(57)【要約】  本発明は、ヒト患者から得られたサンプル中のＤＰＰ−４レベルの検出および測定のためのロバストな、高感度かつ特異的なアッセイを提供する。本発明はさらに、ヒトＤＰＰ−４を認識する新規な抗ＤＰＰ−４モノクローナル抗体、およびこれらの抗体の１以上を含むアッセイキットを提供する。
2018502577.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
寄託番号ＰＴＡ−１２１８７０として米国培養細胞系統保存機関（ＡＴＣＣ）に寄託されたハイブリドーマから産生されるマウスモノクローナル抗体ｍ３Ｂ７．６、寄託番号ＰＴＡ−１２１８７１としてＡＴＣＣに寄託されたハイブリドーマから産生されるマウスモノクローナル抗体ｍ５Ｂ７．７、寄託番号ＰＴＡ−１２１８７２としてＡＴＣＣに寄託されたハイブリドーマから産生されるラットモノクローナル抗体Ｒ１１Ａ２．１５、または寄託番号ＰＴＡ−１２１８７３としてＡＴＣＣに寄託されたハイブリドーマから産生されるラットモノクローナル抗体Ｒ１１Ａ９．１１の結合を競合的に阻害する、および／またはそれと同じジペプチジルペプチダーゼ−４（ＤＰＰ−４）エピトープに結合する、単離された抗体またはその抗原結合フラグメント、変異体もしくは誘導体。
【請求項２】
３つの重鎖の相補性決定領域（ＣＤＲ） ＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２およびＶＨＣＤＲ３を含む重鎖可変ドメイン（ＶＨ）、ならびに３つの軽鎖のＣＤＲ、ＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２およびＶＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む、ジペプチジルペプチダーゼ−４（ＤＰＰ−４）に結合する、単離された抗体またはその抗原結合フラグメント、変異体もしくは誘導体であって、ここで、該単離された抗体またその抗原結合フラグメント、変異体もしくは誘導体のＣＤＲが、寄託番号ＰＴＡ−１２１８７０として米国培養細胞系統保存機関（ＡＴＣＣ）に寄託されたハイブリドーマから産生されるマウスモノクローナル抗体ｍ３Ｂ７．６、寄託番号ＰＴＡ−１２１８７１としてＡＴＣＣに寄託されたハイブリドーマから産生されるマウスモノクローナル抗体ｍ５Ｂ７．７、寄託番号ＰＴＡ−１２１８７２としてＡＴＣＣに寄託されたハイブリドーマから産生されるラットモノクローナル抗体Ｒ１１Ａ２．１５、または寄託番号ＰＴＡ−１２１８７３としてＡＴＣＣに寄託されたハイブリドーマから産生されるラットモノクローナル抗体Ｒ１１Ａ９．１１のＣＤＲと同一である、単離された抗体またはその抗原結合フラグメント、変異体もしくは誘導体。
【請求項３】
寄託番号ＰＴＡ−１２１８７０として米国培養細胞系統保存機関（ＡＴＣＣ）に寄託されたハイブリドーマから産生されるマウスモノクローナル抗体ｍ３Ｂ７．６、寄託番号ＰＴＡ−１２１８７１としてＡＴＣＣに寄託されたハイブリドーマから産生されるマウスモノクローナル抗体ｍ５Ｂ７．７、寄託番号ＰＴＡ−１２１８７２としてＡＴＣＣに寄託されたハイブリドーマから産生されるラットモノクローナル抗体Ｒ１１Ａ２．１５、または寄託番号ＰＴＡ−１２１８７３としてＡＴＣＣに寄託されたハイブリドーマから産生されるラットモノクローナル抗体Ｒ１１Ａ９．１１のＶＨおよびＶＬと同一のＶＨおよびＶＬを含む、請求項２記載の単離された抗体またはその抗原結合フラグメント、変異体もしくは誘導体。
【請求項４】
抗体フラグメントが、Ｆａｂフラグメント、Ｆａｂ’フラグメント、Ｆ（ａｂ’）２フラグメント、Ｆｖフラグメント、または一本鎖抗体分子である、請求項１から３のいずれか一項記載の単離された抗体またはその抗原結合フラグメント、変異体もしくは誘導体。
【請求項５】
寄託番号ＰＴＡ−１２１８７０として米国培養細胞系統保存機関（ＡＴＣＣ）に寄託されたハイブリドーマ、寄託番号ＰＴＡ−１２１８７１としてＡＴＣＣに寄託されたハイブリドーマ、寄託番号ＰＴＡ−１２１８７２としてＡＴＣＣに寄託されたハイブリドーマ、寄託番号ＰＴＡ−１２１８７３としてＡＴＣＣに寄託されたハイブリドーマ、およびそれらの組合せからなる群より選択される、ハイブリドーマ。
【請求項６】
寄託番号ＰＴＡ−１２１８７０として米国培養細胞系統保存機関（ＡＴＣＣ）に寄託されたハイブリドーマ、寄託番号ＰＴＡ−１２１８７１としてＡＴＣＣに寄託されたハイブリドーマ、寄託番号ＰＴＡ−１２１８７２としてＡＴＣＣに寄託されたハイブリドーマ、寄託番号ＰＴＡ−１２１８７３としてＡＴＣＣに寄託されたハイブリドーマ、またはそれらの組合せを含む、抗体産生細胞培養物。
【請求項７】
請求項５記載のハイブリドーマまたは請求項６記載の抗体産生細胞培養物により産生される、単離された抗体またはその抗原結合フラグメント、変異体もしくは誘導体。
【請求項８】
請求項１から４または７のいずれか一項記載の抗体またはその抗原結合フラグメント、変異体もしくは誘導体、あるいは請求項５記載のハイブリドーマまたは請求項６記載の細胞培養物により産生される抗体またはその抗原結合フラグメント、変異体もしくは誘導体であって、ここで、該抗体またはその抗原結合フラグメント、変異体もしくは誘導体が、それらに融合された異種ポリペプチドをさらに含む、抗体またはその抗原結合フラグメント、変異体もしくは誘導体。
【請求項９】
該異種ポリペプチドが、安定化ポリペプチドペプチド、タグ、ラベルまたはそれらの組合せである、請求項８記載の抗体またはその抗原結合フラグメント、変異体もしくは誘導体。
【請求項１０】
請求項１から４または７のいずれか一項記載の抗体またはその抗原結合フラグメント、変異体もしくは誘導体、あるいは請求項５記載のハイブリドーマまたは請求項６記載の細胞培養物により産生される抗体またはその抗原結合フラグメント、変異体もしくは誘導体であって、ここで、該抗体またはその抗原結合フラグメント、変異体もしくは誘導体が、異種部分に結合している、抗体またはその抗原結合フラグメント、変異体もしくは誘導体。
【請求項１１】
該異種部分が、ペプチド、タンパク質、酵素、脂質、異種抗体もしくはそのフラグメント、検出可能なラベル、またはポリエチレングリコール（ＰＥＧ）の１以上を含む、請求項１０記載の抗体またはその抗原結合フラグメント、変異体もしくは誘導体。
【請求項１２】
該異種部分が、ビオチンまたはルテニウムキレートを含む、請求項１１記載の抗体またはその抗原結合フラグメント、変異体もしくは誘導体。
【請求項１３】
請求項１から４または７から１２のいずれか一項記載の抗体またはその抗原結合フラグメント、変異体もしくは誘導体、あるいは請求項５記載のハイブリドーマまたは請求項６記載の細胞培養物により産生される抗体またはその抗原結合フラグメント、変異体もしくは誘導体を含む、組成物。
【請求項１４】
請求項１から４または７から１２のいずれか一項記載の抗体またはその抗原結合フラグメント、変異体もしくは誘導体、あるいは請求項５記載のハイブリドーマまたは請求項６記載の細胞培養物により産生される抗体またはその抗原結合フラグメント、変異体もしくは誘導体、の少なくとも２つの組合せを含む、組成物。
【請求項１５】
請求項１から４または７から１２のいずれか一項記載の抗体またはそのサブユニット、抗原結合フラグメント、変異体もしくは誘導体、あるいは請求項５記載のハイブリドーマまたは請求項６記載の細胞培養物により産生される抗体またはそのサブユニット、抗原結合フラグメント、変異体もしくは誘導体、をコードする核酸分子を含む、単離されたポリヌクレオチド。
【請求項１６】
請求項１から４または７から１２のいずれか一項記載の抗体またはその抗原結合フラグメント、変異体もしくは誘導体、あるいは請求項５記載のハイブリドーマまたは請求項６記載の細胞培養物により産生される抗体またはその抗原結合フラグメント、変異体もしくは誘導体、をコードする２以上の核酸分子を含む、組成物。
【請求項１７】
２以上の核酸分子が、同じベクター内に位置している、請求項１６記載の組成物。
【請求項１８】
請求項１５記載の単離されたポリヌクレオチドまたは請求項１６または１７記載の２以上の核酸分子を含む、ベクター。
【請求項１９】
２以上の核酸分子が、少なくとも２つの別個のベクター内に位置している、請求項１６記載の組成物。
【請求項２０】
請求項１９記載のベクター。
【請求項２１】
請求項１８記載のベクターまたは請求項２０記載のベクターを含む、単離された宿主細胞。
【請求項２２】
（ａ）請求項２１記載の宿主細胞を培養し、および（ｂ）抗体、サブユニット、フラグメントもしくは誘導体を採取することを含む、請求項１から４または７から１２のいずれか一項記載の抗ＤＰＰ−４抗体、またはそのサブユニット、フラグメント、変異体もしくは誘導体、あるいは請求項５記載のハイブリドーマまたは請求項６記載の細胞培養物により産生される抗体またはそのサブユニット、フラグメント、変異体もしくは誘導体の作製方法。
【請求項２３】
請求項１から４または７から１２のいずれか一項記載の抗体またはその抗原結合フラグメント、変異体もしくは誘導体、あるいは請求項５記載のハイブリドーマまたは請求項６記載の細胞培養物により産生される抗体またはその抗原結合フラグメント、変異体もしくは誘導体を含む、サンプル中のジペプチジルペプチダーゼ−４（ＤＰＰ−４）レベルを測定するためのキット。
【請求項２４】
請求項１から４または７から１２のいずれか一項記載の抗体またはその抗原結合フラグメント、変異体もしくは誘導体、あるいは請求項５記載のハイブリドーマまたは請求項６記載の細胞培養物により産生される抗体またはその抗原結合フラグメント、変異体もしくは誘導体、の少なくとも２つを含む、サンプル中のジペプチジルペプチダーゼ−４（ＤＰＰ−４）レベルを測定するためのキット。
【請求項２５】
固体支持体および検出試薬をさらに含む、請求項２３または２４記載のキット。
【請求項２６】
捕捉抗体またはそのフラグメント、変異体もしくは誘導体、および検出抗体またはそのフラグメント、変異体もしくは誘導体を含む、請求項２３から２５のいずれか一項記載のキット。
【請求項２７】
（ａ）捕捉抗体が、寄託番号ＰＴＡ−１２１８７０としてＡＴＣＣに寄託されたハイブリドーマから産生されるマウスモノクローナル抗体ｍ３Ｂ７．６、またはその抗原結合フラグメント、変異体もしくは誘導体であり、検出抗体が、寄託番号ＰＴＡ−１２１８７２としてＡＴＣＣに寄託されたハイブリドーマから産生されるラットモノクローナル抗体Ｒ１１Ａ２．１５、またはその抗原結合フラグメント、変異体もしくは誘導体である；
（ｂ）捕捉抗体が、寄託番号ＰＴＡ−１２１８７０としてＡＴＣＣに寄託されたハイブリドーマから産生されるマウスモノクローナル抗体ｍ３Ｂ７．６、またはその抗原結合フラグメント、変異体もしくは誘導体であり、検出抗体が、寄託番号ＰＴＡ−１２１８７３としてＡＴＣＣに寄託されたハイブリドーマから産生されるラットモノクローナル抗体Ｒ１１Ａ９．１１、またはその抗原結合フラグメント、変異体もしくは誘導体である；
（ｃ）捕捉抗体が、寄託番号ＰＴＡ−１２１８７１としてＡＴＣＣに寄託されたハイブリドーマから産生されるマウスモノクローナル抗体ｍ５Ｂ７．７、またはその抗原結合フラグメント、変異体もしくは誘導体であり、検出抗体が、寄託番号ＰＴＡ−１２１８７２としてＡＴＣＣに寄託されたハイブリドーマから産生されるラットモノクローナル抗体Ｒ１１Ａ２．１５、またはその抗原結合フラグメント、変異体もしくは誘導体である；
（ｄ）捕捉抗体が、寄託番号ＰＴＡ−１２１８７１としてＡＴＣＣに寄託されたハイブリドーマから産生されるマウスモノクローナル抗体ｍ５Ｂ７．７、またはその抗原結合フラグメント、変異体もしくは誘導体であり、検出抗体が、寄託番号ＰＴＡ−１２１８７３としてＡＴＣＣに寄託されたハイブリドーマから産生されるラットモノクローナル抗体Ｒ１１Ａ９．１１、またはその抗原結合フラグメント、変異体もしくは誘導体である；
（ｅ）捕捉抗体が、寄託番号ＰＴＡ−１２１８７２としてＡＴＣＣに寄託されたハイブリドーマから産生されるラットモノクローナル抗体Ｒ１１Ａ２．１５、またはその抗原結合フラグメント、変異体もしくは誘導体であり、検出抗体が、寄託番号ＰＴＡ−１２１８７０としてＡＴＣＣに寄託されたハイブリドーマから産生されるマウスモノクローナル抗体ｍ３Ｂ７．６、またはその抗原結合フラグメント、変異体もしくは誘導体である；
（ｆ）捕捉抗体が、寄託番号ＰＴＡ−１２１８７２としてＡＴＣＣに寄託されたハイブリドーマから産生されるラットモノクローナル抗体Ｒ１１Ａ２．１５、またはその抗原結合フラグメント、変異体もしくは誘導体であり、検出抗体が、寄託番号ＰＴＡ−１２１８７１としてＡＴＣＣに寄託されたハイブリドーマから産生されるマウスモノクローナル抗体ｍ５Ｂ７．７、またはその抗原結合フラグメント、変異体もしくは誘導体である；
（ｇ）捕捉抗体が、寄託番号ＰＴＡ−１２１８７３としてＡＴＣＣに寄託されたハイブリドーマから産生されるラットモノクローナル抗体Ｒ１１Ａ９．１１、またはその抗原結合フラグメント、変異体もしくは誘導体であり、検出抗体が、寄託番号ＰＴＡ−１２１８７０としてＡＴＣＣに寄託されたハイブリドーマから産生されるマウスモノクローナル抗体ｍ３Ｂ７．６、またはその抗原結合フラグメント、変異体もしくは誘導体である；または、
（ｈ）捕捉抗体が、寄託番号ＰＴＡ−１２１８７３としてＡＴＣＣに寄託されたハイブリドーマから産生されるラットモノクローナル抗体Ｒ１１Ａ９．１１、またはその抗原結合フラグメント、変異体もしくは誘導体であり、検出抗体が、寄託番号ＰＴＡ−１２１８７１としてＡＴＣＣに寄託されたハイブリドーマから産生されるマウスモノクローナル抗体ｍ５Ｂ７．７、またはその抗原結合フラグメント、変異体もしくは誘導体である、
請求項２６記載のキット。
【請求項２８】
検出抗体が検出可能なラベルを含む、請求項２３から２７のいずれか一項記載のキット。
【請求項２９】
検出可能なラベルがビオチンであり、検出試薬が、ストレプトアビジン−西洋ワサビペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）複合体およびＨＲＰの発色基質を含む、請求項２８記載のキット。
【請求項３０】
検出可能なラベルがルテニウムキレートである、請求項２９記載のキット。
【請求項３１】
少なくとも２つの抗ＤＰＰ−４抗体またはその抗原結合フラグメントを含む、１以上のサンプル中のジペプチジルペプチダーゼ−４（ＤＰＰ−４）レベルを検出する方法であって、ここで、抗ＤＰＰ−４抗体の１つが、寄託番号ＰＴＡ−１２１８７０として米国培養細胞系統保存機関（ＡＴＣＣ）に寄託されたハイブリドーマから産生されるマウスモノクローナル抗体ｍ３Ｂ７．６、または寄託番号ＰＴＡ−１２１８７１としてＡＴＣＣに寄託されたハイブリドーマから産生されるマウスモノクローナル抗体ｍ５Ｂ７．７の結合を競合的に阻害する、および／またはそれと同じＤＰＰ−４エピトープに結合する、単離された抗体またはその抗原結合フラグメント、変異体もしくは誘導体を含み、および抗ＤＰＰ−４抗体の１つが、寄託番号ＰＴＡ−１２１８７２としてＡＴＣＣに寄託されたハイブリドーマから産生されるラットモノクローナル抗体Ｒ１１Ａ２．１５、または寄託番号ＰＴＡ−１２１８７３としてＡＴＣＣに寄託されたハイブリドーマから産生されるラットモノクローナル抗体Ｒ１１Ａ９．１１の結合を競合的に阻害する、および／またはそれと同じＤＰＰ−４エピトープに結合する、単離された抗体またはその抗原結合フラグメント、変異体もしくは誘導体を含む、検出方法。
【請求項３２】
２以上の抗ＤＰＰ−４抗体のうち１つが、３つの重鎖の相補性決定領域（ＣＤＲ）、ＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２およびＶＨＣＤＲ３を含む重鎖可変ドメイン（ＶＨ）、ならびに３つの軽鎖のＣＤＲ、ＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２およびＶＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む、単離された抗体またはその抗原結合フラグメント、変異体もしくは誘導体であって、ここで、該単離された抗体またその抗原結合フラグメント、変異体もしくは誘導体のＣＤＲが、寄託番号ＰＴＡ−１２１８７０としてＡＴＣＣに寄託されたハイブリドーマから産生されるマウスモノクローナル抗体ｍ３Ｂ７．６、または寄託番号ＰＴＡ−１２１８７１としてＡＴＣＣに寄託されたハイブリドーマから産生されるマウスモノクローナル抗体ｍ５Ｂ７．７のＣＤＲと同一であり；２以上の抗ＤＰＰ−４抗体のうち１つが、３つの重鎖相補性決定領域（ＣＤＲ）、ＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２およびＶＨＣＤＲ３を含む重鎖可変ドメイン（ＶＨ）、ならびに３つの軽鎖ＣＤＲ、ＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２およびＶＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む、単離された抗体またはその抗原結合フラグメント、変異体もしくは誘導体であって、ここで、該単離された抗体またその抗原結合フラグメント、変異体もしくは誘導体のＣＤＲが、寄託番号ＰＴＡ−１２１８７２としてＡＴＣＣに寄託されたハイブリドーマから産生されるラットモノクローナル抗体Ｒ１１Ａ２．１５、または寄託番号ＰＴＡ−１２１８７３としてＡＴＣＣに寄託されたハイブリドーマから産生されるラットモノクローナル抗体Ｒ１１Ａ９．１１のＣＤＲと同一である、請求項３１記載の方法。
【請求項３３】
２以上の抗ＤＰＰ−４抗体のうち１つが、寄託番号ＰＴＡ−１２１８７０としてＡＴＣＣに寄託されたハイブリドーマから産生されるマウスモノクローナル抗体ｍ３Ｂ７．６、または寄託番号ＰＴＡ−１２１８７１としてＡＴＣＣに寄託されたハイブリドーマから産生されるマウスモノクローナル抗体ｍ５Ｂ７．７のＶＨおよびＶＬと同一のＶＨおよびＶＬを含む、単離された抗体またはその抗原結合フラグメント、変異体もしくは誘導体であり；２以上の抗ＤＰＰ−４抗体のうち１つが、寄託番号ＰＴＡ−１２１８７２としてＡＴＣＣに寄託されたハイブリドーマから産生されるラットモノクローナル抗体Ｒ１１Ａ２．１５、または寄託番号ＰＴＡ−１２１８７３としてＡＴＣＣに寄託されたハイブリドーマから産生されるラットモノクローナル抗体Ｒ１１Ａ９．１１のＶＨおよびＶＬと同一のＶＨおよびＶＬを含む、単離された抗体またはその抗原結合フラグメント、変異体もしくは誘導体である、請求項３１または３２記載の方法。
【請求項３４】
該アッセイが、固体支持体に結合させた第一の抗ＤＰＰ−４“捕捉”抗体またはその抗原結合フラグメント、ならびに第二の抗ＤＰＰ−４“検出”抗体またはその抗原結合フラグメントを含む、サンドイッチ免疫アッセイである、請求項３１から３３のいずれか一項記載の方法。
【請求項３５】
（ａ）捕捉抗体またはその抗原結合フラグメントを固体支持体に結合させ；
（ｂ）ＤＰＰ−４が試験サンプルまたは対照サンプル中に存在する場合、ＤＰＰ−４が捕捉抗体またはその抗原結合フラグメントに結合するのを可能にするのに十分な条件下で、該サンプルを適用し；
（ｃ）捕捉抗体またはその抗原結合フラグメントに結合しているＤＰＰ−４に結合するのを可能にするのに十分な条件下で、検出抗体またはその抗原結合フラグメントを提供し；および
（ｄ）ＤＰＰ−４に結合した検出抗体またはその抗原結合フラグメントの量を測定すること
を含む、請求項３４記載の免疫アッセイ。
【請求項３６】
検出抗体またはその抗原結合フラグメントが、検出可能なラベルをさらに含む、請求項３５記載の免疫アッセイ。
【請求項３７】
検出可能なラベルがビオチンである、請求項３６記載の免疫アッセイ。
【請求項３８】
検出可能なラベルがルテニウムキレートである、請求項３７記載の免疫アッセイ。
【請求項３９】
（ａ）捕捉抗体が、寄託番号ＰＴＡ−１２１８７０としてＡＴＣＣに寄託されたハイブリドーマから産生されるマウスモノクローナル抗体ｍ３Ｂ７．６、またはその抗原結合フラグメント、変異体もしくは誘導体であり、検出抗体が、寄託番号ＰＴＡ−１２１８７２としてＡＴＣＣに寄託されたハイブリドーマから産生されるラットモノクローナル抗体Ｒ１１Ａ２．１５、またはその抗原結合フラグメント、変異体もしくは誘導体である；
（ｂ）捕捉抗体が、寄託番号ＰＴＡ−１２１８７０としてＡＴＣＣに寄託されたハイブリドーマから産生されるマウスモノクローナル抗体ｍ３Ｂ７．６、またはその抗原結合フラグメント、変異体もしくは誘導体であり、検出抗体が、寄託番号ＰＴＡ−１２１８７３としてＡＴＣＣに寄託されたハイブリドーマから産生されるラットモノクローナル抗体Ｒ１１Ａ９．１１、またはその抗原結合フラグメント、変異体もしくは誘導体である；
（ｃ）捕捉抗体が、寄託番号ＰＴＡ−１２１８７１としてＡＴＣＣに寄託されたハイブリドーマから産生されるマウスモノクローナル抗体ｍ５Ｂ７．７、またはその抗原結合フラグメント、変異体もしくは誘導体であり、検出抗体が、寄託番号ＰＴＡ−１２１８７２としてＡＴＣＣに寄託されたハイブリドーマから産生されるラットモノクローナル抗体Ｒ１１Ａ２．１５、またはその抗原結合フラグメント、変異体もしくは誘導体である；
（ｄ）捕捉抗体が、寄託番号ＰＴＡ−１２１８７１としてＡＴＣＣに寄託されたハイブリドーマから産生されるマウスモノクローナル抗体ｍ５Ｂ７．７、またはその抗原結合フラグメント、変異体もしくは誘導体であり、検出抗体が、寄託番号ＰＴＡ−１２１８７３としてＡＴＣＣに寄託されたハイブリドーマから産生されるラットモノクローナル抗体Ｒ１１Ａ９．１１、またはその抗原結合フラグメント、変異体もしくは誘導体である；
（ｅ）捕捉抗体が、寄託番号ＰＴＡ−１２１８７２としてＡＴＣＣに寄託されたハイブリドーマから産生されるラットモノクローナル抗体Ｒ１１Ａ２．１５、またはその抗原結合フラグメント、変異体もしくは誘導体であり、検出抗体が、寄託番号ＰＴＡ−１２１８７０としてＡＴＣＣに寄託されたハイブリドーマから産生されるマウスモノクローナル抗体ｍ３Ｂ７．６、またはその抗原結合フラグメント、変異体もしくは誘導体である；
（ｆ）捕捉抗体が、寄託番号ＰＴＡ−１２１８７２としてＡＴＣＣに寄託されたハイブリドーマから産生されるラットモノクローナル抗体Ｒ１１Ａ２．１５、またはその抗原結合フラグメント、変異体もしくは誘導体であり、検出抗体が、寄託番号ＰＴＡ−１２１８７１としてＡＴＣＣに寄託されたハイブリドーマから産生されるマウスモノクローナル抗体ｍ５Ｂ７．７、またはその抗原結合フラグメント、変異体もしくは誘導体である；
