(57)【要約】  ＤＮａｓｅ含有の液体洗浄組成物を用いた処理による水濾過膜の洗浄方法。任意選択で、組成物は、バイオサイドおよび／またはプロテアーゼなどの他の酵素を含む。ＤＮＡｓｅは、アスペルギルス・オリゼー（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｏｒｙｚａｅ）またはバチルス・リケニフォルミス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｌｉｃｈｅｎｉｆｏｒｍｉｓ）から得られるものであってよい。【特許請求の範囲】
【請求項１】
ＤＮａｓｅを含む液体洗浄組成物と膜を接触させることによる水濾過膜の洗浄方法。
【請求項２】
前記洗浄方法が、定置洗浄（ＣＩＰ）または分解洗浄（ＣＯＰ）である、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記膜を通過する水流量（フラックス）が改善される、請求項１または２に記載の方法。
【請求項４】
前記膜をバイオサイド組成物と接触させるステップの前または後に行われる、請求項１〜３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項５】
前記水濾過膜が、バイオフィルムを含む、請求項１〜４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項６】
前記バイオフィルムが、以下：アシネトバクター属（Ａｃｉｎｅｔｏｂａｃｔｅｒ）、バチルス属（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）、コマモナス属（Ｃｏｍａｍｏｎａｓ）、エシェリキア属（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ）、シュードモナス属（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）、およびスフィンゴモナス属（Ｓｐｈｉｎｇｏｍｏｎａｓ）種からなる群から選択される１つまたは複数の細菌を含む、請求項５に記載の方法。
【請求項７】
前記バイオフィルムが、以下：アシネトバクター・カルコアセチカス（Ａｃｉｎｅｔｏｂａｃｔｅｒ  ｃａｌｃｏａｃｅｔｉｃｕｓ）、バチルス・アミロリケファシエンス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ａｍｙｌｏｌｉｑｕｅｆａｃｉｅｎｓ）ＳＣ１００、バチルス・アミロリケファシエンス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ａｍｙｌｏｌｉｑｕｅｆａｃｉｅｎｓ）ＳＣ１６８、コマモナス・デニトリフィカンス（Ｃｏｍａｍｏｎａｓ  ｄｅｎｉｔｒｉｆｉｃａｎｓ）、大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ）Ｋ−１２、緑膿菌（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）、およびスフィンゴモナス・ミューコシシマ（Ｓｐｈｉｎｇｏｍｏｎａｓ  ｍｕｃｏｓｉｓｓｉｍａ）からなる群から選択される１つまたは複数の細菌種を含む、請求項５に記載の方法。
【請求項８】
前記洗浄組成物のｐＨが、ｐＨ６〜９であり；好ましくは、前記ｐＨは、ほぼ中性である、請求項１〜７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項９】
３０〜１００℃の温度、好ましくは５０〜８０℃の温度で前記膜を前記洗浄組成物と接触させる、請求項１〜８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１０】
前記膜を、以下：アミラーゼ、アラビナーゼ、カルボヒドラーゼ、セルラーゼ、クチナーゼ、ガラクタナーゼ、リパーゼ、マンナナーゼ、オキシドレダクターゼ；ペクチナーゼ、ペクチン酸リアーゼ、ペルヒドロラーゼ、プロテアーゼ、およびキシラナーゼからなる群から選択される１つまたは複数の非ＤＮａｓｅ酵素と同時または個別に接触させ、好ましくは、前記非ＤＮａｓｅ酵素は、プロテアーゼである、請求項１〜９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１１】
前記ＤＮａｓｅが、アスペルギルス・オリゼー（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｏｒｙｚａｅ）ＤＮａｓｅまたはその誘導体である、請求項１〜１０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１２】
前記ＤＮａｓｅが、配列番号１に示されるアミノ酸配列に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むか、またはそれからなる、ＤＮａｓｅ活性を有するポリペプチドである、請求項１〜１１のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１３】
前記ＤＮａｓｅが、配列番号１に示されるアミノ酸配列を含むか、またはそれからなる、ＤＮａｓｅ活性を有するポリペプチドである、請求項１〜１２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１４】
前記ＤＮａｓｅが、バチルス・リケニフォルミス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｌｉｃｈｅｎｉｆｏｒｍｉｓ）ＤＮａｓｅまたはその誘導体である、請求項１〜１０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１５】
前記ＤＮａｓｅが、配列番号２に示されるアミノ酸配列に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むか、またはそれからなる、ＤＮａｓｅ活性を有するポリペプチドである、請求項１〜１０のいずれか１項に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ＤＮａｓｅ含有の洗浄組成物を用いた水濾過膜の洗浄に関する。
【背景技術】
【０００２】
膜汚損は、膜濾過プロセスで直面する問題であり、技術および経済の観点から、水および廃水処理ならびに脱塩でのその実用化を決定する上で重要な要因である。膜汚損としては、無機汚損／スケーリング、微粒子／コロイド汚損、ならびに死滅有機物質または生存微生物による有機汚損（一般にバイオフィルムを形成する）が挙げられる。有機および無機成分ならびに微生物による汚損は、同時に起こる恐れがあり、これらの成分は、機構に関して相互作用し得る。
【０００３】
濾過膜を洗浄するための公知の手段は、定置洗浄（ＣＩＰ）である。典型的なＣＩＰサイクルは、往々にして、高ｐＨ（例えば、ＮａＯＨ）、低ｐＨ（例えば、クエン酸または硝酸）用の化学薬品、水、ならびに消毒のためのバイオサイド、例えば漂白剤の使用を含む。酪農業で使用される膜を洗浄するための典型的なＣＩＰサイクルは、多くのステップからなり、これは、多くの場合、以下を含む：
−６０〜８０℃まで加熱され、所定時間にわたって再循環され得る、清水フラックスによるフラッシュ／予備洗浄、
−約６０〜８０℃の温度で、所定時間にわたる苛性ソーダ溶液（ＮａＯＨ）の循環、
−清水フラックスによる中間洗浄、
−所定時間にわたる酸性溶液の循環、
−清水フラックスによる最終洗浄、
−最終空気ブロー。
【０００４】
他の産業部門でも膜洗浄のための類似のプロセスが存在し、個々のステップは、膜汚損の性質に応じて異なる順序で適用することができる。酵素製造産業で使用される膜洗浄のための典型的なＣＩＰサイクルは、水洗浄、低温および高温苛性洗浄、ならびに硝酸洗浄を含む。
【０００５】
ＣＩＰに強刺激性化学薬品を使用するのは望ましくなく、環境に問題を引き起こす。過去数年の間に、酵素の使用を含むＣＩＰ法が開発されている。
【０００６】
国際特許出願：国際公開第９７／０２７５３号パンフレットは、定置洗浄用のプロテアーゼおよびリパーゼを含む溶液に関する。この溶液は、ミルクまたは焦がしミルクの残渣を含む洗浄プロセス装置において有効であることが判明した。
【０００７】
典型的なＣＩＰ法と比較して、ＤＮａｓｅ酵素の使用による改善された膜洗浄にはいくつかの利点があり、例えば、汚れの少ない膜を介して液体をポンピングする動力の節約、苛酷且つ有害な化学薬品の使用の低減、酸および塩基ならびに使用後の排出を中和する費用の削減、より穏やかな洗浄条件および化学もしくは物理的手段による除去ではない汚損の除去による膜寿命の延長が挙げられる。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００８】
本発明は、ＤＮａｓｅを含む液体洗浄組成物と膜を接触させることによる水濾過膜の洗浄方法を提供する。
【０００９】
洗浄方法は、定置洗浄（ＣＩＰ）または分解洗浄（ＣＯＰ）によるものでよい。
【００１０】
一実施形態では、膜を通過する水流量（フラックス）が改善される。
【００１１】
別の実施形態では、本方法は、膜をバイオサイド組成物と接触させるステップの前または後に行う。
【００１２】
また別の実施形態では、水濾過膜は、バイオフィルムを含み、これは、好ましくは、以下：アシネトバクター属（Ａｃｉｎｅｔｏｂａｃｔｅｒ）、バチルス属（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）、コマモナス属（Ｃｏｍａｍｏｎａｓ）、エシェリキア属（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ）、シュードモナス属（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）、およびスフィンゴモナス属（Ｓｐｈｉｎｇｏｍｏｎａｓ）種からなる群から選択される１または複数の細菌を含む。
【００１３】
本発明の他の態様および実施形態は、説明および実施例から明らかにされるであろう。
【発明を実施するための形態】
【００１４】
本発明に関して、「水濾過」および「水処理」という用語は、水溶液および水性懸濁液、ならびに実質的な純水の濾過および処理を含む。
【００１５】
細胞外ＤＮＡは、膜への生物および非生物有機物質の付着を開始する上で重要な役割を果たすことが明らかにされている。細胞外ＤＮＡ（ｅＤＮＡ）は、動物、植物または微生物起源の死滅細胞から環境へと放出されている。ＤＮＡは、粘着性であり、表面およびその他の分子に結合して、単純に微小分子を凝集させてより大きな分子にするか、またはバイオフィルム形成を開始するかのいずれかによって膜汚損を誘導する。表面への微生物の付着に加えて、ｅＤＮＡは、バイオフィルム中の構造成分としても機能する。バイオフィルム中のｅＤＮＡの役割は、微生物の種によって変わり、タンパク質および多糖などの他の細胞外ポリマーも重要な役割を果たすが、表面への微生物付着および早期バイオフィルム形成においてｅＤＮＡが主要な役割を果たすことは明らかである。
【００１６】
水または非水性液体の濾過／精製に使用される膜としては、限外濾過（ＵＦ）、精密濾過（ＭＦ）、ナノ濾過（ＮＦ）および逆浸透（ＲＯ）膜が挙げられる。膜が汚損されると、膜を介した特定の液体の流れを維持するために、オペレータは、膜を通過する圧力（膜間差圧）を増加しなければならないが、これによって、電力の消費が増加する。特定の圧力を超えると、膜の完全性が不可逆的に損傷される。
【００１７】
水濾過膜を洗浄するためのＤＮａｓｅ酵素の使用は、膜への有機材料および微生物の付着を低減することができ、これによって、膜を通過する水／液体の流れが改善される。さらに、膜洗浄のためのＤＮａｓｅの使用は、酸、塩基、漂白剤ならびに他の消毒剤およびバイオサイドなどの従来の化学洗浄剤と組み合わせることもできる。ＤＮａｓｅ洗浄ステップは、他の洗浄薬品もしくは製剤による洗浄工程の前または後のいずれに適用することもできる。
【００１８】
一般に使用されるバイオサイドおよび洗浄薬品としては、以下：２，２−ジブロモ−３−ニトリロプロピオンアミド（ＤＢＮＰＡ）、ロダロン、次亜塩素酸ナトリウム、Ｈ２Ｏ２、ＨＮＯ３、クエン酸、シュウ酸、ＮａＯＨ、ＥＤＴＡ、界面活性剤、凝固剤、抗スケール剤および崩壊剤が挙げられる。
【００１９】
