(57)【要約】  治療薬の半減期を延長するための方法と組成物が提供される。１つの半減期延長部分は治療薬に結合してもよく、それにより治療薬の半減期を延ばす。治療薬に結合した半減期延長部分を含む修飾された治療薬は、被験体の疾患または疾病を処置するために使用されることもある。【選択図】図８
2018511574.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
修飾された治療薬であって、
（ｉ）  ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５４、５５、５９、および６０からなる群から選択されたリラキシンＡ鎖アミノ酸配列を含む治療薬（ＴＡ）と、
（ｉｉ）半減期延長部分とを含み、
ここで、ＴＡは、ＴＡのシステイン残基によって半減期延長部分に共有結合する、修飾された治療薬。
【請求項２】
システイン残基はリラキシンＡ鎖アミノ酸配列中にある、請求項１に記載の修飾された治療薬。
【請求項３】
システイン残基は、リラキシンＡ鎖アミノ酸配列の２位置にある、請求項２に記載の修飾された治療薬。
【請求項４】
治療薬はリラキシンＡ鎖アミノ酸配列ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５４を含む、請求項１−３に記載の修飾された治療薬。
【請求項５】
治療薬はリラキシンＡ鎖アミノ酸配列ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５９を含む、請求項１−３に記載の修飾された治療薬。
【請求項６】
治療薬はさらにリラキシンＢ鎖を含む、請求項１−５のいずれか１つに記載の修飾された治療薬。
【請求項７】
治療薬は修飾されたリラキシンＢ鎖をさらに含み、ここで、１つ以上のアミノ酸が付加、欠失、または置換され、あるいはその組み合わせが行われている、請求項１−５のいずれか１つに記載の修飾された治療薬。
【請求項８】
治療薬は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１６、４０、４８−５２、５６、５８、および６１からなる群から選択されたリラキシンＢ鎖アミノ酸配列をさらに含む、請求項１−５のいずれか１つに記載の修飾された治療薬。
【請求項９】
治療薬は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１６、４０、４８−５２、５６、５８、および６１からなる群から選択されたアミノ酸配列に少なくとも５０％相同するリラキシンＢ鎖アミノ酸配列をさらに含む、請求項１−５のいずれか１つに記載の修飾された治療薬。
【請求項１０】
治療薬は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４８のリラキシンＢ鎖アミノ酸配列をさらに含む、請求項１−５のいずれか１つに記載の修飾された治療薬。
【請求項１１】
修飾された治療薬の半減期は、治療薬のみの半減期よりも長い、請求項１−１０のいずれか１つに記載の修飾された治療薬。
【請求項１２】
（ｉ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５４、５５、５９、および６０からなる群から選択されたアミノ酸配列に少なくとも５０％相同するリラキシンＡ鎖アミノ酸配列を含む治療薬（ＴＡ）と、
（ｉｉ）半減期延長部分とを含む、
修飾された治療薬であって、
ＴＡはＴＡのシステイン残基によって半減期延長部分に共有結合する、修飾された治療薬。
【請求項１３】
リラキシンＡ鎖アミノ酸配列は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５４、５５、５９、および６０からなる群から選択されたアミノ酸配列に少なくとも８０％相同する、請求項１２に記載の修飾された治療薬。
【請求項１４】
リラキシンＡ鎖アミノ酸配列は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５４、５５、５９、および６０からなる群から選択されたアミノ酸配列に少なくとも９０％相同する、請求項１２に記載の修飾された治療薬。
【請求項１５】
システイン残基はリラキシンＡ鎖アミノ酸配列中にある、請求項１２−１４のいずれか１つに記載の修飾された治療薬。
【請求項１６】
システイン残基は、リラキシンＡ鎖アミノ酸配列の２位置にある、請求項１５に記載の修飾された治療薬。
【請求項１７】
リラキシンＡ鎖アミノ酸配列はアミノ酸配列ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５４に少なくとも５０％相同する、請求項１２−１６のいずれか１つに記載の修飾された治療薬。
【請求項１８】
リラキシンＡ鎖アミノ酸配列はアミノ酸配列ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５９に少なくとも５０％相同する、請求項１２−１６のいずれか１つに記載の修飾された治療薬。
【請求項１９】
治療薬はリラキシンＢ鎖をさらに含む、請求項１２−１８のいずれか１つに記載の修飾された治療薬。
【請求項２０】
治療薬は修飾されたリラキシンＢ鎖をさらに含み、ここで、１つ以上のアミノ酸が付加、欠失、または置換され、あるいはその組み合わせが行われている、請求項１２−１８のいずれか１つに記載の修飾された治療薬。
【請求項２１】
治療薬は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１６、４０、４８−５２、５６、５８、および６１からなる群から選択されたリラキシンＢ鎖アミノ酸配列をさらに含む、請求項１２−１８のいずれか１つに記載の修飾された治療薬。
【請求項２２】
治療薬は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１６、４０、４８−５２、５６、５８、および６１からなる群から選択されたアミノ酸配列に少なくとも５０％相同するリラキシンＢ鎖アミノ酸配列をさらに含む、請求項１２−１８のいずれか１つに記載の修飾された治療薬。
【請求項２３】
治療薬は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４８のリラキシンＢ鎖アミノ酸配列をさらに含む、請求項１２−１８のいずれか１つに記載の修飾された治療薬。
【請求項２４】
修飾された治療薬の半減期は、治療薬のみの半減期よりも長い、請求項１２−２３のいずれか１つに記載の修飾された治療薬。
【請求項２５】
（ｉ）  ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５４、５５、５９、および６０からなる群から選択されたリラキシンＡ鎖アミノ酸配列を含む治療薬（ＴＡ）であって、最大で５つのアミノ酸が付加、欠失、置換され、またはその組み合わせが行われた、治療薬と、
（ｉｉ）半減期延長部分とを含む、
修飾された治療薬であって、
ここで、ＴＡは、ＴＡのシステイン残基によって半減期延長部分に共有結合する、修飾された治療薬。
【請求項２６】
１つのアミノ酸がリラキシンＡ鎖アミノ酸配列から付加、欠失、または置換されている、請求項２５に記載の修飾された治療薬。
【請求項２７】
２つのアミノ酸がリラキシンＡ鎖アミノ酸配列から付加、欠失、置換され、またはその組み合わせが行われている、請求項２５に記載の修飾された治療薬。
【請求項２８】
３つのアミノ酸がリラキシンＡ鎖アミノ酸配列から付加、欠失、置換され、またはその組み合わせが行われている、請求項２５に記載の修飾された治療薬。
【請求項２９】
システイン残基はリラキシンＡ鎖アミノ酸配列中にある、請求項２５−２８のいずれか１つに記載の修飾された治療薬。
【請求項３０】
システイン残基は、リラキシンＡ鎖アミノ酸配列の２位置にある、請求項２９に記載の修飾された治療薬。
【請求項３１】
リラキシンＡ鎖アミノ酸配列はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５４であり、ここで、最大で５つのアミノ酸が付加、欠失、置換され、またはその組み合わせが行われている、請求項２５−３０のいずれか１つに記載の修飾された治療薬。
【請求項３２】
リラキシンＡ鎖アミノ酸配列はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５９であり、ここで、最大で５つのアミノ酸が付加、欠失、置換され、またはその組み合わせが行われている、請求項２５−３０のいずれか１つに記載の修飾された治療薬。
【請求項３３】
治療薬はリラキシンＢ鎖をさらに含む、請求項２５−３２のいずれか１つに記載の修飾された治療薬。
【請求項３４】
治療薬は修飾されたリラキシンＢ鎖をさらに含み、ここで、１つ以上のアミノ酸が付加、欠失、または置換され、あるいはその組み合わせが行われている、請求項２５−３２のいずれか１つに記載の修飾された治療薬。
【請求項３５】
治療薬は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１６、４０、４８−５２、５６、５８、および６１からなる群から選択されたリラキシンＢ鎖アミノ酸配列をさらに含む、請求項２５−３２のいずれか１つに記載の修飾された治療薬。
【請求項３６】
治療薬は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１６、４０、４８−５２、５６、５８、および６１からなる群から選択されたアミノ酸配列に少なくとも５０％相同するリラキシンＢ鎖アミノ酸配列をさらに含む、請求項２５−３２のいずれか１つに記載の修飾された治療薬。
【請求項３７】
治療薬は、リラキシンＢ鎖アミノ酸配列ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４８をさらに含む、請求項２５−３２のいずれか１つに記載の修飾された治療薬。
【請求項３８】
修飾された治療薬の半減期は、治療薬のみの半減期よりも長い、請求項２５−３７のいずれか１つに記載の修飾された治療薬。
【請求項３９】
（ｉ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５４、５５、５９、および６０からなる群から選択されたリラキシンＡ鎖アミノ酸配列の一部を含む治療薬（ＴＡ）と、
（ｉｉ）半減期延長部分とを含む、
修飾された治療薬であって、
ここで、ＴＡは、ＴＡのシステイン残基によって半減期延長部分に共有結合する、修飾された治療薬。
【請求項４０】
リラキシンＡ鎖アミノ酸配列の一部は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５４、５５、５９、または６０の少なくとも２０の連続するアミノ酸を含む、請求項３９に記載の修飾された治療薬。
【請求項４１】
リラキシンＡ鎖アミノ酸配列の一部は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５４、５５、５９、および６０の少なくとも１５の連続するアミノ酸を含む、請求項３９に記載の修飾された治療薬。
【請求項４２】
リラキシンＡ鎖の一部は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５４、５５、５９、および６０の少なくとも１０の連続するアミノ酸を含む、請求項３９に記載の修飾された治療薬。
【請求項４３】
システイン残基は、リラキシンＡ鎖アミノ酸配列の一部にある、請求項３９−４２のいずれか１つに記載の修飾された治療薬。
【請求項４４】
システイン残基は、リラキシンＡ鎖アミノ酸配列の一部の２位置にある、請求項４３に記載の修飾された治療薬。
【請求項４５】
治療薬は、リラキシンＡ鎖アミノ酸配列ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５４の一部を含む、請求項３９−４４のいずれか１つに記載の修飾された治療薬。
【請求項４６】
治療薬は、リラキシンＡ鎖アミノ酸配列ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５９の一部を含む、請求項３９−４４のいずれか１つに記載の修飾された治療薬。
【請求項４７】
治療薬はリラキシンＢ鎖をさらに含む、請求項３９−４６のいずれか１つに記載の修飾された治療薬。
【請求項４８】
治療薬は修飾されたリラキシンＢ鎖をさらに含み、ここで、１つ以上のアミノ酸が付加、欠失、または置換され、あるいはその組み合わせが行われている、請求項３９−４６のいずれか１つに記載の修飾された治療薬。
【請求項４９】
治療薬は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１６、４０、４８−５２、５６、５８、および６１からなる群から選択されたリラキシンＢ鎖アミノ酸配列をさらに含む、請求項３９−４６のいずれか１つに記載の修飾された治療薬。
【請求項５０】
治療薬は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１６、４０、４８−５２、５６、５８、および６１からなる群から選択されたアミノ酸配列に少なくとも５０％相同するリラキシンＢ鎖アミノ酸配列をさらに含む、請求項３９−４６のいずれか１つに記載の修飾された治療薬。
【請求項５１】
治療薬はアミノ酸配列ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４８をさらに含む、請求項３９−４６のいずれか１つに記載の修飾された治療薬。
【請求項５２】
修飾された治療薬の半減期は、治療薬のみの半減期よりも長い、請求項３９−５１のいずれか１つに記載の修飾された治療薬。
【請求項５３】
修飾された治療薬は以下の式を有し、
【化１】
2018511574.tif 000102
式中、ＴＡは治療薬であり、
【化２】
2018511574.tif 000103
は半減期延長部分である、請求項１−５２のいずれか１つに記載の修飾された治療薬。
【請求項５４】
Ａ１はＴＡ、およびＰ１またはＬを結合する化学基であり、
Ｐ１は単結合または−ＰＥＧ−Ａ２−であり、および、
Ｌは、ステロール誘導体、胆汁酸誘導体、ビタミンＥ誘導体、脂肪二酸誘導体、脂肪酸誘導体、脂肪酸アミド誘導体、脂肪族アミン誘導体、および脂肪族アルコール誘導体からなる群から選択される脂質誘導体であり、ここで、脂質誘導体はアミドまたはエーテル結合によってＰ１に結合する、請求項４９に記載の修飾された治療薬。
【請求項５５】
ＴＡのシステイン残基の硫黄原子は化学結合によってＡ１に結合される、請求項５３または５４に記載の修飾された治療薬。
【請求項５６】
Ａ１は以下から選択され、
【化３】
2018511574.tif 000104
ＰＥＧは以下から選択され、
【化４】
2018511574.tif 000105
Ａ２は単結合、
【化５】
2018511574.tif 000106
から選択され、
Ｌは、テトラデカン酸、オクタデカン二酸、ミリスチン酸、ステアリン酸、ドコサヘキサエン酸、リトコール酸、コール酸、およびパルミチン酸から選択された酸部分であり、ここで、酸部分はアミド結合によってＰ１に結合され、
Ｘは単結合、−Ｎ（Ｒ５）−、−Ｓ−、または−Ｏ−であり、
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、およびＲ４はそれぞれ独立して、Ｈ、ハロ、−ＣＮ、−ＳＲ５、アルキル、シクロアルキル、ハロアルキル、−ＮＲ５Ｒ５、または−ＯＲ５であり、
Ｒ５はそれぞれ独立して、Ｈ、アルキル、ハロアルキル、アリールアルキル、またはヘテロアルキルであり、
Ｒ６はＯＨまたは−ＮＲ５Ｒ５であり、
Ｒ７はそれぞれ独立して、Ｈ、アルキル、ハロアルキル、アリールアルキル、またはヘテロアルキルであり、
ｍとｎは独立して、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、または２０であり、
ｒは１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０であり、
ｓは１、２、３、４、または５であり、
ｋは１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０であり、
ｐは２、３、４、５、６、７、８、９、または１０であり、および、
ｑは２、３、４、５、６、７、８、９、または１０である、請求項５３−５５のいずれか１つに記載の修飾された治療薬。
【請求項５７】
Ａ１は
【化６】
2018511574.tif 000107
である、請求項５３−５６のいずれか１つに記載の修飾された治療薬。
【請求項５８】
ＰＥＧは
【化７】
2018511574.tif 000108
である、請求項５３−５７のいずれか１つに記載の修飾された治療薬。
【請求項５９】
Ａ２は
【化８】
2018511574.tif 000109
である、請求項５３−５８のいずれか１つに記載の修飾された治療薬。
【請求項６０】
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、およびＲ４はそれぞれＨである、請求項５３−５９のいずれか１つに記載の修飾された治療薬。
【請求項６１】
Ｒ５はそれぞれ独立してＨである、請求項５３−６０のいずれか１つに記載の修飾された治療薬。
【請求項６２】
Ｒ６はそれぞれＯＨまたはＮＨ２である、請求項５３−６１のいずれか１つに記載の修飾された治療薬。
【請求項６３】
Ｒ７はそれぞれＨである、請求項５３−６２のいずれか１つに記載の修飾された治療薬。
【請求項６４】
ｍは、１、２、３、４、５、６、７、８、または９である、請求項５３−６３のいずれか１つに記載の修飾された治療薬。
【請求項６５】
ｎは１、２、３、４、または５である、請求項５３−６４のいずれか１つに記載の修飾された治療薬。
【請求項６６】
ｒは１、２、または３である、請求項５３−６５のいずれか１つに記載の修飾された治療薬。
【請求項６７】
ｓは２または４である、請求項５３−６６のいずれか１つに記載の修飾された治療薬。
【請求項６８】
ｐは２である、請求項５３−６７のいずれか１つに記載の修飾された治療薬。
【請求項６９】
Ｘは−Ｏ−である、請求項５３−６８のいずれか１つに記載の修飾された治療薬。
【請求項７０】
修飾された治療薬は、以下からなる群から選択される、請求項５３に記載の修飾された治療薬。
【化９】
2018511574.tif 000110
【化１０】
2018511574.tif 000111
【請求項７１】
修飾された治療薬は
【化１１】
2018511574.tif 000112
である、請求項５３に記載の修飾された治療薬。
【請求項７２】
修飾された治療薬は
【化１２】
2018511574.tif 000113
【化１３】
2018511574.tif 000114
【化１４】
2018511574.tif 000115
【化１５】
2018511574.tif 000116
【化１６】
2018511574.tif 000117
【化１７】
2018511574.tif 000118
である、請求項５３に記載の修飾された治療薬。
【請求項７３】
請求項１−７２のいずれか１つに記載の修飾された治療薬を含む医薬組成物。
【請求項７４】
被験体の疾患または疾病を処置する方法であって、
治療上有効な量の請求項１−７２のいずれか１つに記載の修飾された治療薬を含む医薬組成物を被験体に投与する工程を含む、方法。
【請求項７５】
疾患または疾病は心血管障害である、請求項７４に記載の方法。
【請求項７６】
疾患または疾病は急性心不全である、請求項７４に記載の方法。
【請求項７７】
疾患または疾病は線維症である、請求項７４に記載の方法。
【請求項７８】
疾患または疾病は疼痛である、請求項７４に記載の方法。
【請求項７９】
疼痛は神経障害性疼痛または炎症性疼痛である、請求項７８に記載の方法。
【請求項８０】
修飾された治療薬は１つ以上の追加の治療薬とともに投与される、請求項７４に記載の方法。
【請求項８１】
１つ以上の追加の治療薬は、抗炎症薬、疼痛を処置する薬物、またはその任意の組み合わせからなる群から選択される、請求項８０に記載の方法。
【請求項８２】
１つ以上の追加の治療薬はアスピリンである、請求項８１に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本出願は２０１５年３月１８日に出願された米国出願番号第６２／１３４，９３９号の利益を主張するものであり、当該文献は参照により全体として本明細書に組み込まれる。
【背景技術】
【０００２】
治療薬（例えば生物学的製剤）の開発は短い半減期により阻まれることが多い。物質の生物学的半減期または排出半減期は、物質（例えば、代謝産物、薬物、シグナル伝達分子、放射性核種、またはそれ以外の物質）が、その薬理学的、生理学的、または放射線学的活性の半分を失うのにかかる時間である。短い半減期の結果として、患者は頻繁に高投与量を投与されることが増え、これによりコンプライアンスは低下し、コストはかさみ、副作用のリスクが増大することもある。
【０００３】
持続放出製品は、短い半減期の薬物の吸収を延長させるように設計され、それにより、血清薬物濃度の変動を最小限に抑えつつ、長期間の投与を可能にする。半減期を延ばすために使用される最新の戦略は、水力学的量（ＰＥＧｙｌａｔｉｏｎ）を増加させる戦略、またはＦｃＲｎを媒介とする再循環（アルブミン融合）を使用する戦略である。生物学的製剤の半減期を延ばすために、薬物に対するポリペプチドまたは親油性の成分の付着も用いられてきた（特許文献１、特許文献２、特許文献３）。
【０００４】
本開示は治療薬の生物学的、化学的、生理学的、薬理学的、薬物動態学的、および／または薬力学的な特性を改善するために修飾された治療薬を提供する。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００５】
【特許文献１】米国特許出願第６，２６８，３４３号
【特許文献２】米国特許出願第５，７５０，４９７号
【特許文献３】米国特許出願第８，１２９，３４３号
【発明の概要】
【０００６】
以下を含む修飾された治療薬が本明細書に開示され、
（ｉ）  ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５４、５５、５９、および６０からなる群から選択されたリラキシンＡ鎖アミノ酸配列を含む治療薬（ＴＡ）；および、
（ｉｉ）半減期延長部分；
ここで、ＴＡは、ＴＡのシステイン残基によって半減期延長部分に共有結合する。
【０００７】
修飾された治療薬のいくつかの実施形態では、システイン残基はリラキシンＡ鎖アミノ酸配列中にある。修飾された治療薬のいくつかの実施形態では、システイン残基は、リラキシンＡ鎖アミノ酸配列の２位置にある。修飾された治療薬のいくつかの実施形態では、治療薬はリラキシンＡ鎖アミノ酸配列ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５４を含む。修飾された治療薬のいくつかの実施形態では、治療薬はリラキシンＡ鎖アミノ酸配列ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５９を含む。修飾された治療薬のいくつかの実施形態では、治療薬はさらにリラキシンＢ鎖を含む。修飾された治療薬のいくつかの実施形態では、治療薬は修飾されたリラキシンＢ鎖をさらに含み、ここで、１つ以上のアミノ酸が付加、欠失、または置換され、あるいはその組み合わせが行われている。修飾された治療薬のいくつかの実施形態では、治療薬は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１６、４０、４８−５２、５６、５８、および６１からなる群から選択されたリラキシンＢ鎖アミノ酸配列をさらに含む。修飾された治療薬のいくつかの実施形態では、治療薬は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１６、４０、４８−５２、５６、５８、および６１からなる群から選択されたアミノ酸配列に少なくとも５０％相同するリラキシンＢ鎖アミノ酸配列をさらに含む。修飾された治療薬のいくつかの実施形態では、治療薬は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４８のリラキシンＢ鎖アミノ酸配列をさらに含む。修飾された治療薬のいくつかの実施形態では、修飾された治療薬の半減期は、治療薬のみの半減期よりも長い。
【０００８】
以下を含む修飾された治療薬が本明細書に開示される：
（ｉ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５４、５５、５９、および６０からなる群から選択されたアミノ酸配列に少なくとも５０％相同するリラキシンＡ鎖アミノ酸配列を含む治療薬（ＴＡ）、および
（ｉｉ）半減期延長部分；ここで、ＴＡは、ＴＡのシステイン残基によって半減期延長部分に共有結合する。
【０００９】
修飾された治療薬のいくつかの実施形態では、リラキシンＡ鎖アミノ酸配列は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５４、５５、５９、および６０からなる群から選択されたアミノ酸配列に少なくとも８０％相同する。修飾された治療薬のいくつかの実施形態では、リラキシンＡ鎖アミノ酸配列は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５４、５５、５９、および６０からなる群から選択されたアミノ酸配列に少なくとも９０％相同する。修飾された治療薬のいくつかの実施形態では、システイン残基はリラキシンＡ鎖アミノ酸配列中にある。修飾された治療薬のいくつかの実施形態では、システイン残基は、リラキシンＡ鎖アミノ酸配列の２位置にある。修飾された治療薬のいくつかの実施形態では、リラキシンＡ鎖アミノ酸配列はアミノ酸配列ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５４に少なくとも５０％相同する。修飾された治療薬のいくつかの実施形態では、リラキシンＡ鎖アミノ酸配列はアミノ酸配列ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５９に少なくとも５０％相同する。修飾された治療薬のいくつかの実施形態では、治療薬はリラキシンＢ鎖をさらに含む。修飾された治療薬のいくつかの実施形態では、治療薬は修飾されたリラキシンＢ鎖をさらに含み、ここで、１つ以上のアミノ酸が付加、欠失、または置換され、あるいはその組み合わせが行われている。修飾された治療薬のいくつかの実施形態では、治療薬は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１６、４０、４８−５２、５６、５８、および６１からなる群から選択されたリラキシンＢ鎖アミノ酸配列をさらに含む。修飾された治療薬のいくつかの実施形態では、治療薬は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１６、４０、４８−５２、５６、５８、および６１からなる群から選択されたアミノ酸配列に少なくとも５０％相同するリラキシンＢ鎖アミノ酸配列をさらに含む。修飾された治療薬のいくつかの実施形態では、治療薬は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４８のリラキシンＢ鎖アミノ酸配列をさらに含む。修飾された治療薬のいくつかの実施形態では、修飾された治療薬の半減期は、治療薬のみの半減期よりも長い。
【００１０】
以下を含む修飾された治療薬が本明細書に開示される：
（ｉ）  ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５４、５５、５９、および６０からなる群から選択されたリラキシンＡ鎖アミノ酸配列を含む治療薬（ＴＡ）であって；最大で５つのアミノ酸が付加、欠失、置換され、またはその組み合わせが行われた、治療薬、および、
（ｉｉ）半減期延長部分；ここで、ＴＡは、ＴＡのシステイン残基によって半減期延長部分に共有結合する。
【００１１】
修飾された治療薬のいくつかの実施形態では、１つのアミノ酸がリラキシンＡ鎖アミノ酸配列から付加、欠失、または置換されている。修飾された治療薬のいくつかの実施形態では、２つのアミノ酸がリラキシンＡ鎖アミノ酸配列から付加、欠失、置換され、またはその組み合わせが行われている。修飾された治療薬のいくつかの実施形態では、３つのアミノ酸がリラキシンＡ鎖アミノ酸配列から付加、欠失、置換され、またはその組み合わせが行われている。修飾された治療薬のいくつかの実施形態では、システイン残基はリラキシンＡ鎖アミノ酸配列中にある。修飾された治療薬のいくつかの実施形態では、システイン残基は、リラキシンＡ鎖アミノ酸配列の２位置にある。修飾された治療薬のいくつかの実施形態では、リラキシンＡ鎖アミノ酸配列はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５４であり、ここで、最大で５つのアミノ酸が付加、欠失、置換され、またはその組み合わせが行われた。修飾された治療薬のいくつかの実施形態では、リラキシンＡ鎖アミノ酸配列はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５９であり、ここで、最大で５つのアミノ酸が付加、欠失、置換され、またはその組み合わせが行われた。修飾された治療薬のいくつかの実施形態では、治療薬はリラキシンＢ鎖をさらに含む。修飾された治療薬のいくつかの実施形態では、治療薬は修飾されたリラキシンＢ鎖をさらに含み、ここで、１つ以上のアミノ酸が付加、欠失、または置換され、あるいはその組み合わせが行われている。修飾された治療薬のいくつかの実施形態では、治療薬は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１６、４０、４８−５２、５６、５８、および６１からなる群から選択されたリラキシンＢ鎖アミノ酸配列をさらに含む。修飾された治療薬のいくつかの実施形態では、治療薬は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１６、４０、４８−５２、５６、５８、および６１からなる群から選択されたアミノ酸配列に少なくとも５０％相同するリラキシンＢ鎖アミノ酸配列をさらに含む。修飾された治療薬のいくつかの実施形態では、治療薬は、リラキシンＢ鎖アミノ酸配列ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４８をさらに含む。修飾された治療薬のいくつかの実施形態では、修飾された治療薬の半減期は、治療薬のみの半減期よりも長い。
【００１２】
以下を含む修飾された治療薬が本明細書に開示される：
（ｉ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５４、５５、５９、および６０からなる群から選択されたリラキシンＡ鎖アミノ酸配列の一部を含む治療薬（ＴＡ）、および、
（ｉｉ）半減期延長部分、
ここで、ＴＡは、ＴＡのシステイン残基によって半減期延長部分に共有結合する。
【００１３】
修飾された治療薬のいくつかの実施形態では、リラキシンＡ鎖アミノ酸配列の一部は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５４、５５、５９、または６０の少なくとも２０の連続するアミノ酸を含む。修飾された治療薬のいくつかの実施形態では、リラキシンＡ鎖アミノ酸配列の一部は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５４、５５、５９、および６０の少なくとも１５の連続するアミノ酸を含む。修飾された治療薬のいくつかの実施形態では、リラキシンＡ鎖の一部は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５４、５５、５９、および６０の少なくとも１０の連続するアミノ酸を含む。修飾された治療薬のいくつかの実施形態では、システイン残基は、リラキシンＡ鎖アミノ酸配列の一部にある。修飾された治療薬のいくつかの実施形態では、システイン残基は、リラキシンＡ鎖アミノ酸配列の一部の２位置にある。修飾された治療薬のいくつかの実施形態では、治療薬は、リラキシンＡ鎖アミノ酸配列ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５４の一部を含む。修飾された治療薬のいくつかの実施形態では、治療薬は、リラキシンＡ鎖アミノ酸配列ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５９の一部を含む。修飾された治療薬のいくつかの実施形態では、治療薬はリラキシンＢ鎖をさらに含む。修飾された治療薬のいくつかの実施形態では、治療薬は修飾されたリラキシンＢ鎖をさらに含み、ここで、１つ以上のアミノ酸が付加、欠失、または置換され、あるいはその組み合わせが行われている。修飾された治療薬のいくつかの実施形態では、治療薬は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１６、４０、４８−５２、５６、５８、および６１からなる群から選択されたリラキシンＢ鎖アミノ酸配列をさらに含む。修飾された治療薬のいくつかの実施形態では、治療薬は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１６、４０、４８−５２、５６、５８、および６１からなる群から選択されたアミノ酸配列に少なくとも５０％相同するリラキシンＢ鎖アミノ酸配列をさらに含む。修飾された治療薬のいくつかの実施形態では、治療薬はアミノ酸配列ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４８をさらに含む。修飾された治療薬のいくつかの実施形態では、修飾された治療薬の半減期は、治療薬のみの半減期よりも長い。
【００１４】
修飾された治療薬のいくつかの実施形態では、修飾された治療薬は以下の式を有し、
【００１５】
【化１】
2018511574.tif 000003
式中、ＴＡは治療薬であり、
【００１６】
【化２】
2018511574.tif 000004
は半減期延長部分である。
【００１７】
修飾された治療薬のいくつかの実施形態では、
Ａ１はＴＡ、およびＰ１またはＬを結合する化学基であり、
Ｐ１は単結合または−ＰＥＧ−Ａ２−であり、および、
Ｌは、ステロール誘導体、胆汁酸誘導体、ビタミンＥ誘導体、脂肪二酸（ｆａｔｔｙ  ｄｉ−ａｃｉｄ）誘導体、脂肪酸誘導体、脂肪酸アミド誘導体、脂肪族アミン誘導体、および脂肪族アルコール誘導体からなる群から選択される脂質誘導体であり、ここで、脂質誘導体はアミドまたはエーテル結合によってＰ１に結合する。
【００１８】
修飾された治療薬のいくつかの実施形態では、ＴＡのシステイン残基の硫黄原子は化学結合によってＡ１に結合される。
【００１９】
式（Ａ）の修飾された治療薬のいくつかの実施形態では、Ａ１は以下から選択され、
【００２０】
【化３】
2018511574.tif 000005
ＰＥＧは以下から選択され、
【００２１】
【化４】
2018511574.tif 000006
Ａ２は単結合、
【００２２】
【化５】
2018511574.tif 000007
から選択され、
Ｌは、テトラデカン酸、オクタデカン二酸、ミリスチン酸、ステアリン酸、ドコサヘキサエン酸、リトコール酸、リトコール酸、コール酸、およびパルミチン酸から選択された酸部分であり、ここで、酸部分はアミド結合によってＰ１に結合され、
Ｘは単結合、−Ｎ（Ｒ５）−、−Ｓ−、または−Ｏ−であり、
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、およびＲ４はそれぞれ独立して、Ｈ、ハロ、−ＣＮ、−ＳＲ５、アルキル、シクロアルキル、ハロアルキル、−ＮＲ５Ｒ５、または−ＯＲ５であり、
Ｒ５はそれぞれ独立して、Ｈ、アルキル、ハロアルキル、アリールアルキル、またはヘテロアルキルであり、
Ｒ６はＯＨまたは−ＮＲ５Ｒ５であり、
Ｒ７はそれぞれ独立して、Ｈ、アルキル、ハロアルキル、アリールアルキル、またはヘテロアルキルであり、
ｍとｎは独立して、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、または２０であり、
ｒは１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０であり、
ｓは１、２、３、４、または５であり、
ｋは１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０であり、
ｐは２、３、４、５、６、７、８、９、または１０であり、および、
ｑは２、３、４、５、６、７、８、９、または１０である。
【００２３】
修飾された治療薬のいくつかの実施形態では、Ａ１は
【００２４】
【化６】
2018511574.tif 000008
である。
【００２５】
修飾された治療薬のいくつかの実施形態では、ＰＥＧは
【００２６】
【化７】
2018511574.tif 000009
である。
【００２７】
修飾された治療薬のいくつかの実施形態では、Ａ２は
【００２８】
【化８】
2018511574.tif 000010
である。
【００２９】
修飾された治療薬のいくつかの実施形態では、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、およびＲ４はそれぞれＨである。修飾された治療薬のいくつかの実施形態では、Ｒ５はそれぞれ独立してＨである。修飾された治療薬のいくつかの実施形態では、Ｒ６はそれぞれＯＨまたはＮＨ２である。修飾された治療薬のいくつかの実施形態では、Ｒ７はそれぞれＨである。修飾された治療薬のいくつかの実施形態では、ｍは、１、２、３、４、５、６、７、８、または９である。修飾された治療薬のいくつかの実施形態では、ｎは１、２、３、４、または５である。修飾された治療薬のいくつかの実施形態では、ｒは１、２、または３である。修飾された治療薬のいくつかの実施形態では、ｓは２または４である。修飾された治療薬のいくつかの実施形態では、ｐは２である。修飾された治療薬のいくつかの実施形態では、Ｘは−Ｏ−である。
【００３０】
別の態様では、本明細書に記載された修飾された治療薬の１つ以上を含む医薬組成物がある。
【００３１】
さらに、本明細書では、被験体の疾患または疾病を処置する方法であって、治療上有効な量の本明細書に記載される修飾された治療薬を含む組成物を被験体に投与する工程を含む方法が開示される。疾患または疾病は心血管障害であり得る。疾患または疾病は急性心不全であり得る。疾患または疾病は線維症であり得る。疾患または疾病は疼痛であり得る。疼痛は神経障害性疼痛または炎症性疼痛であり得る。上記方法は、１つ以上の追加の治療薬を被験体に投与する工程をさらに含み得る。１つ以上の追加の治療薬は、抗炎症薬、スタチン、利尿薬、β−遮断薬、アンジオテンシン変換酵素阻害薬、アンジオテンシンＩＩ受容体拮抗薬、またはその任意の組み合わせからなる群から選択されてもよい。１つ以上の追加の治療薬は、抗炎症薬、疼痛を処置する薬物、またはその任意の組み合わせからなる群から選択されてもよい。１つ以上の追加の治療薬はアスピリンであり得る。
【図面の簡単な説明】
【００３２】
本発明の新規な特徴は添付の請求項で具体的に説明される。本発明は、添付の図面と共に精読すると以下の詳細な記載から最も良く理解される。一般的な手法に従って、図面の様々な特徴は同一縮尺ではないことを強調しておく。これに反して、明瞭化のために様々な特徴の寸法が任意に拡大縮小される。図には以下の特徴が含まれている。
【図１】脂質接合のためにシステインで修飾されたリラキシンを示す（ボックスで囲まれた残基は、例えば、Ｌ−システイン、リジン、グルタミン、アラニンに変異することがある）。
【図２】ＬＧＲ７とＣＲＥ−Ｌｕｃレポーター株を発現するＨＥＫ２９３Ｔ細胞におけるリラキシン２受容体（ＲＸＦＰ２またはＬＧＲ７）を活性化するヒトリラキシン２を示す。
【図３】リラキシンＢ：Ｄ１Ａ−Ａ：Ｑ１−Ｌ２Ｃ−ＦＡ２薬剤（エントリー１、表３）のリラキシンＢ：Ｄ１Ａ−Ａ：ｐＱ１−Ｌ２Ｃ−ＦＡ２（エントリー５、表３）への転換を示すクロマトグラムを示す。
【図４】ｐＶＢ００８  リラキシン２リンカーベクターの概略図と他のリラキシン発現構築物の追加の概略図を示す。
【図５】（Ａ）トキシン（Ｔｏｘｉｎ）−５５０ペプチド（野生型）に対するジスルフィド結合パターン、および（Ｂ）システイン−ノットトキシン−５５０ペプチドの典型的なインビトロフォールディング経路を示し、中央の構造は２−スルフィド結合中間体を描いており、ジスルフィド結合はシステインＩとシステインＩＶとの間、およびシステインＩＩとシステインＶとの間で結合される。
【図６】野生型のリラキシンに関するマウスの薬物動態学的データを示す。
【図７】修飾された治療薬（エントリー２、表３）に関するマウスの薬物動態学的データを示す。
【図８】修飾された治療薬（エントリー１、表３）に関するマウスの薬物動態学的データを示す。
【図９】修飾された治療薬（エントリー３、表３）に関するマウスの薬物動態学的データを示す。
【図１０】マウスに修飾された治療薬（Ａ：ＩＶ、Ｂ：ＳＣ）（エントリー７、表３）に関するマウスの薬物動態学的データを示す。
【図１１】修飾された治療薬（Ａ：ＩＶ、Ｂ：ＳＣ）（エントリー８、表３）に関するマウスの薬物動態学的データを示す。
【図１２】修飾された治療薬（Ａ：ＩＶ、Ｂ：ＳＣ）（エントリー９、表３）に関するマウスの薬物動態学的データを示す。
【図１３】修飾された治療薬（Ａ：ＩＶ、Ｂ：ＳＣ）（エントリー５、表３）に関するラットの薬物動態学的データを示す。
【図１４】野性型リラキシン（エントリー９、表３）と比較して、ＬＧＲ７とＣＲＥ−Ｌｕｃレポーター株を発現するＨＥＫ２９３Ｔ細胞におけるリラキシン２受容体（ＲＸＦＰ２またはＬＧＲ７）を活性化する修飾された治療薬を示す。
【図１５】野性型リラキシン（エントリー１、表３）と比較して、ＬＧＲ７とＣＲＥ−Ｌｕｃレポーター株を発現するＨＥＫ２９３Ｔ細胞におけるリラキシン２受容体（ＲＸＦＰ２またはＬＧＲ７）を活性化する修飾された治療薬を示す。
【図１６】野性型リラキシン（エントリー７、表３）と比較して、ＬＧＲ７とＣＲＥ−Ｌｕｃレポーター株を発現するＨＥＫ２９３Ｔ細胞におけるリラキシン２受容体（ＲＸＦＰ２またはＬＧＲ７）を活性化する修飾された治療薬を示す。
【図１７】野性型リラキシン（エントリー８、表３）と比較して、ＬＧＲ７とＣＲＥ−Ｌｕｃレポーター株を発現するＨＥＫ２９３Ｔ細胞におけるリラキシン２受容体（ＲＸＦＰ２またはＬＧＲ７）を活性化する修飾された治療薬を示す。
【図１８】野性型リラキシン（エントリー４、表３）と比較して、ＬＧＲ７とＣＲＥ−Ｌｕｃレポーター株を発現するＨＥＫ２９３Ｔ細胞におけるリラキシン２受容体（ＲＸＦＰ２またはＬＧＲ７）を活性化する修飾された治療薬を示す。
【発明を実施するための形態】
【００３３】
修飾された治療薬が本明細書に開示される。一般に、修飾された治療薬は治療薬（ＴＡ）と１つ以上の半減期延長部分を含んでもよく、ここでＴＡは１つ以上の半減期延長部分に結合している。いくつかの実施形態では、修飾された治療薬は治療薬（ＴＡ）と１つの半減期延長部分を含み、ここでＴＡは半減期延長部分に結合している。治療薬はペプチドであり得る。ＴＡは、１つ以上の半減期延長部分の各々に共有結合することがある。ＴＡはＴＡ上のアミノ酸残基によって１つ以上の半減期延長部分に結合することがある。アミノ酸残基はシステインまたはリジンであり得る。アミノ酸残基はシステインであり得る。修飾された治療薬の半減期は、治療薬のみの半減期よりも長いことがある。半減期延長部分は脂質、ポリグリコール領域、またはその組み合わせを含むことがある。半減期延長部分はヘテロアリールまたはヘテロシクリルの基をさらに含むことがある。半減期延長部分は、ＴＡ上のシステイン残基の硫黄原子に結合することがある。ＴＡは少なくとも１つのアイソスター（ｉｓｏｓｔｅｒｉｃ）ジスルフィド模倣物を含むペプチドであり得る。
【００３４】
脂質複合体（ＬＣ）が本明細書に開示される。一般に、ＬＣは脂質と治療薬を含む。ＬＣは、脂質を治療薬に結合するリンカーをさらに含むことがあり、リンカーはヘテロアリールまたはヘテロシクリルの基を含む。治療薬は少なくとも１つのアイソスタージスルフィド模倣物を含むことがある。
【００３５】
脂質複合体（ＬＣ）は、（ａ）１つ以上の脂質であって、ステロール、ステロール誘導体、胆汁酸、ビタミンＥ誘導体、脂肪二酸、脂肪酸、脂肪酸アミド、脂肪族アミン、および脂肪族アルコール、ならびにその誘導体から選択される、脂質；（ｂ）治療薬（ＴＡ）、および（ｃ）１つ以上の脂質の各々をＴＡに結合するリンカーであって、ヘテロアリールまたはヘテロシクリルの基を含む、リンカー、を含んでもよく、ＴＡはペプチドであり、および、リンカーはそれぞれペプチド上のアミノ酸によってＴＡと複合化する。アミノ酸残基はシステインまたはリジンであり得る。
【００３６】
脂質複合体（ＬＣ）は（ａ）１つ以上の脂質であって、ステロール、ステロール誘導体、胆汁酸、ビタミンＥ誘導体、脂肪二酸、脂肪酸、脂肪酸アミド、および脂肪族アルコールから選択される、脂質；（ｂ）１つ以上の治療薬（ＴＡ）、および（ｃ）脂質をＴＡに結合するリンカーであって、ヘテロアリールまたはヘテロシクリルの基を含み、それぞれがアミノ酸残基によってＴＡと複合化する、リンカーを含んでもよい。アミノ酸残基はシステインまたはリジンであり得る。
【００３７】
本明細書では、（ａ）１つ以上の脂質であって、ステロール、ステロール誘導体、胆汁酸、ビタミンＥ誘導体、脂肪二酸、脂肪酸、脂肪酸アミド、および脂肪族アルコールから選択される、脂質と、（ｂ）１つ以上の治療薬（ＴＡ）と、（ｃ）ＴＡに脂質を結合するリンカーであって、ヘテロアリールまたはヘテロシクリルの基を含む、リンカーとを含んでいる脂質複合体（ＬＣ）がさらに開示されており、１つ以上のＴＡはリラキシンペプチドまたはその誘導体を含み、リンカーはそれぞれアミノ酸残基によって１つ以上のＴＡに結合している。