（ｇ）捕捉抗体が、寄託番号ＰＴＡ−１２１８７３としてＡＴＣＣに寄託されたハイブリドーマから産生されるラットモノクローナル抗体Ｒ１１Ａ９．１１、またはその抗原結合フラグメント、変異体もしくは誘導体であり、検出抗体が、寄託番号ＰＴＡ−１２１８７０としてＡＴＣＣに寄託されたハイブリドーマから産生されるマウスモノクローナル抗体ｍ３Ｂ７．６、またはその抗原結合フラグメント、変異体もしくは誘導体である；または、
（ｈ）捕捉抗体が、寄託番号ＰＴＡ−１２１８７３としてＡＴＣＣに寄託されたハイブリドーマから産生されるラットモノクローナル抗体Ｒ１１Ａ９．１１、またはその抗原結合フラグメント、変異体もしくは誘導体であり、検出抗体が、寄託番号ＰＴＡ−１２１８７１としてＡＴＣＣに寄託されたハイブリドーマから産生されるマウスモノクローナル抗体ｍ５Ｂ７．７、またはその抗原結合フラグメント、変異体もしくは誘導体である、
請求項３４から３８のいずれか一項記載の免疫アッセイ。
【請求項４０】
請求項３４から３９のいずれか一項記載の免疫アッセイ；請求項２３から３０のいずれか一項記載のキット；および／あるいは、請求項１から４または７から１２のいずれか一項記載の抗体またはその抗原結合フラグメント、変異体もしくは誘導体、または請求項５記載のハイブリドーマまたは請求項６記載の細胞培養物により産生される抗体またはその抗原結合フラグメント、変異体もしくは誘導体を用いてサンプルをアッセイすることを含む、対象から得られたサンプル中のジペプチジルペプチダーゼ−４（ＤＰＰ−４）の量を測定する方法。
【請求項４１】
対象から得られたサンプルが、全血、血清、血漿、唾液、尿、痰、気管支肺胞洗浄液、肺上皮細胞、または鼻ポリープ、または皮膚の１以上である、請求項４０記載の方法。
【請求項４２】
ＩＬ−１３媒介性疾患もしくは障害、肺疾患もしくは障害、および慢性炎症性皮膚疾患もしくは障害からなる群より選択される疾患または病状を有する、請求項４０または４１記載の方法。
【請求項４３】
疾患または病状が、喘息、アトピー性喘息、コルチコステロイドナイーブ喘息、慢性喘息、コルチコステロイド抵抗性喘息、コルチコステロイド難治性喘息、喫煙による喘息、コルチコステロイドによって制御されない喘息、特発性肺線維症（ＩＰＦ）、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、潰瘍性大腸炎（ＵＣ）、アトピー性皮膚炎（ＡＤ）、アレルギー性鼻炎、慢性鼻副鼻腔炎、皮膚線維症、アレルギー性接触性皮膚炎、湿疹および乾癬からなる群より選択される、請求項４２記載の方法。
【請求項４４】
サンプルが、対象から得られ、該サンプル中のＤＰＰ−４レベルの測定のために提供される、請求項４０から４３のいずれか一項記載の方法。
【請求項４５】
免疫アッセイが、固体支持体に結合された第一の抗ＤＰＰ−４“捕捉”抗体またはその抗原結合フラグメント、および第二の抗ＤＰＰ−４“検出”抗体またはその抗原結合フラグメントを含む、サンドイッチ免疫アッセイを含む、請求項４０から４４のいずれか一項記載の方法。
【請求項４６】
免疫アッセイが、
（ａ）捕捉抗体またはその抗原結合フラグメントを固体支持体に結合させ；
（ｂ）ＤＰＰ−４が試験サンプルまたは対照サンプル中に存在する場合、ＤＰＰ−４が捕捉抗体またはその抗原結合フラグメントに結合するのを可能にするのに十分な条件下で、該サンプルを適用し；
（ｃ）捕捉抗体またはその抗原結合フラグメントに結合しているＤＰＰ−４に結合するのを可能にするのに十分な条件下で、検出抗体またはその抗原結合フラグメントを提供し；および
（ｄ）ＤＰＰ−４に結合した検出抗体またはその抗原結合フラグメントの量を測定すること
を含む、請求項４５記載の方法。
【請求項４７】
検出抗体またはそのフラグメント、変異体もしくは誘導体が、検出可能なラベルをさらに含む、請求項４６記載の方法。
【請求項４８】
検出可能なラベルがビオチンである、請求項４７記載の方法。
【請求項４９】
検出可能なラベルがルテニウムキレートである、請求項４８記載の方法。
【請求項５０】
（ａ）捕捉抗体が、寄託番号ＰＴＡ−１２１８７０としてＡＴＣＣに寄託されたハイブリドーマから産生されるマウスモノクローナル抗体ｍ３Ｂ７．６、またはその抗原結合フラグメント、変異体もしくは誘導体であり、検出抗体が、寄託番号ＰＴＡ−１２１８７２としてＡＴＣＣに寄託されたハイブリドーマから産生されるラットモノクローナル抗体Ｒ１１Ａ２．１５、またはその抗原結合フラグメント、変異体もしくは誘導体である；
（ｂ）捕捉抗体が、寄託番号ＰＴＡ−１２１８７０としてＡＴＣＣに寄託されたハイブリドーマから産生されるマウスモノクローナル抗体ｍ３Ｂ７．６、またはその抗原結合フラグメント、変異体もしくは誘導体であり、検出抗体が、寄託番号ＰＴＡ−１２１８７３としてＡＴＣＣに寄託されたハイブリドーマから産生されるラットモノクローナル抗体Ｒ１１Ａ９．１１、またはその抗原結合フラグメント、変異体もしくは誘導体である；
（ｃ）捕捉抗体が、寄託番号ＰＴＡ−１２１８７１としてＡＴＣＣに寄託されたハイブリドーマから産生されるマウスモノクローナル抗体ｍ５Ｂ７．７、またはその抗原結合フラグメント、変異体もしくは誘導体であり、検出抗体が、寄託番号ＰＴＡ−１２１８７２としてＡＴＣＣに寄託されたハイブリドーマから産生されるラットモノクローナル抗体Ｒ１１Ａ２．１５、またはその抗原結合フラグメント、変異体もしくは誘導体である；
（ｄ）捕捉抗体が、寄託番号ＰＴＡ−１２１８７１としてＡＴＣＣに寄託されたハイブリドーマから産生されるマウスモノクローナル抗体ｍ５Ｂ７．７、またはその抗原結合フラグメント、変異体もしくは誘導体であり、検出抗体が、寄託番号ＰＴＡ−１２１８７３としてＡＴＣＣに寄託されたハイブリドーマから産生されるラットモノクローナル抗体Ｒ１１Ａ９．１１、またはその抗原結合フラグメント、変異体もしくは誘導体である；
（ｅ）捕捉抗体が、寄託番号ＰＴＡ−１２１８７２としてＡＴＣＣに寄託されたハイブリドーマから産生されるラットモノクローナル抗体Ｒ１１Ａ２．１５、またはその抗原結合フラグメント、変異体もしくは誘導体であり、検出抗体が、寄託番号ＰＴＡ−１２１８７０としてＡＴＣＣに寄託されたハイブリドーマから産生されるマウスモノクローナル抗体ｍ３Ｂ７．６、またはその抗原結合フラグメント、変異体もしくは誘導体である；
（ｆ）捕捉抗体が、寄託番号ＰＴＡ−１２１８７２としてＡＴＣＣに寄託されたハイブリドーマから産生されるラットモノクローナル抗体Ｒ１１Ａ２．１５、またはその抗原結合フラグメント、変異体もしくは誘導体であり、検出抗体が、寄託番号ＰＴＡ−１２１８７１としてＡＴＣＣに寄託されたハイブリドーマから産生されるマウスモノクローナル抗体ｍ５Ｂ７．７、またはその抗原結合フラグメント、変異体もしくは誘導体である；
（ｇ）捕捉抗体が、寄託番号ＰＴＡ−１２１８７３としてＡＴＣＣに寄託されたハイブリドーマから産生されるラットモノクローナル抗体Ｒ１１Ａ９．１１、またはその抗原結合フラグメント、変異体もしくは誘導体であり、検出抗体が、寄託番号ＰＴＡ−１２１８７０としてＡＴＣＣに寄託されたハイブリドーマから産生されるマウスモノクローナル抗体ｍ３Ｂ７．６、またはその抗原結合フラグメント、変異体もしくは誘導体である；または、
（ｈ）捕捉抗体が、寄託番号ＰＴＡ−１２１８７３としてＡＴＣＣに寄託されたハイブリドーマから産生されるラットモノクローナル抗体Ｒ１１Ａ９．１１、またはその抗原結合フラグメント、変異体もしくは誘導体であり、検出抗体が、寄託番号ＰＴＡ−１２１８７１としてＡＴＣＣに寄託されたハイブリドーマから産生されるマウスモノクローナル抗体ｍ５Ｂ７．７、またはその抗原結合フラグメント、変異体もしくは誘導体である、
請求項４５から４９のいずれか一項記載の方法。
【請求項５１】
対象が喘息患者であり、該患者から採取されたサンプルが血清を含む、請求項４０から５０のいずれか一項記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
電子的に提出された配列表の引用
本願と共に出願された電子的に提出されたＡＳＣＩＩテキストファイル（ファイル名 DPP4−100P1_ sequence_listing.txt; サイズ：２６，７４１バイト；および、作成日：２０１４年１２月１５日）の配列表の内容は、その全体を引用により本願明細書中に包含させる。
【背景技術】
【０００２】
背景
ジペプチジルペプチダーゼＩＶ（ＤＰＰ−４）（ＣＤ２６またはアデノシンデアミナーゼ結合タンパク質としても公知）は、２位にプロリンまたはアラニンを有するポリペプチドのＮ末端からのＮ末端ジペプチドの加水分解を触媒するプロリルオリゴペプチダーゼファミリーのＩＩ型膜貫通セリンプロテアーゼ（酵素番号（ＥＣ番号）３．４．１４．５（ＢＲＥＮＤＡ｜ＩＵＢＭＢ））である。ＧＬＰ−１、ＧＬＰ−２、胃阻害ポリペプチド（ＧＩＰ）、下垂体アデニレートシクラーゼ活性化ポリペプチド（ＰＡＣＡＰ）および神経ペプチドＹを含む多数のケモカインおよびペプチドホルモンが、ＤＰＰ−４によって切断され、不活性化される。例えば、Yaron A., Naider F. Crit. Rev. Biochem. Mol. Biol. 28, 31−81 (1993); Mentlein R. Regul Pept. 85(1):9−24 (1999)を参照のこと。その結果、ＤＰＰ−４は、ケモカインおよびペプチドホルモンを阻害する能力を有するが、グルコース代謝、食欲および疼痛制御を調節する。
【０００３】
調節性プロテアーゼとしてのその役割に加えて、ＤＰＰ−４はまた、いくつかの分子に結合し、細胞内シグナル伝達を誘導する。特に、ＤＰＰ−４は、アデノシンデアミナーゼ（ＡＤＡ）を含むいくつかのリガンドに結合することにより、Ｔ細胞共刺激／増殖およびリンパ球−上皮細胞接着を誘導する。例えば、Gines et al., Biochem. J. 361:203−209 (2002)を参照のこと。ＤＰＰ−４はまた、Ｔ細胞成熟および遊走、サイトカイン分泌、抗体産生、Ｂ細胞の免疫グロブリンアイソタイプスイッチ、および細胞傷害性Ｔ細胞の活性化を増強することも報告されている。Ohnuma et. al., Front Biosci. 13:2299−310 (2008)。
【０００４】
ＤＰＰ−４は、２番染色体に位置する遺伝子（２ｑ２４．３）によりコードされる、１１０ｋＤａの糖タンパク質であり（Abbott et al. Immunogenetics. 40(5):331−8 (1994)）、７６６アミノ酸からなるホモ二量体として機能する。各単量体は、α／βヒドロラーゼドメインおよび８枚羽（blade）のβ−プロペラドメインの２つのドメインからなる。ＤＰＰ−４は、肝臓、肺、腎臓、上皮細胞およびリンパ球を含むいくつかの組織で広く発現されている。Heike et al. Clin Exp Immunol. 74:431−434 91988）； Gorrell et al., Scand J Immunol. 54:249−264 (2001)。Ｔ細胞活性化により、ＤＰＰ−４発現は、静止（resting）Ｔ細胞で上方制御される。重要な触媒ドメインを含む細胞外ドメインのほとんど（残基３９−７６６）を含む可溶性の活性化型ＤＰＰ−４もまた、観察されている。Ikushima H, et al. Cell Immunol. 215(1):106−10 (2002)。
【０００５】
ＤＰＰ−４遺伝子ノックアウトマウスは、経口ブドウ糖負荷における改善された耐糖能、インスリンおよびＧＬＰ−１活性の増加；食餌誘発性肥満に対する耐性；および、高脂肪食後の増加したインスリン感受性、を示す。Marguet et al., Proc Natl Acad Sci U S A. 97(12):6874−9 (2000); Conarello et al., Proc Natl Acad Sci U S A. 100(11):6825−30 (2003)。代謝障害および血糖コントロールにおけるその役割に加えて、ＤＰＰ−４はまた、免疫機能、細胞遊走、細胞へのウイルスの侵入、癌転移および炎症の制御にも関与している。例えば、Aytac et al., Curr Drug Targets Immune Endocr Metabol Disord 4(1):11−8 (2004)を参照のこと。
【０００６】
ごく最近、ＤＰＰ−４発現は、インターロイキン−１３（ＩＬ−１３）によって高度に誘導されることが報告された。例えば、Zhang et al., Am J Respir Crit Care Med 189:A4875 (2014); Shiobara et al., Am J Respir Crit Care Med 189:A4239 (2014); Brightling et al., Am J Respir Crit Care Med 189:A6670 (2014)；２０１４年、１月２７日出願の米国特許仮出願公開番号６１／９３１，８７８；および、２０１４年５月９日出願の米国特許仮出願公開番号６１／９９０，９３２を参照のこと（これらは各々、引用によりその内容全体が全ての目的について本明細書中に包含される）。ＩＬ−１３は、約１２ｋＤａの未修飾分子量を有する、１１４アミノ酸のサイトカインである。McKenzie, A. N., et al. J Immunol, 1993. 150:5436−44; Minty, A., et al. Nature, 1993. 362:248−50。ＩＬ−１３レベルは、喘息、慢性閉塞性肺疾患、特発性肺線維症およびアトピー性皮膚炎を含むが、これに限定されない、多数の疾患または障害における疾患の重症度と関連することが示されている。例えば、喘息の、アレルギー性炎症げっ歯動物モデルにおいて、ＩＬ−１３の高いレベルが、疾患の重症度と相関することが報告されている（引用によりその内容全体が本明細書中に包含される、２０１２年３月１日公開の米国特許仮出願公開番号２０１２−００５２０６０を参照のこと）。
【０００７】
慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）には、種々の程度の慢性気管支炎、小気道疾患および肺気腫を有する患者集団が含まれ、現在の喘息の治療にほとんど応答しない進行性の難治性の肺機能低下症により特徴付けられる。Zhengら（J Clin Invest, 2000. 106:1081−93）は、マウス肺におけるＩＬ−１３の過剰発現が、ヒトＣＯＰＤの複数の症状を反映して、気腫、上昇した粘液産生および炎症を引き起こすことを実証した。従って、これらの徴候は、ＩＬ−１３が、特に喘息様の特徴を有する患者において、ＣＯＰＤの病因に重要な役割を果たすということである。
【０００８】
ＩＬ−１３はまた、炎症性腸疾患の病因においても役割を果たし、特発性肺線維症（ＩＰＦ）などの線維症状態と関連を有している。例えば、Jovani, M., et al. Curr Drug Targets. 2013.12:1444−52; and Rafii, R., et al. J Thorac Dis. 2013. 1:48−73を参照のこと。
【０００９】
アトピー性皮膚炎は、アレルギー性鼻炎および喘息などの他のアトピー性疾患に関連することが多い、一般的な慢性炎症性皮膚疾患である（Bieber, New England Journal of Medicine, 2008, 358: 1483−1494）。ＩＬ−１３  ｍＲＮＡの上方制御が、アトピー性皮膚炎の亜急性および慢性病変において観察されている（Tazawa et al., Arch. Dermatol. Res., 2004, 295:459−464; Purwar et al,, J. Invest. Derm., 2006, 126, 1043−1051; Oh et al., J Immunol., 2011, 186:7232−42）。
【００１０】
高レベルのＤＰＰ−４が、喘息、ＣＯＰＤおよびＡＤ患者において観察されている（例えば、２０１４年１月２７日出願の米国特許仮出願公開番号６１／９３１，８７８；および、２０１４年５月９日出願の米国特許仮出願公開番号６１／９９０，９３２、これらの各々は、引用によりその内容全体を本明細書中に包含される）。加えて、喘息患者を対象とした第２Ｂ相臨床治験では、高血清ＤＰＰ−４レベルは、ＩＬ−１３媒介性肺疾患または障害（例えば、喘息、ＩＰＦまたはＣＯＰＤ）あるいはＩＬ−１３媒介性慢性炎症性皮膚疾患または障害（例えば、アトピー性皮膚炎）を含むＩＬ−１３媒介性疾患または障害の予測バイオマーカーとしてＤＰＰ−４を同定するＩＬ−１３抗体アンタゴニスト（トラロキヌマブ）で処置した患者における改善された応答率を予測した。Brightling et al., Am J Respir Crit Care Med 189:A6670 (2014)；および、２０１４年１月２７日出願の米国特許仮出願公開番号６１／９３１，８７８；および、２０１４年５月９日出願の米国特許仮出願公開番号６１／９９０，９３２（それぞれ、引用によりその内容を本明細書中に包含させる）を参照のこと。従って、増加したＤＰＰ−４レベルは、特定のＩＬ−１３媒介性疾患または障害と相関することが知られており、且つＤＰＰ−４血清レベルは、抗ＩＬ−１３治療に対する患者の応答を予測することが知られているが、ＩＬ−１３媒介性疾患または障害に罹患している患者を含むが、これに限定されない患者におけるＤＰＰ−４レベルの量を測定する、および／またはその変化を決定するための、特異的な高感度のアッセイが依然として必要とされている。患者において血清ＤＰＰ−４レベルを測定するために使用することができる市販の試薬があるが、これらの市販の試薬またはキットは、ロット間の差異に起因するアッセイ変動をもたらすだけでなく、あまり感度がよくない、ポリクローナル抗体に依拠する。従って、患者におけるＤＰＰ−４レベルの量を測定し、および／またはその変化を決定するための、特異的かつ高感度な抗体、試薬および／または免疫アッセイが依然として必要とされている。
【発明の概要】
【００１１】
発明の概要
本発明は、例えば、対象におけるＤＰＰ−４レベルを決定するための診断アッセイにおいて使用され得る、抗ジペプチジルペプチダーゼ−４（ＤＰＰ−４）抗体を提供する。本発明の例示的な抗ＤＰＰ−４抗体には、（１）特許手続上の微生物寄託の国際的承認に関するブダペスト条約の規定により、ＡＴＣＣ寄託番号ＰＴＡ−１２１８７０として米国培養細胞系統保存機関（ＡＴＣＣ）（10801 University Boulevard, Manassas, Va. 20110−2209）に２０１５年１月８日に寄託されたハイブリドーマから産生されるマウスモノクローナル抗体ｍ３Ｂ７．６；（２）特許手続上の微生物寄託の国際的承認に関するブダペスト条約の規定により、ＡＴＣＣ寄託番号ＰＴＡ−１２１８７１として米国培養細胞系統保存機関（ＡＴＣＣ）（10801 University Boulevard, Manassas, Va. 20110−2209）に２０１５年１月８日に寄託されたハイブリドーマから産生されるマウスモノクローナル抗体ｍ５Ｂ７．７；（３）特許手続上の微生物寄託の国際的承認に関するブダペスト条約の規定により、ＡＴＣＣ寄託番号ＰＴＡ−１２１８７２として米国培養細胞系統保存機関（ＡＴＣＣ）（10801 University Boulevard, Manassas, Va. 20110−2209）に２０１５年１月８日に寄託されたハイブリドーマから産生されるラットモノクローナル抗体Ｒ１１Ａ２．１５；および、（４）特許手続上の微生物寄託の国際的承認に関するブダペスト条約の規定により、ＡＴＣＣ寄託番号ＰＴＡ−１２１８７３として米国培養細胞系統保存機関（ＡＴＣＣ）（10801 University Boulevard, Manassas, Va. 20110−2209）に２０１５年１月８日に寄託されたハイブリドーマから産生されるラットモノクローナル抗体Ｒ１１Ａ９．１１が含まれる。
【００１２】
特定の面において、本発明は、単離された抗体またはその抗原結合フラグメント、変異体もしくは誘導体、または２以上のかかる抗体を提供し、ここで、該抗体または複数の抗体は、（１）寄託番号ＰＴＡ−１２１８７０としてＡＴＣＣに寄託されたハイブリドーマから産生されるマウスモノクローナル抗体ｍ３Ｂ７．６、（２）寄託番号ＰＴＡ−１２１８７１としてＡＴＣＣに寄託されたハイブリドーマから産生されるマウスモノクローナル抗体ｍ５Ｂ７．７、（３）寄託番号ＰＴＡ−１２１８７２としてＡＴＣＣに寄託されたハイブリドーマから産生されるラットモノクローナル抗体Ｒ１１Ａ２．１５、または（４）寄託番号ＰＴＡ−１２１８７３としてＡＴＣＣに寄託されたハイブリドーマから産生されるラットモノクローナル抗体Ｒ１１Ａ９．１１、またはそれらの任意の組合せの結合を競合的に阻害する、および／またはそれと同じＤＰＰ−４エピトープに結合する。
【００１３】
特定の面において、本発明は、３つの重鎖相補性決定領域（ＣＤＲ）ＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２およびＶＨＣＤＲ３を有する重鎖可変ドメイン（ＶＨ）、ならびに３つの軽鎖ＣＤＲ ＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２およびＶＬＣＤＲ３を有する軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む、ＤＰＰ−４に結合する、単離された抗体またはその抗原結合フラグメント、変異体もしくは誘導体を提供し、ここで、該単離された抗体またその抗原結合フラグメント、変異体もしくは誘導体のＣＤＲは、寄託番号ＰＴＡ−１２１８７０としてＡＴＣＣに寄託されたハイブリドーマから産生されるマウスモノクローナル抗体ｍ３Ｂ７．６、寄託番号ＰＴＡ−１２１８７１としてＡＴＣＣに寄託されたハイブリドーマから産生されるマウスモノクローナル抗体ｍ５Ｂ７．７、寄託番号ＰＴＡ−１２１８７２としてＡＴＣＣに寄託されたハイブリドーマから産生されるラットモノクローナル抗体Ｒ１１Ａ２．１５、または寄託番号ＰＴＡ−１２１８７３としてＡＴＣＣに寄託されたハイブリドーマから産生されるラットモノクローナル抗体Ｒ１１Ａ９．１１のＣＤＲと同一である。
【００１４】
