(57)【要約】本出願は、ＡＦＰペプチドおよびＭＨＣクラスＩタンパク質を含む複合体に特異的に結合する抗体部分を含む構築物を提供する。これらの構築物を作製および使用する方法もまた提供される。本発明は、例えば、アルファ−フェトプロテイン（ＡＦＰ）ペプチドおよび主要組織適合（ＭＨＣ）クラスＩタンパク質を含む複合体（ＡＦＰ／ＭＨＣクラスＩ複合体またはＡＭＣ）に特異的に結合する抗体部分を含む、単離された抗ＡＭＣ構築物を提供する。【選択図】図１６Ｂ
2018512145.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
アルファ−フェトプロテイン（ＡＦＰ）ペプチドおよび主要組織適合（ＭＨＣ）クラスＩタンパク質を含む複合体（ＡＦＰ／ＭＨＣクラスＩ複合体またはＡＭＣ）に特異的に結合する抗体部分を含む、単離された抗ＡＭＣ構築物。
【請求項２】
前記ＭＨＣクラスＩタンパク質が、ＨＬＡ−Ａ０２対立遺伝子のＨＬＡ−Ａ＊０２：０１サブタイプである、請求項１に記載の単離された抗ＡＭＣ構築物。
【請求項３】
前記ＡＦＰペプチドが、配列番号３〜１３および１６からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する、請求項１または２に記載の単離された抗ＡＭＣ構築物。
【請求項４】
前記ＡＦＰペプチドが、ＦＭＮＫＦＩＹＥＩ（配列番号４）のアミノ酸配列を有する、請求項３に記載の単離された抗ＡＭＣ構築物。
【請求項５】
前記抗体部分が、全長抗体、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、（Ｆａｂ’）２、Ｆｖまたは単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）である、請求項１から４のいずれか一項に記載の単離された抗ＡＭＣ構築物。
【請求項６】
約０．１ｐＭ〜約５００ｎＭのＫｄで前記ＡＦＰ／ＭＨＣクラスＩ複合体に結合する、請求項１から５のいずれか一項に記載の単離された抗ＡＭＣ構築物。
【請求項７】
前記抗体部分が、
ｉ）Ｇ−Ｆ／Ｙ−Ｓ／Ｔ−Ｆ−Ｄ／Ｓ／Ｔ−Ｄ／Ｎ／Ｓ−Ｙ／Ａ−Ａ／Ｇ／Ｗ（配列番号８７）のアミノ酸配列を含む重鎖相補性決定領域（ＨＣ−ＣＤＲ）１、または最大で約３アミノ酸の置換を含むそのバリアント、Ｉ／Ｓ−Ｋ／Ｓ−Ｘ−Ｈ／Ｙ−Ｘ−Ｇ−Ｘ−Ｔ（配列番号８８）のアミノ酸配列を含むＨＣ−ＣＤＲ２、または最大で約３アミノ酸の置換を含むそのバリアント、およびＡ／Ｇ−Ｘ−Ｗ／Ｙ−Ｙ−Ｘ−Ｘ−Ｘ−Ｆ／Ｙ−Ｄ（配列番号８９）のアミノ酸配列を含むＨＣ−ＣＤＲ３、または最大で約３アミノ酸の置換を含むそのバリアントを含む重鎖可変ドメイン；ならびに
ｉｉ）Ｓ／Ｔ−Ｇ／Ｓ−Ｄ／Ｎ−Ｉ／Ｖ−Ａ／Ｇ−Ａ／Ｓ／Ｖ−Ｘ−Ｈ／Ｙ（配列番号１２０）のアミノ酸配列を含む軽鎖相補性決定領域（ＬＣ−ＣＤＲ）１、または最大で約３アミノ酸の置換を含むそのバリアント、およびＱ−Ｓ／Ｔ−Ｙ／Ｗ−Ｄ／Ｔ−Ｓ／Ｔ−Ａ／Ｓ（配列番号１２１）のアミノ酸配列を含むＬＣ−ＣＤＲ３、または最大で３アミノ酸の置換を含むそのバリアントを含む軽鎖可変ドメイン
を含み、Ｘは任意のアミノ酸であり得る、請求項１から６のいずれか一項に記載の単離された抗ＡＭＣ構築物。
【請求項８】
前記抗体部分が、
ｉ）配列番号５７〜６６のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＨＣ−ＣＤＲ１、または最大で約５アミノ酸の置換を含むそのバリアント、配列番号６７〜７６のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＨＣ−ＣＤＲ２、または最大で約５アミノ酸の置換を含むそのバリアント、および配列番号７７〜８６のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＨＣ−ＣＤＲ３；または最大で約５アミノ酸の置換を含むそのバリアントを含む重鎖可変ドメイン；ならびに
ｉｉ）配列番号９０〜９９のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＬＣ−ＣＤＲ１、または最大で約５アミノ酸の置換を含むそのバリアント、配列番号１００〜１０９のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＬＣ−ＣＤＲ２、または最大で約３アミノ酸の置換を含むそのバリアント、および配列番号１１０〜１１９のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＬＣ−ＣＤＲ３；または最大で約５アミノ酸の置換を含むそのバリアントを含む軽鎖可変ドメイン
を含む、請求項１から６のいずれか一項に記載の単離された抗ＡＭＣ構築物。
【請求項９】
前記抗体部分が、ａ）配列番号１７〜２６のいずれか１つのアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン、または配列番号１７〜２６のいずれか１つに対して少なくとも約９５％の配列同一性を有するそのバリアント；およびｂ）配列番号２７〜３６のいずれか１つのアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン、または配列番号２７〜３６のいずれか１つに対して少なくとも約９５％の配列同一性を有するそのバリアントを含む、請求項８に記載の単離された抗ＡＭＣ構築物。
【請求項１０】
多特異的である、請求項１から９のいずれか一項に記載の単離された抗ＡＭＣ構築物。
【請求項１１】
タンデムｓｃＦｖ、ダイアボディ（Ｄｂ）、単鎖ダイアボディ（ｓｃＤｂ）、二重親和性再標的化（ＤＡＲＴ）抗体、二重可変ドメイン（ＤＶＤ）抗体、ノブ−イントゥ−ホール（ＫｉＨ）抗体、ドックアンドロック（ＤＮＬ）抗体、化学架橋抗体、ヘテロマルチマー抗体またはヘテロコンジュゲート抗体である、請求項１０に記載の単離された抗ＡＭＣ構築物。
【請求項１２】
ペプチドリンカーによって連結された２つのｓｃＦｖを含むタンデムｓｃＦｖである、請求項１１に記載の単離された抗ＡＭＣ構築物。
【請求項１３】
第２の抗原に特異的に結合する第２の抗体部分をさらに含む、請求項１０〜１２のいずれか一項に記載の単離された抗ＡＭＣ構築物。
【請求項１４】
前記第２の抗原が、ＣＤ３γ、ＣＤ３δ、ＣＤ３ε、ＣＤ３ζ、ＣＤ２８、ＯＸ４０、ＧＩＴＲ、ＣＤ１３７、ＣＤ２７、ＣＤ４０ＬおよびＨＶＥＭからなる群から選択される、請求項１３に記載の単離された抗ＡＭＣ構築物。
【請求項１５】
前記第２の抗原がＣＤ３εであり、前記単離された抗ＡＭＣ構築物が、前記ＡＦＰ／ＭＨＣクラスＩ複合体に特異的なＮ末端ｓｃＦｖおよびＣＤ３εに特異的なＣ末端ｓｃＦｖを含むタンデムｓｃＦｖである、請求項１３に記載の単離された抗ＡＭＣ構築物。
【請求項１６】
前記抗体部分を含む細胞外ドメイン、膜貫通ドメイン、ならびにＣＤ３ζ細胞内シグナル伝達配列およびＣＤ２８細胞内シグナル伝達配列を含む細胞内シグナル伝達ドメインを含むキメラ抗原受容体である、請求項１から９のいずれか一項に記載の単離された抗ＡＭＣ構築物。
【請求項１７】
前記単離された抗ＡＭＣ構築物が、前記抗体部分およびエフェクター分子を含むイムノコンジュゲートであり、該エフェクター分子が、薬物、毒素、放射性同位体、タンパク質、ペプチドおよび核酸からなる群から選択される治療剤である、請求項１から９のいずれか一項に記載の単離された抗ＡＭＣ構築物。
【請求項１８】
前記抗体部分および標識を含むイムノコンジュゲートである、請求項１から９のいずれか一項に記載の単離された抗ＡＭＣ構築物。
【請求項１９】
請求項１から１７のいずれか一項に記載の単離された抗ＡＭＣ構築物を含む医薬組成物。
【請求項２０】
請求項１から１８のいずれか一項に記載の単離された抗ＡＭＣ構築物を発現する宿主細胞。
【請求項２１】
請求項１から１８のいずれか一項に記載の単離された抗ＡＭＣ構築物のポリペプチド成分をコードする核酸。
【請求項２２】
請求項１６に記載の単離された抗ＡＭＣ構築物を発現するエフェクター細胞。
【請求項２３】
Ｔ細胞である、請求項２２に記載のエフェクター細胞。
【請求項２４】
ＡＦＰペプチドおよびＭＨＣクラスＩタンパク質を含む複合体をその表面上に提示する細胞を検出する方法であって、該細胞を、請求項１８に記載の単離された抗ＡＭＣ構築物と接触させるステップ、および該細胞上の前記標識の存在を検出するステップを含む方法。
【請求項２５】
ＡＦＰ陽性疾患を有する個体を処置する方法であって、該個体に、
ａ）有効量の請求項１９に記載の医薬組成物、または
ｂ）有効量の請求項２２もしくは２３に記載のエフェクター細胞
を投与するステップを含む方法。
【請求項２６】
前記投与が、静脈内経路または腫瘍内経路を介した投与である、請求項２５に記載の方法。
【請求項２７】
前記投与が、第１の疾患部位に対して遠位の注射部位への投与である、請求項２５に記載の方法。
【請求項２８】
ＡＦＰ陽性疾患を有する個体を診断する方法であって、
ａ）有効量の請求項１８に記載の単離された抗ＡＭＣ構築物を該個体に投与するステップ；および
ｂ）該個体における前記標識のレベルを決定するステップであって、閾値レベルを上回る該標識のレベルは、該個体が該ＡＦＰ陽性疾患を有することを示す、ステップ
を含む方法。
【請求項２９】
ＡＦＰ陽性疾患を有する個体を診断する方法であって、
ａ）該個体に由来する試料を、請求項１８に記載の単離された抗ＡＭＣ構築物と接触させるステップ；および
ｂ）該試料中の、該単離された抗ＡＭＣ構築物と結合した細胞の数を決定するステップであって、閾値レベルを上回る、該単離された抗ＡＭＣ構築物と結合した細胞の数の値は、該個体が該ＡＦＰ陽性疾患を有することを示す、ステップ
を含む方法。
【請求項３０】
前記ＡＦＰ陽性疾患ががんである、請求項２５から２９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３１】
前記がんが、肝細胞癌、胚細胞腫瘍または乳がんである、請求項３０に記載の方法。
【請求項３２】
前記がんが肝細胞癌である、請求項３１に記載の方法。
【請求項３３】
前記がんが転移性肝細胞癌である、請求項３２に記載の方法。
【請求項３４】
前記ＡＦＰ陽性疾患が肝細胞癌であり、転移が阻害される、請求項２５から２７のいずれか一項に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願の相互参照
本願は、２０１５年４月３日に出願された米国仮出願第６２／１４２，９５８号、２０１５年１０月２１日に出願された米国仮出願第６２／２４４，６５３号、および２０１６年３月７日に出願された米国仮出願第６２／３０４，９１５号の優先権を主張し、これらすべては、全体において本明細書に参照によって組み込まれる。
【０００２】
発明の分野
本発明は、ＡＦＰペプチドと複合体形成したＭＨＣ分子を特異的に結合する抗体構築物、ならびに疾患を処置および診断することを含むその使用に関する。
【０００３】
ＡＳＣＩＩテキストファイルでの配列表の提出
ＡＳＣＩＩテキストファイルでの以下の提出の内容は、その全体が参照によって本明細書に組み込まれる：コンピューター可読形態（ＣＲＦ）の配列表（ファイル名：７５００４２０００１４０ＳＥＱＬＩＳＴ．ｔｘｔ、データ記録：２０１６年４月１日、サイズ：６５ＫＢ）。
【背景技術】
【０００４】
細胞表面タンパク質は、細胞性タンパク質のごく一部のみを構成し、これらのタンパク質は、腫瘍特異的でない場合が多い。細胞を容易に浸透できないことに起因して、市販の治療用モノクローナル抗体（ｍＡｂ）は、これらの細胞表面タンパク質を認識するが、それらのほとんどは、系統抗原または分化抗原である（Ｍｉｌｅｎｉｃ，  Ｅ．Ｄ．、Ｃｕｒｒ．  Ｐｈａｒｍ．  Ｄｅｓ．  ８巻：１７９４〜１７６４頁、２００２年；Ｇｒｉｌｌｏ−Ｌｏｐｅｚ，  Ａ．Ｊ．、Ｅｘｐｅｒｔ  Ｒｅｖ．  Ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ  Ｔｈｅｒ．  ２巻（３号）：３２３〜３２９頁、２００２年；Ｊｏｎｅｓ，  Ｋ．Ｌ．およびＢｕｚｄａｔ，  Ａ．Ｕ．、Ｌａｎｃｅｔ  Ｏｎｃｏｌ．  １０巻（１２号）：１１７９〜１１８７頁、２００９年）。対照的に、変異したまたは発癌腫瘍関連タンパク質は、典型的には、核、細胞質または分泌型であり、小分子薬物によって現在最良に対処されているか、または分泌型タンパク質の場合には、抗がん薬物標的としてほとんど対処されていないかのいずれかである（Ｒｅｄｄｙら、Ｅｘｐｅｒｔ  Ｏｐｉｎ．  Ｔｈｅｒ．  Ｔａｒｇｅｔｓ  ３巻：３１３〜３２４頁、２０１２年；Ｔａｋｅｕｃｈｉ，  Ｋ．およびＩｔｏ，  Ｆ．、Ｂｉｏｌ．  Ｐｈａｒｍ．  Ｂｕｌｌ．  ３４巻（１２号）：１７７４〜１７８０頁；Ｒｏｙｃｈｏｗｄｈｕｒｙ，  Ｓ．およびＴａｌｐａｚ，  Ｍ．、Ｂｌｏｏｄ  Ｒｅｖ．  ６巻：２７９〜２９０頁、２０１１年）。しかし、ほとんどの細胞内タンパク質は、プロテアソームで分解され得、処理され得、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）によって認識されるＭＨＣ分子との関連で、細胞表面上のＭＨＣ分子によってＴ細胞ペプチドエピトープとして提示され得る（Ｍｏｒｒｉｓら、Ｂｌｏｏｄ  Ｒｅｖ．  ２０巻：６１〜６９頁、２００６年；Ｋｏｎｎｉｇ，  Ｒ．、Ｃｕｒｒ．  Ｏｐｉｎ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  １４巻（１号）：７５〜８３頁、２００２年）。したがって、細胞表面上の分泌型または細胞内腫瘍抗原由来ペプチド／ＭＨＣ複合体を認識する治療用ｍＡｂを生成することは、ｍＡｂによって提供される増強された特異性および治療ポテンシーを利用する。ｍＡｂを生成するためにファージディスプレイを使用することにおける最近の進歩により、規定されたエピトープに対する優れた特異性を有する薬剤を、大きい抗体レパートリーから選択することが可能になっている。固形腫瘍抗原に特異的ないくつかのかかるｍＡｂが、ＨＬＡ−Ａ０１およびＨＬＡ−Ａ０２との関連で、ファージディスプレイライブラリーから首尾よく選択されている（Ｎｏｙら、Ｅｘｐｅｒｔ  Ｒｅｖ．  Ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ  Ｔｈｅｒ．  ５巻（３号）：５２３〜５３６頁、２００５年；Ｃｈａｍｅｓら、Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ  ９７巻：７９６９〜７９７４頁、２０００年；Ｈｅｌｄら、Ｅｕｒ．  Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  ３４巻：２９１９〜２９２９頁、２００４年；Ｌｅｖら、Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．  ６２巻：３１８４〜３１９４頁、２００２年；Ｋｌｅｃｈｅｖｓｋｙら、Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．  ６８巻（１５号）：６３６０〜６３６７頁、２００８年）。より最近、十分に記載されたＴ細胞エピトープ、ヒトＷＴ１／ＨＬＡ−Ａ０２複合体に特異的なヒトｍＡｂが、細胞アッセイおよびｉｎ  ｖｉｖｏモデルにおいて、Ｆｃ媒介性エフェクター細胞機能を介して、複数のがん細胞株および原発性がん細胞を阻害することが示された（Ｄａｏら、Ｓｃｉ．  Ｔｒａｎｓｌ．  Ｍｅｄ．  ５巻：１７６ｒａ３３頁、２０１３年；Ｖｅｏｍｅｔｔら、Ｃｌｉｎ．  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．  ｄｏｉ：１０．１１５８／１０７８−０４３２、２０１４年）。
【０００５】
アルファ−フェトプロテイン（ＡＦＰ）は、卵黄嚢および胎児肝臓において産生され循環中に分泌される、６９ｋＤの糖タンパク質である。ＡＦＰの合成は、出生後に劇的に減少し、ごく微量が成体肝臓中に存在する。正常な成体ヒト血清では、ＡＦＰ濃度は通常、５〜７ｎｇ／ｍｌの低さである（Ｔｅｒｅｎｔｉｅｖ，  Ａ．Ａ．およびＭｏｌｄｏｇａｚｉｅｖａ，  Ｎ．Ｔ．、Ｔｕｍｏｕｒ  Ｂｉｏｌ．  ３４巻（４号）：２０７５〜２０９１頁、２０１３年）。しかし、ＡＦＰ遺伝子の発現は、肝臓再生、肝発癌（ｈｅｐａｔｏｃａｒｃｉｎｏｇｅｎｓｉｓ）、胚細胞腫瘍の間に、またはウイルス感染の一部の場合（ＨＢＶ／ＨＣＶ）において、成体において再活性化される。したがって、血清ＡＦＰの測定は、ＡＦＰ陽性がんの診断において、およびＡＦＰ陽性がんの処置に対する応答のモニタリングにおいて重要な役割を果たす。現在、ＡＦＰは、腫瘍特異的分子バイオマーカーのうちの「至適基準」とみなされている。しかし、ＡＦＰは細胞表面タンパク質ではないので、ＡＦＰを標的化することは、抗がん抗体薬物開発のための非常に活発な領域にはなってこなかった。
【０００６】
原発性肝臓がんは、世界中でがんの５番目に多い形態であり、がん関連死の２番目に多い原因である。２０１２年には、世界中で約７８２，０００の新たながん症例、および約７４６，０００の肝臓がん関連死が存在した（ｈｔｔｐ：／／ｇｌｏｂｏｃａｎ．ｉａｒｃ．ｆｒ／Ｐａｇｅｓ／ｆａｃｔ＿ｓｈｅｅｔｓ＿ｃａｎｃｅｒ．ａｓｐｘ）。肝臓がんの９０〜９５％は、肝細胞癌（ＨＣＣ）である。慢性肝炎、肝硬変および脂肪肝疾患によって引き起こされるものなどの慢性肝臓損傷は、ＨＣＣの発生と密接に関連する。肝炎ウイルス感染（例えば、ＨＢＶ、ＨＣＶ）、アフラトキシンＢ曝露、アルコール摂取および他の代謝疾患（例えば、肥満および糖尿病）は、ＨＣＣの周知のリスク因子である。ＨＣＣの発生率は、東アジアおよびアフリカ諸国におけるＨＢＶおよびＨＣＶの流行に起因して、これらの地域において高い（Ｓｈｉｂａｔａ，  Ｔ．およびＡｂｕｒａｔａｎｉ，  Ｈ．、Ｎａｔ．  Ｒｅｖ．  Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌ．  Ｈｅｐａｔｏｌ．  １１巻（６号）：３４０〜３４９頁、２０１４年）。しかし、ＨＣＶに感染した患者の数は、西側諸国、特に、ウイルス性肝炎感染が薬物濫用を介して部分的に媒介されている米国において、急速に増加している。一方、非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）および肥満に起因する肝硬変の発生率もまた、西側諸国において増加した。米国では、ＨＣＣは、９番目に多いがんである（Ｖａｌｌａｎｕｅｖａら、Ｎａｔ．  Ｒｅｖ．  Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌ．  Ｈｅｐａｔｏｌ．  １０巻（１号）：３４〜４２頁）。
【０００７】
ＨＣＣを有する患者の平均生存期間は、診断から３ヶ月である。しかし、これは、腫瘍のステージおよび根底にある肝疾患の程度と密接に関連する。診断の時点で摘出および移植に適切であるとみなされるのは、少数のＨＣＣ患者だけなので、ＨＣＣを有する患者の大部分に対する処置は、主に対症療法的である。非外科的処置、例えば、経動脈的化学塞栓術（ＴＡＣＥ／ＴＡＥ）、ラジオ波焼灼療法、およびソラフェニブのような全身標的化剤は、腫瘍負荷を低減させ、生存率を改善することが示されているが、これらの処置は、がん細胞を根絶せず、患者は頻繁に再燃する。したがって、より有効な治療の開発は、依然として急を要する研究分野である（Ｂｅｈｂｏｕｄｉら、Ｌｉｖｅｒ  Ｉｎｔ．  ３０巻（４号）：５２１〜５２６頁、２０１０年）。
【０００８】
ＡＦＰ発現は、ＨＣＣのおよそ８０％において再活性化される。ＭＨＣクラスＩタンパク質によってＨＣＣがん細胞表面上に提示されたペプチドを認識するＡＦＰ特異的細胞傷害性ＣＤ８  Ｔ細胞応答を生じさせることを目的とした免疫療法研究は、Ｔ細胞エピトープとして多くのヒトＡＦＰペプチドを報告している（Ｂｕｔｔｅｒｆｉｅｌｄら、Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  １６６巻：５３００〜５３０８頁、２００１年；Ｐａｒｄｅｅ，  Ａ．Ｄ．およびＢｕｔｔｅｒｆｉｅｌｄ，  Ｌ．Ｈ．、ＯｎｃｏＩｍｍｕｎｏｌ．  １巻：４８〜５５頁、２０１２年；Ｂｕｔｔｅｒｆｉｅｌｄら、Ｊ．  Ｔｒａｎｓ．  Ｍｅｄ．  １２巻：８６頁、２０１４年；Ｌｉｕら、Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  １７７巻（１号）：７１２〜７２１頁、２００６年；Ｍｉｚｕｋｏｓｈｉら、Ｉｎｔ．  Ｊ．  Ｃａｎｃｅｒ  １１８巻（５号）：１１９４〜１２０４頁、２００６年）。これらのペプチドのうち、ＦＭＮＫＦＩＹＥＩ（ＡＦＰ１５８）は、ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１によって拘束される免疫優性Ｔ細胞エピトープである。ＡＦＰ／ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１複合体は、正常なＨＬＡ−Ａ＊０２：０１ドナーからｉｎ  ｖｉｔｒｏでペプチド特異的Ｔ細胞を誘導した。これらのＡＦＰ１５８特異的Ｔ細胞は、細胞傷害性アッセイおよびＩＦＮγ  ＥＬＩＳＰＯＴアッセイの両方において、ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１陽性およびＡＦＰ陽性の腫瘍細胞を認識した。ＡＦＰ１５８は、ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１陽性ＨＣＣ細胞株ＨｅｐＧ２由来の表面ペプチドの質量分析による分析によって同定されたが、ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１陰性がん細胞株Ｈｅｐ３Ｂからは同定されなかった（Ｂｕｔｔｅｒｆｉｅｌｄら、Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  １６６巻：５３００〜５３０８頁、２００１年）。これらのデータは、ＡＦＰ１５８が実際にプロセシングされ、ＡＦＰ陽性がん細胞においてＨＬＡ−Ａ＊０２：０１分子によって提示されることを支持している。したがって、ＡＦＰ１５８／ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１は、ｍＡｂがん薬物開発のための良好な標的候補である。
【０００９】
ＡＦＰを過剰発現するがんを処置するための治療標的としてＡＦＰを使用する伝統的なアプローチは、ＡＦＰタンパク質を標的とする抗体または種々のＡＦＰペプチドを用いたワクチン接種を使用することに依拠している。ＡＦＰタンパク質に対する抗体は、治療効力をほとんど有さないが、それは、ＡＦＰが細胞表面タンパク質ではなく、高い循環レベルで存在し得、したがって、ＡＦＰを発現する細胞への抗体のいずれの特異的標的化をも低減させるからである。種々のＭＨＣ拘束されたＡＦＰペプチドおよびそれらのバリアントを用いたワクチン接種は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏでＡＦＰ特異的Ｔ細胞の活性化およびＡＦＰ提示細胞の細胞傷害性の増加をもたらすことが観察されてきたが、臨床的に重要な治療利益は未だ観察されていない。
本明細書で参照される全ての刊行物、特許、特許出願および公開された特許出願の開示は、それらの全体が参照によって本明細書に組み込まれる。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【００１０】
【非特許文献１】Ｍｉｌｅｎｉｃ，  Ｅ．Ｄ．、Ｃｕｒｒ．  Ｐｈａｒｍ．  Ｄｅｓ．  ８巻：１７９４〜１７６４頁、２００２年
【非特許文献２】Ｇｒｉｌｌｏ−Ｌｏｐｅｚ，  Ａ．Ｊ．、Ｅｘｐｅｒｔ  Ｒｅｖ．  Ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ  Ｔｈｅｒ．  ２巻（３号）：３２３〜３２９頁、２００２年
【非特許文献３】Ｊｏｎｅｓ，  Ｋ．Ｌ．およびＢｕｚｄａｔ，  Ａ．Ｕ．、Ｌａｎｃｅｔ  Ｏｎｃｏｌ．  １０巻（１２号）：１１７９〜１１８７頁、２００９年
【非特許文献４】Ｒｅｄｄｙら、Ｅｘｐｅｒｔ  Ｏｐｉｎ．  Ｔｈｅｒ．  Ｔａｒｇｅｔｓ  ３巻：３１３〜３２４頁、２０１２年
【非特許文献５】Ｔａｋｅｕｃｈｉ，  Ｋ．およびＩｔｏ，  Ｆ．、Ｂｉｏｌ．  Ｐｈａｒｍ．  Ｂｕｌｌ．  ３４巻（１２号）：１７７４〜１７８０頁
【非特許文献６】Ｒｏｙｃｈｏｗｄｈｕｒｙ，  Ｓ．およびＴａｌｐａｚ，  Ｍ．、Ｂｌｏｏｄ  Ｒｅｖ．  ６巻：２７９〜２９０頁、２０１１年
【非特許文献７】Ｍｏｒｒｉｓら、Ｂｌｏｏｄ  Ｒｅｖ．  ２０巻：６１〜６９頁、２００６年
【非特許文献８】Ｋｏｎｎｉｇ，  Ｒ．、Ｃｕｒｒ．  Ｏｐｉｎ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  １４巻（１号）：７５〜８３頁、２００２年
【非特許文献９】Ｎｏｙら、Ｅｘｐｅｒｔ  Ｒｅｖ．  Ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ  Ｔｈｅｒ．  ５巻（３号）：５２３〜５３６頁、２００５年
【非特許文献１０】Ｃｈａｍｅｓら、Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ  ９７巻：７９６９〜７９７４頁、２０００年
【非特許文献１１】Ｈｅｌｄら、Ｅｕｒ．  Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  ３４巻：２９１９〜２９２９頁、２００４年
【非特許文献１２】Ｌｅｖら、Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．  ６２巻：３１８４〜３１９４頁、２００２年
【非特許文献１３】Ｋｌｅｃｈｅｖｓｋｙら、Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．  ６８巻（１５号）：６３６０〜６３６７頁、２００８年
【非特許文献１４】Ｄａｏら、Ｓｃｉ．  Ｔｒａｎｓｌ．  Ｍｅｄ．  ５巻：１７６ｒａ３３頁、２０１３年
【非特許文献１５】Ｖｅｏｍｅｔｔら、Ｃｌｉｎ．  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．  ｄｏｉ：１０．１１５８／１０７８−０４３２、２０１４年
【非特許文献１６】Ｔｅｒｅｎｔｉｅｖ，  Ａ．Ａ．およびＭｏｌｄｏｇａｚｉｅｖａ，  Ｎ．Ｔ．、Ｔｕｍｏｕｒ  Ｂｉｏｌ．  ３４巻（４号）：２０７５〜２０９１頁、２０１３年
【非特許文献１７】Ｓｈｉｂａｔａ，  Ｔ．およびＡｂｕｒａｔａｎｉ，  Ｈ．、Ｎａｔ．  Ｒｅｖ．  Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌ．  Ｈｅｐａｔｏｌ．  １１巻（６号）：３４０〜３４９頁、２０１４年
【非特許文献１８】Ｖａｌｌａｎｕｅｖａら、Ｎａｔ．  Ｒｅｖ．  Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌ．  Ｈｅｐａｔｏｌ．  １０巻（１号）：３４〜４２頁
【非特許文献１９】Ｂｅｈｂｏｕｄｉら、Ｌｉｖｅｒ  Ｉｎｔ．  ３０巻（４号）：５２１〜５２６頁、２０１０年
【非特許文献２０】Ｂｕｔｔｅｒｆｉｅｌｄら、Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  １６６巻：５３００〜５３０８頁、２００１年
【非特許文献２１】Ｐａｒｄｅｅ，  Ａ．Ｄ．およびＢｕｔｔｅｒｆｉｅｌｄ，  Ｌ．Ｈ．、ＯｎｃｏＩｍｍｕｎｏｌ．  １巻：４８〜５５頁、２０１２年
【非特許文献２２】Ｂｕｔｔｅｒｆｉｅｌｄら、Ｊ．  Ｔｒａｎｓ．  Ｍｅｄ．  １２巻：８６頁、２０１４年
【非特許文献２３】Ｌｉｕら、Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  １７７巻（１号）：７１２〜７２１頁、２００６年
【非特許文献２４】Ｍｉｚｕｋｏｓｈｉら、Ｉｎｔ．  Ｊ．  Ｃａｎｃｅｒ  １１８巻（５号）：１１９４〜１２０４頁、２００６年
【非特許文献２５】Ｂｕｔｔｅｒｆｉｅｌｄら、Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  １６６巻：５３００〜５３０８頁、２００１年
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【００１１】
本出願は、一態様では、ＡＦＰペプチドおよびＭＨＣクラスＩタンパク質を含む複合体（本明細書で「ＡＦＰ／ＭＨＣクラスＩ複合体」または「ＡＭＣ」と呼ぶ）に結合する構築物（例えば、単離された構築物）を提供する。一部の実施形態では、構築物（「抗ＡＭＣ構築物」）は、ＡＦＰペプチドおよびＭＨＣクラスＩタンパク質を含む複合体に特異的に結合する抗体部分（本明細書で「抗ＡＭＣ抗体部分」と呼ぶ）を含む。
【００１２】
したがって、一部の実施形態では、ＡＦＰペプチドおよびＭＨＣクラスＩタンパク質を含む複合体に特異的に結合する抗体部分を含む抗ＡＭＣ構築物（例えば、単離された抗ＡＭＣ構築物）が提供される。一部の実施形態では、ＡＦＰ／ＭＨＣクラスＩ複合体は、細胞表面上に存在する。一部の実施形態では、ＡＦＰ／ＭＨＣクラスＩ複合体は、がん細胞の表面上に存在する。
【００１３】
一部の実施形態では、抗ＡＭＣ構築物は、ＡＦＰペプチドおよびＭＨＣクラスＩタンパク質を含む複合体に特異的に結合する抗体部分を含み、このＭＨＣクラスＩタンパク質は、ＨＬＡ−Ａである。一部の実施形態では、ＭＨＣクラスＩタンパク質は、ＨＬＡ−Ａ０２である。一部の実施形態では、ＭＨＣクラスＩタンパク質は、ＨＬＡ−Ａ０２対立遺伝子のＨＬＡ−Ａ＊０２：０１サブタイプである。
【００１４】
一部の実施形態では、上記抗ＡＭＣ構築物（例えば、単離された抗ＡＭＣ構築物）のいずれかによれば、抗ＡＭＣ構築物は、ＡＦＰペプチドおよびＭＨＣクラスＩタンパク質を含む複合体に特異的に結合する抗体部分を含み、この抗体部分は、ＡＦＰペプチド、およびＭＨＣクラスＩタンパク質とは異なるＨＬＡ対立遺伝子を有する第２のＭＨＣクラスＩタンパク質を含む複合体と交差反応する。一部の実施形態では、抗体部分は、ＡＦＰペプチドの種間バリアントおよびＭＨＣクラスＩタンパク質を含む複合体と交差反応する。一部の実施形態では、抗体部分は、１つのアミノ酸置換（例えば、保存的アミノ酸置換）を含むＡＦＰペプチドのバリアントおよびＭＨＣクラスＩタンパク質を含む複合体と交差反応する。
【００１５】
一部の実施形態では、上記抗ＡＭＣ構築物（例えば、単離された抗ＡＭＣ構築物）のいずれかによれば、抗ＡＭＣ構築物は、ＡＦＰペプチドおよびＭＨＣクラスＩタンパク質を含む複合体に特異的に結合する抗体部分を含み、このＡＦＰペプチドは、約８〜約１２（例えば、約８、９、１０、１１または１２のいずれか）アミノ酸長である。一部の実施形態では、ＡＦＰペプチドは、ヒトＡＦＰに由来する。一部の実施形態では、ＡＦＰペプチドは、配列番号３〜１３および１６からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する。一部の実施形態では、ＡＦＰペプチドは、アミノ酸配列ＦＭＮＫＦＩＹＥＩ（配列番号４）を有する。
【００１６】
一部の実施形態では、上記抗ＡＭＣ構築物（例えば、単離された抗ＡＭＣ構築物）のいずれかによれば、抗ＡＭＣ構築物は、ＡＦＰペプチドおよびＭＨＣクラスＩタンパク質を含む複合体に特異的に結合する抗体部分を含み、この抗体部分は、全長抗体、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、（Ｆａｂ’）２、Ｆｖまたは単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）である。一部の実施形態では、抗体部分は、完全にヒト、ヒト抗体フレームワーク領域を伴って半合成、またはヒト化である。
【００１７】
一部の実施形態では、上記抗ＡＭＣ構築物（例えば、単離された抗ＡＭＣ構築物）のいずれかによれば、抗ＡＭＣ構築物は、ＡＦＰペプチドおよびＭＨＣクラスＩタンパク質を含む複合体に特異的に結合する抗体部分を含み、この抗体部分は、約０．１ｐＭ〜約５００ｎＭの間（例えば、これらの値の間の任意の範囲を含んで、約０．１ｐＭ、１．０ｐＭ、１０ｐＭ、５０ｐＭ、１００ｐＭ、５００ｐＭ、１ｎＭ、１０ｎＭ、５０ｎＭ、１００ｎＭまたは５００ｎＭのいずれか）の平衡解離定数（Ｋｄ）で、ＡＦＰ／ＭＨＣクラスＩ複合体に結合する。一部の実施形態では、単離された抗ＡＭＣ構築物は、約０．１ｐＭ〜約５００ｎＭの間（例えば、これらの値の間の任意の範囲を含んで、約０．１ｐＭ、１．０ｐＭ、１０ｐＭ、５０ｐＭ、１００ｐＭ、５００ｐＭ、１ｎＭ、１０ｎＭ、５０ｎＭ、１００ｎＭまたは５００ｎＭのいずれか）のＫｄで、ＡＦＰ／ＭＨＣクラスＩ複合体に結合する。
【００１８】
一部の実施形態では、抗ＡＭＣ構築物は、ＡＦＰペプチドおよびＭＨＣクラスＩタンパク質を含む複合体に特異的に結合する抗体部分を含み、この抗体部分は、ｉ）Ｇ−Ｆ／Ｙ−Ｓ／Ｔ−Ｆ−Ｄ／Ｓ／Ｔ−Ｄ／Ｎ／Ｓ−Ｙ／Ａ−Ａ／Ｇ／Ｗ（配列番号８７）のアミノ酸配列を含む重鎖相補性決定領域（ＨＣ−ＣＤＲ）１、または最大で約３（例えば、約１、２または３のいずれか）アミノ酸の置換を含むそのバリアント、Ｉ／Ｓ−Ｋ／Ｓ−Ｘ−Ｈ／Ｙ−Ｘ−Ｇ−Ｘ−Ｔ（配列番号８８）のアミノ酸配列を含むＨＣ−ＣＤＲ２、または最大で約３（例えば、約１、２または３のいずれか）アミノ酸の置換を含むそのバリアント、およびＡ／Ｇ−Ｘ−Ｗ／Ｙ−Ｙ−Ｘ−Ｘ−Ｘ−Ｆ／Ｙ−Ｄ（配列番号８９）のアミノ酸配列を含むＨＣ−ＣＤＲ３、または最大で約３（例えば、約１、２または３のいずれか）アミノ酸の置換を含むそのバリアントを含む重鎖可変ドメイン；ならびにｉｉ）Ｓ／Ｔ−Ｇ／Ｓ−Ｄ／Ｎ−Ｉ／Ｖ−Ａ／Ｇ−Ａ／Ｓ／Ｖ−Ｘ−Ｈ／Ｙ（配列番号１２０）のアミノ酸配列を含む軽鎖相補性決定領域（ＬＣ−ＣＤＲ）１、または最大で約３（例えば、約１、２または３のいずれか）アミノ酸の置換を含むそのバリアント、およびＱ−Ｓ／Ｔ−Ｙ／Ｗ−Ｄ／Ｔ−Ｓ／Ｔ−Ａ／Ｓ（配列番号１２１）のアミノ酸配列を含むＬＣ−ＣＤＲ３、または最大で約３（例えば、約１、２または３のいずれか）アミノ酸の置換を含むそのバリアントを含む軽鎖可変ドメインを含み、Ｘは任意のアミノ酸であり得る。
【００１９】
一部の実施形態では、抗ＡＭＣ構築物は、ＡＦＰペプチドおよびＭＨＣクラスＩタンパク質を含む複合体に特異的に結合する抗体部分を含み、この抗体部分は、ｉ）配列番号５７〜６６のいずれか１つのアミノ酸配列を含む（一部の実施形態ではそれからなる）ＨＣ−ＣＤＲ１、または最大で約５（例えば、約１、２、３、４または５のいずれか）アミノ酸の置換を含むそのバリアント、配列番号６７〜７６のいずれか１つのアミノ酸配列を含む（一部の実施形態ではそれからなる）ＨＣ−ＣＤＲ２、または最大で約５（例えば、約１、２、３、４または５のいずれか）アミノ酸の置換を含むそのバリアント、および配列番号７７〜８６のいずれか１つのアミノ酸配列を含む（一部の実施形態ではそれからなる）ＨＣ−ＣＤＲ３、または最大で約５（例えば、約１、２、３、４または５のいずれか）アミノ酸の置換を含むそのバリアントを含む重鎖可変ドメイン；ならびにｉｉ）配列番号９０〜９９のいずれか１つのアミノ酸配列を含む（一部の実施形態ではそれからなる）ＬＣ−ＣＤＲ１、または最大で約５（例えば、約１、２、３、４または５のいずれか）アミノ酸の置換を含むそのバリアント、配列番号１００〜１０９のいずれか１つのアミノ酸配列を含む（一部の実施形態ではそれからなる）ＬＣ−ＣＤＲ２、または最大で約３（例えば、約１、２または３のいずれか）アミノ酸の置換を含むそのバリアント、および配列番号１１０〜１１９のいずれか１つのアミノ酸配列を含む（一部の実施形態ではそれからなる）ＬＣ−ＣＤＲ３、または最大で約５（例えば、約１、２、３、４または５のいずれか）アミノ酸の置換を含むそのバリアントを含む軽鎖可変ドメインを含む。
【００２０】
一部の実施形態では、抗ＡＭＣ構築物は、ＡＦＰペプチドおよびＭＨＣクラスＩタンパク質を含む複合体に特異的に結合する抗体部分を含み、この抗体部分は、ｉ）配列番号５７〜６６のいずれか１つのアミノ酸配列を含む（一部の実施形態ではそれからなる）ＨＣ−ＣＤＲ１、配列番号６７〜７６のいずれか１つのアミノ酸配列を含む（一部の実施形態ではそれからなる）ＨＣ−ＣＤＲ２、および配列番号７７〜８６のいずれか１つのアミノ酸配列を含む（一部の実施形態ではそれからなる）ＨＣ−ＣＤＲ３を含む（一部の実施形態ではそれらからなる）重鎖可変ドメイン；またはＨＣ−ＣＤＲ領域中に最大で約５（例えば、約１、２、３、４または５のいずれか）アミノ酸の置換を含むそのバリアント；ならびにｉｉ）配列番号９０〜９９のいずれか１つのアミノ酸配列を含む（一部の実施形態ではそれからなる）ＬＣ−ＣＤＲ１、配列番号１００〜１０９のいずれか１つのアミノ酸配列を含む（一部の実施形態ではそれからなる）ＬＣ−ＣＤＲ２、および配列番号１１０〜１１９のいずれか１つのアミノ酸配列を含む（一部の実施形態ではそれからなる）ＬＣ−ＣＤＲ３を含む軽鎖可変ドメイン；またはＬＣ−ＣＤＲ領域中に最大で約５（例えば、約１、２、３、４または５のいずれか）アミノ酸の置換を含むそのバリアントを含む。
【００２１】
一部の実施形態では、抗ＡＭＣ構築物は、ＡＦＰペプチドおよびＭＨＣクラスＩタンパク質を含む複合体に特異的に結合する抗体部分を含み、この抗体部分は、ａ）配列番号１７〜２６のいずれか１つのアミノ酸配列を含む（一部の実施形態ではそれからなる）重鎖可変ドメインまたは配列番号１７〜２６のいずれか１つに対して少なくとも約９５％（例えば、少なくとも約９５％、９６％、９７％、９８％または９９％のいずれか）の配列同一性を有するそのバリアント；およびｂ）配列番号２７〜３６のいずれか１つのアミノ酸配列を含む（一部の実施形態ではそれからなる）軽鎖可変ドメインまたは配列番号２７〜３６のいずれか１つに対して少なくとも約９５％（例えば、少なくとも約９５％、９６％、９７％、９８％または９９％のいずれか）の配列同一性を有するそのバリアントを含む。一部の実施形態では、抗体部分は、配列番号１７〜２６のいずれか１つのアミノ酸配列を含む（一部の実施形態ではそれからなる）重鎖可変ドメインおよび配列番号２７〜３６のいずれか１つのアミノ酸配列を含む（一部の実施形態ではそれからなる）軽鎖可変ドメインを含む。
【００２２】
一部の実施形態では、抗ＡＭＣ構築物は、標的ＡＦＰ／ＭＨＣクラスＩ複合体への結合について、上記抗体部分のいずれかに従い第２の抗体部分と競合する第１の抗体部分を含む。一部の実施形態では、第１の抗体部分は、第２の抗体部分と同じ、または実質的に同じエピトープに結合する。一部の実施形態では、標的ＡＦＰ／ＭＨＣクラスＩ複合体への第１の抗体部分の結合は、標的ＡＦＰ／ＭＨＣクラスＩ複合体への第２の抗体部分の結合を、少なくとも約７０％（例えば、少なくとも約７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９８％または９９％のいずれか）阻害し、または逆もまた同様である。一部の実施形態では、第１の抗体部分および第２の抗体部分は、標的ＡＦＰ／ＭＨＣクラスＩ複合体への結合について交差競合する、即ち、第１および第２の抗体部分の各々は、標的ＡＦＰ／ＭＨＣクラスＩ複合体への結合について他方と競合する。
【００２３】
一部の実施形態では、上記抗ＡＭＣ構築物（例えば、単離された抗ＡＭＣ構築物）のいずれかによれば、単離された抗ＡＭＣ構築物は、全長抗体である。一部の実施形態では、単離された抗ＡＭＣ構築物は、単一特異的である。一部の実施形態では、単離された抗ＡＭＣ構築物は、多特異的である。一部の実施形態では、単離された抗ＡＭＣ構築物は、二重特異的である。一部の実施形態では、単離された抗ＡＭＣ分子は、タンデムｓｃＦｖ、ダイアボディ（ｄｉａｂｏｄｙ）（Ｄｂ）、単鎖ダイアボディ（ｓｃＤｂ）、二重親和性再標的化（ｄｕａｌ−ａｆｆｉｎｉｔｙ  ｒｅｔａｒｇｅｔｉｎｇ）（ＤＡＲＴ）抗体、二重可変ドメイン（ＤＶＤ）抗体、ノブ−イントゥ−ホール（ｋｎｏｂ−ｉｎｔｏ−ｈｏｌｅ）（ＫｉＨ）抗体、ドックアンドロック（ｄｏｃｋ  ａｎｄ  ｌｏｃｋ）（ＤＮＬ）抗体、化学架橋抗体、ヘテロマルチマー抗体またはヘテロコンジュゲート抗体である。一部の実施形態では、単離された抗ＡＭＣ構築物は、ペプチドリンカーによって連結された２つのｓｃＦｖを含むタンデムｓｃＦｖである。一部の実施形態では、ペプチドリンカーは、アミノ酸配列ＧＧＧＧＳを含む（一部の実施形態ではそれからなる）。
【００２４】
一部の実施形態では、上記抗ＡＭＣ構築物（例えば、単離された抗ＡＭＣ構築物）のいずれかによれば、抗ＡＭＣ構築物は、ＡＦＰペプチドおよびＭＨＣクラスＩタンパク質を含む複合体に特異的に結合する抗体部分を含み、この単離された抗ＡＭＣ構築物は、第２の抗原に特異的に結合する第２の抗原結合部分（ａｎｔｉｇｅｎ−ｂｉｎｄｉｎｇ  ｍｏｉｅｔｙ）をさらに含む。一部の実施形態では、第２の抗原結合部分は、抗体部分である。一部の実施形態では、第２の抗原は、Ｔ細胞の表面上の抗原である。一部の実施形態では、Ｔ細胞は、細胞傷害性Ｔ細胞、ヘルパーＴ細胞およびナチュラルキラーＴ細胞からなる群から選択される。一部の実施形態では、第２の抗原は、ＣＤ３γ、ＣＤ３δ、ＣＤ３ε、ＣＤ３ζ、ＣＤ２８、ＯＸ４０、ＧＩＴＲ、ＣＤ１３７、ＣＤ２７、ＣＤ４０ＬおよびＨＶＥＭからなる群から選択される。一部の実施形態では、第２の抗原はＣＤ３εであり、単離された抗ＡＭＣ構築物は、ＡＦＰ／ＭＨＣクラスＩ複合体に特異的なＮ末端ｓｃＦｖおよびＣＤ３εに特異的なＣ末端ｓｃＦｖを含むタンデムｓｃＦｖである。一部の実施形態では、第２の抗原は、ナチュラルキラー細胞、好中球、単球、マクロファージまたは樹状細胞の表面上の抗原である。
【００２５】
一部の実施形態では、上記抗ＡＭＣ構築物（例えば、単離された抗ＡＭＣ構築物）のいずれかによれば、抗ＡＭＣ構築物は、ＡＦＰペプチドおよびＭＨＣクラスＩタンパク質を含む複合体に特異的に結合する抗体部分を含み、この単離された抗ＡＭＣ構築物は、キメラ抗原受容体である。一部の実施形態では、キメラ抗原受容体は、抗体部分を含む細胞外ドメイン、膜貫通ドメインおよび細胞内シグナル伝達ドメインを含む。一部の実施形態では、細胞内シグナル伝達ドメインは、ＣＤ３ζ細胞内シグナル伝達配列および共刺激シグナル伝達配列を含む。一部の実施形態では、共刺激シグナル伝達配列は、ＣＤ２８細胞内シグナル伝達配列である。
【００２６】
一部の実施形態では、上記抗ＡＭＣ構築物（例えば、単離された抗ＡＭＣ構築物）のいずれかによれば、抗ＡＭＣ構築物は、ＡＦＰペプチドおよびＭＨＣクラスＩタンパク質を含む複合体に特異的に結合する抗体部分を含み、この単離された抗ＡＭＣ構築物は、抗体部分およびエフェクター分子を含むイムノコンジュゲートである。一部の実施形態では、エフェクター分子は、薬物、毒素、放射性同位体、タンパク質、ペプチドおよび核酸からなる群から選択される治療剤である。一部の実施形態では、治療剤は、薬物または毒素である。一部の実施形態では、エフェクター分子は、標識である。
【００２７】
さらに他の実施形態では、上記実施形態のいずれかに従う抗ＡＭＣ構築物（例えば、単離された抗ＡＭＣ構築物）を含む医薬組成物が提供される。一部の実施形態では、医薬組成物は、抗ＡＭＣ構築物と会合した細胞（例えば、エフェクター細胞）をさらに含む。一部の実施形態では、抗ＡＭＣ構築物またはそのポリペプチド成分を発現するまたはそれと会合した宿主細胞が提供される。一部の実施形態では、抗ＡＭＣ構築物またはそのポリペプチド成分をコードする核酸が提供される。一部の実施形態では、この核酸を含むベクターが提供される。一部の実施形態では、抗ＡＭＣ構築物を発現するまたはそれと会合したエフェクター細胞が提供される。一部の実施形態では、エフェクター細胞は、Ｔ細胞である。
【００２８】
一部の実施形態では、ＡＦＰペプチドおよびＭＨＣクラスＩタンパク質を含む複合体をその表面上に提示する細胞を検出する方法であって、細胞を、ａ）ＡＦＰペプチドおよびＭＨＣクラスＩタンパク質を含む複合体に特異的に結合する抗体部分ならびにｂ）標識を含む、上記実施形態のいずれかに従う抗ＡＭＣ構築物（例えば、単離された抗ＡＭＣ構築物）と接触させるステップ、ならびに細胞上の標識の存在を検出するステップを含む方法が提供される。
【００２９】
一部の実施形態では、ＡＦＰ陽性疾患を有する個体を処置する方法であって、個体に、有効量の、上記実施形態のいずれかに従う抗ＡＭＣ構築物（例えば、単離された抗ＡＭＣ構築物）を含む医薬組成物を投与するステップを含む方法が提供される。一部の実施形態では、医薬組成物は、単離された抗ＡＭＣ構築物と会合した細胞（例えば、エフェクター細胞）をさらに含む。一部の実施形態では、ＡＦＰ陽性疾患を有する個体を処置する方法であって、個体に、有効量の、上記抗ＡＭＣ  ＣＡＲのいずれかを発現するエフェクター細胞を投与するステップを含む方法が提供される。一部の実施形態では、エフェクター細胞は、Ｔ細胞である。一部の実施形態では、投与は、個体における第１の疾患部位に対して遠位の注射部位への投与である。一部の実施形態では、注射部位は、第１の疾患部位に対して遠位の第１の腫瘍である。一部の実施形態では、第１の疾患部位は、ＡＦＰ陽性腫瘍である。一部の実施形態では、ＡＦＰ陽性疾患は、がんである。一部の実施形態では、がんは、肝細胞癌または胚細胞腫瘍である。一部の実施形態では、がんは、肝細胞癌である。一部の実施形態では、がんは肝細胞癌であり、転移が阻害される。一部の実施形態では、がんは、転移性肝細胞癌である。
【００３０】
一部の実施形態では、ＡＦＰ陽性疾患を有する個体を診断する方法であって、ａ）有効量の上記実施形態のいずれかに従う単離された抗ＡＭＣ構築物を個体に投与するステップ；およびｂ）個体における標識のレベルを決定するステップであって、閾値レベルを上回る標識のレベルは、個体がＡＦＰ陽性疾患を有することを示す、ステップを含む方法が提供される。一部の実施形態では、ＡＦＰ陽性疾患を有する個体を診断する方法であって、ａ）個体に由来する試料を、上記実施形態のいずれかに従う単離された抗ＡＭＣ構築物と接触させるステップ；およびｂ）試料中の、単離された抗ＡＭＣ構築物と結合した細胞の数を決定するステップであって、閾値レベルを上回る、単離された抗ＡＭＣ構築物と結合した細胞の数の値は、個体がＡＦＰ陽性疾患を有することを示す、ステップを含む方法が提供される。一部の実施形態では、ＡＦＰ陽性疾患は、がんである。一部の実施形態では、がんは、肝細胞癌または胚細胞腫瘍である。一部の実施形態では、がんは、肝細胞癌である。一部の実施形態では、がんは肝細胞癌であり、転移が阻害される。一部の実施形態では、がんは、転移性肝細胞癌である。
【００３１】
本明細書に記載される構築物のいずれかを作製する方法、本明細書に記載される方法に適切な製造物品およびキットもまた提供される。
【図面の簡単な説明】
【００３２】
【図１】図１は、限外濾過による濃縮後のＡＦＰ１５８ペプチド／ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１複合体のサイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）クロマトグラムを示す。適正にフォールディングされたペプチド／ＭＨＣ複合体単量体：２１２．４９ｍＬ；ミスフォールディングされた凝集体：１１１．２７ｍＬ；遊離のβ２Ｍ：２６７．２１ｍＬ。
【００３３】
【図２】図２は、ＳＥＣ後に単離されたＡＦＰ１５８／ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１複合体の純度を決定するための還元ＳＤＳ−ＰＡＧＥ分析を示す図である。主要なバンドは、ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１サブユニットおよびβ２Ｍサブユニットに対応する。
【００３４】
【図３】図３は、ビオチン化ＡＦＰ１５８ペプチド／ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１（Ｂｉｏ−ＡＦＰ１５８）の、ビオチン化対照ペプチド／ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１（Ｂｉｏ−対照）に対する、特異的な結合についてのファージクローンＥＬＩＳＡの結果を示すグラフである。
【００３５】
【図４】図４は、β２Ｍを負荷したＴ２細胞、β２Ｍ／ＡＦＰ１５８ペプチドを負荷したＴ２細胞、およびβ２Ｍ／ｈＴＥＲＴペプチドを負荷したＴ２細胞の結合についてのファージクローンＦＡＣＳ結合アッセイの結果を示す図である。
【００３６】
【図５】図５は、β２Ｍを負荷したＴ２細胞に対する、β２Ｍ／ヒトＡＦＰ１５８ペプチドを負荷したＴ２細胞およびβ２Ｍ／マウスＡＦＰ１５８ペプチドを負荷したＴ２細胞との交差反応性についてのファージクローンＦＡＣＳ結合アッセイの結果を示す図である。
【００３７】
【図６】図６は、種々の位置に単一のアラニン置換を有するＡＦＰ１５８ペプチドを負荷したＴ２細胞についてのファージクローン番号５２  ＦＡＣＳ結合アッセイの結果を示す図である。
【００３８】
【図７】図７は、β２Ｍ  ＡＦＰ１５８ペプチドを負荷したＴ２細胞、β２Ｍおよび通常発現する内在性タンパク質に由来するペプチドの混合物を負荷したＴ２細胞またはβ２Ｍを負荷したＴ２細胞の結合についてのファージクローンＦＡＣＳ結合アッセイの結果を示す図である。
【００３９】
【図８】図８は、精製された抗ＡＦＰ１５８／ＭＨＣ二重特異的抗体の分子量決定のためのＳＤＳ−ＰＡＧＥ分析を示す図である。
【００４０】
【図９】図９は、凝集のレベルを評価するための、例示的な精製されたＡＦＰ１５８二重特異的抗体のＳＥＣクロマトグラムを示す図である。抗ＡＦＰ１５８／ＭＨＣ二重特異的抗体単量体：約１５．８ｍＬ。
【００４１】
【図１０】図１０は、種々の濃度の抗ＡＦＰ１５８／ＭＨＣ二重特異的抗体（ＢｓＡｂ）によって媒介される複数のがん細胞株のＴ細胞による殺滅を示す図である。各濃度について、棒は、左から右に、ＨＥＰＧ２細胞株、ＳＫ−ＨＥＰ１細胞株、Ｈｅｌａ細胞株、ＨＥＰ３Ｂ細胞株、Ｒａｊｉ細胞株、Ｊｕｒｋａｔ細胞株、Ｄａｕｄｉ細胞株、およびＫ５６２細胞株を表す。
【００４２】
【図１１】図１１は、キメラ抗原受容体構築物の概略図である。
【００４３】
【図１２】図１２は、抗ＡＦＰ１５８／ＭＨＣ  ＣＡＲのパネルを発現するＴ細胞によって媒介される、ＨＥＰＧ２細胞株、ＳＫ−ＨＥＰ１細胞株、およびＳＫ−ＨＥＰ１−ＭｉｎｉＧ細胞株の殺滅を示すグラフである。
【００４４】
【図１３】図１３は、例示的な抗ＡＦＰ１５８／ＭＨＣ  ＣＡＲを発現するＴ細胞によって媒介される、ＡＦＰ１５８およびＨＬＡ−Ａ＊０２：０１について陽性または陰性であるがん細胞株のパネルの殺滅を示す図である。各細胞株の起源の組織、ＡＦＰ／ＡＦＰ１５８ペプチド発現、および、細胞がＨＬＡ−Ａ０２対立遺伝子を発現するかどうかが表中に示されている。
【００４５】
【図１４Ａ】図１４Ａは、ＡＦＰ１５８  ＣＡＲを形質導入したＴ細胞または偽形質導入したＴ細胞をＡＦＰ１５８およびＨＬＡ−Ａ＊０２：０１について陽性または陰性であるがん細胞株と共インキュベートした後のＩＬ−２、ＩＬ−４、ＩＬ−６、およびＩＬ−８の放出を示すグラフである。
【００４６】
【図１４Ｂ】図１４Ｂは、ＡＦＰ１５８  ＣＡＲを形質導入したＴ細胞または偽形質導入したＴ細胞をＡＦＰ１５８およびＨＬＡ−Ａ＊０２：０１について陽性または陰性であるがん細胞株と共インキュベートした後のＩＬ−１０、ＧＭ−ＣＳＦ、ＩＦＮ−γ、およびＴＮＦ−αの放出を示すグラフである。
【００４７】
【図１５Ａ】図１５Ａは、偽形質導入したＴ細胞もしくはＡＦＰ１５８  ＣＡＲを形質導入したＴ細胞の静脈内注射で処置したＨｅｐＧ２皮下異種移植マウス、または無処置のままにしたＨｅｐＧ２皮下異種移植マウスにおける腫瘍成長を示すグラフである。
【００４８】
【図１５Ｂ】図１５Ｂは、偽形質導入したＴ細胞もしくはＡＦＰ１５８  ＣＡＲを形質導入したＴ細胞の腫瘍内注射で処置したＨｅｐＧ２皮下異種移植マウス、または無処置のままにしたＨｅｐＧ２皮下異種移植マウスにおける腫瘍成長を示すグラフである。
【００４９】
【図１６Ａ】図１６Ａは、偽形質導入したＴ細胞もしくはＡＦＰ１５８  ＣＡＲを形質導入したＴ細胞の腹腔内注射で処置するか、または無処置のままにした７０日後の、ルシフェラーゼでタグ付けしたＨｅｐＧ２（ＨｅｐＧ２−Ｌｕｃ２）腹腔内異種移植マウスからの光子放射の変化を示すグラフである。
【００５０】
【図１６Ｂ】図１６Ｂは、ＨｅｐＧ２−Ｌｕｃ２腫瘍を有するマウスの７０日目における光子放射画像である。
【００５１】
【図１７】図１７は、ＡＦＰ１５８  ＣＡＲを形質導入したＴ細胞の静脈内注射もしくは腫瘍内注射、または偽形質導入したＴ細胞の静脈内注射で処置したＳＫ−Ｈｅｐ１−ＭｉｎｉＧ皮下異種移植マウスにおける腫瘍成長を示すグラフである。
【００５２】
【図１８】図１８は、全長抗ＡＦＰ１５８／ＭＨＣマウスキメラＩｇＧ１抗体の純度を決定するためのＳＤＳ−ＰＡＧＥ分析を示す図である。
【００５３】
【図１９】図１９は、ＡＦＰ１５８／ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１を提示するＳＫ−ＨＥＰ１−ｍｉｎｉＧ細胞に対する全長抗ＡＦＰ１５８／ＭＨＣマウスキメラＩｇＧ１（黒い線）または陰性対照（二次抗体単独、灰色の線）の結合のＦＡＣＳ分析を示す図である。
【００５４】
【図２０】図２０は、ＡＦＰ１５８／ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１複合体、組換えＡＦＰタンパク質または遊離のＡＦＰ１５８ペプチドに対する全長抗ＡＦＰ１５８／ＭＨＣマウスキメラＩｇＧ１の結合についてのＥＬＩＳＡの結果を示す図である。左側のパネル：全長抗ＡＦＰ１５８／ＭＨＣマウスキメラＩｇＧ１の用量依存曲線；右側：ＡＦＰ１５８ペプチド／ＭＨＣ（ＭＨＣ）、ＡＦＰタンパク質（ＡＦＰ）およびＡＦＰ１５８ペプチド（ペプチド）についての、１００ｎｇ／ｍＬにおける抗体結合のＯＤ４５０。
【００５５】
【図２１】図２１は、ＡＦＰ１５８  ＣＡＲ−Ｔ細胞または対照を腫瘍内に注射したマウスについての経時的な体重測定値（最初の投薬後３５日目まで）を示すグラフである。
【００５６】
【図２２】図２２は、ＡＦＰ１５８  ＣＡＲを形質導入したＴ細胞の静脈内注射もしくは腫瘍内注射、ＡＦＰ１５８  ＣＡＲを形質導入したＴ細胞とＡＰＣの組合せの腫瘍内注射、または偽形質導入したＴ細胞の腫瘍内注射で処置した両側ＳＫ−Ｈｅｐ１−ＭｉｎｉＧ皮下異種移植マウスにおける腫瘍成長カイネティクスを示すグラフである。腫瘍内注射を右側腹部腫瘍に注射した。
【００５７】
【図２３】図２３は、ＡＦＰ１５８  ＣＡＲを形質導入したＴ細胞とＡＰＣの組合せの右側腹部腫瘍への腫瘍内注射で処置した両側ＳＫ−Ｈｅｐ１−ＭｉｎｉＧ皮下異種移植マウス由来の腫瘍切片におけるヒトＣＤ３の免疫組織化学染色を示す図である。Ｌ、左側の腫瘍；Ｒ、右側の腫瘍。
【００５８】
【図２４】図２４は、ＡＦＰ１５８  ＣＡＲ形質導入末梢血リンパ球のフローサイトメトリー分析を示す図である；細胞をＡＦＰ１５８／ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１四量体を用いて染色し、抗ＣＤ３抗体、抗ＣＤ４抗体、または抗ＣＤ８抗体を用いて共染色した。偽形質導入細胞および無染色の細胞を対照として含めた。
【００５９】
【図２５】図２５は、標的細胞（ＨｅｐＧ２、ＳＫ−ＨＥＰ−１またはＳＫ−Ｈｅｐ１−ＭｉｎｉＧ）と共培養した後のＡＦＰ１５８  ＣＡＲを形質導入したＴ細胞の脱顆粒のフローサイトメトリー分析を示す図である。形質導入したＴ細胞をＣＡＲおよびＣＤ８発現に対してゲーティングし、抗ＣＤ１０７ａについて染色した。
【００６０】
【図２６】図２６は、代表的なＡＦＰ１５８  ＣＡＲを発現するように形質導入した細胞におけるＣＡＲ細胞表面分布を示す図である。細胞をＡＦＰ１５８／ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１四量体−ＰＥを用いて染色した。
【発明を実施するための形態】
【００６１】
本出願は、ＡＦＰペプチドおよびＭＨＣクラスＩタンパク質を含む複合体（本明細書で「ＡＦＰ／ＭＨＣクラスＩ複合体」または「ＡＭＣ」と呼ぶ）に特異的に結合する抗体部分（本明細書で「抗ＡＭＣ抗体部分」と呼ぶ）を含む単離された構築物（本明細書で「抗ＡＭＣ構築物」と呼ぶ）を提供する。抗ＡＭＣ構築物は、循環ＡＦＰタンパク質または遊離ＡＦＰペプチドとは対照的に、ＡＦＰ／ＭＨＣクラスＩ複合体（例えば、ＡＦＰを発現する細胞の表面上にＭＨＣ−提示ＡＦＰペプチド）を特異的に認識する。抗ＡＭＣ抗体部分は、抗ＣＤ３二重特異的抗体として強化される場合、またはＴ細胞によって発現されるキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）中に存在する場合、ＡＭＣ提示がん細胞などのＡＭＣ提示標的細胞を死滅させるように、ヒトＴ細胞を特異的に再指向させた（ｒｅｄｉｒｅｃｔｅｄ）。この戦略は、ＡＭＣ提示細胞（即ち、ＭＨＣクラスＩ分子に結合したＡＦＰペプチドをその表面上に提示している細胞）を特異的に標的化できない、ＡＦＰタンパク質に対する抗体の使用に勝る、重要な技術的利点を提供する。さらに、抗ＡＭＣ抗体部分は、検出可能な部分に融合させた場合、循環ＡＦＰレベルよりも潜在的により関連する疾患進行の尺度である、ＡＭＣ提示細胞の数および分布の変化に対する高い感受性を有する、ＡＦＰ陽性疾患または障害の診断および予後判定を可能にする。
【００６２】
ファージディスプレイテクノロジーを使用して、本発明者らは、ヒトＡＦＰ１５８ペプチド／ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１複合体、ならびにＨＬＡ−Ａ０２対立遺伝子の他のサブタイプとの関連で形成されたＡＦＰ１５８／ＭＨＣ複合体に対して特異的で高い親和性の複数のモノクローナル抗体を生成した。フローサイトメトリーおよびＴ細胞媒介性細胞傷害性アッセイにより、抗体が、ＡＦＰおよびＨＬＡ−Ａ＊０２：０１拘束された様式で、ＡＦＰペプチドパルスしたＴ２細胞およびＡＭＣ提示がん細胞株を認識することが実証された。抗体は、抗ＣＤ３二重特異的抗体またはＣＡＲ  Ｔ細胞として強化される場合、ＡＦＰ陽性およびＨＬＡ−Ａ＊０２：０１陽性の標的がん細胞を死滅させるように、ヒトＴ細胞を再指向させた。本明細書に示されるデータは、ＨＬＡ複合体との関連での分泌型がん抗原に対する抗体が、固形腫瘍適応症などのがん適応症に対する有効な治療剤であり得ることを実証している。
【００６３】
したがって、本出願は、ＡＦＰペプチドおよびＭＨＣクラスＩタンパク質を含む複合体に特異的に結合する抗体部分を含む構築物（例えば、単離された構築物）を提供する。構築物は、例えば、全長抗ＡＭＣ抗体、多特異的抗ＡＭＣ分子（例えば、二重特異的抗ＡＭＣ抗体）、抗ＡＭＣキメラ抗原受容体（「ＣＡＲ」）または抗ＡＭＣイムノコンジュゲートであり得る。
【００６４】
別の態様では、抗ＡＭＣ構築物、またはこれらの構築物の抗ＡＭＣ抗体部分の一部分をコードする核酸が提供される。
【００６５】
別の態様では、ＡＦＰペプチドおよびＭＨＣクラスＩタンパク質を含む複合体に特異的に結合する抗体部分を含む抗ＡＭＣ構築物を含む組成物が提供される。組成物は、抗ＡＭＣ構築物または抗ＡＭＣ構築物を発現するもしくはそれと会合したエフェクター細胞（例えば、抗ＡＭＣ  ＣＡＲを発現するＴ細胞）を含む医薬組成物であり得る。
【００６６】
処置または診断目的のための抗ＡＭＣ構築物（または抗ＡＭＣ構築物を発現するもしくはそれと会合した細胞）を作製および使用する方法、ならびにかかる方法に有用なキットおよび製造物品もまた提供される。
【００６７】
定義
本明細書で使用する場合、「処置」または「処置する」は、臨床結果を含む有益なまたは所望の結果を得るためのアプローチである。本発明の目的のために、有益なまたは所望の臨床結果には、以下のうち１または複数が含まれるがこれらに限定されない：疾患から生じる１もしくは複数の症状を軽減すること、疾患の程度を弱めること、疾患を安定化すること（例えば、疾患の悪化を防止もしくは遅延させること）、疾患の拡散（例えば、転移）を防止もしくは遅延させること、疾患の再発を防止もしくは遅延させること、疾患の進行を遅延もしくは減速させること、疾患状態を緩和すること、疾患の寛解（部分的もしくは全体的）を提供すること、疾患を処置するために必要とされる１もしくは複数の他の薬物療法の用量を減少させること、疾患の進行を遅延させること、生活の質を増加もしくは改善すること、体重増加を増加させること、および／または生存期間を延長させること。がんの病理学的結果（例えば、腫瘍体積など）の低減もまた、「処置」によって包含される。本発明の方法は、処置のこれらの態様のうちいずれか１または複数を企図する。
【００６８】
用語「再発」、「再燃する」または「再燃した」とは、疾患の消失の臨床評価後のがんまたは疾患の復帰を指す。遠隔転移または局所的再発の診断は、再燃とみなされ得る。
【００６９】
用語「難治性」または「抵抗性」とは、処置に応答していないがんまたは疾患を指す。
【００７０】
「活性化」とは、Ｔ細胞に関連して本明細書で使用する場合、検出可能な細胞増殖を誘導するように十分に刺激されたＴ細胞の状態を指す。活性化は、誘導されたサイトカイン産生、および検出可能なエフェクター機能とも関連し得る。
【００７１】
用語「抗体部分」は、全長抗体およびその抗原結合断片を含む。全長抗体は、２つの重鎖および２つの軽鎖を含む。軽鎖および重鎖の可変領域は、抗原結合を担う。両方の鎖中の可変領域は、一般に、相補性決定領域（ＣＤＲ）と呼ばれる３つの高度に可変性のループを含む（ＬＣ−ＣＤＲ１、ＬＣ−ＣＤＲ２およびＬＣ−ＣＤＲ３を含む軽鎖（ＬＣ）ＣＤＲ、ＨＣ−ＣＤＲ１、ＨＣ−ＣＤＲ２およびＨＣ−ＣＤＲ３を含む重鎖（ＨＣ）ＣＤＲ）。本明細書に開示される抗体および抗原結合断片についてのＣＤＲ境界は、Ｋａｂａｔ、ＣｈｏｔｈｉａまたはＡｌ−Ｌａｚｉｋａｎｉの慣習によって定義または同定され得る（Ａｌ−Ｌａｚｉｋａｎｉ  １９９７年；Ｃｈｏｔｈｉａ  １９８５年；Ｃｈｏｔｈｉａ  １９８７年；Ｃｈｏｔｈｉａ  １９８９年；Ｋａｂａｔ  １９８７年；Ｋａｂａｔ  １９９１年）。重鎖または軽鎖の３つのＣＤＲは、ＣＤＲよりも高度に保存され、超可変ループを支持するための足場を形成する、フレームワーク領域（ＦＲ）として公知の隣接ストレッチ間に挟まれている。重鎖および軽鎖の定常領域は、抗原結合に関与しないが、種々のエフェクター機能を示す。抗体は、それらの重鎖の定常領域のアミノ酸配列に基づいてクラスに割り当てられる。抗体の５つの主要なクラスまたはアイソタイプは、それぞれ、α、δ、ε、γおよびμ重鎖の存在を特徴とする、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧおよびＩｇＭである。いくつかの主要な抗体クラスは、ＩｇＧ１（γ１重鎖）、ＩｇＧ２（γ２重鎖）、ＩｇＧ３（γ３重鎖）、ＩｇＧ４（γ４重鎖）、ＩｇＡ１（α１重鎖）またはＩｇＡ２（α２重鎖）などのサブクラスへと分割される。
【００７２】
本明細書で使用する用語「抗原結合断片」とは、例えば、ダイアボディ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ断片、ジスルフィド安定化Ｆｖ断片（ｄｓＦｖ）、（ｄｓＦｖ）２、二重特異的ｄｓＦｖ（ｄｓＦｖ−ｄｓＦｖ’）、ジスルフィド安定化ダイアボディ（ｄｓダイアボディ）、単鎖抗体分子（ｓｃＦｖ）、ｓｃＦｖダイマー（二価ダイアボディ）、１もしくは複数のＣＤＲを含む抗体の一部分から形成された多特異的抗体、ラクダ化（ｃａｍｅｌｉｚｅｄ）単一ドメイン抗体、ナノボディ（ｎａｎｏｂｏｄｙ）、ドメイン抗体、二価ドメイン抗体、または抗原に結合するが完全な抗体構造を含まない任意の他の抗体断片を含む抗体断片を指す。抗原結合断片は、親抗体または親抗体断片（例えば、親ｓｃＦｖ）が結合する同じ抗原に結合することが可能である。一部の実施形態では、抗原結合断片は、１または複数の異なるヒト抗体由来のフレームワーク領域にグラフトされた、特定のヒト抗体由来の１または複数のＣＤＲを含み得る。
【００７３】
本明細書で使用する用語「エピトープ」とは、抗体または抗体部分が結合する抗原上の原子またはアミノ酸の特定の群を指す。２つの抗体または抗体部分は、それらが抗原について競合的な結合を示す場合、その抗原内の同じエピトープを結合し得る。
【００７４】
本明細書で使用する場合、第１の抗体部分が、等モル濃度の第１の抗体部分の存在下で、第２の抗体部分の標的ＡＭＣ結合を、少なくとも約５０％（例えば、少なくとも約５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９８％または９９％のいずれか）阻害する場合、第１の抗体部分は、標的ＡＭＣへの結合について第２の抗体部分と「競合する」、または逆もまた同様である。それらの交差競合に基づいて抗体を「ビニングする」ためのハイスループットプロセスは、ＰＣＴ公開番号ＷＯ０３／４８７３１に記載されている。
【００７５】
本明細書で使用する場合、用語「特異的に結合する」または「〜に特異的である」とは、生物学的分子を含む分子の不均一な集団の存在下で標的の存在を決定する、測定可能で再現性のある相互作用、例えば、標的と抗体または抗体部分との間の結合を指す。例えば、標的（これは、エピトープであり得る）に特異的に結合する抗体または抗体部分は、より高い親和性、アビディティで、より容易に、および／または他の標的へのその結合よりも長い持続時間で、この標的を結合する抗体または抗体部分である。一部の実施形態では、抗原に特異的に結合する抗体または抗体部分は、他の標的に対するその結合親和性の少なくとも約１０倍である結合親和性で、抗原（例えば、ＡＦＰペプチド／ＭＨＣクラスＩタンパク質複合体）の１または複数の抗原決定基と反応する。
【００７６】
本明細書で使用する「単離された」抗ＡＭＣ構築物とは、（１）天然に見出されるタンパク質と関連しない、（２）同じ供給源由来の他のタンパク質を含まない、（３）異なる種由来の細胞によって発現される、または（４）天然に存在しない、抗ＡＭＣ構築物を指す。
【００７７】
本明細書で使用する用語「単離された核酸」は、「単離された核酸」が、その起源によって、（１）「単離された核酸」が天然に見出されるポリヌクレオチドの全てもしくは一部分と関連しない、（２）天然では関連しないポリヌクレオチドに作動可能に連結した、または（３）より大きい配列の一部として天然では生じない、ゲノム、ｃＤＮＡもしくは合成起源またはそれらのある組合せの核酸を意味することを意図する。
【００７８】
本明細書で使用する場合、用語「ＣＤＲ」または「相補性決定領域」は、重鎖ポリペプチドおよび軽鎖ポリペプチドの両方の可変領域内に見出される非連続的な抗原結合部位（ａｎｔｉｇｅｎ  ｃｏｍｂｉｎｉｎｇ  ｓｉｔｅ）を意味することを意図する。これらの特定の領域は、Ｋａｂａｔら、Ｊ．  Ｂｉｏｌ．  Ｃｈｅｍ．  ２５２巻：６６０９〜６６１６頁（１９７７年）；Ｋａｂａｔら、Ｕ．Ｓ．  Ｄｅｐｔ．  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ  ａｎｄ  Ｈｕｍａｎ  Ｓｅｒｖｉｃｅｓ、「Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  ｉｎｔｅｒｅｓｔ」（１９９１年）；Ｃｈｏｔｈｉａら、Ｊ．  Ｍｏｌ．  Ｂｉｏｌ．  １９６巻：９０１〜９１７頁（１９８７年）；およびＭａｃＣａｌｌｕｍら、Ｊ．  Ｍｏｌ．  Ｂｉｏｌ．  ２６２巻：７３２〜７４５頁（１９９６年）によって記載されており、ここで、定義は、互いに対して比較した場合の、アミノ酸残基の重複またはサブセットを含む。それにもかかわらず、抗体もしくはグラフト化抗体のＣＤＲまたはそのバリアントを指すためのいずれかの定義の適用は、本明細書で定義および使用される用語の範囲内であることが意図される。上で引用した参考文献の各々によって定義されるＣＤＲを包含するアミノ酸残基は、比較として以下の表１に示される。
【表１】
2018512145.tif 000003
【００７９】
用語「キメラ抗体」とは、それらが本発明の生物学的活性を示す限り、重鎖および／または軽鎖の一部分が、特定の種に由来するまたは特定の抗体クラスもしくはサブクラスに属する抗体中の対応する配列と同一または相同であるが、鎖（複数可）の残部が、別の種に由来するまたは別の抗体クラスもしくはサブクラスに属する抗体ならびにかかる抗体の断片中の対応する配列と同一または相同である抗体を指す（米国特許第４，８１６，５６７号；およびＭｏｒｒｉｓｏｎら、Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ、８１巻：６８５１〜６８５５頁（１９８４年）を参照のこと）。
【００８０】
抗体または抗体部分に関して、用語「半合成」とは、抗体または抗体部分が、１または複数の天然に存在する配列および１または複数の天然に存在しない（即ち、合成）配列を有することを意味する。
【００８１】
「Ｆｖ」は、完全な抗原認識部位および抗原結合部位を含む最小抗体断片である。この断片は、緊密に非共有結合的に会合した、１つの重鎖可変領域ドメインおよび１つの軽鎖可変領域ドメインのダイマーからなる。これら２つのドメインの折り畳みから、抗原結合のためのアミノ酸残基に寄与し、抗体に抗原結合特異性を付与する６つの超可変ループ（各々重鎖および軽鎖由来の３つのループ）が生じる。しかし、単一の可変ドメイン（または抗原に特異的な３つのＣＤＲのみを含むＦｖの半分）でさえも、結合部位全体よりも低い親和性でではあるが、抗原を認識し結合する能力を有する。
【００８２】
「ｓＦｖ」または「ｓｃＦｖ」とも略される「単鎖Ｆｖ」は、単一のポリペプチド鎖に結合されたＶＨおよびＶＬ抗体ドメインを含む抗体断片である。一部の実施形態では、ｓｃＦｖポリペプチドは、抗原結合のための所望の構造をｓｃＦｖが形成できるようにする、ＶＨドメインとＶＬドメインとの間にポリペプチドリンカーをさらに含む。ｓｃＦｖの総説については、Ｐｌｕｃｋｔｈｕｎ、Ｔｈｅ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ  ｏｆ  Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ、１１３巻、ＲｏｓｅｎｂｕｒｇおよびＭｏｏｒｅ編、Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ、２６９〜３１５頁（１９９４年）を参照のこと。
【００８３】
用語「ダイアボディ」とは、Ｖドメインの鎖内対形成ではなく鎖間対形成が達成されて、二価断片、即ち、２つの抗原結合部位を有する断片を生じるように、ＶＨドメインとＶＬドメインとの間に短いリンカー（例えば、約５〜約１０残基）を典型的に有するｓｃＦｖ断片（前の段落を参照のこと）を構築することによって調製される小さい抗体断片を指す。二重特異的ダイアボディは、２つの抗体のＶＨドメインおよびＶＬドメインが異なるポリペプチド鎖上に存在する２つの「クロスオーバー」ｓｃＦｖ断片のヘテロダイマーである。ダイアボディは、例えば、ＥＰ４０４，０９７；ＷＯ９３／１１１６１；およびＨｏｌｌｉｎｇｅｒら、Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ、９０巻：６４４４〜６４４８頁（１９９３年）中により完全に記載されている。
【００８４】
非ヒト（例えば、げっ歯類）抗体の「ヒト化」形態は、非ヒト抗体に由来する最小配列を含むキメラ抗体である。大部分は、ヒト化抗体は、レシピエントの超可変領域（ＨＶＲ）由来の残基が、所望の抗体特異性、親和性および能力を有する、マウス、ラット、ウサギまたは非ヒト霊長類などの非ヒト種（ドナー抗体）の超可変領域由来の残基によって置き換えられた、ヒト免疫グロブリン（レシピエント抗体）である。一部の例では、ヒト免疫グロブリンのフレームワーク領域（ＦＲ）残基は、対応する非ヒト残基によって置き換えられる。さらに、ヒト化抗体は、レシピエント抗体中にもドナー抗体中にも見出されない残基を含み得る。これらの改変は、抗体性能をさらに洗練するために行われる。一般に、ヒト化抗体は、少なくとも１つの、典型的には２つの可変ドメインの実質的に全てを含み、ここで、超可変ループの全てまたは実質的に全ては、非ヒト免疫グロブリンのものと対応し、ＦＲの全てまたは実質的に全ては、ヒト免疫グロブリン配列のものである。ヒト化抗体は、任意選択で、免疫グロブリン定常領域の少なくとも一部分（Ｆｃ）、典型的にはヒト免疫グロブリンのＦｃもまた含む。さらなる詳細については、Ｊｏｎｅｓら、Ｎａｔｕｒｅ  ３２１巻：５２２〜５２５頁（１９８６年）；Ｒｉｅｃｈｍａｎｎら、Ｎａｔｕｒｅ  ３３２巻：３２３〜３２９頁（１９８８年）；およびＰｒｅｓｔａ、Ｃｕｒｒ．  Ｏｐ．  Ｓｔｒｕｃｔ．  Ｂｉｏｌ．  ２巻：５９３〜５９６頁（１９９２年）を参照のこと。
【００８５】
本明細書で同定されたポリペプチド配列および抗体配列に関して、「パーセント（％）アミノ酸配列同一性」または「相同性」は、配列同一性の一部として任意の保存的置換を考慮して配列をアラインさせた後、比較されているポリペプチド中のアミノ酸残基と同一である、候補配列中のアミノ酸残基の百分率として定義される。パーセントアミノ酸配列同一性を決定することを目的としたアラインメントは、例えば、ＢＬＡＳＴ、ＢＬＡＳＴ−２、ＡＬＩＧＮ、Ｍｅｇａｌｉｇｎ（ＤＮＡＳＴＡＲ）またはＭＵＳＣＬＥソフトウェアなどの公に入手可能なコンピューターソフトウェアを使用して、当該分野の技術範囲内の種々の方法で達成され得る。当業者は、比較されている配列の全長にわたって最大のアラインメントを達成するために必要な任意のアルゴリズムを含む、アラインメントを測定するための適切なパラメーターを決定できる。しかし、本明細書の目的のために、％アミノ酸配列同一性の値は、配列比較コンピュータープログラムＭＵＳＣＬＥを使用して生成される（Ｅｄｇａｒ，  Ｒ．Ｃ．、Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ３２巻（５号）：１７９２〜１７９７頁、２００４年；Ｅｄｇａｒ，  Ｒ．Ｃ．、ＢＭＣ  Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ  ５巻（１号）：１１３頁、２００４年）。
【００８６】
用語「Ｆｃ受容体」または「ＦｃＲ」は、抗体のＦｃ領域に結合する受容体を記述するために使用される。一部の実施形態では、本発明のＦｃＲは、ＩｇＧ抗体を結合するもの（γ受容体）であり、これらの受容体の対立遺伝子バリアントおよび選択的スプライシングされた形態を含む、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩおよびＦｃγＲＩＩＩサブクラスの受容体を含む。ＦｃγＲＩＩ受容体は、その細胞質ドメインが主に異なる類似のアミノ酸配列を有するＦｃγＲＩＩＡ（「活性化受容体」）およびＦｃγＲＩＩＢ（「阻害受容体」）を含む。活性化受容体ＦｃγＲＩＩＡは、その細胞質ドメイン中に免疫受容体チロシン活性化モチーフ（ＩＴＡＭ）を含む。阻害受容体ＦｃγＲＩＩＢは、その細胞質ドメイン中に免疫受容体チロシン阻害モチーフ（ｉｍｍｕｎｏｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｔｙｒｏｓｉｎｅ−ｂａｓｅｄ  ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ  ｍｏｔｉｆ）（ＩＴＩＭ）を含む（総説Ｍ．  ｉｎ  Ｄａｅｒｏｎ、Ａｎｎｕ．  Ｒｅｖ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  １５巻：２０３〜２３４頁（１９９７年）を参照のこと）。この用語は、アロタイプ、例えば、ＦｃγＲＩＩＩＡアロタイプ：ＦｃγＲＩＩＩＡ−Ｐｈｅ１５８、ＦｃγＲＩＩＩＡ−Ｖａｌ１５８、ＦｃγＲＩＩＡ−Ｒ１３１および／またはＦｃγＲＩＩＡ−Ｈ１３１を含む。ＦｃＲは、ＲａｖｅｔｃｈおよびＫｉｎｅｔ、Ａｎｎｕ．  Ｒｅｖ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ９巻：４５７〜９２頁（１９９１年）；Ｃａｐｅｌら、Ｉｍｍｕｎｏｍｅｔｈｏｄｓ  ４巻：２５〜３４頁（１９９４年）；ならびにｄｅ  Ｈａａｓら、Ｊ．  Ｌａｂ．  Ｃｌｉｎ．  Ｍｅｄ．  １２６巻：３３０〜４１頁（１９９５年）で概説されている。将来同定されるものを含む他のＦｃＲは、本明細書で用語「ＦｃＲ」によって包含される。この用語は、胎児への母系ＩｇＧの移行を担う新生児受容体ＦｃＲｎもまた含む（Ｇｕｙｅｒら、Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  １１７巻：５８７頁（１９７６年）およびＫｉｍら、Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  ２４巻：２４９頁（１９９４年））。
【００８７】
用語「ＦｃＲｎ」とは、新生児Ｆｃ受容体（ＦｃＲｎ）を指す。ＦｃＲｎは、主要組織適合複合体（ＭＨＣ）と構造的に類似しており、β２−ミクログロブリンに非共有結合したα鎖からなる。新生児Ｆｃ受容体ＦｃＲｎの複数の機能は、ＧｈｅｔｉｅおよびＷａｒｄ（２０００年）Ａｎｎｕ．  Ｒｅｖ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  １８巻、７３９〜７６６頁において概説されている。ＦｃＲｎは、母親から若年への免疫グロブリンＩｇＧの受動的送達、および血清ＩｇＧレベルの調節において役割を果たす。ＦｃＲｎは、ピノサイトーシスされたＩｇＧを結合し、細胞内でおよび細胞を横切っての両方でインタクトな形態でそれを輸送し、デフォルト分解経路からそれらをレスキューする、サルベージ受容体として作用し得る。
