(57)【要約】  本発明は、再生医療の分野、より詳しくは、必要とする対象に投与される生体材料のイン・ビボ生着能の改善に関する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
生体材料のイン・ビボ生着能の増強方法であって、単離された生体材料を少なくとも１種類の５−ヒドロキシトリプタミン１Ｂ受容体（５−ＨＴ１  ＢＲ）刺激剤とイン・ビトロおよび／またはエクス・ビボで接触させる工程を少なくとも含んでなる、方法。
【請求項２】
前記剤が、抗鬱剤および抗片頭痛薬、その薬学的に許容可能な誘導体、類似体、異性体、代謝物、塩、溶媒和物、包接体、多形体および共結晶、ならびにそれらの組合せからなる群から選択される、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記抗鬱剤が、非定型抗鬱剤、好ましくは、ボルチオキセチンなどのビスアリールスルファニルアミン、ならびにチアネプチン、アゴメラチン、ネファゾドン、トラゾドン、ブスピロン、タンドスピロン、およびケタミン；選択的セロトニン再取り込み阻害剤（ＳＳＲＩ）、好ましくは、フルオキセチン、シタロプラム、エスシタロプラム、セルトラリン、ノルセルトラリン、パロキセチン、フルボキサミン、フェモキセチン、インダルピン、アラプロクラート、セリクラミン、イフォキセチン、ジメリジン、ダポキセチン、エトペリドン、ならびにそれらの代謝物デスメチルシタロプラム、ジデスメチルシタロプラムおよびセプロキセチン；セロトニンおよびノルエピネフリン再取り込み阻害剤（ＳＮＲＩ）、好ましくは、デュロキセチン、ベンラファキシン、デスベンラファキシン、ミルナシプラン、レボミルナシプラン、およびシブトラミン；セロトニン−ノルエピネフリン−ドーパミン再取り込み阻害剤（ＳＮＤＲＩ）、好ましくは、ビシファジン、ブラソフェンシン、テソフェンシンおよびノミフェンシン；三環系抗鬱剤（ＴＣＡ）、好ましくは、クロミプラミン、アモキサピン、ノルトリプチリン、マプロチリン、トリミプラミン、イミプラミン、デシプラミンおよびプロトリプチリン；モノアミンオキシダーゼ阻害剤（ＭＡＯ）、好ましくは、イプロニアジド、フェネルジン、トラニルシプロミン、モクロベミド、セレギリンおよびラサギリン；ならびにノルアドレナリン作動性・特異的セロトニン作動性抗鬱剤（ＮａＳＳＡ）、好ましくは、ミルタザピン、ミアンセリン、アプタザピン、エスミルタザピン、セチプチリンおよびＳ３２２１２（Ｎ−［４−メトキシ−３−（４−メチルピペラジン−１−イル）フェニル］−１，２−ジヒドロ−３Ｈ−ベンゾ［ｅ］インドール−３−カルボキサミドとしても知られる）からなる群から選択される、請求項２に記載の方法。
【請求項４】
前記抗片頭痛薬が、エルゴタミンまたはトリプタンであり、前記トリプタンは好ましくはスマトリプタン、リザトリプタン、ゾルミトリプタン、エレトリプタン、アルモトリプタン、フロバトリプタン、ナラトリプタン  アビトリプタンおよびドニトリプタンからなる群から選択される、請求項２に記載の方法。
【請求項５】
前記剤が、少なくとも１つの荷電した、好ましくは正に荷電した、化学部分を含んでなるように修飾される、請求項１〜４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６】
前記正に荷電した化学部分が、第四級アンモニウム基または第三級スルホニウム基である、請求項５に記載の方法。
【請求項７】
前記第四級アンモニウム基は式（Ｉ）
−（ＮＲ１Ｒ２Ｒ３）＋Ｚ−    （Ｉ）
を有し、式中、
Ｚは、有機もしくは無機陰イオンであり；かつ
Ｒ１、Ｒ２およびＲ３は、それぞれ独立にアルキル、アリールおよびシクロアルキルからなる群から選択される；または
前記第三級スルホニウム基は式（ＩＩ）
−（ＳＲ４Ｒ５）＋Ｚ−    （ＩＩ）
を有し、式中、
Ｚは、有機もしくは無機陰イオンであり；かつ
Ｒ４およびＲ５はそれぞれ独立に、アルキル、アリールおよびシクロアルキルからなる群から選択される、
請求項６に記載の方法。
【請求項８】
前記剤が、ボルチオキセチンの塩、ヒスチジン、アルギニンまたはリシンなどの少なくとも１つの正に荷電したアミノ酸と結合したボルチオキセチン、ピロリジニウム−ボルチオキセチン、ピペラジニウム−ボルチオキセチン、ジメチルアンモニウム−ボルチオキセチン、スルホニウム−ボルチオキセチン、Ｎ−オキシド−ボルチオキセチン、スルホキシド−ボルチオキセチン、およびホスホニウム−ボルチオキセチンからなる群から選択される正に荷電したボルチオキセチンである、請求項５〜７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９】
前記生体材料が、細胞、組織、臓器、それらの誘導物、およびそれらの組合せからなる群から選択される、請求項１〜８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０】
請求項１〜９のいずれか一項に定義される方法に従って得ることができる、イン・ビボ生着能が増強された単離された生体材料。
【請求項１１】
少なくとも請求項１０に記載の生体材料と場合により少なくとも１種類の薬学的に許容可能な賦形剤とを含んでなる、医療デバイス。
【請求項１２】
少なくとも１種類の活性剤をさらに含んでなる、請求項１０に記載の生体材料、または請求項１１に記載の医療デバイス。
【請求項１３】
薬剤として使用するための、請求項１０もしくは１２に定義される単離された生体材料、または請求項１１もしくは１２に定義される医療デバイス。
【請求項１４】
細胞、組織または臓器の再生を必要とする対象において使用するための、請求項１０もしくは１２に定義される単離された生体材料、または請求項１１もしくは１２に定義される医療デバイス。
【請求項１５】
細胞、組織または臓器の再生を必要とする対象における治療前使用のための、請求項１〜８のいずれか一項に定義される５−ヒドロキシトリプタミン１Ｂ受容体（５−ＨＴ１  ＢＲ）刺激剤。
【請求項１６】
細胞、組織または臓器の再生を目的とする処置を必要とする対象における治療前使用、ならびに前記処置を受けている前記対象における治療時および／または治療後使用のための、請求項１〜８のいずれか一項に定義される５−ヒドロキシトリプタミン１Ｂ受容体（５−ＨＴ１  ＢＲ）刺激剤。
【請求項１７】
細胞、組織または臓器の再生を受けている対象における治療時および／または治療後使用のための、請求項１〜８のいずれか一項に定義される５−ヒドロキシトリプタミン１Ｂ受容体（５−ＨＴ１  ＢＲ）刺激剤。
【請求項１８】
細胞、組織または臓器の再生を目的とする処置を必要とする対象の細胞、組織または臓器を再生することを目的とする処置における同時、個別または逐次投与のための組合せ製剤としての、単離された生体材料および請求項１〜８のいずれか一項に定義される５−ヒドロキシトリプタミン１Ｂ受容体（５−ＨＴ１  ＢＲ）刺激剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、再生医療の分野、より詳しくは、必要とする対象に投与される生体材料のイン・ビボ（ｉｎ  ｖｉｖｏ）生着能の改善に関する。
【背景技術】
【０００２】
多臓器不全の予防および治療のための細胞に基づく療法は、広範な病理学的障害の処置および治癒における患者の機能および転帰を大幅に調節できる可能性をもたらす。現在までに、数件の臨床試験によって、種々の細胞種、特に幹細胞の潜在的有効性が示唆されている(Rennert et al.， 2012; Perin et al.， 2013; Meng et al.， 2015; Liu et al.， 2015)。しかしながら、臨床試験においてこれまでに認められた利益は、一貫しておらず、わずかな程度である。
【０００３】
同時に、前臨床試験では、修復および機能を最大限にするために最適化されることが必要な幹細胞のホーミング、生着、生存、パラクリン因子放出および分化を含む細胞に基づく修復過程における重要な事象が同定されている(Rennert et al.， 2012)。
【０００４】
これらの観察所見は、患者にとっての臨床的利益を最大限にすることを期待してこれらの重要な事象を最適化するために、（細胞、組織および／または臓器のいずれかの形態で）投与される生体材料を調製できる、および／または前記生体材料を受容できるように対象を予備刺激できる新薬を開発することの当技術分野での必要性を強調するものである。
【０００５】
本発明は、上記で考察した当技術分野における必要性に取り組んでいる。
【０００６】
特に、本発明者らは、驚くことに、予期せずに、フルオキセチンおよびボルチオキセチンが生着促進能を示すことを発見した。実際に、細胞移植前およびその後も継続したマウスへのそれらのイン・ビボ投与により、移植後に、骨格筋および骨髄それぞれにおける移植された筋原幹細胞および造血幹細胞の数が増加した。マウスに細胞移植後にのみ前記薬剤を投与した場合も、移植された細胞の数の増加はわずかに低かったものの、同様の観察所見が認められた。よって、本結果は、これらの抗鬱剤は様々な種類の生体材料の生着能を増強でき、そのため、細胞療法、組織移植または臓器移植の前処置、同時処置および／または後処置として使用できることを示している。そうするためには、再生療法の前、最中または後に、患者に投与される生体材料を前記抗鬱剤とイン・ビトロ（ｉｎ  ｖｉｔｒｏ）またはエクス・ビボ（ｅｘ  ｖｉｖｏ）で接触させること、および／または前記薬剤をイン・ビボで患者に直接投与することのいずれかを選択することができる。抗鬱剤は、生体材料のドナーに投与してもよい。本発明者らは、細胞移植後の幹細胞数の同程度の増加を達成するためには、イン・ビボでの前処置の期間はボルチオキセチンの方がフルオキセチンよりもかなり短かった（マウスにおいてそれぞれ１２日対６週間）ことをさらに観察した。これらのデータは、イン・ビボ生着能に対するその有益な効果の発現の速さのために、本明細書で提案される再生医療用途におけるボルチオキセチンの重要性をさらに強調している。最後に、本発明者らは、フルオキセチンおよびボルチオキセチンは５−ヒドロキシトリプタミン１Ｂ受容体の刺激を介して生着を促進することを特定した。まとめると、これらの結果は、イン・ビボ生着能は５−ヒドロキシトリプタミン１Ｂ受容体の刺激を介して増強されることを示唆している。
【０００７】
よって、本発明は、５−ヒドロキシトリプタミン１Ｂ受容体を刺激する薬剤の使用に頼り生体材料のイン・ビボ生着能を増強するための方法に関する。本発明はさらに、前記方法によって得ることができる生体材料、前記生体材料を含んでなる医療デバイス、ならびに必要とする対象において前記生体材料もしくは前記医療デバイスおよび／または５−ヒドロキシトリプタミン１Ｂ受容体を刺激する薬剤を使用する治療方法を包含する。
【発明の概要】
【０００８】
本発明に関して使用される科学用語および技術用語は、そうではないことが述べられない限り、当業者により一般に理解されている意味を有するものとする。さらに、本明細書で使用される名称、ならびに分子生物学、細胞培養、および薬理学の技術は、文脈がそうではないことを必要としない限り、当技術分野で周知のものであり、慣用されている。このような技術は文献で十分に説明されている（Ausubel et al., Current Protocols in Molecular Biology, John Wiley & Sons編, Inc. New York, 2013; Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 第22版, Mack Publishing Co., Easton, Pa., 2012参照）。
【０００９】
定義は本明細書の全域に示される。
【００１０】
本発明に係る方法および製品
上記に示されるように、本発明者らは、フルオキセチンまたはボルチオキセチン（二剤とも５−ヒドロキシトリプタミン１Ｂ受容体（５−ＨＴ１  ＢＲ）を刺激する）の投与が、間接的に（フルオキセチンおよびボルチオキセチンのセロトニンレベルの上昇を介して）および／または直接的に（ボルチオキセチンの５−ＨＴ１  ＢＲ部分的促進作用を介して）、必要とする対象において移植される生体材料のイン・ビボ生着能を大幅に増強することを発見した。この発見は、再生医療における新たな革新的適用に道を開くものであり、以下の詳細に記載する。
【００１１】
よって、本発明は、単離された生体材料を、それを必要とする対象への細胞療法、組織移植または臓器移植によるその材料の投与前に、５−ヒドロキシトリプタミン１Ｂ受容体（５−ＨＴ１  ＢＲ）刺激剤と接触させることからなる第１の方法を提案する。
【００１２】
よって、第１の側面において、本発明は、生体材料のイン・ビボ生着能を増強するための方法であって、単離された生体材料を少なくとも１種類の５−ヒドロキシトリプタミン１Ｂ受容体（５−ＨＴ１  ＢＲ）刺激剤とイン・ビトロおよび／またはエクス・ビボで接触させる工程を少なくとも含んでなるか、または前記工程から本質的になるか、または前記工程からなる方法を対象とする。
【００１３】
言い換えれば、本発明は、好ましくは、生体材料のイン・ビボ生着能を増強するための方法であって、以下の工程
ａ）場合により、生体材料を取得する工程；
ｂ）前記単離された生体材料を少なくとも１種類の５−ヒドロキシトリプタミン１Ｂ受容体（５−ＨＴ１  ＢＲ）刺激剤とイン・ビトロおよび／またはエクス・ビボで接触させる工程；および
ｃ）場合により、前記生体材料を回収する工程
を含んでなるか、または前記工程から本質的になるか、または前記工程からなる方法を対象とする。
【００１４】
好ましい態様によれば、上記方法は、単に単離された生体材料に対して実施され（従って、上記工程ａ）を含まない）、従って、イン・ビトロおよび／またはエクス・ビボのみで行われる。よって、前記方法は、必要とする対象に生体材料を投与することを目的とする処置の前に実施することができる。
【００１５】
好ましい態様によれば、上記の方法において有効量の５−ＨＴ１  ＢＲ刺激剤が使用される。「有効量」とは、本明細書では、本発明の薬剤が、それが指示される効果、すなわち、前記生体材料のイン・ビボ生着能の増強を提供するに十分な量で前記生体材料と接触される（またはインキュベートされる）ことを意味する。
【００１６】
さらに、好ましい態様によれば、上記のイン・ビトロまたはエクス・ビボ接触工程は、有効な期間実施される。「有効な期間」とは、本明細書では、単離された生体材料および５−ＨＴ１  ＢＲ刺激剤が、それが指示される効果、すなわち、前記生体材料のイン・ビボ生着能の増強を提供するに十分な期間接触される（または互いとともにインキュベートされる）ことを意味する。
【００１７】
好ましくは、前記の有効な期間は、約５時間〜約４０日の間、好ましくは約０．５日〜約３５日の間、約５日〜約３０日の間、より好ましくは約５時間〜約５日の間に含まれ、いっそうより好ましくは約２日間である。
【００１８】
生体材料の「イン・ビボ生着能」とは、必要とする対象（すなわち、レシピエント）に生体材料を投与した後の、前記材料に起源する細胞のイン・ビボ拡大および／またはホーミングを意味する。言い換えれば、それは、本明細書では、前記生体材料からの新たに形成された細胞（例えば、幹細胞および／または分化細胞）の増殖および／または前記レシピエントに前記材料を投与した後の、レシピエント内での新たに形成された細胞の存続の確立を指す。以下にさらに記載するように、生体材料が細胞から成り立つものであれ、組織から成り立つものであれ、または臓器から成り立つものであれ、前記材料の生着能は、投与される生体材料の生検由来の細胞の数を測定することにより、かつ、その数を参照値と比較することにより評価することができる。例えば、本発明の文脈では、参照値は、５−ＨＴ１  ＢＲ刺激剤と接触されずに投与された生体材料の生検由来の細胞の数であり得る。あるいは、イン・ビボ生着能は、幹細胞および／または分化細胞などの生体材料由来の細胞の数が前記材料を対象に投与した後に増加した場合に増強されるということができる。実際に、例に示されるように、ドナー細胞から再構成された組織のパーセンテージまたは面積は細胞移植後に増大した。言い換えれば、生着能は、投与後と投与前の生体材料由来の細胞の数の比が１より大きい、好ましくは２以上である時に、イン・ビボで増強されると言われる。細胞の数、または細胞計数値は、フローサイトメトリーによるなどの当技術分野で周知のいずれの方法によって測定することもできる。