特定の面において、本発明により提供される抗体またはその抗原結合フラグメント、変異体もしくは誘導体は、寄託番号ＰＴＡ−１２１８７０としてＡＴＣＣに寄託されたハイブリドーマから産生されるマウスモノクローナル抗体ｍ３Ｂ７．６、寄託番号ＰＴＡ−１２１８７１としてＡＴＣＣに寄託されたハイブリドーマから産生されるマウスモノクローナル抗体ｍ５Ｂ７．７、寄託番号ＰＴＡ−１２１８７２としてＡＴＣＣに寄託されたハイブリドーマから産生されるラットモノクローナル抗体Ｒ１１Ａ２．１５、または寄託番号ＰＴＡ−１２１８７３としてＡＴＣＣに寄託されたハイブリドーマから産生されるラットモノクローナル抗体Ｒ１１Ａ９．１１のＶＨおよびＶＬと同一のＶＨおよびＶＬを含み得る。
【００１５】
特定の面において、本発明は、上記の抗原結合抗体フラグメントを提供する。特定の面において、抗体フラグメントは、Ｆａｂフラグメント、Ｆａｂ’フラグメント、Ｆ（ａｂ’）２フラグメント、Ｆｖフラグメント、または一本鎖抗体分子であり得る。
【００１６】
本発明はさらに、寄託番号ＰＴＡ−１２１８７０としてＡＴＣＣに寄託されたハイブリドーマ、寄託番号ＰＴＡ−１２１８７１としてＡＴＣＣに寄託されたハイブリドーマ、寄託番号ＰＴＡ−１２１８７２としてＡＴＣＣに寄託されたハイブリドーマ、寄託番号ＰＴＡ−１２１８７３としてＡＴＣＣに寄託されたハイブリドーマ、および／またはそれらの組合せを提供する。特定の面において、本発明は、寄託番号ＰＴＡ−１２１８７０としてＡＴＣＣに寄託されたハイブリドーマ、寄託番号ＰＴＡ−１２１８７１としてＡＴＣＣに寄託されたハイブリドーマ、寄託番号ＰＴＡ−１２１８７２としてＡＴＣＣに寄託されたハイブリドーマ、寄託番号ＰＴＡ−１２１８７３としてＡＴＣＣに寄託されたハイブリドーマ、および／またはそれらの組合せを含む、抗体産生細胞培養物を提供する。別の面において、本発明は、本明細書に記載のハイブリドーマまたは本明細書に記載の抗体産生細胞により産生される単離された抗体またはその抗原結合フラグメント、変異体もしくは誘導体を提供する。
【００１７】
特定の面において、本発明の抗体またはその抗原結合フラグメント、変異体もしくは誘導体、あるいは本発明のハイブリドーマまたは細胞培養物により産生される抗体またはその抗原結合フラグメント、変異体もしくは誘導体（例えば、抗体ｍ３Ｂ７．６、ｍ５Ｂ７．７、Ｒ１１Ａ２．１５、またはＲ１１Ａ９．１１を含む）はさらに、それと融合した異種ポリペプチドを含む。例えば、特定の面において、異種ポリペプチドは、安定化ポリペプチドペプチド、タグ、ラベル、またはそれらの組合せである。
【００１８】
特定の面において、本発明の抗体またはその抗原結合フラグメント、変異体もしくは誘導体、あるいは本発明のハイブリドーマまたは細胞培養物により産生される抗体またはその抗原結合フラグメント、変異体もしくは誘導体（例えば、抗体ｍ３Ｂ７．６、ｍ５Ｂ７．７、Ｒ１１Ａ２．１５、またはＲ１１Ａ９．１１を含む）は、異種部分に結合される。特定の面において、異種部分は、ペプチド、タンパク質、酵素、脂質、異種抗体もしくはそのフラグメント、検出可能なラベル、またはポリエチレングリコール（ＰＥＧ）の１以上を含む。特定の面において、異種部分は、例えば、ビオチン、またはルテニウムキレートである。
【００１９】
本発明はさらに、本発明の抗体またはその抗原結合フラグメント、変異体もしくは誘導体、および／または本発明のハイブリドーマまたは細胞培養物により産生される抗体またはその抗原結合フラグメント、変異体もしくは誘導体（例えば、抗体ｍ３Ｂ７．６、ｍ５Ｂ７．７、Ｒ１１Ａ２．１５、および／またはＲ１１Ａ９．１１を含む）を含む組成物を提供する。特定の面において、組成物は、少なくとも２つのそのような抗体の組合せを含む。
【００２０】
別の面において、本発明は、本発明の抗体またはそのサブユニット、フラグメント、変異体もしくは誘導体、あるいは本発明のハイブリドーマまたは細胞培養物により産生される抗体、またはそのサブユニット、フラグメント、変異体もしくは誘導体（例えば、抗体ｍ３Ｂ７．６、ｍ５Ｂ７．７、Ｒ１１Ａ２．１５、またはＲ１１Ａ９．１１を含む）をコードする核酸分子を含む、単離されたポリヌクレオチドを提供する。本発明はさらに、提供されるポリヌクレオチドを含むベクターを提供する。
【００２１】
特定の面において、本発明は、本発明の抗体またはそのフラグメント、変異体もしくは誘導体、あるいは本発明のハイブリドーマまたは細胞培養物により産生される抗体またはそのフラグメント、変異体もしくは誘導体（例えば、抗体ｍ３Ｂ７．６、ｍ５Ｂ７．７、Ｒ１１Ａ２．１５、またはＲ１１Ａ９．１１を含む）をコードする２以上の核酸分子を含む組成物を提供する。特定の面において、該２以上の核酸分子は、同じベクター内に位置する。本発明はさらに、同じベクター内に位置して提供される２以上の核酸分子を含むベクターを提供する。特定の面において、該２以上の核酸分子は、少なくとも２つの別個のベクターに位置する。本発明はさらに、２つの別個のベクターを提供する。
【００２２】
本発明はさらに、提供されるベクター、または２以上の提供されるベクターを含む、単離された宿主細胞を提供する。本発明はさらに、本発明の抗ＤＰＰ−４抗体、またはサブユニット、フラグメント、変異体もしくは誘導体、あるいは本発明のハイブリドーマまたは細胞培養物により産生される抗体、またはサブユニット、フラグメント、変異体もしくは誘導体（例えば、抗体ｍ３Ｂ７．６、ｍ５Ｂ７．７、Ｒ１１Ａ２．１５、および／またはＲ１１Ａ９．１１を含む）を作製する方法を提供し、ここで、該方法は、（ａ）提供された宿主細胞を培養すること、および（ｂ）抗体、サブユニット、フラグメントもしくは誘導体を採取すること、を含む。
【００２３】
別の面において、本発明は、サンプル中のＤＰＰ−４レベルを測定するためのキットを提供し、ここで、該キットは、本発明の抗体またはそのフラグメント、変異体もしくは誘導体、あるいは本発明のハイブリドーマまたは細胞培養物により産生される抗体またはそのフラグメント、変異体もしくは誘導体（例えば、抗体ｍ３Ｂ７．６、ｍ５Ｂ７．７、Ｒ１１Ａ２．１５、またはＲ１１Ａ９．１１を含む）を含む。特定の面において、該キットは、少なくとも２つのそのような抗体、またはそれらのフラグメント、変異体もしくは誘導体を含む。該キットは、固体支持体および／または検出試薬をさらに含み得る。特定の面において、少なくとも２つの抗体のうち１つ、またはそのフラグメント、変異体もしくは誘導体は、捕捉抗体またはそのフラグメント、変異体もしくは誘導体であってよく、少なくとも２つの抗体のうち１つ、またはそのフラグメント、変異体、もしくは誘導体は、検出抗体またはそのフラグメント、変異体もしくは誘導体であり得る。特定の面において、検出抗体は、検出可能なラベルを含んでいてよく、例えば、検出可能なラベルは、ビオチンであってよく、該キットは、ストレプトアビジン−西洋ワサビペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）複合体およびＨＲＰの発色基質などの検出試薬を含み得るか、または検出可能なラベルは、ルテニウムキレートであり得る。
【００２４】
特定の面において：
捕捉抗体は、寄託番号ＰＴＡ−１２１８７０としてＡＴＣＣに寄託されたハイブリドーマから産生されるマウスモノクローナル抗体ｍ３Ｂ７．６、またはその抗原結合フラグメント、変異体もしくは誘導体であってよく、そして検出抗体は、寄託番号ＰＴＡ−１２１８７２としてＡＴＣＣに寄託されたハイブリドーマから産生されるラットモノクローナル抗体Ｒ１１Ａ２．１５またはその抗原結合フラグメント、変異体もしくは誘導体であり得る；
【００２５】
捕捉抗体は、寄託番号ＰＴＡ−１２１８７０としてＡＴＣＣに寄託されたハイブリドーマから産生されるマウスモノクローナル抗体ｍ３Ｂ７．６、またはその抗原結合フラグメント、変異体もしくは誘導体であってよく、そして検出抗体は、寄託番号ＰＴＡ−１２１８７３としてＡＴＣＣに寄託されたハイブリドーマから産生されるラットモノクローナル抗体Ｒ１１Ａ９．１１またはその抗原結合フラグメント、変異体もしくは誘導体であり得る；
【００２６】
捕捉抗体は、寄託番号ＰＴＡ−１２１８７１としてＡＴＣＣに寄託されたハイブリドーマから産生されるマウスモノクローナル抗体ｍ５Ｂ７．７、またはその抗原結合フラグメント、変異体もしくは誘導体であってよく、そして検出抗体は、寄託番号ＰＴＡ−１２１８７２としてＡＴＣＣに寄託されたハイブリドーマから産生されるラットモノクローナル抗体Ｒ１１Ａ２．１５またはその抗原結合フラグメント、変異体もしくは誘導体であり得る；
【００２７】
捕捉抗体は、寄託番号ＰＴＡ−１２１８７１としてＡＴＣＣに寄託されたハイブリドーマから産生されるマウスモノクローナル抗体ｍ５Ｂ７．７またはその抗原結合フラグメント、変異体もしくは誘導体であってよく、そして検出抗体は、寄託番号ＰＴＡ−１２１８７３としてＡＴＣＣに寄託されたハイブリドーマから産生されるラットモノクローナル抗体Ｒ１１Ａ９．１１またはその抗原結合フラグメント、変異体もしくは誘導体であり得る；
【００２８】
捕捉抗体は、寄託番号ＰＴＡ−１２１８７２としてＡＴＣＣに寄託されたハイブリドーマから産生されるラットモノクローナル抗体Ｒ１１Ａ２．１５、またはその抗原結合フラグメント、変異体もしくは誘導体であってよく、そして検出抗体は、寄託番号ＰＴＡ−１２１８７０としてＡＴＣＣに寄託されたハイブリドーマから産生されるマウスモノクローナル抗体ｍ３Ｂ７．６、またはその抗原結合フラグメント、変異体もしくは誘導体であり得る；
【００２９】
捕捉抗体は、寄託番号ＰＴＡ−１２１８７２としてＡＴＣＣに寄託されたハイブリドーマから産生されるラットモノクローナル抗体Ｒ１１Ａ２．１５またはその抗原結合フラグメント、変異体もしくは誘導体であってよく、そして検出抗体は、寄託番号ＰＴＡ−１２１８７１としてＡＴＣＣに寄託されたハイブリドーマから産生されるマウスモノクローナル抗体ｍ５Ｂ７．７またはその抗原結合フラグメント、変異体もしくは誘導体であり得る；
【００３０】
捕捉抗体は、寄託番号ＰＴＡ−１２１８７３としてＡＴＣＣに寄託されたハイブリドーマから産生されるラットモノクローナル抗体Ｒ１１Ａ９．１１またはその抗原結合フラグメント、変異体もしくは誘導体であってよく、そして検出抗体は、寄託番号ＰＴＡ−１２１８７０としてＡＴＣＣに寄託されたハイブリドーマから産生されるマウスモノクローナル抗体ｍ３Ｂ７．６、またはその抗原結合フラグメント、変異体もしくは誘導体であり得る；および／または、
【００３１】
捕捉抗体は、寄託番号ＰＴＡ−１２１８７３としてＡＴＣＣに寄託されたハイブリドーマから産生されるラットモノクローナル抗体Ｒ１１Ａ９．１１またはその抗原結合フラグメント、変異体もしくは誘導体であってよく、そして検出抗体は、寄託番号ＰＴＡ−１２１８７１としてＡＴＣＣに寄託されたハイブリドーマから産生されるマウスモノクローナル抗体ｍ５Ｂ７．７またはその抗原結合フラグメント、変異体もしくは誘導体であり得る。
【００３２】
本発明はさらに、１以上のサンプル中のＤＰＰ−４レベルを検出するための免疫アッセイを提供し、ここで、該免疫アッセイは、少なくとも２つの抗ＤＰＰ−４抗体またはその抗原結合フラグメント、変異体もしくは誘導体の使用を含み、該抗ＤＰＰ−４抗体の１つは、寄託番号ＰＴＡ−１２１８７０としてＡＴＣＣに寄託されたハイブリドーマから産生されるマウスモノクローナル抗体ｍ３Ｂ７．６、または寄託番号ＰＴＡ−１２１８７１としてＡＴＣＣに寄託されたハイブリドーマから産生されるマウスモノクローナル抗体ｍ５Ｂ７．７の結合を競合的に阻害する、および／またはそれと同じＤＰＰ−４エピトープに結合する、単離された抗体またはその抗原結合フラグメント、変異体もしくは誘導体であり得て、該抗ＤＰＰ−４抗体の１つは、寄託番号ＰＴＡ−１２１８７２としてＡＴＣＣに寄託されたハイブリドーマから産生されるラットモノクローナル抗体Ｒ１１Ａ２．１５または寄託番号ＰＴＡ−１２１８７３としてＡＴＣＣに寄託されたハイブリドーマから産生されるラットモノクローナル抗体Ｒ１１Ａ９．１１の結合を競合的に阻害する、および／またはそれと同じＤＰＰ−４エピトープに結合する、単離された抗体またはその抗原結合フラグメント、変異体もしくは誘導体を含む。
【００３３】
特定の面において、免疫アッセイは、少なくとも２つの抗ＤＰＰ−４抗体またはその抗原結合フラグメント、変異体もしくは誘導体の使用を含み、ここで、該抗ＤＰＰ−４抗体の１つは、３つの重鎖ＣＤＲ ＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２およびＶＨＣＤＲ３を有するＶＨ、ならびに３つの軽鎖ＣＤＲ ＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２およびＶＬＣＤＲ３を有するＶＬを含む、単離された抗体またはその抗原結合フラグメント、変異体もしくは誘導体であってよく、ここで、該単離された抗体またはフラグメント、変異体もしくは誘導体のＣＤＲは、寄託番号ＰＴＡ−１２１８７０としてＡＴＣＣに寄託されたハイブリドーマから産生されるマウスモノクローナル抗体ｍ３Ｂ７．６、または寄託番号ＰＴＡ−１２１８７１としてＡＴＣＣに寄託されたハイブリドーマから産生されるマウスモノクローナル抗体ｍ５Ｂ７．７のＣＤＲと同一であり；そして、２以上の抗ＤＰＰ−４抗体のうち１つは、３つの重鎖ＣＤＲ ＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２およびＶＨＣＤＲ３を有するＶＨ、ならびに３つの軽鎖ＣＤＲ ＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２およびＶＬＣＤＲ３を有するＶＬを含む、単離された抗体またはその抗原結合フラグメント、変異体もしくは誘導体であってよく、ここで、該単離された抗体またはフラグメント、変異体もしくは誘導体のＣＤＲは、寄託番号ＰＴＡ−１２１８７２としてＡＴＣＣに寄託されたハイブリドーマから産生されるラットモノクローナル抗体Ｒ１１Ａ２．１５、または寄託番号ＰＴＡ−１２１８７３としてＡＴＣＣに寄託されたハイブリドーマから産生されるラットモノクローナル抗体Ｒ１１Ａ９．１１のＣＤＲと同一である。
【００３４】
特定の面において、免疫アッセイは、少なくとも２つの抗ＤＰＰ−４抗体またはその抗原結合フラグメント、変異体もしくは誘導体の使用を含み、ここで、２以上の抗ＤＰＰ−４抗体のうち１つは、寄託番号ＰＴＡ−１２１８７０としてＡＴＣＣに寄託されたハイブリドーマから産生されるマウスモノクローナル抗体ｍ３Ｂ７．６、または寄託番号ＰＴＡ−１２１８７１としてＡＴＣＣに寄託されたハイブリドーマから産生されるマウスモノクローナル抗体ｍ５Ｂ７．７のＶＨおよびＶＬと同一のＶＨおよびＶＬを含む、単離された抗体またはその抗原結合フラグメント、変異体もしくは誘導体であってよく；そして、２以上の抗ＤＰＰ−４抗体のうち１つは、寄託番号ＰＴＡ−１２１８７２としてＡＴＣＣに寄託されたハイブリドーマから産生されるラットモノクローナル抗体Ｒ１１Ａ２．１５、または寄託番号ＰＴＡ−１２１８７３としてＡＴＣＣに寄託されたハイブリドーマから産生されるラットモノクローナル抗体Ｒ１１Ａ９．１１のＶＨおよびＶＬと同一のＶＨおよびＶＬを含む、単離された抗体またはその抗原結合フラグメント、変異体もしくは誘導体であり得る。
【００３５】
特定の面において、免疫アッセイは、固体支持体に結合した第一の抗ＤＰＰ−４“捕捉”抗体またはその抗原結合フラグメント、ならびに第二の抗ＤＰＰ−４“検出”抗体またはその抗原結合フラグメント（例えば、抗体ｍ３Ｂ７．６、ｍ５Ｂ７．７、Ｒ１１Ａ２．１５、および／またはＲ１１Ａ９．１１を含む）の使用を含む、サンドイッチ免疫アッセイであり得る。例えば、該免疫アッセイは、固体支持体に捕捉抗体またはその抗原結合フラグメントを結合させること；サンプル中にＤＰＰ−４が存在する場合、ＤＰＰ−４が捕捉抗体またはその抗原結合フラグメントに結合するのに十分な条件下で、試験サンプルまたは対照サンプルを適用すること；捕捉抗体またはその抗原結合フラグメントに既に結合したＤＰＰ−４への結合を可能にするのに十分な条件下で、検出抗体またはその抗原結合フラグメントを適用すること；および、ＤＰＰ−４に結合した検出抗体またはその抗原結合フラグメントの量を測定することを含み得る。特定の面において、検出抗体は、検出可能なラベルを含んでいてよく、例えば、検出可能なラベルは、ビオチンであり得て、該キットは、ストレプトアビジン−西洋ワサビペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）複合体およびＨＲＰの発色基質などの検出試薬を含み得るか、または検出可能なラベルは、ルテニウムキレートであり得る。
【００３６】
特定の面において、免疫アッセイは、捕捉抗体および検出抗体の使用を含み得る：
【００３７】
ここで、捕捉抗体は、寄託番号ＰＴＡ−１２１８７０としてＡＴＣＣに寄託されたハイブリドーマから産生されるマウスモノクローナル抗体ｍ３Ｂ７．６またはその抗原結合フラグメント、変異体もしくは誘導体であり、検出抗体は、寄託番号ＰＴＡ−１２１８７２としてＡＴＣＣに寄託されたハイブリドーマから産生されるラットモノクローナル抗体Ｒ１１Ａ２．１５またはその抗原結合フラグメント、変異体もしくは誘導体である；
【００３８】
捕捉抗体は、寄託番号ＰＴＡ−１２１８７０としてＡＴＣＣに寄託されたハイブリドーマから産生されるマウスモノクローナル抗体ｍ３Ｂ７．６またはその抗原結合フラグメント、変異体もしくは誘導体であり、検出抗体は、寄託番号ＰＴＡ−１２１８７３としてＡＴＣＣに寄託されたハイブリドーマから産生されるラットモノクローナル抗体Ｒ１１Ａ９．１１またはその抗原結合フラグメント、変異体もしくは誘導体である；
【００３９】
捕捉抗体は、寄託番号ＰＴＡ−１２１８７１としてＡＴＣＣに寄託されたハイブリドーマから産生されるマウスモノクローナル抗体ｍ５Ｂ７．７またはその抗原結合フラグメント、変異体もしくは誘導体であり、検出抗体は、寄託番号ＰＴＡ−１２１８７２としてＡＴＣＣに寄託されたハイブリドーマから産生されるラットモノクローナル抗体Ｒ１１Ａ２．１５またはその抗原結合フラグメント、変異体もしくは誘導体である；
【００４０】
捕捉抗体は、寄託番号ＰＴＡ−１２１８７１としてＡＴＣＣに寄託されたハイブリドーマから産生されるマウスモノクローナル抗体ｍ５Ｂ７．７またはその抗原結合フラグメント、変異体もしくは誘導体であり、検出抗体は、寄託番号ＰＴＡ−１２１８７３としてＡＴＣＣに寄託されたハイブリドーマから産生されるラットモノクローナル抗体Ｒ１１Ａ９．１１またはその抗原結合フラグメント、変異体もしくは誘導体である；
【００４１】
捕捉抗体は、寄託番号ＰＴＡ−１２１８７２としてＡＴＣＣに寄託されたハイブリドーマから産生されるラットモノクローナル抗体Ｒ１１Ａ２．１５またはその抗原結合フラグメント、変異体もしくは誘導体であり、検出抗体は、寄託番号ＰＴＡ−１２１８７０としてＡＴＣＣに寄託されたハイブリドーマから産生されるマウスモノクローナル抗体ｍ３Ｂ７．６またはその抗原結合フラグメント、変異体もしくは誘導体である；
【００４２】
捕捉抗体は、寄託番号ＰＴＡ−１２１８７２としてＡＴＣＣに寄託されたハイブリドーマから産生されるラットモノクローナル抗体Ｒ１１Ａ２．１５またはその抗原結合フラグメント、変異体もしくは誘導体であり、検出抗体は、寄託番号ＰＴＡ−１２１８７１としてＡＴＣＣに寄託されたハイブリドーマから産生されるマウスモノクローナル抗体ｍ５Ｂ７．７またはその抗原結合フラグメント、変異体もしくは誘導体である；
【００４３】
捕捉抗体は、寄託番号ＰＴＡ−１２１８７３としてＡＴＣＣに寄託されたハイブリドーマから産生されるラットモノクローナル抗体Ｒ１１Ａ９．１１またはその抗原結合フラグメント、変異体もしくは誘導体であり、検出抗体は、寄託番号ＰＴＡ−１２１８７０としてＡＴＣＣに寄託されたハイブリドーマから産生されるマウスモノクローナル抗体ｍ３Ｂ７．６またはその抗原結合フラグメント、変異体もしくは誘導体である；および／または、
【００４４】
捕捉抗体は、寄託番号ＰＴＡ−１２１８７３としてＡＴＣＣに寄託されたハイブリドーマから産生されるラットモノクローナル抗体Ｒ１１Ａ９．１１またはその抗原結合フラグメント、変異体もしくは誘導体であり、検出抗体は、寄託番号ＰＴＡ−１２１８７１としてＡＴＣＣに寄託されたハイブリドーマから産生されるマウスモノクローナル抗体ｍ５Ｂ７．７またはその抗原結合フラグメント、変異体もしくは誘導体である。
【００４５】
特定の面において、本発明は、対象から得られたサンプル中のＤＰＰ−４の量を測定する方法を提供し、該方法は、提供される免疫アッセイまたはキット、および／または提供される抗体またはフラグメント、変異体もしくは誘導体、またはかかる抗体の２以上の組合せ（例えば、抗体ｍ３Ｂ７．６、ｍ５Ｂ７．７、Ｒ１１Ａ２．１５、および／またはＲ１１Ａ９．１１を含む）を用いてサンプルをアッセイすることを含む。特定の面において、サンプルは、全血、血清、血漿、唾液、尿、痰、気管支肺胞洗浄液、肺上皮細胞、または鼻ポリープ、または皮膚の１以上であり得る。特定の面において、対象は、ＩＬ−１３媒介性疾患または障害、肺疾患または障害、および慢性炎症性皮膚疾患または障害からなる群より選択される疾患または病状を有する。例えば、該疾患または病状は、喘息、アトピー性喘息、コルチコステロイドナイーブ喘息、慢性喘息、コルチコステロイド抵抗性喘息、コルチコステロイド難治性喘息、喫煙による喘息、コルチコステロイドによって制御されない喘息、特発性肺線維症（ＩＰＦ）、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、潰瘍性大腸炎（ＵＣ）、アトピー性皮膚炎（ＡＤ）、アレルギー性鼻炎、慢性鼻副鼻腔炎、皮膚線維症、アレルギー性接触性皮膚炎、湿疹および／または乾癬であり得る。特定の面において、サンプルは、対象から得られ、サンプル中のＤＰＰ−４レベルの測定のために提出され得る。特定の面において、対象は喘息患者であってよく、該患者から採取されたサンプルは血清であり得る。
【図面の簡単な説明】
【００４６】
【図１】図１：反復性複数部位免疫化技術（Repetitive Immunization at Multiple Sites）（ＲＩＭＭＳ）プロトコールのための流入領域リンパ節注入部位。ヒトＤＰＰ−４に特異的なマウスおよびラットモノクローナル抗体は、ＲＩＭＭＳプロトコールを用いて産生された（Kilpatrick, K., et al., Hybridoma 16:381−389 (2009)）。要すれば、２匹のＷｉｓｔａｒラットを、図１に示す流入領域リンパ節注入部位Ａ、ＢおよびＣに、３０、１５、７、３、３および３μｇのＣＤ２６を用いて、それぞれ０、２、５、７、９および１３日目に免疫化した。マウスの免疫化は、同じスケジュールに従ったが、各時点での抗原の量を半分にして行った。
【００４７】
