１９９７）３１４８２−８８；Ｗａｎｇ，Ｋ．，ｅｔ  ａｌ．Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  ｕｎｄ  Ｃｅｌｌｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇ���１８（１９９８）６０８３−６０８９）、及びＢｃｌ−２は、ヘテロダイマーが検出され得なくてもＢａｘのオリゴマー化を妨げる（Ｍｉｋｈａｉｌｏｖ，Ｖ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ２７６（２００１）１８３６１−１８３７４）ことは十分に確立されている。したがって生存促進性タンパク質がＢａｘ活性化を直接的にまたは間接的に制限するかどうかは、不明のままである。
【００１４】
Ｂａｘ及びＢａｋはほとんどの環境下で機能的に同等であると思われるが（Ｌｉｎｄｓｔｅｎ，Ｔ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｅｌｌ  ６（２０００）１３８９−１３９９、前述のＷｅｉ，Ｍ．Ｃ．，ｅｔ  ａｌ．，２００１）、それらの調節における実質的な差異は、健康な細胞におけるそれらの明確な局在化から予測される。大部分はサイドゾルであるＢａｘとは異なり、Ｂａｋはミトコンドリアの外膜及び健康な細胞の小胞体上の複合体に存在する（前述のＷｅｉ，Ｍ．Ｃ，ｅｔ  ａｌ．，２０００、Ｚｏｎｇ，Ｗ．Ｘ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌｏｇｙ１６２（２００３）５９−６９）。それにもかかわらず、細胞毒性シグナルの受信時に、Ｂａｘ及びＢａｋは両方ともコンホメーションを変え、Ｂａｘはオルガネラ膜に移動し、ここでＢａｘ及びＢａｋの両方は、結合できるホモオリゴマーを形成し、膜透過化をもたらす（Ｈｓｕ，Ｙ．Ｔ．，ｅｔ  ａｌ．，ＰＮＡＳ９４（１９９７）３６６８−３６７２、前述のＷｏｌｔｅｒ，Ｋ．Ｇ．，ｅｔ  ａｌ．，１９９７、Ａｎｔｏｎｓｓｏｎ，Ｂ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ２７６（２００１）１１６１５−１１６２３、Ｎｅｃｈｕｓｈｔａｎ，Ａ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌｏｇｙ１５３（２００１）１２６５−１２７６、前述のＷｅｉ，Ｍ．Ｃ．，ｅｔ  ａｌ．，２００１、Ｍｉｋｈａｉｌｏｖ，Ｖ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ２７８（２００３）５３６７−５３７６）。
【００１５】
種々のＢｃｌ−２阻害剤が存在し、そのすべてはタンパク質のＢｃｌ−２ファミリーの生存促進性要素を阻害するという同じ性質を有し、したがって癌治療の有望な候補である。そのようなＢｃｌ−２阻害剤は例えば、オブリメルセン、ＳＰＣ−２９９６、ＲＴＡ−４０２、ゴシポル、ＡＴ−１０１、オバトクラックスメシル酸塩、Ａ−３７１１９１、Ａ−３８５３５８、Ａ−４３８７４４、ＡＢＴ−７３７、ＡＢＴ−２６３（ナビトクラックス）、ＡＴ−１０１、ＢＬ−１１、ＢＬ−１９３、ＧＸ−１５−００３、２−メトキシアンチマイシンＡ３、ＨＡ−１４−１、ＫＦ−６７５４４、プルプロガリン、ＴＰ−ＴＷ−３７、ＹＣ−１３７及びＺ−２４であり、例えばＺｈａｉ，Ｄ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｃｅｌｌ  Ｄｅａｔｈ  ａｎｄ  Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ１３（２００６）１４１９−１４２１に記載されている。
【００１６】
他のＢｃｌ−２ファミリータンパク質と癌の間の結合も十分に確立されており、詳細に実証されて（Ｓｔｒａｓｓｅｒ，Ａ．２０１１ＥＭＢＯ  Ｊ．３０，３６６７−３６８３）、他のＢｅｌファミリータンパク質の阻害剤も既知である。Ｂｃｌ−ＸＬ−選択的阻害剤Ａ−ｌ１５５４６３及びＡ−１３３１８５２は、例えばＬｅｖｅｒｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．Ｓｃｉｅｎｃｅ  Ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎａｌ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ  Ｖｏｌ７、Ｉｓｓｕｅ２７９  ２７９ｒａ４０に記載されている。Ｂｃｌ−ＸＬの選択的チアゾールヒドラゾン阻害剤は、Ｓｌｅｅｂｓ  ｅｔ  ａｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．２０１３，５６，５５１４−５５４０に開示されている。他のＢｃｌ−ＸＬ阻害剤の他の説明については、例えばＫｏｅｈｌｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，ＡＣＳ  Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔ．２０１４，５，６６２−６６７及びＴａｏ  ｅｔ  ａｌ，ＡＣＳ  Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．ｅｔｔ．２０１４，５，１０８８−１０を参照のこと。ＭＣｌ−１阻害剤及び癌治療用としてのその使用は、例えばＬｅｖｅｒｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｅｌｌ  Ｄｅａｔｈ  ａｎｄ  Ｄｉｓｅａｓｅ（２０１５）６，ｅ１５９０、Ｂｒｕｎｃｋｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．２０１５，５８，２１８０−２１９４、Ｐｅｔｒｏｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｏｒｇａｎｉｃ＆Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  Ｌｅｔｔｅｒｓ２４（２０１４）１４８４−１４８８、Ａｂｕｌｗｅｒｄｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｌ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｈｅｒ２０１４、１３：５６５−５、Ａｂｕｌｗｅｒｄｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．２０１４，５７，４１１１−４１３３、Ｂｕｒｋｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．２０１５，５８，３７９４−３８０５、Ｆｒｉｂｅｒｇ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．２０１３，５６，１５−３０及びｂｅｌｍａｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ＆Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ１４５（２０１５）７６−８４に記載されている。Ｍｃｌ−１／Ｂｃｌ−ｘＬ二重阻害剤は、Ｔａｎａｋａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．２０１３，５６，９６３５−９６４５に開示されている。
【発明の概要】
【００１７】
一態様で、本発明は、抗ＨＥＲ２抗体−薬物複合体及びＢｃｌファミリータンパク質の阻害剤の有効量をそれを必要とするヒトに投与することを含む、それを必要とするヒトの癌治療のための方法に関する。
【００１８】
一態様で、本発明は、抗ＨＥＲ２抗体−薬物複合体及び選択的Ｂｃｌ−２阻害剤の有効量をそれを必要とするヒトに投与することを含む、それを必要とするヒトの癌治療のための方法に関する。
【００１９】
一実施形態において、癌はＨＥＲ２陽性癌である。
【００２０】
別の実施形態では、癌は、ＨＥＲ陽性乳癌または胃癌である。
【００２１】
更に別の実施形態において、ＨＥＲ２陽性乳癌または胃癌は、２＋もしくは３＋のＨＥＲ２免疫組織化学（ＩＨＣ）スコア、及び／または２．０以上のｉｎ  ｓｉｔｕハイブリダイゼーション（ＩＳＨ）増幅率（ｈｅｒ２：ＣＥＰ１７ｉｎ  ｓｉｔｕハイブリダイゼーション（ＩＳＨ）増幅率）を有する。
【００２２】
更なる実施形態においてＨＥＲ２陽性癌（例えば乳癌または胃癌）は、単剤として投与される抗ＨＥＲ２抗体−薬物複合体による治療に耐性がある。
【００２３】
他の更なる実施形態において、ＨＥＲ２陽性癌（例えば乳癌または胃癌）は、単剤として投与される抗ＨＥＲ２抗体−薬物複合体による治療に感受性があり、ならびに抗ＨＥＲ２抗体−薬物複合体及び選択的Ｂｃｌ−２阻害剤の組み合わせは、抗ＨＥＲ２抗体−薬物複合体による治療に未経験な患者に投与することができる。
【００２４】
異なる実施形態において、抗ＨＥＲ２抗体−薬物複合体及び選択的Ｂｃｌ−２阻害剤は、単剤として投与した抗ＨＥＲ２抗体−薬物複合体による治療に耐性がある、これらに限定されないが乳癌または胃癌などのＨＥＲ２陽性癌の相乗的な活性を含む、相乗的な活性を示す。
【００２５】
すべての実施形態において、抗ＨＥＲ２抗体−薬物複合体は、例えばトラスツズマブ−ＭＣＣ−ＤＭ１であり得る。
【００２６】
すべての実施形態において、選択的Ｂｃｌ−２阻害剤は、例えば２−（１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−５−イルオキシ）−４−（４−（（２−（４−クロロフェニル）−４，４−ジメチルシクロヘキサ−１−エニル）メチル）ピペラジン−１−イル）−Ｎ−（３−ニトロ−４−（（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−イル）メチルアミノ）フェニルスルホニル）ベンズアミド、またはその薬学的に許容される塩であり得る。
【００２７】
別の態様で、本発明は、ヒトに有効量のトラスツズマブ−ＭＣＣ−ＤＭ１及び２−（１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−５−イルオキシ）−４−（４−（（２−（４−クロロフェニル）−４，４−ジメチルシクロヘキサ−１−エニル）メチル）ピペラジン−１−イル−Ｎ−（３−ニトロ−４−（（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−イル）メチルアミノ）フェニルスルホニル）ベンズアミド、またはその薬学的に許容される塩を投与することを含む、それを必要とするヒトのＨＥＲ２陽性癌治療のための方法に関する。
【００２８】
一実施形態において、癌は、ＨＥＲ２陽性乳癌または胃癌である。
【００２９】
別の実施形態において、ＨＥＲ２陽性乳癌または胃癌は、２＋もしくは３＋のＨＥＲ２免疫組織化学（ＩＨＣ）スコア、及び／または２．０以上のｉｎ  ｓｉｔｕハイブリダイゼーション（ＩＳＨ）増幅率（ｈｅｒ２：ＣＥＰ１７ｉｎ  ｓｉｔｕハイブリダイゼーション（ＩＳＨ）増幅率））を有する。
【００３０】
更に別の実施形態において、ＨＥＲ２陽性癌（例えば乳癌または胃癌）は、単剤として投与されるトラスツズマブ−ＭＣＣ−ＤＭ１による治療に耐性がある。
【００３１】
更なる実施形態において、ＨＥＲ２陽性癌（例えば乳癌または胃癌）は、単剤として投与されるトラスツズマブ−ＭＣＣ−ＤＭ１による治療に感受性があり、及びトラスツズマブ−ＭＣＣ−ＤＭ１及び２−（１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−５−イルオキシ）−４−（４−（（２−（４−クロロフェニル）−４，４−ジメチルシクロヘキサ−１−エニル）メチル）ピペラジン−１−イル）−Ｎ−（３−ニトロ−４−（（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−イル）メチルアミノ）フェニルスルホニル）ベンズアミドまたはその薬学的に許容される塩の組み合わせは、トラスツズマブ−ＭＣＣ−ＤＭ１による治療に未経験な患者に投与されることができる。
【００３２】
他の更なる実施形態において、ＨＥＲ２陽性癌（例えば乳癌または胃癌）は、単剤として投与される抗ＨＥＲ２抗体−薬物複合体による治療に感受性があり、ならびに抗ＨＥＲ２抗体−薬物複合体及び選択的Ｂｃｌ−２阻害剤の組み合わせは、抗ＨＥＲ２抗体−薬物複合体による治療に未経験な患者に投与することができる。更なる実施形態において、トラスツズマブ−ＭＣＣ−ＤＭ１及び２−（１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−５−イルオキシ）−４−（４−（（２−（４−クロロフェニル）−４，４−ジメチルシクロヘキサ−１−エニル）メチル）ピペラジン−１−イル）−Ｎ−（３−ニトロ−４−（（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−イル）メチルアミノ）フェニルスルホニル）ベンズアミド、またはその薬学的に許容される塩は、これらに限定されないが乳癌または胃癌などのＨＥＲ２陽性癌の相乗的な活性を含む、相乗的な活性を示す。
【００３３】
他の更なる実施形態において、トラスツズマブ−ＭＣＣ−ＤＭ１及び２−（１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−５−イルオキシ）−４−（４−（（２−（４−クロロフェニル）−４，４−ジメチルシクロヘキサ−１−エニル）メチル）ピペラジン−１−イル）−Ｎ−（３−ニトロ−４−（（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−イル）メチルアミノ）フェニルスルホニル）ベンズアミド、またはその薬学的に許容される塩は、併用投与される。
【００３４】
別の実施形態で、トラスツズマブ−ＭＣＣ−ＤＭ１及び２−（１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−５−イルオキシ）−４−（４−（（２−（４−クロロフェニル）−４，４−ジメチルシクロヘキサ−１−エニル）メチル）ピペラジン−１−イル）−Ｎ−（３−ニトロ−４−（（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−イル）メチルアミノ）フェニルスルホニル）ベンズアミド、またはその薬学的に許容される塩は、同時に投与される。
【００３５】
更に別の実施形態で、トラスツズマブ−ＭＣＣ−ＤＭ１及び２−（１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−５−イルオキシ）−４−（４−（（２−（４−クロロフェニル）−４，４−ジメチルシクロヘキサ−１−エニル）メチル）ピペラジン−１−イル）−Ｎ−（３−ニトロ−４−（（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−イル）メチルアミノ）フェニルスルホニル）ベンズアミド、またはその薬学的に許容される塩は、連続して投与される。
【００３６】
別の態様で、本発明は、癌治療のための薬剤の調製における、抗ＨＥＲ２抗体−薬物複合体及びＢｃｌファミリータンパク質の阻害剤の組み合わせの使用に関する。
【００３７】
一実施形態において、Ｂｃｌファミリータンパク質は、Ｂｃｌ−２様タンパク質、例えばＭｃｌ−１、Ｂｃｌ−ｘｌ、Ｂｃｌ−ｗ（ＢＣＬ２Ｌ２）またはＢｃｌ−ｘｓ、好ましくはＭｃｌ−１またはＢｃｌ−ｘｌである。
【００３８】
別の態様で、本発明は、癌治療のための薬剤の調製における、抗ＨＥＲ２抗体−薬物複合体及び選択的Ｂｃｌ−２阻害剤の組み合わせの使用に関する。
【００３９】
一実施形態において、本発明は、癌治療のための薬剤の調製における、トラスツズマブ−ＭＣＣ−ＤＭ１及び２−（１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−５−イルオキシ）−４−（４−（（２−（４−クロロフェニル）−４，４−ジメチルシクロヘキサ−１−エニル）メチル）ピペラジン−１−イル）−Ｎ−（３−ニトロ−４−（（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−イル）メチルアミノ）フェニルスルホニル）ベンズアミド、またはその薬学的に許容される塩の組み合わせの使用に関する。