【００１９】
本発明の文脈で、「生体材料」とは、本明細書において、生物活性を持ち得、かつ、生命の発生または維持のために生きている生物により通常使用される有機材料を意味する。本発明の文脈では、前記材料は、上記に示されるような細胞を含んでなり、従って、好ましくは、細胞、組織、臓器、それらの誘導物およびそれらの組合せからなる群から選択され、または言い換えれば、好ましくは、細胞、組織、臓器、それらの誘導物、またはそれらの組合せから成り立つ。前記細胞、組織および臓器は、天然物であっても、合成物であっても、またはイン・ビトロで操作されてもよい。例えば、細胞、組織および臓器は、対象とする導入遺伝子を発現させるために操作することができる。本発明に係る生体材料は、より詳しくは、必要とする対象において細胞、組織または臓器の再生のために使用することを目的とし、従って、同種（同じ種）、異種（異なる種）、自己（同じ対象）、または同系起源（双生児などの免疫学的に適合する同じ種の異なる対象）のものであり得る。自己および同系生体材料が、ここでは、生体材料の免疫拒絶を回避するために特に好ましい。
【００２０】
本発明に係る細胞は、必要とする対象に、例えば、細胞療法により投与可能な幹細胞、分化細胞、およびそれらの組合せの中から選択することができる。
【００２１】
本発明に係る好適な幹細胞の例としては、限定されるものではないが、胚性幹細胞；全能性幹細胞；特に誘導多能性幹細胞を含む多能性幹細胞；複能性幹細胞；成体幹細胞；神経幹細胞、筋原幹細胞（すなわち、衛星細胞、すなわち、Ｐａｘ７＋およびＣＤ３４＋）、造血幹細胞（ＨＳＣ）、間葉幹細胞（ＭＳＣ）、骨髄由来ＭＳＣ、皮膚または腸幹細胞などの上皮幹細胞、および脂肪組織由来幹細胞といった任意の起源の前駆細胞および幹細胞が含まれる。
【００２２】
本発明に係る特に好ましい幹細胞は、筋原幹細胞、造血幹細胞、および間葉幹細胞（ＭＳＣ）；より好ましくは、筋原幹細胞および造血幹細胞である。
【００２３】
本発明に係る好適な分化細胞の例としては、限定されるものではないが、ニューロン、筋原細胞（すなわち、筋芽細胞または筋細胞）、造血細胞、上皮細胞、骨芽細胞、骨細胞、軟骨細胞、血液細胞、ケラチノサイト、メラノサイト、線維芽細胞、メルケル細胞、ランゲルハンス細胞、脂肪細胞、および内皮細胞などの任意の起源の細胞が含まれる。
【００２４】
本発明に係る特に好ましい分化細胞は、筋原細胞、および造血細胞である。
【００２５】
本発明に係る組織は、必要とする対象に移植可能な任意の組織の中から選択することができる。本発明に係る好適な組織の例としては、限定されるものではないが、脳組織、神経、筋肉（例えば、心筋、骨格筋、平滑筋、または横紋筋）、血管組織、血液、上皮（例えば、卵巣上皮）、精巣組織、骨髄、骨、軟骨、歯髄、脂肪組織、網膜、角膜、肝臓、および皮膚（例えば、皮膚の表皮または真皮）が含まれる。
【００２６】
本発明に係る特に好ましい組織は、心筋、骨格筋、平滑筋、または横紋筋などの筋肉、血管組織、血液、および骨髄である。
【００２７】
細胞または組織誘導物も使用可能であり、例えば、骨または軟骨代替物（例えば、脱灰骨基質、ヒドロキシアパタイトなどのセラミック、リン酸三カルシウム、サンゴ、生体活性ガラス、それらの組合せなど）、皮膚代替物（いくつか例を挙げると、例えば、バイオボラン（登録商標）、トランスサイト（登録商標）、インテグラ（登録商標）、アロダーム（登録商標）、アプリグラフ（登録商標）、ダーマグラフ（登録商標）これらはとりわけＳｍｉｔｈ  ＆  Ｎｅｐｈｅｗ、Ｉｎｔｅｇｒａ、ＬｉｆｅＣｅｌｌ、Ａｐｌｉｇｒａｆ、およびＤｅｒｍａｇｒａｆｔにより商品化されている）、心血管組織代替物(Zimmerman et al., 2003; Neal et al., 2012; Lundberg et al., 2013; Li et al., 2013; Fernandez et al., 2014)、平滑筋代替物、または神経代替物(Konofaos et al., 2013)がある。
【００２８】
最後に、本発明に係る臓器は、必要とする対象に移植可能な任意の臓器の中から選択することができる。本発明に係る好適な臓器の例としては、限定されるものではないが、脊髄などの神経系、心臓、血管、脂肪、肺、腎臓、肝臓、膵臓、腸、顔面、歯、手、脚、陰茎、子宮、精巣、骨、皮膚、靱帯または胸腺の任意の一部が含まれる。
【００２９】
本発明に係る特に好ましい臓器は、心臓および血管である。
【００３０】
好ましい態様によれば、本発明に係る生体材料は、少なくとも幹細胞を含んでなる。
【００３１】
対象において再生される必要がある細胞、組織または臓器に応じて、意図される使用に適当な生体材料を選択することは、当業者の技量の範囲内である。
【００３２】
例えば、神経系の一部を再生するためには、生体材料は、好ましくは、神経幹細胞、ニューロン、神経、脳組織、脊髄、およびそれらの組合せからなる群から選択され、より好ましくは、神経幹細胞である。
【００３３】
別の例として、筋肉を再生するためには、生体材料は、好ましくは、筋原幹細胞、筋原細胞、筋肉組織およびそれらの組合せからなる群から選択され、より好ましくは、筋原幹細胞である。
【００３４】
さらなる例として、必要とする対象において血液組織もしくは骨髄を再生する、または任意の造血系の機能不全もしくは疾患を処置するためには、生体材料は、好ましくは、造血幹細胞、血液細胞、骨髄および血管からなる群から選択され、より好ましくは、造血幹細胞である。
【００３５】
しかし、様々な細胞種において一部の幹細胞は分化能を有することが、当業者に十分知られている。例えば、間葉幹細胞は、骨組織細胞（骨芽細胞および骨細胞）、軟骨細胞(cartilage cell)（軟骨細胞(chondrocyte)）、脂肪細胞(fat cell）（脂肪細胞(adipocyte)）および造血を支持する間質細胞を自然に生じ得る（Goumans et al., 2014; Li et al., 2009）。その上、一部の幹細胞は、分化転換するために、すなわち、予測される系統から予想される細胞種以外の細胞種に分化するために、遺伝子導入などによってリプログラミングされ得る。例えば、脳幹細胞は、心筋細胞へと分化する血液細胞または造血細胞への分化能を示している。従って、生体材料は、骨、軟骨、脂肪組織もしくは血液を再生するためには間葉幹細胞であることが好ましく、または血液もしくは心筋を再生するためには分化転換している脳幹細胞であることが好ましい。
【００３６】
好ましい態様によれば、上記の方法は、本発明の生体材料を保存する工程をさらに含んでなる。前記工程は、５−ヒドロキシトリプタミン１Ｂ受容体（５−ＨＴ１  ＢＲ）刺激剤を接触させる前に、および／または前記の接触と並行して実施することができる。
【００３７】
実際に、生体材料を保存する能力は、それに頼る臨床適用にとって非常に重要であり、また、患者がその投与を受ける準備ができるまでの保管も可能とする。
【００３８】
対象に投与する前に単離された生体材料の機能的完全性を保存する方法は、当技術分野においてよく知られている。例えば、引用することにより本明細書の一部とされる特許出願ＷＯ２０１１／１５１４５２  Ａ１では、幹細胞の取得および保存方法が記載されているが、引用することにより本明細書の一部とされる特許出願ＵＳ  １３／５５２，２５５およびＵＳ２００８００５７４８６  Ａ１では、組織および／または臓器の保存方法が記載されている。引用することにより本明細書の一部とされるＷＯ２００９０６８７９８  Ａ１ではさらに、細胞、組織または臓器の保護および／または保存方法が記載されている。
【００３９】
例えば、生体材料は、特許出願ＷＯ２０１１／１５１４５２  Ａ１に記載のとおり、無酸素条件またはほぼ無酸素の条件で維持することができる。好ましくは、前記単離された生体材料は、０．１％以下の酸素濃度で維持でき、より好ましくは、酸素の不在下で維持できる。前記維持は、好ましくは１〜６℃で実施でき、好ましくは３〜５℃およびより好ましくは４℃ならびに／または１２時間〜６０日の間に含まれる期間実施できる。前記維持は、好ましくは、当技術分野で慣用されている好適な化学的に定義された増殖培地にて前記生体材料を培養することにより実施できる。前記増殖培地は、いくつか例を挙げると、改変イーグル培地（ＭＥＭ）、ダルベッコの改変イーグル培地（ＤＭＥＭ）、ＲＰＭＩ  １６４０培地、ＣＭＲＬ−１０６６培地、エイムス培地、ハムＦ０およびＦ１２培地、リーボビッツまたはウィリアムス培地であり得る。前記増殖培地は、液体、半固体または固体（寒天など）であり得、ならびに／または血清、増殖因子および／もしくは抗生物質を添加してもしなくてもよい。
【００４０】
別の側面では、本発明は、上述の方法に従って、好ましくは、上述のエクス・ビボおよび／またはイン・ビトロの方法に従って得られる、イン・ビボ生着能が増強された単離された生体材料を対象とする。
【００４１】
しかし、イン・ビボ生着能が増強された生体材料は、５−ＨＴ１  ＢＲ刺激剤を投与されるまたは投与されている対象から得ることもできることを述べなければならない。
【００４２】
従って、別の側面では、本発明は、生体材料のイン・ビボ生着能を増強するための方法であって、
ａ）少なくとも１種類の５−ＨＴ１  ＢＲ刺激剤を投与されるまたは投与されている対象から生体材料を単離する工程
を含んでなる方法を対象とする。
【００４３】
用語「対象」は、本明細書全体で、ヒトまたは動物、好ましくはヒトを指す。本明細書では、生体材料を単離する対象は、以下でさらに定義するように、生体材料を提供することを目的とする対象、すなわちドナーであることが理解されるべきである。
【００４４】
しかし、上記に示されるように、生体材料は自己のものであり得る。この特定の態様によれば、生体材料のドナーは、前記材料のレシピエントにもなる。
【００４５】
特定の態様では、生体材料を単離する対象は、死亡している、ならびに／または、いくつか例を挙げると、片頭痛、頭痛および／または精神障害、例えば、鬱病、不安もしくは双極性障害に罹患していない、またはこれらに対する処置を受けていない。
【００４６】
さらに好ましくは、上記の方法は、
ｂ）前記単離された生体材料を前記５−ＨＴ１  ＢＲ刺激剤とイン・ビトロおよび／またはエクス・ビボでさらに接触させる工程；および
ｃ）場合により、前記生体材料を回収する工程
を含んでなることができる。
【００４７】
好ましい態様は、上記の通りである。
【００４８】
よって、別の側面では、本発明は、上述の方法に従って得られる、イン・ビボ生着能が増強された単離された生体材料を対象とする。
【００４９】
さらに、別の側面では、本発明は、生体材料を提供する対象に使用するための５−ヒドロキシトリプタミン１Ｂ受容体（５−ＨＴ１  ＢＲ）刺激剤を対象とする。より正確には、本発明は、生体材料を提供する対象を処置するための５−ヒドロキシトリプタミン１Ｂ受容体（５−ＨＴ１  ＢＲ）刺激剤の使用に関する。言い換えれば、本発明は、生体材料を提供する対象に少なくとも１種類の５−ヒドロキシトリプタミン１Ｂ受容体（５−ＨＴ１  ＢＲ）刺激剤を投与することを含んでなる方法に関する。
【００５０】
「生体材料を提供する対象」とは、本明細書では、生体材料のドナー（レシピエント、すなわち、生体材料を受容する対象に対して）、または言い換えれば、生体材料が自身の身体から単離される予定のまたは単離される対象を意味する。
【００５１】
しかし、上記に示されるように、生体材料は自己のものであり得る。この特定の態様によれば、生体材料のドナーは、前記材料のレシピエントにもなることが理解されるべきである。
【００５２】
特定の態様では、前記対象は、死亡している、ならびに／あるいは、片頭痛、頭痛および／または精神障害、例えば、鬱病、不安もしくは双極性障害に罹患していない、またはこれらに対する処置を受けていない。
【００５３】
さらに後述する通り、前記対象への５−ＨＴ１  ＢＲ刺激剤の投与は、それを必要とする対象（すなわち、レシピエント）に投与することを目的とする生体材料を単離する前および／またはそれと同時に実施できることがさらに理解されるべきである。
【００５４】
好ましい態様によれば、上記の方法において有効量の５−ＨＴ１  ＢＲ刺激剤が使用される。「有効量」とは、本明細書では、本発明の薬剤が、それが指示される効果、すなわち、それを必要とする対象（すなわち、レシピエント）に投与される生体材料のイン・ビボ生着能の増強を提供するに十分な量で対象に投与されることを意味する。
【００５５】
例えば、前記５−ＨＴ１  ＢＲ刺激剤は、約５ｍｇ／ｋｇ〜約３０ｍｇ／ｋｇの間、好ましくは約１０ｍｇ／ｋｇ〜約２５ｍｇ／ｋｇの間、より好ましくは約１５ｍｇ／ｋｇ〜約２０ｍｇ／ｋｇの間に含まれる、好ましくは１８ｍｇ／ｋｇの有効量で対象に投与することができる。
【００５６】
さらに、好ましい態様によれば、上記の方法は有効な期間実施される。「有効な期間」とは、本明細書では、５−ＨＴ１  ＢＲ刺激剤が、それが指示される効果、すなわち、それを必要とする対象（すなわち、レシピエント）に投与される生体材料のイン・ビボ生着能の増強を提供するに十分な期間で対象に投与されることを意味する。
【００５７】
例えば、前記５−ＨＴ１  ＢＲ刺激剤は、好ましくは、約６週間の期間（特に、フルオキセチンなどの遅効性の５−ＨＴ１  ＢＲ刺激剤の場合）または約１２日の期間（特に、ボルチオキセチンなどの速効性の５−ＨＴ１  ＢＲ刺激剤の場合）、対象に投与することができる。
【００５８】
ひとたび作成されたら、本発明に係るイン・ビボ生着能が増強された単離された生体材料は、それを必要とする患者に投与できる医療デバイスに必要に応じて使用することができる。
【００５９】
従って、本発明の別の側面は、少なくとも本発明に係るイン・ビボ生着能が増強された単離された生体材料、および場合により、少なくとも１種類の薬学的に許容可能な賦形剤を含んでなる医療デバイスを提供する。
【００６０】
本明細書で使用する場合、用語「薬学的に許容可能な賦形剤」とは、有効期間、適用部位での保持時間、消費者受容性などの組成物の特性を改善するために使用できる、薬理作用を持たないために不活性の(inactive)または不活性の(inert)成分、従って無毒性の成分を意味する。これには、限定されるものではないが、生理学的に適合する界面活性剤（陽イオン、陰イオン、または中性）；表面安定剤；保存剤、湿潤剤または乳化剤などのその他のエンハンサー；溶媒；バッファー；塩溶液；分散媒；等張剤および吸収遅延剤などが含まれる。
【００６１】
デバイスは、生体材料を組み込む／配置することができる包帯もしくはパッチ（例えば、創傷治癒用）の形態、またはインプラント（例えば、欠損したもしくは損なわれた骨、軟骨、もしくは歯の修復用）の形態など、使用目的に好適ないずれの形態であってもよい。
【００６２】
本発明に係る医療デバイスは、それを必要とする対象に生体材料を投与した際に、生体材料のイン・ビボ生着をさらに促進することができる；または細胞、組織もしくは臓器の再生を刺激することができる；または免疫抑制を支持することさえできる治療薬などの活性剤を少なくとも１種類さらに含んでなることができる。例えば、コルチコイド、シクロスポリン、プレドニゾン、ミコフェノール酸モフェチル、エベロリムス、シロリムス、タクロリムスおよび／またはアザチオプリンを、免疫抑制を支持する治療薬として使用してもよい。
【００６３】
前述のように、本発明に係るイン・ビボ生着能が増強された単離された生体材料、または前記生体材料を含んでなる医療デバイスは、前記材料の生着促進能から利益を得られる医療用途、特に、細胞療法、組織移植または臓器移植などの再生医療用途に使用することができる。