【００３８】
本明細書では、（ａ）１つ以上の脂質であって、ステロール、ステロール誘導体、胆汁酸、ビタミンＥ誘導体、脂肪二酸、脂肪酸、脂肪酸アミド、および脂肪族アルコールから選択される、脂質と、（ｂ）少なくとも１つのアイソスタージスルフィド模倣物を含む１つ以上の治療薬（ＴＡ）とを含んでいる脂質複合体（ＬＣ）がさらに開示されており、１つ以上のＴＡはそれぞれペプチドであり、１つ以上の脂質はペプチド上のアミノ酸残基によってＴＡと複合化する。
【００３９】
本発明の方法、キット、および組成物が詳細に記載される前に、本発明は記載される特定の方法、キット、または組成物に制限されず、当然のことながら変化することもあることが理解されよう。さらに、本明細書で使用される用語は特定の実施形態だけを記載することを目的としており、本発明の範囲が添付の請求項によってのみ制限されるため、限定的であることを意図していないことも理解されよう。実施例は、完全な開示と本発明の実施方法と使用方法の記載を当業者に与えるために示されており、発明者が発明とみなしているものの範囲を限定することを意図しておらず、以下の実験が実施された全てのまたは唯一の実験であることを表すことも意図していない。用いられる数（例えば、量、温度など）に関しては正確を期すために様々な努力がなされてきたが、いくつかの実験誤差と偏差については説明が付くはずである。特段指示のない限り、部分は重量部分であり、分子量は重量平均分子量であり、温度は摂氏度であり、圧力は大気圧またはほぼ大気圧下である。
【００４０】
一連の値が提供される場合、その範囲の上限と下限との間で、文脈で特段明示されていない限り、下限の単位の小数第一位までのその間のそれぞれの値も具体的に開示される。任意の記載された範囲の任意の記載された値またはその間の値と、その記載された範囲の任意の他の記載されたまたは介在する値との間のそれぞれの小さな範囲は本発明内に包含される。こうした小さな範囲の上下限は独立して、範囲に含まれることもあれば、排除されることもあり、その小さな範囲に一方か、両方が含まれるか、またはいずれも含まれない場合、それぞれの範囲は、記載された範囲中の任意の具体的に除外された制限を受けて、本発明に包含される。記載された範囲が１つまたは両方の限界を含む場合、これらの含まれる限界の一方または両方を除外する範囲は本発明にも含まれる。
【００４１】
別段の定めのない限り、本明細書で使用されるすべての技術的および科学的な用語は、本発明が属する分野の当業者によって一般に理解されるのと同じ意味を有する。本明細書に記載される方法や材料と類似するまたは同等の任意の方法や材料を本発明の実施または試験の際に使用することができるが、可能性のある、および好ましい方法や材料がここで記載されている。本明細書で言及されるすべての出版物は、出版物の引用の際に関連付けられる方法、および／または材料を開示、および記載するために参照により本明細書に組み込まれる。本開示は矛盾がある程度まで、組み込まれた出版物の任意の開示に取って代わることが理解されよう。
【００４２】
本開示を読んだ当業者には明らかであるが、本明細書に記載および例証される個々の実施形態の各々は、本発明の範囲と精神を逸脱することなく、他の複数の実施形態のいずれかの特徴から容易に分離されることもあれば組み合わされることもある別々の要素と特徴を有している。任意の列挙された方法を、列挙された事象の順序で、または論理上可能な他の順序で実行することができる。
【００４３】
本明細書や添付の請求項で使用されるように、単数形「ａ」、「ａｎ」、および「ｔｈｅ」は、文脈で特段の定めのない限り、複数の指示物を含んでいる。したがって、例えば、「細胞」への言及は、複数のそうした細胞を含んでおり、「ペプチド」への言及は、１つ以上のペプチド、およびその等価物（例えば、当業者に知られているポリペプチドなど）への言及を含んでいる。
【００４４】
本明細書で議論される出版物は、本出願の出願日に先立って開示するためにのみ提供される。本発明が先行発明によるこうした公開に先行するという資格がないという承認として解釈されるものは本明細書には何もない。さらに、提供される公開日は、独立して確認される必要があることがある実際の公開日とは異なり得る。
【００４５】
方法と組成物は、治療薬の半減期を延長する修飾された治療薬を生成するために提供される。例えば、これらの方法と組成物は多くの疾患の治療用途で見られ、例えば、心疾患は、リラキシンだけによりもリラキシンと複合化した半減期延長分子でより有効に処置されることがある。本発明のこれらおよび他の目的、利点、ならびに特徴は、以下により完全に記載されるような組成物と方法の詳細を読んだ当業者には明白となるであろう。
【００４６】
本発明の好ましい実施形態が本明細書に示され記載されてきた一方で、こうした実施形態はほんの一例として与えられることは当業者にとって明白である。多くの変更、変化、および置換が、本発明から逸脱することなく、当業者の心に思い浮かぶであろう。本明細書に記載される本発明の実施形態の様々な代案が、本発明の実施において利用されるかもしれないことを理解されたい。以下の請求項は本発明の範囲を定義するものであり、この請求項とその均等物の範囲内の方法、および構造体がそれによって包含されるものであるということが意図されている。
【００４７】
修飾された治療薬
以下を含む修飾された治療薬が本明細書に開示される：
（ｉ）リラキシンＡ鎖を含む治療薬（ＴＡ）、および（ｉｉ）半減期延長部分；
ここで、ＴＡは、ＴＡのシステイン残基によって半減期延長部分に共有結合する。
【００４８】
修飾された治療薬のいくつかの実施形態では、リラキシンＡ鎖は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５４、５５、５９、および６０からなる群から選択されたアミノ酸配列である。修飾された治療薬のいくつかの実施形態では、リラキシンＡ鎖アミノ酸配列はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４１ではない。修飾された治療薬のいくつかの実施形態では、リラキシンＡ鎖アミノ酸配列はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４２ではない。修飾された治療薬のいくつかの実施形態では、リラキシンＡ鎖アミノ酸配列はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４３ではない。修飾された治療薬のいくつかの実施形態では、リラキシンＡ鎖アミノ酸配列はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４４ではない。修飾された治療薬のいくつかの実施形態では、リラキシンＡ鎖アミノ酸配列はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４５ではない。修飾された治療薬のいくつかの実施形態では、リラキシンＡ鎖アミノ酸配列はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４６ではない。修飾された治療薬のいくつかの実施形態では、リラキシンＡ鎖アミノ酸配列はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４７ではない。修飾された治療薬のいくつかの実施形態では、リラキシンＡ鎖アミノ酸配列はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５３ではない。修飾された治療薬のいくつかの実施形態では、リラキシンＡ鎖アミノ酸配列はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５５ではない。修飾された治療薬のいくつかの実施形態では、治療薬はリラキシンＢ鎖をさらに含む。修飾された治療薬のいくつかの実施形態では、治療薬は修飾されたリラキシンＢ鎖をさらに含み、ここで、１つ以上のアミノ酸が付加、欠失、置換され、またはその組み合わせが行われた。修飾された治療薬のいくつかの実施形態では、治療薬は、付加、欠失、または置換された１つのアミノ酸を含む、修飾されたリラキシンＢ鎖をさらに含む。修飾された治療薬のいくつかの実施形態では、治療薬は、付加、欠失、置換されたか、またはその組み合わせが行われた２つのアミノ酸を含む、修飾されたリラキシンＢ鎖をさらに含む。修飾された治療薬のいくつかの実施形態では、治療薬は、付加、欠失、置換されたか、またはその組み合わせが行われた３つのアミノ酸を含む、修飾されたリラキシンＢ鎖をさらに含む。修飾された治療薬のいくつかの実施形態では、治療薬は、付加、欠失、置換されたか、またはその組み合わせが行われた４つのアミノ酸を含む、修飾されたリラキシンＢ鎖をさらに含む。修飾された治療薬のいくつかの実施形態では、治療薬は、付加、欠失、置換されたか、またはその組み合わせが行われた５つのアミノ酸を含む、修飾されたリラキシンＢ鎖をさらに含む。修飾された治療薬のいくつかの実施形態では、治療薬は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１６、４０、４８−５２、５６、５８、および６１からなる群から選択されたリラキシンＢ鎖アミノ酸配列をさらに含む。修飾された治療薬のいくつかの実施形態では、治療薬は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１６、４０、４８−５２、５６、５８、および６１からなる群から選択されたアミノ酸配列に少なくとも５０％相同するリラキシンＢ鎖アミノ酸配列をさらに含む。修飾された治療薬のいくつかの実施形態では、治療薬は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４８のリラキシンＢ鎖アミノ酸配列をさらに含む。修飾された治療薬のいくつかの実施形態では、修飾された治療薬の半減期は、治療薬の��の半減期よりも長い。
【００４９】
以下を含む修飾された治療薬が本明細書に開示される：
（ｉ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５４、５５、５９、および６０からなる群から選択されたリラキシンＡ鎖アミノ酸配列を含む治療薬（ＴＡ）、および、
（ｉｉ）半減期延長部分；
ここで、ＴＡは、ＴＡのシステイン残基によって半減期延長部分に共有結合する。
【００５０】
修飾された治療薬のいくつかの実施形態では、システイン残基はリラキシンＡ鎖アミノ酸配列中にある。修飾された治療薬のいくつかの実施形態では、システイン残基はリラキシンＡ鎖アミノ酸配列中ではない。修飾された治療薬のいくつかの実施形態では、システイン残基は、リラキシンＡ鎖アミノ酸配列の２位置にある。修飾された治療薬のいくつかの実施形態では、システイン残基は、リラキシンＡ鎖アミノ酸配列の１３位置にある。修飾された治療薬のいくつかの実施形態では、治療薬はリラキシンＡ鎖アミノ酸配列ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５４を含む。修飾された治療薬のいくつかの実施形態では、治療薬はリラキシンＡ鎖アミノ酸配列ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５５を含む。修飾された治療薬のいくつかの実施形態では、治療薬はリラキシンＡ鎖アミノ酸配列ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５９を含む。修飾された治療薬のいくつかの実施形態では、治療薬はリラキシンＡ鎖アミノ酸配列ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６０を含む。修飾された治療薬のいくつかの実施形態では、治療薬はリラキシンＢ鎖をさらに含む。修飾された治療薬のいくつかの実施形態では、治療薬は修飾されたリラキシンＢ鎖をさらに含み、ここで、１つ以上のアミノ酸が付加、欠失、置換され、またはその組み合わせが行われた。修飾された治療薬のいくつかの実施形態では、治療薬は、付加、欠失、または置換された１つのアミノ酸を含む、修飾されたリラキシンＢ鎖をさらに含む。修飾された治療薬のいくつかの実施形態では、治療薬は、付加、欠失、置換されたか、またはその組み合わせが行われた２つのアミノ酸を含む、修飾されたリラキシンＢ鎖をさらに含む。修飾された治療薬のいくつかの実施形態では、治療薬は、付加、欠失、置換されたか、またはその組み合わせが行われた３つのアミノ酸を含む、修飾されたリラキシンＢ鎖をさらに含む。修飾された治療薬のいくつかの実施形態では、治療薬は、付加、欠失、置換されたか、またはその組み合わせが行われた４つのアミノ酸を含む、修飾されたリラキシンＢ鎖をさらに含む。修飾された治療薬のいくつかの実施形態では、治療薬は、付加、欠失、置換されたか、またはその組み合わせが行われた５つのアミノ酸を含む、修飾されたリラキシンＢ鎖をさらに含む。修飾された治療薬のいくつかの実施形態では、治療薬は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１６、４０、４８−５２、５６、５８、および６１からなる群から選択されたリラキシンＢ鎖アミノ酸配列をさらに含む。修飾された治療薬のいくつかの実施形態では、治療薬は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１６、４０、４８−５２、５６、５８、および６１からなる群から選択されたアミノ酸配列に少なくとも５０％相同するリラキシンＢ鎖アミノ酸配列をさらに含む。修飾された治療薬のいくつかの実施形態では、治療薬は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４８のリラキシンＢ鎖アミノ酸配列をさらに含む。修飾された治療薬のいくつかの実施形態では、修飾された治療薬の半減期は、治療薬のみの半減期よりも長い。
【００５１】
以下を含む修飾された治療薬が本明細書に開示される：
（ｉ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５４、５５、５９、および６０からなる群から選択されたアミノ酸配列に少なくとも５０％相同するリラキシンＡ鎖アミノ酸配列を含む治療薬（ＴＡ）、および
（ｉｉ）半減期延長部分；
ここで、ＴＡは、ＴＡのシステイン残基によって半減期延長部分に共有結合する。
【００５２】
修飾された治療薬のいくつかの実施形態では、リラキシンＡ鎖アミノ酸配列は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５４、５５、５９、および６０からなる群から選択されたアミノ酸配列に少なくとも５１％、５２％、５３％、５４％、５５％、５６％、５７％、５８％、５９％、６０％、６１％、６２％、６３％、６４％、６５％、６６％、６７％、６８％、６９％、７０％、７１％、７２％、７３％、７４％、７５％、７６％、７７％、７８％、７９％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、または９６％相同する。修飾された治療薬のいくつかの実施形態では、リラキシンＡ鎖アミノ酸配列は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５４、５５、５９、および６０からなる群から選択されたアミノ酸配列に少なくとも８０％相同する。修飾された治療薬のいくつかの実施形態では、リラキシンＡ鎖アミノ酸配列は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５４、５５、５９、および６０からなる群から選択されたアミノ酸配列に少なくとも９０％相同する。修飾された治療薬のいくつかの実施形態では、システイン残基はリラキシンＡ鎖アミノ酸配列中にある。修飾された治療薬のいくつかの実施形態では、システイン残基はリラキシンＡ鎖アミノ酸配列中ではない。修飾された治療薬のいくつかの実施形態では、システイン残基は、リラキシンＡ鎖アミノ酸配列の２位置にある。修飾された治療薬のいくつかの実施形態では、システイン残基は、リラキシンＡ鎖アミノ酸配列の１３位置にある。修飾された治療薬のいくつかの実施形態では、リラキシンＡ鎖アミノ酸配列はアミノ酸配列ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５４に少なくとも５０％相同する。修飾された治療薬のいくつかの実施形態では、リラキシンＡ鎖アミノ酸配列はアミノ酸配列ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５５に少なくとも５０％相同する。修飾された治療薬のいくつかの実施形態では、リラキシンＡ鎖アミノ酸配列はアミノ酸配列ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５９に少なくとも５０％相同する。修飾された治療薬のいくつかの実施形態では、リラキシンＡ鎖アミノ酸配列はアミノ酸配列ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６０に少なくとも５０％相同する。修飾された治療薬のいくつかの実施形態では、リラキシンＡ鎖アミノ酸配列はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４１ではない。修飾された治療薬のいくつかの実施形態では、リラキシンＡ鎖アミノ酸配列はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４２ではない。修飾された治療薬のいくつかの実施形態では、リラキシンＡ鎖アミノ酸配列はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４３ではない。修飾された治療薬のいくつかの実施形態では、リラキシンＡ鎖アミノ酸配列はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４４ではない。修飾された治療薬のいくつかの実施形態では、リラキシンＡ鎖アミノ酸配列はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４５ではない。修飾された治療薬のいくつかの実施形態では、リラキシンＡ鎖アミノ酸配列はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４６ではない。修飾された治療薬のいくつかの実施形態では、リラキシンＡ鎖アミノ酸配列はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４７ではない。修飾された治療薬のいくつかの実施形態では、リラキシンＡ鎖アミノ酸配列はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５３ではない。修飾された治療薬のいくつかの実施形態では、リラキシンＡ鎖アミノ酸配列はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５５ではない。修飾された治療薬のいくつかの実施形態では、治療薬はリラキシンＢ鎖をさらに含む。修飾された治療薬のいくつかの実施形態では、治療薬は修飾されたリラキシンＢ鎖をさらに含み、ここで、１つ以上のアミノ酸が付加、欠失、置換され、またはその組み合わせが行われた。修飾された治療薬のいくつかの実施形態では、治療薬は、付加、欠失、または置換された１つのアミノ酸を含む、修飾されたリラキシンＢ鎖をさらに含む。修飾された治療薬のいくつかの実施形態では、治療薬は、付加、欠失、置換されたか、またはその組み合わせが行われた２つのアミノ酸を含む、修飾されたリラキシンＢ鎖をさらに含む。修飾された治療薬のいくつかの実施形態では、治療薬は、付加、欠失、置換されたか、またはその組み合わせが行われた３つのアミノ酸を含む、修飾されたリラキシンＢ鎖をさらに含む。修飾された治療薬のいくつかの実施形態では、治療薬は、付加、欠失、置換されたか、またはその組み合わせが行われた４つのアミノ酸を含む、修飾されたリラキシンＢ鎖をさらに含む。修飾された治療薬のいくつかの実施形態では、治療薬は、付加、欠失、置換されたか、またはその組み合わせが行われた５つのアミノ酸を含む、修飾されたリラキシンＢ鎖をさらに含む。修飾された治療薬のいくつかの実施形態では、治療薬は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１６、４０、４８−５２、５６、５８、および６１からなる群から選択されたリラキシンＢ鎖アミノ酸配列をさらに含む。修飾された治療薬のいくつかの実施形態では、治療薬は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１６、４０、４８−５２、５６、５８、および６１からなる群から選択されたアミノ酸配列に少なくとも５０％相同するリラキシンＢ鎖アミノ酸配列をさらに含む。修飾された治療薬のいくつかの実施形態では、治療薬は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４８のリラキシンＢ鎖アミノ酸配列をさらに含む。修飾された治療薬のいくつかの実施形態では、修飾された治療薬の半減期は、治療薬のみの半減期よりも長い。
【００５３】
以下を含む修飾された治療薬が本明細書に開示される：
（ｉ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５４、５５、５９、および６０からなる群から選択されたリラキシンＡ鎖アミノ酸配列を含む治療薬（ＴＡ）であって、最大で５つのアミノ酸が付加、欠失、置換され、またはその組み合わせが行われた、治療薬、および
（ｉｉ）半減期延長部分；
ここで、ＴＡは、ＴＡのシステイン残基によって半減期延長部分に共有結合する。
【００５４】
修飾された治療薬のいくつかの実施形態では、１つのアミノ酸がリラキシンＡ鎖アミノ酸配列から付加、欠失、または置換されている。修飾された治療薬のいくつかの実施形態において、２つのアミノ酸がリラキシンＡ鎖アミノ酸配列から付加、欠失、置換されたか、またはその組み合わせが行われた。修飾された治療薬のいくつかの実施形態において、３つのアミノ酸がリラキシンＡ鎖アミノ酸配列から付加、欠失、置換されたか、またはその組み合わせが行われた。修飾された治療薬のいくつかの実施形態において、４つのアミノ酸がリラキシンＡ鎖アミノ酸配列から付加、欠失、置換されたか、またはその組み合わせが行われた。修飾された治療薬のいくつかの実施形態において、５つのアミノ酸がリラキシンＡ鎖アミノ酸配列から付加、欠失、置換されたか、またはその組み合わせが行われた。修飾された治療薬のいくつかの実施形態では、システイン残基はリラキシンＡ鎖アミノ酸配列中にある。修飾された治療薬のいくつかの実施形態では、システイン残基はリラキシンＡ鎖アミノ酸配列中ではない。修飾された治療薬のいくつかの実施形態では、システイン残基は、リラキシンＡ鎖アミノ酸配列の２位置にある。修飾された治療薬のいくつかの実施形態では、システイン残基は、リラキシンＡ鎖アミノ酸配列の１３位置にある。修飾された治療薬のいくつかの実施形態では、リラキシンＡ鎖アミノ酸配列はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５４であり、ここで、最大で５つのアミノ酸が付加、欠失、置換され、またはその組み合わせが行われた。修飾された治療薬のいくつかの実施形態では、リラキシンＡ鎖アミノ酸配列はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５５であり、ここで、最大で５つのアミノ酸が付加、欠失、置換され、またはその組み合わせが行われた。修飾された治療薬のいくつかの実施形態では、リラキシンＡ鎖アミノ酸配列はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５９であり、ここで、最大で５つのアミノ酸が付加、欠失、置換され、またはその組み合わせが行われた。修飾された治療薬のいくつかの実施形態では、リラキシンＡ鎖アミノ酸配列はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６０であり、ここで、最大で５つのアミノ酸が付加、欠失、置換され、またはその組み合わせが行われた。修飾された治療薬のいくつかの実施形態では、リラキシンＡ鎖アミノ酸配列はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４１ではない。修飾された治療薬のいくつかの実施形態では、リラキシンＡ鎖アミノ酸配列はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４２ではない。修飾された治療薬のいくつかの実施形態では、リラキシンＡ鎖アミノ酸配列はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４３ではない。修飾された治療薬のいくつかの実施形態では、リラキシンＡ鎖アミノ酸配列はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４４ではない。修飾された治療薬のいくつかの実施形態では、リラキシンＡ鎖アミノ酸配列はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４５ではない。修飾された治療薬のいくつかの実施形態では、リラキシンＡ鎖アミノ酸配列はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４６ではない。修飾された治療薬のいくつかの実施形態では、リラキシンＡ鎖アミノ酸配列はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４７ではない。修飾された治療薬のいくつかの実施形態では、リラキシンＡ鎖アミノ酸配列はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５３ではない。修飾された治療薬のいくつかの実施形態では、リラキシンＡ鎖アミノ酸配列はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５５ではない。修飾された治療薬のいくつかの実施形態では、治療薬はリラキシンＢ鎖をさらに含む。修飾された治療薬のいくつかの実施形態では、治療薬は修飾されたリラキシンＢ鎖をさらに含み、ここで、１つ以上のアミノ酸が付加、欠失、置換され、またはその組み合わせが行われた。修飾された治療薬のいくつかの実施形態では、治療薬は、付加、欠失、または置換された１つのアミノ酸を含む、修飾されたリラキシンＢ鎖をさらに含む。修飾された治療薬のいくつかの実施形態では、治療薬は、付加、欠失、置換されたか、またはその組み合わせが行われた２つのアミノ酸を含む、修飾されたリラキシンＢ鎖をさらに含む。修飾された治療薬のいくつかの実施形態では、治療薬は、付加、欠失、置換されたか、またはその組み合わせが行われた３つのアミノ酸を含む、修飾されたリラキシンＢ鎖をさらに含む。修飾された治療薬のいくつかの実施形態では、治療薬は、付加、欠失、置換されたか、またはその組み合わせが行われた４つのアミノ酸を含む、修飾されたリラキシンＢ鎖をさらに含む。修飾された治療薬のいくつかの実施形態では、治療薬は、付加、欠失、置換されたか、またはその組み合わせが行われた５つのアミノ酸を含む、修飾されたリラキシンＢ鎖をさらに含む。修飾された治療薬のいくつかの実施形態では、治療薬は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１６、４０、４８−５２、５６、５８、および６１からなる群から選択されたリラキシンＢ鎖アミノ酸配列をさらに含む。修飾された治療薬のいくつかの実施形態では、治療薬は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１６、４０、４８−５２、５６、５８、および６１からなる群から選択されたアミノ酸配列に少なくとも５０％相同するリラキシンＢ鎖アミノ酸配列をさらに含む。修飾された治療薬のいくつかの実施形態では、治療薬は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４８のリラキシンＢ鎖アミノ酸配列をさらに含む。修飾された治療薬のいくつかの実施形態では、修飾された治療薬の半減期は、治療薬のみの半減期よりも長い。
【００５５】
以下を含む修飾された治療薬が本明細書に開示される：
（ｉ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５４、５５、５９、および６０からなる群から選択されたリラキシンＡ鎖アミノ酸配列の一部を含む治療薬（ＴＡ）、および
（ｉｉ）半減期延長部分；ここで、ＴＡは、ＴＡのシステイン残基によって半減期延長部分に共有結合する。
【００５６】
修飾された治療薬のいくつかの実施形態では、リラキシンＡ鎖アミノ酸配列の一部は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５４、５５、５９、および６０の少なくとも２０の連続するアミノ酸を含む。修飾された治療薬のいくつかの実施形態では、リラキシンＡ鎖アミノ酸配列の一部は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５４、５５、５９、および６０の少なくとも２０、少なくとも１９、少なくとも１８、少なくとも１７、少なくとも１６、少なくとも１５、少なくとも１４、少なくとも１３、少なくとも１２、少なくとも１１、少なくとも１０、少なくとも９、少なくとも８、少なくとも７、少なくとも６、または少なくとも５の連続するアミノ酸を含む。修飾された治療薬のいくつかの実施形態では、リラキシンＡ鎖アミノ酸配列の一部は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５４、５５、５９、および６０の少なくとも１５の連続するアミノ酸を含む。修飾された治療薬のいくつかの実施形態では、リラキシンＡ鎖アミノ酸配列の一部は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５４、５５、５９、および６０の少なくとも１０の連続するアミノ酸を含む。修飾された治療薬のいくつかの実施形態では、システイン残基は、リラキシンＡ鎖アミノ酸配列の一部にある。修飾された治療薬のいくつかの実施形態では、システイン残基は、リラキシンＡ鎖アミノ酸配列の一部にない。修飾された治療薬のいくつかの実施形態では、システイン残基は、リラキシンＡ鎖アミノ酸配列の一部の２位置にある。修飾された治療薬のいくつかの実施形態では、システイン残基は、リラキシンＡ鎖アミノ酸配列の一部の２位置にある。修飾された治療薬のいくつかの実施形態では、治療薬は、リラキシンＡ鎖アミノ酸ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５４の一部を含む。修飾された治療薬のいくつかの実施形態では、治療薬は、リラキシンＡ鎖アミノ酸ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５５の一部を含む。修飾された治療薬のいくつかの実施形態では、治療薬は、リラキシンＡ鎖アミノ酸ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５９の一部を含む。修飾された治療薬のいくつかの実施形態では、治療薬は、リラキシンＡ鎖アミノ酸ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６０の一部を含む。修飾された治療薬のいくつかの実施形態では、リラキシンＡ鎖アミノ酸配列はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４１ではない。修飾された治療薬のいくつかの実施形態では、リラキシンＡ鎖アミノ酸配列はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４２ではない。修飾された治療薬のいくつかの実施形態では、リラキシンＡ鎖アミノ酸配列はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４３ではない。修飾された治療薬のいくつかの実施形態では、リラキシンＡ鎖アミノ酸配列はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４４ではない。修飾された治療薬のいくつかの実施形態では、リラキシンＡ鎖アミノ酸配列はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４５ではない。修飾された治療薬のいくつかの実施形態では、リラキシンＡ鎖アミノ酸配列はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４６ではない。修飾された治療薬のいくつかの実施形態では、リラキシンＡ鎖アミノ酸配列はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４７ではない。修飾された治療薬のいくつかの実施形態では、リラキシンＡ鎖アミノ酸配列はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５３ではない。修飾された治療薬のいくつかの実施形態では、リラキシンＡ鎖アミノ酸配列はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５５ではない。修飾された治療薬のいくつかの実施形態では、治���薬はリラキシンＢ鎖をさらに含む。修飾された治療薬のいくつかの実施形態では、治療薬は修飾されたリラキシンＢ鎖をさらに含み、ここで、１つ以上のアミノ酸が付加、欠失、置換され、またはその組み合わせが行われた。修飾された治療薬のいくつかの実施形態では、治療薬は、付加、欠失、または置換された１つのアミノ酸を含む、修飾されたリラキシンＢ鎖をさらに含む。修飾された治療薬のいくつかの実施形態では、治療薬は、付加、欠失、置換されたか、またはその組み合わせが行われた２つのアミノ酸を含む、修飾されたリラキシンＢ鎖をさらに含む。修飾された治療薬のいくつかの実施形態では、治療薬は、付加、欠失、置換されたか、またはその組み合わせが行われた３つのアミノ酸を含む、修飾されたリラキシンＢ鎖をさらに含む。修飾された治療薬のいくつかの実施形態では、治療薬は、付加、欠失、置換されたか、またはその組み合わせが行われた４つのアミノ酸を含む、修飾されたリラキシンＢ鎖をさらに含む。修飾された治療薬のいくつかの実施形態では、治療薬は、付加、欠失、置換されたか、またはその組み合わせが行われた５つのアミノ酸を含む、修飾されたリラキシンＢ鎖をさらに含む。修飾された治療薬のいくつかの実施形態では、治療薬は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１６、４０、４８−５２、５６、５８、および６１からなる群から選択されたリラキシンＢ鎖アミノ酸配列をさらに含む。修飾された治療薬のいくつかの実施形態では、治療薬は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１６、４０、４８−５２、５６、５８、および６１からなる群から選択されたアミノ酸配列に少なくとも５０％相同するリラキシンＢ鎖アミノ酸配列をさらに含む。修飾された治療薬のいくつかの実施形態では、治療薬は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４８のリラキシンＢ鎖アミノ酸配列をさらに含む。修飾された治療薬のいくつかの実施形態では、修飾された治療薬の半減期は、治療薬のみの半減期よりも長い。
【００５７】
いくつかの実施形態では、修飾された治療薬は以下の式を有し、
【００５８】
【化９】
2018511574.tif 000011
式中、ＴＡは治療薬であり、
【００５９】
【化１０】
2018511574.tif 000012
は半減期延長部分である。
【００６０】
修飾された治療薬のいくつかの実施形態では、
Ａ１はＴＡ、およびＰ１またはＬを結合する化学基であり、
Ｐ１は単結合または−ＰＥＧ−Ａ２−であり、および、
Ｌは、ステロール誘導体、胆汁酸誘導体、ビタミンＥ誘導体、脂肪二酸（ｆａｔｔｙ  ｄｉ−ａｃｉｄ）誘導体、脂肪酸誘導体、脂肪酸アミド誘導体、脂肪族アミン誘導体、および脂肪族アルコール誘導体からなる群から選択される脂質誘導体であり、ここで、脂質誘導体はアミドまたはエーテル結合によってＰ１に結合する。
【００６１】
修飾された治療薬のいくつかの実施形態では、脂質誘導体は、プロパン酸、ブタン酸、ペンタン酸、ヘキサン酸、ヘプタン酸、オクタン酸、ノナン酸、デカン酸、ウンデカン酸、ドデカン酸、トリデカン酸、テトラデカン酸、ミリスチン酸、ペンタデカン酸、ヘキサデカン酸、ヘプタデカン酸、オクタデカン酸、ノナデカン酸、エイコサン酸、ヘンイコサノン酸、ドコサン酸、トリコサン酸、テトラコサン酸、ペンタコサン酸、ヘキコサン酸、ヘプタコサン酸、オクタコサン酸、ノナコサン酸、トリアコンタン酸、ヘントリアコンタン（ｈｅｎａｔｒｉａｃｏｎｔａｎｏｉｃ）酸、ドトリアコンタン（ｄｏｔｒｉａｃｏｎｔａｎｏｉｃ）酸、トリトリアコンタン（ｔｒｉｔｒｉａｃｏｎｔａｎｏｉｃ）酸、テトラトリアコンタン（ｔｅｔｒａｔｒｉａｃｏｎｔａｎｏｉｃ）酸、ペンタトリアコンタン（ｐｅｎｔａｔｒｉａｃｏｎｔａｎｏｉｃ）酸、およびヘキサトリアコンタン（ｈｅｘａｔｒｉａｃｏｎｔａｎｏｉｃ）酸、マロン酸、コハク酸、グルタル酸、アジピン酸、ピメリン酸、スベリン酸、アゼライン酸、セバシン酸、ウンデカン二酸、ドデカン二酸、トリデカン二酸、テトラデカン二酸、ペンタデカン二酸、ヘキサデカン二酸、ヘプタデカン二酸、オクタデカン二酸、およびノナデカン二酸、ミリストレイン酸、パルミトレイン酸、サピエン酸、オレイン酸、エライジン酸、バクセン酸、リノール酸、リノレライド酸、α−リノレン酸、アラキドン酸、エイコサペンタノン酸、エルカ酸、およびドコサヘキサエン酸からなる群から選択される。
【００６２】
修飾された治療薬のいくつかの実施形態では、脂質誘導体は、オクタン酸、ノナン酸、デカン酸、ウンデカン酸、ドデカン酸、トリデカン酸、テトラデカン酸、ミリスチン酸、ペンタデカン酸、ヘキサデカン酸、ヘプタデカン酸、オクタデカン酸、ノナデカン酸、エイコサン酸、ヘンイコサノン酸、ドコサン酸、トリコサン酸、テトラコサン酸、ペンタコサン酸、ヘキコサン酸、ヘプタコサン酸、オクタコサン酸、ノナコサン酸、トリアコンタン酸、ヘントリアコンタン酸、ドトリアコンタン酸、トリトリアコンタン酸、テトラトリアコンタン酸、ペンタトリアコンタン酸、およびヘキサトリアコンタン酸、マロン酸、コハク酸、グルタル酸、アジピン酸、ピメリン酸、スベリン酸、アゼライン酸、セバシン酸、ウンデカン二酸、ドデカン二酸、トリデカン二酸、テトラデカン二酸、ペンタデカン二酸、ヘキサデカン二酸、ヘプタデカン二酸、オクタデカン二酸、ノナデカン二酸、およびミリストレイン酸、パルミトレイン酸、サピエン酸、オレイン酸、エライジン酸、バクセン酸、リノール酸、リノレライド酸、α−リノレン酸、アラキドン酸、エイコサペンタノン酸、エルカ酸、およびドコサヘキサエン酸からなる群から選択される。
【００６３】
修飾された治療薬のいくつかの実施形態では、脂質誘導体はコレステロール、７−ＯＨコレステロール、７，２５−ジヒドロキシコレステロール、コール酸、ケノデオキシコール酸、リトコール酸、デオキシコール酸、グリココール酸、グリコデオキシコール酸、グリコリトコール酸、およびグリコケノデオキシコール酸からなる群から選択される。
【００６４】
修飾された治療薬のいくつかの実施形態において、脂質誘導体は、α−トコフェロール、β−トコフェロール、γ−トコフェロール、δ−トコフェロール、α−トコトリエノール、β−トコトリエノール、γ−トコトリエノールおよびδ−トコトリエノールからなる群から選択される。
【００６５】
修飾された治療薬のいくつかの実施形態では、ＴＡのシステイン残基の硫黄原子は化学結合によってＡ１に結合される。
【００６６】
式（Ａ）の修飾された治療薬のいくつかの実施形態では、Ａ１は
【００６７】
【化１１】
2018511574.tif 000013
から選択され、ＰＥＧは
【００６８】
【化１２】
2018511574.tif 000014
から選択され、Ａ２は単結合、
【００６９】
【化１３】
2018511574.tif 000015
から選択され、
Ｌは、テトラデカン酸、オクタデカン二酸、ミリスチン酸、ステアリン酸、ドコサヘキサエン酸、リトコール酸、コール酸、およびパルミチン酸から選択された酸部分であり、
ここで、酸部分はアミド結合によってＰ１に結合され、
Ｘは単結合、−Ｎ（Ｒ５）−、−Ｓ−、または−Ｏ−であり、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、およびＲ４はそれぞれ独立して、Ｈ、ハロ、−ＣＮ、−ＳＲ５、アルキル、シクロアルキル、ハロアルキル、−ＮＲ５Ｒ５、または−ＯＲ５であり、
Ｒ５はそれぞれ独立して、Ｈ、アルキル、ハロアルキル、アリールアルキル、またはヘテロアルキルであり、
Ｒ６はＯＨまたは−ＮＲ５Ｒ５であり、
Ｒ７はそれぞれ独立して、Ｈ、アルキル、ハロアルキル、アリールアルキル、またはヘテロアルキルであり、
ｍとｎは独立して、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、または２０であり、
ｒは１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０であり、
ｓは１、２、３、４、または５であり、
ｋは１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０であり、
ｐは２、３、４、５、６、７、８、９、または１０であり、および、
ｑは２、３、４、５、６、７、８、９、または１０である。
【００７０】
修飾された治療薬のいくつかの実施形態では、Ａ１は
【００７１】
【化１４】
2018511574.tif 000016
である。
【００７２】
修飾された治療薬のいくつかの実施形態では、ＰＥＧは
【００７３】
【化１５】
2018511574.tif 000017
である。
【００７４】
修飾された治療薬のいくつかの実施形態では、Ａ２は
【００７５】
【化１６】
2018511574.tif 000018
である。
【００７６】
修飾された治療薬のいくつかの実施形態では、Ａ１は
【００７７】
【化１７】
2018511574.tif 000019
であり、ＰＥＧは
【００７８】
【化１８】
2018511574.tif 000020
であり、Ａ２は
【００７９】
【化１９】
2018511574.tif 000021
である。
【００８０】
修飾された治療薬のいくつかの実施形態では、Ａ１は
【００８１】
【化２０】
2018511574.tif 000022
であり、ＰＥＧは
【００８２】
【化２１】
2018511574.tif 000023
であり、Ａ２は
【００８３】
【化２２】
2018511574.tif 000024
であり、Ｘは−Ｏ−であり、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、およびＲ７はそれぞれＨであり、ｍは１または２であり、ｐは２であり、ｎは１であり、および、ｓは２、３、または４である。
【００８４】
修飾された治療薬のいくつかの実施形態では、Ａ１は
【００８５】
【化２３】
2018511574.tif 000025
あり、ＰＥＧは
【００８６】
【化２４】
2018511574.tif 000026
であり、Ａ２は
【００８７】
【化２５】
2018511574.tif 000027
である。
【００８８】
修飾された治療薬のいくつかの実施形態では、Ａ１は
【００８９】
【化２６】
2018511574.tif 000028
であり、ＰＥＧは
【００９０】
【化２７】
2018511574.tif 000029
であり、Ａ２は
【００９１】
【化２８】
2018511574.tif 000030
であり、Ｘは−Ｏ−であり、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、およびＲ７はそれぞれＨであり、ｍは１または２であり、ｐは２であり、ｒは１または２であり、および、ｎは１である。
【００９２】
修飾された治療薬のいくつかの実施形態では、Ａ１は
【００９３】
【化２９】
2018511574.tif 000031
であり、ＰＥＧは
【００９４】
【化３０】
2018511574.tif 000032
であり、Ａ２は
【００９５】
【化３１】
2018511574.tif 000033
である。
【００９６】
修飾された治療薬のいくつかの実施形態では、Ａ１は
【００９７】
【化３２】
2018511574.tif 000034
であり、ＰＥＧは
【００９８】
【化３３】
2018511574.tif 000035
であり、Ａ２は
【００９９】
【化３４】
2018511574.tif 000036
であり、Ｘは−Ｏ−であり、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、およびＲ７はそれぞれＨであり、ｍは１または２であり、ｐは２であり、ｎは１であり；ｒは１または２であり、および、ｓは２、３、または４である。
【０１００】
修飾された治療薬のいくつかの実施形態では、Ａ１は
【０１０１】
【化３５】
