(57)【要約】  本発明は、抗ウイルス組成物に関する。本発明はまた、ウマウイルス感染の治療における使用のための組成物に関する。具体的には、本発明は、動物におけるウマウイルス感染及び／又はウマウイルスによる感染の治療の方法における使用のための、少なくとも１つの抗ウイルス化合物を含む、組成物に関する。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
動物におけるウマウイルス感染及び／又はウマウイルスによる感染の治療の方法における使用のための、少なくとも１つの抗ウイルス化合物を含む組成物であって、好ましくは、前記抗ウイルス化合物が、アデホビル、又はそのプロドラッグ、同等物、若しくは誘導体から選択され、かつ／あるいは前記抗ウイルス化合物が、テノホビル、又はそのプロドラッグ、同等物、若しくは誘導体から選択される、組成物。
【請求項２】
前記抗ウイルス化合物が、アデホビル、又はそのプロドラッグ、同等物、若しくは誘導体、及び／あるいはテノホビル、又はそのプロドラッグ、同等物、若しくは誘導体から選択される、請求項１に記載の使用のための組成物。
【請求項３】
前記抗ウイルス化合物が、式（Ｉ）の化合物：
2018522836.tif 000012
（式中、
Ｘは、アデニン、グアニン、シトシン、チミン、ウラシル、２，６−ジアミノプリン、又はヒポキサンチンであり、
Ｒ１及びＲ２は、同じ又は異なり、ＯＲ４、ＮＨ２、ＮＨＲ４、ＮＨＲ５、ＮＨＲ４Ｒ５、又はＮ（Ｒ５）２からなる群から各々独立して選択され、一部の場合において、Ｒ１及びＲ２は、互いに連結して環状基を形成し、他の場合において、Ｒ１又はＲ２は、Ｒ３に連結して環状基を形成し、
Ｒ３は、非置換であり得るか、又はヒドロキシ、酸素、窒素、及びハロゲンからなる群から独立して選択される置換基によって置換され得る、Ｃ１−Ｃ２０アルキルを表し、Ｒ３がＣＨ（ＣＨ２ＯＲ６）ＣＨ２であるとき、Ｒ１及びＲ２は、ＯＨを各々独立して表し、Ｒ６は、加水分解性エステル基であり、
Ｒ４は、水素又は生理学的加水分解性基を表し、Ｒ４はまた、Ｒ５’であってもよく、
Ｒ５は、ヒドロキシル、酸素、窒素、及びハロゲンからなる群から独立して選択される置換基によって置換され得るか、又は非置換であり得る、Ｃ１−Ｃ２０アルキル、アルコキシ、アミノ、アリール、又はアリール−アルキルを表し、
Ｒ５’は、ヒドロキシル、酸素、窒素、及びハロゲンからなる群から独立して選択される置換基によって置換され得るか、又は非置換であり得る、Ｃ４−Ｃ２０アルキル、アリール、又はアリール−アルキルを表す）、
又はその薬学的若しくは獣医学的に許容可能な塩である、請求項１又は請求項２に記載の使用のための組成物。
【請求項４】
前記抗ウイルス化合物が、アデホビル及び／又はテノホビルから選択される、請求項１〜３のいずれか１項に記載の使用のための組成物。
【請求項５】
前記プロドラッグ、誘導体、若しくは同等物が、アデホビルジピボキシル、テノホビルジソプロキシル、テノホビルジスプロキシル（ｄｉｓｐｒｏｘｉｌ）フマレート、及び／又はテノホビルアラフェナミドから選択される、請求項２〜４のいずれか１項に記載の使用のための組成物。
【請求項６】
前記ウマウイルス感染が、ウマレンチウイルス感染であり、かつ／又は前記ウマウイルスが、ウマレンチウイルスである、請求項１〜５のいずれか１項に記載の使用のための組成物。
【請求項７】
前記ウマレンチウイルス感染が、ウマ感染性貧血であり、かつ／又は前記ウマレンチウイルスが、ウマ感染性貧血ウイルス（ＥＩＡＶ）である、請求項６に記載の使用のための組成物。
【請求項８】
前記ウマウイルス感染が、ウマヘルペスウイルス感染であり、かつ／又は前記ウイルスが、ウマヘルペスウイルスである、請求項１〜５のいずれか１項に記載の使用のための組成物。
【請求項９】
前記ウマヘルペスウイルスが、ＥＨＶ−１、ＥＨＶ−２、ＥＨＶ−３、ＥＨＶ−４、及びＥＨＶ−５からなる群から選択される、請求項８に記載の使用のための組成物。
【請求項１０】
前記ウマウイルス感染が、新型ウマウイルス感染であり、かつ／又は前記ウマウイルスが、新型ウマウイルス（ＮＥＶ）である、請求項１〜５のいずれか１項に記載の使用のための組成物。
【請求項１１】
前記動物が、ウマ科動物（ｅｑｕｉｎｅ）である、請求項１〜１０のいずれか１項に記載の使用のための組成物。
【請求項１２】
前記動物が、ウマ（ｈｏｒｓｅ）である、請求項１〜１１のいずれか１項に記載の使用のための組成物。
【請求項１３】
前記動物が、ＮＥＶ血清反応陽性ウマである、請求項１〜１２のいずれか１項に記載の使用のための組成物。
【請求項１４】
前記生理学的加水分解性基が、ＣＨ２Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ５）２、ＣＨ２Ｃ（Ｏ）ＯＲ５、ＣＨ２ＯＣ（Ｏ）Ｒ５、ＣＨ（Ｒ５）ＯＣ（Ｏ）Ｒ５（Ｒ、Ｓ、若しくはＲＳ立体化学）、ＣＨ（Ｒ５）Ｃ（Ｏ）Ｒ５（Ｒ、Ｓ、若しくはＲＳ立体化学）、ＣＨ２Ｃ（Ｒ５）２ＣＨ２ＯＨ、又はＣＨ２ＯＲ５からなる群から選択される、請求項３〜１３のいずれか１項に記載の使用のための組成物。
【請求項１５】
Ｒ５が、ｔｅｒｔ−ブチル及びＯＣＨ（ＣＨ３）２から選択される、請求項３〜１４のいずれか１項に記載の使用のための組成物。
【請求項１６】
前記化合物が、立体異性的に純粋である、請求項３〜１５のいずれか１項に記載の使用のための組成物。
【請求項１７】
前記組成物が、少なくとも１週間に１回、好ましくは２４〜１２０時間毎、好ましくは４８〜９６時間毎、好ましくは７２時間毎に、前記動物に投与される、請求項１〜１６のいずれか１項に記載の使用のための組成物。
【請求項１８】
１〜６週間に１０〜１０００ｍｇ／ｋｇの総用量を提供するための請求項１〜１７のいずれか１項に記載の使用のための組成物。
【請求項１９】
前記組成物が、経口、静脈内、筋肉内、皮下、経鼻、又は肺内からなる群から選択される経路を介して投与される、請求項１〜１８のいずれか１項に記載の使用のための組成物。
【請求項２０】
前記治療が、ウマウイルス感染の１つ以上の臨床症状を緩和することを含む、請求項１〜１９のいずれか１項に記載の使用のための組成物。
【請求項２１】
前記臨床症状が、発熱、血小板減少症、食欲不振、体重減少、衰弱、拒食症、鬱、不快感、無気力、嗜眠、倦怠感、脱力感、弱脈、不整脈、同時感染、血小板数の低下、貧血、浮腫、点状出血、出血、頻呼吸（ｔａｃｈｙｐｎｅｉａ）、鼻出血（鼻血）、下痢、血便、脾腫、並びに脚、腹部、胸部、及び／又は生殖器の腫脹からなる群から選択される、請求項２０に記載の使用のための組成物。
【請求項２２】
動物におけるウマウイルス感染及び／又はウマウイルスによる感染の治療の方法であって、少なくとも１つの抗ウイルス化合物を含む組成物を前記動物に投与することを含む方法。
【請求項２３】
前記抗ウイルス化合物が、アデホビル、又はそのプロドラッグ、同等物、若しくは誘導体、及び／あるいはテノホビル、又はそのプロドラッグ、同等物、若しくは誘導体から選択される、請求項２２に記載の方法。
【請求項２４】
式（Ｉ）の抗ウイルス化合物：
2018522836.tif 000013
（式中、
Ｘは、アデニン、グアニン、シトシン、チミン、ウラシル、２，６−ジアミノプリン、又はヒポキサンチンであり、
Ｒ１及びＲ２は、同じ又は異なり、ＯＲ４、ＮＨ２、ＮＨＲ４、ＮＨＲ５、ＮＨＲ４Ｒ５、又はＮ（Ｒ５）２からなる群から各々独立して選択され、一部の場合において、Ｒ１及びＲ２は、互いに連結して環状基を形成し、他の場合において、Ｒ１又はＲ２は、Ｒ３に連結して環状基を形成し、
Ｒ３は、非置換であり得るか、又はヒドロキシ、酸素、窒素、及びハロゲンからなる群から独立して選択される置換基によって置換され得る、Ｃ１−Ｃ２０アルキルを表し、Ｒ３がＣＨ（ＣＨ２ＯＲ６）ＣＨ２であるとき、Ｒ１及びＲ２は、ＯＨを各々独立して表し、Ｒ６は、加水分解性エステル基であり、
Ｒ４は、水素又は生理学的加水分解性基を表し、Ｒ４はまた、Ｒ５’であってもよく、
Ｒ５は、ヒドロキシル、酸素、窒素、及びハロゲンからなる群から独立して選択される置換基によって置換され得るか、又は非置換であり得る、Ｃ１−Ｃ２０アルキル、アルコキシ、アミノ、アリール、又はアリール−アルキルを表し、
Ｒ５’は、ヒドロキシル、酸素、窒素、及びハロゲンからなる群から独立して選択される置換基によって置換され得るか、又は非置換であり得る、Ｃ４−Ｃ２０アルキル、アリール、又はアリール−アルキルを表す）、
又はその薬学的若しくは獣医学的に許容可能な塩を、前記動物に投与することを含む、請求項２２又は２３に記載の方法。
【請求項２５】
前記抗ウイルス化合物が、アデホビル及び／又はテノホビルから選択される、請求項２２〜２４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２６】
前記プロドラッグ、誘導体、若しくは同等物が、アデホビルジピボキシル、テノホビルジソプロキシル、テノホビルジスプロキシル（ｄｉｓｐｒｏｘｉｌ）フマレート、及び／又はテノホビルアラフェナミドから選択される、請求項２３〜２５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２７】
前記ウマウイルス感染が、ウマレンチウイルス感染であり、かつ／又は前記ウマウイルスが、ウマレンチウイルスである、請求項２２〜２６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２８】
前記ウマレンチウイルス感染が、ウマ感染性貧血であり、かつ／又は前記ウマレンチウイルスが、ウマ感染性貧血ウイルス（ＥＩＡＶ）である、請求項２７に記載の方法。
【請求項２９】
前記ウマウイルス感染が、ウマヘルペスウイルス感染であり、かつ／又は前記ウイルスが、ウマヘルペスウイルスである、請求項２２〜２６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３０】
前記ウマヘルペスウイルスが、ＥＨＶ−１、ＥＨＶ−２、ＥＨＶ−３、ＥＨＶ−４、及びＥＨＶ−５からなる群から選択される、請求項２９に記載の方法。
【請求項３１】
前記ウマウイルス感染が、新型ウマウイルス感染であり、かつ／又は前記ウマウイルスが、新型ウマウイルス（ＮＥＶ）である、請求項２２〜２６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３２】
前記動物が、ウマ科動物（ｅｑｕｉｎｅ）である、請求項２２〜３１のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３３】
前記動物が、ウマ（ｈｏｒｓｅ）である、請求項２２〜３２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３４】
前記動物が、ＮＥＶ血清反応陽性ウマである、請求項２２〜３３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３５】
前記生理学的加水分解性基が、ＣＨ２Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ５）２、ＣＨ２Ｃ（Ｏ）ＯＲ５、ＣＨ２ＯＣ（Ｏ）Ｒ５、ＣＨ（Ｒ５）ＯＣ（Ｏ）Ｒ５（Ｒ、Ｓ、若しくはＲＳ立体化学）、ＣＨ（Ｒ５）Ｃ（Ｏ）Ｒ５（Ｒ、Ｓ、若しくはＲＳ立体化学）、ＣＨ２Ｃ（Ｒ５）２ＣＨ２ＯＨ、又はＣＨ２ＯＲ５からなる群から選択される、請求項２４〜３４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３６】
Ｒ５が、ｔｅｒｔ−ブチル及びＯＣＨ（ＣＨ３）２から選択される、請求項２４〜３５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３７】
前記化合物が、立体異性的に純粋である、請求項２４〜３６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３８】
前記組成物が、少なくとも１週間に１回、好ましくは２４〜１２０時間毎、好ましくは４８〜９６時間毎、好ましくは７２時間毎に、前記動物に投与される、請求項２２〜３７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３９】
１〜６週間に１０〜１０００ｍｇ／ｋｇの総用量を提供するための、請求項２２〜３８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項４０】
前記組成物が、経口、静脈内、筋肉内、皮下、経鼻、又は肺内からなる群から選択される経路を介して投与される、請求項２２〜３９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項４１】
前記治療が、ウマウイルス感染の１つ以上の臨床症状を緩和することを含む、請求項２２〜４０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項４２】
前記臨床症状が、発熱、血小板減少症、食欲不振、体重減少、衰弱、拒食症、鬱、不快感、無気力、嗜眠、倦怠感、脱力感、弱脈、不整脈、同時感染、血小板数の低下、貧血、浮腫、点状出血、出血、頻呼吸（ｔａｃｈｙｐｎｅｉａ）、鼻出血（鼻血）、下痢、血便、脾腫、並びに脚、腹部、胸部、及び／又は生殖器の腫脹からなる群から選択される、請求項４１に記載の方法。
【請求項４３】
抗ウマウイルス医薬としての使用のための請求項３〜２１のいずれか１項に記載の化合物、又はそのプロドラッグ、同等物、若しくは誘導体を含む組成物。
【請求項４４】
動物におけるウマウイルス感染及び／又はウマウイルスによる感染の治療のための医薬の製造のための、少なくとも１つの抗ウイルス化合物を含む組成物の使用。
【請求項４５】
前記抗ウイルス化合物が、アデホビル、又はそのプロドラッグ、同等物、若しくは誘導体、及び／あるいはテノホビル、又はそのプロドラッグ、同等物、若しくは誘導体から選択される、請求項４４に記載の組成物の使用。
【請求項４６】
前記抗ウイルス化合物が、式（Ｉ）の化合物、又はその薬学的に若しくは獣医学的に許容可能な塩である、請求項４４又は４５に記載の組成物の使用。
【請求項４７】
診断方法であって、
（ａ）動物から試料を得ること、
（ｂ）少なくとも１つの抗ウイルス化合物を含む組成物を、前記試料と混合すること、
（ｃ）前記試料におけるウマウイルス、及び／又はウマウイルス粒子、及び／又はウマウイルスペプチド、及び／又はウマウイルス核酸の存在又は不在を判定すること、を含む方法。
【請求項４８】
ウマウイルスに関してスクリーニングする方法であって、
（ａ）動物から試料を得ること、
（ｂ）抗ウイルス化合物を含む組成物を、前記試料と混合すること、
（ｃ）前記試料におけるウマウイルス、及び／又はウマウイルス粒子、及び／又はウマウイルスペプチド、及び／又はウマウイルス核酸の存在又は不在を判定すること、を含む方法。
【請求項４９】
前記ウマウイルスが、抗ウイルス医薬に対して耐性であり、かつ／又は前記ウマウイルスが、前記抗ウイルス化合物に対して耐性であり、かつ／又は前記ウマウイルスが、請求項３〜２１のいずれか１項に記載の化合物に対して耐性である、請求項４７又は請求項４８に記載の方法。
【請求項５０】
請求項４７又は請求項４８に記載の方法を使用して、ウマ科哺乳動物におけるウイルス感染を特定するための方法。
【請求項５１】
請求項４７又は請求項４８に記載の方法を使用した、動物におけるウイルス感染の特定と、任意に、他の動物からのウマウイルス感染した動物の隔離とを含む、動物群におけるウイルス感染を制御するための方法。
【請求項５２】
請求項１〜２１のいずれか１項に記載の使用のための少なくとも１つの抗ウイルス化合物と、薬学的に許容可能な担体、ビヒクル、希釈剤、又は賦形剤とを含む薬学的組成物。
【請求項５３】
請求項１〜２１のいずれか１項に記載の使用のための少なくとも１つの抗ウイルス化合物と、任意に、前記動物への投与のための説明書とを含むキット。
【請求項５４】
ウマウイルスにおける逆転写酵素活性を調節するための、少なくとも１つの抗ウイルス化合物を含む組成物の使用。
【請求項５５】
インビトロでのウマウイルスの複製を阻害するための、少なくとも１つの抗ウイルス化合物を含む組成物の使用。
【請求項５６】
インビトロでのウマウイルスに感染した動物細胞の生存を促進するための、少なくとも１つの抗ウイルス化合物を含む組成物の使用。
【請求項５７】
前記動物細胞が、ウマ細胞、例えば、ウマ皮膚細胞又はウママクロファージである、請求項５６に記載の使用。
【請求項５８】
動物におけるウマウイルス感染及び／又はウマウイルスによる感染の治療の方法における使用のための組成物であって、前記組成物が、アデホビル、又はそのプロドラッグ、同等物、若しくは誘導体を含み、かつ／あるいは前記組成物が、テノホビル、又はそのプロドラッグ、同等物、若しくは誘導体を含む、組成物。
【請求項５９】
動物におけるウマウイルス感染及び／又はウマウイルスによる感染の治療の方法における使用のための組成物であって、前記組成物が、アデホビル及び／又はテノホビルを含み、前記ウマウイルス感染が、ＮＥＶ又はＥＩＡＶによって引き起こされる、組成物。
【請求項６０】
動物におけるウマウイルス感染及び／又はウマウイルスによる感染の治療の方法における使用のための組成物であって、前記組成物が、アデホビル及び／又はテノホビルを含む、組成物。
【請求項６１】
実質的に本明細書に記載され、添付の実施例を参照した使用のための組成物。
【請求項６２】
実質的に本明細書に記載され、添付の実施例を参照した方法。
【請求項６３】
実質的に本明細書に記載され、添付の実施例を参照した薬学的組成物。
【請求項６４】
実質的に本明細書に記載され、添付の実施例を参照したキット。
【請求項６５】
実質的に本明細書に記載され、添付の実施例を参照した使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、概して、医薬品の分野に関する。さらに、種々の実施形態は、薬学的医薬品に関する。具体的には、本発明は、ウマウイルス感染の治療における使用のための組成物に関する。
【背景技術】
【０００２】
ウマ感染性貧血（ＥＩＡ）又は沼沢熱は、ウマ及びウマ類の古代からのレンチウイルス疾患である。ＥＩＡＶ（ウマ感染性貧血ウイルス）レトロウイルスは、動物疾患であるウマの沼沢熱に関与する最初のウイルス性因子であることが、歴史的に既知である。
【０００３】
この疾患は、欧州において、１８４３年にフランスで最初に報告された（Ｌｉｇｎｅｅ，１８４３）。現在は、世界中に広がったと考えられている。近年、沼沢熱のいくつかの臨床的症例が、欧州のウマ個体群において、国際獣疫事務局（Ｗｏｒｌｄ  Ｏｒｇａｎｉｚａｔｉｏｎ  ｆｏｒ  Ａｎｉｍａｌ  Ｈｅａｌｔｈ（ＯＩＥ））によって報告された。
【０００４】
このウイルスの古代起源、地理的分散、監視計画を有する国における経時的な持続性、及び極めて可変性であるＥＩＡＶの能力は、このウイルスに関して学ぶべきことが依然として多く存在することを示唆する。このため、診断及び治療のための手段及び方法が、必要とされる。
【０００５】
現在、この疾患に対する既知の治癒法は存在しない。血清反応陽性動物の診断、検疫／隔離、又は排除は、疾患を制御する唯一の方法である。ＥＩＡＶに感染したウマの血清における抗ＥＩＡＶ抗体の検出のための現在の免疫診断試験は、抗原としての全ウイルス、又はウイルス組み換えタンパク質を利用する。
【０００６】
ＥＩＡの存在を診断するためのＯＩＥ公式試験は、米国特許第３，９２９，９８２号及び米国特許第３，９３２，６０１号に記載されるように、Ｃｏｇｇｉｎｓ又は寒天ゲル拡散試験（ＡＧＩＤ）を使用した、罹患動物の血清中の疾患に特異的な抗体の存在である。
【０００７】
最近では、Ｆｉｄａｌｇｏ−Ｃａｒｖａｌｈｏ及び同僚らが、新型でこれまでに特徴付けられていないウイルスを特定しており、これは、ＥＩＡＶ試験に関して不一致の結果を有するウマから得たものであり、即ち、これらのウマは、免疫ブロットにおいてはＥＩＡＶに対して陽性であったが、ＡＧＩＤ試験及びＥＬＩＳＡの両方においては、ＥＩＡＶに対して陰性であった。この新型の特徴付けられていないウイルスは、ＰＣＴ／ＰＴ２０１４／００００７７に記載されるように、新型ウマウイルス（ＮＥＶ）と命名された。
