(57)【要約】  本発明は、非ヒト哺乳動物のメスの繁殖周期を制御、管理または操作するための方法、組成物およびキットに関する。本方法は、発情誘発および／または同期化、排卵および／または過排卵の誘発を含み、授精または胚の着床前の免疫寛容性子宮環境を提供する方法を任意選択でさらに含む。【選択図】図1
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
メス非ヒト哺乳動物における繁殖を制御する方法であって、
（ｉ）少なくとも１種の卵胞刺激剤および透過促進剤を含む浸食性組成物を含む第１の膣用送達システムを膣内に挿入することにより、発情／多卵胞リクルートを誘発するステップ、ならびに／または
（ｉｉ）少なくとも１種の卵胞刺激剤および透過促進剤を含む浸食性組成物を含む第２の膣用送達システムを膣内に挿入することにより、排卵／黄体化を誘発するステップ、ならびに／または
（ｉｉｉ）エオタキシン、ＲＡＮＴＥＳ、ＩＬ−１２およびＧＭ−ＣＳＦのうちの少なくとも１種または複数ならびに透過促進剤を含む浸食性組成物を含む第３の膣用送達システムを膣内に挿入することにより、胚の着床前または授精前に免疫寛容性子宮環境を誘発するステップ
を含む方法。
【請求項２】
ステップ（ｉｉ）が、ステップ（ｉ）後４０から６０時間の間に実施される、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
ステップ（ｉｉ）が、実験動物種においてステップ（ｉ）後４６から５２時間の間に実施される、請求項２に記載の方法。
【請求項４】
ステップ（ｉｉｉ）が、ステップ（ｉｉ）の前に、それと同時に、またはその後に実施される、請求項１から３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５】
第１および第２の膣送達が、単一の膣用送達デバイスを二重の機能で使用できるよう、二相性送達デバイスの形態であるか、または、三相性送達システムの形態であり、それによって、単一の送達システムが、３つすべての機能性成分を送達する、請求項１から４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６】
（ａ）ステップ（ｉ）、
（ｂ）ステップ（ｉｉ）、
（ｃ）ステップ（ｉ）および（ｉｉ）、
（ｄ）ステップ（ｉ）および（ｉｉｉ）、
（ｅ）ステップ（ｉｉ）および（ｉｉｉ）、ならびに
（ｆ）ステップ（ｉ）、ステップ（ｉｉ）およびステップ（ｉｉｉ）
からなる群から選択される、請求項１に記載の方法。
【請求項７】
複数のメスに対して同時に実施される、請求項１から６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８】
膣用送達システムが、膣内に頸管口のレベルまで挿入され、イン・サイチュで放出される、請求項１から７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９】
膣用送達システムの浸食性組成物が、それらの有効成分を膣粘膜に放出し、それによって、有効成分が膣粘膜により吸収される、請求項１から８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０】
膣用送達システムが、膣用カプセル剤、膣用ゲル剤、膣用錠剤、膣用散剤、膣用液剤、膣用ペッサリー剤、膣用カップ、膣用スポンジまたは膣用フォーム剤もしくは噴霧剤の形態である、請求項１から９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１１】
膣用送達システムが、膣用ペッサリー剤の形態である、請求項１から１０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１２】
第１および第２の膣用送達システムが、単一の二相性放出ペッサリー剤である膣用ペッサリー剤において組み合わされるか、または、３つすべての膣用送達システムを組み合わせて、三相性放出ペッサリー剤を提供する、請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
透過促進剤が、キレート剤、界面活性剤、胆汁酸塩、脂肪酸、非界面活性剤、包接錯体、チオール化ポリマーを含む群から選択される、請求項１から１２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１４】
キレート剤が、ＥＤＴＡ、クエン酸、サリチル酸ナトリウムおよびサリチル酸メトキシを含む群から選択される、請求項１３に記載の方法。
【請求項１５】
界面活性剤が、ラウリル硫酸ナトリウム、ポリドカノール、ポリオキシエチレン、ポリオキシエチレン−９−ラウリルエーテル、ポリオキシエチレン−２０−セチルエーテル、塩化ベンザルコニウム、２３−ラウリルエーテル、塩化セチルピリジニウム、臭化セチルトリメチルアンモニウムを含む群から選択される、請求項１３に記載の方法。
【請求項１６】
胆汁酸塩が、グリコール酸ナトリウム、デオキシコール酸ナトリウム、タウロコール酸ナトリウム、グリコデオキシコール酸ナトリウムおよびホスファチルコリンを含む群から選択される、請求項１３に記載の方法。
【請求項１７】
脂肪酸が、オクタン酸、オレイン酸、カプリン酸、ラウリン酸／プロピレングリコール、オレイン酸メチル、リゾホスファチジルコリンおよびホスファチジコリンを含む群から選択される、請求項１３に記載の方法。
【請求項１８】
非界面活性剤が不飽和環状尿素である、請求項１３に記載の方法。
【請求項１９】
包接錯体がシクロデキストリンである、請求項１３に記載の方法。
【請求項２０】
チオール化ポリマーが、キトサン−４−チオブチルアミド、キトサン−システイン、ポリ（アクリル酸）−ホモシステイン、ポリカルボフィル−システイン、ポリカルボフィル−システイン／ｇｓｈ、キトサン−４−チオエチルアミド／ｇｓｈおよびキトサン−４−チオグリコール酸を含む群から選択される、請求項１３に記載の方法。
【請求項２１】
透過促進剤が、アプロチニン、アゾン、シクロデキストリン、硫酸デキストラン、メントール、ポリソルベート８０、スルホキシドおよび様々なアルキルグリコシドを含む群から選択される、請求項１３に記載の方法。
【請求項２２】
第１の膣用送達システムの少なくとも１種の卵胞刺激剤が、妊馬血清性ゴナドトロピン（ＰＭＳＧ）、ヒト閉経期ゴナドトロピン（ＨＭＧ）、メノトロピン、卵胞刺激ホルモン（ＦＳＨ）、フォリトロピン−アルファ、フォリトロピン−ベータ、コリフォリトロピン−アルファ、ウロフォリトロピン、活性化されたベータグリカン、フォリスタチン、グルカゴン様ペプチド１（ＧＬＰ−１）、エクステンジン−４、フォリスタチン阻害剤、ペプチドＹＹ、アクチビンＡ／Ｂ、インヒビン阻害剤、アクチビン受容体遮断剤およびキスペプチン、またはアクチビン、フォリスタチン、ＧＬＰ−１、アクチビンＡ／Ｂ、インヒビン、およびキスペプチンに関するシグナリングの調節を通じて内因性ＦＳＨプロファイルに影響を及ぼす任意の他の薬剤、ならびに卵胞刺激性を保持する組換えまたはその他の、それらの天然または合成類似体のうちの任意のもの、ならびにそれらの混合物を含む群から選択される、請求項１から２１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２３】