【００６４】
よって、別の側面では、本発明は、薬剤として使用するための、上記のような、イン・ビボ生着能が増強された単離された生体材料または医療デバイスを提供する。上記のような好ましい態様は、本明細書において必要な変更を加えて適用される。
【００６５】
この点に関して、本発明は、好ましくは、細胞、組織または臓器の再生を必要とする対象（すなわち、レシピエント）に使用するための、上記のようなイン・ビボ生着能が増強された単離された生体材料または医療デバイスに関する。より正確には、本発明は、細胞、組織または臓器の再生を必要とする対象に処置を行うための、本発明に係る単離された生体材料または医療デバイスの使用に関する。言い換えれば、本発明は、細胞、組織または臓器の再生を必要とする対象に、単離された生体材料または医療デバイスを投与することを含んでなる方法に関する。
【００６６】
さらに、好ましくは、本発明は、必要とする対象（すなわち、レシピエント）における細胞、組織または臓器の損失、損傷または障害の処置に使用するための、上記のようなイン・ビボ生着能が増強された単離された生体材料または医療デバイスに関する。より正確には、本発明は、必要とする対象における細胞、組織または臓器の損失、損傷または障害の処置に本発明の単離された生体材料または医療デバイスを使用することに関する。言い換えれば、本発明は、細胞、組織または臓器の損失、損傷または障害の処置を必要とする対象に本発明の単離された生体材料または医療デバイスを投与することを含んでなる方法に関する。
【００６７】
「細胞、組織または臓器の再生」とは、本明細書では、上記で例示したものなど、対象の生体を構成する1つまたは複数の細胞、組織、または臓器の再生または修復を意味する。
【００６８】
用語「細胞、組織または臓器の損失、損傷または障害」は、本明細書では、上記で例示したものなど、対象の生体を構成する細胞、組織、または臓器のいずれの自然的、先天的または後天的な損失、損傷または障害（すなわち、機能不全）も包含する。前記損失、損傷または障害は、例えば、自然老化過程、病理学的障害、および／または生体のいずれの部位の外傷または傷害にも起因し得る。
【００６９】
本発明に係る細胞、組織または臓器の損失、損傷または障害の例としては、限定されるものではないが、
骨および／または軟骨の損失、損傷または障害、例えば、骨壊死、骨粗鬆症、骨折、歯周炎、歯牙欠損、関節炎；
皮膚の損失、損傷または障害、例えば、皮膚の発赤または疼痛、皮膚の炎症、水疱および開放創、火傷、膿瘍および皮膚潰瘍を含む皮膚病変；
神経系のいずれかの部位の損失、損傷または障害、例えば、アルツハイマー病、前頭側頭葉萎縮、レビー小体型認知症、ピック病、染色体に関連した認知症、パーキンソン病、進行性核上麻痺、多系統萎縮症、大脳皮質基底核変性症、ハンチントン病、ジストニア、小脳性運動失調、遺伝性痙攣性対麻痺を含む神経変性疾患；白質ジストロフィーなどの白質の原疾患および多発性硬化症などの炎症を伴う白質疾患；脳卒中；脊髄損傷；
筋肉の損失、損傷または障害、例えば、デュシェンヌ型筋ジストロフィー、ベッカー型筋ジストロフィー、先天性筋ジストロフィー、肢帯型筋ジストロフィー（例えば、三好型または遠位型ミオパチー、ジスフェリン異常症、カベオリン異常症、サルコグリカン異常症、ミオチリノパシー）、顔面肩甲上腕型筋ジストロフィー、眼球咽頭型筋ジストロフィー、筋強直性筋ジストロフィー、非ジストロフィー性ミオトニー症候群、遠位型筋ジストロフィー、エメリ・ドレフュス型筋ジストロフィーなどの遺伝性ミオパチー；ネマリンミオパチー、筋細管または中心核ミオパチー、中心コアミオパチー、デスミンミオパチー、代謝性ミオパチー（例えば、脂質ミオパチー、ミトコンドリアミオパチーおよびマッカードル病、ポンペ病または垂井病などのグリコーゲン貯蔵障害）などの遺伝性ミオパチー；薬剤性ミオパチー、毒素性ミオパチー、外傷性ミオパチー、手術性ミオパチー、疾患性ミオパチー（例えば、癌、ウイルスまたは細菌感染、内分泌障害）、食事性ミオパチー、サルコペニア、尿失禁または肛門括約筋機能不全、心筋梗塞などの加齢性ミオパチーなどの後天性ミオパチー；
造血系のいずれかの部位の損失、損傷または障害、例えば、急性骨髄性白血病、急性リンパ芽球性白血病、慢性骨髄性白血病、慢性リンパ球性白血病、若年性骨髄単球性白血病、ホジキンリンパ腫または非ホジキンリンパ腫などの白血病およびリンパ腫；多発性骨髄腫およびその他の形質細胞障害；重度の再生不良性貧血および、重度の再生不良性貧血、ファンコニ貧血、発作性夜間ヘモグロビン尿症（ＰＮＨ）、赤芽球ろう、無巨核球性症／先天性血小板減少症などのその他の骨髄不全状態；重症複合免疫不全症（全サブタイプ）および、ウィスコット・アルドリッチ症候群などのその他の遺伝性免疫系障害；βサラセミア・メジャーおよび鎌形赤血球症などの異常ヘモグロビン症；ハーラー症候群ならびに、副腎白質ジストロフィーおよび異染性白質ジストロフィーなどのその他の遺伝性代謝障害；難治性貧血（全種類）、慢性骨髄単球性白血病および原因不明性骨髄様化生（骨髄線維症）などの骨髄異形成および骨髄増殖性障害；家族性血球貪食性リンパ組織球症およびその他の組織球性障害が含まれる。造血系のいずれかの部位の損失、損傷または障害は、血液毒の経口摂取または照射事故など、骨髄移植を必要とする上記の疾患またはその他の疾患（例えば、固形腫瘍など）における処置によっても間接的に誘発され得る。
【００７０】
好ましくは、本発明に従って処置される細胞、組織または臓器の損失、損傷または障害は、上記のような筋肉の損失、損傷または障害および造血系の損失、損傷または障害から選択される。
【００７１】
用語「処置（「treating」、「treatment」または「treat」）」は、本明細書で使用する場合、とりわけ、治療法と干渉するおよび／または治療法の結果生じるものを含む、欠損、機能不全、疾患またはその他の有害な過程の予防、改善、阻害または治癒を包含する。
【００７２】
本発明の文脈では、細胞、組織または臓器の再生を目的とする処置、または細胞、組織もしくは臓器の損失、損傷もしくは障害の処置は、本明細書では、好ましくは、投与される生体材料の性質に応じた細胞療法、組織移植または臓器移植である。
【００７３】
前記処置は、上記のように、単離された生体材料の投与を受ける必要がある対象に対して実施することができる。特定の態様では、前記対象は、片頭痛、頭痛および／または精神障害、例えば、鬱病、不安もしくは双極性障害に罹患していない、またはこれらに対する処置を受けていない。
【００７４】
好ましい態様によれば、単離された生体材料の治療上有効な量は、上記の方法において使用される。「治療上有効な量」とは、本明細書では、単離された生体材料が、前記材料が投与される対象に過度に負の影響を引き起こすことなく、それが指示される効果、すなわち、細胞、組織もしくは臓器の再生および／または細胞、組織もしくは臓器の損失、損傷もしくは障害の処置を提供するに十分な量で投与されることを意味する。当技術分野で通例の方法で送達する生体材料の望ましい治療量を決定することは、当業者の技量の範囲内である。
【００７５】
例えば、生体材料が細胞、特に幹細胞からなる場合は、本発明に係る好ましい治療上有効な量は、少なくとも約１．０×１０４個／ｋｇ、より好ましくは、少なくとも約５．０×１０４個／ｋｇ、少なくとも約１．０×１０５個／ｋｇ、さらに好ましくは、少なくとも約５．０×１０５個／ｋｇ、少なくとも約１．０×１０６個／ｋｇ、いっそうより好ましくは、少なくとも約５．０×１０６個／ｋｇ、少なくとも約１．０×１０７個／ｋｇ、いっそうより好ましくは、少なくとも約５．０×１０７個／ｋｇ、少なくとも約１．０×１０８個／ｋｇ、少なくとも約５．０×１０８個／ｋｇ、最も好ましくは、少なくとも約１．０×１０９個／ｋｇである。
【００７６】
しかし、投与される生体材料の治療上有効な量は、処置される患者の年齢および体重；細胞、組織もしくは臓器の再生／処置される損失、損傷もしくは障害の性質；ならびに／または投与様式および投与頻度によって変えてもよい。
【００７７】
本発明に係る単離された生体材料または医療デバイスを対象に投与する方法は、当業者によく知られている。そのような方法としては、限定されるものではないが、接種もしくは注射もしくは移植（例えば、筋肉内、皮下、関節内など）、または局所適用（例えば、創傷、火傷などの皮膚領域へ）が含まれる。目的とする部位への局所注射が、本明細書では特に好まれ得る。例えば、筋肉の再生を望む場合は、衛星細胞を筋肉内注射することができ、ならびに／またはＨＳＣおよび／もしくはＭＳＣを静脈内注射することができる。あるいは、血液組織または骨髄の再生を望む場合は、ＨＳＣおよび／またはＭＳＣを静脈内注射することができる。
【００７８】
本発明者らはさらに、筋肉または骨髄の再生を目的とする細胞移植の前に、前記対象に対して５−ヒドロキシトリプタミン１Ｂ受容体（５−ＨＴ１  ＢＲ）刺激剤による前記対象の前処置を実施しても、移植された細胞のイン・ビボ生着能を増強できることを示した。
【００７９】
従って、別の側面では、本発明は、細胞、組織または臓器の再生を必要とする対象における治療前使用（pre-therapeutic use）のための５−ヒドロキシトリプタミン１Ｂ受容体（５−ＨＴ１  ＢＲ）刺激剤に関する。より正確には、本発明は、細胞、組織または臓器の再生を必要とする対象を前処置するための５−ヒドロキシトリプタミン１Ｂ受容体（５−ＨＴ１  ＢＲ）刺激剤の使用に関する。言い換えれば、本発明は、対象において細胞、組織または臓器の再生を目的とする処置の前に前記対象に少なくとも１種類の５−ヒドロキシトリプタミン１Ｂ受容体（５−ＨＴ１  ＢＲ）刺激剤を投与することを含んでなる方法に関する。
【００８０】
さらに好ましくは、本発明は、必要とする対象において細胞、組織、臓器の損失、損傷または障害の処置の前に使用するための、上記のような５−ヒドロキシトリプタミン１Ｂ受容体（５−ＨＴ１  ＢＲ）刺激剤に関する。より正確には、本発明は、必要とする対象において細胞、組織、臓器の損失、損傷または障害の処置の前の５−ヒドロキシトリプタミン１Ｂ受容体（５−ＨＴ１  ＢＲ）刺激剤の使用に関する。言い換えれば、本発明は、細胞、組織、臓器の損失、損傷または障害の処置を必要とする対象に対して、前記処置の前に少なくとも１種類の５−ヒドロキシトリプタミン１Ｂ受容体（５−ＨＴ１  ＢＲ）刺激剤を投与することを含んでなる方法に関する。
【００８１】
このことは、対象が、細胞、組織もしくは臓器の再生を目的とする処置、または言い換えれば、細胞、組織もしくは臓器の損失、損傷もしくは障害の処置を待っている間に、この方法を実施できることを意味する。
【００８２】
前記対象は、生体材料の投与を待っているレシピエントであり得る。
【００８３】
特定の態様では、前記対象は、片頭痛、頭痛および／または精神障害、例えば、鬱病、不安もしくは双極性障害に罹患していない、またはこれらに対する処置を受けていない。
【００８４】
好ましい態様によれば、有効量の５−ＨＴ１  ＢＲ刺激剤が上記の方法において使用される。「有効量」とは、本明細書では、本発明の薬剤が、それが指示される効果、すなわち、細胞、組織もしくは臓器の再生、または言い換えれば、対象に対して後に実施される細胞、組織もしくは臓器の損失、損傷もしくは障害の処置を提供するに十分な量で前記対象に投与されることを意味する。
【００８５】
例えば、前記５−ＨＴ１  ＢＲ刺激剤は、約５ｍｇ／ｋｇ〜約３０ｍｇ／ｋｇの間、好ましくは約１０ｍｇ／ｋｇ〜約２５ｍｇ／ｋｇの間、より好ましくは約１５ｍｇ／ｋｇ〜約２０ｍｇ／ｋｇの間に含まれる、好ましくは１８ｍｇ／ｋｇの有効量で対象に投与することができる。
【００８６】
さらに、好ましい態様によれば、上記の方法は有効な期間実施される。「有効な期間」とは、本明細書では、５−ＨＴ１  ＢＲ刺激剤が、それが指示される効果、すなわち、細胞、組織もしくは臓器の再生、または言い換えれば、対象に対して後に実施される細胞、組織もしくは臓器の損失、損傷もしくは障害の処置を提供するに十分な期間で前記対象に投与されることを意味する。
【００８７】
例えば、５−ＨＴ１  ＢＲ刺激剤は、好ましくは、細胞、組織もしくは臓器の再生を目的とする処置の前、または言い換えれば、細胞、組織、臓器の損失、損傷もしくは障害の処置の前の少なくとも７週間、より好ましくは少なくとも３０日間、いっそうより好ましくは少なくとも１０〜２０日間投与することができる。５−ＨＴ１  ＢＲ刺激剤がフルオキセチンなどの遅効性の５−ＨＴ１  ＢＲ刺激剤である場合、前記薬剤は、所望の効果を達成するために、例えば、好ましくは約６週間投与することができる。一方、５−ＨＴ１  ＢＲ刺激剤がボルチオキセチンなどの速効性の５−ＨＴ１  ＢＲ刺激剤である場合は、前記薬剤は、所望の効果を達成するために、例えば、好ましくは約１２日間投与することができる。
【００８８】
しかし、当業者は、有益な効果を最大限にするためには、５−ヒドロキシトリプタミン１Ｂ受容体（５−ＨＴ１  ＢＲ）刺激剤の投与は、前記対象における細胞、組織もしくは臓器の再生を目的とする処置の実施中および／もしくは実施後、または言い換えれば、細胞、組織もしくは臓器の損失、損傷もしくは障害の処置の実施中および／もしくは実施後に行うことができることを容易に理解するであろう。
【００８９】
この好ましい態様によれば、本発明は、細胞、組織または臓器の再生を目的とする処置を必要とする対象における治療前使用のための、ならびに前記処置を受けている前記対象における治療時（co-therapeutic）および／または治療後使用（post-therapeutic use）のための５−ヒドロキシトリプタミン１Ｂ受容体（５−ＨＴ１  ＢＲ）刺激剤に関する。より正確には、本発明は、細胞、組織または臓器の再生を目的とする処置を必要とする対象を前処置するための、ならびに前記処置を受けている前記対象を同時処置および／または後処置するための５−ヒドロキシトリプタミン１Ｂ受容体（５−ＨＴ１  ＢＲ）刺激剤の使用に関する。言い換えれば、本発明は、対象における細胞、組織または臓器の再生を目的とする処置の前、ならびに前記処置と同時に（simultaneously）および／または前記処置の後に、少なくとも１種類の５−ヒドロキシトリプタミン１Ｂ受容体（５−ＨＴ１  ＢＲ）刺激剤を前記対象に投与することを含んでなる方法に関する。
【００９０】
言い換えれば、本発明は、必要とする対象において細胞、組織、臓器の損失、損傷または障害の処置の前、ならびに前記処置と同時におよび／または前記処置の後に使用するための、上記のような５−ヒドロキシトリプタミン１Ｂ受容体（５−ＨＴ１  ＢＲ）刺激剤に関する。より正確には、本発明は、必要とする対象において細胞、組織、臓器の損失、損傷または障害の処置の前、ならびに前記処置と同時におよび／または前記処置の後における５−ヒドロキシトリプタミン１Ｂ受容体（５−ＨＴ１  ＢＲ）刺激剤の使用に関する。言い換えれば、本発明は、細胞、組織、臓器の損失、損傷または障害の処置を必要とする対象に、前記処置の前、ならびに前記処置と同時におよび／または前記処置の後に、少なくとも１種類の５−ヒドロキシトリプタミン１Ｂ受容体（５−ＨＴ１  ＢＲ）刺激剤を投与することを含んでなる方法に関する。
【００９１】
例えば、５−ＨＴ１  ＢＲ刺激剤は、好ましくは、細胞、組織もしくは臓器の再生を目的とする処置の実施後、または言い換えれば、細胞、組織、臓器の損失、損傷もしくは障害の処置後、少なくとも６週間、さらに好ましくは、少なくとも１５日間、より好ましくは、少なくとも１０日間、さらに投与することができる。例示的目的で、前記５−ＨＴ１  ＢＲ刺激剤は、好ましくは、約６週間の期間（特に、フルオキセチンなどの遅効性の５−ＨＴ１  ＢＲ刺激剤の場合）または約１２日の期間（特に、ボルチオキセチンなどの速効性の５−ＨＴ１  ＢＲ刺激剤の場合）、対象に投与することができる。
【００９２】
