(57)【要約】本開示は、頭蓋手術、例えば頭蓋冠リモデリング処置と組み合わせて、患者に可溶性アルカリホスファターゼ（ｓＡＬＰ）を投与することによって、前記患者（例えば、低ホスファターゼ血症（ＨＰＰ）を有し、及び増大した頭蓋内圧（ＩＣＰ）を示す、またはそのおそれがある患者）の頭蓋縫合早期癒合症を治療する方法を特徴とする。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
低ホスファターゼ血症（ＨＰＰ）を有し、及び増大した頭蓋内圧（ＩＣＰ）を示す、またはそのおそれがある患者の頭蓋縫合早期癒合症を治療する方法であって、少なくとも１つの頭蓋冠リモデリング処置と組み合わせて、患者に可溶性アルカリホスファターゼ（ｓＡＬＰ）を投与することを含む、前記方法。
【請求項２】
前記ｓＡＬＰが、前記頭蓋冠リモデリング処置の前に前記患者に投与される、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記ｓＡＬＰが、前記頭蓋冠リモデリング処置の約２か月〜約１日、特に６週間、１か月、３週間、２週間、１週間、６日、５日、４日または２日前に前記患者に投与される、請求項２に記載の方法。
【請求項４】
前記ｓＡＬＰが、前記少なくとも１つの頭蓋冠リモデリング処置の約３週間前に投与される、請求項３に記載の方法。
【請求項５】
前記ｓＡＬＰが、前記少なくとも１つの頭蓋冠リモデリング処置の後に前記患者に投与される、請求項１に記載の方法。
【請求項６】
前記ｓＡＬＰが、前記頭蓋冠リモデリング処置の約２か月〜約１日、特に６週間、１か月、３週間、２週間、１週間、６日、５日、４日または２日後に前記患者に投与される、請求項５に記載の方法。
【請求項７】
前記ｓＡＬＰが、前記少なくとも１つの頭蓋冠リモデリング処置の約３週間後に投与される、請求項６に記載の方法。
【請求項８】
前記患者が、前記ｓＡＬＰの投与前に頭蓋縫合早期癒合症と診断される、請求項１に記載の方法。
【請求項９】
前記患者が、前記頭蓋冠リモデリング処置の前に頭蓋縫合早期癒合症と診断される、請求項１に記載の方法。
【請求項１０】
前記患者がヒトである、請求項１〜９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１１】
前記ＨＰＰが、乳児ＨＰＰ、小児ＨＰＰ、周産期良性型ＨＰＰまたは周産期致死性型ＨＰＰである、請求項１〜１０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１２】
前記患者が頭蓋縫合早期癒合症の１つ以上の更なる症状を示す、請求項１〜１１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１３】
前記ｓＡＬＰが、頭蓋縫合の早期癒合の前に、前記患者に投与される、請求項１〜１２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１４】
前記方法が、前記患者のＩＣＰをモニタリングすることを更に含む、請求項１〜１３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１５】
前記方法が、前記患者の頭蓋縫合早期癒合症の１つ以上の更なる症状をモニタリングすることを更に含む、請求項１〜１４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１６】
前記モニタリングすることが、Ｘ線撮影、超音波検査、臨床検査及び／またはｓＡＬＰ活性の測定のうち少なくとも１つを含む、請求項１５に記載の方法。
【請求項１７】
前記Ｘ線撮影がコンピュータ断層撮影（ＣＴ）スキャンを含む、請求項１６に記載の方法。
【請求項１８】
前記ｓＡＬＰ活性の測定が、前記患者からの血清及び／または血液試料中のホスホエタノールアミン（ＰＥＡ）、無機ピロホスフェート（ＰＰｉ）及び／またはピリドキサル５’−ホスフェート（ＰＬＰ）のうちの少なくとも１つを測定することを含む、請求項１６に記載の方法。
【請求項１９】
前記ｓＡＬＰが、増大したＩＣＰを治療するために治療上有効な量で投与される、請求項１〜１８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２０】
前記ｓＡＬＰが、頭蓋縫合早期癒合症の１つ以上の更なる症状を治療するために治療上有効な量で投与される、請求項１〜１９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２１】
前記頭蓋縫合早期癒合症の１つ以上の更なる症状が、頭痛、易刺激性、悪心及び嘔吐（嘔吐する）、拍動性耳鳴、難聴、異常な頭蓋骨及び顔面形状、気道障害、閉塞性睡眠時無呼吸、キアリＩ型奇形、脳の異常、失明、視覚障害、複視、視力低下、難聴、痙攣、精神発達の障害、小脳扁桃ヘルニア、脊髄空洞症、両側性うっ血乳頭、眼振、小頭症、短頭症、長頭症、人工呼吸器依存及び／または慢性視神経浮腫を含む、請求項１２、１５または２０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２２】
前記ｓＡＬＰが、ＨＰＰの少なくとも１つの症状を治療するために治療上有効な量で投与される、請求項１〜２１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２３】
前記ＨＰＰの症状が、乳歯の早期喪失、不完全な骨石灰化、血液中及び／または尿中の高い無機ピロホスフェート（ＰＰｉ）濃度、血液中及び／または尿中の高いホスホエタノールアミン（ＰＥＡ）濃度、血液中及び／または尿中の高いピリドキサル５’−ホスフェート（ＰＬＰ）濃度、低石灰化、くる病の肋骨、高カルシウム尿症、低身長、骨格変形、あひる歩行、骨痛、骨折、ＨＰＰ関連の痙攣、不適切な体重増、くる病、及び／またはピロリン酸カルシウム二水和物の結晶沈着を含む、請求項２２に記載の方法。
【請求項２４】
前記ｓＡＬＰが、薬学的に許容される担体と共に医薬品組成物で調製される、請求項１〜２３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２５】
前記薬学的に許容される担体が生理食塩水である、請求項２４に記載の方法。
【請求項２６】
前記医薬品組成物が、筋肉内、皮下、静脈内、経口、経鼻、舌下、髄腔内または皮内投与のために調製される、請求項２４または２５に記載の方法。
【請求項２７】
前記医薬組成物が、毎日または毎週の投与のために調製される、請求項２４〜２６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２８】
前記ｓＡＬＰが、約０．１ｍｇ／ｋｇ〜約２０ｍｇ／ｋｇの投与量で、または約０．５ｍｇ／ｋｇ〜約１４０ｍｇ／ｋｇの毎週の投与量で患者に投与される、請求項１〜２７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２９】
前記ｓＡＬＰが、ホスホエタノールアミン（ＰＥＡ）、無機ピロホスフェート（ＰＰｉ）及びピリドキサル５’−ホスフェート（ＰＬＰ）への生理的活性である、請求項１〜２８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３０】
前記ｓＡＬＰが、骨の骨格の石灰化を改善する触媒的効果がある、請求項１〜２９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３１】
前記ｓＡＬＰが、アルカリホスファターゼの可溶性細胞外ドメインである、請求項１〜３０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３２】
前記ｓＡＬＰが、組織非特異的アルカリホスファターゼ（ＴＮＡＬＰ）、胎盤アルカリホスファターゼ（ＰＡＬＰ）、生殖細胞アルカリホスファターゼ（ＧＣＡＬＰ）、及び腸アルカリホスファターゼ（ＩＡＬＰ）からなる群から選択される、請求項１〜３１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３３】
前記ｓＡＬＰがＴＮＡＬＰである、請求項３２に記載の方法。
【請求項３４】
ａ）前記ＴＮＡＬＰが、配列番号１、２、３、４または５に記載のアミノ酸配列を含み、
ｂ）前記ＴＮＡＬＰが、配列番号６に記載のアミノ酸配列を含み、
ｃ）前記ＴＮＡＬＰが、配列番号７に記載のアミノ酸配列を含み、
ｄ）前記ＴＮＡＬＰが、配列番号８に記載のアミノ酸配列を含み、
ｅ）前記ＴＮＡＬＰが、配列番号９に記載のアミノ酸配列を含み、
ｆ）前記ＴＮＡＬＰが、配列番号１０に記載のアミノ酸配列を含み、
ｇ）前記ＴＮＡＬＰが、配列番号１１、１２もしくは１３に記載のアミノ酸配列を含み、または
ｈ）前記ＴＮＡＬＰが、配列番号１４に記載のアミノ酸配列を含む、請求項３３に記載の方法。
【請求項３５】
ａ）前記ＰＡＬＰが、配列番号１５もしくは１６に記載のアミノ酸配列を含み、
ｂ）前記ＧＣＡＬＰが、配列番号１７に記載のアミノ酸配列を含み、または
ｃ）前記ＩＡＬＰが、配列番号１８に記載のアミノ酸配列を含む、請求項３２に記載の方法。
【請求項３６】
前記ｓＡＬＰが、Ｚ−ｓＡＬＰ−Ｙ−スペーサー−Ｘ−Ｗｎ−Ｖ及びＺ−Ｗｎ−Ｘ−ｓＡＬＰ−Ｙ−スペーサー−Ｖからなる群から選択される構造を有するポリペプチドを含み、ここで
Ｖは不存在である、または少なくとも１つのアミノ酸のアミノ酸配列であり、
Ｘは不存在である、または少なくとも１つのアミノ酸のアミノ酸配列であり、
Ｙは不存在である、または少なくとも１つのアミノ酸のアミノ酸配列であり、
Ｚは不存在である、または少なくとも１つのアミノ酸のアミノ酸配列であり、及び
Ｗｎが骨標的部分である、請求項１〜３４の任意の一項に記載の方法。
【請求項３７】
前記構造がＺ−ｓＡＬＰ−Ｙ−スペーサー−Ｘ−Ｗｎ−Ｖである、請求項３６に記載の方法。
【請求項３８】
前記骨標的部分が、ポリアスパラギンまたはポリグルタミン領域である、請求項３６に記載の方法。
【請求項３９】
ｎ＝１〜５０である、請求項３８に記載の方法。
【請求項４０】
ｎ＝３〜３０である、請求項３９に記載の方法。
【請求項４１】
ｎ＝５〜１５である、請求項４０に記載の方法。
【請求項４２】
ｎ＝１０である、請求項４１に記載の方法。
【請求項４３】
前記スペーサーが結晶化可能断片（Ｆｃ）領域を含む、請求項３６〜４２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４４】
前記Ｆｃ領域が、ＣＨ２ドメイン、ＣＨ３ドメイン及びヒンジ領域を含む、請求項４３に記載の方法。
【請求項４５】
前記Ｆｃが、ＩｇＧ−１、ＩｇＧ−２、ＩｇＧ−３及びＩｇＧ−４からなる群から選択される免疫グロブリンの定常ドメインである、請求項４４に記載の方法。
【請求項４６】
前記Ｆｃが、免疫グロブリンＩｇＧ−１の定常ドメインである、請求項４５に記載の方法。
【請求項４７】
Ｖ、Ｚ及びスペーサーのうちの少なくとも１つが不存在である、請求項３６に記載の方法。
【請求項４８】
Ｙが２つのアミノ酸残基である、請求項３６に記載の方法。
【請求項４９】
Ｙがロイシン−リジンである、請求項４８に記載の方法。
【請求項５０】
Ｘが２つのアミノ酸残基である、請求項３６に記載の方法。
【請求項５１】
Ｘがアスパルテート−イソロイシンである、請求項５０に記載の方法。
【請求項５２】
前記ｓＡＬＰが、配列番号１９に記載のアミノ酸配列を含む、請求項１〜３４または３６〜５１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５３】
前記ｓＡＬＰが、配列番号１９のアミノ酸配列である、請求項５２に記載の方法。
【請求項５４】
前記患者が頭蓋縫合早期癒合症の１つ以上の症状の改善を示す、請求項１〜５３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５５】
前記１つ以上の症状が、頭痛、易刺激性、悪心及び嘔吐（嘔吐する）、拍動性耳鳴、難聴、異常な頭蓋骨及び顔面形状、気道障害、閉塞性睡眠時無呼吸、キアリＩ型奇形、脳の異常、失明、視覚障害、複視、視力低下、難聴、痙攣、精神発達の障害、小脳扁桃ヘルニア、脊髄空洞症、両側性うっ血乳頭、眼振、小頭症、短頭症、長頭症、人工呼吸器依存及び／または慢性視神経浮腫を含む、請求項５４に記載の方法。
【請求項５６】
前記患者が１つ以上の神経症状の改善を示す、請求項１〜５５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５７】
頭蓋縫合早期癒合症を治療または予防するための薬剤の製造において、請求項１〜５６のいずれか一項に記載のｓＡＬＰの使用。
【請求項５８】
患者のＨＰＰを診断する方法であって、前記方法が、頭蓋縫合早期癒合症を有する患者のＴＮＡＬＰ活性のレベルを測定することを含む、前記方法。
【請求項５９】
前記ＴＮＡＬＰ活性の測定が、前記患者からの血清及び／または血液試料中のホスホエタノールアミン（ＰＥＡ）、無機ピロホスフェート（ＰＰｉ）及び／またはピリドキサル５’−ホスフェート（ＰＬＰ）のうちの少なくとも１つを測定することを含む、請求項５８に記載の方法。
【請求項６０】
患者のＨＰＰを診断する方法であって、前記方法が、頭蓋縫合早期癒合症を有する患者のＴＮＡＬＰ中の突然変異の存在を測定することを含む、前記方法。
【請求項６１】
前記ＴＮＡＬＰの突然変異がＨＰＰと関連する、請求項６０に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本開示は、可溶性アルカリホスファターゼ（ｓＡＬＰ）を使用して頭蓋縫合早期癒合症を治療する方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
低ホスファターゼ血症（ＨＰＰ）は、最も重篤な形態の疾患で１００，０００件の出生数当たり１人の発生率を有する、稀な遺伝性の骨格疾患である。ＨＰＰは出生時に観察されると多くの場合致命的で、約７０％の高い乳児死亡率を有する。重症患者は、進行性の胸部変形が原因の呼吸不全から、多くの場合乳児期に死亡する。前記疾患は、組織非特異型アルカリホスファターゼ（ＴＮＡＬＰ）の遺伝子コード化の機能欠損突然変異から生じる。ＴＮＡＬＰ活性は、骨基質の発育に重要な役割を果たしている。特にＴＮＡＬＰは、無機ピロホスフェート（ＰＰｉ）、ピリドキサル５’−ホスフェート（ＰＬＰ）及びホスホエタノールアミン（ＰＥＡ）を加水分解する、骨芽細胞及び軟骨細胞膜の外側表面に存在する表面酵素である。ＰＰｉが骨石灰化の強力な阻害剤であるので、ＴＮＡＬＰのｉｎ  ｖｉｖｏでの主要な役割は、細胞外ＰＰｉプールを調整することである。ＨＰＰにおける様なＴＮＡＬＰ活性の欠乏がある場合、ＰＰｉは蓄積し、それは骨石灰化の阻害をもたらす。
