(57)【要約】  ウイルス性皮膚疾患、前腫瘍性および腫瘍性の皮膚疾患、および他の新生物の治療のための組成物および方法が開示されている。
2018519331.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
非腫瘍性皮膚病変、前腫瘍性皮膚病変、腫瘍性皮膚病変、膀胱癌およびウイルス媒介皮膚疾患からなる群より選択される状態の治療のための、０．０１％〜１％のレシキモドを含む組成物であって、望ましくない紅斑（ｅｒｙｔｈｅｍａ）および他の炎症反応を制限する一方、前記の組成物は、所望により、局所投与に続いて増強された浸透のために処方されており、前記組成物は、局所特異的な炎症性サイトカイン応答を開始する、組成物。
【請求項２】
前記の前腫瘍性色素性病変（ｐｉｇｍｅｎｔｅｄ  ｌｅｓｉｏｎ）が、不定形メラニン細胞性病変（ａｔｙｐｉｃａｌ  ｍｅｌａｎｏｃｙｔｉｃ  ｌｅｓｉｏｎｓ）、不定形メラニン細胞過形成（ａｔｙｐｉｃａｌ  ｍｅｌａｎｏｃｙｔｉｃ  ｈｙｐｅｒｐｌａｓｉａ）、不定形表皮内メラニン細胞過形成（ａｔｙｐｉｃａｌ  ｉｎｔｒａｅｐｉｄｅｒｍａｌ  ｍｅｌａｎｏｃｙｔｉｃ  ｈｙｐｅｒｐｌａｓｉａ）、不定形表皮内メラニン細胞増殖（ａｔｙｐｉｃａｌ  ｉｎｔｒａｅｐｉｄｅｒｍａｌ  ｍｅｌａｎｏｃｙｔｉｃ  ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ）、光線性角化症（ａｃｔｉｎｉｃ  ｋｅｒａｔｏｓｉｓ）、砒素角化症（ａｒｓｅｎｉｃａｌ  ｋｅｒａｔｏｓｉｓ）、放射線角化症（ｒａｄｉａｔｉｏｎ  ｋｅｒａｔｏｓｉｓ）、ＰＵＶＡ角化症（ＰＵＶＡ  ｋｅｒａｔｏｓｉｓ）、およびボウエノイド丘疹症（ｂｏｗｅｎｏｉｄ  ｐａｐｕｌｏｓｉｓ）、から選択される請求項１の組成物。
【請求項３】
前記の腫瘍性病変が、悪性黒子、表皮内メラノーマ（ｍｅｌａｎｏｍａ  ｉｎ  ｓｉｔｕ）、扁平上皮内細胞癌、ボーエン病、扁平上皮細胞癌、基底細胞癌、皮脂腺癌、腺腫瘍（ｐｏｒｏｃａｒｃｉｎｏｍａ）、乳房外ページェット病、メルケル細胞癌、カポジ肉腫、および皮膚Ｔ細胞リンパ腫である、請求項１に記載の組成物。
【請求項４】
前記の腫瘍性病変が、原発性侵襲性メラノーマ（ｐｒｉｍａｒｙ  ｉｎｖａｓｉｖｅ  ｍｅｌａｎｏｍａ）の指標であり、前記の組成物が、組織を介した浸潤を減少させ、そして、リンパ節への転移を減少させるのに有効である、請求項１の組成物。
【請求項５】
非腫瘍性皮膚病変、異常な表皮ケラチノサイト増殖および脂漏性（ｓｅｂｏｒｒｈｅｉｃ）角化症の治療のための請求項１の組成物。
【請求項６】
単純性ヘルペス感染症１型および２型、伝染性軟属腫、ヒトパピローマウイルス感染症、外陰上皮内腫瘍、膣上皮内腫瘍、尋常性疣贅（ｃｏｍｍｏｎ  ｗａｒｔｓ）および性器疣贅（ｇｅｎｉｔａｌ  ｗａｒｔｓ）から選択された、非腫瘍性の、ウイルスにより誘発される皮膚病変の治療のための、請求項１に記載の組成物。
【請求項７】
嚢内（ｉｎｔｒａｃｙｓｔｉｃ）投与のために製剤化された、膀胱癌の治療のための、請求項１に記載の組成物であって、前記の組成物は、刺激を制限しながら、膀胱上皮への、レシキモドの浸透および送達を増強させる、組成物。
【請求項８】
膀胱癌が、表在癌（ｓｕｐｅｒｆｉｃｉａｌ  ｃａｒｃｉｎｏｍａ）および膀胱上皮内癌（ｂｌａｄｄｅｒ  ｃａｒｃｉｎｏｍａ  ｉｎ  ｓｉｔｕ）から選択される、請求項７に記載の組成物であって、前記の組成物は、リンパ節への転移を削減しながら、筋肉および他の組織を介した浸潤を減少するのに有効である、組成物。
【請求項９】
ｉ．オレイン酸（５０％）およびミリスチン酸イソプロピル（５０％）の、５０ミリリットルのリン酸緩衝生理食塩水および５０ミリリットルのエタノールを含む、１％重量／容量の総濃度の溶液、または、
ｉｉ．ミリスチン酸イソプロピル（５０％）およびラウリル硫酸ナトリウム（５０％）の、５０ミリリットルのリン酸緩衝生理食塩水および５０ミリリットルのエタノールを含む、０．５重量／容量％の総濃度の溶液、または、
ｉｉｉ．オレイン酸（５０％）およびラウリル硫酸ナトリウム（５０％）の、５０ミリリットルのリン酸緩衝生理食塩水および５０ミリリットルのエタノールを含む、０．５重量／容量％の総濃度の溶液、または、
ｉｖ．オレイン酸（３３％）、ミリスチン酸イソプロピル（３３％）およびラウリル硫酸ナトリウム（３３％）の、５０ミリリットルのリン酸緩衝生理食塩水および５０ミリリットルのエタノールを含む、０．５重量／容量％の総濃度の溶液、または、
ｖ．パルミチン酸イソプロピル（５０％）およびオレイン酸ナトリウム（５０％）の、５０ミリリットルのリン酸緩衝生理食塩水および５０ミリリットルのエタノールを含む、２％重量／容量の総濃度の溶液、または、
ｖｉ．ラウリル硫酸ナトリウム（２５％）およびリノール酸（７５％）の、５０ミリリットルのリン酸緩衝生理食塩水および５０ミリリットルのエタノールを含む、１．０重量／容量％の総濃度の溶液、または、
ｖｉｉ．パルミチン酸（５０％）およびラウリン酸イソプロピル（５０％）の、５０ミリリットルのリン酸緩衝生理食塩水および５０ミリリットルのエタノールを含む、２．０重量／容量％の総濃度の溶液、または、
ｖｉｉｉ．オレイン酸（５０％）およびリノール酸（５０％）の、５０ミリリットルのリン酸緩衝生理食塩水および５０ミリリットルのエタノールを含む、１．５重量／容量％の総濃度の溶液、または
ｉｘ．リノール酸（２５％）、オレイン酸（２５％）およびリノール酸イソプロピル（５０％）の、５０ミリリットルのリン酸緩衝生理食塩水および５０ミリリットルのエタノールを含む、０．５重量／容量％の総濃度の溶液、または、
ｘ．オレイン酸ナトリウム（３３％）、オレイン酸（３３％）およびパルミチン酸メチル（３３％）の、５０ミリリットルのリン酸緩衝生理食塩水および５０ミリリットルのエタノールを含む、２．０重量／容量％の総濃度の溶液、または
ｘｉ．５０ミリリットルのリン酸緩衝生理食塩水および５０ミリリットルのエタノールを含む溶液、または、
ｘｉｉ．オレイン酸（１０％）の、５０ミリリットルのリン酸緩衝生理食塩水および５０ミリリットルのエタノールを含む溶液、または、
ｘｉｉｉ．オレイン酸（２％）およびラウリル硫酸ナトリウム（５％）の、５０ミリリットルのリン酸緩衝生理食塩水および５０ミリリットルのエタノールを含む溶液、
からなる成分を更に含む、請求項１に記載の組成物。
【請求項１０】
請求項１に記載の組成物の局所投与を含む、皮膚の腫瘍病変およびウイルスで誘発される皮膚疾患の治療のための方法であって、前記の組成物は、紅斑および炎症から選択される有害な皮膚反応を制限しながら、前記の病変または疾患を低減または排除するのに有効であり、前記組成物は、周囲組織への腫瘍病変組織の浸透およびリンパ節への転移を低減する、方法。
【請求項１１】
前記の皮膚の腫瘍病変が、不定形メラニン細胞性病変（ａｔｙｐｉｃａｌ  ｍｅｌａｎｏｃｙｔｉｃ  ｌｅｓｉｏｎｓ）、不定形メラニン細胞過形成（ａｔｙｐｉｃａｌ  ｍｅｌａｎｏｃｙｔｉｃ  ｈｙｐｅｒｐｌａｓｉａ）、不定形表皮内メラニン細胞過形成（ａｔｙｐｉｃａｌ  ｉｎｔｒａｅｐｉｄｅｒｍａｌ  ｍｅｌａｎｏｃｙｔｉｃ  ｈｙｐｅｒｐｌａｓｉａ）、不定形表皮内メラニン細胞増殖（ａｔｙｐｉｃａｌ  ｉｎｔｒａｅｐｉｄｅｒｍａｌ  ｍｅｌａｎｏｃｙｔｉｃ  ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ）および光線性角化症（ａｃｔｉｎｉｃ  ｋｅｒａｔｏｓｉｓ）から選択される、前腫瘍性色素性病変（ｐｒｅｃａｎｃｅｒｏｕｓ  ｐｉｇｍｅｎｔｅｄ  ｌｅｓｉｏｎ）である、請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
前記の病変が、悪性黒子、表皮内メラノーマ（ｍｅｌａｎｏｍａ  ｉｎ  ｓｉｔｕ）、扁平上皮内細胞癌から選択され、前記の組成物が、局部組織浸潤を減少させるのに有効である、請求項１０に記載の方法。
【請求項１３】
前記の病変が、原発性侵襲性メラノーマ、基底細胞癌、または扁平上皮癌の指標であり、前記の組成物が、組織を介する浸潤を減少させ、およびリンパ節への転移を減少させるのに有効である、請求項１０に記載の方法。
【請求項１４】
前記の病変が、ボーエン病、扁平上皮内細胞癌、砒素角化症、放射線角化症、ＰＵＶＡ角化症、ボウエノイド丘疹症、皮脂腺癌、腺腫瘍（ｐｏｒｏｃａｒｃｉｎｏｍａ）、乳房外ページェット病、メルケル細胞癌および皮膚Ｔ細胞リンパ腫から選択される、請求項１０に記載の方法。
【請求項１５】
表皮ケラチノサイト増殖、および脂漏性角化症の治療のための、請求項１０に記載の方法。
【請求項１６】
前記のウイルス誘発性皮膚疾患が、伝染性軟属腫、ＨＰＶ感染、外陰上皮内新生物、膣上皮内新生物、尋常性疣贅（ｃｏｍｍｏｎ  ｗａｒｔｓ）およびＨＳＶ感染、から選択される、請求項１０に記載の方法。
【請求項１７】
請求項１に記載の組成物の嚢内（ｉｎｔｒａｃｙｓｔｉｃ）投与を含む、膀胱腫瘍の治療のための方法であって、前記の組成物は、刺激を制限しながら、レシキモドの膀胱上皮への透過および送達を増強し、前記の組成物は、周囲の筋肉組織への腫瘍の浸潤、および、リンパ節への転移を低減する、方法。
【請求項１８】
前記の膀胱腫瘍が、表在性膀胱癌（ｓｕｐｅｒｆｉｃｉａｌ  ｂｌａｄｄｅｒ  ｃａｎｃｅｒ）および膀胱上皮内癌（ｂｌａｄｄｅｒ  ｃａｒｃｉｎｏｍａ  ｉｎ  ｓｉｔｕ）である、請求項１７に記載の方法。
【請求項１９】
局所または嚢内（ｉｎｔｒａｃｙｓｔｉｃ）投与によっては到達することができない深部組織腫瘍を、腫瘍内投与のために製剤化された請求項１に記載の組成物を含む治療方法であって、前記の製剤が、望ましくない系の副作用（ｓｙｓｔｅｍ  ｓｉｄｅ  ｅｆｆｅｃｔｓ）を低減しつつ、腫瘍組織における、腫瘍内のレシキモドの浸透および保持を増強し、前記の製剤が、所望により、炎症性サイトカインの分泌を増強する、非特異的局所炎症を開始する、方法。
【請求項２０】
前記の腫瘍が、転移性上皮癌、扁平上皮細胞癌、基底細胞癌、肺癌、膀胱癌、前立腺癌、脳腫瘍、乳癌、膵臓癌、卵巣癌、肝臓癌、胃癌、間葉系悪性腫瘍、肉腫、リンパ腫および進展した皮膚Ｔ細胞リンパ腫、から選択される、請求項１９に記載の方法。
【請求項２１】
前記の治療が、さらに、抗−ＰＤ１、抗−ＰＤＬ１、抗−ＣＴＬＡ−４抗体、抗ＣＤ１３７抗体、アゴニストのＣＤ４０抗体、ＣＤ１３４（抗−ＯＸ４０）アゴニストおよびＰＬＸ３３９７から選択される、少なくとも一つの免疫調節剤の全身投与を含む、請求項１０、請求項１７、または請求項１９に記載の方法。
【請求項２２】
さらに、インターフェロンγの全身投与を含む、請求項１０、請求項１７、または請求項１９に記載の方法。
【請求項２３】
さらに、全身的な抗ＰＤ−１抗体の有無において、局所放射線の投与を含む、請求項１０、請求項１７、または請求項１９に記載の方法。
【請求項２４】
さらに、光力学治療の適用を含む、請求項１０、請求項１７、または請求項１９に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本出願は、２０１６年６月３０日に出願された米国仮出願６２／１８６，９３１号の優先権を主張する、そして、その全開示は、完全に記載されているように、参照により本明細書に組み込まれる。