【０００８】
アデホビル（そのプロドラッグ形態、アデホビルジピボキシルを含む）は、ヒトＢ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ）感染を治療するための処方医薬品として現在使用されている、ヌクレオシド及び逆転写阻害剤である。それはまた、ヒト単純ヘルペスウイルス感染を治療するためにも使用され得る。アデホビルは、ＨＩＶ感染に対しては功を奏さなかった治療である。
【０００９】
アデホビルは、チェコ科学アカデミーの有機化学・生化学研究所（Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ  ｏｆ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ａｎｄ  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，Ａｃａｄｅｍｙ  ｏｆ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｃｚｅｃｈ  Ｒｅｐｕｂｌｉｃ）において、Ａｎｔｏｎｉｎ  Ｈｏｌyによって最初に作製され、この薬物は、ＨＩＶのためにＧｉｌｅａｄ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ社によって、Ｐｒｅｖｅｏｎというブランド名で開発された。しかしながら、この薬物は、６０又は１２０ｍｇで投薬されたときの腎毒性の重症度及び頻度に関する懸念から、ＨＩＶに対してＦＤＡ認証を受けなかった。アデホビルは、１０ｍｇというはるかに低い用量でヒトＢ型肝炎（ＨＢＶ）感染に対して有効である。アデホビルは、現在、Ｈｅｐｓｅｒａというブランド名の下、この適応症に対して販売されている。
【００１０】
アデホビルは、ＨＢＶが身体内で再生するために重要な酵素である逆転写酵素を遮断することによって作用する。活性ウイルス複製の証拠、及び血清アミノトランスフェラーゼ（主にＡＬＴ）における持続的上昇又は組織学的活性疾患の証拠のいずれかを伴う、成人の慢性Ｂ型肝炎の治療に対して認証されている。
【００１１】
アデホビルジピボキシルは、２つのピバロイルオキシメチル単位を含有し、それをアデホビルのプロドラッグ形態にする。アデホビルのプロドラッグ形態は、これまでビス−ＰＯＭ  ＰＭＥＡと呼ばれていた。
【００１２】
アデホビルの構造式は、以下のとおりである。
2018522836.tif 000002
【００１３】
アデホビルジピボキシルの化学名は、９−［２−［［ビス［（ピバロイルオキシ）メトキシ］ホスフィニル］−メトキシ］エチル］アデニンである。それは、Ｃ２０Ｈ３２Ｎ５Ｏ８Ｐの分子式、５０１．４８ｇ／ｍｏｌの分子量、及び以下のとおりの構造式を有する。
2018522836.tif 000003
【００１４】
テノホビルは、別のヌクレオチドアナログ逆転写酵素阻害剤（ＮＲＴＩ）である。テノホビルは、Ｇｉｌｅａｄ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ社によって、Ｖｉｒｅａｄ（ジソプロキシルフマレートプロドラッグ／塩、又はＴＤＦとして）という商品名の下で市販されている。ＴＤＦ（Ｖｉｒｅａｄ）は、ＨＩＶ及び慢性Ｂ型肝炎の治療に対してＦＤＡ認証されている。それはまた、Ｒｅｖｉｒｏというブランド名の下でも市販されている。テノホビルはまた、１日１回の投薬のためのＴｒｕｖａｄａというブランド名を有する製品において、エムトリシタビンとの固定用量の組み合わせでも入手可能である。テノホビル、エムトリシタビン、及びエファビレンツとの固定用量の三重組み合わせである、Ａｔｒｉｐｌａは、ＨＩＶの治療のために１日１回用量としてＦＤＡによって認証された。
【００１５】
テノホビルは、ヒト成人及び２歳以上のヒト小児患者におけるＨＩＶ−１感染の治療のために、他の抗レトロウイルス薬剤との組み合わせにおいて適応される。テノホビルはまた、ヒト成人及び１２歳以上のヒト小児患者における慢性Ｂ型肝炎の治療にも適応される。テノホビル単独及びテノホビル／エムトリシタビンの組み合わせの両方が、ＨＩＶに罹患するリスクを著しく低減したことも見出されている。
【００１６】
テノホビルは、ＵＳ４，８０８，７１６に記載されるように、Ａｎｔｏｎｉｎ  Ｈｏｌyによって、プラハのチェコ科学アカデミーの有機化学・生化学研究所（Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ  ｏｆ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ａｎｄ  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，Ａｃａｄｅｍｙ  ｏｆ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｃｚｅｃｈ  Ｒｅｐｕｂｌｉｃ）において最初に合成された。１９９７年に、Ｇｉｌｅａｄ社及びサンフランシスコのカリフォルニア大学からの研究者は、テノホビルが、皮下注射によって投薬されるとき、ヒトにおいて抗ＨＩＶ効果を呈することを実証した。Ｇｉｌｅａｄ社の医薬品化学チームは、経口送達のために、修飾型のテノホビルである、テノホビルジソプロキシルフマレートをさらに開発した。
【００１７】
テノホビルのＩＵＰＡＣ名称は、［（２Ｒ）−１−（６−アミノプリン−９−イル）プロパン−２−イル］オキシメチルホスホン酸であり、その構造式は、以下のとおりである。
2018522836.tif 000004
【００１８】
テノホビルジソプロキシルプロドラッグ（フマレート塩、ＴＤＦとして図示）の構造式は、以下のとおりである。
2018522836.tif 000005
【００１９】
テノホビルアラフェナミドプロドラッグ（フマレート塩、ＴＡＦとして図示）の構造式は、以下のとおりである。
2018522836.tif 000006
【００２０】
米国特許第５，６６３，１５９号は、ホスホネートヌクレオチドアナログの抗ウイルス活性プロドラッグの合成を記載している。かかる活性プロドラッグの例としては、アデホビルジピボキシル及びテノホビルジソプロキシルが挙げられる。
【００２１】
米国特許第６，４５１，３４０号は、アデホビルジピボキシルの結晶形態、及びそれを調製する方法を記載している。
【００２２】
したがって、ウマウイルス疾患及び感染の薬学的治療に対する必要性が存在する。
【００２３】
発明の記載
本発明は、動物におけるウマウイルス感染及び／又はウマウイルスによる感染の治療の方法における使用のための、少なくとも１つの抗ウイルス化合物（例えば、一部の実施形態に関しては、抗レトロウイルス化合物）を含む、組成物を提供する。
【００２４】
本発明はまた、動物におけるウマウイルス感染及び／又はウマウイルスによる感染の治療の方法であって、少なくとも１つの抗ウイルス化合物（例えば、抗レトロウイルス化合物）を含む組成物を前記動物に投与することを含む、方法を提供する。
【００２５】
有利に、本発明に従う使用のための組成物は、ウマウイルス感染を治療、予防、又は診断することが可能である。有利に、これは、ウマウイルス感染感染を有する動物（即ち、血清反応陽性動物）（例えば、ウマ）をより多く治療することができるほど、感染の蔓延を制限することができるということを意味する。
【００２６】
さらなる態様において、本発明は、診断方法を提供し、この方法は、
（ａ）動物から試料を得ることと、
（ｂ）少なくとも１つの抗ウイルス化合物（例えば、抗レトロウイルス化合物）を含む組成物を、前記試料と混合することと、
（ｃ）前記試料におけるウマウイルス、及び／又はウマウイルス粒子、及び／又はウマウイルスペプチド、及び／又はウマウイルス核酸の存在又は不在を判定することと、を含む。
【００２７】
本発明はまた、ウマウイルスに関してスクリーニングする方法を提供し、この方法は、
（ａ）動物から試料を得ることと、
（ｂ）抗ウイルス化合物（例えば、抗レトロウイルス化合物）を含む組成物を、前記試料と混合することと、
（ｃ）前記試料におけるウマウイルス、及び／又はウマウイルス粒子、及び／又はウマウイルスペプチド、及び／又はウマウイルス核酸の存在又は不在を判定することと、を含む。
【００２８】
別の態様において、本発明は、ウイルス感染の特定と、任意に、他の動物からのウマウイルスに感染した動物の隔離と、を含む、動物群におけるウイルス感染を制御するための方法を提供する。
【００２９】
関連する態様において、本発明は、本発明に従う使用のための少なくとも１つの抗ウイルス化合物（例えば、抗レトロウイルス化合物）と、薬学的に許容可能な担体、ビヒクル、希釈剤、又は賦形剤と、を含む、薬学的組成物を提供する。
【００３０】
また、本発明によって、本発明に従う使用のための少なくとも１つの抗ウイルス化合物（例えば、抗レトロウイルス化合物）と、任意に、前記動物への投与のための説明書と、を含む、キットが提供される。
【００３１】
さらなる態様において、本発明に従う組成物は、ウマウイルスにおける逆転写酵素活性を調節するため、インビトロでのウマウイルスの複製を阻害するため、及び／又はインビトロでのウマウイルスに感染した動物細胞の生存を促進するために使用され得る。
【図面の簡単な説明】
【００３２】
【図１】電子顕微鏡法によって分析されたＮＥＶ形態。ウイルス粒子のネガティブ染色（パネルＡ、Ｂ、及びＣ）、並びに感染した細胞の染色（パネルＤ）。
【図２】図２Ａ：Ｐｒｅｓｔｏ青色細胞生存率アッセイを使用して分析した、ＮＥＶ感染後１１日目のウマ皮膚（ＥＤ）細胞の細胞生存率。ＮＥＶに感染し処理された細胞と、未処理細胞との間で観察される相違は、ｐ値＜０．０００１で、２方向ＡＮＯＶＡ及びＢｏｎｆｅｒｒｏｎｉ後試験を使用することによって、統計的に有意であった。図２Ｂ：５〜２５６０ｎＭの範囲の濃度でのアデホビルジピボキシルの１０の連続希釈液（１：２）の存在下における、ＮＥＶに感染した細胞の細胞生存率の用量反応曲線。結果は、４パラメータ関数（可変スロープを呈するログ（薬物）対反応）を使用して、Ｐｒｉｓｍソフトウェアによって分析した。
【図３】図３Ａ：Ｐｒｅｓｔｏ青色細胞生存率アッセイを使用して分析した、ＮＥＶ感染後１１日目のＭａｃＦ細胞の細胞生存率。ＮＥＶに感染し処理された細胞と、未処理細胞との間で観察される相違は、ｐ値＜０．０００１で、２方向ＡＮＯＶＡ及びＢｏｎｆｅｒｒｏｎｉ後試験を使用することによって、統計的に有意であった。図３Ｂ：０．０５ｎＭ〜２８μΜの範囲の濃度でのアデホビルジピボキシルの１１の連続希釈液（１：４）の存在下における、ＮＥＶに感染したマクロファージ細胞株の細胞生存率の用量反応曲線。結果は、４パラメータ関数（可変スロープを呈するログ（薬物）対反応）を使用して、Ｐｒｉｓｍソフトウェアによって分析した。
【図４Ａ】アデホビルジピボキシルは、ＥＩＡＶ（Ｉ）に対して抗ウイルス活性を有する。ＥＩＡＶに感染したウマ皮膚細胞を、感染後最長２０日間、１又は１０μΜのアデホビル、テノホビル、ネビラピン、又はジドブジンのいずれかで処理した。試料を、ＲＴ  ｑＰＣＲ技術を使用して、ウイルス粒子の数／細胞培養上清１ｍＬに関してスクリーニングした。
【図４Ｂ】アデホビルジピボキシルは、ＥＩＡＶ（ＩＩ）に対して抗ウイルス活性を有する。ＥＩＡＶに感染したウマ皮膚細胞を、感染後最長２０日間、１又は１０μΜのダルナビル、インジナビル、ダクラタスビル、又はシクロスポリンＡのいずれかで処理した。試料を、ＲＴ  ｑＰＣＲ技術を使用して、ウイルス粒子の数／細胞培養上清１ｍＬに関してスクリーニングした。
【図４Ｃ】ＥＤ細胞におけるＥＩＡＶＷＹＯウイルス複製へのアデホビルジピボキシルの効果。結果は、ＩＣ５０を計算するために、４パラメータ関数（可変スロープを呈するログ（薬物）対反応）を使用して、Ｐｒｉｓｍソフトウェアによって分析した。
【図５】図５Ａ：異なる濃度のアデホビルジピボキシルの存在下における、細胞生存率の用量反応曲線。コンフルエントなＥＤ細胞単層を、ＨＢＳＳで２回洗浄して、非接着性細胞を除去し、アデホビルジピボキシルで６日間前処理した。薬物ＣＣ５０を判定するために、４、６、９、１３．５、２０．２５０、３０．３７０、４５．５６０、６８．３４０、１０２．５２０、１５３．７７０、２３０．６６０、及び２０００μΜの１２の異なる濃度を各薬物濃度あたり５通りで実施した。細胞生存率は、ＰｒｅｓｔｏＢｌｕｅ試薬を使用することによって評価し、２４時間インキュベーションした。結果は、４パラメータ関数（可変スロープを呈するログ（薬物）対反応）を使用して、Ｐｒｉｓｍソフトウェアによって分析した。図５Ｂ：異なる濃度のアデホビルジピボキシルの存在下における、細胞生存率の用量反応曲線。コンフルエントなＭａｃＦ細胞単層を、ＨＢＳＳで２回洗浄して、非接着性細胞を除去し、アデホビルジピボキシルで７日間前処理した。薬物ＣＣ５０を判定するために、４５．５６０、６８．３４０、１０２．５２０、１５３．７７０、２３０．６６０、及び２０００μΜの６つの異なる濃度を各薬物濃度度あたり５通りで実施した。細胞生存率は、ＰｒｅｓｔｏＢｌｕｅ試薬を使用することによって評価し、２４時間インキュベーションした。結果は、４パラメータ関数（可変スロープを呈するログ（薬物）対反応）を使用して、Ｐｒｉｓｍソフトウェアによって分析した。
【図６】図６Ａ：ＥＤ細胞内のｑＰＣＲによって得られたＥＨＶ−１に対するアデホビルジピボキシルＩＣ５０。ウイルス粒子生成は、３通りで、細胞培養上清において、感染後３日目にアッセイされ、ｑＰＣＲによって判定された。結果は、ＩＣ５０を計算するために、４パラメータ関数（可変スロープを呈するログ（薬物）対反応）を使用して、Ｐｒｉｓｍソフトウェアによって分析した。図６Ｂ：ＥＤ細胞内の細胞生存率アッセイによって得られたＥＨＶ−１に対するアデホビルジピボキシルＩＣ５０。ＥＤ細胞内のＥＨＶ−１に対する薬物ＩＣ５０を判定するために、生存率は、ＰｒｅｓｔｏＢｌｕｅ試薬を使用することによって評価し、２４時間インキュベーションした。異なる濃度のアデホビルジピボキシルで処理された、ＥＨＶ−１に感染したＥＤ細胞単層を、感染後６日目にアッセイした。結果は、４パラメータ関数（可変スロープを呈するログ（薬物）対反応）を使用して、Ｐｒｉｓｍソフトウェアによって分析した。
【図７】図７Ａ：マクロファージ様細胞株内のｑＰＣＲによって得られたＥＨＶ−１に対するアデホビルジピボキシルＩＣ５０。ウイルス粒子生成は、３通りで、細胞培養上清において、感染後３日目にアッセイされ、ｑＰＣＲによって判定された。結果は、ＩＣ５０を計算するために、４パラメータ関数（可変スロープを呈するログ（薬物）対反応）を使用して、Ｐｒｉｓｍソフトウェアによって分析した。図７Ｂ：マクロファージ様細胞株内の細胞生存率アッセイによって得られたＥＨＶ−１に対するアデホビルジピボキシルＩＣ５０。ＭａｃＦ細胞内のＥＨＶ−１に対する薬物ＩＣ５０を判定するために、生存率は、ＰｒｅｓｔｏＢｌｕｅ試薬を使用することによって評価し、２４時間インキュベーションした。異なる濃度のアデホビルジピボキシルで処理された、ＥＨＶ−１に感染したＭａｃＦ細胞単層を、感染後６日目にアッセイした。結果は、４パラメータ関数（可変スロープを呈するログ（薬物）対反応）を使用して、Ｐｒｉｓｍソフトウェアによって分析した。
【図８】図８Ａ：ＥＤ細胞内のｑＰＣＲによって得られたＥＨＶ−１に対するテノホビルジソプロキシルフマレートＩＣ５０。ウイルス粒子生成は、３通りで、細胞培養上清において、感染後３日目にアッセイされ、ｑＰＣＲによって判定された。結果は、ＩＣ５０を計算するために、４パラメータ関数（可変スロープを呈するログ（薬物）対反応）を使用して、Ｐｒｉｓｍソフトウェアによって分析した。図８Ｂ：ＥＤ細胞内の細胞生存率アッセイによって得られたＥＨＶ−１に対するテノホビルジソプロキシルフマレートＩＣ５０。ＥＤ細胞内のＥＨＶ−１に対する薬物ＩＣ５０を判定するために、生存率は、ＰｒｅｓｔｏＢｌｕｅ試薬を使用することによって評価し、２４時間インキュベーションした。異なる濃度のテノホビルジソプロキシルフマレートで処理された、ＥＨＶ−１に感染したＥＤ細胞単層を、感染後６日目にアッセイした。結果は、４パラメータ関数（可変スロープを呈するログ（薬物）対反応）を使用して、Ｐｒｉｓｍソフトウェアによって分析した。
【図９】異なる濃度のテノホビルジソプロキシルフマレートの存在下における、細胞生存率の用量反応曲線。コンフルエントなＥＤ細胞単層を、ＨＢＳＳで２回洗浄して、非接着性細胞を除去し、テノホビルジソプロキシルフマレートで３日間前処理した。薬物ＣＣ５０を判定するために、１μΜ、及び２５．３９〜３５０μΜの１０の１：１．３連続希釈液を各薬物濃度あたり５通りで実施した。細胞生存率は、ＰｒｅｓｔｏＢｌｕｅ試薬を使用することによって評価し、２４時間インキュベーションした。結果は、４パラメータ関数（ログ（可変スロープを呈する薬物）対反応）を使用して、Ｐｒｉｓｍソフトウェアによって分析した。
【図１０】図１０Ａ：マクロファージ様細胞株内のｑＰＣＲによって得られたＥＨＶ−１に対するテノホビルジソプロキシルフマレートＩＣ５０。ウイルス粒子生成は、３通りで、細胞培養上清において、感染後３日目にアッセイされ、ｑＰＣＲによって判定された。結果は、ＩＣ５０を計算するために、４パラメータ関数（可変スロープを呈するログ（薬物）対反応）を使用して、Ｐｒｉｓｍソフトウェアによって分析した。図１０Ｂ：マクロファージ様細胞株内の細胞生存率アッセイによって得られたＥＨＶ−１に対するテノホビルジソプロキシルフマレートＩＣ５０。ＭａｃＦ細胞内のＥＨＶ−１に対する薬物ＩＣ５０を判定するために、生存率は、ＰｒｅｓｔｏＢｌｕｅ試薬を使用することによって評価し、２４時間インキュベーションした。異なる濃度のテノホビルジソプロキシルフマレートで処理された、ＥＨＶ−１に感染したＭａｃＦ細胞単層を、感染後６日目にアッセイした。結果は、４パラメータ関数（可変スロープを呈するログ（薬物）対反応）を使用して、Ｐｒｉｓｍソフトウェアによって分析した。
【発明を実施するための形態】
【００３３】
本明細書において使用される際、「ａ」、「ａｎ」、及び「ｔｈｅ」という単数形は、別途文脈が明確に定めない限り、単数及び複数の指示対象の両方を含む。
【００３４】
「ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ（含む）」、「ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ（含む）」、及び「ｃｏｍｐｒｉｓｅｄ  ｏｆ（からなる）」という用語は、本明細書において使用される際、「ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ（含む）」、「ｉｎｃｌｕｄｅｓ（含む）」、又は「ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ（含有する）」、「ｃｏｎｔａｉｎｓ（含有する）」と同義であり、包括的又はオープンエンドであり、追加の、列挙されていない要員、要素、又は方法ステップを除外しない。「ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ（含む）」、「ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ（含む）」、及び「ｃｏｍｐｒｉｓｅｄ  ｏｆ（からなる）」という用語はまた、「ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ  ｏｆ（からなる）」という用語も含む。
【００３５】
抗ウイルス化合物
本発明の第１の態様は、動物におけるウマウイルス感染及び／又はウマウイルスによる感染の治療の方法における使用のための、少なくとも１つの抗ウイルス化合物を含む、組成物に関する。
【００３６】