【００４０】
すべての実施形態において、癌はＨＥＲ２陽性癌であり得る。
【００４１】
すべての実施形態において、癌は、例えば乳癌または胃癌であり得る。
【００４２】
すべての実施形態において、ＨＥＲ２陽性癌（例えば乳癌または胃癌）は、単剤として投与されるトラスツズマブ−ＭＣＣ−ＤＭ１による治療に耐性があり得る。
【００４３】
すべての実施形態において、ＨＥＲ２陽性癌（例えば乳癌または胃癌）は、単剤として投与されるトラスツズマブ−ＭＣＣ−ＤＭ１による治療に感受性があり得て、及びトラスツズマブ−ＭＣＣ−ＤＭ１及び２−（１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−５−イルオキシ）−４−（４−（（２−（４−クロロフェニル）−４，４−ジメチルシクロヘキサ−１−エニル）メチル）ピペラジン−１−イル）−Ｎ−（３−ニトロ−４−（（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−イル）メチルアミノ）フェニルスルホニル）ベンズアミドまたはその薬学的に許容される塩の組み合わせは、トラスツズマブ−ＭＣＣ−ＤＭ１による治療に未経験な患者を治療するために使用され得る。
【００４４】
別の態様で、本発明は、癌治療のための薬剤の調製における、抗ＨＥＲ２抗体−薬物複合体及びＢｃｌファミリータンパク質の阻害剤の組み合わせの使用に関する。
【００４５】
一実施形態において、Ｂｃｌファミリータンパク質は、Ｂｃｌ−２様タンパク質、例えばＭｃｌ−１、Ｂｃｌ−ｘｌ、Ｂｃｌ−ｗ（ＢＣＬ２Ｌ２）またはＢｃｌ−ｘｓ、好ましくはＭｃｌ−１またはＢｃｌ−ｘｌである。
【００４６】
更なる態様で、本発明は、癌治療で使用するための、抗ＨＥＲ２抗体−薬物複合体及び選択的Ｂｃｌ−２阻害剤の組み合わせに関する。
【００４７】
一実施形態において、トラスツズマブ−ＭＣＣ−ＤＭ１及び２−（１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−５−イルオキシ）−４−（４−（（２−（４−クロロフェニル）−４，４−ジメチルシクロヘキサ−１−エニル）メチル）ピペラジン−１−イル）−Ｎ−（３−ニトロ−４−（（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−イル）メチルアミノ）フェニルスルホニル）ベンズアミド、またはその薬学的に許容される塩の組み合わせは、癌治療に使用するためである。
【００４８】
すべての実施形態において、癌は、例えばＨＥＲ２陽性乳癌または胃癌などのＨＥＲ２陽性癌であり得る。
【００４９】
特定の実施形態において、癌（例えば乳癌または胃癌）は、単剤として投与される場合、抗ＨＥＲ２抗体−薬物複合体またはトラスツズマブ−ＭＣＣ−ＤＭ１による治療に耐性がある。
【００５０】
別の実施形態では、ＨＥＲ２陽性癌（例えば乳癌または胃癌）は、単剤として投与される場合、抗ＨＥＲ２抗体−薬物複合体（例えば、トラスツズマブ−ＭＣＣ−ＤＭ１）による治療に感受性があり得て、ならびにその組み合わせは、抗ＨＥＲ２抗体−薬物複合体（例えば、トラスツズマブ−ＭＣＣ−ＤＭ１）による治療に未経験な患者に投与することができる。
【００５１】
別の態様においては、本発明は、ＨＥＲ２陽性癌患者から得られた腫瘍試料において、対照試料の発現レベルと比較してＢｃｌ−２遺伝子またはその生成物の発現レベルを測定すること、及び前記腫瘍試料の発現レベルが、前記対照試料の発現レベルより大きく、少なくとも２倍、または少なくとも３倍、または少なくとも４倍、または少なくとも５倍であるとき、前記抗ＨＥＲ２抗体−薬物複合体による治療に対する耐性について前記癌を診断すること、を含む、抗ＨＥＲ２抗体−薬物複合体による治療に耐性があるＨＥＲ２陽性腫瘍の診断のための方法に関する。
【００５２】
更なる態様においては、本発明は、ＨＥＲ２陽性癌患者から得られた腫瘍試料において、対照試料の発現レベルと比較してＢｃｌ−２遺伝子またはその生成物の発現レベルを測定すること、及び前記腫瘍試料の発現レベルが、前記対照試料の発現レベルより大きく、２倍未満、または少なくとも３倍、または少なくとも４倍、または少なくとも５倍であるとき、前記抗ＨＥＲ２抗体−薬物複合体による治療に対する感受性について前記癌を診断すること、を含む、抗ＨＥＲ２抗体−薬物複合体による治療への感受性が高いＨＥＲ２陽性腫瘍の診断のための方法に関する。
【００５３】
他の更なる態様において、本発明は、（ｉ）前記対象から腫瘍試料を得ること、（ｉｉ）対照試料と比較して、前記腫瘍試料のＢｃｌ−２遺伝子またはその生成物の発現レベルを測定すること、及び（ｉｉｉ）前記腫瘍試料のＢｃｌ−２の測定した発現レベルが、前記対照試料の発現レベルより大きく、少なくとも２倍、または少なくとも３倍、または少なくとも４倍、または少なくとも５倍であるとき、抗ＨＥＲ２抗体−薬物複合体による治療に対する耐性について前記腫瘍を診断すること、または前記腫瘍試料のＢｃｌ−２の測定した発現レベルが、前記対照試料の発現レベルより大きく、２倍未満、または少なくとも３倍、または少なくとも４倍、または少なくとも５倍であるとき、抗ＨＥＲ２抗体−薬物複合体による治療への感受性について前記腫瘍を診断すること、を含む、抗ＨＥＲ２抗体−薬物複合体による治療に耐性があるまたはそれへの感受性が高い、ＨＥＲ２陽性腫瘍を有する対象の診断のための方法に関する。
【００５４】
一実施形態では、対象はヒト患者である。
【００５５】
別の実施形態で、対照試料は、前記抗ＨＥＲ２抗体−薬物複合体による治療に対する耐性がない、同じ種類の細胞の腫瘍試料である。
【００５６】
更に別の実施形態において、腫瘍は乳癌または胃癌である。
【００５７】
更なる実施形態において、腫瘍試料は、ホルマリン固定パラフィン包埋腫瘍試料である。
【００５８】
すべての実施形態において、診断法は、腫瘍試料のＨＥＲ２遺伝子またはその生成物の発現レベルを測定する工程を更に含むことができる。
【００５９】
すべての実施形態において、診断法は、腫瘍試料のＢｃｌ−２の測定した発現レベルが、前記対照試料の発現レベルより大きく、少なくとも２倍、または少なくとも３倍、または少なくとも４倍、または少なくとも５倍であるとき、抗ＨＥＲ２抗体−薬物複合体と選択的Ｂｃｌ−２阻害剤で対象を治療する工程を更に含むことができる。
【００６０】
すべての実施形態において、診断法は、腫瘍試料のＢｃｌ−２の測定した発現レベルが前記対照試料の発現レベルより大きく、２倍未満であるとき、前記患者を抗ＨＥＲ２抗体−薬物複合体で治療する工程を更に含むことができる。
【００６１】
一実施形態において、抗ＨＥＲ２抗体−薬物複合体は、トラスツズマブ−ＭＣＣ−ＤＭ１である。
【００６２】
別の実施形態では、選択的Ｂｃｌ−２阻害剤は、２−（１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−５−イルオキシ）−４−（４−（（２−（４−クロロフェニル）−４，４−ジメチルシクロヘキサ−１−エニル）メチル）ピペラジン−１−イル）−Ｎ−（３−ニトロ−４−（（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−イル）メチルアミノ）フェニルスルホニル）ベンズアミド、またはその薬学的に許容される塩である。
【００６３】
別の態様においては、本発明は、患者から得た生体試料の抗ＨＥＲ２抗体−薬物複合体による治療に対する耐性があるＨＥＲ２陽性腫瘍のｉｎ  ｖｉｔｒｏ診断またはその予後のためのキットに関し、それは、Ｂｃｌ−２遺伝子またはその発現生成物の特異的結合パートナーを含む。
【００６４】
一実施形態において、結合パートナーは抗Ｂｃｌ−２抗体である。
【００６５】
別の実施形態では、結合パートナーは、Ｂｃｌ−２遺伝子にハイブリダイズする核酸である。
【００６６】
更なる態様において、本発明は、ＨＥＲ２発現癌の患者の併用治療のための、抗ＨＥＲ２抗体薬物複合体及び選択的Ｂｃｌ−２阻害剤を含むキットに関する。
【００６７】
本発明の一実施形態において、キットは薬学的に許容される担体を更に含む。キットは無菌の希釈剤を更に含むことができ、それは好ましくは別個の追加の容器に保存される。キットは、ＨＥＲ２発現癌（例えばＨＥＲ２発現乳癌または胃癌）のための方法としての併用療法の使用を指示する印刷した使用説明書を含む、添付文書を更に含むことができる。
【００６８】
他の態様における様に、ＨＥＲ２発現癌は、例えば乳癌または胃癌であり得て、種々の実施形態で、抗ＨＥＲ２抗体薬物複合体はトラスツズマブ−ＭＣＣ−ＤＭ１であり得て、及び／または選択的Ｂｃｌ−２阻害剤は、２−（１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−５−イルオキシ）−４−（４−（（２−（４−クロロフェニル）−４，４−ジメチルシクロヘキサ−１−エニル）メチル）ピペラジン−１−イル）−Ｎ−（３−ニトロ−４−（（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−イル）メチルアミノ）フェニルスルホニル）ベンズアミド、またはその薬学的に許容される塩であり得る。
【００６９】
特定の実施形態において、治療されるＨＥＲ２発現癌（例えば乳癌または胃癌）は、単剤として投与される場合、抗ＨＥＲ２抗体−薬物複合体またはトラスツズマブ−ＭＣＣ−ＤＭ１による治療に耐性がある。
【００７０】
別の実施形態では、ＨＥＲ２発現癌（例えば乳癌または胃癌）は、単剤として投与される場合、抗ＨＥＲ２抗体−薬物複合体（例えば、トラスツズマブ−ＭＣＣ−ＤＭ１）による治療に感受性があり得て、ならびにその組み合わせは、抗ＨＥＲ２抗体−薬物複合体（例えば、トラスツズマブ−ＭＣＣ−ＤＭ１）による治療に未経験な患者に投与することができる。
【図面の簡単な説明】
【００７１】
【図１Ａ】図１Ａ及び図１Ｂは、親細胞と比較して、Ｔ−ＤＭ１耐性ＫＰＬ−４及びＢＴ−４７４Ｍ１ヒト乳癌細胞（ＨＥＲ２陽性）のＢｃｌ−２ファミリー生存促進性分子の発現を示す。図１Ａは、ＴａｑＭａｎ  ｑＲＴ−ＰＣＲ解析により評価されるｍＲＮＡ発現を示す。図１Ｂは、ウエスタンブロット解析によるタンパク質発現を示す。
【図１Ｂ】図１Ｂは、ウエスタンブロット解析によるタンパク質発現を示す。
【図２】Ｔ−ＤＭ１＋ＧＤＣ−０１９９の組み合わせはＫＰＬ−４  Ｔ−ＤＭ１耐性ヒト乳癌細胞の相乗効果を有し、一方でＫＰＬ−４親細胞において相乗効果は観察されないことを示す、細胞生存率アッセイの結果を示す。
【図３】カスパーゼ３及び７の活性化を測定する、カスパーゼ活性化アッセイの結果を示す。２４時間の薬物治療で、Ｔ−ＤＭ１耐性ＫＰＬ−４ヒト乳癌細胞が、ＧＤＣ−０１９９の存在下で、Ｔ−ＤＭ１に再感作するが、一方２４時間で、ＫＰＬ−４親細胞のＴ−ＤＭ１＋／−ＧＤＣ−０１９９の効果がないことを、結果は示す。
【図４Ａ】図４Ａ及び図４Ｂは、４８時間の薬剤治療の後、親細胞と比較してＴ−ＤＭ１耐性ＫＰＬ−４ヒト乳癌細胞のカスパーゼ３及び７の活性化を測定する、カスパーゼ活性化アッセイの結果を示す。Ｔ−ＤＭ１単独の軽微な影響による、ＧＤＣ−０１９９をＴ−ＤＭ１に追加した、カスパーゼ３及び７活性化の用量依存的増加を、結果は示す。ＫＰＬ−４親細胞において、Ｔ−ＤＭ１は、ＧＤＣ−０１９９の追加に応じて、軽微な増加を伴うカスパーゼ３及び７の強力な活性化を誘発する。
【図４Ｂ】図４Ａ及び図４Ｂは、４８時間の薬剤治療の後、親細胞と比較してＴ−ＤＭ１耐性ＫＰＬ−４ヒト乳癌細胞のカスパーゼ３及び７の活性化を測定する、カスパーゼ活性化アッセイの結果を示す。Ｔ−ＤＭ１単独の軽微な影響による、ＧＤＣ−０１９９をＴ−ＤＭ１に追加した、カスパーゼ３及び７活性化の用量依存的増加を、結果は示す。ＫＰＬ−４親細胞において、Ｔ−ＤＭ１は、ＧＤＣ−０１９９の追加に応じて、軽微な増加を伴うカスパーゼ３及び７の強力な活性化を誘発する。
【図５Ａ】１μｇ／ｍＬのＴ−ＤＭ１単独で、またはＧＤＣ−０１９９の所定の投与量と組み合わせて４８時間処理したクローン＃１７Ｔ−ＤＭ１耐性ＫＰＬ−４ヒト乳癌細胞株における、カスパーゼ３及び７の活性化を測定する、カスパーゼ活性化アッセイの結果を示す。Ｔ−ＤＭ１単独の軽微な影響による、ＧＤＣ−０１９９をＴ−ＤＭ１に追加した、カスパーゼ３及び７活性化の用量依存的増加を、結果は示す。
【図５Ｂ】ＳＣＩＤベージュマウスにおけるクローン＃１７Ｔ−ＤＭ１耐性ＫＰＬ−４ヒト乳癌異種移植片の腫瘍増殖（腫瘍体積で測定）のＴ−ＤＭ１（５ｍｇ／ｋｇを１度投与）、ＧＤＣ−０１９９（１日１回１００ｍｇ／ｋｇ×２１）またはその組み合わせの効果を示す。組み合わせ薬剤治療は、単剤治療の活性がないことによる、腫瘍の増殖停止をもたらした。
【図６Ａ】０．１μｇ／ｍＬ及び１μｇ／ｍＬのＴ−ＤＭ１濃度で、それぞれ単独で、またはＧＤＣ−０１９９の所定の濃度と組み合わせて処理したクローン＃８Ｔ−ＤＭ１耐性ＫＰＬ−４ヒト乳癌細胞株における、カスパーゼ３及び７の活性化を測定する、カスパーゼ活性化アッセイの結果を示す。
【図６Ｂ】０．１μｇ／ｍＬ及び１μｇ／ｍＬのＴ−ＤＭ１濃度で、それぞれ単独で、またはＧＤＣ−０１９９の所定の濃度と組み合わせて処理したクローン＃８Ｔ−ＤＭ１耐性ＫＰＬ−４ヒト乳癌細胞株における、カスパーゼ３及び７の活性化を測定する、カスパーゼ活性化アッセイの結果を示す。
【図６Ｃ】ＳＣＩＤベージュマウスにおけるクローン＃８Ｔ−ＤＭ１耐性ＫＰＬ−４ヒト乳癌異種移植片の腫瘍増殖（腫瘍体積で測定）のＴ−ＤＭ１（３週に１回５ｍｇ／ｋｇ×２）、ＧＤＣ−０１９９（１日１回１００ｍｇ／ｋｇ×２１）またはその組み合わせの効果を示す。
【図７Ａ】ＤＡＢ検出法を使用した免疫組織化学（ＩＨＣ）で測定されるホルマリン固定パラフィン包埋Ｔ−ＤＭ１耐性ＫＰＬ−４異種移植腫瘍試料（クローン＃８及び＃１７）のＢｃｌ−２の発現を示す。
【図７Ｂ】ＤＡＢ検出法を使用した免疫組織化学（ＩＨＣ）で測定されるホルマリン固定パラフィン包埋Ｔ−ＤＭ１耐性ＫＰＬ−４異種移植腫瘍試料（クローン＃８及び＃１７）のＨＥＲ２（ＥｒｂＢ２）の発現を示す。
【図８】ＧＤＣ−０１９９、Ｔ−ＤＭ１またはＴ−ＤＭ−１＋ＧＤＣ−０１９９で処理した、クローン＃１７ＫＰＬ−４  Ｔ−ＤＭ１耐性異種移植腫瘍のＢｃｌ−２及びＨＥＲ２のウエスタンブロット解析により測定したタンパク質発現を示す。
【図９Ａ】ＨＥＲ２＋ＭＤＡ−ＭＢ−３６１乳癌細胞（Ｔ−ＤＭ１未感作細胞）の２４時間の処理後、９つの異なる濃度のＴ−ＤＭ１と組み合わせた５つの異なる濃度のＧＤＣ−０１９９（μＭ）の効果を試験する、カスパーゼ３／７活性化発光ｉｎ  ｖｉｔｒｏアポトーシスアッセイの結果を示す。結果は、試験したすべての組み合わせにおいて、Ｔ−ＤＭ１単独より強化されたアポトーシスを示す。
【図９Ｂ】ＨＥＲ２＋ＭＤＡ−ＭＢ−３６１乳癌細胞で、３つの異なる濃度のＧＤＣ−０１９９（０．６３μＭ、１．２５μＭ、２．５μＭ）単独で及びＴ−ＤＭ１（０．１μＭ）と組み合わせた効果を試験する、動態カスパーゼ３／７活性化蛍光ｉｎ  ｖｉｔｒｏアポトーシスアッセイの結果を示す。結果は、試験したすべての組み合わせにおいて、Ｔ−ＤＭ１単独より強化されたカスパーゼ活性化を示す。
【図１０Ａ】ＨＥＲ２＋ＨＣＣ１５６９乳癌細胞（Ｔ−ＤＭ１未感作細胞）の２４時間の処理にて、９つの異なる濃度と組み合わせた５つの別個のＧＤＣ−０１９９（μＭ）の効果を試験する、カスパーゼ３／７活性化発光ｉｎ  ｖｉｔｒｏアポトーシスアッセイの結果を示す。結果は、Ｔ−ＤＭ１単独よるアポトーシスの誘発はないが、試験したすべての組み合わせによってアポトーシスが強化されたことを示す。
【図１０Ｂ】ＨＥＲ２＋ＨＣＣ１５６９乳癌細胞で、３つの異なる濃度のＧＤＣ−０１９９（０．６３μＭ、１．２５μＭ、２．５μＭ）単独で及びＴ−ＤＭ１（０．１μＭ）と組み合わせた効果を試験する、動態カスパーゼ３／７蛍光ｉｎ  ｖｉｔｒｏアポトーシスアッセイの結果を示す。結果は、併用療法によって用量依存的に強化されたカスパーゼ活性化を示す。
【図１１】ＨＥＲ２＋ＭＤＡ−ＭＢ−３６１乳癌異種移植モデルの腫瘍増殖における、Ｔ−ＤＭ１（１ｍｇ／ｋｇ、３ｍｇ／ｋｇ、７ｍｇ／ｋｇ、静脈内、３週に１回×１）及びＧＤＣ−０１９９（１００ｍｇ／ｋｇ、経口、１日１回×２１）の単独または併用での効果を示す。著しい腫瘍増殖の遅延が、７ｍｇ／ｋｇのＴ−ＤＭ１と組み合わせたＧＤＣ−０１９９で観察された。
