(57)【要約】腫瘍、がん、または病的細胞に、ホーミング、分布、標的化、指向化、または蓄積するペプチドが開示される。血液脳関門を通過して、脳内および脳の特定領域内に、ホーミング、分布、標的化、指向化、または蓄積するペプチドもまた開示される。医薬組成物、およびペプチドまたはこのようなペプチドを含んでなるペプチド−活性薬剤複合体の使用もさらに開示される。このような組成物は、標的領域、組織、構造または細胞への薬剤の標的または非標的送達のために製剤化され得る。本開示の標的化組成物は、ペプチドによって標的化される標的領域、組織、構造または細胞に、ペプチドまたはペプチド−活性薬剤複合体を送達し得る。
2018521994.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
配列番号１９８〜配列番号２０９または配列番号４０７〜配列番号４１８のいずれか１つの配列またはその断片を含んでなるペプチド。
【請求項２】
配列番号１〜配列番号１９２または配列番号２１０〜配列番号４０１のいずれか１つまたはその断片と、少なくとも８０％の配列同一性を有する配列を含んでなるペプチド。
【請求項３】
前記配列が、配列番号１〜配列番号１９２または配列番号２１０〜配列番号４０１のいずれか１つまたはその断片と、少なくとも８５％、少なくとも９０％、または少なくとも９５％の配列同一性を有する、請求項２に記載のペプチド。
【請求項４】
前記配列が、配列番号１〜配列番号１９２または配列番号２１０〜配列番号４０１のいずれか１つまたはその断片である、請求項２〜３のいずれか一項に記載のペプチド。
【請求項５】
配列番号１９８〜配列番号２０９のいずれか１つの配列またはその断片を含んでなる、ペプチド。
【請求項６】
配列番号１〜配列番号１９２のいずれか１つまたはその断片と、少なくとも８０％の配列同一性を有する配列を含んでなるペプチド。
【請求項７】
前記配列が、配列番号１〜配列番号１９２のいずれか１つまたはその断片と、少なくとも８５％、少なくとも９０％、または少なくとも９５％の配列同一性を有する、請求項６に記載のペプチド。
【請求項８】
前記配列が、配列番号１〜配列番号１９２のいずれか１つまたはその断片である、請求項６〜７のいずれか一項に記載のペプチド。
【請求項９】
配列番号４０７〜配列番号４１８のいずれか１つの配列またはその断片を含んでなる、ペプチド。
【請求項１０】
配列番号２１０〜配列番号４０１のいずれか１つと少なくとも８０％の配列同一性を有する配列、またはその断片を含んでなるペプチド。
【請求項１１】
前記配列が、配列番号２１０〜配列番号４０１のいずれか１つまたはその断片と、少なくとも８５％、少なくとも９０％、または少なくとも９５％の配列同一性を有する、請求項１０に記載のペプチド。
【請求項１２】
前記配列が、配列番号２１０〜配列番号４０１のいずれか１つまたはその断片である、請求項１０〜１１のいずれか一項に記載のペプチド。
【請求項１３】
前記ペプチドがノットペプチドである、請求項１〜１２のいずれか一項に記載のペプチド。
【請求項１４】
前記ペプチドが、少なくとも６、少なくとも８、少なくとも１０、少なくとも１２、少なくとも１４、または少なくとも１６のシステイン残基を含んでなる、請求項１〜１３のいずれか一項に記載のペプチド。
【請求項１５】
前記ペプチドが、システイン残基間に形成された複数のジスルフィド架橋を含んでなる、請求項１〜１４のいずれか一項に記載のペプチド。
【請求項１６】
前記残基の少なくとも５％以上が、分子内ジスルフィド結合を形成するシステインである、請求項１〜１５のいずれか一項に記載のペプチド。
【請求項１７】
前記ペプチドが、ジスルフィドノットを介してジスルフィドを含んでなる、請求項１〜１６のいずれか一項に記載のペプチド。
【請求項１８】
前記ペプチドの少なくとも１つのアミノ酸残基がＬ立体配置であるか、または前記ペプチドの少なくとも１つのアミノ酸残基がＤ立体配置である、請求項１〜１７のいずれか一項に記載のペプチド。
【請求項１９】
前記配列が、少なくとも１１、少なくとも１２、少なくとも１３、少なくとも１４、少なくとも１５、少なくとも１６、少なくとも１７、少なくとも１８、少なくとも１９、少なくとも２０、少なくとも２１、少なくとも２２、少なくとも２３、少なくとも２４、少なくとも２５、少なくとも２６、少なくとも２７、少なくとも２８、少なくとも２９、少なくとも３０、少なくとも３１、少なくとも３２、少なくとも３３、少なくとも３４、少なくとも３５、少なくとも３６、少なくとも３７、少なくとも３８、少なくとも３９、少なくとも４０、少なくとも４１、少なくとも４２、少なくとも４３、少なくとも４４、少なくとも４５、少なくとも４６、少なくとも４７、少なくとも４８、少なくとも４９、少なくとも５０、少なくとも５１、少なくとも５２、少なくとも５３、少なくとも５４、少なくとも５５、少なくとも５６、少なくとも５７、少なくとも５８残基、少なくとも５９、少なくとも６０、少なくとも６１、少なくとも６２、少なくとも６３、少なくとも６４、少なくとも６５、少なくとも６６、少なくとも６７、少なくとも６８、少なくとも６９、少なくとも７０、少なくとも７１、少なくとも７２、少なくとも７３、少なくとも７４、少なくとも７５、少なくとも７６、少なくとも７７、少なくとも７８、少なくとも７９、少なくとも８０、または少なくとも８１残基長である、請求項１〜１８のいずれか一項に記載のペプチド。
【請求項２０】
前記ペプチドが、少なくとも１つのその他のペプチドを有する多量体構造に配置される、請求項１〜１９のいずれか一項に記載のペプチド。
【請求項２１】
前記ペプチドが、生理学的ｐＨで０．５より高い正の正味電荷を有する、請求項１〜２０のいずれか一項に記載のペプチド。
【請求項２２】
前記ペプチドが、生理学的ｐＨで−０．５より低い負の正味電荷を有する、請求項１〜２０のいずれか一項に記載のペプチド。
【請求項２３】
対象への投与時に、前記対象の特定の領域、組織、構造、または細胞に、ホーミング、標的化、蓄積，移動、または指向化する、請求項１〜２２のいずれか一項に記載のペプチド。
【請求項２４】
前記ペプチドの少なくとも１つの残基が、化学修飾を含んでなる、請求項１〜２３のいずれか一項に記載のペプチド。
【請求項２５】
前記化学修飾が、前記ペプチドのＮ末端をブロックする、請求項２４に記載のペプチド。
【請求項２６】
前記修飾が、メチル化、アセチル化、またはアシル化である、請求項２４に記載のペプチド。
【請求項２７】
前記化学修飾が、１つまたは複数のリジン残基またはそれらの類似体のメチル化；Ｎ末端のメチル化；または１つまたは複数のリジン残基または類似体それらのメチル化およびＮ末端のメチル化である請求項２４に記載のペプチド。
【請求項２８】
前記ペプチドが、アシル付加物に連結される、請求項１〜２７のいずれか１項に記載のペプチド。
【請求項２９】
前記ペプチドが、活性薬剤に連結される、請求項１〜２８のいずれか１項に記載のペプチド。
【請求項３０】
前記活性薬剤が、前記ペプチドのＮ末端またはＣ末端で前記ペプチドと融合される、請求項２９に記載のペプチド。
【請求項３１】
前記活性薬剤が、ニューロテンシンペプチドである、請求項３０に記載のペプチド。
【請求項３２】
前記ニューロテンシンペプチドが、配列番号４２０の配列を有する、請求項３１に記載のペプチド。
【請求項３３】
ニューロテンシンペプチドと融合した前記ペプチドが、連続配列を含んでなる、請求項３０〜３２のいずれか一項に記載のペプチド。
【請求項３４】
１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０の活性薬剤が、前記ペプチドに連結される、請求項２９〜３３のいずれか一項に記載のペプチド。
【請求項３５】
前記ペプチドが、切断可能リンカーを介して前記活性薬剤に連結される、請求項２９〜３４のいずれか一項に記載のペプチド。
【請求項３６】
前記ペプチドが、リンカーによって、前記ペプチドのＮ末端で、内部リジン残基のεアミンで、アスパラギンまたはグルタミン残基のカルボン酸で、またはＣ末端で、前記活性薬剤に連結される、請求項２９〜３５のいずれか１項に記載のペプチド。
【請求項３７】
前記内部リジン残基が、配列番号３７のアミノ酸残基１７、配列番号３７のアミノ酸残基２５、または配列番号３７のアミノ酸残基２９に対応する位置にある、請求項３６に記載のペプチド。
【請求項３８】
前記内部リジン残基が、配列番号２４６のアミノ酸残基１５、配列番号２４６のアミノ酸残基２３、または配列番号２４６のアミノ酸残基２７に対応する位置にある、請求項３６に記載のペプチド。
【請求項３９】
非天然アミノ酸をさらに含んでなり、前記非天然アミノ酸が、挿入、付加、または別のアミノ酸への置換である、請求項２９〜３８のいずれか１項に記載のペプチド。
【請求項４０】
前記ペプチドが、リンカーによって、非天然アミノ酸で前記活性薬剤に連結される、請求項３９に記載のペプチド。
【請求項４１】
前記リンカーが、アミド結合、エステル結合、カルバメート結合、炭酸結合、ヒドラゾン結合、オキシム結合、ジスルフィド結合、チオエステル結合または炭素−窒素結合を含んでなる、請求項３６〜３４０のいずれか１項に記載のペプチド。
【請求項４２】
前記切断可能リンカーが、マトリックスメタロプロテイナーゼ、トロンビン、カテプシン、またはβ−グルクロニダーゼのための切断部位を含んでなる、請求項３５に記載のペプチド。
【請求項４３】
前記ペプチドが、切断不能リンカーを介して前記活性薬剤に連結される、請求項２９〜４２のいずれか一項に記載のペプチド。
【請求項４４】
前記活性薬剤が、ペプチド、ポリペプチド、ポリヌクレオチド、抗体、一本鎖変数断片（ｓｃＦｖ）、抗体断片、サイトカイン、ホルモン、増殖因子、チェックポイント阻害剤、免疫修飾物質、神経伝達物質、化学薬剤、細胞毒性分子、毒素、放射線増感剤、放射線防護体、治療用小分子、ナノ粒子、リポソーム、ポリマー、デンドリマー、脂肪酸、ペプチド模倣剤、補体結合ペプチドまたはタンパク質、ポリエチレングリコール、脂質、またはＦｃ領域からなる群から選択される、請求項２９に記載のペプチド。
【請求項４５】
前記活性薬剤が、ポリデオキシリボヌクレオチドまたはポリリボヌクレオチド配列である、請求項２９に記載のペプチド。
【請求項４６】
前記活性薬剤が、抗炎症剤、抗真菌剤、抗ウイルス剤、または抗感染症薬である、請求項２９に記載のペプチド。
【請求項４７】
前記活性薬剤が、化学療法剤である、請求項２９に記載のペプチド。
【請求項４８】
前記活性薬剤がノットペプチドである、請求項２９に記載のペプチド。
【請求項４９】
前記活性薬剤が、放射線増感剤または光増感剤である、請求項２９に記載のペプチド。
【請求項５０】
前記細胞毒性分子が、オーリスタチン、ＭＭＡＥ、メイタンシノイド、ＤＭ１、ＤＭ４、ドキソルビシン、カリケアマイシン、白金化合物、シスプラチン、タキサン、パクリタキセル、ＳＮ−３８、ＢＡＣＥ阻害剤、Ｂｃｌ−ｘＬ阻害剤、ＷＥＨＩ−５３９、ベネトクラクス、ＡＢＴ−１９９、ナビトクラクス、ＡＴ−１０１、オバトクラクス、ピロロベンゾジアゼピンまたはピロロベンゾジアゼピン二量体、またはドラスタチンである、請求項２９に記載のペプチド。
【請求項５１】
前記ペプチドが、検出可能薬剤に連結される、請求項１〜５０のいずれか１項に記載のペプチド。
【請求項５２】
前記検出可能薬剤が、前記ペプチドのＮ末端またはＣ末端で前記ペプチドと融合される、請求項５１に記載のペプチド。
【請求項５３】
１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０の検出可能薬剤がペプチドに連結される、請求項５１〜５２のいずれか一項に記載のペプチド。
【請求項５４】
前記ペプチドが、切断可能リンカーを介して前記検出可能薬剤に連結される、請求項５１〜５３のいずれか一項に記載のペプチド。
【請求項５５】
前記ペプチドが、リンカーによって、ペプチドのＮ末端で、内部リジン残基のεアミンで、またはＣ末端で、検出可能薬剤に連結される、請求項５１〜５３のいずれか一項に記載のペプチド。
【請求項５６】
前記内部リジンが、配列番号３７のアミノ酸残基１７、配列番号３７のアミノ酸残基２５、または配列番号３７のアミノ酸残基２９に対応する位置にある、請求項５５に記載のペプチド。
【請求項５７】
前記内部リジン残基が、配列番号２４６のアミノ酸残基１５、配列番号２４６のアミノ酸残基２３、または配列番号２４６のアミノ酸残基２７に対応する位置にある、請求項５５に記載のペプチド。
【請求項５８】
非天然アミノ酸をさらに含んでなり、前記非天然アミノ酸が、挿入、付加、または別のアミノ酸への置換である、請求項５１〜５７のいずれか１項に記載のペプチド。
【請求項５９】
前記ペプチドが、リンカーによって非天然アミノ酸で前記活性薬剤に連結される、請求項５８に記載のペプチド。
【請求項６０】
前記リンカーが、アミド結合、エステル結合、カルバメート結合、ヒドラゾン結合、オキシム結合、または炭素−窒素結合を含んでなる、請求項５５〜５９のいずれか一項に記載のペプチド。
【請求項６１】
前記切断可能リンカーが、マトリックスメタロプロテイナーゼ、トロンビン、カテプシン、またはβ−グルクロニダーゼのための切断部位を含んでなる、請求項５４に記載のペプチド。
【請求項６２】
前記ペプチドが、切断不能リンカーを介して前記検出可能薬剤に連結される、請求項５１〜６１のいずれか一項に記載のペプチド。
【請求項６３】
前記検出可能薬剤が、フルオロフォア、近赤外線色素、造影剤、ナノ粒子、金属含有ナノ粒子、金属キレート、Ｘ線造影剤、ＰＥＴ薬剤、放射性同位体、または放射性核種キレート剤である、請求項５１〜６２のいずれか一項に記載のペプチド。
【請求項６４】
前記検出可能薬剤が、蛍光染料である、請求項に５１記載のペプチド。
【請求項６５】
前記ペプチドが、腫瘍またはがん性細胞に、ホーミング、標的化、指向化、蓄積、または移動する、請求項１〜６４のいずれか１項に記載のペプチド。
【請求項６６】
前記腫瘍が、固形腫瘍である、請求項６５に記載のペプチド。
【請求項６７】
前記腫瘍が、血液悪性疾患である、請求項６５〜６６のいずれか一項に記載のペプチド。
【請求項６８】
前記ペプチドが固形腫瘍に浸透する、請求項６６〜６７のいずれか一項に記載のペプチド。
【請求項６９】
前記ペプチドが、がん性細胞に内在化または浸透する、請求項６６〜６７のいずれか一項に記載のペプチド。
【請求項７０】
前記腫瘍またはがん性細胞が、脳がん、神経膠芽腫、結腸がん、トリプルネガティブ乳がん、転移性がん、または肉腫に由来する、請求項６５〜６９のいずれか一項に記載のペプチド。
【請求項７１】
前記ペプチドが、血液脳関門を通過して前記腫瘍に接近する、請求項６５〜７０のいずれか一項に記載のペプチド。
【請求項７２】
前記ペプチドが、血液脳脊髄液関門を通過して前記腫瘍に接近する、請求項６５〜７１のいずれか一項に記載のペプチド。
【請求項７３】
前記ペプチドが、対象の血液脳関門または血液脳脊髄液関門を通過する、請求項１〜７２のいずれか一項に記載のペプチド。
【請求項７４】
前記ペプチドが、対象の血液脳脊髄液関門を通過する、請求項１〜７３のいずれか一項に記載のペプチド。
【請求項７５】
前記ペプチドが、血液脳関門を通過した後に、対象の腫瘍または病的領域、組織、構造、または細胞に、ホーミング、標的化、指向化、蓄積、または移動する、請求項７３〜７４のいずれか一項に記載のペプチド。
【請求項７６】
対象への投与時に、前記ペプチドが、対象の特定の脳領域前記に、ホーミング、標的化、指向化、蓄積、または移動する、請求項１〜７５のいずれか一項に記載のペプチド。
【請求項７７】
前記脳の特定の領域が、脳室、脳脊髄液、海馬、髄膜、吻側移動流、歯状回、脳室下領域、またはそれらの任意の組み合わせを含んでなる、請求項７６に記載のペプチド。
【請求項７８】
前記ペプチドが、神経学的障害、リソソーム蓄積症、てんかん、髄膜炎、脳内感染症、脳卒中、および多発性硬化症に影響を及ぼす、請求項１〜７７のいずれか一項に記載のペプチド。
【請求項７９】
前記ペプチドが、神経変性疾患に関連するタンパク質凝集に影響を及ぼす、請求項１〜７８のいずれか一項に記載のペプチド。
【請求項８０】
前記ペプチドが、脳がんに関連する経路を阻害する、請求項１〜７９のいずれか一項に記載のペプチド。
【請求項８１】
前記ペプチドが、イオンチャネルを阻害または活性化する、請求項１〜８０のいずれか一項に記載のペプチド。
【請求項８２】
前記ペプチドが、プロテアーゼ阻害活性を示す、請求項１〜８１のいずれか一項に記載のペプチド。
【請求項８３】
前記ペプチドが、抗菌、抗真菌、または抗ウイルス活性を有する、請求項１〜８２のいずれか一項に記載のペプチド。
【請求項８４】
請求項１〜８３のいずれか一項に記載のペプチドまたはそれらの塩と、薬学的に許容できる担体とを含んでなる、医薬組成物。
【請求項８５】
前記医薬組成物が、対象への投与のために製剤化される、請求項８４に記載の医薬組成物。
【請求項８６】
前記医薬組成物が、吸入、鼻腔内投与、経口投与、局所投与、静脈内投与、皮下投与、関節内投与、筋肉内投与、クモ膜下腔内、腹腔内投与、またはそれらの組み合わせのために製剤化される、請求項８４〜８５のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項８７】
請求項１〜８３のいずれか一項に記載のペプチド、または請求項８４〜８６のいずれか一項に記載の医薬組成物を対象に投与するステップ
を含んでなる、それを必要とする対象における病状を治療する方法。
【請求項８８】
前記ペプチドまたは医薬組成物が、吸入、鼻腔内、経口、局所、静脈内、皮下、関節内、筋肉内投与、腹腔内、またはそれらの組み合わせによって投与される、請求項８７に記載の方法。
【請求項８９】
前記ペプチドまたは医薬組成物が、投与に続いて、前記対象のがん性または病的領域、組織、構造、または細胞に、ホーミング、標的化、蓄積、移動、または指向化する、請求項８７〜８８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９０】
前記病状が、腫瘍またはがんである、請求項８７〜８９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９１】
前記病状が、固形腫瘍である、請求項８７〜９０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９２】
前記腫瘍が血液悪性疾患である、請求項８７〜９０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９３】
前記病状が、脳腫瘍、トリプルネガティブ乳がん、結腸がん転移、転移性がんまたは肉腫である、請求項８７〜８９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９４】
脳腫瘍が、手術不能である、請求項９３に記載の方法。
【請求項９５】
前記ペプチドが血液脳関門を通過して、脳内腫瘍にホーミング、標的化、移動、蓄積、または指向化する、請求項９１〜９４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９６】
前記ペプチドが血液脳脊髄液関門を通過して、脳内腫瘍にホーミング、標的化、移動、蓄積、または指向化する、請求項９１〜９５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９７】
前記方法がその他の治療法と組み合わされる、請求項８７〜９５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９８】
前記その他の治療法が、化学療法、放射線療法、または免疫調節療法を含んでなる、請求項９７に記載の方法。
【請求項９９】
前記ペプチドが、投与に続いて前記対象の血液脳関門を通過する、請求項８７〜９８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１００】
前記ペプチドが、投与に続いて前記対象の血液脳脊髄液関門を通過する、請求項８７〜９９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０１】
前記ペプチドが、投与に続いて、対象の脳室、脳脊髄液、髄膜、吻側移動流、または海馬に、ホーミング、標的化、指向化、蓄積、または移動する、請求項８７〜１００のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０２】
前記病状が、脳の病状である、請求項８７〜１０１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０３】
前記病状が、脳室、脳脊髄液、または海馬の機能に関連する、請求項８７〜１０２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０４】
前記脳の病状が、脳の機能に関連する、請求項１０３に記載の方法。
【請求項１０５】
前記ペプチドが、脳の病状を診断、予防、または治療する、請求項１０３〜１０４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０６】
前記脳の病状が、脳腫瘍または脳がんである、請求項１０３〜１０５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０７】
前記脳の病状が、記憶障害または記憶機能、アルツハイマー病、パーキンソン病、多系統萎縮症（ＭＳＡ）、統合失調症、てんかん、進行性多巣性白質脳症、真菌感染症、うつ病、双極性障害、心的外傷後ストレス障害、脳卒中、外傷性脳損傷、感染症、または多発性硬化症である、請求項１０３〜１０６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０８】
請求項１〜８３のいずれか一項に記載のペプチド、または請求項８４〜８７のいずれか一項に記載の医薬組成物を対象に投与するステップと、
前記対象の臓器または身体領域をイメージングするステップと
を含んでなる、対象の臓器または身体領域をイメージングする方法。
【請求項１０９】
前記対象のがんまたは病的領域、組織、構造または細胞を検出するステップをさらに含んでなる、請求項１０８に記載の方法。
【請求項１１０】
前記対象において手術を実施するステップをさらに含んでなる、請求項１０８〜１０９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１１１】
前記がんを治療するステップをさらに含んでなる、請求項１０８〜１１０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１１２】
前記手術が、前記対象のがんまたは病的領域、組織、構造または細胞を除去するステップを含む、請求項１０８〜１１１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１１３】
外科的除去後に、前記対象のがんまたは病的領域、組織、構造、または細胞をイメージングするステップをさらに含んでなる、請求項１１２に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願の相互参照
本出願は、その各内容全体が参照により本明細書に援用される、２０１５年６月２６日に出願された米国仮特許出願第６２／１８５，５２９号明細書、２０１５年６月２６日に出願された米国仮特許出願第６２／１８５，５２７号明細書、２０１５年１０月９日に出願された米国仮特許出願第６２／２３９，７４３号明細書；２０１５年１０月９日に出願された米国仮特許出願第６２／２３９，７３９号明細書、２０１６年４月１４日に出願された米国仮特許出願第６２／３２２，７２４号明細書；および２０１６年６月２４日に出願された米国仮特許出願第６２／３５４，６４２号明細書に関連する。
【背景技術】
【０００２】
多くのタイプのがんでは、患者予後は、薬物治療の有効性および腫瘍への外科的アクセスによって直接影響を受ける。特に、腫瘍切除の精度は、腫瘍マージンまたはがん細胞の小さな病巣を検出するための術中イメージングに依存する。しかし、現行の術中がん組織イメージングの方法は不正確である。
【０００３】
これらのタイプのがんの中でも、脳疾患は特に治療が困難である。血液脳関門（ＢＢＢ）は、９７％を上回る小分子が脳に入ることを排除し得て、抗体などのより大きな分子は、ほとんど普遍的に排除される。通常、脳に入るほとんどの分子は、小型で親油性であり、標的特異性を欠く。脳障害の治療を目的とする少数の薬物のみが、治療的に実現性のあることが証明されており、失敗の主な理由は、標的組織へのアクセスの欠如である。さらに、脳へのアクセスを得ることができる多くの薬物は、脳の病状を治療するのに適さない。標的組織へのアクセスの欠如および特異性の欠如は、薬物が脳内の標的領域、組織、構造または細胞に、ホーミング、標的化、または指向化し得るのに要するよりも、高い用量の投与をもたらす。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
同様に、その他のタイプのがん、特にいくつかのタイプの固形腫瘍も治療が困難であるが、これは正常組織における薬物の副作用を管理しながら、このような腫瘍への十分に高いレベルの有効薬物を達成するのが困難なためである。その結果、その他の組織における副作用のレベルを最小限に抑えながら、固形腫瘍に薬剤を特異的に標的化して、腫瘍におけるより高い有効用量の薬物を達成する必要性がある。さらに、固形腫瘍またはその他に由来するかどうかに関わりなく、任意のがん性細胞に、薬物を特異的に標的化する必要性もある。典型的な抗がん剤レジメンは用量制限毒性によって制限されることが多く、部位外の毒性を制限するために、いくつかの抗体薬物コンジュゲートを使用して薬物が特定の腫瘍に標的化されるが、多くの腫瘍タイプではこのような特定の治療法は利用できない。本明細書において、本発明者らは、腫瘍を標的化する新規ペプチドを提供する。
【課題を解決するための手段】
【０００５】
本開示は、腫瘍を治療するための組成物および方法に関する。本明細書に記載されるのは、対象への投与に続いて、がん性細胞に、ホーミング、分布、標的化、指向化、蓄積、移動、および／または結合するペプチドである。いくつかの実施形態では、本明細書の組成物および方法は、対象への投与に続いて、脳内のがん性のまたは病的細胞にホーミング、分布、標的化、指向化、蓄積、移動、および／または結合するペプチドを利用する。いくつかの実施形態では、本開示のホーミングペプチドは、活性薬剤を用いて、組織またはその細胞に送達される。
【０００６】
様々な態様では、本開示は、配列番号１９８〜配列番号２０９または配列番号４０７〜配列番号４１８のいずれか１つの配列、またはその断片を含んでなるペプチドを提供する。
【０００７】
様々な態様では、本開示は、配列番号１〜配列番号１９２または配列番号２１０〜配列番号４０１のいずれか１つまたはその断片と、少なくとも８０％の配列同一性を有する配列を含んでなるペプチドを提供する。いくつかの態様では、ペプチドは、配列番号１〜配列番号１９２または配列番号２１０〜配列番号４０１のいずれか１つまたはその断片と、少なくとも８５％、少なくとも９０％、または少なくとも９５％の配列同一性を有する配列を含んでなる。その他の態様では、ペプチドは、配列番号１〜配列番号１９２または配列番号２１０〜配列番号４０１のいずれか１つの配列、またはその断片を含んでなる。
【０００８】
様々な態様では、本開示は、配列番号１９８〜配列番号２０９のいずれか１つの配列またはその断片を含んでなるペプチドを提供する。
【０００９】
様々な態様では、本開示は、配列番号１〜配列番号１９２のいずれか１つまたはその断片と、少なくとも８０％の配列同一性を有する配列を含んでなるペプチドを提供する。いくつかの態様では、ペプチドは、配列番号１〜配列番号１９２のいずれか１つまたはその断片と、少なくとも８５％、少なくとも９０％、または少なくとも９５％の配列同一性を有する配列を含んでなる。その他の態様では、ペプチドは、配列番号１〜配列番号１９２のいずれか１つである配列、またはその断片を含んでなる。
【００１０】
様々な態様では、本開示は、配列番号４０７〜配列番号４１８のいずれか１つの配列またはその断片を含んでなるペプチドを提供する。
【００１１】
様々な態様では、本開示は、配列番号２１０〜配列番号４０１のいずれか１つまたはその断片と、少なくとも８０％の配列同一性を有する配列を含んでなるペプチドを提供する。いくつかの態様では、ペプチドは、配列番号２１０〜配列番号４０１のいずれか１つまたはその断片と、少なくとも８５％、少なくとも９０％、または少なくとも９５％の配列同一性を有する配列を含んでなる。その他の態様では、ペプチドは、配列番号２１０〜配列番号４０１のいずれか１つである配列、またはその断片を含んでなる。
【００１２】
いくつかの態様では、本開示の任意のペプチドは、ノットペプチドである。その他の態様では、ペプチドは、少なくとも６個、少なくとも８個、少なくとも１０個、少なくとも１２個、少なくとも１４個、または少なくとも１６個のシステイン残基を含んでなる。いくつかの態様では、ペプチドは、システイン残基間に形成された複数のジスルフィド架橋を含んでなる。さらなる態様では、残基の少なくとも５％以上は、分子内ジスルフィド結合を形成するシステインである。いくつかの態様では、ペプチドは、ジスルフィドノットを介してジスルフィドを含んでなる。
【００１３】
いくつかの態様では、ペプチドの少なくとも１つのアミノ酸残基はＬ立体配置であり、またはその中でペプチドの少なくとも１つのアミノ酸残基はＤ立体配置である。いくつかの態様では、配列は、少なくとも１１、少なくとも１２、少なくとも１３、少なくとも１４、少なくとも１５、少なくとも１６、少なくとも１７、少なくとも１８、少なくとも１９、少なくとも２０、少なくとも２１、少なくとも２２、少なくとも２３、少なくとも２４、少なくとも２５、少なくとも２６、少なくとも２７、少なくとも２８、少なくとも２９、少なくとも３０、少なくとも３１、少なくとも３２、少なくとも３３、少なくとも３４、少なくとも３５、少なくとも３６、少なくとも３７、少なくとも３８、少なくとも３９、少なくとも４０、少なくとも４１、少なくとも４２、少なくとも４３、少なくとも４４、少なくとも４５、少なくとも４６、少なくとも４７、少なくとも４８、少なくとも４９、少なくとも５０、少なくとも５１、少なくとも５２、少なくとも５３、少なくとも５４、少なくとも５５、少なくとも５６、少なくとも５７、少なくとも５８残基、少なくとも５９、少なくとも６０、少なくとも６１、少なくとも６２、少なくとも６３、少なくとも６４、少なくとも６５、少なくとも６６、少なくとも６７、少なくとも６８、少なくとも６９、少なくとも７０、少なくとも７１、少なくとも７２、少なくとも７３、少なくとも７４、少なくとも７５、少なくとも７６、少なくとも７７、少なくとも７８、少なくとも７９、少なくとも８０、または少なくとも８１残基長である。
【００１４】
いくつかの態様では、ペプチドは、少なくとも１つの他のペプチドを有する多量体構造に配置される。
【００１５】
いくつかの態様では、ペプチドは生理学的ｐＨで０．５より高い正の正味電荷を有する。その他の態様では、ペプチドは、生理学的ｐＨで−０．５より低い負の正味電荷を有する。
【００１６】
いくつかの態様では、対象への投与時に、ペプチドは、対象の特定の領域、組織、構造、または細胞に、ホーミング、標的化、蓄積、移動し、または指向化する。
【００１７】
いくつかの態様では、ペプチドの少なくとも１つの残基は、化学修飾を含んでなる。いくつかの態様では、化学修飾は、ペプチドのＮ末端をブロックする。いくつかの態様では、修飾は、メチル化、アセチル化、またはアシル化である。その他の態様では、化学修飾は、１つまたは複数のリジン残基またはそれらの類似体のメチル化；Ｎ末端のメチル化；または１つまたは複数のリジン残基または類似体それらのメチル化およびＮ末端のメチル化である。いくつかの態様では、ペプチドはアシル付加物に連結される。
【００１８】
いくつかの態様では、ペプチドは活性薬剤に連結される。さらなる態様では、活性薬剤は、ペプチドのＮ末端またはＣ末端ペプチドと融合される。いくつかの態様では、活性薬剤は、ニューロテンシンペプチドである。さらなる態様では、ニューロテンシンペプチドは、配列番号４２０の配列を有する。なおもさらなる態様では、ペプチドは、連続配列を含んでなるニューロテンシンペプチドに融合される。いくつかの態様では、１、２、３、４、５、６、７、８、９，または１０の活性薬剤がペプチドに連結される。
【００１９】
いくつかの態様では、ペプチドは、切断可能リンカーを介して活性薬剤に連結される。その他の態様では、ペプチドは、リンカーによって、ペプチドのＮ末端、内部リジン残基のεアミン、アスパラギンまたはグルタミン残基のカルボン酸、またはＣ末端で、活性薬剤に連結される。さらなる態様では、内部リジン残基は、配列番号３７のアミノ酸残基１７、配列番号３７のアミノ酸残基２５、または配列番号３７のアミノ酸残基２９に対応する位置にある。その他の態様では、内部リジン残基は、配列番号２４６のアミノ酸残基１５、配列番号２４６のアミノ酸残基２３、または配列番号２４６のアミノ酸残基２７に対応する位置にある。
【００２０】
その他の態様では、ペプチドは、非天然アミノ酸をさらに含んでなり、その中で非天然アミノ酸は、挿入、付加、または別のアミノ酸への置換である。
【００２１】
いくつかの態様では、ペプチドは、リンカーによって、非天然アミノ酸で活性薬剤に連結されるその他の態様では、リンカーは、アミド結合、エステル結合、カルバメート結合、炭酸結合、ヒドラゾン結合、オキシム結合、ジスルフィド結合、チオエステル結合、または炭素−窒素結合を含んでなる。さらなる態様では、切断可能なリンカーは、マトリックスメタロプロテイナーゼ、トロンビン、カテプシン、またはβ−グルクロニダーゼのための切断部位を含む。いくつかの態様では、ペプチドは、切断不能リンカーを介して活性薬剤に連結される。
【００２２】
いくつかの態様では、活性薬剤は、ペプチド、ポリペプチド、ポリヌクレオチド、抗体、一本鎖変数断片（ｓｃＦｖ）、抗体断片、サイトカイン、ホルモン、増殖因子、チェックポイント阻害剤、免疫修飾物質、神経伝達物質、化学薬剤、細胞毒性分子、毒素、放射線増感剤、放射線防護体、治療用小分子、ナノ粒子、リポソーム、ポリマー、デンドリマー、脂肪酸、ペプチド模倣剤、補体結合ペプチドまたはタンパク質、ポリエチレングリコール、脂質、またはＦｃ領域からなる群から選択される。その他の態様では、活性薬剤は、ポリデオキシリボヌクレオチドまたはポリリボヌクレオチド配列である。追加的な態様では、活性薬剤は、抗炎症剤、抗真菌剤、抗ウイルス剤、または抗感染症薬である。いくつかの態様では、活性薬剤は、化学療法剤である。その他の態様では、活性薬剤は、ノットペプチドである。なおも別の態様では、活性薬剤は、放射線増感剤または光増感剤である。いくつかの態様では、細胞毒性分子は、オーリスタチン、ＭＭＡＥ、メイタンシノイド、ＤＭ１、ＤＭ４、ドキソルビシン、カリケアマイシン、白金化合物、シスプラチン、タキサン、パクリタキセル、ＳＮ−３８、ＢＡＣＥ阻害剤、Ｂｃｌ−ｘＬ阻害剤、ＷＥＨＩ−５３９、ベネトクラクス、ＡＢＴ−１９９、ナビトクラクス、ＡＴ−１０１、オバトクラクス、ピロロベンゾジアゼピンまたはピロロベンゾジアゼピン二量体、またはドラスタチンである。
【００２３】
その他の態様では、ペプチドは検出可能薬剤に連結される。さらなる態様では、活性薬剤は、ペプチドのＮ末端またはＣ末端ペプチドと融合される。なおさらなる態様では、１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０の検出可能薬剤がペプチドに連結される。
【００２４】
いくつかの態様では、ペプチドは、切断可能リンカーを介して検出可能薬剤に連結される。その他の態様では、ペプチドは、リンカーによって、ペプチドのＮ末端、内部リジン残基のεアミン、またはＣ末端で、検出可能薬剤に連結される。さらなる態様では、内部リジンは、配列番号３７のアミノ酸残基１７、配列番号３７のアミノ酸残基２５、または配列番号３７のアミノ酸残基２９に対応する位置にある。その他の態様では、内部リジン残基は、配列番号２４６のアミノ酸残基１５、配列番号２４６のアミノ酸残基２３、または配列番号２４６のアミノ酸残基２７に対応する位置にある。
【００２５】
いくつかの態様では、ペプチドは、非天然アミノ酸をさらに含んでなり、その中で非天然アミノ酸は、挿入、付加、または別のアミノ酸への置換である。
【００２６】
いくつかの態様では、ペプチドは、リンカーによって、非天然アミノ酸で活性薬剤に連結される。その他の態様では、リンカーは、アミド結合、エステル結合、カルバメート結合、ヒドラゾン結合、オキシム結合、または炭素−窒素結合を含んでなる。さらなる態様では、切断可能なリンカーは、マトリックスメタロプロテイナーゼ、トロンビン、カテプシン、またはβ−グルクロニダーゼのための切断部位を含む。いくつかの態様では、ペプチドは、切断不能リンカーを介して検出可能薬剤に連結される。
【００２７】
その他の態様では、検出可能薬剤は、フルオロフォア、近赤外線色素、造影剤、ナノ粒子、金属含有ナノ粒子、金属キレート、Ｘ線造影剤、ＰＥＴ薬剤、放射性同位体、または放射性核種キレート剤である。いくつかの態様では、検出可能薬剤は蛍光染料である。
【００２８】
いくつかの態様では、ペプチドは、腫瘍またはがん性細胞に、ホーミング、標的化、指向化、蓄積、または移動する。いくつかの態様では、腫瘍は固形腫瘍である。その他の態様では、腫瘍は血液悪性疾患である。さらなる態様では、ペプチドは固形腫瘍に浸透する。なおもさらなる態様では、ペプチドはがん性細胞に内在化または浸透する。いくつかの態様では、腫瘍またはがん性細胞は、脳がん、神経膠芽腫、結腸がん、トリプルネガティブ乳がん、転移性がん、または肉腫に由来する。
【００２９】
いくつかの態様では、ペプチドは、血液脳関門を通過して腫瘍に接近する。その他の態様では、ペプチドは、血液脳脊髄液関門を通過して腫瘍に接近する。
【００３０】
いくつかの態様では、ペプチドは、対象の血液脳関門または血液脳脊髄液関門を通過する。その他の態様では。（Ｉｎ  ｏｔｈｅｒ  ａｓｐｅｃｔｓ．）その他の態様では、ペプチドは対象の血液脳脊髄液関門を通過する。
【００３１】
いくつかの態様では、ペプチドは、血液脳関門を通過した後に、対象の腫瘍または病的領域、組織、構造、または細胞に、ホーミング、標的化、指向化、蓄積、または移動する。
【００３２】
その他の態様では、対象への投与時に、ペプチドは、対象の特定の脳領域にホーミング、標的化、ｉ指向化、蓄積、または移動する。さらなる態様では、脳の特定の領域は、脳室、脳脊髄液、海馬、髄膜、吻側移動流（ｒｏｓｔｒａｌ  ｍｉｇｒａｔｏｒｙ  ｓｙｓｔｅｍ）、歯状回、脳室下領域、またはそれらの任意の組み合わせを含んでなる。
【００３３】
いくつかの態様では、ペプチドは、神経学的障害、リソソーム蓄積症、てんかん、髄膜炎、脳内感染症、ストローク、および多発性硬化症に影響を及ぼす。いくつかの態様では、ペプチドは、神経変性疾患に関連するタンパク質の凝集に影響を及ぼす。その他の態様では、ペプチドは、脳がんに関連する経路を阻害する。なおも別の態様では、ペプチドは、イオンチャネルを阻害または活性化する。いくつかの態様では、ペプチドはプロテアーゼ阻害活性を示す。その他の態様では、ペプチドは、抗菌、抗真菌、または抗ウイルス活性を有する。
【００３４】
様々な態様では、本開示は、本開示のペプチドまたはその塩と、薬学的に許容できる担体とを含んでなる、医薬組成物を提供する。いくつかの態様では、医薬組成物は、対象への投与のために製剤化される。さらなる態様では、医薬組成物は、吸入、鼻腔内投与、経口投与、局所投与、静脈内投与、皮下投与、関節内投与、筋肉内投与、クモ膜下腔内、腹腔内投与、またはそれらの組み合わせのための製剤である。
【００３５】
様々な態様では、本開示は、本開示のペプチドまたは医薬組成物を対象に投与するステップを含んでなる、それを必要とする対象において、病状を治療する方法を提供する。いくつかの態様では、ペプチドまたは医薬組成物は、吸入、鼻腔内、経口的、局所的、静脈内、皮下、関節内、筋肉内投与、腹腔内、またはそれらの組み合わせによって投与される。
【００３６】
いくつかの態様では、方法のペプチドまたは医薬組成物。（Ｉｎ  ｓｏｍｅ  ａｓｐｅｃｔｓ，ｔｈｅ  ｐｅｐｔｉｄｅ  ｏｒ  ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｍｅｔｈｏｄ．）いくつかの態様では、病状は腫瘍またはがんである。さらなる態様では、病状は固形腫瘍である。その他の態様では、腫瘍は血液悪性疾患である。その他の態様では、病状は、脳腫瘍、トリプルネガティブ乳がん、結腸がん転移、転移性がんまたは肉腫である。さらなる態様では、脳腫瘍は手術不能である。
【００３７】
いくつかの態様では、方法のペプチドは、血液脳関門を通過して、脳内腫瘍に、ホーミング、標的化、移動、蓄積、または指向化する。いくつかの態様では、ペプチドは、血液脳脊髄液関門を通過して、脳内腫瘍に、ホーミング、標的化、移動、蓄積、または指向化する。
【００３８】
いくつかの態様では、方法はその他の治療と組み合わされる。さらなる局面において、その他の治療は、化学療法、放射線療法、または免疫調節療法を含んでなる。
【００３９】
いくつかの態様では、方法のペプチドは、投与に続いて対象の血液脳関門を通過する。その他の態様では、ペプチドは、投与に続いて対象の血液脳脊髄液関門を通過する。
【００４０】
いくつかの態様では、方法のペプチドは、投与に続いて、対象の脳室、脳脊髄液、髄膜、吻側移動流（ｒｏｓｔｒａｌ  ｍｉｇｒａｔｏｒｙ  ｓｙｓｔｅｍ）、または海馬に、ホーミング、標的化、指向化、蓄積、または移動する。いくつかの態様では、病状は脳の病状である。その他の態様では、病状は、脳室、脳脊髄液、または海馬機能に関連する。さらなる態様では、脳の病状は、脳の機能に関連する。
【００４１】
いくつかの態様では、方法のペプチドは、脳の病状を診断、予防、または治療する。さらなる態様では、脳の病状は脳腫瘍または脳がんである。その他の態様では、脳の病状は、記憶または記憶機能障害、アルツハイマー病、パーキンソン病、多系統萎縮症（ＭＳＡ）、統合失調症、てんかん、進行性多巣性白質脳症、真菌感染症、うつ病、双極性障害、心的外傷後ストレス障害、脳卒中、外傷性脳損傷、感染症、または多発性硬化症である。
【００４２】
様々な態様では、本開示は、本開示のペプチドまたは医薬組成物を対象に投与するステップと、前記対象の臓器または身体領域をイメージングするステップとを含んでなる、対象の臓器または身体領域をイメージングする方法を提供する。
【００４３】
いくつかの態様では、方法は、対象のがんまたは病的領域、組織、構造または細胞を検出するステップを含んでなる。さらなる態様では、方法は、対象に外科手術を実施するステップを含んでなる。なおもさらなる態様では、方法は、がんを治療するステップを含んでなる。
【００４４】
いくつかの態様では、方法の外科手術は、対象のがんまたは病的領域、組織、構造または細胞を除去するステップを含んでなる。さらなる態様では、方法は、外科的除去の後に、対象のがんまたは病的領域、組織、構造、または細胞をイメージングするステップを含んでなる。
【００４５】
参照による援用
本明細書で言及され、開示され、または参照される全ての刊行物、特許、および特許出願は、個々の刊行物、特許、または特許出願が、あたかも具体的かつ個別に参照により援用されているかのように、その内容全体が参照により本明細書に援用される。
【００４６】
本発明の新規特性は、添付の特許請求の範囲に詳細に記載されている。本発明の特徴および利点のより良い理解は、その中で本発明の原理が利用される例示的な実施形態を記載する、以下の詳細な説明およびその添付図面を参照することによって得られるであろう。
【図面の簡単な説明】
【００４７】
【図１】リジンをメチル化することによって、放射性標識されたペプチドである。図１Ａは天然リジンを例示し、図１Ｂはジメチル化リジンを示す。
【図２】フルオキセチン（上）およびイヌリン（下）対照群について、脳およびその他の組織における１４Ｃシグナルを示す。
【図３】配列番号１の放射性標識ペプチドについて、脳およびその他の組織における１４Ｃシグナルを示す。
【図４】配列番号３の放射性標識ペプチドについて、脳およびその他の組織における１４Ｃシグナルを示す。
【図５】配列番号１のペプチドのＨＰＬＣプロファイルを示す。
【図６】配列番号２のペプチドの非還元型および還元型サンプルの双方について、ＨＰＬＣプロファイルのオーバーレイを示す。
【図７】配列番号３のペプチドの非還元型および還元型サンプルの双方について、ＨＰＬＣプロファイルのオーバーレイを示す。
【図８】配列番号４のペプチドのＨＰＬＣプロファイルを示す。
【図９】配列番号１〜配列番号４を発現するコンストラクトの例示的な構成を示す。
【図１０】本開示のペプチドを製造する方法の概略図を示す。