本明細書の全ての態様及び実施形態において、本発明の抗ウイルス化合物は、抗レトロウイルス化合物であり得る。
【００３７】
「抗ウイルス化合物」は、インビトロ又はインビボにかかわらず、直接的又は間接的にかかわらず、ウイルスの正常な生物学的活性又は感染能力を軽減する（又は軽減することが可能である）ことが既知である、任意の化合物を包含することが意図される。例えば、その物質は、ウイルスの複製を予防し得る、及び／又はレトロウイルス核酸の逆転写を予防し得る、及び／又はウイルスプロテアーゼ活性を阻害し得る、及び／又は動物若しくは宿主におけるウイルス感染の発症若しくは進行を予防し得る。
【００３８】
「抗レトロウイルス化合物」は、インビトロ又はインビボにかかわらず、直接的又は間接的にかかわらず、レトロウイルスの正常な生物学的活性又は感染能力を軽減する（又は軽減することが可能である）ことが既知である、任意の化合物を包含することが意図される。例えば、その物質は、レトロウイルスの複製を予防し得る、及び／又はレトロウイルス核酸の逆転写を予防し得る、及び／又はレトロウイルスプロテアーゼ活性を阻害し得る、及び／又は動物若しくは宿主におけるレトロウイルス感染の発症若しくは進行を予防し得る。
【００３９】
一実施形態において、抗ウイルス化合物は、ホスホネートヌクレオチド、又はそのプロドラッグ、同等物、若しくは誘導体である。
【００４０】
一実施形態において、抗ウイルス化合物は、アデホビル、又はそのプロドラッグ、同等物、若しくは誘導体、及び／あるいはテノホビル、又はそのプロドラッグ、同等物、若しくは誘導体から選択される。
【００４１】
本発明の組成物は、アデホビル、又はそのプロドラッグ、同等物、若しくは誘導体、及びテノホビル、又はそのプロドラッグ、同等物、若しくは誘導体のうちの２つ以上の組み合わせを含み得る。
【００４２】
好ましい実施形態において、本発明の組成物は、アデホビルジピボキシル、テノホビルジソプロキシル、テノホビルジスプロキシル（ｄｉｓｐｒｏｘｉｌ）フマレート、及び／又はテノホビルアラフェナミドのうちの１つ以上を含む。
【００４３】
好ましい実施形態において、本発明の組成物は、アデホビルジピボキシルを含む。
【００４４】
好ましい実施形態において、本発明の組成物は、テノホビルジソプロキシルを含む。
【００４５】
別の実施形態において、抗ウイルス化合物は、式（Ｉ）の化合物：
2018522836.tif 000007
（式中、
Ｘは、アデニン、グアニン、シトシン、チミン、ウラシル、２，６−ジアミノプリン、又はヒポキサンチンであり、Ｒ１及びＲ２は、同じ若しくは異なり、ＯＲ４、ＮＨ２、ＮＨＲ４、ＮＨＲ５、ＮＨＲ４Ｒ５、又はＮ（Ｒ５）２からなる群から各々独立して選択され、一部の場合において、Ｒ１及びＲ２は、互いに連結して、環状基を形成し、他の場合において、Ｒ１又はＲ２は、Ｒ３に連結して、環状基を形成し、
Ｒ３は、非置換であり得るか、又はヒドロキシ、酸素、窒素、及びハロゲンからなる群から独立して選択される置換基によって置換され得る、Ｃ１−Ｃ２０アルキルを表し、Ｒ３がＣＨ（ＣＨ２ＯＲ６）ＣＨ２であるとき、Ｒ１及びＲ２は、ＯＨを各々独立して表し、Ｒ６は、加水分解性エステル基であり、
Ｒ４は、水素又は生理学的加水分解性基を表し、Ｒ４はまた、Ｒ５’であってもよく、
Ｒ５は、ヒドロキシル、酸素、窒素、及びハロゲンからなる群から独立して選択される置換基によって置換され得るか、又は非置換であり得る、Ｃ１−Ｃ２０アルキル、アルコキシ、アミノ、アリール、又はアリール−アルキルを表し、
Ｒ５’は、ヒドロキシル、酸素、窒素、及びハロゲンからなる群から独立して選択される置換基によって置換され得るか、又は非置換であり得る、Ｃ４−Ｃ２０アルキル、アリール、又はアリール−アルキルを表す）、
又はその薬学的若しくは獣医学的に許容可能な塩である。
【００４６】
一部の実施形態において、生理学的加水分解性基は、エステル、カーボネート、又はカルバメート基であり得る。
【００４７】
一部の実施形態において、生理学的加水分解性基は、ＣＨ２Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ５）２、ＣＨ２Ｃ（Ｏ）ＯＲ５、ＣＨ２ＯＣ（Ｏ）Ｒ５、ＣＨ（Ｒ５）ＯＣ（Ｏ）Ｒ５（Ｒ、Ｓ、若しくはＲＳ立体化学）、ＣＨ（Ｒ５）Ｃ（Ｏ）Ｒ５（Ｒ、Ｓ、若しくはＲＳ立体化学）、ＣＨ２Ｃ（Ｒ５）２ＣＨ２ＯＨ、又はＣＨ２ＯＲ５からなる群から選択される。
【００４８】
１つの特定の実施形態において、Ｒ３は、エチルである。
【００４９】
別の特定の実施形態において、Ｒ５は、ｔｅｒｔ−ブチル及びＯＣＨ（ＣＨ３）２から選択される。
【００５０】
別の特定の実施形態において、Ｒ５’は、フェニルである。
【００５１】
別の実施形態において、Ｒ４はまた、Ｒ５’であり得るが、Ｒ４及びＲ５’が同時にアルキルではないことを条件とする。
【００５２】
別の実施形態において、Ｒ４もＲ５’も、（ＣＨ２）３Ｏ（ＣＨ２）１５ＣＨ３ではない。
【００５３】
一実施形態において、本発明の抗ウイルス化合物は、式（ＩＩ）に示されるような一般構造式：
2018522836.tif 000008
（式中、
Ｘ、Ｒ１、及びＲ２は、式（Ｉ）に記載されるとおりであり、
Ｚは、水素、メチル、ＣＨ２ＯＲ６（Ｒ、Ｓ、若しくはＲＳ立体化学）、ヒドロキシメチル、又は置換若しくは非置換低級アルキルを表し、ＺがＣＨ２ＯＲ６であるとき、Ｒ１及びＲ２はさらに、ＯＨから独立して選択され得、
Ｒ６は、加水分解性基を表す）、
又はその薬学的若しくは獣医学的に許容可能な塩を有する。
【００５４】
一部の実施形態において、ＺがＣＨ２ＯＲ６であるとき、Ｒｅは、ＣＨ２Ｐｈではなく、Ｒ１及びＲ２は両方、エトキシではない。さらなる実施形態において、Ｒ１がメトキシであり、かつＲ２が水素であるとき、Ｒｅは、メチルではない。さらなる実施形態において、Ｒ１がメトキシであり、かつＲ２が水素であるとき、Ｒｅは、オクチルではない。
【００５５】
別の実施形態において、本発明の抗ウイルス化合物は、式（ＩＩＩ）の一般構造式：
2018522836.tif 000009
（式中、
Ｘ及びＲ１は、式（Ｉ）において先で記載されるとおりであり、
Ｚは、式（ＩＩ）に記載されるとおりであり、
Ｒ７は、ＯＨ、ＮＨ２、ＮＨＲ５、又はＮ（Ｒ５）２を表し、
Ｒ５は、式（Ｉ）に記載されるとおりである）、
又はその薬学的若しくは獣医学的に許容可能な塩を有する。
【００５６】
式（ＩＩ）の化合物は、以下に示される式（ＩＶ）の立体異性的に純粋な化合物等の立体異性的に純粋であり得る。
2018522836.tif 000010
【００５７】
式（ＩＩＩ）の化合物は、以下に示される式（Ｖ）の立体異性的に純粋な化合物等の立体異性的に純粋であり得る。
2018522836.tif 000011
【００５８】
本発明に従う抗ウイルス化合物は、アデホビル及び／又はテノホビルから選択され得る。
【００５９】
本発明に従う抗ウイルス化合物、具体的には、式（Ｉ）〜（Ｖ）の化合物は、ＵＳ５，６６３，１５９に示される反応スキームに従って合成され得る。
【００６０】
「アルキル」は、分岐若しくは非分岐であり得る、いくつかの炭素原子、例えば、１〜２０個の炭素原子、好ましくは１〜１０個の炭素原子、より好ましくは１〜５個の炭素原子、最も好ましくは１〜３個の炭素原子を有する、飽和炭化水素ラジカルを意味する。アルキルラジカルの非限定的な例としては、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、イソブチル、ｓｅｃ−ブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、ｔｅｒｔ−アミル、ペンチル、ヘキシル、ヘプチル、オクチルなどが挙げられ、メチル、エチル、ｎ−プロピル、及びイソプロピルは、具体的に、好ましい例を表す。
【００６１】
「低級アルキル」は、より短いアルキル、例えば、１〜約６個の炭素原子を含有するものである。また、本明細書において言及される際、「低級」アルキル、アルケニル、又はアルキニル部分（例えば、「低級アルキル」）は、アルキルの場合、１〜１０、好ましくは１〜８個の炭素原子、並びにアルケン及びアルキンの場合、２〜１０、好ましくは２〜８個の炭素原子からなる鎖である。
【００６２】
「Ｃ１〜Ｃ２０アルキル」という用語は、本明細書及び請求項において使用される際（別途文脈が明確に示さない限り）、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、イソブチル、ｔ−ブチルなど等の、１〜２０個の炭素原子を有する、飽和若しくは不飽和、分岐若しくは直鎖炭化水素基を意味する。別途、特定の例において指示されない限り、「置換若しくは非置換」という用語は、本明細書及び請求項において使用される際、原子、元素、又は基が水素原子を置き換えているとして考えられる炭化水素基を意味することが意図される。前記置換アルキル基は、好ましくは、ヒドロキシル、酸素、窒素、及びハロゲンからなる群から選択される要員で置換されている。
【００６３】
「アルコキシ」は、炭化水素鎖置換基を有する酸素ラジカルを意味し、ここでは、炭化水素鎖は、アルキル又はアルケニル（即ち、−Ｏ−アルキル又は−Ｏ−アルケニル）である。アルコキシラジカルの例としては、メトキシ、エトキシ、ｎ−プロポキシ、イソプロポキシ、ｎ−ブトキシ、イソブトキシ、ｓｅｃ−ブトキシ、ｔｅｒｔ−ブトキシ、アリルオキシなどが挙げられる。
【００６４】
「アリール」は、芳香族炭化水素環である。アリール環は、単環式又は縮合二環式環系である。単環式アリール環は、環に６個の炭素原子を含有する。単環式アリール環はまた、フェニル環とも称される。二環式アリール環は、環に８〜１７個の炭素原子、好ましくは９〜１２個の炭素原子を含有する。二環式アリール環は、一方の環がアリールであり、他方の環がアリール、シクロアルキル、又はヘテロシクロアルキルである、環系を含む。好ましい二環式アリール環は、５、６、又は７員環に縮合された５、６、又は７員環を含む。アリール環は、環上で、非置換、又は１〜４個の置換基で置換され得る。アリールは、ハロ、シアノ、ニトロ、ヒドロキシ、カルボキシ、アミノ、アシル、アミノ、アルキル、ヘテロアルキル、ハロアルキル、フェニル、アリールオキシ、アルコキシ、ヘテロアルキルオキシ、カルバミル、ハロアルキル、メチレンジオキシ、ヘテロアリールオキシ、又はこれらの任意の組み合わせで置換され得る。アリール環の例としては、ナフチル、トリル、キシリル、及びフェニルが挙げられる。
【００６５】
「ハロ」又は「ハロゲン」は、フルオロ、クロロ、ブロモ、又はヨードであり得る。
【００６６】
「生理学的加水分解性エステル基」によって、生きている生物における物理的、化学的、又は生物学的プロセスの結果として開裂され得るエステル結合又は連結を意味する。かかる基の例は、ピリミジン及びプリン塩基のヌクレオシドアナログへのジエステル−ホスホネート連結である。
【００６７】
「活性成分」という用語は、本明細書において使用される際、本発明に従う１つ以上の化合物、又はその異性体、溶媒和物、薬学的若しくは獣医学的に許容可能な塩、若しくは代謝産物を包含する。
【００６８】
前記化合物の純粋な異性体形態は、同じ基本分子構造の他のエナンチオマー又はジアステレオマー形態を実質的に含まない異性体として定義される。具体的には、「立体異性的に純粋」又は「キラル的に純粋」という用語は、少なくとも約８０％（即ち、少なくとも９０％の１つの異性体、及び多くても１０％の他の可能な異性体）、好ましくは少なくとも９０％、より好ましくは少なくとも９４％、最も好ましくは少なくとも９７％を超える立体異性体を有する化合物に関する。「エナンチオマー的に純粋」及び「ジアステレオマー的に純粋」という用語は、問題の混合物のエナンチオマー過剰率、ジアステレオマー過剰率をそれぞれ考慮して、同様に理解されるべきである。結果として、エナンチオマーの混合物が、本明細書に記載される調製方法のうちのいずれかの間に得られる場合、それは、好適なキラル固定相を使用した液体クロマトグラフィによって分離することができる。好適なキラル固定相は、例えば、多糖、具体的には、セルロース又はアミロース誘導体である。商業的に入手可能な多糖系キラル固定相は、ＣｈｉｒａｌＣｅｌ（商標）ＣＡ、ＯＡ、ＯＢ、ＯＣ、ＯＤ、ＯＦ、ＯＧ、ＯＪ、及びＯＫ、並びにＣｈｉｒａｌｐａｋ（商標）ＡＤ、ＡＳ、ＯＰ（＋）、及びＯＴ（＋）である。前記多糖キラル固定相と組み合わせて使用するための適切な溶離剤又は移動相は、エタノール、イソプロパノールなどのようなアルコールで修飾されたヘキサンなどである。ｃｉｓ及びｔｒａｎｓという用語は、Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ａｂｓｔｒａｃｔｓ命名法に従って本明細書で使用され、環部分上の置換基の位置を指す。式の化合物の絶対立体化学構成は、例えば、Ｘ線回析等の周知の方法を使用しつつ、当業者によって容易に判定され得る。
【００６９】
当業者はまた、本発明の化合物が、とりわけ、それらの環境のｐＨに依存して、多くの異なるプロトン化状態において存在し得るということを認識するであろう。本明細書で提供される構造式は、いくつかの可能なプロトン化状態のうちの１つのみにおける化合物を描写するが、これらの構造が例解的であるにすぎないこと、及び本発明がいかなる特定のプロトン化状態にも限定されないことが理解され、化合物のいずれかの及び全てのプロトン化形態は、本発明の範囲内にあることが意図される。
【００７０】
プロドラッグ、同等物、誘導体
本発明は、本明細書に記載される化合物の任意の好適なプロドラッグ、同等物、若しくは誘導体を提供する。
【００７１】
プロドラッグ、誘導体、又は同等物は、アデホビルジピボキシル、及び／又はテノホビルジソプロキシル、及び／又はテノホビルジスプロキシル（ｄｉｓｐｒｏｘｉｌ）フマレート、及び／又はテノホビルアラフェナミドから選択され得る。
【００７２】
「プロドラッグ」という用語は、本明細書及び請求項において使用される際（別途、文脈が示さない限り）、投与後、活性薬物に変換し戻される活性薬物の誘導体を示す。より具体的には、それは、エステル部分等の生理学的加水分解性基の加水分解、又はエステル若しくはアミド部分の酸化的開裂を受けて、活性遊離薬物を放出することが可能である、ヌクレオチドホスホネート抗ウイルス薬物の誘導体を指す。生理学的加水分解性基は、身体内で加水分解されて親薬物自体をもたらすことによって、プロドラッグとして機能する。
【００７３】
本発明の実施形態は、本発明の化合物の種々の前駆体又は「プロドラッグ」形態に関する。それ自体は有意に生物学的に活性ではないが、動物に送達されるときに、動物の身体の正常な機能、とりわけ、胃若しくは血液血清に存在する酵素によって触媒される化学反応を受ける、化学種の形態で、本発明の化合物を製剤化することが望ましくあり得、前記化学反応は、本明細書で定義されるような化合物を放出する効果を有する。このため、「プロドラッグ」という用語は、インビボで活性薬学的成分に変換されるこれらの種に関する。
【００７４】
本発明のプロドラッグは、製剤化に好適な任意の形態を有することができ、例えば、エステル、より具体的には、アルキルエステルが、非限定的な一般的なプロドラッグ形態である。しかしながら、この場合、プロドラッグは、必然的に、共有結合が、標的位置に存在する酵素の作用によって開裂される形態において存在し得る。例えば、Ｃ−Ｃ共有結合は、前記標的位置において、１つ以上の酵素によって選択的に開裂され得、したがって、容易に加水分解性の前駆体、とりわけ、エステル、アミドなど以外の形態のプロドラッグが使用され得る。プロドラッグにおける活性薬学的成分の対応物は、アミノ酸又はペプチド構造、アルキル鎖、糖部分等の異なる構造を有することができる。
【００７５】
「同等物」及び「誘導体」という用語は、本明細書に記載される化合物と同等の機能を有する、本明細書に記載される化合物の任意の構造的、異性体、エナンチオマー、又はジアステレオマー誘導体（例えば、１つ以上の官能性若しくは非官能性基の付加によって）を包含することが意図される。同等物又は誘導体の活性は、本明細書に記載される化合物のそれよりも大きくても、又は小さくてもよい。該用語はまた、本明細書に記載される化合物の塩、溶媒和物、及び代謝産物、例えば、その薬学的に若しくは獣医学的に許容可能な塩を網羅することが意図される。該用語はまた、本明細書に記載される化合物の異なる形態、例えば、結晶形態を網羅することが意図される。該用語はまた、本明細書に記載される化合物の異なる異性体、例えば、Ｒ−、Ｓ−、又はＲ−Ｓ立体異性体を網羅することが意図される。
【００７６】
「異性体」という用語は、本明細書において使用される際、本発明の化合物が有し得る、互変異性体形態を含む、全ての可能な異性体形態を意味する。別途記載されない限り、標準的な化学名称は、基本的な分子構造の全てのジアステレオマー及びエナンチオマー（本発明の化合物は、少なくとも１つのキラル中心を有し得るため）を含む、全ての可能な立体化学的異性体形態を指す。より具体的には、別途記載されない限り、立体中心は、Ｒ−又はＳ−構成のいずれかを有し得、置換基は、ｃｉｓ−又はｔｒａｎｓ−構成のいずれかを有し得る。
【００７７】
特定の実施形態において、本発明の化合物、例えば、式（Ｉ）〜（Ｖ）のうちのいずれか１つの化合物のプロドラッグは、修飾されたＲ４基によって特徴付けられる。具体的には、プロドラッグにおいて、少なくとも１つのＲ４基は、ＣＨ２Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ５）２、ＣＨ２Ｃ（Ｏ）ＯＲ５、ＣＨ２ＯＣ（Ｏ）Ｒ５、ＣＨ（Ｒ５）ＯＣ（Ｏ）Ｒ５（Ｒ、Ｓ、若しくはＲＳ立体化学）、ＣＨ（Ｒ５）Ｃ（Ｏ）Ｒ５（Ｒ、Ｓ、若しくはＲＳ立体化学）、ＣＨ２Ｃ（Ｒ５）２ＣＨ２ＯＨ、又はＣＨ２ＯＲ５である。特定の実施形態において、Ｒ５は、非置換であるか、又はヒドロキシ、酸素、窒素、若しくはハロゲンによって置換されている、Ｃ１−Ｃ２０アルキル、アリール、又はアリール−アルキルであり得る。特定の実施形態において、プロドラッグは、同一のＲ４基を含有する。
【００７８】
細胞によって摂取されると、本発明のこれらの化合物、具体的には、式（Ｉ）〜（Ｖ）のうちのいずれか１つの化合物は、Ｒ４基のうちのいずれかが、リン酸塩若しくは二リン酸であるが、他方が水素であるように、リン酸化することができる。したがって、特定の実施形態において、本発明の化合物の代謝産物は、修飾されたＲ４基によって特徴付けられる。したがって、特定の実施形態において、本発明の化合物の代謝産物において、Ｒ４基のうちの少なくとも１つは、リン酸塩若しくは二リン酸である。好ましくは、本発明の化合物の代謝産物において、Ｒ４基のうちの１つは、リン酸塩若しくは二リン酸であるが、他方は、水素である。
【００７９】
「薬学的に許容可能な塩」又は「獣医学的に許容可能な塩」という用語は、本明細書において使用される際、その式の化合物が形成することができる、かつかかる化合物の塩基形態を適切な塩基又は酸で処理することによって好都合に得られ得る、治療的に活性な非毒性の付加塩形態を意味する。以前若しくは以降で言及される薬学的に許容可能な酸及び塩基付加塩は、本発明の化合物が形成することができる、治療的に活性な非毒性の酸及び塩基付加塩形態を含むことを意味する。薬学的に許容可能な酸付加塩は、塩基形態をかかる適切な酸で処理することによって好都合に得ることができる。適切な酸は、例えば、ハロゲン化水素酸、例えば、塩酸若しくは臭化水素酸、硫酸、硝酸、リン酸、及び同様の酸等の無機酸；又は例えば、酢酸、プロパン酸、ヒドロキシ酢酸、乳酸、ピルビン酸、シュウ酸（即ち、エタン二酸）、マロン酸、コハク酸（即ち、ブタン二酸）、マレイン酸、フマル酸、リンゴ酸、酒石酸、クエン酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、ｐ−トルエンスルホン酸、シクラミン酸、サリチル酸、ｐ−アミノサリチル酸、パモン酸、及び同様の酸等の有機酸を含む。逆に、前記塩形態は、適切な塩基での処理によって、遊離塩基形態に変換することができる。酸性プロトンを含有する本発明の化合物は、適切な有機及び無機塩基での処理によって、それらの非毒性金属又はアミン付加塩形態に変換することが可能であり得る。