実験動物種についての第１の膣用送達システムの少なくとも１種の卵胞刺激剤の濃度が、１．０から１０，０００ｉｕの範囲である、請求項１から２２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２４】
第２の膣用送達システムの少なくとも１種の黄体形成剤が、ヒト絨毛性ゴナドトロピン（ｈＣＧ）およびその各種形態、完全ｈＣＧ、Ｃ末端ペプチド完全ｈＣＧ、インタクトｈＣＧ、遊離βサブユニットｈＣＧ、βコアフラグメントｈＣＧ、高グリコシル化ｈＣＧ、ニックｈＣＧ、アルファｈＣＧ、下垂体ｈＣＧ、黄体形成ホルモン（ＬＨ）、それらの、卵巣からの卵母細胞放出を刺激または促進するような、組換えまたはそれ以外の、天然または合成類似体の任意のもの、ならびにそれらの混合物を含む群から選択される、請求項１から２３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２５】
第２の膣用送達システムの少なくとも１種の黄体形成剤の濃度が、１．０から１０，０００ｉｕの範囲である、請求項１から２４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２６】
第３の膣用送達システムが、エオタキシン、ＲＡＮＴＥＳ、ＩＬ−１２およびＧＭ−ＣＳＦのうちの任意の１種または複数を含む、請求項１から２５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２７】
第３の膣用送達システムが、ＭＣＰ−１、ＭＩＰ、ＩＬ−１７、ＩＬ−９、ＴＮＦ−αおよびＴＧＦβを含む群から選択される、任意の１種、２種、３種、４種、５種または６種の追加のサイトカインをさらに含む、請求項２６に記載の方法。
【請求項２８】
ＩＬ−１２が、ＩＬ−１２  ｐ４０またはＩＬ−１２ｐ７０のいずれかである、請求項２６に記載の方法。
【請求項２９】
ＭＩＰが、ＭＩＰ−１αまたはＭＩＰ−１βのいずれかである、請求項２７に記載の方法。
【請求項３０】
第３の膣用送達システムが、ＩＬ−１α、ＩＬ−１β、ＩＬ−１ｒａ、ＩＬ−２ｒａ、ＩＬ−２、ＩＬ−３、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＩＬ−８、ＩＬ１０、ＩＬ−１３、ＩＬ−１５、ＩＬ−１６、ＩＬ−１８、ＦＧＦ、Ｇ−ＣＳＦ、ＩＦＮ−α２、ＩＦＮ−γ、ＩＰ−１０、ＰＤＧＦ、レプチン、ＣＴＡＣＫ、ＫＣ、ＧＲＯα、ＨＧＦ、ＬＩＦ、ＭＣＰ−３、Ｍ−ＣＳＦ、ＭＩＦ、ＭＩＧ、β−ＮＧＦ、ＳＣＦ、ＳＣＧＦ−β、ＳＤＦ−１α、ＴＮＦ−β、ＴＲＡＩＬおよびＶＥＧＦを含む群から選択される追加のサイトカインのうちの任意の１種または複数をさらに含む、請求項２６から２９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３１】
膣用送達システムが、粘膜付着性ポリマーをさらに含む、請求項１から３０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３２】
粘膜付着性ポリマーが天然または合成である、請求項３１に記載の方法。
【請求項３３】
天然粘膜付着性ポリマーが、アガロース、キトサン、ゼラチン、ヒアルロン酸、カラギーナン、ペクチン、アルギン酸ナトリウム、可溶性デンプン、カラヤガムおよびセルロース誘導体を含む群から選択される、請求項３２に記載の方法。
【請求項３４】
合成粘膜付着性ポリマーが、カーボポール、ポリカルボフィル、ポリアクリル酸、ポリアクリレート、アクリル酸のコポリマー、ポリエテレングリコール、メチルビニルエーテルおよびメタクリル酸のコポリマー、ポリ−２−ヒドロキシエチルアクリレート、アクリル酸およびエチルヘキシルアクリレートのコポリマー、ポリメタクリレート、ポリアルキルシアノアクリレート、ポリイソブチルシアノアクリレート、ポリイソヘキシルシアノアクリレート、チオール化ポリマー、ポリビニル誘導体ならびにポリヒドロキシエチレンを含む群から選択される、請求項３０に記載の方法。
【請求項３５】
少なくとも１種の卵胞刺激剤の膣内送達のための浸食性組成物。
【請求項３６】
請求項８から２３および請求項３１から３４に記載の任意の１つまたは複数の特徴をさらに含む、請求項３５に記載の組成物。
【請求項３７】
少なくとも１種の黄体形成剤の膣内送達のための浸食性組成物。
【請求項３８】
請求項８から２３および請求項２５から２６４および請求項３１から３４に記載の任意の１つまたは複数の特徴をさらに含む、請求項３７に記載の組成物。
【請求項３９】
腟坐剤、ペッサリー剤、錠剤、散剤、生体付着性錠剤、カプセル剤、マイクロ粒子、生体付着性マイクロ粒子、マイクロカプセル剤、マイクロスフェア、リポソーム、クリーム剤、ローション剤、フォーム剤、噴霧剤、フィルム、軟膏剤、液剤、ゲル剤、または徐放性ゲル剤、錠剤もしくはカプセル剤、または膣に投与されるかもしくは膣用デバイス内に組み込まれる徐放性坐剤として調製される、請求項３５から３８のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項４０】
非ヒト哺乳動物における発情の誘発または複数の動物における発情の同期化における使用のための、請求項３５、３６および３９のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項４１】
非ヒト哺乳動物における排卵または過排卵の誘発における使用のための、請求項３７から３９のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項４２】
（ｉ）非ヒトメス哺乳動物における発情の誘発もしくは同期化における使用のための第１の膣内送達システム、および／または（ｉｉ）非ヒトメス哺乳動物にける排卵もしくは過排卵を誘発するための第２の膣内送達システム、および／または（ｉｉｉ）非ヒトメス哺乳動物における子宮内の免疫寛容環境を誘発するための第３の膣内送達システムを含むキットであって、任意選択で、（ａ）膣内送達システムを挿入するための挿入デバイスおよび（ｂ）説明書のセットをさらに含むキット。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、獣亜綱非ヒト哺乳動物の繁殖周期を制御、管理または操作するための方法および組成物に関する。本方法は、発情誘発および／または同期化、排卵および／または過排卵の誘発を含み、授精または胚の着床前の免疫寛容性子宮環境を提供する方法を任意選択でさらに含む。本方法は、妊娠および胚着床の成功率の改善ならびに産仔数の増加を提供する。本発明は、とりわけ、本発明の方法のための組成物、配合物およびキットを提供する。