【図１１Ａ−Ｂ】図１１は、配列番号４（図１１Ａ）、配列番号６（図１１Ｂ）、配列番号１７（図１１Ｃ）、配列番号２５（図１１Ｄ）、および配列番号３２（図１１Ｅ）のペプチド小規模発現試行からの品質管理データを示す。
【図１１Ｃ−Ｄ】図１１は、配列番号４（図１１Ａ）、配列番号６（図１１Ｂ）、配列番号１７（図１１Ｃ）、配列番号２５（図１１Ｄ）、および配列番号３２（図１１Ｅ）のペプチド小規模発現試行からの品質管理データを示す。
【図１１Ｅ】図１１は、配列番号４（図１１Ａ）、配列番号６（図１１Ｂ）、配列番号１７（図１１Ｃ）、配列番号２５（図１１Ｄ）、および配列番号３２（図１１Ｅ）のペプチド小規模発現試行からの品質管理データを示す。
【図１２Ａ−Ｂ】図１２は、配列番号３９ペプチドのＨＰＬＣデータ、およびＳＤＳ−ＰＡＧＥゲル上の還元型バンドと比較した非還元型；および配列番号２５ペプチドのＭＡＬＤＩ質量分析グラフを示す。図１２Ａは、配列番号３９のＨＰＬＣプロファイルを示す。図１２Ｂは、ＳＤＳ−ＰＡＧＥゲル上の配列番号３９の非還元型および還元型バンドを示す。
【図１２Ｃ】図１２は、配列番号３９ペプチドのＨＰＬＣデータ、およびＳＤＳ−ＰＡＧＥゲル上の還元型バンドと比較した非還元型；および配列番号２５ペプチドのＭＡＬＤＩ質量分析グラフを示す。図１２Ｃは、配列番号２５のＭＡＬＤＩ質量分析グラフの全スペクトルを示す。
【図１２Ｄ】図１２は、配列番号３９ペプチドのＨＰＬＣデータ、およびＳＤＳ−ＰＡＧＥゲル上の還元型バンドと比較した非還元型；および配列番号２５ペプチドのＭＡＬＤＩ質量分析グラフを示す。図１２Ｄは、配列番号２５のＭＡＬＤＩ質量分析グラフの全スペクトルの拡大部分を示す。
【図１３】Ａｌｅｘａ  ６４７蛍光色素にコンジュゲートされた９ナノモルの配列番号５の放射性標識ペプチド（配列番号５−ＲＡペプチドコンジュゲート）投与の３時間後における、マウスの白色光および対応するオートラジオグラフィー画像を示す。  図１３Ａは、Ａｌｅｘａ  ６４７蛍光色素にコンジュゲートされた９ナノモルの配列番号５の放射性標識ペプチド（配列番号５−ＲＡペプチドコンジュゲート）投与の３時間後における、マウスの凍結切片の白色光画像を示す。  図１３Ｂは、図１３Ａに対応するオートラジオグラフィー画像を示し、その中では、１４Ｃシグナルが、Ａｌｅｘａ  ６４７蛍光色素にコンジュゲートされた９ナノモルの配列番号５の放射性標識ペプチド（配列番号５−ＲＡペプチドコンジュゲート）投与の３時間後における、マウスのＲＨ−２８腫瘍を含む組織に分布するペプチド分布を同定する。  図１３Ｃは、Ａｌｅｘａ  ６４７蛍光色素にコンジュゲートされた９ナノモルの配列番号５の放射性標識ペプチド（配列番号５−ＲＡペプチドコンジュゲート）投与の３時間後における、図１３Ａおよび図１３Ｂと同じマウスの異なる凍結切片の白色光画像を示す。  図１３Ｄは、図１３Ｃに対応するオートラジオグラフィー画像を示し、その中では、１４Ｃシグナルが、Ａｌｅｘａ  ６４７蛍光色素にコンジュゲートされた９ナノモルの配列番号５の放射性標識ペプチド（配列番号５−ＲＡペプチドコンジュゲート）投与の３時間後における、ＲＨ−２８腫瘍を含む組織に分布するペプチド分布を同定する。  図１３Ｅは、Ａｌｅｘａ  ６４７蛍光色素にコンジュゲートされた９ナノモルの配列番号５の放射性標識ペプチド（配列番号５−ＲＡペプチドコンジュゲート）投与の３時間後における、図１３Ａ〜図１３Ｄに示されるのと異なるマウスの凍結切片の白色光画像を示す。  図１３Ｆは、図１３Ｅに対応するオートラジオグラフィー画像を示し、その中では、１４Ｃシグナルが、Ａｌｅｘａ  ６４７蛍光色素にコンジュゲートされた９ナノモルの配列番号５の放射性標識ペプチド（配列番号５−ＲＡペプチドコンジュゲート）投与の３時間後における、マウスのＲＨ−２８腫瘍を含む組織に分布するペプチド分布を同定する。  図１３Ｇは、Ａｌｅｘａ  ６４７蛍光色素にコンジュゲートされた９ナノモルの配列番号５の放射性標識ペプチド（配列番号５−ＲＡペプチドコンジュゲート）投与の３時間後における、図１３Ｅおよび図１３Ｆと同じマウスの異なる凍結切片の白色光画像を示す。  図１３Ｈは、図１３Ａに対応するオートラジオグラフィー画像を示し、その中では、１４Ｃシグナルが、Ａｌｅｘａ  ６４７蛍光色素にコンジュゲートされた９ナノモルの配列番号５の放射性標識ペプチド（配列番号５−ＲＡペプチドコンジュゲート）投与の３時間後における、マウスのＲＨ−２８腫瘍を含む組織に分布するペプチド分布を同定する。
【図１４】図１４は、Ａｌｅｘａ  ６４７蛍光色素にコンジュゲートされた９ナノモルの配列番号５の放射能標識ペプチド（配列番号５−ＲＡペプチドコンジュゲート）投与の２４時間後における、マウスの白色光および対応するオートラジオグラフィー画像を示す。  図１４Ａは、Ａｌｅｘａ  ６４７蛍光色素にコンジュゲートされた９ナノモルの配列番号５の放射性標識ペプチド（配列番号５−ＲＡペプチドコンジュゲート）投与の２４時間後における、マウスの凍結切片の白色光画像を示す。  図１４Ｂは、図１４Ａに対応するオートラジオグラフィー画像を示し、その中では、１４Ｃシグナルが、Ａｌｅｘａ  ６４７蛍光色素にコンジュゲートされた９ナノモルの配列番号５の放射性標識ペプチド（配列番号５−ＲＡペプチドコンジュゲート）投与の２４時間後における、マウスのＲＨ−２８腫瘍を含む組織に分布するペプチド分布を同定する。  図１４Ｃは、Ａｌｅｘａ  ６４７蛍光色素にコンジュゲートされた９ナノモルの配列番号５の放射性標識ペプチド（配列番号５−ＲＡペプチドコンジュゲート）投与の２４時間後における、図１４Ａおよび図１４Ｂと同じマウスの異なる凍結切片の白色光画像を示す。  図１４Ｄは、図１４Ｃに対応するオートラジオグラフィー画像を示し、その中では、１４Ｃシグナルが、Ａｌｅｘａ  ６４７蛍光色素（配列番号５−ＲＡペプチドコンジュゲート）にコンジュゲートされた９ナノモルの配列番号３の放射性標識ペプチド投与の２４時間後における、マウスのＲＨ−２８腫瘍を含む組織に分布するペプチド分布を同定する。  図１４Ｅは、Ａｌｅｘａ  ６４７蛍光色素（配列番号５−ＲＡペプチドコンジュゲート）にコンジュゲートされた９ナノモルの配列番号５の放射性標識ペプチド投与の２４時間後における、図１４Ａ〜図１４Ｄに示されるのと異なるマウスの凍結切片の白色光画像を示す。  図１４Ｆは、図１４Ｅに対応するオートラジオグラフィー画像を示し、その中では、１４Ｃシグナルが、Ａｌｅｘａ  ６４７蛍光色素にコンジュゲートされた９ナノモルの配列番号５の放射性標識ペプチド（配列番号５−ＲＡペプチドコンジュゲート）投与の２４時間後における、マウスのＲＨ−２８腫瘍を含む組織に分布するペプチド分布を同定する。  図１４Ｇは、Ａｌｅｘａ  ６４７蛍光色素にコンジュゲートされた９ナノモルの配列番号５の放射性標識ペプチド（配列番号５−ＲＡペプチドコンジュゲート）投与の２４時間後における、図１４Ｅおよび図１４Ｆと同じマウスの異なる凍結切片の白色光画像を示す。  図１４Ｈは、図１４Ｇに対応するオートラジオグラフィー画像を示し、その中では、１４Ｃシグナルが、Ａｌｅｘａ  ６４７蛍光色素（配列番号５−ＲＡペプチドコンジュゲート）にコンジュゲートされた９ナノモルの配列番号５の放射性標識ペプチド投与の２４時間後における、マウスのＲＨ−２８腫瘍を含む組織に分布するペプチド分布を同定する。
【図１５】図１５は、バリン−シトルリンリンカーを介してＭＭＡＥにコンジュゲートされた１１ナノモルの配列番号５の放射性標識ペプチド（配列番号５−ＲＺペプチドコンジュゲート）投与の３時間後における、マウス白色光および対応するオートラジオグラフィー画像を示す。  図１５Ａは、バリン−シトルリンリンカーによってＭＭＡＥにコンジュゲートされた１１ナノモルの配列番号５の放射性標識ペプチド（配列番号５−ＲＺペプチドコンジュゲート）投与の３時間後における、マウスの凍結切片の白色光画像を示す。  図１５Ｂは、図１５Ａに対応するオートラジオグラフィー画像を示し、その中では、１４Ｃシグナルが、バリン−シトルリンリンカーを介してＭＭＡＥにコンジュゲートされた１１ナノモルの配列番号５の放射性標識ペプチド（配列番号５−ＲＺペプチドコンジュゲート）投与の３時間後における、マウスのＲＨ−２８腫瘍を含む組織に分布するペプチド分布を同定する。  図１５Ｃは、バリン−シトルリンリンカーを介してＭＭＡＥにコンジュゲートされた１１ナノモルの配列番号５の放射性標識ペプチド（配列番号５−ＲＺペプチドコンジュゲート）投与の３時間後における、図１５Ａおよび図１５Ｂと同じマウスの異なる凍結切片の白色光画像を示す。  図１５Ｄは、図１５Ｃに対応するオートラジオグラフィー画像を示し、その中では、１４Ｃシグナルが、バリン−シトルリンリンカーを介してＭＭＡＥにコンジュゲートされた１１ナノモルの配列番号５の放射性標識ペプチド（配列番号５−ＲＺペプチドコンジュゲート）投与の３時間後における、ＲＨ−２８腫瘍を含む組織に分布するペプチド分布を同定する。  図１５Ｅは、バリン−シトルリンリンカーを介してＭＭＡＥにコンジュゲートされた１１ナノモルの配列番号５の放射性標識ペプチド（配列番号５−ＲＺペプチドコンジュゲート）投与の３時間後における、図１５Ａ〜図１５Ｄに示されるのと異なるマウスの凍結切片の白色光画像を示す。  図１５Ｆは、図１５Ｅに対応するオートラジオグラフィー画像を示し、その中では、１４Ｃシグナルが、バリン−シトルリンリンカーを介してＭＭＡＥにコンジュゲートされた１１ナノモルの配列番号５の放射性標識ペプチド（配列番号５−ＲＺペプチドコンジュゲート）投与の３時間後における、マウスのＲＨ−２８腫瘍を含む組織に分布するペプチド分布を同定する。  図１５Ｇは、バリン−シトルリンリンカーを介してＭＭＡＥにコンジュゲートされた１１ナノモルの配列番号５の放射性標識ペプチド（配列番号５−ＲＺペプチドコンジュゲート）投与の３時間後における、図１５Ｅおよび図１５Ｆと同じマウスの異なる凍結切片の白色光画像を示す。  図１５Ｈは、図１５Ｇに対応するオートラジオグラフィー画像を示し、その中では、１４Ｃシグナルが、バリン−シトルリンリンカーを介してＭＭＡＥにコンジュゲートされた１１ナノモルの配列番号５の放射性標識ペプチド（配列番号５−ＲＺペプチドコンジュゲート）投与の３時間後における、ＲＨ−２８腫瘍を含む組織に分布するペプチド分布を同定する。
【図１６】図１６は、バリン−シトルリンリンカーを介してＭＭＡＥにコンジュゲートされた１１ナノモルの配列番号５の放射性標識ペプチド（配列番号５−ＲＺペプチドコンジュゲート）投与の２４時間後における、マウス白色光および対応するオートラジオグラフィー画像を示す。  図１６Ａは、バリン−シトルリンリンカーを介してＭＭＡＥにコンジュゲートされた１１ナノモルの配列番号５の放射性標識ペプチド（配列番号５−ＲＺペプチドコンジュゲート）投与の２４時間後における、マウスの凍結切片の白色光画像を示す。  図１６Ｂは、図１６Ａに対応するオートラジオグラフィー画像を示し、その中では、１４Ｃシグナルが、バリン−シトルリンリンカーを介してＭＭＡＥにコンジュゲートされた１１ナノモルの配列番号５の放射性標識ペプチド（配列番号５−ＲＺペプチドコンジュゲート）投与の２４時間後における、マウスのＲＨ−２８腫瘍を含む組織に分布するペプチド分布を同定する。  図１６Ｃは、バリン−シトルリンリンカーを介してＭＭＡＥにコンジュゲートされた１１ナノモルの配列番号５の放射性標識ペプチド（配列番号５−Ｚペプチドコンジュゲート）投与の２４時間後における、図１６Ａおよび図１６Ｂと同じマウスの異なる凍結切片の白色光画像を示す。  図１６Ｄは、図１６Ｃに対応するオートラジオグラフィー画像を示し、その中では、１４Ｃシグナルが、バリン−シトルリンリンカーを介してＭＭＡＥにコンジュゲートされた１１ナノモルの配列番号５の放射性標識ペプチド（配列番号５−ＲＺペプチドコンジュゲート）投与の２４時間後における、ＲＨ−２８腫瘍を含む組織に分布するペプチド分布を同定する。  図１６Ｅは、バリン−シトルリンリンカーを介してＭＭＡＥにコンジュゲートされた１１ナノモルの配列番号５の放射性標識ペプチド（配列番号５−ＲＺペプチドコンジュゲート）投与の２４時間後における、図１６Ａ〜図１６Ｄに示されるのと異なるマウスの凍結切片の白色光画像を示す。  図１６Ｆは、図１６Ｅに対応するオートラジオグラフィー画像を示し、その中では、１４Ｃシグナルが、バリン−シトルリンリンカーを介してＭＭＡＥにコンジュゲートされた１１ナノモルの配列番号５の放射性標識ペプチド（配列番号５−ＲＺペプチドコンジュゲート）投与の２４時間後における、マウスのＲＨ−２８腫瘍を含む組織に分布するペプチド分布を同定する。  図１６Ｇは、バリン−シトルリンリンカーを介してＭＭＡＥにコンジュゲートされた１１ナノモルの配列番号５の放射性標識ペプチド（配列番号１５−ＲＺペプチドコンジュゲート）投与の２４時間後における、図１６Ｅおよび図１６Ｆと同じマウスの異なる凍結切片の白色光画像を示す。  図１６Ｈは、図１６Ｇに対応するオートラジオグラフィー画像を示し、その中では、１４Ｃシグナルが、バリン−シトルリンリンカーを介してＭＭＡＥにコンジュゲートされた１１ナノモルの配列番号５の放射性標識ペプチド（配列番号５−ＲＺペプチドコンジュゲート）投与の２４時間後における、ＲＨ−２８腫瘍を含む組織に分布するペプチド分布を同定する。
【図１７】図１７は、１２．８ナノモルの配列番号５ペプチドの放射性標識ペプチド（配列番号５−Ｒペプチド）投与の３時間後における、マウス白色光および対応するオートラジオグラフィー画像を示す。  図１７Ａは、１２．８ナノモルの配列番号５ペプチドの放射性標識ペプチド（配列番号５−Ｒペプチド）投与の３時間後における、マウスの凍結切片の白色光画像を示す。  図１７Ｂは、図１７Ａに対応するオートラジオグラフィー画像を示し、その中では、１４Ｃシグナルが、１２．８ナノモルの配列番号５の放射性標識ペプチド（配列番号５−Ｒペプチド）投与の３時間後における、マウスのＲＨ−２８腫瘍を含む組織に分布するペプチド分布を同定する。  図１７Ｃは、１２．８ナノモルの配列番号５の放射性標識ペプチド（配列番号５−Ｒペプチド）投与の３時間後における、図１７Ａおよび図１７Ｂと同じマウスの異なる凍結切片の白色光画像を示す。  図１７Ｄは、図１７Ｃに対応するオートラジオグラフィー画像を示し、その中では、１４Ｃシグナルが、１２．８ナノモルの配列番号５の放射性標識ペプチド（配列番号５−Ｒペプチド）投与の３時間後における、ＲＨ−２８腫瘍を含む組織に分布するペプチド分布を同定する。  図１７Ｅは、１２．８ナノモルの配列番号５の放射性標識ペプチド（配列番号５−Ｒペプチド）投与の３時間後における、図１７Ａ〜図１７Ｄに示されるのと異なるマウスの凍結切片の白色光画像を示す。  図１７Ｆは、図１７Ｅに対応するオートラジオグラフィー画像を示し、その中では、１４Ｃシグナルが、１２．８ナノモルの配列番号５の放射性標識ペプチド（配列番号５−Ｒペプチド）投与の３時間後における、マウスのＲＨ−２８腫瘍を含む組織に分布するペプチド分布を同定する。  図１７Ｇは、１２．８ナノモルの配列番号５の放射性標識ペプチド（配列番号５−Ｒペプチド）投与の３時間後における、図１７Ｅおよび図１７Ｆと同じマウスの異なる凍結切片の白色光画像を示す。  図１７Ｈは、図１７Ｇに対応するオートラジオグラフィー画像を示し、その中では、１４Ｃシグナルが、１２．８ナノモルの配列番号５の放射性標識ペプチド（配列番号５−Ｒペプチド）投与の３時間後における、ＲＨ−２８腫瘍を含む組織に分布するペプチド分布を同定する。
【図１８】図１８は、切断不能リンカーを介してＤＭ−１にコンジュゲートされた１４ナノモルの配列番号５の放射性標識ペプチド（配列番号５−ＲＹペプチドコンジュゲート）投与の３時間後における、マウス白色光および対応するオートラジオグラフィー画像を示す。  図１８Ａは、切断不能リンカーを介してＤＭ−１にコンジュゲートされた１４ナノモルの配列番号５の放射性標識ペプチド（配列番号５−ＲＹペプチドコンジュゲート）投与の３時間後における、マウスの凍結切片の白色光画像を示す。  図１８Ｂは、図１８Ａに対応するオートラジオグラフィー画像を示し、その中では、１４Ｃシグナルが、切断不能リンカーを介してＤＭ−１にコンジュゲートされた１４ナノモルの配列番号５の放射性標識ペプチド（配列番号５−ＲＹペプチドコンジュゲート）投与の３時間後における、マウスのＲＨ−２８腫瘍を含む組織に分布するペプチド分布を同定する。  図１８Ｃは、切断不能リンカーを介してＤＭ−１にコンジュゲートされた１４ナノモルの配列番号５の放射性標識ペプチド（配列番号５−ＲＹペプチドコンジュゲート）投与の３時間後における、図１８Ａおよび図１８Ｂと同じマウスの異なる凍結切片の白色光画像を示す。  図１８Ｄは、図１８Ｃに対応するオートラジオグラフィー画像を示し、その中では、１４Ｃシグナルが、切断不能リンカーを介してＤＭ−１にコンジュゲートされた１４ナノモルの配列番号５の放射性標識ペプチド（配列番号５−ＲＹペプチドコンジュゲート）投与の３時間後における、ＲＨ−２８腫瘍を含む組織に分布するペプチド分布を同定する。  図１８Ｅは、切断不能リンカーを介してＤＭ−１にコンジュゲートされた１４ナノモルの配列番号５の放射性標識ペプチド（配列番号５−ＲＹペプチドコンジュゲート）投与の３時間後における、図１８Ａ〜図１８Ｄに示されるのと異なるマウスの凍結切片の白色光画像を示す。  図１８Ｆは、図１８Ｅに対応するオートラジオグラフィー画像を示し、その中では、１４Ｃシグナルが、切断不能リンカーを介してＤＭ−１にコンジュゲートされた１４ナノモルの配列番号５の放射性標識ペプチド（配列番号５−ＲＹペプチドコンジュゲート）投与の３時間後における、マウスのＲＨ−２８腫瘍を含む組織に分布するペプチド分布を同定する。  図１８Ｇは、切断不能リンカーを介してＤＭ−１にコンジュゲートされた１４ナノモルの配列番号５の放射性標識ペプチド（配列番号５−ＲＹペプチドコンジュゲート）投与の３時間後における、図１８Ｅおよび図１８Ｆと同じマウスの異なる凍結切片の白色光画像を示す。  図１８Ｈは、図１８Ｇに対応するオートラジオグラフィー画像を示し、その中では、１４Ｃシグナルが、切断不能リンカーを介してＤＭ−１にコンジュゲートされた１４ナノモルの配列番号５の放射性標識ペプチド（配列番号５−ＲＹペプチドコンジュゲート）投与の３時間後における、ＲＨ−２８腫瘍を含む組織に分布するペプチド分布を同定する。
【図１９】図１９は、切断不能リンカーを介してＤＭ−１にコンジュゲートされた１４ナノモルの配列番号５の放射性標識ペプチド（配列番号５−ＲＹペプチドコンジュゲート）投与の２４時間後における、マウス白色光および対応するオートラジオグラフィー画像を示す。  図１９Ａは、切断不能リンカーを介してＤＭ−１にコンジュゲートされた１４ナノモルの配列番号５の放射性標識ペプチド（配列番号５−ＲＹペプチドコンジュゲート）投与の２４時間後における、マウスの凍結切片の白色光画像を示す。  図１９Ｂは、図１９Ａに対応するオートラジオグラフィー画像を示し、その中では、１４Ｃシグナルが、切断不能リンカーを介してＤＭ−１にコンジュゲートされた１４ナノモルの配列番号５の放射性標識ペプチド（配列番号５−ＲＹペプチドコンジュゲート）投与の２４時間後における、マウスのＲＨ−２８腫瘍を含む組織に分布するペプチド分布を同定する。  図１９Ｃは、切断不能リンカーを介してＤＭ−１にコンジュゲートされた１４ナノモルの配列番号５の放射性標識ペプチド（配列番号５−ＲＹペプチドコンジュゲート）投与の２４時間後における、図１９Ａおよび図１９Ｂと同じマウスの異なる凍結切片の白色光画像を示す。  図１９Ｄは、図１９Ｃに対応するオートラジオグラフィー画像を示し、その中では、１４Ｃシグナルが、切断不能リンカーを介してＤＭ−１にコンジュゲートされた１４ナノモルの配列番号５の放射性標識ペプチド（配列番号５−ＲＹペプチドコンジュゲート）投与の２４時間後における、ＲＨ−２８腫瘍を含む組織に分布するペプチド分布を同定する。  図１９Ｅは、切断不能リンカーを介してＤＭ−１にコンジュゲートされた１４ナノモルの配列番号５の放射性標識ペプチド（配列番号５−ＲＹペプチドコンジュゲート）投与の２４時間後における、図１９Ａ〜図１９Ｄに示されるのと異なるマウスの凍結切片の白色光画像を示す。  図１９Ｆは、図１９Ｆに対応するオートラジオグラフィー画像を示し、その中では、１４Ｃシグナルが、切断不能リンカーを介してＤＭ−１にコンジュゲートされた１４ナノモルの配列番号５の放射性標識ペプチド（配列番号５−ＲＹペプチドコンジュゲート）投与の２４時間後における、マウスのＲＨ−２８腫瘍を含む組織に分布するペプチド分布を同定する。  図１９Ｇは、切断不能リンカーを介してＤＭ−１にコンジュゲートされた１４ナノモルの配列番号５の放射性標識ペプチド（配列番号５−ＲＹペプチドコンジュゲート）投与の２４時間後における、図１９Ｅおよび図１９Ｆと同じマウスの異なる凍結切片の白色光画像を示す。  図１９Ｈは、図１９Ｇに対応するオートラジオグラフィー画像を示し、その中では、１４Ｃシグナルが、切断不能リンカーを介してＤＭ−１にコンジュゲートされた１４ナノモルの配列番号５の放射性標識ペプチド（配列番号５−ＲＹペプチドコンジュゲート）投与の２４時間後における、ＲＨ−２８腫瘍を含む組織に分布するペプチド分布を同定する。
【図２０Ａ−Ｆ】図２０は、１００ナノモルの放射性標識配列番号３７ペプチド投与の３時間後における、非損傷腎臓を有するマウスからの白色光および対応するオートラジオグラフィー画像を示す。  図２０Ａは、１００ナノモルの放射性標識配列番号３７ペプチド投与の３時間後における、非損傷腎臓を有するマウスの凍結切片の白色光画像を示す。  図２０Ｂは、図２０Ａに対応するオートラジオグラフィー画像を示し、その中では、１４Ｃシグナルが、１００ナノモルの放射性標識配列番号３７ペプチド投与の３時間後における、非損傷腎臓を有するマウス組織に分布するペプチドを同定する。  図２０Ｃは、１００ナノモルの放射性標識配列番号３７ペプチド投与の３時間後における、図２０Ａおよび図２０Ｂと同じマウスの異なる凍結切片の白色光画像を示す。  図２０Ｄは、図２０Ｃに対応するオートラジオグラフィー画像を示し、その中では、１４Ｃシグナルが、１００ナノモルの放射性標識配列番号３７ペプチド投与の３時間後における、マウス組織に分布するペプチドを同定する。  図２０Ｅは、１００ナノモルの放射性標識配列番号３７ペプチド投与の３時間後における、図２０Ａ〜図２０Ｄと同じマウスの異なる凍結切片の白色光画像を示す。  図２０Ｆは、図２０Ｅに対応するオートラジオグラフィー画像を示し、その中では、１４Ｃシグナルが、１００ナノモルの放射性標識配列番号３７ペプチド投与の３時間後における、マウス組織に分布するペプチドを同定する。
【図２０Ｇ−Ｌ】図２０は、１００ナノモルの放射性標識配列番号３７ペプチド投与の３時間後における、非損傷腎臓を有するマウスからの白色光および対応するオートラジオグラフィー画像を示す。  図２０Ｇは、１００ナノモルの放射性標識配列番号３７ペプチド投与の３時間後における、図２０Ａ〜図２０Ｆに示されるのと異なる非損傷腎臓を有するマウスの凍結切片の白色光画像を示す。  図２０Ｈは、図２０Ｇに対応するオートラジオグラフィー画像を示し、その中では、１４Ｃシグナルが、１００ナノモルの放射性標識配列番号３７ペプチド投与の３時間後における、マウス組織に分布するペプチドを同定する。  図２０Ｉは、１００ナノモルの放射性標識配列番号３７ペプチド投与の３時間後における、図２０Ｇおよび図２０Ｈと同じマウスの異なる凍結切片の白色光画像を示す。  図２０Ｊは、図２０Ｉに対応するオートラジオグラフィー画像を示し、その中では、１４Ｃシグナルが、１００ナノモルの放射性標識配列番号３７ペプチド投与の３時間後における、マウス組織に分布するペプチドを同定する。  図２０Ｋは、１００ナノモルの放射性標識配列番号３７ペプチド投与の３時間後における、図２０Ｇ〜図２０Ｊと同じマウスの異なる凍結切片の白色光画像を示す。  図２０Ｌは、図２０Ｋに対応するオートラジオグラフィー画像を示し、その中では、１４Ｃシグナルが、１００ナノモルの放射性標識配列番号３７ペプチド投与の３時間後における、マウスに分布するペプチドを同定する。
【図２１】図２１は、１００ナノモルの放射性標識配列番号３７ペプチド投与の３時間後における、結索腎臓を有するマウスからの白色光および対応するオートラジオグラフィー画像を示す。  図２１Ａは、１００ナノモルの放射性標識配列番号３７ペプチド投与の３時間後における、結索腎臓を有するマウスの凍結切片の白色光画像を示す。  図２１Ｂは、図２１Ａに対応するオートラジオグラフィー画像を示し、その中では、１４Ｃシグナルが、１００ナノモルの放射性標識配列番号３７ペプチド投与の３時間後における、結索腎臓を有するマウス組織に分布するペプチドを同定する。  図２１Ｃは、１００ナノモルの放射性標識配列番号３７ペプチド投与の３時間後における、図２１Ａおよび図２１Ｂと同じマウスの異なる凍結切片の白色光画像を示す。  図２１Ｄは、図２１Ｃに対応するオートラジオグラフィー画像を示し、その中では、１４Ｃシグナルが、１００ナノモルの放射性標識配列番号３７ペプチド投与の３時間後における、マウス組織に分布するペプチドを同定する。  図２１Ｅは、１００ナノモルの放射性標識配列番号３７ペプチド投与の３時間後における、図２１Ａ〜図２１Ｄに示されるのと異なる、結紮腎臓を有するマウスの凍結切片の白色光画像を示す。  図２１Ｆは、図２１Ｅに対応するオートラジオグラフィー画像を示し、その中では、１４Ｃシグナルが、１００ナノモルの放射性標識配列番号３７ペプチド投与の３時間後における、マウス組織に分布するペプチドを同定する。  図２１Ｇは、１００ナノモルの放射性標識配列番号３７ペプチド投与の３時間後における、図２１Ｅおよび図２１Ｆと同じマウスの異なる凍結切片の白色光画像を示す。  図２１Ｈは、図２１Ｇに対応するオートラジオグラフィー画像を図示し、その中では、１４Ｃシグナルが、１００ナノモルの放射性標識配列番号３７ペプチド投与の３時間後における、マウス組織に分布するペプチドを同定する。
【図２２】図２２は、１００ナノモルの放射性標識配列番号３５ペプチド投与の３時間後における、非損傷腎臓を有するマウスからの白色光および対応するオートラジオグラフィー画像を示す。  図２２Ａは、１００ナノモルの放射性標識配列番号３５ペプチド投与の３時間後における、非損傷腎臓を有するマウスの凍結切片の白色光画像を示す。  図２２Ｂは、図２２Ａに対応するオートラジオグラフィー画像を示し、その中では、１４Ｃシグナルが、１００ナノモルの放射性標識配列番号３５ペプチド投与の３時間後における、非損傷腎臓を有するマウス組織に分布するペプチドを同定する。  図２２Ｃは、１００ナノモルの放射性標識配列番号３５ペプチド投与の３時間後における、図２２Ａおよび図２２Ｂと同じマウスの異なる凍結切片の白色光画像を示す。  図２２Ｄは、図２２Ｃに対応するオートラジオグラフィー画像を示し、その中では、１４Ｃシグナルが、１００ナノモルの放射性標識配列番号３５ペプチド投与の３時間後における、マウス組織に分布するペプチドを同定する。  図２２Ｅは、１００ナノモルの放射性標識配列番号３５ペプチド投与の３時間後における、図２２Ａ〜図２２Ｄに示されるのと異なる、非損傷腎臓を有するマウスの凍結切片の白色光画像を示す。  図２２Ｆは、図２２Ｅに対応するオートラジオグラフィー画像を示し、その中では、１４Ｃシグナルが、１００ナノモルの放射性標識配列番号３５ペプチド投与の３時間後における、マウス組織に分布するペプチドを同定する。  図２２Ｇは、１００ナノモルの放射性標識配列番号３５ペプチド投与の３時間後における、図２２Ｅおよび図２２Ｆと同じマウスの異なる凍結切片の白色光画像を示す。  図２２Ｈは、図２２Ｇに対応するオートラジオグラフィー画像を示し、その中では、１４Ｃシグナルが、１００ナノモルの放射性標識配列番号３５ペプチド投与の３時間後における、マウス組織に分布するペプチドを同定する。
【図２３】図２３は、１００ナノモルの放射性標識配列番号３５ペプチド投与の３時間後における、結索腎臓を有するマウスからの白色光および対応するオートラジオグラフィー画像を示す。  図２３Ａは、１００ナノモルの放射性標識配列番号３５ペプチド投与の３時間後における、結索腎臓を有するマウスの凍結切片の白色光画像を示す。  図２３Ｂは、図２３Ａに対応するオートラジオグラフィー画像を示し、その中では、１４Ｃシグナルが、１００ナノモルの放射性標識配列番号３５ペプチド投与の３時間後における、結索腎臓を有するマウス組織に分布するペプチドを同定する。  図２３Ｃは、１００ナノモルの放射性標識配列番号３５ペプチド投与の３時間後における、図２３Ａおよび図２３Ｂと同じマウスの異なる凍結切片の白色光画像を示す。  図２３Ｄは、図２３Ｃに対応するオートラジオグラフィー画像を示し、その中では、１４Ｃシグナルが、１００ナノモルの放射性標識配列番号３５ペプチド投与の３時間後における、マウス組織に分布するペプチドを同定する。  図２３Ｅは、１００ナノモルの放射性標識配列番号３５ペプチド投与の３時間後における、図２３Ａ〜図２３Ｄに示されるのと異なる、結紮腎臓を有するマウスの凍結切片の白色光画像を示す。  図２３Ｆは、図２３Ｅに対応するオートラジオグラフィー画像を示し、その中では、１４Ｃシグナルが、１００ナノモルの配列番号３５ペプチド投与の３時間後における、マウス組織に分布するペプチドを同定する。  図２３Ｇは、１００ナノモルの放射性標識配列番号３５ペプチド投与の３時間後における、図２３Ｅおよび図２３Ｆと同じマウスの異なる凍結切片の白色光画像を示す。  図２３Ｈは、図２３Ｇに対応するオートラジオグラフィー画像を示し、その中では、１４Ｃシグナルが、１００ナノモルの放射性標識配列番号３５ペプチド投与の３時間後における、マウス組織に分布するペプチドを同定する。
【図２４】配列番号５ペプチドの投与後の半減期のグラフを示す。
【図２５】図２５は、ＡＦ６４７蛍光染料にコンジュゲートされた１０ナノモルの配列番号４ペプチド（配列番号４−Ａペプチドコンジュゲート）、ＡＦ６４７蛍光染料にコンジュゲートされた１０ナノモルのインペラトキシン（インペラトキシン−Ａコンジュゲート）、ＡＦ６４７蛍光染料にコンジュゲートされた１０ナノモルのコノトキシンＣＶＩＣ（コノトキシン−Ａコンジュゲート）、またはＡＦ６４７蛍光染料にコンジュゲートされた１０ナノモルの配列番号５４ペプチド（配列番号５４−Ａペプチドコンジュゲート）投与の４時間後におけるマウス、またはいかなるペプチドも投与されていないマウスのいずれかから摘出されたユーイング肉腫腫瘍の近赤外線蛍光画像の比較を示す。  図２５Ａは、ＡＦ６４７蛍光染料にコンジュゲートされた１０ナノモルの配列番号４ペプチド（配列番号４−Ａペプチドコンジュゲート）投与の４時間後におけるマウスから摘出された、ユーイング肉腫腫瘍の近赤外蛍光画像を示す。  図２５Ｂは、ＡＦ６４７蛍光染料にコンジュゲートされた１０ナノモルの配列番号４ペプチド（配列番号４−Ａペプチドコンジュゲート）投与の４時間後における、図２５Ａとは異なるマウスから摘出された、ユーイング肉腫腫瘍の近赤外蛍光画像を示す。  図２５Ｃは、ＡＦ６４７蛍光染料にコンジュゲートされた１０ナノモルのインペラトキシン（インペラトキシン−Ａコンジュゲート）投与の４時間後における、マウスから摘出されたユーイング肉腫腫瘍の近赤外蛍光画像を示す。  図２５Ｄは、ＡＦ６４７蛍光染料にコンジュゲートされた１０ナノモルのインペラトキシン（インペラトキシン−Ａコンジュゲート）投与の４時間後における、図２５Ｃとは異なるマウスから摘出されたユーイング肉腫腫瘍の近赤外蛍光画像を示す。  図２５Ｅは、ＡＦ６４７蛍光染料にコンジュゲートされた１０ナノモルのコノトキシンＣＶＩＣ（コノトキシン−Ａコンジュゲート）投与の４時間後における、マウスから摘出されたユーイング肉腫腫瘍の近赤外蛍光画像を示す。  図２５Ｆは、ＡＦ６４７蛍光染料にコンジュゲートされた１０ナノモルの配列番号５４ペプチド（配列番号５４−Ａペプチドコンジュゲート）投与の４時間後におけるマウスから摘出された、ユーイング肉腫腫瘍の近赤外蛍光画像を示す。  図２５Ｇは、陰性対照としていかなるペプチドも投与されていないマウスから摘出された、ユーイング肉腫腫瘍の近赤外蛍光画像を示す。
【図２６】図２６は、ＡＦ６４７蛍光染料にコンジュゲートされた１０ナノモルの配列番号４ペプチド（配列番号４−Ａペプチドコンジュゲート）、ＡＦ６４７蛍光染料にコンジュゲートされた１０ナノモルのインペラトキシン（インペラトキシン−Ａコンジュゲート）、ＡＦ６４７蛍光染料にコンジュゲートされた１０ナノモルのコノトキシンＣＶＩＣ（コノトキシン−Ａコンジュゲート）、またはＡＦ６４７蛍光染料にコンジュゲートされた１０ナノモルの配列番号５４ペプチド（配列番号５４−Ａペプチドコンジュゲート）投与の４時間後におけるマウス、またはいかなるペプチドも投与されていないマウスのいずれかから摘出されたユーイング肉腫腫瘍の近赤外線蛍光画像の比較を示す。  図２６Ａは、ＡＦ６４７蛍光染料にコンジュゲートされた１０ナノモルの配列番号４ペプチド（配列番号４−Ａペプチドコンジュゲート）投与の４時間後におけるマウスから摘出された、腎臓の近赤外蛍光画像を示す。  図２６Ｂは、ＡＦ６４７蛍光染料にコンジュゲートされた１０ナノモルの配列番号４ペプチド（配列番号４−Ａペプチドコンジュゲート）投与の４時間後における、図２６Ａとは異なるマウスから摘出された、腎臓の近赤外蛍光画像を示す。  図２６Ｃは、ＡＦ６４７蛍光染料にコンジュゲートされた１０ナノモルのインペラトキシン（インペラトキシン−Ａコンジュゲート）投与の４時間後における、マウスから摘出された腎臓の近赤外蛍光画像を示す。  図２６Ｄは、ＡＦ６４７蛍光染料にコンジュゲートされた１０ナノモルのインペラトキシン（インペラトキシン−Ａコンジュゲート）投与の４時間後における、図２６Ｃとは異なるマウスから摘出された腎臓の近赤外蛍光画像を示す。  図２６Ｅは、ＡＦ６４７蛍光染料にコンジュゲートされた１０ナノモルのコノトキシンＣＶＩＣ（コノトキシン−Ａコンジュゲート）投与の４時間後における、マウスから摘出された腎臓の近赤外蛍光画像を示す。  図２６Ｆは、ＡＦ６４７蛍光染料にコンジュゲートされた１０ナノモルの配列番号５４ペプチド（配列番号５４−Ａペプチドコンジュゲート）投与の４時間後におけるマウスから摘出された、腎臓の近赤外蛍光画像を示す。  図２６Ｇは、陰性対照としていかなるペプチドも投与されていないマウスから摘出された、腎臓の近赤外蛍光画像を示す。
【図２７】図２７は、ＡＦ６４７蛍光染料にコンジュゲートされた１０ナノモルの配列番号４ペプチド（配列番号４−Ａペプチドコンジュゲート）、ＡＦ６４７蛍光染料にコンジュゲートされた１０ナノモルのインペラトキシン（インペラトキシン−Ａコンジュゲート）、ＡＦ６４７蛍光染料にコンジュゲートされた１０ナノモルのコノトキシンＣＶＩＣ（コノトキシン−Ａコンジュゲート）、またはＡＦ６４７蛍光染料にコンジュゲートされた１０ナノモルの配列番号５４ペプチド（配列番号５４−Ａペプチドコンジュゲート）投与の４時間後におけるマウス、またはいかなるペプチドも投与されていないマウスのいずれかから摘出された摘出された（ｅｘｃｉｓｅｄ  ｅｘｃｉｓｅｄ）肝臓の近赤外蛍光画像を示す。  図２７Ａは、ＡＦ６４７蛍光染料にコンジュゲートされた１０ナノモルの配列番号４ペプチド（配列番号４−Ａペプチドコンジュゲート）投与の４時間後におけるマウスから摘出された、肝臓の近赤外蛍光画像を示す。  図２７Ｂは、ＡＦ６４７蛍光染料にコンジュゲートされた１０ナノモルの配列番号４ペプチド（配列番号４−Ａペプチドコンジュゲート）投与の４時間後における、図２７Ａとは異なるマウスから摘出された、肝臓の近赤外蛍光画像を示す。  図２７Ｃは、ＡＦ６４７蛍光染料にコンジュゲートされた１０ナノモルのインペラトキシン（インペラトキシン−Ａコンジュゲート）投与の４時間後における、マウスから摘出された肝臓の近赤外蛍光画像を示す。  図２７Ｄは、ＡＦ６４７蛍光染料にコンジュゲートされた１０ナノモルのインペラトキシン（インペラトキシン−Ａペプチドコンジュゲート）投与の４時間後における、図２７Ｃとは異なるマウスから摘出された肝臓の赤外蛍光画像を示す。  図２７Ｅは、ＡＦ６４７蛍光染料にコンジュゲートされた１０ナノモルのコノトキシンＣＶＩＣ（コノトキシン−Ａコンジュゲート）投与の４時間後における、マウスから摘出された肝臓の近赤外蛍光画像を示す。  図２７Ｆは、ＡＦ６４７蛍光染料にコンジュゲートされた１０ナノモルの配列番号５４ペプチド（配列番号５４−Ａペプチドコンジュゲート）投与の４時間後におけるマウスから摘出された、肝臓の近赤外蛍光画像を示す。  図２７Ｇは、陰性対照としていかなるペプチドも投与されていないマウスから摘出された、肝臓の近赤外蛍光画像を示す。
【図２８Ａ−Ｂ】図２８は、ＡＦ６４７蛍光染料にコンジュゲートされた１０ナノモルの配列番号５４ペプチド（配列番号５４−Ａペプチドコンジュゲート）投与の４時間後における、いかなるペプチドも投与されていないマウスから摘出された、様々な組織の近赤外蛍光画像を示す。  図２８Ａは、ＡＦ６４７蛍光染料にコンジュゲートされた１０ナノモルの配列番号５４ペプチド（配列番号５４−Ａペプチドコンジュゲート）投与の４時間後に摘出された、様々な組織の近赤外蛍光画像を示す。上段の左から右への組織は、腫瘍、腎臓、肝臓、心臓、および排液リンパ節である。下段の左から右への組織は、脳、脾臓、骨格筋、肺、側方リンパ節である。組織の蛍光は、ペプチドコンジュゲートの存在を示す。  図２８Ｂは、ＡＦ６４７蛍光染料にコンジュゲートされた１０ナノモルの配列番号５４ペプチド（配列番号５４−Ａペプチドコンジュゲート）投与の４時間後に摘出された、図２８Ａの様々な組織の近赤外蛍光画像を示すが、画像は腎臓なしで撮影された。上段の左から右への組織は、腫瘍、肝臓、心臓、および排液リンパ節である。下段の左から右への組織は、脳、脾臓、骨格筋、肺、側方リンパ節である。組織の蛍光は、ペプチドコンジュゲートの存在を示す。
【図２８Ｃ】図２８は、ＡＦ６４７蛍光染料にコンジュゲートされた１０ナノモルの配列番号５４ペプチド（配列番号５４−Ａペプチドコンジュゲート）投与の４時間後における、いかなるペプチドも投与されていないマウスから摘出された、様々な組織の近赤外蛍光画像を示す。  図２８Ｃは、陰性対照としていかなるペプチドも投与されていないマウスから摘出された、様々な組織の近赤外蛍光画像を示す。上段の左から右への組織は、腫瘍、腎臓、肝臓、および心臓である。下段の左から右への組織は、脳、脾臓、骨格筋、および肺である。組織蛍光は、自己蛍光を示す。
【図２９】図２９は、ＡＦ６４７蛍光染料にコンジュゲートされた１０ナノモルの配列番号５４ペプチド（配列番号５４−Ａペプチドコンジュゲート）投与の４時間後に安楽死させた、腎臓摘出または非摘出マウスの体腔内の生体外近赤外蛍光画像を示す。  図２９Ａは、ＡＦ６４７蛍光染料にコンジュゲートされた１０ナノモルの配列番号５４ペプチド（配列番号５４−Ａペプチドコンジュゲート）投与の４時間後に安楽死させたマウスの体腔内の生体外近赤外蛍光画像を示す。Ｌｖは肝臓の位置を示す。Ｔｍは腫瘍の位置を示す。Ｋｄは腎臓の位置を示す。Ｂｌは膀胱の位置を示す。  図２９Ｂは、図２９Ａに示されるＡＦ６４７蛍光染料にコンジュゲートされた１０ナノモルの配列番号５４ペプチド（配列番号５４−Ａペプチドコンジュゲート）投与の４時間後に安楽死させたマウスの体腔内の生体外近赤外蛍光画像を示すが、腎臓は除去されている。Ｌｖは肝臓の位置を示す。Ｔｍは腫瘍の位置を示す。Ｂｌは膀胱の位置を示す。Ｈｔは心臓の位置を示す。Ｌｇは肺の位置を示す。
【図３０】配列番号５５ペプチドについて、脳における１４Ｃシグナルを示す。
【図３１】還元型および非還元型クロマトグラムを重ね合わせた、配列番号５５のペプチドのＨＰＬＣプロファイルを示す。
【図３２】図３２は、全脳ホモジネート中の配列番号５５の１４Ｃ標識ペプチドのＨＰＬＣ放射線写真を示す。  図３２Ａは、粗脳ホモジネートにスパイクされて、シンチレーション検出器を装着した疎水性カラム上のＨＰＬＣ上で、アセトニトリル勾配および０．１％ＴＦＡを使用して泳動されたペプチドを示す。  図３２Ｂは、放射性標識ペプチドの全身投与後における、３匹のマウスの脳のシンチレーションＨＰＬＣトレースを示す。矢印は、図３２Ａに示されるスパイク対照と同じ保持時間における、無処理１４Ｃで標識された配列番号５５ペプチドに対応するピークを示す。
【図３３】脳室およびＣＳＦなどの脳内の特定の構造への配列番号５５ペプチドの局在を示唆する、矢状（図３３Ａ）および冠状（図３３Ｂ）の脳切片を示す。図３３Ａと図３３Ｂの双方で、放射能スキャンが左側に示され、暗い領域はより高い活性を有する。通常光の組織の画像は、右側に示される。
【図３４】図３４は、１００ナノモルの放射性標識配列番号３９ペプチド投与の３時間後における、結索腎臓を有するマウスの白色光画像および対応するオートラジオグラフィー画像を示す。  図３４Ａは、１００ナノモルの放射性標識配列番号３９ペプチド投与の３時間後における、結索腎臓を有するマウスの凍結切片の白色光画像を示す。  図３４Ｂは、図３４Ａに対応するオートラジオグラフィー画像を示し、その中では、１４Ｃシグナルが、１００ナノモルの放射性標識配列番号３９ペプチド投与の３時間後における、結索腎臓を有するマウス組織に分布するペプチドを同定する。
【図３５】図３５は、１００ナノモルの放射性標識された配列番号３６ペプチド投与の３時間後における、結索腎臓を有するマウスの白色光画像および対応するオートラジオグラフィー画像を示す。  図３５Ａは、１００ナノモルの放射性標識配列番号３６ペプチド投与の３時間後における、結索腎臓を有するマウスの凍結切片の白色光画像を示す。  図３５Ｂは、図３５Ａに対応するオートラジオグラフィー画像を示し、その中では、１４Ｃシグナルが、１００ナノモルの放射性標識配列番号３６ペプチド投与の３時間後における、結索腎臓を有するマウス組織に分布するペプチドを同定する。
【図３６】図３６は、マウス冠状脳切片の白色光およびオートラジオグラフィー画像を示し、１００ナノモルの配列番号５５のペプチドの放射性標識第１の精製画分（第１のＨＰＬＣペプチドピーク）投与、または同じＨＰＬＣからの配列番号５５のペプチドの放射性標識第２の精製画分（第２のＨＰＬＣペプチドピーク）投与の３時間後における、ペプチド分布が同定される。  図３６Ａは、右側にマウスの冠状脳切片の白色光画像、左側に白色光画像に対応するオートラジオグラフィー画像を示す。オートグラフ画像中の１４Ｃシグナルは、ペプチド分布を同定し、１００ナノモルのペプチド投与の３時間後における、脳室およびＣＳＦなどの脳内の特定の構造への、配列番号５５のペプチドの放射性標識第１精製画分（第１ＨＰＬＣペプチドピーク）の局在を示唆する。  図３６Ｂは、右側にマウスの冠状脳切片の白色光画像、左側に白色光画像に対応するオートラジオグラフィー画像を示す。オートグラフ画像中の１４Ｃシグナルは、ペプチド分布を同定し、１００ナノモルのペプチド投与の３時間後における、脳室およびＣＳＦなどの脳内の特定の構造への、配列番号５５のペプチドの第２精製画分（図３６ＡのＨＰＬＣからの第２のＨＰＬＣペプチドピーク）の局在化を示唆する。
【図３７】図３７は、結紮腎臓を有するマウスの白色光画像および対応するオートラジオグラフィー画像を示し、１００ナノモルの配列番号５５のペプチドの放射性標識第１の精製画分（第１のＨＰＬＣペプチドピーク）投与の３時間後における、ペプチド分布を同定する。  図３７Ａは、１００ナノモルの配列番号５５のペプチドの放射性標識第１の精製画分（第１のＨＰＬＣペプチドピーク）投与の３時間後における、結紮腎臓を有するマウスの凍結切片の白色光画像を示す。  図３７Ｂは、３７Ａに対応するオートラジオグラフィー画像を示し、その中で１４Ｃシグナルは、１００ナノモルの配列番号５５ペプチドの放射性標識第１の画分（第１のＨＰＬＣペプチドピーク）投与の３時間後における、結索腎臓を有するマウス組織中のペプチド分布を同定する。
【図３８】図３８は、結紮腎臓を有するマウスの白色光画像および対応するオートラジオグラフィー画像を示し、１００ナノモルの配列番号５５のペプチドの放射性標識第２の精製画分（図３７からのＨＰＬＣの第２のＨＰＬＣペプチドピーク）投与の３時間後における、ペプチド分布を同定する。  図３８Ａは、１００ナノモルの配列番号５５のペプチドの放射性標識第２の精製画分（図３７からのＨＰＬＣの第２のＨＰＬＣペプチドピーク）投与の３時間後における、結索腎臓を有するマウスの凍結切片の白色光画像を示す。  図３８Ｂは、図３８Ａに対応するオートラジオグラフィー画像を示し、その中では１４Ｃシグナルが、１００ナノモルの配列番号５５のペプチドの放射性標識第２の精製画分（図３７からのＨＰＬＣの第２のＨＰＬＣペプチドピーク）投与の３時間後における、結索腎臓を有するマウス組織におけるペプチド分布を同定する。