【０００２】
［発明の分野］
本発明は、皮膚科学および腫瘍学の分野に関する。
より具体的には、本発明は、非腫瘍性皮膚疾患、前腫瘍性皮膚障害、皮膚および他の組織の原発性および転移性新生物の治療用の、レシキモド含有組成物を提供する。
【０００３】
［発明の背景］
本発明が関係する技術水準を説明するために、いくつかの刊行物および特許文献が明細書全体にわたって引用されている。
これらの引用の各々は、完全に記載されているように、参照により本明細書に組み込まれる。
【０００４】
皮膚腫瘍は、腫瘍、非メラノーマ皮膚腫瘍、基底細胞腫瘍および扁平上皮細胞腫瘍（ｓｑｕａｍｏｕｓ  ｃｅｌｌ  ｃａｒｃｉｎｏｍａ）の最も一般的なタイプの腫瘍の、最も一般的な診断形である。
【０００５】
非メラノーマ皮膚腫瘍は、しばしば外科的切除で治療される。限られた有効性または費用のために、非外科的治療は、少数の患者でのみ行われる。メラノーマは、世界中で最も多くの皮膚腫瘍関連死をもたらす。メラノーマは、男性においては、５番目に最も一般的な腫瘍であり、そして、女性においては、６番目に最も一般的な腫瘍である。
それは、２５〜２９歳の若い成人、特に、若い女性における腫瘍の最も一般的な形態である。
【０００６】
表皮内メラノーマ（Ｉｎ  ｓｉｔｕ  ｍｅｌａｎｏｍａ）は、メラノーマの非常に初期の段階である。皮膚の最上層（表皮）に腫瘍細胞があるが、それらはすべて、それらが進行を開始する表皮に含まれる。表皮内メラノーマを治癒することにより、侵襲性（ｉｎｖａｓｉｖｅ）メラノーマを予防することができる。
【０００７】
アジュバントとして、または外科治療の代わりに、局所化皮膚（ｃｕｔａｎｅｏｕｓ）メラノーマの治療のために多くの治療法が検討されている。
【０００８】
前腫瘍性皮膚病変は、悪性病変よりも一般的である。これらの前腫瘍性病変は、まだ腫瘍ではないが経時的に腫瘍になる可能性のある皮膚の変化の指標（ｉｎｄｉｃａｔｉｖｅ）である。
【０００９】
不定形メラノサイト病変、不定形メラノサイト過形成（ｍｅｌａｎｏｃｙｔｉｃ  ｈｙｐｅｒｐｌａｓｉａ）および不定形表皮内メラノサイトを含む、前腫瘍性色素性病変（Ｐｒｅ−ｃａｎｃｅｒｏｕｓ  ｐｉｇｍｅｎｔｅｄ  ｌｅｓｉｏｎｓ）は、高い増殖レベルを示す。これらの病変のいくつかは、メラノーマに進行する可能性を有すると考えられている。
【００１０】
病変の分類は、典型的には、病変の視覚的または病理学的検査に基づく。
悪性腫瘍への進行を阻止または阻害するために、そのような前腫瘍性病変のための新しい治療プロトコールが緊急に必要とされている。
【００１１】
皮膚と同様に、膀胱もまた、腫瘍の変異可能性を有する表面内層（ｓｕｒｆａｃｅ  ｌｉｎｉｎｇ）を有する。
早期膀胱癌は、また、表在性膀胱癌（ｓｕｐｅｒｆｉｃｉａｌ  ｂｌａｄｄｅｒ  ｃａｎｃｅｒ）または非筋肉性侵襲性膀胱癌（ｎｏｎｍｕｓｃｌｅ  ｉｎｖａｓｉｖｅ  ｂｌａｄｄｅｒ  ｃａｎｃｅｒ）とも呼ばれる。これは、腫瘍細胞が膀胱の内層にのみ存在することを意味する。
ＣＩＳ（表皮内腫瘍（ｃａｒｃｉｎｏｍａ  ｉｎ  ｓｉｔｕ））においては、腫瘍細胞は、依然として、膀胱の膀胱内層（ｂｌａｄｄｅｒ  ｌｉｎｉｎｇ）にのみ存在する。それらは、少し、苔のように見える平らなシートの形状である。ＣＩＳは、膀胱内層全体において、所々で発生する可能性があり、そして、細胞は非常に異常である。
【００１２】
この腫瘍は、膀胱のより深い層に広がる高いリスクと関連する。初期段階の膀胱癌は、膀胱へのＢＣＧワクチン投与で治療することができる。ＣＩＳを治療することにより、侵襲性腫瘍を阻止することができる。
しかしながら、早期膀胱癌に対する現在の非外科的治療は非常に限られている。
【００１３】
腫瘍性病変が進行すると、それらは、転移性になり、そして、化学療法、放射線療法および免疫療法が、手術に加えて使用され得る。
【００１４】
レシキモド（Ｒｅｓｉｑｕｉｍｏｄ）は、構造がイミキモドに関連しているイミダゾキノリンファミリーの１つのメンバーであり、Ｔｏｌｌ様受容体７および８のアゴニストとして作用する免疫応答調節因子である。
しかし、イミキモドは、Ｔｏｌｌ様受容体７（ＴＬＲ７）のみを介してシグナルを伝達するため、イミキモドとは明らかに異なる。
イミキモドは、一群の皮膚疾患の治療法としてＦＤＡから承認されている。イミキモドと比較して、レシキモドは、ＩＦＮ−α、ＴＮＦ−α、ＩＬ−１、ＩＬ−６、ＩＬ−８およびＩＬ−１２のより強力な誘導物質である。
【００１５】
レシキモドは、Ｔ細胞活性化において、イミキモドよりも１０〜１００倍強力であることが示されているが、臨床使用のためにまだ、ＦＤＡから、承認されていない。
【００１６】
レシキモドは、動物モデルにおいて、抗原特異的ＣＤ８＋Ｔ細胞応答の効率的な誘導をもたらす、外因性抗原の交差提示（ｃｒｏｓｓ−ｐｒｅｓｅｎｔａｔｉｏｎ）を促進することが示されている。
動物実験の結果は、免疫細胞の局所活性化を誘導し、炎症性の（ｐｒｏｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ）サイトカインの産生を刺激し、そして、有効な細胞応答の活性化をもたらす、樹状細胞（ｄｅｎｄｒｉｔｉｃ  ｃｅｌｌｓ）による抗原提示（ａｎｔｉｇｅｎ−ｐｒｅｓｅｎｔａｔｉｏｎ）を増強する能力を含む、樹状細胞（ｄｅｎｄｒｉｔｉｃ  ｃｅｌｌｓ）を活性化するレシキモドの能力を確認した。
【００１７】
放射線照射と一緒に、レシキモドを全身送達すると、リンパ腫モデルにおいて、耐久性のある抗腫瘍免疫応答をプライミング（ｐｒｉｍｅｓ）する（Ｄｏｖｅｄｉ  ＳＪ  ２０１３，Ｂｌｏｏｄ  １２１（２）：２５１−９）。
【００１８】
レシキモドは、光線性角化症（ａｃｔｉｎｉｃ  ｋｅｒａｔｏｓｉｓ）、皮膚Ｔ細胞リンパ腫（ｃｕｔａｎｅｏｕｓ  Ｔ  ｃｅｌｌ  ｌｙｍｐｈｏｍａ）および単純ヘルペスウイルス（ｈｅｒｐｅｓ  ｓｉｍｐｌｅｘ  ｖｉｒｕｓ）を治療するための臨床試験に使用されてきたが、混合した結果を示した。
他の従来技術におけるレシキモドの使用は、一貫性のない結果を伴う転移性メラノーマを含む、様々な疾患を治療するための、ワクチンアジュバント剤としての投与が含まれる。
【００１９】
レシキモドは、メラノーマの治療におけるＮＹ−ＥＳＯ−１タンパク質ワクチンのためのワクチンアジュバントとして使用されてきた（Ｓａｂａｄｏ  ＲＬ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｒｅｓ．２０１５）。
【００２０】
臨床免疫療法における大きな進歩は、阻害性免疫受容体およびそのリガンド（総称して免疫チェックポイント）の遮断であった。
具体的には、ＣＴＬＡ４およびＰＤ１（またはＰＤＬ１）の遮断は、多くの異なる高度悪性腫瘍において、臨床的有効性を示した。
しかし、応答率は、依然として、臨床試験では比較的低く、そして、免疫チェックポイントの遮断を、他の薬剤と組み合わせる、アンメットの臨床上の必要性がある。
【００２１】
［発明の概要］
本発明によれば、有効量のレシキモドを含む組成物および製剤、ならびに非腫瘍性、前腫瘍性および腫瘍性病変の治療のためのその使用方法が開示される。
本発明の好ましい実施形態において、種々の病気の治療のために、０．０１％〜１％のレシキモドを含む組成物が提供される。
【００２２】
本発明の製剤は、紅斑、炎症または全身性サイトカインの放出などの有害反応を制限する一方、局所（局所、嚢内（ｉｎｔｒａｃｙｓｔｉｃ）および腫瘍内（ｉｎｔｒａｔｕｍｏｒａｌ））の投与のために製剤化され、レシキモドの透過および送達を増強し、そして、有益な局所免疫反応を促進する。
それらは、望ましくない副作用をも低減させると同時に、レシキモドの治療効果を最大限に高めるように、特に、処方されるので、局所、嚢内および腫瘍内製剤は、異なる。
【００２３】
特に好ましい実施形態では、前腫瘍（ｐｒｅｃａｎｃｅｒｏｕｓ）病変は、光線性角化症（ａｃｔｉｎｉｃ  ｋｅｒａｔｏｓｉｓ）、不定型接合メラニン細胞性病変（ａｎ  ａｔｙｐｉｃａｌ  ｊｕｎｃｔｉｏｎａｌ  ｍｅｌａｎｏｃｙｔｉｃ  ｌｅｓｉｏｎｓ）、不定型メラニン細胞過形成（ａｔｙｐｉｃａｌ  ｍｅｌａｎｏｃｙｔｉｃ  ｈｙｐｅｒｐｌａｓｉａ）、不定型表皮内メラニン細胞過形成（ａｔｙｐｉｃａｌ  ｉｎｔｒａｅｐｉｄｅｒｍａｌ  ｍｅｌａｎｏｃｙｔｉｃ  ｈｙｐｅｒｐｌａｓｉａ）、不定型表皮内メラニン細胞増殖（ａｔｙｐｉｃａｌ  ｉｎｔｒａｅｐｉｄｅｒｍａｌ  ｍｅｌａｎｏｃｙｔｉｃ  ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ）から選択される。
【００２４】
別の実施形態では、腫瘍性病変は、基底細胞腫瘍（ｂａｓａｌ  ｃｅｌｌ  ｃａｒｃｉｎｏｍａ）、扁平上皮細胞腫瘍（ｓｑｕａｍｏｕｓ  ｃｅｌｌ  ｃａｒｃｉｎｏｍａ）、悪性黒子（ｌｅｎｔｉｇｏ  ｍａｌｉｇｎａ）、表皮内メラノーマ（ｍｅｌａｎｏｍａ  ｉｎ  ｓｉｔｕ）およびメラノーマである。
【００２５】
新生物は、また、ボーエン病（Ｂｏｗｅｎ’ｓ  ｄｉｓｅａｓｅ）、扁平表皮内細胞癌（ｓｑｕａｍｏｕｓ  ｃｅｌｌ  ｃａｒｃｉｎｏｍａ  ｉｎ  ｓｉｔｕ）、砒素角化症（ａｒｓｅｎｉｃａｌ  ｋｅｒａｔｏｓｉｓ）、放射線角化症（ｒａｄｉａｔｉｏｎ  ｋｅｒａｔｏｓｉｓ）、ＰＵＶＡ角化症（ＰＵＶＡ  ｋｅｒａｔｏｓｉｓ）、ボウエノイド丘疹（ｂｏｗｅｎｏｉｄ  ｐａｐｕｌｏｓｉｓ）、皮脂腫瘍（ｓｅｂａｃｅｏｕｓ  ｃａｒｃｉｎｏｍａ）、腺腫瘍（Ｐｏｒｏｃａｒｃｉｎｏｍａ）、乳腺外パジェット病（ｅｘｔｒａｍａｍｍａｒｙ  Ｐａｇｅｔ’ｓ  ｄｉｓｅａｓｅ）、メルケル細胞癌（Ｍｅｒｋｅｌ  ｃｅｌｌ  ｃａｒｃｉｎｏｍａ）、カポジ肉腫および皮膚Ｔ細胞リンパ腫（ｃｕｔａｎｅｏｕｓ  Ｔ  ｃｅｌｌ  ｌｙｍｐｈｏｍａ）から選択することができる。
【００２６】
該組成物はまた、異常な表皮ケラチノサイト増殖および脂漏性（ｓｅｂｏｒｒｈｅｉｃ）角化症の治療のために有効性を有する。
この組成物はまた、外陰部の上皮内新生組織形成（ｖｕｌｖａｒ  ｉｎｔｒａｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ  ｎｅｏｐｌａｓｉａ）、膣の上皮内新生組織形成（ｖａｇｉｎａｌ  ｉｎｔｒａｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ  ｎｅｏｐｌａｓｉａ）、治療が困難な尋常性疣贅（ｃｏｍｍｏｎ  ｗａｒｔｓ）、伝染性軟属腫（ｍｏｌｌｕｓｃｕｍ  ｃｏｎｔａｇｉｏｓｕｍ）およびＨＳＶ感染が含まれる、ＨＰＶ感染のようなウイルス性皮膚感染（ｖｉｒａｌ  ｓｋｉｎ  ｉｎｆｅｃｔｉｏｎｓ）の治療に有効である。
【００２７】
代替的な実施形態では、腫瘍病変は、膀胱上皮内癌（ｂｌａｄｄｅｒ  ｃａｒｃｉｎｏｍａ  ｉｎ  ｓｉｔｕ）および早期膀胱癌（表在性膀胱癌または非筋侵襲性膀胱癌）である。
【００２８】