【００８０】
適切な塩基塩形態は、例えば、アンモニウム塩、アルカリ及び土類アルカリ金属塩、例えば、リチウム、ナトリウム、カリウム、マグネシウム、カルシウム塩など、有機塩基、例えば、第１級、第２級、及び第３級脂肪族及び芳香族アミン、例えば、メチルアミン、エチルアミン、プロピルアミン、イソプロピルアミン、４つのブチルアミン異性体、ジメチルアミン、ジエチルアミン、ジエタノールアミン、ジプロピルアミン、ジイソプロピルアミン、ジ−ｎ−ブチルアミン、ピロリジン、ピペラジン、モルホリン、トリメチルアミン、トリエチルアミン、トリプロピルアミン、キヌクリジン、ピリジン、キノリン、及びイソキノリンを有する塩；ベンザチン、Ｎ−メチル−Ｄ−グルカミン、ヒドラバミン塩、並びに、例えば、アルギニン、リジンなどのようなアミノ酸を有する塩を含む。逆に、塩形態は、酸での処理によって、遊離酸形態に変換することができる。
【００８１】
さらに、生理学的に許容不可能である酸又は塩基の塩もまた、例えば、生理学的に許容可能な化合物の調製又は精製において、使用を見出し得る。全ての塩は、生理学的に許容可能な酸又は塩基から誘導されるかどうかにかかわらず、本発明の範囲内にある。
【００８２】
好ましい実施形態において、本発明の化合物は、フマル酸塩として提供される。
【００８３】
プロドラッグ塩であるテノホビルジスプロキシル（ｄｉｓｐｒｏｘｉｌ）フマレート（ＴＤＦ）は、当業者によって非公式に、単に「テノホビル」と称され得る。このため、本発明の文脈において、「テノホビル」という用語は、「テノホビル」「テノホビルジソプロキシル」、「テノホビルジソプロキシルフマレート」、「ＴＤＦ」、「テノホビルアラフェナミド」、「テノホビルアラフェナミドフマレート」、及び「ＴＡＦ」のうちの１つ以上（ｏｎｅ  ｏｆ  ｍｏｒｅ）を意味するために使用され得る。
【００８４】
等しく、「アデホビル」という用語は、「アデホビル」、「アデホビルジピボキシル」、及び「ＡＤ」のうちの１つ以上を意味するために使用され得る。
【００８５】
ウマウイルス
ＥＩＡＶ
ウマ（Ｅｑｕｕｓ  ｃａｂａｌｌｕｓ）に加えて、ＥＩＡＶは、ロバ（Ｅｑｕｕｓ  ａｓｉｎｕｓ）（Ｃｏｏｋ  ｅｔ  ａｌ．，２００１）及びラバ（Ｓｐｙｒｏｕ  ｅｔ  ａｌ．，２００３）に感染し得る。しかしながら、疾患発現に対する広範な宿主感受性が、これらの種において呈される（Ｃｏｏｋ  ｅｔ  ａｌ．，２００１；Ｈａｍｍｏｎｄ  ｅｔ  ａｌ．，２０００；Ｓｐｙｒｏｕ  ｅｔ  ａｌ．，２００３）。ＥＩＡＶに感染したウマは、感染中に、急性／亜急性、慢性、及び不顕性という３つの異なる疾患段階を提示し得る。
【００８６】
ウイルス（ＥＩＡＶ）は、アメリカ大陸、欧州の一部、中東及び極東、ロシア、並びに南アフリカで特有のものである。ＥＩＡＶは、血液、唾液、乳、及び身体分泌物を通じて、伝染し得る。伝染は、主に、吸血昆虫、並びに刺咬アブ、例えば、ウシアブ及びメクラアブを通じたものである。ウイルスは、保菌体において最長４時間生存することができる。汚染された外科機器、並びに再利用された針及び注射器及び小部品は、ＥＩＡＶを伝染させ得る。さらに、雌馬は、胎盤を介してそれらの子馬にＥＩＡＶを伝染させ得る。疾患に伝染するリスクは、感染したウマが病気であるとき、ウイルスの血液レベルが高くなるため、最も大きい。
【００８７】
ＥＩＡインキュベーション期間は、通常、１〜３週間続くが、３か月と長い場合もある。疾患の兆候のうち最も顕著なものは、熱性エピソード（３９℃を上回る直腸温として定義）、血小板減少症（１０５０００／血液１μｌを下回る血小板レベルとして定義）の同時発症であり、これらは、典型的には、少なくとも１０５コピーのＥＩＡＶウイルス粒子／血漿１ｍＬのウイルス血症を伴う。
【００８８】
ＥＩＡの急性形態は、全力での疾患の突然発症である。臨床兆候としては、高熱、貧血（赤血球破壊に起因する）、血小板減少症、脱力感、下腹部及び脚の腫脹、弱脈、不整脈、頻呼吸（ｔａｃｈｙｐｎｅｉａ）、粘膜上の点状出血、下痢、及び血便が挙げられる。血小板減少症は、一貫した血液学的所見であり、急性感染したウマにおいて検出される最も初期の血液学的異常のうちの１つである（Ｃｌａｂｏｕｇｈ  ｅｔ  ａｌ．，１９９１；Ｃｒａｗｆｏｒｄ  ｅｔ  ａｌ．，１９９６）。神経学的兆候もまた、ＥＩＡに感染したウマにおいて報告されている（Ｏａｋｓ  ｅｔ  ａｌ．，２００４）。時折、急性感染中の死亡も発生し、ウマは、突然死亡し得る。最初の発作後、ウマの大半は、無症状になり得る。
【００８９】
ＥＩＡの亜急性形態は、より遅く、疾患の進行があまり重症ではない。症状としては、再発性発熱、体重減少、脾腫（直腸検査中に感じられる）、貧血、並びに下胸部、腹壁、陰茎鞘、陰嚢、及び脚の腫脹が挙げられる。
【００９０】
一部は、軽度の病気及び発育障害から発熱、鬱、粘膜上の点状出血、体重減少、浮腫、及び時として死亡まで様々である、慢性の再発性のＥＩＡ兆候を発症する。ＥＩＡの慢性形態は、ウマが容易に疲労し、かつ作業に不適である場合である。ウマは、再発性発熱及び貧血を有し得、ウマは、初回発作の数年後でさえ、亜急性又は急性形態を再発し得る。感染したウマの大半は、感染の結果としての顕性の臨床的異常を伴わないが（Ｃｏｇｇｉｎｓ，１９８４；Ｌｅｒｏｕｘ  ｅｔ  ａｌ．，２００４；ＭｃＧｕｉｒｅ  ｅｔ  ａｌ．，１９９０）、依然として、試験では、ＥＩＡ抗体に対して陽性である、生涯、不顕性の保菌体となる。かかるウマは、依然として、ウイルスを伝播し得る。
【００９１】
感染したウマにおいて観察される病因とは対照的に、ロバ及びラバのインビボでの実験的感染において、ＥＩＡＶに起因する明白な臨床兆候はない。実際、これらのウマ類は、感染の発症から、不顕性の保菌体として挙動する（Ｃｏｏｋ  ｅｔ  ａｌ．，２００１；Ｓｐｙｒｏｕ  ｅｔ  ａｌ．，２００３）。
【００９２】
ＥＩＡは、妊娠中の雌馬において、流産を引き起こし得る。これは、ウイルスが血液に進入するときに再発がある場合、妊娠中いつでも生じ得る。ほとんどの感染した雌馬は、流産するが、しかしながら、一部は、健康な子馬を出産する。子馬は、必ずしも感染しているわけではない。
【００９３】
本発明者らは、本明細書に記載される抗ウイルス化合物が、ＥＩＡＶを阻害することができ、このため、動物におけるウマ感染性貧血及び／又はＥＩＡＶの感染を治療するために使用され得ることを、予想外に見出した。
【００９４】
ＥＩＡＶを使用した本明細書に記載されるインビトロデータ及び結果は、インビボ設定に翻訳され得る。
【００９５】
本発明の化合物、具体的には、アデホビルは、ＥＩＡＶを阻害するために、及び／又はウマ感染性貧血の治療において、１〜１０，０００ｎＭ、好ましくは１〜１０００ｎＭ、さらにより好ましくは１〜１００ｎＭの濃度で使用され得る。
【００９６】
したがって、本発明の化合物、具体的には、アデホビルは、ＥＩＡＶを阻害するために、及び／又はウマにおけるウマ感染性貧血の治療において、１ｎｇ／ｋｇ〜５０ｍｇ／ｋｇ、好ましくは０．０５〜２５ｍｇ／ｋｇ、さらにより好ましくは０．１〜１０ｍｇ／ｋｇの用量で使用され得る。
【００９７】
一実施形態において、上の用量は、１〜８週間の期間に、２４〜１２０時間毎、例えば、４８〜９６時間毎、例えば、７２時間毎に提供される。
【００９８】
ＮＥＶ
本発明者らは、ＥＩＡＶ試験に関して不一致の結果を有するウマ（即ち、ウマは、免疫ブロットにおいてはＥＩＡＶに対して陽性であったが、ＡＧＩＤ試験及びＥＬＩＳＡの両方においては、ＥＩＡＶに対して陰性であった）から得られたウイルスを特定した。
【００９９】
このこれまでに特徴付けられていないウイルスは、ＰＣＴ／ＰＴ２０１４／００００７７に記載されるように、新型ウマウイルス（ＮＥＶ）と命名された。
【０１００】
本明細書に記載されるＮＥＶウイルスは、Ｅｑｕｉｇｅｒｍｉｎａｌ  ＳＡ，Ｂｉｏｃａｎｔ  Ｐａｒｋ，ｎｕｃｌｅｏ  ４  ｌｏｔｅ  ４，Ｃａｎｔａｎｈｅｄｅ，３０６０−１９７  Ｐｏｒｔｕｇａｌによって、特許手続きのための微生物寄託の国際認識に関するブダペスト条約（Ｂｕｄａｐｅｓｔ  Ｔｒｅａｔｙ  ｏｎ  ｔｈｅ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｒｅｃｏｇｎｉｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｄｅｐｏｓｉｔ  ｏｆ  Ｍｉｃｒｏｏｒｇａｎｉｓｍｓ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  ｐｕｒｐｏｓｅｓ  ｏｆ  Ｐａｔｅｎｔ  Ｐｒｏｃｅｄｕｒｅ）の下、欧州細胞培養コレクション（Ｅｕｒｏｐｅａｎ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｃｅｌｌ  Ｃｕｌｔｕｒｅｓ（ＥＣＡＡＣ））、培養コレクション（Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎｓ）、英国公衆衛生庁（Ｐｕｂｌｉｃ  Ｈｅａｌｔｈ  Ｅｎｇｌａｎｄ）（Ｐｏｒｔｏｎ  Ｄｏｗｎ，Ｓａｌｉｓｂｕｒｙ，Ｗｉｌｔｓｈｉｒｅ  ＵＫ  ＳＰ４  ０ＪＧ）で、２０１４年１２月２日に受託番号１４１２０２０１の下、寄託されている。
【０１０１】
本発明の他の態様は、受託番号１４１２０２０１の下、ＥＣＡＡＣ寄託機関において行われた上のウイルス寄託に関する。
【０１０２】
当該分野における他の従事者は、ＮＥＶをＥＩＡＶ又はＥＩＡＶ様と称し得る。
【０１０３】
本発明者らは、本明細書に記載される抗ウイルス化合物が、ＮＥＶを阻害することができ、このため、動物におけるＮＥＶ感染及び／又はＮＥＶでの感染を治療するために使用され得ることを、予想外に見出した。
【０１０４】
ＮＥＶを使用した本明細書に記載されるインビトロデータ及び結果は、インビボ設定に翻訳され得る。
【０１０５】
本発明の化合物、具体的には、アデホビルは、ＮＥＶを阻害するために、０．０５ｎＭ〜２８μΜ、好ましくは５〜２５６０ｎＭの濃度で使用され得る。具体的には、本発明の化合物、例えば、アデホビルは、ＮＥＶを阻害するために、１００ｎＭを上回る、好ましくは１μΜを上回る濃度で使用され得る。
【０１０６】
したがって、本発明の化合物、具体的には、アデホビルは、ＮＥＶを阻害するために、５ｎｇ／ｋｇ〜５０ｍｇ／ｋｇ、好ましくは０．０２５〜２５ｍｇ／ｋｇの用量で使用され得る。具体的には、本発明の化合物、例えば、アデホビルは、ウマにおいてＮＥＶを阻害するために、０．０１ｍｇ／ｋｇを上回る、好ましくは０．１ｍｇ／ｋｇを上回る濃度で使用され得る。
【０１０７】
一実施形態において、上の用量は、１〜８週間の期間に、２４〜１２０時間毎、例えば、４８〜９６時間毎、例えば、７２時間毎に提供される。
【０１０８】
ウマヘルペスウイルス（ＥＨＶ）
ＥＨＶ−１、ＥＨＶ−２、ＥＨＶ−３、ＥＨＶ−４、及びＥＨＶ−５を含む、ウマヘルペスウイルスのいくつかの種が記載されている。
【０１０９】
ウマヘルペスウイルス１（ＥＨＶ−１）は、ウマにおいて、流産、呼吸器疾患、及び時折、新生児死亡を引き起こす。脳炎もまた、罹患動物において生じ得、運動失調、麻痺、及び死亡につながる。入手可能なワクチン（ＡＴＣｖｅｔコード：ＱＩ０５ＡＡ１１）が存在するが、しかしながら、その有効性は、疑問の余地がある。ほとんどのウマは、ＥＨＶ−１に感染しているが、ウイルスは、潜伏性となり、兆候又は症状を示さない可能性がある。
【０１１０】
ＥＨＶ−１は、単離されている２つの主要な株を有する。Ｄ７５２株は、このウイルスの神経学的発生により相関し、非神経学的発生は、Ｎ７５２とより近く関連する。
【０１１１】
ＥＨＶ−１感染の症状は、協調の減少、尿滴下、発熱、後肢脱力感、バランスを維持するために物に寄り掛かること、嗜眠、及び地面から離れることができないことである。このウイルスの感染のさらなる兆候としては、鬱、拒食症、鼻及び眼の分泌物が挙げられる。発熱は、ＥＨＶ−１の最も一般的な臨床兆候である。
【０１１２】
ＥＨＶ−１に対する治療は限られており、抗炎症薬物の使用が挙げられる。ワクチンは、ウイルスを制御するために存在するが、それを予防するためではない。ＥＨＶ−１の治療は、本発明の特に好ましい態様である。
【０１１３】
一部の実施形態において、ＥＨＶ−１は、ＥＨＶ−１（ｄｌ  ＴＫ）又はＥＨＶ−１（サブタイプ１）ＲＱ  ｄｌ  ＴＫ、例えば、受託番号ＶＲ−２２４８の下でＡＴＣＣに寄託されたＥＨＶ−１である。
【０１１４】
ウマヘルペスウイルス４（ＥＨＶ−４）は、ウマにおいて鼻肺炎を引き起こし、子馬における呼吸器感染の最も重要なウイルス原因である。ＥＨＶ−４は、罹患動物において、生涯の潜伏性感染を引き起こす。症状としては、発熱、食欲の減少、及び鼻からの分泌物が挙げられる。ＥＨＶ−４は、気道、上皮、及びその関連リンパ節の感染に限定されている上気道疾患である。
【０１１５】
ウマヘルペスウイルス２（ＥＨＶ−２）は、ウマにおける呼吸器疾患で不確かな役割を担っているが、ＥＨＶ−２は、咳嗽、結膜炎、並びに顎下腺及び耳下腺リンパ節の腫れ等の症状を呈する症例から分離されている。ウマヘルペスウイルス３（ＥＨＶ−３）は、ウマ媾疹として既知である疾患を引き起こす。該疾患は、直接的及び性的接触を通じて、及び恐らく感染した膣分泌物を有するアブを通じて、蔓延する。該疾患の兆候としては、膣、陰茎、包皮、及び会陰の膿疱並びに潰瘍が挙げられる。
【０１１６】
本発明者らは、本明細書に記載される抗ウイルス化合物が、ウマヘルペスウイルスを阻害することができ、このため、動物におけるウマヘルペスウイルス感染及び／又はウマヘルペスウイルスでの感染を治療するために使用され得ることを、予想外に見出した。
【０１１７】
ＥＨＶを使用した本明細書に記載されるインビトロデータ及び結果は、インビボ設定に翻訳され得る。
【０１１８】
本発明者らは、アデホビルが、ＥＨＶを阻害するために、及び／又はＥＨＶ感染の治療において、ナノモル濃度で使用され得ることを見出した。このため、アデホビルは、５〜２５００ｎＭ、好ましくは５〜１０００ｎＭ、好ましくは５〜５００ｎＭ、好ましくは５〜１５０ｎＭ、好ましくは５〜１００ｎＭ、さらにより好ましくは５〜１０ｎＭの濃度で使用され得る。
【０１１９】
したがって、アデホビルは、ウマにおいて、ＥＨＶを阻害するために、及び／又はＥＨＶ感染の治療において、０．０２５〜２５ｍｇ／ｋｇ、好ましくは０．０２５〜１０ｍｇ／ｋｇ、好ましくは０．０２５〜５ｍｇ／ｋｇ、好ましくは０．０２５〜１ｍｇ／ｋｇ、好ましくは０．０２５〜０．５ｍｇ／ｋｇ、好ましくは０．０２５〜０．１ｍｇ／ｋｇ、さらにより好ましくは０．０２５〜０．０５ｍｇ／ｋｇの用量で使用され得る。
【０１２０】
テノホビルは、ＥＨＶを阻害するために、及び／又はＥＨＶ感染の治療において、１〜６０μΜ、好ましくは１〜２０μΜ、好ましくは１〜１０μΜ、好ましくは１〜５μΜ、さらにより好ましくは１〜３μΜの濃度で使用され得る。
【０１２１】
したがって、テノホビルは、ウマにおいて、ＥＨＶを阻害するために、及び／又はＥＨＶ感染の治療において、０．０１〜６００ｍｇ／ｋｇ、好ましくは０．１〜４０ｍｇ／ｋｇ、好ましくは０．５〜２０ｍｇ／ｋｇ、好ましくは１〜１０ｍｇ／ｋｇ、さらにより好ましくは１〜５ｍｇ／ｋｇの用量で使用され得る。
【０１２２】
一実施形態において、上の用量は、１〜８週間の期間に、２４〜１２０時間毎、例えば、４８〜９６時間毎、例えば、７２時間毎に提供される。
【０１２３】
ウマウイルス感染
本発明に従うウマウイルスは、ウマにおいて、感染又は常在することが可能である。しかしながら、ウマウイルスはまた、ウマ以外の動物において、感染又は常在することが可能である。
【０１２４】
ウマウイルスの例としては、ＥＩＡＶ、ＮＥＶ、ＥＨＶ１−５、ブニヤウイルス、ウマライノウイルス、東部ウマ脳炎、ウマロタウイルス、ウマアデノウイルス、狂犬病ウイルス、西部ウマ脳炎ウイルス、アフリカ馬疫ウイルス（ＡＨＳＶ）、ウマインフルエンザウイルス、ベネズエラ脳炎ウイルス、ウマパピローマウイルス、水疱性口内炎ウイルスが挙げられる。
【０１２５】
複数の実施形態において、１つ以上のウマウイルス又はウイルス粒子（好ましくは、検出可能な数のウマウイルス又はウイルス粒子）が、宿主動物等の宿主に進入している。ウイルスは、宿主細胞及び組織に進入することが可能であり得る。ウイルスは、前記細胞及び／若しくは組織の内側で休眠中であり得るか、又は複製中であり得る。
【０１２６】
ウマウイルス疾患及び感染の例としては、アフリカ馬疫、西部ウマ脳脊髄炎、媾疫（Ｄｏｕｒｉｎｅ）、媾疫（Ｃｏｖｅｒｉｎｇ  Ｓｉｃｋｎｅｓｓ）、東部ウマ脳脊髄炎、ウマ感染性貧血、ＮＥＶ感染、ウマヘルペス、ウマ鼻肺炎、ウマインフルエンザ、スーラ病、ウマピロプラズマ病、鼻疽、ウマ伝染性子宮炎、及びウマウイルス動脈炎が挙げられる。
【０１２７】
本発明に従うウマウイルスによる感染は、感染した宿主において症状を提示する場合があるか、又はない場合がある。
【０１２８】
本発明によると、ウマウイルス感染は、ウマレンチウイルス感染であり得る。ウマウイルスは、ウマレンチウイルスであり得る。
【０１２９】
本発明によると、ウマレンチウイルス感染は、ウマ感染性貧血であり得る。ウマレンチウイルスは、ウマ感染性貧血ウイルス（ＥＩＡＶ）であり得る。
【０１３０】
本発明によると、ウマウイルス感染は、ウマヘルペスウイルス感染であり得る。ウマウイルスは、ウマヘルペスウイルスであり得る。ウマヘルペスウイルスは、ＥＨＶ−１、ＥＨＶ−２、ＥＨＶ−３、ＥＨＶ−４、及びＥＨＶ−５からなる群から選択され得る。
【０１３１】
本発明によると、ウマウイルス感染は、新型ウマウイルス感染であり得る。ウマウイルスは、新型ウマウイルス（ＮＥＶ）であり得る。
【０１３２】
本発明によると、ウマウイルス感染は、ウマレトロウイルス感染であり得る。ウマウイルスは、ウマレトロウイルスであり得る。
【０１３３】
治療の方法
「治療」という用語は、任意の形態の治療、予防、又は診断を包含することが意図され、疾患の治癒及び予防の両方を行うための治療を含む。このため、健康な動物の治療は、治療としてみなされる。治療はまた、疾患に対する治癒的治療に加え、症状の緩和も網羅する。
【０１３４】
一態様において、本発明は、動物におけるウマウイルス感染及び／又はウマウイルスによる感染の治療の方法であって、少なくとも１つの抗ウイルス化合物を含む組成物を前記動物に投与することを含む、方法を提供する。
【０１３５】
本明細書に記載される全ての実施形態は、本発明に従う治療の方法に等しく適用される。
【０１３６】
本発明は、抗ウマウイルス医薬としての使用のための、本明細書に記載される化合物（具体的には、式（Ｉ）〜（Ｖ）のうちのいずれか１つの化合物、又はそのプロドラッグ、同等物、若しくは誘導体）を含む組成物を提供する。
【０１３７】
また、動物におけるウマウイルス感染及び／又はウマウイルスによる感染の治療のための医薬の製造のための、少なくとも１つの抗ウイルス化合物を含む組成物の使用も提供される。
【０１３８】
本明細書に記載される全ての実施形態は、本発明に従うかかる使用に等しく適用される。
【０１３９】
本発明に従う治療は、ウマウイルス感染の１つ以上の臨床症状を緩和することを含み得る。
【０１４０】
一実施形態において、本発明の動物は、ウマ科動物（equine）である。別の実施形態において、動物は、ウマ科哺乳動物である。一実施形態において、動物は、ウマ類（equid）である。
【０１４１】
ウマ類の例としては、ウマ、ロバ、ラバ、ケッテイ、及びシマウマが挙げられる。
【０１４２】
一部の実施形態において、「ウマ類」及び「ウマ（ウマ科動物）」という用語は、同義的に使用される。
【０１４３】
別の実施形態において、動物は、ウマ（horse）である。
【０１４４】
ＥＩＡＶ、ＮＥＶ、及びＥＨＶ等のウマウイルスは、ウマ等の動物に感染し得る。
【０１４５】
別の実施形態において、動物は、ＮＥＶ血清反応陽性及び／又はＥＩＡＶ血清反応陽性ウマである。