膜洗浄方法は、「定置洗浄」（ＣＩＰ）または「分解洗浄」（ＣＯＰ）のいずれであってもよい。ＣＩＰ洗浄法の場合、膜は、処理施設内に設置されたままで、膜を洗浄製剤中に沈めるか、もしくは浸ける浸漬法、または膜を介して洗浄製剤を連続的に循環させるフロースルー法のいずれかで、洗浄製剤に付される。
【００２０】
ＣＯＰ法では、膜は施設から取り外されて、別の浸漬またはフロースルー工程で洗浄される。
【００２１】
汚損の性質に応じて、ＣＩＰまたはＣＯＰ洗浄法は、数分から数時間、例えば、一晩延長することができる。
【００２２】
典型的な膜洗浄方法は、水での洗浄を挟んで、数回の個別ステップを有し得る。化学薬品およびＤＮａｓｅ洗浄ステップの順序は、膜汚損の性質に基づいて変動し得る。
【００２３】
ＤＮａｓｅ酵素の活性プロフィールに応じて、ＤＮａｓｅ洗浄方法は、低、中性もしくは高ｐＨ、および低温または高温のいずれで実施してもよい。好ましくは、この方法は、ｐＨ６〜９および温度３０〜７０℃で実施する。
【００２４】
ＤＮａｓｅ（デオキシリボヌクレアーゼ）
「ＤＮａｓｅ」という用語は、ＤＮＡ骨格において、ホスホジエステル結合の加水分解切断を触媒することにより、ＤＮＡを分解するＤＮａｓｅ活性を有するポリペプチドを意味する。ＤＮａｓｅ活性を呈示する酵素の例は、国際生化学・分子生物学連合（Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｕｎｉｏｎ  ｏｆ  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ａｎｄ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ）（ＩＵＢＭＢ）の命名委員会（Ｎｏｍｅｎｃｌａｔｕｒｅ  Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ）の推奨事項に定義されている通り、酵素クラスＥＣ３．１．１１〜ＥＣ３．１．３１に含まれるものである。
【００２５】
「ＤＮａｓｅ」、「ＤＮａｓｅ酵素」という用語および「ＤＮａｓｅ活性を有するポリペプチド」という表現は、本出願全体を通して置き換え可能に使用される。本発明の目的のために、ＤＮａｓｅ活性は、アッセイＩに記載する手順に従って決定される。
【００２６】
一態様では、本発明のＤＮａｓｅは、配列番号１のアミノ酸配列を有するＤＮａｓｅのＤＮａｓｅ活性の少なくとも２０％、例えば、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも１００％を有する。
【００２７】
本発明に従って使用されるＤＮａｓｅは、配列番号１または配列番号２のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むか、またはそれからなる、ＤＮａｓｅ活性を呈示する成熟型ポリペプチドである。
【００２８】
好ましくは、ＤＮａｓｅのアミノ酸配列は、配列番号１または配列番号２のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の配列同一性、より好ましくは少なくとも９０％、より好ましくは少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、最も好ましくは１００％の配列同一性を有する。一実施形態では、ＤＮａｓｅのアミノ酸配列は、配列番号１または配列番号２である。別の実施形態では、ＤＮａｓｅは、真菌ＤＮａｓｅであり、好ましくは糸状菌ＤＮａｓｅであり、より好ましくはアスペルギルス属（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ）ＤＮａｓｅであり、最も好ましくはアスペルギルス・オリゼー（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｏｒｙｚａｅ）ＤＮａｓｅである。別の実施形態では、ＤＮａｓｅは、アスペルギルス・オリゼー（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｏｒｙｚａｅ）ＤＮａｓｅまたはその誘導体である。また別の実施形態では、ＤＮａｓｅは、本明細書に参照により組み込まれる、国際出願番号ＰＣＴ／欧州特許第２０１５／０５７８８３号明細書（現在、国際公開第２０１５／１５５３５０号パンフレット）に開示されているようなＤＮａｓｅである。
【００２９】
一実施形態では、配列番号１または配列番号２のアミノ酸配列に導入されるアミノ酸置換、欠失および／または挿入の数は、１０以下、例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、もしくは１０；または５以下、例えば、１、２、３、４、もしくは５；または２以下である。アミノ酸変更は、副次的な性質のもの、すなわち、タンパク質の折り畳みおよび／または活性に有意に影響しない保存的アミノ酸置換もしくは挿入；典型的には１〜３０アミノ酸の小さな欠失；アミノ末端メチオニン残基などの小さなアミノもしくはカルボキシル末端伸長；２０〜２５以下の残基からなる小さなリンカー；あるいは、正味電荷またはポリ−ヒスチジン配列（ｔｒａｃｔ）、抗原エピトープもしくは結合ドメインなどの別の機能を変更することにより精製を促進する小さな伸長であってもよい。
【００３０】
保存的置換の例は、塩基性アミノ酸（アルギニン、リシンおよびヒスチジン）、酸性アミノ酸（グルタミン酸およびアスパラギン酸）、極性アミノ酸（グルタミンおよびアスパラギン）、疎水性アミノ酸（ロイシン、イソロイシンおよびバリン）、芳香族アミノ酸（フェニルアラニン、トリプトファンおよびチロシン）、ならびに小アミノ酸（グリシン、アラニン、セリン、トレオニンおよびメチオニン）の基の中にある。概して特定の活性を改変しないアミノ酸置換は当技術分野において公知であり、例えば、Ｈ．Ｎｅｕｒａｔｈ  ａｎｄ  Ｒ．Ｌ．Ｈｉｌｌ，１９７９，Ｔｈｅ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ，Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋに記載されている。一般的な置換は、以下：Ａｌａ／Ｓｅｒ、Ｖａｌ／Ｉｌｅ、Ａｓｐ／Ｇｌｕ、Ｔｈｒ／Ｓｅｒ、Ａｌａ／Ｇｌｙ、Ａｌａ／Ｔｈｒ、Ｓｅｒ／Ａｓｎ、Ａｌａ／Ｖａｌ、Ｓｅｒ／Ｇｌｙ、Ｔｙｒ／Ｐｈｅ、Ａｌａ／Ｐｒｏ、Ｌｙｓ／Ａｒｇ、Ａｓｐ／Ａｓｎ、Ｌｅｕ／Ｉｌｅ、Ｌｅｕ／Ｖａｌ、Ａｌａ／Ｇｌｕ、およびＡｓｐ／Ｇｌｙである。
【００３１】
ポリペプチドの必須アミノ酸は、例えば、部位指定突然変異誘発またはアラニンスキャン突然変異誘発（Ｃｕｎｎｉｎｇｈａｍ  ａｎｄ  Ｗｅｌｌｓ，１９８９，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４４：１０８１−１０８５）など、当技術分野で公知の方法に従って同定することができる。後者の技術では、分子中の残基ごとに単一アラニン突然変異を導入し、得られた突然変異分子をＤＮａｓｅ活性について試験することによって、分子の活性に不可欠なアミノ酸残基を同定する。Ｈｉｌｔｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９９６，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７１：４６９９−４７０８も参照されたい。ＤＮａｓｅまたはその他の生物学的相互作用の活性部位は、推定接触部位アミノ酸の突然変異と共に、核磁気共鳴、結晶学、電気回析、または光親和性標識などの技術によって決定されるような構造の物理分析によって決定することもできる。例えば、ｄｅ  Ｖｏｓ  ｅｔ  ａｌ．，１９９２，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２５５：３０６−３１２；Ｓｍｉｔｈ  ｅｔ  ａｌ．，１９９２，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２４：８９９−９０４；Ｗｌｏｄａｖｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，１９９２，ＦＥＢＳ  Ｌｅｔｔ．３０９：５９−６４を参照されたい。必須アミノ酸のアイデンティティは、関連ポリペプチドとのアラインメントから推定することもできる。
【００３２】
単一または複数のアミノ酸置換、欠失、および／または挿入を実施して、公知の突然変異誘発、組換え、および／またはシャッフリングの方法を用いて試験した後、Ｒｅｉｄｈａａｒ−Ｏｌｓｏｎ  ａｎｄ  Ｓａｕｅｒ，１９８８，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４１：５３−５７；Ｂｏｗｉｅ  ａｎｄ  Ｓａｕｅｒ，１９８９，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８６：２１５２−２１５６；国際公開第９５／１７４１３号パンフレット；または国際公開第９５／２２６２５号パンフレットに開示されるものなどの関連スクリーニング方法を実施することができる。使用することができる他の方法として、エラーが起こりがちなＰＣＲ、ファージ展示（例えば、Ｌｏｗｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９９１，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ３０：１０８３２−１０８３７；米国特許第５，２２３，４０９号明細書；国際公開第９２／０６２０４号パンフレット）および領域指定突然変異誘発（Ｄｅｒｂｙｓｈｉｒｅ  ｅｔ  ａｌ．，１９８６，Ｇｅｎｅ  ４６：１４５；Ｎｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，１９８８，ＤＮＡ  ７：１２７）が挙げられる。
【００３３】
２つのアミノ酸配列同士の関係性は、パラメータ「配列同一性」によって表される。本発明の目的のために、２つのアミノ酸配列同士の配列同一性は、ＥＭＢＯＳＳパッケージ（ＥＭＢＯＳＳ：Ｔｈｅ  Ｅｕｒｏｐｅａｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  Ｏｐｅｎ  Ｓｏｆｔｗａｒｅ  Ｓｕｉｔｅ，Ｒｉｃｅ  ｅｔ  ａｌ．，  ２０００，Ｔｒｅｎｄｓ  Ｇｅｎｅｔ．１６：２７６−２７７）のＮｅｅｄｌｅプログラムに実装されるＮｅｅｄｌｅｍａｎ−Ｗｕｎｓｃｈアルゴリズム（Ｎｅｅｄｌｅｍａｎ  ａｎｄ  Ｗｕｎｓｃｈ，１９７０，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．４８：４４３−４５３）、好ましくはバージョン５．０．０以降を用いて決定される。使用されるパラメータは、ギャップオープンペナルティ：１０、ギャップ伸長ペナルティ：０．５、およびＥＢＬＯＳＵＭ６２（ＢＬＯＳＵＭ６２のＥＭＢＯＳＳバージョン）置換マトリックスである。「最長同一性」と表示されるＮｅｅｄｌｅの出力（−ｎｏｂｒｉｅｆオプションを用いて得られる）は、同一性（％）として用いられ、次のように計算する：（同一の残基×１００）／（アラインメントの長さ−アラインメント中のギャップの総数）。
【００３４】
バイオフィルム
バイオフィルムは、細胞が、繊維表面、金属表面、またはいずれか他の硬質表面などの表面上に互いに付着している、あらゆる微生物群である。こうした付着細胞は、多くの場合、細胞外高分子物質（ＥＰＳ）の自己生成マトリックス内に包埋されている。バイオフィルムＥＰＳは、一般に、細胞外ＤＮＡ、タンパク質、および多糖から構成される高分子凝集塊である。
【００３５】
バイオフィルムは、生存または非生存表面上に形成し得る。バイオフィルム内で増殖する微生物細胞は、同じ生物の浮遊細胞とは生理学的に異なっており、浮遊細胞は、対照的に、液体媒体中に浮遊または泳動し得る単細胞である。バイオフィルム内に生存する細菌は通常、フィルムの高密度且つ保護された環境によって、これらの細菌が多様な方法で協同および相互作用することが可能になるため、同じ種の浮遊細菌とは極めて異なる特性を有する。この環境の１つの利点は、高密度の細胞外マトリックスおよび細胞の外層が集団の内部を保護するために、洗剤および抗生物質に対する耐性が増大することである。
【００３６】
