(57)【要約】  本発明はコール酸誘導体、及びその製造方法及び医薬用途に関する。具体的には、本発明は式（I）の構造を持つコール酸誘導体、その立体異性体または薬学的に許容される塩に関する。一連の化合物は、循環器疾患、アテローム性動脈硬化症、動脈硬化症、高コレステロール血症、高脂血症及び慢性肝炎、慢性肝疾患、胃腸疾患、ネフローゼ、心血管疾患、代謝疾患、癌（例えば、結腸直腸癌）または脳卒中や他の疾患などの神経性兆候を含むFXR介在性疾患を治療するために広範な医薬用途で使用することができ、新世代のFXRアゴニストに開発することが期待されている。【選択図】なし
2018519246.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（I）のコール酸誘導体、またはその立体異性体または薬学的に許容される塩：
【化１】
2018519246.tif 000049
（式中、
R1、R2及びR3は、それぞれ水素、フッ素、臭素、トリフルオロメチル及びC1-8アルキルから成る群から選択され；
R４は、
【化２】
2018519246.tif 000050
から成る群から選択され；
X1は、窒素及びCR8から成る群から選択され；
X2は、CR8R9、NR10、酸素及び硫黄原子から成る群から選択され；
Y1及びY2は、それぞれ独立して、CR8R9、NR10、酸素及び硫黄原子から成る群から選択され；
Zは、CR8R9、NR10、酸素及び硫黄原子から成る群から選択され；
R5は、水素、ヒドロキシ、シアノ、アミノ、C1-8アルコキシ及びSO2R11から成る群から選択され；
R6は、SO2R11, SO3R11, C(O)OR11, C(O)R12及びC0-4-P(O)R13R14から成る群から選択され；
R7は、ヒドロキシ、ヒドロキシル置換C1-8アルキル及びハロC1-8アルキルから成る群から選択され；
R8及びR9は、それぞれ独立して、水素、重水素、ハロゲン、ヒドロキシ、シアノ、ニトロ、C1-8アルキル、C2-8アルケニル、C2-8アルキニル、C3-8シクロアルキル、C1-8アルコキシ、C3-8シクロアルコキシ、SO2R11、C(O)OR11、C(O)R12及びP(O)R13R14から成る群から選択され、該アルキル及びシクロアルキルは、それぞれハロゲン、ヒドロキシ、C1-8アルキル、C1-8アルコキシ、ハロC1-8アルコキシ、C3-8シクロアルキル及びC3-8シクロアルコキシから成る群から選択される1以上の基で任意に置換されていてもよく；
R10は、水素、C1-8アルキル、C3-8シクロアルキル、ハロC1-8アルキル、及びC1-8アルコキシから成る群から選択され；
R11は、水素、C1-8アルキル、C3-8シクロアルキル、ハロC1-8アルキル、フェニル及びp-メチルフェニルから成る群から選択され；
R12, R13及びR14は、それぞれ独立して、ヒドロキシ、C1-8アルキル、C3-8シクロアルキル、ハロC1-8アルキル、C1-8アルコキシ、アミノ、及びC1-8アルキル二置換アミノから成る群から選択され；
ｎは、0または1である）。
【請求項２】
C1-8アルキルは、好ましくはC1-6アルキルから選択され、より好ましくはC1-3アルキルから選択される；C1-8アルコキシは、好ましくはC1-6アルコキシから選択され、より好ましくはC1-3アルコキシから選択される；C3-8シクロアルキルは、好ましくはC3-6シクロアルキルから選択される；C3-8シクロアルコキシは、好ましくはC3-6シクロアルコキシから選択される；C2-8アルケニルは、好ましくはC2-4アルケニルから選択される；C2-8アルキニルは、好ましくはC2-4アルキニルから選択される、請求項１に記載のコール酸誘導体、またはその立体異性体または薬学的に許容される塩。
【請求項３】
R3が水素、メチル、エチル及びイソプロピルから成る群から選択され；R1, R2, R4, R5, R6, R7, R8, R9, R10, R11, R12, R13, R14, X1, X2, Y1, Y2, Z及びnは請求項１で定義した通りである、請求項１に記載のコール酸誘導体、またはその立体異性体または薬学的に許容される塩。
【請求項４】
R3が水素及びメチルから成る群から選択され；R1, R2, R4, R5, R6, R7, R8, R9, R10, R11, R12, R13, R14, X1, X2, Y1, Y2, Z及びnは請求項１で定義した通りである、請求項１に記載のコール酸誘導体、またはその立体異性体または薬学的に許容される塩。
【請求項５】
化合物が、式（II）の化合物：
【化３】
2018519246.tif 000051
である、請求項１に記載のコール酸誘導体、またはその立体異性体または薬学的に許容される塩。
【請求項６】
R1が水素であり；R3が水素及びメチルから成る群から選択され；R2, R4, R5, R6, R7, R8, R9, R10, R11, R12, R13, R14, X1, X2, Y1, Y2, Z及びnは請求項１で定義した通りである、請求項１に記載のコール酸誘導体、またはその立体異性体または薬学的に許容される塩。
【請求項７】
化合物が、式（III）の化合物：
【化４】
2018519246.tif 000052
である、請求項１に記載のコール酸誘導体、またはその立体異性体または薬学的に許容される塩。
【請求項８】
化合物が、式（IV）の化合物：
【化５】
2018519246.tif 000053
（式中、R4は、
【化６】
2018519246.tif 000054
から成る群から選択され；R2, R3, R5, R6, R7, R8, R9, R10, R11, R12, R13, R14, X1, X2, Y1, Y2, Z及びnは請求項１で定義した通りである。）
である、請求項１に記載のコール酸誘導体、またはその立体異性体または薬学的に許容される塩。
【請求項９】
R4が、
【化７】
2018519246.tif 000055
から成る群から選択されるとき、ｎは１であり；
R4が、
【化８】
2018519246.tif 000056
であるとき、ｎは０であり；
R2, R3, R5, R6, R7, R8, R9, R10, R11, R12, R13, R14, X1, X2, Y1, Y2及びZは請求項１で定義した通りである、請求項８に記載のコール酸誘導体、またはその立体異性体または薬学的に許容される塩。
【請求項１０】
化合物が、
【化９】
2018519246.tif 000057
から成る群から選択される、請求項８に記載のコール酸誘導体、またはその立体異性体または薬学的に許容される塩。
【請求項１１】
化合物が、
【化１０】
2018519246.tif 000058
から成る群から選択される、請求項８に記載のコール酸誘導体、またはその立体異性体または薬学的に許容される塩。
【請求項１２】
化合物が、
【化１１】
2018519246.tif 000059
である、請求項８に記載のコール酸誘導体、またはその立体異性体または薬学的に許容される塩。
【請求項１３】
化合物が、式（V）の化合物：
【化１２】
2018519246.tif 000060
（式中、X1, X2, R2, R8, R9, R10, R11, R12, R13及びR14は請求項１で定義した通りである。）
である、請求項８に記載のコール酸誘導体、またはその立体異性体または薬学的に許容される塩。
【請求項１４】
化合物が、
【化１３】
2018519246.tif 000061
から成る群から選択される、請求項８に記載のコール酸誘導体、またはその立体異性体または薬学的に許容される塩。
【請求項１５】
化合物が、式（VI）の化合物：
【化１４】
2018519246.tif 000062
（式中、Y1, Y2, R2, R8, R9, R10, R11, R12, R13及びR14は請求項１で定義した通りである。）
である、請求項８に記載のコール酸誘導体、またはその立体異性体または薬学的に許容される塩。
【請求項１６】
化合物が、
【化１５】
2018519246.tif 000063
から成る群から選択される、請求項８に記載のコール酸誘導体、またはその立体異性体または薬学的に許容される塩。
【請求項１７】
化合物が、式（VII）の化合物：
【化１６】
2018519246.tif 000064
（式中、R2, R8, R9, R10, R11, R12, R13, R14及びZは請求項１で定義した通りである。）
である、請求項８に記載のコール酸誘導体、またはその立体異性体または薬学的に許容される塩。
【請求項１８】
化合物が、
【化１７】
2018519246.tif 000065
から成る群から選択される、請求項８に記載のコール酸誘導体、またはその立体異性体または薬学的に許容される塩。
【請求項１９】
式（VIII）のコール酸誘導体、またはその立体異性体または薬学的に許容される塩：
【化１８】
2018519246.tif 000066
（式中、Zは、酸素及び硫黄原子から成る群から選択され；
R2は、水素、フッ素、臭素、トリフルオロメチル及びC1-8アルキルから成る群から選択される）。
【請求項２０】
化合物が、
【化１９】
2018519246.tif 000067
から成る群から選択される、請求項１９に記載のコール酸誘導体、またはその立体異性体または薬学的に許容される塩。
【請求項２１】
ステップ：
【化２０】
2018519246.tif 000068
2018519246.tif 000069
2018519246.tif 000070
（式中、R2, R5, R6, R7, R8, R9, R10, R11, R12, R13, R14, X1, X2, Y1, Y2及びZは請求項１で定義した通りであり；Pg1はヒドロキシル保護基であり、好ましくはC1-4アルキル及びベンジルから成る群から選択され、Pg2はヒドロキシル保護基であり、好ましくはC1-4アルキル及びアセチルから成る群から選択される。）
を含む、請求項１〜２０のいずれか1項に記載のコール酸誘導体、またはその立体異性体または薬学的に許容される塩の製造方法。
【請求項２２】
請求項１〜２０のいずれか1項に記載のコール酸誘導体、その立体異性体または薬学的に許容される塩の治療有効量、及び薬学的に許容される担体を含有する医薬組成物。
【請求項２３】
FXR介在性疾患及び状態を予防または治療するための薬剤の製造における、請求項１〜２０のいずれか1項に記載のコール酸誘導体、その立体異性体または薬学的に許容される塩、または請求項２２に記載の医薬組成物の使用。
【請求項２４】
FXR介在性疾患及び状態が循環器疾患、高コレステロール血症、高脂血症及び慢性肝炎、慢性肝疾患、胃腸疾患、ネフローゼ、脳血管疾患、代謝疾患及び癌から成る群から選択される、請求項２３に記載の使用。
【請求項２５】