【００８８】
ヒトＩｇＧ  Ｆｃ領域の「ＣＨ１ドメイン」（「Ｈ１」ドメインの「Ｃ１」とも呼ぶ）は通常、約アミノ酸１１８から約アミノ酸２１５までにわたる（ＥＵ番号付け系）。
【００８９】
「ヒンジ領域」は一般に、ヒトＩｇＧ１のＧｌｕ２１６からＰｒｏ２３０までのストレッチと定義される（Ｂｕｒｔｏｎ、Ｍｏｌｅｃ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  ２２巻：１６１〜２０６頁（１９８５年））。他のＩｇＧアイソタイプのヒンジ領域は、重鎖間Ｓ−Ｓ結合を形成する最初のおよび最後のシステイン残基を同じ位置に配置することによって、ＩｇＧ１配列とアラインされ得る。
【００９０】
ヒトＩｇＧ  Ｆｃ領域の「ＣＨ２ドメイン」（「Ｈ２」ドメインの「Ｃ２」とも呼ぶ）は通常、約アミノ酸２３１から約アミノ酸３４０までにわたる。ＣＨ２ドメインは、別のドメインとは密接に対形成しないという点で独自である。むしろ、２つのＮ結合型分岐鎖炭水化物鎖（Ｎ−ｌｉｎｋｅｄ  ｂｒａｎｃｈｅｄ  ｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅ  ｃｈａｉｎ）が、インタクトなネイティブＩｇＧ分子の２つのＣＨ２ドメイン間に挟まれている。炭水化物は、ドメイン−ドメイン対形成の代わりを提供し得、ＣＨ２ドメインの安定化を助け得ると推測されている。Ｂｕｒｔｏｎ、Ｍｏｌｅｃ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  ２２巻：１６１〜２０６頁（１９８５年）。
【００９１】
「ＣＨ３ドメイン」（「Ｈ３」ドメインの（ｏｒ）「Ｃ２」とも呼ぶ）は、Ｆｃ領域中のＣＨ２ドメインに対してＣ末端側の残基のストレッチ（即ち、抗体配列の約アミノ酸残基３４１から、典型的には、ＩｇＧのアミノ酸残基４４６または４４７におけるＣ末端まで）を含む。
【００９２】
「機能的Ｆｃ断片」は、ネイティブ配列Ｆｃ領域の「エフェクター機能」を有する。例示的な「エフェクター機能」には、Ｃ１ｑ結合；補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）；Ｆｃ受容体結合；抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）；ファゴサイトーシス；細胞表面受容体（例えば、Ｂ細胞受容体；ＢＣＲ）の下方調節などが含まれる。かかるエフェクター機能は一般に、結合ドメイン（例えば、抗体可変ドメイン）と組み合わせるためにＦｃ領域を必要とし、当該分野で公知の種々のアッセイを使用して評価され得る。
【００９３】
「変更された」ＦｃＲ結合親和性またはＡＤＣＣ活性を有するバリアントＩｇＧ  Ｆｃを有する抗体は、親ポリペプチド、またはネイティブ配列Ｆｃ領域を含むポリペプチドと比較して、増強されたかまたは弱められたかのいずれかのＦｃＲ結合活性（例えば、ＦｃγＲまたはＦｃＲｎ）および／またはＡＤＣＣ活性を有する抗体である。ＦｃＲへの「増加した結合を示す」バリアントＦｃは、親ポリペプチドまたはネイティブ配列ＩｇＧ  Ｆｃよりも高い親和性（例えば、より低い見かけのＫｄまたはＩＣ５０値）で、少なくとも１つのＦｃＲを結合する。一部の実施形態によれば、親ポリペプチドと比較した結合における改善は、結合における、約３倍、例えば、約５、１０、２５、５０、６０、１００、１５０、２００もしくは最大で５００倍のいずれか、または約２５％〜１０００％の改善である。ＦｃＲへの「減少した結合を示す」ポリペプチドバリアントは、親ポリペプチドよりも低い親和性（例えば、より高い見かけのＫｄまたはより高いＩＣ５０値）で、少なくとも１つのＦｃＲを結合する。親ポリペプチドと比較した結合における減少は、結合における約４０％またはそれ超の減少であり得る。
【００９４】
「抗体依存性細胞媒介性細胞傷害」または「ＡＤＣＣ」とは、ある特定の細胞傷害性細胞（例えば、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、好中球およびマクロファージ）上に存在するＦｃ受容体（ＦｃＲ）に結合した分泌型Ｉｇが、これらの細胞傷害性エフェクター細胞に、抗原保有標的細胞に特異的に結合し、引き続いて細胞毒を用いて標的細胞を死滅させることができるようにさせる、細胞傷害の形態を指す。抗体は、細胞傷害性細胞を「強化し（ａｒｍ）」、かかる殺滅に絶対に必要とされる。ＡＤＣＣを媒介するための主な細胞であるＮＫ細胞は、ＦｃγＲＩＩＩのみを発現するが、単球は、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩおよびＦｃγＲＩＩＩを発現する。造血細胞上でのＦｃＲ発現は、ＲａｖｅｔｃｈおよびＫｉｎｅｔ、Ａｎｎｕ．  Ｒｅｖ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ９巻：４５７〜９２頁（１９９１年）の第４６４頁の表３にまとめられている。目的の分子のＡＤＣＣ活性を評価するために、米国特許第５，５００，３６２号または第５，８２１，３３７号に記載されるものなどのｉｎ  ｖｉｔｒｏ  ＡＤＣＣアッセイが実施され得る。かかるアッセイに有用なエフェクター細胞には、末梢血単核球（ＰＢＭＣ）およびナチュラルキラー（ＮＫ）細胞が含まれる。あるいは、またはさらに、目的の分子のＡＤＣＣ活性は、例えば、Ｃｌｙｎｅｓら  ＰＮＡＳ  （ＵＳＡ）  ９５巻：６５２〜６５６頁（１９９８年）に開示されるものなどの動物モデルにおいて、ｉｎ  ｖｉｖｏで評価され得る。
【００９５】
野生型ＩｇＧ  Ｆｃを有するポリペプチドまたは親ポリペプチドよりも有効に、ヒトエフェクター細胞の存在下で、「増加したＡＤＣＣを示す」または抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）を媒介するバリアントＦｃ領域を含むポリペプチドは、アッセイにおけるバリアントＦｃ領域を有するポリペプチドの量および野生型Ｆｃ領域を有するポリペプチド（または親ポリペプチド）の量が本質的に同じ場合、ｉｎ  ｖｉｔｒｏまたはｉｎ  ｖｉｖｏで、ＡＤＣＣを媒介するにあたって実質的により有効であるポリペプチドである。一般に、かかるバリアントは、例えば、動物モデルなどにおいて、当該分野で公知の任意のｉｎ  ｖｉｔｒｏ  ＡＤＣＣアッセイ、例えば、ＡＤＣＣ活性を決定するためのアッセイまたは方法を使用して同定される。一部の実施形態では、バリアントは、野生型Ｆｃ（または親ポリペプチド）よりも、ＡＤＣＣを媒介するにあたって、約５倍〜約１００倍、例えば、約２５〜約５０倍有効である。
【００９６】
「補体依存性細胞傷害」または「ＣＤＣ」とは、補体の存在下での標的細胞の溶解を指す。古典的補体経路の活性化は、それらの同系抗原に結合した（適切なサブクラスの）抗体への、補体系の最初の成分（Ｃ１ｑ）の結合によって開始される。補体活性化を評価するために、例えば、Ｇａｚｚａｎｏ−Ｓａｎｔｏｒｏら、Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ２０２巻：１６３頁（１９９６年）に記載されるＣＤＣアッセイが実施され得る。変更されたＦｃ領域アミノ酸配列および増加または減少したＣ１ｑ結合能力を有するポリペプチドバリアントは、米国特許第６，１９４，５５１Ｂ１号およびＷＯ９９／５１６４２に記載されている。これらの特許公開の内容は、参照によって本明細書に具体的に組み込まれる。Ｉｄｕｓｏｇｉｅら  Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  １６４巻：４１７８〜４１８４頁（２０００年）もまた参照のこと。
【００９７】
特記しない限り、「アミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列」は、互いの縮重バージョンであり、同じアミノ酸配列をコードする、全てのヌクレオチド配列を含む。タンパク質またはＲＮＡをコードする、語句ヌクレオチド配列は、タンパク質をコードするヌクレオチド配列が一部のバージョンにおいてイントロン（複数可）を含み得る限りにおいて、イントロンもまた含み得る。
【００９８】
用語「作動可能に連結した」とは、後者の発現を生じる、調節配列と異種核酸配列との間の機能的連結を指す。例えば、第１の核酸配列が、第２の核酸配列と機能的に関連して配置される場合、第１の核酸配列は、第２の核酸配列と作動可能に連結している。例えば、プロモーターが、コード配列の転写または発現に影響を与える場合、そのプロモーターは、コード配列に作動可能に連結している。一般に、作動可能に連結したＤＮＡ配列は、連続的であり、必要に応じて、同じリーディングフレームで２つのタンパク質コード領域を結合させる（ｊｏｉｎ）。
【００９９】
「相同」とは、２つのポリペプチド間または２つの核酸分子間の配列類似性または配列同一性を指す。２つの比較される配列の両方中のある位置が、同じ塩基またはアミノ酸モノマーサブユニットによって占められる場合、例えば、２つのＤＮＡ分子の各々中のある位置がアデニンによって占められる場合、これらの分子は、その位置において相同である。２つの配列間の相同性のパーセントは、比較される位置の数によって除算された、２つの配列によって共有される一致するまたは相同の位置の数に、１００を乗じた関数である。例えば、２つの配列中の１０個の位置のうち６つが一致しているまたは相同である場合、これら２つの配列は、６０％相同である。例として、ＤＮＡ配列ＡＴＴＧＣＣおよびＴＡＴＧＧＣは、５０％の相同性を共有する。一般に、２つの配列が最大の相同性を与えるようにアラインされるとき、比較が行われる。
【０１００】
本明細書に開示される抗ＡＭＣ構築物または組成物の「有効量」は、具体的に述べられた目的を成し遂げるのに十分な量である。「有効量」は、実験的に、および述べられた目的に関連する公知の方法によって、決定され得る。
【０１０１】
用語「治療有効量」とは、個体における疾患または障害を「処置する」のに有効な、本明細書に開示される抗ＡＭＣ構築物または組成物の量を指す。がんの場合、本明細書に開示される抗ＡＭＣ構築物または組成物の治療有効量は、がん細胞の数を低減させ得；腫瘍のサイズもしくは重量を低減させ得；末梢臓器中へのがん細胞浸潤を阻害し得（即ち、ある程度まで減速させる、好ましくは停止させる）；腫瘍転移を阻害し得（即ち、ある程度まで減速させる、好ましくは停止させる）；腫瘍成長をある程度まで阻害し得；および／またはがんと関連する症状のうち１もしくは複数をある程度まで軽減し得る。本明細書に開示される抗ＡＭＣ構築物または組成物は、成長を防止し得および／または既存のがん細胞を死滅させ得る限りにおいて、細胞増殖抑制性および／または細胞傷害性であり得る。一部の実施形態では、治療有効量は、成長阻害量である。一部の実施形態では、治療有効量は、患者の生存期間を延長させる量である。一部の実施形態では、治療有効量は、患者の無増悪生存期間を改善する量である。
【０１０２】
本明細書で使用する場合、「薬学的に許容される」または「薬理学的に適合する」とは、生物学的にも他の点でも望ましくないことのない材料を意味し、例えば、材料は、任意の顕著な望ましくない生物学的影響を引き起こすことも、それが含まれる組成物の他の成分のいずれかと有害な様式で相互作用することもなしに、患者に投与される医薬組成物中に組み入れることができる。薬学的に許容されるキャリアまたは賦形剤は、好ましくは、毒性学的試験および製造試験の必要な標準を満たし、ならびに／または米国食品医薬品局が作成したＩｎａｃｔｉｖｅ  Ｉｎｇｒｅｄｉｅｎｔ  Ｇｕｉｄｅ上に含まれる。
【０１０３】
用語「標識」とは、本明細書で使用する場合、抗ＡＭＣ抗体部分に直接的または間接的に結合体化され得る検出可能な化合物または組成物を指す。標識は、それ自体で検出可能であり得（例えば、放射性同位体標識または蛍光標識）、または酵素標識の場合、検出可能な基質化合物または組成物の化学的変更を触媒し得る。
【０１０４】
本明細書に記載される発明の実施形態は、実施形態「からなる」および／または実施形態「から本質的になる」を含むことが理解される。
【０１０５】
本明細書の「約」値またはパラメーターに対する言及は、その値またはパラメーター自体に対する変動を含む（および記載する）。例えば、「約Ｘ」に言及する記載は、「Ｘ」の記載を含む。
【０１０６】
本明細書で使用する場合、値またはパラメーター「ではない」に対する言及は、値またはパラメーター「以外」を一般に意味し記載する。例えば、方法が、Ｘ型のがんを処置するために使用されないとは、この方法が、Ｘ以外の型のがんを処置するために使用されることを意味する。
【０１０７】
本明細書および添付の特許請求の範囲で使用する場合、単数形「１つの、ある（ａ）」、「もしくは、または、あるいは（ｏｒ）」および「この、その、前記、該（ｔｈｅ）」は、文脈が明らかに他を指定しない限り、複数の指示対象を含む。
【０１０８】
抗ＡＭＣ構築物
一態様では、本発明は、ＡＦＰペプチドおよびＭＨＣクラスＩタンパク質を含む複合体（「ＡＦＰ／ＭＨＣクラスＩ複合体」または「ＡＭＣ」）に特異的に結合する抗体部分を含むＡＦＰ／ＭＨＣクラスＩ複合体特異的構築物（抗ＡＭＣ構築物）を提供する。抗ＡＭＣ構築物の特異性は、ＡＭＣに特異的に結合する抗ＡＭＣ抗体部分、例えば、全長抗体またはその抗原結合断片に由来する。一部の実施形態では、ＡＦＰペプチドおよびＭＨＣクラスＩタンパク質を含む複合体に特異的に結合する部分（例えば、抗体部分）に対する言及は、ａ）全長ＡＦＰ、遊離ＡＦＰペプチド、ペプチドに結合していないＭＨＣクラスＩタンパク質および非ＡＦＰペプチドに結合したＭＨＣクラスＩタンパク質の各々についてのその結合親和性の少なくとも約１０（例えば、少なくとも約１０、２０、３０、４０、５０、７５、１００、２００、３００、４００、５００、７５０、１０００またはそれ超のいずれかを含む）倍である親和性；またはｂ）全長ＡＦＰ、遊離ＡＦＰペプチド、ペプチドに結合していないＭＨＣクラスＩタンパク質および非ＡＦＰペプチドに結合したＭＨＣクラスＩタンパク質の各々への結合についてのそのＫｄの約１／１０倍以下（例えば、約１／１０、１／２０、１／３０、１／４０、１／５０、１／７５、１／１００、１／２００、１／３００、１／４００、１／５００、１／７５０、１／１０００またはそれ未満のいずれか以下）のＫｄで、その部分がＡＭＣに結合することを意味する。結合親和性は、当該分野で公知の方法、例えば、ＥＬＩＳＡ、蛍光活性化細胞分取（ＦＡＣＳ）分析または放射性免疫沈降アッセイ（ＲＩＡ）によって決定され得る。Ｋｄは、当該分野で公知の方法、例えば、Ｂｉａｃｏｒｅ機器を利用する表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）アッセイまたは、例えば、Ｓａｐｉｄｙｎｅ機器を利用する動的排除（ｋｉｎｅｔｉｃ  ｅｘｃｌｕｓｉｏｎ）アッセイ（ＫｉｎＥｘＡ）などによって決定され得る。
【０１０９】
企図された抗ＡＭＣ構築物には、例えば、全長抗ＡＭＣ抗体、多特異的（例えば、二重特異的）抗ＡＭＣ分子、抗ＡＭＣキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）および抗ＡＭＣイムノコンジュゲートが含まれる。
【０１１０】
例えば、一部の実施形態では、ＡＦＰペプチドおよびＭＨＣクラスＩタンパク質を含む複合体に特異的に結合する抗ＡＭＣ抗体部分を含む抗ＡＭＣ構築物（例えば、単離された抗ＡＭＣ構築物）が提供される。一部の実施形態では、ＡＦＰペプチドは、ＡＦＰ１５８（配列番号４）である。一部の実施形態では、ＭＨＣクラスＩタンパク質は、ＨＬＡ−Ａ０２である。一部の実施形態では、ＭＨＣクラスＩタンパク質は、ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１（ＧｅｎＢａｎｋ受託番号：ＡＡＯ２０８５３）である。一部の実施形態では、抗ＡＭＣ構築物は、天然に存在しない。一部の実施形態では、抗ＡＭＣ構築物は、全長抗体である。一部の実施形態では、抗ＡＭＣ構築物は、多特異的（例えば、二重特異的）分子である。一部の実施形態では、抗ＡＭＣ構築物は、キメラ抗原受容体である。一部の実施形態では、抗ＡＭＣ構築物は、イムノコンジュゲートである。一部の実施形態では、抗ＡＭＣ構築物は、約０．１ｐＭ〜約５００ｎＭの間（例えば、これらの値の間の任意の範囲を含んで、約０．１ｐＭ、１．０ｐＭ、１０ｐＭ、５０ｐＭ、１００ｐＭ、５００ｐＭ、１ｎＭ、１０ｎＭ、５０ｎＭ、１００ｎＭまたは５００ｎＭのいずれか）のＫｄで、ＡＭＣを結合する。一部の実施形態では、抗ＡＭＣ構築物は、ＭＨＣクラスＩタンパク質および１つのアミノ酸置換（例えば、保存的アミノ酸置換）を有するＡＦＰペプチドのバリアントを含む少なくとも１つ（例えば、少なくとも２、３、４、５または６のいずれか）の複合体と交差反応する。一部の実施形態では、抗ＡＭＣ構築物は、ＡＦＰペプチドおよび異なるサブタイプのＭＨＣクラスＩタンパク質を含む少なくとも１つ（例えば、少なくとも２、３、４または５のいずれか）の複合体と交差反応する。
【０１１１】
一部の実施形態では、ＡＦＰ１５８ペプチド（配列番号４）およびＨＬＡ−Ａ＊０２：０１を含む複合体に特異的に結合する抗ＡＭＣ抗体部分を含む抗ＡＭＣ構築物が提供される。一部の実施形態では、抗ＡＭＣ構築物は、天然に存在しない。一部の実施形態では、抗ＡＭＣ構築物は、全長抗体である。一部の実施形態では、抗ＡＭＣ構築物は、多特異的（例えば、二重特異的）分子である。一部の実施形態では、抗ＡＭＣ構築物は、キメラ抗原受容体である。一部の実施形態では、抗ＡＭＣ構築物は、イムノコンジュゲートである。一部の実施形態では、抗ＡＭＣ構築物は、約０．１ｐＭ〜約５００ｎＭの間（例えば、これらの値の間の任意の範囲を含んで、約０．１ｐＭ、１．０ｐＭ、１０ｐＭ、５０ｐＭ、１００ｐＭ、５００ｐＭ、１ｎＭ、１０ｎＭ、５０ｎＭ、１００ｎＭまたは５００ｎＭのいずれか）のＫｄで、ＡＭＣを結合する。一部の実施形態では、抗ＡＭＣ構築物は、ＭＨＣクラスＩタンパク質および１つのアミノ酸置換（例えば、保存的アミノ酸置換）を有するＡＦＰペプチドのバリアントを含む少なくとも１つ（例えば、少なくとも２、３、４、５または６のいずれか）の複合体と交差反応する。一部の実施形態では、抗ＡＭＣ構築物は、ＡＦＰペプチドおよび異なるサブタイプのＭＨＣクラスＩタンパク質を含む少なくとも１つ（例えば、少なくとも２、３、４または５のいずれか）の複合体と交差反応する。
【０１１２】
一部の実施形態では、ＡＦＰペプチドおよびＭＨＣクラスＩタンパク質を含む複合体に特異的に結合する抗ＡＭＣ抗体部分であって、ｉ）Ｇ−Ｆ／Ｙ−Ｓ／Ｔ−Ｆ−Ｄ／Ｓ／Ｔ−Ｄ／Ｎ／Ｓ−Ｙ／Ａ−Ａ／Ｇ／Ｗ（配列番号８７）のアミノ酸配列を含むＨＣ−ＣＤＲ１、または最大で約３（例えば、約１、２または３のいずれか）アミノ酸の置換を含むそのバリアント、Ｉ／Ｓ−Ｋ／Ｓ−Ｘ−Ｈ／Ｙ−Ｘ−Ｇ−Ｘ−Ｔ（配列番号８８）のアミノ酸配列を含むＨＣ−ＣＤＲ２、または最大で約３（例えば、約１、２または３のいずれか）アミノ酸の置換を含むそのバリアント、およびＡ／Ｇ−Ｘ−Ｗ／Ｙ−Ｙ−Ｘ−Ｘ−Ｘ−Ｆ／Ｙ−Ｄ（配列番号８９）のアミノ酸配列を含むＨＣ−ＣＤＲ３；または最大で約３（例えば、約１、２または３のいずれか）アミノ酸の置換を含むそのバリアントを含む重鎖可変ドメイン配列；ならびにｉｉ）Ｓ／Ｔ−Ｇ／Ｓ−Ｄ／Ｎ−Ｉ／Ｖ−Ａ／Ｇ−Ａ／Ｓ／Ｖ−Ｘ−Ｈ／Ｙ（配列番号１２０）のアミノ酸配列を含むＬＣ−ＣＤＲ１、または最大で約３（例えば、約１、２または３のいずれか）アミノ酸の置換を含むそのバリアント、およびＱ−Ｓ／Ｔ−Ｙ／Ｗ−Ｄ／Ｔ−Ｓ／Ｔ−Ａ／Ｓ（配列番号１２１）のアミノ酸配列を含むＬＣ−ＣＤＲ３、または最大で約３（例えば、約１、２または３のいずれか）アミノ酸の置換を含むそのバリアントを含む軽鎖可変ドメインを含み；Ｘは任意のアミノ酸であり得る、抗ＡＭＣ抗体部分を含む抗ＡＭＣ構築物が提供される。一部の実施形態では、抗ＡＭＣ構築物は、天然に存在しない。一部の実施形態では、抗ＡＭＣ構築物は、全長抗体である。一部の実施形態では、抗ＡＭＣ構築物は、多特異的（例えば、二重特異的）分子である。一部の実施形態では、抗ＡＭＣ構築物は、キメラ抗原受容体である。一部の実施形態では、抗ＡＭＣ構築物は、イムノコンジュゲートである。一部の実施形態では、抗ＡＭＣ構築物は、約０．１ｐＭ〜約５００ｎＭの間（例えば、これらの値の間の任意の範囲を含んで、約０．１ｐＭ、１．０ｐＭ、１０ｐＭ、５０ｐＭ、１００ｐＭ、５００ｐＭ、１ｎＭ、１０ｎＭ、５０ｎＭ、１００ｎＭまたは５００ｎＭのいずれか）のＫｄで、ＡＭＣを結合する。一部の実施形態では、抗ＡＭＣ構築物は、ＭＨＣクラスＩタンパク質および１つのアミノ酸置換（例えば、保存的アミノ酸置換）を有するＡＦＰペプチドのバリアントを含む少なくとも１つ（例えば、少なくとも２、３、４、５または６のいずれか）の複合体と交差反応する。一部の実施形態では、抗ＡＭＣ構築物は、ＡＦＰペプチドおよび異なるサブタイプのＭＨＣクラスＩタンパク質を含む少なくとも１つ（例えば、少なくとも２、３、４または５のいずれか）の複合体と交差反応する。
【０１１３】
一部の実施形態では、ＡＦＰペプチドおよびＭＨＣクラスＩタンパク質を含む複合体に特異的に結合する抗ＡＭＣ抗体部分であって、ｉ）配列番号５７〜６６のいずれか１つのアミノ酸配列を含む（一部の実施形態ではそれからなる）ＨＣ−ＣＤＲ１；または最大で約５（例えば、約１、２、３、４または５のいずれか）アミノ酸の置換を含むそのバリアント；配列番号６７〜７６のいずれか１つのアミノ酸配列を含む（一部の実施形態ではそれからなる）ＨＣ−ＣＤＲ２；または最大で約５（例えば、約１、２、３、４または５のいずれか）アミノ酸の置換を含むそのバリアント；および配列番号７７〜８６のいずれか１つのアミノ酸配列を含む（一部の実施形態ではそれからなる）ＨＣ−ＣＤＲ３；または最大で約５（例えば、約１、２、３、４または５のいずれか）アミノ酸の置換を含むそのバリアントを含む重鎖可変ドメイン配列；ならびにｉｉ）配列番号９０〜９９のいずれか１つのアミノ酸配列を含む（一部の実施形態ではそれからなる）ＬＣ−ＣＤＲ１；または最大で約５（例えば、約１、２、３、４または５のいずれか）アミノ酸の置換を含むそのバリアント；配列番号１００〜１０９のいずれか１つのアミノ酸配列を含む（一部の実施形態ではそれからなる）ＬＣ−ＣＤＲ２；または最大で約３（例えば、約１、２または３のいずれか）アミノ酸の置換を含むそのバリアント；および配列番号１１０〜１１９のいずれか１つのアミノ酸配列を含む（一部の実施形態ではそれからなる）ＬＣ−ＣＤＲ３；または最大で約５（例えば、約１、２、３、４または５のいずれか）アミノ酸の置換を含むそのバリアントを含む軽鎖可変ドメイン配列を含む抗ＡＭＣ抗体部分を含む抗ＡＭＣ構築物が提供される。一部の実施形態では、抗ＡＭＣ構築物は、天然に存在しない。一部の実施形態では、抗ＡＭＣ構築物は、全長抗体である。一部の実施形態では、抗ＡＭＣ構築物は、多特異的（例えば、二重特異的）分子である。一部の実施形態では、抗ＡＭＣ構築物は、キメラ抗原受容体である。一部の実施形態では、抗ＡＭＣ構築物は、イムノコンジュゲートである。一部の実施形態では、抗ＡＭＣ構築物は、約０．１ｐＭ〜約５００ｎＭの間（例えば、これらの値の間の任意の範囲を含んで、約０．１ｐＭ、１．０ｐＭ、１０ｐＭ、５０ｐＭ、１００ｐＭ、５００ｐＭ、１ｎＭ、１０ｎＭ、５０ｎＭ、１００ｎＭまたは５００ｎＭのいずれか）のＫｄで、ＡＭＣを結合する。一部の実施形態では、抗ＡＭＣ構築物は、ＭＨＣクラスＩタンパク質および１つのアミノ酸置換（例えば、保存的アミノ酸置換）を有するＡＦＰペプチドのバリアントを含む少なくとも１つ（例えば、少なくとも２、３、４、５または６のいずれか）の複合体と交差反応する。一部の実施形態では、抗ＡＭＣ構築物は、ＡＦＰペプチドおよび異なるサブタイプのＭＨＣクラスＩタンパク質を含む少なくとも１つ（例えば、少なくとも２、３、４または５のいずれか）の複合体と交差反応する。
【０１１４】
一部の実施形態では、ＡＦＰペプチドおよびＭＨＣクラスＩタンパク質を含む複合体に特異的に結合する抗ＡＭＣ抗体部分であって、ｉ）配列番号５７〜６６のいずれか１つのアミノ酸配列を含む（一部の実施形態ではそれからなる）ＨＣ−ＣＤＲ１；配列番号６７〜７６のいずれか１つのアミノ酸配列を含む（一部の実施形態ではそれからなる）ＨＣ−ＣＤＲ２；および配列番号７７〜８６のいずれか１つのアミノ酸配列を含む（一部の実施形態ではそれからなる）ＨＣ−ＣＤＲ３を含む重鎖可変ドメイン配列；またはＨＣ−ＣＤＲ配列中に最大で約５（例えば、約１、２、３、４または５のいずれか）アミノ酸の置換を含むそのバリアント；ならびにｉｉ）配列番号９０〜９９のいずれか１つのアミノ酸配列を含む（一部の実施形態ではそれからなる）ＬＣ−ＣＤＲ１；配列番号１００〜１０９のいずれか１つのアミノ酸配列を含む（一部の実施形態ではそれからなる）ＬＣ−ＣＤＲ２；および配列番号１１０〜１１９のいずれか１つのアミノ酸配列を含む（一部の実施形態ではそれからなる）ＬＣ−ＣＤＲ３を含む軽鎖可変ドメイン配列；またはＬＣ−ＣＤＲ配列中に最大で約５（例えば、約１、２、３、４または５のいずれか）アミノ酸の置換を含むそのバリアントを含む抗ＡＭＣ抗体部分を含む抗ＡＭＣ構築物が提供される。一部の実施形態では、抗ＡＭＣ構築物は、天然に存在しない。一部の実施形態では、抗ＡＭＣ構築物は、全長抗体である。一部の実施形態では、抗ＡＭＣ構築物は、多特異的（例えば、二重特異的）分子である。一部の実施形態では、抗ＡＭＣ構築物は、キメラ抗原受容体である。一部の実施形態では、抗ＡＭＣ構築物は、イムノコンジュゲートである。一部の実施形態では、抗ＡＭＣ構築物は、約０．１ｐＭ〜約５００ｎＭの間（例えば、これらの値の間の任意の範囲を含んで、約０．１ｐＭ、１．０ｐＭ、１０ｐＭ、５０ｐＭ、１００ｐＭ、５００ｐＭ、１ｎＭ、１０ｎＭ、５０ｎＭ、１００ｎＭまたは５００ｎＭのいずれか）のＫｄで、ＡＭＣを結合する。一部の実施形態では、抗ＡＭＣ構築物は、ＭＨＣクラスＩタンパク質および１つのアミノ酸置換（例えば、保存的アミノ酸置換）を有するＡＦＰペプチドのバリアントを含む少なくとも１つ（例えば、少なくとも２、３、４、５または６のいずれか）の複合体と交差反応する。一部の実施形態では、抗ＡＭＣ構築物は、ＡＦＰペプチドおよび異なるサブタイプのＭＨＣクラスＩタンパク質を含む少なくとも１つ（例えば、少なくとも２、３、４または５のいずれか）の複合体と交差反応する。
【０１１５】
一部の実施形態では、ＡＦＰペプチドおよびＭＣＨクラスＩタンパク質を含む複合体に特異的に結合する抗ＡＭＣ抗体部分であって、配列番号１７〜２６のいずれか１つのアミノ酸配列を含む（一部の実施形態ではそれからなる）重鎖可変ドメイン、または少なくとも約９５％（例えば、少なくとも約９６％、９７％、９８％または９９％のいずれか）の配列同一性を有するそのバリアント、および配列番号２７〜３６のいずれか１つのアミノ酸配列を含む（一部の実施形態ではそれからなる）軽鎖可変ドメイン、または少なくとも約９５％（例えば、少なくとも約９６％、９７％、９８％または９９％のいずれか）の配列同一性を有するそのバリアントを含む抗ＡＭＣ抗体部分を含む抗ＡＭＣ構築物が提供される。一部の実施形態では、抗ＡＭＣ構築物は、天然に存在しない。一部の実施形態では、抗ＡＭＣ構築物は、全長抗体である。一部の実施形態では、抗ＡＭＣ構築物は、多特異的（例えば、二重特異的）分子である。一部の実施形態では、抗ＡＭＣ構築物は、キメラ抗原受容体である。一部の実施形態では、抗ＡＭＣ構築物は、イムノコンジュゲートである。一部の実施形態では、抗ＡＭＣ構築物は、約０．１ｐＭ〜約５００ｎＭの間（例えば、これらの値の間の任意の範囲を含んで、約０．１ｐＭ、１．０ｐＭ、１０ｐＭ、５０ｐＭ、１００ｐＭ、５００ｐＭ、１ｎＭ、１０ｎＭ、５０ｎＭ、１００ｎＭまたは５００ｎＭのいずれか）のＫｄで、ＡＭＣを結合する。一部の実施形態では、抗ＡＭＣ構築物は、ＭＨＣクラスＩタンパク質および１つのアミノ酸置換（例えば、保存的アミノ酸置換）を有するＡＦＰペプチドのバリアントを含む少なくとも１つ（例えば、少なくとも２、３、４、５または６のいずれか）の複合体と交差反応する。一部の実施形態では、抗ＡＭＣ構築物は、ＡＦＰペプチドおよび異なるサブタイプのＭＨＣクラスＩタンパク質を含む少なくとも１つ（例えば、少なくとも２、３、４または５のいずれか）の複合体と交差反応する。
【０１１６】
一部の実施形態では、標的ＡＦＰ／ＭＨＣクラスＩ複合体への結合について、本明細書に記載される抗ＡＭＣ抗体部分のいずれかに従う第２の抗ＡＭＣ抗体部分と競合する第１の抗ＡＭＣ抗体部分を含む抗ＡＭＣ構築物が提供される。一部の実施形態では、第１の抗ＡＭＣ抗体部分は、第２の抗ＡＭＣ抗体部分と同じまたは実質的に同じエピトープに結合する。一部の実施形態では、標的ＡＦＰ／ＭＨＣクラスＩ複合体への第１の抗ＡＭＣ抗体部分の結合は、標的ＡＦＰ／ＭＨＣクラスＩ複合体への第２の抗ＡＭＣ抗体部分の結合を、少なくとも約７０％（例えば、少なくとも約７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９８％または９９％のいずれか）阻害し、または逆もまた同様である。一部の実施形態では、第１の抗ＡＭＣ抗体部分および第２の抗ＡＭＣ抗体部分は、標的ＡＦＰ／ＭＨＣクラスＩ複合体への結合について交差競合する、即ち、第１および第２の抗体部分の各々は、標的ＡＦＰ／ＭＨＣクラスＩ複合体への結合について他方と競合する。
【０１１７】
異なる態様は、以下の種々のセクションにおいてさらに詳細に議論される。
【０１１８】
抗ＡＭＣ抗体部分
抗ＡＭＣ構築物は、ＡＦＰペプチドおよびＭＨＣクラスＩタンパク質を含む複合体に特異的に結合する抗ＡＭＣ抗体部分を含む。
【０１１９】
一部の実施形態では、抗ＡＭＣ抗体部分は、細胞の表面上に存在するＡＭＣに特異的に結合する。一部の実施形態では、細胞は、異常に高いレベルのＡＦＰをその表面上に提示する。一部の実施形態では、細胞は、がん細胞である。一部の実施形態では、がん細胞は、固形腫瘍中にある。一部の実施形態では、がん細胞は、転移性がん細胞である。
【０１２０】
一部の実施形態では、ＡＦＰペプチドは、ＭＨＣクラスＩ拘束されたペプチドである。一部の実施形態では、ＡＦＰペプチドは、約８〜約１２（例えば、約８、９、１０、１１または１２のいずれか）アミノ酸長である。一部の実施形態では、ＡＦＰペプチドは、ヒトＡＦＰ（ｈＡＦＰ）、マウスＡＦＰ（ｍＡＦＰ）またはラットＡＦＰ（ｒＡＦＰ）に由来する。
【０１２１】
一部の実施形態では、ＡＦＰペプチドは、ｈＡＦＰに由来する。一部の実施形態では、ＡＦＰペプチドは、ｈＡＦＰのアミノ酸１３７〜１４５（ＰＬＦＱＶＰＥＰＶ、配列番号３）、ｈＡＦＰのアミノ酸１５８〜１６６（ＦＭＮＫＦＩＹＥＩ、配列番号４、本明細書で「ＡＦＰ１５８」とも呼ぶ）、ｈＡＦＰのアミノ酸３２５〜３３４（ＧＬＳＰＮＬＮＲＦＬ、配列番号５）またはｈＡＦＰのアミノ酸５４２〜５０（ＧＶＡＬＱＴＭＫＱ、配列番号６）の配列を含む（一部の実施形態ではそれらからなる）。
【０１２２】
一部の実施形態では、ＡＦＰペプチドは、ｍＡＦＰに由来する。一部の実施形態では、ＡＦＰペプチドは、ｍＡＦＰのアミノ酸１５４〜１６２（ＦＭＮＲＦＩＹＥＶ、配列番号１６）の配列を含む。
【０１２３】
一部の実施形態では、ＭＨＣクラスＩタンパク質は、ＨＬＡ−Ａ、ＨＬＡ−Ｂ、ＨＬＡ−Ｃ、ＨＬＡ−Ｅ、ＨＬＡ−ＦまたはＨＬＡ−Ｇである。一部の実施形態では、ＭＨＣクラスＩタンパク質は、ＨＬＡ−Ａである。一部の実施形態では、ＨＬＡ−Ａは、ＨＬＡ−Ａ０２である。一部の実施形態では、ＨＬＡ−Ａ０２は、ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１である。
【０１２４】
一部の実施形態では、抗ＡＭＣ抗体部分は、全長抗体である。一部の実施形態では、抗ＡＭＣ抗体部分は、抗原結合断片、例えば、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ断片、ジスルフィド安定化Ｆｖ断片（ｄｓＦｖ）および単鎖抗体分子（ｓｃＦｖ）からなる群から選択される抗原結合断片である。一部の実施形態では、抗ＡＭＣ抗体部分は、ｓｃＦｖである。一部の実施形態では、抗ＡＭＣ抗体部分は、ヒト、ヒト化または半合成である。
【０１２５】
一部の実施形態では、抗ＡＭＣ抗体部分は、複合体中のＡＦＰペプチドのＮ末端部分に特異的に結合する。一部の実施形態では、抗ＡＭＣ抗体部分は、複合体中のＡＦＰペプチドのＣ末端部分に特異的に結合する。一部の実施形態では、抗ＡＭＣ抗体部分は、複合体中のＡＦＰペプチドの中央部分に特異的に結合する。
【０１２６】
一部の実施形態では、抗ＡＭＣ抗体部分は、ＡＦＰペプチドおよびＭＨＣクラスＩタンパク質を含む複合体に特異的に結合し、この抗ＡＭＣ抗体部分は、ＡＦＰペプチドおよびＭＨＣクラスＩタンパク質の対立遺伝子バリアントを含む少なくとも１つの複合体と交差反応する。一部の実施形態では、対立遺伝子バリアントは、ＭＨＣクラスＩタンパク質と比較した場合、最大で約１０（例えば、約１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０のいずれか）アミノ酸の置換を有する。一部の実施形態では、対立遺伝子バリアントは、ＭＨＣクラスＩタンパク質と同じ血清型である。一部の実施形態では、対立遺伝子バリアントは、ＭＨＣクラスＩタンパク質とは異なる血清型である。一部の実施形態では、抗ＡＭＣ抗体部分は、ＡＦＰペプチドおよびＭＨＣクラスＩタンパク質の任意の対立遺伝子バリアントを含む複合体と交差反応しない。
【０１２７】
一部の実施形態では、抗ＡＭＣ抗体部分は、ＡＦＰペプチドおよびＭＨＣクラスＩタンパク質を含む複合体に特異的に結合し、この抗ＡＭＣ抗体部分は、ＭＨＣクラスＩタンパク質および１つのアミノ酸置換（例えば、保存的置換）を有するＡＦＰペプチドのバリアントを含む少なくとも１つの複合体と交差反応する。一部の実施形態では、抗ＡＭＣ抗体部分は、ＭＨＣクラスＩタンパク質およびＡＦＰペプチドの任意のバリアントを含む複合体と交差反応しない。
【０１２８】
一部の実施形態では、抗ＡＭＣ抗体部分は、ＡＦＰペプチドおよびＭＨＣクラスＩタンパク質を含む複合体に特異的に結合し、この抗ＡＭＣ抗体部分は、ＭＨＣクラスＩタンパク質およびＡＦＰペプチドの種間バリアントを含む少なくとも１つの複合体と交差反応する。一部の実施形態では、例えば、ＡＦＰペプチドは、ヒトＡＦＰペプチドであり、ＡＦＰペプチドの種間バリアントは、そのマウスまたはラットバリアントである。一部の実施形態では、抗ＡＭＣ抗体部分は、ＭＨＣクラスＩタンパク質およびＡＦＰペプチドの任意の種間バリアントを含む複合体と交差反応しない。
【０１２９】
一部の実施形態では、抗ＡＭＣ抗体部分（または抗ＡＭＣ抗体部分を含む抗ＡＭＣ構築物）は、全長ＡＦＰ、遊離ＡＦＰペプチド、ペプチドに結合していないＭＨＣクラスＩタンパク質および非ＡＦＰペプチドに結合したＭＨＣクラスＩタンパク質の各々に対するその結合親和性の少なくとも約１０（例えば、少なくとも約１０、２０、３０、４０、５０、７５、１００、２００、３００、４００、５００、７５０、１０００またはそれ超のいずれかを含む）倍である親和性で、ＡＦＰペプチドおよびＭＨＣクラスＩタンパク質を含む複合体に結合する。一部の実施形態では、抗ＡＭＣ抗体部分（または抗ＡＭＣ抗体部分を含む抗ＡＭＣ構築物）は、全長ＡＦＰ、遊離ＡＦＰペプチド、ペプチドに結合していないＭＨＣクラスＩタンパク質および非ＡＦＰペプチドに結合したＭＨＣクラスＩタンパク質の各々への結合についてのそのＫｄの約１／１０倍以下（例えば、約１／１０、１／２０、１／３０、１／４０、１／５０、１／７５、１／１００、１／２００、１／３００、１／４００、１／５００、１／７５０、１／１０００またはそれ未満のいずれか以下）のＫｄで、ＡＦＰペプチドおよびＭＨＣクラスＩタンパク質を含む複合体に結合する。
【０１３０】
一部の実施形態では、抗ＡＭＣ抗体部分（または抗ＡＭＣ抗体部分を含む抗ＡＭＣ構築物）は、約０．１ｐＭ〜約５００ｎＭの間（例えば、これらの値の間の任意の範囲を含んで、約０．１ｐＭ、１．０ｐＭ、１０ｐＭ、５０ｐＭ、１００ｐＭ、５００ｐＭ、１ｎＭ、１０ｎＭ、５０ｎＭ、１００ｎＭまたは５００ｎＭのいずれか）のＫｄで、ＡＦＰペプチドおよびＭＨＣクラスＩタンパク質を含む複合体に結合する。一部の実施形態では、抗ＡＭＣ抗体部分（または抗ＡＭＣ抗体部分を含む抗ＡＭＣ構築物）は、約１ｐＭ〜約２５０ｐＭの間（例えば、これらの値の間の任意の範囲を含んで、約１、１０、２５、５０、７５、１００、１５０、２００または２５０ｐＭのいずれか）のＫｄで、ＡＦＰペプチドおよびＭＨＣクラスＩタンパク質を含む複合体に結合する。一部の実施形態では、抗ＡＭＣ抗体部分（または抗ＡＭＣ抗体部分を含む抗ＡＭＣ構築物）は、約１ｎＭ〜約５００ｎＭの間（例えば、これらの値の間の任意の範囲を含んで、約１、１０、２５、５０、７５、１００、１５０、２００、２５０、３００、３５０、４００、４５０または５００ｎＭのいずれか）のＫｄで、ＡＦＰペプチドおよびＭＨＣクラスＩタンパク質を含む複合体に結合する。
【０１３１】
一部の実施形態では、抗ＡＭＣ抗体部分は、ＡＦＰ１５８（配列番号４）およびＭＨＣクラスＩタンパク質（例えば、ＨＬＡ−Ａ０２、例えば、ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１）を含む複合体に特異的に結合する。一部の実施形態では、抗ＡＭＣ抗体部分は、配列番号７のＡＦＰペプチドおよびＭＨＣクラスＩタンパク質（例えば、ＨＬＡ−Ａ０２、例えば、ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１）を含む複合体；配列番号８のＡＦＰペプチドおよびＭＨＣクラスＩタンパク質（例えば、ＨＬＡ−Ａ０２、例えば、ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１）を含む複合体；配列番号９のＡＦＰペプチドおよびＭＨＣクラスＩタンパク質（例えば、ＨＬＡ−Ａ０２、例えば、ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１）を含む複合体；配列番号１０のＡＦＰペプチドおよびＭＨＣクラスＩタンパク質（例えば、ＨＬＡ−Ａ０２、例えば、ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１）を含む複合体；配列番号１１のＡＦＰペプチドおよびＭＨＣクラスＩタンパク質（例えば、ＨＬＡ−Ａ０２、例えば、ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１）を含む複合体；配列番号１２のＡＦＰペプチドおよびＭＨＣクラスＩタンパク質（例えば、ＨＬＡ−Ａ０２、例えば、ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１）を含む複合体；ならびに配列番号１３のＡＦＰペプチドおよびＭＨＣクラスＩタンパク質（例えば、ＨＬＡ−Ａ０２、例えば、ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１）を含む複合体のうち少なくとも１つ（少なくとも約２、３、４、５、６または７のいずれかを含む）にさらに結合する。
【０１３２】
一部の実施形態では、抗ＡＭＣ抗体部分は、配列番号４のＡＦＰペプチドおよびＭＨＣクラスＩタンパク質（例えば、ＨＬＡ−Ａ０２、例えば、ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１）を含む複合体；配列番号１０のＡＦＰペプチドおよびＭＨＣクラスＩタンパク質（例えば、ＨＬＡ−Ａ０２、例えば、ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１）を含む複合体；配列番号１１のＡＦＰペプチドおよびＭＨＣクラスＩタンパク質（例えば、ＨＬＡ−Ａ０２、例えば、ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１）を含む複合体；配列番号１２のＡＦＰペプチドおよびＭＨＣクラスＩタンパク質（例えば、ＨＬＡ−Ａ０２、例えば、ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１）を含む複合体；ならびに配列番号１３のＡＦＰペプチドおよびＭＨＣクラスＩタンパク質（例えば、ＨＬＡ−Ａ０２、例えば、ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１）を含む複合体、に特異的に結合する。
【０１３３】
一部の実施形態では、抗ＡＭＣ抗体部分は、配列番号４のＡＦＰペプチドおよびＭＨＣクラスＩタンパク質（例えば、ＨＬＡ−Ａ０２、例えば、ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１）を含む複合体；配列番号７のＡＦＰペプチドおよびＭＨＣクラスＩタンパク質（例えば、ＨＬＡ−Ａ０２、例えば、ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１）を含む複合体；ならびに配列番号８のＡＦＰペプチドおよびＭＨＣクラスＩタンパク質（例えば、ＨＬＡ−Ａ０２、例えば、ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１）を含む複合体、に特異的に結合する。
【０１３４】
一部の実施形態では、抗ＡＭＣ抗体部分は、配列番号４のＡＦＰペプチドおよびＭＨＣクラスＩタンパク質（例えば、ＨＬＡ−Ａ０２、例えば、ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１）を含む複合体；配列番号８のＡＦＰペプチドおよびＭＨＣクラスＩタンパク質（例えば、ＨＬＡ−Ａ０２、例えば、ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１）を含む複合体；配列番号１０のＡＦＰペプチドおよびＭＨＣクラスＩタンパク質（例えば、ＨＬＡ−Ａ０２、例えば、ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１）を含む複合体；配列番号１１のＡＦＰペプチドおよびＭＨＣクラスＩタンパク質（例えば、ＨＬＡ−Ａ０２、例えば、ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１）を含む複合体；配列番号１２のＡＦＰペプチドおよびＭＨＣクラスＩタンパク質（例えば、ＨＬＡ−Ａ０２、例えば、ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１）を含む複合体；ならびに配列番号１３のＡＦＰペプチドおよびＭＨＣクラスＩタンパク質（例えば、ＨＬＡ−Ａ０２、例えば、ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１）を含む複合体、に特異的に結合する。
【０１３５】
一部の実施形態では、抗ＡＭＣ抗体部分は、配列番号４のＡＦＰペプチドおよびＭＨＣクラスＩタンパク質（例えば、ＨＬＡ−Ａ０２、例えば、ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１）を含む複合体；配列番号７のＡＦＰペプチドおよびＭＨＣクラスＩタンパク質（例えば、ＨＬＡ−Ａ０２、例えば、ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１）を含む複合体；ならびに配列番号１３のＡＦＰペプチドおよびＭＨＣクラスＩタンパク質（例えば、ＨＬＡ−Ａ０２、例えば、ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１）を含む複合体、に特異的に結合する。
【０１３６】
一部の実施形態では、抗ＡＭＣ抗体部分は、配列番号４のＡＦＰペプチドおよびＭＨＣクラスＩタンパク質（例えば、ＨＬＡ−Ａ０２、例えば、ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１）を含む複合体；配列番号７のＡＦＰペプチドおよびＭＨＣクラスＩタンパク質（例えば、ＨＬＡ−Ａ０２、例えば、ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１）を含む複合体；配列番号９のＡＦＰペプチドおよびＭＨＣクラスＩタンパク質（例えば、ＨＬＡ−Ａ０２、例えば、ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１）を含む複合体；配列番号１１のＡＦＰペプチドおよびＭＨＣクラスＩタンパク質（例えば、ＨＬＡ−Ａ０２、例えば、ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１）を含む複合体；ならびに配列番号１３のＡＦＰペプチドおよびＭＨＣクラスＩタンパク質（例えば、ＨＬＡ−Ａ０２、例えば、ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１）を含む複合体、に特異的に結合する。
【０１３７】
一部の実施形態では、抗ＡＭＣ抗体部分は、ＡＦＰ１５８（配列番号４）およびＨＬＡ−Ａ＊０２：０１を含む複合体に特異的に結合する。一部の実施形態では、抗−抗体部分（ａｎｔｉ−ａｎｔｉｂｏｄｙ  ｍｏｉｅｔｙ）は、ＡＦＰ１５８（配列番号４）およびＨＬＡ−Ａ＊０２：０２（ＧｅｎＢａｎｋ受託番号：ＡＦＬ９１４８０）を含む複合体、ＡＦＰ１５８（配列番号４）およびＨＬＡ−Ａ＊０２：０３（ＧｅｎＢａｎｋ受託番号：ＡＡＡ０３６０４）を含む複合体、ＡＦＰ１５８（配列番号４）およびＨＬＡ−Ａ＊０２：０５（ＧｅｎＢａｎｋ受託番号：ＡＡＡ０３６０３）を含む複合体、ＡＦＰ１５８（配列番号４）およびＨＬＡ−Ａ＊０２：０６（ＧｅｎＢａｎｋ受託番号：ＣＣＢ７８８６８）を含む複合体、ＡＦＰ１５８（配列番号４）およびＨＬＡ−Ａ＊０２：０７（ＧｅｎＢａｎｋ受託番号：ＡＣＲ５５７１２）を含む複合体、ならびにＡＦＰ１５８（配列番号４）およびＨＬＡ−Ａ＊０２：１１（ＧｅｎＢａｎｋ受託番号：ＣＡＢ５６６０９）を含む複合体のうち少なくとも１つ（少なくとも約２、３、４、５または６のいずれかを含む）と交差反応する。一部の実施形態では、抗ＡＭＣ抗体部分は、ＡＦＰ１５８（配列番号４）およびＨＬＡ−Ａ＊０２：０２を含む複合体、ＡＦＰ１５８（配列番号４）およびＨＬＡ−Ａ＊０２：０３を含む複合体、ならびにＡＦＰ１５８（配列番号４）およびＨＬＡ−Ａ＊０２：１１を含む複合体の各々と交差反応する。一部の実施形態では、抗ＡＭＣ抗体部分は、ＡＦＰ１５８（配列番号４）およびＨＬＡ−Ａ＊０２：０２を含む複合体、ＡＦＰ１５８（配列番号４）およびＨＬＡ−Ａ＊０２：０５を含む複合体、ＡＦＰ１５８（配列番号４）およびＨＬＡ−Ａ＊０２：０６を含む複合体、ＡＦＰ１５８（配列番号４）およびＨＬＡ−Ａ＊０２：０７を含む複合体、ならびにＡＦＰ１５８（配列番号４）およびＨＬＡ−Ａ＊０２：１１を含む複合体の各々と交差反応する。
【０１３８】
一部の実施形態では、抗ＡＭＣ抗体部分は、完全にヒトの配列および１または複数の合成領域を含む半合成抗体部分である。一部の実施形態では、抗ＡＭＣ抗体部分は、完全にヒトの軽鎖可変ドメイン、ならびに完全にヒトのＦＲ１、ＨＣ−ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＨＣ−ＣＤＲ２、ＦＲ３およびＦＲ４領域ならびに合成ＨＣ−ＣＤＲ３を含む半合成重鎖可変ドメインを含む半合成抗体部分である。一部の実施形態では、半合成重鎖可変ドメインは、約５〜約２５（例えば、約５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４または２５のいずれか）アミノ酸長の配列を有する完全に合成のＨＣ−ＣＤＲ３を含む。一部の実施形態では、半合成重鎖可変ドメインまたは合成ＨＣ−ＣＤＲ３は、約５〜約２５（例えば、約５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４または２５のいずれか）アミノ酸長の配列を有する完全に合成のＨＣ−ＣＤＲ３を含む半合成ライブラリー（例えば、半合成ヒトライブラリー）から取得され、この配列中の各アミノ酸は、標準的なヒトアミノ酸マイナスシステインからランダムに選択される。一部の実施形態では、合成ＨＣ−ＣＤＲ３は、約１０〜約１９（例えば、約１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８または１９のいずれか）アミノ酸長である。
【０１３９】
抗ＡＭＣ抗体部分は、一部の実施形態では、特異的配列またはかかる配列のある特定のバリアントを含む。一部の実施形態では、バリアント配列中のアミノ酸置換は、ＡＭＣに結合する抗ＡＭＣ抗体部分の能力を実質的に低減させない。例えば、ＡＭＣ結合親和性を実質的に低減させない変更がなされ得る。ＡＭＣ結合親和性を実質的に改善する、またはある他の特性、例えば、特異性および／もしくはＡＭＣの関連のバリアントとの交差反応性に影響を与える変更もまた、企図される。
【０１４０】
一部の実施形態では、抗ＡＭＣ抗体部分は、ｉ）Ａ／Ｇ−Ｘ−Ｗ／Ｙ−Ｙ−Ｘ−Ｘ−Ｘ−Ｆ／Ｙ−Ｄ（配列番号８９）のアミノ酸配列を含むＨＣ−ＣＤＲ３、または最大で約３（例えば、約１、２または３のいずれか）アミノ酸の置換を含むそのバリアントを含む重鎖可変ドメイン；およびｉｉ）Ｑ−Ｓ／Ｔ−Ｙ／Ｗ−Ｄ／Ｔ−Ｓ／Ｔ−Ａ／Ｓ（配列番号１２１）のアミノ酸配列を含むＬＣ−ＣＤＲ３、または最大で約３（例えば、約１、２または３のいずれか）アミノ酸の置換を含むそのバリアントを含む軽鎖可変ドメインを含み；Ｘは任意のアミノ酸であり得る。
【０１４１】
一部の実施形態では、抗ＡＭＣ抗体部分は、ｉ）Ａ／Ｇ−Ｘ−Ｗ／Ｙ−Ｙ−Ｘ−Ｘ−Ｘ−Ｆ／Ｙ−Ｄ（配列番号８９）のアミノ酸配列を含むＨＣ−ＣＤＲ３を含む重鎖可変ドメイン；およびｉｉ）Ｑ−Ｓ／Ｔ−Ｙ／Ｗ−Ｄ／Ｔ−Ｓ／Ｔ−Ａ／Ｓ（配列番号１２１）のアミノ酸配列を含むＬＣ−ＣＤＲ３を含む軽鎖可変ドメインを含み；Ｘは任意のアミノ酸であり得る。
【０１４２】
一部の実施形態では、抗ＡＭＣ抗体部分は、ｉ）Ｇ−Ｆ／Ｙ−Ｓ／Ｔ−Ｆ−Ｄ／Ｓ／Ｔ−Ｄ／Ｎ／Ｓ−Ｙ／Ａ−Ａ／Ｇ／Ｗ（配列番号８７）のアミノ酸配列を含むＨＣ−ＣＤＲ１、または最大で約３（例えば、約１、２または３のいずれか）アミノ酸の置換を含むそのバリアント、Ｉ／Ｓ−Ｋ／Ｓ−Ｘ−Ｈ／Ｙ−Ｘ−Ｇ−Ｘ−Ｔ（配列番号８８）のアミノ酸配列を含むＨＣ−ＣＤＲ２、または最大で約３（例えば、約１、２または３のいずれか）アミノ酸の置換を含むそのバリアント、およびＡ／Ｇ−Ｘ−Ｗ／Ｙ−Ｙ−Ｘ−Ｘ−Ｘ−Ｆ／Ｙ−Ｄ（配列番号８９）のアミノ酸配列を含むＨＣ−ＣＤＲ３、または最大で約３（例えば、約１、２または３のいずれか）アミノ酸の置換を含むそのバリアントを含む重鎖可変ドメイン；ならびにｉｉ）Ｓ／Ｔ−Ｇ／Ｓ−Ｄ／Ｎ−Ｉ／Ｖ−Ａ／Ｇ−Ａ／Ｓ／Ｖ−Ｘ−Ｈ／Ｙ（配列番号１２０）のアミノ酸配列を含むＬＣ−ＣＤＲ１、または最大で約３（例えば、約１、２または３のいずれか）アミノ酸の置換を含むそのバリアント、およびＱ−Ｓ／Ｔ−Ｙ／Ｗ−Ｄ／Ｔ−Ｓ／Ｔ−Ａ／Ｓ（配列番号１２１）のアミノ酸配列を含むＬＣ−ＣＤＲ３、または最大で約３（例えば、約１、２または３のいずれか）アミノ酸の置換を含むそのバリアントを含む軽鎖可変ドメインを含み；Ｘは任意のアミノ酸であり得る。
【０１４３】
一部の実施形態では、抗ＡＭＣ抗体部分は、ｉ）Ｇ−Ｆ／Ｙ−Ｓ／Ｔ−Ｆ−Ｄ／Ｓ／Ｔ−Ｄ／Ｎ／Ｓ−Ｙ／Ａ−Ａ／Ｇ／Ｗ（配列番号８７）のアミノ酸配列を含むＨＣ−ＣＤＲ１、または最大で約３（例えば、約１、２または３のいずれか）アミノ酸の置換を含むそのバリアント、Ｉ／Ｓ−Ｋ／Ｓ−Ｘ−Ｈ／Ｙ−Ｘ−Ｇ−Ｘ−Ｔ（配列番号８８）のアミノ酸配列を含むＨＣ−ＣＤＲ２、または最大で約３（例えば、約１、２または３のいずれか）アミノ酸の置換を含むそのバリアント、およびＡ／Ｇ−Ｘ−Ｗ／Ｙ−Ｙ−Ｘ−Ｘ−Ｘ−Ｆ／Ｙ−Ｄ（配列番号８９）のアミノ酸配列を含むＨＣ−ＣＤＲ３を含む重鎖可変ドメイン；ならびにｉｉ）Ｓ／Ｔ−Ｇ／Ｓ−Ｄ／Ｎ−Ｉ／Ｖ−Ａ／Ｇ−Ａ／Ｓ／Ｖ−Ｘ−Ｈ／Ｙ（配列番号１２０）のアミノ酸配列を含むＬＣ−ＣＤＲ１、または最大で約３（例えば、約１、２または３のいずれか）アミノ酸の置換を含むそのバリアント、およびＱ−Ｓ／Ｔ−Ｙ／Ｗ−Ｄ／Ｔ−Ｓ／Ｔ−Ａ／Ｓ（配列番号１２１）のアミノ酸配列を含むＬＣ−ＣＤＲ３を含む軽鎖可変ドメインを含み；Ｘは任意のアミノ酸であり得る。
【０１４４】
一部の実施形態では、抗ＡＭＣ抗体部分は、ｉ）Ｇ−Ｆ／Ｙ−Ｓ／Ｔ−Ｆ−Ｄ／Ｓ／Ｔ−Ｄ／Ｎ／Ｓ−Ｙ／Ａ−Ａ／Ｇ／Ｗ（配列番号８７）のアミノ酸配列を含むＨＣ−ＣＤＲ１、Ｉ／Ｓ−Ｋ／Ｓ−Ｘ−Ｈ／Ｙ−Ｘ−Ｇ−Ｘ−Ｔ（配列番号８８）のアミノ酸配列を含むＨＣ−ＣＤＲ２、およびＡ／Ｇ−Ｘ−Ｗ／Ｙ−Ｙ−Ｘ−Ｘ−Ｘ−Ｆ／Ｙ−Ｄ（配列番号８９）のアミノ酸配列を含むＨＣ−ＣＤＲ３を含む重鎖可変ドメイン；またはＨＣ−ＣＤＲ配列中に最大で約３（例えば、約１、２または３のいずれか）アミノ酸の置換を含むそのバリアント；ならびにｉｉ）Ｓ／Ｔ−Ｇ／Ｓ−Ｄ／Ｎ−Ｉ／Ｖ−Ａ／Ｇ−Ａ／Ｓ／Ｖ−Ｘ−Ｈ／Ｙ（配列番号１２０）のアミノ酸配列を含むＬＣ−ＣＤＲ１、およびＱ−Ｓ／Ｔ−Ｙ／Ｗ−Ｄ／Ｔ−Ｓ／Ｔ−Ａ／Ｓ（配列番号１２１）のアミノ酸配列を含むＬＣ−ＣＤＲ３を含む軽鎖可変ドメイン；またはＬＣ−ＣＤＲ配列中に最大で約３（例えば、約１、２または３のいずれか）アミノ酸の置換を含むそのバリアントを含み；Ｘは任意のアミノ酸であり得る。
【０１４５】
一部の実施形態では、抗ＡＭＣ抗体部分は、ｉ）Ｇ−Ｆ／Ｙ−Ｓ／Ｔ−Ｆ−Ｄ／Ｓ／Ｔ−Ｄ／Ｎ／Ｓ−Ｙ／Ａ−Ａ／Ｇ／Ｗ（配列番号８７）のアミノ酸配列を含むＨＣ−ＣＤＲ１、Ｉ／Ｓ−Ｋ／Ｓ−Ｘ−Ｈ／Ｙ−Ｘ−Ｇ−Ｘ−Ｔ（配列番号８８）のアミノ酸配列を含むＨＣ−ＣＤＲ２、およびＡ／Ｇ−Ｘ−Ｗ／Ｙ−Ｙ−Ｘ−Ｘ−Ｘ−Ｆ／Ｙ−Ｄ（配列番号８９）のアミノ酸配列を含むＨＣ−ＣＤＲ３を含む重鎖可変ドメイン；ならびにｉｉ）Ｓ／Ｔ−Ｇ／Ｓ−Ｄ／Ｎ−Ｉ／Ｖ−Ａ／Ｇ−Ａ／Ｓ／Ｖ−Ｘ−Ｈ／Ｙ（配列番号１２０）のアミノ酸配列を含むＬＣ−ＣＤＲ１、およびＱ−Ｓ／Ｔ−Ｙ／Ｗ−Ｄ／Ｔ−Ｓ／Ｔ−Ａ／Ｓ（配列番号１２１）のアミノ酸配列を含むＬＣ−ＣＤＲ３を含む軽鎖可変ドメインを含み；Ｘは任意のアミノ酸であり得る。本明細書で言及されるＣＤＲの配列は、以下の表２に提供される。
【表２】
2018512145.tif 000004
【０１４６】
一部の実施形態では、抗ＡＭＣ抗体部分は、ｉ）配列番号７７〜８６のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＨＣ−ＣＤＲ３、または最大で約５（例えば、約１、２、３、４または５のいずれか）アミノ酸の置換を含むそのバリアントを含む重鎖可変ドメイン；およびｉｉ）配列番号１１０〜１１９のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＬＣ−ＣＤＲ３、または最大で約５（例えば、約１、２、３、４または５のいずれか）アミノ酸の置換を含むそのバリアントを含む軽鎖可変ドメインを含む。
【０１４７】
一部の実施形態では、抗ＡＭＣ抗体部分は、ｉ）配列番号７７〜８６のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＨＣ−ＣＤＲ３を含む重鎖可変ドメイン；およびｉｉ）配列番号１１０〜１１９のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＬＣ−ＣＤＲ３を含む軽鎖可変ドメインを含む。
【０１４８】
一部の実施形態では、抗ＡＭＣ抗体部分は、ｉ）配列番号５７〜６６のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＨＣ−ＣＤＲ１、または最大で約５（例えば、約１、２、３、４または５のいずれか）アミノ酸の置換を含むそのバリアント、配列番号６７〜７６のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＨＣ−ＣＤＲ２、または最大で約５（例えば、約１、２、３、４または５のいずれか）アミノ酸の置換を含むそのバリアント、および配列番号７７〜８６のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＨＣ−ＣＤＲ３、または最大で約５（例えば、約１、２、３、４または５のいずれか）アミノ酸の置換を含むそのバリアントを含む重鎖可変ドメイン；ならびにｉｉ）配列番号９０〜９９のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＬＣ−ＣＤＲ１、または最大で約５（例えば、約１、２、３、４または５のいずれか）アミノ酸の置換を含むそのバリアント、配列番号１００〜１０９のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＬＣ−ＣＤＲ２、または最大で約３（例えば、約１、２または３のいずれか）アミノ酸の置換を含むそのバリアント、および配列番号１１０〜１１９のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＬＣ−ＣＤＲ３、または最大で約５（例えば、約１、２、３、４または５のいずれか）アミノ酸の置換を含むそのバリアントを含む軽鎖可変ドメインを含む。
【０１４９】
一部の実施形態では、抗ＡＭＣ抗体部分は、ｉ）配列番号５７〜６６のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＨＣ−ＣＤＲ１、または最大で約５（例えば、約１、２、３、４または５のいずれか）アミノ酸の置換を含むそのバリアント、配列番号６７〜７６のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＨＣ−ＣＤＲ２、または最大で約５（例えば、約１、２、３、４または５のいずれか）アミノ酸の置換を含むそのバリアント、および配列番号７７〜８６のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＨＣ−ＣＤＲ３を含む重鎖可変ドメイン；ならびにｉｉ）配列番号９０〜９９のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＬＣ−ＣＤＲ１、または最大で約５（例えば、約１、２、３、４または５のいずれか）アミノ酸の置換を含むそのバリアント、配列番号１００〜１０９のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＬＣ−ＣＤＲ２、または最大で約３（例えば、約１、２または３のいずれか）アミノ酸の置換を含むそのバリアント、および配列番号１１０〜１１９のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＬＣ−ＣＤＲ３を含む軽鎖可変ドメインを含む。
【０１５０】
一部の実施形態では、抗ＡＭＣ抗体部分は、ｉ）配列番号５７〜６６のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＨＣ−ＣＤＲ１；配列番号６７〜７６のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＨＣ−ＣＤＲ２；および配列番号７７〜８６のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＨＣ−ＣＤＲ３を含む重鎖可変ドメイン配列；またはＨＣ−ＣＤＲ配列中に最大で約５（例えば、約１、２、３、４または５のいずれか）アミノ酸の置換を含むそのバリアント；ならびにｉｉ）配列番号９０〜９９のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＬＣ−ＣＤＲ１；配列番号１００〜１０９のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＬＣ−ＣＤＲ２；および配列番号１１０〜１１９のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＬＣ−ＣＤＲ３を含む軽鎖可変ドメイン配列；またはＬＣ−ＣＤＲ配列中に最大で約５（例えば、約１、２、３、４または５のいずれか）アミノ酸の置換を含むそのバリアントを含む。
【０１５１】
一部の実施形態では、抗ＡＭＣ抗体部分は、ｉ）配列番号５７〜６６のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＨＣ−ＣＤＲ１；配列番号６７〜７６のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＨＣ−ＣＤＲ２；および配列番号７７〜８６のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＨＣ−ＣＤＲ３を含む重鎖可変ドメイン配列；または最大で約５（例えば、約１、２、３、４または５のいずれか）アミノ酸の置換を含むそのバリアントであって、これらのアミノ酸置換は、ＨＣ−ＣＤＲ１またはＨＣ−ＣＤＲ２中にある、そのバリアント；ならびにｉｉ）配列番号９０〜９９のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＬＣ−ＣＤＲ１；配列番号１００〜１０９のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＬＣ−ＣＤＲ２；および配列番号１１０〜１１９のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＬＣ−ＣＤＲ３を含む軽鎖可変ドメイン配列；または最大で約５（例えば、約１、２、３、４または５のいずれか）アミノ酸の置換を含むそのバリアントであって、これらのアミノ酸置換は、ＨＣ−ＣＤＲ１またはＨＣ−ＣＤＲ２中にある、そのバリアントを含む。
【０１５２】
一部の実施形態では、抗ＡＭＣ抗体部分は、ｉ）配列番号５７〜６６のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＨＣ−ＣＤＲ１；配列番号６７〜７６のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＨＣ−ＣＤＲ２；および配列番号７７〜８６のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＨＣ−ＣＤＲ３を含む重鎖可変ドメイン配列；ならびにｉｉ）配列番号９０〜９９のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＬＣ−ＣＤＲ１；配列番号１００〜１０９のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＬＣ−ＣＤＲ２；および配列番号１１０〜１１９のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＬＣ−ＣＤＲ３を含む軽鎖可変ドメイン配列を含む。本明細書で言及されるＨＣ−ＣＤＲの配列は、以下の表３に提供され、本明細書で言及されるＬＣ−ＣＤＲの配列は、以下の表４に提供される。
【表３】
2018512145.tif 000005
【表４】
2018512145.tif 000006
【０１５３】
一部の実施形態では、抗ＡＭＣ抗体部分は、配列番号１７〜２６のいずれか１つのアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン、または少なくとも約９５％（例えば、少なくとも約９６％、９７％、９８％または９９％のいずれかを含む）の配列同一性を有するそのバリアント、および配列番号２７〜３６のいずれか１つのアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン、または少なくとも約９５％（例えば、少なくとも９６％、９７％、９８％または９９％のいずれかを含む）の配列同一性を有するそのバリアントを含む。
【０１５４】
一部の実施形態では、抗ＡＭＣ抗体部分は、配列番号１７〜２６のいずれか１つのアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインおよび配列番号２７〜３６のいずれか１つのアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを含む。
【０１５５】
重鎖および軽鎖可変ドメインは、いくつかの抗ＡＭＣ抗体部分を生成するために、種々のペアワイズの組合せで組み合わされ得る。
【０１５６】
例えば、一部の実施形態では、抗ＡＭＣ抗体部分は、配列番号５７のアミノ酸配列を含むＨＣ−ＣＤＲ１、または最大で約５（例えば、約１、２、３、４または５のいずれか）アミノ酸の置換を含むそのバリアント；配列番号６７のアミノ酸配列を含むＨＣ−ＣＤＲ２、または最大で約５（例えば、約１、２、３、４または５のいずれか）アミノ酸の置換を含むそのバリアント；および配列番号７７のアミノ酸配列を含むＨＣ−ＣＤＲ３、または最大で約５（例えば、約１、２、３、４または５のいずれか）アミノ酸の置換を含むそのバリアントを含む重鎖可変ドメイン；ならびに配列番号９０のアミノ酸配列を含むＬＣ−ＣＤＲ１、または最大で約５（例えば、約１、２、３、４または５のいずれか）アミノ酸の置換を含むそのバリアント；配列番号１００のアミノ酸配列を含むＬＣ−ＣＤＲ２、または最大で約３（例えば、約１、２または３のいずれか）アミノ酸の置換を含むそのバリアント；および配列番号１１０のアミノ酸配列を含むＬＣ−ＣＤＲ３、または最大で約５（例えば、約１、２、３、４または５のいずれか）アミノ酸の置換を含むそのバリアントを含む軽鎖可変ドメインを含む。
【０１５７】
一部の実施形態では、抗ＡＭＣ抗体部分は、配列番号５７のアミノ酸配列を含むＨＣ−ＣＤＲ１、配列番号６７のアミノ酸配列を含むＨＣ−ＣＤＲ２、および配列番号７７のアミノ酸配列を含むＨＣ−ＣＤＲ３含む重鎖可変ドメイン、またはＨＣ−ＣＤＲ配列中に最大で約５（例えば、約１、２、３、４または５のいずれか）アミノ酸の置換を含むそのバリアント；ならびに配列番号９０のアミノ酸配列を含むＬＣ−ＣＤＲ１、配列番号１００のアミノ酸配列を含むＬＣ−ＣＤＲ２、および配列番号１１０のアミノ酸配列を含むＬＣ−ＣＤＲ３を含む軽鎖可変ドメイン、またはＬＣ−ＣＤＲ配列中に最大で約５（例えば、約１、２、３、４または５のいずれか）アミノ酸の置換を含むそのバリアントを含む。
【０１５８】
一部の実施形態では、抗ＡＭＣ抗体部分は、配列番号５７のアミノ酸配列を含むＨＣ−ＣＤＲ１、配列番号６７のアミノ酸配列を含むＨＣ−ＣＤＲ２、および配列番号７７のアミノ酸配列を含むＨＣ−ＣＤＲ３を含む重鎖可変ドメイン；ならびに配列番号９０のアミノ酸配列を含むＬＣ−ＣＤＲ１、配列番号１００のアミノ酸配列を含むＬＣ−ＣＤＲ２、および配列番号１１０のアミノ酸配列を含むＬＣ−ＣＤＲ３を含む軽鎖可変ドメインを含む。
【０１５９】
一部の実施形態では、抗ＡＭＣ抗体部分は、配列番号５８のアミノ酸配列を含むＨＣ−ＣＤＲ１、または最大で約５（例えば、約１、２、３、４または５のいずれか）アミノ酸の置換を含むそのバリアント；配列番号６８のアミノ酸配列を含むＨＣ−ＣＤＲ２、または最大で約５（例えば、約１、２、３、４または５のいずれか）アミノ酸の置換を含むそのバリアント；および配列番号７８のアミノ酸配列を含むＨＣ−ＣＤＲ３、または最大で約５（例えば、約１、２、３、４または５のいずれか）アミノ酸の置換を含むそのバリアントを含む重鎖可変ドメイン；ならびに配列番号９１のアミノ酸配列を含むＬＣ−ＣＤＲ１、または最大で約５（例えば、約１、２、３、４または５のいずれか）アミノ酸の置換を含むそのバリアント；配列番号１０１のアミノ酸配列を含むＬＣ−ＣＤＲ２、または最大で約３（例えば、約１、２または３のいずれか）アミノ酸の置換を含むそのバリアント；および配列番号１１１のアミノ酸配列を含むＬＣ−ＣＤＲ３、または最大で約５（例えば、約１、２、３、４または５のいずれか）アミノ酸の置換を含むそのバリアントを含む軽鎖可変ドメインを含む。
【０１６０】
一部の実施形態では、抗ＡＭＣ抗体部分は、配列番号５８のアミノ酸配列を含むＨＣ−ＣＤＲ１、配列番号６８のアミノ酸配列を含むＨＣ−ＣＤＲ２、および配列番号７８のアミノ酸配列を含むＨＣ−ＣＤＲ３含む重鎖可変ドメイン、またはＨＣ−ＣＤＲ配列中に最大で約５（例えば、約１、２、３、４または５のいずれか）アミノ酸の置換を含むそのバリアント；ならびに配列番号９１のアミノ酸配列を含むＬＣ−ＣＤＲ１、配列番号１０１のアミノ酸配列を含むＬＣ−ＣＤＲ２、および配列番号１１１のアミノ酸配列を含むＬＣ−ＣＤＲ３を含む軽鎖可変ドメイン、またはＬＣ−ＣＤＲ配列中に最大で約５（例えば、約１、２、３、４または５のいずれか）アミノ酸の置換を含むそのバリアントを含む。
【０１６１】
一部の実施形態では、抗ＡＭＣ抗体部分は、配列番号５８のアミノ酸配列を含むＨＣ−ＣＤＲ１、配列番号６８のアミノ酸配列を含むＨＣ−ＣＤＲ２、および配列番号７８のアミノ酸配列を含むＨＣ−ＣＤＲ３を含む重鎖可変ドメイン；ならびに配列番号９１のアミノ酸配列を含むＬＣ−ＣＤＲ１、配列番号１０１のアミノ酸配列を含むＬＣ−ＣＤＲ２、および配列番号１１１のアミノ酸配列を含むＬＣ−ＣＤＲ３を含む軽鎖可変ドメインを含む。
【０１６２】
一部の実施形態では、抗ＡＭＣ抗体部分は、配列番号５９のアミノ酸配列を含むＨＣ−ＣＤＲ１、または最大で約５（例えば、約１、２、３、４または５のいずれか）アミノ酸の置換を含むそのバリアント；配列番号６９のアミノ酸配列を含むＨＣ−ＣＤＲ２、または最大で約５（例えば、約１、２、３、４または５のいずれか）アミノ酸の置換を含むそのバリアント；および配列番号７９のアミノ酸配列を含むＨＣ−ＣＤＲ３、または最大で約５（例えば、約１、２、３、４または５のいずれか）アミノ酸の置換を含むそのバリアントを含む重鎖可変ドメイン；ならびに配列番号９２のアミノ酸配列を含むＬＣ−ＣＤＲ１、または最大で約５（例えば、約１、２、３、４または５のいずれか）アミノ酸の置換を含むそのバリアント；配列番号１０２のアミノ酸配列を含むＬＣ−ＣＤＲ２、または最大で約３（例えば、約１、２または３のいずれか）アミノ酸の置換を含むそのバリアント；および配列番号１１２のアミノ酸配列を含むＬＣ−ＣＤＲ３、または最大で約５（例えば、約１、２、３、４または５のいずれか）アミノ酸の置換を含むそのバリアントを含む軽鎖可変ドメインを含む。
【０１６３】
一部の実施形態では、抗ＡＭＣ抗体部分は、配列番号５９のアミノ酸配列を含むＨＣ−ＣＤＲ１、配列番号６９のアミノ酸配列を含むＨＣ−ＣＤＲ２、および配列番号７９のアミノ酸配列を含むＨＣ−ＣＤＲ３含む重鎖可変ドメイン、またはＨＣ−ＣＤＲ配列中に最大で約５（例えば、約１、２、３、４または５のいずれか）アミノ酸の置換を含むそのバリアント；ならびに配列番号９２のアミノ酸配列を含むＬＣ−ＣＤＲ１、配列番号１０２のアミノ酸配列を含むＬＣ−ＣＤＲ２、および配列番号１１２のアミノ酸配列を含むＬＣ−ＣＤＲ３を含む軽鎖可変ドメイン、またはＬＣ−ＣＤＲ配列中に最大で約５（例えば、約１、２、３、４または５のいずれか）アミノ酸の置換を含むそのバリアントを含む。
【０１６４】
一部の実施形態では、抗ＡＭＣ抗体部分は、配列番号５９のアミノ酸配列を含むＨＣ−ＣＤＲ１、配列番号６９のアミノ酸配列を含むＨＣ−ＣＤＲ２、および配列番号７９のアミノ酸配列を含むＨＣ−ＣＤＲ３を含む重鎖可変ドメイン；ならびに配列番号９２のアミノ酸配列を含むＬＣ−ＣＤＲ１、配列番号１０２のアミノ酸配列を含むＬＣ−ＣＤＲ２、および配列番号１１２のアミノ酸配列を含むＬＣ−ＣＤＲ３を含む軽鎖可変ドメインを含む。
【０１６５】
一部の実施形態では、抗ＡＭＣ抗体部分は、配列番号６０のアミノ酸配列を含むＨＣ−ＣＤＲ１、または最大で約５（例えば、約１、２、３、４または５のいずれか）アミノ酸の置換を含むそのバリアント；配列番号７０のアミノ酸配列を含むＨＣ−ＣＤＲ２、または最大で約５（例えば、約１、２、３、４または５のいずれか）アミノ酸の置換を含むそのバリアント；および配列番号８０のアミノ酸配列を含むＨＣ−ＣＤＲ３、または最大で約５（例えば、約１、２、３、４または５のいずれか）アミノ酸の置換を含むそのバリアントを含む重鎖可変ドメイン；ならびに配列番号９３のアミノ酸配列を含むＬＣ−ＣＤＲ１、または最大で約５（例えば、約１、２、３、４または５のいずれか）アミノ酸の置換を含むそのバリアント；配列番号１０３のアミノ酸配列を含むＬＣ−ＣＤＲ２、または最大で約３（例えば、約１、２または３のいずれか）アミノ酸の置換を含むそのバリアント；および配列番号１１３のアミノ酸配列を含むＬＣ−ＣＤＲ３、または最大で約５（例えば、約１、２、３、４または５のいずれか）アミノ酸の置換を含むそのバリアントを含む軽鎖可変ドメインを含む。
【０１６６】
一部の実施形態では、抗ＡＭＣ抗体部分は、配列番号６０のアミノ酸配列を含むＨＣ−ＣＤＲ１、配列番号７０のアミノ酸配列を含むＨＣ−ＣＤＲ２、および配列番号８０のアミノ酸配列を含むＨＣ−ＣＤＲ３含む重鎖可変ドメイン、またはＨＣ−ＣＤＲ配列中に最大で約５（例えば、約１、２、３、４または５のいずれか）アミノ酸の置換を含むそのバリアント；ならびに配列番号９３のアミノ酸配列を含むＬＣ−ＣＤＲ１、配列番号１０３のアミノ酸配列を含むＬＣ−ＣＤＲ２、および配列番号１１３のアミノ酸配列を含むＬＣ−ＣＤＲ３を含む軽鎖可変ドメイン、またはＬＣ−ＣＤＲ配列中に最大で約５（例えば、約１、２、３、４または５のいずれか）アミノ酸の置換を含むそのバリアントを含む。
【０１６７】
一部の実施形態では、抗ＡＭＣ抗体部分は、配列番号６０のアミノ酸配列を含むＨＣ−ＣＤＲ１、配列番号７０のアミノ酸配列を含むＨＣ−ＣＤＲ２、および配列番号８０のアミノ酸配列を含むＨＣ−ＣＤＲ３を含む重鎖可変ドメイン；ならびに配列番号９３のアミノ酸配列を含むＬＣ−ＣＤＲ１、配列番号１０３のアミノ酸配列を含むＬＣ−ＣＤＲ２、および配列番号１１３のアミノ酸配列を含むＬＣ−ＣＤＲ３を含む軽鎖可変ドメインを含む。
【０１６８】
一部の実施形態では、抗ＡＭＣ抗体部分は、配列番号６１のアミノ酸配列を含むＨＣ−ＣＤＲ１、または最大で約５（例えば、約１、２、３、４または５のいずれか）アミノ酸の置換を含むそのバリアント；配列番号７１のアミノ酸配列を含むＨＣ−ＣＤＲ２、または最大で約５（例えば、約１、２、３、４または５のいずれか）アミノ酸の置換を含むそのバリアント；および配列番号８１のアミノ酸配列を含むＨＣ−ＣＤＲ３、または最大で約５（例えば、約１、２、３、４または５のいずれか）アミノ酸の置換を含むそのバリアントを含む重鎖可変ドメイン；ならびに配列番号９４のアミノ酸配列を含むＬＣ−ＣＤＲ１、または最大で約５（例えば、約１、２、３、４または５のいずれか）アミノ酸の置換を含むそのバリアント；配列番号１０４のアミノ酸配列を含むＬＣ−ＣＤＲ２、または最大で約３（例えば、約１、２または３のいずれか）アミノ酸の置換を含むそのバリアント；および配列番号１１４のアミノ酸配列を含むＬＣ−ＣＤＲ３、または最大で約５（例えば、約１、２、３、４または５のいずれか）アミノ酸の置換を含むそのバリアントを含む軽鎖可変ドメインを含む。
【０１６９】
一部の実施形態では、抗ＡＭＣ抗体部分は、配列番号６１のアミノ酸配列を含むＨＣ−ＣＤＲ１、配列番号７１のアミノ酸配列を含むＨＣ−ＣＤＲ２、および配列番号８１のアミノ酸配列を含むＨＣ−ＣＤＲ３含む重鎖可変ドメイン、またはＨＣ−ＣＤＲ配列中に最大で約５（例えば、約１、２、３、４または５のいずれか）アミノ酸の置換を含むそのバリアント；ならびに配列番号９４のアミノ酸配列を含むＬＣ−ＣＤＲ１、配列番号１０４のアミノ酸配列を含むＬＣ−ＣＤＲ２、および配列番号１１４のアミノ酸配列を含むＬＣ−ＣＤＲ３を含む軽鎖可変ドメイン、またはＬＣ−ＣＤＲ配列中に最大で約５（例えば、約１、２、３、４または５のいずれか）アミノ酸の置換を含むそのバリアントを含む。
【０１７０】
一部の実施形態では、抗ＡＭＣ抗体部分は、配列番号６１のアミノ酸配列を含むＨＣ−ＣＤＲ１、配列番号７１のアミノ酸配列を含むＨＣ−ＣＤＲ２、および配列番号８１のアミノ酸配列を含むＨＣ−ＣＤＲ３を含む重鎖可変ドメイン；ならびに配列番号９４のアミノ酸配列を含むＬＣ−ＣＤＲ１、配列番号１０４のアミノ酸配列を含むＬＣ−ＣＤＲ２、および配列番号１１４のアミノ酸配列を含むＬＣ−ＣＤＲ３を含む軽鎖可変ドメインを含む。
【０１７１】
一部の実施形態では、抗ＡＭＣ抗体部分は、配列番号６２のアミノ酸配列を含むＨＣ−ＣＤＲ１、または最大で約５（例えば、約１、２、３、４または５のいずれか）アミノ酸の置換を含むそのバリアント；配列番号７２のアミノ酸配列を含むＨＣ−ＣＤＲ２、または最大で約５（例えば、約１、２、３、４または５のいずれか）アミノ酸の置換を含むそのバリアント；および配列番号８２のアミノ酸配列を含むＨＣ−ＣＤＲ３、または最大で約５（例えば、約１、２、３、４または５のいずれか）アミノ酸の置換を含むそのバリアントを含む重鎖可変ドメイン；ならびに配列番号９５のアミノ酸配列を含むＬＣ−ＣＤＲ１、または最大で約５（例えば、約１、２、３、４または５のいずれか）アミノ酸の置換を含むそのバリアント；配列番号１０５のアミノ酸配列を含むＬＣ−ＣＤＲ２、または最大で約３（例えば、約１、２または３のいずれか）アミノ酸の置換を含むそのバリアント；および配列番号１１５のアミノ酸配列を含むＬＣ−ＣＤＲ３、または最大で約５（例えば、約１、２、３、４または５のいずれか）アミノ酸の置換を含むそのバリアントを含む軽鎖可変ドメインを含む。
【０１７２】
一部の実施形態では、抗ＡＭＣ抗体部分は、配列番号６２のアミノ酸配列を含むＨＣ−ＣＤＲ１、配列番号７２のアミノ酸配列を含むＨＣ−ＣＤＲ２、および配列番号８２のアミノ酸配列を含むＨＣ−ＣＤＲ３含む重鎖可変ドメイン、またはＨＣ−ＣＤＲ配列中に最大で約５（例えば、約１、２、３、４または５のいずれか）アミノ酸の置換を含むそのバリアント；ならびに配列番号９５のアミノ酸配列を含むＬＣ−ＣＤＲ１、配列番号１０５のアミノ酸配列を含むＬＣ−ＣＤＲ２、および配列番号１１５のアミノ酸配列を含むＬＣ−ＣＤＲ３を含む軽鎖可変ドメイン、またはＬＣ−ＣＤＲ配列中に最大で約５（例えば、約１、２、３、４または５のいずれか）アミノ酸の置換を含むそのバリアントを含む。
【０１７３】