典型的なバイオフィルムは、以下：アシネトバクター属（Ａｃｉｎｅｔｏｂａｃｔｅｒ）、バチルス属（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）、コマモナス属（Ｃｏｍａｍｏｎａｓ）、エシェリキア属（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ）、シュードモナス属（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）、およびスフィンゴモナス属（Ｓｐｈｉｎｇｏｍｏｎａｓ）からなる群から選択される１つまたは複数の細菌；例えば、以下：アシネトバクター・カルコアセチカス（Ａｃｉｎｅｔｏｂａｃｔｅｒ  ｃａｌｃｏａｃｅｔｉｃｕｓ）、バチルス・アミロリケファシエンス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ａｍｙｌｏｌｉｑｕｅｆａｃｉｅｎｓ）ＳＣ１００、バチルス・アミロリケファシエンス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ａｍｙｌｏｌｉｑｕｅｆａｃｉｅｎｓ）ＳＣ１６８、コマモナス・デニトリフィカンス（Ｃｏｍａｍｏｎａｓ  ｄｅｎｉｔｒｉｆｉｃａｎｓ）、大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ）Ｋ−１２、緑膿菌（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）、およびスフィンゴモナス・ミューコシシマ（Ｓｐｈｉｎｇｏｍｏｎａｓ  ｍｕｃｏｓｉｓｓｉｍａ）からなる群から選択される１つまたは複数の細菌種を含む。
【００３７】
非ＤＮａｓｅ酵素
本発明に従い、任意選択でＤＮａｓｅと組み合わせるべき非ＤＮａｓｅ酵素は、アミラーゼ、アラビナーゼ、カルボヒドラーゼ、セルラーゼ、クチナーゼ、ガラクタナーゼ、リパーゼ、マンナナーゼ、オキシドレダクターゼ（ハロペルオキシダーゼ、ラッカーゼ、オキシダーゼ、ペルオキシダーゼ）、ペクチン酸リアーゼ、ペクチナーゼ、ペルヒドロラーゼ、プロテアーゼ、およびキシラナーゼからなる群から選択される１つまたは複数の非ＤＮａｓｅ酵素であってよい。
【００３８】
一般に、選択される酵素の特性は、洗浄条件（すなわち、至適ｐＨ、他の酵素および非酵素成分などとの適合性）と適合性であり、しかも酵素は、有効量で存在すべきである。
【００３９】
プロテアーゼ
好適なプロテアーゼとしては、細菌、真菌、植物、ウイルスまたは動物起源、例えば、野菜または微生物起源のプロテアーゼが挙げられる。微生物起源が好ましい。化学的に修飾された突然変異体、またはタンパク質改変された突然変異体も含まれる。プロテアーゼは、セリンプロテアーゼまたはメタロプロテアーゼなどのアルカリ性プロテアーゼであってよい。セリンプロテアーゼは、例えば、トリプシンなどのＳ１ファミリーのもの、またはスブチリシンなどのＳ８ファミリーのものであってもよい。メタロプロテアーゼプロテアーゼは、例えば、ファミリーＭ４由来のサーモリシンまたはＭ５、Ｍ７もしくはＭ８ファミリー由来のものなどのその他のメタロプロテアーゼであってもよい。
【００４０】
「スブチラーゼ」という用語は、Ｓｉｅｚｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９９１，Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｎｇｎｇ．４：７１９−７３７、およびＳｉｅｚｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９９７，Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ６：５０１−５２３による、セリンプロテアーゼのサブグループを指す。セリンプロテアーゼは、活性部位にセリンを有することを特徴とするプロテアーゼのサブグループであり、これは、基質と一緒に共有結合付加体を形成する。スブチラーゼは、６つの亜門、すなわち、スブチリシン（Ｓｕｂｔｉｌｉｓｉｎ）ファミリー、サーミターゼ（Ｔｈｅｒｍｉｔａｓｅ）ファミリー、プロテイナーゼＫ（Ｐｒｏｔｅｉｎａｓｅ  Ｋ）ファミリー、ランチビオチック（Ｌａｎｔｉｂｉｏｔｉｃ）ペプチダーゼファミリー、ケキシン（Ｋｅｘｉｎ）ファミリーおよびピロリシン（Ｐｙｒｏｌｙｓｉｎ）ファミリーにさらに分類することができる。
【００４１】
スブチラーゼの例は、米国特許第７，２６２，０４２号明細書および国際公開第２００９／０２１８６７号パンフレットに記載されている、例えば、バチルス・アルカロフィルス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ａｌｋａｌｏｐｈｉｌｕｓ）、Ｂ．アミロリケファシエンス（Ｂ．ａｍｙｌｏｌｉｑｕｅｆａｃｉｅｎｓ）、バチルス・ギブソニイ（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｇｉｂｓｏｎｉｉ）、バチルス・レンツス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｌｅｎｔｕｓ）、バチルス・プミルス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｐｕｍｉｌｕｓ）、および枯草菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｕｂｔｉｌｉｓ）などのバチルス属（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）由来のもの、ならびに国際公開第８９／０６２７９号パンフレットに記載されているスブチリシン・レンツス（ｓｕｂｔｉｌｉｓｉｎ  ｌｅｎｔｕｓ）、スブチリシン（ｓｕｂｔｉｌｉｓｉｎ）Ｎｏｖｏ、スブチリシン（ｓｕｂｔｉｌｉｓｉｎ）Ｃａｒｌｓｂｅｒｇ、バチルス・リケニフォルミス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｌｉｃｈｅｎｉｆｏｒｍｉｓ）、スブチリシン（ｓｕｂｔｉｌｉｓｉｎ）ＢＰＮ’、スブチリシン（ｓｕｂｔｉｌｉｓｉｎ）３０９、スブチリシン（ｓｕｂｔｉｌｉｓｉｎ）１４７およびスブチリシン（ｓｕｂｔｉｌｉｓｉｎ）１６８、ならびに（国際公開第９３／１８１４０号パンフレット）に記載されているプロテアーゼＰＤ１３８由来のものである。その他の有用なプロテアーゼは、国際公開第９２／１７５７７号パンフレット、国際公開第０１／１６２８５号パンフレット、国際公開第０２／２６０２４号パンフレットおよび国際公開第０２／１６５４７号パンフレットに記載されているものであってよい。トリプシン様プロテアーゼの例は、トリプシン（例えば、ブタまたはウシ起源）、ならびに国際公開第８９／０６２７０号パンフレット、国際公開第９４／２５５８３号パンフレットおよび国際公開第２００５／０４０３７２号パンフレットに記載されているフザリウム属（Ｆｕｓａｒｉｕｍ）プロテアーゼ、ならびに国際公開第２００５／０５２１６１号パンフレットおよび国際公開第２００５／０５２１４６号パンフレットに記載されているセルモナス（Ｃｅｌｌｕｍｏｎａｓ）から得られるキモトリプシンプロテアーゼである。
【００４２】
別の好ましいプロテアーゼは、例えば国際公開第９５／２３２２１号パンフレットに記載されているバチルス・レンツス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｌｅｎｔｕｓ）ＤＳＭ５４８３からのアルカリ性プロテアーゼ、ならびに国際公開第９２／２１７６０号パンフレット、国際公開第９５／２３２２１号パンフレット、欧州特許第１９２１１４７号明細書および欧州特許第１９２１１４８号明細書に記載されているその変異体である。
【００４３】
メタロプロテアーゼの例は、国際公開第２００７／０４４９９３号明細書（Ｇｅｎｅｎｃｏｒ  Ｉｎｔ．）に記載されている中性メタロプロテアーゼ、例えば、バチルス・アミロリケファシエンス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ａｍｙｌｏｌｉｑｕｅｆａｃｉｅｎｓ）由来のものなどである。
【００４４】
有用なプロテアーゼの例は、国際公開第９２／１９７２９号パンフレット、国際公開第９６／３４９４６号パンフレット、国際公開第９８／２０１１５号パンフレット、国際公開第９８／２０１１６号パンフレット、国際公開第９９／１１７６８号パンフレット、国際公開第０１／４４４５２号パンフレット、国際公開第０３／００６６０２号パンフレット、国際公開第２００４／０３１８６号パンフレット、国際公開第２００４／０４１９７９号パンフレット、国際公開２００７／００６３０５号パンフレット、国際公開第２０１１／０３６２６３号パンフレット、国際公開第２０１１／０３６２６４号パンフレットに記載されている変異体であって、特に、ＢＰＮ’番号付けを用いて、以下の１つまたは複数の位置に置換を伴う変異体である：３、４、９、１５、２７、３６、５７、６８、７６、８７、９５、９６、９７、９８、９９、１００、１０１、１０２、１０３、１０４、１０６、１１８、１２０、１２３、１２８、１２９、１３０、１６０、１６７、１７０、１９４、１９５、１９９、２０５、２０６、２１７、２１８、２２２、２２４、２３２、２３５、２３６、２４５、２４８、２５２および２７４。より好ましいスブチラーゼ変異体は、次の突然変異を有し得る：Ｓ３Ｔ、Ｖ４Ｉ、Ｓ９Ｒ、Ａ１５Ｔ、Ｋ２７Ｒ，＊３６Ｄ、Ｖ６８Ａ、Ｎ７６Ｄ、Ｎ８７Ｓ，Ｒ、＊９７Ｅ、Ａ９８Ｓ、Ｓ９９Ｇ，Ｄ，Ａ、Ｓ９９ＡＤ、Ｓ１０１Ｇ，Ｍ，Ｒ  Ｓ１０３Ａ、Ｖ１０４Ｉ，Ｙ，Ｎ、Ｓ１０６Ａ、Ｇ１１８Ｖ，Ｒ、Ｈ１２０Ｄ，Ｎ、Ｎ１２３Ｓ、Ｓ１２８Ｌ、Ｐ１２９Ｑ、Ｓ１３０Ａ、Ｇ１６０Ｄ、Ｙ１６７Ａ、Ｒ１７０Ｓ、Ａ１９４Ｐ、Ｇ１９５Ｅ、Ｖ１９９Ｍ、Ｖ２０５Ｉ、Ｌ２１７Ｄ、Ｎ２１８Ｄ、Ｍ２２２Ｓ、Ａ２３２Ｖ、Ｋ２３５Ｌ、Ｑ２３６Ｈ、Ｑ２４５Ｒ、Ｎ２５２Ｋ、Ｔ２７４Ａ（ＢＰＮ’番号付けを用いて）。
【００４５】
好適な市販のタンパク分解酵素としては、次の商品名：Ａｌｃａｌａｓｅ（商標）、Ｄｕｒａｌａｓｅ（商標）、Ｄｕｒａｚｙｍ（商標）、Ｒｅｌａｓｅ（商標）、Ｒｅｌａｓｅ（商標）Ｕｌｔｒａ、Ｓａｖｉｎａｓｅ（商標）、Ｓａｖｉｎａｓｅ（商標）Ｕｌｔｒａ、Ｐｒｉｍａｓｅ（商標）、Ｐｏｌａｒｚｙｍｅ（商標）、Ｋａｎｎａｓｅ（商標）、Ｌｉｑｕａｎａｓｅ（商標）、Ｌｉｑｕａｎａｓｅ（商標）Ｕｌｔｒａ、Ｏｖｏｚｙｍｅ（商標）、Ｃｏｒｏｎａｓｅ（商標）、Ｃｏｒｏｎａｓｅ（商標）Ｕｌｔｒａ、Ｂｌａｚｅ（商標）、Ｎｅｕｔｒａｓｅ（商標）、Ｅｖｅｒｌａｓｅ（商標）およびＥｓｐｅｒａｓｅ（商標）（Ｎｏｖｏｚｙｍｅｓ  Ａ／Ｓ）で販売されているもの、次の商品名：Ｍａｘａｔａｓｅ（商標）、Ｍａｘａｃａｌ（商標）、Ｍａｘａｐｅｍ（商標）、Ｐｕｒａｆｅｃｔ（商標）、Ｐｕｒａｆｅｃｔ  Ｐｒｉｍｅ（商標）、Ｐｕｒａｆｅｃｔ  ＭＡ（商標）、Ｐｕｒａｆｅｃｔ  Ｏｘ（商標）、Ｐｕｒａｆｅｃｔ  ＯｘＰ（商標）、Ｐｕｒａｍａｘ（商標）、Ｐｒｏｐｅｒａｓｅ（商標）、ＦＮ２（商標）、ＦＮ３（商標）、ＦＮ４（商標）、Ｅｘｃｅｌｌａｓｅ（商標）、Ｅｒａｓｅｒ（商標）、Ｏｐｔｉｃｌｅａｎ（商標）およびＯｐｔｉｍａｓｅ（商標）（Ｄａｎｉｓｃｏ／ＤｕＰｏｎｔ）、Ａｘａｐｅｍ（商標）（Ｇｉｓｔ−Ｂｒｏｃａｓｅｓ  Ｎ．Ｖ．）、ＢＬＡＰ（米国特許第５，３５２，６０４号明細書の図２９に示される配列）およびその変異体（Ｈｅｎｋｅｌ  ＡＧ）およびＫＡＰ（バチルス・アルカロフィルス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ａｌｋａｌｏｐｈｉｌｕｓ）スブチリシン）（花王株式会社から）で販売されているものが挙げられる。
【００４６】
プロテアーゼ、さらには他の種類の酵素も、プロテアーゼ活性、例えば、セリンプロテアーゼ活性の可逆的阻害剤であるプロテアーゼ阻害剤と一緒に使用してもよい。好ましくは、プロテアーゼ阻害剤は、（可逆的）スブチリシンプロテアーゼ阻害剤である。特に、プロテアーゼ阻害剤は、ペプチドアルデヒド、ホウ酸、もしくはボロン酸；またはこれらのいずれかの誘導体であってよい。
【００４７】
好適なボロン酸誘導体は、米国特許第４，９６３，６５５号明細書、米国特許第５，１５９，０６０号明細書、国際公開第９５／１２６５５号パンフレット、国際公開第９５／２９２２３号パンフレット、国際公開第９２／１９７０７号パンフレット、国際公開第９４／０４６５３号パンフレット、国際公開第９４／０４６５４号パンフレット、米国特許第５，４４２，１００号明細書、米国特許第５，４８８，１５７号明細書および米国特許第５，４７２，６２８号明細書に記載されている。