【図１２】ＨＥＲ２＋乳癌細胞株ＢＴ−４７４、ＥＦＭ１９２Ａ、ＫＰＬ−４、ＨＣＣ１５６９、ＨＣＣ１９５４、ＭＤＡ−３６１、ＵＡＣＣ−８１２、ＺＲ−７５−３０における、Ｂｃｌ−２ファミリー（総及びホスホ−Ｂｃｌ−２及び−Ｂｃｌ−ｘＬ、総Ｍｃｌ−１及びＢｉｍ）のＧＤＣ−０１９９と共にまたはそれなしで、Ｔ−ＤＭ１の効果のウエスタンブロット解析を示す。
【図１３】トラスツズマブ軽鎖のアミノ酸配列（配列番号１）を示す。
【図１４】トラスツズマブ重鎖のアミノ酸配列（配列番号２）を示す。
【発明を実施するための形態】
【００７２】
これより本発明のある特定の実施形態を詳細に参照するが、それらの例は、添付の構造及び式に例示されている。本発明は、列挙される実施形態と併せて説明されるが、それらは、本発明をこれらの実施形態に限定することを意図するものではないことを理解されたい。反対に、本発明は、特許請求の範囲によって定義される本発明の範囲内に含まれ得る、すべての代替例、修正、及び均等物を網羅することを意図するものである。当業者であれば、本発明の実施に使用することができる、本明細書に記載されるものに類似または同等である多数の方法及び材料を理解するであろう。本発明は、決して記載される方法及び材料に限定されるものではない。
【００７３】
本開示全体で引用されるすべての参照文献は、参照によりそれら全体が本明細書に明示的に組み込まれる。組み込まれる文献、特許、及び同様の資料のうちの１つ以上が、本出願（定義される用語、用語の用法、記載される技法等を含むがそれらに限定されない）と異なるか、または矛盾する場合は、本出願が優先される。
【００７４】
定義
本明細書の「抗体」という用語は、最も広義に使用され、それらが所望の抗原結合活性を呈する限り、これらに限定されないが、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、多重特異性抗体（例えば、二重特異性抗体）、及び抗体フラグメントを含む、種々の抗体構造を包含する。
【００７５】
「モノクローナル抗体」という用語は、本明細書で用いる場合、実質的に同種の抗体の集団から得られる抗体を指し、すなわち、その集団を含む個々の抗体は、同一であり、及び／または同じエピトープに結合するが、例えば、自然発生突然変異を含有するか、またはモノクローナル抗体調製物の産生中に生じる、起こり得る変異抗体は例外であり、かかる変異体は一般的に少量で存在する。異なる決定基（エピトープ）に対する異なる抗体を典型的に含む、ポリクローナル抗体製剤とは対照的に、モノクローナル抗体製剤の各モノクローナル抗体は、抗原上の単一の決定基に対する。したがって、「モノクローナル」という修飾語は、実質的に同種の抗体の集団から得られるものとして抗体の特徴を示しており、任意の特定の方法による抗体の産生を必要とするものとして解釈されるものではない。例えば、本発明に従って使用されるモノクローナル抗体は、ハイブリドーマ法、組換えＤＮＡ法、ファージディスプレイ法、及びヒト免疫グロブリン遺伝子座のすべてまたは一部を含有するトランスジェニック動物を利用する方法を含むが、これらに限定されない、多様な技法によって作製されてもよく、モノクローナル抗体を作製するためのかかる方法及び他の例示的な方法が、本明細書に記載されている。
【００７６】
本明細書の抗体薬物複合体で使用する抗ＨＥＲ２抗体は、モノクローナル抗体である。
【００７７】
「キメラ抗体」という用語は、１つの供給源または種に由来する可変領域、すなわち結合領域と、異なる供給源または種に由来する定常領域の少なくとも一部を含む、通常は組換えＤＮＡ技術によって調製される、モノクローナル抗体を指す。マウス可変領域及びヒト定常領域を含む、キメラ抗体が特に好ましい。このようなマウス／ヒトキメラ抗体は、マウス免疫グロブリン可変領域をコードするＤＮＡセグメントとヒト免疫グロブリン定常領域をコードするＤＮＡセグメントを含む、発現した免疫グロブリン遺伝子の生成物である。本発明に包含される「キメラ抗体」の他の形態は、クラスまたはサブクラスが元の抗体から改変または変化されたものである。このような「キメラ」抗体は、「クラススイッチ抗体」とも称される。キメラ抗体を作成方法は、当該技術分野において周知の従来の組換えＤＮＡ及び遺伝子トランスフェクション技術を含む。例えば、Ｍｏｒｒｉｓｏｎ，Ｓ．Ｌ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ  Ｓｃｉ．ＵＳＡ８１（１９８４）６８５１−６８５５、米国特許得第５，２０２，２３８号及び同第５，２０４，２４４号を参照のこと。
【００７８】
「ヒト化抗体」という用語は、フレームワーク領域または「相補性決定領域」（ＣＤＲ）が、親免疫グロブリンのものと比べて異なる特異性の免疫グロブリンのＣＤＲを含むように改変された抗体を意味する。好ましい実施態様では、ヒト抗体のフレームワーク領域中にマウスＣＤＲをグラフトさせて「ヒト化抗体」を調製する。例えば、Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ，Ｌ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ３３２（１９８８）３２３−３２７及びＮｅｕｂｅｒｇｅｒ，Ｍ．Ｓ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ３１４（１９８５）２６８−２７０を参照のこと。特に好ましいＣＤＲは、キメラ及び二官能性抗体について上述した抗原を認識する配列を表すものに対応する。
【００７９】
本明細書で使用する場合「ヒト抗体」という用語は、ヒト生殖系免疫グロブリン配列に由来する可変及び定常領域を有する抗体を含むことが意図される。ヒト抗体は従来技術で周知であり（ｖａｎ  Ｄｉｊｋ，Ｍ．Ａ．，ａｎｄ  ｖａｎ  ｄｅ  Ｗｉｎｋｅｌ，Ｊ．Ｇ．，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．５（２００１）３６８−３７４）、及びファージディスプレイを含む種々の技術により作成できる。そのような技術に基づいて、豊富な種類の標的に対するヒト抗体を作成できる。ヒト抗体の例は、例えばＫｅｌｌｅｒｍａｎｎ，Ｓ．Ａ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｃｕｒｒ  Ｏｐｉｎ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．１３（２００２）５９３−５９７に記載される。ヒト抗体を作成及び選択するためのファージディスプレイ技術の使用については、例えばＷｉｎｔｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｎｎ  Ｒｅｖｉｅｗ  Ｉｍｍｕｎｏｌ，１９９４，１２：４３３−４５５を参照のこと、ならびにトランスジェニックマウス及びファージディスプレイからの完全ヒト抗体の作成については、例えばＬｏｎｂｅｒｇ、Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｏｐｉｎｉｏｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌ、２００８、２０（４）：４５０−４５９を参照のこと。
【００８０】
本明細書で使用する場合「組換えヒト抗体」という用語は、組換え手段によって調製され、発現され、作成されまたは単離されたすべてのヒト抗体、例えば、ヒト免疫グロブリン遺伝子に対してトランスジェニックである動物（例えばマウス）に由来する、もしくはＮＳ０細胞もしくはＣＨＯ細胞などの宿主細胞から単離された抗体、または宿主細胞にトランスフェクトされた組換え発現ベクターを使用して発現される抗体を含むことが意図される。このような組換えヒト抗体は、再編成した形態のヒト生殖系列免疫グロブリン配列に由来する可変及び定常領域を有する。
【００８１】
本明細書で使用する場合「特異的結合」または「特異的に結合する」とは、不必要または非特異的標的との結合と区別するように、標的に対して十分選択的である結合を指す。一実施形態において、標的に特異的に結合する抗体は、結合親和性は、１μＭ以下、１００ｎＭ以下、１０ｎＭ以下、１ｎＭ以下、０．１ｎＭ以下、０．０１ｎＭ以下または０．００１ｎＭ以下（例えば１０−８Ｍ以下、例えば１０−８Ｍ〜１０−１３Ｍ、例えば１０−９Ｍ〜１０−１３Ｍ）のその標的のための結合親和性（Ｋｄ）を有する。更に別の実施形態では、ＫＤは、１０−１０ｍｏｌ／ｌ以下（例えば１０−１２ｍｏｌ／ｌ）である。結合親和性は、標準結合アッセイ、例えば標的抗原を発現する細胞のスキャッチャードプロット解析により測定される。
【００８２】
本明細書で使用する場合「核酸分子」という用語は、ＤＮＡ分子及びＲＮＡ分子を包含することを意図する。核酸分子は、一本鎖または二本鎖であり得る。一実施形態において、それは二本鎖ＤＮＡである。
【００８３】
「定常ドメイン」は、抗体を抗原に結合させることに直接関与しないが、エフェクター機能（ＡＤＣＣ、補体結合及びＣＤＣ）に関与している。
【００８４】
「可変領域」または「可変ドメイン」という用語は、抗体を抗原に結合することに関与する、抗体重鎖または軽鎖のドメインを指す。天然抗体の重鎖及び軽鎖の可変ドメイン（それぞれ、ＶＨ及びＶＬ）は一般に、同様の構造を有し、各ドメインは、４つの保存されたフレームワーク領域（ＦＲ）及び３つの超可変領域（ＨＶＲ）を含む。（例えばＫｉｎｄｔ  ｅｔ  ａｌ．Ｋｕｂｙ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，６th ｅｄ．，Ｗ．Ｈ．Ｆｒｅｅｍａｎ  ａｎｄ  Ｃｏ．，ｐａｇｅ９１（２００７）を参照のこと）。
【００８５】
「超可変領域」または「ＨＶＲ」という用語は、本明細書で用いる場合、配列中で超可変（「相補性決定領域」または「ＣＤＲ」）であり、及び／または構造的に定義されたループ（「超可変ループ」）を形成し、及び／または抗原接触残基（「抗原接触体」）を含有する、抗体可変ドメインの領域の各々を指す。概して、その抗原結合部位は、ＶＨに３つ（Ｈ１、Ｈ２、Ｈ３）とＶＬに３つ（Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３）の６つのＨＶＲを有する。本明細書の例示的なＨＶＲは、
（ａ）アミノ酸残基２６〜３２（Ｌ１）、５０〜５２（Ｌ２）、９１〜９６（Ｌ３）、２６〜３２（Ｈ１）、５３〜５５（Ｈ２）、及び９６〜１０１（Ｈ３）で発生する超可変ループ（Ｃｈｏｔｈｉａ  ａｎｄ  Ｌｅｓｋ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１−９１７（１９８７））、
（ｂ）アミノ酸残基２４〜３４（Ｌ１）、５０〜５６（Ｌ２）、８９〜９７（Ｌ３）、３１〜３５ｂ（Ｈ１）、５０〜６５（Ｈ２）、及び９５〜１０２（Ｈ３）で発生するＣＤＲ（Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈ  Ｅｄ．，Ｐｕｂｌｉｃ  Ｈｅａｌｔｈ  Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ．（１９９１））、
（ｃ）アミノ酸残基２７ｃ〜３６（Ｌ１）、４６〜５５（Ｌ２）、８９〜９６（Ｌ３）、３０〜３５ｂ（Ｈ１）、４７〜５８（Ｈ２）、及び９３〜１０１（Ｈ３）で発生する抗原接触（ＭａｃＣａｌｌｕｍ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２６２：７３２−７４５（１９９６））、ならびに
（ｄ）ＨＶＲアミノ酸残基４６〜５６（Ｌ２）、４７〜５６（Ｌ２）、４８〜５６（Ｌ２）、４９〜５６（Ｌ２）、２６〜３５（Ｈ１）、２６〜３５ｂ（Ｈ１）、４９〜６５（Ｈ２）、９３〜１０２（Ｈ３）、及び９４〜１０２（Ｈ３）を含む、（ａ）、（ｂ）、及び／または（ｃ）の組み合わせを含む。
【００８６】
本発明の「抗ＨＥＲ２抗体」という用語は、ＨＥＲ２抗原と特異的に結合する抗体である。
【００８７】
本明細書で定義されるように「トラスツズマブ」「ＨＥＲＣＥＰＴＩＮ（登録商標）」及び「ｈｕＭＡｂ４Ｄ５−８」という用語は、同じ意味で用いられる。このような抗体は、好ましくは、図１３（配列番号１）及び図１４（配列番号２）にそれぞれ示される軽鎖アミノ酸配列及び重鎖アミノ酸配列を含む。
【００８８】
「エピトープ４Ｄ５」または「４Ｄ５エピトープ」または「４Ｄ５」は、抗体４Ｄ５（ＡＴＣＣ  ＣＲＬ１０４６３）及びトラスツズマブが結合するＨＥＲ２の細胞外ドメイン内の領域である。このエピトープは、ＨＥＲ２の膜貫通ドメインに近くにあり、ＨＥＲ２のドメインＩＶ内にある。４Ｄ５エピトープに結合する抗体をスクリーニングするために、Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，  Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，Ｅｄ  Ｈａｒｌｏｗ  ａｎｄ  ｄａｖｉｄ  Ｌａｎｅ（１９８８）に記載されるもの等のルーチンクロスブロッキングアッセイを行うことができる。代替として、エピトープマッピングを行い、抗体がＨＥＲ２の４Ｄ５エピトープ（例えば、ＨＥＲ２を含む約残基５２９〜約残基６２５に由来する領域内の任意の１つ以上の残基）に結合するかどうかを評価することができる。
【００８９】
「エピトープ２Ｃ４」または「２Ｃ４エピトープ」は、抗体２Ｃ４が結合するＨＥＲ２の細胞外ドメイン内の領域である。２Ｃ４エピトープに結合する抗体をスクリーニングするために、Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，Ｅｄ  Ｈａｒｌｏｗ  ａｎｄ  ｄａｖｉｄ  Ｌａｎｅ（１９８８）に記載されるもの等のルーチンクロスブロッキングアッセイを行うことができる。代替として、エピトープマッピングを行い、抗体がＨＥＲ２の２Ｃ４エピトープに結合するかどうかを評価することができる。エピトープ２Ｃ４は、ＨＥＲ２の細胞外ドメイン内のドメインＩＩからの残基を含む。２Ｃ４抗体及びペルツズマブは、ドメインＩ、ＩＩ、及びＩＩＩの接合部でＨＥＲ２の細胞外ドメインに結合する（Ｆｒａｎｋｌｉｎ  ｅｔ  ａｌ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｃｅｌｌ５：３１７−３２８  （２００４））。
【００９０】
本明細書で定義されるように、「Ｔ−ＤＭ１」、「トラスツズマブ−ＭＣＣ−ＤＭ１」、「アド−トラスツズマブエムタンシン」、「トラスツズマブエムタンシン」、及び「ＫＡＤＣＹＬＡ（登録商標）」という用語は、互換的に使用され、リンカー部分ＭＣＣによってマイタンシノイド薬物部分ＤＭ１に結合されたトラスツズマブを指し、１、２、３、４、５、６、７、及び８つの薬物部分が抗体トラスツズマブに共有結合される、様々に負荷及び結合された抗体−薬物複合体のすべての混合物を含む（米国特許第７０９７８４０号、同第２００５／０２７６８１２号、同第２００５／０１６６９９３号）。
【００９１】
本明細書で使用する場合「Ｂｃｌ−２」という用語は、Ｂｃｌ−２タンパク質（Ｓｗｉｓｓ  Ｐｒｏｔ  ＩＤ  Ｎｏ．Ｐ１０４１５）（タンパク質のＢｃｌ−２ファミリーに属する）を指す（Ｃｏｒｙ．Ｓ．，ａｎｄ  Ａｄａｍｓ，Ｊ．Ｍ．，Ｎａｔｕｒｅ  Ｒｅｖｉｅｗｓ  Ｃａｎｃｅｒ２（２００２）６４７−６５６、Ａｄａｍｓ，Ｇｅｎｅｓ  ｕｎｄ  Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ１７（２００３）２４８１−２４９５、Ｄａｎｉａｌ，Ｎ．Ｎ．，ａｎｄ  Ｋｏｒｓｍｅｙｅｒ，Ｓ．Ｊ．，Ｃｅｌｌ１１６（２００４）２０５−２１９、Ｐｅｔｒｏｓ，Ａ．Ｍ．，Ｂｉｏｃｈｉｍ  Ｂｉｏｐｈｙｓ  Ａｃｔａ１６４４（２００４）８３−９４）。
【００９２】