【背景技術】
【０００２】
発情とは、メスが性的に受容性である（「発情している」）段階を指す。性腺刺激ホルモンの制御下で、卵胞が成熟し、エストロゲン分泌がその作用を及ぼす。このとき、メスは性的に受容的な行動を示し、これは、可視的な生理的変化により示されうる状況である。発情同期化は、メス哺乳動物をターゲットにして、時間およびコストを節約してプロセスを全般に合理化するために概ね同時に受精できるよう、短期間（通常は３６から９６時間）内に発情および排卵させるためのプロセスである。発情周期の同期化は、経済的に有利であり、農業動物において、たとえば人工授精のコストを減少させ、乳生産の効率および収益性を最大化するために、最も一般的に使用される。
【０００３】
発情周期の誘発および／または同期化は、ほとんどの獣亜綱哺乳動物種において、ホルモンの異なる組合せを供給することにより、常法で達成され、黄体退行因子（プロスタグランジンＦ２α、ＰＧＦ２αおよびその類似体）および黄体因子（ｐｒｏｇｅｓｔａｔｉｖｅ  ｆａｃｔｏｒ）（プロゲステロンおよびその類似体）が一般に使用される。ＰＧＦ２αの分泌は、哺乳動物において黄体の退行を引き起こす事象であり、発情行動、そしてそれゆえ排卵へと至る卵胞期に移行する。発情は、排卵の前兆ということができる。家畜動物、たとえばブタ、ウシおよびヒツジに対する外因性ＰＧＦ２αまたはその類似体の投与は、迅速で制御された黄体退行を誘発する。単回の注射として与えられた場合、メスの一部は、非黄体期またはきわめて初期もしくはきわめて終期の黄体期にあり、反応を示さない。数日空けた２回の注射の使用は、２回目の注射で、発情行動および排卵を示すことにより反応するすべての動物が周期の正しい段階にあることを保証する。他方、黄体期中の黄体の分泌作用を模倣するために、黄体ホルモン（ｐｒｏｇｅｓｔａｔｉｖｅ  ｈｏｒｍｏｎｅ）を数日間適用（毎日の食餌によるかまたは徐放のためのシステムを使用してのいずれかで）し、ホルモンの中止が卵胞期、そしてそれゆえ発情および排卵を誘発すると考えられる。効果的であるために、黄体処置（ｐｒｏｇｅｓｔａｔｉｖｅ  ｔｒｅａｔｍｅｎｔ）の持続期間は、一般に、卵巣における潜在的な黄体の活動寿命を超えなければならないか、または黄体退行剤と組み合わされてもよい。
【０００４】
実験動物繁殖プログラムにおいて、利便性および経済的理由のため、同期化発情もまた使用される。なぜなら、交配は、受容性メスが発情している場合にのみ生じるからである。マウスおよびラットにおいて、発情周期は４〜５日間持続（女性の平均２８日の月経周期に相当）し、これは、潜在的な交配に参加する、潜在的な受容性メスの大きなプールに依存する必要性をもたらす。典型的には、ランダムな周期の個体群において、７５％のラット／マウス受容個体が発情しておらず、初期プールにおいて多数のメスが必要になる。適切な時点でメスが発情している（同期化発情の非存在下で、性的に受容性）見込みは、それらの周期の長さによって１：４から１：５である。したがって、４匹の受容個体が必要な場合、１６から２０匹のオスとの潜在的な交配対として１６から２０匹のメスがケージに入れられ、これは、２０〜２５％の成功率に換算される。この数字は、一部のメスがそのパートナーとの交配を拒むと、さらに低くなりうる。マウスでは、たとえば、５．０ｉｕの妊馬血清性ゴナドトロピン（ＰＭＳＧ）（または、卵胞刺激性を有する何らかの他の薬剤、たとえばヒト閉経期ゴナドトロピン、ｈＭＧ）が腹腔内投与されたときにトリガーとして作用し、過刺激を誘発できることが、先行技術から知られている。この投与法は、メスの内因性視床下部−下垂体−卵巣軸を無効化することにより、４６〜５２時間で同じ目標を達成する。しかるのちに、同じ経路で投与される５．０ｉｕのヒト絨毛性ゴナドトロピン（ｈＣＧ）を、補助的な排卵トリガーとして使用できる。このアプローチの成功率は相対的に高いとはいえ、それは、メスを１９８６年の動物（科学的処置）法のもとで規制される処置（すなわち、痛み、苦しみまたは持続的な危害を潜在的に引き起こす処置）に供することを伴い、熟練した操作者を必要とする。しかしながら、ネズミ目動物における発情同期化のための最も一般的な現存の方略は、「ホイットン効果」を通じたものである。マウスでは、これは、オス包皮腺により産生されるものを含むオスフェロモンを発する、新鮮で土の敷かれたオスケージベッディングにターゲットのメス動物を曝露することにより達成される。３日間を経て、これは、一定の割合の曝露メスマウスに発情をもたらす。この方略の有効性は、ユニット、収容環境、系統および個々の動物の特性により変化し、概して、同期交配実験における使用のためのまたは胚移植のための受容個体としての、４０〜７０％の同期化メスをもたらすことが認められている。このアプローチに伴う問題は、成功率の大きな変動、および、エンドユーザーが利用可能な、個別の十分に多数であることが保証された発情メスをもたらすために、メスの大きなプールを使用することが必要な点である。
【０００５】
排卵誘発および過排卵は、卵巣を刺激して成熟卵母細胞をもたらすための、注射可能な排卵誘発剤（ゴナドトロピン）の使用を記述する用語である。排卵誘発の目的は、この時点で通常は排卵しないと考えられるメスにおいて、卵母細胞を成長および排卵させることであり、一方で過排卵の目的は、非ヒト哺乳動物のメスにおける受胎能を改善するよう、２つ以上の卵母細胞をもたらすことである。実験動物では、過排卵は、排他的にではないが典型的には、基礎研究目的で、または、トランスジェニック／顕微操作胚を創出するために、インビボ／インビトロ受精のための複数の卵母細胞を生成するためであり、よく確立されたアプローチを使用して達成される。これらは、典型的には、妊馬血清性ゴナドトロピン（ＰＭＳＧ）、ヒト閉経期ゴナドトロピン（ｈＭＧ）または卵胞刺激ホルモン（ＦＳＨ、組換え等）を腹腔内投与することを伴う。４６〜５２時間後（ネズミ目動物において）、黄体形成剤（ｈＣＧ、黄体形成ホルモン（ＬＨ）またはその他）の投与を、排卵を誘発するために使用できる。マウスにおいて過排卵を誘発するための典型的なプロトコルは、約４８時間を空けた５ｉｕのＰＭＳＧおよび５ｉｕのｈＣＧの腹腔内投与を含む。これらの薬剤は、腹膜により吸収され、多数の卵胞をリクルートして排卵前期へと（そして、適切なＬＨ様トリガーが与えられれば、排卵へと）発達させ、それゆえ生理学的な視床下部−下垂体−卵巣の制御を無効化する。結果として、１匹の動物当たり、より多くの卵母細胞／卵胞がもたらされ、一定数の同期的な卵胞または排卵後卵母細胞を生成するのに必要な動物の数を減少させる利益を提供する。このアプローチの不利益は、それが、メスを規制された処置（すなわち、痛み、苦しみまたは持続的な危害を潜在的に引き起こす処置）に供することを伴い、意図しない膀胱内注射等の併発を避けるために、熟練した操作者を必要とすることである。