2018511574.tif 000037
であり、ＰＥＧは
【０１０２】
【化３６】
2018511574.tif 000038
であり、Ａ２は
【０１０３】
【化３７】
2018511574.tif 000039
である。
【０１０４】
修飾された治療薬のいくつかの実施形態では、Ａ１は
【０１０５】
【化３８】
2018511574.tif 000040
であり、ＰＥＧは
【０１０６】
【化３９】
2018511574.tif 000041
であり、Ａ２は
【０１０７】
【化４０】
2018511574.tif 000042
であり、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、およびＲ７はそれぞれＨであり、ｍは５、６、７、または８であり、ｐは２であり、および、ｓは２、３、または４である。
【０１０８】
修飾された治療薬のいくつかの実施形態では、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、およびＲ４はそれぞれＨである。修飾された治療薬のいくつかの実施形態では、Ｒ５はそれぞれ独立してＨである。修飾された治療薬のいくつかの実施形態では、Ｒ６はそれぞれＯＨまたはＮＨ２である。修飾された治療薬のいくつかの実施形態では、Ｒ６はそれぞれＯＨである。修飾された治療薬のいくつかの実施形態では、Ｒ７はそれぞれＨである。修飾された治療薬のいくつかの実施形態では、ｍは、１、２、３、４、５、６、７、８、または９である。修飾された治療薬のいくつかの実施形態では、ｍは１である。修飾された治療薬のいくつかの実施形態では、ｍは２である。修飾された治療薬のいくつかの実施形態では、ｍは５である。修飾された治療薬のいくつかの実施形態では、ｍは８である。修飾された治療薬のいくつかの実施形態では、ｎは１、２、３、４、または５である。修飾された治療薬のいくつかの実施形態では、ｎは１である。修飾された治療薬のいくつかの実施形態では、ｒは１、２、または３である。修飾された治療薬のいくつかの実施形態では、ｒは１である。修飾された治療薬のいくつかの実施形態では、ｓは２または４である。修飾された治療薬のいくつかの実施形態では、ｓは２である。修飾された治療薬のいくつかの実施形態では、ｓは４である。修飾された治療薬のいくつかの実施形態では、ｐは２である。修飾された治療薬のいくつかの実施形態では、Ｘは−Ｏ−である。
【０１０９】
修飾された治療薬のいくつかの実施形態では、Ｌは、テトラデカン酸、オクタデカン二酸、ミリスチン酸、ステアリン酸、ドコサヘキサエン酸、リトコール酸、コール酸、およびパルミチン酸から選択された酸部分であり、Ｐ１は−ＰＥＧ−Ａ２−であり、ここで、酸部分はアミド結合によってＡ２に結合される。いくつかの実施形態では、アミド結合は、Ａ２の１つのアミノ部分とＬの１つの酸部分との間で形成される。いくつかの実施形態では、酸誘導体は、以下の式
【０１１０】
【化４１】
2018511574.tif 000043
に従って分子の残りに結合され、ここで、Ｌ１は、テトラデカン酸、オクタデカン二酸、ミリスチン酸、ステアリン酸、ドコサヘキサエン酸、リトコール酸、コール酸、またはパルミチン酸の一部であり、ＮＨはＡ２の一部である。いくつかの実施形態では、Ｌ１は
【０１１１】
【化４２】
2018511574.tif 000044
である。いくつかの実施形態では、Ｌ１は
【０１１２】
【化４３】
2018511574.tif 000045
である。いくつかの実施形態では、Ｌ１は
【０１１３】
【化４４】
2018511574.tif 000046
である。
【０１１４】
いくつかの実施形態では、修飾された治療薬は、以下からなる群から選択される：
【０１１５】
【化４５】
2018511574.tif 000047
【０１１６】
【化４６】
2018511574.tif 000048
【０１１７】
いくつかの実施形態では、修飾された治療薬は、
【０１１８】
【化４７】
2018511574.tif 000049
である。
【０１１９】
式（Ａ）の修飾された治療薬を生成する方法が本明細書に開示され、該方法は、ＴＡのシステイン残基をＡ３−Ｐ１−Ｘで反応させる工程を含み、ここでＡ３はＡ１を形成するための反応的な前駆体である。いくつかの実施形態では、Ａ３はハロアセトアミド、マレイミド、ベンジルハロゲン化物、またはピリジルジスルフィドである。さらなる実施形態では、Ａ３はハロアセトアミドである。またさらなる実施形態では、Ａ３はブロモアセトアミドである。
【０１２０】
さらに、治療薬（ＴＡ）と１つ以上の半減期延長部分とを含む修飾された治療薬が本明細書に開示され、ここでＴＡは１つ以上の半減期延長部分に結合する。治療薬はペプチドであり得る。ＴＡは、１つ以上の半減期延長部分の各々に共有結合することがある。ＴＡは治療薬上のアミノ酸残基によって１つ以上の半減期延長部分に結合することもある。アミノ酸残基はシステインまたはリジンであり得る。修飾された治療薬の半減期は、治療薬のみの半減期よりも長いことがある。半減期延長部分は脂質、ポリグリコール領域、またはその組み合わせを含むことがある。修飾された治療薬の非限定的な例としては脂質複合体（ＬＣ）が挙げられる。
【０１２１】
治療薬（ＴＡ）と１つ以上の半減期延長部分とを含む修飾された治療薬が本明細書に開示され、ここでＴＡは１つ以上の半減期延長部分に結合する。治療薬はペプチドであり得る。ＴＡは少なくとも１つのアイソスタージスルフィド模倣物を含むことがある。アイソスタージスルフィド模倣物はヘテロアリール基を含むことがある。ＴＡは、１つ以上の半減期延長部分の各々に共有結合することがある。ＴＡは治療薬上のアミノ酸残基によって１つ以上の半減期延長部分に結合することもある。アミノ酸残基はシステインまたはリジンであり得る。修飾された治療薬の半減期は、治療薬のみの半減期よりも長いことがある。半減期延長部分は脂質、ポリグリコール領域、またはその組み合わせを含むことがある。半減期延長部分はヘテロアリールまたはヘテロシクリルの基をさらに含むことがある。半減期延長部分は、治療薬上のシステイン残基の硫黄原子に結合することがある。修飾された治療薬の非限定的な例としては脂質複合体（ＬＣ）が挙げられる。
【０１２２】
治療薬と１つ以上の半減期延長部分とを含む修飾された治療薬が本明細書に開示され、ここで治療薬は、ペプチド上のアミノ酸残基によって１つ以上の半減期延長部分の各々に共有結合するペプチドであり、１つ以上の半減期延長部分の各々はヘテロアリールまたはヘテロシクリルの基を含み、および、修飾された治療薬の半減期はペプチドだけの半減期よりも長い。ペプチドは１つ以上のアミノ酸の付加、欠失、置換、またはその組み合わせを含むことがある。アミノ酸残基はペプチド上のアミノ酸の付加または置換であり得る。アミノ酸残基は野生型のペプチド上のアミノ酸の付加または置換であり得る。アミノ酸残基はシステインまたはリジンであり得る。アミノ酸残基はシステインであり得る。１つ以上の半減期延長部分の各々はヘテロアリール基を含むことがある。１つ以上の半減期延長部分の各々はヘテロシクリル基を含むことがある。ヘテロアリールまたはヘテロシクリルの基は少なくとも１つの窒素を含むことがある。ヘテロアリールまたはヘテロシクリルの基は少なくとも１つの窒素を含む５員環であり得る。ヘテロアリールまたはヘテロシクリルの基は、ピロール、ピラゾール、イミダゾール、トリアゾール、チアゾール、オキサゾール、およびイソオキサゾールから選択されることがある。ヘテロアリールまたはヘテロシクリルの基はトリアゾールであり得る。修飾された治療薬はＬＣであり得る。
【０１２３】
さらに、本明細書では、治療薬と１つ以上の半減期延長部分とを含む修飾された治療薬が開示され、ここで、治療薬はペプチド上のアミノ酸残基によって１つ以上の半減期延長部分の各々に共有結合するペプチドであり、半減期延長部分の各々は脂質とヘテロアリールまたはヘテロシクリルの基とを含み、および、修飾された治療薬の半減期はペプチドだけの半減期よりも長い。ペプチドは１つ以上のアミノ酸の付加、欠失、置換、またはその組み合わせを含むことがある。アミノ酸残基はペプチド上のアミノ酸の付加または置換であり得る。アミノ酸残基は野生型のペプチド上のアミノ酸の付加または置換であり得る。アミノ酸残基はシステインまたはリジンであり得る。アミノ酸残基はシステインであり得る。１つ以上の半減期延長部分の各々はヘテロアリール基を含むことがある。１つ以上の半減期延長部分の各々はヘテロシクリル基を含むことがある。ヘテロアリールまたはヘテロシクリルの基は少なくとも１つの窒素を含むことがある。ヘテロアリールまたはヘテロシクリルの基は少なくとも１つの窒素を含む５員環であり得る。ヘテロアリールまたはヘテロシクリルの基は、ピロール、ピラゾール、イミダゾール、トリアゾール、チアゾール、オキサゾール、およびイソオキサゾールから選択されることがある。ヘテロアリールまたはヘテロシクリルの基はトリアゾールであり得る。修飾された治療薬はＬＣであり得る。
【０１２４】
さらに、本明細書では、治療薬と１つ以上の半減期延長部分とを含む修飾された治療薬が開示され、ここで、治療薬はペプチド上のアミノ酸残基によって１つ以上の半減期延長部分の各々に共有結合するペプチドであり、半減期延長部分の各々は脂質とヘテロアリールまたはヘテロシクリルの基とを含み、ペプチドは、リラキシン、Ｈ１リラキシン、Ｈ２リラキシン、Ｈ３リラキシン、ヒトＩＮＳＬ３、ヒトＩＮＳＬ４、ヒトＩＮＳＬ６、ヒトＩＧＦ１、ヒトＩＧＦＩＩ、ヒトインスリン、オキシントモジュリン、エキセナチド、エキセンディン−４、グルカゴン様タンパク質−１（ＧＬＰ−１）、ＧＬＰ−２、グルカゴン、ＧＬＰ−１Ｒ、およびＧＩＰＲデュアルアゴニスト、ＧＬＰ−１Ｒ、およびＧＣＧＲデュアルアゴニスト、レプチン、ベータトロフィン、ＦＧＦ２１、ＧＤＦ１１、ＡＮＧＰＴＬ３、ペプチドベースのトキシン、Ｍｏｋａ、およびＶＭ−２４、またはこれらの誘導体から選択され、誘導体は、１つ以上のアミノ酸の付加、欠失、または置換、あるいはその組み合わせを含むペプチドであり、および、修飾された治療薬の半減期はペプチドだけの半減期よりも長い。アミノ酸残基はペプチド上のアミノ酸の付加または置換であり得る。アミノ酸残基は野生型のペプチド上のアミノ酸の付加または置換であり得る。アミノ酸残基はシステインまたはリジンであり得る。アミノ酸残基はシステインであり得る。１つ以上の半減期延長部分の各々はヘテロアリール基を含むことがある。１つ以上の半減期延長部分の各々はヘテロシクリル基を含むことがある。ヘテロアリールまたはヘテロシクリルの基は少なくとも１つの窒素を含むことがある。ヘテロアリールまたはヘテロシクリルの基は少なくとも１つの窒素を含む５員環であり得る。ヘテロアリールまたはヘテロシクリルの基は、ピロール、ピラゾール、イミダゾール、トリアゾール、チアゾール、オキサゾール、およびイソオキサゾールから選択されることがある。ヘテロアリールまたはヘテロシクリルの基はトリアゾールであり得る。修飾された治療薬はＬＣであり得る。
【０１２５】
さらに、本明細書では、治療薬と１つ以上の半減期延長部分とを含む修飾された治療薬が開示され、ここで、治療薬はペプチド上のアミノ酸残基によって１つ以上の半減期延長部分の各々に共有結合するペプチドであり、半減期延長部分の各々は脂質とヘテロアリールまたはヘテロシクリルの基とを含み、ペプチドは、リラキシン、オキシントモジュリン、エキセナチド、エキセンディン−４、グルカゴン様タンパク質−１（ＧＬＰ−１）、ＧＬＰ−２、グルカゴン、ＧＬＰ−１ＲおよびＧＩＰＲデュアルアゴニスト、ＧＬＰ−１ＲおよびＧＣＧＲデュアルアゴニスト、レプチン、ベータトロフィン、ＦＧＦ２１、ＧＤＦ１１、ＡＮＧＰＴＬ３、トキシン−５５０、Ｍｏｋａ、およびＶＭ−２４、またはその誘導体から選択され、誘導体は、１つ以上のアミノ酸の付加、欠失、または置換、あるいはその組み合わせを含むペプチドであり、および、修飾された治療薬の半減期はペプチドだけの半減期よりも長い。アミノ酸残基はペプチド上のアミノ酸の付加または置換であり得る。アミノ酸残基は野生型のペプチド上のアミノ酸の付加または置換であり得る。アミノ酸残基はシステインまたはリジンであり得る。アミノ酸残基はシステインであり得る。１つ以上の半減期延長部分の各々はヘテロアリール基を含むことがある。１つ以上の半減期延長部分の各々はヘテロシクリル基を含むことがある。ヘテロアリールまたはヘテロシクリルの基は少なくとも１つの窒素を含むことがある。ヘテロアリールまたはヘテロシクリルの基は少なくとも１つの窒素を含む５員環であり得る。ヘテロアリールまたはヘテロシクリルの基は、ピロール、ピラゾール、イミダゾール、トリアゾール、チアゾール、オキサゾール、およびイソオキサゾールから選択されることがある。ヘテロアリールまたはヘテロシクリルの基はトリアゾールであり得る。修飾された治療薬はＬＣであり得る。
【０１２６】
さらに、本明細書では、治療薬と１つ以上の半減期延長部分とを含む修飾された治療薬が開示され、ここで、治療薬はペプチド上のアミノ酸残基によって１つ以上の半減期延長部分の各々に共有結合するペプチドであり、半減期延長部分の各々は脂質とヘテロアリールまたはヘテロシクリルの基とを含み、ペプチドはリラキシンまたはその誘導体であり、誘導体は１つ以上のアミノ酸の付加、欠失、または置換、あるいはその組み合わせを含むペプチドであり、および、修飾された治療薬の半減期はペプチドだけの半減期よりも長い。アミノ酸残基はペプチド上のアミノ酸の付加または置換であり得る。アミノ酸残基は野生型のペプチド上のアミノ酸の付加または置換であり得る。アミノ酸残基はシステインまたはリジンであり得る。アミノ酸残基はシステインであり得る。１つ以上の半減期延長部分の各々はヘテロアリール基を含むことがある。１つ以上の半減期延長部分の各々はヘテロシクリル基を含むことがある。ヘテロアリールまたはヘテロシクリルの基は少なくとも１つの窒素を含むことがある。ヘテロアリールまたはヘテロシクリルの基は少なくとも１つの窒素を含む５員環であり得る。ヘテロアリールまたはヘテロシクリルの基は、ピロール、ピラゾール、イミダゾール、トリアゾール、チアゾール、オキサゾール、およびイソオキサゾールから選択されることがある。ヘテロアリールまたはヘテロシクリルの基はトリアゾールであり得る。修飾された治療薬はＬＣであり得る。
【０１２７】
さらに、本明細書では、治療薬と１つ以上の半減期延長部分とを含む修飾された治療薬が開示され、ここで、治療薬はペプチド上のアミノ酸残基によって１つ以上の半減期延長部分の各々に共有結合するペプチドであり、半減期延長部分の各々は脂質とヘテロアリールまたはヘテロシクリルの基とを含み、治療薬は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１０−６１からなる群から選択されたポリペプチド配列の少なくとも一部を含むアミノ酸配列によってコード化され、および、修飾された治療薬の半減期はペプチドだけの半減期よりも長い。ペプチドは１つ以上のアミノ酸の付加、欠失、置換、またはその組み合わせを含むことがある。アミノ酸残基はペプチド上のアミノ酸の付加または置換であり得る。アミノ酸残基は野生型のペプチド上のアミノ酸の付加または置換であり得る。アミノ酸残基はシステインまたはリジンであり得る。アミノ酸残基はシステインであり得る。１つ以上の半減期延長部分の各々はヘテロアリール基を含むことがある。１つ以上の半減期延長部分の各々はヘテロシクリル基を含むことがある。ヘテロアリールまたはヘテロシクリルの基は少なくとも１つの窒素を含むことがある。ヘテロアリールまたはヘテロシクリルの基は少なくとも１つの窒素を含む５員環であり得る。ヘテロアリールまたはヘテロシクリルの基は、ピロール、ピラゾール、イミダゾール、トリアゾール、チアゾール、オキサゾール、およびイソオキサゾールから選択されることがある。ヘテロアリールまたはヘテロシクリルの基はトリアゾールであり得る。修飾された治療薬はＬＣであり得る。
【０１２８】
さらに、本明細書では、治療薬と１つ以上の半減期延長部分とを含む修飾された治療薬が開示され、ここで、治療薬はペプチド上のアミノ酸残基によって１つ以上の半減期延長部分の各々に共有結合するペプチドであり、半減期延長部分の各々はヘテロアリールまたはヘテロシクリルの基と、ステロール、ステロール誘導体、胆汁酸、ビタミンＥ誘導体、脂肪二酸、脂肪酸、脂肪酸アミド、脂肪族アミン、および脂肪族アルコール、ならびにこれらの誘導体から選択された脂質を含み、および、修飾された治療薬の半減期はペプチドだけの半減期よりも長い。ペプチドは１つ以上のアミノ酸の付加、欠失、置換、またはその組み合わせを含むことがある。アミノ酸残基はペプチド上のアミノ酸の付加または置換であり得る。アミノ酸残基は野生型のペプチド上のアミノ酸の付加または置換であり得る。アミノ酸残基はシステインまたはリジンであり得る。アミノ酸残基はシステインであり得る。１つ以上の半減期延長部分の各々はヘテロアリール基を含むことがある。１つ以上の半減期延長部分の各々はヘテロシクリル基を含むことがある。ヘテロアリールまたはヘテロシクリルの基は少なくとも１つの窒素を含むことがある。ヘテロアリールまたはヘテロシクリルの基は少なくとも１つの窒素を含む５員環であり得る。ヘテロアリールまたはヘテロシクリルの基は、ピロール、ピラゾール、イミダゾール、トリアゾール、チアゾール、オキサゾール、およびイソオキサゾールから選択されることがある。ヘテロアリールまたはヘテロシクリルの基はトリアゾールであり得る。修飾された治療薬はＬＣであり得る。
【０１２９】
さらに、本明細書では、治療薬と１つ以上の半減期延長部分とを含む修飾された治療薬が開示され、ここで、治療薬はペプチド上のアミノ酸残基によって１つ以上の半減期延長部分の各々に共有結合するペプチドであり、半減期延長部分の各々はヘテロアリールまたはヘテロシクリルの基と、ステロール、ステロール誘導体、胆汁酸、ビタミンＥ誘導体、脂肪二酸、脂肪酸、脂肪酸アミド、脂肪族アミン、および脂肪族アルコール、ならびにこれらの誘導体から選択された脂質を含み、ペプチドは、リラキシン、Ｈ１リラキシン、Ｈ２リラキシン、Ｈ３リラキシン、ヒトＩＮＳＬ３、ヒトＩＮＳＬ４、ヒトＩＮＳＬ６、ヒトＩＧＦ１、ヒトＩＧＦＩＩ、ヒトインスリン、オキシントモジュリン、エキセナチド、エキセンディン−４、グルカゴン様タンパク質−１（ＧＬＰ−１）、ＧＬＰ−２、グルカゴン、ＧＬＰ−１Ｒ、およびＧＩＰＲデュアルアゴニスト、ＧＬＰ−１Ｒ、およびＧＣＧＲデュアルアゴニスト、レプチン、ベータトロフィン、ＦＧＦ２１、ＧＤＦ１１、ＡＮＧＰＴＬ３、ペプチドベースのトキシン、Ｍｏｋａ、およびＶＭ−２４、またはこれらの誘導体から選択され、誘導体は、１つ以上のアミノ酸の付加、欠失、または置換、あるいはその組み合わせを含むペプチドであり、および、修飾された治療薬の半減期はペプチドだけの半減期よりも長い。アミノ酸残基はペプチド上のアミノ酸の付加または置換であり得る。アミノ酸残基は野生型のペプチド上のアミノ酸の付加または置換であり得る。アミノ酸残基はシステインまたはリジンであり得る。アミノ酸残基はシステインであり得る。１つ以上の半減期延長部分の各々はヘテロアリール基を含むことがある。１つ以上の半減期延長部分の各々はヘテロシクリル基を含むことがある。ヘテロアリールまたはヘテロシクリルの基は少なくとも１つの窒素を含むことがある。ヘテロアリールまたはヘテロシクリルの基は少なくとも１つの窒素を含む５員環であり得る。ヘテロアリールまたはヘテロシクリルの基は、ピロール、ピラゾール、イミダゾール、トリアゾール、チアゾール、オキサゾール、およびイソオキサゾールから選択されることがある。ヘテロアリールまたはヘテロシクリルの基はトリアゾールであり得る。修飾された治療薬はＬＣであり得る。
【０１３０】
さらに、本明細書では、治療薬と１つ以上の半減期延長部分とを含む修飾された治療薬が開示され、ここで、治療薬はペプチド上のアミノ酸残基によって１つ以上の半減期延長部分の各々に共有結合するペプチドであり、半減期延長部分の各々はヘテロアリールまたはヘテロシクリルの基と、ステロール、ステロール誘導体、胆汁酸、ビタミンＥ誘導体、脂肪二酸、脂肪酸、脂肪酸アミド、脂肪族アミン、および脂肪族アルコール、ならびにこれらの誘導体から選択された脂質を含み、ペプチドは、リラキシン、オキシントモジュリン、エキセナチド、エキセンディン−４、グルカゴン様タンパク質−１（ＧＬＰ−１）、ＧＬＰ−２、グルカゴン、ＧＬＰ−１ＲおよびＧＩＰＲデュアルアゴニスト、ＧＬＰ−１ＲおよびＧＣＧＲデュアルアゴニスト、レプチン、ベータトロフィン、ＦＧＦ２１、ＧＤＦ１１、ＡＮＧＰＴＬ３、トキシン−５５０、Ｍｏｋａ、およびＶＭ−２４、またはその誘導体から選択され、誘導体は、１つ以上のアミノ酸の付加、欠失、または置換、あるいはその組み合わせを含むペプチドであり、および、修飾された治療薬の半減期はペプチドだけの半減期よりも長い。アミノ酸残基はペプチド上のアミノ酸の付加または置換であり得る。アミノ酸残基は野生型のペプチド上のアミノ酸の付加または置換であり得る。アミノ酸残基はシステインまたはリジンであり得る。アミノ酸残基はシステインであり得る。１つ以上の半減期延長部分の各々はヘテロアリール基を含むことがある。１つ以上の半減期延長部分の各々はヘテロシクリル基を含むことがある。ヘテロアリールまたはヘテロシクリルの基は少なくとも１つの窒素を含むことがある。ヘテロアリールまたはヘテロシクリルの基は少なくとも１つの窒素を含む５員環であり得る。ヘテロアリールまたはヘテロシクリルの基は、ピロール、ピラゾール、イミダゾール、トリアゾール、チアゾール、オキサゾール、およびイソオキサゾールから選択されることがある。ヘテロアリールまたはヘテロシクリルの基はトリアゾールであり得る。修飾された治療薬はＬＣであり得る。
【０１３１】
さらに、本明細書では、治療薬と１つ以上の半減期延長部分とを含む修飾された治療薬が開示され、ここで、治療薬はペプチド上のアミノ酸残基によって１つ以上の半減期延長部分の各々に共有結合するペプチドであり、半減期延長部分の各々はヘテロアリールまたはヘテロシクリルの基と、ステロール、ステロール誘導体、胆汁酸、ビタミンＥ誘導体、脂肪二酸、脂肪酸、脂肪酸アミド、脂肪族アミン、および脂肪族アルコール、ならびにこれらの誘導体から選択された脂質を含み、ペプチドはリラキシンまたはその誘導体であり、誘導体は１つ以上のアミノ酸の付加、欠失、または置換、あるいはその組み合わせを含むペプチドであり、および、修飾された治療薬の半減期はペプチドだけの半減期よりも長い。アミノ酸残基はペプチド上のアミノ酸の付加または置換であり得る。アミノ酸残基は野生型のペプチド上のアミノ酸の付加または置換であり得る。アミノ酸残基はシステインまたはリジンであり得る。アミノ酸残基はシステインであり得る。１つ以上の半減期延長部分の各々はヘテロアリール基を含むことがある。１つ以上の半減期延長部分の各々はヘテロシクリル基を含むことがある。ヘテロアリールまたはヘテロシクリルの基は少なくとも１つの窒素を含むことがある。ヘテロアリールまたはヘテロシクリルの基は少なくとも１つの窒素を含む５員環であり得る。ヘテロアリールまたはヘテロシクリルの基は、ピロール、ピラゾール、イミダゾール、トリアゾール、チアゾール、オキサゾール、およびイソオキサゾールから選択されることがある。ヘテロアリールまたはヘテロシクリルの基はトリアゾールであり得る。修飾された治療薬はＬＣであり得る。
【０１３２】
さらに、本明細書では、治療薬と１つ以上の半減期延長部分とを含む修飾された治療薬が開示され、ここで、治療薬はペプチド上のアミノ酸残基によって１つ以上の半減期延長部分の各々に共有結合するペプチドであり、半減期延長部分の各々はヘテロアリールまたはヘテロシクリルの基とポリグリコール領域とを含み、および、修飾された治療薬の半減期はペプチドだけの半減期よりも長い。ペプチドは１つ以上のアミノ酸の付加、欠失、置換、またはその組み合わせを含むことがある。アミノ酸残基はペプチド上のアミノ酸の付加または置換であり得る。アミノ酸残基は野生型のペプチド上のアミノ酸の付加または置換であり得る。アミノ酸残基はシステインまたはリジンであり得る。アミノ酸残基はシステインであり得る。１つ以上の半減期延長部分の各々はヘテロアリール基を含むことがある。１つ以上の半減期延長部分の各々はヘテロシクリル基を含むことがある。ヘテロアリールまたはヘテロシクリルの基は少なくとも１つの窒素を含むことがある。ヘテロアリールまたはヘテロシクリルの基は少なくとも１つの窒素を含む５員環であり得る。ヘテロアリールまたはヘテロシクリルの基は、ピロール、ピラゾール、イミダゾール、トリアゾール、チアゾール、オキサゾール、およびイソオキサゾールから選択されることがある。ヘテロアリールまたはヘテロシクリルの基はトリアゾールであり得る。修飾された治療薬はＬＣであり得る。
【０１３３】
さらに、本明細書では、治療薬と１つ以上の半減期延長部分とを含む修飾された治療薬が開示され、ここで、治療薬はペプチド上のアミノ酸残基によって１つ以上の半減期延長部分の各々に共有結合するペプチドであり、半減期延長部分の各々はヘテロアリールまたはヘテロシクリルの基とポリグリコール領域とを含み、ペプチドは、リラキシン、Ｈ１リラキシン、Ｈ２リラキシン、Ｈ３リラキシン、ヒトＩＮＳＬ３、ヒトＩＮＳＬ４、ヒトＩＮＳＬ６、ヒトＩＧＦ１、ヒトＩＧＦＩＩ、ヒトインスリン、オキシントモジュリン、エキセナチド、エキセンディン−４、グルカゴン様タンパク質−１（ＧＬＰ−１）、ＧＬＰ−２、グルカゴン、ＧＬＰ−１Ｒ、およびＧＩＰＲデュアルアゴニスト、ＧＬＰ−１Ｒ、およびＧＣＧＲデュアルアゴニスト、レプチン、ベータトロフィン、ＦＧＦ２１、ＧＤＦ１１、ＡＮＧＰＴＬ３、ペプチドベースのトキシン、Ｍｏｋａ、およびＶＭ−２４、またはこれらの誘導体から選択され、誘導体は、１つ以上のアミノ酸の付加、欠失、または置換、あるいはその組み合わせを含むペプチドであり、および、修飾された治療薬の半減期はペプチドだけの半減期よりも長い。アミノ酸残基はペプチド上のアミノ酸の付加または置換であり得る。アミノ酸残基は野生型のペプチド上のアミノ酸の付加または置換であり得る。アミノ酸残基はシステインまたはリジンであり得る。アミノ酸残基はシステインであり得る。１つ以上の半減期延長部分の各々はヘテロアリール基を含むことがある。１つ以上の半減期延長部分の各々はヘテロシクリル基を含むことがある。ヘテロアリールまたはヘテロシクリルの基は少なくとも１つの窒素を含むことがある。ヘテロアリールまたはヘテロシクリルの基は少なくとも１つの窒素を含む５員環であり得る。ヘテロアリールまたはヘテロシクリルの基は、ピロール、ピラゾール、イミダゾール、トリアゾール、チアゾール、オキサゾール、およびイソオキサゾールから選択されることがある。ヘテロアリールまたはヘテロシクリルの基はトリアゾールであり得る。修飾された治療薬はＬＣであり得る。
【０１３４】
さらに、本明細書では、治療薬と１つ以上の半減期延長部分とを含む修飾された治療薬が開示され、ここで、治療薬はペプチド上のアミノ酸残基によって１つ以上の半減期延長部分の各々に共有結合するペプチドであり、半減期延長部分の各々はヘテロアリールまたはヘテロシクリルの基とポリグリコール領域とを含み、ペプチドは、リラキシン、オキシントモジュリン、エキセナチド、エキセンディン−４、グルカゴン様タンパク質−１（ＧＬＰ−１）、ＧＬＰ−２、グルカゴン、ＧＬＰ−１ＲおよびＧＩＰＲデュアルアゴニスト、ＧＬＰ−１ＲおよびＧＣＧＲデュアルアゴニスト、レプチン、ベータトロフィン、ＦＧＦ２１、ＧＤＦ１１、ＡＮＧＰＴＬ３、トキシン−５５０、Ｍｏｋａ、およびＶＭ−２４、またはその誘導体から選択され、誘導体は、１つ以上のアミノ酸の付加、欠失、または置換、あるいはその組み合わせを含むペプチドであり、および、修飾された治療薬の半減期はペプチドだけの半減期よりも長い。アミノ酸残基はペプチド上のアミノ酸の付加または置換であり得る。アミノ酸残基は野生型のペプチド上のアミノ酸の付加または置換であり得る。アミノ酸残基はシステインまたはリジンであり得る。アミノ酸残基はシステインであり得る。１つ以上の半減期延長部分の各々はヘテロアリール基を含むことがある。１つ以上の半減期延長部分の各々はヘテロシクリル基を含むことがある。ヘテロアリールまたはヘテロシクリルの基は少なくとも１つの窒素を含むことがある。ヘテロアリールまたはヘテロシクリルの基は少なくとも１つの窒素を含む５員環であり得る。ヘテロアリールまたはヘテロシクリルの基は、ピロール、ピラゾール、イミダゾール、トリアゾール、チアゾール、オキサゾール、およびイソオキサゾールから選択されることがある。ヘテロアリールまたはヘテロシクリルの基はトリアゾールであり得る。修飾された治療薬はＬＣであり得る。
【０１３５】
さらに、本明細書では、治療薬と１つ以上の半減期延長部分とを含む修飾された治療薬が開示され、ここで、治療薬はペプチド上のアミノ酸残基によって１つ以上の半減期延長部分の各々に共有結合するペプチドであり、半減期延長部分の各々はヘテロアリールまたはヘテロシクリルの基とポリグリコール領域とを含み、ペプチドはリラキシンまたはその誘導体であり、誘導体は１つ以上のアミノ酸の付加、欠失、または置換、あるいはその組み合わせを含むペプチドであり、および、修飾された治療薬の半減期はペプチドだけの半減期よりも長い。アミノ酸残基はペプチド上のアミノ酸の付加または置換であり得る。アミノ酸残基は野生型のペプチド上のアミノ酸の付加または置換であり得る。アミノ酸残基はシステインまたはリジンであり得る。アミノ酸残基はシステインであり得る。１つ以上の半減期延長部分の各々はヘテロアリール基を含むことがある。１つ以上の半減期延長部分の各々はヘテロシクリル基を含むことがある。ヘテロアリールまたはヘテロシクリルの基は少なくとも１つの窒素を含むことがある。ヘテロアリールまたはヘテロシクリルの基は少なくとも１つの窒素を含む５員環であり得る。ヘテロアリールまたはヘテロシクリルの基は、ピロール、ピラゾール、イミダゾール、トリアゾール、チアゾール、オキサゾール、およびイソオキサゾールから選択されることがある。ヘテロアリールまたはヘテロシクリルの基はトリアゾールであり得る。修飾された治療薬はＬＣであり得る。
【０１３６】
さらに、本明細書では、治療薬と１つ以上の半減期延長部分とを含む修飾された治療薬が開示され、ここで、治療薬はペプチド上のアミノ酸残基によって１つ以上の半減期延長部分の各々に共有結合するペプチドであり、半減期延長部分の各々はヘテロアリールまたはヘテロシクリルの基とポリグリコール領域とを含み、治療薬は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１０−６１からなる群から選択されたポリペプチド配列の少なくとも一部を含むアミノ酸配列によってコード化され、および、修飾された治療薬の半減期はペプチドだけの半減期よりも長い。アミノ酸残基はペプチド上のアミノ酸の付加または置換であり得る。アミノ酸残基は野生型のペプチド上のアミノ酸の付加または置換であり得る。アミノ酸残基はシステインまたはリジンであり得る。アミノ酸残基はシステインであり得る。１つ以上の半減期延長部分の各々はヘテロアリール基を含むことがある。１つ以上の半減期延長部分の各々はヘテロシクリル基を含むことがある。ヘテロアリールまたはヘテロシクリルの基は少なくとも１つの窒素を含むことがある。ヘテロアリールまたはヘテロシクリルの基は少なくとも１つの窒素を含む５員環であり得る。ヘテロアリールまたはヘテロシクリルの基は、ピロール、ピラゾール、イミダゾール、トリアゾール、チアゾール、オキサゾール、およびイソオキサゾールから選択されることがある。ヘテロアリールまたはヘテロシクリルの基はトリアゾールであり得る。修飾された治療薬はＬＣであり得る。
【０１３７】
さらに、本明細書では、治療薬と１つ以上の半減期延長部分とを含む修飾された治療薬が開示され、ここで、治療薬はペプチド上のアミノ酸残基によって１つ以上の半減期延長部分の各々に共有結合するペプチドであり、半減期延長部分の各々はヘテロアリールまたはヘテロシクリルの基、脂質、およびポリグリコール領域を含み、および、修飾された治療薬の半減期はペプチドだけの半減期よりも長い。ペプチドは１つ以上のアミノ酸の付加、欠失、置換、またはその組み合わせを含むことがある。アミノ酸残基はペプチド上のアミノ酸の付加または置換であり得る。アミノ酸残基は野生型のペプチド上のアミノ酸の付加または置換であり得る。アミノ酸残基はシステインまたはリジンであり得る。アミノ酸残基はシステインであり得る。１つ以上の半減期延長部分の各々はヘテロアリール基を含むことがある。１つ以上の半減期延長部分の各々はヘテロシクリル基を含むことがある。ヘテロアリールまたはヘテロシクリルの基は少なくとも１つの窒素を含むことがある。ヘテロアリールまたはヘテロシクリルの基は少なくとも１つの窒素を含む５員環であり得る。ヘテロアリールまたはヘテロシクリルの基は、ピロール、ピラゾール、イミダゾール、トリアゾール、チアゾール、オキサゾール、およびイソオキサゾールから選択されることがある。ヘテロアリールまたはヘテロシクリルの基はトリアゾールであり得る。修飾された治療薬はＬＣであり得る。
【０１３８】
さらに、本明細書では、治療薬と１つ以上の半減期延長部分とを含む修飾された治療薬が開示され、ここで、治療薬はペプチド上のアミノ酸残基によって１つ以上の半減期延長部分の各々に共有結合するペプチドであり、半減期延長部分の各々はヘテロアリールまたはヘテロシクリルの基、ポリグリコール領域、およびステロール、ステロール誘導体、胆汁酸、ビタミンＥ誘導体、脂肪二酸、脂肪酸、脂肪酸アミド、脂肪族アミン、および脂肪族アルコール、ならびにこれらの誘導体から選択された脂質を含み、および、修飾された治療薬の半減期はペプチドだけの半減期よりも長い。ペプチドは１つ以上のアミノ酸の付加、欠失、置換、またはその組み合わせを含むことがある。アミノ酸残基はペプチド上のアミノ酸の付加または置換であり得る。アミノ酸残基は野生型のペプチド上のアミノ酸の付加または置換であり得る。アミノ酸残基はシステインまたはリジンであり得る。アミノ酸残基はシステインであり得る。１つ以上の半減期延長部分の各々はヘテロアリール基を含むことがある。１つ以上の半減期延長部分の各々はヘテロシクリル基を含むことがある。ヘテロアリールまたはヘテロシクリルの基は少なくとも１つの窒素を含むことがある。ヘテロアリールまたはヘテロシクリルの基は少なくとも１つの窒素を含む５員環であり得る。ヘテロアリールまたはヘテロシクリルの基は、ピロール、ピラゾール、イミダゾール、トリアゾール、チアゾール、オキサゾール、およびイソオキサゾールから選択されることがある。ヘテロアリールまたはヘテロシクリルの基はトリアゾールであり得る。修飾された治療薬はＬＣであり得る。
【０１３９】
さらに明らかにした、本明細書で、治療薬と１つ以上の半減期伸びる部分を含む修正済の治療薬である。そこでは治療薬ペプチド上のアミノ酸残基によって１つ以上の半減期伸びる部分の各々に共有結合で付けられているペプチドである；半減期延長部分の各々はヘテロアリールまたはヘテロシクリルの基、ポリグリコール領域、およびステロール、ステロール誘導体、胆汁酸、ビタミンＥ誘導体、脂肪二酸、脂肪酸、脂肪酸アミド、脂肪族アミン、および脂肪族アルコール、ならびにこれらの誘導体から選択された脂質を含み、ペプチドは、リラキシン、Ｈ１リラキシン、Ｈ２リラキシン、Ｈ３リラキシン、ヒトＩＮＳＬ３、ヒトＩＮＳＬ４、ヒトＩＮＳＬ６、ヒトＩＧＦ１、ヒトＩＧＦＩＩ、ヒトインスリン、オキシントモジュリン、エキセナチド、エキセンディン−４、グルカゴン様タンパク質−１（ＧＬＰ−１）、ＧＬＰ−２、グルカゴン、ＧＬＰ−１Ｒ、およびＧＩＰＲデュアルアゴニスト、ＧＬＰ−１Ｒ、およびＧＣＧＲデュアルアゴニスト、レプチン、ベータトロフィン、ＦＧＦ２１、ＧＤＦ１１、ＡＮＧＰＴＬ３、ペプチドベースのトキシン、Ｍｏｋａ、およびＶＭ−２４、またはこれらの誘導体から選択され、誘導体は、１つ以上のアミノ酸の付加、欠失、または置換、あるいはその組み合わせを含むペプチドであり、および、修飾された治療薬の半減期はペプチドだけの半減期よりも長い。アミノ酸残基はペプチド上のアミノ酸の付加または置換であり得る。アミノ酸残基は野生型のペプチド上のアミノ酸の付加または置換であり得る。アミノ酸残基はシステインまたはリジンであり得る。アミノ酸残基はシステインであり得る。１つ以上の半減期延長部分の各々はヘテロアリール基を含むことがある。１つ以上の半減期延長部分の各々はヘテロシクリル基を含むことがある。ヘテロアリールまたはヘテロシクリルの基は少なくとも１つの窒素を含むことがある。ヘテロアリールまたはヘテロシクリルの基は少なくとも１つの窒素を含む５員環であり得る。ヘテロアリールまたはヘテロシクリルの基は、ピロール、ピラゾール、イミダゾール、トリアゾール、チアゾール、オキサゾール、およびイソオキサゾールから選択されることがある。ヘテロアリールまたはヘテロシクリルの基はトリアゾールであり得る。修飾された治療薬はＬＣであり得る。
【０１４０】
さらに、本明細書では、治療薬と１つ以上の半減期延長部分とを含む修飾された治療薬が開示され、ここで、治療薬はペプチド上のアミノ酸残基によって１つ以上の半減期延長部分の各々に共有結合するペプチドであり、半減期延長部分の各々はヘテロアリールまたはヘテロシクリルの基、ポリグリコール領域、およびステロール、ステロール誘導体、胆汁酸、ビタミンＥ誘導体、脂肪二酸、脂肪酸、脂肪酸アミド、脂肪族アミン、および脂肪族アルコール、ならびにこれらの誘導体から選択された脂質を含み、ペプチドは、リラキシン、オキシントモジュリン、エキセナチド、エキセンディン−４、グルカゴン様タンパク質−１（ＧＬＰ−１）、ＧＬＰ−２、グルカゴン、ＧＬＰ−１ＲおよびＧＩＰＲデュアルアゴニスト、ＧＬＰ−１ＲおよびＧＣＧＲデュアルアゴニスト、レプチン、ベータトロフィン、ＦＧＦ２１、ＧＤＦ１１、ＡＮＧＰＴＬ３、トキシン−５５０、Ｍｏｋａ、およびＶＭ−２４、またはその誘導体から選択され、誘導体は、１つ以上のアミノ酸の付加、欠失、または置換、あるいはその組み合わせを含むペプチドであり、および、修飾された治療薬の半減期はペプチドだけの半減期よりも長い。アミノ酸残基はペプチド上のアミノ酸の付加または置換であり得る。アミノ酸残基は野生型のペプチド上のアミノ酸の付加または置換であり得る。アミノ酸残基はシステインまたはリジンであり得る。アミノ酸残基はシステインであり得る。１つ以上の半減期延長部分の各々はヘテロアリール基を含むことがある。１つ以上の半減期延長部分の各々はヘテロシクリル基を含むことがある。ヘテロアリールまたはヘテロシクリルの基は少なくとも１つの窒素を含むことがある。ヘテロアリールまたはヘテロシクリルの基は少なくとも１つの窒素を含む５員環であり得る。ヘテロアリールまたはヘテロシクリルの基は、ピロール、ピラゾール、イミダゾール、トリアゾール、チアゾール、オキサゾール、およびイソオキサゾールから選択されることがある。ヘテロアリールまたはヘテロシクリルの基はトリアゾールであり得る。修飾された治療薬はＬＣであり得る。
【０１４１】
さらに、本明細書では、治療薬と１つ以上の半減期延長部分とを含む修飾された治療薬が開示され、ここで、治療薬はペプチド上のアミノ酸残基によって１つ以上の半減期延長部分の各々に共有結合するペプチドであり、半減期延長部分の各々はヘテロアリールまたはヘテロシクリルの基、ポリグリコール領域、およびステロール、ステロール誘導体、胆汁酸、ビタミンＥ誘導体、脂肪二酸、脂肪酸、脂肪酸アミド、脂肪族アミン、および脂肪族アルコール、ならびにこれらの誘導体から選択された脂質を含み、ペプチドはリラキシンまたはその誘導体であり、誘導体は１つ以上のアミノ酸の付加、欠失、または置換、あるいはその組み合わせを含むペプチドであり、および、修飾された治療薬の半減期はペプチドだけの半減期よりも長い。アミノ酸残基はペプチド上のアミノ酸の付加または置換であり得る。アミノ酸残基はシステインまたはリジンであり得る。アミノ酸残基はシステインであり得る。１つ以上の半減期延長部分の各々はヘテロアリール基を含むことがある。１つ以上の半減期延長部分の各々はヘテロシクリル基を含むことがある。ヘテロアリールまたはヘテロシクリルの基は少なくとも１つの窒素を含むことがある。ヘテロアリールまたはヘテロシクリルの基は少なくとも１つの窒素を含む５員環であり得る。ヘテロアリールまたはヘテロシクリルの基は、ピロール、ピラゾール、イミダゾール、トリアゾール、チアゾール、オキサゾール、およびイソオキサゾールから選択されることがある。ヘテロアリールまたはヘテロシクリルの基はトリアゾールであり得る。修飾された治療薬はＬＣであり得る。
【０１４２】
本明細書に開示された修飾された治療薬は以下の構造を有してもよく、：
【０１４３】
【化４８】
2018511574.tif 000050
式中、
ＴＡはアミノ酸残基を備えた治療薬であり、ここで、アミノ酸残基はＡ１に結合され、
Ａ１はＴＡとＰ１を結合する化学基であり、
Ｐ１はヘテロアリールまたはヘテロシクリルの基を含み、および、
Ｘは半減期延長部分である。
【０１４４】
式（Ｉ）のＸは脂質を含むことがある。
【０１４５】
式（Ｉ）の修飾された治療薬のＴＡのアミノ酸は、システインまたはリジンであり得る。式（Ｉ）の修飾された治療薬のＴＡのアミノ酸残基の硫黄または窒素の原子は化学結合によってＡ１に結合されることがある。
【０１４６】
式（Ｉ）の修飾された治療薬のＴＡのアミノ酸はシステインであり得る。式（Ｉ）の修飾された治療薬のＴＡのシステイン残基の硫黄原子は化学結合によってＡ１に結合されることがある。式（Ｉ）の修飾された治療薬のＴＡのアミノ酸はリジンであり得る。式（Ｉ）の修飾された治療薬のＴＡのシステイン残基の窒素原子は化学結合によってＡ１に結合されることがある。
【０１４７】
式（Ｉ）の修飾された治療薬のＰ１は−ＰＥＧ−Ａ２−であり、ここで、ＰＥＧは１つ以上のポリエチレングリコールサブユニットを含む化学基であり、Ａ２はヘテロアリールまたはヘテロシクリルの基を含み、ＰＥＧとＸを結合する化学基である。Ａ２はヘテロアリール基を含むことがある。Ａ２はヘテロシクリル基を含むことがある。ヘテロアリールまたはヘテロシクリルの基は少なくとも１つの窒素を含むことがある。ヘテロアリールまたはヘテロシクリルの基は少なくとも１つの窒素を含む５員環であり得る。ヘテロアリールまたはヘテロシクリルの基は、ピロール、ピラゾール、イミダゾール、トリアゾール、チアゾール、オキサゾール、およびイソオキサゾールから選択されることがある。ヘテロアリールまたはヘテロシクリルの基はトリアゾール環であり得る。
【０１４８】
式（Ｉ）の半減期延長部分は脂質を含むことがある。脂質は、プロパン酸、ブタン酸、ペンタン酸、ヘキサン酸、ヘプタン酸、オクタン酸、ノナン酸、デカン酸、ウンデカン酸、ドデカン酸、トリデカン酸、テトラデカン酸、ミリスチン酸、ペンタデカン酸、ヘキサデカン酸、ヘプタデカン酸、オクタデカン酸、ノナデカン酸、エイコサン酸、ヘンイコサノン酸、ドコサン酸、トリコサン酸、テトラコサン酸、ペンタコサン酸、ヘキコサン酸、ヘプタコサン酸、オクタコサン酸、ノナコサン酸、トリアコンタン酸、ヘントリアコンタン酸、ドトリアコンタン酸、トリトリアコンタン酸、テトラトリアコンタン酸、ペンタトリアコンタン酸、およびヘキサトリアコンタン酸からなる群から選択されてもよい。脂質は、マロン酸、コハク酸、グルタル酸、アジピン酸、ピメリン酸、スベリン酸、アゼライン酸、セバシン酸、ウンデカン二酸、ドデカン二酸、トリデカン二酸、テトラデカン二酸、ペンタデカン二酸、ヘキサデカン二酸、ヘプタデカン二酸、オクタデカン二酸、およびノナデカン二酸からなる群から選択されてもよい。脂質は、ミリストレイン酸、パルミトレイン酸、サピエン酸、オレイン酸、エライジン酸、バクセン酸、リノール酸、リノレライド酸、α−リノレン酸、アラキドン酸、エイコサペンタノン酸、エルカ酸、ドコサヘキサエン酸からなる群から選択されてもよい。脂質は、コレステロール、７−ＯＨコレステロール、７，２５−ジヒドロキシコレステロール、コール酸、ケノデオキシコール酸、リトコール酸、デオキシコール酸、グリココール酸、グリコデオキシコール酸、グリコリトコール酸、およびグリコケノデオキシコール酸からなる群から選択されてもよい。式（Ｉ）の修飾された治療薬の１つ以上の脂質は、コール酸、ケノデオキシコール酸、リトコール酸、デオキシコール酸、グリココール酸、グリコデオキシコール酸、グリコリトコール酸、およびグリコケノデオキシコール酸からなる群から選択されてもよい。式（Ｉ）の修飾された治療薬の１つ以上の脂質は、α−トコフェロール、β−トコフェロール、γ−トコフェロール、δ−トコフェロール、α−トコトリエノール、β−トコトリエノール、γ−トコトリエノール、およびδ−トコトリエノールからなる群から選択されてもよい。式（Ｉ）の修飾された治療薬の１つ以上の脂質は、オクタデカン二酸、テトラデシルアミン、ミリスチン酸、ドコサヘキサエン酸、リトコール酸エステル、コール酸、およびパルミチン酸からなる群から選択されてもよい。
【０１４９】
式（Ｉ）の修飾された治療薬のＰＥＧは以下から選択されてもよく、
【０１５０】
【化４９】
2018511574.tif 000051
ここで、ｍとｎは独立して、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、または２０である。
【０１５１】
本明細書で開示される式（Ｉ）の修飾された治療薬のいくつかの実施形態において、
Ａ１は
【０１５２】
【化５０】
2018511574.tif 000052
から選択され、および、
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、およびＲ４はそれぞれ、Ｈ、ハロ、ＣＮ、−ＳＲ５、アルキル、シクロアルキル、ハロアルキル、−ＮＲ５Ｒ５、−ＮＣ（Ｏ）Ｒ５、−ＮＣ（Ｏ）ＯＲ５、および−ＯＲ５から独立して選択され、
Ｒ５はそれぞれ独立して、Ｈ、アルキル、ハロアルキル、アリールアルキル、（シクロアルキル）アルキル、またはヘテロアルキルであり、ｐは２、３、４、５、６、７、８、９、または１０であり、および、
ｑは２、３、４、５、６、７、８、９、または１０である。
【０１５３】