慢性肝疾患は原発性肝硬変（PBC）、脳腱黄色腫症（CTX）、原発性硬化性胆のう炎（PSC）、薬物によって引き起こされる胆汁うっ滞、妊娠の肝内胆汁うっ滞症、非経口栄養随伴の胆汁うっ滞（PNAC）、細菌過剰繁殖の胆汁うっ滞または膿血症、自己免疫性肝炎、ウイルス性慢性肝炎、アルコール性肝疾患、非アルコール性脂肪性肝疾患（NAFLD）、非アルコール性脂肪性肝炎（NASH）、肝移植に関連する移植片対宿主病、生体肝移植の再生、先天性肝線維症、総胆管結石症、肉芽形成肝疾患（granulation liver disease）、肝臓内及び肝臓外の悪性腫瘍、シェーグレン症候群、サルコイドーシス、ウィルソン病、ゴーシェ病、ヘモクロマトーシス及びα1-アンチトリプシン欠乏症から成る群から選択され；胃腸疾患は炎症性腸疾患（IBD）、過敏性腸症候群（IBS）、細菌過剰繁殖、栄養分吸収障害、reflection後の結腸炎及び顕微鏡的大腸炎から成る群から選択され、炎症性腸疾患は、好ましくはクローン病及び潰瘍性腸炎から成る群から選択され；ネフローゼは糖尿病性腎症、巣状分節性糸球体硬化症（FSGS）、高血圧性腎症、慢性糸球体炎、慢性移植糸球体症、慢性間質性腎炎及び多発性のう胞腎疾患から成る群から選択され；循環器疾患は動脈硬化症、動脈硬化症、アテローム性動脈硬化症、脂質異常症、高コレステロール血症及び高トリグリセリド血症から成る群から選択され；代謝疾患はインシュリン抵抗性、I型糖尿病、II型糖尿病及び肥満症から成る群から選択され；脳血管疾患は脳卒中であり；癌は結腸直腸癌及び肝臓癌から成る群から選択される、請求項２４に記載の使用。
【請求項２６】
請求項１〜２０のいずれか1項に記載のコール酸誘導体、その立体異性体または薬学的に許容される塩、または請求項２２に記載の医薬組成物の治療有効量を投与することを含む、FXR介在性疾患及び状態を予防または治療する方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は医薬品合成の分野に属し、具体的にはコール酸誘導体、及びその製造方法及び医薬用途に関する。
【背景技術】
【０００２】
ファルネシル誘導体X受容体（FXR）は、主に肝臓、小腸、腎臓及び副腎で発現し、脂肪組織や心臓では発現が少ない、ホルモン核内受容体スーパーファミリーの一員である。ファルネソールが最初にそのリガンドと考えられたので、それはFXRと名付けられている。FXRリガンドがFXRのカルボキシ末端のリガンド結合領域（LBD）に直接結合すると、核内受容体のコンホメーションが変化してレチナール誘導体受容体（RXR）とヘテロ二量体を形成し、最終的に標的遺伝子の特異的FXR DNA応答要素と一体化して標的遺伝子の転写を調節し、糖と脂質代謝の調節に関与する。FXRは、従って、重要なエネルギー調整器である。一次胆汁酸ケノデオキシコール酸は、FXRの最も効果的なリガンドであり、二次胆汁酸リトコール酸とデオキシコール酸は、また、FXRを活性化することができる。FXR結合において天然リガンドより数倍強い合成FXRリガンド（6-ECDCA、GW4064など）もある。FXRの主な標的遺伝子としては、胆汁酸塩排出ポンプ（BSEP）、胆汁酸結合タンパク質（IBABP）、低分子ヘテロ二量体パートナー受容体（SHP）などが挙げられる。FXRは、これらの遺伝子プロモーター上のFXR反応要素（FXRE）と反応することによってこれらの遺伝子の発現を調節する。しかしながら、コレステロール7αヒドロキシラーゼ（CYP7α1）などの、ある特定の主要なFXR制御遺伝子のプロモーター配列に典型的なFXR結合応答配列がなく、それ故FXRは転写抑制因子SHPの発現を間接的に誘導することによってCYP7α1と他のLRH-1標的遺伝子の転写をブロックし、次いでCYP7α1プロモーターの肝臓受容体ホモログ（LRH-1）と抑制複合体を形成する。FXRは、胆汁酸とコレステロールの代謝で重要な役割を果たし、益々注目を引いている肝臓関連疾患と関係している。新しいFXRアゴニストを見つけることは、胆汁うっ滞症候群などの肝臓疾患の治療におけるホットな研究トピックスとなっている。原発性胆汁性肝硬変（PBC）の治療として、6-エチルケノデオキシコール酸（オベチコール酸）が第III相臨床試験を完了しており、早くも2015年には上市されるであろう。この化合物は、また非アルコール性脂肪性肝炎においても十分な治療効果を示している。FXRアゴニストは、胆汁酸塩排出ポンプ（BSEP）を刺激することにより胆汁酸依存性の胆汁流を増加させることも、MRP2を刺激することにより胆汁うっ滞を減らして非胆汁酸依存性の胆汁流を増加させることもできる。FXRは、胆汁うっ滞疾患及び非アルコール性脂肪性肝炎などの他の代謝性疾患を治療することができる新しい薬物をスクリーニングするためのターゲットになると期待されている。さらに、現在の研究は、FXRアゴニストはアテローム性動脈硬化症、胆汁酸障害に起因する胆汁うっ滞症、肝線維症、肝硬変、癌などの疾患（表１参照）の治療及び研究に有用であることを示している。
2018519246.tif 000003
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００３】
研究の過程で、発明者らは式（I）で表されるような一連のコール酸誘導体を見出した。これらの化合物は、FXR活性に関して顕著なアゴニスト作用を有していて、循環器疾患、アテローム性動脈硬化症、動脈硬化症、高コレステロール血症、高脂血症及び慢性肝炎、慢性肝疾患、胃腸疾患、ネフローゼ、心血管疾患、代謝疾患、癌（例えば結腸直腸癌）または発作や他の疾患などの神経性の兆候を含むFXR介在性疾患の治療に、広範な医薬用途で用いることができ、新世代のFXRアゴニストに開発されることが期待されている。
【課題を解決するための手段】
【０００４】
一つの態様において、本発明は、式（I）のコール酸誘導体、その立体異性体または薬学的に許容される塩を提供する：
【化１】
2018519246.tif 000004
式中、
R1、R2及びR3は、それぞれ水素、フッ素、臭素、トリフルオロメチル及びC1-8アルキルから成る群から選択され；
R４は、
【化２】
2018519246.tif 000005
から成る群から選択され；
X1は、窒素及びCR8から成る群から選択され；
X2は、CR8R9、NR10、酸素及び硫黄原子から成る群から選択され；
Y1及びY2は、それぞれ独立して、CR8R9、NR10、酸素及び硫黄原子から成る群から選択され；
Zは、CR8R9、NR10、酸素及び硫黄原子から成る群から選択され；
R5は、水素、ヒドロキシ、シアノ、アミノ、C1-8アルコキシ及びSO2R11から成る群から選択され；
R6は、SO2R11, SO3R11, C(O)OR11, C(O)R12及びC0-4-P(O)R13R14から成る群から選択され；
R7は、ヒドロキシル、C1-8アルキル、及びヒドロキシで置換されたハロC1-8アルキルから成る群から選択され；
R8及びR9は、それぞれ独立して、水素、重水素、ハロゲン、ヒドロキシ、シアノ、ニトロ、C1-8アルキル、C2-8アルケニル、C2-8アルキニル、C3-8シクロアルキル、C1-8アルコキシ、C3-8シクロアルコキシ、SO2R11、C(O)OR11、C(O)R12及びP(O)R13R14から成る群から選択され、該アルキル及びシクロアルキルは、それぞれハロゲン、ヒドロキシ、C1-8アルキル、C1-8アルコキシ、ハロC1-8アルコキシ、C3-8シクロアルキル及びC3-8シクロアルコキシから成る群から選択される1以上の基で任意に更に置換されていてもよく；
R10は、水素、C1-8アルキル、C3-8シクロアルキル、ハロC1-8アルキル、及びC1-8アルコキシから成る群から選択され；
R11は、水素、C1-8アルキル、C3-8シクロアルキル、ハロC1-8アルキル、フェニル及びp-メチルフェニルから成る群から選択され；
R12, R13及びR14は、それぞれ独立して、ヒドロキシ、C1-8アルキル、C3-8シクロアルキル、ハロC1-8アルキル、C1-8アルコキシ、アミノ、及びC1-8アルキル二置換アミノから成る群から選択され；
ｎは、0または1である。
【０００５】
好ましい実施態様において、本発明によるコール酸誘導体、その立体異性体または薬学的に許容される塩では、C1-8アルキルは、好ましくはC1-6アルキルから選択され、より好ましくはC1-3アルキルから選択される；C1-8アルコキシは、好ましくはC1-6アルコキシから選択され、より好ましくはC1-3アルコキシから選択される；C3-8シクロアルキルは、好ましくはC3-6シクロアルキルから選択される；C3-8シクロアルコキシは、好ましくはC3-6シクロアルコキシから選択される；C2-8アルケニルは、好ましくはC2-4アルケニルから選択される；C2-8アルキニルは、好ましくはC2-4アルキニルから選択される。
【０００６】
好ましい実施態様において、本発明によるコール酸誘導体、その立体異性体または薬学的に許容される塩では、R1は、水素、フッ素、メチル、トリフルオロメチル、エチル及びイソプロピルから成る群から選択され；R2, R3, R4, R5, R6, R7, R8, R9, R10, R11, R12, R13, R14, X1, X2, Y1, Y2, Z及びnは、式（I）の化合物で定義した通りである。
【０００７】
好ましい実施態様において、本発明によるコール酸誘導体、その立体異性体または薬学的に許容される塩では、R2は、水素、メチル、エチル及びイソプロピルから成る群から選択され；R1, R3, R4, R5, R6, R7, R8, R9, R10, R11, R12, R13, R14, X1, X2, Y1, Y2, Z及びnは、式（I）の化合物で定義した通りである。
【０００８】
好ましい実施態様において、本発明によるコール酸誘導体、その立体異性体または薬学的に許容される塩では、R3は、水素、メチル、エチル及びイソプロピルから成る群から選択され；R1, R2, R4, R5, R6, R7, R8, R9, R10, R11, R12, R13, R14, X1, X2, Y1, Y2, Z及びnは、式（I）の化合物で定義した通りである。
【０００９】
より好ましい実施態様において、本発明によるコール酸誘導体、その立体異性体または薬学的に許容される塩では、R3は、水素及びメチルから成る群から選択され；R1, R2, R4, R5, R6, R7, R8, R9, R10, R11, R12, R13, R14, X1, X2, Y1, Y2, Z及びnは、式（I）の化合物で定義した通りである。
【００１０】
最も好ましい実施態様において、本発明によるコール酸誘導体、その立体異性体または薬学的に許容される塩は、式（II）の化合物である：
【化３】
2018519246.tif 000006
【００１１】