【０１４６】
本発明に従う動物は、ウマ科哺乳動物に限定されない。例えば、動物は、ヒトであり得る。
【０１４７】
特定の実施形態において、化合物は、ウマ等の動物におけるウイルス負荷の低減を含む、治療の方法における使用に対して想定される。さらなる特定の実施形態において、化合物はまた、感染の臨床症状の低減における使用に対して想定される。
【０１４８】
具体的には、特定の実施形態において、本発明の化合物は、発熱、血小板減少症、食欲不振、体重減少、衰弱、拒食症、鬱、不快感、無気力、嗜眠、倦怠感、脱力感、弱脈、不整脈、同時感染、血小板数の低下、貧血、浮腫、点状出血、出血、頻呼吸（ｔａｃｈｙｐｎｅｉａ）、鼻出血（鼻血）、下痢、血便、脾腫、並びに脚、腹部、胸部、及び／又は生殖器の腫脹からなる群から選択される、臨床兆候又は症状の治療における使用に対して想定される。さらなる実施形態において、かかる症状は、ＮＥＶ及び／又はＥＩＡＶ及び／又はＥＨＶに感染したウマにおいて存在し得る。
【０１４９】
診断の方法及び診断キット
本発明は、診断方法を提供し、この方法は、
（ａ）動物から試料を得ることと、
（ｂ）少なくとも１つの抗ウイルス化合物を含む組成物を、前記試料と混合することと、
（ｃ）前記試料におけるウマウイルス、及び／又はウマウイルス粒子、及び／又はウマウイルスペプチド、及び／又はウマウイルス核酸の存在又は不在を判定することと、を含む。
【０１５０】
本発明はまた、ウマウイルスに関してスクリーニングする方法を提供し、この方法は、
（ａ）動物から試料を得ることと、
（ｂ）抗ウイルス化合物を含む組成物を、前記試料と混合することと、
（ｃ）前記試料におけるウマウイルス、及び／又はウマウイルス粒子、及び／又はウマウイルスペプチド、及び／又はウマウイルス核酸の存在又は不在を判定することと、を含む。
【０１５１】
本発明はまた、ウマウイルスに関してスクリーニングする方法を提供し、この方法は、
（ａ）動物から試料を得ることと、
（ｂ）抗ウイルス化合物を含む組成物を、前記試料と混合することと、
（ｃ）前記試料においてウイルス逆転写活性を評価することによって、前記試料におけるウマウイルス及び／又はウマウイルスタンパク質の存在又は不在を判定することと、を含み、任意に、前記ウイルス逆転写活性は、合成ＲＮＡ、非標識及び／又は標識プローブとの前記試料の直接的な接触によって判定される。
【０１５２】
本発明はまた、ウマウイルスに関してスクリーニングする方法を提供し、この方法は、
（ａ）動物から試料を得ることと、
（ｂ）抗ウイルス化合物を含む組成物を、前記試料と混合することと、
（ｃ）前記試料においてウイルスプロテアーゼ活性を評価することによって、前記試料におけるウマウイルス及び／又はウマウイルスタンパク質の存在又は不在を判定することと、を含み、任意に、前記ウイルスプロテアーゼ活性は、ウイルスプロテアーゼに対する開裂部位を含有する非標識及び／又は標識プローブとの前記試料の直接的な接触によって判定される。
【０１５３】
本発明はまた、ウマウイルスに関してスクリーニングする方法を提供し、この方法は、
（ａ）動物から試料を得ることと、
（ｂ）抗ウイルス化合物を含む組成物を、前記試料と混合することと、
（ｃ）ウイルス複製を評価することによって、前記試料におけるウマウイルス及び／又はウマウイルスタンパク質の存在又は不在を判定することと、を含み、任意に、前記ウイルス複製は、許容細胞との前記試料の接触後に判定される。
【０１５４】
一実施形態において、ウマウイルスは、抗ウイルス医薬に対して耐性であり得る。ウマウイルスは、抗ウイルス化合物、例えば、抗レトロウイルス化合物に対して耐性であり得る。ウマウイルスはまた、本明細書に記載される化合物、具体的には、式（Ｉ）〜（Ｖ）のうちのいずれか１つの化合物、又はそのプロドラッグ、同等物、若しくは誘導体に対して耐性であり得る。
【０１５５】
本発明はまた、本明細書に記載される方法又は診断方法のうちのいずれか１つを使用して、ウマ科哺乳動物におけるウイルス感染を特定するための方法を提供する。
【０１５６】
本発明はまた、本明細書に記載される方法又は診断方法のうちのいずれか１つを使用した、動物におけるウイルス感染の特定と、任意に、他の動物からのウマウイルスに感染した動物の隔離と、を含む、動物群においてウイルス感染を制御するための方法を提供する。
【０１５７】
本発明は、本発明に従う使用のための少なくとも１つの抗ウイルス化合物と、任意に、前記動物への投与のための説明書と、を含む、キットを提供する。
【０１５８】
一実施形態において、キットは、診断キットである。かかるキットは、動物におけるウマウイルス感染の診断において有用であり得る。
【０１５９】
本発明に従うキットを使用することによって、又は本発明の診断方法を使用することによって、ＥＩＡＶ及び／又はＮＥＶ及び／又はＥＨＶ等のウマウイルスに感染している動物を特定することができる。
【０１６０】
ウマウイルス感染を有する動物は、他の動物（例えば、ウマウイルスを有しない動物）から隔離され得る。有利に、これは、感染した動物から、感染していない動物へのウマウイルス感染の蔓延を予防することに役立ち、それによって、動物群内のウマウイルス感染を制御する。
【０１６１】
ウマウイルス感染を有する動物は、ウマウイルス感染の進行を判定する、及び／又はウマウイルス疾患の進行を判定するために（本発明に従うキットを使用することによって、又は本発明の診断方法を使用することによって）監視され得る。ウマウイルス感染を有する動物は、一旦感染のレベル及び／又はウマウイルスの進行が臨界点に達すると、他の動物（例えば、ウマウイルスを有しない動物）から隔離され得る。典型的には、動物は、直腸温度が３９℃を上回る場合、熱性エピソード中に隔離されるべきであり、血小板レベルは、１０５０００／血液１μＬを下回り、ウイルス血症は、少なくとも１０５コピーのウマウイルス粒子／血漿１ｍＬである。
【０１６２】
さらに、又は代わりに、ウマウイルス感染を有する動物を（本発明に従うキットを使用することによって、又は本発明の診断方法を使用することによって）特定することにより、ウマウイルスに感染した動物に使用される医療機器が、ウマウイルス感染を有しない動物に使用されないことを保証するように注意すべきである。有利に、これは、感染した動物から、感染していない動物へのウマウイルス感染の蔓延を予防することに役立ち、それによって、動物群へのウマウイルス感染を制御する。
【０１６３】
一部の実施形態において、ウマウイルスを有すると特定された動物は、安楽死させられる。典型的には、安楽死させられる動物は、頻繁な熱エピソードを有する動物、及び傾眠状態又は側臥位の動物である。ウマウイルス感染を有する動物は、ウイルス血症のピークが頻繁である場合に安楽死させられ得る。
【０１６４】
本発明の化合物に加えて、本発明のキット及び診断方法としては、限定されないが、以下の技術、競合及び非競合アッセイ、ラジオイムノアッセイ、生物発光及び化学発光アッセイ、蛍光分析アッセイ、赤外線アッセイ、サンドイッチアッセイ、免疫放射線アッセイ、ドットブロット、ＥＬＩＳＡを含む酵素結合アッセイ、マイクロタイタープレート、抗体被覆ストリップ、又は尿若しくは血液の迅速な監視のためのディップスティック、及び免疫細胞化学、ポリメラーゼ連鎖反応を含むＤＮＡ若しくはＲＮＡ増幅技術、逆転写、及びＬＡＭＰアッセイが挙げられ得る。各キットに関して、アッセイの範囲、感度、精度、信頼性、特異性、及び再現性が確立される。アッセイ内及びアッセイ間の変動は、変位又は活性の標準曲線上の２０％、５０％、及び８０％の地点で確立される。
【０１６５】
試料は、本明細書において言及される際、動物から入手される／入手可能である。一実施形態において、試料は、ウマ、ロバ、ラバ、ケッテイ、又はシマウマ等のウマから入手される／入手可能である。
【０１６６】
試料は、血液、血清、血漿、唾液、痰、尿、糞便生検、リンパ節生検、乳、精液、及び／又は汗であり得る。
【０１６７】
本発明の診断方法は、典型的には、エクスビボ又はインビトロで実行される。
【０１６８】
本発明に従う組成物及び／又は本発明に従う薬学的組成物はまた、ウマウイルス疾患の診断若しくは予防、及び／又は動物におけるウマウイルスによる感染の診断若しくは予防のためのキット又はアッセイにおいて使用され得る。
【０１６９】
用量及び投与
本発明は、本発明に従う使用のための少なくとも１つの抗ウイルス化合物（例えば、抗レトロウイルス化合物）と、薬学的に許容可能な担体、ビヒクル、希釈剤、又は賦形剤と、を含む、薬学的組成物を提供する。
【０１７０】
投与
本発明の化合物は、経口又は非経口使用のために、既知の薬学的担体及び賦形剤を使用する従来の方法で製剤化され得、それらは、単一用量形態で、又は複数用量容器内で提示され得る。組成物は、錠剤、カプセル、溶液、懸濁液、又はエマルジョンの形態であり得る。これらの化合物はまた、ココアバター又は他の脂肪材料等の従来の坐薬基剤を利用する坐薬として製剤化され得る。化合物は、所望される場合、他の抗ウイルス化合物との組み合わせで投与され得る。
【０１７１】
一実施形態において、本発明に従う使用のための組成物は、経口、非経口、静脈内、筋肉内、皮下、経鼻、肺内、腹腔内、皮膚内、髄腔内、及び硬膜外からなる群から選択される経路を介して投与され得る。
【０１７２】
好ましい実施形態において、投与の経路は、経口、静脈内、又は筋肉内である。特に好ましい実施形態において、投与の経路は、筋肉内、例えば、注射可能な筋肉内である。
【０１７３】
本発明は、想定される治療的使用に特に適している、本発明の化合物の製剤をさらに提供する。本発明の化合物は、通常の実践に従い選択されるであろう従来の担体及び賦形剤で製剤化され得る。錠剤は、賦形剤、滑剤、充填剤、結合剤などを含有し得る。水性製剤は、無菌形態で調製され、経口投与以外の送達のために意図される場合は一般に等張性である。製剤は、任意に、「Ｈａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｅｘｃｉｐｉｅｎｔｓ」（１９８６）に記載されるもの等の賦形剤を含有し、水酸化ナトリウム、アスコルビン酸及び他の抗酸化剤、ＥＤＴＡ等のキレート化剤、デキストリン等の炭水化物、ヒドロキシアルキルセルロース、ヒドロキシアルキルメチルセルロース、ステアリン酸などを含む。
【０１７４】
続いて、「薬学的に許容可能な担体」又は「獣医学的に許容可能な担体」という用語は、本明細書において使用される際、例えば、前述の組成物を溶解、分散、若しくは拡散することによって、治療される位置へのその適用若しくは播種を促進するために、かつ／又はその有効性を損なうことなくその貯蔵、輸送、又は取扱いを促進するために、活性成分が製剤化される任意の材料又は物質を意味する。薬学的に許容可能な担体又は獣医学的に許容可能な担体は、固体、又は液体、又は液体を形成するために圧縮された気体であってもよく、即ち、本発明の組成物は、濃縮物、エマルジョン、溶液、顆粒、粉塵、スプレー、エアロゾル、懸濁液、軟膏、クリーム、錠剤、ペレット、又は粉末として好適に使用され得る。
【０１７５】
前述の薬学的組成物及びそれらの製剤における使用のための好適な薬学的担体は、当業者に周知であり、本発明内のそれらの選択に特に制限はない。それらはまた、薬学的実践と一致するもの、即ち、哺乳動物に対して永久的損傷をもたらさない担体及び添加剤である限り、湿潤剤、分散剤、増粘剤、接着剤、乳化剤、溶媒、コーティング、抗菌及び抗真菌剤（例えば、フェノール、ソルビン酸、クロロブタノール、ベンジルアルコール）、等張剤（糖又は塩化ナトリウム等）などの添加剤を含み得る。本発明の薬学的組成物は、例えば、活性成分を、１ステップ又はマルチステップ手順で、選択された担体材料と共に均質に混合、コーティング、及び／又は粉砕することによって任意の既知の方法で調製されてよく、該当する場合、界面活性剤等の他の添加剤が、例えば、それらを通常は約１〜１０μｍの直径を有する微小球の形態で得ることを鑑みて、即ち、活性成分の制御放出又は持続放出のためのマイクロカプセルの製造のために、微粒子化によって調製されてもよい。
【０１７６】
本発明の薬学的組成物において使用される、利尿剤又は乳化剤としても知られる好適な界面活性剤は、良好な乳化、分散、及び／又は湿潤特性を有する非イオン性、カチオン性、及び／又はアニオン性材料である。好適なアニオン性界面活性剤としては、水溶性石鹸及び水溶性合成界面活性剤の両方が挙げられる。好適な石鹸は、アルカリ又はアルカリ土類金属塩、高次脂肪酸（Ｃ１０〜Ｃ２２）の非置換若しくは置換アンモニウム塩、例えば、オレイン酸若しくはステアリン酸、又はココナッツ油若しくは獣脂油から入手可能な天然脂肪酸混合物のナトリウム若しくはカリウム塩である。合成界面活性剤としては、ポリアクリル酸のナトリウム又はカルシウム塩；脂肪スルホン酸塩及び硫酸塩；スルホン酸化ベンズイミダゾール誘導体及びアルキルアリールスルホン酸塩が挙げられる。脂肪スルホン酸塩又は硫酸塩は、通常、アルカリ又はアルカリ土類金属塩、非置換アンモニウム塩、又は８〜２２個の炭素原子を有するアルキル若しくはアシルラジカルで置換されたアンモニウム塩、例えば、リグノスルホン酸若しくはドデシルスルホン酸のナトリウム若しくはカルシウム塩、又は天然脂肪酸から得られた脂肪アルコール硫酸塩、硫酸若しくはスルホン酸エステルのアルカリ若しくはアルカリ土類金属塩（ラウリル硫酸ナトリウム等）、及び脂肪アルコール／エチレンオキシド付加物の混合物の形態である。好適なスルホン酸化ベンズイミダゾール誘導体は、好ましくは、８〜２２個の炭素原子を含有する。（アルキルアリールスルホン酸塩の例は、ドデシルベンゼンスルホン酸若しくはジブチル−ナフタレンスルホン酸のナトリウム、カルシウム、若しくはアルカノールアミン塩、又はナフタレンスルホン酸／ホルムアルデヒド縮合物である。また、対応するリン酸塩、例えば、リン酸エステルの塩、並びにｐ−ノニルフェノールとエチレン及び／若しくはプロピレンオキシドの付加物、又はリン脂質も好適である。この目的のために好適なリン脂質は、天然（動物若しくは植物細胞を起源とする）又はセファリン若しくはレシチン型の合成リン脂質、例えば、ホスファチジルエタノールアミン、ホスファチジルセリン、ホスファチジルグリセリン、リゾレシチン、カルジオリピン、ジオクタニルホスファチジルコリン、ジパルミトイルホスファチジルコリン、及びそれらの混合物等である。
【０１７７】
好適な非イオン性界面活性剤としては、アルキルフェノール、脂肪アルコール、脂肪酸、分子中に少なくとも１２個の原子を含有する脂肪族アミン又はアミド、アルキルアレンスルホン酸塩及びジアルキルスルホコハク酸塩のポリエトキシ化及びポリプロポキシ化誘導体、例えば、脂肪族及び脂環式アルコール、飽和及び不飽和脂肪酸並びにアルキルフェノールのポリグリコールエーテル誘導体が挙げられ、該誘導体は、好ましくはアルキルフェノールの（脂肪族）炭化水素部分に３〜１０個のグリコールエーテル基及び８〜２０個の炭素原子、並びにアルキル部分に６〜１８個の炭素原子を含有する。さらに好適な非イオン性界面活性剤は、ポリエチレンオキシドとポリプロピレングリコールとの水溶性付加物、アルキル鎖中に１〜１０個の炭素原子を含有するエチレンジアミノポリプロピレングリコールであり、この付加物は、２０〜２５０個のエチレングリコールエーテル基及び／又は１０〜１００個のプロピレングリコールエーテル基を含有する。かかる化合物は、通常、プロピレングリコール単位あたり１〜５エチレングリコール単位を含有する。非イオン性界面活性剤の代表例は、ノニルフェノール−ポリエトキシエタノール、ヒマシ油ポリグリコールエーテル、ポリプロピレン／ポリエチレンオキシド付加物、トリブチルフェノキシポリエトキシエタノール、ポリエチレングリコール、及びオクチルフェノキシポリエトキシエタノールである。ポリエチレンソルビタン（ポリオキシエチレンソルビタントリオレアート等）、グリセロール、ソルビタン、スクロース、及びペンタエリスリトールの脂肪酸エステルもまた、好適な非イオン性界面活性剤である。
【０１７８】
好適なカチオン性界面活性剤としては、ハロ、フェニル、置換フェニル、又はヒドロキシで任意に置換された炭化水素ラジカルを有する第４級アンモニウム塩、特にハロゲン化物；例えば、Ｎ−置換基として少なくとも１つのＣ８〜Ｃ２２アルキルラジカル（例えば、セチル、ラウリル、パルミチル、ミリスチル、オレイルなど）、及びさらなる置換基として、非置換又はハロゲン化低級アルキル、ベンジル、及び／又はヒドロキシ−低級アルキルラジカルを含有する第４級アンモニウム塩が挙げられる。
【０１７９】
この目的のために好適な界面活性剤のより詳細な説明は、例えば、″ＭｃＣｕｔｃｈｅｏｎ′ｓ  Ｄｅｔｅｒｇｅｎｔｓ  ａｎｄ  Ｅｍｕｌｓｉｆｉｅｒｓ  Ａｎｎｕａｌ″（ＭＣ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｒｏｐ．，Ｒｉｄｇｅｗｏｏｄ，Ｎ．Ｊ．，１９８１）、″Ｔｅｎｓｉｄ−Ｔａｓｃｈｅｎｂｕｃｈ″，２ｎｄ  Ｅｄ．（Ｈａｎｓｅｒ  Ｖｅｒｉａｇ，Ｖｉｅｎｎａ，１９８１）及び″Ｅｎｃｙｃｌｏｐａｅｄｉａ  ｏｆ  Ｓｕｒｆａｃｔａｎｔｓ″，（Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏ．，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，１９８１）において見出され得る。
【０１８０】
活性成分を単独で投与することは可能であるが、それらを薬学的製剤として提示することが好ましい。本発明の薬学的又は獣医学的な使用のための製剤は、上に記載されるように、少なくとも１つの活性成分を、１つ以上の薬学的又は獣医学的に許容可能な担体、したがって、任意に他の治療成分と一緒に含む。担体（複数可）は、最適に、製剤の他の成分と相溶性であり、そのレシピエントに有害でないという意味において「許容可能」である。製剤としては、経口又は非経口（皮下、腹腔内、筋肉内、静脈内、皮膚内、髄腔内、及び硬膜外を含む）投与に好適なものが挙げられる。
【０１８１】
製剤は、単位用量形態で好都合に提示されてもよく、調剤の分野において周知の方法のうちのいずれかによって調製され得る。特定の実施形態において、上に示されるように、本発明の化合物は、経口又は注射可能な製剤として提供される。
【０１８２】
かかる方法としては、活性成分を、１つ以上の副成分からなる担体と会合させるステップが挙げられる。一般に、製剤は、活性成分を、液体担体若しくは細分された固体担体、又は両方と均一かつ密接に会合させること、次いで必要に応じて、生成物を成形することによって調製される。
【０１８３】
経口投与に好適な本発明の製剤は、カプセル、カシェット、腸溶性カプセル、又は錠剤等の別個の単位として提示され得、それぞれ既定量の活性成分を粉末若しくは顆粒として、水性液体若しくは非水性液体中の溶液若しくは懸濁液として、又は水中油液体エマルジョン若しくは油中水液体エマルジョンとして含有する。活性成分はまた、ボーラス、舐剤、又はペーストとして提示されてもよい。
【０１８４】
錠剤は、任意に１つ以上の副成分と共に、圧縮又は成形によって作製され得る。圧縮錠剤は、好適な機械において、粉末又は顆粒等の自由流動形態の活性成分を圧縮することによって調製され、任意に結合剤、潤滑剤、不活性希釈剤、保存剤、界面活性剤、又は分散剤等と混合され得る。成形錠剤は、好適な機械において、不活性液体希釈剤で湿らせた粉末状化合物の混合物を成形することによって作製され得る。錠剤は、任意に、コーティング及びスコアされてもよく、そこで活性成分の遅延又は制御放出を提供するように製剤化され得る。
【０１８５】
