(57)【要約】  本発明は、新規のペプチドに関し、遺伝子転写のＰＢＸ依存性制御を損ない、したがって、異常な細胞分裂が生じる障害の治療または予防において有用性がある。特に、本発明は、アミノ酸配列（Ｉ）：  Ｙ１Ｘ１Ｘ２ＫＷＸ３Ｘ４Ｘ５Ｘ６Ｘ７Ｙ２（Ｉ）  を含むペプチドを提供し、  ここで  配列Ｘ１〜Ｘ７は、少なくとも７個のアミノ酸を含むアミノ酸配列であり（任意選択で、ここに規定される９個のアミノ酸位置の１つまたは複数の間で、１または２個のアミノ酸残基によって中断され得る）；  Ｘ１は、Ｗ、Ｔ、ＰＥ、ＫＱＩ、ＶＶ、ＰＱＴ、Ｈ、ＲＩおよび不存在から選択されて；  Ｘ２は、芳香族側鎖を有するアミノ酸またはシステインであり；  Ｘ３は、疎水性アミノ酸であり  Ｘ４は、荷電側鎖を有するアミノ酸であり；  Ｘ５は、塩基性側鎖を有するアミノ酸であり；  Ｘ６は、アミノ酸または不存在であり；  Ｘ７は、１つまたは複数のアミノ酸または不存在であり；および  Ｙ１およびＹ２は、Ｙ１およびＹ２の少なくとも一方は存在するという条件で、それぞれ、不存在または塩基性アミノ酸のカチオン性ポリマーを含むペプチドである。【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（Ｉ）：
Ｙ１Ｘ１Ｘ２ＫＷＸ３Ｘ４Ｘ５Ｘ６Ｘ７Ｙ２（Ｉ）
のアミノ酸配列を含むペプチドであって、
ここで
前記配列Ｘ１〜Ｘ７は、少なくとも７個のアミノ酸を含むアミノ酸配列であり（任意選択で、ここに規定される９個のアミノ酸位置の１つまたは複数の間で、１または２個のアミノ酸残基によって中断され得る）；
Ｘ１は、Ｗ、Ｔ、ＰＥ、ＫＱＩ、ＶＶ、ＰＱＴ、Ｈ、ＲＩおよび不存在から選択されて；
Ｘ２は、芳香族側鎖を有するアミノ酸またはシステインであり；
Ｘ３は、疎水性アミノ酸であり
Ｘ４は、荷電側鎖を有するアミノ酸であり；
Ｘ５は、塩基性側鎖を有するアミノ酸であり；
Ｘ６は、アミノ酸または不存在であり；
Ｘ７は、１つまたは複数のアミノ酸または不存在であり；および
Ｙ１およびＹ２は、Ｙ１およびＹ２の少なくとも一方は存在するという条件で、それぞれ、不存在または塩基性アミノ酸のカチオン性ポリマーを含むペプチドである、
ペプチド。
【請求項２】
請求項１に記載のペプチドであって、
Ｙ１および／またはＹ２は、細胞透過性部分である、
ペプチド。
【請求項３】
請求項１または２に記載のペプチドであって、
Ｙ１および／またはＹ２は、塩基性アミノ酸のホモポリマーである、
ペプチド。
【請求項４】
請求項１から３のいずれかに記載のペプチドであって、
Ｙ１および／またはＹ２の塩基性アミノ酸は、アルギニン、リジンおよびヒスチジンから選択される、
ペプチド。
【請求項５】
請求項１から４のいずれかに記載のペプチドであって、
Ｙ１および／またはＹ２は、ポリアルギニンペプチドである、
ペプチド。
【請求項６】
請求項５に記載のペプチドであって、
Ｙ１および／またはＹ２は、（Ａｒｇ）６−１２である、
ペプチド。
【請求項７】
請求項６に記載のペプチドであって、
Ｙ１および／またはＹ２は、（Ａｒｇ）９である、
ペプチド。
【請求項８】
式（ＩＩ）：
Ｙ３Ｘ１Ｘ２ＫＷＸ３Ｘ４Ｘ５Ｘ６Ｘ７Ｙ４（ＩＩ）
のアミノ酸配列を含むペプチドであって、
ここで
前期配列Ｘ１〜Ｘ７は、少なくとも７個のアミノ酸を含むアミノ酸配列であり（任意選択で、ここに規定される９個のアミノ酸位置の１つまたは複数の間で、１または２個のアミノ酸残基によって中断され得る）；
Ｘ１は、Ｗ、Ｔ、ＰＥ、ＫＱＩ、ＶＶ、ＰＱＴ、Ｈ、ＲＩおよび不存在から選択されて；
Ｘ２は、芳香族側鎖を有するアミノ酸またはシステインであり；
Ｘ３は、疎水性アミノ酸であり
Ｘ４は、荷電側鎖を有するアミノ酸であり；
Ｘ５は、塩基性側鎖を有するアミノ酸であり；
Ｘ６は、アミノ酸または不存在であり；
Ｘ７は、１つまたは複数のアミノ酸または不存在であり；および
Ｙ３およびＹ４は、Ｙ３およびＹ４の少なくとも一方は存在するという条件で、それぞれ、不存在または細胞透過性部分を含む配列を含むペプチドのいずれかであり；
ここで、前記ペプチドの少なくともＮ末およびＣ末アミノ酸は、Ｄ構造である、
ペプチド。
【請求項９】
請求項１から８のいずれかに記載のペプチドであって、
前記配列Ｘ１〜Ｘ７は、ＷＹＫＷＭＫＫＨＨ、ＷＹＫＷＭＫＫＡＡ、およびＷＹＫＷＭＫＫから選択される、
ペプチド。
【請求項１０】
請求項８または９に記載のペプチドであって、
Ｙ３および／またはＹ４は、Ｙ１および／またはＹ２に関して請求項１から７のいずれかにおいて定義した塩基性アミノ酸のカチオン性ポリマーを含むペプチドである、
ペプチド。
【請求項１１】
請求項１から１０のいずれかに記載のペプチドであって、前記ペプチドは：
ＷＹＫＷＭＫＫＨＨＲＲＲＲＲＲＲＲＲ；
ＷＹＫＷＭＫＫＡＡＲＲＲＲＲＲＲＲＲ；および
ＷＹＫＷＭＫＫＲＲＲＲＲＲＲＲＲ
から選択される配列を有する、
ペプチド。
【請求項１２】
請求項８または９に記載のペプチドであって、
前記細胞透過性部分は、アミノ酸配列
Ｘ９ＱＸ１０Ｘ１１Ｘ１２ＷＦＱＮＸ１３Ｘ１４ＭＸ１５ＷＸ１６Ｘ１７
を含み、
ここで
Ｘ９は、ＲまたはＱまたは不存在であり；
Ｘ１０、Ｘ１２は、それぞれ独立に、ＩまたはＬであり；および
Ｘ１１、Ｘ１３、Ｘ１４、Ｘ１５、Ｘ１６およびＸ１７は、それぞれ独立に、ＫまたはＲである、
ペプチド。
【請求項１３】
請求項１２に記載のペプチドであって、
前記細胞透過性部分は、２０アミノ酸配列：
ＱＩＫＩＷＦＱＮＲＲＭＫＷＫＫ；
ＱＩＲＩＷＦＱＮＲＲＭＫＷＫＫ；
ＱＩＫＩＷＦＱＮＫＲＭＫＷＫＫ；
ＱＩＫＩＷＦＱＮＫＫＭＫＷＫＫ；
ＱＩＲＩＷＦＱＮＲＫＭＫＷＫＫ；
ＱＩＲＩＷＦＱＮＲＲＭＲＷＫＫ；
ＱＩＲＩＷＦＱＮＲＲＭＫＷＲＫ；
ＱＩＲＩＷＦＱＮＲＲＭＫＷＫＲ；
ＱＩＲＩＷＦＱＮＲＲＭＫＷＲＲ；
ＱＩＲＩＷＦＱＮＲＲＭＫＷＫＫ；
ＱＩＫＩＷＦＱＮＲＲＭＫＷＲＫ；
ＱＩＲＩＷＦＱＮＫＲＭＫＷＲＫ；
ＱＩＫＬＷＦＱＮＲＲＭＫＷＫＫ、
ＱＬＫＬＷＦＱＮＲＲＭＫＷＫＫ；または
ＱＬＲＩＷＦＱＮＲＲＭＫＷＫＫ
を含む、
ペプチド。
【請求項１４】
請求項８に記載のペプチドであって、前記ペプチドは：
ＷＹＫＷＭＫＫＨＨＲＱＩＫＩＷＦＱＮＲＲＭＫＷＫ；
ＷＹＫＷＭＫＫＨＨＲＱＩＫＩＷＦＱＮＲＲＭＫＷＫＫ；
ＷＹＫＷＭＫＫＨＨＲＱＩＫＩＷＦＱＮＲＲＭＫＷＫ；
ＷＹＫＷＭＫＫＨＨＲＱＩＫＩＷＦＱＮＲＲＭＫＷＫＫ
ＷＹＫＷＭＫＫＨＨＲＱＩＫＩＷＦＱＮＲＲＭＫＷＫ；および
ＷＹＫＷＭＫＫＨＨＲＱＩＫＩＷＦＱＮＲＲＭＫＷＫＫ
から選択される配列を有する、
ペプチド。
【請求項１５】
請求項１から１４のいずれかに記載のペプチド、および、１つまたは複数の薬学的に許容できる賦形剤、希釈剤および／または担体を含む、
医薬組成物。
【請求項１６】
請求項１５に記載の医薬組成物であって、
１つまたは複数のさらなる治療的薬剤と組み合わせた、
医薬組成物。
【請求項１７】
請求項１６に記載の医薬組成物であって、
前記の１つまたは複数のさらなる治療的薬剤は、それぞれ、細胞傷害剤および化学療法剤から選択される、
医薬組成物。
【請求項１８】
請求項１から１４のいずれかに記載のペプチドであって、
製剤としての使用のための、
ペプチド。
【請求項１９】
請求項１から１４のいずれかに記載のペプチドであって、
異常な細胞分裂が生じる症状または障害の治療または予防での使用のための、
ペプチド。
【請求項２０】
請求項１９に記載の使用のための、請求項１９に記載のペプチドであって、
前記障害は、癌である、
ペプチド。
【請求項２１】
請求項１９または２０に記載のペプチドであって、
請求項１９または２０に記載の使用のための、１つまたは複数の細胞傷害剤または化学療法剤と組み合わせた、
ペプチド。
【請求項２２】
請求項１９から２１のいずれかに記載の使用のための、請求項１９から２１のいずれかに記載のペプチドであって、
前記細胞は、１つまたは複数のＨｏｘ遺伝子を発現する、
ペプチド。
【請求項２３】
先行する請求項のいずれかに記載の、請求項１９から２２のいずれかに記載の使用のための、請求項１９から２２のいずれかに記載のペプチドであって、
ＰＢＸは、前記細胞において癌遺伝子として作用しない、
ペプチド。
【請求項２４】
請求項１から１４のいずれか一項に定義されるペプチドであって、
細胞傷害剤または化学療法剤の副作用の低減での使用のための、
ペプチド。
【請求項２５】
請求項１から１４のいずれか一項に定義されるペプチドであって、
インビボでの幹細胞集団の維持または拡大での使用のための、
ペプチド。
【請求項２６】
請求項１から１４のいずれか一項に定義されるペプチドの使用であって、
異常な細胞分裂が生じる障害を治療または予防するための医薬品の製造での、
使用。
【請求項２７】
異常な細胞分裂が生じる症状または障害を予防または治療するための方法であって、
それを必要とする対象に、治療的に有効量の請求項１から１４のいずれか一項に定義されるペプチドを投与するステップを含む、
方法。
【請求項２８】
請求項２７に記載の方法であって、
前記対象は、細胞傷害剤または化学療法剤も投与される、
方法。
【請求項２９】
幹細胞（ｓｔｅｒｎ  ｃｅｌｌ）をエクスビボで維持または拡大する方法であって、
前記幹細胞を、請求項１から１４のいずれか一項に定義されるペプチドと接触させるステップを含む、
方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ＰＢＸ依存性転写制御を損なう、具体的には、ＰＢＸに対するＨＯＸの結合に影響を与える新規のペプチド、および、例えば特定の癌を治療するための、および幹細胞の多能性を維持するための、例えば培養拡大中に幹細胞の多能性を維持するための、異常な細胞分裂の低減を含む多くの適用におけるそれらの使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
様々な転写因子は、成体幹細胞の成熟および胚形成中のタンパク質の発現の制御に関与する。ホメオボックス（ＨＯＸ）遺伝子は、約６０アミノ酸のホメオドメインをコードする約１８０ｂｐの高度に保存されたヌクレオチド配列を含む。ホメオドメインは、他の遺伝子内の標的配列に結合して発生中のそれらの発現を調節することのできる、ＤＮＡ結合タンパク質ドメインである。クラスター化したＨｏｘ遺伝子は、重要な発生レギュレーターであり、進化全体を通して高度に保存されている。それらがコードするホメオティックなＨＯＸタンパク質は、発生遺伝子のような下位の下流遺伝子の転写を調節することによって軸パターン形成を制御するための転写因子として機能する。プレＢ細胞形質転換関連遺伝子（ＰＢＸ）もまた、ＨＯＸと協同的に相互作用することによって発生中の遺伝子発現を制御して標的ＤＮＡに結合する、重要な調節タンパク質である（Ｍａｎｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９９６，Ｔｒｅｎｄｓ  Ｇｅｎｅｔ．，１２（７），ｐ２５８−２６２）。
【０００３】
その結合パートナーに対するＰＢＸの結合を阻害することによって、異常な細胞増殖が低減されて、そのような細胞増殖が生じる障害または症状を予防または治療し得ることが知られている。そのような阻害は、幹細胞に対して意味深くて有用な効果を有することが見いだされていて、これらの細胞の多能性が維持されるのを可能にする。これらの知見は、所望の細胞が保護および場合により拡大され得て、一方で、有害な細胞の増殖が防止され得る、重大な臨床適用を提供する（Ｍｏｒｇａｎ，Ｒ．，Ｐｉｒａｒｄ，Ｐ．Ｍ．，Ｓｈｅａｒｓ，Ｌ．，Ｓｏｈａｌ，Ｊ．，Ｐｅｔｔｅｎｇｅｌｌ，Ｒ．＆  Ｐａｎｄｈａ，Ｈ．Ｓ．（２００７）Ａｎｔａｇｏｎｉｓｍ  ｏｆ  ＨＯＸ／ＰＢＸ  ｄｉｍｅｒ  ｆｏｒｍａｔｉｏｎ  ｂｌｏｃｋｓ  ｔｈｅ  ｉｎ  ｖｉｖｏ  ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｍｅｌａｎｏｍａ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ，６７，５８０６−５８１３；  Ｓｈｅａｒｓ，Ｌ．，Ｐｌｏｗｒｉｇｈｔ，Ｌ．，Ｈａｒｒｉｎｇｔｏｎ，Ｋ．，Ｐａｎｄｈａ，Ｈ．Ｓ．＆  Ｍｏｒｇａｎ，Ｒ．（２００８）Ｄｉｓｒｕｐｔｉｎｇ  ｔｈｅ  ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎ  ｂｅｔｗｅｅｎ  ＨＯＸ  ａｎｄ  ＰＢＸ  ｃａｕｓｅｓ  ｎｅｃｒｏｔｉｃ  ａｎｄ  ａｐｏｐｔｏｔｉｃ  ｃｅｌｌ  ｄｅａｔｈ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｒｅｎａｌ  ｃａｎｃｅｒ  ｌｉｎｅｓ  ＣａＫｉ−２  ａｎｄ  ７６９−Ｐ．Ｊ  Ｕｒｏｌ，１８０，２１９６−２２０１；Ｐｌｏｗｒｉｇｈｔ，Ｌ．，Ｈａｒｒｉｎｇｔｏｎ，Ｋ．Ｊ．，Ｐａｎｄｈａ，Ｈ．Ｓ．＆  Ｍｏｒｇａｎ，Ｒ．（２００９）ＨＯＸ  ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ  ｆａｃｔｏｒｓ  ａｒｅ  ｐｏｔｅｎｔｉａｌ  ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  ｔａｒｇｅｔｓ  ｉｎ  ｎｏｎ−ｓｍａｌｌ−ｃｅｌｌ  ｌｕｎｇ  ｃａｎｃｅｒ（ｔａｒｇｅｔｉｎｇ  ＨＯＸ  ｇｅｎｅｓ  ｉｎ  ｌｕｎｇ  ｃａｎｃｅｒ）．Ｂｒ  Ｊ  Ｃａｎｃｅｒ，１００，４７０−４７５；Ｄａｎｉｅｌｓ，Ｔ．Ｒ．，Ｎｅａｃａｔｏ，ＩＩ，Ｒｏｄｒｉｇｕｅｚ，Ｊ．Ａ．，Ｐａｎｄｈａ，Ｈ．Ｓ．，Ｍｏｒｇａｎ，Ｒ．＆  Ｐｅｎｉｃｈｅｔ，Ｍ．Ｌ．（２０１０）Ｄｉｓｒｕｐｔｉｏｎ  ｏｆ  ＨＯＸ  ａｃｔｉｖｉｔｙ  ｌｅａｄｓ  ｔｏ  ｃｅｌｌ  ｄｅａｔｈ  ｔｈａｔ  ｃａｎ  ｂｅ  ｅｎｈａｎｃｅｄ  ｂｙ  ｔｈｅ  ｉｎｔｅｒｆｅｒｅｎｃｅ  ｏｆ  ｉｒｏｎ  ｕｐｔａｋｅ  ｉｎ  ｍａｌｉｇｎａｎｔ  Ｂ  ｃｅｌｌｓ．Ｌｅｕｋｅｍｉａ，２４，１５５５−１５６５；Ｍｏｒｇａｎ，Ｒ．，Ｐｌｏｗｒｉｇｈｔ，Ｌ．，Ｈａｒｒｉｎｇｔｏｎ，Ｋ．Ｊ．，Ｍｉｃｈａｅｌ，Ａ．＆  Ｐａｎｄｈａ，Ｈ．Ｓ．（２０１０）Ｔａｒｇｅｔｉｎｇ  ＨＯＸ  ａｎｄ  ＰＢＸ  ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ  ｆａｃｔｏｒｓ  ｉｎ  ｏｖａｒｉａｎ  ｃａｎｃｅｒ．ＢＭＣ  Ｃａｎｃｅｒ，１０，８９；Ｍｏｒｇａｎ，Ｒ．，Ｂｏｘａｌｌ，Ａ．，Ｈａｒｒｉｎｇｔｏｎ，Ｋ．Ｊ．，Ｓｉｍｐｓｏｎ，Ｇ．Ｒ．，Ｇｉｌｌｅｔｔ，Ｃ．，Ｍｉｃｈａｅｌ，Ａ．＆  Ｐａｎｄｈａ，Ｈ．Ｓ．（２０１２）Ｔａｒｇｅｔｉｎｇ  ｔｈｅ  ＨＯＸ／ＰＢＸ  ｄｉｍｅｒ  ｉｎ  ｂｒｅａｓｔ  ｃａｎｃｅｒ．  Ｂｒｅａｓｔ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ  Ｔｒｅａｔ，１３６，３８９−３９８；Ｅｒｒｉｃｏ，Ｍ．Ｃ．，Ｆｅｌｉｃｅｔｔｉ，Ｆ．，Ｂｏｔｔｅｒ���，Ｌ．，Ｍａｔｔｉａ，Ｇ．，Ｂｏｅ，Ａ．，Ｆｅｌｌｉ，Ｎ．，Ｐｅｔｒｉｎｉ，Ｍ．，Ｂｅｌｌｅｎｇｈｉ，Ｍ．，Ｐａｎｄｈａ，Ｈ．Ｓ．，Ｃａｌｖａｒｕｓｏ，Ｍ．，Ｔｒｉｐｏｄｏ，Ｃ．，Ｃｏｌｏｍｂｏ，Ｍ．Ｐ．，Ｍｏｒｇａｎ，Ｒ．＆  Ｃａｒｅ，Ａ．（２０１３）Ｔｈｅ  ａｂｒｏｇａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｈｅ  ＨＯＸＢ７／ＰＢＸ２  ｃｏｍｐｌｅｘ  ｉｎｄｕｃｅｓ  ａｐｏｐｔｏｓｉｓ  ｉｎ  ｍｅｌａｎｏｍａ  ｔｈｒｏｕｇｈ  ｔｈｅ  ｍｉＲ−２２１＆２２２−ｃ−ＦＯＳ  ｐａｔｈｗａｙ．Ｉｎｔ  Ｊ  Ｃａｎｃｅｒ，１３３，８７９−８９２；Ｍｏｒｇａｎ，Ｒ．，Ｂｏｘａｌｌ，Ａ．，Ｈａｒｒｉｎｇｔｏｎ，Ｋ．Ｊ．，Ｓｉｍｐｓｏｎ，Ｇ．Ｒ．，Ｍｉｃｈａｅｌ，Ａ．＆  Ｐａｎｄｈａ，Ｈ．Ｓ．（２０１４）Ｔａｒｇｅｔｉｎｇ  ＨＯＸ  ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ  ｆａｃｔｏｒｓ  ｉｎ  ｐｒｏｓｔａｔｅ  ｃａｎｃｅｒ．ＢＭＣ  Ｕｒｏｌ，１４，１７；その内容は、全ての目的に関してそれらの全体において援用される）。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
本発明は、例えば、ＰＢＸおよびその共因子、好ましくはＨＯＸの間の相互作用を妨げることによって、ＰＢＸ依存性転写制御（例えば活性化または抑制）を損なう新規のペプチドを提供し、例えばＨＯＸおよびＰＢＸタンパク質の結合に影響を及ぼすその標的ＤＮＡは、異常な細胞分裂の予防または低減および幹細胞の多能性の維持などの大きな利点を与え得る下流効果を有する。特に、本発明は、ＰＢＸモジュレーター、具体的には拮抗薬、より具体的には、ＰＢＸに対するＨＯＸタンパク質のヘキサペプチド領域の結合の拮抗薬として作用する、新規のペプチドを提供する。
【課題を解決するための手段】
【０００５】
一態様では、本発明は、式（Ｉ）のアミノ酸配列（配列番号１）：
Ｙ１Ｘ１Ｘ２ＫＷＸ３Ｘ４Ｘ５Ｘ６Ｘ７Ｙ２（Ｉ）
を含むまたはからなるペプチド、
または、例えばラベルまたは付着部分によって任意選択で置換されてよい、その機能的に同等の誘導体、変異体またはフラグメント、を提供し、
ここで
配列Ｘ１〜Ｘ７は、少なくとも７個のアミノ酸を含むアミノ酸配列であり（任意選択で、ここに規定される９個のアミノ酸位置の１つまたは複数の間で、１または２個のアミノ酸残基によって中断され得る）；
Ｘ１は、Ｗ、Ｔ、ＰＥ、ＫＱＩ、ＶＶ、ＰＱＴ、Ｈ、ＲＩおよび不存在から選択されて；
Ｘ２は、芳香族側鎖を有するアミノ酸またはシステインであり；
Ｘ３は、疎水性アミノ酸であり
Ｘ４は、荷電側鎖を有するアミノ酸であり；
Ｘ５は、塩基性側鎖を有するアミノ酸であり；
Ｘ６は、アミノ酸または不存在であり；
Ｘ７は、１つまたは複数のアミノ酸または不存在であり；および
Ｙ１およびＹ２は、Ｙ１およびＹ２の少なくとも一方は存在するという条件で、それぞれ、不存在または塩基性アミノ酸のカチオン性ポリマーを含むペプチドである。
【発明を実施するための形態】
【０００６】
本明細書全体を通して、および、その後の特許請求の範囲において、文脈がそれ以外を要求しない限り、単語「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅ）」、または、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ）」または「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」のような変形は、述べられた整数またはステップまたは整数またはステップの群の包含を暗示するが、任意の他の整数またはステップまたは整数またはステップの群の除外ではないことが理解されるべきである。
【０００７】
当業者は、２以上のアミノ酸が結合してペプチドを形成する場合、水の要素は除去されて、および、それぞれのアミノ酸の残りは、アミノ酸残基と呼ばれることを理解する。アミノ酸残基は、他の全てからそれを固有のものにするアミノ酸の部分である。したがって、本明細書において、ペプチド内に含まれるアミノ酸配列の関連における「アミノ酸」に対する言及は、必要に応じて、それぞれのアミノ酸残基を指すと理解される。
【０００８】
本明細書において言及される「ペプチド」は、１００個未満のアミノ酸残基；具体的には５０残基未満の長さ；より具体的には３０残基未満の長さ；より具体的には１０〜２５残基の長さの分子である。
【０００９】
ポリアルギニン配列のような塩基性アミノ酸のカチオン性ポリマーに対するそのようなＰＢＸモジュレーターペプチドの付着は、改善された有効性をもたらし得る。特に、そのようなカチオン性ポリマーを細胞透過性部分として用いることにより、ペプチドの効果は、他の細胞透過性配列が用いられる場合よりもさらにいっそう迅速に見られ得る。
【００１０】
一実施態様では、Ｘ１は、Ｗ、Ｔ、ＰＥ、ＫＱＩ、ＶＶ、ＰＱＴ、ＨおよびＲＩから選択される。さらなる実施態様では、Ｘ１は、Ｗである。
【００１１】
一実施態様では、Ｘ２は、Ｃ、Ｙ、ＦおよびＷから選択される。さらなる実施態様では、Ｘ２は、Ｙである。
【００１２】
一実施態様では、Ｘ３は、Ｍ、Ｉ、ＶおよびＬから選択される。さらなる実施態様では、Ｘ２は、Ｍである。
【００１３】
一実施態様では、Ｘ４は、Ｋ、Ｄ、ＲおよびＨから選択される。さらなる実施態様では、Ｘ４は、Ｋ、ＤおよびＲから選択される。さらなる実施態様では、Ｘ４は、ＫまたはＲである。さらに、さらなる実施態様では、Ｘ４は、Ｋである。
【００１４】
一実施態様では、Ｘ５は、ＫまたはＲである。さらなる実施態様では、Ｘ５は、Ｋである。
【００１５】
一実施態様では、Ｘ６は、Ｋ、Ｒ、Ｅ、Ｈ、Ｄ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、ＴおよびＡから選択される。さらなる実施態様では、Ｘ６は、ＨまたはＡである。さらに、さらなる実施態様では、Ｘ６は、Ａである。代替の実施態様では、Ｘ６は、不存在である。
【００１６】
一実施態様では、Ｘ７は、Ｋ、Ｒ、Ｅ、Ｈ、Ｄ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、ＡおよびＧから選択される。さらなる実施態様では、Ｘ７は、Ｈ、ＨＲ、Ａ、ＡＲまたはＧである。さらに、さらなる実施態様では、Ｘ７は、ＨまたはＡである。さらに、さらなる実施態様では、Ｘ７は、Ａである。代替の実施態様では、Ｘ７は、不存在である。
【００１７】
一実施態様では、Ｙ１およびＹ２は、それぞれ、Ｙ１およびＹ２の少なくとも一方が存在するように、不存在または塩基性アミノ酸のカチオン性ホモポリマーを含むペプチドのいずれかである。さらなる実施態様では、Ｙ１およびＹ２の塩基性アミノ酸は、存在するならば、アルギニンから選択される。
【００１８】
一実施態様では、Ｙ１および／またはＹ２は、細胞透過性部分として作用し、または、細胞透過性部分として作用する配列を含む。
【００１９】
好適には、Ｙ１および／またはＹ２部分は、細胞透過性部分として作用して、細胞にペプチドが入るのを可能にする、または助ける。
【００２０】
好適には、Ｘ１〜Ｘ７配列は、ＨＯＸとＰＢＸとの間の相互作用をインビボで妨げることが可能な配列に対応する。
【００２１】
本発明のペプチドは、本明細書に記載の任意のペプチドＹ１および／またはＹ２に付着された、本発明に記載の任意の配列Ｘ１〜Ｘ７を含む、またはからなる。すなわち、本明細書に記載の塩基性アミノ酸の任意のカチオン性ポリマーは、本明細書に記載の任意のＸ１〜Ｘ７配列と組み合わせて用いられ得て、ペプチドＸ１〜Ｘ７のＣ末、Ｎ末、または両末端に位置し得る。
【００２２】
上記の配列（Ｉ）において、Ｘ１〜Ｘ４は、ヘキサペプチド配列を形成する。
【００２３】