【０００３】
ＨＰＰは、くる病（骨軟化症）から子宮の骨石灰化のほぼ完全な欠如まで、著しい範囲の症状及び重篤度を引き起こす。ほとんどの患者は、骨格の変化、低身長、下肢痛、歩行障害及び歯の早期の脱落といった特徴を示す。頭蓋の骨も影響を受ける可能性があり、特に周産期、小児及び乳児のＨＰＰの場合、頭蓋縫合早期癒合症の複合型をもたらす。
【０００４】
頭蓋骨癒合症は、頭蓋縫合の早期骨化がある消耗性疾患である。頭蓋縫合早期癒合症の患者は、高い頭蓋内圧、異常な頭蓋骨及び顔面形状、気道障害、閉塞性睡眠時無呼吸、脳の異常、失明、難聴、痙攣、精神発達の障害ならびに死に悩まされることが多い。頭蓋縫合早期癒合症が利用できる一次治療は、遺伝カウンセリング、歯科及び医療支援と組み合わせた頭蓋冠リモデリングによる外科的治療である。
【０００５】
特に外科的に矯正した頭蓋縫合早期癒合症は、頭蓋内圧を軽減する、再発性頭蓋縫合早期癒合症を治療する、頭蓋骨及び顔面形状を正常化するために、乳児及び小児期を通じて複数の手術を必要とすることを拒絶できる。早期の及び正確な診断を有する場合であっても、頭蓋縫合早期癒合症は高い疾病率を有する。したがって頭蓋縫合早期癒合症のＨＰＰ患者を治療するために使用することができる方法に対する必要性が存在する。
【発明の概要】
【０００６】
一実施形態の第１の態様は、低ホスファターゼ血症（ＨＰＰ）を有する患者（例えばヒト）の頭蓋縫合早期癒合症を治療する方法を特徴とする。例えば患者は、増大した頭蓋内圧（ＩＣＰ）を示すことができる、またはその傾向が見られる。前記方法は、例えば頭蓋冠リモデリング処置と組み合わせて、患者に可溶性アルカリホスファターゼ（ｓＡＬＰ）を投与することを含む。
【０００７】
一実施形態において、ｓＡＬＰは、頭蓋冠リモデリング処置の前に、患者に投与される。あるいはｓＡＬＰは、頭蓋冠リモデリング処置の後に、患者に投与される。特にｓＡＬＰは、頭蓋冠リモデリング処置の約２か月〜約１日、特に６週間、１か月、３週間、２週間、１週間、６日、５日、４日または２日前にまたはその後に患者に投与される。例えばｓＡＬＰは、頭蓋冠リモデリング処置室の３週間前またはその後に投与される。更にｓＡＬＰは、頭蓋縫合の早期癒合の前に、患者に投与され得る。
【０００８】
一実施形態において、患者は、ｓＡＬＰの投与の前に、外科的矯正を必要とする頭蓋縫合早期癒合症と診断される。あるいは患者は、頭蓋冠リモデリング処置の前に、外科的矯正を必要とする頭蓋縫合早期癒合症と診断される。例えば頭蓋縫合早期癒合症は、臨床検査、Ｘ線撮影（３次元（３Ｄ）コンピュータ断層撮影（ＣＴ））及び／または超音波検査により診断されることができる。
【０００９】
本開示の第１の態様のいくつかの実施形態において、患者はヒトである。特に患者は、乳児ＨＰＰ、小児ＨＰＰ、周産期良性型ＨＰＰまたは周産期致死性型ＨＰＰを有する。
【００１０】
本開示の第１の態様の種々の実施形態において、患者は、頭蓋縫合早期癒合症、例えば、頭痛、易刺激性、悪心及び嘔吐（嘔吐する）、拍動性耳鳴、難聴、異常な頭蓋骨及び顔面形状、気道障害、閉塞性睡眠時無呼吸、キアリＩ型奇形、脳の異常、うっ血乳頭、視神経損傷、失明、視覚障害、複視、視力低下、難聴、痙攣、精神発達の障害、小脳扁桃ヘルニア、脊髄空洞症、両側うっ血乳頭、眼振、小頭症、短頭症、長頭症、人工呼吸器依存及び／または慢性視神経浮腫の１つ以上の更なる症状を示す。
【００１１】
本開示の第１の態様の実施形態において、前記方法は、患者のＩＣＰをモニタリングすることを更に含む。例えば前記方法は、例えばＸ線撮影（例えば、ＣＴスキャン）、超音波検査、臨床検査及び／またはｓＡＬＰ活性の測定のうちの１つ以上によって、患者の頭蓋縫合早期癒合症の１つ以上の更なる症状をモニタリングすることを更に含む。特にｓＡＬＰ活性の測定は、患者からの血清及び／または血液試料中のホスホエタノールアミン（ＰＥＡ）、無機ピロホスフェート（ＰＰｉ）及び／またはピリドキサル５’−ホスフェート（ＰＬＰ）のうちの少なくとも１つを測定することを含む。特定の実施形態において、ｓＡＬＰ活性は年齢調整正常範囲未満である。
【００１２】
本開示の第１の態様の種々実施形態において、ｓＡＬＰは、増大したＩＣＰを治療するために治療上有効な量で投与される。更にｓＡＬＰは、頭蓋縫合早期癒合症の１つ以上の更なる症状、例えば、頭痛、易刺激性、悪心及び嘔吐（嘔吐する）、拍動性耳鳴、難聴、異常な頭蓋骨及び顔面形状、気道障害、閉塞性睡眠時無呼吸、キアリＩ型奇形、脳の異常、失明、視覚障害、複視、視力低下、難聴、痙攣、精神発達の障害、小脳扁桃ヘルニア、脊髄空洞症、両側うっ血乳頭、眼振、小頭症、短頭症、長頭症、人工呼吸器依存及び／または慢性視神経浮腫を治療する及び／または改善するために投与され得る。
【００１３】
本開示の第１の態様のいくつかの実施形態において、ｓＡＬＰは、例えば、乳歯の早期喪失、不完全な骨石灰化、血液中及び／または尿中の高いＰＰｉ濃度、血液中及び／または尿中の高いＰＥＡ濃度、血液中及び／または尿中の高いＰＬＰ濃度（特にＰＬＰ濃度が標準の年齢調製上限の少なくとも２倍の場合）、低石灰化、くる病の肋骨、高カルシウム尿症、低身長、骨格変形、あひる歩行、骨痛、骨折、ＨＰＰ関連の痙攣、不適切な体重増、くる病、及び／またはピロリン酸カルシウム二水和物の結晶沈着のうちの１つ以上を含む、少なくとも１つのＨＰＰ表現型を治療するために治療上有効な量で投与される。
【００１４】
本開示の第１の態様のいくつかの実施形態において、ｓＡＬＰは、薬学的に許容される担体（例えば生理食塩水）と共に医薬品組成物で調製される。種々の実施形態において、医薬品組成物は、筋肉内、皮下、静脈内、経口、経鼻、舌下、髄腔内または皮内投与のために調製される。例えば医薬品組成物は、毎日または毎週の投与のために調製されることができ、例えばｓＡＬＰは、約０．１ｍｇ／ｋｇ〜約２０ｍｇ／ｋｇの投与量で、または約０．５ｍｇ／ｋｇ〜約１４０ｍｇ／ｋｇの毎週の投与量で患者に投与される。
【００１５】
本開示の第１の態様の好ましい実施形態において、ｓＡＬＰは、ＰＥＡ、ＰＰｉ及びＰＬＰに対する生理的活性である。例えばｓＡＬＰは、骨の骨格の石灰化を改善する触媒的効果がある。
【００１６】
本開示の第１の態様の種々の実施形態において、ｓＡＬＰは、アルカリホスファターゼの可溶性細胞外ドメインであり、例えばそこでｓＡＬＰは、組織非特異的アルカリホスファターゼ（ＴＮＡＬＰ）、胎盤アルカリホスファターゼ（ＰＡＬＰ、例えば、配列番号１５または１６）、生殖細胞アルカリホスファターゼ（ＧＣＡＬＰ、例えば、配列番号１７）、及び腸アルカリホスファターゼ（ＩＡＬＰ、例えば、配列番号１８）からなる群から選択される。例えばｓＡＬＰはＴＮＡＬＰである（例えば、ＴＮＡＬＰは、配列番号１〜１４に記載のアミノ酸配列を含む）。
【００１７】
本開示の第１の態様の種々の実施形態において、ｓＡＬＰは、Ｚ−ｓＡＬＰ−Ｙ−スペーサー−Ｘ−Ｗｎ−Ｖ及びＺ−Ｗｎ−Ｘ−ｓＡＬＰ−Ｙ−スペーサー−Ｖからなる群から選択される構造を有するポリペプチドを含む。例えばＶ、Ｘ、Ｙ及びＺはそれぞれ不存在であり得る、または少なくとも１つのアミノ酸のアミノ酸配列であり得る。いくつかの実施形態では、少なくとも１つのＶ、Ｚ及びスペーサーは、不存在である。特定の実施形態において、Ｙは２つのアミノ酸残基である（例えば、Ｙはロイシン−リジンである）、及び／またはＸは２つのアミノ酸残基である（例えば、Ｘはアスパラギン酸−イソロイシンである）。特定の実施形態で、構造はＺ−ｓＡＬＰ−Ｙ−スペーサー−Ｘ−Ｗｎ−Ｖである。
【００１８】
Ｗｎは骨標的部分、例えばポリアスパラギンまたはポリグルタミン領域であり、そこでｎ＝１〜５０、例えばｎ＝３〜３０、例えば５〜１５、例えば１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３６、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９または５０である。あるいは、Ｗｎは不存在である。いくつかの実施形態では、スペーサーは、結晶化可能断片（Ｆｃ）領域、例えばＣＨ２ドメイン、ＣＨ３ドメイン、及びヒンジ領域を含む。特にＦｃは、ＩｇＧ−１、ＩｇＧ−２、ＩｇＧ−３及びＩｇＧ−４からなる群から選択される免疫グロブリンの定常ドメインである。例えばＦｃは、免疫グロブリンＩｇＧ−１の定常ドメインである。
【００１９】
本開示の第１の態様のいくつかの実施形態において、ｓＡＬＰは、配列番号１９に記載のアミノ酸配列を含み、例えばｓＡＬＰは、配列番号１９のアミノ酸配列である。
【００２０】
上述の態様のいずれかにおいて、患者は、頭蓋縫合早期癒合症の１つ以上の症状の改善を示すことができ、例えばそこで、１つ以上の症状は、増大したＩＣＰ、異常な頭蓋骨及び顔面形状、気道障害、閉塞性睡眠時無呼吸、拍動性耳鳴、キアリＩ型奇形、脳の異常、難聴、失明、視覚障害、複視、難聴、痙攣、精神発達の障害、易刺激性、悪心、嘔吐、吐き気、小脳扁桃ヘルニア、脊髄空洞症、頭痛、両側うっ血乳頭、眼振、視力低下、小頭症、短頭症、長頭症、人工呼吸器依存、うっ血乳頭及び／または慢性視神経浮腫を含む。
【００２１】
上述の態様のいずれかにおいて、患者は、１つ以上の神経症状の改善を示す。
【００２２】
上述の態様のいずれかにおいて、ｓＡＬＰは、頭蓋縫合早期癒合症を治療または予防するための薬剤の製造において使用することができる。
【００２３】
本開示の他の態様は、患者のＨＰＰを診断する方法を特徴とし、そこで前記方法は、頭蓋縫合早期癒合症を有する患者のＴＮＡＬＰ活性のレベルを測定することを含む。特にＴＮＡＬＰ活性の測定は、患者からの血清及び／または血液試料中のＰＥＡ、ＰＰｉ及び／またはＰＬＰ（特にＰＬＰ濃度が年齢調整正常の上限の少なくとも２倍である場合）のうちの少なくとも１つを測定することを含むことができる。
【００２４】
本開示の他の態様は、患者のＨＰＰを診断する方法を特徴とし、そこで前記方法は、頭蓋縫合早期癒合症を有する患者のＴＮＡＬＰ中の突然変異の存在を測定することを含む。種々の実施形態において、ＴＮＡＬＰの突然変異はＨＰＰと関連している。
【００２５】
定義
「頭蓋縫合早期癒合症」とは、隣接する頭頂部（頭蓋冠）骨が部分的または完全に早期に癒合して（部分的または完全な石灰化を含む）、それによって頭蓋骨の成長パターンを有害に変える状態を意味する。頭蓋縫合早期癒合症の症状は、頭痛、易刺激性、悪心及び嘔吐（嘔吐する）、拍動性耳鳴、難聴、異常な頭蓋骨及び顔面形状、気道障害、閉塞性睡眠時無呼吸、拍動性耳鳴、キアリＩ型奇形、脳の異常、失明、視覚障害、複視、視力低下、難聴、痙攣、精神発達の障害、小脳扁桃ヘルニア、脊髄空洞症、両側うっ血乳頭、眼振、小頭症、短頭症、長頭症、人工呼吸器依存及び／または慢性視神経浮腫を含み得るが、これらに限定されない。
【００２６】
本明細書で使用する場合「頭蓋内圧」及び「ＩＣＰ」という用語は、脳組織及び脳脊髄液に影響を与える頭蓋骨内の圧力を意味する。例えば増大したＩＣＰは１０ｍｍＨｇ超のＩＣＰを含むが、これに限定されず、ここで１０〜２０ｍｍＨｇは通常のＩＣＰより大きく、著しく増大したＩＣＰは２０ｍｍＨｇより大きい。増大したＩＣＰと関連する症状は、頭痛、易刺激性、悪心及び嘔吐（嘔吐する）、拍動性耳鳴、難聴、異常な頭蓋骨及び顔面形状、気道障害、閉塞性睡眠時無呼吸、キアリＩ型奇形、脳の異常、失明、視覚障害、複視、視力低下、難聴、痙攣、精神発達の障害、小脳扁桃ヘルニア、脊髄空洞症、両側うっ血乳頭、眼振、小頭症、短頭症、長頭症、人工呼吸器依存及び／または慢性視神経浮腫を含むことができる。同じように限定されるものではないが、増大したＩＣＰは、Ｘ線撮影（例えば、コンピュータ断層撮影（ＣＴ）スキャン）、超音波検査法及び臨床検査のうちの１つ以上により診断される及び／またはモニタリングされることができる。
【００２７】
本明細書で使用する場合「頭蓋冠リモデリング」処置という用語は、例えばＩＣＰ及び／または１つ以上の頭蓋縫合早期癒合症の他の症状を軽減するために、頭蓋骨の骨の再配置及び／または除去を含有する１つ以上の手術を指す。
【００２８】
本明細書で使用する場合「低ホスファターゼ血症」及び「ＨＰＰ」という用語は、例えば組織非特異型アルカリホスファターゼ（ＴＮＡＬＰ）をコードする、ＡＬＰＬ（アルカリホスファターゼ、肝臓／骨／腎臓）遺伝子の１つ以上の機能欠損突然変異によって生じる、稀な遺伝性骨格障害を指す。ＨＰＰは、乳児ＨＰＰ、小児ＨＰＰ、周産期ＨＰＰ（例えば、良好型周産期ＨＰＰまたは致死性型周産期ＨＰＰ）、成人ＨＰＰまたは歯型低ホスファターゼ症として更に特徴づけられる。
【００２９】
本明細書で使用する場合「ＨＰＰ表現型」という用語は、頭蓋縫合早期癒合症、くる病（成長軟骨板の欠陥）、骨軟化症、無機ピロホスフェート（ＰＰ；）、ホスホエタノールアミン（ＰＥＡ）またはピリドキサル５’−ホスフェート（ＰＬＰ）の高い血液中及び／または尿中濃度、痙攣、骨痛、ならびに軟骨石灰化症及び早死に至る関節のピロリン酸カルシウム二水和物の結晶堆積（ＣＰＰＤ）のうちの任意の１つを指す。同じように限定されるものではないが、ＨＰＰ表現型は、長骨の長さ（大腿骨、脛骨、上腕骨、橈骨及び／または尺骨を含むが、これらに限定されない）の減少、骨全体の平均密度の減少、ならびに骨（例えば大腿骨、脛骨、肋骨ならびに中足骨及び指骨）の骨石灰化の減少、歯の石灰化の減少、ならびに乳歯の早期喪失（例えば、歯の石化組織セメント質の無形成、形成不全または形成異常）を伴う成長遅延のうちの１つ以上によって実証されることができる。同じように限定されるものではないが、骨石灰化作用欠陥の矯正または防止は、以下の長骨の長さの増加、骨及び／または歯の石灰化の増加、脚の曲がりの矯正、骨痛の減少、ならびに関節のＣＰＰＤ結晶沈着の減少のうちの１一つ以上によって観察されることができる。
【００３０】