【図２】図２Ａ−Ｄ：抗ＤＰＰ−４マウスおよびラット抗体は、直接結合ＥＬＩＳＡを用いて示されるように、ヒトＤＰＰ−４に特異的である。ヒトＤＰＰ−４で免疫化した２匹のラット（Ｒ９４７２およびＲ９４７３）からの、免疫前（左側）または試験１３日目（右側）の血清を用いた、ヒトＤＰＰ−４（ｒ−ＤＰＰ−４−ｈｉｓ）（Ａ）またはヒトｇｐ１３０−ｈｉｓ（Ｂ）に対する直接結合ＥＬＩＳＡ。１３日目のラット血清は、ヒトＤＰＰ４に特異的に結合するが、一方で、免疫前血清を用いると特異的結合は見られない。ヒトＤＰＰ−４で免疫化した５匹のマウス（ｍｓ９４４７、ｍｓ９４４８、ｍｓ９４４９、ｍｓ９４５０およびｍｓ９４５１）からの、免疫前（左側）または試験１３日目（右側）の血清を用いた、ヒトＤＰＰ−４（ｒ−ＤＰＰ−４−ｈｉｓ）（Ｃ）またはヒトｇｐ１３０−ｈｉｓ（Ｄ）に対する直接結合ＥＬＩＳＡ。１３日目のマウス血清は、ヒトＤＰＰ−４に特異的に結合するが、一方で、免疫前血清を用いると特異的結合は見られない。
【００４８】
【図３】図３Ａ−Ｂ：免疫アッセイにおける、捕捉抗体としてｍ３Ｂ７．６抗体（Ａ）またはｍ５Ｂ７．７（Ｂ）を用いる、ヒトＤＰＰ−４の検出。Ａでは、ＤＰＰ−４を、ＰＢＳまたは１％正常ヒト血清（ＮＨＳ）に添加し、捕捉抗体としてｍ３Ｂ７．６を用い、そして検出抗体としてＲ１１Ａ２．１５、Ｒ１１Ａ９．１１、または対照抗体Ｒ２２２１１３（R&D Systems Catalog No. MAB1180）を用いて、サンドイッチＥＬＩＳＡアッセイを行った。ｍ３Ｂ７．６＋Ｒ１１Ａ２．１５またはｍ３Ｂ７．６＋Ｒ１１Ａ９．１１は、サンドイッチＥＬＩＳＡアッセイにおいてヒトＤＰＰ−４を測定する際に最高の感度を提供した。Ｂでは、ＤＰＰ−４を、ＰＢＳまたは１％正常ヒト血清（ＮＨＳ）に添加し、捕捉抗体としてｍ５Ｂ７．７を用い、そして検出抗体としてＲ１１Ａ２．１５、Ｒ１１Ａ９．１１、または対照抗体Ｒ２２２１１３（R&D Systems Catalog No. MAB1180）を用いて、サンドイッチＥＬＩＳＡアッセイを行った。ｍ５Ｂ７．７＋Ｒ１１Ａ２．１５またはｍ５Ｂ７．７＋Ｒ１１Ａ９．１１は、サンドイッチＥＬＩＳＡアッセイにおいてヒトＤＰＰ−４を測定する際に最高の感度を提供した。これらの結果は、図２に記載の結果と合わせて、抗体ｍ３Ｂ７．６、ｍ５Ｂ７．７、Ｒ１１Ａ２．１５およびＲ１１Ａ９．１１が、内因性および組み換えヒトＤＰＰ４の両方を検出することを実証する。加えて、市販の抗体（Ｒ２２２１１３）は、ＤＰＰ−４を検出した抗体ｍ３Ｂ７．６、ｍ５Ｂ７．７、Ｒ１１Ａ２．１５およびＲ１１Ａ９．１１と比較して、これらの免疫アッセイでＤＰＰ４を検出することができなかった。
【００４９】
【図４】図４Ａ−Ｅ：マウスモノクローナル抗体ｍ３Ｂ７．６とｍ５Ｂ７．７は、互いに競合し、ラットモノクローナル抗体Ｒ１１Ａ２．１５とＲ１１Ａ９．１１は、互いに競合する。Ａ）図４Ｂ−Ｅに示すように、ｍ３Ｂ７．６、ｍ５Ｂ７．７、Ｒ１１Ａ２．１５およびＲ１１Ａ９．１１の相対的結合特異性および競合プロファイルを決定するために用いたＯＣＴＥＴアッセイの概略図。要すれば、試験抗体を最初にビオチン化し、次いで、ストレプトアビジンバイオセンサー上で、２００μｌ中２０μｇ／ｍｌの濃度で５分間、捕捉した。その後、バイオセンサーを２００μＬのＰＢＳ緩衝液で１分間洗浄し、次いで、組み換えヒトＤＰＰ−４を１０μｇ／ｍＬで用いて、５分間インキュベートし、２００μＬのＰＢＳ緩衝液で１分間洗浄した。競合抗体を、試験抗体と１：１の比で混合し、それぞれ終濃度２０μｇ／ｍｌで、バイオセンサー上に２００μｌを５分間ロードした。試験抗体に対するさらなる結合を示す競合抗体は、異なるエピトープを有すると見なされた。そうでなければ、それらは同じエピトープを共有すると考えられた。Ｂ）試験抗体としてｍ３Ｂ７．６（ａ）を用いた、ＯＣＴＥＴアッセイの結果である。ｍ５Ｂ７．７（ｂ）は、ｍ３Ｂ７．６（ａ）と同じ結合プロファイルを示したが、Ｒ１１Ａ２．１５（ｃ）およびＲ１１Ａ９．１１（ｄ）は、ｍ３Ｂ７．６（ａ）とは異なる結合プロファイルを示した。これらの結果に基づき、抗体ｍ３Ｂ７．６およびｍ５Ｂ７．７は、同じか、または重複するエピトープを共有する。Ｃ）試験抗体としてｍ５Ｂ７．７（ｂ）を用いた、ＯＣＴＥＴアッセイの結果。ｍ３Ｂ７．６（ａ）は、ｍ５Ｂ７．７（ｂ）と同じ結合プロファイルを示したが、Ｒ１１Ａ２．１５（ｃ）およびＲ１１Ａ９．１１（ｄ）は、ｍ５Ｂ７．７（ｂ）とは異なる結合プロファイルを示した。これらの結果に基づき、抗体ｍ５Ｂ７．７およびｍ３Ｂ７．６は、同じか、または重複するエピトープを共有する。Ｄ）試験抗体としてＲ１１Ａ２．１５（ｃ）を用いた、ＯＣＴＥＴアッセイの結果。Ｒ１１Ａ９．１１（ｄ）は、Ｒ１１Ａ２．１５（ｃ）と同じ結合プロファイルを示したが、ｍ３Ｂ７．６（ａ）およびｍ５Ｂ７．７（ｂ）は、Ｒ１１Ａ２．１５（ｃ）とは異なる結合プロファイルを示した。これらの結果から、抗体Ｒ１１Ａ２．１５およびＲ１１Ａ９．１１は、同じか、または重複するエピトープを共有する。Ｅ）試験抗体としてＲ１１Ａ９．１１（ｄ）を用いた、ＯＣＴＥＴアッセイの結果。Ｒ１１Ａ２．１５（ｃ）は、Ｒ１１Ａ９．１１（ｄ）と同じ結合プロファイルを示したが、ｍ３Ｂ７．６（ａ）およびｍ５Ｂ７．７（ｂ）は、Ｒ１１Ａ９．１１（ｄ）とは異なる結合プロファイルを示した。これらの結果から、抗体Ｒ１１Ａ９．１１およびＲ１１Ａ２．１５は、同じか、または重複するエピトープを共有する。
【発明を実施するための形態】
【００５０】
詳細な説明
本発明は、抗ＤＰＰ−４モノクローナル抗体、これらの抗体の１以上を含むアッセイキット、およびヒト患者から得られたサンプル中のＤＰＰ−４レベルの検出および測定のための、これらの抗体の１以上を用いる、ロバストな、高感度かつ特異的な免疫アッセイを提供する。
【００５１】
本明細書および添付の特許請求の範囲において、単数形“ａ”、“ａｎ”および“ｔｈｅ”は、その内容について別段の明確な指示がない限り、複数の指示対象を含む。用語“ａ”（または“ａｎ”）、ならびに用語“１以上”および“少なくとも１つ”は、本明細書中、互換的に使用され得る。
【００５２】
さらに、本明細書で用いる“および／または”は、２つの指定された特徴または構成要素のそれぞれの具体的な開示として、他の指定された特徴または構成要素の有無を示すものと解釈されるべきである。従って、本明細書中“Ａおよび／またはＢ”などの語句において使用される用語“および／または”は、“ＡおよびＢ”、“ＡまたはＢ”、“Ａ”（単独）、ならびに“Ｂ”（単独）を包含することを意図する。同様に、“Ａ、Ｂ、および／またはＣ”などの語句において使用される用語“および／または”は、以下の面のそれぞれを包含することを意図する：Ａ、ＢおよびＣ；Ａ、ＢまたはＣ；ＡまたはＣ；ＡまたはＢ；ＢまたはＣ；ＡおよびＣ；ＡおよびＢ；ＢおよびＣ；Ａ（単独）；Ｂ（単独）；ならびに、Ｃ（単独）。
【００５３】
複数の面が、用語“〜を含む”を用いて本明細書に記載されている場合、“〜からなる”および／または“本質的に〜からなる”という用語で記載された類似の面もまた、提供される。
【００５４】
本明細書および特許請求の範囲を通じて数値と関連して使用される用語“約”は、当業者に、よく知られている、および許容される精度（accuracy）を示す。一般に、かかる精度は±１０％である。
【００５５】
他にこれと異なる記載がない限り、本明細書で用いる全ての技術用語および科学用語は、本発明が関係する分野の当業者に一般的に理解されるのと同じ意味を有する。例えば、the Concise Dictionary of Biomedicine and Molecular Biology, Juo, Pei−Show, 2nd ed., 2002, CRC Press; The Dictionary of Cell and Molecular Biology, 3rd ed., 1999, Academic Press; および、the Oxford Dictionary Of Biochemistry And Molecular Biology, Revised, 2000, Oxford University Pressは、本明細書で用いる多くの用語の一般的な辞書を当業者に提供する。
【００５６】
単位、接頭語および記号は、国際単位系（ＳＩ）の許容書式で示される。数値範囲は、範囲を定義する数値を包含する。他に特記しない限り、アミノ酸配列は、アミノ末端からカルボキシ末端方向へ左側から右側へ記載されている。本明細書で提供される見出しは、本明細書の種々の面または複数の面に限定するものではなく、本明細書全体を参照することによって包含され得る。従って、以下に定義される用語は、明細書全体を参照することによって、より完全に定義される。
【００５７】
“単離された”物質、組成物、物体および／または複数の物質、組成物または物体の組合せ、あるいはその文法上の変形、例えば、単離された生物学的物質とは、その天然環境にない物質である。特定の精製レベルは必要とされない。例えば、単離された抗体とは、その天然または自然環境で産生されない、または存在しない、抗体である。組換え産生された生物学的物質とは、ハイブリドーマなどの非天然細胞で産生される物質と同様に、本明細書に記載の通り単離されたと見なされる。物質、例えば、生物学的物質はまた、何れか適切な技術によって分離、分画または部分的にもしくは実質的に精製されている場合に、“単離された”と見なされる。特定の面において、単離された物質、例えば、単離された生物学的物質は、“天然に存在しない”物質であり得る。
【００５８】
本明細書で用いる用語“天然に存在しない”物質、組成物、物体および／または複数の物質、組成物または物体の組合せ、あるいはその文法上の変形は、当業者によって“天然に存在する”として十分に理解されているか、あるいは米国特許商標庁などの行政機関もしくは裁判所などの司法機関によって“天然に存在する”と決定もしくは解釈されている、またはある時点で決定もしくは解釈された、物質、組成物、物体および／または複数の物質、組成物または物体の組合せの形態を明示的に除外するが、単に除外するだけの、条件付きの用語である。例えば、用語“天然に存在しない抗体”は、天然に存在する抗体、例えば、抗原刺激の通常の環境に暴露されたマウスの免疫系に天然に存在し得る抗体、または例えば、米国特許商標庁などの行政機関、または裁判所、例えば連邦裁判所などの司法機関によって、“天然に存在する”と最終的に決定された抗体を、明示的に除外する。
【００５９】
本明細書において互換的に使用される“ポリヌクレオチド”または“核酸”は、任意の長さのヌクレオチドのポリマーを意味し、ＤＮＡおよびＲＮＡを含む。ヌクレオチドは、デオキシリボヌクレオチド、リボヌクレオチド、修飾されたヌクレオチドまたは塩基、および／またはそれらの類縁体、またはＤＮＡもしくはＲＮＡポリメラーゼによってポリマーに組み込まれ得る基質であり得る。ポリヌクレオチドは、メチル化されたヌクレオチドおよびそれらの類縁体などの修飾ヌクレオチドを含み得る。上記の記載は、ＲＮＡおよびＤＮＡを含む、本明細書で言及される全てのポリヌクレオチドに適用される。
【００６０】
本明細書で用いる用語“発現”とは、遺伝子が生化学的物質、例えば、本明細書で提供されるトランスポーター分子を産生することによる過程を意味する。この過程は、遺伝子ノックダウンならびに一過性発現および安定発現の両方を含むが、これに限定されない、細胞内の遺伝子の機能的存在の現出を含む。これには、１以上のｍＲＮＡへの遺伝子の転写、および１以上のポリペプチドへのかかるｍＲＮＡの翻訳が含まれるが、これに限定されない。最終産物が生化学的物質である場合、発現には、その生化学的および全ての前駆体の生成が含まれる。
【００６１】
“発現産物”は、核酸、例えば、遺伝子の転写により産生されるメッセンジャーＲＮＡ、またはポリペプチドの何れかであり得る。本明細書に記載の発現産物にはさらに、転写後修飾、例えばポリアデニル化を有する核酸、または翻訳後修飾、例えば、メチル化、グリコシル化、脂質の付加、他のタンパク質サブユニットとの会合、タンパク質分解切断などを有するポリペプチドが含まれる。
【００６２】
本明細書で用いる用語“ベクター”または“発現ベクター”は、宿主細胞中に目的の発現産物を導入するか、または宿主細胞中に目的の遺伝子産物を発現させるためのビークルとして使用されるベクターを意味する。当業者に知られているように、このようなベクターは、プラスミド、ファージ、ウイルスおよびレトロウイルスからなる群より容易に選択され得る。一般的に、ベクターは、選択マーカー、特定の核酸のクローニングを容易にするための適切な制限部位、および真核細胞もしくは原核細胞に侵入するおよび／または複製する能力を含み得る。ベクターの例には、ウイルスベクター、そのままの(naked)ＤＮＡもしくはＲＮＡ発現ベクター、プラスミド、コスミドまたはファージベクター、カチオン性縮合剤に関連するＤＮＡもしくはＲＮＡ発現ベクター、リポソームに封入されたＤＮＡもしくはＲＮＡ発現ベクター、およびプロデューサー細胞などの特定の真核細胞が含まれるが、これに限定されない。
【００６３】
用語“宿主細胞”は、組換えＤＮＡ技術を用いて構築され、少なくとも１つの発現産物をコードするベクターを有する細胞を意味する。組換え宿主からの発現産物の単離方法の記載において、用語“細胞”および“細胞培養物”は、これと異なる記載が明示されない限り、発現産物の供給源を示すために互換的に用いられ、すなわち、該“細胞”からの発現産物の採取とは、スピンダウンした全細胞からの採取、または培地および懸濁した細胞の両方を含む細胞培養物からの採取のいずれかを意味する。
【００６４】
用語“ポリペプチド”、“ペプチド”および“タンパク質”は、任意の長さのアミノ酸のポリマーを意味するために、本明細書中、互換的に用いられる。ポリマーは、直鎖状または分枝鎖状であってよく、修飾アミノ酸を含んでいてもよく、非アミノ酸がそれを中断してもよい。該用語はまた、天然に、または介入；例えば、ジスルフィド結合形成、グリコシル化、脂質化、アセチル化、リン酸化、または何れか他の操作もしくは修飾、例えば標識成分との結合など、によって修飾されたアミノ酸ポリマーを包含する。また、この定義内には、例えば、１以上のアミノ酸の類縁体（例えば、非天然アミノ酸などを含む）、ならびに当技術分野で公知の他の修飾を含むポリペプチドも含まれる。本発明のポリペプチドは抗体に基づいているため、特定の態様において、該ポリペプチドは、一本鎖または会合鎖(associated chain)として存在し得ることが理解される。
【００６５】
本明細書で用いる用語“ＤＰＰ−４”は、ＤＰＰ−４遺伝子（ｃＤＮＡ：配列番号：７）によりコードされるジペプチジルペプチダーゼＩＶタンパク質（ＥＣ３．４．１４．５；Ｕｎｉｐｒｏｔ：Ｐ２７４８７（膜結合形態：配列番号：５；可溶性形態：配列番号：６）を意味する。ＤＰＰ−４はまた、ＤＰＰ−ＩＶ、アデノシンデアミナーゼ複合体タンパク質２、またはＣＤ２６（分化のクラスター２６）としても知られている。ＤＰＰ−４は、アトラクチン、ＦＡＰ、ＤＰＰ８およびＤＰＰ９に関係する。ＤＰＰ−４は、高度に保存された多機能性ＩＩ型膜貫通糖タンパク質であり、それは、循環血中（血漿）、ならびに上皮細胞、内皮細胞およびリンパ系細胞を含む、いくつかの細胞タイプの表面上の両方に存在する。ＤＰＰ−４は、Ｔ細胞共刺激、ケモカイン生物学、ＩＩ型糖尿病、および腫瘍生物学に関与するセリンプロテアーゼファミリーの一部である（Zhong et al., Atherosclerosis 2013;226:305−314）。ＤＰＰ−４の内因性基質には、増殖因子、ケモカイン、神経ペプチドおよび血管作用性ペプチドなどの広範なプロリン含有ペプチドが含まれる（Gorrell, M., Clin. Sci. 108, 277−292, 2005; McIntosh, C. H. S., et al. Int. J. Biochem. Cell Biol. 38, 860−872, 2006）。喘息のような炎症性呼吸器疾患におけるＤＰＰ−４の役割は、Ｇｉｏｖａｎｎｉｎｉ−Ｃｈａｍｉ（Giovannini−Chami et al., European Respiratory Journal. 2012 May;39(5):1197−205）によって提案されており、彼らは、制御されない喘息に関連する、ダニアレルギー性鼻炎を有する小児の鼻上皮において、ＤＰＰ−４転写産物（および、他のＴｈ２シグナル伝達遺伝子）の上昇を見出した。用語ＤＰＰ−４にはまた、そのフラグメント、変異体（例えば、当技術得分野で知られているＫ１Ｒ、Ｖ７Ｉ、Ｓ４３７Ｉ、Ｔ５５７Ｉ、Ｄ６６３Ｅ変異体）、および誘導体（例えば、ＤＰＰ−４タンパク質のグリコシル化もしくは非グリコシル化タンパク質形態、または他の化学的に修飾されたタンパク質形態）が含まれる。
【００６６】
例えば、“ＤＰＰ−４レベル”または“ＤＰＰ−４の量”における、用語“レベル”または“量”は、生物学的サンプルにおけるＤＰＰ−４の存在または発現（タンパク質発現）を検出するための分析方法を用いて得られ、および生物学的サンプル中のＤＰＰ−４の、それに関する、またはそれに対応する、存在、不存在、絶対量もしくは濃度、相対量もしくは濃度、力価、発現レベル、測定されたレベルの比などを示す、測定値を意味する。“値”または“レベル”の精度は、ＤＰＰ−４を検出するために用いられる特定の分析方法（例えば、本明細書で提供される免疫アッセイ）の特定の設計および要素によって変わる。例えば、米国特許出願公開第２０１０／００２２１７５２号を参照のこと。
【００６７】
ＤＰＰ−４に関して本明細書中で使用される場合、用語“上昇したＤＰＰ−４”、“高ＤＰＰ−４”、“上昇したＤＰＰ−４レベル”または“高ＤＰＰ−４レベル”は、正常レベルまたは範囲よりも高い、生物学的サンプル（例えば、血清）におけるレベルを意味する。ＤＰＰ−４の正常レベルまたは範囲は、標準的手法に従って定義される。従って、特定の生物学的サンプルにおいて測定されたレベルは、類似の正常サンプルにおいて決定されたレベルまたはレベル範囲と比較され得る。ＤＰＰ−４のレベルは、試験サンプル中に正常サンプルよりも高いレベルまたは範囲で存在する場合に上昇すると言われている。
【００６８】
本明細書で用いる用語“抗体”（またはフラグメント、変異体もしくは誘導体）とは、Ｂ細胞によって産生される一般的な抗体との関連で、抗原に結合可能な抗体の少なくとも最小の部分、例えば、少なくとも重鎖（ＶＨ）の可変ドメインおよび軽鎖（ＶＬ）の可変ドメインを意味する。脊椎動物系における基本的な抗体構造は、比較的よく理解されている。例えば、Harlow et al., Antibodies : A Laboratory Manual, (Cold Spring Harbor Laboratory Press, 2nd ed. 1988)を参照のこと。他に特記されない限り、抗体“フラグメント”、“変異体”または“誘導体”とは、抗原結合“フラグメント”、“変異体”または“誘導体”を意味する。
【００６９】
本明細書に記載される抗体に言及するとき、用語“フラグメント”、“変異体”、“誘導体”および“類縁体”には、対照抗体の少なくともいくつかの活性、例えば、抗原結合活性を保持するが、構造的には異なっている抗体が含まれ得る。抗体のフラグメントには、例えば、例えば、Ｆａｂ、Ｆａｂ’およびＦ（ａｂ’）２、Ｆｄ、Ｆｖ、一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）、一本鎖抗体、ジスルフィド結合Ｆｖ（ｓｄＦｖ）、フラグメントが含まれる。変異体には、上記のフラグメント、およびまた例えば、アミノ酸置換、欠失または挿入により、可変ドメインにおいて変更されたアミノ酸配列を有する抗体が含まれる。変異体は、自発的に発生することも、または意図的に構築することもできる。意図的に構築された変異体は、当技術分野で公知の突然変異誘発技術を用いて作製することができる。変異体抗体は、保存的または非保存的アミノ酸置換、欠失または付加を含み得る。変異は、例えば、対照抗体と同じエピトープに結合するか、または対照抗体を競合的に阻害するなど、抗体が対照抗体の機能を維持するという規制によってのみ制限される。誘導体は、天然抗体には見いだされない追加の特徴を示すように改変された抗体である。例には、抗体の抗原結合ドメインを含む融合タンパク質、または複合体化抗体が含まれる。“誘導体”抗体にはまた、側鎖官能基の反応により化学的に誘導体化された１以上のアミノ酸が含まれ得る。“誘導体”としては、２０個の標準アミノ酸の１以上の標準または合成アミノ酸誘導体を含む抗体もまた含まれ得る。例えば、４−ヒドロキシプロリンは、プロリンと置換され得て；５−ヒドロキシリジンは、リシンと置換され得て；３−メチルヒスチジンは、ヒスチジンと置換され得て；ホモセリンは、セリンと置換され得て；および、オルニチンは、リシンと置換され得る。
【００７０】
軽鎖および重鎖の両方は、構造的および機能的相同性の領域に分けられる。用語“定常”および“可変”は、機能的に使用される。これに関して、軽鎖（ＶＬ）および重鎖（ＶＨ）部分の両方の可変ドメインが、抗原認識および特異性を決定することが理解され得る。逆に、軽鎖（ＣＬ）および重鎖（ＣＨ１、ＣＨ２またはＣＨ３）の定常ドメインは、分泌、経胎盤移動、Ｆｃ受容体結合、補体結合などの重要な生物学的特性をもたらす。
【００７１】
上記の通り、可変領域は、結合分子が抗原上のエピトープを選択的に認識し、特異的に結合するのを可能にする。すなわち、抗体のＶＬドメインおよびＶＨドメイン、または相補性決定領域（ＣＤＲ）のサブセットは、結合して、３次元抗原結合部位を規定する可変領域を形成する。この四次結合分子構造は、Ｙの各アームの末端に存在する抗原結合部位を形成する。より具体的には、抗原結合部位は、ＶＨ鎖およびＶＬ鎖のそれぞれ上の３つのＣＤＲによって規定される。
【００７２】
抗体において、各抗原結合ドメイン中に存在する６つの“相補性決定領域”または“ＣＤＲ”は、抗体が水性環境下でその３次元配置をとるように、抗原結合ドメインを形成するように特異的に配置されたアミノ酸の短い非連続の配列である。フレームワーク”領域と呼ばれる抗原結合ドメイン中のアミノ酸の残りの部分は、分子間変動が少ない。フレームワーク領域は、大部分がβシート構造を採り、ＣＤＲは、結合して、場合によってはβシート構造の一部を形成するループを形成する。従って、フレームワーク領域は、鎖間、非共有結合相互作用によってＣＤＲを正しい配向に位置付ける足場を形成するように作用する。位置決めされたＣＤＲによって形成される抗原結合ドメインは、免疫反応性抗原上のエピトープに相補的な表面を規定する。この相補的表面は、その同族エピトープに対する抗体の非共有結合を促進する。ＣＤＲおよびフレームワーク領域のそれぞれを含むアミノ酸は、それらが正確に定義されているため、当業者により任意の所定の重鎖または軽鎖可変領域について容易に同定され得る（“Sequences of Proteins of Immunological Interest” Kabat, E., et al., U.S. Department of Health and Human Services, (1983); および、Chothia and Lesk, J. Mol. Biol., 196:901−917 (1987)を参照のこと、それらの内容全体は、引用により本明細書中に包含される）。