より好ましい実施態様において、本発明によるコール酸誘導体、その立体異性体または薬学的に許容される塩では、R1は、水素であり；R3は、水素及びメチルから成る群から選択され；R2, R4, R5, R6, R7, R8, R9, R10, R11, R12, R13, R14, X1, X2, Y1, Y2, Z及びnは、式（I）の化合物で定義した通りである。
【００１２】
最も好ましい実施態様において、本発明によるコール酸誘導体、その立体異性体または薬学的に許容される塩は、式（III）の化合物である：
【化４】
2018519246.tif 000007
【００１３】
最も好ましい実施態様において、本発明によるコール酸誘導体、その立体異性体または薬学的に許容される塩は、式（IV）の化合物である：
【化５】
2018519246.tif 000008
式中、R4は、
【化６】
2018519246.tif 000009
から成る群から選択され；R2, R3, R5, R6, R7, R8, R9, R10, R11, R12, R13, R14, X1, X2, Y1, Y2, Z及びnは、式（I）の化合物で定義した通りである。
【００１４】
より好ましい実施態様の本発明によるコール酸誘導体、その立体異性体または薬学的に許容される塩において、R4が、
【化７】
2018519246.tif 000010
から成る群から選択されるとき、ｎは１であり；
R4が、
【化８】
2018519246.tif 000011
であるとき、ｎは０であり；
R2, R3, R5, R6, R7, R8, R9, R10, R11, R12, R13, R14, X1, X2, Y1, Y2及びZは、式（I）の化合物で定義した通りである。
【００１５】
最も好ましい実施態様において、本発明によるコール酸誘導体、その立体異性体または薬学的に許容される塩は、
【化９】
2018519246.tif 000012
から成る群から選択されるか；または
【化１０】
2018519246.tif 000013
から成る群から選択されるか；または
【化１１】
2018519246.tif 000014
の化合物から選択される。
【００１６】
より好ましい実施態様において、本発明によるコール酸誘導体、その立体異性体または薬学的に許容される塩は、式（V）の化合物である：
【化１２】
2018519246.tif 000015
式中、X1, X2, R2, R8, R9及びR10は、式（I）の化合物で定義した通りである。
【００１７】
最も好ましい実施態様において、本発明によるコール酸誘導体、その立体異性体または薬学的に許容される塩は、
【化１３】
2018519246.tif 000016
から成る群から選択される。
【００１８】
より好ましい実施態様において、本発明によるコール酸誘導体、その立体異性体または薬学的に許容される塩は、式（VI）の化合物である：
【化１４】
2018519246.tif 000017
式中、Y1, Y2, R2, R8, R9, R10, R11, R12, R13及びR14は、式（I）の化合物で定義した通りである。
【００１９】
最も好ましい実施態様において、本発明によるコール酸誘導体、その立体異性体または薬学的に許容される塩は、
【化１５】
2018519246.tif 000018
から成る群から選択される。
【００２０】
より好ましい実施態様において、本発明によるコール酸誘導体、その立体異性体または薬学的に許容される塩は、式（VII）の化合物：
【化１６】
2018519246.tif 000019
または、下記に定義する２つの異性体：
【化１７】
2018519246.tif 000020
を含む、下記に定義の化合物：
【化１８】
2018519246.tif 000021
（式中、R2, R8, R9, R10, R11, R12, R13, R14及びZは、式（I）の化合物で定義した通りである）である。
【００２１】
最も好ましい実施態様において、本発明によるコール酸誘導体、その立体異性体または薬学的に許容される塩は、
【化１９】
2018519246.tif 000022
から成る群から選択される。
【００２２】
他の態様において、本発明は、式（VIII）のコール酸誘導体、その立体異性体または薬学的に許容される塩を提供し、該式（VIII）の化合物は下記に定義する通りである：
【化２０】
2018519246.tif 000023
Zは、酸素及び硫黄原子から成る群から選択され；
R2は、水素、フッ素、臭素、トリフルオロメチル及びC1-8アルキルから成る群から選択される。
【００２３】
より好ましい実施態様において、本発明によるコール酸誘導体、その立体異性体または薬学的に許容される塩は、
【化２１】
2018519246.tif 000024
から成る群から選択される。
【００２４】
他の態様において、本発明は、ステップ：
【化２２】
2018519246.tif 000025
2018519246.tif 000026
（式中、R2, R5, R6, R7, R8, R9, R10, R11, R12, R13, R14, X1, X2, Y1, Y2及びZは、式（I）の化合物で定義した通りである）
を含む、上述のコール酸誘導体、その立体異性体または薬学的に許容される塩の製造方法を提供する。
【００２５】
Pg1は、ヒドロキシル保護基であり、好ましくはC1-4アルキル及びベンジルから成る群から選択され、Pg2は、ヒドロキシル保護基であり、好ましくはC1-4アルキル及びアセチルから成る群から選択される。
【００２６】
他の態様において、本発明は、上述のコール酸誘導体、その立体異性体または薬学的に許容される塩の治療有効量及び薬学的に許容される担体を含有する医薬組成物を提供する。
【００２７】
他の態様において、本発明は、FXR介在性疾患及び状態を予防または治療するための薬剤の製造における、上述のコール酸誘導体、その立体異性体または薬学的に許容される塩、または上述の医薬組成物の使用を提供する。
【００２８】
好ましい実施態様において、FXR介在性疾患及び状態は、循環器疾患、高コレステロール血症、高脂血症及び慢性肝炎、慢性肝疾患、胃腸疾患、ネフローゼ、脳血管疾患、代謝疾患及び癌から成る群から選択される。
【００２９】
より好ましい実施態様において、慢性肝疾患は、原発性肝硬変（PBC）、脳腱黄色腫症（CTX）、原発性硬化性胆のう炎（PSC）、薬物によって引き起こされる胆汁うっ滞、妊娠の肝内胆汁うっ滞症、非経口栄養随伴の胆汁うっ滞（PNAC）、細菌過剰繁殖の胆汁うっ滞または膿血症、自己免疫性肝炎、ウイルス性慢性肝炎、アルコール性肝疾患、非アルコール性脂肪性肝疾患（NAFLD）、非アルコール性脂肪性肝炎（NASH）、肝移植に関連する移植片対宿主病、生体肝移植の再生、先天性肝線維症、総胆管結石症、肉芽形成肝疾患（granulation liver disease）、肝臓内及び肝臓外の悪性腫瘍、シェーグレン症候群、サルコイドーシス、ウィルソン病、ゴーシェ病、ヘモクロマトーシス及びα1-アンチトリプシン欠乏症から成る群から選択される。
【００３０】
より好ましい実施態様において、胃腸疾患は、炎症性腸疾患（IBD）（クローン病及び潰瘍性腸炎を含む）、過敏性腸症候群（IBS）、細菌過剰繁殖、栄養分吸収障害、reflection後の結腸炎及び顕微鏡的大腸炎から成る群から選択される。
【００３１】
より好ましい実施態様において、ネフローゼは、糖尿病性腎症、巣状分節性糸球体硬化症（FSGS）、高血圧性腎症、慢性糸球体炎、慢性移植糸球体症、慢性間質性腎炎及び多発性のう胞腎疾患から成る群から選択される。
【００３２】
より好ましい実施態様において、循環器疾患は、動脈硬化症、動脈硬化症、アテローム性動脈硬化症、脂質異常症、高コレステロール血症及び高トリグリセリド血症から成る群から選択される。
【００３３】
より好ましい実施態様において、代謝疾患は、インシュリン抵抗性、I型糖尿病、II型糖尿病及び肥満症から成る群から選択される。
【００３４】
より好ましい実施態様において、脳血管疾患は、脳卒中である。
【００３５】
より好ましい実施態様において、癌は、結腸直腸癌及び肝臓癌から成る群から選択される。
【００３６】
他の態様において、本発明は、上述のコール酸誘導体、その立体異性体または薬学的に許容される塩、または上述の医薬組成物の治療有効量を投与することを含む、FXR介在性疾患または状態の予防または治療方法を提供する。
【本発明の詳細な説明】
【００３７】
詳細な説明:特に言及しない限り、本明細書及び特許請求の範囲で用いた以下の用語は以下に述べる意味を有する。
【００３８】
「Ｃ１−８アルキル」とは、１〜８個の炭素原子を持つ、直鎖または分岐鎖アルキル基をいう。「アルキル」とは、飽和脂肪族炭化水素基をいう。例えば、メチル、エチル、n-プロピル、イソプロピル、n-ブチル、イソブチル、t-ブチル、sec-ブチル、n-ペンチル、1,1-ジメチルプロピル、1,2-ジメチルプロピル、2,2-ジメチルプロピル、1-エチルプロピル、2-メチルブチル、3-メチルブチル、n-ヘキシル、1-エチル−2-メチルプロピル、1,1,2-トリメチルプロピル、1,1-ジメチルブチル、1,2-ジメチルブチル、2,2-ジメチルブチル、1,3-ジメチルブチル、2-エチルブチル、2-メチルペンチル、3-メチルペンチル、4-メチルペンチル、2,3-ジメチルブチル、n-ヘプチル、2-メチルヘキシル、3-メチルヘキシル、4-メチルヘキシル、5-メチルヘキシル、2,3-ジメチルペンチル、2,4-ジメチルペンチル、2,2-ジメチルペンチル、3,3-ジメチルペンチル、2-エチルペンチル、3-エチルペンチル、n-オクチル、2,3-ジメチルヘキシル、2,4-ジメチルヘキシル、2,5-ジメチルヘキシル、2,2-ジメチルヘキシル、3,3-ジメチルヘキシル、4,4-ジメチルヘキシル、2-エチルヘキシル、3-エチルヘキシル、4-エチルヘキシル、2-メチル−2-エチルペンチル、2-メチル−3-エチルペンチル及びそれらの種々の分岐鎖異性体である。
【００３９】
「シクロアルキル」とは、飽和または部分的に不飽和の単環式または多環式炭化水素置換基をいう。「Ｃ３−８シクロアルキル」とは、３〜８個の炭素原子を持つ、シクロアルキル基をいう。例えば、
単環式シクロアルキルの代表例としては、これらに限定されないが、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロペンテニル、シクロヘキシル、シクロヘキセニル、シクロヘキサジエニル、シクロヘプチル、シクロヘプタトリエニル及びシクロオクチルなどが挙げられる。
多環式シクロアルキルには、スピロ環、縮合環または架橋環を持つシクロアルキルが含まれる。「スピロシクロアルキル」とは、１個の共通の炭素原子(スピロ原子と呼ばれる。)を通じてつながっている環を持つ多環式基であって、１つ以上の環は１つ以上の二重結合を含んでいてもよいが、環のどれも完全に共役したπ電子系を持たないものをいう。共通のスピロ原子の数によって、スピロシクロアルキルはモノ-スピロシクロアルキル、ジ-スピロシクロアルキルまたはポリ-スピロシクロアルキルに分けられる。スピロシクロアルキルの代表例としては、これらに限定されないが、以下のものが含まれる。