【００４８】
好適なペプチドアルデヒドは、国際公開第９４／０４６５１号パンフレット、国際公開第９５／２５７９１号パンフレット、国際公開第９８／１３４５８号パンフレット、国際公開第９８／１３４５９号パンフレット、国際公開第９８／１３４６０号パンフレット、国際公開第９８／１３４６１号パンフレット、国際公開第９８／１３４６１号パンフレット、国際公開第９８／１３４６２号パンフレット、国際公開第２００７／１４１７３６号パンフレット、国際公開第２００７／１４５９６３号パンフレット、国際公開第２００９／１１８３７５号パンフレット、国際公開第２０１０／０５５０５２号パンフレットおよび国際公開第２０１１／０３６１５３号パンフレットに記載されている。あるいは、ペプチドアルデヒドは、国際公開第２０１１／０３６１５３号パンフレットに記載されている式を有し得る。
【００４９】
ペプチドアルデヒドは、例えば、Ｍａｒｃｈ，Ｊ．Ａｄｖａｎｃｅｄ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，ｆｏｕｒｔｈ  ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｗｉｌｅｙ−Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ，ＵＳ  １９９２，ｐ  ８９５などのテキストブックに記載されているように；および国際公開第２０１３／００４６３６号パンフレットに記載されているように、亜硫酸水素ナトリウムとの反応によって水溶性ハイドロサルファイト付加物に変換することもできる。
【００５０】
リパーゼ／クチナーゼ
好適なリパーゼおよびクチナーゼとしては、細菌または真菌起源のものが挙げられる。化学的に修飾された突然変異体またはタンパク質改変突然変異体が含まれる。例として、以下：欧州特許第２５８０６８号明細書および欧州特許第３０５２１６号明細書に記載されている、テルモマイセス属（Ｔｈｅｒｍｏｍｙｃｅｓ）由来、例えば、Ｔ．ラヌギノスス（Ｔ．ｌａｎｕｇｉｎｏｓｕｓ）（旧名：フミコラ・ラヌギノサ（Ｈｕｍｉｃｏｌａ  ｌａｎｕｇｉｎｏｓａ））由来のリパーゼ、例えば、国際公開第９６／１３５８０号パンフレットに記載されているＨ．インソレンス（Ｈ．ｉｎｓｏｌｅｎｓ）といったフミコラ属（Ｈｕｍｉｃｏｌａ）由来のクチナーゼ、例えば、Ｐ．アルカリゲネス（Ｐ．ａｌｃａｌｉｇｅｎｅｓ）またはＰ．シュードアルカリゲネス（Ｐ．ｐｓｅｕｄｏａｌｃａｌｉｇｅｎｅｓ）（欧州特許第２１８２７２号明細書）、Ｐ．セパシア（Ｐ．ｃｅｐａｃｉａ）（欧州特許第３３１３７６号明細書）、Ｐ．スタッツェリ（Ｐ．ｓｔｕｔｚｅｒｉ）（ドイツ国特許第１３７２０３４号明細書）、Ｐ．フルオレセンス（Ｐ．ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｓ）、シュードモナス属（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｓｐ．）ＳＤ７０５株（国際公開第９５／０６７２０号パンフレットおよび国際公開第９６／２７００２号パンフレット）、Ｐ．ウィスコンシネンシス（Ｐ．ｗｉｓｃｏｎｓｉｎｅｎｓｉｓ）（国際公開第９６／１２０１２号パンフレット）由来などのシュードモナス属（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）リパーゼ、枯草菌（Ｂ．ｓｕｂｔｉｌｉｓ）（Ｄａｒｔｏｉｓ  ｅｔ  ａｌ．，１９９３，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａ  ｅｔ  Ｂｉｏｐｈｙｓｉｃａ  Ａｃｔａ  １１３１：２５３−３６０）、Ｂ．ステアロサーモフィルス（Ｂ．ｓｔｅａｒｏｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓ）（ＪＰ６４／７４４９９２号明細書）またはＢ．プミルス（国際公開第９１／１６４２２号明細書）由来などのバチルス属（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）リパーゼ、ＧＤＳＬタイプのストレプトマイセス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ）リパーゼ（国際公開第２０１０／０６５４５５号パンフレット）、イネいもち病菌（Ｍａｇｎａｐｏｒｔｈｅ  ｇｒｉｓｅａ）由来のクチナーゼ（国際公開第２０１０／１０７５６０号パンフレット）、シュードモナス・メンドシナ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｍｅｎｄｏｃｉｎａ）由来のクチナーゼ（米国特許第５，３８９，５３９号明細書）、サーモビフィダ・フスカ（Ｔｈｅｒｍｏｂｉｆｉｄａ  ｆｕｓｃａ）由来のリパーゼ（国際公開第２０１１／０８４４１２号パンフレット）、ゲオバチルス・ステアロサーモフィルス（Ｇｅｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｔｅａｒｏｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓ）リパーゼ（国際公開第２０１１／０８４４１７号パンフレット）、枯草菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｕｂｔｉｌｉｓ）由来のリパーゼ（国際公開第２０１１／０８４５９９号パンフレット）、ならびにストレプトマイセス・グリセウス （Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ｇｒｉｓｅｕｓ）（国際公開第２０１１／１５０１５７号パンフレット）およびＳ．プリスチナエスピラリス（Ｓ．ｐｒｉｓｔｉｎａｅｓｐｉｒａｌｉｓ）（国際公開第２０１２／１３７１４７号パンフレット）由来のリパーゼが挙げられる。
【００５１】
他の例は、国際公開第９２／０５２４９号パンフレット、国際公開第９４／０１５４１号パンフレット、欧州特許第４０７２２５号明細書、欧州特許第２６０１０５号明細書、国際公開第９５／３５３８１号パンフレット、国際公開第９６／００２９２号パンフレット、国際公開第９５／３０７４４号パンフレット、国際公開第９４／２５５７８号パンフレット、国際公開第９５／１４７８３号パンフレット、国際公開第９５／２２６１５号パンフレット、国際公開第９７／０４０７９号パンフレット、国際公開第９７／０７２０２号パンフレット、国際公開第００／６００６３号パンフレット、国際公開第２００７／０８７５０８号パンフレットおよび国際公開第２００９／１０９５００号パンフレットに記載のものなどのリパーゼ変異体である。
【００５２】
好ましい市販のリパーゼ酵素としては、Ｌｉｐｏｌａｓｅ（商標）、Ｌｉｐｏｌａｓｅ  Ｕｌｔｒａ（商標）、およびＬｉｐｅｘ（商標）；Ｌｅｃｉｔａｓｅ（商標）、Ｌｉｐｏｌｅｘ（商標）；Ｌｉｐｏｃｌｅａｎ（商標）、Ｌｉｐｏｐｒｉｍｅ（商標）（Ｎｏｖｏｚｙｍｅｓ  Ａ／Ｓ）が挙げられる。その他の市販のリパーゼとしては、Ｌｕｍａｆａｓｔ（Ｇｅｎｅｎｃｏｒ  Ｉｎｔ  Ｉｎｃ）；Ｌｉｐｏｍａｘ（Ｇｉｓｔ−Ｂｒｏｃａｄｅｓ／Ｇｅｎｅｎｃｏｒ  Ｉｎｔ  Ｉｎｃ）およびＳｏｌｖａｙ製のバチルス属（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｐ．）リパーゼが挙げられる。
【００５３】
カルボヒドラーゼ
カルボヒドラーゼは、炭水化物を切断する酵素を指す一般的用語である。一般に、カルボヒドラーゼは、それらが作用する基質の名称から命名され、例えば、アミラーゼは、アミラーゼに作用し、セルラーゼはセルロースに作用する。例えば、アミラーゼ、セルラーゼ、ペクチナーゼ、ペクチン酸リアーゼ、マンナナーゼ、アラビナーゼ、ガラクタナーゼおよびキシラナーゼといった多くのカルボヒドラーゼが洗浄および洗濯用途に有用であることがわかっており、これらは全て液体組成物に適用することができる。
【００５４】
アミラーゼ
適切なアミラーゼとしては、細菌または真菌起源のものが挙げられる。化学修飾またはタンパク質改変変異体も挙げられる。アミラーゼとしては、例えば英国特許第１，２９６，８３９号明細書でより詳細に記載されるバチルス・リケニフォミス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｌｉｃｈｅｎｉｆｏｒｍｉｓ）の特殊な株などの、例えばバチルス属（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）から得られるα−アミラーゼが挙げられる。
【００５５】
適切なアミラーゼの例としては、国際公開第９５／１０６０３号パンフレットの配列番号２を有するアミラーゼ、またはその配列番号３と９０％の配列同一性を有する変種が挙げられる。好ましい変種は、国際公開第９４／０２５９７号パンフレット、国際公開第９４／１８３１４号パンフレット、国際公開第９７／４３４２４号パンフレット、および国際公開第９９／１９４６７号パンフレットの配列番号４に記載され、１５、２３、１０５、１０６、１２４、１２８、１３３、１５４、１５６、１７８、１７９、１８１、１８８、１９０、１９７、２０１、２０２、２０７、２０８、２０９、２１１、２４３、２６４、３０４、３０５、３９１、４０８、および４４４位に１つまたは複数の置換がある変種などである。
【００５６】
異なる適切なアミラーゼとしては、国際公開第０２／１０３５５号パンフレットの配列番号６を有するアミラーゼ、または配列番号６と９０％の配列同一性を有するその変種が挙げられる。配列番号６の好ましい変種は、１８１および１８２位の欠失と、１９３位の置換とを有するものである。適切なその他のアミラーゼは、国際公開第２００６／０６６５９４号パンフレットの配列番号６で示されるＢ．アミロリケファシエンス（Ｂ．ａｍｙｌｏｌｉｑｕｅｆａｃｉｅｎｓ）に由来するα−アミラーゼの残基１〜３３と、国際公開第２００６／０６６５９４号パンフレットの配列番号４で示されるＢ．リケニフォルミス（Ｂ．ｌｉｃｈｅｎｉｆｏｒｍｉｓ）α−アミラーゼの残基３６〜４８３とを含むハイブリッドα−アミラーゼ、またはそれと９０％の配列同一性を有する変種である。このハイブリッドα−アミラーゼの好ましい変種は、Ｇ４８、Ｔ４９、Ｇ１０７、Ｈ１５６、Ａ１８１、Ｎ１９０、Ｍ１９７、Ｉ２０１、Ａ２０９、およびＱ２６４位の１つまたは複数に、置換、欠失または挿入を有するものである。国際公開第２００６／０６６５９４号パンフレットの配列番号６で示されるＢ．アミロリケファシエンス（Ｂ．ａｍｙｌｏｌｉｑｕｅｆａｃｉｅｎｓ）に由来するα−アミラーゼの残基１〜３３と、配列番号４の残基３６〜４８３とを含むハイブリッドα−アミラーゼの最も好ましい変種は、
Ｍ１９７Ｔ；
Ｈ１５６Ｙ＋Ａ１８１Ｔ＋Ｎ１９０Ｆ＋Ａ２０９Ｖ＋Ｑ２６４Ｓ；または
Ｇ４８Ａ＋Ｔ４９Ｉ＋Ｇ１０７Ａ＋Ｈ１５６Ｙ＋Ａ１８１Ｔ＋Ｎ１９０Ｆ＋Ｉ２０１Ｆ＋Ａ２０９Ｖ＋Ｑ２６４Ｓ
の置換を有するものである。
【００５７】
適切なさらなるアミラーゼは、国際公開第９９／１９４６７号パンフレットの配列番号６を有するアミラーゼ、または配列番号６と９０％の配列同一性を有するそれらの変種である。配列番号６の好ましい変種は、Ｒ１８１、Ｇ１８２、Ｈ１８３、Ｇ１８４、Ｎ１９５、Ｉ２０６、Ｅ２１２、Ｅ２１６、およびＫ２６９位の１つまたは複数に、置換、欠失または挿入を有するものである。特に好ましいアミラーゼは、Ｒ１８１およびＧ１８２位、またはＨ１８３およびＧ１８４位に、欠失を有するものである。
【００５８】
利用し得る追加的なアミラーゼは、国際公開第９６／２３８７３号パンフレットの配列番号１、配列番号３、配列番号２または配列番号７を有するもの、または配列番号１、配列番号２、配列番号３または配列番号７と９０％の配列同一性を有する、それらの変種である。配列番号１、配列番号２、配列番号３または配列番号７の好ましい変種は、１４０、１８１、１８２、１８３、１８４、１９５、２０６、２１２、２４３、２６０、２６９、３０４、および４７６位の１つまたは複数に、置換、欠失または挿入を有するものである。より好ましい変種は、１８１および１８２位、または１８３および１８４位に、欠失を有するものである。配列番号１、配列番号２または配列番号７の最も好ましいアミラーゼ変種は、１８３および１８４位に欠失、および１４０、１９５、２０６、２４３、２６０、３０４、および４７６位の１つまたは複数に置換を有するものである。
【００５９】