一部の実施形態では、抗ＡＭＣ抗体部分は、配列番号６２のアミノ酸配列を含むＨＣ−ＣＤＲ１、配列番号７２のアミノ酸配列を含むＨＣ−ＣＤＲ２、および配列番号８２のアミノ酸配列を含むＨＣ−ＣＤＲ３を含む重鎖可変ドメイン；ならびに配列番号９５のアミノ酸配列を含むＬＣ−ＣＤＲ１、配列番号１０５のアミノ酸配列を含むＬＣ−ＣＤＲ２、および配列番号１１５のアミノ酸配列を含むＬＣ−ＣＤＲ３を含む軽鎖可変ドメインを含む。
【０１７４】
一部の実施形態では、抗ＡＭＣ抗体部分は、配列番号６３のアミノ酸配列を含むＨＣ−ＣＤＲ１、または最大で約５（例えば、約１、２、３、４または５のいずれか）アミノ酸の置換を含むそのバリアント；配列番号７３のアミノ酸配列を含むＨＣ−ＣＤＲ２、または最大で約５（例えば、約１、２、３、４または５のいずれか）アミノ酸の置換を含むそのバリアント；および配列番号８３のアミノ酸配列を含むＨＣ−ＣＤＲ３、または最大で約５（例えば、約１、２、３、４または５のいずれか）アミノ酸の置換を含むそのバリアントを含む重鎖可変ドメイン；ならびに配列番号９６のアミノ酸配列を含むＬＣ−ＣＤＲ１、または最大で約５（例えば、約１、２、３、４または５のいずれか）アミノ酸の置換を含むそのバリアント；配列番号１０６のアミノ酸配列を含むＬＣ−ＣＤＲ２、または最大で約３（例えば、約１、２または３のいずれか）アミノ酸の置換を含むそのバリアント；および配列番号１１６のアミノ酸配列を含むＬＣ−ＣＤＲ３、または最大で約５（例えば、約１、２、３、４または５のいずれか）アミノ酸の置換を含むそのバリアントを含む軽鎖可変ドメインを含む。
【０１７５】
一部の実施形態では、抗ＡＭＣ抗体部分は、配列番号６３のアミノ酸配列を含むＨＣ−ＣＤＲ１、配列番号７３のアミノ酸配列を含むＨＣ−ＣＤＲ２、および配列番号８３のアミノ酸配列を含むＨＣ−ＣＤＲ３含む重鎖可変ドメイン、またはＨＣ−ＣＤＲ配列中に最大で約５（例えば、約１、２、３、４または５のいずれか）アミノ酸の置換を含むそのバリアント；ならびに配列番号９６のアミノ酸配列を含むＬＣ−ＣＤＲ１、配列番号１０６のアミノ酸配列を含むＬＣ−ＣＤＲ２、および配列番号１１６のアミノ酸配列を含むＬＣ−ＣＤＲ３を含む軽鎖可変ドメイン、またはＬＣ−ＣＤＲ配列中に最大で約５（例えば、約１、２、３、４または５のいずれか）アミノ酸の置換を含むそのバリアントを含む。
【０１７６】
一部の実施形態では、抗ＡＭＣ抗体部分は、配列番号６３のアミノ酸配列を含むＨＣ−ＣＤＲ１、配列番号７３のアミノ酸配列を含むＨＣ−ＣＤＲ２、および配列番号８３のアミノ酸配列を含むＨＣ−ＣＤＲ３を含む重鎖可変ドメイン；ならびに配列番号９６のアミノ酸配列を含むＬＣ−ＣＤＲ１、配列番号１０６のアミノ酸配列を含むＬＣ−ＣＤＲ２、および配列番号１１６のアミノ酸配列を含むＬＣ−ＣＤＲ３を含む軽鎖可変ドメインを含む。
【０１７７】
一部の実施形態では、抗ＡＭＣ抗体部分は、配列番号６４のアミノ酸配列を含むＨＣ−ＣＤＲ１、または最大で約５（例えば、約１、２、３、４または５のいずれか）アミノ酸の置換を含むそのバリアント；配列番号７４のアミノ酸配列を含むＨＣ−ＣＤＲ２、または最大で約５（例えば、約１、２、３、４または５のいずれか）アミノ酸の置換を含むそのバリアント；および配列番号８４のアミノ酸配列を含むＨＣ−ＣＤＲ３、または最大で約５（例えば、約１、２、３、４または５のいずれか）アミノ酸の置換を含むそのバリアントを含む重鎖可変ドメイン；ならびに配列番号９７のアミノ酸配列を含むＬＣ−ＣＤＲ１、または最大で約５（例えば、約１、２、３、４または５のいずれか）アミノ酸の置換を含むそのバリアント；配列番号１０７のアミノ酸配列を含むＬＣ−ＣＤＲ２、または最大で約３（例えば、約１、２または３のいずれか）アミノ酸の置換を含むそのバリアント；および配列番号１１７のアミノ酸配列を含むＬＣ−ＣＤＲ３、または最大で約５（例えば、約１、２、３、４または５のいずれか）アミノ酸の置換を含むそのバリアントを含む軽鎖可変ドメインを含む。
【０１７８】
一部の実施形態では、抗ＡＭＣ抗体部分は、配列番号６４のアミノ酸配列を含むＨＣ−ＣＤＲ１、配列番号７４のアミノ酸配列を含むＨＣ−ＣＤＲ２、および配列番号８４のアミノ酸配列を含むＨＣ−ＣＤＲ３含む重鎖可変ドメイン、またはＨＣ−ＣＤＲ配列中に最大で約５（例えば、約１、２、３、４または５のいずれか）アミノ酸の置換を含むそのバリアント；ならびに配列番号９７のアミノ酸配列を含むＬＣ−ＣＤＲ１、配列番号１０７のアミノ酸配列を含むＬＣ−ＣＤＲ２、および配列番号１１７のアミノ酸配列を含むＬＣ−ＣＤＲ３を含む軽鎖可変ドメイン、またはＬＣ−ＣＤＲ配列中に最大で約５（例えば、約１、２、３、４または５のいずれか）アミノ酸の置換を含むそのバリアントを含む。
【０１７９】
一部の実施形態では、抗ＡＭＣ抗体部分は、配列番号６４のアミノ酸配列を含むＨＣ−ＣＤＲ１、配列番号７４のアミノ酸配列を含むＨＣ−ＣＤＲ２、および配列番号８４のアミノ酸配列を含むＨＣ−ＣＤＲ３を含む重鎖可変ドメイン；ならびに配列番号９７のアミノ酸配列を含むＬＣ−ＣＤＲ１、配列番号１０７のアミノ酸配列を含むＬＣ−ＣＤＲ２、および配列番号１１７のアミノ酸配列を含むＬＣ−ＣＤＲ３を含む軽鎖可変ドメインを含む。
【０１８０】
一部の実施形態では、抗ＡＭＣ抗体部分は、配列番号６５のアミノ酸配列を含むＨＣ−ＣＤＲ１、または最大で約５（例えば、約１、２、３、４または５のいずれか）アミノ酸の置換を含むそのバリアント；配列番号７５のアミノ酸配列を含むＨＣ−ＣＤＲ２、または最大で約５（例えば、約１、２、３、４または５のいずれか）アミノ酸の置換を含むそのバリアント；および配列番号８５のアミノ酸配列を含むＨＣ−ＣＤＲ３、または最大で約５（例えば、約１、２、３、４または５のいずれか）アミノ酸の置換を含むそのバリアントを含む重鎖可変ドメイン；ならびに配列番号９８のアミノ酸配列を含むＬＣ−ＣＤＲ１、または最大で約５（例えば、約１、２、３、４または５のいずれか）アミノ酸の置換を含むそのバリアント；配列番号１０８のアミノ酸配列を含むＬＣ−ＣＤＲ２、または最大で約３（例えば、約１、２または３のいずれか）アミノ酸の置換を含むそのバリアント；および配列番号１１８のアミノ酸配列を含むＬＣ−ＣＤＲ３、または最大で約５（例えば、約１、２、３、４または５のいずれか）アミノ酸の置換を含むそのバリアントを含む軽鎖可変ドメインを含む。
【０１８１】
一部の実施形態では、抗ＡＭＣ抗体部分は、配列番号６５のアミノ酸配列を含むＨＣ−ＣＤＲ１、配列番号７５のアミノ酸配列を含むＨＣ−ＣＤＲ２、および配列番号８５のアミノ酸配列を含むＨＣ−ＣＤＲ３含む重鎖可変ドメイン、またはＨＣ−ＣＤＲ配列中に最大で約５（例えば、約１、２、３、４または５のいずれか）アミノ酸の置換を含むそのバリアント；ならびに配列番号９８のアミノ酸配列を含むＬＣ−ＣＤＲ１、配列番号１０８のアミノ酸配列を含むＬＣ−ＣＤＲ２、および配列番号１１８のアミノ酸配列を含むＬＣ−ＣＤＲ３を含む軽鎖可変ドメイン、またはＬＣ−ＣＤＲ配列中に最大で約５（例えば、約１、２、３、４または５のいずれか）アミノ酸の置換を含むそのバリアントを含む。
【０１８２】
一部の実施形態では、抗ＡＭＣ抗体部分は、配列番号６５のアミノ酸配列を含むＨＣ−ＣＤＲ１、配列番号７５のアミノ酸配列を含むＨＣ−ＣＤＲ２、および配列番号８５のアミノ酸配列を含むＨＣ−ＣＤＲ３を含む重鎖可変ドメイン；ならびに配列番号９８のアミノ酸配列を含むＬＣ−ＣＤＲ１、配列番号１０８のアミノ酸配列を含むＬＣ−ＣＤＲ２、および配列番号１１８のアミノ酸配列を含むＬＣ−ＣＤＲ３を含む軽鎖可変ドメインを含む。
【０１８３】
一部の実施形態では、抗ＡＭＣ抗体部分は、配列番号６６のアミノ酸配列を含むＨＣ−ＣＤＲ１、または最大で約５（例えば、約１、２、３、４または５のいずれか）アミノ酸の置換を含むそのバリアント；配列番号７６のアミノ酸配列を含むＨＣ−ＣＤＲ２、または最大で約５（例えば、約１、２、３、４または５のいずれか）アミノ酸の置換を含むそのバリアント；および配列番号８６のアミノ酸配列を含むＨＣ−ＣＤＲ３、または最大で約５（例えば、約１、２、３、４または５のいずれか）アミノ酸の置換を含むそのバリアントを含む重鎖可変ドメイン；ならびに配列番号９９のアミノ酸配列を含むＬＣ−ＣＤＲ１、または最大で約５（例えば、約１、２、３、４または５のいずれか）アミノ酸の置換を含むそのバリアント；配列番号１０９のアミノ酸配列を含むＬＣ−ＣＤＲ２、または最大で約３（例えば、約１、２または３のいずれか）アミノ酸の置換を含むそのバリアント；および配列番号１１９のアミノ酸配列を含むＬＣ−ＣＤＲ３、または最大で約５（例えば、約１、２、３、４または５のいずれか）アミノ酸の置換を含むそのバリアントを含む軽鎖可変ドメインを含む。
【０１８４】
一部の実施形態では、抗ＡＭＣ抗体部分は、配列番号６６のアミノ酸配列を含むＨＣ−ＣＤＲ１、配列番号７６のアミノ酸配列を含むＨＣ−ＣＤＲ２、および配列番号８６のアミノ酸配列を含むＨＣ−ＣＤＲ３含む重鎖可変ドメイン、またはＨＣ−ＣＤＲ配列中に最大で約５（例えば、約１、２、３、４または５のいずれか）アミノ酸の置換を含むそのバリアント；ならびに配列番号９９のアミノ酸配列を含むＬＣ−ＣＤＲ１、配列番号１０９のアミノ酸配列を含むＬＣ−ＣＤＲ２、および配列番号１１９のアミノ酸配列を含むＬＣ−ＣＤＲ３を含む軽鎖可変ドメイン、またはＬＣ−ＣＤＲ配列中に最大で約５（例えば、約１、２、３、４または５のいずれか）アミノ酸の置換を含むそのバリアントを含む。
【０１８５】
一部の実施形態では、抗ＡＭＣ抗体部分は、配列番号６６のアミノ酸配列を含むＨＣ−ＣＤＲ１、配列番号７６のアミノ酸配列を含むＨＣ−ＣＤＲ２、および配列番号８６のアミノ酸配列を含むＨＣ−ＣＤＲ３を含む重鎖可変ドメイン；ならびに配列番号９９のアミノ酸配列を含むＬＣ−ＣＤＲ１、配列番号１０９のアミノ酸配列を含むＬＣ−ＣＤＲ２、および配列番号１１９のアミノ酸配列を含むＬＣ−ＣＤＲ３を含む軽鎖可変ドメインを含む。
【０１８６】
一部の実施形態では、抗ＡＭＣ抗体部分は、配列番号１７に示されるアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン、または少なくとも約９５％（例えば、少なくとも約９６％、９７％、９８％または９９％のいずれか）の配列同一性を有するそのバリアント、および配列番号２７に示されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン、または少なくとも約９５％（例えば、少なくとも約９６％、９７％、９８％または９９％のいずれかを含む）の配列同一性を有するそのバリアントを含む。一部の実施形態では、抗ＡＭＣ抗体部分は、配列番号１７に示されるアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインおよび配列番号２７に示されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを含む。
【０１８７】
一部の実施形態では、抗ＡＭＣ抗体部分は、配列番号１８に示されるアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン、または少なくとも約９５％（例えば、少なくとも約９６％、９７％、９８％または９９％のいずれかを含む）の配列同一性を有するそのバリアント、および配列番号２８に示されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン、または少なくとも約９５％（例えば、少なくとも約９６％、９７％、９８％または９９％のいずれかを含む）の配列同一性を有するそのバリアントを含む。一部の実施形態では、抗ＡＭＣ抗体部分は、配列番号１８に示されるアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインおよび配列番号２８に示されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを含む。
【０１８８】
一部の実施形態では、抗ＡＭＣ抗体部分は、配列番号１９に示されるアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン、または少なくとも約９５％（例えば、少なくとも約９６％、９７％、９８％または９９％のいずれか）の配列同一性を有するそのバリアント、および配列番号２９に示されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン、または少なくとも約９５％（例えば、少なくとも約９６％、９７％、９８％または９９％のいずれかを含む）の配列同一性を有するそのバリアントを含む。一部の実施形態では、抗ＡＭＣ抗体部分は、配列番号１９に示されるアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインおよび配列番号２９に示されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを含む。
【０１８９】
一部の実施形態では、抗ＡＭＣ抗体部分は、配列番号２０に示されるアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン、または少なくとも約９５％（例えば、少なくとも約９６％、９７％、９８％または９９％のいずれか）の配列同一性を有するそのバリアント、および配列番号３０に示されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン、または少なくとも約９５％（例えば、少なくとも約９６％、９７％、９８％または９９％のいずれかを含む）の配列同一性を有するそのバリアントを含む。一部の実施形態では、抗ＡＭＣ抗体部分は、配列番号２０に示されるアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインおよび配列番号３０に示されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを含む。
【０１９０】
一部の実施形態では、抗ＡＭＣ抗体部分は、配列番号２１に示されるアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン、または少なくとも約９５％（例えば、少なくとも約９６％、９７％、９８％または９９％のいずれか）の配列同一性を有するそのバリアント、および配列番号３１に示されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン、または少なくとも約９５％（例えば、少なくとも約９６％、９７％、９８％または９９％のいずれかを含む）の配列同一性を有するそのバリアントを含む。一部の実施形態では、抗ＡＭＣ抗体部分は、配列番号２１に示されるアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインおよび配列番号３１に示されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを含む。
【０１９１】
一部の実施形態では、抗ＡＭＣ抗体部分は、配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン、または少なくとも約９５％（例えば、少なくとも約９６％、９７％、９８％または９９％のいずれか）の配列同一性を有するそのバリアント、および配列番号３２に示されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン、または少なくとも約９５％（例えば、少なくとも約９６％、９７％、９８％または９９％のいずれかを含む）の配列同一性を有するそのバリアントを含む。一部の実施形態では、抗ＡＭＣ抗体部分は、配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインおよび配列番号３２に示されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを含む。
【０１９２】
一部の実施形態では、抗ＡＭＣ抗体部分は、配列番号２３に示されるアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン、または少なくとも約９５％（例えば、少なくとも約９６％、９７％、９８％または９９％のいずれか）の配列同一性を有するそのバリアント、および配列番号３３に示されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン、または少なくとも約９５％（例えば、少なくとも約９６％、９７％、９８％または９９％のいずれかを含む）の配列同一性を有するそのバリアントを含む。一部の実施形態では、抗ＡＭＣ抗体部分は、配列番号２３に示されるアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインおよび配列番号３３に示されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを含む。
【０１９３】
一部の実施形態では、抗ＡＭＣ抗体部分は、配列番号２４に示されるアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン、または少なくとも約９５％（例えば、少なくとも約９６％、９７％、９８％または９９％のいずれかを含む）の配列同一性を有するそのバリアント、および配列番号３４に示されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン、または少なくとも約９５％（例えば、少なくとも約９６％、９７％、９８％または９９％のいずれかを含む）の配列同一性を有するそのバリアントを含む。一部の実施形態では、抗ＡＭＣ抗体部分は、配列番号２４に示されるアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインおよび配列番号３４に示されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを含む。
【０１９４】
一部の実施形態では、抗ＡＭＣ抗体部分は、配列番号２５に示されるアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン、または少なくとも約９５％（例えば、少なくとも約９６％、９７％、９８％または９９％のいずれか）の配列同一性を有するそのバリアント、および配列番号３５に示されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン、または少なくとも約９５％（例えば、少なくとも約９６％、９７％、９８％または９９％のいずれかを含む）の配列同一性を有するそのバリアントを含む。一部の実施形態では、抗ＡＭＣ抗体部分は、配列番号２５に示されるアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインおよび配列番号３５に示されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを含む。
【０１９５】
一部の実施形態では、抗ＡＭＣ抗体部分は、配列番号２６に示されるアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン、または少なくとも約９５％（例えば、少なくとも約９６％、９７％、９８％または９９％のいずれかを含む）の配列同一性を有するそのバリアント、および配列番号３６に示されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン、または少なくとも約９５％の配列同一性を有するそのバリアントを含む。一部の実施形態では、抗ＡＭＣ抗体部分は、配列番号２６に示されるアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインおよび配列番号３６に示されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを含む。
【０１９６】
一部の実施形態では、抗ＡＭＣ抗体部分は、標的ＡＦＰ／ＭＨＣクラスＩ複合体への結合について、本明細書に記載される抗ＡＭＣ抗体部分のいずれかに従う第２の抗ＡＭＣ抗体部分と競合する。一部の実施形態では、抗ＡＭＣ抗体部分は、第２の抗ＡＭＣ抗体部分と同じまたは実質的に同じエピトープに結合する。一部の実施形態では、標的ＡＦＰ／ＭＨＣクラスＩ複合体への抗ＡＭＣ抗体部分の結合は、標的ＡＦＰ／ＭＨＣクラスＩ複合体への第２の抗ＡＭＣ抗体部分の結合を、少なくとも約７０％（例えば、少なくとも約７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９８％または９９％のいずれか）阻害し、または逆もまた同様である。一部の実施形態では、抗ＡＭＣ抗体部分および第２の抗ＡＭＣ抗体部分は、標的ＡＦＰ／ＭＨＣクラスＩ複合体への結合について交差競合する、即ち、これらの抗体部分の各々は、標的ＡＦＰ／ＭＨＣクラスＩ複合体への結合について他方と競合する。
【０１９７】
全長抗ＡＭＣ抗体
抗ＡＭＣ構築物は、一部の実施形態では、抗ＡＭＣ抗体部分を含む全長抗体（本明細書で「全長抗ＡＭＣ抗体」とも呼ぶ）である。一部の実施形態では、全長抗体は、モノクローナル抗体である。
【０１９８】
一部の実施形態では、全長抗ＡＭＣ抗体は、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧおよびＩｇＭなどの免疫グロブリン由来のＦｃ配列を含む。一部の実施形態では、全長抗ＡＭＣ抗体は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３またはＩｇＧ４のいずれかなどのＩｇＧのＦｃ配列を含む。一部の実施形態では、全長抗ＡＭＣ抗体は、ヒト免疫グロブリンのＦｃ配列を含む。一部の実施形態では、全長抗ＡＭＣ抗体は、マウス免疫グロブリンのＦｃ配列を含む。一部の実施形態では、全長抗ＡＭＣ抗体は、増強された抗体依存性細胞性細胞傷害（ＡＤＣＣ）または補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）エフェクター機能を有するように、変更されたまたは他の方法で変化されたＦｃ配列を含む。
【０１９９】
したがって、例えば、一部の実施形態では、ａ）ＡＦＰペプチドおよびＭＨＣクラスＩタンパク質を含む複合体に特異的に結合する抗ＡＭＣ抗体部分、ならびにｂ）Ｆｃ領域を含む全長抗ＡＭＣ抗体が提供される。一部の実施形態では、ＡＦＰペプチドは、ＡＦＰ１５８（配列番号４）である。一部の実施形態では、ＭＨＣクラスＩタンパク質は、ＨＬＡ−Ａ０２である。一部の実施形態では、ＭＨＣクラスＩタンパク質は、ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１である。一部の実施形態では、ａ）ＡＦＰ１５８ペプチド（配列番号４）およびＨＬＡ−Ａ＊０２：０１を含む複合体に特異的に結合する抗ＡＭＣ抗体部分、ならびにｂ）Ｆｃ領域を含む全長抗ＡＭＣ抗体が提供される。一部の実施形態では、Ｆｃ領域は、ＩｇＧ１  Ｆｃ配列を含む。一部の実施形態では、Ｆｃ領域は、ヒトＩｇＧ１  Ｆｃ配列を含む。一部の実施形態では、Ｆｃ領域は、マウスＩｇＧ１  Ｆｃ配列を含む。
【０２００】
一部の実施形態では、ａ）ＡＦＰペプチドおよびＭＨＣクラスＩタンパク質を含む複合体に特異的に結合する抗ＡＭＣ抗体部分であって、ｉ）Ｇ−Ｆ／Ｙ−Ｓ／Ｔ−Ｆ−Ｄ／Ｓ／Ｔ−Ｄ／Ｎ／Ｓ−Ｙ／Ａ−Ａ／Ｇ／Ｗ（配列番号８７）のアミノ酸配列を含むＨＣ−ＣＤＲ１、または最大で約３（例えば、約１、２または３のいずれか）アミノ酸の置換を含むそのバリアント、Ｉ／Ｓ−Ｋ／Ｓ−Ｘ−Ｈ／Ｙ−Ｘ−Ｇ−Ｘ−Ｔ（配列番号８８）のアミノ酸配列を含むＨＣ−ＣＤＲ２、または最大で約３（例えば、約１、２または３のいずれか）アミノ酸の置換を含むそのバリアント、およびＡ／Ｇ−Ｘ−Ｗ／Ｙ−Ｙ−Ｘ−Ｘ−Ｘ−Ｆ／Ｙ−Ｄ（配列番号８９）のアミノ酸配列を含むＨＣ−ＣＤＲ３；または最大で約３（例えば、約１、２または３のいずれか）アミノ酸の置換を含むそのバリアントを含む重鎖可変ドメイン配列；ならびにｉｉ）Ｓ／Ｔ−Ｇ／Ｓ−Ｄ／Ｎ−Ｉ／Ｖ−Ａ／Ｇ−Ａ／Ｓ／Ｖ−Ｘ−Ｈ／Ｙ（配列番号１２０）のアミノ酸配列を含むＬＣ−ＣＤＲ１、または最大で約３（例えば、約１、２または３のいずれか）アミノ酸の置換を含むそのバリアント、およびＱ−Ｓ／Ｔ−Ｙ／Ｗ−Ｄ／Ｔ−Ｓ／Ｔ−Ａ／Ｓ（配列番号１２１）のアミノ酸配列を含むＬＣ−ＣＤＲ３、または最大で約３（例えば、約１、２または３のいずれか）アミノ酸の置換を含むそのバリアントを含む軽鎖可変ドメインを含み；Ｘは任意のアミノ酸であり得る、抗ＡＭＣ抗体部分、ならびにｂ）Ｆｃ領域を含む全長抗ＡＭＣ抗体が提供される。一部の実施形態では、Ｆｃ領域は、ＩｇＧ１  Ｆｃ配列を含む。一部の実施形態では、Ｆｃ領域は、ヒトＩｇＧ１  Ｆｃ配列を含む。一部の実施形態では、Ｆｃ領域は、マウスＩｇＧ１  Ｆｃ配列を含む。
【０２０１】
一部の実施形態では、ａ）ＡＦＰペプチドおよびＭＨＣクラスＩタンパク質を含む複合体に特異的に結合する抗ＡＭＣ抗体部分であって、ｉ）Ｇ−Ｆ／Ｙ−Ｓ／Ｔ−Ｆ−Ｄ／Ｓ／Ｔ−Ｄ／Ｎ／Ｓ−Ｙ／Ａ−Ａ／Ｇ／Ｗ（配列番号８７）のアミノ酸配列を含むＨＣ−ＣＤＲ１、Ｉ／Ｓ−Ｋ／Ｓ−Ｘ−Ｈ／Ｙ−Ｘ−Ｇ−Ｘ−Ｔ（配列番号８８）のアミノ酸配列を含むＨＣ−ＣＤＲ２、およびＡ／Ｇ−Ｘ−Ｗ／Ｙ−Ｙ−Ｘ−Ｘ−Ｘ−Ｆ／Ｙ−Ｄ（配列番号８９）のアミノ酸配列を含むＨＣ−ＣＤＲ３を含む重鎖可変ドメイン配列；ならびにｉｉ）Ｓ／Ｔ−Ｇ／Ｓ−Ｄ／Ｎ−Ｉ／Ｖ−Ａ／Ｇ−Ａ／Ｓ／Ｖ−Ｘ−Ｈ／Ｙ（配列番号１２０）のアミノ酸配列を含むＬＣ−ＣＤＲ１、およびＱ−Ｓ／Ｔ−Ｙ／Ｗ−Ｄ／Ｔ−Ｓ／Ｔ−Ａ／Ｓ（配列番号１２１）のアミノ酸配列を含むＬＣ−ＣＤＲ３を含む軽鎖可変ドメインを含み；Ｘは任意のアミノ酸であり得る、抗ＡＭＣ抗体部分、ならびにｂ）Ｆｃ領域を含む全長抗ＡＭＣ抗体が提供される。一部の実施形態では、Ｆｃ領域は、ＩｇＧ１  Ｆｃ配列を含む。一部の実施形態では、Ｆｃ領域は、ヒトＩｇＧ１  Ｆｃ配列を含む。一部の実施形態では、Ｆｃ領域は、マウスＩｇＧ１  Ｆｃ配列を含む。
【０２０２】
一部の実施形態では、ａ）ＡＦＰペプチドおよびＭＨＣクラスＩタンパク質を含む複合体に特異的に結合する抗ＡＭＣ抗体部分であって、ｉ）配列番号５７〜６６のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＨＣ−ＣＤＲ１、または最大で約５（例えば、約１、２、３、４または５のいずれか）アミノ酸の置換を含むそのバリアント、配列番号６７〜７６のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＨＣ−ＣＤＲ２、または最大で約５（例えば、約１、２、３、４または５のいずれか）アミノ酸の置換を含むそのバリアント、および配列番号７７〜８６のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＨＣ−ＣＤＲ３、または最大で約５（例えば、約１、２、３、４または５のいずれか）アミノ酸の置換を含むそのバリアントを含む重鎖可変ドメイン；ならびにｉｉ）配列番号９０〜９９のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＬＣ−ＣＤＲ１、または最大で約５（例えば、約１、２、３、４または５のいずれか）アミノ酸の置換を含むそのバリアント、配列番号１００〜１０９のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＬＣ−ＣＤＲ２、または最大で約３（例えば、約１、２または３のいずれか）アミノ酸の置換を含むそのバリアント、および配列番号１１０〜１１９のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＬＣ−ＣＤＲ３、または最大で約５（例えば、約１、２、３、４または５のいずれか）アミノ酸の置換を含むそのバリアントを含む軽鎖可変ドメインを含む抗ＡＭＣ抗体部分を含む全長抗ＡＭＣ抗体が提供される。一部の実施形態では、Ｆｃ領域は、ＩｇＧ１  Ｆｃ配列を含む。一部の実施形態では、Ｆｃ領域は、ヒトＩｇＧ１  Ｆｃ配列を含む。一部の実施形態では、Ｆｃ領域は、マウスＩｇＧ１  Ｆｃ配列を含む。
【０２０３】
一部の実施形態では、ａ）ＡＦＰペプチドおよびＭＨＣクラスＩタンパク質を含む複合体に特異的に結合する抗ＡＭＣ抗体部分であって、ｉ）配列番号５７〜６６のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＨＣ−ＣＤＲ１；配列番号６７〜７６のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＨＣ−ＣＤＲ２；および配列番号７７〜８６のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＨＣ−ＣＤＲ３を含む重鎖可変ドメイン配列；またはＨＣ−ＣＤＲ配列中に最大で約５（例えば、約１、２、３、４または５のいずれか）アミノ酸の置換を含むそのバリアント；ならびにｉｉ）配列番号９０〜９９のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＬＣ−ＣＤＲ１；配列番号１００〜１０９のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＬＣ−ＣＤＲ２；および配列番号１１０〜１１９のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＬＣ−ＣＤＲ３を含む軽鎖可変ドメイン配列；またはＬＣ−ＣＤＲ配列中に最大で約５（例えば、約１、２、３、４または５のいずれか）アミノ酸の置換を含むそのバリアントを含む抗ＡＭＣ抗体部分；ならびにｂ）Ｆｃ領域を含む全長抗ＡＭＣ抗体が提供される。一部の実施形態では、Ｆｃ領域は、ＩｇＧ１  Ｆｃ配列を含む。一部の実施形態では、Ｆｃ領域は、ヒトＩｇＧ１  Ｆｃ配列を含む。一部の実施形態では、Ｆｃ領域は、マウスＩｇＧ１  Ｆｃ配列を含む。
【０２０４】
一部の実施形態では、ａ）ＡＦＰペプチドおよびＭＨＣクラスＩタンパク質を含む複合体に特異的に結合する抗ＡＭＣ抗体部分であって、ｉ）配列番号５７〜６６のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＨＣ−ＣＤＲ１；配列番号６７〜７６のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＨＣ−ＣＤＲ２；および配列番号７７〜８６のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＨＣ−ＣＤＲ３を含む重鎖可変ドメイン配列；ならびにｉｉ）配列番号９０〜９９のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＬＣ−ＣＤＲ１；配列番号１００〜１０９のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＬＣ−ＣＤＲ２；および配列番号１１０〜１１９のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＬＣ−ＣＤＲ３を含む軽鎖可変ドメイン配列を含む抗ＡＭＣ抗体部分；ならびにｂ）Ｆｃ領域を含む全長抗ＡＭＣ抗体が提供される。一部の実施形態では、Ｆｃ領域は、ＩｇＧ１  Ｆｃ配列を含む。一部の実施形態では、Ｆｃ領域は、ヒトＩｇＧ１  Ｆｃ配列を含む。一部の実施形態では、Ｆｃ領域は、マウスＩｇＧ１  Ｆｃ配列を含む。
【０２０５】
一部の実施形態では、ａ）ＡＦＰペプチドおよびＭＨＣクラスＩタンパク質を含む複合体に特異的に結合する抗ＡＭＣ抗体部分であって、配列番号１７〜２６のいずれか１つのアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン、または少なくとも約９５％（例えば、少なくとも約９６％、９７％、９８％または９９％のいずれか）の配列同一性を有するそのバリアント、および配列番号２７〜３６のいずれか１つのアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン、または少なくとも約９５％の配列同一性を有するそのバリアントを含む抗ＡＭＣ抗体部分；ならびにｂ）Ｆｃ領域を含む全長抗ＡＭＣ抗体が提供される。一部の実施形態では、Ｆｃ領域は、ＩｇＧ１  Ｆｃ配列を含む。一部の実施形態では、Ｆｃ領域は、ヒトＩｇＧ１  Ｆｃ配列を含む。一部の実施形態では、Ｆｃ領域は、マウスＩｇＧ１  Ｆｃ配列を含む。
【０２０６】
一部の実施形態では、ａ）ＡＦＰペプチドおよびＭＨＣクラスＩタンパク質を含む複合体に特異的に結合する抗ＡＭＣ抗体部分であって、配列番号１７〜２６のいずれか１つのアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインおよび配列番号２７〜３６のいずれか１つのアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを含む抗ＡＭＣ抗体部分；ならびにｂ）Ｆｃ領域を含む全長抗ＡＭＣ抗体が提供される。一部の実施形態では、Ｆｃ領域は、ＩｇＧ１  Ｆｃ配列を含む。一部の実施形態では、Ｆｃ領域は、ヒトＩｇＧ１  Ｆｃ配列を含む。一部の実施形態では、Ｆｃ領域は、マウスＩｇＧ１  Ｆｃ配列を含む。
【０２０７】
一部の実施形態では、全長抗ＡＭＣ抗体は、約０．１ｐＭ〜約５００ｎＭの間（例えば、これらの値の間の任意の範囲を含んで、約０．１ｐＭ、１．０ｐＭ、１０ｐＭ、５０ｐＭ、１００ｐＭ、５００ｐＭ、１ｎＭ、１０ｎＭ、５０ｎＭ、１００ｎＭまたは５００ｎＭのいずれか）のＫｄで、ＡＦＰペプチドおよびＭＨＣクラスＩタンパク質を含む複合体に結合する。一部の実施形態では、全長抗ＡＭＣ抗体は、約１ｐＭ〜約２５０ｐＭの間（例えば、これらの値の間の任意の範囲を含んで、約１、１０、２５、５０、７５、１００、１５０、２００または２５０ｐＭのいずれか）のＫｄで、ＡＦＰペプチドおよびＭＨＣクラスＩタンパク質を含む複合体に結合する。
【０２０８】
多特異的抗ＡＭＣ分子
抗ＡＭＣ構築物は、一部の実施形態では、抗ＡＭＣ抗体部分および第２の結合部分（例えば、第２の抗原結合部分）を含む多特異的抗ＡＭＣ分子を含む。一部の実施形態では、多特異的抗ＡＭＣ分子は、抗ＡＭＣ抗体部分および第２の抗原結合部分を含む。
【０２０９】
多特異的分子は、少なくとも２つの異なる抗原またはエピトープに対する結合特異性を有する分子である（例えば、二重特異的抗体は、２つの抗原またはエピトープに対する結合特異性を有する）。２よりも多い結合価および／または特異性を有する多特異的分子もまた企図される。例えば、三重特異的抗体が調製され得る。Ｔｕｔｔら  Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  １４７巻：６０頁（１９９１年）。当業者が、互いに組み合わせて本発明の多特異的抗ＡＭＣ分子を形成するために、本明細書に記載される個々の多特異的分子の適切な特徴を選択できることを理解すべきである。
【０２１０】
したがって、例えば、一部の実施形態では、ａ）ＡＦＰペプチドおよびＭＨＣクラスＩタンパク質を含む複合体に特異的に結合する抗ＡＭＣ抗体部分、ならびにｂ）第２の結合部分（例えば、抗原結合部分）を含む多特異的（例えば、二重特異的）抗ＡＭＣ分子が提供される。一部の実施形態では、第２の結合部分は、ＭＨＣクラスＩタンパク質に結合した異なるＡＦＰペプチドを含む複合体に特異的に結合する。一部の実施形態では、第２のｓｃＦｖは、異なるＭＨＣクラスＩタンパク質に結合したＡＦＰペプチドを含む複合体に特異的に結合する。一部の実施形態では、第２の結合部分は、ＭＨＣクラスＩタンパク質に結合したＡＦＰペプチドを含む複合体上の異なるエピトープに特異的に結合する。一部の実施形態では、第２の結合部分は、異なる抗原に特異的に結合する。一部の実施形態では、第２の結合部分は、細胞傷害性細胞などの細胞の表面上の抗原に特異的に結合する。一部の実施形態では、第２の結合部分は、リンパ球、例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞、好中球、単球、マクロファージまたは樹状細胞の表面上の抗原に特異的に結合する。一部の実施形態では、第２の結合部分は、エフェクターＴ細胞、例えば、細胞傷害性Ｔ細胞（細胞傷害性Ｔリンパ球（ＣＴＬ）またはＴキラー細胞としても公知）に特異的に結合する。
【０２１１】
一部の実施形態では、ａ）ＡＦＰペプチドおよびＭＨＣクラスＩタンパク質を含む複合体に特異的に結合する抗ＡＭＣ抗体部分、ならびにｂ）ＣＤ３に特異的に結合する第２の抗原結合部分を含む多特異的抗ＡＭＣ分子が提供される。一部の実施形態では、第２の抗原結合部分は、ＣＤ３εに特異的に結合する。一部の実施形態では、第２の抗原結合部分は、ＣＤ３εのアゴニストエピトープに特異的に結合する。用語「アゴニストエピトープ」とは、本明細書で使用する場合、（ａ）多特異的分子の結合の際に、任意選択で、同じ細胞上でのいくつかの多特異的分子の結合の際に、前記多特異的分子にＴＣＲシグナル伝達を活性化させ、Ｔ細胞活性化を誘導させるエピトープ、および／または（ｂ）ＣＤ３のイプシロン鎖のアミノ酸残基のみから構成され、Ｔ細胞上のその天然の環境（即ち、ＴＣＲ、ＣＤ３γ鎖などによって取り囲まれる）において提示される場合、多特異的分子による結合のためにアクセス可能であるエピトープ、および／または（ｃ）多特異的分子の結合の際に、ＣＤ３γと比較して、ＣＤ３εの空間的位置の安定化をもたらさないエピトープを意味する。
【０２１２】
一部の実施形態では、ａ）ＡＦＰペプチドおよびＭＨＣクラスＩタンパク質を含む複合体に特異的に結合する抗ＡＭＣ抗体部分、ならびにｂ）例えば、ＣＤ３γ、ＣＤ３δ、ＣＤ３ε、ＣＤ３ζ、ＣＤ２８、ＣＤ１６ａ、ＣＤ５６、ＣＤ６８およびＧＤＳ２Ｄを含む、エフェクター細胞の表面上の抗原に特異的に結合する第２の抗原結合部分を含む多特異的抗ＡＭＣ分子が提供される。
【０２１３】
一部の実施形態では、ａ）ＡＦＰペプチドおよびＭＨＣクラスＩタンパク質を含む複合体に特異的に結合する抗ＡＭＣ抗体部分、ならびにｂ）Ｃ１ｑなどの補体系の成分に特異的に結合する第２の抗原結合部分を含む多特異的抗ＡＭＣ分子が提供される。Ｃ１ｑは、血清補体系を活性化するＣ１酵素複合体のサブユニットである。
【０２１４】
一部の実施形態では、第２の抗原結合部分は、Ｆｃ受容体に特異的に結合する。一部の実施形態では、第２の抗原結合部分は、Ｆｃγ受容体（ＦｃγＲ）に特異的に結合する。ＦｃγＲは、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞の表面上に存在するＦｃγＲＩＩＩ、またはマクロファージ、単球、好中球および／もしくは樹状細胞の表面上に存在するＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩＡ、ＦｃγＲＩＩＢＩ、ＦｃγＲＩＩＢ２およびＦｃγＲＩＩＩＢのうち１つであり得る。一部の実施形態では、第２の抗原結合部分は、Ｆｃ領域またはその機能的断片である。この文脈で使用する「機能的断片」とは、ＦｃγＲ保有エフェクター細胞、特に、マクロファージ、単球、好中球および／または樹状細胞が、細胞傷害性溶解またはファゴサイトーシスによって標的細胞を死滅させるのを可能にするのに十分な特異性および親和性で、ＦｃＲ、特にＦｃγＲに結合することがなおも可能な抗体Ｆｃ領域の断片を指す。機能的Ｆｃ断片は、活性化ＦｃγＲＩなどのＦｃＲへの元の全長Ｆｃの一部分の結合を競合的に阻害することが可能である。一部の実施形態では、機能的Ｆｃ断片は、活性化ＦｃγＲに対するその親和性の少なくとも３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％または９５％を保持する。一部の実施形態では、Ｆｃ領域またはその機能的断片は、増強されたＦｃ領域またはその機能的断片である。用語「増強されたＦｃ領域」とは、本明細書で使用する場合、Ｆｃ受容体媒介性エフェクター機能、特に、抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）、補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）および抗体媒介性ファゴサイトーシスを増強するように改変されたＦｃ領域を指す。これは、当該分野で公知のように、例えば、活性化受容体（例えば、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞上で発現されるＦｃγＲＩＩＩＡ（ＣＤ１６Ａ））に対する増加した親和性および／または阻害性受容体（例えば、ＦｃγＲＩＩＢ１／Ｂ２（ＣＤ３２Ｂ））への減少した結合をもたらす方法でＦｃ領域を変更することによって、達成され得る。さらに他の実施形態では、第２の抗原結合部分は、ＦｃγＲ保有エフェクター細胞、特に、マクロファージ、単球、好中球および／または樹状細胞が、細胞傷害性溶解またはファゴサイトーシスによって標的細胞を死滅させるのを可能にするのに十分な特異性および親和性で、ＦｃＲ、特にＦｃγＲに特異的に結合する抗体またはその抗原結合断片である。
【０２１５】
一部の実施形態では、多特異的抗ＡＭＣ分子は、ＡＭＣ提示標的細胞の殺滅を可能にし、および／またはＡＭＣ提示標的細胞を溶解するようにＣＴＬを有効に再指向させ得る。一部の実施形態では、本発明の多特異的（例えば、二重特異的）抗ＡＭＣ分子は、１０〜５００ｎｇ／ｍｌの範囲のｉｎ  ｖｉｔｒｏ  ＥＣ５０を示し、約１：１〜約５０：１（例えば、約１：１〜約１５：１または約２：１〜約１０：１）のＣＴＬ対標的細胞の比率で、ＣＴＬを介した標的細胞の約５０％の再指向された溶解（ｒｅｄｉｒｅｃｔｅｄ  ｌｙｓｉｓ）を誘導することができる。
【０２１６】
一部の実施形態では、多特異的（例えば、二重特異的）抗ＡＭＣ分子は、標的細胞が溶解されるような方法で、刺激されたまたは未刺激のＣＴＬと標的細胞とを架橋することが可能である。これは、標的特異的Ｔ細胞クローンの生成または樹状細胞による共通の抗原提示が、多特異的抗ＡＭＣ分子がその所望の活性を発揮するために必要とされないという利点を提供する。一部の実施形態では、本発明の多特異的抗ＡＭＣ分子は、他の活性化シグナルの非存在下で、標的細胞を溶解するようにＣＴＬを再指向させることが可能である。一部の実施形態では、多特異的抗ＡＭＣ分子の第２の抗原結合部分は、ＣＤ３に特異的に結合し（例えば、ＣＤ３εに特異的に結合し）、ＣＤ２８および／またはＩＬ−２を介したシグナル伝達は、標的細胞を溶解するようにＣＴＬを再指向させるために必要とされない。
【０２１７】
２つの抗原（例えば、２つの異なる細胞上の抗原）に同時に結合する多特異的抗ＡＭＣ分子の選好性を測定するための方法は、当業者の通常の能力の範囲内である。例えば、第２の結合部分がＣＤ３に特異的に結合する場合、多特異的抗ＡＭＣ分子は、ＣＤ３＋／ＡＦＰ−細胞およびＣＤ３−／ＡＦＰ＋細胞の混合物と接触させられ得る。次いで、多特異的抗ＡＭＣ分子陽性単一細胞の数および多特異的抗ＡＭＣ分子によって架橋された細胞の数が、当該分野で公知のように、顕微鏡法または蛍光活性化細胞分取（ＦＡＣＳ）によって評価され得る。
【０２１８】
例えば、一部の実施形態では、ａ）ＡＦＰペプチドおよびＭＨＣクラスＩタンパク質を含む複合体に特異的に結合する抗ＡＭＣ抗体部分、ならびにｂ）第２の抗原結合部分を含む多特異的抗ＡＭＣ分子が提供される。一部の実施形態では、ＡＦＰペプチドは、ＡＦＰ１５８（配列番号４）である。一部の実施形態では、ＭＨＣクラスＩタンパク質は、ＨＬＡ−Ａ０２である。一部の実施形態では、ＭＨＣクラスＩタンパク質は、ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１である。一部の実施形態では、第２の抗原結合部分は、ＭＨＣクラスＩタンパク質に結合した異なるＡＦＰペプチドを含む複合体に特異的に結合する。一部の実施形態では、第２の抗原結合部分は、異なるＭＨＣクラスＩタンパク質に結合したＡＦＰペプチドを含む複合体に特異的に結合する。一部の実施形態では、第２の抗原結合部分は、ＭＨＣクラスＩタンパク質に結合したＡＦＰペプチドを含む複合体上の異なるエピトープに特異的に結合する。一部の実施形態では、第２の抗原結合部分は、別の抗原に特異的に結合する。一部の実施形態では、第２の抗原結合部分は、ＡＭＣ提示細胞などの細胞の表面上の抗原に特異的に結合する。一部の実施形態では、第２の抗原結合部分は、ＡＦＰを発現しない細胞の表面上の抗原に特異的に結合する。一部の実施形態では、第２の抗原結合部分は、細胞傷害性細胞の表面上の抗原に特異的に結合する。一部の実施形態では、第２の抗原結合部分は、リンパ球、例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞、好中球、単球、マクロファージまたは樹状細胞の表面上の抗原に特異的に結合する。一部の実施形態では、第２の抗原結合部分は、エフェクターＴ細胞、例えば、細胞傷害性Ｔ細胞の表面上の抗原に特異的に結合する。一部の実施形態では、第２の抗原結合部分は、例えば、ＣＤ３γ、ＣＤ３δ、ＣＤ３ε、ＣＤ３ζ、ＣＤ２８、ＣＤ１６ａ、ＣＤ５６、ＣＤ６８およびＧＤＳ２Ｄを含む、エフェクター細胞の表面上の抗原に特異的に結合する。一部の実施形態では、抗ＡＭＣ抗体部分は、ヒト、ヒト化または半合成である。一部の実施形態では、第２の抗原結合部分は、抗体部分である。一部の実施形態では、第２の抗原結合部分は、ヒト、ヒト化または半合成の抗体部分である。一部の実施形態では、多特異的抗ＡＭＣ分子は、少なくとも１つ（例えば、少なくとも約２、３、４、５またはそれ超のいずれか）のさらなる抗原結合部分をさらに含む。
【０２１９】
一部の実施形態では、ａ）ＡＦＰ１５８ペプチド（配列番号４）およびＨＬＡ−Ａ＊０２：０１を含む複合体に特異的に結合する抗ＡＭＣ抗体部分、およびｂ）第２の抗原結合部分を含む多特異的抗ＡＭＣ分子が提供される。
【０２２０】
一部の実施形態では、ａ）ＡＦＰペプチドおよびＭＨＣクラスＩタンパク質を含む複合体に特異的に結合する抗ＡＭＣ抗体部分であって、ｉ）Ｇ−Ｆ／Ｙ−Ｓ／Ｔ−Ｆ−Ｄ／Ｓ／Ｔ−Ｄ／Ｎ／Ｓ−Ｙ／Ａ−Ａ／Ｇ／Ｗ（配列番号８７）のアミノ酸配列を含むＨＣ−ＣＤＲ１、または最大で約３（例えば、約１、２または３のいずれか）アミノ酸の置換を含むそのバリアント、Ｉ／Ｓ−Ｋ／Ｓ−Ｘ−Ｈ／Ｙ−Ｘ−Ｇ−Ｘ−Ｔ（配列番号８８）のアミノ酸配列を含むＨＣ−ＣＤＲ２、または最大で約３（例えば、約１、２または３のいずれか）アミノ酸の置換を含むそのバリアント、およびＡ／Ｇ−Ｘ−Ｗ／Ｙ−Ｙ−Ｘ−Ｘ−Ｘ−Ｆ／Ｙ−Ｄ（配列番号８９）のアミノ酸配列を含むＨＣ−ＣＤＲ３、または最大で約３（例えば、約１、２または３のいずれか）アミノ酸の置換を含むそのバリアントを含む重鎖可変ドメイン配列；ならびにｉｉ）Ｓ／Ｔ−Ｇ／Ｓ−Ｄ／Ｎ−Ｉ／Ｖ−Ａ／Ｇ−Ａ／Ｓ／Ｖ−Ｘ−Ｈ／Ｙ（配列番号１２０）のアミノ酸配列を含むＬＣ−ＣＤＲ１、または最大で約３（例えば、約１、２または３のいずれか）アミノ酸の置換を含むそのバリアント、およびＱ−Ｓ／Ｔ−Ｙ／Ｗ−Ｄ／Ｔ−Ｓ／Ｔ−Ａ／Ｓ（配列番号１２１）のアミノ酸配列を含むＬＣ−ＣＤＲ３、または最大で約３（例えば、約１、２または３のいずれか）アミノ酸の置換を含むそのバリアントを含む軽鎖可変ドメインを含み；Ｘは任意のアミノ酸であり得る、抗ＡＭＣ抗体部分、ならびにｂ）第２の抗原結合部分を含む多特異的抗ＡＭＣ分子が提供される。
【０２２１】
一部の実施形態では、ａ）ＡＦＰペプチドおよびＭＨＣクラスＩタンパク質を含む複合体に特異的に結合する抗ＡＭＣ抗体部分であって、ｉ）Ｇ−Ｆ／Ｙ−Ｓ／Ｔ−Ｆ−Ｄ／Ｓ／Ｔ−Ｄ／Ｎ／Ｓ−Ｙ／Ａ−Ａ／Ｇ／Ｗ（配列番号８７）のアミノ酸配列を含むＨＣ−ＣＤＲ１、Ｉ／Ｓ−Ｋ／Ｓ−Ｘ−Ｈ／Ｙ−Ｘ−Ｇ−Ｘ−Ｔ（配列番号８８）のアミノ酸配列を含むＨＣ−ＣＤＲ２、およびＡ／Ｇ−Ｘ−Ｗ／Ｙ−Ｙ−Ｘ−Ｘ−Ｘ−Ｆ／Ｙ−Ｄ（配列番号８９）のアミノ酸配列を含むＨＣ−ＣＤＲ３を含む重鎖可変ドメイン配列；ならびにｉｉ）Ｓ／Ｔ−Ｇ／Ｓ−Ｄ／Ｎ−Ｉ／Ｖ−Ａ／Ｇ−Ａ／Ｓ／Ｖ−Ｘ−Ｈ／Ｙ（配列番号１２０）のアミノ酸配列を含むＬＣ−ＣＤＲ１、およびＱ−Ｓ／Ｔ−Ｙ／Ｗ−Ｄ／Ｔ−Ｓ／Ｔ−Ａ／Ｓ（配列番号１２１）のアミノ酸配列を含むＬＣ−ＣＤＲ３を含む軽鎖可変ドメインを含み；Ｘは任意のアミノ酸であり得る、抗ＡＭＣ抗体部分、ならびにｂ）第２の抗原結合部分を含む多特異的抗ＡＭＣ分子が提供される。
【０２２２】
一部の実施形態では、ａ）ＡＦＰペプチドおよびＭＨＣクラスＩタンパク質を含む複合体に特異的に結合する抗ＡＭＣ抗体部分であって、ｉ）配列番号５７〜６６のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＨＣ−ＣＤＲ１、または最大で約５（例えば、約１、２、３、４または５のいずれか）アミノ酸の置換を含むそのバリアント、配列番号６７〜７６のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＨＣ−ＣＤＲ２、または最大で約５（例えば、約１、２、３、４または５のいずれか）アミノ酸の置換を含むそのバリアント、および配列番号７７〜８６のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＨＣ−ＣＤＲ３、または最大で約５（例えば、約１、２、３、４または５のいずれか）アミノ酸の置換を含むそのバリアントを含む重鎖可変ドメイン；ならびにｉｉ）配列番号９０〜９９のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＬＣ−ＣＤＲ１、または最大で約５（例えば、約１、２、３、４または５のいずれか）アミノ酸の置換を含むそのバリアント、配列番号１００〜１０９のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＬＣ−ＣＤＲ２、または最大で約３（例えば、約１、２または３のいずれか）アミノ酸の置換を含むそのバリアント、および配列番号１１０〜１１９のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＬＣ−ＣＤＲ３、または最大で約５（例えば、約１、２、３、４または５のいずれか）アミノ酸の置換を含むそのバリアントを含む軽鎖可変ドメインを含む抗ＡＭＣ抗体部分；ならびにｂ）第２の抗原結合部分を含む多特異的抗ＡＭＣ分子が提供される。
【０２２３】
一部の実施形態では、ａ）ＡＦＰペプチドおよびＭＨＣクラスＩタンパク質を含む複合体に特異的に結合する抗ＡＭＣ抗体部分であって、ｉ）配列番号５７〜６６のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＨＣ−ＣＤＲ１；配列番号６７〜７６のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＨＣ−ＣＤＲ２；および配列番号７７〜８６のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＨＣ−ＣＤＲ３を含む重鎖可変ドメイン配列；またはＨＣ−ＣＤＲ配列中に最大で約５（例えば、約１、２、３、４または５のいずれか）アミノ酸の置換を含むそのバリアント；ならびにｉｉ）配列番号９０〜９９のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＬＣ−ＣＤＲ１；配列番号１００〜１０９のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＬＣ−ＣＤＲ２；および配列番号１１０〜１１９のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＬＣ−ＣＤＲ３を含む軽鎖可変ドメイン配列；またはＬＣ−ＣＤＲ配列中に最大で約５（例えば、約１、２、３、４または５のいずれか）アミノ酸の置換を含むそのバリアントを含む抗ＡＭＣ抗体部分；ならびにｂ）第２の抗原結合部分を含む多特異的抗ＡＭＣ分子が提供される。
【０２２４】
一部の実施形態では、ａ）ＡＦＰペプチドおよびＭＨＣクラスＩタンパク質を含む複合体に特異的に結合する抗ＡＭＣ抗体部分であって、ｉ）配列番号５７〜６６のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＨＣ−ＣＤＲ１；配列番号６７〜７６のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＨＣ−ＣＤＲ２；および配列番号７７〜８６のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＨＣ−ＣＤＲ３を含む重鎖可変ドメイン配列；ならびにｉｉ）配列番号９０〜９９のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＬＣ−ＣＤＲ１；配列番号１００〜１０９のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＬＣ−ＣＤＲ２；および配列番号１１０〜１１９のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＬＣ−ＣＤＲ３を含む軽鎖可変ドメイン配列を含む抗ＡＭＣ抗体部分；ならびにｂ）第２の抗原結合部分を含む多特異的抗ＡＭＣ分子が提供される。
【０２２５】
一部の実施形態では、ａ）配列番号１７〜２６のいずれか１つのアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン、または少なくとも約９５％（例えば、少なくとも約９６％、９７％、９８％または９９％のいずれか）の配列同一性を有するそのバリアント、および配列番号２７〜３６のいずれか１つのアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン、または少なくとも約９５％の配列同一性を有するそのバリアントを含む抗ＡＭＣ抗体部分；ならびにｂ）第２のｓｃＦｖを含む多特異的抗ＡＭＣ分子が提供される。
【０２２６】
一部の実施形態では、ａ）配列番号１７〜２６のいずれか１つのアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインおよび配列番号２７〜３６のいずれか１つのアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを含む抗ＡＭＣ抗体部分；ならびにｂ）第２の抗原結合部分を含む多特異的抗ＡＭＣ分子が提供される。
【０２２７】
一部の実施形態では、多特異的抗ＡＭＣ分子は、例えば、ダイアボディ（Ｄｂ）、単鎖ダイアボディ（ｓｃＤｂ）、タンデムｓｃＤｂ（Ｔａｎｄａｂ）、線状ダイマーｓｃＤｂ（ＬＤ−ｓｃＤｂ）、環状ダイマーｓｃＤｂ（ＣＤ−ｓｃＤｂ）、ジ−ダイアボディ、タンデムｓｃＦｖ、タンデムジ−ｓｃＦｖ（例えば、二重特異的Ｔ細胞エンゲージャー）、タンデムトリ−ｓｃＦｖ、トリ（ア）ボディ（ｔｒｉ（ａ）ｂｏｄｙ）、二重特異的Ｆａｂ２、ジ−ミニ抗体（ｍｉｎｉａｎｔｉｂｏｄｙ）、テトラボディ（ｔｅｔｒａｂｏｄｙ）、ｓｃＦｖ−Ｆｃ−ｓｃＦｖ融合物、二重親和性再標的化（ＤＡＲＴ）抗体、二重可変ドメイン（ＤＶＤ）抗体、ＩｇＧ−ｓｃＦａｂ、ｓｃＦａｂ−ｄｓ−ｓｃＦｖ、Ｆｖ２−Ｆｃ、ＩｇＧ−ｓｃＦｖ融合物、ドックアンドロック（ＤＮＬ）抗体、ノブ−イントゥ−ホール（ＫｉＨ）抗体（ＫｉＨテクノロジーによって調製された二重特異的ＩｇＧ）、ＤｕｏＢｏｄｙ（Ｄｕｏｂｏｄｙテクノロジーによって調製された二重特異的ＩｇＧ）、ヘテロマルチマー抗体またはヘテロコンジュゲート抗体である。一部の実施形態では、多特異的抗ＡＭＣ分子は、タンデムｓｃＦｖ（例えば、タンデムジ−ｓｃＦｖ、例えば、二重特異的Ｔ細胞エンゲージャー）である。
【０２２８】
タンデムｓｃＦｖ
多特異的抗ＡＭＣ分子は、一部の実施形態では、抗ＡＭＣ抗体部分を含む第１のｓｃＦｖおよび第２のｓｃＦｖを含むタンデムｓｃＦｖ（本明細書で「タンデムｓｃＦｖ多特異的抗ＡＭＣ抗体」とも呼ぶ）である。一部の実施形態では、タンデムｓｃＦｖ多特異的抗ＡＭＣ抗体は、少なくとも１つ（例えば、少なくとも約２、３、４、５またはそれ超のいずれか）のさらなるｓｃＦｖをさらに含む。
【０２２９】
一部の実施形態では、ａ）ＡＦＰペプチドおよびＭＨＣクラスＩタンパク質を含む複合体に特異的に結合する第１のｓｃＦｖ、ならびにｂ）第２のｓｃＦｖを含むタンデムｓｃＦｖ多特異的（例えば、二重特異的）抗ＡＭＣ抗体が提供される。一部の実施形態では、ＡＦＰペプチドは、ＡＦＰ１５８（配列番号４）である。一部の実施形態では、ＭＨＣクラスＩタンパク質は、ＨＬＡ−Ａ０２である。一部の実施形態では、ＭＨＣクラスＩタンパク質は、ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１である。一部の実施形態では、第２のｓｃＦｖは、ＭＨＣクラスＩタンパク質に結合した異なるＡＦＰペプチドを含む複合体に特異的に結合する。一部の実施形態では、第２のｓｃＦｖは、異なるＭＨＣクラスＩタンパク質に結合したＡＦＰペプチドを含む複合体に特異的に結合する。一部の実施形態では、第２のｓｃＦｖは、ＭＨＣクラスＩタンパク質に結合したＡＦＰペプチドを含む複合体上の異なるエピトープに特異的に結合する。一部の実施形態では、第２のｓｃＦｖは、別の抗原に特異的に結合する。一部の実施形態では、第２のｓｃＦｖは、ＡＭＣ提示細胞などの細胞の表面上の抗原に特異的に結合する。一部の実施形態では、第２のｓｃＦｖは、ＡＦＰを発現しない細胞の表面上の抗原に特異的に結合する。一部の実施形態では、第２のｓｃＦｖは、細胞傷害性細胞の表面上の抗原に特異的に結合する。一部の実施形態では、第２のｓｃＦｖは、リンパ球、例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞、好中球、単球、マクロファージまたは樹状細胞の表面上の抗原に特異的に結合する。一部の実施形態では、第２のｓｃＦｖは、エフェクターＴ細胞、例えば、細胞傷害性Ｔ細胞の表面上の抗原に特異的に結合する。一部の実施形態では、第２のｓｃＦｖは、例えば、ＣＤ３γ、ＣＤ３δ、ＣＤ３ε、ＣＤ３ζ、ＣＤ２８、ＣＤ１６ａ、ＣＤ５６、ＣＤ６８およびＧＤＳ２Ｄを含む、エフェクター細胞の表面上の抗原に特異的に結合する。一部の実施形態では、第１のｓｃＦｖは、ヒト、ヒト化または半合成である。一部の実施形態では、第２のｓｃＦｖは、ヒト、ヒト化または半合成である。一部の実施形態では、第１のｓｃＦｖおよび第２のｓｃＦｖは共に、ヒト、ヒト化または半合成である。一部の実施形態では、タンデムｓｃＦｖ多特異的抗ＡＭＣ抗体は、少なくとも１つ（例えば、少なくとも約２、３、４、５またはそれ超のいずれか）のさらなるｓｃＦｖをさらに含む。
【０２３０】
一部の実施形態では、ａ）ＡＦＰ１５８ペプチド（配列番号４）およびＨＬＡ−Ａ＊０２：０１を含む複合体に特異的に結合する第１のｓｃＦｖ、ならびにｂ）第２のｓｃＦｖを含むタンデムｓｃＦｖ多特異的（例えば、二重特異的）抗ＡＭＣ抗体が提供される。
【０２３１】
一部の実施形態では、ａ）ＡＦＰペプチドおよびＭＨＣクラスＩタンパク質を含む複合体に特異的に結合する第１のｓｃＦｖであって、ｉ）Ｇ−Ｆ／Ｙ−Ｓ／Ｔ−Ｆ−Ｄ／Ｓ／Ｔ−Ｄ／Ｎ／Ｓ−Ｙ／Ａ−Ａ／Ｇ／Ｗ（配列番号８７）のアミノ酸配列を含むＨＣ−ＣＤＲ１、または最大で約３（例えば、約１、２または３のいずれか）アミノ酸の置換を含むそのバリアント、Ｉ／Ｓ−Ｋ／Ｓ−Ｘ−Ｈ／Ｙ−Ｘ−Ｇ−Ｘ−Ｔ（配列番号８８）のアミノ酸配列を含むＨＣ−ＣＤＲ２、または最大で約３（例えば、約１、２または３のいずれか）アミノ酸の置換を含むそのバリアント、およびＡ／Ｇ−Ｘ−Ｗ／Ｙ−Ｙ−Ｘ−Ｘ−Ｘ−Ｆ／Ｙ−Ｄ（配列番号８９）のアミノ酸配列を含むＨＣ−ＣＤＲ３、または最大で約３（例えば、約１、２または３のいずれか）アミノ酸の置換を含むそのバリアントを含む重鎖可変ドメイン配列；ならびにｉｉ）Ｓ／Ｔ−Ｇ／Ｓ−Ｄ／Ｎ−Ｉ／Ｖ−Ａ／Ｇ−Ａ／Ｓ／Ｖ−Ｘ−Ｈ／Ｙ（配列番号１２０）のアミノ酸配列を含むＬＣ−ＣＤＲ１、または最大で約３（例えば、約１、２または３のいずれか）アミノ酸の置換を含むそのバリアント、およびＱ−Ｓ／Ｔ−Ｙ／Ｗ−Ｄ／Ｔ−Ｓ／Ｔ−Ａ／Ｓ（配列番号１２１）のアミノ酸配列を含むＬＣ−ＣＤＲ３、または最大で約３（例えば、約１、２または３のいずれか）アミノ酸の置換を含むそのバリアントを含む軽鎖可変ドメインを含み；Ｘは任意のアミノ酸であり得る、第１のｓｃＦｖ、ならびにｂ）第２のｓｃＦｖを含むタンデムｓｃＦｖ多特異的（例えば、二重特異的）抗ＡＭＣ抗体が提供される。
【０２３２】
一部の実施形態では、ａ）ＡＦＰペプチドおよびＭＨＣクラスＩタンパク質を含む複合体に特異的に結合する第１のｓｃＦｖであって、ｉ）Ｇ−Ｆ／Ｙ−Ｓ／Ｔ−Ｆ−Ｄ／Ｓ／Ｔ−Ｄ／Ｎ／Ｓ−Ｙ／Ａ−Ａ／Ｇ／Ｗ（配列番号８７）のアミノ酸配列を含むＨＣ−ＣＤＲ１、Ｉ／Ｓ−Ｋ／Ｓ−Ｘ−Ｈ／Ｙ−Ｘ−Ｇ−Ｘ−Ｔ（配列番号８８）のアミノ酸配列を含むＨＣ−ＣＤＲ２、およびＡ／Ｇ−Ｘ−Ｗ／Ｙ−Ｙ−Ｘ−Ｘ−Ｘ−Ｆ／Ｙ−Ｄ（配列番号８９）のアミノ酸配列を含むＨＣ−ＣＤＲ３を含む重鎖可変ドメイン配列；ならびにｉｉ）Ｓ／Ｔ−Ｇ／Ｓ−Ｄ／Ｎ−Ｉ／Ｖ−Ａ／Ｇ−Ａ／Ｓ／Ｖ−Ｘ−Ｈ／Ｙ（配列番号１２０）のアミノ酸配列を含むＬＣ−ＣＤＲ１、およびＱ−Ｓ／Ｔ−Ｙ／Ｗ−Ｄ／Ｔ−Ｓ／Ｔ−Ａ／Ｓ（配列番号１２１）のアミノ酸配列を含むＬＣ−ＣＤＲ３を含む軽鎖可変ドメインを含み；Ｘは任意のアミノ酸であり得る、第１のｓｃＦｖ、ならびにｂ）第２のｓｃＦｖを含むタンデムｓｃＦｖ多特異的（例えば、二重特異的）抗ＡＭＣ抗体が提供される。
【０２３３】
一部の実施形態では、ａ）ＡＦＰペプチドおよびＭＨＣクラスＩタンパク質を含む複合体に特異的に結合する第１のｓｃＦｖであって、ｉ）配列番号５７〜６６のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＨＣ−ＣＤＲ１、または最大で約５（例えば、約１、２、３、４または５のいずれか）アミノ酸の置換を含むそのバリアント、配列番号６７〜７６のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＨＣ−ＣＤＲ２、または最大で約５（例えば、約１、２、３、４または５のいずれか）アミノ酸の置換を含むそのバリアント、および配列番号７７〜８６のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＨＣ−ＣＤＲ３、または最大で約５（例えば、約１、２、３、４または５のいずれか）アミノ酸の置換を含むそのバリアントを含む重鎖可変ドメイン；ならびにｉｉ）配列番号９０〜９９のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＬＣ−ＣＤＲ１、または最大で約５（例えば、約１、２、３、４または５のいずれか）アミノ酸の置換を含むそのバリアント、配列番号１００〜１０９のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＬＣ−ＣＤＲ２、または最大で約３（例えば、約１、２または３のいずれか）アミノ酸の置換を含むそのバリアント、および配列番号１１０〜１１９のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＬＣ−ＣＤＲ３、または最大で約５（例えば、約１、２、３、４または５のいずれか）アミノ酸の置換を含むそのバリアントを含む軽鎖可変ドメインを含む第１のｓｃＦｖ；ならびにｂ）第２のｓｃＦｖを含むタンデムｓｃＦｖ多特異的（例えば、二重特異的）抗ＡＭＣ抗体が提供される。
【０２３４】
一部の実施形態では、ａ）ＡＦＰペプチドおよびＭＨＣクラスＩタンパク質を含む複合体に特異的に結合する第１のｓｃＦｖであって、ｉ）配列番号５７〜６６のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＨＣ−ＣＤＲ１；配列番号６７〜７６のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＨＣ−ＣＤＲ２；および配列番号７７〜８６のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＨＣ−ＣＤＲ３を含む重鎖可変ドメイン配列；またはＨＣ−ＣＤＲ配列中に最大で約５（例えば、約１、２、３、４または５のいずれか）アミノ酸の置換を含むそのバリアント；ならびにｉｉ）配列番号９０〜９９のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＬＣ−ＣＤＲ１；配列番号１００〜１０９のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＬＣ−ＣＤＲ２；および配列番号１１０〜１１９のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＬＣ−ＣＤＲ３を含む軽鎖可変ドメイン配列；またはＬＣ−ＣＤＲ配列中に最大で約５（例えば、約１、２、３、４または５のいずれか）アミノ酸の置換を含むそのバリアントを含む第１のｓｃＦｖ；ならびにｂ）第２のｓｃＦｖを含むタンデムｓｃＦｖ多特異的（例えば、二重特異的）抗ＡＭＣ抗体が提供される。
【０２３５】
一部の実施形態では、ａ）ＡＦＰペプチドおよびＭＨＣクラスＩタンパク質を含む複合体に特異的に結合する第１のｓｃＦｖであって、ｉ）配列番号５７〜６６のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＨＣ−ＣＤＲ１；配列番号６７〜７６のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＨＣ−ＣＤＲ２；および配列番号７７〜８６のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＨＣ−ＣＤＲ３を含む重鎖可変ドメイン配列；ならびにｉｉ）配列番号９０〜９９のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＬＣ−ＣＤＲ１；配列番号１００〜１０９のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＬＣ−ＣＤＲ２；および配列番号１１０〜１１９のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＬＣ−ＣＤＲ３を含む軽鎖可変ドメイン配列を含む第１のｓｃＦｖ；ならびにｂ）第２のｓｃＦｖを含むタンデムｓｃＦｖ多特異的（例えば、二重特異的）抗ＡＭＣ抗体が提供される。
【０２３６】
一部の実施形態では、ａ）配列番号１７〜２６のいずれか１つのアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン、または少なくとも約９５％（例えば、少なくとも約９６％、９７％、９８％または９９％のいずれか）の配列同一性を有するそのバリアント、および配列番号２７〜３６のいずれか１つのアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン、または少なくとも約９５％の配列同一性を有するそのバリアントを含む第１のｓｃＦｖ；ならびにｂ）第２のｓｃＦｖを含むタンデムｓｃＦｖ多特異的（例えば、二重特異的）抗ＡＭＣ抗体が提供される。
【０２３７】
一部の実施形態では、ａ）配列番号１７〜２６のいずれか１つのアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインおよび配列番号２７〜３６のいずれか１つのアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを含む第１のｓｃＦｖ；ならびにｂ）第２のｓｃＦｖを含むタンデムｓｃＦｖ多特異的（例えば、二重特異的）抗ＡＭＣ抗体が提供される。
【０２３８】
一部の実施形態では、ａ）ＡＦＰペプチドおよびＭＨＣクラスＩタンパク質を含む複合体に特異的に結合する第１のｓｃＦｖ、ならびにｂ）第２のｓｃＦｖを含むタンデムｓｃＦｖ多特異的（例えば、二重特異的）抗ＡＭＣ抗体が提供され、このタンデムｓｃＦｖ多特異的抗ＡＭＣ抗体は、タンデムジ−ｓｃＦｖまたはタンデムトリ−ｓｃＦｖである。一部の実施形態では、タンデムｓｃＦｖ多特異的抗ＡＭＣ抗体は、タンデムジ−ｓｃＦｖである。一部の実施形態では、タンデムｓｃＦｖ多特異的抗ＡＭＣ抗体は、二重特異的Ｔ細胞エンゲージャーである。
【０２３９】
例えば、一部の実施形態では、ａ）ＡＦＰペプチドおよびＭＨＣクラスＩタンパク質を含む複合体に特異的に結合する第１のｓｃＦｖ、ならびにｂ）Ｔ細胞の表面上の抗原に特異的に結合する第２のｓｃＦｖを含むタンデムジ−ｓｃＦｖ二重特異的抗ＡＭＣ抗体が提供される。一部の実施形態では、ＡＦＰペプチドは、ＡＦＰ１５８（配列番号４）である。一部の実施形態では、ＭＨＣクラスＩタンパク質は、ＨＬＡ−Ａ０２である。一部の実施形態では、ＭＨＣクラスＩタンパク質は、ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１である。一部の実施形態では、第２のｓｃＦｖは、エフェクターＴ細胞、例えば、細胞傷害性Ｔ細胞の表面上の抗原に特異的に結合する。一部の実施形態では、第２のｓｃＦｖは、例えば、ＣＤ３γ、ＣＤ３δ、ＣＤ３ε、ＣＤ３ζ、ＣＤ２８、ＯＸ４０、ＧＩＴＲ、ＣＤ１３７、ＣＤ２７、ＣＤ４０ＬおよびＨＶＥＭからなる群から選択される抗原に特異的に結合する。一部の実施形態では、第２のｓｃＦｖは、Ｔ細胞の表面上の抗原上のアゴニストエピトープに特異的に結合し、抗原への第２のｓｃＦｖの結合は、Ｔ細胞活性化を増強する。一部の実施形態では、第１のｓｃＦｖは、ヒト、ヒト化または半合成である。一部の実施形態では、第２のｓｃＦｖは、ヒト、ヒト化または半合成である。一部の実施形態では、第１のｓｃＦｖおよび第２のｓｃＦｖは共に、ヒト、ヒト化または半合成である。
【０２４０】
一部の実施形態では、ａ）ＡＦＰ１５８ペプチド（配列番号４）およびＨＬＡ−Ａ＊０２：０１を含む複合体に特異的に結合する第１のｓｃＦｖ、ならびにｂ）Ｔ細胞の表面上の抗原に特異的に結合する第２のｓｃＦｖを含むタンデムジ−ｓｃＦｖ二重特異的抗ＡＭＣ抗体が提供される。
【０２４１】
一部の実施形態では、ａ）ｉ）Ｇ−Ｆ／Ｙ−Ｓ／Ｔ−Ｆ−Ｄ／Ｓ／Ｔ−Ｄ／Ｎ／Ｓ−Ｙ／Ａ−Ａ／Ｇ／Ｗ（配列番号８７）のアミノ酸配列を含むＨＣ−ＣＤＲ１、または最大で約３（例えば、約１、２または３のいずれか）アミノ酸の置換を含むそのバリアント、Ｉ／Ｓ−Ｋ／Ｓ−Ｘ−Ｈ／Ｙ−Ｘ−Ｇ−Ｘ−Ｔ（配列番号８８）のアミノ酸配列を含むＨＣ−ＣＤＲ２、または最大で約３（例えば、約１、２または３のいずれか）アミノ酸の置換を含むそのバリアント、およびＡ／Ｇ−Ｘ−Ｗ／Ｙ−Ｙ−Ｘ−Ｘ−Ｘ−Ｆ／Ｙ−Ｄ（配列番号８９）のアミノ酸配列を含むＨＣ−ＣＤＲ３、または最大で約３（例えば、約１、２または３のいずれか）アミノ酸の置換を含むそのバリアントを含む重鎖可変ドメイン配列；ならびにｉｉ）Ｓ／Ｔ−Ｇ／Ｓ−Ｄ／Ｎ−Ｉ／Ｖ−Ａ／Ｇ−Ａ／Ｓ／Ｖ−Ｘ−Ｈ／Ｙ（配列番号１２０）のアミノ酸配列を含むＬＣ−ＣＤＲ１、または最大で約３（例えば、約１、２または３のいずれか）アミノ酸の置換を含むそのバリアント、およびＱ−Ｓ／Ｔ−Ｙ／Ｗ−Ｄ／Ｔ−Ｓ／Ｔ−Ａ／Ｓ（配列番号１２１）のアミノ酸配列を含むＬＣ−ＣＤＲ３、または最大で約３（例えば、約１、２または３のいずれか）アミノ酸の置換を含むそのバリアントを含む軽鎖可変ドメインを含む、ＡＦＰペプチドおよびＭＨＣクラスＩタンパク質を含む複合体に特異的に結合する第１のｓｃＦｖであって；Ｘは任意のアミノ酸であり得る、第１のｓｃＦｖ、ならびにｂ）Ｔ細胞の表面上の抗原に特異的に結合する第２のｓｃＦｖを含むタンデムジ−ｓｃＦｖ二重特異的抗ＡＭＣ抗体が提供される。
【０２４２】
一部の実施形態では、ａ）ｉ）Ｇ−Ｆ／Ｙ−Ｓ／Ｔ−Ｆ−Ｄ／Ｓ／Ｔ−Ｄ／Ｎ／Ｓ−Ｙ／Ａ−Ａ／Ｇ／Ｗ（配列番号８７）のアミノ酸配列を含むＨＣ−ＣＤＲ１、Ｉ／Ｓ−Ｋ／Ｓ−Ｘ−Ｈ／Ｙ−Ｘ−Ｇ−Ｘ−Ｔ（配列番号８８）のアミノ酸配列を含むＨＣ−ＣＤＲ２、およびＡ／Ｇ−Ｘ−Ｗ／Ｙ−Ｙ−Ｘ−Ｘ−Ｘ−Ｆ／Ｙ−Ｄ（配列番号８９）のアミノ酸配列を含むＨＣ−ＣＤＲ３を含む重鎖可変ドメイン配列；ならびにｉｉ）Ｓ／Ｔ−Ｇ／Ｓ−Ｄ／Ｎ−Ｉ／Ｖ−Ａ／Ｇ−Ａ／Ｓ／Ｖ−Ｘ−Ｈ／Ｙ（配列番号１２０）のアミノ酸配列を含むＬＣ−ＣＤＲ１、およびＱ−Ｓ／Ｔ−Ｙ／Ｗ−Ｄ／Ｔ−Ｓ／Ｔ−Ａ／Ｓ（配列番号１２１）のアミノ酸配列を含むＬＣ−ＣＤＲ３を含む軽鎖可変ドメインを含む、ＡＦＰペプチドおよびＭＨＣクラスＩタンパク質を含む複合体に特異的に結合する第１のｓｃＦｖであって；Ｘは任意のアミノ酸であり得る、第１のｓｃＦｖ、ならびにｂ）Ｔ細胞の表面上の抗原に特異的に結合する第２のｓｃＦｖを含むタンデムジ−ｓｃＦｖ二重特異的抗ＡＭＣ抗体が提供される。
【０２４３】
一部の実施形態では、ａ）ｉ）配列番号５７〜６６のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＨＣ−ＣＤＲ１、または最大で約５（例えば、約１、２、３、４または５のいずれか）アミノ酸の置換を含むそのバリアント、配列番号６７〜７６のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＨＣ−ＣＤＲ２、または最大で約５（例えば、約１、２、３、４または５のいずれか）アミノ酸の置換を含むそのバリアント、および配列番号７７〜８６のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＨＣ−ＣＤＲ３、または最大で約５（例えば、約１、２、３、４または５のいずれか）アミノ酸の置換を含むそのバリアントを含む重鎖可変ドメイン；ならびにｉｉ）配列番号９０〜９９のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＬＣ−ＣＤＲ１、または最大で約５（例えば、約１、２、３、４または５のいずれか）アミノ酸の置換を含むそのバリアント、配列番号１００〜１０９のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＬＣ−ＣＤＲ２、または最大で約３（例えば、約１、２または３のいずれか）アミノ酸の置換を含むそのバリアント、および配列番号１１０〜１１９のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＬＣ−ＣＤＲ３、または最大で約５（例えば、約１、２、３、４または５のいずれか）アミノ酸の置換を含むそのバリアントを含む軽鎖可変ドメインを含む、ＡＦＰペプチドおよびＭＨＣクラスＩタンパク質を含む複合体に特異的に結合する第１のｓｃＦｖ；ならびにｂ）Ｔ細胞の表面上の抗原に特異的に結合する第２のｓｃＦｖを含むタンデムジ−ｓｃＦｖ二重特異的抗ＡＭＣ抗体が提供される。
【０２４４】
一部の実施形態では、ａ）ｉ）配列番号５７〜６６のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＨＣ−ＣＤＲ１；配列番号６７〜７６のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＨＣ−ＣＤＲ２；および配列番号７７〜８６のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＨＣ−ＣＤＲ３を含む重鎖可変ドメイン配列；またはＨＣ−ＣＤＲ配列中に最大で約５（例えば、約１、２、３、４または５のいずれか）アミノ酸の置換を含むそのバリアント；ならびにｉｉ）配列番号９０〜９９のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＬＣ−ＣＤＲ１；配列番号１００〜１０９のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＬＣ−ＣＤＲ２；および配列番号１１０〜１１９のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＬＣ−ＣＤＲ３を含む軽鎖可変ドメイン配列；またはＬＣ−ＣＤＲ配列中に最大で約５（例えば、約１、２、３、４または５のいずれか）アミノ酸の置換を含むそのバリアントを含む、ＡＦＰペプチドおよびＭＨＣクラスＩタンパク質を含む複合体に特異的に結合する第１のｓｃＦｖ、ならびにｂ）Ｔ細胞の表面上の抗原に特異的に結合する第２のｓｃＦｖを含むタンデムジ−ｓｃＦｖ二重特異的抗ＡＭＣ抗体が提供される。
【０２４５】
一部の実施形態では、ａ）ｉ）配列番号５７〜６６のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＨＣ−ＣＤＲ１；配列番号６７〜７６のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＨＣ−ＣＤＲ２；および配列番号７７〜８６のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＨＣ−ＣＤＲ３を含む重鎖可変ドメイン配列；ならびにｉｉ）配列番号９０〜９９のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＬＣ−ＣＤＲ１；配列番号１００〜１０９のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＬＣ−ＣＤＲ２；および配列番号１１０〜１１９のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＬＣ−ＣＤＲ３を含む軽鎖可変ドメイン配列を含む、ＡＦＰペプチドおよびＭＨＣクラスＩタンパク質を含む複合体に特異的に結合する第１のｓｃＦｖ；ならびにｂ）Ｔ細胞の表面上の抗原に特異的に結合する第２のｓｃＦｖを含むタンデムジ−ｓｃＦｖ二重特異的抗ＡＭＣ抗体が提供される。
【０２４６】