本明細書で使用する場合「選択的Ｂｃｌ−２阻害剤」という用語は、タンパク質のＢｃｌ−２ファミリーの生存促進性要素を阻害するポリペプチド及び小分子を意味する。好ましくは、選択的Ｂｃｌ−２阻害剤は、２−（１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−５−イルオキシ）−４−（４−（（２−（４−クロロフェニル）−４，４−ジメチルシクロヘキサ−１−エニル）メチル）ピペラジン−１−イル）−Ｎ−（３−ニトロ−４−（（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−イル）メチルアミノ）フェニルスルホニル）ベンズアミド（別名ＡＢＴ−１９９またはＧＤＣ−０１９９）、またはその薬学的に許容される塩、式ＩのＢｃｌ−２阻害剤であり、それは、国際特許公開第ＷＯ２０１０／０１３８５８８号、及び米国特許公開第２０１０／０３０５１２２号に記載されており、それらは本明細書に参照により組み込まれる。
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式Ｉ
【００９３】
本明細書で「抗腫瘍剤」とは、癌を治療するために使用する薬剤を意味する。本明細書で抗腫瘍剤の非限定例は、化学療法剤、ＨＥＲ二量化阻害剤、ＨＥＲ抗体、腫瘍関連抗原に対する抗体、抗ホルモン化合物、サイトカイン、ＥＧＦＲ標的薬、血管新生阻害剤、チロシンキナーゼ阻害剤、増殖抑制剤及び抗体、細胞毒性剤、アポトーシスを誘発する抗体、ＣＯＸ阻害剤、ファーネシル転移酵素阻害剤、癌胎児性タンパク質ＣＡ１２５を結合する抗体、ＨＥＲ２ワクチン、Ｒａｆまたはｒａｓ阻害剤、リポソームドキソルビシン、トポテカン、タキサン、二重チロシンキナーゼ阻害剤、ＴＬＫ２８６、ＥＭＤ−７２００、ペルツズマブ、トラスツズマブ、エルロチニブ、ならびにベバシズマブを含む。
【００９４】
「化学療法」は、癌の治療に有用な化学療法剤の使用である。
【００９５】
「化学療法剤」は、作用機序に関わらず、癌の治療に有用な化合物である。化学療法剤の部類としては、アルキル化剤、抗代謝剤、紡錘体毒植物アルカロイド、細胞傷害性／抗腫瘍抗生物質、トポイソメラーゼ阻害剤、抗体、光増感剤、及びキナーゼ阻害剤が含まれるがこれらに限定されない。化学療法剤の例としては、エルロチニブ（ＴＡＲＣＥＶＡ（登録商標）、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ／ＯＳＩ  Ｐｈａｒｍ．）、ドセタキセル（ＴＡＸＯＴＥＲＥ（登録商標）、Ｓａｎｏｆｉ−Ａｖｅｎｔｉｓ）、５−ＦＵ（フルオロウラシル、５−フルオロウラシル、ＣＡＳ番号５１−２１−８）、ゲムシタビン（ＧＥＭＺＡＲ（登録商標）、Ｌｉｌｌｙ）、ＰＤ−０３２５９０１（ＣＡＳ番号３９１２１０−１０−９、Ｐｆｉｚｅｒ）、シスプラチン（シス−ジアミン、ジクロロ白金（ＩＩ）、ＣＡＳ番号１５６６３−２７−１）、カルボプラチン（ＣＡＳ番号４１５７５−９４−４）、パクリタキセル（ＴＡＸＯＬ（登録商標）、Ｂｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ  Ｓｑｕｉｂｂ  Ｏｎｃｏｌｏｇｙ，Ｐｒｉｎｃｅｔｏｎ，Ｎ．Ｊ．）、テモゾロミド（４−メチル−５−オキソ−２，３，４，６，８−ペンタザビシクロ［４．３．０］ノナ−２，７，９−トリエン−９−カルボキサミド、ＣＡＳ番号８５６２２−９３−１、ＴＥＭＯＤＡＲ（登録商標）、ＴＥＭＯＤＡＬ（登録商標）、Ｓｃｈｅｒｉｎｇ  Ｐｌｏｕｇｈ）、タモキシフェン（（Ｚ）−２−［４−（１，２−ジフェニルブタ−１−エニル）フェノキシ］−Ｎ，Ｎ−ジメチル−エタンアミン、ＮＯＬＶＡＤＥＸ（登録商標）、ＩＳＴＵＢＡＬ（登録商標）、ＶＡＬＯＤＥＸ（登録商標））、及びドキソルビシン（ＡＤＲＩＡＭＹＣＩＮ（登録商標））、Ａｋｔｉ−１／２、ＨＰＰＤ、ならびにラパマイシンが挙げられる。
【００９６】
化学療法剤の更なる例には、オキサリプラチン（ＥＬＯＸＡＴＩＮ（登録商標），Ｓａｎｏｆｉ）、ボルテゾミブ（ＶＥＬＣＡＤＥ（登録商標），Ｍｉｌｌｅｎｎｉｕｍ  Ｐｈａｒｍ．）、スーテント（ＳＵＮＩＴＩＮＩＢ（登録商標），ＳＵ１１２４８，Ｐｆｉｚｅｒ）、レトロゾール（ＦＥＭＡＲＡ（登録商標），Ｎｏｖａｒｔｉｓ）、メシル酸イマチニブ（ＧＬＥＥＶＥＣ（登録商標），Ｎｏｖａｒｔｉｓ）、ＸＬ−５１８（ＭＥＫ阻害剤，Ｅｘｅｌｉｘｉｓ，国際特許第ＷＯ２００７／０４４５１５号）、ＡＲＲＹ−８８６（Ｍｅｋ阻害剤，ＡＺＤ６２４４，Ａｒｒａｙ  ＢｉｏＰｈａｒｍａ，Ａｓｔｒａ  Ｚｅｎｅｃａ）、ＳＦ−１１２６（ＰＩ３Ｋ阻害剤，Ｓｅｍａｆｏｒｅ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）、ＢＥＺ−２３５（ＰＩ３Ｋ阻害剤，Ｎｏｖａｒｔｉｓ）、ＸＬ−１４７（ＰＩ３Ｋ阻害剤，Ｅｘｅｌｉｘｉｓ）、ＰＴＫ７８７／ＺＫ２２２５８４（Ｎｏｖａｒｔｉｓ）、フルベストラント（ＦＡＳＬＯＤＥＸ（登録商標），ＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａ）、ロイコボリン（フォリン酸）、ラパマイシン（シロリムス，ＲＡＰＡＭＵＮＥ（登録商標），Ｗｙｅｔｈ）、ラパチニブ（ＴＹＫＥＲＢ（登録商標），ＧＳＫ５７２０１６，Ｇｌａｘｏ  Ｓｍｉｔｈ  Ｋｌｉｎｅ）、ロナファルニブ（ＳＡＲＡＳＡＲ（商標），ＳＣＨ６６３３６，Ｓｃｈｅｒｉｎｇ  Ｐｌｏｕｇｈ）、ソラフェニブ（ＮＥＸＡＶＡＲ（登録商標），ＢＡＹ４３−９００６，Ｂａｙｅｒ  Ｌａｂｓ）、ゲフィチニブ（ＩＲＥＳＳＡ（登録商標），ＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａ）、イリノテカン（ＣＡＭＰＴＯＳＡＲ（登録商標），ＣＰＴ−１１，Ｐｆｉｚｅｒ）、チピファルニブ（ＺＡＲＮＥＳＴＲＡ（商標），Ｊｏｈｎｓｏｎ＆Ｊｏｈｎｓｏｎ）、ＡＢＲＡＸＡＮＥ（商標）（Ｃｒｅｍｏｐｈｏｒ−ｆｒｅｅ）、パクリタキセルのアルブミン操作したナノ粒子製剤（Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｐａｒｔｎｅｒｓ，Ｓｃｈａｕｍｂｅｒｇ，Ｉｌ）、バンデタニブ（ｒＩＮＮ，ＺＤ６４７４，ＺＡＣＴＩＭＡ（登録商標），ＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａ）、クロラムブシル、ＡＧ１４７８、ＡＧ１５７１（ＳＵ５２７１；Ｓｕｇｅｎ）、テムシロリムス（ＴＯＲＩＳＥＬ（登録商標），Ｗｙｅｔｈ）、パゾパニブ（ＧｌａｘｏＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅ）、カンフォスファミド（ＴＥＬＣＹＴＡ（登録商標），Ｔｅｌｉｋ）、チオテパ及びシクロホスファミド（ＣＹＴＯＸＡＮ（登録商標）、ＮＥＯＳＡＲ（登録商標））；ブスルファン、インプロスルファン及びピポスルファンなどのスルホン酸アルキル；ベンゾドーパ、カルボコン、メツレドーパ及びウレドーパなどのアジリジン；アルトレタアミン、トリエチレンメラミン、トリエチレンホスホラミド、トリエチレンチオホスホラミド及びトリメチロメラミンを含むエチレンイミン及びメチラメラミン；アセトゲニン（特にブラタシン及びブラタシノン）；カンプトセシン（合成類似体トポテカンを含む）；ブリオスタチン；カリスタチン；ＣＣ−１０６５（そのアドゼレシン、カルゼレシン及びバイゼレシン合成類似体を含む）；クリプトフィシン（特にクリプトフィシン１及びクリプトフィシン８）；ドラスタチン；デュオカルマイシン（合成類似体、ＫＷ−２１８９及びＣ���Ｉ−ＴＭ１を含む）；エリュテロビン；パンクラチスタチン；サルコジクチン；スポンジスタチン；クロランブシル、クロルナファジン、クロロホスファミド、エストラムスチン、イホスファミド、メクロレタミン、メクロレタミンオキシドヒドロクロリド、メルファラン、ノベンビチン、フェネステリン、プレドニムスチン、トロフォスファミド、ウラシルマスタードなどのナイトロジェンマスタード；カルムスチン、クロロゾトシン、フォテムスチン、ロムスチン、ニムスチン及びラニムスチンなどのニトロスレアス；エネジイン抗生物質などの抗生物質（例えば、カリケアマイシン、カリケアマイシンガンマ１Ｉ及びカリケアマイシンオメガＩ１（Ａｇｎｅｗ  Ｃｈｅｍ  Ｉｎｔｌ．Ｅｄ．Ｅｎｇｌ．（１９９４）３３：１８３−１８６）；ダイネミシン、ダイネミシンＡ；クロドロネートなどのビスホスホネート；エスペラマイシン；同様にネオカルチノスタチン発光団及び関連色素タンパク質エネジイン抗生物質発光団）、アクラシノマイシン、アクチノマイシン、オースラマイシン、アザセリン、ブレオマイシン、カクチノマイシン、カラビシン、カルミノマイシン、カルジノフィリン、クロモマイシン、ダクチノマイシン、ダウノルビシン、デトルビシン、６−ジアゾ−５−オキソ−Ｌ−ノルロイシン、モルフォリノ−ドキソルビシン、シアノモルフォリノ−ドキソルビシン、２−ピロリノ−ドキソルビシン及びデオキシドキソルビシン、エピルビシン、エソルビシン、イダルビシン、マセロマイシン、マイトマイシンＣなどのマイトマイシン、マイコフェノール酸、ノガラマイシン、オリボマイシン、ペプロマイシン、ポトフィロマイシン、ピューロマイシン、クエラマイシン、ロドルビシン、ストレプトニグリン、ストレプトゾシン、ツベルシジン、ウベニメクス、ジノスタチン、ゾルビシン；メトトレキセート及び５−フルオロウラシル（５−ＦＵ）などの代謝拮抗剤；デノプテリン、メトトレキセート、プテロプテリン、トリメトレキセートなどの葉酸類似体；フルダラビン、６−メルカプトプリン、チアミプリン、チオグアニンなどのプリン類似体；アンシタビン、アザシチジン、６−アザウリジン、カルモフール、シタラビン、ジデオキシウリジン、ドキシフルリジン、エノシタビン、フロキシウリジンなどのピリミジン類似体；カルステロン、プロピオン酸ドロモスタノロン、エピチオスタノール、メピチオスタン、テストラクトンなどのアンドロゲン；アミノグルテチミド、ミトタン、トリロスタンなどの抗副腎剤；フロリン酸などの葉酸リプレニッシャー；アセグラトン；アルドホスファミドグリコシド；アミノレブリン酸；エニルウラシル；アムサクリン；ベストラブシル；ビサントレン；エダトラキセート；デフォファミン；デメコルシン；ジアジコン；エルフォルニチン；酢酸エリプチニウム；エポチロン；エトグルシド；硝酸ガリウム；ヒドロキシ尿素；レンチナン；ロニダミン；メイタンシン及びアンサマイトシンなどのメイタンシノイド；ミトグアゾン；ミトキサントロン；モピダモール；ニトラクリン；ペントスタチン；フェナメット；ピラルビシン；ロソキサントロン；ポドフィリン酸；２−エチルヒドラジド；プロカルバジン；ＰＳＫ（登録商標）多糖類複合体（ＪＨＳ  Ｎａｔ���ｒａｌ  Ｐｒｏｄｕｃｔｓ，Ｅｕｇｅｎｅ，ＯＲ）；ラゾキサン；リゾキシン；シゾフィラン；スピロゲルマニウム；テニュアゾン酸；トリアジコン；２，２’，２”−トリクロロトリエチルアミン；トリコテセン（Ｔ−２トキシン、ベラキュリンＡ、ロリジンＡ及びアングイデン）；ウレタン；ビンデシン；ダカルバジン；マンノムスチン；ミトブロニトール；ミトラクトール；ピポブロマン；ガシトシン；アラビノシド（Ａｒａ−Ｃ）；シクロホスファミド；チオテパ；６−チオグアニン；メルカプトプリン；メトトレキセート；シスプラチン及びカルボプラチンなどのプラチナ類似体；ビンブラスチン；エトポシド（ＶＰ−１６）；イホスファミド；ミトキサントン；ビンクリスチン；ビノレルビン（ＮＡＶＥＬＢＩＮＥ（登録商標））；ノバントロン；テニポシド；エダトレキセート；ダウノマイシン；アミノプテリン；カペシタビン（ＸＥＬＯＤＡ（登録商標），Ｒｏｃｈｅ）；イバンドロナート；ＣＰＴ−１１；トポイソメラーゼ阻害剤ＲＦＳ２０００；ジフルオロメチロールニチン（ＤＭＦＯ）；レチノイン酸などのレチノイド；ならびに上述のいずれかの薬学的に許容される塩、酸及び誘導体が含まれる。
【００９７】
「癌」及び「癌性」という用語は、無秩序な細胞増殖によって通常特徴づけられる、哺乳動物の生理学的状態を意味するまたは表す。「腫瘍」は１つ以上の癌細胞を含む。癌の例としては、癌腫、リンパ腫、芽細胞腫、肉腫、及び白血病またはリンパ系の悪性病変が挙げられるがこれらに限定されない。そのような癌のより具体的な例には、乳癌、扁平上皮癌（例えば扁平上皮細胞癌）、小細胞肺癌、非小細胞肺癌（「ＮＳＣＬＣ」）、肺腺癌及び肺の扁平上皮癌を含む肺癌、腹膜癌、肝細胞癌、消化管癌を含む胃癌、膵臓癌、神経膠芽腫、子宮頸癌、卵巣癌、肝臓癌、膀胱癌、肝細胞癌、乳癌、結腸癌、直腸癌、結腸直腸癌、子宮内膜癌または子宮癌腫、唾液腺癌腫、腎臓癌または腎癌、前立腺癌、外陰癌、甲状腺癌、肝癌腫、肛門癌腫、陰茎癌腫、ならびに頭頸部癌が含まれる。好ましい実施形態において、癌は、乳癌である。別の好ましい実施形態において、癌は胃癌である。
【００９８】
「０期」、「Ｉ期」、「ＩＩ期」、「ＩＩＩ期」、または「ＩＶ期」、及びこの分類内の様々な亜期の腫瘍または癌への言及は、当該技術分野において既知の全ステージグループ分けまたはローマ数字ステージング方法を使用する腫瘍または癌の分類を示す。一般に癌の実際の病期は癌の種類によって決定されるが、０期癌は上皮病変であり、Ｉ期癌は、小さい局在化腫瘍であり、ＩＩ期及びＩＩＩ期癌は、局所リンパ節の関与を示す局所進行腫瘍であり、ＩＶ期癌は、転移性癌を表す。各種の腫瘍に特異的な病期は、熟練した臨床医に既知である。
【００９９】
「転移性乳癌」という用語は、癌細胞が、血管またはリンパ腺によって元の部位から体内の１つ以上の他の部位に伝播し、乳房以外の１つ以上の臓器内で１つ以上の二次腫瘍を形成する乳癌の状態を意味する。
【０１００】
「進行」癌は、局所浸潤または転移のいずれかによって元の部位または臓器の外側に拡散しているものである。したがって、「進行」癌という用語は、局所的に進行した疾患及び転移性疾患の両方を含む。
【０１０１】
「難治性」癌は、抗腫瘍剤（例えば化学療法）が癌患者に投与されている場合でも、進行するものである。難治性癌の例は、プラチナ製剤不応性のものである。
【０１０２】
「再発」癌は、手術等の初期療法への応答後に、初期部位または遠位部位のいずれかにおいて再成長したものである。
【０１０３】
「局所的再発」癌は、治療後に以前に治療された癌と同じ場所で再発する癌である。
「手術可能な」または「切除可能な」癌は、主要臓器に限定され、手術（切除）に適した癌である。
【０１０４】
「ｎｏｎ−ｒｅｓｅｃｔａｂｌｅ（切除不可能な）」または「ｕｎｒｅｓｅｃｔａｂｌｅ（切除不可能な）」癌は、手術によって除去（切除）することができない。
【０１０５】
「ＨＥＲ２陽性」及び「ＨＥＲ２発現」という用語は、本明細書で区別なく使用する。「ＨＥＲ２陽性」癌は、正常レベルよりも高いＨＥＲ２を有する癌細胞を含む。ＨＥＲ２陽性癌の例としては、ＨＥＲ２陽性乳癌及びＨＥＲ２陽性胃癌が挙げられる。所望によりＨＥＲ２陽性はＨＥＲ２過剰発現癌であり、いくつかの実施形態において、ＨＥＲ２陽性癌は、２＋もしくは３＋の免疫組織化学（ＩＨＣ）スコア、及び／または２．０以上のｉｎ  ｓｉｔｕハイブリダイゼーション（ＩＳＨ）増幅率を有する。
【０１０６】
ｉｎ  ｓｉｔｕハイブリダイゼーション（ＩＳＨ）は、蛍光、発色もしくは銀検出システム（すなわち、ＦＩＳＨ、ＣＩＳＨまたはＳＩＳＨ）、またはＣＩＳＨ及びＳＩＳＨシステム（明視野二倍ＩＳＨ、ＢＤＩＳＨ）もしくは二重ハプテン、二重色ＩＳＨ、ＤＤＩＳＨの組み合わせと連結したＤＮＡプローブを使用して、ｈｅｒ２のコピーの数を測定する。単一プローブを使用して、核当たりのｈｅｒ２コピーだけを計数して、または１７番染色体セントロメアプローブ（染色体計数プローブ１７、ＣＥＰ１７）のハイブリダイゼーションがｈｅｒ２：ＣＥＰ１７比の測定を可能にするデュアルプローブ技術として、ＩＳＨを実施することができる。同じスライドにおける２つのプローブのコハイブリダゼーションによる二重色技術として、または各プローブが連続スライドで用いられる単色アッセイとして、２プローブ法を実施できる。ｈｅｒ２：ＣＥＰ１７比は、後者が他のパラメーター（例えば腫瘍の分裂指数、切片の厚さ、核切断効果及び異常染色体のコピー数（異数染色体））にも依存しているので、平均ｈｅｒ２コピー数よりｈｅｒ２増幅状態の良好な反射としてみなされることもある。「ｉｎ  ｓｉｔｕハイブリダイゼーション（ＩＳＨ）増幅率≧２．０」という語句は、ｈｅｒ２：ＣＥＰ１７比≧２．０を意味する。更なる詳細については、例えば、Ｓａｕｔｅｒ  Ｇ，ｅｔ  ａｌ．Ｇｕｉｄｅｌｉｎｅｓ  ｆｏｒ  ｈｕｍａｎ  ｅｐｉｄｅｒｍａｌ  ｇｒｏｗｔｈ  ｆａｃｔｏｒ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ２ｔｅｓｔｉｎｇ：ｂｉｏｌｏｇｉｃ  ａｎｄ  ｍｅｔｈｏｄｏｌｏｇｉｃ  ｃｏｎｓｉｄｅｒａｔｉｏｎｓ．Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｏｎｃｏｌ２００９、２７：１３２３−１３３３及びｔｈｅ  ｒｅｖｉｅｗ  ａｒｔｉｃｌｅ  ｂｙ  Ｈａｎｎａ  ｅｔ  ａｌ．Ｍｏｄｅｒｎ  Ｐａｔｈｏｌｏｇｙ（２０１４）２７，４−１８を参照のこと。