利用し得るその他のアミラーゼは、国際公開第２００８／１５３８１５号パンフレットの配列番号２、国際公開第０１／６６７１２号パンフレットの配列番号１０を有するアミラーゼ、または国際公開第２００８／１５３８１５号パンフレットの配列番号２と９０％の配列同一性を有する、または国際公開第０１／６６７１２号パンフレットの配列番号１０と９０％の配列同一性を有する、それらの変種である。国際公開第０１／６６７１２号パンフレットの配列番号１０の好ましい変種は、１７６、１７７、１７８、１７９、１９０、２０１、２０７、２１１、および２６４位の１つまたは複数に、置換、欠失または挿入を有するものである。
【００６０】
さらに適切なアミラーゼは、国際公開第２００９／０６１３８０号パンフレットの配列番号２を有するアミラーゼ、または配列番号２と９０％の配列同一性を有するその変種である。配列番号２の好ましい変種は、Ｃ末端にトランケーションを有し、および／またはＱ８７、Ｑ９８、Ｓ１２５、Ｎ１２８、Ｔ１３１、Ｔ１６５、Ｋ１７８、Ｒ１８０、Ｓ１８１、Ｔ１８２、Ｇ１８３、Ｍ２０１、Ｆ２０２、Ｎ２２５、Ｓ２４３、Ｎ２７２、Ｎ２８２、Ｙ３０５、Ｒ３０９、Ｄ３１９、Ｑ３２０、Ｑ３５９、Ｋ４４４、およびＧ４７５位の１つまたは複数に置換、欠失または挿入を有するものである。配列番号２のより好ましい変種は、Ｑ８７Ｅ，Ｒ、Ｑ９８Ｒ、Ｓ１２５Ａ、Ｎ１２８Ｃ、Ｔ１３１Ｉ、Ｔ１６５Ｉ、Ｋ１７８Ｌ、Ｔ１８２Ｇ、Ｍ２０１Ｌ、Ｆ２０２Ｙ、Ｎ２２５Ｅ，Ｒ、Ｎ２７２Ｅ，Ｒ、Ｓ２４３Ｑ，Ａ，Ｅ，Ｄ、Ｙ３０５Ｒ、Ｒ３０９Ａ、Ｑ３２０Ｒ、Ｑ３５９Ｅ、Ｋ４４４Ｅ、およびＧ４７５Ｋ位の１つまたは複数に、置換を有し、および／またはＲ１８０および／またはＳ１８１またはＴ１８２および／またはＧ１８３位に欠失を有するものである。配列番号２の最も好ましいアミラーゼ変種は、
Ｎ１２８Ｃ＋Ｋ１７８Ｌ＋Ｔ１８２Ｇ＋Ｙ３０５Ｒ＋Ｇ４７５Ｋ；
Ｎ１２８Ｃ＋Ｋ１７８Ｌ＋Ｔ１８２Ｇ＋Ｆ２０２Ｙ＋Ｙ３０５Ｒ＋Ｄ３１９Ｔ＋Ｇ４７５Ｋ；
Ｓ１２５Ａ＋Ｎ１２８Ｃ＋Ｋ１７８Ｌ＋Ｔ１８２Ｇ＋Ｙ３０５Ｒ＋Ｇ４７５Ｋ；または
Ｓ１２５Ａ＋Ｎ１２８Ｃ＋Ｔ１３１Ｉ＋Ｔ１６５Ｉ＋Ｋ１７８Ｌ＋Ｔ１８２Ｇ＋Ｙ３０５Ｒ＋Ｇ４７５Ｋ
の置換を有するものであり、変種は、Ｃ末端トランケート型であり、任意選択的に、２４３位の置換、および／または１８０位および／または１８１位の欠失をさらに含む。
【００６１】
その他の適切なアミラーゼは、国際公開第０１／６６７１２号パンフレットの配列番号１２を有するα−アミラーゼ、または配列番号１２と少なくとも９０％の配列同一性を有する変種である。好ましいアミラーゼ変種は、国際公開第０１／６６７１２号パンフレットの配列番号１２のＲ２８、Ｒ１１８、Ｎ１７４；Ｒ１８１、Ｇ１８２、Ｄ１８３、Ｇ１８４、Ｇ１８６、Ｗ１８９、Ｎ１９５、Ｍ２０２、Ｙ２９８、Ｎ２９９、Ｋ３０２、Ｓ３０３、Ｎ３０６、Ｒ３１０、Ｎ３１４；Ｒ３２０、Ｈ３２４、Ｅ３４５、Ｙ３９６、Ｒ４００、Ｗ４３９、Ｒ４４４、Ｎ４４５、Ｋ４４６、Ｑ４４９、Ｒ４５８、Ｎ４７１、Ｎ４８４位の１つまたは複数に、置換、欠失または挿入を有するものである。特別な好ましいアミラーゼとしては、Ｄ１８３およびＧ１８４に欠失を有し、Ｒ１１８Ｋ、Ｎ１９５Ｆ、Ｒ３２０Ｋ、およびＲ４５８Ｋに置換を有する変種と、Ｍ９、Ｇ１４９、Ｇ１８２、Ｇ１８６、Ｍ２０２、Ｔ２５７、Ｙ２９５、Ｎ２９９、Ｍ３２３、Ｅ３４５、およびＡ３３９位から選択される１つまたは複数に置換をさらに有する変種が挙げられ、最も好ましいのは、これらの全ての位置にさらに置換を有する変種である。
【００６２】
その他の例は、国際公開第２０１１／０９８５３１号パンフレット、国際公開第２０１３／００１０７８号パンフレット、および国際公開第２０１３／００１０８７号パンフレットに記載されるものなどのアミラーゼ変種である。
【００６３】
市販のアミラーゼは、Ｓｔａｉｎｚｙｍｅ（商標）、Ｓｔａｉｎｚｙｍｅ  Ｐｌｕｓ（商標）、Ａｍｐｌｉｆｙ（商標）、Ｒｅｓｉｌｉｅｎｃｅ（商標）、Ｅｖｅｒｅｓｔ（商標）、Ｄｕｒａｍｙｌ（商標）、Ｔｅｒｍａｍｙｌ（商標）、Ｔｅｒｍａｍｙｌ  Ｕｌｔｒａ（商標）、Ｎａｔａｌａｓｅ（商標）、Ｆｕｎｇａｍｙｌ（商標）およびＢＡＮ（商標）（Ｎｏｖｏｚｙｍｅｓ  Ａ／Ｓ）、Ｒａｐｉｄａｓｅ（商標）およびＰｕｒａｓｔａｒ（商標）／Ｅｆｆｅｃｔｅｎｚ（商標）、Ｐｏｗｅｒａｓｅ（商標）およびＰｒｅｆｅｒｅｎｚ  Ｓ１００（Ｇｅｎｅｎｃｏｒ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｃ．／ＤｕＰｏｎｔから）である。
【００６４】
リアーゼ
リアーゼは、例えば、米国特許第６，１２４，１２７号明細書、国際公開第９９／２７０８３号パンフレット、国際公開第９９／０７０８４号パンフレット、国際公開第０２／０６４４２号パンフレット、国際公開第０２／０９２７４１号パンフレット、国際公開第０３／０９５６３８号パンフレットに記載されているように、バチルス属（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）、特にＢ．アガラドハエレンス（Ｂ．ａｇａｒａｄｈａｅｒｅｎｓ）もしくはＢ．リケニフォルミス（Ｂ．ｌｉｃｈｅｒｎｉｆｏｒｍｉｓ）、またはこれらのいずれかから得られる変異体に由来するペクチン酸リアーゼである。市販のペクチン酸リアーゼは、ＸＰｅｃｔ（商標）、Ｐｅｃｔａｗａｓｈ（商標）、およびＰｅｃｔａｗａｙ（商標）（Ｎｏｖｏｚｙｍｅｓ  Ａ／Ｓ）である。
【００６５】
マンナナーゼ
マンナナーゼは、ファミリー５または２６のアルカリ性マンナナーゼであってよい。これは、バチルス属（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）またはフミコラ属（Ｈｕｍｉｃｏｌａ）、特にＢ．アガラドハエレンス（Ｂ．ａｇａｒａｄｈａｅｒｅｎｓ）、Ｂ．クラウシイ（Ｂ．ｃｌａｕｓｉｉ）、Ｂ．ハロデュランス（Ｂ．ｈａｌｏｄｕｒａｎｓ）、Ｂ．リケニフォルミス（Ｂ．ｌｉｃｈｅｎｉｆｏｒｍｉｓ）、またはＨ．インソレンス（Ｈ．ｉｎｓｏｌｅｎｓ）由来の野生型であってよい。好適なマンナナーゼは、国際公開第９９／６４６１９号パンフレットに記載されている。市販のマンナナーゼは、Ｍａｎｎａｗａｙ（商標）（Ｎｏｖｏｚｙｍｅｓ  Ａ／Ｓ）である。
【００６６】
セルラーゼ
好適なセルラーゼは、細菌または真菌起源のものであってよい。化学的に修飾された突然変異体または遺伝子的に修飾された突然変異体が含まれる。好適なセルラーゼとしては、アクレモニウム属（Ａｃｒｅｍｏｎｉｕｍ）、バチルス属（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）、フザリウム属（Ｆｕｓａｒｉｕｍ）、フミコラ属（Ｈｕｍｉｃｏｌａ）、シュードモナス属（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）、チエラビア属（Ｔｈｉｅｌａｖｉａ）由来のセルラーゼ、例えば、米国特許第４，４３５，３０７号明細書、米国特許第５，６４８，２６３号明細書、米国特許第５，６９１，１７８号明細書、米国特許第５，７７６，７５７号明細書および国際公開第８９／０９２５９号パンフレットに開示されている、フザリウム・オキシスポルム（Ｆｕｓａｒｉｕｍ  ｏｘｙｓｐｏｒｕｍ）、フミコラ・インソレンス（Ｈｕｍｉｃｏｌａ  ｉｎｓｏｌｅｎｓ）、およびミセリオフトラ・テルモフィラ（Ｍｙｃｅｌｉｏｐｈｔｈｏｒａ  ｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌａ）から産生される真菌セルラーゼなどが挙げられる。
【００６７】
特に好適なセルラーゼは、色の取り扱いについて有益性を有するアルカリ性または中性セルラーゼである。このようなセルラーゼの例は、欧州特許第０４９５２５７号明細書、欧州特許第０５３１３７２号明細書、国際公開第９６／１１２６２号パンフレット、国際公開第９６／２９３９７号パンフレット、国際公開第９８／０８９４０号パンフレットに記載されているセルラーゼである。他の例は、国際公開第９４／０７９９８号パンフレット、欧州特許第０５３１３１５号明細書、米国特許第５，４５７，０４６号明細書、米国特許第５，６８６，５９３号明細書、米国特許第５，７６３，２５４号明細書、国際公開第９５／２４４７１号パンフレット、国際公開第９８／１２３０７号パンフレットおよび国際公開第９９／０１５４４号パンフレットに記載されているものなどのセルラーゼ変異体である。
【００６８】
市販のセルラーゼとしては、Ｃａｒｅｚｙｍｅ（商標）、Ｃｅｌｌｕｚｙｍｅ（商標）、Ｃｅｌｌｕｃｌｅａｎ（商標）、Ｃｅｌｌｕｃｌａｓｔ（商標）、Ｅｎｄｏｌａｓｅ（商標）、Ｒｅｎｏｚｙｍｅ（商標）、Ｗｈｉｔｅｚｙｍｅ（Ｎｏｖｏｚｙｍｅｓ  Ａ／Ｓ）；Ｃｌａｚｉｎａｓｅ（商標）、Ｐｕｒａｄａｘ、Ｐｕｒａｄａｘ  ＨＡ、およびＰｕｒａｄａｘ  ＥＧ（Ｇｅｎｅｎｃｏｒから市販）ならびにＫＡＣ−５００（Ｂ）（商標）（花王株式会社）が挙げられる。
【００６９】
ペルオキシダーゼ／オキシダーゼ
好適なペルオキシダーゼは、国際生化学・分子生物学連合（Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｕｎｉｏｎ  ｏｆ  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ａｎｄ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ）（ＩＵＢＭＢ）の命名委員会（Ｎｏｍｅｎｃｌａｔｕｒｅ  Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ）により記載されている酵素分類ＥＣ１．１１．１．７に含まれるペルオキシダーゼ、またはそれから得られる、ペルオキシダーゼ活性を呈示するいずれかの断片である。
【００７０】
好適なペルオキシダーゼとしては、植物、細菌または真菌起源のものが挙げられる。化学的に修飾された突然変異体またはタンパク質改変突然変異体が含まれる。有用なペルオキシダーゼの例としては、例えば、ウシグソヒトヨタケ（Ｃ．ｃｉｎｅｒｅａ）といったヒトヨタケ属（Ｃｏｐｒｉｎｏｐｓｉｓ）由来のペルオキシダーゼ（欧州特許第１７９，４８６号明細書）、ならびに国際公開第９３／２４６１８号パンフレット、国際公開第９５／１０６０２号パンフレットおよび国際公開第９８／１５２５７号パンフレットに記載されているものなどのその変異体が挙げられる。
【００７１】
本発明のペルオキシダーゼはまた、クロロペルオキシダーゼ、ブロモペルオキシダーゼなどのハロペルオキシダーゼ酵素、およびクロロペルオキシダーゼまたはブロモペルオキシダーゼ活性を呈示する化合物も含む。ハロペルオキシダーゼは、ハロゲン化物イオンに対するその特異性に応じて分類される。クロロペルオキシダーゼ（Ｅ．Ｃ．１．１１．１．１０）は、塩化物イオンからの次亜塩素酸塩の形成を触媒する。
【００７２】
一実施形態では、本発明のハロペルオキシダーゼは、クロロペルオキシダーゼである。好ましくは、ハロペルオキシダーゼは、バナジウムハロペルオキシダーゼ、すなわち、バナジン酸塩含有ハロペルオキシダーゼである。本発明の好ましい方法において、バナジン酸塩含有ハロペルオキシダーゼは、塩化物イオンの供給源と組み合わせる。
【００７３】
ハロペルオキシダーゼは、多種の真菌、特に、暗色線菌科（ｄｅｍａｔｉａｃｅｏｕｓ  ｈｙｐｈｏｍｙｃｅｔｅｓ）の真菌群、例えば、アルテルナリア属（Ａｌｔｅｒｎａｒｉａ）、ボトリチス属（Ｂｏｔｒｙｔｉｓ）、例えばＣ．フマゴ（Ｃ．ｆｕｍａｇｏ）などのカルダリオマイセス属（Ｃａｌｄａｒｉｏｍｙｃｅｓ）、例えばＣ．ベルクローサ（Ｃ．ｖｅｒｒｕｃｕｌｏｓａ）およびＣ．イナエクアリス（Ｃ．ｉｎａｅｑｕａｌｉｓ）などのクルブラリア属（Ｃｕｒｖｕｌａｒｉａ）、ドレクスレラ属（Ｄｒｅｃｈｓｌｅｒａ）、ならびにウロクラジウム属（Ｕｌｏｃｌａｄｉｕｍ）などから単離されている。
【００７４】
ハロペルオキシダーゼはまた、シュードモナス属（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）、例えば、Ｐ．ピロシニア（Ｐ．ｐｙｒｒｏｃｉｎｉａ）、およびストレプトマイセス属（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ）、例えば、Ｓ．オーレオファシエンス（Ｓ．ａｕｒｅｏｆａｃｉｅｎｓ）などの細菌からも単離されている。
【００７５】