「ｓＡＬＰ」「可溶性アルカリホスファターゼ」及び「アルカリホスファターゼの細胞外ドメイン」という用語は同じ意味で用いられ、可溶な、非膜結合型アルカリホスファターゼまたはドメイン、その生物学的に活性な断片または生物学的に活性な変異体を指す。ｓＡＬＰｓは、例えば、Ｃ末端糖脂質アンカー（ＧＰＩシグナル配列、例えば、ヒトＴＮＡＬＰ（配列番号１、２、３、４または５）のアミノ酸残基１８〜５０２を含む、またはそれからなるポリペプチド）を欠く、アルカリホスファターゼを含む。特にＴＮＡＬＰは、例えば配列番号１９のアミノ酸残基１〜４８５を含む、またはそれからなるポリペプチドを含むことができる。ｓＡＬＰは、例えばヒトＴＮＡＬＰの哺乳動物オーソログ、例えばアカゲザルＴＮＡＬＰ（配列番号６）、ラットＴＮＡＬＰ（配列番号７）、イヌＴＮＡＬＰ（配列番号８）、ブタＴＮＡＬＰ（配列番号９）、マウスＴＮＡＬＰ（配列番号１０）、ウシＴＮＡＬＰ（配列番号１１〜１３）、またはネコＴＮＡＬＰ（配列番号１４）などを更に含む。ｓＡＬＰは、ヒトＰＡＬＰ（例えば、配列番号１５または１６のアミノ酸残基１８〜５０２を含む、またはそれからなるポリペプチド）、ＧＣＡＬＰ（例えば、配列番号１７のアミノ酸残基１８〜５０２を含む、またはそれからなるポリペプチド）及びＩＡＬＰ（例えば、配列番号１８のアミノ酸残基１８〜５０２を含む、またはそれからなるポリペプチド）、ならびにアルカリホスファターゼ活性、例えば、ＰＰｉを加水分解する能力を保持する追加の変異体及びその類似体の可溶な非膜結合形状も含む。ｓＡＬＰは特に、Ｎ末端シグナルペプチド（例えば、配列番号１〜５、７、１０〜１２もしくは１４のａａ１〜１７、または配列番号６のａａ１〜２５）を欠いている。
【００３１】
「ｓＡＬＰポリペプチド」は構造Ａ−ｓＡＬＰ−Ｂを有するポリペプチドを意味し、そこでｓＡＬＰは本明細書で定義されるとおりであり、Ａ及びＢのそれぞれは不存在である、または少なくとも１つのアミノ酸のアミノ酸配列（例えば、本明細書に記載の任意のｓＡＬＰ融合ポリペプチド）である。
【００３２】
「Ｆｃ」とは、免疫グロブリン重鎖のＣＨ２及びＣＨ３ドメインを含む、免疫グロブリン、例えばＩｇＧ−１、ＩｇＧ−２、ＩｇＧ−３またはＩｇＧ−４の結晶化可能断片領域を意味する。Ｆｃは、ＦａｂとＦｃ領域とを接合するヒンジ領域の任意の部分も含み得る。Ｆｃは、ヒトを含む任意の哺乳動物のものであり得て、及び（例えばグリコシル化により）翻訳後修飾が可能である。非限定例として、Ｆｃは、配列番号２０で示されるアミノ酸配列を有するヒトＩｇＧ−１の結晶化可能断片領域であり得る。
【００３３】
「骨標的部分」とは、骨標的部分が単独で、少なくとも１０−６Ｍ〜約１０−１５Ｍ（例えば、１０−７Ｍ、１０−８Ｍ、１０−９Ｍ、１０−１０Ｍ、１０−１１Ｍ、１０−１２Ｍ、１０−１３、１０−１４ＭＭまたは１０−１５Ｍ）である骨基質に対するｉｎ  ｖｉｖｏ結合親和性を有するように、骨基質に対する十分な親和性を有する１と５０の間のアミノ酸残基長のアミノ酸配列を意味する。
【００３４】
「細胞外ドメイン」とは、天然タンパク質、例えばアルカリホスファターゼの任意の機能的細胞外部分を意味する。特に細胞外ドメインは、シグナルペプチドを欠いている。
【００３５】
「シグナルペプチド」とは、分泌経路（例えば、細胞外間隙）にポリペプチドを向けるポリペプチドのＮ末端の短いペプチド（５〜３０のアミノ酸長）を意味する。シグナルペプチドは通常、ポリペプチドの分泌中に切断される。シグナル配列は、ポリペプチドを細胞内区画または細胞小器官、例えばゴルジ装置に向けることができる。シグナル配列は、ポリペプチドを細胞の特定の領域に標的化する既知の機能を有するペプチドとの相同性または生物学的活性により同定可能である。当業者であれば、容易に利用可能なソフトウェア（例えば、Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  Ａｎａｌｙｓｉｓ  Ｓｏｆｔｗａｒｅ  Ｐａｃｋａｇｅ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ  Ｃｏｍｐｕｔｅｒ  Ｇｒｏｕｐ，Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  ｏｆ  Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  Ｃｅｎｔｅｒ，１７１０Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ａｖｅｎｕｅ，Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩｓ．５３７０５、ＢＬＡＳＴ、またはＰＩＬＥＵＰ／ＰＲＥＴＴＹＢＯＸプログラム）を用いて、シグナルペプチドを同定することが可能である。シグナル配列は、例えば配列番号１〜５、７、１０〜１２もしくは１４のアミノ酸残基１〜１７、または配列番号６のアミノ酸残基１〜２５と実質的に同一のものであり得る。
【００３６】
「断片」とは、好ましくは参照の核酸分子またはポリペプチドの全長の少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％またはそれ以上を含有する、ポリペプチドまたは核酸分子の一部を意味する。断片は、例えば１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、１００、１１０、１２０、１３０、１４０、１５０、１６０、１７０、１８０、１９０、２００、２１０、２２０、２３０、２４０、２５０、２６０、２７０、２８０、２９０、３００、４００、５００、６００、７００またはそれ以上の（ポリペプチドの全長まで）アミノ酸残基を含むことができる。代表的なｓＡＬＰ断片は、ＡＬＰ（例えば配列番号１〜５）のアミノ酸残基１８〜４９８、１８〜４９９、１８〜５００、１８〜５０１、１８〜５０２、１８〜５０３、１８〜５０４、１８〜５０５、１８〜５０６、１８〜５０７、１８〜５０８、１８〜５０９、１８〜５１０、１８〜５１１または１８〜５１２を有し、追加のＣ末端及び／またはＮ末端部分を含むことができる。
【００３７】
本明細書で使用する場合、ポリペプチドまたは核酸配列が参照配列に対して「少なくともＸ％の配列同一性」を有するとして参照されるとき、そこで「Ｘ」が実数の場合、ポリペプチドまたは核酸のアミノ酸残基またはヌクレオチドの少なくともＸ％は、配列が最適に並んでいるときに参照配列と同一であることを意味する。配列の最適なアライメントを、当該技術分野の技術内（例えば、Ｓｍｉｔｈ  Ｗａｔｅｒｍａｎ配列アルゴリズム（Ｓｍｉｔｈ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１４７：１９５−７，１９８１）及びＢＬＡＳＴ（Ｂａｘｉｃ  Ｌｏｃａｌ  Ａｌｉｇｎｍｅｎｔ  Ｓｅａｒｃｈ  Ｔｏｏｌ、Ａｌｔｓｃｈｕｌ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２１５：４０３−１０，１９９０））の種々の方法で決定できる。これら及び他の配列アルゴリズムは、ＧｅｎｅＭａｔｃｈｅｒ  Ｐｌｕｓ（Ｓｃｈｗａｒｚ  ａｎｄ  Ｄａｙｈｏｆｆ，Ａｔｌａｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ，Ｄａｙｈｏｆｆ，Ｍ．Ｏ．，Ｅｄ  ｐｐ３５３−３５８，１９７９）、ＢＬＡＳＴ、ＢＬＡＳＴ−２、ＢＬＡＳＴ−Ｐ、ＢＬＡＳＴ−Ｎ、ＢＬＡＳＴ−Ｘ、ＷＵ−ＢＬＡＳＴ−２、ＡＬＩＧＮ、ＡＬＩＧＮ−２、ＣＬＵＳＴＡＬ、Ｍｅｇａｌｉｇｎ（ＤＮＡＳＴＡＲ）またはアライメントについて他のソフトウェア／ハードウェア中に組み込まれる、「Ｂｅｓｔ  Ｆｉｔ」（Ｓｍｉｔｈ  ａｎｄ  Ｗａｔｅｒｍａｎ，Ａｄｖａｎｃｅｓ  ｉｎ  Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｍａｔｈｅｍａｔｉｃｓ，４８２−４８９，１９８１）などの一般公開されているコンピュータソフトウェアを用いてアクセス可能である。更に当業者であれば、比較される配列の長さ全体にわたる最適なアライメントを得るのに必要な任意のアルゴリズムを含む、アライメントを評価するのに適切なパラメーターを決定することができる。
【００３８】
「核酸分子」とは、２つ以上の共有結合した天然起源のまたは修飾されたヌクレオチドの配列を有する分子、例えばＲＮＡまたはＤＮＡを意味する。核酸分子は、例えば単一鎖または二本鎖であり得て、及び修飾もしくは非修飾ヌクレオチド、またはそれらの混合物もしくは組み合わせを含んでもよい。種々の塩、混合塩及び遊離酸型も含まれる。
【００３９】
「ペプチド」「ポリペプチド」及び「タンパク質」という用語は同じ意味で用いられ、翻訳後修飾（例えば、グリコシル化またはリン酸化）を問わず、本明細書に記載の天然起源または非天然起源のポリペプチドまたはペプチドの全部または一部を構成する、２つ以上の天然または非天然アミノ酸残基の任意の鎖を意味する。
【００４０】
「薬学的に許容される担体」または「薬学的に許容される賦形剤」とは、一緒に投与される化合物の治療的特性を維持しながら治療患者に生理学的に許容できる、少なくとも１つの担体または賦形剤をそれぞれ意味する。１つの例示的な薬学的に許容される担体物質は、生理食塩水である。他の生理学的に許容できる担体及びその製剤は当業者に周知であり、例えばＲｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，（２０ｔｈ  ｅｄｉｔｉｏｎ），Ａ．Ｇｅｎｎａｒｏ，Ｅｄ．２０００，Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ，Ｗｉｌｌｉａｍｓ＆Ｗｉｌｋｉｎｓ，Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ，ＰＡに記載されている。
【００４１】
「医薬組成物」とは、少なくとも１つの薬学的に許容される賦形剤、希釈剤または担体と共に調製された、本明細書で記載したポリペプチドまたは核酸分子を含有する、組成物を意味する。「医薬組成物」とは、患者の疾患または事象の治療または予防のための治療レジメンの一部として政府規制当局の承認を得て、製造または販売され得る。医薬組成物は、例えば皮下投与、静脈内投与（例えば、粒状栓子を含まない無菌溶液として及び静脈内使用に好適な溶媒系で）、経口投与（例えば、錠剤、カプセル剤、カプレット剤、ゲルカプセル剤もしくはシロップ剤）のために、または本明細書で記載の任意の他の製剤、例えば単位投与形態で調製できる。
【００４２】
「対象」及び「患者」という用語は同じ意味で用いられ、ヒト、または例えばウシ、ウマ、イヌ、ヒツジもしくはネコなどの非ヒト哺乳動物を含む哺乳動物を意味するが、これらに限定されない。
【００４３】
「治療上有効な量」とは、頭蓋縫合早期癒合症の少なくとも１つの症状を実質的に改善する、治療する、防ぐ、遅延させる、抑制する、もしくは抑えるのに十分な、または増大したＩＣＰを示す、もしくは増大したＩＣＰを有するおそれがある、もしくはそれを発現するおそれがあるＨＰＰ患者を治療するのに十分な、本明細書に記載のポリペプチドまたは核酸分子の量を意味する。本明細書に記載の組成物の治療上有効な量は、治療される疾患の重篤度、ならびに患者の状態、体重及び一般的症状に依存し得て、ならびにそのような因子を考慮して当業者によって決定されることができる。本明細書に記載の組成物の治療上有効な量は、一定期間にわたり患者に単回用量で投与可能であり、または複数回用量で投与可能である。
【００４４】
「治療すること」「治療する」または「治療」とは、例えば医薬組成物を投与することによる、頭蓋縫合早期癒合症の治癒、寛解、安定化、その可能性の低減もしくはその予防を意図する患者の医療管理、及び／または増大したＩＣＰを示すもしくはそれを有するおそれのある患者の医療管理を意味する。この用語は、積極的治療、すなわち疾患、病態、障害もしくは事象の改善を特に目指した治療、またはその治癒に関連付けられる治療を含み、更に原因療法、すなわち関連する疾患、病態、障害もしくは事象の原因の除去を目指した治療も含む。更にこの用語は、緩和療法、すなわち疾患、病態、障害または事象の治癒ではなく、少なくとも１つの症状の軽減または改善用にデザインされた治療；対症療法、すなわち関連する疾患、病態、障害または事象の全身症状ために行われる治療；予防療法、すなわち例えばまだ病気でないが、特定の疾患、病態、障害もしくは事象に罹患しやすい、またはそのリスクがある患者の、関連する疾患、病態、障害または事象の発生の最小化、または部分的もしくは完全な抑制を目指した治療；ならびに支持療法、すなわち関連する疾患、病態、障害または事象の改善を目指した別の特異療法を補うために用いられる治療を含む。
【００４５】
本明細書で使用する場合「約」という用語は、記載値の±１０％の量を意味する。
【００４６】
本明細書で使用する場合「１つの（ａ）」「１つの（ａｎ）」とは、特に指示がない限り「少なくとも１つの」または「１つ以上の」を意味する。更に単数形の「１つの（ａ）」「１つの（ａｎ）」及び「その（ｔｈｅ）」は、内容が明らかにそうではないことを記載する場合を除いて、複数の対象を含む。
【００４７】
本開示の他の特徴及び利点は、以下の発明を実施するための形態、図面及び特許請求の範囲から明白であろう。
【図面の簡単な説明】
【００４８】
【図１Ａ】図１Ａ及び図１Ｂは、頭蓋縫合早期癒合症の患者の頭部の３次元（３Ｄ）コンピュータ断層撮影（ＣＴ）スキャンを示す画像である。図１Ａは、右冠状縫合及び大泉門遺残の開大を有する、左冠状及び矢状頭蓋縫合早期癒合症を明らかにする、３Ｄ頭部ＣＴスキャンの上面図である。図１Ｂは、顔面のゆがみを有する、左冠状頭蓋縫合早期癒合症を明らかにする、３Ｄ頭部ＣＴスキャンの前面図である。
【図１Ｂ】図１Ａの続きである。
【図２Ａ】図２Ａ及び図２Ｂは、手術前及びその後の頭蓋縫合早期癒合症の患者（すなわち、患者１）のＣＴスキャンを示す画像である。図２Ａは、溝及び回の喪失、内板のスカラッピング、脳実質外腔の不存在、キアリＩ型奇形を示唆する大後頭孔の密集を示す術前矢状面のＣＴスキャンである。図２Ｂは、溝及び回の画定、大脳基底槽及び脳実質外腔の増加した間隙、頭蓋脊椎接合部でより少ない密集をここで示す、手術の１年後に実施した手術後の矢状面ＣＴである。
【図２Ｂ】図２Ａの続きである。
【図３Ａ】図３Ａ〜図３Ｃは、手術前及びその後の頭蓋縫合早期癒合症の患者（すなわち、患者２）のＣＴスキャンを示す画像である。図３Ａは、消失した左冠状縫合の３Ｄ頭部ＣＴスキャンの術前側面図である。図３Ｂは、大泉門遺残を有する十字縫合上の消失した矢状縫合及び骨突出の３Ｄ頭部ＣＴスキャンの術前上面図である。図３Ｃは、頭蓋冠の改善した骨の成長を示す、手術７か月後の３Ｄ頭部ＣＴスキャン側面図である。
【図３Ｂ】図３Ａの続きである。
【図３Ｃ】図３Ｂの続きである。