本発明に係る５−ヒドロキシトリプタミン１Ｂ受容体（５−ＨＴ１  ＢＲ）刺激剤は、さらなる活性剤を含んでなってもよい医薬組成物においてそのような治療前使用のために使用することもできる。
【００９３】
従って、別の側面では、本発明はさらに、細胞、組織または臓器の再生を必要とする対象における治療前使用のための医薬組成物を提供し、前記組成物は、少なくとも１種類の５−ヒドロキシトリプタミン１Ｂ受容体（５−ＨＴ１  ＢＲ）刺激剤および少なくとも１種類の薬学的に許容可能な賦形剤を含んでなる。より正確には、本発明は、細胞、組織または臓器の再生を必要とする対象を前処置するための前記医薬組成物の使用に関する。言い換えれば、本発明は、対象において細胞、組織または臓器の再生を目的とする処置の前に、少なくとも前記医薬組成物を前記対象に投与することを含んでなる方法に関する。
【００９４】
好ましくは、本発明は、必要とする対象において細胞、組織、臓器の損失、損傷または障害の処置の前に使用するための前記医薬組成物に関する。より正確には、本発明は、必要とする対象において細胞、組織、臓器の損失、損傷または障害の処置の前の前記医薬組成物の使用に関する。言い換えれば、本発明は、細胞、組織、臓器の損失、損傷または障害の処置を必要とする対象に、前記処置の前に、少なくとも前記医薬組成物を投与することを含んでなる方法に関する。
【００９５】
この組成物の治療時および／または治療後使用と組合せた治療前使用も、本明細書において包含される。
【００９６】
この好ましい態様によれば、本発明は、細胞、組織または臓器の再生を目的とする処置を必要とする対象における治療前使用のための、ならびに前記処置を受けている前記対象における治療時および／または治療後使用のための前記医薬組成物に関する。より正確には、本発明は、細胞、組織または臓器の再生を目的とする処置を必要とする対象を前処置するための、ならびに前記処置を受けている前記対象を同時処置および／または後処置するための前記医薬組成物の使用に関する。言い換えれば、本発明は、対象において細胞、組織または臓器の再生を目的とする処置の前、ならびに前記処置と同時におよび／または前記処置の後に、前記対象に少なくとも前記医薬組成物を投与することを含んでなる方法に関する。
【００９７】
好ましい態様によれば、前記医薬組成物は、少なくとも１種類の活性剤をさらに含んでなる。前記組成物の薬学的に許容可能な賦形剤および／または活性剤は、上記のようなものであり得る。
【００９８】
前記医薬組成物は、好ましくは、本発明の目的に好適な形態であり得る。例えば、前記組成物は、液体懸濁液、固形の剤形（顆粒、丸剤、カプセル剤もしくは錠剤）、またはペーストもしくはゲルなどの非経口投与、経口投与（すなわち、経腸もしくは経口）または局所的投与に好適な形態であり得る。非経口という用語は、本明細書で使用する場合、皮下、静脈内、または筋肉内注射を含む。
【００９９】
経口投与が、本明細書では特に好ましい。しかし、経口投与の代わりとして、または経口投与に加えて、目的の部位（すなわち、再生する部位）への局所注射を実施することができる。例えば、筋肉の再生を望む場合は、本組成物を筋肉内注射することができる。あるいは、血液組織または骨髄の再生を望む場合は、本組成物を静脈内注射することができる。
【０１００】
上記のような処置される対象、５−ヒドロキシトリプタミン１Ｂ受容体（５−ＨＴ１  ＢＲ）刺激剤の有効量および方法を実施する有効な期間に関する好ましい態様は、必要な変更を加えて前記医薬組成物に適用される。
【０１０１】
当業者は、細胞、組織もしくは臓器の再生を目的とする処置と並行しておよび／もしくは前記処置の後に、または、言い換えれば、細胞療法、組織移植もしくは臓器移植などの細胞、組織、もしくは臓器の損失、損傷もしくは障害の処置の後のいずれかで、５−ヒドロキシトリプタミン１Ｂ受容体（５−ＨＴ１  ＢＲ）刺激剤を投与することができることをさらに理解するであろう。
【０１０２】
従って、別の側面では、本発明は、細胞、組織または臓器の再生を目的とする処置を受けている対象における治療時および／または治療後使用のための、上記のような５−ヒドロキシトリプタミン１Ｂ受容体（５−ＨＴ１  ＢＲ）刺激剤に関する。より正確には、本発明は、細胞、組織または臓器の再生を受けている対象を前処置および／または後処置するための５−ヒドロキシトリプタミン１Ｂ受容体（５−ＨＴ１  ＢＲ）刺激剤の使用に関する。言い換えれば、本発明は、細胞、組織または臓器の再生を目的とする処置を受けている対象に、前記処置と同時におよび／または前記処置の後に、少なくとも１種類の５−ヒドロキシトリプタミン１Ｂ受容体（５−ＨＴ１  ＢＲ）刺激剤を投与することを含んでなる方法に関する。
【０１０３】
さらに好ましくは、本発明は、対象における細胞、組織、臓器の損失、損傷または障害の処置と同時におよび／または前記処置の後に使用するための、上記のような５−ヒドロキシトリプタミン１Ｂ受容体（５−ＨＴ１  ＢＲ）刺激剤に関する。より正確には、本発明は、対象における細胞、組織、臓器の損失、損傷または障害の処置と同時におよび／または前記処置の後に５−ヒドロキシトリプタミン１Ｂ受容体（５−ＨＴ１  ＢＲ）刺激剤を使用することに関する。言い換えれば、本発明は、細胞、組織、臓器の損失、損傷または障害の処置を受けている対象に、前記処置と同時におよび／または前記処置の後に、少なくとも１種類の５−ヒドロキシトリプタミン１Ｂ受容体（５−ＨＴ１  ＢＲ）刺激剤を投与することを含んでなる方法に関する。
【０１０４】
前記対象は、生体材料を投与されるまたは投与されているレシピエントであり得る。
【０１０５】
特定の態様では、前記対象は、片頭痛、頭痛および／または精神障害、例えば、鬱病、不安もしくは双極性障害に罹患していない、またはこれらに対する処置を受けていない。
【０１０６】
好ましい態様によれば、有効量の５−ＨＴ１  ＢＲ刺激剤が上記の方法において使用される。「有効量」とは、本明細書では、本発明の薬剤が、それが指示される効果、すなわち、細胞、組織もしくは臓器の再生、または言い換えれば、対象に対して実施されるまたは実施されている細胞、組織もしくは臓器の損失、損傷もしくは障害の処置を提供するに十分な量で前記対象に投与されることを意味する。
【０１０７】
例えば、前記５−ＨＴ１  ＢＲ刺激剤は、約５ｍｇ／ｋｇ〜約３０ｍｇ／ｋｇの間、好ましくは約１０ｍｇ／ｋｇ〜約２５ｍｇ／ｋｇの間、より好ましくは約１５ｍｇ／ｋｇ〜約２０ｍｇ／ｋｇの間に含まれる、および好ましくは１８ｍｇ／ｋｇの有効量で対象に投与することができる。
【０１０８】
さらに、好ましい態様によれば、上記の方法は有効な期間実施される。「有効な期間」とは、本明細書では、５−ＨＴ１  ＢＲ刺激剤が、それが指示される効果、すなわち、細胞、組織もしくは臓器の再生、または言い換えれば、対象に対して実施されるまたは実施されている細胞、組織もしくは臓器の損失、損傷もしくは障害の処置を提供するに十分な期間で前記対象に投与されることを意味する。
【０１０９】
例えば、５−ＨＴ１  ＢＲ刺激剤は、好ましくは、細胞、組織もしくは臓器の再生を目的とする処置の実施後、または言い換えれば、細胞、組織、臓器の損失、損傷もしくは障害の処置後、少なくとも６週間、さらに好ましくは、少なくとも１５日間、より好ましくは、少なくとも１０日間、投与することができる。例示的目的で、前記５−ＨＴ１  ＢＲ刺激剤は、好ましくは、約６週間の期間（特に、フルオキセチンなどの遅効性の５−ＨＴ１  ＢＲ刺激剤の場合）または約１２日の期間（特に、ボルチオキセチンなどの速効性の５−ＨＴ１  ＢＲ刺激剤の場合）、対象に投与することができる。
【０１１０】
本発明に係る５−ヒドロキシトリプタミン１Ｂ受容体（５−ＨＴ１  ＢＲ）刺激剤は、さらなる活性剤を含んでなってもよい医薬組成物においてそのような治療時および／または治療後使用のために使用することもできる。
【０１１１】
従って、別の側面では、本発明はさらに、細胞、組織または臓器の再生を目的とする処置を受けている対象における治療時および／または治療後使用のための医薬組成物を提供する。前記組成は、少なくとも１種類の５−ヒドロキシトリプタミン１Ｂ受容体（５−ＨＴ１  ＢＲ）刺激剤および少なくとも１種類の薬学的に許容可能な賦形剤を含んでなる。より正確には、本発明は、細胞、組織または臓器の再生を受けている対象を前処置および／または後処置するための前記医薬組成物の使用に関する。言い換えれば、本発明は、細胞、組織または臓器の再生を目的とする処置を受けている対象に対して、前記処置と同時におよび／または前記処置の後に、少なくとも前記医薬組成物を投与することを含んでなる方法に関する。
【０１１２】
さらに好ましくは、本発明は、対象における細胞、組織、臓器の損失、損傷または障害の処置と同時におよび／または前記処置の後に使用するための上記のような前記医薬組成物に関する。より正確には、本発明は、対象における細胞、組織、臓器の損失、損傷または障害の処置と同時におよび／または前記処置の後に前記医薬組成物を使用することに関する。言い換えれば、本発明は、細胞、組織、臓器の損失、損傷または障害の処置を受けている対象に対して、前記処置と同時におよび／または前記処置の後に、少なくとも前記医薬組成物を投与することを含んでなる方法に関する。
【０１１３】
好ましい態様によれば、前記医薬組成物は、少なくとも１種類の活性剤をさらに含んでなる。前記組成の薬学的に許容可能な賦形剤および／または活性剤は、上記のようなものであり得る。
【０１１４】
前記医薬組成物は、好ましくは、本発明の目的に好適な形態であり得る。例えば、前記組成は、液体懸濁液、固形の剤形（顆粒、丸剤、カプセル剤もしくは錠剤）、またはペーストもしくはゲルなどの非経口投与、経口投与（すなわち、経腸もしくは経口）または局所的投与に好適な形態であり得る。用語「非経口」は、本明細書で使用する場合、皮下、静脈内、または筋肉内注射を含む。
【０１１５】
経口投与が、本明細書では特に好ましい。しかし、経口投与の代わりとして、または経口投与に加えて、目的の部位（すなわち、再生する部位）への局所注射を実施することができる。例えば、筋肉の再生を望む場合は、組成を筋肉内注射することができる。あるいは、血液組織または骨髄の再生を望む場合は、組成を静脈内注射することができる。
【０１１６】
上記のような処置される対象、５−ヒドロキシトリプタミン１Ｂ受容体（５−ＨＴ１  ＢＲ）刺激剤の有効量および方法を実施する有効な期間に関する好ましい態様は、必要な変更を加えて前記医薬組成物に適用される。
【０１１７】
本発明はさらに、生体材料および５−ヒドロキシトリプタミン１Ｂ受容体（５−ＨＴ１  ＢＲ）刺激剤の使用に頼ることにより、対象における細胞、組織または臓器を再生する治療法を提供する。
【０１１８】
従って、別の側面では、本発明は、必要とする対象（すなわち、レシピエント）の細胞、組織または臓器の再生を目的とする処置における同時、個別または逐次投与のための組合せ製剤としての、単離された生体材料（または前記材料を含んでなる医療デバイス）および５−ヒドロキシトリプタミン１Ｂ受容体（５−ＨＴ１  ＢＲ）刺激剤に関する。言い換えれば、本発明は、必要とする対象（すなわち、レシピエント）の細胞、組織または臓器の損失、損傷または障害の処置における同時、個別または逐次投与のための組合せ製剤としての、単離された生体材料（または前記材料を含んでなる医療デバイス）および５−ヒドロキシトリプタミン１Ｂ受容体（５−ＨＴ１  ＢＲ）刺激剤に関する。
【０１１９】
より正確には、本発明は、必要とする対象における細胞、組織もしくは臓器を再生する方法、または、必要とする対象における細胞、組織、臓器の損失、損傷もしくは障害を処置する方法であって、
ａ）少なくとも１種類の５−ヒドロキシトリプタミン１Ｂ受容体（５−ＨＴ１  ＢＲ）刺激剤を前記対象に投与する工程；および
ｂ）少なくとも１つの単離された生体材料または上記のような医療デバイスを、工程ａ）と同時に、個別にまたは逐次的に（すなわち、工程ａ）の前または後に）、前記対象にさらに投与する工程
を含んでなる方法に関する。
【０１２０】
好ましい態様によれば、工程ｂ）は、工程ａ）と逐次的に（すなわち、工程ａ）の前または後に）実施される。
【０１２１】
さらに、好ましい態様によれば、上記の方法は、工程ａ）の反復からなる工程ｃ）をさらに含んでなる。言い換えれば、工程ａ）は、工程ｂ）の後にさらに実施することができる。
【０１２２】
特定の態様では、前記対象は、片頭痛、頭痛および／または精神障害、例えば、鬱病、不安もしくは双極性障害に罹患していない、またはこれらに対する処置を受けていない。
【０１２３】
上記の方法において使用される好ましい単離された生体材料および／または医療デバイスは、上記の通りである。従って、上記の方法は、細胞療法、組織移植または臓器移植であり得る。最も好ましくは、前記方法において使用される生体材料は、上記のような、イン・ビボ生着能が増強された生体材料、または前記材料を含んでなる医療デバイスである。
【０１２４】
５−ヒドロキシトリプタミン１Ｂ受容体（５−ＨＴ１  ＢＲ）刺激剤
本発明の異なる側面および態様は、５−ヒドロキシトリプタミン１Ｂ受容体（５−ＨＴ１  ＢＲ）刺激剤の使用に頼る。
【０１２５】
この点に関して、「５−ヒドロキシトリプタミン受容体」、「５−ＨＴ受容体」、「５−ＨＴ  Ｒ」または「セロトニン受容体」とは、本明細書では、Ｇタンパク質シグナル伝達経路（すなわち、ＧＰＣＲ）の活性化を介して、および／またはリガンド依存性イオンチャネル（すなわち、ＬＧＩＣ）として作用する、ほぼ総ての動物の中枢神経系および末梢神経系で認められる一本鎖ポリペプチド７回膜貫通型受容体のスーパーファミリーを意味する。５−ヒドロキシトリプタミン受容体は、とりわけ、グルタミン酸、ＧＡＢＡ、ドーパミン、エピネフリン／ノルエピネフリンおよびアセチルコリンなどの多くの神経伝達物質、ならびにオキシトシン、プロラクチン、バソプレシン、コルチゾール、コルチコトロピンおよびサブスタンスＰなどの多くのホルモンの放出を調節するために、天然リガンドであるセロトニンによって活性化される。
【０１２６】
５−ヒドロキシトリプタミン受容体は、そのＧタンパク質共役に従って、７つのグループにさらに分類され、そのうち、５−ＨＴ１および２つのグループが本発明の文脈で特に関心が持たれる。
【０１２７】
「５−ＨＴ１受容体」グループは、５−ＨＴ１  Ａ、Ｂ、Ｄ、ＥおよびＦのサブタイプを含んでなり、これらはヒトにおいて４０〜６３％の構造的相同性を共有し、Ｇαｉ／ｏタンパク質と優先的に共役する。５−ＨＴ１受容体サブタイプの活性化は、一般に、カリウムチャネルの活性化を介して抑制性神経伝達を誘発し、その結果、細胞内のｃＡＭＰ産生が減少する。
【０１２８】
５−ＨＴ１受容体グループのうち、「５−ＨＴ１  Ｂ受容体」（「５−ヒドロキシトリプタミン１Ｂ受容体」、「５−ヒドロキシトリプタミン受容体１Ｂ」、「５−ＨＴ−１Ｂ」、「５−ＨＴ−１Ｄ−β」、「セロトニン１Ｄβ受容体」または「セロトニン受容体１Ｂ」）は、１９９２にＪｉｎらによって同定および特徴付けされている。ヒトにおいては、６ｑ１３に位置する６番染色体に局在するＨＴＢ１Ｒ遺伝子（ＮＣＢＩ  ＲｅｆＳｅｑアクセッション番号およびバージョン番号ＮＭ＿０００８６３．１およびＧｌ：４５０４５３２；対応するコードタンパク質：ＮＣＢＩ  ＲｅｆＳｅｑアクセッション番号およびバージョン番号ＮＰ＿０００８５４．１およびＧｌ：４５０４５３３）によってコードされている。この受容体の配列は、ヒト、チンパンジー、アカゲザル、サル、イヌ、雌ウシ、マウス、ラット、ニワトリ、ゼブラフィッシュ、Ｃ．エレガンスおよびカエルにおいて高度に保存されており、現在までに１３５種の生物が、ヒト遺伝子ＨＴＲ１Ｂとの相同分子種を有することが知られている。
【０１２９】