製剤は、任意に、例えば、０．０７５〜２０％  ｗ／ｗ（０．１％  ｗ／ｗ、例えば０．６％  ｗ／ｗ、０．７％  ｗ／ｗ等の増分で０．１％〜２０％の範囲の活性成分（複数可）を含む）、好ましくは０．２〜１５％  ｗ／ｗ、最も好ましくは０．５〜１０％  ｗ／ｗの量で活性成分（複数可）を含有する局所軟膏又はクリームとして適用される。軟膏中で製剤化された場合、活性成分は、パラフィン又は水混和性軟膏基剤のいずれかと共に用いられ得る。代わりに、活性成分は、水中油クリーム基剤と共にクリームに製剤化され得る。所望される場合、クリーム基剤の水性相は、例えば、少なくとも３０％  ｗ／ｗの多価アルコール、即ち、２つ以上のヒドロキシル基を有するアルコール、例えばプロピレングリコール、ブタン−１，３−ジオール、マンニトール、ソルビトール、グリセロール、及びポリエチレングリコール（ＰＥＧ４００を含む）、並びにそれらの混合物を含み得る。局所製剤は、望ましくは、皮膚又は他の罹患領域を通じた活性成分の吸収又は浸透を増強する化合物を含み得る。かかる皮膚浸透増強剤の例としては、ジメチルスルホキシド及び関連類似体が挙げられる。
【０１８６】
本発明のエマルジョンの油性相は、既知の成分から既知の様式で構成され得る。相は、単に乳化剤（そうでなければ利尿剤として知られる）を含み得るが、望ましくは少なくとも１つの乳化剤と脂肪若しくは油との、又は脂肪及び油両方との混合物を含む。任意に、親水性乳化剤は、安定化剤として作用する親油性乳化剤と一緒に含まれる。油及び脂肪の両方を含むことも好ましい。併せて、乳化剤（複数可）は、安定化剤（複数可）の有り無しで、いわゆる乳化蝋を形成し、この蝋は、油及び脂肪と併せて、クリーム製剤の油性分散相を形成する、いわゆる乳化軟膏基剤を形成する。
【０１８７】
薬学的エマルジョン製剤に使用される可能性がある大部分の油中の活性化合物の可溶度は非常に低いため、製剤のための好適な油及び脂肪の選択は、所望の美容的特性を達成することに基づく。故に、クリームは、任意に、管又は他の容器からの漏出を防ぐために好適な濃度を有する、非脂性、非汚染性、及び洗浄可能な製品であるべきである。直鎖又は分岐鎖、一塩基性又は二塩基性アルキルエステル、例えばジイソアジペート、イソセチルステアレート、ココナッツ脂肪酸のプロピレングリコールジエステル、イソプロピルミリステート、デシルオレアート、イソプロピルパルミテート、ブチルステアレート、２−エチルヘキシルパルミテート、又はＣｒｏｄａｍｏｌ  ＣＡＰとして知られる分岐鎖エステルのブレンドが使用されてもよく、最後の３つが好ましいエステルである。これらは、要求される特性に応じて単独で、又は組み合わせで使用され得る。代わりに、白色軟質パラフィン及び／若しくは液体パラフィン、又は他の鉱物油等の高融点脂質を使用することができる。
【０１８８】
好ましい単位用量製剤は、有効用量、本明細書で上に列挙される、又はその適切な分画の活性成分を含有するものである。具体的に上述される成分に加えて、本発明の製剤は、問題の製剤の種類に関して薬学的又は獣医学的分野において従来の他の薬剤を含み得ることが理解されるべきであり、例えば、経口投与に好適なものは、香味剤を含み得る。
【０１８９】
本発明の化合物は、活性成分として本発明の１つ以上の化合物を含有する制御放出薬学的製剤（「制御放出製剤」）として提供され得、活性成分の放出を制御及び調節して、より低頻度の投薬を可能にするか、又は所与の発明の化合物の薬物動態又は毒性プロファイルを改善することができる。制御放出製剤は、経口投与のために適応され、本発明の１つ以上の化合物を含む別個の単位が、従来の方法に従って調製され得る。組成物中の活性成分の作用期間を制御するために、追加の成分が含まれてもよい。故に、制御放出組成物は、例えば、ポリエステル、ポリアミノ酸、ポリビニルピロリドン、エチレン−酢酸ビニルコポリマー、メチルセルロース、カルボキシメチルセルロース、硫酸プロタミンなど等の適切なポリマー担体を選択することによって達成され得る。薬物放出の速度及び作用期間はまた、活性成分を、ポリマー系物質（ヒドロゲル、ポリ乳酸、ヒドロキシメチルセルロース、ポリメチルメタクリレート、及び他の上に記載されるポリマー等）の粒子、例えば、マイクロカプセルに組み込むことによって制御され得る。かかる方法としては、リポソーム、微小球、マイクロエマルジョン、ナノ粒子、ナノカプセルなどのようなコロイド薬物送達系が挙げられる。投与経路に応じて、獣医学的な組成物は、保護コーティングを必要とし得る。注射使用に好適な薬学的形態としては、その即座調製のための水性溶液又は分散液及び無菌粉末が挙げられる。したがって、この目的のための典型的な担体としては、生体適合性水性緩衝液、エタノール、グリセロール、プロピレングリコール、ポリエチレングリコールなど、及びそれらの混合物が挙げられる。
【０１９０】
いくつかの化合物又は活性成分が組み合わせで使用される場合、それらは必ずしもそれらの連合治療効果を、治療される動物において同時に直接もたらすとは限らないという事実を鑑みて、対応する組成物は、別個だが隣接したレポジトリ又はコンパートメント内の２つ以上の成分を含有する医療キット又はパッケージの形態であってもよい。後者の文脈において、各活性成分は、したがって、他の成分とは異なる投与経路に好適な方法で製剤化されてもよく、例えば、それらのうちの１つは、経口又は非経口製剤の形態であり得るが、その他は、静脈内注射用のアンプルの形態である。
【０１９１】
用量
ウマウイルスに感染した動物の治療のための最適な用量計画は、本発明に従う化合物が、少なくとも週１回、１０〜１０００ｍｇ／ｋｇの総用量で投与される場合に達成され得る。かかる計画は、ウマウイルスに感染した動物におけるウイルス負荷の低減及び／又は臨床症状の低減を保証する。故に、本発明のさらなる態様は、本発明の治療方法における使用のための本発明の化合物を提供し、ここで化合物は、少なくとも週１回、１０〜１０００ｍｇ／ｋｇの総用量で投与される。ある特定の実施形態において、化合物は、経口経路を介して投与される。ある特定の実施形態において、化合物は、皮下注射を介して投与される。
【０１９２】
一実施形態において、本発明の少なくとも１つの化合物は、１０〜１０００ｍｇ／ｋｇの総用量で１〜６週間の間提供される。
【０１９３】
別の実施形態において、本発明の化合物、具体的にはアデホビルは、ウマウイルス（例えば、ＮＥＶ、ＥＩＡＶ、又はＥＨＶ）に感染したウマに、０．１〜５ｍｇ／ｋｇの用量で２４〜１２０時間毎、例えば４８〜９６時間毎、例えば７２時間毎に１〜８週間の期間にわたって投与されてもよい。
【０１９４】
さらに、単位用量形態で提供される場合、組成物は、約０．１〜約１００ｍｇ／ｋｇ／用量の活性抗ウイルス成分を含有し得る。本発明の化合物の用量は、動物の体重及び年齢のような因子、並びに疾患の特定の性質及び重症度に依存し、医師又は獣医師の裁量の範囲内である。治療のための用量は、投与の頻度及び経路に応じて異なり得る。
【０１９５】
用量は、所与の期間を通して１回、２回、又はそれ以上で投与される好適な形態の１つ、２つ、又はそれ以上の用量に分割され得る。
【０１９６】
本発明の組成物は、予防的又は治療的処置のために投与され得る。予防的適用において、組成物は、ウマウイルス感染又は疾患の発達に対する臨床的に判定された素因又は増加した感受性を有する動物に投与され得る。本発明の組成物は、臨床疾患又は感染の発症を遅延、低減、又は好ましくは予防するのに十分な量で動物に投与され得る。治療適用において、組成物は、病態の症状及びその合併症を治癒するか、又は少なくとも部分的に停止させるのに十分な量で、疾患又は感染に既に罹患している動物に投与される。この目的を達成するために適切な量は、「治療上有効な用量」、疾患又は感染と関連したいくつかの症状を実質的に改善するのに十分な化合物の量として定義される。治療上有効な量の化合物は、疾患又は感染を治癒するために必要とされないかもしれないが、疾患若しくは病態の発症が遅延、妨害、若しくは予防されるか、又は疾患若しくは感染の症状が改善されるか、あるいは疾患若しくは感染の期間が変わるか、又は例えば重症度が低くなるか、又は動物における回復が加速されるような疾患又は感染の治療を提供する。この使用に有効な量は、疾患又は感染の重症度、並びに動物の体重及び全身状態に依存し得るが、一般に、動物あたりの用量につき約０．５ｍｇ〜約３０００ｍｇの薬剤（複数可）の範囲であり得る。初期投与及びブースター投与のための好適な計画は、典型的に、初期投与に続く１つ以上の時間、日、週、又は月間隔での後続投与による繰り返し用量で表され得る。本発明の組成物中に存在する化合物（複数可）の総有効量は、単一用量として、ボーラスとして、若しくは比較的短期間にわたる注入のいずれかによって哺乳動物に投与され得るか、又は分画化治療プロトコルを使用して投与することができ、複数用量が、より長い期間にわたって投与される（例えば、４〜６、８〜１２、１４〜１６、若しくは１８〜２４時間毎、又は２〜４日、１〜２週間毎、月１回の投薬）。代わりに、血中の治療上有効な濃度を維持するのに十分な連続静脈内注入が企図される。
【０１９７】
本発明の組成物内に存在し、動物（例えば、ヒト又はウマ）に適用される本発明の方法において使用される治療上有効な量の１つ以上の化合物は、動物の年齢、体重、及び病態の個体差を考慮して熟練者により判定され得る。本発明の組成物は、治療される動物において望ましい結果（例えば、感染の緩徐化又は寛解）をもたらす量である、有効な量で動物に投与される。治療上有効な量は、当業者によって経験的に判定され得る。
【０１９８】
動物は、用量あたり約０．１〜３，０００ｍｇの範囲で週１回以上（例えば、週２、３、４、５、６、若しくは７回、又はそれ以上）、週あたり０．１〜２，５００（例えば、２，０００、１，５００、１，０００、５００、１００、１０、１、０．５、又は０．１）ｍｇ用量の薬剤を受けてもよい。動物は、用量あたり０．１〜３，０００ｍｇの範囲で２又は３週間毎に１回、組成物の薬剤を受けてもよい。
【０１９９】
有効量を含む本発明の組成物の単一又は複数投与は、治療する医師又は獣医師によって選択された用量レベル及びパターンで実行され得る。用量及び投与スケジュールは、動物における疾患又は感染の重症度に基づいて判定及び調製することができ、医師、獣医師、又は本明細書に記載される者によって一般に実施される方法に従って治療過程を通して監視され得る。
【０２００】
本発明の組成物は、処置若しくは治療のいずれかの従来方法との組み合わせで使用され得るか、又は処置若しくは治療の従来方法とは別個に使用され得る。
【０２０１】
本発明の組成物が、他の薬剤との複合療法で投与される場合、それらは、連続的に、又は同時に動物に投与され得る。代わりに、本発明に従う薬学的組成物は、本明細書に記載される、薬学的に許容可能な賦形剤、及び当該技術分野において既知の別の治療剤又は予防剤と共に、本発明の組成物の組み合わせで構成され得る。
【０２０２】
本発明と併せて使用され得る追加の抗ウイルス化合物としては、限定されないが、ジドブジン（ＡＺＴ）、ダルナビル、ダクラタスビル、及びインジナビル、又はそれらのプロドラッグ、同等物、若しくは誘導体が挙げられる。
【０２０３】
他の使用
また、ウマウイルスにおける逆転写酵素活性を調節するために少なくとも１つの抗ウイルス化合物を含む組成物の使用が提供される。
【０２０４】
逆転写酵素活性は、化合物によって増加又は阻害、好ましくは阻害され得る。逆転写酵素活性は、当該技術分野における任意の好適な方法によって判定され得る。かかる方法は、当業者の能力の範囲内である。
【０２０５】
また、ウマウイルスの複製をインビトロで阻害するために少なくとも１つの抗ウイルス化合物を含む組成物の使用が提供される。
【０２０６】
ウマウイルスの複製を監視するための技術は、当業者に既知である。例としては、ウイルス滴定及び列挙アッセイ、並びにＲＴ  ｑＰＣＲが挙げられる。
【０２０７】
また、ウマウイルスに感染した動物細胞の生存をインビトロで促進するために少なくとも１つの抗ウイルス化合物を含む組成物の使用が提供される。
【０２０８】
一実施形態において、該動物細胞は、ウマ細胞、例えば、ウマ皮膚細胞又はウママクロファージである。
【０２０９】
好適なウマ皮膚細胞としては、基準ＡＴＣＣ  ＣＣＬ５７を担持するものが挙げられる。
【０２１０】
好適なウママクロファージ細胞としては、「ＭａｃＦ」と呼ばれるもの、又はＦｉｄａｌｇｏ−Ｃａｒｖａｌｈｏ  ｅｔ  ａｌ，２００９において報告されている手順に従いＮＥＶ−血清反応陽性ウマから自然に不死化したものが挙げられる。
【０２１１】
細胞生存を監視するための技術は、当業者に既知であり、細胞列挙、トリパンブルー染色、フローサイトメトリー、アポトーシスアッセイ、ウェスタンブロッティング、ＥＬＩＳＡ、免疫組織化学、細胞生存率アッセイ、及びホルマザンを基礎にしたアッセイが挙げられ得る。
【実施例】
【０２１２】
本発明は、以下の非限定例によってさらに説明される。
【０２１３】
実施例１：ＮＥＶは、レンチウイルスの形態を有する。
ＮＥＶウイルス粒子を、２０％スクロース勾配の上に積層し、５００００ｇで１時間、４℃で超遠心した。ペレットをリン酸緩衝液に溶解し、ネガティブ染色電子顕微鏡法に供した。図１Ａ、１Ｂ、及び１Ｃは、ＮＥＶウイルス粒子が、６０〜１２０ｎｍの範囲であり、楕円形コアを持つレンチウイルス形態を有することを示す。さらに、ＮＥＶに感染した細胞も、感染の５日後に電子顕微鏡法によって分析した。図１Ｄは、レンチウイルスウイルス粒子と同様に血漿膜から出芽するウイルス粒子を示す。
【０２１４】
実施例２：アデホビルジピボキシルは、ウマレンチウイルスに対して抗ウイルス活性を有する。
ウマ皮膚細胞（ＡＴＣＣ  ＣＣＬ５７）（１０５細胞／ｃｍ２）を、９６ウェルプレートにおいて、感染の２４〜７２時間前に完全培地中に播種し、９５％〜９９％コンフルエントな単層が得られるまで、３７℃及び５％ＣＯ２の湿ったチャンバ内でインキュベーションした。完全培地は、１０％不活性化胎仔血清（Ｇｉｂｃｏ，Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）、１％  Ｇｌｕｔａｍａｘ（Ｇｉｂｃｏ，Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）、及び１％ペニシリン−ストレプトマイシン（Ｇｉｂｃｏ，Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を含むＤＭＥＭ培地（Ｇｉｂｃｏ，Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）で構成された。
【０２１５】
アデホビルジピボキシル、並びに他のＦＤＡ又はＥＭＡにより認証された抗ウイルス薬物、例えばジドブジン（ヌクレオシド逆転写阻害剤）、ネビラピン（非ヌクレオシド逆転写阻害剤）、インジナビル硫酸塩（ＨＩＶ−１プロテアーゼ阻害剤）、ダルナビルエタノール付加物（ＨＩＶ−１プロテアーゼ阻害剤）、ダクラスタビル（ＨＣＶ  ＮＳ５Ａ阻害剤）、シクロスポリンＡ（免疫抑制剤）、及び抗ウイルスとして前臨床／臨床アッセイにおいて評価される薬物、例えばテノホビル（ヌクレオシド逆転写阻害剤）の抗ウイルス効果を評価した（図４Ａ及び４Ｂ）。細胞を、１又は１０μＭの薬物で１時間、５通りで前処理し、ＮＥＶ（１１３０  ＰＦＵ／ウェル）に２時間感染させた。２時間後、薬物を含む新鮮な培地に取り換えた。次いで、細胞を９日間、３７℃及び５％ＣＯ２の湿ったチャンバ内でインキュベーションした。９日後、処理された細胞の細胞生存率を、ＰｒｅｓｔｏＢｌｕｅ細胞生存率試薬を使用することによって、非感染細胞及び感染未処理細胞の細胞生存率と比較した。結果は、ＮＥＶ未処理細胞の細胞生存率がほぼゼロであること、及びアデホビルジピボキシルが、細胞生存率へのＮＥＶの効果を完全に逆転させたことを示した。アデホビルジピボキシル処理された細胞は、非感染細胞と同様の細胞生存率を示した。アデホビルジピボキシル処理されたＮＥＶに感染した細胞と、未処理のＮＥＶに感染した細胞との間で観察される相違は、１μＭ又は１０μＭ両方の薬物濃度に関して、統計的に有意であった（ｐ＜０．０００１）。さらに、１０μＭでのテノホビルによる感染細胞の処理もまた、感染細胞の細胞生存率を増加させた。テノホビル処理された細胞と未処理細胞感染細胞との間で観察される相違は、ｐ＜０．００５で統計的に有意であった。
【０２１６】
実施例３：ＮＥＶに対するアデホビルジピボキシルの抗ウイルス活性の分析
ウマ皮膚細胞
ウマ皮膚細胞（ＡＴＣＣ  ＣＣＬ５７）（１０５細胞／ｃｍ２）を、９６ウェルプレートにおいて、感染の２４〜７２時間前に完全培地中に播種し、９５％〜９９％コンフルエントな単層が得られるまで、３７℃及び５％ＣＯ２の湿ったチャンバ内でインキュベーションした。完全培地は、１０％不活性化胎仔血清（Ｇｉｂｃｏ，Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）、１％  Ｇｌｕｔａｍａｘ（Ｇｉｂｃｏ，Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）、及び１％ペニシリン−ストレプトマイシン（Ｇｉｂｃｏ，Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を含むＤＭＥＭ培地（Ｇｉｂｃｏ，Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）で構成された。
【０２１７】
コンフルエントな細胞単層を、ＨＢＳＳで２回洗浄して非接着性細胞を除去し、１５０μＬの感染培地（５％ＦＢＳを含むＤＭＥＭ）でインキュベーションし、アデホビルジピボキシル［１００％ＤＭＳＯ中１０ｍＭのストックから］（Ｓｅｌｌｅｃｋｃｈｅｍ，Ｇｅｒｍａｎｙ）で前処理した。アデホビルジピボキシル（Ｓｅｌｌｅｃｋｃｈｅｍ，Ｇｅｒｍａｎｙ）での前処理は、感染を進行させた。薬物ＩＣ５０を判定するために、５〜２５６０ｎＭの範囲の濃度での１０の１：２連続希釈を各薬物濃度あたり５通りで実施した。ＥＤ細胞を、感染前に６０分間薬物で前処理し、感染の間処理を維持した。ＮＥＶウイルス粒子（１１３０  ＰＦＵを含有する１０μＬ）を、細胞培養培地に２時間にわたって付加した。感染後、細胞をＨＢＳＳで２回洗浄して、未結合ウイルスを除去し、各ウェルにおいて新鮮な完全培地及び新鮮な薬物を置換した。感染後１１日目に、細胞を、製造者の指示に従い、ＰｒｅｓｔｏＢｌｕｅ細胞生存率アッセイ（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｒｏｂｅｓ，Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を使用することによって、生存率に関してスクリーニングした。アデホビルジピボキシル処理細胞の吸光度（５７０ｎｍ）を、非感染及び／又は未処理のＮＥＶに感染した細胞の吸光度と比較した。１５μＬのＰｒｅｓｔｏｂｌｕｅ試薬を、アッセイウェルに直接付加し、吸光度を、Ｐｒｅｓｔｏｂｌｕｅ試薬を用いてインキュベーションの２４時間後に５７０ｎｍで測定した。細胞無しで２４時間インキュベーションしたＰｒｅｓｔｏｂｌｕｅ試薬のベースライン吸光度値を除去することによって、全ての吸光度値を補正した。
【０２１８】
図２Ａは、ＮＥＶ感染後１１日目のＥＤ細胞の細胞生存率が、ほぼゼロであったことを示し、高いＮＥＶ細胞壊死性を確認する。それとは対照的に、非感染細胞（模擬細胞）及び３２０ｎＭのアデホビルジピボキシルで処理された細胞は、非常に類似した吸光度値を示し、薬物が、ＥＤ感染細胞の細胞生存率を逆転させ得ることを示唆する。結果は、アデホビルジピボキシルが、ナノモル濃度での単一用量処理後のＥＤ細胞においてＮＥＶ細胞壊死効果を遮断し得ることを示す。ＮＥＶ処理細胞と、未処理細胞との間で観察される相違は、ｐ値＜０．０００１で、２方向ＡＮＯＶＡ及びＢｏｎｆｅｒｒｏｎｉ後試験を使用することによって、統計的に有意であった。
【０２１９】
図２Ｂは、５〜２５６０ｎＭの範囲の濃度でのアデホビルジピボキシルの１０の連続希釈液（１：２）の存在下における、ＮＥＶに感染した細胞の細胞生存率の用量反応曲線を示す。結果は、４パラメータ関数（可変スロープを呈するログ（薬物）対反応）を使用して、Ｐｒｉｓｍソフトウェアによって分析した。結果は、薬物のＩＣ５０が、１１２．７ｎＭであったことを示した（自由度＝５１、Ｒ２＝０．９４６０、Ｈｉｌｌスロープ＝４．７８４）。
【０２２０】
ウママクロファージ細胞株