【００７３】
当技術分野で使用および／または許容される用語の２以上の定義がある場合、本明細書で用いる該用語の定義は、明示的に反対の記載がない限り、そのような意味の全てを含むことを意図する。特定の例は、重鎖および軽鎖ポリペプチドの両方の可変領域内に見出される非連続の抗原結合部位を記載するための用語“相補性決定領域（“ＣＤＲ”）”の使用である。この特定の領域は、Kabatらの、U.S. Dept. of Health and Human Services, “Sequences of Proteins of Immunological Interest” (1983)およびChothiaらの、J. Mol. Biol. 196:901−917 (1987)（それらは引用により本明細書中に包含される）に記載されており、その定義は、互いに比較したとき、アミノ酸残基の重複またはサブセットを含む。それにもかかわらず、抗体またはその変異体のＣＤＲを意味するためのいずれかの定義の適用は、本明細書で定義され、使用される用語の範囲内にあることを意図する。
【００７４】
抗体またはその抗原結合フラグメント、変異体もしくは誘導体には、ポリクローナル抗体、モノクローナル抗体、ヒト抗体、ヒト化抗体もしくはキメラ抗体、一本鎖抗体、エピトープ結合フラグメント、例えば、Ｆａｂ、Ｆａｂ’およびＦ（ａｂ’）２、Ｆｄ、Ｆｖ、一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）、一本鎖抗体、ジスルフィド結合Ｆｖ（ｓｄＦｖ）、ＶＬもしくはＶＨドメインのいずれかを含むフラグメント、Ｆａｂ発現ライブラリーによって産生されたフラグメントが含まれるが、これらに限定されない。ＳｃＦｖ分子は当技術分野で公知であり、例えば米国特許第５，８９２，０１９号に記載されている。本明細書に包含される免疫グロブリンまたは抗体分子は、免疫グロブリン分子の全てのタイプ（例えば、ＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＡ、およびＩｇＹ）、クラス（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１およびＩｇＡ２）またはサブクラスであり得る。
【００７５】
“特異的に結合する”とは、一般的に、抗体またはフラグメント、変異体もしくは誘導体が、その抗原結合ドメインを介してエピトープに結合すること、およびその結合が、抗原結合ドメインとエピトープの間の相補性を必要とすることを意味する。この定義に従って、抗体は、無作為の、無関係なエピトープに結合するよりも容易に、その抗原結合ドメインを介してエピトープへ結合するとき、該エピトープに“特異的に結合する”と言われる。
【００７６】
抗体またはフラグメント、変異体もしくは誘導体は、対照抗体またはその抗原結合フラグメントのエピトープへの結合をある程度阻害する程度まで、そのエピトープに優先的に結合する場合、該所定のエピトープに対して対照抗体またはその抗原結合フラグメントの結合を競合的に阻害すると言われる。競合的阻害は、当技術分野で公知の任意の方法、例えば競合ＥＬＩＳＡアッセイによって決定することができる。結合分子は、少なくとも９０％、少なくとも８０％、少なくとも７０％、少なくとも６０％、または少なくとも５０％まで、所定のエピトープへの対照抗体またはその抗原結合フラグメントの結合を競合的に阻害すると言える。
【００７７】
本明細書に記載の抗体またはその抗原結合フラグメント、変異体もしくは誘導体は、抗原のエピトープ（複数可）または部分（複数可）、例えば、それらが認識するか、または特異的に結合する標的多糖類に関して、記載または特定され得る。例えば、本明細書に記載の抗体の抗原結合ドメインと特異的に相互作用するヒトＤＰＰ−４の部分は、“エピトープ”である。
【００７８】
本明細書で用いる用語“ＩＬ−１３媒介性疾患または障害”は、（単独で、または他のメディエーターと共同して）引き起こされるか、障害を有する対象においてＩＬ−１３の異常なレベルによって悪化する、それと関連する、またはそれにより長引く、疾患を意味する。ＩＬ−１３媒介性疾患または障害の限定を意図しない例には、喘息、特発性肺線維症（ＩＰＦ）、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、潰瘍性大腸炎（ＵＣ）、アトピー性皮膚炎（ＡＤ）、アレルギー性鼻炎、または慢性鼻副鼻腔炎が挙げられる。
【００７９】
本明細書で用いる用語“肺疾患または障害”は、少なくとも部分的に肺または呼吸器系に影響を与える病状を意味する。限定を意図しない例には、喘息、アトピー性喘息、コルチコステロイドナイーブ喘息、慢性喘息、コルチコステロイド抵抗性喘息、コルチコステロイド難治性喘息、喫煙による喘息、コルチコステロイドによって制御されない喘息、ＩＰＦ、ＣＯＰＤ、アレルギー性鼻炎、または慢性鼻副鼻腔炎が含まれる。特定の面において、肺疾患または障害は、ＩＬ−１３媒介性である。
【００８０】
本明細書で用いる用語“慢性炎症性皮膚疾患または障害”は、少なくとも部分的に皮膚に影響を与える病状を意味する。限定を意図しない例としては、アトピー性皮膚炎、皮膚線維症、アレルギー性接触性皮膚炎、湿疹または乾癬が含まれる。特定の面において、慢性炎症性皮膚疾患または障害は、ＩＬ−１３媒介性である。
【００８１】
用語“喘息”は、可逆性気流閉塞および／または気管支過敏症として存在する疾患を意味し、いくつかの例においては、根底に炎症が関与している。喘息の例としては、アレルギー性喘息、アトピー性喘息、コルチコステロイドナイーブ喘息、慢性喘息、コルチコステロイド抵抗性喘息、コルチコステロイド難治性喘息、喫煙による喘息、コルチコステロイドによって制御されない喘息および他の喘息が挙げられ、例えばExpert Panel Report 3: Guidelines for the Diagnosis and Management of Asthma, National Asthma Education and 予防 Program (2007) (“NAEPP Guidelines”)に記載されている。
【００８２】
本明細書で用いる用語“ＣＯＰＤ”は、慢性閉塞性肺疾患を意味する。用語“ＣＯＰＤ”には、気腫および慢性閉塞性気管支炎の２つの主な症状が含まれる。
【００８３】
用語“特発性肺線維症”（ＩＰＦ）は、肺の進行性瘢痕または線維症を特徴とする疾患を意味する。これは、肺胞が徐々に線維化組織によって置き換わる間質性肺疾患の特定のタイプである。ＩＰＦでは、進行性の瘢痕化により、通常は薄く柔軟な組織が肥厚して堅くなり、肺が拡張し難くなり、酸素が容易に血流に入るのを妨げる。例えば、Am. J. Respir. Crit. Care Med. 2000. 161:646−664を参照のこと。
【００８４】
用語“潰瘍性大腸炎”（ＵＣ）は、特徴的な潰瘍または白斑を含む結腸直腸に影響を及ぼす消化器（ＧＩ）管の炎症性障害を意味する。ＵＣは間欠性疾患であり、症状が悪化している期間および比較的症状がない期間がある。活動性疾患の症状には、長期間（数週間）持続する血液混じりの下痢、体重減少、慢ＧＩ管からの慢性的な血液の喪失、貧血、腹痛、および軽度の不快感から痛みを伴う腸の動きまたは痛みを伴う腸の動きを伴う腹部痙攣が含まれる。例えば、Danese, et al. N Engl J Med. 2011 365(18):1713−25を参照のこと。
【００８５】
本明細書で用いる用語“アトピー性皮膚炎”は、アレルギー性鼻炎および喘息などの他のアトピー性疾患に関連することが多い慢性炎症性皮膚障害、再発性皮膚障害、非伝染性皮膚障害および掻痒性皮膚障害を意味する（Bieber, New England Journal of Medicine, 2008, 358: 1483−1494）。用語“アトピー性皮膚炎”は、“神経皮膚炎”、“アトピー性湿疹”または“内因性湿疹”と同等である。本明細書の記載に従い、それらが生じる場所、出現する場所、またはそれらを引き起こすストレス要因から、その名称を得る、アトピー性皮膚炎の特定の形態はまた、用語“アトピー性皮膚炎”にも包含される。これらには、屈面性湿疹、マルラスカトゥム湿疹（eczema mulluscatum）、いぼ状湿疹、ワクチニア性湿疹、ジスコイデス湿疹（eczema dyskoides）、異汗性湿疹、微生物性湿疹、貨幣状湿疹、脂漏性湿疹および湿疹の他の型；口周囲皮膚炎（perioral dermatitis and periorbital dermatitis）が含まれるが、これに限定されない。本明細書で用いる用語アトピー性皮膚炎にはまた、例えば黄色ブドウ球菌感染症などの頻繁に起こる細菌二次感染、伝染性膿痂疹およびそれに関連する疾患などの膿皮症、ならびに濾胞性狼瘡またはウイルス性二次感染が挙げられる。ＩＬ−１３は、疾患の病因に関与し、重要なインビボ誘導因子である。例えば、Oh et al., J. Immunol. 186:7232−42 (2011); Tazawa et al., Arch. Dermatol. Res. 295:459−464 (2004); Metwally et al. Egypt J. Immunol.  11:171−7 (2004)を参照のこと。
【００８６】
本明細書で用いる用語“対象”または“患者”は、全ての対象、特にヒトまたは非ヒト動物を含む、哺乳動物対象を意味する。用語“非ヒト動物”には、全ての脊椎動物、例えば、非ヒト霊長動物、ヒツジ、イヌ、ネコ、ウマ、ウシ、クマ、ニワトリ、両生類、爬虫類などの、ヒトまたは非ヒト哺乳動物が含まれる。
【００８７】
本明細書のいくつかの面において、対象は、ナイーブ(naive)な対象である。ナイーブな対象は、治療を施されていない、例えば治療剤を投与されていない対象である。いくつかの面において、ナイーブな対象は、ＩＬ−１３媒介性疾患または障害、例えば、喘息、ＩＦＰ、ＣＯＰＤ、ＡＤまたはＵＣを有すると診断される前に、治療剤で処置されていない。別の面において、対象は、ＩＬ−１３媒介性疾患または障害を有すると診断される前に、治療を受けた、および／または１以上の用量の治療剤（例えば、ＩＬ−１３媒介性疾患もしくは障害、肺疾患もしくは障害、慢性炎症性皮膚疾患もしくは障害または炎症性腸疾患もしくは障害と関連する炎症応答を調節することができる治療剤）を受容していた。
【００８８】
本明細書で用いる用語“ＩＬ−１３アンタゴニスト”は、インビトロまたはインビボでのＩＬ−１３の発現、活性もしくは半減期、またはＩＬ−１３媒介性疾患または障害を有する対象におけるＩＬ−１３により引き起こされる、または悪化される症状、病状または後遺症に影響し得る任意の薬剤を意味する。ＩＬ−１３アンタゴニストは、直接的または間接的に、ＩＬ−１３活性を阻害、低減もしくは中和し、ＩＬ−１３発現を阻害もしくは低減し、ＩＬ−１３半減期を低下させるか、またはＩＬ−１３による症状の悪化を防ぐことができる、以下に定義の“治療剤”であり得る。特定の面において、ＩＬ−１３アンタゴニストは、抗ＩＬ−１３モノクローナル抗体、例えば、トラロキヌマブ（配列番号３および４）、または２０１２年３月１日に公開され、引用によりその全体を本明細書に包含させる米国特許仮出願公開番号２０１２−００５２０６０に記載の他の抗ＩＬ−１３モノクローナル抗体である。他の面において、ＩＬ−１３アンタゴニストには、（ａ）抗ヒト−ＩＬ−１３抗体、例えば、レブリキズマブ（配列番号１および２）（ＭＩＬＲ１４４４Ａ／ＲＧ３６３７、Ｒｏｃｈｅ／Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ）、ＡＢＴ−３０８（Ａｂｂｏｔｔ）、ＧＳＫ６７９５８６（ＧｌａｘｏＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅ）またはＱＡＸ５７６（Ｎｏｖａｒｔｉｓ）；（ｂ）抗ヒト−ＩＬ−１３Ｒα１抗体、例えば、Ｍｅｒｃｋ  ＭＫ６１０５；（ｃ）ＩＬ−１３−毒素複合体、例えばＩＬ−１３−ＰＥ３８ＱＱＲ（ＮｅｏＰｈａｒｍ、Ｉｎｃ．）；（ｄ）ＩＬ−４ムテインＡｅｒｏｖａｎｔ(商標)（Ａｅｒｏｖａｎｃｅ、Ｉｎｃ．）；（ｅ）抗ＩＬ−４Ｒα抗体、例えばデュピルマブ／ＲＥＧＮ６６８（Ｒｅｇｅｎｅｒｏｎ）；（ｆ）ＩＬ−４Ｒαに対する二本鎖オリゴヌクレオチド、例えばＡＩＲ６４５（Ｉｓｉｓ）；または、（ｇ）ＩＬ−４／ＩＬ−１３二重特異性抗体、例えばＧＳＫ２４３４７３５（Glaxo SmithKline）が含まれるが、これらに限定されない。
【００８９】
本明細書で用いる用語“治療剤”は、所望の、通常は有益な効果を生じるために対象に投与される治療的に活性な物質を意味する。用語治療剤には、例えば、抗体またはその活性フラグメント、ペプチド、脂質、タンパク質薬物、タンパク質コンジュゲート薬物、酵素、オリゴヌクレオチド、リボザイム、遺伝物質、プリオン、ウイルス、細菌、および真核細胞を含むが、これらに限定されない、小分子薬物および生物製剤と一般に呼ばれる古典的低分子治療剤が挙げられる。治療剤は、対象に投与されたとき、所望の治療的活性物質に代謝されるプロドラッグであってもよい。ある面において、治療剤は予防剤である。加えて、治療剤は、薬学的に処方され得る。治療剤はまた、光または超音波エネルギーのような他の形態のエネルギーによって、または全身的に投与され得る他の循環分子によって活性化される放射性同位体または薬剤であり得る。
【００９０】
本明細書で用いる用語“サンプル”には、対象から得られた、全血、血清、筋肉、唾液などの、生物学的液体または組織が含まれる。サンプルには、全血、血清、筋肉、唾液、尿、滑液、骨髄、脳脊髄液、鼻分泌物、喀痰、羊水、気管支肺胞洗浄液、肺組織、末梢血単核細胞、全白血球細胞、リンパ節細胞、脾臓細胞、扁桃腺細胞、または皮膚などの、生物学的液体または組織が含まれ得る。いくつかの特定の面において、そのサンプルは、血液またはその一部、筋肉、皮膚、またはそれらの組合せである。サンプルは、当技術分野で公知の手段によって得られ得る。
【００９１】
本明細書に記載の方法およびシステムを適用するために、患者由来のサンプルはいつでも得ることができる。場合によっては、治療が開始された後または治療が終了した後に、連続したサンプルを患者から得ることができる。サンプルは、例えば、医療提供者(healthcare provider)（例えば、医師）または医療給付提供者（healthcare benefits provider）によって要求され得て、同じか、または異なる医療提供者（例えば、看護師、病院）または臨床検査室(clinical laboratory)によって入手および／または処理され得て、および処理後に、結果をさらに別の医療提供者、医療給付提供者または患者に送付され得る。同様に、１以上のスコアの測定／決定、スコア間の比較、スコアの評価および処置の決定を、１または複数の医療提供者、医療給付提供者、および／または臨床検査室によって行うことができる。
【００９２】
本明細書で用いる用語“医療提供者”は、生存対象、例えばヒト患者に直接的に関わり、処置を行う個人または施設を意味する。医療提供者の限定を意図しない例には、医師、看護師、技術師、セラピスト、薬剤師、カウンセラー、代替医療従事者(alternative medicine practitioner)、医療施設、医院、病院、救急救命室、クリニック、緊急医療センター、代替医療クリニック／施設、ならびにその他の、一般医療、専門医療、外科、および／またはその他のタイプの処置、評価、維持、治療、投薬および／またはアドバイス(助言)を含むが、これらに限定されない、全般的および／または専門的な治療、評価、維持、治療、投薬および／または患者の健康状態の全部または一部に関するアドバイスを提供する組織が含まれる。
【００９３】
本明細書で用いる用語“臨床検査室”は、生存対象、例えばヒト由来の材料の検査または処理のための施設を意味する。処理の限定を意図しない例としては、生存対象、例えばヒトの、例えば疾患または障害の診断、予防、または治療のための情報、または生存対象、例えばヒトの健康の評価についての情報を提供することを目的とした、ヒト身体由来の材料の生物学的、生化学的、血清学的、化学的、免疫学的、血液学的、生物物理学的、細胞学的、病理学的、遺伝学的または他の検査が含まれる。これらの検査はまた、サンプルの採取または入手方法、調製、決定、測定、またはその他に、生存対象、例えばヒト対象の体内、または生存対象、例えばヒト対象の身体から得られたサンプル中の、種々の物質の存在または不存在を記述する方法を含む。
【００９４】
本明細書で用いる用語“医療給付提供者”としては、患者に１以上の医療給付（healthcare benefit）、給付制度（benefit plan）、健康保険、および／または医療費勘定プログラムの利用について、全体的または部分的に提供する、提示する、勧誘する、支払う、あるいはその他関連事項を行う、個別の団体、組織、または集団を含む。
【００９５】
ある面において、医療提供者は、ＤＰＰ−４を測定するために本明細書に記載の免疫アッセイまたはキットのいずれかを投与または使用するために、別の医療提供者を管理または指示し得る。医療提供者は、サンプルを入手する、サンプルを処理する、サンプルを提出する、サンプルを受け取る、サンプルを移す、サンプルを分析もしくは測定する、サンプルを定量化する、サンプルの分析／測定／定量の後に得られた結果を提供する、サンプルの分析／測定／定量の後に得られた結果を受け取る、１以上のサンプルの分析／測定／定量の後に得られた結果を比較／スコア化する、１以上のサンプルからの比較／スコアを提供する、１以上のサンプルからの比較／スコアを得る、治療剤を投与する（例えば、ＩＬ−１３媒介性疾患または障害、例えば喘息、ＩＰＦ、ＣＯＰＤ、ＡＤまたはＵＣなどを処置する治療剤）、治療を開始する、治療を終了する、治療を継続する、治療の実施を一時的に中断する、投与される治療剤の量を増加する、投与される治療剤の量を減らす、ある量の治療剤の投与を継続する、治療剤の投与頻度を増加する、治療剤の投与頻度を減らす、治療剤に対して同じ投与頻度を維持する、ある治療または治療剤を少なくとも別の治療または治療剤で置き換える、ある治療または治療剤と少なくとも別の治療または追加の治療剤とを組み合わせるといった行為を実施するか、または別の医療提供者もしくは患者に実行するように指示し得る。
【００９６】
ある面において、医療給付提供者は、例えば、サンプルの採取、サンプルの処理、サンプルの提出、サンプルの受取、サンプルの移動、サンプルの分析または測定、サンプルの定量、サンプルの分析／測定／定量後に得られた結果の提供、サンプルの分析／測定／定量後に得られた結果の移行、１以上のサンプルの分析／測定／定量後に得られた結果の比較／スコア化、１以上のサンプルからの比較／スコアの移行、治療または治療剤の投与、治療または治療剤の投与の開始、治療または治療剤の投与の中断、治療または治療剤の投与の継続、治療または治療剤の投与の一時的中断、投与される治療剤の量の増加、投与される治療剤の量の減少、ある量の治療剤の投与の継続、治療剤の投与頻度の増加、治療剤の投与頻度の減少、治療剤に対して同じ投与頻度を維持する、ある治療または治療剤を少なくとも別の治療または治療剤で置き換える、あるいはある治療または治療剤と少なくとも別の治療または追加の治療剤とを組み合わせることを、許可または拒否することができる。
【００９７】
さらに、医療給付提供者は、例えば、治療の処方を許可または却下し、治療の適用範囲を認可または拒否し、治療費の払戻しを認可または却下し、治療の適格性を決定または否定することなどを行うことができる。
【００９８】
ある面において、臨床検査室は、例えば、サンプルを採取または入手する、サンプルを処理する、サンプルを提出する、サンプルを受け取る、サンプルを移す、サンプルを分析または測定する、サンプルを定量する、サンプルを分析／測定／定量後に得られた結果を提供する、サンプルを分析／測定／定量後に得られた結果を受け取る、１以上のサンプルを分析／測定／定量後に得られた結果を比較／スコア化する、１以上のサンプルからの比較／スコアを提供する、１以上のサンプルからの比較／スコアを得る、あるいは他の関連する行動をとることができる。
【００９９】
バイオマーカーとしてのＤＰＰ−４
上昇したＤＰＰ−４レベルが、喘息、ＣＯＰＤおよびＡＤ患者において観察されている（例えば、２０１４年１月２７日出願の米国特許仮出願公開番号６１／９３１，８７８；および、２０１４年５月９日出願の米国特許仮出願公開番号６１／９９０，９３２を参照のこと、それぞれ引用により本明細書中にその全体を包含させる）。加えて、喘息患者の第２Ｂ相臨床治験において、高血清ＤＰＰ−４レベルは、ＩＬ−１３媒介性肺疾患もしくは障害（例えば、喘息、ＩＰＦまたはＣＯＰＤ）またはＩＬ−１３媒介性慢性炎症性皮膚疾患もしくは障害（例えば、アトピー性皮膚炎）を含むＩＬ−１３媒介性疾患または障害の予測バイオマーカーとしてのＤＰＰ−４を同定するＩＬ−１３抗体アンタゴニスト（トラロキヌマブ）で処置した患者における改善された応答率を予測した。Brightling et al., Am J Respir Crit Care Med 189:A6670 (2014)；および２０１４年１月２７日出願の米国特許仮出願公開番号６１／９３１，８７８；および２０１４年５月９日出願の米国特許仮出願公開番号６１／９９０，９３２を参照のこと、それぞれ引用によりその内容全体を本明細書中に包含させる。
【０１００】
従って、喘息、ＩＰＦ、ＣＯＰＤ、ＡＤおよびＵＣ、ならびに他の炎症性疾患、肺疾患もしくは障害、または慢性炎症性皮膚疾患もしくは障害を有する患者における上昇したＤＰＰ−４レベルは、ＩＬ−１３活性を中和する療法を含むが、これに限定されない、特定の療法の利益を受けることができる患者を同定するために使用することができる。患者のＤＰＰ−４レベルを測定するのに有用な、本明細書に記載の抗ＤＰＰ４抗体を使用する抗ＤＰＰ−４抗体および免疫アッセイおよびキットが提供される。