「５−ヒドロキシトリプタミン１Ｂ受容体（５−ＨＴ１  ＢＲ）刺激剤」または「５−ＨＴ１  ＢＲ刺激剤」とは、本明細書では、５−ヒドロキシトリプタミン１Ｂ受容体の活性を直接的または間接的のいずれかで刺激できる、または言い換えれば、前記受容体の天然リガンド（すなわち、セロトニン）によって通常発揮される効果を模倣もしくは増強できる活性剤を意味する。直接的な刺激は、前記受容体への薬剤の結合を必要とするが、間接的な刺激は、前記受容体への前記薬剤の結合は関与しない（すなわち、別の作用機序を介して受容体に作用する）。候補薬剤が前記受容体を活性化する能力は、当技術分野で周知の方法、例えば、細胞内の５−ＨＴ１  ＢＲを過剰発現し、組換え細胞を前記候補薬剤と接触させる前後に細胞内のｃＡＭＰの産生を測定することによって、評価することができる。５−ＨＴ１  ＢＲの活性を測定するその他の方法も当技術分野で記載されており、それには、とりわけ、電流測定検出器を用いた電気化学検出器に連結した逆相高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ−ＥＤ）が含まれる。本発明の文脈では、前記薬剤は、５−ヒドロキシトリプタミン１Ｂ受容体に対して選択的であってもよいし、または５−ヒドロキシトリプタミン１Ｂ受容体だけでなく、他の５−ＨＴ受容体などのその他の受容体に対しても作用してもよい。
【０１３０】
本明細書に記載の本発明の異なる側面および態様によれば、本発明で使用される薬剤は、前記５−ＨＴ１  ＢＲに直接的または間接的のいずれかで作用することができる。
【０１３１】
好ましい態様によれば、本発明で使用される５−ＨＴ１  ＢＲ刺激剤は、抗鬱剤および抗片頭痛薬、その薬学的に許容可能な誘導体、類似体、異性体、代謝物、塩、溶媒和物、包接体、多形体、および共結晶、ならびにそれらの組合せからなる群から選択される。
【０１３２】
「誘導体」とは、本明細書では、対象化合物（すなわち、５−ＨＴ１  ＢＲ刺激剤）に直接由来し、前記化合物と同一ではないが構造的に類似しており、同じ生物活性および／または物理化学的特性を保持する化合物を意味する。
【０１３３】
「類似体」または「機能的類似体」とは、本明細書では、同配体などの、対象化合物に直接由来しておらず、そのため構造的には異なるが、同じ生物活性および／または物理化学的特性を示す化合物を意味する。
【０１３４】
本発明に係る５−ＨＴ１  ＢＲ刺激剤の「誘導体」および「類似体」は、本明細書では、さらに後述するように、上記で定義される５−ＨＴ１  ＢＲ刺激活性を保持するが、血液脳関門を通過しない化合物を包含する。
【０１３５】
「異性体」とは、本明細書では、対象化合物と同じ化学式を有するが、化学構造は異なる化合物を意味する。この用語は、構造異性体および立体異性体を包含する。本発明の異性体が立体異性体の場合は、個々の立体異性体（鏡像異性体およびジアステレオ異性体）ならびにそれらの混合物が本発明の範囲内に含まれる。本発明に係る化合物の一部は、互変異性型（構造異性体の一種）で存在してもよく、これらも本発明の範囲内に含まれる。
【０１３６】
「代謝物」とは、本明細書で使用する場合、中間体および／または代謝産物であるいずれの化合物も意味する。化合物に由来する代謝物は通常、それが投与される対象において対象化合物を分解および排出する自然の生化学的過程の一部として形成される。本発明に係る抗鬱剤の代謝物の例は、以下でさらに提示する。
【０１３７】
用語「薬学的に許容可能な塩」または「塩」は、本明細書で使用する場合、本発明の文脈において適当な様式で使用する場合、特に、哺乳類で使用する場合に、生理学上忍容される（すなわち、非毒性の）塩を意味する。薬学的に許容可能な塩としては、薬学的に許容可能な無機酸および有機酸および塩基から誘導されるものが含まれる。本発明に係る好適な酸の例としては、塩酸、臭化水素酸、硫酸、硝酸、過塩素酸、フマル酸、マレイン酸、リン酸、グリコール酸、乳酸、サリチル酸、コハク酸、トルエン−ｐ−硫酸、酒石酸、酢酸、クエン酸、メタンスルホン酸、ギ酸、安息香酸、マロン酸、ナフタレン−２−硫酸、ベンゼンスルホン酸、グルコン酸、グルタミン酸、ビス−メチレンサリチル酸、エタンジスルホン酸、プロピオン酸、ｐ−アミノ−安息香酸、リンゴ酸、マンデル酸、桂皮酸、シトラコン酸、アスパラギン酸、ステアリン酸、パルミチン酸、イタコン酸およびスルファミン酸、ならびにテオフィリン酢酸および８−ハロテオフィリン、例えば、８−ブロモテオフィリンが含まれる。それら自体薬学的に許容可能でないシュウ酸などの他の酸も、本化合物およびそれらの薬学的に許容可能な酸付加塩を得る上で中間体として有用な塩の製造において使用可能である。適当な塩基から誘導される塩としては、アルカリ金属（例えば、ナトリウム）、アルカリ土類金属（例えば、マグネシウム）、アンモニウムおよびＮ−（Ｃ１−Ｃ４アルキル）４＋塩が含まれる。
【０１３８】
本発明に係る用語「溶媒和物」は、当該化合物が非共有結合的相互作用を介して別の分子（通常には極性溶媒）に結合している、本発明に従ういずれの形態の活性剤（すなわち、５−ＨＴ１  ＢＲ刺激剤）も意味すると理解されるべきであり、特に、水和物およびメタノレートなどのアルコレートを含む。溶媒和の方法は当技術分野で周知である。
【０１３９】
「包接体」とは、本明細書では、第２のタイプの対象分子／化合物を捕捉または含有し、かつ、対象分子／化合物の水中での安定性および溶解度を高めるために使用できる格子またはケージからなる化学物質を意味する。包接体は一般にポリマーである。
【０１４０】
用語「多形体」は、本明細書では、対象化合物の異なる結晶形を意味し、この場合、分子は異なる配置および／または異なる分子立体配座を有する。多形体は、対象分子の結晶性液体形態または結晶性固体形態を含む。水和物および包接体は多形体であり得る。
【０１４１】
「共結晶」とは、本明細書では、原子、イオンまたは分子であり得る少なくとも２つの成分から構成される結晶構造を意味する。溶媒和物および包接体は、ある条件では共結晶であり得る。
【０１４２】
本発明の文脈では、上記に定義される薬学的に許容可能な誘導体、類似体、異性体、代謝物、塩、溶媒和物、包接体、多形体、および共結晶は活性があり、すなわち、それらは５−ＨＴ１  ＢＲ刺激活性を示す。前記活性は上記のように評価することができる。
【０１４３】
本明細書に記載の５−ＨＴ１  ＢＲ刺激剤、またはそれらの誘導体、類似体、異性体、代謝物、塩、溶媒和物、包接体、多形体、および共結晶は好ましくは薬学的に許容可能なまたは実質的に純粋な形態であることがさらに理解されるべきである。薬学的に許容可能な形態とは、とりわけ、薬学的許容可能な純度を有すること、すなわち、希釈剤および担体などの通常の製薬添加剤、ならびに通常の用量レベルで毒性があると考えられるいずれの材料も含まないことを意味する。本発明の文脈では、純度レベルは好ましくは、９８％ｗを超え、より好ましくは９９％を超え、いっそうより好ましくは９９．９％を超える。好ましい態様では、前記純度レベルは９９．９％である。
【０１４４】
上述のように、本発明に係る５−ＨＴ１  ＢＲ刺激剤は、トリプタンまたはエルゴタミンなどの抗片頭痛薬の中から選択することができる。トリプタンは、５ＨＴ１  ＢＲおよび５ＨＴ１  ＤＲに対するそれらのアゴニスト効果のために片頭痛および群発性頭痛の処置に使用されるトリプタミン系薬物として当技術分野で周知である。本発明に係るトリプタンの例としては、限定されるものではないが、スマトリプタン、リザトリプタン、ゾルミトリプタン、エレトリプタン、アルモトリプタン、フロバトリプタン、ナラトリプタン、アビトリプタン、およびドニトリプタンが含まれる。前記化合物の塩の非限定例は、塩酸ドニトリプタン、臭化水素酸エレトリプタン、および安息香酸リザトリプタンである。
【０１４５】
【化１】
2018534325.tif 000002
2018534325.tif 000003
2018534325.tif 000004
【０１４６】
本発明に係る特に好ましいトリプタンは、スマトリプタン、リザトリプタン、ゾルミトリプタン、エレトリプタン、アルモトリプタン、およびフロバトリプタンからなる群から選択される。
【０１４７】
本発明に係る５−ＨＴ１  ＢＲ刺激剤は、あるいは抗鬱剤の中から選択することができる。
【０１４８】
「抗鬱剤」とは、本明細書では、鬱病（憂鬱症を含む）および／または気分変調などの気分障害を処置することができる活性剤を意味する。本発明に係る抗鬱剤としては、限定されるものではないが、セロトニン再取り込み阻害剤（ＳＲＩ）；三環系抗鬱剤（ＴＣＡ）；モノアミンオキシダーゼ阻害剤（ＭＡＯ）；ノルアドレナリン作動性・特異的セロトニン作動性抗鬱剤（ＮａＳＳＡ）；非定型抗鬱剤または抗鬱剤増強剤が含まれる。
【０１４９】
セロトニン再取り込み阻害剤（ＳＲＩ）は、一般に、シナプス前終末へのセロトニン神経伝達物質の再取り込みを阻害し、それにより、セロトニン細胞外レベルおよび従ってセロトニン作動性伝達を増大させることにより作用する化合物種を呼称する。このような化合物は、神経伝達物質セロトニンに選択的または非選択的に作用し得る。ＳＲＩはまた、実際に、他のモノアミン再取り込み系、特に、ノルエピネフリンおよびドーパミンの輸送体に対しても様々な程度の選択性を示し得る。ＳＲＩとしては一般に、選択的セロトニン再取り込み阻害剤（ＳＳＲＩ）、セロトニンおよびノルエピネフリン再取り込み阻害剤（ＳＮＲＩ）およびセロトニン−ノルエピネフリン−ドーパミン再取り込み阻害剤（ＳＮＤＲＩ）が含まれる。
【０１５０】
選択的セロトニン再取り込み阻害剤（ＳＳＲＩ）の例としては、限定されるものではないが、フルオキセチン、シタロプラム、エスシタロプラム、セルトラリン、ノルセルトラリン、パロキセチン、フルボキサミン、フェモキセチン、インダルピン、アラプロクラート、セリクラミン、イフォキセチン、ジメリジン、ダポキセチン、およびエトペリドン、好ましくは、フルオキセチン、シタロプラム、エスシタロプラム、セルトラリン、ノルセルトラリン、パロキセチン、フルボキサミン、フェモキセチン、インダルピン、アラプロクラート、セリクラミン、イフォキセチン、ジメリジン、およびダポキセチンが含まれる。
【０１５１】
【化２】
2018534325.tif 000005
【０１５２】
活性ＳＳＲＩ代謝物の例としては、限定されるものではないが、デスメチルシタロプラム、ジデスメチルシタロプラム、およびセプロキセチン（すなわち、（Ｓ）−ノルフルオキセチン）が含まれる。
【０１５３】
セロトニンおよびノルエピネフリン再取り込み阻害剤（ＳＮＲＩ）の例としては、限定されるものではないが、デュロキセチン、ベンラファキシン、デスベンラファキシン、ミルナシプラン、レボミルナシプラン、およびシブトラミンが含まれる。
【０１５４】
セロトニン−ノルエピネフリン−ドーパミン再取り込み阻害剤（ＳＮＤＲＩ）（三重再取り込み阻害剤またはＴＲＩとしても知られる）の例としては、限定されるものではないが、ビシファジン  ブラソフェンシン、テソフェンシンおよびノミフェンシン、好ましくは、ビシファジンが含まれる。
【０１５５】
本発明に係る三環系抗鬱剤（ＴＣＡ）の例としては、限定されるものではないが、クロミプラミン、アモキサピン、ノルトリプチリン、マプロチリン、トリミプラミン、イミプラミン、デシプラミンおよびプロトリプチリンが含まれる。
【０１５６】
本発明に係るモノアミンオキシダーゼ阻害剤（ＭＡＯ）の例としては、限定されるものではないが、イプロニアジド、フェネルジン、トラニルシプロミン、モクロベミド、セレギリンおよびラサギリンが含まれる。
【０１５７】
好ましくはシナプス前α−２アドレナリン受容体を遮断することにより作用するノルアドレナリン作動性・特異的セロトニン作動性抗鬱剤（ＮａＳＳＡ）の例としては、とりわけ、ミルタザピン、ミアンセリン、アプタザピン、エスミルタザピン、セチプチリンおよびＳ３２２１２（Ｎ−［４−メトキシ−３−（４−メチルピペラジン−１−イル）フェニル］−１，２−ジヒドロ−３Ｈ−ベンゾ［ｅ］インドール−３−カルボキサミドとしても知られる）が含まれる。
【０１５８】
非定型抗鬱剤（文字通り、それらは前述の抗鬱剤種のいずれにも属さないと定義される）または抗鬱剤増強剤の例としては、限定されるものではないが、ボルチオキセチンなどのビスアリールスルファニルアミン、ならびにチアネプチン、アゴメラチン、ネファゾドン、トラゾドン、ブスピロン、タンドスピロン、およびケタミン、好ましくは、ボルチオキセチン、チアネプチン、アゴメラチン、ネファゾドン、トラゾドン、ブスピロン、タンドスピロン、およびケタミンが含まれる。
【０１５９】
ビスアリールスルファニルアミンは、引用することにより本明細書の一部とされる特許出願ＷＯ２００３／０２９２３２に開示されており、本発明に係る５−ＨＴ１  ＢＲ刺激剤の範囲内にある。前記化合物は、以下の一般式（Ａ）：
【０１６０】
【化３】
2018534325.tif 000006
［式中、
ｍは、１または２であり；
ｐは、０、１、２、３、４、５、６、７または８であり；
ｑは、０、１、２、３または４であり；
ｓは、１または２であり；
各Ｒ１’は独立にＣ１−６−アルキルにより表される基から選択されるか、または同じ炭素原子に結合された２つのＲ１’は３〜６員スピロ結合シクロアルキルを形成してもよく；
各Ｒ２’は独立に、ハロゲン、シアノ、ニトロ、Ｃ１−６−アルク（エン／イン）イル、Ｃ１−６−アルク（エン／イン）イルオキシ、Ｃ１−６−アルク（エン／イン）イルスルファニル、ヒドロキシ、ヒドロキシ−Ｃ１−６−アルク（エン／イン）イル、ハロ−Ｃ１−６−アルク（エン／イン）イル、ハロ−Ｃ１−６−アルク（エン／イン）イルオキシ、Ｃ３−８−シクロアルク（エン）イル、Ｃ３−８−シクロアルク（エン）イル−Ｃ１−６−アルク（エン／イン）イル、アシル、Ｃ１−６−アルク（エン／イン）イルオキシカルボニル、Ｃ１−６−アルク（エン／イン）イルスルホニル、または−ＮＲｘＲｙ；−ＮＲｘＣＯ−Ｃ１−６−アルク（エン／イン）イルにより表される基から選択され；
各Ｒ３’は独立に、ハロゲン、シアノ、ニトロ、Ｃ１−６−アルク（エン／イン）イル、Ｃ１−６−アルク（エン／イン）イルオキシ、Ｃ１−６−アルク（エン／イン）イルスルファニル、ヒドロキシ、ヒドロキシ−Ｃ１−６−アルク（エン／イン）イル、ハロ−Ｃ１−６−アルク（エン／イン）イル、ハロ−Ｃ１−６−アルク（エン／イン）イルオキシ、Ｃ３−８−シクロアルク（エン）イル、Ｃ３−８−シクロアルク（エン）イル−Ｃ１−６−アルク（エン／イン）イル、Ｃ１−６−アルク（エン／イン）イルスルホニル、アリール、Ｃ１−６−アルク（エン／イン）イルオキシカルボニル、アシル、−ＮＲｘＣＯ−Ｃ１−６−アルク（エン／イン）イル、ＣＯＮＲｘＲｙまたはＮＲｘＲｙにより表される基から選択されるか；
または２つの隣接するＲ３’置換基は一緒に、
【０１６１】
【化４】
2018534325.tif 000007
からなる群から選択されるフェニル環と縮合した複素環を形成し、
ここで、Ｗは、ＯまたはＳであり、かつ、ＲａおよびＲｂは、水素またはＣ１−６−アルキルであるか；または２つの隣接するＲ３’置換基は一緒に、１、２もしくは３個のヘテロ原子を含有する縮合複素芳香族系を形成し、
各ＲｘおよびＲｙは独立に、水素、Ｃ１−６−アルク（エン／イン）イル、Ｃ３−８−シクロアルク（エン）イル、Ｃ３−８−シクロアルク（エン）イル−Ｃ１−６−アルク（エン／イン）イル、もしくはアリールにより表される基から選択され；またはＲｘおよびＲｙはそれらが結合されている窒素と一緒に、場合により１個のさらなるヘテロ原子を含む３〜７員環を形成する］
に従って記載することができ、またはその薬学的に許容可能な塩である。
【０１６２】
一般式（Ａ）の化合物の合成は、ＷＯ２００３／０２９２３２に十分に記載され、従って、本明細書で詳説する必要はない。
【０１６３】
一般式（Ａ）の好ましい態様は、ｐが０であるものである。
【０１６４】
一般式（Ａ）の好ましい態様は、ｍが１または２であるものである。
【０１６５】
一般式（Ａ）の好ましい態様は、Ｒ２がトリフルオロメチル、またはＣ１−６−アルキルであるものである。
【０１６６】
一般式（Ａ）の好ましい態様は、Ｒ３がハロゲン、Ｃ１−６−アルコキシ、Ｃ１−６−スルファニル、Ｃ１−６−アルキルヒドロキシおよびトリフルオロメチルからなる群から選択されるものである。