別の態様では、レシキモドは、基底細胞癌、扁平上皮癌、表在性膀胱癌、悪性黒子、表皮内メラノーマ、原発性侵襲性メラノーマおよび皮膚Ｔ細胞リンパ腫の治療のために、インターフェロンγと組み合わせて投与される。
基底細胞癌、扁平上皮癌、表在性膀胱癌、悪性黒子、表皮内メラノーマ、原発性侵襲性メラノーマおよび皮膚Ｔ細胞リンパ腫の治療のための、放射線療法と組み合わせた、レシキモドの使用も、本発明の態様を形成する。
【００２９】
基底細胞癌、扁平上皮癌、表在性膀胱癌、悪性黒子、表皮内メラノーマ、原発性侵襲性メラノーマおよび皮膚Ｔ細胞リンパ腫の治療のための光力学（ｐｈｏｔｏｄｙｎａｍｉｃ）療法と組み合わせた、レシキモドの使用もまた、開示される。
【００３０】
本発明の特に好ましい実施形態では、上述のように、組成物の局所または嚢胞内（ｉｎｔｒａｃｙｓｔｉｃ）に投与することを含む、皮膚および膀胱の、非腫瘍性の、前腫瘍性の、および腫瘍性の新生物を治療するための方法が提供され、その組成物は、前記の病変を低減または排除するのに有効である。
【００３１】
この方法は、メラノーマを含む、深部の腫瘍または転移性腫瘍の治療のためのものである場合、レシキモドの腫瘍内注射、または、たとえば、抗ＰＤ１、抗ＰＤＬ１、抗ＣＴＬＡ−４抗体、ＣＤ１３７（ウレルマブ）、ＣＤ４０、ＣＤ１３４（抗−ＯＸ４０）アゴニスト、および、ＭＤＳＣを阻害することができる他の免疫調節小分子（ＰＬＸ３３９７など）を含む、１つまたは複数の免疫調節因子の全身投与と共にレシキモドを腫瘍内に投与することが好ましい。
【００３２】
腫瘍内製剤およびその使用方法は、転移性上皮癌、扁平上皮癌、基底細胞癌、肺癌、膀胱癌、前立腺癌、脳腫瘍、乳癌、膵臓癌、卵巣癌、肝臓癌、胃癌、他の上皮悪性腫瘍細胞および軟組織肉腫のような間質系悪性腫瘍細胞、ならびにリンパ腫および進行性皮膚Ｔ細胞リンパ腫のような造血悪性腫瘍を含み、これらに限定されず、様々な病理学的症状の治療に、有利に使用することができる。
【００３３】
本発明の特に好ましい実施形態では、上述のように、組成物単独、または、抗ＰＤ１、または抗ＰＤＬ１、または、抗ＣＴＬＡ−４抗体、または、ＣＤ１３７（ウレルマブ）、ＣＤ４０、ＣＤ１３４（抗−ＯＸ４０）のアゴニスト、およびＭＤＳＣを阻害することができる他の免疫調節小分子（ＰＬＸ３３９７など）の全身投与と組み合わせた、腫瘍内投与を含む、深部または転移性腫瘍の処置のための方法が提供され、その組成物は、前記の病変を低減または排除するのに有効である。
【図面の簡単な説明】
【００３４】
【図１】図１Ａ−１Ｉ。レシキモドは、Ｔｙｒ：：ｃｒｅＥＲ、ＢＲＡＦｃａマウスの腫瘍増殖を阻害する。図１Ａ）治療計画。図１Ｂ）ビヒクル（ｎ＝５）で処置したマウスの大きな色素性病変。図１Ｃ）レシキモド（ｎ＝８）で処置したマウスにおける残留皮膚色素性沈着。図１Ｄ）処置前のマウスにおける色素性病変。図１Ｅ）レシキモド治療後１月目の同じ病変。図１Ｆ）ビヒクルで処理した腫瘍の組織学。真皮（ｄｅｒｍｉｓ）に、多くの腫瘍細胞がある。図１Ｇ）レシキモドで治療した腫瘍の組織。生存している腫瘍細胞は見られず、そして、色素沈着を伴う多くのマクロファージが真皮（ｄｅｒｍｉｓ）に見られる。図１Ｈ）レシキモド治療の１月後の病変の組織。生存している腫瘍細胞は見られず、そして、色素沈着したマクロファージのみが、真皮に見られる。図１Ｉ）ビヒクルまたはレシキモドで処置したマウスの腫瘍増殖曲線。＊はｐ＜０．０５を示す。ｂ−ｅにおける、棒は６ミリメートルを示す。ｆ−ｈにおける棒は、２００μｍを示す。
【図２】図２Ａ〜２Ｌ。レシキモド（Ｒｅｓｉｑｕｉｍｏｄ）は、Ｔｙｒ：：ｃｒｅＥＲ、ＢＲＡＦｃａ、Ｐｈｄ２ｌｏｘ／ｌｏｘマウスにおける、メラノーマ増殖を阻害する。図２Ａ）処置計画。図２Ｂ）ビヒクルで処置したマウスの大きな腫瘍（ｎ＝１０）。図２Ｃ）腫瘍で満たされた皮膚の下側（Ｕｎｄｅｒｓｉｄｅ）。図２Ｄおよび２Ｅ）対照マウスにおけるメラノーマの組織学。真皮は腫瘍細胞で満たされている。図２Ｆ）ほぼ完全な応答（ｎ＝１０）を有する、レシキモド処置マウス。図２Ｇ）腫瘍がなくなった皮膚の下側（Ｕｎｄｅｒｓｉｄｅ）。図２Ｈ）正常に見える、処置されたマウスの皮膚の組織。図２Ｉ）色素を有するマクロファージが、処理されたマウスの真皮（ｄｅｒｍｉｓ）に存在する。矢印はマクロファージを指す。図２Ｊ）腫瘍増殖曲線。図２Ｋ）対照マウスにおける表皮内メラノーマ。矢印は、表皮および毛包における、腫瘍細胞を指す。図２Ｌ）処置されたマウスにおける、正常に見える表皮。＊はｐ＜０．０５を示す。ｂ、ｃ、ｆ、およびｇにおける、棒は６ミリメートルを示す。ｄ、ｅ、ｈ、およびＩにおける、棒は２００μｍを示す。ｋおよびｌにおける、棒は１０μｍを示す。
【図３】図３Ａ〜３Ｉ。レシキモド（Ｒｅｓｉｑｕｉｍｏｄ）は、Ｔｙｒ：：ｃｒｅＥＲ、ＢＲＡＦｃａ、Ｐｔｅｎｌｏｘ／ｌｏｘマウスにおけるメラノーマ増殖を阻害する。図３Ａ）処置計画。図３Ｂ）対照処置をした、マウスの代表的な画像（ｎ＝１５）。図３Ｃ）レシキモド処置した、マウスの代表的な画像（ｎ＝１５）。図３Ｄ）対照マウスにおける、メラノーマの組織。矢印は、骨格筋を指す。図３Ｅ）処置したマウスにおける、メラノーマの組織。矢印は、骨格筋を指す。図３Ｆ）腫瘍体積に対する、レシキモドの効果。図３Ｇ）マウスの生存に対する、レシキモド（ｒｅｓｉｑｕｉｍｏｄ）の効果。図３Ｈ）対照マウスにおける表皮内メラノーマ。矢印は、表皮における腫瘍細胞を指す。図３Ｉ）処置したマウスにおける正常に見える表皮。＊は、ｐ＜０．０５を示す。棒は、図３Ｂおよび図３Ｃにおいては、６ミリメートル、図３Ｄおよび図３Ｅにおいては、４００ミクロン、および図３Ｈおよび図３Ｉにおいては、５０ミクロンを指す。
【図４】図４Ａ〜４Ｉ。レシキモド処置後の腫瘍免疫微小環境の再プログラミング。図４Ａ）処置計画。図４Ｂ）陽性リンパ節に対する、レシキモドの効果（ｎ＝５）。図４Ｃ）は、腫瘍の厚さに対する、レシキモドの効果。図４Ｄ）腫瘍内ＣＤ４５＋細胞に対する、レシキモドの効果。図４Ｅ）腫瘍内Ｍ−ＭＤＳＣに対する、レシキモドの効果。図４Ｆ）ＣＤ８＋細胞における、腫瘍内ＧｒａｍＢ  ＭＦＩに対する、レシキモドの効果。図４Ｇ）腫瘍内ＧｒａｍＢ＋ＣＤ８＋Ｔ細胞に対する、レシキモドの効果。図４Ｈ）腫瘍内のＧｒａｍＢ＋ＣＤ８＋ｋｉ−６７＋細胞に対する、レシキモドの効果。図４Ｉ）腫瘍内のＰＤ１＋ＣＤ８＋細胞に対する、レシキモドの効果。すべての測定値を、対照と比較した。＊はｐ＜０．０５を示す。
【図５】図５Ａ〜５Ｅ。レシキモドは、Ｂ１６メラノーマモデルにおけるメラノーマ増殖を阻害する。図５Ａ）処置計画。図５Ｂ）メラノーマ増殖に対する、レシキモドの効果（ｎ＝１０）。図５Ｃ）マウスの生存に及ぼす、レシキモドの効果。図５Ｄ）対照（左）およびレシキモド（右）で処置したマウス由来のメラノーマの組織。処置したマウスには、より多い炎症細胞が存在する。矢印は炎症細胞を指す。図５Ｅ）対照マウスと比較した、処置したマウスからの腫瘍組織における、サイトカインおよびケモカインのｍＲＮＡ発現の倍率変化（Ｆｏｌｄ  ｃｈａｎｇｅｓ）。＊はｐ＜０．０５を示す。棒は、２５μｍを指す。
【図６Ａ】図６Ａ〜６Ｃ。ＣＤ８＋Ｔ細胞は、メラノーマに対するレシキモドの効果を媒介する。図６Ａ）Ｒａｇ−１欠損マウスに対する、レシキモドの効果。生存曲線は、これらのマウスにおいて、レシキモドの効果が消滅したことを示した。
【図６Ｂ】図６Ａ〜６Ｃ。ＣＤ８＋Ｔ細胞は、メラノーマに対するレシキモドの効果を媒介する。図６Ｂ）ＣＤ８−枯渇マウスに対する、レシキモドの効果。生存曲線は、これらのマウスにおいて、レシキモドの効果が消滅したことを示した。
【図６Ｃ】図６Ａ〜６Ｃ。ＣＤ８＋Ｔ細胞は、メラノーマに対するレシキモドの効果を媒介する。図６Ｃ）刺激後のＴ細胞によるサイトカイン放出に対する、レシキモドの効果。
【図７】図７Ａ〜７Ｇ。レシキモドと抗ＰＤ１療法の併用は、メラノーマの増殖を劇的に減少させた。図７Ａ）処置計画。図７Ｂ−７Ｅ）対照ビヒクル（図７Ｂ）、抗ＰＤ１（図７Ｃ）、レシキモド（図７Ｄ）、および、レシキモド＋抗ＰＤ１（図７Ｅ）で処置したマウスの代表的な画像。図７Ｆ）メラノーマ増殖に対する治療の効果（各グループｎ＝５）。図７Ｇ）リンパ節転移に対する治療の効果。＊はｐ＜０．０５を示す。＊＊はｐ＜０．０１を示す。棒は、６ミリメートルを示す。
【図８Ａ】図８Ａ〜８Ｂ。エタノールおよびリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）との組み合わせからなる局所製剤中のレシキモド（ｒｅｓｉｑｕｉｍｏｄ）の安定性および溶解性。図８Ａ）２週間経過した、代表的な５０：５０のエタノール：リン酸緩衝生理食塩水（ｐｂｓ）の局所製剤の、異なる組成でのレシキモド製剤のＨＰＬＣクロマトグラム。クロマトグラムは、レシキモドは、基本配合物中の種々の濃度において、Ｃ１８カラム上で、単一ピークおよび安定した保持時間の存在によって示されるように、分解または副産物の生成なしに、基本処方において、安定で、そして溶解性であることを示す。すべてのデータは、以下の勾配条件で収集する：（ｉ）１６ｎＭ；（ｉｉ）１２．７ｎＭ；（ｉｉｉ）９．５ｎＭ；（ｉｖ）６．４ｎＭ；（ｖ）１．６ｎＭおよび（ｖｉ）０．１６ｎＭのレシキモド（ｒｅｓｉｑｕｉｍｏｄ）を含む１０mＬの注入に対して、０〜５分：１００％水；５〜１５分：０〜１００％アセトニトリル勾配；１５−２０分：１００％アセトニトリル；２０〜２５分：１００％〜０％アセトニトリル勾配；２５−３０分：１００％水。
【図８Ｂ】図８Ａ〜８Ｂ。エタノールおよびリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）との組み合わせからなる局所製剤中のレシキモド（ｒｅｓｉｑｕｉｍｏｄ）の安定性および溶解性。図８Ｂ）製剤中に存在するレシキモドのモル数の関数として、レシキモドの曲線下の面積を示す検量線。強い統計的相関は、さらに、リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）：エタノール処方において、レシキモドが安定であり、可溶であることを示す。
【図９Ａ】図９Ａ〜９Ｄ。化学的浸透増強剤を含有する局所製剤からのレシキモドの増強された送達。図９Ａ）６時間での、５０：５０のリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）：エタノール（対照と表示）、１０％（容量／容量）のオレイン酸を化学増強剤として含む処方（処方１と表示）およびラウリル硫酸ナトリウム（５％）およびオレイン酸（２％）を化学増強剤として含有する処方（処方２と表示）からのレシキモドのヒト皮膚透過性。これらのデータは、化学的浸透増強剤が、６時間で、ヒトの皮膚を横断して、レシキモドが局所的に送達されることを、非常に加速することができ、それによって、生物活性の標的に、レシキモドが送達される、総局所投与量の減量および／または遅延時間の短縮を齎すことができることを示す。
【図９Ｂ】図９Ａ〜９Ｄ。化学的浸透増強剤を含有する局所製剤からのレシキモドの増強された送達。図９Ｂ）６時間で、３つの異なる処方から、皮膚を横断して送達されるレシキモドの量。
【図９Ｃ】図９Ａ〜９Ｄ。化学的浸透増強剤を含有する局所製剤からのレシキモドの増強された送達。図９Ｃ）１８時間での、３つの異なる処方における、ヒト皮膚を横断するレシキモドの透過が示される。これらのデータは、基本処方と比較した、浸透増強剤の存在下での、レシキモドの、ヒト皮膚を横断する、増強された浸透および増強された送達を示す。