【０００６】
一群の動物において、短期間での繁殖性の排卵および交配を伴う、発情同期化のための信頼のおける方法が必要とされている。これは、動物管理（過排卵効果の存在または非存在下での、動物ユニットにおける異なる個体および群の繁殖の制御および計画）、生物工学（胚回収および胚移植のための偽妊娠フォスターの誘導のためのゴナドトロピン過排卵プロトコルと組み合わせた、人工授精）、研究（胚発生に関する段階特異的研究または新生仔に関する研究において同期化された分娩を得ることのいずれかのための同期化妊娠をもたらすための、同期化交配個体との標準化され一致した実験群のスケジューリング）、および福祉（実験動物数の低減および動物に基づく研究実験計画の洗練）を改善するために有利であり、有益であると考えられる。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明の第１の態様によれば、メス非ヒト哺乳動物における繁殖を制御する方法であって、
（ｉ）少なくとも１種の卵胞刺激剤および透過促進剤を含む浸食性組成物を含む第１の膣用送達システムを膣内に挿入することにより、発情／多卵胞リクルートを誘発するステップ、ならびに／または
（ｉｉ）少なくとも１種の卵胞刺激剤および透過促進剤を含む浸食性組成物を含む第２の膣用送達システムを膣内に挿入することにより、排卵／黄体化を誘発するステップ、ならびに／または
（ｉｉｉ）エオタキシン、ＲＡＮＴＥＳ、ＩＬ−１２およびＧＭ−ＣＳＦのうちの少なくとも１種または複数ならびに透過促進剤を含む浸食性組成物を含む第３の膣用送達システムを膣内に挿入することにより、胚の着床前または授精前に免疫寛容性子宮環境を誘発するステップ
を含む方法が提供される。
【０００８】
好ましくは、ステップ（ｉｉ）は、ステップ（ｉ）後４０から６０時間の間、より好ましくはステップ（ｉ）後４６から５２時間の間に実施される。
【０００９】
本発明のいくつかの実施形態において、第１および第２の膣用送達システムは、単一の膣用送達デバイスを二重の機能で使用できるよう、二相性送達デバイスの形態であってもよい。さらなる別の実施形態では、膣用送達システムは、三相性送達システムであってもよく、それによって、単一の送達システムが、３つすべての機能性成分を送達する。
【００１０】
好ましくは、ステップ（ｉｉｉ）は、ステップ（ｉｉ）の前に、それと同時に（同時投与）、またはその後に実施される。
【００１１】
メス動物が人工授精されるかまたはオスと交配するかのいずれかである本発明の一実施形態では、本方法は、ステップ（ｉ）、（ｉｉ）および（ｉｉｉ）を含んでいてもよい。代替的一実施形態では、本発明の方法は、ステップ（ｉ）および（ｉｉｉ）を必要とすると考えられる。本発明のさらなる別の一実施形態では、メスがすでに発情している場合、本方法は、ステップ（ｉｉ）およびステップ（ｉｉｉ）のみを必要としてもよい。したがって、制御される必要のある繁殖プロセスの態様に応じて、本発明の方法は、ユーザーの要求により適合されることが認められると考えられる。
【００１２】
好ましくは、本発明の方法は、複数のメスに対して同時に実施される。
【００１３】
好ましくは、膣用送達システムは、膣内に頸管口のレベルまで挿入され、イン・サイチュで放出される。
【００１４】
好ましくは、膣用送達システムの浸食性組成物は、それらの有効成分を膣粘膜に放出し、それによって、有効成分は膣粘膜により吸収される。
【００１５】
好ましくは、膣用送達システムは、膣用カプセル剤、膣用ゲル剤、膣用錠剤、膣用散剤、膣用液剤、膣用ペッサリー剤、膣用カップ、膣用スポンジまたは膣用フォーム剤もしくは噴霧剤の形態である。最も好ましくは、膣用送達システムは、膣用ペッサリー剤の形態である。したがって、第１および第２の膣用送達システムが組み合わされる場合には、膣用ペッサリー剤は単一の二相性放出ペッサリー剤であり、或いは、３つすべての膣用送達システムを組み合わせて、三相性放出ペッサリー剤を提供できる。
【００１６】
好ましくは、透過促進剤は、キレート剤、界面活性剤、胆汁酸塩、脂肪酸、非界面活性剤、包接錯体、チオール化ポリマーを含む群から選択される。
【００１７】
好適なキレート剤には、ＥＤＴＡ、クエン酸、サリチル酸ナトリウムおよびサリチル酸メトキシが含まれるが、これらに限定されない。
【００１８】
好適な界面活性剤には、ラウリル硫酸ナトリウム、ポリドカノール、ポリオキシエチレン、ポリオキシエチレン−９−ラウリルエーテル、ポリオキシエチレン−２０−セチルエーテル、塩化ベンザルコニウム、２３−ラウリルエーテル、塩化セチルピリジニウム、臭化セチルトリメチルアンモニウムが含まれるが、これらに限定されない。好適な胆汁酸塩には、グリコール酸ナトリウム、デオキシコール酸ナトリウム、タウロコール酸ナトリウム、グリコデオキシコール酸ナトリウムおよびホスファチルコリン（ｐｈｏｓｐｈａｔｙｌｃｈｏｌｉｎｅ）が含まれるが、これらに限定されない。好適な脂肪酸には、オクタン酸、オレイン酸、カプリン酸、ラウリン酸／プロピレングリコール、オレイン酸メチル、リゾホスファチジルコリン（ｌｙｓｏｐｈｏｓｐｈａｔｉｄｌｙｃｈｏｌｉｎｅ）およびホスファチジコリン（ｐｈｏｓｐｈａｔｉｄｙｃｈｏｌｉｎｅ）が含まれるが、これらに限定されない。好適な非界面活性剤には、不飽和環状尿素が含まれるが、これに限定されない。好適な包接錯体には、シクロデキストリンが含まれるが、これに限定されない。好適なチオール化ポリマーには、キトサン−４−チオブチルアミド、キトサン−システイン、ポリ（アクリル酸）−ホモシステイン、ポリカルボフィル−システイン、ポリカルボフィル−システイン／ｇｓｈ、キトサン−４−チオエチルアミド／ｇｓｈおよびキトサン−４−チオグリコール酸が含まれるが、これらに限定されない。他の好適な薬剤には、アプロチニン、アゾン、シクロデキストリン、硫酸デキストラン、メントール、ポリソルベート８０、スルホキシドおよび様々なアルキルグリコシドが含まれるが、これらに限定されない。
【００１９】
好ましくは、第１の膣用送達システムの少なくとも１種の卵胞刺激剤は、妊馬血清性ゴナドトロピン（ＰＭＳＧ）、ヒト閉経期ゴナドトロピン（ｈＭＧ）、メノトロピン、卵胞刺激ホルモン（ＦＳＨ）、フォリトロピン−アルファ、フォリトロピン−ベータ、コリフォリトロピン−アルファ、ウロフォリトロピン、活性化されたベータグリカン、フォリスタチン、および卵胞刺激性を保持する組換えまたはその他の、それらの天然または合成類似体のうちの任意のもの、ならびにそれらの混合物を含む群から選択される。加えて、好適な候補物質は、グルカゴン様ペプチド１（ＧＬＰ−１）およびエクステンジン−４（ｅｘｔｅｎｄｉｎ−４）を含み、その両方が、キスペプチン系を通じてＦＳＨ（およびＬＨ）レベルを増加させる。さらなる別の例には、フォリスタチン阻害剤、ペプチドＹＹ、アクチビンＡ／Ｂ、インヒビン阻害剤、アクチビン受容体遮断剤およびキスペプチンまたは、アクチビン、フォリスタチン、ＧＬＰ−１、アクチビンＡ／Ｂ、インヒビン、およびキスペプチンに関するシグナリングの調節を通じて内因性ＦＳＨプロファイルに影響を及ぼす任意の他の薬剤が含まれる。