一実施態様では、式（Ｉ）のペプチドは、式：
Ｙ１ＷＹＫＷＭＫＫＨＨＹ２（配列番号３）
またはその機能的に同等の誘導体、変異体またはフラグメントを有し、ここで、Ｙ１およびＹ２は、本明細書に定義されるとおりである。
【００２４】
配列Ｘ１〜Ｘ７は、ＷＹＫＷＭＫＫＨＨ（配列番号１０）またはＷＹＫＷＭＫＫＨＨＲ（配列番号１１）であってよく、または、Ｘ１〜Ｘ７は、配列ＷＹＫＷＭＫＫＨＨ（配列番号１０）の変異体であってよく、例えば、変異体は、１、２、３、４またはそれより多くのアミノ酸が、上記の式（Ｉ）の制約内で変化する。例えば、位置Ｘ１のＷは、不存在であってよく、または、Ｔ、ＰＥ、ＫＱＩ、ＶＶ、ＰＱＴ、ＨおよびＲＩから選択されるいずれか１つで置換されてよく；位置Ｘ２のＹは、システインまたは芳香族側鎖を有する別のアミノ酸（具体的にはＣ、ＦおよびＷから選択される、より具体的にはＣ）によって置換されてよく；Ｘ３は、別の疎水性アミノ酸（具体的にはＬ、ＩおよびＶから選択される）によって置換されてよく；位置Ｘ４のＫは、荷電側鎖を有する別のアミノ酸（具体的にはＤ、ＲおよびＨから選択される、より具体的にはＲ）によって置換されてよく；位置Ｘ５のＫは、塩基性側鎖を有する別のアミノ酸、具体的にはＲによって置換されてよく；位置Ｘ６のＨは、別のアミノ酸（具体的にはＫ、Ｒ、Ｅ、Ｄ、Ｎ、Ｑ、ＳおよびＴから選択される、より具体的にはＴ）によって置換されてよく；位置Ｘ７のＨは、任意の他の１つまたは複数のアミノ酸によって置換されてよく、または不存在であってよく、例えば、Ｘ７は、Ｔまたは不存在であってよい。任意の１、２、３、４、５、６、または７個のこれらの置換を行なって、上記の式（Ｉ）の範囲内に入る代替のペプチドを作製し得る。
【００２５】
別の実施態様では、式（Ｉ）のペプチドは、式：
Ｙ１ＷＹＫＷＭＫＫＡＡＹ２（配列番号４）
または、その機能的に同等の誘導体、変異体またはフラグメントを有し、ここで、Ｙ１およびＹ２は、本明細書において定義されるとおりである。
【００２６】
配列Ｘ１〜Ｘ７は、ＷＹＫＷＭＫＫＡＡ（配列番号１２）またはＷＹＫＷＭＫＫＡＡＲ（配列番号１３）であってよく、または、Ｘ１〜Ｘ７は、配列ＷＹＫＷＭＫＫＡＡ（配列番号１２）の変異体であってよく、例えば、変異体は、１、２、３、４またはそれより多くのアミノ酸が、上記の式（Ｉ）の制約内で変化する。例えば、位置Ｘ１のＷは、不存在であってよく、または、Ｔ、ＰＥ、ＫＱＩ、ＶＶ、ＰＱＴ、ＨおよびＲＩから選択されるいずれか１つで置換されてよく；位置Ｘ２のＹは、システインまたは芳香族側鎖を有する別のアミノ酸（具体的にはＣ、ＦおよびＷから選択される、より具体的にはＣ）によって置換されてよく；Ｘ３は、別の疎水性アミノ酸（具体的にはＬ、ＩおよびＶから選択される）によって置換されてよく；Ｘ４のＫは、荷電側鎖を有する別のアミノ酸（具体的にはＤ、ＲおよびＨから選択される、より具体的にはＲ）によって置換されてよく；位置Ｘ５のＫは、塩基性側鎖を有する別のアミノ酸、具体的にはＲによって置換されてよく；位置Ｘ６のＡは、別のアミノ酸（具体的にはＫ、Ｒ、Ｅ、Ｄ、Ｎ、Ｑ、ＳおよびＴから選択される、より具体的にはＴ）によって置換されてよく；位置Ｘ７のＡは、任意の他の１つまたは複数のアミノ酸によって置換されてよく、または不存在でよく、例えば、Ｘ７は、Ｔまたは不存在であってよい。任意の１、２、３、４、５、６、または７個のこれらの置換を行なって、上記の式（Ｉ）の範囲内に入る代替のペプチドを作製し得る。
【００２７】
別の実施態様では、式（Ｉ）のペプチドは、式：
Ｙ１ＷＹＫＷＭＫＫＹ２（配列番号５）
または、その機能的に同等の誘導体、変異体またはフラグメントを有し、ここで、Ｙ１およびＹ２は、本明細書において定義されるとおりである。
【００２８】
配列Ｘ１〜Ｘ７は、ＷＹＫＷＭＫＫ（配列番号１４）またはＷＹＫＷＭＫＫＲ（配列番号１５）であってよく、または、Ｘ１〜Ｘ５は、配列ＷＹＫＷＭＫＫ（配列番号１４）の変異体であってよく、例えば、変異体は、１、２、３、４またはそれより多くのアミノ酸が、上記の式（Ｉ）の制約内で変化する。例えば、位置Ｘ１のＷは、不存在であってよく、または、Ｔ、ＰＥ、ＫＱＩ、ＶＶ、ＰＱＴ、ＨおよびＲＩから選択されるいずれか１つで置換されてよく；位置Ｘ２のＹは、システインまたは芳香族側鎖を有する別のアミノ酸（具体的にはＣ、ＦおよびＷから選択される、より具体的にはＣ）によって置換されてよく；Ｘ３は、別の疎水性アミノ酸（具体的にはＬ、ＩおよびＶから選択される）によって置換されてよく；Ｘ４のＫは、荷電側鎖を有する別のアミノ酸（具体的にはＤ、ＲおよびＨから選択される、より具体的にはＲ）によって置換されてよく；位置Ｘ５のＫは、塩基性側鎖を有する別のアミノ酸、具体的にはＲによって置換されてよい。任意の１、２、３、４、または５個のこれらの置換を行なって、上記の式（Ｉ）の範囲内に入る代替のペプチドを作製し得る。
【００２９】
一実施態様では、アミノ酸置換は、位置Ｘ２、およびＸ３〜Ｘ７において生じる。さらなる実施態様では、アミノ酸置換は、位置Ｘ３〜Ｘ７の１、２、３または４個において生じる。
【００３０】
例えば、一実施態様では、上記の式（Ｉ）における残基Ｘ１〜Ｘ７は、以下であってよい：
Ｘ１＝Ｗ；Ｘ２＝ＹまたはＣ；Ｘ３＝Ｍ、Ｉ、ＶまたはＬ；Ｘ４＝Ｋ、ＲまたはＤ；Ｘ５＝ＫまたはＲ；Ｘ６＝Ｈ；Ａ、Ｔまたは不存在；Ｘ７＝任意のアミノ酸または不存在；
Ｘ１＝Ｗ；Ｘ２＝ＹまたはＣ；Ｘ３＝Ｍ、Ｉ、ＶまたはＬ；Ｘ４＝Ｋ、ＲまたはＤ；Ｘ５＝ＫまたはＲ；Ｘ６＝Ｈ、Ａ、Ｔまたは不存在；Ｘ７＝Ｈ、ＨＲ、Ａ、ＡＲ、Ｔ、Ｇまたは不存在；
Ｘ１＝Ｗ；Ｘ２＝Ｙ；Ｘ３＝Ｍ、Ｉ、ＶまたはＬ；Ｘ４＝ＫまたはＲ；Ｘ５＝ＫまたはＲ；Ｘ６＝Ｈ、Ａ、Ｔまたは不存在；Ｘ７＝任意のアミノ酸または不存在；
Ｘ１＝Ｗ；Ｘ２＝Ｙ；Ｘ３＝Ｍ、Ｉ、ＶまたはＬ；Ｘ４＝ＫまたはＲ；Ｘ５＝ＫまたはＲ；Ｘ６＝Ｈ、ＡまたはＴ；Ｘ７＝Ｈ、ＨＲ、Ａ、ＡＲ、Ｔ、Ｇまたは不存在。
【００３１】
Ｘ１〜Ｘ７に関する適切な配列は、以下を含む：
ＷＹＫＷＭＫＫＨＨ（配列番号１０）
ＷＣＫＷＬＤＲＨＧ（配列番号１９）
ＷＹＫＷＶＫＫＨＨ（配列番号２０）
ＷＹＫＷＩＫＫＨＨ（配列番号２１）
ＷＹＫＷＭＲＫＨＨ（配列番号２２）
ＷＹＫＷＭＫＲＨＨ（配列番号２３）
ＷＹＫＷＭＲＲＨＨ（配列番号２４）
ＷＹＫＷＭＫＫＴＨ（配列番号２５）
ＷＹＫＷＭＫＫＨＴ（配列番号２６）
ＷＹＫＷＭＫＫＴＴ（配列番号２７）
ＷＣＫＷＭＫＫＨＨ（配列番号２８）
ＷＣＫＷＭＲＫＨＨ（配列番号２９）
ＷＣＫＷＭＫＲＨＨ（配列番号３７）
ＷＣＫＷＭＲＲＨＨ（配列番号３８）
ＷＹＫＷＭＫＲＴＨ（配列番号３９）
ＷＹＫＷＭＲＫＴＨ（配列番号４０）
ＷＹＫＷＭＲＲＴＨ（配列番号４１）
ＷＹＫＷＭＲＫＨＴ（配列番号４２）
ＷＹＫＷＭＫＲＨＴ（配列番号４３）
ＷＹＫＷＭＲＲＨＴ（配列番号４４）
ＷＹＫＷＭＲＲＴＴ（配列番号４５）
ＷＹＫＷＬＲＫＨＨ（配列番号４６）
ＷＹＫＷＬＫＲＨＨ（配列番号４７）
ＷＹＫＷＭＫＫＨ（配列番号４８）
ＷＹＫＷＭＫＫＡＡ（配列番号１２）
ＷＣＫＷＬＤＲＡＧ（配列番号４９）
ＷＹＫＷＶＫＫＡＡ（配列番号５０）
ＷＹＫＷＩＫＫＡＡ（配列番号５１）
ＷＹＫＷＭＲＫＡＡ（配列番号５２）
ＷＹＫＷＭＫＲＡＡ（配列番号５３）
ＷＹＫＷＭＲＲＡＡ（配列番号５４）
ＷＹＫＷＭＫＫＴＡ（配列番号５５）
ＷＹＫＷＭＫＫＡＴ（配列番号５６）
ＷＣＫＷＭＫＫＡＡ（配列番号５７）
ＷＣＫＷＭＲＫＡＡ（配列番号５８）
ＷＣＫＷＭＫＲＡＡ（配列番号５９）
ＷＣＫＷＭＲＲＡＡ（配列番号６０）
ＷＹＫＷＭＫＲＴＡ（配列番号６１）
ＷＹＫＷＭＲＫＴＡ（配列番号６２）
ＷＹＫＷＭＲＲＴＡ（配列番号６３）
ＷＹＫＷＭＲＫＡＴ（配列番号６４）
ＷＹＫＷＭＫＲＡＴ（配列番号６５）
ＷＹＫＷＭＲＲＡＴ（配列番号６６）
ＷＹＫＷＬＲＫＡＡ（配列番号６７）
ＷＹＫＷＬＫＲＡＡ（配列番号６８）
ＷＹＫＷＭＫＫＡ（配列番号６９）
ＷＹＫＷＭＫＫ（配列番号１４）
【００３２】
任意のこれらの変異Ｘ１〜Ｘ７配列は、本明細書に記載の任意のＹ１および／またはＹ２残基と組み合わせて用いられ得る。例えば、本明細書に記載の任意のＸ１〜Ｘ７配列は、Ｃ末、Ｎ末または両末端に付着された、（Ａｒｇ）６−１２ペプチド、例えば、（Ａｒｇ）６［配列番号９０］、（Ａｒｇ）７［配列番号９１］、（Ａｒｇ）８［配列番号９２］、（Ａｒｇ）９［配列番号９］、（Ａｒｇ）１０［配列番号９３］、（Ａｒｇ）１１［配列番号９４］または（Ａｒｇ）１２［配列番号９５］ペプチドとともに用いられ得る。
【００３３】
上記に説明したように、Ｙ１および／またはＹ２は、塩基性アミノ酸のカチオン性ポリマーであり、または含む。典型的に、Ｙ１および／またはＹ２は、細胞透過性部分として作用することが可能な配列を含む。
【００３４】
一実施態様では、Ｙ１は、Ｘ１上のＮ末アミノ基を介して付着される。代替の実施態様では、Ｙ１は、Ｘ１の側鎖を介して付着される。一実施態様では、Ｙ２は、Ｘ７上のＣ末カルボキシル基を介して付着される。代替の実施態様では、Ｙ２は、Ｘ７の側鎖を介して付着される。存在する場合、Ｙ１およびＹ２は、それぞれ好適に、５０アミノ酸またはそれ未満のペプチドであり、任意選択で置換される。
【００３５】
本明細書において用いられる「細胞透過性部分」は、それが付着される分子が細胞に入るのを助けるまたは促進する分子、分子の構造または集合を指す。
【００３６】
Ｙ１および／またはＹ２の関連において、それが付着されるペプチドなどの分子が細胞に入るのを可能にするまたは助けることのできる、塩基性アミノ酸の任意のカチオン性ポリマーが用いられ得る。部分は、一般に様々な細胞型に入ることのできる作用物質であってよく、または、治療される特定の細胞型に特異的または標的化されてよい。
【００３７】
細胞透過性部分は、ペプチドＸ１〜Ｘ７に直接結合されてよく、または、１つまたは複数のアミノ酸のリンカー配列を介して付着されてよい。リンカー配列は、位置Ｘ７にアミノ酸（単数または複数）を含んでよい。典型的に、リンカーは、かさばる側基を持たないアミノ酸を含み、したがって、セリンおよびグリシンのようにタンパク質の折り畳みを妨害しない。リンカーは、細胞にペプチドが入るのを細胞透過性部分が助けるまたは促進するのを可能にして、および、ペプチドのＨＯＸ−ＰＢＸ相互作用部分がＨＯＸ−ＰＢＸ結合を妨げるのも可能にする。リンカーは、柔軟なアミノ酸リンカーであってよい。リンカーは、典型的に、２０アミノ酸までの長さ、例えば、５〜１８または１０〜１６、具体的には１５アミノ酸を有する。
【００３８】
細胞透過性部分は、あるいは、ペプチドＸ１〜Ｘ７と関連してよく、例えば、リポフェクションのためのリポソームまたはポリカチオンまたはカチオン性脂質を用いることにより、例えば、前記ペプチドを含む複合体をカプセル化または形成してよい。本明細書において用いられる「〜と関連する」は、ペプチドに付着または何らかの方法で結合される部分を指す。
【００３９】
一実施態様では、Ｙ１および／またはＹ２は、カチオン性ポリマーまたは薬学的に許容できるその塩であり、または含む。
【００４０】
本明細書において用いられる用語「薬学的に許容できる塩」は、本発明の化合物の生物学的有効性および特性を保持する塩を指し、そして、典型的に、生物学的または他の方法で望ましくないものでない。本発明のペプチドは、アミノ基および／またはカルボキシル基またはそれらに類似する基の存在により、酸および／または塩基の塩を形成することが可能である。
【００４１】
薬学的に許容できる酸付加塩は、無機酸および有機酸とともに形成することができ、例えば、酢酸塩、アスパラギン酸塩、安息香酸塩、ベシル酸塩、臭化塩／臭化水素酸塩、重炭酸塩／炭酸塩、重硫酸塩／硫酸塩、カンファースルホン酸塩（ｃａｍｐｈｏｒｓｕｌｆｏｒｎａｔｅ）、塩化物塩／塩酸塩、クロロテオフィロン酸塩（ｃｈｌｏｒｔｈｅｏｐｈｙｌｌｏｎａｔｅ）、クエン酸塩、エタン二スルホン酸塩（ｅｔｈａｎｄｉｓｕｌｆｏｎａｔｅ）、フマル酸塩、グルセプト酸塩、グルコン酸塩、グルクロン酸塩、馬尿酸塩、ヨウ化水素酸塩／ヨウ化物塩、イセチオン酸塩、乳酸塩、ラクトビオン酸塩、ラウリル硫酸塩、リンゴ酸塩、マレイン酸塩、マロン酸塩、マンデル酸塩、メシル酸塩、メチル硫酸塩、ナフトエ酸塩（ｎａｐｈｔｈｏａｔｅ）、ナプシル酸塩、ニコチン酸塩、硝酸塩、オクタデカン酸塩、オレイン酸塩、シュウ酸塩、パルミチン酸塩、パモ酸塩、リン酸塩／リン酸水素塩／リン酸二水素塩、ポリガラクツロ酸塩、プロピオン酸塩、ステアリン酸塩、コハク酸塩、スルホサリチル酸塩、酒石酸塩、トシル酸塩、トリフルオロ酢酸塩およびトリフルオロメチルスルホン酸塩である。
【００４２】
塩を生じることのできる無機酸は、例えば、塩酸、臭化水素酸、硫酸、硝酸、リン酸などを含む。
【００４３】
塩を生じることのできる有機酸は、例えば、酢酸、プロピオン酸、グリコール酸、シュウ酸、マレイン酸、マロン酸、コハク酸、フマル酸、酒石酸、クエン酸、安息香酸、マンデル酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、トルエンスルホン酸、トリフルオロメチルスルホン酸塩、スルホサリチル酸などを含む。薬学的に許容できる塩基付加塩は、無機および有機の塩基と形成することができる。
【００４４】
塩を生じることのできる無機塩基は、例えば、アンモニウム塩および周期表のカラムＩ〜ＸＩＩ由来の金属を含む。特定の実施態様では、塩は、ナトリウム、カリウム、アンモニウム、カルシウム、マグネシウム、鉄、銀、亜鉛、および銅に由来し；特に適切な塩は、アンモニウム、カリウム、ナトリウム、カルシウム、およびマグネシウムの塩を含む。
【００４５】
塩を生じることのできる有機塩基は、例えば、一級、二級、および三級アミン、天然起源の置換アミンを含む置換アミン、環状アミン、塩基イオン交換樹脂などを含む。特定の有機アミンは、イソプロピルアミン、ベンザチン、コリネート（ｃｈｏｌｉｎａｔｅ）、ジエタノールアミン、ジエチルアミン、リジン、メグルミン、ピペラジンおよびトロメタミンを含む。
【００４６】
さらに、それらの塩を含む本発明のペプチドは、それらの水和物の形態で得ることもできて、または、それらの結晶化のために用いられる他の溶媒を含む。
【００４７】
本発明のペプチド、すなわち、水素結合のためのドナーおよび／またはアクセプターとして作用することが可能な基を含む式（Ｉ）のペプチドは、適切な共結晶形成具を用いて共結晶を形成することが可能であってよい。これらの共結晶は、公知の共結晶形成手順によって、式（Ｉ）のペプチドから調製され得る。そのような手順は、研削、加熱、共昇華、共溶解、または、結晶化条件下で共結晶形成具と式（Ｉ）の化合物を溶液中で接触させるステップ、および、それによって形成される共結晶を単離するステップを含む。適切な共結晶形成具は、ＷＯ２００４／０７８１６３に記載されるものを含む。それ故に、本発明は、式（Ｉ）のペプチドを含む共結晶をさらに提供する。
【００４８】
当業者は、塩基性基および酸性基の両方が存在する場合、本発明のペプチドは、分子内塩、例えば、双性イオンも形成し得ることを理解する。
【００４９】
Ｙ１および／またはＹ２は、塩基性アミノ酸のカチオン性ポリマーであり、または含む。好適には、塩基性アミノ酸は、リジン、アルギニンおよびヒスチジンから選択される。そのようなポリアミノ酸は、Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈから容易に利用可能である。
【００５０】
Ｙ１および／またはＹ２は、塩基性アミノ酸のホモポリマーであってよく、または含んでよい。例えば、Ｙ１および／またはＹ２は、ポリアルギニン、ポリリジンまたはポリヒスチジンであってよい。あるいは、ポリアミノ酸は、１つまたは複数の塩基性アミノ酸のポリマーであってよく、任意選択で１つまたは複数の非塩基性アミノ酸を含んでもよい。したがって、ポリアミノ酸は、１つまたは複数の塩基性アミノ酸および任意選択で１つまたは複数の他のアミノ酸を含んでよい。そのようなコポリマーは、典型的に、塩基性アミノ酸の大部分を含む。例えば、コポリマー内のアミノ酸の５０〜１００％は、塩基性であってよい。好適には、６０〜９０％または７０〜８０％は、塩基性である。一実施態様では、コポリマー内のアミノ酸の少なくとも７５％、例えば少なくとも８５％、９５％、９８％、または９９％は、塩基性である。一実施態様では、これらの塩基性アミノ酸、またはそのような塩基性アミノ酸の群は、コポリマー内で塩基性アミノ酸のみの鎖として共に位置してよい。一般に、塩基性アミノ酸は、１つまたは複数のリジン、ヒスチジンおよびアルギニンを含む。コポリマーが、１つまたは複数の非塩基性アミノ酸を含む場合は、これらは、好ましくは、アスパラギン酸またはグルタミン酸のような酸性アミノ酸ではない。１つまたは複数の非塩基性アミノ酸は、脂肪族または芳香族側鎖を有するアミノ酸、例えば、トレオニン、プロリン、トリプトファン、セリンまたはフェニルアラニンを含んでよい。
【００５１】
任意の上記のポリアミノ酸におけるアミノ酸は、ＬまたはＤアミノ酸であってよい。
【００５２】
一実施態様では、ポリアミンは、アルギニン（Ａｒｇ）ｘまたはリジン（Ｌｙｓ）ｘのホモポリマーである。ポリ−Ｌ−アルギニンまたはポリ−Ｌ−リジン、特にポリ−Ｌ−アルギニンが適切である。典型的に、ホモポリマーは、約５００〜１５０００、例えば５００〜１００００、５００〜５０００、または５００〜１０００の分子量を有する。一実施態様では、上記式におけるｘは、３〜１００、例えば３〜５０、３〜３０または３〜２０の範囲であってよい。
【００５３】
小ペプチドホモポリマー、例えば、５００〜１５００、例えば５００〜１２５０、または７００〜１０００の範囲の分子量を有するものが、特に適切である。典型的に、小ペプチドでは、ｘは、３〜１５、例えば６〜１２の値を有する。例えば、Ｙ１および／またはＹ２は、ポリアルギニンからなる６〜１２個のアルギニン残基からなるポリアルギニンであってよく、または含んでよい。本明細書において例示されるものは、ペプチドであって、ここで、Ｙ１および／またはＹ２は、（Ａｒｇ）９であり、例えばここで、Ｙ１は不存在であり、Ｙ２は、Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ａｒｇ（配列番号９）である。
【００５４】
特に適切なペプチドは、したがって、Ｙ１および／またはＹ２＝（Ａｒｇ）９のものを含む。
【００５５】
特に適切なペプチドは、配列
ＷＹＫＷＭＫＫＨＨＲＲＲＲＲＲＲＲＲ（配列番号６）；
ＷＹＫＷＭＫＫＡＡＲＲＲＲＲＲＲＲＲ（配列番号７）；
ＷＹＫＷＭＫＫＲＲＲＲＲＲＲＲＲ（配列番号８）；
または、それらの機能的に同等の誘導体、変異体またはフラグメントを有する。
【００５６】
式（Ｉ）のペプチドにおけるアミノ酸は、ＬまたはＤアミノ酸であってよい。
【００５７】
ペプチド内の全てのアミノ酸は、同一の立体化学を有してよく、例えば、ペプチドは、Ｌ−アミノ酸のみまたはＤ−アミノ酸のみからなってよい。あるいは、ペプチドは、Ｌ−およびＤ−アミノ酸の両方の組み合わせを含んでよい。以下に説明するように、ペプチド内のＬ−およびＤ−アミノ酸の数および位置を変更することによって、生じるペプチドの安定性、例えば、体への投与後のペプチドの安定性に影響を与えることが可能であり得る。一実施態様では、ペプチドの少なくともＮ末−およびＣ末−ｍｏｓｔのアミノ酸はＤ構造であり、一方で、残りのアミノ酸はＬ構造である。
【００５８】
任意選択で、１、２、３、４またはそれより多くのさらなるアミノ酸も、Ｄ構造である。任意選択で、位置Ｘ７またはそれに隣接する１つまたは複数のアミノ酸は、Ｄ構造である。任意選択で、位置Ｘ２〜Ｘ３のアミノ酸は、Ｌ構造である。
【００５９】
ＰＢＸモジュレーターペプチドの安定性は、ペプチド内に１つまたは複数のＤ−アミノ酸を組み込むことによって改善され得ることが知られている。特に、血漿におけるペプチドの半減期は、ペプチドの少なくともＮ末およびＣ末の位置にＤアミノ酸を用いることによって改善され得る。この改善された半減期は、様々な細胞透過性配列を含むペプチドに見られる。
【００６０】
したがって、第二の実施態様では、本発明のペプチドは、式（ＩＩ）のアミノ酸配列（配列番号２）：
Ｙ３Ｘ１Ｘ２ＫＷＸ３Ｘ４Ｘ５Ｘ６Ｘ７Ｙ４（ＩＩ）
ここで
配列Ｘ１〜Ｘ７は、少なくとも７個のアミノ酸を含むアミノ酸配列であり（任意選択で、ここに規定される９個のアミノ酸位置の１つまたは複数の間で、１または２個のアミノ酸残基によって中断され得る）；
Ｘ１は、Ｗ、Ｔ、ＰＥ、ＫＱＩ、ＶＶ、ＰＱＴ、Ｈ、ＲＩおよび不存在から選択されて；
Ｘ２は、芳香族側鎖を有するアミノ酸またはシステインであり；
Ｘ３は、疎水性アミノ酸であり
Ｘ４は、荷電側鎖を有するアミノ酸であり；
Ｘ５は、塩基性側鎖を有するアミノ酸であり；
Ｘ６は、アミノ酸または不存在であり；
Ｘ７は、１つまたは複数のアミノ酸または不存在であり；および
Ｙ３およびＹ４は、Ｙ３およびＹ４の少なくとも一方は存在するという条件で、それぞれ、不存在または細胞透過性部分を含む配列を含むペプチドのいずれかであり；
ここで、前記ペプチドの少なくともＮ末およびＣ末アミノ酸は、Ｄ構造である；
または、その機能的に同等の誘導体、変異体またはフラグメント
を含み、またはからなる。
【００６１】
一実施態様では、Ｘ１は、Ｗ、Ｔ、ＰＥ、ＫＱＩ、ＶＶ、ＰＱＴ、ＨおよびＲＩから選択される。さらなる実施態様では、Ｘ１は、Ｗである。
【００６２】
一実施態様では、Ｘ２は、Ｃ、Ｙ、ＦおよびＷから選択される。さらなる実施態様では、Ｘ２は、Ｙである。
【００６３】
一実施態様では、Ｘ３は、Ｍ、Ｉ、ＶおよびＬから選択される。さらなる実施態様では、Ｘ２は、Ｍである。
【００６４】
一実施態様では、Ｘ４は、Ｋ、Ｄ、ＲおよびＨから選択される。さらなる実施態様では、Ｘ４は、Ｋ、ＤおよびＲから選択される。さらなる実施態様では、Ｘ４は、ＫまたはＲである。さらに、さらなる実施態様では、Ｘ４は、Ｋである。
【００６５】
一実施態様では、Ｘ５は、ＫまたはＲである。さらなる実施態様では、Ｘ５は、Ｋである。
【００６６】
一実施態様では、Ｘ６は、Ｋ、Ｒ、Ｅ、Ｈ、Ｄ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、ＴおよびＡから選択される。さらなる実施態様では、Ｘ６は、ＨまたはＡである。さらに、さらなる実施態様では、Ｘ６は、Ａである。代替の実施態様では、Ｘ６は、不存在である。
【００６７】
一実施態様では、Ｘ７は、Ｋ、Ｒ、Ｅ、Ｈ、Ｄ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、ＡおよびＧから選択される。さらなる実施態様では、Ｘ７は、Ｈ、ＡまたはＧである。さらに、さらなる実施態様では、Ｘ７は、ＨまたはＡである。さらに、さらなる実施態様では、Ｘ７は、Ａである。代替の実施態様では、Ｘ７は、不存在である。
【００６８】
上記の配列において、Ｘ１〜Ｘ４は、ヘキサペプチド配列を形成する。
【００６９】
一実施態様では、式（ＩＩ）のペプチドは、式：
Ｙ３ＷＹＫＷＭＫＫＨＨＹ４（配列番号１６）