好ましい実施形態では、ハロペルオキシダーゼは、クルブラリア属（Ｃｕｒｖｕｌａｒｉａ  ｓｐ．）、特に、クルブラリア・イナエクアリス（Ｃｕｒｖｕｌａｒｉａ  ｉｎａｅｑｕａｌｉｓ）もしくはクルブラリア・ベルクローサ（Ｃｕｒｖｕｌａｒｉａ  ｖｅｒｒｕｃｕｌｏｓａ）、例えば、国際公開第９５／２７０４６号パンフレットに記載のＣ．イナエクアリス（Ｃ．ｉｎａｅｑｕａｌｉｓ）ＣＢＳ１０２．４２；または国際公開第９７／０４１０２号パンフレットに記載のＣ．ベルクローサ（Ｃ．ｖｅｒｒｕｃｕｌｏｓａ）ＣＢＳ１４７．６３もしくはＣ．ベルクローサ（Ｃ．ｖｅｒｒｕｃｕｌｏｓａ）ＣＢＳ４４４．７０；国際公開第０１／７９４５８号パンフレットに記載のデンドリフィエラ・サリナ（Ｄｅｎｄｒｙｐｈｉｅｌｌａ  ｓａｌｉｎａ）；国際公開第０１／７９４５９号パンフレットに記載のドレクスレラ・ハルトレビイ（Ｄｒｅｃｈｓｌｅｒａ  ｈａｒｔｌｅｂｉｉ）；国際公開第０１／７９４６０号パンフレットに記載のジェニクロスポリウム属（Ｇｅｎｉｃｕｌｏｓｐｏｒｉｕｍ  ｓｐ．）；または国際公開第０１／７９４６１号パンフレットに記載のファエオトリココニス・クロタラリエ（Ｐｈａｅｏｔｒｉｃｈｏｃｏｎｉｓ  ｃｒｏｔａｌａｒｉｅ）から得ることができる。
【００７６】
好適なオキシダーゼとしては、特に、酵素分類ＥＣ１．１０．３．２に含まれるいずれかのラッカーゼ酵素、またはそれから得られる、ラッカーゼ活性を呈示するいずれかの断片、または類似の活性を呈示する化合物、例えば、カテコールオキシダーゼ（ＥＣ１．１０．３．１）、ｏ−アミノフェノールオキシダーゼ（ＥＣ１．１０．３．４）、またはビリルビンオキシダーゼ（ＥＣ１．３．３．５）が挙げられる。
【００７７】
好ましいラッカーゼ酵素は、微生物由来の酵素である。酵素は、植物、細菌または真菌（糸状真菌および酵母を含む）から得ることができる。
【００７８】
真菌由来の好適な例としては、以下の株：アスペルギルス属（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ）、ボトリチス属（Ｂｏｔｒｙｔｉｓ）、コリビア属（Ｃｏｌｌｙｂｉａ）、ヒトヨタケ属（Ｃｏｐｒｉｎｏｐｓｉｓ）、例えば、ウシグソヒトヨタケ（Ｃ．ｃｉｎｅｒｅａ）、ササクレヒトヨタケ（Ｃ．ｃｏｍａｔｕｓ）、ヒメヒトヨタケ（Ｃ．ｆｒｉｅｓｉｉ）、およびヒメヒガサヒトヨタケ（Ｃ．ｐｌｉｃａｔｉｌｉｓ）、コリオルス属（Ｃｏｒｉｏｌｕｓ）、例えば、Ｃ．ヒルスツス（Ｃ．ｈｉｒｓｕｔｕｓ）（ＪＰ２２３８８８５号明細書）、ツリガネタケ属（Ｆｏｍｅｓ）、レンチヌス属（Ｌｅｎｔｉｎｕｓ）、ミセリオフトラ属（Ｍｙｃｅｌｉｏｐｈｔｈｏｒａ）、例えば、Ｍ．サーモフィラ（Ｍ．ｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌａ）、ニューロスポラ属（Ｎｅｕｒｏｓｐｏｒａ）、例えば、Ｎ．クラッサ（Ｎ．ｃｒａｓｓａ）、ヒカゲタケ属（Ｐａｎａｅｏｌｕｓ）、例えば、ワライタケ（Ｐ．ｐａｐｉｌｉｏｎａｃｅｕｓ）、フレビア属（Ｐｈｌｅｂｉａ）、例えば、Ｐ．ラジアータ（Ｐ．ｒａｄｉａｔａ）（国際公開第９２／０１０４６号パンフレット）、ヒラタケ属（Ｐｌｅｕｒｏｔｕｓ）、ポドスポラ属（Ｐｏｄｏｓｐｏｒａ）、ポリポルス属（Ｐｏｌｙｐｏｒｕｓ）、例えばＰ．ピンシツス（Ｐ．ｐｉｎｓｉｔｕｓ）、ナヨタケ属（Ｐｓａｔｈｙｒｅｌｌａ）、例えば、イタチタケ（Ｐ．ｃｏｎｄｅｌｌｅａｎａ）、リゾクトニア属（Ｒｈｉｚｏｃｔｏｎｉａ）、例えば、Ｒ．ソラニ（Ｒ．ｓｏｌａｎｉ）、シタリジウム属（Ｓｃｈｙｔａｌｉｄｉｕｍ）、例えば、Ｓ．サーモフィルム（Ｓ．ｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｍ）、またはカワラタケ属（Ｔｒａｍｅｔｅｓ）、例えば、フルイカワラタケ（Ｔ．ｖｉｌｌｏｓａ）およびカワラタケ（Ｔ．ｖｅｒｓｉｃｏｌｏｒ）から得られるラッカーゼが挙げられる。
【００７９】
細菌由来の好適な例としては、バチルス属（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）の株から得られるラッカーゼが挙げられる。
【００８０】
ヒトヨタケ属（Ｃｏｐｒｉｎｏｐｓｉｓ）またはミセリオフトラ属（Ｍｙｃｅｌｉｏｐｈｔｈｏｒａ）由来のラッカーゼ；特に、国際公開第９７／０８３２５号パンフレットに開示のウシグソヒトヨタケ（Ｃｏｐｒｉｎｏｐｓｉｓ  ｃｉｎｅｒｅａ）由来のラッカーゼ；または国際公開第９５／３３８３６号パンフレットに開示のミセリオフトラ・サーモフィラ（Ｍｙｃｅｌｉｏｐｈｔｈｏｒａ  ｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌａ）由来のラッカーゼが好ましい。
【００８１】
ペルヒドロラーゼ
適切なペルヒドロラーゼは、過酸素源（例えば過酸化水素）の存在下で、カルボン酸エステル（アシル）基材からの過酸の生成をもたらす過加水分解反応を触媒できる。多数の酵素がこの反応を低レベルで行う一方で、ペルヒドロラーゼは高い過加水分解：加水分解比を示し、それは頻繁に１を超える。適切なペルヒドロラーゼは、植物、細菌または真菌起源であってもよい。化学修飾またはタンパク質改変変異体も挙げられる。
【００８２】
有用なペルヒドロラーゼの例としては、天然起源マイコバクテリウム属（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ）ペルヒドロラーゼ酵素、またはその変種が挙げられる。例示的な酵素は、マイコバクテリウム・スメグマチス（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｓｍｅｇｍａｔｉｓ）に由来する。このような酵素、その酵素的特性、その構造、およびその変種は、国際公開第２００５／０５６７８２号パンフレット、国際公開第２００８／０６３４００号パンフレット、米国特許出願公開第２００８／０１４５３５３号明細書、および米国特許出願公開第２００７／０１６７３４４号明細書に記載される。
【００８３】
水濾過膜
水または廃水処理プロセスにおいて多様な膜タイプおよび構成を使用することができる。膜構成のタイプとしては、毛細管、管状、中空ファイバー、マルチチューブ、板枠式／フラットシート、プリーツ状カートリッジフィルター、渦巻き形、およびセラミックディスクをはじめとするセラミックなどが挙げられる。膜は、例えば、塩素化ポリエチレン、ポリアクリロニトリル、ポリスルホン、ポリエーテルスルホン、ポリビニルアルコール、酢酸セルロース、再生セルロース、ポリフッ化ビニリデン、ポリエチルスルホン、ポリエチレン、ポリプロピレン、およびセラミック材料などの１つまたは複数種の材料から製造することができる。用途に応じて変わり得る膜の他の特徴には、例えば、膜孔サイズがある。膜孔のサイズは、水もしくは廃水から除去しようとする粒子または不純物のサイズに応じて増減し得る。本発明に従う膜のタイプは、限外濾過、精密濾過、およびナノ濾過に使用されるものを含む。
【００８４】
膜バイオリアクターシステム
膜バイオリアクター（ＭＢＲ）システムは、典型的に、２つの基本的な工程：生分解と膜分離を組み合わせて、１つの工程とし、この工程で、懸濁固体と、生分解を担う微生物が膜濾過ユニットによって処理水から分離される。例えば、Ｗａｔｅｒ  Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  Ｍｅｍｂｒａｎｅ  Ｐｒｏｃｅｓｓｅｓ，ＭｃＧｒａｗ−Ｈｉｌｌ，１９９６，ｐ．１７．２を参照されたい。全バイオマスはシステム内に閉じ込められ、反応器内の微生物の滞留時間（汚泥齢）の制御と排水の消毒の両方が達成される。
【００８５】
典型的なＭＢＲユニットでは、流入廃水が曝気槽内にポンピングまたは重力供給され、そこで、廃水中の有機材料を生分解するバイオマスと廃水を接触させる。ブロワーなどの送風手段がバイオマスに酸素を供給する。こうして得られた混合液は曝気槽から膜モジュール内にポンピングまたは重力供給され、そこで、圧力下の膜を介して機械的もしくは重力により濾過されるか、または低真空下で膜を介して濾過される。一部のシステムでは、曝気槽と膜タンクは同じタンクである。排水はシステムから排出されるが、濃縮された混合液は、バイオリアクター内に戻される。一定の汚泥齢を維持するために、余剰汚泥はポンピングにより排出され、逆洗洗浄、化学洗浄、空気洗浄、またはこれらの機構の任意の組み合わせによって膜は定期的に洗浄される。
【００８６】
ＭＢＲシステムは多構成を有する。２つの主要なＭＢＲプロセス構成は、浸水／浸漬および副流を含む。さらに、ポンピングおよびエアリフトを含む、２つの主要な油圧操作機構もある。これらの構成およびバルク液体移送モードは、一般に、通常のバイオマスリジェクションＭＢＲと呼ばれている。他の構成としては、処理水からバイオマスを分離する以外の目的のために膜を使用する抽出および拡散プロセスを含む。これらのプロセス構成は全て、上の「膜」のセクションに記載したものなどの膜を含む１つまたは複数の膜ユニットを含む。
【００８７】
一実施形態では、膜は、膜バイオリアクター内に存在する。別の実施形態では、廃水処理プロセスは、膜バイオリアクター内で行われ、バイオリアクター内では、典型的に、膜フラットシートカセットユニット、または中空糸ユニット自体が浸漬される。
【００８８】
一実施形態では、廃水は、膜バイオリアクターに入る前に、前処理される。前処理は、廃水源、前処理施設で、またはＭＢＲシステム全体の一環として実施することができる。このような前処理としては、粗大固形物除去を達成するためのバースクリーン、沈砂池、または回転ドラムスクリーンを挙げることができる。その他の前処理は、有害汚染物質などの物質、油もしくは燃料、またはその他の有毒物質の除去を含み得る。
【００８９】
水処理プロセス
１つまたは複数の水処理プロセスが本発明によって考慮される。こうした水処理プロセスとして、限定されないが、逆浸透、水脱塩および飲料水精製、ならびに廃水処理プロセスが挙げられる。本発明に従う水または廃水は、し尿、下水だめ漏出物、浄化槽排出物、下水処理場排出物、家庭雑排水もしくは汚水などの洗浄水、集水された雨水、地下水、余剰製造液、海水、河川水、廃液、高速道路排水、雨水排水、水洗便所排水、電子機器、輸送車両、製薬、塗料、潤滑剤、プラスチック製品、原油およびガス、ならびにそれらから得られる精製品、飼料、食品および飲料、繊維、不織布、紙およびパルプ、加工穀物および植物油、化学薬品、タンパク質（例えば、酵素）などの製品を製造する産業からのプロセス水、産業廃棄物、冷却水もしくは工業用水などの工場敷地廃水または排水、ならびに農業廃水もしくは排水を含むあらゆる供給源からのものであってよい。
【００９０】
液体洗浄組成物
本発明に従い使用される液体洗浄組成物は、固体（または気体）ではない物理形態を有する。これは、注加性液体、注加性ゲルまたは非注加性ゲルであってもよい。これは、等方性または構造化のいずれであってもよいが、好ましくは等方性である。
【００９１】
液体洗浄組成物は、水性であってもよく、典型的に、最大７０％の水、最大５０％の水、最大４０％の水、最大３０％の水、または最大２０％の水など、重量基準で少なくとも２０％であり最大で９５％の水を含有する。制限なしに、アルカノール、アミン、ジオール、エーテル、およびポリオールをはじめとするその他の各種液体が、水性液体組成物に包含されてもよい。水性液体組成物は、０〜３０％の有機溶剤を含有してもよい。液体組成物は非水性でさえあってもよく、その中では、含水量が１０％未満、好ましくは５％未満である。
【００９２】
洗浄組成物は、単位用量製品の形態を取ってもよい。単位用量製品は、非再利用容器内の単回用量の包装である。これは洗濯用および食器洗い用洗剤で、使われることが多くなっている。洗剤単位用量製品は、単回洗浄で使用される量の洗剤の包装（例えば水溶性膜からできているパウチ内の）である。
【００９３】