【００２０】
好ましくは、第１の膣用送達システムの少なくとも１種の卵胞刺激剤の濃度は、１．０から１０，０００．０ｉｕ、より好ましくは１０から５，０００ｉｕの範囲またはその間の任意の整数である。投与される卵胞刺激剤のレベルは、受容個体の種、系統および年齢によることが認められると考えられる。たとえば、ウシに投与される卵胞刺激剤の量は、１，０００から１０，０００ｉｕの範囲である一方で、ネズミ目動物に投与される量は、５から１００ｉｕの範囲であることが想定される。過排卵を達成するために、卵胞刺激剤の量が、特定の種における天然レベルの２から２０倍の間である必要があることが認められると考えられる。
【００２１】
好ましくは、第２の膣用送達システムの少なくとも１種の黄体形成剤は、ヒト絨毛性ゴナドトロピン（ｈＣＧ）およびその各種形態、完全ｈＣＧ、Ｃ末端ペプチド完全ｈＣＧ、インタクトｈＣＧ、遊離βサブユニットｈＣＧ、βコアフラグメントｈＣＧ、高グリコシル化ｈＣＧ、ニックｈＣＧ、アルファｈＣＧ、下垂体ｈＣＧ、黄体形成ホルモン（ＬＨ）、ルトロピンα、および卵巣からの卵母細胞放出を刺激または促進する組換えまたはその他の、それらの天然または合成類似体のうちの任意のもの、ならびにそれらの混合物を含む群から選択される。
【００２２】
好ましくは、第２の膣用送達システムの少なくとも１種の黄体形成剤の濃度は、１．０から１０，０００．０ｉｕ、より好ましくは１０から５，０００ｉｕの範囲またはその間の任意の整数である。投与される黄体形成剤のレベルは、受容個体の種、系統および年齢によることが認められると考えられる。たとえば、ウシに投与される黄体形成剤の量は、１，０００から１０，０００ｉｕの範囲である一方で、ネズミ目動物に投与される量は、５から１００ｉｕの範囲であることが想定される。過排卵を達成するために、卵胞刺激剤の量が、特定の種における天然レベルの２から２０倍の間である必要があることが認められると考えられる。
【００２３】
好ましくは、第３の膣用送達システムのサイトカインは、エオタキシン、ＲＡＮＴＥＳ、ＧＭ−ＣＳＦおよびＩＬ−１２のうちの任意の１種を単独でまたは組み合わせて含む。
【００２４】
本発明のいくつかの実施形態では、第３の膣用送達システムは、１種または複数のさらなるサイトカインに加えて、エオタキシン、ＧＭ−ＣＳＦおよびＩＬ−１２の組合せを含んでいてもよい。
【００２５】
好ましくは、第３の膣用送達システムは、ＭＣＰ−１、ＭＩＰ、ＩＬ−１７、ＩＬ−９、ＴＮＦ−αおよびＴＧＦβを含む群から選択される、任意の１種、２種、３種、４種、５種、６種、７種または８種の追加のサイトカインをさらに含む。したがって、第３の膣用送達システムの浸食性組成物は、一例示として、ＩＬ−１２、ＭＣＰ−１、ＭＩＰおよびＩＬ−１７に加えて、エオタキシンおよびＲＡＮＴＥＳであってもよい。エオタキシン、ＧＭ−ＣＳＦおよびＩＬ−１２の基本的な二重の組合せを使用して、子宮が、移植胚、精子または他の同種異系移植組織に対して、より高い受容性またはより低い敵対性を有するよう誘導することにおいて使用するために特定されたサイトカインの数多くの特定の組合せを提供することは、本発明の範囲内である。
【００２６】
好ましくは、ＩＬ−１２は、ＩＬ−１２ｐ４０またはＩＬ−１２ｐ７０のいずれかである。
【００２７】
好ましくは、ＭＩＰは、ＭＩＰ−１αまたはＭＩＰ−１βのいずれかである。
【００２８】
好ましくは、第３の膣用送達システムは、ＩＬ−１α、ＩＬ−１β、ＩＬ−１ｒａ、ＩＬ−２ｒａ、ＩＬ−２、ＩＬ−３、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＩＬ−８、ＩＬ１０、ＩＬ−１３、ＩＬ−１５、ＩＬ−１６、ＩＬ−１８、ＦＧＦ、Ｇ−ＣＳＦ、ＩＦＮ−α２、ＩＦＮ−γ、ＩＰ−１０、ＰＤＧＦ、ＶＥＧＦ、レプチン、ＣＴＡＣＫ、ＫＣ、ＧＲＯα、ＨＧＦ、ＬＩＦ、ＭＣＰ−３、Ｍ−ＣＳＦ、ＭＩＦ、ＭＩＧ、β−ＮＧＦ、ＳＣＦ、ＳＣＧＦ−β、ＳＤＦ−１α、ＴＮＦ−β、ＴＲＡＩＬおよびＶＥＧＦを含む群から選択される追加のサイトカインのうちの任意の１種または複数をさらに含む。
【００２９】
したがって、本発明の第３の膣用送達システムは、数多くの異なる組合せ、たとえば、限定するものではないが、エオタキシンに加えて、前述のリストから選択される１から５０またはその間の任意の数の特定されたサイトカインを含んでいてもよいことが認められると考えられる。
【００３０】
本発明の第３の膣用送達システムは、以下のサイトカインから選択される。すなわち、
（ｉ）単独のまたは組み合わせたエオタキシン、ＲＡＮＴＥＳ、ＧＭ−ＣＳＦおよびＩＬ−１２のうちの任意の１種、ならびに任意選択で、
（ｉｉ）ＭＣＰ−１、ＭＩＰ、ＩＬ−１７、ＩＬ−９、ＴＮＦ−αおよびＴＧＦβ
を含む群から選択される１種または複数の追加のサイトカイン、ならびに任意選択で
（ｉｉｉ）ＩＬ−１α、ＩＬ−１β、ＩＬ−１ｒａ、ＩＬ−２ｒａ、ＩＬ−２、ＩＬ−３、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＩＬ−８、ＩＬ１０、ＩＬ−１３、ＩＬ−１５、ＩＬ−１６、ＩＬ−１８、ＦＧＦ、Ｇ−ＣＳＦ、ＩＦＮ−α２、ＩＦＮ−γ、ＩＰ−１０、ＰＤＧＦ、ＶＥＧＦ、ＣＴＡＣＫ、ＫＣ、ＧＲＯα、ＨＧＦ、レプチン、ＬＩＦ、ＭＣＰ−３、Ｍ−ＣＳＦ、ＭＩＦ、ＭＩＧ、β−ＮＧＦ、ＳＣＦ、ＳＣＧＦ−β、ＳＤＦ−１α、ＴＮＦ−β、ＴＲＡＩＬおよびＶＥＧＦ
を含む群から選択される１種または複数のさらなる追加のサイトカイン。
【００３１】
第３の膣用送達システムは、最少で１種から５０種までまたはその間の任意の数の異なるサイトカインを含みうることが認められると考えられる。
【００３２】
好ましくは、膣用送達システムは、粘膜付着性ポリマーをさらに含む。粘膜付着性ポリマーは、天然であっても合成であってもよい。粘膜付着性ポリマーが天然ポリマーの場合、それは、アガロース、キトサン、ゼラチン、ヒアルロン酸、カラギーナン、ペクチン、アルギン酸ナトリウム、可溶性デンプン、カラヤガムおよびセルロース誘導体を含む群から選択されるが、これらに限定されない。粘膜付着性ポリマーが合成である場合、それは、カーボポール、ポリカルボフィル、ポリアクリル酸、ポリアクリレート、アクリル酸のコポリマー、ポリエテレングリコール、メチルビニルエーテルおよびメタクリル酸のコポリマー、ポリ−２−ヒドロキシエチルアクリレート、アクリル酸およびエチルヘキシルアクリレートのコポリマー、ポリメタクリレート、ポリアルキルシアノアクリレート、ポリイソブチルシアノアクリレート、ポリイソヘキシルシアノアクリレート、チオール化ポリマー、ポリビニル誘導体ならびにポリヒドロキシエチレンを含む群から選択されるが、これらに限定されない。