式（Ｉ）の修飾された治療薬のＰ１はポリグリコールを含むことがある。ポリグリコールは、ポリエチレングリコール、ポリプロピレングリコール、ポリブチレングリコール、またはその組み合わせから選択されてもよい。ポリグリコールはポリエチレングリコールであり得る。ポリグリコールはポリプロピレングリコールであり得る。ポリグリコールはポリブチレングリコールであり得る。
【０１５４】
式（Ｉ）の修飾された治療薬を生成する方法が本明細書に開示され、該方法は、Ａ３−Ｐ１−ＸでＴＡのシステイン残基を反応させる工程を含み、ここでＡ３はＡ１を形成するための反応的な前駆体である。いくつかの実施形態では、Ａ３はハロアセトアミド、マレイミド、ベンジルハロゲン化物、またはピリジルジスルフィドである。さらなる実施形態では、Ａ３はハロアセトアミドである。またさらなる実施形態では、Ａ３はブロモアセトアミドである。
【０１５５】
さらに、本明細書では、治療薬と１つ以上の半減期延長部分とを含む修飾された治療薬が開示され、ここで、治療薬はペプチド上のアミノ酸残基によって１つ以上の半減期延長部分の各々に共有結合するペプチドであり、ペプチドは少なくとも１つのアイソスタージスルフィド模倣物を含み、および、修飾された治療薬の半減期はペプチドだけの半減期よりも長い。１つ以上の半減期延長部分の各々は脂質、ポリグリコール領域、またはその組み合わせを含んでもよい。１つ以上の半減期延長部分の各々は脂質を含んでもよい。１つ以上の半減期延長部分の各々はポリグリコール領域を含んでもよい。１つ以上の半減期延長部分の各々は脂質とポリグリコール領域を含んでもよい。脂質は、ステロール、ステロール誘導体、胆汁酸、ビタミンＥ誘導体、脂肪二酸、脂肪酸、脂肪酸アミド、脂肪族アミン、および脂肪族アルコール、およびこれらの誘導体からなる群とから選択されてもよい。ポリグリコール領域は１つ以上のポリエチレングリコール単位、ポリプロピレングリコール単位、またはポリブチレングリコール単位、あるいはこれらの組み合わせを含んでもよい。ポリグリコール領域は１０００以上のポリエチレングリコール単位、ポリプロピレングリコール単位、またはポリブチレングリコール単位、あるいはその組み合わせを含んでもよい。アイソスタージスルフィド模倣物はヘテロアリール基を含むことがある。ヘテロアリール基は少なくとも１つの窒素を含むことがある。ヘテロアリール基は少なくとも１つの窒素を含む５員環であり得る。ペプチドは１つ以上のアミノ酸の付加、欠失、または置換、あるいはその組み合わせを含み得る。半減期延長部分が結合するアミノ酸残基は、ペプチドのＮ末端またはＣ末端に位置することがある。半減期延長部分が結合するアミノ酸残基は、ペプチドの非末端位置に位置することがある。半減期延長部分が結合するアミノ酸残基は、ペプチド上でのアミノ酸の付加または置換であり得る。ペプチドはペプチジルトキシンであり得る。ペプチドはトキシン−５５０、Ｍｏｋａ、およびＶＭ−２４、またはその誘導体から選択されてもよく、誘導体は１つ以上のアミノ酸の付加、欠失、または置換、あるいはその組み合わせを含むペプチドである。ペプチドは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２２、２３、および２６−３１からなる群から選択されたポリペプチド配列の少なくとも一部を含むアミノ酸配列を含み得る。ペプチドは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２２、２３、および２６−３１からなる群から選択されたポリペプチド配列に基づくまたは由来する１０以上のアミノ酸を含むアミノ酸配列を含んでもよい。ペプチドは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２２、２３、および２６−３１を含む群から選択されたアミノ酸配列に少なくとも５０％相同するアミノ酸配列を含むことがある。ペプチドは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２２、２３、および２６−３１を含む群から選択されたアミノ酸配列に少なくとも８０％相同するアミノ酸配列を含むことがある。
【０１５６】
半減期延長部分
【０１５７】
治療薬と１つ以上の半減期延長部分とを含む修飾された治療薬が本明細書に開示され、ここで治療薬は、ペプチド上のアミノ酸残基によって１つ以上の半減期延長部分の各々に共有結合するペプチドであり、１つ以上の半減期延長部分の各々はヘテロアリールまたはヘテロシクリルの基を含み、および、修飾された治療薬の半減期はペプチドだけの半減期よりも長い。さらに、治療薬と１つ以上の半減期延長部分とを含む修飾された治療薬が本明細書に開示され、ここで治療薬は、ペプチド上のアミノ酸残基によって１つ以上の半減期延長部分の各々に共有結合するペプチドであり、ペプチドは少なくとも１つのアイソスタージスルフィド模倣物を含み、および、修飾された治療薬の半減期はペプチドだけの半減期よりも長い。
【０１５８】
１つ以上の半減期延長部分は脂質、ポリグリコール領域、またはその組み合わせを含むことがある。１つ以上の半減期延長部分は延長された組み換えポリペプチド（ＸＴＥＮ）を含むことがある。
【０１５９】
ポリグリコール領域は１つ以上のポリエチレングリコール単位、ポリプロピレングリコール単位、またはポリブチレングリコール単位、あるいはその組み合わせを含むことがある。ポリグリコール領域は１つ以上のポリエチレングリコール単位を含むことがある。ポリグリコール領域は１つ以上のポリプロピレングリコール単位を含むことがある。ポリグリコール領域は１つ以上のポリブチレングリコール単位を含むことがある。
【０１６０】
ポリグリコール領域は１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、またはそれ以上のポリエチレングリコール単位、ポリプロピレングリコール単位、またはポリブチレングリコール単位、あるいはその組み合わせを含むことがある。ポリグリコール領域は１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、またはそれ以上のポリエチレングリコール単位を含むことがある。ポリグリコール領域は１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、またはそれ以上のポリプロピレングリコール単位を含むことがある。ポリグリコール領域は１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、またはそれ以上のポリブチレングリコール単位を含むことがある。
【０１６１】
ポリグリコール領域は１００、２００、３００、４００、５００、６００、７００、８００、９００、１０００、またはそれ以上のポリエチレングリコール単位、ポリプロピレングリコール単位あるいはポリブチレングリコール単位を含むことがある、あるいはその組み合わせ。ポリグリコール領域は１００、２００、３００、４００、５００、６００、７００、８００、９００、１０００、またはそれ以上のポリエチレングリコール単位を含むことがある。ポリグリコール領域は１００、２００、３００、４００、５００、６００、７００、８００、９００、１０００、またはそれ以上のポリプロピレングリコール単位を含むことがある。ポリグリコール領域は１００、２００、３００、４００、５００、６００、７００、８００、９００、１０００、またはそれ以上のポリブチレングリコール単位を含むことがある。
【０１６２】
ポリグリコール領域は１０００、２０００、３０００、４０００、５０００、６０００、７０００、８０００、９０００、１００００、１１０００、１２０００、１３０００、１４０００、１５０００、１６０００、１７０００、１８０００、１９０００、２００００、２５０００、３００００、３５０００、４００００、４５０００、５００００、またはそれ以上のポリエチレングリコール単位、ポリプロピレングリコール単位、あるいはポリブチレングリコール単位、あるいはその組み合わせを含むことがある。ポリグリコール領域は１０００、２０００、３０００、４０００、５０００、６０００、７０００、８０００、９０００、１００００、１１０００、１２０００、１３０００、１４０００、１５０００、１６０００、１７０００、１８０００、１９０００、２００００、２５０００、３００００、３５０００、４００００、４５０００、５００００、またはそれ以上のポリエチレングリコール単位を含むことがある。ポリグリコール領域は１０００、２０００、３０００、４０００、５０００、６０００、７０００、８０００、９０００、１００００、１１０００、１２０００、１３０００、１４０００、１５０００、１６０００、１７０００、１８０００、１９０００、２００００、２５０００、３００００、３５０００、４００００、４５０００、５００００、またはそれ以上のポリプロピレングリコール単位を含むことがある。ポリグリコール領域は１０００、２０００、３０００、４０００、５０００、６０００、７０００、８０００、９０００、１００００、１１０００、１２０００、１３０００、１４０００、１５０００、１６０００、１７０００、１８０００、１９０００、２００００、２５０００、３００００、３５０００、４００００、４５０００、５００００、またはそれ以上のポリブチレングリコール単位を含むことがある。
【０１６３】
ポリグリコール領域は、５００−５０，０００ダルトンの分子量を含むことがある。ポリグリコール領域は、５００−４０，０００ダルトンの分子量を含むことがある。ポリグリコール領域は、５００−３０，０００ダルトンの分子量を含むことがある。ポリグリコール領域は、５００−２０，０００ダルトンの分子量を含むことがある。ポリグリコール領域は、インクリメントをそこに含めて、５００、６００、７００、８００、９００、１０００、２０００、３０００、４０００、５０００、６０００、７０００、８０００、９０００、１００００、１５０００、２００００、２５０００、３００００、３５０００、４００００、または４５０００ダルトン以上の分子量を含むことがある。
【０１６４】
半減期延長部分は、ＴＡの上のシステイン残基によってＴＡに結合してもよい。結合はＴＡ上のシステイン残基の硫黄原子を介する化学的結合によるものであってもよい。半減期延長部分は、ＴＡ上のシステイン残基の硫黄原子に直接結合するリンカーを含むことがある。半減期延長部分は、ＴＡ上のシステイン残基の硫黄原子に共有結合するリンカーを含むことがある。
【０１６５】
半減期延長部分は、ＴＡ上のリシン残基によってＴＡに結合することがある。結合は、ＴＡ上のリシン残基の窒素原子によって化学的結合によるものであってもよい。半減期延長部分は、ＴＡ上のリシン残基の窒素原子に直接結合するリンカーを含むことがある。半減期延長部分は、ＴＡ上のリシン残基の窒素原子に共有結合するリンカーを含むことがある。
【０１６６】
脂質複合体（ＬＣ）
本明細書では、１つ以上の治療薬（ＴＡ）に結合した１つ以上の脂質を含む脂質複合体（ＬＣ）が開示される。脂質複合体は、１つのＴＡに結合した１つ以上の脂質を含むことがある。脂質複合体はさらに１つ以上のＴＡと１つ以上の脂質との間の親水性の連結部（ｈｙｄｒｏｐｈｉｌｉｃ  ｃｏｎｎｅｃｔｏｒ）を含む。脂質複合体は１つ以上のポリエチレングリコールサブユニットをさらに含むことがある。脂質複合体はヘテロアリールまたはヘテロシクリルの基をさらに含むことがある。１つ以上の脂質がペグ化されてもよい。
【０１６７】
本明細書に開示されたＬＣは以下の構造を有することがあり、
【０１６８】
【化５１】
2018511574.tif 000053
式中、
ＴＡは治療薬であり、
Ａ１はＴＡ、およびＰ１またはＬを結合する化学基であり、
Ｐ１はヘテロアリールまたはヘテロシクリルの基を含み、および、
Ｌは脂質である。
【０１６９】
ＴＡのアミノ酸残基の硫黄または窒素の原子は、式（ＩＩ）のＬＣ中の化学結合によってＡ１に結合されることがある。式（ＩＩ）のＬＣのＡ１は
【０１７０】
【化５２】
2018511574.tif 000054
から選択されてもよく、および、
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、およびＲ４はそれぞれ、Ｈ、ハロ、ＣＮ、−ＳＲ５、アルキル、シクロアルキル、ハロアルキル、−ＮＲ５Ｒ５、−ＮＣ（Ｏ）Ｒ５、−ＮＣ（Ｏ）ＯＲ５、および−ＯＲ５から独立して選択され、
Ｒ５はそれぞれ独立して、Ｈ、アルキル、ハロアルキル、アリールアルキル、（シクロアルキル）アルキル、またはヘテロアルキルであり、
ｋは１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０であり、
ｐは２、３、４、５、６、７、８、９、または１０であり、および、
ｑは２、３、４、５、６、７、８、９、または１０である。
【０１７１】
式（ＩＩ）のＬＣのＰ１はポリグリコールをさらに含むことがある。ポリグリコールは、ポリエチレングリコール、ポリプロピレングリコール、ポリブチレングリコール、またはその組み合わせから選択されてもよい。ポリグリコールはポリエチレングリコールであり得る。ポリグリコールはポリプロピレングリコールであり得る。ポリグリコールはポリブチレングリコールであり得る。
【０１７２】
式（ＩＩ）のＬＣのＰ１は−ＰＥＧ−Ａ２−であり得る；ここで、ＰＥＧは１つ以上のポリエチレングリコールサブユニットを含む化学基であり、および、Ａ２はヘテロアリールまたはヘテロシクリルの基を含み、ＰＥＧとＬを結合する。
【０１７３】
式（ＩＩ）のＬＣのＰＥＧは、
【０１７４】
【化５３】
2018511574.tif 000055
から選択されてもよく、ここで、ｍとｎは独立して、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、または２０である。
【０１７５】
式（ＩＩ）のＬＣのＡ２はヘテロシクリル基を含むことがある。式（ＩＩ）のＬＣのＡ２はヘテロアリール基を含むことがある。ヘテロアリールまたはヘテロシクリルの基は少なくとも１つの窒素を含むことがある。ヘテロアリールまたはヘテロシクリルの基は、ピロール、ピラゾール、イミダゾール、トリアゾール、チアゾール、オキサゾール、およびイソオキサゾールから選択されることがある。ヘテロアリールまたはヘテロシクリルの基はトリアゾールであり得る。
【０１７６】
式（ＩＩ）のＬＣの１つ以上の脂質は、プロパン酸、ブタン酸、ペンタン酸、ヘキサン酸、ヘプタン酸、オクタン酸、ノナン酸、デカン酸、ウンデカン酸、ドデカン酸、トリデカン酸、テトラデカン酸、ミリスチン酸、ペンタデカン酸、ヘキサデカン酸、ヘプタデカン酸、オクタデカン酸、ノナデカン酸、エイコサン酸、ヘンイコサノン酸、ドコサン酸、トリコサン酸、テトラコサン酸、ペンタコサン酸、ヘキコサン酸、ヘプタコサン酸、オクタコサン酸、ノナコサン酸、トリアコンタン酸、ヘントリアコンタン酸、ドトリアコンタン酸、トリトリアコンタン酸、テトラトリアコンタン酸、ペンタトリアコンタン酸、およびヘキサトリアコンタン酸からなる群から選択されてもよい。式（ＩＩ）のＬＣの１つ以上の脂質は、マロン酸、コハク酸、グルタル酸、アジピン酸、ピメリン酸、スベリン酸、アゼライン酸、セバシン酸、ウンデカン二酸、ドデカン二酸、トリデカン二酸、テトラデカン二酸、ペンタデカン二酸、ヘキサデカン二酸、ヘプタデカン二酸、オクタデカン二酸、およびノナデカン二酸からなる群から選択されてもよい。式（ＩＩ）のＬＣの１つ以上の脂質は、ミリストレイン酸、パルミトレイン酸、サピエン酸、オレイン酸、エライジン酸、バクセン酸、リノール酸、リノレライド酸、α−リノレン酸、アラキドン酸、エイコサペンタノン酸、エルカ酸、ドコサヘキサエン酸からなる群から選択されてもよい。式（ＩＩ）のＬＣの１つ以上の脂質は、コレステロール、７−ＯＨコレステロール、７，２５−ジヒドロキシコレステロール、コール酸、ケノデオキシコール酸、リトコール酸、デオキシコール酸、グリココール酸、グリコデオキシコール酸、グリコリトコール酸、およびグリコケノデオキシコール酸からなる群から選択されてもよい。式（ＩＩ）のＬＣの１つ以上の脂質は、コール酸、ケノデオキシコール酸、リトコール酸、デオキシコール酸、グリココール酸、グリコデオキシコール酸、グリコリトコール酸、およびグリコケノデオキシコール酸からなる群から選択されてもよい。式（ＩＩ）のＬＣの１つ以上の脂質は、α−トコフェロール、β−トコフェロール、γ−トコフェロール、δ−トコフェロール、α−トコトリエノール、β−トコトリエノール、γ−トコトリエノール、およびδ−トコトリエノールからなる群から選択されてもよい。式（ＩＩ）のＬＣの１つ以上の脂質は、オクタデカン二酸、テトラデシルアミン、ミリスチン酸、ドコサヘキサエン酸、リトコール酸エステル、コール酸、およびパルミチン酸からなる群から選択されてもよい。
【０１７７】
式（ＩＩ）のＬＣを生成する方法が本明細書に開示され、該方法は、ＴＡのアミノ酸残基をＡ３−Ｐ１−Ｌで反応させる工程を含み、ここでＡ３はＡ１を形成するための反応的な前駆体である。いくつかの実施形態では、Ａ３はハロアセトアミド、マレイミド、ベンジルハロゲン化物、またはピリジルジスルフィドである。さらなる実施形態では、Ａ３はハロアセトアミドである。またさらなる実施形態では、Ａ３はブロモアセトアミドである。
【０１７８】
脂質複合体（ＬＣ）は（ａ）１つ以上の脂質であって、ステロール、ステロール誘導体、胆汁酸、ビタミンＥ誘導体、脂肪二酸、脂肪酸、脂肪酸アミド、および脂肪族アルコールから選択される、脂質；および、（ｂ）１つ以上の治療薬（ＴＡ）を含み、ここで１つ以上の脂質はアミノ酸残基によって１つ以上の治療薬と複合化する。
【０１７９】
脂質複合体（ＬＣ）は（ａ）１つ以上の脂質であって、ステロール、ステロール誘導体、胆汁酸、ビタミンＥ誘導体、脂肪二酸、脂肪酸、脂肪酸アミド、および脂肪族アルコールから選択される、脂質；および、（ｂ）１つ以上の治療薬（ＴＡ）を含み、ここで１つ以上の脂質はシステイン残基によって１つ以上の治療薬と複合化する。
【０１８０】
脂質複合体（ＬＣ）は、（ａ）１つ以上の脂質であって、ステロール、ステロール誘導体、胆汁酸、ビタミンＥ誘導体、脂肪二酸、脂肪酸、脂肪酸アミド、脂肪族アミン、および脂肪族アルコール、ならびにその誘導体から選択される、脂質；（ｂ）治療薬（ＴＡ）、および（ｃ）１つ以上の脂質の各々をＴＡに結合するリンカーであって、ヘテロアリールまたはヘテロシクリルの基を含む、リンカーを備え、ここで、ＴＡはペプチドであり、リンカーはそれぞれペプチド上のアミノ酸残基によってＴＡと複合化する。アミノ酸残基はシステイン、リジン、またはセリンであり得る。アミノ酸残基はシステインまたはリジンから選択されることがある。アミノ酸残基はシステインであり得る。アミノ酸残基はリジンであり得る。アミノ酸はアミノ酸突然変異であり得る。アミノ酸はアミノ酸付加またはアミノ酸置換であり得る。アミノ酸はペプチドのＮ末端またはＣ末端に位置することがある。アミノ酸はペプチドの非末端位置に位置することがある。リンカーはさらに１つ以上のポリエチレングリコールサブユニットを含むことがある。脂質がペグ化されることがある。リンカーはヘテロシクリル基を含むことがある。リンカーはヘテロアリール基を含むことがある。ヘテロアリールまたはヘテロシクリルの基は少なくとも１つの窒素を含むことがある。ヘテロアリールまたはヘテロシクリルの基は少なくとも１つの窒素を含む５員環であり得る。ヘテロアリールまたはヘテロシクリルの基は、ピロール、ピラゾール、イミダゾール、トリアゾール、チアゾール、オキサゾール、およびイソオキサゾールから選択されることがある。ヘテロアリールまたはヘテロシクリルの基はトリアゾール環であり得る。
【０１８１】
脂質複合体（ＬＣ）は（ａ）１つ以上の脂質であって、ステロール、ステロール誘導体、胆汁酸、ビタミンＥ誘導体、脂肪二酸、脂肪酸、脂肪酸アミド、および脂肪族アルコールから選択された脂質；（ｂ）１つ以上の治療薬（ＴＡ）、および（ｃ）１つ以上の脂質の各々をＴＡに結合するリンカーであって、ヘテロアリールまたはヘテロシクリルの基を含む、リンカーを備え、ここで、１つ以上のＴＡはリラキシンペプチドまたは誘導体を含む。脂質複合体（ＬＣ）（ａ）１つ以上の脂質、ステロール、ステロール誘導体、胆汁酸、ビタミンＥ誘導体、脂肪二酸、脂肪酸、脂肪酸アミド、脂肪族アミン、および脂肪族アルコールから選択された脂質、およびその誘導体を含むことがある；（ｂ）治療薬（ＴＡ）、および（ｃ）１つ以上の脂質の各々をＴＡに結合するリンカーであって、ヘテロアリールまたはヘテロシクリルの基を含む、リンカーを備え、ここで、ＴＡはそれのリラキシンペプチドまたはその誘導体を含む。アミノ酸はペプチドのＮ末端またはＣ末端に位置することがある。アミノ酸はペプチドの非末端位置に位置することがある。リンカーはさらに１つ以上のポリエチレングリコールサブユニットを含むことがある。脂質がペグ化されることがある。リンカーはヘテロシクリル基を含むことがある。リンカーはヘテロアリール基を含むことがある。ヘテロアリールまたはヘテロシクリルの基は少なくとも１つの窒素を含むことがある。ヘテロアリールまたはヘテロシクリルの基は少なくとも１つの窒素を含む５員環であり得る。ヘテロアリールまたはヘテロシクリルの基は、ピロール、ピラゾール、イミダゾール、トリアゾール、チアゾール、オキサゾール、およびイソオキサゾールから選択されることがある。ヘテロアリールまたはヘテロシクリルの基はトリアゾール環であり得る。
【０１８２】
脂質複合体（ＬＣ）は、（ａ）１つ以上の脂質であって、ステロール、ステロール誘導体、胆汁酸、ビタミンＥ誘導体、脂肪二酸、脂肪酸、脂肪酸アミド、および脂肪族アルコールから選択された脂質；（ｂ）１つ以上の治療薬（ＴＡ）、および（ｃ）１つ以上の脂質の各々をＴＡに結合するリンカーであって、ヘテロアリールまたはヘテロシクリルの基を含む、リンカーを備え、ここで、１つ以上のＴＡはリラキシンペプチドまたはその誘導体を含み、リンカーはそれぞれアミノ酸残基によって１つ以上のＴＡに結合している。脂質複合体（ＬＣ）（ａ）１つ以上の脂質、ステロール、ステロール誘導体、胆汁酸、ビタミンＥ誘導体、脂肪二酸、脂肪酸、脂肪酸アミド、脂肪族アミン、および脂肪族アルコールから選択された脂質、およびその誘導体を含むことがある；（ｂ）治療薬（ＴＡ）、および（ｃ）１つ以上の脂質の各々をＴＡに結合するリンカーであって、ヘテロアリールまたはヘテロシクリルの基を含む、リンカーを備え、ここで、ＴＡはリラキシンペプチドまたはその誘導体を含み、リンカーはそれぞれペプチド上のアミノ酸残基によってＴＡに結合している。アミノ酸残基はシステイン、リジン、またはセリンであり得る。アミノ酸残基はシステインまたはリジンから選択されることがある。アミノ酸残基はシステインであり得る。アミノ酸残基はリジンであり得る。アミノ酸はアミノ酸突然変異であり得る。アミノ酸はアミノ酸付加またはアミノ酸置換であり得る。アミノ酸はペプチドのＮ末端またはＣ末端に位置することがある。アミノ酸はペプチドの非末端位置に位置することがある。リンカーはさらに１つ以上のポリエチレングリコールサブユニットを含むことがある。脂質がペグ化されることがある。リンカーはヘテロシクリル基を含むことがある。リンカーはヘテロアリール基を含むことがある。ヘテロアリールまたはヘテロシクリルの基は少なくとも１つの窒素を含むことがある。ヘテロアリールまたはヘテロシクリルの基は少なくとも１つの窒素を含む５員環であり得る。ヘテロアリールまたはヘテロシクリルの基は、ピロール、ピラゾール、イミダゾール、トリアゾール、チアゾール、オキサゾール、およびイソオキサゾールから選択されることがある。ヘテロアリールまたはヘテロシクリルの基はトリアゾール環であり得る。
【０１８３】
脂質複合体（ＬＣ）は１つ以上の治療薬（ＴＡ）に結合する１つ以上の脂質と、１つ以上の脂質の各々をＴＡに結合するリンカーとを含んでもよく、リンカーはヘテロアリールまたはヘテロシクリルの基を含み、ここで、１つ以上のＴＡは修飾されたリラキシンペプチドを含み、修飾されたリラキシンペプチドは１つ以上のアミノ酸突然変異を備えた野生型のリラキシンポリペプチドを含むことがある。脂質複合体（ＬＣ）治療薬（ＴＡ）（ここでＴＡは修飾されたリラキシンペプチドを含む）に付けられた１つ以上の脂質を含むことがある、そして、ここで修飾されたリラキシンペプチドは、１つ以上のアミノ酸突然変異を備えた野生型のリラキシンポリペプチドを含む。
【０１８４】
本明細書に開示されたＬＣは、修飾されたリラキシンペプチドを含むＴＡを含むことがある。本明細書で開示されるＬＣは１つ以上の脂質を含んでもよく、１つ以上の脂質は、ステロール、ステロール誘導体、胆汁酸、ビタミンＥ誘導体、脂肪酸、および脂肪族アルコール、ならびにその誘導体からなる群から選択されてもよい。修飾されたリラキシンペプチドに対する１つ以上の脂質の結合は共有結合を含むことがある。１つ以上の脂質はシステイン残基によって修飾されたリラキシンペプチドに結合することがある。システイン残基はアミノ酸突然変異であり得る。システイン残基はアミノ酸付加またはアミノ酸置換であり得る。システイン残基は、野生型のペプチド上のアミノ酸の付加または置換であり得る。アミノ酸はペプチドのＮ末端またはＣ末端に位置することがある。アミノ酸はペプチドの非末端位置に位置することがある。リンカーはさらに１つ以上のポリエチレングリコールサブユニットを含むことがある。脂質がペグ化されることがある。リンカーはヘテロシクリル基を含むことがある。リンカーはヘテロアリール基を含むことがある。ヘテロアリールまたはヘテロシクリルの基は少なくとも１つの窒素を含むことがある。ヘテロアリールまたはヘテロシクリルの基は少なくとも１つの窒素を含む５員環であり得る。ヘテロアリールまたはヘテロシクリルの基は、ピロール、ピラゾール、イミダゾール、トリアゾール、チアゾール、オキサゾール、およびイソオキサゾールから選択されることがある。ヘテロアリールまたはヘテロシクリルの基はトリアゾール環であり得る。
【０１８５】
本明細書に開示されたＬＣは以下の構造を有してもよく、
【０１８６】
【化５４】
2018511574.tif 000056
ここで、ＴＡは少なくとも１つのアイソスタージスルフィド模倣物を含む治療薬であり、Ａ１はＴＡ、およびＰ１またはＬを結合する化学基であり、Ｐ１は単結合であるか、またはポリグリコールを含み、および、Ｌは脂質である。Ｐ１は単結合であり得る。ＴＡのアミノ酸残基の硫黄または窒素の原子は、化学結合によってＡ１に結合されることがある。Ａ１は
【０１８７】
【化５５】
2018511574.tif 000057
から選択されることがあり、ここで、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、およびＲ４はそれぞれ、Ｈ、ハロ、ＣＮ、−ＳＲ５、アルキル、シクロアルキル、ハロアルキル、−ＮＲ５Ｒ５、−ＮＣ（Ｏ）Ｒ５、−ＮＣ（Ｏ）ＯＲ５、および−ＯＲ５から独立して選択され、Ｒ５はそれぞれ独立して、Ｈ、アルキル、ハロアルキル、アリールアルキル、（シクロアルキル）アルキル、またはヘテロアルキルであり、ｋは１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０であり、ｐは２、３、４、５、６、７、８、９、または１０であり、および、ｑは２、３、４、５、６、７、８、９、または１０である。Ｐ１はポリグリコールを含むことがある。Ｐ１は−ＰＥＧ−Ａ２−であり得て、ＰＥＧは１つ以上のポリエチレングリコールサブユニットを含む化学基であり得て、および、Ａ２はＰＥＧとＬを結合する化学基であり得る。ＰＥＧは、
【０１８８】
【化５６】
2018511574.tif 000058
から選択されてもよく、ここで、ｍとｎは独立して、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、または２０である。Ａ２は単結合、
【０１８９】
【化５７】
2018511574.tif 000059
から選択されてもよく、ここで、Ｘは単結合、ＮＲ５、Ｓ、またはＯであり、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、およびＲ４はそれぞれ、Ｈ、ハロ、ＣＮ、−ＳＲ５、アルキル、シクロアルキル、ハロアルキル、−ＮＲ５Ｒ５、および−ＯＲ５から独立して選択され、Ｒ５はそれぞれ独立して、Ｈ、アルキル、ハロアルキル、アリールアルキル、またはヘテロアルキルであり、Ｒ６はＯＨまたは−ＮＲ５Ｒ５であり、Ｒ７はそれぞれ、Ｈ、アルキル、ハロアルキル、アリールアルキル、およびヘテロアルキルから独立して選択され、ｒは１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０であり、および、ｓは１、２、３、４、または５である。脂質は、オクタデカン二酸、テトラデシルアミン、ミリスチン酸、ステアリン酸、ドコサヘキサエン酸、リトコール酸エステル、コール酸、およびパルミチン酸からなる群から選択されることがある。アイソスタージスルフィド模倣物はヘテロアリール基を含むことがある。ヘテロアリール基は少なくとも１つの窒素を含むことがある。ヘテロアリール基は少なくとも１つの窒素を含む５員環であり得る。
【０１９０】
リンカー
本明細書に開示されたＬＣはさらに１つ以上のリンカーを含むことがある。本明細書に開示されたＬＣはさらに２つ以上のリンカーを含むことがある。本明細書に開示されたＬＣはさらに３つ以上のリンカーを含むことがある。本明細書に開示されたＬＣはさらに４つ以上のリンカーを含むことがある。本明細書に開示されたＬＣはさらに５つ以上のリンカーを含むことがある。
【０１９１】
１つ以上のリンカーは脂質の治療薬への結合を可能にしてもよい。リンカーは脂質の別の脂質への結合を可能にしてもよい。リンカーは１つ以上のポリエチレングリコールサブユニットを含む化学基への脂質の結合を可能にしてもよい。リンカーはＰＥＧの別のＰＥＧへの結合を可能にしてもよい。リンカーはＰＥＧの治療薬への結合を可能にしてもよい。リンカーは治療薬の別の治療薬への結合を可能にしてもよい。リンカーはアミノ酸であり得る。リンカーは治療薬のアミノ酸であり得る。リンカーは治療薬のアミノ酸突然変異であり得る。リンカーは治療薬の置換されたアミノ酸であり得る。リンカーは治療薬のアミノ酸付加であり得る。リンカーはペプチドのＣ末端にあるアミノ酸突然変異であり得る。リンカーはペプチドのＮ末端にあるアミノ酸突然変異であり得る。リンカーはペプチドの非末端位置にあるアミノ酸突然変異であり得る。リンカーはリジンであり得る。リンカーはシステインであり得る。リンカーはＬ−システインであり得る。リンカーはエーテルまたはアミドであり得る。リンカーはＰＥＧ分子を脂質に結合してもよい。
【０１９２】
リンカーはヘテロアリールまたはヘテロシクリルの基を含むことがある。リンカーはヘテロシクリル基を含むことがある。リンカーはヘテロアリール基を含むことがある。ヘテロアリールまたはヘテロシクリルの基は少なくとも１つの窒素を含むことがある。ヘテロアリールまたはヘテロシクリルの基は少なくとも１つの窒素を含む５員環であり得る。ヘテロアリールまたはヘテロシクリルの基は、ピロール、ピラゾール、イミダゾール、トリアゾール、チアゾール、オキサゾール、およびイソオキサゾールから選択されることがある。ヘテロアリールまたはヘテロシクリルの基はトリアゾール環であり得る。
【０１９３】
脂質誘導体
本明細書に開示されたＬＣは１つ以上の脂質誘導体を含むことがある。脂質誘導体はＴＡに結合することがある。脂質誘導体のＴＡへの結合は、ＴＡの薬物動態学的特性を増強することがある。脂質誘導体はポリグリコールを含むことがある。脂質誘導体がペグ化されることがある。ペグ化された脂質は少なくとも１つのポリエチレングリコールサブユニットを含むことがある。脂質誘導体はペグ化されないことがある。脂質は疎水性または両親媒性の小分子として広く定義されることがある。脂質は自然発生することもあれば、合成的なものであることもある。脂質は、エイコサノイド、プロスタグランジン、ロイコトリエン、トロンボキサン、ワックスエステル、コエンザイムＡ誘導体、脂肪酸カルニチン、脂肪酸アミド、エタノールアミン、胆汁酸、ビタミンＥ、ビタミンＡ、ビタミンＤ、ビタミンＫ、脂溶性ビタミン誘導体、モノグリセリド、ジグリセリド、トリグリセリド、リン脂質、ホスファチジルコリン、グリセロ脂質、グリセロール、グリセロリン脂質、スフィンゴリピド、サッカロ脂質（ｓａｃｃｈａｒｏｌｉｐｉｄｓ）、ポリケチド、ステロール、ステロール誘導体、ステロール脂質、ステロイドホルモン、プレノール脂質、カロテノイド、脂肪酸、および脂肪族アルコールであり得る。
【０１９４】
１つの態様において、本明細書では、Ａ３−Ｐ１−Ｌの構造を有する脂質誘導体が開示され、
ここで、
Ａ３はハロアセトアミド、マレイミド、ベンジルハロゲン化物、またはピリジルジスルフィドであり、
Ｐ１はヘテロアリールまたはヘテロシクリルの基を含み、および、
Ｌは、ステロール、ステロール誘導体、胆汁酸、ビタミンＥ誘導体、脂肪二酸、脂肪酸、脂肪酸アミド、および脂肪族アルコール、ならびにその誘導体から選択された脂質である。
【０１９５】
いくつかの実施形態では、Ｐ１は−ＰＥＧ−Ａ２−であり、ここでＰＥＧは１つ以上のポリエチレングリコールサブユニットを含む化学基であり、Ａ２はＰＥＧとＬを結合する化学基である。本明細書に記載されるいくつかの実施形態では、ＰＥＧは、
【０１９６】
【化５８】
2018511574.tif 000060
から選択され、ここで、ｍとｎは独立して、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、または２０である。
【０１９７】
Ａ２はヘテロアリールまたはヘテロシクリルの基を含むことがある。Ａ２はヘテロシクリル基を含むことがある。Ａ２はヘテロアリール基を含むことがある。ヘテロアリールまたはヘテロシクリルの基は少なくとも１つの窒素を含むことがある。ヘテロアリールまたはヘテロシクリルの基は、ピロール、ピラゾール、イミダゾール、トリアゾール、チアゾール、オキサゾール、およびイソオキサゾールから選択されることがある。ヘテロアリールまたはヘテロシクリルの基はトリアゾールであり得る。
【０１９８】
本明細書に記載されるいくつかの実施形態において、Ａ２は単結合、
【０１９９】
【化５９】
2018511574.tif 000061
から選択され、
Ｘは単結合、ＮＲ５、Ｓ、またはＯであり、
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、およびＲ４はそれぞれ、Ｈ、ハロ、ＣＮ、−ＳＲ５、アルキル、シクロアルキル、ハロアルキル、−ＮＲ５Ｒ５、および−ＯＲ５から独立して選択され、
Ｒ５はそれぞれ独立して、Ｈ、アルキル、ハロアルキル、アリールアルキル、またはヘテロアルキルであり、
Ｒ６はＯＨまたは−ＮＲ５Ｒ５であり、
Ｒ７はそれぞれ、Ｈ、アルキル、ハロアルキル、アリールアルキル、およびヘテロアルキルから独立して選択され、
ｒは１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０であり、および、
ｓは１、２、３、４、または５である。
【０２００】
脂質
本明細書に開示されるＬＣは１つ以上の脂質を含むことがある。１つ以上の脂質は脂肪酸であり得る。脂肪酸（ＦＡ）は１つ以上の治療薬（ＴＡ）に結合することがある。脂肪酸のＴＡへの結合はＴＡの薬物動態学的特性を増強することがある。脂肪酸は、脂肪二酸、脂肪酸アミド、脂肪族アミン、または脂肪族アルコールであり得る。脂肪酸は飽和または不飽和であり得る。飽和脂肪酸としては、限定されないが、ラウリン酸、ミリスチン酸、パルミチン酸、ステアリン酸、アラキジン酸が挙げられる。不飽和脂肪酸としては、限定されないが、パルミトレイン酸、オレイン酸、リノール酸、リノレン酸、エルカ酸、およびアラキドン酸が挙げられる。脂肪酸は、短鎖脂肪酸、中鎖脂肪酸、長鎖脂肪酸、または超長鎖脂肪酸であり得る。脂肪酸は一不飽和または多価不飽和であり得る。脂肪酸は、オメガ脂肪酸、必須脂肪酸、部分的に水素化した脂肪酸、シス異性体脂肪酸、またはトランス異性体脂肪酸であり得る。脂肪酸は、ω−３脂肪酸、ω−６脂肪酸、またはω−９脂肪酸であり得る。脂肪酸はジカルボン酸であり得る。
【０２０１】
脂肪酸は約６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、またはそれ以上の炭素原子の鎖を含み得る。脂肪酸は、１、２、３、４、５、６、またはそれ以上の二重結合をさらに含む炭素鎖を含み得る。脂肪酸は自然発生のものであってもよい。脂肪酸は自然発生ではなくてもよい。脂肪酸が合成されてもよい。
【０２０２】
本明細書で開示されるＬＣは１つ以上の脂肪酸をさらに含み得る。本明細書で開示されるＬＣはさらに２つ以上の脂肪酸を含み得る。本明細書で開示されるＬＣはさらに３つ以上の脂肪酸を含み得る。本明細書で開示されるＬＣはさらに４つ以上の脂肪酸を含み得る。本明細書で開示されるＬＣはさらに５つ以上の脂肪酸を含み得る。脂肪酸は異なることもある。脂肪酸は同じこともある。
【０２０３】
任意のＬＣの１つ以上の脂質は、ミリスチン酸、ドコサヘキサエン酸、リトコール酸エステル、コール酸、およびパルミチン酸からなる群から選択されることがある。任意のＬＣの１つ以上の脂質はミリスチン酸であり得る。任意のＬＣの１つ以上の脂質はドコサヘキサエン酸であり得る。任意のＬＣの１つ以上の脂質はリトコール酸エステルであり得る。任意のＬＣの１つ以上の脂質はコール酸であり得る。任意のＬＣの１つ以上の脂質はパルミチン酸であり得る。
【０２０４】
ＬＣは１つ以上のステロールまたはステロール誘導体を含むことがある。ステロールまたはステロールの誘導体は、コレステロール、７−ＯＨコレステロール、７，２５−ジヒドロキシコレステロール、コール酸、ケノデオキシコール酸、リトコール酸、デオキシコール酸、グリココール酸、グリコデオキシコール酸、グリコリトコール酸、およびグリコケノデオキシコール酸からなる群から選択されることがある。
【０２０５】
ＬＣは１つ以上の胆汁酸を含むことがある。胆汁酸は、コール酸、ケノデオキシコール酸、リトコール酸、デオキシコール酸、グリココール酸、グリコデオキシコール酸、グリコリトコール酸、およびグリコケノデオキシコール酸からなる群から選択されることがある。
【０２０６】
ＬＣは１つ以上のビタミンＥ誘導体を含むことがある。ビタミンＥ誘導体は、α−トコフェロール、β−トコフェロール、γ−トコフェロール、δ−トコフェロール、α−トコトリエノール、β−トコトリエノール、γ−トコトリエノール、およびδ−トコトリエノールからなる群から選択されてもよい。
【０２０７】
ペグ化された脂質
本明細書で開示されるＬＣは１つ以上のペグ化された脂質を含むことがある。ペグ化された脂質は少なくとも１つのポリエチレングリコールサブユニットを含むことがある。脂質と１つ以上のポリエチレングリコールサブユニットとの間の結合は、直接の結合またはリンカー（Ａ２）であり得る。脂質と１つ以上のポリエチレングリコールサブユニットとの間のリンカーの非限定的な例は、単結合、
【０２０８】
【化６０】
2018511574.tif 000062
を含み、ここで、
Ｘは単結合、ＮＲ５、Ｓ、またはＯであり、
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、およびＲ４はそれぞれ、Ｈ、ハロ、ＣＮ、−ＳＲ５、アルキル、シクロアルキル、ハロアルキル、−ＮＲ５Ｒ５、および−ＯＲ５から独立して選択され、
Ｒ５はそれぞれ独立して、Ｈ、アルキル、ハロアルキル、アリールアルキル、またはヘテロアルキルであり、
Ｒ６はＯＨまたは−ＮＲ５Ｒ５であり、
Ｒ７はそれぞれ、Ｈ、アルキル、ハロアルキル、アリールアルキル、およびヘテロアルキルから独立して選択され、
ｒは１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０であり、および、
ｓは１、２、３、４、または５である。
【０２０９】
ペグ化された脂質は構造Ｐ１−Ｌを有することがあり、ここでＰ１は−ＰＥＧ−Ａ２−であり、ＰＥＧは１つ以上のポリエチレングリコールサブユニットを含む化学基であり、Ａ２はＰＥＧとＬを結合する化学基であり、および、Ｌは脂質である。ＰＥＧは、
【０２１０】
【化６１】
2018511574.tif 000063
から選択されてもよく、ここで、ｍとｎは独立して、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、または２０である。Ａ２はヘテロアリールまたはヘテロシクリルの基であり得る。ヘテロアリールまたはヘテロシクリルの基は少なくとも１つの窒素を含むことがある。ヘテロアリールまたはヘテロシクリルの基は、ピロール、ピラゾール、イミダゾール、トリアゾール、チアゾール、オキサゾール、およびイソオキサゾールから選択されることがある。ヘテロアリールまたはヘテロシクリルの基はトリアゾールであり得る。
【０２１１】
ペグ化された脂質はリンカーによって治療薬に結合されることがある。リンカーは１つ以上のアミド部分を含むことがある。１つ以上のアミド部分はヘテロアリールまたはヘテロシクリルの基と取り替えられることがある。ヘテロアリールまたはヘテロシクリルの基は少なくとも１つの窒素を含むことがある。ヘテロアリールまたはヘテロシクリルの基は、ピロール、ピラゾール、イミダゾール、トリアゾール、チアゾール、オキサゾール、およびイソオキサゾールから選択されることがある。ヘテロアリールまたはヘテロシクリルの基はトリアゾールであり得る。
【０２１２】
治療薬（ＴＡ）
本明細書に開示された修飾された治療薬は１つ以上の治療薬を含むことがある。修飾された治療薬は２つ以上の治療薬を含むことがある。修飾された治療薬は３、４、５、６、７、またはそれ以上の治療薬を含むことがある。治療薬は異なることもある。治療薬は同じこともある。本明細書で使用されるように、用語「治療薬」とは、標的タンパク質、標的ペプチド、標的細胞、または標的組織の活性を調節する候補タンパク質またはペプチドを指す。活性の調節は標的のタンパク質、ペプチド、細胞、または組織の活性または発現を増加させ、減少させ、刺激し、または、防ぐことを含んでもよい。標的タンパク質またはペプチドは、発現または活性による疾患または障害の病因に関与するタンパク質を含んでいる。ＴＡは、タンパク質、生体分子、化学薬品、トキシン、薬物、またはその任意の組み合わせの少なくとも一部を含むことがある。典型的なＴＡとしては、限定されないが、ホルモン、キナーゼ、受容体、リガンド、成長因子、調節タンパク質、代謝性タンパク質、サイトカイン、ケモカイン、インターフェロン、ホスファターゼ、抗体、ペプチジルトキシン、またはその任意の組み合わせの少なくとも一部が挙げられる。ＴＡは、１つ以上のアミノ酸の付加、欠失、置換、またはその組み合わせを含む野生型のペプチドまたは修飾されたペプチドであり得る。１つ以上のアミノ酸の付加または置換はペプチドのＣ末端に位置することがある。１つ以上のアミノ酸の付加または置換はペプチドのＮ末端に位置することがある。１つ以上のアミノ酸の付加または置換はペプチドのＮ末端またはＣ末端に位置することがある。１つ以上のアミノ酸の付加または置換はペプチドのＮ末端とＣ末端の両方に位置することがある。１つ以上のアミノ酸の付加または置換はペプチドの非末端位置に位置することがある。
【０２１３】
ＴＡはホルモンであり得る。ホルモンの例としては、限定されないが、ペプチドホルモン、脂質およびリン脂質由来のホルモン、ならびにモノアミンが挙げられる。ペプチドホルモンは一般にアミノ酸の鎖からなる。小さなペプチドホルモンの例としては、限定されないが、甲状腺刺激ホルモン放出ホルモン（ＴＲＨ）とバソプレシンが挙げられる。多数のまたは数百ものアミノ酸からなるペプチドはタンパク質と呼ばれることがある。タンパク質ホルモンの例はインスリンと成長ホルモンを含む。より多くの複合タンパク質ホルモンは炭水化物側鎖を有し、糖タンパク質ホルモンと呼ばれることがある。黄体形成ホルモン、濾胞刺激ホルモン、および甲状腺刺激ホルモンは、糖タンパク質ホルモンの例である。脂質とリン脂質に由来するホルモンは一般にリノール酸とアラキドン酸とリン脂質のような脂質に由来する。タンパク質ホルモンは、コレステロールとエイコサノイドに由来するステロイドホルモンを含むことがある。ステロイドホルモンの例はテストステロンとコルチゾールである。エイコサノイドはプロスタグランジンを含むことがある。モノアミンは、芳香族アミノ酸デカルボキシラーゼ酵素の作用により、フェニルアラニン、チロシン、トリプトファンのような芳香族アミノ酸に由来することがある。ＴＡはオキシントモジュリンであり得る。ＴＡはエキセンディン−４であり得る。ＴＡはエキセナチドであり得る。ＴＡはグルカゴン様ペプチド（ＧＬＰ−１）であり得る。ＴＡはグルカゴンであり得る。ＴＡはレプチンであり得る。ＴＡはベータトロフィンであり得る。
【０２１４】