パウチは、例えば水との接触前にパウチから組成物を放出させることなく、組成物を保持するのに適した、任意の形態、形状、および材質であり得る。パウチは、内部容量を封入する水溶性フィルムからできている。前記内部容量は、パウチのコンパートメントに分割され得る。好ましいフィルムは、膜またはシートに成形される高分子材料、好ましくはポリマーである。好ましいポリマー、共重合体またはそれらの誘導体は、選択されたポリアクリレート、および水溶性アクリレート共重合体、メチルセルロース、カルボキシメチルセルロース、ナトリウムデキストリン、エチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、マルトデキストリン、ポリメタクリレート、最も好ましくはポリビニルアルコール共重合体、およびヒドロキシプロピルメチルセルロース（ＨＰＭＣ）である。好ましくは、例えばＰＶＡなどの膜内のポリマーのレベルは、少なくとも約６０％である。好ましい平均分子量は、典型的に、約２０，０００〜約１５０，０００である。フィルムはまた、ポリラクチドおよびポリビニルアルコールなどの加水分解性および水溶性ポリマーの混合物（製品番号Ｍ８６３０の下に知られており、Ｇａｒｙ，Ｉｎｄ．，ＵＳのＣｈｒｉｓ  Ｃｒａｆｔ  Ｉｎ．Ｐｒｏｄ．によって販売される）に加えて、グリセロール、エチレングリセロール、プロピレングリコール、ソルビトールのような可塑剤、およびそれらの混合物を含む、混合組成物であり得る。パウチは、水溶性膜によって離隔された、固体洗濯洗浄組成物または部分的成分および／または液体洗浄組成物または部分的成分を含み得る。液体成分のためのコンパートメントは、固体を含有するコンパートメントと、組成が異なり得る（例えば、米国特許出願公開第２００９／００１１９７０号明細書を参照されたい）。
【００９４】
洗浄成分の選択は、洗浄される膜のタイプ、汚染のタイプおよび／または程度、洗浄温度、および洗浄製品の配合への考慮を含んでもよい。下で言及される成分は、特定の機能性に従った一般的見出しによって分類されるが、当業者には理解されるように、成分は追加的な機能性を含んでもよいので、これは制限として解釈すべきでない。
【００９５】
追加的成分の選択は、当業者の技術範囲内であり、下記の例示的な非限定的成分をはじめとする従来の成分が挙げられる。
【００９６】
界面活性剤
洗浄組成物は、アニオン性および／またはカチオン性および／または非イオン性および／または半極性および／または両性イオン性、またはその混合物であってもよい、１つまたは複数の界面活性剤を含んでもよい。特定の実施形態では、洗浄組成物は、１つまたは複数の非イオン性界面活性剤と、１つまたは複数のアニオン性界面活性剤との混合物を含む。界面活性剤は、典型的に、重量基準で約１％〜約４０％、または約３％〜約２０％、または約３％〜約１０％などの、約０．１％〜６０％のレベルで存在する。界面活性剤は、所望の浄化用途に基づいて選択され、当該技術分野で公知のあらゆる従来の界面活性剤が挙げられる。洗浄組成物で使用するために当該技術分野で公知の任意の界面活性剤を利用してもよい。
【００９７】
その中に含まれる場合、洗浄組成物は、通常は、重量基準で約５％〜約１５％、または約２０％〜約２５％をはじめとする、約５％〜約３０％などの、約１％〜約４０％のアニオン性界面活性剤を含有するであろう。アニオン性界面活性剤の非限定的例としては、硫酸塩およびスルホン酸塩、特に、直鎖アルキルベンゼンスルホン酸塩（ＬＡＳ）、ＬＡＳ異性体、分枝アルキルベンゼンスルホン酸塩（ＢＡＢＳ）、フェニルアルカンスルホン酸塩、α−オレフィンスルホン酸塩（ＡＯＳ）、オレフィンスルホン酸塩、アルケンスルホン酸塩、アルカン−２，３−ジイルビス（硫酸塩）、ヒドロキシアルカンスルホン酸塩およびジスルホン酸塩、ドデシル硫酸ナトリウム（ＳＤＳ）などの硫酸アルキル（ＡＳ）、脂肪アルコール硫酸塩（ＦＡＳ）、第一級アルコール硫酸塩（ＰＡＳ）、アルコールエーテル硫酸塩（ＡＥＳまたはＡＥＯＳまたはＦＥＳ；アルコールエトキシ硫酸塩または脂肪アルコールエーテル硫酸塩としてもまた知られている）、第二級アルカンスルホン酸塩（ＳＡＳ）、パラフィンスルホン酸塩（ＰＳ）、エステルスルホン酸塩、スルホン化脂肪酸グリセロールエステル、メチルエステルスルホネート（ＭＥＳ）をはじめとするα−スルホ脂肪酸メチルエステル（α−ＳＦＭｅまたはＳＥＳ）、アルキルまたはアルケニルコハク酸、ドデセニル／テトラデセニルコハク酸（ＤＴＳＡ）、アミノ酸の脂肪酸誘導体、スルホコハク酸のジエステルおよびモノエステルまたは石鹸、およびそれらの組み合わせが挙げられる。
【００９８】
その中に含まれる場合、洗浄組成物は、通常は、重量基準で約０．１％〜約１０％のカチオン性界面活性剤を含有するであろう。カチオン性界面活性剤の非限定的例としては、アルキルジメチルエタノールアミンクアット（ＡＤＭＥＡＱ）、臭化セチルトリメチルアンモニウム（ＣＴＡＢ）、塩化ジメチルジステアリルアンモニウム（ＤＳＤＭＡＣ）、およびアルキルベンジルジメチルアンモニウム、アルキル第四級アンモニウム化合物、アルコキシル化第四級アンモニウム（ＡＱＡ）化合物、およびそれらの組み合わせが挙げられる。
【００９９】
その中に含まれる場合、洗浄組成物は、通常は、例えば、重量基準で約０．５％〜約３０％、特に約１％〜約２０％、約３％〜約１０％、約３％〜約５％、または約８％〜約１２％などの、約０．２％〜約４０％の非イオン性界面活性剤を含有する。非イオン性界面活性剤の非限定的例としては、アルコールエトキシレート（ＡＥまたはＡＥＯ）、プロポキシル酸アルコール、プロポキシル化脂肪アルコール（ＰＦＡ）、エトキシル化および／またはプロポキシル化脂肪酸アルキルエステルなどのアルコキシル化脂肪酸アルキルエステル、アルキルフェノールエトキシレート（ＡＰＥ）、ノニルフェノールエトキシレート（ＮＰＥ）、アルキルポリグリコシド（ＡＰＧ）、アルコキシル化アミン、脂肪酸モノエタノールアミド（ＦＡＭ）、脂肪酸ジエタノールアミド（ＦＡＤＡ）、エトキシル化脂肪酸モノエタノールアミド（ＥＦＡＭ）、プロポキシル化脂肪酸モノエタノールアミド（ＰＦＡＭ）、ポリヒドロキシアルキル脂肪酸アミド、またはグルコサミンのＮ−アシルＮ−アルキル誘導体（グルクアミド、ＧＡ、または脂肪酸グルクアミド、ＦＡＧＡ）、ならびに商品名ＳＰＡＮおよびＴＷＥＥＮの下に入手できる製品、およびそれらの組み合わせが挙げられる。
【０１００】
その中に含まれる場合、洗浄組成物は、通常は、重量基準で約０．１％〜約２０％の半極性界面活性剤を含有する。半極性界面活性剤の非限定的例としては、アルキルジメチルアミンオキシドとＮ−（ココアルキル）−Ｎ，Ｎ−ジメチルアミンオキシドとＮ−（タローアルキル）−Ｎ，Ｎ−ビス（２−ヒドロキシエチル）アミンオキシドなどのアミン酸化物（ＡＯ）、脂肪酸アルカノールアミドおよびエトキシル化脂肪酸アルカノールアミド、およびそれらの組み合わせが挙げられる。
【０１０１】
その中に含まれる場合、洗浄組成物は、通常は、重量基準で約０．１％〜約１０％の両性イオン性界面活性剤を含有する。両性イオン性界面活性剤の非限定的例としては、ベタイン、アルキルジメチルベタイン、スルホベタイン、およびそれらの組み合わせが挙げられる。
【０１０２】
使用方法
上のパラグラフに記載したように、本発明は、ＤＮａｓｅを含む液体洗浄組成物と膜を接触させることによって水濾過膜を洗浄する方法を提供する。好ましくは、膜を介した水流量（フラックス）が改善される。液体洗浄組成物は、上のパラグラフに記載した成分をさらに含んでもよい。
【０１０３】
一実施形態では、洗浄プロセスは、定置洗浄（ＣＩＰ）または分解洗浄（ＣＯＰ）である。
【０１０４】
一実施形態では、水濾過膜のＤＮａｓｅ処理は、膜をバイオサイド組成物と接触させるステップの前または後に行う。
【０１０５】
一実施形態では、水濾過膜はバイオフィルムを含む。好ましくは、バイオフィルムは、アシネトバクター属（Ａｃｉｎｅｔｏｂａｃｔｅｒ）、バチルス属（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）、コマモナス属（Ｃｏｍａｍｏｎａｓ）、エシェリキア属（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ）、シュードモナス属（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）、およびスフィンゴモナス属（Ｓｐｈｉｎｇｏｍｏｎａｓ）種からなる群から選択される１つまたは複数の細菌を含む。より好ましくは、バイオフィルムは、以下：アシネトバクター・カルコアセチカス（Ａｃｉｎｅｔｏｂａｃｔｅｒ  ｃａｌｃｏａｃｅｔｉｃｕｓ）、バチルス・アミロリケファシエンス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ａｍｙｌｏｌｉｑｕｅｆａｃｉｅｎｓ）ＳＣ１００、バチルス・アミロリケファシエンス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ａｍｙｌｏｌｉｑｕｅｆａｃｉｅｎｓ）ＳＣ１６８、コマモナス・デニトリフィカンス（Ｃｏｍａｍｏｎａｓ  ｄｅｎｉｔｒｉｆｉｃａｎｓ）、大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ）Ｋ−１２、緑膿菌（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）、およびスフィンゴモナス・ミューコシシマ（Ｓｐｈｉｎｇｏｍｏｎａｓ  ｍｕｃｏｓｉｓｓｉｍａ）からなる群から選択される１つまたは複数の細菌を含み；好ましくは、細菌は、緑膿菌（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）である。
【０１０６】
別の実施形態では、洗浄組成物のｐＨは、６〜９であり；好ましくは、ｐＨはほぼ中性である。
【０１０７】
一実施形態では、３０〜１００℃の温度、好ましくは５０〜８０℃の温度で洗浄組成物と膜を接触させる。
【０１０８】
また別の実施形態では、プロテアーゼ、リパーゼ、クチナーゼ、アミラーゼ、カルボヒドラーゼ、セルラーゼ、ペクチナーゼ、ペクチン酸リアーゼ、マンナナーゼ、アラビナーゼ、ガラクタナーゼ、キシラナーゼ、ペルヒドロラーゼ、およびオキシドレダクターゼからなる群から選択される１つまたは複数の非ＤＮａｓｅ酵素と膜を同時に、または個別に接触させ；好ましくは、非ＤＮａｓｅ酵素は、プロテアーゼである。
【０１０９】
一実施形態では、洗浄組成物で使用されるＤＮａｓｅは、アスペルギルス・オリゼー（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｏｒｙｚａｅ）ＤＮａｓｅまたはその誘導体である。好ましくは、ＤＮａｓｅは、配列番号１に示されるアミノ酸配列に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むか、またはそれからなる、ＤＮａｓｅ活性を有するポリペプチドである。より好ましくは、ＤＮａｓｅは、配列番号１に示されるアミノ酸配列を含むか、またはそれからなる、ＤＮａｓｅ活性を有するポリペプチドである。
【０１１０】
別の実施形態では、ＤＮａｓｅは、バチルス・リケニフォルミス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｌｉｃｈｅｎｉｆｏｒｍｉｓ）ＤＮａｓｅまたはその誘導体である。好ましくは、ＤＮａｓｅは、配列番号２に示されるアミノ酸配列に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むか、またはそれからなる、ＤＮａｓｅ活性を有するポリペプチドである。
【０１１１】
アッセイＩ：ＤＮａｓｅ活性
ＤＮａｓｅ活性は、メチルグリーンを用いたＤＮａｓｅテスト寒天（ＤＮａｓｅ  Ｔｅｓｔ  Ａｇａｒ  ｗｉｔｈ  Ｍｅｔｈｙｌ  Ｇｒｅｅｎ）（ＢＤ，Ｆｒａｎｋｌｉｎ  Ｌａｋｅｓ，ＮＪ，ＵＳＡ）で決定したが、これは、供給業者のマニュアルに従って調製した。手短には、２１ｇのＤＮａｓｅテスト寒天を５００ｍｌの水に溶解させた後、１２１℃で１５分間オートクレーブ処理した。オートクレーブ処理した寒天をウォーターバス中で４８℃に温度調節した後、２０ｍｌの寒天をペトリ皿に注ぎ込み、室温でのインキュベーションｏ／ｎにより凝固させた。凝固した寒天プレート上に、５μｌの酵素溶液を添加し、班点状の酵素溶液周辺の無色領域としてＤＮａｓｅ活性を観察した。
【実施例】
【０１１２】
バッファーおよび基質として使用した化学薬品は、少なくとも試薬グレードの市販の製品であった。実施例１で使用されるＤＮａｓｅは、アスペルギルス・オリゼー（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｏｒｙｚａｅ）から取得したが、これは、配列番号１に示されるアミノ酸配列の成熟型ポリペプチドである。
【０１１３】
実施例１
ＤＮａｓｅによる水濾過膜の処理
細菌および培地
廃水および水処理施設に一般に存在する７つの微生物を用いて、本試験のための複数種バイオフィルムを作出した。下記の微生物を選択した。