【図４Ａ】図４Ａ及び図４Ｂは、手術前及びその後の頭蓋縫合早期癒合症の患者（すなわち、患者２）のＣＴスキャンを示す画像である。図４Ａは、脳実質外腔の不存在、小さな脳室腔及び堅い脳底槽の術前軸方ＣＴスキャンを示す。図４Ｂは、頭蓋骨拡大、開いた大脳基底槽、第三脳室の再構成及び脳実質外腔の存在を明らかにする、手術３か月後に実施した術後軸方ＣＴスキャンである。
【図４Ｂ】図４Ａの続きである。
【図５Ａ】図５Ａ〜図５Ｃは、生後１日（図５Ａ）、６か月（図５Ｂ）及び１８か月（図５Ｃ）で実施した患者５の頭蓋骨石灰化の程度を示す、横方向の頭蓋Ｘ線画像である。生後５週間でのｓＡＬＰ治療開始の後、頭蓋骨石灰化に大きな改善があった。
【図５Ｂ】図５Ａの続きである。
【図５Ｃ】図５Ｂの続きである。
【図６Ａ】図６Ａ〜図６Ｃは、生後１２か月で実施した患者５の３Ｄ復元を示す術前ＣＴスキャンの画像である。ＣＴスキャンは、右冠状縫合（図６Ａ）、左冠状縫合（図６Ｂ）及び前頭縫合（図６Ｃ）の部分的骨癒合を有する、頭蓋の減少した石灰化を示す。
【図６Ｂ】図６Ａの続きである。
【図６Ｃ】図６Ｂの続きである。
【発明を実施するための形態】
【００４９】
ｓＡＬＰ（ＳＴＲＥＮＳＩＱ（商標）などのＴＮＡＬＰ、例えば配列番号１９）を、低ホスファターゼ血症（ＨＰＰ）患者（例えばヒト、特に乳児または小児）の頭蓋縫合早期癒合症（例えば頭蓋骨の早期癒合）を治療するために、手術、例えば頭蓋冠リモデリング処置と組み合わせて、効果的に使用できることを、本発明者は発見した。特にｓＡＬＰを、増大した頭蓋内圧（ＩＣＰ）を示す、またはそのおそれがあるＨＰＰ患者を治療するために投与できる。ｓＡＬＰは、ｓＡＬＰポリペプチド（例えば、ＡＬＰの分泌型可溶性細胞外ドメイン）またはｓＡＬＰ融合ポリペプチド（例えば、結晶化可能断片（Ｆｃ）領域及び／または骨標的部分に融合したｓＡＬＰ）であり得る。例えば増大したＩＣＰを示す、またはそれを有するおそれがあるＨＰＰ患者の頭蓋縫合早期癒合症を治療するために、頭蓋手術、例えば頭蓋冠リモデリング処置と組み合わせて、ｓＡＬＰを投与する方法（例えばそこでｓＡＬＰは、頭蓋冠リモデリング処置の前に、またはその後に投与される）が、記載されている。
【００５０】
治療方法
低ホスファターゼ血症（ＨＰＰ）を有する患者などの患者（例えばヒト）の頭蓋縫合早期癒合症を治療するための方法を、本明細書で開示する。特に患者は、増大した頭蓋内圧（ＩＣＰ）を示す場合がある、またはその傾向が見られ得る。前記方法は、可溶性アルカリホスファターゼ（ｓＡＬＰ、ＳＴＲＥＮＳＩＱ（商標）などのＴＮＡＬＰ、例えば配列番号１９）を、例えば頭蓋手術、例えば頭蓋冠リモデリング処置と組み合わせて、患者に投与することを含有する。特にｓＡＬＰは、例えば頭蓋縫合の適切な癒合を可能にする、または頭蓋縫合の未熟な癒合を防ぐために、頭蓋冠リモデリング処置の前に患者に投与することができる。あるいは患者が、ｓＡＬＰ（ＳＴＲＥＮＳＩＱ（商標）などのＴＮＡＬＰ、例えば配列番号１９）投与の前に頭蓋冠リモデリング処置を必要とする頭蓋縫合早期癒合症の症状（例えば、増大したＩＣＰ）の症状を示す場合、ｓＡＬＰを、例えば増大したＩＣＰの軽減、頭蓋縫合の適切な癒合及び／または頭蓋骨の適切な成長を可能にするために、頭蓋冠リモデリング処置の後に投与できる。
【００５１】
ｓＡＬＰの投与及び／または頭蓋冠リモデリング処置の前に、例えば臨床検査、Ｘ線撮影（例えばコンピュータ断層撮影（ＣＴ））及び／または超音波検査によって、患者は頭蓋縫合早期癒合症と診断され得る。例えば頭蓋冠リモデリング処置に対するｓＡＬＰ投与（例えば、頭蓋冠リモデリング処置の前またはその後のｓＡＬＰ投与）の治療及び／またはタイミングの有効性を測定するために、頭蓋縫合早期癒合症の症状は、治療の後（例えば、頭蓋冠リモデリング処置と組み合わせたｓＡＬＰ（ＳＴＲＥＮＳＩＱ（商標）などのＴＮＡＬＰ、例えば配列番号１９）投与の後）、モニタリングされることができる。
【００５２】
頭蓋冠リモデリング処置と組み合わせたｓＡＬＰ（ＳＴＲＥＮＳＩＱ（商標）などのＴＮＡＬＰ、例えば配列番号１９）による治療は、ＩＣＰの減少などの頭蓋縫合早期癒合症の症状の改善をもたらすことができる。本発明の方法は、頭蓋縫合早期癒合症に伴う神経症状を治療するために使用することができ、その結果、頭蓋縫合早期癒合症の回復または頭蓋縫合早期癒合症の重篤な症状の低減（例えばＩＣＰの減少）が生じる。特に本方法は、頭痛、易刺激性、悪心及び嘔吐（嘔吐する）、拍動性耳鳴、難聴、異常な頭蓋骨及び顔面形状、気道障害、閉塞性睡眠時無呼吸、拍動性耳鳴、キアリＩ型奇形、脳の異常、失明、視覚障害、複視、視力低下、難聴、痙攣、精神発達の障害、小脳扁桃ヘルニア、脊髄空洞症、両側うっ血乳頭、眼振、小頭症、短頭症、長頭症、人工呼吸器依存及び／または慢性視神経浮腫を含む症状の改善をもたらし得るが、これらに限定されない。
【００５３】
本明細書に記載の方法は、上述の症状のいずれかの改善をもたらす可能性がある。例えば頭蓋冠リモデリング処置と組み合わせたｓＡＬＰ（ＳＴＲＥＮＳＩＱ（商標）などのＴＮＡＬＰ、例えば配列番号１９）による治療は、頭痛及び易刺激性の発生の減少をもたらすことができる。例えば頭蓋冠リモデリング処置と組み合わせたｓＡＬＰによる治療を受けた後３０日間（例えば、治療を受けた後２日間、４日間、６日間、８日間、１０日間、１５日間、２０日間、２５日間、３０日間、４０日間、６０日間、６０日間）にわたって悪心及び嘔吐のより少ない発生をもたらすことができる。例えば頭蓋冠リモデリング処置と組み合わせたｓＡＬＰによる治療を受けた後、患者は、視野の改善（例えば視覚障害の回復または増加した視力）に経験し得る。患者は、治療前の患者の状態と比較して、改善した神経症状（例えば脳の異常の消失またはその減少）を示すことができる。例えば本治療の方法の後、患者の頭囲は増加して、患者の年齢による平均頭囲に近づくことができる。
【００５４】
低ホスファターゼ血症
ＨＰＰは、例えば頭蓋冠リモデリング処置などの頭蓋手術と組み合わせたｓＡＬＰで治療し得る、基質石灰化疾患である。ｓＡＬＰ（ＳＴＲＥＮＳＩＱ（商標）などのＴＮＡＬＰ、例えば配列番号１９）は、本明細書に記載されるように投与して、例えば周産期ＨＰＰ、乳児ＨＰＰ、小児ＨＰＰ、成人ＨＰＰ及び歯型低ホスファターゼ症を治療することができる。特に乳児ＨＰＰ、小児ＨＰＰ及び周産期ＨＰＰ（例えば、周産期良性型または周産期良性型ＨＰＰ）を有する患者は、例えば頭蓋冠リモデリング処置と組み合わせたｓＡＬＰ（ＳＴＲＥＮＳＩＱ（商標）などのＴＮＡＬＰ、例えば配列番号１９）で治療することができる。
【００５５】
ＨＰＰ（例えば、周産期ＨＰＰ、乳児ＨＰＰ、小児ＨＰＰ、成人ＨＰＰ及び歯型低ホスファターゼ症）を伴う表現型は、例えば頭蓋冠リモデリング処置と組み合わせたｓＡＬＰで治療することができる。例えば本方法は、周産期ＨＰＰの患者（例えば、胸部の低形成及びくる病により増加した呼吸困難；頭蓋骨の低下した骨形成；椎体の低下した骨形成及び高さ；及び／または著しい骨幹端の不規則性を有する上腕骨、橈骨及び尺骨の骨幹端の骨形成の非存在；破砕及びすり減りの患者）を治療するために使用することができる。本方法は、これらに限定されないが、不適切な体重増、くる病の発現、骨格の石灰化障害、進行性の骨格の脱灰化、肋骨骨折及び胸部変形を含む、乳児ＨＰＰの症状を示す患者を治療するためにも使用できる。低身長及び骨格変形（例えば、曲がった脚、フレアー状骨幹端によってもたらされる拡大した手首、膝及び足首）の原因となる、小児ＨＰＰの患者（例えば、乳歯の早期喪失（歯の石化組織セメント質の無形成、形成不全または形成異常）及びくる病を含む症状を示す患者）を、本方法で治療できる。したがって本明細書に記載のＨＰＰの症状のいずれかを緩和するために、本方法を使用することができる。例えばｓＡＬＰで治療され得るＨＰＰ症状の非限定例は、血液中及び／または尿中の高い無機ピロホスフェート（ＰＰｉ）濃度、血液中及び／または尿中の高いホスホエタノールアミン（ＰＥＡ）濃度、血液中及び／または尿中の高いピリドキサル５’−ホスフェート（ＰＬＰ）濃度、低石灰化、くる病の肋骨、高カルシウム尿症、骨痛、骨折、ＨＰＰ関連の痙攣、不適切な体重増、及び／またはピロリン酸カルシウム二水和物の結晶沈着を含む。
【００５６】
ＴＮＡＬＰの突然変異を有する患者は、増大したＩＣＰまたは頭蓋縫合早期癒合症と関連する症状を緩和するために、頭蓋冠リモデリング処置などの頭蓋手術と組み合わせたｓＡＬＰ（ＳＴＲＥＮＳＩＱ（商標）などのＴＮＡＬＰ、例えば配列番号１９）によって治療されることもできる。酵素の活性部位近傍、ホモ二量体境界面、クラウンドメイン、アミノ末端アーム及びカルシウム結合部位を含む、ＴＮＡＬＰの様々な位置のミスセンス変異はすべて、その触媒活性に影響を及ぼすことがわかった。更にミスセンス、ナンセンス、フレームシフト及びスプライス部位変異は、細胞表面の正常以下の活性をもたらす異常な変異タンパク質または細胞内輸送障害に至ることも示した。したがって本方法は、ＴＮＡＬＰの種々の変異（例えば、ミスセンス変異、フレームシフト、ナンセンス及びスプライシング変異）の患者を治療するために使用することができる。例えばＴＮＡＬＰの変異の存在は、治療（例えば、頭蓋冠リモデリングと組み合わせたｓＡＬＰ投与）の前にまたはその後に、患者からの試料で検出され得る。そのうえ、患者及び／または胎児試料（例えば母体血液、胎盤及び／または胎児試料から得た胎児の核酸）の母親は、ＴＮＡＬＰの変異について当該技術分野において周知の方法によって試験を受けることができる。ＨＰＰの従来の管理は、疾患の表現型発現の対症療法、例えば食事の制限または尿へのカルシウム排せつ増加、及び骨折の整形外科的安定化によって、高カルシウム血症を治療することも更に包含する。したがってこれらの治療（例えば食事の制限、尿へのカルシウム排せつ増加及び骨折の整形外科的安定化）を、増大したＩＣＰまたは頭蓋縫合早期癒合症と関連する症状を緩和するために、頭蓋冠リモデリング処置などの頭蓋手術と組み合わせたｓＡＬＰの投与と共に使用することができる。
【００５７】
頭蓋縫合早期癒合症
ＨＰＰ及び頭蓋縫合早期癒合症の特定の患者は、頭蓋冠リモデリング処置などの頭蓋手術と組み合わせたｓＡＬＰ（ＳＴＲＥＮＳＩＱ（商標）などのＴＮＡＬＰ、例えば配列番号１９）で治療され得る。特に本明細書に記載の方法を使用して治療した患者は、例えば頭蓋縫合早期癒合症（例えば、頭蓋縫合の早期癒合）の乳児、小児及び周産期の患者（例えば、増大したＩＣＰを示す、またはその発現のおそれがある患者）を含むことができる。例えば頭蓋冠リモデリング処置と組み合わせたｓＡＬＰによる治療は、出生の新生児期（例えば１時間、８時間、１２時間、１日、２日、３日、４日、５日、６日、１週、２週、３週または１か月以内）に、または出生前に開始されることもできる。このような治療は子宮内でも開始され得る。これらの方法は、癒合する縫合（複数可）を特徴とする頭蓋縫合早期癒合症を治療するために使用することもできる。癒合は通常、矢状、前頭、冠状、λ状及び鱗状縫合のうちの１つ以上を含む。したがって頭蓋縫合早期癒合症をもたらす１つ以上の頭蓋縫合（例えば、矢状、前頭、冠状、λ状及び鱗状）の癒合を示す患者は、手術と組み合わせたｓＡＬＰ（ＳＴＲＥＮＳＩＱ（商標）などのＴＮＡＬＰ、例えば配列番号１９）で治療され得る。
【００５８】
頭蓋縫合早期癒合症の種々の形態の患者も、頭蓋冠リモデリング処置と組み合わせたｓＡＬＰ（ＳＴＲＥＮＳＩＱ（商標）などのＴＮＡＬＰ、例えば配列番号１９）によって治療し得る。特に頭蓋縫合早期癒合症と関連する周知の突然変異は、線維芽細胞成長因子受容体（ＦＧＦＲ）で生じて、パイフェル症候群、セートレ・ヒョツェン症候群、アペール症候群、クルーゾン病、Ｂｅａｒｅ−Ｓｔｅｖｅｎｓｏｎ症候群、Ｊａｃｋｓｏｎ−Ｗｅｉｓｓ症候群、アントレー・ビクスラー症候群及びＭｕｅｎｋｅ症候群を含む、２０を上回る種々の遺伝性疾患と関連する。したがって本明細書で開示される方法で治療した患者は、例えばＦＧＦＲ（例えばＦＧＦＲ１、ＦＧＦＲ２またはＦＧＦＲ３）遺伝子の突然変異を有する可能性がある。そのうえＦＧＦＲ遺伝子の突然変異は、治療（例えば、頭蓋冠リモデリングと組み合わせたｓＡＬＰ投与）の前にまたはその後に、患者からの試料で検出され得る。そのうえ、患者及び／または胎児試料（例えば母体血液、胎盤または胎児試料から得た胎児の核酸）の両親は、突然変異について当該技術分野において周知の方法によって試験を受けることができる。頭蓋縫合早期癒合症は、根底にある疾患に関連して発現する可能性もあり、それは、ＨＰＰ、甲状腺機能亢進症、高カルシウム血症、ビタミンＤ欠乏症、腎性骨異栄養症、ハーラー症候群、鎌状赤血球病及び地中海貧血症を含むが、これらに限定されない。例えば本明細書に記載の方法は、上述した疾患のいずれかの患者の頭蓋縫合早期癒合症を伴う症状を回復させる及び／または防ぐことができる。
【００５９】
本方法は、頭蓋縫合早期癒合症の患者（例えば、ＨＰＰ患者）の診断を更に含むことができる。患者は、ｓＡＬＰ（ＳＴＲＥＮＳＩＱ（商標）などのＴＮＡＬＰ、例えば配列番号１９）の投与及び／または頭蓋冠リモデリング処置の前に、またはその後に頭蓋縫合早期癒合症と診断され得る。頭蓋縫合早期癒合症は、例えば臨床検査によって診断されることができ、例えば内科医は患者の頭部及び縫合を調べることができる。縫合線が位置する隆起の存在は、これが通常の縫合に存在しない場合、頭蓋縫合早期癒合症と診断され得る。頭部形状の対称、頭部のサイズ（例えば小頭症）、耳及び目の位置及び対称、前頭部の形状及び傾斜、ならびに縫合のサイズ及び形状も、頭蓋縫合早期癒合症の診断中に調べられる。これらの臨床的特徴のいずれかを、本明細書に記載の方法に従って頭蓋縫合早期癒合症を診断するために使用することができる。本発明の診断法は、Ｘ線撮影（例えば、Ｘ線またはコンピュータ断層撮影（ＣＴ））及び／または超音波を更に含むことができる。特に３次元（３Ｄ）ＣＴは、頭蓋骨の特徴及び変形の存在の特性決定に加えて、癒合縫合の重篤度及び位置の測定を可能にする。超音波画像は、出生前の患者の頭蓋縫合早期癒合症の診断のためにも使用され得る。
【００６０】