【０１０７】
本明細書で「患者」または「対象」は、ヒト患者である。患者は「癌患者」、すなわち、癌、特に胃癌または乳癌の１つ以上の症状を罹患しているか、または罹患する危険性がある者であり得る。
【０１０８】
「患者集団」は、癌患者の群を指す。そのような集団を使用して、ペルツズマブなどの薬物の統計的に有意な有効性及び／または安全性を実証することができる。
【０１０９】
「再発」患者は、寛解後に癌の徴候または症状を有する者である。任意に、患者は、アジュバントまたはネオアジュバント療法後に再発した。
【０１１０】
「ＨＥＲ発現、増幅、または活性化を示す」癌または生体試料は、診断試験において、ＨＥＲ受容体を発現する（過剰発現を含む）、ＨＥＲ遺伝子が増幅する、かつ／またはさもなければＨＥＲ受容体の活性化もしくはホスホリル化を実証するものである。
【０１１１】
本明細書で使用する場合「相乗的」という用語は、２つ以上の単剤の相加効果よりも有効である治療上の組み合わせを指す。抗ＨＥＲ２抗体−薬物複合体（例えばトラスツズマブ−ＭＣＣ−ＤＭ１）と選択的Ｂｃｌ−２阻害剤の間の相乗的相互作用の測定は、本明細書に記載のアッセイから得られた結果、または抗癌剤中の相乗効果、併用効果及び拮抗作用を定量化するための標準プログラムを利用する、当該技術分野において周知の他のアッセイシステムの結果に基づくことができる。利用するのが好ましいプログラムは、「Ｎｅｗ  Ａｖｅｎｕｅｓ  ｉｎ  Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔａｌ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ」Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，１９８７，Ｃｈａｐｔｅｒ２においてＣｈｏｕ及びＴａｌａｌａｙよって説明される。０．８未満の組み合わせ指数（ＣＩ）値は相乗作用を示し、１．２よりも高い値は拮抗作用を示し、０．８〜１．２の間の値は相加効果を示す。併用療法は、「相乗効果」を提供し、「相乗的」であることを証明し得、これは、すなわち、共に使用された活性成分が化合物を別々に使用することから生じる効果の総和を上回る場合に達成される効果である。相乗効果は、活性成分が、（１）複合単位用量製剤中で同時製剤化され、同時に投与または送達されるか、（２）別個の製剤として交互にまたは並行して送達されるか、あるいは（３）何らかの他のレジメンによるときに獲得され得る。交互療法で送達される場合、相乗効果は、例えば、別個のシリンジ中の異なる注射によって逐次的に投与または送達されるときに獲得され得る。一般的に、交互療法の間、各活性成分の有効な投与量は、逐次的に、すなわちすぐに連続的に投与され、一方、併用療法においては、２つ以上の活性成分の有効な投与量は一緒に投与される。
【０１１２】
「ネオアジュバント療法」または「術前療法」は、本明細書において、手術前に付与される療法を指す。ネオアジュバント療法の目標は、即時の全身治療を提供することであり、潜在的に、手術、それに続く全身療法の標準シーケンスに従った場合にさもなくば増殖するであろう微小転移を根絶する。ネオアジュバント療法はまた、腫瘍サイズを低減し、それにより最初に切除不可能であった腫瘍を完全に切除するか、または臓器及びその機能の一部を保存するのに役立つ場合がある。更に、ネオアジュバント療法は、薬効のｉｎ  ｖｉｖｏ評価を可能にし、これによって後続の治療の選択を導かれ得る。
【０１１３】
「アジュバント療法」は、本明細書において、疾患再発の危険性を低減するために、残留疾患の証拠を検出することができない根治手術後に付与される療法を指す。アジュバント療法の目標は、癌の再発を防止すること、したがって癌関連死の可能性を低減することである。アジュバント療法は、本明細書において、ネオアジュバント療法を具体的に除外する。
【０１１４】
「根治手術」は、その用語が医学コミュニティ内で使用されるように使用される。根治手術としては、例えば、腫瘍の除去または切除をもたらす手順、手術、またはさもなければ、腫瘍の除去または切除をもたらすもの、例えば、すべての肉眼視可能な腫瘍の除去または切除をもたらすものを含む。根治手術としては、例えば、腫瘍の完全もしくは治癒的切除、または肉眼的完全切除が挙げられる。根治手術は、１つ以上の段階で起こる手順を含み、例えば、腫瘍の切除前に１つ以上の手術または他の手順が行われる複数段階手術手順を含む。根治手術は、関与する臓器、臓器及び組織の一部、ならびに周囲臓器、例えば、リンパ節、臓器の一部、または組織を含む腫瘍を除去する、または切除する手順を含む。除去は不完全であり得るため、腫瘍細胞は検出されないまま残留する場合がある。
【０１１５】
「生存（率）」は、患者が依然として生存していることを指し、無疾患生存（ＤＦＳ）、無進行生存（ＰＦＳ）、及び全生存（ＯＳ）を含む。生存率は、カプラン−マイヤー方法によって推定することができ、生存率のいかなる相違も、層別ログランク検定を使用して計算される。
【０１１６】
「無進行生存」（ＰＦＳ）は、治療の初日から、どちらが最初に起こるかに関わらず、記録された疾患進行（単離されたＣＮＳ進行を含む）または研究上のあらゆる原因による死亡までの期間である。
【０１１７】
「無疾患生存（ＤＦＳ）」は、癌を再発することなく、治療の開始から、または最初の診断から例えば、約１年、約２年、約３年、約４年、約５年、約１０年の定義された期間にわたってなおも患者が生存していることを指す。本発明の一態様において、ＤＦＳは、ＩＴＴ（ｉｎｔｅｎｔ−ｔｏ−ｔｒｅａｔ）原則に従って解析される。すなわち、患者は、割り付けられた療法に基づいて評価される。ＤＦＳの解析で使用される事象は、癌の局所的再発、局所再発、及び遠隔再発、二次癌の発生、及び先行事象（例えば、乳癌再発または第２の原発癌）のない患者の任意の原因による死亡を含み得る。
【０１１８】
「全生存」は、患者が、治療の開始から、または最初の診断から約１年、約２年、約３年、約４年、約５年、約１０年等の定義された期間にわたってもなお生存していることを指す。本発明の根拠をなす試験において、生存分析に使用される事象は、任意の原因による死亡であった。
【０１１９】
「生存を延長させる」とは、未治療の患者と比較して、または対照治療プロトコルと比較して、治療された患者におけるＤＦＳ及び／またはＯＳを増加させることを意味する。生存は、治療の開始の後、または最初の診断の後、少なくとも約６ヶ月、または少なくとも約１年、または少なくとも約２年、または少なくとも約３年、または少なくとも約４年、または少なくとも約５年、または少なくとも約１０年等にわたって監視される。
【０１２０】
生存分析の「ハザード比」は、経過観察の期間中、対照と比較して治療における死亡の危険性の減少を表す、２つの生存曲線の差の概要である。ハザード比は、事象の比についての統計的定義である。本発明の目的ために、ハザード比は、対照群の事象の確率によって分割した、任意の特定の時点での実験群の事象の確率を表すと定義される。
【０１２１】
「単剤療法」とは、一連の治療期間中に、癌または腫瘍の治療のために単一治療剤のみを含む治療レジメンを意味する。
【０１２２】
「治療する」及び「治療」という用語は、治療処置及び予防または防止対策の両方を意味し、その目的は、癌などの過剰増殖状態の増殖、進行もしくは拡がりなどの望ましくない生理学的変化もしくは障害を防ぐ、または遅らせる（軽減する）ことである。本発明の目的では、有益または所望の臨床結果としては、検出できるか検出できないかに関係なく、症状の軽減、疾患の程度の減弱、疾患の状態の安定化（すなわち、悪化しない）、疾患進行の遅延または減速、疾患状態の緩和または一時的緩和、及び寛解（部分的もしくは完全なもの）が挙げられるがこれらに限定されない。「治療」はまた、治療を受けない場合の予測生存期間と比較して、生存期間を延長することも意味し得る。治療が必要なものには、状態もしくは障害を既に有するもの、ならびに状態もしくは障害を有する傾向にあるもの、または状態もしくは障害を予防する必要があるものが挙げられる。
【０１２３】
「治療方法」またはそれに相当するものは、例えば癌に適用される場合、患者の癌細胞の数を低減するもしくは排除する、もしくは癌の症状を緩和するように計画された手順、または過程を指す。癌または別の増殖性疾患の「治療方法」は、癌細胞もしくは他の障害が実際に排除される、細胞もしくは障害の数が実際に低減される、または癌もしくは他の障害の症状が実際に緩和されることを必ずしも意味しない。多くの場合、成功の可能性が低くても、それでもなお、患者の病歴と推定される生存予測を加味し、総合的に有益な行動方針であると考えられる癌の治療方法が実施される。
【０１２４】
「併用投与」または「併用投与する」という用語は、２つの別個の製剤としての抗ＨＥＲ２抗体−薬物複合体及び選択的Ｂｃｌ−２阻害剤の投与を指す。併用投与は、同時、またはいずれかの順序で連続的であり得る。１つの更なる実施形態において、両方の（またはすべて）活性剤がその生物活性を同時に発揮する期間がある。抗ＨＥＲ２抗体−薬物複合体及び選択的Ｂｃｌ−２阻害剤は、同時にまたは連続的に併用投与される（例えば、連続注入による静脈内（ｉ．ｖ．）投与を介して（１つは抗体−薬物複合体抗体のため、最終的に１つはＢｃｌ−２阻害剤のため、またはＢｃｌ−２阻害剤は経口投与される））。両方の治療薬が連続的に併用投与されるとき、「所定の期間」によって分離される２つの個別投与で、薬品は投与される。所定の期間という用語は、１時間〜１５日のいずれかを意味する。例えば薬剤の１つは、他の薬剤の投与から約１５、１４、１３、１２、１１、１０、９、８、７、６、５、４、３、２もしくは１日、または２４、２３、２２、２１、２０、１９、１８、１７、１６、１５、１４，１３、１２、１１、１０、９、８、７、６、５、４、３、２もしくは１時間内で投与されることができ、及び一実施形態において、所定の期間は１０、９、８、７、６、５、４、３、２もしくは１日、または２４、２３、２２、２１、２０、１９、１８，１７、１６，１５、１４，１３、１２、１１、１０、９、８、７、６、５、４、３、２もしくは１時間である。
【０１２５】
「同時に」という用語は、同じ時間で、または短い期間で、通常１時間未満以内を意味する。
【０１２６】
１つ以上の他の薬物と「同時に」投与される薬物は、同一治療サイクル中、１つ以上の他の薬物と同じ治療日に、任意に１つ以上の他の薬物と同じ時間に投与される。例えば、３週間毎に付与される癌療法の場合、同時に投与される薬物はそれぞれ、３週間のサイクルの１日目に投与される。
【０１２７】
本明細書で使用する場合、投与期間は、その間に治療薬が少なくとも１回投与される期間を意味する、投与サイクルは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９または３０日間である。
【０１２８】
特定の実施形態で、投与サイクルは２１日間である。
【０１２９】
本明細書で提供する患者の癌を治療する方法の特定の実施形態において、方法は、抗ＨＥＲ２抗体−薬物複合体及び選択的Ｂｃｌ−２阻害を１つ以上の投与サイクルで患者に投与することを含む。一実施形態において、１つ以上の投与サイクルはそれぞれ、少なくとも１週の間持続する。別の実施形態では、１つ以上の投与サイクルはそれぞれ、少なくとも２週間、３週間、４週間、５週間、６週間、７週間、８週間、９週間また９週超である。一実施形態において、各投与サイクルは３週間である。
【０１３０】
好ましい実施形態において、抗体−薬物複合体は、静脈内（ｉ．ｖ．）注入として、３週間（２１日サイクル）毎に投与される。
【０１３１】
別の好ましい実施形態として、抗体−薬物複合体は、ＫＡＤＣＹＬＡ（登録商標）（アド−トラスツズマブエムタンシン）であり、それは３．６ｍｇ／ｋｇの静脈内注入として３週間（２１日サイクル）毎に投与される。
【０１３２】
本明細書において開示される治療方法のいくつかの実施形態において、選択的Ｂｃｌ−２阻害剤は、２−（１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−５−イルオキシ）−４−（４−（（２−（４−クロロフェニル）−４，４−ジメチルシクロヘキサ−１−エニル）メチル）ピペラジン−１−イル）−Ｎ−（３−ニトロ−４−（（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−イル）メチルアミノ）フェニルスルホニル）ベンズアミド（ＧＤＣ−０１９９）である。特定の実施形態で、患者に投与される投与量当たりのＧＤＣ−０１９９の量は、１０ｍｇ〜８０ｍｇの間の最初の量から１９０ｍｇ〜４００ｍｇの間の最終的な量まで、最初の投与サイクル中に増加する。特定の実施形態で、患者に投与される投与量当たりのＧＤＣ−０１９９の量は、５０ｍｇまたは１００ｍｇから開始して、投与量当たり３００ｍｇまで増加する。いくつかの実施形態では、患者に投与される初回投与量のＧＤＣ−０１９９の量は、例えば２０ｍｇ〜６０ｍｇの間（例えば２０ｍｇ、２５ｍｇ、３０ｍｇ、３５ｍｇ、４０ｍｇ、４５ｍｇ、５０ｍｇ、５５ｍｇまたは６０ｍｇの投与量）で、続いて１００ｍｇ、２００ｍｇ、３００ｍｇ以上のＧＤＣ−０１９９の投与量であり得る。
【０１３３】
「有害事象」とは、関連性の有無に関係なく、実験の（医薬）生成物の使用または他のプロトコルに規定された処置と時間的に関連する、任意の好ましくなくかつ予想外の徴候、症状または疾患であり、ＡＥ報告期間前に存在しなかった乳癌に関連する徴候または症状；プロトコルに規定された処置（例えば、生検などの侵襲的処置）の結果として生じる合併症；該当する場合、薬剤休薬、未処置観察期、または他のプロトコルに規定された処置と関連する、実験処置の割当前に生じたＡＥ；プロトコル指定ＡＥ報告期間中に重篤度もしくは頻度が悪化した、または特性が変化したと研究者が判断した既往症（実験している状態以外の）を含む、プロトコル指定ＡＥの報告期間中に現れる患者で、以前に観察されない有害事象（ＡＥ）を含む。
【０１３４】
抗体−薬物複合体は「治療に有効な量」（または単に「有効な量」）で患者に投与されることは自明であり、それは、研究者、獣医、医者もしくは他の臨床医が探求している、組織、系、動物もしくはヒトの生物学的もしくは医学的反応を引き出す、対応する化合物または組み合わせの量である。治療的薬剤の有効量の投与は、単回投与または分割用量投与であり得る。「分割用量投与」とは、複数の投与量、好ましくは２つに分割されて、１日または２日以内に投与される有効量を意味する。例えば１００ｍｇの選択的Ｂｃｌ−２阻害剤が効果的であるとみなされる場合、それは１回１００ｍｇの投与、または２回５０ｍｇの投与で投与されることができる。分割用量投与は、副作用を低減するために、投与期間の開始時に望ましい場合がある。有効量が分割用量で投与された場合、それは依然として有効量の１回の投与とみなされる。例えば１００ｍｇが選択的Ｂｃｌ−２阻害剤の有効量であって、その量がある期間（例えば２日）にわたって２回５０ｍｇの投与量で投与されるとき、１つの有効量だけがその期間中に投与される。
【０１３５】
本明細書における治療剤の「固定」または「一定」用量は、患者の体重（ＷＴ）または体表面積（ＢＳＡ）に関係なくヒト患者に投与される用量を指す。したがって、この固定用量または一定用量は、ｍｇ／ｋｇ用量またはｍｇ／ｍ２用量として提供されないが、むしろ治療剤の絶対量として提供される。
【０１３６】
本明細書における「負荷」用量は一般に、患者に投与される治療剤の初期用量を含み、その１つ以上の維持用量（複数可）が続く。一般に、単一負荷用量が投与されるが、本明細書において複数の負荷用量が企図される。通常、維持用量（複数可）で達成され得るより早く治療剤の所望の安定状態濃度を達成するように、投与される負荷用量（複数可）の量は、投与される維持用量（複数可）の量を超え、かつ／または負荷用量（複数可）は、維持用量（複数可）より頻繁に投与される。
【０１３７】