【化２３】
2018519246.tif 000027
【００４０】
「縮合シクロアルキル」とは、全て炭素の多環式基であって、系内の各環が隣接した一対の炭素原子を他の環と共有していて、１つ以上の環が１つ以上の二重結合を含んでいてもよいが、環のどれも完全に共役したπ電子系を持たないものをいう。構成する環の数によって、縮合シクロアルキルは二環式、三環式、四環式及び多環式の縮合シクロアルキルに分けられる。縮合シクロアルキルの代表例としては、これらに限定されないが、以下のものが含まれる。
【化２４】
2018519246.tif 000028
【００４１】
「架橋シクロアルキル」とは、全て炭素の多環式基であって、系内のそれぞれ二つの環が２個の連結していない原子を共有しているものをいう。この環は１つ以上の二重結合を持っていてもよいが、完全に共役したπ電子系を持たない。構成する環の数によって、架橋シクロアルキルは二環式、三環式、四環式及び多環式の架橋シクロアルキルに分けられる。架橋シクロアルキルの代表例としては、これらに限定されないが、以下のものが含まれる。
【化２５】
2018519246.tif 000029
シクロアルキルはアリール、ヘテロアリールまたはヘテロシクリルに縮合していてもよく、ここでは親構造と結合する環はシクロアルキルである。代表例としては、これらに限定されないが、インダニル、テトラヒドロナフチル及びベンゾシクロヘプチルアルキルなどが含まれる。
【００４２】
「アルコキシ」とは、−Ｏ−(アルキル)をいい、ここでアルキルは上記で定義した通りである。「Ｃ１-8アルコキシ」とは、１〜８個の炭素を有するアルコキシをいう。代表例としては、これらに限定されないが、メトキシ、エトキシ、プロポキシ及びブトキシなどが含まれる。
【００４３】
「シクロアルコキシ」とは、−Ｏ−(無置換シクロアルキル)をいい、ここでシクロアルキルは上記で定義した通りである。「Ｃ3-8シクロアルコキシ」とは、３〜８個の炭素を有するシクロアルコキシ基をいう。代表例としては、これらに限定されないが、シクロプロポキシ、シクロブチルオキシ、シクロペンチルオキシ及びシクロヘキシルオキシなどが挙げられる。
【００４４】
「ハロＣ１−８アルキル」とは、Ｃ１−８アルキル基をいい、ここでアルキル中の水素がフッ素、塩素、臭素またはヨウ素原子で置換されている。例えば、ジフルオロメチル、ジクロロメチル、ジブロモメチル、トリフルオロメチル、トリクロロメチル及びトリブロモメチルなどである。
【００４５】
「Ｃ(Ｏ)Ｒ１２」とは、Ｒ１２で置換されているカルボニル基をいう。
「Ｐ(Ｏ)Ｒ１２Ｒ１３」とは、Ｒ１２及びＲ１３で置換されているホスホリルをいい、ここでＲ１２及びＲ１３は任意に同一または異なるものである。
【００４６】
「ＰＥ］とは、石油エーテルをいう。
「ＥＡ］とは、酢酸エチルをいう。
「ＴＨＦ］とは、テトラヒドロフランをいう。
「ＤＣＭ］とは、ジクロロメタンをいう。
「ＣＤＩ］とはN,N-カルボニルジイミダゾールをいう。
「ＤＭＦ」とは、N,N-ジメチルホルムアミドをいう。
「ジオキサン」とは、1,4-ジオキサンをいう。
「ＤＭＡＰ］とは、4-ジメチルアミノピリジンをいう。
「ＤＩＰＥＡ］とは、ジイソプロピルエチルアミンをいう。
「ＴＭＳＣｌ］とは、トリメチルクロロシランをいう。
「ＬＤＡ］とは、リチウムジイソプロピルアミドをいう。
「Selectflour」とは、選択的フッ化物試薬をいう。
「ＥＤＣ・ＨＣｌ」とは、1-[3-(ジメチルアミノ)プロピル]-3-エチルカルボジイミド塩酸塩をいう。
「ＴＢＴＵ］とは、O-ベンゾトリアゾール-N,N,N',N'-テトラメチルウロニウムテトラフルオロボレートをいう。
「ＮＢＳ］とは、N-ブロモスクシンイミドをいう。
【００４７】
「任意の」または「任意に」は、続いて記載した出来事や状況が生じても、生じなくてもよいことを意味する。そのような記載は出来事や状況が生じても、生じなくてもよいことを含んでいる。例えば、「アルキルで任意に置換されたヘテロシクリル」は、アルキル基が存在しても、しなくてもよいことを意味する。その記載はアルキルで置換されているヘテロシクリルとアルキルで置換されていないヘテロシクリルの場合を含んでいる。
【００４８】
「置換された」は、基内の１以上の水素原子がそれぞれ対応する数の置換基で独立して置換されていることを意味する。置換基はそれらの化学的に可能な位置にのみ存在することは言うまでもない。当業者は過剰な努力を払うことなく置換が可能かどうかについて判断することができる。例えば、フリーの水素を持つアミノまたはヒドロキシが不飽和結合を持つ炭素原子(例えば、オレフィン)に結合すると不安定である。
【００４９】
「医薬組成物」とは、ここで記載される１以上の化合物またはそれらの生理学的/薬学的な塩またはプロドラッグ及び生理学的/薬学的な担体及び賦形剤などのような他の化学成分の混合物をいう。医薬組成物の目的は生体への化合物投与を容易にすることであり、これにより活性成分の吸収を補助し、生物活性が実現できる。
【００５０】
以下の実施例は本発明を詳細かつ完全に説明するためのものであるが、これらの実施例は本発明の範囲を限定するものと考えてはならない。また、本発明はこれらの実施例に限定されるものでもない。
【００５１】
本発明における化合物の構造は、核磁気共鳴(ＮＭＲ)及び/または液体クロマトグラフィー-質量分析(ＬＣ−ＭＳ)によって同定した。ＮＭＲのケミカルシフトは１０−６(ｐｐｍ)で示した。ＮＭＲはBruker AVANCE-400装置で測定し、測定のための溶媒は重水素化ジメチルスルホキシド(ＤＭＳＯ−ｄ６)、重水素化メタノール(ＣＤ３ＯＤ)及び重水素化クロロホルム(ＣＤＣｌ３)であり、内部標準としてテトラメチルシラン(ＴＭＳ)を用いた。
【００５２】
液体クロマトグラフィー-質量分析(ＬＣ−ＭＳ)の測定はAgilent 1200 インフィニティシリーズ質量分析計で行った。ＨＰＬＣの測定はAgilent 1200DAD高圧液体クロマトグラフィー装置(クロマトグラフィーカラム：Sunfire C18 150 x 4.6 mm)及びWaters 2695-2996 高圧液体クロマトグラフィー装置(クロマトグラフィーカラム：Gimini C18 150 x 4.6 mm)で行った。
【００５３】
薄層シリカゲルクロマトグラフィー(ＴＬＣ)には、Yantai Huanghai HSGF254 またはQingdao GF254シリカゲルプレートを使用した。ＴＬＣに使用したプレートの寸法は0.15 mm 〜 0.2 mmであり、生成物の精製に使用したプレートの寸法は0.4 mm 〜 0.5 mmである。カラムクロマトグラフィー用の担体として、一般にYantai Huanghai 200〜300メッシュのシリカゲルを使用した。
【００５４】
本発明の実施例に用いた原料物質は、公知で購入できるもの、または該技術分野で知られる方法を採用または準用して合成きるものである。
【００５５】
特に言及しない限り、本発明の反応は全て乾燥した窒素またはアルゴン雰囲気下及び磁石による連続な攪拌下で行った。また、溶媒は乾燥したものである。
【実施例１】
【００５６】
(4R)-4-((3R,4R,5S,6R,7R,10R,13R)-6-エチル-4-フルオロ-3,7-ジヒドロキシ-10,13-ジメチルヘキサデカヒドロ-1H-シクロペンタ[a]フェナントレン-17-イル）ペンタン酸の調製
【化２６】
2018519246.tif 000030
工程1:
6α-エチル-ケノデオキシコール酸(OCA, 6.0 g, 14.2 mmol)を4N HClのメタノール溶液に溶解し、還流下で２時間撹拌した。TLC(PE:EA=1:2)により反応の終了が示された後、メタノールを蒸発して除去した。重炭酸ナトリウムの飽和溶液を加え、反応溶液をアルカリ性に調整し、酢酸エチル50 mLで抽出した。有機相を硫酸ナトリウムで乾燥し、減圧下で濃縮し、化合物1-ii(6.0 g, 98%)を得た。
工程2:
化合物1-ii(4.0 g, 9.2 mmol)をトルエン40 mLに溶解した後、炭酸銀(5.0 g, 18.4 mmol)及び珪藻土(10 g)を加えた。反応溶液を還流下で24時間撹拌した。TLC(PE:EA=1:2)により反応の終了が示された後、反応溶液を濾過し、珪藻土を除去した後、酢酸エチルで数回洗浄した。有機相を減圧下で濃縮し、残渣をカラムクロマトグラフィーで精製し、化合物1-iii(1.0 g, 25%)を得た。
工程3:
化合物1-iii(100 mg, 0.21 mmol)をテトラヒドロフラン2 mLに溶解した後、-78℃でTMSCl(200 μL, 1.05 mmol)及びLDA(90 μL, 0.42 mmol)を加えた。混合物を３時間撹拌し、重炭酸ナトリウムの飽和溶液で急冷させ、酢酸エチルで抽出した。有機相を硫酸ナトリウムで乾燥し、減圧下で濃縮し、中間体を得た。生成物をアセトニトリル2 mLに溶解し、selectflour(105 mg, 0.29 mmol)を添加した後、室温で１時間撹拌した。TLC(PE:EA=5:1)により反応の終了が示された後、水10 mLを加え、反応溶液を酢酸エチルで抽出した。有機相を減圧下で濃縮し、化合物1-iv(100 mg)を得た。この粗製品を直接次の工程に用いた。
工程4:
化合物1-iv(300 mg, 0.6 mmol)をジオキサン/H2O (10 mL/0.5 mL)に溶解し、水素化ホウ素ナトリウム(49 mg, 1.3 mmol)を数回に分けて加えた。反応混合物を室温で終夜撹拌した。当量の水素化ホウ素ナトリウムを反応混合物に加え、４時間連続に撹拌した。TLC(PE:EA=5:1)による出発原料の消失が示された後、水10 mLで反応を急冷させ、酢酸エチルで抽出した。有機相を硫酸ナトリウムで乾燥し、カラムクロマトグラフィーで精製し、化合物1-v(40 mg, 15%)を得た。
工程5:
化合物1-v(40 mg, 0.088 mmol)をテトラヒドロフラン1 mLに溶解し、1 N NaOH 1 mLを加えた。反応溶液を室温で２時間撹拌した。TLC(PE:EA=1:1)により反応の終了が示された後、1N HClを加え、反応溶液を酸性に調整し、酢酸エチルで抽出した。有機相を硫酸ナトリウムで乾燥し、カラムクロマトグラフィーで精製し、化合物1(5 mg, 12%)を得た。
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 5.35 - 5.13 (m, 1H), 3.75 (s, 1H), 3.56 - 3.36 (m, 1H), 2.40 - 2.28 (m, 1H), 2.23 - 2.11 (m, 1H), 0.90 (s, 3H), 0.88 - 0.83 (m, 6H), 0.59 (s,3H).
