(57)【要約】本発明は、一般に、離脱基で活性化されたカリケアマイシン分子に関する。本発明はさらに、一般に、ジスルフィドにより１つ以上のカリケアマイシン分子に直接コンジュゲートされた抗体を含む、抗体−薬物コンジュゲートに関する。本開示のいくつかの他の態様において、本開示の抗体−薬物コンジュゲートを含む薬学的組成物が提供され、この薬学的組成物は、希釈剤、担体、及び賦形剤のうちの少なくとも１つをさらに含む。他の態様において、本開示の抗体−薬物コンジュゲート、ならびに希釈剤、担体、及び賦形剤のうちの少なくとも１つを含む薬学的組成物が、癌の治療のための患者に投与するために提供される。【特許請求の範囲】
【請求項１】
式Ｉまたは式ＩＩ、
【化９】
2018533568.tif 000017
の薬物中間体組成物であって、
式中、Ｒは、Ｈ、−Ｃ（Ｏ）Ｒ１、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ１Ｒ２、−Ｓ（Ｏ）２Ｒ１、及び−Ｓ（Ｏ）２ＮＲ２Ｒ１から選択され、Ｒ１及びＲ２は、独立して、Ｃ１−Ｃ６アルキル及びＣ６−Ｃ２０アリールから選択され、Ｒ３は、ＮＯ２、Ｃｌ、Ｆ、ＣＮ、ＣＯ２Ｈ、及びＢｒから選択され、ｑは、０、１、または２である、前記薬物中間体組成物。
【請求項２】
Ｒが、−Ｃ（Ｏ）ＣＨ３である、請求項１に記載の薬物中間体組成物。
【請求項３】
Ｒ３がＮＯ２であり、ｑが１である、請求項１または請求項２に記載の薬物中間体組成物。
【請求項４】
式Ｉａ、
【化１０】
2018533568.tif 000018
を有する、請求項３に記載の薬物中間体組成物。
【請求項５】
式ＩＩａ、
【化１１】
2018533568.tif 000019
を有する、請求項１または請求項２に記載の薬物中間体組成物。
【請求項６】
式ＩＩＩ、
【化１２】
2018533568.tif 000020
を有する抗体−薬物コンジュゲート化合物、またはその薬学的に許容される塩であり、
式中、Ｒは、Ｈ、−Ｃ（Ｏ）Ｒ１、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ１Ｒ２、−Ｓ（Ｏ）２Ｒ１、及び−Ｓ（Ｏ）２ＮＲ２Ｒ１から選択され、
Ｒ１及びＲ２は、独立して、Ｃ１−Ｃ６アルキル及びＣ６−Ｃ２０アリールから選択され、
ｐは、１〜８の整数であり、
Ａｂは、（１）〜（５３）：
（１）ＢＭＰＲ１Ｂ（骨形成タンパク質受容体ＩＢ型）、
（２）Ｅ１６（ＬＡＴ１、ＳＬＣ７Ａ５）、
（３）ＳＴＥＡＰ１（前立腺の６回膜貫通上皮抗原）、
（４）ＭＵＣ１６（０７７２Ｐ、ＣＡ１２５）、
（５）ＭＰＦ（ＭＰＦ、ＭＳＬＮ、ＳＭＲ、巨核球増強因子、メソテリン）、
（６）Ｎａｐｉ２ｂ（ＮＡＰＩ−３Ｂ、ＮＰＴＩＩｂ、ＳＬＣ３４Ａ２、溶質輸送体ファミリー３４（リン酸ナトリウム）、メンバー２、ＩＩ型ナトリウム依存性リン酸輸送体３ｂ）、
（７）Ｓｅｍａ  ５ｂ（ＦＬＪ１０３７２、ＫＩＡＡ１４４５、Ｍｍ．４２０１５、ＳＥＭＡ５Ｂ、ＳＥＭＡＧ、セマフォリン５ｂ  Ｈｌｏｇ、セマドメイン、７回トロンボスポンジン反復（１型及び１型様）、膜貫通ドメイン（ＴＭ）、及び短い細胞質ドメイン、（セマフォリン）５Ｂ）、
（８）ＰＳＣＡ  ｈｌｇ（２７０００５０Ｃ１２Ｒｉｋ、Ｃ５３０００８Ｏ１６Ｒｉｋ、ＲＩＫＥＮ  ｃＤＮＡ  ２７０００５０Ｃ１２、ＲＩＫＥＮ  ｃＤＮＡ  ２７０００５０Ｃ１２遺伝子）、
（９）ＥＴＢＲ（エンドセリンＢ型受容体）、
（１０）ＭＳＧ７８３（ＲＮＦ１２４、仮説上のタンパク質ＦＬＪ２０３１５）、
（１１）ＳＴＥＡＰ２（ＨＧＮＣ＿８６３９、ＩＰＣＡ−１、ＰＣＡＮＡＰ１、ＳＴＡＭＰ１、ＳＴＥＡＰ２、ＳＴＭＰ、前立腺癌関連遺伝子１、前立腺癌関連タンパク質１、前立腺の６回膜貫通上皮抗原２、６回膜貫通前立腺タンパク質）、
（１２）ＴｒｐＭ４（ＢＲ２２４５０、ＦＬＪ２００４１、ＴＲＰＭ４、ＴＲＰＭ４Ｂ、一過性受容器電位カチオンチャネル、サブファミリーＭ、メンバー４）、
（１３）ＣＲＩＰＴＯ（ＣＲ、ＣＲ１、ＣＲＧＦ、ＣＲＩＰＴＯ、ＴＤＧＦ１、奇形癌由来の成長因子）、
（１４）ＣＤ２１（ＣＲ２（補体受容体２）またはＣ３ＤＲ（Ｃ３ｄ／エプスタイン・バーウイルス受容体）またはＨｓ．７３７９２）、
（１５）ＣＤ７９ｂ（ＣＤ７９Ｂ、ＣＤ７９β、ＩＧｂ（免疫グロブリン関連ベータ）、Ｂ２９）、
（１６）ＦｃＲＨ２（ＩＦＧＰ４、ＩＲＴＡ４、ＳＰＡＰ１Ａ（ＳＨ２ドメイン含有ホスファターゼアンカータンパク質１ａ）、ＳＰＡＰ１Ｂ、ＳＰＡＰ１Ｃ）、
（１７）ＨＥＲ２、
（１８）ＮＣＡ、
（１９）ＭＤＰ、
（２０）ＩＬ２０Ｒα、
（２１）ブレビカン、
（２２）ＥｐｈＢ２Ｒ、
（２３）ＡＳＬＧ６５９、
（２４）ＰＳＣＡ、
（２５）ＧＥＤＡ、
（２６）ＢＡＦＦ−Ｒ（Ｂ細胞活性化因子受容体、ＢＬｙＳ受容体３、ＢＲ３）、
（２７）ＣＤ２２（Ｂ細胞受容体ＣＤ２２−Ｂアイソフォーム）、
（２８）ＣＤ７９ａ（ＣＤ７９Ａ、ＣＤ７９α、免疫グロブリン関連アルファ）、
（２９）ＣＸＣＲ５（バーキットリンパ腫受容体１）、
（３０）ＨＬＡ−ＤＯＢ（ＭＨＣクラスＩＩ分子のベータサブユニット（Ｉａ抗原））、
（３１）Ｐ２Ｘ５（プリン受容体Ｐ２Ｘリガンド開口型イオンチャネル５）、
（３２）ＣＤ７２（Ｂ細胞分化抗原ＣＤ７２、Ｌｙｂ−２）、
（３３）ＬＹ６４（リンパ球抗原６４（ＲＰ１０５）、ロイシンリッチ反復（ＬＲＲ）ファミリーのＩ型膜タンパク質）、
（３４）ＦｃＲＨ１（Ｆｃ受容体様タンパク質１）、
（３５）ＦｃＲＨ５（ＩＲＴＡ２、免疫グロブリンスーパーファミリー受容体転位関連２）、
（３６）ＴＥＮＢ２（推定上の膜貫通プロテオグリカン）、
（３７）ＰＭＥＬ１７（ｓｉｌｖｅｒ相同体、ＳＩＬＶ、Ｄ１２Ｓ５３Ｅ、ＰＭＥＬ１７、ＳＩ、ＳＩＬ）、
（３８）ＴＭＥＦＦ１（ＥＧＦ様ドメイン及び２つのフォリスタチン様ドメインを有する膜貫通タンパク質１、トモレグリン−１）、
（３９）ＧＤＮＦ−Ｒａ１（ＧＤＮＦファミリー受容体アルファ１、ＧＦＲＡ１、ＧＤＮＦＲ、ＧＤＮＦＲＡ、ＲＥＴＬ１、ＴＲＮＲ１、ＲＥＴ１Ｌ、ＧＤＮＦＲ−アルファ１、ＧＦＲ−ＡＬＰＨＡ−１）、
（４０）Ｌｙ６Ｅ（リンパ球抗原６複合体、遺伝子座Ｅ、Ｌｙ６７、ＲＩＧ−Ｅ、ＳＣＡ−２、ＴＳＡ−１）、
（４１）ＴＭＥＭ４６（ｓｈｉｓａ相同体２（Ｘｅｎｏｐｕｓ  ｌａｅｖｉｓ）、ＳＨＩＳＡ２）、
（４２）Ｌｙ６Ｇ６Ｄ（リンパ球抗原６複合体、遺伝子座Ｇ６Ｄ、Ｌｙ６−Ｄ、ＭＥＧＴ１）、
（４３）ＬＧＲ５（ロイシンリッチ反復含有Ｇタンパク質結合型受容体５、ＧＰＲ４９、ＧＰＲ６７）、
（４４）ＲＥＴ（ｒｅｔ癌原遺伝子、ＭＥＮ２Ａ、ＨＳＣＲ１、ＭＥＮ２Ｂ、ＭＴＣ１、ＰＴＣ、ＣＤＨＦ１２、Ｈｓ．１６８１１４、ＲＥＴ５１、ＲＥＴ−ＥＬＥ１）、
（４５）ＬＹ６Ｋ（リンパ球抗原６複合体、遺伝子座Ｋ、ＬＹ６Ｋ、ＨＳＪ００１３４８、ＦＬＪ３５２２６）、
（４６）ＧＰＲ１９（Ｇタンパク質結合型受容体１９、Ｍｍ．４７８７）、
（４７）ＧＰＲ５４（ＫＩＳＳ１受容体、ＫＩＳＳ１Ｒ、ＧＰＲ５４、ＨＯＴ７Ｔ１７５、ＡＸＯＲ１２）、
（４８）ＡＳＰＨＤ１（アスパラギン酸ベータヒドロキシラーゼドメイン含有１、ＬＯＣ２５３９８２）、
（４９）チロシナーゼ（ＴＹＲ、ＯＣＡＩＡ、ＯＣＡ１Ａ、チロシナーゼ、ＳＨＥＰ３）、
（５０）ＴＭＥＭ１１８（ｒｉｎｇフィンガータンパク質、膜貫通２、ＲＮＦＴ２、ＦＬＪ１４６２７）、
（５１）ＧＰＲ１７２Ａ（Ｇタンパク質結合型受容体１７２Ａ、ＧＰＣＲ４１、ＦＬＪ１１８５６、Ｄ１５Ｅｒｔｄ７４７ｅ）、
（５２）ＣＤ３３、ならびに
（５３）ＣＬＬ−１から選択される１つ以上の腫瘍関連抗原または細胞表面受容体に結合する抗体である、前記抗体−薬物コンジュゲート化合物。
【請求項７】
Ａｂが、システイン操作抗体である、請求項６に記載の抗体−薬物コンジュゲート化合物。
【請求項８】
前記システイン操作抗体が、ＬＣ  Ｋ１４９Ｃ、ＨＣ  Ａ１４０、ＨＣ  Ａ１１８Ｃ、及びＨＣ  Ｌ１７７Ｃから選択された変異体である、請求項７に記載の抗体−薬物コンジュゲート化合物。
【請求項９】
Ａｂが、抗ＨＥＲ２  ４Ｄ５、抗ＣＤ２２、抗ＣＤ３３、抗Ｌｙ６Ｅ、抗Ｎａｐｉ３ｂ、抗ＨＥＲ２  ７Ｃ２、及び抗ＣＬＬ−１から選択される、請求項６〜８のいずれか１項に記載の抗体−薬物コンジュゲート化合物。
【請求項１０】
ｐが、１、２、３、または４である、請求項６〜９のいずれか１項に記載の抗体−薬物コンジュゲート化合物。
【請求項１１】
前記抗体−薬物コンジュゲート化合物の混合物を含み、前記抗体−薬物コンジュゲート化合物の混合物における１抗体当たりの平均薬物負荷が、約２〜約５である、請求項６〜９のいずれか１項に記載の抗体−薬物コンジュゲート化合物。
【請求項１２】
請求項６〜１１のいずれか１項に記載の抗体−薬物コンジュゲート化合物、及び薬学的に許容される希釈剤、担体、または賦形剤を含む、薬学的組成物。
【請求項１３】
治療有効量の化学療法剤をさらに含む、請求項１２に記載の薬学的組成物。
【請求項１４】
哺乳動物における癌の治療のための医薬品の製造における請求項６〜１１のいずれか１項に記載の抗体−薬物コンジュゲート化合物の使用。
【請求項１５】
請求項１２に記載の薬学的組成物を患者に投与することを含む、癌の治療方法。
【請求項１６】
前記患者が、前記抗体−薬物コンジュゲートと組み合わせて化学療法剤を投与される、請求項１５に記載の方法。
【請求項１７】
癌の治療方法に使用するための、請求項６〜１１のいずれか１項に記載の抗体−薬物コンジュゲート化合物。
【請求項１８】
請求項６の抗体−薬物コンジュゲート化合物の作製方法であって、
（ａ）（１）〜（５３）：
（１）ＢＭＰＲ１Ｂ（骨形成タンパク質受容体ＩＢ型）、
（２）Ｅ１６（ＬＡＴ１、ＳＬＣ７Ａ５）、
（３）ＳＴＥＡＰ１（前立腺の６回膜貫通上皮抗原）、
（４）ＭＵＣ１６（０７７２Ｐ、ＣＡ１２５）、
（５）ＭＰＦ（ＭＰＦ、ＭＳＬＮ、ＳＭＲ、巨核球増強因子、メソテリン）、
（６）Ｎａｐｉ２ｂ（ＮＡＰＩ−３Ｂ、ＮＰＴＩＩｂ、ＳＬＣ３４Ａ２、溶質輸送体ファミリー３４（リン酸ナトリウム）、メンバー２、ＩＩ型ナトリウム依存性リン酸輸送体３ｂ）、
（７）Ｓｅｍａ  ５ｂ（ＦＬＪ１０３７２、ＫＩＡＡ１４４５、Ｍｍ．４２０１５、ＳＥＭＡ５Ｂ、ＳＥＭＡＧ、セマフォリン５ｂ  Ｈｌｏｇ、セマドメイン、７回トロンボスポンジン反復（１型及び１型様）、膜貫通ドメイン（ＴＭ）、及び短い細胞質ドメイン、（セマフォリン）５Ｂ）、
（８）ＰＳＣＡ  ｈｌｇ（２７０００５０Ｃ１２Ｒｉｋ、Ｃ５３０００８Ｏ１６Ｒｉｋ、ＲＩＫＥＮ  ｃＤＮＡ  ２７０００５０Ｃ１２、ＲＩＫＥＮ  ｃＤＮＡ  ２７０００５０Ｃ１２遺伝子）、
（９）ＥＴＢＲ（エンドセリンＢ型受容体）、
（１０）ＭＳＧ７８３（ＲＮＦ１２４、仮説上のタンパク質ＦＬＪ２０３１５）、
（１１）ＳＴＥＡＰ２（ＨＧＮＣ＿８６３９、ＩＰＣＡ−１、ＰＣＡＮＡＰ１、ＳＴＡＭＰ１、ＳＴＥＡＰ２、ＳＴＭＰ、前立腺癌関連遺伝子１、前立腺癌関連タンパク質１、前立腺の６回膜貫通上皮抗原２、６回膜貫通前立腺タンパク質）、
（１２）ＴｒｐＭ４（ＢＲ２２４５０、ＦＬＪ２００４１、ＴＲＰＭ４、ＴＲＰＭ４Ｂ、一過性受容器電位カチオンチャネル、サブファミリーＭ、メンバー４）、
（１３）ＣＲＩＰＴＯ（ＣＲ、ＣＲ１、ＣＲＧＦ、ＣＲＩＰＴＯ、ＴＤＧＦ１、奇形癌由来の成長因子）、
（１４）ＣＤ２１（ＣＲ２（補体受容体２）またはＣ３ＤＲ（Ｃ３ｄ／エプスタイン・バーウイルス受容体）またはＨｓ．７３７９２）、
（１５）ＣＤ７９ｂ（ＣＤ７９Ｂ、ＣＤ７９β、ＩＧｂ（免疫グロブリン関連ベータ）、Ｂ２９）、
（１６）ＦｃＲＨ２（ＩＦＧＰ４、ＩＲＴＡ４、ＳＰＡＰ１Ａ（ＳＨ２ドメイン含有ホスファターゼアンカータンパク質１ａ）、ＳＰＡＰ１Ｂ、ＳＰＡＰ１Ｃ）、
（１７）ＨＥＲ２、
（１８）ＮＣＡ、
（１９）ＭＤＰ、
（２０）ＩＬ２０Ｒα、
（２１）ブレビカン、
（２２）ＥｐｈＢ２Ｒ、
（２３）ＡＳＬＧ６５９、
（２４）ＰＳＣＡ、
（２５）ＧＥＤＡ、
（２６）ＢＡＦＦ−Ｒ（Ｂ細胞活性化因子受容体、ＢＬｙＳ受容体３、ＢＲ３）、
（２７）ＣＤ２２（Ｂ細胞受容体ＣＤ２２−Ｂアイソフォーム）、
（２８）ＣＤ７９ａ（ＣＤ７９Ａ、ＣＤ７９α、免疫グロブリン関連アルファ）、
（２９）ＣＸＣＲ５（バーキットリンパ腫受容体１）、
（３０）ＨＬＡ−ＤＯＢ（ＭＨＣクラスＩＩ分子のベータサブユニット（Ｉａ抗原））、
（３１）Ｐ２Ｘ５（プリン受容体Ｐ２Ｘリガンド開口型イオンチャネル５）、
（３２）ＣＤ７２（Ｂ細胞分化抗原ＣＤ７２、Ｌｙｂ−２）、
（３３）ＬＹ６４（リンパ球抗原６４（ＲＰ１０５）、ロイシンリッチ反復（ＬＲＲ）ファミリーのＩ型膜タンパク質）、
（３４）ＦｃＲＨ１（Ｆｃ受容体様タンパク質１）、
（３５）ＦｃＲＨ５（ＩＲＴＡ２、免疫グロブリンスーパーファミリー受容体転位関連２）、
（３６）ＴＥＮＢ２（推定上の膜貫通プロテオグリカン）、
（３７）ＰＭＥＬ１７（ｓｉｌｖｅｒ相同体、ＳＩＬＶ、Ｄ１２Ｓ５３Ｅ、ＰＭＥＬ１７、ＳＩ、ＳＩＬ）、
（３８）ＴＭＥＦＦ１（ＥＧＦ様ドメイン及び２つのフォリスタチン様ドメインを有する膜貫通タンパク質１、トモレグリン−１）、
（３９）ＧＤＮＦ−Ｒａ１（ＧＤＮＦファミリー受容体アルファ１、ＧＦＲＡ１、ＧＤＮＦＲ、ＧＤＮＦＲＡ、ＲＥＴＬ１、ＴＲＮＲ１、ＲＥＴ１Ｌ、ＧＤＮＦＲ−アルファ１、ＧＦＲ−ＡＬＰＨＡ−１）、
（４０）Ｌｙ６Ｅ（リンパ球抗原６複合体、遺伝子座Ｅ、Ｌｙ６７、ＲＩＧ−Ｅ、ＳＣＡ−２、ＴＳＡ−１）、
（４１）ＴＭＥＭ４６（ｓｈｉｓａ相同体２（Ｘｅｎｏｐｕｓ  ｌａｅｖｉｓ）、ＳＨＩＳＡ２）、
（４２）Ｌｙ６Ｇ６Ｄ（リンパ球抗原６複合体、遺伝子座Ｇ６Ｄ、Ｌｙ６−Ｄ、ＭＥＧＴ１）、
（４３）ＬＧＲ５（ロイシンリッチ反復含有Ｇタンパク質結合型受容体５、ＧＰＲ４９、ＧＰＲ６７）、
（４４）ＲＥＴ（ｒｅｔ癌原遺伝子、ＭＥＮ２Ａ、ＨＳＣＲ１、ＭＥＮ２Ｂ、ＭＴＣ１、ＰＴＣ、ＣＤＨＦ１２、Ｈｓ．１６８１１４、ＲＥＴ５１、ＲＥＴ−ＥＬＥ１）、
（４５）ＬＹ６Ｋ（リンパ球抗原６複合体、遺伝子座Ｋ、ＬＹ６Ｋ、ＨＳＪ００１３４８、ＦＬＪ３５２２６）、
（４６）ＧＰＲ１９（Ｇタンパク質結合型受容体１９、Ｍｍ．４７８７）、
（４７）ＧＰＲ５４（ＫＩＳＳ１受容体、ＫＩＳＳ１Ｒ、ＧＰＲ５４、ＨＯＴ７Ｔ１７５、ＡＸＯＲ１２）、
（４８）ＡＳＰＨＤ１（アスパラギン酸ベータヒドロキシラーゼドメイン含有１、ＬＯＣ２５３９８２）、
（４９）チロシナーゼ（ＴＹＲ、ＯＣＡＩＡ、ＯＣＡ１Ａ、チロシナーゼ、ＳＨＥＰ３）、
（５０）ＴＭＥＭ１１８（ｒｉｎｇフィンガータンパク質、膜貫通２、ＲＮＦＴ２、ＦＬＪ１４６２７）、
（５１）ＧＰＲ１７２Ａ（Ｇタンパク質結合型受容体１７２Ａ、ＧＰＣＲ４１、ＦＬＪ１１８５６、Ｄ１５Ｅｒｔｄ７４７ｅ）、
（５２）ＣＤ３３、ならびに
（５３）ＣＬＬ−１から選択される１つ以上の腫瘍関連抗原または細胞表面受容体に結合する抗体を、
（ｂ）式Ｉまたは式ＩＩ
【化１３】
2018533568.tif 000021
（式中、Ｒは、Ｈ、−Ｃ（Ｏ）Ｒ１、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ１Ｒ２、−Ｓ（Ｏ）２Ｒ１、及び−Ｓ（Ｏ）２ＮＲ２Ｒ１から選択され、Ｒ１及びＲ２は、独立して、Ｃ１−Ｃ６アルキル及びＣ６−Ｃ２０アリールから選択され、Ｒ３は、ＮＯ２、Ｃｌ、Ｆ、ＣＮ、ＣＯ２Ｈ、及びＢｒから選択され、ｑは、０、１、または２である）の薬物中間体と反応させることを含む、前記方法。
【請求項１９】
Ａｂが、システイン操作抗体である、請求項１８に記載の方法。
【請求項２０】
前記システイン操作抗体が、ＬＣ  Ｋ１４９Ｃ、ＨＣ  Ａ１４０、ＨＣ  Ａ１１８Ｃ、及びＨＣ  Ｌ１７７Ｃから選択された変異体である、請求項１８に記載の方法。
【請求項２１】
Ａｂが、抗ＨＥＲ２  ４Ｄ５、抗ＣＤ２２、抗ＣＤ３３、抗Ｌｙ６Ｅ、抗Ｎａｐｉ３ｂ、抗ＨＥＲ２  ７Ｃ２、及び抗ＣＬＬ−１から選択される、請求項１８〜２０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２２】
ｐが、１、２、３、または４である、請求項１８〜２１のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２３】
前記抗体−薬物コンジュゲート化合物の混合物を含み、前記抗体−薬物コンジュゲート化合物の混合物における１抗体当たりの平均薬物負荷が、約２〜約５．２４である、請求項１８〜２１のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２４】
請求項１２に記載の薬学的組成物、容器、及び前記薬学的組成物が癌の治療に使用され得ることを示す添付文書またはラベルを含む、製造品。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願の相互参照
本出願は、２０１５年１０月２０日提出の米国仮出願第６２／２４３，９６７号の優先利益を主張する。
［技術分野］
【０００２】
本発明の分野は、一般に、１つ以上のカリケアマイシン分子に直接コンジュゲートされた抗体を含む、抗体−薬物コンジュゲートに関する。
【背景技術】
【０００３】
カリケアマイシン及びカリケアマイシン誘導体は、例えば、米国特許第４，９７０，１９８号（その全体が本明細書に組み込まれる）に記載される、抗菌剤及び抗腫瘍剤のファミリーを指す。本開示の範囲内のカリケアマイシン誘導体は、米国特許第５，０３７，６５１号に記載されるジヒドロ誘導体、及び米国特許第５，０７９，２３３号（それらの両方はそれらの全体が本明細書に組み込まれる）に記載されるＮ−アシル化誘導体を含むが、これらに限定されない。本明細書に使用されるとき、カリケアマイシン誘導体は、異なる化合物を得るために、１つ以上の位置で置換されたカリケアマイシンを指す。
【０００４】
カリケアマイシンファミリーの抗生物質、ならびにそれらの誘導体及び類似体は、ピコモル以下の濃度で二本鎖ＤＮＡ切断を生成することができる（Ｈｉｎｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９３）Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ５３：３３３６−３３４２、Ａｎｇｅｗ  Ｃｈｅｍ．Ｉｎｔｌ．Ｅｄ．Ｅｎｇｌ．（１９９４）３３：１８３−１８６、Ｌｏｄｅ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９８）  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ５８：２９２５−２９２８）。カリケアマイシンは、エンジイン環構造（三重結合に隣接する二重結合を含む環）及びメチルトリスルフィド（すなわち、−Ｓ−Ｓ−Ｓ−ＣＨ３）基を含む弾頭（ｗａｒｈｅａｄ）を含む。弾頭はジスルフィド結合の還元により活性化され、活性化された弾頭は二本鎖ＤＮＡ切断をもたらすことにより機能すると考えられる。作用機構は、エンジイン環が、ステップ（ｉ）メチルトリスルフィド部分の求核攻撃によるカリケアマイシン＝ＣＨＣＨ２ＳＨ部分の形成、及びＣＨ３−Ｓ−Ｓ−の切断、（ｉｉ）カリケアマイシン＝ＣＨＣＨ２ＳＨからの縮合２，５−ジヒドロチオフェン環の形成、及び（ｉｉｉ）エンジインからの縮合ベンゼン遊離ジラジカルの形成によるジスルフィド結合の還元切断により活性化される、Ｂｏｕｃｈａｒｄ，Ｈ．，ｅｔ  ａｌ．，Ａｂ−ｄｒｕｇ  ｃｏｎｊｕｇａｔｅｓ−Ａ  ｎｅｗ  ｗａｖｅ  ｏｆ  ｃａｎｃｅｒ  ｄｒｕｇｓ，Ｂｉｏｏｒｇａｎｉｃ  ＆  Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  Ｌｅｔｔｅｒｓ  ２４（２０１４）５３５７−５３６３によって提案された。次いで、活性化されたカリケアマイシンが二本鎖ＤＮＡを切断する。
【０００５】
カリケアマイシンは、細胞内作用部位を有するが、いくつかの例では、血漿膜を効果的に横断しない。したがって、いくつかの実施形態において、抗体媒介性内在化によるこれらの薬剤の細胞取り込みによって、細胞傷害性効果が大幅に増強され得る。カリケアマイシン−リンカー−抗体コンジュゲートは、カリケアマイシンの細胞傷害性効力と組み合わせて、抗体の特異性及び効果的な血漿膜透過性（内在化）を提供する。したがって、いくつかの態様において、カリケアマイシンの細胞取り込みによって、その細胞傷害性効果が大幅に増強され得る。カリケアマイシン−リンカー−抗体薬物コンジュゲートの形成方法は、既知であり、例えば、米国特許第５，８７７，２９６号、同第５，７７３，００１号、同第５，７１２，３７４号、同第５，７１４，５８６号、同第５，７３９，１１６号、及び同第５，７６７，２８５号（これらの各々は参照により本明細書に組み込まれる）に記載される。
【０００６】
抗体−リンカー−薬物コンジュゲートを含む抗体−薬物コンジュゲートは、強力な細胞傷害性薬の標的を抗原発現腫瘍細胞に定め、それによってそれらの抗腫瘍活性を増強することによって、抗体と細胞傷害性薬の両方の理想的な特性を組み合わせているため、有望な標的化学療法分子である。所与の標的抗原のための抗体−薬物コンジュゲート開発の成功は、抗体の選択、リンカーの安定性、細胞傷害性薬の効力、及びリンカー−薬物を抗体にコンジュゲートする様式を最適化することに依存する。より具体的には、効果的な抗体−薬物コンジュゲートは、（ｉ）抗体が標的抗原に対して十分な特異性を保持し、薬物の有効性が維持される、抗体−薬物コンジュゲート形成方法、（ｉｉ）血液中での薬物放出、及び非標的細胞への随伴する損傷を制限するのに十分な抗体−薬物コンジュゲートの安定性、（ｉｉｉ）治療細胞内抗体−薬物コンジュゲート濃度を達成するのに十分な細胞膜輸送効率（エンドサイトーシス）、（ｉｖ）治療薬物濃度を達成するのに十分な抗体−薬物コンジュゲートからの十分な細胞内薬物放出、及び（ｖ）ナノモルまたはナノモル以下の量の薬物細胞傷害性のうちの少なくとも１つ以上を特徴とする。
【０００７】
従来の結合手段、すなわち、リンカーを介する薬物部分の抗体への共有結合は、一般に、薬物部分が抗体のいくつかの部位に結合される不均質な分子の混合物をもたらす。例えば、細胞傷害性薬は、典型的に、抗体に多数存在するリジン残基を介して抗体にコンジュゲートされており、不均質な抗体−薬物コンジュゲート混合物が生成される。反応条件に応じて、不均質な混合物は、典型的に、０〜約８個、またはそれ以上の薬物部分が結合した抗体が分散して含まれている。加えて、薬物部分と単一抗体との比が特定の整数比であるコンジュゲートの各サブグループ内には、薬物部分が抗体の様々な部位に結合している不均質である可能性のある混合物がある。コンジュゲーション反応により得られる不均質な混合物に含まれる抗体−薬物コンジュゲート種の分子を分類し、特徴付けるには、分析方法及び調製方法は不適切である。抗体は、大型の複雑かつ構造的に多様な生体分子であり、多数の反応性官能基を有することが多い。リンカー試薬及び薬物−リンカー中間体との抗体反応性は、ｐＨ、濃度、塩濃度、及び共溶媒などの因子に依存する。さらに、複数ステップのコンジュゲーションプロセスは、反応条件の制御ならびに反応物質及び中間体の特徴付けが困難であることから、再現できない可能性がある。
【０００８】
抗体−薬物コンジュゲートは、典型的に、１つ以上の抗体のシステインチオール基を、薬物に結合された１つ以上のリンカー部分にコンジュゲートし、それにより、抗体−リンカー−薬物複合体を形成することにより形成される。ｐＨ７付近でプロトン化され、求核性が低いほとんどのアミンとは異なり、システインチオールは中性ｐＨで反応する。遊離チオール（ＲＳＨ、スルフヒドリル）基は比較的反応性が高いため、システイン残基を有するタンパク質は、ジスルフィド結合したオリゴマーとしてその酸化形態で存在するか、またはジスルフィド基が内部架橋していることが多い。抗体のシステインチオール基は、一般に、抗体のアミンまたはヒドロキシル基よりも求電子性コンジュゲーション試薬に対する反応性が高い、すなわち、求核性が高い。タンパク質の様々なアミノ酸残基をシステインアミノ酸に変異させることによるシステインチオール基の操作には問題が生じる場合があり、特に、不対（遊離Ｃｙｓ）残基または反応もしくは酸化が比較的起こりやすい残基の場合に問題が生じる場合がある。Ｅ．ｃｏｌｉの周辺質中、培養上清中、または部分的もしくは完全に精製されたタンパク質中のいずれにせよ、タンパク質の濃縮溶液中では、タンパク質の表面上の不対Ｃｙｓ残基が対合し、酸化して、分子間ジスルフィドが形成され、それによってタンパク質二量体または多量体が形成されることができる。ジスルフィド二量体の形成により、新たなＣｙｓは、薬物、リガンド、または他の標識に対するコンジュゲーションについて非反応性となる。さらに、タンパク質が、酸化により新たに操作されたＣｙｓ残基と既存のＣｙｓ残基との間で分子間ジスルフィド結合を形成した場合、いずれのＣｙｓ基も、活性部位の関与及び相互作用に利用することができない。さらに、このタンパク質は、誤った折り畳みまたは三次構造の喪失により不活性または非特異的となり得る（Ｚｈａｎｇ  ｅｔ  ａｌ（２００２）  Ａｎａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．３１１：１−９）。
【０００９】
操作されたシステインがコンジュゲーションに利用することができる部位でのシステイン置換を通して抗体への薬物の部位特異的コンジュゲーションを提供するが、免疫グロブリンの折り畳み及び組み立てを乱さず、また抗原の結合及びエフェクター機能を変化させない、改善された抗体−薬物コンジュゲートであるＴＨＩＯＭＡＢ（商標）が開発された（Ｊｕｎｕｔｕｌａ，ｅｔ  ａｌ．，２００８ｂ  Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈ．，２６（８）：９２５−９３２、Ｄｏｒｎａｎ  ｅｔ  ａｌ．（２００９）  Ｂｌｏｏｄ  １１４（１３）：２７２１−２７２９、米国特許第７５２１５４１号、同第７７２３４８５号、ＷＯ２００９／０５２２４９）。これらのＴＨＩＯＭＡＢ（商標）抗体を、次いで、操作されたシステインチオール基を通して細胞傷害性薬にコンジュゲートして、均質な化学量論性（例えば、単一の操作されたシステイン部位を有する抗体では、抗体当たり最大２つの薬物）を有するＴＨＩＯＭＡＢ（商標）薬物コンジュゲート（ＴＤＣ）を得ることができる。異なる抗原に対する複数の抗体を用いた研究により、ＴＤＣが、異種移植片モデルにおいては従来の抗体−薬物コンジュゲートと同程度に効果的であり、関連する前臨床モデルではより高い用量で忍容されることが示された。ＴＨＩＯＭＡＢ（商標）抗体は、抗体の異なる位置（例えば、軽鎖−Ｆａｂ、重鎖−Ｆａｂ、及び重鎖−Ｆｃ内の特定のアミノ酸位（すなわち、部位））で薬物と結合するように操作されている。ＴＨＩＯＭＡＢ（商標）抗体のインビトロ及びインビボでの安定性、有効性、及びＰＫ特性により、それらの均質性及び細胞傷害性薬との部位特異的コンジュゲーションに起因して、従来の抗体−薬物コンジュゲートに勝る固有の利点が得られる。
【００１０】
抗体−薬物コンジュゲート、及び具体的には、抗体−カリケアマイシン誘導体コンジュゲートの調製及び使用には尚も他の制限または課題がある。例えば、一部のリンカーは、血流中で不安定であり、それにより、標的細胞における内在化前に許容できない量の薬物を放出する可能性がある。他のリンカーは、血流中で安定性を提供し得るが、細胞内放出の有効性が悪影響を及ぼす場合がある。所望の細胞内放出を提供するリンカーは、典型的に、血流中での安定性が乏しい。換言すると、血流の安定性及び細胞内放出は、典型的に、反比例関係にある。第２に、標準的なコンジュゲーションプロセスにおいて、担体タンパク質上に負荷されたカリケアマイシン（薬物負荷）の量、コンジュゲーション反応において形成される凝集体の量、及び得ることができる最終精製コンジュゲートの収量は、相互に関係する。例えば、凝集体の形成は、一般に、担体−抗体にコンジュゲートされるカリケアマイシン及びその誘導体の当量数に正相関する。薬物の効力及び有効性は、カリケアマイシン含量に伴って増加するため、抗体の親和性を保持しながら、抗体担体上へのカリケアマイシン負荷を最大にすることが望ましい。しかしながら、高薬物負荷下で、形成された凝集体は、治療用途のために除去されなければならない。結果として、薬物負荷媒介凝集体形成は、抗体−薬物コンジュゲートの収量を減少させ、プロセスのスケールアップを困難にさせる場合がある。例えば、リンカーを使用する先行技術のコンジュゲーション方法は、コンジュゲーション反応に添加されるカリケアマイシンの量を制限することにより、より高い薬物負荷と抗体−薬物コンジュゲート収量との間で妥協が必要であることが分かった。
したがって、最適化された安全性及び有効性を提供する、改善された効果的なカリケアマイシン−抗体コンジュゲートが継続的に必要とされている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１１】
【特許文献１】米国特許第４，９７０，１９８号明細書
【図面の簡単な説明】
【００１２】
【図１】０．３ｍｇ／ｋｇ、１ｍｇ／ｋｇ、３ｍｇ／ｋｇ、６ｍｇ／ｋｇ、及び１０ｍｇ／ｋｇの用量でチオＨｕ抗Ｌｙ６Ｅ  ＬＣ  Ｋ１４９Ｃ−ｐ−ニトロ−ＰＤＳ−カリケアマイシンをＩＶ投薬した後、及び３ｍｇ／ｋｇでチオＨｕ抗ＣＤ２２  ＬＣ  Ｋ１４９Ｃ−ｐ−ニトロ−ＰＤＳ−カリケアマイシン対照をＩＶ投薬した、ＳＣＩＤベージュマウスのＨＣＣ１５６９Ｘ２ゼノグラフモデルにおける経時的なインビボ腫瘍体積変化のプロットを示す。
【図２】０．３ｍｇ／ｋｇ、１ｍｇ／ｋｇ、３ｍｇ／ｋｇ、６ｍｇ／ｋｇ、及び１０ｍｇ／ｋｇの用量でチオＨｕ抗ＣＤ２２  １０Ｆ４ｖ３  ＬＣ  Ｋ１４９Ｃ−ｐ−ニトロ−ＰＤＳ−カリケアマイシンをＩＶ投薬した後、及び３ｍｇ／ｋｇでチオＨｕ抗Ｌｙ６Ｅ  ９Ｂ１２ｖ１２  ＬＣ  Ｋ１４９Ｃ−ｐ−ニトロ−ＰＤＳ−カリケアマイシン対照をＩＶ投薬した、ＣＢ−１７  Ｆｏｘ  Ｃｈａｓｅ  ＳＣＩＤマウスのＷＳＵ−ＤＬＣＬ２ゼノグラフモデルにおける経時的なインビボ腫瘍体積変化のプロットを示す。
【図３Ａ】非標的対照チオＨｕ抗Ｌｙ６Ｅ  ９Ｂ１２．ｖ１２  ＬＣ  Ｋ１４９Ｃ−カリケアマイシンと比較した、標的チオＨｕ抗ＣＤ２２  １０Ｆ４ｖ３  ＬＣ  Ｋ１４９Ｃ−カリケアマイシンＩＣ５０のＣＤ２２陽性バーキットヒトリンパ腫細胞（ＢＪＡＢ）に対するＩＣ５０効力対ログ濃度のプロットを示す。標的効力は、非標的効力よりも＞１５００倍大きい。
【図３Ｂ】非標的対照チオＨｕ抗Ｌｙ６Ｅ  ９Ｂ１２．ｖ１２  ＬＣ  Ｋ１４９Ｃ−カリケアマイシンと比較した、標的チオＨｕ抗Ｌｙ６Ｅ  １０Ｆ４ｖ３  ＬＣ  Ｋ１４９Ｃ−カリケアマイシンＩＣ５０効力のＣＤ２２陽性ＷＳＵ−ＤＬＣＬ２ヒトびまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫由来細胞株に対するＩＣ５０効力対ログ濃度のプロットを示す。標的効力は、非標的効力よりも＞２０００倍大きい。
【図３Ｃ】ジャーカット細胞に対するチオＨｕ抗Ｌｙ６Ｅ  １０Ｆ４ｖ３  ＬＣ  Ｋ１４９Ｃ−カリケアマイシンのＩＣ５０効力対ログ濃度、及びチオＨｕ抗Ｌｙ６Ｅ  ９Ｂ１２．ｖ１２  ＬＣ  Ｋ１４９Ｃ−カリケアマイシンのＩＣ５０効力対ログ濃度のプロットを示す。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【００１３】
本開示の一態様において、式Ｉ及び式ＩＩ、
【化１−１】
2018533568.tif 000002
【化１−２】
2018533568.tif 000003
の薬物中間体が提供される。
かかる態様において、Ｒは、Ｈ、−Ｃ（Ｏ）Ｒ１、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ１Ｒ２、−Ｓ（Ｏ）２Ｒ１、及び−Ｓ（Ｏ）２ＮＲ２Ｒ１から選択され、Ｒ１及びＲ２は、独立して、Ｃ１−Ｃ６アルキル及びＣ６−Ｃ２０アリールから選択され、Ｒ３は、ＮＯ２、Ｃｌ、Ｆ、ＣＮ、ＣＯ２Ｈ、及びＢｒから選択され、ｑは、０、１、または２である。
【００１４】
本開示の別の態様において、式ＩＩＩ、
【化２】
2018533568.tif 000004
の抗体−薬物コンジュゲート、またはその薬学的に許容される塩が提供される。