本明細書における「維持」用量は、治療期間にわたって患者に投与される治療剤の１つ以上の用量を指す。通常、維持用量は、ほぼ毎週、約２週間毎、約３週間毎、または約４週間毎の治療間隔で投与されるが、３週間毎等の治療間隔で投与されることが好ましい。
【０１３８】
「点滴」または「点滴する」は、治療と目的として、静脈から体内に薬物含有溶液を導入することを指す。一般に、これは、点滴（ＩＶ）バッグを介して達成される。
【０１３９】
「点滴バッグ」または「ＩＶバッグ」は、患者の静脈を介して投与され得る溶液を保持することができるバッグである。一実施形態において、溶液は、生理食塩液である（例えば、約０．９％または約０．４５％ＮａＣｌ）。任意に、ＩＶバッグは、ポリオレフィンまたはポリ塩化ビニルから形成される。
【０１４０】
本発明に関連して、追加の他の細胞毒性剤、化学療法剤もしくは抗癌剤、またはそのような薬剤の効果を強化する化合物（例えばサイトカイン）は、ＨＥＲ２発現癌の抗ＨＥＲ２抗体−薬物複合体及びＢｃｌ−２阻害剤の併用治療に使用され得る。そのような分子は、意図される目的に有効な量で組み合わさって存在することが好適である。好ましくは抗ＨＥＲ２抗体−薬物複合体及びＢｃｌ−２阻害剤の併用治療は、そのような追加の細胞毒性剤、化学療法剤もしくは抗癌剤、またはそのような薬剤の効果を強化する化合物を伴わずに使用される。
【０１４１】
そのような薬剤は、例えば、アルキル化剤またはアルキル化作用を有する薬剤（例えばシクロホスファミド（ＣＴＸ；例えばＣＹＴＯＸＡＮ（登録商標））、クロラムブシル（ＣＨＬ；例えばＬＥＵＫＥＲＡＮ（登録商標））、シスプラチン（ＣｉｓＰ；例えばＰＬＡＴＩＮＯＬｌ（登録商標））、ブスルファン（例えばＭＣＬＥＲＡＮ（登録商標））、メルファラン、カルムスチン（ＢＣＮＵ）、ストレプトゾトシン、トリエチレンメラミン（ＴＥＭ）、マイトマイシンＣなど）；代謝拮抗剤（例えばメトトレキサート（ＭＴＸ）、エトポシド（ＶＰ１６；例えばＶＥＰＥＳＩＤ（登録商標））、６−メルカプトプリン（６ＭＰ）、６−チオグアニン（６ＴＧ）、シタラビン（Ａｒａ−Ｃ）、５−フルオロウラシル（５−ＦＵ）、カペシタビン（例えばＸＥＬＯＤＡ（登録商標））、ダカルバジン（ＤＴＩＣ）など）；抗生物質（例えばアクチノマイシンＤ、ドキソルビシン（ＤＸＲ；例えばＡＤＲＩＡＭＹＣＩＮ（登録商標））、ダウノルビシン（ダウノマイシン）、ブレオマイシン、ミトラマイシンなど）；アルカロイド（例えばビンクリスチン（ＶＣＲ）などのビンカアルカロイドなど）；ならびに他の抗腫瘍剤（例えばパクリタクセル（例えばＴＡＸＯＬ（登録商標））及びパクリタクセル誘導体、静細胞薬、グルココルチコイド（例えばデキサメタゾン（ＤＥＸ；例えばＤＥＣＡＤＲＯＮ（登録商標））及びコルチコステロイド（例えばプレドニソン、ヌクレオシド酵素阻害剤（例えばヒドロキシ尿素））、アミノ酸枯渇酵素（例えばアスパラギナーゼ、ロイコボリン及び他の葉酸誘導体）、ならびに類似の種々の抗腫瘍剤を包含する。以下の薬剤も、追加の薬剤、アミフォスチン（例えばＥＴＨＹＯＬ（登録商標））、ダクチノマイシン、メクロエタミン（窒素マスタード）、ストレプトゾシン、シクロホスファミド、ロムスチン（ＣＣＮＵ）、ドキソルビシンリポ（例えばＤＯＸＩＬ（登録商標））、ゲムシタビン（例えばＧＥＭＺＡＲ（登録商標））、ダウノルビシンリポ（例えばＤＡＵＮＯＸＯＭＥ（登録商標））、プロカルバジン、マイトマイシン、ドセタキセル（例えばＴＡＸＯＴＥＲＥＳＡ（登録商標））、アルデスロイキン、カルボプラチン、オキサリプラチン、クラドリピン、カンプトセシン、ＣＰＴ１１（イリノテカン）、１０−ヒドロキシ７−エチル−カンプトセシン（ＳＮ３８）、フロクスウリジン、フルダラビン、イホスファミド、イダルビシン、メスナ、インターフェロンベータ、インターフェロンアルファ、ミトキサントロン、トポテカン、ロイプロリド、メゲストロール、メルファラン、メルカプトプリン、プリカマイシン、ミトタン、ペガスパルガーゼ、ペントスタチン、ピポブロマン、プリカマイシン、タモキシフェン、テニポシド、テストラクトン、チオグアニン、チオテパ、ウラシルマスタード、ビノレルビン、クロラムブシルとして用いることができる。好ましくはＩＩ型抗−ＣＤ２０抗体及びＢｃｌ−２阻害剤の併用治療は、そのような追加の薬剤を伴わずに使用される。
【０１４２】
上述の細胞毒性剤及び抗癌剤、ならびにタンパク質キナーゼ阻害剤のような抗増殖性標的特異性抗癌剤の化学療法レジメンにおける使用は一般的に、癌治療技術において十分に特性決定されており、本明細書でのその使用は、耐性及び有効性を監視することについて、ならびに投与経路及び投与量を調整することについて同じ考慮下にある。例えば細胞毒性剤の実際の投与量は、組織培養法を用いて決定される患者の培養細胞応答に依存して変化することができる。一般的に投与量は、追加の他の薬剤の不在下で使用される量と比較して、低減される。
【０１４３】
有効な細胞毒性剤の通常の投与量は、製造業者から推奨される範囲内であり得て、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ応答または動物モデルにおける応答で示されている場合、最大約１桁分まで濃度または量を低減することができる。したがって実際の投与量は、医師の判断、患者の状態、及び初代培養悪性細胞もしくは組織培養した組織試料のｉｎ  ｖｉｔｒｏ応答性に基づく治療方法、または適切な動物モデルにおいて観察された応答に基づいた治療方法の有効性に依存するであろう。
【０１４４】
本発明に関連して、有効量の電離放射線が使用される、及び／または放射性医薬品が、抗ＨＥＲ２抗体−薬物複合体及びＢｃｌ−２阻害剤併用治療に加えて使用され得る。放射線の発生源は、治療される患者の体外または体内に存在する。その発生源が患者の体外に存在する場合、治療は体外照射療法（ＥＢＲＴ）として知られている。放射線の発生源が患者の体内に存在する場合、治療は近接照射療法（ＢＴ）と呼ばれる。本発明に関連して使用するための放射性原子は、ラジウム、セシウム−１３７、イリジウム−１９２、アメリシウム−２４１、金−１９８、コバルト−５７、銅−６７、テクネチウム−９９、ヨウ素−１２３、ヨウ素−１３１及びインジウム−１１１を含む群から選択され得るが、これらに限定されない。このような放射性同位体で抗体を標識することも、可能である。好ましくはＩＩ型抗−ＣＤ２０抗体とＢｃｌ−２阻害剤の併用治療は、このような電離放射線なしで使用される。
【０１４５】
放射線療法は、切除不能もしくは手術不可能な腫瘍及び／または腫瘍転移を制御するための標準療法である。改善された結果は、放射線療法が化学療法と組合された場合、見いだされる。放射線療法は、標的領域に供給される高照射量の放射線が腫瘍及び正常組織における生殖細胞の死をもたらす原理に基づく。放射線量レジメンは一般的に、放射線吸収線量（Ｇｙ）、時間及び分画により定義され、ならびに腫瘍学者によって慎重に定義されなければならない。患者が受ける放射線量は種々の考慮事項に依存するが、２つの最も重要なことは、身体の他の重要な構造または器官に対する腫瘍の位置、及び腫瘍が拡がる程度である。放射線療法を受ける患者の通常の過程は１〜６週間にわたる治療スケジュールで、週５日間、約１．８〜２．０Ｇｙの単回の１日の線量で１０〜８０Ｇｙの間の総照射量で患者に投与される。本発明の好ましい実施形態において、ヒト患者の腫瘍が本発明の併用治療及び放射線を用いて治療されるとき、相乗作用がある。言い換えると、本発明の組み合わせを含む薬剤を用いた腫瘍増殖の阻害は、放射線、所望により追加の化学療法剤または抗癌剤と組み合わせるとき、強化される。補助的な放射線治療のパラメーターは、例えば国際特許第ＷＯ９９／６００２３号に含まれる。
【０１４６】
抗ＨＥＲ２抗体−薬物複合体は、ボーラスとして静脈内投与による、または一定期間にわたる連続注入による、筋肉内、腹腔内、脳脊髄内、皮下、関節内、滑液嚢内もしくは髄腔内経路による既知の方法に従い、ヒト患者に投与される。抗体の静脈内または皮下投与が好ましい。
【０１４７】
Ｂｃｌ−２阻害剤は、既知の方法に従い、例えばボーラスとして静脈内投与により、または一定期間にわたる連続注入により、筋肉内、腹腔内、脳脊髄内、皮下、関節内、滑液嚢内、髄腔内もしくは経口経路により、患者に投与される。Ｂｃｌ−２阻害剤の静脈内、皮下または経口投与が好ましい。
【０１４８】
本明細書で使用する場合「薬学的に許容される担体」という用語は、医薬品の投与と適合する溶媒、分散媒、コーティング、抗菌及び抗カビ剤、等張剤及び吸収遅延剤を包含する、医薬品の投与と適合するあらゆる材料を含むことを目的としている。任意の従来の媒質または薬剤が活性化合物と不適合である場合を除いて、本発明の組成物でのその使用は企図される。補足的活性成分を組成物に組み込むこともできる。
【０１４９】
「バイアル」は、液体または凍結乾燥調製物を保有するのに好適な容器である。一実施形態において、バイアルは、単回使用バイアル、例えば、栓を有する２０ｃｃの単回使用バイアルである。
【０１５０】
「添付文書」という用語は、かかる治療薬の適応症、使用法、投薬量、投与、禁忌症についての情報、及び／またはその使用に関する警告を含有する、治療薬の商用のパッケージに通例含まれる指示書を指すように使用される。
【０１５１】
トラスツズマブ−ＭＣＣ−ＤＭ１（Ｔ−ＤＭ１、ＫＡＤＣＹＬＡ（登録商標）、アド−トラスツズマブエムタンシン）
本発明は、構造
2018521064.tif 000003
式ＩＩ
を有するトラスツズマブ−ＭＣＣ−ＤＭ１を含む治療上の組み合わせを含み、
Ｔｒはトラスツズマブであり、ｐは１〜８の整数である。薬物対抗体の比または薬物負荷は、トラスツズマブ−ＭＣＣ−ＤＭ１の上記構造においてｐによって表される。薬物負荷値ｐは１〜８である。トラスツズマブ−ＭＣＣ−ＤＭ１は、様々に負荷されかつ結合された抗体−薬物複合体のすべての混合物を含むが、この場合１、２、３、４、５、６、７、及び８つの薬物部分が、抗体トラスツズマブに共有結合される。
【０１５２】
トラスツズマブは、哺乳動物細胞（チャイニーズハムスター卵巣、ＣＨＯ）懸濁培養によって産生される。ＨＥＲ２（またはｃ−ｅｒｂＢ２）癌原遺伝子は、上皮成長因子受容体に構造的に関連する、１８５ｋＤａの膜貫通受容体タンパク質をコードする。ＨＥＲ２タンパク質過剰発現は、原発性乳癌の２５％〜３０％で観察され、固定腫瘍ブロックの免疫組織化学に基づく評価を使用して決定され得る（Ｐｒｅｓｓ  ＭＦ，ｅｔ  ａｌ（１９９３）Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ５３：４９６０−７０）。トラスツズマブは、マウス４Ｄ５抗体の、またはそれに由来する抗原結合残基を有する抗体である（ブダペスト条約下でＡＴＣＣ  ＣＲＬ１０４６３、Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（１２３０１Ｐａｒｋｌａｗｎ  Ｄｒｉｖｅ，Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ，Ｍｄ．２０８５２）に１９９０年５月２４日に寄託）。例示的なヒト化４Ｄ５抗体としては、米国特許第５８２１３３７号のように、ｈｕＭＡｂ４Ｄ５−１、ｈｕＭＡｂ４Ｄ５−２、ｈｕＭＡｂ４Ｄ５−３、ｈｕＭＡｂ４Ｄ５−４、ｈｕＭＡｂ４Ｄ５−５、ｈｕＭＡｂ４Ｄ５−６、ｈｕＭＡｂ４Ｄ５−７、及びｈｕＭＡｂ４Ｄ５−８（ＨＥＲＣＥＰＴＩＮ（登録商標））が挙げられる。
【０１５３】
抗体−薬物複合体（トラスツズマブ−ＭＣＣ−ＤＭ１）はメイタンシノイド薬物部分ＤＭ１（米国特許第５２０８０２０号、同第６４４１１６３号）を含み、アンサマイトシン発酵生成物（米国特許第６７９０９５４号、同第２００５／０１７０４７５号）から調製することができる。
【０１５４】
選択的Ｂｃｌ−２阻害剤
好ましい実施形態において、本発明の選択的Ｂｃｌ−２阻害剤は、２−（１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−５−イルオキシ）−４−（４−（（２−（４−クロロフェニル）−４，４−ジメチルシクロヘキサ−１−エニル）メチル）ピペラジン−１−イル）−Ｎ−（３−ニトロ−４−（（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−イル）メチルアミノ）フェニルスルホニル）ベンズアミド（別名ＡＢＴ−１９９またはＧＤＣ−０１９９）、またはその薬学的に許容される塩、式ＩのＢｃｌ−２阻害剤であり、それは、国際特許公開第ＷＯ２０１０／０１３８５８８号、及び米国特許公開第２０１０／０３０５１２２号に記載されており、それらは本明細書に参照により組み込まれる。
2018521064.tif 000004
式Ｉ
【０１５５】
他の選択的Ｂｃｌ−２阻害剤は例えば、オブリメルセン、ＳＰＣ−２９９６、ＲＴＡ−４０２、ゴシポル、ＡＴ−１０１、オバトクラックスメシル酸塩、Ａ−３７１１９１、Ａ−３８５３５８、Ａ−４３８７４４、ＡＢＴ−７３７、ＡＢＴ−２６３、ＡＴ−１０１、ＢＬ−１１、ＢＬ−１９３、ＧＸ−１５−００３、２−メトキシアンチマイシンＡ３、ＨＡ−１４−１、ＫＦ−６７５４４、プルプロガリン、ＴＰ−ＴＷ−３７、ＹＣ−１３７及びＺ−２４であり、例えばＺｈａｉ，Ｄ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｃｅｌｌ  Ｄｅａｔｈ  ａｎｄ  Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ１３（２００６）１４１９−１４２１に記載されている。
【０１５６】
医薬組成物
本発明の医薬組成物または製剤は、トラスツズマブ−ＭＣＣ−ＤＭ１、選択的Ｂｃｌ−２阻害剤、及び１つ以上の薬学的に許容される担体、滑沢剤、希釈剤または賦形剤の組み合わせを含む。
【０１５７】
本発明のトラスツズマブ−ＭＣＣ−ＤＭ１及び選択的Ｂｃｌ−２阻害剤は、非溶媒和形態で存在することができ、ならびに水、エタノールなどの薬学的に許容される溶媒との溶媒和形態で存在することができ、本発明は溶媒和形態と非溶媒和形態の両方を包含することが意図されている。
【０１５８】
本発明のトラスツズマブ−ＭＣＣ−ＤＭ１及び選択的Ｂｃｌ−２阻害剤は、異なる互変異性型で存在することができ、すべてのそのような形態は本発明の範囲内に包含される。用語「互変異性体」または「互変異性体形態」は、低エネルギーの障壁を介して相互転換できる異なるエネルギーの構造異性体を指す。例えば、プロトン互変異性体（プロトトロピー互変異性体としても知られている）は、ケト−エノール及びイミン−エナミン異性化反応等のプロトンの移行を介した相互変換を含む。原子価互変異性体は、結合性電子のいくつかの再編成による相互変換を含む。
【０１５９】
医薬組成物は、任意の薬学的に非活性な賦形剤、希釈剤、担体または滑沢剤に加えて、本明細書に記載の追加の薬剤のリストから選択されるトラスツズマブ−ＭＣＣ−ＤＭ１及び選択的Ｂｃｌ−２阻害剤を含む、２つ以上（例えば、２つ）の薬学的活性剤からなるバルク組成物及び個々の投与単位の両方を包含する。バルク組成物及び各個別の投与単位は、上述した薬学的活性剤の固定量を含むことができる。バルク組成物は、個別の投与単位へまだ形成されていない材料である。例示の投与単位は、経口投与単位（例えば錠剤、丸剤、カプセルなど）である。同様に、本発明の医薬組成物を投与することによって患者を治療する、本明細書に記載の方法は、バルク組成物及び個々の投与単位の投与も包含することを意図する。
【０１６０】
医薬組成物はまた、本明細書に引用したものと同一である本発明の同位体標識化合物を包含するが、１つ以上の原子は、通常自然界に見られる原子質量または質量数とは異なる原子質量または質量数を有する原子によって置換される。指定された任意の特定の原子または元素の同位体はすべて、本発明の化合物及びその使用の範囲内にあると考えられる。本発明の化合物に組み込むことができる代表的なアイソトープとしては、水素、炭素、窒素、酸素、リン、硫黄、フッ素、塩素及びヨウ素の同位元素（例えば２Ｈ、３Ｈ、１１Ｃ、１３Ｃ、１４Ｃ、１３Ｎ、１５Ｎ、１５Ｏ、１７Ｏ、１８Ｏ、３２Ｐ、３３Ｐ、３５Ｓ、１８Ｆ、３６Ｃｌ、１２３Ｉ及び１２５Ｉ）が含まれるが、これらに限定されない。本発明の特定の同位体標識化合物（例えば、３Ｈ及び１４Ｃで標識されたもの）は、化合物及び／または基質組織内分布アッセイに有用である。トリチウム化（３Ｈ）及び炭素−１４（１４Ｃ）同位体は、調製及び検出性が容易であるため有用である。更に、重水素（２Ｈ）などのより重い同位体で置換することによって、より大きい代謝安定性から得られる特定の治療上の利点をもたらすことができ（例えば、ｉｎ  ｖｉｖｏ半減期の延長または必要な投与量の減少）、したがって、いくつかの状況で好ましいことがある。１５Ｏ、１３Ｎ、１１Ｃ及び１８Ｆなどのポジトロン放出同位体は、基質受容体占有率を調べるために、陽電子射出断層撮影法（ＰＥＴ）試験に有用である。本発明の同位体標識化合物は一般に、非同位体標識試薬を同位体標識試薬に置き換えることによって、本明細書の以下のスキーム及び／または実施例に開示されたものと類似の手順に従うことによって調製することができる。