【図３９】図３９は、１００ナノモルの放射性標識された配列番号８３ペプチド投与の３時間後におけるペプチド分布を同定する、結索腎臓を有するマウスの白色光および対応するオートラジオグラフィー画像を示す。  図３９Ａは、１００ナノモルの放射性標識配列番号８３ペプチド投与の３時間後における、結索腎臓を有するマウスの凍結切片の白色光画像を示す。  図３９Ｂは、図３９Ａに対応するオートラジオグラフィー画像を示し、その中では１４Ｃシグナルが、１００ナノモルの放射性標識配列番号８３ペプチド投与の３時間後における、結索腎臓を有するマウス組織に分布するペプチドを同定する。
【図４０】右側に冠状脳切片の白色光画像、左側に白色光画像に対応するオートラジオグラフィー画像を示す。オートグラフ画像中の１４Ｃシグナルは、放射性標識配列番号３４投与の３時間後におけるペプチド分布を同定し、脳室およびＣＳＦなどの脳内の特定の構造へのペプチドの局在を示唆する。
【図４１】右側に冠状脳切片の白色光画像、左側に白色光画像に対応するオートラジオグラフィー画像を示す。オートグラフ画像中の１４Ｃシグナルは、放射性標識配列番号８３投与の３時間後におけるペプチド分布を同定し、脳室およびＣＳＦなどの脳内の特定の構造へのペプチドの局在を示唆する。
【図４２】Ｃｏｌｏ２０５腫瘍を有するメスハーラン胸腺欠損マウスに対する、１０ナノモルのＣｙ５．５にコンジュゲートされた配列番号３７のペプチド投与の２４時間後に摘出された、Ｃｏｌｏ２０５腫瘍（左上）、結腸（中央上）、肝臓（右上）、脳（中央左）、脾臓（中央右）、筋肉（左下）、皮膚（中央下）、および腎臓（右下）の近赤外蛍光画像を示す。
【図４３】ＭＤＡ−ＭＢ−２３腫瘍を有するメスハーラン胸腺欠損マウスに対する、１０ナノモルのＣｙ５．５にコンジュゲートされた配列番号３７のペプチド投与の２４時間後に摘出された、ＭＤＡ−ＭＢ−２３１腫瘍（左上）、結腸（中央上）、肝臓（右上）、脳（中央左）、脾臓（中央右）、筋肉（左下）、皮膚（中央下）、および腎臓（右下）の近赤外蛍光画像を示す。
【図４４】Ｕ８７腫瘍を有するメスハーラン胸腺欠損マウスに対する、１０ナノモルのＣｙ５．５にコンジュゲートされた配列番号３７（ＳＥＱ  Ｄ  ＮＯ：３７）のペプチド投与の２４時間後に摘出された、Ｕ８７腫瘍（左上）、結腸（中央上）、肝臓（右上）、脳（中央左）、脾臓（中央右）、筋肉（左下）、皮膚（中央下）、および腎臓（右下）の近赤外蛍光画像を示す。
【図４５】配列番号３と整列させた配列番号２の配列をループ位置のアノテーションと共に示し、配列番号２の構造を左に、配列番号の３構造を右に、それらの対応する３Ｄ構造を示す。
【図４６】配列番号１および配列番号４の配列アライメントをアノテートされたループ位置と共に示す。
【発明を実施するための形態】
【００４８】
本開示は、腫瘍を治療するための組成物および方法に関する。さらに、それは、血液脳関門を通過して脳腫瘍およびその他の脳障害および疾患の治療を可能にする組成物に関する。いくつかの実施形態では、本明細書の組成物および方法は、対象への投与に続いて、がん性細胞にホーミング、分布、標的化、指向化、蓄積、移動、および／または結合するペプチドを利用する。さらなる実施形態では、本明細書の組成物および方法は、対象への投与に続いて、脳内のがん性のまたは病的細胞にホーミング、分布、標的化、指向化、蓄積、移動、および／または結合するペプチドを利用する。その他の実施形態では、本明細書に記載のペプチドは、血液脳関門を通過して、神経細胞実質に入り、脳がんをはじめとする神経学的疾患の標的に、治療効果のある分子を送達する。いくつかの実施形態では、本開示のホーミングペプチドは、活性薬剤を用いて、組織またはその細胞に送達される。活性薬剤は、標的組織またはその細胞に対して、治療効果を発揮し得る。例えば、特定の実施形態では、ペプチドは、がん組織またはその細胞への化学療法剤の局所送達を可能にする。別の例として、特定の実施形態では、ペプチドは、脳の患部組織または細胞への治療薬の局所送達を可能にする。特定の実施形態では、本開示のホーミングペプチドを使用して、標的組織または細胞が画像化される。例えば、ペプチドはフルオロフォアを用いたイメージングを可能にする。特定の実施形態では、ペプチドそれ自体が治療応答を有し、またはそれを誘導する。
【００４９】
多くの種類の腫瘍は、治療が困難である。しばしば、患者の予後は、がん細胞を効果的に殺滅する薬物療法の能力と、がん細胞を外科的に切除し得る精度とに直接影響を受ける。例えば、腫瘍の治療における１つの課題は、多くの薬物治療が全身性であり、したがってそれらの使用の有効性が、全身使用の毒性によって制約されることである。別の課題は、がん組織の術中イメージングの現行の方法が、腫瘍マージンまたはがん細胞の小さな病巣を正確に描写できないことである。その代わりに、切除は、外科医が腫瘍を視覚的に認識する能力に依存するか、または外科手術状況で触診することによって物理的にそれを見つける能力に依存し、これは腫瘍マージンまたは病巣を同定する不正確な方法であり得る。
【００５０】
脳腫瘍、ならびにその他の脳障害および疾患の治療は、治療するのが困難であり複雑である。１つの課題は、患者の循環系内に投与される多くの薬物が、循環血液を脳の細胞外液および中枢神経系組織から分離する選択的障壁である、血液脳関門（ＢＢＢ）または血液ＣＳＦ関門を通過できないことである。別の課題は、多くの薬物が、脳内の１つまたは複数の標的領域、組織、構造または細胞に対する十分な特異性を欠いていることである。したがって、脳の病状の治療は、高濃度の非特異的薬物の使用をしばしば必要とし、最適以下の有効性および全身性副作用をもたらす。薬物を脳に送達するもう１つの様式は、外科手術と併用してそれらを直接適用することである。別の方法は、血液脳関門を通過する特定の薬物を同定することである。ＢＢＢを通過できる特異的で効力がある薬剤は、特定の組織、細胞、構造および領域を選択的に標的化して化合物を送達することによって、多くの治療の非特異性に対抗し得る。このような薬物はまた、イオンチャネル、タンパク質−タンパク質相互作用、細胞外マトリックス再形成（すなわち、プロテアーゼ阻害）、細胞内シグナル伝達経路、神経伝達物質シグナル伝達、感染などを調節するのに有用であり得る。このような標的治療は、より低い用量、副作用の低減、および治療結果の改善を可能にし得て、それは脳の急性疾患だけでなく、慢性疾患においてもまた有利であろう。
【００５１】
本開示は、ノッチンに由来するペプチドのクラスを記載し、これはがん細胞または罹患細胞に、ホーミング、分布、標的化、指向化、蓄積、移動、および／または結合し得て、がん性または病的細胞を治療するために、直接的に使用され、または活性薬物、ペプチドまたは分子の担体として使用される。１つまたは複数の特定のがん性または病的領域、組織、構造または細胞に、ホーミング、分散、標的化、移動、または蓄積するペプチドは、非特異的な潜在的にネガティブな影響をより少なくし得る。
【００５２】
本開示は、治療目的およびイメージング目的のどちらかまたは双方で使用し得る、活性薬剤または検出可能薬剤を特定の領域、組織、構造または細胞に送達し得る、新たな種類の担体もまた提供する。本明細書に記載されるように、活性薬剤または検出可能薬剤は、本開示のペプチドに連結され得る。
【００５３】
さらに、本開示は、ノッチンに由来する一群のペプチドのクラスを記載し、これはＢＢＢまたは血液ＣＳＦ関門を効果的に通過して、脳の病状を治療するために、直接使用され、または活性薬剤、ペプチドまたは分子の担体として使用され得る。例えば、アルツハイマー病は、アミロイドβペプチド断片の凝集に関連する脳の病状である。アミロイドβペプチド断片の蓄積は、β−セクレターゼとして知られている酵素による、アミロイド前駆体タンパク質（ＡＰＰ）のタンパク質分解性切断の結果である。ＢＢＢを通過してβ−セクレターゼプロテアーゼと相互作用し、それを阻害し得る治療用ペプチドは、例えば、プロテアーゼとの結合またはその阻害、ＡＰＰ切断との拮抗、アミロイドベータフラグメント経路の調節、またはその他の機序によって、アミロイドβ断片の凝集を減少させることで、アルツハイマー病の治療および予防に使用され得る。さらに、例えばリバスチグミンなどのアセチルコリンエステラーゼ阻害剤が、アルツハイマー病の治療に使用されている。しかし、これらは全身投与され、しばしば末梢における徐脈および気管支収縮などの症状を引き起こす。より多くのアセチルコリンエステラーゼ（ａｃｅｔｙｌｃｈｏｌｉｎｅｓｅｔｅｒａｓｅ）をコンジュゲートとして、ＢＢＢを越えて送達する機会は、末梢におけるより少ない用量と副作用を可能にしてもよい。本開示のペプチドを使用して、様々な病状の症状が治療され得る。
【００５４】
脳の特定の領域、組織、構造または細胞に、選択的にホーミング、分布、標的化、指向化、移動、または蓄積するペプチドもまた本明細書に記載される。場合によっては、ペプチドは、記憶および学習および空間ナビゲーションの中心である海馬；脳および脊椎に見いだされる脳脊髄液（ＣＳＦ）；ＣＳＦ産生および循環の部位である脳室系；吻側移動流；歯状回；神経幹細胞；または神経前駆細胞の１つまたは複数に蓄積する。海馬の歯状回と脳室下領域は、成人の脳における神経発生の２つの部位であり、吻側移動流は新しいニューロンの移動の１つの機序である。したがって、これらの領域を標的とすることは、修復または再生をはじめとする、神経発生の様々な局面の調節ができるようにし得る。脳の１つまたは複数の特定の領域、組織、構造または細胞に、ホーミング、分散、標的化、移動、または蓄積するペプチドは、例えば、神経学的病状のための薬物の使用および有効性をしばしば制限する副作用などの、非特異的で潜在的にネガティブな影響をより少なくできる。さらに、このようなペプチドは、既存の薬物を、脳の特定の領域、組織、構造または細胞に直接標的化し、それらが血液脳関門を通過するのを助けることによって、既存の薬物の有効性を高め得る。
【００５５】
本開示は、治療用目的およびイメージング目的のどちらかまたは双方で使用し得る、活性薬剤または検出可能薬剤を脳に送達し得る、新たな種類の薬物担体もまた提供する。血液脳関門は、脳組織を取り囲む内皮細胞間の特殊な密着接合部、ならびに基底膜および星状細胞突起部によって形成される。同様に血液ＣＳＦ関門は、脈絡膜上皮細胞間の密着接合部、基底膜、および内皮細胞によって形成される。ＢＢＢおよび血液ＣＳＦ関門の機能の１つは、脳を保護して、それを血流に存在することもある有害な毒素から隔離することである。本明細書に記載されるように、活性薬剤または検出可能薬剤は、本開示のペプチドに連結され得て、連結ペプチド−活性薬剤または連結ペプチド−検出可能薬剤化合物は、血液脳関門または血液ＣＳＦ関門を通過し得る。
【００５６】
本開示はまた、対象の病状を治療する方法もまた提供し、方法は、例えば、海馬、ＣＳＦ、脳室系、髄膜、吻側移動流、または例えば、（パーキンソン病に関連し得る）黒質などの脳のその他の特定の領域内などの対象の脳内の領域、組織、構造または細胞に、ホーミング、標的化、移動、指向化するペプチドを対象に投与するステップを含んでなる。場合によっては、投与されたペプチドは、対象の血液脳関門または血液ＣＳＦ関門を通過し得る。本開示の追加的な態様および利点は、本開示の例示的な実施形態が示されて記載される以下の詳細な説明から、当業者には明らかになるであろう。理解されうるように、本開示は、その他の異なる実施形態が可能であり、いずれも本開示から逸脱することなく、いくつかの詳細が様々な点で変更可能である。したがって、図面および説明は本質的に例示的であって、制限的ではないと見なされるべきである。
【００５７】
本開示の追加的な態様および利点は、本開示の例示的な実施形態が示され、記載される以下の詳細な説明から、当業者には明らかになるであろう。理解されうるように、本開示は、その他の異なる実施形態が可能であり、いずれも本開示から逸脱することなく、いくつかの詳細が様々な点で変更可能である。したがって、図面および説明は本質的に例示的であって、制限的ではないと見なされるべきである。
【００５８】
本明細書の用法では、天然Ｌ−鏡像異性アミノ酸の略号は従来通りであり、次のようである：アラニン（Ａ、Ａｌａ）；アルギニン（Ｒ、Ａｒｇ）；アスパラギン（Ｎ、Ａｓｎ）；アスパラギン酸（Ｄ、Ａｓｐ）；システイン（Ｃ、Ｃｙｓ）；グルタミン酸（Ｅ、Ｇｌｕ）；グルタミン（Ｑ、Ｇｌｎ）；グリシン（Ｇ、Ｇｌｙ）；ヒスチジン（Ｈ、Ｈｉｓ）；イソロイシン（Ｉ、Ｉｌｅ）；ロイシン（Ｌ、Ｌｅｕ）；リジン（Ｋ、Ｌｙｓ）；メチオニン（Ｍ、Ｍｅｔ）；フェニルアラニン（Ｆ、Ｐｈｅ）；プロリン（Ｐ、Ｐｒｏ）；セリン（Ｓ、Ｓｅｒ）；スレオニン（Ｔ、Ｔｈｒ）；トリプトファン（Ｗ、Ｔｒｐ）；チロシン（Ｙ、Ｔｙｒ）；バリン（Ｖ、Ｖａｌ）。典型的に、Ｘａａは任意のアミノ酸を示し得る。いくつかの実施形態では、Ｘは、アスパラギン（Ｎ）、グルタミン（Ｑ）、ヒスチジン（Ｈ）、リジン（Ｋ）、またはアルギニン（Ｒ）であり得る。
【００５９】
本開示のいくつかの実施形態は、任意の標準または非標準アミノ酸またはその類似体のＤアミノ酸残基を考察する。アミノ酸配列が一連の三文字または一文字のアミノ酸略称として表される場合、標準的用法および慣例に従って、左方向がアミノ末端方向であり、右方向がカルボキシ末端方向である。
【００６０】
ペプチド
ノッチンは、通常、約１１〜約８１アミノ酸長の範囲のペプチドのクラスであり、しばしば緻密型構造に折り畳まれる。ノッチンは、典型的には、いくつかの分子内ジスルフィド架橋によって特徴付けられ、β鎖および他の二次構造を含有してもよい、複合三次構造に組み立てられる。ジスルフィド結合の存在は、ノッチンに顕著な環境安定性を与え、それらが極端な温度およびｐＨに耐えて、血流のタンパク質分解酵素に抵抗できるようにする。ノッチンの剛性はまた、標的に結合する際に柔軟なペプチドが生じる「エントロピーのペナルティ」を支払うことなく、標的に結合することを可能にする。例えば、結合は、ペプチドが標的に結合して複合体を形成する際に起こる、エントロピーの損失によって悪影響を受ける。したがって、「エントロピーのペナルティ」は結合に対する有害効果であり、この結合の際に生じるエントロピーの損失が大きければ大きいほど、「エントロピーのペナルティ」もより大きくなる。さらに、可撓性の非結合分子は、複合体を形成した際に柔軟性が失われることから、堅固に構造化された分子よりも多くのエントロピーを失う。しかしながら、非結合分子の剛性はまた、分子が形成し得る複合体の数を制限することによって、一般に特異性を増加させる。ノットペプチドは、抗体様の親和性で標的に結合し得る。ノッチンの配列構造および配列同一性または相同性のより幅広い試験は、それらが全ての種類の動植物における収束進化によって生じたことを明らかにする。動物では、それらは通常、毒液、例えば、クモおよびサソリの毒液に典型的に見いだされ、イオンチャネルの調節に関与するとされている。植物のノッチンタンパク質は、動物のタンパク質分解酵素を阻害し、または抗菌活性を有し得て、ノッチンが植物の天然防御において機能し得ることが示唆される。
【００６１】
本開示は、これらのノットペプチド（またはノッチン）を含んでなり、またはそれらに由来するペプチドを提供する。本明細書の用法では、「ノットペプチド」という用語は、「ノッチン」および「オプチド」という用語と同義であると見なされる。
【００６２】
本開示のペプチドは、システインアミノ酸残基を含んでなり得る。場合によっては、ペプチドは少なくとも６個のシステインアミノ酸残基を有する。場合によっては、ペプチドは少なくとも８個のシステインアミノ酸残基を有する。他の事例では、ペプチドは、少なくとも１０個のシステインアミノ酸残基、少なくとも１２個のシステインアミノ酸残基、少なくとも１４個のシステインアミノ酸残基、または少なくとも１６個のシステインアミノ酸残基を有する。
【００６３】
ノットペプチドは、ジスルフィド架橋を含んでなり得る。ノットペプチドは、その中で残基の５％以上が分子内ジスルフィド結合を形成するシステインである、ペプチドであり得る。ジスルフィド結合ペプチドは、薬物スキャフォールドであり得る。いくつかの実施形態では、ジスルフィド架橋はノットを形成する。ジスルフィド架橋は、例えば、システイン１と４、２と５、または３と６との間などのシステイン残基間で形成され得る。場合によっては、１つのジスルフィド架橋は、他の２つのジスルフィド架橋によって形成されるループを通過して、例えば、ノットを形成する。その他の場合には、ジスルフィド架橋は任意の２つのシステイン残基間に形成され得る。
【００６４】
本開示は、ペプチドスキャフォールドをさらに含み、これは例えば、追加的なペプチドを生成するための出発点として使用され得る。いくつかの実施形態では、これらのスキャフォールドは、様々なノットペプチド（またはノッチン）に由来し得る。特定の実施形態では、ノットペプチドは複合三次構造に構築され、これはいくつかの分子内ジスルフィド架橋によって特徴付けられ、必要に応じてβ鎖およびαらせんなどのその他の二次構造を含有する。例えば、ノットペプチドは、いくつかの実施形態では、ジスルフィドノットを介するジスルフィドによって特徴付けられる、小さなジスルフィドに富むタンパク質を含む。このノットは、例えば、１つのジスルフィド架橋が、他の２つのジスルフィドと相互接続骨格とによって形成される大環状分子を通過する場合に得られる。いくつかの実施形態では、ノットペプチドとしては成長因子システインノット、またはインヒビターシステインノットが挙げられる。その他の可能なペプチド構造としては、βシートなしに２つのジスルフィド架橋によって連結される２つの平行らせんを有するペプチド（例えば、ヘプトキシン）が挙げられる。
【００６５】
ノットペプチドは、Ｌ立体配置にある少なくとも１つのアミノ酸残基を含んでなり得る。ノットペプチドは、Ｄ立体配置にある少なくとも１つのアミノ酸残基を含んでなり得る。いくつかの実施形態では、ノットペプチドは１５〜４０アミノ酸残基長である。その他の実施形態では、ノットペプチドは１１〜５７アミノ酸残基長である。なおもその他の実施形態では、ノットペプチドは１１〜８１アミノ酸残基長である。さらなる実施形態では、ノットペプチドは少なくとも２０アミノ酸残基長である。
【００６６】
これらの種類のペプチドは、毒素または毒液が存在するかまたはそれに関連することが知られているクラスのタンパク質に由来し得る。場合によっては、ペプチドは、サソリまたはクモに関連する毒素または毒液に由来し得る。ペプチドは、様々な属および種のクモおよびサソリの毒液および毒素に由来し得る。例えば、ペプチドは、レイウルス・キンクエストリアツス・ヘブラオイス（Ｌｅｉｕｒｕｓ  ｑｕｉｎｑｕｅｓｔｒｉａｔｕｓ  ｈｅｂｒａｅｕｓ）、ブツス・オシタヌス・ツネタヌス（Ｂｕｔｈｕｓ  ｏｃｃｉｔａｎｕｓ  ｔｕｎｅｔａｎｕｓ）、ホッテントッタ・ジュダイクス（Ｈｏｔｔｅｎｔｏｔｔａ  ｊｕｄａｉｃｕｓ）、メソブツス・オイポイス（Ｍｅｓｏｂｕｔｈｕｓ  ｅｕｐｅｕｓ）、ブツス・オッシタヌス・イスラエリス（Ｂｕｔｈｕｓ  ｏｃｃｉｔａｎｕｓ  ｉｓｒａｅｌｉｓ）、ハドルルス・ゲルトスキ（Ｈａｄｒｕｒｕｓ  ｇｅｒｔｓｃｈｉ）、アンドロクトヌス・アウストラリス（Ａｎｄｒｏｃｔｏｎｕｓ  ａｕｓｔｒａｌｉｓ）、セントルロイデス・ノキシウス（Ｃｅｎｔｒｕｒｏｉｄｅｓ  ｎｏｘｉｕｓ）、ヘテロメトルス・ラオチクス（Ｈｅｔｅｒｏｍｅｔｒｕｓ  ｌａｏｔｉｃｕｓ）、オピストフタルムス・カリナツス（Ｏｐｉｓｔｏｐｈｔｈａｌｍｕｓ  ｃａｒｉｎａｔｕｓ）、ハプロペルマ・スクミドチ（Ｈａｐｌｏｐｅｌｍａ  ｓｃｈｍｉｄｔｉ）、イソメトルス・マクラツス（Ｉｓｏｍｅｔｒｕｓ  ｍａｃｕｌａｔｕｓ）、ハプロペルマ・フウェヌム（Ｈａｐｌｏｐｅｌｍａ  ｈｕｗｅｎｕｍ）、ハプロペルマ・ハイナヌム（Ｈａｐｌｏｐｅｌｍａ  ｈａｉｎａｎｕｍ）、ハプロペルマ・シュミドチ（Ｈａｐｌｏｐｅｌｍａ  ｓｃｈｍｉｄｔｉ）、アゲレノプシス・アペルタ（Ａｇｅｌｅｎｏｐｓｉｓ  ａｐｅｒｔａ）、ハイドロニク・ベルスタ（Ｈａｙｄｒｏｎｙｃｈｅ  ｖｅｒｓｕｔａ）、セレノコスミア・フウエナ（Ｓｅｌｅｎｏｃｏｓｍｉａ  ｈｕｗｅｎａ）、ヘテロポダ・ベナトリア（Ｈｅｔｅｒｏｐｏｄａ  ｖｅｎａｔｏｒｉａ）、グランモストラ・ロセア（Ｇｒａｍｍｏｓｔｏｌａ  ｒｏｓｅａ）、オルニトクトヌス・フウエナ（Ｏｒｎｉｔｈｏｃｔｏｎｕｓ  ｈｕｗｅｎａ）、ハドロニク・ベルスタ（Ｈａｄｒｏｎｙｃｈｅ  ｖｅｒｓｕｔａ）、アトラキス・ロブスツス（Ａｔｒａｘ  ｒｏｂｕｓｔｕｓ）、アンゲレノプシス・アペルタ（Ａｎｇｅｌｅｎｏｐｓｉｓ  ａｐｅｒｔａ）、サルモポオイス・カンブリドゲイ（Ｐｓａｌｍｏｐｏｅｕｓ  ｃａｍｂｒｉｄｇｅｉ）、ハドロニク・インフェンサ（Ｈａｄｒｏｎｙｃｈｅ  ｉｎｆｅｎｓａ）、パラコエロテス・ルクトスス（Ｐａｒａｃｏｅｌｏｔｅｓ  ｌｕｃｔｏｓｕｓ）、およびキロブラキス・ジングズハオオル（Ｃｈｉｌｏｂｒａｃｈｙｓ  ｊｉｎｇｚｈａｏｏｒ）、およびその他の適切な属または種のサソリまたはクモに由来する毒液または毒素であり得る。いくつかの場合において、ペプチドは、ブツス・マルテンシイ・カルシュ（Ｂｕｔｈｕｓ  ｍａｒｔｅｎｓｉｉ  Ｋａｒｓｈ）（サソリ）毒素に由来し得る。いくつかの実施形態では、ペプチドは、ｐｆａｍ００５４５３：Ｔｏｘｉｎ＿６クラスのメンバーに由来し得る。
【００６７】
表１は、サソリまたはクモの毒素または毒液に由来する、本開示で使用するための例示的なペプチドを列挙する。
【００６８】
【表１】
2018521994.tif 000003
【００６９】
【表２】
2018521994.tif 000004
【００７０】
【表３】
2018521994.tif 000005
【００７１】
【表４】
2018521994.tif 000006
【００７２】
【表５】
2018521994.tif 000007
【００７３】
【表６】
2018521994.tif 000008
【００７４】
【表７】
2018521994.tif 000009
【００７５】
【表８】
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【００７６】
【表９】
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【００７７】
【表１０】
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【００７８】
【表１１】
2018521994.tif 000013
【００７９】
場合によっては、本開示のペプチドは、配列ＧＳＸ１ＣＸ２ＰＣＦＴＴＸ３Ｘ４Ｘ５Ｘ６Ｘ７Ｘ８Ｘ９ＣＸ１０Ｘ１１ＣＣＧＸ１２Ｘ１３Ｘ１４Ｘ１５ＧＸ１６ＣＸ１７ＧＰＸ１８ＣＸ１９ＣＸ２０（配列番号１９８）、またはその断片を含んでなり得て、式中、Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３、Ｘ４、Ｘ５、Ｘ６、Ｘ７、Ｘ８、Ｘ９、Ｘ１０、Ｘ１１、Ｘ１２、Ｘ１３、Ｘ１４、Ｘ１５、Ｘ１６、Ｘ１７、Ｘ１８、Ｘ１９、およびＸ２０は、それぞれ個々に任意のアミノ酸またはアミノ酸類似体である。
【００８０】
場合によっては、本開示のペプチドは、配列Ｘ１ＣＸ２ＰＣＦＴＴＸ３Ｘ４Ｘ５Ｘ６Ｘ７Ｘ８Ｘ９ＣＸ１０Ｘ１１ＣＣＧＸ１２Ｘ１３Ｘ１４Ｘ１５ＧＸ１６ＣＸ１７ＧＰＸ１８ＣＸ１９ＣＸ２０（配列番号４０７）、またはその断片を含んでなり得て、式中、Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３、Ｘ４、Ｘ５、Ｘ６、Ｘ７、Ｘ８、Ｘ９、Ｘ１０、Ｘ１１、Ｘ１２、Ｘ１３、Ｘ１４、Ｘ１５、Ｘ１６、Ｘ１７、Ｘ１８、Ｘ１９、およびＸ２０は、それぞれ個々に任意のアミノ酸またはアミノ酸類似体である。
【００８１】
場合によっては、本開示のペプチドは、配列ＧＳＸ１ＣＸ２ＰＣＦＴＴＸ３Ｘ４Ｘ５Ｘ６Ｘ７Ｘ８Ｘ９ＣＸ１０Ｘ１１ＣＣＧＸ１２Ｘ１３Ｘ１４Ｘ１５ＧＸ１６ＣＸ１７ＧＰＸ１８ＣＸ１９ＣＸ２０（配列番号１９９）、またはその断片を含んでなり得て、式中、Ｘ１は、Ｍ、Ｒ、Ｉ、Ｄ、Ｈ、またはＬから選択され；Ｘ２は、Ｍ、ＩまたはＬから選択され；Ｘ３は、Ｄ、Ｈ、Ｅ、Ｓ、Ｇ、またはＩから選択され；Ｘ４は、Ｈ、Ｅ、Ｑ、Ｒ、Ｙ、またはＴから選択され；Ｘ５は、Ｑ、Ｒ、Ｈ、Ｅ、Ｙ、またはＦから選択され；Ｘ６は、Ｍ、Ｉ、またはＬから選択され；Ｘ７は、Ａ、Ｆ、Ｅ、Ｉ、またはＱから選択され；Ｘ８は、Ｒ、Ｅ、Ｉ、Ｄ、Ｎ、またはＨ；から選択されＸ９は、Ｒ、Ｎ、Ｈ、Ｅ、Ｙ、Ｆ、Ｉ、Ｔ、またはＱから選択され；Ｘ１０は、ＤまたはＥから選択され；Ｘ１１は、Ｄ、ＩＨ、Ｅ、Ｒ、Ｙ、Ｆ、またはＡから選択され；Ｘ１２は、ＧまたはＩから選択され；Ｘ１３は、Ｒ、Ｄ、Ｗ、Ｆ、またはＧから選択され；Ｘ１４は、Ｇ、Ｄ、またはＳから選択され；Ｘ１５は、Ｒ、Ｄ、Ｇ、またはＹから選択され；Ｘ１６は、ＫまたはＲから選択され；Ｘ１７は、Ｙ、Ｎ、Ｈ、Ｄ、またはＷから選択され；Ｘ１８は、ＱまたはＨから選択され；Ｘ１９は、ＬまたはＩから選択され；Ｘ２０は、Ｒ、Ｇ、Ｆ、またはＩから選択される。
【００８２】
場合によっては、本開示のペプチドは、配列Ｘ１ＣＸ２ＰＣＦＴＴＸ３Ｘ４Ｘ５Ｘ６Ｘ７Ｘ８Ｘ９ＣＸ１０Ｘ１１ＣＣＧＸ１２Ｘ１３Ｘ１４Ｘ１５ＧＸ１６ＣＸ１７ＧＰＸ１８ＣＸ１９ＣＸ２０（配列番号４０８）、またはその断片を含んでなり得て、式中、Ｘ１はＭ、Ｒ、Ｉ、Ｄ、Ｈ、またはＬから選択され；Ｘ２はＭ、ＩまたはＬから選択され；Ｘ３はＤ、Ｈ、Ｅ、Ｓ、Ｇ、またはＩから選択され；Ｘ４はＨ、Ｅ、Ｑ、Ｒ、Ｙ、またはＴから選択され；Ｘ５はＱ、Ｒ、Ｈ、Ｅ、Ｙ、またはＦから選択され；Ｘ６はＭ、Ｉ、またはＬから選択され；Ｘ７は、Ａ、Ｆ、Ｅ、Ｉ、またはＱから選択され；Ｘ８はＲ、Ｅ、Ｉ、Ｄ、Ｎ、またはＨ；から選択されＸ９はＲ、Ｎ、Ｈ、Ｅ、Ｙ、Ｆ、Ｉ、Ｔ、またはＱから選択され；Ｘ１０はＤまたはＥから選択され；Ｘ１１はＤ、ＩＨ、Ｅ、Ｒ、Ｙ、Ｆ、またはＡから選択され；Ｘ１２はＧまたはＩから選択され；Ｘ１３はＲ、Ｄ、Ｗ、Ｆ、またはＧから選択され；Ｘ１４はＧ、Ｄ、またはＳから選択され；Ｘ１５はＲ、Ｄ、Ｇ、またはＹから選択され；Ｘ１６はＫまたはＲから選択され；Ｘ１７はＹ、Ｎ、Ｈ、Ｄ、またはＷから選択され；Ｘ１８はＱまたはＨから選択され；Ｘ１９はＬまたはＩから選択され；Ｘ２０はＲ、Ｇ、Ｆ、またはＩから選択される。
【００８３】
場合によっては、本開示のペプチドは、配列ＧＳＶＧＣＥＥＣＰＸ１ＨＣＸ２ＧＸ３Ｘ４ＡＸ５ＰＴＣＤＸ６ＧＶＣＮＣＮＶ（配列番号２０１）、またはその断片を含んでなり得て、式中、Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３、Ｘ４、Ｘ５、およびＸ６は、それぞれ個々に任意のアミノ酸またはアミノ酸類似体である。
【００８４】
場合によっては、本開示のペプチドは、配列ＶＧＣＥＥＣＰＸ１ＨＣＸ２ＧＸ３Ｘ４ＡＸ５ＰＴＣＤＸ６ＧＶＣＮＣＮＶ（配列番号４１０）、またはその断片を含んでなり得て、式中、Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３、Ｘ４、Ｘ５、およびＸ６は、それぞれ個々に任意のアミノ酸またはアミノ酸類似体である。
【００８５】
他の事例では、ペプチドは、配列ＧＳＶＧＣＥＥＣＰＸ１ＨＣＸ２ＧＸ３Ｘ４ＡＸ５ＰＴＣＤＸ６ＧＶＣＮＣＮＶ（配列番号２０２）、またはその断片を含んでなり得て、式中、Ｘ１はＭ、Ａ、Ｖ、Ｉ、またはＬから選択され、式中、Ｘ２はＫまたはＲから選択され、式中、Ｘ３はＫまたはＲから選択され，式中、Ｘ４はＮ、Ｈ、Ｍ、Ｋ、またはＱから選択され、式中、Ｘ５はＮ、Ｋ、Ｖ、Ｉ、Ｌ、ＲまたはＱから選択され、式中、Ｘ６はＤ、Ｎ、Ｇ、Ｙ、またはＥから選択される。
【００８６】
他の事例では、ペプチドは、配列ＶＧＣＥＥＣＰＸ１ＨＣＸ２ＧＸ３Ｘ４ＡＸ５ＰＴＣＤＸ６ＧＶＣＮＣＮＶ（配列番号４１１）、またはその断片を含んでなり得て、式中、Ｘ１はＭ、Ａ、Ｖ、Ｉ、またはＬから選択され、式中、Ｘ２はＫまたはＲから選択され、式中、Ｘ３はＫまたはＲから選択され，式中、Ｘ４はＮ、Ｈ、Ｍ、Ｋ、またはＱから選択され、式中、Ｘ５はＮ、Ｋ、Ｖ、Ｉ、Ｌ、ＲまたはＱから選択され、式中、Ｘ６はＤ、Ｎ、Ｇ、Ｙ、またはＥから選択される。
【００８７】
場合によっては、本開示のペプチドは、配列ＧＳＶＧＣＸ１ＥＸ２ＰＸ３Ｘ４ＣＫＧＫＸ５ＡＸ６ＰＴＣＸ７Ｘ８Ｘ９Ｘ１０ＣＸ１１ＣＮＸ１２（配列番号２０３）、またはその断片を含んでなり得て、式中、Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３、Ｘ４、Ｘ５、Ｘ６、Ｘ７、Ｘ８、Ｘ９、Ｘ１０、Ｘ１１、およびＸ１２は、それぞれ個々に任意のアミノ酸またはアミノ酸類似体である。
【００８８】
場合によっては、本開示のペプチドは、配列ＶＧＣＸ１ＥＸ２ＰＸ３Ｘ４ＣＫＧＫＸ５ＡＸ６ＰＴＣＸ７Ｘ８Ｘ９Ｘ１０ＣＸ１１ＣＮＸ１２（配列番号４１２）、またはその断片を含んでなり得て、式中、Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３、Ｘ４、Ｘ５、Ｘ６、Ｘ７、Ｘ８、Ｘ９、Ｘ１０、Ｘ１１、およびＸ１２は、それぞれ個々に任意のアミノ酸またはアミノ酸類似体である。
【００８９】
場合によっては、本開示のペプチドは、配列ＧＳＶＧＣＸ１ＥＸ２ＰＸ３Ｘ４ＣＫＧＫＸ５ＡＸ６ＰＴＣＸ７Ｘ８Ｘ９Ｘ１０ＣＸ１１ＣＮＸ１２（配列番号２０４）、またはその断片を含んでなり得て、式中、Ｘ１はＡまたはＥから選択され；Ｘ２はＣまたはＤから選択され；Ｘ３はＭ、Ａ、Ｋ、またはＶから選択され；Ｘ４はＨまたはＹから選択され；Ｘ５はＮ、Ｈ、Ｍ、Ｋ、またはＱから選択され；Ｘ６はＮ、ＫＶ、Ｉ、またはＬから選択され；Ｘ７はＤ、Ｙ、Ｃ、またはＥから選択され；Ｘ８はＤ、Ｎ、Ｇ、またはＹから選択され；Ｘ９はＧまたはＥから選択され；Ｘ１０はＶから選択されまたは存在せず；Ｘ１１はＮ、Ｋ、またはＥから選択され；Ｘ１２はＶ、Ａ、Ｉ、またはＤから選択される。
【００９０】
場合によっては、本開示のペプチドは、配列ＶＧＣＸ１ＥＸ２ＰＸ３Ｘ４ＣＫＧＫＸ５ＡＸ６ＰＴＣＸ７Ｘ８Ｘ９Ｘ１０ＣＸ１１ＣＮＸ１２（配列番号４１３）、またはその断片を含んでなり得て、式中、Ｘ１はＡまたはＥから選択され；Ｘ２はＣまたはＤから選択され；Ｘ３はＭ、Ａ、Ｋ、またはＶから選択され；Ｘ４はＨまたはＹから選択され；Ｘ５はＮ、Ｈ、Ｍ、Ｋ、またはＱから選択され；Ｘ６はＮ、ＫＶ、Ｉ、またはＬから選択され；Ｘ７はＤ、Ｙ、Ｃ、またはＥから選択され；Ｘ８はＤ、Ｎ、Ｇ、またはＹから選択され；Ｘ９はＧまたはＥから選択され；Ｘ１０はＶから選択されまたは存在せず；Ｘ１１はＮ、Ｋ、またはＥから選択され；Ｘ１２はＶ、Ａ、Ｉ、またはＤから選択される。
【００９１】
場合によっては、本開示のペプチドは、配列ＧＳＸ１Ｘ２ＣＥＤＣＰＸ３ＨＣＸ４Ｘ５Ｘ６Ｘ７Ｘ８Ｘ９ＡＫＣＸ１０ＮＤＸ１１ＣＶＣＥＸ１２Ｘ１３（配列番号２０５）、またはその断片を含んでなり得て、式中、Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３、Ｘ４、Ｘ５、Ｘ６、Ｘ７、Ｘ８、Ｘ９、Ｘ１０、Ｘ１１、Ｘ１２、およびＸ１３は、それぞれ個々に任意のアミノ酸またはアミノ酸類似体である。
【００９２】
場合によっては、本開示のペプチドは、配列Ｘ１Ｘ２ＣＥＤＣＰＸ３ＨＣＸ４Ｘ５Ｘ６Ｘ７Ｘ８Ｘ９ＡＫＣＸ１０ＮＤＸ１１ＣＶＣＥＸ１２Ｘ１３（配列番号４１４）、またはその断片を含んでなり得て、式中、Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３、Ｘ４、Ｘ５、Ｘ６、Ｘ７、Ｘ８、Ｘ９、Ｘ１０、Ｘ１１、Ｘ１２、およびＸ１３は、それぞれ個々に任意のアミノ酸またはアミノ酸類似体である。
【００９３】
場合によっては、本開示のペプチドは、配列ＧＳＸ１Ｘ２ＣＥＤＣＰＸ３ＨＣＸ４Ｘ５Ｘ６Ｘ７Ｘ８Ｘ９ＡＫＣＸ１０ＮＤＸ１１ＣＶＣＥＸ１２Ｘ１３（配列番号２０６）、またはその断片を含んでなり得て、式中、Ｘ１はＶまたはＡから選択され；Ｘ２はＳ、Ｔ、またはＧから選択され；Ｘ３はＤまたはＥから選択され；Ｘ４はＳまたはＡから選択され；Ｘ５はＴまたはＱから選択され；Ｘ６はＱまたはＫから選択され；Ｘ７はＫ、Ｎ、またはＤから選択され；Ｘ８はＡまたはＱから選択され；Ｘ９はＲまたはＱから選択され；Ｘ１０はＤまたはＥから選択され；Ｘ１１はＫまたはＲから選択され；Ｘ１２はＰ、Ｓ、またはＡから選択され；Ｘ１３はＫ、Ｖ、またはＩから選択される。
【００９４】
場合によっては、本開示のペプチドは、配列Ｘ１Ｘ２ＣＥＤＣＰＸ３ＨＣＸ４Ｘ５Ｘ６Ｘ７Ｘ８Ｘ９ＡＫＣＸ１０ＮＤＸ１１ＣＶＣＥＸ１２Ｘ１３（配列番号４１５）、またはその断片を含んでなり得て、式中、Ｘ１はＶまたはＡから選択され；Ｘ２はＳ、Ｔ、またはＧから選択され；Ｘ３はＤまたはＥから選択され；Ｘ４はＳまたはＡから選択され；Ｘ５はＴまたはＱから選択され；Ｘ６はＱまたはＫから選択され；Ｘ７はＫ、Ｎ、またはＤから選択され；Ｘ８はＡまたはＱから選択され；Ｘ９はＲまたはＱから選択され；Ｘ１０はＤまたはＥから選択され；Ｘ１１はＫまたはＲから選択され；Ｘ１２はＰ、Ｓ、またはＡから選択され；Ｘ１３はＫ、Ｖ、またはＩから選択される。
【００９５】
場合によっては、本開示のペプチドは、配列ＧＳＸ１ＣＸ２ＰＣＦＴＴＤＨＱＸ２ＡＲＲＣＤＤＣＣＧＧＲＧＲＧＸ３ＣＹＧＰＱＣＸ２ＣＸ４（配列番号２０７）、またはその断片を含んでなり得て、式中、Ｘ１はＰまたはＣ以外の任意のアミノ酸またはアミノ酸類似体であり；Ｘ２はＡ、Ｌ、Ｖ、Ｉ、またはＭから独立して選択され；Ｘ３はＫまたはＲから選択され；Ｘ４はＣ以外の任意のアミノ酸またはアミノ酸類似体である。
【００９６】
場合によっては、本開示のペプチドは、配列Ｘ１ＣＸ２ＰＣＦＴＴＤＨＱＸ２ＡＲＲＣＤＤＣＣＧＧＲＧＲＧＸ３ＣＹＧＰＱＣＸ２ＣＸ４（配列番号４１６）、またはその断片を含んでなり得て、式中、Ｘ１はＰまたはＣ以外の任意のアミノ酸またはアミノ酸類似体であり；Ｘ２はＡ、Ｌ、Ｖ、Ｉ、またはＭから独立して選択され；Ｘ３はＫまたはＲから選択され；Ｘ４はＣ以外の任意のアミノ酸またはアミノ酸類似体である。
【００９７】
場合によっては、本開示のペプチドは、配列ＧＳＭＣＭＰＣＦＴＴＤＨＲＭＡＥＮＣＤＩＣＣＧＧＤＧＲＧＸＣＹＧＰＱＣＬＣＲ（配列番号２０８）またはその断片を含んでなり得て、式中、ＸはＲまたはＫである。
【００９８】
場合によっては、本開示のペプチドは、配列ＭＣＭＰＣＦＴＴＤＨＲＭＡＥＮＣＤＩＣＣＧＧＤＧＲＧＸＣＹＧＰＱＣＬＣＲ（配列番号４１７）またはその断片を含んでなり得て、式中、ＸはＲまたはＫである。
【００９９】
場合によっては、本開示のペプチドは、配列ＧＳＸＣＭＰＣＦＴＴＸＸＸＭＸＸＸＣＤＸＣＣＧＸＸＸＸＧＸＣＸＧＰＸＣＬＣＸ（配列番号２０９）またはその断片を含んでなり得て、式中、Ｘは独立して、任意のアミノ酸またはアミノ酸類似体であり得る。
【０１００】
場合によっては、本開示のペプチドは、配列ＸＣＭＰＣＦＴＴＸＸＸＭＸＸＸＣＤＸＣＣＧＸＸＸＸＧＸＣＸＧＰＸＣＬＣＸ（配列番号４１８）またはその断片を含んでなり得て、式中、Ｘは独立して、任意のアミノ酸またはアミノ酸類似体であり得る。
【０１０１】
いくつかの実施形態では、本開示のペプチドは、位置４、５、７、８、１２、１８、２１、２２、２６、２８、３０、３５、または３７の１つまたは複数に、システイン残基を有する配列を含んでなる。例えば、特定の実施形態では、ペプチドは、位置４にシステイン残基を有する配列を含んでなる。特定の実施形態では、ペプチドは、位置５にシステイン残基を有する配列を含んでなる。特定の実施形態では、ペプチドは、位置７にシステイン残基を有する配列を含んでなる。特定の実施形態では、ペプチドは、位置８にシステイン残基を有する配列を含んでなる。特定の実施形態では、ペプチドは、位置１２にシステイン残基を有する配列を含んでなる。特定の実施形態では、ペプチドは、位置１８にシステイン残基を有する配列を含んでなる。特定の実施形態では、ペプチドは、位置２１にシステイン残基を有する配列を含んでなる。特定の実施形態では、ペプチドは、位置２２にシステイン残基を有する配列を含んでなる。特定の実施形態では、ペプチドは、位置２６にシステイン残基を有する配列を含んでなる。特定の実施形態では、ペプチドは、位置２８にシステイン残基を有する配列を含んでなる。特定の実施形態では、ペプチドは、位置３０にシステイン残基を有する配列を含んでなる。特定の実施形態では、ペプチドは、位置３５にシステイン残基を有する配列を含んでなる。特定の実施形態では、ペプチドは、位置３７にシステイン残基を有する配列を含んでなる。いくつかの実施形態では、配列中の第１のシステイン残基は、配列中の第４のシステイン残基とジスルフィド結合し、配列中の第２のシステイン残基は、配列中の第５のシステイン残基とジスルフィド結合し、配列中の第３のシステイン残基は、配列中の第６のシステイン残基とジスルフィド結合する。いくつかの実施形態では、配列中の第１のシステイン残基は、配列中の第４のシステイン残基とジスルフィド結合し、配列中の第２のシステイン残基は、配列中の第６のシステイン残基とジスルフィド結合し、配列中の第３のシステイン残基は、配列中の第７のシステイン残基とジスルフィド結合し、配列中の第５のシステイン残基は、配列中の第８のシステイン残基にジスルフィド結合する。必要に応じて、ペプチドは、「ｔｗｏ−ａｎｄ−ｔｈｒｏｕｇｈ」構造系としても知られている、２つの別のジスルフィド架橋によって形成される環を通過する１つのジスルフィド架橋を含むことができる。
【０１０２】
いくつかの実施形態では、本開示のペプチドは、配列ＧＳＣＸＸＣＸＸＸＸＸＸＸＸＸＸＣＸＸＣＣＸＸＸＸＸＸＸＣＸＸＸＸＣＸＣ（配列番号２００）を含んでなり得て、式中、システイン残基の少なくとも一部または全部が分子内ジスルフィド架橋を形成し、Ｘは任意のアミノ酸またはアミノ酸類似体である。
【０１０３】
いくつかの実施形態では、本開示のペプチドは、配列ＣＸＸＣＸＸＸＸＸＸＸＸＸＸＣＸＸＣＣＸＸＸＸＸＸＸＣＸＸＸＸＣＸＣ（配列番号４０９）を含んでなり得て、式中、システイン残基の少なくとも一部または全部が分子内ジスルフィド架橋を形成し、Ｘは任意のアミノ酸またはアミノ酸類似体である。
【０１０４】
場合によっては、ペプチドは１つのみのリジン残基を含み、またはリジン残基を含まないことができる。場合によっては、ペプチド中のリシン残基の一部または全部が、アルギニン残基で置換される。場合によっては、ペプチド中のメチオニン残基の一部または全部が、ロイシンまたはイソロイシンによって置換される。場合によっては、ペプチド中のトリプトファン残基の一部または全部が、フェニルアラニンまたはチロシンによって置換される。場合によっては、ペプチド中のアスパラギン残基の一部または全部が、グルタミンによって置換される。症例によっては、ペプチドのＮ末端は、アセチル基などによってブロックされる。代案としては、または組み合わせて、場合によっては、ペプチドのＣ末端が、アミド基などによってブロックされる。いくつかの実施形態では、ペプチドは遊離アミン上のメチル化によって修飾される。例えば、完全メチル化は、ホルムアルデヒドおよびシアノ水素化ホウ素ナトリウムによる還元的メチル化の使用を通じて達成されてもよい。
【０１０５】
場合によっては、配列番号１〜配列番号２０９に示される最初の２つのＮ末端アミノ酸（ＧＳ）、またはそのようなＮ末端アミノ酸（ＧＳ）は存在しなくてもよく、または配列番号２１０〜配列番号４１８に示されるように、任意のその他の１つまたは２つのアミノ酸によって置換されてもよい。
【０１０６】
ペプチドのＣ末端Ａｒｇ残基はＡｌａ、Ａｓｎ、Ａｓｐ、Ｇｌｎ、Ｇｌｕ、Ｇｌｙ、Ｈｉｓ、Ｌｅｕ、Ｌｙｓ、Ｍｅｔ、Ｐｈｅ、Ｐｒｏ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｔｒｐ、Ｔｙｒ、またはＶａｌなどの別の残基に修飾される。例えば、ペプチドのＣ末端Ａｒｇ残基は、Ｉｌｅに修飾され得る。代案としては、ペプチドのＣ末端Ａｒｇ残基は、任意の非天然アミノ酸に修飾され得る。この修飾は、重要な水素結合の維持をなおも可能にしながら、治療中を含めて、発現、合成、プロセシング、貯蔵、生体外、または生体内におけるＣ末端残基のクリッピングを防止し得る。重要な水素結合は、最初の折り畳み核形成中に形成される水素結合であり得て、最初のヘアピンを形成するために重要である。
【０１０７】
一般に、関連する構造相同体のＮＭＲ溶液構造を用いて、特定の生物学的機能を維持しながら、折り畳み、安定性、製造可能性を改善し得る、変異ストラテジーの情報を提供し得る。それらを用いて、一群の構造的に相同的なスキャフォールドの３Ｄファーマコフォアが予測され、ならびに関連タンパク質の可能な移植領域が予測されて、改善された特性を有するキメラが作製され得る。例えば、本発明者らは、このストラテジーを用いて、改善された特性を有する薬物を設計するために使用され得る、重要なアミノ酸位置およびループを同定し、または配列番号５、配列番号１、配列番号２、および配列番号３のペプチドの折り畳みおよび製造可能性を複雑にする有害な変異を修正した。表２は、配列番号５から習得されたように、いくらかの成功をもって使用された、重要なアミノ酸位置およびループを要約する。いくつかの態様では、下の表に列挙されるアミノ酸が保持されてもよい一方で、ペプチド配列中のその他の残基は変異して、ペプチドの機能、ホーミング、および活性が、改善、変更、除去、または別の様式で修飾されてもよい。
【０１０８】
【表１２】
2018521994.tif 000014
【０１０９】
上記の表２の残基に関して、上記の位置および相互作用残基は、本明細書に記載の任意のペプチド配列内の異なるが対応する位置を記載するものと理解される。例えば、配列番号１〜配列番号２０９に示される最初の２つのＮ末端アミノ酸は存在しなくてもよく、または配列番号２１０に示されるように、任意のその他の１つまたは２つのアミノ酸によって置換されてもよく、Ｎ末端アミノ酸（ＧＳ）が存在しないペプチド中では、アミノ酸位置Ｔ１０はＴ８に対応して相互作用残基Ｈ１１、Ｈ１２はＨ９、Ｈ１０に対応し；アミノ酸位置Ｄ１９はＤ１７に対応して相互作用残基Ｃ２２、Ｇ２３、Ｇ２４、Ｇ２６、およびＲ２７はＣ２０、Ｇ２１、Ｇ２２、Ｇ２４、およびＲ２５に対応し、およびアミノ酸位置Ｒ３８はＲ３６に対応して相互作用残基Ｒ２７はＲ２５に対応する。さらに、位置１１の相互作用残基はアスパラギン酸で置換され得る。同様に、配列番号１〜配列番号１９６の本明細書のペプチドの変異型は、同様に対応する残基を有するであろう。
【０１１０】
さらに、２つ以上のペプチドの一次配列と三次配列との比較を用いて、配列および３Ｄ折り畳みパターンを明らかにし得て、それを活用してペプチドが改善され、これらのペプチドの生物学的活性が解析され得る。例えば、ＢＢＢを通過しまたはＣＳＦに侵入する２つの異なるペプチドスキャフォールドを比較することにより、折り畳み特性を有する変異型を設計するなどの、操作ストラテジーの指針となり得る、保存されたファルマコフォアの同定をもたらし得る。重要なファルマコフォア（ｐｈａｒｍａｃｏｒｅｓ）は、例えば、タンパク質−タンパク質結合相互作用に重要であり得る芳香族残基を含んでなり得る。
【０１１１】
場合によっては、ペプチドは、配列番号１〜配列番号１９２のいずれか１つまたはその機能的断片である。その他の実施形態では、本開示のペプチドは、配列番号１〜配列番号１９２のいずれか１つと９９％、９５％、９０％、８５％または８０％の配列同一性または相同性を有するペプチド、またはその断片をさらに含んでなる。
【０１１２】
その他の場合では、ペプチドは、配列番号１〜配列番号１９２のいずれか１つと相同的であるペプチド、またはその機能的断片であり得る。「相同的」という用語は、本明細書では、配列番号１〜配列番号１９２または配列番号２１０〜配列番号４１０のいずれか１つの配列と少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または９５％を超える配列同一性または相同性を有するペプチド、またはその機能的断片を示すために使用される。
【０１１３】
なおもその他の場合では、配列番号１〜配列番号１９２または配列番号２１０〜配列番号４１０のいずれか１つのペプチドの変異型核酸分子は、コードされたペプチドアミノ酸配列と、配列番号１〜配列番号１９２または配列番号２１０〜配列番号４１０のいずれか１つのアミノ酸配列との配列同一性または相同性の判定によって、または核酸ハイブリダイゼーションアッセイによって、同定され得る。このようなペプチド変異型は、（１）洗浄ストリンジェンシーが５５〜６５℃で、０．５×〜２×ＳＳＣおよび０．１％ＳＤＳに等しい、ストリンジェントな洗浄条件下において、配列番号１〜配列番号１９２または配列番号２１０〜配列番号４１０のいずれか１つのヌクレオチド配列を有する核酸分子（または先の配列の任意の補体）とハイブリダイズしたままである、および（２）配列番号１〜配列番号１９２または配列番号２１０〜配列番号４１０のいずれか１つのアミノ酸配列と、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％または９５％を超える配列同一性または相同性を有するペプチドをコードする、核酸分子を含み得る。代案としては、配列番号１〜配列番号１９２または配列番号２１０〜配列番号４１０のいずれか１つのペプチド変異体は、（１）洗浄ストリンジェンシーが５０〜６５°Ｃで０．１×〜０．２×ＳＳＣおよび０．１％ＳＤＳに等しい、高度なストリンジェントな洗浄条件下において、配列番号１〜配列番号１９２または配列番号２１０〜配列番号４１０のいずれか１つのヌクレオチド配列を有する核酸分子（または先の配列の任意の補体）とハイブリダイズしたままである、および（２）配列番号１〜配列番号１９２または配列番号２１０〜配列番号４１０のいずれか１つのアミノ酸配列と、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％または９５％を超える配列同一性または相同性を有するペプチドをコードする、核酸分子として特徴付け得る。