【０１６７】
一般式（Ａ）の好ましい態様は、ｍ＝１、ｐ＝０、ｑ＝０、Ｒ３がメチルであり、かつｓ＝２であるものである。
【０１６８】
一般式（Ａ）の特に好ましい態様は、式（Ａ）の化合物が下記のうちのいずれかであるものである：
１−［２−（２−トリフルオロメチルフェニルスルファニル）フェニル］ピペラジン、
１−［２−（４−ブロモフェニルスルファニル）フェニル］ピペラジン、
１−｛２−［４−（メチルスルファニル）フェニルスルファニル］フェニル｝ピペラジン、
１−［２−（４−ヒドロキシフェニルスルファニル］フェニル｝ピペラジン、
ボルチオキセチンとしても知られる１−［２−（２，４−ジメチルフェニルスルファニル）フェニル］ピペラジン、
【０１６９】
【化５】
2018534325.tif 000008
１−［２−（３，５−ジメチルフェニルスルファニル）フェニル］ピペラジン、
１−［２−（２，６−ジメチルフェニルスルファニル）フェニル］ピペラジン、
１−［２−（２，５−ジメチルフェニルスルファニル）フェニル］ピペラジン、
１−［２−（２−トリフルオロメチルフェニルスルファニル）フェニル］［１，４］ジアゼパン、
１−［２−（３−メチルフェニルスルファニル）フェニル］−［１，４］−ジアゼパン、
２−（４−メチルフェニルスルファニル）フェニル−１−ピペラジン、
１−［２−（４−クロロフェニルスルファニル）フェニル］−ピペラジン、
１−［２−（４−メトキシフェニルスルファニル）−４−クロロフェニル］ピペラジン、
１−［２−（４−メトキシフェニルスルファニル）−４−メチルフェニル］ピペラジン、
１−［２−（４−メトキシフェニルスルファニル）−５−メチルフェニル］ピペラジン、
１−［２−（４−フルオロフェニルスルファニル）−５−メチルフェニル］ピペラジン、
１−［２−（４−メトキシフェニルスルファニル）−５−トリフルオロメチルフェニル］ピペラジン、
１−［２−（４−クロロフェニルスルファニル）フェニル］−３−メチルピペラジン、
１−［２−（４−クロロフェニルスルファニル）フェニル］−３，５−ジメチルピペラジン、
またはそれらの薬学的に許容可能な塩。
【０１７０】
最も好ましい態様は、式（Ａ）の化合物が１−［２−（２，４−ジメチルフェニルスルファニル）フェニル］ピペラジン（すなわち、ボルチオキセチン）であるものである。
【０１７１】
「ハロゲン」は、本明細書では、フルオロ（Ｆ）、クロロ（ＣＩ）、ブロモ（Ｂｒ）またはヨード（Ｉ）を意味する。
【０１７２】
「アルキル」、「アルケニル」、「アルキニル」、および「アリール」は、さらに以下に定義される。
【０１７３】
Ｃ１−６−アルク（エン／イン）イルという表現は、Ｃ１−６−アルキル、Ｃ２−６−アルケニルまたはＣ２−６−アルキニル基を意味する。
【０１７４】
Ｃ３−８−シクロアルク（エン）イルという表現は、Ｃ３−８−シクロアルキル−またはシクロアルケニル基を意味する。
【０１７５】
用語Ｃ１−６アルキルは、１〜６個の炭素原子を有する分岐型または非分岐型アルキル基を意味し、限定されるものではないが、メチル、エチル、１−プロピル、２−プロピル、１−ブチル、２−ブチル、２−メチル−２−プロピルおよび２−メチル−１−プロピルを含む。
【０１７６】
同様に、Ｃ２−６アルケニルおよびＣ２−６アルキニルはそれぞれ、２〜６個の炭素原子を有し、それぞれ１個の二重結合および１個の三重結合を含むそのような基を呼称し、限定されるものではないが、エテニル、プロペニル、ブテニル、エチニル、プロピニルおよびブチニルを含む。
【０１７７】
用語Ｃ３−８シクロアルキルは、３〜８個のＣ原子を有する単環式または二環式炭素環を呼称し、限定されるものではないが、シクロプロピル、シクロペンチル、シクロヘキシルなどを含む。
【０１７８】
用語Ｃ３−８シクロアルケニルは、３〜８個のＣ原子を有し、１個の二重結合を含む、単環式または二環式炭素環を呼称する。
【０１７９】
用語Ｃ３−８−シクロアルク（エン）イル−Ｃ１−６−アルク（エン／イン）イル、Ｃ３−８−シクロアルク（エン）イルおよびＣ１−６−アルク（エン／イン）イルは上記で定義される通りである。
【０１８０】
用語Ｃ１−６−アルク（エン／イン）イルオキシ、Ｃ１−６アルク（エン／イン）イルスルファニル、ヒドロキシ−Ｃ１−６−アルク（エン／イン）イル、ハロ−Ｃ１−６−アルク（エン／イン）イル、ハロ−Ｃ１−６−アルク（エン／イン）イルオキシ、Ｃ１−６−アルク（エン／イン）イルスルホニルなどは、Ｃ１−６−アルク（エン／イン）イルが上記で定義される通りであるそのような基を呼称する。
【０１８１】
本明細書で使用する場合、用語Ｃ１−６−アルク（エン／イン）イルオキシカルボニルは、式Ｃ１−６−アルク（エン／イン）イル−Ｏ−ＣＯ−の基を意味し、ここで、Ｃ１−６−アルク（エン／イン）イルは上記で定義される通りである。
【０１８２】
本明細書で使用する場合、用語アシルは、ホルミル、Ｃ１−６−アルク（エン／イン）イルカルボニル、アリールカルボニル、アリール−Ｃ１−６−アルク（エン／イン）イルカルボニル、Ｃ３−８−シクロアルク（エン）イルカルボニルまたはＣ３−８−シクロアルク（エン）イル−Ｃ１−６−アルク（エン／イン）イル−カルボニル基を意味する。
【０１８３】
場合により１個のさらなるヘテロ原子を含有する３〜７員環という用語は、本明細書で使用する場合、１−モルホリニル、１−ピペリジニル、１−アゼピニル、１−ピペラジニル、１−ホモピペラジニル、１−イミダゾリル、１−ピロリルまたはピラゾリルなどの環系を意味し、これらは総てＣ１−６−アルキルでさらに置換されてもよい。
【０１８４】
２つの隣接するＲ３’置換基により形成され、かつ、親環と縮合した複素環は一緒に、３Ｈ−１，２，３−オキサチアゾール、１，３，２−オキサチアゾール、１，３，２−ジオキサゾール、３Ｈ−１，２，３−ジチアゾール(dithiazote)、１，３，２−ジチアゾール、１，２，３−オキサジアゾール、１，２，３−チアジアゾール、１Ｈ−１，２，３−トリアゾール、イソキサゾール、オキサゾール、イソチアゾール、チアゾール、１Ｈ−イミダゾール、１Ｈ−ピラゾール、１Ｈ−ピロール、フランまたはチオフェンなどの５員単環式環、および１，２，３−オキサチアジン、１，２，４−オキサチアジン、１，２，５−オキサチアジン、１，４，２−オキサチアジン、１，４，３−オキサチアジン、１，２，３−ジオキサジン、１，２，４−ジオキサジン、４Ｈ−１，３，２−ジオキサジン、１，４，２−ジオキサジン、２Ｈ−１，５，２−ジオキサジン、１，２，３−ジチアジン、１，２，４−ジチアジン、４Ｈ−１，３，２−ジチアジン、１，４，２−ジチアジン、２Ｈ−１，５，２−ジチアジン、２Ｈ−１，２，３−オキサジアジン、２Ｈ−１，２，４−オキサジアジン、２Ｈ−１，２，５−オキサジアジン、２Ｈ−１，２，６−オキサジアジン、２Ｈ−１，３，４−オキサジアジン、２Ｈ−１，２，３−チアジアジン、２Ｈ−１，２，４−チアジアジン、２Ｈ−１，２，５−チアジアジン、２Ｈ−１，２，６−チアジアジン、２Ｈ−１，３，４−チアジアジン、１，２，３−トリアジン、１，２，４−トリアジン、２Ｈ−１，２−オキサジン、２Ｈ−１，３−オキサジン、２Ｈ−１，４−オキサジン、２Ｈ−１，２−チアジン、２Ｈ−１，３−チアジン、２Ｈ−１，４−チアジン、ピラジン、ピリダジン、ピリミジン、４Ｈ−１，３−オキサチイン、１，４−オキサチイン、４Ｈ−１，３−ジオキシン、１，４−ジオキシン、４Ｈ−１，３−ジチイン、１，４−ジチイン、ピリジン、２Ｈ−ピランまたは２Ｈ−チインなどの６員単環式環といった環を形成してよい。
【０１８５】
さらに、一般式（Ａ）の化合物は、非溶媒和型ならびに水、およびエタノールなどの薬学的に許容可能な溶媒との溶媒和型で存在してよい。
【０１８６】
一般式（Ａ）の化合物にはキラル中心を含むものがあり、このような化合物は、異性体（すなわち、鏡像異性体）の形態で存在する。このような異性体およびラセミ混合物を含むそれらのいずれの混合物も本発明の範囲内にある。
【０１８７】
本発明に係る特に好ましい抗鬱剤は、ボルチオキセチンなどの上記のようなビスアリールスルファニルアミン、ならびにフルオキセチン、シタロプラム、エスシタロプラム、セルトラリン、パロキセチン、フルボキサミン、フェモキセチン、インダルピン、アラプロクラート、ジメリジン、デュロキセチン、ベンラファキシン、デスベンラファキシン、ミルナシプラン、レボミルナシプラン、シブトラミン、ビシファジン、クロミプラミン、アモキサピン、マプロチリン、イミプラミン、デシプラミン、モクロベミド、セレギリン、ミルタザピン、ミアンセリン、チアネプチン、アゴメラチン、トラゾドン、ブスピロン、タンドスピロン、およびケタミンからなる群から選択される。より好ましくは、本発明に係る抗鬱剤は、ボルチオキセチンなどの上記のようなビスアリールスルファニルアミン、およびフルオキセチンからなる群から選択される。
【０１８８】
本発明に係る他の好適な５−ＨＴ１  ＢＲ刺激剤は、塩酸アンピルトリン、ＣＧＳ−１２０６６Ａ、ＣＧＳ  １２０６６Ｂ二マレイン酸塩、オキシメタゾリン、５−カルボキサミドトリプタミン、ＣＰ−９３１２９およびその塩、例えば、ＣＰ−９３１２９二塩酸塩、ＣＰ−９４２５３およびその塩、例えば、ＣＰ−９４２５３塩酸塩、ＣＰ−１２２，２８８、ＣＰ−１３５，８０７、ＲＵ−２４９６９およびそれらの塩、例えば、ＲＵ−２４９６９ヘミコハク酸酸、ジプラシドン、アセナピン、シュウ酸５−ノニルオキシトリプタミン、ピンドロールおよび／または（Ｓ）−（−）−ピンドロール、好ましくは、塩酸アンピルトリン、ＣＧＳ−１２０６６Ａ、ＣＧＳ  １２０６６Ｂ二マレイン酸塩、オキシメタゾリン、５−カルボキサミドトリプタミン、ＣＰ−９３１２９、ＣＰ−９３１２９二塩酸塩、ＣＰ−９４２５３、ＣＰ−１２２，２８８、ＣＰ−１３５，８０７、ＲＵ−２４９６９、ジプラシドン、および／またはアセナピンであり得る。
【０１８９】
好ましい態様によれば、本発明で使用される５−ＨＴ１  ＢＲ刺激剤は、非定型抗鬱剤およびＳＲＩ、特に、ＳＳＲＩからなる群から選択される抗鬱剤である。
【０１９０】
より好ましくは、本発明の５−ＨＴ１  ＢＲ刺激剤は、非定型抗鬱剤のボルチオキセチンまたはＳＳＲＩのフルオキセチンである。最も好ましくは、本発明の５−ＨＴ１  ＢＲ刺激剤はボルチオキセチンである。
【０１９１】
しかし、本発明の５−ヒドロキシトリプタミン１Ｂ受容体（５−ＨＴ１  ＢＲ）刺激剤が望ましくないＣＮＳ関連有害作用を示す場合、末梢のセロトニン系に対する前記薬剤の効果を制限することが特に都合がよい。抗鬱剤は、そのような副作用を示すことで特によく知られている。副作用は、前記薬剤の構造を化学修飾すること、および特に電荷化学部分をグラフトして血液脳関門の通過を防ぐことによって、防止することができる。
【０１９２】
従って、好ましい態様では、本発明で使用される５−ＨＴ１  ＢＲ刺激剤は、少なくとも１つの荷電した化学部分、好ましくは正に荷電した化学部分を含んでなるように修飾される。特に、正電荷は、広範なｐＨ、特に、生理的ｐＨで保持され得る。
【０１９３】
他の用語において、本発明に係るこのように修飾された５−ＨＴ１  ＢＲ刺激剤は、血液脳関門を通過することができない。よって、このように修飾された抗鬱剤および抗片頭痛薬はそれぞれ、無効な抗鬱剤および無効な抗片頭痛薬である。
【０１９４】
このような化学修飾は、引用することにより本明細書の一部とされる特許出願ＷＯ２００７／１４８３４１に詳細に記載されており、血液脳関門の通過を防ぎながら、化合物の５−ＨＴ１  ＢＲ刺激活性を保持するために実施することができる。
【０１９５】
用語「荷電した化学部分」、「荷電した部分」、「荷電した化学基」または「荷電した基」は、本明細書で使用する場合、有機分子の一部を形成し、かつ正または負の静電荷を特徴とする原子または原子団を指す。
【０１９６】
よって、「正に荷電した化学部分」、「正に荷電した部分」、「正に荷電した化学基」または「正に荷電した基」とは、本明細書では、正の静電荷を特徴とする、上記で定義される荷電した化学部分を意味する。１以上の正に荷電した部分を含む化合物は、しばしば分子陽イオンと呼ばれる分子イオンである。原子の正に荷電した基は、少なくとも１つで、これらの原子中の陽子の数より少ない電子を有する。正に荷電した化学部分としては、限定されるものではないが、アンモニウムおよびスルホニウム基が含まれる。
【０１９７】
生理的ｐＨで電荷を保持する正に荷電した基は、５−ＨＴ１−ＢＲ刺激剤が活性である体内の生理的環境に典型的なｐＨ範囲で陽子交換相互作用に関与することができない基である。一般に、生理的ｐＨは約７．４であり、従って、生理的ｐＨで電荷を保持する正に荷電した基は、約５〜８のｐＨ範囲でイオン化した状態を維持する正に荷電した化学基を指す。ｐＨレベルが生理的ｐＨの点で非常に低い消化管においてさえ、本発明に係る正に荷電した化学部分は正に荷電した状態を維持し、よって、本発明に係る修飾された５−ＨＴ１−ＢＲ刺激剤は、消化管のｐＨレベルによる悪影響を受けないことに注目すべきである。
【０１９８】
さらに、さらに好ましい態様によれば、前記正に荷電した化学部分は、第四級アンモニウム基または第三級スルホニウム基である。
【０１９９】
「第四級アンモニウム」とは、本明細書では、４個の非水素置換基と結合しており、そのため正に荷電した分子（アミン）の一部を形成する窒素原子を意味する。用語「アミン」は、各Ｒ’およびＲ”が独立に水素、アルキル、シクロアルキル、ヘテロ脂環式、アリールまたはヘテロアリールである−ＮＲ’Ｒ”基を表す。
【０２００】
「第三級スルホニウム基」とは、本明細書では、３個の非水素置換基と結合しており、そのため正に荷電した分子（スルホニウム）の一部を形成する硫黄原子を意味する。用語「スルホニウム」は、Ｒ’およびＲ”がそれぞれ独立にアルキル、シクロアルキル、ヘテロ脂環式、アリールまたはヘテロアリールである−Ｓ＋Ｒ’Ｒ”を指す。
【０２０１】
本発明によれば、用語「アルキル基」は、直鎖型または分岐型飽和脂肪族基を指す。好ましくは、アルキル基は、１〜２０個の炭素原子、より好ましくは１〜１０個の炭素原子、いっそうより好ましくは１〜６個の間の炭素原子を有する。数的範囲、例えば「１〜１０」が本明細書で記載される場合は常に、基、この場合はアルキル基が、１個の炭素原子、２個の炭素原子、３個の炭素原子など、１０個以下の炭素原子を含有してもよいことを意味する。アルキル基の例としては、限定されるものではないが、メチル、エチル、プロピル、ブチル、ｔｅｒｔ−ブチルおよびイソプロピル基が含まれる。アルキル基は、さらに置換することができる。置換された場合、置換基は、例えば、アルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、ハロゲン化物、ヒドロキシ、アルコキシおよびヒドロキシアルキルであり得る。用語「アルキル」は、本明細書で使用する場合、飽和または不飽和炭化水素をさらに包含し、従って、この用語は、アルケニルおよびアルキニルをさらに包含する。
【０２０２】
用語「シクロアルキル」は、３〜８個の炭素原子を有する脂肪族単環式または二環式環を指し、限定されるものではないが、シクロプロピル、シクロペンチル、シクロヘキシル、などを含む。
【０２０３】
用語「アルケニル」は、少なくとも２個の炭素原子および少なくとも１つの炭素−炭素二重結合を有し、かつ、上記のように１以上の置換基で置換され得る、本明細書で定義されるような不飽和アルキルを表す。用語「アルキニル」は、少なくとも２個の炭素原子および少なくとも１つの炭素−炭素三重結合を有し、かつ、上記のように１以上の置換基で置換され得る、不飽和アルキルである。
【０２０４】
用語「アリール」は、完全共役π電子系を有する全炭素単環式または縮合環多環式（すなわち、隣接する炭素原子対を共有する環）基を表す。
【０２０５】