【図９Ｄ】図９Ａ〜９Ｄ。化学的浸透増強剤を含有する局所製剤からのレシキモドの増強された送達。図９Ｄ）１８時間で、３つの異なる処方から皮膚を横断して送達されるレシキモドの量。
【図１０】図１０。局所製剤のアジュバント潜在力。効果が変わる局所浸透増強剤でもある、１０の独自の処方から測定した、皮膚組織からのサイトカイン  インターロイキン１α（ＩＬ−１α）の分泌。
【００３５】
ＩＬ−１αは、代表的なサイトカインであり、そして、自然免疫応答に関与する組織炎症のマーカーである。
【発明の詳細な説明】
【００３６】
皮膚腫瘍は、通常、表面上に存在する。
表皮内メラノーマ（ｍｅｌａｎｏｍａ  ｉｎ  ｓｉｔｕ）は、依然として表皮（ｅｐｉｄｅｒｍｉｓ）に限定され、そして、典型的に、ゆっくりと増殖する。
そのような病変は、侵襲性メラノーマに進行するまでに数年かかることがある。
侵襲性メラノーマは通常、表皮成分を有するが、もはや、メラノーマ細胞は真皮を侵襲するので、表皮に限らない。転移性腫瘍は、通常深く位置する。レシキモドの効果は、機能的な樹状細胞およびＴ細胞の存在を必要とするため、現在、インビトロで、レシキモドの腫瘍死滅効果の機能を試験することは現実的ではない。
【００３７】
本発明によれば、我々は、自然の免疫系を持つ、複数のインビボ色素性病変のトランスジェニックマウスモデル（ｉｎ  ｖｉｖｏ  ｐｉｇｍｅｎｔｅｄ  ｌｅｓｉｏｎ  ｔｒａｎｓｇｅｎｉｃ  ｍｏｕｓｅ  ｍｏｄｅｌｓ）において、および同系メラノーママウスモデル（ｓｙｎｇｅｎｅｉｃ  ｍｅｌａｎｏｍａ  ｍｏｕｓｅ  ｍｏｄｅｌ）において、レシキモドが機能することを実証するデータを提供する。
【００３８】
我々のデータは、レシキモドが、母斑（ｎｅｖｕｓ）における、メラノサイト腫瘍細胞、不定形の表皮内メラノサイトの増殖およびメラノーマを阻害または死滅させるのに有効であることを示した。
さらに、レシキモドで処理されたマウスもまた、有意に、リンパ節の転移性メラノーマが減少し、レシキモドは、メラノーマ細胞の転移を阻害することができることを示した。
加えて、我々は、全身の抗ＰＤ−１療法との組み合わせで、レシキモドが、有意に、メラノーマモデルにおける抗ＰＤ−１治療効果を増強することを示した。
【００３９】
重要なことに、我々のデータは、レシキモドが、腫瘍におけるＣＤ４５陽性白血球の流入を誘導し、そして、レシキモドの効果は、ＣＤ８＋Ｔ細胞の活性化および骨髄由来のサプレッサー細胞の阻害の両方を介して媒介されることを示す。私たちの発見の範囲は広い。
【００４０】
腫瘍に対するレシキモドの効果は、ＣＤ８Ｔ細胞の活性化、および骨髄由来サプレッサー細胞の阻害を介して媒介されるため、レシキモドの効果は、メラノサイト腫瘍に限定されない。他の上皮腫瘍および皮膚Ｔ細胞リンパ腫の治療にも有効である。
メラノーマを含む転移性腫瘍は、しばしば皮下組織（ｓｕｂｃｕｔｉｓ）、またはその他の内部部位にあるので、レシキモドの局所適用が、これらの部位に到達する可能性は低い。
【００４１】
後期腫瘍／メラノーマ患者における、レシキモドの治療効果をさらに改善するために、本発明者らは、注射形態のレシキモドを開発した。
我々は、高用量のレシキモド注射でさえも、マウスにおいて有意な毒性を引き起こさないことを見出し、したがって注射可能なレシキモドが安全であることを示した。従って、本発明は、レシキモド単独、または、抗ＰＤ１、または抗ＰＤＬ１、または抗ＣＴＬＡ−４抗体またはＣＤ１３７（ウレルマブ）、ＣＤ４０、ＣＤ１３４（抗ＯＸ−４０）のアゴニストおよびＭＤＳＣを阻害することができる他の免疫調節小分子（たとえばＰＬＸ３３９７）と組み合わせた、新規な注射用製剤の使用を提供する。
【００４２】
この製剤は、単独または組み合わせて、およびその使用方法は、制限なく、転移性上皮癌（ｍｅｔａｓｔａｔｉｃ  ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ  ｃａｎｃｅｒ）、扁平上皮癌（ｓｑｕａｍｏｕｓ  ｃｅｌｌ  ｃａｒｃｉｎｏｍａ）、基底細胞癌（ｂａｓａｌ  ｃｅｌｌ  ｃａｒｃｉｎｏｍａ）、肺癌、膀胱癌、前立腺癌、脳腫瘍、乳癌、膵臓癌、肝臓癌、胃癌、他の上皮悪性腫瘍細胞および軟部組織肉腫（ｓｏｆｔ  ｔｉｓｓｕｅ  ｓａｒｃｏｍａｓ）のような間葉系悪性腫瘍細胞（ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌ  ｍａｌｉｇｎａｎｔ  ｔｕｍｏｒ  ｃｅｌｌｓ）、ならびに、Ｂ細胞リンパ腫、白血病および進行性皮膚Ｔ細胞リンパ腫のような造血悪性腫瘍（ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃ  ｍａｌｉｇｎａｎｃｙ）、を含む、多種多様な病理学的症状を有利に治療するために使用されることができる。
【００４３】
注射用製剤は、化学成分の使用による、増強された浸透／浸潤および／または免疫アジュバント活性（ａｄｊｕｖａｎｃｙ）を達成するためのいくつかの利点を提供する。
米国特許公報第２００４／０２６５３５１Ａ１号（参照により本明細書に組み込まれる）は、組織環境内にレシキモドのような薬物を局在化させ、そして保持する方法を教示する。これは、精製油（大豆油、ベニバナ油、トリオレインおよびヒマシ油、分別ヤシ油、ミグリオール８１０，８１２、ネオビー（Ｎｅｏｂｅｅ）ＭＳ、カプテックス（Ｃａｐｔｅｘ）３００）およびＦＤＡが承認した皮膚充填剤（ヒドロキシルアパタイト、ヒアルロン酸、ポリ−Ｌ−乳酸、コラーゲン、ヒドロゲル）を注射用製剤の成分として使用することにより達成される。
【００４４】
本発明は、単一成分または複数成分を使用した注射の部位から、この末端に向けての、レシキモドの拡散を遅らせるために、たとえば、ビヒクル、ゲルおよび担体を含む、化合物の新規な適用を含む。
【００４５】
１つのアプローチでは、レシキモドは、局所および注射可能な投与のための、安定性および溶解性を保証する溶媒で、処方される（図８参照）。
注目すべきことに、化学的増強剤を含めることは、活性成分であるレシキモドが、局所的に、腫瘍マトリックス（大部分、細胞と細胞外マトリックス成分から成る）を介して、拡散することを促進する、このことは、図９に示すデータから明らかである。
【００４６】
さらに、化学的増強剤は、炎症の因子であり、かつ、自然免疫応答のメディエーターであるサイトカインの分泌を促進することによって、免疫応答の開始および促進に資する、局所的な炎症を引き起こす能力を有する。
【００４７】
自然免疫応答は、適応免疫応答と相乗作用し、そして、腫瘍および悪性細胞に対する全体的な活性に有益であることはよく知られている。これは、皮膚における、インターロイキン１α（ＩＬ−１α）の分泌を開始する化学物質の能力に関する、図１０に示されたデータから導ける。ＩＬ−１αは、組織における非特異的な炎症の既知のマーカーであり、そして、アジュバント活性の代理的測定を提供する。
【００４８】
局所的な炎症および組織浸透増強を誘導することができる部分には、スルホキシド、アルコール、ポリオール、アルカン、脂肪酸、エステル、アミンおよびアミド、テルペン、界面活性剤、シクロデキストリン、Ｃ２またはＣ３アルコール類およびそれ以上、Ｃ３またはＣ４ジオールまたはそれ以上、ＤＭＳＯ、ＤＭＦ、ＤＭＡおよび関連する溶媒、１−ｎ−ドデシル−シクロアザシクロヘプタン−２−オン、Ｎ−メチル−ピロリドンおよびＮ−（２−ヒドロキシエチル）ピロリドンおよび広範な種類のアゾン、およびそれらの混合物（２成分、３成分またはそれ以上）を含み、さもなければ、それらのクレームされた活性以外の方法で、薬理学的および化学的に不活性であり、そして、化学的に安定であり、強力で、非感受性であり（ｎｏｎｓｅｎｓｉｔｉｚｉｎｇ）、非光毒性であり（ｎｏｎｐｈｏｔｏｔｏｘｉｃ）、毛穴を詰まらせにくい（ｎｏｎｃｏｍｅｄｏｇｅｎｉｃ）、多種の広範囲のクラスの化学物質が含まれるが、これらに限定されない。
【００４９】
そのような薬剤が使用される典型的な濃度範囲は、使用される特定の薬剤に依存するが、リン酸緩衝生理食塩水中のエタノール０．５〜５０％容量／容量を含有する基本処方中であり、その溶解度によって制約されない限り、０．０１〜５０％重量／容量の範囲内である。
【００５０】
以下の定義は、本発明の理解を容易にするために提供される。これらは、本発明を、一切、限定するものではない。
【００５１】
「アゴニスト（ａｇｏｎｉｓｔ）」とは、細胞活性を誘導する、受容体（たとえば、ＴＬＲ）と結合することができる化合物をいう。アゴニストは、受容体に直接結合するリガンドであってもよい。あるいは、アゴニストは、たとえば、
（ａ）受容体に直接結合する別の分子と複合体を形成する、または
（ｂ）さもなければ、他の化合物が受容体に直接結合するように、他の化合物の修飾を齎すことによって、間接的に受容体と結びついてもよい。
【００５２】
アゴニストは、特定のＴＬＲのアゴニスト（たとえば、ＴＬＲ６アゴニスト）、またはＴＬＲの特定の組み合わせ（たとえば、ＴＬＲ７／８アゴニスト−ＴＬＲ７およびＴＬＲ８の両方のアゴニスト）として言及することができる。
【００５３】
「改善する（Ａｍｅｌｉｏｒａｔｅ）」とは、範囲、重症度、頻度、および／または特定の状態に特徴的な症状の可能性または臨床的徴候における、任意の低減を指す。
【００５４】
「細胞媒介免疫活性（Ｃｅｌｌ−ｍｅｄｉａｔｅｄ  ｉｍｍｕｎｅ  ａｃｔｉｖｉｔｙ）」は、たとえば、少なくとも１つのＴＨ１サイトカインの産生の増加などの細胞媒介免疫応答の一部とみなされる生物学的活性を指す。
【００５５】
「免疫細胞」とは、免疫系の細胞、すなわち、免疫応答が、生得的、後天性、体液性、または細胞媒介性であるかどうかにかかわらず、免疫応答の生成または維持に直接または間接的に関与する細胞、を意味する。
【００５６】
「徴候（Ｓｉｇｎ）」または「臨床的徴候（ｃｌｉｎｉｃａｌ  ｓｉｇｎ）」は、患者以外の人が見つけることができる特定の状態に関する客観的な身体所見を指す。
【００５７】
「症状（Ｓｙｍｐｔｏｍ）」は、疾患または患者の状態の任意の主観的証拠を指す。
【００５８】
「治療する（Ｔｒｅａｔ）」またはその変形とは、状態に関連する症状または徴候を、ある程度、軽減、進行制限、改善または解決することを指す。
【００５９】
本明細書で使用される、「浸透増強剤（Ｐｅｎｅｔｒａｔｉｏｎ  ｅｎｈａｎｃｅｒ）」および「浸潤増強（ｐｅｒｍｅａｔｉｏｎ  ｅｎｈａｎｃｅｍｅｎｔ）」は、それぞれ、すなわち、薬剤が、皮膚または腫瘍などの組織を介して浸透する速度および程度を増加させるような、薬剤および薬剤に対する組織の浸透性の増加、に関する。
このような増強剤の使用を介して影響された増強された浸透は、たとえば、拡散細胞装置（ｄｉｆｆｕｓｉｏｎ  ｃｅｌｌ  ａｐｐａｒａｔｕｓ）または表皮内での測定（ｉｎ  ｓｉｔｕ  ｍｅａｓｕｒｅｍｅｎｔｓ）を用いて、動物またはヒトの皮膚または腫瘍組織を介する、薬物の拡散速度を測定することによって、観察することができる。
【００６０】