ＴＡはリラキシンペプチドまたはその誘導体であり得る。リラキシンペプチドは修飾されたリラキシンペプチドを含むことがある。修飾されたリラキシンペプチドは、１つ以上のアミノ酸突然変異を含む野生型のリラキシンペプチドの少なくとも一部を含むことがある。リラキシンペプチドは、リラキシンペプチドのＡ鎖および／またはＢ鎖の少なくとも一部を含むことがある。リラキシンペプチドは１つ以上のアミノ酸突然変異を含むことがある。１つ以上のアミノ酸突然変異は欠失、置換、付加、またはその組み合わせを含むことがある。１つ以上のアミノ酸突然変異は、野生型のリラキシンポリペプチドに対する１つ以上のアミノ酸残基の付加を含むことがある。１つ以上のアミノ酸突然変異は、野生型のリラキシンポリペプチドの１つ以上のアミノ酸残基の置換を含むことがある。１つ以上のアミノ酸突然変異は、野生型のリラキシンポリペプチドの１つ以上のアミノ酸残基の欠失を含むことがある。１つ以上のアミノ酸突然変異は、野生型のリラキシンペプチドのＡ鎖および／またはＢ鎖において１つ以上のアミノ酸残基の１つ以上のアミノ酸置換を含むことがある。１つ以上のアミノ酸突然変異は、野生型のリラキシンペプチドのＡ鎖において１つ以上のアミノ酸残基の１つ以上のアミノ酸置換を含むことがある。Ａ鎖中の１つ以上のアミノ酸残基の１つ以上のアミノ酸置換は、Ｙ３Ｃ、Ａ７Ｃ、Ｔ１６Ｃ、Ｒ１８Ｃ、Ｓ１９Ｃ、またはその組み合わせからなる群から選択されることがある。１つ以上のアミノ酸突然変異は、野生型のリラキシンペプチドのＢ鎖において１つ以上のアミノ酸残基の１つ以上のアミノ酸置換を含むことがある。Ｂ鎖中の１つ以上のアミノ酸残基の１つ以上のアミノ酸置換は、Ｄ１Ａ、Ｓ２Ｃ、Ｍ４Ｃ、Ｓ２６Ｃ、およびＳ２９Ｃ、またはその任意の組み合わせからなる群から選択されることがある。１つ以上のアミノ酸突然変異は、野生型のリラキシンペプチドのＡ鎖中にＹ３Ｃ置換を含むことがある。１つ以上のアミノ酸突然変異は、野生型のリラキシンペプチドのＡ鎖中にＡ７Ｃ置換を含むことがある。１つ以上のアミノ酸突然変異は、野生型のリラキシンペプチドのＡ鎖中にＴ１６Ｃ置換を含むことがある。１つ以上のアミノ酸突然変異は、野生型のリラキシンペプチドのＡ鎖中にＲ１８Ｃ置換を含むことがある。１つ以上のアミノ酸突然変異は、野生型のリラキシンペプチドのＡ鎖中にＳ１９Ｃ置換を含むことがある。１つ以上のアミノ酸突然変異は、野生型のリラキシンペプチドのＢ鎖中にＳ２Ｃ置換を含むことがある。１つ以上のアミノ酸突然変異は、野生型のリラキシンペプチドのＢ鎖中にＤ１Ａ置換を含むことがある。１つ以上のアミノ酸突然変異は、野生型のリラキシンペプチドのＢ鎖中にＭ４Ｃ置換を含むことがある。１つ以上のアミノ酸突然変異は、野生型のリラキシンペプチドのＢ鎖中にＳ２６Ｃ置換を含むことがある。１つ以上のアミノ酸突然変異は、野生型のリラキシンペプチドのＢ鎖中にＳ２９Ｃ置換を含むことがある。１つ以上のアミノ酸突然変異は、野生型のリラキシンペプチドの１つ以上のアミノ酸残基をシステイン残基に置換することを含んでもよい。野生型のリラキシンペプチドの１つ以上のアミノ酸残基は、アラニン、メチオニン、アルギニン、セリン、トレオニン、およびチロシンからなる群から選択される。１つ以上のアミノ酸突然変異は、野生型のリラキシンペプチドに１つ以上のアミノ酸残基を加えることを含んでもよい。
【０２１５】
ＴＡは成長因子であり得る。成長因子としては、限定されないが、サイトカインとホルモンが挙げられることもある。成長因子の例としては、限定されないが、アドレノメデュリン（ＡＭ）、アンジオポエチン（Ａｎｇ）、オートクリン運動因子、骨形成タンパク質（ＢＭＰ）、脳由来神経栄養因子（ＢＤＮＦ）、上皮成長因子（ＥＧＦ）、エリスロポイエチン（ＥＰＯ）、線維芽細胞成長因子（ＦＧＦ）、膠細胞株由来の神経栄養因子（ＧＤＮＦ）、果粒球コロニー刺激因子（Ｇ−ＣＳＦ）、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ）、成長分化因子−９（ＧＤＦ９）、肝細胞増殖因子（ＨＧＦ）、肝癌由来の成長因子（ＨＤＧＦ）、インスリン様成長因子（ＩＧＦ）、移動刺激因子、ミオスタチン（ＧＤＦ−８）、神経成長因子（ＮＧＦ）および他のニューロトロフィン、血小板由来増殖因子（ＰＤＧＦ）、トロンボポイエチン（ＴＰＯ）、形質転換増殖因子アルファ（ＴＧＦ−α）、形質転換増殖因子ベータ（ＴＧＦ−β）、腫瘍壊死因子−アルファ（ＴＮＦ−α）、および血管内皮細胞増殖因子（ＶＥＧＦ）が挙げられる。ＴＡは線維芽細胞成長因子２１（ＦＧＦ２１）であり得る。
【０２１６】
ＴＡは細胞調節タンパク質であり得る。ＴＡは、形質転換増殖因子ベータスーパーファミリーの細胞調節タンパク質であり得る。ＴＡはデカペンタプレジックＶｇ関連（ＤＶＲ）サブファミリーのメンバーであり得る。ＴＡはアクチビン／インヒビンサブファミリーのメンバーであり得る。ＴＡはＴＧＦベータ−サブファミリーのメンバーであり得る。ＴＡは成長分化因子（ＧＤＦ）であり得る。ＧＤＦは、ＧＤＦ１、ＧＤＦ２、ＧＤＦ３、ＧＤＦ５、ＧＤＦ６、ＧＦＤ８、ＧＤＦ９、ＧＤＦ１０、ＧＤＦ１１、およびＧＤＦ１５であり得る。ＴＡは成長分化因子１１（ＧＤＦ１１）であり得る。
【０２１７】
ＴＡはペプチジルトキシンであり得る。例としては、限定されないが、トキシン−５５０、Ｍｏｋａ、およびＶＭ−２４が挙げられる。
【０２１８】
ＴＡはタンパク質であり得る。タンパク質は分泌された因子のアンジオポエチン様ファミリーのメンバーであり得る。タンパク質はアンジオポエチン様タンパク質（ＡＮＧＰＴＬ）であり得る。ＡＮＧＰＴＬの例としては、限定されないが、ＡＮＧＰＴＬ１、ＡＮＧＰＴＬ２、ＡＮＧＰＴＬ３、ＡＮＧＰＴＬ４、ＡＮＧＰＴＬ５、ＡＮＧＰＴＬ６、およびＡＮＧＰＴＬ７であり得る。ＴＡはＡＮＧＰＴＬ３であり得る。
【０２１９】
ＴＡは、リラキシン、Ｈ１リラキシン、Ｈ２リラキシン、Ｈ３リラキシン、ヒトＩＮＳＬ３、ヒトＩＮＳＬ４、ヒトＩＮＳＬ６、ヒトＩＧＦ１、ヒトＩＧＦＩＩ、ヒトインスリン、オキシントモジュリン、エキセナチド、エキセンディン−４、グルカゴン様タンパク質−１（ＧＬＰ−１）、ＧＬＰ−２、グルカゴン、ＧＬＰ−１ＲおよびＧＩＰＲデュアルアゴニスト、ＧＬＰ−１ＲおよびＧＣＧＲデュアルアゴニスト、レプチン、ベータトロフィン、ＦＧＦ２１、ＧＤＦ１１、ＡＮＧＰＴＬ３、ペプチドベースのトキシン、Ｍｏｋａ、およびＶＭ−２４、ならびにこれらの誘導体から選択されたペプチドを含むことがあり、誘導体は１つ以上のアミノ酸の付加、欠失、または置換、あるいはその組み合わせを含むペプチドである。ＴＡはリラキシン、オキシントモジュリン、エキセナチド、エキセンディン−４、グルカゴン様タンパク質−１（ＧＬＰ−１）、ＧＬＰ−２、グルカゴン、ＧＬＰ−１ＲおよびＧＩＰＲデュアルアゴニスト、ＧＬＰ−１ＲおよびＧＣＧＲデュアルアゴニスト、レプチン、ベータトロフィン、ＦＧＦ２１、ＧＤＦ１１、ＡＮＧＰＴＬ３、ペプチドベースのトキシン、Ｍｏｋａ、またはＶＭ−２４、あるいはその誘導体を含むことがある。誘導体は１つ以上のアミノ酸の付加、欠失、または置換、あるいはその組み合わせを含むペプチドである。ＴＡはオキシントモジュリン、エキセナチド、エキセンディン−４、グルカゴン様タンパク質−１（ＧＬＰ−１）、ＧＬＰ−２、グルカゴン、ＧＬＰ−１ＲおよびＧＩＰＲデュアルアゴニスト、またはＧＬＰ−１ＲおよびＧＣＧＲデュアルアゴニスト、あるいはこれらの誘導体を含むことがあり、誘導体は１つ以上のアミノ酸の付加、欠失、または置換、あるいはその組み合わせを含むペプチドである。ＴＡはＨ１リラキシン、Ｈ２リラキシン、Ｈ３リラキシン、ヒトＩＮＳＬ３、ヒトＩＮＳＬ４、ヒトＩＮＳＬ６、ヒトＩＧＦ１、ヒトＩＧＦＩＩ、またはヒトインスリン、あるいはこれらの誘導体を含むことがあり、誘導体は１つ以上のアミノ酸の付加、欠失、または置換、あるいはその組み合わせを含むペプチドである。ＴＡはＨ１リラキシン、Ｈ２リラキシン、またはＨ３リラキシン、あるいはこれらの誘導体を含むことがあり、誘導体は１つ以上のアミノ酸の付加、欠失、または置換、あるいはその組み合わせを含むペプチドである。ＴＡはヒトＩＮＳＬ３、ヒトＩＮＳＬ４、ヒトＩＮＳＬ６、ヒトＩＧＦ１、またはヒトＩＧＦＩＩ、あるいはこれらの誘導体を含むことがあり、誘導体は１つ以上のアミノ酸の付加、欠失、または置換、あるいはその組み合わせを含むペプチドである。ＴＡはペプチジルトキシンまたはその誘導体を含むことがあり、誘導体は１つ以上のアミノ酸の付加、欠失、または置換、あるいはその組み合わせを含むペプチドである。ＴＡはトキシン−５５０、Ｍｏｋａ、またはＶＭ−２４、あるいはその誘導体を含むことがあり、誘導体は１つ以上のアミノ酸の付加、欠失、または置換、あるいはその組み合わせを含むペプチドである。ＴＡはヒトインスリンまたはその誘導体を含むことがあり、誘導体は１つ以上のアミノ酸の付加、欠失、または置換、あるいはその組み合わせを含むペプチドである。
【０２２０】
ＴＡは、上に基づいたか、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１−９を含む群から選択されたヌクレオチド配列に基づくまたは由来するヌクレオチド配列によってコード化されてもよい。ＴＡは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１−９を含む群から選択されたヌクレオチド配列に少なくとも５０％相同するヌクレオチド配列によってコード化されてもよい。ＴＡは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１−９を含む群から選択されたヌクレオチド配列に、少なくとも５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９２％、９５％、９７％、９９％、または１００％相同するヌクレオチド配列によってコード化されてもよい。ＴＡは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１−９を含む群から選択されたヌクレオチド配列に少なくとも７０％相同するヌクレオチド配列によってコード化されてもよい。ＴＡは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１−９を含む群から選択されたヌクレオチド配列に少なくとも７５％相同するヌクレオチド配列によってコード化されてもよい。ＴＡは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１−９を含む群から選択されたヌクレオチド配列に少なくとも８０％相同するヌクレオチド配列によってコード化されてもよい。ＴＡは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１−９を含む群から選択された１つ以上のヌクレオチド配列を含んでもよい。ＴＡは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１−９を含む群から選択された２つ以上のヌクレオチド配列を含んでもよい。ＴＡは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１−９を含む群から選択された３つ以上のヌクレオチド配列を含んでもよい。ＴＡは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１−９を含む群から選択された４つ以上のヌクレオチド配列を含んでもよい。ＴＡは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１−９を含む群から選択された５、６、７、８、または９のヌクレオチド配列を含んでもよい。
【０２２１】
ＴＡは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ１０−６１：を含む群から選択されたアミノ酸配列を含んでもよい。ＴＡは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１０−６１を含む群から選択されたアミノ酸配列に少なくとも５０％相同するアミノ酸配列を含んでもよい。ＴＡは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１０−６１を含む群から選択されたアミノ酸配列に、少なくとも５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９２％、９５％、９７％、９９％、または１００％相同するアミノ酸配列を含んでもよい。ＴＡは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１０−６１を含む群から選択されたアミノ酸配列に少なくとも７０％相同するアミノ酸配列を含んでもよい。ＴＡは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１０−６１を含む群から選択されたアミノ酸配列に少なくとも７５％相同するアミノ酸配列を含んでもよい。ＴＡは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１０−６１を含む群から選択されたアミノ酸配列に少なくとも８０％相同するアミノ酸配列を含んでもよい。ＴＡは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１０−６１を含む群から選択された１つ以上のアミノ酸配列を含んでもよい。ＴＡは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１０−６１を含む群から選択された２つ以上のアミノ酸配列を含んでもよい。ＴＡは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１０−６１を含む群から選択された３つ以上のアミノ酸配列を含んでもよい。ＴＡは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１０−６１を含む群から選択された４つ以上のアミノ酸配列を含んでもよい。ＴＡは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１０−６１を含む群から選択された５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、または１５もしくはそれ以上のアミノ酸配列を含んでもよい。
【０２２２】
ＴＡは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１０−６１を含む群から選択されたアミノ酸配列からの２０以上の連続するアミノ酸を含んでもよい。ＴＡは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１０−６１を含む群から選択されたアミノ酸配列からの３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１１０、１２０、１３０、またはそれ以上の連続するアミノ酸を含んでもよい。
【０２２３】
ＴＡは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１６、４０、４８−５２、５４、５６、５５、５８、および５９−６１からなる群から選択されたアミノ酸配列を含んでもよい。ＴＡは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１６、４０、４８−５２、５４、５６、５５、５８、および５９−６１からなる群から選択されたアミノ酸配列に少なくとも５０％相同するアミノ酸配列を含んでもよい。ＴＡは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１６、４０、４８−５２、５４、５６、５５、５８、および５９−６１からなる群から選択されたアミノ酸配列に、少なくとも５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９２％、９５％、９７％、９９％、または１００％相同するアミノ酸配列を含んでもよい。ＴＡは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１６、４０、４８−５２、５４、５６、５５、５８、および５９−６１からなる群から選択されたアミノ酸配列に少なくとも７０％相同するアミノ酸配列を含んでもよい。ＴＡは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１６、４０、４８−５２、５４、５６、５５、５８、および５９−６１からなる群から選択されたアミノ酸配列に少なくとも７５％相同するアミノ酸配列を含んでもよい。ＴＡは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１６、４０、４８−５２、５４、５６、５５、５８、および５９−６１からなる群から選択されたアミノ酸配列に少なくとも８０％相同するアミノ酸配列を含んでもよい。ＴＡは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１６、４０、４８−５２、５４、５６、５５、５８、および５９−６１からなる群から選択された１つ以上のアミノ酸配列を含んでもよい。ＴＡは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１６、４０、４８−５２、５４、５６、５５、５８、および５９−６１からなる群から選択された２つ以上のアミノ酸配列を含んでもよい。ＴＡは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１６、４０、４８−５２、５４、５６、５５、５８、および５９−６１からなる群から選択された２つ以上のアミノ酸配列を含んでもよい。ＴＡは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１６、４０、４８−５２、５４、５６、５５、５８、および５９−６１からなる群から選択された３つ以上のアミノ酸配列を含んでもよい。ＴＡは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１６、４０、４８−５２、５４、５６、５５、５８、および５９−６１からなる群から選択されたアミノ酸配列からの２０以上の連続するアミノ酸を含んでもよい。ＴＡは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１６、４０、４８−５２、５４、５６、５５、５８、および５９−６１を含む群から選択されたアミノ酸配列からの１９、１８、１７、１６、１５、１４、１３、１２、１１、１０、９、８、７、６、または５、もしくはそれ以上の連続するアミノ酸を含んでもよい。
【０２２４】
ＴＡはアミノ酸配列ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５４を含んでもよい。ＴＡはアミノ酸配列ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５４とアミノ酸配列ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４８を含んでもよい．ＴＡはアミノ酸配列ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５５を含んでもよい。ＴＡはアミノ酸配列ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５５とアミノ酸配列ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４８を含んでもよい。ＴＡはアミノ酸配列ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５９を含んでもよい。ＴＡはアミノ酸配列ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５９とアミノ酸配列ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４８を含んでもよい。
【０２２５】
ＴＡはアミノ酸配列ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６１を含んでもよい。ＴＡはアミノ酸配列ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６１と、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１０−６０からなる群から選択された１つ以上のアミノ酸配列を含んでもよい。ＴＡはアミノ酸配列ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６１と、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１０−６０からなる群から選択された１つのアミノ酸配列を含んでもよい。ＴＡはアミノ酸配列ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６１とアミノ酸配列ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４５を含んでもよい。ＴＡはアミノ酸配列ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６１とアミノ酸配列ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５４を含んでもよい。ＴＡはアミノ酸配列ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６１とアミノ酸配列ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５５を含んでもよい。ＴＡはアミノ酸配列ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６１とアミノ酸配列ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５９を含んでもよい。
【０２２６】
ＴＡは哺乳動物または非哺乳動物からのものであり得る。ＴＡはヒトからであり得る。あるいは、ＴＡは、ヤギ、ヒツジ、雌ウシ、ウサギ、サル、イヌ、ネコ、またはこれらの組み合わせからであり得る。ＴＡは爬虫類からであり得る。ＴＡはスネークまたはトカゲからであり得る。ＴＡは両生類からであり得る。ＴＡはカエルまたはヒキガエルからであり得る。ＴＡはトリからであり得る。ＴＡは組み換え型であってもよい。
【０２２７】
本明細書に開示されたＴＡはさらに１つ以上のリンカーを含むことがある。本明細書に開示されたＴＡはさらに２つ以上のリンカーを含むことがある。本明細書に開示されたＴＡはさらに３つ以上のリンカーを含むことがある。本明細書に開示されたＴＡはさらに４つ以上のリンカーを含むことがある。本明細書に開示されたＴＡはさらに５つ以上のリンカーを含むことがある。
【０２２８】
ジスルフィド模倣物を備える治療薬（ＴＡ）
ＴＡはさらに１つ以上のアイソスタージスルフィド模倣物を含むことがある。アイソスタージスルフィド模倣物はヘテロアリール基を含むことがある。
【０２２９】
薬物動態学
修飾された治療薬が薬物動態学的または薬力学的行動に良い影響を及ぼすメカニズムは、限定されないが、（ｉ）インビボのタンパク質分解の分解または治療薬の他の活性を低下させる化学修飾を防ぐまたは緩和すること；（ｉｉ）腎濾過を減少させ、受容体を媒介とするクリアランスを減少させ、またはバイオアベイラビリティを増加させることによって、半減期または薬物動態学的特性を改善すること；（ｉｉｉ）毒性を減少させること；（ｉｖ）溶解性を改善すること；および／または（ｖ）治療薬の生物学的活性ならびに／もしくは標的選択性を増加させること、を含む。
【０２３０】
半減期延長部分は、ＴＡに結合すると治療薬（ＴＡ）の１つ以上の薬物動態学的特性を増強することがある。
【０２３１】
本明細書に開示される修飾された治療薬は、ＴＡのみの場合と比較すると、薬動力学によって測定されるように、ＴＡの１つ以上の薬物動態学的特性を少なくとも約２００％増強することがある。本明細書に開示された修飾された治療薬は、ＴＡのみの場合と比較すると、薬動力学によって測定されるように、ＴＡの１つ以上の薬物動態学的特性を少なくとも約３００％、４００％、５００％、６００％、７００％、８００％、９００％、１０００％増強することがある。本明細書に開示された修飾された治療薬は、ＴＡのみの場合と比較すると、薬動力学によって測定されるように、ＴＡの１つ以上の薬物動態学的特性を少なくとも約２５０％増強することがある。本明細書に開示された修飾された治療薬は、ＴＡのみの場合と比較すると、薬動力学によって測定されるように、ＴＡの１つ以上の薬物動態学的特性を少なくとも約３００％増強することがある。本明細書に開示された修飾された治療薬は、ＴＡのみの場合と比較すると、薬動力学によって測定されるように、ＴＡの１つ以上の薬物動態学的特性を少なくとも約３５０％増強することがある。本明細書に開示された修飾された治療薬は、ＴＡのみの場合と比較すると、薬動力学によって測定されるように、ＴＡの１つ以上の薬物動態学的特性を少なくとも約４００％を増強することがある。本明細書に開示された修飾された治療薬は、ＴＡのみの場合と比較すると、薬動力学によって測定されるように、ＴＡの１つ以上の薬物動態学的特性を少なくとも約５００％増強することがある。
【０２３２】
薬物動態学的特性は半減期を含むことがある。修飾された治療薬の半減期は、ＴＡのみの場合の半減期と比較して、少なくともおよそ２倍長いこともある。本明細書で開示される修飾された治療薬の半減期は、ＴＡのみの場合の半減期と比較して、少なくともおよそ３倍、４倍、または５倍長いこともある。本明細書で開示される修飾された治療薬の半減期は、ＴＡのみの場合の半減期と比較して、少なくとも６、７、８、９、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、または５０倍長いこともある。本明細書で開示される修飾された治療薬の半減期は、ＴＡのみの場合の半減期と比較して、少なくともおよそ５倍長いこともある。本明細書で開示される修飾された治療薬の半減期は、ＴＡのみの場合の半減期と比較して、少なくともおよそ１０倍長いこともある。
【０２３３】
加えて、修飾された治療薬は、治療薬の非複合化形態と比較して、製造性を増大させ、および／または治療薬の免疫原性を減少させることに関して肯定的な効果を有することがある。
【０２３４】
修飾された治療薬は、ＴＡのみに対して匹敵する活性を有することがある。修飾された治療薬は、ＴＡのみの場合と同等の活性を有することがある。修飾された治療薬は、ＴＡのみの場合よりも活性が増大することもある。修飾された治療薬は、ＴＡのみの場合よりも活力が減少することもある。
【０２３５】
修飾された治療薬を形成するための半減期延長部分のＴＡへの結合は、ＴＡ単独の場合と比較して、修飾された治療薬の活性をせいぜい２、３、４、５、６、７、８、９、または１０倍しか低下させないこともある。ＬＣを形成するＴＡへの１つ以上の脂質の結合は、ＴＡ単独の場合と比較して、ＬＣの活性をせいぜい２、３、４、５、６、７、８、９、または１０倍しか低下させないこともある。修飾された治療薬を形成するＴＡへのポリグリコール領域の結合は、ＴＡ単独の場合と比較して、修飾された治療薬の活性をせいぜい２、３、４、５、６、７、８、９、または１０倍しか低下させないこともある。
【０２３６】
治療的適用
さらに、本明細書では、１つ以上の疾患および／または疾病を処置し、緩和し、阻害し、および／または予防するための修飾された治療薬が開示される。疾患および／または疾病は慢性の疾患または疾病であり得る。代替的に、疾患および／または疾病は急性の疾患または疾病であり得る。疾患または疾病は再発性、難治性、進行性であるか、または寛解期であり得る。疾患または疾病は１つ以上の細胞型に影響を与えることがある。１つ以上の疾患および／または疾病は、自己免疫疾患、炎症性疾患、心疾患、および妊娠であり得る。本明細書で開示される修飾された治療薬は、それを必要としている被験体に投与されることがある。
【０２３７】
本明細書では、被験体の疾患または疾病を処置する方法が開示され、該方法はＬＣを含む組成物を被験体に投与する工程を含み、ここで、ＬＣは治療薬に結合した脂質を含み、治療薬はリラキシンまたはその誘導体である。
【０２３８】
本明細書では、被験体の疾患または疾病を処置する方法が開示され、該方法は、修飾された治療薬を含む組成物を被験体に投与する工程を含み、ここで、修飾された治療薬は、（ｉ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５４、５５、５９、および６０からなる群から選択されたアミノ酸配列を含む治療薬（ＴＡ）と、（ｉｉ）半減期延長部分とを含む。
【０２３９】
本明細書では、被験体の疾患または疾病を処置する方法が開示され、該方法は、修飾された治療薬を含む組成物を被験体に投与する工程を含み、ここで、修飾された治療薬は、（ｉ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５４、５５、５９、および６０からなる群から選択されたアミノ酸配列に少なくとも５０％相同するアミノ酸配列を含む治療薬（ＴＡ）と、（ｉｉ）半減期延長部分とを含む。
【０２４０】
本明細書では、被験体の疾患または疾病を処置する方法が開示され、該方法は、修飾された治療薬を含む組成物を被験体に投与する工程を含み、ここで、修飾された治療薬は、（ｉ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５４、５５、５９、および６０からなる群から選択されたアミノ酸配列を含む治療薬（ＴＡ）であって、最大で５つのアミノ酸が付加、欠失、置換されるか、またはその組み合わせが行われた、治療薬（ＴＡ）と、（ｉｉ）半減期延長部分とを含む。
【０２４１】
本明細書では、被験体の疾患または疾病を処置する方法が開示され、該方法は、修飾された治療薬を含む組成物を被験体に投与する工程を含み、ここで、修飾された治療薬は、（ｉ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５４、５５、５９、および６０からなる群から選択されたアミノ酸配列の一部を含む治療薬（ＴＡ）と、（ｉｉ）半減期延長部分とを含む。
【０２４２】
疾患または疾病は心疾患であり得る。心疾患は急性心不全であり得る。さらなる心疾患としては、限定されないが、うっ血性心不全、代償性の心不全、または非代償性心不全が挙げられる。疾患または疾病は自己免疫障害であり得る。自己免疫障害は強皮症、全身性強皮症、または全身性強皮症であり得る。疾患または疾病は疼痛であり得る。疼痛は神経障害性疼痛または炎症性疼痛であり得る。疾患または疾病は炎症性疾患であり得る。炎症性疾患は線維筋痛であり得る。疾患または疾病は線維症であり得る。代替的に、疾患は妊娠であり得る。修飾された治療薬は、子癇前症を処置するか、または分娩を誘発するために使用されてもよい。修飾された治療薬は、１つ以上の追加の治療薬とともに投与されることがある。追加の治療薬は、抗炎症薬、スタチン、利尿薬、β−遮断薬、アンジオテンシン変換酵素阻害薬、およびアンジオテンシンＩＩ受容体拮抗薬の１つ以上を含むことがある。１つ以上の追加の治療薬は、抗炎症薬、疼痛を処置する薬物、またはその任意の組み合わせからなる群から選択されることがある。追加の治療薬はアスピリンであり得る。
【０２４３】
さらに、本明細書では、被験体の疾患または疾病を処置する方法が開示され、該方法は、１つ以上のＬＣを被験体に投与する工程を含み、ここで、１つ以上の脂質複合体（ＬＣ）は、（ａ）ステロール、ステロール誘導体、胆汁酸、ビタミンＥ誘導体、脂肪二酸、脂肪酸、脂肪酸アミド、および脂肪族アルコールからなる群から選択された、１つ以上の脂質と、（ｂ）１つ以上の治療薬（ＴＡ）とを含み、１つ以上の脂質は、１つ以上の治療薬中の少なくとも１つのシステイン残留物に結合する。１つ以上のＴＡはリラキシンを含むことがある。疾患または疾病は心疾患であり得る。心疾患は急性心不全であり得る。さらなる心疾患としては、限定されないが、うっ血性心不全、代償性の心不全、または非代償性心不全が挙げられる。疾患または疾病は自己免疫障害であり得る。自己免疫障害は強皮症、全身性強皮症、または全身性強皮症であり得る。疾患または疾病は炎症性疾患であり得る。炎症性疾患は線維筋痛であり得る。疾患または疾病は線維症であり得る。代替的に、疾患は妊娠である。ＬＣは、子癇前症を処置するか、または分娩を誘発するために使用されてもよい。ＬＣは１つ以上の追加の治療薬とともに投与されることがある。追加の治療薬は、抗炎症薬、スタチン、利尿薬、β−遮断薬、アンジオテンシン変換酵素阻害薬、およびアンジオテンシンＩＩ受容体拮抗薬の１つ以上を含むことがある。追加の治療薬はアスピリンであり得る。
【０２４４】
さらに、本明細書では、被験体の疾患または疾病を処置する方法が開示され、該方法は、１つ以上のＬＣを被験体に投与する工程を含み、１つ以上の脂質複合体（ＬＣ）は、（ａ）ステロール、ステロール誘導体、胆汁酸、ビタミンＥ誘導体、脂肪二酸、脂肪酸、脂肪酸アミド、脂肪族アミン、および脂肪族アルコール、ならびにこれらの誘導体からなる群から選択される１つ以上の脂質と、（ｂ）治療薬（ＴＡ）とを含み、ここで、ＴＡはペプチドであり、１つ以上の脂質はペプチド上のアミノ酸によってペプチドに結合している。ＴＡはリラキシンを含むことがある。疾患または疾病は心疾患であり得る。心疾患は急性心不全であり得る。さらなる心疾患としては、限定されないが、うっ血性心不全、代償性の心不全、または非代償性心不全が挙げられる。疾患または疾病は自己免疫障害であり得る。自己免疫障害は強皮症、全身性強皮症、または全身性強皮症であり得る。疾患または疾病は炎症性疾患であり得る。炎症性疾患は線維筋痛であり得る。疾患または疾病は線維症であり得る。代替的に、疾患は妊娠である。ＬＣは、子癇前症を処置するか、または分娩を誘発するために使用されてもよい。ＬＣは１つ以上の追加の治療薬とともに投与されることがある。追加の治療薬は、抗炎症薬、スタチン、利尿薬、β−遮断薬、アンジオテンシン変換酵素阻害薬、およびアンジオテンシンＩＩ受容体拮抗薬の１つ以上を含むことがある。追加の治療薬はアスピリンであり得る。
【０２４５】
さらに、本明細書では、被験体の疾患または疾病を処置する方法が開示され、該方法は、式（ＩＩ）：ＴＡ−Ａ１−Ｐ１−Ｌの１つ以上の脂質複合体（ＬＣ）を被験体に投与する工程を含み、ここで、ＴＡは治療薬であり、Ａ１はＴＡとＰ１を結合する化学基であり、Ｐ１はヘテロアリールまたはヘテロシクリルの基を含み、および、Ｌは脂質である。ＴＡはリラキシンを含むことがある。疾患または疾病は心疾患であり得る。心疾患は急性心不全であり得る。さらなる心疾患としては、限定されないが、うっ血性心不全、代償性の心不全、または非代償性心不全が挙げられる。疾患または疾病は自己免疫障害であり得る。自己免疫障害は強皮症、全身性強皮症、または全身性強皮症であり得る。疾患または疾病は炎症性疾患であり得る。炎症性疾患は線維筋痛であり得る。疾患または疾病は線維症であり得る。代替的に、疾患は妊娠である。ＬＣは、子癇前症を処置するか、または分娩を誘発するために使用されてもよい。ＬＣは１つ以上の追加の治療薬とともに投与されることがある。追加の治療薬は、抗炎症薬、スタチン、利尿薬、β−遮断薬、アンジオテンシン変換酵素阻害薬、およびアンジオテンシンＩＩ受容体拮抗薬の１つ以上を含むことがある。追加の治療薬はアスピリンであり得る。
【０２４６】
本明細書では、被験体の代謝性の疾患または疾病を予防または処置する方法が提供され、該方法は、１つ以上のＬＣを被験体に投与する工程を含み、ここで、１つ以上の脂質複合体（ＬＣ）は、（ａ）ステロール、ステロール誘導体、胆汁酸、ビタミンＥ誘導体、脂肪二酸、脂肪酸、脂肪酸アミド、および脂肪族アルコールからなる群から選択された、１つ以上の脂質と、（ｂ）１つ以上の治療薬（ＴＡ）と、および（ｃ）１つ以上の脂質の各々をＴＡに結合するリンカーであって、ヘテロアリールまたはヘテロシクリルの基を含む、リンカーを備え、ここで、リンカーはそれぞれ、１つ以上の治療薬中の１つ以上のアミノ酸残基に結合している。１つ以上のＴＡは、ＧＬＰ−１、エキセンディン−４、エキセナチド、オキシントモジュリン、グルカゴン、ＦＧＦ２１、またはその誘導体を含むことがある。ＧＬＰ−１はヒトＧＬＰ−１であり得る。ＦＧＦ２１はヒトＦＧＦ２１であり得る。代謝性の疾患または疾病は糖尿病であり得る。代謝性の疾患または疾病は、糖原病、フェニルケトン尿症、カエデシロップ病、グルタル酸血症Ｉ型、カルバモイル燐酸シンテターゼＩ欠失、アルカプトン尿症、中鎖アシルコエンザイムＡ脱水素酵素欠失（ＭＣＡＤＤ）、急性間欠性ポルフィリン症、レッシュ−ナイハン症候群、類脂質先天性副腎過形成、先天性副腎過形成、カーンズ−セイヤ症候群、ツェルウェガー症候群、ゴーシェ病、またはニーマン−ピック病であり得る。
【０２４７】
本明細書では、被験体の代謝性の疾患または疾病を予防または処置する方法が提供され、該方法は、１つ以上のＬＣを被験体に投与する工程を含み、１つ以上の脂質複合体（ＬＣ）は、（ａ）ステロール、ステロール誘導体、胆汁酸、ビタミンＥ誘導体、脂肪二酸、脂肪酸、脂肪酸アミド、脂肪族アミン、および脂肪族アルコール、ならびにこれらの誘導体からなる群から選択される１つ以上の脂質と、（ｂ）治療薬（ＴＡ）、および（ｃ）１つ以上の脂質の各々をＴＡに結合するリンカーであって、ヘテロアリールまたはヘテロシクリルの基を含む、リンカーを備え、ここで、ＴＡはペプチドであり、リンカーはそれぞれペプチド上のアミノ酸残基によってＴＡに結合している。ＴＡはＧＬＰ−１、エキセンディン−４、エキセナチド、オキシントモジュリン、グルカゴン、ＦＧＦ２１、またはその誘導体を含むことがある。ＧＬＰ−１はヒトＧＬＰ−１であり得る。ＦＧＦ２１はヒトＦＧＦ２１であり得る。代謝性の疾患または疾病は糖尿病であり得る。代謝性の疾患または疾病は、糖原病、フェニルケトン尿症、カエデシロップ病、グルタル酸血症Ｉ型、カルバモイル燐酸シンテターゼＩ欠失、アルカプトン尿症、中鎖アシルコエンザイムＡ脱水素酵素欠失（ＭＣＡＤＤ）、急性間欠性ポルフィリン症、レッシュ−ナイハン症候群、類脂質先天性副腎過形成、先天性副腎過形成、カーンズ−セイヤ症候群、ツェルウェガー症候群、ゴーシェ病、またはニーマン−ピック病であり得る。
【０２４８】
本明細書では、被験体の代謝性の疾患または疾病を予防または処置する方法が提供され、該方法は、式（ＩＩ）：ＴＡ−Ａ１−Ｐ１−Ｌの１つ以上の脂質複合体（ＬＣ）を被験体に投与する工程を含み、ここで、ＴＡは治療薬であり、Ａ１はＴＡとＰ１を結合する化学基であり、Ｐ１はヘテロアリールまたはヘテロシクリルの基を含み、および、Ｌは脂質である。ＴＡはＧＬＰ−１、エキセンディン−４、エキセナチド、オキシントモジュリン、グルカゴン、ＦＧＦ２１、またはその誘導体を含むことがある。ＧＬＰ−１はヒトＧＬＰ−１であり得る。ＦＧＦ２１はヒトＦＧＦ２１であり得る。１つ以上の脂質は、１つ以上のステロール、ステロール誘導体、胆汁酸、ビタミンＥ誘導体、脂肪二酸、脂肪酸、脂肪酸アミド、および脂肪族アルコールを含むことがある。代謝性の疾患または疾病は糖尿病であり得る。代謝性の疾患または疾病は、糖原病、フェニルケトン尿症、カエデシロップ病、グルタル酸血症Ｉ型、カルバモイル燐酸シンテターゼＩ欠失、アルカプトン尿症、中鎖アシルコエンザイムＡ脱水素酵素欠失（ＭＣＡＤＤ）、急性間欠性ポルフィリン症、レッシュ−ナイハン症候群、類脂質先天性副腎過形成、先天性副腎過形成、カーンズ−セイヤ症候群、ツェルウェガー症候群、ゴーシェ病、またはニーマン−ピック病であり得る。
【０２４９】
本明細書では、被験体の中枢神経系（ＣＮＳ）障害を予防または処置する方法が提供され、該方法は、１つ以上のＬＣを被験体に投与する工程を含み、ここで、１つ以上の脂質複合体（ＬＣ）は、（ａ）ステロール、ステロール誘導体、胆汁酸、ビタミンＥ誘導体、脂肪二酸、脂肪酸、脂肪酸アミド、および脂肪族アルコールからなる群から選択された、１つ以上の脂質と、（ｂ）１つ以上の治療薬（ＴＡ）、および（ｃ）１つ以上の脂質の各々をＴＡに結合するリンカーであって、ヘテロアリールまたはヘテロシクリルの基を含む、リンカーを備え、ここで、リンカーはそれぞれ１つ以上の治療薬中の少なくとも１つのアミノ酸残基に結合している。１つ以上のＴＡはＧＬＰ−１、エキセンディン−４、エキセナチド、オキシントモジュリン、グルカゴン、またはその誘導体を含むことがある。ＧＬＰ−１はヒトＧＬＰ−１であり得る。ＣＮＳ障害はアルツハイマー病（ＡＤ）であり得る。さらなるＣＮＳ障害としては、限定されないが、脳炎、髄膜炎、熱帯性痙攣性不全対麻痺、クモ膜嚢胞、ハンチントン病、閉じ込め症候群、パーキンソン病、トゥレット症、および多発性硬化症が挙げられる。
【０２５０】
本明細書では、被験体の中枢神経系（ＣＮＳ）障害を予防または処置する方法が提供され、該方法は、１つ以上のＬＣを被験体に投与する工程を含み、１つ以上の脂質複合体（ＬＣ）は、（ａ）ステロール、ステロール誘導体、胆汁酸、ビタミンＥ誘導体、脂肪二酸、脂肪酸、脂肪酸アミド、脂肪族アミン、および脂肪族アルコール、ならびにこれらの誘導体からなる群から選択される１つ以上の脂質と、（ｂ）治療薬（ＴＡ）、および（ｃ）１つ以上の脂質の各々をＴＡに結合するリンカーであって、ヘテロアリールまたはヘテロシクリルの基を含む、リンカーを備え、ここで、ＴＡはペプチドであり、リンカーはそれぞれペプチド上のアミノ酸残基によってＴＡに結合している。ＴＡはＧＬＰ−１、エキセンディン−４、エキセナチド、オキシントモジュリン、グルカゴン、またはその誘導体を含むことがある。ＧＬＰ−１はヒトＧＬＰ−１であり得る。ＣＮＳ障害はアルツハイマー病（ＡＤ）であり得る。さらなるＣＮＳ障害としては、限定されないが、脳炎、髄膜炎、熱帯性痙攣性不全対麻痺、クモ膜嚢胞、ハンチントン病、閉じ込め症候群、パーキンソン病、トゥレット症、および多発性硬化症が挙げられる。
【０２５１】
本明細書では、被験体の中枢神経系（ＣＮＳ）障害を予防または処置する方法が提供され、該方法は、式（ＩＩ）：ＴＡ−Ａ１−Ｐ１−Ｌの１つ以上の脂質複合体（ＬＣ）を被験体に投与する工程を含み、ここで、ＴＡは治療薬であり、Ａ１はＴＡとＰ１を結合する化学基であり、Ｐ１はヘテロアリールまたはヘテロシクリルの基を含み、および、Ｌは脂質である。１つ以上の脂質は、１つ以上のステロール、ステロール誘導体、胆汁酸、ビタミンＥ誘導体、脂肪二酸、脂肪酸、脂肪酸アミド、および脂肪族アルコールを含むことがある。１つ以上の脂質は、１つ以上のステロール、ステロール誘導体、胆汁酸、ビタミンＥ誘導体、脂肪二酸、脂肪酸、脂肪酸アミド、または脂肪族アルコール、あるいはその誘導体を含むことがある。ＴＡはＧＬＰ−１、エキセンディン−４、エキセナチド、オキシントモジュリン、グルカゴン、またはその誘導体を含むことがある。ＧＬＰ−１はヒトＧＬＰ−１であり得る。ＣＮＳ障害はアルツハイマー病（ＡＤ）であり得る。さらなるＣＮＳ障害としては、限定されないが、脳炎、髄膜炎、熱帯性痙攣性不全対麻痺、クモ膜嚢胞、ハンチントン病、閉じ込め症候群、パーキンソン病、トゥレット症、および多発性硬化症が挙げられる。
【０２５２】
本明細書では、被験体のＧＬＰ−１Ｒおよび／またはグルカゴン受容体（ＧＣＧＲ）アゴニストから利益を得る疾患または疾病を予防または処置する方法が提供され、該方法は、被験体に１つ以上のＬＣを投与する工程を含み、ここで、１つ以上の脂質複合体（ＬＣ）は、（ａ）ステロール、ステロール誘導体、胆汁酸、ビタミンＥ誘導体、脂肪二酸、脂肪酸、脂肪酸アミド、および脂肪族アルコールからなる群から選択された、１つ以上の脂質と、（ｂ）１つ以上の治療薬（ＴＡ）、および（ｃ）１つ以上の脂質の各々をＴＡに結合するリンカーであって、ヘテロアリールまたはヘテロシクリルの基を含む、リンカーを備え、ここで、リンカーはそれぞれ、１つ以上の治療薬中の少なくとも１つのシステイン残基に結合している。１つ以上のＴＡはＧＬＰ−１、エキセンディン−４、エキセナチド、オキシントモジュリン、グルカゴン、またはその誘導体を含むことがある。ＧＬＰ−１はヒトＧＬＰ−１であり得る。疾患または疾病は代謝性の疾患または障害であり得る。疾患または疾病は糖尿病であり得る。疾患または疾病は肥満であり得る。ＧＬＰ−１Ｒおよび／またはＧＣＧＲアゴニストから利益を得るさらなる疾患および／または疾病としては、限定されないが、脂質異常症、心血管疾患、および脂肪肝疾患が挙げられる。
【０２５３】
本明細書では、被験体のＧＬＰ−１Ｒおよび／またはグルカゴン受容体（ＧＣＧＲ）アゴニストから利益を得る疾患または疾病を予防または処置する方法が提供され、該方法は、被験体に１つ以上のＬＣを投与する工程を含み、ここで、１つ以上の脂質複合体（ＬＣ）は、（ａ）ステロール、ステロール誘導体、胆汁酸、ビタミンＥ誘導体、脂肪二酸、脂肪酸、脂肪酸アミド、脂肪族アミン、および脂肪族アルコール、ならびにこれらの誘導体からなる群から選択される１つ以上の脂質と、（ｂ）治療薬（ＴＡ）、および（ｃ）１つ以上の脂質の各々をＴＡに結合するリンカーであって、ヘテロアリールまたはヘテロシクリルの基を含む、リンカーを備え、ここで、ＴＡはペプチドであり、リンカーはそれぞれペプチド上のアミノ酸残基によってＴＡに結合している。ＴＡはＧＬＰ−１、エキセンディン−４、エキセナチド、オキシントモジュリン、グルカゴン、またはその誘導体を含むことがある。ＧＬＰ−１はヒトＧＬＰ−１であり得る。疾患または疾病は代謝性の疾患または障害であり得る。疾患または疾病は糖尿病であり得る。疾患または疾病は肥満であり得る。ＧＬＰ−１Ｒおよび／またはＧＣＧＲアゴニストから利益を得るさらなる疾患および／または疾病としては、限定されないが、脂質異常症、心血管疾患、および脂肪肝疾患が挙げられる。
【０２５４】
本明細書では、被験体のＧＬＰ−１Ｒおよび／またはグルカゴン受容体（ＧＣＧＲ）アゴニストから利益を得る疾患または疾病を予防または処置する方法が提供され、該方法は、式（ＩＩ）：ＴＡ−Ａ１−Ｐ１−Ｌの１つ以上の脂質複合体（ＬＣ）を被験体に投与する工程を含み、ここで、ＴＡは治療薬であり、Ａ１はＴＡとＰ１を結合する化学基であり、Ｐ１はヘテロアリールまたはヘテロシクリルの基を含み、および、Ｌは脂質である。１つ以上の脂質は、１つ以上のステロール、ステロール誘導体、胆汁酸、ビタミンＥ誘導体、脂肪二酸、脂肪酸、脂肪酸アミド、および脂肪族アルコール、またはこれらの誘導体を含むことがある。１つ以上の脂質は、１つ以上のステロール、ステロール誘導体、胆汁酸、ビタミンＥ誘導体、脂肪二酸、脂肪酸、脂肪酸アミド、または脂肪族アルコール、あるいはこれらの誘導体を含むことがある。ＴＡはＧＬＰ−１、エキセンディン−４、エキセナチド、オキシントモジュリン、グルカゴン、またはその誘導体を含むことがある。ＧＬＰ−１はヒトＧＬＰ−１であり得る。疾患または疾病は代謝性の疾患または障害であり得る。疾患または疾病は糖尿病であり得る。疾患または疾病は肥満であり得る。ＧＬＰ−１Ｒおよび／またはＧＣＧＲアゴニストから利益を得るさらなる疾患および／または疾病としては、限定されないが、脂質異常症、心血管疾患、および脂肪肝疾患が挙げられる。