【０１０１】
抗ＤＰＰ−４抗体
本発明は、単離された抗ＤＰＰ−４抗体およびその抗原結合フラグメントを提供する。特定の面において、本明細書に記載の抗ＤＰＰ−４抗体および抗原結合フラグメントは、ヒトＤＰＰ−４に結合することができる。
【０１０２】
本発明は、特に、ヒトＤＰＰ−４に結合する、２つのマウスモノクローナル抗体および２つのラットモノクローナル抗体を提供する。これらの抗体は、標準的なハイブリドーマ技術によって産生され、これらの抗体を産生するハイブリドーマは、ブダペスト条約の規定により米国培養細胞系統保存機関（ＡＴＣＣ）（Manassas, Va）に２０１５年１月８日に寄託されている。マウス抗ＤＰＰ−４抗体は、本明細書中、ｍ３Ｂ７．６およびｍ５Ｂ７．７と記載され、およびラット抗ＤＰＰ−４抗体は、本明細書中、Ｒ１１Ａ２．１５およびＲ１１Ａ９．１１と記載される。また、これらの抗体の抗原結合フラグメント、変異体、および／または誘導体も提供される。また、同じエピトープに結合するか、またはｍ３Ｂ７．６、ｍ５Ｂ７．７、Ｒ１１Ａ２．１５およびＲ１１Ａ９．１１の１以上を競合的に阻害することができる点で、これらの抗体に関連する抗体も提供される。マウスモノクローナル抗体ｍ３Ｂ７．６は、寄託番号ＰＴＡ−１２１８７０として米国培養細胞系統保存機関（ＡＴＣＣ）（Manassas, Va）に寄託されたハイブリドーマから産生され、マウスモノクローナル抗体ｍ５Ｂ７．７は、寄託番号ＰＴＡ−１２１８７１としてＡＴＣＣに寄託されたハイブリドーマから産生され、ラットモノクローナル抗体Ｒ１１Ａ２．１５は、寄託番号ＰＴＡ−１２１８７２としてＡＴＣＣに寄託されたハイブリドーマから産生され、そしてラットモノクローナル抗体Ｒ１１Ａ９．１１は、寄託番号ＰＴＡ−１２１８７３としてＡＴＣＣに寄託されたハイブリドーマから産生される。
【０１０３】
特定の面において、単離された抗体またはその抗原結合フラグメント、変異体もしくは誘導体が提供され、ここで、該抗体は、寄託番号ＰＴＡ−１２１８７０として米国培養細胞系統保存機関（ＡＴＣＣ）に寄託されたハイブリドーマから産生されるマウスモノクローナル抗体ｍ３Ｂ７．６、寄託番号ＰＴＡ−１２１８７１としてＡＴＣＣに寄託されたハイブリドーマから産生されるマウスモノクローナル抗体ｍ５Ｂ７．７、寄託番号ＰＴＡ−１２１８７２としてＡＴＣＣに寄託されたハイブリドーマから産生されるラットモノクローナル抗体Ｒ１１Ａ２．１５、および／または寄託番号ＰＴＡ−１２１８７３としてＡＴＣＣに寄託されたハイブリドーマから産生されるラットモノクローナル抗体Ｒ１１Ａ９．１１と同じＤＰＰ−４エピトープに結合する。
【０１０４】
特定の面において、単離された抗体またはその抗原結合フラグメント、変異体もしくは誘導体が提供され、ここで、該抗体は、ＤＰＰ−４、例えばヒトＤＰＰ−４への、寄託番号ＰＴＡ−１２１８７０として米国培養細胞系統保存機関（ＡＴＣＣ）に寄託されたハイブリドーマから産生されるマウスモノクローナル抗体ｍ３Ｂ７．６、寄託番号ＰＴＡ−１２１８７１としてＡＴＣＣに寄託されたハイブリドーマから産生されるマウスモノクローナル抗体ｍ５Ｂ７．７、寄託番号ＰＴＡ−１２１８７２としてＡＴＣＣに寄託されたハイブリドーマから産生されるラットモノクローナル抗体Ｒ１１Ａ２．１５、および／または寄託番号ＰＴＡ−１２１８７３としてＡＴＣＣに寄託されたハイブリドーマから産生されるラットモノクローナル抗体Ｒ１１Ａ９．１１の結合を競合的に阻害する。例えば、モノクローナル抗体ｍ３Ｂ７．６およびｍ５Ｂ７．７は、ヒトＤＰＰ−４への結合について互いに競合的に阻害することができ、そしてモノクローナル抗体Ｒ１１Ａ９．１１およびＲ１１Ａ２．１５は、ヒトＤＰＰ−４への結合について互いに競合的に阻害することができる。
【０１０５】
特定の面において、単離された抗ＤＰＰ−４抗体またはフラグメント、変異体もしくは誘導体が提供され、ここで該抗体は、３つの重鎖相補性決定領域（ＣＤＲ）ＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２およびＶＨＣＤＲ３を有する重鎖可変ドメイン（ＶＨ）、ならびに３つの軽鎖ＣＤＲ ＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２およびＶＬＣＤＲ３を有する軽鎖可変領域（ＶＬ）を含み、該単離された抗体またはフラグメント、変異体もしくは誘導体のＣＤＲは、寄託番号ＰＴＡ−１２１８７０として米国培養細胞系統保存機関（ＡＴＣＣ）に寄託されたハイブリドーマから産生されるマウスモノクローナル抗体ｍ３Ｂ７．６、寄託番号ＰＴＡ−１２１８７１としてＡＴＣＣに寄託されたハイブリドーマから産生されるマウスモノクローナル抗体ｍ５Ｂ７．７、寄託番号ＰＴＡ−１２１８７２としてＡＴＣＣに寄託されたハイブリドーマから産生されるラットモノクローナル抗体Ｒ１１Ａ２．１５、および／または寄託番号ＰＴＡ−１２１８７３としてＡＴＣＣに寄託されたハイブリドーマから産生されるラットモノクローナル抗体Ｒ１１Ａ９．１１のＣＤＲと同一である。
【０１０６】
特定の面において、単離された抗ＤＰＰ−４抗体またはフラグメント、変異体もしくは誘導体が提供され、ここで該抗体は、寄託番号ＰＴＡ−１２１８７０として米国培養細胞系統保存機関（ＡＴＣＣ）に寄託されたハイブリドーマから産生されるマウスモノクローナル抗体ｍ３Ｂ７．６、寄託番号ＰＴＡ−１２１８７１としてＡＴＣＣに寄託されたハイブリドーマから産生されるマウスモノクローナル抗体ｍ５Ｂ７．７、寄託番号ＰＴＡ−１２１８７２としてＡＴＣＣに寄託されたハイブリドーマから産生されるラットモノクローナル抗体Ｒ１１Ａ２．１５、および／または寄託番号ＰＴＡ−１２１８７３としてＡＴＣＣに寄託されたハイブリドーマから産生されるラットモノクローナル抗体Ｒ１１Ａ９．１１のＶＨおよびＶＬと同一のＶＨおよびＶＬを含む。
【０１０７】
当業者は、１以上の寄託されたハイブリドーマから１以上の抗体を得ることにより、発現された抗体を単離、クローニングおよび配列決定して、過度の実験をすることなく、ＶＨ、ＶＬおよびＣＤＲ領域を決定することができる。
【０１０８】
特定の面において、ハイブリドーマが提供され、ここで該ハイブリドーマは、寄託番号ＰＴＡ−１２１８７０として米国培養細胞系統保存機関（ＡＴＣＣ）に寄託されたハイブリドーマ、寄託番号ＰＴＡ−１２１８７１としてＡＴＣＣに寄託されたハイブリドーマ、寄託番号ＰＴＡ−１２１８７２としてＡＴＣＣに寄託されたハイブリドーマ、寄託番号ＰＴＡ−１２１８７３としてＡＴＣＣに寄託されたハイブリドーマ、またはそれらの組合せである。
【０１０９】
特定の面において、抗体産生細胞培養物が提供され、ここで該細胞培養物は、本明細書に記載の抗ＤＰＰ−４抗体またはフラグメント、変異体もしくは誘導体を発現するために使用され得る。特定の面において、細胞培養物は、寄託番号ＰＴＡ−１２１８７０として米国培養細胞系統保存機関（ＡＴＣＣ）に寄託されたハイブリドーマ、寄託番号ＰＴＡ−１２１８７１としてＡＴＣＣに寄託されたハイブリドーマ、寄託番号ＰＴＡ−１２１８７２としてＡＴＣＣに寄託されたハイブリドーマ、寄託番号ＰＴＡ−１２１８７３としてＡＴＣＣに寄託されたハイブリドーマ、またはそれらの組合せを含む。
【０１１０】
本明細書に記載の抗ＤＰＰ−４抗体またはそのフラグメント、変異体もしくは誘導体は、さらなるポリペプチド、例えば、分泌を誘導するシグナルペプチドをさらに含み得る。さらに、本明細書に記載の抗ＤＰＰ−４抗体またはそのフラグメント、変異体もしくは誘導体は、例えば、本明細書に記載の融合ポリペプチド、Ｆａｂフラグメント、ｓｃＦｖ、または他の誘導体であり得る。
【０１１１】
特定の面において、本発明により提供される抗ＤＰＰ−４抗体またはフラグメント、変異体もしくは誘導体は、融合タンパク質の一部であってよく、すなわち、該抗体またはその抗原結合フラグメントは、異種ポリペプチドに融合され得る。本明細書で用いる用語“異種ポリペプチド”は、ポリペプチドが、抗ＤＰＰ−４抗体またはフラグメント、変異体もしくは誘導体とは別の物質に由来することを意味する。限定しない例において、抗体またはその抗原結合フラグメント、変異体もしくは誘導体に融合される“異種ポリペプチド”は、同じ種の非免疫グロブリンポリペプチド、または免疫グロブリンもしくは非免疫グロブリン異種ポリペプチドに由来し得る。ある面において、異種ポリペプチドは、例えば、安定化ポリペプチドペプチド、タグ、ラベルまたはそれらの組合せであり得る。
【０１１２】
特定の面において、本発明で提供される抗ＤＰＰ−４抗体またはそのフラグメント、変異体もしくは誘導体は、異種アミノ酸配列、または抗体とは通常結合しない１以上の他の部分（例えば、ペプチド、タンパク質、酵素、脂質、異種抗体またはフラグメント、変異体もしくは誘導体、検出可能なラベル、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、または該薬物の２以上の組合せ）を含み得る。さらなる面において、本発明で提供される抗ＤＰＰ−４抗体またはそのフラグメント、変異体もしくは誘導体は、酵素、蛍光標識、化学発光標識、生物発光標識、放射性標識、または該検出可能な標識の２以上の組合せからなる群より選択される検出可能なラベルを含み得る。特定の面において、検出可能なラベルはビオチンであり、これは、例えば酵素、例えば西洋ワサビペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）に結合したストレプトアビジンと相互作用し得る。特定の面において、検出可能なラベルはルテニウムキレートであり、これは、電流に暴露されると光を放出することができる。他の検出可能な標識は、当業者に周知である。
【０１１３】
本発明はまた、１以上の上記の抗ＤＰＰ−４抗体またはそのフラグメントを含む組成物を提供する。特定の面において、組成物は、本明細書の他の箇所に記載される通り、“捕捉”抗体および“検出”抗体を含む。本発明で提供される組成物は、緩衝液、担体および防腐剤を含み得るが、これに限定されない。防腐剤、安定化剤、緩衝液、抗酸化剤および／または他の添加剤には、リン酸、クエン酸および他の有機酸などの緩衝液；アスコルビン酸およびメチオニンなどの抗酸化剤；塩化オクタデシルジメチルベンジルアンモニウムなどの防腐剤；塩化ヘキサメトニウム；塩化ベンザルコニウム；塩化ベンゼトニウム；フェノール、ブチルまたはベンジルアルコール；アルキルパラベン、例えばメチルまたはプロピルパラベン；カテコール；レゾルシノール；シクロヘキサノール；３’−ペンタノール；および、ｍ−クレゾール；低分子量ポリペプチド；タンパク質、例えば血清アルブミン、ゼラチンまたは免疫グロブリン；親水性ポリマー、例えばポリビニルピロリドン；アミノ酸、例えばグリシン、グルタミン、アスパラギン、ヒスチジン、アルギニンまたはリシン；グルコース、マンノースまたはデキストリンを含む、単糖類、二糖類、および他の炭水化物；キレート剤、例えばＥＤＴＡ；糖類、例えばスクロース、マンニトール、トレハロースまたはソルビトール；塩形成対イオン、例えばナトリウム；金属錯体（例えば、Ｚｎ−タンパク質複合体）；および／または、非イオン性界面活性剤、例えばＴＷＥＥＮ(商標)、ＰＬＵＲＯＮＩＣ(商標)、またはポリエチレングリコール（ＰＥＧ）が含まれ得る。本明細書に記載の組成物は、本明細書の他の箇所に記載される通り、単一のバイアルまたは容器中で混合することができるか、または２つ以上のバイアルまたは容器で提供することができるか、もしくはキットの一部として提供することができる。
【０１１４】
ポリヌクレオチド類
本発明は、本明細書に記載の抗ＤＰＰ−４抗体またはサブユニット（例えば、重鎖または軽鎖）、フラグメント、変異体もしくは誘導体をコードするポリヌクレオチドを提供する。特定の面において、単離されたポリヌクレオチドまたは２以上のポリヌクレオチドを含むポリヌクレオチド組成物が提供され、これは、本明細書に記載の抗ＤＰＰ−４抗体またはサブユニット（例えば、重鎖または軽鎖）、フラグメント、変異体もしくは誘導体を、単独でまたは集合的にコードする。
【０１１５】
特定の面において、本発明は、抗ＤＰＰ−４抗体またはサブユニット（例えば、重鎖または軽鎖）、フラグメント、変異体もしくは誘導体をコードする核酸を含む単離されたポリヌクレオチドを提供し、ここで、該抗体は、３つの重鎖相補性決定領域（ＣＤＲ）ＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２およびＶＨＣＤＲ３を有する重鎖可変ドメイン（ＶＨ）、ならびに３つの軽鎖ＣＤＲ ＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２およびＶＬＣＤＲ３を有する軽鎖可変領域（ＶＬ）を含み、該単離された抗体またはフラグメント、変異体もしくは誘導体のＣＤＲは、寄託番号ＰＴＡ−１２１８７０として米国培養細胞系統保存機関（ＡＴＣＣ）に寄託されたハイブリドーマから産生されるマウスモノクローナル抗体ｍ３Ｂ７．６、寄託番号ＰＴＡ−１２１８７１としてＡＴＣＣに寄託されたハイブリドーマから産生されるマウスモノクローナル抗体ｍ５Ｂ７．７、寄託番号ＰＴＡ−１２１８７２としてＡＴＣＣに寄託されたハイブリドーマから産生されるラットモノクローナル抗体Ｒ１１Ａ２．１５、および／または寄託番号ＰＴＡ−１２１８７３としてＡＴＣＣに寄託されたハイブリドーマから産生されるラットモノクローナル抗体Ｒ１１Ａ９．１１のＣＤＲと同一である。
【０１１６】
本発明はまた、抗ＤＰＰ−４抗体またはサブユニット（例えば、重鎖または軽鎖）、フラグメント、変異体もしくは誘導体をコードする核酸を含む単離されたポリヌクレオチドを提供し、ここで、該抗体は、寄託番号ＰＴＡ−１２１８７０として米国培養細胞系統保存機関（ＡＴＣＣ）に寄託されたハイブリドーマから産生されるマウスモノクローナル抗体ｍ３Ｂ７．６、寄託番号ＰＴＡ−１２１８７１としてＡＴＣＣに寄託されたハイブリドーマから産生されるマウスモノクローナル抗体ｍ５Ｂ７．７、寄託番号ＰＴＡ−１２１８７２としてＡＴＣＣに寄託されたハイブリドーマから産生されるラットモノクローナル抗体Ｒ１１Ａ２．１５、および／または寄託番号ＰＴＡ−１２１８７３としてＡＴＣＣに寄託されたハイブリドーマから産生されるラットモノクローナル抗体Ｒ１１Ａ９．１１のＶＨおよびＶＬと同一のＶＨおよびＶＬを含む。
【０１１７】
本発明は、本明細書に記載の抗ＤＰＰ−４抗体またはサブユニット（例えば、重鎖または軽鎖）、フラグメント、変異体もしくは誘導体を単独または集合的にコードする２以上のポリペプチドを含む組成物をさらに提供する。
【０１１８】
特定の面において、本明細書に記載の抗ＤＰＰ−４抗体またはサブユニット（例えば、重鎖または軽鎖）、フラグメント、変異体もしくは誘導体の提示、スクリーニング、単離、クローニングおよび／または発現を容易にするために、ベクター、または２以上のベクターが提供される。特定の面において、ベクターまたは複数のベクターは発現ベクターである。
【０１１９】
特定の面において、ポリヌクレオチド組成物の２以上の核酸分子は、同じベクター内に位置し得る。特定の面において、ポリヌクレオチド組成物の２以上の核酸分子は、少なくとも２つの別個のベクター内に位置し得る。
【０１２０】
発現ベクターは、本明細書に記載の抗ＤＰＰ−４抗体またはサブユニット（例えば、重鎖または軽鎖）、フラグメント、変異体もしくは誘導体をコードする、単離されたポリヌクレオチド（複数可）を発現するために使用される。組換え発現ベクターは、哺乳動物、微生物、ウイルスまたは昆虫遺伝子に由来する適切な転写または翻訳調節エレメントに作動可能に結合したトランスポーター分子のポリペプチド鎖をコードする合成またはｃＤＮＡ由来のＤＮＡフラグメントを有する、複製可能なＤＮＡ構築物である。転写単位は、一般的に、以下に詳細に記載する通り、（１）遺伝子発現において調節的役割を有する遺伝子エレメント、例えば、転写プロモーターまたはエンハンサー、（２）ｍＲＮＡに転写されてタンパク質に翻訳される構造的またはコード配列、および（３）適当な転写および翻訳開始および終結配列、の組合せを含む。このような調節エレメントは、転写を制御するオペレーター配列を含み得る。通常、複製起点によって与えられる宿主中で複製する能力、および形質転換体の認識を容易にする選択遺伝子を、さらに組み込むことができる。
【０１２１】
特定の面において、単離されたポリヌクレオチドまたは２以上の単離されたポリヌクレオチドを含む組成物が、プロモーターと作動可能に結合した核酸分子、または２以上のプロモーターと作動可能に結合した２以上の核酸分子を含んで提供され、ここで、該プロモーターは同じであっても異なっていてもよい。
【０１２２】
核酸領域は、それらが互いに機能的に関連しているとき、“作動可能に結合”している。例えば、シグナルペプチドのＤＮＡ（分泌リーダー）は、ポリペプチドの分泌に関与する前駆体として発現される場合、該ポリペプチドのＤＮＡと作動可能に結合しているか；プロモーターは、配列の転写を制御する場合、コーディング配列と作動可能に結合しているか；または、リボソーム結合部位は、それが翻訳を可能にするように配置されている場合、コーディング配列と作動可能に結合している。
【０１２３】
発現制御配列および発現ベクターの選択は、宿主の選択によって変わり得る。多種多様な発現宿主／ベクターの組合せを用いることができる。真核生物宿主に有用な発現ベクターには、例えば、ＳＶ４０、ウシ乳頭腫ウイルス、アデノウイルスおよびサイトメガロウイルス由来の発現制御配列を含むベクターが含まれる。細菌宿主に有用な発現ベクターには、公知の細菌プラスミド、例えばｐＣＲ１、ｐＢＲ３２２、ｐＭＢ９およびそれらの誘導体を含む大腸菌由来のプラスミド、より広い宿主範囲のプラスミド、例えばＭ１３および糸状一本鎖ＤＮＡファージなどが含まれる。
【０１２４】
特定の面において、本明細書に記載のポリヌクレオチドを含んむ単離された宿主細胞はが提供さえる。特定の面において、本発明で提供されるポリヌクレオチド組成物の２以上のポリヌクレオチドを含む１以上の単離された宿主細胞が提供される。
【０１２５】
本明細書で提供されるトランスポーター分子の発現に適する宿主細胞には、適当なプロモーターの制御下にある原核細胞、酵母細胞、昆虫細胞または高等真核細胞が含まれる。原核細胞には、グラム陰性菌またはグラム陽性菌、例えば大腸菌または桿菌が含まれる。高等真核細胞には、以下に記載されるような哺乳動物由来の樹立細胞株が含まれる。無細胞翻訳系を用いることもできる。抗体産生を含むタンパク質産生の方法に関するさらなる情報は、例えば、米国特許公開第２００８／０１８７９５４号、米国特許第６，４１３，７４６号および同第６，６６０，５０１号、ならびに国際特許公開第ＷＯ０４００９８２３に見いだされ得て、それらの各々は、引用によりその内容全体が本明細書中に包含される。
【０１２６】
種々の哺乳動物または昆虫細胞培養系を用いて、本明細書で提供される抗ＤＰＰ−４抗体またはサブユニット（例えば、重鎖または軽鎖）、フラグメント、変異体もしくは誘導体を発現させることもできる。好適な哺乳動物宿主細胞株の例としては、ＨＥＫ−２９３およびＨＥＫ−２９３Ｔ、Ｇｌｕｚｍａｎ（Cell 23:175, 1981）に記載のサル腎臓細胞のＣＯＳ−７系統、ならびに、例えば、Ｌ細胞、Ｃ１２７、３Ｔ３、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）、ＮＳ０、ＨｅＬａおよびＢＨＫ細胞株を含む他の細胞株が挙げられる。哺乳動物発現ベクターは、複製起点、発現されるべき遺伝子に作動可能に結合した適切なプロモーターおよびエンハンサー、ならびに他の５’または３’フランキング非転写配列、ならびに５’または３’非翻訳配列、例えばリボソーム結合部位、ポリアデニル化部位、スプライスドナー部位およびスプライスアクセプター部位、ならびに転写終結配列などの非転写エレメントを含み得る。昆虫細胞における異種タンパク質の産生のためのバキュロウイルス系は、Luckow and Summers, BioTechnology 6:47 (1988)に記載されている。
【０１２７】
本明細書で提供される宿主細胞は、本明細書で提供される抗ＤＰＰ−４抗体またはサブユニット（例えば、重鎖または軽鎖）、フラグメント、変異体もしくは誘導体を作製する方法において利用され得て、ここで、該方法には、（ａ）宿主細胞を培養すること、および（ｂ）該宿主細胞から発現される抗体、フラグメント、またはサブユニットを単離することが含まれる。
【０１２８】
ＤＰＰ−４レベルを検出するためのアッセイ
本発明は、ヒトＤＰＰ−４上の複数の異なるエピトープを認識する、少なくとも１つ、例えば少なくとも２つの抗ＤＰＰ−４抗体またはその抗原結合フラグメントを用いる免疫アッセイを用いて、サンプルをアッセイすることを含む、対象から得られたサンプル中のＤＰＰ−４レベルを測定する方法を提供する。この方法で使用するための抗体の例としては、本明細書に記載の、寄託番号ＰＴＡ−１２１８７０としてＡＴＣＣに寄託されたハイブリドーマから産生されるマウスモノクローナル抗体ｍ３Ｂ７．６、寄託番号ＰＴＡ−１２１８７１としてＡＴＣＣに寄託されたハイブリドーマから産生されるマウスモノクローナル抗体ｍ５Ｂ７．７、寄託番号ＰＴＡ−１２１８７２としてＡＴＣＣに寄託されたハイブリドーマから産生されるラットモノクローナル抗体Ｒ１１Ａ２．１５、および／または寄託番号ＰＴＡ−１２１８７３としてＡＴＣＣに寄託されたハイブリドーマから産生されるラットモノクローナル抗体Ｒ１１Ａ９．１１、ならびに／またはその抗原結合フラグメント、変異体もしくは誘導体の１以上が挙げられる。
【０１２９】
本方法は、対象から得られたサンプル中のＤＰＰ−４の検出のための特異的かつ高感度な免疫アッセイの使用を含む。サンプルは、本明細書で提供される少なくとも１つ、例えば少なくとも２つの本明細書に記載の抗ＤＰＰ−４抗体、例えば寄託番号ＰＴＡ−１２１８７０としてＡＴＣＣに寄託されたハイブリドーマから産生されるマウスモノクローナル抗体ｍ３Ｂ７．６、寄託番号ＰＴＡ−１２１８７１としてＡＴＣＣに寄託されたハイブリドーマから産生されるマウスモノクローナル抗体ｍ５Ｂ７．７、寄託番号ＰＴＡ−１２１８７２としてＡＴＣＣに寄託されたハイブリドーマから産生されるラットモノクローナル抗体Ｒ１１Ａ２．１５、および／または寄託番号ＰＴＡ−１２１８７３としてＡＴＣＣに寄託されたハイブリドーマから産生されるラットモノクローナル抗体Ｒ１１Ａ９．１１、ならびに／またはその抗原結合フラグメント、変異体もしくは誘導体を使用する免疫アッセイでアッセイされる。
【０１３０】