【０１１４】
配列同一性百分率または相同性は、従来法によって判定される。例えば、Ａｌｔｓｃｈｕｌ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｕｌｌ．Ｍａｔｈ．Ｂｉｏ．４８：６０３（１９８６）、およびＨｅｎｉｋｏｆｆ  ａｎｄ  Ｈｅｎｉｋｏｆｆ，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８９：１０９１５（１９９２）を参照されたい。簡潔に述べると、ギャップオープニングペナルティ１０、ギャップ伸長ペナルティ１、およびＨｅｎｉｋｏｆｆ  ａｎｄ  Ｈｅｎｉｋｏｆｆ（同上）の「ＢＬＯＳＵＭ６２」重み行列を用いて、２つのアミノ酸配列が整列され、アライメントスコアが最適化される。次に配列同一性または相同性が、（［完全一致の総数］／［より長い配列長＋２つの配列を整列させるためにより長い配列に導入されたギャップ数］）（１００）として計算される。
【０１１５】
さらに、２つのアミノ酸配列を整列させるために利用可能な多くの確立されたアルゴリズムが存在する。例えば、ＰｅａｒｓｏｎおよびＬｉｐｍａｎの「ＦＡＳＴＡ」類似性検索アルゴリズムは、本明細書で開示されるペプチドのアミノ酸配列と、ペプチド変異型のアミノ酸配列とによって共有される、配列同一性または相同性のレベルを調べるのに適した、タンパク質アライメント法である。ＦＡＳＴＡアルゴリズムは、Ｐｅａｒｓｏｎ  ａｎｄ  Ｌｉｐｍａｎ，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ  Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８５：２４４４（１９８８）、およびＰｅａｒｓｏｎ，Ｍｅｔｈ．Ｅｎｚｙｍｏｌ．１８３：６３（１９９０）によって説明される。簡潔に述べると、ＦＡＳＴＡは、保存的アミノ酸置換、挿入、または欠失を考慮することなく、クエリー配列（例えば、配列番号１）と、最高密度の同一性（ｋｔｕｐ変数が１の場合）または対の同一性（ｋｔｕｐ＝２の場合）のどちらかを有する試験配列とによって共有される領域を同定することによって、最初に配列類似性が特徴付けられる。次に、最高密度の同一性を有する１０の領域が、アミノ酸置換マトリックスを用いて、全ての対合アミノ酸の類似性を比較することによって再スコアされ、領域の末端は最も高いスコアに寄与する残基のみを含むように「トリミング」される。「カットオフ」値（配列長およびｋｔｕｐ値に基づく所定の式によって計算される）より大きいスコアを有するいくつかの領域が存在する場合、トリミングされた初期領域を調べて、領域を結合させてギャップとの近似整列を形成させ得るかどうかが判定される。最後に、２つのアミノ酸配列の最高スコア領域が、アミノ酸の挿入および欠失を許容する、Ｎｅｅｄｌｅｍａｎ−Ｗｕｎｓｃｈ−Ｓｅｌｌｅｒｓアルゴリズム（Ｎｅｅｄｌｅｍａｎ  ａｎｄ  Ｗｕｎｓｃｈ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．４８：４４４（１９７０）；Ｓｅｌｌｅｒｓ，Ｓｉａｍ  Ｊ．Ａｐｐｌ．Ｍａｔｈ．２６：７８７（１９７４））の修正を用いて整列される。ＦＡＳＴＡ分析のための例示的なパラメーターは、ｋｔｕｐ＝１、ギャップオープニングペナルティー＝１０、ギャップ延長ペナルティー＝１、および置換マトリックス＝ＢＬＯＳＵＭ６２である。これらのパラメータは、Ｐｅａｒｓｏｎ，Ｍｅｔｈ．Ｅｎｚｙｍｏｌ．１８３：６３（１９９０）の補遺２で説明されるように、スコアリングマトリックスファイル（「ＳＭＡＴＲＩＸ」）を修正することにより、ＦＡＳＴＡプログラムに導入され得る。
【０１１６】
ＦＡＳＴＡを用いて、上で開示されるような比率を用いて、核酸分子の配列同一性または相同性が判定され得る。ヌクレオチド配列の比較のために、ｋｔｕｐ値は１〜６、好ましくは３〜６、最も好ましくは３の範囲であり得て、その他のパラメータは上記のように設定される。
【０１１７】
「保存的アミノ酸置換」である一般的なアミノ酸のいくつかの例は、以下の群のそれぞれの中のアミノ酸の間の置換によって例示される：（１）グリシン、アラニン、バリン、ロイシン、およびイソロイシン、（２）フェニルアラニン、チロシン、およびトリプトファン、（３）セリンおよびスレオニン、（４）アスパラギン酸塩およびグルタミン酸、（５）グルタミンおよびアスパラギン、および（６）リジン、アルギニン、およびヒスチジン。ＢＬＯＳＵＭ６２表は、関連タンパク質の５００を超えるグループの高度に保存された領域に相当する、タンパク質配列断片の約２，０００の局所的な多重アライメントからのアミノ酸置換マトリックスである（Ｈｅｎｉｋｏｆｆ  ａｎｄ  Ｈｅｎｉｋｏｆｆ，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ  Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ８９：１０９１５（１９９２））。したがって、ＢＬＯＳＵＭ６２置換頻度を用いて、本発明のアミノ酸配列に導入されてもよい保存的アミノ酸置換が定義され得る。（上で考察されるように）化学的性質のみに基づいてアミノ酸置換を設計することも可能であるが、用語「保存的アミノ酸置換」は、好ましくは、−１より大きいＢＬＯＳＵＭ６２値によって表される置換を指す。例えば、置換が０、１、２または３のＢＬＯＳＵＭ６２値によって特徴付けられる場合、アミノ酸置換は保存的である。このシステムによれば、好ましい保存的アミノ酸置換は、少なくとも１（例えば、１、２または３）のＢＬＯＳＵＭ６２値によって特徴付けられる一方で、より好ましい保存的アミノ酸置換は、少なくとも２のＢＬＯＳＵＭ６２値（例えば、２または３）によって特徴付けられる。
【０１１８】
構造的完全性を維持するのに重要な領域またはドメイン内にあるアミノ酸残基の判定が、判定され得る（Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ  ｏｆ  ａｍｉｎｏａｃｉｄ．．．ｃａｎ  ｂｅ  ｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄ．）これらの領域内では、程度の差はあるもの、変化に耐えて分子の全体的な三次構造を維持し得る、特定の残基を判定し得る。配列構造を分析する方法としては、アミノ酸またはヌクレオチドの高い同一性または相同性を有する複数の配列の整列、および利用可能なソフトウェア（例えば、Ｉｎｓｉｇｈｔ  ＩＩ．ＲＴＭ．ｖｉｅｗｅｒ  ａｎｄ  ｈｏｍｏｌｏｇｙ  ｍｏｄｅｌｉｎｇ  ｔｏｏｌｓ；ＭＳＩ，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，Ｃａｌｉｆ．）を用いたコンピュータ分析、二次構造の傾向、二成分パターン、相補的充填、および埋没極性相互作用が挙げられるが、これに限定されるものではない（Ｂａｒｔｏｎ，Ｇ．Ｊ．，Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｏｐｉｎ．Ｓｔｒｕｃｔ．Ｂｉｏｌ．５：３７２−６（１９９５）およびＣｏｒｄｅｓ，Ｍ．Ｈ．ｅｔ  ａｌ．，Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｏｐｉｎ．Ｓｔｒｕｃｔ．Ｂｉｏｌ．６：３−１０（１９９６））。一般に、分子への修正を設計し、または特定の断片を同定する場合、構造の判定は、典型的には、修飾分子の活性を評価することを伴い得る。
【０１１９】
さらなる実施形態では、ペプチド断片は、少なくとも１７、少なくとも１８、少なくとも１９、少なくとも２０、少なくとも２１、少なくとも２２、少なくとも２３、少なくとも２４、少なくとも２５、少なくとも２６、少なくとも２７、少なくとも２８、少なくとも２９、少なくとも３０、少なくとも３１、少なくとも３２、少なくとも３３、少なくとも３４、少なくとも３５、少なくとも３６、少なくとも３７、少なくとも３８、少なくとも３９、少なくとも４０、少なくとも４１、少なくとも４２、少なくとも４３、少なくとも４４、少なくとも４５、少なくとも４６残基長である、配列番号１〜配列番号１９６のいずれか１つの連続断片を含んでなり、その中ではペプチド断片は、ペプチドの任意の部分から選択される。
【０１２０】
本開示のペプチドは、正電荷アミノ酸残基をさらに含んでなり得る。場合によっては、ペプチドは少なくとも１個の正電荷残基を有する。場合によっては、ペプチドは少なくとも２個の正電荷残基を有する。場合によっては、ペプチドは少なくとも３個の正電荷残基を有する。その他の事例では、ペプチドは、少なくとも４個の正電荷残基、少なくとも５個の正電荷残基、少なくとも６個の正電荷残基、少なくとも７個の正電荷残基、少なくとも８個の正電荷残基、または少なくとも９個の正電荷残基を有する。正電荷残基は任意の正電荷アミノ酸残基から選択され得るが、いくつかの実施形態では、正電荷残基はＫまたはＲ、またはＫとＲの組み合わせのどちらかである。
【０１２１】
本開示のペプチドは、中性アミノ酸残基をさらに含んでなり得る。場合によっては、ペプチドは３５個以下の中性アミノ酸残基を有する。他の事例では、ペプチドは、８１個以下の中性アミノ酸残基、７０個以下の中性アミノ酸残基、６０個以下の中性アミノ酸残基、５０個以下の中性アミノ酸残基、４０個以下の中性アミノ酸残基、３６個以下の中性アミノ酸残基、３３個以下の中性アミノ酸残基、３０個以下の中性アミノ酸残基、２５個以下の中性アミノ酸残基、または１０個以下の中性アミノ酸残基を有する。
【０１２２】
本開示のペプチドは、負のアミノ酸残基をさらに含んでなり得る。場合によっては、ペプチドは、６個以下の負のアミノ酸残基、５個以下の負のアミノ酸残基、４個以下の負のアミノ酸残基、３個以下の負のアミノ酸残基、２個以下の負のアミノ酸残基、または１個以下の負のアミノ酸残基を有する。負のアミノ酸残基は、任意の中性電荷アミノ酸残基から選択され得るが、いくつかの実施形態では、負のアミノ酸残基は、ＥまたはＤ、またはＥおよびＤの双方の組み合わせのどちらかである。
【０１２３】
生理学的ｐＨでは、ペプチドは、例えば、−５、−４、−３、−２、−１、０、＋１、＋２、＋３、＋４、または＋５などの正味電荷を有し得る。正味電荷がゼロであれば、ペプチド非電荷または両性イオン性であり得る。いくつかの実施形態では、ペプチドは、１つまたは複数のジスルフィド結合を含有して、生理学的ｐＨで正の正味電荷を有し、正味電荷は、＋０．５以下、＋１以下、＋１．５以下、＋２以下、＋２．５以下、＋３以下、＋３．５以下、＋４以下、＋４．５以下、＋５以下、＋５．５以下、＋６以下、＋６．５以下、＋７以下、＋７．５以下、＋８以下、＋８．５以下、＋９以下、＋１０以下であり得る。いくつかの実施形態では、ペプチドは、生理学的ｐＨで負の正味電荷を有し、正味電荷は、−０．５以下、−１以下、−１．５以下、−２以下、−２．５以下、−３以下、−３．５以下、−４または以下、−４．５以下、−５以下、−５．５以下、−６以下、−６．５以下、−７以下、−７．５以下、−８以下、−８．５以下、−９以下、−１０以下であり得る。場合によっては、ペプチド内の１つまたは複数の変異の操作は、生理学的ｐＨで等電点、電荷、表面電荷またはレオロジーが変化したペプチドをもたらす。サソリまたはクモ由来のペプチドに対するこのような変異の操作は、例えば、正味電荷を１、２、３、４、または５低下させ、または正味電荷を１、２、３、４、または５増加させることによって、複合体の正味電荷を変化させ得る。このような場合、遺伝子操作された変異は、ペプチドが血液脳関門を通過する能力を促進してもよい。ペプチドのレオロジーおよび効力を改善するのに適したアミノ酸修飾は、保存的または非保存的変異を含み得る。ペプチドは、ペプチドがそれに由来する毒液または毒素構成成分の配列と比較して、最大で１アミノ酸変異、最大で２アミノ酸変異、最大で３アミノ酸変異、最大で４アミノ酸変異、最大で５アミノ酸変異、最大で６アミノ酸変異、最大で７アミノ酸変異、最大で８アミノ酸変異、最大で９アミノ酸変異、最大で１０アミノ酸変異、または別の適切な数の変異を含んでなり得る。その他の場合には、ペプチドまたはその機能的断は、ペプチドがそれに由来する毒液または毒素構成成分の配列と比較して、少なくとも１アミノ酸変異、少なくとも２アミノ酸変異、少なくとも３アミノ酸変異、少なくとも４アミノ酸変異、少なくとも５アミノ酸変異、少なくとも６アミノ酸変異、少なくとも７アミノ酸変異、少なくとも８アミノ酸変異、少なくとも９アミノ酸変異、少なくとも１０アミノ酸変異、または別の適切な数の変異を含んでなる。いくつかの実施形態では、ペプチド内で変異を操作して、生理学的ｐＨにおいて所望の電荷または安定性を有するペプチドが提供され得る。
【０１２４】
本開示は、本明細書に記載の様々なペプチドの多量体もまた包含する。多量体の例としては、二量体、三量体、四量体、五量体、六量体、七量体などが挙げられる。多量体は、複数の同一サブユニットから形成されるホモマー、または複数の異なるサブユニットから形成されるヘテロマーであってもよい。いくつかの実施形態では、本開示のペプチドは、少なくとも１つのその他のペプチド、または２、３、４、５、６、７、８、９、１０またはそれ以上のその他のペプチドを有する多量体構造に配置される。特定の実施形態では、多量体構造のペプチドは、それぞれ同一配列を有する。代替の実施形態では、多量体構造のペプチドの一部または全部が、異なる配列を有する。
【０１２５】
本開示は、ペプチドスキャフォールドをさらに含み、これは例えば、追加的なペプチドを生成するための出発点として使用され得る。いくつかの実施形態では、これらのスキャフォールドは、様々なノットペプチドまたはノッチンに由来し得る。スキャフォールドのための、いくつかの適切なペプチドとしては、クロロトキシン、ブラゼイン、サーキュリン、ステクリスプ、ハナトキシン、ミッドカイン、ヘフトキシン、ジャガイモカルボキシペプチダーゼインヒビター、バブルプロテイン、アトラクチン、α−ＧＩ、α−ＧＩＤ、μ−ＰＩＩＩＡ、ω−ＭＶＩＩＡ、ω−ＣＶＩＤ、χ−ＭｒＩＡ、ρ−ＴＩＡ、コナントキンＧ、コンツラキンＧ、ＧｓＭＴｘ４、マルガトキシン、ｓｈＫ、毒素Ｋ、キモトリプシンインヒビター（ＣＴＩ）、およびＥＧＦエピレギュリンコアが挙げられるが、これに限定されるものではない。
【０１２６】
場合によってはペプチドは、配列番号１〜配列番号１９２または配列番号２１０〜配列番号４１０のいずれか１つの配列を含んでなる。いくつかの実施形態では、ペプチド配列は、追加的なアミノ酸で挟まれる。１つまたは複数の追加的なアミノ酸は、例えば，所望の生体内電荷、等電点、化学的結合部位、安定性、または生理学的な性質をペプチドにもたらし得る。
【０１２７】
２つ以上のペプチドは、ある程度の配列同一性または相同性の程度を共有し得て、生体内で類似した特性を共有し得る。例えば、ペプチドは、配列番号１〜配列番号１９２の任意の１つペプチドと、ある程度の配列同一性または相同性を共有し得る。場合によっては、本開示の１つまたは複数のペプチドは、約２０％までのペアワイズ配列同一性または相同性、約２５％までのペアワイズ配列同一性または相同性、約３０％までのペアワイズ配列同一性または相同性、約３５％までのペアワイズ配列同一性または相同性、約４０％までのペアワイズ配列同一性または相同性、約４５％までのペアワイズ配列同一性または相同性、約５０％までのペアワイズ配列同一性または相同性、約５５％までのペアワイズ配列同一性または相同性、約６０％までのペアワイズ配列同一性または相同性、約６５％までのペアワイズ配列同一性または相同性、約７０％までのペアワイズ配列同一性または相同性、約７５％までのペアワイズ配列同一性または相同性、約８０％までのペアワイズ配列同一性または相同性、約８５％までのペアワイズ配列同一性または相同性、約９０％までのペアワイズ配列同一性または相同性、約９５％までのペアワイズ配列同一性または相同性、約９６％までのペアワイズ配列同一性または相同性、約９７％までのペアワイズ配列同一性または相同性、約９８％までのペアワイズ配列同一性または相同性、約９９％までのペアワイズ配列同一性または相同性、約９９．５％までのペアワイズ配列同一性または相同性、または約９９．９％までのペアワイズ配列同一性または相同性を有し得る。場合によっては、本開示の１つまたは複数のペプチドは、第２のペプチドと、少なくとも約２０％のペアワイズ配列同一性または相同性、少なくとも約２５％のペアワイズ配列同一性または相同性、少なくとも約３０％のペアワイズ配列同一性または相同性、少なくとも約３５％のペアワイズ配列同一性または相同性、少なくとも約４０％のペアワイズ配列同一性または相同性、少なくとも約４５％のペアワイズ配列同一性または相同性、少なくとも約５０％のペアワイズ配列同一性または相同性、少なくとも約５５％のペアワイズ配列同一性または相同性、少なくとも約６０％のペアワイズ配列同一性または相同性、少なくとも約６５％のペアワイズ配列同一性または相同性、少なくとも約７０％のペアワイズ配列同一性または相同性、少なくとも約７５％のペアワイズ配列同一性または相同性、少なくとも約８０％のペアワイズ配列同一性または相同性、少なくとも約８５％のペアワイズ配列同一性または相同性、少なくとも約９０％のペアワイズ配列同一性または相同性、少なくとも約９５％のペアワイズ配列同一性または相同性、少なくとも約９６％のペアワイズ配列同一性または相同性、少なくとも約９７％のペアワイズ配列同一性または相同性、少なくとも約９８％のペアワイズ配列同一性または相同性、少なくとも約９９％のペアワイズ配列同一性または相同性、少なくとも約９９．５％のペアワイズ配列同一性または相同性、少なくとも約９９．９の配列同一性または相同性を有し得る。ＮＣＢＩ  ＢＬＡＳＴ、Ｃｌｕｓｔａｌ  Ｗ、ＭＡＦＦＴ、Ｃｌｕｓｔａｌ  Ｏｍｅｇａ、ＡｌｉｇｎＭｅ、Ｐｒａｌｉｎｅなどの様々な方法およびソフトウエアプログラム、または別の適切な方法またはアルゴリズムを用いて、２つ以上のペプチド間の相同性を判定し得る。
【０１２８】
配列アライメントを用いて、２つの生物学的配列（タンパク質または核酸）間の機能的、構造的および／または進化的関係を示してもよい、類似性領域が同定される。対照的に、多重配列アラインメント（ＭＳＡ）は、３つ以上の生物学的配列のアライメントである。ＭＳＡアプリケーションの結果から相同性が推定され、配列間の進化的関係が評価され得る。当業者は、本明細書の用法では、「配列相同性」および「配列同一性」および「パーセント（％）配列同一性」および「パーセント（％）配列相同性」が同義的に使用されており、必要に応じて、参照ポリヌクレオチドまたはアミノ酸配列に対する、配列の関連性または多様性を意味することを認識するであろう。
【０１２９】
化学修飾
ペプチドは、様々な方法の１つまたは複数で、化学的に修飾し得る。いくつかの実施形態では、ペプチドが変異して、機能が付加され、機能が欠失され、または生体内挙動が変更され得る。ジスルフィド結合間の１つまたは複数のループを修飾または置換して、その他のペプチドからの活性成分を含め得る（Ｍｏｏｒｅ  ａｎｄ  Ｃｏｃｈｒａｎ，Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ，５０３，ｐ．２２３−２５１，２０１２に記載されるように）。アミノ酸はまた、半減期を増加させ、生体内結合挙動を修飾または付加または欠失させ、新たな標的機能を追加し、表面電荷および疎水性を変更し、またはコンジュゲーション部位を可能にするなどのために変異させ得る。Ｎ−メチル化は、本開示のペプチドにおいて生じ得るメチル化の一例である。いくつかの実施形態では、ペプチドは遊離アミン上のメチル化によって修飾される。例えば、完全メチル化は、ホルムアルデヒドおよびシアノ水素化ホウ素ナトリウムによる還元的メチル化の使用を通じて達成されてもよい。図１は、メチル化を有する、または有しない配列番号１のペプチドのモデルを示す。
【０１３０】
化学修飾は、例えば、ペプチドの半減期を延長し、または生体内分布または薬物動態プロファイルを変化させ得る。化学修飾は、ポリマー、ポリエーテル、ポリエチレングリコール、生体高分子、ポリアミノ酸、脂肪酸、デンドリマー、Ｆｃ領域、パルミチン酸またはミリスチン酸（ｍｙｒｉｓｔｏｌａｔｅ）などの単純飽和炭素鎖、またはアルブミンを含んでなり得る。ポリアミノ酸としては、例えば、反復される単一アミノ酸（例えば、ポリグリシン）を有するポリアミノ酸配列、およびパターンに従っても従わなくてもよい混合ポリアミノ酸配列（例えば、ｇｌｙ−ａｌａ−ｇｌｙ−ａｌａ）を有するポリアミノ酸配列、または前述の任意の組み合わせが挙げられる。
【０１３１】
いくつかの実施形態では、本開示のペプチドは、修飾がペプチドの安定性および／または半減期を増加させるように修飾されてもよい。いくつかの実施形態では、Ｎ末端、Ｃ末端、または内部アミノ酸への疎水性部分の結合を使用して、本開示のペプチドの半減期を延長させ得る。他の実施形態では、本開示のペプチドは、例えば、血清半減期に影響を及ぼし得る翻訳後修飾（例えば、メチル化および／またはアミド化）を含み得る。いくつかの実施形態では、単純炭素鎖（例えば、ミリストイル化および／またはパルミトイル化（ｐａｌｍｉｔｙｌａｔｉｏｎ）による）は、融合タンパク質またはペプチドにコンジュゲートされ得る。いくつかの実施形態では、単純炭素鎖は、融合タンパク質またはペプチドが、非コンジュゲート材料から容易に分離されるようにしてもよい。例えば、非コンジュゲート材料から融合タンパク質またはペプチドを分離するために用いられてもよい方法としては、溶媒抽出および逆相クロマトグラフィーが挙げられるが、これに限定されるものではない。親油性部分は、血清アルブミンへの可逆的結合を介して半減期を延長させ得る。コンジュゲートされた部分は、例えば、血清アルブミンへの可逆的結合を通じてペプチドの半減期を延長させる親油性部分であり得る。いくつかの実施形態では、親油性部分は、コレステン、コレスタン、コレスタジエン、およびオキシステロールをはじめとする、コレステロールまたはコレステロール誘導体であり得る。いくつかの実施形態では、ペプチドは、ミリスチン酸（テトラデカン酸）またはその誘導体にコンジュゲートされ得る。その他の実施形態では、本開示のペプチドは、半減期修飾剤に結合される（例えば、コンジュゲートされる）。半減期修飾剤の例としては、ポリマー；ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）；ヒドロキシエチルデンプン；ポリビニルアルコール；水溶性ポリマー；両性イオン性水溶性ポリマー；水溶性ポリ（アミノ酸）；プロリン、アラニンおよびセリンの水溶性ポリマー；グリシン、グルタミン酸、およびセリンを含有する水溶性ポリマー；Ｆｃ領域；脂肪酸；パルミチン酸；またはアルブミンに結合する分子が挙げられるが、これに限定されるものではない。
【０１３２】
いくつかの実施形態では、配列番号１〜配列番号１９６の最初の２つのＮ末端アミノ酸（ＧＳ）は、別の分子へのコンジュゲーションまたは融合を促進するための、ならびにこのようなコンジュゲートまたは融合された分子からの切断を容易にするための、スペーサーまたはリンカーの役割を果たす。いくつかの実施形態では、本開示の融合タンパク質またはペプチドは、例えば、ペプチドの特性を修飾しまたは変化させ得る、その他の部分にコンジュゲートさせ得る。
【０１３３】
活性薬剤コンジュゲート
本開示に従ったペプチドは、腫瘍、がん、および脳疾患および障害の治療で使用するための薬剤にコンジュゲートまたは融合され得る。例えば、特定の実施形態では、本明細書に記載のペプチドは、機能的能力を提供する活性薬剤などの別の分子に融合される。活性薬剤の配列とペプチドの配列とを含有するベクターの発現を通じて、ペプチドが活性薬剤と融合され得る。様々な実施形態において、ペプチドの配列および活性薬剤の配列は、同一のオープンリーディングフレーム（ＯＲＦ）から発現される。様々な実施形態において、ペプチドの配列および活性薬剤の配列は、連続配列を含んでなり得る。ペプチドおよび活性薬剤は、融合ペプチドにおいて、それらの機能的能力が別々に発現された場合と比較して、同様の機能的能力をそれぞれ維持し得る。特定の実施形態では、活性薬剤の例としては、ニューロテンシンペプチドなどのその他のペプチドが挙げられる。ニューロテンシンは、１３アミノ酸神経ペプチドであり、これは黄体形成ホルモンおよびプロラクチン放出の調節に関与し得て、ドーパミン作動系と相互作用し得るとができるが、血液脳関門を通過しない。したがって、ニューロテンシンペプチドと、血液脳関門を通過し得本明細書に記載のペプチドの１つとの融合は、ニューロテンシンペプチドの機能的能力を保持し得て血液関門を通過できる融合ペプチドを生成し得る。例えば、本開示のペプチドのＤＮＡ配列がニューロテンシンの遺伝子に挿入されて、ペプチド−ニューロテンシン融合体が製造される。
【０１３４】
さらに、例えば、特定の実施形態では、本明細書に記載のペプチドは、機能的能力を提供する活性薬剤などの別の分子に付着される。いくつかの実施形態では、１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０の活性薬剤が、ペプチドに連結され得る。複数の活性薬剤は、複数のリジン残基および／またはＮ末端にコンジュゲートさせるなどの方法によって付着させ得て、または複数のポリマーまたは活性薬剤をデンドリマーなどのスキャフォールドに連結させて、次に薬剤−スキャフォールドをペプチドに付着させることによって、付着させ得る（Ｙｕｒｋｏｖｅｔｓｋｉ，Ａ．Ｖ．，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ  ７５（１６）：３３６５−７２（２０１５）に記載されるように。活性薬剤の例としては、ペプチド、オリゴペプチド、ポリペプチド、ペプチド模倣剤、ポリヌクレオチド、ポリリボヌクレオチド、ＤＮＡ、ｃＤＮＡ、ｓｓＤＮＡ、ＲＮＡ、ｄｓＲＮＡ、マイクロＲＮＡ、オリゴヌクレオチド、抗体、一本鎖変数断片（ｓｃＦｖ）、抗体断片、アプタマー、サイトカイン、インターフェロン、ホルモン、酵素、増殖因子、チェックポイント阻害剤、ＰＤ−１阻害剤、ＰＤ−Ｌ１阻害剤、ＣＴＬＡ４阻害剤、ＣＤ抗原、ケモカイン、神経伝達物質、イオンチャネル阻害剤、イオンチャネル賦活剤、Ｇタンパク質共役型受容体阻害剤、Ｇタンパク質共役型受容体賦活剤、化学薬剤、放射線増感剤、放射線防護体、放射性核種、治療用小分子、ステロイド、コルチコステロイド、抗炎症剤、免疫修飾物質、補体結合ペプチドまたはタンパク質、腫瘍壊死因子阻害剤、腫瘍壊死因子賦活剤、腫瘍壊死因子受容体ファミリー作動薬、腫瘍壊死受容体拮抗薬、Ｔｉｍ−３阻害剤、プロテアーゼ阻害剤、アミノ糖、化学療法薬、細胞毒性化学物質、毒素、チロシンキナーゼ阻害剤、抗感染症薬、抗生物質、抗ウイルス剤、抗真菌剤、アミノグリコシド、非ステロイド系抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）、スタチン、ナノ粒子、リポソーム、ポリマー、生体高分子、多糖類、プロテオグリカン、グリコサミノグリカン、ポリエチレングリコール、脂質、デンドリマー、脂肪酸、またはＦｃ領域、またはそれらの活性断片または修飾が挙げられるが、これに限定されるものではない。いくつかの実施形態では、ペプチドは、例えば、直接、またはリンカーを介して、活性薬剤に共有結合または非共有結合される。例えば、使用され得る細胞毒性分子としては、オーリスタチン、ＭＭＡＥ、ＭＭＡＦ、ドロスタチン、オーリスタチンＦ、モノメチルオーリスタチン（ｍｏｎｏｍｅｔｈｙｌａｕｒｓｔａｔｉｎ）Ｄ、ＤＭ１、ＤＭ４、メイタンシノイド、メイタンシン、カリケアマイシン、Ｎ−アセチル−γ−カリケアマイシン、ピロロベンゾジアゼピン、ＰＢＤ二量体、ドキソルビシン、ビンカアルカロイド（４−デアセチルビンブラスチン）、デュオカルマイシン、キノコアマトキシンの環状オクタペプチド類似体、エポチロン、およびアントラサイクリン（ａｎｔｈｒａｃｙｌｉｎｅｓ）、ＣＣ−１０６５、タキサン、パクリタキセル、カバジタキセル、ドセタキセル、ＳＮ−３８、イリノテカン、ビンクリスチン、ビンブラスチン、白金化合物、シスプラチン、メトトレキサート、およびＢＡＣＥ阻害剤が挙げられる（ｕｓｅｄｉｎｃｌｕｄｅ）。活性薬剤の追加的な例は、ＭｃＣｏｍｂｓ，Ｊ．Ｒ．，ＡＡＰＳ  Ｊ，１７（２）：３３９−５１（２０１５）、Ｄｕｃｒｙ，Ｌ．，Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｄｒｕｇ  Ｃｏｎｊｕｇａｔｅｓ（２０１３）、およびＳｉｎｇｈ，Ｓ．Ｋ．，Ｐｈａｒｍ  Ｒｅｓ．３２（１１）：３５４１−３５７１（２０１５）に記載される。本明細書で開示されるペプチドは、がん性細胞に、ホーミング、分散、標的化、指向化、蓄積、移動および／または結合させるために使用され得て、したがって付着または融合した活性薬剤を局在化するためにも使用され得る。さらに、ノットクロロトキシンペプチドは、細胞に内在化させ得る（Ｗｉｒａｎｏｗｓｋａ，Ｍ．，Ｃａｎｃｅｒ  Ｃｅｌｌ  Ｉｎｔ．，１１：２７（２０１１））。したがって、活性薬剤ペプチドコンジュゲートまたは融合ペプチドの細胞内移行、細胞内局在、および内部移行後の細胞内輸送は、活性薬剤結合体コンジュゲートまたは融合体の有効性における重要要素であり得る（Ｄｕｃｒｙ，Ｌ．，Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｄｒｕｇ  Ｃｏｎｊｕｇａｔｅｓ（２０１３）；およびＳｉｎｇｈ，Ｓ．Ｋ．，Ｐｈａｒｍ  Ｒｅｓ．３２（１１）：３５４１−３５７１（２０１５））。本明細書の実施形態で使用するのに適する例示的なリンカーは、以下でさらに詳細に考察される。
【０１３５】
抗体−薬物コンジュゲート（例えば、Ａｄｃｅｔｒｉｓ、Ｋａｄｃｙｌａ、Ｍｙｌｏｔａｒｇ）と比較して、いくつかの態様では、本明細書に記載されるような活性薬剤にコンジュゲートされたペプチドは、そのより小さなサイズのために固形腫瘍のより良好な浸透を示してもよい。その他の態様では、抗体−薬物コンジュゲートと比較して、本明細書に記載されるような活性薬剤にコンジュゲートされたペプチドは、ＢＢＢを透過するその能力のために脳腫瘍により良好に到達できてもよい。特定の態様では、本明細書に記載されるような活性薬剤にコンジュゲートされたペプチドは、抗体−薬物コンジュゲートと比較して、異なるまたはより高用量の活性薬剤を輸送できてもよい。なおも別の態様では、本明細書に記載されるような活性薬剤にコンジュゲートされたペプチドは、抗体−薬物コンジュゲートと比較して、規定された薬物比のより良い部位特異的送達を有してもよい。その他の態様では、ペプチドは、（水の他に）有機溶媒中で溶媒和を受け入れやすくあってもよく、これは、薬物（低い水溶性を有することが多い）の溶媒和およびコンジュゲーションのためのより多くの合成経路、およびより高いコンジュゲーション収量、ペプチドにコンジュゲートされる薬物のより高い比率（抗体との対比で）、および／またはコンジュゲーション中における凝集体／高分子量種の形成の減少を可能にする。さらに、さもなければ短い配列中には存在しない残基を通じて、または非天然アミノ酸の包含を通じて、独特のアミノ酸残基がペプチドに導入されて、ペプチドの部位特異的コンジュゲーションができるようにしてもよい。
【０１３６】
本開示のペプチドまたは融合ペプチドは、組織または体液からペプチドを回収するための、親和性ハンドル（例えば、ビオチン）を提供するなどのその他の役割を果たし得る、その他の部分にコンジュゲートされ得る。例えば、本開示のペプチドまたは融合ペプチドはまた、ビオチンにコンジュゲートされ得る。半減期の延長に加えて、ビオチンは、組織またはその他の部位から、ペプチドまたは融合ペプチドを回収するための親和性ハンドルとしても作用し得る。いくつかの実施形態では、検出可能な標識および親和性ハンドルの双方として作用し得る、蛍光性ビオチンコンジュゲートを用い得る。市販の蛍光性ビオチンコンジュゲートの非限定的例としては、Ａｔｔｏ  ４２５−ビオチン、Ａｔｔｏ  ４８８−ビオチン、Ａｔｔｏ  ５２０−ビオチン、Ａｔｔｏ−５５０ビオチン、Ａｔｔｏ  ５６５−ビオチン、Ａｔｔｏ  ５９０−ビオチン、Ａｔｔｏ  ６１０−ビオチン、Ａｔｔｏ  ６２０−ビオチン、Ａｔｔｏ  ６５５−ビオチン、Ａｔｔｏ  ６８０−ビオチン、Ａｔｔｏ  ７００−ビオチン、Ａｔｔｏ  ７２５−ビオチン、Ａｔｔｏ  ７４０−ビオチン、フルオレセインビオチン、ビオチン−４−フルオレセイン、ビオチン−（５−フルオレセイン）コンジュゲート、およびビオチン−Ｂ−フィコエリトリン、Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ  ４８８ビオシチン、ＡＬＥＸＡ粉末（ｆｌｏｕｒ）５４６、Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ  ５４９、ルシファーイエローカダベリンビオチン−Ｘ、ルシファーイエロービオシチン、オレゴングリーン４８８ビオシチン、ビオチン−ローダミン、およびテトラメチルローダミンビオシチンが挙げられるいくつかのその他の例では、コンジュゲートは、化学発光化合物、コロイド金属、ルミネセンス化合物、酵素、放射性同位体、および常磁性標識を含み得る。いくつかの実施形態では、本明細書に記載のペプチドはまた、別の分子にも付着され得る。例えば、ペプチド配列はまた、別の活性薬剤（例えば、小分子、ペプチド、ポリペプチド、ポリヌクレオチド、抗体、アプタマー、サイトカイン、成長因子、神経伝達物質、先行するものいずれかの活性断片または修飾、フルオロフォア、放射性同位体、放射性核種キレート剤、アシル付加物、化学リンカー、または糖など）にも付着され得る。いくつかの実施形態では、ペプチドは、活性薬剤に、融合、または共有結合、または非共有結合され得る。
【０１３７】
さらに、毒素または毒液から誘導された２つ以上のペプチド配列が、特定のペプチド上に存在し得て、または特定のペプチドと融合され得る。ペプチドは、様々な技術によって生体分子に組み込まれ得る。ペプチドは、アミド結合などの共有結合形成などの化学転換によって、組み込まれ得る。ペプチドは、例えば、固相または溶液相ペプチド合成によって組み込まれ得る。ペプチドは、生体分子をコードする核酸配列を調製することによって組み込まれ得て、その中で核酸配列は、ペプチドをコードする部分配列を含む。部分配列は、生体分子をコードする配列に加え得て、または生体分子をコードする配列の部分配列を置換し得る。
【０１３８】
検出可能薬剤コンジュゲート
ペプチドは、イメージング、研究、治療学、セラノスティクス、医薬品、化学療法、キレート療法、標的化薬物送達、および放射線療法に使用される薬剤にコンジュゲートさせ得る。いくつかの実施形態では、ペプチドは、例えば、フルオロフォア、近赤外線色素、造影剤、ナノ粒子、金属含有ナノ粒子、金属キレート、Ｘ線造影剤、ＰＥＴ薬剤、金属、放射性同位体、色素、放射性核種キレート剤、またはイメージングで使用され得る別の適切な材料などの検出可能薬剤にコンジュゲートされる。いくつかの実施形態では、１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０の検出可能薬剤が、ペプチドに連結され得る。放射性同位体の非限定的例としては、α放射体、β放射体、陽電子放射体、およびγ放射体が挙げられる。いくつかの実施形態では、金属または放射性同位体は、アクチニウム、アメリシウム、ビスマス、カドミウム、セシウム、コバルト、ユウロピウム、ガドリニウム、イリジウム、鉛、ルテチウム、マンガン、パラジウム、ポロニウム、ラジウム、ルテニウム、サマリウム、ストロンチウム、テクネチウム、タリウム、およびイットリウムからなる群から選択される。いくつかの実施形態では、金属は、アクチニウム、ビスマス、鉛、ラジウム、ストロンチウム、サマリウム、またはイットリウムである。いくつかの実施形態では、放射性同位体は、アクチニウム−２２５または鉛−２１２である。いくつかの実施形態において、近赤外線染料は、生物学的組織および体液によって容易に消光されない。いくつかの実施形態では、フルオロフォアは、６５０ｎｍ〜４０００ｎｍの波長の電磁放射を発する蛍光剤であり、このような放射は薬剤を検出するために使用されている。本開示のコンジュゲート分子として使用され得る蛍光染料の非限定的例としては、ＤｙＬｉｇｈｔ−６８０、ＤｙＬｉｇｈｔ−７５０、ＶｉｖｏＴａｇ−７５０、ＤｙＬｉｇｈｔ−８００、ＩＲＤｙｅ−８００、ＶｉｖｏＴａｇ−６８０、Ｃｙ５．５、またはインドシアニングリーン（ＩＣＧ）が挙げられる。いくつかの実施形態では、近赤外線染料は、しばしばシアニン染料（例えば、Ｃｙ７、Ｃｙ５．５、およびＣｙ５）を含む。本開示のコンジュゲート分子として使用される蛍光染料の追加的な非限定的例としては、アクリジン（ａｃｒａｄｉｎｅ）オレンジまたはイエロー、Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ（例えば、Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ７９０、７５０、７００、６８０、６６０、および６４７）およびそのあらゆる誘導体、７−アクチノマイシンＤ、８−アニリノナフタレン−１−スルホン酸、ＡＴＴＯ色素およびそのあらゆる誘導体、オーラミン−ローダミン染色およびそのあらゆる誘導体、ベンゾアントロン（ｂｅｎｓａｎｔｒｈｏｎｅ）、ビマン、９−１０−ビス（フェニルエチニル）アントラセン、５，１２−ビス（フェニルエチニル）ナフタセン（ｎａｔｈｔｈａｃｅｎｅ）、ビスベンズイミド、ブレインボウ、カルセイン、カルボキシフルオレセイン（ｃａｒｂｏｄｙｆｌｕｏｒｅｓｃｅｉｎ）およびそのあらゆる誘導体、１−クロロ−９，１０−ビス（フェニルエチニル）アントラセンおよびそのあらゆる誘導体、ＤＡＰＩ、ＤｉＯＣ６、ＤｙＬｉｇｈｔ  Ｆｌｕｏｒｓおよびそのあらゆる誘導体、エピコッコノン、臭化エチジウム、ＦｌＡｓＨ−ＥＤＴ２、Ｆｌｕｏ色素およびそのあらゆる誘導体、ＦｌｕｏＰｒｏｂｅおよびそのあらゆる誘導体、フルオレセインおよびそのあらゆる誘導体、Ｆｕｒａおよびそのあらゆる誘導体、ＧｅｌＧｒｅｅｎおよびそのあらゆる誘導体、ＧｅｌＲｅｄおよびそのあらゆる誘導体、蛍光タンパク質およびそのあらゆる誘導体、例えばｍＣｈｅｒｒｙなどのｍイソ型タンパク質およびそのあらゆる誘導体、ヘプタメチン（ｈｅｔａｍｅｔｈｉｎｅ）色素およびそのあらゆる誘導体、ヘキスト（ｈｏｅｓｃｈｓｔ）染色、イミノクマリン、インディアンイエロー、ｉｎｄｏ−１およびそのあらゆる誘導体、ラウルダン、ルシファーイエローおよびそのあらゆる誘導体、ルシフェリンおよびそのあらゆる誘導体、ルシフェラーゼおよびそのあらゆる誘導体、メロシアニン（ｍｅｒｃｏｃｙａｎｉｎｅ）およびそのあらゆる誘導体、ナイル染料およびそのあらゆる誘導体、ペリレン、フロキシン、フィコ色素およびそのあらゆる誘導体、ヨウ化プロピジウム（ｐｒｏｐｉｄｉｕｍ  ｉｏｄｉｄｅ）、ピラニン、ローダミンおよびそのあらゆる誘導体、リボグリーン、ＲｏＧＦＰ、ルブレン、スチルベンおよびそのあらゆる誘導体、スルホローダミンおよびそのあらゆる誘導体、ＳＹＢＲおよびそのあらゆる誘導体、ｓｙｎａｐｔｏ−ｐＨｌｕｏｒｉｎ、テトラフェニルブタジエン、テトラナトリウムトリス、テキサスレッド、チタンイエロー、ＴＳＱ、ウンベリフェロン、ビオラントロン、黄色蛍光タンパク質（ｙｅｌｌｏｗ  ｆｌｕｒｏｅｓｃｅｎｔ  ｐｒｏｔｅｉｎ）、およびＹＯＹＯ−１が挙げられる。その他の適切な蛍光染料としては、フルオレセインおよびフルオレセイン染料（例えば、フルオレセインイソチオシアニンまたはＦＩＴＣ、ナフトフルオレセイン、４’、５’−ジクロロ−２’，７’−ジメトキシフルオレセイン、６−カルボキシフルオレセインまたはＦＡＭなど）、カルボシアニン、メロシアニン、スチリル染料、オキソノール染料、フィコエリトリン、エリスロシン、エオシン、ローダミン染料（例えば、カルボキシテトラメチル−ローダミンまたはＴＡＭＲＡ、カルボキシローダミン６Ｇ、カルボキシ−Ｘ−ローダミン（ＲＯＸ）、リサミンローダミンＢ、ローダミン６Ｇ、ローダミングリーン、ローダミンレッド、テトラメチルローダミン（ＴＭＲ）など）、クマリンおよびクマリン染料（例えば、メトキシクマリン、ジアルキルアミノクマリン、ヒドロキシクマリン、アミノメチルクマリン（ＡＭＣＡ）など）、オレゴングリーン染料（例えば、オレゴングリーン４８８、オレゴングリーン５００、オレゴングリーン５１４、など）、テキサスレッド、テキサスレッド−Ｘ、スペクトラムレッド、スペクトラムグリーン、シアニン染料（例えば、ＣＹ−３、Ｃｙ−５、ＣＹ−３．５、ＣＹ−５．５など）、ＡＬＥＸＡ  ＦＬＵＯＲ染料（例えば、ＡＬＥＸＡ  ＦＬＵＯＲ  ３５０、ＡＬＥＸＡ  ＦＬＵＯＲ  ４８８、ＡＬＥＸＡ  ＦＬＵＯＲ  ５３２、ＡＬＥＸＡ  ＦＬＵＯＲ  ５４６、ＡＬＥＸＡ  ＦＬＵＯＲ  ５６８、ＡＬＥＸＡ  ＦＬＵＯＲ  ５９４、ＡＬＥＸＡ  ＦＬＵＯＲ  ６３３、ＡＬＥＸＡ  ＦＬＵＯＲ  ６６０、ＡＬＥＸＡ  ＦＬＵＯＲ  ６８０など）、ＢＯＤＩＰＹ染料（���えば、ＢＯＤＩＰＹ  ＦＬ、ＢＯＤＩＰＹ  Ｒ６Ｇ、ＢＯＤＩＰＹ  ＴＭＲ、ＢＯＤＩＰＹ  ＴＲ、ＢＯＤＩＰＹ  ５３０／５５０、ＢＯＤＩＰＹ  ５５８／５６８、ＢＯＤＩＰＹ  ５６４／５７０、ＢＯＤＩＰＹ  ５７６／５８９、ＢＯＤＩＰＹ  ５８１／５９１、ＢＯＤＩＰＹ  ６３０／６５０、ＢＯＤＩＰＹ  ６５０／６６５など）、ＩＲＤｙｅｓ（例えば、ＩＲＤ４０、ＩＲＤ  ７００、ＩＲＤ  ８００など）などが挙げられるが、これに限定されるものではない。追加的な適切な検出可能薬剤は、ＰＣＴ／ＵＳ第１４／５６１７７号明細書に記載される。放射性同位体の非限定的例としては、α放射体、β放射体、陽電子放射体、およびγ放射体が挙げられる。いくつかの実施形態では、金属または放射性同位体は、アクチニウム、アメリシウム、ビスマス、カドミウム、セシウム、コバルト、ユウロピウム、ガドリニウム、イリジウム、鉛、ルテチウム、マンガン、パラジウム、ポロニウム、ラジウム、ルテニウム、サマリウム、ストロンチウム、テクネチウム、タリウム、およびイットリウムからなる群から選択される。いくつかの実施形態では、金属は、アクチニウム、ビスマス、鉛、ラジウム、ストロンチウム、サマリウム、またはイットリウムである。いくつかの実施形態では、放射性同位体は、アクチニウム−２２５または鉛−２１２である。
【０１３９】
本開示のその他の実施形態は、放射線増感剤または光増感剤にコンジュゲートされたペプチドを提供する。放射線増感剤の例としては、ＡＢＴ−２６３、ＡＢＴ−１９９、ＷＥＨＩ−５３９、パクリタキセル、カルボプラチン、シスプラチン、オキサリプラチン、ゲムシタビン、エタニダゾール、ミソニダゾール、チラパザミン、および核酸塩基誘導体（例えば、ハロゲン化プリンまたはピリミジン、例えば、５−フルオロデオキシウリジン）が挙げられるが、これに限定されるものではない。光増感剤の例としては、照射発熱蛍光性分子またはビーズ、ナノ粒子、ポルフィリンおよびポルフィリン誘導体（例えば、クロリン、バクテリオクロリン，イソバクテリオクロリン、フタロシアニン、およびナフタロシアニン）、金属ポルフィリン、金属フタロシアニン、アンゲリシン、カルコゲンアピリリウム（ｃｈａｌｃｏｇｅｎａｐｙｒｒｉｌｌｉｕｍ）染料、クロロフィル、クマリン、フラビンとアロキサジンおよびリボフラビンなどの関連化合物、フラーレン、フェオホルビド、ピロフェオホルビド、シアニン（例えば、メロシアニン５４０）、フェオフィチン、サフィリン、テキサフィリン、プルプリン、ポルフィセン、フェノチアジニウム、メチレンブルー誘導体、ナフタルイミド、ナイルブルー誘導体、キノン、ペリレンキノン（例えば、ヒペリシン、ヒポクレリン、およびセルコスポリン）、ソラレン、キノン、レチノイド、ローダミン、チオフェン、ベルジン（ｖｅｒｄｉｎｓ）、キサンテン染料（例えば、エオシン、エリスロシン、ローズベンガル）、ポルフィリンの二量体およびオリゴマー形態、および５−アミノレブリン酸などのプロドラッグが挙げられるが、これに限定されるものではない。有利なことに、このアプローチは、治療薬（例えば、薬物）および電磁エネルギー（例えば、放射線または光）の双方を同時に用いて、病的細胞（例えば、がん細胞）の高度に特異的な標的化を可能にする。いくつかの実施形態では、ペプチドは、例えば、直接、またはリンカーを介して、薬剤に融合、または共有結合、または非共有結合される。本明細書の実施形態で使用するのに適する例示的なリンカーは、以下でさらに詳細に考察される。
【０１４０】
リンカー