一部の実施形態では、ａ）配列番号１７〜２６のいずれか１つのアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン、または少なくとも約９５％（例えば、少なくとも約９６％、９７％、９８％または９９％のいずれか）の配列同一性を有するそのバリアント、および配列番号２７〜３６のいずれか１つのアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン、または少なくとも約９５％（例えば、少なくとも約９６％、９７％、９８％または９９％のいずれか）の配列同一性を有するそのバリアントを含む第１のｓｃＦｖ、ならびにｂ）Ｔ細胞の表面上の抗原に特異的に結合する第２のｓｃＦｖを含むタンデムジ−ｓｃＦｖ二重特異的抗ＡＭＣ抗体が提供される。
【０２４７】
一部の実施形態では、ａ）配列番号１７〜２６のいずれか１つのアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインおよび配列番号２７〜３６のいずれか１つのアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを含む第１のｓｃＦｖ、ならびにｂ）Ｔ細胞の表面上の抗原に特異的に結合する第２のｓｃＦｖを含むタンデムジ−ｓｃＦｖ二重特異的抗ＡＭＣ抗体が提供される。
【０２４８】
一部の実施形態では、ａ）ＡＦＰペプチドおよびＭＨＣクラスＩタンパク質を含む複合体に特異的に結合する第１のｓｃＦｖ、ならびにｂ）ＣＤ３εに特異的に結合する第２のｓｃＦｖを含むタンデムジ−ｓｃＦｖ二重特異的抗ＡＭＣ抗体が提供される。一部の実施形態では、ＡＦＰペプチドは、ＡＦＰ１５８（配列番号４）である。一部の実施形態では、ＭＨＣクラスＩタンパク質は、ＨＬＡ−Ａ０２である。一部の実施形態では、ＭＨＣクラスＩタンパク質は、ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１である。一部の実施形態では、第１のｓｃＦｖは、ペプチドリンカーによる連結を介して第２のｓｃＦｖに融合される。一部の実施形態では、ペプチドリンカーは、約５〜約２０の間（例えば、これらの値の間の任意の範囲を含んで、約５、１０、１５または２０のいずれか）のアミノ酸長である。一部の実施形態では、ペプチドリンカーは、アミノ酸配列ＧＧＧＧＳを含む（一部の実施形態ではそれからなる）。一部の実施形態では、第１のｓｃＦｖは、ヒト、ヒト化または半合成である。一部の実施形態では、第２のｓｃＦｖは、ヒト、ヒト化または半合成である。一部の実施形態では、第１のｓｃＦｖおよび第２のｓｃＦｖは共に、ヒト、ヒト化または半合成である。
【０２４９】
一部の実施形態では、ａ）ＡＦＰ１５８ペプチド（配列番号４）およびＨＬＡ−Ａ＊０２：０１を含む複合体に特異的に結合する第１のｓｃＦｖ、ならびにｂ）ＣＤ３εに特異的に結合する第２のｓｃＦｖを含むタンデムジ−ｓｃＦｖ二重特異的抗ＡＭＣ抗体が提供される。一部の実施形態では、第１のｓｃＦｖは、ペプチドリンカーによる連結を介して第２のｓｃＦｖに融合される。一部の実施形態では、ペプチドリンカーは、約５〜約２０の間（例えば、これらの値の間の任意の範囲を含んで、約５、１０、１５または２０のいずれか）のアミノ酸長である。一部の実施形態では、ペプチドリンカーは、アミノ酸配列ＧＧＧＧＳを含む（一部の実施形態ではそれからなる）。一部の実施形態では、第１のｓｃＦｖは、ヒト、ヒト化または半合成である。一部の実施形態では、第２のｓｃＦｖは、ヒト、ヒト化または半合成である。一部の実施形態では、第１のｓｃＦｖおよび第２のｓｃＦｖは共に、ヒト、ヒト化または半合成である。
【０２５０】
一部の実施形態では、ａ）ｉ）Ｇ−Ｆ／Ｙ−Ｓ／Ｔ−Ｆ−Ｄ／Ｓ／Ｔ−Ｄ／Ｎ／Ｓ−Ｙ／Ａ−Ａ／Ｇ／Ｗ（配列番号８７）のアミノ酸配列を含むＨＣ−ＣＤＲ１、または最大で約３（例えば、約１、２または３のいずれか）アミノ酸の置換を含むそのバリアント、Ｉ／Ｓ−Ｋ／Ｓ−Ｘ−Ｈ／Ｙ−Ｘ−Ｇ−Ｘ−Ｔ（配列番号８８）のアミノ酸配列を含むＨＣ−ＣＤＲ２、または最大で約３（例えば、約１、２または３のいずれか）アミノ酸の置換を含むそのバリアント、およびＡ／Ｇ−Ｘ−Ｗ／Ｙ−Ｙ−Ｘ−Ｘ−Ｘ−Ｆ／Ｙ−Ｄ（配列番号８９）のアミノ酸配列を含むＨＣ−ＣＤＲ３、または最大で約３（例えば、約１、２または３のいずれか）アミノ酸の置換を含むそのバリアントを含む重鎖可変ドメイン配列；ならびにｉｉ）Ｓ／Ｔ−Ｇ／Ｓ−Ｄ／Ｎ−Ｉ／Ｖ−Ａ／Ｇ−Ａ／Ｓ／Ｖ−Ｘ−Ｈ／Ｙ（配列番号１２０）のアミノ酸配列を含むＬＣ−ＣＤＲ１、または最大で約３（例えば、約１、２または３のいずれか）アミノ酸の置換を含むそのバリアント、およびＱ−Ｓ／Ｔ−Ｙ／Ｗ−Ｄ／Ｔ−Ｓ／Ｔ−Ａ／Ｓ（配列番号１２１）のアミノ酸配列を含むＬＣ−ＣＤＲ３、または最大で約３（例えば、約１、２または３のいずれか）アミノ酸の置換を含むそのバリアントを含む軽鎖可変ドメインを含む、ＡＦＰペプチドおよびＭＨＣクラスＩタンパク質を含む複合体に特異的に結合する第１のｓｃＦｖであって；Ｘは任意のアミノ酸であり得る、第１のｓｃＦｖ、ならびにｂ）ＣＤ３εに特異的に結合する第２のｓｃＦｖを含むタンデムジ−ｓｃＦｖ二重特異的抗ＡＭＣ抗体が提供される。一部の実施形態では、第１のｓｃＦｖは、ペプチドリンカーによる連結を介して第２のｓｃＦｖに融合される。一部の実施形態では、ペプチドリンカーは、約５〜約２０の間（例えば、これらの値の間の任意の範囲を含んで、約５、１０、１５または２０のいずれか）のアミノ酸長である。一部の実施形態では、ペプチドリンカーは、アミノ酸配列ＧＧＧＧＳを含む（一部の実施形態ではそれからなる）。一部の実施形態では、第１のｓｃＦｖは、ヒト、ヒト化または半合成である。一部の実施形態では、第２のｓｃＦｖは、ヒト、ヒト化または半合成である。一部の実施形態では、第１のｓｃＦｖおよび第２のｓｃＦｖは共に、ヒト、ヒト化または半合成である。
【０２５１】
一部の実施形態では、ａ）ｉ）Ｇ−Ｆ／Ｙ−Ｓ／Ｔ−Ｆ−Ｄ／Ｓ／Ｔ−Ｄ／Ｎ／Ｓ−Ｙ／Ａ−Ａ／Ｇ／Ｗ（配列番号８７）のアミノ酸配列を含むＨＣ−ＣＤＲ１、Ｉ／Ｓ−Ｋ／Ｓ−Ｘ−Ｈ／Ｙ−Ｘ−Ｇ−Ｘ−Ｔ（配列番号８８）のアミノ酸配列を含むＨＣ−ＣＤＲ２、およびＡ／Ｇ−Ｘ−Ｗ／Ｙ−Ｙ−Ｘ−Ｘ−Ｘ−Ｆ／Ｙ−Ｄ（配列番号８９）のアミノ酸配列を含むＨＣ−ＣＤＲ３を含む重鎖可変ドメイン配列；ならびにｉｉ）Ｓ／Ｔ−Ｇ／Ｓ−Ｄ／Ｎ−Ｉ／Ｖ−Ａ／Ｇ−Ａ／Ｓ／Ｖ−Ｘ−Ｈ／Ｙ（配列番号１２０）のアミノ酸配列を含むＬＣ−ＣＤＲ１、およびＱ−Ｓ／Ｔ−Ｙ／Ｗ−Ｄ／Ｔ−Ｓ／Ｔ−Ａ／Ｓ（配列番号１２１）のアミノ酸配列を含むＬＣ−ＣＤＲ３を含む軽鎖可変ドメインを含む、ＡＦＰペプチドおよびＭＨＣクラスＩタンパク質を含む複合体に特異的に結合する第１のｓｃＦｖであって；Ｘは任意のアミノ酸であり得る、第１のｓｃＦｖ、ならびにｂ）ＣＤ３εに特異的に結合する第２のｓｃＦｖを含むタンデムジ−ｓｃＦｖ二重特異的抗ＡＭＣ抗体が提供される。一部の実施形態では、第１のｓｃＦｖは、ペプチドリンカーによる連結を介して第２のｓｃＦｖに融合される。一部の実施形態では、ペプチドリンカーは、約５〜約２０の間（例えば、これらの値の間の任意の範囲を含んで、約５、１０、１５または２０のいずれか）のアミノ酸長である。一部の実施形態では、ペプチドリンカーは、アミノ酸配列ＧＧＧＧＳを含む（一部の実施形態ではそれからなる）。一部の実施形態では、第１のｓｃＦｖは、ヒト、ヒト化または半合成である。一部の実施形態では、第２のｓｃＦｖは、ヒト、ヒト化または半合成である。一部の実施形態では、第１のｓｃＦｖおよび第２のｓｃＦｖは共に、ヒト、ヒト化または半合成である。
【０２５２】
一部の実施形態では、ａ）ｉ）配列番号５７〜６６のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＨＣ−ＣＤＲ１、または最大で約５（例えば、約１、２、３、４または５のいずれか）アミノ酸の置換を含むそのバリアント、配列番号６７〜７６のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＨＣ−ＣＤＲ２、または最大で約５（例えば、約１、２、３、４または５のいずれか）アミノ酸の置換を含むそのバリアント、および配列番号７７〜８６のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＨＣ−ＣＤＲ３、または最大で約５（例えば、約１、２、３、４または５のいずれか）アミノ酸の置換を含むそのバリアントを含む重鎖可変ドメイン；ならびにｉｉ）配列番号９０〜９９のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＬＣ−ＣＤＲ１、または最大で約５（例えば、約１、２、３、４または５のいずれか）アミノ酸の置換を含むそのバリアント、配列番号１００〜１０９のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＬＣ−ＣＤＲ２、または最大で約３（例えば、約１、２または３のいずれか）アミノ酸の置換を含むそのバリアント、および配列番号１１０〜１１９のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＬＣ−ＣＤＲ３、または最大で約５（例えば、約１、２、３、４または５のいずれか）アミノ酸の置換を含むそのバリアントを含む軽鎖可変ドメインを含む、ＡＦＰペプチドおよびＭＨＣクラスＩタンパク質を含む複合体に特異的に結合する第１のｓｃＦｖ、ならびにｂ）ＣＤ３εに特異的に結合する第２のｓｃＦｖを含むタンデムジ−ｓｃＦｖ二重特異的抗ＡＭＣ抗体が提供される。一部の実施形態では、第１のｓｃＦｖは、ペプチドリンカーによる連結を介して第２のｓｃＦｖに融合される。一部の実施形態では、ペプチドリンカーは、約５〜約２０の間（例えば、これらの値の間の任意の範囲を含んで、約５、１０、１５または２０のいずれか）のアミノ酸長である。一部の実施形態では、ペプチドリンカーは、アミノ酸配列ＧＧＧＧＳを含む（一部の実施形態ではそれからなる）。一部の実施形態では、第１のｓｃＦｖは、ヒト、ヒト化または半合成である。一部の実施形態では、第２のｓｃＦｖは、ヒト、ヒト化または半合成である。一部の実施形態では、第１のｓｃＦｖおよび第２のｓｃＦｖは共に、ヒト、ヒト化または半合成である。
【０２５３】
一部の実施形態では、ａ）ｉ）配列番号５７〜６６のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＨＣ−ＣＤＲ１；配列番号６７〜７６のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＨＣ−ＣＤＲ２；および配列番号７７〜８６のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＨＣ−ＣＤＲ３を含む重鎖可変ドメイン配列；またはＨＣ−ＣＤＲ配列中に最大で約５（例えば、約１、２、３、４または５のいずれか）アミノ酸の置換を含むそのバリアント；ならびにｉｉ）配列番号９０〜９９のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＬＣ−ＣＤＲ１；配列番号１００〜１０９のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＬＣ−ＣＤＲ２；および配列番号１１０〜１１９のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＬＣ−ＣＤＲ３を含む軽鎖可変ドメイン配列；またはＬＣ−ＣＤＲ配列中に最大で約５（例えば、約１、２、３、４または５のいずれか）アミノ酸の置換を含むそのバリアントを含む、ＡＦＰペプチドおよびＭＨＣクラスＩタンパク質を含む複合体に特異的に結合する第１のｓｃＦｖ、ならびにｂ）ＣＤ３εに特異的に結合する第２のｓｃＦｖを含むタンデムジ−ｓｃＦｖ二重特異的抗ＡＭＣ抗体が提供される。一部の実施形態では、第１のｓｃＦｖは、ペプチドリンカーによる連結を介して第２のｓｃＦｖに融合される。一部の実施形態では、ペプチドリンカーは、約５〜約２０の間（例えば、これらの値の間の任意の範囲を含んで、約５、１０、１５または２０のいずれか）のアミノ酸長である。一部の実施形態では、ペプチドリンカーは、アミノ酸配列ＧＧＧＧＳを含む（一部の実施形態ではそれからなる）。一部の実施形態では、第１のｓｃＦｖは、ヒト、ヒト化または半合成である。一部の実施形態では、第２のｓｃＦｖは、ヒト、ヒト化または半合成である。一部の実施形態では、第１のｓｃＦｖおよび第２のｓｃＦｖは共に、ヒト、ヒト化または半合成である。
【０２５４】
一部の実施形態では、ａ）ｉ）配列番号５７〜６６のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＨＣ−ＣＤＲ１；配列番号６７〜７６のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＨＣ−ＣＤＲ２；および配列番号７７〜８６のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＨＣ−ＣＤＲ３を含む重鎖可変ドメイン配列；ならびにｉｉ）配列番号９０〜９９のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＬＣ−ＣＤＲ１；配列番号１００〜１０９のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＬＣ−ＣＤＲ２；および配列番号１１０〜１１９のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＬＣ−ＣＤＲ３を含む軽鎖可変ドメイン配列を含む、ＡＦＰペプチドおよびＭＨＣクラスＩタンパク質を含む複合体に特異的に結合する第１のｓｃＦｖ；ならびにｂ）ＣＤ３εに特異的に結合する第２のｓｃＦｖを含むタンデムジ−ｓｃＦｖ二重特異的抗ＡＭＣ抗体が提供される。一部の実施形態では、第１のｓｃＦｖは、ペプチドリンカーによる連結を介して第２のｓｃＦｖに融合される。一部の実施形態では、ペプチドリンカーは、約５〜約２０の間（例えば、これらの値の間の任意の範囲を含んで、約５、１０、１５または２０のいずれか）のアミノ酸長である。一部の実施形態では、ペプチドリンカーは、アミノ酸配列ＧＧＧＧＳを含む（一部の実施形態ではそれからなる）。一部の実施形態では、第１のｓｃＦｖは、ヒト、ヒト化または半合成である。一部の実施形態では、第２のｓｃＦｖは、ヒト、ヒト化または半合成である。一部の実施形態では、第１のｓｃＦｖおよび第２のｓｃＦｖは共に、ヒト、ヒト化または半合成である。
【０２５５】
一部の実施形態では、ａ）配列番号１７〜２６のいずれか１つのアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン、または少なくとも約９５％（例えば、少なくとも約９６％、９７％、９８％または９９％のいずれか）の配列同一性を有するそのバリアント、および配列番号２７〜３６のいずれか１つのアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン、または少なくとも約９５％（例えば、少なくとも約９６％、９７％、９８％または９９％のいずれか）の配列同一性を有するそのバリアントを含む第１のｓｃＦｖ、ならびにｂ）ＣＤ３εに特異的に結合する第２のｓｃＦｖを含むタンデムジ−ｓｃＦｖ二重特異的抗ＡＭＣ抗体が提供される。一部の実施形態では、第１のｓｃＦｖは、ペプチドリンカーによる連結を介して第２のｓｃＦｖに融合される。一部の実施形態では、ペプチドリンカーは、約５〜約２０の間（例えば、これらの値の間の任意の範囲を含んで、約５、１０、１５または２０のいずれか）のアミノ酸長である。一部の実施形態では、ペプチドリンカーは、アミノ酸配列ＧＧＧＧＳを含む（一部の実施形態ではそれからなる）。一部の実施形態では、第１のｓｃＦｖは、ヒト、ヒト化または半合成である。一部の実施形態では、第２のｓｃＦｖは、ヒト、ヒト化または半合成である。一部の実施形態では、第１のｓｃＦｖおよび第２のｓｃＦｖは共に、ヒト、ヒト化または半合成である。
【０２５６】
一部の実施形態では、ａ）配列番号１７〜２６のいずれか１つのアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインおよび配列番号２７〜３６のいずれか１つのアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを含む第１のｓｃＦｖ、ならびにｂ）ＣＤ３εに特異的に結合する第２のｓｃＦｖを含むタンデムジ−ｓｃＦｖ二重特異的抗ＡＭＣ抗体が提供される。一部の実施形態では、第１のｓｃＦｖは、ペプチドリンカーによる連結を介して第２のｓｃＦｖに融合される。一部の実施形態では、ペプチドリンカーは、約５〜約２０の間（例えば、これらの値の間の任意の範囲を含んで、約５、１０、１５または２０のいずれか）のアミノ酸長である。一部の実施形態では、ペプチドリンカーは、アミノ酸配列ＧＧＧＧＳを含む（一部の実施形態ではそれからなる）。一部の実施形態では、第１のｓｃＦｖは、ヒト、ヒト化または半合成である。一部の実施形態では、第２のｓｃＦｖは、ヒト、ヒト化または半合成である。一部の実施形態では、第１のｓｃＦｖおよび第２のｓｃＦｖは共に、ヒト、ヒト化または半合成である。
【０２５７】
一部の実施形態では、タンデムジ−ｓｃＦｖ二重特異的抗ＡＭＣ抗体は、約０．１ｐＭ〜約５００ｎＭの間（例えば、これらの値の間の任意の範囲を含んで、約０．１ｐＭ、１．０ｐＭ、１０ｐＭ、５０ｐＭ、１００ｐＭ、５００ｐＭ、１ｎＭ、１０ｎＭ、５０ｎＭ、１００ｎＭまたは５００ｎＭのいずれか）のＫｄで、ＡＦＰペプチドおよびＭＨＣクラスＩタンパク質を含む複合体に結合する。一部の実施形態では、タンデムジ−ｓｃＦｖ二重特異的抗ＡＭＣ抗体は、約１ｎＭ〜約５００ｎＭの間（例えば、これらの値の間の任意の範囲を含んで、約１、１０、２５、５０、７５、１００、１５０、２００、２５０、３００、３５０、４００、４５０または５００ｎＭのいずれか）のＫｄで、ＡＦＰペプチドおよびＭＨＣクラスＩタンパク質を含む複合体に結合する。
【０２５８】
キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）およびＣＡＲエフェクター細胞
抗ＡＭＣ構築物は、一部の実施形態では、抗ＡＭＣ抗体部分を含むキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）（本明細書で「抗ＡＭＣ  ＣＡＲ」とも呼ぶ）である。抗ＡＭＣ抗体部分を含むＣＡＲを含むＣＡＲエフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞）（本明細書で「抗ＡＭＣ  ＣＡＲエフェクター細胞」、例えば、「抗ＡＭＣ  ＣＡＲ  Ｔ細胞」とも呼ぶ）もまた提供される。
【０２５９】
抗ＡＭＣ  ＣＡＲは、ａ）ＡＦＰペプチドおよびＭＨＣクラスＩタンパク質を含む複合体に特異的に結合する抗ＡＭＣ抗体部分を含む細胞外ドメイン、ならびにｂ）細胞内シグナル伝達ドメインを含む。膜貫通ドメインは、細胞外ドメインと細胞内ドメインとの間に存在し得る。
【０２６０】
抗ＡＭＣ  ＣＡＲの細胞外ドメインと膜貫通ドメインとの間、または抗ＡＭＣ  ＣＡＲの細胞内ドメインと膜貫通ドメインとの間には、スペーサードメインが存在し得る。スペーサードメインは、膜貫通ドメインをポリペプチド鎖中の細胞外ドメインまたは細胞内ドメインに連結するように機能する任意のオリゴペプチドまたはポリペプチドであり得る。スペーサードメインは、例えば、約１０〜約１００または約２５〜約５０アミノ酸を含む、最大で約３００アミノ酸を含み得る。
【０２６１】
膜貫通ドメインは、天然供給源由来または合成供給源由来のいずれかであり得る。供給源が天然である場合、ドメインは、任意の膜結合型タンパク質または膜貫通タンパク質に由来し得る。本発明において特に使用される膜貫通領域は、Ｔ細胞受容体のα、β、δもしくはγ鎖、ＣＤ２８、ＣＤ３ε、ＣＤ３ζ、ＣＤ４５、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ８、ＣＤ９、ＣＤ１６、ＣＤ２２、ＣＤ３３、ＣＤ３７、ＣＤ６４、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ１３４、ＣＤ１３７またはＣＤ１５４に由来し得る（即ち、少なくともそれらの膜貫通領域（複数可）を含み得る）。一部の実施形態では、膜貫通ドメインは合成であり得、この場合、膜貫通ドメインは、ロイシンおよびバリンなどの、主に疎水性の残基を含み得る。一部の実施形態では、フェニルアラニン、トリプトファンおよびバリンの三つ組が、合成膜貫通ドメインの各末端において見出され得る。一部の実施形態では、例えば、約２と約１０との間（例えば、約２、３、４、５、６、７、８、９または１０のいずれか）のアミノ酸長の長さを有する短いオリゴペプチドリンカーまたはポリペプチドリンカーが、抗ＡＭＣ  ＣＡＲの膜貫通ドメインと細胞内シグナル伝達ドメインとの間に連結を形成し得る。一部の実施形態では、リンカーは、グリシン−セリン二つ組である。
【０２６２】
一部の実施形態では、抗ＡＭＣ  ＣＡＲの細胞内ドメイン中の配列のうち１つと天然に結合する膜貫通ドメインが使用される（例えば、抗ＡＭＣ  ＣＡＲ細胞内ドメインがＣＤ２８共刺激配列を含む場合、抗ＡＭＣ  ＣＡＲの膜貫通ドメインは、ＣＤ２８膜貫通ドメインに由来する）。一部の実施形態では、膜貫通ドメインは、同じまたは異なる表面膜タンパク質の膜貫通ドメインへのかかるドメインの結合を回避して、受容体複合体の他のメンバーとの相互作用を最小化するために、選択され得、またはアミノ酸置換によって改変され得る。
【０２６３】
抗ＡＭＣ  ＣＡＲの細胞内シグナル伝達ドメインは、抗ＡＭＣ  ＣＡＲが配置された免疫細胞の通常のエフェクター機能のうち少なくとも１つの活性化を担う。例えば、Ｔ細胞のエフェクター機能は、サイトカインの分泌を含む細胞溶解活性またはヘルパー活性であり得る。したがって、用語「細胞内シグナル伝達ドメイン」とは、エフェクター機能シグナルを伝達し、特殊化した機能を実施するように細胞に指示する、タンパク質の一部分を指す。通常は細胞内シグナル伝達ドメイン全体が使用され得るが、多くの場合、鎖全体を使用する必要はない。細胞内シグナル伝達ドメインのトランケートされた一部分が使用される限りにおいて、かかるトランケートされた一部分は、それがエフェクター機能シグナルを伝達する限り、インタクトな鎖の代わりに使用され得る。したがって、用語「細胞内シグナル伝達配列」は、エフェクター機能シグナルを伝達するのに十分な、細胞内シグナル伝達ドメインの任意のトランケートされた一部分を含むことを意味する。
【０２６４】
本発明の抗ＡＭＣ  ＣＡＲにおける使用のための細胞内シグナル伝達ドメインの例には、抗原受容体会合後にシグナル伝達を開始させるように協力して作用するＴ細胞受容体（ＴＣＲ）および共受容体の細胞質配列、ならびにこれらの配列の任意の誘導体またはバリアントおよび同じ機能的能力を有する任意の合成配列が含まれる。
【０２６５】
ＴＣＲ単独を介して生成されるシグナルは、Ｔ細胞の完全な活性化には不十分であること、および二次または共刺激シグナルもまた必要とされることが公知である。したがって、Ｔ細胞活性化は、２つの別個のクラスの細胞内シグナル伝達配列：ＴＣＲを介した抗原依存的一次活性化を開始させる配列（一次シグナル伝達配列）、および二次または共刺激シグナルを提供するように、抗原非依存的様式で作用する配列（共刺激シグナル伝達配列）、によって媒介されると言うことができる。
【０２６６】
一次シグナル伝達配列は、刺激的方法または阻害的方法のいずれかで、ＴＣＲ複合体の一次活性化を調節する。刺激的様式で作用する一次シグナル伝達配列は、免疫受容体チロシン活性化モチーフまたはＩＴＡＭとして公知のシグナル伝達モチーフを含み得る。抗ＡＭＣ  ＣＡＲ構築物は、一部の実施形態では、１または複数のＩＴＡＭを含む。
【０２６７】
本発明において特に使用されるＩＴＡＭ含有一次シグナル伝達配列の例には、ＴＣＲζ、ＦｃＲγ、ＦｃＲβ、ＣＤ３γ、ＣＤ３δ、ＣＤ３ε、ＣＤ５、ＣＤ２２、ＣＤ７９ａ、ＣＤ７９ｂおよびＣＤ６６ｄに由来するものが含まれる。
【０２６８】
一部の実施形態では、抗ＡＭＣ  ＣＡＲは、ＣＤ３ζに由来する一次シグナル伝達配列を含む。例えば、ＣＡＲの細胞内シグナル伝達ドメインは、ＣＤ３ζ細胞内シグナル伝達配列自体を含み得、または本発明の抗ＡＭＣ  ＣＡＲとの関連において有用な任意の他の所望の細胞内シグナル伝達配列（複数可）と組み合わされ得る。例えば、抗ＡＭＣ  ＣＡＲの細胞内ドメインは、ＣＤ３ζ細胞内シグナル伝達配列および共刺激シグナル伝達配列を含み得る。共刺激シグナル伝達配列は、例えば、ＣＤ２７、ＣＤ２８、４−１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＯＸ４０、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＰＤ−１、ＩＣＯＳ、リンパ球機能関連抗原−１（ＬＦＡ−１）、ＣＤ２、ＣＤ７、ＬＩＧＨＴ、ＮＫＧ２Ｃ、Ｂ７−Ｈ３、ＣＤ８３と特異的に結合するリガンドなどを含む共刺激分子の細胞内ドメインの一部分であり得る。
【０２６９】
一部の実施形態では、抗ＡＭＣ  ＣＡＲの細胞内シグナル伝達ドメインは、ＣＤ３ζの細胞内シグナル伝達配列およびＣＤ２８の細胞内シグナル伝達配列を含む。一部の実施形態では、抗ＡＭＣ  ＣＡＲの細胞内シグナル伝達ドメインは、ＣＤ３ζの細胞内シグナル伝達配列および４−１ＢＢの細胞内シグナル伝達配列を含む。一部の実施形態では、抗ＡＭＣ  ＣＡＲの細胞内シグナル伝達ドメインは、ＣＤ３ζの細胞内シグナル伝達配列ならびにＣＤ２８および４−１ＢＢの細胞内シグナル伝達配列を含む。
【０２７０】
したがって、例えば、一部の実施形態では、ａ）ＡＦＰペプチドおよびＭＨＣクラスＩタンパク質を含む複合体に特異的に結合する抗ＡＭＣ抗体部分を含む細胞外ドメイン、ｂ）膜貫通ドメイン、ならびにｃ）細胞内シグナル伝達ドメインを含む抗ＡＭＣ  ＣＡＲが提供される。一部の実施形態では、ＡＦＰペプチドは、ＡＦＰ１５８（配列番号４）である。一部の実施形態では、ＭＨＣクラスＩタンパク質は、ＨＬＡ−Ａ０２である。一部の実施形態では、ＭＨＣクラスＩタンパク質は、ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１である。一部の実施形態では、細胞内シグナル伝達ドメインは、免疫細胞を活性化することが可能である。一部の実施形態では、細胞内シグナル伝達ドメインは、一次シグナル伝達配列および共刺激シグナル伝達配列を含む。一部の実施形態では、一次シグナル伝達配列は、ＣＤ３ζ細胞内シグナル伝達配列を含む。一部の実施形態では、共刺激シグナル伝達配列は、ＣＤ２８細胞内シグナル伝達配列を含む。一部の実施形態では、細胞内ドメインは、ＣＤ３ζ細胞内シグナル伝達配列およびＣＤ２８細胞内シグナル伝達配列を含む。
【０２７１】
一部の実施形態では、ａ）ＡＦＰ１５８ペプチド（配列番号４）およびＨＬＡ−Ａ＊０２：０１を含む複合体に特異的に結合する抗ＡＭＣ抗体部分を含む細胞外ドメイン、ｂ）膜貫通ドメイン、ならびにｃ）細胞内シグナル伝達ドメインを含む抗ＡＭＣ  ＣＡＲが提供される。一部の実施形態では、細胞内シグナル伝達ドメインは、免疫細胞を活性化することが可能である。一部の実施形態では、細胞内シグナル伝達ドメインは、一次シグナル伝達配列および共刺激シグナル伝達配列を含む。一部の実施形態では、一次シグナル伝達配列は、ＣＤ３ζ細胞内シグナル伝達配列を含む。一部の実施形態では、共刺激シグナル伝達配列は、ＣＤ２８細胞内シグナル伝達配列を含む。一部の実施形態では、細胞内ドメインは、ＣＤ３ζ細胞内シグナル伝達配列およびＣＤ２８細胞内シグナル伝達配列を含む。
【０２７２】
一部の実施形態では、ａ）ＡＦＰペプチドおよびＭＨＣクラスＩタンパク質を含む複合体に特異的に結合する抗ＡＭＣ抗体部分であって、ｉ）Ｇ−Ｆ／Ｙ−Ｓ／Ｔ−Ｆ−Ｄ／Ｓ／Ｔ−Ｄ／Ｎ／Ｓ−Ｙ／Ａ−Ａ／Ｇ／Ｗ（配列番号８７）のアミノ酸配列を含むＨＣ−ＣＤＲ１、または最大で約３（例えば、約１、２または３のいずれか）アミノ酸の置換を含むそのバリアント、Ｉ／Ｓ−Ｋ／Ｓ−Ｘ−Ｈ／Ｙ−Ｘ−Ｇ−Ｘ−Ｔ（配列番号８８）のアミノ酸配列を含むＨＣ−ＣＤＲ２、または最大で約３（例えば、約１、２または３のいずれか）アミノ酸の置換を含むそのバリアント、およびＡ／Ｇ−Ｘ−Ｗ／Ｙ−Ｙ−Ｘ−Ｘ−Ｘ−Ｆ／Ｙ−Ｄ（配列番号８９）のアミノ酸配列を含むＨＣ−ＣＤＲ３、または最大で約３（例えば、約１、２または３のいずれか）アミノ酸の置換を含むそのバリアントを含む重鎖可変ドメイン配列；ならびにｉｉ）Ｓ／Ｔ−Ｇ／Ｓ−Ｄ／Ｎ−Ｉ／Ｖ−Ａ／Ｇ−Ａ／Ｓ／Ｖ−Ｘ−Ｈ／Ｙ（配列番号１２０）のアミノ酸配列を含むＬＣ−ＣＤＲ１、または最大で約３（例えば、約１、２または３のいずれか）アミノ酸の置換を含むそのバリアント、およびＱ−Ｓ／Ｔ−Ｙ／Ｗ−Ｄ／Ｔ−Ｓ／Ｔ−Ａ／Ｓ（配列番号１２１）のアミノ酸配列を含むＬＣ−ＣＤＲ３、または最大で約３（例えば、約１、２または３のいずれか）アミノ酸の置換を含むそのバリアントを含む軽鎖可変ドメインを含み；Ｘは任意のアミノ酸であり得る、抗ＡＭＣ抗体部分を含む細胞外ドメイン、ｂ）膜貫通ドメイン、ならびにｃ）細胞内シグナル伝達ドメインを含む抗ＡＭＣ  ＣＡＲが提供される。一部の実施形態では、細胞内シグナル伝達ドメインは、免疫細胞を活性化することが可能である。一部の実施形態では、細胞内シグナル伝達ドメインは、一次シグナル伝達配列および共刺激シグナル伝達配列を含む。一部の実施形態では、一次シグナル伝達配列は、ＣＤ３ζ細胞内シグナル伝達配列を含む。一部の実施形態では、共刺激シグナル伝達配列は、ＣＤ２８細胞内シグナル伝達配列を含む。一部の実施形態では、細胞内ドメインは、ＣＤ３ζ細胞内シグナル伝達配列およびＣＤ２８細胞内シグナル伝達配列を含む。
【０２７３】
一部の実施形態では、ａ）ＡＦＰペプチドおよびＭＨＣクラスＩタンパク質を含む複合体に特異的に結合する抗ＡＭＣ抗体部分であって、ｉ）Ｇ−Ｆ／Ｙ−Ｓ／Ｔ−Ｆ−Ｄ／Ｓ／Ｔ−Ｄ／Ｎ／Ｓ−Ｙ／Ａ−Ａ／Ｇ／Ｗ（配列番号８７）のアミノ酸配列を含むＨＣ−ＣＤＲ１、Ｉ／Ｓ−Ｋ／Ｓ−Ｘ−Ｈ／Ｙ−Ｘ−Ｇ−Ｘ−Ｔ（配列番号８８）のアミノ酸配列を含むＨＣ−ＣＤＲ２、およびＡ／Ｇ−Ｘ−Ｗ／Ｙ−Ｙ−Ｘ−Ｘ−Ｘ−Ｆ／Ｙ−Ｄ（配列番号８９）のアミノ酸配列を含むＨＣ−ＣＤＲ３を含む重鎖可変ドメイン配列；ならびにｉｉ）Ｓ／Ｔ−Ｇ／Ｓ−Ｄ／Ｎ−Ｉ／Ｖ−Ａ／Ｇ−Ａ／Ｓ／Ｖ−Ｘ−Ｈ／Ｙ（配列番号１２０）のアミノ酸配列を含むＬＣ−ＣＤＲ１、およびＱ−Ｓ／Ｔ−Ｙ／Ｗ−Ｄ／Ｔ−Ｓ／Ｔ−Ａ／Ｓ（配列番号１２１）のアミノ酸配列を含むＬＣ−ＣＤＲ３を含む軽鎖可変ドメインを含む抗ＡＭＣ抗体部分を含む細胞外ドメイン；ｂ）細胞内シグナル伝達ドメインを含む抗ＡＭＣ  ＣＡＲが提供される。一部の実施形態では、細胞内シグナル伝達ドメインは、免疫細胞を活性化することが可能である。一部の実施形態では、細胞内シグナル伝達ドメインは、一次シグナル伝達配列および共刺激シグナル伝達配列を含む。一部の実施形態では、一次シグナル伝達配列は、ＣＤ３ζ細胞内シグナル伝達配列を含む。一部の実施形態では、共刺激シグナル伝達配列は、ＣＤ２８細胞内シグナル伝達配列を含む。一部の実施形態では、細胞内ドメインは、ＣＤ３ζ細胞内シグナル伝達配列およびＣＤ２８細胞内シグナル伝達配列を含む。
【０２７４】
一部の実施形態では、ａ）ＡＦＰペプチドおよびＭＨＣクラスＩタンパク質を含む複合体に特異的に結合する抗ＡＭＣ抗体部分であって、ｉ）配列番号５７〜６６のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＨＣ−ＣＤＲ１、または最大で約５（例えば、約１、２、３、４または５のいずれか）アミノ酸の置換を含むそのバリアント、配列番号６７〜７６のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＨＣ−ＣＤＲ２、または最大で約５（例えば、約１、２、３、４または５のいずれか）アミノ酸の置換を含むそのバリアント、および配列番号７７〜８６のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＨＣ−ＣＤＲ３、または最大で約５（例えば、約１、２、３、４または５のいずれか）アミノ酸の置換を含むそのバリアントを含む重鎖可変ドメイン；ならびにｉｉ）配列番号９０〜９９のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＬＣ−ＣＤＲ１、または最大で約５（例えば、約１、２、３、４または５のいずれか）アミノ酸の置換を含むそのバリアント、配列番号１００〜１０９のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＬＣ−ＣＤＲ２、または最大で約３（例えば、約１、２または３のいずれか）アミノ酸の置換を含むそのバリアント、および配列番号１１０〜１１９のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＬＣ−ＣＤＲ３、または最大で約５（例えば、約１、２、３、４または５のいずれか）アミノ酸の置換を含むそのバリアントを含む軽鎖可変ドメインを含む抗ＡＭＣ抗体部分を含む細胞外ドメイン；ｂ）膜貫通ドメイン、ならびにｃ）細胞内シグナル伝達ドメインを含む抗ＡＭＣ  ＣＡＲが提供される。一部の実施形態では、細胞内シグナル伝達ドメインは、免疫細胞を活性化することが可能である。一部の実施形態では、細胞内シグナル伝達ドメインは、一次シグナル伝達配列および共刺激シグナル伝達配列を含む。一部の実施形態では、一次シグナル伝達配列は、ＣＤ３ζ細胞内シグナル伝達配列を含む。一部の実施形態では、共刺激シグナル伝達配列は、ＣＤ２８細胞内シグナル伝達配列を含む。一部の実施形態では、細胞内ドメインは、ＣＤ３ζ細胞内シグナル伝達配列およびＣＤ２８細胞内シグナル伝達配列を含む。
【０２７５】
一部の実施形態では、ａ）ＡＦＰペプチドおよびＭＨＣクラスＩタンパク質を含む複合体に特異的に結合する抗ＡＭＣ抗体部分であって、ｉ）配列番号５７〜６６のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＨＣ−ＣＤＲ１；配列番号６７〜７６のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＨＣ−ＣＤＲ２；および配列番号７７〜８６のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＨＣ−ＣＤＲ３を含む重鎖可変ドメイン配列；またはＨＣ−ＣＤＲ配列中に最大で約５（例えば、約１、２、３、４または５のいずれか）アミノ酸の置換を含むそのバリアント；ならびにｉｉ）配列番号９０〜９９のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＬＣ−ＣＤＲ１；配列番号１００〜１０９のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＬＣ−ＣＤＲ２；および配列番号１１０〜１１９のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＬＣ−ＣＤＲ３を含む軽鎖可変ドメイン配列；またはＬＣ−ＣＤＲ配列中に最大で約５（例えば、約１、２、３、４または５のいずれか）アミノ酸の置換を含むそのバリアントを含む抗ＡＭＣ抗体部分を含む細胞外ドメイン；ｂ）膜貫通ドメイン、ならびにｃ）細胞内シグナル伝達ドメインを含む抗ＡＭＣ  ＣＡＲが提供される。一部の実施形態では、細胞内シグナル伝達ドメインは、免疫細胞を活性化することが可能である。一部の実施形態では、細胞内シグナル伝達ドメインは、一次シグナル伝達配列および共刺激シグナル伝達配列を含む。一部の実施形態では、一次シグナル伝達配列は、ＣＤ３ζ細胞内シグナル伝達配列を含む。一部の実施形態では、共刺激シグナル伝達配列は、ＣＤ２８細胞内シグナル伝達配列を含む。一部の実施形態では、細胞内ドメインは、ＣＤ３ζ細胞内シグナル伝達配列およびＣＤ２８細胞内シグナル伝達配列を含む。
【０２７６】
一部の実施形態では、ａ）ＡＦＰペプチドおよびＭＨＣクラスＩタンパク質を含む複合体に特異的に結合する抗ＡＭＣ抗体部分であって、ｉ）配列番号５７〜６６のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＨＣ−ＣＤＲ１；配列番号６７〜７６のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＨＣ−ＣＤＲ２；および配列番号７７〜８６のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＨＣ−ＣＤＲ３を含む重鎖可変ドメイン配列；ならびにｉｉ）配列番号９０〜９９のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＬＣ−ＣＤＲ１；配列番号１００〜１０９のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＬＣ−ＣＤＲ２；および配列番号１１０〜１１９のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＬＣ−ＣＤＲ３を含む軽鎖可変ドメイン配列を含む抗ＡＭＣ抗体部分を含む細胞外ドメイン；ｂ）細胞内シグナル伝達ドメインを含む抗ＡＭＣ  ＣＡＲが提供される。一部の実施形態では、細胞内シグナル伝達ドメインは、免疫細胞を活性化することが可能である。一部の実施形態では、細胞内シグナル伝達ドメインは、一次シグナル伝達配列および共刺激シグナル伝達配列を含む。一部の実施形態では、一次シグナル伝達配列は、ＣＤ３ζ細胞内シグナル伝達配列を含む。一部の実施形態では、共刺激シグナル伝達配列は、ＣＤ２８細胞内シグナル伝達配列を含む。一部の実施形態では、細胞内ドメインは、ＣＤ３ζ細胞内シグナル伝達配列およびＣＤ２８細胞内シグナル伝達配列を含む。
【０２７７】
一部の実施形態では、ａ）ＡＦＰペプチドおよびＭＨＣクラスＩタンパク質を含む複合体に特異的に結合する抗ＡＭＣ抗体部分であって、配列番号１７〜２６のいずれか１つのアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン、または少なくとも約９５％（例えば、少なくとも約９６％、９７％、９８％または９９％のいずれか）の配列同一性を有するそのバリアント、および配列番号２７〜３６のいずれか１つのアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン、または少なくとも約９５％の配列同一性を有するそのバリアントを含む抗ＡＭＣ抗体部分を含む細胞外ドメイン；ｂ）膜貫通ドメイン、ならびにｃ）細胞内シグナル伝達ドメインを含む抗ＡＭＣ  ＣＡＲが提供される。一部の実施形態では、細胞内シグナル伝達ドメインは、免疫細胞を活性化することが可能である。一部の実施形態では、細胞内シグナル伝達ドメインは、一次シグナル伝達配列および共刺激シグナル伝達配列を含む。一部の実施形態では、一次シグナル伝達配列は、ＣＤ３ζ細胞内シグナル伝達配列を含む。一部の実施形態では、共刺激シグナル伝達配列は、ＣＤ２８細胞内シグナル伝達配列を含む。一部の実施形態では、細胞内ドメインは、ＣＤ３ζ細胞内シグナル伝達配列およびＣＤ２８細胞内シグナル伝達配列を含む。
【０２７８】
一部の実施形態では、ａ）ＡＦＰペプチドおよびＭＨＣクラスＩタンパク質を含む複合体に特異的に結合する抗ＡＭＣ抗体部分であって、配列番号１７〜２６のいずれか１つのアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインおよび配列番号２７〜３６のいずれか１つのアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを含む抗ＡＭＣ抗体部分を含む細胞外ドメイン；ｂ）細胞内シグナル伝達ドメインを含む抗ＡＭＣ  ＣＡＲが提供される。一部の実施形態では、細胞内シグナル伝達ドメインは、免疫細胞を活性化することが可能である。一部の実施形態では、細胞内シグナル伝達ドメインは、一次シグナル伝達配列および共刺激シグナル伝達配列を含む。一部の実施形態では、一次シグナル伝達配列は、ＣＤ３ζ細胞内シグナル伝達配列を含む。一部の実施形態では、共刺激シグナル伝達配列は、ＣＤ２８細胞内シグナル伝達配列を含む。一部の実施形態では、細胞内ドメインは、ＣＤ３ζ細胞内シグナル伝達配列およびＣＤ２８細胞内シグナル伝達配列を含む。
【０２７９】
一部の実施形態では、ａ）ＡＦＰペプチドおよびＭＨＣクラスＩタンパク質を含む複合体に特異的に結合する抗ＡＭＣ抗体部分を含む細胞外ドメイン、ｂ）膜貫通ドメイン、ならびにｃ）ＣＤ３ζ細胞内シグナル伝達配列およびＣＤ２８細胞内シグナル伝達配列を含む細胞内シグナル伝達ドメインを含む抗ＡＭＣ  ＣＡＲが提供される。一部の実施形態では、ＡＦＰペプチドは、ＡＦＰ１５８（配列番号４）である。一部の実施形態では、ＭＨＣクラスＩタンパク質は、ＨＬＡ−Ａ０２である。一部の実施形態では、ＭＨＣクラスＩタンパク質は、ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１である。
【０２８０】
一部の実施形態では、ａ）ＡＦＰ１５８ペプチド（配列番号４）およびＨＬＡ−Ａ＊０２：０１を含む複合体に特異的に結合する抗ＡＭＣ抗体部分を含む細胞外ドメイン、ｂ）膜貫通ドメイン、ならびにｃ）ＣＤ３ζ細胞内シグナル伝達配列およびＣＤ２８細胞内シグナル伝達配列を含む細胞内シグナル伝達ドメインを含む抗ＡＭＣ  ＣＡＲが提供される。
【０２８１】
一部の実施形態では、ａ）ＡＦＰペプチドおよびＭＨＣクラスＩタンパク質を含む複合体に特異的に結合する抗ＡＭＣ抗体部分であって、ｉ）Ｇ−Ｆ／Ｙ−Ｓ／Ｔ−Ｆ−Ｄ／Ｓ／Ｔ−Ｄ／Ｎ／Ｓ−Ｙ／Ａ−Ａ／Ｇ／Ｗ（配列番号８７）のアミノ酸配列を含むＨＣ−ＣＤＲ１、または最大で約３（例えば、約１、２または３のいずれか）アミノ酸の置換を含むそのバリアント、Ｉ／Ｓ−Ｋ／Ｓ−Ｘ−Ｈ／Ｙ−Ｘ−Ｇ−Ｘ−Ｔ（配列番号８８）のアミノ酸配列を含むＨＣ−ＣＤＲ２、または最大で約３（例えば、約１、２または３のいずれか）アミノ酸の置換を含むそのバリアント、およびＡ／Ｇ−Ｘ−Ｗ／Ｙ−Ｙ−Ｘ−Ｘ−Ｘ−Ｆ／Ｙ−Ｄ（配列番号８９）のアミノ酸配列を含むＨＣ−ＣＤＲ３、または最大で約３（例えば、約１、２または３のいずれか）アミノ酸の置換を含むそのバリアントを含む重鎖可変ドメイン配列；ならびにｉｉ）Ｓ／Ｔ−Ｇ／Ｓ−Ｄ／Ｎ−Ｉ／Ｖ−Ａ／Ｇ−Ａ／Ｓ／Ｖ−Ｘ−Ｈ／Ｙ（配列番号１２０）のアミノ酸配列を含むＬＣ−ＣＤＲ１、または最大で約３（例えば、約１、２または３のいずれか）アミノ酸の置換を含むそのバリアント、およびＱ−Ｓ／Ｔ−Ｙ／Ｗ−Ｄ／Ｔ−Ｓ／Ｔ−Ａ／Ｓ（配列番号１２１）のアミノ酸配列を含むＬＣ−ＣＤＲ３、または最大で約３（例えば、約１、２または３のいずれか）アミノ酸の置換を含むそのバリアントを含む軽鎖可変ドメインを含み；Ｘは任意のアミノ酸であり得る、抗ＡＭＣ抗体部分を含む細胞外ドメイン、ｂ）膜貫通ドメイン、ならびにｃ）ＣＤ３ζ細胞内シグナル伝達配列およびＣＤ２８細胞内シグナル伝達配列を含む細胞内シグナル伝達ドメインを含む抗ＡＭＣ  ＣＡＲが提供される。
【０２８２】
一部の実施形態では、ａ）ＡＦＰペプチドおよびＭＨＣクラスＩタンパク質を含む複合体に特異的に結合する抗ＡＭＣ抗体部分であって、ｉ）Ｇ−Ｆ／Ｙ−Ｓ／Ｔ−Ｆ−Ｄ／Ｓ／Ｔ−Ｄ／Ｎ／Ｓ−Ｙ／Ａ−Ａ／Ｇ／Ｗ（配列番号８７）のアミノ酸配列を含むＨＣ−ＣＤＲ１、Ｉ／Ｓ−Ｋ／Ｓ−Ｘ−Ｈ／Ｙ−Ｘ−Ｇ−Ｘ−Ｔ（配列番号８８）のアミノ酸配列を含むＨＣ−ＣＤＲ２、およびＡ／Ｇ−Ｘ−Ｗ／Ｙ−Ｙ−Ｘ−Ｘ−Ｘ−Ｆ／Ｙ−Ｄ（配列番号８９）のアミノ酸配列を含むＨＣ−ＣＤＲ３を含む重鎖可変ドメイン配列；ならびにｉｉ）Ｓ／Ｔ−Ｇ／Ｓ−Ｄ／Ｎ−Ｉ／Ｖ−Ａ／Ｇ−Ａ／Ｓ／Ｖ−Ｘ−Ｈ／Ｙ（配列番号１２０）のアミノ酸配列を含むＬＣ−ＣＤＲ１、およびＱ−Ｓ／Ｔ−Ｙ／Ｗ−Ｄ／Ｔ−Ｓ／Ｔ−Ａ／Ｓ（配列番号１２１）のアミノ酸配列を含むＬＣ−ＣＤＲ３を含む軽鎖可変ドメインを含み；Ｘは任意のアミノ酸であり得る、抗ＡＭＣ抗体部分を含む細胞外ドメイン、ｂ）膜貫通ドメイン、ならびにｃ）ＣＤ３ζ細胞内シグナル伝達配列およびＣＤ２８細胞内シグナル伝達配列を含む細胞内シグナル伝達ドメインを含む抗ＡＭＣ  ＣＡＲが提供される。
【０２８３】
一部の実施形態では、ａ）ＡＦＰペプチドおよびＭＨＣクラスＩタンパク質を含む複合体に特異的に結合する抗ＡＭＣ抗体部分であって、ｉ）配列番号５７〜６６のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＨＣ−ＣＤＲ１、または最大で約５（例えば、約１、２、３、４または５のいずれか）アミノ酸の置換を含むそのバリアント、配列番号６７〜７６のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＨＣ−ＣＤＲ２、または最大で約５（例えば、約１、２、３、４または５のいずれか）アミノ酸の置換を含むそのバリアント、および配列番号７７〜８６のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＨＣ−ＣＤＲ３、または最大で約５（例えば、約１、２、３、４または５のいずれか）アミノ酸の置換を含むそのバリアントを含む重鎖可変ドメイン；ならびにｉｉ）配列番号９０〜９９のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＬＣ−ＣＤＲ１、または最大で約５（例えば、約１、２、３、４または５のいずれか）アミノ酸の置換を含むそのバリアント、配列番号１００〜１０９のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＬＣ−ＣＤＲ２、または最大で約３（例えば、約１、２または３のいずれか）アミノ酸の置換を含むそのバリアント、および配列番号１１０〜１１９のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＬＣ−ＣＤＲ３、または最大で約５（例えば、約１、２、３、４または５のいずれか）アミノ酸の置換を含むそのバリアントを含む軽鎖可変ドメインを含む抗ＡＭＣ抗体部分を含む細胞外ドメイン；ｂ）膜貫通ドメイン、ならびにｃ）ＣＤ３ζ細胞内シグナル伝達配列およびＣＤ２８細胞内シグナル伝達配列を含む細胞内シグナル伝達ドメインを含む抗ＡＭＣ  ＣＡＲが提供される。
【０２８４】
一部の実施形態では、ａ）ＡＦＰペプチドおよびＭＨＣクラスＩタンパク質を含む複合体に特異的に結合する抗ＡＭＣ抗体部分であって、ｉ）配列番号５７〜６６のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＨＣ−ＣＤＲ１；配列番号６７〜７６のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＨＣ−ＣＤＲ２；および配列番号７７〜８６のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＨＣ−ＣＤＲ３を含む重鎖可変ドメイン配列；またはＨＣ−ＣＤＲ配列中に最大で約５（例えば、約１、２、３、４または５のいずれか）アミノ酸の置換を含むそのバリアント；ならびにｉｉ）配列番号９０〜９９のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＬＣ−ＣＤＲ１；配列番号１００〜１０９のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＬＣ−ＣＤＲ２；および配列番号１１０〜１１９のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＬＣ−ＣＤＲ３を含む軽鎖可変ドメイン配列；またはＬＣ−ＣＤＲ配列中に最大で約５（例えば、約１、２、３、４または５のいずれか）アミノ酸の置換を含むそのバリアントを含む抗ＡＭＣ抗体部分を含む細胞外ドメイン；ｂ）膜貫通ドメイン、ならびにｃ）ＣＤ３ζ細胞内シグナル伝達配列およびＣＤ２８細胞内シグナル伝達配列を含む細胞内シグナル伝達ドメインを含む抗ＡＭＣ  ＣＡＲが提供される。
【０２８５】
一部の実施形態では、ａ）ＡＦＰペプチドおよびＭＨＣクラスＩタンパク質を含む複合体に特異的に結合する抗ＡＭＣ抗体部分であって、ｉ）配列番号５７〜６６のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＨＣ−ＣＤＲ１；配列番号６７〜７６のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＨＣ−ＣＤＲ２；および配列番号７７〜８６のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＨＣ−ＣＤＲ３を含む重鎖可変ドメイン配列；ならびにｉｉ）配列番号９０〜９９のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＬＣ−ＣＤＲ１；配列番号１００〜１０９のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＬＣ−ＣＤＲ２；および配列番号１１０〜１１９のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＬＣ−ＣＤＲ３を含む軽鎖可変ドメイン配列を含む抗ＡＭＣ抗体部分を含む細胞外ドメイン；ｂ）膜貫通ドメイン、ならびにｃ）ＣＤ３ζ細胞内シグナル伝達配列およびＣＤ２８細胞内シグナル伝達配列を含む細胞内シグナル伝達ドメインを含む抗ＡＭＣ  ＣＡＲが提供される。
【０２８６】
一部の実施形態では、ａ）ＡＦＰペプチドおよびＭＨＣクラスＩタンパク質を含む複合体に特異的に結合する抗ＡＭＣ抗体部分であって、ｉ）配列番号１７〜２６のいずれか１つのアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン、または少なくとも約９５％（例えば、少なくとも約９６％、９７％、９８％または９９％のいずれか）の配列同一性を有するそのバリアント、および配列番号２７〜３６のいずれか１つのアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン、または少なくとも約９５％の配列同一性を有するそのバリアントを含む抗ＡＭＣ抗体部分を含む細胞外ドメイン；ｂ）膜貫通ドメイン、ならびにｃ）ＣＤ３ζ細胞内シグナル伝達配列およびＣＤ２８細胞内シグナル伝達配列を含む細胞内シグナル伝達ドメインを含む抗ＡＭＣ  ＣＡＲが提供される。
【０２８７】
一部の実施形態では、ａ）ＡＦＰペプチドおよびＭＨＣクラスＩタンパク質を含む複合体に特異的に結合する抗ＡＭＣ抗体部分であって、配列番号１７〜２６のいずれか１つのアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインおよび配列番号２７〜３６のいずれか１つのアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを含む抗ＡＭＣ抗体部分を含む細胞外ドメイン；ｂ）膜貫通ドメイン、ならびにｃ）ＣＤ３ζ細胞内シグナル伝達配列およびＣＤ２８細胞内シグナル伝達配列を含む細胞内シグナル伝達ドメインを含む抗ＡＭＣ  ＣＡＲが提供される。
【０２８８】
抗ＡＭＣ  ＣＡＲを発現するエフェクター細胞（例えば、リンパ球、例えば、Ｔ細胞）もまた、本明細書で提供される。
【０２８９】
抗ＡＭＣ  ＣＡＲを発現するエフェクター細胞を産生する方法であって、抗ＡＭＣ  ＣＡＲをコードする核酸を含むベクターをエフェクター細胞中に導入するステップを含む方法もまた提供される。一部の実施形態では、ベクターをエフェクター細胞中に導入するステップは、エフェクター細胞にベクターを形質導入するステップを含む。一部の実施形態では、ベクターをエフェクター細胞中に導入するステップは、エフェクター細胞にベクターをトランスフェクトするステップを含む。エフェクター細胞中へのベクターの形質導入またはトランスフェクションは、当該分野で公知の任意の方法を使用して実施され（ｃａｒｒｉｅｄ  ａｂｏｕｔ）得る。
【０２９０】
イムノコンジュゲート
抗ＡＭＣ構築物は、一部の実施形態では、エフェクター分子に結合された抗ＡＭＣ抗体部分を含むイムノコンジュゲート（本明細書で「抗ＡＭＣイムノコンジュゲート」とも呼ぶ）を含む。一部の実施形態では、エフェクター分子は、細胞傷害性である、細胞増殖抑制性である、または他の方法でいくらかの治療利益を提供する、治療剤、例えば、がん治療剤である。一部の実施形態では、エフェクター分子は、直接的または間接的のいずれかで検出可能なシグナルを生成し得る標識である。
【０２９１】
一部の実施形態では、抗ＡＭＣ抗体部分および治療剤を含む抗ＡＭＣイムノコンジュゲート（本明細書で「抗体−薬物コンジュゲート」または「ＡＤＣ」とも呼ぶ）が提供される。一部の実施形態では、治療剤は、細胞傷害性である、細胞増殖抑制性である、または標的細胞が分裂する能力を他の方法で防止もしくは低減させる、毒素である。細胞傷害剤または細胞増殖抑制剤、即ち、がんの処置において腫瘍細胞を死滅させるまたは阻害する薬物の局所的送達のためのＡＤＣの使用（ＳｙｒｉｇｏｓおよびＥｐｅｎｅｔｏｓ、Ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  １９巻：６０５〜６１４頁（１９９９年）；Ｎｉｃｕｌｅｓｃｕ−ＤｕｖａｚおよびＳｐｒｉｎｇｅｒ、Ａｄｖ．  Ｄｒｇ．  Ｄｅｌ．  Ｒｅｖ．  ２６巻：１５１〜１７２頁（１９９７年）；米国特許第４，９７５，２７８号）は、標的細胞への薬物部分の標的化送達、および標的細胞中での細胞内蓄積を可能にするが、このとき、これらの結合体化されていない治療剤の全身投与は、正常細胞ならびに排除が求められる標的細胞に対する、許容できないレベルの毒性を生じ得る（Ｂａｌｄｗｉｎら、Ｌａｎｃｅｔ（１９８６年３月１５日）：６０３〜６０５頁（１９８６年）；Ｔｈｏｒｐｅ（１９８５年）、「Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｃａｒｒｉｅｒｓ  Ｏｆ  Ｃｙｔｏｔｏｘｉｃ  Ａｇｅｎｔｓ  Ｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｈｅｒａｐｙ：  Ａ  Ｒｅｖｉｅｗ」、Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ’８４：  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ａｎｄ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ、Ａ．  Ｐｉｎｃｈｅｒａら（編）、４７５〜５０６頁）。その結果、最小の毒性を伴う最大効力が求められる。重要なことに、ほとんどの正常細胞は、それらの表面上にＡＭＣを提示しないので、それらは抗ＡＭＣイムノコンジュゲートを結合できず、毒素または他の治療剤の殺滅効果から保護される。
【０２９２】
抗ＡＭＣイムノコンジュゲートにおいて使用される治療剤には、例えば、ダウノマイシン、ドキソルビシン、メトトレキセートおよびビンデシンが含まれる（Ｒｏｗｌａｎｄら、Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．  ２１巻：１８３〜１８７頁（１９８６年））。抗ＡＭＣイムノコンジュゲートにおいて使用される毒素には、細菌毒素、例えばジフテリア毒素、植物毒素、例えばリシン、小分子毒素、例えばゲルダナマイシン（Ｍａｎｄｌｅｒら、Ｊ．Ｎａｔ．  Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｎｓｔ．  ９２巻（１９号）：１５７３〜１５８１頁（２０００年）；Ｍａｎｄｌｅｒら、Ｂｉｏｏｒｇａｎｉｃ  ＆  Ｍｅｄ．  Ｃｈｅｍ．  Ｌｅｔｔｅｒｓ  １０巻：１０２５〜１０２８頁（２０００年）；Ｍａｎｄｌｅｒら、Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ  Ｃｈｅｍ．  １３巻：７８６〜７９１頁（２００２年））、メイタンシノイド（ＥＰ１３９１２１３；Ｌｉｕら、Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ  ９３巻：８６１８〜８６２３頁（１９９６年））、およびカリケアマイシン（Ｌｏｄｅら、Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．  ５８巻：２９２８頁（１９９８年）；Ｈｉｎｍａｎら、Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．  ５３巻：３３３６〜３３４２頁（１９９３年））が含まれる。毒素は、チューブリン結合、ＤＮＡ結合またはトポイソメラーゼ阻害を含む機構によって、それらの細胞傷害効果および細胞分裂阻害効果を発揮し得る。一部の細胞傷害薬は、大きい抗体またはタンパク質受容体リガンドに結合体化された場合、不活性であるまたはあまり活性でない傾向がある。
【０２９３】
使用され得る酵素的に活性な毒素およびその断片には、例えば、ジフテリアＡ鎖、ジフテリア毒素の非結合活性断片、外毒素Ａ鎖（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ由来）、リシンＡ鎖、アブリンＡ鎖、モデシン（ｍｏｄｅｃｃｉｎ）Ａ鎖、α−サルシン（α−ｓａｒｃｉｎ）、Ａｌｅｕｒｉｔｅｓ  ｆｏｒｄｉｉタンパク質、ジアンチン（ｄｉａｎｔｈｉｎ）タンパク質、Ｐｈｙｔｏｌａｃａ  ａｍｅｒｉｃａｎａタンパク質（ＰＡＰＩ、ＰＡＰＩＩおよびＰＡＰ−Ｓ）、ｍｏｍｏｒｄｉｃａ  ｃｈａｒａｎｔｉａ阻害剤、クルシン（ｃｕｒｃｉｎ）、クロチン（ｃｒｏｔｉｎ）、ｓａｐａｏｎａｒｉａ  ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓ阻害剤、ゲロニン、ミトゲリン（ｍｉｔｏｇｅｌｌｉｎ）、レストリクトシン（ｒｅｓｔｒｉｃｔｏｃｉｎ）、フェノマイシン（ｐｈｅｎｏｍｙｃｉｎ）、エノマイシン（ｅｎｏｍｙｃｉｎ）およびトリコテセン（ｔｒｉｃｏｔｈｅｃｅｎｅ）が含まれる。例えば、１９９３年１０月２８日公開のＷＯ９３／２１２３２を参照のこと。
【０２９４】
抗ＡＭＣ抗体部分と、１または複数の小分子毒素、例えば、カリケアマイシン、メイタンシノイド、ドラスタチン、アウリスタチン（ａｕｒｏｓｔａｔｉｎ）、トリコテセンおよびＣＣ１０６５、ならびに毒素活性を有するこれらの毒素の誘導体との抗ＡＭＣイムノコンジュゲートもまた、本明細書で企図される。
【０２９５】
一部の実施形態では、細胞内活性を有する治療剤を含む抗ＡＭＣイムノコンジュゲートが提供される。一部の実施形態では、抗ＡＭＣイムノコンジュゲートは、内部移行され、治療剤は、細胞のタンパク質合成を遮断し、そこで細胞死をもたらす細胞毒である。一部の実施形態では、治療剤は、例えば、ゲロニン、ボウガニン（ｂｏｕｇａｎｉｎ）、サポリン、リシン、リシンＡ鎖、ブリオジン（ｂｒｙｏｄｉｎ）、ジフテリア毒素、レストリクトシン、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ外毒素Ａおよびそれらのバリアントを含む、リボソーム不活性化活性を有するポリペプチドを含む細胞毒である。一部の実施形態では、治療剤が、リボソーム不活性化活性を有するポリペプチドを含む細胞毒である場合、抗ＡＭＣイムノコンジュゲートは、タンパク質が細胞にとって細胞傷害性であるように、標的細胞への結合の際に内部移行されなければならない。
【０２９６】
一部の実施形態では、ＤＮＡを破壊するように作用する治療剤を含む抗ＡＭＣイムノコンジュゲートが提供される。一部の実施形態では、ＤＮＡを破壊するように作用する治療剤は、例えば、エンジイン（例えば、カリケアマイシンおよびエスペラミシン）および非エンジイン小分子薬剤（例えば、ブレオマイシン、メチジウムプロピル（ｍｅｔｈｉｄｉｕｍｐｒｏｐｙｌ）−ＥＤＴＡ−Ｆｅ（ＩＩ））からなる群から選択される。本出願に従って有用な他のがん治療剤には、ダウノルビシン、ドキソルビシン、ディスタマイシンＡ、シスプラチン、マイトマイシンＣ、エクチナサイジン、デュオカルマイシン／ＣＣ−１０６５およびブレオマイシン／ペプレオマイシン（ｐｅｐｌｅｏｍｙｃｉｎ）が限定なしに含まれる。
【０２９７】
本発明は、抗ＡＭＣ抗体部分と核酸分解活性を有する化合物（例えば、リボヌクレアーゼまたはＤＮＡエンドヌクレアーゼ、例えば、デオキシリボヌクレアーゼ；ＤＮａｓｅ）との間で形成された抗ＡＭＣイムノコンジュゲートをさらに企図する。
【０２９８】
一部の実施形態では、抗ＡＭＣイムノコンジュゲートは、チューブリンを破壊するように作用する薬剤を含む。かかる薬剤には、例えば、リゾキシン（ｒｈｉｚｏｘｉｎ）／メイタンシン、パクリタキセル、ビンクリスチンおよびビンブラスチン、コルヒチン、アウリスタチン  ドラスタチン１０  ＭＭＡＥおよびペロルシド（ｐｅｌｏｒｕｓｉｄｅ）Ａが含まれ得る。
【０２９９】
一部の実施形態では、抗ＡＭＣイムノコンジュゲートは、例えば、Ａｓａｌｅｙ  ＮＳＣ  １６７７８０、ＡＺＱ  ＮＳＣ  １８２９８６、ＢＣＮＵ  ＮＳＣ  ４０９９６２、ブスルファン  ＮＳＣ  ７５０、カルボキシフタラトプラチナ（ｃａｒｂｏｘｙｐｈｔｈａｌａｔｏｐｌａｔｉｎｕｍ）ＮＳＣ  ２７１６７４、ＣＢＤＣＡ  ＮＳＣ  ２４１２４０、ＣＣＮＵ  ＮＳＣ  ７９０３７、ＣＨＩＰ  ＮＳＣ  ２５６９２７、クロラムブシル  ＮＳＣ  ３０８８、クロロゾトシン  ＮＳＣ  １７８２４８、シス−プラチナム（ｃｉｓ−ｐｌａｔｉｎｕｍ）ＮＳＣ  １１９８７５、クロメゾン（ｃｌｏｍｅｓｏｎｅ）ＮＳＣ  ３３８９４７、シアノモルホリノドキソルビシン  ＮＳＣ  ３５７７０４、シクロジソン（ｃｙｃｌｏｄｉｓｏｎｅ）ＮＳＣ  ３４８９４８、ジアンヒドロガラクチトール  ＮＳＣ  １３２３１３、フルオロドパン（ｆｌｕｏｒｏｄｏｐａｎ）ＮＳＣ  ７３７５４、ヘプスルファム（ｈｅｐｓｕｌｆａｍ）ＮＳＣ  ３２９６８０、ヒカントン  ＮＳＣ  １４２９８２、メルファラン  ＮＳＣ  ８８０６、メチルＣＣＮＵ  ＮＳＣ  ９５４４１、マイトマイシンＣ  ＮＳＣ  ２６９８０、ミトゾラミド（ｍｉｔｏｚｏｌａｍｉｄｅ）ＮＳＣ  ３５３４５１、ナイトロジェンマスタード  ＮＳＣ  ７６２、ＰＣＮＵ  ＮＳＣ  ９５４６６、ピペラジン  ＮＳＣ  ３４４００７、ピペラジンジオン  ＮＳＣ  １３５７５８、ピポブロマン  ＮＳＣ  ２５１５４、ポルフィロマイシン  ＮＳＣ  ５６４１０、スピロヒダントインマスタード（ｓｐｉｒｏｈｙｄａｎｔｏｉｎ  ｍｕｓｔａｒｄ）ＮＳＣ  １７２１１２、テロキシロン（ｔｅｒｏｘｉｒｏｎｅ）ＮＳＣ  ２９６９３４、テトラプラチン（ｔｅｔｒａｐｌａｔｉｎ）ＮＳＣ  ３６３８１２、チオテパ  ＮＳＣ  ６３９６、トリエチレンメラミン  ＮＳＣ  ９７０６、ウラシルナイトロジェンマスタード  ＮＳＣ  ３４４６２およびＹｏｓｈｉ−８６４  ＮＳＣ  １０２６２７が含まれるアルキル化剤を含む。
【０３００】
一部の実施形態では、本出願の抗ＡＭＣイムノコンジュゲートのがん治療剤の一部分は、アロコルヒチン（ａｌｌｏｃｏｌｃｈｉｃｉｎｅ）ＮＳＣ  ４０６０４２、ハリコンドリンＢ  ＮＳＣ  ６０９３９５、コルヒチン  ＮＳＣ  ７５７、コルヒチン誘導体  ＮＳＣ  ３３４１０、ドラスタチン１０  ＮＳＣ  ３７６１２８（ＮＧ−アウリスタチン由来）、メイタンシン  ＮＳＣ  １５３８５８、リゾキシン  ＮＳＣ  ３３２５９８、タキソール  ＮＳＣ  １２５９７３、タキソール誘導体  ＮＳＣ  ６０８８３２、チオコルヒチン（ｔｈｉｏｃｏｌｃｈｉｃｉｎｅ）ＮＳＣ  ３６１７９２、トリチルシステイン  ＮＳＣ  ８３２６５、ビンブラスチン硫酸塩  ＮＳＣ  ４９８４２およびビンクリスチン硫酸塩  ＮＳＣ  ６７５７４が限定なしに含まれる有糸分裂阻害剤を含み得る。
【０３０１】
一部の実施形態では、抗ＡＭＣイムノコンジュゲートは、カンプトテシン  ＮＳＣ  ９４６００、カンプトテシンＮａ塩  ＮＳＣ  １００８８０、アミノカンプトテシン  ＮＳＣ  ６０３０７１、カンプトテシン誘導体  ＮＳＣ  ９５３８２、カンプトテシン誘導体  ＮＳＣ  １０７１２４、カンプトテシン誘導体  ＮＳＣ  ６４３８３３、カンプトテシン誘導体  ＮＳＣ  ６２９９７１、カンプトテシン誘導体  ＮＳＣ  ２９５５００、カンプトテシン誘導体  ＮＳＣ  ２４９９１０、カンプトテシン誘導体  ＮＳＣ  ６０６９８５、カンプトテシン誘導体  ＮＳＣ  ３７４０２８、カンプトテシン誘導体  ＮＳＣ  １７６３２３、カンプトテシン誘導体  ＮＳＣ  ２９５５０１、カンプトテシン誘導体  ＮＳＣ  ６０６１７２、カンプトテシン誘導体  ＮＳＣ  ６０６１７３、カンプトテシン誘導体  ＮＳＣ  ６１０４５８、カンプトテシン誘導体  ＮＳＣ  ６１８９３９、カンプトテシン誘導体  ＮＳＣ  ６１０４５７、カンプトテシン誘導体  ＮＳＣ  ６１０４５９、カンプトテシン誘導体  ＮＳＣ  ６０６４９９、カンプトテシン誘導体  ＮＳＣ  ６１０４５６、カンプトテシン誘導体  ＮＳＣ  ３６４８３０、カンプトテシン誘導体  ＮＳＣ  ６０６４９７およびモルホリノドキソルビシン  ＮＳＣ  ３５４６４６が限定なしに含まれるトポイソメラーゼＩ阻害剤を含む。
【０３０２】
一部の実施形態では、抗ＡＭＣイムノコンジュゲートは、ドキソルビシン  ＮＳＣ  １２３１２７、アモナフィド（ａｍｏｎａｆｉｄｅ）ＮＳＣ  ３０８８４７、ｍ−ＡＭＳＡ  ＮＳＣ  ２４９９９２、アントラピラゾール（ａｎｔｈｒａｐｙｒａｚｏｌｅ）誘導体  ＮＳＣ  ３５５６４４、ピラゾロアクリジン（ｐｙｒａｚｏｌｏａｃｒｉｄｉｎｅ）ＮＳＣ  ３６６１４０、ビサントレン（ｂｉｓａｎｔｒｅｎｅ）ＨＣＬ  ＮＳＣ  ３３７７６６、ダウノルビシン  ＮＳＣ  ８２１５１、デオキシドキソルビシン  ＮＳＣ  ２６７４６９、ミトキサントロン  ＮＳＣ  ３０１７３９、メノガリル  ＮＳＣ  ２６９１４８、Ｎ，Ｎ−ジベンジルダウノマイシン  ＮＳＣ  ２６８２４２、オキサントラゾール（ｏｘａｎｔｈｒａｚｏｌｅ）ＮＳＣ  ３４９１７４、ルビダゾン（ｒｕｂｉｄａｚｏｎｅ）ＮＳＣ  １６４０１１、ＶＭ−２６  ＮＳＣ  １２２８１９およびＶＰ−１６  ＮＳＣ  １４１５４０が限定なしに含まれるトポイソメラーゼＩＩ阻害剤を含む。
【０３０３】
一部の実施形態では、抗ＡＭＣイムノコンジュゲートは、Ｌ−アラノシン  ＮＳＣ  １５３３５３、５−アザシチジン  ＮＳＣ  １０２８１６、５−フルオロウラシル  ＮＳＣ  １９８９３、アシビシン  ＮＳＣ  １６３５０１、アミノプテリン誘導体  ＮＳＣ  １３２４８３、アミノプテリン誘導体  ＮＳＣ  １８４６９２、アミノプテリン誘導体  ＮＳＣ  １３４０３３、アンチフォール（ａｎｔｉｆｏｌ）ＮＳＣ  ６３３７１３、アンチフォール  ＮＳＣ  ６２３０１７、ベーカーズ可溶性アンチフォール（Ｂａｋｅｒ’ｓ  ｓｏｌｕｂｌｅ  ａｎｔｉｆｏｌ）  ＮＳＣ  １３９１０５、ジクロロアリルローソン（ｄｉｃｈｌｏｒａｌｌｙｌ  ｌａｗｓｏｎｅ）ＮＳＣ  １２６７７１、ブレキナル  ＮＳＣ  ３６８３９０、フトラフール（ｆｔｏｒａｆｕｒ）（プロドラッグ）ＮＳＣ  １４８９５８、５，６−ジヒドロ−５−アザシチジン  ＮＳＣ  ２６４８８０、メトトレキセート  ＮＳＣ  ７４０、メトトレキセート誘導体  ＮＳＣ  １７４１２１、Ｎ−（ホスホノアセチル）−Ｌ−アスパルテート（ＰＡＬＡ）ＮＳＣ  ２２４１３１、ピラゾフリン（ｐｙｒａｚｏｆｕｒｉｎ）ＮＳＣ  １４３０９５、トリメトレキセート  ＮＳＣ  ３５２１２２、３−ＨＰ  ＮＳＣ  ９５６７８、２’−デオキシ−５−フルオロウリジン  ＮＳＣ  ２７６４０、５−ＨＰ  ＮＳＣ  １０７３９２、α−ＴＧＤＲ  ＮＳＣ  ７１８５１、グリシン酸アフィディコリン（ａｐｈｉｄｉｃｏｌｉｎ  ｇｌｙｃｉｎａｔｅ）ＮＳＣ  ３０３８１２、ａｒａ−Ｃ  ＮＳＣ  ６３８７８、５−アザ−２’−デオキシシチジン  ＮＳＣ  １２７７１６、β−ＴＧＤＲ  ＮＳＣ  ７１２６１、シクロシチジン  ＮＳＣ  １４５６６８、グアナゾール  ＮＳＣ  １８９５、ヒドロキシウレア  ＮＳＣ  ３２０６５、イノシングリコジアルデヒド（ｉｎｏｓｉｎｅ  ｇｌｙｃｏｄｉａｌｄｅｈｙｄｅ）ＮＳＣ  １１８９９４、マクベシン（ｍａｃｂｅｃｉｎ）Ｉｌ  ＮＳＣ  ３３０５００、ピラゾロイミダゾール（ｐｙｒａｚｏｌｏｉｍｉｄａｚｏｌｅ）ＮＳＣ  ５１１４３、チオグアニン  ＮＳＣ  ７５２およびチオプリン  ＮＳＣ  ７５５が限定なしに含まれる、ＲＮＡまたはＤＮＡ代謝拮抗薬を含む。
【０３０４】
一部の実施形態では、抗ＡＭＣイムノコンジュゲートは、高度に放射活性の原子を含む。種々の放射活性同位体が、放射結合体化（ｒａｄｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅｄ）抗体の産生のために利用可能である。例には、２１１Ａｔ、１３１Ｉ、１２５Ｉ、９０Ｙ、１８６Ｒｅ、１８８Ｒｅ、１５３Ｓｍ、２１２Ｂｉ、３２Ｐ、２１２Ｐｂ、およびＬｕの放射活性同位体が含まれる。
【０３０５】
一部の実施形態では、抗ＡＭＣ抗体部分は、腫瘍プレ標的化における利用のために「受容体」（例えば、ストレプトアビジン）に結合体化され得、この抗体−受容体コンジュゲートは、患者に投与され、その後、除去剤を使用して循環から未結合のコンジュゲートが除去され、次いで、細胞傷害剤（例えば、放射性核種）に結合体化された「リガンド」（例えば、アビジン）が投与される。
【０３０６】
一部の実施形態では、抗ＡＭＣイムノコンジュゲートは、プロドラッグ活性化酵素に結合体化された抗ＡＭＣ抗体部分を含み得る。一部のかかる実施形態では、プロドラッグ活性化酵素は、プロドラッグ（例えば、ペプチジル化学療法剤、ＷＯ８１／０１１４５を参照のこと）を、抗がん薬物などの活性薬物に変換する。かかる抗ＡＭＣイムノコンジュゲートは、一部の実施形態では、抗体依存的酵素媒介性プロドラッグ治療（ａｎｔｉｂｏｄｙ−ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ  ｅｎｚｙｍｅ−ｍｅｄｉａｔｅｄ  ｐｒｏｄｒｕｇ  ｔｈｅｒａｐｙ）（「ＡＤＥＰＴ」）において有用である。抗体に結合体化され得る酵素には、ホスフェート含有プロドラッグを遊離薬物に変換するために有用なアルカリホスファターゼ；サルフェート含有プロドラッグを遊離薬物に変換するために有用なアリールスルファターゼ；非毒性５−フルオロシトシンを抗がん薬物５−フルオロウラシルに変換するために有用なシトシンデアミナーゼ；ペプチド含有プロドラッグを遊離薬物に変換するために有用なプロテアーゼ、例えば、セラチアプロテアーゼ、サーモリシン、スブチリシン、カルボキシペプチダーゼおよびカテプシン（例えば、カテプシンＢおよびＬ）；Ｄ−アミノ酸置換基を含むプロドラッグを変換するために有用なＤ−アラニルカルボキシペプチダーゼ；グリコシル化プロドラッグを遊離薬物に変換するために有用な炭水化物切断酵素、例えば、β−ガラクトシダーゼおよびノイラミニダーゼ；β−ラクタムで誘導体化された薬物を遊離薬物に変換するために有用なβ−ラクタマーゼ；ならびにペニシリンアミダーゼ、例えば、それらのアミン窒素においてそれぞれフェノキシアセチル基またはフェニルアセチル基で誘導体化された薬物を遊離薬物に変換するために有用なペニシリンＶアミダーゼおよびペニシリンＧアミダーゼが含まれるがこれらに限定されない。一部の実施形態では、酵素は、当該分野で周知の組換えＤＮＡ技術によって、抗体部分に共有結合され得る。例えば、Ｎｅｕｂｅｒｇｅｒら、Ｎａｔｕｒｅ  ３１２巻：６０４〜６０８頁（１９８４年）を参照のこと。
【０３０７】
一部の実施形態では、抗ＡＭＣイムノコンジュゲートの治療的一部分は、核酸であり得る。使用され得る核酸には、アンチセンスＲＮＡ、遺伝子、または核酸アナログ、例えば、チオグアニンおよびチオプリンを含む他のポリヌクレオチドが含まれるがこれらに限定されない。
【０３０８】
本出願は、エフェクター分子に結合した抗ＡＭＣ抗体部分を含む抗ＡＭＣイムノコンジュゲートをさらに提供し、このエフェクター分子は、間接的または直接的に検出可能なシグナルを生成し得る標識である。これらの抗ＡＭＣイムノコンジュゲートは、研究適用または診断適用のために、例えば、がんのｉｎ  ｖｉｖｏ検出のために使用され得る。標識は、好ましくは、検出可能なシグナルを、直接的または間接的のいずれかで生成することが可能である。例えば、標識は、放射線不透過性であり得るかまたは放射性同位体、例えば、３Ｈ、１４Ｃ、３２Ｐ、３５Ｓ、１２３Ｉ、１２５Ｉ、１３１Ｉ；蛍光（フルオロフォア）もしくは化学発光（クロモフォア）化合物、例えば、フルオレセインイソチオシアネート、ローダミンもしくはルシフェリン；酵素、例えば、アルカリホスファターゼ、β−ガラクトシダーゼもしくは西洋ワサビペルオキシダーゼ；イメージング剤；または金属イオンであり得る。一部の実施形態では、標識は、シンチグラフィー研究のための放射活性原子、例えば、９９Ｔｃもしくは１２３Ｉ、または核磁気共鳴（ＮＭＲ）画像法（磁気共鳴画像法、ＭＲＩとしても公知）のためのスピン標識、例えば、ジルコニウム−８９、ヨウ素−１２３、ヨウ素−１３１、インジウム−１１１、フッ素−１９、炭素−１３、窒素−１５、酸素−１７、ガドリニウム、マンガンもしくは鉄である。ジルコニウム−８９は、種々の金属キレート剤に錯体化され得、例えば、ＰＥＴ画像法（ＷＯ２０１１／０５６９８３）のために、抗体に結合体化され得る。
【０３０９】
一部の実施形態では、抗ＡＭＣイムノコンジュゲートは、間接的に検出可能である。例えば、抗ＡＭＣイムノコンジュゲートに特異的であり、検出可能な標識を含む二次抗体が、抗ＡＭＣイムノコンジュゲートを検出するために使用され得る。
【０３１０】
したがって、例えば、一部の実施形態では、ａ）ＡＦＰペプチドおよびＭＨＣクラスＩタンパク質を含む複合体に特異的に結合する抗ＡＭＣ抗体部分、ならびにｂ）エフェクター分子を含む抗ＡＭＣイムノコンジュゲートが提供される。一部の実施形態では、ＡＦＰペプチドは、ＡＦＰ１５８（配列番号４）である。一部の実施形態では、ＭＨＣクラスＩタンパク質は、ＨＬＡ−Ａ０２である。一部の実施形態では、ＭＨＣクラスＩタンパク質は、ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１である。一部の実施形態では、エフェクター分子は、抗ＡＭＣ抗体部分に共有結合される。一部の実施形態では、エフェクター分子は、例えば、薬物、毒素、放射性同位体、タンパク質、ペプチドおよび核酸からなる群から選択される治療剤である。一部の実施形態では、エフェクター分子は、がん治療剤である。一部の実施形態では、がん治療剤は、化学療法薬である。一部の実施形態では、がん治療剤は、例えば、２１１Ａｔ、１３１Ｉ、１２５Ｉ、９０Ｙ、１８６Ｒｅ、１８８Ｒｅ、１５３Ｓｍ、２１２Ｂｉ、３２Ｐおよび２１２Ｐｂからなる群から選択される、高度に放射活性の原子である。一部の実施形態では、エフェクター分子は、直接的または間接的のいずれかで検出可能なシグナルを生成し得る標識である。一部の実施形態では、標識は、例えば、３Ｈ、１４Ｃ、３２Ｐ、３５Ｓ、１２３Ｉ、１２５Ｉおよび１３１Ｉからなる群から選択される放射性同位体である。一部の実施形態では、抗ＡＭＣ抗体部分は、ｓｃＦｖである。一部の実施形態では、抗ＡＭＣ抗体部分は、ヒト、ヒト化または半合成である。
【０３１１】
一部の実施形態では、ａ）ＡＦＰ１５８ペプチド（配列番号４）およびＨＬＡ−Ａ＊０２：０１を含む複合体に特異的に結合する抗ＡＭＣ抗体部分、ならびにｂ）エフェクター分子を含む抗ＡＭＣイムノコンジュゲートが提供される。一部の実施形態では、エフェクター分子は、抗ＡＭＣ抗体部分に共有結合される。一部の実施形態では、エフェクター分子は、例えば、薬物、毒素、放射性同位体、タンパク質、ペプチドおよび核酸からなる群から選択される治療剤である。一部の実施形態では、エフェクター分子は、がん治療剤である。一部の実施形態では、がん治療剤は、化学療法薬である。一部の実施形態では、がん治療剤は、例えば、２１１Ａｔ、１３１Ｉ、１２５Ｉ、９０Ｙ、１８６Ｒｅ、１８８Ｒｅ、１５３Ｓｍ、２１２Ｂｉ、３２Ｐおよび２１２Ｐｂからなる群から選択される、高度に放射活性の原子である。一部の実施形態では、エフェクター分子は、直接的または間接的のいずれかで検出可能なシグナルを生成し得る標識である。一部の実施形態では、標識は、例えば、３Ｈ、１４Ｃ、３２Ｐ、３５Ｓ、１２３Ｉ、１２５Ｉおよび１３１Ｉからなる群から選択される放射性同位体である。一部の実施形態では、抗ＡＭＣ抗体部分は、ｓｃＦｖである。一部の実施形態では、抗ＡＭＣ抗体部分は、ヒト、ヒト化または半合成である。
【０３１２】
一部の実施形態では、ａ）ＡＦＰペプチドおよびＭＨＣクラスＩタンパク質を含む複合体に特異的に結合する抗ＡＭＣ抗体部分であって、ｉ）Ｇ−Ｆ／Ｙ−Ｓ／Ｔ−Ｆ−Ｄ／Ｓ／Ｔ−Ｄ／Ｎ／Ｓ−Ｙ／Ａ−Ａ／Ｇ／Ｗ（配列番号８７）のアミノ酸配列を含むＨＣ−ＣＤＲ１、または最大で約３（例えば、約１、２または３のいずれか）アミノ酸の置換を含むそのバリアント、Ｉ／Ｓ−Ｋ／Ｓ−Ｘ−Ｈ／Ｙ−Ｘ−Ｇ−Ｘ−Ｔ（配列番号８８）のアミノ酸配列を含むＨＣ−ＣＤＲ２、または最大で約３（例えば、約１、２または３のいずれか）アミノ酸の置換を含むそのバリアント、およびＡ／Ｇ−Ｘ−Ｗ／Ｙ−Ｙ−Ｘ−Ｘ−Ｘ−Ｆ／Ｙ−Ｄ（配列番号８９）のアミノ酸配列を含むＨＣ−ＣＤＲ３、または最大で約３（例えば、約１、２または３のいずれか）アミノ酸の置換を含むそのバリアントを含む重鎖可変ドメイン配列；ならびにｉｉ）Ｓ／Ｔ−Ｇ／Ｓ−Ｄ／Ｎ−Ｉ／Ｖ−Ａ／Ｇ−Ａ／Ｓ／Ｖ−Ｘ−Ｈ／Ｙ（配列番号１２０）のアミノ酸配列を含むＬＣ−ＣＤＲ１、または最大で約３（例えば、約１、２または３のいずれか）アミノ酸の置換を含むそのバリアント、およびＱ−Ｓ／Ｔ−Ｙ／Ｗ−Ｄ／Ｔ−Ｓ／Ｔ−Ａ／Ｓ（配列番号１２１）のアミノ酸配列を含むＬＣ−ＣＤＲ３、または最大で約３（例えば、約１、２または３のいずれか）アミノ酸の置換を含むそのバリアントを含む軽鎖可変ドメインを含み；Ｘは任意のアミノ酸であり得る、抗ＡＭＣ抗体部分、ならびにｂ）エフェクター分子を含む抗ＡＭＣイムノコンジュゲートが提供される。
【０３１３】