患者（例えば、ＨＰＰ患者）の頭蓋縫合早期癒合症の症状は、頭蓋冠リモデリング処置と組み合わせたｓＡＬＰ（ＳＴＲＥＮＳＩＱ（商標）などのＴＮＡＬＰ、例えば配列番号１９）によって患者を治療する前、またはその後に更にモニタリングされ得る。例えば頭蓋縫合早期癒合症の症状は、治療の前にモニタリングされて、本方法の実施の前の患者の頭蓋縫合早期癒合症の重篤度及び状態を評価できる。本発明の方法は、ＩＣＰ及び増大したＩＣＰと関連する症状をモニタリング（例えば、ＩＣＰの連続記録を可能にする頭蓋骨を貫通するプローブを使用したＩＣＰの直接モニタリング、または腰髄の脊髄液（ＣＳＦ）カテーテルを介したＩＣＰの間接モニタリング）することを含むことができる。増大したＩＣＰと関連する症状は、頭痛、易刺激性、悪心及び嘔吐（嘔吐する）、拍動性耳鳴、難聴、異常な頭蓋骨及び顔面形状、気道障害、閉塞性睡眠時無呼吸、キアリＩ型奇形、脳の異常、失明、視覚障害、複視、視力低下、難聴、痙攣、精神発達の障害、小脳扁桃ヘルニア、脊髄空洞症、両側うっ血乳頭、眼振、小頭症、短頭症、長頭症、人工呼吸器依存及び／または慢性視神経浮腫を含むことができるが、これらに限定されない。モニタリングは、Ｘ線撮影、超音波検査、臨床検査及び／またはｓＡＬＰ活性の測定も含むことができる。特にｓＡＬＰ活性は、患者からの血清及び／または血液試料中のホスホエタノールアミン（ＰＥＡ）、無機ピロホスフェート（ＰＰｉ）及び／またはピリドキサル５’−ホスフェート（ＰＬＰ）を測定することによって決定され得る。
【００６１】
アルカリホスファターゼ
本開示は、ＡＬＰをコードする特定のアルカリホスファターゼ（ＡＬＰ）または核酸配列に限定されない。アルカリホスファターゼは、ホスフェート部分の開裂（例えば、ピロホスフェート（ＰＰｉ）の加水分解）を触媒する一群の酵素を含む。４つの周知の哺乳動物アルカリホスファターゼ（ＡＬＰ）アイソザイム、組織非特異型アルカリホスファターゼ（ＴＮＡＬＰ、更に以下で記載）、胎盤アルカリホスファターゼ（ＰＬＡＬＰ）（例えば、受入番号Ｐ０５１８７、ＮＰ＿１１２６０３及びＮＰ＿００１６２３）、生殖細胞アルカリホスファターゼ（ＧＡＬＰ）（例えば、受入番号Ｐ１０６９６）及び腸アルカリホスファターゼ（ＩＡＬＰ）（例えば、受入番号Ｐ０９９２３及びＮＰ＿００１６２２）がある。上述の代表的なＡＬＰに加えて、本開示は、ＨＰＰ患者の頭蓋縫合早期癒合症を治療するための、ＡＬＰの同一または類似の触媒部位構造及び／または酵素活性を含む任意のポリペプチドも提供する。ｓＡＬＰを含有する骨送達複合体は、ＰＣＴ出願第ＷＯ２００５／１０３２６３号及び同第ＷＯ２００８／１３８１３１号に更に記載されており、それらは、それら全体が本明細書に参照により組み込まれる。
【００６２】
本明細書に記載の方法に従って使用され得るＴＮＡＬＰは、例えば、ヒトＴＮＡＬＰ（受入番号ＮＰ＿０００４６９、ＡＡＩ１０９１０、ＡＡＨ９０８６１、ＡＡＨ６６１１６、ＡＡＨ２１２８９及びＡＡＩ２６１６６）、アカゲザルＴＮＡＬＰ（受入番号ＸＰ＿０１１０９７１７）、ラットＴＮＡＬＰ（受入番号ＮＰ＿０３７１９１）、イヌＴＮＡＬＰ（受入番号ＡＡＦ６４５１６）、ブタＴＮＡＬＰ（受入番号ＡＡＮ６４２７３）、マウス（受入番号ＮＰ＿０３１４５７）、ウシＴＮＡＬＰ（受入番号ＮＰ＿７８９８２８、ＮＰ＿７７６４１２、ＡＡＭ８２０９及びＡＡＣ３３８５８）及びネコＴＮＡＬＰ（受入番号ＮＰ＿００１０３６０２８）を含む。特にＴＮＡＬＰは、例えばＨＰＰ患者の場合、頭蓋縫合早期癒合症の治療のために使用する組換えヒトＴＮＡＬＰ（例えば、配列番号１９、ＳＴＲＥＮＳＩＱ（商標）、米国特許第７，７６３，７１２号及び同第７，９６０，５２９号を参照、その全体が本明細書に組み込まれる）であり得る。
【００６３】
可溶性アルカリホスファターゼ
本発明のＡＬＰは、本明細書に記載のアルカリホスファターゼのいずれかの可溶性（例えば、細胞外または非膜結合型）形態を含む。本発明のｓＡＬＰは、例えば、ヒト組織非特異的アルカリホスファターゼ（ｈＴＮＡＬＰ）の可溶性形態であり得る。本開示は特定のｓＡＬＰに限定されず、例えば、ホスホエタノールアミン（ＰＥＡ）、無機ピロホスフェート（ＰＰｉ）及びピリドキサル５’−ホスフェート（ＰＬＰ）への生理的活性である、任意のｓＡＬＰポリペプチドも含むことができる。例えば本発明のｓＡＬＰは、骨の骨格の石灰化を改善するために触媒的に適切である。本発明は、本明細書に記載の状態、例えばＨＰＰ患者の頭蓋縫合早期癒合症を治療するために使用され得る、本明細書に記載のｓＡＬＰをコードする核酸を更に含む。
【００６４】
ＴＮＡＬＰは、Ｃ末端で糖脂質部分によって固着した膜結合型タンパク質である（Ｓｗｉｓｓ−Ｐｒｏｔ、Ｐ０５１８６）。この糖脂質アンカー（ＧＰＩ）は、疎水性Ｃ末端の除去後、翻訳後に加えられ、それは一時的な膜アンカーとして及びＧＰＩ添加のためのシグナルとして機能する。ＧＰＩアンカーが細胞膜に位置する一方で、ＴＮＡＬＰの残留部分は細胞外である。特にＴＮＡＬＰ（例えば、ヒトＴＮＡＬＰ（ｈＴＮＡＬＰ））は、疎水性Ｃ末端配列の最初のアミノ酸（アラニン）を終止コドンに置き換えるために操作され得て、それによって、ＴＮＡＬＰの天然アンカー型のすべてのアミノ酸残基を含み、ＧＰＩ膜アンカーを欠いている操作したｈＴＮＡＬＰを生じる。ＧＰＩ膜アンカーの位置は異なるＡＬＰで変化して、例えばポリペプチドのＣ末端の最後の１０、１２、１４、１６、１８、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３２、３４、３６、３８、４０、４５、５０以上のアミノ酸残基を含むことができることを、当業者は理解するであろう。組換えｓＴＮＡＬＰは、例えばアミノ酸１〜５０２（分泌された場合１８〜５０２）、アミノ酸１〜５０１（分泌された場合１８〜５０１）、アミノ酸１〜５０４（分泌された場合１８〜５０４）、アミノ酸１〜５０５（分泌された場合１８〜５０５）、またはアミノ酸１〜５０２を含むことができる。したがって天然ＡＬＰのＣ末端は、ＡＬＰ活性に影響を及ぼさずに、特定のアミノ酸によって切頭され得る。
【００６５】
Ｃ末端ＧＰＩアンカーに加えて、ＴＮＡＬＰはＮ末端シグナルペプチド配列も有する。Ｎ末端シグナルペプチドは、それが合成されたが、ＥＲ内に移行後ＴＮＡＬＰから切断されるとき、合成されたタンパク質上に存在する。本発明のｓＡＬＰは、その分泌型（すなわち、Ｎ末端シグナルを欠いている）及び非分泌型（すなわち、Ｎ末端シグナルを有する）形態の両方を含む。Ｎ末端シグナルペプチドの位置が種々のアルカリホスファターゼで変化して、例えばポリペプチドのＮ末端上最初の５、８、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２７、３０以上のアミノ酸残基を含むことができることを、当業者は理解するであろう。当業者は、例えばＢｅｎｄｔｓｅｎら（Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．３４０（４）：７８３−７９５，２００４）に記載されて、ｗｗｗ．ｃｂｓ．ｄｔｕ．ｄｋ／ｓｅｒｖｉｃｅｓ／ＳｉｇｎａｌＰ／のウェブで入手可能な適切なコンピュータアルゴリズムによって、シグナル配列切断部位の位置を予測できる。
【００６６】
本発明は、ＡＬＰアイソザイム（例えば、ＴＮＡＬＰ、ＰＡＬＰ、ＧＣＡＬＰ、ＩＡＬＰなど）の細胞外ドメインに由来するｓＡＬＰ共通配列も含む。したがって上述のｓＴＮＡＬＰと同様に、本開示は、すなわちペプチドシグナルなしに、好ましくはＡＬＰの細胞外ドメインを含む、他の可溶性ヒトＡＬＰアイソザイムも提供する。本発明のｓＡＬＰは、ヒトＡＬＰアイソザイム及び哺乳動物ＴＮＡＬＰオルトログ（ヒト、マウス、ラット、ウシ、ネコ及びイヌ）のＡＬＰ細胞外ドメインに由来する共通配列、または哺乳動物ＴＮＡＬＰオルトログ（ヒト、マウス、ラット、ウシ、ネコ及びイヌ）だけのＡＬＰ細胞外ドメインに由来する共通配列を満たすポリペプチド配列も含む。本発明のｓＡＬＰは、これらのＴＮＡＬＰオルトログまたはヒトＡＬＰアイソザイムの種々の組み合わせに由来する類似の共通配列を満たすものも含む。このような共通配列は、例えばＷＯ２００８／１３８１３１で提供される。
【００６７】
本発明のｓＡＬＰは、上述のｓＡＬＰの野生型配列だけではなく、これらのアルカリホスファターゼに対する少なくとも５０％（例えば、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％以上）の配列同一性を有する任意のポリペプチド（例えば、配列番号１〜２４）も含むことができる。ＡＬＰ配列内に導入され得る突然変異の例は、米国特許公開第２０１３／０３２３２４４号に記載されており、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。ｓＡＬＰは、任意の適切な１つ以上アミノ酸残基で、所望によりグリコシル化されることができる。更にｓＡＬＰは、本明細書に記載のｓＡＬＰのいずれかに対する、少なくとも５０％（例えば、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％以上）の配列同一性を有し得る。ｓＡＬＰは、本明細書に記載のｓＡＬＰのいずれかに対して１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０以上の付加、欠失または置換を有することができる。
【００６８】
ｓＡＬＰ融合ポリペプチド
本明細書に記載のｓＡＬＰ及びリンカーのいずれかは、ｓＡＬＰポリペプチド、例えばＡ−ｓＡＬＰ−ＢのｓＡＬＰポリペプチドに組み込まれてもよく、そこでＡ及びＢのそれぞれは不存在である、または少なくとも１つのアミノ酸のアミノ酸配列である。存在する場合、Ａ及び／またはＢは、本明細書に記載の任意のリンカーであり得る。いくつかのｓＡＬＰポリペプチドで、Ａは不存在である、Ｂは不存在である、またはＡ及びＢ両方は不存在である。本発明のｓＡＬＰポリペプチドは、本明細書に記載されるように、ｓＡＬＰ融合ポリペプチドを提供するＦｃ領域を所望により含むことができる。ｓＡＬＰポリペプチドは、本明細書に記載されるように、骨標的部分を所望により含むことができる。いくつかのｓＡＬＰポリペプチドで、リンカー、例えば可撓性リンカーは、骨標的部分とジペプチド配列などのｓＡＬＰ（例えば、ロイシン−リジンまたはアスパラギン酸−イソロイシン）の間に含まれることができる。更に代表的なＦｃ領域、リンカー及び骨標的部分を以下述べる。
【００６９】
本明細書に記載のｓＡＬＰ、リンカー及びＦｃ領域のいずれかは、融合ポリペプチド（例えば、組換え融合ポリペプチド）に組み込まれることができ、それは、構造Ｚ−ｓＡＬＰ−Ｙ−スペーサー−Ｘ−Ｗｎ−Ｖ、Ｚ−Ｗｎ−Ｘ−スペーサー−Ｙ−ｓＡＬＰ−Ｖ、Ｚ−ｓＡＬＰ−Ｙ−Ｗｎ−Ｘ−スペーサー−Ｖ及びＺ−Ｗｎ−Ｘ−ｓＡＬＰ−Ｙ−スペーサー−Ｖを含む。特に前記構造は、Ｚ−ｓＡＬＰ−Ｙ−スペーサー−Ｘ−Ｗｎ−ＶまたはＺ−Ｗｎ−Ｘ−スペーサー−Ｙ−ｓＡＬＰ−Ｖであり得る。ｓＡＬＰは、本明細書に記載のような（例えば、ＴＮＡＬＰ、ＰＡＬＰ、ＧＣＡＬＰ及びＩＡＬＰ）ＡＬＰの可溶性細胞外ドメインなどのＡＬＰの完全長または機能的断片であり得る。Ｘ、Ｙ、Ｚ及びＶ及び／またはスペーサーの任意の１つは、不存在、または少なくとも１つのアミノ酸のアミノ酸配列であり得る。Ｗｎは、例えば一連の連続的ＡｓｐまたはＧｌｕ残基を有する骨標的部分であり得て、そこでｎ＝１〜５０、例えばｎ＝３〜３０、例えば５〜１５、例えば１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３６、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９または５０である。骨標的部分は、存在する場合、融合ポリペプチドのどこか、例えばＮ末端もしくはＣ末端に、もしくはその近くに、及び／またはリンカー領域に配置されることができる。例えば骨標的部分はＣ末端である。ｓＡＬＰポリペプチド及び融合ポリペプチドは、骨標的部分を含まなくてもよい。
【００７０】
本発明のｓＡＬＰ融合ポリペプチドは、構造ｈＴＮＡＬＰ−Ｆｃ−Ｄ１０であり得る。特にｓＡＬＰ融合ポリペプチドは、配列番号１９のアミノ酸配列を含むことができる。
【００７１】
有用なスペーサーは、Ｆｃを含むポリペプチド、及び終端で非常に負に帯電したペプチド（例えば、Ｗｎ）の存在によって生じる斥力を緩和することが可能な親水性かつ可撓性ポリペプチドを含むが、これらに限定されない。例えば本発明のｓＡＬＰは、Ｎ末端またはＣ末端ドメインで免疫グロブリンのＦｃ領域を含む、融合ポリペプチドであり得る。免疫グロブリン分子は、当該技術分野において周知である構造を有する。それは、鎖内ジスルフィド結合で接合した２つの軽鎖（それぞれ約２３ｋＤ）及び２つの重鎖（それぞれ約５０〜７０ｋＤ）を含む。免疫グロブリンは、Ｆａｂ（軽鎖ならびに重鎖のＶＨ及びＣＨ１ドメインを含む）及びＦｃ（隣接する配列と共に重鎖のＣＨ２及びＣＨ３ドメインを含む）内にタンパク分解性に直ちに切断される（例えば、パパイン開裂によって）。本明細書に記載されるように有用なＦｃは、任意の哺乳動物（例えば、ヒト）からの、ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＤまたはＩｇＥ及びこれらの種々のサブクラス（例えば、ＩｇＧ−１、ＩｇＧ−２、ＩｇＧ−３、ＩｇＧ−４、ＩｇＡ−１、ＩｇＡ−２）を含む、任意の免疫グロブリン分子のＦｃ断片を含む。例えばＦｃ断片は、ヒトＩｇＧ−１である。本発明のＦｃ断片は、例えば、重鎖のＣＨ２及びＣＨ３ドメイン、ならびにヒンジ領域の任意の部分を含むことができる。Ｆｃ領域は、当業者に周知である任意の適切な１つ以上アミノ酸残基で、所望によりグリコシル化されることができる。特に融合ポリペプチドのＦｃ断片は、配列番号２５のアミノ酸配列を有する、または配列番号２５に対する、少なくとも５０％（例えば、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％以上）の配列同一性を有する。操作された、例えば非天然起源のＦｃ領域は、例えば国際出願公開第ＷＯ２００５／００７８０９号に記載されているように、本発明の方法で利用でき、それは参照により本明細書に組み込まれる。本明細書に記載されるようにＦｃ断片は、本明細書に記載のＦｃ断片のいずれかに対して１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２５、３０、３５、４０、５０以上の付加、欠失または置換を有することができる。
【００７２】