がん性のまたは病的細胞または特定の脳領域（例えば、海馬、脳室系、ＣＳＦ）に、ホーミング、分布、標的化、移動、蓄積、または指向化する本開示に従ったペプチドは、リンカーを介して、またはリンカーの非存在下で直接、小分子、第２のペプチド、タンパク質、抗体、抗体断片、アプタマー、ポリペプチド、ポリヌクレオチド、フルオロフォア、放射性同位体、放射性核種キレート剤、ポリマー、生体高分子、脂肪酸、アシル付加物、化学リンカー、または糖または本明細書に記載のその他の活性薬剤または検出可能薬剤などの別の部分（例えば、活性薬剤または検出可能薬剤）に付着され得る。血液脳関門または血液ＣＳＦを通過するペプチドは、リンカーを介して、またはリンカーの非存在下で直接、小分子、第２のペプチド、タンパク質、抗体、抗体断片、アプタマー、ポリペプチド、フルオロフォア、放射性同位体、放射性核種キレート剤、ポリマー、生体高分子、脂肪酸、アシル付加物、化学リンカー、または糖または本明細書に記載のその他の活性薬剤または検出可能薬剤などの別の分子に付着され得る。リンカーの非存在下では、例えば、活性薬剤または検出可能薬剤は、ペプチドのＮ末端またはＣ末端に融合されて、活性薬剤または検出可能薬剤融合ペプチドが生成され得る。その他の実施形態では、還元的アルキル化によるペプチド融合を通して、連結が生成され得る。
【０１４１】
ペプチドを別の分子の領域に共有結合的に付着させることで、直接付着が可能である。例えば、活性薬剤または検出可能薬剤は、ペプチドのＮ末端またはＣ末端に融合されて、活性薬剤または検出可能薬剤融合ペプチドが生成れ得る。別の例として、ペプチドは、リンカーによって、Ｎ末端、内部リジン残基、またはＣ末端において、別の分子のアミノ酸配列の末端に付着され得る。付着が内部リジン残基にある場合、もう１つの分子は、内部リジン残基のεアミンでペプチドに連結され得る。例えば、内部リジン残基は、配列番号３７のアミノ酸残基１７、配列番号３７のアミノ酸残基２５、または配列番号３７のアミノ酸残基２９または例えば配列番号１〜配列番号１９６のいずれかにおける対応するリジン残基のいずれかなどの開示されたペプチドの類似残基に対応する位置に存在し得る。別の例として、内部リジン残基は、配列番号２４６のアミノ酸残基１５、配列番号２４６のアミノ酸残基２３、または配列番号２４６のアミノ酸残基２７または例えば配列番号２１０〜配列番号４０５のいずれかにおける対応するリジン残基のいずれかなどの開示されたペプチドの類似残基に対応する位置に存在し得る。いくつかのさらなる例では、ペプチドは、リジン、セリン、スレオニン、システイン、チロシン、アスパラギン酸、非天然アミノ酸残基、またはグルタミン酸残基の側鎖などの側鎖によって、別の分子に付着され得る。リンカーは、アミド結合、エステル結合、エーテル結合、カルバメート結合、炭酸結合、炭素−窒素結合、トリアゾール、大環状分子、オキシム結合、ヒドラゾン結合、炭素−炭素一重または二重または三重結合、ジスルフィド結合、２つのシステイン間の二炭素架橋、２つのシステイン間の３つの炭素架橋、またはチオエーテル結合であり得る。なおもその他の実施形態では、ペプチドは、非天然アミノ酸を含んでなり、その中で非天然アミノ酸は、挿入、付加、または別のアミノ酸への置換であり、ペプチドはリンカーによって、非天然アミノ酸で活性薬剤に連結される。いくつかの実施形態では、開示されるペプチドそれ自体の類似領域（アミノ酸配列の末端；リジン、セリン、スレオニン、システイン、チロシン、アスパラギン酸、非天然アミノ酸残基、またはグルタミン酸残基側鎖などのアミノ酸側鎖、アミド結合、エステル結合、エーテル結合、カルバメート結合、炭素−窒素結合、トリアゾール、大環状分子、オキシム結合、ヒドラゾン結合、炭素−炭素一重、二重または三重結合、ジスルフィド結合、チオエーテル結合、または本明細書に記載されるようなその他のリンカーを介するなど）を使用して、別の分子が連結されてもよい。
【０１４２】
リンカーを介する付着は、別の分子とペプチドとの間のリンカー部分の組み込みを伴う。ペプチドおよび別の分子は、どちらもリンカーに共有結合的に付着され得る。リンカーは切断可能、切断不能、自己犠牲、親水性、または疎水性であり得る。リンカーは、１つが別の分子に結合して１つがペプチドに結合する少なくとも２つの官能基と、２つの官能基間の連結部分とを有する。いくつかの例示的なリンカーは、Ｊａｉｎ，Ｎ．，Ｐｈａｒｍ  Ｒｅｓ．３２（１１）：３５２６−４０（２０１５）、Ｄｏｒｏｎｉｎａ，Ｓ．Ｏ．，Ｂｉｏｃｏｎｊ  Ｃｈｅｍ．１９（１０）：１９６０−３（２００８）、Ｐｉｌｌｏｗ，Ｔ．Ｈ．，Ｊ  Ｍｅｄ  Ｃｈｅｍ．５７（１９）：７８９０−９（２０１４）、Ｄｏｒｙｗａｌｋｓａ，Ｍ．，Ｂｉｏｃｏｎｊ  Ｃｈｅｍ．２６（４）：６５０−９（２０１５）、Ｋｅｌｌｏｇｇ，Ｂ．Ａ．，Ｂｉｏｃｏｎｊ  Ｃｈｅｍ．２２（４）：７１７−２７（２０１１）、およびＺｈａｏ，Ｒ．Ｙ．，Ｊ  Ｍｅｄ  Ｃｈｅｍ．５４（１０）：３６０６−２３（２０１１）に記載される。
【０１４３】
付着のための官能基の非限定的例としては、例えば、アミド結合、エステル結合、エーテル結合、炭酸結合、カルバメート結合、炭素−窒素結合、トリアゾール、大環状分子、オキシム結合、ヒドラゾン結合、炭素−炭素一重または二重または三重結合、ジスルフィド結合またはチオエーテル結合を形成できる官能基が挙げられる。このような結合を形成できる官能基の非限定的例としては、アミノ基；カルボキシル基；アルデヒド基；アジ化物基；アルキンおよびアルケン基；ケトン；ヒドラジド；ヒドラジン；酸フッ化物、塩化物、臭化物、およびヨウ化物などの酸ハロゲン化物；対称性、混合、および環式酸無水物をはじめとする酸無水物；炭酸塩；シアノ、スクシンイミジル、およびＮ−ヒドロキシスクシンイミジルなどの離脱基に結合するカルボニル官能基；マレイミド；加水分解するように設計されたマレイミド基含有リンカー；マレイミドカプロイル；ＭＣＣ（［Ｎ−マレイミドメチル］シクロヘキサン−１−カルボキシレート）；Ｎ−エチルマレイミド；マレイミドアルカン；ｍｃ−ｖｃ−ＰＡＢＣ；ＤＵＢＡ（デュオカルマイシンヒドロキシベンズアミド−アザインドールリンカー）；ＳＭＣＣスクシンイミジル−４−（Ｎ−マレイミドメチル）シクロヘキサン−１−カルボキシレート；ＳＰＤＰ（Ｎ−スクシンイミジル−３−（２−ピリジルジチオ）プロピオネート）；ＳＰＤＢＮ−スクシンイミジル−４−（２−ピリジルジチオ）ブタノアート；スルホ−ＳＰＤＢ  Ｎ−スクシンイミジル−４−（２−ピリジルジチオ）−２−スルホブタノアート；ＳＰＰ  Ｎ−スクシンイミジル４−（２−ピリジルジチオ）ペンタノエート；ジチオピリジルマレイミド（ＤＴＭ）；ヒドロキシルアミン、ビニル−ハロ基；ハロアセトアミド基；ブロモアセトアミド；ヒドロキシル基；スルフヒドリル基；および例えば、アルキル、アルケニル、アルキニル、アリルやまたはハロゲン化物、メシレート、トシレート、トリフレート、エポキシド、リン酸エステル、硫酸エステル、およびベシレートなどのベンジル離脱基を有する分子が挙げられる。
【０１４４】
連結部分の非限定的例としては、アルキレン、アルケニレン、アルキニレン、ポリエーテル、ポリエステルなどのポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、ポリアミド、ポリアミノ酸、ポリペプチド、切断可能ペプチド、Ｖａｌ−Ｃｉｔ、Ｐｈｅ−Ｌｙｓ、Ｖａｌ−Ｌｙｓ、Ｖａｌ−Ａｌａ、Ｄｏｒｏｎｉｎａ  ｅｔ  ａｌ．，２００８に記載のその他のペプチドリンカー、βグルクロニダーゼによって切断可能なリンカー、カテプシンによってまたはカテプシンＢ、Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｌ、Ｓ、Ｃ、Ｋ、Ｏ、Ｆ、Ｖ、Ｘ、またはＷによって切断可能なリンカー、Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ｐ−アミノベンジルオキシカルボニル、グルクロニド−ＭＡＢＣ、アミノベンジルカルバメート、Ｄ−アミノ酸、およびポリアミンが挙げられ、これらのいずれも未置換であるか、またはハロゲン、ヒドロキシル基、スルフヒドリル基、アミノ基、ニトロ基、ニトロソ基、シアノ基、アジド基、スルホキシド基、スルホン基、スルホンアミド基、カルボキシル基、カルボキサルデヒド基、イミン基、アルキル基、ハロアルキル基、アルケニル基、ハロアルケニル基、アルキニル基、ハロアルキニル基、アルコキシ基、アリール基、アリールオキシ基、アラルキル基、アリールアルコキシ基、ヘテロシクリル基、アシル基、アシルオキシ基、カルバメート基、アミド基、ウレタン基、エポキシド、荷電基、両性イオン基、およびエステル基などの置換基の任意の数で置換される。分子を共に連結する反応のその他の非限定的な例としては、クリックケミストリー、銅非含有クリックケミストリー、ＨＩＰＳライゲーション、シュタウディンガーライゲーション、およびヒドラジン−イソ−ピクテ・スペングラーが挙げられる。
【０１４５】
リンカーの非限定的な例としては、
【化１】
2018521994.tif 000015
が挙げられ、
式中、各ｎは、独立して０〜約１，０００；１〜約１，０００；０〜約５００；１〜約５００；０〜約２５０；１〜約２５０；０〜約２００；１〜約２００；０〜約１５０；１〜約１５０；０〜約１００；１〜約１００；０〜約５０；１〜約５０；０〜約４０；１〜約４０；０〜約３０；１〜約３０；０〜約２５；１〜約２５；０〜約２０；１〜約２０；０〜約１５；１〜約１５；０〜約１０；１〜約１０；０〜約５；または１〜約５である。いくつかの実施形態では、各ｎは、独立して０、約１、約２、約３、約４、約５、約６、約７、約８、約９、約１０、約１１、約１２、約１３、約１４、約１５、約１６、約１７、約１８、約１９、約２０、約２１、約２２、約２３、約２４、約２５、約２６、約２７、約２８、約２９、約３０、約３１、約３２、約３３、約３４、約３５、約３６、約３７、約３８、約３９、約４０、約４１、約４２、約４３、約４４、約４５、約４６、約４７、約４８、約４９、または約５０である。いくつかの実施形態では、ｍは、１〜約１，０００；１〜約５００；１〜約２５０；１〜約２００；１〜約１５０；１〜約１００；１〜約５０；１〜約４０；１〜約３０；１〜約２５；１〜約２０；１〜約１５；１〜約１０；または１〜約５である。いくつかの実施形態では、ｍは、０、約１、約２、約３、約４、約５、約６、約７、約８、約９、約１０、約１１、約１２、約１３、約１４、約１５、約１６、約１７、約１８、約１９、約２０、約２１、約２２、約２３、約２４、約２５、約２６、約２７、約２８、約２９、約３０、約３１、約３２、約３３、約３４、約３５、約３６、約３７、約３８、約３９、約４０、約４１、約４２、約４３、約４４、約４５、約４６、約４７、約４８、約４９、または約５０であり、またはＪａｉｎ，Ｎ．，Ｐｈａｒｍ  Ｒｅｓ．３２（１１）：３５２６−４０（２０１５）またはＤｕｃｒｙ，Ｌ．，Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｄｒｕｇ  Ｃｏｎｊｕｇａｔｅｓ（２０１３）で開示されるような任意のリンカーである。
【０１４６】
いくつかの場合において、リンカーはコハク酸リンカーであり得て、薬剤はエステル結合、または２つのメチレン炭素を間に有するアミド結合を介して、ペプチドに付着され得る。その他の場合には、リンカーは、ヒドロキシヘキサン酸または乳酸などのヒドロキシル基およびカルボン酸の双方を有する、任意のリンカーであり得る。
【０１４７】
いくつかの実施形態では、リンカーは、未修飾形態で活性薬剤を遊離させ得る。その他の実施形態では、活性薬剤は、化学修飾によって遊離され得る。なおもその他の実施形態では、リンカーおよび／またはペプチドの一部になおも連結される活性薬剤は、異化作用によって遊離され得る。
【０１４８】
リンカーは、切断不能リンカーまたは切断可能リンカーであってもよい。いくつかの実施形態では、切断不能リンカーは、血清アルブミン上の遊離チオール上への結合部分の交換によって、結合部分を緩慢に遊離させ得る。いくつかの実施形態では、切断可能リンカーの使用は、例えば、腫瘍またはがん性細胞を標的化した後に、結合部分（例えば、治療薬）がペプチドから遊離できるようにし得る。その他の実施形態では、切断可能リンカーの使用は、ＢＢＢを通過した後に、任意選択的に特定の脳領域を標的化した後に、コンジュゲートされた治療薬がペプチドから遊離できるようにし得る。場合によっては、例えば、バリン−シトルリンリンカーなどのように、リンカーは酵素切断可能である。いくつかの実施形態では、リンカーは、自己犠牲部分を含有する。その他の実施形態では、リンカーは、マトリックスメタロプロテアーゼ（ＭＭＰ）、トロンビン、カテプシン、またはβ−グルクロニダーゼのための切断部位など、特定のプロテアーゼのための１つまたは複数の切断部位を含む。代案としては、または組み合わせて、リンカーは、ｐＨ、還元または加水分解などのその他の機序によって切断可能である。
【０１４９】
リンカーの加水分解または還元の速度は、用途に応じて微調整または修正され得る。例えば、非障害エステルを有するリンカーの加水分解速度は、エステルカルボニルの隣に嵩高い基を有するリンカーの加水分解と比較して、より迅速である。嵩高い基は、メチル基、エチル基、フェニル基、環、またはイソプロピル基、または立体バルクを提供する任意の基であり得る。場合によっては、立体バルクは、ケトロラクによってなど、薬物自体によって、そのカルボン酸を介してコンジュゲートされた際に提供され得る。リンカーの加水分解速度は、標的位置におけるコンジュゲートの滞留時間に応じて調節され得る。例えば、ペプチドが腫瘍または脳から比較的迅速に除去される場合、リンカーは急速に加水分解するように調整され得る。ペプチドが標的位置においてより長い滞留時間を有する場合、より緩慢な加水分解速度は、活性薬剤の延長された送達ができるようにする。“Ｐｒｏｇｒａｍｍｅｄ  ｈｙｄｒｏｌｙｓｉｓ  ｉｎ  ｄｅｓｉｇｎｉｎｇ  ｐａｃｌｉｔａｘｅｌ  ｐｒｏｄｒｕｇ  ｆｏｒ  ｎａｎｏｃａｒｒｉｅｒ  ａｓｓｅｍｂｌｙ”Ｓｃｉ  Ｒｅｐ  ２０１５，５，１２０２３  Ｆｕ  ｅｔ  ａｌ．，が、改変された加水分解速度の例を提供する。
【０１５０】
製造方法
様々な発現ベクター／宿主系が、本明細書に記載のペプチドの組換え発現に利用され得る。このようなシステムの非限定的例としては、本明細書に記載のペプチドまたはペプチド融合タンパク質／キメラタンパク質をコードする核酸配列を含有する、組換えバクテリオファージＤＮＡまたはプラスミドＤＮＡまたはコスミドＤＮＡ発現ベクターで形質転換された、細菌などの微生物；前述の核酸配列を含有する組換え酵母発現ベクターで形質転換された、酵母；前述の核酸配列を含有する組換えウイルス発現ベクター（例えば、バキュロウイルス）で感染された、昆虫細胞系；組換えウイルス発現ベクター（例えば、カリフラワーモザイクウイルス（ＣａＭＶ）、タバコモザイクウイルス（ＴＭＶ）で感染された、または前述の核酸配列を含有する組換えプラスミド（例えば、Ｔｉプラスミド）発現ベクターで形質転換された、植物細胞系；または二重微小染色体において安定して増幅される（例えば、ＣＨＯ／ｄｈｆｒ、ＣＨＯ／グルタミンシンセターゼ）または不安定に増幅される（例えば、マウス型細胞株）のどちらかである、遺伝子操作されて前述の核酸配列の複数コピーを含有する細胞株を含む、組換えウイルス発現ベクター（例えば、アデノウイルス、ワクシニアウイルス）で感染された、動物細胞系が挙げられる。ペプチドのジスルフィド結合の形成および折り畳みは、発現中または発現後、またはその双方で起こり得る。
【０１５１】
宿主細胞は、本明細書に記載の１つまたは複数のペプチドを発現するように適応させ得る。宿主細胞は、原核、真核、または昆虫細胞であり得る。場合によっては、宿主細胞は、挿入された配列の発現を調節でき、または所望の特定の様式で遺伝子またはタンパク質産物を修飾およびプロセシングできる。例えば、特定のプロモーターからの発現は、特定の誘導物質（例えば、メタロチオネイン（ｍｅｔａｌｌｏｔｈｉｏｎｉｎｅ）プロモーターのための亜鉛およびカドミウムイオン）の存在下で増加され得る。場合によっては、ペプチド産物の修飾（例えば、リン酸化）およびプロセシング（例えば、切断）は、ペプチドの機能にとって重要であり得る。宿主細胞は、ペプチドの翻訳後プロセシングおよび修飾のための特徴的かつ特異的な機序を有し得る。場合によっては、ペプチドを発現するために使用される宿主細胞は、最小量のタンパク質分解酵素を分泌する。
【０１５２】
細胞ベースまたはウイルスベースのサンプルの場合、生物を精製前に処理して、標的ポリペプチドを保存および／または遊離させ得る。いくつかの実施形態では、細胞は固定剤を用いて固定される。いくつかの実施形態では、細胞は溶解される。細胞材料は、有意な割合の細胞を破壊することなく細胞物質の表面および／または細胞間の隙間からタンパク質を除去するように、処理され得る。例えば、細胞間空隙および／または植物細胞壁内に位置するタンパク質を除去するために、細胞材料は液体緩衝液に浸漬され得て、または植物材料の場合は真空に曝露され得る。細胞材料が微生物である場合、タンパク質は微生物培養液から抽出され得る。代案としては、ペプチドは封入体に充填させることができる。封入体は、培地中の細胞成分からさらに分離され得る。いくつかの実施形態では、細胞は破壊されない。細胞またはウイルス粒子の付着および／または精製のために、細胞またはウイルスによって提示される細胞またはウイルスペプチドが使用され得る。組換え系に加えて、ペプチドはまた、タンパク質およびペプチド合成に用いられる様々な既知の技術を用いた抽出前に、無細胞系においても合成され得る。
【０１５３】
場合によっては、宿主細胞は、薬物の付着点を有するペプチドを産生する。結合点は、リジン残基、Ｎ末端、システイン残基、システインジスルフィド結合、または非天然アミノ酸を含み得る。ペプチドはまた、固相ペプチド合成または溶液相ペプチド合成などにより、合成的に製造され得る。ペプチド合成は、フルオレニルメチルオキシカルボニル（Ｆｍｏｃ）化学によって、またはブチルオキシカルボニル（Ｂｏｃ）化学によって実施され得る。ペプチドは、合成中または合成後、またはその双方において、折り畳まれ得る（ジスルフィド結合の形成）。ペプチド断片は、合成的または組換え的に生成され得る。次に、ペプチド断片は、酵素的または合成的に共に連結され得る。
【０１５４】
図１０は、図９で示され、本開示全体を通じて記載されるような、本明細書で提供される配列番号１〜配列番号１９６のコンストラクトなどの、本開示のペプチドを発現するコンストラクトを製造する方法の概略図を示す。
【０１５５】
その他の態様では、本開示のペプチドは、例えば、Ｆｍｏｃ固相ペプチド合成法（“Ｆｍｏｃ  ｓｏｌｉｄ  ｐｈａｓｅ  ｐｅｐｔｉｄｅ  ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，ａ  ｐｒａｃｔｉｃａｌ  ａｐｐｒｏａｃｈ，”ｅｄｉｔｅｄ  ｂｙ  Ｗ．Ｃ．Ｃｈａｎ  ａｎｄ  Ｐ．Ｄ．Ｗｈｉｔｅ，Ｏｘｆｏｒｄ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｐｒｅｓｓ，２０００）に従って、従来の固相化学合成技術によって調製され得る。
【０１５６】
ペプチド医薬組成物
本開示の医薬組成物は、本明細書に記載の任意のペプチドと、担体、安定剤、希釈剤、分散剤、懸濁剤、増粘剤、抗酸化剤、溶解剤、緩衝液、オスモライト、塩類、界面活性剤、アミノ酸、封入剤、増量剤、抗凍結剤、および／または賦形剤などのその他の化学成分との組み合わせであり得る。医薬組成物は、本明細書に記載のペプチドの生物への投与を容易にする。薬学的組成物は、医薬組成物として治療有効量で、例えば、静脈内、皮下、筋肉内、直腸内、煙霧剤、非経口、眼科用、肺、経皮、膣、眼、経鼻、口腔、舌下、吸入、皮膚、クモ膜下腔内、鼻腔内、および局所投与をはじめとする様々な形態および経路によって投与され得る。医薬組成物は、例えば、本明細書に記載のペプチドを直接臓器に、必要に応じてデポーに注射することによって、局所的または全身的な様式で投与され得る。
【０１５７】
非経口注射は、ボーラス注射または持続注入のために製剤化され得る。医薬組成物は、油性または水性ビヒクル中の滅菌懸濁液、溶液またはエマルジョンとしての非経口注射に適した形態であり得て、懸濁剤、安定化剤および／または分散剤のような製剤化剤を含有し得る。非経口投与のための医薬製剤としては、水溶性形態の本明細書に記載のペプチドの水溶液が挙げられる。本明細書に記載のペプチドの懸濁液は、油性注射懸濁液として調製され得る。適切な親油性溶媒またはビヒクルとしては、ゴマ油または合成脂肪酸エステルなどの脂肪油、オレイン酸エチル、トリグリセリド、またはリポソームなどが挙げられる。水性注射懸濁液は、カルボキシメチルセルロースナトリウム、ソルビトール、またはデキストランなどの懸濁液の粘度を増加させる物質を含有し得る。懸濁液はまた、本明細書に記載のこのようなペプチドの溶解性を高めおよび／または凝集を減少させる、適切な安定剤または薬剤も含有して、高度に濃縮された溶液の調製ができるようにし得る。代案としては、本明細書中に記載のペプチドは、例えば、滅菌発熱物質非含有水などの適切なビヒクルによる使用前の再構成のために凍結乾燥され得て、または粉末形態であり得る。いくつかの実施形態では、精製ペプチドは静脈内投与される。本明細書に記載のペプチドは、対象に投与されて、例えば、海馬などの器官に、ホーミング、標的化、移動、または指向化し、対象の血液脳関門を通過し得る。
【０１５８】
本開示のペプチドは、外科手術中に、脳または脳組織または細胞などの臓器または臓器組織または細胞に直接適用され得る。本明細書に記載の組換えペプチドは、局所的に投与され得て、溶液、懸濁液、ローション、ゲル、ペースト、薬用スティック、香膏、クリーム、および軟膏などの様々な局所投与可能な組成物に調合され得る。このような医薬組成物は、溶解剤、安定剤、張度増強剤、緩衝液、および保存料を含有し得る。
【０１５９】
本明細書で提供される治療または使用方法の実施において、本明細書に記載の（ｄｅｓｃｒｉｂｅｄ  ｈｅｒｅｉｎ  ｄｅｓｃｒｉｂｅｄ  ｈｅｒｅｉｎ）ペプチドの治療有効量は、免疫系に影響を及ぼす病状に罹患している対象に、医薬組成物中で投与され得る。いくつかの実施形態では、対象はヒトなどの哺乳類である。治療有効量は、疾患の重症度、対象の年齢および相対的な健康状態、使用される化合物の効力、およびその他の要素に応じて広範に変動し得る。
【０１６０】
医薬組成物は、活性化合物の薬学的に使用され得る調製物への加工を容易にする、賦形剤および助剤を含んでなる、１つまたは複数の生理学的に許容される担体を使用して製剤化され得る。処方は、選択された投与経路に応じて修正され得る。本明細書に記載のペプチドを含んでなる医薬組成物は、例えば、ペプチドを組換え系において発現させ、ペプチドを精製し、ペプチドを凍結乾燥し、混合し、溶解し、顆粒化し、糖衣丸を製造し、研和し、乳化し、カプセル化し、封入し、または圧縮加工することによって製造し得る。医薬組成物は、少なくとも１つの薬学的に許容可能な担体、希釈剤または賦形剤、および本明細書に記載の化合物を遊離塩基または薬理的に許容可能な塩形態として含み得る。
【０１６１】
本明細書に記載の化合物を含んでなる本明細書に記載のペプチドを調製する方法は、本明細書に記載のペプチドを１つまたは複数の不活性な薬学的に許容可能な賦形剤または担体と共に調合して、固体、半固体または液体組成物を形成するステップを含む。固体組成物としては、例えば、粉末、錠剤、分散性顆粒、カプセル、カシェ剤、および坐薬が挙げられる。これらの組成物はまた、例えば、湿潤剤または乳化剤、ｐＨ緩衝剤、およびその他の薬理的に許容可能な添加剤などの微量の無毒の補助物質を含有し得る。
【０１６２】
薬理的に許容可能な賦形剤の非限定的例は、例えば、それぞれその内容全体が参照により援用される、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ，Ｎｉｎｅｔｅｅｎｔｈ  Ｅｄ（Ｅａｓｔｏｎ，Ｐａ．：Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏｍｐａｎｙ，１９９５）；Ｈｏｏｖｅｒ，Ｊｏｈｎ  Ｅ．，Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏ．，Ｅａｓｔｏｎ，Ｐｅｎｎｓｙｌｖａｎｉａ  １９７５；Ｌｉｂｅｒｍａｎ，Ｈ．Ａ．ａｎｄ  Ｌａｃｈｍａｎ，Ｌ．，Ｅｄｓ．，Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｄｏｓａｇｅ  Ｆｏｒｍｓ，Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｃｋｅｒ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，Ｎ．Ｙ．，１９８０；およびＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｄｏｓａｇｅ  Ｆｏｒｍｓ  ａｎｄ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｓｅｖｅｎｔｈ  Ｅｄ．（Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ  Ｗｉｌｌｉａｍｓ  ＆  Ｗｉｌｋｉｎｓ  １９９９）に見いだされ得る。
【０１６３】
イメージングおよび外科的方法におけるペプチドの使用
本開示は、がん性のまたは病的細胞に、ホーミング、分布、標的化、移動、蓄積、または指向化するペプチドに関する。本開示は、体内で、特定の領域、組織、構造、または細胞に、ホーミング、標的化、移動、蓄積、または指向化するペプチドと、このようなペプチドを使用する方法とに関する。これらのペプチドは、血液脳関門または血液ＣＳＦ関門に結合して通過する能力を有し、それによってこれらは様々な用途のために有用になる。これらの能力は、これらを様々な用途のために有用にする。特に、ペプチドは、ペプチドが向けられた生体分子の部位特異的調節に応用される。このようなペプチドの最終用途としては、例えば、イメージング、研究、治療学、セラノスティクス、医薬品、化学療法、キレート療法、標的化薬物送達、および放射線療法が挙げられる。いくつかの用途として、標的化薬物送達およびイメージングも挙げられる。
【０１６４】
いくつかの実施形態では、本開示のペプチドは、金属、放射性同位元素、色素、フルオロフォア、またはイメージングに使用され得る別の適切な物質を送達する。放射性同位体の非限定的例としては、α放射体、β放射体、陽電子放射体、およびγ放射体が挙げられる。いくつかの実施形態では、金属または放射性同位体は、アクチニウム、アメリシウム、ビスマス、カドミウム、セシウム、コバルト、ユウロピウム、ガドリニウム、イリジウム、鉛、ルテチウム、マンガン、パラジウム、ポロニウム、ラジウム、ルテニウム、サマリウム、ストロンチウム、テクネチウム、タリウム、およびイットリウムからなる群から選択される。いくつかの実施形態では、金属は、アクチニウム、ビスマス、鉛、ラジウム、ストロンチウム、サマリウム、またはイットリウムである。いくつかの実施形態では、放射性同位体は、アクチニウム−２２５または鉛−２１２である。
【０１６５】
いくつかの実施形態では、フルオロフォアは、６５０ｎｍ〜４０００ｎｍの波長の電磁放射を発する蛍光剤であり、このような放射は薬剤を検出するために使用されている。本開示のコンジュゲート分子として使用され得る蛍光染料の非限定的例としては、ＤｙＬｉｇｈｔ−６８０、ＤｙＬｉｇｈｔ−７５０、ＶｉｖｏＴａｇ−７５０、ＤｙＬｉｇｈｔ−８００、ＩＲＤｙｅ−８００、ＶｉｖｏＴａｇ−６８０、Ｃｙ５．５、ＺＷ８００、ＺＱ８００、またはインドシアニングリーン（ＩＣＧ）が挙げられる。いくつかの実施形態では、近赤外線染料は、しばしばシアニン染料（例えば、Ｃｙ７、Ｃｙ５．５、およびＣｙ５）を含む。本開示のコンジュゲート分子として使用される蛍光染料の追加的な非限定的例としては、アクリジン（ａｃｒａｄｉｎｅ）オレンジまたはイエロー、Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ（例えば、Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ７９０、７５０、７００、６８０、６６０、および６４７）およびそのあらゆる誘導体、７−アクチノマイシンＤ、８−アニリノナフタレン−１−スルホン酸、ＡＴＴＯ色素およびそのあらゆる誘導体、オーラミン−ローダミン染色およびそのあらゆる誘導体、ベンゾアントロン（ｂｅｎｓａｎｔｒｈｏｎｅ）、ビマン、９−１０−ビス（フェニルエチニル）アントラセン、５，１２−ビス（フェニルエチニル）ナフタセン（ｎａｔｈｔｈａｃｅｎｅ）、ビスベンズイミド、ブレインボウ、カルセイン、カルボキシフルオレセイン（ｃａｒｂｏｄｙｆｌｕｏｒｅｓｃｅｉｎ）およびそのあらゆる誘導体、１−クロロ−９，１０−ビス（フェニルエチニル）アントラセンおよびそのあらゆる誘導体、ＤＡＰＩ、ＤｉＯＣ６、ＤｙＬｉｇｈｔ  Ｆｌｕｏｒｓおよびそのあらゆる誘導体、エピコッコノン、臭化エチジウム、ＦｌＡｓＨ−ＥＤＴ２、Ｆｌｕｏ色素およびそのあらゆる誘導体、ＦｌｕｏＰｒｏｂｅおよびそのあらゆる誘導体、フルオレセインおよびそのあらゆる誘導体、Ｆｕｒａおよびそのあらゆる誘導体、ＧｅｌＧｒｅｅｎおよびそのあらゆる誘導体、ＧｅｌＲｅｄおよびそのあらゆる誘導体、蛍光タンパク質およびそのあらゆる誘導体、例えばｍＣｈｅｒｒｙなどのｍイソ型タンパク質およびそのあらゆる誘導体、ヘプタメチン（ｈｅｔａｍｅｔｈｉｎｅ）色素およびそのあらゆる誘導体、ヘキスト（ｈｏｅｓｃｈｓｔ）染色、イミノクマリン、インディアンイエロー、ｉｎｄｏ−１およびそのあらゆる誘導体、ラウルダン、ルシファーイエローおよびそのあらゆる誘導体、ルシフェリンおよびそのあらゆる誘導体、ルシフェラーゼおよびそのあらゆる誘導体、メロシアニン（ｍｅｒｃｏｃｙａｎｉｎｅ）およびそのあらゆる誘導体、ナイル染料およびそのあらゆる誘導体、ペリレン、フロキシン、フィコ色素およびそのあらゆる誘導体、ヨウ化プロピジウム（ｐｒｏｐｉｕｍ  ｉｏｄｉｄｅ）、ピラニン、ローダミンおよびそのあらゆる誘導体、リボグリーン、ＲｏＧＦＰ、ルブレン、スチルベンおよびそのあらゆる誘導体、スルホローダミンおよびそのあらゆる誘導体、ＳＹＢＲおよびそのあらゆる誘導体、ｓｙｎａｐｔｏ−ｐＨｌｕｏｒｉｎ、テトラフェニルブタジエン、テトラナトリウムトリス、テキサスレッド、チタンイエロー、ＴＳＱ、ウンベリフェロン、ビオラントロ���、黄色蛍光タンパク質（ｙｅｌｌｏｗ  ｆｌｕｒｏｅｓｃｅｎｔ  ｐｒｏｔｅｉｎ）、およびＹＯＹＯ−１が挙げられる。その他の適切な蛍光染料としては、フルオレセインおよびフルオレセイン染料（例えば、フルオレセインイソチオシアニンまたはＦＩＴＣ、ナフトフルオレセイン、４’、５’−ジクロロ−２’，７’−ジメトキシフルオレセイン、６−カルボキシフルオレセインまたはＦＡＭなど）、カルボシアニン、メロシアニン、スチリル染料、オキソノール染料、フィコエリトリン、エリスロシン、エオシン、ローダミン染料（例えば、カルボキシテトラメチル−ローダミンまたはＴＡＭＲＡ、カルボキシローダミン６Ｇ、カルボキシ−Ｘ−ローダミン（ＲＯＸ）、リサミンローダミンＢ、ローダミン６Ｇ、ローダミングリーン、ローダミンレッド、テトラメチルローダミン（ＴＭＲ）など）、クマリンおよびクマリン染料（例えば、メトキシクマリン、ジアルキルアミノクマリン、ヒドロキシクマリン、アミノメチルクマリン（ＡＭＣＡ）など）、オレゴングリーン染料（例えば、オレゴングリーン４８８、オレゴングリーン５００、オレゴングリーン５１４、など）、テキサスレッド、テキサスレッド−Ｘ、スペクトラムレッド、スペクトラムグリーン、シアニン染料（例えば、ＣＹ−３、Ｃｙ−５、ＣＹ−３．５、ＣＹ−５．５など）、ＡＬＥＸＡ  ＦＬＵＯＲ染料（例えば、ＡＬＥＸＡ  ＦＬＵＯＲ  ３５０、ＡＬＥＸＡ  ＦＬＵＯＲ  ４８８、ＡＬＥＸＡ  ＦＬＵＯＲ  ５３２、ＡＬＥＸＡ  ＦＬＵＯＲ  ５４６、ＡＬＥＸＡ  ＦＬＵＯＲ  ５６８、ＡＬＥＸＡ  ＦＬＵＯＲ  ５９４、ＡＬＥＸＡ  ＦＬＵＯＲ  ６３３、ＡＬＥＸＡ  ＦＬＵＯＲ  ６６０、ＡＬＥＸＡ  ＦＬＵＯＲ  ６８０など）、ＢＯＤＩＰＹ染料（例えば、ＢＯＤＩＰＹ  ＦＬ、ＢＯＤＩＰＹ  Ｒ６Ｇ、ＢＯＤＩＰＹ  ＴＭＲ、ＢＯＤＩＰＹ  ＴＲ、ＢＯＤＩＰＹ  ５３０／５５０、ＢＯＤＩＰＹ  ５５８／５６８、ＢＯＤＩＰＹ  ５６４／５７０、ＢＯＤＩＰＹ  ５７６／５８９、ＢＯＤＩＰＹ  ５８１／５９１、ＢＯＤＩＰＹ  ６３０／６５０、ＢＯＤＩＰＹ  ６５０／６６５など）、ＩＲＤｙｅｓ（例えば、ＩＲＤ４０、ＩＲＤ  ７００、ＩＲＤ  ８００など）などが挙げられるが、これに限定されるものではない。追加的な適切な検出可能薬剤は、ＰＣＴ／ＵＳ第１４／５６１７７号明細書に記載され、またはイメージングに使用され得る別の適切な物質である。
【０１６６】
本発明は、検出可能薬剤にコンジュゲートされた本開示のペプチドを使用した、がん、がん組織、腫瘍組織、がん性細胞、または患部組織の術中イメージングおよび切除のための方法を提供する。いくつかの態様では、前述のがん、がん組織、腫瘍組織、または患部組織または細胞は、本開示のペプチドを使用して、がん、がん組織、腫瘍組織、がん性細胞、または患部組織の術中視覚化を可能にする蛍光イメージングによって、検出可能である。いくつかの態様では、本開示のペプチドは、１つまたは複数の検出可能薬剤にコンジュゲートされる。さらなる実施形態では、検出可能薬剤は、ペプチドと結合した蛍光性部分を含んでなる。別の実施形態では、検出可能薬剤は放射性核種を含んでなる。いくつかの態様では、イメージングは術前イメージングである。他の態様では、イメージングは開腹手術中に達成される。さらなる態様では、イメージングは、内視鏡検査またはその他の非侵襲的外科的手法を用いながら達成される。なおもさらなる態様では、イメージングは、前述のがん、がん組織、腫瘍組織、または患部組織または細胞の外科的除去後に実施される。
【０１６７】
いくつかの態様では、本開示は、前述のがん、がん組織、腫瘍組織または患部組織または細胞を検出する方法を提供し、方法は、目的の組織を、検出可能薬剤にコンジュゲートされた本開示のペプチドに接触させるステップと、ペプチドの結合レベルを測定するステップとを含んでなり、上昇した結合レベルは、正常組織と比較して増加した検出可能薬剤の検出によって示され、それは組織が、前述のがん、がん組織、腫瘍組織または患部組織または細胞であることの徴候である。
【０１６８】
がんの治療
一実施形態では、方法は、本開示のペプチドの有効量をそれを必要とする対象に投与するステップを含む。
【０１６９】
「有効量」という用語は、本明細書の用法では、治療される疾患または病状の１つまたは複数の症状をある程度緩和する、投与された薬剤または化合物の十分な量を指す。その結果は、疾患の徴候、症状、または原因の減少および／または緩和、または生体系の任意のその他の所望の改変であり得る。このような薬剤または化合物を含有する組成物は、予防、増強および／または治療処置のために投与され得る。任意の個々の症例における適切な「有効」量は、用量漸増試験などの技術を用いて判定されてもよい。
【０１７０】
本開示の方法、組成物、およびキットは、病状の症状を予防し、治療し、阻止し、逆転させ、または改善する方法を含んでなってもよい。治療は、対象（例えば、個人、飼育動物、野生動物、または疾患または病状に罹患した実験動物）を本開示のペプチドで治療することを含んでなってもよい。疾患は、がんまたは腫瘍であってもよい。疾患の治療において、ペプチドは腫瘍またはがん性細胞と接触してもよい。対象は、ヒトであってもよい。対象は、ヒト；チンパンジーなどの非ヒト霊長類、およびその他の類人猿およびサル種；畜牛、ウマ、ヒツジ、ヤギ、ブタなどの家畜；ウサギ、イヌ、およびネコなどの飼育動物；ラット、マウスおよびモルモットなどの齧歯類をはじめとする実験動物などであり得る。対象は、あらゆる年齢であり得る。対象は、例えば、高齢者、成人、青年、前青年、小児、幼児、子宮内胎児であり得る。
【０１７１】
治療は、疾患の臨床的発症前に、対象に提供されてもよい。治療は、疾患の臨床的発症後に、対象に提供されてもよい。治療は、疾患の臨床的発症後、１日、１週間、６ヶ月間、１２ヶ月間、または２年間以上後に、対象に提供されてもよい。治療は、疾患の臨床的発症後、１日、１週間、１ヶ月、６ヶ月、１２ヶ月、２年間以上にわたり、対象に提供されてもよい。治療は、疾患の臨床的発症後、１日、１週間、１ヶ月間、６ヶ月間、１２ヶ月間、または２年間未満の後に、対象に提供されてもよい。治療はまた、臨床試験においてヒトを治療することも含んでもよい。治療は、本開示全体を通じて記載される医薬組成物の１つまたは複数などの医薬組成物を、対象に投与するステップを含んでなり得る。治療は、静脈内、皮下、筋肉内、吸入、皮膚、局所、経口、舌下、クモ膜下腔内、経皮的、鼻腔内、腹腔経路を介して、または例えば、脳内の経路を介して脳内へ直接、のいずれかで、本開示のペプチドを対象に送達するステップを含んでなり得る。治療は、静脈内、皮下、筋肉内、吸入、皮膚、局所、経口、クモ膜下腔内、経皮、鼻腔内（ｉｎｔｒａｎｓａｌｌｙ）、非経口、経口、腹膜経路を介して、経鼻、舌下、または脳内へ直接的にのいずれかで、ペプチド−活性薬剤複合体を対象に投与することを含み得る。
【０１７２】
いくつかの実施形態では、本開示は、本開示のペプチドの有効量をそれを必要とする対象に投与するステップを含んでなる、がんまたは腫瘍を治療する方法を提供する。本開示のペプチドを用いて治療され得るがんまたは病状の一例は、固形腫瘍である。本開示のペプチドで治療され得るがんまたは病状のさらなる例としては、トリプルネガティブ乳がん、乳がん、乳がん転移、本明細書に記載のあらゆるがんの転移、結腸がん、結腸がん転移、肉腫、急性リンパ芽球性白血病、急性骨髄性白血病、副腎皮質がん、カポジ肉腫などのＡＩＤＳ関連がん、ＡＩＤＳ関連リンパ腫、原発性ＣＮＳリンパ腫、肛門がん、虫垂がん、小児星状細胞腫、星状細胞腫、小児非定型奇形腫／ｒｈａｂｄｉｏｄ腫瘍、ＣＮＳ非定型奇形腫／ラブドイド（ｒｈａｂｄｉｏｄ）腫瘍、非定型奇形腫／ラブドイド（ｒｈａｂｄｉｏｄ）腫瘍、基底細胞がん、皮膚がん、胆管がん、膀胱がん、骨がん、ユーイング肉腫家族腫瘍、骨肉腫、軟骨腫、軟骨肉腫、原発性および転移性骨がん、悪性線維性組織球腫、小児脳幹神経膠腫、脳幹神経膠腫、脳腫瘍、脳および脊髄腫瘍、中枢神経系胚芽腫、小児中枢神経系胚芽腫、中枢神経系胚細胞腫瘍、小児中枢神経系胚細胞腫瘍、頭蓋咽頭腫、小児頭蓋咽頭腫、上衣腫、小児上衣腫、乳がん、気管支腫瘍、小児気管支腫瘍、バーキットリンパ腫、カルチノイド腫瘍、胃腸がん、原発不明がん、心臓腫瘍、小児心臓腫瘍、原発性リンパ腫、子宮頸がん、胆管がん、脊索腫、小児脊索腫、慢性リンパ球性白血病、慢性骨髄性白血病、慢性骨髄増殖性新生物、結腸がん、結腸直腸がん、皮膚Ｔ細胞リンパ腫、腺管上皮内がん、子宮内膜がん、食道がん、鼻腔神経芽細胞腫、小児鼻腔神経芽細胞腫、ユーイング肉腫、頭蓋外胚細胞腫瘍、小児頭蓋外胚細胞腫瘍、性腺外胚細胞腫瘍、眼がん、眼球内黒色腫、網膜芽細胞腫、卵管がん、骨の線維性組織球腫、胆嚢がん、胃がん、消化管カルチノイド腫瘍、消化管間質腫瘍、卵巣がん、精巣がん、妊娠性絨毛性疾患、神経膠腫、有毛細胞白血病、頭頸部がん、肝細胞がん、組織球増殖症、ランゲルハンス細胞組織球増殖症、ホジキンリンパ腫、下咽頭がん、眼球内黒色腫、黒色腫、黒色腫転移、膵島細胞腫瘍、膵臓神経内分泌腫瘍、腎臓がん、腎細胞腫瘍、ウィルムス腫瘍、小児腎臓腫瘍、口唇および口腔がん、肝臓がん、肺がん、非ホジキンリンパ腫、マクログロブリン血症（ｍａｃｒｏｇｌｏｄｕｌｉｎｅｍｉａ）、ワルデンシュトレームマクログロブリン血症、男性乳がん、メルケル細胞がん、原発不明転移性扁平上皮頸部がん、ＮＵＴ遺伝子関与正中管がん、口腔がん、多発性内分泌腺腫症候群、小児多発性内分泌腺腫症候群、多発性骨髄腫／形質細胞腫瘍、菌状息肉腫、骨髄異形成症候群、骨髄異形成／骨髄増殖性新生物、多発性骨髄腫、骨髄増殖性（ｍｙｌｏｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｖｅ）新生物、慢性骨髄増殖性新生物、鼻腔および副鼻腔がん、鼻咽頭がん、神経芽腫（ｎｅｕｏｒｂｌａｓｔｏｍａ）、非小細胞肺がん、中咽頭がん、低い悪性潜在的な腫瘍、膵臓がん、膵臓神経内分泌腫瘍、乳頭腫症、小児乳頭腫症、傍神経節腫、副鼻腔および鼻腔がん、副甲状腺がん、陰茎のがん、褐色細胞腫、咽頭がん、脳下垂体腫瘍、胸膜肺芽腫、小児胸膜肺芽腫、原発性腹膜がん、前立腺がん、直腸がん、妊娠関連がん、横紋筋肉腫、小児横紋筋肉腫、唾液腺がん、セザリー症候群、小細胞肺がん、小腸がん（ｃａｎｅｒ）、軟部組織肉腫、扁平上皮がん、精巣がん、咽喉がん、胸腺腫、胸腺がん、甲状腺がん、腎臓および骨盤および尿管の移行上皮がん、子宮がん、尿道がん、子宮内膜がん、子宮肉腫、膣がん、血管腫瘍、および外陰がんが挙げられる。
【０１７３】
いくつかの実施形態では、ペプチドは、カリウムチャネルに結合する。いくつかの実施形態では、ペプチドは、ナトリウムチャネルに結合する。いくつかの実施形態では、ペプチドは、カリウムチャネルおよび／またはナトリウムチャネルをブロックし、いくつかの実施形態では、ペプチドは、カリウムチャネルおよび／またはナトリウムチャネルを活性化する。いくつかの実施形態では、ペプチドは、イオンチャネルまたは塩化物チャネルまたはカルシウムチャネルと相互作用する。いくつかの実施形態では、ペプチドは、ニコチン性アセチルコリン受容体、一過性受容体電位チャネル、ＮＭＤＡ受容体、セロトニン受容体、ＫＩＲチャネル、ＧＡＢＡチャネル、グリシン受容体、グルタミン酸受容体、酸感受性イオンチャネル、Ｋ２Ｐチャネル、Ｎａｖ１．７、またはプリン作動性受容体と相互作用する。いくつかの実施形態では、ペプチドは、マトリックスメタロプロテイナーゼと相互作用して、がん細胞移動または転移を阻害し、または抗腫瘍活性を有する。いくつかの実施形態では、ペプチドは、カルシウム活性化カリウムチャネルと相互作用する。いくつかの実施形態では、ペプチドは、抗菌、抗真菌、または抗ウイルス活性を有する。いくつかの実施形態では、ペプチドは、プロテアーゼを阻害する。いくつかの実施形態では、ペプチドは、疼痛に影響を及ぼすチャネルと相互作用する。いくつかの実施形態では、ペプチドは、影響を受ける臓器の組織またはその構造に対して、その他の治療効果を有する。
【０１７４】
いくつかの実施形態では、本開示ペプチドは、プロテアーゼ阻害活性を示す。特定の実施形態では、ペプチドを使用して、血液凝固関連するプロテアーゼ（例えば、トロンビン、第１０ａ因子）、代謝関連プロテアーゼ（例えば、ＤＰＰ−ＩＶ）、がん関連プロテアーゼ（例えば、マトリックスメタロプロテイナーゼ、カテプシン）、ウイルス感染症関連プロテアーゼ（例えば、ＨＩＶプロテアーゼ）、および炎症関連プロテアーゼ（例えば、トリプターゼ、カリクレイン）などの目的のプロテアーゼが阻害される。
【０１７５】
いくつかの実施形態では、本開示のペプチドは、免疫選択的抗炎症性誘導体（ＩｍＳＡＩＤ）特性を組み込むことなどによって、抗炎症性になるように修飾され得る。特定の実施形態では、ＩｍＳＡＩＤは、本明細書に記載されるようながん性細胞を標的化できるペプチドに組み込まれ、または付加される。ＦＥＧは、抗炎症特性を付与する重要な配列の一例である。代案としてはまたは組み合わせて、本開示のペプチドが免疫調節分子にコンジュゲートされて、炎症を逆転させ、低減し、または制限し得る。
【０１７６】
いくつかの実施形態では、本開示のペプチドを使用して、がんが治療される。例えば、特定の実施形態では、本明細書で提供されるペプチドを使用して、ＲＡＳ、ＭＹＣ、ＰＨＦ５Ａ、ＢｕｂＲ１、ＰＫＭＹＴ１、またはＢｕＧＺなどの重要ながん関連経路が直接阻害される。
【０１７７】