【００３３】
本発明の第２の態様によれば、少なくとも１種の卵胞刺激剤の膣内送達のための浸食性組成物が提供される。
【００３４】
好ましくは、組成物の少なくとも１種の卵胞刺激剤は、妊馬血清性ゴナドトロピン（ＰＭＳＧ）、ヒト閉経期ゴナドトロピン（ＨＭＧ）、メノトロピン、卵胞刺激ホルモン（ＦＳＨ）、フォリトロピン−アルファ、フォリトロピン−ベータ、コリフォリトロピン−アルファ、ウロフォリトロピン、活性化されたベータグリカン、フォリスタチン、および卵胞刺激性を保持する組換えまたはその他の、それらの天然または合成類似体のうちの任意のもの、ならびにそれらの混合物を含む群から選択される。加えて、好適な候補物質は、グルカゴン様ペプチド１（ＧＬＰ−１）およびエクステンジン−４を含み、その両方が、キスペプチン系を通じてＦＳＨ（およびＬＨ）レベルを増加させる。さらなる別の例には、フォリスタチン阻害剤、ペプチドＹＹ、アクチビンＡ／Ｂ、インヒビン阻害剤、アクチビン受容体遮断剤およびキスペプチンまたは、アクチビン、フォリスタチン、ＧＬＰ−１、アクチビンＡ／Ｂ、インヒビン、およびキスペプチンに関するシグナリングの調節を通じて内因性ＦＳＨプロファイルに影響を及ぼす任意の他の薬剤が含まれる。
【００３５】
好ましくは、膣用組成物は、少なくとも１種の卵胞刺激剤を、有効成分の経粘膜送達のため、膣粘膜に送達する。
【００３６】
好ましくは、本発明の第２の態様の組成物は、腟坐剤、ペッサリー剤、錠剤、散剤、生体付着性錠剤、カプセル剤、マイクロ粒子、生体付着性マイクロ粒子、マイクロカプセル剤、マイクロスフェア、リポソーム、クリーム剤、ローション剤、フォーム剤、噴霧剤、フィルム、軟膏剤、液剤、ゲル剤、または徐放性ゲル剤、錠剤もしくはカプセル剤、または膣に投与されるかもしくは膣用デバイス内に組み込まれる徐放性坐剤として調製される。
【００３７】
好ましくは、第１の膣用送達システムの少なくとも１種の卵胞刺激剤の濃度は、１．０から１０，０００．０ｉｕ、より好ましくは１０から１０，０００ｉｕの範囲またはその間の任意の整数である。
【００３８】
飼育動物／家畜にとって好ましくは、上限は、およそ３，０００ｉｕの経腟送達を保証するために、好ましくはおよそ１０，０００ｉｕである。
【００３９】
本発明の第３の態様によれば、少なくとも１種の黄体形成剤の膣内送達のための浸食性組成物が提供される。
【００４０】
好ましくは、第２の膣用送達システムの少なくとも１種の黄体形成剤は、ヒト絨毛性ゴナドトロピン（ｈＣＧ）およびその各種形態、完全ｈＣＧ、Ｃ末端ペプチド完全ｈＣＧ、インタクトｈＣＧ、遊離βサブユニットｈＣＧ、βコアフラグメントｈＣＧ、高グリコシル化ｈＣＧ、ニックｈＣＧ、アルファｈＣＧ、下垂体ｈＣＧ、黄体形成ホルモン（ＬＨ）、および卵巣からの卵母細胞放出を刺激または促進する組換えまたはその他の、それらの天然または合成類似体のうちの任意のもの、ならびにそれらの混合物を含む群から選択される。
【００４１】
好ましくは、第２の膣用送達システムの少なくとも１種の黄体形成剤の濃度は、１．０から１０，０００．０ｉｕ、より好ましくは１０から５，０００ｉｕの範囲またはその間の任意の整数である。
【００４２】
飼育動物／家畜にとって好ましくは、上限は、およそ３，０００ｉｕの経腟送達を保証するために、好ましくはおよそ１０，０００ｉｕである。
【００４３】
本発明の第４の態様によれば、非ヒト哺乳動物における発情の誘発または複数の動物における発情の同期化における使用のための、少なくとも１種の卵胞刺激剤を含む、膣内送達のための浸食性組成物が提供される。
【００４４】
本発明の第５の態様によれば、非ヒト哺乳動物における排卵または過排卵の誘発における使用のための、少なくとも１種の黄体形成剤を含む、膣内送達のための浸食性組成物が提供される。
【００４５】
本発明の第６の態様によれば、（ｉ）発情の誘発または同期化における使用のための第１の膣内送達システム、（ｉｉ）排卵または過排卵を誘発するための第２の膣内送達システム、および（ｉｉｉ）子宮内の免疫寛容環境を誘発するための第３の膣内送達システムを含むキットであって、任意選択で、膣内送達システムを挿入するための挿入デバイスをさらに含むキットが提供される。
【００４６】
キットは、説明書のセットをさらに含んでいてもよい。
【００４７】
本発明の別の一態様では、キットは、メス動物が人工授精されるかもしくはオスと自然交配するかのいずれかである場合、第１および第２の膣内送達システム、または代わりに、メスが移植胚の受容個体である場合、第１および第３の膣用送達システム、または、メスがすでに発情している場合、第２および第３の膣内送達システムを含んでいてもよい。したがって、制御される必要のある繁殖プロセスの態様に応じて、本発明のキットは、ユーザーの要求により適合されることが認められると考えられる。
【００４８】
本発明の一態様に帰される任意の特徴は、必要な変更を加えて、本発明のありとあらゆる他の態様に適用されることが認められると考えられる。
【００４９】
本発明の実施形態を、添付の図面を参照して本明細書において以下にさらに記述する。
【図面の簡単な説明】
【００５０】
【図１】ｉ．ｐ．（腹腔内）またはｐ．ｖ．（経膣）送達のいずれかによる、平均胞状卵胞数に対する例示的卵胞刺激剤の処置効果を示すグラフである。
【図２】ｉ．ｐ．（腹腔内）またはｐ．ｖ．（経膣）送達のいずれかによる、平均全二次および胞状卵胞総数に対する例示的卵胞刺激剤の処置効果を示すグラフである。
【図３】膣送達される自己ナノ乳化薬物送達（ＳＮＥＤＤ）およびＰＭＳＧのｉ．ｐ．（腹腔内）送達の組合せを使用した胚収量を示すグラフである。
【図４Ａ】膣送達される自己ナノ乳化薬物送達（ＳＮＥＤＤ）およびＰＭＳＧのｉ．ｐ．（腹腔内）送達の組合せを使用した胚収量を、陰性メスおよび変性胚を差し引いて示すグラフである。
【図４Ｂ】膣送達される自己ナノ乳化薬物送達（ＳＮＥＤＤ）およびＰＭＳＧのｉ．ｐ．（腹腔内）送達の組合せを使用した胚収量の、変性胚を差し引いた全データを示すグラフである。
【発明を実施するための形態】
【００５１】
本発明の実施形態を、添付の表を参照して本明細書において以下にさらに記述する。表１（下）は、膣内システムの送達のタイムチャートを、マウスまたはラットにおける交配または胚移植に対して示す。胚移植を、それが望ましい場合には第４日から第５日までに、または遺伝子組換え／キメラ／凍結保存胚の場合には、発生的に対応する時期に実施することも可能である。
【００５２】
【表１】
2018531940.tif 000003