本明細書に記載のｓＡＬＰ融合ポリペプチドは、ＦＣ断片の間にペプチドリンカー領域を含む。更にペプチドリンカー領域は、Ｆｃ断片と任意の骨標的部分の間に含まれることができる。リンカー領域は、ｓＡＬＰが生物学的に活性を維持することができる、例えば立体障害でない、任意の配列及び長さであり得る。代表的なリンカー長は、１と２００のアミノ酸残基の間（例えば、１〜５、６〜１０、１１〜１５、１６〜２０、２１〜２５、２６〜３０、３１〜３５、３６〜４０、４１〜４５、４６〜５０、５１〜５５、５６〜６０、６１〜６５、６６〜７０、７１〜７５、７６〜８０、８１〜８５、８６〜９０、９１〜９５、９６〜１００、１０１〜１１０、１１１〜１２０、１２１〜１３０、１３１〜１４０、１４１〜１５０、１５１〜１６０、１６１〜１７０、１７１〜１８０、１８１〜１９０または１９１〜２００のアミノ酸残基）である。例えばリンカーは、可撓部分（例えば、有意な固定の二次または三次構造のない領域）を含む、またはそれからなる。例示の可撓性リンカーは、例えば少なくとも５０％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、または１００％のグリシン残基を含む、高グリシンリンカーである。リンカーは、例えばセリン残基も含み得る。場合によってはリンカーのアミノ酸配列は、グリシン及びセリン残基だけからなる。リンカーは、任意の適切な１つ以上アミノ酸残基で、所望によりグリコシル化されることができる。そのうえリンカーは、本明細書に記載されるとおり、共有結合的または非共有結合的に付着された任意の他の配列または部分を含んでもよい。リンカーは不存在でもよく、その場合、介在残基なしで、Ｆｃ断片及びｓＡＬＰは直接融合される。特定のＦｃ−ｓＡＬＰまたはｓＡＬＰ−Ｆｃ融合ポリペプチドは、本開示に従って、１）リンカーを有しない、または２）一部のｓＡＬＰに対応するリンカーのいずれかとして解釈される。例えば、ｈｓＴＮＡＬＰ（１〜５０２）に直接融合したＦｃは、例えば、リンカーを有しない（ｈｓＴＮＡＬＰがアミノ酸１〜５０２である）、または１７のアミノ酸リンカーを有する（ｈｓＴＮＡＬＰ（１８〜５０２））として解釈され得る。
【００７３】
追加のアミノ酸残基は、融合ポリペプチドを作成するために使用するクローニング方法に従って、ポリペプチド内に導入することができる。例えば追加のアミノ酸残基は、可溶性形態のポリペプチドを維持するために、追加のＧＰＩアンカーシグナルを提供しない。更に任意のこのような追加のアミノ酸残基は、本発明のポリペプチド内に組み込まれるとき、切断部位を宿主細胞のエンドプロテアーゼに提供しない。デザインされた配列が宿主細胞のエンドプロテアーゼにより切断されるという可能性を、例えばＩｋｅｚａｗａ（Ｂｉｏｌ．Ｐｈａｒｍ．Ｂｕｌｌ．２５：４０９−４１７（２００２））によって記載されているように予測できる。
【００７４】
本発明のｓＡＬＰｓ及びｓＡＬＰ融合ポリペプチドは、二量体または四量体内に会合化できる。例えば２つのｓＡＬＰ−Ｆｃモノマーは、Ｆｃ断片のヒンジ領域に位置する２つのジスルフィド結合によって共有結合的に結合されることができる。そのうえ本発明のポリペプチドまたは融合ポリペプチド（例えば、ｓＡＬＰポリペプチドまたは融合ポリペプチド）は、グリコシル化またはＰＥＧ結合化され得る。
【００７５】
核酸及びポリペプチドの作成
本明細書のｓＡＬＰ及びｓＡＬＰ融合ポリペプチドをコードする核酸は、当該技術分野において周知の任意の方法によって生成することができる。一般的に、所望の融合ポリペプチドをコードする核酸は、分子クローニング方法を使用して生成されて、通常、ベクター（例えばプラスミドまたはウイルス）内に配置される。ベクターは、核酸を融合ポリペプチドの発現に適切な宿主細胞に変えるために使用する。代表的な方法は、例えばＭａｎｉａｔｉｓら（Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇｓ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，１９８９）に開示される。多くの種類の細胞は、適切な宿主細胞として使用することができるが、それらが適切な翻訳後修飾を付与することが可能であるので、哺乳動物細胞が好ましい。本発明の宿主細胞は、例えば、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞、Ｌ細胞、Ｃ１２７細胞、３Ｔ３細胞、ＢＨＫ細胞、ＣＯＳ−７細胞または当該技術分野において周知の他の任意の好適な宿主細胞を含むことができる。例えば宿主細胞は、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞（例えば、ＣＨＯ−ＤＧ４４細胞）である。
【００７６】
ｓＡＬＰ及びｓＡＬＰ融合ポリペプチドは、宿主細胞のｓＡＬＰポリペプチドの発現を達成するのに好適な任意の条件下で、生成されることができる。このような条件は、緩衝液（重炭酸塩及び／またはＨＥＰＥＳ）、イオン（塩化物、ホスフェート、カルシウム、ナトリウム、カリウム、マグネシウム、鉄）、炭素源（単糖、アミノ酸、場合により脂質、ヌクレオチド、ビタミン）及びインスリンなどの成長因子などの成分によって調製される培地；α−ＭＥＭ、ＤＭＥＭ、ハム−Ｆ１２、ならびに２−４ｍＭのＬグルタミン及び５％のウシ胎児血清を補充したＩＭＤＭＳなどの通常の市販の培地；Ｈｙｃｌｏｎｅ（商標）ＳＦＭ４ＣＨＯ、Ｓｉｇｍａ  ＣＨＯ  ＤＨＦＲ−、２〜４ｍＭのＬグルタミンを補充したＣａｍｂｒｅｘ  ＰＯＷＥＲ（商標）ＣＨＯ  ＣＤなどの通常の市販の動物性タンパク質非含有培地；の適切な選択を含む。これらの培地は、選択圧を維持して、安定的なタンパク質生成発現を可能にするために、望ましくはチミジン、ヒポキサンチン及びＬ−グリシンなしで調製される。
【００７７】
医薬組成物及び製剤
本発明の組成物（例えば、ｓＡＬＰまたはｓＡＬＰ融合ポリペプチド（ＳＴＲＥＮＳＩＱ（商標）などのＴＮＡＬＰまたはＴＮＡＬＰ融合ポリペプチド、例えば配列番号１９）を含む）は、当該技術分野において周知の種々の方法によって投与されることができる。当業者であれば理解するであろうが、投与経路及び／または投与方法は、所望の結果に応じて変化する。投与経路は、様々な因子（例えば環境及び治療目的）に依存し得る。特に本明細書に記載のポリペプチド及び融合ポリペプチドは、当該技術分野において周知の任意の経路によって、例えば皮下（例えば皮下注射によって）、静脈内、経口、経鼻、筋肉内、舌下、髄腔内または皮内によって投与され得る。例として本発明の医薬品組成物は、液体、溶液、懸濁液、丸剤、カプセル、錠剤、ゲルカプセル、粉末、ゲル、軟膏、クリーム、噴霧剤、ミスト、霧化された蒸気、エアロゾルまたはフィトソームの形態であり得る。
【００７８】
治療のタイミング
ｓＡＬＰまたはｓＡＬＰ融合ポリペプチド（ＳＴＲＥＮＳＩＱ（商標）などのＴＮＡＬＰ、例えば配列番号１９）を含む、本明細書に記載の組成物を、頭蓋手術、例えば頭蓋冠リモデリング処置の前に投与できる（頭蓋手術、例えば頭蓋冠リモデリング処置の、例えば４か月以上前、３か月前、２か月前、１か月前、４週間前、３週間前、２週間前、１週間前、６日前、５日前、４日前、３日前、２日前、１日前、その前の２４時間未満内）。更に本組成物を、頭蓋手術、例えば頭蓋冠リモデリング処置の後に投与できる（頭蓋手術、例えば頭蓋冠リモデリング処置の、例えば４か月以上後、３か月後、２か月後、１か月後、４週間後、３週間後、２週間後、１週間後、６日前、５日前、４日前、３日前、２日前、１日前、その後の２４時間未満内）。ｓＡＬＰ組成物を、例えば頭蓋縫合早期癒合症の症状が管理可能であるとみなされる場合、頭蓋手術、例えば頭蓋冠リモデリング処置の前に投与され得る。頭蓋冠リモデリング処置の前のｓＡＬＰ（ＳＴＲＥＮＳＩＱ（商標）などのＴＮＡＬＰ、例えば配列番号１９）組成物の投与は、頭蓋縫合の適切な癒合を可能にする、または頭蓋縫合の未熟な癒合を防ぐためにも、実行され得る。あるいは患者が、ｓＡＬＰ投与の前に頭蓋冠リモデリング処置を必要とする頭蓋縫合早期癒合症の症状（例えば、増大したＩＣＰ）の症状を示す場合、ｓＡＬＰを、例えば増大したＩＣＰの軽減、頭蓋縫合の適切な癒合及び／または頭蓋骨の適切な成長を可能にするために、頭蓋冠リモデリング処置の後に投与できる。
【００７９】
投与量
医薬組成物（例えば、ｓＡＬＰまたはｓＡＬＰ融合ポリペプチド（例えば、ＳＴＲＥＮＳＩＱ（商標）などのＴＮＡＬＰまたはＴＮＡＬＰ融合ポリペプチド、例えば配列番号１９）を含む）は、頭蓋縫合早期癒合症の患者（例えば、ＨＰＰ患者）などの患者に投与されることができる。投与量は、投与方法及び患者の年齢を含む、多くの因子に依存する。一般的に単回投与内に含まれる本組成物（例えば、ｓＡＬＰまたはｓＡＬＰ融合ポリペプチド）の量は、有意な毒性を誘導せずに、本明細書に記載されるように状態（例えば、頭蓋縫合早期癒合症）を治療するのに効果的な量である。
【００８０】
例えば、本明細書に記載のｓＡＬＰポリペプチド（例えばＳＴＲＥＮＳＩＱ（商標）などのＴＮＡＬＰ、例えば配列番号１９）は、例えば、０．０１ｍｇ／ｋｇ〜５００ｍｇ／ｋｇ（例えば、０．０５ｍｇ／ｋｇ〜５００ｍｇ／ｋｇ、０．１ｍｇ／ｋｇ〜２０ｍｇ／ｋｇ、５ｍｇ／ｋｇ〜５００ｍｇ／ｋｇ、０．１ｍｇ／ｋｇ〜１００ｍｇ／ｋｇ、１０ｍｇ／ｋｇ〜１００ｍｇ／ｋｇ、０．１ｍｇ／ｋｇ〜５０ｍｇ／ｋｇ、０．５ｍｇ／ｋｇ〜２５ｍｇ／ｋｇ、１．０ｍｇ／ｋｇ〜１０ｍｇ／ｋｇ、１．５ｍｇ／ｋｇ〜５ｍｇ／ｋｇまたは２．０ｍｇ／ｋｇ〜３．０ｍｇ／ｋｇ）、または１μｇ／ｋｇ〜１，０００μｇ／ｋｇ（例えば、５μｇ／ｋｇ〜１，０００μｇ／ｋｇ、１μｇ／ｋｇ〜７５０μｇ／ｋｇ、５μｇ／ｋｇ〜７５０μｇ／ｋｇ、１０μｇ／ｋｇ〜７５０μｇ／ｋｇ、１μｇ／ｋｇ〜５００μｇ／ｋｇ、５μｇ／ｋｇ〜５００μｇ／ｋｇ、１０μｇ／ｋｇ〜５００μｇ／ｋｇ、１μｇ／ｋｇ〜１００μｇ／ｋｇ、５μｇ／ｋｇ〜１００μｇ／ｋｇ、１０μｇ／ｋｇ〜１００μｇ／ｋｇ、１μｇ／ｋｇ〜５０μｇ／ｋｇ、５μｇ／ｋｇ〜５０μｇ／ｋｇまたは１０μｇ／ｋｇ〜５０μｇ／ｋｇ）の範囲の個々の用量で患者に投与されることができる。
【００８１】
ｓＡＬＰの例示の投与量は、例えば、０．０１、０．０５、０．１、０．５、１、２、２．５、５、１０、２０、２５、５０、１００、１２５、１５０、２００、２５０もしくは５００ｍｇ／ｋｇ、または１、２、２．５、５、１０、２０、２５、５０、１００、１２５、１５０、２００、２５０、５００、７５０、９００もしくは１，０００μｇ／ｋｇを含む。本明細書で記載されるすべての投与量または範囲について、「約」という用語は、記載値または範囲の終点±１０％で、これらの投与量を変更するために用いることができる。特に、本開示による組成物（例えば、ｓＡＬＰ（例えば、ＳＴＲＥＮＳＩＱ（商標）などのＴＮＡＬＰ、例えば配列番号１９）を含む）は、約０．００１ｍｇ／ｋｇ／日〜約５００ｍｇ／ｋｇ／日、約０．０１ｍｇ／ｋｇ／日〜約１００ｍｇ／ｋｇ／日または約０．０１ｍｇ／ｋｇ／日〜約２０ｍｇ／ｋｇ／日の範囲の投与量で患者に投与することができる。例えばｓＡＬＰ組成物（例えば、ＳＴＲＥＮＳＩＱ（商標）などのＴＮＡＬＰ、例えば配列番号１９）は、例えば約０．５ｍｇ／ｋｇ／週〜約１４０ｍｇ／ｋｇ／週、例えば約０．８ｍｇ／ｋｇ／週〜約５０ｍｇ／ｋｇ／週または約１ｍｇ／ｋｇ／週〜約１０ｍｇ／ｋｇ／週（例えば、６ｍｇ／ｋｇ／週）の範囲の毎週の投与量で患者に投与できる。投与量は、通常の因子（例えば疾患の範囲及び患者からの異なるパラメーター）に従って、臨床医によって変更され得る。
【００８２】
ｓＡＬＰｓ及びｓＡＬＰ融合ポリペプチド（例えば、ＳＴＲＥＮＳＩＱ（商標）などのＴＮＡＬＰまたはＴＮＡＬＰ融合ポリペプチド、例えば配列番号１９）を含む組成物の用量は、単回または複数回投与レジメンのいずれかで提供され得る。例えば１時間毎、２時間毎、毎日、１日２回、週２回、週３回、週４回、週５回、週６回、毎週、隔週、毎月、隔月または年１回、用量を投与することができる。あるいは、例えば１日当たりの２回、３回、４回、５回、６回、７回、８回、９回、１０回、１１回または１２回、用量を投与することができる。特に、投薬レジメンは毎週１回である。投薬レジメンの持続期間は、例えば１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９もしくは３０日、週もしくは月であり得る、または患者の残りの寿命の期間であり得る。投与の量、頻度及び持続期間は、通常の因子（例えば疾患の範囲及び患者からの異なるパラメーター）に従って、臨床医によって変更され得る。
【００８３】
ｓＡＬＰｓ及びｓＡＬＰ融合ポリペプチドをコードする核酸を、遺伝子治療に好適な投与量で本明細書の製剤によって、患者に投与できる。投与される核酸の量は、核酸の長さ及び性質、使用するベクター（例えば、ウイルス性または非ウイルス性）、コードされるポリペプチドの活性、賦形剤の存在、投与経路及び方法、ならびに患者の全身状態及び適合性を含む、当業者に周知の多くの因子に依存する。投与の代表的な用量及び経路は、例えばＭｅｌｍａｎら（Ｉｓｒ．Ｍｅｄ．Ａｓｓｏｃ．Ｊ．９：１４３−１４６（２００７）、勃起不全を治療するため、プラスミド中のヒトｃＤＮＡの０．５ｍｇ〜７．５ｍｇの陰茎内注入を記載）、Ｐｏｗｅｌｌら（Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ  １１８：５８−６５，２００８、重症下肢虚血を治療するため、肝細胞増殖因子プラスミドの０．４ｍｇ〜４．０ｍｇの筋肉注射を記載）、Ｗａｄｄｉｌｌら（ＡＪＲ  Ａｍ．Ｊ．Ｒｏｅｎｔｇｅｎｏｌ．１６９：６３−６７，１９９７、黒色腫を治療するため、ＭＨＣ抗原をコードするプラスミドＤＮＡの０．０１ｍｇ〜０．２５ｍｇのＣＴ誘導腫瘍内注入を記載）、Ｋａｓｔｒｕｐら（Ｊ．Ａｍ．Ｃｏｌｌ．Ｃａｒｄｉｏｌ．４５：９８２−９８８，２００５、重篤の狭心症を治療するため、ＶＥＧＦプラスミドの０．５ｍｇの心筋内注入を記載）、及びＲｏｍｅｒｏら（Ｈｕｍ．Ｇｅｎｅ．Ｔｈｅｒ．１５：１０６５−１０７６，２００４、デュシェンヌ／ベッカー型筋ジストロフィーを治療するため、プラスミドの０．２ｍｇ〜０．６ｍｇの筋肉注射を記載）に記載されており、このそれぞれは、参照により本明細書に組み込まれる。
【００８４】
ｓＡＬＰｓ及びｓＡＬＰ融合ポリペプチドをコードする核酸は、例えば０．０１ｍｇ〜１００ｍｇ（例えば０．０５ｍｇ〜５０ｍｇ、０．１ｍｇ〜１０ｍｇ、０．３ｍｇ〜３ｍｇまたは約１ｍｇ）の範囲の用量で、患者に投与されることができる。核酸が投与され得る総容量はその濃度に依存し、例えば、１μＬ〜１０ｍＬ（例えば、１０μＬ〜１ｍＬ、５０μＬ〜５００μＬ、７０μＬ〜２００μＬ、９０μＬ〜１５０μＬまたは１００μＬ〜１２０μＬ）の範囲であり得る。核酸は、例えば１時間毎、２時間毎、毎日、１日２回、週２回、週３回、週４回、週５回、週６回、毎週、隔週、毎月、隔月または年１回投与することができる。あるいは核酸は、例えば１日当たりの２回、３回、４回、５回、６回、７回、８回、９回、１０回、１１回または１２回投与することができる。投薬レジメンの持続期間は、例えば１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９もしくは３０日、週もしくは月であり得る、または患者の残りの寿命の期間であり得る。