いくつかの態様では、本開示のペプチドは、１つまたは複数の治療薬にコンジュゲートされる。特定の態様では、治療薬は、以下から選択されるが、これに限定されるものではない、化学療法薬、抗がん剤、または抗がん剤である：放射性同位体、毒素、酵素、感作薬物、干渉ＲＮＡをはじめとする核酸、抗体、血管新生阻害剤、シスプラチン、白金化合物、代謝拮抗薬、有糸分裂インヒビター、成長因子インヒビター、タキサン、パクリタキセル、カバジタキセ、テモゾロマイド、トポテカン、フルオロウラシル、ビンクリスチン、ビンブラスチン、４−デアセチルビンブラスチン、プロカルバジン、ダカルバジン（ｄｅｃａｒｂａｚｉｎｅ）、アルトレタミン、メトトレキサート、メルカプトプリン、チオグアニン、リン酸フルダラビン、クラドリビン、ペントスタチン、シタラビン、アザシチジン、エトポシド、テニポシド、イリノテカン、ドセタキセル、ドキソルビシン、ダウノルビシン、ダクチノマイシン、イダルビシン、プリカマイシン、マイトマイシン、ブレオマイシン、タモキシフェン、フルタミド、ロイプロリド、ゴセレリン、アミノグルテチミド（ａｍｉｎｏｇｌｕｔｈｉｍｉｄｅ）、アナストロゾール、アムサクリン、アスパラギナーゼ、ミトキサントロン、ミトタンおよびアミホスチン、ビンカアルカロイド、環式オクタペプチド類似体ｏｆキノコアマトキシン、エポチロン、およびアントラサイクリン（ａｎｔｈｒａｃｙｌｉｎｅｓ）、ＣＣ−１０６５、ＳＮ−３８、およびＢＡＣＥインヒビター、およびそれらの同等物、ならびにフォトアブレーション剤。例えば、特定の実施形態では、本開示のペプチドは、血液脳関門を通過する限定的能力を有するＣＤＫ４／６阻害剤である、パルボシクリブにコンジュゲートされる。別の例として、特定の実施形態では、本開示のペプチドは、モノメチルオーリスタチンＥ（ＭＭＡＥ）、ＭＭＡＦ、オーリスタチン、ドロスタチン、オーリスタチンＦ、モノメチルオーリスタチンＤ、メイタンシノイド（例えば、ＤＭ−１、ＤＭ４、メイタンシン）、ピロロベンゾジアゼピン（ｐｙｒｒｏｌｏｂｅｎｚｏｄｉａｚａｐｉｎｅ）二量体、カリケアマイシン、Ｎ−アセチル−γ−カリケアマイシン、デュオカルマイシン、アントラサイクリン、微小管阻害剤、またはＤＮＡ損傷剤にコンジュゲートされる。
【０１７８】
任意選択的に、本開示の特定の実施形態は、放射線増感剤または光増感剤にコンジュゲートされたペプチドを提供する。放射線増感剤の例としては、ＡＢＴ−２６３、ＡＢＴ−１９９、ＷＥＨＩ−５３９、パクリタキセル、カルボプラチン、シスプラチン、オキサリプラチン、ゲムシタビン、エタニダゾール、ミソニダゾール、チラパザミン、および核酸塩基誘導体（例えば、ハロゲン化プリンまたはピリミジン、例えば、５−フルオロデオキシウリジン）が挙げられるが、これに限定されるものではない。光増感剤の例としては、照射発熱蛍光性分子またはビーズ、ポルフィリンおよびポルフィリン誘導体（例えば、クロリン、バクテリオクロリン，イソバクテリオクロリン、フタロシアニン、およびナフタロシアニン）、金属ポルフィリン、金属フタロシアニン、アンゲリシン、カルコゲンアピリリウム（ｃｈａｌｃｏｇｅｎａｐｙｒｒｉｌｌｉｕｍ）染料、クロロフィル、クマリン、フラビンとアロキサジンおよびリボフラビンなどの関連化合物、フラーレン、フェオホルビド、ピロフェオホルビド、シアニン（例えば、メロシアニン５４０）、フェオフィチン、サフィリン、テキサフィリン、プルプリン、ポルフィセン、フェノチアジニウム、メチレンブルー誘導体、ナフタルイミド、ナイルブルー誘導体、キノン、ペリレンキノン（例えば、ヒペリシン、ヒポクレリン、およびセルコスポリン）、ソラレン、キノン、レチノイド、ローダミン、チオフェン、ベルジン（ｖｅｒｄｉｎｓ）、キサンテン染料（例えば、エオシン、エリスロシン、ローズベンガル）、ポルフィリンの二量体およびオリゴマー形態、および５−アミノレブリン酸などのプロドラッグが挙げられるが、これに限定されるものではない。有利なことに、このアプローチは、治療薬（例えば、薬物）および電磁エネルギー（例えば、放射線または光）の双方を同時に用いて、がん細胞の高度に特異的な標的化を可能にする。
【０１７９】
特定の実施形態では、本開示のペプチドは変異して、特定の組織にホーミング、分布、標的化、移動、蓄積、または指向化するが、その他の組織は対象とせず、その機能の強さまたは特異性を変化させ、またはイオンチャンネルを苦しめたり（ａｇｏｎｉｚｉｎｇ）、プロテアーゼを阻害するなど、機能を獲得または喪失する。
【０１８０】
本開示はまた、２つ以上のペプチドが共にコンジュゲートまたは融合される、「タンデム」ペプチドの使用も包含する。特定の実施形態では、タンデムペプチドは、共にコンジュゲートまたは融合された２つ以上のノットペプチドを含んでなり、その中では、少なくとも１つのノットペプチドが特定の領域を標的化できる一方で、少なくとも１つの他のノットペプチドは、上記および本明細書で論じたように、ＢＩＭ類似体などの特定の治療活性を提供する。
【０１８１】
いくつかの実施形態では、本開示は、本開示のペプチドの有効量をそれを必要とする対象に投与するステップを含んでなる、がんを治療する方法を提供する。
【０１８２】
いくつかの実施形態では、本開示は、がんを治療する方法を提供し、方法は、本開示のペプチドの有効量と、薬学的に許容できる担体とを含んでなる医薬組成物をそれを必要とする患者に投与するステップを含んでなる。
【０１８３】
いくつかの実施形態では、本開示は、本開示のペプチドの有効量を対象に投与するステップを含んでなる、細胞の浸潤活性を阻害する方法を提供する。
【０１８４】
配列番号１〜配列番号１９２または配列番号２１０〜配列番号４０１のいずれかの配列を含んでなるペプチド、および本明細書に記載されるような任意のペプチド誘導体またはペプチド−活性薬剤を使用して、上部消化管疾患およびがん（例えば、喉頭、口腔、食道がん、唾液腺、扁桃腺、咽頭、腺肉腫、口腔悪性黒色腫、頭頸部がん）が標的化され得る。配列番号１〜配列番号１９２または配列番号２１０〜配列番号４０１のいずれかの配列を含んでなるペプチド、および本明細書に記載されるような任意のペプチド誘導体またはペプチド−活性薬剤を使用して、胆嚢疾患およびがんがさらに標的化され得る。
【０１８５】
本明細書に記載の、毒液または毒素由来のペプチド、ペプチド、修飾ペプチド、標識ペプチド、ペプチド−活性薬剤コンジュゲート、および医薬組成物は、予防的および／または治療的処置のために投与され得る。治療用途では、組成物は、疾患または病状の症状を治癒させまたは少なくともある程度阻止するのに、または病状を治癒、回復、改善、または寛解させるのに十分な量で、疾患または病状に既に罹患している対象に投与され得る。本明細書中に記載されるこのようなペプチドはまた、病状を予防（全体的または部分的）して、それが発症、罹患、または悪化する可能性を軽減するためにも投与され得る。この用途のために有効な量は、疾患または病状の重症度および経過、以前の治療、対象の健康状態、体重、および薬物に対する応答、および主治医の計算に基づいて変動し得る。
【０１８６】
いくつかの実施形態では、本開示は、配列番号１〜配列番号１９６または配列番号２１０〜配列番号４０５のいずれかの配列を含んでなるペプチド、またはその機能的断片を対象に投与するステップを含んでなる、対象の腫瘍またはがん性細胞を治療する方法を提供する。
【０１８７】
本明細書に記載の複数のペプチドは、任意の順序で、または同時に投与され得る。場合によっては、毒素または毒液から誘導されたペプチドの複数の機能的断片は、任意の順序で、または同時に投与され得る。同時であれば、本明細書に記載の複数のペプチドは、静脈内注射のような単一の一体化形態で、または後続する静脈内投与などの複数の形態で提供され得る。
【０１８８】
ペプチドは、キットとしてパッケージされ得る。いくつかの実施形態では、キットは、ペプチドの使用または投与に関する書面による指示を含む。
【０１８９】
脳腫瘍およびその他の脳疾患および障害の治療
一実施形態では、方法は、本開示のペプチドの有効量をそれを必要とする対象に投与するステップを含む。
【０１９０】
「有効量」という用語は、本明細書の用法では、治療される疾患または病状の１つまたは複数の症状をある程度緩和する、投与される薬剤または化合物の十分な量を指す。その結果は、疾患の徴候、症状、または原因の減少および／または緩和、または生体系の任意のその他の所望の改変であり得る。このような薬剤または化合物を含有する組成物は、予防、増強および／または治療処置のために投与され得る。任意の個々の症例における適切な「有効」量は、用量漸増試験などの技術を用いて判定されてもよい。
【０１９１】
本開示の方法、組成物、およびキットは、病状の症状を予防し、治療し、阻止し、逆転させ、または改善する方法を含んでなってもよい。治療は、対象（例えば、個人、飼育動物、野生動物、または疾患または病状に罹患した実験動物）を本開示のペプチドで治療することを含んでなってもよい。疾患は、脳または脊髄疾患であってもよい。疾患の治療において、ペプチドは、対象の血液脳関門または血液脳脊髄液関門を通過してもよい。対象は、ヒトであってもよい。対象は、ヒト；チンパンジーなどの非ヒト霊長類、およびその他の類人猿およびサル種；畜牛、ウマ、ヒツジ、ヤギ、ブタなどの家畜；ウサギ、イヌ、およびネコなどの飼育動物；ラット、マウスおよびモルモットなどの齧歯類をはじめとする実験動物などであり得る。対象は、あらゆる年齢であり得る。対象は、例えば、高齢者、成人、青年、前青年、小児、幼児、子宮内胎児であり得る。
【０１９２】
治療は、疾患の臨床的発症前に、対象に提供されてもよい。治療は、疾患の臨床的発症後に、対象に提供されてもよい。治療は、疾患の臨床的発症後、１日、１週間、６ヶ月間、１２ヶ月間、または２年間以上後に、対象に提供されてもよい。治療は、疾患の臨床的発症後、１日、１週間、１ヶ月、６ヶ月、１２ヶ月、２年間以上にわたり、対象に提供されてもよい。治療は、疾患の臨床的発症後、１日、１週間、１ヶ月間、６ヶ月間、１２ヶ月間、または２年間未満の後に、対象に提供されてもよい。治療はまた、臨床試験において、ヒトを治療することも含んでもよい。治療は、本開示全体を通じて記載される医薬組成物の１つまたは複数などの医薬組成物を、対象に投与するステップを含んでなり得る。治療は、静脈内、皮下、筋肉内、吸入、皮膚、局所、経口、舌下、クモ膜下腔内、経皮的、鼻腔内、腹腔経路を介して、または例えば、脳内の経路を介して脳内へ直接的にのいずれかで、本開示のペプチドを対象に送達するステップを含んでなり得る。治療は、静脈内、皮下、筋肉内、吸入、皮膚、局所、経口、クモ膜下腔内、経皮、鼻腔内（ｉｎｔｒａｎｓａｌｌｙ）、非経口、経口、腹膜経路を介して、経鼻、舌下、または脳内へ直接的にのいずれかで、ペプチド−活性薬剤複合体を対象に投与することを含み得る。
【０１９３】
複数の脳領域、組織、構造または細胞の活性が、本開示のペプチドによって調節され得る。脳の領域、組織、構造のいくつかとしては、以下が挙げられる：ａ）大脳皮質、基底核（線条体、）および嗅球を含む大脳；ｂ）歯状核、介在核、室頂核、および前庭核を含む小脳；ｃ）視床、視床下部、および下垂体腺の後部を含む間脳；およびｄ）脳橋、黒質、延髄を含む脳幹；ｅ）海馬および歯状回を含む側頭葉（顆粒細胞下帯を含む）；ｆ）側脳室（左右の脳室）、第３脳室、第４脳室、脳室内孔、中脳水道、中央口、左右の外側口、脈絡叢、および脳室下領域を含む脳室系；ｇ）クモ膜下腔、槽、溝を含む、ＣＳＦおよび関連組織；ｈ）硬膜、クモ膜、および軟膜を含む髄膜；ｉ）吻側移動流；ｊ）神経幹細胞、神経前駆細胞、および新規神経細胞；ｋ）上記（ａ）〜（ｊ）の任意の細胞または細胞型。いくつかの実施形態では、本開示のペプチドは、ＢＢＢまたは血液ＣＳ関門を通過して、１つまたは複数の特定の脳領域、組織、構造または細胞に蓄積し得る。例えば、特定の実施形態では、本明細書に記載のペプチドは、海馬、ＣＳＦ、脳室系、髄膜、または吻側移動流、またはそれらの組み合わせに、ホーミング、標的化、指向化、移動、または蓄積する。
【０１９４】
いくつかの実施形態では、本開示は、本開示のペプチドの有効量をそれを必要とする対象に投与するステップを含んでなる、脳の疾患または病状を治療する方法を提供する。脳疾患または病状は、任意の神経変性疾患またはリソソーム蓄積症であり得る。神経変性疾患は、制限なしに、アルツハイマー病、パーキンソン病、ハンチントン病、筋萎縮性側索硬化、前頭側頭型認知症、進行性核上性麻痺、および大脳皮質基底核変性症をはじめとする、中枢神経系の構造または機能の喪失に関するあらゆる疾患または状態または病状をはじめとする、中枢神経系の構造または機能の喪失に関するあらゆる疾患または状態または病状であり得る。リソソーム蓄積症は、限定されるものではないが、クラッベ病、ゴーシェ病、テイ・サックス病、ニーマン・ピック病、ポンペ病、ハーラー症候群、およびハンター症候群をはじめとする、リソソーム機能の欠陥に関する、あらゆる疾患、状態、または病状であり得る。本開示のペプチドで治療され得る脳疾患または病状のさらなる例としては、聴神経腫（前庭シュワン細胞腫）、急性硬膜下血腫、常習癖（例えば、アルコール依存症、薬物常習癖、ニコチンまたはタバコなど）、アルツハイマー病、筋萎縮性側索硬化（ＡＬＳ、またはルー・ゲーリック病）、未分化星状細胞腫（ＡＡ）、不安および関連障害、摂食障害、反社会性性格障害、中脳水道狭窄症、クモ膜嚢胞、アーノルド・キアリ奇形、動静脈奇形（ＡＶＭ）、星状細胞腫、自閉症、バリズム、双極性障害双、脳動脈瘤、脳発作、脳転移、脳幹神経膠腫、過食症、頸動脈狭窄症、小児破局てんかん、海綿状血管腫、脳動脈瘤、脳挫傷および大脳内血腫、脳出血、キアリ奇形、脊索腫、舞踏病、脈絡叢嚢胞、慢性硬膜下血腫、コロイド嚢胞、昏睡、脳振盪、頭蓋銃創、大脳皮質基底核変性症、頭蓋咽頭腫、頭蓋骨早期癒合症、クッシング病、嚢胞（類表皮腫瘍）、認知症、うつ病および関連障害、摂食障害、減量および満腹、糖尿病、ドラベ症候群、上衣腫、てんかん、硬膜外血腫てんかん、本態性振戦、側頭葉外てんかん、椎間関節症候群、前頭側頭型認知症、神経節膠腫、ゴーシェ病、胚細胞腫、多形性膠芽腫（ＧＢＭ）、神経膠腫、頸静脈小体腫瘍、舌咽神経痛、血管芽細胞腫、片側顔面痙攣、水頭症、ハンチントン病、免疫系障害、大脳内出血、ハーラー症候群、ハンター症候群、脳圧低下、ＪＰＡ（若年性毛様細胞性星状細胞腫）、クラッベ病、レノックス・ゲシュタウト症候群、脂肪脊髄膜瘤、低悪性度星状細胞腫（Ａｓｔｏｃｙｔｏｍａ）（ＬＧＡ）、リンパ球性下垂体炎、リンパ腫、髄芽腫、髄膜腫、髄膜炎、内側側頭葉てんかん、転移性脳腫瘍、片頭痛、ミトコンドリア病、もやもや病、多発性硬化症、多系統萎縮症（ＭＳＡ）、ニーマン・ピック病、ネルソン症候群、神経嚢虫症、神経変性障害、神経線維腫、神経障害性疼痛、非機能性下垂体腺腫、常圧水頭症、強迫性障害、乏突起膠腫、視神経神経膠腫、骨髄炎、パーキンソン病、妄想症および関連障害、小児水頭症、幻肢痛、毛様細胞性星状細胞腫、松果体腫瘍、松果体芽細胞腫、松果体細胞腫、下垂体腺腫（腫瘍）、下垂体卒中、下垂体破損、ポンペ病、帯状疱疹後神経痛、外傷後痙攣、心的外傷後ストレス障害、原発性ＣＮＳリンパ腫、プロラクチン産生腺腫、偽脳腫瘍、進行性の核上性麻痺、ラトケ嚢胞、再発性腺腫、関節リウマチ、統合失調症、シュワン細胞腫、側弯症、頭蓋骨骨折、スリット脳室症候群、痙縮、特発性脳圧低下、脳卒中（脳発作、ＴＩＡ）、クモ膜下出血、空洞、テイ・サックス病、向甲状腺細胞（ＴＳＨ）分泌腺腫、斜頸、一過性虚血性発作（ＴＩＡ）、外傷性脳損傷、外傷性血腫、三叉神経痛、脳室炎、前庭シュワン細胞腫、うつ病、気分障害、リソソーム蓄積症、記憶障害、学習障害、空間記憶またはナビゲーションの障害、ストレス関連障害、心的外傷後ストレス障害、疼痛、老化、海馬萎縮症、真菌感染症および進行性多巣性白質脳症（Ｌｅｕｋｏｅｎｃｅｐａｌｏｐａｔｈｙ）をはじめとする脳感染症、または別の脳疾患または病状が挙げられる。その他の場合では、本開示のペプチドを使用して、アルコール依存症、タバコ常習癖、薬物常習癖、または不安が治療され得る。
【０１９５】
いくつかの実施形態では、ペプチドは、脳内のカリウムチャネルに結合する。いくつかの実施形態では、ペプチドは、脳内のナトリウムチャネルに結合する。いくつかの実施形態では、ペプチドは、カリウムチャネルおよび／またはナトリウムチャネルをブロックし、いくつかの実施形態では、ペプチドは、カリウムチャネルおよび／またはナトリウムチャネルを活性化する。いくつかの実施形態では、ペプチドは、イオンチャネルまたは塩化物チャネルまたはカルシウムチャネルと相互作用する。いくつかの実施形態では、ペプチドは、ニコチン性アセチルコリン受容体、一過性受容体電位チャネル、ＮＭＤＡ受容体、セロトニン受容体、ＫＩＲチャネル、ＧＡＢＡチャネル、グリシン受容体、グルタミン酸受容体、酸感受性イオンチャネル、Ｋ２Ｐチャネル、Ｎａｖ１．７、またはプリン作動性受容体と相互作用する。いくつかの実施形態では、ペプチドは、マトリックスメタロプロテイナーゼと相互作用して、がん細胞移動または転移を阻害し、または抗腫瘍活性を有する。いくつかの実施形態では、ペプチドは、カルシウム活性化カリウムチャネルと相互作用する。いくつかの実施形態では、ペプチドは、抗菌、抗真菌、または抗ウイルス活性を有する。いくつかの実施形態では、ペプチドは、プロテアーゼを阻害する。いくつかの実施形態では、ペプチドは、疼痛に影響を及ぼすチャネルと相互作用する。いくつかの実施形態では、ペプチドは、脳またはその構造に対するその他の治療効果を有する。
【０１９６】
いくつかの実施形態では、本開示のペプチドを使用して、海馬に関連する、疾患または病状が診断または治療される。海馬は、学習、記憶、気分、および認知に関与する重要な脳構造である。容積および細胞充実性の減少、神経密度の低下、および神経伝達物質機能の欠陥をはじめとする海馬の変化は、晩年のうつ病（Ｔａｙｌｏｒ）；大うつ病および双極性障害（Ｄｒｅｖｅｔｓ）；心的外傷後ストレス障害（ＰＴＳＤ）（Ｓｃｈｍｉｄｔ）；アルツハイマー病（Ｎａｖａ−Ｍｅｓａ）；および統合失調症（Ｐｅｒｅｚ）をはじめとする障害の開始、持続、および／または進行に関連する。海馬を標的化する本発明のペプチドを使用して、特に、これらの疾患が治療され、またはこれらの疾患を治療するための治療上有効な物質を標的化し得る。いくつかの実施形態では、ペプチドを使用して、ＧＡＢＡ、ＮＭＤＡ、ＡＭＰＡ、ドーパミン、またはセロトニン受容体などの受容体に作用することで、これらの疾患が治療される。海馬の歯状回はまた、神経発生の部位でもあり得る。
【０１９７】
いくつかの実施形態では、本開示のペプチドを使用して、ＣＳＦまたは脳室系に関連する、疾患または病状が診断または治療される。ＣＳＦは、脳および脊髄を取り囲んでその中で循環する流体であり、脳に機械的保護を提供して、中枢神経系の恒常性および代謝に役割を果たす。ＣＳＦは、脳室系によって産生されて、その中を循環する。ＣＳＦまたは脳室系に関連する疾患および病状としては、反社会性性格障害、脳出血、脳振盪、認知症、上衣腫、水頭症、髄膜炎、多系統萎縮症（ＭＳＡ）、神経変性疾患（筋萎縮性側索硬化、パーキンソン病、アルツハイマー病、ハンチントン病など）心的外傷後ストレス障害、統合失調症、クモ膜下出血、外傷性脳損傷、および脳室炎が挙げられるが、これに限定されるものではない。
【０１９８】
ＣＳＦまたは脳室系を標的化する本開示のペプチドを使用して、特に、これらの疾患が治療され、またはこれらの疾患を治療するための治療上有効な物質を標的化し得る。例えば、特定の実施形態では、本開示のペプチドを使用して、ミトコンドリアデユビキチナーゼＵＳＰ３０（例えば、パーキンソン病治療のため）または二重ロイシンジッパーキナーゼ（例えば、神経変性治療のため）などの疾患に関連する標的が調節される。別の例として、特定の実施形態では、ペプチドは、アルツハイマー病などの神経変性疾患を治療するのに使用される治療薬に、コンジュゲートされる。このような薬物としてはまた、ガランタミンやドネペジル（ｄｏｎｚｅｐｉｌ）やタクリンが、あるいはサリンなどのように一般に毒性が強すぎると一般に考えられている神経毒さえもが挙げられる。神経変性疾患を治療するに有用な治療薬の例としては、アセチルコリンエステラーゼ阻害剤（例えば、リバスチグミン（ｒｉｖａｓｔｉｇｉｍｉｎｅ））、ガランタミン、ドネペジル（ｄｏｎｚｅｐｉｌ）、タクリン、および神経毒（例えば、サリン）が挙げられるが、これに限定されるものではない。このアプローチは、非標的全身送達を利用する従来の方法と比較して、より低い投与量による治療、および末梢における副作用の低減を可能にする。さらに別の例では、特定の実施形態では、脳室腔にホーミング、分布、標的化、移動、蓄積、または指向化するペプチドは、放射線による脳転移の治療中に、放射線防護体として（例えば、単独でまたはアミホスチンなどの放射線防護化合物とのコンジュゲートとして）使用される。
【０１９９】
いくつかの実施形態では、本開示のペプチドを使用して、小コンダクタンスカルシウム活性化カリウムチャネル（ＳＫチャネル）が阻害される。ＳＫチャネルを阻害するペプチドとしては、例えば、Ｔｏｘｉｎ＿６クラスのメンバーが挙げられる。必要に応じて、このようなペプチドは、脳室などの特定の脳領域へのホーミングを示してもよい。特定の実施形態では、本開示のペプチドは、ＳＫ１、ＳＫ２、ＳＫ３、またはＳＫ４チャネルサブタイプの１つまたは複数などの１つまたは複数のＳＫチャネルサブタイプに対する特異性を有する。特定の実施形態では、ＳＫ３サブタイプの阻害は、ドーパミン作動性ニューロンにおける発火の頻度を増加させ、したがってドーパミンレベルを増加させて、それはパーキンソン病の身体的症状を改善してもよい。
【０２００】
いくつかの実施形態では、本開示のペプチドを使用して、タウ、プリオンタンパク質、アミロイドβ、αシヌクレイン、パーキン（ｐａｒｋｉｎｉｎ）、またはハンチンチンなどの神経変性疾患に関連するタンパク質の凝集に影響を及ぼす（例えば、低下させ、遅延させ、または阻害する）。
【０２０１】
いくつかの実施形態では、本開示のペプチドを使用して、１つまたは複数の特異的イオンチャネルが阻害または活性化され、イオンチャネルの阻害または活性化は、一連の疾患の症状を緩和する。表３は、本明細書に提示される組成物および方法によって治療されてもよい、例示的イオンチャネルおよび関連疾患を示す。
【０２０２】
【表１３】
2018521994.tif 000016
【０２０３】
いくつかの実施形態では、本開示ペプチドは、プロテアーゼ阻害活性を示す。特定の実施形態では、ＢＢＢを通過することができるペプチを使用して、βおよびγセクレターゼなどのアルツハイマー関連プロテアーゼが阻害される。代案の実施形態では、ＢＢＢを通過することができまたはできなくてもよいペプチドを使用して、血液凝固関連プロテアーゼ（例えば、トロンビン、第１０ａ因子）、代謝関連プロテアーゼ（例えば、ＤＰＰ−ＩＶ）、がん関連プロテアーゼ（例えば、マトリックスメタロプロテイナーゼ、カテプシン）、ウイルス感染関連プロテアーゼ（例えば、ＨＩＶプロテアーゼ）、および炎症関連プロテアーゼ（例えば、トリプターゼ、カリクレイン）などのその他の目的のプロテアーゼが阻害される。
【０２０４】
いくつかの実施形態では、本開示のペプチドは、免疫選択的抗炎症性誘導体（ＩｍＳＡＩＤ）特性を組み込むことなどによって、抗炎症性であるように修飾され得る。特定の実施形態では、ＩｍＳＡＩＤは、本明細書に記載されるような特定の脳領域を標的化できるペプチドに組み込まれ、または付加される。ＦＥＧは、抗炎症特性を付与する重要な配列の一例である。代案としてはまたは組み合わせて、本開示のペプチドが免疫調節分子にコンジュゲートされて、炎症を逆転させ、低減し、または制限し得る。
【０２０５】
いくつかの態様では、本開示のペプチドは、１つまたは複数の治療薬にコンジュゲートされる。特定の実施形態では、本明細書に記載のペプチドをコンジュゲートとして使用して、ＢＢＢまたは血液ＣＳＦ関門を越えて、必要に応じて脳の特定の領域、組織、構造、または細胞に療薬が送達される。このような治療薬の例としては、抗炎症性分子（例えば、デキサメタゾン、プレドニゾン、プレドニゾロン、メチルプレドニゾロン、またはトリアムシノロン（ｔｒａｉｍｃｉｎｏｌｏｎｅ））、抗真菌剤（例えば、フルコナゾール、アンホテリシンＢ、ケトコナゾール、またはアバフンギン）、抗ウイルス剤（例えば、アシクロビル、シドフォビル）、増殖因子（例えば、ＮＧＦまたはＥＧＦ）、または抗感染症薬（例えば、シプロフロキサシン、テトラサイクリン、エリスロマイシン、またはストレプトマイシン）が挙げられる。例えば、特定の実施形態では、本開示のペプチドは、さもなければ先行する方法および組成物を用いて治療することが非常に困難である、脳の真菌感染症を治療するために抗真菌剤にコンジュゲートされる。別の例として、特定の実施形態では、ＢＢＢ透過性の本開示のペプチドは、さもなければ確かな治療法がない、ＪＣウイルスによって引き起こされる進行性多巣性白質脳症（ｌｅｕｃｏｅｎｃｅｐｈａｌｏｐａｔｈｙ）（ＰＭＬ）を治療するために、シドフォビルにコンジュゲートされる。
【０２０６】
いくつかの実施形態では、本開示のペプチドを使用して、脳がんが治療される。例えば、特定の実施形態では、本明細書で提供されるペプチドを使用して、ＲＡＳ、ＭＹＣ、ＰＨＦ５Ａ、ＢｕｂＲ１、ＰＫＭＹＴ１、またはＢｕＧＺなどの重要ながん関連経路を直接阻害する。代案としてはまたは組み合わせて、本開示のペプチドを使用して、脳がんを治療するために、コンジュゲートされた治療薬がＢＢＢを越えて輸送される。
【０２０７】
さらなる態様では、治療薬は、放射性同位体、毒素、酵素、感作薬物、干渉ＲＮＡをはじめとする核酸、抗体、血管新生阻害剤、シスプラチン、白金化合物、代謝拮抗薬、有糸分裂インヒビター、成長因子インヒビター、タキサン、パクリタキセル、カバジタキセ、テモゾロマイド、トポテカン、フルオロウラシル、ビンクリスチン、ビンブラスチン、４−デアセチルビンブラスチン、プロカルバジン、ダカルバジン（ｄｅｃａｒｂａｚｉｎｅ）、アルトレタミン、メトトレキサート、メルカプトプリン、チオグアニン、リン酸フルダラビン、クラドリビン、ペントスタチン、シタラビン、アザシチジン、エトポシド、テニポシド、イリノテカン、ドセタキセル、ドキソルビシン、ダウノルビシン、ダクチノマイシン、イダルビシン、プリカマイシン、マイトマイシン、ブレオマイシン、タモキシフェン、フルタミド、ロイプロリド、ゴセレリン、アミノグルテチミド（ａｍｉｎｏｇｌｕｔｈｉｍｉｄｅ）、アナストロゾール、アムサクリン、アスパラギナーゼ、ミトキサントロン、ミトタンおよびアミホスチン、ビンカアルカロイド、環式オクタペプチド類似体ｏｆキノコアマトキシン、エポチロン、およびアントラサイクリン（ａｎｔｈｒａｃｙｌｉｎｅｓ）、ＣＣ−１０６５、ＳＮ−３８、およびＢＡＣＥインヒビター、およびそれらの同等物、ならびにフォトアブレーション剤から選択されるが、これに限定されるものではない、化学療法剤、抗がん剤、または抗がん剤である。例えば、特定の実施形態では、本開示のペプチドは、ＢＢＢを通過する限定的能力を有するＣＤＫ４／６阻害剤である、パルボシクリブにコンジュゲートされる。別の例として、特定の実施形態では、本開示のペプチドは、モノメチルオーリスタチンＥ（ＭＭＡＥ）、ＭＭＡＦ、オーリスタチン、ドロスタチン、オーリスタチンＦ、モノメチルオーリスタチンＤ、メイタンシノイド（例えば、ＤＭ−１、ＤＭ４、メイタンシン）、ピロロベンゾジアゼピン（ｐｙｒｒｏｌｏｂｅｎｚｏｄｉａｚａｐｉｎｅ）二量体、Ｎ−アセチル−γ−カリケアマイシン、デュオカルマイシン、アントラサイクリン、微小管阻害剤、またはＤＮＡ損傷剤にコンジュゲートされる。
【０２０８】
任意選択的に、本開示の特定の実施形態は、放射線増感剤または光増感剤にコンジュゲートされたペプチドを提供する。放射線増感剤の例としては、ＡＢＴ−２６３、ＡＢＴ−１９９、ＷＥＨＩ−５３９、パクリタキセル、カルボプラチン、シスプラチン、オキサリプラチン、ゲムシタビン、エタニダゾール、ミソニダゾール、チラパザミン、および核酸塩基誘導体（例えば、ハロゲン化プリンまたはピリミジン、例えば、５−フルオロデオキシウリジン）が挙げられるが、これに限定されるものではない。光増感剤の例としては、照射発熱蛍光性分子またはビーズ、ポルフィリンおよびポルフィリン誘導体（例えば、クロリン、バクテリオクロリン，イソバクテリオクロリン、フタロシアニン、およびナフタロシアニン）、金属ポルフィリン、金属フタロシアニン、アンゲリシン、カルコゲンアピリリウム（ｃｈａｌｃｏｇｅｎａｐｙｒｒｉｌｌｉｕｍ）染料、クロロフィル、クマリン、フラビンとアロキサジンおよびリボフラビンなどの関連化合物、フラーレン、フェオホルビド、ピロフェオホルビド、シアニン（例えば、メロシアニン５４０）、フェオフィチン、サフィリン、テキサフィリン、プルプリン、ポルフィセン、フェノチアジニウム、メチレンブルー誘導体、ナフタルイミド、ナイルブルー誘導体、キノン、ペリレンキノン（例えば、ヒペリシン、ヒポクレリン、およびセルコスポリン）、ソラレン、キノン、レチノイド、ローダミン、チオフェン、ベルジン（ｖｅｒｄｉｎｓ）、キサンテン染料（例えば、エオシン、エリスロシン、ローズベンガル）、ポルフィリンの二量体およびオリゴマー形態、および５−アミノレブリン酸などのプロドラッグが挙げられるが、これに限定されるものではない。有利なことに、このアプローチは、治療薬（例えば、薬物）および電磁エネルギー（例えば、放射線または光）の双方を同時に用いて、がん細胞の高度に特異的な標的化を可能にする。
【０２０９】
特定の実施形態では、本開示のペプチドは変異して、ＢＢＢまたは血液ＣＳＦ関門通過する能力を維持して、特定の組織に、ホーミング、分布、標的化、移動、蓄積、または指向化するが、イオンチャンネルを苦しめたり（ａｇｏｎｉｚｉｎｇ）、プロテアーゼを阻害するなど、機能を獲得または喪失する。その他の実施形態では、本開示のペプチドは変異して、特定の組織に、ホーミング、分布、標的化、移動、蓄積、または指向化して、その機能の強度や特異性を変化させ、機能を獲得または喪失させるが、その他の組織は対象としない。
【０２１０】
本開示はまた、２つ以上のペプチドが共にコンジュゲートまたは融合される、「タンデム」ペプチドの使用も包含する。特定の実施形態では、タンデムペプチドは、共にコンジュゲートまたは融合された２つ以上のノットペプチドを含んでなり、その中では、少なくとも１つのノットペプチドが、ＢＢＢを通過して任意選択的に特定の脳領域を標的化できる一方で、少なくとも１つの他のノットペプチドは、上記および本明細書で論じたように、ＢＩＭ類似体などの特定の治療活性を提供する。
【０２１１】
いくつかの実施形態では、本開示は、本開示のペプチドの有効量をそれを必要とする対象に投与するステップを含んでなる、がんを治療する方法を提供する。
【０２１２】
いくつかの実施形態では、本開示は、本開示のペプチドの有効量と、薬学的に許容できる担体とを含んでなる医薬組成物をそれを必要とする患者に投与するステップを含んでなる、がんを治療する方法を提供する。
【０２１３】
いくつかの実施形態では、本開示は、本開示のペプチドの有効量を対象に投与するステップを含んでなる、細胞の浸潤活性を阻害する方法を提供する。
【０２１４】
いくつかの態様では、本開示は、がん、がん組織、または腫瘍組織を検出する方法を提供し、方法は、目的の組織を、検出可能薬剤にコンジュゲートされた本開示のペプチドに接触させるステップと、ペプチドの結合レベルを測定するステップとを含んでなり、正常組織と比較して上昇した結合レベルは、組織が、がん組織または腫瘍組織であることの徴候である。
【０２１５】
本発明は、検出可能薬剤にコンジュゲートされた本開示のペプチドを使用する、がん、がん組織、または腫瘍組織の術中イメージングおよび切除のための方法を提供する。いくつかの態様では、がん、がん組織、または腫瘍組織は、本開示のペプチドを使用して、がん、がん組織、または腫瘍組織の術中視覚化を可能にする、蛍光イメージングによって検出可能である。いくつかの態様では、本開示のペプチドは、１つまたは複数の検出可能薬剤にコンジュゲートされる。さらなる実施形態では、検出可能薬剤は、ペプチドと結合している蛍光性部分を含んでなる。別の実施形態では、検出可能薬剤は、放射性核種を含んでなる。いくつかの態様では、イメージングは、開腹手術開放手術を用いて達成される。さらなる態様では、イメージングは、内視鏡検査またはその他の非侵襲的外科的手法を用いて達成される。
【０２１６】
場合によっては、ペプチドまたはペプチド−活性薬剤を使用して、ＢＢＢまたは血液ＣＳＦ関門を通過して、次に抗腫瘍機能、標的化された毒性、転移阻害などを有することによって、脳内のがんが標的化され得る。その他の場合には、ペプチドまたはペプチド活性薬剤を使用して、腫瘍およびその他の病変中の転移をはじめとする脳の病変が、標識化、検出、または画像化され得て、それは様々な外科的手法によって除去されてもよい。
【０２１７】
さらに、本開示の特定のペプチドは、脳外の疾患および病状における追加的な適用性を有し得る。配列番号１〜配列番号１９２または配列番号２１０〜配列番号４０１のいずれかの配列を含んでなるペプチド、および本明細書に記載されるような任意のペプチド誘導体またはペプチド−活性薬剤を使用して、上部消化管疾患およびがん（例えば、喉頭、口腔、食道がん、唾液腺、扁桃腺、咽頭、腺肉腫、口腔悪性黒色腫、頭頸部がん）がさらに標的化され得る。配列番号１〜配列番号１９２または配列番号２１０〜配列番号４０１のいずれかの配列を含んでなるペプチド、および本明細書に記載されるような任意のペプチド誘導体またはペプチド−活性薬剤を使用して、胆嚢疾患およびがんがさらに標的化され得る。
【０２１８】
本明細書に記載の毒液または毒素由来のペプチド、ペプチド、修飾ペプチド、標識ペプチド、ペプチド−活性薬剤コンジュゲート、および医薬組成物は、予防的および／または治療的処置のために投与され得る。治療用途では、組成物は、疾患または病状の症状を治癒させまたは少なくともある程度阻止するのに、または病状を治癒、回復、改善、または寛解させるのに十分な量で、疾患または病状に既に罹患している対象に投与され得る。本明細書中に記載されるこのようなペプチドはまた、病状を予防（全体的または部分的）して、それが発症、罹患、または悪化する可能性を軽減するためにも投与され得る。この用途のために有効な量は、疾患または病状の重症度および経過、以前の治療、対象の健康状態、体重、および薬物に対する応答、および主治医の計算に基づいて変動し得る。
【０２１９】
いくつかの実施形態では、本開示は、対象の脳の病状を治療する方法を提供し、方法は、配列番号１〜配列番号１９６のいずれかの配列を含んでなるペプチドまたはその機能的断を対象に投与するステップを含んでなる。
【０２２０】
本明細書に記載の複数のペプチドは、任意の順序で、または同時に投与され得る。場合によっては、毒素または毒液から誘導されたペプチドの複数の機能的断片は、任意の順序で、または同時に投与され得る。同時であれば、本明細書に記載の複数のペプチドは、静脈内注射のような単一の一体化形態で、または後続する静脈内投与などの複数の形態で提供され得る。
【０２２１】
ペプチドはキットとしてパッケージされ得る。いくつかの実施形態では、キットは、ペプチドの使用または投与に関する書面による指示を含む。
【実施例】
【０２２２】
以下の実施例は、本開示のいくつかの態様をさらに説明するために含まれ、本発明の範囲を限定するためには使用されないものとする。
【０２２３】
実施例１
ペプチドの製造
本実施例は、本明細書に記載のペプチドの製造を記載する。サソリおよびクモのノッチンタンパク質由来のペプチドは、公表された方法論を用いて哺乳類細胞培養において生成した。（Ａ．Ｄ．Ｂａｎｄａｒａｎａｙｋｅ，Ｃ．Ｃｏｒｒｅｎｔｉ，Ｂ．Ｙ．Ｒｙｕ，Ｍ．Ｂｒａｕｌｔ，Ｒ．Ｋ．Ｓｔｒｏｎｇ，Ｄ．Ｒａｗｌｉｎｇｓ．２０１１．Ｄａｅｄａｌｕｓ：ａ  ｒｏｂｕｓｔ，ｔｕｒｎｋｅｙ  ｐｌａｔｆｏｒｍ  ｆｏｒ  ｒａｐｉｄ  ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ  ｏｆ  ｄｅｃｉｇｒａｍ  ｑｕａｎｔｉｔｉｅｓ  ｏｆ  ａｃｔｉｖｅ  ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ  ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｉｎ  ｈｕｍａｎ  ｃｅｌｌ  ｌｉｎｅｓ  ｕｓｉｎｇ  ｎｏｖｅｌ  ｌｅｎｔｉｖｉｒａｌ  ｖｅｃｔｏｒｓ．Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ．（３９）２１，ｅ１４３）。
【０２２４】
ペプチド配列をＤＮＡに逆翻訳し、合成して、標準的分子生物学技術を用いて、シデロカリンとインフレームでクローン化した。（Ｍ．Ｒ．Ｇｒｅｅｎ，Ｊｏｓｅｐｈ  Ｓａｍｂｒｏｏｋ．Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ．２０１２  Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｐｒｅｓｓ．）。得られたコンストラクトをレンチウイルス内にパッケージし、ＨＥＫ２９３細胞に形質移入して増殖させ、固定化金属アフィニティークロマトグラフィー（ＩＭＡＣ）によって単離し、タバコエッチウイルスプロテアーゼで切断して、逆相クロマトグラフィーによって均質性に精製した。精製に続いて、各ペプチドを凍結乾燥して凍結保存した。
【０２２５】
実施例２
ペプチド放射性標識
本実施例は、ペプチドの放射性標識を記載する。いくつかのノッチンを標準技術によって、１４Ｃホルムアルデヒドおよびシアノ水素化ホウ素ナトリウムを用いた還元的メチル化によって、放射性標識した。配列は、Ｎ末端にアミノ酸「Ｇ」および「Ｓ」を有するように操作した。Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ  Ｖ９１：１９８３ｐ．５７０およびＪＢＣ  ２５４（１１）：１９７９  ｐ．４３５９を参照されたい。過剰なホルムアルデヒドを使用して、完全なメチル化（全ての遊離アミンのジメチル化）を確実にした。標識されたペプチドは、Ｓｔｒａｔａ−Ｘカラム（Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ  ８Ｂ−Ｓ１００−ＡＡＫ）上での固相抽出によって単離し、５％メタノール添加水で洗浄して、２％ギ酸添加メタノール中に回収した。溶媒は、引き続いて穏やかな加熱および窒素ガス流を用いて、ブローダウン蒸発器内で除去した。
【０２２６】
実施例３
ペプチド投与
本実施例は、ペプチドの投与を例証する。様々な用量のペプチドを体重２０ｇ〜２５ｇのメスハーラン胸腺欠損ヌードマウスに、尾静脈注射（ノッチン当たりｎ＝２マウス）によって投与した。実験は、二重反復試験で実施した。腎臓を結索して、ペプチドの腎臓濾過を防止した。配列番号１〜配列番号４、配列番号３４、配列番号３５、配列番号５５、配列番号５、配列番号３６〜配列番号３７、および配列番号３９のペプチドは、リジンおよびＮ末端をメチル化することによって放射性標識され、したがって実際の結合剤は、メチルまたはジメチルリジンおよびメチル化またはジメチル化アミノ末端を含有してもよい（図１）。
【０２２７】
各ペプチドの２０ナノモルの標的用量を、側腹部肉腫Ａ２０４腫瘍を有する別々のメスハーラン胸腺欠損ヌードマウスに麻酔下で投与した。用量は、全身オートラジオグラフィーのために調節した。各ペプチド（２０ナノモルの標的用量）は、動物を安楽死させて切片化する前に、３時間の標的時間にわたり動物内で自由に循環させた。一部の動物は、おそらく各マウスの腎臓を結紮するために使用された麻酔および外科手術の合併症、またはいくつかのペプチドの毒性効果のために、ペプチドを投与された後に死亡した。各ペプチドの循環時間は、動物間で変動した。フルオキセチン（Ｐｒｏｚａｃ）は、腎臓結紮を受けなかった動物において、ＢＢＢを通過する陽性対照として使用した。イヌリンはＢＢＢを通過しないことが知られているため、この多糖類を陰性対照として使用した。
【０２２８】
実施例４
血液脳関門を通過して脳にホーミングするペプチド
本実施例は、血液脳関門（ＢＢＢ）および／または血液脳脊髄液（ＣＳＦ）関門を通過して、場合によっては脳内の特定の位置にホーミングするペプチドを示す。投与期間の終了時に、マウスをヘキサン／ドライアイス浴内で凍結し、次にカルボキシメチルセルロースのブロック中で凍結させた。脳、腫瘍、肝臓、腎臓、肺、心臓、脾臓、膵臓、筋肉、脂肪、胆嚢、上部胃腸管、下部胃腸管、骨、骨髄、生殖路（ｒｅｐｒｏｄｕｃｔｉｖｅ  ｔｒａｃｋ）、眼、軟骨、胃、皮膚、脊髄、膀胱、唾液腺、およびその他の各種組織を含む動物全身の矢状切片の薄い凍結切片をミクロトームによって得て、冷凍庫内で乾燥させて（ｄｅｓｓｉｃａｔｅ）、約１０日間にわたりホスフォイメージャー（ｐｈｏｓｐｈｏｉｍａｇｅｒ）プレートに曝露させた。
【０２２９】
これらのプレートを発色させて、各臓器からのシグナル（濃度計測）を、各動物の心臓の血液中に見られるシグナルに対して正規化した。その組織中の血液から予測されるシグナルよりも暗い、組織中のシグナルは、領域、組織、構造または細胞における蓄積を示唆する。フルオキセチンは血液脳関門を通過し得て、陽性対照である。イヌリンは血液脳関門を通過し得ず、陰性対照である。図２は、フルオキセチン（上）およびイヌリン（下）対照群について、脳およびその他の組織における１４Ｃシグナルを示す。図３は、配列番号１の放射性標識ペプチドについて、脳およびその他の組織における１４Ｃシグナルを示す。図４は、配列番号３の放射性標識ペプチドについて、脳およびその他の組織における１４Ｃシグナルを示す。図３０は、配列番号５５のペプチドで処置されたマウス脳における１４Ｃシグナルを示す、オートラジオグラフィー画像を示す。
【０２３０】
さらに、脳には約３％の血液が含まれる。したがって、血液中の領域当たりの放射能シグナルを脳内のシグナルと比較した際に、血液中のシグナルの３％よりもはるかに高い脳内のシグナルは、ＢＢＢを通じた脳内の物質の蓄積に起因し得る。血液中と比較した脳内の少なくとも１０％の拡散シグナルの比率を、高い透過性の基準レベルとして選択した。濃度計シグナルはまた、脳内の特定部位内の高濃度も示し得て、それはＢＢＢおよび／または血液ＣＳＦ障壁を通過したことを示し得る。図３４Ａは、１００ナノモルの放射性標識配列番号３９ペプチド投与の３時間後における、結索腎臓を有するマウスの凍結切片の白色光画像を示す。図３４Ｂは、図３４Ａに対応するオートラジオグラフィー画像を示し、その中で１４Ｃシグナルは、１００ナノモルの放射性標識配列番号３９ペプチド投与の３時間後における、結索腎臓を有するマウス組織におけるペプチド分布を同定し、放射性標識配列番号３９ペプチドの平均脳／血液比は、６．０１％と判定された。図３５Ａは、１００ナノモルの放射性標識配列番号３６ペプチド投与の３時間後における、結索腎臓を有するマウスの凍結切片の白色光画像を示す。図３５Ｂは、図３５Ａに対応するオートラジオグラフィー画像を示し、その中で１４Ｃシグナルは、１００ナノモルの放射性標識配列番号３６ペプチド投与の３時間後における、結索腎臓を有するマウス組織におけるペプチド分布を同定し、放射性標識配列番号３６の平均脳／血液比は、９．６４％と判定された。
【０２３１】
表４は、各ペプチドの脳への移動の概要を列挙する。血液の数値は、心臓の血液中の濃度計シグナルを示す。脳の数値は、心臓の血液中で検出されたシグナルと比較した、その組織中のシグナルの百分率を示す。
【０２３２】
【表１４】
2018521994.tif 000017
【０２３３】
配列番号１、配列番号２、配列番号３、配列番号４、配列番号３４、配列番号３６、および配列番号３７のペプチドは、陰性対照ペプチドである、イヌリン、ＧＳ−ハイナントキシンＧＳＫＣＬＰＰＧＫＰＣＹＧＡＴＱＫＩＰＣＣＧＶＣＳＨＮＮＣＴ（配列番号４１９）、およびカリウムチャネルペプチドと比較して、血液脳関門を高度に透過する。配列番号５、配列番号３５、配列番号３９、および配列番号５５のペプチドは、陰性対照ペプチドであるイヌリン、ＧＳ−ハイナントキシン、およびカリウムチャネルペプチドと比較して、血液脳関門を中等度に透過する。配列番号３５〜配列番号３９のペプチドは、配列番号５のペプチドの設計された変異型であり、したがって、変異型が血液脳関門を高度に透過するように、または高度に透過しないように、設計し得ることが示される。さらに、配列番号５５のペプチドは、潜在的に、海馬、ＣＳＦ、脳室、髄膜および／または吻側移動流である、脳内の領域、組織、構造または細胞に特異的に移動することが見いだされた（例えば、実施例１１を参照されたい）。図５〜図８および図３１は、それぞれ、配列番号１；配列番号２；配列番号３；配列番号４；および配列番号５５のペプチドのＨＰＬＣプロファイルを示す。
【０２３４】
実施例５
治療薬によるペプチド投与およびホーミング
本実施例は、治療薬によるペプチド投与およびホーミングを記載する。本開示のペプチドは、組換え的に発現されまたは化学的に合成されて、次に薬剤にコンジュゲートされる。代案としては、本開示のペプチドは、組換え発現中に薬物に融合される。細胞毒性化学療法薬（例えば、タキサン、アルキル化剤、または微小管阻害剤）、アンチセンス（ｓｉＲＮＡ、ｄｓＲＮＡ）、抗うつ剤、抗精神病薬、イオンチャネル遮断薬、プロテアーゼ阻害剤、神経伝達物質、抗ウイルス剤、抗生物質、抗真菌剤、神経成長因子、モノクローナル抗体、サイトカインなどの薬物；またはチアネプチン、フェニトイン、フルオキセチン、リチウム、三環式抗うつ薬、抗精神病薬、バルプロ酸ナトリウム、ミフェプリストン、抗痙攣薬、ビタミンＡ、抗酸化剤、神経発生促進剤、選択的セロトニン再取り込み阻害薬、セロトニン／ノルアドレナリン再取り込み阻害薬、パロキセチン、フェニトイン、神経栄養因子、ニュールツリン、ホルモン、またはテストステロンなどの脳に影響を及ぼしてもよいその他の薬物が、薬物−ペプチドコンジュゲートまたは融合体中で使用される。薬物−ペプチドコンジュゲートは、Ｇｒｅｇ  ＨｅｒｍａｎｓｏｎによってＢｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ  Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓに記載されている技術を用いて作製される。１つまたは複数の薬物−ペプチドコンジュゲートまたは融合体が、ヒトまたは動物に投与される。