一部の実施形態では、ａ）ＡＦＰペプチドおよびＭＨＣクラスＩタンパク質を含む複合体に特異的に結合する抗ＡＭＣ抗体部分であって、ｉ）Ｇ−Ｆ／Ｙ−Ｓ／Ｔ−Ｆ−Ｄ／Ｓ／Ｔ−Ｄ／Ｎ／Ｓ−Ｙ／Ａ−Ａ／Ｇ／Ｗ（配列番号８７）のアミノ酸配列を含むＨＣ−ＣＤＲ１、Ｉ／Ｓ−Ｋ／Ｓ−Ｘ−Ｈ／Ｙ−Ｘ−Ｇ−Ｘ−Ｔ（配列番号８８）のアミノ酸配列を含むＨＣ−ＣＤＲ２、およびＡ／Ｇ−Ｘ−Ｗ／Ｙ−Ｙ−Ｘ−Ｘ−Ｘ−Ｆ／Ｙ−Ｄ（配列番号８９）のアミノ酸配列を含むＨＣ−ＣＤＲ３を含む重鎖可変ドメイン配列；ならびにｉｉ）Ｓ／Ｔ−Ｇ／Ｓ−Ｄ／Ｎ−Ｉ／Ｖ−Ａ／Ｇ−Ａ／Ｓ／Ｖ−Ｘ−Ｈ／Ｙ（配列番号１２０）のアミノ酸配列を含むＬＣ−ＣＤＲ１、およびＱ−Ｓ／Ｔ−Ｙ／Ｗ−Ｄ／Ｔ−Ｓ／Ｔ−Ａ／Ｓ（配列番号１２１）のアミノ酸配列を含むＬＣ−ＣＤＲ３を含む軽鎖可変ドメインを含み；Ｘは任意のアミノ酸であり得る、抗ＡＭＣ抗体部分、ならびにｂ）エフェクター分子を含む抗ＡＭＣイムノコンジュゲートが提供される。
【０３１４】
一部の実施形態では、ａ）ＡＦＰペプチドおよびＭＨＣクラスＩタンパク質を含む複合体に特異的に結合する抗ＡＭＣ抗体部分であって、ｉ）配列番号５７〜６６のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＨＣ−ＣＤＲ１、または最大で約５（例えば、約１、２、３、４または５のいずれか）アミノ酸の置換を含むそのバリアント、配列番号６７〜７６のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＨＣ−ＣＤＲ２、または最大で約５（例えば、約１、２、３、４または５のいずれか）アミノ酸の置換を含むそのバリアント、および配列番号７７〜８６のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＨＣ−ＣＤＲ３、または最大で約５（例えば、約１、２、３、４または５のいずれか）アミノ酸の置換を含むそのバリアントを含む重鎖可変ドメイン；ならびにｉｉ）配列番号９０〜９９のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＬＣ−ＣＤＲ１、または最大で約５（例えば、約１、２、３、４または５のいずれか）アミノ酸の置換を含むそのバリアント、配列番号１００〜１０９のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＬＣ−ＣＤＲ２、または最大で約３（例えば、約１、２または３のいずれか）アミノ酸の置換を含むそのバリアント、および配列番号１１０〜１１９のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＬＣ−ＣＤＲ３、または最大で約５（例えば、約１、２、３、４または５のいずれか）アミノ酸の置換を含むそのバリアントを含む軽鎖可変ドメインを含む抗ＡＭＣ抗体部分、ならびにｂ）エフェクター分子を含む抗ＡＭＣイムノコンジュゲートが提供される。
【０３１５】
一部の実施形態では、ａ）ＡＦＰペプチドおよびＭＨＣクラスＩタンパク質を含む複合体に特異的に結合する抗ＡＭＣ抗体部分であって、ｉ）配列番号５７〜６６のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＨＣ−ＣＤＲ１；配列番号６７〜７６のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＨＣ−ＣＤＲ２；および配列番号７７〜８６のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＨＣ−ＣＤＲ３を含む重鎖可変ドメイン配列；またはＨＣ−ＣＤＲ配列中に最大で約５（例えば、約１、２、３、４または５のいずれか）アミノ酸の置換を含むそのバリアント；ならびにｉｉ）配列番号９０〜９９のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＬＣ−ＣＤＲ１；配列番号１００〜１０９のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＬＣ−ＣＤＲ２；および配列番号１１０〜１１９のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＬＣ−ＣＤＲ３を含む軽鎖可変ドメイン配列；またはＬＣ−ＣＤＲ配列中に最大で約５（例えば、約１、２、３、４または５のいずれか）アミノ酸の置換を含むそのバリアントを含む抗ＡＭＣ抗体部分、ならびにｂ）エフェクター分子を含む抗ＡＭＣイムノコンジュゲートが提供される。
【０３１６】
一部の実施形態では、ａ）ＡＦＰペプチドおよびＭＨＣクラスＩタンパク質を含む複合体に特異的に結合する抗ＡＭＣ抗体部分であって、ｉ）配列番号５７〜６６のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＨＣ−ＣＤＲ１；配列番号６７〜７６のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＨＣ−ＣＤＲ２；および配列番号７７〜８６のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＨＣ−ＣＤＲ３を含む重鎖可変ドメイン配列；ならびにｉｉ）配列番号９０〜９９のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＬＣ−ＣＤＲ１；配列番号１００〜１０９のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＬＣ−ＣＤＲ２；および配列番号１１０〜１１９のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＬＣ−ＣＤＲ３を含む軽鎖可変ドメイン配列を含む抗ＡＭＣ抗体部分、ならびにｂ）エフェクター分子を含む抗ＡＭＣイムノコンジュゲートが提供される。
【０３１７】
一部の実施形態では、ａ）ＡＦＰペプチドおよびＭＨＣクラスＩタンパク質を含む複合体に特異的に結合する抗ＡＭＣ抗体部分であって、配列番号１７〜２６のいずれか１つのアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン、または少なくとも約９５％（例えば、少なくとも約９６％、９７％、９８％または９９％のいずれか）の配列同一性を有するそのバリアント、および配列番号２７〜３６のいずれか１つのアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン、または少なくとも約９５％（例えば、少なくとも約９６％、９７％、９８％または９９％のいずれか）の配列同一性を有するそのバリアントを含む抗ＡＭＣ抗体部分、ならびにｂ）エフェクター分子を含む抗ＡＭＣイムノコンジュゲートが提供される。
【０３１８】
一部の実施形態では、ａ）ＡＦＰペプチドおよびＭＨＣクラスＩタンパク質を含む複合体に特異的に結合する抗ＡＭＣ抗体部分であって、配列番号１７〜２６のいずれか１つのアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインおよび配列番号２７〜３６のいずれか１つのアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを含む抗ＡＭＣ抗体部分、ｂ）エフェクター分子を含む抗ＡＭＣイムノコンジュゲートが提供される。
【０３１９】
核酸
抗ＡＭＣ構築物または抗ＡＭＣ抗体部分をコードする核酸分子もまた企図される。一部の実施形態では、全長抗ＡＭＣ抗体をコードする核酸（または核酸のセット）が提供される。一部の実施形態では、多特異的抗ＡＭＣ分子（例えば、多特異的抗ＡＭＣ抗体、二重特異的抗ＡＭＣ抗体または二重特異的Ｔ細胞エンゲージャー抗ＡＭＣ抗体）またはそのポリペプチドの一部分（ｐｏｌｙｐｅｐｔｉｄｅ  ｐｏｒｔｉｏｎ）をコードする核酸（または核酸のセット）が提供される。一部の実施形態では、抗ＡＭＣ  ＣＡＲをコードする核酸（または核酸のセット）が提供される。一部の実施形態では、抗ＡＭＣイムノコンジュゲートまたはそのポリペプチドの一部分をコードする核酸（または核酸のセット）が提供される。
【０３２０】
本出願は、これらの核酸配列に対するバリアントもまた含む。例えば、バリアントには、少なくとも中程度にストリンジェントなハイブリダイゼーション条件下で本出願の抗ＡＭＣ構築物または抗ＡＭＣ抗体部分をコードする核酸配列にハイブリダイズするヌクレオチド配列が含まれる。
【０３２１】
本発明は、本発明の核酸が挿入されたベクターもまた提供する。
【０３２２】
簡潔にまとめると、抗ＡＭＣ構築物またはそのポリペプチドの一部分をコードする天然または合成の核酸による抗ＡＭＣ構築物（例えば、抗ＡＭＣ  ＣＡＲ）またはそのポリペプチドの一部分の発現は、その核酸が、例えば、プロモーター（例えば、リンパ球特異的プロモーター）および３’非翻訳領域（ＵＴＲ）を含む５’および３’調節エレメントに作動可能に連結するように、適切な発現ベクター中に核酸を挿入することによって達成され得る。ベクターは、真核生物宿主細胞における複製および組込みに適切であり得る。典型的なクローニングベクターおよび発現ベクターは、転写ターミネーターおよび翻訳ターミネーター、開始配列、ならびに所望の核酸配列の発現の調節に有用なプロモーターを含む。
【０３２３】
本発明の核酸はまた、標準的な遺伝子送達プロトコールを使用して、核酸免疫および遺伝子治療のために使用され得る。遺伝子送達のための方法は、当該分野で公知である。例えば、それらの全体が参照によって本明細書に組み込まれる米国特許第５，３９９，３４６号、同第５，５８０，８５９号、同第５，５８９，４６６号を参照のこと。一部の実施形態では、本発明は、遺伝子治療ベクターを提供する。
【０３２４】
核酸は、いくつかの型のベクター中にクローニングされ得る。例えば、核酸は、プラスミド、ファージミド、ファージ誘導体、動物ウイルスおよびコスミドが含まれるがこれらに限定されないベクター中にクローニングされ得る。特に目的とするベクターには、発現ベクター、複製ベクター、プローブ生成ベクターおよび配列決定ベクターが含まれる。
【０３２５】
さらに、発現ベクターは、ウイルスベクターの形態で細胞に提供され得る。ウイルスベクターテクノロジーは、当該分野で周知であり、例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋら（２００１年、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：  Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ、Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ）中、ならびに他のウイルス学および分子生物学のマニュアル中に記載されている。ベクターとして有用なウイルスには、レトロウイルス、アデノウイルス、アデノ随伴ウイルス、ヘルペスウイルスおよびレンチウイルスが含まれるがこれらに限定されない。一般に、適切なベクターは、少なくとも１種の生物において機能的な複製起点、プロモーター配列、簡便な制限エンドヌクレアーゼ部位、および１または複数の選択可能なマーカーを含む（例えば、ＷＯ０１／９６５８４；ＷＯ０１／２９０５８；および米国特許第６，３２６，１９３号を参照のこと）。
【０３２６】
いくつかのウイルスベースの系が、哺乳動物細胞中への遺伝子移入のために開発されている。例えば、レトロウイルスは、遺伝子送達系のための簡便なプラットフォームを提供する。選択された遺伝子は、当該分野で公知の技術を使用して、ベクター中に挿入され得、レトロウイルス粒子中にパッケージングされ得る。次いで、組換えウイルスは、単離され得、ｉｎ  ｖｉｖｏまたはｅｘ  ｖｉｖｏのいずれかで、対象の細胞に送達され得る。いくつかのレトロウイルス系が、当該分野で公知である。一部の実施形態では、アデノウイルスベクターが使用される。いくつかのアデノウイルスベクターが、当該分野で公知である。一部の実施形態では、レンチウイルスベクターが使用される。レンチウイルスなどのレトロウイルスに由来するベクターは、導入遺伝子の長期の安定な組込みおよび娘細胞におけるその伝播を可能にするので、長期遺伝子移入を達成するのに適切なツールである。レンチウイルスベクターは、肝細胞などの非増殖性細胞を形質導入できるという点で、マウス白血病ウイルスなどのオンコ−レトロウイルス（ｏｎｃｏ−ｒｅｔｒｏｖｉｒｕｓ）に由来するベクターを越えるさらなる利点を有する。これらは、低い免疫原性のさらなる利点もまた有する。
【０３２７】
さらなるプロモーターエレメント、例えば、エンハンサーは、転写開始の頻度を調節する。典型的には、これらは、開始部位の３０〜１１０ｂｐ上流の領域中に位置するが、いくつかのプロモーターは、開始部位の下流にも機能的エレメントを含むことが最近示されている。プロモーターエレメント間のスペーシングは、エレメントが互いに対して反転されるまたは移動される場合にプロモーター機能が保存されるように、しばしば柔軟である。チミジンキナーゼ（ｔｋ）プロモーターでは、プロモーターエレメント間のスペーシングは、活性が減退し始める前に、５０ｂｐ離れて増加され得る。
【０３２８】
適切なプロモーターの一例は、最初期サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）プロモーター配列である。このプロモーター配列は、それに作用的にに連結した任意のポリヌクレオチド配列の高いレベルの発現を駆動することが可能な強い構成的プロモーター配列である。適切なプロモーターの別の例は、伸長成長因子（Ｅｌｏｎｇａｔｉｏｎ  Ｇｒｏｗｔｈ  Ｆａｃｔｏｒ）−１α（ＥＦ−１α）である。しかし、サルウイルス４０（ＳＶ４０）初期プロモーター、マウス乳癌ウイルス（ＭＭＴＶ）、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）の長い末端反復（ＬＴＲ）プロモーター、ＭｏＭｕＬＶプロモーター、トリ白血病ウイルスプロモーター、エプスタイン・バーウイルス最初期プロモーター、ラウス肉腫ウイルスプロモーター、ならびに、これらに限定されないが、アクチンプロモーター、ミオシンプロモーター、ヘモグロビンプロモーターおよびクレアチンキナーゼプロモーターなどのヒト遺伝子プロモーターが含まれるがこれらに限定されない、他の構成的プロモーター配列もまた使用され得る。さらに、本発明は、構成的プロモーターの使用に限定されるべきではない。誘導性プロモーターもまた、本発明の一部として企図される。誘導性プロモーターの使用は、かかる発現が所望される場合には作用的に連結したポリヌクレオチド配列の発現のスイッチをオンにし、または発現が所望されない場合には発現のスイッチをオフにすることが可能な分子スイッチを提供する。誘導性プロモーターの例には、メタロチオネイン（ｍｅｔａｌｌｏｔｈｉｏｎｉｎｅ）プロモーター、グルココルチコイドプロモーター、プロゲステロンプロモーターおよびテトラサイクリンプロモーターが含まれるがこれらに限定されない。
【０３２９】
ポリペプチドまたはその一部分の発現を評価するために、細胞中に導入される発現ベクターは、ウイルスベクターを介してトランスフェクトまたは感染されることが求められる細胞の集団からの発現細胞の同定および選択を促進するために、選択可能なマーカー遺伝子もしくはレポーター遺伝子のいずれかまたはそれら両方もまた含み得る。他の態様では、選択可能なマーカーは、ＤＮＡの別々の小片上に保有され得、共トランスフェクション手順において使用され得る。選択可能なマーカーおよびレポーター遺伝子の両方には、宿主細胞における発現を可能にする適切な調節配列が隣接し得る。有用な選択可能なマーカーには、例えば、抗生物質耐性遺伝子、例えばｎｅｏなどが含まれる。
【０３３０】
レポーター遺伝子は、潜在的にトランスフェクトされた細胞を同定するため、および調節配列の機能性を評価するために使用される。一般に、レポーター遺伝子は、レシピエント生物または組織中に存在することもそれらによって発現されることもなく、ある容易に検出可能な特性、例えば、酵素活性によってその発現が明らかにされるポリペプチドをコードする、遺伝子である。レポーター遺伝子の発現は、ＤＮＡがレシピエント細胞中に導入された後の適切な時点でアッセイされる。適切なレポーター遺伝子には、ルシフェラーゼ、β−ガラクトシダーゼ、クロラムフェニコールアセチルトランスフェラーゼ、分泌型アルカリホスファターゼまたは緑色蛍光タンパク質遺伝子をコードする遺伝子が含まれ得る（例えば、Ｕｉ−Ｔｅｌら、２０００年  ＦＥＢＳ  Ｌｅｔｔｅｒｓ  ４７９巻：７９〜８２頁）。適切な発現系は、周知であり、公知の技術を使用して調製され得るまたは商業的に取得され得る。一般に、レポーター遺伝子の最も高いレベルの発現を示す最小の５’隣接領域を有する構築物が、プロモーターとして同定される。かかるプロモーター領域は、レポーター遺伝子に連結され得、プロモーター駆動性の転写をモジュレートする能力について薬剤を評価するために使用され得る。
【０３３１】
遺伝子を細胞中に導入し発現させる方法は、当該分野で公知である。発現ベクターに関して、ベクターは、当該分野の任意の方法によって、宿主細胞、例えば、哺乳動物、細菌、酵母または昆虫の細胞中に容易に導入され得る。例えば、発現ベクターは、物理的、化学的または生物学的手段によって、宿主細胞中に移入され得る。
【０３３２】
ポリヌクレオチドを宿主細胞中に導入するための物理的方法には、リン酸カルシウム沈殿、リポフェクション、微粒子銃、マイクロインジェクション、エレクトロポレーションなどが含まれる。ベクターおよび／または外因性核酸を含む細胞を産生するための方法は、当該分野で周知である。例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋら（２００１年、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：  Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ、Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ）を参照のこと。一部の実施形態では、ポリヌクレオチドの宿主細胞中への導入は、リン酸カルシウムトランスフェクションによって実施される。
【０３３３】
目的のポリヌクレオチドを宿主細胞中に導入するための生物学的方法には、ＤＮＡベクターおよびＲＮＡベクターの使用が含まれる。ウイルスベクター、特にレトロウイルスベクターは、哺乳動物、例えば、ヒト細胞中に遺伝子を挿入する、最も広く使用される方法になっている。他のウイルスベクターは、レンチウイルス、ポックスウイルス、単純ヘルペスウイルス１、アデノウイルスおよびアデノ随伴ウイルスなどに由来し得る。例えば、米国特許第５，３５０，６７４号および同第５，５８５，３６２号を参照のこと。
【０３３４】
ポリヌクレオチドを宿主細胞中に導入するための化学的手段には、コロイド分散系、例えば、高分子複合体、ナノカプセル、ミクロスフェア、ビーズ、ならびに水中油エマルジョン、ミセル、混合ミセルおよびリポソームを含む脂質ベースの系が含まれる。ｉｎ  ｖｉｔｒｏおよびｉｎ  ｖｉｖｏで送達ビヒクルとして使用するための例示的なコロイド系は、リポソーム（例えば、人工膜小胞）である。
【０３３５】
非ウイルス送達系が利用される場合、例示的な送達ビヒクルは、リポソームである。脂質製剤の使用が、核酸の宿主細胞中への導入（ｉｎ  ｖｉｔｒｏ、ｅｘ  ｖｉｖｏまたはｉｎ  ｖｉｖｏ）のために企図される。別の態様では、核酸は、脂質と会合し得る。脂質と会合した核酸は、リポソームの水性内部中に封入され得、リポソームの脂質二重層内に散在され得、リポソームおよびオリゴヌクレオチドの両方と結合する連結分子を介してリポソームに結合され得、リポソーム中に捕捉され得、リポソームと複合体形成され得、脂質を含む溶液中に分散され得、脂質と混合され得、脂質と組み合わされ得、脂質中に懸濁物として含まれ得、ミセルと共に含まれもしくはミセルと複合体形成され得、または脂質と他の方法で会合し得る。脂質、脂質／ＤＮＡまたは脂質／発現ベクター会合組成物は、溶液中の任意の特定の構造に限定されない。例えば、これら組成物は、二重層構造中に、ミセルとして、または「崩壊した」構造で、存在し得る。これらはまた、溶液中に単に散在して、サイズまたは形状が均一ではない凝集体をおそらくは形成し得る。脂質は、天然に存在する脂質または合成脂質であり得る脂肪性物質である。例えば、脂質には、細胞質中に天然に存在する脂肪滴、ならびに長鎖脂肪族炭化水素ならびにその誘導体、例えば、脂肪酸、アルコール、アミン、アミノアルコールおよびアルデヒドを含む化合物のクラスが含まれる。
【０３３６】
外因性核酸を宿主細胞中に導入するためまたは細胞を本発明の阻害剤に他の方法で曝露させるために使用される方法に関わらず、宿主細胞中の組換えＤＮＡ配列の存在を確認するために、種々のアッセイが実施され得る。かかるアッセイには、例えば、サザンおよびノーザンブロッティング、ＲＴ−ＰＣＲおよびＰＣＲなどの、当業者に周知の「分子生物学的」アッセイ；例えば、免疫学的手段（ＥＬＩＳＡおよびウエスタンブロット）によるまたは本発明の範囲内に入る薬剤を同定するための本明細書に記載されるアッセイによる、特定のペプチドの存在または非存在を検出するなどの「生化学的」アッセイが含まれる。
【０３３７】
ＡＦＰおよびＭＨＣクラスＩタンパク質
アルファ−フェトプロテイン（ＡＦＰ、α−フェトプロテイン；アルファ−１−フェトプロテイン、アルファ−フェトグロブリン（ａｌｐｈａ−ｆｅｔｏｇｌｏｂｕｌｉｎ）またはアルファ胎児タンパク質とも呼ぶ）は、ヒトにおいてＡＦＰ遺伝子によってコードされる５９１アミノ酸の糖タンパク質である。ＡＦＰ遺伝子は、第４染色体のｑ腕（４ｑ２５）上に位置する。ＡＦＰは、胎児発生の間に卵黄嚢および肝臓によって産生される主要な血漿タンパク質である。ＡＦＰは、血清アルブミンの胎児形態であると考えられる。ＡＦＰは、銅、ニッケル、脂肪酸およびビリルビンに結合し、モノマー、ダイマーおよびトリマー形態で見出される。ＡＦＰは、ヒト胎児において見出される最も豊富な血漿タンパク質である。血漿レベルは、出生後に急速に減少するが、第１三半期の最後に始まって出生前に減少し始める。正常な成体レベルは、８〜１２カ月齢までに通常は達成される。成体ヒトにおけるＡＦＰの機能は未知である；しかし、げっ歯類では、ＡＦＰは、エストラジオールに結合して、胎盤を横切った胎児へのこのホルモンの輸送を防止する。ＡＦＰの主な機能は、雌性胎児の男性化を防止することである。ヒトＡＦＰはエストロゲンを結合しないので、ヒトにおけるその機能はあまり明らかではない。
【０３３８】
ヒトにおけるＡＦＰが上昇する疾患の一部には、例えば、肝細胞癌／ヘパトーマ、胚細胞腫瘍、転移性肝臓がん、臍ヘルニア、神経管欠損、卵黄嚢腫瘍および毛細血管拡張性運動失調症が含まれる。
【０３３９】
ＭＨＣクラスＩタンパク質は、主要組織適合複合体（ＭＨＣ）分子の２つの主要なクラスのうちの１つであり（他方は、ＭＨＣクラスＩＩである）、身体のほぼ全ての有核細胞に見出される。それらの機能は、細胞内由来のタンパク質の断片をＴ細胞にディスプレイすることである；健康な細胞は無視されるが、外来タンパク質を含む細胞は、免疫系によって攻撃される。ＭＨＣクラスＩタンパク質は、細胞質ゾルタンパク質に由来するペプチドを提示するので、ＭＨＣクラスＩ提示の経路は、細胞質ゾル経路または内因性経路と呼ばれる場合が多い。クラスＩ  ＭＨＣ分子は、プロテアソームによる細胞質ゾルタンパク質の分解から主に生成されるペプチドを結合する。次いで、ＭＨＣ  Ｉ：ペプチド複合体は、細胞の原形質膜中に挿入される。ペプチドは、クラスＩ  ＭＨＣ分子の細胞外部分に結合される。したがって、クラスＩ  ＭＨＣの機能は、細胞内タンパク質を細胞傷害性Ｔ細胞（ＣＴＬ）にディスプレイすることである。しかし、クラスＩ  ＭＨＣは、交差提示として公知のプロセスにおいて、外因性タンパク質から生成されたペプチドもまた提示し得る。
【０３４０】
ＭＨＣクラスＩタンパク質は、２つのポリペプチド鎖、αおよびβ２−ミクログロブリン（β２Ｍ）からなる。これら２つの鎖は、ｂ２ｍとα３ドメインとの相互作用を介して非共有結合的に連結される。α鎖だけが多型性であり、ＨＬＡ遺伝子によってコードされるが、ｂ２ｍサブユニットは多型性ではなく、β−２ミクログロブリン遺伝子によってコードされる。α３ドメインは、原形質膜に及んでおり、Ｔ細胞のＣＤ８共受容体と相互作用する。α３−ＣＤ８相互作用は、ＭＨＣ  Ｉ分子を適所に保持し、細胞傷害性Ｔ細胞の表面上のＴ細胞受容体（ＴＣＲ）は、そのα１−α２ヘテロダイマーリガンドを結合し、カップリングされたペプチドを抗原性についてチェックする。α１およびα２ドメインは、ペプチドが結合するための溝を形成するように折り畳まる。ＭＨＣクラスＩタンパク質は、８〜１０アミノ酸長であるペプチドを結合する。
【０３４１】
ヒト白血球抗原（ＨＬＡ）遺伝子は、ＭＨＣ遺伝子のヒトバージョンである。ヒトにおける３つの主要なＭＨＣクラスＩタンパク質は、ＨＬＡ−Ａ、ＨＬＡ−ＢおよびＨＬＡ−Ｃであり、３つの非主要なＭＨＣクラスＩタンパク質は、ＨＬＡ−Ｅ、ＨＬＡ−ＦおよびＨＬＡ−Ｇである。ＨＬＡ−Ａは、ヒトにおける遺伝子の中で、最も速く進化するコード配列にランク付けされている。２０１３年１２月現在、１７４０の活性タンパク質および１１７のヌルタンパク質をコードする、２４３２の公知のＨＬＡ−Ａ対立遺伝子が存在した。ＨＬＡ−Ａ遺伝子は、第６染色体の短腕上に位置し、ＨＬＡ−Ａのより大きいα鎖構成要素（ｃｏｎｓｔｉｔｕｅｎｔ）をコードする。ＨＬＡ−Ａ  α鎖のバリエーションは、ＨＬＡ機能にとって重要である。このバリエーションは、集団中の遺伝子多様性を促進する。各ＨＬＡは、ある特定の構造のペプチドに対して異なる親和性を有するので、より多様なＨＬＡは、細胞表面上に「提示」されるより多様な抗原を意味し、集団のサブセットが任意の所与の外来侵入者に対して抵抗性である可能性（ｌｉｋｅｌｉｈｏｏｄ）を高める。これは、単一の病原体がヒト集団全体を一掃する能力を有する可能性を減少させる。各個体は、彼らの親の各々に由来する、最大で２つの型のＨＬＡ−Ａを発現し得る。一部の個体は、両親から同じＨＬＡ−Ａを受け継ぎ、それらの個々のＨＬＡ多様性を減少させる；しかし、個体の大部分は、ＨＬＡ−Ａの２つの異なるコピーを受け取る。この同じパターンは、全てのＨＬＡ群に当てはまる。言い換えると、ヒトは、２４３２の公知のＨＬＡ−Ａ対立遺伝子のうち１つまたは２つのいずれかのみを発現し得る。
【０３４２】
全ての対立遺伝子は、少なくとも４桁の分類、例えば、ＨＬＡ−Ａ＊０２：１２を受ける。Ａは、対立遺伝子が属するＨＬＡ遺伝子を示す。多くのＨＬＡ−Ａ対立遺伝子が存在し、その結果、血清型による分類は、カテゴリー化を単純化する。桁の次の対は、この割り当てを示す。例えば、ＨＬＡ−Ａ＊０２：０２、ＨＬＡ−Ａ＊０２：０４およびＨＬＡ−Ａ＊０２：３２４は全て、Ａ２血清型（＊０２接頭辞によって指定される）のメンバーである。この群は、ＨＬＡ適合性を担う主要な因子である。これの後の全ての数字は、血清型決定によっては決定できず、遺伝子配列決定を介して指定される。桁の第２のセットは、どのＨＬＡタンパク質が産生されるかを示す。これらは、発見の順に割り当てられ、２０１３年１２月現在、４５６の異なるＨＬＡ−Ａ０２タンパク質が公知である（ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１〜ＨＬＡ−Ａ＊０２：４５６の名称が割り当てられている）。最も短い可能なＨＬＡ名は、これらの詳細の両方を含む。それを超えた各拡張は、タンパク質を変化させてもさせなくてもよいヌクレオチド変化を示す。
【０３４３】
一部の実施形態では、抗ＡＭＣ抗体部分は、ＡＦＰペプチドおよびＭＨＣクラスＩタンパク質を含む複合体と特異的に結合し、ＭＨＣクラスＩタンパク質は、ＨＬＡ−Ａ、ＨＬＡ−Ｂ、ＨＬＡ−Ｃ、ＨＬＡ−Ｅ、ＨＬＡ−ＦまたはＨＬＡ−Ｇである。一部の実施形態では、ＭＨＣクラスＩタンパク質は、ＨＬＡ−Ａ、ＨＬＡ−ＢまたはＨＬＡ−Ｃである。一部の実施形態では、ＭＨＣクラスＩタンパク質は、ＨＬＡ−Ａである。一部の実施形態では、ＭＨＣクラスＩタンパク質は、ＨＬＡ−Ｂである。一部の実施形態では、ＭＨＣクラスＩタンパク質は、ＨＬＡ−Ｃである。一部の実施形態では、ＭＨＣクラスＩタンパク質は、ＨＬＡ−Ａ０１、ＨＬＡ−Ａ０２、ＨＬＡ−Ａ０３、ＨＬＡ−Ａ０９、ＨＬＡ−Ａ１０、ＨＬＡ−Ａ１１、ＨＬＡ−Ａ１９、ＨＬＡ−Ａ２３、ＨＬＡ−Ａ２４、ＨＬＡ−Ａ２５、ＨＬＡ−Ａ２６、ＨＬＡ−Ａ２８、ＨＬＡ−Ａ２９、ＨＬＡ−Ａ３０、ＨＬＡ−Ａ３１、ＨＬＡ−Ａ３２、ＨＬＡ−Ａ３３、ＨＬＡ−Ａ３４、ＨＬＡ−Ａ３６、ＨＬＡ−Ａ４３、ＨＬＡ−Ａ６６、ＨＬＡ−Ａ６８、ＨＬＡ−Ａ６９、ＨＬＡ−Ａ７４またはＨＬＡ−Ａ８０である。一部の実施形態では、ＭＨＣクラスＩタンパク質は、ＨＬＡ−Ａ０２である。一部の実施形態では、ＭＨＣクラスＩタンパク質は、ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１〜５５５のいずれか１つ、例えば、ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１、ＨＬＡ−Ａ＊０２：０２、ＨＬＡ−Ａ＊０２：０３、ＨＬＡ−Ａ＊０２：０４、ＨＬＡ−Ａ＊０２：０５、ＨＬＡ−Ａ＊０２：０６、ＨＬＡ−Ａ＊０２：０７、ＨＬＡ−Ａ＊０２：０８、ＨＬＡ−Ａ＊０２：０９、ＨＬＡ−Ａ＊０２：１０、ＨＬＡ−Ａ＊０２：１１、ＨＬＡ−Ａ＊０２：１２、ＨＬＡ−Ａ＊０２：１３、ＨＬＡ−Ａ＊０２：１４、ＨＬＡ−Ａ＊０２：１５、ＨＬＡ−Ａ＊０２：１６、ＨＬＡ−Ａ＊０２：１７、ＨＬＡ−Ａ＊０２：１８、ＨＬＡ−Ａ＊０２：１９、ＨＬＡ−Ａ＊０２：２０、ＨＬＡ−Ａ＊０２：２１、ＨＬＡ−Ａ＊０２：２２またはＨＬＡ−Ａ＊０２：２４である。一部の実施形態では、ＭＨＣクラスＩタンパク質は、ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１である。ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１は、全ての白色人種の３９〜４６％において発現され、したがって、本発明における使用のためのＭＨＣクラスＩタンパク質の適切な選択を示す。
【０３４４】
抗ＡＭＣ抗体部分を生成することにおける使用に適切なＡＦＰペプチドは、例えば、当業者に公知のコンピューター予測モデルを使用して、ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１結合モチーフならびにプロテアソームおよび免疫−プロテアソーム（ｉｍｍｕｎｅ−ｐｒｏｔｅａｓｏｍｅ）のための切断部位の存在に基づいて、決定され得る。ＭＨＣ結合部位を予測するために、かかるモデルには、ＩＥＤＢ（Ｖｉｔａら、Ｔｈｅ  ｉｍｍｕｎｅ  ｅｐｉｔｏｐｅ  ｄａｔａｂａｓｅ  （ＩＥＤＢ）  ３．０．  Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．  ２０１４年１０月９日．  ｐｉｉ：  ｇｋｕ９３８）、ＰｒｏＰｒｅｄ１（ＳｉｎｇｈおよびＲａｇｈａｖａ、ＰｒｏＰｒｅｄ：  ｐｒｅｄｉｃｔｉｏｎ  ｏｆ  ＨＬＡ−ＤＲ  ｂｉｎｄｉｎｇ  ｓｉｔｅｓ．  ＢＩＯＩＮＦＯＲＭＡＴＩＣＳ  １７巻（１２号）：１２３６〜１２３７頁、２００１年中に、より詳細に記載されている）およびＳＹＦＰＥＩＴＨＩ（Ｓｃｈｕｌｅｒら  ＳＹＦＰＥＩＴＨＩ，  Ｄａｔａｂａｓｅ  ｆｏｒ  Ｓｅａｒｃｈｉｎｇ  ａｎｄ  Ｔ−Ｃｅｌｌ  Ｅｐｉｔｏｐｅ  Ｐｒｅｄｉｃｔｉｏｎ．、Ｉｍｍｕｎｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ、４０９巻（１号）：７５〜９３頁、２００７年を参照のこと）が含まれるがこれらに限定されない。
【０３４５】
適切なペプチドが一旦同定されると、ペプチド合成が、当業者に周知のプロトコールに従って実施され得る。それらの比較的小さいサイズに起因して、本発明のペプチドは、従来のペプチド合成技術に従って、溶液中または固体支持体上で直接合成され得る。種々の自動合成機が市販されており、公知のプロトコールに従って使用され得る。溶液相中でのペプチドの合成は、合成ペプチドの大規模産生のための十分に確立された手順になっており、したがって、本発明のペプチドを調製する適切な代替法である（例えば、Ｊｏｈｎ  Ｍｏｒｒｏｗ  ＳｔｅｗａｒｔおよびＭａｒｔｉｎら  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ａｌｍｅｚ−ｍｅｄｉａｔｅｄ  Ａｍｉｄａｔｉｏｎ  Ｒｅａｃｔｉｏｎｓ  ｔｏ  Ｓｏｌｕｔｉｏｎ  Ｐｈａｓｅ  Ｐｅｐｔｉｄｅ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ、Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ  Ｌｅｔｔｅｒｓ  ３９巻、１５１７〜１５２０頁、１９９８年によるＳｏｌｉｄ  Ｐｈａｓｅ  Ｐｅｐｔｉｄｅ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓを参照のこと）。
【０３４６】
候補ＡＦＰペプチドの結合活性は、抗原提示溝中のペプチドによって安定化される場合にＨＬＡ−Ａの発現を増加させる抗原プロセシング欠損Ｔ２細胞株を使用して試験され得る。Ｔ２細胞を、細胞表面上のＨＬＡ−Ａ発現を安定化するのに十分な時間にわたって候補ペプチドでパルスし、当該分野で公知の任意の方法を使用して、例えば、ＨＬＡ−Ａに特異的な蛍光標識されたモノクローナル抗体（例えば、ＢＢ７．２）による免疫染色とその後の蛍光活性化細胞分取（ＦＡＣＳ）分析とによって、測定し得る。
抗ＡＭＣ抗体および抗ＡＭＣ抗体部分の調製
【０３４７】
一部の実施形態では、抗ＡＭＣ抗体または抗ＡＭＣ抗体部分は、モノクローナル抗体である。モノクローナル抗体は、例えば、ＫｏｈｌｅｒおよびＭｉｌｓｔｅｉｎ、Ｎａｔｕｒｅ、２５６巻：４９５頁（１９７５年）ならびにＳｅｒｇｅｅｖａら、Ｂｌｏｏｄ、１１７巻（１６号）：４２６２〜４２７２頁によって記載されるものなどのハイブリドーマ法を使用して、本明細書および以下の実施例に記載されるファージディスプレイ法を使用して、または組換えＤＮＡ法（例えば、米国特許第４，８１６，５６７号を参照のこと）を使用して、調製され得る。
【０３４８】
ハイブリドーマ法では、ハムスター、マウスまたは他の適切な宿主動物が、典型的には、免疫剤に特異的に結合する抗体を産生するまたは産生することが可能なリンパ球を惹起するために、免疫剤で免疫される。あるいは、リンパ球は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏで免疫され得る。免疫剤には、目的のタンパク質のポリペプチドもしくは融合タンパク質、または少なくとも２つの分子を含む複合体、例えば、ＡＦＰペプチドおよびＭＨＣクラスＩタンパク質を含む複合体が含まれ得る。一般に、ヒト起源の細胞が所望される場合、末梢血リンパ球（「ＰＢＬ」）が使用され、または非ヒト哺乳動物供給源が所望される場合、脾臓細胞もしくはリンパ節細胞が使用される。次いで、リンパ球は、ハイブリドーマ細胞を形成するために、ポリエチレングリコールなどの適切な融合剤を使用して、不死化細胞株と融合される。例えば、Ｇｏｄｉｎｇ、Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：  Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ（Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ：  Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ、１９８６年）、５９〜１０３頁を参照のこと。不死化細胞株は通常、形質転換された哺乳動物細胞、特に、げっ歯類、ウシおよびヒト起源の骨髄腫細胞である。通常、ラットまたはマウス骨髄腫細胞株が使用される。ハイブリドーマ細胞は、未融合の不死化細胞の成長または生存を阻害する１または複数の物質を好ましくは含む、適切な培養培地中で培養され得る。例えば、親細胞が酵素ヒポキサンチングアニンホスホリボシルトランスフェラーゼ（ＨＧＰＲＴまたはＨＰＲＴ）を欠く場合、ハイブリドーマ用の培養培地は、典型的には、ＨＧＰＲＴ欠損細胞の成長を防止する、ヒポキサンチン、アミノプテリンおよびチミジンを含む（「ＨＡＴ培地」）。
【０３４９】
一部の実施形態では、不死化細胞株は、効率的に融合し、選択された抗体産生細胞による抗体の安定な高レベル発現を支持し、ＨＡＴ培地などの培地に対して感受性である。一部の実施形態では、不死化細胞株は、例えば、Ｓａｌｋ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ  Ｃｅｌｌ  Ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ  Ｃｅｎｔｅｒ、Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ、ＣａｌｉｆｏｒｎｉａおよびＡｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ、Ｍａｎａｓｓａｓ、Ｖｉｒｇｉｎｉａから取得され得る、マウス骨髄腫株である。ヒト骨髄腫およびマウス−ヒトヘテロ骨髄腫（ｈｅｔｅｒｏｍｙｅｌｏｍａ）細胞株もまた、ヒトモノクローナル抗体の産生について記載されている。Ｋｏｚｂｏｒ、Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．、１３３巻：３００１頁（１９８４年）；Ｂｒｏｄｅｕｒら  Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ  Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ  ａｎｄ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ（Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ，  Ｉｎｃ．：  Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ、１９８７年）５１〜６３頁。
【０３５０】
次いで、ハイブリドーマ細胞が培養される培養培地は、ポリペプチドに対するモノクローナル抗体の存在についてアッセイされ得る。ハイブリドーマ細胞によって産生されたモノクローナル抗体の結合特異性は、免疫沈降によって、またはｉｎ  ｖｉｔｒｏ結合アッセイ、例えば、ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）もしくは酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）によって決定され得る。かかる技術およびアッセイは、当該分野で公知である。モノクローナル抗体の結合親和性は、例えば、ＭｕｎｓｏｎおよびＰｏｌｌａｒｄ、Ａｎａｌ．  Ｂｉｏｃｈｅｍ．、１０７巻：２２０頁（１９８０年）のスキャッチャード分析によって決定され得る。
【０３５１】
所望のハイブリドーマ細胞が同定された後、それらのクローンは、限界希釈手順によってサブクローニングされ得、標準的な方法によって成長され得る。Ｇｏｄｉｎｇ、上記。この目的のために適切な培養培地には、例えば、ダルベッコ改変イーグル培地およびＲＰＭＩ−１６４０培地が含まれる。あるいは、ハイブリドーマ細胞は、哺乳動物において腹水としてｉｎ  ｖｉｖｏで成長され得る。
【０３５２】
サブクローンによって分泌されたモノクローナル抗体は、従来の免疫グロブリン精製手順、例えば、プロテインＡ−Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ、ヒドロキシルアパタイトクロマトグラフィー、ゲル電気泳動、透析またはアフィニティクロマトグラフィーなどによって、培養培地または腹水から単離または精製され得る。
【０３５３】
抗ＡＭＣ抗体または抗体部分は、所望の活性（単数または複数）を有する抗体についてコンビナトリアルライブラリーをスクリーニングすることによっても同定され得る。例えば、ファージディスプレイライブラリーを生成し、所望の結合特徴を有する抗体についてかかるライブラリーをスクリーニングするための種々の方法が、当該分野で公知である。かかる方法は、例えば、Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍら、Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  １７８巻：１〜３７頁（Ｏ’Ｂｒｉｅｎら編、Ｈｕｍａｎ  Ｐｒｅｓｓ、Ｔｏｔｏｗａ、Ｎ．Ｊ．、２００１年）において概説され、例えば、ＭｃＣａｆｆｅｒｔｙら、Ｎａｔｕｒｅ  ３４８巻：５５２〜５５４頁；Ｃｌａｃｋｓｏｎら、Ｎａｔｕｒｅ  ３５２巻：６２４〜６２８頁（１９９１年）；Ｍａｒｋｓら、Ｊ．  Ｍｏｌ．  Ｂｉｏｌ．  ２２２巻：５８１〜５９７頁（１９９２年）；ＭａｒｋｓおよびＢｒａｄｂｕｒｙ、Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  ２４８巻：１６１〜１７５頁（Ｌｏ編、Ｈｕｍａｎ  Ｐｒｅｓｓ、Ｔｏｔｏｗａ、Ｎ．Ｊ．、２００３年）；Ｓｉｄｈｕら、Ｊ．  Ｍｏｌ．  Ｂｉｏｌ．  ３３８巻（２号）：２９９〜３１０頁（２００４年）；Ｌｅｅら、Ｊ．  Ｍｏｌ．  Ｂｉｏｌ．  ３４０巻（５号）：１０７３〜１０９３頁（２００４年）；Ｆｅｌｌｏｕｓｅ、Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ  １０１巻（３４号）：１２４６７〜１２４７２頁（２００４年）；ならびにＬｅｅら、Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ２８４巻（１〜２号）：１１９〜１３２頁（２００４年）においてさらに記載されている。
【０３５４】
ある特定のファージディスプレイ法では、Ｗｉｎｔｅｒら、Ａｎｎ．  Ｒｅｖ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．、１２巻：４３３〜４５５頁（１９９４年）に記載されるように、ＶＨ遺伝子およびＶＬ遺伝子のレパートリーが、ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）によって別々にクローニングされ、ファージライブラリー中にランダムに組み換えられ、これは次いで、抗原結合ファージについてスクリーニングされ得る。ファージは、典型的には、単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）断片またはＦａｂ断片のいずれかとして、抗体断片をディスプレイする。免疫された供給源由来のライブラリーは、ハイブリドーマを構築する必要なしに、免疫原に対する高親和性抗体を提供する。あるいは、Ｇｒｉｆｆｉｔｈｓら、ＥＭＢＯ  Ｊ、１２巻：７２５〜７３４頁（１９９３年）によって記載されるように、いずれの免疫もなしに、広範な非自己抗原およびまた自己抗原に対する抗体の単一の供給源を提供するために、ナイーブレパートリーが、（例えば、ヒトから）クローニングされ得る。最後に、ナイーブライブラリーは、ＨｏｏｇｅｎｂｏｏｍおよびＷｉｎｔｅｒ、Ｊ．  Ｍｏｌ．  Ｂｉｏｌ．、２２７巻：３８１〜３８８頁（１９９２年）に記載されるように、高度に可変性のＣＤＲ３領域をコードし、ｉｎ  ｖｉｔｒｏで再構成を達成するために、再構成されていないＶ遺伝子セグメントを幹細胞からクローニングし、ランダム配列を含むＰＣＲプライマーを使用することによって、合成によっても作製され得る。ヒト抗体ファージライブラリーを記載している特許公報には、例えば、米国特許第５，７５０，３７３号、ならびに米国特許公開第２００５／００７９５７４号、同第２００５／０１１９４５５号、同第２００５／０２６６０００号、同第２００７／０１１７１２６号、同第２００７／０１６０５９８号、同第２００７／０２３７７６４号、同第２００７／０２９２９３６号および同第２００９／０００２３６０号が含まれる。
【０３５５】
抗体またはその抗原結合断片は、ファージディスプレイを使用してＡＦＰペプチドおよびＭＨＣクラスＩタンパク質を含む複合体に特異的な抗体についてライブラリーをスクリーニングして調製され得る。ライブラリーは、少なくとも１×１０９（例えば、少なくとも約１×１０９、２．５×１０９、５×１０９、７．５×１０９、１×１０１０、２．５×１０１０、５×１０１０、７．５×１０１０または１×１０１１のいずれか）の独自のヒト抗体断片の多様性を有するヒトｓｃＦｖファージディスプレイライブラリーであり得る。一部の実施形態では、ライブラリーは、全てのヒト重鎖および軽鎖サブファミリーを包含する、健康なドナー由来のヒトＰＭＢＣおよび脾臓から抽出されたＤＮＡから構築されたナイーブヒトライブラリーである。一部の実施形態では、ライブラリーは、種々の疾患を有する患者、例えば、自己免疫疾患を有する患者、がん患者および感染性疾患を有する患者から単離されたＰＢＭＣから抽出されたＤＮＡから構築されたナイーブヒトライブラリーである。一部の実施形態では、ライブラリーは、半合成ヒトライブラリーであり、ここで、重鎖ＣＤＲ３は、完全にランダム化され、全てのアミノ酸（システインを除く）は、任意の所与の位置において等しく存在する可能性がある（例えば、Ｈｏｅｔ，  Ｒ．Ｍ．ら、Ｎａｔ．  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．  ２３巻（３号）：３４４〜３４８頁、２００５年を参照のこと）。一部の実施形態では、半合成ヒトライブラリーの重鎖ＣＤＲ３は、約５〜約２４（例えば、約５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３または２４のいずれか）アミノ酸の長さを有する。一部の実施形態では、ライブラリーは、非ヒトファージディスプレイライブラリーである。
【０３５６】
高い親和性でＡＭＣに結合するファージクローンは、固体支持体（例えば、溶液パニングについてはビーズまたは細胞パニングについては哺乳動物細胞など）に結合するＡＭＣへのファージの反復性の結合と、その後の非結合ファージの除去および特異的に結合したファージの溶出とによって、選択され得る。溶液パニングの一例では、ＡＭＣは、固体支持体への固定のためにビオチン化され得る。ビオチン化されたＡＭＣは、ファージライブラリーおよび固体支持体、例えば、ストレプトアビジン−結合体化Ｄｙｎａｂｅａｄｓ  Ｍ−２８０と混合され、次いで、ＡＭＣ−ファージ−ビーズ複合体が単離される。次いで、結合したファージクローンが溶出され、発現および精製のために、適切な宿主細胞、例えば、Ｅ．ｃｏｌｉ  ＸＬ１−Ｂｌｕｅを感染させるために使用される。細胞パニングの一例では、ＡＭＣのＡＦＰペプチドが負荷されたＴ２細胞（ＴＡＰ欠損、ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１＋リンパ芽球細胞株）が、ファージライブラリーと混合され、その後、細胞が収集され、結合したクローンが溶出され、発現および精製のために、適切な宿主細胞を感染させるために使用される。パニングは、ＡＭＣに特異的に結合するファージクローンについて富化するために、溶液パニング、細胞パニングまたはそれら両方の組合せのいずれかを用いて、複数（例えば、約２、３、４、５、６またはそれ超のいずれか）ラウンド実施され得る。富化されたファージクローンは、例えばＥＬＩＳＡおよびＦＡＣＳを含む当該分野で公知の任意の方法によって、ＡＭＣへの特異的結合について試験され得る。
【０３５７】
モノクローナル抗体は、米国特許第４，８１６，５６７号に記載されるものなどの組換えＤＮＡ法によっても作製され得る。本発明のモノクローナル抗体をコードするＤＮＡは、従来の手順を使用して（例えば、マウス抗体の重鎖および軽鎖をコードする遺伝子に特異的に結合することが可能なオリゴヌクレオチドプローブを使用することによって）、容易に単離および配列決定され得る。上記ハイブリドーマ細胞または本発明のＡＭＣ特異的ファージクローンは、かかるＤＮＡの供給源として機能し得る。一旦単離されると、ＤＮＡは、発現ベクター中に配置され得、これは次いで、組換え宿主細胞におけるモノクローナル抗体の合成を得るために、宿主細胞、例えば、別段免疫グロブリンタンパク質を産生しない、サルＣＯＳ細胞、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞または骨髄腫細胞中にトランスフェクトされる。ＤＮＡは、例えば、相同な非ヒト配列の代わりに、ヒト重鎖および軽鎖定常ドメインならびに／もしくはフレームワーク領域のコード配列を用いることによって（米国特許第４，８１６，５６７号；Ｍｏｒｒｉｓｏｎら、上記）、または免疫グロブリンコード配列に非免疫グロブリンポリペプチドのコード配列の全てもしくは一部を共有結合で繋げることによっても、改変され得る。かかる非免疫グロブリンポリペプチドは、本発明の抗体の定常ドメインの代わりに使用でき、またはキメラ二価抗体を作り出すために、本発明の抗体の１つの抗原結合部位の可変ドメインの代わりに使用できる。
【０３５８】
抗体は、一価抗体であり得る。一価抗体を調製するための方法は、当該分野で公知である。例えば、１つの方法には、免疫グロブリン軽鎖および改変重鎖の組換え発現が関与する。重鎖は、重鎖架橋を防止するために、一般にＦｃ領域中の任意の点において、トランケートされる。あるいは、架橋を防止するために、関連のシステイン残基が、別のアミノ酸残基で置換され、または欠失される。
【０３５９】
ｉｎ  ｖｉｔｒｏの方法もまた、一価抗体を調製するために適切である。その断片、特にＦａｂ断片を産生するための抗体の消化は、当該分野で公知の任意の方法を使用して達成され得る。
【０３６０】
所望の結合特異性を有する抗体可変ドメイン（抗体−抗原結合部位）は、免疫グロブリン定常ドメイン配列に融合され得る。融合物は、好ましくは、ヒンジ領域、ＣＨ２領域およびＣＨ３領域の少なくとも一部を含む免疫グロブリン重鎖定常ドメインとの融合物である。一部の実施形態では、軽鎖結合に必要な部位を含む第１の重鎖定常領域（ＣＨ１）が、融合物の少なくとも１つ中に存在する。免疫グロブリン重鎖融合物、および所望の場合には免疫グロブリン軽鎖をコードするＤＮＡは、別々の発現ベクター中に挿入され、適切な宿主生物中に共トランスフェクトされる。二重特異的抗体を生成することのさらなる詳細については、例えば、Ｓｕｒｅｓｈら、Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ、１２１巻：２１０頁（１９８６年）を参照のこと。
【０３６１】
ヒト抗体およびヒト化抗体
抗ＡＭＣ抗体または抗体部分は、ヒト化抗体またはヒト抗体であり得る。非ヒト（例えば、マウス）抗体のヒト化形態は、典型的には非ヒト免疫グロブリンに由来する最小配列を含む、キメラ免疫グロブリン、免疫グロブリン鎖、またはそれらの断片（例えば、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、ｓｃＦｖまたは抗体の他の抗原結合サブ配列）である。ヒト化抗体は、レシピエントのＣＤＲ由来の残基が、所望の特異性、親和性および能力を有する非ヒト種（ドナー抗体）、例えば、マウス、ラットまたはウサギのＣＤＲ由来の残基によって置き換えられた、ヒト免疫グロブリン（レシピエント抗体）を含む。一部の例では、ヒト免疫グロブリンのＦｖフレームワーク残基は、対応する非ヒト残基によって置き換えられる。ヒト化抗体は、レシピエント抗体中またはインポートされたＣＤＲもしくはフレームワーク配列中のいずれにも見出されない残基もまた含み得る。一般に、ヒト化抗体は、少なくとも１つ、典型的には２つの可変ドメインの実質的に全てを含み得、ここで、ＣＤＲ領域の全てまたは実質的に全ては、非ヒト免疫グロブリンのものと対応し、ＦＲ領域の全てまたは実質的に全ては、ヒト免疫グロブリンコンセンサス配列のものである。一部の実施形態では、ヒト化抗体は、免疫グロブリン定常領域の少なくとも一部分（Ｆｃ）、典型的にはヒト免疫グロブリンのものを含む。例えば、Ｊｏｎｅｓら、Ｎａｔｕｒｅ、３２１巻：５２２〜５２５頁（１９８６年）；Ｒｉｅｃｈｍａｎｎら、Ｎａｔｕｒｅ、３３２巻：３２３〜３２９頁（１９８８年）；Ｐｒｅｓｔａ、Ｃｕｒｒ．  Ｏｐ．  Ｓｔｒｕｃｔ．  Ｂｉｏｌ．、２巻：５９３〜５９６頁（１９９２年）を参照のこと。
【０３６２】
一般に、ヒト化抗体は、非ヒトである供給源からその中に導入された１または複数のアミノ酸残基を有する。これらの非ヒトアミノ酸残基は、典型的には「インポート」可変ドメインから取られた「インポート」残基と呼ばれる場合が多い。一部の実施形態によれば、ヒト化は、げっ歯類のＣＤＲまたはＣＤＲ配列を、ヒト抗体の対応する配列の代わりに用いることによる、Ｗｉｎｔｅｒおよび共同研究者（Ｊｏｎｅｓら、Ｎａｔｕｒｅ、３２１巻：５２２〜５２５頁（１９８６年）；Ｒｉｅｃｈｍａｎｎら、Ｎａｔｕｒｅ、３３２巻：３２３〜３２７頁（１９８８年）；Ｖｅｒｈｏｅｙｅｎら、Ｓｃｉｅｎｃｅ、２３９巻：１５３４〜１５３６頁（１９８８年））の方法に従って本質的に実施され得る。したがって、かかる「ヒト化」抗体は、インタクトなヒト可変ドメインに実質的に満たないものが、非ヒト種由来の対応する配列によって置換された抗体である（米国特許第４，８１６，５６７号）。実際には、ヒト化抗体は、典型的には、いくつかのＣＤＲ残基およびおそらくはいくつかのＦＲ残基が、げっ歯類抗体中の類似の部位由来の残基によって置換されたヒト抗体である。
【０３６３】
ヒト化の代替法として、ヒト抗体が生成され得る。例えば、免疫の際に、内因性免疫グロブリン産生の非存在下でヒト抗体の完全レパートリーを産生することが可能なトランスジェニック動物（例えば、マウス）を産生することが現在可能である。例えば、キメラおよび生殖系列変異体マウスにおける抗体重鎖連結領域（ＪＨ）遺伝子のホモ接合性欠失が、内因性抗体産生の完全な阻害を生じることが記載されている。かかる生殖系列変異体マウス中へのヒト生殖系列免疫グロブリン遺伝子アレイの移入は、抗原チャレンジの際にヒト抗体の産生を生じる。例えば、Ｊａｋｏｂｏｖｉｔｓら、ＰＮＡＳ  ＵＳＡ、９０巻：２５５１頁（１９９３年）；Ｊａｋｏｂｏｖｉｔｓら、Ｎａｔｕｒｅ、３６２巻：２５５〜２５８頁（１９９３年）；Ｂｒｕｇｇｅｍａｎｎら、Ｙｅａｒ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．、７巻：３３頁（１９９３年）；米国特許第５，５４５，８０６号、第５，５６９，８２５号、第５，５９１，６６９号；第５，５４５，８０７号；およびＷＯ９７／１７８５２を参照のこと。あるいは、ヒト抗体は、内因性免疫グロブリン遺伝子が部分的または完全に不活性化されたトランスジェニック動物、例えば、マウス中にヒト免疫グロブリン遺伝子座を導入することによって作製され得る。チャレンジの際に、遺伝子再構成、アセンブリおよび抗体レパートリーを含むあらゆる点において、ヒトにおいて見られたものと密接に類似したヒト抗体産生が観察される。このアプローチは、例えば、米国特許第５，５４５，８０７号；同第５，５４５，８０６号；同第５，５６９，８２５号；同第５，６２５，１２６号；同第５，６３３，４２５号；および同第５，６６１，０１６号、ならびにＭａｒｋｓら、Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、１０巻：７７９〜７８３頁（１９９２年）；Ｌｏｎｂｅｒｇら、Ｎａｔｕｒｅ、３６８巻：８５６〜８５９頁（１９９４年）；Ｍｏｒｒｉｓｏｎ、Ｎａｔｕｒｅ、３６８巻：８１２〜８１３頁（１９９４年）；Ｆｉｓｈｗｉｌｄら、Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、１４巻：８４５〜８５１頁（１９９６年）；Ｎｅｕｂｅｒｇｅｒ、Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、１４巻：８２６頁（１９９６年）；ＬｏｎｂｅｒｇおよびＨｕｓｚａｒ、Ｉｎｔｅｒｎ．  Ｒｅｖ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．、１３巻：６５〜９３頁（１９９５年）中に記載されている。
【０３６４】
ヒト抗体はまた、ｉｎ  ｖｉｔｒｏで活性化されたＢ細胞（米国特許第５，５６７，６１０号および同第５，２２９，２７５号を参照のこと）によって、またはファージディスプレイライブラリーを含む当該分野で公知の種々の技術を使用することによって、生成され得る。ＨｏｏｇｅｎｂｏｏｍおよびＷｉｎｔｅｒ、Ｊ．  Ｍｏｌ．  Ｂｉｏｌ．、２２７巻：３８１頁（１９９１年）；Ｍａｒｋｓら、Ｊ．  Ｍｏｌ．  Ｂｉｏｌ．、２２２巻：５８１頁（１９９１年）。ＣｏｌｅらおよびＢｏｅｒｎｅｒらの技術は、ヒトモノクローナル抗体の調製のためにも利用可能である。Ｃｏｌｅら、Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ａｎｄ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｈｅｒａｐｙ、Ａｌａｎ  Ｒ．  Ｌｉｓｓ、７７頁（１９８５年）およびＢｏｅｒｎｅｒら、Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．、１４７巻（１号）：８６〜９５頁（１９９１年）。
【０３６５】
多特異的抗体
一部の実施形態では、抗ＡＭＣ構築物は、多特異的抗体である。多特異的（例えば、二重特異的）抗体を作製するための適切な方法は、当該分野で周知である。例えば、二重特異的抗体の産生は、２つの免疫グロブリン重鎖／軽鎖対の共発現に基づき得、このとき、これら２つの対は各々、異なる特異性を有し、会合によりヘテロダイマー抗体を生じる（例えば、ＭｉｌｓｔｅｉｎおよびＣｕｅｌｌｏ、Ｎａｔｕｒｅ、３０５巻：５３７〜５３９頁（１９８３年）；ＷＯ９３／０８８２９、ならびにＴｒａｕｎｅｃｋｅｒら、ＥＭＢＯ  Ｊ．  １０巻：３６５５頁（１９９１年）を参照のこと）。免疫グロブリン重鎖および軽鎖のランダムな仕分けに起因して、これらのハイブリドーマ（クアドローマ）は、１０種の異なる抗体分子の潜在的な混合物を産生するが、そのうち１つだけが正しい二重特異的構造を有する。正しい分子の精製は、アフィニティクロマトグラフィーステップによって通常達成される。類似の手順は、ＷＯ９３／０８８２９およびＴｒａｕｎｅｃｋｅｒら、ＥＭＢＯ、１０巻：３６５５〜３６５９頁（１９９１年）中に開示されている。あるいは、重鎖および軽鎖の組み合わせは、種限定的な対形成を利用することによって方向づけされ得（ｃａｎ  ｂｅ  ｄｉｒｅｃｔｅｄ）（例えば、Ｌｉｎｄｈｏｆｅｒら、Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．、１５５巻：２１９〜２２５頁（１９９５年）を参照のこと）、重鎖の対形成は、ＣＨ３ドメインの「ノブ−イントゥ−ホール」操作の使用によって方向づけされ得る（例えば、米国特許第５，７３１，１６８号；Ｒｉｄｇｗａｙら、Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｎｇ．、９巻（７号）：６１７〜６２１頁（１９９６年）を参照のこと）。多特異的抗体は、抗体Ｆｃヘテロダイマー分子を作製するために静電ステアリング効果（ｅｌｅｃｔｒｏｓｔａｔｉｃ  ｓｔｅｅｒｉｎｇ  ｅｆｆｅｃｔ）を操作することによっても作製され得る（例えば、ＷＯ２００９／０８９００４Ａ１を参照のこと）。さらに別の方法では、安定な二重特異的抗体は、制御されたＦａｂ腕交換によって生成され得、このとき、別個の抗原特異性およびＣＨ３ドメイン中の一致した点変異を有する２つの親抗体が、還元条件において混合され、高度に純粋な二重特異的抗体を形成するための、分離、再アセンブリおよび再酸化が可能となる。Ｌａｂｒｉｇｉｎら、Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．、１１０巻（１３号）：５１４５〜５１５０頁（２０１３年）。重鎖／軽鎖対の混合物を含むかかる抗体は、本明細書で「ヘテロマルチマー抗体」とも呼ばれる。
【０３６６】
異なる特異性を有する抗体またはその抗原結合断片はまた、多特異的ヘテロコンジュゲート抗体を生成するために化学的に架橋され得る。例えば、異なる抗原に対する特異性を各々が有する２つのＦ（ａｂ’）２分子が、化学的に連結され得る。Ｐｕｌｌａｒｋａｔら、Ｔｒｅｎｄｓ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．、４８巻：９〜２１頁（１９９９年）。かかる抗体は、例えば、望ましくない細胞に免疫系細胞を標的化するため（米国特許第４，６７６，９８０号）およびＨＩＶ感染の処置のために提案されてきた。ＷＯ９１／００３６０；ＷＯ９２／２００３７３；ＥＰ０３０８９。これらの抗体は、架橋剤が関与するものを含む、合成タンパク質化学における公知の方法を使用して、ｉｎ  ｖｉｔｒｏで調製され得ることが企図される。例えば、免疫毒素は、ジスルフィド交換反応を使用して、またはチオエーテル結合を形成することによって、構築され得る。この目的に適切な試薬の例には、イミノチオレートおよびメチル−４−メルカプトブチルイミデート（ｍｅｔｈｙｌ−４−ｍｅｒｃａｐｔｏｂｕｔｙｒｉｍｉｄａｔｅ）ならびに例えば、米国特許第４，６７６，９８０号に開示されるものが含まれる。
【０３６７】
一部の実施形態では、多特異的抗体は、組換えＤＮＡ技術を使用して調製され得る。例えば、二重特異的抗体は、２つのｓｃＦｖを融合させることによって、例えば、ペプチドリンカーを介して２つのｓｃＦｖを融合させて、タンデムｓｃＦｖを生じさせることによって、操作され得る。タンデムｓｃＦｖの一例は、二重特異的Ｔ細胞エンゲージャーである。二重特異的Ｔ細胞エンゲージャーは、抗ＣＤ３  ｓｃＦｖを、標的細胞の表面抗原、例えば腫瘍関連抗原（ＴＡＡ）に特異的なｓｃＦｖに連結させて、標的細胞へのＴ細胞の再指向を生じさせることによって、作製される。Ｍａｃｋら、Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．、９２巻：７０２１〜７０２５頁（１９９５年）；Ｂｒｉｓｃｈｗｅｉｎら、Ｍｏｌ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．、４３巻（８号）：１１２９〜１１４３頁（２００６年）。２つの可変ドメイン間のペプチドリンカーの長さを短縮させることによって、これらは自己アセンブルを妨げられ得、第２のポリペプチド上のドメインと対形成するように強制され得、ダイアボディ（Ｄｂ）と呼ばれるコンパクトな二重特異的抗体を生じる。Ｈｏｌｌｉｇｅｒら、Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．、９０巻：６４４４〜６４４８頁（１９９３年）。Ｄｂの２つのポリペプチドは各々、同じ鎖上の２つのドメイン間の対形成を可能にするには短すぎるリンカーによってＶＬに結合されたＶＨを含む。したがって、１つのポリペプチドのＶＨドメインおよびＶＬドメインは、別のポリペプチドの相補的なＶＬドメインおよびＶＨドメインと対形成するように強制され、それによって、２つの抗原結合部位（ａｎｔｉｇｅｎ−ｂｉｎｄｉｎｇ  ｓｉｔｅ）を形成する。この形式の改変では、２つのポリペプチドは、別のペプチドリンカーによって連結されて、単鎖ダイアボディ（ｓｃＤｂ）を生じる。Ｄｂ形式のさらに別の改変では、二重親和性再標的化（ＤＡＲＴ）二重特異的抗体は、Ｃ末端システイン残基の前に、所望のヘテロダイマー構造のアセンブリを駆動するドメインを任意選択で含め、各ポリペプチドのＣ末端におけるシステイン残基間にジスルフィド結合を導入することによって生成され得る。Ｖｅｒｉら、Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  Ｒｈｅｕｍ．、６２巻（７号）：１９３３〜１９４３頁（２０１０年）。２つのモノクローナル抗体の標的結合可変ドメインが、四価の二重特異的抗体を得るために天然に存在するリンカーを介して組み合わされた二重可変ドメイン免疫グロブリン（ＤＶＤ−Ｉｇ（商標））もまた、当該分野で公知である。ＧｕおよびＧｈａｙｕｒ、Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｅｎｚｙｍｏｌ．、５０２巻：２５〜４１頁（２０１２年）。さらに別の形式では、ドックアンドロック（ＤＮＬ）二重特異的抗体は、ヒトＡキナーゼアンカータンパク質（ＡＫＡＰ）のアンカリングドメインに由来するペプチド（ＡＤ２）との、ヒトｃＡＭＰ依存的タンパク質キナーゼ（ＰＫＡ）の調節サブユニットに由来するペプチド（ＤＤＤ２）のダイマー化を利用することによって調製される。Ｒｏｓｓｉら、Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．、１０３巻：６８４１〜６８４６頁（２００６年）。
【０３６８】
組換え細胞培養物から二重特異的抗体断片を直接作製および単離するための種々の技術もまた記載されている。例えば、二重特異的抗体は、ロイシンジッパーを使用して産生されてきた。Ｋｏｓｔｅｌｎｙら、Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．、１４８巻（５号）：１５４７〜１５５３頁（１９９２年）。この方法は、抗体ホモダイマーの産生のためにも利用され得る。
【０３６９】
抗ＡＭＣバリアント
一部の実施形態では、本明細書で提供される抗体のアミノ酸配列バリアントが企図される。例えば、抗体の結合親和性および／または他の生物学的特性を改善することが望まれ得る。抗体のアミノ酸配列バリアントは、抗体をコードするヌクレオチド配列中に適切な改変を導入することによって、またはペプチド合成によって調製され得る。かかる改変には、例えば、抗体のアミノ酸配列からの欠失、および／またはかかるアミノ酸配列中への挿入、および／またはかかるアミノ酸配列内の残基の置換が含まれる。最終構築物が所望の特徴、例えば、抗原結合性を有することを条件として、欠失、挿入および置換の任意の組合せが、最終構築物に到達するために作製され得る。
【０３７０】
一部の実施形態では、１または複数のアミノ酸置換を有する抗体バリアントが提供される。置換変異誘発のための目的の部位には、ＨＶＲおよびＦＲが含まれる。アミノ酸置換は、目的の抗体中に導入され得、産物は、所望の活性、例えば、保持／改善された抗原結合、減少した免疫原性または改善されたＡＤＣＣもしくはＣＤＣについて、スクリーニングされ得る。
【０３７１】
保存的置換は以下の表５に示される。
【表５】
2018512145.tif 000007
【０３７２】
アミノ酸は、共通する側鎖特性に従って異なるクラスへとグループ分けされ得る：
ａ．疎水性：ノルロイシン、Ｍｅｔ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ；
ｂ．中性親水性：Ｃｙｓ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ；
ｃ．酸性：Ａｓｐ、Ｇｌｕ；
ｄ．塩基性：Ｈｉｓ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ；
ｅ．鎖配向に影響を与える残基：Ｇｌｙ、Ｐｒｏ；
ｆ．芳香族：Ｔｒｐ、Ｔｙｒ、Ｐｈｅ。
【０３７３】
非保存的置換は、これらのクラスのうち１つのメンバーを別のクラスに交換することを伴う。
【０３７４】
例示的な置換バリアントは、例えば、ファージディスプレイベースの親和性成熟技術を使用して簡便に生成され得る親和性成熟抗体である。簡潔に述べると、１または複数のＣＤＲ残基が変異され、バリアント抗体がファージ上にディスプレイされ、特定の生物学的活性（例えば、結合親和性）についてスクリーニングされる。変更（例えば、置換）は、例えば、抗体親和性を改善するために、ＨＶＲ中に作製され得る。かかる変更は、ＨＶＲ「ホットスポット」、即ち、体細胞成熟プロセスの間に高頻度で変異を受けるコドンによってコードされる残基（例えば、Ｃｈｏｗｄｈｕｒｙ、Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｍｏｌ．  Ｂｉｏｌ．  ２０７巻：１７９〜１９６頁（２００８年）を参照のこと）および／または特異性決定残基（ＳＤＲ）中に作製され得、得られたバリアントＶＨまたはＶＬは、結合親和性について試験される。二次ライブラリーから構築および再選択することによる親和性成熟は、例えば、Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍら、Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  １７８巻：１〜３７頁（Ｏ’Ｂｒｉｅｎら編、Ｈｕｍａｎ  Ｐｒｅｓｓ、Ｔｏｔｏｗａ、ＮＪ（２００１年））に記載されている。
【０３７５】
親和性成熟の一部の実施形態では、多様性が、種々の方法（例えば、エラープローンＰＣＲ、鎖シャッフリングまたはオリゴヌクレオチド指向性変異誘発（ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ−ｄｉｒｅｃｔｅｄ  ｍｕｔａｇｅｎｅｓｉｓ））のいずれかによる成熟のために選択された可変遺伝子中に導入される。次いで、二次ライブラリーが作り出される。次いで、ライブラリーは、所望の親和性を有する任意の抗体バリアントを同定するためにスクリーニングされる。多様性を導入するための別の方法には、いくつかのＨＶＲ残基（例えば、一度に４〜６残基）がランダム化されるＨＶＲ指向性アプローチが関与する。抗原結合に関与するＨＶＲ残基は、例えば、アラニンスキャニング変異誘発またはモデル化を使用して、特異的に同定され得る。特に、ＣＤＲ−Ｈ３およびＣＤＲ−Ｌ３が標的化される場合が多い。
【０３７６】
一部の実施形態では、置換、挿入または欠失が、かかる変更が抗原に結合する抗体の能力を実質的に低減させない限り、１または複数のＨＶＲ内に存在し得る。例えば、結合親和性を実質的に低減させない保存的変更（例えば、本明細書で提供される保存的置換）が、ＨＶＲ中に作製され得る。かかる変更は、ＨＶＲ「ホットスポット」またはＳＤＲの外側にあり得る。上で提供されたバリアントＶＨ配列およびＶＬ配列の一部の実施形態では、各ＨＶＲのいずれかが変更されていない、または１、２もしくは３つ以下のアミノ酸置換を含む。
【０３７７】
変異誘発のために標的化され得る抗体の残基または領域の同定のために有用な方法は、ＣｕｎｎｉｎｇｈａｍおよびＷｅｌｌｓ（１９８９年）Ｓｃｉｅｎｃｅ、２４４巻：１０８１〜１０８５頁によって記載されるように、「アラニンスキャニング変異誘発」と呼ばれる。この方法では、標的残基（例えば、荷電残基、例えば、ａｒｇ、ａｓｐ、ｈｉｓ、ｌｙｓおよびｇｌｕ）の１つの残基または群が同定され、抗体と抗原との相互作用が影響を受けるかどうかを決定するために、中性または負に荷電したアミノ酸（例えば、アラニンまたはポリアラニン）によって置き換えられる。さらなる置換が、初期の置換に対する機能的感受性を明らかに示すアミノ酸位置において導入され得る。あるいは、またはさらに、抗原−抗体複合体の結晶構造が、抗体と抗原との間の接触点を同定するために決定され得る。かかる接触残基および隣接残基は、置換のための候補として標的化または排除され得る。バリアントは、それらが所望の特性を含むかどうかを決定するためにスクリーニングされ得る。
【０３７８】
アミノ酸配列挿入には、１残基から１００またはそれ超の残基を含むポリペプチドまでの長さの範囲のアミノ末端および／またはカルボキシル末端融合、ならびに単一または複数のアミノ酸残基の配列内挿入が含まれる。末端挿入の例には、Ｎ末端メチオニル残基を有する抗体が含まれる。抗体分子の他の挿入バリアントには、酵素（例えば、ＡＤＥＰＴのため）または抗体の血清半減期を増加させるポリペプチドへの、抗体のＮまたはＣ末端への融合が含まれる。
【０３７９】
Ｆｃ領域バリアント
一部の実施形態では、１または複数のアミノ酸改変が、本明細書で提供される全長抗ＡＭＣ抗体のＦｃ領域中に導入され得、それによってＦｃ領域バリアントを生成する。一部の実施形態では、Ｆｃ領域バリアントは、Ｆｃ受容体（ＦｃＲ）への結合と関連する場合が多い、増強された抗体依存性細胞性細胞傷害（ＡＤＣＣ）エフェクター機能を有する。一部の実施形態では、Ｆｃ領域バリアントは、減少したＡＤＣＣエフェクター機能を有する。エフェクター機能を変更し得る、Ｆｃ配列に対する変化または変異の多くの例が存在する。例えば、ＷＯ００／４２０７２およびＳｈｉｅｌｄｓら  Ｊ  Ｂｉｏｌ．  Ｃｈｅｍ．  ９巻（２号）：６５９１〜６６０４頁（２００１年）は、ＦｃＲへの改善されたまたは弱められた結合を有する抗体バリアントを記載している。これらの刊行物の内容は、参照によって本明細書に具体的に組み込まれる。
【０３８０】
抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）は、腫瘍細胞に対する治療用抗体の作用機構である。ＡＤＣＣは、免疫系のエフェクター細胞が、その膜表面抗原が特異的抗体（例えば、抗ＡＭＣ抗体）によって結合された標的細胞（例えば、がん細胞）を能動的に溶解する、細胞媒介性免疫防御である。典型的なＡＤＣＣには、抗体によるＮＫ細胞の活性化が関与する。ＮＫ細胞は、Ｆｃ受容体であるＣＤ１６を発現する。この受容体は、標的細胞の表面に結合した抗体のＦｃの一部分を認識しそれに結合する。ＮＫ細胞の表面上の最も一般的なＦｃ受容体は、ＣＤ１６またはＦｃγＲＩＩＩと呼ばれる。抗体のＦｃ領域へのＦｃ受容体の結合は、ＮＫ細胞活性化、細胞溶解性顆粒の放出および引き続く標的細胞のアポトーシスを生じさせる。腫瘍細胞殺滅へのＡＤＣＣの寄与は、高親和性ＦｃＲをトランスフェクトされたＮＫ−９２細胞を使用する特異的試験を用いて測定され得る。結果は、ＦｃＲを発現しない野生型ＮＫ−９２細胞と比較される。
【０３８１】
一部の実施形態では、本発明は、一部ではあるが全てではないエフェクター機能を保有するＦＣ領域を含む抗ＡＭＣ構築物バリアントを企図し、これにより、かかるバリアントは、抗ＡＭＣ構築物のｉｎ  ｖｉｖｏ半減期が重要であるが、ある特定のエフェクター機能（例えば、ＣＤＣおよびＡＤＣＣ）が不要または有害である適用のための、望ましい候補になっている。ｉｎ  ｖｉｔｒｏおよび／またはｉｎ  ｖｉｖｏ細胞傷害性アッセイが、ＣＤＣおよび／またはＡＤＣＣ活性の低減／枯渇を確認するために実施され得る。例えば、Ｆｃ受容体（ＦｃＲ）結合アッセイは、抗体がＦｃγＲ結合を欠く（したがって、ＡＤＣＣ活性を欠いている可能性がある）がＦｃＲｎ結合能は保持していることを確実にするために実施され得る。ＡＤＣＣを媒介するための主要な細胞であるＮＫ細胞は、ＦｃγＲＩＩＩのみを発現するが、単球は、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩおよびＦｃγＲＩＩＩを発現する。造血細胞上のＦｃＲ発現は、ＲａｖｅｔｃｈおよびＫｉｎｅｔ、Ａｎｎｕ．  Ｒｅｖ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  ９巻：４５７〜４９２頁（１９９１年）の第４６４頁の表３にまとめられている。目的の分子のＡＤＣＣ活性を評価するためのｉｎ  ｖｉｔｒｏアッセイの非限定的な例は、米国特許第５，５００，３６２号（例えば、Ｈｅｌｌｓｔｒｏｍ，  Ｉ．ら  Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔ’ｌ  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ  ８３巻：７０５９〜７０６３頁（１９８６年）を参照のこと）およびＨｅｌｌｓｔｒｏｍ，  Ｉら、Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔ’ｌ  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ  ８２巻：１４９９〜１５０２頁（１９８５年）；米国特許第５，８２１，３３７号（Ｂｒｕｇｇｅｍａｎｎ，  Ｍ．ら、Ｊ．  Ｅｘｐ．  Ｍｅｄ．  １６６巻：１３５１〜１３６１頁（１９８７年）を参照のこと）に記載されている。あるいは、非放射活性アッセイ方法が使用され得る（例えば、フローサイトメトリーのためのＡＣＴＩ（商標）非放射活性細胞傷害性アッセイ（ＣｅｌｌＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｉｎｃ．Ｍｏｕｎｔａｉｎ  Ｖｉｅｗ、Ｃａｌｉｆ．）；およびＣｙｔｏＴｏｘ  ９６（商標）非放射活性細胞傷害性アッセイ（Ｐｒｏｍｅｇａ、Ｍａｄｉｓｏｎ、Ｗｉｓ．）を参照のこと）。かかるアッセイのための有用なエフェクター細胞には、末梢血単核球（ＰＢＭＣ）およびナチュラルキラー（ＮＫ）細胞が含まれる。あるいは、またはさらに、目的の分子のＡＤＣＣ活性は、ｉｎ  ｖｉｖｏで、例えば、Ｃｌｙｎｅｓら  Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔ’ｌ  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ  ９５巻：６５２〜６５６頁（１９９８年）に開示されたものなどの動物モデルにおいて、評価され得る。Ｃ１ｑ結合アッセイもまた、抗体がＣ１ｑに結合できず、したがってＣＤＣ活性を欠くことを確認するために実施され得る。例えば、ＷＯ２００６／０２９８７９およびＷＯ２００５／１００４０２中の、Ｃ１ｑおよびＣ３ｃ結合ＥＬＩＳＡを参照のこと。補体活性化を評価するために、ＣＤＣアッセイが実施され得る（例えば、Ｇａｚｚａｎｏ−Ｓａｎｔｏｒｏら、Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ２０２巻：１６３頁（１９９６年）；Ｃｒａｇｇ，  Ｍ．  Ｓ．ら、Ｂｌｏｏｄ  １０１巻：１０４５〜１０５２頁（２００３年）；ならびにＣｒａｇｇ，  Ｍ．  Ｓ．お���びＭ．  Ｊ．  Ｇｌｅｎｎｉｅ、Ｂｌｏｏｄ  １０３巻：２７３８〜２７４３頁（２００４年）を参照のこと）。ＦｃＲｎ結合およびｉｎ  ｖｉｖｏクリアランス／半減期の決定は、当該分野で公知の方法を使用しても実施され得る（例えば、Ｐｅｔｋｏｖａ，  Ｓ．  Ｂ．ら、Ｉｎｔ’ｌ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  １８巻（１２号）：１７５９〜１７６９頁（２００６年）を参照のこと）。