「アリールまたはヘテロアリール基」とは、本明細書では、好ましくは４〜１５個の間の炭素原子、好ましくは５〜１０個の間の炭素原子を含んでなる単環式または多環式芳香族基を意味する。アリール基の例としては、限定されるものではないが、フェニル、ナフチルなどが含まれる。本発明に係るアリール基は、上記のように、１以上の置換基でさらに置換されてもよい。ヘテロアリール基は一般に、窒素、酸素、および硫黄などの少なくとも１つのヘテロ原子（ヘテロ原子は炭素または水素ではない任意の原子）を含んでなる。ヘテロアリール基の例としては、限定されるものではないが、ピロール、フラン、チオフェン、イミダゾール、オキサゾール、チアゾール、ピラゾール、ピリジン、ピリミジン、キノリン、イソキノリンおよびプリンが含まれる。ヘテロアリール基は、上記のように、１以上の置換基でさらに置換されてもよく、代表的な例としては、チアジアゾール、ピリジン、ピロール、オキサゾール、インドール、プリンなどが挙げられる。
【０２０６】
より好ましい態様では、前記第四級アンモニウム基は式（Ｉ）
−（ＮＲ１Ｒ２Ｒ３）＋Ｚ−    （Ｉ）
を有し、式中、
Ｚは、ＮＯ３−、Ｈ２ＰＯ４２−、Ｂｒ−、ＨＳＯ４−、ＣＨ３ＳＯ３−、または酒石酸陰イオンなどの有機または無機陰イオンであり；かつ
Ｒ１、Ｒ２およびＲ３は、それぞれ独立にアルキル、アリールおよびシクロアルキルからなる群から選択される。
【０２０７】
好ましくは、Ｒ１、Ｒ２およびＲ３は、それぞれ１〜４個の炭素原子を有するアルキルであり、より好ましくは、Ｒ１、Ｒ２およびＲ３は、それぞれ正に荷電した基を生じるメチル、または第四級アンモニウム基−（ＮＭｅ３）＋である。
【０２０８】
別の好ましい態様では、前記第三級スルホニウム基は式（ＩＩ）
−（ＳＲ４Ｒ５）＋Ｚ−    （ＩＩ）
を有し、式中、
Ｚは、ＮＯ３−、Ｈ２ＰＯ４２−、Ｂｒ−、ＨＳＫＯ４−、ＣＨ３ＳＯ３−、または酒石酸陰イオンなどの有機または無機陰イオンであり；かつ
Ｒ４およびＲ５は、それぞれ独立にアルキル、アリールおよびシクロアルキルからなる群から選択される。
【０２０９】
好ましくは、Ｒ４およびＲ５は、それぞれ１〜４個の炭素原子を有するアルキルであり、より好ましくは、Ｒ４およびＲ５は、それぞれ正に荷電した基を生じるメチル、またはスルホニウム−（ＳＭｅ２）＋である。
【０２１０】
正に荷電した基は、５−ＨＴ１  ＢＲ刺激剤の一部を形成する既存の基から、５−ＨＴ１  ＢＲ刺激剤上に形成されることができ、すなわち、部分的に荷電した基もしくは無電荷の基を正に荷電した基に転じることによって、または陽子交換相互作用に関与できる既存の正に荷電した基を、そのような相互作用に関与できない基に転じることによって、不可逆的な正電荷、もしくは永久正電荷にすることで、５−ＨＴ１  ＢＲ刺激剤を修飾する。
【０２１１】
あるいは、１以上の炭素原子を正に荷電した基と置換することによって、例えば、水素原子または他の置換基を第四級アンモニウムまたは第三級スルホニウム基と置換することによって、正に荷電した基を５−ＨＴ１  ＢＲ刺激剤に付加することができる。
【０２１２】
本明細書に記載の化合物を誘導できる好ましい５−ＨＴ１  ＢＲ刺激剤の例としては、限定されるものではないが、ボルチオキセチンなどの上記のようなビスアリールスルファニルアミン、ならびにフルオキセチン、シタロプラム、アラプロクラート、ダポキセチン、フルボキサミン、パロキセチン、セルトラリン、ベンラファキシン、ジメリジン、エトペリドン、デスベンラファキシン、デュロキセチン、ミルナシプラン、ネファゾドン、ベンラファキシン、ブラソフェンシン、テソフェンシンおよびノミフェンシン、好ましくは、ボルチオキセチン、フルオキセチン、シタロプラム、アラプロクラート、ダポキセチン、フルボキサミン、パロキセチン、セルトラリン、ベンラファキシンおよびジメリジンが含まれる。実際に、これらの薬剤は総て、第四級アンモニウム、すなわち、上記で定義される正に荷電した基に容易に変換され得る少なくとも１つのアミン基をすでに含んでなる。特に、前記薬剤は、上記の式（Ｉ）の少なくとも１つの第四級アンモニウム基を含んでなるように修飾され得る。
【０２１３】
そのような第四級アンモニウム基を含んでなるシタロプラムの誘導体の例としては、ｎ−メチル−シタロプラム（ＮＭＣ）が挙げられ、その合成は、特許出願ＷＯ２００７／１２８３４１に詳説されている。
【０２１４】
式（Ａ）のビスアリールスルファニルアミンも、それぞれ第四級アンモニウム基および／または第三級スルホニウム基に容易に変換され得るアミン基だけでなく硫黄基も含んでなるため、本明細書において特に都合がよい。正に荷電した部分は、前記化合物のピペラジン基の炭素原子と結合することもできる。
【０２１５】
前記ビスアリールスルファニルアミンの特に好ましい誘導体は、以下の式（Ｂ）の化合物である。
【０２１６】
【化６】
2018534325.tif 000009
【０２１７】
式中、
Ｚは、ＮＯ３−、Ｈ２ＰＯ４２−、Ｂｒ−、ＨＳＯ４−、ＣＨ３ＳＯ３−、もしくは酒石酸陰イオンなどの、上記で定義される有機もしくは無機陰イオン、または有機もしくは無機陰イオンの混合物であり、その全体的な電荷は、式（Ｂ）の化合物が中性となるような電荷である；
Ｒ１’、Ｒ２’、Ｒ３’、ｍ、ｐ、ｑおよびｓは、上記で定義される通りであり、ここで、Ｒ３’は、場合により、上記で定義されるアンモニウム基またはスルホニウム基で置換されたＣ１−６−アルク（エン／イン）イルオキシ基であり得、好ましくは、Ｒ３’はコリンである；
ｔは、０、１、２、３、４、５、６、７または８、好ましくは０または１、より好ましくは０である（ただし、ｔ＋ｐ≦８）；
各Ｒ４’は、スルホニウム基またはアンモニウム基などの、上記で定義される通りの、同一または異なる、好ましくは正に荷電した、少なくとも１つの荷電した化学部分である。；
Ｘ’は、
−（ＮＲ５’Ｒ６’）＋−、ここで、
Ｒ５’およびＲ６’は、それぞれ独立に、本明細書で定義される水素、アルキル、アリールおよびシクロアルキル、好ましくは、水素、Ｃ１−６−アルキル、およびＣ３−８−シクロアルキルにより表される基から選択される；または
Ｒ５’Ｒ６’は、それらが結合されている窒素と一緒に、シクロヘテロアルキル、好ましくは３〜８員シクロヘテロアルキル、より好ましくは３〜６員シクロヘテロアルキルを形成する；
−ＮＨ−；
−ＮＲ７’−、ここで、Ｒ７’はＣ１−６−アルキルである；
−Ｎ＋（Ｏ−）Ｒ８’−、ここで、Ｒ８’はＣ１−６−アルキルである；
−ＮＣ（Ｏ）Ｒ９’−、ここで、Ｒ９’は、アミノ酸（前記アミノ酸は、ヒスチジン、アルギニンもしくはリシンなど、好ましくは正に荷電している）、またはアミノ酸誘導体（前記誘導体は、コリンもしくはカルニチンなど、好ましくは正に荷電している）、またはＣ１−６−アルキルホスホニウムである；
からなる群から選択される；
Ｙ’は、
−Ｓ−；
−（ＳＲ１０’）＋−、ここで、Ｒ１０’は、本明細書で定義される水素、アルキル、アリールおよびシクロアルキルにより表される基から選択され、好ましくはＣ１−６−アルキルである；ならびに
−Ｓ＋（Ｏ）―−
からなる群から選択される。
【０２１８】
当業者は、陰イオンＺは、分子上の正電荷を平衡化させるために存在していることを容易に理解するであろう。従って、式（Ｂ）の化合物は、分子の正電荷を中和するのに必要なだけの陰イオンＺを含んでなる。熟練の実務者であれば、ｐ＞０およびｔ＞０の場合、Ｒ１’およびＲ４’は、異なる炭素であろうとも、複素環式環の炭素原子のいずれかに結合していることをさらに理解するであろう。
【０２１９】
好ましい態様では、Ｘ’、Ｙ’、Ｒ４’（ｔ＞０の場合）およびＲ３’（アンモニウム基またはスルホニウム基で置換されている場合）のうち１つのみが、正に荷電した化学部分である。
【０２２０】
Ｒ１’、Ｒ２’、Ｒ３’、ｍ、ｐ、ｑおよびｓに関する好ましい態様は、上記で定義される通りである。
【０２２１】
本発明の好ましい態様では、特に好ましくは、荷電した化学部分を含んでなるように、本明細書に記載の化合物が誘導体化される５−ＨＴ１  ＢＲ刺激剤は、上記で定義されるビスアリールスルファニルアミンなどの非定型抗鬱剤およびＳＲＩ、特にＳＳＲＩからなる群から選択される。
【０２２２】
より好ましくは、修飾される５−ＨＴ１  ＢＲ刺激剤は、非定型抗鬱剤のボルチオキセチンまたはＳＳＲＩのフルオキセチンである。最も好ましくは、修飾される５−ＨＴ１  ＢＲ刺激剤は、ボルチオキセチンである。
【０２２３】
例えば、ボルチオキセチンは、以下のように化学修飾され得る。
【０２２４】
【化７】
2018534325.tif 000010
【０２２５】
式中、Ｚ、ｔ、Ｒ４’、Ｘ’およびＹ’は、上記で定義される通りである。より好ましくは、ｔ＝０である。
【０２２６】
少なくとも１つの荷電した化学部分、好ましくは正に荷電した化学部分を含んでなるボルチオキセチンの特に好ましい塩、誘導体および／または類似体は、以下からなる群から選択される。
【０２２７】
【化８】
2018534325.tif 000011
【０２２８】
式中、ＨＺは、好ましくは、ＨＮＯ３、Ｈ３ＰＯ４、ＨＢｒ、Ｈ２ＳＯ４、ＣＨ３ＳＯ３Ｈ、または酒石酸（ボルチオキセチンの塩）である；
【０２２９】
【化９】
2018534325.tif 000012
【０２３０】
式中、ＡＡはアミノ酸である。
【０２３１】
【化１０】
2018534325.tif 000013
【０２３２】
好ましくは、
式中、ＡＡ＋は、ヒスチジン、アルギニン、またはリシンなどの正に荷電したアミノ酸である；
【０２３３】
【化１１】
2018534325.tif 000014
2018534325.tif 000015
2018534325.tif 000016
【０２３４】
好ましくは、少なくとも１つの荷電した化学部分、好ましくは正に荷電した化学部分を含んでなるボルチオキセチンの前記塩、誘導体および／または類似体は、
上記のようなボルチオキセチンの塩；
上記のような、ヒスチジン、アルギニンまたはリシンなどの正に荷電したアミノ酸（好ましくは、少なくとも１つ）に結合したボルチオキセチン；
ピロリジニウム−ボルチオキセチン；
ピペラジニウム−ボルチオキセチン；
ジメチルアンモニウム−ボルチオキセチン；
スルホニウム−ボルチオキセチン；
Ｎ−オキシド−ボルチオキセチン；
スルホキシド−ボルチオキセチン；
ホスホニウム−ボルチオキセチン；ならびに
テンポール−カルバメート−ボルチオキセチン
からなる群から選択される。
【０２３５】
より好ましくは、少なくとも１つの正に荷電した化学部分を含んでなるボルチオキセチンの前記塩、誘導体および／または類似体は、
上記のようなボルチオキセチンの塩；
上記のような、ヒスチジン、アルギニンまたはリシンなどの正に荷電したアミノ酸（好ましくは、少なくとも１つ）に結合したボルチオキセチン；
ピロリジニウム−ボルチオキセチン；
ピペラジニウム−ボルチオキセチン；
ジメチルアンモニウム−ボルチオキセチン；
スルホニウム−ボルチオキセチン；
Ｎ−オキシド−ボルチオキセチン；
スルホキシド−ボルチオキセチン；ならびに
ホスホニウム−ボルチオキセチン
からなる群から選択される。
【０２３６】
さらに、いっそうより好ましくは、少なくとも１つの正に荷電した化学部分を含んでなるボルチオキセチンの前記塩、誘導体および／または類似体は、
上記のようなボルチオキセチンの塩；
上記のような、ヒスチジン、アルギニンまたはリシンなどの正に荷電したアミノ酸（好ましくは、少なくとも１つの）に結合したボルチオキセチン；
ピロリジニウム−ボルチオキセチン；
ピペラジニウム−ボルチオキセチン；
ジメチルアンモニウム−ボルチオキセチン；
スルホニウム−ボルチオキセチン；ならびに
ホスホニウム−ボルチオキセチン
からなる群から選択される。
【０２３７】
さらに、いっそうより好ましくは、前記正に荷電したボルチオキセチンは、ヒスチジン−ボルチオキセチンおよびピロリジニウム−ボルチオキセチンからなる群から選択される。
【０２３８】
上記化合物は、当技術分野における従来の方法に従って調製することができる。そのような方法は、以下でさらに詳細に説明する。
【０２３９】
例えば、ピロリジニウム−ボルチオキセチンまたはピペラジニウム−ボルチオキセチンを合成するためには、当業者は、以下のように進めることができる。
【０２４０】
【化１２】
2018534325.tif 000017
【０２４１】
より詳しくは、４−アリールピペラジンに対するピロリジニウム（ｎ＝１）の形成に関しては、Ｋ２ＣＯ３、エタノール（ＥｔＯＨ）および１０時間の還流（引用することにより本明細書の一部とされるMokrosz et al., 1992）、またはＫ２ＣＯ３、アセトンおよび１５時間の還流（引用することにより本明細書の一部とされるＷＯ２００４／９９１４Ａ１参照）のいずれかを用いて反応を実施することができる。
【０２４２】
さらに、例えば、ジメチルアンモニウム−ボルチオキセチンを合成するためには、当業者は、以下のように進めることができる。
【０２４３】
【化１３】
2018534325.tif 000018
【０２４４】
より詳しくは、４−アリールピペラジンのジメチル化に関しては、１番目の工程がエシュバイラー・クラーク反応であり、２番目の工程がメチル化であるＲｏｍａｎｅｌｌｉら（２００１、引用することにより本明細書の一部とされる）を参照することができる。
【０２４５】
別の例示的な例として、ボルチオキセチンのアミノ酸誘導体、コリン−ボルチオキセチンおよびカルニチン−ボルチオキセチンを合成するために、当業者は、以下のように進めることができる。
【０２４６】
【化１４】
2018534325.tif 000019
【０２４７】
より詳しくは、カルニチンに対するアミドの形成に関しては、ピリジン、二塩化エチレン（ＥＤＣ）、ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）、およびエタノール（ＥｔＯＨ）を用いたアシルヒドラジン（引用することにより本明細書の一部とされるKuroda et al., 1996）、またはピリジン、二塩化エチレン（ＥＤＣ）、メタノール（ＭｅＯＨ）およびアセトニトリル（ＣＨ３ＣＮ）を用いた第一級アミン（引用することにより本明細書の一部とされるNakaya et al., 2001）のいずれかに対して反応を実施することができる。
【０２４８】
別の例示的な例として、ホスホニウム−ボルチオキセチンを合成するためには、当業者は、以下のように進めることができる。
【０２４９】
【化１５】
2018534325.tif 000020
【０２５０】
別の例示的な例として、Ｎ−オキシド−ボルチオキセチンを合成するためには、当業者は、以下のように進めることができる。
【０２５１】
【化１６】
2018534325.tif 000021
【０２５２】
より詳しくは、４−アリール−ピペラジンのＮ−酸化に関しては、メタ−クロロペルオキシ安息香酸（ｍ−ＣＰＢＡ）およびＣＨ２Ｃｌ２を用いて、２０〜４５℃で反応を実施することができる（引用することにより本明細書の一部とされるＵＳ２００８／１５３８１２Ａ１、ＷＯ２０１１／１６２５１５Ａ２またはＷＯ２００４／１０４００７Ａ１参照）。
【０２５３】
別の例示的な例として、テンポール−カルバメート−ボルチオキセチンを合成するためには、当業者は、以下のように進めることができる。
【０２５４】
【化１７】
2018534325.tif 000022
【０２５５】
別の例示的な例として、ベンジル−コリン−ボルチオキセチンを合成するためには、当業者は、以下のように進めることができる。
【０２５６】
【化１８】
2018534325.tif 000023
【０２５７】
より詳しくは、ベンジル位の臭素化に関しては、Ｎ−ブロモスクシンイミド、アゾビスイソブチロニトリル（ＡＩＢＮ）およびテトラクロロメタン（ＣＣｌ４）（引用することにより本明細書の一部とされるＵＳ２０１０／４１５９Ａ１参照）、またはＮ−ブロモスクシンイミド、メタ−クロロペルオキシ安息香酸（ｍ−ＣＰＢＡ）およびテトラクロロメタン（ＣＣｌ４）（引用することにより本明細書の一部とされるFarmaco, 1989, 44, p.683以降参照）のいずれかを用いて、反応を実施することができる。
【０２５８】