ウママクロファージ細胞株（ＭａｃＦ）は、Ｆｉｄａｌｇｏ−Ｃａｒｖａｌｈｏ  ｅｔ．ａｌ，２００９において報告されている手順に従い、ＮＥＶ−血清反応陽性ウマから自然に不死化した。
【０２２１】
Ｍａｃ  Ｆ細胞を完全培地に播種し、３７℃及び５％ＣＯ２の湿ったチャンバ内で、９６ウェルプレートにおいて０．５×１０５細胞／ｃｍ２の細胞密度でインキュベーションした。９５％〜９９％コンフルエントな細胞単層が得られるまで、ＮＥＶ感染の２４〜７２時間前に細胞をインキュベーションした。
【０２２２】
コンフルエントな細胞単層を、ＨＢＳＳで２回洗浄して非接着性細胞を除去し、１５０μＬの感染培地（５％ＦＢＳを含むＤＭＥＭ）でインキュベーションし、ＥＤ細胞に関して上に報告されるように、アデホビルジピボキシル［１００％ＤＭＳＯ中１０ｍＭのストックから］（Ｓｅｌｌｅｃｋｃｈｅｍ，Ｇｅｒｍａｎｙ）で前処理した。ＭａｃＦ細胞株における薬物ＩＣ５０を判定するために、０．０５ｎＭ〜２８μＭの範囲で１１の１：４連続希釈を各薬物濃度あたり５通りで実施した。ＭａｃＦ細胞を、感染前に６０分間薬物で前処理し、感染の間処理を維持した。ＮＥＶウイルス粒子（１１３０  ＰＦＵを含有する１０μＬ）を、細胞培養培地に２時間にわたって付加した。感染後、細胞をＨＢＳＳで２回洗浄して、未結合ウイルスを除去し、各ウェルにおいて新鮮な完全培地及び新鮮な薬物を取り替えた。感染後１１日目に、細胞を、製造者の指示に従い、ＰｒｅｓｔｏＢｌｕｅ細胞生存率アッセイ（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｒｏｂｅｓ，Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を使用することによって、生存率に関してスクリーニングした。アデホビルジピボキシル処理細胞の吸光度（５７０ｎｍ）を、非感染及び／又は未処理のＮＥＶに感染した細胞の吸光度と比較した。１５μＬのＰｒｅｓｔｏｂｌｕｅ試薬を、アッセイウェルに直接付加し、吸光度を、Ｐｒｅｓｔｏｂｌｕｅ試薬を用いてインキュベーションの２４時間後に５７０ｎｍで測定した。ベースライン（細胞無しで２４時間インキュベーションしたＰｒｅｓｔｏｂｌｕｅ試薬の吸光度値）を除去することによって、全ての吸光度値を補正した。
【０２２３】
図３Ａは、ＮＥＶ感染後１１日目のＭａｃＦ細胞の細胞生存率の不在を示し、マクロファージ細胞株、ＭａｃＦにおけるＮＥＶ細胞壊死効果を確認する。しかしながら、模擬ＭａｃＦ細胞の吸光度値は、１４μＭのアデホビルジピボキシルで処理された細胞に関して観察されたものと非常に類似していた（又はさらにはわずかに高かった）。結果は、アデホビルジピボキシルが、ＮＥＶ−血清反応陽性ウマから確立されたマクロファージ細胞株においてＮＥＶ細胞壊死効果も遮断し得ることを示す。
【０２２４】
図３Ｂは、０．０５ｎＭ〜２８μΜの範囲の濃度でのアデホビルジピボキシルの１１の連続希釈液（１：４）の存在下における、ＮＥＶに感染したマクロファージ細胞株の細胞生存率の用量反応曲線を示す。結果は、４パラメータ関数（可変スロープを呈するログ（薬物）対反応）を使用して、Ｐｒｉｓｍソフトウェアによって分析した。結果は、薬物のＩＣ５０が、３．８３５μＭであったことを示した（自由度＝５６、Ｒ２＝０．９１４６、Ｈｉｌｌスロープ＝２．２５１）。
【０２２５】
アデホビルジピボキシルＩＣ５０は、ＭａｃＦ細胞に関して３．８３５μＭであり、ＥＤ細胞に関して１１２．７ｎＭであった。
【０２２６】
マクロファージ起源であり、ＮＥＶ−血清反応陽性ウマから得られたＭａｃＦ細胞であることは、ＮＥＶ感染に対するこの抗ウイルス薬のインビボ有効性を示唆し得る。
【０２２７】
実施例４：アデホビルジピボキシルは、ＥＩＡＶに対して抗ウイルス活性を有する。
アデホビルジピボキシルは、ウマ感染性貧血ウイルス（ＥＩＡＶ）に対して高度に活性である。
【０２２８】
ウマ皮膚細胞（９６ウェルプレートの１ウェルあたり３×１０４細胞）を播種し、完全培地（ＮＥＶ感染に関して上に記載される）において、５％  ＣＯ２下、３７℃で感染前に２４時間〜７２時間にわたってインキュベーションした。アデホビルジピボキシル、並びに他のＦＤＡ又はＥＭＡにより認証された抗ウイルス薬物、例えばジドブジン（ヌクレオシド逆転写阻害剤）、ネビラピン（非ヌクレオシド逆転写阻害剤）、インジナビル硫酸塩（ＨＩＶ−１プロテアーゼ阻害剤）、ダルナビルエタノール付加物（ＨＩＶ−１プロテアーゼ阻害剤）、ダクラスタビル（ＨＣＶ  ＮＳ５Ａ阻害剤）、シクロスポリンＡ（免疫抑制剤）、及び抗ウイルスとして前臨床／臨床アッセイにおいて評価される薬物、例えばテノホビル（ヌクレオシド逆転写阻害剤）の抗ウイルス効果を評価した（図４Ａ及び４Ｂ）。
【０２２９】
上述の薬物はまた、ＥＩＡＶの抗ウイルス薬として試験した。そのために、細胞を、２つの異なる濃度１μＭ又は１０μＭの薬物で１時間、３通りで前処理した。次いで、細胞をＥＩＡＶＷＹＯに感染させた（３  ＭＯＩで２時間）。感染後、新鮮な培地及び薬物に取り換え、細胞を５、１０、１５、及び２０日間にわたってインキュベーションした。ＥＩＡＶＷＹＯ複製を、ＲＴ  ｑＰＣＲによって培養上清中のＥＩＡＶウイルスゲノムを定量化することにより評価した。図４Ａ及び４Ｂは、ＥＩＡＶ複製動態における異なる薬物の効果を示す。驚くべきことに、アデホビルジピボキシルは、単一用量でＥＩＡＶ複製を遮断した。ウイルスは、５日目に３つの複製のうちの１つにおいて処理細胞から低レベルで回収され（１０ウイルス粒子／ｍＬ）、３つの複製のうちの別のものから１５日目に回収されただけであった（１００ウイルス粒子／ｍＬ）。感染し処理された細胞と未処理感染細胞との間で観察される相違は、ｐ＜０．００１で統計的に有意であった。さらに、１０μＭでのテノホビル及びジドブジンはまた、感染後１５日目及び２０日目に、ウイルス複製を１０８から１０５ウイルス粒子／ｍＬへと著しく低減することによって、ＥＩＡＶの複製において有意な効果をもたらした。また、プロテアーゼ阻害剤は、ＥＩＡＶウイルス複製への顕著な効果を示した。感染後１５日目に、１０μＭ濃度のダルナビルは、ウイルス複製を１０８から１０３ウイルス粒子／ｍＬへと著しく減少させ、１０μＭのインジナビルは、ウイルス複製を１０８から１０４ウイルス粒子／ｍＬへと著しく減少させた。
【０２３０】
アデホビルジピボキシルは、ウマ感染性貧血ウイルスに対して顕著な抗ウイルス活性を示した（図４Ａ及び４Ｂ）。
【０２３１】
さらに、ＥＤ細胞上のＥＩＡＶＷＹＯウイルス複製への薬物の効果をより良く評価するために、アデホビルジピボキシルのＩＣ５０を判定した。コンフルエントな細胞単層を、上に記載されるように播種し、ＨＢＳＳで２回洗浄して非接着性細胞を除去し、１５０μＬの感染培地（５％ＦＢＳを含むＤＭＥＭ）でインキュベーションし、アデホビルジピボキシル［１００％ＤＭＳＯ中１０ｍＭのストックから］（Ｓｅｌｌｅｃｋｃｈｅｍ，Ｇｅｒｍａｎｙ）で６０分間前処理した。アデホビルジピボキシル（Ｓｅｌｌｅｃｋｃｈｅｍ，Ｇｅｒｍａｎｙ）での前処理は、感染を進行させた。０．０１〜１０，０００ｎＭの範囲での１１の連続希釈（０．０１、１９．５３、３９．０６、７８．１３０、１５６．２５０、３１２．５、６２５、１２５０、２５００、５０００、及び１００００ｎＭ）を各薬物濃度あたり３通りで実施した。処理を感染の間維持した。ＥＩＡＶＷＹＯウイルス粒子（１．９×１０５ウイルス粒子を含有する１０μＬ）を、９６ウェルプレートの各ウェルに付加し、２時間インキュベーションした。感染後、細胞をＨＢＳＳで２回洗浄して、未結合ウイルスを除去し、各ウェルにおいて新鮮な薬物を含有する新鮮な完全培地に取り換えた。感染後７日目に、試料を、ＲＴ  ｑＰＣＲ技術を使用して、ウイルス粒子の数／細胞培養上清１ｍＬに関してスクリーニングした。定量化のために、ＥＩＡＶプラスミドＤＮＡの標準曲線を使用した。標準曲線を得るために、２通りで、７の１：１０希釈を同時に試験した。試料を３通りで試験した。得られた標準曲線（Ｒ２  ０．９９４、効率９６．５６％）は、ウイルス粒子の定量化を可能にした。
【０２３２】
図４Ｃは、ＥＤ細胞におけるＥＩＡＶＷＹＯウイルス複製へのアデホビルジピボキシルの効果を示す。結果は、４パラメータ関数（可変スロープを呈するログ（薬物）対反応）を使用して、Ｐｒｉｓｍソフトウェアによって分析し、薬物のＩＣ５０が、３．３８３ｎＭであったことを示した（自由度＝２９、Ｒ２＝０．９９１７、Ｈｉｌｌスロープ＝０．４４９２）。
【０２３３】
ウマ皮膚細胞におけるアデホビルジピボキシルＣＣ５０
さらに、ＥＤ細胞におけるアデホビルジピボキシルの細胞毒性について取り組んだ。そのために、ＥＤ細胞（１０５細胞／ｃｍ２）を、９６ウェルプレートにおいて上述のとおり播種した。コンフルエントなＥＤ細胞単層を、ＨＢＳＳで２回洗浄して、非接着性細胞を除去し、アデホビルジピボキシル［１００％ＤＭＳＯ中１０ｍＭのストックから］（Ｓｅｌｌｅｃｋｃｈｅｍ，Ｇｅｒｍａｎｙ）で６日間前処理した。薬物ＣＣ５０を判定するために、４、６、９、１３．５、２０．２５０、３０．３７０、４５．５６０、６８．３４０、１０２．５２０、１５３．７７０、２３０．６６０、及び２０００μΜの１２の異なる濃度を各薬物濃度あたり５通りで実施した。細胞生存率は、ＩＣ５０を分析するために上述のとおりＰｒｅｓｔｏＢｌｕｅ試薬を使用することによって評価し、２４時間インキュベーションした。
【０２３４】
図５Ａは、異なる濃度のアデホビルジピボキシルの存在下における、細胞生存率の用量反応曲線を示す。結果は、４パラメータ関数（可変スロープを呈するログ（薬物）対反応）を使用して、Ｐｒｉｓｍソフトウェアによって分析した。結果は、薬物のＣＣ５０が１４１であったことを示した。８０μＭ（自由度＝５５、Ｒ２＝０．９６０２、Ｈｉｌｌスロープ＝２．４２７）。
【０２３５】
マクロファージ細胞株におけるアデホビルジピボキシルＣＣ５０
ＭａｃＦ細胞（１０５細胞／ｃｍ２）におけるアデホビルジピボキシルの細胞毒性を、９６ウェルプレートにおいて上述のとおり播種した。コンフルエントなＭａｃＦ細胞単層を、ＨＢＳＳで２回洗浄して、非接着性細胞を除去し、アデホビルジピボキシル［１００％ＤＭＳＯ中１０ｍＭのストックから］（Ｓｅｌｌｅｃｋｃｈｅｍ，Ｇｅｒｍａｎｙ）で７日間前処理した。薬物ＣＣ５０を判定するために、４５．５６０、６８．３４０、１０２．５２０、１５３．７７０、２３０．６６０、及び２０００μΜの６つの異なる濃度を各薬物濃度度あたり５通りで実施した。細胞生存率は、ＩＣ５０を分析するために上述のとおりＰｒｅｓｔｏＢｌｕｅ試薬を使用することによって評価し、２４時間インキュベーションした。
【０２３６】
図５Ｂは、異なる濃度のアデホビルジピボキシルの存在下における、細胞生存率の用量反応曲線を示す。結果は、４パラメータ関数（ログ（可変スロープを呈する薬物）対反応）を使用して、Ｐｒｉｓｍソフトウェアによって分析した。結果は、薬物のＣＣ５０が２０７であったことを示した。１０μＭ（自由度＝２５、Ｒ２＝０．９８９５、Ｈｉｌｌスロープ＝１７．０８）。
【０２３７】
実施例５：アデホビルジピボキシルは、ウマヘルペスウイルス−１（ＥＨＶ−１）に対して抗ウイルス活性を有する。
ウマ皮膚細胞における抗ウイルス活性アッセイ
アデホビルジピボキシルの抗ウイルス活性を、上清中のＥＨＶ−１ウイルス粒子の数の低減を測定することによって直接、及び感染培養物中の生存細胞数の上昇を定量化することによって間接的に評価した。
【０２３８】
ウマ皮膚細胞（ＡＴＣＣ  ＣＣＬ５７）（１０５細胞／ｃｍ２）を、感染の２４〜７２時間前に完全培地中、９６ウェルプレートに播種し、９５％〜９９％コンフルエントな単層が得られるまで、３７℃及び５％ＣＯ２の湿ったチャンバ内でインキュベーションした。完全培地は、１０％不活性化胎仔血清（Ｇｉｂｃｏ，Ｔｈｅｒｍｏｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）、１％  Ｇｌｕｔａｍａｘ（Ｇｉｂｃｏ，Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）、及び１％ペニシリン−ストレプトマイシン（Ｇｉｂｃｏ，Ｔｈｅｒｍｏｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を含むＤＭＥＭ培地（Ｇｉｂｃｏ，Ｔｈｅｒｍｏｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）で構成された。コンフルエントな細胞単層を、ＨＢＳＳで２回洗浄して非接着性細胞を除去し、１５０μＬの感染培地（５％ＦＢＳを含むＤＭＥＭ）でインキュベーションし、異なる濃度のアデホビルジピボキシル［１００％ＤＭＳＯ中１００ｍＭのストックから］（Ｓｅｌｌｅｃｋｃｈｅｍ，Ｇｅｒｍａｎｙ）で前処理した。この薬物での前処理は、感染を進行させた。
【０２３９】
ＥＤ細胞を、感染前に３０分間薬物で前処理し、感染の間処理を維持した。
【０２４０】
アデホビルジピボキシルのＩＣ５０を判定するために、５〜２５００ｎＭの範囲の濃度での８又は１０の１：２連続希釈を各薬物濃度あたり５通りで実施した。ＥＤ細胞を、感染前に３０分間薬物で前処理し、感染の間処理を維持した。
【０２４１】
細胞を、ＥＨＶ−１に１ＭＯＩで２時間感染させた。感染性ＥＨＶ−１ウイルス粒子を、ＡＴＣＣ（ＶＲ−２２４８）から購入したＥＨＶ−１分子クローンでＥＤ細胞において生成した。感染後、細胞をＨＢＳＳで２回洗浄して、未結合ウイルスを除去し、各ウェルにおいて新鮮な完全培地及び新鮮な薬物に取り換えた。処理を、新鮮な薬物を付加せずに６日間維持した。
【０２４２】
ＥＨＶ−１ウイルス粒子の定量化を、感染後６６時間又は７２時間（３日目）にアッセイした。ウェルを、ＥＨＶ−１特異的定量リアルタイムＰＣＲアッセイ（ＣＦＸ９６  Ｂｉｏｒａｄ装置）を使用することにより、ウイルス粒子／細胞培養上清１ｍＬの数に関してスクリーニングした。ＥＨＶ−１合成ＤＮＡの標準曲線を使用した。標準曲線を得るために、２通りで、合成ＤＮＡの７の１：１０希釈を同時に試験した。試料を３通りで試験した。得られた標準曲線（Ｒ２  ０．９９５、効率９１．７％）は、細胞培養培地中で生成されたＥＨＶ−１ウイルス粒子の定量化を可能にした。結果は、４パラメータ関数（可変スロープを呈するログ（薬物）対反応）を使用して、Ｐｒｉｓｍソフトウェアによって分析した。感染後３日目にｑＰＣＲによって測定して、３つの独立した実験において検出されたＩＣ５０は、４．４１５ｎＭであり、標準偏差は２．７２７であった。図６Ａは、３日目にｑＰＣＲによって判定されたＩＣ５０値の代表的な実験を示す。
【０２４３】
感染後６日後に、レアズリンを基礎にした細胞生存率アッセイ（ＰｒｅｓｔｏＢｌｕｅ、Ｔｈｅｒｍｏｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を使用して、ｑＰＣＲ定量化に関して上に示されるものと同じ条件において増加した細胞数を評価した。細胞生存率アッセイの場合、異なる濃度のアデホビルジピボキシルで処理されたＥＨＶ−１感染細胞の吸光度（５７０ｎｍ）を、非感染及び／又は未処理ＥＨＶ−１感染細胞の吸光度と比較した。１５μＬのＰｒｅｓｔｏｂｌｕｅ試薬を、アッセイウェルに直接付加し、吸光度を、Ｐｒｅｓｔｏｂｌｕｅ試薬を用いてインキュベーションの２４時間後に５７０ｎｍで測定した。ベースライン（細胞無しで２４時間インキュベーションしたＰｒｅｓｔｏｂｌｕｅ試薬の吸光度値）を除去することによって、全ての吸光度値を補正した。結果は、４パラメータ関数（可変スロープを呈するログ（薬物）対反応）を使用して、Ｐｒｉｓｍソフトウェアによって分析した。図６Ｂは、感染後６日目に判定された用量曲線応答及びＩＣ５０値の代表的な実験を示す。３つの独立した実験において得られた平均ＩＣ５０値は、１２２．９ｎＭであり、標準偏差は１９．４１４であった。
【０２４４】
アデホビルジピボキシルは、ＥＨＶ−１に関して１１６２．３の優れた治療指数（ＣＣ５０／ＩＣ５０）を示した。
【０２４５】
ウママクロファージ様細胞株における抗ウイルス活性アッセイ
アデホビルジピボキシルの抗ウイルス活性もまた、マクロファージ様細胞株において評価した。ＭａｃＦ細胞を、感染の２４〜７２時間前に完全培地中、９６ウェルプレートに１０５細胞／ｃｍ２の密度で播種し、９５％〜９９％コンフルエントな単層が得られるまで、３７℃及び５％ＣＯ２の湿ったチャンバ内でインキュベーションした。完全培地は、１０％の不活性化胎仔血清（Ｇｉｂｃｏ，Ｔｈｅｒｍｏｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）、２％のＧｌｕｔａｍａｘ（Ｇｉｂｃｏ，Ｔｈｅｒｍｏｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）、及び１％ペニシリン−ストレプトマイシン（Ｇｉｂｃｏ，Ｔｈｅｒｍｏｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を含むＤＭＥＭ培地（Ｇｉｂｃｏ，Ｔｈｅｒｍｏｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）で構成された。コンフルエントな細胞単層を、ＨＢＳＳで２回洗浄して非接着性細胞を除去し、１５０μＬの感染培地（５％ＦＢＳを含むＤＭＥＭ）でインキュベーションし、異なる濃度のアデホビルジピボキシル［１００％ＤＭＳＯ中１００ｍＭのストックから］（Ｓｅｌｌｅｃｋｃｈｅｍ，Ｇｅｒｍａｎｙ）で前処理した。この薬物での前処理は、感染を進行させた。
【０２４６】
ＭａｃＦ細胞を、感染前に３０分間薬物で前処理し、感染の間処理を維持した。
【０２４７】
アデホビルジピボキシルのＩＣ５０を判定するために、１３〜５００ｎＭの範囲の濃度での８の１：２連続希釈を各薬物濃度あたり５通りで実施した。ＭａｃＦ細胞を、感染前に３０分間薬物で前処理し、感染の間処理を維持した。
【０２４８】
感染研究、ウイルス粒子定量化、及び細胞生存率アッセイを、ＥＤ細胞における抗ウイルスアッセイに関して上に記載されるとおり実施した。
【０２４９】
ＭａｃＦにおいて、感染後３日目にｑＰＣＲによって測定して、３つの独立した実験において得られたＩＣ５０値は、１４２．２７ｎＭであり、標準偏差は５６．２７８であった。図７Ａは、ＭａｃＦ細胞において３日目にｑＰＣＲによって判定されたＩＣ５０値の代表的実験を示す。
【０２５０】
感染後６日後に、レアズリンを基礎にした細胞生存率アッセイ（ＰｒｅｓｔｏＢｌｕｅ、Ｔｈｅｒｍｏｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を使用して、上に示されるものと同じ条件において増加した細胞数を評価した。図７Ｂは、細胞生存率によって感染後６日目に判定された用量曲線応答及びＩＣ５０値の代表的な実験を示す。２つの独立した実験において判定された平均ＩＣ５０値は、１７１．８５ｎＭであり、標準偏差は２８．６３であった。
【０２５１】
実施例６：テノホビルジソプロキシルフマレートは、ＥＨＶ−１に対して抗ウイルス活性を有する。
ウマ皮膚細胞における抗ウイルス活性アッセイ
テノホビルジソプロキシルフマレートの抗ウイルス活性を、上清中のＥＨＶ−１ウイルス粒子の数の低減を測定することによって、及び感染培養物中の生存細胞数の上昇を定量化することによって評価した。
【０２５２】
ウマ皮膚細胞（ＡＴＣＣ  ＣＣＬ５７）（１０５細胞／ｃｍ２）を、感染の２４〜７２時間前に完全培地中、９６ウェルプレートに播種し、９５％〜９９％コンフルエントな単層が得られるまで、３７℃及び５％ＣＯ２の湿ったチャンバ内でインキュベーションした。完全培地は、１０％の不活性化胎仔血清（Ｇｉｂｃｏ，Ｔｈｅｒｍｏｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）、１％のＧｌｕｔａｍａｘ（Ｇｉｂｃｏ，Ｔｈｅｒｍｏｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）、及び１％ペニシリン−ストレプトマイシン（Ｇｉｂｃｏ，Ｔｈｅｒｍｏｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を含むＤＭＥＭ培地（Ｇｉｂｃｏ，Ｔｈｅｒｍｏｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）で構成された。コンフルエントな細胞単層を、ＨＢＳＳで２回洗浄して非接着性細胞を除去し、１５０μＬの感染培地（５％ＦＢＳを含むＤＭＥＭ）でインキュベーションし、異なる濃度のテノホビルジソプロキシルフマレート［１００％ＤＭＳＯ中１００ｍＭのストックから］（Ｓｅｌｌｅｃｋｃｈｅｍ，Ｇｅｒｍａｎｙ）で前処理した。この薬物での前処理は、感染を進行させた。