かかる態様において、Ｒは、Ｈ、−Ｃ（Ｏ）Ｒ１、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ１Ｒ２、−Ｓ（Ｏ）２Ｒ１、及び−Ｓ（Ｏ）２ＮＲ２Ｒ１から選択され、Ｒ１及びＲ２は、独立して、Ｃ１−Ｃ６アルキル及びＣ６−Ｃ２０アリールから選択される。指定子ｐは、１〜８の整数である。Ａｂは、本明細書に列記される（１）〜（５３）：（１）ＢＭＰＲ１Ｂ（骨形成タンパク質受容体ＩＢ型）、（２）Ｅ１６（ＬＡＴ１，ＳＬＣ７Ａ５）、（３）ＳＴＥＡＰ１（前立腺の６回膜貫通上皮抗原）、（４）ＭＵＣ１６（０７７２Ｐ、ＣＡ１２５）、（５）ＭＰＦ（ＭＰＦ、ＭＳＬＮ、ＳＭＲ、巨核球増強因子、メソテリン）、（６）Ｎａｐｉ２ｂ（ＮＡＰＩ−３Ｂ、ＮＰＴＩＩｂ、ＳＬＣ３４Ａ２、溶質輸送体ファミリー３４（リン酸ナトリウム）、メンバー２、ＩＩ型ナトリウム依存性リン酸輸送体３ｂ）、（７）Ｓｅｍａ  ５ｂ（ＦＬＪ１０３７２、ＫＩＡＡ１４４５、Ｍｍ．４２０１５、ＳＥＭＡ５Ｂ、ＳＥＭＡＧ、セマフォリン５ｂ  Ｈｌｏｇ、セマドメイン、７回トロンボスポンジン反復（１型及び１型様）、膜貫通ドメイン（ＴＭ）、及び短い細胞質ドメイン、（セマフォリン）５Ｂ）、（８）ＰＳＣＡ  ｈｌｇ（２７０００５０Ｃ１２Ｒｉｋ、Ｃ５３０００８Ｏ１６Ｒｉｋ、ＲＩＫＥＮ  ｃＤＮＡ  ２７０００５０Ｃ１２、ＲＩＫＥＮ  ｃＤＮＡ  ２７０００５０Ｃ１２遺伝子）、（９）ＥＴＢＲ（エンドセリンＢ型受容体）、（１０）ＭＳＧ７８３（ＲＮＦ１２４、仮説上のタンパク質ＦＬＪ２０３１５）、（１１）ＳＴＥＡＰ２（ＨＧＮＣ＿８６３９、ＩＰＣＡ−１、ＰＣＡＮＡＰ１、ＳＴＡＭＰ１、ＳＴＥＡＰ２、ＳＴＭＰ、前立腺癌関連遺伝子１、前立腺癌関連タンパク質１、前立腺の６回膜貫通上皮抗原２、６回膜貫通前立腺タンパク質）、（１２）ＴｒｐＭ４（ＢＲ２２４５０、ＦＬＪ２００４１、ＴＲＰＭ４、ＴＲＰＭ４Ｂ、一過性受容器電位カチオンチャネル、サブファミリーＭ、メンバー４）、（１３）ＣＲＩＰＴＯ（ＣＲ、ＣＲ１、ＣＲＧＦ、ＣＲＩＰＴＯ、ＴＤＧＦ１、奇形癌由来の成長因子）、（１４）ＣＤ２１（ＣＲ２（補体受容体２）またはＣ３ＤＲ（Ｃ３ｄ／エプスタイン・バーウイルス受容体）またはＨｓ．７３７９２）、（１５）ＣＤ７９ｂ（ＣＤ７９Ｂ、ＣＤ７９β、ＩＧｂ（免疫グロブリン関連ベータ）、Ｂ２９）、（１６）ＦｃＲＨ２（ＩＦＧＰ４、ＩＲＴＡ４、ＳＰＡＰ１Ａ（ＳＨ２ドメイン含有ホスファターゼアンカータンパク質１ａ）、ＳＰＡＰ１Ｂ、ＳＰＡＰ１Ｃ）、（１７）ＨＥＲ２、（１８）ＮＣＡ、（１９）ＭＤＰ、（２０）ＩＬ２０Ｒα、（２１）Ｂｒｅｖｉｃａｎ、（２２）ＥｐｈＢ２Ｒ、（２３）ＡＳＬＧ６５９、（２４）ＰＳＣＡ、（２５）ＧＥＤＡ、（２６）ＢＡＦＦ−Ｒ（Ｂ細胞活性化因子受容体、ＢＬｙＳ受容体３、ＢＲ３）、（２７）ＣＤ２２（Ｂ細胞受容体ＣＤ２２−Ｂアイソフォーム）、（２８）ＣＤ７９ａ（ＣＤ７９Ａ、ＣＤ７９α、免疫グロブリン関連アルファ）、（２９）ＣＸＣＲ５（バーキットリンパ腫受容体１）、（３０）ＨＬＡ−ＤＯＢ（ＭＨＣクラスＩＩ分子のベータサブユニット（Ｉａ抗原））、（３１）Ｐ２Ｘ５（プリン受容体Ｐ２Ｘリガンド開口型イオンチャネル５）、（３２）ＣＤ７２（Ｂ細胞分化抗原ＣＤ７２、Ｌｙｂ−２）、（３３）���Ｙ６４（リンパ球抗原６４（ＲＰ１０５）、ロイシンリッチ反復（ＬＲＲ）ファミリーのＩ型膜タンパク質）、（３４）ＦｃＲＨ１（Ｆｃ受容体様タンパク質１）、（３５）ＦｃＲＨ５（ＩＲＴＡ２、免疫グロブリンスーパーファミリー受容体転位関連２）、（３６）ＴＥＮＢ２（推定上の膜貫通プロテオグリカン）、（３７）ＰＭＥＬ１７（ｓｉｌｖｅｒ相同体、ＳＩＬＶ、Ｄ１２Ｓ５３Ｅ、ＰＭＥＬ１７、ＳＩ、ＳＩＬ）、（３８）ＴＭＥＦＦ１（ＥＧＦ様ドメイン及び２つのフォリスタチン様ドメインを有する膜貫通タンパク質１、トモレグリン−１）、（３９）ＧＤＮＦ−Ｒａ１（ＧＤＮＦファミリー受容体アルファ１、ＧＦＲＡ１、ＧＤＮＦＲ、ＧＤＮＦＲＡ、ＲＥＴＬ１、ＴＲＮＲ１、ＲＥＴ１Ｌ、ＧＤＮＦＲ−アルファ１、ＧＦＲ−ＡＬＰＨＡ−１）、（４０）Ｌｙ６Ｅ（リンパ球抗原６複合体、遺伝子座Ｅ、Ｌｙ６７、ＲＩＧ−Ｅ、ＳＣＡ−２、ＴＳＡ−１）、（４１）ＴＭＥＭ４６（ｓｈｉｓａ相同体２（Ｘｅｎｏｐｕｓ  ｌａｅｖｉｓ）、ＳＨＩＳＡ２）、（４２）Ｌｙ６Ｇ６Ｄ（リンパ球抗原６複合体、遺伝子座Ｇ６Ｄ、Ｌｙ６−Ｄ、ＭＥＧＴ１）、（４３）ＬＧＲ５（ロイシンリッチ反復含有Ｇタンパク質結合型受容体５、ＧＰＲ４９、ＧＰＲ６７）、（４４）ＲＥＴ（ｒｅｔ癌原遺伝子、ＭＥＮ２Ａ、ＨＳＣＲ１、ＭＥＮ２Ｂ、ＭＴＣ１、ＰＴＣ、ＣＤＨＦ１２、Ｈｓ．１６８１１４、ＲＥＴ５１、ＲＥＴ−ＥＬＥ１）、（４５）ＬＹ６Ｋ（リンパ球抗原６複合体、遺伝子座Ｋ、ＬＹ６Ｋ、ＨＳＪ００１３４８、ＦＬＪ３５２２６）、（４６）ＧＰＲ１９（Ｇタンパク質結合型受容体１９、Ｍｍ．４７８７）、（４７）ＧＰＲ５４（ＫＩＳＳ１受容体、ＫＩＳＳ１Ｒ、ＧＰＲ５４、ＨＯＴ７Ｔ１７５、ＡＸＯＲ１２）、（４８）ＡＳＰＨＤ１（アスパラギン酸ベータヒドロキシラーゼドメイン含有１、ＬＯＣ２５３９８２）、（４９）チロシナーゼ（ＴＹＲ、ＯＣＡＩＡ、ＯＣＡ１Ａ、チロシナーゼ、ＳＨＥＰ３）、（５０）ＴＭＥＭ１１８（ｒｉｎｇフィンガータンパク質、膜貫通２、ＲＮＦＴ２、ＦＬＪ１４６２７）、（５１）ＧＰＲ１７２Ａ（Ｇタンパク質結合型受容体１７２Ａ、ＧＰＣＲ４１、ＦＬＪ１１８５６、Ｄ１５Ｅｒｔｄ７４７ｅ）、（５２）ＣＤ３３、及び（５３）ＣＬＬ−１から選択される１つ以上の腫瘍関連抗原または細胞表面受容体に結合する抗体である。
【００１５】
本開示のいくつかの他の態様において、本開示の抗体−薬物コンジュゲートを含む薬学的組成物が提供され、この薬学的組成物は、希釈剤、担体、及び賦形剤のうちの少なくとも１つをさらに含む。
【００１６】
他の態様において、本開示の抗体−薬物コンジュゲート、ならびに希釈剤、担体、及び賦形剤のうちの少なくとも１つを含む薬学的組成物が、癌の治療のための患者に投与するために提供される。
【００１７】
また他の態様において、動物における癌の治療のための医薬品の製造における使用のために、本開示の抗体−薬物コンジュゲートが提供される。
【００１８】
さらに他の態様において、本開示の抗体−薬物コンジュゲートで癌を治療するための方法が提供される。
【００１９】
他の態様において、本開示の抗体−薬物コンジュゲートの作製方法が提供され、本方法は、本明細書の別の箇所に記載される（１）〜（５３）から選択される１つ以上の腫瘍関連抗原または細胞表面受容体と結合する抗体を、本明細書の別の箇所に記載される式Ｉまたは式ＩＩの薬物−離脱基中間体組成物と反応させることを含む。
【００２０】
他の態様において、製造品が提供され、本製造品は、本開示の抗体−薬物コンジュゲート、ならびに希釈剤、担体、及び賦形剤のうちの少なくとも１つ；容器；ならびに薬学的組成物が癌を治療するために使用され得ることを示す添付文書またはラベルを含む。
【発明を実施するための形態】
【００２１】
これより本発明のある特定の実施形態を詳細に参照するが、それらの例は、添付の構造及び式に例示されている。本発明は、列挙される実施形態と併せて説明されるが、それらは、本発明をこれらの実施形態に限定することを意図するものではないことを理解されたい。逆に、本発明は、全ての代替形、修正形、及び同等物を含めることが意図されており、それらは特許請求の範囲によって定められる本発明の範囲内に含まれ得る。
【００２２】
当業者であれば、本発明の実施に使用することができる、本明細書に記載されるものに類似または同等である多数の方法及び材料を理解するであろう。本発明は、決して記載される方法及び材料に限定されるものではない。
【００２３】
本開示は、一般に、リンカーまたはリンカー部分の不在下で、１つ以上のカリケアマイシン誘導体に直接コンジュゲートされた抗体を含む、抗体−薬物コンジュゲートに関する。本開示は、さらに、離脱基を含むカリケアマイシン誘導体中間体組成物に関する。かかる中間体組成物は、抗体が、離脱基の喪失後、及び従来のリンカーまたはリンカー部分の不在下で、カリケアマイシン誘導体に直接共有結合された抗体である、抗体−薬物コンジュゲートの形成に好適な基質である。本開示は、さらに、疾患、具体的には癌の治療におけるような抗体−カリケアマイシンコンジュゲートの使用に関する。本明細書で使用される場合、別途明記されない限り、カリケアマイシンは、本開示によって包含されるカリケアマイシン誘導体化合物を指す。
【００２４】
この点において、米国特許第５５，８７７，２９６号及び同第５，７７３，００１号に開示されるもののような、抗体−カリケアマイシン及び抗体−カリケアマイシン誘導体コンジュゲートを形成するための先行技術の方法が、スケールアップの実行不可能な提示する精製問題を呈する大きな割合のコンジュゲート凝集体をもたらすことに留意すべきである（参照により本明細書に組み込まれる、米国特許公開第２００７／０２１３５１１  Ａ１号の例えば、段落［０００８］及び［０００９］を参照のこと）。米国特許第５，７１４，５８６号及び同第５，７１２，３７４号において開示される方法は、５０％〜６０％の望ましくない低いコンジュゲートされた画分を有する抗体−薬物コンジュゲートを生成することがさらに公知である（例えば、米国特許公開第２００７／０２１３５１１  Ａ１号の段落［００１０］を参照のこと）。さらに、問題となるのは、リンカーが、血流中で不安定であり、それにより、内在化前に著しい薬物の放出をもたらす場合があることである。さらに、かかるカリケアマイシン−リンカー−抗体コンジュゲートの使用は、典型的には、形成凝集体をもたらす、具体的には、１抗体分子当たりの薬物負荷が増加する場合に、既知のコンジュゲーションプロセスの能力によって制限され得る。
【００２５】
これまでの実験的証拠に基づいて、リンカーの不在下で、抗体とカリケアマイシン誘導体とのジスルフィド共有結合によって、直接コンジュゲーションが、１抗体当たりの再現可能なカリケアマイシンの薬物充填（ＤＡＲ）、凝集体形成の減少、改善された血流の安定性、及び改善された細胞内放出を特徴とする、改善された抗体−カリケアマイシンコンジュゲートを提供することが発見されている。したがって、ジスルフィド結合によって、カリケアマイシンへの抗体の直接コンジュゲーションが、血流の安定性及び細胞内放出を効果的に分離し、そのため、改善された血流の安定性及び改善された細胞内放出の両方が可能であると考えられる。
【００２６】
定義
別途定義しない限り、本明細書で用いる技術的及び科学的な用語は、本発明が属する分野の当業者により一般的に理解されるのと同じ意味を有し、それらは、Ｓｉｎｇｌｅｔｏｎ  ｅｔ  ａｌ．（１９９４）  Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ  ｏｆ  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ  ａｎｄ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，２ｎｄ  Ｅｄ．，Ｊ．Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，ＮＹ、及びＪａｎｅｗａｙ，Ｃ．，Ｔｒａｖｅｒｓ，Ｐ．，Ｗａｌｐｏｒｔ，Ｍ．，Ｓｈｌｏｍｃｈｉｋ（２００１）  Ｉｍｍｕｎｏｂｉｏｌｏｇｙ，５ｔｈ  Ｅｄ．，Ｇａｒｌａｎｄ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋと一致する。
【００２７】
「親和性」とは、分子（例えば、抗体）とその結合パートナー（例えば、抗原）との単一結合部位の間の非共有結合相互作用の合計の強度を指す。別途示されない限り、本明細書で使用される場合、「結合親和性」とは、結合対のメンバー（例えば、抗体及び抗原）間の１：１の相互作用を反映する固有の結合親和性を指す。分子ＸのそのパートナーＹに対する親和性は、一般に、解離定数（Ｋｄ）で表され得る。親和性は、本明細書に記載される方法を含む当該技術分野で既知の一般的な方法によって測定することができる。結合親和性を測定するための具体的な例証的かつ例示的な実施形態が、以下に記載される。
【００２８】
本明細書における「抗体」という用語は、最も広義に使用され、特に、所望される生物学的活性を呈する限り、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、二量体、多量体、多重特異性抗体（例えば、二重特異性抗体）、及び抗体断片が含まれる（Ｍｉｌｌｅｒ  ｅｔ  ａｌ．（２００３）  Ｊｏｕｒ．ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  １７０：４８５４−４８６１）。抗体は、マウス、ヒト、ヒト化、キメラであってもよいか、または他の種に由来するものであってもよい。抗体は、特定の抗原を認識しそれに結合することができる、免疫系によって生成されるタンパク質である。（Ｊａｎｅｗａｙ，Ｃ．，Ｔｒａｖｅｒｓ，Ｐ．，Ｗａｌｐｏｒｔ，Ｍ．，Ｓｈｌｏｍｃｈｉｋ（２００１）Ｉｍｍｕｎｏ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，５ｔｈ  Ｅｄ．，Ｇａｒｌａｎｄ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ）。標的抗原は、一般に、複数の抗体のＣＤＲによって認識されるエピトープとも呼ばれる多数の結合部位を有する。異なるエピトープに特異的に結合するそれぞれの抗体は、異なる構造を有する。したがって、１つの抗原は、１つを上回る対応する抗体を有し得る。抗体には、完全長免疫グロブリン分子、または完全長免疫グロブリン分子の免疫学的に活性な部分、すなわち、目的の標的抗原またはその一部に免疫特異的に結合する抗原結合部位を含む分子が含まれ、そのような標的としては、癌細胞、または自己免疫疾患と関連する自己免疫抗体を産生する細胞（複数可）が含まれるがこれらに限定されない。本明細書に開示される免疫グロブリンは、免疫グロブリン分子の任意の種類（例えば、ＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、及びＩｇＡ）、クラス（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１、及びＩｇＡ２）、またはサブクラスのものであり得る。免疫グロブリンは、任意の種に由来し得る。しかしながら、一態様において、免疫グロブリンは、ヒト、マウス、またはウサギ起源のものである。
【００２９】
「抗体断片」には、完全長抗体の一部分、一般には、その抗原結合領域または可変領域が含まれる。抗体断片の例としては、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、及びＦｖ断片；ダイアボディ；直鎖抗体；ミニボディ（Ｏｌａｆｓｅｎ  ｅｔ  ａｌ（２００４）  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｎｇ．Ｄｅｓｉｇｎ  ＆  Ｓｅｌ．１７（４）：３１５−３２３）、Ｆａｂ発現ライブラリーによって産生される断片、抗イディオタイプ（抗Ｉｄ）抗体、ＣＤＲ（相補性決定領域）、及び癌細胞抗原、ウイルス抗原、または微生物抗原に免疫特異的に結合する本明細書において任意に記載されるエピトープ結合断片、一本鎖抗体分子；ならびに抗体断片から形成された多重特異性抗体が挙げられる。
【００３０】
本明細書に使用される「モノクローナル抗体」という用語は、実質的に同種の抗体の集団から得られた抗体を指す、すなわち、その集団に含まれる個々の抗体は同一であるが、少量で存在し得る天然の変異の可能性は除く。モノクローナル抗体は、高度に特異的であり、単一の抗原部位を対象としている。さらに、異なる決定基（エピトープ）に指向される異なる抗体を含むポリクローナル抗体調製物とは対照的に、それぞれのモノクローナル抗体は、抗原上の単一の決定基に指向されるものである。それらの特異性に加えて、モノクローナル抗体は、他の抗体が混入することなく合成することができるという点で、有利である。「モノクローナル」という修飾語は、実質的に同種の抗体集団から得られるという抗体の特徴を示し、任意の特定の方法による抗体の産生を必要とするものと解釈されるべきではない。例えば、本発明に従って使用されるモノクローナル抗体は、Ｋｏｈｌｅｒ  ｅｔ  ａｌ．（１９７５）  Ｎａｔｕｒｅ  ２５６：４９５によって最初に記載されたハイブリドーマ法によって作製され得るか、または組換えＤＮＡ法（例えば、米国特許第４８１６５６７号、同第５８０７７１５号を参照のこと）によって作製され得る。モノクローナル抗体はまた、例えば、Ｃｌａｃｋｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．（１９９１）  Ｎａｔｕｒｅ，３５２：６２４−６２８、Ｍａｒｋｓ  ｅｔ  ａｌ．（１９９１）  Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，２２２：５８１−５９７に記載される技術を用いて、ファージ抗体ライブラリーから単離され得る。
【００３１】
本明細書におけるモノクローナル抗体には、特に、重鎖及び／または軽鎖の一部分が、特定の種に由来するかまたは特定の抗体クラスもしくはサブクラスに属する抗体における対応する配列と同一または同種であり、一方で鎖（複数可）の残りが別の種に由来するかまたは別の抗体クラスもしくはサブクラスに属する抗体における対応する配列と同一または同種である、「キメラ」抗体、ならびにそのような抗体の断片が含まれるが、これは、それらが所望される生物学的活性を呈する限りにおいてである（米国特許第４８１６５６７号及びＭｏｒｒｉｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ（１９８４）  Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８１：６８５１−６８５５）。本明細書の目的のキメラ抗体には、非ヒト霊長類（例えば、旧世界ザル、類人猿等）に由来する可変ドメイン抗原結合配列とヒト定常領域配列とを含む、「霊長類化」抗体が含まれる。
【００３２】
本明細書において「無傷抗体」とは、ＶＬドメイン及びＶＨドメイン、ならびに軽鎖定常ドメイン（ＣＬ）及び重鎖定常ドメインＣＨ１、ＣＨ２、及びＣＨ３を含むものである。定常ドメインは、天然配列の定常ドメイン（例えば、ヒトの天然配列の定常ドメイン）またはそのアミノ酸配列変異体であり得る。無傷抗体は、１つ以上の「エフェクター機能」を有し得、この機能は、抗体のＦｃ定常領域（天然配列の配列Ｆｃ領域またはアミノ酸配列変異体のＦｃ領域）に起因し得る生物学的活性を指す。抗体のエフェクター機能の例としては、Ｃ１ｑ結合、補体依存性細胞傷害性、Ｆｃ受容体結合、抗体依存性細胞媒介性細胞傷害性（ＡＤＣＣ）、ファゴサイトーシス、ならびにＢ細胞受容体及びＢＣＲなどの細胞表面受容体の下方制御が挙げられる。
【００３３】
重鎖の定常ドメインのアミノ酸配列に応じて、無傷抗体には、異なる「クラス」が割り当てられ得る。無傷免疫グロブリン抗体にはＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、及びＩｇＭの５つの主要なクラスがあり、これらのうちいくつかは、「サブクラス」（アイソタイプ）、例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ、及びＩｇＡ２にさらに分割され得る。抗体の異なるクラスに対応する重鎖定常ドメインは、それぞれ、α、δ、ε、γ、及びμと呼ばれる。免疫グロブリンの異なるクラスのサブユニット構造及び三次元構成は周知である。Ｉｇの形態には、ヒンジ修飾またはヒンジなしの形態が含まれる（Ｒｏｕｘ  ｅｔ  ａｌ．（１９９８）  Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６１：４０８３−４０９０、Ｌｕｎｄ  ｅｔ  ａｌ．（２０００）  Ｅｕｒ．Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．２６７：７２４６−７２５６、米国特許公開第２００５／００４８５７２号、同第２００４／０２２９３１０号）。
【００３４】
「システイン操作抗体」または「システイン操作抗体変異体」は、抗体の１つ以上の残基がシステイン残基で置換されている抗体である。本開示に従って、システイン操作抗体のチオール基（複数可）を、カリケアマイシンとコンジュゲートして、ＴＨＩＯＭＡＢ（商標）抗体（すなわち、ＴＨＩＯＭＡＢ（商標）薬物コンジュゲート（ＴＤＣ）、本開示に従って、薬物がカリケアマイシン誘導体である）を形成することができる。特定の実施形態において、置換された残基は、抗体の利用しやすい部位で生じる。これらの残基をシステインで置換することによって、反応性のチオール基がそれにより抗体の利用しやすい部位に位置付けられ、それを使用して、薬物部分に抗体をコンジュゲートして、本明細書にさらに記載される、免疫コンジュゲートを作製することができる。例えば、ＴＨＩＯＭＡＢ（商標）抗体は、軽鎖におけるシステインではない天然残基のシステインへの単一の変異（例えば、Ｋａｂａｔ番号付けによるＧ６４Ｃ、Ｋ１４９Ｃ、もしくはＲ１４２Ｃ）または重鎖におけるもの（例えば、Ｋａｂａｔ番号付けによるＤ１０１ＣもしくはＶ１８４ＣもしくはＴ２０５Ｃ）を有する抗体であり得る。具体的な例では、ＴＨＩＯＭＡＢ（商標）抗体は、重鎖または軽鎖のいずれかに単一のシステイン変異を有し、そのため各完全長抗体（すなわち、２つの重鎖と２つの軽鎖を有する抗体）は、２つの操作されたシステイン残基を有することになる。システイン操作抗体及び予備方法は、米国特許公開第２０１２／０１２１６１５  Ａ１号（参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）によって開示される。
【００３５】
「癌」及び「癌性」という用語は、細胞成長／増殖の未調節によって典型的に特徴付けられる、哺乳動物における生理学的状態を指すか、または説明する。癌の例には、癌腫、リンパ腫（例えば、ホジキン及び非ホジキンリンパ腫）、芽細胞腫、肉腫、及び白血病が挙げられるが、これらに限定されない。かかる癌のより具体的な例には、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、慢性骨髄単球性白血病、急性前骨髄球性白血病（ＡＰＬ）、慢性骨髄増殖性障害、血小板性白血病、前駆体Ｂ細胞急性リンパ芽球性白血病（ｐｒｅ−Ｂ−ＡＬＬ）、前駆体Ｔ細胞急性リンパ芽球性白血病（ｐｒｅＴ−ＡＬＬ）、多発性骨髄腫（ＭＭ）、肥満細胞疾患、肥満細胞性白血病、肥満細胞肉腫、骨髄性肉腫、リンパ性白血病、及び未分化白血病が含まれる。いくつかの実施形態において、癌は、骨髄性白血病である。いくつかの実施形態において、癌は、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）である。
【００３６】
「キメラ」抗体という用語は、重鎖及び／または軽鎖の一部が特定の源または種に由来し、一方で重鎖及び／または軽鎖の残りが異なる源または種に由来する抗体を指す。
【００３７】
抗体の「クラス」は、その重鎖によって保有される定常ドメインまたは定常領域の型を指す。抗体の５つの主要なクラス：ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、及びＩｇＭが存在し、これらのいくつかは、サブクラス（アイソタイプ）、例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１、及びＩｇＡ２にさらに分けることができる。免疫グロブリンの異なるクラスに対応する重鎖定常ドメインはそれぞれ、α、δ、ε、γ、及びμと呼ばれる。
【００３８】
「エフェクター機能」とは、抗体のアイソタイプにより異なる抗体のＦｃ領域に起因する生物活性を指す。抗体エフェクター機能の例としては、Ｃ１ｑ結合及び補体依存性細胞傷害性（ＣＤＣ）、Ｆｃ受容体結合、抗体依存性細胞媒介性細胞傷害性（ＡＤＣＣ）、食作用、細胞表面受容体（例えば、Ｂ細胞受容体）の下方制御、ならびにＢ細胞活性化が挙げられる。
【００３９】
薬剤、例えば、薬学的製剤の「有効量」とは、必要な投与量で必要な期間にわたって所望の治療または予防結果を達成するのに有効な量を指す。
【００４０】
「エピトープ」という用語は、抗体が結合する抗原分子上の特定の部位を指す。いくつかの実施形態において、抗体が結合する抗原分子上の特定の部位は、ヒドロキシルラジカルフットプリント法によって決定される。
【００４１】
本明細書における「Ｆｃ領域」という用語は、定常領域の少なくとも一部を含有する免疫グロブリン重鎖のＣ末端領域を定義するように使用される。この用語は、天然配列Ｆｃ領域及び変異型Ｆｃ領域を含む。一実施形態において、ヒトＩｇＧ重鎖Ｆｃ領域は、Ｃｙｓ２２６から、またはＰｒｏ２３０から、重鎖のカルボキシル末端に及ぶ。しかしながら、Ｆｃ領域のＣ末端リジン（Ｌｙｓ４４７）は、存在する場合もあれば、しない場合もある。本明細書で別途明記されない限り、Ｆｃ領域または定常領域内のアミノ酸残基の番号付けは、Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈ  Ｅｄ．Ｐｕｂｌｉｃ  Ｈｅａｌｔｈ  Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ，１９９１に記載される、ＥＵインデックスとも呼ばれるＥＵ番号付けシステムに従う。
【００４２】
「フレームワーク」または「ＦＲ」とは、超可変領域（ＨＶＲ）残基以外の可変ドメイン残基を指す。可変ドメインのＦＲは、一般に、４つのＦＲドメイン、ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３、及びＦＲ４からなる。したがって、ＨＶＲ及びＦＲ配列は、一般に、ＶＨ（またはＶＬ）にＦＲ１−Ｈ１（Ｌ１）−ＦＲ２−Ｈ２（Ｌ２）−ＦＲ３−Ｈ３（Ｌ３）−ＦＲ４の順序で出現する。
【００４３】
「完全長抗体」、「無傷抗体」、及び「全抗体」という用語は、本明細書で、天然抗体構造と実質的に同様の構造を有するか、または本明細書に定義されるＦｃ領域を含有する重鎖を有する抗体を指すように同義に使用される。
【００４４】
「宿主細胞」、「宿主細胞株」、及び「宿主細胞培養物」という用語は同義に使用され、外因性核酸が導入された細胞を指し、そのような細胞の子孫を含む。宿主細胞には、「形質転換体」及び「形質転換細胞」が含まれ、これらには、初代形質転換細胞及び継代の数にかかわらずそれに由来する子孫が含まれる。子孫は、核酸含有量が親細胞と完全に同一ではない場合があるが、変異を含み得る。最初に形質転換された細胞についてスクリーニングまたは選択されたものと同じ機能または生物活性を有する変異子孫が、本明細書に含まれる。
【００４５】
「ヒト抗体」は、ヒトもしくはヒト細胞によって産生された抗体、またはヒト抗体レパートリーもしくは他のヒト抗体コード配列を利用する非ヒト源に由来する抗体のアミノ酸配列に対応するアミノ酸配列を保有するものである。ヒト抗体のこの定義は、非ヒト抗原結合残基を含むヒト化抗体を明確に除外する。
【００４６】
「ヒトコンセンサスフレームワーク」は、ヒト免疫グロブリンＶＬまたはＶＨフレームワーク配列の選択において最も一般的に生じるアミノ酸残基を表すフレームワークである。一般に、ヒト免疫グロブリンＶＬまたはＶＨ配列の選択は、可変ドメイン配列の下位群からである。一般に、配列の下位群は、Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，Ｆｉｆｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，ＮＩＨ  Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ  ９１−３２４２，Ｂｅｔｈｅｓｄａ  ＭＤ（１９９１），ｖｏｌｓ．１−３にあるような下位群である。一実施形態において、ＶＬについて、下位群は、上記のＫａｂａｔらにあるような下位群カッパＩである。一実施形態において、ＶＨについて、下位群は、上記のＫａｂａｔらにあるような下位群ＩＩＩである。
【００４７】
「ヒト化」抗体は、非ヒトＨＶＲ由来のアミノ酸残基及びヒトＦＲ由来のアミノ酸残基を含むキメラ抗体を指す。特定の実施形態において、ヒト化抗体は、少なくとも１つ、典型的には２つの可変ドメインの実質的に全てを含み、そのＨＶＲ（例えば、ＣＤＲ）の全てまたは実質的に全てが非ヒト抗体のものに対応し、ＦＲの全てまたは実質的に全てがヒト抗体のものに対応する。ヒト化抗体は、任意に、ヒト抗体に由来する抗体定常領域の少なくとも一部を含んでもよい。抗体、例えば非ヒト抗体の「ヒト化型」は、ヒト化を受けた抗体を指す。
【００４８】
「可変領域」または「可変ドメイン」という用語は、抗体の抗原への結合に関与する抗体の重鎖または軽鎖のドメインを指す。天然抗体の重鎖及び軽鎖の可変ドメイン（それぞれ、ＶＨ及びＶＬ）は、一般に類似の構造を有し、各ドメインが４つの保存フレームワーク領域（ＦＲ）及び３つの超可変領域（ＨＶＲ）を含む。（例えば、Ｋｉｎｄｔ  ｅｔ  ａｌ．Ｋｕｂｙ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，６ｔｈ  ｅｄ．，Ｗ．Ｈ．Ｆｒｅｅｍａｎ  ａｎｄ  Ｃｏ．，ｐａｇｅ  ９１（２００７）を参照のこと。）単一のＶＨドメインまたはＶＬドメインは、抗原結合特異性を付与するのに十分であり得る。さらに、特定の抗原に結合する抗体を、ＶＨドメインまたはＶＬドメインを使用して抗原に結合する抗体から単離し、それぞれ、相補的ＶＬドメインまたはＶＨドメインのライブラリーをスクリーニングすることができる。例えば、Ｐｏｒｔｏｌａｎｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５０：８８０−８８７（１９９３）、Ｃｌａｒｋｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  ３５２：６２４−６２８（１９９１）を参照のこと。
【００４９】
本明細書で使用される「ベクター」という用語は、それが結合している別の核酸を運搬することができる核酸分子を指す。この用語は、自己複製核酸構造としてのベクター、及びそれが導入される宿主細胞のゲノム内に組み込まれたベクターを含む。ある特定のベクターは、それらが作動可能に結合している核酸の発現を誘導することができる。かかるベクターは、本明細書で「発現ベクター」と称される。
【００５０】
本明細書で使用される「超可変領域」または「ＨＶＲ」という用語は、抗体可変ドメインの領域の各々を指す。配列が超可変であり、かつ／または構造的に規定されたループ（「超可変ループ」）を形成する。一般に、天然四本鎖抗体は、６つのＨＶＲを含み、３つがＶＨにあり（Ｈ１、Ｈ２、Ｈ３）、３つがＶＬにある（Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３）。ＨＶＲは、一般に、超可変ループ及び／または「相補性決定領域」（ＣＤＲ）由来のアミノ酸残基を含み、後者は、配列可変性が最も高く、かつ／または抗原認識に関与する。例示的な超可変ループは、アミノ酸残基２６〜３２（Ｌ１）、５０〜５２（Ｌ２）、９１〜９６（Ｌ３）、２６〜３２（Ｈ１）、５３〜５５（Ｈ２）、及び９６〜１０１（Ｈ３）において生じる（Ｃｈｏｔｈｉａ  ａｎｄ  Ｌｅｓｋ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１−９１７（１９８７））。例示的なＣＤＲ（ＣＤＲ−Ｌ１、ＣＤＲ−Ｌ２、ＣＤＲ−Ｌ３、ＣＤＲ−Ｈ１、ＣＤＲ−Ｈ２、及びＣＤＲ−Ｈ３）は、アミノ酸残基２４〜３４（Ｌ１）、５０〜５６（Ｌ２）、８９〜９７（Ｌ３）、３１〜３５Ｂ（Ｈ１）、５０〜６５（Ｈ２）、及び９５〜１０２（Ｈ３）において生じる（Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈ  Ｅｄ．Ｐｕｂｌｉｃ  Ｈｅａｌｔｈ  Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ（１９９１）。）ＶＨ内のＣＤＲ１を除いて、ＣＤＲは、一般に、超可変ループを形成するアミノ酸残基を含む。ＣＤＲは、抗原と接触する残基である「特異性決定残基」または「ＳＤＲ」も含む。ＳＤＲは、短縮（ａｂｂｒｅｖｉａｔｅｄ）−ＣＤＲ、またはａ−ＣＤＲと呼ばれるＣＤＲの領域内に収容される。例示のａ−ＣＤＲ（ａ−ＣＤＲ−Ｌ１、ａ−ＣＤＲ−Ｌ２、ａ−ＣＤＲ−Ｌ３、ａ−ＣＤＲ−Ｈ１、ａ−ＣＤＲ−Ｈ２、及びａ−ＣＤＲ−Ｈ３）は、アミノ酸残基３１〜３４（Ｌ１）、５０〜５５（Ｌ２）、８９〜９６（Ｌ３）、３１〜３５Ｂ（Ｈ１）、５０〜５８（Ｈ２）、及び９５〜１０２（Ｈ３）に生じる。（Ａｌｍａｇｒｏ  ａｎｄ  Ｆｒａｎｓｓｏｎ，Ｆｒｏｎｔ．Ｂｉｏｓｃｉ．１３：１６１９−１６３３（２００８）を参照のこと。）別途指定されない限り、ＨＶＲ残基及び可変ドメイン内の他の残基（例えば、ＦＲ残基）は、Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．（上記参照）に従って本明細書で番号付けされる。