【０２５５】
本明細書では、被験体の疼痛を予防または処置する方法が提供され、該方法は、１つ以上のＬＣを被験体に投与する工程を含み、ここで、１つ以上の脂質複合体（ＬＣ）は、（ａ）ステロール、ステロール誘導体、胆汁酸、ビタミンＥ誘導体、脂肪二酸、脂肪酸、脂肪酸アミド、脂肪族アミン、および脂肪族アルコール、ならびにこれらの誘導体からなる群から選択される１つ以上の脂質と、（ｂ）治療薬（ＴＡ）とを含み、ここで、治療薬は少なくとも１つのアイソスタージスルフィド模倣物を含むペプチドであり、修飾された治療薬の半減期はペプチド単独の場合の半減期よりも長い。疼痛は神経障害性疼痛または炎症性疼痛であり得る。ペプチドはペプチジルトキシンであり得る。上記方法は、１つ以上の追加の治療薬を被験体に投与する工程をさらに含み得る。１つ以上の追加の治療薬は、抗炎症薬、疼痛を処置する薬物、またはその任意の組み合わせからなる群から選択されてもよい。１つ以上の追加の治療薬はアスピリンであり得る。
【０２５６】
組成物
本明細書に開示される修飾された治療薬を含む医薬組成物が本明細書に開示される。組成物は１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、またはそれ以上の修飾された治療薬を含むことがある。修飾された治療薬は様々であり得る。代替的に、修飾された治療薬は同じか、または類似することもあり得る。修飾された治療薬は様々な治療薬、様々な半減期延長部分、またはその組み合わせを含むことがある。半減期延長部分は同じか、または類似することもあり得る。
【０２５７】
さらに、本明細書では、本明細書で開示されるＬＣを含む医薬組成物も開示される。組成物は１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、またはそれ以上のＬＣを含み得る。ＬＣは異なることがある。代替的に、ＬＣは同じか、または類似することもあり得る。ＬＣは様々な治療薬、様々な脂質、またはその組み合わせを含むことがある。脂質は同じであるか、または類似することもあり得る。
【０２５８】
本明細書に記載される組成物は、１つ以上の薬学的に許容可能な塩、賦形剤、またはビヒクルをさらに含み得る。本医薬組成物で使用される薬学的に許容可能な塩、賦形剤、またはビヒクルは、担体、賦形剤、希釈剤、抗酸化剤、保存剤、着色剤、調味料およびと稀釈剤、乳化剤、懸濁化剤、溶媒、充填剤、増量剤、緩衝剤、送達ビヒクル、等張化剤、共溶媒、湿潤剤、錯化剤、緩衝剤、抗菌剤、および界面活性剤を含んでいる。
【０２５９】
血清アルブミンと混じり合った中性の緩衝食塩水または食塩水は、典型的な適切な担体である。医薬組成物は、アスコルビン酸のような抗酸化剤；低分子量ポリペプチド；血清アルブミン、ゼラチン、または免疫グロブリンのようなタンパク質；ポリビニルピロリドンのような親水性ポリマー；グリシン、グルタミン、アスパラギン、アルギニン、またはリジンのようなアミノ酸；単糖類、二糖類、およびグルコース、マンノース、またはデキストリンを含む他の炭水化物；ＥＤＴＡのようなキレート剤；マンニトールまたはソルビトールのような糖アルコール；ナトリウムのような塩形成対イオン；および／または、ツイーン、プルロニック、またはポリエチレングリコール（ＰＥＧ）のような非イオン界面活性剤を含むこともある。さらに、一例として、適切な等張促進剤は、アルカリ金属ハロゲン化物（好ましくはナトリウムまたは塩化カリウム）、マンニトール、ソルビトールなどを含んでいる。適切な保存剤は塩化ベンザルコニウム、チメロサール、フェネチルアルコール、メチルパラベン、プロピルパラベン、クロルヘキシジン、ソルビン酸などを含んでいる。過酸化水素は保存剤としても使用されることがある。適切な共溶媒はグリセリン、プロピレングリコール、およびＰＥＧを含んでいる。適切な錯化剤はカフェイン、ポリビニルピロリドン、ベータ−シクロデキストリン、またはヒドロキシ−プロピル−ベータ−シクロデキストリンを含んでいる。適切な界面活性剤または湿潤剤は、ソルビタンエステル、ポリソルベート８０のようなポリソルベート、トロメタミン、レシチン、コレステロール、チロキサポールなどを含んでいる。緩衝剤は、酢酸塩、ホウ酸塩、クエン酸塩、リン酸塩、重炭酸塩、またはトリス−ＨＣｌのような従来の緩衝剤であり得る。緩衝酢酸溶液は約ｐＨ４−５．５であってもよく、トリス緩衝液は約ｐＨ７−８．５であり得る。さらなる医薬品は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，  １８ｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，  Ａ．  Ｒ．  Ｇｅｎｎａｒｏ，  ｅｄ．，  Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏｍｐａｎｙ，  １９９０で説明されている。
【０２６０】
組成物は、液体の形態、あるいは凍結乾燥または冷凍乾燥された形態であってもよく、１以上のリオプロテクタント（ｌｙｏｐｒｏｔｅｃｔａｎｔｓ）、賦形剤、界面活性剤、高分子量の構造的な添加剤、および／または増量剤を含んでもよい（例えば、米国特許第６，６８５，９４０号、第６，５６６，３２９号、および第６，３７２，７１６号を参照）。１つの実施形態では、スクロース、ラクトース、またはトレハロースのような非還元糖であるリオプロテクタントが含まれている。一般に含まれるリオプロテクタントの量は、再構成時に、高張性またはわずかに低張性の製剤も適切ではあるが、結果として生じる製剤が等張性になるような量である。加えて、リオプロテクタントの量は、凍結乾燥時のタンパク質の許容しがたい量の分解および／または凝集を防ぐのに十分でなければならない。あらかじめ凍結乾燥された製剤中の砂糖（例えばスクロース、ラクトース、トレハロース）の典型的なリオプロテクタント濃度は、約１０ｍＭから約４００ｍＭまでである。別の実施形態では、界面活性剤は、例えば非イオン界面活性剤、ポリソルベート（例えばポリソルベート２０、ポリソルベート８０）のようなイオン性界面活性剤；ポロキサマー（例えばポロキサマー１８８）；ポリ（エチレングリコール）フェニルエーテル（例えばトリトン）；ドデシル硫酸ナトリウム（ＳＤＳ）；ラウリル硫酸ナトリウム；オクチルグリコシドナトリウム；ラウリル−、ミリスチル−、リノレイル−、またはステアリル−スルホベタイン；ラウリル−、ミリスチル−、リノレイル−、またはステアリル−サルコシン；リノレイル−、ミリスチル−、またはセチル−ベタイン；ラウラミドプロピル、コカミドプロピル、リノールアミドプロピル−、ミリストアミドプロピル−、パルミドロプロピル、またはイソステアラミドプロピル−ベタイン（例えばラウラミドプロピル）；ミリストアミドプロピル、パルミドプロピル、またはイソステアラミドプロピル−ジメチルアミン；ココイルメチルタウリンナトリウム、またはオフェイルメチルタウリン二ナトリウムメチル；および、ＭＯＮＡＱＵＡＴ（商標）シリーズ（Ｍｏｎａ  Ｉｎｄｕｓｔｒｉｅｓ，  Ｉｎｃ．，  Ｐａｔｅｒｓｏｎ，  Ｎ．Ｊ．）、ポリエチルグリコール、ポリプロピルグリコール、およびエチレンとプロピレングリコール（例えばプルロニック、ＰＦ６８など）のコポリマーが含まれる。あらかじめ凍結乾燥された製剤中に存在することもある典型的な量の界面活性剤は、約０．００１−０．５％からである。高分子量の構造的な添加剤（例えば充填剤、結合剤）は、例えば、アカシア、アルブミン、アルギン酸、リン酸カルシウム（二塩基）、セルロース、カルボキシメチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウム、ヒドロキシエチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、微結晶性セルロース、デキストラン、デキストリン、デキストラート、スクロース、チロース、α化デンプン、硫酸カルシウム、アミロース、グリシン、ベントナイト、マルトース、ソルビトール、エチルセルロース、リン酸水素二ナトリウム、リン酸二ナトリウム、ピロ亜硫酸二ナトリウム、ポリビニルアルコール、ゼラチン、グ��コース、グアーガム、液状グルコース、圧縮可能な砂糖、ケイ酸アルミニウムマグネシウム、マルトデキストリン、ポリエチレンオキシド、ポリメタクリレート、ポビドン、アルギン酸ナトリウム、トラガント微結晶性セルロース、デンプン、およびゼインを含み得る。高分子量の構造的な添加剤の典型的な濃度は０．１重量％−１０重量％までである。他の実施形態では、増量剤（例えばマンニトール、グリシン）が含まれることがある。
【０２６１】
組成物は非経口投与に適していることがある。典型的な組成物は、熟練の作業員に利用可能な任意の経路、例えば、関節内、皮下、静脈内、筋肉内、腹腔内、大脳内（実質内）、脳室内、筋肉内、眼内、動脈内、または損傷内の経路による動物への注射または注入に適している。非経口製剤は典型的には、随意に薬学的に許容可能な保存剤を含んでいる、無菌、発熱物質を含まない、等張の水溶液であり得る。
【０２６２】
非水溶媒の例は、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール、オリーブオイルのような植物油、およびオレイン酸エチルのような注射可能な有機酸エステルである。水性担体は水、アルコール／水溶液、塩性媒体および緩衝媒体を含むエマルジョンまたは懸濁液を含んでいる。非経口ビヒクルは、塩化ナトリウム溶液、リンゲルデキストロース、デキストロースと塩化ナトリウム、乳酸リンゲルまたは固定油を含んでいる。静脈内のビヒクルは、流体と栄養素の補給物、リンゲルデキストロースに基づくものなどの電解質補充薬を含んでいる。保存剤と他の添加剤、例えば抗菌剤、抗酸化剤、キレート剤、不活性ガスなども存在することがある。一般には、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅ，  １６ｔｈ  Ｅｄ．，  Ｍａｃｋ  Ｅｄｓ．，  １９８０．を参照。
【０２６３】
本明細書に記載される医薬組成物は、製品の局所濃度をもたらし（例えば、大量投与、貯蔵効果）、および／または特定の局所的な環境における安定性または半減期を増加させる方法で、制御送達または持続送達向けに製剤化されてもよい。組成物は、生分解性マトリックス、注射可能なミクロスフェア、マイクロカプセル粒子、マイクロカプセル、生侵食性の粒子ビーズ、リポソーム、および後にデポー注射として送達可能な活性な薬剤の制御放出または持続放出をもたらす移植可能な送達装置と同様に、ポリ乳酸、ポリグリコール酸などのポリマー化合物の微粒子の調製物を含む、本明細書で開示されるＬＣ、ポリペプチド、核酸、またはベクターの製剤を含み得る。上記のような持続されたまたは制御された送達手段を製剤化するための技術が知られており、医薬品の制御放出および送達のために様々なポリマーが開発および使用されている。こうしたポリマーは典型的には生分解性かつ生体適合性である。エナンチオマーポリマーまたはポリペプチドセグメントの錯体生成によって形成されたものを含むポリマーヒドロゲルと温度またはｐＨに敏感な特性を有するヒドロゲルは、生理活性タンパク質薬剤（例えば超長ＣＤＲ３を含む抗体）の捕捉に関与する条件が緩くかつ水性であるため、薬物デポー効果をもたらすために望ましいこともある。例えば、ＷＯ９３／１５７２２の医薬組成物の送達のための制御放出多孔性ポリマー微粒子の記載を参照。
【０２６４】
この目的に適切な材料はポリラクチド（例えば、米国特許第３，７７３，９１９号を参照）、ポリ−（α−ヒドロキシカルボン酸）、ポリ−Ｄ−（−）−３−ヒドロキシ酪酸（ＥＰ１３３，９８８Ａ）、Ｌ−グルタミン酸とガンマエチル−Ｌ−グルタミン酸塩（Ｓｉｄｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｂｉｏｐｏｌｙｍｅｒｓ，  ２２：  ５４７−５５６  （１９８３））、ポリ（２−ヒドロキシエチル−メタクリレート（Ｌａｎｇｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｊ．  Ｂｉｏｍｅｄ．  Ｍａｔｅｒ．  Ｒｅｓ．，  １５：  １６７−２７７  （１９８１），  ａｎｄ  Ｌａｎｇｅｒ，  Ｃｈｅｍ．  Ｔｅｃｈ．，  １２：  ９８−１０５  （１９８２））、エチレン酢酸ビニル、またはポリ−Ｄ（−）−３−ヒドロキシ酪酸のポリマーを含む。他の生分解性ポリマーはポリ（ラクトン）、ポリ（アセタール）、ポリ（オルトエステル）、およびポリ（オルトカーボネート）を含んでいる。持続放出組成物はさらにリポソームを含むこともあり、これは、当該技術分野で知られている複数の方法のいずれかによって調製可能である（例えば、Ｅｐｐｓｔｅｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ，  ８２：  ３６８８−９２  （１９８５）を参照）。担体そのものまたはその分解産物は目的組織内では無毒でなければならず、さらに疾病を悪化させてはならない。これは、標的障害の動物モデルでの日常的なスクリーニングによって、あるいは上記モデルが利用不可能な場合には正常動物において、判定可能である。
【０２６５】
持続放出用の組み換えタンパク質のマイクロカプセル化は、ヒト成長ホルモン（ｒｈＧＨ）、インターフェロン−（ｒｈＩＦＮ−）、インターロイキン２、およびＭＮＲｇｐ１２０を用いて成功を収めた。Ｊｏｈｎｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｎａｔ．  Ｍｅｄ．，  ２：７９５−７９９  （１９９６）；  Ｙａｓｕｄａ，  Ｂｉｏｍｅｄ．  Ｔｈｅｒ．，  ２７：１２２１−１２２３  （１９９３）；  ＨＯＲＡ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ．  ８：７５５−７５８  （１９９０）；  Ｃｌｅｌａｎｄ，  “Ｄｅｓｉｇｎ  ａｎｄ  Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｓｉｎｇｌｅ  Ｉｍｍｕｎｉｚａｔｉｏｎ  Ｖａｃｃｉｎｅｓ  Ｕｓｉｎｇ  Ｐｏｌｙｌａｃｔｉｄｅ  Ｐｏｌｙｇｌｙｃｏｌｉｄｅ  Ｍｉｃｒｏｓｐｈｅｒｅ  Ｓｙｓｔｅｍｓ，”  ｉｎ  Ｖａｃｃｉｎｅ  Ｄｅｓｉｇｎ：  Ｔｈｅ  Ｓｕｂｕｎｉｔ  ａｎｄ  Ａｄｊｕｖａｎｔ  Ａｐｐｒｏａｃｈ，  Ｐｏｗｅｌｌ  ａｎｄ  Ｎｅｗｍａｎ，  ｅｄｓ，  （Ｐｌｅｎｕｍ  Ｐｒｅｓｓ：  Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，  １９９５），  ｐｐ．  ４３９−４６２；  ＷＯ  ９７／０３６９２，  ＷＯ  ９６／４００７２，  ＷＯ  ９６／０７３９９；  および、Ｕ．Ｓ．  Ｐａｔｅｎｔ  Ｎｏ．  ５，６５４，０１０．これらのタンパク質の持続放出製剤は、その生体適合性と広範な生物分解性の特性ゆえに、ポリ−乳酸−コグリコール酸（ＰＬＧＡ）ポリマーを使用して開発された。ＰＬＧＡ、乳酸、およびグリコール酸の分解産物は、人体内で迅速に取り除くことが可能である。さらに、このポリマーの分解性はその分子量と組成物を依存することがある。Ｌｅｗｉｓ，  “Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  ｒｅｌｅａｓｅ  ｏｆ  ｂｉｏａｃｔｉｖｅ  ａｇｅｎｔｓ  ｆｒｏｍ  ｌａｃｔｉｄｅ／ｇｌｙｃｏｌｉｄｅ  ｐｏｌｙｍｅｒ，”  ｉｎ：  Ｍ．  Ｃｈａｓｉｎ  ａｎｄ  Ｒ．  Ｌａｎｇｅｒ  （Ｅｄｓ．），  Ｂｉｏｄｅｇｒａｄａｂｌｅ  Ｐｏｌｙｍｅｒｓ  ａｓ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｓｙｓｔｅｍｓ  （Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ：  Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，  １９９０），  ｐｐ．  １−４１．持続放出組成物のさらなる例としては、例えば、ＥＰ５８，４８１Ａ、米国特許第３，８８７，６９９号、ＥＰ１５８，２７７Ａ、カナダ特許第１１７６５６５号、Ｕ．  Ｓｉｄｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｂｉｏｐｏｌｙｍｅｒｓ  ２２，  ５４７［１９８３］，Ｒ．Ｌａｎｇｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｃｈｅｍ．  Ｔｅｃｈ．  １２，  ９８［１９８２］，Ｓｉｎｈａ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｊ．Ｃｏｎｔｒｏｌ．  Ｒｅｌｅａｓｅ  ９０，  ２６１［２００３］，Ｚｈｕ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．  １８，  ２４［２０００］，および  Ｄａｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｏｌｌｏｉｄｓ  Ｓｕｒｆ  Ｂ  Ｂｉｏｉｎｔｅｒｆａｃｅｓ  ４１，１１７［２００５］が挙げられる。
【０２６６】
生体接着ポリマーも、本開示の組成物中におけるまたは該組成物と一緒の使用に関して企図されている。生体接着剤は長時間にわたって生物学的基板に付着することができる合成および天然の物質である。例えば、カーボポールとポリカルボフィルは両方ともポリ（アクリル酸）の合成の架橋誘導体である。天然の物質に基づく生体接着送達系は例えば、ヒアルロナンとしても知られているヒアルロン酸を含んでいる。ヒアルロン酸は、Ｄ−グルクロン酸とＮ−アセチル−Ｄ−グルコサミンの残基からなる天然のムコ多糖である。ヒアルロン酸は、滑液や目の硝子体と眼房水において見られるように、結合組織を含む脊椎動物の細胞外の組織マトリックス中で見られる。ヒアルロン酸のエステル化された誘導体は、生体適合性かつ生分解性である、送達のために使用されるミクロスフェアを生成するために使用されてきた（例えば、Ｃｏｒｔｉｖｏ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｂｉｏｍａｔｅｒｉａｌｓ  （１９９１）  １２：７２７−７３０；  ＥＰ  ５１７，５６５；  ＷＯ  ９６／２９９９８；  Ｉｌｌｕｍ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｊ．  Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  Ｒｅｌ．  （１９９４）  ２９：１３３−１４１を参照）。
【０２６７】
生物分解性および非生物分解性のポリマーマトリックスは、本開示の組成物を送達するために使用されてもよく、こうしたポリマーマトリックスは天然または合成ポリマーを含んでもよい。生分解性マトリックスが好ましい。放出が生じる期間はポリマーの選択に基づく。典型的には、数時間と３〜１２か月の間に及び期間にわたる放出がとても望ましい。生分解性の送達系を形成するために使用され得る典型的な合成ポリマーは以下を含んでいる：乳酸とグリコール酸のポリマー、ポリアミド、ポリカーボネート、ポリアルキレン、ポリアルキレングリコール、ポリアルキレンオキシド、ポリアルキレンテレフタレート、ポリビニルアルコール、ポリビニルエーテル、ポリビニルエステル、ポリ−ビニルハロゲン化物、ポリビニルピロリドン、ポリグリコリド、ポリシロキサン、ポリ無水物、ポリウレタンおよびそのコポリマー、ポリ（酪酸（ｂｕｔｉｃ  ａｃｉｄ）、ポリ（吉草酸）、アルキルセルロース、ヒドロキシアルキルセルロース、セルロースエーテル、セルロースエステル、ニトロセルロース、アクリルエステルとメタクリルエステルのポリマー、メチルセルロース、エチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ヒドロキシブチルメチルセルロース、酢酸セルロース、プロピオン酸セルロース、酢酸酪酸セルロース、酢酸フタル酸セルロース、カルボキシルエチルセルロース、三酢酸セルロース、硫酸セルロースナトリウム塩、ポリ（メタクリル酸メチル）、ポリ（メタクリル酸エチル）、ポリ（メタクリル酸ブチル）、ポリ（メタクリル酸イソブチル）、ポリ（メタクリル酸ヘキシル）、ポリ（メタクリル酸イソデシル）、ポリ（メタクリル酸ラウリル）、ポリ（メタクリル酸フェニル）、ポリ（アクリル酸メチル）、ポリ（アクリル酸イソプロピル）、ポリ（アクリル酸イソブチル）、ポリ（アクリル酸オクタデシル）、ポリエチレン、ポリプロピレン、ポリ（エチレングリコール）、ポリ（エチレンオキシド）、ポリ（エチレンテレフタレート）、ポリ（ビニルアルコール）、ポリ酢酸ビニル、ポリ塩化ビニル、ポリスチレン、およびポリビニルピロリドン。典型的な天然ポリマーは、アルギン酸塩と、デキストランおよびセルロース混合物を含む他の多糖類、コラーゲン、その化学的誘導体（化学基、例えば、アルキル、アルキレンの置換、付加、ヒドロキシル化、酸化、および当業者によって日常的に行われている他の修飾）、アルブミン、および他の親水性のタンパク質、ゼインおよび他のプロラミン、ならびに、疎水性タンパク質、これらのコポリマーを含んでいる。一般に、これらの材料は、インビボで、表面腐食、または全体侵食によって、酵素加水分解または水への暴露のいずれかによって分解する。ポリマーは随意に、水中でその重量の最大約９０％を吸収することができるヒドロゲル（例えば、ＷＯ  ０４／００９６６４，  ＷＯ  ０５／０８７２０１，  Ｓａｗｈｎｅｙ，  ｅｔ  ａｌ．，  Ｍａｃｒｏｍｏｌｅｃｕｌｅｓ，  １９９３，  ２６，  ５８１−５８７を参照）の形態であり、随意に、多価イオンまたは他のポリマーと架橋する。
【０２６８】
送達系はさらに、コレステロール、コレステロールエステルなどのステロール、および脂肪酸、またはモノ−ジ−グリセリドおよびトリ−グリセリドといった中性脂肪を含む脂質である非ポリマー系、ヒドロゲル放出系；サイラスティック系；ペプチドベース系；ワックス・コーティング；従来の結合剤と賦形剤を使用する圧縮錠剤；部分的に縮合した植込剤；などを含む。特定の例としては、限定されないが、（ａ）生成物が米国特許第４，４５２，７７５号、米国特許第４，６７５，１８９号、および米国特許第５，７３６，１５２号に記載されるものを含むマトリックス内のある形態で含まれている、侵食性の系、および（ｂ）製品が米国特許第３，８５４，４８０号、米国特許第５，１３３，９７４号、および米国特許第５，４０７，６８６に記載されるようなポリマーから制御された速度で浸透する、拡散系、が挙げられる。製品を含むリポソームは、知られている方法、例えば（ＤＥ  ３，２１８，１２１；  Ｅｐｓｔｅｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ，  ８２：  ３６８８−３６９２  （１９８５）；  Ｈｗａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ，  ７７：  ４０３０−４０３４  （１９８０）；  ＥＰ  ５２，３２２；  ＥＰ  ３６，６７６；  ＥＰ  ８８，０４６；  ＥＰ  １４３，９４９；  ＥＰ  １４２，６４１；  ＪＰ  ８３−１１８００８；  Ｕ．Ｓ．  Ｐａｔｅｎｔ  Ｎｏｓ．  ４，４８５，０４５  ａｎｄ  ４，５４４，５４５；  ａｎｄ  ＥＰ  １０２，３２４）に記載される方法より調製されてもよい。
【０２６９】
代替的にまたは追加的に、組成物は、本明細書に開示されるＬＣ、ＬＣの少なくとも一部をコード化する核酸、またはＬＣの少なくとも一部をコード化する核酸を含むベクターが吸収されたか、またはカプセル化された膜、スポンジ、または他の適切な材料の影響を受けた領域への移植によって局所的に投与されてもよい。移植装置が使用される場合、該装置は任意の適切な組織または器官へ移植されてもよく、本明細書に開示されるＬＣ、ＬＣの少なくとも一部をコード化する核酸、またはＬＣの少なくとも一部をコード化する核酸を含むベクターの送達は、大量投与により、または継続的な投与により、装置を介して直接、あるいは継続的な注入を利用するカテーテルにより、行うことができる。
【０２７０】
本明細書に開示されるＬＣ、ＬＣの少なくとも一部をコード化する核酸、またはＬＣの少なくとも一部をコード化する核酸を含むベクターを含む医薬組成物は吸入のために、例えば、乾燥粉末として製剤化されてもよい。吸入溶液はさらにエアロゾル送達用の液化された噴霧剤で製剤化されることがある。さらに別の製剤では、溶液は霧状であってもよい。経肺投与用のさらなる医薬組成物は、例えば、化学修飾されたタンパク質の肺送達について開示するＷＯ９４／２００６９に記載されるものを含む。肺送達については、粒径は遠位肺への送達に適していなければならない。例えば、粒径は１μｍから５μｍまでであってもよいが、しかしながら、例えば、それぞれの粒子が充分に多孔性である場合には、より大きな粒子が使用されることもある。
【０２７１】
本明細書に開示されるＬＣ、ＬＣの少なくとも一部をコード化する核酸、またはＬＣの少なくとも一部をコード化する核酸を含むベクターを含んでいる特定の製剤は、経口投与されてもよい。この方法で投与される製剤は、錠剤やカプセル剤のような固体の剤形を調剤する際に通例使用される担体とともに、または担体を用いずに製剤化されることもある。例えば、カプセルは、バイオアベイラビリティが最大化され、前全身的な分解が最小限に抑えられるときに、胃腸管中の位置で製剤の活性な部分を放出することを目的とすることが可能である。追加の薬剤は選択的な結合剤の吸収を促すために含まれることがある。希釈剤、調味料、低融点ワックス、植物油、滑沢剤、懸濁化剤、錠剤崩壊剤、および結合剤も使用することができる。
【０２７２】
別の調製物は、錠剤の製造に適した無毒な賦形剤を含む混合物中に、本明細書に開示されるＬＣ、ＬＣの少なくとも一部をコード化する核酸、またはＬＣの少なくとも一部をコード化する核酸を含むベクターを含んでいる有効な量の抗体を含んでもよい。滅菌水または別の適切なビヒクル中に錠剤を溶かすことによって、溶液は単位投与量剤形で調製されてもよい。適切な賦形剤としては、限定されないが、炭酸カルシウム、炭酸ナトリウムまたは重炭酸ナトリウム、ラクトース、あるいはリン酸カルシウムなどの不活性な希釈剤；または、デンプン、ゼラチン、あるいはアカシアのような結合剤；または、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸、あるいは滑石のような平滑剤が挙げられる。
【０２７３】
適切なおよび／または好ましい医薬製剤は、意図した投与経路、送達フォーマット、および望ましい投与量に依存して、本開示と製剤技術の一般的な知識を考慮して決定されてもよい。投与の方法にかかわらず、有効量は患者の体重、体表面積、または臓器のサイズによって計算されることがある。本明細書に記載される製剤の各々を含む処置に適切な投与量を決定するための計算のさらなる改良は、当該技術分野で日常的になされ、当該技術分野で日常的に行なわれる作業の範囲内である。適切な投与量は適切な用量反応データを使用して確認されてもよい。
【０２７４】
「薬学的に許容可能な」は、連邦政府または州政府の規制機関によって承認されるものあるいは承認可能なもの、あるいは、米国の薬局方、またはヒトを含む動物に使用するための他の一般に認識される薬局方に列挙されるものを指す場合がある。
【０２７５】
「薬学的に許容可能な塩」とは、薬学的に許容可能であるとともに、親化合物の所望の薬理活性を所有する化合物の塩を指す。
【０２７６】
「薬学的に許容可能な賦形剤、担体、またはアジュバント」は、本開示の少なくとも１つの抗体と共に、被験体に投与してもよい賦形剤、担体、またはアジュバントを指す場合があり、それらは、その薬理活性を破壊せず、且つ、治療用の量の化合物を送達するのに十分な用量で投与された時に無毒である。
【０２７７】
「薬学的に許容可能なビヒクル」は、本開示の少なくとも１つの抗体とともに投与される希釈剤、アジュバント、賦形剤、または担体を指す。
【０２７８】
ベクター、宿主細胞、および組み換え法
本明細書に開示されるようなＴＡは、組み換え方法によって発現されることがある。一般に、ＴＡをコード化する核酸は、さらなるクローニング（ＤＮＡの増幅）または発現のために、単離され、再現可能なベクターに挿入されてもよい。ＬＣをコード化するＤＮＡはＰＣＲ増幅によって調製され、従来の手順を用いて（例えば、ＬＣをコード化するヌクレオチドに特異的に結合することができるオリゴヌクレオチドプローブを用いて）配列決定されてもよい。典型的な実施形態では、ＬＣをコード化する核酸はＰＣＲ増幅され、制限酵素は消化され、ゲルは精製される。消化されたＬＣは、再現可能なベクターに挿入されることがある。消化されたＬＣ挿入物を含む再現可能なベクターは、さらなるクローニング（ＤＮＡの増幅）または発現のために、宿主細胞に形質転換または形質導入されてもよい。宿主細胞は原核生物または真核細胞であり得る。
【０２７９】
ポリヌクレオチドは、本明細書で開示されるＬＣのポリペプチド成分をコード化する配列は、重複するオリゴヌクレオチドプライマーを用いるＰＣＲ増幅によって得られることもある。ポリヌクレオチド配列は単離され、ＴＡ生成細胞から配列決定されてもよい。代替的に、ポリヌクレオチドはヌクレオチドシンセサイザーまたはＰＣＲ技術を使用して合成されてもよい。いったん得られると、ポリペプチドをコード化する配列は、原核生物の宿主および／または真核生物の宿主において異種ポリヌクレオチドを複製および発現することができる組換えベクターに挿入される。
【０２８０】
加えて、宿主微生物と適合するレプリコンおよび制御配列を含むファージベクターは、これらの宿主に関連して形質転換ベクターとして使用されてもよい。例えば、λＧＥＭＴＭ−１１のようなバクテリオファージは、大腸菌ＬＥ３９２などの影響を受けやすい宿主細胞を形質転換するために使用することができる組換えベクターを作る際に利用されてもよい。
【０２８１】
ＴＡは、細胞内（例えば細胞質）または細胞外（例えば分泌）で発現されてもよい。細胞外の発現については、ベクターは、ＴＡが細胞の外部に転位することを可能にする分泌シグナルを含み得る。
【０２８２】
ＴＡをコード化するベクターのクローニングまたは発現に適切な宿主細胞は、原核生物または真核細胞を含んでいる。宿主細胞は真核生物であってもよい。真核細胞の例としては、限定されないが、ヒト胎生腎（ＨＥＫ）細胞、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞、真菌、酵母、無脊椎細胞（例えば植物細胞や昆虫細胞）、リンパ球細胞（例えばＹＯ、ＮＳＯ、Ｓｐ２０細胞）が挙げられる。適切な哺乳動物宿主細胞株の他の例は、ＳＶ４０（ＣＯＳ−７）によって形質転換されたサルの腎臓ＣＶ１株；ベビーハムスター腎臓細胞（ＢＨＫ）；マウス・セルトリ細胞；サル腎培養細胞（ＣＶ１）；アフリカミドリザル腎臓細胞（ＶＥＲＯ−７６）；ヒト子宮頚癌細胞（ＨＥＬＡ）；イヌ腎臓細胞（ＭＤＣＫ；）バッファローラット肝細胞（ＢＲＬ  ３Ａ）；ヒト肺細胞（Ｗ１３８）；ヒト肝細胞（ＨｅｐＧ２）；マウス乳房腫瘍（ＭＭＴ  ０６０５６２）；ＴＲ１細胞；ＭＲＣ５細胞；および、ＦＳ４細胞である。宿主細胞は原核細胞（例えば大腸菌）であり得る。
【０２８３】
宿主細胞はＴＡをコード化するヌクレオチドを含むベクターで形質転換されてもよい。形質転換された宿主細胞は培地で培養されてもよい。培地は、プロモーターを誘発し、形質転換体を選択し、または所望の配列をコード化する遺伝子を増幅あるいは発現するための１つ以上の薬剤で補充されてもよい。宿主細胞を形質転換する方法は、当該技術分野で知られており、エレクトロポレーション、塩化カルシウム、またはポリエチレングリコール／ＤＭＳＯを含んでもよい。
【０２８４】
代替的に、宿主細胞はＴＡをコード化するヌクレオチドを含むベクターでトランスフェクトまたは形質導入されてもよい。トランスフェクトまたは形質導入された宿主細胞は培地で培養されてもよい。培地は、プロモーターを誘発し、トランスフェクトまたは形質導入された細胞を選択し、または所望の配列をコード化する遺伝子を発現するための１つ以上の薬剤で補充されてもよい。
【０２８５】
発現されたＴＡは、宿主細胞の周辺質へ分泌されて該周辺質から回収されるか、あるいは培養培地へ運ばれることもある。周辺質からのタンパク質回収は宿主細胞を破壊することを含むこともある。宿主細胞の破壊は浸透圧ショック、超音波処理、または溶解を含むことがある。遠心分離または濾過は細胞破片または全体の細胞を除去するために使用されてもよい。ＴＡは、例えば、親和性樹脂クロマトグラフィーによってさらに精製されることがある。
【０２８６】
代替的に、培養培地へ分泌されるＴＡは培地内で単離されてもよい。細胞は培養物から除去されてもよく、培養上清は、生成されたタンパク質をさらに精製するために、ろ過され濃縮されてもよい。発現されたポリペプチドはさらに、ポリアクリルアミドゲル電気泳動（ＰＡＧＥ）とウェスタンブロットアッセイなどの一般的に知られている方法を使用して、単離および同定可能である。
【０２８７】
ＴＡの製造は発酵プロセスによって大量に行われてもよい。様々な大規模な流加発酵処置は組み換えタンパク質の産生に利用可能である。大規模な発酵は、少なくとも１０００リットルの容量、好ましくは約１，０００〜１００，０００リットルの容量を有する。こうした発酵槽は、酸素と栄養素、とりわけグルコース（好ましい炭素／エネルギー源）を分布させるために撹拌機の羽根車を使用してもよい。小規模な発酵とは一般に、容積でせいぜい約１００リットルであり、約１リットルから約１００リットルまで変動可能な発酵槽における発酵を指す。
【０２８８】
発酵プロセスでは、タンパク質発現の誘発は典型的には、細胞が適切な条件下で、細胞が初期の定常期にある段階である、所望の密度、例えば、約１８０−２２０のＯＤ５５０まで成長した後に始められる。当該技術分野で知られ、および本明細書に記載されるように、様々な誘導物質は、採用されたベクター構築物に従って用いられてもよい。細胞は誘発よりも前に短時間で成長することもある。細胞は通常約１２−５０時間誘発されるが、それよりも長いまたは短い誘発時間が用いられてもよい。
【０２８９】
本明細書に開示されるＴＡの生成収率と品質を改善するために、様々な発酵条件を変更することができる。例えば、分泌されたＴＡポリペプチドの適切な組立てとフォールディングを改善するために、Ｄｓｂタンパク質（ＤｓｂＡ、ＤｓｂＢ、ＤｓｂＣ、ＤｓｂＤ、および／またはＤｓｂＧ）、あるいはＦｋｐＡ（シャペロン活性を有するペプチジルプロピルシス、トランス−イソメラーゼ）などのシャペロンタンパク質を過剰発現する追加のベクターを用いて、宿主原核細胞を同時形質転換してもよい。シャペロンタンパク質は、細菌の宿主細胞において生成された異種タンパク質の適切なフォールディングと溶解を促すことが実証されている。
【０２９０】
発現された異種タンパク質（とりわけ、タンパク分解性に敏感なもの）のタンパク質分解を最小限に抑えるために、タンパク分解酵素に欠けている特定の宿主株を本開示に使用することができる。例えば、宿主細胞株はプロテアーゼＩＩＩ、ＯｍｐＴ、ＤｅｇＰ、Ｔｓｐ、プロテアーゼＩ、プロテアーゼＭｉ、プロテアーゼＶ、プロテアーゼＶＩ、およびこれらの組み合わせなどの既知の細菌プロテアーゼをコード化する遺伝子中で遺伝子突然変異を引き起こすために修飾されてもよい。複数の大腸菌のプロテアーゼ欠乏株が入手可能である。
【０２９１】
当該技術分野で知られている標準的なタンパク質精製方法を使用することができる。以下の手順は適切な精製手順の典型的なものである：免疫親和性またはイオン交換カラムの分別、エタノール沈澱、逆相ＨＰＬＣ、シリカまたはＤＥＡＥなどの陽イオン交換樹脂上のクロマトグラフィー、クロマトフォーカシング、ＳＤＳ−ＰＡＧＥ、硫酸アンモニウム沈殿法、ヒドロキシルアパタイトクロマトグラフィー、ゲル電気泳動、透析、および親和性クロマトグラフィー、ならびに例えば、セファデックスＧ−７５を使用するゲルろ過。
【０２９２】
ＴＡは、市販のタンパク濃度フィルタ、例えばＡｍｉｃｏｎまたはＭｉｌｌｉｐｏｒｅ  Ｐｅｌｌｉｃｏｎ（登録商標）限外濾過ユニットを使用して濃縮されてもよい。
【０２９３】
プロテアーゼ阻害剤またはプロテアーゼ阻害剤カクテルは、ＴＡのタンパク質分解を阻害する前述の工程のいずれかに含まれてもよい。
【０２９４】
場合によっては、ＴＡまたはそのフラグメントは単離時に生物学的に活性でないこともある。「リフォールディング」、またはポリペプチドをその３次構造に変換してジスフィルド結合を生成する様々な方法は、生物学的活性を回復させるために使用可能である。こうした方法は、通常７以上のｐＨになるまで、および特定の濃度のカオトロープの存在下で、可溶化ポリペプチドを暴露することを含む。カオトロープの選択は封入体の可溶化に使用される選択に非常に似ているが、カオトロープは通常、より低い濃度で使用され、可溶化に使用されるカオトロープと必ずしも同じではない。タンパク質のシステイン橋の形成時にジスルフィド混合を生じさせる特定の酸化還元電位を生成するために、リフォールディング／酸化溶液は、特定の割合で還元剤または還元剤とその酸化形とも含むことがある。一般に使用される酸化還元対の中には、システイン／シスタミン、グルタチオン（ＧＳＨ）／ジチオビスＧＳＨ、塩化第二銅、ジチオトレイトール（ＤＴＴ）／ジチアンＤＴＴ、および２−メルカプトエタノール（ｂＭＥ）／ジ−チオ−ｂ（ＭＥ）を含むものもある。多くの例では、共溶媒はリフォールディングの効率を増加させるために使用されてもよく、この目的に使用される一般の試薬はグリセロール、様々な分子量のポリエチレングリコール、アルギニンなどを含む。緩衝剤の選択は、リフォールディングされたペプチドの三次元構造を決定することがある。硫酸アンモニウムを含む緩衝剤を使用することで、他のタイプの緩衝剤よりも優れた収率で所望のリフォールディングされたペプチドがもたらされることもある。
【０２９５】
＜キット／製造品＞
さらなる態様として、本開示は、本開示の方法を実行するためにその使用を促す方法で包装された１つ以上の化合物または組成物を含むキットを含んでいる。１つの実施形態では、こうしたキットは、添付されたラベル、または、本方法を実行する際の化合物と組成物の使用について明記した添付文書を備えた容器内で包装される、本明細書に記載される化合物または組成物を（例えば、修飾された治療薬単独で、または第２の薬剤と組み合わせて）含んでいる。適切な容器は例えば、瓶、バイアル、シリンジなどを含む。容器はガラスまたはプラスチックのような様々な材料から形成されてもよい。容器は無菌のアクセスポートを有していることもある（例えば、容器は、皮下注射針によって貫通可能な栓を備えた静脈用注射液バッグまたはバイアルであり得る）。製品は、（ａ）組成物が含まれた第１の容器であって、組成物が本明細書で開示されるような修飾された治療薬を含む、第１の容器；（ｂ）組成物が含まれる第２の容器であって、組成物がさらに治療薬を含む、第２の容器）を含んでもよい。本明細書で開示されるこの実施形態における製品は、特定の疾患を処置するために第１と第２の組成物を使用することができるということを示す添付文書をさらに含み得る。代替的にまたは追加的に、製品はさらに、注射用の静菌性の水（ＢＷＦＩ）、リン酸緩衝食塩水、リンゲル溶液、およびデキストロース溶液などの薬学的に許容可能な緩衝液を含む、第２の（または第３の）容器を含んでもよい。それはさらに、他の緩衝剤、希釈剤、フィルタ、針、およびシリンジを含む、商業的およびユーザー寄りの観点から望ましい他の材料を含んでいる。好ましくは、化合物または組成物は単位剤形で包装される。キットはさらに、特定の投与経路に従って組成物を投与するのに、あるいはスクリーニングアッセイを実行するのに適切な装置を含んでもよい。好ましくは、キットは、修飾された治療薬組成物の使用について記載したラベルを含んでいる。
【０２９６】
ある実施形態では、修飾された治療薬を含む組成物は、ヒト、ウシ、ネコ、イヌ、およびマウスなどの哺乳動物への静脈内投与に適合した医薬組成物として、日常的な処置に合わせて製剤化される。典型的には、静脈内投与用組成物は無菌の等張水性緩衝液の溶液である。必要に応じて、組成物はさらに、可溶化剤や、注入部位の疼痛を緩和するためにリグノカインなどの局所麻酔薬を含むこともある。一般に、成分は単位剤形で、例えば、活性薬剤の量を示すアンプルまたは小袋のような密封容器中の乾燥した凍結乾燥粉末または水を含まない濃縮物として、別々にまたはまとめて混合して供給される。組成物が注入によって投与されることになっている場合、組成物は無菌の医薬品グレードの水または生理食塩水を含んでいる注入瓶で分注可能である。組成物が注入によって投与される場合、成分が投与前に混合されるように、注射用滅菌水または生理食塩水のアンプルを提供することができる。
【０２９７】
タンパク質の異常な発現および／または活性に関連する疾患または障害の処置、阻害、または予防に効果的であり得る本明細書に記載される組成物の量は、標準的な臨床技術によって決定することができる。加えて、インビボアッセイは最適な投与量範囲を特定しやすくするために随意に使用されてもよい。製剤中で使用される正確な投与量は投与経路と疾患または障害の重症度にも依存することがあり、実務者の判断や各患者の状況によって決定されなければならない。有効な量は、インビトロまたは動物モデルの試験システムに由来する用量反応曲線から推定される。
【０２９８】
定義
【０２９９】
以下の用語は、本明細書で使用されるように、特段の定めのない限り、以下の意味を有する：
【０３００】
「アミノ」は−ＮＨ２ラジカルを指す。
【０３０１】
「シアノ」または「ニトリル」は−ＣＮラジカルを指す。
【０３０２】
「ヒドロキシ」または「ヒドロキシル」は−ＯＨラジカルを指す。
【０３０３】
「ニトロ」は−ＮＯ２ラジカルを指す。
【０３０４】
「オキソ」は＝Ｏ置換基を指す。
【０３０５】
「オキシム（Ｏｘｉｍｅ）」は＝Ｎ−ＯＨ置換基を指す。
【０３０６】
「チオキソ（Ｔｈｉｏｘｏ）」は＝Ｓ置換基を指す。
【０３０７】
「アルキル」は直鎖または分枝鎖の炭化水素鎖ラジカルを指し、１〜３０の炭素原子を有し、単結合によって分子の残りに結合する。１から３０までの炭素原子の任意の数を含むアルキルが含まれている。例えば、最大で３０までの炭素原子を含むアルキルは、同様にＣ１−Ｃ３０アルキルと呼ばれ、例えば、最大で１２の炭素原子を含むアルキルはＣ１−Ｃ１２アルキルである。他の数の炭素原子を含むアルキル（と本明細書で定義される他の部分）は同様に表される。アルキル基としては、限定されないが、Ｃ１−Ｃ３０アルキル、Ｃ１−Ｃ２０アルキル、Ｃ１−Ｃ１５アルキル、Ｃ１−Ｃ１０アルキル、Ｃ１−Ｃ８アルキル、Ｃ１−Ｃ６アルキル、Ｃ１−Ｃ４アルキル、Ｃ１−Ｃ３アルキル、Ｃ１−Ｃ２アルキル、Ｃ２−Ｃ８アルキル、Ｃ３−Ｃ８アルキル、および、Ｃ４−Ｃ８アルキルが挙げられる。代表的なアルキル基としては、限定されないが、メチル、エチル、ｎ−プロピル、１−メチルエチル（イソ−プロピル）、ｎ−ブチル、ｉ−ブチル、ｓ−ブチル、ｎ−ペンチル、１，１−ジメチルエチル（ｔ−ブチル）、３−メチルヘキシル、２−メチルヘキシル、ビニル、アリル、プロピニルなどが挙げられる。不飽和を含むアルキルは、アルケニルとアルキニルの基を含んでいる。明細書で別段の定めのない限り、アルキル基は、以下に記載されるように、随意に置換されてもよい。
【０３０８】
「アルキレン」または「アルキレン鎖」は上記のアルキルについて記載されるように、直鎖または分枝鎖の二価炭化水素鎖を指す。明細書で別段の定めのない限り、アルキレン基は、以下に記載されるように、随意に置換されてもよい。
【０３０９】
「アルコキシ」は、Ｒａが定義されるようなアルキルラジカルである式ＯＲａのラジカルを指す。明細書で別段の定めのない限り、アルコキシ基は、以下に記載されるように、随意に置換されてもよい。
【０３１０】
「アリール」は、水素、６〜３０の炭素原子、および少なくとも１つの芳香族環を含む、炭化水素環系に由来するラジカルを指す。アリールラジカルは、単環式、二環式、三環式、または、四環式の環系であってもよく、縮合または架橋の環系を含んでもよい。アリールラジカルとしては、限定されないが、アセアントリレン、アセナフチレン、アセフェナントリレン、アントラセン、アズレン、ベンゼン、クリセン、フルオランテン、フルオレン、ａｓ−インダセン、ｓ−インダセン、インダン、インデン、ナフタレン、フェナレン、フェナントレン、プレイアデン、ピレン、およびトリフェニレンの炭化水素環系に由来するアリールラジカルが挙げられる。とりわけ明細書で別段の定めのない限り、用語「アリール」または接頭辞「ａｒ」（「アラルキル」中のように）は、随意に置換されたアリールラジカルを含むことを意味している。
【０３１１】
「シクロアルキル」または「炭素環」は、安定した非芳香族の単環式または多環式の環状炭素を指し、飽和または不飽和の縮合したまたは架橋した環系を含み得る。代表的なシクロアルキルまたは炭素環としては、限定されないが、３〜１５の炭素原子、３から１０の炭素原子、３から８の炭素原子、３から６の炭素原子、３から５の炭素原子、または３〜４の炭素原子を有するシクロアルキルが挙げられる。単環式のシクロアルキルまたは炭素環は、例えば、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、シクロヘプチル、およびシクロオクチルを含んでいる。多環式のシクロアルキルまたは炭素環は、例えば、アダマンチル、ノルボルニル、デカリニル、ビシクロ［３．３．０］オクタン、ビシクロ［４．３．０］ノナン、シス−デカリン、トランス−デカリン、ビシクロ［２．１．１］ヘキサン、ビシクロ［２．２．１］ヘプタン、ビシクロ［２．２．２］オクタン、ビシクロ［３．２．２］ノナン、および、ビシクロ［３．３．２］デカン、ならびに、７，７−ジメチル−ビシクロ［２．２．１］ヘプタニルを含む。本明細書において別段の定めのない限り、シクロアルキルまたは炭素環の基は随意に置換されることがある。シクロアルキル基の説明的な例は、以下の部分を含むがこれらに限定されない：