【００５３】
【表２】
2018531940.tif 000004
2018531940.tif 000005
【００５４】
本明細書における、繁殖を「制御すること」への言及は、外的または人工的手段により、非ヒト哺乳動物のメスにおける繁殖プロセスの周期を管理、操作または別の方法で方向づけることを含むことが意図されている。
【００５５】
本明細書における「繁殖プロセス」への言及は、自然交配または人工授精のいずれかによる、胚着床または受精卵母細胞の着床までのメス繁殖周期の段階を含むことが意図されている。
【００５６】
本明細書における「浸食性」組成物への言及は、組成物を膣粘膜に放出するための、組成物の遅延放出、天然環境条件による磨耗、緩徐な崩壊または減衰を含むことが意図されている。
【００５７】
本明細書における「透過促進剤」への言及は、膣粘膜／子宮頚管粘膜または子宮内膜を通じた透過を促進する任意の物質を含むことが意図されている。
【００５８】
本明細書における「ムコ多糖付着剤」への言及は、膣の粘膜組織に付着し、有効成分の生物学的利用能を改善または増強するよう、かかる生物組織に長期間付着する能力を有し、そのことにより粘膜組織を通じた有効成分の透過を増強する、合成または天然の任意の薬剤を含むことが意図されている。
【００５９】
本明細書における「卵胞刺激性を有する薬剤」への言及は、卵巣において未成熟卵胞の成長および／またはリクルートを直接または間接のいずれかで刺激する、任意の天然または合成ホルモン、生物学的物質、化学物質または化合物を含むことが意図されている。
【００６０】
本明細書における「黄体形成剤」への言及は、卵巣からの成熟卵母細胞の放出および／または機能的黄体の確立を誘発する原因となるか、それに関与するか、またはそれを促進する、任意の天然または合成ホルモン、生物学的物質、化学物質または化合物を含むことが意図されている。
【００６１】
本明細書における「発情の誘発」への言及はまた、多卵胞リクルートを包含する。
【００６２】
本明細書における「排卵の誘発」への言及は、黄体化の誘発と同義である。
【００６３】
ポリマー薬物送達プラットフォームを伴う粘膜付着のプロセスは、様々な他のプロセスのなかでもウェッティング、吸着およびポリマー鎖の相互貫入を含む複雑なものである。粘膜付着結合の成功および程度は、様々なポリマーに基づく性質、たとえば架橋度、鎖長および様々な官能基の存在に影響を受ける。粘膜を標的として制御された、医薬品有効成分（ＡＰＩ）の薬物送達の魅力から、製剤科学者たちは、かかるタスクのための数多くのポリマーシステムを開発するようになった。製剤科学者たちは、候補付着薬物送達プラットフォームを選択するために、一定範囲のインビトロおよびインビボの粘膜付着試験セットアップを自由に選べる。かかるものとして、粘膜付着システムには、局所または全身作用のためのＡＰＩ送達のため、多くの粘膜被覆器官にわたって広範な用途が見出されてきた。かかる粘膜付着性製剤の発展は、第１世代の荷電親水性ポリマーネットワークから、より特異的な、レクチン、チオールおよび様々な他の付着性官能基に基づく第２世代のシステムへと移行した。
【００６４】
本発明の方法および組成物は、ランダムな周期の動物またはリー・ブート効果もしくは季節／光周期関連無排卵を示すものにおいて発情周期を同期化し、ランダムな周期の動物またはリー・ブート効果もしくは季節／光周期関連無排卵を示すものにおいて過排卵を誘発する薬剤の投与のための、異なるアプローチを使用することを伴う。妊馬血清性ゴナドトロピン（ＰＭＳＧ）、ヒト閉経期ゴナドトロピン（ｈＭＧ）および卵胞刺激ホルモン（ＦＳＨ、組換えまたは他のもの）を含むが、これらに限定されない、卵胞刺激性を有する１種または複数の薬剤を送達するために、膣用ペッサリー剤に基づくアプローチが使用される。実験動物の場合には４６〜５２時間後だが、飼育動物種または農場動物（ｆａｒｍ  ａｎｉｍａｌ）／家畜についてはより長く、黄体形成剤（ｈＣＧ、黄体形成ホルモン（ＬＨ）またはその他）の投与を、排卵を誘発するために使用できる。これらの薬剤は、骨盤および腹部において腹膜により吸収される（先行技術の方法）のと同様に、膣粘膜により吸収され、卵巣を標的として同じ目的を達成するが、多卵胞発達（卵胞刺激剤の場合）および排卵／黄体化（黄体形成剤の場合）を誘発するのに十分な血漿中レベルを達成するために、投与される用量が変更される。投与される投与量が、発情同期化または過排卵が達成されるかどうかを最終的に決定する。このアプローチの利点は、未熟な操作者でも使用できる、標準化され、倫理的に妥当で、最小限の侵襲性の送達システムである。動物に対するストレスの低減は、これらの動物が処置後に自然な行動、たとえば交尾を行う可能性がより高いことを意味し、腹腔内注射、すなわち腸または膀胱穿孔に付随するリスクを回避する。次に、このようにして過排卵した動物からの卵母細胞を、体外受精または卵細胞質内精子注入法を含む、様々な用途のために使用できる。動物を交配させる場合、得られた胚は、遺伝子導入、インビトロ胚培養実験、毒性研究、幹細胞注入または系統再誘導（ｌｉｎｅ  ｒｅｄｅｒｉｖａｔｉｏｎ）を含む、広範な用途に使用できる。動物が代わりに発情同期化のために使用される場合、それらは、繁殖用オスとの同期交配を含む様々な用途に、または胚移植（たとえば遺伝子導入、キメラまたは系統再導出胚のため）のための受容個体として好適であると考えられる。
【実施例１】
【００６５】
マウスに、標準的な腹腔内注射により５ＩＵの妊馬血清性ゴナドトロピン（ＰＭＳＧ）を投与して、発情期中または発情間期中に排卵を誘発し、対照マウスには１％のＢｒｉｊ５８を注射した。試験マウスに、１５ＩＵのＰＭＳＧ、１０％のクエン酸を添加した膣内ペッサリー剤を与え、対照には、１０％のクエン酸のみを添加したペッサリー剤を与えた。結果は、ｉ．ｐ経路による標準的な誘発が与えられたマウスでは排卵が達成されたが、ＰＭＳＧを添加したペッサリー剤を用いて処置したマウスでは、所望された卵胞の放出が達成されなかったことを示す。これは、ペッサリー剤に有効成分のみを添加しても、透過促進剤または粘膜付着剤のいずれもない場合には、排卵を誘発するには不十分であることを示した。
【実施例２】
【００６６】
３５μｌの自己ナノ乳化薬物送達（ＳＮＥＤＤ）ベース製剤を３匹のマウスに投与し、２４時間観察した。有害事象は観察されず、製剤は十分な耐容性を示した。次に、ｉ．ｐ．（腹腔内）またはｐ．ｖ．（経膣）ＰＭＳＧ送達のいずれかに分けられたマウスを用いて、完全なインビボ評価を実施した。０、２、４、６、２４および４７時間でマウスを選別し、卵巣／血清を解析のために採取した。結果は、２４および４８時間での初期表面卵胞数が、ｉ．ｐ．とｐ．ｖ．ＰＭＳＧ送達との間で概ね等しいこと、ならびに、０、２、４、６、２４および４７時間でＥＬＩＳＡにより測定したｐ．ｖ．送達を用いた血清ＰＭＳＧプロファイルが、ｉ．ｐ．送達と広く酷似し、ピーク血清ＰＭＳＧレベルが最初の６時間で生じることを示した（データは示さず）。