【００５１】
「個体」または「対象」は、哺乳動物である。哺乳動物には、家畜（例えば、ウシ、ヒツジ、ネコ、イヌ、及びウマ）、霊長類（例えば、ヒト、及びサル等の非ヒト霊長類）、ウサギ、ならびに齧歯類（例えば、マウス及びラット）が含まれるが、これらに限定されない。ある特定の実施形態において、個体または対象は、ヒトである。
【００５２】
「単離抗体」は、その天然環境の構成成分から分離された抗体である。いくつかの実施形態において、抗体は、例えば、電気泳動（例えば、ＳＤＳ−ＰＡＧＥ、等電点電気泳動法（ＩＥＦ）、キャピラリー電気泳動法）またはクロマトグラフ（例えば、イオン交換もしくは逆相ＨＰＬＣ）によって決定される、９５％または９９％を超える純度に精製される。抗体の純度を評定するための方法の概説については、例えば、Ｆｌａｔｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒ．Ｂ  ８４８：７９−８７（２００７）を参照のこと。
【００５３】
「天然抗体」とは、様々な構造を有する天然に存在する免疫グロブリン分子を指す。例えば、天然ＩｇＧ抗体は、ジスルフィド結合されている２つの同一の軽鎖及び２つの同一の重鎖から構成される、約１５０，０００ダルトンのヘテロ四量体糖タンパク質である。Ｎ末端からＣ末端まで、各重鎖は、可変重ドメイン（ｖａｒｉａｂｌｅ  ｈｅａｖｙ  ｄｏｍａｉｎ）または重鎖可変ドメインとも呼ばれる可変領域（ＶＨ）と、その後に３つの定常ドメイン（ＣＨ１、ＣＨ２、及びＣＨ３）とを有する。同様に、Ｎ末端からＣ末端まで、各軽鎖は、可変軽ドメイン（ｖａｒｉａｂｌｅ  ｌｉｇｈｔ  ｄｏｍａｉｎ）または軽鎖可変ドメインとも呼ばれる可変領域（ＶＬ）と、その後に定常軽（ＣＬ）ドメインとを有する。抗体の軽鎖は、その定常ドメインのアミノ酸配列に基づいて、カッパ（κ）及びラムダ（λ）と呼ばれる２つの型のうちの１つに割り当てられ得る。
【００５４】
「添付文書」という用語は、かかる治療薬の適応症、使用法、投薬量、投与、併用療法、禁忌症についての情報、及び／またはその使用に関する警告を含有する、治療剤製品の市販パッケージに通例含まれる指示書を指すように使用される。
【００５５】
参照ポリペプチド配列に対する「アミノ酸配列同一性パーセント（％）」は、いずれの保存的置換も配列同一性の一部として考慮しない、配列を整列させ、必要に応じてギャップを導入して、最大配列同一性パーセントを達成した後の、参照ポリペプチド配列におけるアミノ酸残基と同一の候補配列におけるアミノ酸残基の割合と定義される。アミノ酸配列同一性パーセントを決定するための整列は、当該技術分野の技術範囲内の様々な方法で、例えば、ＢＬＡＳＴ、ＢＬＡＳＴ−２、ＡＬＩＧＮ、またはＭｅｇａｌｉｇｎ（ＤＮＡＳＴＡＲ）ソフトウェア等の公的に入手可能なコンピュータソフトウェアを使用して達成され得る。当業者であれば、比較される配列の全長にわたる最大整列を達成するのに必要な任意のアルゴリズムを含む、配列の整列に適切なパラメータを決定することができる。しかしながら、本明細書における目的のために、アミノ酸配列同一性％値は、配列比較コンピュータプログラムＡＬＩＧＮ−２を使用して生成される。ＡＬＩＧＮ−２配列比較コンピュータプログラムは、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ，Ｉｎｃ．によって記述され、ソースコードは、ユーザ文書と共に米国著作権庁（Ｕ．Ｓ．Ｃｏｐｙｒｉｇｈｔ  Ｏｆｆｉｃｅ），Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ  Ｄ．Ｃ．，２０５５９に提出されており、米国著作権番号ＴＸＵ５１００８７の下に登録されている。ＡＬＩＧＮ−２プログラムは、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ，Ｉｎｃ．，Ｓｏｕｔｈ  Ｓａｎ  Ｆｒａｎｃｉｓｃｏ，Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａから公的に入手可能であるか、またはソースコードからコンパイルされ得る。ＡＬＩＧＮ−２プログラムは、デジタルＵＮＩＸ（登録商標）  Ｖ４．０Ｄを含むＵＮＩＸ（登録商標）オペレーティングシステムでの使用のためにコンパイルされるべきである。全ての配列比較パラメータは、ＡＬＩＧＮ−２プログラムによって設定されており、変動しない。
【００５６】
アミノ酸配列比較のためにＡＬＩＧＮ−２が用いられる状況下で、所与のアミノ酸配列Ａの、所与のアミノ酸配列Ｂへの、所与のアミノ酸配列Ｂとの、または所与のアミノ酸配列Ｂに対するアミノ酸配列同一性％（あるいは、所与のアミノ酸配列Ｂへの、所与のアミノ酸配列Ｂとの、または所与のアミノ酸配列Ｂに対するある特定のアミノ酸配列同一性％を有するか、または含む所与のアミノ酸配列Ａと表現され得る）は、以下のように計算される：１００×分数Ｘ／Ｙ。式中、Ｘは、配列整列プログラムＡＬＩＧＮ−２によってそのプログラムのＡとＢとの整列において完全な一致とスコア化されるアミノ酸残基の数であり、Ｙは、Ｂ内のアミノ酸残基の総数である。アミノ酸配列Ａの長さがアミノ酸配列Ｂの長さと等しくない場合、ＡのＢに対するアミノ酸配列同一性％が、ＢのＡに対するアミノ酸配列同一性％と等しくないことが理解される。別途具体的に明記されない限り、本明細書で使用される全てのアミノ酸配列同一性％値は、直前の段落に記載されるようにＡＬＩＧＮ−２コンピュータプログラムを使用して得られる。
【００５７】
「薬学的製剤」という用語は、調製物の中に含有される活性成分の生物学的活性が有効になるような形態であり、かつ製剤が投与される対象にとって許容できないほど有毒である追加の構成成分を何ら含有しない調製物を指す。
【００５８】
「薬学的に許容される担体」は、対象にとって無毒である、活性成分以外の薬学的製剤中の成分を指す。薬学的に許容される担体には、緩衝液、賦形剤、安定剤、または保存剤が含まれるが、これらに限定されない。
【００５９】
「治療する」及び「治療」という用語は、治療的治療及び予防的または防止処置の両方を指し、その目的は、望ましくない生理学的変化または障害、例えば、癌の発生または拡がりを予防または遅延（緩和）することである。本発明の目的では、有益または所望の臨床結果としては、検出できるか検出できないかに関係なく、症状の軽減、疾患の程度の減弱、疾患の状態の安定化（すなわち、悪化しない）、疾患進行の遅延または減速、疾患状態の緩和または一時的緩和、及び寛解（部分的もしくは完全なもの）が挙げられるがこれらに限定されない。「治療」はまた、治療を受けていなかった場合に予測される生存と比較して、生存期間を長くすることも意味し得る。治療が必要なものには、状態もしくは障害を既に有するもの、ならびに状態もしくは障害を有する傾向にあるもの、または状態もしくは障害を予防する必要があるものが挙げられる。
【００６０】
「治療有効量」という用語は、哺乳動物における疾患または障害を治療するのに有効な薬物の量を指す。癌の場合、薬物の治療有効量は、癌細胞の数の低減；腫瘍サイズの縮小；癌細胞が末梢器官に浸潤することの阻害（すなわち、ある程度の遅延及び好ましくは停止）；腫瘍転移の阻害（すなわち、ある程度の遅延及び好ましくは停止）；腫瘍成長のある程度の阻害；ならびに／または癌と関連する症状の１つ以上のある程度の緩和を行うことができる。薬物が既存の癌細胞の成長の予防及び／またはそれらの殺滅を行うことができる限り、この薬物は細胞増殖抑制性及び／または細胞傷害性であり得る。癌療法に関しては、有効性は、例えば、疾患進行に対する時間（ＴＴＰ）の評価及び／または応答速度（ＲＲ）の判定によって、測定することができる。
【００６１】
「癌」及び「癌性」という用語は、制御されていない細胞成長を典型的に特徴とする哺乳動物における生理学的状態を指すか、または説明する。「腫瘍」は、１つ以上の癌性細胞を含む。癌の例としては、癌腫、リンパ腫、芽細胞腫、肉腫、及び白血病またはリンパ系の悪性病変が挙げられるがこれらに限定されない。そのような癌のより具体的な例としては、扁平上皮細胞癌（例えば、上皮系扁平上皮細胞癌（ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ  ｓｑｕａｍｏｕｓ  ｃｅｌｌ  ｃａｎｃｅｒ））、小細胞肺癌、非小細胞肺癌（「ＮＳＣＬＣ」）、肺の腺癌、及び肺の扁平上皮癌を含む肺癌、腹膜の癌、肝細胞癌、消化管癌を含む胃癌（ｇａｓｔｒｉｃ  ｃａｎｃｅｒ）または胃癌（ｓｔｏｍａｃｈ  ｃａｎｃｅｒ）、膵臓癌、膠芽腫、子宮頸癌、卵巣癌、肝臓癌、膀胱癌、肝細胞癌、乳癌、結腸癌、直腸癌、結腸直腸癌、子宮内膜癌または子宮癌、唾液腺癌、腎臓癌（ｋｉｄｎｅｙ  ｃａｎｃｅｒ）または腎臓癌（ｒｅｎａｌ  ｃａｎｃｅｒ）、前立腺癌、外陰部癌、甲状腺癌、肝癌、肛門癌、陰茎癌、ならびに頭頸部癌が挙げられる。
【００６２】
本明細書で使用される「離脱基」という用語は、本明細書に記載される基を含む化学反応の過程で離れる、スルフヒドリル部分を指す。
【００６３】
本明細書で使用される、「ヒドロカルビル」という用語は、専ら炭素及び水素の元素のみからなる有機化合物またはラジカルを説明する。これらの部分は、アルキル、アルケニル、アルキニル、及びアリール部分を含むが、これらに限定されない。これらの部分はまた、アルカリール、アルケンアリール（ａｌｋｅｎａｒｙｌ）、及びアルキナリル（ａｌｋｙｎａｒｙｌ）等の他の脂肪族または環状炭化水素基で置換された、アルキル、アルケニル、アルキニル、及びアリール部分も含む。別段示さない限り、これらの部分は、好ましくは、１〜２０個の炭素原子、１〜１０個の炭素原子、または１〜６個の炭素原子を含む。
【００６４】
別段示さない限り、本明細書に記載されるアルキル基は、好ましくは、主鎖に１〜８個の炭素原子を含有する低級アルキルである。それらは、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、アリル、ベンジル、ヘキシル等が含まれるが、これらに限定されない、直鎖もしくは分岐鎖または環状であり得る。
【００６５】
別段示さない限り、本明細書に記載されるアルキニル基は、好ましくは、主鎖に２〜８個の炭素原子を含有し、２０個までの炭素原子を含有する低級アルキニルである。それらは、エチニル、プロピニル、ブチニル、イソブチニル、ヘキシニル等が含まれるが、これらに限定されない、直鎖または分岐鎖であり得る。
【００６６】
本明細書で単独でまたは別の基の一部として使用される「アリール」という用語は、任意で置換された同素環芳香族基、好ましくは、フェニル、ビフェニル、ナフチル、置換フェニル、置換ビフェニル、または置換ナフチル等であるが、これらに限定されない、環部分内に５〜２０個の炭素、５〜１０個の炭素、または５〜６個の炭素を含有する単環式基または二環式基を意味する。アリール部分は、任意に、Ｏ、Ｓ、及びＮから選択される１つ以上のヘテロ原子を含み得る。かかる複素環式芳香族化合物は、環内に１または２個の窒素原子、１または２個の硫黄原子、１または２個の酸素原子、及びこれらの組み合わせを含み得、各ヘテロ原子は、炭素を通して分子の残りに結合する。非限定的な例示の基としては、ピリジン、ピラジン、ピリミジン、ピラゾール、ピロール、イミダゾール、チオペン、チオピリリウム（ｔｈｉｏｐｙｒｒｉｌｉｕｍ）、パラチアジン、インドール、プリン、ベンズイミダゾール、キノロン、フェノチアジンが挙げられる。非限定的な例示の置換基としては、以下の基：ヒドロカルビル、置換ヒドロカルビル、アルキル、アルコキシ、アシル、アシルオキシ、アルケニル、アルケノキシ、アリール、アリールオキシ、アミノ、アミド、アセタール、カルバミル、カルボシクロ、シアノ、エステル、エーテル、ハロゲン、ヘテロシクロ、ヒドロキシル、ケト、ケタール、ホスホ、ニトロ、及びチオのうちの１つ以上が挙げられる。
【００６７】
本明細書に記載される「置換」部分は、炭素以外の少なくとも１つの原子で置換されるヒドロカルビル、アルキル、及びアリール等の部分であり、炭素鎖原子が窒素、酸素、ケイ素、リン、ホウ素、硫黄、またはハロゲン原子等のヘテロ原子で置換される部分を含む。これらの置換基としては、ハロゲン、ヘテロシクロ、アルコキシ、アルケノキシ、アルキノキシ、アリールオキシ、ヒドロキシ、ケト、アシル、アシルオキシ、ニトロ、第三級アミノ、アミド、ニトロ、シアノ、チオ、スルフィネート、スルホンアミド、ケタール、アセタール、エステル、及びエーテルが挙げられるが、これらに限定されない。
【００６８】
本明細書で単独でまたは別の基の一部として使用される「ハロゲン」という用語は、塩素、臭素、フッ素、及びヨウ素を指す。
【００６９】
抗体
本開示の実施形態のうちのいずれかにおいて、抗体は、ヒト化である。一実施形態において、抗体は、本開示の実施形態のいずれかにあるようなＨＶＲを含み、ヒトアクセプターフレームワーク、例えば、ヒト免疫グロブリンフレームワークまたはヒトコンセンサスフレームワークをさらに含む。ある特定の実施形態において、ヒトアクセプターフレームワークは、ヒトＶＬカッパＩコンセンサス（ＶＬＫＩ）フレームワーク及び／またはＶＨフレームワークＶＨ１である。ある特定の実施形態において、ヒトアクセプターフレームワークは、以下の変異のうちのいずれか１つを含む、ヒトＶＬカッパＩコンセンサス（ＶＬＫＩ）フレームワーク及び／またはＶＨフレームワークＶＨ１である。
【００７０】
別の態様において、抗体は、本明細書に提供される実施形態のうちのいずれかにあるようなＶＨ、及び本明細書に提供される実施形態のうちのいずれかにあるようなＶＬを含む。
【００７１】
本発明のさらなる態様において、本明細書において実施形態のうちのいずれかによる抗体は、ヒト抗体を含むモノクローナル抗体である。一実施形態において、抗体は、抗体断片、例えば、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、ｓｃＦｖ、ダイアボディ、またはＦ（ａｂ’）２断片である。別の実施形態において、本抗体は、実質的に完全長の抗体、例えば、本明細書に定義されるＩｇＧ１抗体、ＩｇＧ２ａ抗体、または他の抗体クラスもしくはアイソタイプである。
【００７２】
さらなる態様において、本明細書において実施形態のうちのいずれかによる抗体は、本明細書に記載される特長のうちのいずれかを、単独でまたは組み合わせて組み込むことができる。
【００７３】
１．抗体親和性
ある特定の実施形態において、本明細書に提供される抗体は、１μＭ以下、１００ｎＭ以下、５０ｎＭ以下、１０ｎＭ以下、５ｎＭ以下、１ｎＭ以下、０．１ｎＭ以下、０．０１ｎＭ以下、または０．００１ｎＭ以下の解離定数（Ｋｄ）を有し、任意に、１０−１３Ｍ以上（例えば、１０−８Ｍ以下、例えば、１０−８Ｍ〜１０−１３Ｍ、１０−９Ｍ〜１０−１３Ｍ）である。
【００７４】
一実施形態において、Ｋｄは、以下のアッセイにより説明されるように、目的の抗体のＦａｂバージョン及びその抗原を用いて行われる放射標識抗原結合アッセイ（ＲＩＡ）によって測定される。抗原に対するＦａｂの溶液結合親和性は、Ｆａｂを、未標識抗原の一連の滴定の存在下で、最小濃度の（１２５Ｉ）標識抗原と平衡化し、次いで抗Ｆａｂ抗体コーティングプレートと結合した抗原を捕捉することによって、測定される（例えば、Ｃｈｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２９３：８６５−８８１（１９９９）を参照のこと）。アッセイの条件を確立するために、ＭＩＣＲＯＴＩＴＥＲ（登録商標）  マルチウェルプレートを、５０ｍＭの炭酸ナトリウム（ｐＨ９．６）中の５μｇ／ｍｌの捕捉用抗Ｆａｂ抗体（Ｃａｐｐｅｌ  Ｌａｂｓ）で一晩コーティングし、その後、ＰＢＳ中の２％（ｗ／ｖ）ウシ血清アルブミンで２〜５時間にわたって室温（約２３℃）で遮断する。非吸着性のプレート（Ｎｕｎｃ番号＃２６９６２０）中で、１００ｐＭまたは２６ｐＭ［１２５Ｉ］−抗原を、目的とするＦａｂの段階希釈液と混合する（例えば、Ｐｒｅｓｔａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．５７：４５９３−４５９９（１９９７）の抗ＶＥＧＦ抗体Ｆａｂ−１２の評価と一致する）。次いで、目的とするＦａｂを一晩インキュベートするが、インキュベーションは、平衡に達することを確実にするために、より長い期間（例えば、約６５時間）継続してもよい。その後、室温でのインキュベーション（例えば、１時間）のために混合物を捕捉プレートに移す。次いで、溶液を除去し、プレートをＰＢＳ中０．１％ポリソルベート２０（ＴＷＥＥＮ−２０（登録商標））で８回洗浄する。プレートが乾燥したら、１５０μＬ／ウェルのシンチラント（ＭＩＣＲＯＳＣＩＮＴ−２０（商標）；Ｐａｃｋａｒｄ）を付加し、プレートをＴＯＰＣＯＵＮＴ（商標）ガンマ計数器（Ｐａｃｋａｒｄ）上で１０分間、計数する。最大結合の２０％以下をもたらす各Ｆａｂの濃度を競合結合アッセイでの使用に選択する。
【００７５】
別の実施形態によれば、Ｋｄは、ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）−２０００、ＢＡＩＣＯＲＥ（登録商標）−Ｔ２００、またはＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）−３０００（ＢＩＡｃｏｒｅ，Ｉｎｃ．，Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ，ＮＪ）を使用した表面プラズモン共鳴アッセイを使用して、２５℃で、約１０応答単位（ＲＵ）で固定化された抗原ＣＭ５チップを用いて測定される。簡潔には、供給業者の指示に従って、カルボキシメチル化デキストランバイオセンサーチップ（ＣＭ５、ＢＩＡＣＯＲＥ，Ｉｎｃ．）を、Ｎ−エチル−Ｎ’−（３−ジメチルアミノプロピル）−カルボジイミド塩酸塩（ＥＤＣ）及びＮ−ヒドロキシスクシンイミド（ＮＨＳ）で活性化する。抗原を、１０ｍＭの酢酸ナトリウム（ｐＨ４．８）で５μｇ／ｍｌまで（約０．２μＭ）希釈し、かつ／またはＨＢＳ−Ｐ（０．０１Ｍ  Ｈｅｐｅｓ  ｐＨ７．４、０．１５Ｍ  ＮａＣｌ、０．００５％Ｓｕｒｆａｃｔａｎｔ  Ｐ２０）で希釈した後、５μｌ／分及び／または３０μｌ／分の流量で注入して、カップリングされたタンパク質のおよそ１０応答単位（ＲＵ）を達成する。抗原の注入後、１Ｍのエタノールアミンを注入して、未反応基を遮断する。動態測定のために、Ｆａｂの２倍段階希釈液（０．７８ｎＭ〜５００ｎＭ）を、２５℃の０．０５％ポリソルベート２０（ＴＷＥＥＮ−２０（商標））界面活性剤（ＰＢＳＴ）を有するＰＢＳ中約２５μＬ／分の流量で注入する。会合速度（ｋｏｎ）及び解離速度（ｋｏｆｆ）は、単純な１対１のラングミュア結合モデル（ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ  Ｓｏｆｔｗａｒｅバージョン３．２）を使用して、会合センサグラムと解離センサグラムとを同時に当てはめることによって計算される。平衡解離定数（Ｋｄ）をｋｏｆｆ／ｋｏｎ比として計算する。例えば、Ｃｈｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２９３：８６５−８８１（１９９９）を参照のこと。上記表面プラズモン共鳴アッセイによるオンレートが１０６Ｍ−１ｓ−１を超える場合、オンレートは、ストップトフローを備えた分光光度計（Ａｖｉｖ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ）、または撹拌キュベットを備えた８０００シリーズＳＬＭ−ＡＭＩＮＣＯ（商標）分光光度計（ＴｈｅｒｍｏＳｐｅｃｔｒｏｎｉｃ）等の分光計で測定される場合に、増加する抗原濃度の存在下で、２５℃で、ＰＢＳ中２０ｎＭの抗−抗原抗体（Ｆａｂ型）（ｐＨ７．２）の蛍光発光強度（励起＝２９５ｎｍ、発光＝３４０ｎｍ、１６ｎｍ帯域通過）の増加または減少を測定する蛍光消光技法を使用して決定することができる。
【００７６】
２．抗体断片
ある特定の実施形態において、本明細書に提供される抗体は、抗体断片である。抗体断片には、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆａｂ’−ＳＨ、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、及びｓｃＦｖ断片、ならびに本明細書に記載される他の断片が含まれるが、これらに限定されない。ある特定の抗体断片の概説については、Ｈｕｄｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．Ｎａｔ．Ｍｅｄ．９：１２９−１３４（２００３）を参照のこと。ｓｃＦｖ断片の概説については、例えば、Ｐｌｕｃｋｔｈｕｎ，ｉｎ  Ｔｈｅ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ  ｏｆ  Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，ｖｏｌ．１１３，Ｒｏｓｅｎｂｕｒｇ  ａｎｄ  Ｍｏｏｒｅ  ｅｄｓ．，（Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ），ｐｐ．２６９−３１５（１９９４）を参照されたく、ＷＯ９３／１６１８５ならびに米国特許第５，５７１，８９４号及び同第５，５８７，４５８号も参照のこと。サルベージ受容体結合エピトープ残基を含み、増加したインビボ半減期を有する、Ｆａｂ及びＦ（ａｂ’）２断片の考察については、米国特許第５，８６９，０４６号を参照のこと。
【００７７】
ダイアボディは、二価または二重特異性であり得る２つの抗原結合部位を有する抗体断片である。例えば、ＥＰ４０４，０９７、ＷＯ１９９３／０１１６１、Ｈｕｄｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔ．Ｍｅｄ．９：１２９−１３４（２００３）、及びＨｏｌｌｉｎｇｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９０：６４４４−６４４８（１９９３）を参照のこと。トリアボディ及びテトラボディも、Ｈｕｄｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔ．Ｍｅｄ．９：１２９−１３４（２００３）に記載されている。
【００７８】
単一ドメイン抗体は、抗体の重鎖可変ドメインの全てもしくは一部、または軽鎖可変ドメインの全てもしくは一部を含む、抗体断片である。ある特定の実施形態において、単一ドメイン抗体は、ヒト単一ドメイン抗体である（Ｄｏｍａｎｔｉｓ，Ｉｎｃ．，Ｗａｌｔｈａｍ，ＭＡ、例えば、米国特許第６，２４８，５１６  Ｂ１号を参照のこと）。
【００７９】
抗体断片は、本明細書に記載されるように、無傷抗体のタンパク質消化及び組み換え宿主細胞（例えば、Ｅ．ｃｏｌｉまたはファージ）による産生を含むが、これらに限定されない様々な技法によって作製することができる。
【００８０】
３．キメラ抗体及びヒト化抗体
ある特定の実施形態において、本明細書に提供される抗体は、キメラ抗体である。ある特定のキメラ抗体は、例えば、米国特許第４，８１６，５６７号、及びＭｏｒｒｉｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８１：６８５１−６８５５（１９８４））に記載される。一例において、キメラ抗体は、非ヒト可変領域（例えば、マウス、ラット、ハムスター、ウサギ、または非ヒト霊長類、例えばサルに由来する可変領域）及びヒト定常領域を含む。さらなる例において、キメラ抗体は、クラスまたはサブクラスが親抗体のクラスまたはサブクラスから変化した「クラススイッチ」抗体である。キメラ抗体には、その抗原結合断片が含まれる。
【００８１】
ある特定の実施形態において、キメラ抗体は、ヒト化抗体である。典型的には、非ヒト抗体は、非ヒト親抗体の特異性及び親和性を保持しながら、ヒトに対する免疫原性を低減させるために、ヒト化される。一般に、ヒト化抗体は、ＨＶＲ、例えば、ＣＤＲ（またはその一部）が非ヒト抗体由来であり、かつＦＲ（またはその一部）がヒト抗体配列由来である１つ以上の可変ドメインを含む。ヒト化抗体は、任意に、ヒト定常領域の少なくとも一部を含むことになる。いくつかの実施形態において、ヒト化抗体におけるいくつかのＦＲ残基は、例えば、抗体特異性または親和性を回復または改善するために、非ヒト抗体（例えば、ＨＶＲ残基が由来する抗体）由来の対応する残基で置換される。
【００８２】
ヒト化抗体及びそれらを作製する方法は、例えば、Ａｌｍａｇｒｏ  ａｎｄ  Ｆｒａｎｓｓｏｎ，Ｆｒｏｎｔ．Ｂｉｏｓｃｉ．１３：１６１９−１６３３（２００８）において概説され、例えば、Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  ３３２：３２３−３２９（１９８８）、Ｑｕｅｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ  Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８６：１００２９−１００３３（１９８９）、米国特許第５，８２１，３３７号、同第７，５２７，７９１号、同第６，９８２，３２１号、及び同第７，０８７，４０９号、Ｋａｓｈｍｉｒｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ  ３６：２５−３４（２００５）（ＳＤＲ（ａ−ＣＤＲ）移植について説明）、Ｐａｄｌａｎ，Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２８：４８９−４９８（１９９１）（「リサーフェイシング」について説明）、Ｄａｌｌ’Ａｃｑｕａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ  ３６：４３−６０（２００５）（「ＦＲシャフリング」について説明）、ならびにＯｓｂｏｕｒｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ  ３６：６１−６８（２００５）及びＫｌｉｍｋａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｒ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ，８３：２５２−２６０（２０００）（ＦＲシャフリングへの「誘導選択」アプローチについて説明）にさらに記載されている。
【００８３】
ヒト化に使用され得るヒトフレームワーク領域としては、「最良適合」法を使用して選択されるフレームワーク領域（例えば、Ｓｉｍｓ  ｅｔ  ａｌ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５１：２２９６（１９９３）を参照のこと）、軽鎖または重鎖可変領域の特定の下位集団のヒト抗体のコンセンサス配列に由来するフレームワーク領域（例えば、Ｃａｒｔｅｒ  ｅｔ  ａｌ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８９：４２８５（１９９２）、及びＰｒｅｓｔａ  ｅｔ  ａｌ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１５１：２６２３（１９９３）を参照のこと）、ヒト成熟（体細胞変異した）フレームワーク領域またはヒト生殖細胞株フレームワーク領域（例えば、Ａｌｍａｇｒｏ  ａｎｄ  Ｆｒａｎｓｓｏｎ，Ｆｒｏｎｔ．Ｂｉｏｓｃｉ．１３：１６１９−１６３３（２００８）を参照のこと）、ならびにＦＲライブラリーのスクリーニングに由来するフレームワーク領域（例えば、Ｂａｃａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７２：１０６７８−１０６８４（１９９７）及びＲｏｓｏｋ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７１：２２６１１−２２６１８（１９９６）を参照のこと）が含まれるが、これらに限定されない。
【００８４】
４．ヒト抗体
ある特定の実施形態において、本明細書に提供される抗体は、ヒト抗体である。ヒト抗体は、当該技術分野で既知の様々な技法を使用して産生することができる。ヒト抗体は、一般に、ｖａｎ  Ｄｉｊｋ  ａｎｄ  ｖａｎ  ｄｅ  Ｗｉｎｋｅｌ，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．５：３６８−７４（２００１）及びＬｏｎｂｅｒｇ，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２０：４５０−４５９（２００８）に記載されている。
【００８５】
ヒト抗体は、抗原投与に応答して、無傷ヒト抗体またはヒト可変領域を有する無傷抗体を産生するように修飾されたトランスジェニック動物に免疫原を投与することによって調製され得る。かかる動物は、典型的には、内因性免疫グロブリン遺伝子座を置き換えるか、または染色体外に存在するかもしくは動物の染色体内にランダムに組み込まれるヒト免疫グロブリン遺伝子座の全てまたは一部を含有する。かかるトランスジェニックマウスにおいて、内因性免疫グロブリン遺伝子座は、一般に、不活性化されている。トランスジェニック動物からヒト抗体を得るための方法の概説については、Ｌｏｎｂｅｒｇ，Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．２３：１１１７−１１２５（２００５）を参照のこと。例えば、米国特許第６，０７５，１８１号及び同第６，１５０，５８４号（ＸＥＮＯＭＯＵＳＥ（商標）技術を記載する）、米国特許第５，７７０，４２９号（ＨＵＭＡＢ（登録商標）技術を記載する）、ならびに米国特許第７，０４１，８７０号（Ｋ−Ｍ  ＭＯＵＳＥ（登録商標）技術を記載する）、ならびに米国特許出願公開第２００７／００６１９００号（ＶＥＬＯＣＩＭＯＵＳＥ（登録商標）技術を記載する）も参照のこと。かかる動物によって生成された無傷抗体由来のヒト可変領域は、例えば、異なるヒト定常領域と組み合わせることによってさらに修飾され得る。
【００８６】
ヒト抗体は、ハイブリドーマに基づく方法によって作製することもできる。ヒトモノクローナル抗体の産生のためのヒト骨髄腫及びマウス−ヒトヘテロ骨髄腫細胞株が説明されてきた（例えば、Ｋｏｚｂｏｒ  Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１３３：３００１（１９８４）、Ｂｒｏｄｅｕｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ  Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ  ａｎｄ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ，ｐｐ．５１−６３（Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，１９８７）、及びＢｏｅｒｎｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１４７：８６（１９９１）を参照のこと）。ヒトＢ細胞ハイブリドーマ技術を介して生成されるヒト抗体もまた、Ｌｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，１０３：３５５７−３５６２（２００６）に記載される。さらなる方法としては、例えば、米国特許第７，１８９，８２６号（ハイブリドーマ細胞株からのモノクローナルヒトＩｇＭ抗体の産生を記載する）及びＮｉ，Ｘｉａｎｄａｉ  Ｍｉａｎｙｉｘｕｅ，２６（４）：２６５−２６８（２００６）（ヒト−ヒトハイブリドーマを記載する）に記載の方法が挙げられる。ヒトハイブリドーマ技術（トリオーマ技術）は、Ｖｏｌｌｍｅｒｓ  ａｎｄ  Ｂｒａｎｄｌｅｉｎ，Ｈｉｓｔｏｌｏｇｙ  ａｎｄ  Ｈｉｓｔｏｐａｔｈｏｌｏｇｙ，２０（３）：９２７−９３７（２００５）及びＶｏｌｌｍｅｒｓ  ａｎｄ  Ｂｒａｎｄｌｅｉｎ，Ｍｅｔｈｏｄｓ  ａｎｄ  Ｆｉｎｄｉｎｇｓ  ｉｎ  Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  ａｎｄ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ，２７（３）：１８５−９１（２００５）にも記載されている。