または、その機能的に同等の誘導体、変異体またはフラグメントを有し、ここで、Ｙ３およびＹ４は、本明細書において定義されるとおりである。
【００７０】
配列Ｘ１〜Ｘ７は、ＷＹＫＷＭＫＫＨＨ（配列番号１０）またはＷＹＫＷＭＫＫＨＨＲ（配列番号１１）であってよく、または、Ｘ１〜Ｘ７は、配列ＷＹＫＷＭＫＫＨＨ（配列番号１０）の変異体であってよく、例えば、変異体は、１、２、３、４またはそれより多くのアミノ酸が、上記の式（Ｉ）の制約内で変化する。例えば、位置Ｘ１のＷは、不存在であってよく、または、Ｔ、ＰＥ、ＫＱＩ、ＶＶ、ＰＱＴ、ＨおよびＲＩから選択されるいずれか１つで置換されてよく；位置Ｘ２のＹは、システインまたは芳香族側鎖を有する別のアミノ酸（具体的にはＣ、ＦおよびＷから選択される、より具体的にはＣ）によって置換されてよく；Ｘ３は、別の疎水性アミノ酸（具体的にはＬ、ＩおよびＶから選択される）によって置換されてよく；Ｘ４のＫは、荷電側鎖を有する別のアミノ酸（具体的にはＤ、ＲおよびＨから選択される、より具体的にはＲ）によって置換されてよく；位置Ｘ５のＫは、塩基性側鎖を有する別のアミノ酸、具体的にはＲによって置換されてよく；位置Ｘ６のＨは、別のアミノ酸（具体的にはＫ、Ｒ、Ｅ、Ｄ、Ｎ、Ｑ、ＳおよびＴから選択される、より具体的にはＴ）によって置換されてよく；位置Ｘ７のＨは、任意の他の１つまたは複数のアミノ酸によって置換されてよく、または不存在であってよく、例えば、Ｘ７は、Ｔまたは不存在であってよい。任意の１、２、３、４、５、６、または７個のこれらの置換を行なって、上記の式（ＩＩ）の範囲内に入る代替のペプチドを作製し得る。
【００７１】
別の実施態様では、式（ＩＩ）のペプチドは、式：
Ｙ３ＷＹＫＷＭＫＫＡＡＹ４（配列番号１７）
または、その機能的に同等の誘導体、変異体またはフラグメントを有し、ここで、Ｙ３およびＹ４は、本明細書において定義されるとおりである。
【００７２】
配列Ｘ１〜Ｘ７は、ＷＹＫＷＭＫＫＡＡ（配列番号１２）またはＷＹＫＷＭＫＫＡＡＲ（配列番号１３）であってよく、または、Ｘ１〜Ｘ７は、配列ＷＹＫＷＭＫＫＡＡ（配列番号１２）の変異体であってよく、例えば、変異体は、１、２、３、４またはそれより多くのアミノ酸が、上記の式（ＩＩ）の制約内で変化する。例えば、位置Ｘ１のＷは、不存在であってよく、または、Ｔ、ＰＥ、ＫＱＩ、ＶＶ、ＰＱＴ、ＨおよびＲＩから選択されるいずれか１つで置換されてよく；位置Ｘ２のＹは、システインまたは芳香族側鎖を有する別のアミノ酸（具体的にはＣ、ＦおよびＷから選択される、より具体的にはＣ）によって置換されてよく；Ｘ３は、別の疎水性アミノ酸（具体的にはＬ、ＩおよびＶから選択される）によって置換されてよく；Ｘ４のＫは、荷電側鎖を有する別のアミノ酸（具体的にはＤ、ＲおよびＨから選択される、より具体的にはＲ）によって置換されてよく；位置Ｘ５のＫは、塩基性側鎖を有する別のアミノ酸、具体的にはＲによって置換されてよく；位置Ｘ６のＡは、別のアミノ酸（具体的にはＫ、Ｒ、Ｅ、Ｄ、Ｎ、Ｑ、ＳおよびＴから選択される、より具体的にはＴ）によって置換されてよく；位置Ｘ７のＡは、任意の他の１つまたは複数のアミノ酸によって置換されてよく、または不存在でよく、例えば、Ｘ７は、Ｔまたは不存在であってよい。任意の１、２、３、４、５、６、または７個のこれらの置換を行なって、上記の式（ＩＩ）の範囲内に入る代替のペプチドを作製し得る。
【００７３】
別の実施態様では、式（ＩＩ）のペプチドは、式：
Ｙ３ＷＹＫＷＭＫＫＹ４（配列番号１８）
または、その機能的に同等の誘導体、変異体またはフラグメントを有し、ここで、Ｙ３およびＹ４は、本明細書において定義されるとおりである。
【００７４】
配列Ｘ１〜Ｘ７は、ＷＹＫＷＭＫＫ（配列番号１４）またはＷＹＫＷＭＫＫＲ（配列番号１５）であってよく、または、Ｘ１〜Ｘ５は、配列ＷＹＫＷＭＫＫ（配列番号１４）の変異体であってよく、例えば、変異体は、１、２、３、４またはそれより多くのアミノ酸が、上記の式（ＩＩ）の制約内で変化する。例えば、位置Ｘ１のＷは、不存在であってよく、または、Ｔ、ＰＥ、ＫＱＩ、ＶＶ、ＰＱＴ、ＨおよびＲＩから選択されるいずれか１つで置換されてよく；位置Ｘ２のＹは、システインまたは芳香族側鎖を有する別のアミノ酸（具体的にはＣ、ＦおよびＷから選択される、より具体的にはＣ）によって置換されてよく；Ｘ３は、別の疎水性アミノ酸（具体的にはＬ、ＩおよびＶから選択される）によって置換されてよく；Ｘ４のＫは、荷電側鎖を有する別のアミノ酸（具体的にはＤ、ＲおよびＨから選択される、より具体的にはＲ）によって置換されてよく；位置Ｘ５のＫは、塩基性側鎖を有する別のアミノ酸、具体的にはＲによって置換されてよい。任意の１、２、３、４、または５個のこれらの置換を行なって、上記の式（ＩＩ）の範囲内に入る代替のペプチドを作製し得る。
【００７５】
一実施態様では、アミノ酸置換は、位置Ｘ２、およびＸ３〜Ｘ７で生じる。さらなる実施態様では、アミノ酸置換は、位置Ｘ３〜Ｘ７の１、２、３、または４個で生じる。
【００７６】
例えば、一実施態様では、上記の式（ＩＩ）における残基Ｘ１〜Ｘ７は、以下であってよい：
Ｘ１＝Ｗ；Ｘ２＝ＹまたはＣ；Ｘ３＝Ｍ、Ｉ、ＶまたはＬ；Ｘ４＝Ｋ、ＲまたはＤ；Ｘ５＝ＫまたはＲ；Ｘ６＝Ｈ、Ａ、Ｔまたは不存在；Ｘ７＝任意のアミノ酸または不存在；
Ｘ１＝Ｗ；Ｘ２＝ＹまたはＣ；Ｘ３＝Ｍ、Ｉ、ＶまたはＬ；Ｘ４＝Ｋ、ＲまたはＤ；Ｘ５＝ＫまたはＲ；Ｘ６＝Ｈ、Ａ、Ｔまたは不存在；Ｘ７＝Ｈ、ＨＲ、Ａ、ＡＲ、Ｔ、Ｇまたは不存在；
Ｘ１＝Ｗ；Ｘ２＝Ｙ；Ｘ３＝Ｍ、Ｉ、ＶまたはＬ；Ｘ４＝ＫまたはＲ；Ｘ５＝ＫまたはＲ；Ｘ６＝Ｈ、Ａ、Ｔまたは不存在；Ｘ７＝任意のアミノ酸または不存在；
Ｘ１＝Ｗ；Ｘ２＝Ｙ；Ｘ３＝Ｍ、Ｉ、ＶまたはＬ；Ｘ４＝ＫまたはＲ；Ｘ５＝ＫまたはＲ；Ｘ６＝Ｈ、Ａ、Ｔ；Ｘ７＝Ｈ、ＨＲ、Ａ、ＡＲ、Ｔ、Ｇまたは不存在。
【００７７】
任意のこれらの変異体Ｘ１〜Ｘ７配列は、本明細書に記載の任意のＹ３および／またはＹ４残基と組み合わせて用いられ得る。例えば、本明細書に記載の任意のＸ１〜Ｘ７配列は、Ｃ末、Ｎ末、または両末端に付着された、（Ａｒｇ）６−１２ペプチド、例えば、（Ａｒｇ）７、（Ａｒｇ）８または（Ａｒｇ）９ペプチドとともに用いられ得る。あるいは、本明細書に記載の任意のＸ１〜Ｘ７配列は、Ｃ末、Ｎ末、または両末端に付着された、以下に記載されるもののようなペネトラチンペプチドとともに用いられ得る。
【００７８】
上記に記載される「細胞透過性部分」は、それが付着される分子が細胞に入るのを助けるまたは促進する、分子、分子の構造または集合を指す。
【００７９】
様々なそのような部分が当技術分野でよく知られていて、ペプチド、例えば、ペネトラチン、ｔａｔ由来タンパク質、細胞が入るのを可能にするペプチドシグナル配列、そのようなペプチドシグナルを含むペプチド、ならびに、トランスポータンまたはモデル両親媒性ペプチドのような合成および／またはキメラ細胞透過性ペプチドを含む（Ｌｉｎｄｇｒｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，２０００，ＴｉＰＳ，２１，ｐ９９−１０３、および、Ｄｅｒｏｓｓｉ  ｅｔ  ａｌ．，１９９８，Ｔｒｅｎｄｓ  Ｃ．Ｂｉｏｌ．，８，ｐ８４−８７）。細胞に入ることが可能な非ペプチド分子または物質もまた用いられ得る。好適には、細胞透過性部分は、受容体非依存性のメカニズムによって作用する。本発明のペプチドのような分子が、細胞に入るのを可能にするまたは助けることのできる任意の物質が用いられ得る。部分は、一般に、様々な細胞型に入ることのできる作用物質であってよく、または、治療される特定の細胞型に特異的または標的化されてよい。
【００８０】
細胞透過性部分は、ペプチドＸ１〜Ｘ７に直接結合されてよく、または、１つまたは複数のアミノ酸のリンカー配列を介して付着されてよい。リンカー配列は、位置Ｘ７にアミノ酸（単数または複数）を含んでよい。細胞透過性部分は、あるいは、ペプチドＸ１〜Ｘ７と関連してよく、例えば、リポフェクションのためのリポソームまたはポリカチオンまたはカチオン性脂質を用いることにより、例えば、前記ペプチドを含む複合体をカプセル化または形成してよい。
【００８１】
本明細書において用いられる「〜と関連する」は、ペプチドに付着または何らかの方法で結合される部分を指す。
【００８２】
一実施態様では、Ｙ３および／またはＹ４は、上述の塩基性アミノ酸のカチオン性ポリマーを含んでよく、またはからなってよい。上記に記載の任意のそのようなカチオン性ポリマーは、本発明のこの実施態様において用いられ得る。例えば、Ｙ３および／またはＹ４は、（Ａｒｇ）９のようなポリアルギニン配列を含んでよく、またはからなってよい。
【００８３】
代替の実施態様では、前記細胞透過性部分は、以下の一般式（配列番号３０）
Ｘ９ＱＸ１０Ｘ１１Ｘ１２ＷＦＱＮＸ１３Ｘ１４ＭＸ１５ＷＸ１６Ｘ１７
を有するペネトラチン配列に基づくペプチドを含み、またはからなり、
ここで
Ｘ９は、ＲまたはＱまたは不存在であり；
Ｘ１０、Ｘ１２は、それぞれ独立に、ＩまたはＬであり；および
Ｘ１１、Ｘ１３、Ｘ１４、Ｘ１５、Ｘ１６およびＸ１７は、それぞれ独立に、ＫまたはＲである。
【００８４】
好適には、ペネトラチン配列は、以下の形態を有する：
ＱＩＫＩＷＦＱＮＲＲＭＫＷＫＫ（配列番号７０）；
ＱＩＲＩＷＦＱＮＲＲＭＫＷＫＫ（配列番号７１）；
ＱＩＫＩＷＦＱＮＫＲＭＫＷＫＫ（配列番号７２）；
ＱＩＫＩＷＦＱＮＫＫＭＫＷＫＫ（配列番号７３）；
ＱＩＲＩＷＦＱＮＲＫＭＫＷＫＫ（配列番号７４）；
ＱＩＲＩＷＦＱＮＲＲＭＲＷＫＫ（配列番号７５）；
ＱＩＲＩＷＦＱＮＲＲＭＫＷＲＫ（配列番号７６）；
ＱＩＲＩＷＦＱＮＲＲＭＫＷＫＲ（配列番号７７）；
ＱＩＲＩＷＦＱＮＲＲＭＫＷＲＲ（配列番号７８）；
ＱＩＲＩＷＦＱＮＲＲＭＫＷＫＫ（配列番号７９）；
ＱＩＫＩＷＦＱＮＲＲＭＫＷＲＫ（配列番号８０）；
ＱＩＲＩＷＦＱＮＫＲＭＫＷＲＫ（配列番号８１）；
ＱＩＫＬＷＦＱＮＲＲＭＫＷＫＫ（配列番号８２）；
ＱＬＫＬＷＦＱＮＲＲＭＫＷＫＫ（配列番号８３）；または
ＱＬＲＩＷＦＱＮＲＲＭＫＷＫＫ（配列番号８４）。
【００８５】
特に適切なペプチドは、配列
ＷＹＫＷＭＫＫＨＨＲＱＩＫＩＷＦＱＮＲＲＭＫＷＫＫ（配列番号３１）
または、その機能的に同等の誘導体、変異体またはフラグメント
を有する。
【００８６】
代替のペプチドは、配列ＷＹＫＷＭＫＫＨＨＲＱＩＫＩＷＦＱＮＲＲＭＫＷＫ（配列番号３４）を有する。
【００８７】
特に適切なペプチドは、配列
ＷＹＫＷＭＫＫＡＡＲＱＩＫＩＷＦＱＮＲＲＭＫＷＫＫ（配列番号３２）を有する。
【００８８】
代替のペプチドは、配列ＷＹＫＷＭＫＫＡＡＲＱＩＫＩＷＦＱＮＲＲＭＫＷＫ（配列番号３５）を有する。
【００８９】
特に適切なペプチドは、配列
ＷＹＫＷＭＫＫＲＱＩＫＩＷＦＱＮＲＲＭＫＷＫＫ（配列番号３３）を有する。
【００９０】
代替のペプチドは、配列ＷＹＫＷＭＫＫＲＱＩＫＩＷＦＱＮＲＲＭＫＷＫ（配列番号３６）を有する。
【００９１】
式（ＩＩ）のペプチドにおいて、２以上のアミノ酸は、Ｄ構造で存在する。少なくともＮ末およびＣ末アミノ酸は、Ｄ構造で存在する。１、２、３、４、５、またはそれより多くのさらなるアミノ酸がＤアミノ酸であってもよい。例えば、位置Ｘ７またはそれに隣接するアミノ酸（単数または複数）は、Ｄアミノ酸（単数または複数）であってよく、または含んでよい。ペプチド内の全てのアミノ酸が、Ｄ構造であってよい。一実施態様では、Ｎ末およびＣ末アミノ酸は、Ｄアミノ酸であり、残りのアミノ酸はＬアミノ酸である。任意選択で、位置Ｘ２〜Ｘ３のアミノ酸は、Ｌ構造である。一実施態様では、少なくともＮ末およびＣ末アミノ酸は、Ｄアミノ酸であり、位置Ｘ２〜Ｘ３のアミノ酸は、Ｌアミノ酸である。
【００９２】
その「機能的に同等の」誘導体、変異体またはフラグメントは、本発明のペプチドに関連する、またはそれから得られるペプチドを指し、ここで、アミノ酸配列は、例えば、改変アミノ酸の使用によって、または、単一または多数のアミノ酸（例えば、１〜１０、例えば１〜５、特に１または２残基での）置換、付加および／または欠失によって、改変されているが、それにもかかわらず、機能性活性を保持する。例えば、配列番号６、７、８、３１、３２および３３の特定のペプチドの機能的に同等の誘導体は、ＨＯＸミミックとして作用する能力を保持し得て、およびしたがって、ＨＯＸタンパク質およびＰＢＸタンパク質（特にＰＢＸｌまたはＰＢＸ２）の間の相互作用と拮抗する。そのような相互作用は、一般的な実験的技術を用いて評価され得る。１つのそのような方法は、２００７年１月４日、ＷＯ２００７／００６０１として発行された国際特許出願ＰＣＴ／ＧＢ２００６／００２３９０に示されて、その内容は、全ての目的に関してそれらの全体に援用される。（Ａｒｇ）ｘ配列またはペネトラチン配列の機能的に同等の誘導体は、例えば、付着されたペプチドが細胞に入るのを可能にすることによって、細胞透過性部分としての活性を保持し得る。そのような能力は、実施例１に示されるもののような一般に公知の技術によって評価されてもよい。
【００９３】
配列番号６、７または８のペプチドの適切な機能的に同等の誘導体、変異体またはフラグメントは、配列番号１の配列の範囲内に入り、または含む。（Ａｒｇ）９の適切な機能的に同等の誘導体、変異体またはフラグメントは、上述のＹ１および／またはＹ２の範囲内に入る。
【００９４】
配列番号３１、３２または３３のペプチドの適切な機能的に同等の誘導体、変異体またはフラグメントは、配列番号２の配列の範囲内に入り、または含む。ペネトラチン配列の適切な機能的に同等の誘導体、変異体またはフラグメントは、配列番号３０の配列の範囲内に入り、または含む。
【００９５】
「付加」の意味の中では、アミノおよび／またはカルボキシル末端融合タンパク質またはポリペプチドである変異が含まれて、ペプチド配列に融合されたさらなるタンパク質またはポリペプチドを含む。
【００９６】
上述したように、ペプチドは、好ましくはＮ末またはＣ末において、さらなる部分によって置換され得る。そのような部分は、ペプチドの機能、その標的化またはその合成、捕捉または識別、例えばラベル（例えばビオチン）または脂質分子を助けるために付加され得る。そのような部分は、あるいは、ペプチド自体の中に見られ得る。例えば、ラベルのような部分は、ペプチド内に内部に位置するアミノ酸に付着され得る。例えば、Ｘ７は、そのような部分の全てまたは一部を含んでよく、または、前記部分は、Ｙ１、Ｙ２、Ｙ３および／またはＹ４の一部を形成してよく、またはそれらの中に位置してよい。
【００９７】
「置換」変異体は、好ましくは、１つまたは複数のアミノ酸の、同じ数のアミノ酸との置換を伴い、保存的アミノ酸置換をする。例えば、アミノ酸は、似た特性を有する代替のアミノ酸、例えば、別の塩基性アミノ酸、別の荷電アミノ酸、別の親水性アミノ酸または別の脂肪族アミノ酸によって置換され得る。主なアミノ酸の一部の特性は、表１のとおりである：
【００９８】
【表１】
2018533570.tif 000002
【００９９】
好適には、「誘導体」または「変異体」は、天然起源のアミノ酸の代わりに、配列内に現れるアミノ酸がその構造的アナログであるものを含む。配列において用いられるアミノ酸は、ペプチドの機能が著しく悪影響を受けない限り、誘導体化または改変されてもよい（例えば標識）。
【０１００】
上述の誘導体および変異体は、ペプチドの合成中に、または生産後の改変によって、または、ペプチドが組み換えの形態である場合、部位特異的突然変異誘発、ランダム突然変異誘発、または酵素的切断および／または核酸のライゲーションの公知の技術を用いて、調製されてよい。
【０１０１】
本発明に係る機能的に同等の「フラグメント」は、例えばＮおよび／またはＣ末からの１つまたは複数のアミノ酸の除去によるトランケーションによって作られ得る。そのようなフラグメントは、配列番号１または２の配列に由来してよく、または、上述の機能的に同等のペプチドに由来してよい。好適には、そのようなフラグメントは、６〜３０残基の長さ、例えば、６〜２５または１０〜１５残基である。
【０１０２】
好適には、本発明に係る機能性変異体は、例えば、配列番号６、７、８、３１、３２または３３に対して、７０％を超える、例えば７５または８０％、好ましくは８５％を超える、例えば９０または９５％を超えるホモロジーを有するアミノ酸配列を有する（この後に記載の試験による）。
【０１０３】
アミノ酸配列との関連において、「配列同一性」は、以下のパラメーターでＣｌｕｓｔａｌＷ（Ｔｈｏｍｐｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９９４、上記）を用いて評価した場合に、示された値を有する配列を指す：
【０１０４】
ペアワイズアライメントパラメーター−方法：正確な、マトリックス：ＰＡＭ、ギャップオープンペナルティー：１０．００、ギャップエクステンションペナルティー：０．１０；
マルチプルアライメントパラメーター−マトリックス：ＰＡＭ、ギャップオープンペナルティー：１０．００、遅れに関する同一性（％）：３０、ペナライズエンドギャップ：ｏｎ、Ｇａｐ分離距離：０、ネガティブマトリックス：ｎｏ、ギャップエクステンションペナルティー：０．２０、残基−特異的ギャップペナルティー：ｏｎ、親水性ギャップペナルティー：ｏｎ、親水性残基：ＧＰＳＮＤＱＥＫＲ。特定の残基における配列同一性は、単純に誘導体化されている同一の残基を含むことが意図される。
【０１０５】
本明細書に定義される本発明のペプチドは、化学的に改変、例えば、翻訳後に改変され得る。例えば、それらはグリコシル化されてよく、または、改変されたアミノ酸残基を含んでよい。それらは、ポリペプチドとのコンジュゲートおよびアミドを含む様々な形態のポリペプチド誘導体であってよい。
【０１０６】
化学的に改変されたペプチドは、機能性側基の反応によって化学的に誘導体化された１つまたは複数の残基を有するものも含む。そのような誘導体化された側基は、アミン塩酸塩、ｐ−トルエンスルホニル基、カルボベンゾキシ基、ｔ−ブチルオキシカルボニル基、クロロアセチル基、およびホルミル基を形成するために誘導体化されているものを含む。フリーのカルボキシル基を誘導体化して、塩、メチルおよびエチルエステルまたは他のタイプのエステルまたはヒドラジドが形成され得る。フリーのヒドロキシル基を誘導体化して、Ｏ−アシルまたはＯ−アルキル誘導体が形成され得る。ヒスチジンのイミダゾール窒素を誘導体化して、Ｎ−ｉｍ−ベンジルヒスチジンが形成され得る。
【０１０７】
環化ペプチド、すなわち、共有結合で結合されて環を生じる本発明のペプチドもまた、化学的に改変されたペプチドとして含まれる。典型的に、アミノ末端とカルボキシ末端（いわゆるヘッド−トゥ−テールの環化）、アミノ末端と側鎖（いわゆるヘッド−トゥ−側鎖の環化）、カルボキシ末端と側鎖（いわゆる側鎖−トゥ−テールの環化）、または、側鎖と側鎖（いわゆる側鎖−トゥ−側鎖の環化）は、共有結合で結合されて環状ペプチドを形成し得る。ヘッド−トゥ−テールの環状ペプチドは、典型的に、アミド結合の形成によって形成され得る。側鎖−トゥ−側鎖のサイクルは、典型的に、環状ペプチド内のＣｙｓ−Ｃｙｓジスルフィド架橋形成またはアミド結合形成を介して形成され得る。あるいは、アミノ末端、カルボキシ末端または側鎖は、共有結合でペプチド主鎖に結合されて環状ペプチドを形成し得る。
【０１０８】
２０個の標準的なアミノ酸の１つまたは複数の天然起源アミノ酸誘導体を含むものもまた、化学的に改変されたペプチドとして含まれる。
【０１０９】
例えば、４−ヒドロキシプロリンは、プロリンに関して置換され得て、または、ホモセリンは、セリンに関して置換され得る。
【０１１０】
本発明のペプチドは、露出ラベルを持っていてよい。適切なラベルは、放射性同位体、蛍光ラベル、酵素ラベル、または、ビオチンのような他のタンパク質ラベルを含む。
【０１１１】
本明細書に提供される任意の式は、ペプチドの非標識形態ならびに同位体的に標識された形態を表わすことも意図する。同位体的に標識されたペプチドは、１つまたは複数の原子が、選択された原子質量または質量数を有する原子によって置換されていることを除いて、本明細書において与えられる式によって表される構造を有する。本発明のペプチドに組み込まれ得る同位体の例は、水素、炭素、窒素、酸素、亜リン酸、フッ素、および塩素の同位体、例えば、それぞれ、２Ｈ、３Ｈ、１１Ｃ、１３Ｃ、１４Ｃ、１５Ｎ、１８Ｆ  ３１Ｐ、３２Ｐ、３５Ｓ、３６Ｃｌ、１２５Ｉを含む。本発明は、例えば、３Ｈ、および１４Ｃのような放射性同位体が中に存在するもののような、本明細書に定義される様々な同位体的に標識されたペプチドを含む。そのような同位体的に標識されたペプチドは、代謝試験（１４Ｃを用いる）、反応速度論試験（例えば、２Ｈまたは３Ｈを用いる）、検出またはイメージング技術、例えば、薬物または基質組織分配アッセイを含む単一光子放出型コンピュータ断層撮影（ＳＰＥＣＴ）または陽電子放射断層撮影（ＰＥＴ）において、または、患者の放射性治療において、有用である。特に、１８Ｆまたは標識ペプチドは、ＰＥＴまたはＳＰＥＣＴ試験に特に望ましくあり得る。本発明の同位体的に標識されたペプチドおよびそのプロドラッグは、一般に、スキームまたは実施例に開示される手順、および、同位体的に標識されていない試薬に関して容易に利用可能な、同位体的に標識された試薬を置換することによる以下に記載の調製を行なうことによって、調製され得る。
【０１１２】
本発明の同位体的に標識されたペプチドは、当業者に公知の従来技術によって、または、以前に採用された標識されていない試薬の代わりに適切な同位体的に標識された試薬を用いた本明細書に記載のものと類似する方法によって、一般に調製され得る。
【０１１３】
本発明に係る薬学的に許容できる溶媒和物は、結晶化の溶媒が同位体的に置換され得るもの、例えばＤ２Ｏ、ｄ６−アセトン、ｄ６−ＤＭＳＯを含む。
【０１１４】
本発明に係る使用のための上述のペプチドは、遺伝子学または化学的手段を含む従来の合成モードによって調製され得る。
【０１１５】
固相メリフィールド型合成のような合成技術は、純度、抗原特異性、不要な副産物がないこと、および、生産の容易性の理由のために、好ましくあり得る。固相ペプチド合成のための適切な技術は、当業者によく知られている（例えば、Ｍｅｒｒｉｆｉｅｌｄ  ｅｔ  ａｌ．，１９６９，Ａｄｖ．Ｅｎｚｙｍｏｌ  ３２，２２１−９６、および、Ｆｉｅｌｄｓ  ｅｔ  ａｌ．，１９９０，Ｉｎｔ．Ｊ．Ｐｅｐｔｉｄｅ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｒｅｓ，３５，１６１−２１４を参照）。化学的合成は、末端アミノ酸の官能基の選択的脱保護および選択的に保護されたアミノ酸残基のカップリングの反応のサイクルセットを含む当技術分野でよく知られている方法によって、その後に、最後に全ての官能基の完全な脱保護によって、行なわれ得る。
【０１１６】
合成は、溶液中で、または当技術分野で知られている適切な固相を用いて固体支持体上で、行なわれ得る。
【０１１７】