【００８５】
これらはガイドラインであり、その理由は、実際の用量は、各患者に特有の臨床学的因子に基づき、主治医または栄養士によって、慎重に選択かつ滴定されなければならないからである。最適な周期的投与量は当該技術分野において周知の方法により決定されて、因子（例えば、上述のような患者の年齢）及び他の臨床的に関連する因子に影響される。更に患者は、他の疾患または状態について薬物を取っている可能性がある。他の薬物は、本発明のポリペプチドまたは核酸が患者に投与される期間中、続行され得るが、そのような場合は、有害な副作用が生じるか決定するため低用量から始めることが望ましい。
【００８６】
例えばｓＡＬＰまたはｓＡＬＰ融合ポリペプチド（ＳＴＲＥＮＳＩＱ（商標）などのＴＮＡＬＰまたはＴＮＡＬＰ融合ポリペプチド、例えば配列番号１９）は注入のための溶液として調製されることができ、それは無色透明からわずかに黄色の水溶液（ｐＨ７．４）である。ｓＡＬＰまたはｓＡＬＰポリペプチドは、１２ｍｇ／０．３ｍＬ，１８ｍｇ／０．４５ｍＬ、２８ｍｇ／０．７ｍＬ、４０ｍｇ／１ｍｌまたは８０ｍｇ／０．８ｍＬの濃度で調製され得る。特に本組成物は、注入のための４０ｍｇ／ｍｌの溶液として調製されることができ、そこで溶液の各ｍｌは、４０ｍｇのｓＡＬＰまたはｓＡＬＰポリペプチド（例えば、各バイアルは０．３ｍｌの溶液及び１２ｍｇのｓＡＬＰ（４０ｍｇ／ｍｌ）を含有、各バイアルは０．４５ｍｌの溶液及び１８ｍｇのｓＡＬＰ（４０ｍｇ／ｍｌ）を含有、各バイアルは０．７ｍｌの溶液及び２８ｍｇのｓＡＬＰ（４０ｍｇ／ｍｌ）を含有、または各バイアルは１．０ｍｌの溶液及び４０ｍｇのアスホターゼアルファ（４０ｍｇ／ｍｌ）を含有）を含む。ｓＡＬＰまたはｓＡＬＰポリペプチド（ＳＴＲＥＮＳＩＱ（商標）などのＴＮＡＬＰまたはＴＮＡＬＰ融合ポリペプチド、例えば配列番号１９）は、１００ｍｇ／ｍｌの濃度の注入のための溶液として調製されることができ、そこで溶液の各１ｍｌは、１００ｍｇのｓＡＬＰまたはｓＡＬＰポリペプチド（例えば、各バイアルは０．８ｍｌの溶液及び８０ｍｇのアスホターゼアルファ（１００ｍｇ／ｍｌ）を含有）を含む。
【００８７】
例えば、ｓＡＬＰまたはｓＡＬＰ融合ポリペプチド（ＳＴＲＥＮＳＩＱ（商標）などのＴＮＡＬＰまたはＴＮＡＬＰ融合ポリペプチド、例えば配列番号１９）の推奨用量は、皮下に週３回投与される体重の２ｍｇ／ｋｇ、または皮下に週６回投与される体重の１ｍｇ／ｋｇの投与レジメンである。追加の用量情報を以下に提供する（表１）。
【表１】
2018533571.tif 000002
【００８８】
製剤
ｓＡＬＰｓ及びｓＡＬＰ融合ポリペプチド（例えば、ＳＴＲＥＮＳＩＱ（商標）などのＴＮＡＬＰまたはＴＮＡＬＰ融合ポリペプチド、例えば配列番号１９）を含む組成物は、標準的方法に従って調製され得る。医薬製剤は十分に確立した技術であり、例えばＧｅｎｎａｒｏ（２０００）“Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ，”２０ｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ，Ｗｉｌｌｉａｍｓ＆Ｗｉｌｋｉｎｓ（ＩＳＢＮ：０６８３３０６４７２）、Ａｎｓｅｌ  ｅｔ  ａｌ．（１９９９）“Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｄｏｓａｇｅ  Ｆｏｒｍｓ  ａｎｄ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｓｙｓｔｅｍｓ，”７ｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ  Ｗｉｌｌｉａｍｓ＆Ｗｉｌｋｉｎｓ  Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ（ＩＳＢＮ：０６８３３０５７２７）、及びＫｉｂｂｅ（２０００）“Ｈａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｅｘｃｉｐｉｅｎｔｓ  Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ，”３ｒｄ  Ｅｄｉｔｉｏｎ（ＩＳＢＮ：０９１７３３０９６Ｘ）に更に記載されている。例えば、ｓＡＬＰ組成物（例えば、ＳＴＲＥＮＳＩＱ（商標）などのＴＮＡＬＰ、例えば配列番号１９）は、例えば好適な濃度及び２〜８℃（例えば、４℃）での保管に適している緩衝液として調製されることができる。組成物は、０℃未満（例えば−２０℃または−８０℃）の温度での保管のためにも調製されることができる。組成物は、２〜８℃（例えば４℃）で、最高２年間（例えば１か月、２か月、３か月、４か月、５か月、６か月、７か月、８か月、９か月、１０か月、１１か月、１年、１と１／２年または２年間）の保管のためにも調製されることができる。したがって本明細書に記載の組成物は、２〜８℃（例えば４℃）で、少なくとも１年間保管する際安定であり得る。
【００８９】
ｓＡＬＰｓ及びｓＡＬＰ融合ポリペプチド（例えば、ＳＴＲＥＮＳＩＱ（商標）などのＴＮＡＬＰまたはＴＮＡＬＰ融合ポリペプチド、例えば配列番号１９）を含む組成物は、様々な形態であり得る。これらの形態は、例えば液体、半固体及び固体剤形、例えば溶液（例えば、注射可能かつ不溶解性溶液）、分散液または懸濁液、錠剤、丸剤、粉末、リポソーム及び坐剤を含む。好ましい形態は、ある程度は意図される投与方法及び治療的適用による。
【００９０】
例えば、全身または局部送達を目的とする組成物は、注射可能または不溶解性溶液の形であり得る。したがって組成物（例えば、ｓＡＬＰポリペプチドまたはｓＡＬＰ融合ポリペプチド、例えばＳＴＲＥＮＳＩＱ（商標）などのＴＮＡＬＰまたはＴＮＡＬＰ融合ポリペプチド、例えば配列番号１９）は、非経口方法（例えば、皮下、静脈内、腹腔内または筋肉注射）による投与のために調製されることができる。本明細書で使用する場合「非経口投与」「非経口的に投与される」及び他の文法的に等しい語句は、経腸投与及び局所投与以外、通常は注射による投与方法を意味し、皮下、皮内、静脈内、鼻孔内、眼球内、肺、筋肉内、動脈内、髄腔内、嚢内、眼窩内、心臓内、皮内、肺内、腹腔内、経気管、表皮下、関節内、被膜下、クモ膜下、脊髄内、硬膜外、脳内、頭蓋内、頸動脈内及び胸骨内注射及び注入を含むが、これらに限定されない。
【００９１】
ｓＡＬＰｓ及びｓＡＬＰ融合ポリペプチド（例えば、ＳＴＲＥＮＳＩＱ（商標）などのＴＮＡＬＰまたはＴＮＡＬＰ融合ポリペプチド、例えば配列番号１９）を含む組成物は、溶液、マイクロエマルション、分散液、リポソーム、または高濃度での安定した保管に好適な規則的な構造として調製され得る。滅菌注射用溶液は、本発明の組成物を上述の成分のうちの１つまたは組み合わせと共に必要な量の適切な溶媒に混合し、必要に応じて続いて濾過滅菌することにより調製することができる。一般的に分散液は、本明細書に記載の組成物を、塩基性分散液及び上述のものからの他の必要な成分を含有する無菌ビヒクル中に混合することによって調製する。滅菌注射用溶液を調製するための無菌粉末の場合、調製方法は、本明細書に記載の組成物に加えて、予め滅菌濾過したその溶液からの任意の追加の所望成分（以下を参照）の粉末を得る、真空乾燥及び凍結乾燥が挙げられる。適切な溶液の流動性は、例えばレシチンなどのコーティングの使用によって、分散液の場合には必要な粒径の維持によって、及び界面活性剤の使用によって維持することができる。吸収を遅延させる試薬、例えばモノステアリン酸塩及びゼラチンを組成物に含めることによって、注射用組成物の長期の吸収をもたらすことができる。
【００９２】
本明細書で記載される組成物は、免疫リポソーム組成物でも調製され得る。このような製剤は当該技術分野において周知の方法により調製されることができ、例えばその方法は、Ｅｐｓｔｅｉｎ  ｅｔ  ａｌ．（１９８５）Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ８２：３６８８、Ｈｗａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．（１９８０）Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ７７：４０３０、ならびに米国特許第４，４８５，０４５号及び同第４，５４４，５４５号に記載される。増強した循環時間を有するリポソームは、例えば米国特許第５，０１３，５５６号に開示される。
【００９３】
ｓＡＬＰｓ及びｓＡＬＰ融合ポリペプチド（例えば、ＳＴＲＥＮＳＩＱ（商標）などのＴＮＡＬＰまたはＴＮＡＬＰ融合ポリペプチド、例えば配列番号１９）を含む組成物は更に、インプラント及びマイクロカプセル化送達システムを含む制御放出製剤などの急速な放出に対して本組成物（例えばｓＡＬＰｓ及びｓＡＬＰ融合ポリペプチド）を保護する、担体とともに調製され得る。エチレン酢酸ビニル、ポリ無水物、ポリグリコール酸、コラーゲン、ポリオルトエステル及びポリ乳酸などの、生分解性かつ生体適合性ポリマーを使用することができる。このような製剤の調製のための多くの方法は、当該技術分野において周知である。例えば、Ｊ．Ｒ．Ｒｏｂｉｎｓｏｎ（１９７８）“Ｓｕｓｔａｉｎｅｄ  ａｎｄ  Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  Ｒｅｌｅａｓｅ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｓｙｓｔｅｍｓ，”Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋを参照のこと。
【００９４】
組成物が第２の活性剤と組み合わせて使用する予定のとき、組成物は第２の薬剤と共調製することができる、または組成物は第２の薬剤の調製とは別に調製されることができる。例えば各医薬品組成物は、例えば投与の直前に混合され得る、及び一緒に投与され得る、または別々に、例えば同じもしくは異なる時間に投与されることができる。
【００９５】
ｓＡＬＰｓ及びｓＡＬＰ融合ポリペプチド（例えば、ＳＴＲＥＮＳＩＱ（商標）などのＴＮＡＬＰまたはＴＮＡＬＰ融合ポリペプチド、例えば配列番号１９）を含む組成物は、静脈内ガンマグロブリン治療（ＩＶＩＧ）、血奨交換療法、血漿補充療法または血漿交換法と共に、患者への、または胎児に投与する場合、このような胎児を身ごもっている女性への投与のために調製されることができる。
【００９６】
担体／溶媒
ｓＡＬＰｓ及びｓＡＬＰ融合ポリペプチド（例えば、ＳＴＲＥＮＳＩＱ（商標）などのＴＮＡＬＰまたはＴＮＡＬＰ融合ポリペプチド、例えば配列番号１９）を含む製剤は、薬学的に許容される滅菌水性溶媒もしくは非水性溶媒、懸濁液またはエマルションと組み合わせて患者に提供されることができる。非水性溶媒の例は、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール、植物油、魚油及び注射用有機エステルである。水性担体は、塩化ナトリウム溶液、リンゲルデキストロース溶液、デキストロースプラス塩化ナトリウム溶液、ラクトース含有リンゲル溶液または不揮発油を含有する、生理食塩水及び緩衝医薬非経口溶媒を含む、水、水アルコール溶液、エマルションまたは懸濁液を含む。例えば薬学的に許容される担体は、塩化ナトリウム及び／またはリン酸ナトリウムを含むことができ、そこで本組成物は、例えば約１５０ｍＭの塩化ナトリウム及び／または約２５ｍＭのリン酸ナトリウム（ｐＨ７．４）を含む。
【００９７】
静脈内溶媒は、流体及び栄養素補充剤、電解質補充剤（例えばリンゲルデキストロースに基づくもの）などが挙げられる。薬学的に許容される塩はそこに含まれることができ、例えば、鉱酸塩（例えば塩酸塩、臭化水素酸塩、リン酸塩、硫酸塩など）、及び有機酸の塩（例えば酢酸塩、プロピオン酸塩、マロン酸塩、安息香酸塩など）である。更に補助物質（例えば湿潤剤、乳化剤、ｐＨ緩衝物質など）は、このような溶媒中に存在し得る。薬学的に許容される担体に関する徹底的な議論は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ（Ｍａｃｋ  Ｐｕｂ．Ｃｏ．，Ｎ．Ｊ．１９９１）で示される。
【００９８】
遺伝子治療
ｓＡＬＰｓ及びｓＡＬＰ融合ポリペプチド（例えば、ＳＴＲＥＮＳＩＱ（商標）などのＴＮＡＬＰまたはＴＮＡＬＰ融合ポリペプチド、例えば配列番号１９）は、遺伝子治療によって送達されることもでき、タンパク質をコードする外因性核酸は、目的の組織に送達されて、ｉｎ  ｖｉｖｏ発現される。例えば遺伝子治療方法は、Ｖｅｒｍｅら（Ｎａｔｕｒｅ３８９：２３９−２４２，１９９７）、Ｙａｍａｍｏｔｏら（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｔｈｅｒａｐｙ１７：Ｓ６７−Ｓ６８，２００９）及びＹａｍａｍｏｔｏら（Ｊ．Ｂｏｎｅ  Ｍｉｎｅｒ．Ｒｅｓ．２６：１３５−１４２，２０１１）で論じられており、そのそれぞれは参照により本明細書に組み込まれる。ウイルス及び非ウイルスベクター系の両方を使用することができる。ベクターは、例えばプラスミド、人工染色体（例えば、細菌、哺乳動物または酵母人工染色体）、複製起点を備えるウイルスまたはファージベクター、及び所望によりウイルス性ポリペプチドをコードする核酸の発現のためのプロモーター、及び所望によりプロモーターの制御因子であり得る。ベクターは、１つ以上の選択マーカー遺伝子、例えば細菌プラスミドについてはアンピシリンもしくはカナマイシン耐性遺伝子、または真菌ベクターについては耐性遺伝子を含むことができる。ベクターは、例えばＤＮＡ、ＲＮＡもしくはウイルスポリペプチドの生成のためにｉｎ  ｖｉｔｒｏで使用されることができ、または例えばベクターによってコードされるウイルスポリペプチドの生成のために宿主細胞、例えば哺乳動物の宿主細胞を遺伝子導入するもしくは形質転換するために使用することができる。ベクターは、例えばワクチン接種または遺伝子治療の方法で、ｉｎ  ｖｉｖｏで使用するのに適していてもよい。
【００９９】