【００８７】
ヒト抗体はまた、ヒト由来ファージディスプレイライブラリーから選択されるＦｖクローン可変ドメイン配列を単離することによって生成することもできる。かかる可変ドメイン配列は、次いで、所望のヒト定常ドメインと組み合わせることができる。抗体ライブラリーからヒト抗体を選択するための技法は、本明細書に記載される。
【００８８】
５．ライブラリー由来抗体
本発明の抗体は、所望の活性（複数可）を有する抗体についてコンビナトリアルライブラリーをスクリーニングすることによって単離され得る。例えば、ファージディスプレイライブラリーを生成し、所望の結合特性を保有する抗体についてかかるライブラリーをスクリーニングするための多様な方法が、当該技術分野で既知である。かかる方法は、例えば、Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍ  ｅｔ  ａｌ．ｉｎ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  １７８：１−３７（Ｏ’Ｂｒｉｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，ｅｄ．，Ｈｕｍａｎ  Ｐｒｅｓｓ，Ｔｏｔｏｗａ，ＮＪ，２００１）に概説されており、例えば、ＭｃＣａｆｆｅｒｔｙ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  ３４８：５５２−５５４、Ｃｌａｃｋｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  ３５２：６２４−６２８（１９９１）、Ｍａｒｋｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２２：５８１−５９７（１９９２）、Ｍａｒｋｓ  ａｎｄ  Ｂｒａｄｂｕｒｙ，ｉｎ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  ２４８：１６１−１７５（Ｌｏ，ｅｄ．，Ｈｕｍａｎ  Ｐｒｅｓｓ，Ｔｏｔｏｗａ，ＮＪ，２００３）、Ｓｉｄｈｕ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．３３８（２）：２９９−３１０（２００４）、Ｌｅｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．３４０（５）：１０７３−１０９３（２００４）、Ｆｅｌｌｏｕｓｅ，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  １０１（３４）：１２４６７−１２４７２（２００４）、及びＬｅｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ２８４（１−２）：１１９−１３２（２００４）にさらに記載される。
【００８９】
ある特定のファージディスプレイ方法では、ＶＨ及びＶＬ遺伝子のレパートリーが、ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）によって別個にクローニングされ、ファージライブラリーでランダムに組み換えられ、その後、Ｗｉｎｔｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１２：４３３−４５５（１９９４）に記載されるように抗原結合ファージについてスクリーニングされる。ファージは、典型的には、一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）断片またはＦａｂ断片のいずれかとして抗体断片をディスプレイする。免疫化源由来のライブラリーは、ハイブリドーマの構築を必要とすることなく、免疫原に高親和性抗体を提供する。あるいは、ナイーブレパートリーは、Ｇｒｉｆｆｉｔｈｓ  ｅｔ  ａｌ．，ＥＭＢＯ  Ｊ，１２：７２５−７３４（１９９３）によって記載されるように、（例えば、ヒトから）クローニングされて、いかなる免疫化も伴うことなく、広範囲の非自己抗原及び自己抗原に対する単一抗体源を提供することができる。最後に、ナイーブライブラリーはまた、Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍ  ａｎｄ  Ｗｉｎｔｅｒ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，２２７：３８１−３８８（１９９２）に記載されるように、幹細胞からの再配列されていないＶ遺伝子セグメントをクローニングし、無作為配列を含有するＰＣＲプライマーを使用して高度可変ＣＤＲ３領域をコードし、インビトロで再配列を達成することによって、合成的に作製することができる。ヒト抗体ファージライブラリーについて記載する特許公開としては、例えば、米国特許第５，７５０，３７３号、ならびに米国特許公開第２００５／００７９５７４号、同第２００５／０１１９４５５号、同第２００５／０２６６０００号、同第２００７／０１１７１２６号、同第２００７／０１６０５９８号、同第２００７／０２３７７６４号、同第２００７／０２９２９３６号、及び同第２００９／０００２３６０号が挙げられる。
【００９０】
ヒト抗体ライブラリーから単離された抗体または抗体断片は、本明細書においてヒト抗体またはヒト抗体断片と見なされる。
【００９１】
６．多重特異性抗体
ある特定の実施形態において、本明細書に提供される抗体は、多重特異性抗体、例えば、二重特異性抗体である。「多重特異性抗体」という用語は、多重エピトープ特異性を有する（すなわち、１つの生物学的分子上の２つもしくはそれ以上の異なるエピトープに特異的に結合することができるか、または２つもしくはそれ以上の異なる生物学的分子上のエピトープに特異的に結合することができる）抗原結合ドメインを含む抗体を特に網羅する。いくつかの実施形態において、多重特異性抗体は、少なくとも２つの異なる部位に対する結合特異性を有するモノクローナル抗体である。いくつかの実施形態において、多重特異性抗体（二重特異性抗体等）の抗原結合ドメインは、２つのＶＨ／ＶＬユニットを含み、第１のＶＨ／ＶＬユニットは、第１のエピトープに特異的に結合し、第２のＶＨ／ＶＬユニットは、第２のエピトープに特異的に結合し、各ＶＨ／ＶＬユニットは、重鎖可変ドメイン（ＶＨ）及び軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）を含む。かかる多重特異性抗体としては、完全長抗体、２つ以上のＶＬ及びＶＨドメインを有する抗体、抗体断片、例えば、Ｆａｂ、Ｆｖ、ｄｓＦｖ、ｓｃＦｖ、ダイアボディ、二重特異性ダイアボディ及びトリアボディ、共有結合または非共有結合で連結されている抗体断片が挙げられるが、これらに限定されない。重鎖可変領域の少なくとも一部分及び／または軽鎖可変領域の少なくとも一部分をさらに含むＶＨ／ＶＬ単位は、「アーム」または「ヘミマー」または「半抗体」とも称され得る。いくつかの実施形態において、ヘミマーは、第２のヘミマーと分子内ジスルフィド結合が形成されることを可能にするのに十分な重鎖可変領域の部分を含む。いくつかの実施形態において、ヘミマーは、例えば、相補的ホール突然変異またはノブ突然変異を含む第２のヘミマーまたは半抗体とのヘテロ二量体化を可能にする、ノブ突然変異またはホール突然変異を含む。ノブ突然変異及びホール突然変異が、本明細書でさらに考察される。
【００９２】
ある特定の実施形態において、本明細書に提供される多重特異性抗体は、二重特異性抗体であり得る。「二重特異性抗体」という用語は、１つの生物学的分子上の２つの異なるエピトープに特異的に結合することができるか、または２つの異なる生物学的分子上のエピトープに特異的に結合することができる抗原結合ドメインを含む多重特異性抗体を網羅する。本明細書において、二重特異性抗体はまた、「デュアル特異性（ｄｕａｌ  ｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙ）」を有するもの、または「デュアル特異性である（ｄｕａｌ  ｓｐｅｃｉｆｉｃ）」とも称される場合がある。二重特異性抗体は、完全長抗体または抗体断片として調製することができる。本明細書で使用される「二重パラトピック（ｂｉｐａｒａｔｏｐｉｃ）抗体」という用語は、第１の抗原結合ドメイン及び第２の抗原結合ドメインが同じ抗原分子上に２つの異なるエピトープに結合するか、または２つの異なる抗原分子上のエピトープに結合してもよい、二重特異性抗体を指す。
【００９３】
いくつかの実施形態において、二重パラトピック抗体の第１の抗原結合ドメイン及び第２の抗原結合ドメインは、１つの及び同じ抗原分子内の２つのエピトープに結合してもよい（分子内結合）。例えば、二重パラトピック抗体の第１の抗原結合ドメイン及び第２の抗原結合ドメインは、同じ抗体分子上の２つの異なるエピトープに結合してもよい。ある特定の実施形態において、二重パラトピック抗体が結合する２つの異なるエピトープは、通常、１つの単一特異性抗体、例えば、従来の抗体等、または１つの免疫グロブリン単一可変ドメインによって同時に結合されないエピトープである。
【００９４】
いくつかの実施形態において、二重パラトピック抗体の第１の抗原結合ドメイン及び第２の抗原結合ドメインは、２つの別個の抗原分子内に位置するエピトープに結合してもよい。
【００９５】
多重特異性抗体を作製するための技法には、異なる特異性を有する２つの免疫グロブリン重鎖−軽鎖対の組み換え共発現（Ｍｉｌｓｔｅｉｎ  ａｎｄ  Ｃｕｅｌｌｏ，Ｎａｔｕｒｅ  ３０５：５３７（１９８３）、ＷＯ９３／０８８２９、及びＴｒａｕｎｅｃｋｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，ＥＭＢＯ  Ｊ．１０：３６５５（１９９１）を参照のこと）、及び「ノブ・イン・ホール」操作（例えば、米国特許第５，７３１，１６８号を参照のこと）、ＷＯ２００９／０８９００４、米国特許公開第２００９／０１８２１２７号、同第２０１１／０２８７００９号、Ｍａｒｖｉｎ  ａｎｄ  Ｚｈｕ，Ａｃｔａ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｓｉｎ．（２００５）２６（６）：６４９−６５８、及びＫｏｎｔｅｒｍａｎｎ（２００５）Ａｃｔａ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｓｉｎ．，２６：１−９を参照のこと）が含まれるが、これらに限定されない。本明細書に使用される「ノブ・イン・ホール」または「ＫｎＨ」技術という用語は、２つのポリペプチドを、それらが相互作用する界面において一方のポリペプチドに隆起（ノブ）を導入し、他方のポリペプチドに空洞（ホール）を導入することにより、インビトロまたはインビボで一緒に対合することを誘導する技術を指す。例えば、ＫｎＨは、抗体のＦｃ：Ｆｃ結合界面、ＣＬ：ＣＨ１界面、またはＶＨ／ＶＬ界面に導入されている（例えば、米国特許公開第２０１１／０２８７００９号、同第２００７／０１７８５５２号、ＷＯ９６／０２７０１１、ＷＯ９８／０５０４３１、及びＺｈｕ  ｅｔ  ａｌ．，１９９７，Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ６：７８１−７８８を参照のこと）。いくつかの実施形態において、ＫｎＨにより、多重特異性抗体の製造中に２つの異なる重鎖を一緒に対合することが促進される。例えば、Ｆｃ領域内にＫｎＨを有する多重特異性抗体は、各Ｆｃ領域に連結された単一可変ドメインをさらに含むことができるか、または同様のもしくは異なる軽鎖可変ドメインと対合する異なる重鎖可変ドメインをさらに含むことができる。ＫｎＨ技術を使用して、２つの異なる受容体細胞外ドメインを一緒に、または異なる標的認識配列を含む（例えば、アフィボディ（ａｆｆｉｂｏｄｙ）、ペプチボディ（ｐｅｐｔｉｂｏｄｙ）、及び他のＦｃ融合を含む）、任意の他のポリペプチド配列を対合することもできる。
【００９６】
本明細書で使用される「ノブ突然変異」という用語は、ポリペプチドが別のポリペプチドと相互作用する界面において、隆起（ノブ）をポリペプチドに導入する突然変異を指す。いくつかの実施形態において、他のポリペプチドには、ホール突然変異を有する。
【００９７】
「隆起」とは、第１のポリペプチドの界面から突出し、それ故に隣接した界面（すなわち、第２のポリペプチドの界面）の補償空洞内に位置付け可能になり、これにより、例えば、ヘテロ多量体を安定させ、それによりホモ多量体形成よりもヘテロ多量体形成が好都合になる、少なくとも１つのアミノ酸側鎖を指す。隆起は、元の界面に存在し得るか、または合成的に（例えば、界面をコードする核酸を改変することによって）導入され得る。いくつかの実施形態において、第１のポリペプチドの界面をコードする核酸は、隆起をコードするように変更される。これを達成するために、第１のポリペプチドの界面の少なくとも１つの「元の」アミノ酸残基をコードする核酸が、元のアミノ酸残基よりも大きい側鎖体積を有する少なくとも１つの「移入」アミノ酸残基をコードする核酸で置き換えられる。２つ以上の元の残基及び対応する移入残基が存在し得ることが理解される。様々なアミノ残基の側鎖体積は、例えば、米国特許公開第２０１１／０２８７００９号の表１に示される。「隆起」を導入する突然変異は、「ノブ突然変異」と称され得る。
【００９８】
いくつかの実施形態において、隆起の形成のための移入残基は、アルギニン（Ｒ）、フェニルアラニン（Ｆ）、チロシン（Ｙ）、及びトリプトファン（Ｗ）から選択される天然のアミノ酸残基である。いくつかの実施形態において、移入残基は、トリプトファンまたはチロシンである。いくつかの実施形態において、隆起の形成のための元の残基は、アラニン、アスパラギン、アスパラギン酸、グリシン、セリン、トレオニン、またはバリン等の小さい側鎖体積を有する。
【００９９】
「空洞」とは、第２のポリペプチドの界面から凹んでおり、それ故に隣接する第１のポリペプチドの界面上の対応する隆起を収容する少なくとも１つのアミノ酸側鎖を指す。空洞は、元の界面に存在し得るか、または合成的に（例えば、界面をコードする核酸を改変することによって）導入され得る。いくつかの実施形態において、第２のポリペプチドの界面をコードする核酸を、空洞をコードするように変化させる。これを達成するために、第２のポリペプチドの界面の少なくとも１つの「元の」アミノ酸残基をコードする核酸が、元のアミノ酸残基よりも小さい側鎖体積を有する少なくとも１つの「移入」アミノ酸残基をコードするＤＮＡで置き換えられる。２つ以上の元の残基及び対応する移入残基が存在し得ることが理解される。いくつかの実施形態において、空洞の形成のためのインポート残基は、アラニン（Ａ）、セリン（Ｓ）、トレオニン（Ｔ）、及びバリン（Ｖ）から選択される、自然発生するアミノ酸残基である。いくつかの実施形態において、インポート残基は、セリン、アラニン、またはトレオニンである。いくつかの実施形態において、空洞の形成のための元の残基は、チロシン、アルギニン、フェニルアラニン、またはトリプトファン等の大きい側鎖体積を有する。「空洞」を導入する突然変異は、「ホール突然変異」と称され得る。
【０１００】
隆起は、空洞内で「位置付け可能」であり、これは、それぞれ、第１のポリペプチド及び第２のポリペプチドの界面の隆起及び空洞の空間的位置、ならびに隆起及び空洞の大きさが、界面での第１のポリペプチドと第２のポリペプチドとの正常な会合を著しく乱すことなく隆起が空洞内に位置し得るようなものであることを意味する。Ｔｙｒ、Ｐｈｅ、及びＴｒｐ等の隆起は、典型的に界面の軸から垂直に延出せず、好ましい構造を有せず、対応する空洞を有する隆起のアラインメントは、場合によっては、Ｘ線結晶学または核磁気共鳴（ＮＭＲ）によって得られるもの等の３次元構造に基づいて、隆起／空洞の対をモデル化することに依存する。これは、当該技術分野で広く受け入れられている技法を使用して達成され得る。
【０１０１】
いくつかの実施形態において、ＩｇＧ１定常領域内のノブ変異は、Ｔ３６６Ｗである。いくつかの実施形態において、ＩｇＧ１定常領域内のホール変異は、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、及びＹ４０７Ｖから選択される１つ以上の変異を含む。いくつかの実施形態において、ＩｇＧ１定常領域内のホール変異は、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、及びＹ４０７Ｖを含む。
【０１０２】
いくつかの実施形態において、ＩｇＧ４定常領域内のノブ変異は、Ｔ３６６Ｗある。いくつかの実施形態において、ＩｇＧ４定常領域内のホール変異は、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、及びＹ４０７Ｖから選択される１つ以上の変異を含む。いくつかの実施形態において、ＩｇＧ４定常領域内のホール変異は、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、及びＹ４０７Ｖを含む。
【０１０３】
多重特異性抗体はまた、静電的ステアリング（ｅｌｅｃｔｒｏｓｔａｔｉｃ  ｓｔｅｅｒｉｎｇ）効果を操作して抗体Ｆｃ−ヘテロ二量体分子を作製すること（ＷＯ２００９／０８９００４Ａ１）、２つ以上の抗体または断片を架橋すること（例えば、米国特許第４６７６９８０号、及びＢｒｅｎｎａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２２９：８１（１９８５）を参照のこと）、ロイシンジッパーを使用して二重特異性抗体を産生すること（例えば、Ｋｏｓｔｅｌｎｙ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１４８（５）：１５４７−１５５３（１９９２）を参照のこと）、「ダイアボディ」技術を使用して二重特異性抗体断片を作製すること（Ｈｏｌｌｉｎｇｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，９０：６４４４−６４４８（１９９３））、及び１本鎖Ｆｖ（ｓＦｖ）二量体を使用すること（Ｇｒｕｂｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１５２：５３６８（１９９４））、ならびに例えば、Ｔｕｔｔ  ｅｔ  ａｌ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４７：６０（１９９１）に記載される三重特異性抗体を調製することによって、作製されてもよい。
【０１０４】
「オクトパス（Ｏｃｔｏｐｕｓ）抗体」または「二重可変（ｄｕａｌ−ｖａｒｉａｂｌｅ）ドメイン免疫グロブリン」（ＤＶＤ）を含む、３つ以上の機能的抗原結合部位を有する操作された抗体もまた、本明細書に含まれる（例えば、米国特許公開第２００６／００２５５７６Ａ１号、及びＷｕ  ｅｔ  ａｌ．Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ（２００７）を参照のこと）。
【０１０５】
ある特定の実施形態において、１つ以上のアミノ酸修飾が、本明細書に提供される抗体のＦｃ領域に導入され、それによりＦｃ領域変異体が生成され得る。Ｆｃ領域変異体は、１つ以上のアミノ酸位置にアミノ酸修飾（例えば、置換）を含むヒトＦｃ領域配列（例えば、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４  Ｆｃ領域）を含み得る。
【０１０６】
ある特定の実施形態において、本発明は、全てではないが、いくつかのエフェクター機能を有することにより、インビボでの抗体の半減期が重要であるが、ある特定のエフェクター機能（補体及びＡＤＣＣ等）が不要または有害である用途に望ましい候補となる抗体変異体を企図する。インビトロ及び／またはインビボ細胞傷害性アッセイを行って、ＣＤＣ及び／またはＡＤＣＣ活性の低減／枯渇を確認することができる。例えば、Ｆｃ受容体（ＦｃＲ）結合アッセイを行って、抗体がＦｃγＲ結合を欠く（故にＡＤＣＣ活性を欠く可能性が高い）が、ＦｃＲｎ結合能力を保持していることを確実にすることができる。ＡＤＣＣを媒介するための初代細胞であるＮＫ細胞が、Ｆｃ（ＲＩＩＩ）のみを発現する一方で、単球は、Ｆｃ（ＲＩ）、Ｆｃ（ＲＩＩ）、及びＦｃ（ＲＩＩＩ）を発現する。造血細胞でのＦｃＲ発現は、Ｒａｖｅｔｃｈ  ａｎｄ  Ｋｉｎｅｔ，Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．９：４５７−４９２（１９９１）の４６４頁の表３に要約されている。目的の分子のＡＤＣＣ活性を評価するためのインビトロアッセイの非限定的な例は、米国特許第５５００３６２号（例えば、Ｈｅｌｌｓｔｒｏｍ，Ｉ．ｅｔ  ａｌ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ  Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８３：７０５９−７０６３（１９８６）を参照のこと）及びＨｅｌｌｓｔｒｏｍ，Ｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ  Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８２：１４９９−１５０２（１９８５）、同第５，８２１，３３７号（Ｂｒｕｇｇｅｍａｎｎ，Ｍ．ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１６６：１３５１−１３６１（１９８７）を参照のこと）に記載されている。あるいは、非放射性アッセイ法を用いてもよい（例えば、フローサイトメトリーのためのＡＣＴＩ（商標）非放射性細胞傷害性アッセイ（ＣｅｌｌＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｉｎｃ．Ｍｏｕｎｔａｉｎ  Ｖｉｅｗ，ＣＡ、及びＣｙｔｏＴｏｘ  ９６（登録商標）非放射性細胞傷害性アッセイ（Ｐｒｏｍｅｇａ，Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩ）を参照のこと）。かかるアッセイに有用なエフェクター細胞としては、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）及びナチュラルキラー（ＮＫ）細胞が挙げられる。あるいは、または追加的に、目的の分子のＡＤＣＣ活性は、例えば、Ｃｌｙｎｅｓ  ｅｔ  ａｌ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ  Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９５：６５２−６５６（１９９８）に開示されるもの等の動物モデルにおいて、インビボで評価されてもよい。Ｃ１ｑ結合アッセイを実行して、抗体がＣ１ｑに結合することができず、それ故にＣＤＣ活性を欠くことを確認することもできる。例えば、ＷＯ２００６／０２９８７９及びＷＯ２００５／１００４０２におけるＣ１ｑ及びＣ３ｃ結合ＥＬＩＳＡを参照のこと。補体活性化を評定するために、ＣＤＣアッセイが行われ得る（例えば、Ｇａｚｚａｎｏ−Ｓａｎｔｏｒｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ  ２０２：１６３（１９９６）、Ｃｒａｇｇ，Ｍ．Ｓ．ｅｔ  ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ  １０１：１０４５−１０５２（２００３）、及びＣｒａｇｇ，Ｍ．Ｓ．ａｎｄ  Ｍ．Ｊ．Ｇｌｅｎｎｉｅ，Ｂｌｏｏｄ  １０３：２７３８−２７４３（２００４）を参照のこと）。ＦｃＲｎ結合及びインビボクリアランス／半減期決定もまた、当該技術分野において既知である方法を使用して実行することができる（Ｐｅｔｋｏｖａ，Ｓ．Ｂ．ｅｔ  ａｌ．，Ｉｎｔ’ｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１８（１２）：１７５９−１７６９（２００６））。
【０１０７】
低下したエフェクター機能を有する抗体としては、Ｆｃ領域残基２３８、２６５、２６９、２７０、２９７、３２７、及び３２９のうちの１つ以上の置換を有するものが挙げられる（米国特許第６，７３７，０５６号）。かかるＦｃ変異体には、残基２６５及び２９７のアラニンへの置換を有するいわゆる「ＤＡＮＡ」Ｆｃ変異体を含む、アミノ酸２６５位、２６９位、２７０位、２９７位、及び３２７位のうちの２つ以上における置換を有するＦｃ変異体が含まれる（米国特許第７３３２５８１号）。
【０１０８】
ある特定の実施形態において、野生型ヒトＦｃ領域のＰｒｏ３２９が、グリシンもしくはアルギニン、または、Ｆｃのプロリン３２９とＦｃｇＲＩＩＩのトリプトファン残基Ｔｒｐ８７及びＴｒｐ１１０との間に形成される、Ｆｃ／Ｆｃγ受容体界面内のプロリンサンドイッチを破壊するのに十分に大きなアミノ酸残基で置換される（Ｓｏｎｄｅｒｍａｎｎ  ｅｔ  ａｌ．：Ｎａｔｕｒｅ  ４０６，２６７−２７３（２０  Ｊｕｌｙ  ２０００））。さらなる実施形態において、Ｆｃ変異体内の少なくとも１つのさらなるアミノ酸置換は、Ｓ２２８Ｐ、Ｅ２３３Ｐ、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｌ２３５Ｅ、Ｎ２９７Ａ、Ｎ２９７Ｄ、またはＰ３３１Ｓであり、さらに別の実施形態において、該少なくとも１つのさらなるアミノ酸置換は、ヒトＩｇＧ１  Ｆｃ領域のＬ２３４Ａ及びＬ２３５Ａ、またはヒトＩｇＧ４  Ｆｃ領域のＳ２２８Ｐ及びＬ２３５Ｅである（米国特許第８９６９５２６号、これは参照によりその全体が組み込まれる）。
【０１０９】
ある特定の実施形態において、ポリペプチドは、野生型ヒトＩｇＧ  Ｆｃ領域のＦｃ変異体を含み、このポリペプチドは、グリシンで置換されたヒトＩｇＧ  Ｆｃ領域のＰｒｏ３２９を有し、Ｆｃ変異体は、ヒトＩｇＧ１  Ｆｃ領域のＬ２３４Ａ及びＬ２３５Ａ、またはヒトＩｇＧ４  Ｆｃ領域のＳ２２８Ｐ及びＬ２３５Ｅにおいて少なくとも２つのさらなるアミノ酸置換を含み、残基は、ＫａｂａｔのＥＵインデックスに従って付番される（米国特許第８，９６９，５２６号、これは参照によりその全体が組み込まれる）。ある特定の実施形態において、Ｐ３２９Ｇ、Ｌ２３４Ａ、及びＬ２３５Ａの置換を含むポリペプチドは、ヒトＦｃγＲＩＩＩＡ及びＦｃγＲＩＩＡに対する親和性の低減を示し、野生型ヒトＩｇＧ  Ｆｃ領域を含むポリペプチドによって誘発されるＡＤＣＣの少なくとも２０％にＡＤＣＣを下方調節し、かつ／またはＡＤＣＰを下方調節する（米国特許第８，９６９，５２６号、これは参照によりその全体が組み込まれる）。
【０１１０】
特定の一実施形態において、野生型ヒトＦｃポリペプチドのＦｃ変異体を含むポリペプチドは、三重変異、すなわちＰｒｏ３２９位におけるアミノ酸置換、Ｌ２３４Ａ変異、及びＬ２３５Ａ変異（Ｐ３２９／ＬＡＬＡ）を含む（米国特許第８，９６９，５２６号、これは参照によりその全体が組み込まれる）。特定の実施形態において、ポリペプチドは、以下のアミノ酸置換：Ｐ３２９Ｇ、Ｌ２３４Ａ、及びＬ２３５Ａを含む。
【０１１１】
ＦｃＲへの結合が改善または低減されたある特定の抗体変異体が記載されている（例えば、米国特許第６，７３７，０５６号；ＷＯ２００４／０５６３１２、及びＳｈｉｅｌｄｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．９（２）：６５９１−６６０４（２００１）を参照のこと）。
【０１１２】
ある特定の実施形態において、抗体変異体は、ＡＤＣＣを改善する１つ以上のアミノ酸置換、例えば、Ｆｃ領域の２９８、３３３、及び／または３３４位（残基のＥＵ番号付け）での置換を有するＦｃ領域を含む。
【０１１３】
いくつかの実施形態では、例えば、米国特許第６，１９４，５５１号、ＷＯ９９／５１６４２、及びＩｄｕｓｏｇｉｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６４：４１７８−４１８４（２０００）に記載される、改変された（すなわち、改善または低減のいずれか）Ｃ１ｑ結合及び／または補体依存性細胞傷害性（ＣＤＣ）をもたらす変化が、Ｆｃ領域になされる。
【０１１４】
増加した半減期と、母体ＩｇＧの胎児への移送に関与する新生児Ｆｃ受容体（ＦｃＲｎ）への改善された結合（Ｇｕｙｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１１７：５８７（１９７６）及びＫｉｍ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２４：２４９（１９９４））は、米国特許公開第２００５／００１４９３４Ａ１号（Ｈｉｎｔｏｎ  ｅｔ  ａｌ．）に記載されている。それらの抗体は、Ｆｃ領域のＦｃＲｎへの結合を改善する１つ以上の置換を有するＦｃ領域を含む。かかるＦｃ変異体は、Ｆｃ領域残基：２３８、２５６、２６５、２７２、２８６、３０３、３０５、３０７、３１１、３１２、３１７、３４０、３５６、３６０、３６２、３７６、３７８、３８０、３８２、４１３、４２４、または４３４のうちの１つ以上における置換、例えば、Ｆｃ領域残基４３４の置換を有するものを含む（米国特許第７，３７１，８２６号）。
【０１１５】
Ｆｃ領域変異体の他の例に関して、Ｄｕｎｃａｎ  ＆  Ｗｉｎｔｅｒ，Ｎａｔｕｒｅ  ３２２：７３８−４０（１９８８）、米国特許第５，６４８，２６０号、米国特許第５，６２４，８２１号、及びＷＯ９４／２９３５１も参照のこと。
【０１１６】
７．システイン操作抗体変異体
ある特定の実施形態において、抗体の１つ以上の残基がシステイン残基で置換されている、システイン操作抗体、例えば、「ＴＨＩＯＭＡＢ（商標）抗体」を作製することが望ましい場合がある。特定の実施形態において、置換された残基は、抗体の利用しやすい部位で生じる。これらの残基をシステインで置換することによって、反応性のチオール基がそれにより抗体の利用しやすい部位に位置付けられ、それを使用して、薬物部分に抗体をコンジュゲートして、本明細書にさらに記載される、免疫コンジュゲートを作製することができる。ある特定の実施形態において、以下の残基のいずれか１つ以上が、システインで置換され得る：軽鎖のＶ２０５（Ｋａｂａｔ番号付け）、軽鎖のＫ１４９（Ｋａｂａｔ番号付け）、重鎖のＡ１１８（ＥＵ番号付け）、及び重鎖Ｆｃ領域のＳ４００（ＥＵ番号付け）。システイン操作抗体は、例えば、米国特許第７，５２１，５４１号に記載されるように生成され得る。
【０１１７】
いくつかの態様において、ＴＨＩＯＭＡＢ（商標）抗体は、以下の表１に列挙される重鎖または軽鎖システイン置換のうちの１つを含む。
【表１−１】
2018533568.tif 000005
【表１−２】
2018533568.tif 000006
【０１１８】
他の態様において、ＴＨＩＯＭＡＢ（商標）抗体は、表２に列挙される重鎖システイン置換のうちの１つを含む。
【表２】
2018533568.tif 000007
【０１１９】
いくつかの他の態様において、ＴＨＩＯＭＡＢ（商標）抗体は、表３に列挙される軽鎖システイン置換のうちの１つを含む。
【表３】
2018533568.tif 000008
【０１２０】
いくつかの他の態様において、ＴＨＩＯＭＡＢ（商標）抗体は、表４に列挙される重鎖または軽鎖システイン置換のうちの１つを含む。
【表４】
2018533568.tif 000009
【０１２１】