13C NMR (101 MHz, CDCl3) δ 178.50, 99.65 (d, J = 168.8 Hz), 74.89 (d, J = 20.0 Hz), 70.96, 55.78, 50.45, 49.37 (d, J = 13.6 Hz), 42.77, 42.10, 40.33, 39.48, 39.00 (d, J = 9.4 Hz), 35.39, 35.33, 34.44, 30.78, 29.69, 28.15, 26.02 (d, J = 8.5 Hz), 24.28 (d, J = 8.3 Hz), 23.60, 23.28, 20.75, 18.23, 12.48, 11.83.
19F NMR (376 MHz, CDCl3) δ -188.73.
【実施例２】
【００５７】
(4R)-4-((3R,5S,6R,7R,10S,13R)-6-エチル-3,7-ジヒドロキシ-10,13-ジメチルヘキサデカヒドロ-1H-シクロペンタ[a]フェナントレン-17-イル）-N-ヒドロキシペンタンアミドの調製
【化２７】
2018519246.tif 000031
6α-エチル-ケノデオキシコール酸(OCA, 100 mg, 0.24 mmol)をN,N-ジメチルホルムアミド2 mlに溶解し、N,N-カルボニルジイミダゾール(77 mg, 0.48 mmol)を加えた。反応混合物を室温で0.5時間撹拌した。次に、塩酸ヒドロキシルアミン(66 mg, 0.95 mmol)を加え、反応は完了するまでに室温で0.5時間継続した。反応混合物を水で急冷させ、酢酸エチルで３回抽出した。有機相を無水硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過した。濾液を減圧下で濃縮し、残渣をカラムクロマトグラフィーで精製し、化合物2(16 mg, 15%)を得た。
1H NMR (400 MHz, DMSO) δ 4.29 (d, J = 4.2 Hz, 1H), 4.04 (d, J = 5.0 Hz, 1H), 3.50 (brs, 1H), 3.20 -3.10 (m, 2H), 2.05 - 1.61 (m), 1.60 - 0.76 (m), 0.60 (s, 3H).
13C NMR (101 MHz, DMSO) δ 169.99, 71.08, 68.89, 56.02, 50.60, 45.83, 42.50, 41.77, 36.01, 35.70, 35.42, 34.05, 33.14, 31.94, 30.93, 29.68, 29.44, 28.29, 23.57, 22.63, 20.89, 18.76, 12.22, 12.17.
【実施例３】
【００５８】
(4R)-N-シアノ-4-((3R,5S,6R,7R,10S,13R)-6-エチル-3,7--ジヒドロキシ-10,13-ジメチルヘキサデカヒドロ-1H-シクロペンタ[a]フェナントレン-17-イル）ペンタンアミドの調製
【化２８】
2018519246.tif 000032
6α-エチル-ケノデオキシコール酸(OCA, 60 mg, 0.14mmol)、DMAP(21 mg, 0.17 mmol)、EDC・HCl(38 mg, 0.20 mmol)及びNH2CN(12 mg, 0.28 mmol)をジクロロメタン2 mlに溶解し、DIPEA(50 μL, 0.28 mmol)を加えた。反応混合物を完了までに室温で終夜撹拌した。反応溶液をジクロロメタンで希釈し、薄い塩酸及び飽和鹹水で連続に洗浄した。有機相を無水硫酸ナトリウムで乾燥し、 濾過した。濾液を減圧下で濃縮し、残渣をカラムクロマトグラフィーで精製し、化合物3(25 mg, 39%)を得た。
1H NMR (400 MHz, DMSO) δ 4.28 (brs, 1H), 3.50 (brs, 1H), 3.13 (brs, 1H), 2.30 (dd, J = 9.6, 5.1 Hz, 2H), 2.20 (dd, J = 14.1, 5.8 Hz, 2H), 1.96 - 1.59 (m), 1.60 - 0.76 (m), 0.61 (s, 3H).
13C NMR (101 MHz, DMSO) δ 175.28, 71.08, 68.89, 55.92, 50.59, 45.82, 42.53, 41.76, 36.02, 35.70, 35.30, 34.04, 33.14, 32.40, 30.92, 29.44, 28.24, 23.57, 22.63, 20.89, 18.69, 12.18, 12.17.
【実施例４】
【００５９】
(4R)-4-((3R,5S,6R,7R,10S,13R)-6-エチル-3,7-ジヒドロキシ-10,13-ジメチルヘキサデカヒドロ-1H-シクロペンタ[a]フェナントレン-17-イル）-N-メトキシペンタンアミドの調製
【化２９】
2018519246.tif 000033
6α-エチル-ケノデオキシコール酸(OCA, 42 mg, 0.1 mmol)をN,N-ジメチルホルムアミド1 mLに溶解し、トリエチルアミン(0.03 mL, 0.2 mmol)を加えた。次に、氷浴中でエチルクロロホルメート(0.01 mL, 0.11 mmol)を加え、0.5時間撹拌した。メトキシルアミン塩酸塩(9 mg, 0.11 mmol)をN,N-ジメチルホルムアミド1 mLに溶解した後、トリエチルアミン(0.03 mL, 0.2 mmol)を加えた。この溶液を上記の反応混合物に滴下し、反応を室温まで徐々に昇温した。３〜４時間後に反応が完了した。反応溶液を飽和鹹水で洗浄し、酢酸エチルで３回抽出した。有機相を合わせ、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過した。濾液をカラムクロマトグラフィーで濃縮し、化合物4(19.2 mg, 43%)を得た。
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 3.69 (brs, 3H), 3.63 (brs, 1H), 3.40 - 3.27 (m, 1H), 1.96 - 1.02 (m), 1.00 - 0.75 (m), 0.59 (s, 3H).
13C NMR (101 MHz, MeOD) δ 171.86, 71.81, 69.79, 62.89, 55.87, 50.29, 45.57, 42.38, 41.78, 40.19, 39.66, 35.41, 35.26, 33.15, 33.05, 31.50, 29.88, 29.39, 27.89, 23.18, 22.39, 22.11, 20.60, 17.51, 10.87, 10.66.
【実施例５】
【００６０】
((4R)-4-((3R,5S,6R,7R,10S,13R)-6-エチル-3,7-ジヒドロキシ-10,13-ジメチルヘキサデカヒドロ-1H-シクロペンタ[a]フェナントレン-17-イル）ペンタノイルアミノ）メタンスルホン酸の調製
【化３０】
2018519246.tif 000034
6α-エチル-ケノデオキシコール酸(OCA, 42 mg, 0.10 mmol)を乾燥したN,N-ジメチルホルムアミド1 mLに溶解し、氷-水浴中でトリエチルアミン(28 μL, 0.20 mmol)及びエチルクロロホルメート(11 μL, 0.11 mmol)を連続に加えた。反応混合物をこの温度で30分間撹拌した。アミノメタンスルホン酸(12 mg, 0.11 mmol)を添加した後、反応混合物を室温まで昇温し、５時間撹拌した。反応終了後、反応溶液を減圧下で濃縮し、粗製品をカラムクロマトグラフィーで精製し、化合物5(35 mg, 68%)を得た。
1H NMR (400 MHz, MeOD) δ 4.42 - 4.25 (m, 2H), 3.67 (brs, 1H), 3.33 (brs, 1H), 2.48 - 2.31 (m, 1H), 2.28 - 2.13 (m, 1H), 2.11 - 1.70 (m), 1.68 - 0.84 (m), 0.71 (s, 3H).
13C NMR (101 MHz, MeOD) δ 175.42, 71.84, 69.86, 56.00, 55.50, 50.30, 45.57, 42.41, 41.75, 40.19, 39.69, 35.59, 35.45, 35.30, 33.15, 33.07, 32.71, 31.59, 29.93, 27.95, 23.25, 22.51, 22.12, 20.64, 17.68, 11.03, 10.77.
【実施例６】
【００６１】
(((4R)-4-((3R,5S,6R,7R,10S,13R)-6-エチル-3,7-ジヒドロキシ-10,13-ジメチルヘキサデカヒドロ-1H-シクロペンタ[a]フェナントレン-17-イル)ペンタノイルアミノ)メチル)ホスホン酸の調製
【化３１】
2018519246.tif 000035
工程1:
6α-エチル-ケノデオキシコール酸(OCA, 40 mg, 0.046 mmoL)をジクロロメタンに溶解し、炭酸ジ(N-スクシンイミジル)(20 mg, 0.051 mmol)及びトリエチルアミン(40 μL, 0.14 mmol)を連続に加えた。反応混合物を室温で４時間撹拌した。TLC((PE:EA=1:2)による出発原料の消失が示された後、水2 mL及びジクロロメタン10 mLを加えた。有機相を硫酸ナトリウムで乾燥し、減圧下で濃縮し、化合物6-iiを得た。
工程2:
化合物6-iiをDMF/H2O(1 mL/1 mL)に溶解し、炭酸ナトリウム(12 mg, 0.11 mmol)及びアミノメチルリン酸を加えた。反応混合物を室温で24時間攪拌した。TLC(PE:EA=2:1)により反応の終了が示された後、 1N HClを加え、反応溶液を酸性に調整し、酢酸エチル10 mLを加えた。有機相を水2 mLで３回洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥し、減圧下で濃縮し、化合物6(5.4 mg, 22%)を得た。
1H NMR (400 MHz, MeOD) δ 3.55 (s, 1H), 3.48 (d, J = 12.5 Hz, 2H), 3.23 - 3.19 (m, 1H), 0.88 (d, J = 6.4 Hz, 3H), 0.85 - 0.74 (m, 6H), 0.60 (s, 3H).
13C NMR (101 MHz, MeOD) δ 175.22, 71.81, 69.81, 56.01, 50.28, 45.57, 42.36, 41.77, 40.18, 39.67, 36.78, 35.52, 35.39, 35.25, 33.15, 33.04, 32.48, 31.71, 29.87, 27.89, 23.18, 22.36, 22.10, 20.59, 17.52, 10.85, 10.63.
31P NMR (162 MHz, MeOD) δ 20.49 (s).