本発明のペプチドは医薬組成物で用いることが意図されるので、それらはそれぞれ、好ましくは実質的に純粋な形態、例えば少なくとも６０％純粋、より好適には少なくとも７５％純粋、好ましくは少なくとも８５％、特に、少なくとも９８％純粋で提供されることが容易に理解される（％は、重量に関する重量ベースである）。化合物の不純な製剤は、医薬組成物において用いられるより純粋な形態を調製するために用いられ得て；これらのより純粋でない化合物の製剤は、本発明の化合物の少なくとも１％、より好適には少なくとも５％、好ましくは１０〜５９％を含むべきである。
【０１１８】
代替の実施態様では、本発明のペプチドは、それをコードしていて発現することが可能なポリヌクレオチドから生産され得て、またはその形態で送達され得る。そのようなポリヌクレオチドは、例として、Ｓａｍｂｒｏｏｋ  ｅｔ  ａｌ（１９８９，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ−ａ  ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  ｍａｎｕａｌ；Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｐｒｅｓｓ）に記載の当技術分野でよく知られている方法に従って合成され得る。そのようなポリヌクレオチドは、本発明のペプチドの生産において、インビトロまたはインビボで用いられ得る。そのようなポリヌクレオチドは、したがって、癌または本明細書に記載の他の疾患または症状の治療において投与または使用され得る。
【０１１９】
また、本発明は、そのようなポリヌクレオチド配列を含む発現ベクターも含む。そのような発現ベクターは、分子生物学の分野において日常的に構築されて、本発明のペプチドの発現を可能にするために、例えば、プラスミドＤＮＡおよび適切なイニシエーター、プロモーター、エンハンサー、および、必要であり得て正しい方位で置かれたポリアデニル化シグナルのような他のエレメントの使用を伴ってよい。他の適切なベクターは、当業者に明らかである。この点についてさらなる例として、我々は、Ｓａｍｂｒｏｏｋ  ｅｔ  ａｌ（上記）を言及する。
【０１２０】
したがって、ペプチドは、そのようなベクターを細胞に送達して、ベクターからの転写を生じさせることによって提供され得る。好適には、本発明の、またはベクターにおける本発明での使用のための、ポリヌクレオチドは、宿主細胞によってコード配列の発現を提供することが可能な制御配列に動作可能に連結されて、すなわち、ベクターは、発現ベクターである。用語「動作可能に連結され」は、並置を指し、ここで、記載されるコンポーネントは、それらの意図された様式でそれらが機能するのを可能にする関係である。コード配列に「動作可能に連結され」たプロモーターのような調節配列は、コード配列の発現が、調節配列と適合する条件下で達成されるような方法で配置される。
【０１２１】
ベクターは、例えば、複製起点、任意選択で前記ポリヌクレオチドの発現のためのプロモーター、および、任意選択でプロモーターのレギュレーターとともに提供される、プラスミド、ウイルスまたはファージベクターであってよい。ベクターは、１つまたは複数の選択可能なマーカー遺伝子、細菌性プラスミドの場合には例えばアンピシリン耐性遺伝子、または、真菌ベクターについては耐性遺伝子を含んでよい。ベクターは、例えばＤＮＡまたはＲＮＡの生産のためにインビトロで用いられてよく、または、哺乳類の宿主細胞のような宿主細胞をトランスフェクトまたは形質転換するために用いられてよい。また、ベクターは、インビボで用いられるようにも適用され得て、例えば、ポリペプチドのインビボ発現を可能にする。
【０１２２】
プロモーターおよび他の発現制御シグナルは、発現がデザインされる宿主細胞と適合するように選択され得る。例えば、酵母プロモーターは、Ｓ．ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ  ＧＡＬ４およびＡＤＨプロモーター、Ｓ．ｐｏｍｂｅ  ｎｍｔ１およびａｄｈプロモーターを含む。哺乳類のプロモーター、例えばｂ−アクチンプロモーターが用いられてよい。組織特異的プロモーターが特に好ましい。哺乳類のプロモーターは、カドミウムのような重金属に応答して誘導され得るメタロチオネインプロモーターを含む。また、ＳＶ４０ラージＴ抗原プロモーター、アデノウイルスプロモーター、モロニーミューリン白血病ウイルスの長い末端反復（ＭＭＬＶ  ＬＴＲ）、ラウス肉腫ウイルス（ＲＳＶ）ＬＴＲプロモーター、ＳＶ４０プロモーター、ヒトサイトメガロウイルス（ＣＭＶ）ＩＥプロモーター、アデノウイルス、ＨＳＶプロモーター（ＨＳＹ  ＩＥプロモーターなど）、またはＨＰＶプロモーター、特に、ＨＰＶ上流調節領域（ＵＲＲ）のようなウイルスプロモーターも用いられ得る。これらのプロモーターは全て、当該分野において容易に利用可能である。
【０１２３】
また、本発明は、本発明のペプチドを発現するように改変されている細胞も含む。そのような細胞は、一過的に、または好ましくは、哺乳類細胞または昆虫細胞のような安定したより高度の真核生物細胞株、酵母のようなより低度の真核生物細胞、または、細菌細胞のような原核生物細胞を含む。本発明のペプチドをコードするベクターの挿入によって改変され得る細胞の特定の例は、哺乳類のＨＥＫ２９３Ｔ、ＣＨＯ、ＨｅＬａおよびＣＯＳ細胞を含む。好適には、選択される細胞株は、安定なだけでなく、ポリペプチドの細胞表面発現および成熟したグリコシル化も可能にするものである。発現は、形質転換された卵母細胞において達成され得る。適切なペプチドは、トランスジェニック非ヒト動物、特にマウスの細胞内に発現され得る。本発明のペプチドを発現しているトランスジェニック非ヒト動物は、本発明の範囲内に含まれる。また、本発明のペプチドは、アフリカツメガエルの卵母細胞またはメラニン保有細胞（ｒｎｅｌａｎｏｐｈｏｒｅｓ）においても発現され得る。
【０１２４】
また、本発明は、以前に定義されたペプチドに向けられた、すなわち、ペプチド上に存在するエピトープに結合して、したがって、そのようなペプチドに対して選択的および特異的に結合する、抗体（モノクローナルまたはポリクローナル）およびそれらの抗原結合フラグメント（例えばＦ（ａｂ）２、ＦａｂおよびＦｖフラグメント、すなわち、抗原結合部位を含む、抗体の「可変」領域のフラグメント）にも拡張されて、それは、本発明の方法で使用され得る。
【０１２５】
上述の本発明のペプチドは、ＰＢＸとＨＯＸとの間の相互作用を特異的にブロックすることが可能である。本発明のペプチドは、様々な癌細胞のタイプの増殖を切除または低減し得る。これらの変化に伴い、多くの公知のＨＯＸ標的の下方制御が観察され得る。以下により詳細に説明するように、本発明のペプチドは、したがって、Ｈｏｘ遺伝子が発現される癌の治療において、他の癌治療中の細胞保護剤として、または、幹細胞培養のエクスビボでの保護において、治療的用途を有し得る。
【０１２６】
上述のペプチドは、ＰＢＸと、その結合パートナー、例えばＨＯＸとの相互作用をブロックするために用いられ得て、好ましくは、それにより、ＨＯＸの、その標的ＤＮＡへの結合を防止する。したがって、さらなる態様では、本発明は、ＰＢＸの、結合パートナー、特にＨＯＸに対する結合を低減または阻害するための本明細書に記載のペプチドの使用、または、ＨＯＸの、その標的ＤＮＡに対する結合を低減または阻害するためのそのようなペプチドの使用を提供する。
【０１２７】
「ＰＢＸ」は、プレＢ細胞形質転換関連遺伝子のファミリーのタンパク質産物を指し、脊椎動物における遺伝子のようなショウジョウバエのエクストラデンティクル遺伝子のエクストラデンティクルホメオプロテインタンパク質およびホモログをコードする遺伝子を含む。脊椎動物ＰＢＸタンパク質は、ホメオドメイン（ｈｏｍｅｏｄｏｒｎａｉｎ）を含む転写因子である（Ｍａｎｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９９６）。
【０１２８】
「ＨＯＸ」は、約６０アミノ酸のホメオドメインをコードする配列およびホメオドメインのＮ末にヘキサペプチド配列をコードする配列を含む、ホメオボックス遺伝子のタンパク質産物を指す（Ｍｏｒｇａｎ  ｅｔ  ａｌ．，２０００，ＴＩＧ，１６（２），ｐ６６−６７、および、Ｋｒｕｍｌａｕｆ，１９９４，Ｃｅｌｌ，７８（２），ｐ１９１−２０１）。ＨＯＸタンパク質は、初期発生における前期−後期の発生を規定する作用をする、転写因子である。本明細書に記載されるそのようなＰＢＸまたはＨＯＸ遺伝子またはタンパク質は、任意の多細胞動物内に存在するホモログを含むが、好適には脊椎動物由来、例えば哺乳類由来、特にヒト由来である。
【０１２９】
本明細書において言及される「結合」は、可逆または不可逆の反応における少なくとも２つの部分の相互作用または関連性を指し、ここで、前記結合は、好適には、特異的および選択的である。
【０１３０】
本明細書において用いられる「結合パートナー」は、その結合パートナーを特異的に（すなわち、他の分子に対する結合に優先して）認識および結合する分子を指す。そのような結合ペアは、一緒に結合されると複合体を形成する。
【０１３１】
「結合の低減」は、例えば、結合を達成するために必要とされる結合ペアの一方の濃度の増加によって明らかにされる、結合の減少を指す。低減は、特異的な結合のわずかな減少ならびに絶対的な撤廃を含む。特異的な結合の低減全体は、結合の防止と同等であると考えられる。
【０１３２】
「阻害」は、パートナーの結合を低減する働きをするペプチドによる結合パートナーの結合の競合的妨害を指す。
【０１３３】
ＰＢＸ依存性転写制御を防止または低減する薬剤は、異常な細胞分裂に対する有利な効果を有することが見いだされている（２００４年７月１日、ＷＯ２００４／０５５０４９として発行された国際特許出願ＰＣＴ／ＧＢ２００３／００５４２５、および、２００７年１月４日、ＷＯ２００７／００６０１として発行された国際特許出願ＰＣＴ／ＧＢ２００６／００２３９０、その内容は、全ての目的に関してそれらの全体で援用される）。
【０１３４】
そのような薬剤は、典型的に、ＰＢＸの、その結合パートナーに対する結合、特に、ＰＢＸとＨＯＸとの間の結合を、防止、低減または阻害するもの（ＰＢＸとＨＯＸとの間の相互作用の拮抗薬など、例えば、本明細書に記載のペプチド）である。しかしながら、適切な薬剤は、標的ＤＮＡに対する転写因子の結合に影響を及ぼすものも含み、例えば、ＰＢＸまたはその結合パートナー（ＨＯＸなど）の、標的ＤＮＡに対する相互作用をブロックする。好適には、そのような薬剤は、ＨＯＸ依存性転写制御を防止する。
【０１３５】
理論によって拘束されることを望まないが、ＨＯＸ：ＰＢＸ結合の拮抗薬は、多数の重要なＨＯＸ：ＰＢＸタンパク質結合パートナーの間の相互作用を防止して、ＨＯＸタンパク質は、したがって、それらが結合する遺伝子に対して転写因子として作用することができないと考えられる。これらの遺伝子の発現を調節することができないことは、細胞に対して、過剰な細胞分裂の低減または防止および細胞死の誘導のような非常に多くの効果を有し得る。同様に、ＰＢＸ依存性転写制御を防止または低減する、例えば、ＨＯＸのその標的ＤＮＡとの相互作用をブロックする任意の部分は、同様の効果を有することが期待され得る。
【０１３６】
この目的に適切な薬剤は、ＨＯＸおよび／またはＰＢＸおよびそれらが結合するＤＮＡ標的の間の相互作用の拮抗薬、ＰＢＸおよびその結合パートナー、典型的にＨＯＸタンパク質の間の相互作用の拮抗薬、または、ＨＯＸ／ＰＢＸまたは標的ＤＮＡの結合能力を損なう、例えば、関連のある部位をブロックする、または、ＨＯＸ／ＰＢＸまたは標的ＤＮＡ上の関連のある部位に構造変化を生じさせる、または、結合に利用可能な分子の数を低減させる薬剤を含む（それは、例えば、ＰＢＸ／ＨＯＸの発現／発現産物を改変することによって達成され得る）。しかしながら、好適には、拮抗薬が用いられる。適切な薬剤は、上述の本発明のペプチドである。
【０１３７】
さらなる態様では、したがって、本発明は、異常な細胞分裂を低減させる方法を提供し、ここで、前記細胞は、本発明のペプチド（以降、代わりに「本発明の薬剤」と呼ばれる）が投与されて、ＰＢＸ依存性転写制御を防止または低減して、好適には、結合パートナー、好ましくはＨＯＸ（好適には、ＨＯＸＢ４、ＨＯＸＢ８またはＨＯＸＡ９）に対するＰＢＸの結合を低減または防止して、または、ＨＯＸのその標的ＤＮＡに対する結合を低減または防止して、好適には拮抗薬、好適にはＨＯＸとＰＢＸとの間の相互作用の拮抗薬であり、好適には、ＨＯＸ依存性転写制御を阻害する。
【０１３８】
本明細書に記載の「異常な細胞分裂」は、存在する条件下で適切と考えられる正常レベルより高い細胞分裂（すなわち異常な細胞分裂）を指す。異常な細胞分裂のマーカーは、当業者によく知られていて、特定の細胞が影響を受けているかどうか決定するために用いられ得る。例えば、異常な細胞分裂を受けている細胞は、異型の細胞診、例えば、細胞多形性、核多形性、核過染色性または増大した核細胞質比を示し得る。異常な細胞分裂を受けている細胞は、細胞分化の失敗を示し得る。より具体的には、そのような異常な細胞分裂は、以降に記載の特定の症状または疾患／障害、例えば癌に存在し得る。
【０１３９】
細胞分裂の「低減」は、細胞増殖の速度の低減を指す。好適には、細胞増殖は、コントロール増殖（薬剤無し）と比較して、同一期間にわたって、０．５未満、特に０．２５未満、例えば０．１未満に低減される（ここでコントロール増殖＝１）。好適には、低減された細胞分裂は、細胞増殖の低減に加えてまたは代わりとして生じ得る細胞死／生存能力の欠損を含む。細胞死が生じると、好適には存在する細胞の５０％よりも多く、具体的には細胞の７５％よりも多くが破壊される。
【０１４０】
用いられる薬剤の投与量を調節することによって、一部の悪性腫瘍を完全に切除することも可能であり得る。本発明のペプチドは、したがって、癌性細胞の増殖を減速する、または完全に破壊するために用いられ得る。以下により詳細に説明するように、適切な投与量は多くの因子に依存し、技術のある熟練者によって決定され得る。
【０１４１】
本明細書に記載の「ＰＢＸ依存性転写制御」は、ＰＢＸが極めて重要な役割を果たす、例えば転写調節複合体における補助因子として作用するプロセスによる、遺伝子の転写の活性化または抑制を指す。
【０１４２】
防止または低減は、転写の程度における測定可能な変化を指す。
【０１４３】
防止は、検出できないレベルの転写の低減と同等である。
【０１４４】
「標的ＤＮＡ」は、ＰＢＸ、ＨＯＸ、または、そのようなタンパク質を含む転写制御複合体の他のメンバーが結合する調節領域を含む遺伝子を指す。
【０１４５】
本明細書において言及される「拮抗薬」は、結合ペアの一方の分子に対する構造的類似性のせいで、結合ペアの他方の分子への結合に関してその分子と競合する、分子または分子の複合体である。
【０１４６】
本明細書において具体的に言及されるように、本明細書の拮抗薬は、ＨＯＸとＰＢＸとの間の相互作用の拮抗薬であり、これらの物質間の結合を防止または低減する。適切な拮抗薬は、ＨＯＸまたはＰＢＸ上の結合部位に結合し、またはそれと競合する。典型的に、拮抗薬は、ＨＯＸ上のＰＢＸ結合部位を模倣する（すなわちＰＢＸに結合する）ことによって競合する。
【０１４７】
そのような方法は、インビトロ、インビボまたはエクスビボで行なわれてよい。
【０１４８】
ＰＢＸとＨＯＸとの間の相互作用を特異的にブロックおよび異常な細胞分裂を阻害するそれらの能力を考慮して、本発明のペプチド（以降、代わりに「本発明の薬剤」と呼ぶ）は、異常な細胞分裂が生じる症状または障害、具体的には癌の治療または予防において有用である。
【０１４９】
本発明に係る治療は、症候的または予防的であってよい。
【０１５０】
したがって、さらなる態様では、本発明は、製剤としての使用のための本発明の薬剤を含む。
【０１５１】
したがって、さらなる態様によれば、本発明は、異常な細胞分裂が生じる症状または障害を治療または予防するための、本発明の薬剤を提供する。
【０１５２】
したがって、さらなる態様によれば、本発明は、異常な細胞分裂が生じる症状または障害の予防または治療のための医薬品の製造での、本発明の薬剤の使用を提供する。
【０１５３】
したがって、さらなる態様によれば、本発明は、異常な細胞分裂（が生じる）症状または障害を予防または治療するための方法を提供し、それは、それを必要とする対象に、治療的に有効量の本発明の薬剤を投与するステップを含む。
【０１５４】
前述のように、本発明は、さらなる態様として、異常な細胞分裂が生じる様態または障害、具体的には癌を予防または治療するための方法も提供し、それは、それを必要とする対象に、具体的にはヒト対象に、治療的に有効量の本発明の薬剤を投与するステップを含む。
【０１５５】
別の態様では、本発明は、異常な細胞分裂が生じる症状または障害、具体的には癌を、予防または治療するための本発明の薬剤を提供する。
【０１５６】
別の態様では、本発明は、異常な細胞分裂が生じる症状または障害、具体的には癌の、予防または治療のための医薬品の製造における本発明の薬剤の使用を提供する。
【０１５７】
本明細書において言及される「障害」または「疾患」は、例えば、感染または獲得性または先天性遺伝子欠陥によって生じ得る、正常な生物と比較して症候的または無症状の生物に潜んでいる病理学的障害を指す。
【０１５８】
「症状」は、例えば、毒素、薬物または汚染物質のような体内の部分の存在などの疾患を通して生じたものではない、生物の心または体の状態を指す。
【０１５９】
本明細書において用いられる用語、任意の疾患または障害を「治療する（ｔｒｅａｔ）」、「治療する（ｔｒｅａｔｉｎｇ）」または「治療（ｔｒｅａｔｍｅｎｔ）」は、一実施態様では、疾患または障害の寛解（すなわち、疾患または少なくとも１つのその臨床症候の発生の減速または阻止または低減）を指す。別の実施態様では「治療する（ｔｒｅａｔ）」、「治療する（ｔｒｅａｔｉｎｇ）」または「治療（ｔｒｅａｔｍｅｎｔ）」は、患者によって認識され得ないものを含む少なくとも１つの物理的パラメーターの、緩和または寛解を指す。さらに別の実施態様では、「治療する（ｔｒｅａｔ）」、「治療する（ｔｒｅａｔｉｎｇ）」または「治療（ｔｒｅａｔｍｅｎｔ）」は、身体的（例えば、認識できる症候の安定化）、生理的（例えば、物理的パラメーターの安定化）のいずれか、または両方の、疾患または障害の調節を指す。さらに別の実施態様では、「治療する（ｔｒｅａｔ）」、「治療する（ｔｒｅａｔｉｎｇ）」または「治療（ｔｒｅａｔｍｅｎｔ）」は、疾患または障害の発症または発生または進行の予防または遅延を指す。例えば、影響を受け得る症候は、腫瘍サイズまたは所定のサンプル内の癌性細胞の数（または、以降に説明される低減した幹細胞数）を含む。
【０１６０】
症状または障害の「予防」は、前記の症状または障害の１つまたは複数の症候の出現または程度によって評価される、症状または障害の発症の遅延または予防またはその重症度の低減を指す。
【０１６１】
本明細書において用いられる用語「対象」は、動物を指す。典型的に、動物は、哺乳類である。また、対象は、例えば、霊長類（ヒトなど）、ウシ、ヒツジ、ヤギ、ウマ、イヌ、ネコ、ウサギ、ラット、マウス、魚、鳥なども指す。特定の実施態様では、対象は霊長類である。さらに別の実施態様では、対象はヒトである。
【０１６２】
本明細書において用いられる対象は、そのような対象が、そのような治療から、生物学的に、医学的に、または、クオリティ・オブ・ライフに、恩恵を受けるならば、治療「を必要とする」。
【０１６３】
用語「治療的に有効量」の本発明の薬剤は、対象の生物学的または医学的な応答、例えば、酵素またはタンパク質活性の低減または阻害を誘発する、または、症候を寛解させる、症状を緩和する、疾患の進行を減速または遅延する、または、疾患を予防するなどの、本発明の薬剤の量を指す。１つの非限定的な実施態様では、用語「治療的に有効量」は、対象に投与された場合に、異常な細胞分裂が生じる症状または障害を少なくとも部分的に緩和、阻害、予防および／または寛解するのに効果的な、本発明の薬剤の量を指す。別の非限定的な実施態様では、用語「治療的に有効量」は、細胞、または組織、または非細胞の生物学的材料、または培地に投与された場合に、異常な細胞分裂を少なくとも部分的に低減するのに効果的な、本発明の薬剤の量を指す。
【０１６４】
方法をインビボで行なう代わりとして、そのような方法は、例えば、サンプル内で、異常な細胞増殖を受けている細胞の細胞分裂を低減するため、またはそのような細胞を除去するために、インビトロで行なってよい。適切な培養条件は、以降に記載の本発明の他の方法について説明される。
【０１６５】
これは、異常な細胞が制御／除去され得る正常細胞および異常細胞の両方を含む細胞サンプル、および、その後の手順のために用いられる、例えばドナーの体に戻される正常細胞を含むサンプルにおいて、特に有用である。これは、例えば、患者の血液サンプル由来の異常な造血性の血液細胞、例えば白血病（ｌｅｕｋａｅｍｉｃ）細胞を除去するのに有用であり得て、残りの細胞は、それから、その患者の体に戻され得る。
【０１６６】
したがって、さらなる態様では、本発明は、サンプル中の細胞において、異常な細胞分裂を低減する（具体的には、癌細胞の、増殖を低減する、より具体的には、死を引き起こして、したがって、数を低減する）方法を提供し、ここで、以前に説明した本発明の薬剤は、前記サンプルに投与される。異常な細胞分裂によって象徴される障害または症状を患っている患者を治療する（またはそれを予防する）方法では、前記サンプルは、前記患者から採取され得て、それから、以降に説明されるようにその患者に戻される。この文脈において、「サンプル」は、ヒトまたは非ヒト動物から得られる任意の材料を指し、前記動物の胚、胎児、幼年および成体段階を含み、それは、異常な細胞分裂を受けている細胞を含み、組織および体液を含む。
【０１６７】
「体液」は、この場合において、特に、血液、脊椎流体およびリンパを含み、「組織」は、外科的処置または他の手段によって得られた組織を含む。
【０１６８】
好適には、異常な細胞分裂は、人間、他の哺乳類および動物、鳥、昆虫および魚のような、任意の真核生物であり得る真核生物由来の細胞において生じる。
【０１６９】
細胞が由来し得る、または、本発明の方法が実施され得る、非ヒト動物は、限定されないが、哺乳類、具体的には霊長類、飼育動物、家畜、および実験動物を含む。したがって、動物は、マウス、ラット、ニワトリ、カエル、モルモット、ネコ、イヌ、ブタ、ウシ、ヤギ、ヒツジ、ウマを含む。好適には、細胞は、ヒト由来であり、方法は、ヒトを治療するために用いられて、または、ヒトにおいて予防的である。
【０１７０】
特に、異常な細胞分裂を受けている細胞は癌細胞であり、治療または予防されるべき障害は癌である。この方法で治療され得る癌は、ＨＯＸおよびＰＢＸ遺伝子の発現を伴う癌であり、ここで、ＨＯＸ／ＰＢＸダイマーの発現は、本発明のペプチドの活性により低減されて、したがって、癌性細胞の増殖をブロックし、その増殖を低減し、または、その死を直接もたらす。