癌の治療における本発明の抗体−薬物コンジュゲートに有用であり得るシステイン操作抗体としては、細胞表面受容体及び腫瘍関連抗原（ＴＡＡ）に対する抗体が挙げられるが、これらに限定されない。腫瘍関連抗原は、当該技術分野で既知であり、当該技術分野で周知の方法及び情報を用いて抗体を生成するのに使用するために調製され得る。癌の診断及び治療のための有効な細胞標的を発見する目的で、研究者らは、１つ以上の正常な非癌性細胞（複数可）と比較して、１つ以上の特定の癌細胞種（複数可）の表面に特異的に発現する膜貫通ポリペプチドまたはそうでなければ、腫瘍関連ポリペプチドを特定しようとした。しばしば、かかる腫瘍関連ポリペプチドは、非癌性細胞の表面上と比較して、癌細胞の表面上ではより豊富に発現する。かかる腫瘍関連細胞表面の抗原ポリペプチドの特定により、抗体に基づく治療法によって癌細胞を破壊のために特異的に標的とする能力が生じた。
【０１２２】
腫瘍関連抗原ＴＡＡの例としては、本明細書に列挙されるＴＡＡ（１）〜（５３）が挙げられるが、これらに限定されない。便宜上、これらの抗原（全て当該技術分野で既知である）に関連する情報を本明細書に列挙し、この情報には、名称、別称、Ｇｅｎｂａｎｋ受託番号、及び主な参考文献（複数可）に続き、Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｃｅｎｔｅｒ  ｆｏｒ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ（ＮＣＢＩ）の核酸及びタンパク質配列を特定する慣例が含まれている。ＴＡＡ（１）〜（５３）に対応する核酸及びタンパク質の配列は、ＧｅｎＢａｎｋ等の公的データベースで入手可能である。抗体の標的となる腫瘍関連抗原としては、引用される参考文献において特定されている配列と比べて少なくとも約７０％、８０％、８５％、９０％、もしくは９５％の配列同一性を有する全てのアミノ酸配列変異体及び同位体、または引用される参考文献中に見出される配列を有するＴＡＡと実質的に同じ生物学的特性もしくは特徴を呈するものが含まれる。例えば、変異体配列を有するＴＡＡは、一般に、列挙される対応する配列を有するＴＡＡに特異的に結合する抗体に特異的に結合することができる。本明細書に具体的に引用される参考文献中の配列及び開示は、参照により明示的に組み込まれる。
【０１２３】
腫瘍関連抗原
（１）ＢＭＰＲ１Ｂ（骨形成タンパク質受容体ＩＢ型、Ｇｅｎｂａｎｋ受託番号ＮＭ＿００１２０３）  ｔｅｎ  Ｄｉｊｋｅ，Ｐ．，ｅｔ  ａｌ．Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２６４（５１５５）：１０１−１０４（１９９４），Ｏｎｃｏｇｅｎｅ  １４（１１）：１３７７−１３８２（１９９７））、ＷＯ２００４０６３３６２（請求項２）、ＷＯ２００３０４２６６１（請求項１２）、ＵＳ２００３１３４７９０−Ａ１（３８〜３９頁）；ＷＯ２００２１０２２３５（請求項１３；２９６頁）、ＷＯ２００３０５５４４３（９１〜９２頁）、ＷＯ２００２９９１２２（実施例２；５２８〜５３０頁）、ＷＯ２００３０２９４２１（請求項６）、ＷＯ２００３０２４３９２（請求項２；図１１２）、ＷＯ２００２９８３５８（請求項１；１８３頁）、ＷＯ２００２５４９４０（１００〜１０１頁）、ＷＯ２００２５９３７７（３４９〜３５０頁）、ＷＯ２００２３０２６８（請求項２７；３７６頁）、ＷＯ２００１４８２０４（実施例；図４）  ＮＰ＿００１１９４骨形成タンパク質受容体、ＩＢ型／ｐｉｄ＝ＮＰ＿００１１９４．１−相互参照：ＭＩＭ：６０３２４８、ＮＰ＿００１１９４．１、ＡＹ０６５９９４。
【０１２４】
（２）Ｅ１６（ＬＡＴ１、ＳＬＣ７Ａ５、Ｇｅｎｂａｎｋ受託番号ＮＭ＿００３４８６）  Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．２５５（２），２８３−２８８（１９９９），Ｎａｔｕｒｅ  ３９５（６６９９）：２８８−２９１（１９９８）、Ｇａｕｇｉｔｓｃｈ，Ｈ．Ｗ．，ｅｔ  ａｌ．（１９９２）  Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６７（１６）：１１２６７−１１２７３）、ＷＯ２００４０４８９３８（実施例２）、ＷＯ２００４０３２８４２（実施例ＩＶ）、ＷＯ２００３０４２６６１（請求項１２）、ＷＯ２００３０１６４７５（請求項１）、ＷＯ２００２７８５２４（実施例２）、ＷＯ２００２９９０７４（請求項１９；１２７〜１２９頁）、ＷＯ２００２８６４４３（請求項２７；２２２、３９３頁）、ＷＯ２００３００３９０６（請求項１０；２９３頁）、ＷＯ２００２６４７９８（請求項３３；９３〜９５頁）、ＷＯ２０００１４２２８（請求項５；１３３〜１３６頁）；ＵＳ２００３２２４４５４（図３）、ＷＯ２００３０２５１３８（請求項１２；１５０頁）、ＮＰ＿００３４７７溶質輸送体ファミリー７（カチオン性アミノ酸輸送体、ｙ＋システム）、メンバー５／ｐｉｄ＝ＮＰ＿００３４７７．３−Ｈｏｍｏ  ｓａｐｉｅｎｓ、相互参照：ＭＩＭ：６００１８２、ＮＰ＿００３４７７．３、ＮＭ＿０１５９２３、ＮＭ＿００３４８６＿１。
【０１２５】
（３）ＳＴＥＡＰ１（前立腺の６回膜貫通上皮抗原、Ｇｅｎｂａｎｋ受託番号ＮＭ＿０１２４４９）  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．６１（１５），５８５７−５８６０（２００１）、Ｈｕｂｅｒｔ，Ｒ．Ｓ．，ｅｔ  ａｌ．（１９９９）  Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．９６（２５）：１４５２３−１４５２８）、ＷＯ２００４０６５５７７（請求項６）、ＷＯ２００４０２７０４９（図１Ｌ）、ＥＰ１３９４２７４（実施例１１）、ＷＯ２００４０１６２２５（請求項２）、ＷＯ２００３０４２６６１（請求項１２）、ＵＳ２００３１５７０８９（実施例５）、ＵＳ２００３１８５８３０（実施例５）、ＵＳ２００３０６４３９７（図２）、ＷＯ２００２８９７４７（実施例５；６１８〜６１９頁）、ＷＯ２００３０２２９９５（実施例９；図１３Ａ、実施例５３；１７３頁、実施例２；図２Ａ）；ＮＰ＿０３６５８１  前立腺の６回膜貫通上皮抗原、相互参照：ＭＩＭ：６０４４１５；ＮＰ＿０３６５８１．１；ＮＭ＿０１２４４９＿１。
【０１２６】
（４）０７７２Ｐ（ＣＡ１２５、ＭＵＣ１６、Ｇｅｎｂａｎｋ受託番号ＡＦ３６１４８６）  Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７６（２９）：２７３７１−２７３７５（２００１））、ＷＯ２００４０４５５５３（請求項１４）、ＷＯ２００２９２８３６（請求項６；図１２）、ＷＯ２００２８３８６６（請求項１５；１１６〜１２１頁）；ＵＳ２００３１２４１４０（実施例１６）；ＵＳ  ７９８９５９。相互参照：ＧＩ：３４５０１４６７、ＡＡＫ７４１２０．３、ＡＦ３６１４８６＿１。
【０１２７】
（５）ＭＰＦ（ＭＰＦ、ＭＳＬＮ、ＳＭＲ、巨核球増強因子、メソテリン、Ｇｅｎｂａｎｋ受託番号ＮＭ＿００５８２３）  Ｙａｍａｇｕｃｈｉ，Ｎ．，ｅｔ  ａｌ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６９（２），８０５−８０８（１９９４）、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．９６（２０）：１１５３１−１１５３６（１９９９）、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．９３（１）：１３６−１４０（１９９６）、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７０（３７）：２１９８４−２１９９０（１９９５））、ＷＯ２００３１０１２８３（請求項１４）；（ＷＯ２００２１０２２３５（請求項１３；２８７〜２８８頁）、ＷＯ２００２１０１０７５（請求項４；３０８〜３０９頁）、ＷＯ２００２７１９２８（３２０〜３２１頁）、ＷＯ９４１０３１２（５２〜５７頁）；相互参照：ＭＩＭ：６０１０５１、ＮＰ＿００５８１４．２、ＮＭ＿００５８２３＿１。
【０１２８】
（６）Ｎａｐｉ３ｂ（ＮＡＰＩ−３Ｂ、ＮＰＴＩＩｂ、ＳＬＣ３４Ａ２、溶質輸送体ファミリー３４（リン酸ナトリウム）、メンバー２、ＩＩ型ナトリウム依存性リン酸輸送体３ｂ、Ｇｅｎｂａｎｋ受託番号ＮＭ＿００６４２４）  Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７７（２２）：１９６６５−１９６７２（２００２）、Ｇｅｎｏｍｉｃｓ  ６２（２）：２８１−２８４（１９９９）、Ｊ．Ａ．，ｅｔ  ａｌ．（１９９９）  Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．２５８（３）：５７８−５８２）、ＷＯ２００４０２２７７８（請求項２）、ＥＰ１３９４２７４（実施例１１）、ＷＯ２００２１０２２３５（請求項１３；３２６頁）、ＥＰ８７５５６９（請求項１；１７〜１９頁）、ＷＯ２００１５７１８８（請求項２０；３２９頁）、ＷＯ２００４０３２８４２（実施例ＩＶ）、ＷＯ２００１７５１７７（請求項２４；１３９〜１４０頁）、相互参照：ＭＩＭ：６０４２１７、ＮＰ＿００６４１５．１、ＮＭ＿００６４２４＿１。
【０１２９】
（７）Ｓｅｍａ  ５ｂ（ＦＬＪ１０３７２、ＫＩＡＡ１４４５、Ｍｍ．４２０１５、ＳＥＭＡ５Ｂ、ＳＥＭＡＧ、セマフォリン５ｂ  Ｈｌｏｇ、セマドメイン、７回トロンボスポンジン反復（１型及び１型様）、膜貫通ドメイン（ＴＭ）、及び短い細胞質ドメイン、（セマフォリン）５Ｂ、Ｇｅｎｂａｎｋ受託番号ＡＢ０４０８７８）  Ｎａｇａｓｅ  Ｔ．，ｅｔ  ａｌ．（２０００）  ＤＮＡ  Ｒｅｓ．７（２）：１４３−１５０）、ＷＯ２００４０００９９７（請求項１）、ＷＯ２００３００３９８４（請求項１）、ＷＯ２００２０６３３９（請求項１；５０頁）、ＷＯ２００１８８１３３（請求項１；４１〜４３、４８〜５８頁）、ＷＯ２００３０５４１５２（請求項２０）、ＷＯ２００３１０１４００（請求項１１）；受託番号：Ｑ９Ｐ２８３、ＥＭＢＬ、ＡＢ０４０８７８、ＢＡＡ９５９６９．１。Ｇｅｎｅｗ、ＨＧＮＣ：１０７３７。
【０１３０】
（８）ＰＳＣＡ  ｈｌｇ（２７０００５０Ｃ１２Ｒｉｋ、Ｃ５３０００８Ｏ１６Ｒｉｋ、ＲＩＫＥＮ  ｃＤＮＡ  ２７０００５０Ｃ１２、ＲＩＫＥＮ  ｃＤＮＡ  ２７０００５０Ｃ１２遺伝子、Ｇｅｎｂａｎｋ受託番号ＡＹ３５８６２８）、Ｒｏｓｓ  ｅｔ  ａｌ．（２００２）  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．６２：２５４６−２５５３、ＵＳ２００３１２９１９２（請求項２）、ＵＳ２００４０４４１８０（請求項１２）、ＵＳ２００４０４４１７９（請求項１１）、ＵＳ２００３０９６９６１（請求項１１）、ＵＳ２００３２３２０５６（実施例５）、ＷＯ２００３１０５７５８（請求項１２）、ＵＳ２００３２０６９１８（実施例５）、ＥＰ１３４７０４６（請求項１）、ＷＯ２００３０２５１４８（請求項２０）、相互参照：ＧＩ：３７１８２３７８、ＡＡＱ８８９９１．１、ＡＹ３５８６２８＿１。
【０１３１】
（９）ＥＴＢＲ（エンドセリンＢ型受容体、Ｇｅｎｂａｎｋ受託番号ＡＹ２７５４６３）、Ｎａｋａｍｕｔａ  Ｍ．，ｅｔ  ａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．１７７，３４−３９，１９９１、Ｏｇａｗａ  Ｙ．，ｅｔ  ａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．１７８，２４８−２５５，１９９１、Ａｒａｉ  Ｈ．，ｅｔ  ａｌ．Ｊｐｎ．Ｃｉｒｃ．Ｊ．５６，１３０３−１３０７，１９９２、Ａｒａｉ  Ｈ．，ｅｔ  ａｌ．Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６８，３４６３−３４７０，１９９３、Ｓａｋａｍｏｔｏ  Ａ．，Ｙａｎａｇｉｓａｗａ  Ｍ．，ｅｔ  ａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．１７８，６５６−６６３，１９９１、Ｅｌｓｈｏｕｒｂａｇｙ  Ｎ．Ａ．，ｅｔ  ａｌ．Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６８，３８７３−３８７９，１９９３、Ｈａｅｎｄｌｅｒ  Ｂ．，ｅｔ  ａｌ．Ｊ．Ｃａｒｄｉｏｖａｓｃ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．２０，ｓ１−Ｓ４，１９９２、Ｔｓｕｔｓｕｍｉ  Ｍ．，ｅｔ  ａｌ．Ｇｅｎｅ  ２２８，４３−４９，１９９９、Ｓｔｒａｕｓｂｅｒｇ  Ｒ．Ｌ．，ｅｔ  ａｌ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．９９，１６８９９−１６９０３，２００２、Ｂｏｕｒｇｅｏｉｓ  Ｃ．，ｅｔ  ａｌ．Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ．Ｍｅｔａｂ．８２，３１１６−３１２３，１９９７、Ｏｋａｍｏｔｏ  Ｙ．，ｅｔ  ａｌ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７２，２１５８９−２１５９６，１９９７、Ｖｅｒｈｅｉｊ  Ｊ．Ｂ．，ｅｔ  ａｌ．Ａｍ．Ｊ．Ｍｅｄ．Ｇｅｎｅｔ．１０８，２２３−２２５，２００２、Ｈｏｆｓｔｒａ  Ｒ．Ｍ．Ｗ．，ｅｔ  ａｌ．Ｅｕｒ．Ｊ．Ｈｕｍ．Ｇｅｎｅｔ．５，１８０−１８５，１９９７、Ｐｕｆｆｅｎｂｅｒｇｅｒ  Ｅ．Ｇ．，ｅｔ  ａｌ．Ｃｅｌｌ  ７９，１２５７−１２６６，１９９４、Ａｔｔｉｅ  Ｔ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｈｕｍ．Ｍｏｌ．Ｇｅｎｅｔ．４，２４０７−２４０９，１９９５、Ａｕｒｉｃｃｈｉｏ  Ａ．，ｅｔ  ａｌ．Ｈｕｍ．Ｍｏｌ．Ｇｅｎｅｔ．５：３５１−３５４，１９９６、Ａｍｉｅｌ  Ｊ．，ｅｔ  ａｌ．Ｈｕｍ．Ｍｏｌ．Ｇｅｎｅｔ．５，３５５−３５７，１９９６、Ｈｏｆｓｔｒａ  Ｒ．Ｍ．Ｗ．，ｅｔ  ａｌ．Ｎａｔ．Ｇｅｎｅｔ．１２，４４５−４４７，１９９６、Ｓｖｅｎｓｓｏｎ  Ｐ．Ｊ．，ｅｔ  ａｌ．Ｈｕｍ．Ｇｅｎｅｔ．１０３，１４５−１４８，１９９８、Ｆｕｃｈｓ  Ｓ．，ｅｔ  ａｌ．Ｍｏｌ．Ｍｅｄ．７，１１５−１２４，２００１、Ｐｉｎｇａｕｌｔ  Ｖ．，ｅｔ  ａｌ．（２００２）  Ｈｕｍ．Ｇｅｎｅｔ．１１１，１９８−２０６、ＷＯ２００４０４５５１６（請求項１）、ＷＯ２００４０４８９３８（実施例２）、ＷＯ２００４０４００００（請求項１５１）、ＷＯ２００３０８７７６８（請求項１）、ＷＯ２００３０１６４７５（請求項１）、ＷＯ２００３０１６４７５（請求項１）、ＷＯ２００２６１０８７（図１）、ＷＯ２００３０１６４９４（図６）、ＷＯ２００３０２５１３８（請求項１２；１４４頁）、ＷＯ２００１９８３５１（請求項１；１２４〜１２５頁）、ＥＰ５２２８６８（請求項８；図２）、ＷＯ２００１７７１７２（請求項１；２９７〜２９９頁）、ＵＳ２００３１０９６７６、ＵＳ６５１８���０４（図３）、ＵＳ５７７３２２３（請求項１ａ；Ｃｏｌ３１〜３４）、ＷＯ２００４００１００４。
【０１３２】
（１０）ＭＳＧ７８３（ＲＮＦ１２４、仮説上のタンパク質ＦＬＪ２０３１５、Ｇｅｎｂａｎｋ受託番号ＮＭ＿０１７７６３）、ＷＯ２００３１０４２７５（請求項１）、ＷＯ２００４０４６３４２（実施例２）、ＷＯ２００３０４２６６１（請求項１２）、ＷＯ２００３０８３０７４（請求項１４；６１頁）、ＷＯ２００３０１８６２１（請求項１）、ＷＯ２００３０２４３９２（請求項２；図９３）、ＷＯ２００１６６６８９（実施例６）、相互参照：ＬｏｃｕｓＩＤ：５４８９４、ＮＰ＿０６０２３３．２、ＮＭ＿０１７７６３＿１。
【０１３３】
（１１）ＳＴＥＡＰ２（ＨＧＮＣ＿８６３９、ＩＰＣＡ−１、ＰＣＡＮＡＰ１、ＳＴＡＭＰ１、ＳＴＥＡＰ２、ＳＴＭＰ、前立腺癌関連遺伝子１、前立腺癌関連タンパク質１、前立腺の６回膜貫通上皮抗原２、６回膜貫通前立腺タンパク質、Ｇｅｎｂａｎｋ受託番号ＡＦ４５５１３８）  Ｌａｂ．Ｉｎｖｅｓｔ．８２（１１）：１５７３−１５８２（２００２））、ＷＯ２００３０８７３０６；ＵＳ２００３０６４３９７（請求項１；図１）、ＷＯ２００２７２５９６（請求項１３；５４〜５５頁）、ＷＯ２００１７２９６２（請求項１；図４Ｂ）、ＷＯ２００３１０４２７０（請求項１１）、ＷＯ２００３１０４２７０（請求項１６）、ＵＳ２００４００５５９８（請求項２２）、ＷＯ２００３０４２６６１（請求項１２）、ＵＳ２００３０６０６１２（請求項１２；図１０）、ＷＯ２００２２６８２２（請求項２３；図２）、ＷＯ２００２１６４２９（請求項１２；図１０）、相互参照：ＧＩ：２２６５５４８８、ＡＡＮ０４０８０．１、ＡＦ４５５１３８＿１。
【０１３４】
（１２）ＴｒｐＭ４（ＢＲ２２４５０、ＦＬＪ２００４１、ＴＲＰＭ４、ＴＲＰＭ４Ｂ、一過性受容器電位カチオンチャネル、サブファミリーＭ、メンバー４、Ｇｅｎｂａｎｋ受託番号ＮＭ＿０１７６３６）  Ｘｕ，Ｘ．Ｚ．，ｅｔ  ａｌ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．９８（１９）：１０６９２−１０６９７（２００１）、Ｃｅｌｌ  １０９（３）：３９７−４０７（２００２）、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７８（３３）：３０８１３−３０８２０（２００３））、ＵＳ２００３１４３５５７（請求項４）、ＷＯ２０００４０６１４（請求項１４；１００〜１０３頁）、ＷＯ２００２１０３８２（請求項１；図９Ａ）、ＷＯ２００３０４２６６１（請求項１２）、ＷＯ２００２３０２６８（請求項２７；３９１頁）、ＵＳ２００３２１９８０６（請求項４）、ＷＯ２００１６２７９４（請求項１４；図１Ａ〜Ｄ）、相互参照：ＭＩＭ：６０６９３６、ＮＰ＿０６０１０６．２、ＮＭ＿０１７６３６＿１。
【０１３５】
（１３）ＣＲＩＰＴＯ（ＣＲ、ＣＲ１、ＣＲＧＦ、ＣＲＩＰＴＯ、ＴＤＧＦ１、奇形癌由来の成長因子、Ｇｅｎｂａｎｋ受託番号ＮＰ＿００３２０３またはＮＭ＿００３２１２）  Ｃｉｃｃｏｄｉｃｏｌａ，Ａ．，ｅｔ  ａｌ．ＥＭＢＯ  Ｊ．８（７）：１９８７−１９９１（１９８９）、Ａｍ．Ｊ．Ｈｕｍ．Ｇｅｎｅｔ．４９（３）：５５５−５６５（１９９１））、ＵＳ２００３２２４４１１（請求項１）、ＷＯ２００３０８３０４１（実施例１）、ＷＯ２００３０３４９８４（請求項１２）、ＷＯ２００２８８１７０（請求項２；５２〜５３頁）、ＷＯ２００３０２４３９２（請求項２；図５８）、ＷＯ２００２１６４１３（請求項１；９４〜９５、１０５頁）、ＷＯ２００２２２８０８（請求項２；図１）、ＵＳ５８５４３９９（実施例２；Ｃｏｌ１７〜１８）、ＵＳ５７９２６１６（図２）、相互参照：ＭＩＭ：１８７３９５、ＮＰ＿００３２０３．１、ＮＭ＿００３２１２＿１。
【０１３６】
（１４）ＣＤ２１（ＣＲ２（補体受容体２）またはＣ３ＤＲ（Ｃ３ｄ／エプスタイン・バーウイルス受容体）またはＨｓ．７３７９２、Ｇｅｎｂａｎｋ受託番号Ｍ２６００４）  Ｆｕｊｉｓａｋｕ  ｅｔ  ａｌ．（１９８９）  Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６４（４）：２１１８−２１２５）、Ｗｅｉｓ  Ｊ．Ｊ．，ｅｔ  ａｌ．Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１６７，１０４７−１０６６，１９８８、Ｍｏｏｒｅ  Ｍ．，ｅｔ  ａｌ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．８４，９１９４−９１９８，１９８７、Ｂａｒｅｌ  Ｍ．，ｅｔ  ａｌ．Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．３５，１０２５−１０３１，１９９８、Ｗｅｉｓ  Ｊ．Ｊ．，ｅｔ  ａｌ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．８３，５６３９−５６４３，１９８６、Ｓｉｎｈａ  Ｓ．Ｋ．，ｅｔ  ａｌ．（１９９３）  Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５０，５３１１−５３２０、ＷＯ２００４０４５５２０（実施例４）、ＵＳ２００４００５５３８（実施例１）、ＷＯ２００３０６２４０１（請求項９）、ＷＯ２００４０４５５２０（実施例４）、ＷＯ９１０２５３６（図９．１〜９．９）、ＷＯ２００４０２０５９５（請求項１）、受託番号：Ｐ２００２３、Ｑ１３８６６、Ｑ１４２１２、ＥＭＢＬ、Ｍ２６００４、ＡＡＡ３５７８６．１。
【０１３７】
（１５）  ＣＤ７９ｂ（ＣＤ７９Ｂ、ＣＤ７９β、ＩＧｂ（免疫グロブリン関連ベータ）、Ｂ２９、Ｇｅｎｂａｎｋ受託番号ＮＭ＿０００６２６または１１０３８６７４）  Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．（２００３）  １００（７）：４１２６−４１３１，Ｂｌｏｏｄ（２００２）  １００（９）：３０６８−３０７６、Ｍｕｌｌｅｒ  ｅｔ  ａｌ．（１９９２）  Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２２（６）：１６２１−１６２５）、ＷＯ２００４０１６２２５（請求項２、図１４０）、ＷＯ２００３０８７７６８、ＵＳ２００４１０１８７４（請求項１、１０２頁）、ＷＯ２００３０６２４０１（請求項９）、ＷＯ２００２７８５２４（実施例２）；ＵＳ２００２１５０５７３（請求項５、１５頁）；ＵＳ５６４４０３３、ＷＯ２００３０４８２０２（請求項１、３０６及び３０９頁）、ＷＯ  ９９／５５８６５８、ＵＳ６５３４４８２（請求項１３、図１７Ａ／Ｂ）、ＷＯ２０００５５３５１（請求項１１、１１４５〜１１４６頁）、相互参照：ＭＩＭ：１４７２４５、ＮＰ＿０００６１７．１、ＮＭ＿０００６２６＿１。
【０１３８】
（１６）ＦｃＲＨ２（ＩＦＧＰ４、ＩＲＴＡ４、ＳＰＡＰ１Ａ（ＳＨ２ドメイン含有ホスファターゼアンカータンパク質１ａ）、ＳＰＡＰ１Ｂ、ＳＰＡＰ１Ｃ、Ｇｅｎｂａｎｋ受託番号ＮＭ＿０３０７６４、ＡＹ３５８１３０）  Ｇｅｎｏｍｅ  Ｒｅｓ．１３（１０）：２２６５−２２７０（２００３）、Ｉｍｍｕｎｏｇｅｎｅｔｉｃｓ  ５４（２）：８７−９５（２００２）、Ｂｌｏｏｄ  ９９（８）：２６６２−２６６９（２００２）、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．９８（１７）：９７７２−９７７７（２００１）、Ｘｕ，Ｍ．Ｊ．，ｅｔ  ａｌ．（２００１）  Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．２８０（３）：７６８−７７５、ＷＯ２００４０１６２２５（請求項２）、ＷＯ２００３０７７８３６、ＷＯ２００１３８４９０（請求項５；図１８Ｄ−１〜１８Ｄ−２）、ＷＯ２００３０９７８０３（請求項１２）、ＷＯ２００３０８９６２４（請求項２５）、相互参照：ＭＩＭ：６０６５０９、ＮＰ＿１１０３９１．２、ＮＭ＿０３０７６４＿１。
【０１３９】
（１７）ＨＥＲ２（ＥｒｂＢ２、Ｇｅｎｂａｎｋ受託番号Ｍ１１７３０）  Ｃｏｕｓｓｅｎｓ  Ｌ．，ｅｔ  ａｌ．Ｓｃｉｅｎｃｅ（１９８５）  ２３０（４７３０）：１１３２−１１３９）、Ｙａｍａｍｏｔｏ  Ｔ．，ｅｔ  ａｌ．Ｎａｔｕｒｅ  ３１９，２３０−２３４，１９８６、Ｓｅｍｂａ  Ｋ．，ｅｔ  ａｌ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．８２，６４９７−６５０１，１９８５、Ｓｗｉｅｒｃｚ  Ｊ．Ｍ．，ｅｔ  ａｌ．Ｊ．Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ．１６５，８６９−８８０，２００４、Ｋｕｈｎｓ  Ｊ．Ｊ．，ｅｔ  ａｌ．Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７４，３６４２２−３６４２７，１９９９、Ｃｈｏ  Ｈ．−Ｓ．，ｅｔ  ａｌ．Ｎａｔｕｒｅ  ４２１，７５６−７６０，２００３、Ｅｈｓａｎｉ  Ａ．，ｅｔ  ａｌ．（１９９３）  Ｇｅｎｏｍｉｃｓ  １５，４２６−４２９、ＷＯ２００４０４８９３８（実施例２）、ＷＯ２００４０２７０４９（図１Ｉ）、ＷＯ２００４００９６２２、ＷＯ２００３０８１２１０、ＷＯ２００３０８９９０４（請求項９）、ＷＯ２００３０１６４７５（請求項１）、ＵＳ２００３１１８５９２、ＷＯ２００３００８５３７（請求項１）、ＷＯ２００３０５５４３９（請求項２９；図１Ａ〜Ｂ）、ＷＯ２００３０２５２２８（請求項３７、図５Ｃ）、ＷＯ２００２２２６３６（実施例１３、９５〜１０７頁）、ＷＯ２００２１２３４１（請求項６８、図７）、ＷＯ２００２１３８４７（７１〜７４頁）、ＷＯ２００２１４５０３（１１４〜１１７頁）、ＷＯ２００１５３４６３（請求項２、４１〜４６頁）、ＷＯ２００１４１７８７（１５頁）、ＷＯ２０００４４８９９（請求項５２、図７）、ＷＯ２０００２０５７９（請求項３、図２）、ＵＳ５８６９４４５（請求項３、Ｃｏｌ３１〜３８）、ＷＯ９６３０５１４（請求項２、５６〜６１頁）、ＥＰ１４３９３９３（請求項７）、ＷＯ２００４０４３３６１（請求項７）、ＷＯ２００４０２２７０９、ＷＯ２００１００２４４（実施例３、図４）、受託番号：Ｐ０４６２６、ＥＭＢＬ、Ｍ１１７６７、ＡＡＡ３５８０８．１。ＥＭＢＬ、Ｍ１１７６１、ＡＡＡ３５８０８．１。
【０１４０】
（１８）ＮＣＡ（ＣＥＡＣＡＭ６、Ｇｅｎｂａｎｋ受託番号Ｍ１８７２８）、Ｂａｒｎｅｔｔ  Ｔ．，ｅｔ  ａｌ．Ｇｅｎｏｍｉｃｓ  ３，５９−６６，１９８８、Ｔａｗａｒａｇｉ  Ｙ．，ｅｔ  ａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．１５０，８９−９６，１９８８、Ｓｔｒａｕｓｂｅｒｇ  Ｒ．Ｌ．，ｅｔ  ａｌ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．９９：１６８９９−１６９０３，２００２、ＷＯ２００４０６３７０９、ＥＰ１４３９３９３（請求項７）、ＷＯ２００４０４４１７８（実施例４）、ＷＯ２００４０３１２３８、ＷＯ２００３０４２６６１（請求項１２）、ＷＯ２００２７８５２４（実施例２）、ＷＯ２００２８６４４３（請求項２７、４２７頁）、ＷＯ２００２６０３１７（請求項２）、受託番号：Ｐ４０１９９、Ｑ１４９２０、ＥＭＢＬ、Ｍ２９５４１、ＡＡＡ５９９１５．１。ＥＭＢＬ、Ｍ１８７２８。
【０１４１】
（１９）ＭＤＰ（ＤＰＥＰ１、Ｇｅｎｂａｎｋ受託番号ＢＣ０１７０２３）  Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．９９（２６）：１６８９９−１６９０３（２００２））、ＷＯ２００３０１６４７５（請求項１）、ＷＯ２００２６４７９８（請求項３３、８５〜８７頁）、ＪＰ０５００３７９０（図６〜８）、ＷＯ９９４６２８４（図９）、相互参照：ＭＩＭ：１７９７８０、ＡＡＨ１７０２３．１、ＢＣ０１７０２３＿１。
【０１４２】
（２０）ＩＬ２０Ｒα（ＩＬ２０Ｒａ、ＺＣＹＴＯＲ７、Ｇｅｎｂａｎｋ受託番号ＡＦ１８４９７１）、Ｃｌａｒｋ  Ｈ．Ｆ．，ｅｔ  ａｌ．Ｇｅｎｏｍｅ  Ｒｅｓ．１３，２２６５−２２７０，２００３、Ｍｕｎｇａｌｌ  Ａ．Ｊ．，ｅｔ  ａｌ．Ｎａｔｕｒｅ  ４２５，８０５−８１１，２００３、Ｂｌｕｍｂｅｒｇ  Ｈ．，ｅｔ  ａｌ．Ｃｅｌｌ  １０４，９−１９，２００１、Ｄｕｍｏｕｔｉｅｒ  Ｌ．，ｅｔ  ａｌ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６７，３５４５−３５４９，２００１、Ｐａｒｒｉｓｈ−Ｎｏｖａｋ  Ｊ．，ｅｔ  ａｌ．Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７７，４７５１７−４７５２３，２００２、Ｐｌｅｔｎｅｖ  Ｓ．，ｅｔ  ａｌ．（２００３）  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ４２：１２６１７−１２６２４、Ｓｈｅｉｋｈ  Ｆ．，ｅｔ  ａｌ．（２００４）  Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１７２，２００６−２０１０、ＥＰ１３９４２７４（実施例１１）、ＵＳ２００４００５３２０（実施例５）、ＷＯ２００３０２９２６２（７４〜７５頁）、ＷＯ２００３００２７１７（請求項２、６３頁）、ＷＯ２００２２２１５３（４５〜４７頁）、ＵＳ２００２０４２３６６（２０〜２１頁）、ＷＯ２００１４６２６１（５７〜５９頁）、ＷＯ２００１４６２３２（６３〜６５頁）、ＷＯ９８３７１９３（請求項１、５５〜５９頁）、受託番号：Ｑ９ＵＨＦ４、Ｑ６ＵＷＡ９、Ｑ９６ＳＨ８、ＥＭＢＬ、ＡＦ１８４９７１、ＡＡＦ０１３２０．１。
【０１４３】
（２１）Ｂｒｅｖｉｃａｎ（ＢＣＡＮ、ＢＥＨＡＢ、Ｇｅｎｂａｎｋ受託番号ＡＦ２２９０５３）  Ｇａｒｙ  Ｓ．Ｃ．，ｅｔ  ａｌ．Ｇｅｎｅ  ２５６，１３９−１４７，２０００、Ｃｌａｒｋ  Ｈ．Ｆ．，ｅｔ  ａｌ．Ｇｅｎｏｍｅ  Ｒｅｓ．１３，２２６５−２２７０，２００３、Ｓｔｒａｕｓｂｅｒｇ  Ｒ．Ｌ．，ｅｔ  ａｌ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．９９，１６８９９−１６９０３，２００２、ＵＳ２００３１８６３７２（請求項１１）、ＵＳ２００３１８６３７３（請求項１１）、ＵＳ２００３１１９１３１（請求項１、図５２）、ＵＳ２００３１１９１２２（請求項１、図５２）、ＵＳ２００３１１９１２６（請求項１）、ＵＳ２００３１１９１２１（請求項１、図５２）、ＵＳ２００３１１９１２９（請求項１）、ＵＳ２００３１１９１３０（請求項１）、ＵＳ２００３１１９１２８（請求項１、図５２）、ＵＳ２００３１１９１２５（請求項１）、ＷＯ２００３０１６４７５（請求項１）、ＷＯ２００２０２６３４（請求項１）。
【０１４４】
（２２）ＥｐｈＢ２Ｒ（ＤＲＴ、ＥＲＫ、Ｈｅｋ５、ＥＰＨＴ３、Ｔｙｒｏ５、Ｇｅｎｂａｎｋ受託番号ＮＭ＿００４４４２）  Ｃｈａｎ，Ｊ．ａｎｄ  Ｗａｔｔ，Ｖ．Ｍ．，Ｏｎｃｏｇｅｎｅ  ６（６），１０５７−１０６１（１９９１）  Ｏｎｃｏｇｅｎｅ  １０（５）：８９７−９０５（１９９５），Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．２１：３０９−３４５（１９９８），Ｉｎｔ．Ｒｅｖ．Ｃｙｔｏｌ．１９６：１７７−２４４（２０００））、ＷＯ２００３０４２６６１（請求項１２）、ＷＯ２０００５３２１６（請求項１、４１頁）、ＷＯ２００４０６５５７６（請求項１）、ＷＯ２００４０２０５８３（請求項９）、ＷＯ２００３００４５２９（１２８〜１３２頁）、ＷＯ２０００５３２１６（請求項１、４２頁）；相互参照：ＭＩＭ：６００９９７、ＮＰ＿００４４３３．２、ＮＭ＿００４４４２＿１。
【０１４５】
（２３）ＡＳＬＧ６５９（Ｂ７ｈ、Ｇｅｎｂａｎｋ受託番号ＡＸ０９２３２８）  ＵＳ２００４０１０１８９９（請求項２）、ＷＯ２００３１０４３９９（請求項１１）、ＷＯ２００４０００２２１（図３）、ＵＳ２００３１６５５０４（請求項１）、ＵＳ２００３１２４１４０（実施例２）、ＵＳ２００３０６５１４３（図６０）、ＷＯ２００２１０２２３５（請求項１３、２９９頁）、ＵＳ２００３０９１５８０（実施例２）、ＷＯ２００２１０１８７（請求項６、図１０）、ＷＯ２００１９４６４１（請求項１２、図７ｂ）、ＷＯ２００２０２６２４（請求項１３、図１Ａ〜１Ｂ）、ＵＳ２００２０３４７４９（請求項５４、４５〜４６頁）、ＷＯ２００２０６３１７（実施例２、３２０〜３２１頁、請求項３４、３２１〜３２２頁）、ＷＯ２００２７１９２８（４６８〜４６９頁）、ＷＯ２００２０２５８７（実施例１、図１）、ＷＯ２００１４０２６９（実施例３、１９０〜１９２頁）、ＷＯ２０００３６１０７（実施例２、２０５〜２０７頁）、ＷＯ２００４０５３０７９（請求項１２）、ＷＯ２００３００４９８９（請求項１）、ＷＯ２００２７１９２８（２３３〜２３４、４５２〜４５３頁）、ＷＯ０１１６３１８。
【０１４６】