拡散細胞は、Ｍｅｒｒｉｔｔら（「皮膚の浸透ための拡散装置」、Ｊ．ｏｆ  Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  Ｒｅｌｅａｓｅ、１（１９８４）１６１−１６２頁）に記載されている。
【００６１】
本明細書で使用される「アジュバント活性（Ａｄｊｕｖａｎｃｙ）」は、免疫系の活性化因子によって引き起こされる、非特異的炎症または特異的免疫応答に影響を及ぼす能力を指す。
【００６２】
本明細書中で使用される場合、治療に対する「抗腫瘍応答（ａｎｔｉ−ｃａｎｃｅｒ  ｒｅｓｐｏｎｓｅ）」という用語は、治療に対する腫瘍のいかなる応答、好適には、治療の開始後の腫瘍重量および／または容量における変化を指す。
【００６３】
過剰増殖性（Ｈｙｐｅｒｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｖｅ）障害の応答は、ＣＴ、ＰＥＴ、マンモグラフィー、超音波または触診により測定されることによって、局所または全身介入後の腫瘍の大きさを、初期サイズおよび寸法と比較して、評価することができる。
応答は、生検または外科的切除後の腫瘍のキャリパー測定（ｃａｌｉｐｅｒ  ｍｅａｓｕｒｅｍｅｎｔ）または病理学的検査によっても評価され得る。
応答は、腫瘍の容量のパーセント変化のような定量的に、または、「病理的完全応答（ｐａｔｈｏｌｏｇｉｃａｌ  ｃｏｍｐｌｅｔｅ  ｒｅｓｐｏｎｓｅ）」（ｐＣＲ）、「臨床的完全寛解（ｃｌｉｎｉｃａｌ  ｃｏｍｐｌｅｔｅ  ｒｅｍｉｓｓｉｏｎ）」（ｃＣＲ）、「臨床的部分寛解（ｃｌｉｎｉｃａｌ  ｐａｒｔｉａｌ  ｒｅｍｉｓｓｉｏｎ）」（ｃＰＲ）、「臨床的安定疾患（ｃｌｉｎｉｃａｌ  ｓｔａｂｌｅ  ｄｉｓｅａｓｅ）」（ｃＳＤ）、「臨床的進行疾患（ｃｌｉｎｉｃａｌ  ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｖｅ  ｄｉｓｅａｓｅ）」（ｃＰＤ）または他の定性的基準のような定性的に、記録することができる。
【００６４】
過剰増殖性障害応答の評価は、治療の開始後早期に、たとえば、数時間後、数日後、または数週間後、または、好ましくは、数ヶ月後に、行うことができる。
【００６５】
応答評価の典型的なエンドポイントは、化学療法の終了時または残留腫瘍細胞および／または腫瘍床（ｔｕｍｏｒ  ｂｅｄ）の外科的切除時である。これは、典型的には、治療開始後３ヶ月である。
【００６６】
本明細書中で使用される、「腫瘍のサイズの減少（ｄｅｃｒｅａｓｉｎｇ  ｔｈｅ  ｓｉｚｅ  ｏｆ  ａ  ｔｕｍｏｒ）」は、腫瘍のサイズの減少として定義される。このような効果は、腫瘍における腫瘍細胞の増殖数を減少させることによって（たとえば、腫瘍細胞の細胞分割を減少することによって）および／または既存の腫瘍細胞の細胞毒性（ｃｙｔｏｔｏｘｉｃｉｔｙ）または細胞死（アポトーシス）を誘導することによって、達成することができる。それによって、腫瘍増殖は停止または防止される。
【００６７】
本明細書中で使用される、用語「腫瘍を阻害する（ｉｎｈｉｂｉｔｉｎｇ  ｃａｎｃｅｒ）」または「腫瘍細胞の増殖を阻害する（ｉｎｈｉｂｉｔｉｎｇ  ｃａｎｃｅｒ  ｃｅｌｌ  ｇｒｏｗｔｈ」は、望ましくないまたは不適切な、細胞増殖の阻害を含むことが意図される。阻害は、急速増殖を含む増殖の阻害を含むことが意図される。
【００６８】
「腫瘍細胞の増殖を阻害する（ｉｎｈｉｂｉｔｉｎｇ  ｃａｎｃｅｒ  ｃｅｌｌ  ｇｒｏｗｔｈ）」という用語は、また、被験体における腫瘍の増殖の防止または被験体における既存の腫瘍の増殖の低下を含む、腫瘍増殖の阻害を包含することを意図する。阻害はまた、ある部位から別の部位への腫瘍の転移の阻害であり得る。
【００６９】
腫瘍の少なくとも１つの症状が緩和され、停止され、減速され、または予防される場合、腫瘍は「阻害（ｉｎｈｉｂｉｔｅｄ）」される。
本明細書中で使用される場合、腫瘍の再発または転移が、低減、遅延、遅延、または防止される場合、腫瘍はまた、「阻害（ｉｎｈｉｂｉｔｅｄ）」される。
【００７０】
本明細書で使用される場合、「ａ」、「ａｎ」、「ｔｈｅ」、「少なくとも１つ」および「１つまたはそれ以上」は互換的に使用される。
【００７１】
したがって、たとえば、「ａｎ」免疫応答調節剤（ＩＲＭ）の化合物を含む医薬組成物は、医薬組成物が少なくとも１つのＩＲＭ化合物を含むことを意味すると解釈することができる。
【００７２】
本明細書中で使用される場合、用語「被験体」は、ヒト、マウス、ラット、ウサギ、非ヒト霊長類、または任意の他の哺乳動物を含むが、これらに限定されない、任意の動物を意味する。一実施形態では、被験体は霊長類である。別の実施形態において、被験体はヒトである。
【００７３】
また、本明細書において、エンドポイントによる数値範囲の記載は、その範囲内に包括される全ての数を含む（たとえば、１〜５は、１、１．５、２、２．７５、３、３．８０、４、５等を含む。）。
また、本発明のレシキモドを含有する組成物は、１〜５％の間を含んでいてもよい。
【００７４】
本明細書で使用される場合、「相乗的」という用語は、一緒に行われると、個々の治療法の相加的効果よりも効果的である、本明細書に記載の治療剤の組み合わせを指す。治療法の組み合わせの相乗効果（たとえば、治療剤の組合せ）は、たとえば、増殖性疾患のような疾患または障害を有する被験体に対する、１つまたはそれ以上の治療剤の、より低用量の使用、および／または、薬剤のより少ない頻度での投与を可能にする。
１つまたはそれ以上の治療剤の、より低用量を利用する、および／または、より少ない頻度で治療剤を投与する能力は、疾患または障害の処置における治療の有効性を低下させることなく、被験体への薬剤の投与に伴う毒性を低減する。
さらに、相乗効果は、たとえば、増殖性疾患のような疾患または障害の防止、管理または治療における、薬剤の改善された有効性をもたらし得る。
最後に、治療法の組み合わせの相乗効果は、いずれかの治療剤単独の使用に関連する、有害なまたは望ましくない副作用を回避または低減し得る。
【００７５】
本明細書で使用される場合、用語「組み合わせて（ｉｎ  ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ）」は、２つ以上の治療剤の使用を指す。
「組み合わせて（ｉｎ  ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ）」という用語の使用は、治療剤が、たとえば、増殖性障害のような疾患または障害を有する被験体に投与される、順序を制限しない。
このような本明細書に記載の化合物である第一の治療剤は、たとえば、癌のような増殖性障害のような疾患または障害を有する被験体に、抗腫瘍剤のような第二の治療剤の投与に、先立って（たとえば、５分前、１５分前、３０分前、４５分前、１時間前、２時間前、４時間前、６時間前、１２時間前、２４時間前、４８時間前、７２時間前、９６時間前、１週間前、２週間前、３週間前、４週間前、５週間前、６週間前、８週間前、または１２週間前）、それと同時に、またはその後（たとえば、５分後、１５分後、３０分後、４５分後、１時間後、２時間後、４時間後、６時間後、１２時間後、２４時間後、４８時間後、７２時間後、９６時間後、１週間後、２週間後、３週間後、４週間後、５週間後、６週間後、８週間後、または１２週間後）投与することができる。
【００７６】
免疫応答調節剤（「ＩＲＭ」）には、抗ウイルス活性および抗腫瘍活性を含むがこれらに限定されない、強力な免疫調節活性を有する化合物が含まれる。特定のＩＲＭは、サイトカインの産生および分泌を調節する。たとえば、特定のＩＲＭ化合物は、たとえば、Ｉ型インターフェロン、ＴＮＦ−α、ＩＬ−１、ＩＬ−６、ＩＬ−８、ＩＬ−０、ＩＬ−１２、ＭＩＰ−１および／またはＭＣＰ−１のような、サイトカインの産生および分泌を調節する。
別の例として、特定のＩＲＭ化合物は、ＩＬ−４およびＩＬ−５のような、特定のＴＨ２サイトカインの産生および分泌を阻害することができる。
さらに、いくつかのＩＲＭ化合物は、ＩＬ−１およびＴＮＦを抑制すると言われている（米国特許番号６，５１８，２６５号）。
【００７７】
レシキモド、（１−［４−アミノ−２−（エトキシメチル）イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−１−イル］−２−メチルプロパン−２−オール）は、免疫応答調節剤（ＩＲＭ）であり、Ｔｏｌｌ様受容体（ＴＬＲ）７および８を介して細胞を刺激することによって機能する。
【００７８】
本明細書で使用する、「有効量」は、本明細書に記載の薬剤の組み合わせに関して使用する場合、癌細胞に対して統計的に有意な所望の効果を提供する組み合わせにおける各薬剤の量を、制限なく、含む。いくつかの実施形態において、有効量は、非腫瘍細胞に対する毒性量の臨床的受容性をさらに必要とするように狭めることができる。
【００７９】
代表的な所望の効果が本明細書に記載されている。たとえば、その効果は、腫瘍増殖の速度の低下、腫瘍増殖の停止、または腫瘍の大きさ、質量、代謝活性、または体積の減少であり得、固体腫瘍に対する応答評価基準（ＲＥＣＩＳＴ）、組合せの薬剤の個々の薬剤または、組合せの薬剤のサブコンビネーションのみ等での治療に対する、生存の統計的に有意な増加、などの標準クライテリア等によって測定されるが、これらに限定されない。
【００８０】
有効量は、治療または阻害される細胞増殖のタイプ、使用される治療剤のタイプ、特定の治療剤、被験体のサイズ、または腫瘍細胞の増殖または腫瘍の重症度などの因子に依存して変化し得る。
たとえば、組合せを構成する個々の薬剤のそれぞれの選択は、「有効量」を構成するものに影響を及ぼすことができる。
【００８１】
当業者は、前述の因子を研究し、そして、過度の実験をすることなく、治療剤の組み合わせの有効量に関する決定を行うことができるであろう。
たとえば、インビトロ（ｉｎ  ｖｉｔｒｏ）アッセイを使用して、治療剤の「有効量」を決定することができる。
当業者は、上記のインビトロアッセイにおいて使用するための、組み合わせにおける個々の薬剤の適切な量を選択するであろう。
【００８２】
細胞生存割合（ｃｅｌｌ  ｓｕｒｖｉｖａｌ  ｆｒａｃｔｉｏｎ）は、選択された量が治療剤の特定の組み合わせについて、「有効量」であるかどうかを決定するために使用することができる。たとえば、アッセイ内で使用される選択された量は、好ましくは、細胞の少なくとも、５０％、より好ましくは、７５％、そして、最も好ましくは、少なくとも９５％の死滅をもたらすべきである。
【００８３】
好ましい実施形態では、治療剤の有効用量は亜毒性（ｓｕｂｔｏｘｉｃ）用量である。本明細書で使用される場合、亜毒性用量という用語は、細胞の約１０％未満の殺滅をもたらす用量を指す。
【００８４】
投与レジメン（たとえば、順番）も、また、有効量を構成するものに影響を与えることができる。
さらに、数回に分けた投与量、および、ずらした投与量（ｓｔａｇｇｅｒｅｄ  ｄｏｓａｇｅｓ）を、毎日または逐次、局所投与することができ、または投与量を連続的に注入することができる。さらに、投薬量は、治療状況の緊急性（ｅｘｉｇｅｎｃｉｅｓ）によって示されるように、比例して増加または減少させることができる。