緑膿菌（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）（ＡＴＣＣ１９４２９）
アシネトバクター・カルコアセチカス（Ａｃｉｎｅｔｏｂａｃｔｅｒ  ｃａｌｃｏａｃｅｔｉｃｕｓ）（ＡＴＣＣ２３０５５）
コマモナス・デニトリフィカンス（Ｃｏｍａｍｏｎａｓ  ｄｅｎｉｔｒｉｆｉｃａｎｓ）（ＡＴＣＣ７００９３７）
大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ）Ｋ−１２（ＡＴＣＣ１０７９８）
スフィンゴモナス・ミューコシシマ（Ｓｐｈｉｎｇｏｍｏｎａｓ  ｍｕｃｏｓｉｓｓｉｍａ）（ＮＲＲＬ  Ｂ−５９４５４）
バチルス・アミロリケファシエンス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ａｍｙｌｏｌｉｑｕｅｆａｃｉｅｎｓ）ＳＣ１００
バチルス・アミロリケファシエンス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ａｍｙｌｏｌｉｑｕｅｆａｃｉｅｎｓ）ＳＣ１６８
【０１１４】
細菌を３０℃のルリア寒天ブロス（Ｌｕｒｉａ  Ｂｒｏｔｈ）（ＬＢ；１５．５ｇ／Ｌ；Ｂｅｃｋｔｏｎ  Ｄｉｃｋｅｎｓｏｎ，Ｆｒａｎｋｌｉｎ  Ｌａｋｅｓ，ＮＪ）において、２００ＲＰＭで一晩培養し、バイオフィルムアッセイを実施した。バイオフィルムアッセイは全てＬＢを用いて実施した。
【０１１５】
フィルタプレートフラックスアッセイ較正曲線
フラックス変化を評価するために、指示染料であるブリリアントグリーン（Ｃｌａｒｉａｎｔ  Ｃｏｒｐ，Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ）を用いて、ＥＭＤ  Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ  ＭｕｌｔｉＳｃｒｅｅｎＨＴＳ  ９６−Ｗｅｌｌ  Ｆｉｌｔｅｒ  Ｐｌａｔｅの膜を通過することができる液体の量を測定した。蒸留水中濃度０．０５％（ｗｔ／ｖｏｌ）のブリリアントグリーンについて較正曲線を作成した。透明な平底を有するＣｏｓｔａｒ（登録商標）９６−ウェルブラックアッセイプレートに１０〜２４０μＬの量の０．０５％ブリリアントグリーン染料を投入した。これらの量のシリーズを３回反復して実施し、６１０ｎｍでの吸光度でＢｉｏｔｅｋ  Ｓｙｎｅｒｇｙ  Ｈ４  Ｈｙｂｒｉｄ  Ｒｅａｄｅｒ  Ｋｉｎｅｔｉｃ  Ｐｌａｔｅ  Ｒｅａｄｅｒ（ＫＰＲ）により測定した。対応する量の各々からの吸光度読取り値に基づいて、吸光度読取り値に対応する量に対して吸光度をプロットすることにより、標準曲線をエクセルで作成した。この標準曲線によって、一次方程式が得られ、これを用いて、フィルタプレートの膜を通過することができる液体の量を評価した。
【０１１６】
９６ウェルフィルタプレートフラックスアッセイ
培養物を２００ＲＰＭで振盪しながら、３０℃のＬＢ中で個別に一晩増殖させた。Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  Ｓｐｅｃｔｒｏｎｉｃ  ２０Ｄ＋分光光度計を用いて、６００ｎｍでの光学密度により培養物増殖を測定した。培養物を各々０．５のＯＤ６００まで希釈した。希釈した培養物を個別のチューブ内に等量１ｍＬで一緒に添加し、穏やかにボルテックスした。ＥＭＤ  Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ  ＭｕｌｔｉＳｃｒｅｅｎＨＴＳ  ９６−Ｗｅｌｌ  Ｆｉｌｔｅｒ  Ｐｌａｔｅに混合培養物をロードした。マルチチャンネルピペットで、混合培養物の１００μＬアリコートをカラム１〜４および９〜１２に分配した。カラム５〜８には、ＬＢ培地対照を１００μＬアリコートずつ添加した。プレートを設置した後、「ブレス−イージー（ｂｒｅａｔｈｅ−ｅａｓｙ）」フィルムをプレートに取り付けた。プレートが乾いてしまわないことを確実にするために、湿潤ＷＹＰＡＬＬタオルと一緒に、Ｔｕｐｐｅｒｗａｒｅ容器内部にプレートをテープで貼り付けて、９９％相対湿度を維持した。Ｔｕｐｐｅｒｗａｒｅを３０℃で、７日間２００ＲＰＭのシェーカ上に配置した。
【０１１７】
９６ウェルフィルタプレートの７日のインキュベーション後、ＢＳＬ  ＩＩフード内の「ブレス−イージー」フィルムを取り外した。ＷＹＰＡＬＬタオル上でプレートを裏返し、ウェル中の液体の大部分が除去されるようにした。各ウェルを２００μＬのリン酸バッファーで洗浄した。プレートを直ちに裏返し、バッファーをプレートのウェルから除去した。液体全部がウェルから除去されたことを確実にするために、裏返したプレートをタオルの上で軽く叩いた。
【０１１８】
ここから、以下の経路を使用して、生物汚損膜に対するＤＮａｓｅ処理の効果を決定した。
【０１１９】
温度の影響
処理ウェルをセミランダムに選択して、限外濾過ＤＮａｓｅサンプルを試験プレートにおいて滅菌水中１ｐｐｍの最終濃度まで希釈した。ＤＮａｓｅ処理を施していないウェルには滅菌水を添加した。２つのプレートをそれぞれ室温（２２℃）および最適温度（６０℃）で１時間インキュベートした。インキュベーション後、プレートを裏返し、液体をウェルから除去した。プレートをリン酸バッファーでもう１回すすいだ後、液体を除去した。
【０１２０】
酵素濃度の影響
処理ウェルをセミランダムに選択して、限外濾過ＤＮａｓｅサンプルを２つの個別の平板培養プレートにおいてそれぞれ滅菌水中０．１ｐｐｍおよび１ｐｐｍの最終濃度まで希釈した。ＤＮａｓｅ処理を施していないウェルには滅菌水を添加した。２つのプレートをそれぞれ室温（２２℃）で２０分間インキュベートした。インキュベーション後、プレートを裏返し、液体をウェルから除去した。プレートをリン酸バッファーでもう１回すすいだ後、液体を除去した。
【０１２１】
時間の影響
処理ウェルをセミランダムに選択して、限外濾過ＤＮａｓｅサンプルを試験プレートにおいて滅菌水中１ｐｐｍの最終濃度まで希釈した。ＤＮａｓｅ処理を施していないウェルには滅菌水を添加した。５つのプレートを室温（２２℃）でそれぞれ０、５、１０、２０および６０分間インキュベートした。インキュベーション後、プレートを裏返し、液体をウェルから除去した。プレートをリン酸バッファーで再度すすいだ後、液体を除去した。
【０１２２】
プレートの各々をリン酸バッファーですすいでから、０．０５％ブリリアントグリーン指示染料の２００μＬサンプルを各ウェルに添加した。透明な平底を有するＣｏｓｔａｒ（登録商標）９６ウェルブラック上にフィルタプレートを配置し、回収プレートとして使用した。この組み合わせを、ブランクカウンターバランスと一緒にＥｐｐｅｎｄｏｒｆ  Ｃｅｎｔｒｉｆｕｇｅ  ５８１０内に配置した。室温（２２℃）で、遠心機を１５０ｒｃｆに１分間設定した。遠心分離後、回収プレートを遠心機から取り出し、それぞれのウェルの各々に膜を通過して入った指示染料の量を、Ｂｉｏｔｅｋ  Ｓｙｎｅｒｇｙ  Ｈ４  Ｈｙｂｒｉｄ  Ｒｅａｄｅｒ  Ｋｉｎｅｔｉｃ  Ｐｌａｔｅ  Ｒｅａｄｅｒ（ＫＰＲ）により吸光度６１０ｎｍで測定した。較正曲線（既述）から得られた方程式を用いて、回収プレートの各ウェルから量を算出することができた。フラックスパーセンテージは、処理ウェルをその対応する非汚損対照で割ることによって計算した。ＤＮａｓｅで処理した膜と処理していない膜とのフラックス比較を示すために、非処理汚損ウェルについてもこれを実施した。
【０１２３】
ＤＮａｓｅで前処理した９６ウェルフィルタプレートフラックスアッセイ
既述した７つの微生物を３０℃のＬＢ中で、２００ＲＰＭで振盪しながら個別に一晩増殖させた。Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  Ｓｐｅｃｔｒｏｎｉｃ  ２０Ｄ＋分光光度計を用いて、６００ｎｍでの光学密度により培養物増殖を測定した。各培養物を各々０．５のＯＤ６００まで希釈した。希釈した培養物を個別のチューブ内に等量１ｍＬで一緒に添加し、穏やかにボルテックスした。ＥＭＤ  Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ  ＭｕｌｔｉＳｃｒｅｅｎＨＴＳ  ９６−Ｗｅｌｌ  Ｆｉｌｔｅｒ  Ｐｌａｔｅの選択ウェル中に混合培養物、ならびに３つの種（アスペルギルス・オリゼー（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｏｒｙｚａｅ）、バチルス・リケニフォルミス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｌｉｃｈｅｎｉｆｏｒｍｉｓ）および枯草菌（Ｂ．ｓｕｂｔｉｌｉｓ））の限外濾過ＤＮａｓｅをロードした。処理ウェルをランダムに選択し、ＤＮａｓｅ処理を施していないウェルには滅菌水を添加した。プレートを設置してから、「ブレス−イージー（ｂｒｅａｔｈｅ−ｅａｓｙ）」フィルムをプレートに取り付けた。プレートが乾燥しないことを確実にするために、湿潤ＷＹＰＡＬＬタオルと一緒にプレートをＴｕｐｐｅｒｗａｒｅ容器内部にテープで貼り付けて、９９％相対湿度を維持した。Ｔｕｐｐｅｒｗａｒｅを３０℃で、７日間２００ＲＰＭのシェーカ上に配置した。
【０１２４】
９６ウェルフィルタプレートの７日のインキュベーション後、ＢＳＬ  ＩＩフード内の「ブレス−イージー」フィルムを取り外した。ＷＹＰＡＬＬタオル上でプレートを裏返し、ウェル中の液体全部が除去されるようにした。ウェルを２００μＬのリン酸バッファーで洗浄した。プレートを直ちに裏返し、バッファーをプレートのウェルから除去した。液体全部がウェルから除去されたことを確実にするために、裏返したプレートをタオルの上で軽く叩いた。
【０１２５】
フィルタプレートをリン酸バッファーですすいでから、２００μＬの０．０５％ブリリアントグリーン指示染料を各ウェルに添加した。回収プレートとして使用される透明な平底アッセイプレートを備えるＣｏｓｔａｒ（登録商標）９６ウェルブラック上にフィルタプレートを配置した。この組み合わせを、ブランクカウンターバランスと一緒にＥｐｐｅｎｄｏｒｆ  Ｃｅｎｔｒｉｆｕｇｅ  ５８１０内に配置した。室温（２２℃）で、遠心機を１５０ｒｃｆに１分間設定した。遠心分離後、回収プレートを遠心機から取り出し、膜を通過して回収プレートに入った指示染料の量をＢｉｏｔｅｋ  Ｓｙｎｅｒｇｙ  Ｈ４  Ｈｙｂｒｉｄ  Ｒｅａｄｅｒ  Ｋｉｎｅｔｉｃ  Ｐｌａｔｅ  Ｒｅａｄｅｒ（ＫＰＲ）により吸光度６１０ｎｍで測定した。較正曲線（既述）を用いて、各ウェルを通過した量を算出した。処理ウェルをその対応する非汚損対照で割ることによって、フラックスパーセンテージを求めた。ＤＮａｓｅで処理した膜と処理していない膜とのフラックス比較を示すために、非処理汚損ウェルについてもこれを実施した。
【０１２６】
結果
温度の影響
室温で投与したＤＮａｓｅ処理は、高温で投与したＤＮａｓｅ処理と比較して、フラックスにほとんどまたは全く差がなかったため、温度は、ＤＮａｓｅ効果に対してほとんど影響を示さなかった。ＤＮａｓｅで処理した汚損膜のフラックスは、非汚損対照と比較して、依然として８８％超高かった（表１参照）。
【０１２７】
酵素濃度の影響
１ｐｐｍおよび０．１ｐｐｍのＤＮａｓｅ濃度を比較すると、これらの用量の間にほとんどまたは全く差はなかった。
【０１２８】
時間の影響
各々の時点（５分、１０分、２０分、６０分）で、それぞれのＤＮａｓｅ処理が、水処理ウェルと比較して、フラックスに有意な増加を示した。しかしながら、２０分より長く処理を実施した後に、フラックスの改善はほとんど認められなかった。この時点で、ＤＮａｓｅ処理膜は、非汚損膜のそれに対して、９０％超のフラックスに達する（表１参照）。
【０１２９】
結論
フロースルー量（％）が、１ｐｐｍ濃度のアスペルギルス・オリゼー（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｏｒｙｚａｅ）の限外濾過ＤＮａｓｅで前処理した複数種バイオフィルムによる汚損９６ウェルフィルタプレートの膜を通過した。限外濾過物で処理したウェルは、非処理のものと比較して、フラックスに有意な増加を示した。フラックスは、汚損膜において非汚損膜のフラックスの８８％超まで回復した。
【０１３０】
【表１】
2018531783.tif 000002
【配列表】
2018531783000001.app
【国際調査報告】
2018531783.tif 000003
2018531783.tif 000004
2018531783.tif 000005