【０１７１】
さらなる実施態様では、本発明のペプチドは、癌性細胞に対して、静止状態から細胞周期にそれらを動かして、およびしたがって、他の、例えば細胞傷害性の抗癌治療にそれらをより敏感にさせるように作用し得る。
【０１７２】
好適には、治療されるべき前記細胞は、１つまたは複数のＨｏｘ遺伝子を発現する。例えば、前記細胞は、ＨＯＸＡ１、ＨＯＸＡ３、ＨＯＸＡ４、ＨＯＸＡ５、ＨＯＸＡ７、ＨＯＸＡ９、、ＨＯＸＢ１、ＨＯＸＢ２、ＨＯＸＢ３、ＨＯＸＢ４、ＨＯＸＢ８、ＨＯＸＢ９、、ＨＯＸＣ４、ＨＯＸＣ６、ＨＯＸＣ８、、ＨＯＸＤ３、ＨＯＸＤ４、ＨＯＸＤ８、およびＨＯＸＤ９のうちの１つまたは複数を発現し得る。前記細胞は、ＨＯＸＢ４、ＨＯＸＢ８およびＨＯＸＡ９のうちの１つまたは複数を発現し得る。細胞におけるＨｏｘ遺伝子発現のレベルは、本発明のペプチドに対する細胞の感度に直接関与し得る可能性がある。本発明のペプチドは、したがって、高レベルのＨＯＸ遺伝子発現、例えば、周辺組織のものよりも高いレベルのＨＯＸ遺伝子発現、または、細胞が癌細胞である他の癌タイプのものよりも高いレベルのＨＯＸ遺伝子発現を示す細胞を治療するのにより効果的である。本発明の方法は、したがって、治療されるべき細胞が、そのような増大した、またはより高いレベルのＨＯＸ遺伝子発現を示す場合に特に適切であり得る。
【０１７３】
好適には、前記癌は、悪性または前悪性または良性腫瘍であり、癌腫、肉腫、グリオーマ、メラノーマおよびリンパ腫を含み、膀胱、腎臓、膵臓、脳、頭頚部、胸部、消化管、前立腺、肺および卵巣の癌、および白血病およびリンパ腫を含む。特に、結腸直腸、膵臓、膀胱、前立腺、頸部、卵巣、胃および非小細胞肺癌である。
【０１７４】
異常な細胞分裂によって特徴付けられる症状または障害は、制限されないが、中皮腫、肝胆道（肝および胆管）、一次または二次的ＣＮＳ腫瘍、一次または二次的脳腫瘍、肺癌（ＮＳＣＬＣおよびＳＣＬＣ）、骨癌、膵癌、メラノーマおよび非黒色腫性皮膚癌、頭頚部の癌、皮膚または眼球内メラノーマ、卵巣癌、結腸癌、直腸癌、肛門領域の癌、胃癌、胃腸（胃、結腸直腸、および十二指腸）、消化管間質腫瘍、乳癌、子宮癌、卵管の癌腫、子宮内膜の癌腫、頸部の癌腫、膣の癌腫、外陰部の癌腫、ホジキン病、食道の癌、小腸の癌、内分泌系の癌、甲状腺の癌、副甲状腺の癌、副腎の癌、軟組織、軟骨（ｃａｒｔｉｌｉｄｇｅ）、または骨の肉腫、尿道の癌、陰茎の癌、前立腺癌、精巣癌、精巣リンパ腫、慢性または急性白血病、慢性骨髄性白血病、リンパ性リンパ腫、膀胱の癌、腎臓または尿管の癌、腎細胞癌、腎盂の癌腫、中枢神経系（ＣＮＳ）の新生物、原発性ＣＮＳリンパ腫、非ホジキンリンパ腫、脊椎軸の腫瘍、脳幹グリオーマ、下垂体腺腫、副腎皮質癌、胆嚢癌、多発性骨髄腫、胆管細胞癌、線維肉腫、神経芽細胞腫、網膜芽細胞腫、または、前述の癌の１つまたは複数の組み合わせを含む癌である。
【０１７５】
本発明の一実施態様では、癌は、肺癌（ＮＳＣＬＣおよびＳＣＬＣ）、メラノーマ、頭頚部の癌、卵巣癌、結腸癌、直腸癌、肛門領域の癌、胃癌、乳癌、腎臓または尿管の癌、腎細胞癌、腎盂の癌腫、甲状腺の癌、副甲状腺の癌、膵癌、前立腺癌、中枢神経系（ＣＮＳ）の新生物、原発性ＣＮＳリンパ腫、非ホジキンリンパ腫、または脊椎軸の腫瘍、または、前述の癌の１つまたは複数の組み合わせである。
【０１７６】
特定の実施態様では、癌は、肺癌（ＮＳＣＬＣおよびＳＣＬＣ）、メラノーマ、頭頚部の癌、卵巣癌、乳癌、前立腺癌、結腸癌、または腎細胞癌である。
【０１７７】
別の実施態様では、異常な細胞分裂が生じる前記症状または障害は、良性増殖性疾患であり、制限されないが、乾癬、良性前立腺肥大または再狭窄を含む。
【０１７８】
一実施態様では、異常な細胞分裂が生じる前記症状または障害は、脊髄形成異常（ＭＤＳ）である。
【０１７９】
一部の癌、例えばヒトプレＢ細胞白血病の一部の形態では、ＰＢＸは、癌遺伝子として作用し得る。そのような癌におけるＰＢＸの効果は、ＰＢＸが癌遺伝子でない他の癌タイプにおけるものとは異なる。したがって、本発明のペプチドの効果も異なってよい。
【０１８０】
一実施態様では、したがって、本発明は、本発明のペプチドの効果は、上記に記載したＰＢＸ：ＨＯＸ効果とは異なるメカニズムを介するので、そのような癌に適用しない。この実施態様では、したがって、本発明のペプチドは、異常な細胞分裂が生じる、および、ＰＢＸが癌遺伝子として作用しない、癌または他の障害の治療または予防において用いられ得る。
【０１８１】
好適には、癌性細胞は、１つまたは複数のＨｏｘ遺伝子を発現する。例えば、本発明の方法による治療に適切な癌は、ヒトプレＢ細胞白血病以外の白血病であり得る。
【０１８２】
急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）のような一部の癌では、本発明のペプチドは、癌性細胞の増殖をブロックし得るが、これらの細胞がＧＯ／Ｇ１静止状態を離れて細胞周期に入るのも刺激し得る。これらの２つの効果は、同一条件下で同一の細胞において見られる。これは、ペプチドによって細胞がＧＯ／Ｇ１を離れる（すなわち細胞周期に入る）のをトリガーされることに起因する可能性があるが、その結果、分裂することができず、その代わりに、分化し、またはアポトーシスを受ける。本発明のペプチドは、原発性ＡＭＬおよび成熟骨髄性白血病の両方の治療において用いられ得る。このことは急性骨髄性およびリンパ系白血病における本発明のペプチドに関する特定の有用性を示唆する。本発明のペプチドを用いたこれらの細胞におけるＰＢＸ／ＨＯＸ相互作用のブロックは、したがって、インビボでの白血病細胞の増殖を予防するための効果的な治療を形成し得る。加えて、細胞周期に入る白血病（ｌｅｕｋａｅｍｉｃ）細胞の割合を増やすことによって、本発明のペプチドは、化学療法のような他の癌治療に対するそれらの感受性も増大させ得る。本発明のペプチドは、したがって、以下にさらに記載する別の癌治療と組み合わせて用いられ得る。
【０１８３】
ＰＢＸ依存性転写制御を防止または低減させる薬剤もまた、幹細胞に対して有益な効果を有することが見いだされている。
【０１８４】
本明細書において言及される「幹細胞」は、様々な細胞、例えば様々な血液細胞のタイプに分化することが可能な未分化細胞であり、造血性細胞（例えば骨髄に見られる）および神経細胞および肝幹細胞、胚性幹細胞および胚性生殖細胞を含み、多能性および全能性細胞の両方を包含する。胚細胞は、胚盤胞の内部細胞塊から得られる細胞であると考えられ、胚性生殖細胞は、５〜１０週齢の胎児の生殖巣堤の始原生殖細胞から単離された細胞である。好適には、細胞は、以前に説明されたように、真核生物から得られる。
【０１８５】
ＰＢＸが介在する転写制御の防止は、低減されるが継続的な細胞分裂および分化の分子マーカー（例えばＣＤ３８）の出現をもたらす。しかしながら、その転写制御をブロックする薬剤の除去の際に、細胞は、分子マーカー（例えばＨＯＸＢ４、ＨＯＸＢ８、ＨＯＸＡ９、ＡＣ１３３）の出現によって評価されるように幹細胞に戻り、したがって、細胞の多能性を反映する（２００７年１月４日、ＷＯ２００７／００６０１として発行された、国際特許出願ＰＣＴ／ＧＢ２００６／００２３９０、その内容は、全ての目的に関してそれらの全体で援用される）。理論によって拘束されることを望まないが、分化／成熟のマーカーの出現にかかわらず、分化の症候を示す表現型変化は生じず、その代わり、薬剤が投与されている間、細胞は著しく低下した細胞周期速度を有すると考えられる。薬剤を除去すると、細胞は幹細胞に戻る。
【０１８６】
また、本発明のペプチドを用いた多能性造血幹細胞および前駆細胞（ＨＳＰＣ）の処置は、それらの増殖をブロックし得て、細胞周期のＧＯ−Ｇ１期における細胞の割合を増大させ得ると考えられる。培養の長寿命は、推定の幹細胞ならびにより分化した前駆細胞集団の効果を確認する。これらの遺伝子標的に対するこれらの阻害効果の特異性は、その可逆性によって強調されて、遺伝子転写および細胞増殖は、ペプチドの除去で再開する。
【０１８７】
これらの結果は、例えば前記細胞の一時的な保存のための、（例えば培地中での）幹細胞の維持または拡大を含む多くの適用を有し、その保存期間中に拡大の可能性がある。そのような細胞は、それから、例えば、年齢、疾患（癌または自己免疫性疾患など）、先天性因子、環境的影響または汚染物質および／または投与された化学物資などに起因して、幹細胞の数および／または特定の分化細胞型を産生する能力が低減した患者への、幹細胞の添加が望ましい臨床適用において用いられ得る。特に、幹細胞は、化学療法または放射線療法の前に患者から採取され得て、そして、維持および／または拡大されて、そして、化学療法または放射線療法の後にその患者に戻される。
【０１８８】
代替の例として、幹細胞は、特定の分化細胞、例えば神経細胞が形成され得る細胞を、特に、そのような適切な幹細胞が不存在または低レベルでのみ存在する成体レシピエントにおいて、提供するために用いられ得る。幹細胞のレシピエントは、好適にはドナーでもあるが、異なる個体であってもよい。本発明のペプチドは、したがって、インビトロまたはエクスビボでの培養中に、幹細胞（例えば骨髄細胞）を含む外植組織を保護するために用いられ得る。
【０１８９】
また、細胞は、通常はそれらの生存能力に影響を及ぼすかもしれない処置の間、例えば、化学または放射線療法などの間、例えば生存能力を維持するために、エクスビボまたはインビボで維持されてもよい。
【０１９０】
本明細書に記載の薬剤、すなわち本発明のペプチドは、幹細胞の細胞周期を一時的に止めるまたは減速することによって、そのような処置による損傷に対する幹細胞の感受性を低減させるために用いられ得る。例えば、本発明のペプチドは、多くの化学療法レジームと関連する細胞傷害性ショックのような他の癌治療によって引き起こされる副作用を低減させるために用いられ得る。インビボでの幹細胞に対する本発明のペプチドの細胞保護効果は、副作用の発生の低下に起因して、より高いレベルまたは投与量のそのような癌治療が用いられるのも可能にし得る。例えば、より高い投与量の化学または放射線療法が可能であり得る。
【０１９１】
したがって、さらなる態様では、本発明は、幹細胞を維持または拡大する方法を提供し、ここで、前記方法は、前記細胞を、以前に記載の本発明の薬剤、好適には拮抗薬、好適にはＨＯＸとＰＢＸとの間の相互作用の拮抗薬と、接触させるステップを少なくとも含む。この方法は、幹細胞の多能性または分化全能性を維持するために用いられ得る。
【０１９２】
好適には、この方法は、インビトロまたはエクスビボで、培地中で行なわれて、その場合は、当該方法は、ドナーから幹細胞を採取する最初のステップを含んでよい。しかしながら、当該方法は、特に、薬剤への曝露または幹細胞損傷を引き起こすかもしれない処置の間、個体における幹細胞の数を維持または改善するために、インビボで用いてもよい。そのような状況では、本発明は、患者において幹細胞を維持または拡大する方法を提供し、ここで、前記患者は、本発明の薬剤、好適には拮抗薬、好適にはＨＯＸとＰＢＸとの間の相互作用の拮抗薬が投与される。
【０１９３】
細胞を「維持する」は、処置または培養期間の過程で、大きな割合の、開始の、例えば採取された細胞の生存能力を、最小限の細胞分裂で維持することを指す。
【０１９４】
細胞を「拡大する」は、少なくとも一部の細胞分裂、好適には有意な細胞分裂が、処置または培養の過程で、細胞の数を増大させることを指す。
【０１９５】
本明細書において言及される「培養」は、制御された人工的環境、すなわちエクスビボでの、細胞の増殖または維持を指す。細胞の培養のための標準的な技術はよく知られている。好適には、細胞は、３７℃、５％ＣＯ２加湿雰囲気中で、標準的な培養培地中で培養される。好適には、前記培養は、少なくとも２時間、好適には２４時間よりも長く；例えば２４時間〜８週間実施される。
【０１９６】
本明細書において用いられる「接触させる」は、薬剤がアクセスを有するのを可能にする任意の適切な技術、したがって、例えば培養培地に対する適用による、サンプル内の細胞への結合の可能性を指す。
【０１９７】
細胞が維持または拡大された後に、薬剤が除去されて多能性または分化全能性を回復させ得る。方法がインビボで行なわれる場合、これは、投与を止めて、体が薬剤を取り除くのを可能にすることによって達成され得る。インビトロまたはエクスビボで、例えば新鮮な培地を用いて洗浄および置換することによって、薬剤は培養培地から除去される。あるいは、薬剤は、自然に分解するのを可能にさせることによって除去され得る。
【０１９８】
したがって、本発明は、幹細胞を維持または拡大する、および／または、多能性または全能性幹細胞を培地中で好適には前記細胞の拡大された集団を得る方法を提供し、ここで、前記方法は、少なくとも以下のステップを含む：
ａ）前記細胞を、培地中で、上記に記載のＰＢＸ依存性転写制御を低減または防止する本発明の薬剤、好適には拮抗薬、好適にはＨＯＸとＰＢＸとの間の相互作用の拮抗薬と、接触させるステップ；
ｂ）前記細胞を、前記薬剤の不存在下で培養するステップ。
【０１９９】
ペプチドは、培養中に数日以内に分解されて、したがって、活性のペプチドは枯渇することに注意すべきである。したがって、ステップｂ）は、分解が生じるのに十分な時間が経過している場合は、いかなる事前の洗浄もせずに行なってよい。以前に述べたように、培養時間は、少なくとも２時間、好適には２４時間よりも長く、例えば２４時間〜８週間である。
【０２００】
当該方法は、ドナーから幹細胞を採取する最初のステップを含んでよい。
【０２０１】
本発明のこの方法および他の方法によって得られた細胞は、医薬品としてのそれらの使用と同様に本発明のさらなる態様を含む。
【０２０２】
上述のインビトロまたはエクスビボの方法によってこのように調製された細胞は、それから、そのような幹細胞を必要とする個体に投与され得る。任意選択で、細胞は、移植の前、例えば培養の過程中、または、移植の直前に、遺伝子改変などによって、例えば遺伝子導入のため、または前記細胞に以前は存在しない機能を取り込むために、例えば遺伝子損失を補うために、例えば、アデノシンデアミナーゼ（ＡＤＡ）のような喪失因子を提供することによって、改変され得る。
【０２０３】
したがって、さらなる態様では、本発明は、幹細胞を必要とする個体を治療する方法を提供し、ここで、上述の方法によって調製された幹細胞は、前記個体に投与される。
【０２０４】
好適には、前記幹細胞を必要とする前記個体は、正常より低いまたは望ましいレベルのそのような細胞を有する（または有するであろう）個体であり、その症状は、通常に、例えば年齢を通して、または外部因子の結果として、例えば化学療法または放射線療法を通して、存在し得る。好適には、前記幹細胞は、レシピエント個体から得られる。
【０２０５】
したがって、本発明は、レシピエント個体における幹細胞の数を改善する方法を提供し、ここで、前記方法は、少なくとも以下のステップを含む：
ａ）ドナーから幹細胞を採取するステップ、
ｂ）上記に記載の方法に従って、前記幹細胞を培養するステップ；
ｃ）前記レシピエント個体に、前記の培養した幹細胞を投与するステップ。
【０２０６】
好適には、当該方法は、化学療法または放射線療法に曝される患者における幹細胞の数を改善する方法であり、ここで、前記方法は、少なくとも以下のステップを含む：
ａ）化学療法または放射線療法の前に、前記患者から幹細胞を採取するステップ、
ｂ）以前に記載した方法に従って、前記幹細胞を培養するステップ；
ｃ）化学療法または放射線療法の完了後に、前記患者に、前記の培養した幹細胞を投与するステップ。
【０２０７】
あるいは、上記の方法における採取するステップａ）は、不存在であってよく、および、ステップｂ）は、以前に記載した方法に従ってドナーから採取された幹細胞を培養するステップを含んでよい。前記細胞は、前記ドナー由来の細胞、組織または体液のサンプルを得ることによって、および任意選択で、そこから細胞を抽出することによって、採取され得る。
【０２０８】
本明細書において用いられる「サンプル」は、ヒトまたは非ヒト動物のようなドナーから得られる任意の材料を指し、前記動物の胚、胎児、幼年および成体段階を含み、それは、幹細胞を含み、組織および体液を含む。
【０２０９】
「体液」は、血液および脊椎の流体を含む。
【０２１０】
「組織サンプル」は、外科的介入によって得られる組織（例えば骨髄または肝臓）、または、他の手段による、例えば胎盤および臍帯を含む。細胞が得られる動物または当該方法が適用される動物は、好ましくは、異常な細胞分裂を低減する方法との関連で上記に記載される。
【０２１１】
本明細書において用いられる「幹細胞の数を改善する」という言及は、投与が生じた時点での個体内に存在する数と比較した、追加される幹細胞（好適には、追加される特定のタイプ、例えば造血性幹細胞）の数の増大を指す。したがって、化学療法または放射線療法に曝される患者の場合では、観察される改善は、化学療法後または放射線療法後の患者における幹細胞の数である。改善は、以前は不存在または非常に少ない数で存在する特定の幹細胞、例えば神経幹細胞の追加からなってもよい。
【０２１２】
あるいは、本発明は、幹細胞に関する必要性によって象徴される症状または障害の治療または予防のための、好適には、例えば化学療法または放射線療法に起因して幹細胞の数が通常よりも少ない症状または障害の治療または予防における、または、目的の部位において不存在または異常に少ない数または所望よりも少ない数で存在する１つまたは複数の特定の分化細胞の生産を幹細胞の提供によって可能にし得る症状において、本発明の薬剤を提供する。
【０２１３】
幹細胞の数が通常よりも少ない症状または障害は、自己免疫疾患、放射線療法、化学療法および特定のウイルス感染を含む。
【０２１４】
移植による幹細胞の使用が、不存在または通常よりも低くまたは所望のレベルよりも低く存在する適切な分化細胞を提供し得る症状は、アルツハイマー病、パーキンソン病および他の加齢に関連した障害または症状（美容処置を含む）、多発性硬化症、脊髄損傷、糖尿病、慢性心疾患、末期の腎臓疾患、肝不全を含み、幹細胞は、破壊されたまたは機能障害性の細胞を置き換えるために用いられる。そのような症状または障害の予防は、本発明の薬剤の使用によって保護された状態に幹細胞を維持することによって達成され得る。
【０２１５】
本発明は、上述のように、幹細胞に関する必要性によって象徴される症状または障害の治療のための、上記に記載した方法によって調製される細胞をさらに提供する。
【０２１６】
異常な細胞分裂に対する前述の薬剤の効果に起因して、そのような異常な細胞を含む幹細胞のサンプルでさえ用いられ得て、幹細胞を拡大しながら異常な分裂を低減する二重の効果が達成され得ることに注意すべきである。したがって、前述の薬剤を、インビトロ、エクスビボまたはインビボで用いて、異常な細胞増殖を受けている細胞を除去しながら、正常幹細胞／前駆細胞を保護し得る。これは、例えば白血病／リンパ腫を治療する場合に、特に造血性細胞に適用可能である。
【０２１７】
したがって、特定の態様では、本発明は、異常な細胞分裂が生じる症状または障害、例えば、ヒトまたは非ヒト対象における癌を、治療または予防する方法を提供し、ここで、前記方法は、本発明の薬剤を投与するステップを含み、ここで、前記薬剤は、前記の異常な細胞分裂を低減すること、および、前記対象の幹細胞を維持または拡大することの両方が可能である。
【０２１８】
上述のように、ＰＢＸ依存性転写制御を低減または防止する本発明の薬剤、特にＨＯＸ：ＰＢＸ拮抗薬は、様々な臨床適用を有し、したがって、本発明のさらなる態様は、本発明の薬剤を含む医薬組成物を提供する。医薬品としてのこれらの薬剤の使用は、本発明のさらなる態様を形成する。
【０２１９】
したがって、さらなる態様では、本発明は、上記に記載のＰＢＸ依存性転写制御を低減または防止する本発明の薬剤、好適には拮抗薬、好適にはＨＯＸとＰＢＸとの間の相互作用の拮抗薬、または、そのようなペプチドを発現することが可能なポリヌクレオチドまたはベクター、および薬学的に許容できる担体を含む、医薬組成物を提供する。
【０２２０】
医薬品としての使用のための、特に、異常な細胞分裂によって象徴される障害または症状、または幹細胞に関する必要性によって象徴される障害または症状、例えば、本明細書に記載の症状の治療または予防での使用のための、本明細書に記載の医薬組成物、および、そのような組成物を用いた治療または予防の方法、および、そのような障害または症状の治療または予防のための医薬品の調製のための前記薬剤の使用は、本発明のさらなる態様を形成する。
【０２２１】
本明細書において言及される「薬学的に許容できる」は、組成物の他の成分と適合し、ならびに、レシピエントに生理的にも許容できる、成分を指す。
【０２２２】
本明細書において用いられる用語「薬学的に許容できる担体」は、当業者に公知であるように、任意および全ての溶媒、分散媒、コーティング、界面活性剤、抗酸化、防腐剤（例えば、抗菌剤、抗真菌剤）、等張剤、吸収遅延剤、塩類、防腐剤、薬物、薬物安定剤、バインダー、賦形剤、崩壊剤、潤滑剤、甘味料、香料、色素など、およびそれらの組み合わせを含む（例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，１８ｔｈ  Ｅｄ．Ｍａｃｋ  Ｐｒｉｎｔｉｎｇ  Ｃｏｍｐａｎｙ，１９９０，ｐｐ．１２８９−１３２９を参照）。任意の従来の担体は、活性成分と不適合である場合を除く限りにおいて、治療的または医薬組成物でのその使用が検討される。
【０２２３】
本発明に係る医薬組成物は、容易に利用可能な成分を用いて従来の様式で製剤化され得る。したがって、活性成分（すなわちペプチド）は、１つまたは複数の従来の担体、希釈剤および／または賦形剤を用いて、任意選択で他の活性物質と一緒に取り込まれてよく、従来のガレヌス製剤、例えば、錠剤、丸薬、粉末、トローチ、サシェ、カシェ剤、エリキシル剤、懸濁液、エマルション、溶液、シロップ、エアロゾル（固形媒体として、または液体媒体で）、軟膏、軟および硬ゼラチンカプセル、坐薬、滅菌された注射可能な溶液、滅菌されたパッケージ粉末などが生産される。
【０２２４】
医薬組成物は、例えば、経口投与、非経口投与、および直腸投与などの特定の投与経路のために製剤化され得る。加えて、本発明の医薬組成物は、固形形態（制限されずに、カプセル、錠剤、丸薬、顆粒、粉末または坐薬を含む）、または、液体形態（制限されずに、溶液、懸濁液またはエマルションを含む）で作られ得る。医薬組成物は、滅菌のような従来の調剤操作に供され得て、および／または、従来の不活性希釈剤、平滑剤、または緩衝剤、ならびに、アジュバント、例えば、防腐剤、安定剤、湿潤剤、乳化剤（ｅｍｕｌｓｉｆｅｒ）およびバッファーなどを含んでよい。
【０２２５】
典型的に、医薬組成物は、以下のものと一緒に活性成分を含む錠剤またはゼラチンカプセルである。
ａ）希釈剤、例えば、ラクトース、ポリラクトン、ブドウ糖、スクロース、マンニトール、ソルビトール、セルロースおよび／またはグリシン；