【０１６１】
トラスツズマブ−ＭＣＣ−ＤＭ１及び選択的Ｂｃｌ−２阻害剤は、ヒトを含む哺乳動物の過剰増殖性疾患の治療的処置（予防処置を含む）のための治療上の組み合わせに使用するための標準薬務に従って調製されることができる。本発明は、１つ以上の薬学的に許容される担体、滑沢剤、希釈剤または賦形剤を伴う、トラスツズマブ−ＭＣＣ−ＤＭ１を含む、医薬組成物を提供する。
【０１６２】
適切な担体、希釈剤及び賦形剤は当業者に周知であり、炭水化物、ワックス、水溶性及び／または膨潤性ポリマー、親水性または疎水性材料、ゼラチン、油、溶媒、水等の材料を含む。使用される特定の担体、希釈剤、または賦形剤は、本発明の化合物が適用される手段及び目的に依存する。溶媒は、一般的に哺乳動物に投与するために、安全（ＧＲＡＳ）であると当業者によって認識される溶媒に基づいて選択される。一般に、安全な溶媒は、水及び水に可溶性または混和性である他の非毒性溶媒等の非毒性水性溶媒である。好適な水性溶媒は、水、エタノール、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール（例えばＰＥＧ４００、ＰＥＧ３００）など、及びこれらの混合物を含む。製剤はまた、薬物（すなわち本発明の化合物またはその薬学的組成物）の的確な提示を提供するか、または医薬品（すなわち医薬）の製造を補助するために、１つ以上の緩衝剤、安定化剤、界面活性剤、湿潤剤、潤滑剤、乳化剤、懸濁化剤、防腐剤、抗酸化剤、不透明化剤、流動促進剤、加工助剤、着色剤、甘味剤、芳香剤、香味剤、及び他の既知の添加剤を含んでもよい。
【０１６３】
製剤は、従来の溶解及び混合手順を使用して調製されてもよい。例えば、バルク薬物物質（すなわち、本発明の化合物または化合物の安定化形態（例えば、シクロデキストリン誘導体または他の周知の錯化剤との複合体）は、上述の１つ以上の賦形剤の存在下で、適当な溶媒に溶解させる。本発明の化合物は、典型的には、容易に制御可能な薬物用量を提供し、所定のレジメンで患者コンプライアンスを可能にするように薬学的剤形に製剤化される。
【０１６４】
適用のための薬学的組成物（または製剤）は、薬物を投与するために使用される方法に応じて多様な方法で包装されてもよい。一般的に分配用物品は、その中に薬学的製剤を適切な形態で配置した容器を含む。好適な容器は、当業者に周知であり、ボトル（プラスチック及びガラス）、小袋、アンプル、プラスチックバッグ、金属シリンダー等の材料が挙げられる。容器はまた、パッケージの内容物への不用意なアクセスを防止するための不正開封防止アセンブリを含んでもよい。それに加えて、容器は、容器の内容物を説明するラベルをその上に配置している。ラベルはまた、適切な注意書きを含んでいてもよい。
【０１６５】
本発明の化合物の医薬製剤は、凍結乾燥製剤、粉砕粉末または水溶液の形態で、薬学的に許容される希釈剤、担体、賦形剤または安定剤を伴う、種々の投与経路及び種類のために調製され得る（Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ（１９９５）１８ｔｈ  ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌ．Ｃｏ．、Ｅａｓｔｏｎ、ＰＡ）。製剤は、周囲温度で、適切なｐＨで、及び所望の度合いの純度で、生理学的に許容される担体、すなわち、用いられる用量及び濃度においてレシピエントに対して非毒性である担体と混合することによって行われてもよい。製剤のｐＨは、具体的な用途及び化合物の濃度に主に依存するが、約３〜約８の範囲であってもよい。
【０１６６】
医薬製剤は、好ましくは滅菌である。特に、ｉｎ  ｖｉｖｏ投与用に使用される製剤は、滅菌性でなければならない。そのような滅菌は、滅菌濾過膜を通す濾過によって容易に達成される。
【０１６７】
医薬製剤は、通常、固体組成物、凍結乾燥製剤として、または水溶液として保管され得る。
【０１６８】
本発明の医薬製剤は、十分な医学的実用性に合わせた様式で、すなわち、量、濃度、スケジュール、コース、溶媒、及び投与経路で製剤化され、処方され、投与される。この文脈における考慮の要因には、治療されている特定の障害、治療されている特定の哺乳動物、個々の患者の臨床的病態、障害の原因、薬剤の送達部位、投与方法、投与のスケジュール管理、及び医療従事者に既知の他の要因が含まれる。投与される化合物の治療的有効量は、このような考慮によって管理され、凝固因子介在性障害を予防、改善、または治療するために必要な最小の量である。そのような量は好ましくは、宿主に対して毒性である、または宿主を著しくより出血させやすくする量以下である。
【０１６９】
許容される希釈剤、担体、賦形剤、及び安定剤は、用いられる用量及び濃度でレシピエントに対して非毒性であり、緩衝液、例えばリン酸塩、クエン酸塩、及び他の有機酸等；アスコルビン酸及びメチオニンを含む抗酸化剤；防腐剤（例えば塩化オクタデシルジメチルベンジルアンモニウム；塩化ヘキサメトニウム；塩化ベンザルコニウム、塩化ベンゼトニウム；フェノール、ブチル、もしくはベンジルアルコール；アルキルパラベン、例えばメチルもしくはプロピルパラベン等；カテコール；レゾルシノール；シクロヘキサノール；３−ペンタノール；及びｍ−クレゾール）；低分子量（約１０残基未満）ポリペプチド；タンパク質、例えば血清アルブミン、ゼラチン、もしくは免疫グロブリン等；親水性ポリマー、例えばポリビニルピロリドン等；アミノ酸、例えばグリシン、グルタミン、アスパラギン、ヒスチジン、アルギニン、もしくはリジン等；グルコース、マンノース、もしくはデキストリンを含む単糖類、二糖類、及び他の炭水化物；キレート剤、例えばＥＤＴＡ等；糖類、例えばスクロース、マンニトール、トレハロース、もしくはソルビトール等；塩形成対イオン、例えばナトリウム等；金属錯体（例えば、Ｚｎ−タンパク質複合体）；及び／または非イオン性界面活性剤（例えばＴｗｅｅｎ８０を含むＴＷＥＥＮ(商標)、ＰＬＵＲＯＮＩＣＳ(商標)、またはＰＥＧ４００を含むポリエチレングリコール（ＰＥＧ））を含む。医薬活性成分はまた、例えば、コアセルベーション技法によって、または界面重合によって調製されたマイクロカプセル、例えば、それぞれ、ヒドロキシメチルセルロースまたはゼラチンマイクロカプセル及びポリ−（メチルメタシレート）マイクロカプセル内に、コロイド薬物送達系（例えば、リポソーム、アルブミンマイクロスフェア、マイクロ乳濁液、ナノ粒子、及び名のカプセル）中、またはマクロ乳濁液中に取り込まれ得る。かかる技術は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ  １８ｔｈ  ｅｄｉｔｉｏｎ，（１９９５）Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌ．Ｃｏ．，Ｅａｓｔｏｎ，ＰＡに開示されている。
【０１７０】
医薬製剤は、本明細書に詳述の投与経路に適したものを含む。本製剤は、好都合にも単位剤形で提供することができ、薬学の分野において周知である任意の方法によって調製することができる。技術及び製剤は一般的に、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ１８ｔｈ−Ｅｄ．（１９９５）Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏ．，Ｅａｓｔｏｎ，ＰＡ．中に見いだされる。当該方法は、活性成分を、１つ以上の補助成分を構成する担体と会合させるステップを含む。一般に、製剤は、活性成分を液体担体または微粉化固体担体またはその両方と均一かつ密接に会合させ、次いで、必要に応じて、産物を成形することによって調製される。
【０１７１】
一般的な提案として、投与されるトラスツズマブ−ＭＣＣ−ＤＭ１の投与量当たりの最初の薬学的有効量は、１日当たり患者の体重の約０．０１〜１００ｍｇ／ｋｇ、すなわち約０．１〜２０ｍｇ／ｋｇの範囲で、使用される化合物の通常の最初の範囲は０．３〜１５ｍｇ／ｋｇ／日である。
【０１７２】
好ましい実施形態において、トラスツズマブ−ＭＣＣ−ＤＭ１は、バイアル当たり１００ｍｇまたはバイアル当たり１６０ｍｇを含有する単回投与用バイアルの凍結乾燥した粉末として製剤化されて、静脈内注入として３．６ｍｇ／ｋｇの用量で３週毎に投与される。
【０１７３】
抗Ｂｃｌ−２活性剤だけの医薬組成物（例えばＢｅｌ−２阻害剤）は、例えば低分子化合物（例えばＡＢＴ−７３７、ＡＢＴ−１９９またはＡＢＴ−２６３）においてその薬学的特性に依存し、一製剤は例えば以下のとおりであり得る。
ａ）錠剤（湿式造粒法）：
2018521064.tif 000005
製造手順：
１．成分１、２、３及び４を混合して、精製水と顆粒化する。
２．粒子を５０℃にて乾燥する。
３．粒子を好適な製粉装置に通す。
４．成分５を加えて、３分間混合し、好適なプレスで押圧する。
ｂ）カプセル剤：
2018521064.tif 000006
製造手順：
１．成分１、２及び３を好適なミキサーで３０分間混合する。
２．成分４及び５を加えて、３分間混合する。
３．好適なカプセル内に充填する。
【０１７４】
活性成分はまた、例えば、コアセルベーション技法によって、または界面重合によって調製されたマイクロカプセル、例えば、それぞれ、ヒドロキシメチルセルロースまたはゼラチンマイクロカプセル及びポリ−（メチルメタシレート）マイクロカプセル内に、コロイド薬物送達系（例えば、リポソーム、アルブミンマイクロスフェア、マイクロ乳濁液、ナノ粒子、及びナノカプセル）中、またはマクロ乳濁液中に取り込まれ得る。かかる技術は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ  １６ｔｈ  ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｏｓｏｌ，Ａ．Ｅｄ．（１９８０）に開示されている。
【０１７５】
徐放性調製物が調製されてもよい。徐放性調製物の好適な例には、抗体を含有する固体疎水性ポリマーの半透性マトリックスが含まれ、これらのマトリックスは、成形物品、例えば、フィルム、またはマイクロカプセルの形態である。徐放性マトリックスの例としては、ポリエステル、ヒドロゲル（例えば、ポリ（２−ヒドロキシエチル−メタクリレート）またはポリ（ビニルアルコール））、ポリラクチド（米国特許第３，７７３，９１９号）、Ｌ−グルタミン酸とガンマ−エチル−Ｌ−グルタメートとのコポリマー、非分解性エチレン酢酸ビニル、例えばＬＵＰＲＯＮ  ＤＥＰＯＴ（商標）（乳酸−グリコール酸コポリマー及び酢酸ロイプロリドから構成される注射可能なマイクロスフェア）等の分解性乳酸−グリコール酸コポリマー、及びポリ−Ｄ−（−）−３−ヒドロキシ酪酸が挙げられる。
【０１７６】
ｉｎ  ｖｉｖｏ投与に使用される製剤は、滅菌されてなければならない。これは、滅菌濾過膜を通す濾過によって容易に達成される。
【０１７７】
以下の実施例、配列表及び図は、本発明の理解を助けるために提供されており、その真の範囲は添付の特許請求の範囲に記載されている。本発明の趣旨から逸脱することなく、様々な変更が行われてもよいと理解される。
【実施例】
【０１７８】
実施例１
Ｔ−ＤＭ１耐性乳癌細胞のＢｃｌ−２ファミリー生存促進性分子の発現
Ｔ−ＤＭ１耐性細胞株の作成
最初に、ＫＰＬ−４及びＢＴ−４７４Ｍ１細胞は、１０ｎｇ／ｍＬの非常に低濃度で開始して、Ｔ−ＤＭ１の存在下で連続培養によってＴ−ＤＭ１に耐性であるように作成されて、２μｇ／ｍＬまで徐々に増やされた。得られた細胞は「耐性プール」であり、２μｇ／ｍＬのＴ−ＤＭ１の培養中に維持された。耐性クローンを安定して得るために、各プール（ＫＰＬ−４及びＢＴ−４７４Ｍ１）は、単細胞ソーティング及びクローニングに供した。Ｔ−ＤＭ１の非存在下で安定的な耐性を有するクローンが同定され得るように、クローンはＴ−ＤＭ１なしで維持された。
【０１７９】
ＴａｑＭａｎ解析
総ＲＮＡは、Ｑｉａｇｅｎ  ＲＮｅａｓｙミニキットを使用して作成された。ゲノムＤＮＡは、ＤＮａｓｅにより除去した。Ｉ．遺伝子発現は、リアルタイム定量的ＰＣＲ（ｑＰＣＲまたはＴａｑＭａｎ）を使用して定量化した。ＴａｑＭａｎ  Ｏｎｅ−Ｓｔｅｐ  Ｕｎｉｖｅｒｓａｌ  Ｍａｓｔｅｒ  Ｍｉｘ（Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）をすべての反応で使用した。反応は、ＡＢＩ７５００リアルタイムｑＰＣＲシステムによる標準９６ウェルプレートフォーマットで実施した。１００ｎｇのトータルＲＮＡを、各反応のテンプレートとして使用した。データ分析のために、未処置Ｃｔは、ハウスキーピング遺伝子ＨＰ１ＢＰ３に標準化した。
【０１８０】
ＴａｑＭａｎ解析の結果を、図１Ａに示す。Ｂｃｌ−２  ｍＲＮＡ発現が、親、非耐性ＫＰＬ−４及びＢＴ−４７４Ｍ１細胞と比較して、Ｔ−ＤＭ１耐性ＫＰＬ−４及びＴ−ＤＭ１耐性ＢＴ−４７４Ｍ１細胞株（ハウスキーピング遺伝子ＨＰ１ＢＰ３に標準化した）で増加したことを図は示す。
【０１８１】
ウエスタンブロット解析を、以下のとおり実施した。細胞は、プロテアーゼ及びホスファターゼ阻害剤（Ｒｏｃｈｅ）を有する補正したＦＬＡＧ溶出緩衝剤（ＣＦＥＢ）（１９．１７ｍＭのトリス（ｐＨ７．５）、９１６．７μＭのＭｇＣｌ２、９２．５ｍＭのＮａＣｌ及び０．１％のトリトンＸ−１００）に溶解させ、場合によっては６Ｍの尿素を加えた。透明溶解物を定量して、等量のタンパク質は減少させ、アルキル化されて、ＳＤＳ−ＰＡＧＥにより分離されて、標準的手順の後、ＰＶＤＦ膜（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）に移した。それぞれの抗体製造業者に推奨されるように、ウエスタンブロット法を実施した。Ｂｃｌ−２がＴ−ＤＭ１耐性ＫＰＬ−４及びＢＴ−４７４細胞株で過剰発現することを、図１Ｂに示されるウエスタンブロット解析は確認する。
【０１８２】
実施例２
細胞増殖アッセイ−母及びＴ−ＤＭ１耐性ＫＰＬ−４乳癌細胞株
細胞増殖アッセイは、Ｃｅｌｌ−Ｔｉｔｅｒ  Ｇｌｏ試薬を使用して３日実施された。実施例１に記載されているように作成されたＫＰＬ−４親乳癌細胞及びＫＰＬ−４  Ｔ−ＤＭ１耐性乳癌細胞は、固定比率でＴ−ＤＭ１、ＧＤＣ−０１９９またはＴ−ＤＭ１とＧＤＣ−０１９９の組み合わせで処理した。相乗作用は、組み合わせ指数「ＣＩ」を得るために、ＣａｌｃｕＳｙｎソフトウェアによるＣｈｏｕ  ａｎｄ  Ｔａｌａｌｙ  Ｄｒｕｇ  Ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ  Ｄｏｓｅ−Ｅｆｆｅｃｔ解析を使用した（Ｃｈｏｕ  ａｎｄ  Ｔａｌａｌａｙ（１９８４）Ａｄｖ．ｎｚｙｍｅ  Ｒｅｇｕｌ．２２：２７−５５）。１未満のＣＩ値は相乗効果を示し、ＣＩ＝１は相加性を示した。
【０１８３】
アッセイ条件：細胞は、１０％胎児ウシ血清（ＦＢＳ）及び２ｍｍのＬ−グルタミンを補充した、ハムＦ−１２：高グルコースＤＭＥＭ（１：１）中に維持した。細胞を９６ウェルプレートに蒔き（ＫＰＬ−４親細胞は１ウェル当たり４０００細胞、ＫＰＬ−４  Ｔ−ＤＭ１耐性細胞は１ウェル当たり８０００細胞）、５％ＣＯ２の加湿雰囲気下で３７℃にて一晩付着させた。それから培地を除去し、Ｔ−ＤＭ１、ＧＤＣ−０１９９、両方の組み合わせのいずれかを含有する新しい培養基で置き換えた。Ｃｅｌｌ  Ｔｉｔｅｒ−Ｇｌｏ（Ｐｒｏｍｅｇａ  Ｃｏｒｐ．）を薬剤投与した３日後にウェルに加えて、発光シグナルはＥｎＶｉｓｉｏｎ  Ｍｕｌｔｉｌａｂｅｌ  Ｐｌａｔｅ  Ｒｅａｄｅｒ（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ）を使用して測定された。組み合わせ指数（Ｃ．Ｉ．）はＣａｌｃｕＳｙｎソフトウェア（Ｂｉｏｓｏｆｔ，Ｉｎｃ）を使用して作成した。