【００８５】
本明細書において、使用される、「薬学的に許容される（ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｌｙ  ａｃｃｅｐｔａｂｌｅ）」という用語は、健全な医学的判断の範囲内で、過剰な毒性、刺激、アレルギー反応、または他の問題または厄介な問題（ｃｏｍｐｌｉｃａｔｉｏｎ）を伴わずに、ヒトおよび動物の組織と接触して使用するのに適し、合理的な利益／リスク比に見合った、治療剤、材料、組成物および／または剤形のそれらの組み合わせを指す。
【００８６】
本明細書で使用される、「薬学的に許容される担体（ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｌｙ−ａｃｃｅｐｔａｂｌｅ  ｃａｒｒｉｅｒ）」という用語は、１つの器官または身体の一部分から、別の器官、または身体の一部分に、対象化学物質を運搬または輸送することに関与する、液体または固体の充填剤、希釈剤、賦形剤、溶媒またはカプセル化物質などの薬学的に許容される材料、組成物、またはビヒクルを意味する。
各担体は、製剤の他の成分と適合し、かつ、患者に有害ではないという意味で、「許容される（ａｃｃｅｐｔａｂｌｅ）」ものでなければならない。
【００８７】
薬学的に許容される担体として役立ち得る材料のいくつかの例には、
（１）ラクトース、グルコースおよびスクロースのような糖；
（２）トウモロコシデンプンおよびジャガイモデンプンのようなデンプン；
（３）カルボキシメチルセルロースナトリウム、エチルセルロースおよび酢酸セルロースのようなセルロースおよびその誘導体；
（４）粉末状のトラガカント；
（５）麦芽；
（６）ゼラチン；
（７）タルク；
（８）カカオバターおよび坐薬ワックスのような賦形剤；
（９）ピーナッツ油、綿実油、ベニバナ油、ゴマ油、オリーブ油、コーン油および大豆油のような油；
（１０）プロピレングリコールのようなグリコール；
（１１）グリセリン、ソルビトール、マンニトールおよびポリエチレングリコールのようなポリオール；
（１２）オレイン酸エチルおよび、ラウリン酸エチルなどのエステル類；
（１３）寒天；
（１４）水酸化マグネシウムおよび水酸化アルミニウムのような緩衝剤；
（１５）アルギン酸；
（１６）発熱物質を含まない水；
（１７）等張性生理食塩水；
（１８）リンゲル液；
（１９）エチルアルコール；
（２０）リン酸緩衝液；および
（２１）医薬製剤に使用される他の非毒性適合物質；
を挙げることができる。
【００８８】
「薬学的に許容される塩（ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｌｙ−ａｃｃｅｐｔａｂｌｅ  ｓａｌｔｓ）」という用語は、本発明に包含される治療剤の、比較的非毒性の、無機酸および有機酸の付加塩を指す。
これらの塩は、治療剤の最終的な単離および精製の間に、そのままで、または、その遊離塩基形態の精製された治療剤を、適切な有機酸または無機酸と、別個に、反応させ、そして、このように形成された塩を単離することによって、調製することができる。
代表的な塩としては、臭化水素塩、塩化水素塩、硫酸塩、重硫酸塩、リン酸塩、硝酸塩、酢酸塩、バレリン酸塩、オレイン酸塩、パルミチン酸塩、ステアリン酸塩、ラウリン酸塩、安息香酸塩、乳酸塩、リン酸塩、トシル酸塩、クエン酸塩、マレイン酸塩、フマル酸塩、コハク酸塩、酒石酸塩、ナフチル酸塩、メシル酸塩、酒石酸塩、酒石酸塩、グルコヘプタン酸塩、ラクトビオン酸塩、およびラウリルスルホン酸塩などが挙げられる（たとえば、ベルゲら（１９７７）、“薬学的塩”、Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｓｃｉ．６６：１−１９を参照）。
【００８９】
特に断らない限り、化合物への言及は、任意の異性体（たとえば、ジアステレオマーまたはエナンチオマー）、塩、溶媒和物、多形体などを含む任意の薬学的に許容される形態の化合物を含むことができる。
特に、化合物が光学活性である場合、化合物への言及は、化合物のエナンチオマーのそれぞれ、ならびにエナンチオマーのラセミ混合物を含むことができる。
【００９０】
レシキモドを含む、疾患の治療のための、局所、嚢内（ＩＮＴＲＡＣＹＳＴＩＣ）および腫瘍内組成物
化学的浸透増強剤は、活性医薬成分（薬物または薬物質）の、皮膚への吸収、摂取および送達を向上させるために、局所および経皮製剤において、しばしば使用される。そのような製剤はまた、組織の局部的区画内のさらなる透過を補うために、および／または、それらが送達される組織における免疫関連応答を増強するために使用され得る。
【００９１】
特定の化学物質増強剤製剤の設計はささいなものではなく、これらの薬剤の皮膚浸透性への影響についての包括的な理解を必要とする。
皮膚／腫瘍への薬物の浸透および摂取を特異的に増強するために、特定の化学的増強剤製剤を、薬物の物理化学的特性とマッチさせることは、実際に実現可能である。
そのような製剤は、限定されるものではないが、１つまたはそれ以上の化学的増強剤の組み合わせ；薬物および化学的増強剤の皮膚／腫瘍への分配（ｐｏｒｔｉｏｎｉｎｇ）を改善する１つまたはそれ以上の溶媒またはビヒクル；および局所または腫瘍内製剤として、それらを取り込むためのゲル化剤またはマトリックスを含む。
【００９２】
各カテゴリーの化学物質のいくつかの例は、以前に文献に開示されている。
しかしながら、各成分を用いて、薬物の物理化学的特性に合致させ、そして、その皮膚浸透を改善するように、具体的に組み合わせることは、ささいなことではなく、また、個々の化学物質の特定の特性に特異的に（ｓｉｎｇｕｌａｒｌｙ）依存するものでもない。
【００９３】
皮膚／腫瘍に対する各成分の効果は、製剤中で使用される濃度に依存し、そして、単一の製剤において、それらの組合せから予想される相乗効果があることに留意することが重要である。
これらの効果は、相加的、正の相乗的、または負の相乗的であり得る。
そして、このことは、皮膚／腫瘍の浸透の動力学、および、これらの製剤からの皮膚／腫瘍の中およびその横断的に送達される薬物の蓄積効果は、使用される特定の処方に依存することを意味する。
したがって、薬物の生理学的および生物学的および治療上のエンドポイントは、薬物特性に加えて、製剤によって、大きく左右されることになる。
これらのエンドポイントには、何例かを明らかにする（highlight a few）ために、薬物動態／薬力学（ＰＫ／ＰＤ）、曲線下面積によって決定される累積吸収（ＡＵＣ）、生物学的同等性、治療指数（ＴＩ）が含まれるが、これらに限定されない。
【００９４】
さらに、薬物の特定の処方は、その効力だけでなく、適用時の皮膚に対する許容性／安全性にも影響を及ぼす。
これには、とりわけ、刺激、皮膚毒性、紅斑などの副作用が含まれ、これらに限定されない。
【００９５】
組織全体または腫瘍のような局在化された組織区画内における、薬剤の浸透を増強することに加えて、化学的浸透増強剤の有益な効果は、腫瘍治療において重要な免疫応答の誘導に影響を及ぼす炎症効果を提供することである。
【００９６】
したがって、局所、嚢内および／または注射用の製剤中に、薬剤を取り組むことは、腫瘍治療の治療的エンドポイントに対する相加的または相加的な効果以上を達成することができる。
【００９７】
投与に適した製剤には、当技術分野において適切であることが知られている担体を含む、クリーム剤、軟膏剤、液剤、ゲル剤、ローション剤、ペースト剤、パッチ剤、泡剤またはスプレー剤が挙げられる。
レシキモドおよび他の薬剤の、局所、嚢内（ｉｎｔｒａｃｙｓｔｉｃ）または腫瘍内投与のための剤形は、粉末、スプレー、軟膏、ペースト、クリーム、軟膏ローション、ゲル、溶液、およびパッチが挙げられる。
【００９８】
活性成分は、無菌条件下で、薬学的に許容される担体、および必要とされ得る任意の保存剤、緩衝剤、または推進剤と混合され得る。
【００９９】
軟膏、ペースト、クリーム、ローション、溶液、泡およびゲルは、治療剤に加えて、動物および植物油脂、油、ワックス、パラフィン、デンプン、トラガカント、セルロース誘導体、ポリエチレングリコール、シリコン、ベントナイト、ケイ酸、タルクおよび酸化亜鉛、またはそれらの混合物などの賦形剤を含むことができる。
【０１００】
注射可能な製剤はまた、精製油（大豆油、ベニバナ油、トリオレインおよびヒマシ油、分別ヤシ油、ミグリオール８１０，８１２、ネオビー  ＭＳ、カプテックス（Ｃａｐｔｅｘ）３００およびＦＤＡ承認の皮膚充填剤（ヒドロキシルアパタイト、ヒアルロン酸、ポリ−Ｌ−乳酸、コラーゲン、ヒドロゲル）を注射用製剤の成分として使用することによって、達成することができる。
【０１０１】
増強剤、ビヒクルおよびマトリックス（Ｋａｒａｎｄｅ  ２００４  Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｋａｒａｎｄｅ  ２００５  ＰＮＡＳ、ならびに、これらの仕事において引用されている参考文献およびそれらの参考文献において引用されている、関連する参考文献）を含む製剤の特定の成分を選択することによって、最適化される、局所、嚢内（ｉｎｔｒａｃｙｓｔｉｃ）および腫瘍内（ｉｎｔｒａｔｕｍｏｒａｌ）の製剤を設計することができる。
特定の製剤は、薬物の有効性および標的適応症（ｔａｒｇｅｔ  ｉｎｄｉｃａｔｉｏｎ）に重大な影響を及ぼし得る。
【０１０２】
本発明者らは、その構造と化学組成から、レシキモドの物理化学的性質を確立した（http://pubchem.ncbi.nlm.nih.gov/compound/Resiquimod#section=Depositor-Supplied-Synonyms）。
本発明者らは、その効力と安全性とのバランスをとることを許容する透過増強剤の化学的記述子（ｄｅｓｃｒｉｐｔｏｒｓ）を特定した（ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｄ）。
これらに基づいて、本発明者らは、０〜２％重量／容量の全濃度範囲で、０〜１００％の範囲の重量割合で、以下のリストからの化学物質を含有する、化学的透過増強剤の組み合わせを特定した（ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｄ）。
処方は、製剤を製造するために、２または３種の個々の化学物質を溶媒中に含むことができる。
レシキモドは、そのような処方において組み合わされる。
【０１０３】