【０３８２】
低減されたエフェクター機能を有する抗体には、Ｆｃ領域残基２３８、２６５、２６９、２７０、２９７、３２７および３２９のうち１または複数の置換を有するものが含まれる（米国特許第６，７３７，０５６号）。かかるＦｃ変異体には、残基２６５および２９７のアラニンへの置換を有するいわゆる「ＤＡＮＡ」Ｆｃ変異体（米国特許第７，３３２，５８１号）を含む、アミノ酸位置２６５、２６９、２７０、２９７および３２７のうち２またはそれ超において置換を有するＦｃ変異体が含まれる。
【０３８３】
ＦｃＲへの改善されたまたは弱められた結合を有するある特定の抗体バリアントが記載されている（例えば、米国特許第６，７３７，０５６号；ＷＯ２００４／０５６３１２およびＳｈｉｅｌｄｓら、Ｊ．  Ｂｉｏｌ．  Ｃｈｅｍ．  ９巻（２号）：６５９１〜６６０４頁（２００１年）を参照のこと）。
【０３８４】
一部の実施形態では、ＡＤＣＣを改善する１または複数のアミノ酸置換を含むバリアントＦｃ領域を含む抗ＡＭＣ構築物（例えば、全長抗ＡＭＣ抗体）バリアントが提供される。一部の実施形態では、バリアントＦｃ領域は、ＡＤＣＣを改善する１または複数のアミノ酸置換を含み、これらの置換は、バリアントＦｃ領域の２９８位、３３３位および／または３３４位にある（残基のＥＵ番号付け）。一部の実施形態では、抗ＡＭＣ構築物（例えば、全長抗ＡＭＣ抗体）バリアントは、そのバリアントＦｃ領域中に以下のアミノ酸置換を含む：Ｓ２９８Ａ、Ｅ３３３ＡおよびＫ３３４Ａ。
【０３８５】
一部の実施形態では、例えば、米国特許第６，１９４，５５１号、ＷＯ９９／５１６４２およびＩｄｕｓｏｇｉｅら、Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  １６４巻：４１７８〜４１８４頁（２０００年）に記載されるように、変更された（即ち、改善されたまたは弱められたのいずれかの）Ｃ１ｑ結合および／または補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）を生じさせる変更が、Ｆｃ領域中で作製される。
【０３８６】
一部の実施形態では、半減期を増加させるおよび／または新生児Ｆｃ受容体（ＦｃＲｎ）への結合を改善する１または複数のアミノ酸置換を含むバリアントＦｃ領域を含む抗ＡＭＣ構築物（例えば、全長抗ＡＭＣ抗体）バリアントが提供される。増加した半減期およびＦｃＲｎへの改善された結合を有する抗体は、ＵＳ２００５／００１４９３４Ａ１（Ｈｉｎｔｏｎら）に記載されている。これらの抗体は、その中にＦｃＲｎへのＦｃ領域の結合を改善する１または複数の置換を有するＦｃ領域を含む。かかるＦｃバリアントには、Ｆｃ領域残基：２３８、２５６、２６５、２７２、２８６、３０３、３０５、３０７、３１１、３１２、３１７、３４０、３５６、３６０、３６２、３７６、３７８、３８０、３８２、４１３、４２４または４３４のうち１または複数における置換、例えば、Ｆｃ領域の残基４３４の置換（米国特許第７，３７１，８２６号）を有するものが含まれる。
【０３８７】
Ｆｃ領域バリアントの他の例に関しては、ＤｕｎｃａｎおよびＷｉｎｔｅｒ、Ｎａｔｕｒｅ  ３２２巻：７３８〜４０頁（１９８８年）；米国特許第５，６４８，２６０号；米国特許第５，６２４，８２１号；ならびにＷＯ９４／２９３５１もまた参照のこと。
【０３８８】
本明細書に記載されるＦｃバリアントのいずれかまたはそれらの組合せを含む抗ＡＭＣ構築物（例えば、全長抗ＡＭＣ抗体）が企図される。
【０３８９】
グリコシル化バリアント
一部の実施形態では、本明細書で提供される抗ＡＭＣ構築物は、抗ＡＭＣ構築物がグリコシル化される程度を増加または減少させるように変更される。抗ＡＭＣ構築物へのグリコシル化部位の付加または欠失は、１または複数のグリコシル化部位が作り出されるまたは除去されるように、抗ＡＭＣ構築物またはそのポリペプチドの一部分のアミノ酸配列を変更させることによって簡便に達成され得る。
【０３９０】
抗ＡＭＣ構築物がＦｃ領域を含む場合、それに結合された炭水化物が変更され得る。哺乳動物細胞によって産生されたネイティブ抗体は、典型的には、Ｆｃ領域のＣＨ２ドメインのＡｓｎ２９７にＮ結合によって一般に結合される分岐鎖二分岐型オリゴ糖を含む。例えば、Ｗｒｉｇｈｔら、ＴＩＢＴＥＣＨ  １５巻：２６〜３２頁（１９９７年）を参照のこと。オリゴ糖には、種々の炭水化物、例えば、マンノース、Ｎ−アセチルグルコサミン（ＧｌｃＮＡｃ）、ガラクトースおよびシアル酸、ならびに二分岐型オリゴ糖構造の「幹」中のＧｌｃＮＡｃに結合したフコースが含まれ得る。一部の実施形態では、本発明の抗ＡＭＣ構築物におけるオリゴ糖の改変は、ある特定の改善された特性を有する抗ＡＭＣ構築物バリアントを作り出すためになされ得る。
【０３９１】
一部の実施形態では、Ｆｃ領域を含む抗ＡＭＣ構築物（例えば、全長抗ＡＭＣ抗体）バリアントが提供され、このＦｃ領域に結合した炭水化物構造は、低減されたフコースを有するまたはフコースを欠き、これがＡＤＣＣ機能を改善し得る。具体的には、野生型ＣＨＯ細胞において産生された同じ抗ＡＭＣ構築物上のフコースの量と比較して、低減されたフコース（ｆｕｓｏｓｅ）を有する抗ＡＭＣ構築物が本明細書で企図される。即ち、これらは、ネイティブＣＨＯ細胞（例えば、ネイティブグリコシル化パターンを生じるＣＨＯ細胞、例えば、ネイティブＦＵＴ８遺伝子を含むＣＨＯ細胞）によって産生される場合、別段それらが有するフコースの量よりも低い量のフコースを有することを特徴とする。一部の実施形態では、抗ＡＭＣ構築物は、その上のＮ結合型グリカンの約５０％、４０％、３０％、２０％、１０％または５％未満がフコースを含む構築物である。例えば、かかる抗ＡＭＣ構築物中のフコースの量は、１％〜８０％、１％〜６５％、５％〜６５％または２０％〜４０％であり得る。一部の実施形態では、抗ＡＭＣ構築物は、その上のＮ結合型グリカンのいずれもがフコースを含まない、即ち、抗ＡＭＣ構築物が完全にフコースなしであるか、またはフコースを有さないもしくは非フコシル化された（ａｆｕｃｏｓｙｌａｔｅｄ）構築物である。フコースの量は、例えばＷＯ２００８／０７７５４６に記載されるように、ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ質量分析によって測定される、Ａｓｎ２９７に結合した全ての糖構造（ｇｌｙｃｏｓｔｒｕｃｔｕｒｅ）（例えば、複合体、ハイブリッドおよび高マンノース構造物）の総和と比較した、Ａｓｎ２９７における糖鎖内のフコースの平均量を計算することによって決定される。Ａｓｎ２９７とは、Ｆｃ領域中の約２９７位に位置するアスパラギン残基を指す（Ｆｃ領域残基のＥｕ番号付け）；しかし、Ａｓｎ２９７はまた、抗体中の軽微な配列バリエーションに起因して、２９７位の上流または下流の約±３アミノ酸、即ち、２９４位と３００位との間に位置し得る。かかるフコシル化バリアントは、改善されたＡＤＣＣ機能を有し得る。例えば、米国特許公開第ＵＳ２００３／０１５７１０８（Ｐｒｅｓｔａ，  Ｌ．）；ＵＳ２００４／００９３６２１（Ｋｙｏｗａ  Ｈａｋｋｏ  Ｋｏｇｙｏ  Ｃｏ．，  Ｌｔｄ）を参照のこと。「脱フコシル化（ｄｅｆｕｃｏｓｙｌａｔｅｄ）」または「フコース欠損」抗体バリアントに関する刊行物の例には、ＵＳ２００３／０１５７１０８；ＷＯ２０００／６１７３９；ＷＯ２００１／２９２４６；ＵＳ２００３／０１１５６１４；ＵＳ２００２／０１６４３２８；ＵＳ２００４／００９３６２１；ＵＳ２００４／０１３２１４０；ＵＳ２００４／０１１０７０４；ＵＳ２００４／０１１０２８２；ＵＳ２００４／０１０９８６５；ＷＯ２００３／０８５１１９；ＷＯ２００３／０８４５７０；ＷＯ２００５／０３５５８６；ＷＯ２００５／０３５７７８；ＷＯ２００５／０５３７４２；ＷＯ２００２／０３１１４０；Ｏｋａｚａｋｉら  Ｊ．  Ｍｏｌ．  Ｂｉｏｌ．  ３３６巻：１２３９〜１２４９頁（２００４年）；Ｙａｍａｎｅ−Ｏｈｎｕｋｉら  Ｂｉｏｔｅｃｈ．  Ｂｉｏｅｎｇ．  ８７巻：６１４頁（２００４年）が含まれる。脱���コシル化抗体を産生することが可能な細胞株の例には、タンパク質フコシル化が欠損しているＬｅｃ１３  ＣＨＯ細胞（Ｒｉｐｋａら  Ａｒｃｈ．  Ｂｉｏｃｈｅｍ．  Ｂｉｏｐｈｙｓ．  ２４９巻：５３３〜５４５頁（１９８６年）；米国特許出願第ＵＳ２００３／０１５７１０８  Ａ１、Ｐｒｅｓｔａ，  Ｌ；およびＷＯ２００４／０５６３１２  Ａ１、Ａｄａｍｓら、特に、実施例１１）およびノックアウト細胞株、例えば、α−１，６−フコシルトランスフェラーゼ遺伝子ＦＵＴ８ノックアウトＣＨＯ細胞（例えば、Ｙａｍａｎｅ−Ｏｈｎｕｋｉら  Ｂｉｏｔｅｃｈ．  Ｂｉｏｅｎｇ．  ８７巻：６１４頁（２００４年）；Ｋａｎｄａ，  Ｙ．ら、Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．  Ｂｉｏｅｎｇ．、９４巻（４号）：６８０〜６８８頁（２００６年）；およびＷＯ２００３／０８５１０７を参照のこと）が含まれる。
【０３９２】
抗ＡＭＣ構築物（例えば、全長抗ＡＭＣ抗体）バリアントは、例えば、抗ＡＭＣ構築物のＦｃ領域に結合した二分岐型オリゴ糖がＧｌｃＮＡｃによって二分された、二分されたオリゴ糖をさらに備える。かかる抗ＡＭＣ構築物（例えば、全長抗ＡＭＣ抗体）バリアントは、低減されたフコシル化および／または改善されたＡＤＣＣ機能を有し得る。かかる抗体バリアントの例は、例えば、ＷＯ２００３／０１１８７８（Ｊｅａｎ−Ｍａｉｒｅｔら）；米国特許第６，６０２，６８４号（Ｕｍａｎａら）；ＵＳ２００５／０１２３５４６（Ｕｍａｎａら）およびＦｅｒｒａｒａら、Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ａｎｄ  Ｂｉｏｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ、９３巻（５号）：８５１〜８６１頁（２００６年）に記載されている。Ｆｃ領域に結合したオリゴ糖中に少なくとも１つのガラクトース残基を有する抗ＡＭＣ構築物（例えば、全長抗ＡＭＣ抗体）バリアントもまた提供される。かかる抗ＡＭＣ構築物バリアントは、改善されたＣＤＣ機能を有し得る。かかる抗体バリアントは、例えば、ＷＯ１９９７／３００８７（Ｐａｔｅｌら）；ＷＯ１９９８／５８９６４（Ｒａｊｕ，  Ｓ．）；およびＷＯ１９９９／２２７６４（Ｒａｊｕ，  Ｓ．）に記載されている。
【０３９３】
一部の実施形態では、Ｆｃ領域を含む抗ＡＭＣ構築物（例えば、全長抗ＡＭＣ抗体）バリアントは、ＦｃγＲＩＩＩに結合することが可能である。一部の実施形態では、Ｆｃ領域を含む抗ＡＭＣ構築物（例えば、全長抗ＡＭＣ抗体）バリアントは、ヒトエフェクター細胞の存在下でＡＤＣＣ活性を有する、またはヒト野生型ＩｇＧ１Ｆｃ領域を含む他の点では同じ抗ＡＭＣ構築物（例えば、全長抗ＡＭＣ抗体）と比較して、ヒトエフェクター細胞の存在下で増加したＡＤＣＣ活性を有する。
【０３９４】
システイン操作されたバリアント
一部の実施形態では、１または複数のアミノ酸残基がシステイン残基で置換されたシステイン操作された抗ＡＭＣ構築物（例えば、全長抗ＡＭＣ抗体）を作り出すことが望まれ得る。一部の実施形態では、置換された残基は、抗ＡＭＣ構築物のアクセス可能な部位に存在する。これらの残基をシステインで置換することによって、反応性チオール基が、抗ＡＭＣ構築物のアクセス可能な部位に置かれ、本明細書にさらに記載される抗ＡＭＣイムノコンジュゲートを作り出すために、抗ＡＭＣ構築物を他の部分、例えば、薬物部分またはリンカー−薬物部分に結合体化するために使用され得る。システイン操作された抗ＡＭＣ構築物（例えば、全長抗ＡＭＣ抗体）は、例えば米国特許第７，５２１，５４１号に記載されるように生成され得る。
【０３９５】
誘導体
一部の実施形態では、本明細書で提供される抗ＡＭＣ構築物は、当該分野で公知であり容易に入手可能なさらなる非タンパク質性部分を含むように、さらに改変され得る。抗ＡＭＣ構築物の誘導体化に適切な部分には、水溶性ポリマーが含まれるがこれらに限定されない。水溶性ポリマーの非限定的な例には、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、エチレングリコール／プロピレングリコールのコポリマー、カルボキシメチルセルロース、デキストラン、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、ポリ−１，３−ジオキソラン、ポリ−１，３，６−トリオキサン、エチレン／無水マレイン酸コポリマー、ポリアミノ酸（ホモポリマーまたはランダムコポリマーのいずれか）、およびデキストランまたはポリ（ｎ−ビニルピロリドン）ポリエチレングリコール、プロプロピレングリコール（ｐｒｏｐｒｏｐｙｌｅｎｅ  ｇｌｙｃｏｌ）ホモポリマー、ポリプロピレンオキシド（ｐｒｏｌｙｐｒｏｐｙｌｅｎｅ  ｏｘｉｄｅ）／エチレンオキシドコポリマー、ポリオキシエチル化ポリオール（例えば、グリセロール）、ポリビニルアルコール、ならびにそれらの混合物が含まれるがこれらに限定されない。ポリエチレングリコールプロピオンアルデヒドは、水中でのその安定性に起因して、製造における利点を有し得る。ポリマーは、任意の分子量のものであり得、分岐鎖または非分岐鎖であり得る。抗ＡＭＣ構築物に結合したポリマーの数は変動し得、１よりも多いポリマーが結合される場合、それらは同じまたは異なる分子であり得る。一般に、誘導体化に使用されるポリマーの数および／または型は、改善すべき抗ＡＭＣ構築物の特定の特性または機能、抗ＡＭＣ構築物誘導体が規定された条件下で治療に使用されるかどうかなどが含まれるがこれらに限定されない考慮事項に基づいて決定され得る。
【０３９６】
一部の実施形態では、抗ＡＭＣ構築物と放射線への曝露によって選択的に加熱され得る非タンパク質性部分とのコンジュゲートが提供される。一部の実施形態では、非タンパク質性部分は、カーボンナノチューブである（Ｋａｍら、Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ  １０２巻：１１６００〜１１６０５頁（２００５年））。放射線は、任意の波長のものであり得、これには、通常の細胞を害さないが、抗ＡＭＣ構築物−非タンパク質性部分に対して近位の細胞が殺滅される温度まで非タンパク質性部分を加熱する波長が含まれるがこれに限定されない。
【０３９７】
ＣＡＲエフェクター細胞調製
本発明は、一態様では、抗ＡＭＣ  ＣＡＲを発現するエフェクター細胞（例えば、リンパ球、例えば、Ｔ細胞）を提供する。抗ＡＭＣ  ＣＡＲを発現するエフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞）（抗ＡＭＣ  ＣＡＲエフェクター細胞、例えば、抗ＡＭＣ  ＣＡＲ  Ｔ細胞）を調製する例示的な方法は、本明細書に提供される。
【０３９８】
一部の実施形態では、抗ＡＭＣ  ＣＡＲエフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞）は、抗ＡＭＣ  ＣＡＲ（例えば、抗ＡＭＣ抗体部分ならびにＣＤ２８およびＣＤ３ζ細胞内シグナル伝達配列を含むＣＡＲ）を含むベクター（例えば、レンチウイルスベクターを含む）をエフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞）中に導入することによって生成され得る。一部の実施形態では、本発明の抗ＡＭＣ  ＣＡＲエフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞）は、ｉｎ  ｖｉｖｏで複製することができ、ＡＦＰ陽性疾患（例えば、がん、例えば、ＨＣＣ）の持続性の制御をもたらし得る長期持続を生じる。
【０３９９】
一部の実施形態では、本発明は、リンパ球注入を使用する、ＡＦＰ陽性疾患を有するまたはＡＦＰ陽性疾患を有するリスクがある患者の処置のために、抗ＡＭＣ  ＣＡＲを発現する遺伝子改変されたＴ細胞を投与することに関する。一部の実施形態では、自家リンパ球注入が、処置において使用される。自家ＰＢＭＣは、処置を必要とする患者から収集され、Ｔ細胞は、本明細書に記載されており、当該分野で公知の方法を使用して活性化および拡大増殖され（ｅｘｐａｎｄｅｄ）、次いで、患者に注入して戻される。
【０４００】
一部の実施形態では、抗ＡＭＣ  ＣＡＲ  Ｔ細胞は、抗ＡＭＣ抗体部分を含む抗ＡＭＣ  ＣＡＲを発現する（本明細書で「抗ＡＭＣ  ＣＡＲ  Ｔ細胞」とも呼ぶ）。一部の実施形態では、抗ＡＭＣ  ＣＡＲ  Ｔ細胞は、抗ＡＭＣ抗体部分を含む細胞外ドメインならびにＣＤ３ζおよびＣＤ２８の細胞内シグナル伝達配列を含む細胞内ドメインを含む抗ＡＭＣ  ＣＡＲを発現する。本発明の抗ＡＭＣ  ＣＡＲ  Ｔ細胞は、ロバストなｉｎ  ｖｉｖｏ  Ｔ細胞拡大増殖を受け得、血液および骨髄中で長時間にわたって高レベルで持続するＡＭＣ特異的メモリー細胞を樹立できる。一部の実施形態では、患者に注入された本発明の抗ＡＭＣ  ＣＡＲ  Ｔ細胞は、ＡＦＰ陽性疾患を有する患者においてｉｎ  ｖｉｖｏで、ＡＭＣ提示がん細胞などのＡＭＣ提示細胞を排除できる。一部の実施形態では、患者に注入された本発明の抗ＡＭＣ  ＣＡＲ  Ｔ細胞は、少なくとも１つの従来の処置に対して難治性であるＡＦＰ陽性疾患を有する患者においてｉｎ  ｖｉｖｏで、ＡＭＣ提示がん細胞などのＡＭＣ提示細胞を排除できる。
【０４０１】
一部の実施形態では、抗ＡＭＣ  ＣＡＲ  Ｔ細胞は、均等な細胞表面分布で抗ＡＭＣ  ＣＡＲを発現する。均等な細胞表面分布は、例えば、連続的な外観および均等な厚さまたはシグナル強度を有する染色パターンによって特徴付けられ得る。例えば、一部の実施形態では、抗ＡＭＣ  ＣＡＲ  Ｔ細胞を含む組成物、例えば医薬組成物は、細胞表面上に抗ＡＭＣ  ＣＡＲの凝集を有する、約１０％未満（例えば、約１０、９、８、７、６、５、４、３、２または１％未満）の細胞を含む。凝集は、例えば、不均等な厚さもしくはシグナル強度を有する染色パターン、または非連続的な、塊のある、点状のおよび／もしくは不均等な分布パターンによって特徴付けられ得る。一部の実施形態では、抗ＡＭＣ  ＣＡＲ  Ｔ細胞は、細胞表面上に抗ＡＭＣ  ＣＡＲの約１０％未満（例えば、約１０、９、８、７、６、５、４、３、２または１％未満）の凝集を有して、抗ＡＭＣ  ＣＡＲを発現する。一部の実施形態では、抗ＡＭＣ  ＣＡＲ  Ｔ細胞は、低レベルの抗原非依存的抗ＡＭＣ  ＣＡＲ活性化を有する。一部の実施形態では、抗ＡＭＣ  ＣＡＲ  Ｔ細胞は、低レベルのＴ細胞消耗を有する。Ｔ細胞消耗は、がんまたは慢性感染症を有するなどの、免疫活性化が持続する状態の間に天然に生じ、Ｔ細胞が機能障害性になる。Ｔ細胞消耗は、機能的なエフェクターＴ細胞またはメモリーＴ細胞と比較して、損なわれたエフェクター機能、阻害性受容体の延長された発現、および／または変更された転写状態によって特徴付けられ得る。腫瘍細胞および感染症の最適なクリアランスは、Ｔ細胞消耗によって防止される。抗ＡＭＣ  ＣＡＲ  Ｔ細胞のＴ細胞消耗は、例えば、その機能プロファイルおよび／または表現型プロファイルを決定することによって、当該分野で公知の任意の手段によって特徴付けられ得る（Ｗｈｅｒｒｙ，  Ｅ．  Ｊ．、Ｎａｔｕｒｅ  ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  １２巻（６号）：４９２〜４９９頁、２０１１年；Ｊｉａｎｇ，  Ｙ．ら、Ｃｅｌｌ  ｄｅａｔｈ  ＆  ｄｉｓｅａｓｅ  ６巻（６号）：ｅ１７９２頁、２０１５年）。例えば、一部の実施形態では、抗ＡＭＣ  ＣＡＲ  Ｔ細胞は、低レベルの、例えば、ＰＤ−１、ＬＡＧ−３、ＴＩＭ−３、ＣＴＬＡ−４、ＢＴＬＡおよびＴＩＧＩＴを含む、Ｔ細胞消耗の１または複数のマーカーを発現する。一部の実施形態では、抗ＡＭＣ  ＣＡＲ  Ｔ細胞は、ＩＬ−２産生、ＴＮＦ−α産生、ＩＦＮ−γ産生およびグランザイムＢ産生について、非消耗Ｔ細胞に特徴的なレベルを維持し、ならびに／または標的細胞の存在下でｅｘ  ｖｉｖｏ殺滅能を維持し、これは、抗ＡＭＣ  ＣＡＲ  Ｔ細胞が、自己活性化および早期の消耗（ｐｒｅｍａｔｕｒｅ  ｅｘｈａｕｓｔｉｏｎ）を受けていないことを示唆している。
【０４０２】
Ｔ細胞の拡大増殖および遺伝子改変の前に、Ｔ細胞の供給源が被験体から取得される。Ｔ細胞は、末梢血単核球、骨髄、リンパ節組織、臍帯血、胸腺組織、感染の部位由来の組織、腹水、胸水、脾臓組織および腫瘍を含むいくつかの供給源から取得され得る。本発明の一部の実施形態では、当該分野で利用可能ないくつものＴ細胞株が使用され得る。本発明の一部の実施形態では、Ｔ細胞は、Ｆｉｃｏｌｌ（商標）分離などの当業者に公知のいくつもの技術を使用して被験体から収集された血液の単位から取得され得る。一部の実施形態では、個体の循環血由来の細胞は、アフェレーシスによって取得される。アフェレーシス産物は、典型的には、Ｔ細胞を含むリンパ球、単球、顆粒球、Ｂ細胞、他の有核白血球、赤血球および血小板を含む。一部の実施形態では、アフェレーシスによって収集された細胞は、血漿画分を除去するため、および引き続く処理ステップに適切な緩衝液または培地中に細胞を配置するために、洗浄され得る。一部の実施形態では、細胞は、リン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）で洗浄される。一部の実施形態では、洗浄溶液は、カルシウムを欠き、マグネシウムを欠き得る、または全てではないものの、多くの二価カチオンを欠き得る。当業者が容易に理解するように、洗浄ステップは、当業者に公知の方法によって、例えば、製造業者の指示に従って半自動化「フロースルー」遠心分離機（例えば、Ｃｏｂｅ  ２９９１細胞プロセッサー、Ｂａｘｔｅｒ  ＣｙｔｏＭａｔｅまたはＨａｅｍｏｎｅｔｉｃｓ  Ｃｅｌｌ  Ｓａｖｅｒ  ５）を使用することによって達成され得る。洗浄後、細胞は、種々の生体適合性緩衝液、例えば、無Ｃａ２＋、無Ｍｇ２＋ＰＢＳ、ＰｌａｓｍａＬｙｔｅ  Ａ、または緩衝剤ありもしくはなしの他の食塩水溶液中に再懸濁され得る。あるいは、アフェレーシス試料の望ましくない成分が除去され得、細胞が培養培地中に直接再懸濁され得る。
【０４０３】
一部の実施形態では、Ｔ細胞は、赤血球を溶解させ、例えば、ＰＥＲＣＯＬＬ（商標）勾配を介した遠心分離によって、または向流遠心分離溶出（ｃｏｕｎｔｅｒｆｌｏｗ  ｃｅｎｔｒｉｆｕｇａｌ  ｅｌｕｔｒｉａｔｉｏｎ）によって単球を枯渇させることによって、末梢血リンパ球から単離される。Ｔ細胞の特定の下位集団、例えば、ＣＤ３＋、ＣＤ２８＋、ＣＤ４＋、ＣＤ８＋、ＣＤ４５ＲＡ＋およびＣＤ４５ＲＯ＋Ｔ細胞は、陽性または陰性選択技術によってさらに単離され得る。例えば、一部の実施形態では、Ｔ細胞は、所望のＴ細胞の陽性選択に十分な期間にわたる、抗ＣＤ３／抗ＣＤ２８（即ち、３×２８）結合体化ビーズ、例えば、ＤＹＮＡＢＥＡＤＳ（登録商標）Ｍ−４５０  ＣＤ３／ＣＤ２８  Ｔとのインキュベーションによって単離される。一部の実施形態では、期間は、約３０分間である。一部の実施形態では、期間は、３０分間から３６時間またはそれ超まで、およびそれらの間の全ての整数値の範囲である。一部の実施形態では、期間は、少なくとも１、２、３、４、５または６時間である。一部の実施形態では、期間は、１０〜２４時間である。一部の実施形態では、インキュベーション期間は、２４時間である。白血病を有する患者からのＴ細胞の単離のために、より長いインキュベーション時間、例えば２４時間の使用が、細胞収量を増加させ得る。より長いインキュベーション時間は、他の細胞型と比較して少ないＴ細胞が存在する任意の状況において、例えば、腫瘍組織からまたは免疫無防備状態の個体から腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）を単離することにおいて、Ｔ細胞を単離するために使用され得る。さらに、より長いインキュベーション時間の使用は、ＣＤ８＋Ｔ細胞の捕捉の効率を増加させ得る。したがって、この時間を単純に短縮もしくは延長させることによって、Ｔ細胞は、ＣＤ３／ＣＤ２８ビーズに結合するようになり、および／またはビーズ対Ｔ細胞の比率を増加もしくは減少させることによって、Ｔ細胞の下位集団は、培養開始の時点で、もしくはプロセスの間の他の時点で、有利にまたは不利に優先的に選択され得る。さらに、ビーズまたは他の表面上の抗ＣＤ３および／または抗ＣＤ２８抗体の比率を増加または減少させることによって、Ｔ細胞の下位集団は、培養開始の時点で、または他の所望の時点で、有利にまたは不利に優先的に選択され得る。当業者は、複数ラウンドの選択もまた本発明との関連において使用され得ることを認識している。一部の実施形態では、活性化および拡大増殖プロセスにおいて、選択手順を実施し、「選択されていない」細胞を使用することが望まれ得る。「選択されていない」細胞はまた、さらなるラウンドの選択に供され得る。
【０４０４】
陰性選択によるＴ細胞集団の富化は、陰性選択された細胞に独自の表面マーカーに対する抗体の組合せを用いて達成され得る。１つの方法は、陰性選択される細胞上に存在する細胞表面マーカーに対するモノクローナル抗体のカクテルを使用する、負の磁気免疫付着（ｎｅｇａｔｉｖｅ  ｍａｇｎｅｔｉｃ  ｉｍｍｕｎｏａｄｈｅｒｅｎｃｅ）もしくはフローサイトメトリーを介した細胞分取および／または選択である。例えば、陰性選択によってＣＤ４＋細胞を富化するために、モノクローナル抗体カクテルは、典型的には、ＣＤ１４、ＣＤ２０、ＣＤ１１ｂ、ＣＤ１６、ＨＬＡ−ＤＲおよびＣＤ８に対する抗体を含む。一部の実施形態では、ＣＤ４＋、ＣＤ２５＋、ＣＤ６２Ｌｈｉ、ＧＩＴＲ＋およびＦｏｘＰ３＋を典型的には発現する調節性Ｔ細胞を富化または陽性選択することが望まれ得る。あるいは、一部の実施形態では、Ｔ調節細胞は、抗ＣＤ２５結合体化ビーズまたは他の類似の選択方法によって枯渇される。
【０４０５】
陽性または陰性選択による細胞の所望の集団の単離のために、細胞の濃度および表面（例えば、ビーズなどの粒子）を変えることができる。一部の実施形態では、細胞とビーズとの最大の接触を確実にするために、ビーズおよび細胞が一緒に混合される体積を顕著に減少させる（即ち、細胞の濃度を増加させる）ことが望まれ得る。例えば、一部の実施形態では、約２０億細胞／ｍｌの濃度が使用される。一部の実施形態では、約１０億細胞／ｍｌの濃度が使用される。一部の実施形態では、約１００百万細胞／ｍｌ超が使用される。一部の実施形態では、約１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５または５０百万細胞／ｍｌのいずれかの細胞の濃度が使用される。一部の実施形態では、約７５、８０、８５、９０、９５または１００百万細胞／ｍｌのいずれかの細胞の濃度が使用される。一部の実施形態では、約１２５または約１５０百万細胞／ｍｌの濃度が使用される。高い濃度を使用すると、増加した細胞収量、細胞活性化および細胞拡大増殖が生じ得る。さらに、高い細胞濃度の使用は、目的の標的抗原を弱く発現し得る細胞、例えばＣＤ２８陰性Ｔ細胞の、または多くの腫瘍細胞が存在する試料（即ち、白血病血液、腫瘍組織など）からの、より効率的な捕捉を可能にする。細胞のかかる集団は、治療的価値を有し得、取得が望まれる。例えば、高濃度の細胞を使用すると、通常はより弱いＣＤ２８発現を有するＣＤ８＋Ｔ細胞のより効率的な選択が可能になる。
【０４０６】
本発明の一部の実施形態では、Ｔ細胞は、処置後に患者から直接取得される。これに関して、ある特定のがん処置、特に、免疫系を損傷する薬物による処置の後、患者が処置から通常は回復している期間中の処置の直後に、取得されたＴ細胞の品質は、ｅｘ  ｖｉｖｏで拡大増殖するそれらの能力について、最適であり得るまたは改善され得ることが観察されている。同様に、本明細書に記載された方法を使用するｅｘ  ｖｉｖｏ操作の後、これらの細胞は、増強された生着およびｉｎ  ｖｉｖｏ拡大増殖のための好ましい状態にあり得る。したがって、本発明との関連において、この回復期の間に、Ｔ細胞、樹状細胞、または造血系統の他の細胞を含む血液細胞を収集することが企図される。さらに、一部の実施形態では、動員（例えば、ＧＭ−ＣＳＦによる動員）および条件付けレジメンが、被験体において、特定の細胞型の再増殖、再循環、再生および／または拡大増殖が、特に、治療後の規定された時間ウインドウの間に好まれる状態を作り出すために使用され得る。例示的な細胞型には、Ｔ細胞、Ｂ細胞、樹状細胞、および免疫系の他の細胞が含まれる。
【０４０７】
望ましい抗ＡＭＣ  ＣＡＲを発現させるためのＴ細胞の遺伝子改変の前であれ後であれ、Ｔ細胞は、例えば、米国特許第６，３５２，６９４号；第６，５３４，０５５号；第６，９０５，６８０号；第６，６９２，９６４号；第５，８５８，３５８号；第６，８８７，４６６号；第６，９０５，６８１号；第７，１４４，５７５号；第７，０６７，３１８号；第７，１７２，８６９号；第７，２３２，５６６号；第７，１７５，８４３号；第５，８８３，２２３号；第６，９０５，８７４号；第６，７９７，５１４号；第６，８６７，０４１号；および米国特許出願公開第２００６０１２１００５号に記載される方法を一般に使用して、活性化および拡大増殖され得る。
【０４０８】
一般に、本発明のＴ細胞は、それに結合したＣＤ３／ＴＣＲ複合体関連シグナルを刺激する薬剤およびＴ細胞の表面上の共刺激分子を刺激するリガンドを有する表面との接触によって拡大増殖される。特に、Ｔ細胞集団は、例えば、表面上に固定された抗ＣＤ３抗体もしくはその抗原結合断片、または抗ＣＤ２抗体との接触によって、あるいはカルシウムイオノフォアと併せたタンパク質キナーゼＣ活性化因子（例えば、ブリオスタチン）との接触によって、刺激され得る。Ｔ細胞の表面上のアクセサリ分子の共刺激のために、アクセサリ分子を結合するリガンドが使用される。例えば、Ｔ細胞の集団は、Ｔ細胞の増殖を刺激するのに適切な条件下で、抗ＣＤ３抗体および抗ＣＤ２８抗体と接触させられ得る。ＣＤ４＋Ｔ細胞またはＣＤ８＋Ｔ細胞のいずれかの増殖を刺激するために、抗ＣＤ３抗体および抗ＣＤ２８抗体。抗ＣＤ２８抗体の例には、９．３、Ｂ−Ｔ３、ＸＲ−ＣＤ２８（Ｄｉａｃｌｏｎｅ、Ｂｅｓａｎｓｏｎ、Ｆｒａｎｃｅ）が含まれ、当該分野で一般に公知である他の方法と同様に使用され得る（ｃａｎ  ｂｅ  ｕｓｅｄ  ａｓ  ｃａｎ  ｏｔｈｅｒ  ｍｅｔｈｏｄｓ  ｃｏｍｍｏｎｌｙ  ｋｎｏｗｎ  ｉｎ  ｔｈｅ  ａｒｔ）（Ｂｅｒｇら、Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ  Ｐｒｏｃ．  ３０巻（８号）：３９７５〜３９７７頁、１９９８年；Ｈａａｎｅｎら、Ｊ．  Ｅｘｐ．  Ｍｅｄ．  １９０巻（９号）：１３１９〜１３２８頁、１９９９年；Ｇａｒｌａｎｄら、Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  Ｍｅｔｈ．  ２２７巻（１〜２号）：５３〜６３頁、１９９９年）。
【０４０９】
イムノコンジュゲート調製
抗ＡＭＣイムノコンジュゲートは、当該分野で公知の任意の方法を使用して調製され得る。例えば、それらの全体が本明細書に参照によって組み込まれるＷＯ２００９／０６７８００、ＷＯ２０１１／１３３８８６および米国特許出願公開第２０１４３２２１２９号を参照のこと。
【０４１０】
抗ＡＭＣイムノコンジュゲートの抗ＡＭＣ抗体部分は、抗ＡＭＣ抗体部分がエフェクター分子と会合し得るまたはエフェクター分子に連結され得る任意の手段によって、エフェクター分子「に結合」され得る。例えば、抗ＡＭＣイムノコンジュゲートの抗ＡＭＣ抗体部分は、化学的または組換え手段によって、エフェクター分子に結合され得る。融合物またはコンジュゲートを調製するための化学的手段は、当該分野で公知であり、抗ＡＭＣイムノコンジュゲートを調製するために使用され得る。抗ＡＭＣ抗体部分およびエフェクター分子を結合体化するために使用される方法は、標的細胞上の抗原に結合する結合タンパク質の能力を妨害することなしに、結合タンパク質をエフェクター分子と結合させること（ｊｏｉｎｉｎｇ）が可能でなければならない。
【０４１１】
抗ＡＭＣイムノコンジュゲートの抗ＡＭＣ抗体部分は、エフェクター分子に間接的に連結され得る。例えば、抗ＡＭＣイムノコンジュゲートの抗ＡＭＣ抗体部分は、いくつかの型のうち１つのエフェクター分子を含むリポソームに直接連結され得る。エフェクター分子（複数可）および／または抗ＡＭＣ抗体部分はまた、固体表面に結合され得る。
【０４１２】
一部の実施形態では、抗ＡＭＣイムノコンジュゲートの抗ＡＭＣ抗体部分とエフェクター分子とは、共にタンパク質であり、当該分野で周知の技術を使用して結合体化され得る。２つのタンパク質を結合体化できる数百のクロスリンカーが利用可能である（例えば、「Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｃｏｎｊｕｇａｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｃｒｏｓｓｌｉｎｋｉｎｇ」．１９９１年、Ｓｈａｎｓ  Ｗｏｎｇ、ＣＲＣ  Ｐｒｅｓｓ、Ａｎｎ  Ａｒｂｏｒを参照のこと）。クロスリンカーは、一般に、抗ＡＭＣ抗体部分および／またはエフェクター分子上で利用可能なまたはその上に挿入された反応性官能基に基づいて選択される。さらに、反応性基が存在しない場合、光活性化可能なクロスリンカーが使用され得る。ある特定の例では、抗ＡＭＣ抗体部分とエフェクター分子との間にスペーサーを含むことが望まれ得る。当該分野で公知の架橋剤には、ホモ二官能性剤：グルタルアルデヒド、アジプイミド酸ジメチルおよびビス（ジアゾベンジジン）ならびにヘテロ二官能性剤：ｍ  マレイミドベンゾイル−Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドおよびスルホ−ｍ  マレイミドベンゾイル−Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドが含まれる。
【０４１３】
一部の実施形態では、抗ＡＭＣイムノコンジュゲートの抗ＡＭＣ抗体部分は、エフェクター分子の化学的結合のための特定の残基で操作され得る。当該分野で公知の、分子の化学的結合に使用される特定の残基には、リシンおよびシステインが含まれる。クロスリンカーは、抗ＡＭＣ抗体部分上に挿入されたおよびエフェクター分子上で利用可能な反応性官能基に基づいて選択される。
【０４１４】
抗ＡＭＣイムノコンジュゲートは、組換えＤＮＡ技術を使用しても調製され得る。かかる場合には、抗ＡＭＣ抗体部分をコードするＤＮＡ配列が、エフェクター分子をコードするＤＮＡ配列に融合されて、キメラＤＮＡ分子を生じる。キメラＤＮＡ配列は、融合タンパク質を発現する宿主細胞中にトランスフェクトされる。融合タンパク質は、当該分野で公知の技術を使用して、細胞培養物から回収され得、精製され得る。
【０４１５】
標識であるエフェクター分子を結合タンパク質に結合させる例には、Ｈｕｎｔｅｒら、Ｎａｔｕｒｅ  １４４巻：９４５頁（１９６２年）；Ｄａｖｉｄら、Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  １３巻：１０１４頁（１９７４年）；Ｐａｉｎら、Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  Ｍｅｔｈ．  ４０巻：２１９頁（１９８１年）；Ｎｙｇｒｅｎ、Ｊ．  Ｈｉｓｔｏｃｈｅｍ．  ａｎｄ  Ｃｙｔｏｃｈｅｍ．  ３０巻：４０７頁（１９８２年）；ＷｅｎｓｅｌおよびＭｅａｒｅｓ、Ｒａｄｉｏｉｍｍｕｎｏｉｍａｇｉｎｇ  Ａｎｄ  Ｒａｄｉｏｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ、Ｅｌｓｅｖｉｅｒ、Ｎ．Ｙ．（１９８３年）；ならびにＣｏｌｃｈｅｒら、「Ｕｓｅ  Ｏｆ  Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  Ａｓ  Ｒａｄｉｏｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ  Ｆｏｒ  Ｔｈｅ  Ｌｏｃａｌｉｚａｔｉｏｎ  Ｏｆ  Ｈｕｍａｎ  Ｃａｒｃｉｎｏｍａ  Ｘｅｎｏｇｒａｆｔｓ  Ｉｎ  Ａｔｈｙｍｉｃ  Ｍｉｃｅ」、Ｍｅｔｈ．  Ｅｎｚｙｍｏｌ．、１２１巻：８０２〜１６頁（１９８６年）に記載される方法が含まれる。
【０４１６】
放射性標識または他の標識は、公知の方法でイムノコンジュゲート中に取り込まれ得る。例えば、ペプチドは、生合成され得る、または例えば、水素の代わりにフッ素−１９を含む適切なアミノ酸前駆体を使用して、化学的アミノ酸合成によって合成され得る。標識、例えば、９９Ｔｃまたは１２３Ｉ、１８６Ｒｅ、１８８Ｒｅおよび１１１Ｉｎは、ペプチド中のシステイン残基を介して結合され得る。イットリウム−９０は、リシン残基を介して結合され得る。ＩＯＤＯＧＥＮ法（Ｆｒａｋｅｒら、Ｂｉｏｃｈｅｍ．  Ｂｉｏｐｈｙｓ．  Ｒｅｓ．  Ｃｏｍｍｕｎ．  ８０巻：４９〜５７頁（１９７８年））は、ヨウ素−１２３を取り込むために使用され得る。「Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｓｃｉｎｔｉｇｒａｐｈｙ」（Ｃｈａｔａｌ、ＣＲＣ  Ｐｒｅｓｓ  １９８９年）は、他の方法を詳細に記載している。
【０４１７】
抗体部分と細胞傷害剤とのイムノコンジュゲートは、種々の二官能性タンパク質カップリング剤、例えば、Ｎ−スクシンイミジル−３−（２−ピリジルジチオ）プロピオネート（ＳＰＤＰ）、スクシンイミジル−４−（Ｎ−マレイミドメチル）シクロヘキサン−１−カルボキシレート（ＳＭＣＣ）、イミノチオラン（ＩＴ）、イミドエステルの二官能性誘導体（例えば、アジプイミド酸ジメチルＨＣＩ）、活性エステル（例えば、スベリン酸ジスクシンイミジル）、アルデヒド（例えば、グルタルアルデヒド）、ビス−アジド化合物（例えば、ビス（ｐ−アジドベンゾイル）ヘキサンジアミン）、ビス−ジアゾニウム誘導体（例えば、ビス−（ｐ−ジアゾニウムベンゾイル）−エチレンジアミン）、ジイソシアネート（例えば、２，６−ジイソシアン酸トルエン）、およびビス−活性フッ素化合物（例えば、１，５−ジフルオロ−２，４−ジニトロベンゼン）を使用して作製され得る。例えば、リシン免疫毒素は、Ｖｉｔｅｔｔａら、Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２３８巻：１０９８頁（１９８７年）に記載されるように調製され得る。炭素−１４標識１−イソチオシアナトベンジル−３−メチルジエチレントリアミン五酢酸（１−ｉｓｏｔｈｉｏｃｙａｎａｔｏｂｅｎｚｙｌ−３−ｍｅｔｈｙｌｄｉｅｔｈｙｌｅｎｅ  ｔｎａｍｉｎｅｐｅｎｔａａｃｅｔｉｃ  ａｃｉｄ）（ＭＸ−ＤＴＰＡ）は、抗体への放射性核種の結合体化のための例示的なキレート剤である。例えば、ＷＯ９４／１１０２６を参照のこと。リンカーは、細胞における細胞傷害薬の放出を促進する「切断可能なリンカー」であり得る。例えば、酸不安定性リンカー、ペプチダーゼ感受性リンカー、光分解性リンカー、ジメチルリンカーまたはジスルフィド含有リンカー（Ｃｈａｒｉら、Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ５２巻：１２７〜１３１頁（１９９２年）；米国特許第５，２０８，０２０号）が使用され得る。
【０４１８】
本発明の抗ＡＭＣイムノコンジュゲートは、クロスリンカー試薬：（例えば、Ｐｉｅｒｃｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｉｎｃ．、Ｒｏｃｋｆｏｒｄ、ＩＬ、Ｕ．Ｓ．Ａから）市販される、ＢＭＰＳ、ＥＭＣＳ、ＧＭＢＳ、ＨＢＶＳ、ＬＣ−ＳＭＣＣ、ＭＢＳ、ＭＰＢＨ、ＳＢＡＰ、ＳＩＡ、ＳＩＡＢ、ＳＭＣＣ、ＳＭＰＢ、ＳＭＰＨ、スルホ−ＥＭＣＳ、スルホ−ＧＭＢＳ、スルホ−ＫＭＵＳ、スルホ−ＭＢＳ、スルホ−ＳＩＡＢ、スルホ−ＳＭＣＣおよびスルホ−ＳＭＰＢ、ならびにＳＶＳＢ（スクシンイミジル−（４−ビニルスルホン）ベンゾエート）を用いて調製されたＡＤＣを明示的に企図するが、これに限定されない。２００３〜２００４年  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ  Ｈａｎｄｂｏｏｋ  ａｎｄ  Ｃａｔａｌｏｇの４６７〜４９８頁を参照のこと。
【０４１９】
医薬組成物
抗ＡＭＣ構築物を含む組成物（例えば、医薬組成物、本明細書で製剤とも呼ぶ）もまた、本明細書で提供される。一部の実施形態では、組成物は、抗ＡＭＣ構築物と会合した細胞（例えば、エフェクター細胞、例えば、Ｔ細胞）をさらに含む。一部の実施形態では、抗ＡＭＣ構築物および薬学的に許容されるキャリアを含む医薬組成物が提供される。一部の実施形態では、医薬組成物は、抗ＡＭＣ構築物と会合した細胞（例えば、エフェクター細胞、例えば、Ｔ細胞）をさらに含む。
【０４２０】
抗ＡＭＣ構築物の適切な製剤は、所望の程度の純度を有する抗ＡＭＣ構築物を、凍結乾燥製剤または水溶液の形態で、任意選択の薬学的に許容されるキャリア、賦形剤または安定剤（Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ  第１６版、Ｏｓｏｌ，  Ａ．編（１９８０年））と混合することによって取得される。許容されるキャリア、賦形剤または安定剤は、使用される投薬量および濃度においてレシピエントにとって非毒性であり、これには、緩衝剤、例えば、ホスフェート、シトレートおよび他の有機酸；アスコルビン酸およびメチオニンを含む抗酸化剤；防腐剤（例えば、オクタデシルジメチルベンジルアンモニウムクロリド；塩化ヘキサメトニウム；塩化ベンザルコニウム、塩化ベンゼトニウム；フェノール、ブチルもしくはベンジルアルコール；アルキルパラベン、例えば、メチルパラベンもしくはプロピルパラベン；カテコール；レゾルシノール；シクロヘキサノール；３−ペンタノール；およびｍ−クレゾール）；低分子量（約１０残基未満）ポリペプチド；タンパク質、例えば、血清アルブミン、ゼラチンもしくは免疫グロブリン；親水性ポリマー、例えば、ポリビニルピロリドン（ｏｌｙｖｉｎｙｌｐｙｒｒｏｌｉｄｏｎｅ）；アミノ酸、例えば、グリシン、グルタミン、アスパラギン、ヒスチジン、アルギニンもしくはリシン；グルコース、マンノースもしくはデキストリンを含む、単糖、二糖および他の炭水化物；キレート剤、例えば、ＥＤＴＡ；糖、例えば、スクロース、マンニトール、トレハロースもしくはソルビトール；塩形成性対イオン、例えば、ナトリウム；金属錯体（例えば、Ｚｎ−タンパク質錯体）；および／または非イオン性界面活性剤、例えば、ＴＷＥＥＮ（商標）、ＰＬＵＲＯＮＩＣＳ（商標）もしくはポリエチレングリコール（ＰＥＧ）が含まれる。例示的な製剤は、参照によって本明細書に明示的に組み込まれるＷＯ９８／５６４１８に記載されている。皮下投与のために適応させた凍結乾燥製剤は、ＷＯ９７／０４８０１に記載されている。かかる凍結乾燥製剤は、適切な希釈剤で高いタンパク質濃度に再構成され得、再構成された製剤は、本明細書で処置される個体に皮下投与され得る。リポフェクチンまたはリポソームが、本発明の抗ＡＭＣ構築物を細胞中に送達するために使用され得る。
【０４２１】
本明細書の製剤は、処置されている特定の適応症に必要な場合、抗ＡＭＣ構築物に加えて、１または複数の活性化合物、好ましくは、互いに有害な影響を与えない補完的活性を有する活性化合物もまた含み得る。例えば、抗ＡＭＣ構築物に加えて、抗新生物剤、成長阻害剤、細胞傷害剤または化学療法剤をさらに提供することが望まれ得る。かかる分子は、適切には、意図した目的のために有効な量で組み合わされて存在する。かかる他の薬剤の有効量は、製剤中に存在する抗ＡＭＣ構築物の量、疾患または障害または処置の型、および上で議論した他の因子に依存する。これらは一般に、本明細書に記載されるのと同じ投薬量および投与経路で、またはこれまでに使用された投薬量の約１〜９９％で、使用される。
【０４２２】
抗ＡＭＣ構築物はまた、それぞれ、例えば、コアセルベーション技術によってまたは界面重合によって調製されたマイクロカプセル、例えば、ヒドロキシメチルセルロースまたはゼラチン−マイクロカプセルおよびポリ−（メチルメタクリレート）マイクロカプセル中に、コロイド薬物送達系（例えば、リポソーム、アルブミンミクロスフェア、マイクロエマルジョン、ナノ粒子およびナノカプセル）中に、またはマクロエマルジョン中に捕捉され得る。かかる技術は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ  第１６版、Ｏｓｏｌ，  Ａ．編（１９８０年）に開示されている。徐放性調製物が調製され得る。
【０４２３】
抗ＡＭＣ構築物の徐放性調製物が調製され得る。徐放性調製物の適切な例には、抗体（またはその断片）を含む固体疎水性ポリマーの半透性マトリックスが含まれ、このマトリックスは、成形物品、例えば、フィルムまたはマイクロカプセルの形態である。徐放性マトリックスの例には、ポリエステル、ヒドロゲル（例えば、ポリ（２−ヒドロキシエチル−メタクリレート）またはポリ（ビニルアルコール））、ポリラクチド（米国特許第３，７７３，９１９号）、Ｌ−グルタミン酸およびエチル−Ｌ−グルタメートのコポリマー、非分解性エチレン酢酸ビニル、分解性乳酸−グリコール酸コポリマー、例えば、ＬＵＰＲＯＮ  ＤＥＰＯＴ（商標）（乳酸−グリコール酸コポリマーおよび酢酸ロイプロリドから構成される注射可能なミクロスフェア）、ならびにポリ−Ｄ−（−）−３−ヒドロキシ酪酸が含まれる。エチレン酢酸ビニルおよび乳酸−グリコール酸などのポリマーは、１００日を超えた分子の放出を可能にするが、ある特定のヒドロゲルは、より短い期間にわたってタンパク質を放出する。封入された抗体が、身体中で長期にわたって残存する場合、これらは、３７℃での湿気への曝露の結果として、変性または凝集して、生物学的活性の喪失および免疫原性の可能な変化を生じ得る。合理的戦略が、関与する機構に依存して、抗ＡＭＣ構築物の安定化のために考案され得る。例えば、凝集機構が、チオ−ジスルフィド相互変換を介した分子間Ｓ−Ｓ結合形成であることが発見された場合、安定化は、スルフヒドリル残基を改変し、酸性溶液から凍結乾燥し、水分含量を制御し、適切な添加剤を使用し、特定のポリマーマトリックス組成物を開発することによって、達成され得る。
【０４２４】
一部の実施形態では、抗ＡＭＣ構築物は、クエン酸塩、ＮａＣｌ、酢酸塩、コハク酸塩、グリシン、ポリソルベート８０（Ｔｗｅｅｎ  ８０）、または上記のものの任意の組合せを含む緩衝液中で製剤化される。一部の実施形態では、抗ＡＭＣ構築物は、約１００ｍＭ〜約１５０ｍＭのグリシンを含む緩衝液中で製剤化される。一部の実施形態では、抗ＡＭＣ構築物は、約５０ｍＭ〜約１００ｍＭのＮａＣｌを含む緩衝液中で製剤化される。一部の実施形態では、抗ＡＭＣ構築物は、約１０ｍＭ〜約５０ｍＭの酢酸塩を含む緩衝液中で製剤化される。一部の実施形態では、抗ＡＭＣ構築物は、約１０ｍＭ〜約５０ｍＭのコハク酸塩を含む緩衝液中で製剤化される。一部の実施形態では、抗ＡＭＣ構築物は、約０．００５％〜約０．０２％のポリソルベート８０を含む緩衝液中で製剤化される。一部の実施形態では、抗ＡＭＣ構築物は、約５．１と５．６との間のｐＨを有する緩衝液中で製剤化される。一部の実施形態では、抗ＡＭＣ構築物は、１０ｍＭのクエン酸塩、１００ｍＭのＮａＣｌ、１００ｍＭのグリシンおよび０．０１％のポリソルベート８０を含む緩衝液中で製剤化され、この製剤は、ｐＨ５．５である。
【０４２５】
ｉｎ  ｖｉｖｏ投与に使用される製剤は、無菌でなければならない。これは、例えば、無菌濾過膜を介した濾過によって容易に達成される。
【０４２６】
抗ＡＭＣ構築物を使用した処置方法
本発明の抗ＡＭＣ構築物および／または組成物は、例えば、がん（例えば、肝細胞癌、胚細胞腫瘍、および乳がん）を含む、異常に高いＡＦＰ発現を伴う疾患および／または障害（本明細書では「ＡＦＰ陽性」疾患または障害とも称される）を処置するために、個体（例えば、ヒトなどの哺乳動物）に投与することができる。したがって、本出願は、一部の実施形態では、個体におけるＡＦＰ陽性疾患（例えばがん）を処置する方法であって、個体に、有効量の、本明細書に記載の抗ＡＭＣ構築物のいずれか１つなどの、抗ＡＭＣ抗体部分を含む抗ＡＭＣ構築物を含む組成物（例えば、医薬組成物）を投与するステップを含む方法を提供する。一部の実施形態では、組成物は、抗ＡＭＣ構築物と会合した細胞（例えば、エフェクター細胞）をさらに含む。一部の実施形態では、がんは、例えば、肝細胞癌、胚細胞腫瘍、および乳がんからなる群から選択される。一部の実施形態では、がんは、肝細胞癌である。一部の実施形態では、がんは、肝細胞癌であり、処置は、がんの拡散を防止すること、例えば、がんの転移を阻害すること（例えば、防止すること）を含む。一部の実施形態では、がんは、転移性肝細胞癌である。一部の実施形態では、個体は、ヒトである。
【０４２７】
例えば、一部の実施形態では、個体におけるＡＦＰ陽性疾患を処置する方法であって、個体に、有効量の、ＡＦＰペプチドおよびＭＨＣクラスＩタンパク質を含む複合体に特異的に結合する抗ＡＭＣ抗体部分を含む抗ＡＭＣ構築物を含む組成物を投与するステップを含む方法が提供される。一部の実施形態では、ＡＦＰペプチドは、ＡＦＰ１５８（配列番号４）である。一部の実施形態では、ＭＨＣクラスＩタンパク質は、ＨＬＡ−Ａ０２である。一部の実施形態では、ＭＨＣクラスＩタンパク質は、ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１である。一部の実施形態では、抗ＡＭＣ構築物は、天然に存在しない。一部の実施形態では、抗ＡＭＣ構築物は、全長抗体である。一部の実施形態では、抗ＡＭＣ構築物は、多特異的（例えば二重特異的）分子である。一部の実施形態では、抗ＡＭＣ構築物は、キメラ抗原受容体である。一部の実施形態では、抗ＡＭＣ構築物は、イムノコンジュゲートである。一部の実施形態では、組成物は、抗ＡＭＣ構築物と会合した細胞（例えば、エフェクター細胞）をさらに含む。一部の実施形態では、ＡＦＰ陽性疾患は、がんである。一部の実施形態では、がんは、例えば、肝細胞癌、胚細胞腫瘍、または乳がんである。一部の実施形態では、がんは、肝細胞癌である。一部の実施形態では、がんは、肝細胞癌であり、処置は、がんの拡散を防止すること、例えば、がんの転移を阻害すること（例えば、防止すること）を含む。一部の実施形態では、がんは、転移性肝細胞癌である。一部の実施形態では、個体は、ヒトである。
【０４２８】
一部の実施形態では、個体におけるＡＦＰ陽性疾患を処置する方法であって、個体に、有効量の、ＡＦＰ１５８ペプチド（配列番号４）およびＨＬＡ−Ａ＊０２：０１を含む複合体に特異的に結合する抗ＡＭＣ抗体部分を含む抗ＡＭＣ構築物を含む組成物を投与するステップを含む方法が提供される。一部の実施形態では、抗ＡＭＣ構築物は、天然に存在しない。一部の実施形態では、抗ＡＭＣ構築物は、全長抗体である。一部の実施形態では、抗ＡＭＣ構築物は、多特異的（例えば二重特異的）分子である。一部の実施形態では、抗ＡＭＣ構築物は、キメラ抗原受容体である。一部の実施形態では、抗ＡＭＣ構築物は、イムノコンジュゲートである。一部の実施形態では、組成物は、抗ＡＭＣ構築物と会合した細胞（例えば、エフェクター細胞）をさらに含む。一部の実施形態では、ＡＦＰ陽性疾患は、がんである。一部の実施形態では、がんは、例えば、肝細胞癌、胚細胞腫瘍、または乳がんである。一部の実施形態では、がんは、肝細胞癌である。一部の実施形態では、がんは、肝細胞癌であり、処置は、がんの拡散を防止すること、例えば、がんの転移を阻害すること（例えば、防止すること）を含む。一部の実施形態では、がんは、転移性肝細胞癌である。一部の実施形態では、個体は、ヒトである。
【０４２９】
一部の実施形態では、個体におけるＡＦＰ陽性疾患を処置する方法であって、個体に、有効量の、ＡＦＰペプチドおよびＭＨＣクラスＩタンパク質を含む複合体に特異的に結合する抗ＡＭＣ抗体部分であって、ｉ）Ｇ−Ｆ／Ｙ−Ｓ／Ｔ−Ｆ−Ｄ／Ｓ／Ｔ−Ｄ／Ｎ／Ｓ−Ｙ／Ａ−Ａ／Ｇ／Ｗ（配列番号８７）のアミノ酸配列を含むＨＣ−ＣＤＲ１、または最大で約３（例えば、約１、２、もしくは３のいずれか）アミノ酸の置換を含むそのバリアント、Ｉ／Ｓ−Ｋ／Ｓ−Ｘ−Ｈ／Ｙ−Ｘ−Ｇ−Ｘ−Ｔ（配列番号８８）のアミノ酸配列を含むＨＣ−ＣＤＲ２、または最大で約３（例えば、約１、２、もしくは３のいずれか）アミノ酸の置換を含むそのバリアント、およびＡ／Ｇ−Ｘ−Ｗ／Ｙ−Ｙ−Ｘ−Ｘ−Ｘ−Ｆ／Ｙ−Ｄ（配列番号８９）のアミノ酸配列を含むＨＣ−ＣＤＲ３、または最大で約３（例えば、約１、２、もしくは３のいずれか）アミノ酸の置換を含むそのバリアントを含む重鎖可変ドメイン配列；ならびにｉｉ）Ｓ／Ｔ−Ｇ／Ｓ−Ｄ／Ｎ−Ｉ／Ｖ−Ａ／Ｇ−Ａ／Ｓ／Ｖ−Ｘ−Ｈ／Ｙ（配列番号１２０）のアミノ酸配列を含むＬＣ−ＣＤＲ１、または最大で約３（例えば、約１、２、もしくは３のいずれか）アミノ酸の置換を含むそのバリアント、およびＱ−Ｓ／Ｔ−Ｙ／Ｗ−Ｄ／Ｔ−Ｓ／Ｔ−Ａ／Ｓ（配列番号１２１）のアミノ酸配列を含むＬＣ−ＣＤＲ３、または最大で約３（例えば、約１、２、もしくは３のいずれか）アミノ酸の置換を含むそのバリアントを含む軽鎖可変ドメインを含み、Ｘは任意のアミノ酸であり得る、抗ＡＭＣ抗体部分を含む抗ＡＭＣ構築物を含む組成物を投与するステップを含む方法が提供される。一部の実施形態では、抗ＡＭＣ構築物は、天然に存在しない。一部の実施形態では、抗ＡＭＣ構築物は、全長抗体である。一部の実施形態では、抗ＡＭＣ構築物は、多特異的（例えば二重特異的）分子である。一部の実施形態では、抗ＡＭＣ構築物は、キメラ抗原受容体である。一部の実施形態では、抗ＡＭＣ構築物は、イムノコンジュゲートである。一部の実施形態では、組成物は、抗ＡＭＣ構築物と会合した細胞（例えば、エフェクター細胞）をさらに含む。一部の実施形態では、ＡＦＰ陽性疾患は、がんである。一部の実施形態では、がんは、例えば、肝細胞癌、胚細胞腫瘍、または乳がんである。一部の実施形態では、がんは、肝細胞癌である。一部の実施形態では、がんは、肝細胞癌であり、処置は、がんの拡散を防止すること、例えば、がんの転移を阻害すること（例えば、防止すること）を含む。一部の実施形態では、がんは、転移性肝細胞癌である。一部の実施形態では、個体は、ヒトである。
【０４３０】
一部の実施形態では、個体におけるＡＦＰ陽性疾患を処置する方法であって、個体に、有効量の、ＡＦＰペプチドおよびＭＨＣクラスＩタンパク質を含む複合体に特異的に結合する抗ＡＭＣ抗体部分であって、ｉ）Ｇ−Ｆ／Ｙ−Ｓ／Ｔ−Ｆ−Ｄ／Ｓ／Ｔ−Ｄ／Ｎ／Ｓ−Ｙ／Ａ−Ａ／Ｇ／Ｗ（配列番号８７）のアミノ酸配列を含むＨＣ−ＣＤＲ１、Ｉ／Ｓ−Ｋ／Ｓ−Ｘ−Ｈ／Ｙ−Ｘ−Ｇ−Ｘ−Ｔ（配列番号８８）のアミノ酸配列を含むＨＣ−ＣＤＲ２、およびＡ／Ｇ−Ｘ−Ｗ／Ｙ−Ｙ−Ｘ−Ｘ−Ｘ−Ｆ／Ｙ−Ｄ（配列番号８９）のアミノ酸配列を含むＨＣ−ＣＤＲ３を含む重鎖可変ドメイン配列；ならびにｉｉ）Ｓ／Ｔ−Ｇ／Ｓ−Ｄ／Ｎ−Ｉ／Ｖ−Ａ／Ｇ−Ａ／Ｓ／Ｖ−Ｘ−Ｈ／Ｙ（配列番号１２０）のアミノ酸配列を含むＬＣ−ＣＤＲ１、およびＱ−Ｓ／Ｔ−Ｙ／Ｗ−Ｄ／Ｔ−Ｓ／Ｔ−Ａ／Ｓ（配列番号１２１）のアミノ酸配列を含むＬＣ−ＣＤＲ３を含む軽鎖可変ドメインを含み、Ｘは任意のアミノ酸であり得る、抗ＡＭＣ抗体部分を含む抗ＡＭＣ構築物を含む組成物を投与するステップを含む方法が提供される。一部の実施形態では、抗ＡＭＣ構築物は、天然に存在しない。一部の実施形態では、抗ＡＭＣ構築物は、全長抗体である。一部の実施形態では、抗ＡＭＣ構築物は、多特異的（例えば二重特異的）分子である。一部の実施形態では、抗ＡＭＣ構築物は、キメラ抗原受容体である。一部の実施形態では、抗ＡＭＣ構築物は、イムノコンジュゲートである。一部の実施形態では、組成物は、抗ＡＭＣ構築物と会合した細胞（例えば、エフェクター細胞）をさらに含む。一部の実施形態では、ＡＦＰ陽性疾患は、がんである。一部の実施形態では、がんは、例えば、肝細胞癌、胚細胞腫瘍、または乳がんである。一部の実施形態では、がんは、肝細胞癌である。一部の実施形態では、がんは、肝細胞癌であり、処置は、がんの拡散を防止すること、例えば、がんの転移を阻害すること（例えば、防止すること）を含む。一部の実施形態では、がんは、転移性肝細胞癌である。一部の実施形態では、個体は、ヒトである。
【０４３１】
一部の実施形態では、個体におけるＡＦＰ陽性疾患を処置する方法であって、個体に、有効量の、ＡＦＰペプチドおよびＭＨＣクラスＩタンパク質を含む複合体に特異的に結合する抗ＡＭＣ抗体部分であって、ｉ）配列番号５７〜６６のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＨＣ−ＣＤＲ１、または最大で約５（例えば、約１、２、３、４、もしくは５のいずれか）アミノ酸の置換を含むそのバリアント；配列番号６７〜７６のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＨＣ−ＣＤＲ２、または最大で約５（例えば、約１、２、３、４、もしくは５のいずれか）アミノ酸の置換を含むそのバリアント；および配列番号７７〜８６のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＨＣ−ＣＤＲ３；または最大で約５（例えば、約１、２、３、４、もしくは５のいずれか）アミノ酸の置換を含むそのバリアントを含む重鎖可変ドメイン配列；ならびにｉｉ）配列番号９０〜９９のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＬＣ−ＣＤＲ１、または最大で約５（例えば、約１、２、３、４、もしくは５のいずれか）アミノ酸の置換を含むそのバリアント；配列番号１００〜１０９のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＬＣ−ＣＤＲ２、または最大で約５（例えば、約１、２、３、４、もしくは５のいずれか）アミノ酸の置換を含むそのバリアント；および配列番号１１０〜１１９のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＬＣ−ＣＤＲ３；または最大で約５（例えば、約１、２、３、４、もしくは５のいずれか）アミノ酸の置換を含むそのバリアントを含む軽鎖可変ドメイン配列を含む抗ＡＭＣ抗体部分を含む抗ＡＭＣ構築物を含む組成物を投与するステップを含む方法が提供される。一部の実施形態では、抗ＡＭＣ構築物は、天然に存在しない。一部の実施形態では、抗ＡＭＣ構築物は、全長抗体である。一部の実施形態では、抗ＡＭＣ構築物は、多特異的（例えば二重特異的）分子である。一部の実施形態では、抗ＡＭＣ構築物は、キメラ抗原受容体である。一部の実施形態では、抗ＡＭＣ構築物は、イムノコンジュゲートである。一部の実施形態では、組成物は、抗ＡＭＣ構築物と会合した細胞（例えば、エフェクター細胞）をさらに含む。一部の実施形態では、ＡＦＰ陽性疾患は、がんである。一部の実施形態では、がんは、例えば、肝細胞癌、胚細胞腫瘍、または乳がんである。一部の実施形態では、がんは、肝細胞癌である。一部の実施形態では、がんは、肝細胞癌であり、処置は、がんの拡散を防止すること、例えば、がんの転移を阻害すること（例えば、防止すること）を含む。一部の実施形態では、がんは、転移性肝細胞癌である。一部の実施形態では、個体は、ヒトである。
【０４３２】
一部の実施形態では、個体におけるＡＦＰ陽性疾患を処置する方法であって、個体に、有効量の、ＡＦＰペプチドおよびＭＨＣクラスＩタンパク質を含む複合体に特異的に結合する抗ＡＭＣ抗体部分であって、ｉ）配列番号５７〜６６のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＨＣ−ＣＤＲ１；配列番号６７〜７６のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＨＣ−ＣＤＲ２；および配列番号７７〜８６のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＨＣ−ＣＤＲ３；または、ＨＣ−ＣＤＲ配列内に最大で約５（例えば、約１、２、３、４、もしくは５のいずれか）アミノ酸の置換を含むそのバリアントを含む重鎖可変ドメイン配列；ならびにｉｉ）配列番号９０〜９９のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＬＣ−ＣＤＲ１；配列番号１００〜１０９のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＬＣ−ＣＤＲ２；および配列番号１１０〜１１９のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＬＣ−ＣＤＲ３；または、ＬＣ−ＣＤＲ配列内に最大で約５（例えば、約１、２、３、４、もしくは５のいずれか）アミノ酸の置換を含むそのバリアントを含む軽鎖可変ドメイン配列を含む抗ＡＭＣ抗体部分を含む抗ＡＭＣ構築物を含む組成物を投与するステップを含む方法が提供される。一部の実施形態では、抗ＡＭＣ構築物は、天然に存在しない。一部の実施形態では、抗ＡＭＣ構築物は、全長抗体である。一部の実施形態では、抗ＡＭＣ構築物は、多特異的（例えば二重特異的）分子である。一部の実施形態では、抗ＡＭＣ構築物は、キメラ抗原受容体である。一部の実施形態では、抗ＡＭＣ構築物は、イムノコンジュゲートである。一部の実施形態では、組成物は、抗ＡＭＣ構築物と会合した細胞（例えば、エフェクター細胞）をさらに含む。一部の実施形態では、ＡＦＰ陽性疾患は、がんである。一部の実施形態では、がんは、例えば、肝細胞癌、胚細胞腫瘍、または乳がんである。一部の実施形態では、がんは、肝細胞癌である。一部の実施形態では、がんは、肝細胞癌であり、処置は、がんの拡散を防止すること、例えば、がんの転移を阻害すること（例えば、防止すること）を含む。一部の実施形態では、がんは、転移性肝細胞癌である。一部の実施形態では、個体は、ヒトである。
【０４３３】
一部の実施形態では、個体におけるＡＦＰ陽性疾患を処置する方法であって、個体に、有効量の、ＡＦＰペプチドおよびＭＨＣクラスＩタンパク質を含む複合体に特異的に結合する抗ＡＭＣ抗体部分であって、ｉ）配列番号５７〜６６のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＨＣ−ＣＤＲ１；配列番号６７〜７６のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＨＣ−ＣＤＲ２；および配列番号７７〜８６のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＨＣ−ＣＤＲ３を含む重鎖可変ドメイン配列；ならびにｉｉ）配列番号９０〜９９のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＬＣ−ＣＤＲ１；配列番号１００〜１０９のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＬＣ−ＣＤＲ２；および配列番号１１０〜１１９のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＬＣ−ＣＤＲ３を含む軽鎖可変ドメイン配列を含む抗ＡＭＣ抗体部分を含む抗ＡＭＣ構築物を含む組成物を投与するステップを含む方法が提供される。一部の実施形態では、抗ＡＭＣ構築物は、天然に存在しない。一部の実施形態では、抗ＡＭＣ構築物は、全長抗体である。一部の実施形態では、抗ＡＭＣ構築物は、多特異的（例えば二重特異的）分子である。一部の実施形態では、抗ＡＭＣ構築物は、キメラ抗原受容体である。一部の実施形態では、抗ＡＭＣ構築物は、イムノコンジュゲートである。一部の実施形態では、組成物は、抗ＡＭＣ構築物と会合した細胞（例えば、エフェクター細胞）をさらに含む。一部の実施形態では、ＡＦＰ陽性疾患は、がんである。一部の実施形態では、がんは、例えば、肝細胞癌、胚細胞腫瘍、または乳がんである。一部の実施形態では、がんは、肝細胞癌である。一部の実施形態では、がんは、肝細胞癌であり、処置は、がんの拡散を防止すること、例えば、がんの転移を阻害すること（例えば、防止すること）を含む。一部の実施形態では、がんは、転移性肝細胞癌である。一部の実施形態では、個体は、ヒトである。
【０４３４】
一部の実施形態では、個体におけるＡＦＰ陽性疾患を処置する方法であって、個体に、有効量の、ＡＦＰペプチドおよびＭＣＨクラスＩタンパク質を含む複合体に特異的に結合する抗ＡＭＣ抗体部分であって、配列番号１７〜２６のいずれか１つのアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン、または少なくとも約９５％（例えば、少なくとも約９６％、９７％、９８％、９９％のいずれか）の配列同一性を有するそのバリアント、および配列番号２７〜３６のいずれか１つのアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン、または少なくとも約９５％（例えば、少なくとも約９６％、９７％、９８％、９９％のいずれか）の配列同一性を有するそのバリアントを含む抗ＡＭＣ抗体部分を含む抗ＡＭＣ構築物を含む組成物を投与するステップを含む方法が提供される。一部の実施形態では、抗ＡＭＣ構築物は、天然に存在しない。一部の実施形態では、抗ＡＭＣ構築物は、全長抗体である。一部の実施形態では、抗ＡＭＣ構築物は、多特異的（例えば二重特異的）分子である。一部の実施形態では、抗ＡＭＣ構築物は、キメラ抗原受容体である。一部の実施形態では、抗ＡＭＣ構築物は、イムノコンジュゲートである。一部の実施形態では、組成物は、抗ＡＭＣ構築物と会合した細胞（例えば、エフェクター細胞）をさらに含む。一部の実施形態では、ＡＦＰ陽性疾患は、がんである。一部の実施形態では、がんは、例えば、肝細胞癌、胚細胞腫瘍、または乳がんである。一部の実施形態では、がんは、肝細胞癌である。一部の実施形態では、がんは、肝細胞癌であり、処置は、がんの拡散を防止すること、例えば、がんの転移を阻害すること（例えば、防止すること）を含む。一部の実施形態では、がんは、転移性肝細胞癌である。一部の実施形態では、個体は、ヒトである。
【０４３５】
一部の実施形態では、個体におけるＡＦＰ陽性疾患を処置する方法であって、個体に、有効量の、ＡＦＰペプチドおよびＭＣＨクラスＩタンパク質を含む複合体に特異的に結合する抗ＡＭＣ抗体部分であって、配列番号１７〜２６のいずれか１つのアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインおよび配列番号２７〜３６のいずれか１つのアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを含む抗ＡＭＣ抗体部分を含む抗ＡＭＣ構築物を含む組成物を投与するステップを含む方法が提供される。一部の実施形態では、抗ＡＭＣ構築物は、天然に存在しない。一部の実施形態では、抗ＡＭＣ構築物は、全長抗体である。一部の実施形態では、抗ＡＭＣ構築物は、多特異的（例えば二重特異的）分子である。一部の実施形態では、抗ＡＭＣ構築物は、キメラ抗原受容体である。一部の実施形態では、抗ＡＭＣ構築物は、イムノコンジュゲートである。一部の実施形態では、組成物は、抗ＡＭＣ構築物と会合した細胞（例えば、エフェクター細胞）をさらに含む。一部の実施形態では、ＡＦＰ陽性疾患は、がんである。一部の実施形態では、がんは、例えば、肝細胞癌、胚細胞腫瘍、または乳がんである。一部の実施形態では、がんは、肝細胞癌である。一部の実施形態では、がんは、肝細胞癌であり、処置は、がんの拡散を防止すること、例えば、がんの転移を阻害すること（例えば、防止すること）を含む。一部の実施形態では、がんは、転移性肝細胞癌である。一部の実施形態では、個体は、ヒトである。
【０４３６】
一部の実施形態では、個体における転移性肝細胞癌を処置する方法であって、個体に、有効量の、上記実施形態のいずれかに従う抗ＡＭＣ構築物を含む組成物を投与するステップを含む方法が提供される。一部の実施形態では、個体は、ヒトである。
【０４３７】
一部の実施形態では、個体における肝細胞癌の転移を阻害する（例えば、防止する）方法であって、個体に、有効量の、上記実施形態のいずれかに従う抗ＡＭＣ構築物を含む組成物を投与するステップを含む方法が提供される。一部の実施形態では、個体は、ヒトである。
【０４３８】
上記のＡＦＰ陽性疾患を処置するための方法のいずれかの一部の実施形態では、抗ＡＭＣ構築物を、個体への投与前に細胞（例えば、免疫細胞、例えばＴ細胞）とコンジュゲートする。したがって、例えば、個体におけるＡＦＰ陽性疾患を処置する方法であって、ａ）本明細書に記載の抗ＡＭＣ構築物のいずれか１つを細胞（例えば、免疫細胞、例えばＴ細胞）とコンジュゲートして抗ＡＭＣ構築物／細胞コンジュゲートを形成するステップ、およびｂ）個体に、有効量の、抗ＡＭＣ構築物／細胞コンジュゲートを含む組成物を投与するステップを含む方法が提供される。一部の実施形態では、細胞は、個体に由来する。一部の実施形態では、細胞は、個体に由来しない。一部の実施形態では、抗ＡＭＣ構築物と細胞を、細胞の表面上の分子との共有結合によってコンジュゲートする。一部の実施形態では、抗ＡＭＣ構築物と細胞を、細胞の表面上の分子との非共有結合によってコンジュゲートする。一部の実施形態では、抗ＡＭＣ構築物を、抗ＡＭＣ構築物の一部分を細胞の外膜に挿入することによって細胞とコンジュゲートする。一部の実施形態では、抗ＡＭＣ構築物は、天然に存在しない。一部の実施形態では、抗ＡＭＣ構築物は、全長抗体である。一部の実施形態では、抗ＡＭＣ構築物は、多特異的（例えば二重特異的）分子である。一部の実施形態では、抗ＡＭＣ構築物は、キメラ抗原受容体である。一部の実施形態では、抗ＡＭＣ構築物は、イムノコンジュゲートである。一部の実施形態では、ＡＦＰ陽性疾患は、がんである。一部の実施形態では、がんは、例えば、肝細胞癌、胚細胞腫瘍、または乳がんである。一部の実施形態では、がんは、肝細胞癌である。一部の実施形態では、がんは、肝細胞癌であり、処置は、がんの拡散を防止すること、例えば、がんの転移を阻害すること（例えば、防止すること）を含む。一部の実施形態では、がんは、転移性肝細胞癌である。一部の実施形態では、個体は、ヒトである。
【０４３９】
一部の実施形態では、個体は、哺乳動物（例えば、ヒト、非ヒト霊長類、ラット、マウス、ウシ、ウマ、ブタ、ヒツジ、ヤギ、イヌ、ネコなど）である。一部の実施形態では、個体は、ヒトである。一部の実施形態では、個体は、臨床患者、臨床試験の志願者、実験動物などである。一部の実施形態では、個体は、約６０歳未満（例えば、約５０歳未満、約４０歳未満、約３０歳未満、約２５歳未満、約２０歳未満、約１５歳未満、または約１０歳未満のいずれかを含む）である。一部の実施形態では、個体は、約６０歳超（例えば、約７０歳超、約８０歳超、約９０歳超、または約１００歳超のいずれかを含む）である。一部の実施形態では、個体は、本明細書に記載の疾患または障害（例えば、肝細胞癌、胚細胞腫瘍、および乳がん）のうちの１つまたは複数と診断されているまたはそれに遺伝的にかかりやすい。一部の実施形態では、個体は、１つまたは複数の本明細書に記載の疾患または障害に関連づけられる１つまたは複数の危険因子を有する。
【０４４０】
本出願は、一部の実施形態では、個体において、ＡＦＰペプチドおよびＭＨＣクラスＩタンパク質を含む複合体をその表面上に提示する細胞に抗ＡＭＣ構築物（例えば、本明細書に記載の抗ＡＭＣ構築物のいずれか１つ）を送達する方法であって、個体に、抗ＡＭＣ構築物を含む組成物を投与するステップを含む方法を提供する。一部の実施形態では、送達される抗ＡＭＣ構築物は、細胞（例えば、エフェクター細胞、例えば、Ｔ細胞）と会合している。
【０４４１】
がん（例えば、肝細胞癌、胚細胞腫瘍、および乳がん）または異常なＡＦＰ発現を示す任意の他の疾患ならびにそれらの疾患の臨床像に関する多くの診断方法が当技術分野で公知である。そのような方法としては、これらに限定されないが、例えば、免疫組織化学的検査、ＰＣＲ、および蛍光ｉｎ  ｓｉｔｕハイブリダイゼーション（ＦＩＳＨ）が挙げられる。
【０４４２】
一部の実施形態では、異常なＡＦＰ発現を伴う疾患または障害を処置するために、本発明の抗ＡＭＣ構築物および／または組成物を第２の薬剤、第３の薬剤、または第４の薬剤（例えば、抗新生物剤、成長阻害剤、細胞傷害剤、または化学療法剤を含む）と組み合わせて投与する。一部の実施形態では、抗ＡＭＣ構築物を、ＭＨＣクラスＩタンパク質の発現を増大させ、かつ／またはＭＨＣクラスＩタンパク質によるＡＦＰペプチドの表面提示を増強する薬剤と組み合わせて投与する。一部の実施形態では、薬剤として、例えば、ＩＦＮ受容体アゴニスト、Ｈｓｐ９０阻害剤、ｐ５３発現のエンハンサー、および化学療法剤が挙げられる。一部の実施形態では、薬剤は、例えばＩＦＮγ、ＩＦＮβ、およびＩＦＮαを含むＩＦＮ受容体アゴニストである。一部の実施形態では、薬剤は、例えばタネスピマイシン（１７−ＡＡＧ）、アルベスピマイシン（１７−ＤＭＡＧ）、レタスピマイシン（ＩＰＩ−５０４）、ＩＰＩ−４９３、ＣＮＦ２０２４／ＢＩＩＢ０２１、ＭＰＣ−３１００、Ｄｅｂｉｏ  ０９３２（ＣＵＤＣ−３０５）、ＰＵ−Ｈ７１、ガネテスピブ（ＳＴＡ−９０９０）、ＮＶＰ−ＡＵＹ９２２（ＶＥＲ−５２２６９）、ＨＳＰ９９０、ＫＷ−２４７８、ＡＴ１３３８７、ＳＮＸ−５４２２、ＤＳ−２２４８、およびＸＬ８８８を含むＨｓｐ９０阻害剤である。一部の実施形態では、薬剤は、例えば５−フルオロウラシルおよびヌトリン−３を含むｐ５３発現のエンハンサーである。一部の実施形態では、薬剤は、例えばトポテカン、エトポシド、シスプラチン、パクリタキセル、およびビンブラスチンを含む化学療法剤である。
【０４４３】
一部の実施形態では、個体におけるＡＦＰ陽性疾患を処置する方法であって、ここで、ＡＦＰを発現する細胞が、通常はＡＦＰタンパク質およびＭＨＣクラスＩタンパク質を含む複合体をそれらの表面上に提示しないまたは比較的低レベルで提示するもの（例えば、胚細胞腫瘍細胞）である、個体に、抗ＡＭＣ構築物を含む組成物を、ＭＨＣクラスＩタンパク質の発現を増大させ、かつ／またはＭＨＣクラスＩタンパク質によるＡＦＰペプチドの表面提示を増強する薬剤と組み合わせて投与するステップを含む方法が提供される。一部の実施形態では、薬剤として、例えば、ＩＦＮ受容体アゴニスト、Ｈｓｐ９０阻害剤、ｐ５３発現のエンハンサー、および化学療法剤が挙げられる。一部の実施形態では、薬剤は、例えばＩＦＮγ、ＩＦＮβ、およびＩＦＮαを含むＩＦＮ受容体アゴニストである。一部の実施形態では、薬剤は、例えばタネスピマイシン（１７−ＡＡＧ）、アルベスピマイシン（１７−ＤＭＡＧ）、レタスピマイシン（ＩＰＩ−５０４）、ＩＰＩ−４９３、ＣＮＦ２０２４／ＢＩＩＢ０２１、ＭＰＣ−３１００、Ｄｅｂｉｏ  ０９３２（ＣＵＤＣ−３０５）、ＰＵ−Ｈ７１、ガネテスピブ（ＳＴＡ−９０９０）、ＮＶＰ−ＡＵＹ９２２（ＶＥＲ−５２２６９）、ＨＳＰ９９０、ＫＷ−２４７８、ＡＴ１３３８７、ＳＮＸ−５４２２、ＤＳ−２２４８、およびＸＬ８８８を含むＨｓｐ９０阻害剤である。一部の実施形態では、薬剤は、例えば５−フルオロウラシルおよびヌトリン−３を含むｐ５３発現のエンハンサーである。一部の実施形態では、薬剤は、例えばトポテカン、エトポシド、シスプラチン、パクリタキセル、およびビンブラスチンを含む化学療法剤である。
【０４４４】
がんの処置は、例えば、腫瘍の退縮、腫瘍の重量またはサイズの減少、進行までの時間、生存の持続時間、無増悪生存期間、奏効率、応答の持続時間、生活の質、タンパク質の発現および／または活性によって評価することができる。例えば放射線画像法による応答の測定を含む、療法の有効性を決定するための手法を用いることができる。
【０４４５】
一部の実施形態では、処置の有効性は、腫瘍成長阻害の百分率（％ＴＧＩ）として測定され、これは、方程式１００−（Ｔ／Ｃ×１００）（式中、Ｔは、処置される腫瘍の相対的な腫瘍体積の平均であり、Ｃは、無処置の腫瘍の相対的な腫瘍体積の平均である）を使用して算出される。一部の実施形態では、％ＴＧＩは、約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、または９５％超である。
【０４４６】
抗ＡＭＣ構築物組成物の投薬および投与方法
個体（例えば、ヒト）に投与される抗ＡＭＣ構築物組成物の用量は、特定の組成物、投与形式、および処置される疾患の型によって変動し得る。一部の実施形態では、組成物の量は、目的の応答（例えば、部分奏効または完全奏効）をもたらすために有効な量である。一部の実施形態では、抗ＡＭＣ構築物組成物の量は、個体における完全奏効をもたらすために十分である。一部の実施形態では、抗ＡＭＣ構築物組成物の量は、個体における部分奏効をもたらすために十分である。一部の実施形態では、投与される抗ＡＭＣ構築物組成物の量（例えば単独で投与した場合）は、抗ＡＭＣ構築物組成物を用いて処置された個体の集団の中で、約２０％、約２５％、約３０％、約３５％、約４０％、約４５％、約５０％、約５５％、約６０％、約６４％、約６５％、約７０％、約７５％、約８０％、約８５％、または約９０％のいずれかを超える全体の奏効率をもたらすために十分である。本明細書に記載の方法の処置に対する個体の応答は、例えば、ＲＥＣＩＳＴレベルに基づいて決定することができる。
【０４４７】
一部の実施形態では、組成物の量は、個体の無増悪生存期間を延長するために十分である。一部の実施形態では、組成物の量は、個体の全生存期間を延長するために十分である。一部の実施形態では、組成物の量（例えば、単独で（ａｌｏｎｇ）投与した場合）は、抗ＡＭＣ構築物組成物を用いて処置された個体の集団の中で、約５０％、約６０％、約７０％、または約７７％のいずれかを超える臨床的利益をもたらすために十分である。