【０２３５】
実施例６
本開示のペプチドコンジュゲートによる脳感染症の治療
本実施例は、ペプチドコンジュゲートによる脳感染症の治療を記載する。本発明のペプチドは、組換え的に発現されまたは化学合成されて、次にフルコナゾール、リファンピシン、シプロフロキサシンまたはアジスロマイシンなどの抗真菌または抗菌化合物にコンジュゲートされる。配列番号１〜配列番号１９６または配列番号２１０〜配列番号４０５のペプチドのいずれか１つへの薬物のカップリングは、抗真菌または抗菌化合物を脳内に標的化する。１つまたは複数の抗真菌または抗菌ペプチドコンジュゲートが、ヒトまたは動物に投与される。
【０２３６】
実施例７
脳の領域へのペプチド−薬物コンジュゲートの標的化
本開示のペプチドは、組換え的に発現され発現され（ｉｓ  ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ  ｉｓ  ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ）または化学的に合成されて、次にＧｒｅｇ  ＨｅｒｍａｎｓｏｎによってＢｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ  Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓに記載されている技術を用いて、メマンチン、タクリン、リバスチグミン（ｒａｖａｓｔｉｇｍｉｎｅ）、またはドネペジル（ｄｏｎｚｅｐｉｌ）などの薬物にコンジュゲートされる。上記の薬物は、典型的に血液脳関門を通過するが、それでもなお薬物を配列番号５５〜配列番号７９、配列番号１２７、配列番号１３０、配列番号１５２、配列番号１５８、配列番号１６０、または配列番号１９０のいずれか１つのペプチドにカップリングすることで、薬物を対象の海馬ＣＳＦ、脳室系、髄膜、吻側移動流、または歯状回に標的化する。１つまたは複数の薬物−ペプチドコンジュゲートが、ヒトまたは動物に投与される。
【０２３７】
実施例８
本開示のペプチド−コンジュゲートによるウイルスの治療
本実施例は、ペプチドコンジュゲートによるウイルスの治療を記載する。進行性多巣性白血球増多（ＰＭＬ）は、進行性多巣性白質脳症（ｌｅｕｃｏｅｎｃｅｐａｌｏｐａｔｈｙ）（ＰＭＬ）は、脳のウイルス性疾患であり、抗ウイルス剤が典型的に血液脳関門を通過しないことから、それは治療が非常に困難である。本開示のペプチドは、組換え的に発現されまたは化学的に合成されて、次に、シドフォビルまたはシタラビンなどの抗ウイルス化合物にコンジュゲートされる。配列番号１〜配列番号１９６または配列番号２１０〜配列番号４０５のペプチドのいずれか１つへの薬物のカップリングは、抗ウイルス化合物を脳内に標的化する。１つまたは複数の抗ウイルス性ペプチドコンジュゲートが、ヒトまたは動物に投与される。
【０２３８】
実施例９
本開示のペプチドコンジュゲートによる脳腫瘍の治療
本実施例は、ペプチドコンジュゲートによる脳腫瘍の治療を記載する。多くの化学療法薬は、血液脳関門を通過しない。本開示のペプチドは、組換え的に発現されまたは化学的に合成されて、次に、直接またはリンカーを介して、シクロホスファミド、ドキソルビシン、オーリスタチン（例えば、モノメチルオーリスタチンＥ（ＭＭＡＥ）、モノメチルオーリスタチンＦ（ＭＭＡＦ）、ドロスタチン、オーリスタチンＦ、ＭＭＡＤ）、メイタンシノイド（例えば、ＤＭ１、ＤＭ４、メイタンシン）、ピロロベンゾジアゼピン（ｐｙｒｒｏｌｏｂｅｎｚｏｄｉａｚａｐｉｎｅ）二量体、カリケアマイシン（例えば、Ｎ−アセチル−γ−カリケアマイシン）、ビンカアルカロイド（ａｌｋｙｌｏｉｄ）（例えば、４−デアセチルビンブラスチン）、デュオカルマイシン、キノコアマトキシンの環状ペプチド類似体、エポチロン、アントラサイクリン、ＣＣ−１０６５、タキサン（例えば、パクリタキセル、ドセタキセル、カバジタキセ）、ＳＮ−３８、イリノテカン、ビンクリスチン、微小管阻害剤、ＤＮＡ損傷剤、またはテニポシドなどの化学療法化合物にコンジュゲートされる。配列番号１〜配列番号１９６または配列番号２１０〜配列番号４０５のペプチドのいずれか１つへの薬物のカップリングは、化学療法薬化合物を脳内および必要に応じて腫瘍に標的化する。１つまたは複数の化学療法薬−ペプチドコンジュゲートが、ヒトまたは動物に投与される。
【０２３９】
実施例１０
哺乳類発現系を用いたペプチド発現
本実施例は、哺乳類発現系を用いたペプチドの発現を記載する。ペプチドは、Ｂａｎｄａｒａｎａｙａｋｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．２０１１Ｎｏｖ；３９（２１）：ｅ１４３に記載される方法に従って発現させた。ペプチドは、タバコエッチウイルスプロテアーゼを使用してシデロカリンから切断し、アセトニトリルおよび０．１％ＴＦＡの勾配を用いて疎水性カラム上でＦＰＬＣにより精製した。次に、ペプチドを凍結乾燥して凍結保存した。
【０２４０】
図１１Ａ〜図１１Ｅは、配列番号４（図１１Ａ）、配列番号６（図１１Ｂ）、配列番号１７（図１１Ｃ）、配列番号２５（図１１Ｄ）、および配列番号３２（図１１Ｅ）のペプチドの小規模（３０ｍＬ）哺乳類発現研究からの品質管理データを示す。グラフは、アセトニトリルおよび０．１％ＴＦＡの勾配を用いた、疎水性カラム上のＨＰＬＣトレースを示す。より暗いトレースは天然ペプチドであり、より薄いトレースは１００ｍＭジチオスレイトールによる還元に続くペプチドである。図１１Ａ、図１１Ｄ、および図１１Ｅはまた、ＳＤＳ−ＰＡＧＥゲル上の非還元および還元バンドを示す挿入画像も含む。図１１Ａおよび図１１Ｃはまた、分子の質量を提供してジスルフィドが形成されたことを示唆する、ＭＡＬＤＩ質量分析グラフも含む。さらに、図１１Ｄは、還元型ＨＰＬＣトレースにおいて配列番号２５ペプチドが、配列番号４、配列番号６、および配列番号１７（図１１Ａ〜図１１Ｃ）などのその他のペプチドと比較して、より高い純度を有することを示す。このより高い純度は、クリッピングを防止してもよい、ＡｒｇでないＣ末端残基（すなわち、ここではＣ末端残基がＩｌｅである）の存在に起因してもよい。
【０２４１】
図１２Ａ〜図１２Ｄは、配列番号３９（図１２Ａおよび図１２Ｂ）、および配列番号２５（図１２Ｃおよび図１２Ｄ）のペプチドの小規模（３０ｍＬ）哺乳類発現研究からの品質管理データを示す。図１２Ａのグラフは、アセトニトリルおよび０．１％ＴＦＡの勾配を用いた、疎水性カラム上の配列番号３９のＨＰＬＣトレースを示す。より暗いトレースは天然ペプチドであり、より薄いトレースは１００ｍＭジチオスレイトールによる還元に続くペプチドである。図１２Ｂは、ＳＤＳ−ＰＡＧＥゲル上における、配列番号４１のペプチドの酸化型および還元型バンドの画像を示す。図１２Ｃは、分子の質量を提供してジスルフィドが形成されたことを示唆する、配列番号２５のＭＡＬＤＩ質量分析グラフの全スペクトルを示す。図１２Ｄは、図１２Ｃのズームイン部分を示す。
【０２４２】
実施例１１
脳室および脳脊髄液へのペプチドホーミング
この実施例は、配列番号５５のペプチドの心室および脳脊髄液（ＣＳＦ）へのホーミングを例示する。
【０２４３】
様々な用量のペプチドを体重２０ｇ〜２５ｇのメスハーラン胸腺欠損ヌードマウスに、尾静脈注射（ノッチン当たりｎ＝２マウス）によって投与した。実験は、二重反復試験で実施した。腎臓は結索してペプチドの腎臓濾過を防止した。各ペプチドは、リジンおよびＮ末端をメチル化することによって放射性標識されるので、実際の結合剤は、メチルまたはジメチルリジンおよびメチル化またはジメチル化アミノ末端を含有してもよい。メスハーラン胸腺欠損ヌードマウスに、１０〜５０ｕＣｉの１４Ｃを保有する、５０〜１００ナノモルの各ペプチドの標的用量を麻酔下で投与した。各ペプチドは、動物を安楽死させて切片化する前に、動物内で自由に循環させた。フルオキセチンは血液脳関門（ＢＢＢ）を通過するため、腎臓結紮を受けていない動物における陽性対照として使用した。イヌリンはＢＢＢを通過しないため、陰性対照として使用した。
【０２４４】
全身オートラジオグラフィー画像
全身オートラジオグラフィー画像のために、投与期間の終了時に、マウスをヘキサン／ドライアイス浴内で凍結し、次にカルボキシメチルセルロースのブロック中で凍結させた。イメージングのために、動物全身の矢状切片を調製して凍結した。脳、腫瘍、肝臓、腎臓、肺、心臓、脾臓、膵臓、筋肉、脂肪、胆嚢、上部胃腸管、下部胃腸管、骨、骨髄、生殖路（ｒｅｐｒｏｄｕｃｔｉｖｅ  ｔｒａｃｋ）、眼、軟骨、胃、皮膚、脊髄、膀胱、唾液腺、およびその他の各種組織などの組織の薄い凍結切片をミクロトームによって得て、冷凍庫内で乾燥させて、約７日間にわたりホスフォイメージャー（ｐｈｏｓｐｈｏｉｍａｇｅｒ）プレートに曝露させた。これらのプレートを発色させて、各臓器からのシグナル（濃度計測）を、各動物の心臓の血液中に見られるシグナルに対して正規化した。その組織中の血液から予測されるシグナルよりも暗い、組織中のシグナルは、領域、組織、構造または細胞における蓄積を示唆する。
【０２４５】
図３７Ａは、１００ナノモルの配列番号５５のペプチドの放射性標識第１の精製画分（第１のＨＰＬＣペプチドピーク）投与の３時間後における、結紮腎臓を有するマウスの凍結切片の白色光画像を示す。図３７Ｂは、３７Ａに対応するオートラジオグラフィー画像を示し、その中で１４Ｃシグナルは、１００ナノモルの配列番号５５ペプチドの放射性標識第１の画分（第１のＨＰＬＣペプチドピーク）投与の３時間後における、結索腎臓を有するマウス組織中のペプチド分布を同定する。図３８Ａは、１００ナノモルの配列番号５５のペプチドの放射性標識第２の精製画分（図３７ＡからのＨＰＬＣの第２のＨＰＬＣペプチドピーク）投与の３時間後における、結索腎臓を有するマウスの凍結切片の白色光画像を示す。図３８Ｂは、図３８Ａに対応するオートラジオグラフィー画像を示し、その中で１４Ｃシグナルは、１００ナノモルの配列番号５５のペプチドの放射性標識第２の精製画分（図３７ＡからのＨＰＬＣの第２のＨＰＬＣペプチドピーク）投与の３時間後における、結索腎臓を有するマウス組織におけるペプチド分布を同定する。図３９Ａは、１００ナノモルの放射性標識配列番号８３ペプチド投与の３時間後における、結索腎臓を有するマウスの凍結切片の白色光画像を示す。図３９Ｂは、図３９Ａに対応するオートラジオグラフィー画像を示し、その中で１４Ｃシグナルは、１００ナノモルの放射性標識配列番号８３ペプチド投与の３時間後における、結索腎臓を有するマウス組織中のペプチド分布を同定する。
【０２４６】
脳切片オートラジオグラフィー画像
矢状および冠状脳切片のオートラジオグラフィー画像のために、次に投与期間の終了時に、麻酔したマウスを断頭して脳を単離し、ヘキサン／ドライアイス浴内で凍結し、次にカルボキシメチルセルロースのブロック中で凍結した。脳組織の４０μｍ切片を０．５ｍｍ毎に調製し、その結果、薄い凍結切片をイメージングに利用できるようにした。薄い凍結切片をクリオトームによって得て、冷凍庫内で乾燥させ、約７日間ホスフォイメージャー（ｐｈｏｓｐｈｏｉｍａｇｅｒ）プレートに曝露してから、ＲａｙｔｅｓｔＣＲ−３５スキャナーで現像した。
【０２４７】
図３３Ａおよび図３３Ｂは、脳室およびＣＳＦなどの脳内の特定の構造への配列番号５５ペプチドの局在を示唆する、矢状（図３３Ａ）および冠状（図３３Ｂ）の脳切片を示す。各図において、放射能スキャンが左側に示され、暗い領域はより高い活性を有する。通常光の組織の画像は、右側に示される。図３６Ａは、右側にマウスの冠状脳切片の白色光画像、左側に白色光画像に対応するオートラジオグラフィー画像を示す。オートグラフ画像中の１４Ｃシグナルは、ペプチド分布を同定し、ペプチド投与後における、脳室およびＣＳＦなどの脳内の特定の構造への、配列番号５５のペプチドの放射性標識第１精製画分（第１ＨＰＬＣペプチドピーク）の局在を示唆する。図３６Ｂは、右側にマウスの冠状脳切片の白色光画像、左側に白色光画像に対応するオートラジオグラフィー画像を示す。オートグラフ画像中の１４Ｃシグナルは、ペプチド分布を同定し、ペプチド投与の後における、脳室およびＣＳＦなどの脳内の特定の構造への、配列番号５５のペプチドの第２精製画分（図３６ＡからのＨＰＬＣからの第２のＨＰＬＣペプチドピーク）の局在化を示唆する。オートグラフ画像中の１４Ｃシグナルは、ペプチド分布を同定し、配列番号５５のペプチドの第２の精製ピークの脳室およびＣＳＦなどの脳内の特定の構造への局在化を示唆する図４０は、右側に冠状脳切片の白色光画像、左側に白色光画像に対応するオートラジオグラフィー画像を示す。オートグラフ画像中の１４Ｃシグナルは、放射性標識配列番号３４投与の３時間後におけるペプチド分布を同定し、脳室およびＣＳＦなどの脳内の特定の構造へのペプチドの局在を示唆する。図４１は、右側に冠状脳切片の白色光画像、左側に白色光画像に対応するオートラジオグラフィー画像を示す。オートグラフ画像中の１４Ｃシグナルは、放射性標識配列番号８３投与の３時間後におけるペプチド分布を同定し、脳室およびＣＳＦなどの脳内の特定の構造へのペプチドの局在を示唆する。
【０２４８】
脳組織のＨＰＬＣ
脳組織のＨＰＬＣのために、採取した凍結脳を均質化して、ＰＢＳ中の１ｍＭトリスｐＨ８、１５０ｍＭのＮａＣｌ、１ｍＭのＥＤＴＡ、２５ｍＭのスクロース、およびプロテアーゼ阻害剤混合物からなる緩衝液中でタンパク質を単離した。各脳サンプルを５容積（ｗ：ｖ）の緩衝液に添加し、Ｑｉａｌｙｚｅｒ上の鋼ビーズを入れたロックした丸底の２ｍｌ管内で、２分間にわたり３０回／秒の頻度で均質化した。均質化サンプルは、ＴＯＭＹ  ＴＸ−１６０遠心分離機上で１６，０００ｒｐｍで３０分間、または卓上遠心分離機上で最高速度で３０分間、４℃において遠心分離し、可溶性上清を回収した。可溶性上清は、０．２ｕｍシリンジフィルターを通して濾過し、メタノールを使用してサンプルの通過後にフィルターをすすぐことで、ＨＰＬＣ分析のために調製した。濾過されたサンプルおよびメタノールを収集し、気体窒素を用いてブローダウン蒸発器上で乾燥させた。乾燥試料は、１２５μｌに再懸濁した。
【０２４９】
図３２Ａおよび図３２Ｂは、全脳ホモジネート中の１４Ｃ標識された配列番号５５のペプチドのＨＰＬＣ放射線写真を示す。図３２Ａは、粗脳ホモジネートにスパイクされて、シンチレーション検出器を装着した疎水性カラム上のＨＰＬＣ上で、アセトニトリル勾配および０．１％ＴＦＡを使用して泳動されたペプチドを示す。図３２Ｂは、放射性標識ペプチドの全身投与後における、３匹のマウスの脳のシンチレーションＨＰＬＣトレースを示す。したがって、非損傷の配列番号５５のペプチドが、ペプチドを静脈内投与されたマウスの脳に存在した。
【０２５０】
実施例１２
本開示のペプチドによる認知症の治療
本実施例は、本開示のペプチドによる認知症の治療を記載する。配列番号１〜配列番号１９６または配列番号２１０〜配列番号４０５のペプチドの１つまたは複数は、組換え発現されまたは化学合成される。任意選択的に、配列番号１〜配列番号１９６または配列番号２１０〜配列番号４０５のペプチドは、投与前にタウに結合するように変異する。ペプチドは、ヒトまたは動物に投与される。ペプチドは、血液脳関門を通過し、タウに特異的に結合して、様々な形態の認知症に関連する毒性タウ凝集物の蓄積を防止する。
【０２５１】
あるいは、配列番号１〜配列番号１９６または配列番号２１０〜配列番号４０５のペプチドの１つまたは複数が組換え発現されまたは化学的に合成されて、次に、タクリンにコンジュゲートされる。１つまたは複数のタクリン−ペプチドコンジュゲートが、ヒトまたは動物に投与される。配列番号１〜配列番号１９６または配列番号２１０〜配列番号４０５のペプチドのいずれか１つに対するタクリンのカップリングは、タクリンを脳内に標的化し、中枢神経系（ＣＮＳ）へのより多くの送達、そしてそれがそこで副作用を引き起こす末梢におけるより少ない送達を可能にする。
【０２５２】
実施例１３
本開示のペプチドコンジュゲートによる神経変性疾患の治療
本実施例は、ペプチドコンジュゲートによる神経変性疾患の治療を記載する。本開示のペプチドは、組換え的に発現されまたは化学的に合成されて、次に、多発性硬化症病変に対する前駆細胞の増殖または動員を調節して再ミエリン化を促進し得る、上皮成長因子（ＥＧＦ）などの成長因子に、コンジュゲートされる（または組換え的に発現および融合される）。配列番号１〜配列番号１９６または配列番号２１０〜配列番号４０５のいずれか１つのペプチドへの薬物のカップリングは、成長因子を脳内に標的化する。１つまたは複数の成長因子−ペプチドコンジュゲートが、ヒトまたは動物に投与される。
【０２５３】
さらに、本開示のペプチドは、組換え的に発現されまたは化学的に合成されて、次に、神経変性（ｎｅｕｒｏｇｅｎｅｒａｔｉｖｅ）疾患（例えば、アルツハイマー病）を治療するための、アセチルコリンエステラーゼ阻害剤（例えば、リバスチグミン（ｒｉｖａｓｔｉｇｉｍｉｎｅ））、ガランタミン、ドネペジル（ｄｏｎｚｅｐｉｌ）、タクリン（ｔａｃｒｉｎ）、または神経毒（例えば、サリン）などの治療用化合物にコンジュゲートされる。配列番号１〜配列番号１９６または配列番号２１０〜配列番号４０５のいずれか１つのペプチドへの薬物のカップリングは、治療用化合物を脳内に標的化する。１つまたは複数の治療用コンジュゲートが、ヒトまたは動物に投与される。
【０２５４】
実施例１４
本開示のペプチドの機能を変更する
本実施例は、ペプチドの機能の変更を説明する。本開示のペプチドは、１つまたは複数の残基で変異して、その活性が修飾される。このような修飾としては、特定のイオンチャネルへの結合の、特定のプロテアーゼの阻害の、または抗菌活性の獲得または喪失が挙げられる。修飾ペプチドは、組換え的に発現されまたは化学的に合成される。１つまたは複数の修飾されたペプチドは、ヒトまたは動物に投与される。修飾ペプチドは、治療薬として直接使用されてもよい。代案としては、修飾ペプチドは治療薬にコンジュゲートされて、治療薬を脳内に標的化する。
【０２５５】
実施例１５
本開示のペプチドによる神経変性疾患の治療
本実施例は、ペプチドによる神経変性疾患の治療を記載する。本開示のペプチドは、組換え的に発現されまたは化学的に合成されて、ヒトまたは動物に投与される。ペプチドはＢＢＢを通過して、カリウムナトリウムチャネル、塩化物チャネル、カルシウムチャネル、ニコチン性アセチルコリン受容体、一過性受容体潜在的なチャネル、ＮＭＤＡ受容体、セロトニン受容体、ＫＩＲチャネル、ＧＡＢＡチャネル、グリシン受容体、グルタミン酸受容体、酸感受性イオンチャネル、Ｋ２Ｐチャネル、Ｎａｖ１．７などのイオンチャネル、またはプリン作動性受容体を刺激しまたはそれと拮抗し、それによって治療効果を提供する。
【０２５６】
実施例１６
ペプチド投与後の全身オートラジオグラフィー
本実施例は、異なる用量の放射性標識ペプチドまたは放射性標識ペプチドコンジュゲートを投与された、メスハーラン胸腺欠損ヌードマウスの全身オートラジオグラフを示す。各マウスの腎臓は、非損傷のままであるか、または結紮してペプチドの腎臓濾過を妨げた。ペプチドまたはペプチドコンジュゲートは、リジンおよびＮ末端をメチル化することによって放射性標識されたので、実際の結合剤は、メチルまたはジメチルリジンおよびメチル化またはジメチル化アミノ末端を含有してもよい。放射性標識ペプチドは、放射性標識された配列番号５のペプチド、放射性標識された配列番号３５のペプチド、または放射性標識された配列番号３７のペプチドであった。放射性標識ペプチドコンジュゲートは、Ａｌｅｘａ  ６４７蛍光染料にコンジュゲートされた配列番号５を有する放射性標識ペプチド（配列番号５−ＲＡペプチドコンジュゲート）、ＭＭＡＥにコンジュゲートされた配列番号５を有する放射性標識ペプチド（配列番号５−ＲＺペプチドコンジュゲート）、またはＤＭ−１にコンジュゲートされた配列番号５を有する放射性標識ペプチド（配列番号５−ＲＹペプチドコンジュゲート）であった。配列番号５−ＲＡペプチドコンジュゲートは、ＮＨＳエステルを用いて、Ｎ末端またはリジンのどちらかの上の遊離アミンに、Ａｌｅｘａ６４７をコンジュゲートさせることによって作製した。配列番号５−ＲＺペプチドコンジュゲートは、ＮＨＳエステルを用いて、配列番号５ペプチドのＫアミノ酸残基に、バリン−シトルリン−ＰＡＢＣリンカーを有するＭＭＡＥをコンジュゲートさせることによって、構造（Ｉ）
【化２】
2018521994.tif 000018
の化合物に示されるように作製した。配列番号５−ＲＹペプチドコンジュゲートは、ＮＨＳエステルを用いて、配列番号５ペプチドのＫアミノ酸残基に、切断不能リンカーを有するＤＭ−１をコンジュゲートさせることによって、構造（ＩＩ）
【化３】
2018521994.tif 000019
の化合物に示されるように作製した。
メスハーラン胸腺欠損ヌードマウスに、２ｕＣｉの１４Ｃを保有する、９〜１４ナノモルの各ペプチドの標的用量を麻酔下で投与した。
【０２５７】
より具体的には、９ナノモルの配列番号５−ＲＡペプチドコンジュゲートの用量を、非損傷腎臓を有する４匹のマウスに投与した。１１ナノモルの配列番号５−ＲＺペプチドの用量を、非損傷腎臓を有する４匹のマウスに投与した。１２．８ナノモルの配列番号５ペプチドの用量を、非損傷腎臓を有する２匹のマウスに投与した。１４ナノモルの配列番号５−ＲＹペプチドコンジュゲートの用量を、非損傷腎臓を有する４匹のマウスに投与した。１００ナノモルの放射性標識配列番号３５ペプチドを、結紮腎臓を有する２匹のマウスおよび補損傷腎臓を有する２匹のマウスに投与した。１００ナノモルの放射性標識配列番号３７ペプチドを、結紮腎臓を有する２匹のマウスおよび補損傷腎臓を有する２匹のマウスに投与した。各ペプチドの標的用量を、メスハーラン胸腺欠損ヌードマウスに麻酔下で投与した。放射性標識配列番号５ペプチド、配列番号５−ＲＡペプチドコンジュゲート、配列番号５−ＲＺペプチドコンジュゲート、または配列番号５−ＲＹペプチドコンジュゲートを投与されたマウスは、ＲＨ−２８腫瘍を有するメスハーラン胸腺欠損マウスであった。各ペプチドは、動物を安楽死させて切片化する前に、動物内で自由に循環させた。９ナノモル用量の配列番号５−ＲＡペプチドコンジュゲートを投与した２匹のマウスは、ペプチド投与の３時間後に安楽死させた。９ナノモル用量の配列番号５−ＲＡペプチドコンジュゲートを投与した２匹のマウスは、ペプチド投与の２４時間後に安楽死させた。１１ナノモル用量の配列番号５−ＲＺペプチドコンジュゲートを投与した２匹のマウスは、ペプチド投与の３時間後に安楽死させた。１１ナノモル用量の配列番号５−ＲＺペプチドコンジュゲートを投与した２匹のマウスは、ペプチド投与の２４時間後に安楽死させた。１２．８ナノモル用量の放射性標識配列番号５−ＲＡペプチドを投与した２匹のマウスは、ペプチド投与の３時間後に安楽死させた。１４ナノモル用量の配列番号５−ＲＹペプチドコンジュゲートを投与した２匹のマウスは、ペプチド投与の３時間後に安楽死させた。１４ナノモル用量の配列番号５−ＲＹペプチドコンジュゲートを投与した２匹のマウスは、ペプチド投与の２４時間後に安楽死させた。１００ナノモル用量の放射性標識配列番号３５ペプチドを投与した４匹のマウスは、ペプチド投与の３時間後に安楽死させた。１００ナノモル用量の配列番号３７ペプチドを投与した４匹のマウスは、ペプチド投与の３時間後に安楽死させた。
【０２５８】
投与期間の終了時に、マウスをヘキサン／ドライアイス浴内で凍結し、次にカルボキシメチルセルロースのブロック中で凍結させた。動物全身の矢状切片を調製し、その結果、薄い凍結切片がイメージングに利用可能となった。動物の薄い凍結切片をミクロトームによって得て、冷凍庫内で乾燥させ、約１０日間ホスフォイメージャー（ｐｈｏｓｐｈｏｉｍａｇｅｒ）プレートに暴露した。
【０２５９】
これらのプレートを発色させて、各臓器からのシグナル（濃度計測）を、各動物の心臓の血液中に見られるシグナルに対して正規化した。その組織中の血液から予測されるシグナルよりも暗い、組織中のシグナルは、領域、組織、構造または細胞におけるペプチド蓄積を示唆する。
【０２６０】
図１３Ａは、９ナノモルの配列番号５−ＲＡペプチドコンジュゲートの投与の３時間後における、マウスの凍結切片の白色光画像を示す。図１３Ｂは、図１３Ａに対応するオートラジオグラフィー画像を示し、その中では１４Ｃシグナルが、９ナノモルの配列番号５−ＲＡペプチドコンジュゲート投与の３時間後における、ＲＨ−２８腫瘍を含むマウス組織中のペプチド分布を同定する。図１３Ｃは、９ナノモルの配列番号５−ＲＡペプチドコンジュゲート投与の３時間後における、図１３Ａおよび図１３Ｂと同じマウスの異なる凍結切片の白色光画像を示す。図１３Ｄは、図１３Ｃに対応するオートラジオグラフィー画像を示し、その中では１４Ｃシグナルが、９ナノモルの配列番号５−ＲＡペプチドコンジュゲート投与の３時間後における、ＲＨ−２８腫瘍を含む組織中のペプチド分布を同定する。図１３Ｅは、９ナノモルの配列番号５−ＲＡペプチドコンジュゲート投与の３時間後における、図１３Ａ〜図１３Ｄに示されるのとは異なるマウスの凍結切片の白色光画像を示す。図１３Ｆは、図１３Ｅに対応するオートラジオグラフィー画像を示し、その中では１４Ｃシグナルが、９ナノモルの配列番号５−ＲＡペプチドコンジュゲート投与の３時間後における、ＲＨ−２８腫瘍を含むマウス組織中のペプチド分布を同定する。図１３Ｇは、９ナノモルの配列番号５−ＲＡペプチドコンジュゲート投与の３時間後における、図１３Ｅおよび図１３Ｆと同じマウスの異なる凍結切片の白色光画像を示す。図１３Ｈは、図１３Ｇに対応するオートラジオグラフィー画像を示し、その中では１４Ｃシグナルが、９ナノモルの配列番号５−ＲＡペプチドコンジュゲート投与の３時間後における、ＲＨ−２８腫瘍を含む組織中のペプチド分布を同定する。
【０２６１】
図１４Ａは、９ナノモルの配列番号５−ＲＡペプチドコンジュゲート投与の２４時間後における、マウスの凍結切片の白色光画像を示す。図１４Ｂは、図１４Ａに対応するオートラジオグラフィー画像を示し、その中では１４Ｃシグナルが、９ナノモルの配列番号５−ＲＡペプチドコンジュゲート投与の２４時間後における、ＲＨ−２８腫瘍を含むマウス組織中のペプチド分布を同定する。図１４Ｃは、９ナノモルの配列番号５−ＲＡペプチドコンジュゲート投与の２４時間後における、図１４Ａおよび図１４Ｂと同じマウスの異なる凍結切片の白色光画像を示す。図１４Ｄは、図１４Ｃに対応するオートラジオグラフィー画像を示し、その中では１４Ｃシグナルが、９ナノモルの配列番号５−ＲＡペプチドコンジュゲート投与の２４時間後における、ＲＨ−２８腫瘍を含む組織中のペプチド分布を同定する。図１４Ｅは、９ナノモルの配列番号５−ＲＡペプチドコンジュゲート投与の２４時間後における、図１４Ａ〜図１４Ｄに示されるのとは異なるマウスの凍結切片の白色光画像を示す。図１４Ｆは、図１４Ｅに対応するオートラジオグラフィー画像を示し、その中では１４Ｃシグナルが、９ナノモルの配列番号５−ＲＡペプチドコンジュゲート投与の２４時間後における、ＲＨ−２８腫瘍を含むマウス組織中のペプチド分布を同定する。図１４Ｇは、９ナノモルの配列番号５−ＲＡペプチドコンジュゲート投与の２４時間後における、図１４Ｅおよび図１４Ｆと同じマウスの異なる凍結切片の白色光画像を示す。図１４Ｈは、図１４Ｇに対応するオートラジオグラフィー画像を示し、その中では１４Ｃシグナルが、９ナノモルの配列番号５−ＲＡペプチドコンジュゲート投与の２４時間後における、ＲＨ−２８腫瘍を含む組織中のペプチド分布を同定する。
【０２６２】
図１５Ａは、１１ナノモルの配列番号５−ＲＺペプチドコンジュゲートの投与の３時間後における、マウスの凍結切片の白色光画像を示す。図１５Ｂは、図１５Ａに対応するオートラジオグラフィー画像を示し、その中では１４Ｃシグナルが、１１ナノモルの配列番号５−ＲＺペプチドコンジュゲート投与の３時間後における、ＲＨ−２８腫瘍を含むマウス組織中のペプチド分布を同定する。図１５Ｃは、１１ナノモルの配列番号５−ＲＺペプチドコンジュゲート投与の３時間後における、図１５Ａおよび図１５Ｂと同じマウスの異なる凍結切片の白色光画像を示す。図１５Ｄは、図１５Ｃに対応するオートラジオグラフィー画像を示し、その中では１４Ｃシグナルが、１１ナノモルの配列番号５−ＲＺペプチドコンジュゲート投与の３時間後における、ＲＨ−２８腫瘍を含む組織中のペプチド分布を同定する。図１５Ｅは、１１ナノモルの配列番号５−ＲＺペプチドコンジュゲート投与の３時間後における、図１５Ａ〜図１５Ｄに示されるのとは異なるマウスの凍結切片の白色光画像を示す。図１５Ｆは、図１５Ｅに対応するオートラジオグラフィー画像を示し、その中では１４Ｃシグナルが、１１ナノモルの配列番号５−ＲＺペプチドコンジュゲート投与の３時間後における、ＲＨ−２８腫瘍を含むマウス組織中のペプチド分布を同定する。図１５Ｇは、１１ナノモルの配列番号５−ＲＺペプチドコンジュゲート投与の３時間後における、図１５Ｅおよび図１５Ｆと同じマウスの異なる凍結切片の白色光画像を示す。図１５Ｈは、図１５Ｇに対応するオートラジオグラフィー画像を示し、その中では１４Ｃシグナルが、１１ナノモルの配列番号５−ＲＺペプチドコンジュゲート投与の３時間後における、ＲＨ−２８腫瘍を含む組織中のペプチド分布を同定する。
【０２６３】
図１６Ａは、１１ナノモルの配列番号５−ＲＺペプチドコンジュゲート投与の２４時間後における、マウスの凍結切片の白色光画像を示す。図１６Ｂは、図１６Ａに対応するオートラジオグラフィー画像を示し、その中では１４Ｃシグナルが、１１ナノモルの配列番号５−ＲＺペプチドコンジュゲート投与の２４時間後における、ＲＨ−２８腫瘍を含むマウス組織中のペプチド分布を同定する。図１６Ｃは、１１ナノモルの配列番号５−ＲＺペプチドコンジュゲート投与の２４時間後における、図１６Ａおよび図１６Ｂと同じマウスの異なる凍結切片の白色光画像を示す。図１６Ｄは、図１６Ｃに対応するオートラジオグラフィー画像を示し、その中では１４Ｃシグナルが、１１ナノモルの配列番号５−ＲＺペプチドコンジュゲート投与の２４時間後における、ＲＨ−２８腫瘍を含む組織中のペプチド分布を同定する。図１６Ｅは、１１ナノモルの配列番号５−ＲＺペプチドコンジュゲート投与の２４時間後における、図１６Ａ〜図１６Ｄに示されるのとは異なるマウスの凍結切片の白色光画像を示す。図１６Ｆは、図１６Ｅに対応するオートラジオグラフィー画像を示し、その中では１４Ｃシグナルが、１１ナノモルの配列番号５−ＲＺペプチドコンジュゲートペプチド（ｐｅｐｔｉｄｅ  ｃｏｎｊｕｇａｔｅ  ｐｅｐｔｉｄｅ）投与の２４時間後における、ＲＨ−２８腫瘍を含むマウス組織中のペプチド分布を同定する。図１６Ｇは、１１ナノモルの配列番号５−ＲＺペプチドコンジュゲート投与の２４時間後における、図１６Ｅおよび図１６Ｆと同じマウスの異なる凍結切片の白色光画像を示す。図１６Ｈは、図１６Ｇに対応するオートラジオグラフィー画像を示し、その中では１４Ｃシグナルが、１１ナノモルの配列番号５−ＲＺペプチドコンジュゲート投与の２４時間後における、ＲＨ−２８腫瘍を含む組織中のペプチド分布を同定する。
【０２６４】
図１７Ａは、１２．８ナノモルの放射性標識配列番号５ペプチド投与の３時間後における、結索腎臓を有するマウスの凍結切片の白色光画像を示す。図１７Ｂは、図１７Ａに対応するオートラジオグラフィー画像を示し、その中では、１４Ｃシグナルが、１２．８ナノモルの放射性標識配列番号５ペプチド投与の３時間後における、ＲＨ−２８腫瘍を含むマウス組織に分布するペプチド分布を同定する。図１７Ｃは、１２．８ナノモルの放射性標識配列番号５ペプチド投与の３時間後における、図１７Ａおよび図１７Ｂと同じマウスの異なる凍結切片の白色光画像を示す。図１７Ｄは、図１７Ｃに対応するオートラジオグラフィー画像を示し、その中では、１４Ｃシグナルが、１２．８ナノモルの放射性標識配列番号５ペプチド投与の３時間後における、ＲＨ−２８腫瘍を含むマウス組織に分布するペプチド分布を同定する。図１７Ｅは、１２．８ナノモルの放射性標識配列番号５ペプチド投与の３時間後における、図１７Ａ〜図１７Ｄに示されるのと異なるマウスの凍結切片の白色光画像を示す。図１７Ｆは、図１７Ｅに対応するオートラジオグラフィー画像を示し、その中では、１４Ｃシグナルが、１２．８ナノモルの放射性標識配列番号５ペプチド投与の３時間後における、ＲＨ−２８腫瘍を含むマウス組織に分布するペプチド分布を同定する。図１７Ｇは、１２．８ナノモルの放射性標識配列番号５ペプチド投与の３時間後における、図１７Ｅおよび図１７Ｆと同じマウスの異なる凍結切片の白色光画像を示す。図１７Ｈは、図１７Ｇに対応するオートラジオグラフィー画像を示し、その中では、１４Ｃシグナルが、１２．８ナノモルの放射性標識配列番号５ペプチド投与の３時間後における、ＲＨ−２８腫瘍を含むマウス組織に分布するペプチド分布を同定する。
【０２６５】
図１８Ａは、１４ナノモルの配列番号５−ＲＹペプチドコンジュゲートの投与の３時間後における、マウスの凍結切片の白色光画像を示す。図１８Ｂは、図１８Ａに対応するオートラジオグラフィー画像を示し、その中では１４Ｃシグナルが、１４ナノモルの配列番号５−ＲＹペプチドコンジュゲート投与の３時間後における、ＲＨ−２８腫瘍を含むマウス組織中のペプチド分布を同定する。図１８Ｃは、１４ナノモルの配列番号５−ＲＹペプチドコンジュゲート投与の３時間後における、図１８Ａおよび図１８Ｂと同じマウスの異なる凍結切片の白色光画像を示す。図１８Ｄは、図１８Ｃに対応するオートラジオグラフィー画像を示し、その中では１４Ｃシグナルが、１４ナノモルの配列番号５−ＲＹペプチドコンジュゲート投与の３時間後における、ＲＨ−２８腫瘍を含む組織中のペプチド分布を同定する。図１８Ｅは、１４ナノモルの配列番号５−ＲＹペプチドコンジュゲート投与の３時間後における、図１８Ａ〜図１８Ｄに示されるのとは異なるマウスの凍結切片の白色光画像を示す。図１８Ｆは、図１８Ｅに対応するオートラジオグラフィー画像を示し、その中では１４Ｃシグナルが、１４ナノモルの配列番号５−ＲＹペプチドコンジュゲート投与の３時間後における、ＲＨ−２８腫瘍を含むマウス組織中のペプチド分布を同定する。図１８Ｇは、１４ナノモルの配列番号５−ＲＹペプチドコンジュゲート投与の３時間後における、図１８Ｅおよび図１８Ｆと同じマウスの異なる凍結切片の白色光画像を示す。図１８Ｈは、図１８Ｇに対応するオートラジオグラフィー画像を示し、その中では１４Ｃシグナルが、１４ナノモルの配列番号５−ＲＹペプチドコンジュゲート投与の３時間後における、ＲＨ−２８腫瘍を含む組織中のペプチド分布を同定する。
【０２６６】
図１９Ａは、１４ナノモルの配列番号５−ＲＹペプチドコンジュゲート投与の２４時間後における、マウスの凍結切片の白色光画像を示す。図１９Ｂは、図１９Ａに対応するオートラジオグラフィー画像を示し、その中では１４Ｃシグナルが、１４ナノモルの配列番号５−ＲＹペプチドコンジュゲート投与の２４時間後における、ＲＨ−２８腫瘍を含むマウス組織中のペプチド分布を同定する。図１９Ｃは、１４ナノモルの配列番号５−ＲＹペプチドコンジュゲート投与の２４時間後における、図１９Ａおよび図１９Ｂと同じマウスの異なる凍結切片の白色光画像を示す。図１９Ｄは、図１９Ｃに対応するオートラジオグラフィー画像を示し、その中では１４Ｃシグナルが、１４ナノモルの配列番号５−ＲＹペプチドコンジュゲート投与の２４時間後における、ＲＨ−２８腫瘍を含む組織中のペプチド分布を同定する。図１９Ｅは、１４ナノモルの配列番号５−ＲＹペプチドコンジュゲート投与の２４時間後における、図１９Ａ〜図１９Ｄに示されるのとは異なるマウスの凍結切片の白色光画像を示す。図１９Ｆは、図１９Ｅに対応するオートラジオグラフィー画像を示し、その中では１４Ｃシグナルが、１４ナノモルの配列番号５−ＲＹペプチドコンジュゲート投与の２４時間後における、ＲＨ−２８腫瘍を含むマウス組織中のペプチド分布を同定する。図１９Ｇは、１４ナノモルの配列番号５−ＲＹペプチドコンジュゲート投与の２４時間後における、図１９Ｅおよび図１９Ｆと同じマウスの異なる凍結切片の白色光画像を示す。図１９Ｈは、図１９Ｇに対応するオートラジオグラフィー画像を示し、その中では１４Ｃシグナルが、１４ナノモルの配列番号５−ＲＹペプチドコンジュゲート投与の２４時間後における、ＲＨ−２８腫瘍を含む組織中のペプチド分布を同定する。
【０２６７】
図２０Ａは、１００ナノモルの放射性標識配列番号３７ペプチド投与の３時間後における、非損傷腎臓を有するマウスの凍結切片の白色光画像を示す。図２０Ｂは、図２０Ａに対応するオートラジオグラフィー画像を示し、その中では、１４Ｃシグナルが、１００ナノモルの放射性標識配列番号３７ペプチド投与の３時間後における、非損傷腎臓を有するマウス組織に分布するペプチドを同定する。図２０Ｃは、１００ナノモルの放射性標識配列番号３７ペプチド投与の３時間後における、図２０Ａおよび図２０Ｂと同じマウスの異なる凍結切片の白色光画像を示す。図２０Ｄは、図２０Ｃに対応するオートラジオグラフィー画像を示し、その中では、１４Ｃシグナルが、１００ナノモルの放射性標識配列番号３７ペプチド投与の３時間後における、マウス組織に分布するペプチドを同定する。図２０Ｅは、１００ナノモルの放射性標識配列番号３７ペプチド投与の３時間後における、図２０Ａと同じマウスの異なる凍結切片の白色光画像を示す。図２０Ｆは、図２０Ｅに対応するオートラジオグラフィー画像を示し、その中では、１４Ｃシグナルが、１００ナノモルの放射性標識配列番号３７ペプチド投与の３時間後における、マウス組織に分布するペプチドを同定する。図２０Ｇは、１００ナノモルの放射性標識配列番号３７ペプチド投与の３時間後における、図２０Ａ〜図２０Ｆに示されるのと異なる非損傷腎臓を有するマウスの凍結切片の白色光画像を示す。図２０Ｈは、図２０Ｇに対応するオートラジオグラフィー画像を示し、その中では、１４Ｃシグナルが、１００ナノモルの放射性標識配列番号３７ペプチド投与の３時間後における、マウス組織に分布するペプチドを同定する。図２０Ｉは、１００ナノモルの放射性標識配列番号３７ペプチド投与の３時間後における、図２０Ｇおよび図２０Ｈと同じマウスの異なる凍結切片の白色光画像を示す。図２０Ｊは、図２０Ｉに対応するオートラジオグラフィー画像を示し、その中では、１４Ｃシグナルが、１００ナノモルの放射性標識配列番号３７ペプチド投与の３時間後における、組織に分布するペプチドを同定する。図２０Ｋは、１００ナノモルの放射性標識配列番号３７ペプチド投与の３時間後における、図２０Ｇ〜図２０Ｊと同じマウスの異なる凍結切片の白色光画像を示す。図２０Ｌは、図２０Ｋに対応するオートラジオグラフィー画像を示し、その中では、１４Ｃシグナルが、１００ナノモルの放射性標識配列番号３７ペプチド投与の３時間後における、組織に分布するペプチドを同定する。
【０２６８】
図２１Ａは、１００ナノモルの放射性標識配列番号３７ペプチド投与の３時間後における、結索腎臓を有するマウスの凍結切片の白色光画像を示す。図２１Ｂは、図２１Ａに対応するオートラジオグラフィー画像を示し、その中では、１４Ｃシグナルが、１００ナノモルの放射性標識配列番号３７ペプチド投与の３時間後における、非損傷腎臓を有するマウス組織に分布するペプチドを同定する。図２１Ｃは、１００ナノモルの放射性標識配列番号３７ペプチド投与の３時間後における、図２１Ａおよび図２１Ｂと同じマウスの異なる凍結切片の白色光画像を示す。図２１Ｄは、図２１Ｃに対応するオートラジオグラフィー画像を示し、その中では、１４Ｃシグナルが、１００ナノモルの放射性標識配列番号３７ペプチド投与の３時間後における、マウス組織に分布するペプチドを同定する。図２１Ｅは、１００ナノモルの放射性標識配列番号３７ペプチド投与の３時間後における、図２１Ａ〜図２１Ｄに示されるのと異なる、結紮腎臓を有するマウスの凍結切片の白色光画像を示す。図２１Ｆは、図２１Ｅに対応するオートラジオグラフィー画像を示し、その中では、１４Ｃシグナルが、１００ナノモルの放射性標識配列番号３７ペプチド投与の３時間後における、マウス組織に分布するペプチドを同定する。図２１Ｇは、１００ナノモルの放射性標識配列番号３７ペプチド投与の３時間後における、図２１Ｅおよび図２１Ｆと同じマウスの異なる凍結切片の白色光画像を示す。図２１Ｈは、図２１Ｇに対応するオートラジオグラフィー画像を示し、その中では、１４Ｃシグナルが、１００ナノモルの放射性標識配列番号３７ペプチド投与の３時間後における、組織に分布するペプチドを同定する。
【０２６９】
図２２Ａは、１００ナノモルの放射性標識配列番号３５ペプチド投与の３時間後における、非損傷腎臓を有するマウスの凍結切片の白色光画像を示す。図２２Ｂは、図２２Ａに対応するオートラジオグラフィー画像を示し、その中では、１４Ｃシグナルが、１００ナノモルの放射性標識配列番号３５ペプチド投与の３時間後における、非損傷腎臓を有するマウス組織に分布するペプチドを同定する。図２２Ｃは、１００ナノモルの放射性標識配列番号３５ペプチド投与の３時間後における、図２２Ａおよび図２２Ｂと同じマウスの異なる凍結切片の白色光画像を示す。図２２Ｄは、図２２Ｃに対応するオートラジオグラフィー画像を示し、その中では、１４Ｃシグナルが、１００ナノモルの放射性標識配列番号３５ペプチド投与の３時間後における、マウス組織に分布するペプチドを同定する。図２２Ｅは、１００ナノモルの放射性標識配列番号３５ペプチド投与の３時間後における、図２２Ａ〜図２２Ｄに示されるのと異なる、非損傷腎臓を有するマウスの凍結切片の白色光画像を示す。図２２Ｆは、図２２Ｅに対応するオートラジオグラフィー画像を示し、その中では、１４Ｃシグナルが、１００ナノモルの放射性標識配列番号３５ペプチド投与の３時間後における、マウス組織に分布するペプチドを同定する。図２２Ｇは、１００ナノモルの放射性標識配列番号３５ペプチド投与の３時間後における、図２２Ｅおよび図２２Ｆと同じマウスの異なる凍結切片の白色光画像を示す。図２２Ｈは、図２２Ｇに対応するオートラジオグラフィー画像を示し、その中では、１４Ｃシグナルが、１００ナノモルの放射性標識配列番号３５ペプチド投与の３時間後における、組織に分布するペプチドを同定する。
【０２７０】
図２３Ａは、１００ナノモルの放射性標識配列番号３５ペプチド投与の３時間後における、結索腎臓を有するマウスの凍結切片の白色光画像を示す。図２３Ｂは、図２３Ａに対応するオートラジオグラフィー画像を示し、その中では、１４Ｃシグナルが、１００ナノモルの放射性標識配列番号３５ペプチド投与の３時間後における、結索腎臓を有するマウス組織に分布するペプチドを同定する。図２３Ｃは、１００ナノモルの放射性標識配列番号３５ペプチド投与の３時間後における、図２３Ａおよび図２３Ｂと同じマウスの異なる凍結切片の白色光画像を示す。図２３Ｄは、図２３Ｃに対応するオートラジオグラフィー画像を示し、その中では、１４Ｃシグナルが、１００ナノモルの放射性標識配列番号３５ペプチド投与の３時間後における、マウス組織に分布するペプチドを同定する。図２３Ｅは、１００ナノモルの放射性標識配列番号３５ペプチド投与の３時間後における、図２３Ａ〜図２３Ｄに示されるのと異なる、結紮腎臓を有するマウスの凍結切片の白色光画像を示す。図２３Ｆは、図２３Ｅに対応するオートラジオグラフィー画像を示し、その中では、１４Ｃシグナルが、１００ナノモルの放射性標識配列番号３５ペプチド投与の３時間後における、マウス組織に分布するペプチドを同定する。図２３Ｇは、１００ナノモルの放射性標識配列番号３５ペプチド投与の３時間後における、図２３Ｅおよび図２３Ｆと同じマウスの異なる凍結切片の白色光画像を示す。図２３Ｈは、図２３Ｇに対応するオートラジオグラフィー画像を示し、その中では、１４Ｃシグナルが、１００ナノモルの放射性標識配列番号３５ペプチド投与の３時間後における、組織に分布するペプチドを同定する。これらの図は、薬物にコンジュゲートされたペプチドが、薬物を腫瘍組織に標的化し得ることを示す。
【０２７１】
実施例１７
投与後のペプチド半減期
本実施例は、投与後の配列番号５ペプチドの半減期の分析を記載する。マウス当たり、２ｕＣｉの１４Ｃを保有する、１２．８ナノモルの放射性標識配列番号５ペプチドの標的用量を静脈内投与した。ペプチドの投与の５分間、３０分間、１時間、２時間、４時間、８時間、および２４時間後に、半減期分析用血液を得るために心臓穿刺を行った。各時点からの血液を血漿に処理して、次に、液体シンチレーション計数によって１４Ｃについて分析し、放射性標識した配列番号５ペプチドの半減期を判定するために使用した。図２４は、放射性標識配列番号５ペプチドの半減期のグラフを示す。
【０２７２】
実施例１８
ユーイング肉腫へのペプチドの分布