【０１８４】
図２に示すように、Ｔ−ＤＭ１とＧＤＣ−０１９９の組み合わせは、ＫＰＬ−４  Ｔ−ＤＭ１耐性乳癌細胞の相乗的な抗増殖効果を有する。
【０１８５】
実施例３
カスパーゼ３／７活性化発光アッセイ−母及びＴ−ＤＭ１耐性ＫＰＬ−４乳癌細胞株
前述のように、タンパク質のＢｃｌ−２ファミリーは、発生の合図によって及び複数のストレス信号に反応して誘発されるプログラムされた細胞死を調節する。活性化したとき、それらはミトコンドリアの外膜を透過性にすることができ、細胞を分解するカスパーゼを活性化するのに必要なアポトーシス促進性因子（例えばシトクロムＣ）を放出できる（Ｗａｎｇ，Ｋ．，Ｇｅｎｅｓ  ａｎｄ  Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ１５（２００１）２９２２−２９３３、（Ａｄａｍｓ，２００３ｓｕｐｒａ）、Ｇｒｅｅｎ，Ｄ．Ｒ．，ａｎｄ  Ｋｒｏｅｍｅｒ，Ｇ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ３０５（２００４）６２６−６２９）。したがってカスパーゼ（例えばカスパーゼ３及び７）の活性化は、アポトーシス誘導を示す。
【０１８６】
本実験において、基本的に製造業者の指示に従ってＣａｓｐａｓｅ−Ｇｌｏ（登録商標）試薬（Ｐｒｏｍｅｇａ）を使用して、カスパーゼ３／７活性化発光アッセイを実施した。アッセイは、薬物インキュベーション時間が２４時間だった、及びＣａｓｐａｓｅ−Ｇｌｏ３／７（Ｐｒｏｍｅｇａ）をアポトーシスを測定するために使用したことを除いては、生存率アッセイと同様に実施した。
【０１８７】
図３の右パネルに示すように、Ｔ−ＤＭ１＋ＧＤＣ−０１９９の組み合わせで２４時間処理するとき、Ｔ−ＤＭ１耐性ＫＰＬ−４（ＨＥＲ２＋）乳癌細胞は、増加したアポトーシス（増加したカスパーゼ３／７活性化）で示すようにＴ−ＤＭ１に再感作した。同じ組み合わせは、親細胞で効果を示さなかった。その結果が処理の２４時間後に評価されたことに注意する必要があり、親細胞株（左パネル）で、Ｔ−ＤＭ１だけで誘発されるアポトーシスよりそれはあまりに早い。
【０１８８】
図４Ａ及び図４Ｂは、Ｔ−ＤＭ１とＧＤＣ−０１９９それぞれの異なる濃度を使用した、親細胞と比較してＫＰＬ−４  Ｔ−ＤＭ１耐性ヒト乳癌細胞のカスパーゼ３及び７の活性化を測定する、カスパーゼ３／７活性化発光ｉｎ  ｖｉｔｒｏアポトーシスアッセイの結果を示す。増加したアポトーシスは、増加した濃度のＧＤＣ−０１９９（１、２．５または５μＭ）を０．１または１μｇ／ｍＬのＴ−ＤＭ１に添加すると、ＫＰＬ−４  Ｔ−ＤＭ１耐性細胞で観察される。それに対し、Ｔ−ＤＭ１は、ＧＤＣ−０１９９の添加によって更には強化されない、ＫＰＬ−４親細胞の強力なアポトーシスを誘発する。
【０１８９】
図５Ａは、Ｔ−ＤＭ１、ＧＤＣ−０１９９またはＴ−ＤＭ１＋ＧＤＣ−０１９９で処理した、クローン＃１７Ｔ−ＤＭ１耐性ＫＰＬ−４ヒト乳癌細胞のカスパーゼ３及び７の活性化を測定する、カスパーゼ３／７活性化発光ｉｎ  ｖｉｔｒｏアポトーシスアッセイの結果を示す。細胞のＫＰＬ−４  Ｔ−ＤＭ１耐性プールでの観察と同様に、クローン＃１７のアポトーシスの誘発は、増加した濃度のＧＤＣ−０１９９を添加することで増加した。
【０１９０】
図６Ａ及び図６Ｂは、０．１μｇ／ｍＬ及び１μｇ／ｍＬのＴ−ＤＭ１濃度で、それぞれ単独で、またはＧＤＣ−０１９９の所定の濃度と組み合わせて処理したクローン＃８Ｔ−ＤＭ１耐性ＫＰＬ−４ヒト乳癌細胞株における、カスパーゼ３及び７の活性化を測定する、カスパーゼ３／７活性化発光ｉｎ  ｖｉｔｒｏアポトーシスアッセイの結果を示す。
【０１９１】
図４Ａ、図４Ｂ、図５Ａ、図６Ａ及び図６Ｂに示すように、Ｔ−ＤＭ１耐性ＫＰＬ−４乳癌細胞株の異なるクローンで得られた結果は、種々の濃度でＴ−ＤＭ−１＋ＧＤＣ−０１９９の組み合わせの強化されたアポトーシス促進性活性化を確認する。
【０１９２】
実施例４
異種移植試験−ＫＰＬ−４  Ｔ−ＤＭ１耐性乳癌細胞株
すべての異種移植試験において、３，０００，０００のＴ−ＤＭ１耐性ＫＰＬ−４乳癌細胞を、雌ＳＣＩＤベージュマウスの＃２／３乳房脂肪体に注入した。腫瘍が約２００ｍｍ３の体積に達するとき、マウスは処理群（群当たりのマウスｎ＝１０）：５ｍｇ／ｋｇのＴ−ＤＭ１を３週に１回、１００ｍｇ／ｋｇのＧＤＣ−０１９９を１日１回、２つの組み合わせまたは溶媒にランダム化した。Ｔ−ＤＭ１耐性ＫＰＬ−４乳癌細胞の種々のクローンの異種移植について、この異種移植試験の結果を図５Ｂ及び図６Ｃに示す。Ｔ−ＤＭ１及びＧＤＣ−０１９９を組み合わせて使用するとき、結果は、単剤活性と比較して、強化された抗癌効果を示す。
【０１９３】
実施例５
ＩＨＣ試験−Ｔ−ＤＭ１耐性ＫＰＬ−４異種移植腫瘍
ＦＦＰＥ（ホルマリン固定パラフィン包埋）異種移植腫瘍は、ＤＡＢ検出法を使用した免疫組織化学（ＩＨＣ）によって、Ｂｅｌ−２及びＨＥＲ２（ＥｒｂＢ２）発現の分析のために切断された。Ｂｃｌ−２抗体ＳＰ６６をＶｅｎｔａｎａから入手した。ヒト扁桃腺切片は、Ｂｃｌ−２陽性対照として使用した。抗ＨＥＲ２抗体４Ｄ５をＶｅｎｔａｎａから入手した。ヒト乳癌細胞株は陽性対照として使用した（３＋としてＳＫ−ＢＲ−３、２＋としてＭＤＡ−ＭＢ−３６１、陰性としてＭＢＡ−ＭＢ−２３１）。
【０１９４】
図７Ａは、上述のように、ＤＡＢ検出法を使用した免疫組織化学（ＩＨＣ）で測定されるホルマリン固定パラフィン包埋Ｔ−ＤＭ１耐性ＫＰＬ−４異種移植腫瘍試料（クローン＃８及び＃１７）のＢｃｌ−２の発現を示す。
【０１９５】
図７Ｂは、上述のように、ＤＡＢ検出法を使用した免疫組織化学（ＩＨＣ）で測定されるホルマリン固定パラフィン包埋Ｔ−ＤＭ１耐性ＫＰＬ−４異種移植腫瘍試料（クローン＃８及び＃１７）のＨＥＲ２（ＥｒｂＢ２）の発現を示す。
【０１９６】
抗Ｂｃｌ−２抗体結果：各クローンの溶媒群は、ほとんどの場合腫瘍小葉（図示せず）の周辺部に位置する、Ｂｃｌ−２反応性細胞の類似の低周波を示した。Ｔ−ＤＭ１処理群の腫瘍小葉の周辺部のＢｃｌ−２シグナルの頻度及び強度は、増加したまたは変化しなかった。
【０１９７】
抗ＨＥＲ２抗体結果：すべてのクローンの溶媒及びＴ−ＤＭ１処理済み腫瘍は、ＨＥＲ２  ３＋ＩＨＣの超短波を示した。いくつかのＴ−ＤＭ１処理済み腫瘍において、ほとんどの場合腫瘍小葉（図示せず）を囲む間質帯に隣接した、弱いＨＥＲ２染色（クローン＃１７）の領域があった。
【０１９８】
Ｂｃｌ−２のＩＨＣ結果は、異種移植腫瘍として増殖するとき、Ｂｃｌ−２発現がＴ−ＤＭ１耐性クローン＃８及び＃１７中に維持されることを実証する（図７Ａ、ウエスタンブロットによる、ＫＰＬ−４親細胞のごくわずかなＢｃｌ−２発現を示す実施例６を参照）。Ｔ−ＤＭ１処理済みクローン＃１７のＢｃｌ−２発現は、対応する溶媒対照より高い。図７Ｂは、ＩＨＣによって評価されるＨＥＲ２発現を示す。ｉｎ  ｖｉｔｒｏ増殖する細胞で観察される比較的少ないＨＥＲ２発現とは対照的に、溶媒及びＴ−ＤＭ１処理済み腫瘍の両方のクローン＃８及び＃１７は、２＋及び３＋レベルの高ＨＥＲ２発現を示す。２＋または１＋腫瘍細胞の超長波で、すべてのクローン＃８腫瘍は、８５〜９５％のＨＥＲ２＋または３＋であると測定された。溶媒群の３５〜７５％のＨＥＲ２  ３＋細胞及び２０〜６５％のＨＥＲ２  ２＋細胞において、クローン＃１７腫瘍はよりばらつきが大きかった。
【０１９９】
実施例６
異種移植試験−ＫＰＬ−４  Ｔ−ＤＭ１耐性乳房腫瘍
図８は、ＧＤＣ−０１９９、Ｔ−ＤＭ１またはＴ−ＤＭ−１＋ＧＤＣ−０１９９で処理した、ＫＰＬ−４  Ｔ−ＤＭ１耐性クローン＃１７異種移植腫瘍のＢｃｌ−２、ＨＥＲ２、Ｂｃｌ−ｘＬ及びＰｇｐのウエスタンブロット発現データを示す（レーン４〜１９より上の３桁の数字は個々の異種移植腫瘍を示した）。細胞培養でｉｎ  ｖｉｔｒｏ増殖する対応する細胞と比較すると、ＨＥＲ２及びＢｃｌ−２発現がすべての群に維持されることを、発現データは示す。
【０２００】
実施例７
カスパーゼ３／７発光及び蛍光活性化アッセイ−Ｔ−ＤＭ１感受性乳癌細胞株
カスパーゼ３／７活性化発光アッセイは、実施例３に記載のとおり実施した。
【０２０１】
カスパーゼ３活性化蛍光ｉｎ  ｖｉｔｒｏアポトーシスアッセイは、ＩｎｃｕＣｙｔｅ（商標）試薬及び器材を使用して、基本的に製造者の指示に従い、長期にわたってカスパーゼ活性化を測定して（動態解析）、実施した。
【０２０２】
図９Ａは、Ｔ−ＤＭ１に感受性である（未感作）ＨＥＲ２＋ＭＤＡ−ＭＢ−３６１乳癌細胞のカスパーゼ活性の、９つの異なる濃度のＴ−ＤＭ１と組み合わせた５つの異なる濃度のＧＤＣ−０１９９（μＭ）の効果を試験する、カスパーゼ３／７発光ｉｎ  ｖｉｔｒｏアポトーシスアッセイの結果を示す。結果は、ＧＤＣ−０１９９濃度の増加と共に用量依存的な方法で強化される、Ｔ−ＤＭ１によるカスパーゼ３及び７活性化を実証する。
【０２０３】
図９Ｂは、ＨＥＲ２＋Ｔ−ＤＭ１感受性（未感作）ＭＤＡ−ＭＢ−３６１乳癌細胞のカスパーゼ活性の、３つの異なる濃度のＧＤＣ−０１９９（０．６３μＭ、１．２５μＭ、２．５μＭ）単独で及びＴ−ＤＭ１（０．１μＭ）と組み合わせた効果を試験する、カスパーゼ３蛍光ｉｎ  ｖｉｔｒｏアポトーシスアッセイの結果を示す。ＧＤＣ−０１９９が、用量依存的及び時間依存的な方法でＴ−ＤＭ１のみにより誘発される上述のカスパーゼ活性化を強化し、したがってすべての組み合わせによって強化されたアポトーシスをもたらすことを、結果は実証する。
【０２０４】
図１０Ａは、Ｔ−ＤＭ１未感作ＨＥＲ２＋ＨＣＣ１５６９乳癌細胞のカスパーゼ活性の、９つの異なる濃度のＴ−ＤＭ１と組み合わせた５つの異なる濃度のＧＤＣ−０１９９（μＭ）の効果を試験する、カスパーゼ３／７発光ｉｎ  ｖｉｔｒｏアポトーシスアッセイの結果を示す。Ｔ−ＤＭ１単独ではアポトーシスを誘発しないが、ＧＤＣ−０１９９の添加は強化されたカスパーゼ活性をもたらし、したがってすべての組み合わせでアポトーシスを強化したことを、結果は実証する。
【０２０５】
図１０Ｂは、ＨＥＲ２＋ＨＣＣ１５６９乳癌細胞のカスパーゼ活性の、３つの異なる濃度のＧＤＣ−０１９９（０．６３μＭ、１．２５μＭ、２．５μＭ）単独で及びＴ−ＤＭ１（０．１μＭ）と組み合わせた効果を試験する、カスパーゼ３蛍光ｉｎ  ｖｉｔｒｏアポトーシスアッセイの結果を示す。ＧＤＣ−０１９９が、用量依存的及び時間依存的な方法でＴ−ＤＭ１のみにより誘発される上述のカスパーゼ活性化を強化し、したがってすべての組み合わせによって強化されたアポトーシスをもたらすことを、結果は実証する。
【０２０６】
Ｔ−ＤＭ１／ＧＤＣ−０１９９の組み合わせがＴ−ＤＭ１未感作（すなわちＴ−ＤＭ１耐性ではない）細胞株にも効果的であることを、これらの結果は示す。
【０２０７】
実施例８
異種移植試験−Ｔ−ＤＭ１感受性（未感作）ＭＤＡ−ＭＢ−３６１乳房腫瘍
１０，０００，０００のＭＤＡ−ＭＢ−３６１乳癌細胞は、６０日放出１７β−エストラジオールペレットの移植１日後に、雌ＮＯＤ／ＳＣＩＤマウスの右乳房脂肪体に注入した。図１１に示すように、腫瘍が約２００〜３００ｍｍ３の体積に達したとき、マウスは処理群（群当たりのマウスｎ＝１０）、Ｔ−ＤＭ１（１、３または７ｍｇ／ｋｇ、静脈内、１回）、ＧＤＣ−０１９９（１００ｍｇ／ｋｇ、１日１回×２１）、またはＴ−ＤＭ１とＧＤＣ−０１９９の組み合わせにランダム化した。単剤活性と比較して、７ｍｇ／ｋｇのＴ−ＤＭ１によりＧＤＣ−０１９９の強化された抗癌効果を示す。
【０２０８】
実施例９
ウエスタン解析：ＨＥＲ２＋乳癌細胞株のＢｃｌ−２ファミリーに属するタンパク質のＴ−ＤＭ１＋／−ＧＤＣ−０１９９の効果
Ｔ−ＤＭ１（１．２５μｇ／ｍＬ）単独またはＧＤＣ−０１９９（１．２５μＭ）と組み合わせた処理の効果は、種々のＴ−ＤＭ１未感作ＨＥＲ２＋乳癌細胞株で試験された。結果を図１２に示す。試験した８つのＨＥＲ２＋乳癌細胞株のうちの４つ（ＢＴ−４７４、ＨＣＣ１５６９、ＭＤＡ−３６１及びＺＲ−７５−３０）は、Ｂｃｌ−２を発現し、全８つの乳癌細胞株は、他のＢｃｌ−２ファミリーに属すると判定されたＢＣＬ−ｘＬ及びＭｃｌ−１を発現した。細胞株のうちの３つ（ＢＴ−４７４、ＭＤＡ＿３６１及びＺＲ−７５−３０）は、Ｔ−ＤＭ１処理後のＢｅｌ−２のリン酸化、抗細胞分裂阻害剤（例えばＴ−ＤＭ１）への曝露の周知の効果を示した。図９Ａ、図９Ｂ、図１０Ａ及び図１０Ｂに示すように、ＭＤＡ−ＭＢ−３６１及びＨＣＣ１５６９は、Ｔ−ＤＭ１とＧＤＣ−０１９９の組み合わせで処理されるとき、強化されたアポトーシスを示した。
【０２０９】
Ｔ−ＤＭ１（ＫＡＤＣＹＬＡ（登録商標））は、従来のＨＥＲ２標的治療（例えばトラスツズマブ（ＨＥＲＣＥＰＴＩＮ（登録商標））による治療）を受けている乳癌患者などの患者のための癌治療で重要な臨床的利益を示す。米国食品医薬品局は、トラスツズマブ及びタキサンによる治療を以前に受けたＨＥＲ２陽性転移性乳癌を有する患者の治療のために、ＫＡＤＣＹＬＡ（登録商標）（アドトラスツズマブエムタンシン）を承認した。ここで提示されるデータは、Ｂｃｌ（例えばＢｃｌ−２）阻害剤とＴ−ＤＭ１による併用療法が、単剤として投与されるＴ−ＤＭ１の有効性を著しく改善することを実証する。Ｔ−ＤＭ１とＢｃｌ−２阻害剤によるこのような併用療法が、Ｔ−ＤＭ１感受性（未感作）ＨＥＲ２陽性癌（例えば乳癌）及びＴ−ＤＭ１による治療に耐性があるＨＥＲ２陽性癌（例えば乳癌）の両方に効果的なことも、結果は実証する。
【０２１０】
本明細書に引用されているすべての刊行物及び特許出願は、個々の刊行物または特許出願が、具体的かつ個別に参照によって組み込まれると示されているかのように、参照によって本明細書に組み込まれる。理解の明瞭化ために図解及び例を用いてある程度詳しく上述の発明を記載したが、添付する請求の範囲の趣旨及び範囲から逸脱することなく、一定の変更及び修正をそれに行うことができることは、本発明の教示を考慮すれば当業者には容易に明らかである。
【図１Ａ】
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【図１Ｂ】
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【図２】
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【図３】
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【図４Ａ】
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【図４Ｂ】
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【図５Ａ】
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【図５Ｂ】
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【図６Ａ】
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【図６Ｂ】
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【図６Ｃ】
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【図７Ａ】
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【図７Ｂ】
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【図８】
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【図９Ａ】
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【図９Ｂ】
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【図１０Ａ】
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【図１０Ｂ】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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