オクチル硫酸ナトリウム、デシル硫酸ナトリウム、ドデシル硫酸ナトリウム、テトラデシル硫酸ナトリウム、ヘプタデシル硫酸ナトリウム、エイコシル硫酸ナトリウム、ラウレス硫酸ナトリウム、ニコチン硫酸、タウロコール硫酸ナトリウム、ジメチルスルホキシド、ナトリウムトリデシルホスフェート、ケムベタイン（Ｃｈｅｍ  Ｂｅｔａｉｎｅ）ＣＡＳ、ケムベタイン（Ｃｈｅｍ  Ｂｅｔａｉｎｅ）オレイル、ケムベタイン（Ｃｈｅｍ  Ｂｅｔａｉｎｅ）Ｃ、ヘキサデシルジメチルアンモニオプロパンスルホネート、デシルジメチルアンモニオプロパンスルホネート、ドデシルジメチルアンモニオプロパンスルホネート、ミリスチルジメチルアンモニオプロパンスルホネート、ベンジルピリジニウムクロリド、ドデシルピリジニウムクロリド、セチルピリジニウムクロリド、ベンジルジメチルドデシルアンモニウムクロリド、ベンジルジメチルミリスチルアンモニウムクロリド、ベンジルジメチルステアリルアンモニウムクロリド、オクチルトリメチルアンモニウムブロミド、デシルトリメチルアンモニウムブロミド、ドデシルトリメチルアンモニウムブロミド、ミリスチルトリメチルアンモニウムクロリド、セチルトリメチルアンモニウムブロミド、ソルビタンモノラウレート、ソルビタンモノパルミテート、ソルビタンモノステアレート、ソルビタンモノオレエート、ポリオキシエチレンソルビタンモノラウレート、ポリオキシエチレンソルビタンモノパルミテート、Ｂｒｉｊ  ９７、Ｂｒｉｊ  ３０、Ｂｒｉｊ  ５６、Ｔｒｉｔｏｎ  Ｘ−１００、ヘキサン酸、オクタン酸、デカン酸、ウンデカン酸、ドデカン酸、トリデカン酸、ミリスチン酸、パルミチン酸、ステアリン酸、オレイン酸、エライジン酸、リノール酸、リノレン酸、コール酸、メチルヘキサノエート、エチルウンデカノエート、メチルラウレート、メチルトリデカノエート、メチルミリステート、イソプロピルミリステート、イソプロピルパルミテート、パルミチルパルミテート、ジエチルセバケート、テトラカイン、グリセリルモノラウレート、グリセリルモノオレエート、エチルピペラジンカルボキシラート、Ｎ−ラウリルサルコシネート、ナトリウムカプリレート、ナトリウムデカノエート、ナトリウムパルミテート、ナトリウムオレエート、オクチルアミン、デシルアミン、ドデシルアミン、テトラデシルアミン、オレイルアミン、尿素、メチルピロリドン、シクロヘキシルピロリドン、オクチルピロリドン、デシルピロリドン、デシルメチルピロリドン、メチルピペラジン、フェニルピペラジン、オクタンアミド、ヘキサデカンアミド、カプロラクタム、カルベオール、ピネンオキシド、リモネン、メントール、プレゴン、カルバクロール、ピネン、メントン、テルピネオール、シネオール、フェンコン、トリアセチン、トリメトキシプロピレンメチルベンゼン、リナロオール、ゲラニオール、およびオクチルドデカノール。
【０１０４】
他には、スルホキシド、アルコール、ポリオール、アルカン、脂肪酸、エステル、アミンおよびアミド、テルペン、界面活性剤、シクロデキストリン、Ｃ２またはＣ３アルコール類およびそれ以上、Ｃ３またはＣ４のジオールまたはそれ以上、ＤＭＳＯ，ＤＭＦ，ＤＭＡおよび関連する溶媒、１−ｎ−ドデシルーシクロアザシクロヘプタン−２−オン、Ｎ−メチル−ピロリドンおよびＮ−（２−ヒドロキシエチル）ピロリドン、ならびにより広い種類のアゾン（ａｚｏｎｅｓ）、および混合物（二成分、三成分またはそれ以上）を含む。
【０１０５】
レシキモドの物理化学的および構造的特性は、それがその芳香族性に起因する妥当な疎水性を有する小分子であることを示している。
【０１０６】
このような分子の輸送を向上させる、化学的増強剤は、限定的ではないが、一般的に、界面活性剤、脂肪酸および脂肪酸エステルのような極性頭部基（ｐｏｌａｒ  ｈｅａｄ  ｇｒｏｕｐ）を有する長鎖炭化水素である傾向がある。
【０１０７】
炭化水素鎖中の不飽和（一つまたは二つ）は、皮膚脂質二重層の流動化およびレシキモドの透過をさらに助けることができる。
【０１０８】
オレイン酸、リノール酸、リノリン酸、パルミチン酸、ミリスチン酸などは、脂肪酸の例である。
【０１０９】
メチル、エチル、プロピルまたはブチルのような小さなアルキル基を有する、パルミチン酸、ミリスチン酸、オレイン酸、リノール酸などの脂肪酸のエステルは、脂肪酸エステルの例である。
【０１１０】
ラウリル硫酸ナトリウム、オレイン酸ナトリウムなどの脂肪酸エステルの塩は、界面活性剤の例である。
【０１１１】
エタノール、イソプロパノール、ブタノール、ヘキサノールなどを含む、短鎖アルコールは、溶媒の例である。
【０１１２】
化学物質と溶媒の組み合わせは、皮膚を介したレシキモドの透過を有意に高めることができる。
【０１１３】
そのような例の全ての潜在的な組み合わせは、実行可能な処方であって、ＡＰＩであるレシキモドのＰＫ／ＰＤプロファイルを変化させ、効力および安全性を変える。
【０１１４】
上記の化学物質を具体化する処方およびそれらの組み合わせの例は以下の通りである：
レシキモドの濃度は、０．０１、０．０２、０．０３、０．０４〜１％であり、そして、ｉ、ｉｉ、ｉｉｉ、ｉｖ、ｖ、ｖｉ、ｖｉｉ、ｖｉｉｉ、ｉｘ、ｘ、ｘｉ、ｘｉｉまたはｘｉｉｉに列挙された成分と組み合わせることができる。
【０１１５】
ｉ．オレイン酸（５０％）およびミリスチン酸イソプロピル（５０％）の、５０ミリリットルのリン酸緩衝生理食塩水および５０ミリリットルのエタノールを含む、１％重量／容量の総濃度の溶液、
ｉｉ．ミリスチン酸イソプロピル（５０％）およびラウリル硫酸ナトリウム（５０％）の、５０ミリリットルのリン酸緩衝生理食塩水および５０ミリリットルのエタノールを含む、０．５重量／容量％の総濃度の溶液、
ｉｉｉ．オレイン酸（５０％）およびラウリル硫酸ナトリウム（５０％）の、５０ミリリットルのリン酸緩衝生理食塩水および５０ミリリットルのエタノールを含む、０．５重量／容量％の総濃度の溶液、
ｉｖ．オレイン酸（３３％）、ミリスチン酸イソプロピル（３３％）およびラウリル硫酸ナトリウム（３３％）の、５０ミリリットルのリン酸緩衝生理食塩水および５０ミリリットルのエタノールを含む、０．５重量／容量％の総濃度の溶液、
ｖ．パルミチン酸イソプロピル（５０％）およびオレイン酸ナトリウム（５０％）の、５０ミリリットルのリン酸緩衝生理食塩水および５０ミリリットルのエタノールを含む、２％重量／容量の総濃度の溶液、
ｖｉ．ラウリル硫酸ナトリウム（２５％）およびリノール酸（７５％）の、５０ミリリットルのリン酸緩衝生理食塩水および５０ミリリットルのエタノールを含む、１．０重量／容量％の総濃度の溶液、
ｖｉｉ．パルミチン酸（５０％）およびラウリン酸イソプロピル（５０％）の、５０ミリリットルのリン酸緩衝生理食塩水および５０ミリリットルのエタノールを含む、２．０重量／容量％の総濃度の溶液、
ｖｉｉｉ．オレイン酸（５０％）およびリノール酸（５０％）の、５０ミリリットルのリン酸緩衝生理食塩水および５０ミリリットルのエタノールを含む、１．５重量／容量％の総濃度の溶液、
ｉｘ．リノール酸（２５％）、オレイン酸（２５％）およびリノール酸イソプロピル（５０％）の、５０ミリリットルのリン酸緩衝生理食塩水および５０ミリリットルのエタノールを含む、０．５重量／容量％の総濃度の溶液、
ｘ．オレイン酸ナトリウム（３３％）、オレイン酸（３３％）およびパルミチン酸メチル（３３％）の、５０ミリリットルのリン酸緩衝生理食塩水および５０ミリリットルのエタノールを含む、２．０重量／容量％の総濃度の溶液、
ｘｉ．５０ミリリットルのリン酸緩衝生理食塩水および５０ミリリットルのエタノールを含む溶液、
ｘｉｉ．オレイン酸（１０％）の、５０ミリリットルのリン酸緩衝生理食塩水および５０ミリリットルのエタノールを含む溶液、
ｘｉｉｉ．オレイン酸（２％）およびラウリル硫酸ナトリウム（５％）の、５０ミリリットルのリン酸緩衝生理食塩水および５０ミリリットルのエタノールを含む溶液。
【０１１６】
以下の実施例は、本発明の特定の実施形態を説明するために提供される。本発明を決して限定するものではない。
【０１１７】
実施例Ｉ
局所で適用されたレシキモドは、前腫瘍性および腫瘍性病変の進行を阻害する。
母斑およびメラノーマの大多数は、ＢＲＡＦ変異、特に、ＢＲＡＦＶ６００Ｅ変異を含む。
【０１１８】
レシキモドが、悪性腫瘍および早期悪性腫瘍になる可能性を持っている皮膚疾患を治療するために使用することができるかどうかをテストするために、我々は、４つの異なるマウスモデルを用いて、皮膚腫瘍に対するレシキモドの治療の有効性を試験した：
１）表皮中のメラノサイトの不定形増殖（不定形表皮内メラノサイト増殖）を含む母斑（ｎｅｖｕｓ）様病変を、マウスが発症する、Ｔｙｒ：ｃｒｅＥＲ、ＢＲａｆＣａ母斑（ｎｅｖｕｓ）モデル、
２）これらのマウスが、原発性メラノーマを発症する、選択されたＴｙｒ：：ＣｒｅＥＲ，Ｐｈｄ２ｌｏｘ／ｌｏｘ，ＢＲａｆＣＡ  メラノーマモデル、
３）腫瘍が非常に迅速に発症するメラノーマモデルである、Ｔｙｒ：：ｃｒｅＥＲ，ＢＲＡＦｃａ，Ｐｔｅｎｌｏｘ／ｌｏｘ、および
４）Ｂ１６メラノーマモデル。
【０１１９】
上記の遺伝子操作されたマウス（ＧＥＭ）モデルにおいて、ＴＬＲ活性化で誘導された変化が評価された。
ＧＥＭモデルでは、腫瘍は、正常な免疫系の環境（ｃｏｎｔｅｘｔ）で初めから（ｄｅ  ｎｏｖｏ）発生し、そして、周辺間質と共に進化する。
【０１２０】
さらに、表皮内メラノーマは、ＧＥＭモデルでのみ観察でき、そして、研究できるが、異種移植腫瘍モデルでは観察できない。
【０１２１】
Ｔｙｒ：：ｃｒｅＥＲ，ＢＲＡＦｃａマウスにおける、色素性腫瘍の進行に対する、レシキモドの効果
まず、Ｔｙｒ：：ｃｒｅＥＲ，ＢＲＡＦｃａマウスにおける、レシキモドの治療効果を試験した。
この処方は、０．２％のレシキモド、プロピレングリコール、コロイド状二酸化ケイ素、およびトリアセチンを含む。これらのマウスは、４−ＨＴ誘導後に、母斑様色素性腫瘍を発症するが、リンパ節転移は起こらない。
【０１２２】
ブランクの局所ゲルで処置したマウスをコントロールとして使用した。
【０１２３】
色素性病変が、Ｔｙｒ：：ｃｒｅＥＲ，ＢＲＡＦｃａマウスにおいて触診可能になったとき、これらのマウスを、局所的レシキモドまたはブランクのゲルで、週２回、６週間、処置した（図１Ａ）。
腫瘍の直径は、３日ごとにノギスを用いて測定した。
対照群の色素性腫瘍は成長を続けた（図１Ｂおよび１Ｉ）。一方、レシキモドで処置された色素性病変が退縮した（図１Ｃおよび１Ｉ）。
【０１２４】
組織学的検査は、色素性腫瘍細胞は、対照マウスの真皮を占有したことを示し（図１Ｆ）、一方、レシキモドで処置したマウスにおける腫瘍細胞が消失し、そして、色素を有する多くのマクロファージだけが、真皮に見ることができた（図１Ｇ）。表皮中の色素沈着した腫瘍細胞もまた、完全に退縮した（データは示さない）。
【０１２５】
異なる実験において、色素性病変が触診可能になるまで、我々は、待ち（図１Ｄ）、そして、我々は、１ヶ月間、局所レシキモドで、これらのマウスを処置した。
同じ色素沈着した病変は、治療の後に消失した（図１Ｅ）。
これらのマウスを犠牲にし、そして、組織学は、真皮において、色素を含むマクロファージのみを示し、そして、生存している腫瘍細胞は見当たらなかった。
【０１２６】
Ｔｙｒ：：ｃｒｅＥＲ，ＢＲＡＦｃａ，Ｐｈｄ２ｌｏｘ／ｌｏｘマウスにおける、メラノーマの進展に及ぼすレシキモドの効果
Ｔｙｒ：ｃｒｅＥＲ，ＢＲＡＦｃａ，ｐｈｄ２ｌｏｘ／ｌｏｘマウスメラノーマモデルは、Ｘｕ博士の研究室で開発された。メラノーマは、局所的４−ＨＴを用いて、１００％の浸透率で誘導することができる。リンパ節転移はこれらのマウスにおいて頻繁である。
しかし、Ｔｙｒ：：ｃｒｅＥＲ，ＢＲＡＦｃａ，Ｐｔｅｎｌｏｘ／ｌｏｘマウスと相違して、メラノーマ発症の潜伏期間は、有意に長く、そして、Ｃｒｅ活性化の後の中央生存期間は、Ｔｙｒ：：ｃｒｅＥＲ，ＢＲＡＦｃａ，Ｐｔｅｎｌｏｘ／ｌｏｘマウスの６０日に対して、約１８０日である。
【０１２７】