（２４）ＰＳＣＡ（前立腺幹細胞抗原前駆体、Ｇｅｎｂａｎｋ受託番号ＡＪ２９７４３６）  Ｒｅｉｔｅｒ  Ｒ．Ｅ．，ｅｔ  ａｌ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．９５，１７３５−１７４０，１９９８、Ｇｕ  Ｚ．，ｅｔ  ａｌ．Ｏｎｃｏｇｅｎｅ  １９，１２８８−１２９６，２０００、Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．（２０００）  ２７５（３）：７８３−７８８、ＷＯ２００４０２２７０９、ＥＰ１３９４２７４（実施例１１）、ＵＳ２００４０１８５５３（請求項１７）、ＷＯ２００３００８５３７（請求項１）、ＷＯ２００２８１６４６（請求項１、１６４頁）、ＷＯ２００３００３９０６（請求項１０、２８８頁）、ＷＯ２００１４０３０９（実施例１、図１７）、ＵＳ２００１０５５７５１（実施例１、図１ｂ）、ＷＯ２０００３２７５２（請求項１８、図１）、ＷＯ９８５１８０５（請求項１７、９７頁）、ＷＯ９８５１８２４（請求項１０、９４頁）、ＷＯ９８４０４０３（請求項２、図１Ｂ）、受託番号：Ｏ４３６５３、ＥＭＢＬ、ＡＦ０４３４９８、ＡＡＣ３９６０７．１。
【０１４７】
（２５）ＧＥＤＡ（Ｇｅｎｂａｎｋ受託番号ＡＹ２６０７６３）、ＡＡＰ１４９５４脂肪腫ＨＭＧＩＣ融合パートナー様タンパク質／ｐｉｄ＝ＡＡＰ１４９５４．１−ホモサピエンス種：ホモサピエンス（ヒト）ＷＯ２００３０５４１５２（請求項２０）、ＷＯ２００３０００８４２（請求項１）、ＷＯ２００３０２３０１３（実施例３、請求項２０）、ＵＳ２００３１９４７０４（請求項４５）、相互参照：ＧＩ：３０１０２４４９、ＡＡＰ１４９５４．１、ＡＹ２６０７６３＿１。
【０１４８】
（２６）ＢＡＦＦ−Ｒ（Ｂ細胞活性化因子受容体、ＢＬｙＳ受容体３、ＢＲ３、Ｇｅｎｂａｎｋ受託番号ＡＦ１１６４５６）、ＢＡＦＦ受容体／ｐｉｄ＝ＮＰ＿４４３１７７．１−Ｈｏｍｏ  ｓａｐｉｅｎｓ  Ｔｈｏｍｐｓｏｎ，Ｊ．Ｓ．，ｅｔ  ａｌ．Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２９３（５５３７），２１０８−２１１１（２００１）、ＷＯ２００４０５８３０９、ＷＯ２００４０１１６１１、ＷＯ２００３０４５４２２（実施例、３２〜３３頁）、ＷＯ２００３０１４２９４（請求項３５、図６Ｂ）、ＷＯ２００３０３５８４６（請求項７０、６１５〜６１６頁）、ＷＯ２００２９４８５２（Ｃｏｌ１３６〜１３７）、ＷＯ２００２３８７６６（請求項３、１３３頁）、ＷＯ２００２２４９０９（実施例３、図３）、相互参照：ＭＩＭ：６０６２６９、ＮＰ＿４４３１７７．１、ＮＭ＿０５２９４５＿１、ＡＦ１３２６００。
【０１４９】
（２７）ＣＤ２２（Ｂ細胞受容体ＣＤ２２−Ｂアイソフォーム、ＢＬ−ＣＡＭ、Ｌｙｂ−８、Ｌｙｂ８、ＳＩＧＬＥＣ−２、ＦＬＪ２２８１４、Ｇｅｎｂａｎｋ受託番号ＡＫ０２６４６７）、Ｗｉｌｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．（１９９１）  Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１７３：１３７−１４６、ＷＯ２００３０７２０３６（請求項１、図１）、相互参照：ＭＩＭ：１０７２６６、ＮＰ＿００１７６２．１、ＮＭ＿００１７７１＿１。
【０１５０】
（２８）ＣＤ７９ａ（ＣＤ７９Ａ、ＣＤ７９α、免疫グロブリン関連アルファ、Ｉｇベータ（ＣＤ７９Ｂ）と共有結合により相互作用し、ＩｇＭ分子と表面上で複合体を形成し、Ｂ細胞分化に関与するシグナルを伝達するＢ細胞特異的タンパク質）、ｐＩ：４．８４、分子量：２５０２８  ＴＭ：２［Ｐ］遺伝子染色体：１９ｑ１３．２、Ｇｅｎｂａｎｋ受託番号ＮＰ＿００１７７４．１０）  ＷＯ２００３０８８８０８、ＵＳ２００３０２２８３１９、ＷＯ２００３０６２４０１（請求項９）、ＵＳ２００２１５０５７３（請求項４、１３〜１４頁）、ＷＯ９９５８６５８（請求項１３、図１６）、ＷＯ９２０７５７４（図１）、ＵＳ５６４４０３３、Ｈａ  ｅｔ  ａｌ．（１９９２）  Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４８（５）：１５２６−１５３１、Ｍｕｅｌｌｅｒ  ｅｔ  ａｌ．（１９９２）  Ｅｕｒ．Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．２２：１６２１−１６２５、Ｈａｓｈｉｍｏｔｏ  ｅｔ  ａｌ．（１９９４）  Ｉｍｍｕｎｏｇｅｎｅｔｉｃｓ  ４０（４）：２８７−２９５、Ｐｒｅｕｄ’ｈｏｍｍｅ  ｅｔ  ａｌ．（１９９２）  Ｃｌｉｎ．Ｅｘｐ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．９０（１）：１４１−１４６、Ｙｕ  ｅｔ  ａｌ．（１９９２）  Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４８（２）  ６３３−６３７、Ｓａｋａｇｕｃｈｉ  ｅｔ  ａｌ．（１９８８）  ＥＭＢＯ  Ｊ．７（１１）：３４５７−３４６４。
【０１５１】
（２９）ＣＸＣＲ５（バーキットリンパ腫受容体１、ＣＸＣＬ１３ケモカインによって活性化され、リンパ球移動及び体液性免疫において機能し、ＨＩＶ−２感染症、ならびに恐らく、ＡＩＤＳ、リンパ腫、骨髄腫、及び白血病の発症において働くＧタンパク質共役型受容体）、３７２ａａ，ｐＩ：８．５４  分子量：４１９５９  ＴＭ：７［Ｐ］遺伝子染色体：１１ｑ２３．３、Ｇｅｎｂａｎｋ受託番号ＮＰ＿００１７０７．１）  ＷＯ２００４０４００００、ＷＯ２００４０１５４２６、ＵＳ２００３１０５２９２（実施例２）、ＵＳ６５５５３３９（実施例２）、ＷＯ２００２６１０８７（図１）、ＷＯ２００１５７１８８（請求項２０、２６９頁）、ＷＯ２００１７２８３０（１２〜１３頁）、ＷＯ２０００２２１２９（実施例１、１５２〜１５３頁、実施例２、２５４〜２５６頁）、ＷＯ９９２８４６８（請求項１、３８頁）、ＵＳ５４４００２１（実施例２、ｃｏｌ４９〜５２）、ＷＯ９４２８９３１（５６〜５８頁）、ＷＯ９２１７４９７（請求項７、図５）、Ｄｏｂｎｅｒ  ｅｔ  ａｌ．（１９９２）  Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２２：２７９５−２７９９、Ｂａｒｅｌｌａ  ｅｔ  ａｌ．（１９９５）  Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｊ．３０９：７７３−７７９。
【０１５２】
（３０）ＨＬＡ−ＤＯＢ（ペプチドに結合し、ＣＤ４＋Ｔリンパ球にそれらを提示する、ＭＨＣクラスＩＩ分子のベータサブユニット（Ｉａ抗原））、２７３ａａ、ｐＩ：６．５６、分子量：３０８２０  ＴＭ：１［Ｐ］遺伝子染色体：６ｐ２１．３、Ｇｅｎｂａｎｋ受託番号ＮＰ＿００２１１１．１）  Ｔｏｎｎｅｌｌｅ  ｅｔ  ａｌ．（１９８５）  ＥＭＢＯ  Ｊ．４（１１）：２８３９−２８４７、Ｊｏｎｓｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．（１９８９）  Ｉｍｍｕｎｏｇｅｎｅｔｉｃｓ  ２９（６）：４１１−４１３、Ｂｅｃｋ  ｅｔ  ａｌ．（１９９２）  Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２８：４３３−４４１、Ｓｔｒａｕｓｂｅｒｇ  ｅｔ  ａｌ．（２００２）  Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ  ＵＳＡ  ９９：１６８９９−１６９０３、Ｓｅｒｖｅｎｉｕｓ  ｅｔ  ａｌ．（１９８７）  Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６２：８７５９−８７６６、Ｂｅｃｋ  ｅｔ  ａｌ．（１９９６）  Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２５５：１−１３、Ｎａｒｕｓｅ  ｅｔ  ａｌ．（２００２）  Ｔｉｓｓｕｅ  Ａｎｔｉｇｅｎｓ  ５９：５１２−５１９、ＷＯ９９５８６５８（請求項１３、図１５）、ＵＳ６１５３４０８（Ｃｏｌ３５〜３８）、ＵＳ５９７６５５１（ｃｏｌ１６８〜１７０）、ＵＳ６０１１１４６（ｃｏｌ１４５〜１４６）、Ｋａｓａｈａｒａ  ｅｔ  ａｌ．（１９８９）  Ｉｍｍｕｎｏｇｅｎｅｔｉｃｓ  ３０（１）：６６−６８、Ｌａｒｈａｍｍａｒ  ｅｔ  ａｌ．（１９８５）  Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６０（２６）：１４１１１−１４１１９。
【０１５３】
（３１）Ｐ２Ｘ５（プリン受容体Ｐ２Ｘリガンド開口型イオンチャネル５、シナプス伝達及び神経発生に関与し得る、細胞外ＡＴＰによって開閉されるイオンチャネル、欠損すると特発性の排尿筋不安定の病態生理に寄与し得る）、４２２ａａ），ｐＩ：７．６３、分子量：４７２０６  ＴＭ：１［Ｐ］遺伝子染色体：１７ｐ１３．３、Ｇｅｎｂａｎｋ受託番号ＮＰ＿００２５５２．２）  Ｌｅ  ｅｔ  ａｌ．（１９９７）  ＦＥＢＳ  Ｌｅｔｔ．４１８（１−２）：１９５−１９９、ＷＯ２００４０４７７４９、ＷＯ２００３０７２０３５（請求項１０）、Ｔｏｕｃｈｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．（２０００）  Ｇｅｎｏｍｅ  Ｒｅｓ．１０：１６５−１７３、ＷＯ２００２２２６６０（請求項２０）、ＷＯ２００３０９３４４４（請求項１）、ＷＯ２００３０８７７６８（請求項１）、ＷＯ２００３０２９２７７（８２頁）。
【０１５４】
（３２）ＣＤ７２（Ｂ細胞分化抗原ＣＤ７２、Ｌｙｂ−２）  ＰＲＯＴＥＩＮ  ＳＥＱＵＥＮＣＥ  Ｆｕｌｌ  ｍａｅａｉｔｙ．．．ｔａｆｒｆｐｄ（１．．３５９；３５９ａａ）、ｐＩ：８．６６、分子量：４０２２５  ＴＭ：１［Ｐ］遺伝子染色体：９ｐ１３．３、Ｇｅｎｂａｎｋ受託番号ＮＰ＿００１７７３．１）  ＷＯ２００４０４２３４６（請求項６５）、ＷＯ２００３０２６４９３（５１〜５２、５７〜５８頁）、ＷＯ２０００７５６５５（１０５〜１０６頁）、Ｖｏｎ  Ｈｏｅｇｅｎ  ｅｔ  ａｌ．（１９９０）  Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４４（１２）：４８７０−４８７７、Ｓｔｒａｕｓｂｅｒｇ  ｅｔ  ａｌ．（２００２）  Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ  ＵＳＡ  ９９：１６８９９−１６９０３。
【０１５５】
（３３）ＬＹ６４（リンパ球抗原６４（ＲＰ１０５）、ロイシンリッチ反復（ＬＲＲ）ファミリーのＩ型膜タンパク質、Ｂ細胞の活性化及びアポトーシスを制御し、機能消失は、全身性エリテマトーデス患者における疾患活性の増加に関連する）、６６１ａａ，ｐＩ  ６．２０、分子量：７４１４７  ＴＭ：１［Ｐ］遺伝子染色体：５ｑ１２、Ｇｅｎｂａｎｋ受託番号ＮＰ＿００５５７３．１）  ＵＳ２００２１９３５６７、ＷＯ９７０７１９８（請求項１１、３９〜４２頁）、Ｍｉｕｒａ  ｅｔ  ａｌ．（１９９６）  Ｇｅｎｏｍｉｃｓ  ３８（３）：２９９−３０４、Ｍｉｕｒａ  ｅｔ  ａｌ．（１９９８）  Ｂｌｏｏｄ  ９２：２８１５−２８２２、ＷＯ２００３０８３０４７、ＷＯ９７４４４５２（請求項８、５７〜６１頁）、ＷＯ２０００１２１３０（２４〜２６頁）。
【０１５６】
（３４）ＦｃＲＨ１（Ｆｃ受容体様タンパク質１、Ｃ２型Ｉｇ様及びＩＴＡＭドメインを含有する免疫グロブリンＦｃドメインの推定上の受容体、Ｂ−リンパ球分化において役割を有し得る）、４２９ａａ、ｐＩ：５．２８、分子量：４６９２５  ＴＭ：１［Ｐ］遺伝子染色体：１ｑ２１−１ｑ２２、Ｇｅｎｂａｎｋ受託番号ＮＰ＿４４３１７０．１）  ＷＯ２００３０７７８３６、ＷＯ２００１３８４９０（請求項６、図１８Ｅ−１〜１８−Ｅ−２）、Ｄａｖｉｓ  ｅｔ  ａｌ．（２００１）  Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ  ＵＳＡ  ９８（１７）：９７７２−９７７７、ＷＯ２００３０８９６２４（請求項８）、ＥＰ１３４７０４６（請求項１）、ＷＯ２００３０８９６２４（請求項７）。
【０１５７】
（３５）ＩＲＴＡ２（免疫グロブリンスーパーファミリー受容体転座関連２、Ｂ細胞の成長及びリンパ腫形成に潜在的な役割を有する推定上の免疫受容体、転座による遺伝子の制御解除が一部のＢ細胞悪性腫瘍で生じる）、９７７ａａ、ｐＩ：６．８８  分子量：１０６４６８  ＴＭ：１［Ｐ］遺伝子染色体：１ｑ２１、Ｇｅｎｂａｎｋ受託番号Ｈｕｍａｎ：ＡＦ３４３６６２、ＡＦ３４３６６３、ＡＦ３４３６６４、ＡＦ３４３６６５、ＡＦ３６９７９４、ＡＦ３９７４５３、ＡＫ０９０４２３、ＡＫ０９０４７５、ＡＬ８３４１８７、ＡＹ３５８０８５、Ｍｏｕｓｅ：ＡＫ０８９７５６、ＡＹ１５８０９０、ＡＹ５０６５５８、ＮＰ＿１１２５７１．１。ＷＯ２００３０２４３９２（請求項２、図９７）、Ｎａｋａｙａｍａ  ｅｔ  ａｌ．（２０００）  Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．２７７（１）：１２４−１２７、ＷＯ２００３０７７８３６、ＷＯ２００１３８４９０（請求項３、図１８Ｂ−１〜１８Ｂ−２）。
【０１５８】
（３６）ＴＥＮＢ２（ＴＭＥＦＦ２、トモレグリン、ＴＰＥＦ、ＨＰＰ１、ＴＲ、推定上の膜貫通プロテオグリカン、成長因子のＥＧＦ／ヘレグリンファミリー及びフォリスタチンに関連する）、３７４ａａ、ＮＣＢＩ受託番号：ＡＡＤ５５７７６、ＡＡＦ９１３９７、ＡＡＧ４９４５１、ＮＣＢＩ参照配列：ＮＰ＿０５７２７６、ＮＣＢＩ遺伝子：２３６７１、ＯＭＩＭ：６０５７３４、ＳｗｉｓｓＰｒｏｔ  Ｑ９ＵＩＫ５、Ｇｅｎｂａｎｋ受託番号ＡＦ１７９２７４、ＡＹ３５８９０７、ＣＡＦ８５７２３、ＣＱ７８２４３６  ＷＯ２００４０７４３２０（配列番号８１０）、ＪＰ２００４１１３１５１（配列番号２、４、８）、ＷＯ２００３０４２６６１（配列番号５８０）、ＷＯ２００３００９８１４（配列番号４１１）、ＥＰ１２９５９４４（６９〜７０頁）、ＷＯ２００２３０２６８（３２９頁）、ＷＯ２００１９０３０４（配列番号２７０６）、ＵＳ２００４２４９１３０、ＵＳ２００４０２２７２７、ＷＯ２００４０６３３５５、ＵＳ２００４１９７３２５、ＵＳ２００３２３２３５０、ＵＳ２００４００５５６３、ＵＳ２００３１２４５７９、Ｈｏｒｉｅ  ｅｔ  ａｌ．（２０００）  Ｇｅｎｏｍｉｃｓ  ６７：１４６−１５２、Ｕｃｈｉｄａ  ｅｔ  ａｌ．（１９９９）  Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．２６６：５９３−６０２、Ｌｉａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．（２０００）  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．６０：４９０７−１２、Ｇｌｙｎｎｅ−Ｊｏｎｅｓ  ｅｔ  ａｌ．（２００１）  Ｉｎｔ  Ｊ  Ｃａｎｃｅｒ．Ｏｃｔ  １５；９４（２）：１７８−８４。
【０１５９】
（３７）ＰＭＥＬ１７（ｓｉｌｖｅｒ相同体、ＳＩＬＶ、Ｄ１２Ｓ５３Ｅ、ＰＭＥＬ１７、ＳＩ、ＳＩＬ）、ＭＥ２０、ｇｐ１００）  ＢＣ００１４１４、ＢＴ００７２０２、Ｍ３２２９５、Ｍ７７３４８、ＮＭ＿００６９２８、ＭｃＧｌｉｎｃｈｅｙ，Ｒ．Ｐ．ｅｔ  ａｌ．（２００９）  Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．１０６（３３），１３７３１−１３７３６、Ｋｕｍｍｅｒ，Ｍ．Ｐ．ｅｔ  ａｌ．（２００９）  Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２８４（４），２２９６−２３０６。
【０１６０】
（３８）ＴＭＥＦＦ１（ＥＧＦ様ドメイン及び２つのフォリスタチン様ドメインを有する膜貫通タンパク質１、トモレグリン１）、Ｈ７３６５、Ｃ９ｏｒｆ２、Ｃ９ＯＲＦ２、Ｕ１９８７８；Ｘ８３９６１、ＮＭ＿０８０６５５、ＮＭ＿００３６９２、Ｈａｒｍｓ，Ｐ．Ｗ．（２００３）  Ｇｅｎｅｓ  Ｄｅｖ．１７（２１），２６２４−２６２９、Ｇｅｒｙ，Ｓ．ｅｔ  ａｌ．（２００３）  Ｏｎｃｏｇｅｎｅ  ２２（１８）：２７２３−２７２７。
【０１６１】
（３９）ＧＤＮＦ−Ｒａ１（ＧＤＮＦファミリー受容体アルファ１、ＧＦＲＡ１、ＧＤＮＦＲ、ＧＤＮＦＲＡ、ＲＥＴＬ１、ＴＲＮＲ１、ＲＥＴ１Ｌ、ＧＤＮＦＲ−アルファ１、ＧＦＲ−ＡＬＰＨＡ−１）、Ｕ９５８４７、ＢＣ０１４９６２、ＮＭ＿１４５７９３  ＮＭ＿００５２６４、Ｋｉｍ，Ｍ．Ｈ．ｅｔ  ａｌ．（２００９）  Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．２９（８），２２６４−２２７７、Ｔｒｅａｎｏｒ，Ｊ．Ｊ．ｅｔ  ａｌ．（１９９６）  Ｎａｔｕｒｅ  ３８２（６５８６）：８０−８３。
【０１６２】
（４０）  Ｌｙ６Ｅ（リンパ球抗原６複合体、遺伝子座Ｅ、Ｌｙ６７、ＲＩＧ−Ｅ、ＳＣＡ−２、ＴＳＡ−１）、ＮＰ＿００２３３７．１、ＮＭ＿００２３４６．２、ｄｅ  Ｎｏｏｉｊ−ｖａｎ  Ｄａｌｅｎ，Ａ．Ｇ．ｅｔ  ａｌ．（２００３）  Ｉｎｔ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ  １０３（６），７６８−７７４、Ｚａｍｍｉｔ，Ｄ．Ｊ．ｅｔ  ａｌ．（２００２）  Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．２２（３）：９４６−９５２。
【０１６３】
（４１）ＴＭＥＭ４６（ｓｈｉｓａ相同体２（Ｘｅｎｏｐｕｓ  ｌａｅｖｉｓ）、ＳＨＩＳＡ２）、ＮＰ＿００１００７５３９．１、ＮＭ＿００１００７５３８．１、Ｆｕｒｕｓｈｉｍａ，Ｋ．ｅｔ  ａｌ．（２００７）  Ｄｅｖ．Ｂｉｏｌ．３０６（２），４８０−４９２、Ｃｌａｒｋ，Ｈ．Ｆ．ｅｔ  ａｌ．（２００３）  Ｇｅｎｏｍｅ  Ｒｅｓ．１３（１０）：２２６５−２２７０。
【０１６４】
（４２）Ｌｙ６Ｇ６Ｄ（リンパ球抗原６複合体、遺伝子座Ｇ６Ｄ、Ｌｙ６−Ｄ、ＭＥＧＴ１）、ＮＰ＿０６７０７９．２、ＮＭ＿０２１２４６．２、Ｍａｌｌｙａ，Ｍ．ｅｔ  ａｌ．（２００２）  Ｇｅｎｏｍｉｃｓ  ８０（１）：１１３−１２３、Ｒｉｂａｓ，Ｇ．ｅｔ  ａｌ．（１９９９）  Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６３（１）：２７８−２８７。
【０１６５】
（４３）ＬＧＲ５（ロイシンリッチ反復含有Ｇタンパク質結合型受容体５、ＧＰＲ４９、ＧＰＲ６７）、ＮＰ＿００３６５８．１、ＮＭ＿００３６６７．２、Ｓａｌａｎｔｉ，Ｇ．ｅｔ  ａｌ．（２００９）  Ａｍ．Ｊ．Ｅｐｉｄｅｍｉｏｌ．１７０（５）：５３７−５４５、Ｙａｍａｍｏｔｏ，Ｙ．ｅｔ  ａｌ．（２００３）  Ｈｅｐａｔｏｌｏｇｙ  ３７（３）：５２８−５３３。
【０１６６】
（４４）ＲＥＴ（ｒｅｔ癌原遺伝子、ＭＥＮ２Ａ、ＨＳＣＲ１、ＭＥＮ２Ｂ、ＭＴＣ１、ＰＴＣ、ＣＤＨＦ１２、Ｈｓ．１６８１１４、ＲＥＴ５１、ＲＥＴ−ＥＬＥ１）、ＮＰ＿０６６１２４．１、ＮＭ＿０２０９７５．４、Ｔｓｕｋａｍｏｔｏ，Ｈ．ｅｔ  ａｌ．（２００９）  Ｃａｎｃｅｒ  Ｓｃｉ．１００（１０）：１８９５−１９０１、Ｎａｒｉｔａ，Ｎ．ｅｔ  ａｌ．（２００９）  Ｏｎｃｏｇｅｎｅ  ２８（３４）：３０５８−３０６８。
【０１６７】
（４５）ＬＹ６Ｋ（リンパ球抗原６複合体、遺伝子座Ｋ、ＬＹ６Ｋ、ＨＳＪ００１３４８、ＦＬＪ３５２２６）、ＮＰ＿０５９９９７．３、ＮＭ＿０１７５２７．３、Ｉｓｈｉｋａｗａ，Ｎ．ｅｔ  ａｌ．（２００７）  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．６７（２４）：１１６０１−１１６１１、ｄｅ  Ｎｏｏｉｊ−ｖａｎ  Ｄａｌｅｎ，Ａ．Ｇ．ｅｔ  ａｌ．（２００３）  Ｉｎｔ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ  １０３（６）：７６８−７７４。
【０１６８】
（４６）ＧＰＲ１９（Ｇタンパク質結合型受容体１９、Ｍｍ．４７８７）、ＮＰ＿００６１３４．１、ＮＭ＿００６１４３．２、Ｍｏｎｔｐｅｔｉｔ，Ａ．ａｎｄ  Ｓｉｎｎｅｔｔ，Ｄ．（１９９９）  Ｈｕｍ．Ｇｅｎｅｔ．１０５（１−２）：１６２−１６４、Ｏ’Ｄｏｗｄ，Ｂ．Ｆ．ｅｔ  ａｌ．（１９９６）  ＦＥＢＳ  Ｌｅｔｔ．３９４（３）：３２５−３２９。
【０１６９】
（４７）ＧＰＲ５４（ＫＩＳＳ１受容体、ＫＩＳＳ１Ｒ、ＧＰＲ５４、ＨＯＴ７Ｔ１７５、ＡＸＯＲ１２）、ＮＰ＿１１５９４０．２、ＮＭ＿０３２５５１．４、Ｎａｖｅｎｏｔ，Ｊ．Ｍ．ｅｔ  ａｌ．（２００９）  Ｍｏｌ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．７５（６）：１３００−１３０６、Ｈａｔａ，Ｋ．ｅｔ  ａｌ．（２００９）  Ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．２９（２）：６１７−６２３。
【０１７０】
（４８）ＡＳＰＨＤ１（アスパラギン酸ベータヒドロキシラーゼドメイン含有１、ＬＯＣ２５３９８２）、ＮＰ＿８５９０６９．２、ＮＭ＿１８１７１８．３、Ｇｅｒｈａｒｄ，Ｄ．Ｓ．ｅｔ  ａｌ．（２００４）  Ｇｅｎｏｍｅ  Ｒｅｓ．１４（１０Ｂ）：２１２１−２１２７。
【０１７１】
（４９）チロシナーゼ（ＴＹＲ、ＯＣＡＩＡ、ＯＣＡ１Ａ、チロシナーゼ、ＳＨＥＰ３）、ＮＰ＿０００３６３．１、ＮＭ＿０００３７２．４、Ｂｉｓｈｏｐ，Ｄ．Ｔ．ｅｔ  ａｌ．（２００９）  Ｎａｔ．Ｇｅｎｅｔ．４１（８）：９２０−９２５、Ｎａｎ，Ｈ．ｅｔ  ａｌ．（２００９）  Ｉｎｔ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ  １２５（４）：９０９−９１７。
【０１７２】
（５０）ＴＭＥＭ１１８（ｒｉｎｇフィンガータンパク質、膜貫通２、ＲＮＦＴ２、ＦＬＪ１４６２７）、ＮＰ＿００１１０３３７３．１、ＮＭ＿００１１０９９０３．１、Ｃｌａｒｋ，Ｈ．Ｆ．ｅｔ  ａｌ．（２００３）  Ｇｅｎｏｍｅ  Ｒｅｓ．１３（１０）：２２６５−２２７０、Ｓｃｈｅｒｅｒ，Ｓ．Ｅ．ｅｔ  ａｌ．（２００６）  Ｎａｔｕｒｅ  ４４０（７０８２）：３４６−３５１。
【０１７３】
（５１）ＧＰＲ１７２Ａ（Ｇタンパク質結合型受容体１７２Ａ、ＧＰＣＲ４１、ＦＬＪ１１８５６、Ｄ１５Ｅｒｔｄ７４７ｅ）、ＮＰ＿０７８８０７．１、ＮＭ＿０２４５３１．３、Ｅｒｉｃｓｓｏｎ，Ｔ．Ａ．ｅｔ  ａｌ．（２００３）  Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．１００（１１）：６７５９−６７６４、Ｔａｋｅｄａ，Ｓ．ｅｔ  ａｌ．（２００２）  ＦＥＢＳ  Ｌｅｔｔ．５２０（１−３）：９７−１０１。
【０１７４】
（５２）ＣＤ３３、シアル酸に結合する免疫グロブリン様レクチンファミリーのメンバーは、６７ｋＤａのグリコシル化膜貫通タンパク質である。ＣＤ３３は、決定済みの（ｃｏｍｍｉｔｔｅｄ）髄単球性前駆体細胞及び赤血球前駆体細胞に加えて、ほとんどの骨髄性白血病細胞及び単球性白血病細胞に発現する。これは、最も初期の多能性幹細胞、成熟顆粒球、リンパ系細胞、または非造血系細胞には見られない（Ｓａｂｂａｔｈ  ｅｔ  ａｌ．，（１９８５）Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．７５：７５６−５６、Ａｎｄｒｅｗｓ  ｅｔ  ａｌ．，（１９８６）Ｂｌｏｏｄ  ６８：１０３０−５）。ＣＤ３３は、その細胞質尾部に２つのチロシン残基を含み、これらのそれぞれに、多くの阻害性受容体に見られる免疫受容体チロシン系阻害モチーフ（ＩＴＩＭ）に類似の疎水性残基が続いている。
【０１７５】
（５３）ＣＬＬ−１（ＣＬＥＣ１２Ａ、ＭＩＣＬ、及びＤＣＡＬ２）は、Ｃ型レクチン／Ｃ型レクチン様ドメイン（ＣＴＬ／ＣＴＬＤ）スーパーファミリーのメンバーをコードする。このファミリーのメンバーは、共通のタンパク質折り畳みを共有し、細胞接着、細胞間シグナル伝達、糖タンパク質ターンオーバー、ならびに炎症及び免疫応答における役割等の多様な機能を有する。この遺伝子によってコードされるタンパク質は、顆粒球及び単球の機能の負の調節因子である。この遺伝子のいくつかの代替的なスプライス転写物変異体について説明されているが、これらの変異体のうちの一部については全長の性質がわかっていない。この遺伝子は、染色体１２ｐ１３におけるナチュラルキラー遺伝子複合体領域内の他のＣＴＬ／ＣＴＬＤスーパーファミリーメンバーと緊密に関連している（Ｄｒｉｃｋａｍｅｒ  Ｋ（１９９９）  Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｓｔｒｕｃｔ．Ｂｉｏｌ．９（５）：５８５−９０、ｖａｎ  Ｒｈｅｎｅｎ  Ａ，ｅｔ  ａｌ．，（２００７）  Ｂｌｏｏｄ  １１０（７）：２６５９−６６、Ｃｈｅｎ  ＣＨ，ｅｔ  ａｌ．（２００６）  Ｂｌｏｏｄ  １０７（４）：１４５９−６７、Ｍａｒｓｈａｌｌ  ＡＳ，ｅｔ  ａｌ．（２００６）  Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．３６（８）：２１５９−６９、Ｂａｋｋｅｒ  ＡＢ，ｅｔ  ａｌ．（２００５）  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．６４（２２）：８４４３−５０、Ｍａｒｓｈａｌｌ  ＡＳ，，ｅｔ  ａｌ．（２００４）  Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７９（１５）：１４７９２−８０２）。ＣＬＬ−１は、単一のＣ型レクチン様ドメイン（カルシウムまたは糖のいずれにも結合することが予測されていない）、ｓｔａｌｋ領域、膜貫通ドメイン、及びＩＴＩＭモチーフを含む短い細胞質尾部を含む、ＩＩ型膜貫通受容体であることが示されている。
【０１７６】
抗体誘導体
ある特定の実施形態において、本明細書に提供される抗体は、当該技術分野で既知であり、かつ容易に入手可能な追加の非タンパク質性部分を含有するようにさらに修飾され得る。抗体の誘導体化に好適な部分には、水溶性ポリマーが含まれるが、これに限定されない。水溶性ポリマーの非限定的な例としては、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、エチレングリコール／プロピレングリコールのコポリマー、カルボキシメチルセルロース、デキストラン、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、ポリ−１，３−ジオキソラン、ポリ−１，３，６−トリオキサン、エチレン／無水マレイン酸コポリマー、ポリアミノ酸（ホモポリマーまたはランダムコポリマーのいずれか）、及びデキストランまたはポリ（ｎ−ビニルピロリドン）ポリエチレングリコール、プロプロピレングリコールホモポリマー、ポリプロピレンオキシド／エチレンオキシドコポリマー、ポリオキシエチル化ポリオール（例えば、グリセロール）、ポリビニルアルコール、ならびにこれらの混合物が挙げられるが、これらに限定されない。ポリエチレングリコールプロピオンアルデヒドは、水中でのその安定性のため、製造において有利であり得る。ポリマーは、任意の分子量であり得、分岐状または非分岐状であり得る。抗体に結合したポリマーの数は異なり得、２つ以上のポリマーが結合している場合、それらは同じかまたは異なる分子であり得る。一般に、誘導体化に使用されるポリマーの数及び／または種類は、改善される抗体の特定の特性または機能、抗体誘導体が規定の条件下で治療に使用されるかどうか等を含むがこれらに限定されない検討事項に基づいて決定され得る。
【０１７７】
別の実施形態において、放射線への曝露によって選択的に加熱され得る抗体及び非タンパク質性部分のコンジュゲートが提供される。一実施形態において、非タンパク質性部分は、カーボンナノチューブ（Ｋａｍ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  １０２：１１６００−１１６０５（２００５））である。放射線は、任意の波長のものであり得、通常の細胞を傷つけないが、抗体−非タンパク質性部分に近位の細胞が殺滅される温度まで非タンパク質性部分を加熱する波長を含むがこれらに限定されない。
【０１７８】
抗体は、例えば、米国特許第４８１６５６７号に記載されるように、組換え方法及び組成物を用いて産生され得る。かかる核酸は、抗体のＶＬを含むアミノ酸配列及び／または抗体のＶＨを含むアミノ酸配列（例えば、抗体の軽鎖及び／または重鎖）をコードし得る。さらなる実施形態において、かかる核酸を含む１つ以上のベクター（例えば、発現ベクター）が提供される。さらなる実施形態において、かかる核酸を含む宿主細胞が提供される。そのような一実施形態において、宿主細胞は、（１）抗体のＶＬを含むアミノ酸配列及び抗体のＶＨを含むアミノ酸配列をコードする核酸を含むベクター、または（２）抗体のＶＬを含むアミノ酸配列をコードする核酸を含む第１のベクター、及び抗体のＶＨを含むアミノ酸配列をコードする核酸を含む第２のベクターを含む（例えば、それらで形質転換されている）。一実施形態において、宿主細胞は、真核生物のもの、例えば、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞またはリンパ系細胞（例えば、Ｙ０、ＮＳ０、Ｓｐ２０細胞）である。
【０１７９】
抗体の組み換え産生については、例えば、本明細書に記載される抗体をコードする核酸が単離され、宿主細胞内でのさらなるクローニング及び／または発現のために、１つ以上のベクター中に挿入される。かかる核酸は、従来の手順を使用して（例えば、抗体の重鎖及び軽鎖をコードする遺伝子に特異的に結合することができるオリゴヌクレオチドプローブを使用することで）、容易に単離され、配列決定され得る。
【０１８０】
抗体をコードするベクターのクローン化または発現に好適な宿主細胞には、本明細書に記載される原核生物細胞または真核生物細胞が含まれる。例えば、抗体は、特に、グリコシル化及びＦｃエフェクター機能が必要とされない場合に、細菌中で産生され得る。細菌における抗体断片及びポリペプチドの発現については、例えば、米国特許第５，６４８，２３７号、同第５，７８９，１９９号、及び同第５，８４０，５２３号を参照のこと。（Ｅ．ｃｏｌｉにおける抗体断片の発現について説明している、Ｃｈａｒｌｔｏｎ，Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌ．２４８（Ｂ．Ｋ．Ｃ．Ｌｏ，ｅｄ．，Ｈｕｍａｎａ  Ｐｒｅｓｓ，Ｔｏｔｏｗａ，ＮＪ，２００３），ｐｐ．２４５−２５４も参照のこと。）発現後、抗体は、可溶性画分中で細菌細胞ペーストから単離され得、さらに精製され得る。
【０１８１】
原核生物に加えて、糸状菌または酵母等の真核微生物は、抗体をコードするベクターに好適なクローニングまたは発現宿主であり、そのグリコシル化経路が「ヒト化」されており、部分的または完全なヒトグリコシル化パターンを有する抗体の産生をもたらす、真菌及び酵母株を含む。Ｇｅｒｎｇｒｏｓｓ，Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．２２：１４０９−１４１４（２００４）、及びＬｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．２４：２１０−２１５（２００６）を参照のこと。
【０１８２】
グリコシル化抗体の発現に好適な宿主細胞は、多細胞生物（無脊椎動物及び脊椎動物）からも得られる。無脊椎動物細胞の例としては、植物及び昆虫細胞が挙げられる。特にＳｐｏｄｏｐｔｅｒａ  ｆｒｕｇｉｐｅｒｄａ細胞のトランスフェクションのために昆虫細胞と併せて使用され得る、多数のバキュロウイルス株が特定されている。
【０１８３】
植物細胞培養物も宿主として利用することができる。例えば、米国特許第５，９５９，１７７号、同第６，０４０，４９８号、同第６，４２０，５４８号、同第７，１２５，９７８号、及び同第６，４１７，４２９号（トランスジェニック植物において抗体を産生するためのＰＬＡＮＴＩＢＯＤＩＥＳ（商標）技術を記載）を参照のこと。
【０１８４】