本実施例は、Ａ７６３ユーイング肉腫を有する動物への投与後のペプチドの分布を示す。配列番号４、インペラトキシンＧＳＤＣＬＰＨＬＲＲＣＲＡＤＮＤＣＣＧＲＲＣＲＲＲＧＴＮＡＥＲＲＣＲ（配列番号４２１）、コノトキシンＣＶＩＣＧＳＣＲＧＲＧＱＳＣＳＲＬＭＹＤＣＣＴＧＳＣＳＲＲＧＲＣ（配列番号４２２）、または配列番号５４は、組換え的に発現されまたは化学的に合成されて、次に、ペプチドのＮ末端がＡｌｅｘｆｌｏｕｒ６４７（ＡＦ６４７）にコンジュゲートされて、それぞれ、配列番号４−Ａコンジュゲートペプチド（配列番号４−Ａペプチドコンジュゲート）、インペラトキシン−Ａコンジュゲートペプチド（インペラトキシン−Ａコンジュゲート）、コノトキシンＣＶＩＣ−Ａコンジュゲートペプチド（コノトキシン−Ａコンジュゲート）、または配列番号５４−Ａコンジュゲートペプチド（配列番号５４−Ａペプチドコンジュゲート）が作製される。
【０２７３】
１０ナノモルの各ペプチドコンジュゲートの標的用量を、側腹部Ａ６７３ユーイング肉腫腫瘍を有する別々のメスハーラン胸腺欠損ヌードマウスに麻酔下で投与した。各ペプチド−コンジュゲートは、動物を安楽死させる前に、４時間にわたり動物内で自由に循環させた。腫瘍、腎臓、肝臓、心臓、リンパ節、脳、脾臓、骨格筋、リンパ節、および肺を各動物から摘出し、ＩＶＩＳスペクトルを用いて画像化した。
【０２７４】
図２５Ａは、１０ナノモルの配列番号４−Ａペプチドコンジュゲートの投与後における、マウスから摘出されたユーイング肉腫腫瘍の近赤外蛍光画像を示す。図２５Ｂは、１０ナノモルの配列番号４−Ａペプチドコンジュゲートの投与後における、図２５Ａとは異なるマウスから摘出されたユーイング肉腫腫瘍の近赤外蛍光画像を示す。図２５Ｃは、１０ナノモルのインペラトキシン−Ａコンジュゲートの投与後における、マウスから摘出されたユーイング肉腫腫瘍の近赤外蛍光画像を示す。図２５Ｄは、１０ナノモルのインペラトキシン−Ａコンジュゲートの投与後における、図２５Ｃとは異なるマウスから摘出された、ユーイング肉腫腫瘍の近赤外蛍光画像を示す。図２５Ｅは、１０ナノモルのインペラトキシン−Ａコンジュゲートの投与後における、マウスから摘出されたユーイング肉腫腫瘍の近赤外蛍光画像を示す。図２５Ｆは、１０ナノモルの配列番号５４−Ａペプチドコンジュゲートの投与後における、マウスから摘出されたユーイング肉腫腫瘍の近赤外蛍光画像を示す。図２５Ｇは、陰性対照としていかなるペプチドも投与されていないマウスから摘出された、ユーイング肉腫腫瘍の近赤外蛍光画像を示す。組織の蛍光は、ペプチドコンジュゲートの存在を示す。
【０２７５】
図２６Ａは、１０ナノモルの配列番号４−Ａペプチドコンジュゲートの投与後における、マウスから摘出された腎臓の近赤外蛍光画像を示す。図２６Ｂは、１０ナノモルの配列番号４−Ａペプチドコンジュゲートの投与後における、図２６Ａとは異なるマウスから摘出された腎臓の近赤外蛍光画像を示す。図２６Ｃは、１０ナノモルのインペラトキシン−Ａコンジュゲートの投与後における、マウスから摘出された腎臓の近赤外蛍光画像を示す。図２６Ｄは、１０ナノモルのインペラトキシン−Ａコンジュゲートの投与後における、図２６Ｃとは異なるマウスから摘出された腎臓の近赤外蛍光画像を示す。図２６Ｅは、１０ナノモルのコノトキシン−Ａコンジュゲートの投与後における、マウスから摘出された腎臓の近赤外蛍光画像を示す。図２６Ｆは、１０ナノモルの配列番号５４−Ａペプチドコンジュゲートの投与後における、マウスから摘出された腎臓の近赤外蛍光画像を示す。図２６Ｇは、陰性対照としていかなるペプチドも投与されていないマウスから摘出された、腎臓の近赤外蛍光画像を示す。組織の蛍光は、ペプチドコンジュゲートの存在を示す。
【０２７６】
図２７Ａは、１０ナノモルの配列番号４−Ａペプチドコンジュゲートの投与後における、マウスから摘出された肝臓の近赤外蛍光画像を示す。図２７Ｂは、１０ナノモルの配列番号４−Ａペプチドコンジュゲートの投与後における、図２７Ａとは異なるマウスから摘出された肝臓の近赤外蛍光画像を示す。図２７Ｃは、１０ナノモルのインペラトキシン−Ａコンジュゲートの投与後における、マウスから摘出された肝臓の近赤外蛍光画像を示す。図２７Ｄは、１０ナノモルのインペラトキシン−Ａコンジュゲートの投与後における、図２７Ｃとは異なるマウスから摘出された肝臓の近赤外蛍光画像を示す。図２７Ｅは、１０ナノモルのコノトキシン−Ａコンジュゲートの投与後における、マウスから摘出された肝臓の近赤外蛍光画像を示す。図２７Ｆは、１０ナノモルの配列番号５４−Ａペプチドコンジュゲートの投与後における、マウスから摘出された肝臓の近赤外蛍光画像を示す。図２７Ｇは、陰性対照としていかなるペプチドも投与されていないマウスから摘出された、肝臓の近赤外蛍光画像を示す。組織の蛍光は、ペプチドコンジュゲートの存在を示す。
【０２７７】
図２８Ａは、１０ナノモルの配列番号５４−Ａペプチドコンジュゲートの投与後に摘出された、様々な組織の近赤外蛍光画像を示す。上段の左から右への組織は、腫瘍、腎臓、肝臓、心臓、および排液リンパ節である。下段の左から右への組織は、脳、脾臓、骨格筋、肺、側方リンパ節である。組織の蛍光は、ペプチドコンジュゲートの存在を示す。図２８Ｂは、１０ナノモルの配列番号５４−Ａペプチドコンジュゲートの投与後に摘出された、様々な組織の図２８Ａの近赤外蛍光画像を示すが、画像は腎臓なしで撮影された。上段の左から右への組織は、腫瘍、肝臓、心臓、および排液リンパ節である。下段の左から右への組織は、脳、脾臓、骨格筋、肺、側方リンパ節である。組織の蛍光は、ペプチドコンジュゲートの存在を示す。図２８Ｃは、陰性対照としていかなるペプチドも投与されていないマウスから摘出された、様々な組織の近赤外蛍光画像を示す。上段の左から右への組織は、腫瘍、腎臓、肝臓、および心臓である。下段の左から右への組織は、脳、脾臓、骨格筋、および肺である。組織の蛍光は、ペプチドコンジュゲートの存在を示す。
【０２７８】
図２９Ａは、１０ナノモルの配列番号５４−Ａペプチドコンジュゲートの投与の４時間後に安楽死させたマウスの体腔内の生体外近赤外線画像を示す。Ｌｖは肝臓の位置を示す。Ｔｍは腫瘍の位置を示す。Ｋｄは腎臓の位置を示す。Ｂｌは膀胱の位置を示す。組織蛍光は、配列番号５４−Ａペプチドコンジュゲートの存在を示す。図２９Ｂは、図２９Ａに示される、１０ナノモルの配列番号５４−Ａペプチドコンジュゲートの投与の４時間後に安楽死させたマウスの体腔内の生体外近赤外線画像を示すが、腎臓は除去されている。Ｌｖは肝臓の位置を示す。Ｔｍは腫瘍の位置を示す。Ｂｌは膀胱の位置を示す。Ｈｔは心臓の位置を示す。Ｌｇは肺の位置を示す。組織蛍光は、配列番号５４−Ａペプチドコンジュゲートの存在を示す。
【０２７９】
実施例１９
本開示のペプチドによるユーイング肉腫の治療
本実施例は、ユーイング肉腫を治療するための本明細書に記載のペプチドの使用を記載する。本開示のペプチドは、組換え的に発現されまたは化学的に合成されて、次に、直接、または切断可能または切断不能リンカーを介して、シクロホスファミド、ドキソルビシン、オーリスタチン（例えば、モノメチルオーリスタチンＥ（ＭＭＡＥ）、モノメチルオーリスタチンＦ（ＭＭＡＦ）、ドロスタチン、オーリスタチンＦ、ＭＭＡＤ）、メイタンシノイド（例えば、ＤＭ１、ＤＭ４、メイタンシン）、ピロロベンゾジアゼピン（ｐｙｒｒｏｌｏｂｅｎｚｏｄｉａｚａｐｉｎｅ）二量体、カリケアマイシン（例えば、Ｎ−アセチル−γ−カリケアマイシン）、ビンカアルカロイド（ａｌｋｙｌｏｉｄ）（例えば、４−デアセチルビンブラスチン）、デュオカルマイシン、キノコアマトキシンの環状ペプチド類似体、エポチロン、アントラサイクリン、ＣＣ−１０６５、タキサン（例えば、パクリタキセル、ドセタキセル、カバジタキセ）、ＳＮ−３８、イリノテカン、ビンクリスチン、ビンブラスチン、白金化合物（例えば、シスプラチン）、メトトレキサート、微小管阻害剤、イホスファミド、エトポシド、フェンレチニド、ＤＮＡ損傷剤、またはテニポシドなどの化学療法薬にコンジュゲートされる。配列番号１〜配列番号１９２または配列番号２１０〜配列番号４０１のいずれか１つのペプチドに対する化学療法薬のカップリングは、薬物をユーイング肉腫に標的化する。１つまたは複数の化学療法薬−ペプチドコンジュゲートが、ヒトまたは動物に投与される。
【０２８０】
実施例２０
本開示のペプチド−コンジュゲートによる神経膠芽腫の治療
本実施例は、神経膠芽腫を治療するための本明細書に記載のペプチドの使用を記載する。本開示のペプチドは、組換え的に発現されまたは化学的に合成されて、次に、直接、または切断可能または切断不能リンカーを介して、シクロホスファミド、ドキソルビシン、オーリスタチン（例えば、モノメチルオーリスタチンＥ（ＭＭＡＥ）、モノメチルオーリスタチンＦ（ＭＭＡＦ）、ドロスタチン、オーリスタチンＦ、ＭＭＡＤ）、メイタンシノイド（例えば、ＤＭ１、ＤＭ４、メイタンシン）、ピロロベンゾジアゼピン（ｐｙｒｒｏｌｏｂｅｎｚｏｄｉａｚａｐｉｎｅ）二量体、カリケアマイシン（例えば、Ｎ−アセチル−γ−カリケアマイシン）、ビンカアルカロイド（ａｌｋｙｌｏｉｄ）（例えば、４−デアセチルビンブラスチン）、デュオカルマイシン、キノコアマトキシンの環状ペプチド類似体、エポチロン、アントラサイクリン、ＣＣ−１０６５、タキサン（例えば、パクリタキセル、ドセタキセル、カバジタキセ）、ＳＮ−３８、イリノテカン、ビンクリスチン、ビンブラスチン、白金化合物（例えば、シスプラチン）、メトトレキサート、微小管阻害剤、テモゾロマイド、カルムスチン、トポテカン、放射性同位体、パルボシクリブ、ＤＮＡ損傷剤、またはテニポシドなどの化学療法薬にコンジュゲートされる。配列番号１〜配列番号１９６または配列番号２１０〜配列番号４０５のいずれか１つのペプチドに対する化学療法薬のカップリングは、薬物を神経膠芽腫に標的化する。１つまたは複数の化学療法薬−ペプチドコンジュゲートが、ヒトまたは動物に投与される。
【０２８１】
実施例２１
本開示のペプチド−コンジュゲートによるトリプルネガティブ乳がんの治療
本実施例は、トリプルネガティブ乳がんを治療するための本明細書に記載のペプチドの使用を記載する。本開示のペプチドは、組換え的に発現されまたは化学的に合成されて、次に、直接、または切断可能または切断不能リンカーを介して、シクロホスファミド、ドキソルビシン、オーリスタチン（例えば、モノメチルオーリスタチンＥ（ＭＭＡＥ）、モノメチルオーリスタチンＦ（ＭＭＡＦ）、ドロスタチン、オーリスタチンＦ、ＭＭＡＤ）、メイタンシノイド（例えば、ＤＭ１、ＤＭ４、メイタンシン）、ピロロベンゾジアゼピン（ｐｙｒｒｏｌｏｂｅｎｚｏｄｉａｚａｐｉｎｅ）二量体、カリケアマイシン（例えば、Ｎ−アセチル−γ−カリケアマイシン）、ビンカアルカロイド（ａｌｋｙｌｏｉｄ）（例えば、４−デアセチルビンブラスチン）、デュオカルマイシン、キノコアマトキシンの環状ペプチド類似体、エポチロン、アントラサイクリン、ＣＣ−１０６５、タキサン（例えば、パクリタキセル、ドセタキセル、カバジタキセ）、ＳＮ−３８、イリノテカン、ビンクリスチン、ビンブラスチン、白金化合物（例えば、シスプラチン）、メトトレキサート、微小管阻害剤、イニパリブ、カルボプラチン、ＤＮＡ損傷剤、またはテニポシドなどの化学療法薬にコンジュゲートされる。配列番号１〜配列番号１９２または配列番号２１０〜配列番号４０１のいずれか１つのペプチドに対する化学療法薬のカップリングは、薬物をトリプルネガティブ乳がんに標的化する。１つまたは複数の化学療法薬−ペプチドコンジュゲートが、ヒトまたは動物に投与される。
【０２８２】
実施例２２
検出可能薬剤とのペプチド投与
本実施例は、検出可能薬剤とのペプチド投与を記載する。本開示のペプチドは、組換え的に発現されまたは化学的に合成されて、次に、フルオロフォア、近赤外蛍光色素、造影剤、ナノ粒子、金属含有ナノ粒子、金属キレート、Ｘ線造影剤、ＰＥＴ薬剤、放射性同位体、または放射性核種キレート剤などの検出可能薬剤にコンジュゲートされる。１つまたは複数の検出可能薬剤−ペプチドコンジュゲートが、ヒトまたは動物に投与される。
【０２８３】
実施例２３
本開示のペプチド−コンジュゲートによる転移性結腸がんの治療
本実施例は、転移性大腸がんを治療するための本明細書に記載のペプチドの使用を記載する。本開示のペプチドは、組換え的に発現されまたは化学的に合成されて、次に、直接、または切断可能または切断不能リンカーを介して、シクロホスファミド、ドキソルビシン、オーリスタチン（例えば、モノメチルオーリスタチンＥ（ＭＭＡＥ）、モノメチルオーリスタチンＦ（ＭＭＡＦ）、ドロスタチン、オーリスタチンＦ、ＭＭＡＤ）、メイタンシノイド（例えば、ＤＭ１、ＤＭ４、メイタンシン）、ピロロベンゾジアゼピン（ｐｙｒｒｏｌｏｂｅｎｚｏｄｉａｚａｐｉｎｅ）二量体、カリケアマイシン（例えば、Ｎ−アセチル−γ−カリケアマイシン）、ビンカアルカロイド（ａｌｋｙｌｏｉｄ）（例えば、４−デアセチルビンブラスチン）、デュオカルマイシン、キノコアマトキシンの環状ペプチド類似体、エポチロン、アントラサイクリン、ＣＣ−１０６５、タキサン（例えば、パクリタキセル、ドセタキセル、カバジタキセ）、ＳＮ−３８、イリノテカン、ビンクリスチン、ビンブラスチン、白金化合物（例えば、シスプラチン）、メトトレキサート、微小管阻害剤、カペシタビン、フルオロウラシル、イリノテカン、オキサリプラチン、ＤＮＡ損傷剤、またはテニポシドなどの化学療法薬にコンジュゲートされる。配列番号１〜配列番号１９２または配列番号２１０〜配列番号４０１のいずれか１つのペプチドに対する化学療法薬のカップリングは、薬物を転移性結腸がんに標的化する。１つまたは複数の化学療法薬−ペプチドコンジュゲートが、ヒトまたは動物に投与される。
【０２８４】
実施例２４
変異ペプチドによる非脳がんの治療
本実施例は、非脳がんに使用される変異ペプチドを記載する。本開示のペプチドは変異する。この変異は、変異ペプチドが血液脳関門を通過することを妨げる。変異ペプチドは、組換え的に発現されまたは化学的に合成されて、次に、直接、または切断可能または切断不能リンカーを介して、シクロホスファミド、ドキソルビシン、オーリスタチン（例えば、モノメチルオーリスタチンＥ（ＭＭＡＥ）、モノメチルオーリスタチンＦ（ＭＭＡＦ）、ドロスタチン、オーリスタチンＦ、ＭＭＡＤ）、メイタンシノイド（例えば、ＤＭ１、ＤＭ４、メイタンシン）、ピロロベンゾジアゼピン（ｐｙｒｒｏｌｏｂｅｎｚｏｄｉａｚａｐｉｎｅ）二量体、カリケアマイシン（例えば、Ｎ−アセチル−γ−カリケアマイシン）、ビンカアルカロイド（ａｌｋｙｌｏｉｄ）（例えば、４−デアセチルビンブラスチン）、デュオカルマイシン、キノコアマトキシンの環状ペプチド類似体、エポチロン、アントラサイクリン、ＣＣ−１０６５、タキサン（例えば、パクリタキセル、ドセタキセル、カバジタキセ）、ＳＮ−３８、イリノテカン、ビンクリスチン、ビンブラスチン、白金化合物（例えば、シスプラチン）、メトトレキサート、微小管阻害剤、カペシタビン、フルオロウラシル、イリノテカン、オキサリプラチン、ＤＮＡ損傷剤、またはテニポシドなどの化学療法薬にコンジュゲートされた。配列番号１〜配列番号１９２または配列番号２１０〜配列番号４０１のいずれか１つの変異ペプチドに対する化学療法薬のカップリングは、薬物を非脳がんに標的化する。例えば、変異ペプチド薬物コンジュゲートは、トリプルネガティブ乳がんを標的とする。１つまたは複数の化学療法薬−ペプチドコンジュゲートが、ヒトまたは動物に投与される。
【０２８５】
実施例２５
ペプチド薬物コンジュゲートの半減期を変化させる方法
本実施例は、ペプチド薬物コンジュゲートの腫瘍への送達を改善し、腫瘍におけるペプチド薬物コンジュゲート曝露時間を増加させるために、ペプチド薬物コンジュゲートの半減期を増加させる４つの方法を記載する。
【０２８６】
第１の方法では、本開示のペプチドは、組換え的に発現されまたは化学的に合成され、次に、切断可能または切断不能リンカーを介して、シクロホスファミド、ドキソルビシン、ＭＭＡＥ、ＤＭ１、カリケアマイシン、タキソール、またはテニポシドなどの化学療法薬にコンジュゲートされる。さらに、ペプチド薬物コンジュゲートは、リンカー領域にコンジュゲートされた、脂肪酸（例えば、パルミチン酸）、炭化水素鎖またはポリマー（例えば、ポリエチレングリコール）などの部分を含む。配列番号１〜配列番号１９６または配列番号２１０〜配列番号４０５のいずれか１つのペプチドに対する化学療法薬のカップリングは、薬物を腫瘍に標的化する。１つまたは複数の化学療法薬−ペプチドコンジュゲートが、ヒトまたは動物に投与される。ペプチド薬物コンジュゲートの半減期は部分の添加によって増加し、ペプチド薬物コンジュゲートの腫瘍への送達が改善され、腫瘍を治療するための患者への投与後に、腫瘍におけるペプチド薬物曝露時間が増加する。例えば、Ａｌｅｘａ  ＭＭＡＥまたはタキソールにコンジュゲートされると、ペプチドの半減期は数分から数時間に増加する。
【０２８７】
第２の方法では、ペプチド薬物コンジュゲートの半減期は、ペプチドを変異させることによって変更される。配列番号１〜配列番号１９６または配列番号２１０〜配列番号４０５のいずれか１つのペプチドが変異して、アルブミン結合が増加する。変異ペプチドは、組換え的に発現されまたは化学的に合成されて、次に、直接、または切断可能または切断不能リンカーを介して、シクロホスファミド、ドキソルビシン、ＭＭＡＥ、ＤＭ１、カリケアマイシン、タキソール、またはテニポシドなどの化学療法薬にコンジュゲートされる。配列番号１〜配列番号１９６または配列番号２１０〜配列番号４０５のいずれか１つのペプチドに対する化学療法薬のカップリングは、薬物をがんに標的化する。１つまたは複数の化学療法薬−ペプチドコンジュゲートが、ヒトまたは動物に投与される。ペプチド薬物コンジュゲートの半減期はペプチドの変異によって増加し、それはペプチド薬物コンジュゲートの腫瘍への送達を改善し、腫瘍を治療するための患者への投与後におけるペプチド薬物曝露時間を増加させる。
【０２８８】
第３の方法では、ペプチド薬物コンジュゲートの半減期は、ペプチド薬物コンジュゲートに、親油性部分をさらにコンジュゲートさせることによって変更される。ペプチドは、組換え的に発現されまたは化学的に合成されて、次に、直接、または切断可能または切断不能リンカーを介して、シクロホスファミド、ドキソルビシン、ＭＭＡＥ、ＤＭ１、カリケアマイシン、タキソール、またはテニポシドなどの化学療法薬にコンジュゲートされる。ペプチド薬物コンジュゲートは、次に、直接、または切断可能または切断不能リンカーを介して、Ａｌｅｘａ  ６７９またはＣｙ５．５などの親油性部分にコンジュゲートされる。配列番号１〜配列番号１９６または配列番号２１０〜配列番号４０５のいずれか１つのペプチドに対する化学療法薬のカップリングは、薬物をがんに標的化する。１つまたは複数の化学療法薬−ペプチドコンジュゲートが、ヒトまたは動物に投与される。ペプチド薬物コンジュゲートの半減期は、親油性部分への結合によって増加し、それはペプチド薬物コンジュゲートの腫瘍への送達を改善し、腫瘍を治療するための患者への投与後におけるペプチド薬物曝露時間を増加させる。例えば、Ａｌｅｘａ６７９またはＣｙ５．５にコンジュゲートされると、ペプチド薬物コンジュゲートの半減期は増加する。
【０２８９】
第４の方法では、ペプチド薬物コンジュゲートの半減期は、ペプチド薬物コンジュゲートに、抗体のＦｃ部分をさらにコンジュゲートさせることによって変更される。ペプチドは、組換え的に発現されまたは化学的に合成されて、次に、直接、または切断可能または切断不能リンカーを介して、シクロホスファミド、ドキソルビシン、またはテニポシドなどの化学療法薬にコンジュゲートされる。ペプチド薬物コンジュゲートは、次に、直接、または切断可能または切断不能リンカーを介して、抗体のＦｃ部分にコンジュゲートされる。配列番号１〜配列番号１９６または配列番号２１０〜配列番号４０５のいずれか１つのペプチドに対する化学療法薬のカップリングは、薬物をがんに標的化する。１つまたは複数の化学療法薬−ペプチドコンジュゲートが、ヒトまたは動物に投与される。ペプチド薬物コンジュゲートの半減期は、抗体のＦｃ部分への結合によって増加し、それはペプチド薬物コンジュゲートの腫瘍への送達を改善し、腫瘍を治療するための患者への投与後におけるペプチド薬物曝露時間を増加させる。例えば、抗体のＦｃ部分にコンジュゲートされると、ペプチド薬物コンジュゲートの半減期は数日に増加する。
【０２９０】
実施例２６
ペプチドの複数の部位への薬物のコンジュゲーション
この実施例は、少なくとも３つのリジン残基を含有するペプチド上の複数の部位での薬物のコンジュゲーションを記載する。少なくとも３つのリジン残基を有する本開示のペプチドは、組換え的に発現されまたは化学的に合成されて、次に、４異なる部位でペプチドに４つの化学療法薬分子が別々にコンジュゲートされる。これらの部位は、異なるリジンであり、ペプチドのＮ末端である。
【０２９１】
実施例２７
複数の薬物分子のペプチドへのコンジュゲーション
本実施例は、複数の薬物分子のペプチドへのコンジュゲーションを記載する。４つの化学療法薬分子は、分枝またはポリマー骨格に付着される。本開示のペプチドは、組換え的に発現されまたは化学的に合成され、次に、化学療法薬の４つの分子を含有する分岐またはポリマー骨格が、ペプチドにコンジュゲートされる。ペプチドは、配列番号１〜配列番号１９６または配列番号２１０〜配列番号４０５のいずれか１つである。
【０２９２】
実施例２８
本開示のペプチドコンジュゲート中のリンカー
本実施例は、化学療法薬をペプチドに結合させるための切断可能リンカーまたは切断不能リンカーの使用を記載する。本開示のペプチドは、組換え的に発現されまたは化学的に合成されて、次に、エステルを介して、化学療法薬にコンジュゲートされる。このリンカーは切断可能リンカーであり、時間経過に伴うエステル加水分解または血清および細胞エステラーゼによる切断に際して、化学療法薬はペプチドコンジュゲートから遊離される。さらに、本開示のペプチドは、組換え的に発現されまたは化学的に合成されて、次に、バリン−シトルリンカテプシンＢ切断可能リンカーによって、ＭＭＡＥにコンジュゲートされる。代案としては、本開示のペプチドは、組換え的に発現されまたは化学的に合成されて、次に、マレイミドリンカーを介して化学療法薬にコンジュゲートされる。このリンカーは、切断不能リンカーである。化学療法薬は、血清アルブミン上で遊離チオールへの交換を通じて、リンカーによって緩慢に遊離される。さらに、本開示のペプチドは、組換え的に発現されまたは化学的に合成されて、次に、ＮＨＳエステルを介して化学療法薬にコンジュゲートされ、切断不能リンカーを生じるアミドが生成する。
【０２９３】
実施例２９
ペプチドコンジュゲートおよび放射線療法の同時投与
本実施例は、本明細書に記載のペプチドおよび放射線療法と腫瘍への同時投与を記載する。本開示のペプチドは、組換え的に発現されまたは化学的に合成されて、次に、直接、または切断可能または切断不能リンカーを介して、化学療法薬にコンジュゲートされる。配列番号１〜配列番号１９６または配列番号２１０〜配列番号４０５のいずれか１つのペプチドに対する化学療法薬のカップリングは、薬物を腫瘍に標的化する。１つまたは複数の化学療法薬−ペプチドコンジュゲートが、ヒトまたは動物に投与されながら、ヒトまたは動物はまた、腫瘍を標的とする放射線療法によっても治療される。
【０２９４】
実施例３０
ペプチドの腫瘍へのホーミング
この実施例は、ペプチドの腫瘍へのホーミングを記載する。本開示のペプチドを水性条件下で、シアニン５．５（Ｃｙ５．５）ＮＨＳエステル近赤外フルオロフォアで標識した。本開示のペプチドを５０ｍＭ炭酸水素ナトリウム、ｐＨ８．３の中に２ｍｇ／ｍＬで溶解した。Ｃｙ５．５  ＮＨＳエステルを無水ジメチルスルホキシドに１０ｍｇ／ｍＬで溶解した。およそ０．１モル濃度当量の色素を完全に混合しながら、１０分間隔で水性ペプチド溶液に添加した。２１４および６７８ｎｍでモニターされる分析ＨＰＬＣを用いて、反応の完了を評価した。ひとたび完了したら、モノ標識生成物をセミ分取ＨＰＬＣを用いて精製した。単一のＣｙ５．５コンジュゲート生成物の存在を質量分析によって確認した。
【０２９５】
各用量のペプチドを体重２０ｇ〜２５ｇのメスハーラン胸腺欠損ヌードマウスに、尾静脈注射（ペプチド当たりｎ＝３マウス）によって投与した。
【０２９６】
各ペプチドは、色素上の活性ＮＨＳエステルを介して、Ｎ末端でＣｙ５．５または反応性リジンに化学的にコンジュゲートされた。１つのフルオロフォア分子を保有する１０ナノモルの各ペプチドの用量を、腫瘍を有するメスハーラン胸腺欠損ヌードマウスに投与した。得られた蛍光は、溶液の蛍光に基づいて正規化した。腫瘍は、Ｃｏｌｏ２０５（ヒト結腸がん細胞株）、ＭＤＡ−ＭＢ２３１（トリプルネガティブヒト乳がん細胞株）またはＵ８７（ヒト神経膠腫細胞株）のいずれかの皮下異種移植片であり、これらをマウスの側腹部に移植した。各ペプチドおよび各対照は、動物を安楽死させる前に、動物内で自由に循環させた。
【０２９７】
２４時間の投与期間終了時に、ＣＯ２窒息によりマウスを安楽死させた。血液、腫瘍、筋肉、腎臓、肝臓、脾臓および結腸組織を採取し、氷上のＰＢＳに入れた。次に、７００ｎｍチャネル、２１ミクロン分解能、および自動強度設定を用いて、Ｏｄｙｓｓｅｙ  ＣＬｘスキャナー（ＬＩ−ＣＯＲ）上で、組織をスキャンした。目的領域（ＲＯＩ）内のシグナル強度は、Ｉｍａｇｅ  Ｓｔｕｄｉｏソフトウェアバージョン５．２（ＬＩ−ＣＯＲ）を用いて測定した。全てのＲＯＩは同一サイズであった。
【０２９８】
表５は、Ｃｏｌｏ２０５腫瘍を有するメスハーラン胸腺欠損マウスに由来する、配列番号２５、配列番号３２、配列番号１７、配列番号６、配列番号３７、配列番号３５、または配列番号３６のＣｙ５．５標識ペプチドの全臓器近赤外線蛍光定量化データ三重反復試験を列挙する。表５中の各列は、１匹のマウスからのデータを表す（各組織のシグナルは、組織あたり３つのＲＯＩにわたって平均化される）。
【０２９９】
【表１５】
2018521994.tif 000020
【０３００】
表６は、ＭＤＡ−ＭＢ２３１腫瘍を有するメスハーラン胸腺欠損マウスに由来する、配列番号２５、配列番号３２、配列番号１７、配列番号６、配列番号３７、配列番号３５、または配列番号３６のＣｙ５．５標識ペプチドの全臓器蛍光定量化データを列挙する。表６中の各列は、１匹のマウスからのデータを表す（各組織のシグナルは、組織あたり３つのＲＯＩにわたって平均化される）。
【０３０１】
【表１６】
2018521994.tif 000021
【０３０２】
表７は、Ｕ８７腫瘍を有するメスハーラン胸腺欠損マウスに由来する、Ｃｙ５．５にコンジュゲートされた、配列番号２５、配列番号３２、配列番号１７、配列番号６、配列番号３７、配列番号３５または配列番号３６のペプチドの全臓器蛍光定量化データを列挙する。表７中の各列は、１匹のマウスからのデータを表す（各組織のシグナルは、組織あたり３つのＲＯＩにわたって平均化される）。
【０３０３】
【表１７】
2018521994.tif 000022
【０３０４】
図４２は、Ｃｏｌｏ２０５腫瘍（左上）、結腸（中央上）、肝臓（右上）、脳（中央左）、脾臓（中央右）、筋肉（左下）、皮膚（中央下）、および腎臓（右下）の近赤外蛍光画像を示し、Ｃｏｌｏ２０５腫瘍を有するメスハーラン胸腺欠損マウスに投与された後のＣｙ５．５にコンジュゲートした配列番号３７のペプチドの分布が示される。図４３は、ＭＤＡ−ＭＢ−２３１腫瘍（左上）、結腸（中央上）、肝臓（右上）、脳（中央左）、脾臓（中央右）、筋肉（左下）、皮膚（中央下）、および腎臓（右下）の近赤外蛍光画像を示し、ＭＤＡ−ＭＢ−２３１腫瘍を有するメスハーラン胸腺欠損マウスに投与された後のＣｙ５．５にコンジュゲートした配列番号３７のペプチドの分布が示される。図４４は、Ｕ８７腫瘍（左上）、結腸（中央上）、肝臓（右上）、脳（中央左）、脾臓（中央右）、筋肉（左下）、皮膚（中央下）、および腎臓（右下）の近赤外蛍光画像を示し、Ｕ８７腫瘍を有するメスハーラン胸腺欠損マウスに投与された後のＣｙ５．５にコンジュゲートした配列番号３７のペプチドの分布が示される。
【０３０５】
各腫瘍において、配列番号２５、配列番号３２、配列番号１７、配列番号６、配列番号３７、配列番号３５、および配列番号３６のペプチドが検出され、２以上の腫瘍／筋肉比を有し、これはそれぞれのペプチドが複数の腫瘍型にホーミングし得ることを示唆する。肝臓、脾臓、および結腸のようなその他の臓器がペプチドの潜在的な除去経路であることから、腫瘍／筋肉は、腫瘍へのホーミングを評価するために使用され得る比率である。
【０３０６】
配列番号２５、配列番号３２、配列番号１７、および配列番号６のペプチドは、それぞれ単一のリシン残基を有し、それはＣｙ５．５色素とのコンジュゲーションが、リジン残基でおよび／またはＮ末端で、起こったかもしれないことを示唆する。配列番号３７、配列番号３５、および配列番号３６のペプチドは、変異したリジン残基を除いて、リジン残基を有さず、配列番号２５、配列番号３２、および配列番号１７のペプチドと同一であり、それはＣｙ５．５色素とのコンジュゲーションが、配列番号３７、配列番号３５、および配列番号３６のＮ末端で起こったかもしれないことを示唆する。配列番号２５、配列番号３２、配列番号１７、配列番号６、配列番号３７、配列番号３５、および配列番号３６の全てのペプチドが腫瘍において検出されたことから、内部リジン残基およびＮ末端位置の双方が、細胞毒性分子のがん治療用ペプチドへの付着などによる、修飾およびコンジュゲーションのための許容できる部位であることが示唆される。さらに、配列番号３５〜配列番号３７は、一般に、配列番号１７、配列番号２５、および配列番号３２よりも高い腫瘍ホーミングを示し、それは、腫瘍ホーミングのために、Ｎ末端へのコンジュゲーションが有利であってもよいことを示唆する。その結果、配列番号１７、配列番号２５、および配列番号３２中のリジンの変異は、それらの腫瘍ホーミング能力を増強することが示され、それは、Ｎ末端が、一般的に活性薬剤のコンジュゲーションのための好ましい位置であり得ることを提案する。
【０３０７】
実施例３１
改善されたペプチド変異型を判定する方法
本実施例は、スキャフォールドペプチドの一次配列および三次構造を比較および分析することによって、ペプチド変異型を改善する方法を判定する方法を示す。配列番号２ペプチドおよび配列番号３の一次配列および三次構造を比較した。これらのペプチドはどちらも、セラホトキシンファミリー由来であり、ＢＢＢ透過体であると考えられている。この方法を用いて、セラホトキシンファミリーのその他のメンバー上に潜在的にグラフトされて、そのファミリーの非ＢＢＢ透過メンバーをＢＢＢ透過体にすることができる、配列番号２または配列番号３の配列の部分を同定した。
【０３０８】
図４５は、配列番号３と整列させた配列番号２の配列をループ位置のアノテーションと共に示し、配列番号２の構造を左に、配列番号の３構造を右に、それらの対応する３Ｄ構造を示す。２つのスキャフォールドの配列アラインメントを用いて、タンパク質−タンパク質結合相互作用およびＢＢＢ透過に重要であり得る、芳香族ファルマコフォアを同定した。配列番号２および配列番号３の配列および３Ｄ立体配座の検査に基づいて、配列番号２のＦ５、Ｆ３２、およびＦ３４残基、ならびにＷ５、Ｗ３０、およびＷ３２残基は、これらのペプチドのＢＢＢ透過特性にとって重要な残基であってもよい。さらに、配列番号２のＷ６および配列番号３のＷ２７もまた、ＢＢＢ透過にとって重要な残基であってもよい。この比較はまた、配列番号２および配列番号３の双方が、典型的なノッチンよりもはるかに高い芳香族残基百分率をその配列中に有し、したがって、これらのペプチドのＢＢＢ浸透特性にとって、潜在的に重要であり得ることを示した。さらに、構造的相同性の比較は、改善された折り畳み特性を有する変異型の設計をもたらした。例えば、必須のβ−ヘアピンを形成するループ（ループ４）の変異が変異型中に作られて、折り畳みを改善し、ループ（ループ１〜４）のいずれかの特定の変異は、変異型の挙動および活性に劇的な効果を有することが示された。比較はまた、配列番号３がより短いループを有して発現中の折り畳みがあまり良好でないことから、配列番号２ループ２のより長い長さが、折り畳みにとって重要であり得ることを示した。
【０３０９】
さらに、一次配列および構造誘導相同性を用いて、配列番号１のペプチドおよび配列番号４のペプチドを比較した。これらのペプチドはクロロトキシンファミリーに由来し、クロロトキシンファミリーのメンバーまたは類似体は、ＢＢＢ透過体であってもよい。
【０３１０】
図４６は、配列番号１の折り畳みおよび安定性にとって重要な位置を同定するために用いられた、アノテートされたループ部位と共に、配列番号１および配列番号４の配列アラインメントを示す。例えば、Ｃ末端に追加的な残基を付加することで、スキャフォールドの安定性を劇的に変化させ得る。その結果、配列番号１のＣ末端Ｃｙｓ残基の後に付加された追加的な残基を有する作られた変異体は、配列番号１よりもより良好に折り畳まれた。しかし、付加された残基のアイデンティティーは重要であった。付加されたＡｒｇを有する変異体は、あまり好ましくなかったが、これは、良好に折り畳まれたＡｓｎと比較した酵素的クリッピングに起因してもよい。さらに、ループ２の長さは、異なる長さでの折り畳みを許容することが示され、ループ２が、製造可能性および安定性を改善するために、または新たな生物学的活性を導入するために改変され得ることが示唆された。
【０３１１】
実施例３２
相同体の分析および変異型の設計
本実施例は、相同体の分析および変異型の設計を記載する。配列番号１、配列番号２、配列番号３、および配列番号５５のペプチドの相同体をＵｎｉｐｒｏｔデータベースから同定した。次に、これらのペプチドのいくつかを実施例１の方法を用いて発現させ、Ｎ−末端にＧＳアミノ酸を付加して発現させた。変異型の構造分析、配列アラインメント、および／または発現試験または文献から集められた情報を用いて、配列番号１、配列番号２、配列番号３、および配列番号５５のペプチドの変異体が設計され、発現された。
【０３１２】
配列番号１のペプチドの相同体の例示的な配列は、配列番号８５〜配列番号１１０のペプチドであった。配列番号１のペプチドの設計された変異型の例示的な配列は、配列番号１１１〜配列番号１３３のペプチドであった。
【０３１３】
配列番号２のペプチドの相同体の例示的な配列は、配列番号１３４〜配列番号１３８のペプチドであった。配列番号２のペプチドの設計された変異型の例示的な配列は、配列番号１３９〜配列番号１６２のペプチドであった。
【０３１４】
配列番号３のペプチドの相同体の例示的な配列は、配列番号１６３〜配列番号１６８のペプチドであった。配列番号３のペプチドの設計された変異型の例示的な配列は、配列番号１６９〜配列番号１９２のペプチドであった。
【０３１５】
配列番号５５のペプチドの相同体の例示的配列は、配列番号５６〜配列番号６３、配列番号６５〜配列番号７０、配列番号７１〜配列番号７２、配列番号７４〜配列番号７９のペプチドであった。配列番号５５のペプチドの設計された変異型の例示的な配列は、配列番号８３および配列番号８４のペプチドであった。
【０３１６】
実施例３３
ペプチド−ニューロテンシンペプチド融合体
本実施例は、ペプチド−ニューロテンシンペプチド融合体を記載する。ニューロテンシンは、１３アミノ酸の神経ペプチドＥＬＹＥＮＫＰＲＲＰＹＩＬ（配列番号４２０）であり、これは黄体形成ホルモンおよびプロラクチン放出の調節に関与し、ドーパミン作動系との有意な相互作用を有する。
【０３１７】
ニューロテンシンペプチドを配列番号８３、配列番号３７、および配列番号９８のペプチドと融合させ、実施例１の方法を用いて発現させて、配列番号１９３〜配列番号１９６のペプチドを得た。ニューロテンシンペプチドはまた、ＧＳＳ−ハドルカルシンＥＫＤＣＩＫＨＬＱＲＣＲＥＮＫＤＣＣＳＫＫＣＳＲＲＧＴＮＰＥＫＲＣＲ（配列番号４２３）とも融合させて、配列番号１９７のペプチドを得た。
【０３１８】
実施例３４
ペプチド−ニューロテンシンペプチド融合体
本実施例は、ペプチド−ニューロテンシンペプチド融合物を使用する方法を記載する。ニューロテンシンペプチドは、血液脳関門を通過しないが、その代わりに中枢神経系内で産生されてシグナル伝達する。そのため、ニューロテンシンペプチドは、血液脳関門を通過し得る本明細書に記載のペプチドに融合される。配列番号１９３〜配列番号１９６のペプチド−ニューロテンシンペプチド融合物が発現され、それを必要とする対象に投与される。投与後、配列番号１９３〜配列番号１９６のペプチド−ニューロテンシンペプチド融合物は、対象の血液脳関門を通過して、疼痛またはその他のニューロテンシン欠乏の適応症が治療される。対象は、ヒトであり得る。
【０３１９】
実施例３５
ペプチドの生体内分布
本実施例は、ペプチドの生体内分布を記載する。投与期間の終了時に、マウスをヘキサン／ドライアイス浴内で凍結し、次にカルボキシメチルセルロースのブロック中で凍結させた。脳、腫瘍、肝臓、腎臓、肺、心臓、脾臓、膵臓、筋肉、脂肪、胆嚢、上部胃腸管、下部胃腸管、骨、骨髄、生殖路、眼、胃、脊髄、膀胱、唾液腺、およびその他の各種組織を含む動物全身の矢状切片の薄い凍結切片をミクロトームによって得て、冷凍庫内で乾燥させて（ｄｅｓｓｉｃａｔｅ）、約１０日間にわたりホスフォイメージャー（ｐｈｏｓｐｈｏｉｍａｇｅｒ）プレートに曝露させた。
【０３２０】
これらのプレートを発色させて、各臓器からのシグナル（濃度計測）を、各動物の心臓の血液中に見られるシグナルに対して正規化した。その組織中の血液から予測されるシグナルよりも暗い、組織中のシグナルは、領域、組織、構造または細胞における蓄積を示唆する。
【０３２１】
表８は、各ペプチドの肝臓および肺への移動の概要を列挙する。肝臓または肺の数値は、心臓の血液中で検出されたシグナルと比較した、その組織中のシグナルの百分率を示す。
【０３２２】
【表１８】
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【０３２３】
表９は、脾臓、膵臓、筋肉、脂肪組織、胆嚢、上部胃腸管、および下部消化管への各ペプチドの移動の概要を列挙する。
【０３２４】
【表１９】
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【０３２５】
表１０は、各動物の生殖管、皮膚、および唾液腺への各ペプチドの移動の概要を列挙する。生殖路、皮膚または唾液腺の数字は、心臓の血液中で検出されたシグナルと比較した、その組織中のシグナルの百分率を示す。
【０３２６】
【表２０】
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【０３２７】
表１１は、各ペプチドの各動物の脊髄および膀胱への移動の概要を列挙する。高、中、低は、血液中の領域当たりの放射能シグナルと、組織中の放射能シグナルとの比較を示す。不検出は、ペプチドがその組織において検出されなかったことを示す。
【０３２８】
【表２１】
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【０３２９】
本発明の好ましい実施形態が本明細書に示され説明されたが、このような実施形態は単なる例示として提供されることが当業者には明らかであろう。本発明は、本明細書で提供される特定の実施例によって制限されることは意図されない。本発明を前述の明細書を参照して説明したが、本明細書の実施形態の説明および図解が、限定的意味で解釈されることは意図されない。本発明から逸脱することなく、当業者には多数の変動、変更、および置換が可能である。さらに、本発明の全ての態様は、様々な条件および変数に依存する、本明細書に記載の特定の描写、構成または相対比率に限定されないものと理解すべきである。本明細書に記載された本発明の実施形態に対する様々な代替物が、本発明の実施において用いられてもよいものと理解すべきである。したがって、本発明はまた、このような代替物、修正、変種、または同等物も網羅することが想定される。以下の特許請求の範囲は本発明の範囲を定義し、これらの特許請求の範囲内の方法および構造およびそれらの同等物が、それによってカバーされることが意図される。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１Ａ−Ｂ】
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【図１１Ｃ−Ｄ】
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【図１１Ｅ】
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【図１２Ａ−Ｂ】
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【図１２Ｃ】
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【図１２Ｄ】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７】
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【図１８】
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【図１９】
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【図２０Ａ−Ｆ】
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【図２０Ｇ−Ｌ】
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【図２１】
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【図２２】
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【図２３】
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【図２４】
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【図２５】
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【図２６】
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【図２７】
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【図２８Ａ−Ｂ】
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【図２８Ｃ】
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【図２９】
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【図３０】
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【図３１】
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【図３２】
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【図３３】
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【図３４】
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【図３５】
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【図３６】
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【図３７】
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【図３８】
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【図３９】
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【図４０】
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【図４１】
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【図４２】
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【図４３】
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【図４４】
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【図４５】
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【図４６】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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