本発明は、実施例を含む以下の詳細な実験の説明に照らして、さらに理解される。しかし、熟練者は、この詳細な説明は限定的ではなく、本発明の範囲から逸脱することなく、種々の修正、置換、省略、および変更を行えることを認識するであろう。
【図面の簡単な説明】
【０２５９】
【図１】図１：フルオキセチンおよびボルチオキセチンは筋肉幹細胞の生着能を増大させる。（ａ）フルオキセチンの注射のスキーム。Ｒａｇ−／−γＣ−／−マウスに対して、フルオキセチンで６週間処置し、心臓毒で損傷させ、損傷後２４時間にＦＡＣＳ細胞選別後の衛星細胞を移植した。損傷後２８日にマウスを屠殺し、前脛骨筋を固定した。（ｂ〜ｃ）（ｂ）プラセボおよび（ｃ）フルオキセチンで処置したマウスにおけるラミニンおよびＰＬＡＰで免疫染色した前脛骨筋の横断面。（ｄ）プラセボおよびフルオキセチンで処置した動物における全線維中のＰＬＡＰ＋線維のパーセンテージを表したヒストグラム。（ｅ）ボルチオキセチンの注射のスキーム。Ｒａｇ−／−γＣ−／−マウスに対して、ボルチオキセチンで１２日間処置し、心臓毒で損傷させ、損傷後２４時間にＦＡＣＳ細胞選別後の衛星細胞を移植した。損傷後２８日にマウスを屠殺し、前脛骨筋を固定した。（ｆ〜ｇ）（ｆ）プラセボおよび（ｇ）ボルチオキセチンで処置したマウスにおけるラミニンおよびＰＬＡＰで免疫染色した前脛骨筋の横断面。（ｈ）プラセボおよびフルオキセチンで処置した動物における全線維中のＰＬＡＰ＋線維のパーセンテージを表したヒストグラム。平均±ＳＤで示す。＊ｐ＜０．０５。
【図２】図２：フルオキセチンおよびボルチオキセチンは造血幹細胞の生着能を増大させる。（ａ）フルオキセチンの注射のスキーム。Ｒａｇ−／−γＣ−／−マウスに対し、フルオキセチンで３週間処置し、９５ｃＧｙで照射した。照射後２時間に、マウスに対し、Ｔｇ：ＡｃｔｉｎＧＦＰ由来の新鮮骨髄を静脈内注射した。移植後５週に、Ｒａｇ−／−γＣ−／−骨髄をフラッシュし、血球計算により分析した。（ｂ）移植後５週のＲａｇ−／−γＣ−／−骨髄中のＧＦＰ＋細胞のパーセンテージ。（ｃ）移植後のＲａｇ−／−γＣ−／−骨髄の血球計算ドットプロット分析。（ｄ）ボルチオキセチンの注射のスキーム。Ｒａｇ−／−γＣ−／−マウスに対し、ボルチオキセチンで１２日間処置し、９５ｃＧｙで照射した。照射後２時間に、マウスに対し、Ｔｇ：ＡｃｔｉｎＧＦＰ由来の新鮮骨髄を静脈内注射した。移植後５週に、Ｒａｇ−／−γＣ−／−骨髄をフラッシュし、血球計算により分析した。（ｅ）移植後５週のＲａｇ−／−γＣ−／−骨髄中のＧＦＰ＋細胞のパーセンテージ。（ｆ）ボルチオキセチンの注射のスキーム。この条件においては、ボルチオキセチンによる処置は、照射日に開始した。照射後２時間に、マウスに対し、Ｔｇ：ＡｃｔｉｎＧＦＰ由来の新鮮骨髄を静脈内注射した。移植後５週に、Ｒａｇ−／−γＣ−／−骨髄をフラッシュし、血球計算により分析した。（ｇ）プラセボと比較した、ボルチオキセチン処置後の血球計算によるＧＦＰ＋細胞の計数値および定量の代表的なヒストグラム。平均±ＳＤで示す。＊ｐ＜０．０５；＊＊ｐ＜０．００５；ｎｓ：統計学的に有意ではない。
【図３】図３：フルオキセチンおよびボルチオキセチン処置は５ＴＨ１Ｂ受容体を刺激する  プラセボ、フルオキセチンで処置したＲａｇ−／−γＣ−／−免疫不全宿主マウス、およびフルオキセチン＋ＧＲ１２７９３５  ５ＨＴ１  Ｂ阻害剤で処置したＲａｇ−／−γＣ−／−免疫不全宿主マウスにおける、筋肉幹細胞移植後のＰＬＡＰ＋線維（移植片由来）のパーセンテージを表した散布図。
【実施例】
【０２６０】
フルオキセチンおよびボルチオキセチンは筋肉幹細胞および造血幹細胞の生着能を改善する
１．材料および方法
１．１．マウスに対する注射および損傷
使用した総てのプロトコールは、現地の倫理委員会により承認された。前脛骨筋への移植を行う１８時間前に、マウスを麻酔し、心臓毒で損傷させた。移植前に、マウスを再度麻酔し、ＰＢＳ  ４０ｎｌ中１０，０００個の細胞を移植した。筋肉の再生が完了するまで、マウスを２８日間飼育した。骨髄移植のために、マウスを９５ｃＧｙで照射し、非照射骨髄を静脈内移植した。注射の５週後にマウスを屠殺した。
【０２６１】
１．２．組織学的分析
前脛骨筋を慎重に切開し、液体窒素で冷却したイソペンタン中で数分間急速凍結し、凍結切片とする（１０μｍ切片）前に−８０℃で保存した。切片は、染色する前に、室温で一晩保存した。次に、切片をＰＢＳ中で１０分間再水和し、１０％ホルマリンで３分間固定した。次に、切片を手動で通常通りにＰＬＡＰ抗体で染色した。
【０２６２】
スライドは二重盲検で評価し、可能な場合は自動化した。
【０２６３】
１．３．ＦＡＣＳ分析
骨髄分析のために、動物を屠殺し、骨髄をフラッシュし、４０μｍセルストレーナーで濾過した。次に、バルクをＧａｌｌｉｏｓ  Ａ９４３０３（ベックマン・コールター）を用いて直接評価し、Ｋａｌｕｚａフローサイトメトリーソフトウエアを用いて分析した。
【０２６４】
１．４．画像解析
画像解析のために、ＩｍａｇｅＪ  １．４６ｒソフトウエアを使用して、切片あたり１０枚の異なる写真をランダムに撮影し、実験群あたり最低３枚の切片とした。写真を二値画像に変換した後、ピクセル値を収集した。線維の大きさに関しては、１／２００に希釈したウサギ抗ラミニン（シグマアルドリッチ  ＃Ｌ９３９３）を用いて、切片を４℃で一晩免疫染色した。二次ロバ抗ウサギ４８８（ＤＬ４８８  ＪａｃｋｓｏｎＩｍｍｕｎｏ  ＃７１１４８６１５２）を、１／２００で室温にて４５分間使用した。線維の周囲長の測定は、Ｐｉｘｃａｖａｔｏｒ（登録商標）ソフトウエアを用いて自動で実施した。
【０２６５】
１．５．統計分析
統計分析は、適当な検定（明記されない限り、ノンパラメトリックマン・ホイットニー検定）および最低限、有意性に関する９５％信頼区間を用いて、ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍソフトウエアを用いて実施した；図に示されるｐ値は、＜０．０５（＊）、＜０．０１（＊＊）、および＜０．００１（＊＊＊）である。図では、検定した全動物のＲＴ−ｑＰＣＲに関する平均値±ＳＤまたは±ＳＥＭを示すか、表示の通りである。
【０２６６】
２．結果
２．１．フルオキセチンおよびボルチオキセチン処置は損傷パラダイムにおける筋肉幹細胞の生着能の増大を誘導する
筋肉生着能に対するフルオキセチンおよびボルチオキセチンの潜在的効果を検討するために、Ｒａｇ−／−γＣ−／−免疫不全マウス（Sanchez et al., 2013）を本試験に用いた。マウスに対し、前脛骨筋（ＴＡ）を心臓毒で損傷させ、損傷後２４時間に１０，０００個の衛星細胞（ＳＣ）を注射した。衛星細胞（ＳＣ）はＴｇ：Ｐａｘ７ｎＧＦＰ：：ＰＬＡＰマウスから得たものであり（Deprimo et al., 1996; Rocheteau et al., 2012）、ＦＡＣＳによるＳＣの純粋集団の前向きな単離（Ｐａｘ７はＳＣの特異的マーカーである）および追跡（ＰＬＡＰ胎盤性アルカリホスファターゼは普遍的なマーカーである）が可能であった。生着後２８日にＴＡを採取し、ＰＬＡＰ線維数を計数した。
【０２６７】
移植時にＲａｇ−／−γＣ−／−マウスに対し１８ｍｇ／Ｋｇのフルオキセチンで経口的に６週間処置し、再生過程中、処置を継続した（図１ａ）。損傷後２８日に再生が完了したとき、ＰＬＡＰ陽性線維のパーセンテージは、２０．５％±６．５であったのに対し、処置動物では３６％±６．２であった（ｐ＝０．０１６；ｎ＝５、図１ｂ〜ｄ）。言い換えれば、注射後のＳＣの生着能は、フルオキセチン処置動物に注射した場合、ほぼ２倍であった。
【０２６８】
生着能に対するボルチオキセチンの潜在的効果を検討するために、同じアプローチを用いた。Ｒａｇ−／−γＣ−／−マウスに対し、２０ｍｇ／Ｋｇでの腹腔内注射により１２日間処置した。処置開始後１２日に、マウスを損傷させ、Ｐａｘ７ｎＧＦＰ：ＰＬＡＰ  ＳＣを移植した。全再生過程中、処置を継続した（図１ｅ）。損傷後２８日に、ＴＡを採取し、ラミニンおよびＰＬＡＰに関して染色した。プラセボ処置後では１９％±７．７の線維がＰＬＡＰ＋であったのに対し、ボルチオキセチン処置動物では３６．１％±５．７であった（ｐ＝０．０２８、ｎ＝４、図１ｆ〜ｈ）。言い換えれば、注射後のＳＣの生着能は、ボルチオキセチン処置動物に注射した場合、２倍超であった。
【０２６９】
２．２．フルオキセチンおよびボルチオキセチン処置は照射後の骨髄の生着能の増大を誘導する
骨髄生着能に対するフルオキセチンおよびボルチオキセチンの潜在的効果を検討するために、Ｒａｇ−／−γＣ−／−免疫不全マウスを用いた。これらのマウスに対し、９５ｃＧｙで照射した後、Ｔｇ：ＡｃｔｉｎＧＦＰマウス（Okabe et al., 1997）から採取した２百万個の細胞を静脈内注射し、移植細胞の運命を追跡した。
【０２７０】
Ｒａｇ−／−γＣ−／−マウスに対し、１８ｍｇ／Ｋｇのフルオキセチンで経口的に６週間処置した。この期間の後、マウスに対し９５ｃＧｙで照射し、Ｔｇ：ＡｃｔｉｎＧＦＰ由来の新鮮単離骨髄細胞（２百万個）を移植した（図２ａ）。５週後、骨髄中のＧＦＰ＋細胞の数を調べた（処置は一度も中止しなかった）。６３．７％±６．５のＧＦＰ＋細胞がプラセボマウスにおいて検出され、８０．７％±８．４のＧＦＰ＋細胞がフルオキセチン処置マウスにおいて検出された（ｐ＝０．００２３、ｎ＝７、図２ｂ、ｃ）。従って、フルオキセチン処置動物において、生着効率の２５％の増大が認められた。
【０２７１】
生着能に対するボルチオキセチンの潜在的効果を検討するために、同じアプローチを用いた。Ｒａｇ−／−γＣ−／−マウスに対し、２０ｍｇ／Ｋｇでの腹腔内注射により１２日間処置した。処置開始後１２日に、マウスに対し９５ｃＧｙで照射し、Ｔｇ：アクチンＧＦＰ由来の新鮮単離骨髄細胞２百万個を静脈内移植した。移植後５週目に、マウスを屠殺し、骨髄をフラッシュし、分析した（図２ｄ）。５週後、骨髄中のＧＦＰ＋細胞の数を調べた（処置は一度も中止しなかった）。６５．８％±５．５の細胞がプラセボマウスにおいて認められ、一方、８０．２％±５．８の細胞がボルチオキセチン処置動物において認められた（ｐ＝０．００７９、ｎ＝５、図２ｅ）。従って、ボルチオキセチンによる処置後、骨髄細胞の生着能に２１％の増大が認められた。
【０２７２】
ボルチオキセチンの有益な効果の時機をさらに特徴付けるために、以前の実験を１２日間の前処置を行わずに繰り返した（図２ｅ、ｆ）。Ｒａｇ−／−γＣ−／−マウスに対して照射を行い、照射後２時間に、Ｔｇ：ＡｃｔｉｎＧＦＰマウス由来の新鮮骨髄を移植した。同じプラセボを使用した結果、照射時に６５．８％±５．５のＧＦＰ＋細胞が認められ、ボルチオキセチン処置動物では７７．２％±７．６のＧＦＰ＋細胞が認められた（ｐ＝０．０４、ｎ＝５、図２ｅ、ｇ）。動物に前処置を行わなかった場合も、同様の生着能の増大（１７％）が認められた。
【０２７３】
２．３．フルオキセチンおよびボルチオキセチン処置は５ＴＨ１Ｂ受容体を刺激する
Ｒａｇ−／−γＣ−／−マウスに対して、１８ｍｇ／Ｋｇでのフルオキセチンによる処置を６週間行った。前脛骨筋（ＴＡ）を損傷させ、損傷後１８時間に、Ｔｇ：Ｐａｘ７ｎＧＦＰ：ＰＬＡＰ：ＭｙＨＣ２Ｅ３ＦＬａｃＺトリプルトランスジェニックマウス由来の衛星細胞（ＳＣ）１０，０００個を、フルオキセチンで前処置したＲａｇ−／−γＣ−／−マウスに移植した。２１日後、認められた線維の２５．７％±８．７がプラセボ群においてＰＬＡＰ＋であり（前記線維が移植片由来であることを意味する）、一方、フルオキセチンで処置した動物では３９％±６．６がＰＬＡＰ＋であった（条件あたり動物ｎ＝８）（図３）。
【０２７４】
免疫不全Ｒａｇ−／−γＣ−／−宿主動物を１８ｍｇ／Ｋｇでのフルオキセチンに加え５ＨＴ１  ＢＲ阻害剤（ＧＲ１２７９３５）でも処置した場合、線維の２９．９％±７．８がＰＬＡＰ＋であり、すなわち、プラセボの条件と同様であった（動物ｎ＝７）（図３）。
【０２７５】
これらのデータは、イン・ビボでの５ＨＴ１  ＢＲの阻害は、フルオキセチンの有益な効果を失うのに十分であること、および５ＨＴ１  ＢＲの刺激は、生着能を増強するためのフルオキセチンの作用機序であることを示す。
【０２７６】
３．考察
細胞または幹細胞に基づく療法の適用数はクリニックに限られているが、細胞に基づく臨床試験の数は現在増加中である（米国の５９０件および欧州の１０１件を含む、全世界で７７６件が引用）。従って、疾患および組織の再構成を良好にコントロールするために、細胞療法（例えば、胚細胞、成体細胞、または幹細胞）の生着能を改善できる薬剤を有することが、この出現しつつある新種の医学の使用を成功させるために重要である。
【０２７７】
ここで、本結果は、２つの異なるパラダイム（すなわち、筋肉幹細胞の生着および骨髄細胞の生着）において、５ＨＴ１  Ｂ受容体を刺激することで知られる２つの異なる薬剤（フルオキセチンおよびボルチオキセチン）を使用することは有益であり、細胞移植後、ドナー細胞から再構成された組織のパーセンテージまたは面積は高かったことを示している。イン・ビボでの細胞生着に対する有益な効果の発現が早いために、この点に関するボルチオキセチンの潜在力は、フルオキセチンよりも大きいことがさらに認められた。５ＨＴ１  Ｂ阻害剤の送達後、これらの薬剤の効果は５ＨＴ１  Ｂ受容体の刺激を介して得られたことが認められた。
【０２７８】
これらの結果は有望なものであり、また、前記療法を改善するために、白血病における骨髄の移植またはジストロフィー患者における筋肉幹細胞の移植への直接的な適用を見出し得るものである。
【０２７９】
別の重要な適用分野は、間葉幹細胞（ＭＳＣ）の分野に由来する。実際に、同種異系細胞の調製を取り巻く安全性および規制上の懸念によって、自己のおよび最小限に操作された細胞療法が、多くの再生、抗炎症および自己免疫に関する適用に対する魅力的な選択肢となっている。ＭＳＣは、興味深い栄養特性（抗瘢痕作用、抗アポトーシス作用、血管新生作用、有糸分裂促進作用、免疫調節作用、抗菌作用）を有することが示されている。よって、その結果、ＭＳＣは現在、整形外科および脊椎療法：骨折修復、骨壊死、脊椎固定、軟骨修復、関節炎；心血管療法：心疾患、血管疾患；創傷および組織修復：創傷および潰瘍、火傷、神経系障害：多発性硬化症および筋萎縮性側索硬化症、パーキンソン病、脳卒中、脊髄損傷；自己免疫性障害：関節リウマチ、クローン病、紅斑性狼瘡、喘息；腫瘍白血病などの多くの研究および多くの臨床試験で使用されている。これらのＭＳＣの大きな利点の１つは、これらは必ずしも免疫原性である必要はなく、自家移植に使用することができるが、同種移植もすでに有効であることが証明されていることである。これらの研究は総て、生着を改善すること、および細胞の生着能を向上させるための基盤を作ることによって、開発中の薬剤から利益を得ることができる。
【０２８０】
最も関心が持たれる他の適用は、抗炎症作用、抗アポトーシス作用、および抗リモデリング作用を有する、心筋細胞の再生、新血管新生、およびパラクリンサイトカインが関与する心臓組織再生医療である。ここ１０年で、幹細胞は、心筋細胞および血管細胞系統への分化能だけでなく、パラクリン因子などの放出能および抗不整脈効果を有するために、再生医療の有望な候補となってきている。パラクリンサイトカインおよびケモカインは、幹細胞に関連した心臓修復機序において中枢的な役割を果たしている。心筋梗塞（ＭＩ）に対する幹細胞療法の有益な効果を実証した研究は総て、これらの細胞の心保護的効果の重要性を強調することに一致を見ている。
【０２８１】
引用文献
2018534325.tif 000024
2018534325.tif 000025
【図１−１】
2018534325.tif 000026
【図１−２】
2018534325.tif 000027
【図２−１】
2018534325.tif 000028
【図２−２】
2018534325.tif 000029
【図３】
2018534325.tif 000030
【国際調査報告】
2018534325.tif 000031
2018534325.tif 000032
2018534325.tif 000033
2018534325.tif 000034