例えば、本発明は、ヒトＤＰＰ−４上の複数の異なるエピトープを認識する、少なくとも１つ、例えば少なくとも２つの抗ＤＰＰ−４抗体またはその抗原結合フラグメント、変異体もしくは誘導体を用いる免疫アッセイにおいて該サンプルをアッセイすることを含む、対象から得られたサンプル中のＤＰＰ−４レベルを測定する方法を提供する。一面において、少なくとも２つの抗ＤＰＰ−４抗体のうち１つは、寄託番号ＰＴＡ−１２１８７０として米国培養細胞系統保存機関（ＡＴＣＣ）に寄託されたハイブリドーマから産生されるマウスモノクローナル抗体ｍ３Ｂ７．６または寄託番号ＰＴＡ−１２１８７１としてＡＴＣＣに寄託されたハイブリドーマから産生されるマウスモノクローナル抗体ｍ５Ｂ７．７と同じＤＰＰ−４エピトープに結合する、単離された抗体またはその抗原結合フラグメント、変異体もしくは誘導体を含み、および少なくとも２つの抗ＤＰＰ−４抗体のうち１つは、寄託番号ＰＴＡ−１２１８７２としてＡＴＣＣに寄託されたハイブリドーマから産生されるラットモノクローナル抗体Ｒ１１Ａ２．１５、および／または寄託番号ＰＴＡ−１２１８７３としてＡＴＣＣに寄託されたハイブリドーマから産生されるラットモノクローナル抗体Ｒ１１Ａ９．１１と同じＤＰＰ−４エピトープに結合する、単離された抗体またはその抗原結合フラグメント、変異体もしくは誘導体を含む。
【０１３１】
別の面において、少なくとも２つの抗ＤＰＰ−４抗体のうち１つは、寄託番号ＰＴＡ−１２１８７０としてＡＴＣＣに寄託されたハイブリドーマから産生されるマウスモノクローナル抗体ｍ３Ｂ７．６、および／または寄託番号ＰＴＡ−１２１８７１としてＡＴＣＣに寄託されたハイブリドーマから産生されるマウスモノクローナル抗体ｍ５Ｂ７．７のＤＰＰ−４への結合を競合的に阻害する、単離された抗体またはその抗原結合フラグメント、変異体もしくは誘導体を含み；および、少なくとも２つの抗ＤＰＰ−４抗体のうち１つは、寄託番号ＰＴＡ−１２１８７２としてＡＴＣＣに寄託されたハイブリドーマから産生されるラットモノクローナル抗体Ｒ１１Ａ２．１５、および／または寄託番号ＰＴＡ−１２１８７３としてＡＴＣＣに寄託されたハイブリドーマから産生されるラットモノクローナル抗体Ｒ１１Ａ９．１１のＤＰＰ−４への結合を競合的に阻害する、単離された抗体またはその抗原結合フラグメント、変異体もしくは誘導体を含む。
【０１３２】
別の面において、２以上の抗ＤＰＰ−４抗体のうち１つは、３つの重鎖相補性決定領域（ＣＤＲ） ＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２およびＶＨＣＤＲ３を有する重鎖可変ドメイン（ＶＨ）、ならびに３つの軽鎖ＣＤＲ ＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２およびＶＬＣＤＲ３を有する軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む、単離された抗体またはその抗原結合フラグメント、変異体もしくは誘導体であって、ここで、該単離された抗体またはフラグメント、変異体もしくは誘導体のＣＤＲは、寄託番号ＰＴＡ−１２１８７０としてＡＴＣＣに寄託されたハイブリドーマから産生されるマウスモノクローナル抗体ｍ３Ｂ７．６、および／または寄託番号ＰＴＡ−１２１８７１としてＡＴＣＣに寄託されたハイブリドーマから産生されるマウスモノクローナル抗体ｍ５Ｂ７．７のＣＤＲと同一であり；および、２以上の抗ＤＰＰ−４抗体のうち１つは、３つの重鎖相補性決定領域（ＣＤＲ） ＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２およびＶＨＣＤＲ３を有する重鎖可変ドメイン（ＶＨ）、ならびに３つの軽鎖ＣＤＲ ＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２およびＶＬＣＤＲ３を有する軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む、単離された抗体またはその抗原結合フラグメント、変異体もしくは誘導体であって、ここで、該単離された抗体またはフラグメント、変異体もしくは誘導体のＣＤＲは、寄託番号ＰＴＡ−１２１８７２としてＡＴＣＣに寄託されたハイブリドーマから産生されるラットモノクローナル抗体Ｒ１１Ａ２．１５、および／または寄託番号ＰＴＡ−１２１８７３としてＡＴＣＣに寄託されたハイブリドーマから産生されるラットモノクローナル抗体Ｒ１１Ａ９．１１のＣＤＲと同一である。
【０１３３】
別の面において、２以上の抗ＤＰＰ−４抗体のうち１つは、寄託番号ＰＴＡ−１２１８７０としてＡＴＣＣに寄託されたハイブリドーマから産生されるマウスモノクローナル抗体ｍ３Ｂ７．６、および／または寄託番号ＰＴＡ−１２１８７１としてＡＴＣＣに寄託されたハイブリドーマから産生されるマウスモノクローナル抗体ｍ５Ｂ７．７のＶＨおよびＶＬと同一のＶＨおよびＶＬを含む、単離された抗体またはその抗原結合フラグメント、変異体もしくは誘導体であり；および、２以上の抗ＤＰＰ−４抗体のうち１つは、寄託番号ＰＴＡ−１２１８７２としてＡＴＣＣに寄託されたハイブリドーマから産生されるラットモノクローナル抗体Ｒ１１Ａ２．１５、および／または寄託番号ＰＴＡ−１２１８７３としてＡＴＣＣに寄託されたハイブリドーマから産生されるラットモノクローナル抗体Ｒ１１Ａ９．１１のＶＨおよびＶＬと同一のＶＨおよびＶＬを含む、単離された抗体またはその抗原結合フラグメント、変異体もしくは誘導体である。
【０１３４】
これらの抗体またはそのフラグメントは、１以上の異種ポリペプチド、例えば、安定化ポリペプチドペプチド、タグ、ラベルまたはそれらの組合せに融合され得るか、または異種部分、例えば、ペプチド、タンパク質、酵素、脂質、異種抗体もしくはそのフラグメント、検出可能なラベル、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、または任意の２以上の薬物の組合せと結合されていてよい。特定の面において、抗体は、ビオチンまたはルテニウムキレートなどの検出可能なラベルを含む。他の検出可能な標識は、当業者によく知られており、本明細書に包含される。
【０１３５】
特定の面において、免疫アッセイは、サンドイッチ免疫アッセイ、例えば、酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）またはサンドイッチ電気化学発光（ＥＣＬ）アッセイを含み、ここで、第一の抗ＤＰＰ−４“捕捉”抗体またはその抗原結合フラグメントは固体支持体に結合されており、サンプルまたは標準からの抗原は、捕捉抗体への結合が可能であり、次いで、第二の抗ＤＰＰ−４“検出”抗体またはその抗原結合フラグメントを添加し、そして酵素反応、電気化学発光反応、放射能、または他の検出方法のいずれかによって検出される。
【０１３６】
特定の面において、免疫アッセイは、以下を含む：第一の捕捉抗体またはフラグメント、変異体もしくは誘導体を、固体支持体、例えば、当業者に知られているマルチウェルプレートまたは他のアッセイ装置に結合させる。捕捉抗体を、一定時間、例えば一晩結合させ、その後、結合していない抗体を除去する。次いで、プレートを洗浄して、結合していない捕捉抗体を除去する。次いで、プレートをブロッキング溶液で処理して、非特異的タンパク質を固体支持体の非結合領域に結合させる。一般的なブロッキング溶液には、無関係のタンパク質、例えば、脱脂粉乳または血清アルブミンが含まれる。次いで、プレートを再度洗浄し、結合していないブロッキング溶液を除去する。次に、ＤＰＰ−４を含むことが予期されるサンプルを該プレートに添加する。サンプルは一般的には、連続的に希釈され、デュプリケートまたはトリプリケートに播種される。標準量のＤＰＰ−４またはその好適なフラグメントおよび種々の陰性対照を含む対照もまた包含される。抗原を、一定時間、例えば室温で１時間、捕捉抗体に結合させる。その後、インキュベーション後にプレートを洗浄して、結合していない抗原を除去することができる。
【０１３７】
次に、検出抗体を添加する。検出抗体は、一般的に、捕捉抗体とは異なるＤＰＰ−４エピトープに結合する抗ＤＰＰ−４抗体である。検出抗体は、標識されていても、標識されていなくてもよい。検出抗体が標識されていない場合、標識された二次抗体を検出に用いることができ、このことは当業者に周知である。検出抗体は、酵素、例えば西洋ワサビペルオキシダーゼもしくはアルカリホスファターゼで直接標識することができるか、または酵素を結合させることができるタグで標識することができる。例えば、検出抗体はビオチンに結合させることができ、酵素結合ストレプトアビジンをビオチンタグに結合させることにより、次いで酵素を結合させることができる。あるいは、検出抗体は、化学発光性、蛍光性、または電気化学発光性のタグに結合され得る。後者の例はルテニウムキレートである。インキュベーション後、プレートを洗浄して、結合していない検出抗体を除去することができる。
【０１３８】
検出抗体の検出は、使用される検出抗体のタイプに基づいて変化し得る方法によって達成される。検出抗体がビオチンで標識されている場合、酵素結合ストレプトアビジンを添加し、結合していないストレプトアビジンを洗い流し、例えば分光光度計で読み取ることができる比色反応を提供する基質を添加する。検出抗体がルテニウムキレートに結合されている場合、プレートに電流を流し、発光を測定する。
【０１３９】
特定の面において、本方法は、患者サンプル中のＤＰＰ−４レベルを直接測定し、ここで、絶対レベルが、例えば精製された全長ＤＰＰ−４またはＤＰＰ−４フラグメントを用いて標準曲線に免疫アッセイ結果をプロットすることにより、計算される。その後、検出抗体からの検出シグナルは、プレート上に含まれる種々の標準および対照に基づいて定量することができる。結果を標準曲線上にプロットすることにより、試験サンプル中のＤＰＰ−４の絶対レベルまたは量を、例えば、ｎｇ／ｍＬまたはｐｇ  ＤＰＰ−４／ｍＬのタンパク質として計算することができる。
【０１４０】
本明細書で提供される免疫アッセイおよび方法の特定の面において、捕捉抗体は、寄託番号ＰＴＡ−１２１８７０としてＡＴＣＣに寄託されたハイブリドーマから産生されるマウスモノクローナル抗体ｍ３Ｂ７．６またはその抗原結合フラグメント、変異体もしくは誘導体、あるいは寄託番号ＰＴＡ−１２１８７１としてＡＴＣＣに寄託されたハイブリドーマから産生されるマウスモノクローナル抗体ｍ５Ｂ７．７またはその抗原結合フラグメント、変異体もしくは誘導体である。本明細書で提供される免疫アッセイおよび方法の特定の面において、検出抗体は、寄託番号ＰＴＡ−１２１８７２としてＡＴＣＣに寄託されたハイブリドーマから産生されるラットモノクローナル抗体Ｒ１１Ａ２．１５またはその抗原結合フラグメント、変異体もしくは誘導体、あるいは寄託番号ＰＴＡ−１２１８７３としてＡＴＣＣに寄託されたハイブリドーマから産生されるラットモノクローナル抗体Ｒ１１Ａ９．１１またはその抗原結合フラグメント、変異体もしくは誘導体である。
【０１４１】
本明細書で提供される免疫アッセイおよび方法の特定の面において、捕捉抗体は、寄託番号ＰＴＡ−１２１８７２としてＡＴＣＣに寄託されたハイブリドーマから産生されるラットモノクローナル抗体Ｒ１１Ａ２．１５またはその抗原結合フラグメント、変異体もしくは誘導体、あるいは寄託番号ＰＴＡ−１２１８７３としてＡＴＣＣに寄託されたハイブリドーマから産生されるラットモノクローナル抗体Ｒ１１Ａ９．１１またはその抗原結合フラグメント、変異体もしくは誘導体である。本明細書で提供される免疫アッセイおよび方法の特定の面において、検出抗体は、寄託番号ＰＴＡ−１２１８７０としてＡＴＣＣに寄託されたハイブリドーマから産生されるマウスモノクローナル抗体ｍ３Ｂ７．６またはその抗原結合フラグメント、変異体もしくは誘導体、あるいは寄託番号ＰＴＡ−１２１８７１としてＡＴＣＣに寄託されたハイブリドーマから産生されるマウスモノクローナル抗体ｍ５Ｂ７．７またはその抗原結合フラグメント、変異体もしくは誘導体である。
【０１４２】
本明細書で提供される免疫アッセイおよび方法の特定の面において、捕捉抗体は、寄託番号ＰＴＡ−１２１８７０としてＡＴＣＣに寄託されたハイブリドーマから産生されるマウスモノクローナル抗体ｍ３Ｂ７．６またはその抗原結合フラグメント、変異体もしくは誘導体であり、そして検出抗体は、寄託番号ＰＴＡ−１２１８７２としてＡＴＣＣに寄託されたハイブリドーマから産生されるラットモノクローナル抗体Ｒ１１Ａ２．１５またはその抗原結合フラグメント、変異体もしくは誘導体である。本明細書で提供される免疫アッセイおよび方法の特定の面において、捕捉抗体は、寄託番号ＰＴＡ−１２１８７０としてＡＴＣＣに寄託されたハイブリドーマから産生されるマウスモノクローナル抗体ｍ３Ｂ７．６またはその抗原結合フラグメント、変異体もしくは誘導体であり、そして検出抗体は、寄託番号ＰＴＡ−１２１８７３としてＡＴＣＣに寄託されたハイブリドーマから産生されるラットモノクローナル抗体Ｒ１１Ａ９．１１またはその抗原結合フラグメント、変異体もしくは誘導体である。
【０１４３】
本明細書で提供される免疫アッセイおよび方法の特定の面において、捕捉抗体は、寄託番号ＰＴＡ−１２１８７１としてＡＴＣＣに寄託されたハイブリドーマから産生されるマウスモノクローナル抗体ｍ５Ｂ７．７またはその抗原結合フラグメント、変異体もしくは誘導体であり、そして検出抗体は、寄託番号ＰＴＡ−１２１８７２としてＡＴＣＣに寄託されたハイブリドーマから産生されるマウスモノクローナル抗体Ｒ１１Ａ２．１５またはその抗原結合フラグメント、変異体もしくは誘導体である。本明細書で提供される免疫アッセイおよび方法の特定の面において、捕捉抗体は、寄託番号ＰＴＡ−１２１８７１としてＡＴＣＣに寄託されたハイブリドーマから産生されるマウスモノクローナル抗体ｍ５Ｂ７．７またはその抗原結合フラグメント、変異体もしくは誘導体であり、そして検出抗体は、寄託番号ＰＴＡ−１２１８７３としてＡＴＣＣに寄託されたハイブリドーマから産生されるラットモノクローナル抗体Ｒ１１Ａ９．１１またはその抗原結合フラグメント、変異体もしくは誘導体である。
【０１４４】
本明細書で提供される免疫アッセイおよび方法の特定の面において、捕捉抗体は、寄託番号ＰＴＡ−１２１８７２としてＡＴＣＣに寄託されたハイブリドーマから産生されるラットモノクローナル抗体Ｒ１１Ａ２．１５またはその抗原結合フラグメント、変異体もしくは誘導体であり、そして検出抗体は、寄託番号ＰＴＡ−１２１８７０としてＡＴＣＣに寄託されたハイブリドーマから産生されるマウスモノクローナル抗体ｍ３Ｂ７．６またはその抗原結合フラグメント、変異体もしくは誘導体である。本明細書で提供される免疫アッセイおよび方法の特定の面において、捕捉抗体は、寄託番号ＰＴＡ−１２１８７２としてＡＴＣＣに寄託されたハイブリドーマから産生されるラットモノクローナル抗体Ｒ１１Ａ２．１５またはその抗原結合フラグメント、変異体もしくは誘導体であり、そして検出抗体は、寄託番号ＰＴＡ−１２１８７１としてＡＴＣＣに寄託されたハイブリドーマから産生されるマウスモノクローナル抗体ｍ５Ｂ７．７またはその抗原結合フラグメント、変異体もしくは誘導体である。
【０１４５】
本明細書で提供される免疫アッセイおよび方法の特定の面において、捕捉抗体は、寄託番号ＰＴＡ−１２１８７３としてＡＴＣＣに寄託されたハイブリドーマから産生されるラットモノクローナル抗体Ｒ１１Ａ９．１１またはその抗原結合フラグメント、変異体もしくは誘導体であり、そして検出抗体は、寄託番号ＰＴＡ−１２１８７０としてＡＴＣＣに寄託されたハイブリドーマから産生されるマウスモノクローナル抗体ｍ３Ｂ７．６またはその抗原結合フラグメント、変異体もしくは誘導体である。本明細書で提供される免疫アッセイおよび方法の特定の面において、捕捉抗体は、寄託番号ＰＴＡ−１２１８７３としてＡＴＣＣに寄託されたハイブリドーマから産生されるラットモノクローナル抗体Ｒ１１Ａ９．１１またはその抗原結合フラグメント、変異体もしくは誘導体であり、そして検出抗体は、寄託番号ＰＴＡ−１２１８７１としてＡＴＣＣに寄託されたハイブリドーマから産生されるマウスモノクローナル抗体ｍ５Ｂ７．７またはその抗原結合フラグメント、変異体もしくは誘導体である。
【０１４６】
種々の対象サンプルを、本明細書に記載の方法において使用することができる。サンプルの限定しない例としては、全血、血清、血漿、唾液、喀痰、鼻ポリープ、鼻粘液、気管支肺胞洗浄液、皮膚細胞または肺組織、例えば、肺上皮細胞の１以上が挙げられる。特定の面において、サンプルは、血清サンプル、皮膚細胞または肺組織である。
【０１４７】
特定の面において、本明細書に記載の方法は、ＤＰＰ−４アッセイの結果および／または少なくとも一部ＤＰＰ−４レベルに基づく診断結果を対象に通知することを含む。患者は、口頭で、書面で、および／または電子的に通知され得る。この診断はまた、患者の診療記録（medical record）に記録することもできる。
【０１４８】
用語“診療記録”または“患者の診療記録”とは、一般的に以下の項目の１以上を含む、患者の検査および／または処置の結果を意味する：患者の病歴および合併症、医師の身体所見、診断検査および処置の結果、ならびに患者の投薬および治療処置。診療記録は、一般的に、１名以上の医師および／またはフィジカルアシスタントによって作成され、それは、治療および／または接種を必要とする種々の疾患もしくは傷害の記録および／または病歴、および／またはアレルギーの記録および／または病歴、および／または処置の記録および／または履歴、および／または予後の記録および／または履歴、および／または親、兄弟姉妹および／または職業に関する継続的な健康情報の記録および／または履歴の書面、転記または他の記録である。記録は、場合によっては、病状を診断する際に医師によって再検討され得る。
【０１４９】
診療記録は、紙形態であってよく、および／またはコンピュータ可読媒体に保持されてもよい。診療記録は、研究室、医局、病院、保健管理組織、保険会社、および／または個人の医療記録ウェブサイトによって維持することができる。いくつかの面において、ＤＰＰ−４レベルに少なくとも一部基づく診断は、カード、着用装具（worn article）、および／または無線周波数識別（ＲＦＩＤ）タグなどの医療用警告装具上またはその中に記録される。本明細書で用いる用語“着用装具”は、タグ、ブレスレット、ネックレス、アームバンド、またはヘッドバンドを含むが、これに限定されない、対象の身体に着用することができる物品を意味する。
【０１５０】
特定の面において、本方法は、１以上のさらなるアッセイの順位付けおよび／または実施を伴い得る。例えば、ＤＰＰ−４レベルが正常範囲にある（すなわち、上昇していない）と判定された場合、ＤＰＰ−４アッセイは、偽陰性の結果を除外するために繰り返されてよく、および／または１以上のさらなるＤＰＰ−４アッセイを、対象の状態を観測するために行うことができる。ＤＰＰ−４レベルが上昇していると判定された場合、偽陽性の結果を除外するためにＤＰＰ−４アッセイを繰り返すことが望ましい場合がある。
【０１５１】
ＤＰＰ−４検出法、アッセイおよびキット
本発明は、サンプル中のＤＰＰ−４レベルまたはＤＰＰ−４の量の測定または分析を容易にする方法、アッセイおよびキットを提供する。いくつかの面において、本明細書に記載の方法、アッセイおよびキットは、対象由来のサンプル中のＤＰＰ−４レベルまたはＤＰＰ−４の量を決定するために、医療提供者、医療給付提供者、または臨床検査室により実施または使用される。
【０１５２】
特定の面において、免疫アッセイは、患者から得られたサンプルで、患者を処置する医療専門家によって、例えば“処置現場用”診断キットとして処方された本明細書に記載の免疫アッセイを用いて実施される。いくつかの面において、サンプルは患者から得られ、例えば、本明細書に記載の免疫アッセイを用いて、医療従事者の指示に従ってサンプル中のＤＰＰ−４レベルを測定するために、例えば臨床検査室に提出される。
【０１５３】
特定の面において、ＩＬ−１３媒介性疾患または障害を有するか、または有すると予期される患者は、肺疾患もしくは障害、炎症性腸疾患もしくは障害、または慢性炎症性皮膚状態と診断されている。特定の面において、ＩＬ−１３媒介性病状を有するか、または有すると予期される疾患または障害は、喘息、特発性肺線維症（ＩＰＦ）、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、潰瘍性大腸炎（ＵＣ）、アトピー性皮膚炎、アレルギー性鼻炎、または慢性鼻副鼻腔炎である。
【０１５４】
本発明はまた、本明細書に記載の免疫アッセイの実施における使用のためのキットを提供する。かかるキットは、例えば１以上の抗ＤＰＰ−４抗体を含む、方法において利用される１以上の種々の試薬を（例えば、濃縮された形態で）それぞれ有する容器が組み込まれていてよい。１以上の抗ＤＰＰ−４抗体、例えば捕捉抗体は、既に固体支持体に結合されて提供され得て、そして１以上の抗体、例えば検出抗体は、事前に検出可能なラベル、例えばビオチンまたはルテニウムキレートに結合されて提供され得る。キットはまた、本明細書で提供されるアッセイの実施を支持するために、検出可能なラベル（ならびに、標識自体）を抗体にカップリングさせるための試薬、緩衝液、および／または試薬ならびに装置を提供することもできる。特定の面において、検出抗体に結合する標識された二次抗体が提供される。本明細書に記載のキットはさらに、本明細書に記載されるアッセイを実施するのに必要な適切な容器、プレートおよび他の試薬または材料をさらに含み得る。
【０１５５】
サンプル中のＤＰＰ−４レベルを測定するためのキットは、本明細書に記載の抗ＤＰＰ−４抗体またはそのフラグメントの１以上、例えば、寄託番号ＰＴＡ−１２１８７０として米国培養細胞系統保存機関（ＡＴＣＣ）に寄託されたハイブリドーマから産生されるマウスモノクローナル抗体ｍ３Ｂ７．６、寄託番号ＰＴＡ−１２１８７１としてＡＴＣＣに寄託されたハイブリドーマから産生されるマウスモノクローナル抗体ｍ５Ｂ７．７、寄託番号ＰＴＡ−１２１８７２としてＡＴＣＣに寄託されたハイブリドーマから産生されるラットモノクローナル抗体Ｒ１１Ａ２．１５、および／または寄託番号ＰＴＡ−１２１８７３としてＡＴＣＣに寄託されたハイブリドーマから産生されるラットモノクローナル抗体Ｒ１１Ａ９．１１、および／またはその抗原結合フラグメント、変異体もしくは誘導体、あるいは本明細書にそれも記載される関連する抗体またはその抗原結合フラグメントを含んでいてよい。
【０１５６】