ｂ）潤滑剤、例えば、シリカ、タルカン、ステアリン酸、そのマグネシウムまたはカルシウム塩および／またはポリエチレングリコール；錠剤に関しては、また、（ｆｏｒ  ｔａｂｌｅｔｓ  ａｌｓｏ）
ｃ）バインダー、例えば、ケイ酸アルミニウム・マグネシウム、でんぷん糊、ゼラチン、トラガカント、メチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウムおよび／またはポリビニルピロリドン；必要に応じて、
ｄ）崩壊剤、例えば、デンプン、寒天、アルギン酸またはそのナトリウム塩、または発泡性混合物；および／または
ｅ）吸収剤、着色剤、香味料および甘味料。
【０２２６】
錠剤は、当技術分野で知られている方法に従って、フィルムコーティングまたは腸溶性コーティングされてよい。
【０２２７】
経口投与に適切な組成物は、錠剤、トローチ、水性または油性懸濁液、分散性の粉末または顆粒、エマルション、硬カプセルまたは軟カプセル、またはシロップまたはエリキシル剤の形態での、有効量の本発明の化合物を含む。経口使用が意図される組成物は、医薬組成物の製造に関して当技術分野で知られている任意の方法に従って調製されて、そのような組成物は、薬学的に上品で口当たりの良い製剤を提供するために、甘味料、香料、着色剤および保存剤からなる群より選択される１つまたは複数の薬剤を含んでよい。錠剤は、錠剤の製造に適切な非毒性で薬学的に許容できる賦形剤との混合で、活性成分を含んでよい。これらの賦形剤は、例えば、炭酸カルシウム、炭酸ナトリウム、ラクトース、リン酸カルシウムまたはリン酸ナトリウムのような不活性希釈剤；造粒剤および崩壊剤、例えば、トウモロコシスターチ、またはアルギン酸；結合剤、例えば、スターチ、ゼラチンまたはアカシア；および平滑剤、例えばステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸またはタルクである。錠剤は、コーティングされず、または、消化管内での崩壊および吸収を遅らせるために公知の技術によってコーティングされて、それにより、より長い期間にわたって持続した作用を提供する。例えば、グリセリルモノステアレートまたはグリセリルジステアレートのような時間遅延材料が用いられ得る。経口使用のための製剤は、硬ゼラチンカプセルとして提供されてよく、ここで、活性成分は、不活性の固形希釈剤、例えば、炭酸カルシウム、リン酸カルシウムまたはカオリンと混合されて、または、軟ゼラチンカプセルとして提供されてよく、ここで、活性成分は、水または油媒体、例えば、ピーナッツ油、液体パラフィンまたはオリーブ油と混合される。
【０２２８】
特定の注射可能な組成物は、水性等張溶液または懸濁液であり、坐薬は、脂肪質エマルションまたは懸濁液から有利に調製される。前記組成物は、滅菌されてよく、および／または、アジュバント、例えば、保存剤、安定化剤、湿潤剤または乳化剤、溶液プロモーター、浸透圧を調節するための塩類および／またはバッファーを含む。加えて、それらは、他の治療的に価値のある物質を含んでもよい。前記組成物は、それぞれ、従来の混合、造粒またはコーティングの方法に従って調製されて、活性成分の約０．１〜７５％、または約１〜５０％を含む。
【０２２９】
経皮適用に適切な組成物は、適切な担体とともに有効量の本発明の薬剤を含む。経皮送達に適切な担体は、宿主の皮膚を通過するのを助けるための吸収性の薬理学的に許容できる溶媒を含む。例えば、経皮送達は、裏打部材、任意選択で担体とともに化合物を含むリザーバー、任意選択で延長された期間にわたって制御された所定の速度で宿主の皮膚に化合物を送達するための速度制御バリア、および、デバイスを皮膚に固定する手段を備える、包帯の形態である。
【０２３０】
皮膚および目のような局所適用に適切な組成物は、水溶液、懸濁液、軟膏、クリーム、ジェル、または、例えばエアロゾルなどによる送達のための、噴霧可能な製剤を含む。そのような局所送達システムは、特に、皮膚適用、例えば、皮膚癌の治療、例えば、日焼け止めクリーム、ローション、スプレーなどでの予防的使用に適切である。それらは、したがって、当技術分野でよく知られている、化粧品の製剤を含む、局所での使用に特に適合する。そのようなものは、可溶化剤、安定剤、浸透圧増強剤、バッファーおよび防腐剤を含んでよい。
【０２３１】
本明細書において用いられる局所適用は、吸入または鼻腔内適用にも関連し得る。それらは、ドライパウダー吸入器からの乾燥粉末（単独、混合物として、例えば、ラクトースとの乾燥ブレンド、または、例えばリン脂質との混合成分粒子）の形態で、または、適切な噴霧剤を使用してまたは使用せずに、加圧されたコンテナー、ポンプ、スプレー、噴霧器またはネブライザーからのエアロゾル噴霧の提供で、好都合に送達され得る。
【０２３２】
本発明の実施において用いられる本発明の薬剤の用量は、もちろん、例えば、治療されるべき特定の症状、所望の効果、および投与方法によって変化する。一般に、吸入による投与のための適切な毎日の用量は、患者あたり０．０００１〜３０ｍｇ／ｋｇ、典型的に０．０１〜１０ｍｇのオーダーであり、一方で、経口投与のために適切な毎日の投与量は、０．０１〜１００ｍｇ／ｋｇのオーダーである。
【０２３３】
水は、特定の化合物の分解を促進し得るので、本発明は、活性成分として本発明の薬剤を含む無水医薬組成物および剤形をさらに提供する。
【０２３４】
本発明の無水医薬組成物および剤形は、無水または低水分を含む成分および低水分または低湿度状態を用いて調製され得る。無水医薬組成物は、その無水特性が維持されるように調製および保管され得る。したがって、無水組成物は、それらが適切な処方集キット内に含まれ得るように、水への曝露を防ぐことが知られている材料を用いてパッケージされる。適切なパッケージの例は、限定されないが、密閉密封されたホイル、プラスチック、単位用量コンテナー（例えば、バイアル）、ブリスターパック、およびストリップパックを含む。
【０２３５】
本発明は、活性成分としての本発明の化合物が分解する速度を低減させる１つまたは複数の薬剤を含む医薬組成物および剤形をさらに提供する。そのような薬剤は、本明細書において「安定剤」と呼ばれ、限定されないが、抗酸化、例えば、アスコルビン酸、ｐＨバッファー、または塩バッファーなどを含む。
【０２３６】
本発明の薬剤は、１つまたは複数の他の治療的薬剤と同時または前後のいずれかに投与され得る。本発明の薬剤は、別々に、同一または異なる投与経路によって、または、他の薬剤として同一の医薬組成物で一緒に投与され得る。
【０２３７】
一実施態様では、本発明は、治療における同時、別々または連続の使用のための組み合わせた製剤として、本発明の薬剤および少なくとも１つの他の治療的薬剤を含む製品を提供する。一実施態様では、治療は、異常な細胞分裂が生じる症状または障害の治療である。組み合わせた製剤として提供される製品は、本発明の薬剤および他の治療的薬剤（単数または複数）を同一の医薬組成物内に一緒に、または、本発明の薬剤および他の治療的薬剤（単数または複数）を別々の形態で、例えばキットの形態で含む組成物を含む。
【０２３８】
一実施態様では、本発明は、本発明の薬剤および別の治療的薬剤（単数または複数）を含む医薬組成物を提供する。任意選択で、医薬組成物は、上述の薬学的に許容できる賦形剤を含んでよい。
【０２３９】
当業者は、本発明の薬剤が、対象、特にヒト対象に投与され得ることを理解し、ここで、対象は、異常な細胞分裂が生じる症状または障害に関して外科的処置または放射線療法によって治療されている。また、本発明の化合物は、対象、特にヒト対象に投与されてもよく、ここで、対象は、異常な細胞分裂が生じる症状または障害に関して外科的処置または放射線療法によって以前に（例えば２４時間以内に）治療されたことがある。また、対象、特にヒト対象は、異常な細胞分裂が生じる症状または障害に関して外科的処置または放射線療法によって治療されてもよく、ここで、本発明の化合物は、以前に（例えば２４時間以内に）対象に投与されたことがある。
【０２４０】
一実施態様では、本発明は、２以上の別個の医薬組成物を含むキットを提供し、その少なくとも一方は、本発明の薬剤を含む。一実施態様では、キットは、前記組成物を別々に保持するための手段、例えば、コンテナー、分割されたボトル、または分割されたホイルパケットを備える。そのようなキットの例は、錠剤、カプセルなどのパッケージのために典型的に用いられるブリスターパックである。
【０２４１】
本発明のキットは、経口および非経口のような異なる剤形を投与するため、別個の組成物を異なる用量間隔で投与するため、または、別個の組成物を互いに対して滴定するために用いられ得る。コンプライアンスを支援するために、本発明のキットは、投与のための指示書を典型的に含む。
【０２４２】
本発明の併用療法では、本発明の薬剤および他の治療的薬剤は、同一または異なる製造業者によって製造および／または処方され得る。さらに、本発明の薬剤および他の治療的薬剤は：（ｉ）医者に対する併用製品のリリース前に（例えば、本発明の薬剤および他の治療的薬剤を含むキットの場合）；（ｉｉ）投与の直前に医師自身によって（または医師の指導の下で）；（ｉｉｉ）例えば、本発明の薬剤および他の治療的薬剤の連続的な投与中に、患者自身において、併用療法にまとめられ得る。
【０２４３】
したがって、本発明は、異常な細胞分裂が生じる症状または障害を治療するための本発明の薬剤の使用を提供し、ここで、医薬品は、別の治療的薬剤との投与のために調製される。また、本発明は、異常な細胞分裂が生じる症状または障害を治療するための別の治療的薬剤の使用も提供し、ここで、医薬品は、本発明の薬剤とともに投与される。
【０２４４】
また、本発明は、異常な細胞分裂が生じる症状または障害を治療する方法での使用のための本発明の薬剤も提供し、ここで、本発明の薬剤は、別の治療的薬剤との投与のために調製される。また、本発明は、異常な細胞分裂が生じる症状または障害を治療する方法での使用のための別の治療的薬剤も提供し、ここで、他の治療的薬剤は、本発明の薬剤との投与のために調製される。また、本発明は、異常な細胞分裂が生じる症状または障害を治療する方法での使用のための本発明の薬剤も提供し、ここで、本発明の薬剤は、別の治療的薬剤とともに投与される。また、本発明は、異常な細胞分裂が生じる症状または障害を治療する方法での使用のための別の治療的薬剤も提供し、ここで、他の治療的薬剤は、本発明の薬剤とともに投与される。
【０２４５】
また、本発明は、異常な細胞分裂が生じる症状または障害を治療するための本発明の薬剤の使用も提供し、ここで、対象は、別の治療的薬剤によって以前に（例えば２４時間以内に）治療されたことがある。また、本発明は、異常な細胞分裂が生じる症状または障害を治療するための別の治療的薬剤の使用も提供し、ここで、対象は、本発明の薬剤によって以前に（例えば２４時間以内に）治療されたことがある。
【０２４６】
組成物は、本発明の薬剤の作用を補助または増大する分子、例えば、代謝拮抗剤、アルキル化剤、細胞傷害性抗生物質、トポイソメラーゼＩおよび／またはＩＩ阻害剤のような細胞傷害剤、ビンカアルカロイドおよびモノクローナル抗体をさらに含んでよい。
【０２４７】
必要ならば、組成物は、活性成分に付着された標的化部分、例えば、内因性受容体に特異的および選択的に結合して、特定の細胞型または位置への標的化、例えば、リンパ球、単球、マクロファージ、内皮細胞、上皮細胞、血液細胞、赤血球、血小板、好酸球、好中球、ナチュラルキラー細胞、樹状細胞、脳細胞、心細胞、肺細胞、膵島細胞、腎臓細胞、癌細胞、ホルモン腺細胞、皮膚、骨、関節、骨髄、胃粘膜、リンパ節、パイエル板、大網および他の適切な組織への標的化を可能にする、リガンドを含んでもよい。
【０２４８】
本発明のペプチドは、従来の治療に用いられる薬剤、例えば細胞傷害剤の作用を補助または増大して、例えば幹細胞治療中に幹細胞を保護することによってそれらの副作用を低減するために用いられ得る。
【０２４９】
一実施態様では、本発明のペプチドは、１つまたは複数の他の治療的に活性の薬剤と一緒に投与される。例えば、本発明のペプチドは、組み合わせの化学療法剤として用いられ得る。本発明のペプチドは、一部の癌細胞、例えばＡＭＬ細胞が、細胞周期に入るのを誘導し得る。この方法で刺激された細胞は、したがって、従来の抗癌薬物の影響をより受けやすくなり得る。本発明のペプチドは、したがって、白血病などの癌、例えばＡＭＬを標的化するために、細胞傷害性薬物のような他の抗癌剤と組み合わせて用いられ得る。
【０２５０】
また、本発明のペプチドは、内因性の幹細胞集団を保護するために、他の抗癌治療と組み合わせて用いてもよい。本発明のペプチドは、正常な幹細胞／前駆細胞をＧ０／Ｇ１静止状態で維持し得る。この細胞保護能力は、したがって、そのような幹細胞を任意の抗癌治療の効果から保護し得る。これは、本発明のペプチドが分裂細胞を標的化する細胞傷害剤と組み合わせて用いられる場合の特定の使用であり得る。そのような治療の間、患者の正常な幹細胞を静止状態に維持することによって、内因性の幹細胞集団に対する抗癌治療の副作用は最小限化され得る。
【０２５１】
この潜在的副作用の低減は、他の方法で可能または安全であるよりも高い投与量またはレベルの従来の治療が患者に対して用いられるのも可能にし得る。
【０２５２】
一実施態様では、他の治療的薬剤は、抗増殖剤、キナーゼ阻害剤、血管新生阻害剤、増殖因子阻害剤、ｃｏｘ−Ｉ阻害剤、ｃｏｘ−ＩＩ阻害剤、分裂阻害剤、アルキル化剤、代謝拮抗剤、インターカレート抗生物質、増殖因子阻害剤、放射線、細胞周期阻害剤、酵素、トポイソメラーゼ阻害剤、生物学的応答調節剤、抗体、細胞傷害性、抗ホルモン、スタチン、抗アンドロゲンおよび光化学療法剤からなる群より選択される抗腫瘍剤である。
【０２５３】
したがって、本発明は、さらなる態様として、抗増殖剤、キナーゼ阻害剤、血管新生阻害剤、増殖因子阻害剤、ｃｏｘ−Ｉ阻害剤、ｃｏｘ−ＩＩ阻害剤、分裂阻害剤、アルキル化剤、代謝拮抗剤、インターカレート抗生物質、増殖因子阻害剤、放射線、細胞周期阻害剤、酵素、トポイソメラーゼ阻害剤、生物学的応答調節剤、抗体、細胞傷害性、抗ホルモン、スタチン、抗アンドロゲンおよび光化学療法剤からなる群より選択される抗腫瘍剤と本発明の薬剤の組み合わせを含む。
【０２５４】
本発明の一実施態様では、本発明の組成物とともに用いられる抗腫瘍剤は、抗血管新生剤、キナーゼ阻害剤、ｐａｎキナーゼ阻害剤または増殖因子阻害剤である。
【０２５５】
適切なｐａｎキナーゼ阻害剤は、米国特許第６，５７３，２９３号に記載のＳＵ−１１２４８（スニチニブリンゴ酸塩）を含む（Ｐｆｉｚｅｒ  Ｉｎｃ）。
【０２５６】
抗血管新生剤は、限定されないが、以下の薬剤、例えば、ＥＧＦ阻害剤、ＥＧＦＲ阻害剤、ＶＥＧＦ阻害剤、ＶＥＧＦＲ阻害剤、ＴＩＥ２阻害剤、ＩＧＦ１  Ｒ阻害剤、ＣＯＸ−ＩＩ（シクロオキシゲナーゼＩＩ）阻害剤、ＭＭＰ−２（マトリックス−メタロプロテイナーゼ２）阻害剤、およびＭＭＰ−９（マトリックス−メタロプロテイナーゼ９）阻害剤を含む。適切なＶＥＧＦ阻害剤は、例えば、アバスチン（ベバシズマブ）、カリフォルニア州サウスサンフランシスコのＧｅｎｅｎｔｅｃｈ，Ｉｎｃ．の抗ＶＥＧＦモノクローナル抗体を含む。
【０２５７】
さらなるＶＥＧＦ阻害剤は、ＣＰ−５４７，６３２（Ｐｆｉｚｅｒ  Ｉｎｃ．）、ＡＧ１３７３６（アキシチニブ、Ｐｆｉｚｅｒ  Ｉｎｃ．）、ＺＤ−６４７４（ＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａ）、ＡＥＥ７８８（Ｎｏｖａｒｔｉｓ）、ＡＺＤ−２１７１）、ＶＥＧＦ  Ｔｒａｐ（Ｒｅｇｅｎｅｒｏｎ／Ａｖｅｎｔｉｓ）、バタラニブ（ＰＴＫ−７８７、ＺＫ−２２２５８４としても知られる：Ｎｏｖａｒｔｉｓ＆Ｓｃｈｅｒｉｎｇ  ＡＧ）、マクジェン（ペガプタニブ・オクタナトリウム（ｐｅｇａｐｔａｎｉｂ  ｏｃｔａｓｏｄｉｕｍ）、ＮＸ−１８３８、ＥＹＥ−００１、ＰｆｉｚｅｒＩｎｃ．／Ｇｉｌｅａｄ／Ｅｙｅｔｅｃｈ）、ＩＭ８６２（米国ワシトン州カークランドのＣｙｔｒａｎ  Ｉｎｃ．）；およびＡｎｇｉｏｚｙｍｅ、Ｒｉｂｏｚｙｍｅ（コロラド州Ｂｏｕｌｄｅｒ）由来の合成リボザイム、および、Ｃｈｉｒｏｎ（カリフォルニア州Ｅｍｅｒｙｖｉｌｌｅ）およびそれらの組み合わせを含む。本発明の実施において有用なＶＥＧＦ阻害剤は、米国特許第６，５３４，５２４号および第６，２３５，７６４号に開示されて、その両方ともが、全ての目的に関してそれらの全体で援用される。特に適切なＶＥＧＦ阻害剤は、ＣＰ−５４７，６３２、アキシチニブ、バタラニブ、マクジェンおよびそれらの組み合わせを含む。
【０２５８】
本発明の組成物とともに用いられ得る他の抗増殖剤は、酵素ファルネシルタンパク質トランスフェラーゼの阻害剤および受容体チロシンキナーゼＰＤＧＦｒの阻害剤を含む。ＰＤＧＲｒ阻害剤は、限定されないが、２００１年７月７日に発行された国際特許出願公開番号ＷＯ０１／４０２１７、および、２００４年３月１１日に発行された国際特許出願公開番号ＷＯ２００４／０２０４３１に開示されるものを含み、その内容は、全ての目的に関してそれらの全体で援用される。適切なＰＤＧＦｒ阻害剤は、ＰｆｉｚｅｒのＣＰ−６７３，４５１およびＣＰ−８６８，５９６およびその薬学的に許容できる塩類を含む。
【０２５９】
適切なＧＡＲＦ阻害剤は、ＰｆｉｚｅｒのＡＧ−２０３７（ペリトレキソールおよびその薬学的に許容できる塩類）を含む。本発明の実施において有用なＧＡＲＦ阻害剤は、米国特許第５，６０８，０８２号に開示されて、全ての目的に関してその全体で援用される。
【０２６０】
本明細書に記載の本発明の化合物とともに用いられ得る有用なＣＯＸ−ＩＩ阻害剤の例は、ＣＥＬＥＢＲＥＸ（セレコキシブ）、パレコキシブ、デラコキシブ、ＡＢＴ−９６３、ＭＫ−６６３（エトリコキシブ）、ＣＯＸ−１８９（ルミラコキシブ）、ＢＭＳ３４７０７０、ＲＳ  ５７０６７、ＮＳ−３９８、Ｂｅｘｔｒａ（バルデコキシブ）、パレコキシブ（ｐａｒａｃｏｘｉｂ）、Ｖｉｏｘｘ（ロフェコキシブ）、ＳＤ−８３８１、４−メチル−２−（３，４−ジメチルフェニル）−１−（４−スルファモイル−フェニル）−１Ｈ−ピロール、２〜（４−エトキシフェニル）−４−メチル−１−（４−スルファモイルフェニル）−１Ｈ−ピロール、Ｔ−６１４、ＪＴＥ−５２２、Ｓ−２４７４、ＳＶＴ−２０１６、ＣＴ−３、ＳＣ−５８１２５およびＡｒｃｏｘｉａ（エトリコキシブ）を含む。加えて、ＣＯＸ−ＩＩ阻害剤は、米国特許出願番号１０／８０１，４４６および１０／８０１，４２９に開示されて、その内容は、全ての目的に関してそれらの全体で援用される。
【０２６１】
本発明の組成物とともに用いられる抗腫瘍剤としての他の有用な阻害剤は、アスピリン、および、プロスタグランジンを作る酵素（シクロオキシゲナーゼＩおよびＩＩ）を阻害する非ステロイド系抗炎症性薬物（ＮＳＡＩＤ）を含み、より低いレベルのプロスタグランジンをもたらし、以下に限定されないが、サルサラート（Ａｍｉｇｅｓｉｃ）、ジフルニサル（ドロビッド）、イブプロフェン（モトリン）、ケトプロフェン（オルヂス）、ナブメトン（レラフェン）、ピロキシカム（フェルデン）、ナプロキセン（アリーブ、ナプロシン）、ジクロフェナク（ボルタレン）、インドメタシン（インドシン）、スリンダク（クリノリル）、トルメチン（トレクチン）、エトドラク（ロヂン）、ケトロラック（トラドル）、オキサプロジン（Ｄａｙｐｒｏ）およびそれらの組み合わせを含む。
【０２６２】
適切なＣＯＸ−Ｉ阻害剤は、イブプロフェン（モトリン）、ニュプリン、ナプロキセン（アリーブ）、インドメタシン（インドシン）、ナブメトン（レラフェン）およびそれらの混合物を含む。
【０２６３】
本発明の組成物とともに用いられる標的化された薬剤は、ＥＧＦｒ阻害剤、例えば、イレッサ（ゲフィチニブ、ＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａ）、タルセバ（エルロチニブまたはＯＳＩ−７７４、ＯＳＩ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ  Ｉｎｃ．）、アービタックス（セツキシマブ、Ｉｍｃｌｏｎｅ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，Ｉｎｃ．）、ＥＭＤ−７２００（Ｍｅｒｃｋ  ＡＧ）、ＡＢＸ−ＥＧＦ（Ａｍｇｅｎ  Ｉｎｃ．およびＡｂｇｅｎｉｘ  Ｉｎｃ．）、ＨＲ３（Ｃｕｂａｎ  Ｇｏｖｅｒｎｍｅｎｔ）、ＩｇＡ抗体（Ｅｒｌａｎｇｅｎ−Ｎｕｒｅｍｂｅｒｇ大学）、ＴＰ−３８（ＩＶＡＸ）、ＥＧＦＲ融合タンパク質、ＥＧＦ−ワクチン、抗−ＥＧＦｒイムノリポソーム（Ｈｅｒｍｅｓ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ  Ｉｎｃ．）およびそれらの組み合わせを含む。好適には、ＥＧＦｒ阻害剤は、イレッサ、アービタックス、タルセバおよびそれらの組み合わせを含む。他の抗腫瘍剤は、ｐａｎ  ｅｒｂ受容体阻害剤またはＥｒｂＢ２受容体阻害剤、例えば、ＣＰ−７２４，７１４（Ｐｆｉｚｅｒ，Ｉｎｃ．）、ＣＭ  ０３３（カネルチニブ、Ｐｆｉｚｅｒ，Ｉｎｃ．）、ハーセプチン（トラスツズマブ、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ  Ｉｎｃ．）、Ｏｍｉｔａｒｇ（２Ｃ４、ペルツズマブ、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ  Ｉｎｃ．）、ＴＡＫ−１６５（Ｔａｋｅｄａ）、ＧＷ−５７２０１６（ロナファルニブ、ＧｌａｘｏＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅ）、ＧＷ−２８２９７４（ＧｌａｘｏＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅ）、ＥＫＢ−５６９（Ｗｙｅｔｈ）、ＰＫＭ  ６６（Ｎｏｖａｒｔｉｓ）、ｄＨＥＲ２（ＨＥＲ２ワクチン、Ｃｏｒｉｘａ  ａｎｄ  ＧｌａｘｏＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅ）、ＡＰＣ８０２４（ＨＥＲ２ワクチン、Ｄｅｎｄｒｅｏｎ）、抗−ＨＥＲ２／ｎｅｕ二重特異性抗体（Ｄｅｃｏｆ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｃｅｎｔｅｒ）、Ｂ７．ｈｅｒ２．ｌｇＧ３（Ａｇｅｎｓｙｓ）、ＡＳＨＥＲ２（Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ  ｆｏｒ  Ｒａｄ  Ｂｉｏｌｏｇｙ＆Ｍｅｄｉｃｉｎｅ）、三機能性二重特異性抗体（Ｍｕｎｉｃｈ大学）およびｍＡＢ  ＡＲ−２０９（Ａｒｏｎｅｘ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ  Ｉｎｃ）およびｍＡＢ  ２Ｂ−１（Ｃｈｉｒｏｎ）およびそれらの組み合わせから選択されるものを含む。特定のｅｒｂ選択的な抗腫瘍剤は、ハーセプチン、ＴＡＫ−１６５、ＣＰ−７２４，７１４、ＡＢＸ−ＥＧＦ、ＨＥＲ３およびそれらの組み合わせを含む。好適には、ｐａｎ  ｅｒｂ受容体阻害剤は、ＧＷ５７２０１６、ＣＭ  ０３３、ＥＫＢ−５６９、およびＯｍｉｔａｒｇおよびそれらの組み合わせを含む。