【０２５３】
ＥＤ細胞を、感染前に３０分間薬物で前処理し、感染の間処理を維持した。
【０２５４】
テノホビルジソプロキシルフマレートのＩＣ５０を判定するために、１２０ｎＭ〜６０μＭの範囲での１０の１：２連続希釈を各薬物濃度あたり５通りで実施した。ＥＤ細胞を、感染前に３０分間薬物で前処理し、感染の間処理を維持した。
【０２５５】
細胞を、ＥＨＶ−１に１ＭＯＩで２時間感染させた。感染性ＥＨＶ−１ウイルス粒子を、ＡＴＣＣ（ＶＲ−２２４８）から購入したＥＨＶ−１分子クローンでＥＤ細胞において生成した。感染後、細胞をＨＢＳＳで２回洗浄して、未結合ウイルスを除去し、各ウェルにおいて新鮮な完全培地及び新鮮な薬物に取り換えた。処理を、新鮮な薬物を付加せずに６日間維持した。
【０２５６】
ＥＨＶ−１ウイルス粒子の定量化を、感染後６６時間又は７２時間（３日目）にアッセイした。ウェルを、ＥＨＶ−１特異的定量リアルタイムＰＣＲアッセイ（ＣＦＸ９６  Ｂｉｏｒａｄ装置）を使用することにより、ウイルス粒子／細胞培養上清１ｍＬの数に関して、実施例５において上に記載されるようにスクリーニングした。感染後３日目にｑＰＣＲによって、４つの独立した実験において得られた平均ＩＣ５０値は、７．４３９μＭであり、標準偏差は７．０１５であった。図８Ａは、ＥＤ細胞において３日目にｑＰＣＲによって判定されたＩＣ５０値の代表的な実験を示す。感染後６日後に、レアズリンを基礎にした細胞生存率アッセイ（ＰｒｅｓｔｏＢｌｕｅ、Ｔｈｅｒｍｏｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を使用して、実施例５において上に示されるものと同じ条件において増加した細胞数を評価した。図８Ｂは、細胞生存率によって感染後６日目に判定された用量曲線応答及びＩＣ５０値の代表的な実験を示す。４つの独立した実験において判定された平均ＩＣ５０値は、１３．９５μＭであり、標準偏差は１２．６９８であった。
【０２５７】
ＥＤ細胞におけるテノホビルジソプロキシルフマレートＣＣ５０
さらに、ＥＤ細胞におけるテノホビルジソプロキシルフマレートの細胞毒性について取り組んだ。そのために、ＥＤ細胞（１０５細胞／ｃｍ２）を、９６ウェルプレートにおいて上述のとおり播種した。コンフルエントなＥＤ細胞単層を、ＨＢＳＳで２回洗浄して、非接着性細胞を除去し、テノホビルジソプロキシルフマレート［１００％ＤＭＳＯ中１００ｍＭのストックから］（Ｓｅｌｌｅｃｋｃｈｅｍ，Ｇｅｒｍａｎｙ）で３日間前処理した。薬物ＣＣ５０を判定するために、２５．３９〜３５０μＭの１０の異なる１：１．３連続希釈を各薬物濃度あたり５通りで実施した。細胞生存率は、ＩＣ５０を分析するために上述のとおりＰｒｅｓｔｏＢｌｕｅ試薬を使用することによって評価し、２４時間インキュベーションした。
【０２５８】
図９は、異なる濃度のテノホビルジソプロキシルフマレートの存在下における、細胞生存率の用量反応曲線を示す。結果は、４パラメータ関数（可変スロープを呈するログ（薬物）対反応）を使用して、Ｐｒｉｓｍソフトウェアによって分析した。２つの独立した実験からの平均結果は、薬物のＣＣ５０が、１１６．６５μＭであり、標準偏差は１０．５３５であった。
【０２５９】
ＥＨＶ−１の場合、テノホビルジソプロキシルフマレートに関して検出された治療指数（ＣＣ５０／ＩＣ５０）は、８．３３４であった。テノホビルジソプロキシルフマレートの治療指数は、アデホビルジピボキシルに関して得られた１１６２．３の治療指数に対して著しく低かった。
【０２６０】
ウママクロファージ様細胞株における抗ウイルス活性アッセイ
テノホビルジソプロキシルフマレートの抗ウイルス活性もまた、マクロファージ様細胞株において評価した。ＭａｃＦ細胞を、感染の２４〜７２時間前に完全培地中、９６ウェルプレートに１０５細胞／ｃｍ２の密度で播種し、９５％〜９９％コンフルエントな単層が得られるまで、３７℃及び５％ＣＯ２の湿ったチャンバ内でインキュベーションした。完全培地は、１０％の不活性化胎仔血清（Ｇｉｂｃｏ，Ｔｈｅｒｍｏｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）、２％のＧｌｕｔａｍａｘ（Ｇｉｂｃｏ，Ｔｈｅｒｍｏｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）、及び１％ペニシリン−ストレプトマイシン（Ｇｉｂｃｏ，Ｔｈｅｒｍｏｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を含むＤＭＥＭ培地（Ｇｉｂｃｏ，Ｔｈｅｒｍｏｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）で構成された。コンフルエントな細胞単層を、ＨＢＳＳで２回洗浄して非接着性細胞を除去し、１５０μＬの感染培地（５％ＦＢＳを含むＤＭＥＭ）でインキュベーションし、異なる濃度のテノホビルジソプロキシルフマレート［１００％ＤＭＳＯ中１００ｍＭのストックから］（Ｓｅｌｌｅｃｋｃｈｅｍ，Ｇｅｒｍａｎｙ）で前処理した。この薬物での前処理は、感染を進行させた。
【０２６１】
ＭａｃＦ細胞を、感染前に３０分間薬物で前処理し、感染の間処理を維持した。
【０２６２】
テノホビルジソプロキシルフマレートのＩＣ５０を判定するために、１２０ｎＭ〜６０μＭの範囲で１０の１：２連続希釈を、ＥＤ細胞における抗ウイルスアッセイに関して上に記載されるように、各薬物濃度あたり５通りで実施した。
【０２６３】
ＥＨＶ−１細胞感染、ウイルス粒子生成、及び細胞生存率アッセイを、実施例５に記載されるようにアッセイした。
【０２６４】
感染後３日目にｑＰＣＲによって２つの独立した実験において得られた平均ＩＣ５０値は、１．１３μＭであり、標準偏差は１．００であった。図１０Ａは、ＭａｃＦ細胞において３日目にｑＰＣＲによって判定された代表的な用量応答曲線を示す。
【０２６５】
感染後６日後に、レアズリンを基礎にした細胞生存率アッセイ（ＰｒｅｓｔｏＢｌｕｅ、Ｔｈｅｒｍｏｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を使用して、実施例５において上に示されるものと同じ条件において増加した細胞数を評価した。図１０Ｂは、細胞生存率によって感染後６日目に判定された用量曲線応答及びＩＣ５０値の代表的な実験を示す。２つの独立した実験において判定された平均ＩＣ５０値は、２２．７１μＭであり、標準偏差は９．６３であった。
【０２６６】
本明細書において引用される全ての文書は、参照によりそれら全体が本明細書に組み込まれる。
【０２６７】
別途定義されない限り、本発明を開示する際に使用される全ての用語は、技術的及び科学的用語を含めて、本発明が属する技術分野における当業者によって一般に理解されるような意味を有する。さらなるガイダンスによって、説明において使用される用語に関する定義は、本発明の教示をより良く理解するために含まれる。本明細書において使用される用語又は定義は、単に本発明の理解を助けるために提供される。
【０２６８】
本明細書全体での「一実施形態」又は「実施形態」への言及は、実施形態との関連で記載される特定の機構、構造、又は特徴が、本発明の少なくとも１つの実施形態に含まれることを意味する。故に、本明細書全体の種々の箇所における「一実施形態において」又は「実施形態において」という表現の出現は、必ずしも全て同じ実施形態について言及しているとは限らないが、そうである場合もある。さらに、特定の機構、構造、又は特徴は、１つ以上の実施形態において、本開示から当業者に明らかであるように、任意の好適な様式で組み合わされてもよい。さらに、本明細書に記載されるいくつかの実施形態は、他の実施形態において含まれる他の機構ではなくいくつかの機構を含むが、異なる実施形態の機構の組み合わせは、本発明の範囲内であることを意味し、当業者によって理解されるように、異なる実施形態を形成する。例えば、以下の特許請求の範囲において、請求される実施形態のうちのいずれかが、任意の組み合わせで使用され得る。
【図１】
2018522836.tif 000014
【図２】
2018522836.tif 000015
【図３】
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【図４Ａ】
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【図４Ｂ】
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【図４Ｃ】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
2018522836.tif 000022
【図８】
2018522836.tif 000023
【図９】
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【図１０】
2018522836.tif 000025
【手続補正書】
【提出日】平成30年1月29日(2018.1.29)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
動物におけるウマウイルス感染及び／又はウマウイルスによる感染の治療の方法における使用のための、少なくとも１つの抗ウイルス化合物を含む組成物であって、好ましくは、前記抗ウイルス化合物が、アデホビル、又はそのプロドラッグ、同等物、若しくは誘導体から選択され、かつ／あるいは前記抗ウイルス化合物が、テノホビル、又はそのプロドラッグ、同等物、若しくは誘導体から選択される、組成物。
【請求項２】
前記抗ウイルス化合物が、アデホビル、又はそのプロドラッグ、同等物、若しくは誘導体、及び／あるいはテノホビル、又はそのプロドラッグ、同等物、若しくは誘導体から選択される、請求項１に記載の使用のための組成物。
【請求項３】
前記抗ウイルス化合物が、式（Ｉ）の化合物：
2018522836.tif 000026
（式中、
Ｘは、アデニン、グアニン、シトシン、チミン、ウラシル、２，６−ジアミノプリン、又はヒポキサンチンであり、
Ｒ１及びＲ２は、同じ又は異なり、ＯＲ４、ＮＨ２、ＮＨＲ４、ＮＨＲ５、ＮＨＲ４Ｒ５、又はＮ（Ｒ５）２からなる群から各々独立して選択され、一部の場合において、Ｒ１及びＲ２は、互いに連結して環状基を形成し、他の場合において、Ｒ１又はＲ２は、Ｒ３に連結して環状基を形成し、
Ｒ３は、非置換であり得るか、又はヒドロキシ、酸素、窒素、及びハロゲンからなる群から独立して選択される置換基によって置換され得る、Ｃ１−Ｃ２０アルキルを表し、Ｒ３がＣＨ（ＣＨ２ＯＲ６）ＣＨ２であるとき、Ｒ１及びＲ２は、ＯＨを各々独立して表し、Ｒ６は、加水分解性エステル基であり、
Ｒ４は、水素又は生理学的加水分解性基を表し、Ｒ４はまた、Ｒ５’であってもよく、
Ｒ５は、ヒドロキシル、酸素、窒素、及びハロゲンからなる群から独立して選択される置換基によって置換され得るか、又は非置換であり得る、Ｃ１−Ｃ２０アルキル、アルコキシ、アミノ、アリール、又はアリール−アルキルを表し、
Ｒ５’は、ヒドロキシル、酸素、窒素、及びハロゲンからなる群から独立して選択される置換基によって置換され得るか、又は非置換であり得る、Ｃ４−Ｃ２０アルキル、アリール、又はアリール−アルキルを表す）、
又はその薬学的若しくは獣医学的に許容可能な塩である、請求項１又は請求項２に記載の使用のための組成物。
【請求項４】
前記抗ウイルス化合物が、アデホビル及び／又はテノホビルから選択される、請求項１〜３のいずれか１項に記載の使用のための組成物。
【請求項５】
前記プロドラッグ、誘導体、若しくは同等物が、アデホビルジピボキシル、テノホビルジソプロキシル、テノホビルジスプロキシル（ｄｉｓｐｒｏｘｉｌ）フマレート、及び／又はテノホビルアラフェナミドから選択される、請求項２〜４のいずれか１項に記載の使用のための組成物。
【請求項６】
前記ウマウイルス感染が、ウマレンチウイルス感染であり、かつ／又は前記ウマウイルスが、ウマレンチウイルスである、請求項１〜５のいずれか１項に記載の使用のための組成物。
【請求項７】
前記ウマレンチウイルス感染が、ウマ感染性貧血であり、かつ／又は前記ウマレンチウイルスが、ウマ感染性貧血ウイルス（ＥＩＡＶ）である、請求項６に記載の使用のための組成物。
【請求項８】
前記ウマウイルス感染が、ウマヘルペスウイルス感染であり、かつ／又は前記ウイルスが、ウマヘルペスウイルスである、請求項１〜５のいずれか１項に記載の使用のための組成物。
【請求項９】
前記ウマヘルペスウイルスが、ＥＨＶ−１、ＥＨＶ−２、ＥＨＶ−３、ＥＨＶ−４、及びＥＨＶ−５からなる群から選択される、請求項８に記載の使用のための組成物。
【請求項１０】
前記ウマウイルス感染が、新型ウマウイルス感染であり、かつ／又は前記ウマウイルスが、新型ウマウイルス（ＮＥＶ）である、請求項１〜５のいずれか１項に記載の使用のための組成物。
【請求項１１】
前記動物が、ウマ科動物（ｅｑｕｉｎｅ）である、請求項１〜１０のいずれか１項に記載の使用のための組成物。
【請求項１２】
前記動物が、ウマ（ｈｏｒｓｅ）である、請求項１〜１１のいずれか１項に記載の使用のための組成物。
【請求項１３】
前記動物が、ＮＥＶ血清反応陽性ウマである、請求項１〜１２のいずれか１項に記載の使用のための組成物。
【請求項１４】
前記生理学的加水分解性基が、ＣＨ２Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ５）２、ＣＨ２Ｃ（Ｏ）ＯＲ５、ＣＨ２ＯＣ（Ｏ）Ｒ５、ＣＨ（Ｒ５）ＯＣ（Ｏ）Ｒ５（Ｒ、Ｓ、若しくはＲＳ立体化学）、ＣＨ（Ｒ５）Ｃ（Ｏ）Ｒ５（Ｒ、Ｓ、若しくはＲＳ立体化学）、ＣＨ２Ｃ（Ｒ５）２ＣＨ２ＯＨ、又はＣＨ２ＯＲ５からなる群から選択される、請求項３〜１３のいずれか１項に記載の使用のための組成物。
【請求項１５】
Ｒ５が、ｔｅｒｔ−ブチル及びＯＣＨ（ＣＨ３）２から選択される、請求項３〜１４のいずれか１項に記載の使用のための組成物。
【請求項１６】
前記化合物が、立体異性的に純粋である、請求項３〜１５のいずれか１項に記載の使用のための組成物。
【請求項１７】
前記組成物が、少なくとも１週間に１回、好ましくは２４〜１２０時間毎、好ましくは４８〜９６時間毎、好ましくは７２時間毎に、前記動物に投与される、請求項１〜１６のいずれか１項に記載の使用のための組成物。
【請求項１８】
１〜６週間に１０〜１０００ｍｇ／ｋｇの総用量を提供するための請求項１〜１７のいずれか１項に記載の使用のための組成物。
【請求項１９】
前記組成物が、経口、静脈内、筋肉内、皮下、経鼻、又は肺内からなる群から選択される経路を介して投与される、請求項１〜１８のいずれか１項に記載の使用のための組成物。
【請求項２０】
前記治療が、ウマウイルス感染の１つ以上の臨床症状を緩和することを含む、請求項１〜１９のいずれか１項に記載の使用のための組成物。
【請求項２１】
前記臨床症状が、発熱、血小板減少症、食欲不振、体重減少、衰弱、拒食症、鬱、不快感、無気力、嗜眠、倦怠感、脱力感、弱脈、不整脈、同時感染、血小板数の低下、貧血、浮腫、点状出血、出血、頻呼吸（ｔａｃｈｙｐｎｅｉａ）、鼻出血（鼻血）、下痢、血便、脾腫、並びに脚、腹部、胸部、及び／又は生殖器の腫脹からなる群から選択される、請求項２０に記載の使用のための組成物。
【請求項２２】
抗ウマウイルス医薬としての使用のための請求項３〜２１のいずれか１項に記載の化合物、又はそのプロドラッグ、同等物、若しくは誘導体を含む組成物。
【請求項２３】
動物におけるウマウイルス感染及び／又はウマウイルスによる感染の治療のための医薬の製造のための、少なくとも１つの抗ウイルス化合物を含む組成物の使用。
【請求項２４】
前記抗ウイルス化合物が、アデホビル、又はそのプロドラッグ、同等物、若しくは誘導体、及び／あるいはテノホビル、又はそのプロドラッグ、同等物、若しくは誘導体から選択される、請求項２３に記載の組成物の使用。
【請求項２５】
前記抗ウイルス化合物が、式（Ｉ）の化合物、又はその薬学的に若しくは獣医学的に許容可能な塩である、請求項２３又は２４に記載の組成物の使用。
【請求項２６】
診断方法であって、
（ａ）動物から試料を得ること、
（ｂ）少なくとも１つの抗ウイルス化合物を含む組成物を、前記試料と混合すること、
（ｃ）前記試料におけるウマウイルス、及び／又はウマウイルス粒子、及び／又はウマウイルスペプチド、及び／又はウマウイルス核酸の存在又は不在を判定すること、を含む方法。
【請求項２７】
ウマウイルスに関してスクリーニングする方法であって、
（ａ）動物から試料を得ること、
（ｂ）抗ウイルス化合物を含む組成物を、前記試料と混合すること、
（ｃ）前記試料におけるウマウイルス、及び／又はウマウイルス粒子、及び／又はウマウイルスペプチド、及び／又はウマウイルス核酸の存在又は不在を判定すること、を含む方法。
【請求項２８】
前記ウマウイルスが、抗ウイルス医薬に対して耐性であり、かつ／又は前記ウマウイルスが、前記抗ウイルス化合物に対して耐性であり、かつ／又は前記ウマウイルスが、請求項３〜２１のいずれか１項に記載の化合物に対して耐性である、請求項２６又は請求項２７に記載の方法。
【請求項２９】
請求項２６又は請求項２７に記載の方法を使用して、ウマ科哺乳動物におけるウイルス感染を特定するための方法。
【請求項３０】
請求項２６又は請求項２７に記載の方法を使用した、動物におけるウイルス感染の特定と、任意に、他の動物からのウマウイルス感染した動物の隔離とを含む、動物群におけるウイルス感染を制御するための方法。
【請求項３１】
請求項１〜２１のいずれか１項に記載の使用のための少なくとも１つの抗ウイルス化合物と、薬学的に許容可能な担体、ビヒクル、希釈剤、又は賦形剤とを含む薬学的組成物。
【請求項３２】
請求項１〜２１のいずれか１項に記載の使用のための少なくとも１つの抗ウイルス化合物と、任意に、前記動物への投与のための説明書とを含むキット。
【請求項３３】
ウマウイルスにおける逆転写酵素活性を調節するための、少なくとも１つの抗ウイルス化合物を含む組成物の使用。
【請求項３４】
インビトロでのウマウイルスの複製を阻害するための、少なくとも１つの抗ウイルス化合物を含む組成物の使用。
【請求項３５】
インビトロでのウマウイルスに感染した動物細胞の生存を促進するための、少なくとも１つの抗ウイルス化合物を含む組成物の使用。
【請求項３６】
前記動物細胞が、ウマ細胞、例えば、ウマ皮膚細胞又はウママクロファージである、請求項３５に記載の使用。
【請求項３７】
動物におけるウマウイルス感染及び／又はウマウイルスによる感染の治療の方法における使用のための組成物であって、前記組成物が、アデホビル、又はそのプロドラッグ、同等物、若しくは誘導体を含み、かつ／あるいは前記組成物が、テノホビル、又はそのプロドラッグ、同等物、若しくは誘導体を含む、組成物。
【請求項３８】
動物におけるウマウイルス感染及び／又はウマウイルスによる感染の治療の方法における使用のための組成物であって、前記組成物が、アデホビル及び／又はテノホビルを含み、前記ウマウイルス感染が、ＮＥＶ又はＥＩＡＶによって引き起こされる、組成物。
【請求項３９】
動物におけるウマウイルス感染及び／又はウマウイルスによる感染の治療の方法における使用のための組成物であって、前記組成物が、アデホビル及び／又はテノホビルを含む、組成物。
【国際調査報告】
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