これらのマウスが、触知可能な腫瘍を発症したら（誘導後１４０日）、我々は、週２回、６週間（図２Ａ）、局所レシキモド処置（０．２％）を開始した。
【０１２８】
対照マウスにおけるメラノーマは成長し、そして、腫瘍は、１８０日で、非常に大きくなった（図２Ｂ）。
これらのマウスを犠牲にした。
皮膚の下側は、腫瘍によって完全に占められた（図２Ｃ）。
【０１２９】
組織学的に、真皮は、メラノーマ細胞によって完全に満たされた（図２Ｄおよび図２Ｅ）。
対照的に、メラノーマ成長は、レシキモドの処置の後に阻害された（図２Ｆ）。
皮膚の下側には、有意に少ない腫瘍を有した（図２Ｇ）。
組織学的には、皮膚のメラノーマは、退縮し（図２Ｈ）、そして、色素を有する多数のマクロファージが、真皮に存在し（図２Ｉ）、メラノーマが退縮したことを示す。
【０１３０】
治療したマウスのいずれも、リンパ節転移を発症しなかった。
対照マウスにおけるメラノーマの周囲において、メラノーマ細胞は、表皮に見られ（図２Ｋ）、そして、それらは処置の後に消失した（図２Ｌ）。
【０１３１】
Ｔｙｒ：：ｃｒｅＥＲ，ＢＲＡＦｃａ，Ｐｔｅｎｌｏｘ／ｌｏｘマウスにおける、メラノーマ進展に対する、レシキモドの効果
Ｔｙｒ：：ｃｒｅＥＲ，ＢＲＡＦｃａ，Ｐｈｄ２ｌｏｘ／ｌｏｘマウスにおけるメラノーマは、長い潜伏期を有し、そして、メラノーマの成長は比較的遅いので、我々は、次に、メラノーマ成長が非常に速い、Ｔｙｒ：：ｃｒｅＥＲ，ＢＲＡＦｃａ，Ｐｔｅｎｌｏｘ／ｌｏｘマウスにおいて、レシキモドゲルを試験した。
これらのマウスが、触知可能な腫瘍を発症したら、我々は、週２回、６週間、レシキモドで治療した（図３Ａ）。
【０１３２】
対照ビヒクルで処置したマウスは、嵩高い腫瘍を発症した（図３Ｂおよび３Ｆ）。
レシキモド処置は、有意に、メラノーマの成長を遅らせた（図３Ｃおよび３Ｆ）。
さらに、レシキモド処置は、処置されたマウスの寿命を延ばした（図３Ｇ）。
【０１３３】
組織学的に、メラノーマは、対照マウスにおける皮筋層（ｐａｎｎｉｃｕｌｕｓ  ｃａｒｎｏｓｕｓ）の筋肉を介して浸潤し（図３Ｄ）、一方、レシキモドで処置したマウスにおいて、メラノーマは、より薄く、そして、骨格筋を介して浸潤しなかった（図３Ｅ）。
【０１３４】
対照マウスにおけるメラノーマの周囲において、表皮内メラノーマは、表皮に見られ（図３Ｈ）、そして、それらは処置の後に消失した（図３Ｉ）。
【０１３５】
別の実験において、マウスを、３週間にわたって、対照ビヒクルまたはレシキモドで処置し、そして、次いで、それらが依然として処置されている間に屠殺された（図４Ａ）。
対照群のすべての５匹のマウスは、リンパ節転移を発症し、そして、陽性のリンパ節（ｐｏｓｉｔｉｖｅ  ｌｙｍｐｈ  ｎｏｄｅｓ）の数は、マウス当たり、２〜４の範囲であった（図４Ｂ）。一方、レシキモド処置群においては、５匹中２匹のマウスがリンパ節転移、および１匹の陽性のリンパ節が、各々、これらのマウスで同定された（図４Ｂ）。
処置したマウスは、有意により薄い腫瘍を有していた（図４Ｃ）。
【０１３６】
腫瘍および脾臓組織を処置し、そして、多色フローサイトメトリー分析を行った。
我々の分析は、治療後の腫瘍において、ＣＤ４５＋炎症性細胞の有意な増加（図４Ｄ）および、ＣＤ４５＋ＣＤ１１Ｂ＋Ｆ４／８０−Ｌｙ６ｇｈｉｇｈＭＤＳＣの減少を検出した（図４Ｅ）。
【０１３７】
グランザイム（ｇｒａｎｚｙｍｅ）Ｂの発現は、ＣＤ８＋Ｔ細胞において増加した（図４Ｆ）。ＧｒａｎＢ＋ＣＤ８＋およびＧｒａｎＢ＋ＣＤ８＋Ｋｉ−６７＋Ｔ＋細胞の数は、レシキモド処置後に増加し（図４Ｇおよび４Ｈ）、エフェクターＴ細胞の活性化（ｅｆｆｅｃｔｏｒ  Ｔ  ｃｅｌｌ  ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ）を示した。
【０１３８】
興味深いことに、ＰＤ１＋ＣＤ８＋Ｔ細胞もまた、有意に増加し、Ｔ細胞レパートリーを認識する拡大した腫瘍を示唆した。
脾臓由来のデータは、腫瘍におけるこれらのデータと同様である（データは示さない）。
【０１３９】
Ｂ１６メラノーマモデルにおける、メラノーマ進展（ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｏｎ）に対する、レシキモドの効果
レシキモドの効果がＢＲＡＦ変異に依存するかどうかを調べるために、我々は、Ｂ１６−Ｆ１０メラノーマ細胞を用いた、Ｃ５７ＢＬ／６Ｊマウスにおいて、０．２％レシキモドゲルを試験した。
これらのマウスが、触知可能な腫瘍を発症したら、私たちは、週２回、レシキモド処置を開始した（図５Ａ）。
レシキモド処置は、有意に、メラノーマの成長を減速し（図５Ｂ）、そして、処置されたマウスの寿命を延長した（図５Ｃ）。
【０１４０】
組織学は、レシキモド治療後の腫瘍において、より多い炎症細胞を示した（図５Ｄ）。
腫瘍組織を処置して、そして、我々は、ｑＲＴ−ＰＣＲを用いて、腫瘍におけるサイトカインおよびケモカインのｍＲＮＡ発現を測定した。
分析は、対照マウスにおけるレベルと比較して、レシキモドによる処置後における、ＴＮＦ−α、ＩＮＦ−γおよびＣＣＬ２の発現の増加を示した（図５Ｅ）。
【０１４１】
メラノーマの進行における、レシキモドの効果は、ＣＤ８＋Ｔ細胞によって媒介される。
レシキモドの効果が、Ｔ細胞に依存するかどうかを研究するために、Ｂ１６−Ｆ１０メラノーマ細胞を用いた、ＲＡＧ−１欠損マウスにおける、レシキモドゲルの効果を試験した。ＲＡＧ−１欠損マウスは成熟ＢおよびＴリンパ球を持たない。
これらのマウスが触知可能な腫瘍を発症したら、レシキモド治療を、週２回、投与した。
【０１４２】
レシキモド治療は、メラノーマの成長にほとんど影響がなかった（図６Ａ）。
【０１４３】
レシキモドの効果が、ＣＤ８＋Ｔ細胞に依存するかどうかを調べるために、我々は、Ｂ１６−Ｆ１０メラノーマ細胞を用いて、ＣＤ８枯渇（ｄｅｐｌｅｔｅｄ）Ｃ５７マウスにおける、レシキモドゲルの効果を試験した。
ＣＤ８枯渇は、抗−ＣＤ８抗体を使用して達成された。
これらのマウスが一旦、触知可能な腫瘍を発症すると、レシキモドを、週２回、投与した。
【０１４４】
レシキモド治療は、ＣＤ８  Ｔ細胞枯渇（ｄｅｐｌｅｔｅｄ）マウスのメラノーマにおいて、ほとんど影響がなく、その効果がＣＤ８  Ｔ細胞により、媒介されたことを示した（図６Ｂ）。
レシキモドもまた、Ｔ細胞からのサイトカイン放出に効果がある。
脾臓から得た、レシキモドで処置したＴ細胞は、刺激後、ＩＦＮ−γの増加した発現を示した（図６Ｃ）。
【０１４５】
抗−ＰＤ１療法とレシキモドの組み合わせ
Ｔｙｒ：：ｃｒｅＥＲ，ＢＲＡＦｃａ，Ｐｔｅｎｌｏｘ／ｌｏｘマウスにおける、抗−ＰＤ１と組み合わせた、０．２％レシキモドの有効性を評価した。
これらのマウスが触知可能な腫瘍を発症したら、それらは、レシキモド（週２回、６週間）および抗−ＰＤ１療法（２００μｇ、ｉ．ｐ．、週２回、５週間、図７Ａ）で処置された。
【０１４６】
対照ビヒクルで処置したマウスは、嵩高い腫瘍を発症し（図７Ｂ）、そして、抗−ＰＤ抗体で処置したマウスもまた、嵩高い腫瘍を発症した（図７Ｃ）。
レシキモド処置は、有意に、メラノーマ成長を遅らせ（図７Ｄ）、そして、併用療法は、最も有意な効果を示した（図７Ｅ）。
腫瘍容積を測定し、そして、図７Ｆに示した。
【０１４７】
レシキモドは、有意に、陽性のリンパ節の数を減少させるが、抗−ＰＤ１療法は、単独で、リンパ節転移に影響を及ぼさなかった。そして、組み合わせはさらに、陽性のリンパ節を減少した（図７Ｇ）。
【０１４８】
化学的浸透増強剤の存在下での、レシキモドの強化された送達
０．２％のレシキモドの浸透性は、ヒトの皮膚を横断する三つの異なる製剤について、決定された。
図８は、５０：５０のエタノール：ＰＢＳの基本処方における、レシキモドの溶解性および安定性を示す。
【０１４９】
また、図９のデータは、皮膚浸透増強剤を含有する製剤からの、レシキモドの増強された浸透性を示す。
化学的浸透増強剤は、ヒトの皮膚を横断するレシキモドの浸透の遅延時間の短縮だけでなく、ヒトの皮膚を介して送達されるレシキモドの総量を増加させることが可能である。
【０１５０】
化学増強剤製剤のアジュバント活性の効力
試験製剤の免疫刺激能力は、製剤に暴露した後の、ＥｐｉＤｅｒｍTMインビトロ皮膚モデルにおけるインターロイキン１α（ＩＬ−１α）の放出の観点、ヒト正常表皮ケラチノサイトの三次元細胞培養で評価された。
皮膚上の、試験製剤のアジュバント活性の潜在性を研究するために、細胞培養を、試験製剤の１０μＬで、４時間、曝露した。
各試験製剤は、重複して、分析された。
暴露した後、インキュベーション培地を除去し、そして、−２０℃に保存した。
サイトカイン、特にＩＬ−１αの含有量は、ＩＬ−１αのための標準的なヒトの比色ＥＬＩＳＡキットを用いて測定された。
抽出したサンプルからの吸光度のデータは、その後、放出されたＩＬ−１α（ナノグラム／ミリリットル）を決定するために、標準と共に、使用された。
トライトン  Ｘ１００（１％重量／体積）を、陽性対照として使用し、そして、１：１のＰＢＳ：ＥｔＯＨを、陰性対照として使用した。
【０１５１】
図１０のデータは、試験した１０のユニークな処方のアジュバント活性の潜在性を示す。前述したように処方が設計された。
【０１５２】
本発明の好ましい実施形態のいくつかを説明し、そして、具体的に上記に例示してきたが、本発明はかかる実施形態に限定されるものではない。
以下の特許請求の範囲において記載されたように、本発明の範囲および精神から逸脱することなく、様々な修飾をそれらに適用することができる。
【図１】
2018519331.tif 000003
【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６Ａ】
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【図６Ｂ】
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【図６Ｃ】
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【図７】
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【図８Ａ】
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【図８Ｂ】
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【図９Ａ】
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【図９Ｂ】
2018519331.tif 000015
【図９Ｃ】
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【図９Ｄ】
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【図１０】
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【国際調査報告】
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