【実施例７】
【００６２】
(2-((4R)-4-((3R,5S,6R,7R,10S,13R)-6-エチル-3,7-ジヒドロキシ-10,13-ジメチルヘキサデカヒドロ-1H-シクロペンタ[a]フェナントレン-17-イル)ペンタノイルアミノ)エチル)ホスホン酸の調製
【化３２】
2018519246.tif 000036
工程1:
6α-エチル-ケノデオキシコール酸(OCA, 40 mg, 0.046 mmoL)をジクロロメタンに溶解し、炭酸ジ(N-スクシンイミジル)(20 mg, 0.051 mmol)及びトリエチルアミン(40 μL, 0.14 mmol)を連続に加えた。反応混合物を室温で４時間撹拌した。TLC(PE:EA=1:2)により出発原料の消失が示された後、水2 mL及びジクロロメタン10 mLを加えた。有機相を硫酸ナトリウムで乾燥し、減圧下で濃縮し、化合物7-iiを得た。
工程2:
化合物7-iiをDMF/H2O(1 mL/1 mL)に溶解し、炭酸ナトリウム(12 mg, 0.11 mmol)及びアミノエチルリン酸を加えた。反応混合物を室温で24時間攪拌した。TLC(PE:EA=2:1)により反応の終了が示された後、1N HClを加え、反応溶液を酸性に調整した。酢酸エチル10 mLを加え、有機相を水2 mLで３回洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥し、減圧下で濃縮し、化合物7(5.4 mg, 22%)を得た。
1H NMR (400 MHz, MeOD) δ 3.62 - 3.52 (m, 1H), 3.38 - 3.27 (m, 1H), 3.24 - 3.20 (m, 2H), 0.92 - 0.84 (m, 3H), 0.84 - 0.76 (m, 6H), 0.60 (s, 3H).
13C NMR (101 MHz, MeOD) δ 175.31, 71.81, 69.81, 60.13, 55.96, 50.28, 45.58, 42.36, 41.78, 40.19, 39.66, 35.51, 35.39, 35.25, 33.15, 33.05, 31.79, 29.87, 29.32, 27.90, 23.17, 22.34, 22.10, 20.58, 17.52, 13.05, 10.84, 10.61.
31P NMR (162 MHz, MeOD) δ 25.30 (s).
【実施例８】
【００６３】
(4R)-4-((3R,5S,6R,7R,10S,13R)-6-エチル-3,7-ジヒドロキシ-10,13-ジメチルヘキサデカヒドロ-1H-シクロペンタ[a]フェナントレン-17-イル)-N-(2-ヒドロキシエトキシ)ペンタンアミドの調製
【化３３】
2018519246.tif 000037
6α-エチル-ケノデオキシコール酸(OCA, 30 mg, 0.07 mmol)及び化合物8-ii(6.5 mg, 0.085 mmoL)をジクロロメタンに溶解し、TBTU(40 mg, 0.11 mmoL)及びDIPEA(30 μL, 0.21 mmoL)を連続に加えた。反応溶液を室温で終夜撹拌した。TLCにより出発原料の消失が示された後、水を加え、反応溶液を酢酸エチルで抽出した。有機相を減圧下で濃縮し、残渣をカラムクロマトグラフィーで精製し、化合物8(10 mg, 30%)を得た。
1H NMR (400 MHz, MeOD) δ 3.95 - 3.85 (m, 1H), 3.74 (dt, J = 16.4, 4.7 Hz, 2H), 3.67 (s, 1H), 3.35 - 3.32 (m, 1H), 1.00 (d, J = 6.5 Hz, 3H), 0.95 - 0.89 (m, 6H), 0.72 (s, 3H).
13C NMR (101 MHz, MeOD) δ 172.75, 77.45, 71.80, 69.78, 59.02, 55.86, 50.29, 48.46, 45.57, 42.37, 41.77, 40.17, 39.65, 35.40, 35.25, 33.15, 33.04, 31.49, 29.87, 29.32, 27.90, 23.17, 22.36, 22.10, 20.59, 17.47, 10.85, 10.64.
【実施例９】
【００６４】
(3R)-3-((3R,5S,6R,7R,10S,13R)-6-エチル-3,7-ジヒドロキシ-10,13-ジメチルヘキサデカヒドロ-1H-シクロペンタ[a]フェナントレン-17-イル）ブタン-1-スルホン酸の調製
【化３４】
2018519246.tif 000038
工程1:
化合物9-i(1.5 g, 3.58 mmol)をピリジン20 mLに溶解し、無水酢酸15 mLを加えた。反応溶液を室温で終夜撹拌した。TLC(PE:EA=1:1)により反応の終了が示された後、溶媒を蒸発して除去した。残渣をカラムクロマトグラフィーで精製し、化合物9-ii(700 mg, 42%)を得た。
工程2:
化合物9-ii(100 mg, 0.21 mmol)をジクロロメタン2 mLに溶解し、DMF１滴を加えた後、塩化オキサリル(18 μL, 0.21 mmoL)を加えた。反応溶液を室温で１時間撹拌し、その後TLC(PE:EA=5:1)により反応の終了が示された。溶媒を蒸発して除去した後、粗製品をアセトニトリル2 mLに溶解し、化合物9-ii(38 mg, 0.25 mmol)及びDMAP(1 mg, 0.05%)を加えた。混合物を窒素雰囲気下で２時間攪拌した。TLC(PE:EA=5:1)により反応の終了が示された後、カラムクロマトグラフィーにより直接に化合物9-iv(110 mg, 90%)を得た。
工程3:
化合物9-iv(300mg, 0.66 mmol)をエタノール12 mLに溶解し、亜硫酸ナトリウムの水溶液(20%)12 mLを加えた。反応溶液を加熱し、24 時間還流した。TLC(PE:EA=10:1)により反応の終了が示された後、水20 mLを加え、溶液を酸性化した。反応溶液を酢酸エチルで抽出し、硫酸ナトリウムで乾燥し、減圧下で濃縮し、化合物9-v(200 mg, 76%)を得た。
工程4:
化合物9-v(70mg, 0.14mmol)をTHF/H2O(4mL/0.4mL)に溶解し、水素化ホウ素ナトリウム18 mgを添加した後、室温で２時間撹拌した。反応を水で急冷させ、酢酸エチルで抽出した。有機相を減圧下で濃縮し、カラムクロマトグラフィーにより化合物9-vi(30 mg, 50%)を得た。
工程5:
化合物9-vi(30 mg, 0.06mmol)をTHFに溶解し、窒素雰囲気下で水素化リチウムアルミニウム(10 mg, 0.27 mmol)を加えた。生成した溶液を70℃で終夜撹拌した後、水で急冷させ、酢酸エチルで抽出した。有機相を減圧下で濃縮し、カラムクロマトグラフィーにより化合物9(1 mg, 3%)を得た。
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 3.70 - 3.51 (m, 3H), 3.42 - 3.27 (m, 1H), 0.91 - 0.87 (m, 3H), 0.85 - 0.79 (m, 6H), 0.61 (s, 3H).
13C NMR (101 MHz, CDCl3) δ 72.36 70.93, 60.90, 56.38, 50.58 , 45.25 , 42.83 , 41.23 , 40.09 , 39.67 , 39.02 , 35.56 , 34.07 , 33.29, 32.94, 30.70, 29.69 , 28.40 , 23.74, 23.15 , 22.25 , 20.77, 18.84 , 11.77, 11.65.
【実施例１０】
【００６５】
5-((3R)-3-((3R,5S,6R,7R,10S,13R)-6-エチル-3,7-ジヒドロキシ-10,13-ジメチルヘキサデカン-1H-シクロペンタ[a]フェナントレン-17-イル)ブチル)-1,3,4-オキサジアゾール-2(3H)-オンの調製
【化３５】
2018519246.tif 000039
工程1:
メチル6α-エチル-ケノデオキシコール酸塩10-i(96 mg, 0.22 mmol)をエタノール2.5 mLに溶解し、ヒドラジン水和物(0.5 mL, 85%)を加えた。混合物を加熱し、反応がほぼ完了するまでに７時間還流した。室温に冷却した後、混合物を飽和鹹水で洗浄し、酢酸エチルで３回抽出した。有機相を合わせ、無水硫酸ナトリウムで乾燥した後、濾過した。濾液を減圧下で濃縮し、化合物10-ii(87 mg, 91%)を得た。
工程2:
上記粗製品(43 mg, 0.10 mmol)を乾燥したテトラヒドロフラン2 mLに溶解した後、N,N-カルボニルジイミダゾール(19 mg, 0.12 mmol)を加えた。混合物を室温で終夜撹拌した。反応終了後、混合物を飽和鹹水で洗浄し、ジクロロメタンで３回抽出した。有機相を合わせ、無水硫酸ナトリウムで乾燥した後、濾過した。濾液を減圧下で濃縮し、得た粗製品をカラムクロマトグラフィーで精製し、化合物10(20 mg, 43%)を得た。
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 9.64 (s, 1H), 3.65 (brs, 1H), 3.44 - 3.25 (m, 1H), 2.54 (ddd, J = 15.2, 10.5, 4.5 Hz, 1H), 2.38 (ddd, J = 15.7, 9.9, 6.2 Hz, 1H), 2.12 - 1.01 (m), 1.00 - 0.75 (m), 0.59 (s, 3H).
13C NMR (101 MHz, CDCl3) δ 158.71, 155.39, 72.31, 71.14, 55.62, 50.45, 45.17, 42.78, 41.23, 39.98, 39.60, 35.54, 35.51, 35.30, 33.91, 33.28, 31.38, 30.58, 28.22, 23.67, 23.39, 23.14, 22.23, 20.75, 18.25, 11.79, 11.65.
【実施例１１】
【００６６】
(3R,5S,6R,7R,10S,13R)-17-((R)-4-(4H-1,2,4-トリアゾール-3-イル)ブタン-2-イル)-6-エチル-10,13-ジメチルヘキサデカヒドロ-1H-シクロペンタ[a]フェナントレン-3,7-ジフェノールの調製
【化３６】
2018519246.tif 000040
工程1:
6α-エチル-ケノデオキシコール酸(OCA, 42 mg, 0.10 mmol)をN,N-ジメチルホルムアミド1 mLに溶解し、氷-水浴中でトリエチルアミン(28 μL, 0.20 mmol)及びエチルクロロホルメート(11 μL, 0.11 mmol)を連続に加えた。混合物を30分間撹拌した後、2.0 Mアモニアのメタノール溶液(0.10 mL, 0.20 mmol)を加えた。反応混合物を室温まで加熱し、反応終了まで２時間撹拌した。反応溶液を減圧下で濃縮し、粗製品を得た。これを直接次の工程に用いた。
工程2:
N,N-ジメチルホルムアミドジメチルアセタール(2 mL)を上記の粗製品に加え、混合物を加熱し、２時間還流した。反応終了後、混合物を室温に冷却し、減圧下で濃縮した。生成した粗製品を酢酸2 mLに溶解した後、ヒドラジン塩酸塩(21 mg, 0.20 mmol)を加えた。反応溶液を90℃に加熱し、90分間攪拌した。反応溶液を室温まで冷却し、水で急冷させ、酢酸エチルで抽出した。有機相をNaHCO3の飽和水溶液で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過した。濾液を減圧下で濃縮し、残渣をカラムクロマトグラフィーで精製し、化合物11(21 mg, 47%)を得た。
1H NMR (400 MHz, MeOD) δ 3.67 (brs, 1H), 2.94 - 2.80 (m, 1H), 2.73 - 2.66(m, 1H), 2.09 - 0.97 (m), 0.96 - 0.85 (m, 6H), 0.70 (s, 3H).