【０３１２】
【化６２】
2018511574.tif 000064
【０３１３】
「縮合した」とは、既存の環構造に縮合される本明細書に記載される任意の環構造を指す。縮合環がヘテロシクリル環またはヘテロアリール環である場合、縮合ヘテロシクリル環または縮合ヘテロアリール環の一部になる既存の環状構造の任意の炭素原子は、窒素原子と取り替えられてもよい。
【０３１４】
「ハロ」または「ハロゲン」はブロモ、クロロ、フルオロ、またはヨードを指す。
【０３１５】
「ハロアルキル」とは、上記のような１つ以上のハロラジカル、例えば、トリフルオロメチル、ジフルオロメチル、フルオロメチル、トリクロロメチル、２，２，２−トリフルオロエチル、１，２−ジフルオロエチル、３−ブロモ−２−フルオロプロピル、１，２−ジブロモエチルなどによって置換される、上で定義されるようなアルキルラジカルを指す。明細書で別段の定めのない限り、ハロアルキル基は随意に置換されてもよい。
【０３１６】
「ハロアルコキシ」は同様に、Ｒａが定義されるようなハロアルキルラジカルである、式ＯＲａのラジカルを指す。明細書で別段の定めのない限り、ハロアルコキシ基は、以下に記載されるように、随意に置換されてもよい。
【０３１７】
「ヘテロシクロアルキル」または「ヘテロシクリル」または「複素環式環」または「複素環」は、２〜２３の炭素原子と、窒素、酸素、亜リン酸、および硫黄からなる群から選択された１〜８のヘテロ原子とを含む安定した３〜２４員の非芳香族環ラジカルを指す。明細書で別段の定めのない限り、ヘテロシクリルラジカルは、単環式、二環式、三環式、または、四環式の環系であってもよく、縮合したまたは架橋した環系を含んでもよく、ヘテロシクリルラジカル中の窒素、炭素、または硫黄の原子は、随意に酸化されてもよく、窒素原子は随意に四級化されてもよく、および、ヘテロシクリルラジカルは、部分的にまたは完全に飽和していてもよい。こうしたヘテロシクリルラジカルの例としては、限定されないが、アゼチジニル、ジオキソラニル、チエニル［１，３］ジチアニル、デカヒドロイソキノリル、イミダゾリニル、イミダゾリジニル、イソチアゾリジニル、イソキサゾリジニル、モルホリニル、オクタヒドロインドリル、オクタヒドロイソインドリル、２−オキソピペラジニル、２−オキソピペリジニル、２−オキソピロリジニル、オキサゾリジニル、ピペリジニル、ピペラジニル、４−ピペリドニル、ピロリジニル、ピラゾリジニル、キヌクリジニル、チアゾリジニル、テトラヒドロフラニル、トリチアニル、テトラヒドロピラニル、チオモルホリニル、チアモルホリニル、１−オキソ−チオモルホリニル、１，１−ジオキソ−チオモルホリニル、１２−クラウン−４、１５−クラウン−５、１８−クラウン−６、２１−クラウン−７、アザ−１８−クラウン−６、ジアザ−１８−クラウン−６、アザ−２１−クラウン−７、およびジアザ−２１−クラウン−７が挙げられる。明細書で別段の定めのない限り、ヘテロシクリル基は随意に置換されてもよい。非芳香族ヘテロ環としても表される、ヘテロシクロアルキル基の説明的な例は、以下のものを含む。
【０３１８】
【化６３】
2018511574.tif 000065
用語「ヘテロシクロアルキル」は、限定されないが、単糖類、二糖類、およびオリゴ糖を含む、炭水化物の環状形態もすべて含む。特段の定めのない限り、ヘテロシクロアルキルは環の中に２〜１０の炭素を有している。ヘテロシクロアルキル中の炭素原子の数を参照する際、ヘテロシクロアルキル中の炭素原子の数は、ヘテロシクロアルキル（すなわち、ヘテロシクロアルキル環の骨格原子）を構成する原子（ヘテロ原子を含む）の総数と同じではないことに留意する。明細書に別段の定めのない限り、ヘテロシクロアルキル基は随意に置換されてもよい。
【０３１９】
本明細書で単独でまたは組み合わせて使用される用語「ヘテロアリール」は、約５から約２０の骨格環原子を含む随意に置換された芳香族モノラジカルを指し、ここで、環原子の１つ以上は、酸素、窒素、硫黄、亜リン酸、シリコン、セレニウム、およびスズの中から独立して選択されたヘテロ原子であるが、これらの原子に限定されず、ただし、上記の群の環は２つの隣接するＯまたはＳ原子を含まないことを条件とする。２以上のヘテロ原子が環の中に存在する実施形態において、２以上のヘテロ原子は互いに同じであり得るか、または２以上のヘテロ原子のいくつかまたは全ては、それぞれ他のものと異なり得る。用語「ヘテロアリール」は、少なくとも１つのヘテロ原子を有する、随意に置換した縮合および非縮合のヘテロアリールラジカルを含む。用語「ヘテロアリール」はまた、５乃至約２０の骨格環原子を有する縮合および非縮合のヘテロアリールと、同様に、５乃至約１０の骨格環原子を有するものを含む。ヘテロアリール基への結合は、炭素原子またはヘテロ原子を介し得る。ゆえに、非限定的な例として、イミダゾール基は、その炭素原子（イミダゾール−２−イル、イミダゾール−４−イル、またはイミダゾール−５−イル）、あるいはその窒素原子（イミダゾール−１−イルまたはイミダゾール−３−イル）のいずれかを介して親分子に結合されてもよい。同様に、ヘテロアリール基は、その炭素原子のいずれかまたはすべて、および／またはそのヘテロ原子のいずれかまたはすべてを介して、さらに置換されてもよい。縮合ヘテロアリールラジカルは２乃至４の縮合環を含んでもよく、結合環はヘテロ芳香環であり、他の個々の環は、脂環式、複素環、芳香族、ヘテロ芳香族、またはこれらの任意の組み合わせであってもよい。単環ヘテロアリール基の非限定的な例はピリジルを含み、縮合環ヘテロアリール基はベンズイミダゾリル、キノリニル、アクリジニルを含み、非縮合のビヘテロアリール基はビピリジニルを含む。ヘテロアリールのさらなる例としては、限定されないが、フラニル、チエニル、オキサゾリル、アクリジニル、アゼピニル、フェナジニル、ベンズイミダゾリル、ベンズインドリル、ベンゾフラニル、ベンゾフラノニル、ベンゾオキサゾリル、ベンゾチアゾリル、ベンゾチアジアゾリル、ベンゾチオフェニル、ベンゾオキサジアゾリル、ベンゾジオキソリル、ベンゾ［ｂ］［１，４］ジオキセピニル、１，４−ベンゾジオキサニル、ベンゾナフトフラニル、ベンゾトリアゾリル、ベンゾジオキソリル、ベンゾジオキシニル、ベンゾピラニル、ベンゾピラノニル、ベンゾチエニル（ベンゾチオフェニル）、ベンゾ［４，６］イミダゾ［１，２−ａ］ピリジニル、カルバゾリル、シンノリニル、ジベンゾフラニル、ジベンゾチオフェニル、フラノニル、イミダゾリル、インドリル、イソキサゾリル、イソキノリニル、インドリジニル、インダゾリル、イソインドリル、インドリニル、イソインドリニル、インドリジニル、イソチアゾリル、イソインドリルオキサジアゾリル、インダゾリル、ナフチリジニル、オキサジアゾリル、２−オキソアゼピニル、オキシラニル、１−オキシドピリジニル、１−オキシドピリミジニル、１−オキシドピラジニル、１−オキシドピリダジニルピリダジニル、１−フェニル−１Ｈ−ピロリル、フェノチアジニル、フェノキサジニル、ピリジニル、ピリダジニル、ピリミジニル、ピラジニル、ピロリル、ピラジニル、ピラゾリル、プリニル、フタラジニル、プテリジニル、キノリニル、キナゾリニル、キノキサリニル、キヌクリジニル、トリアゾリル、テトラゾリル、チアゾリル、トリアジニル、チアジアゾリル、テトラヒドロキノリニル、チアゾリル、およびチオフェニル、ならびに、例えばピリジル−Ｎ−オキシドなどのこれらのオキシドが挙げられる。ヘテロアリール基の実例となる例は以下の部分を含んでいる：
【０３２０】
【化６４】
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【０３２１】
上記の基はすべて置換されることもあれば、または非置換であってもよい。本明細書で使用されるように「置換された」との用語は、上記の基（例えば、アルキル、アルキレン、アルコキシ、アリール、シクロアルキル、ハロアルキル、ヘテロシクリル、および／またはヘテロアリール）のいずれかがさらに官能化されてもよく、少なくとも１つの水素原子が非水素原子置換基との結合に置き換えられることを意味している。明細書で別段の定めのない限り、置換基は、以下から選択された１つ以上の置換基を含んでもよい：オキソ、アミノ、ＣＯ２Ｈ、ニトリル、ニトロ、ヒドロキシル、チオオキシ、アルキル、アルキレン、アルコキシ、アリール、シクロアルキル、ヘテロシクリル、ヘテロアリール、ジアルキルアミン、アリールアミン、アルキルアリールアミン、ジアリールアミン、トリアルキルアンモニウム（Ｎ＋Ｒ３）、Ｎ−オキシド、イミド、およびエナミン；トリアルキルシリル基、ジアルキルアリールシリル（ｄｉａｌｋｙｌａｒｙｌｓｉｌｙｌ）基、アルキルジアリールシリル（ａｌｋｙｌｄｉａｒｙｌｓｉｌｙｌ）基、トリアリールシリル基、ペルフルオロアルキルまたはペルフルオロアルコキシ、例えば、トリフルオロメチルまたはトリフルオロメトキシなどの基のシリコン原子。「置換された」は同様に、１つ以上の水素原子がオキソ、カルボニル、カルボキシル、およびエステル基中の酸素、ならびに、イミン、オキシム、ヒドラゾン、およびニトリルなどの基における窒素などのヘテロ原子との高次の結合（例えば二重結合または三重結合）に取って代わられる上記の基のいずれかを意味する。例えば、「置換した」は、１以上の水素原子が、−ＮＨ２、−ＮＲｇＣ（＝Ｏ）ＮＲｇＲｈ、−ＮＲｇＣ（＝Ｏ）ＯＲｈ、−ＮＲｇＳＯ２Ｒｈ、−ＯＣ（＝Ｏ）ＮＲｇＲｈ、−ＯＲｇ、−ＳＲｇ、−ＳＯＲｇ、−ＳＯ２Ｒｇ、−ＯＳＯ２Ｒｇ、−ＳＯ２ＯＲｇ、＝ＮＳＯ２Ｒｇ、および−ＳＯ２ＮＲｇＲｈで置き換えられる、上記の基のいずれかを含む。前述において、ＲｇとＲｈは同じまたは異なるものであり、独立して、水素、アルキル、アルコキシ、アルキルアミノ、チオアルキル、アリール、アラルキル、シクロアルキル、シクロアルキルアルキル、ハロアルキル、ヘテロシクリル、Ｎ−ヘテロシクリル、ヘテロシクリルアルキル、ヘテロアリール、Ｎ−ヘテロアリール、および／またはヘテロアリールアルキルである。加えて、前述の置換基のそれぞれも、上記の置換基の１つ以上で随意に置換されてもよい。さらに、上記の基のいずれもが１つ以上の内部酸素、硫黄、または窒素の原子を含むように置換されてもよい。例えば、エーテルまたはポリエーテルの基を形成するために、アルキル基は１以上の内部酸素原子で置換されてもよい。同様に、チオエーテル、ジスルフィドなどを形成するために、アルキル基は１つ以上の内部硫黄原子で置換されてもよい。
【０３２２】
「随意の」または「随意に」との用語は、後に記載される事象または状況が生じることもあれば、生じないこともあること、および、本記載が上記事象または状況が生じる例とそれが生じない例を含んでいることを意味する。例えば、「随意に置換されたアルキル」とは、上に定義されるように、「アルキル」または「置換されたアルキル」のいずれかを意味する。さらに、随意に置換した基は、非置換（例えば−ＣＨ２ＣＨ３）、完全に置換（例えば−ＣＦ２ＣＦ３）、モノ置換（例えば−ＣＨ２ＣＨ２Ｆ）、または、完全な置換とモノ置換との間にあるレベルで置換（例えば−ＣＨ２ＣＨＦ２、−ＣＨ２ＣＦ３、−ＣＦ２ＣＨ３、−ＣＦＨＣＨＦ２など）されてもよい。こうした基は、立体的に非実用的、および／または合成的に利用可能でない、任意の置換または置換パターン（例えば、置換したアルキルは随意に置換したシクロアルキル基を含み、それは随意に置換したアルキル基を潜在的に無制限に含むと定義される）を導入することを意図していないことが、１以上の置換基を含有する任意の基に関して当業者に理解される。したがって、記載された任意の置換基は一般に、約１，０００ダルトン、より具体的には、最大で約５００ダルトンの最大分子量を有するものとして理解されなければならない。
【０３２３】
「互変異性体」は、分子のある原子から同じ分子の別の原子までのプロトン移動を指す。本明細書に示された化合物は、互変異性体として存在してもよい。互変異性体は、単結合、および隣接する二重結合のスイッチを伴う、水素原子の遊走によって相互転換できる化合物である。互変異性化が可能な結合構造において、互変異性体の化学平衡が存在する。本明細書に開示された化合物のすべての互変異性型が企図される。互変異性体の正確な比率は、温度、溶媒、およびｐＨを含むいくつかの因子に依存する。互変体の相互転換のいくつかの例は以下を含んでいる：
【０３２４】
【化６５】
2018511574.tif 000067
【０３２５】
本明細書で開示される化合物の「代謝産物」は、化合物が代謝されるときに形成されるその化合物の誘導体である。用語「活性代謝物」は、化合物が代謝される時に形成される、化合物の生物学的に活性な誘導体を指す。本明細書で用いられるように、用語「代謝」は、有機体によって特定の物質が変化するプロセス（加水分解反応、および、酸化反応のような酵素によって触媒された反応などを含むが、これらに限定されない）の全体を指す。従って、酵素は、化合物への特定の構造的変化をもたらし得る。例えば、チトクロームＰ４５０は、様々な酸化還元反応を触媒する一方で、ウリジン二リン酸グルクロニルトランスフェラーゼは、芳香族アルコール、脂肪族アルコール、カルボン酸、アミン、および遊離スルフヒドリル基への活性化グルクロン酸分子の転移を触媒する。代謝についてのさらに詳しい情報は、「Ｔｈｅ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｂａｓｉｓ  ｏｆ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ，  ９ｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，  ＭｃＧｒａｗ  Ｈｉｌｌ  （１９９６）」から入手してもよい。本明細書で開示される化合物の代謝物は、宿主への化合物の投与と宿主から採取した組織サンプルの解析により、または、肝細胞を用いた化合物のインビトロでのインキュベーションと得られた化合物の分析のいずれかによって、同定される。両方の方法が当該技術では周知である。化合物の代謝産物は酸化のプロセスによって形成され、化合物を含む対応するヒドロキシに対応することもある。化合物は、１以上の薬理学的に活性な代謝物に代謝されることがある。
【０３２６】
本明細書で使用されるように、ペプチドの「誘導体」は、限定されないが、脂質結合（１つ以上のアミノ酸残基交換、またはＬ−対Ｄ−のアミノ酸交換など）を可能にする修飾されたペプチド、フラグメント、１つ以上の追加のアミノ酸を含むアナログ、複合体、および／または、ペプチドの凝集体を指す。ペプチドの誘導体は、ペプチドに対して少なくとも５０％の相同性を有する相同体であり得る。ペプチドの誘導体は、ペプチドに対して少なくとも６０％の相同性を有する相同体であり得る。ペプチドの誘導体は、ペプチドに対して少なくとも７０％の相同性を有する相同体であり得る。ペプチドの誘導体は、ペプチドに対して少なくとも８０％の相同性を有する相同体であり得る。ペプチドの誘導体は、ペプチドに対して少なくとも９０％の相同性を有する相同体であり得る。
【０３２７】
「相同する」、「相同性」、または「パーセント相同性」との用語は、参照配列と比較してアミノ酸配列または核酸配列を記載するために本明細書で使用される際、Ｋａｒｌｉｎ  ａｎｄ  Ａｌｔｓｃｈｕｌ  （Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ  ８７：  ２２６４−２２６８，  １９９０，  ｍｏｄｉｆｉｅｄ  ａｓ  ｉｎ  Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ  ９０：５８７３−５８７７，  １９９３）によって記載される式を用いて決定され得る。こうした式は、Ａｌｔｓｃｈｕｌ  ｅｔ  ａｌ．  （Ｊ．  Ｍｏｌ．  Ｂｉｏｌ．  ２１５：  ４０３−４１０，  １９９０）のｂａｓｉｃ  ｌｏｃａｌ  ａｌｉｇｎｍｅｎｔ  ｓｅａｒｃｈ  ｔｏｏｌ（ＢＬＡＳＴ）プログラムに組み入れられる。配列のパーセント相同性は、この適用の申請日の時点で、ＢＬＡＳＴの最近のバージョンを使用して決定可能である。
【０３２８】
「処置すること」、または「処置」、または「処置するための」、または「緩和すること」、または、「緩和するための」のような用語は以下を指す：１）診断された病態または障害症状を治癒し、遅らせ、減少させ、および／またはその進行を停止させる治療的手段；および／または、２）標的の病態または障害の発症を予防するおよび／または遅らせる予防的または再発防止的手段。したがって、処置を必要とする者はすでに病気を抱えている者、その病気を抱える傾向のある者、およびその病気を予防することになっている者を含む。
【０３２９】
「アミノ酸」はアミノ酸アナログや自然発生のアミノ酸と同じように機能するアミノ酸模倣物だけでなく、自然発生の合成アミノ酸も指す。自然発生のアミノ酸は、後で修正されるアミノ酸、例えばヒドロキシプロリン、ガンマ−カルボキシグルタマート、Ｏ−リン酸化セリンと同様に、遺伝子コードによってコード化されるものである。アミノ酸アナログは自然発生のアミノ酸と同じ塩基化学構造、例えば、水素、カルボキシル基、アミノ基、およびＲ基に結合するアルファ炭素を有する化合物を指し、例えば、ホモセリン、ノルロイシン、メチオニンスルホキシド、メチオニンメチルスルホニウムである。こうしたアナログは、修飾されたＲ基（例えばノルロイシン）または修飾されたペプチド骨格を有し得るが、自然発生のアミノ酸と同じ塩基化学構造を保持することができる。アミノ酸模倣物は、アミノ酸の一般的な化学構造とは異なるが、自然発生のアミノ酸と同じように機能する構造を有する化合物を指す。
【０３３０】
本明細書で使用されるように、用語「治療薬」または「ペプチド治療薬」とは、別のタンパク質、ペプチド、細胞、または組織の活性を調節するタンパク質またはペプチドを指す。活性を調節することは、タンパク質、ペプチド、細胞、または組織の活性または発現を増加させ、減少させ、刺激し、または、防ぐことを含み得る。治療薬は、疾患または障害の病因に関与するタンパク質またはペプチドの活性を調節することがある。典型的なＴＡとしては、限定されないが、ホルモン、キナーゼ、受容体、リガンド、成長因子、調節タンパク質、代謝性タンパク質、サイトカイン、ケモカイン、インターフェロン、ホスファターゼ、抗体、またはこれらの任意の組み合わせの少なくとも一部が挙げられ得る。
【０３３１】
「障害」または「疾患」とは、本明細書に開示された物質／分子（例えば、本明細書に開示されるような修飾された治療薬）または方法を用いる処置から利益を得る疾患を指す。これは哺乳動物を問題になっている障害に罹患しやすくなる病態を含む慢性および急性の障害または疾患を含む。
【０３３２】
「処置」は、処置されている個体または細胞の自然経過を変えようとする臨床的な介在を指し、予防のために、または臨床病理学的な経過の間に行うことができる。望ましい治療効果は、疾患の発生または再発を防ぐこと、症状の緩和、疾患の任意の直接または間接の病的な結果の減少、転移を防ぐこと、疾患の進行の速度を抑えること、病状の改善または緩和、および予後の寛解または改善を含む。
【０３３３】
処置の目的のための「哺乳動物」とは、ヒト、げっ歯類（例えばマウスとラット）、およびサル；家庭内動物と家畜；および、動物園、スポーツ、研究所、またはペットの動物、イヌ、ネコ、ウシ、ウマ、ヒツジ、ブタ、ヤギ、ウサギなどを含む、哺乳動物として分類される任意の動物を指す。いくつかの実施形態では、哺乳動物は、ヒト、げっ歯類、またはサルから選択される。
【０３３４】
「薬学的に許容可能な」とは、連邦政府または州政府の規制当局により承認されているか承認可能であること、あるいは、米国薬局方またはヒトを含む動物で使用される他の一般に許可された薬局方で列挙されていることを指す。
【０３３５】
「薬学的に許容可能な塩」は、薬学的に許容可能であり、親化合物の望ましい薬理活性を有する化合物の塩を指す。
【０３３６】
「薬学的に許容可能な賦形剤、担体、またはアジュバント」とは、本開示の少なくとも１つの抗体と一緒に被験体に投与可能であり、その薬理活性を破壊せず、および、治療量の化合物を送達するのに十分な投与量で投与される際に無毒である、賦形剤、担体、またはアジュバントを指す。
【０３３７】
「薬学的に許容可能なビヒクル」とは、本開示の少なくとも１つの抗体がともに投与される、希釈剤、アジュバント、賦形剤、または担体を指す。
【０３３８】
用語「修飾された治療薬」、「脂質複合体」、および「ＬＣ」は交換可能に使用されてもよい。これらの用語は、半減期延長部分に結合した治療薬（ＴＡ）を指すこともある。
【０３３９】
実施例
【０３４０】
実施例１．リラキシンアナログの遺伝子構造と発現。
【０３４１】
挿入物をポリメラーゼサイクリングアセンブリ（ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ  ｃｙｃｌｉｎｇ  ａｓｓｅｍｂｌｙ）によって調製した。フォワードプライマーとリバースプライマーをアニーリングしてＤＮＡフラグメントを生成し、これをフォワードエンドプライマーとリバースエンドプライマーでさらに濃縮した。その後、増幅させたフラグメントを制限消化酵素（ＮｄｅＩ／ＫｐｎＩ）で消化させた。その後、調製した挿入物を、Ｔ７プロモーターとターミネーターの制御下でＰＥＴバックボーンを有するベクターへ連結した（例えば、図４を参照）。その後、コード化されたＤＮＡフラグメントをＤＮＡ配列決定によって確認した。発現については、リラキシン構築物を、ａｒａＢＡＤプロモーターの制御下でゲノムＴ７  ＲＮＡポリメラーゼ遺伝子を有するＫ１２大腸菌（Ｗ３１１０の誘導体）に形質転換させた。形質転換した大腸菌細胞を、激しく振盪させながら（２５０ｒｐｍ）３７°ＣでＯＤ６００ｎｍ＝０．８になるまで５０μｇ／ｍｌカナマイシンを補充したＬＢ中で培養した。遺伝子の発現を引き起こすために、Ｌ−アラビノース保存溶液（Ｈ２Ｏ中の２０％ｗ／ｖ）を、０．２％の終濃度になるまで加えて、５時間３７°Ｃにおいて２５０ｒｐｍで振盪しながら細胞を継続的にインキュベートした。その後、細胞を遠心分離（６０００ｒｐｍ、１５分）により収集した。実施例１８に記載されるように、封入体の調製を行った。
【０３４２】
実施例．２リラキシンペプチドの生物活性の測定。
【０３４３】
リラキシン２はロイシンに富む反復配列を含むＧＰＣＲ（つまりＬＧＲ７（ＲＦＸＲ１））を介してシグナルを送る。野生型のリラキシンペプチドの生物活性は、組み換えＬＧＲ７を安定的に発現するＨＥＫ２９３Ｔ細胞のアデニレートシクラーゼ活性の刺激に基づいて判定された。安定したＬＧＲ７発現細胞は、２００ｎｇ／ｍｌのＺｅｏｃｉｎ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を補充したダルベッコ変法イーグル培地／Ｆ−１２培地中で維持された。ＣＲＥ−Ｌｕｃレンチウイルス（Ｑｉａｇｅｎ）を有するこれらのＬＧＲ７発現ＨＥＫ２９３Ｔ細胞のレンチウイルス形質導入により、サイクリックＡＭＰ応答エレメント駆動ルシフェラーゼ（ＣＲＥ−Ｌｕｃ）レポーター株が生成され、２週間にわたってピューロマイシン（２μｇ／ｍＬ）で選択された。レポーター遺伝子アッセイを用いて、リラキシンによるｃＡＭＰレベルとＬＧＲ７活性化を検知した。
【０３４４】
アッセイの詳細：ＬＧＲ７とＣＲＥ−Ｌｕｃを発現するＨＥＫ２９３Ｔ細胞を、３８４−ウェルの底の硬い白色プレート中に１０％ＦＢＳを含んでいる５０μＬのダルベッコ変法イーグル培地／Ｆ−１２培地において１ウェル当たり５ｘ１０３細胞の密度で播種する。細胞を３７°Ｃで夜通し事前にインキュベートする。異なる濃度のリラキシンペプチド（０．０１ｎＭから１０００ｎＭまで）を３通り加え、１８時間インキュベートし、Ｂｒｉｇｈｔ  Ｇｌｏ（Ｐｒｏｍｅｇａ）１０μＬを加えることによってルシフェラーゼ活性が検知された。発光をＥｎｖｉｓｉｏｎ（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ）に記録した。非線形曲線フィット後にＥＣ５０を計算する（リラキシンＨ２用量−応答曲線については図２を参照）。選択データは表３と図１４−１８に示される。
【０３４５】
実施例３．ペグ化された脂質（アミド結合）複合化リラキシン（模式図Ａ）の合成
【０３４６】
【化６６】
2018511574.tif 000068
【０３４７】
ｔｅｒｔ−ブチル（２−（２−（２−テトラデカンアミドエトキシ）エトキシ）エチル）カルバマート  （Ａ−２−ａ）．
【０３４８】
Ｎ−ｔ−Ｂｏｃ−アミド−ｄＰＥＧ３−アミン（０．５ｇ、２．０ｍｍｏｌ）を１０ｍｌの乾燥したＤＭＦ中のミリスチン酸（０．４６ｇ、２．０ｍｍｏｌ）の溶液に加え、その後、（ＨＡＴＵ（０．８ｇ、２．１ｍｍｏｌ）とＤＩＰＥＡ（０．４５ｍＬ、２．４ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を６時間、室温で撹拌し、溶媒を真空内で蒸発させた。粗材料をＥｔＯＡｃ中に溶かし、冷たい１％ＨＣｌ、飽和したＮａＨＣＯ３、およびブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、ろ過し、濃縮した。粗材料を、ヘキサン中の勾配２５−５０％ＥｔＯＡｃでシリカゲル上にてフラッシュカラムクロマトグラフィーにより精製することで、白色固形物（収率９０％）として０．８３ｇの所望の化合物を得た。ｍ／ｚ（ＥＳＩ＋）  ４５９．６  （Ｍ＋Ｈ）．
【０３４９】
ｔｅｒｔ−ブチル（２−（２−（２−（（４Ｚ，７Ｚ，１０Ｚ，１３Ｚ，１６Ｚ，１９Ｚ）−ドコサ−４，７，１０，１３，１６，１９−ヘキサエンアミド）エトキシ）エトキシ）エチル）カルバマート（Ａ−２−ｂ）。
【０３５０】
Ｎ−ｔ−Ｂｏｃ−アミド−ｄＰＥＧ３−アミン（０．２５ｇ、１．０ｍｍｏｌ）、ドコサヘキサエン酸（０．３３ｇ、１．０ｍｍｏｌ）、ＨＡＴＵ（０．４１ｇ、１．１ｍｍｏｌ）、およびＤＩＰＥＡ（乾燥したＤＭＦ（５ｍＬ）中で０．２２ｍＬ、１．２ｍｍｏｌ）を用いて、Ａ−２−ａの手順と類似する条件を使用して、表題化合物を調製した。収率６８％、褐色油。１Ｈ  ＮＭＲ  （５００  ＭＨｚ；  ＣＤＣｌ３）：δ  ０．９７  （ｔ，  Ｊ  ＝  ６．０  Ｈｚ，  ３Ｈ），  １．４４  （ｓ，  ９Ｈ），  ２．０７  （ｔ，  Ｊ  ＝  ５．０  Ｈｚ，  ２Ｈ），  ２．２５  （Ｊ  ＝  ５．０  Ｈｚ，  ２Ｈ），  ２．４１  （ｄｄ，  Ｊ  ＝  ５．０，  ６．５  Ｈｚ，  ２Ｈ），  ２．７９−２．８７  （ｍ，  １０Ｈ），  ３．３２  （ｔ，  Ｊ  ＝  ５．５  Ｈｚ，  ２Ｈ），  ３．４５  （ｄｄ，  Ｊ  ＝  ５．０，  ６．０  Ｈｚ，  ２Ｈ），  ３．５５  （ｔ，  Ｊ  ＝  ５．０  Ｈｚ，  ４Ｈ），  ３．５９−３．６２  （ｍ，  ４Ｈ），  ４．９７  （ｓ，  １Ｈ），  ５．３０−５．４２  （ｍ，  １２Ｈ），  ６．０３  （ｓ，  １Ｈ）；ｍ／ｚ（ＥＳＩ＋）  ４５９．６  （Ｍ＋Ｈ）．
【０３５１】
ｔｅｒｔ−ブチル（２−（２−（２−（（Ｒ）−４−（（３Ｒ，５Ｒ，８Ｒ，９Ｓ，１０Ｓ，１３Ｒ，１４Ｓ，１７Ｒ）−３−ヒドロキシ−１０，１３−ジメチルヘキサデカヒドロ−１Ｈ−シクロペンタ［ａ］フェナントレン−１７−イル）ペンタンアミド）エトキシ）エトキシ）エチル）カルバマート（Ａ−２−ｃ）。
【０３５２】
Ｎ−ｔ−Ｂｏｃ−アミド−ｄＰＥＧ３−アミン（０．１４ｇ、０．５５ｍｍｏｌ）を、５ｍｌの乾燥したＤＭＦ中のＮＨＳで活性化したリトコール酸エステル（０．２４ｇ、０．５ｍｍｏｌ）の溶液に加え、その後、ＤＩＰＥＡ（０．１８ｍＬ、１．０ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を１６時間、室温で撹拌し、溶媒を真空内で蒸発させた。粗材料をＤＣＭ中に溶かし、冷たい１％のＨＣｌ、飽和したＮａＨＣＯ３、およびブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、ろ過し、濃縮した。粗材料を、ＤＣＭ中の勾配１−５％メタノールを有するシリカゲル上でフラッシュカラムクロマトグラフィーによって精製することで、白色固形物（収率８０％）として０．４８ｇの所望の化合物を得た。１Ｈ  ＮＭＲ  （５００  ＭＨｚ；  ＣＤＣｌ３）：δ  ０．６２  （ｓ，  ３Ｈ），  ０．９０−２．２５  （ｍ，  ３０Ｈ），  ３．３１  （ｓ，  ２Ｈ），  ３．４３−３．４６  （ｓ，  ２Ｈ），  ３．５２−３．５６  （ｍ，  ４Ｈ），  ３．５９−３．６０  （ｍ，  ６Ｈ），  ４．９４  （ｓ，  １Ｈ），  ６．０５  （ｓ，  １Ｈ）；ｍ／ｚ（ＥＳＩ＋）  ６２８．６（Ｍ＋Ｈ）．ｍ／ｚ（ＥＳＩ＋）  ６０７．５  （Ｍ＋Ｈ）．
【０３５３】
Ｎ−（２−（２−（２−（２−ブロモアセトアミド）エトキシ）エトキシ）エチル）テトラデカンアミド（Ａ−３−ａ）
【０３５４】
ＴＦＡ（２ｍｌ、２６ｍｍｏｌ）を、１０ｍｌのＤＣＭ中のＡ−２−ａ（０．４６ｇ、１ｍｍｏｌ）の溶液に加え、混合物を３時間、室温で撹拌した。反応混合物を濃縮し、粗材料を凍結乾燥して１０ｍｌのＤＣＭに溶かした無色の油を得た。ブロモ酢酸無水物（０．３１ｇ、１．２ｍｍｏｌ）を加え、その後、ＤＩＰＥＡ（０．５２ｍｌ、２．５ｍｍｏｌ）を加え、混合物を３時間、室温で撹拌した。反応混合物をＤＣＭとＥｔＯＡｃで抽出し、１％のＨＣｌ、飽和したＮａＨＣＯ３、およびブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、ろ過し、濃縮した。粗材料を、５％メタノールを含む石油エーテル中の勾配２０−５０％のＥｔＯＡｃを有するシリカゲル上でフラッシュカラムクロマトグラフィーによって精製することで、白色固形物として０．３７ｇの所望の化合物を得た（２つの工程の総収率７８％）。１Ｈ  ＮＭＲ  （５００  ＭＨｚ；  ＣＤＣｌ３）：δ  ０．８８  （ｔ，  Ｊ  ＝  ６．５  Ｈｚ，  ３Ｈ），  １．２５−１．３２  （ｍ，  ２０Ｈ），  １．６２  （ｔ，  Ｊ  ＝  ７．５  Ｈｚ，  ２Ｈ），  ２．１８  （ｔ，  Ｊ  ＝  ８．０  Ｈｚ，  ２Ｈ），  ３．４７  （ｄｄ，  Ｊ  ＝  ５．０，  １０．０  Ｈｚ，  ２Ｈ），  ３．５０  （ｄｄ，  Ｊ  ＝  ５．０，  １０．０  Ｈｚ，  ２Ｈ），  ３．５６−３．５８  （ｍ，  ２Ｈ），  ３．５９−３．６２  （ｍ，  ２Ｈ），  ３．６３  （ｄ，  Ｊ  ＝  ５．５  Ｈｚ，  ５Ｈ），  ３．８８  （ｓ，  ２Ｈ），  ５．９２−５．９３  （ｍ，  １Ｈ），  ６．９４  （ｓ，  １Ｈ）；  ７．０４＊７．１７  （ｍ，  １Ｈ）；１３Ｃ  ＮＭＲ  （１００  ＭＨｚ；  ＣＤＣｌ３）：δ  １４．５５，  ２３．１２，  ２６．２０，  ２９．７６，  ２９．７９，  ２９．９５，  ３０．０６，  ３０．０８，  ３０．０９，  ３０．１１，  ３２．３５，  ３７．２３，  ６９．８４，  ７０．４６，  ７０．８３  （２），  １６６．０６，  １７３．８４；ｍ／ｚ  （ＥＳＩ＋）  ４８０．６  （Ｍ＋Ｈ）．
【０３５５】
（４Ｚ，７Ｚ，１０Ｚ，１３Ｚ，１６Ｚ，１９Ｚ）−Ｎ−（２−（２−（２−（２−ブロモアセトアミド）エトキシ）エトキシ）エチル）ドコサ−４，７，１０，１３，１６，１９−ヘキサエンアミド（Ａ−３−ｂ）．
【０３５６】
Ａ−３−ａの手順と類似した条件を用いて表題化合物を調製した。収率６７％、褐色油。１Ｈ  ＮＭＲ  （５００  ＭＨｚ；  ＣＤＣｌ３）：δ  ０．９６  （ｔ，  Ｊ  ＝  ５．０  Ｈｚ，  ３Ｈ），  ２．０７  （ｑ，  Ｊ  ＝  ７．６  Ｈｚ，  ２Ｈ），  ２．２３  （Ｊ  ＝  ７．２  Ｈｚ，  ２Ｈ），  ２．４０  （ｄｄ，  Ｊ  ＝  ７．２，  １３．８  Ｈｚ，  ２Ｈ），  ２．７９−２．８４  （ｍ，  １０Ｈ），  ３．４４−３．５１  （ｍ，  ４Ｈ），  ３．５５−３．６２  （ｍ，  ４Ｈ），  ３．６３  （ｓ，  ４Ｈ），  ３．８８  （ｓ，  ２Ｈ），  ５．７８−５．４２  （ｍ，  １２Ｈ），  ５．９４  （ｓ，  １Ｈ），  ６．９２  （ｓ，  １Ｈ）；ｍ／ｚ（ＥＳＩ＋）  ５５９．８  （Ｍ＋Ｈ）．
【０３５７】
（Ｒ）−Ｎ−（２−（２−（２−（２−ブロモアセトアミド）エトキシ）エトキシ）エチル）−４−（（３Ｒ，５Ｒ，８Ｒ，９Ｓ，１０Ｓ，１３Ｒ，１４Ｓ，１７Ｒ）−３−ヒドロキシ−１０，１３−ジメチルヘキサデカヒドロ−１Ｈ−シクロペンタ［ａ］フェナントレン−１７−イル）ペンタンアミド）  （Ａ−３−ｃ）。
【０３５８】
Ａ−２−ａをＡ−２−ｃと取り換えてＡ−３−ａの手順と類似した条件を用いて、表題化合物を調製した。収率８７％。白色固形物。１Ｈ  ＮＭＲ  （５００  ＭＨｚ；  ＣＤＣｌ３）：δ  ０．８３  （ｔ，  Ｊ  ＝  ４．０  Ｈｚ，  ３Ｈ），  ０．８５−０．９４  （ｍ，  ６Ｈ），  １．００−１．９１  （ｍ，  ２８Ｈ），  ３．４１−３．６４  （ｍ，  １２Ｈ），  ３．８５−３．８８  （ｍ，  ２Ｈ），  ４．８６−４．９４  （ｍ，  １Ｈ），  ６．０５  （ｔ，  Ｊ  ＝  ７．２  Ｈｚ，  １Ｈ），  ７．０４  （ｓ，  １Ｈ）；ｍ／ｚ（ＥＳＩ＋）  ６２８．６（Ｍ＋Ｈ）．
【０３５９】
脂肪酸または胆汁酸（Ａ−４−ａ、Ａ−４−ｂ、またはＡ−４−ｃ）で誘導体化されたペプチドの合成。
【０３６０】
システインペプチド中間体（１等量）をＤＭＳＯに溶かし、ＴＨＦ中に溶かしたＡ−３−ａ、Ａ−３−ｂ、またはＡ−３−ｃ（２等量）のいずれか１つと反応させ、その後、ＤＩＰＥＡ（３容量％）を加えた。反応の完了をＨＰＬＣ−ＭＳによって評価する。最終ｐＨが４となるまでＴＦＡを加えることで反応をクエンチし、溶出剤（Ａ）水中の０．０５％ＴＦＡ、および（Ｂ）アセトニトリル中の０．０５％ＴＦＡ、ならびに、溶出剤（Ｂ）の以下の勾配：１０％（１分）４０−５５％（１０分）、流速８０ｍｌ／分を使用して、分取逆相ＨＰＬＣにより直接生成する。精製されたペプチドを凍結乾燥し、構造と純度を分析的なＨＰＬＣとエレクトロスプレイ質量分析法によって確認する。
【０３６１】
実施例４．ペグ化された脂質（エーテル結合）複合化リラキシンの合成（模式図Ｂ−１とＢ−２）。
【０３６２】
【化６７】
2018511574.tif 000069
【０３６３】
４．８ｍＬ中のアセトニトリル／水（６：１）中の２−（２−（２−アミノエトキシ）エトキシ）エタノール（１００ｍｇ、０．６７１ｍｍｏｌ、８９μＬ）の溶液を、ジ−ｔｅｒｔ−ブチル重炭酸塩（１５１ｍｇ、０．６９１ｍｍｏｌ）で処理し、その後、０．５ｍＬの１ＮのＮａＯＨ（ａｑ）で処理した。４５分間、室温で撹拌した後に、有機溶媒を真空内で取り除き、残基を飽和したＮＨ４Ｃｌ（ａｑ）に溶かし、所望のカルバマートをＥｔＯＡｃで抽出した。ＥｔＯＡｃを除去することで、無色の油として５７ｍｇ（３４％の収率）のｔｅｒｔ−ブチル２−（２−（２−ヒドロキシエトキシ）エトキシ）エチルカルバマートを得る。
【０３６４】
１．４ｍＬ中のｔ−アミルアルコール中のｔｅｒｔ−ブチル２−（２−（２−ヒドロキシエトキシ）エトキシ）エチルカルバマート（６８．５ｍｇ、０．２７５ｍｍｏｌ）とミリスチルトシラート（１０１ｍｇ、０．２７５ｍｍｏｌ）の溶液を、カリウムｔｅｒｔ−ブトキシド（６１．６ｍｇ、０．５５０ｍｍｏｌ）とヨウ化カリウム（４．６ｍｇ、０．０２８ｍｍｏｌ）で処理した。２時間９０°Ｃまで加熱した後に、反応を室温に冷まし、飽和したＮＨ４Ｃｌ（ａｑ）でクエンチし、その後ＥｔＯＡｃで抽出し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させた。濃縮し、その後、シリカゲル上でフラッシュカラムクロマトグラフィーにより精製することで、無色の油として４４ｍｇ（３６％の収率）のｔｅｒｔ−ブチル２−（２−（２−（テトラデシルオキシ）エトキシ）エトキシ）エチルカルバマートを得た。
【０３６５】
１．２ｍＬのＤＣＭ中のｔｅｒｔ−ブチル２−（２−（２−（テトラデシルオキシ）エトキシ）エトキシ）エチルカルバマートの溶液を、０．２９ｍＬのトリフルオロ酢酸で処理した。５０分間、室温で撹拌した後に、混合物を濃縮し、２ｍＬのＤＣＭ中に再度溶かした。この溶液の１−ｍＬのアリコートを別々のバイアルへ入れ、これを０°Ｃに冷まして、その後、ブロモ酢酸無水物（１０．３ｍｇ、０．０４０ｍｍｏｌ）とＤＩＰＥＡ（１１μＬ、０．０６３ｍｍｏｌ）で満たした。１２時間、室温で撹拌した後に、フラッシュカラムクロマトグラフィーによって反応混合物を精製することで、オフホワイト固体として７．５ｍｇ（２工程で総収率５５％）の２−ブロモ−Ｎ−（２−（２−（２−（テトラデシルオキシ）オキシ）エトキシ）−エチル）アセトアミドを得た。
【０３６６】
ＤＭＳＯ（４ｍＭ）中のＣｙｓ−ペプチド中間体（１等量）の溶液を、ＴＨＦ（５．４ｍＭ）とＤＩＰＥＡ（１１４等量）中の２−ブロモ−Ｎ−（２−（２−（２−（テトラデシルオキシ）エトキシ）エトキシ）−エチル）アセトアミドで処理する。反応の完了に際して、反応混合物を分取逆相ＨＰＬＣによって精製して脂質複合体（Ｂ−１−ａ）を得る。
【０３６７】
【化６８】
2018511574.tif 000070
【０３６８】
ｔｅｒｔ−ブチル２−（２−（２−（２−ブロモエトキシ）エトキシ）エトキシ）エチルカルバマート（Ｂ−２−ａ）。
【０３６９】
１５ｍＬのアセトニトリル／水（６：１）中の２−（２−（２−（２−アミノエトキシ）エトキシ）エトキシ）エタノールｌ  （４００  ｍｇ、２．０７  ｍｍｏｌ、０．３３  ｍＬ）の溶液を、ジ−ｔｅｒｔ−ブチル重炭酸塩（６０３ｍｇ、２．７７ｍｍｏｌ）で処理し、その後、２．８ｍＬの１ＮのＮａＯＨ（ａｑ）で処理した。４５分間、室温で撹拌した後に、有機溶媒を真空内で取り除き、残基を飽和したＮＨ４Ｃｌ（ａｑ）に溶かし、所望のカルバマートをＥｔＯＡｃで抽出した。ＥｔＯＡｃを取り除くことで、無色の油として粗製のカルバマートを得た。
【０３７０】
この油をＤＣＭに溶かし、ｐ−トルエンスルホニルクロリド（１．１８ｇ、６．２１ｍｍｏｌ）とピリジン（０．８４ｍＬ、１０．４ｍｍｏｌ）で処理した。１２時間４０°Ｃで撹拌した後に、混合物をＤＣＭで稀釈し、１ＮのＨＣｌ（２×１０ｍＬ）、Ｈ２Ｏ（１０ｍＬ）、およびブライン（１０ｍＬ）で洗浄し、その後、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、濃縮した。シリカゲル上でのフラッシュカラムクロマトグラフィーによる精製により、無色の油として３３０ｍｇ（２工程の総収率３６％）のトシラートを得た。
【０３７１】
３．１ｍＬの無水物のアセトン中のトシラート（２０３ｍｇ、０．４５３ｍｍｏｌ）の溶液を、ＬｉＢｒ（３８５ｍｇ、４．５３ｍｍｏｌ）で処理した。８時間６０°Ｃで撹拌した後に、溶媒を取り除き、結果として生じる残基をＥｔＯＡｃに溶かした。有機混合物を水で洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥させ、ろ過し、濃縮した。シリカゲル上でのフラッシュカラムクロマトグラフィーによる精製により、無色の油として１２６ｍｇの表題化合物（７８％の収率）を得た。
【０３７２】
２−（（３Ｓ，８Ｓ，９Ｓ，１０Ｒ，１３Ｒ，１４Ｓ，１７Ｒ）−１０，１３−ジメチル−１７−（６−メチルヘプタン−２−イル）−２，３，４，７，８，９，１０，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７−テトラデカヒドロ−１Ｈ−シクロペンタ［ａ］フェナントレン−３−イルオキシ）エタノール（Ｂ−２−ｂ）。
【０３７３】
４ｍＬのＤＣＭ中のコレステロール（１．５０ｇ、３．８９ｍｍｏｌ）の溶液を、ｐ−トルエンスルホニルクロリド（１．４９ｇ、７．７８ｍｍｏｌ）、ピリジン（４ｍＬ）、およびＤＭＡＰ（９４．９ｍｇ、０．７８０ｍｍｏｌ）で処理した。１２時間、室温で撹拌した後に、混合物をＤＣＭで稀釈し、１ＮのＨＣｌ（２×５ｍＬ）、Ｈ２Ｏ（５ｍＬ）、およびブライン（５ｍＬ）で洗浄し、その後、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、真空内で濃縮した。クロロホルムとメタノールから再結晶化することで、白色固形物として１．６６ｇ（７９％の収率）のトシラート中間体を得た。
【０３７４】
７．７ｍＬの１，４−ジオキサン中のトシラート中間体（５００ｍｇ、０．９２６ｍｍｏｌ）で満たされたマイクロ波バイアルを、２．６ｍＬのエチレングリコールで処理した。１０分間、マイクロ波照射によって１６０°Ｃまで加熱した後に、溶媒を取り除き、残基をクロロホルムに溶かし、飽和したＮａＨＣＯ３（５ｍＬ）、Ｈ２Ｏ（５ｍＬ）、およびブライン（５ｍＬ）で洗浄し、その後、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、真空内で濃縮した。シリカゲルを用いるフラッシュカラムクロマトグラフィーによって粗材料を精製することで、白色固形物として２７０ｍｇ（６８％の収率）の表題化合物を得た。
【０３７５】
２−ブロモ−Ｎ−（１４−（（３Ｓ，８Ｓ，９Ｓ，１０Ｒ，１３Ｒ，１４Ｓ，１７Ｒ）−１０，１３−ジメチル−１７−（６−メチルヘプタン−２−イル）−２，３，４，７，８，９，１０，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７−テトラデカヒドロ−１Ｈ−シクロペンタ［ａ］フェナントレン−３−イルオキシ）−３，６，９，１２−テトラオキサテトラデシル）アセトアミド  （Ｂ−２−ｃ）．
【０３７６】
２．５ｍＬのＴＨＦ中のＢ−２−ｂ（２１９ｍｇ、０．５０９ｍｍｏｌ）の溶液を、水素化ナトリウム（鉱油中の６０％の分散液、２０．４ｍｇ、０．５０９ｍｍｏｌ）で処置され、３０分間撹拌した。混合物を０°Ｃに冷まし、２．５ｍＬのＴＨＦ中でＢ−２−ａ（１３９ｍｇ、０．３９２ｍｍｏｌ）で処理した。６時間４０°Ｃに加熱した後に、反応を飽和したＮＨ４Ｃｌ（ａｑ）でクエンチし、ＥｔＯＡｃで抽出した。シリカゲルを使用するフラッシュカラムクロマトグラフィーにより粗材料を精製することで、無色の油として１０１ｍｇのエーテル中間体（３６％の収率）を得た。
【０３７７】
２．１ｍＬのＤＣＭ中のエーテル中間体（７４ｍｇ、０．１０５ｍｍｏｌ）の溶液を、０．５３ｍＬのＴＦＡで処理した。４０分、室温で撹拌した後に、混合物を真空内で濃縮し、１０ｍＬのＤＣＭに溶かした。この溶液の４ｍＬのアリコートを別のバイアルへ入れ、１ｍＬの容量に濃縮して、０°Ｃに冷まし、ブロモ酢酸無水物（１３．６ｍｇ、０．０５３ｍｍｏｌ）とＤＩＰＥＡ（１５μＬ、０．０８８ｍｍｏｌ）で満たした。１２時間、室温で撹拌した後に、反応混合物を、シリカゲルを使用してフラッシュカラムクロマトグラフィーによって直接精製することで、無色の油として１２．６ｍｇの表題化合物（２工程にわたって４１％）を得た。
【０３７８】
脂質複合体Ｂ−２−ｄを、実施例４の模式図Ｂ−１の脂質複合体Ｂ−１−ａに類似するやり方で調製する。
【０３７９】
実施例５．Ｂｒ−ＦＡ１の調製。
【０３８０】
【化６９】
2018511574.tif 000071
【０３８１】
工程Ａ．ｔｅｒｔ−ブチル（２−（２−（２−テトラデカンアミドエトキシ）エトキシ）エチル）カルバマート  （１−１）。
【０３８２】
ミリスチン酸（０．４６ｇ、２ｍｍｏｌ）を５ｍＬのＤＭＦに溶かした。ＨＡＴＵ（０．８ｇ、２．１ｍｍｏｌ）とＤＩＰＥＡ（０．４ｍＬ、２．２ｍｍｏｌ）を加え、その後、Ｂｏｃ−ＮＨ−ＰＥＧ２−ＣＯＯＨ（０．５ｇ、２ｍｍｏｌ）を追加した。その後、反応混合物を６時間撹拌し、溶媒を取り除いた。生成物をＥｔＯＡｃ（３×１５ｍＬ）で抽出した。有機質層を飽和したＮａＨＣＯ３、冷ましたたＨＣｌ（１Ｍ）、およびブラインで連続的に洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、ろ過して、濃縮した。シリカゲル上でのフラッシュカラムクロマトグラフィーによる精製により、９０％の生成物収率中の白色固形物として０．８１ｇの所望の化合物を得た。ＥＳＩ−ＭＳ：ｃａｌｃｄ  ＭＷ  ４５８．４；ｆｏｕｎｄ  ４５９．６［Ｍ＋１］＋．
【０３８３】
工程Ｂ．Ｎ−（２−（２−（２−（２−ブロモアセトアミド）エトキシ）エトキシ）エチル）テトラデカンアミド  （Ｂｒ−ＦＡ１）。
【０３８４】
ＤＣＭ（１０ｍＬ）の中の１−１（０．２３ｇ、０．５ｍｍｏｌ）の溶液を、２時間ＴＦＡ（２ｍＬ）で処理した。その混合物を濃縮し、その後、０°ＣのＤＣＭの１０ｍＬ中でブロモ酢酸無水物（０．１４ｇ、０．５５ｍｍｏｌ）とＤＩＰＥＡ（０．１７ｍＬ、１ｍｍｏｌ）を加えた。その後、反応混合物を２時間撹拌し、溶媒を取り除いた。生成物をＥｔＯＡｃ（３×１５ｍＬ）で抽出した。有機質層を、飽和したＮａＨＣＯ３、冷ましたＨＣｌ（１Ｍ）、およびブラインで連続的に洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、ろ過し、濃縮した。シリカゲル上でのフラッシュカラムクロマトグラフィーによる精製により、８３％の生成物収率中の白色固形物として０．２ｇの表題化合物を得た。  ＥＳＩ−ＭＳ：ｃａｌｃｄ  ＭＷ  ４７９．５；ｆｏｕｎｄ  ４８０．４  ［Ｍ＋１］＋．
【０３８５】
実施例６．Ｂｒ−ＦＡ２の固相合成。
【０３８６】
【化７０】
2018511574.tif 000072
【０３８７】
Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（ｉｖＤｄｅ）−ＯＨ（６０ｍｇ、１００μｍｏｌ）を、５ｍＬのＤＭＦ中でアミノ酸、樹脂、およびＤＩＰＥＡ（７０μＬ、４００μｍｏｌ）を混合し、３０分間撹拌することにより、２−クロロトリチルクロリド樹脂（Ｎｏｖａｂｉｏｃｈｅｍ）（１００ｍｇ、８０μｍｏｌ）に結合した。その後、樹脂をＤＭＦ（３ｘ）、ＤＣＭ（３ｘ）で洗浄し、１０分間ＣＨ３ＯＨ／ＤＣＭ／ＤＩＰＥＡ（８：１：１）で処理することで、未反応のトリチルクロリド部位をキャップし、真空下で乾燥ささせ、デシケーターに保存した。
【０３８８】
この樹脂（５０ｍｇ、４０μｍｏｌ）に、ＤＭＦ（２０％、５ｍＬ）中のピペリジンを加えた。混合物を１分間振盪し、振られ排出させた。別の５ｍＬの２０％ピペリジンを加え、今回は混合物を１５分間振盪した。肯定的なニンヒドリン試験が観察された。その後、上記のように樹脂を洗浄した。
【０３８９】
その後、ＤＭＦ（５ｍＬ）中のカップリング試薬ＨＡＴＵ（７６ｍｇ、２００μｍｏｌ）とＤＩＰＥＡ（３５μＬ、２００μｍｏｌ）を用いて、樹脂を、オクタデカン二酸モノ−ｔｅｒｔ−ブチルエステル（ＡｓｔａＴｅｃｈ）（７４ｍｇ、２００μｍｏｌ）で２時間処理するか、あるいは陰性のニンヒドリン試験が観察されるまで繰り返した。ＤＭＦとＤＣＭで洗浄した後に、ＤＭＦ（５ｍＬ、２×５分）中の２％ヒドラジンで樹脂を処理した。肯定的なニンヒドリン試験が観察された。その後、上記のように樹脂を洗浄した。
【０３９０】
その後、ＤＭＦ（５ｍＬ）中のＨＡＴＵ（７６ｍｇ、２００μｍｏｌ）とＤＩＰＥＡ（３５μＬ、２００μｍｏｌ）を用いて、Ｆｍｏｃ−ＰＥＧ２−プロピオン酸（Ｑｕａｎｔａ  ＢｉｏＤｅｓｉｇｎ）（８０ｍｇ、２００μｍｏｌ）で樹脂を２時間処理するか、あるいは陰性のニンヒドリン試験が観察されるまで繰り返した。その後、上記のように樹脂を洗浄した。その後、保護基を除去し、上記の工程を繰り返す。
【０３９１】
その後、樹脂を、２ｍＬのＤＣＭ中でブロモ酢酸無水物（５５ｍｇ、２００μｍｏｌ）とＤＩＰＥＡ（３５μＬ、２００μｍｏｌ）で処理し、３０分間撹拌した。ＤＣＭ（３ｘ）で洗浄した後に、１０％Ｈ２Ｏと１０％トリイソプロピルシランを含むＤＣＭ中で５ｍＬの１０％ＴＦＡを１時間使用して、生成物を樹脂から切断した。切断後、ＴＦＡを減圧下で除去した。結果として生じた黄色の残基を冷たいジエチルエーテルで数回洗浄し、最後に乾燥させることで窒素流下において黄色の粉末として粗製生成物を得た。
【０３９２】
水（０．１％ＴＦＡ）中で最大で０．５ｍＬの５０％ＣＨ３ＣＮ中に５０ｍｇの粗製生成物を溶かす試みは失敗に終わった。したがって、代替物としｈて、粗製のペプチド（５０ｍｇ）をＤＭＳＯ（０．１ｍＬ）に溶かし、この溶液を５０％のＣＨ３ＣＮ−水で０．５ｍＬの最終容量になるまで稀釈した。その溶液をろ過した。ろ過した溶液を、水（０．１％ＴＦＡ）中の１０％ＣＨ３ＣＮ（０．１％ＴＦＡ）で平衡に保たれた分取ＨＰＬＣカラム（Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ、ＰｒｅｐＣ１８、３００Ａ、５０×２５０ｍｍ）に載せ、カラムを水（０．１％ＴＦＡ）中の１０％ＣＨ３ＣＮ（０．１％ＴＦＡ）で溶出することで、カラムからＤＭＳＯを洗浄した。その後、溶出剤の組成物に、１分以上にわたって３５％ＣＨ３ＣＮ−水（０．１％ＴＦＡ）になるまで勾配をかけ、直線濃度勾配はＣＨ３ＣＮ（０．１％ＴＦＡ）の０．５％／分の速度で、水（０．１％ＴＦＡ）に導入され、５０分間実行された。溶出された画分は、分析的な逆相Ｃ１８カラム（Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ、Ｃ１８、１２０Ａ、４．６×５０ｍｍ）上で純度についてチェックされ、＞９５％の純度の生成物を含む画分を組み合わせて冷凍乾燥することで、表題化合物（１５ｍｇ、４１％の収率）を得た。生成物の分子量をＥＳＩ−ＭＳによって分析した：ｃａｌｃｄ  ＭＷ  ８８０．９；ｆｏｕｎｄ  ８８１．３  ［Ｍ＋１］＋，  ８８２．６  ［Ｍ＋２］＋．
【０３９３】
実施例７．Ｂｒ−ＦＡ３の固相合成。
【０３９４】
【化７１】
2018511574.tif 000073
【０３９５】
表題化合物は、２−クロロトリチルクロリド樹脂をリンクアミド樹脂で置換することにより、Ｂｒ−ＦＡ２と類似したやり方で調製された。分取ＨＰＬＣと凍結乾燥による精製により、約４５％の生成物収率で９５％以上の純度を備えた白色粉末として表題化合物を得た。ペプチドの分子量はＥＳＩ−ＭＳによって分析された：ｃａｌｃｄ  ＭＷ  ８８１．０；ｆｏｕｎｄ  ８８２．２  ［Ｍ＋１］＋，  ８８３．７  ［Ｍ＋２］＋．
【０３９６】
実施例８．Ｂｒ−ＦＡ４の調製。
【０３９７】
【化７２】
2018511574.tif 000074
【０３９８】
ＤＣＭ（１０ｍＬ）中のテトラデシルアミン（１０７ｍｇ、０．５ｍｍｏｌ）の溶液を、ブロモ酢酸無水物（０．１４ｇ、０．５５ｍｍｏｌ）、０°ＣのＤＩＰＥＡ（１００μＬ、０．５５ｍｍｏｌ）で処理した。その後、反応混合物を２時間撹拌し、溶媒を取り除いた。生成物をＥｔＯＡｃ（３×１５ｍＬ）で抽出した。有機質層を飽和したＮａＨＣＯ３、冷ましたＨＣｌ（１Ｍ）、およびブラインで連続的に洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、ろ過し、濃縮した。シリカゲル上でのフラッシュカラムクロマトグラフィーによる精製により、８７％の生成物収率で白色固形物として１４５ｍｇの表題化合物を得た。ＥＳＩ−ＭＳ：ｃａｌｃｄ  ＭＷ  ３３４．３；ｆｏｕｎｄ  ３３５．６  ［Ｍ＋１］＋．
【０３９９】
実施例９．Ｂｒ−ＦＡ５の調製。
【０４００】
【化７３】
2018511574.tif 000075
【０４０１】
工程Ａ．ｔｅｒｔ−ブチル（９，２０−ジオキソ−３，６，１３，１６−テトラオキサ−１０，１９−ジアザトリトリアコンタイル）カルバマート  （１−２）．
【０４０２】
ＤＣＭ（１０ｍＬ）中の１−１の溶液（１１５ｍｇ、０．２５ｍｍｏｌ）を２時間ＴＦＡ（２ｍＬ）で処理した。混合物を濃縮し、その後、５ｍＬのＤＭＦ中のＢｏｃ−ＮＨ−ＰＥＧ２−酸（７０ｍｇ、０．２５ｍｍｏｌ）、ＨＡＴＵ（９５ｍｇ、０．２５ｍｍｏｌ）、およびＤＩＰＥＡ（９０μＬ、０．５ｍｍｏｌ）を加えた。その後、反応混合物を２時間撹拌し、溶媒を取り除いた。生成物をＥｔＯＡｃ（３×１５ｍＬ）で抽出した。有機質層を飽和したＮａＨＣＯ３、冷ましたＨＣｌ（１Ｍ）、およびブラインで連続的に洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、ろ過し、濃縮した。シリカゲル上でのフラッシュカラムクロマトグラフィーによる精製により、７７％の生成物収率で白色固形物として１２２ｍｇの所望の化合物を得た。ＥＳＩ−ＭＳ：ｃａｌｃｄ  ＭＷ  ６１７．９；ｆｏｕｎｄ  ６１８．４  ［Ｍ＋１］＋．
【０４０３】
工程Ｂ．Ｎ−（１−ブロモ−２，１２−ジオキソ−６，９，１６，１９−テトラオキサ−３，１３−ジアザヘンイコサン−２１−イル）テトラデカンアミド  （Ｂｒ−ＦＡ５）．
【０４０４】
ＤＣＭ（１０ｍＬ）中の１−２の溶液（１２２ｍｇ、０．２ｍｍｏｌ）を、２時間ＴＦＡ（２ｍＬ）で処理した。混合物を濃縮し、その後、０°Ｃの５ｍＬのＤＣＭ中のブロモ酢酸無水物（５２ｍｇ、０．２ｍｍｏｌ）とＤＩＰＥＡ（７０μＬ、０．４ｍｍｏｌ）を加えた。その後、反応混合物を２時間撹拌し、溶媒を取り除いた。生成物をＥｔＯＡｃ（３×１５ｍＬ）で抽出した。有機質層を飽和したＮａＨＣＯ３、冷ましたＨＣｌ（１Ｍ）、およびブラインで連続的に洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、ろ過し、濃縮した。ＨＰＬＣによる精製により、６９％の生成物収率で白色固形物として８８ｍｇの表題化合物を得た。ＥＳＩ−ＭＳ：ｃａｌｃｄ  ＭＷ  ６３８．７；ｆｏｕｎｄ  ６３９．４  ［Ｍ＋１］＋．
【０４０５】
実施例１０．Ｂｒ−ＦＡ６の調製。
【０４０６】
【化７４】
2018511574.tif 000076
【０４０７】
工程Ａ．ｔｅｒｔ−ブチル（２−（２−（２−テトラデカンアミドエトキシ）エトキシ）エチル）カルバマート（１−３）。
【０４０８】
オクタデカン二酸モノ−ｔｅｒｔ−ブチルエステル酸（０．１８ｇ、０．５ｍｍｏｌ）を５ｍＬのＤＭＦに溶かした。ＨＡＴＵ（０．２ｇ、０．５５ｍｍｏｌ）とＤＩＰＥＡ（０．１ｍＬ、０．５５ｍｍｏｌ）を加え、その後、Ｂｏｃ−ＮＨ−ＰＥＧ３−ＮＨ２（０．１２ｇ、０．５ｍｍｏｌ）を加えた。その後、反応混合物を６時間撹拌し、溶媒を取り除いた。生成物をＥｔＯＡｃ（３×１０ｍＬ）で抽出した。有機質層を飽和したＮａＨＣＯ３、冷ましたＨＣｌ（１Ｍ）、およびブラインで連続的に洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、ろ過し、濃縮した。シリカゲル上でのフラッシュカラムクロマトグラフィーによる精製により、８７％の生成物収率で白色固形物として０．２８ｇのｔｅｒｔ−ブチル（２−（２−（２−テトラデカンアミドエトキシ）エトキシ）エチル）カルバマートを得た。ＥＳＩ−ＭＳ：ｃａｌｃｄ  ＭＷ  ６４４．５；ｆｏｕｎｄ  ６４５．５  ［Ｍ＋１］＋．
【０４０９】
工程Ｂ．１−ブロモ−２，１６−ジオキソ−６，９，１２−トリオキサ−３，１５−ジアザトリトリアコンタン−３３−酸（Ｂｒ−ＦＡ６）。
【０４１０】
ＤＣＭ（２ｍＬ）中の１−３の溶液（６５ｍｇ、０．１ｍｍｏｌ）を４時間、ＴＦＡ（４ｍＬ）で処理した。その混合物を濃縮し、その後、０ーＣの５ｍＬのＤＣＭ中のブロモ酢酸無水物（２６ｍｇ、０．１ｍｍｏｌ）とＤＩＰＥＡ（３５μＬ、０．２ｍｍｏｌ）を加えた。その後、反応混合物を２時間撹拌し、溶媒を取り除いた。生成物をＨＰＬＣによって精製することで、７０％の生成物収率で白色固形物として３５ｍｇの表題化合物を得た。ＥＳＩ−ＭＳ：ｃａｌｃｄ  ＭＷ  ６０８．３；ｆｏｕｎｄ  ６０９．４  ［Ｍ＋１］＋．
【０４１１】
実施例１１．Ｂｒ−ＦＡ７の固相合成。
【０４１２】
【化７５】
2018511574.tif 000077
【０４１３】
Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（ｉｖＤｄｅ）−ＯＨとＦｍｏｃ−ＰＥＧ２−プロピオン酸をそれぞれ、モノ−Ｆｍｏｃエチレンジアミン塩酸塩と［２−［２−（Ｆｍｏｃ−アミノ）エトキシ］エトキシ］酢酸と置き換えることにより、Ｂｒ−ＦＡ２と類似したやり方で表題化合物を調製した。分取ＨＰＬＣと凍結乾燥による精製により、約２５％の生成物収率で９５％以上の純度を備えた白色粉末として表題化合物を得た。ペプチドの分子量はＥＳＩ−ＭＳによって分析された：ｃａｌｃｄ  ＭＷ  ８９６．９；ｆｏｕｎｄ  ８９８．１  ［Ｍ＋１］＋．
【０４１４】
実施例１２．Ｂｒ−ＦＡ８の調製。
【０４１５】
【化７６】
2018511574.tif 000078
【０４１６】
オクタデカン二酸モノ−ｔｅｒｔ−ブチルエステルをパルミチン酸と置き換えることにより、Ｂｒ−ＦＡ２と類似したやり方で表題化合物を調製した。分取ＨＰＬＣと凍結乾燥による精製により、約２９％の生成物収率で９５％以上の純度を備えた白色粉末として表題化合物を得た。ペプチドの分子量はＥＳＩ−ＭＳによって分析された：ｃａｌｃｄ  ＭＷ  ８２２．４；ｆｏｕｎｄ  ８２３．６  ［Ｍ＋１］＋．
【０４１７】
実施例１３．Ｂｒ−ＦＡ１５５の調製。
【０４１８】
【化７７】
2018511574.tif 000079
【０４１９】
Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｎ３）−ＯＨ（４０ｍｇ、１００μｍｏｌ）を、２ｍＬのＤＭＦ中のＨＡＴＵ（４０ｍｇ）、ＤＩＰＥＡ（２００μＬ）と共に、ｗａｎｇ樹脂（１００ｍｇ、７０μｍｏｌ）に加えて、３０分間撹拌した。その後、樹脂をＤＭＦ（３ｘ）、ＤＣＭ（３ｘ）で洗浄し、その後、１０分間無水酢酸／ＤＩＰＥＡで処理することで未反応のｗａｎｇ樹脂をキャップした。樹脂を真空下で乾燥させ、デシケーター中に保存した。Ｆｍｏｃ基をＤＭＦ中の２０％ピペリジンを２０分に使用して切断し、このプロセスを３回繰り返した。ニンヒドリンを使用して切断の完了を確認した後、樹脂をＤＭＦとＤＣＭで洗浄した。
【０４２０】
その後、脱保護した樹脂を２時間、ＤＭＦ（５ｍＬ）中のオクタデカン二酸モノ−ｔｅｒｔ−ブチルエステル（ＡｓｔａＴｅｃｈ）（７４ｍｇ、２００μｍｏｌ）、ＨＡＴＵ（７６ｍｇ、２００μｍｏｌ）、およびＤＩＰＥＡ（２００μＬ）で処理した。ニンヒドリン試験が陰性となるまでカップリングを繰り返した。ＤＭＦとＤＣＭで洗浄した後に、樹脂を、ＤＭＦ（１ｍＬ）中の１０％銅ヨウ化物、（ＰＥＧ）５−アルキン（４０ｍｇ）、およびＤＩＰＥＡ（０．２ｍＬ）で処理した。その後、樹脂を、２ｍＬのＤＣＭ中のブロモ酢酸無水物（１００ｍｇ、２００μｍｏｌ）とＤＩＰＥＡ（２００μＬ）で処理し、２時間撹拌した。ＤＣＭ（３ｘ）で洗浄した後、生成物を、１０％Ｈ２Ｏと１０％トリイソプロピルシランを含むＤＣＭ中の５ｍＬの５０％ＴＦＡを２時間使用して、樹脂から切断した。切断後に、切断された溶液を乾燥させ、ＨＰＬＣ精製に晒す前にメタノール／ＤＭＦによって再溶解させることで、Ｂｒ−ＦＡ１５５（３ｍｇ、１５％の収率）を得た。ＥＳＩ−ＭＳ  ｃａｌｃｕｌａｔｅｄ  ＭＷ  ８６４．５；ｆｏｕｎｄ  ８６６  ［Ｍ＋１］＋．
【０４２１】
実施例．１４Ｂｒ−ＦＡ１７５の調製
【０４２２】
【化７８】
2018511574.tif 000080
【０４２３】
Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｎ３）−ＯＨ（４０ｍｇ、１００μｍｏｌ）を、２ｍＬのＤＭＦ中のＨＡＴＵ（４０ｍｇ）とＤＩＰＥＡ（２００μＬ）と共に、ｗａｎｇ樹脂（１００ｍｇ、７０μｍｏｌ）に加え、３０分間撹拌した。その後、樹脂をＤＭＦ（３ｘ）、ＤＣＭ（３ｘ）で洗浄し、その後、１０分間無水酢酸／ＤＩＰＥＡで処理することで未反応のｗａｎｇ樹脂をキャップした。樹脂を真空下で乾燥させ、デシケーター中に保存した。Ｆｍｏｃ基をＤＭＦ中の２０％ピペリジンを２０分に使用して切断し、このプロセスを３回繰り返した。ニンヒドリンを使用して切断の完了を確認した後、樹脂をＤＭＦとＤＣＭで洗浄した。その後、脱保護された樹脂を２時間、ＤＭＦ（２ｍＬ）中のミリスチン酸（１００ｍｇ）、ＨＡＴＵ（１８０ｍｇ）、およびＤＩＰＥＡ（２００μＬ）で処理した。樹脂を切断してＮ３−ミリスチン酸を生成させた。ＥＳＩ−ＭＳｃａｌｃｕｌａｔｅｄ  ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  ｗｅｉｇｈｔ  ３８２．５；ｆｏｕｎｄ  ３８３．５  ［Ｍ＋１］＋．
【０４２４】
ＤＩＰＥＡ（１００μＬ）、ＤＣＭ（１ｍＬ）、（ＰＥＧ）５−アルキン（２０ｍｇ）にブロモ酢酸無水物（４０ｍｇ）を加えることで、（ＰＥＧ）５−ブロモ−アルキン（ＡＬＫ）を調製した。生成物をＨＰＬＣによって精製し、凍結乾燥することで、所望の生成物（１５ｍｇ、７０％の収率）を得た。ＥＳＩ−ＭＳ：ｃａｌｃｕｌａｔｅｄ  ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  ｗｅｉｇｈｔ  ３９５．５；ｆｏｕｎｄ  ３９６．５  ［Ｍ＋１］＋．
【０４２５】
Ｎ３−ミリスチン酸（０．５ｍｇ）を、１：１のアセトニトリルと水中の硫酸銅（２ｍｇ）とアスコルビン酸（２ｍｇ）と共に、（ＰＥＧ）５−ブロモ−アルキン（０．７５ｍｇ）に加え、ｐＨを８に調節し、夜通し撹拌してＢｒ−ＦＡ１７５（０．７ｍｇ、７０％の収率）を得た。ＥＳＩ−ＭＳ：ｃａｌｃｕｌａｔｅｄ  ７７９．５，  ｆｏｕｎｄ  ７８０．５  ［Ｍ＋１］＋．
【０４２６】
実施例１５．Ｂｒ−ＦＡ１８２の調製
【０４２７】
【化７９】
2018511574.tif 000081
【０４２８】
Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ−ε−Ｎ−Ｄｄｅ  ５００ｍｇの樹脂（０．１５  ｍｍｏｌｅｓ）を２０％のピペリジンで処理し、その後、ＤＭＦ（３ｘ）、ＤＣＭ（３ｘ）で洗浄した。その後、樹脂をＤＩＥＡ、ＨＡＴＵと共にミリスチン酸（１０等量）で処理し、このカップリングを２時間継続した。ＤｄｅをＤＭＦ（２Ｘ）中の２％ヒドラジンを使用して取り除き、その後、ＤＭＦとＤＣＭで洗浄した。その後、酸−Ｐｅｇ５−Ｆｍｏｃ酸をＤＩＥＡ、ＨＡＴＵを夜通し使用して連結させた。ｎｉｈｙｄｒｉｎ試験でカップリング反応を確認した後、Ｆｍｏｃを切断し、その後、塩基の存在下で遊離アミンを臭素無水酢酸と反応させて、樹脂上の所望の化合物ＦＡ−１８２を得た。ＤＣＭ（３ｘ）で洗浄した後、生成物を、１０％Ｈ２Ｏと１０％トリイソプロピルシランを含むＤＣＭ中の５ｍＬの５０％ＴＦＡを２時間使用して、樹脂から切断した。切断後、切断された溶液を乾燥させ、その後、ＨＰＬＣ精製にかける前にメタノール／ＤＭＦによって再度溶解させた。生成物を含む画分を組み合わせて冷凍乾燥することで、ＦＡ−１８２を得た。（ＥＳＩ−ＭＳ  ｃａｌｃｕｌａｔｅｄ  ＭＷ  ７６８．２．；  ｆｏｕｎｄ  ７６９．４  ［Ｍ＋１］＋
【０４２９】
実施例１６．Ｂｒ−ＦＡ１８３の調製
【０４３０】
【化８０】
2018511574.tif 000082
【０４３１】
ミリスチン酸をオクタデカン二酸モノ−ｔｅｒｔ−ブチルエステルと置き換えることにより、Ｂｒ−ＦＡ１８２と類似したやり方で表題化合物を調製した。分取ＨＰＬＣと凍結乾燥による精製により、白色粉末として表題化合物を得た。ペプチドの分子量はＥＳＩ−ＭＳによって分析された：ｃａｌｃｄ  ＭＷ  ９８７．２；ｆｏｕｎｄ  ９８８．１  ［Ｍ＋１］＋．
【０４３２】
実施例１７．Ｂｒ−ＦＡ１８６の調製
【０４３３】
【化８１】
2018511574.tif 000083
【０４３４】
ミリスチン酸をステアリン酸と置き換えることにより、Ｂｒ−ＦＡ１８２と類似したやり方で表題化合物を調製した。分取ＨＰＬＣと凍結乾燥による精製により、白色粉末として表題化合物を得た。ペプチドの分子量はＥＳＩ−ＭＳによって分析された：ｃａｌｃｄ  ＭＷ  ８２３．４；ｆｏｕｎｄ  ８２４．３  ［Ｍ＋１］＋．
【０４３５】
実施例１８．封入体の調製。
【０４３６】
リラキシンアナログを発現する細胞を沈降させて細胞ペレット剤を生成する。細胞ペレット剤を溶解バッファ（１００ｍＭのトリス、ｐＨ８、１００ｍＭのＮａＣｌ、１％トリトン−Ｘ１００、２ｍＭ  ＥＤＴＡ）中で再懸濁し、少なくとも３回で１８，０００ｐｓｉで作動するＦｒｅｎｃｈ  Ｐｒｅｓｓｕｒｅ  ｃｅｌｌを通過させて溶解させる一方で、各通過の後に細胞懸濁液を４°Ｃまで冷ました。溶解した細胞懸濁液を、４°Ｃにおいて１５，０００ｒｐｍで４５分間、遠心分離機にかけることにより浄化した。ペレット剤は封入体タンパク質に加えて、生菌と細胞残屑を含む。ペレット剤を何度も洗浄して封入体タンパク質を残りのものから単離し、つまり、容器を傾けて上清を移したあとに、ペレット剤を、組織ホモジナイザーを使用して遠心分離にかけ、溶解バッファ中で再懸濁し、この手順を少なくとも３回繰り返した。ペレット剤からトリトン−Ｘ１００を取り除くために、ペレット剤は、洗浄用バッファ（１００ｍＭのトリス、ｐＨ８、１００ｍＭのＮａＣｌ、１％トリトン−Ｘ１００、２ｍＭ  ＥＤＴＡ）で少なくとも２回洗浄し、ペレット剤の洗浄は均質化による再懸濁と、その後の遠心分離によって行われた。その後、ペレット剤を、それ以上精製することなく、リラキシンアナログを生体外でリフォールディングするために直接使用した。
【０４３７】
実施例１９．リラキシンアナログのリフォールディング。
【０４３８】
実施例１８からの細胞ペレット剤をリラキシンアナログのインビトロリフォールディングに使用した。リラキシンアナログのリフォールディングは酸化した／還元したグルタチオンを使用して行われた。封入体を８Ｍの塩酸グアニジン（ＧｄｎＨＣｌ）に溶かした。４０ｍＬのＧｄｎＨＣｌを用いて、１Ｌの大腸菌培養物から単離させた封入体ペレット剤を溶かした。タンパク質を可溶化した後に、不溶性の部分を３０分間１５０００ｒｐｍで遠心分離機にかけてペレット状した。その後、可溶化したタンパク質を、３，０００ＭＷのカットオフＡｍｉｃｏｎ  Ｕｌｔｒａ（Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）遠心濾過機ユニットを使用して、１０−１５ｍＬに濃縮した。その後、変性タンパク質を、３００ｍＬのリフォールディング用バッファ（２ｍＭのＧＳＨ、１０ｍＭのＧＳＳＧを含む、４４０ｍＭのアルギニン、５５ｍＭのトリス、ｐＨ８．２）に稀釈した。リフォールディングを１−２時間継続し、ｐＨ２になるまでＴＦＡを加えてクエンチした。その後、沈殿物を遠心分離機にかけてペレット状にし、上清を遠心分離ユニットに移し、２−３ｍｇ／ｍＬになるまで濃縮した。その後、濃縮タンパク質混合物を、４．０ｍＬ／分の流速でＰｈｅｎｏｍｅｎｅｘ  Ｊｕｐｉｔｅｒ  Ｃ５カラム（２５０×４．６ｍｍ）を使用して、半分取ＨＰＬＣによって精製した。画分を所望のタンパク質についてＬＣ−ＭＳによって分析し、その後、プールして凍結乾燥した。
【０４３９】
実施例２０．リラキシンへの脂質の複合化。
【０４４０】
すべての酵素的処理（トリプシン／Ｃｐ−ＢまたはＴＥＶプロテアーゼ）はシステインをキャップした後に行われた。なぜなら、リラキシン中の遊離チオールは、酵素の消化が一般的に行われる塩基性ｐＨでスクランブルを引き起こすことが観察されたからである。実施例１９からの凍結乾燥されたタンパク質を．２５％ＴＦＡに溶かした。ペグ化された脂質を、ＡＣＮアセトニトリル／１００ｍＭのＮＨ４ＨＣＯ３バッファ（１：１）ｐＨ８．５に溶かした。その後、リラキシンを混合物に加え、反応を２時間室温で進めた；反応の進行をＬＣ−ＭＳによってチェックした。反応の完了後、混合物を凍結乾燥した。
【０４４１】
実施例２１．リラキシン前駆体の二本鎖の前駆体への酵素変換。
【０４４２】
実施例２０からの凍結乾燥された粉末を、１ｍＭのＣａＣｌ２、ｐＨ８を含む５０ｍＭのトリス緩衝液中で再懸濁した。トリプシン（１：１００）をこの混合物に加え、混合物を室温で１時間インキュベートした。１時間後、カルボキシペプチダーゼ−Ｂ（１ｍｇのタンパク質で１０単位）を混合物に加え、切断の進行をＬＣ−ＭＳ分析によってモニタリングした。完全に切断した後、酢酸を加えて混合物のｐＨを４にした。その混合物を凍結乾燥させ、半分取ＨＰＬＣにより精製した。
【０４４３】
実施例２２．ＴＥＶプロテアーゼによるＨｉｓ−タグの切断。
【０４４４】
実施例２１の凍結乾燥されたタンパク質を、３ｍＭのＧＳＨ：０．５ｍＭのＧＳＳＧを含むＰＢＳバッファに再度溶かした。Ｔｅｖプロテアーゼを混合物に加え、室温で夜通しインキュベートした。タグの切断をＬＣ−ＭＳ分析によって確認した。
【０４４５】
実施例２３．Ｂ：Ｄ１Ａ−Ａ：Ｑ１−Ｌ２Ｃリラキシンアナログの発現
【０４４６】
挿入物をポリメラーゼサイクリングアセンブリにより調製した。フォワードプライマーとリバースプライマーをアニーリングしてＤＮＡフラグメントを生成し、これをフォワードエンドプライマーとリバースエンドプライマーでさらに濃縮した。
【０４４７】
その後、増幅させたフラグメントを制限消化酵素（ＮｄｅＩ／ＫｐｎＩ）で消化させた。その後、調製した挿入物を、Ｔ７プロモーターとターミネーターの管理下でＰＥＴバックボーンを有するベクターへ連結した。その後、コード化されたＤＮＡフラグメントをＤＮＡ配列決定によって確認した。
【０４４８】
発現については、リラキシン構築物を、ａｒａＢＡＤプロモーターの制御下でゲノムＴ７  ＲＮＡポリメラーゼ遺伝子を有するＫ１２大腸菌（Ｗ３１１０の誘導体）に形質転換させた。
【０４４９】
形質転換した大腸菌細胞を、激しく振盪しながら（毎分２５０回転数（ｒｐｍ））３７°ＣでＯＤ６００ｎｍ＝０．８になるまで５０μｇ／ｍｌカナマイシンを補充したＬＢ中で培養した。
【０４５０】
遺伝子の発現を引き起こすために、Ｌ−アラビノース保存溶液（Ｈ２Ｏ中の２０％ｗ／ｖ）を、０．２％の終濃度になるまで加えて、５時間３７°Ｃにおいて２５０ｒｐｍで振盪しながら細胞を継続的にインキュベートした。その後、細胞を遠心分離（６０００ｒｐｍ、１５分）により収集した。
【０４５１】
実施例２４．Ｂ：Ｄ１Ａ−Ａ：Ｑ１−Ｌ２Ｃリラキシンアナログのリフォールディング
Ｂ：Ｄ１Ａ、Ａ：Ｑ１−Ｌ２Ｃ−リラキシンアナログのリフォールディングを、酸化した／還元したグルタチオンを使用して行った。封入体を８Ｍの塩酸グアニジン（ＧｄｎＨＣｌ）に溶かした。４０ｍＬのＧｄｎＨＣｌを用いて封入体を溶かし（封入体の調製は実施例１８に記載されるように行われた）、ペレット剤を１Ｌの大腸菌培養物から単離した。タンパク質を可溶化した後に、不溶性の部分を３０分間１５０００ｒｐｍで遠心分離機にかけてペレット状した。その後、可溶化したタンパク質を、３，０００ＭＷのカットオフＡｍｉｃｏｎ  Ｕｌｔｒａ（Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）遠心濾過機ユニットを使用して、１０−１５ｍＬに濃縮した。その後、変性タンパク質を、３００ｍＬのリフォールディング用バッファ（４４０ｍＭのアルギニン、５５ｍＭのトリス、ｐＨ８．２、２ｍＭのＧＳＨ、１０ｍＭのＧＳＳＧを含む）に稀釈した。リフォールディングを１−２時間継続し、ｐＨ２になるまでＴＦＡを加えてクエンチした。その後、沈殿物を遠心分離機にかけてペレット状にし、上清を遠心分離ユニットに移し、２−３ｍｇ／ｍＬになるまで濃縮した。その後、濃縮タンパク質混合物を、４．０ｍＬ／分の流速でＰｈｅｎｏｍｅｎｅｘ  Ｊｕｐｉｔｅｒ  Ｃ５カラム（２５０×４．６ｍｍ）を使用して、半分取ＨＰＬＣによって精製した。画分は所望のタンパク質についてＬＣ−ＭＳによって分析し、その後、プールして、凍結乾燥した。予想される質量：８１６７．４、観察される質量：８１６７．
【０４５２】
実施例２５．Ｂｒ−ＦＡ２〜Ｂ：Ｄ１Ａ−Ａ：Ｑ１−Ｌ２Ｃリラキシンアナログの接合
実施例２４からの凍結乾燥されたＢ：Ｄ１Ａ−Ａ：Ｑ１−Ｌ２Ｃリラキシンアナログを、０．２５％ＴＦＡに溶かした。Ｂｒ−ＦＡ２を、ＡＣＮアセトニトリル／１００ｍＭのＮＨ４ＨＣＯ３バッファ（１：１）、ｐＨ８．５に溶かした。その後、ＡＬ２Ｃリラキシンアナログを混合物に加え、反応を２時間室温で進めた。反応の進行はＬＣ−ＭＳによってチェックした。反応の完了後、混合物を凍結乾燥させて、精製することで、純粋なＢ：Ｄ１Ａ−Ａ：Ｑ１−Ｌ２Ｃ−ＦＡ２リラキシンアナログを得た。予想される質量：８９６８．５、観察される質量：８９６８．９４。
【０４５３】
実施例２６．Ｂ：Ｄ１Ａ−Ａ：Ｑ１−Ｌ２Ｃ−ＦＡ２リラキシンアナログ前駆体の二本鎖リラキシンへの酵素的処理
実施例２５からの凍結乾燥された粉末を、１ｍＭのＣａＣｌ２、ｐＨ８を含む５０ｍＭのトリス緩衝液中で再懸濁した。トリプシン（１：１００）をこの混合物に加え、混合物を室温で１時間インキュベートした。１時間後、カルボキシペプチダーゼ−Ｂ（１ｍｇのタンパク質で１０単位）を混合物に加え、切断の進行をＬＣ−ＭＳ分析によってモニタリングした。完全に切断した後、酢酸を加えて混合物のｐＨを４にした。混合物を凍結乾燥して半分取ＨＰＬＣによって精製することで、リラキシン−Ａ：Ｑ−Ｌ２Ｃ−ＦＡ２を得た。予想される質量：６７２７．１、観察される質量：６７２７．３．
【０４５４】
実施例２７．Ａ：ｐＱ１−Ｌ２Ｃ−ＦＡ２の合成
凍結乾燥されたリラキシンＡ：Ｑ１−Ｌ２Ｃ−ＦＡ２を、５０ｍＭの酢酸中で再懸濁し、その後、６時間９０°Ｃでインキュベートすることで、Ｑ−ＴＯＦ分析により、グルタミン（Ｑ）へのピログルタミン酸（ｐＱ）への完全転換を確認した。予想される質量：６７１０．１、観察される質量：６７１０．３（図３を参照）。
【０４５５】
実施例２８．ＦＡ−ＡＬＫ、ＦＡ１５５、ＦＡ１７５、ＦＡ１８２、ＦＡ１８３、およびＦＡ１８６のＢ：Ｄ１Ａ−Ａ：Ｑ１−Ｌ２Ｃリラキシンアナログとの複合化
二本鎖リラキシンとの複合化と処理は、出発物質として、ＦＡ１５５、ＦＡ１７５、ＦＡ１８２、ＦＡ１８３、およびＦＡ１８６を使用して、実施例２５と２６に記載されるように完了した。観察された質量が表１に列挙される：
【０４５６】
【表１】
2018511574.tif 000084
【０４５７】
実施例２９．トキシン−５５０アナログの遺伝子構造と発現。
挿入物をポリメラーゼサイクリングアセンブリにより調製した。フォワードプライマーとリバースプライマーをアニーリングしてＤＮＡフラグメントを生成し、これをフォワードプライマーとリバースプライマーでさらに濃縮した。その後、増幅されたフラグメントを制限消化酵素（Ｂａｍ  Ｉ／Ｈｉｎｄ−ＩＩＩ）で消化した。その後、調製した挿入物を、ＰＥＴバックボーンを有するベクターへ連結し、コード化されたＤＮＡフラグメントをその後、ＤＮＡ配列決定によって確認した。トキシン−５５０構築物（ｐＥＴ／Ｔｘｉｎ−５５０）を大腸菌株ＢＬ２１（ＤＥ３）に形質転換した。形質転換した大腸菌細胞を、激しく振盪しながら（毎分２５０回転数（ｒｐｍ））３７°ＣでＯＤ６００ｎｍ＝１．０になるまで（５０μｇ／ｍｌカナマイシンを有する）ＴＢ培地で培養した。タンパク質の発現を引き起こすために、ＩＰＴＧ保存溶液（１Ｍ）を０．５ｍＭの終濃度になるまで加え、細胞を２４時間２６°Ｃにおいて２５０ｒｐｍで振盪しながら継続的にインキュベートした。翌日に、細胞を遠心分離（６０００ｒｐｍ、１５分）によって収穫した。実施例１８に記載されるように、封入体の調製を行った。
【０４５８】
実施例３０．トキシン−５５０アナログのリフォールディング。
リフォールディングは酸化した／還元したグルタチオンを使用して行われた。封入体（実施例１８のように）を８Ｍの塩酸グアニジン（ＧｄｎＨＣｌ）に溶かした。１０ｍＬのＧｄｎＨＣｌを用いて、１Ｌの大腸菌培養物から単離した封入体ペレット剤を溶かした。タンパク質を可溶化した後に、別の１０ｍＬのトリ−ＨＣＬバッファ（５０ｍＭ）を加え、不溶性の部分を３０分間１５０００ｒｐｍで遠心分離機にかけてペレット状にした。その後、可溶化した上清の変性タンパク質を２００ｍＬのリフォールディング用バッファ中に稀釈した。可溶化した上清の変性タンパク質を稀釈するために使用された様々なリフォールディング用バッファが以下の表で示される：
【０４５９】
【表２】
2018511574.tif 000085
【０４６０】
図５は、トキシン−５５０ペプチド（野生型）のジスルフィド結合パターンと、システインノットトキシン−５５０ペプチドの典型的なインビトロフォールディング経路を示し、中央の構造は２つのスルフィド結合中間体を描いており、ここで、ジスルフィド結合はシステインＩとシステインＩＶとの間、およびシステインＩＩとシステインＶとの間で形成されている。
【０４６１】
様々なリフォールディングトレイルが用いられ、２Ｍの（ＮＨ４）２ＳＯ４リフォールディング用バッファは例外として、リフォールディング用バッファ条件のほとんどが主要な生成物として２−ジスルフィド結合中間体をもたらしており、３ジスルフィド結合生成物が４時間以内に観察される。３ジスルフィド結合生成物は、システインＩとシステインＩＶとの間、システインＩＩとシステインＶとの間、およびシステインＩＩＩとシステインＶＩとの間で形成されたジスルフィド結合を有する、トキシン−５５０ペプチドを含んでいる。
【０４６２】
実施例３１．脂質のトキシン−５５０との複合化。
リフォールディングされたトキシン−５５０はその後、ＰＢＳ、２％のＴＦＡとバッファ交換されて、脂質と複合化する前に過剰なグルタチオンを除去する。ペグ化された脂質は、ＡＣＮアセトニトリル／１００ｍＭのＮＨ４ＨＣＯ３バッファ（１：１）、ｐＨ８．５に溶かした。その後、トキシンを混合物に加え、反応を２時間室温で進めた。反応の進行をＬＣ−ＭＳによってチェックした。反応の完了後、混合物を凍結乾燥し、Ｃ１８−ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘカラムを用いてＲＰ−ＨＰＬＣによって精製した。
【０４６３】
実施例３２．脂質のオキシントモジュリンとエキセナチドの誘導体との複合化。
オキシントモジュリンＣｙｓ３８（例えばＯｘｍ−Ｃｙｓ３８、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２４）とエキセナチドＣｙｓ４０（例えばＥｘ４−Ｃｙｓ４０、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２５）を、固層ペプチド合成を用いて化学的に合成した。ペグ化された脂質は、ＡＣＮアセトニトリル／１００ｍＭのＮＨ４ＨＣＯ３バッファ（１：１）、ｐＨ８．５に溶かした。システイン突然変異体をＡＣＮアセトニトリル／１００ｍＭのＮＨ４ＨＣＯ３バッファに溶かし、その後、ペグ化された脂質混合物に加え、反応を２時間室温で進めた。反応の進行をＬＣ−ＭＳによってチェックした。反応の完了後、混合物を凍結乾燥し、Ｃ１８−ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘカラムを用いるＲＰ−ＨＰＬＣにより精製した。
【０４６４】
表２の以下の化合物は、類似した手順を用いて調製されるか、または調製された。
【０４６５】
【表３−１】
2018511574.tif 000086
【０４６６】
【表３−２】
2018511574.tif 000087
【０４６７】
【表３−３】
2018511574.tif 000088
【０４６８】
【表３−４】
2018511574.tif 000089
【０４６９】
【表３−５】
2018511574.tif 000090
【０４７０】
【表３−６】
2018511574.tif 000091
【０４７１】
実施例３３．Ｅｘ４とＯｘｍのペプチドの生物活性の測定。
【０４７２】
Ｅｘ４はＧＬＰ１Ｒアゴニストであり、ＯｘｍはＧＬＰ１ＲとＧＣＧＲのデュアルアゴニストである。インビトロ活性は、ＧＬＰ１ＲとＧＣＧＲ受容体を安定的に発現するＨｅｋ２９３細胞のアデニレートシクラーゼ活性の刺激に基づいて判定される。安定的にＧＣＧＲとＧＬＰ１Ｒ受容体を発現する細胞は、２００ｎｇ／ｍｌのＺｅｏｃｉｎ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）で補充されたダルベッコ変法イーグル培地／Ｆ−１２培地で維持される。サイクリックＡＭＰ応答配列により駆動されるルシフェラーゼ（ＣＲＥ−Ｌｕｃ）レポーター株は、ＣＲＥ−Ｌｕｃレンチウイルス（Ｑｉａｇｅｎ）を有するこれらの受容体過剰発現ＨＥＫ２９３Ｔ細胞のレンチウイルス形質導入により生成され、２週間にわたってピューロマイシン（２μｇ／ｍＬ）で選択される。レポーター遺伝子アッセイを用いて、ｃＡＭＰレベルと、Ｅｘ−４またはＯｘｍによるＧＬＰ１ＲとＧＣＧＲの活性化を検知する。
【０４７３】
アッセイの詳細：ＧＬＰ１ＲとＣＲＥ−Ｌｕｃを発現するＨＥＫ２９３Ｔ細胞を、３８４−ウェルの底の硬い白色プレート中に１０％ＦＢＳを含んでいる５０μＬのダルベッコ変法イーグル培地／Ｆ−１２培地において１ウェル当たり５ｘ１０３細胞の密度で播種する。細胞を３７°Ｃで夜通し事前にインキュベートする。異なる濃度のペプチド（０．００１ｎＭから１００ｎＭまで）を３通り加え、１８時間インキュベートし、Ｂｒｉｇｈｔ  Ｇｌｏ（Ｐｒｏｍｅｇａ）１０μＬを加えることによってルシフェラーゼ活性を検知する。発光をＥｎｖｉｓｉｏｎに記録する（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ）。非線形曲線フィット後にＥＣ５０を計算する。ＧＣＧＲ活性については、ＧＣＧＲとＣＲＥ−Ｌｕｃを備えたレポーター細胞株が使用される。
【０４７４】
実施例３４．トキシンペプチドの生物活性の測定。
トキシン−５５０ペプチドは、ＮａＶ  １．７電流の測定のための標準的な実行条件を用いてＩｏｎＦｌｕｘ  ＨＴでアッセイされる。簡潔に言えば、ヒトＮａｖ１．７（ＰｒｅｃｉｓＩＯＮ、Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）のアルファとベータの１サブユニットを過剰発現するＨＥＫ２９３細胞をトリプシン処理し、無血清培地で育成し、３０分間室温で振盪させる。化合物を所望の濃度で標準的な細胞外のリンゲル溶液（ＥＣＳ）へ稀釈する。細胞をＥＣＳで一度洗浄し、その後、４００万個の細胞／ｍＬの濃度においてＥＣＳで育成する。ＩｏｎＦｌｕｘ  ＨＴプレートは標準的なプロトコルに従って設定される。
【０４７５】
ＮａＶ  １．７電流は以下の電圧工程プロトコルに従ってＩｏｎＦｌｕｘで測定される：
１．細胞は１０秒間−９０ｍＶで保持される。
２．細胞は１００ミリ秒にわたって−９０ｍＶから−１２０ｍＶまで段階的に処理される。
ａ．その後、３０ミリ秒にわたって−１０ｍＶまで、および、
ｂ．その後、３０ミリ秒にわたって−９０ｍＶまで戻される。
【０４７６】
ベースライン電流を５分間安定させ、その後、対照ベースライン（ＥＣＳのみ）を確立する。化合物を２０分間適用して、その後、陽性対照（ペプチドＮａＶ１．７遮断薬）を適用する。
【０４７７】
その後、リークサブトラクション（Ｌｅａｋ  ｓｕｂｔｒａｃｔｉｏｎ  ）をデータ上で行い、結果として生じた電流を以下のように分析する：
１．すべての電流掃引についてカーソルラブトラクション（Ｃｕｒｓｏｒ  ｓｕｂｔｒａｃｔｉｏｎ）（ベースライン・ピーク）を行うことで、電流（Ｉ）の振幅を決定する。
２．各パッチのＥＣＳベースライン電流を最大電流（Ｉｍａｘ）として取る。
３．所定の時間（例えば化合物追加後の１０分）については、パーセント・ブロックをＩ／Ｉｍａｘとして計算する。
【０４７８】
実施例３５．半減期延長のためのインビボの薬物動態学的（ＰＫ）研究。
【０４７９】
マウスＰＫ：
【０４８０】
インビボの静脈内および皮下のＰＫ研究を、リラキシンまたはリラキシンＦＡ複合体を備えた雌のＣＤ１マウス（ｎ＝５）で実行した（ＮＨ４Ａｃバッファ中の０．３ｍｇ／ｋｇ）。活性なリラキシンの正確な測定を保証するために、０−２４時間の間隔で採取した血漿サンプルを、細胞ベースのレポーター遺伝子アッセイを使用して分析した。
【０４８１】
バイオ分析：血清サンプルを５点の階段希釈（１：３）中で稀釈し（１：１００）、アッセイプロトコルを伴うＲＸＦＰ１ルシフェラーゼレポーター活性について測定した。注入されたペプチドを基準として使用して、標準曲線を得て、Ｂｏｔｔｏｍ、Ｔｏｐ、ＥＣ５０、Ｈｉｌｌ  Ｓｌｏｐｅについてのパラメータを得た。得られた活性値（ＲＬＵ）を（標準曲線の線形の範囲で）選択し、標準曲線からの方程式（Ｙ＝Ｂｏｔｔｏｍ  ＋  （Ｔｏｐ−Ｂｏｔｔｏｍ）／（１＋１０＾（（ＬｏｇＩＣ５０−Ｘ）＊ＨｉｌｌＳｌｏｐｅ））を駆使して、血漿中の濃度（ｎｍｏｌ／Ｌ）を計算するために使用した。
【０４８２】
ラットＰＫ：
【０４８３】
インビボの静脈内および皮下のＰＫ研究を、リラキシンＢ：Ｄ１Ａ−Ａ：ｐＧＬｕ１−Ｌ２Ｃ−ＦＡ２（ＮＨ４Ａｃバッファ中０．３ｍｇ／ｋｇ）を備えたダール食塩感受性高血圧（ＤＳＳ）の雌ラット（ｎ＝４）で実行した。活性なリラキシンの正確な測定を保証するために、０−２４時間の間隔で採取した血漿サンプルを、細胞ベースのレポーター遺伝子アッセイを使用して分析した。
【０４８４】
バイオ分析：血清サンプルを５点の階段希釈（１：３）中で稀釈し（１：１００）、アッセイプロトコルを伴うＲＸＦＰ１ルシフェラーゼレポーター活性について測定した。注入されたペプチドを基準として使用して、標準曲線を得て、Ｂｏｔｔｏｍ、Ｔｏｐ、ＥＣ５０、Ｈｉｌｌ  Ｓｌｏｐｅについてのパラメータを得た。得られた活性値（ＲＬＵ）を（標準曲線の線形の範囲で）選択し、標準曲線からの方程式（Ｙ＝Ｂｏｔｔｏｍ  ＋  （Ｔｏｐ−Ｂｏｔｔｏｍ）／（１＋１０＾（（ＬｏｇＩＣ５０−Ｘ）＊ＨｉｌｌＳｌｏｐｅ））を駆使して、血漿中の濃度（ｎｍｏｌ／Ｌ）を計算するために使用した。
【０４８５】
脂質複合体リラキシンまたは他の治療薬を皮下、経口、静脈内投与によりマウスに投薬した。ＴＡの血漿レベルを様々な時間点（例えば、静脈内でＰＫ５分、０．５時間、１時間、２時間、４時間、８時間、２４時間、４８時間）におけるＬＧＲ７活性化によって決定した。選択したＰＫデータを表３と図６−１３に示す。
【０４８６】
【表４−１】
2018511574.tif 000092
【０４８７】
【表４−２】
2018511574.tif 000093
【０４８８】
実施例３６．急性心不全モデルにおける薬力学的（ＰＤ）研究とインビボの有効性。
【０４８９】
ＰＫの判定後、適切な投与レジメンが決定され、脂質複合体リラキシンを皮下、経口、または静脈内投与により投薬することで、血圧、尿流量、および／または靭帯の伸びについて有効性モデルにおける脂質複合体リラキシンの有効性を評価する。さらに、脂質複合体リラキシンは、肺と肝臓におけるブレオマイシンにより誘発された線維症モデルにおいて、および／または年老いた糖尿病性の肥満のズッカーラットにおける糖尿病性の創傷治癒モデルにおいて評価される。
【０４９０】
実施例３７．マウスの恥骨間の靭帯の生物検定を使用するＰＤ研究。
リラキシンアナログの生物活性は、Ｓｔｅｉｎｅｔｚらによって記載されるように［Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ  （１９６０）  ６７：１０２−１１５］、リラキシンに関して、十分に確立され、かつ高度に特異的なマウスの恥骨間の靭帯の生物検定を採用することにより、ＣＤ１マウス中で決定される。生後３−４週の雌のＣＤ１の処女マウスが研究から選択される。動物は、制御された温度（２５°Ｃ）と光周期（１２：１２時間の明暗サイクル）条件下でグループ飼育され、標準的な食事と水道水（または指定された飲料用溶液）への無制限なアクセスを与えられる。処置の１日目、０．１ｍｌのごま油中の１０μｇのエストラジオールピオネートをマウスに皮下注入する。８日目、マウスを様々な群：ビヒクル対照、リラキシン重量（ＰＢＳバッファ中の１％ベンゾパープリン４Ｂの懸濁液に溶かす）、および、リラキシンアナログ（２０ｍＭのＮＨ４Ａｃバッファ、ｐＨ６．５に溶かす）に分ける。リラキシン重量またはリラキシンアナログを、皮下注入によって様々な投与量で投与する。リラキシン注入後の様々な時点にマウスを安楽死させ、恥骨間の靭帯の長さを、ノギス測定を駆使して決定する。
【０４９１】
実施例３８．急性心不全の処置のための脂質複合体リラキシンの有効性と安全性
目的：急性心不全で入院した患者の処置のために有効性と安全性を判定するために、脂質複合体リラキシンの異なる投与量をプラセボと比較する。
【０４９２】
【表５】
2018511574.tif 000094
【０４９３】
研究タイプ：介入
【０４９４】
研究デザイン：割当：ランダム
【０４９５】
エンドポイント分類：安全性／有効性研究
【０４９６】
介入モデル：並行群間比較試験
【０４９７】
マスキング：二重盲検（被験体、介護者、調査者、結果査定人）
【０４９８】
主目的：治療
【０４９９】
原発性評価項目：急性心不全における呼吸困難の軽減［時間枠：最大５日］［安全性の問題として指定された：なし］
【０５００】
副次的評価項目：
【０５０１】
病院外かつ生存している日［時間枠：最大６０日］［安全性の問題として指定された：なし］
【０５０２】
心不全または腎不全による、ＣＶ死亡または再入院［時間枠：最大６０日］［安全性の問題として指定された：なし］
【０５０３】
【表６】
2018511574.tif 000095
【０５０４】
詳細な記載：
【０５０５】
これは、急性非代償性心不全のために入院した患者の兆候と症状を処置するための静脈内の組み換えリラキシンの国際的な、無作為化した、二重盲検の、プラセボ対照の第２相／第３相試験である。第２相パイロット研究は完了した；試験の第３相の主要な部分は進行中である。
【０５０６】
適格性
【０５０７】
研究に参加する資格を有する年齢：１８歳以上
【０５０８】
研究に参加する資格を有する性別：両方
【０５０９】
健常者の受付：なし
【０５１０】
基準
【０５１１】
包含基準：
【０５１２】
急性心不全で入院
【０５１３】
安静時にまたは極めて軽度の労作で呼吸困難
【０５１４】
肺うっ血
【０５１５】
インフォームドコンセントを与えることができる
【０５１６】
収縮期血圧＞１２５ｍｍＨｇ  
【０５１７】
３０−７５ｍＬ／ｍｉｎ／１．７３ｍ２のｅＧＦＲとして定義される腎機能障害
【０５１８】
除外基準：
【０５１９】
急性心不全に他のＩＶ治療を使用
【０５２０】
熱または敗血症
【０５２１】
主な神経学的事象を経験したばかりである
【０５２２】
大手術を受けたばかりである
【０５２３】
急性冠動脈症候群を発症したばかりである
【０５２４】
他の治験薬を使用したばかりである
【０５２５】
【表７−１】
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【０５２６】
【表７−２】
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【０５２７】
【表８−１】
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【０５２８】
【表８−２】
2018511574.tif 000099
【０５２９】
【表８−３】
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【０５３０】
【表９】
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【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７】
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【図１８】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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