脊椎動物細胞も宿主として使用することができる。例えば、懸濁液中で成長するように適合された哺乳動物細胞株が、有用であり得る。有用な哺乳類宿主細胞株の他の例は、ＳＶ４０（ＣＯＳ−７）で形質転換されたサル腎臓ＣＶ１株、ヒト胚腎臓株（２９３または例えば、Ｇｒａｈａｍ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｇｅｎ  Ｖｉｒｏｌ．３６：５９（１９７７）に記載されるような２９３細胞）、ベビーハムスター腎臓細胞（ＢＨＫ）、マウスセルトリ細胞（例えば、Ｍａｔｈｅｒ，Ｂｉｏｌ．Ｒｅｐｒｏｄ．２３：２４３−２５１（１９８０）に記載のＴＭ４細胞）、サル腎臓細胞（ＣＶ１）、アフリカミドリザル腎臓細胞（ＶＥＲＯ−７６）、ヒト子宮頸癌細胞（ＨＥＬＡ）、イヌ腎臓細胞（ＭＤＣＫ、バッファローラット肝臓細胞（ＢＲＬ  ３Ａ）、ヒト肺細胞（Ｗ１３８）、ヒト肝臓細胞（Ｈｅｐ  Ｇ２）、マウス乳腺腫瘍（ＭＭＴ  ０６０５６２）、例えば、Ｍａｔｈｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｎｎａｌｓ  Ｎ．Ｙ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．３８３：４４−６８（１９８２）に記載されるようなＴＲＩ細胞、ＭＲＣ  ５細胞、及びＦＳ４細胞である。他の有用な哺乳類宿主細胞株には、ＤＨＦＲ−ＣＨＯ細胞（Ｕｒｌａｕｂ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ７７：４２１６（１９８０）を含む、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞、ならびにＹ０、ＮＳ０、及びＳｐ２／０等の骨髄腫細胞株が含まれる。抗体産生に好適なある特定の哺乳類宿主細胞株の概説については、例えば、Ｙａｚａｋｉ  ａｎｄ  Ｗｕ，Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌ．２４８（Ｂ．Ｋ．Ｃ．Ｌｏ，ｅｄ．，Ｈｕｍａｎａ  Ｐｒｅｓｓ，Ｔｏｔｏｗａ，ＮＪ），ｐｐ．２５５−２６８（２００３）を参照のこと。
【０１８５】
抗体−薬物コンジュゲート
本発明は、１つ以上のカリケアマイシン誘導体化合物にコンジュゲートされた本明細書に抗体を有する、抗体−薬物コンジュゲートを提供する。より具体的には、本開示は、カリケアマイシン誘導体化合物が、リンカー、リンカー−スペーサー、リンカー−反応基等のより慣習的なアプローチよりむしろ、共有結合によって抗体に直接コンジュゲートされた抗体−薬物コンジュゲートを提供する。
【０１８６】
抗体−薬物コンジュゲートによって、腫瘍への薬物部分の送達を標的とすることが可能となり、いくつかの実施形態においては、コンジュゲートされていない薬物を全身投与することにより、正常な細胞にとって許容できないもレベルの毒性がもたされ得る場合に、その中の細胞内蓄積が可能となる（Ｐｏｌａｋｉｓ  Ｐ．（２００５）  Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｏｐｉｎｉｏｎ  ｉｎ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ  ５：３８２−３８７）。
【０１８７】
抗体−薬物コンジュゲートは、強力な細胞傷害性薬物の標的を抗原発現腫瘍細胞にして（Ｔｅｉｃｈｅｒ，Ｂ．Ａ．（２００９）  Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｄｒｕｇ  Ｔａｒｇｅｔｓ  ９：９８２−１００４）、それによって、有効性を最大化してオフターゲット毒性を最小化することにより治療指数を増強することで、抗体及び細胞傷害性薬物の両方の特性を併せ持つ標的化学療法分子である（Ｃａｒｔｅｒ，Ｐ．Ｊ．ａｎｄ  Ｓｅｎｔｅｒ  Ｐ．Ｄ．（２００８）  Ｔｈｅ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｊｏｕｒ．１４（３）：１５４−１６９、Ｃｈａｒｉ，Ｒ．Ｖ．（２００８）  Ａｃｃ．Ｃｈｅｍ．Ｒｅｓ．４１：９８−１０７。
【０１８８】
本発明の抗体−薬物コンジュゲート化合物は、抗癌活性を有するものが含まれる。いくつかの実施形態において、抗体−薬物コンジュゲート化合物は、カリケアマイシン薬物部分または誘導体に直接コンジュゲートされた抗体を含む（すなわち、抗体は、離脱基の喪失後、及びその間にそこに存在する連結基または部分を有さない、カリケアマイシン薬物部分または誘導体に直接的に連結するか、または結合する）。本発明の抗体−薬物コンジュゲートは、有効用量の薬物を腫瘍組織に選択的に送達し、それによって、治療指数（「治療濃度域」）を増加させながら、より高い選択性（すなわちより低い効果的用量）が、達成され得る。
【０１８９】
以下に示される、抗体−薬物コンジュゲート化合物の例示的な実施形態は、腫瘍細胞を標的とする抗体（Ａｂ）、共有結合によってそこに直接連結されるカリケアマイシン薬物部分（Ｄ）を含む。
【化３】
2018533568.tif 000010
かかる実施形態において、Ｒは、Ｈ、−Ｃ（Ｏ）Ｒ１、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ１Ｒ２、−Ｓ（Ｏ）２Ｒ１、及び−Ｓ（Ｏ）２ＮＲ２Ｒ１から適当に選択される。Ｒ１及びＲ２は、独立して、水素、任意に置換されたＣ１−６アルキル及びＣ６−２０アリールから選択され得る。いくつかの特定の態様において、Ｒは、−Ｃ（Ｏ）ＣＨ３であり得る。ｐは、１Ａｂ当量当たりカリケアマイシンの当量を指す。
【０１９０】
いくつかの態様において、Ａｂは、本明細書の別の箇所に記載される、１つ以上の腫瘍関連抗原または細胞表面受容体に結合する抗体である。いくつかの他の態様において、Ａｂは、ＢＭＰＲ１Ｂ、Ｅ１６、ＳＴＥＡＰ１、ＭＵＣ１６、ＭＰＦ、Ｎａｐｉ２ｂ、Ｓｅｍａ  ５ｂ、ＰＳＣＡ  ｈｌｇ、ＥＴＢＲ、ＭＳＧ７８３、ＳＴＥＡＰ２、ＴｒｐＭ４、ＣＲＩＰＴＯ、ＣＤ２１、ＣＤ７９ｂ、ＦｃＲＨ２、ＨＥＲ２、ＮＣＡ、ＭＤＰ、ＩＬ２０Ｒα、Ｂｒｅｖｉｃａｎ、ＥｐｈＢ２Ｒ、ＡＳＬＧ６５９、ＰＳＣＡ、ＧＥＤＡ、ＢＡＦＦ−Ｒ、ＣＤ２２、ＣＤ７９ａ、ＣＸＣＲ５、ＨＬＡ−ＤＯＢ、Ｐ２Ｘ５、ＣＤ７２、ＬＹ６４、ＦｃＲＨ１、ＦｃＲＨ５、ＴＥＮＢ２、ＰＭＥＬ１７、ＴＭＥＦＦ１、ＧＤＮＦ−Ｒａ１、Ｌｙ６Ｅ、ＴＭＥＭ４６、Ｌｙ６Ｇ６Ｄ、ＬＧＲ５、ＲＥＴ、Ｌｙ６Ｋ、ＧＰＲ１９、ＧＰＲ５４、ＡＳＰＨＤ１、チロシナーゼ、ＴＭＥＭ１１８、ＧＰＲ１７２Ａ、ＣＤ３３、及びＣＬＬ−１から選択される。さらに他の態様において、Ａｂは、システイン操作抗体である。好適なシステイン操作抗体は、ＬＣ  Ｋ１４９Ｃ、ＨＣ  Ａ１４０、ＨＣ  Ａ１１８Ｃ、及びＨＣ  Ｌ１７７Ｃから選択された変異体である。さらに他の態様において、Ａｂは、抗ＨＥＲ２  ４Ｄ５、抗ＣＤ２２、抗ＣＤ３３、抗Ｌｙ６Ｅ、抗Ｎａｐｉ３ｂ、抗ＨＥＲ２  ７Ｃ２、及び抗ＣＬＬ−１から選択される。
【０１９１】
薬物負荷は、式Ｉの分子における１抗体当たりの薬物部分の数である、ｐによって表される。薬物負荷は、１抗体当たり１〜２０個の薬物部分（Ｄ）の範囲であり得る。式Ｉの抗体−薬物コンジュゲートは、１〜２０個の範囲の薬物部分にコンジュゲートされた抗体の集団を含む。いくつかの実施形態において、抗体にコンジュゲートされ得る薬物部分の数は、遊離システイン残基の数によって限定される。いくつかの実施形態において、遊離システイン残基は、本明細書に記載される方法によって抗体アミノ酸配列中に導入される。かかる態様において、ｐは、１、２、３、４、５、６、７、または８、及びこれらの範囲内、例えば、１〜８または２〜５であり得る。任意のかかる態様において、ｐ及びｎは、等しい（すなわち、ｐ＝ｎ＝１、２、３、４、５、６、７、もしくは８、またはそれらの間のいくつかの範囲）。式Ｉの例示的な抗体−薬物コンジュゲートには、１、２、３、または４つの操作されたシステインアミノ酸を有する抗体が含まれるが、これらに限定されない（Ｌｙｏｎ，Ｒ．ｅｔ  ａｌ．（２０１２）  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｅｎｚｙｍ．５０２：１２３−１３８）。いくつかの実施形態において、１つ以上の遊離システイン残基が、操作を使用することなく、抗体においてすでに存在しており、その場合、既存の遊離システイン残基を使用して、抗体を薬物に複合してもよい。いくつかの実施形態において、抗体は、１つ以上の遊離システイン残基を生成するために、抗体の複合前に還元条件に曝露される。コンジュゲーション反応から抗体−薬物コンジュゲートを調製する際の１抗体当たりの薬物部分の平均数（ＤＡＲ）は、質量分析法、ＥＬＩＳＡアッセイ、及びＨＰＬＣ等の従来の手段によって特徴付けられてもよい。また、ｐの単位での抗体−薬物コンジュゲートの定量分布が決定されてもよい。いくつかの事例において、ｐがある特定の値である同種の抗体−薬物コンジュゲートを、他の薬物負荷を有する抗体−薬物コンジュゲートから分離し、精製し、かつ特徴付けることは、逆相ＨＰＬＣまたは電気泳動等の手段によって達成されてもよい。
【０１９２】
いくつかの抗体−薬物コンジュゲートでは、ｐは、抗体上の結合部位の数によって限定され得る。例えば、本明細書に記載されるある特定の例示的な実施形態のように、結合がシステインチオールである場合、抗体は、１個のみもしくは限定された数のシステインチオール基を有し得るか、または、１個のみもしくは限定された数の反応性が十分なチオール基を有し得、それに、薬物が結合され得る。ある特定の実施形態において、薬物負荷がより高くなると、例えば、ｐが５超になると、ある特定の抗体−薬物コンジュゲートの凝集、不溶性、傷害性、または細胞透過性の喪失を引き起こし得る。ある特定の実施形態において、抗体−薬物コンジュゲートの平均薬物負荷は、１〜約８、約２〜約６、または約３〜約５の範囲内である。実際、ある特定の抗体−薬物コンジュゲートでは、１抗体当たりの薬物部分の最適な比率は、８未満であり得るか、また約２〜約５であり得ることが示されてきた（例えば、米国特許第７，４９８，２９８号を参照のこと）。
【０１９３】
ある特定の実施形態において、理論上の最大数よりも少ない薬物部分が、コンジュゲーション反応中に抗体にコンジュゲートされる。抗体は、例えば、本明細書に論じられるように、薬物と反応しないリジン残基を含有し得る。一般に、抗体は、薬物部分に連結し得る多くの遊離及び反応性システインチオール基を含有せず、実際、抗体におけるほとんどのシステインチオール残基は、ジスルフィド架橋として存在する。ある特定の実施形態において、抗体は、ジチオスレイトール（ＤＴＴ）またはトリカルボニルエチルホスフィン（ＴＣＥＰ）等の還元剤により、部分または完全還元条件下で還元されて、反応性システインチオール基が生成され得る。ある特定の実施形態において、抗体は、リジンまたはシステイン等の反応性求核基を明らかにするために、変性条件に置かれる。
【０１９４】
抗体−薬物コンジュゲートの負荷（薬物／抗体比）は、異なる方式で、ならびに例えば、（ｉ）抗体と比較してモル過剰の薬物を限定すること、（ｉｉ）コンジュゲーション反応時間または温度を限定すること、及び（ｉｉｉ）システインチオール修飾のための部分または限定的還元条件によって制御され得る。
【０１９５】
１個を超える求核基が薬物と反応する場合、結果として生じる生成物は、抗体に結合する１個以上の薬物部分が分布する抗体−薬物コンジュゲート化合物の混合物であることを理解されたい。１抗体当たりの薬物の平均数は、抗体及び薬物に特異的である二重ＥＬＩＳＡ抗体アッセイによって混合物から算出されてもよい。個々の抗体−薬物コンジュゲート分子は、質量分析法によって混合物中で特定され、ＨＰＬＣ、例えば、疎水性相互作用クロマトグラフィーによって、分離されてもよい（例えば、ＭｃＤｏｎａｇｈ  ｅｔ  ａｌ．（２００６）  Ｐｒｏｔ．Ｅｎｇｒ．Ｄｅｓｉｇｎ  ＆  Ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ  １９（７）：２９９−３０７、Ｈａｍｂｌｅｔｔ  ｅｔ  ａｌ．（２００４）  Ｃｌｉｎ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．１０：７０６３−７０７０、Ｈａｍｂｌｅｔｔ，Ｋ．Ｊ．，ｅｔ  ａｌ．“Ｅｆｆｅｃｔ  ｏｆ  ｄｒｕｇ  ｌｏａｄｉｎｇ  ｏｎ  ｔｈｅ  ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ，ｐｈａｒｍａｃｏｋｉｎｅｔｉｃｓ，ａｎｄ  ｔｏｘｉｃｉｔｙ  ｏｆ  ａｎ  ａｎｔｉ−ＣＤ３０  ａｎｔｉｂｏｄｙ−ｄｒｕｇ  ｃｏｎｊｕｇａｔｅ，”  Ａｂｓｔｒａｃｔ  Ｎｏ．６２４，Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ  ｆｏｒ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ，２００４  Ａｎｎｕａｌ  Ｍｅｅｔｉｎｇ，Ｍａｒｃｈ  ２７−３１，２００４，Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  ＡＡＣＲ，Ｖｏｌｕｍｅ  ４５，Ｍａｒｃｈ  ２００４、Ａｌｌｅｙ，Ｓ．Ｃ．，ｅｔ  ａｌ．“Ｃｏｎｔｒｏｌｌｉｎｇ  ｔｈｅ  ｌｏｃａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｄｒｕｇ  ａｔｔａｃｈｍｅｎｔ  ｉｎ  ａｎｔｉｂｏｄｙ−ｄｒｕｇ  ｃｏｎｊｕｇａｔｅｓ，”  Ａｂｓｔｒａｃｔ  Ｎｏ．６２７，Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ  ｆｏｒ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ，２００４  Ａｎｎｕａｌ  Ｍｅｅｔｉｎｇ，Ｍａｒｃｈ  ２７−３１，２００４，Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  ＡＡＣＲ，Ｖｏｌｕｍｅ  ４５，Ｍａｒｃｈ  ２００４を参照のこと）。ある特定の実施形態において、単一の負荷値を有する同種の抗体−薬物コンジュゲートが、電気泳動またはクロマトグラフィーによってコンジュゲーション混合物から単離されてもよい。
【０１９６】
本開示のいくつかの他の態様において、チオピリジル離脱基またはベンズイミダゾール離脱基を含むカリケアマイシン誘導体組成物が、提供される。かかる組成物は、「活性化されたカリケアマイシン」と称される。次いで、活性化されたカリケアマイシンは、本明細書の別の箇所に記載される抗体とコンジュゲートされ得る。例示的なカリケアマイシン誘導体離脱基組成物を、式Ｉ及びＩＩとして以下に示す。
【化４】
2018533568.tif 000011
かかる態様において、Ｒは、Ｈ、−Ｃ（Ｏ）Ｒ１、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ１Ｒ２、−Ｓ（Ｏ）２Ｒ１、及び−Ｓ（Ｏ）２ＮＲ２Ｒ１から選択され、Ｒ１及びＲ２は、独立して、Ｃ１−Ｃ６アルキル及びＣ６−Ｃ２０アリールから選択され、Ｒ３は、ＮＯ２、Ｃｌ、Ｆ、ＣＮ、ＣＯ２Ｈ、及びＢｒから選択され、ｑは、０、１、または２である。
【０１９７】
例示的な実施形態において、Ｒは、−Ｃ（Ｏ）ＣＨ３である。
【０１９８】
例示的な実施形態において、Ｒ３はＮＯ２であり、ｑは１である。
【０１９９】
ある例示的な実施形態において、薬物中間体は、式Ｉａ、
【化５】
2018533568.tif 000012
を有する。
【０２００】
別の例示的な実施形態において、薬物中間体は、式ＩＩａ、
【化６】
2018533568.tif 000013
を有する。
【０２０１】
活性化されたカリケアマイシンの形成は、以下のスキームによって表され、式中、Ｘは、本明細書の別の箇所に定義される離脱基である。
【化７】
2018533568.tif 000014
この反応において、カリケアマイシンのメチルトリスルフィド部分を、離脱基チオール部分と反応させて、ジスルフィドを形成し、式中、Ｓｃは、カリケアマイシン硫黄原子を指し、Ｓｘは、離脱基硫黄原子を指す。この反応の例は、例えば、米国特許第５，０５３，３９４号、同第５，７１２，３７４号、同第５，７１４，５８６号、同第５，７３９，１１６号、及び同第５，７６７，２８５号において得られる。反応混合物を形成するために好適な溶媒の非限定的な例には、アセトニトリル、テトラヒドロフラン、酢酸エチル、アセトン、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、ジメチルスルホキシド、及びジクロロメタン等の極性非プロトン性溶媒が含まれる。反応混合物中のカリケアマイシン濃度は、限界は狭くなく、好ましくは、約０．０００５、約０．００１、約０．００５、または約０．０１ｍｍｏｌ／ｍＬのように、約０．０００５〜約０．０１ｍｍｏｌ／ｍＬまで様々であり得る。離脱基は、約１．１：１モル／モル、約１．５：１モル／モル、約２：１モル／モル、約２．５：１モル／モル、または約３：１モル／モルのように、化学量論的に過剰に存在する。反応濃度は、好ましくは、約−３０℃、約−２０℃、約−１０℃、約０℃、または約１０℃、及び約−３０℃〜約１０℃、約−３０℃〜約０℃、または約−３０℃〜約−１０℃等のこれらの範囲内である。完了するまでの反応時間は、好ましくは、約４時間〜約４日、例えば、約８時間〜約３６時間または約１８時間〜約３６時間まで様々であり得る。
【０２０２】
本開示のいくつかの態様において、活性化されたカリケアマイシンは、精製され、固体として単離され得る。精製及び単離方法は、当技術分野で既知であり、これには、沈殿、結晶化、濾過、遠心分離、限外濾過及び様々なクロマトグラフ法が含まれる。クロマトグラフィーは、例えば、逆位相及び順相、寸法排除、イオン交換、高、中、及び低圧液体クロマトグラフィー方法及び装置、小規模分析、擬似移動床（ＳＭＢ）及び分取薄層または厚層クロマトグラフィー、ならびに小規模薄層及びフラッシュクロマトグラフィーの技術を含む、任意の数の方法を含むことができる。いくつかのかかる態様において、完成した反応混合物は、乾燥するまで蒸発させ、続いて、極性非プロトン性溶媒中で再溶解され得る。この溶液は、濾過され、次いで、例えば、ヘキサンまたはシクロヘキサン等の無極性貧溶媒と、溶液を混合することによって沈殿し得る。次いで、沈殿物を、濾過によって収集し、任意に、洗浄し、次いで、乾燥させ得る。
【０２０３】
カリケアマイシン−抗体コンジュゲートの形成は、以下のスキームによって表される。
【化８】
2018533568.tif 000015
このスキームにおいて、ｐは、活性化されたカリケアマイシン等価物の数を指し、Ｓｃは、カリケアマイシン硫黄原子であり、Ｘは、本明細書の別の箇所に定義される離脱基であり、Ｓｘは、離脱基硫黄原子であり、Ａｂは、本明細書の別の箇所に記載される抗体であり、ＳａＨは、本明細書の別の箇所に記載されるコンジュゲーションに好適なＡｂ遊離スルフヒドリル部分であり、ｎは、１Ａｂ等価物当たりのＡｂ遊離スルフヒドリル部分の等価物の数である。各ｐ及びｎは、本明細書の別の箇所に定義される。いくつかの態様において、Ａｂ−（ＳａＨ）ｎは、本明細書の別の箇所に記載されるシステイン操作抗体であり得る、及び／またはコンジュゲーション反応における反応性のための還元剤で処理され得る。Ａｂは、抗体の安定性または抗原結合特異性に悪影響を及ぼさないであろう当該技術分野で既知である生理学的緩衝液系に溶解する。いくつかの態様において、リン酸緩衝生理食塩水が使用される。活性化されたカリケアマイシンは、本明細書の別の箇所に記載される少なくとも１つの極性非プロトン性溶媒を含む溶媒系に溶解される。いくつかのかかる態様において、活性化されたカリケアマイシンは、トリス緩衝液ｐＨ８（例えば、５０ｍＭ  Ｔｒｉｓ）に、約５ｍＭ、１０ｍＭ、約２０ｍＭ、約３０ｍＭ、約４０ｍＭ、または約５０ｍＭ、及びこれらの範囲内、例えば、約５０ｍＭ〜約５０ｍＭまたは約１０ｍＭ〜約３０ｍＭの濃度まで溶解される。いくつかの態様において、活性化されたカリケアマイシンは、ＤＭＳＯもしくはアセトニトリル、またはＤＭＳＯに溶解される。コンジュゲーション反応において、活性化されたカリケアマイシン溶液の過度の等価物は、希釈され、冷却された抗体溶液（例えば、約１℃〜約１０℃）で混合される。活性化されたカリケアマイシン溶液は、好ましくは、少なくとも１つの極性非プロトン性溶媒及び少なくとも１つの極性プロトン性溶媒で希釈され得、これらの例には、水、メタノール、エタノール、ｎ−プロパノール、及び酢酸が含まれる。いくつかの特定の態様において、活性化されたカリケアマイシンは、ＤＭＳＯに溶解され、抗体溶液との混合前に、アセトニトリル及び水で希釈される。カリケアマイシンの抗体に対する等価物は、好ましくは、約１．５：１、約３：１、約５：１、約１０：１、約１５：１または約２０：１、及びこれらの範囲内、例えば、約１．５：１〜約２０：１  約１．５：１〜約１５：１、約１．５：１〜約１０：１、約３：１〜約１５：１、約３：１〜約１０：１、約５：１〜約１５：１、または約５：１〜約１０：１であり得る。反応は、好ましくは、ＬＣ−ＭＳ（本明細書の別の箇所に記載される）等の当該技術分野で既知の方法によって完了についてモニタリングされ得、反応は、典型的には、約１時間〜約２４時間で完了する。反応が完了した後、試薬を反応混合物に添加して、反応物を反応停止処理し、未反応の抗体チオール基を封止する。好適な試薬の例は、マレイミドである。
【０２０４】
コンジュゲーション後に、抗体−カリケアマイシンコンジュゲートは、例えば、サイズ排除クロマトグラフィー、疎水性相互作用クロマトグラフィー、イオン交換クロマトグラフィー、クロマト分画、限外濾過、遠心限外濾過、及びこれらの組み合わせ等であるが、これらに限定されない、当該技術分野で既知の精製方法によって、精製され、コンジュゲートされていない反応物質及び／またはコンジュゲート凝集体から分離され得る。例えば、精製は、２０ｍＭのコハク酸ナトリウムｐＨ５中で抗体−カリケアマイシンコンジュゲートを希釈することによって開始され得る。希釈した溶液を、陽イオン交換カラムに適用し、続いて、例えば、２０ｍＭのコハク酸ナトリウムｐＨ５の少なくとも１０カラム体積で洗浄する。コンジュゲートは、ＰＢＳで好適に溶出され得る。
【０２０５】
薬学的製剤
本発明の治療用抗体−薬物コンジュゲートの薬学的製剤は、典型的には、凍結乾燥製剤または水溶液の形態で、所望される程度の純度を有し、１つ以上の任意の薬学的に許容される担体、賦形剤、及び／またはビヒクルを有する単位投薬量の注射可能な形態で、非経口投与、すなわち、ボーラス、静脈内、腫瘍内注射のために調製される（Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ  １６ｔｈ  ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｏｓｏｌ，Ａ．Ｅｄ．（１９８０））。薬学的に許容される担体は一般的に、用いられる投薬量及び濃度でレシピエントに対して非毒性であり、リン酸塩、クエン酸塩、及び他の有機酸等の緩衝剤、アスコルビン酸及びメチオニンを含む抗酸化物質、防腐剤（塩化オクタデシルジメチルベンジルアンモニウム、塩化ヘキサメトニウム、塩化ベンザルコニウム、塩化ベンゼトニウム、フェノール、ブチル、もしくはベンジルアルコール、メチルもしくはプロピルパラベン等のアルキルパラベン、カテコール、レゾルシノール、シクロヘキサノール、３−ペンタノール、及びｍ−クレゾール等）、低分子量（約１０残基未満）のポリペプチド、血清アルブミン、ゼラチン、もしくは免疫グロブリン等のタンパク質、ポリビニルピロリドン等の親水性ポリマー、グリシン、グルタミン、アスパラギン、ヒスチジン、アルギニン、もしくはリジン等のアミノ酸、単糖類、二糖類、及びグルコース、マンノース、もしくはデキストリンを含む他の炭水化物、ＥＤＴＡ等のキレート剤、スクロース、マンニトール、トレハロース、もしくはソルビトール等の糖類、ナトリウム等の塩形成対イオン、金属複合体（例えば、Ｚｎ−タンパク質複合体）、ならびに／またはポリエチレングリコール（ＰＥＧ）等の非イオン性界面活性剤を含むが、これらに限定されない。本明細書における例示的な薬学的に許容される担体は、可溶性の中性活性ヒアルロニダーゼ糖タンパク質（ｓＨＡＳＥＧＰ）、例えば、ｒＨｕＰＨ２０（ＨＹＬＥＮＥＸ（登録商標）、Ｂａｘｔｅｒ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ，Ｉｎｃ．）等のヒト可溶性ＰＨ−２０ヒアルロニダーゼ糖タンパク質等の介在性薬物分散剤をさらに含む。ｒＨｕＰＨ２０を含む、ある特定の例示的なｓＨＡＳＥＧＰ及び使用方法は、米国特許公開第２００５／０２６０１８６号及び同第２００６／０１０４９６８号に記載されている。一態様において、ｓＨＡＳＥＧＰは、コンドロイチナーゼ等の１つ以上のさらなるグリコサミノグリカナーゼと組み合わせられる。
【０２０６】
例示的な凍結乾燥抗体または免疫コンジュゲート製剤は、米国特許第６，２６７，９５８号に記載されている。水性抗体または免疫コンジュゲート製剤には、米国特許第６，１７１，５８６号及びＷＯ２００６／０４４９０８に記載されるものが含まれ、後者の製剤はヒスチジン−酢酸緩衝液が含まれる。
【０２０７】
本明細書における製剤はまた、必要に応じて、治療されている特定の適応症に対する１つを超える活性成分、好ましくは相互に悪影響を及ぼさない相補的活性を有する成分を含有してもよい。
【０２０８】
活性成分は、例えば、コアセルベーション技法もしくは界面重合によって調製されたマイクロカプセル、例えば、それぞれ、ヒドロキシメチルセルロースもしくはゼラチンマイクロカプセル及びポリ−（メチルメタシレート（ｍｅｔｈｙｌｍｅｔｈａｃｙｌａｔｅ））マイクロカプセル中、コロイド薬物送達系（例えば、リポソーム、アルブミンミクロスフェア、マイクロエマルジョン、ナノ粒子、及びナノカプセル）中、またはマイクロエマルジョン中に封入され得る。かかる技法は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ  １６ｔｈ  ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｏｓｏｌ，Ａ．Ｅｄ．（１９８０）において開示されている。
【０２０９】
徐放性調製物が調製され得る。徐放性製剤の好適な例としては、抗体または免疫コンジュゲートを含有する固体疎水性ポリマーの半透性マトリクスが挙げられ、そのマトリクスは、造形品、例えば、フィルム、またはマイクロカプセルの形態である。
【０２１０】
インビボ投与に使用される製剤は、一般に、滅菌のものである。滅菌性は、例えば、滅菌濾過膜を介した濾過によって容易に達成され得る。
【０２１１】
治療の抗体−薬物コンジュゲート方法
本発明の抗体−薬物コンジュゲートは、様々な疾患または障害、例えば、腫瘍抗原の過剰発現を特徴とするものを治療するために用いることができる。例示的な病態また過剰増殖性障害には、良性または悪性の固形腫瘍、ならびに白血病及びリンパ系悪性疾患等の血液学的疾患が含まれる。その他のものとしては、神経性、神経膠性、星状性、視床下部性、腺性、マクロファージ性、上皮性、間質性、胚盤胞性、炎症性、血管形成性、及び自己免疫性を含む免疫性の障害が挙げられる。
【０２１２】
一態様において、本明細書に提供される抗体−薬物コンジュゲートは、癌細胞の増殖を阻害する方法において使用され、本方法は、抗体または抗体−薬物コンジュゲートが細胞の表面上の腫瘍関連抗原に結合することを許容する条件下で、細胞を抗体−薬物コンジュゲートに曝露し、それによって細胞の増殖を阻害することを含む。ある特定の実施形態において、本方法は、インビトロ方法またはインビボ方法である。さらなる実施形態において、細胞は、リンパ球、リンパ芽球、単球、または骨髄単球細胞である。
【０２１３】
インビトロでの細胞増殖の阻害は、Ｐｒｏｍｅｇａ（Ｍａｄｉｓｏｎ、ＷＩ）から市販されている、ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏ（商標）Ｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｔ  Ｃｅｌｌ  Ｖｉａｂｉｌｉｔｙアッセイを使用してアッセイされてもよい。そのアッセイは、代謝的に活性な細胞を示す、存在するＡＴＰの定量に基づいて、培養物中の生存細胞の数を決定する。Ｃｒｏｕｃｈ  ｅｔ  ａｌ．（１９９３）  Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈ．１６０：８１−８８、米国特許第６６０２６７７号を参照のこと。アッセイは、自動化高処理スクリーニング（ＨＴＳ）に適した９６ウェルまたは３８４ウェル形式で行われてもよい。Ｃｒｅｅ  ｅｔ  ａｌ．（１９９５）  ＡｎｔｉＣａｎｃｅｒ  Ｄｒｕｇｓ  ６：３９８−４０４を参照のこと。アッセイ手順は、単一の試薬（ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏ（登録商標）試薬）を培養細胞に直接添加することを伴う。これにより、細胞溶解及びルシフェラーゼ反応によって生み出される発光シグナルの生成がもたらされる。発光シグナルは、培養物中に存在する生存細胞の数に直接比例する、存在するＡＴＰの量に比例する。データは、ルミノメーターまたはＣＣＤカメラ画像化デバイスによって記録することができる。発光出力は、相対発光量（ＲＬＵ）として表される。
【０２１４】
別の態様において、医薬品として使用するための抗体−薬物コンジュゲートが提供される。さらなる態様において、治療方法において使用するための抗体−薬物コンジュゲートが提供される。ある特定の実施形態において、癌を治療することにおいて使用するための抗体−薬物コンジュゲートが提供される。ある特定の実施形態において、本発明は、個人に、有効量の抗体−薬物コンジュゲートを投与することを含む、個体を治療する方法において使用するための抗体−薬物コンジュゲートを提供する。１つのかかる実施形態において、本方法は、例えば、本明細書に記載される、有効量の少なくとも１つの追加の治療剤を個体に投与することをさらに含む。
【０２１５】
さらなる態様において、本発明は、医薬品の製造または調製における抗体−薬物コンジュゲートの使用を提供する。一実施形態において、医薬品は、ＣＬＬ−１陽性癌の治療のためのものである。さらなる実施形態において、医薬品は、ＣＬＬ−１陽性癌の治療方法において使用するためのものであり、本方法は、ＣＬＬ−１陽性癌を有する個体に有効量の医薬品を投与することを含む。１つのかかる実施形態において、本方法は、例えば、本明細書に記載される、有効量の少なくとも１つの追加の治療剤を個体に投与することをさらに含む。
【０２１６】
さらなる態様において、本発明は、癌を治療するための方法を提供する。一実施形態において、本方法は、腫瘍関連発現抗原の検出を特徴とする、かかる癌を有する個体に、本発明の有効量の抗体−薬物コンジュゲートを投与することを含む。１つのかかる実施形態において、本方法は、本明細書に記載される、有効量の少なくとも１つの追加の治療剤を個体に投与することをさらに含む。
【０２１７】
本発明の抗体−薬物コンジュゲートは、治療において単独で、または他の薬剤と組み合わせて使用することができる。例えば、本発明の抗体または免疫コンジュゲートは、少なくとも１つの追加の治療剤と同時投与されてもよい。いくつかの実施形態において、追加の治療剤は、アントラサイクリンである。いくつかの実施形態において、アントラサイクリンは、ダウノルビシンまたはイダルビシンである。いくつかの実施形態において、追加の治療剤は、シタラビンである。いくつかの実施形態において、追加の治療剤は、クラドリビンである。いくつかの実施形態において、追加の治療剤は、フルダラビンまたはトポテカンである。いくつかの実施形態において、追加の治療剤は、５−アザシチジンまたはデシタビンである。
【０２１８】
本明細書に記述されるかかる併用療法は、併用投与（２つ以上の治療剤が同じまたは別個の製剤中に含まれる）、及び個別投与を包含するが、この場合、本発明の抗体または免疫コンジュゲートの投与は、追加の治療剤及び／またはアジュバントの投与の前に、それと同時に、かつ／またはその後に行われ得る。本発明の抗体または免疫コンジュゲートはまた、放射線療法と組み合わせて使用することもできる。
【０２１９】
本発明の抗体または免疫コンジュゲート（及び任意の追加の治療剤）は、非経口投与、肺内投与、及び鼻腔内投与、ならびに局所治療で所望される場合、病変内投与を含む、任意の好適な手段によって投与することができる。非経口注入には、筋肉内、静脈内、動脈内、腹腔内、または皮下投与が含まれる。投薬は、投与が短時間であるか、または慢性的であるかに部分的に応じて、例えば、静脈注射または皮下注射等の注射によって任意の好適な経路で行われ得る。単回投与または様々な時点にわたる複数回投与、ボーラス投与、及びパルス注入を含むがこれらに限定されない様々な投薬スケジュールが本明細書で企図される。