特定の面において、本明細書に記載のキットは、２つの単離された抗体またはその抗原結合フラグメント、捕捉抗体および検出抗体を含む。特定の面において、捕捉抗体は、寄託番号ＰＴＡ−１２１８７０としてＡＴＣＣに寄託されたハイブリドーマから産生されるマウスモノクローナル抗体ｍ３Ｂ７．６、またはその抗原結合フラグメント、変異体もしくは誘導体、あるいは寄託番号ＰＴＡ−１２１８７１としてＡＴＣＣに寄託されたハイブリドーマから産生されるマウスモノクローナル抗体ｍ５Ｂ７．７、またはその抗原結合フラグメント、変異体もしくは誘導体であり、および検出抗体は、寄託番号ＰＴＡ−１２１８７２としてＡＴＣＣに寄託されたハイブリドーマから産生されるラットモノクローナル抗体Ｒ１１Ａ２．１５、またはその抗原結合フラグメント、変異体もしくは誘導体、あるいは寄託番号ＰＴＡ−１２１８７３としてＡＴＣＣに寄託されたハイブリドーマから産生されるラットモノクローナル抗体Ｒ１１Ａ９．１１、またはその抗原結合フラグメント、変異体もしくは誘導体である。
【０１５７】
特定の面において、捕捉抗体は、寄託番号ＰＴＡ−１２１８７２としてＡＴＣＣに寄託されたハイブリドーマから産生されるラットモノクローナル抗体Ｒ１１Ａ２．１５またはその抗原結合フラグメント、変異体もしくは誘導体、あるいは寄託番号ＰＴＡ−１２１８７３としてＡＴＣＣに寄託されたハイブリドーマから産生されるラットモノクローナル抗体Ｒ１１Ａ９．１１またはその抗原結合フラグメント、変異体もしくは誘導体であり、および検出抗体は、寄託番号ＰＴＡ−１２１８７０としてＡＴＣＣに寄託されたハイブリドーマから産生されるマウスモノクローナル抗体ｍ３Ｂ７．６、またはその抗原結合フラグメント、変異体もしくは誘導体、あるいは寄託番号ＰＴＡ−１２１８７１としてＡＴＣＣに寄託されたハイブリドーマから産生されるマウスモノクローナル抗体ｍ５Ｂ７．７またはその抗原結合フラグメント、変異体もしくは誘導体である。
【０１５８】
本明細書で提供されるキットの特定の面において、捕捉抗体は、寄託番号ＰＴＡ−１２１８７０としてＡＴＣＣに寄託されたハイブリドーマから産生されるマウスモノクローナル抗体ｍ３Ｂ７．６、またはその抗原結合フラグメント、変異体もしくは誘導体であり、および検出抗体は、寄託番号ＰＴＡ−１２１８７２としてＡＴＣＣに寄託されたハイブリドーマから産生されるラットモノクローナル抗体Ｒ１１Ａ２．１５、またはその抗原結合フラグメント、変異体もしくは誘導体である。本明細書で提供されるキットの特定の面において、捕捉抗体は、寄託番号ＰＴＡ−１２１８７０としてＡＴＣＣに寄託されたハイブリドーマから産生されるマウスモノクローナル抗体ｍ３Ｂ７．６またはその抗原結合フラグメント、変異体もしくは誘導体であり、および検出抗体は、寄託番号ＰＴＡ−１２１８７３としてＡＴＣＣに寄託されたハイブリドーマから産生されるラットモノクローナル抗体Ｒ１１Ａ９．１１またはその抗原結合フラグメント、変異体もしくは誘導体である。
【０１５９】
本明細書で提供されるキットの特定の面において、捕捉抗体は、寄託番号ＰＴＡ−１２１８７１としてＡＴＣＣに寄託されたハイブリドーマから産生されるマウスモノクローナル抗体ｍ５Ｂ７．７またはその抗原結合フラグメント、変異体もしくは誘導体であり、および検出抗体は、寄託番号ＰＴＡ−１２１８７２としてＡＴＣＣに寄託されたハイブリドーマから産生されるマウスモノクローナル抗体Ｒ１１Ａ２．１５またはその抗原結合フラグメント、変異体もしくは誘導体である。本明細書で提供されるキットの特定の面において、捕捉抗体は、寄託番号ＰＴＡ−１２１８７１としてＡＴＣＣに寄託されたハイブリドーマから産生されるマウスモノクローナル抗体ｍ５Ｂ７．７またはその抗原結合フラグメント、変異体もしくは誘導体であり、および検出抗体は、寄託番号ＰＴＡ−１２１８７３としてＡＴＣＣに寄託されたハイブリドーマから産生されるラットモノクローナル抗体Ｒ１１Ａ９．１１またはその抗原結合フラグメント、変異体もしくは誘導体である。
【０１６０】
本明細書で提供されるキットの特定の面において、捕捉抗体は、寄託番号ＰＴＡ−１２１８７２としてＡＴＣＣに寄託されたハイブリドーマから産生されるラットモノクローナル抗体Ｒ１１Ａ２．１５またはその抗原結合フラグメント、変異体もしくは誘導体であり、そして検出抗体は、寄託番号ＰＴＡ−１２１８７０としてＡＴＣＣに寄託されたハイブリドーマから産生されるマウスモノクローナル抗体ｍ３Ｂ７．６またはその抗原結合フラグメント、変異体もしくは誘導体である。本明細書で提供されるキットの特定の面において、捕捉抗体は、寄託番号ＰＴＡ−１２１８７２としてＡＴＣＣに寄託されたハイブリドーマから産生されるラットモノクローナル抗体Ｒ１１Ａ２．１５またはその抗原結合フラグメント、変異体もしくは誘導体であり、そして検出抗体は、寄託番号ＰＴＡ−１２１８７１としてＡＴＣＣに寄託されたハイブリドーマから産生されるマウスモノクローナル抗体ｍ５Ｂ７．７またはその抗原結合フラグメント、変異体もしくは誘導体である。
【０１６１】
本明細書で提供されるキットの特定の面において、捕捉抗体は、寄託番号ＰＴＡ−１２１８７３としてＡＴＣＣに寄託されたハイブリドーマから産生されるラットモノクローナル抗体Ｒ１１Ａ９．１１またはその抗原結合フラグメント、変異体もしくは誘導体であり、そして検出抗体は、寄託番号ＰＴＡ−１２１８７０としてＡＴＣＣに寄託されたハイブリドーマから産生されるマウスモノクローナル抗体ｍ３Ｂ７．６またはその抗原結合フラグメント、変異体もしくは誘導体である。本明細書で提供されるキットの特定の面において、捕捉抗体は、寄託番号ＰＴＡ−１２１８７３としてＡＴＣＣに寄託されたハイブリドーマから産生されるラットモノクローナル抗体Ｒ１１Ａ９．１１またはその抗原結合フラグメント、変異体もしくは誘導体であり、そして検出抗体は、寄託番号ＰＴＡ−１２１８７１としてＡＴＣＣに寄託されたハイブリドーマから産生されるマウスモノクローナル抗体ｍ５Ｂ７．７またはその抗原結合フラグメント、変異体もしくは誘導体である。
【０１６２】
特定の面において、検出抗体は、検出可能に標識されている。特定の面において、検出可能なラベルはビオチンであり、検出試薬は、ストレプトアビジン−西洋ワサビペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）複合体およびＨＲＰのための発色基質を含む。特定の面において、検出可能なラベルはルテニウムキレートである。本明細書の他の箇所に記載される他の抗体、標識および試薬もまた、本明細書に記載のキットで使用することができる。
【０１６３】
特定の面において、本発明は、少なくとも１つの、例えば少なくとも２つの抗ＤＰＰ−４抗体またはその抗原結合フラグメント、変異体もしくは誘導体、例えば、本明細書に記載の、寄託番号ＰＴＡ−１２１８７０として米国培養細胞系統保存機関（ＡＴＣＣ）に寄託されたハイブリドーマから産生されるマウスモノクローナル抗体ｍ３Ｂ７．６、寄託番号ＰＴＡ−１２１８７１としてＡＴＣＣに寄託されたハイブリドーマから産生されるマウスモノクローナル抗体ｍ５Ｂ７．７、寄託番号ＰＴＡ−１２１８７２としてＡＴＣＣに寄託されたハイブリドーマから産生されるラットモノクローナル抗体Ｒ１１Ａ２．１５、および／または寄託番号ＰＴＡ−１２１８７３としてＡＴＣＣに寄託されたハイブリドーマから産生されるラットモノクローナル抗体Ｒ１１Ａ９．１１、またはその抗原結合フラグメント、変異体もしくは誘導体、あるいは本明細書にそれも記載される関連する抗体またはその抗原結合フラグメント、の使用を含む、１以上のサンプル中のＤＰＰ−４レベルを検出するための免疫アッセイを提供する。
【０１６４】
特定の面において、本明細書に記載の免疫アッセイは、固体支持体に結合した第一の抗ＤＰＰ−４“捕捉”抗体またはその抗原結合フラグメント、ならびに第二の抗ＤＰＰ−４“検出”抗体またはその抗原結合フラグメントを含む、サンドイッチ免疫アッセイ、例えばＥＬＩＳＡアッセイまたはＥＣＬアッセイである。免疫アッセイは、本明細書で提供される方法または当業者に周知かつ理解される方法で実施される。一面において、免疫アッセイは、固体支持体に捕捉抗体またはそのフラグメントト、変異体もしくは誘導体を結合させること；サンプル中にＤＰＰ−４が存在する場合、試験サンプルまたは対照サンプルを適用して、ＤＰＰ−４が捕捉抗体またはそのフラグメント、変異体もしくは誘導体に結合するのを可能にすること；捕捉抗体またはそのフラグメント、変異体もしくは誘導体に既に結合したＤＰＰ−４への結合を可能にするのに、検出抗体またはそのフラグメントを適用すること；および、ＤＰＰ−４に結合した検出抗体またはそのフラグメント、変異体もしくは誘導体の量を測定することを含み得る。特定の面において、アッセイは、洗浄工程、ブロッキング工程およびインキュベーション工程をさらに含み得る。
【０１６５】
特定の面において、検出抗体またはフラグメント、変異体もしくは誘導体は、検出可能なラベル、例えば、ビオチンまたはルテニウムキレートをさらに含む。
【０１６６】
本発明の複数の面は、本発明の特定の抗体の詳細な調製および本発明の抗体を使用するための方法を記載する、以下の限定を意図しない例示を参照することにより、さらに定義され得る。本明細書の記載の範囲から逸脱することなく、材料および方法の両方に対する改変が行われ得ることは、当業者には明らかである。
【実施例】
【０１６７】
実施例
実施例１：ヒトＤＰＰ−４に特異的なラットおよびマウスモノクローナル抗体の作製および特性化
ヒトＤＰＰ−４に特異的なマウスおよびラットモノクローナル抗体を、以下の方法により作製した。動物を、反復性複数部位免疫化（Repetitive Immunization at Multiple Sites）（ＲＩＭＭＳ）プロトコール（Kilpatrick, K., et al., Hybridoma 16:381−389 (2009)）を用いて免疫化した。要するに、５匹のＢａｌｂ／ｃマウスおよび２匹のＷｉｓｔａｒラット(全て４−６週齢)に、各投与日に、完全フロイントアジュバント（Ｓｉｇｍａ）（１回目は、その後の免疫化のために不完全フロイントアジュバントが続く）に混合したｒ−ヒトＤＰＰ４−Ｈｉｓ（R&D Systems Catalog No. 1180）を６か所の背側部位に注射し、ＴｉｔｅｒＭａｘ（Ｓｉｇｍａ）アジュバントに混合した抗原を６か所の腹部側部位に皮下注射した。合計で、各動物に図１に示すように１２か所注射した。１３日目に採血し、免疫化前の血清および免疫化した血清の両方を、ＥＬＩＳＡプレートに結合させたＤＰＰ−４（ｒ−ＤＰＰ−４−Ｈｉｓ、R&D Systemsカタログ番号１１８０）および陰性対照糖タンパク質１３０（ｒ−ｇｐ１３０−Ｈｉｓ）を用いた直接結合ＥＬＩＳＡによって試験した。高結合ＥＬＩＳＡプレートのウェルを、５０μＬの、ＰＢＳ中ｒ−ヒトＤＰＰ−４−Ｈｉｓまたはｇｐ１３０−Ｈｉｓの２μｇ／ｍＬ溶液で、４℃にて一晩、コーティングした。その後、プレートを２００μＬ／ウェルの洗浄緩衝液（ＰＢＳ／０．１％ＴＷＥＥＮ−２０(登録商標)）で３回洗浄した。洗浄後、１５０μＬ／ウェルのブロッキング緩衝液（ＰＢＳ／３％脱脂粉乳／０．１％ＴＷＥＥＮ−２０(登録商標)）を各ウェルに添加し、プレートを室温にて１時間インキュベートした。その後、プレートを上記のように３回洗浄した。
【０１６８】
試験前および試験後の血清を、ＰＢＳ、ｐＨ７．２緩衝液で、最初１：１００希釈から最終１：２１８，６００希釈まで、連続希釈した。５０μＬの各希釈サンプルをプレートに添加し、室温にて１時間インキュベートした。プレートを上記のように３回洗浄した。洗浄後、５０μｌの検出抗体を各ウェルに添加した。マウス群については、ＰＢＳで１：８０００希釈したロバ抗マウス（Ｈ＋Ｌ）：ＨＲＰ（Jackson Immunoresearch, カタログ番号７１５−０３５−１５１）を使用した。ラット群については、ＰＢＳで１：８０００希釈したロバ抗ラット（Ｈ＋Ｌ）：ＨＲＰ（Jackson Immunoresearch、カタログ番号７１５−０３５−１５３）を使用した。プレートを室温にて１時間インキュベートした。その後、プレートを３回洗浄し、予め室温に温めた５０μＬ／ウェルのＴＭＢ基質（ＫＰＬ、カタログ番号５２−００−０４）を添加した。プレートを、室温にて、暗所で１０分間インキュベートし、５０μＬの停止溶液（１Ｍ  ＨＣｌ）を各ウェルに添加した。プレートをλ＝４５０ｎｍで分光光度計で読み取った。
【０１６９】
免疫化前の血清および免疫化後の血清のＤＰＰ−４に対する抗体価を図２に示す。１６日目および１９日目に、ロバストな血清力価を示すラットおよびマウスからリンパ節を取り出し、以下のようにハイブリドーマを作製した。１９日目に、動物からリンパ節を取り出し、リンパ球細胞をリンパ系組織から抽出して、７０μｍ細胞ストレイナーでろ過した。抗原特異的Ｂ細胞を、製造者が推奨するプロトコールを用いて、ＭＡＣＳ、ストレプトアビジンマイクロビーズ（Miltenyi Biotec Catalog # 130−048−101）を用いることにより単離した。その後、ＤＰＰ４特異的Ｂ細胞を、ＰＥＧ（Ｒｏｃｈｅ）融合法に従って１：１の比でミエローマＰ３ｘ／６３Ａｇ８．６５３細胞と融合させた。融合細胞を、２．５ｘ１０４Ｂ細胞／ウェルの密度で、１×ＨＡＴを添加したハイブリドーマ増殖培地（Ｅｘ−Ｃｅｌｌ６１０＋１０％Ｈｉ−ＦＢＳ＋１％ペニシリン−ストレプトマイシン＋１×ＢＭ−馴化Ｈ１ハイブリドーマクローニング補充液）中に播種した。融合の７日後、ＨＡＴ含有培地を、１×ＨＴを添加した増殖培地と交換した。
【０１７０】
ハイブリドーマ上清を、ヒトＤＰＰ−４に結合する抗体についてスクリーニングし、４つのハイブリドーマにより産生された抗体：マウスモノクローナル抗体ｍ３Ｂ７．６（ＩｇＧ１／κ）、マウスモノクローナル抗体ｍ５Ｂ７．７（ＩｇＧ１／κ）、ラットモノクローナル抗体Ｒ１１Ａ２．１５（ＩｇＧ２ａ／κ）、およびラットモノクローナル抗体Ｒ１１Ａ９．１１（ＩｇＧ２ａ／κ）を、さらなる試験のために選択した。これらの４つのモノクローナル抗体を発現するハイブリドーマ細胞株は、ブダペスト条約の規定により、２０１５年１月５日に、寄託番号ＰＴＡ−１２１８７０（ｍ３Ｂ７．６）、寄託番号ＰＴＡ−１２１８７１（ｍ５Ｂ７．７）、寄託番号ＰＴＡ−１２１８７２（Ｒ１１Ａ２．１５）、および寄託番号ＰＴＡ−１２１８７３（Ｒ１１Ａ９．１１）として米国培養細胞系統保存機関（ＡＴＣＣ）に寄託されている。
【０１７１】
実施例２：ＤＰＰ−４を検出するためのサンドイッチＥＬＩＳＡアッセイ
材料および方法
Ａ．ＨＲＰ検出システムを用いたＤＰＰ−４サンドイッチＥＬＩＳＡプロトコール
ＨＲＰベースのサンドイッチＥＬＩＳＡアッセイを以下のように行った。抗ＤＰＰ−４捕捉抗体、試験すべきサンプル、および抗ＤＰＰ−４検出抗体などの具体的な詳細は、種々の例における特定の試験について記載されている。標準的ＥＬＩＳＡプロトコールに対する変形は、当業者によく知られており、本明細書の記載に従って使用可能である。
【０１７２】
高結合ＥＬＩＳＡプレートを、抗ＤＰＰ−４捕捉ｍＡｂ、例えば、ｍ３Ｂ７．６またはｍ５Ｂ７．７（ＰＢＳ中５μｇ／ｍＬ；５０μＬ／ｗｅｌｌ）でコーティングし、４℃で一晩インキュベートした。プレートを２００μＬ／ウェルの洗浄緩衝液（ＰＢＳ／０．１％ＴＷＥＥＮ−２０(登録商標)）で３回洗浄した。洗浄後、１５０μＬ／ウェルのブロッキング緩衝液（ＰＢＳ／３％脱脂粉乳／０．１％ＴＷＥＥＮ−２０(登録商標)）を各ウェルに添加し、プレートを室温で１時間インキュベートした。その後、プレートを上記の通り３回洗浄した。
【０１７３】
標準曲線については、ＤＰＰ−４標準（例えば、R & D Systemsから入手可能な標準、カタログ番号1180−SE）を、ＰＢＳ、ｐＨ７．２緩衝液または１％正常ヒト血清で連続希釈し、例えば、５００ｎｇ／ｍＬから０．４９ｎｇ／ｍｌに２倍希釈した。５０マイクロリットル（５０μＬ）の各標準サンプルまたは希釈サンプルをプレートに添加し、該プレートを室温にて１時間インキュベートした。再度、プレートを上記の通り３回洗浄した。洗浄後、５０μＬの検出ｍＡｂ  Ｒ１１Ａ２．１５、Ｒ１１Ａ９．１１または２２２１１３．１１（２μｇ／ｍｌ濃度で）を各ウェルに添加し、プレートを室温にて１時間インキュベートした。再度、プレートを上記の通り３回洗浄した。洗浄後、ＰＢＳで１：８，０００に希釈した５０μＬのロバ抗Ｒａｔ（Ｈ＋Ｌ）−ＨＲＰ複合体（Jackson Immunoresearch カタログ番号 712−035−153）を各ウェルに添加し、プレートを室温にて１時間インキュベートした。再度、プレートを上記の通り３回洗浄した。洗浄後、予め室温に温めた５０μＬ／ｗｅｌｌのＴＭＢ基質（KPL, Catalog No. 52−00−04）を添加し、プレートを室温にて暗所で１０分間インキュベートし、５０μＬのＴＭＢ停止溶液（１Ｍ  ＨＣｌ）を各ウェルに添加した。最後に、プレートをλ＝４５０ｎｍで分光光度計で読み取った。
【０１７４】
結果
マウスｍ３Ｂ７．６およびｍ５Ｂ７．７を捕捉抗体として用いた結果を図３Ａおよび図３Ｂにそれぞれ示す。２つのマウスおよび２つのラットｍＡｂ（ｍＡｂ  Ｒ１１Ａ２．１５またはＲ１１Ａ９．１１）は、同様の検出限界（ＬＬＯＤ）を有するヒトＣＤ２６に対する４つの異なる検出剤のペアを形成し、サンドイッチＥＬＩＳＡアッセイでのヒトＤＰＰ−４の測定における高感度を提供した。これに対して、市販のラットｍＡｂ（Ｒ２２２１１３）（ヒトＤＰＰＩＶ／ＣＤ２６ＭＡｂ（クローン２２２１１３）、R&D SystemsのラットＩｇＧ２Ａ  カタログ番号ＭＡＢ１１８０）は、ヒトＣＤ２６を検出せず、２つのマウスｍＡｂ ｍ３Ｂ７．６およびｍ５Ｂ７．７が対となるとき、サンドイッチＥＬＩＳＡアッセイでのヒトＤＰＰ−４の測定において感度が顕著に低かった。図３Ａ−Ｂを参照のこと。これらの結果は、本発明の抗体（ｍ３Ｂ７．６、ｍ５Ｂ７．７、Ｒ１１Ａ２．１５およびＲ１１Ａ９．１１）が、市販のラット抗体Ｒ２２２１１３と比べて免疫アッセイにおけるヒトＣＤ２６の検出に優れていることを実証する。加えて、本発明の抗体（ｍ３Ｂ７．６、ｍ５Ｂ７．７、Ｒ１１Ａ２．１５およびＲ１１Ａ９．１１）は、内因性および組換えヒトＣＤ２６の両方を検出し、診断試薬としても有用である。
【０１７５】
図３に示す通り、ｍ３Ｂ７．６＋Ｒ１１Ａ２．１５、ｍ３Ｂ７．６＋Ｒ１１Ａ９．１１、ｍ５Ｂ７．７＋Ｒ１１Ａ２．１５および／またはｍ５Ｂ７．７＋Ｒ１１Ａ９．１１は、サンドイッチＥＬＩＳＡアッセイでのヒトＤＰＰ−４の測定に有効である。加えて、ペアの選択に関わらず、試験におけるＤＰＰ−４の血清濃度は、１−２μｇ／ｍｌの間であった。
【０１７６】
実施例３：ＯＣＴＥＴを用いる抗ＤＰＰ−４ｍＡｂエピトープビニング
４つの抗ＤＰＰ−４抗体（ｍ３Ｂ７．６、ｍ５Ｂ７．７、Ｒ１１Ａ２．１５およびＲ１１Ａ９．１１）についてのエピトープビニングを、ＯＣＴＥＴにより行った。試験抗体をビオチニル化し、２０μｇ／ｍｌの濃度のストレプトアビジンバイオセンサー上で、２００μｌ／ウェルで５分間、捕捉し、その後、２００μＬのＰＢＳ緩衝液で１分間洗浄した。次いで、該バイオセンサーを、１０μｇ／ｍＬの組換えヒトＤＰＰ４と共に５分間インキュベートし、２００μＬのＰＢＳ緩衝液で１分間洗浄した。競合抗体を、終濃度２０μｇ／ｍｌで試験抗体と１：１比で混合して、バイオセンサーと共に２００μｌで５分間インキュベートした。
【０１７７】
アッセイの概略を図４Ａに示し、試験抗体としての４つの抗体（ｍ３Ｂ７．６、ｍ５Ｂ７．７、Ｒ１１Ａ２．１５およびＲ１１Ａ９．１１）の結果を図４Ｂ−Ｅにそれぞれ示す。結果は、マウスモノクローナル抗体ｍ３Ｂ７．６とｍ５Ｂ７．７が互いに競合し、ラットモノクローナル抗体Ｒ１１Ａ２．１５とＲ１１Ａ９．１１が互いに競合することを実証した。マウス抗体はラット抗体と競合せず、従って、エピトープを共有しない。このデータに基づき、本発明者らは、２つのマウス抗体（ｍ３Ｂ７．６およびｍ５Ｂ７．７）が、同じか、または重複するエピトープを共有し、一方で、２つのラット抗体（Ｒ１１Ａ２．１５およびＲ１１Ａ９．１１）が、マウス抗体によって共有されるエピトープとは異なる、エピトープまたは重複するエピトープを共有するという結論を出した。
【０１７８】
特定の面に関する上記の説明は、本明細書に記載の一般的な概念から逸脱することなく、過度の実験をすることなく、そのような特定の面を種々の用途に容易に改変および／または適合させることができる開示の一般的性質を完全に明らかにし得る。従って、そのような適合および改変は、本明細書に記載の教示および示唆に基づいて、開示された面の均等物の意味および範囲内にあることが意図される。本明細書の表現または用語は、本明細書の用語または表現が教示および示唆に照らして当業者によって解釈されるように、説明を目的とし、限定のためではないことが理解されるべきである。
【０１７９】
本発明の幅および範囲は、上記の例示的な面のいずれによっても限定されるべきではなく、添付の特許請求の範囲およびそれらの均等物によってのみ規定されるべきである。
【０１８０】
本願に引用される全ての刊行物、特許、特許出願、および／または他の文書は、本願に引用される全ての刊行物、特許、特許出願、および／または他の文書は、各個々の刊行物、特許、特許出願および／または他の文書が、すべての目的のために引用により組み込まれることが個別に示されている場合と同じ程度に、すべての目的のために引用によりその内容全体が包含される。
【図１】
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【図２】
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【図３Ａ】
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【図３Ｂ】
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【図４Ａ】
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【図４Ｂ】
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【図４Ｃ】
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【図４Ｄ】
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【図４Ｅ】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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