【０２６４】
加えて、他の抗腫瘍剤は、以下の薬剤、ＢＡＹ−４３−９００６（Ｏｎｙｘ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ  Ｉｎｃ．）、ゲナセンス（ａｕｇｍｅｒｏｓｅｎ，Ｇｅｎｔａ）、パニツムマブ（Ａｂｇｅｎｉｘ／Ａｍｇｅｎ）、ゼヴァリン（Ｓｃｈｅｒｉｎｇ）、ベキサール（Ｃｏｒｉｘａ／ＧｌａｘｏＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅ）、アバレリクス、アリムタ、ＥＰＯ  ９０６（Ｎｏｖａｒｔｉｓ）、ディスコデルモリド（ＸＡＡ−２９６）、ＡＢＴ−５１０（Ａｂｂｏｔｔ）、ネオバスタット（Ａｅｔｅｒｎａ）、エンザスタウリン（Ｅｌｉ  Ｌｉｌｌｙ）、コンブレスタチンＡ４Ｐ（Ｏｘｉｇｅｎｅ）、ＺＤ−６１２６（ＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａ）、フラボピリドール（Ａｖｅｎｔｉｓ）、ＣＹＣ−２０２（Ｃｙｃｌａｃｅｌ）、ＡＶＥ−８０６２（Ａｖｅｎｔｉｓ）、ＤＭＸＡＡ（Ｒｏｃｈｅ／Ａｎｔｌｓｏｍａ）、チミタク（Ｅｘｉｍｉａｓ）、テモダール（テモゾロミド、Ｓｃｈｅｒｉｎｇ  Ｐｌｏｕｇｈ）およびレビリムド（Ｃｅｌｅｇｅｎｅ）およびそれらの組み合わせから選択され得る。
【０２６５】
他の抗腫瘍剤は、以下の薬剤、ＣｙＰａｔ（シプロテロンアセテート）、ヒストレリン（ヒストレリンアセテート）、Ｐｌｅｎａｉｘｉｓ（アバレリクスデポー）、アトラセンタン（ＡＢＴ−６２７）、サトラプラチン（ＪＭ−２１６）、サロミド（サリドマイド）、Ｔｈｅｒａｔｏｐｅ、テミリフェン（Ｔｅｍｉｌｉｆｅｎｅ）（ＤＰＰＥ）１  ＡＢＩ−００７（パクリタキセル）、エビスタ（ラロキシフェン）、アタメスタン（Ｂｉｏｍｅｄ−７７７）、Ｘｙｏｔａｘ（ポリグルタメートパクリタキセル）、Ｔａｒｇｅｔｉｎ（ベキサロテン（ｂｅｘａｒｏｔｉｎｅ））およびそれらの組み合わせから選択され得る。
【０２６６】
加えて、他の抗腫瘍剤は、以下の薬剤、Ｔｒｉｚａｏｎｅ（チラパザミン）、Ａｐｏｓｙｎ（エクシスリンド）、Ｎｅｖａｓｔａｔ（ＡＥ−９４１）、Ｃｅｐｌｅｎｅ（ヒスタミンジヒドロクロリド）、Ｏｒａｔｈｅｃｉｎ（ルビテカン）、Ｖｉｒｕｌｉｚｉｎ、Ｇａｓｔｒｉｍｍｕｎｅ（Ｇ１７ＤＴ）、ＤＸ−８９５１ｆ（メシル酸エキサテカン）、オンコナーゼ（ランピマーゼ（ｒａｎｐｉｍａｓｅ））、ＢＥＣ２（ミツモアブ（ｍｉｔｕｍｏａｂ））、Ｘｃｙｔｒｉｎ（モテキサフィンガドリニウム）およびそれらの組み合わせから選択されてもよい。さらなる抗腫瘍剤は、以下の薬剤、ＣｅａＶａｃ（ＣＥＡ）、ＮｅｕＴｒｅｘｉｎ（グルクロン酸トリメトレキサート）およびそれらの組み合わせから選択され得る。さらなる抗腫瘍剤は、以下の薬剤、ＯｖａＲｅｘ（オレゴボマブ）、Ｏｓｉｄｅｍ（ＩＤＭ−１）、およびそれらの組み合わせから選択され得る。
【０２６７】
さらなる抗腫瘍剤は、以下の薬剤、Ａｄｖｅｘｉｎ（ＩＮＧ２０１）、Ｔｉｒａｚｏｎｅ（チラパザミン）、およびそれらの組み合わせから選択され得る。さらなる抗腫瘍剤は、以下の薬剤、ＲＳＲ１３（エファプロキシラル）、Ｃｏｔａｒａ（１３１１  ｃｈＴＮＴ  １／ｂ）、ＮＢＩ−３００１（ＩＬ−４）およびそれらの組み合わせから選択され得る。さらなる抗腫瘍剤は、以下の薬剤、Ｃａｎｖａｘｉｎ、ＧＭＫワクチン、ＰＥＧ  ｌｎｔｅｒｏｎ  Ａ、タキソプレキシン（ＤＨＡ／パクリタキセル（ｐａｃｉｌｔａｘｅｌ））およびそれらの組み合わせから選択され得る。
【０２６８】
他の抗腫瘍剤は、ＰｆｉｚｅｒのＭＥＫ１／２阻害剤ＰＤ３２５９０１、Ａｒｒａｙ  ＢｉｏｐｈａｒｍのＭＥＫ阻害剤ＡＲＲＹ−１４２８８６、Ｂｒｉｓｔｏｌ  ＭｙｅｒｓのＣＤＫ２阻害剤ＢＭＳ−３８７，０３２、ＰｆｉｚｅｒのＣＤＫ阻害剤ＰＤ０３３２９９１およびＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａのＡＸＤ−５４３８およびそれらの組み合わせを含む。
【０２６９】
加えて、ｍＴＯＲ阻害剤は、ＣＣＩ−７７９（Ｗｙｅｔｈ）およびラパマイシン誘導体ＲＡＤ００１（Ｎｏｖａｒｔｉｓ）およびＡＰ−２３５７３（Ａｒｉａｄ）、ＨＤＡＣ阻害剤ＳＡＨＡ（Ｍｅｒｃｋ  Ｉｎｃ／Ａｔｏｎ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）およびそれらの組み合わせとしても使用され得る。さらなる抗腫瘍剤は、オーロラ２阻害剤ＶＸ−６８０（Ｖｅｒｔｅｘ）、Ｃｈｋ１／２阻害剤ＸＬ８４４（Ｅｘｉｌｉｘｉｓ）を含む。
【０２７０】
以下の細胞傷害剤、例えば、エピルビシン（Ｅｌｌｅｎｃｅ）、ドセタキセル（タキソテール）、パクリタキセル、Ｚｉｎｅｃａｒｄ（デクスラゾキサン）、リツキシマブ（リツキサン）、イマチニブメシレート（グリベック）、およびそれらの組み合わせからなる群より選択される１つまたは複数は、本明細書に記載のように本発明の組成物とともに用いられ得る。
【０２７１】
また、本発明は、制限されないが、エキセメスタン（アロマシン、Ｐｆｉｚｅｒ  Ｉｎｃ．）、リュープロレリン（リュープロンまたはリュープリン、ＴＡＰ／Ａｂｂｏｔｔ／Ｔａｋｅｄａ）、アナストロゾール（アリミデックス、Ａｓｔｒａｚｅｎｅｃａ）、ゴセレリン（ｇｏｓｒｅｌｉｎ）（ゾラデックス、ＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａ）、ドキセルカルシフェロール、ファドロゾール、フォルメスタン、タモキシフェンシトレート（タモキシフェン、ノルバデックス、ＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａ）、カソデックス（ＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａ）、アバレリクス（Ｐｒａｅｃｉｓ）、トレルスター、およびそれらの組み合わせを含む、ホルモン療法とともに、本発明の組成物の使用を検討する。
【０２７２】
また、本発明は、抗エストロゲンのようなホルモン療法剤にも関し、制限されないが、フルベストラント、トレミフェン、ラロキシフェン、ラソフォキシフェン、レトロゾール（フェマーラ、Ｎｏｖａｒｔｉｓ）、抗アンドロゲン、例えば、ビカルタミド、フルタミド、ミフェプリストン、ニルタミド、カソデックス（Ｒ）（４’−シアノ−３−（４−フルオロフェニルスルホニル）−２−ヒドロキシ−２−メチル−３’−（トリフルオロメチル）プロピオンアニリド、ビカルタミド）およびそれらの組み合わせを含む。
【０２７３】
さらに、本発明は、本発明の組成物を単独で、または、１つまたは複数の補佐的なケア製品、例えば、フィルグラスチム（ニューポジェン）、オンダンセトロン（Ｚｏｆｒａｎ）、フラグミン、プロクリット、アロキシ、イメンド、またはそれらの組み合わせからなる群より選択される製品と組み合わせて提供する。
【０２７４】
特に適切な細胞傷害剤は、カンプトサール、アービタックス、イレッサ、グリベック、タキソテールおよびそれらの組み合わせを含む。
【０２７５】
以下のトポイソメラーゼＩ阻害剤は、抗腫瘍剤として使用され得る：カンプトテシン；イリノテカンＨＣｌ（カンプトサール）；エドテカリン；オラセシン（ｏｒａｔｈｅｃｉｎ）（Ｓｕｐｅｒｇｅｎ）；エキサテカン（Ｄａｉｉｃｈｉ）；ＢＮ−８０９１５（Ｒｏｃｈｅ）；およびそれらの組み合わせ。特に好ましいトポイソメラーゼ（ｔｏｐｏｓｉｍｅｒａｓｅ）Ｉｌ阻害剤は、エピルビシン（Ｅｌｌｅｎｃｅ）を含む。
【０２７６】
アルキル化剤は、限定されないが、ナイトロジェンマスタードＮ−オキシド、シクロホスファミド、イホスファミド、メルファラン、ブスルファン、ミトブロニトール、カルボコン、チオテパ、ラニムスチン、ニムスチン、テモゾロミド、ＡＭＤ−４７３、アルトレタミン、ＡＰ−５２８０、アパジコン、ブロスタリシン、ベンダムスチン、カルムスチン、エストラムスチン、フォテムスチン、グルホスファミド、イホスファミド、ＫＷ−２１７０、マホスファミド、およびミトラクトールを含み；白金が配位された（ｐｌａｔｉｎｕｍ−ｃｏｏｒｄｉｎａｔｅｄ）アルキル化化合物は、限定されないが、シスプラチン、パラプラチン（カルボプラチン）、エプタプラチン（ｅｐｔａｐｌａｔｉｎ）、ロバプラチン、ネダプラチン、エロキサチン（オキサリプラチン、Ｓａｎｏｆｉ）またはサトラプラチン（ｓａｔｒｐｌａｔｉｎ）およびそれらの組み合わせを含む。特に好ましいアルキル化剤は、エロキサチン（オキサリプラチン）を含む。
【０２７７】
代謝拮抗剤は、限定されないが、メトトレキサート、６−メルカプトプリンリボシド、メルカプトプリン、５−フルオロウラシル（５−ＦＵ）を、単独または以下と組み合わせて、ロイコボリン、タガフール、ＬＩＦＴ、ドキシフルリジン、カルモフール、シタラビン、シタラビンオクホスファート、エノシタビン、Ｓ−１、アリムタ（ペメトレキセド（ｐｒｅｍｅｔｒｅｘｅｄ）二ナトリウム、ＬＹ２３１５１４、ＭＴＡ）、ジェムザール（ゲムシタビン、ＥＩｉ  Ｌｉｌｌｙ）、フルダラビン、５−アザシチジン、カペシタビン、クラドリビン、クロファラビン、デシタビン、エフロルニチン、エチニルシチジン、シトシンアラビノシド、ヒドロキシ尿素、ＴＳ−１、メルファラン、ネララビン、ノラトレキシド、オクホスファート、ペメトレキセド二ナトリウム、ペントスタチン、ｐｅｌｉｔｒｅｘｏｉ、ラルチトレキセド、トリアピン、トリメトレキサート、ビダラビン、ビンクリスチン、ビノレルビン；または、例えば、欧州特許出願番号２３９３６２に開示される好ましい抗転写産物の１つ、例えば、Ｎ−（５−［Ｎ−（３、４−ジヒドロ−２−メチル−４−オキソキナゾリン−６−イルメチル）−Ｎ−メチルアミノ］−２−テノイル）−Ｌ−グルタミン酸およびそれらの組み合わせを含む。
【０２７８】
抗生物質は、インターカレート抗生物質を含み、限定されないが：アクラルビシン、アクチノマイシンＤ、アムルビシン、アナマイシン、アドリアマイシン、ブレオマイシン、ダウノルビシン、ドキソルビシン、エルサミトルシン、エピルビシン、ガラルビシン（ｇａｌａｒｕｂｉｃｉｎ）、イダルビシン、マイトマイシンＣ、ネモルビシン、ネオカルチノスタチン、ペプロマイシン、ピラルビシン、レベッカマイシン、スチマラマー、ストレプトゾシン、バルルビシン、ジノスタチンおよびそれらの組み合わせを含む。
【０２７９】
植物由来の抗腫瘍物質は、分裂阻害剤、例えば、ビンブラスチン、ドセタキセル（タキソテール）、パクリタキセルおよびそれらの組み合わせから選択されるものなどを含む。
【０２８０】
細胞傷害性トポイソメラーゼ阻害剤は、アクラルビシン（ａｃｌａｒｕｂｉｃｎ）、アモナファイド、ベロテカン、カンプトテシン、１０−ヒドロキシカンプトテシン、９−アミノカンプトテシン、ジフロモテカン（ｄｉｆｌｏｍｏｔｅｃａｎ）、イリノテカンＨＣｌ（カンプトサール）、エドテカリン、エピルビシン（Ｅｉｌｅｎｃｅ）、エトポシド、エキサテカン、ジャイマテカン、ラルトテカン、ミトキサントロン、ピラルビシン、ピクサントロン、ルビテカン、シブゾキサン、ＳＮ−３８、タフルポシド、トポテカン、およびそれらの組み合わせからなる群より選択される１つまたは複数の薬剤を含む。好ましい細胞傷害性トポイソメラーゼ阻害剤は、カンプトテシン、１０−ヒドロキシカンプトテシン、９−アミノカンプトテシン（ｃａｍｐｔｏｔｈｅｄｎ）、イリノテカンＨＣｌ（カンプトサール）、エドテカリン、エピルビシン（Ｅｉｌｅｎｃｅ）、エトポシド、ＳＮ−３８、トポテカン、およびそれらの組み合わせからなる群より選択される１つまたは複数の薬剤を含む。
【０２８１】
免疫学は、インターフェロンおよび非常に多くの他の免疫の増強剤を含む。インターフェロンは、インターフェロンα、インターフェロンα−２ａ、インターフェロン、α−２ｂ、インターフェロンβ、インターフェロンγ−１ａ、インターフェロンγ−１ｂ（アクティミューン）、またはインターフェロンγ−ｎ１およびそれらの組み合わせを含む。他の薬剤は、フィルグラスチム、レンチナン（ｉｅｎｔｉｎａｎ）、シゾフィラン（ｓｉｚｏｆｉｌａｎ）、ＴｈｅｒａＣｙｓ、ウベニメクス、ＷＦ−１０、アルデスロイキン、アレムツズマブ、ＢＡＭ−００２、ダカルバジン、ダクリズマブ、デニロイキン、ゲムツズマブオゾガマイシン、イブリツモマブ、イミキモド、レノグラスチム、レンチナン（Ｉｅｎｔｉｎａｎ）、メラノーマワクチン（Ｃｏｒｉｘａ）、モルグラモスチム、ＯｎｃｏＶ  ＡＸ−ＣＬ、サルグラモスチム、タソネルミン、テセロイキン（ｔｅｃｌｅｕｋｉｎ）、チマルファシン（ｔｈｙｍａｌａｓｉｎ）、トシツモマブ、Ｖｉｒｕｌｉｚｉｎ、２−１００、エプラツズマブ、ミツモマブ（ｍｉｔｕｍｏｍａｂ）、オレゴボマブ、ペムツモマブ（ｐｅｍｔｕｍｏｍａｂ）（Ｙ−ｍｕＨＭＦＧＩ）、プロベンジ（Ｄｅｎｄｒｅｏｎ）およびそれらの組み合わせを含む。
【０２８２】
生物学的応答調節剤は、生体の防御メカニズムまたは生物学的応答、例えば、組織細胞の生存、増殖、または分化を改変してそれらが抗腫瘍活性を有するようにさせる薬剤である。そのような薬剤は、クレスチン、レンチナン（Ｉｅｎｔｉｎａｎ）、シゾフィラン、ピシバニール、ウベニメクスおよびそれらの組み合わせを含む。
【０２８３】
他の抗癌剤は、アリトレチノイン、アンプリゲン、アトラセンタンベキサロテン、ボルテゾミブ．ボセンタン、カルチトリオール、エクシスリンド（ｅｘｉｓｕｉｉｎｄ）、フィナステリド．フォテムスチン、イバンドロン酸、ミルテホシン、ミトキサントロン、１−アスパラギナーゼ、プロカルバジン、ダカルバジン、ヒドロキシカルバミド、ペグアスパラガーゼ、ペントスタチン、タザロテン（ｔａｚａｒｏｔｎｅ）、Ｔｅｌｃｙｔａ（ＴＬＫ−２８６，Ｔｅｌｉｋ  Ｉｎｃ．）、ベルケイド（ボルテゾミブ（ｂｏｒｔｅｍａｚｉｂ），Ｍｉｌｌｅｎｉｕｍ）、トレチノイン、およびそれらの組み合わせを含む。
【０２８４】
他の抗血管新生化合物は、アシトレチン、フェンレチニド、サリドマイド、ゾレドロン酸、アンギオスタシン、アプリジン、シレングチド（ｃｉｌｅｎｇｔｉｄｅ）、コンブレタスタチンＡ−４、エンドスタチン、ハロフジノン、レビマスタット（ｒｅｂｉｍａｓｔａｔ）、レモバブ、レブリミド、スクアラミン、ウクライン、ビタキシンおよびそれらの組み合わせを含む。白金が配位された化合物は、限定されないが、シスプラチン、カルボプラチン、ネダプラチン、オキサリプラチン、およびそれらの組み合わせを含む。
【０２８５】
カンプトテシン誘導体は、限定されないが、カンプトテシン、１０−ヒドロキシカンプトテシン、９−アミノカンプトテシン、イリノテカン、ＳＮ−３８、エドテカリン、トポテカンおよびそれらの組み合わせを含む。他の抗腫瘍剤は、ミトキサントロン、ｌ−アスパラギナーゼ、プロカルバジン、ダカルバジン、ヒドロキシカルバミド、ペントスタチン、トレチノインおよびそれらの組み合わせを含む。
【０２８６】
抗腫瘍免疫応答を高めることが可能な抗腫瘍剤、例えば、ＣＴＬＡ４（細胞傷害性リンパ球抗原４）抗体、および、米国特許第６，６８２，７３６号に開示されるＭＤＸ−０１０（Ｍｅｄａｒｅｘ）およびＣＴＬＡ４化合物；および、他のファルネシルタンパク質トランスフェラーゼ阻害剤のような抗増殖剤、例えば、ファルネシルタンパク質トランスフェラーゼ阻害剤などの、ＣＴＬＡ４をブロックすることが可能な他の薬剤も使用され得る。加えて、本発明において用いられ得る特異的なＣＴＬＡ４抗体は、米国仮出願６０／１１３，６４７（１９９８年１２月２３日に出願）、米国特許第６，６８２，７３６号に記載のものを含み、その両方ともが、それらの全体で参照により本明細書中に援用される。
【０２８７】
本発明において用いられ得る特異的なＩＧＦ１Ｒ抗体は、国際特許出願番号ＷＯ２００２／０５３５９６に記載のものを含み、その全体で参照により本明細書中に援用される。本発明において用いられ得る特異的なＣＤ４０抗体は、国際特許出願番号ＷＯ２００３／０４０１７０に記載のものを含み、その全体で参照により本明細書中に援用される。
【０２８８】
遺伝子療法剤は、ＴＮＦｅｒａｄｅ（ＧｅｎｅＶｅｃ）のような抗腫瘍剤としても用いられ得て、放射線療法に応答してＴＮＦαを発現する。
【０２８９】
本発明の一実施態様では、スタチンは、本発明の組成物とともに用いられ得る。スタチン（ＨＭＧ−ＣｏＡ還元酵素（ｒｅｄｕｃａｔａｓｅ）阻害剤）は、アトルバスタチン（Ｌｉｐｉｔｏｒ，Ｐｆｉｚｅｒ  Ｉｎｃ．）、プラバスタチン（Ｐｒａｖａｃｈｏｌ，Ｂｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ  Ｓｑｕｉｂｂ）、ロバスタチン（Ｍｅｖａｃｏｒ，Ｍｅｒｃｋ  Ｉｎｃ．）、シンバスタチン（Ｚｏｃｏｒ，Ｍｅｒｃｋ  Ｉｎｃ．）、フルバスタチン（Ｌｅｓｃｏｌ，Ｎｏｖａｒｔｉｓ）、セリバスタチン（Ｂａｙｃｏｌ，Ｂａｙｅｒ）、ロスバスタチン（Ｃｒｅｓｔｏｒ，ＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａ）、ロバスタチン（Ｌｏｖｏｓｔａｔｉｎ）およびナイアシン（Ａｄｖｉｃｏｒ，Ｋｏｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）、それらの誘導体および組み合わせからなる群より選択され得る。好ましい実施態様では、スタチンは、アトルバスタチン（Ａｔｏｖｏｒｓｔａｔｉｎ）およびロバスタチン、それらの誘導体および組み合わせからなる群より選択される。抗腫瘍剤として有用な他の薬剤は、カデュエットを含む。
【０２９０】
本発明の一実施態様では、本発明の組成物は、活性酸素種を局所的に生産するために用いられる光化学療法剤とともに用いられ得る。光化学療法剤の例は、光線力学的な治療で用いられるパラジウムバクテリオフェオフォルビド（ｂａｃｔｅｒｉｏ  ｐｈｅｐｈｏｒｂｉｄｅ）（ＴＯＯＫＡＤ）；ソラーレン、８−メトキシソラーレン／メトキサレン（Ｏｘｓｏｒａｌｅｎ−Ｕｌｔｒａ（登録商標）、８−ＭＯＰ（登録商標）、Ｏｘｓｏｒａｌｅｎ（登録商標）、Ｕｖａｄｅｘ（登録商標））、４，５，８−トリメチルソラーレン／トリオキサレン（Ｔｒｉｓｏｒａｌｅｎ（登録商標））、ＰＵＶＡ（Ｐｓｏｒａｌｅｎ  Ｕｌｔｒａ  Ｖｉｏｌｅｔ  Ａ  ｌｉｇｈｔ）において使用；ＵＶＡＲまたはＵＶＡＲ（登録商標）ＸＴＳ（商標）Ｐｈｏｔｏｐｈｅｒｅｓｉｓ  Ｓｙｓｔｅｍ（Ｔｈｅｒａｋｏｓ，Ｉｎｃ．，Ｅｘｔｏｎ，ＰＡ）：Ｔｈｅｒａｆｌｅｘ  ＥＣＰ（登録商標）（Ｍａｃｏｐｈａｒｍａ）；ＣｏｂｅＳｐｅｃｔｒａ＋Ｐｈｏｔｏ  Ｉｍｍｕｎｅ  Ｓｙｓｔｅｍ  ＵＶＡ  ＰＩＴ（Ｍｅｄ  Ｔｅｃｈ  Ｓｏｌｕｔｉｏｎ）；光増感剤、例えば、カルシポトリエン、タザロテン、クリサロビンおよびその合成の誘導体アントラリン／１，８−ジヒドロキシ−９−アントロン／ジトラノール（Ｄｒｉｔｈｏｃｒｅｍｅ（登録商標））；（ＢｉｏＬｕｍｉｎｅｓｃｅｎｃｅ  Ａｃｔｉｖａｔｅｄ  Ｄｅｓｔｒｕｃｔｉｏｎ（ＢＬＡＤｅ））で使用されるホタル（Ｐｈｏｔｉｎｕｓ  ｐｙｒａｌｉｓ）ルシフェラーゼ；エリスロシンＢ（ＥＢ）；エリスロシンナトリウム；ｍ−テトラ（ヒドロキシフェニル）クロリン（ｍ−ＴＨＰＣ）／テモポルフィン（Ｆｏｓｃａｎ（登録商標）、Ｂｉｏｌｉｔｅｃ  ＡＧ）；ポルフィリン、例えば、ｄ−アミノレブリン酸（ｄ−ＡＬＡ）（Ｌｅｖｕｌａｎ  Ｋｅｒａｓｔｉｃｋ（登録商標）；ＤＵＳＡ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，Ｉｎｃ．）、５−ＡＬＡメチルエステル（ｍｅｔｈｙｌｅｓｔｈｅｒ）（ＭＬＡ／Ｍ−ＡＬＡ）（Ｍｅｔｖｉｘ（登録商標）；ＰｈｏｔｏＣｕｒｅ  ＡＳＡ）、５−ＡＬＡベンジルエステル（ｂｅｎｚｙｌｅｓｔｈｅｒ）（Ｂｅｎｚｖｉｘ（登録商標））；５−ＡＬＡヘキシルエステル（ｈｅｘｙｌｅｓｔｈｅｒ）（Ｈｅｘｖｉｘ（登録商標））、エチルエチオプルプリン錫（ＳｎＥＴ２）／Ｓｎエチオプルプリン（ｅｔｉｏｐｕｒｐｕｒｉｎ）／ロスタポルフィン（Ｐｈｏｔｒｅｘ（登録商標）、Ｐｕｒｌｙｔｉｎ（登録商標）；Ｍｉｒａｖａｎｔ  ＭｅｄｉｃａｌＴｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、ホウ素化プロトポルフィリン（ＢＯＰＰ（登録商標））、２−（１−ヘキシルオキシエチル）−２−ジビニルピロフェオホルビド−ａ（ＨＰＰＨ）（Ｐｈｏｔｏｃｈｌｏｒ（登録商標）；Ｒｏｓｅｗｅｌｌ  Ｐａｒｋ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ）、テキサフィリン、以下を含む、ユーロピウムテキサフィリン（Ｅｕ−Ｔｅｘ）、ジスプロシウムテキサフィリン（Ｄｙ−Ｔｅｘ）、マンガンテキサフィリン（Ｍｎ−Ｔｅｘ）、ルテチウムテキサフィリン／ＰＣＩ−０１２３（Ｌｕ−Ｔｅｘ（登録商標）、Ｌｕｔｅｘ（登録商標）、Ｌｕｔｒｉｎ（登録商標））、モテキサフィンルテチウム（ＭＬｕ）／ルテチウム（ＩＩＩ）テキサフィリン（Ｌｕ−Ｔｅｘ）（Ａｎｔｒｉｎ（登録商標）、Ｌｕｔｒｉｎ（登録商標）、Ｏｐｔｒｉｎ（登録商標）；Ｐｈａｒｍａｃｙｃｌｉｃｓ  Ｉｎｃ．）、モテキサフィンガドリニウム（ＭＧｄ）／ＰＣＩ−０１２０（Ｘｃｙｔｒｉｎ（登録商標）；由来：Ｐｈａｒｍａｃｙｃｌｉｃｓ  Ｉｎｃ．）  タロシアニン−４（Ｐｃ４）、タラポルフィン（ｔａｐｏｒｆｉｎ）ナトリウム／ＮＰｅ６／モノ−Ｌ−アスパルチルクロリンｅ６／タラポルフィン（ｔａｐｏｒｆｉｎ）ナトリウム／ＬＳ１１（タラポルフィン（登録商標）；Ｌｉｇｈｔ  ＳｃｉｅｎｃｅＣｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）、ベンゾポルフィリン誘導体一塩基酸環Ａ（ＢＰＤ−ＭＡ）／ベルテポルフィン（Ｖｉｓｕｄｙｎｅ（登録商標）、Ｎｏｖａｒｔｉｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）、部分的に精製されたヘマトポルフィリン誘導体（ＨｐＤ）、ポルフィマーナトリウム（フォトフリン（登録商標）；Ａｘｃａｎ  Ｐｈａｒｍａ，Ｉｎｃ．）、ジヘマトポルフィリンエーテル（ＤＨＥ）、フォトサン（ｐｈｏｔｏｓａｎ）−３（ＰＳ−３）、フォトフリン−ＩＩ、メソ−テトラキス−フェニルポルフィリン（ＴＰＰ）およびテトラフェニルポルフィンスルフォネート（ＴＰＰＳ４）を含む。
【０２９１】
以下の実施例は、本発明を説明する：
【実施例】
【０２９２】
実施例１：インビトロでの細胞生存能力に対するペプチドの効果
この実施例では、本発明のペプチドをインビトロアッセイで用いて、様々な細胞株における細胞死および細胞増殖に対するそれらの効果を決定した。
【０２９３】
方法
１．ペプチドデザイン
以下のペプチドを構築した：