13C NMR (101 MHz, MeOD) δ 124.72, 71.80, 69.79, 55.87, 50.28, 45.57, 42.38, 41.77, 40.18, 39.66, 35.40, 35.25, 34.19, 33.15, 33.05, 29.88, 29.52, 27.92, 23.18, 22.37, 22.10, 20.59, 17.50, 10.83, 10.64.
【実施例１２】
【００６７】
3-((3R)-3-((3R,5S,6R,7R,10S,13R)-6-エチル-3,7-ジヒドロキシ-10,13-ジメチルヘキサデカヒドロ-1H-シクロペンタ[a]フェナントレン-17-イル）ブチル）-1,2,4-オキサジアゾール-5-(4H)-オンの調製
【化３７】
2018519246.tif 000041
工程1:
6α-エチル-ケノデオキシコールアミド12-i(210 mg, 0.50 mmol)をテトラヒドロフラン5 mlに溶解した後、氷-水浴中でトリエチルアミン(0.56 mL, 4.0 mmol)及びトリフルオロ酢酸無水物(0.28 mL, 2.0 mmol)を連続に加えた。混合物を室温で３時間撹拌した。反応終了後、反応溶液をNaHCO3の飽和水溶液で急冷させ、酢酸エチルで２回抽出した。有機相を減圧下で濃縮し、残渣をテトラヒドロフラン5 mlに溶解した後、0.5 N水酸化ナトリウム水溶液5 mlを加えた。混合物を60℃に加熱し、３時間撹拌した。反応終了後、酢酸エチルで抽出した。有機相を無水Na2SO4で乾燥し、濾過した。濾液を減圧下で濃縮し、残渣をカラムクロマトグラフィーで精製し、シアノ化合物12-ii(167 mg, 83%)を得た。
工程2:
化合物12-ii(20 mg, 0.05 mmol)、塩酸ヒドロキシルアミン(4 mg, 0.055 mmol)及びNaHCO3(5 mg, 0.06 mmol)にメタノール2 mlを加えた。電子レンジ中で混合物を120℃で15時間撹拌した。反応がほぼ半分終了した後、塩酸ヒドロキシルアミン(4 mg, 0.055 mmol)及びNaHCO3(5 mg, 0.06 mmol)を加え、マイクロウェーブ下で反応はほぼ完了するまでに120℃で12時間継続した。反応溶液を減圧下で濃縮し、酢酸エチルで抽出し、飽和鹹水で洗浄し、無水Na2SO4で乾燥した後、濾過した。濾液を減圧下で濃縮した。生成した粗製品を1,4-ジオキサン2 mlに溶解し、CDI(12 mg, 0.075 mmol)を加えた。反応混合物を加熱し、出発原料が消失するまでに２時間還流した。0.1 N水酸化ナトリウムの水溶液3 mlを加え、混合物を50℃に加熱し、１時間撹拌した。室温まで冷却した後、薄い塩酸を加えて中和し、混合物を酢酸エチルで２回抽出した。有機相を飽和鹹水で洗浄し、無水Na2SO4,で乾燥した後、濾過した。濾液を減圧下で濃縮し、残渣をカラムクロマトグラフィーで精製し、化合物12(15 mg, 65%)を得た。
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 10.53 (s, 1H), 3.63 (brs, 1H), 3.46 - 3.30 (m, 1H), 2.62 - 2.48 (m, 1H), 2.47 - 2.35 (m, 1H), 2.11 - 0.71 (m), 0.60 (s, 3H).
13C NMR (101 MHz, CDCl3) δ 161.06, 159.69, 72.46, 70.93, 55.64, 50.58, 45.14, 42.83, 41.19, 40.03, 39.65, 35.51, 35.34, 33.83, 33.30, 31.94, 31.44, 30.38, 30.21, 29.69, 28.30, 23.69, 23.12, 22.24, 22.09, 20.75, 18.26, 11.80, 11.66.
【実施例１３】
【００６８】
5-((3R)-3-((3R,5S,6R,7R,10S,13R)-6-エチル-3,7-ジヒドロキシ-10,13-ジメチルヘキサデカヒドロ-1H-シクロペンタ[a]フェナントレン-17-イル）ブチル）-1,3,4-オキサジアゾール-2-カルボン酸の調製
【化３８】
2018519246.tif 000042
工程1:
メチル6α-エチル-ケノデオキシコール酸塩10-ii(43 mg, 0.10 mmol)をクロロホルム2 mLに溶解した後、ピリジン(12 μL, 0.15 mmol, 1.5 eq.)及び塩化オキサリルモノエチルエステル(13 μL, 0.12 mmol, 1.2 eq.)を連続に加えた。反応混合物を80℃に加熱し、反応がほぼ完了するまでに２時間攪拌した。反応溶液を減圧下で濃縮し、飽和鹹水で洗浄し、酢酸エチルで３回抽出した。有機相を合わせ、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過し、濾液を減圧下で濃縮した。残渣をカラムクロマトグラフィー(CH2Cl2/MeOH 30:1)で精製し、化合物13-ii(22 mg, 43%)を得た。
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 4.31 (q, J = 7.1 Hz, 2H), 3.63 (brs, 1H), 3.40 -3.28 (m, 1H), 2.31 (ddd, J = 14.9, 10.3, 4.8 Hz, 1H), 2.16 (ddd, J = 14.7, 9.6, 4.7 Hz, 1H), 1.94 - 1.00 (m), 1.00 - 0.71 (m, H), 0.58 (s, 3H).
13C NMR (101 MHz, CDCl3) δ 170.45, 158.61, 152.39, 72.34, 70.87, 63.61, 55.75, 50.54, 45.21, 42.77, 41.23, 40.06, 39.66, 35.51, 35.41, 33.90, 33.26, 31.34, 30.88, 30.59, 30.33, 28.23, 23.70, 23.15, 22.25, 20.77, 18.37, 13.97, 11.82, 11.67.
工程2:
化合物13-ii(16 mg, 0.031 mmol)をテトラヒドロフラン1 mLに溶解した後、水酸化ナトリウムの水溶液(0.5 N)1 mLを加えた。反応混合物を60℃に加熱し、２時間撹拌した。反応終了後、反応溶液に希釈された塩酸を加え、反応溶液を酸性に調整した後、酢酸エチルで抽出した。カラムクロマトグラフィー(CH2Cl2/MeOH 5:1)により化合物13(14 mg, 93%)を得た。
1H NMR (400 MHz, MeOD) δ 3.56 (brs, 1H), 2.31 - 2.17 (m, 1H), 2.17 - 2.03 (m, 1H), 1.99 - 0.73 (m), 0.61 (s, 3H).
13C NMR (101 MHz, MeOD) δ 173.80, 160.17, 157.52, 71.81, 69.82, 55.97, 50.28, 45.57, 42.38, 41.77, 40.18, 39.67, 35.40, 35.25, 33.15, 33.05, 31.39, 30.36, 29.87, 27.87, 23.18, 22.37, 22.10, 20.59, 17.50, 10.88, 10.64.
【実施例１４】
【００６９】
5-((2R)-2-((3R,5S,6R,7R,10S,13R)-6-エチル-3,7-ジヒドロキシ-10,13-ジメチルヘキサデカヒドロ-1H-シクロペンタ[a]フェナントレン-17-イル)プロピル)チアゾリジン-2,4-ジオンの調製
【化３９】
2018519246.tif 000043
工程1:
メチル6α-エチル-ケノデオキシコール酸塩1-ii(845 mg, 1.94 mmoL)を乾燥したテトラヒドロフラン10 mLに溶解し、氷-エタノール浴中で混合物を-72℃に冷却した。LDA溶液(4.9 mL, 9.72 mmol, 2 M)を15分間かけて滴下し、トリメチルクロロシラン(1.0 mL, 11.7 mmol)を滴下した後、さらに15分間撹拌した。反応混合物を低温で４時間撹拌した。N-ブロモサクシニミド(692 mg, 3.89 mmol)をテトラヒドロフラン5 mlに溶解した後、反応系に滴下した。滴下終了後、反応混合物を室温まで加熱し、終夜撹拌した。TLCにより反応の終了が示された後、反応溶液を水10 mlで急冷させ、酢酸エチルで３回抽出した。有機相を合わせ、飽和鹹水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過した。濾液を減圧下で濃縮し、粗製品14-iiを得た。これを直接次の工程に用いた。
工程2:
化合物14-iiをエタノール20 mlに溶解した後、チオ尿素(443 mg, 5.82 mmol)及び酢酸ナトリウム(477 mg, 5.82 mmol)を加えた。混合物を還流まで加熱し、終夜撹拌した。室温まで冷却した後、2N塩酸(20 mL)を加え、反応は還流下で24時間継続した。反応溶液を冷却し、減圧下で濃縮し、エタノールを除去した。残渣を酢酸エチルで３回抽出した。有機相を合わせ、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過し、濾液を減圧下で濃縮し、粗製品をカラムクロマトグラフィーで精製し、ジアステレオ異性体14-α及び14-βの混合物(487 mg, 52%)を得た。
14-α: 1H NMR (400 MHz, MeOD) δ 4.13 (dd, J = 7.4, 5.8 Hz, 1H), 3.60 (brs, 1H), 3.31 - 3.20 (m, 1H), 2.30 (ddd, J = 14.3, 5.6, 3.6 Hz, 1H), 1.96 - 1.02 (m), 1.02 - 0.75 (m, 12H), 0.61 (s, 3H).
13C NMR (101 MHz, MeOD) δ 177.04, 172.50, 71.95, 70.57, 56.15, 50.36, 49.34, 45.24, 42.90, 41.33, 40.17, 39.91, 39.56, 35.48, 35.44, 35.22, 33.32, 33.14, 30.17, 28.36, 23.53, 23.06, 22.10, 20.71, 18.76, 11.60, 11.46.
14-β: 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 4.31 (dd, J = 11.3, 3.3 Hz, 1H), 3.70 (brs, 1H), 3.53 - 3.37 (m, 1H), 2.02 - 1.08 (m), 1.08 - 0.78 (m, 12H), 0.67 (s, 3H)。
13C NMR (101 MHz, CDCl3) δ 176.05, 171.36, 72.51, 71.02, 56.25, 50.49, 50.09, 45.10, 42.90, 41.24, 40.20, 39.97, 39.57, 35.54, 35.51, 35.45, 33.60, 33.08, 30.27, 28.39, 23.70, 23.09, 22.21, 20.72, 17.58, 11.81, 11.65.