【０２２０】
本発明の抗体または免疫コンジュゲートは、良好な医療行為と一致した様式で、製剤化され、投薬され、かつ投与されることになる。これに関連して考慮する要因には、治療されている特定の障害、治療されている特定の哺乳動物、個々の患者の臨床状態、障害の原因、薬剤の送達部位、投与方法、投与のスケジューリング、及び医師に既知である他の要因を含む。必然的にではなく任意に、抗体または免疫コンジュゲートは、問題の障害を予防または治療するために現在使用される１つ以上の薬剤と共に製剤化される。かかる他の薬剤の有効量は、製剤中に存在する抗体または免疫コンジュゲートの量、障害または治療の種類、及び本明細書に論じられる他の要因に応じて異なる。これらは一般に、本明細書に記載されるものと同じ投薬量及び投与経路で使用されるか、または本明細書に記載される投薬量の約１〜９９％、または経験的／臨床的に適切と判断される任意の投薬量及び任意の経路で使用される。
【０２２１】
疾患の予防または治療のために、本発明の抗体または免疫コンジュゲートの適切な投薬量は（単独でまたは１つ以上の他の追加の治療剤と組み合わせて使用されるとき）、治療対象の疾患の種類、抗体または免疫コンジュゲートの種類、疾患の重症度及び経過、抗体または免疫コンジュゲートが予防目的または治療目的で投与されるかどうか、以前の治療法、患者の病歴、抗体または免疫コンジュゲートへの反応、ならびに主治医の裁量によって決定されることになる。抗体または免疫コンジュゲートは、患者に、１回で、または一連の治療にわたって、好適に投与される。疾患の種類及び重症度に応じて、例えば、１回以上の別個の投与によるものであれ、連続注入によるものであれ、約１μｇ／ｋｇ〜１５ｍｇ／ｋｇ（例えば、０．１ｍｇ／ｋｇ〜１０ｍｇ／ｋｇ）の抗体または免疫コンジュゲートが、患者への投与のための初期候補投薬量であり得る。１つの典型的な１日投薬量は、本明細書に言及される要因に応じて、約１μｇ／ｋｇ〜１００ｍｇ／ｋｇまたはそれ以上の範囲に及び得る。病態に応じて数日間またはそれ以上にわたる反復投与では、治療は一般に、疾患症状の所望の抑制が生じるまで持続されるだろう。抗体または免疫コンジュゲートの１つの例示的な投薬量は、約０．０５ｍｇ／ｋｇ〜約１０ｍｇ／ｋｇの範囲内となり得る。したがって、約０．５ｍｇ／ｋｇ、２．０ｍｇ／ｋｇ、４．０ｍｇ／ｋｇ、または１０ｍｇ／ｋｇ（またはそれらの任意の組み合わせ）のうちの１つ以上の用量が患者に投与され得る。かかる用量は、断続的に、例えば毎週または３週間毎（例えば、患者が約２〜約２０回、または例えば約６回の用量の抗体を受容するように）投与されてもよい。より高い初回負荷量、続いて１回以上のより低い用量が、投与されてもよい。しかしながら、他の投薬量レジメンも有用であり得る。この療法の進行は、従来の技法及びアッセイによって容易に監視される。
【０２２２】
標的細胞中の抗体−カリケアマイシンコンジュゲートからの細胞内放出は、グルタチオンによるジスルフィド結合の還元開裂をもたらすと考えられている。グルタチオン媒介性の放出は、酸に不安定なヒドラジンリンカー等の当該技術分野で既知のある特定のリンカーと比較して、利点をもたらす。より具体的には、グルタチオンの血中濃度は、マイクロモル範囲内のように非常に低いことが知られているが、一方、細胞内のグルタチオン濃度は、典型的には、ミリモル範囲内のように、最大３桁分大きい。さらに、癌細胞中のグルタチオン濃度は、還元酵素の活性の増加によりさらに大きいと考えられている。したがって、本開示のカリケアマイシン−抗体コンジュゲートが、血流の改善された安定性及び改善された細胞内放出を提供すると考えられている。
【０２２３】
製品
本発明の別の態様において、本明細書に記載される障害の治療、予防、及び／または診断に有用な材料を含有する製造品が提供される。製品は、容器と、容器上または容器に関連するラベルもしくは添付文書とを含む。好適な容器には、例えば、ボトル、バイアル、シリンジ、ＩＶ溶液バッグ等が含まれる。容器は、ガラスまたはプラスチック等の多様な材料から形成され得る。容器は、それ自体で、または別の組成物と組み合わせて障害の治療、予防、及び／または診断に有効である組成物を保有し、無菌アクセスポート（例えば、容器は、静脈注射用溶液バッグまたは皮下注射針によって貫通可能な栓を有するバイアルであってもよい）を有してもよい。組成物中の少なくとも１つの活性な薬剤は、本発明の抗体または免疫コンジュゲートである。ラベルまたは添付文書は、組成物が、選定した病態を治療するために使用されることを示す。さらに、製品は、（ａ）組成物がその中に含有された第１の容器（この組成物は本発明の抗体または免疫コンジュゲートを含む）、及び（ｂ）組成物がその中に含有された第２の容器（この組成物はさらなる細胞傷害性薬剤または治療剤を含む）を含んでもよい。本発明のこの実施形態における製品は、組成物が、特定の状態を治療するために使用され得ることを示す添付文書をさらに含み得る。代替的に、または追加的に、製品は、注入用静菌水（ＢＷＦＩ）、リン酸緩衝生理食塩水、リンガー溶液、またはデキストロース溶液等の薬学的に許容される緩衝液を含む第２の（または第３の）容器をさらに含んでもよい。それは、他の緩衝剤、希釈剤、フィルター、針、及びシリンジを含む、商業的観点及びユーザの観点から望ましい他の材料をさらに含んでもよい。
【実施例】
【０２２４】
以下は、本発明の方法及び組成物の実施例である。本明細書に提供される概要を得ると、様々な他の実施形態が実施され得ることが理解されよう。
【０２２５】
実施例１−システイン操作抗体の調製
抗体を大量に産生する場合、抗体は、ＣＨＯ細胞内で産生された。ＶＬ及びＶＨをコードするベクターを、ＣＨＯ細胞中にトランスフェクトし、ＩｇＧを、プロテインＡ親和性クロマトグラフィーによって細胞培養培地から精製した。
【０２２６】
最初に単離されるため、抗体中の操作されたシステイン残基は、細胞チオール（例えば、グルタチオン）との混合ジスルフィドとして存在し、そのため複合には使用不可能である。これらの抗体の部分還元（例えば、ＤＴＴによる）、精製、及びデヒドロアスコルビン酸（ＤＨＡＡ）での再酸化により、例えば、Ｊｕｎｕｔｕｌａ  ｅｔ  ａｌ．（２００８）  Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２６：９２５−９３２及び米国特許公開第２０１１／０３０１３３４号でこれまでに説明されたように、コンジュゲーションに使用可能な遊離システインスルフィドリル基を有する抗体がもたらされる。簡潔に述べると、抗体を活性化されたカリケアマイシン薬物部分と組み合わせて、抗体の遊離システイン残基にコンジュゲートすることを可能にした。数時間後、抗体−薬物コンジュゲートを精製した。
【０２２７】
ある特定の条件下において、システイン操作抗体は、２ｍＭのＥＤＴＡを含む５０ｍＭのトリスｐＨ７．５中で、３７℃で３時間、または室温で一晩、ＤＴＴ（クリーランド試薬、ジチオスレイトール）またはＴＣＥＰ（トリス（２−カルボキシエチル）ホスフィン塩酸塩、Ｇｅｔｚ  ｅｔ  ａｌ．（１９９９）  Ａｎａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｖｏｌ  ２７３：７３−８０、Ｓｏｌｔｅｃ  Ｖｅｎｔｕｒｅｓ，Ｂｅｖｅｒｌｙ，ＭＡ）等の還元剤での処理によって、薬物によるコンジュゲーションに対して反応性になった。ＣＨＯ細胞で発現した完全長のシステイン操作されたモノクローナル抗体（ＴＨＩＯＭＡＢ（商標））（Ｇｏｍｅｚ  ｅｔ  ａｌ．（２０１０）  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ａｎｄ  Ｂｉｏｅｎｇ．１０５（４）：７４８−７６０、Ｇｏｍｅｚ  ｅｔ  ａｌ．（２０１０）  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．Ｐｒｏｇ．２６：１４３８−１４４５）を、例えば、新たに導入したシステイン残基と培養培地に存在するシステインとの間に形成され得るジスルフィド結合を還元するように、室温で一晩、約５０倍過剰のＤＴＴにより還元した。還元したＴＨＩＯＭＡＢ（商標）を希釈し、１０ｍＭの酢酸ナトリウム、ｐＨ５中でＨｉＴｒａｐ  Ｓカラムに載せ、０．３Ｍの塩化ナトリウムを含有するＰＢＳで溶出した。あるいは、１／２０体積の１０％酢酸を加えることにより抗体を酸性にし、１０ｍＭのコハク酸塩ｐＨ５で希釈し、カラムに載せ、次いで、１０カラム体積のコハク酸塩緩衝液で洗浄した。カラムは、５０ｍＭのトリスｐＨ７．５、２ｍＭのＥＤＴＡで溶出した。
【０２２８】
軽鎖アミノ酸は、Ｋａｂａｔに従って番号付けされる（Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  ｉｎｔｅｒｅｓｔ，（１９９１）  ５ｔｈ  Ｅｄ．，ＵＳ  Ｄｅｐｔ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ  ａｎｄ  Ｈｕｍａｎ  Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ）。重鎖アミノ酸は、ＥＵ番号付けシステムに従って番号付けされる（Ｅｄｅｌｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．（１９６９）  Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．ｏｆ  Ｓｃｉ．６３（１）：７８−８５）が、Ｋａｂａｔシステムとして記述される場合を除く。一文字アミノ酸略号が使用されている。
【０２２９】
ＣＨＯ細胞に発現される完全長システイン操作されたモノクローナル抗体（ＴＨＩＯＭＡＢ（商標））は、システイン付加物（シスチン）を有するか、または細胞培養条件に起因して、操作されたシステイン上でグルタチオン付加される。操作されたシステインの反応性のチオール基を遊離させるために、ＴＨＩＯＭＡＢ（商標）を、約ｐＨ８．０の５００ｍＭのホウ酸ナトリウム及び５００ｍＭの塩化ナトリウムに溶解し、約５０〜１００倍過剰量の１ｍＭのＴＣＥＰ（トリス（２−カルボキシエチル）ホスフィン塩酸塩（Ｇｅｔｚ  ｅｔ  ａｌ．（１９９９）  Ａｎａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｖｏｌ  ２７３：７３−８０、Ｓｏｌｔｅｃ  Ｖｅｎｔｕｒｅｓ，Ｂｅｖｅｒｌｙ，ＭＡ）で、３７℃において約１〜２時間還元した。あるいは、ＤＴＴを還元剤として使用した。鎖間のジスルフィド結合の形成を、非還元ＳＤＳ−ＰＡＧＥまたは変性逆相ＨＰＬＣ  ＰＬＲＰカラムクロマトグラフィーのいずれかによってモニターした。還元されたＴＨＩＯＭＡＢ（商標）を希釈し、ＨｉＴｒａｐ  ＳＰ  ＦＦカラムにおいて１０ｍＭの酢酸ナトリウム（ｐＨ５）中に充填し、０．３Ｍの塩化ナトリウムを含有するＰＢＳ、または１５０ｍＭの塩化ナトリウムを含有する５０ｍＭのトリス−Ｃｌ（ｐＨ７．５）で溶出した。
【０２３０】
再酸化を行うことによって、ジスルフィド結合が、親Ｍａｂに存在するシステイン残基間に再構築された。溶出された還元ＴＨＩＯＭＡＢ（商標）を、１５×または２ｍＭのデヒドロアスコルビン酸（ｄｈＡＡ）（ｐＨ７）で約３時間または５０ｍＭのトリス−Ｃｌ（ｐＨ７．５）中で約３時間、あるいは２００ｎＭ〜２ｍＭの硫酸銅（ＣｕＳＯ４）水溶液により室温で一晩処理した。当該技術分野で既知の他の酸化体、すなわち、酸化剤、及び酸化条件を使用してもよい。周囲空気酸化も効果的であり得る。この軽度の部分的酸化ステップにより、高い忠実性で鎖内ジスルフィドが効率的に形成された。緩衝液を、Ｓｅｐｈａｄｅｘ  Ｇ２５樹脂での溶出により交換し、１ｍＭのＤＴＰＡを含むＰＢＳで溶出した。チオール／抗体の値を、溶液の２８０ｎｍにおける吸光度からの還元抗体濃度と、ＤＴＮＢ（Ａｌｄｒｉｃｈ、Ｍｉｌｗａｕｋｅｅ、ＷＩ）との反応によるチオール濃度を決定することにより、及び４１２ｎｍにおける吸光度の決定によりチェックした。
【０２３１】
液体クロマトグラフィー／質量分析による分析を、拡大質量範囲を用いるＴＳＱ  Ｑｕａｎｔｕｍ  Ｔｒｉｐｌｅ  ｑｕａｄｒｕｐｏｌｅ（商標）質量分析計（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｅｌｅｃｔｒｏｎ，Ｓａｎ  Ｊｏｓｅ  Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ）で実施した。７５℃に加熱したＰＲＬＰ−Ｓ（登録商標）、１０００Ａ、ミクロボアカラム（５０ｍｍ×２．１ｍｍ、Ｐｏｌｙｍｅｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｓｈｒｏｐｓｈｉｒｅ，ＵＫで試料をクロマトグラフィーに供した。３０〜４０％のＢの直線勾配（溶媒Ａ：水中の０．０５％のＴＦＡ、溶媒Ｂ：アセトニトリル中の０．０４％のＴＦＡ）を使用し、溶離液をエレクトロスプレー源を用いて直接イオン化させた。データを、Ｘｃａｌｉｂｕｒ（登録商標）データシステムにより収集し、ＰｒｏＭａｓｓ（登録商標）（Ｎｏｖａｔｉａ，ＬＬＣ，Ｎｅｗ  Ｊｅｒｓｅｙ）を用いて逆重畳積分を実施した。ＬＣ／ＭＳ分析前に、抗体または薬物コンジュゲート（５０マイクログラム）を、ＰＮＧａｓｅ  Ｆ（２単位／ｍｌ；ＰＲＯｚｙｍｅ，Ｓａｎ  Ｌｅａｎｄｒｏ，ＣＡ）で３７℃で２時間処理し、Ｎ結合型炭水化物を除去した。
【０２３２】
疎水性相互作用クロマトグラフィー（ＨＩＣ）試料を、ブチルＨＩＣ  ＮＰＲカラム（２．５ミクロン粒子サイズ、４．６ｍｍ×３．５ｃｍ）（Ｔｏｓｏｈ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）上に注入し、０．８ｍｌ／分で０〜７０％の直線勾配で溶出した（Ａ：５０ｍＭのリン酸アンモニウム（ｐＨ７）中の１．５Ｍの硫酸アンモニウム、Ｂ：５０ｍＭのリン酸カリウム（ｐＨ７）、２０％  イソプロパノール）。多波長検出器を備えたＡｇｉｌｅｎｔ  １１００シリーズのＨＰＬＣシステム及びＣｈｅｍｓｔａｔｉｏｎソフトウェアを使用して、１抗体当たりの薬物を異なる割合で有する抗体種を分解及び定量化した。
【０２３３】
実施例２−カリケアマイシンの抗体へのコンジュゲーション
実施例１の還元及び再酸化の手順後に、システイン操作抗体（ＴＨＩＯＭＡＢ（商標））を、ＰＢＳ（リン酸緩衝生理食塩水）緩衝液に溶解し、氷上で冷却する。過剰な、約１．５モル〜２０当量の、チオール−反応性ピリジルジスルフィド基で活性化したカリケアマイシンを、ＤＭＳＯに溶解し、アセトニトリル及び水で希釈し、ＰＢＳ中の冷却還元された再酸化抗体に加える。典型的には、５０ｍＭのトリス（ｐＨ８）中の約２０ｍＭの濃度にてＤＭＳＯストックからの薬物を、抗体に添加し、反応混合物のＬＣ−ＭＳ分析により決定される、反応が約１〜約２４時間完了するまでモニタリングした。反応が完了したとき、過剰なマレイミドを添加して、反応物を反応停止処理し、未反応の抗体チオール基を封止する。コンジュゲーション混合物を充填し、ＨｉＴｒａｐ  ＳＰ  ＦＦカラムを通して溶出して、過剰な薬物及び他の不純物を除去した。反応混合物を、遠心分離による限外濾過により濃縮し、システイン操作抗体−薬物コンジュゲートを精製し、ＰＢＳ中のＧ２５樹脂による溶出により脱塩し、滅菌条件下で０．２μｍのフィルターを通して濾過し、貯蔵のために凍結する。
【０２３４】
例えば、粗抗体−薬物コンジュゲートを、２０ｍＭのコハク酸ナトリウム（ｐＨ５）で希釈した後にカチオン交換カラムに適用する。カラムを少なくとも１０カラム体積の２０ｍＭ  コハク酸ナトリウム、ｐＨ５で洗浄し、抗体をＰＢＳで溶出した。抗体−薬物コンジュゲートを、ゲル濾過カラムを用いて、２０ｍＭ  Ｈｉｓ／酢酸塩（ｐＨ５）に、２４０ｍＭのスクロースと共に製剤化した。抗体−薬物コンジュゲートは、タンパク質濃度を決定するためのＵＶ分光法、凝集分析のための分析ＳＥＣ（サイズ排除クロマトグラフィー）、及びＬＣ−ＭＳにより、リジンＣエンドペプチダーゼでの処理の前後に特徴付けた。
【０２３５】
サイズ排除クロマトグラフィーは、０．２５ｍＭ  塩化カリウム及び１５％  ＩＰＡを含む０．２Ｍ  リン酸カリウム（ｐＨ６．２）中、０．７５ｍｌ／分の流速でＳｈｏｄｅｘ  ＫＷ８０２．５カラムを用いて行った。コンジュゲートの凝集状態は、２８０ｎｍでの溶出ピーク面積吸光度の積分により決定した。
【０２３６】
ＬＣ−ＭＳ分析は、Ａｇｉｌｅｎｔ  ＱＴＯＦ  ６５２０  ＥＳＩ装置を用いて行ってもよい。例として、抗体−薬物コンジュゲートを、トリス（ｐＨ７．５）中の１：５００  ｗ／ｗ  エンドペプチダーゼＬｙｓ  Ｃ（Ｐｒｏｍｅｇａ）で、３７℃で３０分間処理する。結果として得られる切断断片を、８０℃に加熱した１０００Å（オングストローム）、８μｍ（ミクロン）  ＰＬＲＰ−Ｓ（高度に架橋されたポリスチレン）カラム上に充填し、５分間で３０％  Ｂ〜４０％  Ｂまでの勾配を用いて溶出する。移動相Ａは、０．０５％  ＴＦＡを含むＨ２Ｏであり、移動相Ｂは、０．０４％  ＴＦＡを含むアセトニトリルであった。流量は、０．５ｍｌ／分であった。タンパク質溶出は、２８０ｎｍでのＵＶ吸光度検出により、エレクトロスプレーイオン化及びＭＳ分析の前にモニタリングした。コンジュゲートされていないＦｃ断片、残存コンジュゲートされていないＦａｂ、及び薬物化されたＦａｂのクロマトグラフィー分解が、通常、達成された。得られたｍ／ｚスペクトルを、Ｍａｓｓ  Ｈｕｎｔｅｒ（商標）ソフトウェア（Ａｇｉｌｅｎｔ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を用いてデコンボリューションして、抗体断片の質量を算出した。
【０２３７】
実施例３−インビトロでの細胞増殖アッセイ
抗体−薬物コンジュゲートのチオＨｕ抗ＣＤ２２  １０Ｆ４ｖ３  ＬＣ  Ｋ１４９Ｃカリケアマイシン及びチオＨｕ抗Ｌｙ６Ｅ  ９Ｂ１２．ｖ１２  ＬＣ  Ｋ１４９Ｃカリケアマイシンの有効性は、以下のプロトコルを用いて細胞増殖アッセイによって測定した（ＣＥＬＬＴＩＴＥＲ  ＧＬＯ（商標）Ｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｔ  Ｃｅｌｌ  Ｖｉａｂｉｌｉｔｙ  Ａｓｓａｙ，Ｐｒｏｍｅｇａ  Ｃｏｒｐ．Ｔｅｃｈｎｉｃａｌ  Ｂｕｌｌｅｔｉｎ  ＴＢ２８８、Ｍｅｎｄｏｚａ  ｅｔ  ａｌ．（２００２）  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．６２：５４８５−５４８８）：
１．培地中の約１０４個の細胞（ＣＤ２２陽性ＢＪＡＢ、ＣＤ２２陽性ＷＳＵ−ＤＬＣＬ２、またはＪｕｒｋａｔ）を含有する１００μｌの細胞培養物のアリコートを、９６ウェルの不透明ウェルプレートの各ウェルに入れた。
２．培地を含有するが細胞を含まない対照ウェルを調製した。
３．抗体−薬物コンジュゲートを実験ウェルに添加し、３〜５日間インキュベートした。
４．プレートは、およそ３０分間室温で平衡化した。
５．各ウェルに存在する細胞培養培地の量と等しい量のＣＥＬＬＴＩＴＥＲ  ＧＬＯ（商標）試薬を添加した。
６．オービタルシェーカーで内容物を２分間混合して、細胞溶解を誘導した。
７．プレートを室温で１０分間インキュベートして、発光シグナルを安定させた。
８．発光は、ＲＬＵ＝相対発光単位としてグラフで記録し、報告した。
【０２３８】
データは、各繰り返しセットの発光の平均として、標準偏差誤差範囲を伴ってプロット表示し、図３Ａ〜３Ｃに示した。プロトコルは、ＣＥＬＬＴＩＴＥＲ  ＧＬＯ（商標）発光細胞を修正したものである。
【０２３９】
実施例４−ＨＥＲ２を高く発現するトランスジェニック外植マウスにおける腫瘍成長阻害のインビボ効果
腫瘍を構築し、０日目に単一治療前に、（カリパスを使用して測定したように）体積で１５０〜２００ｍｍ３まで成長させた。腫瘍体積を、式：Ｖ（ｍｍ３）＝０．５Ａ×Ｂ２（式中、Ａ及びＢは、それぞれ、腫瘍の短径及び長径である）に従って、カリパスを使用して測定した。腫瘍体積が３０００ｍｍ３に到達する前、または腫瘍が間近に迫った潰瘍形成の徴候を示したときに、マウスを殺処分した。各実験群（１群当たり１０匹のマウス）から収集したデータを、平均±標準誤差として表した。
【０２４０】
Ｆｏ５マウス乳腺腫瘍モデルを用いて、単回投与の静脈内注入後に、これまでに記載される、本発明の抗体−薬物コンジュゲートのインビボ有効性を評価した（Ｐｈｉｌｌｉｐｓ  ＧＤＬ，Ｌｉ  ＧＭ，Ｄｕｇｇｅｒ  ＤＬ，ｅｔ  ａｌ．Ｔａｒｇｅｔｉｎｇ  ＨＥＲ２−Ｐｏｓｉｔｉｖｅ  Ｂｒｅａｓｔ  Ｃａｎｃｅｒ  ｗｉｔｈ  Ｔｒａｓｔｕｚｕｍａｂ−ＤＭ１，ａｎ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ−Ｃｙｔｏｔｏｘｉｃ  Ｄｒｕｇ  Ｃｏｎｊｕｇａｔｅ．（２００８）  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．６８：９２８０−９０）（参照により本明細書に組み込まれる）。抗Ｈｅｒ２抗体−薬物コンジュゲートを、マウス乳腺腫瘍ウイルスプロモーター（ＭＭＴＶ−ＨＥＲ２）の転写調節下において、ヒトＨＥＲ２遺伝子が乳腺上皮に過剰発現される、トランスジェニックマウスモデルのＦｏ５モデルで試験した。ＨＥＲ２の過剰発現は、乳腺腫瘍の自然的発生を引き起こす。これらの初代動物のうちの１つ（初代＃５［Ｆｏ５］）の乳腺腫瘍を、腫瘍断片（約２×２ｍｍの大きさ）の連続移植によりＦＶＢマウスの次の世代に伝播された。全ての動物試験を、ｔｈｅ  Ｇｕｉｄｅ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  Ｃａｒｅ  ａｎｄ  Ｕｓｅ  ｏｆ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ａｎｉｍａｌｓに従って行った。各抗体−薬物コンジュゲート（単回投与）を、試験の開始時及び移植から１４日後に、９匹の動物に静脈内に投与された。初期腫瘍サイズは、約２００ｍｍ３の体積であった。
【０２４１】
別の乳房脂肪体移植片有効性モデルは、記載される通りに使用され得（Ｃｈｅｎ  ｅｔ  ａｌ．（２００７）  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ  ６７：４９２４−４９３２）、単回静脈内投与後に腫瘍体積を評価し、腹腔内腫瘍を持つマウスから切除された腫瘍を用いて、次いで、レシピエントマウスの乳腺脂肪体に連続的に継代した。
【０２４２】
このようにして試験され得る細胞株は、ＡＵ５６５、ＨＣＣ１９５４、ＨＣＣ１００８、ＨＣＣ２１５７、ＨＣＣ２０２、ＨＣＣ１４１９、ＨＣＣ２２１８、及びＨＣＣ１５６９を含む。
【０２４３】
実施例５−チオＨｕ抗Ｌｙ６Ｅ  ＬＣ  Ｋ１４９Ｃ−ｐ−ニトロ−ＰＤＳ−カリケアマイシン抗体−薬物コンジュゲートの有効性
乳癌細胞株ＨＣＣ１５６９（ＣＲＬ−２３３０）は、Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ，Ｍａｎａｓｓａｓ，ＶＡ）から得た。ＨＣＣ１５６９  Ｘ２細胞株は、インビボで成長のために最適化された親ＨＣＣ１５６９細胞株（ＡＴＣＣ，ＣＲＬ−２３３０）の誘導体である。親ＨＣＣ１５６９細胞を、雌ＮＣＲヌードマウスの右脇腹に皮下注射し、１つの腫瘍を収穫し、挽いて、ＨＣＣ１５６９  ＸＩ細胞株を得るようインビトロで成長させた。ＨＣＣ１５６９  ＸＩ株を、細胞株の成長を改善させるために、雌ＮＣＲヌードマウスの右脇腹に再度皮下注射した。この試験からの腫瘍を収穫し、インビトロでの成長のために再度適応させて、ＨＣＣ１５６９  Ｘ２細胞株を生成させた。この株に由来するこの細胞株及び腫瘍は、Ｌｙ６Ｅを発現する。
【０２４４】
ＳＣＩＤベージュマウスに、ハンクス平衡塩溶液（ＨＢＳＳ）及びマトリゲルに懸濁された５００万個の細胞を有する右２／３の乳腺脂肪体を接種した。腫瘍体積が、約１６３〜２８２ｍｍ３に到達したとき（０日目）に、動物を各々５匹のマウスの群に無作為に分け、０．３ｍｇ／ｋｇ、１ｍｇ／ｋｇ、３ｍｇ／ｋｇ、６ｍｇ／ｋｇ、及び１０ｍｇ／ｋｇの用量で、ビヒクル対照または抗体−薬物コンジュゲートのいずれかの単回静脈内（ＩＶ）注射を施した。動物の一群に、３ｍｇ／ｋｇのチオＨｕ抗ＣＤ２２  ＬＣ  Ｋ１４９Ｃ−ｐ−ニトロ−ＰＤＳ−カリケアマイシンを投与した。腫瘍体積は、試験が２１日で終了するまで、週２回測定した。腫瘍体積を、カリパスを使用して測定した２次元に基づいて測定し、算出し、式：Ｖ＝０．５ａ×ｂ２（式中、ａ及びｂは、それぞれ、腫瘍の長径及び短径である）に従ってｍｍ３単位で表した。同じ動物からの経時的な腫瘍体積の反復測定を解析するために、混合モデリングアプローチを使用した（例えば、Ｐｉｎｈｅｉｒｏ  Ｊ，ｅｔ  ａｌ．ｎｌｍｅ：ｌｉｎｅａｒ  ａｎｄ  ｎｏｎｌｉｎｅａｒ  ｍｉｘｅｄ  ｅｆｆｅｃｔｓ  ｍｏｄｅｌｓ．２００９、Ｒパッケージ、第３．１−９６版を参照のこと）。このアプローチは、反復測定、及び試験終了前の動物の処置無関係の除外に起因したわずかな脱落率の両方に対処することができる。３次関数回帰スプラインを使用して、非線形プロファイルを、各用量レベルでのｌｏｇ２腫瘍体積の時間経過に当てはめた。次いで、これらの非線形プロファイルを、混合モード内で用量に関連付けた。全ての動物プロトコルは、動物実験委員会（ＩＡＣＵＣ）によって認可された。
【０２４５】
実験結果を図１に示し、これは、１、３、６、及び１０ｍｇ／ｋｇのチオＨｕ抗Ｌｙ６Ｅ  ＬＣ  Ｋ１４９Ｃ−ｐ−ニトロ−ＰＤＳ−カリケアマイシン抗体−薬物コンジュゲートの投与がこの試験期間の間に腫瘍体積を減少させたことを示す。
【０２４６】
実施例６−チオＨｕ抗ＣＤ２２  １０Ｆ４ｖ３  ＬＣ  Ｋ１４９Ｃ−ｐ−ニトロ−ＰＤＳ−カリケアマイシンの有効性
ＷＳＵ−ＤＬＣＬ２腫瘍（びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫細胞株）のマウス異種移植片モデルにおけるチオＨｕ抗ＣＤ２２  １０Ｆ４ｖ３  ＬＣ  Ｋ１４９Ｃ−ｐ−ニトロ−ＰＤＳ−カリケアマイシンコンジュゲートの抗腫瘍有効性効果を検査した。
【０２４７】
雌ＣＢ１７  Ｆｏｘ  Ｃｈａｓｅ  ＳＣＩＤマウスにそれぞれ、ハンクス平衡塩溶液（ＨＢＳＳ）に懸濁された２０００万個のＷＳＵ−ＤＬＣＬ２細胞（ＤＳＭＺ，Ｇｅｒｍａｎ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｍｉｃｒｏｏｒｇａｎｉｓｍｓ  ａｎｄ  Ｃｅｌｌ  Ｃｕｌｔｕｒｅｓ，Ｂｒａｕｎｓｃｈｗｅｉｇ，Ｇｅｒｍａｎｙ）を右脇腹に接種した。異種移植片の腫瘍が、１７５〜２３７ｍｍ３の平均腫瘍体積に到達したとき（０日目）に、動物を各々５匹のマウスの群に無作為に分け、０．３ｍｇ／ｋｇ、１ｍｇ／ｋｇ、３ｍｇ／ｋｇ、６ｍｇ／ｋｇ、及び１０ｍｇ／ｋｇの用量で、ビヒクル対照または抗体−薬物コンジュゲートのいずれかの単回静脈内（ＩＶ）注射を施した。動物の一群に、３ｍｇ／ｋｇのチオＨｕ抗ＬＹ６Ｅ  ９Ｂ１２．ｖ１２  ＬＣ  Ｋ１４９−ｐ−ニトロ−ＰＤＳ−カリケアマイシンを投与した。腫瘍体積は、試験が２１日で終了するまで、本明細書の別の箇所に記載されるように、週２回測定した。全ての動物プロトコルは、動物実験委員会（ＩＡＣＵＣ）によって認可された。
【０２４８】
実験結果を図２に示し、これは、１、３、６、及び１０ｍｇ／ｋｇのチオＨｕ抗ＣＤ２２  １０Ｆ４ｖ３  ＬＣ  Ｋ１４９Ｃ−ｐ−ニトロ−ＰＤＳ−カリケアマイシンの投与が、この試験期間の間に腫瘍体積を減少させたことを示す。
【０２４９】
実施例７−さらなる有効性試験
実施例７は、非標的対照チオＨｕ抗Ｌｙ６Ｅ  ９Ｂ１２．ｖ１２  ＬＣ  Ｋ１４９Ｃカリケアマイシンコンジュゲートと比較した、ＣＤ２２陽性バーキットリンパ腫細胞（「ＢＪＡＢ」）に対する、及びＣＤ２２陽性ヒトびまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫由来細胞株（ＷＳＵ−ＤＬＣＬ２）に対するチオＨｕ抗ＣＤ２２  １０Ｆ４ｖ３  ＬＣ  Ｋ１４９Ｃカリケアマイシンコンジュゲートを有する標的対照の有効性を評価した。各コンジュゲートは、平均して１．７の薬物対抗体の比（「ＤＡＲ」）を有した。各コンジュゲートにおける非標的対照の有効性もまた、Ｊｕｒｋａｔに対して評価した。
【０２５０】
ＢＪＡＢ、ＷＳＵ−ＤＬＣＬ２、及びＪｕｒｋａｔ細胞におけるＩＣ５０の有効性結果を、それぞれ、図３Ａ〜３Ｃに示す。これらの結果は、チオＨｕ抗ＣＤ２２  １０Ｆ４ｖ３  ＬＣ  Ｋ１４９Ｃ−カリケアマイシンによるＣＤ２２陽性ＢＪＡＢ及びＷＳＵ−ＤＬＣＬ２細胞株の処理が、それぞれ、ＢＪＡＢ及びＷＳＵ−ＤＬＣＬ２におけるチオＨｕ抗Ｌｙ６Ｅ  ９Ｂ１２．ｖ１２  ＬＣ  Ｋ１４９Ｃ−カリケアマイシンを有する非標的対照よりも＞１５００倍大きく、＞２０００倍大きい、２桁の有効性を提供したことを示す。これらの結果は、さらに、チオＨｕ抗ＣＤ２２  １０Ｆ４ｖ３  ＬＣ  Ｋ１４９Ｃ−カリケアマイシン及びチオＨｕ抗Ｌｙ６Ｅ  ９Ｂ１２．ｖ１２  ＬＣ  Ｋ１４９Ｃ−カリケアマイシンが、それぞれ、本質的には、Ｊｕｒｋａｔ細胞には有効でなかったことを示す。ＩＣ５０の結果は、以下の表に報告され、ここで、「ＡＤＣ」は、抗体−薬物コンジュゲートを指し、「チオＨｕ抗ＣＤ２２」は、チオＨｕ抗ＣＤ２２  １０Ｆ４ｖ３  ＬＣ  Ｋ１４９Ｃカリケアマイシンを指し、「チオＨｕ抗Ｌｙ６Ｅ」は、チオＨｕ抗Ｌｙ６Ｅ  ９Ｂ１２．ｖ１２  ＬＣ  Ｋ１４９Ｃカリケアマイシンを指す。
【表５】
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【０２５１】
前述の発明が明確な理解のために例証及び例によって多少詳しく説明されているが、これらの説明及び例は、本発明の範囲を限定するものと解釈されるべきではない。本明細書で引用される全ての特許及び科学文献の開示は、参照によりそれらの全体が明示的に組み込まれる。
【０２５２】
本開示またはその好ましい実施形態（複数可）の要素を導入するとき、「ａ」、「ａｎ」、「ｔｈｅ」、及び「ｓａｉｄ」という冠詞は、１つ以上の要素が存在することを意味することが意図される。「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」、「含む（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」、及び「有する（ｈａｖｉｎｇ）」という用語は、包括的であることが意図され、列挙される要素以外の追加の要素が存在し得ることを意味する。
【０２５３】
この明細書は、最良の態様を含む、本発明を開示するために実施例を用いており、また、いかなる当業者も本発明を実施することができるように実施例を用いており、任意のデバイスまたはシステムを製作し使用し、任意の組み込まれた方法を実行することを含んでいる。本発明の特許可能な範囲は、特許請求の範囲によって定義され、当業者が想到するその他の実施例を含むことができる。このような他の実施例が特許請求の範囲の文字通りの言葉と異ならない構造要素を有する場合、または、それらが特許請求の範囲の文字通りの言葉と実質的な差異がなく等価な構造要素を含む場合には、このような他の実施例は特許請求の範囲内であることを意図している。
【図１】
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【図２】
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【図３Ａ】
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【図３Ｂ】
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【図３Ｃ】
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【国際調査報告】
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