【実施例３】
【００６７】
単独でまたはＰＭＳＧと組み合わせての、卵胞リクルートを高める卵胞刺激剤の一例としてのエキセンジン−４の使用を探究するため、ならびに、経膣（ｐ．ｖ．）送達され、それゆえ注射する必要性を回避するときに、エキセンジン−４が所望の効果を有しうるかどうかを決定するため、実験を実施した。
【００６８】
ＣＤ１マウスが、３５μｌの膣フラッシュ中の１．５または５ｎｍｏｌ／ｋｇ体重のいずれかのエキセンジン−４を受けた。エキセンジン−４（ＲＣ７６２−１２、Ｇｅｎｅｒｏｎ）を、製造者の指示に従い再構成し、０．５％のＢＳＡ（Ａ８８０６、Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ）を有する滅菌ＰＢＳ中でさらに希釈した。処置群は以下のとおりだった。
１．  ５ＩＵのＰＭＳＧ  ｉ．ｐ．（対照）
２．  ５ｎｍｏｌ／ｋｇのエキセンジン−４フラッシュ
３．  ５ＩＵのＰＭＳＧ  ｉ．ｐ．＋１．５ｎｍｏｌ／ｋｇのエキセンジン−４フラッシュ
４．  ５ＩＵのＰＭＳＧ  ｉ．ｐ．＋５ｎｍｏｌ／ｋｇのエキセンジン−４フラッシュ
【００６９】
処置を与え、典型的な過排卵プロトコルにおいてｈＣＧが与えられるタイミングと一致させるよう、処置の４７時間後に頚椎脱臼により動物を屠殺した。卵巣を切除し、ワックス包埋の前に１０％のホルマリン中に４８時間固定した。卵巣対を一緒にブロッキングした。卵巣を、最初の全断面から５μｍで切断し、次に卵巣の厚さ全体にわたって、各切片間１００μｍで切片を採取した。Ｈ＆Ｅを使用して切片を染色し、×２０対物レンズを備える光学顕微鏡上で全段階の卵胞を計数した。群間の卵胞数を、ＳＰＳＳ（バージョン２１）を使用して、フォローアップの一対比較（マン−ホイットニー）を伴うクラスカル−ウォリス検定により解析した。
【００７０】
本研究における陽性対照として、ＰＭＳＧ  ｉ．ｐ．注射を使用し、統計的に有意ではないにしろ、エキセンジン−４を用いて処置した動物は、対照群と比較して、一次、二次および後期胞状卵胞が増加した（データは示さず）。
【００７１】
卵胞の成熟におけるエキセンジン−４の有効性を決定するため、二次および胞状卵胞の総和に関してデータを解析した。図２および図３は、エキセンジン−４をＰＭＳＧと組み合わせて膣に送達したときの、二次および胞状卵胞の数の有意でない増加を示す。試料サイズを増加させることは、この差が有意性に到達することを可能にすると予測される。
【００７２】
ＣＤ１マウスにおける膣に投与されるエキセンジン−４の使用は、二次卵胞に加えて胞状卵胞の数の増加をもたらし、これは、完全な過排卵プロトコルが、さらに多数の胚をもたらしうることを示唆した。
【００７３】
過排卵についての卵母細胞収量の増加の明白な価値に加えて、膣送達によるマウスに注射する必要性の回避は、有利にもスタッフの訓練が比較的少なくて済み、３Ｒにも忠実である。結論としては、膣用エキセンジン−４は、ＰＭＳＧ注射の代替案として、マウスにおける卵胞リクルートを増加させるために使用できる。
【実施例４】
【００７４】
二重交差研究により、マウスの過排卵におけるＰＭＳＧおよびｈＣＧ  ＳＮＥＤＤＳの有効性を評価するため、ならびに、無処置の繁殖用オスとの交配後に各群からの胚収量を定量するため、実験を実施した。投与方法は、ｉ．ｐ．注射（５ＩＵ）とともにＳＮＥＤＤ（２５ＩＵ）の効力だった。図３は、ＰＭＳＧ  ＳＮＥＤＤ、続いてｉ．ｐ．ｈＣＧを使用することが最多の胚をもたらし、これが、ｉ．ｐ．ＰＭＳＧ／ｐ．ｖ．ｈＣＧ群よりも有意に多いことを示す。ｉ．ｐ．／ｉ．ｐ．（６．４）群と比較して、ＳＮＥＤＤ／ＳＮＥＤＤ（８．８）群から、有意ではないにしろ、多数の胚を回収した。図４Ａは、胚を一切有しなかったメスをデータセットから除いたデータを示し、全体の有意差はもたらされなかった。しかしながら、変性胚に分類される胚を除去すると、全体差を示した（図４Ｂ）が、いずれの群間にも有意差はなかった。
【００７５】
結論として、ｉ．ｐ．注射による過排卵、またはｐ．ｖ．ＳＮＥＤＤ処置による過排卵の間での交差研究において、統計的有意差はなかった。交差は、ＰＭＳＧ  ＳＮＥＤＤとそれに続くｈＣＧ  ｉ．ｐ．が、最も成功した処置であることを明らかにした。本研究は、繁殖の成功に関与する生物学的薬剤の膣送達を、従来の注射法の代替案または追加案として使用できることを確証する。
【００７６】
本明細書の記載および特許請求の範囲全体を通じて、「を含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅ）」および「を含有する（ｃｏｎｔａｉｎ）」という語ならびにそれらの変化形は、「を含むが、これらに限定されない」を意味し、それらの語は、他の部分、添加剤、成分、整数またはステップを除外することを意図しない（し、除外しない）。本明細書の記載および特許請求の範囲を通じて、文脈が別の解釈を要するのでない限り、単数は複数を包含する。特に、不定冠詞が使用される場合、本明細書は、文脈が別の解釈を要するのでない限り、単数とともに複数も考慮すると理解されるべきである。
【００７７】
本発明の特定の態様、実施形態または例との関連で記載された特徴、整数、特性、化合物、化学的部分または化学基は、本明細書に記載の任意の他の態様、実施形態または例に、それらと不適合でない限り、適用可能であることが理解されるべきである。本明細書（添付の特許請求の範囲、要約および図面のいずれも含む）に開示の特徴のすべて、および／または、それに開示の任意の方法もしくはプロセスのステップのすべてが、かかる特徴および／またはステップのうちの少なくともいくつかが相互に排他的である組合せを除き、任意の組合せで組み合わされてもよい。本発明は、前述の実施形態のいずれの詳細にも限定されない。本発明は、本明細書（添付の特許請求の範囲、要約および図面のいずれも含む）に開示の特徴のうちの任意の新規のものもしくは任意の新規の組合せ、または、それに開示の任意の方法もしくはプロセスのステップのうちの任意の新規のものもしくは任意の新規の組合せにまで拡張する。
【００７８】
本出願との関連で本明細書と同時にまたはそれに先立って出願され、本明細書とともに公衆の縦覧が可能なすべての論文および文献について注目される。さらにそれら論文および文献の内容は引用文献により本明細書に組み込まれている。
【図１】
2018531940.tif 000006
【図２】
2018531940.tif 000007
【図３】
2018531940.tif 000008
【図４Ａ】
2018531940.tif 000009
【図４Ｂ】
2018531940.tif 000010
【国際調査報告】
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