ＨＸＲ９（配列番号８６）は、ＰＢＸおよびＨＯＸタンパク質の間の相互作用を防止して、インビトロおよびマウスモデルの両方において多くの異なる癌の増殖を阻害することが知られている（Ｍｏｒｇａｎ，Ｒ．，Ｐｉｒａｒｄ，Ｐ．Ｍ．，Ｓｈｅａｒｓ，Ｌ．，Ｓｏｈａｌ，Ｊ．，Ｐｅｔｔｅｎｇｅｌｌ，Ｒ．＆  Ｐａｎｄｈａ，Ｈ．Ｓ．（２００７）Ａｎｔａｇｏｎｉｓｍ  ｏｆ  ＨＯＸ／ＰＢＸ  ｄｉｍｅｒ  ｆｏｒｍａｔｉｏｎ  ｂｌｏｃｋｓ  ｔｈｅ  ｉｎ  ｖｉｖｏ  ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｍｅｌａｎｏｍａ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ，６７，５８０６−５８１３；Ｓｈｅａｒｓ，Ｌ．，Ｐｌｏｗｒｉｇｈｔ，Ｌ．，Ｈａｒｒｉｎｇｔｏｎ，Ｋ．，Ｐａｎｄｈａ，Ｈ．Ｓ．＆  Ｍｏｒｇａｎ，Ｒ．（２００８）Ｄｉｓｒｕｐｔｉｎｇ  ｔｈｅ  ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎ  ｂｅｔｗｅｅｎ  ＨＯＸ  ａｎｄ  ＰＢＸ  ｃａｕｓｅｓ  ｎｅｃｒｏｔｉｃ  ａｎｄ  ａｐｏｐｔｏｔｉｃ  ｃｅｌｌ  ｄｅａｔｈ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｒｅｎａｌ  ｃａｎｃｅｒ  ｌｉｎｅｓ  ＣａＫｉ−２  ａｎｄ  ７６９−Ｐ．Ｊ  Ｕｒｏｌ，１８０，２１９６−２２０１；Ｐｌｏｗｒｉｇｈｔ，Ｌ．，Ｈａｒｒｉｎｇｔｏｎ，Ｋ．Ｊ．，Ｐａｎｄｈａ，Ｈ．Ｓ．＆  Ｍｏｒｇａｎ，Ｒ．（２００９）ＨＯＸ  ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ  ｆａｃｔｏｒｓ  ａｒｅ  ｐｏｔｅｎｔｉａｌ  ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  ｔａｒｇｅｔｓ  ｉｎ  ｎｏｎ−ｓｍａｌｌ−ｃｅｌｌ  ｌｕｎｇ  ｃａｎｃｅｒ（ｔａｒｇｅｔｉｎｇ  ＨＯＸ  ｇｅｎｅｓ  ｉｎ  ｌｕｎｇ  ｃａｎｃｅｒ）．Ｂｒ  Ｊ  Ｃａｎｃｅｒ，１００，４７０−４７５；Ｄａｎｉｅｌｓ，Ｔ．Ｒ．，Ｎｅａｃａｔｏ，ＩＩ，Ｒｏｄｒｉｇｕｅｚ，Ｊ．Ａ．，Ｐａｎｄｈａ，Ｈ．Ｓ．，Ｍｏｒｇａｎ，Ｒ．＆  Ｐｅｎｉｃｈｅｔ，Ｍ．Ｌ．（２０１０）Ｄｉｓｒｕｐｔｉｏｎ  ｏｆ  ＨＯＸ  ａｃｔｉｖｉｔｙ  ｌｅａｄｓ  ｔｏ  ｃｅｌｌ  ｄｅａｔｈ  ｔｈａｔ  ｃａｎ  ｂｅ  ｅｎｈａｎｃｅｄ  ｂｙ  ｔｈｅ  ｉｎｔｅｒｆｅｒｅｎｃｅ  ｏｆ  ｉｒｏｎ  ｕｐｔａｋｅ  ｉｎ  ｍａｌｉｇｎａｎｔ  Ｂ  ｃｅｌｌｓ．Ｌｅｕｋｅｍｉａ，２４，１５５５−１５６５；Ｍｏｒｇａｎ，Ｒ．，Ｐｌｏｗｒｉｇｈｔ，Ｌ．，Ｈａｒｒｉｎｇｔｏｎ，Ｋ．Ｊ．，Ｍｉｃｈａｅｌ，Ａ．＆  Ｐａｎｄｈａ，Ｈ．Ｓ．（２０１０）Ｔａｒｇｅｔｉｎｇ  ＨＯＸ  ａｎｄ  ＰＢＸ  ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ  ｆａｃｔｏｒｓ  ｉｎ  ｏｖａｒｉａｎ  ｃａｎｃｅｒ．ＢＭＣ  Ｃａｎｃｅｒ，１０，８９；Ｍｏｒｇａｎ，Ｒ．，Ｂｏｘａｌｌ，Ａ．，Ｈａｒｒｉｎｇｔｏｎ，Ｋ．Ｊ．，Ｓｉｍｐｓｏｎ，Ｇ．Ｒ．，Ｇｉｌｌｅｔｔ，Ｃ．，Ｍｉｃｈａｅｌ，Ａ．＆  Ｐａｎｄｈａ，Ｈ．Ｓ．（２０１２）Ｔａｒｇｅｔｉｎｇ  ｔｈｅ  ＨＯＸ／ＰＢＸ  ｄｉｍｅｒ  ｉｎ  ｂｒｅａｓｔ  ｃａｎｃｅｒ．  Ｂｒｅａｓｔ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ  Ｔｒｅａｔ，１３６，３８９−３９８；Ｅｒｒｉｃｏ，Ｍ．Ｃ．，Ｆｅｌｉｃｅｔｔｉ，Ｆ．，Ｂｏｔｔｅｒｏ，Ｌ．，Ｍａｔｔｉａ，Ｇ．，Ｂｏｅ，Ａ．，Ｆｅｌｌｉ，Ｎ．，Ｐｅｔｒｉｎｉ，Ｍ．，Ｂｅｌｌｅｎｇｈｉ，Ｍ．，Ｐａｎｄｈａ，Ｈ．Ｓ．，Ｃａｌｖａｒｕｓｏ，Ｍ．，Ｔｒｉｐｏｄｏ，Ｃ．，Ｃｏｌｏｍｂｏ，Ｍ．Ｐ．，Ｍｏｒｇａｎ，Ｒ．＆  Ｃａｒｅ，Ａ．（２０１３）Ｔｈ���  ａｂｒｏｇａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｈｅ  ＨＯＸＢ７／ＰＢＸ２  ｃｏｍｐｌｅｘ  ｉｎｄｕｃｅｓ  ａｐｏｐｔｏｓｉｓ  ｉｎ  ｍｅｌａｎｏｍａ  ｔｈｒｏｕｇｈ  ｔｈｅ  ｍｉＲ−２２１＆２２２−ｃ−ＦＯＳ  ｐａｔｈｗａｙ．Ｉｎｔ  Ｊ  Ｃａｎｃｅｒ，１３３，８７９−８９２；Ｍｏｒｇａｎ，Ｒ．，Ｂｏｘａｌｌ，Ａ．，Ｈａｒｒｉｎｇｔｏｎ，Ｋ．Ｊ．，Ｓｉｍｐｓｏｎ，Ｇ．Ｒ．，Ｍｉｃｈａｅｌ，Ａ．＆  Ｐａｎｄｈａ，Ｈ．Ｓ．（２０１４）Ｔａｒｇｅｔｉｎｇ  ＨＯＸ  ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ  ｆａｃｔｏｒｓ  ｉｎ  ｐｒｏｓｔａｔｅ  ｃａｎｃｅｒ．ＢＭＣ  Ｕｒｏｌ，１４，１７）。
【０２９４】
ＨＸＲ９（配列番号８６）は、高度に保存されたＨＯＸヘキサペプチド配列ＷＹＰＷＭＫＫ（配列番号８５）を含み、それは、このプロセスを仲介することが知られていて、細胞膜を横切るタンパク質の効率的な動きを仲介することが以前に示されたポリアルギニンペプチドに連結される。
【０２９５】
ＣＸＲ９（配列番号８７）は、ＨＸＡｒｇ９配列に基づいてコントロールペプチドとして生産されたが、ＨＯＸ／ＰＢＸ干渉ペプチド配列においてアミノ酸置換を有し、上述の癌モデルでは不活性である。
【０２９６】
ＨＸＲ９ＡＳ７（配列番号８８）は、ＨＸＡｒｇ９配列に基づき、ここで、ＨＯＸヘキサペプチド配列ＷＹＰＷＭＫＫ（配列番号５０）は保存される。
【０２９７】
ＨＸＲ９ｎｏＨ（配列番号８９）は、ＨＸＡｒｇ９配列に基づき、ここで、ＨＯＸヘキサペプチド配列ＷＹＰＷＭＫＫ（配列番号５０）は保存される。
【０２９８】
ＨＸＲ９ＫＳ３（配列番号６）は、ＨＸＡｒｇ９配列に基づくが、ＨＯＸ／ＰＢＸ干渉ペプチド配列においてアミノ酸置換を有する。
【０２９９】
ＨＸＲ９ＫＳ３／７（配列番号７）は、ＨＸＡｒｇ９ＡＳ７配列に基づくが、ＨＯＸ／ＰＢＸ干渉ペプチド配列においてアミノ酸置換を有する。
【０３００】
ＨＸＲ９ＫＳ３ｎｏＨ（配列番号８）は、ＨＸＡｒｇ９ｎｏＨ配列に基づくが、ＨＯＸ／ＰＢＸ干渉ペプチド配列においてアミノ酸置換を有する。
【０３０１】
これらのペプチドの配列は以下のとおりである。全てのペプチドは、日常的な化学合成によって調製した。これらのペプチドは、Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈによって９０％純度で合成されて、凍結乾燥された粉末として提供された。これは、水に溶解されて１００ｍＭの各ペプチドのストック濃度を与えた。
【０３０２】
ＨＸＲ９（配列番号８６）：ＷＹＰＷＭＫＫＨＨＲＲＲＲＲＲＲＲＲ
ＣＸＲ９（配列番号８７）：ＷＹＰＡＭＫＫＨＨＲＲＲＲＲＲＲＲＲ
ＨＸＲ９ＡＳ７（配列番号８８）：ＷＹＰＷＭＫＫＡＡＲＲＲＲＲＲＲＲＲ
ＨＸＲ９ｎｏＨ（配列番号８９）：ＷＹＰＷＭＫＫＲＲＲＲＲＲＲＲＲ
ＨＸＲ９ＫＳ３（配列番号６）：ＷＹＫＷＭＫＫＨＨＲＲＲＲＲＲＲＲＲ
ＨＸＲ９ＫＳ３／７（配列番号７）：ＷＹＫＷＭＫＫＡＡＲＲＲＲＲＲＲＲＲ（以降「ＨＴＬ００１」）
ＨＸＲ９ＫＳ３ｎｏＨ（配列番号８）：ＷＹＫＷＭＫＫＲＲＲＲＲＲＲＲＲ
【０３０３】
２．アッセイ
前立腺癌由来の細胞株ＤＵ１４５およびＰＣ３に対するペプチドの細胞毒性を、代謝活性に関して、ＭＴＴアッセイを用いて、以前に記載のとおりに試験した（Ｍｏｒｇａｎ  ｅｔ  ａｌ．２０１４、同上）。細胞傷害性薬物ドセタキセル（標準的な化学療法薬物）を、ポジティブコントロールとして含めた。アッセイを３回繰り返して、結果は、細胞死に関する平均ＩＣ５０±標準偏差として与えられる。
【０３０４】
結果
２時間後および９６時間後に細胞の５０％を死滅させるのに必要な投与量（ＩＣ５０）を、以下の表１に示す。投与量は、μＭ（マイクロモル）であり、３回の実験による平均値は、標準偏差とともに与えられる。ＨＸＲ９と比較したＩＣ５０の倍差もイタリック体で示す。
【０３０５】
【表２】
2018533570.tif 000003
【０３０６】
実施例２：インビトロでの細胞生存能力に対するペプチドの効果
方法
ペプチド
ＨＸＲ９（配列番号８６）：ＷＹＰＷＭＫＫＨＨＲＲＲＲＲＲＲＲＲ
ＣＸＲ９（配列番号８７）：ＷＹＰＡＭＫＫＨＨＲＲＲＲＲＲＲＲ
ＨＸＲ９ＫＳ３／７（配列番号７）：ＷＹＫＷＭＫＫＡＡＲＲＲＲＲＲＲＲＲ（以降「ＨＴＬ００１」）
【０３０７】
これらのペプチドは、Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈによって９０％純度で合成されて、凍結乾燥された粉末として提供された。これは、水に溶解されて１００ｍＭの各ペプチドのストック濃度を与えた。
【０３０８】
アッセイ
細胞死に関するインビトロアッセイ
前立腺癌由来の細胞株ＤＵ１４５、ＬｎＣａＰ、およびＰＣ３、および、乳癌由来の細胞株ＭＤＡ−ＭＢ−２３１に対するペプチドの細胞毒性を、代謝活性に関して、ＭＴＴアッセイを用いて、以前に記載のとおりに試験した（Ｍｏｒｇａｎ  ｅｔ  ａｌ．２０１４）。細胞株によって７０００〜１６０００細胞を、９６ウェル細胞プレート上に蒔いて、５、１０、２０、４０および８０μＭのＣＸＲ９、ＨＸＲ９およびＨＴＬ００１を用いて２時間処理した。処理後、０．５ｍｇ／ｍｌの最終濃度でＭＴＴを添加した。４時間インキュベーションの際に、形成されたホルマザン結晶をＤＭＳＯ中に溶解して、蛍光分光計を用いて光学濃度（ＯＤ）を５４０ｎｍで測定した。細胞生存のパーセンテージを、未処理細胞に対する処理済みの平均ＯＤ値の比として計算した。実験を３回繰り返して、スチューデントのｔ検定を用いて統計分析を行なった。全ての細胞株は、１０％ＦＢＳ、１％ピルビン酸ナトリウムおよび１％Ｌ−グルタミンが添加されたＲＰＭＩ培地中で培養した。それらは全て、３７℃、５％ＣＯ２のインキュベーター内で培養した。アッセイを３回繰り返した。結果は、細胞死に関する平均ＩＣ５０±標準偏差として与えられる。
【０３０９】
結果
図１に示されるように、ＨＴＬ００１（ＨＸＲ９ＫＳ３／７）は、試験された細胞型のそれぞれの死滅においてＨＸＲ９よりも有意に効果的である：
【０３１０】
実施例３：ＰＣ３細胞におけるＨＴＬ００１の局在化
方法
細胞の全体にわたってＨＴＬ００１がどれくらい良好にＰＢＸタンパク質に結合したかを評価するために、ＦＡＭ５−標識ペプチド（ＨＴＬ００１／７ＦＡＭ５）でＰＣ３細胞を処理して、Ｖｅｃｔａｓｈｉｅｌｄ  ＨａｒｄＳｅｔ  Ａｎｔｉｆａｄｅ  Ｍｏｕｎｔｉｎｇ  Ｍｅｄｉｕｍ  ｗｉｔｈ  Ｄａｐｉ（Ｖｅｃｔｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）によって固定およびマウントした。それから、それらをＬｅｉｃａ蛍光顕微鏡の下で観察した。
【０３１１】
１．５×１０５のＰＣ３細胞を、６ウェルプレートの内側の２２×２２ｍｍカバースリップ上に蒔いた。２４〜４８時間のインキュベーション後、ＨＴＬ００１／７ＦＡＭ５で細胞を２時間処理した。インキュベーション期間後に、培地を除去して、ＰＢＳを用いて３回洗浄した。冷却メタノールを添加して、カバースリップを１０分間インキュベートした。それから、メタノールを除去して、暗所で２０分間、風乾させた。それから、カバースリップをＰＢＳで２回洗浄して、Ｖｅｃｔａｓｈｉｅｌｄ  ＨａｒｄＳｅｔ  Ａｎｔｉｆａｄｅ  Ｍｏｕｎｔｉｎｇ  Ｍｅｄｉｕｍ  ｗｉｔｈ  ＤＡＰＩを用いてスライド上にマウントした。
【０３１２】
結果
図２に示されるように、ＨＴＬ００１は、ＰＣ３細胞によって取り込まれて、細胞質および核の両方に存在することが見いだされた。
【０３１３】
実施例４：ＨＴＬ００１処理後のＰＣ３細胞におけるｃＦＯＳ発現
方法
ＰＣ３細胞を２５ｃｍ２プレートに蒔いて、３３μＭのＣＸＲ９、ＨＸＲ９およびＨＴＬ００１を８０％コンフルエンスで用いて２時間処理した。製造業者の説明書に従ってＲＮｅａｓｙ  Ｍｉｎｉ  Ｋｉｔ−ＱＩＡＧＥＮを用いてＲＮＡを単離して、ＮａｎｏＤｒｏｐ  ＮＤ−１０００を用いて定量化した。製造業者のプロトコルに従ってＨｉｇｈ  Ｃａｐａｃｉｔｙ  ｃＤＮＡ  Ｒｅｖｅｒｓｅ  Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ  Ｋｉｔを用いて、２５μｌの最終反応容量で、１μｇの全ＲＮＡからｃＤＮＡを生産した。ｑＲＴ−ＰＣＲによってｃＦＯＳの発現を定量化した。ＴａｑＭａｎ  Ｕｎｉｖｅｒｓａｌ  ＰＣＲ  Ｍａｓｔｅｒ  Ｍｉｘに添加した１：１０希釈（５μｌ／ウェル）の各ｃＤＮＡを用いてリアルタイムＰＣＲ反応を行ない、グリセルアルデヒド３リン酸デヒドロゲナーゼ（ＧＡＰＤＨ）プローブのＴａｑＭａｎ  Ｇｅｎｅ  Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  Ａｓｓａｙ  Ｈｓ００１７０６３０＿ｍ１  ＦＯＳ．Ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎを内因性コントロールとして行なった。比較Ｃｔ方法（ΔΔＣｔアルゴリズム）を分析に用いた。非依存性実験をトリプリケートで行なって３回繰り返した。スチューデントのｔ検定を用いて統計分析を行なった。
【０３１４】
結果
ＨＸＲ９およびＨＴＬ００１の処理の両方とも、図３に示されるように、未処理のＰＣ３細胞と比較してｃＦｏｓ発現を有意に増大させた。また、ｃＦｏｓ発現も、ＨＸＲ９で処理されたものと比較して、ＨＴＬ００１処理細胞において有意により高かった。
【０３１５】
これらの結果は、ｃＦｏｓが本発明のペプチドに対する腫瘍応答のバイオマーカーとして作用することができることを示し、したがって、その高い発現は、潜在的な代理の臨床試験エンドポイントである。
【０３１６】
実施例５：アネキシンＶ−ＦＩＴＣアッセイ
アポトーシスに対するＨＴＬ００１の効果を、アネキシンＶアッセイを用いて評価した。アネキシンＶは、アポトーシスの開始直後に内側の細胞膜から細胞表面へ移行するホスファチジルセリンに結合する。アポトーシスとネクローシスとの間の分化は、ヨウ化プロピジウム（ＰＩ）を添加することによって行なわれる。
【０３１７】
方法
ＰＣ３細胞を２５ｃｍ２プレートに蒔いて、８０％密集度で、３３μＭのＣＸＲ９、ＨＸＲ９およびＨＴＬ００１を用いて２時間処理した。曝露の最後に、浮遊細胞および接着細胞をトリプシン処理によって回収して、ＰＢＳ中で洗浄して、４〜５×１０５細胞を１００μｌの結合バッファー中に再懸濁した。５μｌのアネキシンＶ−ＦＩＴＣおよび０．５μｌのＰＩを添加して、混合して、暗所においてＲＴで１５分間インキュベートした。インキュベーション後、４００μｌの結合バッファーを添加して、サンプルをフローサイトメトリーによって分析した。２μＭのＳＴＳで８時間処理したポジティブコントロールを、アネキシンＶのみ（チャネルＦＬ−１）、ＰＩのみ（チャネルＦＬ−２）、および両方で、２つのシグナルの補正設定のために、別々に染色した。各サンプルにおいて１０４の細胞を評価して、ＣｅｌｌＱｕｅｓｔ  Ｐｒｏソフトウェアで分析を行なった。ドットプロット（ＦＬ−１Ｈ／ＦＬ−２Ｈ）を生産して、生存、初期アポトーシス、後期アポトーシスおよびネクローシスに細胞を分けた。実験を３回繰り返して、スチューデントのｔ検定を用いて統計分析を行なった。
【０３１８】
結果
ＨＸＲ９およびＨＴＬ００１の処理の両方とも、図４に示されるように、未処理のＰＣ３細胞と比較して、アネキシン染色を有意に増大させた。アネキシン染色は、ＨＸＲ９で処理されたものと比較して、ＨＴＬ００１処理細胞において有意により高かった。
【０３１９】
実施例６：ＰＣ３細胞腫瘍異種移植片に対するＨＴＬ００１の効果
方法
ＰＣ３細胞を、６〜１２週齢の雌または雄Ｂａｌｂ−ｃヌードマウス（Ｈａｒｌａｎ，ＵＫ）に皮下注入した。腫瘍サイズが１００ｍｍ３に到達したときに、図３に示される間隔で、ＰＢＳ、ＨＸＲ９またはＨＴＬ００１をマウスに腫瘍内注入した。腫瘍サイズが１０００ｍｍ３に到達したときまたは実験の最後（３６日）にマウスを屠殺した。腫瘍をそれから切除して、１０％ホルマリンに２４時間浸漬して、パラフィン包埋のために処理した。ミクロトームを用いてパラフィンブロック中の異種移植片の５μｍスライスを作製して、免疫組織化学によって異なるタンパク質を検出した。
【０３２０】
ＰＣ３細胞株異種移植片のパラフィン断面を脱パラフィンおよび再水和して、シトレートバッファーを用いて抗原を回収して、Ｈ２Ｏ２を用いて内因性ペルオキシダーゼを抑制した。それから、適切なブロッキング血清を用いてスライドをブロックして、ブロッキング血清中で１時間、ＲＴにて一次抗体とともにインキュベートした。ＤＵＳＰ１に対する一次抗体をＰＢＳで洗い落として、スライドを二次抗体中で３０分間インキュベートした。ＡＢＣキットを製造業者の指示書に従って使用して、ペルオキシダーゼＨを二次抗体に結合させた。ＤＡＢペルオキシダーゼ基質を可視化のために用いて、ヘマトキシリンで核染色した。断面は、酸アルコール中で対比染色されて、スコットタップ水（Ｓｃｏｔｔ’ｓ  ｔａｐ  ｗａｔｅｒ）中で青くなり、ＤＰＸによって脱水されて透明になってマウントされた。
【０３２１】
結果
表２および図５、６および７に示されるように、ＨＴＬ００１は、マウスにおいてＰＣ３腫瘍の有意な増殖遅延を生じさせる。
【０３２２】
【表３】
2018533570.tif 000004
【０３２３】
図５は、時間の関数として、ＰＢＳ注入マウスと比較した、ＨＴＬ００１によって処理した平均相対腫瘍容積を示す。
【０３２４】
図６は、時間の関数として、ＰＢＳ注入マウスと比較した、ＨＴＬ００１によって処理した腫瘍保有マウスの平均相対％体重を示す。
【０３２５】
図７は、ＰＢＳ注入マウスと比較した、腫瘍が２倍および３倍になる時間を示す。
【０３２６】
実施例７：ＨＯＸ／ＰＢＸ結合に関する、細胞に基づくアッセイ
ＨＯＸとＰＢＸとの間の相互作用に関する、本発明のペプチドの拮抗作用活性を決定するための適切なアッセイを、以下に説明する。
【０３２７】
方法
それぞれのペプチドがＨＯＸ／ＰＢＸ結合を破壊する能力を直接評価するために、ＨＯＸ／ＰＢＸ／ＤＮＡダイマーの形成を可能にし得る、細胞に基づくアッセイ系を開発した。培養されたＭＤＡ−ＭＢ−２３１細胞を、１０μＭの各ペプチドで４時間処理して、それから、以下に説明される標準的な調製方法を用いて細胞溶解物を生産するために用いた。それから、以下の表に詳述されるようにＥＬＩＳＡに基づくシステムを用いてＨＯＸＢ４／ＰＢＸ２ダイマーを測定した。このアッセイによる値は、ネガティブコントロール（ＤＭＳＯ）と比較したダイマー形成の％阻害として表される。
【０３２８】
溶解物調製
１．低速遠心分離によってＲＴで５分間、およそ５．０×１０７細胞を回収する。培養培地を注意深く除去する。
２．細胞デブリ（ペレット）をＰＢＳでＲＴにて洗浄して、低速遠心分離によって回収する。注意深く、上清を除去する（全タンパク質）。
３．新たに添加された（プロテアーゼ阻害剤）および／または（ホスファターゼ阻害剤）とともに、１．０ｍｌの事前に冷却されたＲＩＰＡバッファー（または他の適切なバッファー）を添加する。ＲＩＰＡバッファー中でピペットによって細胞を穏やかに再懸濁して、氷上で３０分間インキュベートする。
４．２１ゲージの針を通すこと、Ｄｏｕｎｃｅホモジナイザー、または超音波処理によって、細胞をさらに破壊およびホモゲナイズして、溶解物の温度が上がらないように注意する。（任意選択：１０μｌの１０ｍｇ／ｍｌ  ＰＭＳＦストックを添加）
３０分間氷上でインキュベートする。
５．微量遠心チューブ（単数または複数）に移して、４℃にて１０，０００×ｇで１０分間遠心分離する。上清流体は、全細胞溶解物である。上清を新しい微量遠心チューブに移して、ペレットを捨てる。
【０３２９】
アッセイ方法：
規定されない限り全容量０．１ｍｌ；室温。水没によってプレートを洗浄した。
【表４】
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【０３３０】
ＨＯＸＢ４／ＰＢＸ２ダイマーアッセイに関する概略図を図８に示す。
【０３３１】
結果
ＨＴＬ００１は、ＨＯＸＢ４／ＰＢＸ２ダイマー形成の２８．２（ＳＥＭ  ４．４）％阻害を示した。
【０３３２】
実施例８：ＨＴＬ００１（ＨＸＲ９ＫＳ３／７）によって処理されたＰＣ３細胞株腫瘍異種移植片におけるＤＵＳＰ１タンパク質の発現
ＨＸＲ９の標的として以前に同定された（Ｍｏｒｇａｎ  ｅｔ  ａｌ．２００７、同上）ＤＵＳＰ１タンパク質の発現を、ＰＢＳ単独、ＨＸＲ９またはＨＴＬ００１による腫瘍内処理後にマウスから除去されたＰＣ３腫瘍において試験した。図９に示されるように、ＤＵＳＰ１発現（茶染色）は、ＨＴＬ００１処理後にかなり増大する。
【０３３３】
これらの結果は、ＤＵＳＰ１タンパク質が、本発明のペプチドに対する腫瘍応答のバイオマーカーとして作用し得ることを示し、したがって、その高い発現は、潜在的な代理の臨床試験エンドポイントである。
【図面の簡単な説明】
【０３３４】
【図１】インビトロでの細胞生存能力に対するペプチドの効果
【図２】ＤＡＰＩで染色された細胞（ａ）；ＨＴＬ００１−ＦＩＴＣとともにインキュベート（ｂ）；および、生じた合成画像（ｃ）。ＨＴＬ００１／７ＦＡＭ５は、１．３μＭのＦＡＭ５標識ＨＴＬ００１（グリーン）とともに２時間インキュベートされた後に、インビトロでＰＣ３細胞の細胞質および核に進入する。細胞核は、ＤＡＰＩ（青）を用いて染色された。倍率×４０
【図３】ＨＴＬ００１処理後のＰＣ３細胞におけるｃＦＯＳ発現
【図４】アネキシンＶ−ＦＩＴＣアッセイ（アポトーシスについて）
【図５】時間の関数として、ＰＢＳ注入マウスと比較した、ＨＸＲ９ＫＳ３／７（ＨＴＬ００１）で処置された平均相対腫瘍容積
【図６】時間の関数として、ＰＢＳ注入マウスと比較した、ＨＸＲ９ＫＳ３／７（ＨＴＬ００１）で処置された腫瘍保有マウスの平均相対％体重
【図７】ＰＢＳ注入マウスと比較した、腫瘍が２倍および３倍になる時間
【図８】ＨＯＸＢ４／ＰＢＸ２ダイマーアッセイに関する概要
【図９】ＰＣ３細胞株腫瘍異種移植片におけるＤＵＳＰ１タンパク質の発現
【図１−１】
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【図１−２】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９Ａ】
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【図９Ｂ】
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【図９Ｃ】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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