【０４４８】
一部の実施形態では、組成物の量は、単独で、または第２の薬剤、第３の薬剤、および／または第４の薬剤と組み合わせて、処置前の同じ被験体における対応する腫瘍サイズ、がん細胞の数、もしくは腫瘍成長速度と比較して、または処置を受けていない他の被験体における対応する活性と比較して、少なくとも約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、約９５％または約１００％のいずれかだけ、腫瘍のサイズを縮小させる、がん細胞の数を減少させる、または腫瘍の成長速度を低下させるために十分な量である。精製された酵素を用いたｉｎ  ｖｉｔｒｏアッセイ、細胞に基づくアッセイ、動物モデル、またはヒト試験などの標準の方法を使用して、この効果の大きさを測定することができる。
【０４４９】
一部の実施形態では、組成物中の抗ＡＭＣ構築物（例えば、全長抗ＡＭＣ抗体、多特異的抗ＡＭＣ分子、抗ＡＭＣ  ＣＡＲ、または抗ＡＭＣイムノコンジュゲート）の量は、毒物学的影響（すなわち、臨床的に許容されるレベルの毒性を超える影響）を誘導するレベルを下回る、または、組成物を個体に投与した場合に、潜在的な副作用を制御または耐容することができるレベルである。
【０４５０】
一部の実施形態では、組成物の量は、同じ投薬レジメンに従った組成物の最大耐量（ＭＴＤ）付近である。一部の実施形態では、組成物の量は、ＭＴＤの約８０％、約９０％、約９５％、または約９８％のいずれかを超える。
【０４５１】
一部の実施形態では、組成物中の抗ＡＭＣ構築物（例えば、全長抗ＡＭＣ抗体、多特異的抗ＡＭＣ分子、抗ＡＭＣ  ＣＡＲ、または抗ＡＭＣイムノコンジュゲート）の量は、約０．００１μｇ〜約１０００μｇの範囲に含まれる。
【０４５２】
上記の態様のいずれかの一部の実施形態では、組成物中の抗ＡＭＣ構築物（例えば、全長抗ＡＭＣ抗体、多特異的抗ＡＭＣ分子、抗ＡＭＣ  ＣＡＲ、または抗ＡＭＣイムノコンジュゲート）の有効量は、総体重１ｋｇ当たり約０．１μｇ〜約１００ｍｇの範囲である。
【０４５３】
抗ＡＭＣ構築物組成物は、個体（例えば、ヒト）に、例えば静脈内、動脈内、腹腔内、肺内、経口、吸入、小胞内、筋肉内、気管内、皮下、眼内、髄腔内、経粘膜、および経皮を含む種々の経路によって投与することができる。一部の実施形態では、組成物の持続的継続的放出製剤を使用することができる。一部の実施形態では、組成物を静脈内に投与する。一部の実施形態では、組成物を門脈内に投与する。一部の実施形態では、組成物を動脈内に投与する。一部の実施形態では、組成物を腹腔内に投与する。一部の実施形態では、組成物を肝内に投与する。一部の実施形態では、組成物を肝動脈注入によって投与する。
【０４５４】
抗ＡＭＣ  ＣＡＲエフェクター細胞療法
本出願は、エフェクター細胞（例えば、一次Ｔ細胞）の特異性を、ＡＦＰペプチドおよびＭＨＣクラスＩタンパク質を含む複合体に再指向するための、抗ＡＭＣ  ＣＡＲの使用方法も提供する。したがって、本発明は、哺乳動物においてＡＭＣを提示している細胞を含む標的細胞集団または組織に対するエフェクター細胞媒介性応答（例えば、Ｔ細胞性免疫応答）を刺激する方法であって、哺乳動物に、抗ＡＭＣ  ＣＡＲを発現するエフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞）を投与するステップを含む方法も提供する。
【０４５５】
抗ＡＭＣ  ＣＡＲを発現する抗ＡＭＣ  ＣＡＲエフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞）を、それを必要とするレシピエントに注入することができる。注入された細胞は、レシピエントにおいてＡＭＣを提示している細胞を死滅させることができる。一部の実施形態では、抗体療法とは異なり、抗ＡＭＣ  ＣＡＲエフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞）をｉｎ  ｖｉｖｏで複製することができ、その結果、持続的な腫瘍制御をもたらすことができる長期間の持続性がもたらされる。
【０４５６】
一部の実施形態では、抗ＡＭＣ  ＣＡＲエフェクター細胞は、ロバストなｉｎ  ｖｉｖｏ  Ｔ細胞の拡大増殖（ｅｘｐａｎｓｉｏｎ）を受けることができ、長時間にわたって持続可能な抗ＡＭＣ  ＣＡＲ  Ｔ細胞である。一部の実施形態では、本発明の抗ＡＭＣ  ＣＡＲ  Ｔ細胞は、再活性化されてあらゆるさらなる腫瘍形成または成長を阻害することができる、特異的なメモリーＴ細胞へと発生する。
【０４５７】
本発明の抗ＡＭＣ  ＣＡＲ  Ｔ細胞はまた、哺乳動物におけるｅｘ  ｖｉｖｏ免疫および／またはｉｎ  ｖｉｖｏ療法のためのワクチンの一種としても機能し得る。一部の実施形態では、哺乳動物は、ヒトである。
【０４５８】
ｅｘ  ｖｉｖｏ免疫に関しては、細胞を哺乳動物へと投与する前にｉｎ  ｖｉｔｒｏにおいて以下のうちの少なくとも（ｏｆ  ｌｅａｓｔ）１つを行う：ｉ）細胞の拡大増殖、ｉｉ）抗ＡＭＣ  ＣＡＲをコードする核酸の細胞への導入、および／またはｉｉｉ）細胞の凍結保存。
【０４５９】
ｅｘ  ｖｉｖｏにおける手順は当技術分野で周知であり、以下でより詳細に考察する。簡単に述べると、細胞を哺乳動物（好ましくはヒト）から単離し、本明細書に開示されている抗ＡＭＣ  ＣＡＲを発現するベクターを用いて遺伝子改変する（すなわち、ｉｎ  ｖｉｔｒｏにおいて形質導入またはトランスフェクトする）。抗ＡＭＣ  ＣＡＲ細胞を哺乳動物レシピエントに投与して、治療利益をもたらすことができる。哺乳動物レシピエントはヒトであってよく、抗ＡＭＣ  ＣＡＲ細胞は、レシピエントに関して自己由来であってよい。あるいは、細胞は、レシピエントに関して同種異系、同系または異種であってよい。
【０４６０】
参照により本明細書に組み込まれる米国特許第５，１９９，９４２号に記載されている造血幹細胞および造血前駆細胞のｅｘ  ｖｉｖｏにおける拡大増殖の手順を本発明の細胞に適用することができる。他の適切な方法は当技術分野で公知であり、したがって、本発明は、細胞のｅｘ  ｖｉｖｏにおける拡大増殖のいかなる特定の方法にも限定されない。簡単に述べると、Ｔ細胞のｅｘ  ｖｉｖｏにおける培養および拡大増殖は、（１）哺乳動物由来のＣＤ３４＋造血幹細胞および造血前駆細胞を末梢血回収物または骨髄外植片から採取するステップ；ならびに（２）そのような細胞をｅｘ  ｖｉｖｏにおいて拡大増殖させるステップを含む。米国特許第５，１９９，９４２号に記載されている細胞成長因子に加えて、ｆｌｔ３−Ｌ、ＩＬ−１、ＩＬ−３およびｃ−ｋｉｔリガンドなどの他の因子を細胞の培養および拡大増殖に使用することができる。
【０４６１】
ｅｘ  ｖｉｖｏ免疫に関して細胞に基づくワクチンを使用することに加えて、本発明は、患者において抗原を対象とする免疫応答を引き出すためのｉｎ  ｖｉｖｏ免疫のための組成物および方法も提供する。
【０４６２】
本発明の抗ＡＭＣ  ＣＡＲエフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞）は、単独で、あるいは、希釈剤および／またはＩＬ−２もしくは他のサイトカインなどの他の成分または細胞集団と組み合わせた医薬組成物としてのいずれかで投与することができる。簡単に述べると、本発明の医薬組成物は、抗ＡＭＣ  ＣＡＲエフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞）を、１つまたは複数の薬学的にまたは生理的に許容されるキャリア、希釈剤または賦形剤と組み合わせて含み得る。そのような組成物は、例えば中性緩衝食塩水、リン酸緩衝食塩水などの緩衝液；グルコース、マンノース、スクロースまたはデキストラン、マンニトールなどの炭水化物；タンパク質；ポリペプチドまたはグリシンなどのアミノ酸；抗酸化剤；ＥＤＴＡまたはグルタチオンなどのキレート剤；アジュバント（例えば、水酸化アルミニウム）；ならびに防腐剤を含み得る。一部の実施形態では、抗ＡＭＣ  ＣＡＲエフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞）組成物を静脈内投与用に製剤化する。
【０４６３】
投与される本発明の抗ＡＭＣ  ＣＡＲエフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞）組成物の正確な量は、医師が患者（被験体）の年齢、重量、腫瘍サイズ、感染または転移の程度、および状態の個々の差異を考慮に入れて決定することができる。一部の実施形態では、抗ＡＭＣ  ＣＡＲエフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞）を含む医薬組成物を、体重１ｋｇ当たり細胞約１０４〜約１０９個、例えば体重１ｋｇ当たり細胞約１０４〜約１０５個、約１０５〜約１０６個、約１０６〜約１０７個、約１０７〜約１０８個、または約１０８〜約１０９個（これらの範囲内の全ての整数値を含めて）のいずれかの投与量で投与する。抗ＡＭＣ  ＣＡＲエフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞）組成物は、これらの投与量で複数回投与することもできる。細胞は、免疫療法において一般に公知の注入技法を使用することによって投与することができる（例えば、Ｒｏｓｅｎｂｅｒｇら、Ｎｅｗ  Ｅｎｇ．  Ｊ．  ｏｆ  Ｍｅｄ．、３１９巻：１６７６頁、１９８８年を参照されたい）。特定の患者に最適な投与量および処置レジメンは、医薬の当業者が、患者を疾患の徴候についてモニタリングし、それに応じて処置を調整することによって容易に決定することができる。
【０４６４】
一部の実施形態では、活性化した抗ＡＭＣ  ＣＡＲ  Ｔ細胞を被験体に投与し、その後、血液を再度抜き取り（またはアフェレーシスを実施し）、本発明に従ってそこからＴ細胞を活性化し、患者にこれらの活性化し拡大増殖させたＴ細胞を再注入することが望ましい場合がある。このプロセスは、数週間ごとに複数回行うことができる。一部の実施形態では、Ｔ細胞を１０ｃｃ〜４００ｃｃの採血から活性化することができる。一部の実施形態では、Ｔ細胞を２０ｃｃ、３０ｃｃ、４０ｃｃ、５０ｃｃ、６０ｃｃ、７０ｃｃ、８０ｃｃ、９０ｃｃ、または１００ｃｃの採血から活性化する。
【０４６５】
抗ＡＭＣ  ＣＡＲエフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞）の投与は、エアロゾル吸入、注射、経口摂取、輸血、埋め込みまたは移植によるものを含む、任意の都合のよい様式で行うことができる。本明細書に記載の組成物は、患者に、皮下に、皮内に、腫瘍内に、結節内に、髄内に、筋肉内に、静脈内（ｉ．ｖ．）注射によって、または腹腔内に、投与することができる。一部の実施形態では、本発明の抗ＡＭＣ  ＣＡＲエフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞）組成物を患者に皮内注射または皮下注射によって投与する。一部の実施形態では、本発明の抗ＡＭＣ  ＣＡＲエフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞）組成物をｉ．ｖ．注射によって投与する。抗ＡＭＣ  ＣＡＲエフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞）の組成物は、腫瘍、リンパ節、または感染部位に直接注射することができる。
【０４６６】
したがって、例えば、一部の実施形態では、個体におけるＡＦＰ陽性疾患を処置する方法であって、個体に、有効量の、ａ）ＡＦＰペプチドおよびＭＨＣクラスＩタンパク質を含む複合体に特異的に結合する抗ＡＭＣ抗体部分を含む細胞外ドメイン、ｂ）膜貫通ドメイン、ならびにｃ）ＣＤ３ζ細胞内シグナル伝達配列およびＣＤ２８細胞内シグナル伝達配列を含む細胞内シグナル伝達ドメインを含む抗ＡＭＣ  ＣＡＲを発現するエフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞）を含む組成物を投与するステップを含む、方法が提供される。一部の実施形態では、ＡＦＰペプチドは、ＡＦＰ１５８（配列番号４）である。一部の実施形態では、ＭＨＣクラスＩタンパク質は、ＨＬＡ−Ａ０２である。一部の実施形態では、ＭＨＣクラスＩタンパク質は、ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１である。一部の実施形態では、ＡＦＰ陽性疾患は、がんである。一部の実施形態では、がんは、例えば、肝細胞癌、胚細胞腫瘍、または乳がんである。一部の実施形態では、がんは、肝細胞癌である。一部の実施形態では、がんは、肝細胞癌であり、処置は、がんの拡散を防止すること、例えば、がんの転移を阻害すること（例えば、防止すること）を含む。一部の実施形態では、がんは、転移性肝細胞癌である。一部の実施形態では、投与は、静脈内、腹腔内、または腫瘍内経路を介した投与である。一部の実施形態では、投与は、静脈内経路を介した投与である。一部の実施形態では、投与は、腫瘍内経路を介した投与である。一部の実施形態では、個体は、ヒトである。
【０４６７】
一部の実施形態では、個体におけるＡＦＰ陽性疾患を処置する方法であって、個体に、有効量の、ａ）ＡＦＰ１５８ペプチド（配列番号４）およびＨＬＡ−Ａ＊０２：０１を含む複合体に特異的に結合する抗ＡＭＣ抗体部分を含む細胞外ドメイン、ｂ）膜貫通ドメイン、ならびにｃ）ＣＤ３ζ細胞内シグナル伝達配列およびＣＤ２８細胞内シグナル伝達配列を含む細胞内シグナル伝達ドメインを含む抗ＡＭＣ  ＣＡＲを発現するエフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞）を含む組成物を投与するステップを含む、方法が提供される。一部の実施形態では、ＡＦＰ陽性疾患は、がんである。一部の実施形態では、がんは、例えば、肝細胞癌、胚細胞腫瘍、または乳がんである。一部の実施形態では、がんは、肝細胞癌である。一部の実施形態では、がんは、肝細胞癌であり、処置は、がんの拡散を防止すること、例えば、がんの転移を阻害すること（例えば、防止すること）を含む。一部の実施形態では、がんは、転移性肝細胞癌である。一部の実施形態では、投与は、静脈内、腹腔内、または腫瘍内経路を介した投与である。一部の実施形態では、投与は、静脈内経路を介した投与である。一部の実施形態では、投与は、腫瘍内経路を介した投与である。一部の実施形態では、個体は、ヒトである。
【０４６８】
一部の実施形態では、個体におけるＡＦＰ陽性疾患を処置する方法であって、個体に、有効量の、ａ）ＡＦＰペプチドおよびＭＨＣクラスＩタンパク質を含む複合体に特異的に結合する抗ＡＭＣ抗体部分であって、ｉ）Ｇ−Ｆ／Ｙ−Ｓ／Ｔ−Ｆ−Ｄ／Ｓ／Ｔ−Ｄ／Ｎ／Ｓ−Ｙ／Ａ−Ａ／Ｇ／Ｗ（配列番号８７）のアミノ酸配列を含むＨＣ−ＣＤＲ１、または最大で約３（例えば、約１、２、もしくは３のいずれか）アミノ酸の置換を含むそのバリアント、Ｉ／Ｓ−Ｋ／Ｓ−Ｘ−Ｈ／Ｙ−Ｘ−Ｇ−Ｘ−Ｔ（配列番号８８）のアミノ酸配列を含むＨＣ−ＣＤＲ２、または最大で約３（例えば、約１、２、もしくは３のいずれか）アミノ酸の置換を含むそのバリアント、およびＡ／Ｇ−Ｘ−Ｗ／Ｙ−Ｙ−Ｘ−Ｘ−Ｘ−Ｆ／Ｙ−Ｄ（配列番号８９）のアミノ酸配列を含むＨＣ−ＣＤＲ３、または最大で約３（例えば、約１、２、もしくは３のいずれか）アミノ酸の置換を含むそのバリアントを含む重鎖可変ドメイン配列；およびｉｉ）Ｓ／Ｔ−Ｇ／Ｓ−Ｄ／Ｎ−Ｉ／Ｖ−Ａ／Ｇ−Ａ／Ｓ／Ｖ−Ｘ−Ｈ／Ｙ（配列番号１２０）のアミノ酸配列を含むＬＣ−ＣＤＲ１、または最大で約３（例えば、約１、２、もしくは３のいずれか）アミノ酸の置換を含むそのバリアント、およびＱ−Ｓ／Ｔ−Ｙ／Ｗ−Ｄ／Ｔ−Ｓ／Ｔ−Ａ／Ｓ（配列番号１２１）のアミノ酸配列を含むＬＣ−ＣＤＲ３、または最大で約３（例えば、約１、２、もしくは３のいずれか）アミノ酸の置換を含むそのバリアントを含む軽鎖可変ドメインを含み、Ｘは任意のアミノ酸であり得る、抗ＡＭＣ抗体部分を含む細胞外ドメイン、ｂ）膜貫通ドメイン、ならびにｃ）ＣＤ３ζ細胞内シグナル伝達配列およびＣＤ２８細胞内シグナル伝達配列を含む細胞内シグナル伝達ドメインを含む抗ＡＭＣ  ＣＡＲを発現するエフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞）を含む組成物を投与するステップを含む、方法が提供される。一部の実施形態では、ＡＦＰ陽性疾患は、がんである。一部の実施形態では、がんは、例えば、肝細胞癌、胚細胞腫瘍、または乳がんである。一部の実施形態では、がんは、肝細胞癌である。一部の実施形態では、がんは、肝細胞癌であり、処置は、がんの拡散を防止すること、例えば、がんの転移を阻害すること（例えば、防止すること）を含む。一部の実施形態では、がんは、転移性肝細胞癌である。一部の実施形態では、投与は、静脈内、腹腔内、または腫瘍内経路を介した投与である。一部の実施形態では、投与は、静脈内経路を介した投与である。一部の実施形態では、投与は、腫瘍内経路を介した投与である。一部の実施形態では、個体は、ヒトである。
【０４６９】
一部の実施形態では、個体におけるＡＦＰ陽性疾患を処置する方法であって、個体に、有効量の、ａ）ＡＦＰペプチドおよびＭＨＣクラスＩタンパク質を含む複合体に特異的に結合する抗ＡＭＣ抗体部分であって、ｉ）Ｇ−Ｆ／Ｙ−Ｓ／Ｔ−Ｆ−Ｄ／Ｓ／Ｔ−Ｄ／Ｎ／Ｓ−Ｙ／Ａ−Ａ／Ｇ／Ｗ（配列番号８７）のアミノ酸配列を含むＨＣ−ＣＤＲ１、Ｉ／Ｓ−Ｋ／Ｓ−Ｘ−Ｈ／Ｙ−Ｘ−Ｇ−Ｘ−Ｔ（配列番号８８）のアミノ酸配列を含むＨＣ−ＣＤＲ２、およびＡ／Ｇ−Ｘ−Ｗ／Ｙ−Ｙ−Ｘ−Ｘ−Ｘ−Ｆ／Ｙ−Ｄ（配列番号８９）のアミノ酸配列を含むＨＣ−ＣＤＲ３を含む重鎖可変ドメイン配列；および、ｉｉ）Ｓ／Ｔ−Ｇ／Ｓ−Ｄ／Ｎ−Ｉ／Ｖ−Ａ／Ｇ−Ａ／Ｓ／Ｖ−Ｘ−Ｈ／Ｙ（配列番号１２０）のアミノ酸配列を含むＬＣ−ＣＤＲ１、およびＱ−Ｓ／Ｔ−Ｙ／Ｗ−Ｄ／Ｔ−Ｓ／Ｔ−Ａ／Ｓ（配列番号１２１）のアミノ酸配列を含むＬＣ−ＣＤＲ３を含む軽鎖可変ドメインを含み、Ｘは任意のアミノ酸であり得る、抗ＡＭＣ抗体部分を含む細胞外ドメイン、ｂ）膜貫通ドメイン、ならびにｃ）ＣＤ３ζ細胞内シグナル伝達配列およびＣＤ２８細胞内シグナル伝達配列を含む細胞内シグナル伝達ドメインを含む、抗ＡＭＣ  ＣＡＲを発現するエフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞）を含む組成物を投与するステップを含む方法が提供される。一部の実施形態では、ＡＦＰ陽性疾患は、がんである。一部の実施形態では、がんは、例えば、肝細胞癌、胚細胞腫瘍、または乳がんである。一部の実施形態では、がんは、肝細胞癌である。一部の実施形態では、がんは、肝細胞癌であり、処置は、がんの拡散を防止すること、例えば、がんの転移を阻害すること（例えば、防止すること）を含む。一部の実施形態では、がんは、転移性肝細胞癌である。一部の実施形態では、投与は、静脈内、腹腔内、または腫瘍内経路を介した投与である。一部の実施形態では、投与は、静脈内経路を介した投与である。一部の実施形態では、投与は、腫瘍内経路を介した投与である。一部の実施形態では、個体は、ヒトである。
【０４７０】
一部の実施形態では、個体におけるＡＦＰ陽性疾患を処置する方法であって、個体に、有効量の、ａ）ＡＦＰペプチドおよびＭＨＣクラスＩタンパク質を含む複合体に特異的に結合する抗ＡＭＣ抗体部分であって、ｉ）配列番号５７〜６６のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＨＣ−ＣＤＲ１、または最大で約５（例えば、約１、２、３、４、もしくは５のいずれか）アミノ酸の置換を含むそのバリアント、配列番号６７〜７６のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＨＣ−ＣＤＲ２、または最大で約５（例えば、約１、２、３、４、もしくは５のいずれか）アミノ酸の置換を含むそのバリアント、および配列番号７７〜８６のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＨＣ−ＣＤＲ３、または最大で約５（例えば、約１、２、３、４、もしくは５のいずれか）アミノ酸の置換を含むそのバリアントを含む重鎖可変ドメイン；およびｉｉ）配列番号９０〜９９のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＬＣ−ＣＤＲ１、または最大で約５（例えば、約１、２、３、４、もしくは５のいずれか）アミノ酸の置換を含むそのバリアント、配列番号１００〜１０９のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＬＣ−ＣＤＲ２、または最大で約３（例えば、約１、２、もしくは３のいずれか）アミノ酸の置換を含むそのバリアント、および配列番号１１０〜１１９のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＬＣ−ＣＤＲ３、または最大で約５（例えば、約１、２、３、４、もしくは５のいずれか）アミノ酸の置換を含むそのバリアントを含む軽鎖可変ドメインを含む抗ＡＭＣ抗体部分を含む細胞外ドメイン；ｂ）膜貫通ドメイン、ならびにｃ）ＣＤ３ζ細胞内シグナル伝達配列およびＣＤ２８細胞内シグナル伝達配列を含む細胞内シグナル伝達ドメインを含む抗ＡＭＣ  ＣＡＲを発現するエフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞）を含む組成物を投与するステップを含む、方法が提供される。一部の実施形態では、ＡＦＰ陽性疾患は、がんである。一部の実施形態では、がんは、例えば、肝細胞癌、胚細胞腫瘍、または乳がんである。一部の実施形態では、がんは、肝細胞癌である。一部の実施形態では、がんは、肝細胞癌であり、処置は、がんの拡散を防止すること、例えば、がんの転移を阻害すること（例えば、防止すること）を含む。一部の実施形態では、がんは、転移性肝細胞癌である。一部の実施形態では、投与は、静脈内、腹腔内、または腫瘍内経路を介した投与である。一部の実施形態では、投与は、静脈内経路を介した投与である。一部の実施形態では、投与は、腫瘍内経路を介した投与である。一部の実施形態では、個体は、ヒトである。
【０４７１】
一部の実施形態では、個体におけるＡＦＰ陽性疾患を処置する方法であって、個体に、有効量の、ａ）ＡＦＰペプチドおよびＭＨＣクラスＩタンパク質を含む複合体に特異的に結合する抗ＡＭＣ抗体部分であって、ｉ）配列番号５７〜６６のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＨＣ−ＣＤＲ１；配列番号６７〜７６のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＨＣ−ＣＤＲ２；および配列番号７７〜８６のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＨＣ−ＣＤＲ３；またはＨＣ−ＣＤＲ配列内に最大で約５（例えば、約１、２、３、４、もしくは５のいずれか）アミノ酸の置換を含むそのバリアントを含む重鎖可変ドメイン配列；およびｉｉ）配列番号９０〜９９のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＬＣ−ＣＤＲ１；配列番号１００〜１０９のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＬＣ−ＣＤＲ２；および配列番号１１０〜１１９のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＬＣ−ＣＤＲ３；またはＬＣ−ＣＤＲ配列内に最大で約５（例えば、約１、２、３、４、もしくは５のいずれか）アミノ酸の置換を含むそのバリアントを含む軽鎖可変ドメイン配列を含む抗ＡＭＣ抗体部分を含む細胞外ドメイン；ｂ）膜貫通ドメイン、ならびにｃ）ＣＤ３ζ細胞内シグナル伝達配列およびＣＤ２８細胞内シグナル伝達配列を含む細胞内シグナル伝達ドメインを含む抗ＡＭＣ  ＣＡＲを発現するエフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞）を含む組成物を投与するステップを含む、方法が提供される。一部の実施形態では、ＡＦＰ陽性疾患は、がんである。一部の実施形態では、がんは、例えば、肝細胞癌、胚細胞腫瘍、または乳がんである。一部の実施形態では、がんは、肝細胞癌である。一部の実施形態では、がんは、肝細胞癌であり、処置は、がんの拡散を防止すること、例えば、がんの転移を阻害すること（例えば、防止すること）を含む。一部の実施形態では、がんは、転移性肝細胞癌である。一部の実施形態では、投与は、静脈内、腹腔内、または腫瘍内経路を介した投与である。一部の実施形態では、投与は、静脈内経路を介した投与である。一部の実施形態では、投与は、腫瘍内経路を介した投与である。一部の実施形態では、個体は、ヒトである。
【０４７２】
一部の実施形態では、個体におけるＡＦＰ陽性疾患を処置する方法であって、個体に、有効量の、ａ）ＡＦＰペプチドおよびＭＨＣクラスＩタンパク質を含む複合体に特異的に結合する抗ＡＭＣ抗体部分であって、ｉ）配列番号５７〜６６のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＨＣ−ＣＤＲ１；配列番号６７〜７６のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＨＣ−ＣＤＲ２；および配列番号７７〜８６のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＨＣ−ＣＤＲ３を含む重鎖可変ドメイン配列；および、ｉｉ）配列番号９０〜９９のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＬＣ−ＣＤＲ１；配列番号１００〜１０９のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＬＣ−ＣＤＲ２；および配列番号１１０〜１１９のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＬＣ−ＣＤＲ３を含む軽鎖可変ドメイン配列を含む抗ＡＭＣ抗体部分を含む細胞外ドメイン；ｂ）膜貫通ドメイン、ならびにｃ）ＣＤ３ζ細胞内シグナル伝達配列およびＣＤ２８細胞内シグナル伝達配列を含む細胞内シグナル伝達ドメインを含む抗ＡＭＣ  ＣＡＲを発現するエフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞）を含む組成物を投与するステップを含む、方法が提供される。一部の実施形態では、ＡＦＰ陽性疾患は、がんである。一部の実施形態では、がんは、例えば、肝細胞癌、胚細胞腫瘍、または乳がんである。一部の実施形態では、がんは、肝細胞癌である。一部の実施形態では、がんは、肝細胞癌であり、処置は、がんの拡散を防止すること、例えば、がんの転移を阻害すること（例えば、防止すること）を含む。一部の実施形態では、がんは、転移性肝細胞癌である。一部の実施形態では、投与は、静脈内、腹腔内、または腫瘍内経路を介した投与である。一部の実施形態では、投与は、静脈内経路を介した投与である。一部の実施形態では、投与は、腫瘍内経路を介した投与である。一部の実施形態では、個体は、ヒトである。
【０４７３】
一部の実施形態では、個体におけるＡＦＰ陽性疾患を処置する方法であって、個体に、有効量の、ａ）ＡＦＰペプチドおよびＭＨＣクラスＩタンパク質を含む複合体に特異的に結合する抗ＡＭＣ抗体部分であって、ｉ）配列番号１７〜２６のいずれか１つのアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン、または少なくとも約９５％（例えば、少なくとも約９６％、９７％、９８％、９９％のいずれか）の配列同一性を有するそのバリアント、および配列番号２７〜３６のいずれか１つのアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン、または少なくとも約９５％配列同一性を有するそのバリアントを含む抗ＡＭＣ抗体部分を含む細胞外ドメイン；ｂ）膜貫通ドメイン、ならびにｃ）ＣＤ３ζ細胞内シグナル伝達配列およびＣＤ２８細胞内シグナル伝達配列を含む細胞内シグナル伝達ドメインを含む抗ＡＭＣ  ＣＡＲを発現するエフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞）を含む組成物を投与するステップを含む、方法が提供される。一部の実施形態では、ＡＦＰ陽性疾患は、がんである。一部の実施形態では、がんは、例えば、肝細胞癌、胚細胞腫瘍、または乳がんである。一部の実施形態では、がんは、肝細胞癌である。一部の実施形態では、がんは、肝細胞癌であり、処置は、がんの拡散を防止すること、例えば、がんの転移を阻害すること（例えば、防止すること）を含む。一部の実施形態では、がんは、転移性肝細胞癌である。一部の実施形態では、投与は、静脈内、腹腔内、または腫瘍内経路を介した投与である。一部の実施形態では、投与は、静脈内経路を介した投与である。一部の実施形態では、投与は、腫瘍内経路を介した投与である。一部の実施形態では、個体は、ヒトである。
【０４７４】
一部の実施形態では、個体におけるＡＦＰ陽性疾患を処置する方法であって、個体に、有効量の、ＡＦＰペプチドおよびＭＨＣクラスＩタンパク質を含む複合体に特異的に結合する抗ＡＭＣ抗体部分であって、ａ）配列番号１７〜２６のいずれか１つのアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインおよび配列番号２７〜３６のいずれか１つのアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを含む抗ＡＭＣ抗体部分を含む細胞外ドメイン；ｂ）膜貫通ドメイン、ならびにｃ）ＣＤ３ζ細胞内シグナル伝達配列およびＣＤ２８細胞内シグナル伝達配列を含む細胞内シグナル伝達ドメインを含む抗ＡＭＣ  ＣＡＲを発現するエフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞）を含む組成物を投与するステップを含む、方法が提供される。一部の実施形態では、ＡＦＰ陽性疾患は、がんである。一部の実施形態では、がんは、例えば、肝細胞癌、胚細胞腫瘍、または乳がんである。一部の実施形態では、がんは、肝細胞癌である。一部の実施形態では、がんは、肝細胞癌であり、処置は、がんの拡散を防止すること、例えば、がんの転移を阻害すること（例えば、防止すること）を含む。一部の実施形態では、がんは、転移性肝細胞癌である。一部の実施形態では、投与は、静脈内、腹腔内、または腫瘍内経路を介した投与である。一部の実施形態では、投与は、静脈内経路を介した投与である。一部の実施形態では、投与は、腫瘍内経路を介した投与である。一部の実施形態では、個体は、ヒトである。
【０４７５】
一部の実施形態では、個体におけるＡＦＰ陽性疾患を処置する方法であって、個体に、有効量の、ａ）ＡＦＰペプチドおよびＭＨＣクラスＩタンパク質を含む複合体に特異的に結合する抗ＡＭＣ抗体部分を含む細胞外ドメイン、ｂ）膜貫通ドメイン、ならびにｃ）ＣＤ３ζ細胞内シグナル伝達配列およびＣＤ２８細胞内シグナル伝達配列を含む細胞内シグナル伝達ドメインを含む抗ＡＭＣ  ＣＡＲを発現するエフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞）を含む組成物を投与するステップを含み、投与するステップが、組成物をＡＦＰ陽性疾患（例えば、ＡＦＰ陽性腫瘍）の部位に対して遠位の注射部位に局所注射することを含む、方法が提供される。一部の実施形態では、注射部位は、第１のＡＦＰ陽性腫瘍である（すなわち、投与は、腫瘍内経路を介する）。一部の実施形態では、ＡＦＰ陽性疾患の部位は、第２のＡＦＰ陽性腫瘍である。一部の実施形態では、注射部位は、第１のＡＦＰ陽性腫瘍であり、ＡＦＰ陽性疾患の部位は、第２のＡＦＰ陽性腫瘍である。一部の実施形態では、ＡＦＰペプチドは、ＡＦＰ１５８（配列番号４）である。一部の実施形態では、ＭＨＣクラスＩタンパク質は、ＨＬＡ−Ａ０２である。一部の実施形態では、ＭＨＣクラスＩタンパク質は、ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１である。一部の実施形態では、ＡＦＰ陽性疾患は、がんである。一部の実施形態では、がんは、例えば、肝細胞癌、胚細胞腫瘍、または乳がんである。一部の実施形態では、がんは、肝細胞癌である。一部の実施形態では、がんは、肝細胞癌であり、処置は、がんの拡散を防止すること、例えば、がんの転移を阻害すること（例えば、防止すること）を含む。一部の実施形態では、がんは、転移性肝細胞癌である。一部の実施形態では、個体は、ヒトである。
【０４７６】
一部の実施形態では、個体におけるＡＦＰ陽性疾患を処置する方法であって、個体に、有効量の、ａ）ＡＦＰ１５８ペプチド（配列番号４）およびＨＬＡ−Ａ＊０２：０１を含む複合体に特異的に結合する抗ＡＭＣ抗体部分を含む細胞外ドメイン、ｂ）膜貫通ドメイン、ならびにｃ）ＣＤ３ζ細胞内シグナル伝達配列およびＣＤ２８細胞内シグナル伝達配列を含む細胞内シグナル伝達ドメインを含む抗ＡＭＣ  ＣＡＲを発現するエフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞）を含む組成物を投与するステップを含み、投与するステップが、組成物をＡＦＰ陽性疾患（例えば、ＡＦＰ陽性腫瘍）の部位に対して遠位の注射部位に局所注射することを含む、方法が提供される。一部の実施形態では、注射部位は、第１のＡＦＰ陽性腫瘍である（すなわち、投与は、腫瘍内経路を介する）。一部の実施形態では、ＡＦＰ陽性疾患の部位は、第２のＡＦＰ陽性腫瘍である。一部の実施形態では、注射部位は、第１のＡＦＰ陽性腫瘍であり、ＡＦＰ陽性疾患の部位は、第２のＡＦＰ陽性腫瘍である。一部の実施形態では、ＡＦＰ陽性疾患は、がんである。一部の実施形態では、がんは、例えば、肝細胞癌、胚細胞腫瘍、または乳がんである。一部の実施形態では、がんは、肝細胞癌である。一部の実施形態では、がんは、肝細胞癌であり、処置は、がんの拡散を防止すること、例えば、がんの転移を阻害すること（例えば、防止すること）を含む。一部の実施形態では、がんは、転移性肝細胞癌である。一部の実施形態では、個体は、ヒトである。
【０４７７】
一部の実施形態では、個体におけるＡＦＰ陽性疾患を処置する方法であって、個体に、有効量の、ａ）ＡＦＰペプチドおよびＭＨＣクラスＩタンパク質を含む複合体に特異的に結合する抗ＡＭＣ抗体部分であって、ｉ）Ｇ−Ｆ／Ｙ−Ｓ／Ｔ−Ｆ−Ｄ／Ｓ／Ｔ−Ｄ／Ｎ／Ｓ−Ｙ／Ａ−Ａ／Ｇ／Ｗ（配列番号８７）のアミノ酸配列を含むＨＣ−ＣＤＲ１、または最大で約３（例えば、約１、２、もしくは３のいずれか）アミノ酸の置換を含むそのバリアント、Ｉ／Ｓ−Ｋ／Ｓ−Ｘ−Ｈ／Ｙ−Ｘ−Ｇ−Ｘ−Ｔ（配列番号８８）のアミノ酸配列を含むＨＣ−ＣＤＲ２、または最大で約３（例えば、約１、２、もしくは３のいずれか）アミノ酸の置換を含むそのバリアント、およびＡ／Ｇ−Ｘ−Ｗ／Ｙ−Ｙ−Ｘ−Ｘ−Ｘ−Ｆ／Ｙ−Ｄ（配列番号８９）のアミノ酸配列を含むＨＣ−ＣＤＲ３、または最大で約３（例えば、約１、２、もしくは３のいずれか）アミノ酸の置換を含むそのバリアントを含む重鎖可変ドメイン配列；およびｉｉ）Ｓ／Ｔ−Ｇ／Ｓ−Ｄ／Ｎ−Ｉ／Ｖ−Ａ／Ｇ−Ａ／Ｓ／Ｖ−Ｘ−Ｈ／Ｙ（配列番号１２０）のアミノ酸配列を含むＬＣ−ＣＤＲ１、または最大で約３（例えば、約１、２、もしくは３のいずれか）アミノ酸の置換を含むそのバリアント、およびＱ−Ｓ／Ｔ−Ｙ／Ｗ−Ｄ／Ｔ−Ｓ／Ｔ−Ａ／Ｓ（配列番号１２１）のアミノ酸配列を含むＬＣ−ＣＤＲ３、または最大で約３（例えば、約１、２、もしくは３のいずれか）アミノ酸の置換を含むそのバリアントを含む軽鎖可変ドメインを含み、Ｘは任意のアミノ酸であり得る、抗ＡＭＣ抗体部分を含む細胞外ドメイン、ｂ）膜貫通ドメイン、ならびにｃ）ＣＤ３ζ細胞内シグナル伝達配列およびＣＤ２８細胞内シグナル伝達配列を含む細胞内シグナル伝達ドメインを含む抗ＡＭＣ  ＣＡＲを発現するエフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞）を含む組成物を投与するステップを含み、投与するステップが、組成物をＡＦＰ陽性疾患（例えば、ＡＦＰ陽性腫瘍）の部位に対して遠位の注射部位に局所注射することを含む、方法が提供される。一部の実施形態では、注射部位は、第１のＡＦＰ陽性腫瘍である（すなわち、投与は、腫瘍内経路を介する）。一部の実施形態では、ＡＦＰ陽性疾患の部位は、第２のＡＦＰ陽性腫瘍である。一部の実施形態では、注射部位は、第１のＡＦＰ陽性腫瘍であり、ＡＦＰ陽性疾患の部位は、第２のＡＦＰ陽性腫瘍である。一部の実施形態では、ＡＦＰ陽性疾患は、がんである。一部の実施形態では、がんは、例えば、肝細胞癌、胚細胞腫瘍、または乳がんである。一部の実施形態では、がんは、肝細胞癌である。一部の実施形態では、がんは、肝細胞癌であり、処置は、がんの拡散を防止すること、例えば、がんの転移を阻害すること（例えば、防止すること）を含む。一部の実施形態では、がんは、転移性肝細胞癌である。一部の実施形態では、個体は、ヒトである。
【０４７８】
一部の実施形態では、個体におけるＡＦＰ陽性疾患を処置する方法であって、個体に、有効量の、ａ）ＡＦＰペプチドおよびＭＨＣクラスＩタンパク質を含む複合体に特異的に結合する抗ＡＭＣ抗体部分であって、ｉ）Ｇ−Ｆ／Ｙ−Ｓ／Ｔ−Ｆ−Ｄ／Ｓ／Ｔ−Ｄ／Ｎ／Ｓ−Ｙ／Ａ−Ａ／Ｇ／Ｗ（配列番号８７）のアミノ酸配列を含むＨＣ−ＣＤＲ１、Ｉ／Ｓ−Ｋ／Ｓ−Ｘ−Ｈ／Ｙ−Ｘ−Ｇ−Ｘ−Ｔ（配列番号８８）のアミノ酸配列を含むＨＣ−ＣＤＲ２、およびＡ／Ｇ−Ｘ−Ｗ／Ｙ−Ｙ−Ｘ−Ｘ−Ｘ−Ｆ／Ｙ−Ｄ（配列番号８９）のアミノ酸配列を含むＨＣ−ＣＤＲ３を含む重鎖可変ドメイン配列；および、ｉｉ）Ｓ／Ｔ−Ｇ／Ｓ−Ｄ／Ｎ−Ｉ／Ｖ−Ａ／Ｇ−Ａ／Ｓ／Ｖ−Ｘ−Ｈ／Ｙ（配列番号１２０）のアミノ酸配列を含むＬＣ−ＣＤＲ１、およびＱ−Ｓ／Ｔ−Ｙ／Ｗ−Ｄ／Ｔ−Ｓ／Ｔ−Ａ／Ｓ（配列番号１２１）のアミノ酸配列を含むＬＣ−ＣＤＲ３を含む軽鎖可変ドメインを含み、Ｘは任意のアミノ酸であり得る、抗ＡＭＣ抗体部分を含む細胞外ドメイン、ｂ）膜貫通ドメイン、ならびにｃ）ＣＤ３ζ細胞内シグナル伝達配列およびＣＤ２８細胞内シグナル伝達配列を含む細胞内シグナル伝達ドメインを含む抗ＡＭＣ  ＣＡＲを発現するエフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞）を含む組成物を投与するステップを含み、投与するステップが、組成物をＡＦＰ陽性疾患（例えば、ＡＦＰ陽性腫瘍）の部位に対して遠位の注射部位に局所注射することを含む、方法が提供される。一部の実施形態では、注射部位は、第１のＡＦＰ陽性腫瘍である（すなわち、投与は、腫瘍内経路を介する）。一部の実施形態では、ＡＦＰ陽性疾患の部位は、第２のＡＦＰ陽性腫瘍である。一部の実施形態では、注射部位は、第１のＡＦＰ陽性腫瘍であり、ＡＦＰ陽性疾患の部位は、第２のＡＦＰ陽性腫瘍である。一部の実施形態では、ＡＦＰ陽性疾患は、がんである。一部の実施形態では、がんは、例えば、肝細胞癌、胚細胞腫瘍、または乳がんである。一部の実施形態では、がんは、肝細胞癌である。一部の実施形態では、がんは、肝細胞癌であり、処置は、がんの拡散を防止すること、例えば、がんの転移を阻害すること（例えば、防止すること）を含む。一部の実施形態では、がんは、転移性肝細胞癌である。一部の実施形態では、個体は、ヒトである。
【０４７９】
一部の実施形態では、個体におけるＡＦＰ陽性疾患を処置する方法であって、個体に、有効量の、ａ）ＡＦＰペプチドおよびＭＨＣクラスＩタンパク質を含む複合体に特異的に結合する抗ＡＭＣ抗体部分であって、ｉ）配列番号５７〜６６のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＨＣ−ＣＤＲ１、または最大で約５（例えば、約１、２、３、４、もしくは５のいずれか）アミノ酸の置換を含むそのバリアント、配列番号６７〜７６のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＨＣ−ＣＤＲ２、または最大で約５（例えば、約１、２、３、４、もしくは５のいずれか）アミノ酸の置換を含むそのバリアント、および配列番号７７〜８６のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＨＣ−ＣＤＲ３、または最大で約５（例えば、約１、２、３、４、もしくは５のいずれか）アミノ酸の置換を含むそのバリアントを含む重鎖可変ドメイン；およびｉｉ）配列番号９０〜９９のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＬＣ−ＣＤＲ１、または最大で約５（例えば、約１、２、３、４、もしくは５のいずれか）アミノ酸の置換を含むそのバリアント、配列番号１００〜１０９のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＬＣ−ＣＤＲ２、または最大で約３（例えば、約１、２、もしくは３のいずれか）アミノ酸の置換を含むそのバリアント、および配列番号１１０〜１１９のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＬＣ−ＣＤＲ３、または最大で約５（例えば、約１、２、３、４、もしくは５のいずれか）アミノ酸の置換を含むそのバリアントを含む軽鎖可変ドメインを含む抗ＡＭＣ抗体部分を含む細胞外ドメイン；ｂ）膜貫通ドメイン、ならびにｃ）ＣＤ３ζ細胞内シグナル伝達配列およびＣＤ２８細胞内シグナル伝達配列を含む細胞内シグナル伝達ドメインを含む抗ＡＭＣ  ＣＡＲを発現するエフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞）を含む組成物を投与するステップを含み、投与するステップが、組成物をＡＦＰ陽性疾患（例えば、ＡＦＰ陽性腫瘍）の部位に対して遠位の注射部位に局所注射することを含む、方法が提供される。一部の実施形態では、注射部位は、第１のＡＦＰ陽性腫瘍である（すなわち、投与は、腫瘍内経路を介する）。一部の実施形態では、ＡＦＰ陽性疾患の部位は、第２のＡＦＰ陽性腫瘍である。一部の実施形態では、注射部位は、第１のＡＦＰ陽性腫瘍であり、ＡＦＰ陽性疾患の部位は、第２のＡＦＰ陽性腫瘍である。一部の実施形態では、ＡＦＰ陽性疾患は、がんである。一部の実施形態では、がんは、例えば、肝細胞癌、胚細胞腫瘍、または乳がんである。一部の実施形態では、がんは、肝細胞癌であり、処置は、がんの拡散を防止すること、例えば、がんの転移を阻害すること（例えば、防止すること）を含む。一部の実施形態では、がんは、転移性肝細胞癌である。一部の実施形態では、がんは、肝細胞癌である。一部の実施形態では、個体は、ヒトである。
【０４８０】
一部の実施形態では、個体におけるＡＦＰ陽性疾患を処置する方法であって、個体に、有効量の、ａ）ＡＦＰペプチドおよびＭＨＣクラスＩタンパク質を含む複合体に特異的に結合する抗ＡＭＣ抗体部分であって、ｉ）配列番号５７〜６６のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＨＣ−ＣＤＲ１；配列番号６７〜７６のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＨＣ−ＣＤＲ２；および配列番号７７〜８６のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＨＣ−ＣＤＲ３；またはＨＣ−ＣＤＲ配列内に最大で約５（例えば、約１、２、３、４、もしくは５のいずれか）アミノ酸の置換を含むそのバリアントを含む重鎖可変ドメイン配列；およびｉｉ）配列番号９０〜９９のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＬＣ−ＣＤＲ１；配列番号１００〜１０９のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＬＣ−ＣＤＲ２；および配列番号１１０〜１１９のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＬＣ−ＣＤＲ３；またはＬＣ−ＣＤＲ配列内に最大で約５（例えば、約１、２、３、４、もしくは５のいずれか）アミノ酸の置換を含むそのバリアントを含む軽鎖可変ドメイン配列を含む抗ＡＭＣ抗体部分を含む細胞外ドメイン；ｂ）膜貫通ドメイン、ならびにｃ）ＣＤ３ζ細胞内シグナル伝達配列およびＣＤ２８細胞内シグナル伝達配列を含む細胞内シグナル伝達ドメインを含む抗ＡＭＣ  ＣＡＲを発現するエフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞）を含む組成物を投与するステップを含み、投与するステップが、組成物をＡＦＰ陽性疾患（例えば、ＡＦＰ陽性腫瘍）の部位に対して遠位の注射部位に局所注射することを含む、方法が提供される。一部の実施形態では、注射部位は、第１のＡＦＰ陽性腫瘍である（すなわち、投与は、腫瘍内経路を介する）。一部の実施形態では、ＡＦＰ陽性疾患の部位は、第２のＡＦＰ陽性腫瘍である。一部の実施形態では、注射部位は、第１のＡＦＰ陽性腫瘍であり、ＡＦＰ陽性疾患の部位は、第２のＡＦＰ陽性腫瘍である。一部の実施形態では、ＡＦＰ陽性疾患は、がんである。一部の実施形態では、がんは、例えば、肝細胞癌、胚細胞腫瘍、または乳がんである。一部の実施形態では、がんは、肝細胞癌である。一部の実施形態では、がんは、肝細胞癌であり、処置は、がんの拡散を防止すること、例えば、がんの転移を阻害すること（例えば、防止すること）を含む。一部の実施形態では、がんは、転移性肝細胞癌である。一部の実施形態では、個体は、ヒトである。
【０４８１】
一部の実施形態では、個体におけるＡＦＰ陽性疾患を処置する方法であって、個体に、有効量の、ａ）ＡＦＰペプチドおよびＭＨＣクラスＩタンパク質を含む複合体に特異的に結合する抗ＡＭＣ抗体部分であって、ｉ）配列番号５７〜６６のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＨＣ−ＣＤＲ１；配列番号６７〜７６のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＨＣ−ＣＤＲ２；および配列番号７７〜８６のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＨＣ−ＣＤＲ３を含む重鎖可変ドメイン配列；および、ｉｉ）配列番号９０〜９９のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＬＣ−ＣＤＲ１；配列番号１００〜１０９のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＬＣ−ＣＤＲ２；および配列番号１１０〜１１９のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＬＣ−ＣＤＲ３を含む軽鎖可変ドメイン配列を含む抗ＡＭＣ抗体部分を含む細胞外ドメイン；ｂ）膜貫通ドメイン、ならびにｃ）ＣＤ３ζ細胞内シグナル伝達配列およびＣＤ２８細胞内シグナル伝達配列を含む細胞内シグナル伝達ドメインを含む抗ＡＭＣ  ＣＡＲを発現するエフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞）を含む組成物を投与するステップを含み、投与するステップが、組成物をＡＦＰ陽性疾患（例えば、ＡＦＰ陽性腫瘍）の部位に対して遠位の注射部位に局所注射することを含む、方法が提供される。一部の実施形態では、注射部位は、第１のＡＦＰ陽性腫瘍である（すなわち、投与は、腫瘍内経路を介する）。一部の実施形態では、ＡＦＰ陽性疾患の部位は、第２のＡＦＰ陽性腫瘍である。一部の実施形態では、注射部位は、第１のＡＦＰ陽性腫瘍であり、ＡＦＰ陽性疾患の部位は、第２のＡＦＰ陽性腫瘍である。一部の実施形態では、ＡＦＰ陽性疾患は、がんである。一部の実施形態では、がんは、例えば、肝細胞癌、胚細胞腫瘍、または乳がんである。一部の実施形態では、がんは、肝細胞癌である。一部の実施形態では、がんは、肝細胞癌であり、処置は、がんの拡散を防止すること、例えば、がんの転移を阻害すること（例えば、防止すること）を含む。一部の実施形態では、がんは、転移性肝細胞癌である。一部の実施形態では、個体は、ヒトである。
【０４８２】
一部の実施形態では、個体におけるＡＦＰ陽性疾患を処置する方法であって、個体に、有効量の、ａ）ＡＦＰペプチドおよびＭＨＣクラスＩタンパク質を含む複合体に特異的に結合する抗ＡＭＣ抗体部分であって、ｉ）配列番号１７〜２６のいずれか１つのアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン、または少なくとも約９５％（例えば、少なくとも約９６％、９７％、９８％、９９％のいずれか）の配列同一性を有するそのバリアント、および配列番号２７〜３６のいずれか１つのアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン、または少なくとも約９５％配列同一性を有するそのバリアントを含む抗ＡＭＣ抗体部分を含む細胞外ドメイン；ｂ）膜貫通ドメイン、ならびにｃ）ＣＤ３ζ細胞内シグナル伝達配列およびＣＤ２８細胞内シグナル伝達配列を含む細胞内シグナル伝達ドメインを含む抗ＡＭＣ  ＣＡＲを発現するエフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞）を含む組成物を投与するステップを含み、投与するステップが、組成物をＡＦＰ陽性疾患（例えば、ＡＦＰ陽性腫瘍）の部位に対して遠位の注射部位に局所注射することを含む、方法が提供される。一部の実施形態では、注射部位は、第１のＡＦＰ陽性腫瘍である（すなわち、投与は、腫瘍内経路を介する）。一部の実施形態では、ＡＦＰ陽性疾患の部位は、第２のＡＦＰ陽性腫瘍である。一部の実施形態では、注射部位は、第１のＡＦＰ陽性腫瘍であり、ＡＦＰ陽性疾患の部位は、第２のＡＦＰ陽性腫瘍である。一部の実施形態では、ＡＦＰ陽性疾患は、がんである。一部の実施形態では、がんは、例えば、肝細胞癌、胚細胞腫瘍、または乳がんである。一部の実施形態では、がんは、肝細胞癌である。一部の実施形態では、がんは、肝細胞癌であり、処置は、がんの拡散を防止すること、例えば、がんの転移を阻害すること（例えば、防止すること）を含む。一部の実施形態では、がんは、転移性肝細胞癌である。一部の実施形態では、個体は、ヒトである。
【０４８３】
一部の実施形態では、個体におけるＡＦＰ陽性疾患を処置する方法であって、個体に、有効量の、ＡＦＰペプチドおよびＭＨＣクラスＩタンパク質を含む複合体に特異的に結合する抗ＡＭＣ抗体部分であって、ａ）配列番号１７〜２６のいずれか１つのアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインおよび配列番号２７〜３６のいずれか１つのアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを含む抗ＡＭＣ抗体部分を含む細胞外ドメイン；ｂ）膜貫通ドメイン、ならびにｃ）ＣＤ３ζ細胞内シグナル伝達配列およびＣＤ２８細胞内シグナル伝達配列を含む細胞内シグナル伝達ドメインを含む抗ＡＭＣ  ＣＡＲを発現するエフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞）を含む組成物を投与するステップを含み、投与するステップが、組成物をＡＦＰ陽性疾患（例えば、ＡＦＰ陽性腫瘍）の部位に対して遠位の注射部位に局所注射することを含む、方法が提供される。一部の実施形態では、注射部位は、第１のＡＦＰ陽性腫瘍である（すなわち、投与は、腫瘍内経路を介する）。一部の実施形態では、ＡＦＰ陽性疾患の部位は、第２のＡＦＰ陽性腫瘍である。一部の実施形態では、注射部位は、第１のＡＦＰ陽性腫瘍であり、ＡＦＰ陽性疾患の部位は、第２のＡＦＰ陽性腫瘍である。一部の実施形態では、ＡＦＰ陽性疾患は、がんである。一部の実施形態では、がんは、例えば、肝細胞癌、胚細胞腫瘍、または乳がんである。一部の実施形態では、がんは、肝細胞癌である。一部の実施形態では、がんは、肝細胞癌であり、処置は、がんの拡散を防止すること、例えば、がんの転移を阻害すること（例えば、防止すること）を含む。一部の実施形態では、がんは、転移性肝細胞癌である。一部の実施形態では、個体は、ヒトである。
【０４８４】
一部の実施形態では、個体における転移性肝細胞癌を処置する方法であって、個体に、有効量の、上記実施形態のいずれかに従う抗ＡＭＣ  ＣＡＲを発現するエフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞）を含む組成物を投与するステップを含む方法が提供される。一部の実施形態では、個体は、ヒトである。
【０４８５】
一部の実施形態では、個体における肝細胞癌の転移を阻害する（例えば、防止する）方法であって、個体に、有効量の、上記実施形態のいずれかに従う抗ＡＭＣ  ＣＡＲを発現するエフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞）を含む組成物を投与するステップを含む方法が提供される。一部の実施形態では、個体は、ヒトである。
【０４８６】
一部の実施形態では、個体においてＴ細胞をプライムする方法であって、個体に、有効量の、上記の抗ＡＭＣ  ＣＡＲのいずれかによる抗ＡＭＣ  ＣＡＲを発現するエフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞）を含む組成物を投与するステップを含む方法が提供される。一部の実施形態では、個体は、ＡＦＰ陽性疾患を有する。一部の実施形態では、ＡＦＰ陽性疾患は、がんである。一部の実施形態では、がんは、例えば、肝細胞癌、胚細胞腫瘍、または乳がんである。一部の実施形態では、がんは、肝細胞癌である。一部の実施形態では、投与は、静脈内、腹腔内、または腫瘍内経路を介した投与である。一部の実施形態では、投与は、静脈内経路を介した投与である。一部の実施形態では、投与は、腫瘍内経路を介した投与である。一部の実施形態では、個体は、ヒトである。
【０４８７】
一部の実施形態では、上記の方法のいずれかに従って、方法は、抗原提示細胞、またはＡＰＣ（例えば、単球または単球から分化した樹状細胞）を個体に投与するステップをさらに含む。樹状細胞は、ｅｘ  ｖｉｖｏにおいて単球を特定のサイトカインと共に培養することによって生成することができる（ＰａｌｕｃｋａおよびＢａｎｃｈｅｒｅａｕ、Ｎａｔｕｒｅ  Ｒｅｖｉｅｗｓ  Ｃａｎｃｅｒ  １２巻：２６５〜２７７頁、２０１２年）。一部の実施形態では、ＡＰＣをエフェクター細胞組成物と同時に投与する。一部の実施形態では、ＡＰＣをエフェクター細胞組成物と並行して投与する。一部の実施形態では、ＡＰＣをエフェクター細胞組成物と逐次的に投与する。一部の実施形態では、ＡＰＣをエフェクター細胞組成物と同じ経路を介して投与する。一部の実施形態では、ＡＰＣをエフェクター細胞組成物と同じ部位に投与する。一部の実施形態では、エフェクター細胞組成物はＡＰＣを含む。
【０４８８】
がん
一部の実施形態では、抗ＡＭＣ構築物および抗ＡＭＣ  ＣＡＲ細胞は、がんを処置するために有用であり得る。本明細書に記載の方法のいずれかを使用して処置することができるがんは、血管化していないまたはまだ実質的には血管化していない腫瘍、ならびに血管化した腫瘍を含む。がんは、非固形腫瘍（例えば、血液腫瘍、例えば、白血病およびリンパ腫）を含み得る、または固形腫瘍を含み得る。本発明の抗ＡＭＣ構築物および抗ＡＭＣ  ＣＡＲ細胞を用いて処置されるがんの型としては、これらに限定されないが、癌（ｃａｒｃｉｎｏｍａ）、芽細胞腫、および肉腫、ならびにある特定の白血病またはリンパ系悪性腫瘍、良性腫瘍および悪性腫瘍（ｍａｌｉｇｎａｎｔ  ｔｕｍｏｒ）、ならびに悪性腫瘍（ｍａｌｉｇｎａｎｃｙ）、例えば、肉腫、癌、および黒色腫が挙げられる。成人腫瘍／がんおよび小児腫瘍／がんも含まれる。
【０４８９】
血液がん（ｈｅｍａｔｏｌｏｇｉｃ  ｃａｎｃｅｒ）は、血液または骨髄のがんである。血液（または造血性（ｈｅｍａｔｏｇｅｎｏｕｓ）がんの例としては、急性白血病（例えば、急性リンパ球性白血病、急性骨髄球性白血病、急性骨髄性白血病、ならびに骨髄芽球性白血病、前骨芽球性白血病、骨髄単球性白血病、単球性白血病および赤白血病）、慢性白血病（例えば、慢性骨髄球性（顆粒球性）白血病、慢性骨髄性白血病、および慢性リンパ球性白血病）を含む白血病、真性赤血球増加症、リンパ腫、ホジキン病、非ホジキンリンパ腫（無痛性および高悪性度の形態）、多発性骨髄腫、ワルデンシュトレームマクログロブリン血症、重鎖病、骨髄異形成症候群、ヘアリー細胞白血病および脊髄形成異常症が挙げられる。
【０４９０】
固形腫瘍は、通常は、嚢胞または液体領域を含有しない、組織の異常な腫瘤である。固形腫瘍は、良性または悪性であり得る。異なる型の固形腫瘍の名称は、それらを形成する細胞型に由来する（例えば、肉腫、癌、およびリンパ腫）。肉腫および癌などの固形腫瘍の例としては、線維肉腫、粘液肉腫、脂肪肉腫、軟骨肉腫、骨肉腫、および他の肉腫、滑膜腫、中皮腫、ユーイング腫瘍、平滑筋肉腫、横紋筋肉腫、結腸癌、リンパ系悪性腫瘍、膵がん、乳がん、肺がん、卵巣がん、前立腺がん、肝細胞癌、扁平上皮細胞癌、基底細胞癌、腺癌、汗腺癌、甲状腺髄様癌、甲状腺乳頭癌、褐色細胞腫、脂腺癌、乳頭癌、乳頭状腺癌、髄様癌、気管支原性肺癌、腎細胞癌、ヘパトーマ、胆管癌、絨毛癌、ウィルムス腫瘍、子宮頸がん、精巣腫瘍、セミノーマ、膀胱癌、黒色腫、およびＣＮＳ腫瘍（例えば、神経膠腫（例えば、脳幹神経膠腫および混合型神経膠腫）、神経膠芽腫（多形神経膠芽腫としても公知）星状細胞腫、ＣＮＳリンパ腫、胚細胞腫、髄芽腫、シュワン細胞腫  頭蓋咽頭腫（ｃｒａｎｉｏｐｈａｒｙｏｇｉｏｍａ）、上衣腫、松果体腫、血管芽細胞腫、聴神経腫、乏枝神経膠腫、髄膜腫（ｍｅｎａｎｇｉｏｍａ）、神経芽細胞腫、網膜芽細胞腫および脳転移）が挙げられる。
【０４９１】
一部の実施形態では、がんは、ＨＣＣである。一部の実施形態では、ＨＣＣは、初期ＨＣＣ、非転移性ＨＣＣ、原発性ＨＣＣ、進行ＨＣＣ、局所進行ＨＣＣ、転移性ＨＣＣ、寛解状態のＨＣＣ、または再発性ＨＣＣである。一部の実施形態では、ＨＣＣは、限局性で切除可能なもの（すなわち、完全な外科的除去が可能な、肝臓の一部に限局している腫瘍）、限局性で切除不能なもの（すなわち、限局性腫瘍は、極めて重要な血管構造が影響を受けることが原因でもしくは肝臓が損なわれることが原因で切除不能であり得る）、または切除不能なもの（すなわち、腫瘍が肝臓の全ての葉に影響を及ぼし、かつ／もしくは拡散して他の器官（例えば、肺、リンパ節、骨）に影響を及ぼしている）である。一部の実施形態では、ＨＣＣは、ＴＮＭ分類に従って、Ｉ期腫瘍（血管浸潤を伴わない単一の腫瘍）、ＩＩ期腫瘍（血管浸潤を伴う単一の腫瘍、または複数の腫瘍、５ｃｍを超えない）、ＩＩＩ期腫瘍（複数の腫瘍、いずれかが５ｃｍを超える、または門脈または肝静脈の主要な枝に影響を及ぼしている腫瘍）、ＩＶ期腫瘍（胆嚢以外の隣接する器官への直接浸潤もしくは臓側腹膜の穿孔を伴う腫瘍）、Ｎ１腫瘍（所属リンパ節転移）、またはＭ１腫瘍（遠隔転移）である。一部の実施形態では、ＨＣＣは、ＡＪＣＣ（Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｊｏｉｎｔ  Ｃｏｍｍｉｓｓｉｏｎ  ｏｎ  Ｃａｎｃｅｒ）病期分類基準に従って、Ｔ１期、Ｔ２期、Ｔ３期、またはＴ４期ＨＣＣである。一部の実施形態では、ＨＣＣは、肝細胞癌、ＨＣＣの線維層板型バリアント、および肝細胞・胆管細胞混合癌のうちのいずれか１つである。
【０４９２】
一部の実施形態では、がんは、胚細胞腫瘍である。
【０４９３】
がんの処置は、例えば、腫瘍の退縮、腫瘍の重量またはサイズの減少、進行までの時間、生存の持続時間、無増悪生存期間、奏効率、応答の持続時間、生活の質、タンパク質の発現および／または活性によって評価することができる。例えば放射線画像法による応答の測定を含む、療法の有効性を決定するための手法を使用することができる。
抗ＡＭＣ構築物を使用した診断および画像化のための方法
【０４９４】
細胞の表面上のＡＭＣに特異的に結合する標識された抗ＡＭＣ抗体部分ならびにその誘導体および類似体を、がん（例えば、肝細胞癌、胚細胞腫瘍、または乳がん）などの上記の疾患および障害のいずれかを含む、ＡＦＰの発現、異常な発現（ａｂｅｒｒａｎｔ  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ）および／または活性に関連する疾患および／または障害を、診断目的のために、検出、診断、またはモニタリングするのに使用することができる。例えば、本発明の抗ＡＭＣ抗体部分を、ｉｎ  ｓｉｔｕ、ｉｎ  ｖｉｖｏ、ｅｘ  ｖｉｖｏ、およびｉｎ  ｖｉｔｒｏにおける診断アッセイまたは画像化アッセイにおいて使用することができる。
【０４９５】
本発明のさらなる実施形態は、個体（例えば、ヒトなどの哺乳動物）におけるＡＦＰの発現または異常な発現に関連する疾患または障害を診断する方法を含む。方法は、個体におけるＡＭＣを提示する細胞を検出するステップを含む。一部の実施形態では、個体（例えば、ヒトなどの哺乳動物）におけるＡＦＰの発現または異常な発現に関連する疾患または障害を診断する方法であって、（ａ）個体に、有効量の、上記実施形態のいずれかに従う標識された抗ＡＭＣ抗体部分を投与するステップ；および（ｂ）個体における標識のレベルを決定するステップであって、閾値レベルを上回る標識のレベルは、個体が疾患または障害を有することを示す、ステップを含む方法が提供される。閾値レベルは、例えば、疾患または障害を有する個体の第１のセットおよび疾患または障害を有さない個体の第２のセットにおける上記の診断方法に従い標識を検出し、第１のセットと第２のセットとの間の識別が可能になるレベルに閾値を設定することによるものを含め、種々の方法によって決定することができる。一部の実施形態では、閾値レベルはゼロであり、方法は、個体における標識の存在または非存在を決定するステップを含む。一部の実施形態では、方法は、ステップ（ａ）の投与後ある時間間隔をおいて、標識された抗ＡＭＣ抗体部分を、個体における、ＡＭＣが発現している部位に優先的に集中させる（そして、結合していない標識された抗ＡＭＣ抗体部分は取り除く）ステップをさらに含め。一部の実施形態では、方法は、標識のバックグラウンドレベルを差し引くステップをさらに含む。バックグラウンドレベルは、例えば、標識された抗ＡＭＣ抗体部分を投与する前の個体における標識を検出することによるもの、または疾患もしくは障害を有さない個体における上記の診断方法に従い標識を検出することによるものを含む、種々の方法によって決定することができる。一部の実施形態では、疾患または障害は、がんである。一部の実施形態では、がんは、例えば、肝細胞癌、胚細胞腫瘍、および乳がんからなる群から選択される。一部の実施形態では、がんは、肝細胞癌である。一部の実施形態では、がんは、転移性肝細胞癌である。一部の実施形態では、がんは、転移性肝細胞癌であり、方法は、個体の血液中の標識のレベルを決定するステップをさらに含む。一部の実施形態では、個体は、ヒトである。
【０４９６】
一部の実施形態では、個体（例えば、ヒトなどの哺乳動物）における転移性肝細胞癌を診断する方法であって、（ａ）個体に、有効量の、上記実施形態のいずれかに従い標識された抗ＡＭＣ抗体部分を投与するステップ；および（ｂ）個体の血液中の標識のレベルを決定するステップであって、閾値レベルを上回る標識のレベルは、個体が転移性肝細胞癌を有することを示す、ステップを含む方法が提供される。閾値レベルは、例えば、転移性肝細胞癌を有する個体の第１のセットおよび転移性肝細胞癌を有さない個体の第２のセットにおける上記の診断方法に従い標識を検出し、第１のセットと第２のセットとの間の識別が可能になるレベルに閾値を設定することによるものを含む、種々の方法によって決定することができる。一部の実施形態では、閾値レベルはゼロであり、方法は、個体の血液中の標識の存在または非存在を決定するステップを含む。一部の実施形態では、方法は、ステップ（ａ）の投与後ある時間間隔をおいて、標識された抗ＡＭＣ抗体部分を、個体における、ＡＭＣが発現している部位に優先的に集中させる（そして、結合していない標識された抗ＡＭＣ抗体部分は取り除く）ステップをさらに含む。一部の実施形態では、方法は、標識のバックグラウンドレベルを差し引くステップをさらに含む。バックグラウンドレベルは、例えば、標識された抗ＡＭＣ抗体部分を投与する前の個体における標識を検出することによるもの、または転移性肝細胞癌を有さない個体における上記の診断方法に従い標識を検出することによるものを含む、種々の方法によって決定することができる。一部の実施形態では、個体は、ヒトである。
【０４９７】
一部の実施形態では、個体（例えば、ヒトなどの哺乳動物）におけるＡＦＰの発現または異常な発現に関連する疾患または障害を診断する方法であって、（ａ）上記実施形態のいずれかに従い標識された抗ＡＭＣ抗体部分を、個体に由来する試料（例えば、全血またはホモジナイズした組織）と接触させるステップ；および（ｂ）試料中の、標識された抗ＡＭＣ抗体部分と結合した細胞の数を決定するステップであって、閾値レベルを上回る、標識された抗ＡＭＣ抗体部分と結合した細胞の数の値は、個体が疾患または障害を有することを示す、ステップを含む方法が提供される。閾値レベルは、例えば、疾患または障害を有する個体の第１のセットおよび疾患または障害を有さない個体の第２のセットにおける上記の診断方法に従い標識された抗ＡＭＣ抗体部分と結合した細胞の数を決定し、第１のセットと第２のセットとの間の識別が可能になるレベルに閾値を設定することによるものを含む、種々の方法によって決定することができる。一部の実施形態では、閾値レベルはゼロであり、方法は、試料中の、標識された抗ＡＭＣ抗体部分と結合した細胞の存在または非存在を決定するステップを含む。一部の実施形態では、方法は、標識された抗ＡＭＣ抗体部分と結合した細胞の数のバックグラウンドレベルを差し引くステップをさらに含む。バックグラウンドレベルは、例えば、標識された抗ＡＭＣ抗体部分を投与する前の個体における標識された抗ＡＭＣ抗体部分と結合した細胞の数を決定することによるもの、または疾患もしくは障害を有さない個体における上記の診断方法に従い標識された抗ＡＭＣ抗体部分と結合した細胞の数を決定することによるものを含む、種々の方法によって決定することができる。一部の実施形態では、疾患または障害は、がんである。一部の実施形態では、がんは、例えば、肝細胞癌、胚細胞腫瘍、および乳がんからなる群から選択される。一部の実施形態では、がんは、肝細胞癌である。一部の実施形態では、がんは、転移性肝細胞癌である。一部の実施形態では、がんは、転移性肝細胞癌であり、試料は、血液試料（例えば、全血）である。一部の実施形態では、個体は、ヒトである。
【０４９８】
一部の実施形態では、個体（例えば、ヒトなどの哺乳動物）における転移性肝細胞癌を診断する方法であって、（ａ）上記実施形態のいずれかに従い標識された抗ＡＭＣ抗体部分を、個体に由来する試料（例えば、全血）と接触させるステップ；および（ｂ）試料中の、標識された抗ＡＭＣ抗体部分と結合した細胞の数を決定するステップであって、閾値レベルを上回る、標識された抗ＡＭＣ抗体部分と結合した細胞の数の値が、個体が転移性肝細胞癌を有することを示す、ステップを含む方法が提供される。閾値レベルは、例えば、転移性肝細胞癌を有する個体の第１のセットおよび転移性肝細胞癌を有さない個体の第２のセットにおける上記の診断方法に従い標識された抗ＡＭＣ抗体部分と結合した細胞の数を決定し、第１のセットと第２のセットとの間の識別が可能になるレベルに閾値を設定することによるものを含む、種々の方法によって決定することができる。一部の実施形態では、閾値レベルはゼロであり、方法は、試料中の、標識された抗ＡＭＣ抗体部分と結合した細胞の存在または非存在を決定するステップを含む。一部の実施形態では、方法は、標識された抗ＡＭＣ抗体部分と結合した細胞の数のバックグラウンドレベルを差し引くステップをさらに含む。バックグラウンドレベルは、例えば、標識された抗ＡＭＣ抗体部分を投与する前の個体における標識された抗ＡＭＣ抗体部分と結合した細胞の数を決定することによるもの、または転移性肝細胞癌を有さない個体における上記の診断方法に従い標識された抗ＡＭＣ抗体部分と結合した細胞の数を決定することによるものを含む、種々の方法によって決定することができる。一部の実施形態では、試料は、血液（例えば、全血）である。一部の実施形態では、個体は、ヒトである。
【０４９９】
本発明の抗ＡＭＣ抗体部分は、当業者に公知の方法を使用して生体試料中のＡＭＣを提示する細胞のレベルをアッセイするために使用することができる。適切な抗体標識は当技術分野で公知であり、それらとして、グルコースオキシダーゼなどの酵素標識；ヨウ素（１３１Ｉ、１２５Ｉ、１２３Ｉ、１２１Ｉ）、炭素（１４Ｃ）、硫黄（３５Ｓ）、トリチウム（３Ｈ）、インジウム（１１５ｍＩｎ、１１３ｍＩｎ、１１２Ｉｎ、１１１Ｉｎ）、テクネチウム（９９Ｔｃ、９９ｍＴｃ）、タリウム（２０１Ｔｉ）、ガリウム（６８Ｇａ、６７Ｇａ）、パラジウム（１０３Ｐｄ）、モリブデン（９９Ｍｏ）、キセノン（１３３Ｘｅ）、フッ素（１８Ｆ）、サマリウム（１５３Ｓｍ）、ルテチウム（１７７Ｌｕ）、ガドリニウム（１５９Ｇｄ）、プロメチウム（１４９Ｐｍ）、ランタン（１４０Ｌａ）、イッテルビウム（１７５Ｙｂ）、ホルミウム（１６６Ｈｏ）、イットリウム（９０Ｙ）、スカンジウム（４７Ｓｃ）、レニウム（１８６Ｒｅ、１８８Ｒｅ）、プラセオジム（１４２Ｐｒ）、ロジウム（１０５Ｒｈ）、およびルテニウム（９７Ｒｕ）などの放射性同位体；ルミノール；フルオレセインおよびローダミンなどの蛍光標識；ならびにビオチンが挙げられる。
【０５００】
当技術分野で公知の技法は、本発明の標識された抗ＡＭＣ抗体部分に適用することができる。そのような技法としては、これらに限定されないが、二官能性コンジュゲート剤の使用が挙げられる（例えば、米国特許第５，７５６，０６５号；同第５，７１４，６３１号；同第５，６９６，２３９号；同第５，６５２，３６１号；同第５，５０５，９３１号；同第５，４８９，４２５号；同第５，４３５，９９０号；同第５，４２８，１３９号；同第５，３４２，６０４号；同第５，２７４，１１９号；同第４，９９４，５６０号；および同第５，８０８，００３号を参照されたい）。上記のアッセイに加えて、種々のｉｎ  ｖｉｖｏアッセイおよびｅｘ  ｖｉｖｏアッセイが当業者には利用可能である。例えば、被験体の体内の細胞を、検出可能な標識、例えば放射性同位体を用いて任意選択で標識した抗ＡＭＣ抗体部分に曝露させることができ、抗ＡＭＣ抗体部分の細胞への結合を、例えば、放射活性についての外部スキャニングによって、または、抗ＡＭＣ抗体部分に予め曝露させた、被験体に由来する試料（例えば、生検もしくは他の生体試料）を分析することによって評価することができる。
【０５０１】
製造物品およびキット
本発明の一部の実施形態では、その表面上にＡＭＣを提示する細胞に抗ＡＭＣ構築物を送達するため、または個体におけるＡＭＣを提示する細胞を単離または検出するための、がん（例えば、肝細胞癌、胚細胞腫瘍、または乳がん）などのＡＦＰ陽性疾患の処置に有用な材料を含有する製造物品が提供される。製造物品は、容器、および、容器上のまたは容器に付随する標識または添付文書を含み得る。適切な容器としては、例えば、ビン、バイアル、シリンジなどが挙げられる。容器は、ガラスまたはプラスチックなどの種々の材料から形成されたものであってよい。一般に、容器は、本明細書に記載の疾患または障害の処置に有効である組成物を保持し、滅菌アクセスポートを有し得る（例えば、容器は、静脈内溶液バッグまたは皮下注射針で穴をあけることができる止め栓を有するバイアルであってよい）。組成物中の少なくとも１つの活性剤は、本発明の抗ＡＭＣ構築物である。標識または添付文書は、組成物が特定の状態を処置するために使用されるものであることを示す。標識または添付文書は、抗ＡＭＣ構築物組成物の患者への投与に関する指示をさらに含む。本明細書に記載のコンビナトリアル治療を含む製造物品およびキットも意図される。
【０５０２】
添付文書とは、市販の治療用製品のパッケージに慣習的に含まれる、そのような治療用製品の使用にかかわる適応症、使用法、投与量、投与、禁忌および／または警告についての情報を含有す指示を指す。一部の実施形態では、添付文書は、組成物が、がん（例えば、肝細胞癌、胚細胞腫瘍、または乳がん）を処置するために使用されるものであることを示す。
【０５０３】
さらに、製造物品は、注射用静菌水（ＢＷＦＩ）、リン酸緩衝食塩水、リンゲル液およびブドウ糖溶液などの、薬学的に許容される緩衝液を含む第２の容器をさらに含み得る。製造物品は、他の緩衝液、希釈剤、フィルター、針、およびシリンジを含む、商業的観点および使用者の観点から望ましい他の材料をさらに含み得る。
【０５０４】
任意選択で製造物品と組み合わせた、種々の目的のため、例えば、本明細書に記載のＡＦＰ陽性疾患もしくは障害の処置のため、その表面上にＡＭＣを提示する細胞に抗ＡＭＣ構築物を送達するため、または個体におけるＡＭＣを提示する細胞を単離もしくは検出するために有用なキットも提供される。本発明のキットは、抗ＡＭＣ構築物組成物（または単位剤形および／もしくは製造物品）を含む１つまたは複数の容器を含み、一部の実施形態では、別の薬剤（例えば、本明細書に記載の薬剤）および／または本明細書に記載の方法のいずれかに従い使用するための指示をさらに含む。キットは、処置に適する個体の選択についての記載をさらに含み得る。本発明のキット中に供給される指示は、一般には、ラベルまたは添付文書（例えば、キットに含まれる紙シート）上に書かれた指示であるが、機械により可読の指示（例えば、磁気または光学的な記憶ディスクに保持された指示）も許容される。
【０５０５】
例えば、一部の実施形態では、キットは、抗ＡＭＣ構築物を含む組成物（例えば、全長抗ＡＭＣ抗体、多特異的抗ＡＭＣ分子（例えば、二重特異的抗ＡＭＣ抗体）、または抗ＡＭＣイムノコンジュゲート）を含む。一部の実施形態では、キットは、ａ）抗ＡＭＣ構築物を含む組成物、およびｂ）有効量の、少なくとも１つの他の薬剤であって、ＭＨＣクラスＩタンパク質の発現を増大させ、かつ／またはＭＨＣクラスＩタンパク質によるＡＦＰペプチドの表面提示を増強する他の薬剤（例えば、ＩＦＮγ、ＩＦＮβ、ＩＦＮα、またはＨｓｐ９０阻害剤）を含む。一部の実施形態では、キットは、ａ）抗ＡＭＣ構築物を含む組成物、およびｂ）ＨＣＣなどのＡＦＰ陽性疾患の処置のために、個体に、抗ＡＭＣ構築物組成物を投与することに関する指示を含む。一部の実施形態では、キットは、ａ）抗ＡＭＣ構築物を含む組成物、ｂ）有効量の、少なくとも１つの他の薬剤であって、ＭＨＣクラスＩタンパク質の発現を増大させ、かつ／またはＭＨＣクラスＩタンパク質によるＡＦＰペプチドの表面提示を増強する他の薬剤（例えば、ＩＦＮγ、ＩＦＮβ、ＩＦＮα、またはＨｓｐ９０阻害剤）、ならびにｃ）ＨＣＣなどのＡＦＰ陽性疾患の処置のために、個体に、抗ＡＭＣ構築物組成物および他の薬剤（複数可）を投与することに関する指示を含む。抗ＡＭＣ構築物および他の薬剤（複数可）は別々の容器中に存在していてもよく、単一の容器中に存在していてもよい。例えば、キットは、１つの別個の組成物を含んでもよく、２つまたはそれ超の組成物であって、１つの組成物が抗ＡＭＣ構築物を含み、別の組成物が別の薬剤を含む組成物を含んでもよい。
【０５０６】
一部の実施形態では、キットは、ａ）抗ＡＭＣ構築物を含む組成物（例えば、全長抗ＡＭＣ抗体、多特異的抗ＡＭＣ分子（例えば、二重特異的抗ＡＭＣ抗体）、または抗ＡＭＣイムノコンジュゲート）、およびｂ）抗ＡＭＣ構築物を細胞（例えば、個体に由来する細胞、例えば免疫細胞）と組み合わせて抗ＡＭＣ構築物／細胞コンジュゲートを含む組成物を形成し、抗ＡＭＣ構築物／細胞コンジュゲート組成物を、ＡＦＰ陽性疾患（例えば、ＨＣＣ）の処置のために個体に投与することに関する指示を含む。一部の実施形態では、キットは、ａ）抗ＡＭＣ構築物を含む組成物、およびｂ）細胞（例えば、細胞傷害性細胞）を含む。一部の実施形態では、キットは、ａ）抗ＡＭＣ構築物を含む組成物、ｂ）細胞（例えば、細胞傷害性細胞）、およびｃ）抗ＡＭＣ構築物を細胞と組み合わせて抗ＡＭＣ構築物／細胞コンジュゲートを含む組成物を形成し、抗ＡＭＣ構築物／細胞コンジュゲート組成物を、ＨＣＣなどのＡＦＰ陽性疾患の処置のために個体に投与することに関する指示を含む。一部の実施形態では、キットは、細胞（例えば、細胞傷害性細胞）と会合した抗ＡＭＣ構築物を含む組成物を含む。一部の実施形態では、キットは、ａ）細胞（例えば、細胞傷害性細胞）と会合した抗ＡＭＣ構築物を含む組成物、およびｂ）ＨＣＣなどのＡＦＰ陽性疾患の処置のために組成物を個体に投与することに関する指示を含む。一部の実施形態では、会合は、抗ＡＭＣ構築物と細胞の表面上の分子のコンジュゲーションによるものである。一部の実施形態では、会合は、抗ＡＭＣ構築物の一部を細胞の外膜に挿入することによるものである。
【０５０７】
一部の実施形態では、キットは、抗ＡＭＣ構築物（例えば、全長抗ＡＭＣ抗体、多特異的抗ＡＭＣ分子（例えば、二重特異的抗ＡＭＣ抗体）、抗ＡＭＣ  ＣＡＲ、もしくは抗ＡＭＣイムノコンジュゲート）またはそのポリペプチドの一部分をコードする核酸（または核酸のセット）を含む。一部の実施形態では、キットは、ａ）抗ＡＭＣ構築物またはそのポリペプチドの一部分をコードする核酸（または核酸のセット）、およびｂ）核酸（または核酸のセット）を発現させるための宿主細胞（例えば、エフェクター細胞）を含む。一部の実施形態では、キットは、ａ）抗ＡＭＣ構築物またはそのポリペプチドの一部分をコードする核酸（または核酸のセット）、ならびに、ｂ）ｉ）抗ＡＭＣ構築物を宿主細胞（例えば、エフェクター細胞、例えば、Ｔ細胞）において発現させること、ｉｉ）抗ＡＭＣ構築物または抗ＡＭＣ構築物を発現する宿主細胞を含む組成物を調製すること、およびｉｉｉ）抗ＡＭＣ構築物または抗ＡＭＣ構築物を発現する宿主細胞を含む組成物を、ＨＣＣなどのＡＦＰ陽性疾患の処置のために個体に投与することに関する指示を含む。一部の実施形態では、宿主細胞は、個体に由来する。一部の実施形態では、キットは、ａ）抗ＡＭＣ構築物またはそのポリペプチドの一部分をコードする核酸（または核酸のセット）、ｂ）核酸（または核酸のセット）を発現させるための宿主細胞（例えば、エフェクター細胞）、ならびに、ｃ）ｉ）抗ＡＭＣ構築物を宿主細胞において発現させること、ｉｉ）抗ＡＭＣ構築物または抗ＡＭＣ構築物を発現する宿主細胞を含む組成物を調製すること、およびｉｉｉ）抗ＡＭＣ構築物または抗ＡＭＣ構築物を発現する宿主細胞を含む組成物を、ＨＣＣなどのＡＦＰ陽性疾患の処置のために個体に投与することに関する指示を含む。