【実施例１５】
【００７０】
5-((2R)-2-((3R,5S,7R,10S,13R)-3,7-ジヒドロキシ-10,13-ジメチルヘキサデカヒドロ-1H-シクロペンタ[a]フェナントレン-17-イル)プロピル）チアゾリジン-2,4-ジオンの調製
【化４０】
2018519246.tif 000044
工程1:
メチルケノデオキシコール酸塩15-i(348 mg, 0.86 mmoL)を乾燥したテトラヒドロフラン5 mLに溶解し、氷-エタノール浴中で混合物を-72℃に冷却した。LDA溶液(2.1 mL, 4.28 mmol, 2M)を15分間かけて滴下し、トリメチルクロロシラン(0.44 mL, 5.14 mmol)を滴下した後、さらに15分間撹拌した。反応混合物を低温で４時間撹拌した。N-ブロモサクシニミド(305 mg, 1.71 mmol)をテトラヒドロフラン5 mlに溶解した後、上記の反応系に滴下した。滴下終了後、反応を室温まで加熱し、終夜撹拌した。TLCにより反応の終了が示された後、反応溶液を水10 mlで急冷させ、酢酸エチルで３回抽出した。有機相を合わせ、飽和鹹水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過した。濾液を減圧下で濃縮し、粗製品15-iiを得た。これを直接次の工程に用いた。
工程2:
化合物15-iiをエタノール10 mlに溶解した後、チオ尿素(196 mg, 2.58 mmol)及び酢酸ナトリウム(222 mg, 2.58 mmol)を加えた。混合物を還流まで加熱し、６時間撹拌した。室温まで冷却した後、2N塩酸(10 mL)を加え、反応を還流下で終夜継続した。反応溶液を室温まで冷却し、減圧下で濃縮し、エタノールを除去した後、酢酸エチルで３回抽出した。有機相を合わせ、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過し、濾液を減圧下で濃縮した。粗製品をカラムクロマトグラフィーで精製し、ジアステレオ異性体15-α及び15-βの混合物(220 mg, 57%)を得た。
15-α：1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.27 (s, 1H), 4.16 (dd, J = 7.1, 6.1 Hz, 1H), 3.79 (d, J = 2.3 Hz, 1H), 3.48 - 3.35 (m, 1H), 2.32 (ddd, J = 14.3, 5.8, 3.6 Hz, 1H), 2.13 (dd, J = 24.6, 12.8 Hz, 1H), 1.96 - 1.02 (m), 1.02 - 0.73 (m), 0.62 (s, 3H).
13C NMR (101 MHz, CDCl3) δ 175.14, 170.32, 72.01, 68.54, 56.15, 50.45, 49.20, 42.99, 41.47, 40.25, 39.89, 39.64, 39.41, 35.33, 35.25, 35.05, 34.75, 32.87, 30.67, 28.42, 23.74, 22.75, 20.59, 18.89, 11.76.
15-β：1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 9.87 (s, 1H), 4.23 (dd, J = 11.5, 3.8 Hz, 1H), 3.79 (brs, 1H), 3.53 - 3.28 (m, 1H), 2.32 - 0.98 (m), 0.98 - 0.70 (m), 0.60 (s, 3H).
13C NMR (101 MHz, CDCl3) δ 176.19, 171.57, 72.12, 68.62, 56.15, 50.33, 50.09, 42.81, 41.42, 40.26, 39.56, 39.31, 35.45, 35.33, 35.06, 34.78, 32.70, 30.37, 29.69, 28.41, 23.67, 22.74, 20.57, 17.58, 11.78.
【生物試験例１】
【００７１】
FXR受容体結合活性試験（時間分解蛍光検出法TR-FRET法）
FXR受容体結合に対する本発明化合物の効果を試験するために、我々は市販のFXR受容体結合活性アッセイキットを選んで、FXRとその結合タンパク質フラグメントに対する化合物の効果を試験した（LBD構造ドメインがSRC1フラグメントに結合する）（キット供給者：Life Technology Invitrogen Catalog: PV4835; cisbio Catalog: 610SAXLA and 61GSTKLA）。具体的方法は、キットの説明書に記載されていた。操作は以下の通りであった。
１．2xGST-標識 FXR-LBD/anti-GST Eu混合液を必要容量に調製。GST-FXR-LBDの濃度は6nMであり、Euは50nl/ウェルであった。
２．2xビオチン-標識SRC1ストレプトマイシン-アロフィコシアニン（SA-APC）混合液を必要容量に調製。SRC1の濃度は1000 nMであり、ストレプトマイシン-アロフィコシアニンは50 nl/ウェルであった。
３．2x GST-FXR/EuとSRC1/SA-APCを1:1の比率で混合。
４．20 μlのGST-FXR/EuとSRC1/SA-APCの混合液を、試験化合物を含む384-穴プレートに添加した。
５．1000 rpmで1分間遠心分離；室温で180分間インキュベートした。
６．時間分解蛍光検出：EnVision reader
７．分析結果：
（１）665 nmの値を615 nmの値で割り算をした；
（２）アゴニスト率を計算
アゴニスト率＝(X-Min) / (Max-Min) * 100%
・Xは、各濃度に対する665/615値を表す；
・Minは、化合物を添加しないときの665/615値を表す；
・Maxは、基準化合物の665/615値を表す。
本発明化合物の生化学活性を上記試験により測定した。測定したEC50値を下記の表に示した。
2018519246.tif 000045
結論：本発明の実施例化合物は、FXR活性について顕著なアゴニスト効果を有していた。
【生物試験例２】
【００７２】
FXRレポーター遺伝子発現試験
FXR調節遺伝子発現についての試験化合物の効果を分析するために、我々はPromegaのdual luciferase assay system（Promega #E1980）を用いて、過渡的にFXR Gal4レポーター遺伝子フラグメントで遺伝子導入されたHepG2肝細胞腫の細胞株（ATCC #HB-8065）のFXRレポーター遺伝子について化合物の効果を検出した。具体的実験方法は、次の通りである。
１．HepG2細胞培養及び維持
細胞を消化して、10 mlの完全培地中で適切な密度で細胞を育て、次いで37℃、 5% CO2、湿度条件下で24時間培養した。
２．細胞の植え付けとトランスフェクション
トランスフェクション試薬は、Fugene HD（Promega#E231A）であった。
（１）次の表に従ってトランスフェクション混合液を調製
2018519246.tif 000046
（２）チューブ中の混合液を激しく混合し、室温で15分間インキュベートした。
（３）培養皿で細胞を消化した後、計数する；
（４）細胞懸濁液を所望容積の600,000/ml（96穴プレート100μl /ウェル）に希釈する；
（５）必要容量のトランスフェクション混合液を細胞懸濁液に添加して、100 μl/ウェルで蒔く；
（６）37℃ 、5%CO2、湿度条件下で24時間インキュベートする。
３．化合物の処理
（１）10 mMの化合物の母液を調製し、次いで連続的にDMSOで3倍希釈した；
（２）10 μlの化合物を90 μlの完全培地（10x）に添加した；
（３）5 μlの化合物の溶液（21x）を各ウェルに添加した；
（４）37℃、5%CO2、湿度条件下で18時間インキュベートする。
４．デュアル-ルシフェラーゼアッセイ
ホタルルシフェラーゼ及びウミシイタケルシフェラーゼシグナル（Promega #E1980）をPromegaのdual luciferase assay systemで検出した。
５．分析結果
（１）測定値は、ホタルルシフェラーゼシグナル（F）をウミシイタケルシフェラーゼシグナル（R）で割り算して、即ちF/Rで得られた。このデータ処理は、細胞数とトランスフェクション効率に由来する差を排除した。
（２）アゴニスト率を計算
アゴニスト率＝(X-Min) / (Max-Min) * 100%
・Xは、各濃度のF/R値を表す；
・Minは、化合物を添加しないときのF/R値を表す；
・Maxは、基準化合物のF/R値を表す。
（３）GraphPrism 5.0によりEC50を計算
本発明化合物の生化学活性を上記試験により測定し、測定したEC50値を下記表に示した。
2018519246.tif 000047
結論：本発明の実施例化合物は、FXR活性について顕著なアゴニスト効果を有していた。
【生物試験例３】
【００７３】
（ラットにおける薬物動態試験）
本発明の薬物動態試験をラットにおいて行った、ラットにおける陽性コントロールINT-747及び実施例14-βなどの本発明の代表的化合物の薬物動態挙動を研究し、それらの薬物動態特性を評価した。
１．実験プロトコール
（１）Sippr-BK laboratory animal Co. Ltd. Animal Production License No. SCXK (Shanghai) 2008-0016により供給された、３匹の雄SDラットを用いた。
（２）サンプル10 mgを秤量し、10 mlの0.5%CMC-Na水溶液を加え、混合物を十分に振って均一にして1 mg/mlの溶液を作成し、残りの液体サンプルは定量分析用とした。
（３）３匹の雄SDラットに一夜の絶食後、10 ml/kgの容量で10 mg/kgを胃内に投与した。
（４）約0.05 mlの下あご静脈血を投与前及び投与後0.5, 1.0, 2.0, 4.0, 6.0, 8.0, 24.0, 30.0 hに採取して、EDTA-K2試験管に入れた。血液を6000 rpmで5分間遠心分離して血漿を分離し、-80℃で保存した。ラットは投与後4時間で餌を与えた。
２．分析方法
（１）機器と装置:API 4000 トリプル四重極型質量分析計、Applied Biosystems、米国；島津LC-20AD 高速液体クロマトグラフィーシステム、島津、日本
（２）クロマトグラフの条件：クロマトグラフのカラムはPhenomenex gemiu 5 um C18 50X4.6 mmであった；移動相はアセトニトリル：0.1%TFA水溶液（グラジエント溶出）であった；流速（ml/分）は0.8 ml/分であった。
（３）質量分析の条件：
2018519246.tif 000048
３．薬物動態試験結果
（１）結果は、10 mg/kgの陽性コントロールINT-747の胃内投与後の血中濃度のピーク時間tmaxは0.5hであり、ピーク濃度Cmaxは4413ng/mlであり、血中濃度‐時間曲線下面積AUC0-tは9028 ng/ml・hであることを示した。
（２）試験結果は、実施例14-βの化合物10 mg/kgの胃内投与後の血中濃度のピーク時間tmaxは1hであり、ピーク濃度Cmaxは7577 ng/mlであり、血中濃度‐時間曲線下面積AUC0-tは41796 ng/ml・hであることを示した。
ラットにおける薬物動態試験は、試験動物における実施例14-βの本発明化合物の暴露量が陽性コントロールINT-747のものより著しく良いことを示している。
【国際調査報告】
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