【０５０８】
一部の実施形態では、キットは、抗ＡＭＣ  ＣＡＲをコードする核酸を含む。一部の実施形態では、キットは、抗ＡＭＣ  ＣＡＲをコードする核酸を含むベクターを含む。一部の実施形態では、キットは、ａ）抗ＡＭＣ  ＣＡＲをコードする核酸を含むベクター、ならびに、ｂ）ｉ）個体に由来するＴ細胞などのエフェクター細胞にベクターを導入すること、ｉｉ）抗ＡＭＣ  ＣＡＲエフェクター細胞を含む組成物を調製すること、およびｉｉｉ）抗ＡＭＣ  ＣＡＲエフェクター細胞組成物を、ＨＣＣなどのＡＦＰ陽性疾患の処置のために個体に投与することに関する指示を含む。
【０５０９】
本発明のキットは、適切なパッケージ中に入れられる。適切なパッケージとしては、これらに限定されないが、バイアル、ビン、ジャー、フレキシブル包装（例えば、密閉Ｍｙｌａｒまたはプラスチックバッグ）などが挙げられる。キットは、任意選択で、バッファなどの追加的な成分および説明情報も提供し得る。したがって、本出願は、バイアル（例えば、密閉バイアル）、ビン、ジャー、フレキシブル包装などを含む製造物品も提供する。
【０５１０】
抗ＡＭＣ構築物組成物の使用に関する指示は、一般に、意図された処置のための投与量、投薬スケジュール、および投与経路に関する情報を含む。容器は、単位用量、バルク包装（例えば、複数回用量パッケージ）または亜単位用量（ｓｕｂ−ｕｎｉｔ  ｄｏｓｅ）であり得る。例えば、個体の有効な処置を、例えば、１週間、８日間、９日間、１０日間、１１日間、１２日間、１３日間、２週間、３週間、４週間、６週間、８週間、３カ月間、４カ月間、５カ月間、７カ月間、８カ月間、９カ月間、またはそれ超のいずれかの、長期間にわたってもたらすために十分な投与量の本明細書に開示されている抗ＡＭＣ構築物（例えば、全長抗ＡＭＣ抗体、多特異的抗ＡＭＣ分子（例えば、二重特異的抗ＡＭＣ抗体）、抗ＡＭＣ  ＣＡＲ、または抗ＡＭＣイムノコンジュゲート）を含有するキットを提供することができる。キットはまた、複数の単位用量の抗ＡＭＣ構築物および医薬組成物ならびに使用のための指示を含み、薬局、例えば、病院薬局および調剤薬局における保管および使用のために十分な量で包装されていてもよい。
【０５１１】
本発明の範囲および主旨の中でいくつかの実施形態が可能であることが当業者には理解されよう。ここで以下の非限定的な例に言及することにより、本発明をより詳細に記載する。以下の例は、本発明をさらに例示するものであるが、当然、いかなる形でもその範囲を限定するものと解釈されるべきではない。
【０５１２】
例示的な実施形態
実施形態１．一部の実施形態では、アルファ−フェトプロテイン（ＡＦＰ）ペプチドおよび主要組織適合（ｍａｊｏｒ  ｈｉｓｔｏｃｏｍｐａｔｉｂｉｌｉｔｙ）（ＭＨＣ）クラスＩタンパク質を含む複合体（ＡＦＰ／ＭＨＣクラスＩ複合体またはＡＭＣ）に特異的に結合する抗体部分を含む、単離された抗ＡＭＣ構築物が提供される。
【０５１３】
実施形態２．実施形態１の一部のさらなる実施形態では、ＡＦＰ／ＭＨＣクラスＩ複合体は、細胞表面上に存在する。
【０５１４】
実施形態３．実施形態１の一部のさらなる実施形態では、ＡＦＰ／ＭＨＣクラスＩ複合体は、がん細胞の表面上に存在する。
【０５１５】
実施形態４．実施形態１〜３のいずれか１つの一部のさらなる実施形態では、ＭＨＣクラスＩタンパク質は、ヒト白血球抗原（ＨＬＡ）−Ａである。
【０５１６】
実施形態５．実施形態４の一部のさらなる実施形態では、ＭＨＣクラスＩタンパク質は、ＨＬＡ−Ａ０２である。
【０５１７】
実施形態６．実施形態５の一部のさらなる実施形態では、ＭＨＣクラスＩタンパク質は、ＨＬＡ−Ａ０２対立遺伝子のＨＬＡ−Ａ＊０２：０１サブタイプである。
【０５１８】
実施形態７．実施形態１〜６のいずれか１つの一部のさらなる実施形態では、抗体部分は、ＡＦＰペプチドおよびＭＨＣクラスＩタンパク質とは異なるＨＬＡ対立遺伝子を有する第２のＭＨＣクラスＩタンパク質を含む複合体と交差反応する。
【０５１９】
実施形態８．実施形態１〜７のいずれか１つの一部のさらなる実施形態では、ＡＦＰペプチドは、８〜１２アミノ酸の長さである。
【０５２０】
実施形態９．実施形態１〜８のいずれか１つの一部のさらなる実施形態では、ＡＦＰペプチドは、ヒトＡＦＰに由来する。
【０５２１】
実施形態１０．実施形態１〜９のいずれか１つの一部のさらなる実施形態では、ＡＦＰペプチドは、配列番号３〜１３および１６からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する。
【０５２２】
実施形態１１．実施形態９の一部のさらなる実施形態では、ＡＦＰペプチドは、ＦＭＮＫＦＩＹＥＩ（配列番号４）のアミノ酸配列を有する。
【０５２３】
実施形態１２．実施形態１〜１１のいずれか１つの一部のさらなる実施形態では、単離された抗ＡＭＣ構築物は、ＡＦＰペプチドの種間バリアントおよびＭＨＣクラスＩタンパク質を含む複合体と交差反応する。
【０５２４】
実施形態１３．実施形態１〜１２のいずれか１つの一部のさらなる実施形態では、抗体部分は、ヒト、ヒト化、または半合成である。
【０５２５】
実施形態１４．実施形態１〜１３のいずれか１つの一部のさらなる実施形態では、抗体部分は、全長抗体、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、（Ｆａｂ’）２、Ｆｖ、または単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）である。
【０５２６】
実施形態１５．実施形態１〜１４のいずれか１つの一部のさらなる実施形態では、抗体部分は、ＡＦＰ／ＭＨＣクラスＩ複合体に約０．１ｐＭから約５００ｎＭの平衡解離定数（Ｋｄ）で結合する。
【０５２７】
実施形態１６．実施形態１〜１５のいずれか１つの一部のさらなる実施形態では、単離された抗ＡＭＣ構築物は、ＡＦＰ／ＭＨＣクラスＩ複合体に約０．１ｐＭから約５００ｎＭのＫｄで結合する。
【０５２８】
実施形態１７．実施形態１〜１６のいずれか１つの一部のさらなる実施形態では、抗体部分は、
ｉ）Ｇ−Ｆ／Ｙ−Ｓ／Ｔ−Ｆ−Ｄ／Ｓ／Ｔ−Ｄ／Ｎ／Ｓ−Ｙ／Ａ−Ａ／Ｇ／Ｗ（配列番号８７）のアミノ酸配列を含む重鎖相補性決定領域（ＨＣ−ＣＤＲ）１、または最大で約３アミノ酸の置換を含むそのバリアント、Ｉ／Ｓ−Ｋ／Ｓ−Ｘ−Ｈ／Ｙ−Ｘ−Ｇ−Ｘ−Ｔ（配列番号８８）のアミノ酸配列を含むＨＣ−ＣＤＲ２、または最大で約３アミノ酸の置換を含むそのバリアント、およびＡ／Ｇ−Ｘ−Ｗ／Ｙ−Ｙ−Ｘ−Ｘ−Ｘ−Ｆ／Ｙ−Ｄ（配列番号８９）のアミノ酸配列を含むＨＣ−ＣＤＲ３；または最大で約３アミノ酸の置換を含むそのバリアントを含む重鎖可変ドメイン；ならびに
ｉｉ）Ｓ／Ｔ−Ｇ／Ｓ−Ｄ／Ｎ−Ｉ／Ｖ−Ａ／Ｇ−Ａ／Ｓ／Ｖ−Ｘ−Ｈ／Ｙ（配列番号１２０）のアミノ酸配列を含む軽鎖相補性決定領域（ＬＣ−ＣＤＲ）１、または最大で約３アミノ酸の置換を含むそのバリアント、およびＱ−Ｓ／Ｔ−Ｙ／Ｗ−Ｄ／Ｔ−Ｓ／Ｔ−Ａ／Ｓ（配列番号１２１）のアミノ酸配列を含むＬＣ−ＣＤＲ３；または最大で３アミノ酸の置換を含むそのバリアントを含む軽鎖可変ドメイン
を含み、Ｘは任意のアミノ酸であり得る。
【０５２９】
実施形態１８．実施形態１〜１６のいずれか１つの一部のさらなる実施形態では、抗体部分は、
ｉ）配列番号５７〜６６のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＨＣ−ＣＤＲ１、または最大で約５アミノ酸の置換を含むそのバリアント、配列番号６７〜７６のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＨＣ−ＣＤＲ２、または最大で約５アミノ酸の置換を含むそのバリアント、および配列番号７７〜８６のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＨＣ−ＣＤＲ３；または最大で約５アミノ酸の置換を含むそのバリアントを含む重鎖可変ドメイン；ならびに
ｉｉ）配列番号９０〜９９のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＬＣ−ＣＤＲ１、または最大で約５アミノ酸の置換を含むそのバリアント、配列番号１００〜１０９のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＬＣ−ＣＤＲ２、または最大で約３アミノ酸の置換を含むそのバリアント、および配列番号１１０〜１１９のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＬＣ−ＣＤＲ３；または最大で約５アミノ酸の置換を含むそのバリアントを含む軽鎖可変ドメイン
を含む。
【０５３０】
実施形態１９．実施形態１〜１６のいずれか１つの一部のさらなる実施形態では、抗体部分は、
ｉ）配列番号５７〜６６のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＨＣ−ＣＤＲ１、配列番号６７〜７６のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＨＣ−ＣＤＲ２、および配列番号７７〜８６のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＨＣ−ＣＤＲ３；またはＨＣ−ＣＤＲ領域内に最大で約５アミノ酸の置換を含むそのバリアントを含む重鎖（ＨＣ）可変ドメイン；ならびに
ｉｉ）配列番号９０〜９９のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＬＣ−ＣＤＲ１、配列番号１００〜１０９のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＬＣ−ＣＤＲ２、および配列番号１１０〜１１９のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＬＣ−ＣＤＲ３；またはＬＣ−ＣＤＲ領域内に最大で約５アミノ酸の置換を含むそのバリアントを含む軽鎖（ＬＣ）可変ドメイン
を含む。
【０５３１】
実施形態２０．実施形態１８または１９の一部のさらなる実施形態では、抗体部分は、ａ）配列番号１７〜２６のいずれか１つのアミノ酸配列、または配列番号１７〜２６のいずれか１つに対して少なくとも約９５％の配列同一性を有するそのバリアントを含む重鎖可変ドメイン；およびｂ）配列番号２７〜３６のいずれか１つのアミノ酸配列、または配列番号２７〜３６のいずれか１つに対して少なくとも約９５％の配列同一性を有するそのバリアントを含む軽鎖可変ドメインを含む。
【０５３２】
実施形態２１．実施形態２０の一部のさらなる実施形態では、抗体部分は、配列番号１７〜２６のいずれか１つのアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインおよび配列番号２７〜３６のいずれか１つのアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを含む。
【０５３３】
実施形態２２．実施形態１〜２１のいずれか１つの一部のさらなる実施形態では、単離された抗ＡＭＣ構築物は、全長抗体である。
【０５３４】
実施形態２３．実施形態１〜２２のいずれか１つの一部のさらなる実施形態では、単離された抗ＡＭＣ構築物は、単一特異的である。
【０５３５】
実施形態２４．実施形態１〜２２のいずれか１つの一部のさらなる実施形態では、単離された抗ＡＭＣ構築物は、多特異的である。
【０５３６】
実施形態２５．実施形態２４の一部のさらなる実施形態では、単離された抗ＡＭＣ構築物は、二重特異的である。
【０５３７】
実施形態２６．実施形態２４または２５の一部のさらなる実施形態では、単離された抗ＡＭＣ構築物は、タンデムｓｃＦｖ、ダイアボディ（Ｄｂ）、単鎖ダイアボディ（ｓｃＤｂ）、二重親和性再標的化（ＤＡＲＴ）抗体、二重可変ドメイン（ＤＶＤ）抗体、ノブ−イントゥ−ホール（ＫｉＨ）抗体、ドックアンドロック（ＤＮＬ）抗体、化学架橋抗体、ヘテロマルチマー抗体、またはヘテロコンジュゲート抗体である。
【０５３８】
実施形態２７．実施形態２６の一部のさらなる実施形態では、単離された抗ＡＭＣ構築物は、ペプチドリンカーによって連結された２つのｓｃＦｖを含むタンデムｓｃＦｖである。
【０５３９】
実施形態２８．実施形態２７の一部のさらなる実施形態では、ペプチドリンカーは、アミノ酸配列ＧＧＧＧＳを含む。
【０５４０】
実施形態２９．実施形態２４〜２８のいずれか１つの一部のさらなる実施形態では、単離された抗ＡＭＣ構築物は、第２の抗原に特異的に結合する第２の抗体部分をさらに含む。
【０５４１】
実施形態３０．実施形態２９の一部のさらなる実施形態では、第２の抗原は、Ｔ細胞の表面上の抗原である。
【０５４２】
実施形態３１．実施形態３０の一部のさらなる実施形態では、第２の抗原は、ＣＤ３γ、ＣＤ３δ、ＣＤ３ε、ＣＤ３ζ、ＣＤ２８、ＯＸ４０、ＧＩＴＲ、ＣＤ１３７、ＣＤ２７、ＣＤ４０Ｌ、およびＨＶＥＭからなる群から選択される。
【０５４３】
実施形態３２．実施形態３０の一部のさらなる実施形態では、第２の抗原はＣＤ３εであり、単離された抗ＡＭＣ構築物は、ＡＦＰ／ＭＨＣクラスＩ複合体に特異的なＮ末端ｓｃＦｖおよびＣＤ３εに特異的なＣ末端ｓｃＦｖを含むタンデムｓｃＦｖである。
【０５４４】
実施形態３３．実施形態３０の一部のさらなる実施形態では、Ｔ細胞は、細胞傷害性Ｔ細胞、ヘルパーＴ細胞、およびナチュラルキラーＴ細胞からなる群から選択される。
【０５４５】
実施形態３４．実施形態２９の一部のさらなる実施形態では、第２の抗原は、ナチュラルキラー細胞、好中球、単球、マクロファージまたは樹状細胞の表面上の抗原である。
【０５４６】
実施形態３５．実施形態１〜２１のいずれか１つの一部のさらなる実施形態では、単離された抗ＡＭＣ構築物は、キメラ抗原受容体である。
【０５４７】
実施形態３６．実施形態３５の一部のさらなる実施形態では、キメラ抗原受容体は、抗体部分を含む細胞外ドメイン、膜貫通ドメイン、ならびにＣＤ３ζ細胞内シグナル伝達配列およびＣＤ２８細胞内シグナル伝達配列を含む細胞内シグナル伝達ドメイン、を含む。
【０５４８】
実施形態３７．実施形態１〜２１のいずれか１つの一部のさらなる実施形態では、単離された抗ＡＭＣ構築物は、抗体部分およびエフェクター分子を含むイムノコンジュゲートである。
【０５４９】
実施形態３８．実施形態３６の一部のさらなる実施形態では、エフェクター分子は、薬物、毒素、放射性同位体、タンパク質、ペプチド、および核酸からなる群から選択される治療剤である。
【０５５０】
実施形態３９．実施形態３８の一部のさらなる実施形態では、治療剤は、薬物または毒素である。
【０５５１】
実施形態４０．実施形態３７の一部のさらなる実施形態では、エフェクター分子は、標識である。
【０５５２】
実施形態４１．一部の実施形態では、実施形態１から３９のいずれか１つに記載の単離された抗ＡＭＣ構築物を含む医薬組成物が提供される。
【０５５３】
実施形態４２．一部の実施形態では、実施形態１から４０のいずれか１つに記載の単離された抗ＡＭＣ構築物を発現する宿主細胞が提供される。
【０５５４】
実施形態４３．一部の実施形態では、実施形態１から４０のいずれか１つに記載の単離された抗ＡＭＣ構築物のポリペプチド成分をコードする核酸が提供される。
【０５５５】
実施形態４４．一部の実施形態では、実施形態４３に記載の核酸を含むベクターが提供される。
【０５５６】
実施形態４５．一部の実施形態では、実施形態３５または３６に記載の単離された抗ＡＭＣ構築物を発現するエフェクター細胞が提供される。
【０５５７】
実施形態４６．実施形態４５の一部のさらなる実施形態では、エフェクター細胞は、Ｔ細胞である。
【０５５８】
実施形態４７．一部の実施形態では、ＡＦＰペプチドおよびＭＨＣクラスＩタンパク質を含む複合体をその表面上に提示する細胞を検出する方法であって、細胞を、実施形態４０に記載の単離された抗ＡＭＣ構築物と接触させるステップ、および細胞上の標識の存在を検出するステップを含む方法が提供される。
【０５５９】
実施形態４８．一部の実施形態では、ＡＦＰ陽性疾患を有する個体を処置する方法であって、個体に、有効量の実施形態４１に記載の医薬組成物を投与するステップを含む方法が提供される。
【０５６０】
実施形態４９．一部の実施形態では、ＡＦＰ陽性疾患を有する個体を処置する方法であって、個体に、有効量の実施形態４５または４６に記載のエフェクター細胞を投与するステップを含む方法が提供される。
【０５６１】
実施形態５０．実施形態４８または４９の一部のさらなる実施形態では、投与は、静脈内経路を介した投与である。
【０５６２】
実施形態５１．実施形態４８または４９の一部のさらなる実施形態では、投与は、腫瘍内経路を介した投与である。
【０５６３】
実施形態５２．実施形態４８または４９の一部のさらなる実施形態では、投与は、第１の疾患部位に対して遠位の注射部位への投与である。
【０５６４】
実施形態５３．実施形態５２の一部のさらなる実施形態では、注射部位は、第１の疾患部位に対して遠位の第１の腫瘍である。
【０５６５】
実施形態５４．実施形態５２または５３の一部のさらなる実施形態では、第１の疾患部位は、ＡＦＰ陽性腫瘍である。
【０５６６】
実施形態５５．一部の実施形態では、ＡＦＰ陽性疾患を有する個体を診断する方法であって、
ａ）有効量の実施形態４０に記載の単離された抗ＡＭＣ構築物を個体に投与するステップ；および
ｂ）個体における標識のレベルを決定するステップであって、閾値レベルを上回る標識のレベルは、個体がＡＦＰ陽性疾患を有することを示す、ステップ
を含む方法が提供される。
【０５６７】
実施形態５６．一部の実施形態では、ＡＦＰ陽性疾患を有する個体を診断する方法であって、
ａ）個体に由来する試料を、実施形態４０に記載の単離された抗ＡＭＣ構築物と接触させるステップ；および
ｂ）試料中の、単離された抗ＡＭＣ構築物と結合した細胞の数を決定するステップであって、閾値レベルを上回る、単離された抗ＡＭＣ構築物と結合した細胞の数の値は、個体がＡＦＰ陽性疾患を有することを示す、ステップ
を含む方法が提供される。
【０５６８】
実施形態５７．実施形態４８〜５６のいずれか１つの一部のさらなる実施形態では、ＡＦＰ陽性疾患は、がんである。
【０５６９】
実施形態５８．実施形態５７の一部のさらなる実施形態では、がんは、肝細胞癌、胚細胞性腫瘍、または乳がんである。
【０５７０】
実施形態５９．実施形態５８の一部のさらなる実施形態では、がんは、肝細胞癌である。
【０５７１】
実施形態６０．実施形態５９の一部のさらなる実施形態では、がんは、転移性肝細胞癌である。
【０５７２】
実施形態６１．実施形態４８〜５４のいずれか１つの一部のさらなる実施形態では、ＡＦＰ陽性疾患は肝細胞癌であり、転移が阻害される。
【実施例】
【０５７３】
材料
細胞試料、細胞株、および抗体
細胞株ＨｅｐＧ２、ＳＫ−Ｈｅｐ１、ＭＣＦ７、Ｍａｌｍｅ−３Ｍ、ＣＡ４６、ＴＨＰ−１、Ｃｏｌｏ２０５、ＡＳＰＣ１、ＯＶＣＡＲ３、ＬｎＣＡＰ、Ａ４９８およびＨｅｌａは、Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎから入手した。ＳＫ−Ｈｅｐ１−ＭｉｎｉＧ（またはＳＫ−Ｈｅｐ１  ＡＦＰ  ＭＧ）、ＭＣＦ７−ＭｉｎｉＧおよびＨｅｌａ−ＭｉｎｉＧ（またはＨｅｌａ−ＭＧ）は、それぞれの親細胞株に、ＳＫ−Ｈｅｐ１細胞およびＭＣＦ７細胞におけるＡＦＰ１５８／ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１複合体の高レベルの細胞表面発現をもたらすＡＦＰ１５８ペプチド発現ミニ遺伝子カセットを形質導入することによって生成した。Ｈｅｌａは、ＨＬＡ−Ａ０３陽性およびＨＬＡ−Ａ６８陽性ならびにＨＬＡ＊Ａ０２：０１陰性であり、したがって、Ｈｅｌａ−ＭｉｎｉＧは、ＡＦＰ１５８ミニ遺伝子発現性であるが、ＡＦＰ１５８／ＨＬＡ＊Ａ０２：０１陰性である対照細胞株としての機能を果たした。細胞株を、１０％ＦＢＳ、２ｍＭのグルタミンを補充したＲＰＭＩ１６４０中、３７℃／５％ＣＯ２で培養した。
【０５７４】
以下の抗体を購入した：ＦＩＴＣまたはＡＰＣとコンジュゲートしたヒトＨＬＡ−Ａ０２に対するモノクローナルＡｂ（クローンＢＢ７．２）、およびヒトまたはマウスＣＤ３、ＣＤ１９、ＣＤ５６、ＣＤ３３、ＣＤ３４に対するそのアイソタイプ対照マウスＩｇＧ２ｂ／ＦＩＴＣまたはＡＰＣ（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ、Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ）、ＰＥまたはＦＩＴＣとコンジュゲートしたヤギＦ（ａｂ）２抗ヒトＩｇＧおよびヤギＦ（ａｂ）２抗マウスＩｇＧ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）。
【０５７５】
ペプチドは全て、Ｇｅｎｅｍｅｄ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，Ｉｎｃ．（Ｓａｎ  Ａｎｔｏｎｉｏ、Ｔｅｘ．）により合成された。ペプチドの純度は＞９０％であった。ペプチドをＤＭＳＯに溶解させ、食塩水中に５ｍｇ／ｍＬで希釈し、−１８０℃で凍結した。ビオチン化単鎖ＡＦＰペプチド／ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１および対照ペプチド／ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１複合体を、組換えＨＬＡ−Ａ＊０２：０１およびβ−２ミクログロブリン（β２Ｍ）を用いてペプチドをリフォールディングすることによって合成した。ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１を結合する対照ペプチド１９種（配列番号１２２〜１４０）を以下の１５遺伝子から生成した：ＢＣＲ、ＢＴＧ２、ＣＡＬＲ、ＣＤ２４７、ＣＳＦ２ＲＡ、ＣＴＳＧ、ＤＤＸ５、ＤＭＴＮ、ＨＬＡ−Ｅ、ＩＦＩ３０、ＩＬ７、ＰＩＭ１、ＰＰＰ２Ｒ１Ｂ、ＲＰＳ６ＫＢ１、およびＳＳＲ１。
【０５７６】
（実施例１）
ビオチン化ＡＦＰ１５８／ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１複合体単量体の作製
ビオチン化ＡＦＰ１５８／ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１複合体単量体を標準のプロトコールに従って調製した（Ａｌｔｍａｎ，  Ｊ．Ｄ．およびＤａｖｉｓ、Ｍ．Ｍ．、Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、１７．３．１〜１７．３．３３、２００３年）。簡単に述べると、全長ヒトβ−２ミクログロブリン（β２Ｍ）をコードするＤＮＡをＧｅｎｅｗｉｚで合成し、ベクターｐＥＴ−２７ｂにクローニングした。ＢｉｒＡ基質ペプチド（ＢＳＰ）をＨＬＡ−Ａ＊０２：０１細胞外ドメイン（ＥＣＤ）のＣ末端に付加した。ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１  ＥＣＤ−ＢＳＰをコードするＤＮＡも同様にＧｅｎｅｗｉｚで合成し、ベクターｐＥＴ−２７ｂにクローニングした。ヒトβ２Ｍを発現するベクターおよびＨＬＡ−Ａ＊０２：０１  ＥＣＤ−ＢＳＰを発現するベクターを別々にＥ．ｃｏｌｉ  ＢＬ２１細胞中に形質転換し、細菌培養物から封入体として単離した。ペプチドリガンドＡＦＰ１５８を、ヒトβ２ＭおよびＨＬＡ−Ａ＊０２：０１  ＥＣＤ−ＢＳＰを用いてリフォールディングして、ＡＦＰ１５８／ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１複合体単量体を形成した。フォールディングされたペプチド／ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１単量体を限外濾過によって濃縮し、サイズ排除クロマトグラフィーによってさらに精製した。ＨｉＰｒｅｐ２６／６０  Ｓｅｐｈａｃｒｙｌ  Ｓ−３００ＨＲを、１．５カラム体積のＨｙｃｌｏｎｅ  Ｄｕｌｂｅｃｃｏ’ｓ  Ｐｈｏｓｐｈａｔｅ  Ｂｕｆｆｅｒｅｄ  Ｓａｌｉｎｅ  ｓｏｌｕｔｉｏｎ（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、カタログ番号．ＳＨ３００２８０２）を用いて平衡化した。未精製の試料をローディングし、１カラム体積を用いて溶出した。ミスフォールディングされた凝集体に対応する第１のピークは、およそ１１１．３ｍＬにおいて溶出し、適正にフォールディングされたＭＨＣ複合体に対応するピークは２１２．５ｍＬにおいて観察され、遊離のβ２Ｍに対応するピークは２６７．２ｍＬにおいて観察された（図１）。精製されたＡＦＰ１５８／ＭＨＣ複合体のＳＤＳ−ＰＡＧＥを実施してタンパク質の純度を決定した。簡単に述べると、タンパク質複合体１μｇをＮｕＰＡＧＥ  ＬＤＳ  Ｓａｍｐｌｅ  Ｂｕｆｆｅｒ（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、ＮＰ０００８）２．５μＬと混合し、脱イオン水を用いて１０μＬまでにした。試料を７０℃で１０分間加熱し、次いで、ゲル上にローディングした。ゲル電気泳動を１８０Ｖで１時間実施した。ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１サブユニットおよびβ２Ｍサブユニットがゲル上の主要なバンドとして観察された（図２）。ペプチド／ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１単量体をＢｉｒＡ媒介性酵素反応によってビオチン化し、その後、高分解能陰イオン交換クロマトグラフィーによって精製した。ビオチン化ペプチド／ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１単量体をＰＢＳ中、−８０℃で保管した。
【０５７７】
（実施例２）
ＡＦＰ１５８／ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１複合体に特異的なｓｃＦｖの選択および特徴付け。
Ｅｕｒｅｋａ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓにより構築されたヒトｓｃＦｖ抗体ファージディスプレイライブラリー（多様性＝１０×１０１０）のコレクションを、ＡＦＰ１５８／ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１に特異的なヒトｍＡｂの選択に使用した。１５種の完全ヒトファージｓｃＦｖライブラリーを使用してＡＦＰ１５８／ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１複合体に対してパニングした。タンパク質複合体をプラスチック表面上に固定することによって導入したＭＨＣ１複合体のコンフォメーションの変化を低減させるために、従来のプレートパニングの代わりに溶液パニングおよび細胞パニングを使用した。溶液パニングでは、まず、ビオチン化抗原を、ＰＢＳ緩衝液での広範な洗浄後にヒトｓｃＦｖファージライブラリーと混合し、次いで、抗原−ｓｃＦｖ抗体ファージ複合体を、ストレプトアビジンとコンジュゲートしたＤｙｎａｂｅａｄｓ  Ｍ−２８０により、磁気ラックを通じてプルダウンした。次いで、結合したクローンを溶出させ、Ｅ．ｃｏｌｉ  ＸＬ１−Ｂｌｕｅ細胞への感染に使用した。細胞パニングでは、まず、ＡＦＰ１５８ペプチドを負荷したＴ２細胞をヒトｓｃＦｖファージライブラリーと混合した。Ｔ２細胞は、ＴＡＰ欠損ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１＋リンパ芽球細胞株である。ペプチドを負荷するために、Ｔ２細胞を、無血清ＲＰＭＩ１６４０培地中ペプチド（５０μｇ／ｍｌ）用い、２０μｇ／ｍｌのβ２Ｍの存在下で一晩パルスした。ＰＢＳを用いて広範に洗浄した後、ｓｃＦｖ抗体ファージが結合した、ペプチドを負荷したＴ２細胞を遠心沈澱させた。次いで、結合したクローンを溶出させ、Ｅ．ｃｏｌｉ  ＸＬ１−Ｂｌｕｅ細胞への感染に使用した。次いで、細菌において発現させたファージクローンを精製した。溶液パニング、細胞パニングまたは溶液パニングと細胞パニングとの組合せのいずれかを用いてパニングを３〜４ラウンド実施して、ＡＦＰ１５８／ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１を特異的に結合したｓｃＦｖファージクローンを富化させた。
【０５７８】
ストレプトアビジンＥＬＩＳＡプレートを、ビオチン化ＡＦＰ１５８／ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１複合体単量体（Ｂｉｏ−ＡＦＰ１５８）またはビオチン化対照ペプチド／ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１単量体（Ｂｉｏ−対照）を用いてそれぞれコーティングした。ＡＦＰ１５８／ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１複合体に対する、富化させたファージディスプレイパニングプールからの個々のファージクローンを、コーティングしたプレート中でインキュベートした。ファージクローンの結合を、ＨＲＰとコンジュゲートした抗Ｍ１３抗体によって検出し、ＨＲＰ基質を使用して発色させた。４５０ｎｍにおける吸光度を読み取った。ファージパニングから富化されたファージクローン１２６０種のＥＬＩＳＡスクリーニングによって６０５種の陽性クローンが同定された。図３は、ＥＬＩＳＡアッセイにおけるビオチン化ＡＦＰ１５８／ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１単量体へのファージクローン結合の例を提供する。６０５種のＥＬＩＳＡ陽性ファージクローンのＤＮＡ配列決定により、８２種の独特のクローンが同定された。陽性クローンは、ビオチン化ＡＦＰ１５８／ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１複合体単量体に対する標準のＥＬＩＳＡによって決定した。次いで、ＥＬＩＳＡ陽性クローンのＤＮＡ配列決定によって独特の抗体クローンを同定した。特異的かつ独特のクローンを、生細胞表面上のＨＬＡ−Ａ２／ペプチド複合体へのそれらの結合について、ＡＦＰ１５８を負荷した生Ｔ２細胞を使用したフローサイトメトリー（ＦＡＣＳ分析）によってさらに試験した。種々のペプチドおよびβ２Ｍを負荷したＴ２細胞を、まず、精製されたｓｃＦｖファージクローンを用いて染色し、その後、マウス抗Ｍ１３  ｍＡｂを用いて染色し、最後に、Ｖｅｃｔｏｒ  Ｌａｂの、Ｒ−ＰＥとコンジュゲートしたウマ抗マウスＩｇＧを用いて染色した。染色の各ステップを氷上で３０〜６０分間行い、染色ステップ間で細胞を２回洗浄した。８２種のクローンの中で、４４種がＡＦＰ１５８を負荷したＴ２細胞を特異的に認識する。図４は、ＦＡＣＳによる、ペプチドを負荷したＴ２細胞へのＡＦＰ１５８／ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１特異的ファージクローン結合の例を提供する。ファージクローンは、ＡＦＰ１５８を負荷したＴ２細胞に特異的に結合し、ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１との関連でｈＴＥＲＴ由来のペプチドＩＬＡＫＦＬＨＷＬ（ｈＴＥＲＴ５４０、配列番号１４１）を負荷したＴ２細胞も、β２Ｍを伴うがペプチドが負荷されていないＴ２細胞も認識しなかった。
【０５７９】
（実施例３）
ＦＡＣＳ陽性ＡＦＰ１５８特異的ファージクローンの特徴付け
マウスＡＦＰ１５８ペプチドに対する交差反応性
ＡＦＰ１５８を負荷したＴ２細胞に対するＦＡＣＳ結合分析から選択されたクローンを、生細胞表面上のマウスＡＦＰ１５８ペプチド／ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１複合体に対する交差反応性について、マウスＡＦＰ１５８を負荷した生Ｔ２細胞を使用したＦＡＣＳ分析によってさらに特徴付けた。マウスＡＦＰ１５８ペプチドは、ヒトＡＦＰ１５８ペプチドとは、４位および９位の２つのアミノ酸により異なる。マウスＡＦＰ１５８ペプチド配列はＦＭＮＲＦＩＹＥＶ（配列番号１６）であり、一方、ヒトＡＦＰ１５８ペプチド配列はＦＭＮＫＦＩＹＥＩ（配列番号４）である。ヒトＡＦＰ１５８ペプチド／ＭＨＣ複合体およびマウスＡＦＰ１５８ペプチド／ＭＨＣ複合体の両方と交差反応性の抗体は、ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１トランスジェニックマウスにおける抗体薬物毒性の評価に有用である。試験したファージクローンの中で、４種のクローン（番号１７、番号３３、番号４８および番号７６）がヒトＡＦＰ１５８を負荷したＴ２細胞およびマウスＡＦＰ１５８を負荷したＴ２細胞の両方を認識した（図５）。クローン番号５２および番号７９もマウスＡＦＰ１５８を負荷したＴ２細胞に結合したが、程度がより劣った。
【０５８０】
アラニンウォーキングによるエピトープマッピング
ｍＡｂ認識に関するエピトープを正確に調査するために、１位、３位、４位、５位、６位、７位および８位にアラニン置換を伴うヒトＡＦＰ１５８ペプチド（配列番号７〜１３）をＴ２細胞上にパルスした。次いで、抗体ファージクローンを、これらのペプチドを負荷したＴ２細胞への結合についてＦＡＣＳ分析によって試験した。全ての抗体が、ＡＦＰ１５８ペプチドおよびその周囲のＭＨＣα鎖残基によって形成される小さなコンフォメーショナルエピトープを認識したが、異なる抗体と相互作用する重要なペプチド残基は全く異なった。例えば、クローン番号５２は、１位または３位におけるアラニン置換によりペプチドを負荷したＴ２細胞への結合が劇的に低減し、４位におけるアラニン置換によりクローン番号５２の結合が完全に抑止されたので、ＡＦＰ１５８ペプチドのＮ末端側半分に結合することが予測される。対照的に、５位、６位、７位または８位におけるアラニン置換によってクローン番号５２の結合は変化しなかった。他方では、クローン番号１７−１３は、４位におけるアラニン置換に対しては非感受性であったが、３位、５位および７位における変化に対しては感受性であった。図６は、種々のＡＦＰペプチドを負荷したＴ２細胞へのファージクローン番号５２の結合を示す、ＦＡＣＳ分析の例を提供する。表６は、いくつかのＡＦＰ１５８／ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１特異的抗体クローンの、アラニン置換された、ヒトＡＦＰ１５８ペプチドを負荷したＴ２細胞への結合を要約するものである。
【表６】
2018512145.tif 000008
【０５８１】
内在性ペプチドに対する抗体結合特異性の評価
平均して、ヒトの体内の有核細胞はそれぞれ、５０万種の異なるペプチド／ＭＨＣクラスＩ複合体を発現する。抗ペプチド／ＭＨＣＩ−複合体抗体を高い特異性および治療指数を有する抗がん薬に発展させるためには、抗体が標的ペプチド／ＭＨＣＩ複合体を特異的に認識するが、ＭＨＣＩ分子自体または細胞表面上に提示された他のペプチドと結合したＭＨＣＩ分子は認識しないことが必須である。本研究に関して、関連するＭＨＣＩ分子は、ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１である。本発明者らのファージパニングおよびスクリーニングの初期段階の間に、本発明者らは、ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１分子単体に結合した抗体を排除した（例えば、図３および４を参照されたい）。上位のファージクローンは、例えばグロビンα鎖、β鎖、核タンパク質ｐ６８などの、複数の型の有核ヒト細胞において通常発現するタンパク質に由来するものである１９種の内在性ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１ペプチドに対してもスクリーニングした。内在性ペプチド（Ｐ１９、配列番号１２２〜１４０）のプールをＴ２細胞に負荷し、抗体結合をＦＡＣＳ分析によって決定した。図７に示されている通り、ＡＦＰ１５８／ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１特異的抗体ファージクローンは、ＡＦＰ１５８ペプチドを負荷したＴ２細胞を結合したが、内在性ペプチドを負荷したＴ２細胞を結合しなかった。本発明者らは、同定された抗体はＡＦＰ１５８ペプチド／ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１複合体に特異的であり、試験した他のＨＬＡ−Ａ＊０２：０１ペプチドに結合したＨＬＡ−Ａ＊０２：０１分子は認識しないと結論づけた。
【０５８２】
（実施例４）
二重特異的抗体の工学的作製
二重特異的抗体（ＢｓＡｂ）を、ＡＦＰ１５８／ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１特異的ファージクローンのｓｃＦｖ配列を使用して生成した。ＢｓＡｂは、Ｎ末端にＡＦＰ１５８／ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１特異的ファージクローンのｓｃＦｖ配列を含み、Ｃ末端に抗ヒトＣＤ３εマウスモノクローナルｓｃＦｖを含む単鎖二重特異的抗体である（Ｂｒｉｓｃｈｗｅｉｎ，  Ｋ．ら、Ｍｏｌ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．、４３巻：１１２９〜１１４３頁、２００６年）。ＡＦＰ１５８  ｓｃＦｖをコードするＤＮＡ断片および抗ヒトＣＤ３ε  ｓｃＦｖをコードするＤＮＡ断片を、Ｇｅｎｅｗｉｚで合成し、標準のＤＮＡ技術を使用してＥｕｒｅｋａの哺乳動物発現ベクターｐＧＳＮ−Ｈｙｇにサブクローニングした。抗体の精製および検出のためにヘキサヒスタミンタグ（ｈｅｘｈｉｓｔａｍｉｎｅ  ｔａｇ）をＣ末端に挿入した。チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞にＢｓＡｂ発現ベクターをトランスフェクトし、次いで、ＢｓＡｂ抗体産生のために７日間培養した。分泌されたＡＦＰ１５８  ＢｓＡｂ分子を含有するＣＨＯ細胞上清を収集した。ＢｓＡｂ抗体を、ＨｉｓＴｒａｐ  ＨＰカラム（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を使用し、ＦＰＬＣ  ＡＫＴＡシステムによって精製した。簡単に述べると、ＣＨＯ細胞培養物を清澄化し、低イミダゾール濃度（２０ｍＭ）を有するカラムにローディングし、次いで、均一溶媒の（ｉｓｏｃｒａｔｉｃ）高イミダゾール濃度溶出緩衝液（５００ｍＭ）を使用して、結合したＢｓＡｂタンパク質を溶出した。精製されたＡＦＰ１５８  ＢｓＡｂ抗体の分子量を非還元条件下でゲル電気泳動によって測定した。タンパク質４μｇをＮｕＰＡＧＥ  ＬＤＳ  Ｓａｍｐｌｅ  Ｂｕｆｆｅｒ（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、ＮＰ０００８）２．５μＬと混合し、脱イオン水を用いて１０μＬまでにした。試料を７０℃で１０分間加熱し、次いで、ゲル上にローディングした。ゲル電気泳動を１８０Ｖで１時間実施した。約５０ＫＤのバンドがゲル上の主要なバンドとして観察される（図８）。抗体凝集をサイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）によって評価した。試料５０μＬをＳＥＣカラム（Ａｇｉｌｅｎｔ、ＢｉｏＳＥＣ−３，３００Ａ、４．６ｘ３００ｍｍ）に注入し、それと同時に、ｐＨ７．０に調整した、ダルベッコリン酸緩衝食塩水（Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、ＳＨ３００２８．ＦＳ）および０．２Ｍのアルギニンからなる緩衝液を流した。ＢｓＡｂが保持時間約１５．８ｍＬにおいて主要なピークとして観察された（図９）。高分子量凝集が１０％未満のＢｓＡｂをさらなる特徴付けに使用した。
【０５８３】
（実施例５）
ＡＦＰ１５８  ＢｓＡｂ抗体の特徴付け
ＡＦＰ１５８  ＢｓＡｂ抗体の結合親和性
組換えＡＦＰ１５８／ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１複合体に対するＡＦＰ１５８  ＢｓＡｂ抗体の結合親和性をＳｕｒｆａｃｅ  Ｐｌａｓｍａ  Ｒｅｓｏｎａｎｃｅ（ＢｉａＣｏｒｅ）によって測定した。ＡＦＰ１５８  ＢｓＡｂとＡＦＰ１５８／ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１複合体との間の結合パラメーターを、Ｂｉａｃｏｒｅ  Ｘ１００（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）においてＨｉｓ  Ｃａｐｔｕｒｅ  Ｋｉｔ（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ、カタログ番号２８９９５０５６）を使用し、多サイクルカイネティクス測定に関する製造者のプロトコールに従って測定した。アッセイに使用したタンパク質は全てＨＢＳ−Ｅ緩衝液を使用して希釈した。簡単に述べると、１μｇ／ｍＬのＡＦＰ１５８  ＢｓＡｂを、抗ヒスチジン抗体を用いて予め官能性をもたせたセンサーチップ上に、溶液をフローセル２を通して毎分２μＬで２分間流すことによって固定した。ＡＦＰ１５８／Ａ＊０２：０１複合体に対する結合を０．１９μｇ／ｍＬ、０．３８μｇ／ｍＬ、７．５μｇ／ｍＬ、１５μｇ／ｍＬ、および３０μｇ／ｍＬにおいて分析し、各実行は毎分３０μＬで３分間の会合と３分間の解離からなった。サイクルの最後に、Ｈｉｓ  Ｃａｐｔｕｒｅ  Ｋｉｔからの再生緩衝液を使用して表面を再生した。カイネティクス測定の後に、キットからの再生溶液を使用して表面を再生した。ＢｉａＣｏｒｅ  Ｘ−１００評価ソフトウェアを用い、１：１結合部位モードを使用してデータを解析した。結合パラメーター（会合速度定数ｋａ、解離定数ｋｄ、および平衡解離定数Ｋｄ）を算出した。一価ｓｃＦｖ形式でのＡＦＰ１５８抗体の結合親和性は、１０〜５００ｎＭの範囲に入る（例が表７に提供される）。
【表７】
2018512145.tif 000009
【０５８４】
Ｔ細胞による殺滅アッセイ
腫瘍細胞傷害性をＬＤＨ  Ｃｙｔｏｔｏｘｉｃｉｔｙ  Ａｓｓａｙ（Ｐｒｏｍｅｇａ）によってアッセイした。ＡｌｌＣｅｌｌｓから購入したヒトＴ細胞を、ＣＤ３／ＣＤ２８  Ｄｙｎａｂｅａｄｓ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を用い、製造者のプロトコールに従って活性化し、拡大増殖させた。活性化Ｔ細胞（ＡＴＣ）を、１０％ＦＢＳプラス１００Ｕ／ｍｌのＩＬ−２を伴うＲＰＭＩ１６４０培地中で培養し、維持し、７〜１４日目に使用した。Ｔ細胞は、ＦＡＣＳ分析により、９９％超がＣＤ３＋であった。活性化Ｔ細胞（エフェクター細胞）および標的細胞を５：１の比で、種々の濃度のＢｓＡｂ抗体とともに１６時間共培養した。次いで、細胞傷害性を、培養上清におけるＬＤＨ活性を測定することによって決定した。
【０５８５】
ＡＦＰ１５８  ＢｓＡｂ抗体により、がん細胞がＡＦＰおよびＨＬＡ−Ａ＊０２：０１依存的様式で死滅させられた。試験したすべての細胞株の中で、ＨＥＰＧ２（ＡＦＰおよびＨＬＡ−Ａ＊０２：０１陽性）が、ＡＦＰ１５８  ＢｓＡｂを通じて再指向されたＴ細胞によって最も有効に死滅させられた。ＡＦＰ陰性またはＨＬＡ−Ａ０２陰性、またはその両方に関して陰性のいずれかである、試験した他の細胞株は、同じ実験状況下で同じようには有効に死滅させられなかった（図１０）。
【０５８６】
複数のＨＬＡ−Ａ０２対立遺伝子に対するＡＦＰ１５８  ＢｓＡｂ抗体の交差反応性
ヒトＭＨＣＩ分子は、６種のクラスのアイソフォーム、ＨＬＡ−Ａ、ＨＬＡ−Ｂ、ＨＬＡ−Ｃ、ＨＬＡ−Ｅ、ＨＬＡ−Ｆ、およびＨＬＡ−Ｇからなる。ＨＬＡ−Ａ、ＨＬＡ−Ｂ、およびＨＬＡ−Ｃの重鎖遺伝子は高度に多型である。各アイソフォームについて、ＨＬＡ遺伝子は、重鎖配列の類似性に応じてさらに群分けされる。例えば、ＨＬＡ−Ａは、例えばＨＬＡ−Ａ０１、ＨＬＡ−Ａ０２、ＨＬＡ−Ａ０３などの異なる対立遺伝子に分けられる。ＨＬＡ−Ａ０２対立遺伝子に関しては、例えばＨＬＡ−Ａ０２：０１、ＨＬＡ−Ａ＊０２：０２などの複数のサブタイプが存在する。ＨＬＡ−Ａ０２群の異なるサブタイプの間で、配列の差異は、ほんの数アミノ酸に限られている。したがって、多くの場合、ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１分子に結合するペプチドは、ＨＬＡ−Ａ０２対立遺伝子の複数のサブタイプとも複合体を形成し得る。表８（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ａｌｌｅｌｅｆｒｅｑｕｅｎｃｉｅｓ．ｎｅｔ／）に示されている通り、ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１は、白人の集団の間では優性ＨＬＡ−Ａ０２サブタイプであるが、アジアおよびアフリカでは、Ａ＊０２：０３、Ａ＊０２：０５、Ａ＊０２：０６、Ａ＊０２：０７、およびＡ＊０２：１１も一般的なＨＬＡ−Ａ０２サブタイプである。ＡＦＰ１５８抗体の、ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１との関連でＡＦＰ１５８ペプチドだけでなく、ＨＬＡ−Ａ０２の他のサブタイプも認識する能力により、ＡＦＰ１５８抗体薬による処置が有益になり得る患者集団が広がる。したがって、本発明者らは、ＨＬＡ−Ａ０２対立遺伝子の他のサブタイプを用いた組み換えＡＦＰ１５８／ＭＨＣＩ複合体を生成し、これらの他の複合体に対するＡＦＰ１５８／ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１特異的抗体の結合親和性を試験した。結合親和性は、ＦｏｒｔｅＢｉｏ  Ｏｃｔｅｔ  ＱＫを使用して決定した。５μｇ／ｍＬの、ビオチン化した、種々のサブタイプのＨＬＡ−Ａ０２  ＭＨＣ複合体をストレプトアビジンバイオセンサー上にローディングした。余剰の抗原を洗い流した後、ＢｓＡｂ抗体を１０μｇ／ｍＬで会合および解離について試験した。結合パラメーターを、１：１結合部位、部分的フィッティングモデルを使用して算出した。表９は、いくつかのＡＦＰ１５８  ＢｓＡｂの、異なるサブタイプを用いた複数のＡＦＰ１５８／ＨＬＡ−Ａ０２複合体についての結合親和性を示す。試験した抗体の全てが、ＨＬＡ−Ａ０２対立遺伝子の複数のサブタイプと結合したＡＦＰ１５８を認識することが見出された。
【表８】
2018512145.tif 000010
【表９】
2018512145.tif 000011
【０５８７】
（実施例６）
ＡＦＰ１５８／ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１特異的キメラ抗原受容体を提示するＴ細胞（ＣＡＲ−Ｔ）の生成
キメラ抗原受容体療法（ＣＡＲ−Ｔ療法）は、標的化免疫療法の新しい形態である。これは、モノクローナル抗体の精巧な標的化特異性を、細胞傷害性Ｔ細胞によりもたらされる強力な細胞傷害性および長期間持続と合体させる。この技術により、Ｔ細胞が内在性ＴＣＲとは独立して長期的な新規の抗原特異性を獲得することが可能になる。臨床試験により、神経芽細胞腫（Ｌｏｕｉｓ，  Ｃ．Ｕ．ら、Ｂｌｏｏｄ、１１８巻（２３号）：６０５０〜６頁、２０１１年）、Ｂ−ＡＬＬ（Ｍａｕｄｅ，  Ｓ．Ｌ．ら、Ｎ  Ｅｎｇｌ  Ｊ  Ｍｅｄ．、３７１巻（１６号）：１５０７〜１５１７頁、２０１４年）、ＣＬＬ（Ｂｒｅｎｔｊｅｎｓ，  Ｒ．Ｊ．ら、Ｂｌｏｏｄ．、１１８巻（１８号）：４８１７〜４８２８頁、２０１１年）、およびＢ細胞リンパ腫（Ｋｏｃｈｅｎｄｅｒｆｅｒ，  Ｊ．Ｎ．ら、Ｂｌｏｏｄ．、１１６巻（２０号）：４０９９〜４１０２頁、２０１０年）におけるＣＡＲ−Ｔ療法の臨床的に有意な抗腫瘍活性が示されている。１つの研究では、ＣＤ１９−ＣＡＲ  Ｔ療法を用いて処置されたＢ−ＡＬＬの患者３０名において９０％の完全寛解率が報告された（Ｍａｕｄｅら、上記）。
【０５８８】
ＡＦＰ１５８／ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１特異的抗体の効力をさらに探究するために、本発明者らは、抗ＡＦＰ１５８／ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１  ｓｃＦｖを発現するＣＡＲを構築し、これらのＣＡＲを用いてＴ細胞に形質導入した。レンチウイルスＣＡＲ発現ベクター使用してＡＦＰ１５８／ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１特異的ＣＡＲを構築した。抗ＡＦＰ１５８／ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１  ｓｃＦｖを、細胞内Ｔ細胞刺激シグナルをもたらすためおよびＴ細胞を活性化するためにシスに工学的に作製したＣＤ２８シグナル伝達ドメインおよびＴＣＲζを有する第２世代ＣＡＲにグラフトした（Ｍａｃｋａｌｌ，  Ｃ．Ｌ．ら、Ｎａｔ．  Ｒｅｖ．  Ｃｌｉｎ．  Ｏｎｃｏｌ．、１１巻（１２号）：６９３〜７０３頁、２０１４年）。図１１は、抗ＡＦＰ１５８／ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１  ＣＡＲ構築物の概略図を提供する。
【０５８９】
（実施例７）
ＡＦＰ１５８  ＣＡＲ−Ｔ細胞の特徴付け
ＣＤ４＋およびＣＤ８＋一次Ｔ細胞において発現させたＡＦＰ１５８  ＣＡＲ
末梢血リンパ球を健康なドナーから単離し、抗ＡＦＰ１５８／ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１結合部分をコードするＡＦＰ１５８  ＣＡＲ構築物を用いて形質導入した。形質導入の５日後、ＡＦＰ１５８  ＣＡＲ−Ｔ細胞および偽形質導入細胞を、ＡＦＰ１５８四量体、およびＣＤ３抗体、ＣＤ４抗体またはＣＤ８抗体のうちの１つと共染色し、フローサイトメトリーによって分析した。図２４は、ＡＦＰ１５８  ＣＡＲトランスフェクト細胞および偽トランスフェクト細胞についてのフローサイトメトリーの結果を示し、このことは、ＡＦＰ１５８  ＣＡＲがＣＤ４＋一次Ｔ細胞およびＣＤ８＋一次Ｔ細胞の両方で発現し得ることを示している。
【０５９０】
Ｔ細胞表面上でのＡＦＰ１５８  ＣＡＲの一様な分布
ＣＡＲの細胞表面分布が一様であるＣＡＲ−Ｔ細胞は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏおよびｉｎ  ｖｉｖｏにおいて、ＣＡＲの細胞表面分布が一様でないＣＡＲ−Ｔ細胞よりも腫瘍細胞を効率的に死滅させ、殺滅後にそれほど消耗しないことが実証されている。ＣＡＲの一様でない分布、例えば凝集などにより、抗原に依存しないＣＡＲ活性化、早発のＴ細胞消耗、およびｉｎ  ｖｉｖｏにおける抗腫瘍活性なしがもたらされ得る。したがって、Ｔ細胞表面上でのＣＡＲの一様な分布が望ましい。Ｔ細胞膜上での抗ＡＦＰ１５８／ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１  ｓｃＦｖを発現するＣＡＲの分布を決定するために、ＡＦＰ１５８ペプチド−ＨＬＡ−Ａ２四量体−ＰＥのコンジュゲートを使用して、上記のＡＦＰ１５８  ＣＡＲを形質導入したＴ細胞を染色した。まず、一次ヒトＣＤ３＋Ｔ細胞を抗ＣＤ３およびＣＤ２８ビーズで活性化し、次いで、ＡＦＰ１５８  ＣＡＲレンチウイルスを用いて形質導入した。ウイルスによる形質導入の８日後に、ＡＦＰ１５８  ＣＡＲを形質導入したＴ細胞を、ＡＦＰ１５８ペプチド−ＨＬＡ−Ａ２四量体−ＰＥを２ｎｇ／ｍｌで用い、タンパク質輸送阻害剤の存在下、室温で３０分にわたって染色した。Ｏｌｙｍｐｕｓ蛍光顕微鏡を使用して画像を取得した。本発明者らは、Ｔ細胞膜上でのＡＦＰ１５８  ＣＡＲの分布が一様で滑らかであることを見出した。点状のＣＡＲ分布は認められなかった。代表的な画像を図２６に示す。
【０５９１】
ＡＦＰ１５８  ＣＡＲ−Ｔ細胞のｉｎ  ｖｉｔｒｏ細胞傷害性研究
ＡＦＰ１５８／ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１特異的キメラ抗原受容体を含有するレンチウイルスを、２９３Ｔ細胞にＣＡＲベクターをトランスフェクトすることによって作製した。ヒトＴ細胞を、１００Ｕ／ｍｌのインターロイキン２の存在下、ＣＤ３／ＣＤ２８ビーズ（Ｄｙｎａｂｅａｄｓ（登録商標）、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を用いて１日刺激した後に、形質導入のために使用した。Ｒｅｔｒｏｎｅｃｔｉｎ（Ｔａｋａｒａ）をコーティングした６ウェルプレートにおいて、７２時間にわたり、濃縮したレンチウイルスをＴ細胞に適用した。形質導入Ｔ細胞（ＡＦＰ１５８  ＣＡＲ−Ｔ細胞）の機能的評価を、ＬＤＨ  Ｃｙｔｏｔｏｘｉｃｉｔｙ  Ａｓｓａｙを使用して実施した。使用したエフェクターと標的との比は５：１であった。
【０５９２】
Ｔ細胞に形質導入したＡＦＰ１５８  ＣＡＲクローンのパネルを標的細胞株ＨＥＰＧ２、ＳＫ−ＨＥＰ１、およびＳＫ−ＨＥＰ１−ＭｉｎｉＧに対して試験した。ＡＦＰ１５８  ＣＡＲクローンを用いて形質導入したＴ細胞は、ＡＦＰ１５８／ＨＬＡ＊Ａ０２：０１陽性細胞株であるＨＥＰＧ２およびＳＫ−ＨＥＰ１−ＭｉｎｉＧを特異的に死滅させた（図１２）。ＡＦＰ１５８  ＣＡＲを発現するＴ細胞は、試験した抗体クローンの大部分について、標的陽性がん細胞を特異的かつ高度に効率的に死滅させた。しかし、同じＴ細胞による標的陰性、野生型ＳＫ−ＨＥＰ１細胞の認識は、クローン番号４４を用いて形質導入したＴ細胞（この細胞は、野生型ＳＫ−ＨＥＰ１細胞に対しいくらか非特異的な殺滅を示した）以外は、不十分なものであった。
【０５９３】
ＡＦＰ１５８およびＨＬＡ＊Ａ０２：０１について陽性または陰性であるがん細胞株の大きなパネルを、ＡＦＰ１５８  ＣＡＲ−Ｔ細胞による殺滅について試験した。偽形質導入したまたはＡＦＰ１５８  ＣＡＲ（例示的な（ｅｘｅｍｐｌａｒ）抗ＡＦＰ１５８／ＨＬＡ＊Ａ０２：０１抗体をコードするＣＡＲ構築物）を用いて形質導入した一次Ｔ細胞を、ＡＦＰ１５８／ＨＬＡ＊Ａ０２：０１陽性がん細胞を特異的に死滅させるそれらの能力について、エフェクターと標的との比５：１で試験した。図１３に示されている通り、ＡＦＰ１５８  ＣＡＲ−Ｔ細胞は、ＡＦＰ１５８／ＨＬＡ＊Ａ０２：０１陽性細胞株であるＨｅｐＧ２およびＳＫ−Ｈｅｐ１−ＭｉｎｉＧを特異的に死滅させたが、ＡＦＰ陰性またはＨＬＡ＊Ａ０２：０１陰性のいずれかである他の細胞株のいずれも死滅させなかった。重要なことに、このデータから、本発明者らの抗体が、ＡＦＰを発現する細胞に対して高度に特異的であり、ＡＦＰを発現しない多数の組織型にわたって、ＨＬＡ−Ａ０２細胞株の大きなパネルの非特異的な殺滅は媒介しないことが実証される。
【０５９４】
ＡＦＰ１５８  ＣＡＲを形質導入したＴ細胞は、抗原刺激により脱顆粒する
ＡＦＰ１５８  ＣＡＲを形質導入したＴ細胞における生物学的活性をさらに特徴付けるために、本発明者らは、フローサイトメトリーアッセイを使用して、脱顆粒活性の評価基準としてＣＤ１０７ａ表面発現を検出した。ＡＦＰ１５８  ＣＡＲを形質導入したＴ細胞を、ＨｅｐＧ２、ＳＫ−Ｈｅｐ１、およびＳＫ−Ｈｅｐ１−ＭｉｎｉＧ細胞と、抗ＣＤ１０７ａ抗体およびタンパク質輸送阻害剤カクテルの１：２００希釈物（ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）の存在下で４時間、共インキュベートした。標的細胞と共インキュベートした後、形質導入Ｔ細胞をＡＦＰ１５８／ＨＬＡ四量体および抗ＣＤ８で染色した。四量体陽性ＣＤ８陽性Ｔ細胞における脱顆粒を図２５に示す。Ｓｋ−Ｈｅｐ１−ＭｉｎｉＧ、その後ＨｅｐＧ２と共インキュベートした際には、ＣＤ１０７ａ発現により測定される最高レベルの脱顆粒が観察されたが、親抗原陰性ＳＫ−ＨＥＰ−１を用いた場合には脱顆粒は観察されなかった。これは、上記のＴ細胞媒介性細胞溶解のデータと一致する。
【０５９５】
サイトカイン放出
活性化ＡＦＰ１５８  ＣＡＲ−Ｔ細胞を用いて処置した際のサイトカイン放出プロファイルも試験した。Ｔ細胞を、偽形質導入するかまたは代表的なＡＦＰ１５８  ＣＡＲを用いて形質導入し、示されている標的細胞と共インキュベートした。１６時間後に、培地中へのＩＬ−２、ＩＬ−４、ＩＬ−６、ＩＬ−８、ＩＬ−１０、ＧＭ−ＣＳＦ、ＩＦＮ−γ、およびＴＮＦ−αの放出をＭａｇｐｉｘ  ｍｕｌｔｉｐｌｅｘ  ｓｙｓｔｅｍ（Ｌｕｍｉｎｅｘ）をＢｉｏ−ｐｌｅｘ  Ｐｒｏ  Ｈｕｍａｎ  Ｃｙｔｏｋｉｎｅ  ８−ｐｌｅｘ  Ａｓｓａｙ（ＢｉｏＲａｄ）と共に使用して測定した。サイトカイン濃度を、検量線から、培地、標的細胞単独、およびＡＦＰ１５８  ＣＡＲを形質導入したＴ細胞単独からの値を差し引いた後に決定した。図１４Ａおよび１４Ｂに示されている通り、サイトカイン放出は、ＡＦＰ１５８  ＣＡＲ−Ｔ細胞をＡＦＰ１５８／ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１陽性細胞：ＳＫ−Ｈｅｐ１−ＭｉｎｉＧ、ＭＣＦ７−ＭｉｎｉＧおよびＨｅｐＧ２と共インキュベートした場合にのみ検出され、ＡＦＰ１５８／ＨＬＡ＊Ａ０２：０１陰性細胞：ＳＫ−Ｈｅｐ１およびＭＣＦ７と共インキュベートした場合には検出されなかった。ＡＦＰ１５８  ＣＡＲ−Ｔ細胞をＳＫ−Ｈｅｐ１−ＭｉｎｉＧに曝露した場合およびＭＣＦ７−ＭｉｎｉＧに曝露した場合に、ＡＦＰ１５８  ＣＡＲ−Ｔ細胞は、はるかに高レベルのサイトカインを放出した。これは、ＡＦＰ１５８ミニ遺伝子を形質導入したがん細胞が、ＨｅｐＧ２よりもはるかに高レベルのＡＦＰ１５８／ＨＬＡ＊Ａ０２：０１を細胞表面上に発現することと一致する。偽形質導入したＴ細胞では、ＡＦＰ１５８／ＨＬＡ＊Ａ０２：０１陽性がん細胞の存在下でのサイトカインの放出は、あったとしても痕跡量のみであった。偽形質導入（ＡＦＰ陰性）ＳＫ−Ｈｅｐ１と共インキュベートした後のＩＬ−６の放出は、それらの細胞における内在性ＩＬ−６発現に起因するものである（提示していないデータに基づく）。
【０５９６】
ヒトＨＣＣ異種移植モデルにおけるＡＦＰ１５８  ＣＡＲ  Ｔ細胞のｉｎ  ｖｉｖｏ有効性研究
ＡＦＰ１５８  ＣＡＲ−Ｔ細胞のｉｎ  ｖｉｖｏにおける抗腫瘍活性を、ＳＣＩＤ−ｂｅｉｇｅ免疫無防備マウスにおけるいくつかの確立されたヒトＨＣＣ異種移植モデルにおいて試験した。ＨｅｐＧ２をマウス当たり細胞２．５×１０６個で右側腹部に皮下（ｓ．ｃ．）移植した。腫瘍体積が平均１００ｍｍ３に達したら、マウスを、腫瘍体積に基づいて４つの群にランダム化した：１）無処置、２）偽形質導入した、ドナー適合Ｔ細胞を用いた静脈内（ｉ．ｖ．）処置（偽）、３）代表的なＡＦＰ１５８  ＣＡＲを形質導入したＴ細胞を用いた静脈内（ｉ．ｖ．）処置、および４）ＡＦＰ１５８  ＣＡＲを形質導入したＴ細胞の腫瘍内（ｉ．ｔ．）注射。全ての処置を、マウス当たり細胞１０７個の用量で投与し、２週間ごとに繰り返して合計３用量投与した。
【０５９７】
対照およびＡＦＰ１５８  ＣＡＲ−Ｔ細胞のどちらも、所与の用量およびスケジュールで忍容性が良好であった；研究の間、処置に関連した有害応答は観察されなかった。無処置のマウス、ならびに対照Ｔ細胞で処置したマウスにおける腫瘍は、安楽死が必要なサイズに達するまで継続的に成長した。図１５Ａに示されている通り、ＨｅｐＧ２腫瘍を有するマウスにおけるＡＦＰ１５８  ＣＡＲ−Ｔ細胞の静脈内投与により、初回投与の２８日後から始まる腫瘍成長の遅延がもたらされた。初回投与して３５日目の後に、およそ２５％の腫瘍成長阻害が観察された（図１５Ａ）。ｉ．ｖ．投与の効果が遅延したのとは対照的に、ＡＦＰ１５８  ＣＡＲ−Ｔ細胞のｉ．ｔ．注射では、迅速であり、十分な、かつ長続きする腫瘍の退縮が全てのマウスにおいて引き起こされ、８０％（６／８）で完全な退縮が示された（図１５Ｂ）。
【０５９８】
処置の選択肢が非常に限られている患者のサブセットでは、結果としてＨＣＣの腹膜播種が起こる。したがって、ＡＦＰ１５８  ＣＡＲ−Ｔ細胞の抗腫瘍活性を、確立された腹腔内ＨＣＣ異種移植モデルにおいてさらに試験した。この研究では、ルシフェラーゼでタグ付けしたＨｅｐＧ２細胞（ＨｅｐＧ２−ｌｕｃ２）をマウス当たり細胞２．５×１０６個で腹腔内に（ｉ．ｐ．）移植した。腫瘍負荷を、週に１回、腫瘍由来の生物発光を測定することによって評価した。腫瘍移植の１週間後、動物を、総生物発光フラックスに基づいて４つの群にランダム化した：１）無処置、２）対照Ｔ細胞１０７個のｉ．ｐ．注射での処置、ＡＦＰ１５８  ＣＡＲ−Ｔ細胞１０６個のｉ．ｐ．注射での処置、および４）ＡＦＰ１５８  ＣＡＲ−Ｔ細胞１０７個のｉ．ｐ．注射での処置（群当たりｎ＝６匹のマウス）。各群に２用量のＴ細胞を２週間空けて投与した。
【０５９９】
ｉ．ｖ．投与経路およびｉ．ｔ．投与経路で観察された通り、対照Ｔ細胞またはＡＦＰ１５８  ＣＡＲ−Ｔ細胞のいずれかのｉ．ｐ．注射の結果としての有害反応の臨床徴候は観察されなかった。図１６Ａ（処置後７０日目の、腫瘍を有するマウスからの光子放射の変化）および１６Ｂ（７０日目の、ＨｅｐＧ２−Ｌｕｃ２腫瘍を有するマウスの光子放射画像）に示されている通り、対照Ｔ細胞で処置した動物における腫瘍負荷に、無処置の対照群において観察された腫瘍負荷との差異は示されなかった。対照的に、ＡＦＰ１５８  ＣＡＲ−Ｔ細胞をマウス当たり細胞１０６個または１０７個で用いて処置したマウスでは、ロバストな腫瘍の退縮が示された。用量依存的な抗腫瘍活性は観察されず、これにより、どちらの用量もこのモデルにおける最大効果用量を超えることが示された。したがって、腹膜ＨＣＣのモデルにおけるＡＦＰ１５８  ＣＡＲ  Ｔ細胞を用いたｉ．ｐ．処置は、安全であり、強力であり、腫瘍を有効に根絶した。
【０６００】
ＳＫ−Ｈｅｐ１−ＭｉｎｉＧ  ｓ．ｃ．異種移植モデルにおけるＡＦＰ１５８  ＣＡＲ−Ｔ細胞のｉｎ  ｖｉｖｏ活性についても評価した。ＳＫ−Ｈｅｐ１−ＭｉｎｉＧを、マウス当たり細胞２．５×１０６個で右側腹部に皮下（ｓ．ｃ．）移植した。腫瘍体積が平均１００ｍｍ３に達したら、マウスを、腫瘍体積に基づいて３つの群にランダム化した：１）偽形質導入した、ドナー適合Ｔ細胞を用いた静脈内（ｉ．ｖ．）処置（偽）、２）代表的なＡＦＰ１５８  ＣＡＲを形質導入したＴ細胞を用いた静脈内（ｉ．ｖ．）処置、および３）同じＡＦＰ１５８  ＣＡＲを形質導入したＴ細胞の腫瘍内（ｉ．ｔ．）注射。全ての処置を、マウス当たり細胞１０７個の用量で投与し、１回目の処置の２週間後に１回繰り返した。この腫瘍モデルでは、ＡＦＰ１５８  ＣＡＲ−Ｔ細胞のｉ．ｖ．投与により、即時の腫瘍成長阻害がもたらされ、腫瘍成長が、初回投与後の３１日目までにおよそ２８％遅くなった（図１７）。これにより、ＨｅｐＧ２腫瘍におけるｉ．ｖ．  ＡＦＰ１５８  ＣＡＲ−Ｔ細胞投与による腫瘍成長阻害活性の遅延が、モデル特異的現象であることが示唆される。ＨｅｐＧ２腫瘍において得られた結果と同様に、ＳＫ−Ｈｅｐ１−ＭｉｎｉＧマウスモデルにおけるＡＦＰ１５８  ＣＡＲ−Ｔ細胞のｉ．ｔ．注射により、初回投与の直後にロバストかつ持続的な腫瘍の退縮がもたらされた（図１７）。
【０６０１】
（実施例８）
全長ＩｇＧ１  ＡＦＰ１５８抗体の生成および特徴付け
選択されたファージクローンの全長ヒトＩｇＧ１を、記載の通りＨＥＫ２９３細胞株およびチャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞株において産生させた（Ｔｏｍｉｍａｔｓｕ，  Ｋ．ら、Ｂｉｏｓｃｉ．  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．  Ｂｉｏｃｈｅｍ．、７３巻（７号）：１４６５〜１４６９頁、２００９年）（データは示していない）。簡単に述べると、抗体可変領域を、適合するヒトラムダまたはカッパ軽鎖定常領域およびヒトＩｇＧ１定常領域配列と共に哺乳動物発現ベクターにサブクローニングした。同じクローニング戦略を適用して、本発明者らは、マウスＩｇＧ１重鎖および軽鎖定常領域を有するキメラＡＦＰ１５８全長抗体も生成した。精製された全長ＩｇＧ抗体の分子量を還元条件下および非還元条件下の両方で電気泳動によって測定した。精製されたＡＦＰ１５８マウスキメラＩｇＧ１抗体のＳＤＳ−ＰＡＧＥを実施してタンパク質の純度を決定した。簡単に述べると、タンパク質２μｇをＮｕＰＡＧＥ  ＬＤＳ  Ｓａｍｐｌｅ  Ｂｕｆｆｅｒ（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、ＮＰ０００８）２．５μＬと混合し、脱イオン水を用いて１０μＬまでにした。試料を７０℃で１０分間加熱し、次いで、ゲル上にローディングした。ゲル電気泳動を１８０Ｖで１時間実施した。ＳＤＳ−ＰＡＧＥの例を図１８に示す。
【０６０２】
ＡＦＰ１５８キメラＩｇＧ１抗体を、ＡＦＰ１５８を提示するＳＫ−ＨＥＰ１細胞に対する結合についてフローサイトメトリーによって試験した。ＳＫ−ＨＥＰ１は、ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１陽性およびＡＦＰ陰性細胞株である。ＡＦＰ１５８ミニ遺伝子カセットをＳＫ−ＨＥＰ１細胞にトランスフェクトして、ＡＦＰ１５８を提示するＳＫ−ＨＥＰ１−ｍｉｎｉＧ細胞を生成した。１０μｇ／ｍＬの抗体を細胞に添加して氷上で１時間置いた。洗浄後、Ｒ−ＰＥとコンジュゲートした抗マウスＩｇＧ（Ｈ＋Ｌ）（Ｖｅｃｔｏｒ  Ｌａｂｓ＃ＥＩ−２００７）を添加して抗体結合を検出した。ＡＦＰ１５８抗体は、ミニ遺伝子をトランスフェクトしたＳＫ−ＨＥＰ１−ｍｉｎｉＧ細胞に結合するが、単独の二次対照抗体は同じ細胞に結合しないことが見出された（図１９）。マウスキメラＩｇＧ１  ＡＦＰ１５８抗体の結合親和性をＦｏｒｔｅＢｉｏによって決定した。抗体を一価ＢｓＡｂから二価ＩｇＧ抗体に変換することにより、ＡＦＰ１５８抗体の標的抗原に対する結合親和性が劇的に増大した。全長抗体のＫｄはピコモル濃度範囲であることが決定され、これは、ＢｓＡｂ形式と比較して１００〜１０００倍の増大であった。表１０は、Ｋｄデータの例を示す。
【表１０】
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【０６０３】
ＡＦＰ１５８特異的および陰性対照（ＥＴ９０１）マウスキメラＩｇＧ１を、ＡＦＰ１５８／ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１、ＡＦＰ組換えタンパク質および遊離のＡＦＰ１５８ペプチドに対する結合についてＥＬＩＳＡアッセイにおいて試験した。抗体は、１００ｎｇ／ｍＬから開始して、３×段階希釈、合計８濃度で試験した。ビオチン化ＡＦＰ１５８／Ａ＊０２：０１  ＭＨＣをストレプトアビジンプレートに２μｇ／ｍＬでコーティングし、ＡＦＰタンパク質を２μｇ／ｍＬでコーティングし、ＡＦＰ１５８ペプチドを４０ｎｇ／ｍＬでコーティングした。全長ＡＦＰ１５８抗体が、ＨＬＡ−Ａ０２との関連でＡＦＰ１５８ペプチドのみを認識し、組み換えＡＦＰタンパク質にも遊離のＡＦＰ１５８ペプチドにも結合しないことが確認された（図２０）。
【０６０４】
（実施例９）
遠位ＳＫ−Ｈｅｐ１−ＭｉｎｉＧ  ｓ．ｃ．異種移植モデルにおけるＡＦＰ１５８−ＣＡＲＴの有効性
実施例７では、ＡＦＰ１５８  ＣＡＲ  Ｔ細胞を皮下（ｓ．ｃ．）肝腫瘍モデルに腫瘍内投与することにより、複数の異種移植モデルにおける処置された腫瘍の成長が有意に阻害されることが示された。この実施例において記載される研究の目的は、腫瘍内処置が遠位ｓ．ｃ．腫瘍の成長にも影響を与えるかを評価することであった。
【０６０５】
１つの代表的な研究では、以下の材料および手順を使用した：
【０６０６】
１．  標的腫瘍細胞株ＳＫ−Ｈｅｐ１−ＭｉｎｉＧ（別名ＳＫ−Ｈｅｐ１−ＭＧ）：ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１およびＡＦＰ１５８ペプチドミニ遺伝子を発現するヒトＨＣＣ細胞株ＳＫ−Ｈｅｐ１。
【０６０７】
２．動物：ＳＣＩＤ−ｂｅｉｇｅはＴ細胞およびＢ細胞を有さない。機能的ＮＫ、単球／マクロファージ、顆粒球および樹状細胞を有する。
【０６０８】
３．動物研究は研究の契約研究所において行った。
【０６０９】
４．ＣＡＲＴ細胞：０日目にヒトＴ細胞を活性化した；ｂ）１日目に活性化Ｔ細胞をレンチウイルスによって形質導入した；ｃ）５日目にレンチウイルスおよびビーズを除去した；ｄ）ＣＡＲ  Ｔ細胞を培養し、ＩＬ−２を１００単位／ｍｌで用いて拡大増殖させた；ｅ）ＰＢＭＣからＣＤ３＋Ｔ細胞を枯渇させることによってＡＰＣ細胞を単離した。細胞は主に単球およびＢ細胞である。
【０６１０】
５．動物研究。この研究では、６〜８週齢の雌ＳＣＩＤ  Ｂｅｉｇｅマウスを使用した。ＳＫ−Ｈｅｐ１−ＭｉｎｉＧ細胞株をＤＭＥＭ  Ｍｅｄｉｕｍ＋１０％ＦＢＳおよび１％Ｌ−グルタミン中、５％ＣＯ２を含む加湿雰囲気中、３７℃で培養した。ＳＫ−Ｈｅｐ１−ＭｉｎｉＧ細胞を５０％ＰＢＳプラス５０％マトリゲルに再懸濁させ、マウス４０匹の右側腹部および左側腹部の両方の皮下に、注射部位当たり１００μｌ当たり細胞５×１０６個で移植した。
【０６１１】
腫瘍が平均１００ｍｍ３に達したら、マウスを、右側腹部の腫瘍サイズに基づいて下記の６つの群に、群当たりマウス６匹でランダム化し、各マウスの右側腹部の腫瘍に試料を注射した。ＡＦＰ１５８−ＣＡＲＴ群（群４〜６）に対して、種々の実験において上記の種々の抗体クローンを使用した。代表的なクローンを使用した実験からの結果を以下に示す。他のクローンでも同様の結果がもたらされた（データは示していない）。
【０６１２】
群１：ビヒクル（ＰＢＳ）、１００μＬ／マウス、右部位ｓ．ｃ．腫瘍へのｉ．ｔ．、単回投薬。
【０６１３】
群２：偽＊Ｔ細胞、７百万個／１００μＬ／マウス、右部位ｓ．ｃ．腫瘍へのｉ．ｔ．、単回投薬。（偽Ｔ細胞は、ＣＡＲＴ形質導入を伴わないＴ細胞である）
【０６１４】
群３：ＡＰＣ細胞を伴う偽、７百万個（７０％の偽＋３０％のＡＰＣ）／１００μＬ／マウス、右部位ｓ．ｃ．腫瘍へのｉ．ｔ．、単回投薬。
【０６１５】
群４：ＡＦＰ１５８  ＣＡＲ  Ｔ細胞、７百万個／１００μＬ／マウス、尾静脈を介したｉ．ｖ．、単回投薬。
【０６１６】
群５：ＡＦＰ１５８  ＣＡＲ  Ｔ細胞、７百万個／１００μＬ／マウス、右部位ｓ．ｃ．腫瘍へのｉ．ｔ．、単回投薬。
【０６１７】
群６：ＡＰＣを伴うＡＦＰ１５８  ＣＡＲ  Ｔ細胞、７百万個（７０％のＣＡＲＴ＋３０％のＡＰＣ）／１００μＬ／マウス、右部位ｓ．ｃ．腫瘍へのｉ．ｔ．、単回投薬。
ＡＦＰ１５８−ＣＡＲＴは、本用量／スケジュールで安全である
【０６１８】
投薬後、体重および他の臨床的挙動を綿密にモニタリングした。図２１に示されている通り、いずれの群においても体重減少は観察されなかった。他の、薬物に関連する毒性の臨床徴候は認められなかった。
【０６１９】
単回ｉ．ｔ．投薬により、局所腫瘍の退縮および遠位腫瘍の阻害がもたらされた
図２２に示されている通り、右側腹部のみに注射したＡＦＰ１５８−ＣＡＲＴの単回ｉ．ｔ．投薬により、右側腹部および左側腹部（ＡＦＰ１５８−ＣＡＲ  Ｔ細胞を直接注射していない側）の両方に移植した腫瘍の有意な阻害がもたらされた。腫瘍の全体的な成長カイネティクスを反映する曲線下面積による分析から、ＡＦＰ１５８−ＣＡＲＴを単独でｉ．ｔ．注射することにより、右側腹部において４２％の腫瘍成長阻害がもたらされ（ダネット検定、ｐ＜０．０１）、左側腹部において３３％の腫瘍成長阻害がもたらされる（ｐ＞０．０５）ことが示された。
【０６２０】
ＡＦＰ１５８−ＣＡＲＴ＋ＡＰＣにより、両側の抗腫瘍活性が増強された
図２２に示されている通り、ＡＦＰ１５８−ＣＡＲＴプラスＡＰＣをｉ．ｔ．注射することにより、右側腹部腫瘍の退縮が引き起こされ、全体的な腫瘍阻害は、ビヒクル処置群と比較して６８％であった（ｐ＜０．００１）。それぞれのビヒクル処置群と比較して、遠位の左側腹部腫瘍のより強力な阻害も観察された（４７％、ｐ＜０．０１）。これにより、右側の腫瘍および左側の腫瘍の両方の追加的な阻害における、Ｔ細胞による交差プライミングの関与の可能性が示唆される。
【０６２１】
ＡＦＰ１５８−ＣＡＲＴ＋ＡＰＣで処置した動物において、右側の腫瘍および左側の腫瘍の両方でＣＤ３陽性細胞が観察された
研究終了のとき（投薬の３４日後）に、腫瘍を回収し、ＣＤ３（Ｔ細胞マーカー）の組織学的染色を実施した。図２３に示されている通り、ＡＦＰ１５８−ＣＡＲＴプラスＡＰＣ細胞のｉ．ｔ．注射から、右側の腫瘍および左側の腫瘍の両方においてＣＤ３陽性細胞が見出された。これにより、腫瘍成長阻害におけるヒトＴ細胞の関与が示唆される。
【化１】
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【化２】
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【化３】
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【化４】
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【化５】
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【化６】
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【化７】
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【化８】
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【化９】
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【化１０】
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【化１１】
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【化１２】
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【化１３】
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【化１４】
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【化１５】
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【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４Ａ】
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【図１４Ｂ】
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【図１５Ａ】
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【図１５Ｂ】
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【図１６Ａ】
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【図１６Ｂ】
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【図１７】
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【図１８】
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【図１９】
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【図２０】
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【図２１】
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【図２２】
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【図２３】
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【図２４】
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【図２５】
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【図２６】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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