適したウイルスベクターの例は、レトロウイルス、レンチウイルス、アデノウイルス、アデノ関連ウイルス、単純ヘルペスウイルスを含むヘルペスウイルス、αウイルス、ポックスウイルス（例えばカナリアポックス及びワクシニアウイルス性系）を含む。これらのウイルスを使用した遺伝子導入技術は、当該技術分野において周知である。レトロウイルスベクターは、例えば本発明の核酸を宿主ゲノムに安定して組み込むために用いることができる。それに反して複製欠損アデノウイルスベクターはエピソームを維持して、したがって一過性発現を許容する。昆虫細胞、ヒト細胞、酵母または細菌での発現を促進することが可能なベクター（例えばバキュロウイルスベクター）を、例えばサブユニットワクチン用にまたはイムノアッセイで使用するため、本発明の核酸によってコードされる多量のウイルスポリペプチド（複数可）を生成するために、用いることができる。有用な遺伝子治療方法は、ＷＯ０６／０６０６４１、米国特許第７，１７９，９０３号及びＷＯ０１／３６６２０（そのそれぞれは参照により本明細書に組み込まれる）に記載されているものを含み、それはアデノウイルスベクターを使用して、タンパク質産生細胞として肝細胞を目的の核酸の標的とする。
【０１００】
追加の例で、複製欠損のサルアデノウイルスベクターは、生ベクターとして使用され得る。これらのウイルスはＥ１欠失を含み、Ｅ１遺伝子によって形質転換した細胞株で増殖することができる。これらの複製欠損のサルアデノウイルスベクターの例は、米国特許第６，０８３，７１６号及びＷＯ０３／０４６１２４（そのそれぞれは参照により本明細書に組み込まれる）に記載されている。これらのベクターは本発明の核酸を挿入するために操作されることができ、その結果、コードされたウイルスポリペプチド（複数可）は発現され得る。
【０１０１】
プロモーター及び他の発現調節シグナルは、発現がデザインされる宿主細胞と適合するように選択されることができる。例えば哺乳動物のプロモーターは、カドミウムなどの重金属に反応して誘導され得るメタロチオネインプロモーター、及びβ−アクチンプロモーターを含む。ＳＶ４０ラージＴ抗原プロモーター、ヒトサイトメガロウイルス（ＣＭＶ）前初期（１Ｅ）プロモーター、ラウス肉腫ウイルスＬＴＲプロモーター、アデノウイルスプロモーター、またはＨＰＶプロモーター、特にＨＰＶ上流調節領域（ＵＲＲ）などのウイルスプロモーターも使用され得る。これらのすべてのプロモーターは、追加のプロモーターも併せて、当該技術分野においてきちんと記載されている。
【０１０２】
本明細書に記載の核酸分子は、非ウイルス性系を使用して投与されることもできる。例えばこれらの投与系は、ミクロスフェア封入、ポリ（ラクチド−コ−グリコリド）、ナノ粒子及びリポソーム性系を含む。非ウイルス性系は、「裸の」ポリヌクレオチドの送達を容易にする技術も含む（例えばポリヌクレオチドの導入のために使用するエレクトロポーレーション、「遺伝子銃」送達及び種々の他の技術）。
【０１０３】
導入されたポリヌクレオチドは、宿主細胞で安定してまたは一時的に維持されることができる。導入されたポリヌクレオチドが宿主細胞と適合する複製起点を含む、または宿主細胞のレプリコン（例えば染色体外のレプリコン（例えばプラスミド））、もしくは核もしくはミトコンドリア染色体に統合されることを、安定的な維持は一般的に必要とする。
【０１０４】
以下の実施例は、特許請求された発明を例示するものであって、それを限定するものではない。
【実施例】
【０１０５】
実施例１．症例集積の概要
低ホスファターゼ血症（ＨＰＰ）及び頭蓋縫合早期癒合症の４人の小児患者を、最初に治療した。今回の頭蓋顔面グループの診察時の平均年齢は、３８．２か月だった。各患者は、薬品ＥＮＢ−００４０（ＳＴＲＥＮＳＩＱ（商標）（アスホターゼアルファ）、配列番号１９）による現行の承認済み臨床試験に従って、可溶性アルカリホスファターゼ（ｓＡＬＰ）組成物で治療した。１人の患者は術前にｓＡＬＰ組成物を投与され、３人の患者は手術後にｓＡＬＰ組成物を投与された。４人の患者全員は、変化した神経機能の症状を示し、神経画像診断を受けて、頭蓋縫合早期癒合症の存在を確認した。２人の患者は同じ家族であり、２人とも頭蓋縫合早期癒合症と関連する乳児ＨＰＰを有し、及び４人の男性のいとこがＨＰＰに罹患しているＨＰＰの家族歴を有した。
【０１０６】
実施例２．頭蓋縫合早期癒合症患者１
患者１は、２歳３か月で内分泌医療に初めて来院した３歳９か月の男性だった。彼の病歴は、ＨＰＰ、頭蓋縫合早期癒合症、拘束性肺疾患、呼吸器感染、成長障害及び複数の骨折を含んだ。彼は、慢性呼吸器疾患の急性憎悪の管理のために入院した。今回の頭蓋顔面グループの診察は、長頭症及び左冠状縫合上の隆線の臨床所見を評価するように求められた。
【０１０７】
臨床評価の際、患者は、易刺激性、断続的な嘔吐、頭痛、非対称の頭蓋底、顔面のゆがみ及び両側うっ血乳頭の症状も示した。臨床試験の一部として、患者はｓＡＬＰ組成物、ＥＮＢ−００４０（アスホターゼアルファ、配列番号１９）による治療を待っていた。三次元（３Ｄ）頭部コンピュータ断層撮影（ＣＴ）スキャンによるＸ線画像撮影診断により、左冠状及び矢状頭蓋縫合早期癒合症、頭蓋冠薄化、右前頭葉の異形成、及び右Ｓ状静脈洞の先天性欠如を含む静脈異常（図１Ａ及び図１Ｂ）が見られた。
【０１０８】
これらの症状により、頭蓋再建による前頭眼窩前進は、疑われる頭蓋内圧亢進を減らして、解剖学的変形を矯正するために実施した。同種移植材料（Ｇｒａｆｔｏｎ  ＤＢＭ  ｉｎ  Ｆｌｅｘ  ａｎｄ  Ｐｕｔｔｙ  ｆｏｒｍｓ，ＢｉｏＨｏｒｉｚｏｎｓ  ＩＰＨ，Ｉｎｃ．）は、骨形成を増やすために使用した。患者は、顕著な合併症もなく、処置への忍容性は良好だった。
【０１０９】
手術の３週間後、患者は、ｓＡＬＰ組成物ＥＮＢ−００４０（アスホターゼアルファ、配列番号１９）による治療を、皮下に週６回投与する１ｍｇ／ｋｇの用量で開始した。手術の１年後、患者は、頭痛、易刺激性及び嘔吐を含む増大したＩＣＰに起因する、うっ血乳頭及び症状の回復によって良好だった。この患者は、身体の骨石灰化、歯の萌出、増大した体重増及び全体的な健康の改善を示した。頭蓋冠リモデリング処置は、大脳基底槽の増加した空隙、及び頭蓋椎骨接合部でより少ない密集の大後頭孔をもたらした（図２Ａ、術前矢状ＣＴスキャン）。
【０１１０】
λ字縫合はＨＰＰの初期に閉じる傾向があり、したがって後頭蓋窩の自然な成長を防いで、結果として生じたキアリＩ型奇形の小脳扁桃ヘルニアの形成を場合により引き起こす。患者１で明らかなように、キアリＩ型奇形は、以下の頭蓋冠リモデリング及び増大（頭蓋縫合早期癒合症の他の形態に記載されている現象）を回復させ得る（図２Ｂ、手術の１年後に撮影（矢状ＣＴスキャン））。
【０１１１】
実施例３．頭蓋縫合早期癒合症患者２
患者２は、患者１の姉で５歳６か月だった。患者２は、奇形の頭部形状、頭痛、眼振、慢性視神経浮腫及び視力低下の症状を示した。彼女は、ＨＰＰに対する遺伝的素因及び複合頭蓋縫合早期癒合症の存在に関する懸念について、以前に本国で評価された。
【０１１２】
臨床評価の間、患者の頭囲は４７ｃｍ（彼女の年齢での小頭症）であり、触診で緊張していた開いた大泉門の持続を伴うブレグマ上の有意な骨隆起を伴った。３Ｄ  ＣＴスキャンによるＸ線撮影評価は、脳実質外腔の不存在を伴う内板の著しいスカラッピング、ならびに矢状及び左冠状縫合線の完全な閉塞を有する異常な頭蓋冠形態を明らかにした。これらの結果は、慢性的に高いＩＣＰを懸念する（図３Ａ及び図３Ｂ）。未治療のＨＰＰに続発する慢性変化を考慮すると、手術後の骨を治癒は懸念材料だった。
【０１１３】
患者は、石灰化硬膜の複数領域の特定と共に開いた頭蓋再建を受けた。特に患者は、石灰化硬膜と関連する脳脊髄液（ＣＳＦ）漏れなどのいかなる周術期の合併症もなく、頭蓋冠拡張のため複数のバレルステーブ骨切り術も受けた。手術後７か月で、患者頭部の３Ｄ  ＣＴスキャンは、頭蓋冠の改善した骨成長を示した（図３Ｃ）。Ｘ線撮影の左冠状頭蓋縫合早期癒合症は明白だったが、臨床的に患者は、片側冠状頭蓋縫合早期癒合症（例えば道化師様変形）の非対称眼窩の結果を示さなかった。したがってバレルステーブ骨切り術は、前頭眼窩複合体の改変よりも、完成していた。患者の複雑さ及び石灰化硬膜によるＣＳＦ漏れの危険が高いため、頭蓋冠リモデリングのこの過程は、骨切り術による前頭眼窩頭蓋骨形成術の代わりに選択された。
【０１１４】
頭蓋再建の後、患者の頭囲は４９ｃｍまで増加して、患者の年齢の正規曲線に近づいた。彼女の頭痛の改善、慢性視神経浮腫の安定化及び視力の改善と共に、上昇した頭蓋内圧と関連する症状はおさまった（図４Ａ及び図４Ｂ、手術の１年後に撮影）。
【０１１５】
実施例４．頭蓋縫合早期癒合症患者３
患者３は、周産期の低ホスファターゼ血症で生まれた女乳児だった（出生体重は３０６０ｇ、身長４５ｃｍ、頭囲３２ｃｍ）。彼女は、胎児超音波検査によって、骨格異形成、骨形成不全（例えば、骨粗鬆症）及びＨＰＰと出生前に診断された。反復帝王切開による分娩の後、患者３は、著しい肋骨下収縮及び無呼吸のための陽圧換気を必要とする分娩の後、呼吸困難を急速に発生させた。患者は、酸素脱飽和のためにも挿管されて、異常な胸部コンプライアンスのために補助換気による挿管を維持した。柔らかい頭蓋を伴う異形症、ならびに広く割れた矢状及び前頭縫合を伴う大きな大泉門、変形を伴う短い四肢、内反尖足、短指、狭い胸部及びＨＰＰを有するとして、患者は更に診断された。
【０１１６】
それから患者は、ＨＰＰバイオマーカーを評価した。最初のＡＬＰ濃度＜２０ｉＵ／Ｌだった。遺伝子検査で、意義不明の２つのゲノム変異体が明らかになった（すなわち、欠失１ｐ３１．１及び重複６ｑ２１）。ＡＬＰＬ遺伝子試験は、意義不明の病原性変異体８７６＿ｄｅｌＡＧＧＧＧＡＣｉｎｓＴ及び６５０Ｔ＞Ｃによる複合ヘテロ接合性を示した。臨床症状から判断すると、遺伝子型はＨＰＰの診断で支えになった。リン酸ピリドキサルが上昇し（例えば、＞２５０ｍｃｇ／Ｌ）、及び尿中ホスホエタノールアミンも上昇した（例えば、６０２５ｎｍｏｌ／ｍｇ）ことを、ＡＬＰ活性の更なる試験は立証した。
【０１１７】
患者は、生後２か月で、ｓＡＬＰ組成物ＥＮＢ−００４０（アスホターゼアルファ、配列番号１９）による治療を、皮下に週６回投与する１ｍｇ／ｋｇの用量で開始した（頭蓋冠リモデリングの前に）。生後７か月の頭蓋のＣＴスキャンは、頭蓋冠及び顔面構造をびまん性肥厚と共に骨構造の不良な骨化を示した。患者は、両側冠状癒合を有する短頭症だった。彼女は、生後８か月で複数の骨切り術を伴う開放性頭蓋冠リモデリング、及び両側頭頂後頭リモデリングを必要とした。頭蓋冠リモデリング手術と組み合わせたｓＡＬＰ組成物による術前の治療は、頭蓋縫合早期癒合症の徴候の改善をもたらして、患者は、体重８．０２５ｋｇ及び体長６１．５ｃｍで、１６か月で彼女の本来の管理施設へ移された。
【０１１８】
実施例５．頭蓋縫合早期癒合症患者４
患者４は、周産期の低ホスファターゼ血症で生まれた女乳児だった。患者４は両側視神経浮腫を示した。頭蓋のＣＴスキャンは、不良な骨形成、左冠状頭蓋縫合早期癒合症、矢状頭蓋縫合早期癒合症、及び前頭骨癒合を示した。彼女は、生後２２か月で頭蓋冠リモデリング手術を必要とした。頭蓋冠リモデリング手術と組み合わせたｓＡＬＰ組成物による術後の治療は、頭蓋縫合早期癒合症の徴候の改善をもたらした。
【０１１９】
実施例６．頭蓋縫合早期癒合症の周産期患者５
周産期の患者は、頭蓋冠リモデリング手術と組み合わせたｓＡＬＰの投与によって治療された。出生時、男性患者は体重３４６０ｇだった。患者は挿管され、人工呼吸を装着して、それから地域病院から専門治療子ども病院に移った。患者は遺伝カウンセリングで治療して、ＡＬＰＬ遺伝子の配列決定から、患者が複合ヘテロ接合体であることがわかった（ｃ．６６８Ｇ＞Ａ、ｃ．１１７１Ｃ＞Ｔ）。患者のビタミンＢ６（リン酸ピリドキサル）濃度は＞２０００だった。患者は、頭蓋骨の著しく低下した骨形成、椎体の低下した骨形成及び高さ、上腕骨の骨形成の欠如、著しい骨幹端の不規則性を有する橈骨及び尺骨の骨幹端、破砕及びすり減り、小さい胸部、ならびに内側肋骨の骨形成の欠如及び肋骨のか細い外観を伴う異常な骨を更に示した。
【０１２０】
患者は、生後５週間で、ｓＡＬＰ組成物、ＥＮＢ−００４０（アスホターゼアルファ、配列番号１９）による治療を開始した。それから患者は、良好な体重増加（胃瘻造設によるすべての栄養）、通常の心理社会的発達、及び増加した骨サイズを示し、一方で、低身長、継続する不良な石灰化による四肢の不良な成長、ならびに粗大運動及び微細運動遅延の症状は残った。１２か月間の成長パラメーターは、体重８．５８５ｋｇ、身長６６ｃｍ及び頭囲４７．５ｃｍだった。出生時に頭蓋石灰化はほとんどなかった一方で、頭蓋発生は、ｓＡＬＰ組成物による治療後、著しく改善された（図５Ａ〜図５Ｃ）。患者は、後側頭蓋冠リモデリング及び骨延展を必要として、１歳で冠状癒合を発生させた（図６Ａ〜図６Ｃ）。患者は、頭蓋冠リモデリング処置と組み合わせたｓＡＬＰ組成物による治療の後、著しい改善を示した。
【０１２１】
実施例７．症例集積の要約
頭蓋縫合早期癒合症の場合に、ＣＳＦ流出を、静脈洞高血圧に続発する障害性ＣＳＦ吸収によって減らすことができる。頭蓋縫合早期癒合症で拡大することができない頭蓋骨において、頭蓋内圧亢進は発生する。ＨＰＰ関連の頭蓋縫合早期癒合症の外科的療法の目的は、実質的に頭蓋内容積を増加させ、それによってＩＣＰを減少させることである。今回の患者１及び２で明らかなように、疑われる上昇したＩＣＰを伴う症状（例えば、うっ血乳頭、頭痛及び嘔吐）は、頭蓋容積の増大によって完全に変えられる。ｓＡＬＰ組成物、ＥＮＢ−００４０（アスホターゼアルファ、配列番号１９）による治療は、ＨＰＰの影響を受けるそれらの児童において患者予後を改善し、ならびに頭蓋縫合早期癒合症などの疾患の二次的影響を診断して及び外科的に治療することをここで可能にする。今回の症例集積で、４人の患者は全員、頭蓋縫合早期癒合症を治療するために、頭蓋冠リモデリング処置と共にｓＡＬＰ組成物を投与した（表２）。
【０１２２】
ｓＡＬＰ組成物は、１人の患者で頭蓋冠リモデリング処置に先立って投与されて、３人の患者で頭蓋冠リモデリング処置の後で投与された。ｓＡＬＰ方法の術前及び手術後の投与からの結果は類似しており、患者は手術合併症がなかった。頭蓋冠の再構成は、４人の患者全員について術後期で優れていた。ＨＰＰ関連の頭蓋縫合早期癒合症の外科的矯正は、ｓＡＬＰ投与と組み合わせて使用されるとき、安全かつ有効であることを、これらの結果は示唆する。
【表２】
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【０１２３】
他の実施形態
上述の本明細書で言及している出版物、特許及び特許出願はすべて、それぞれ個々の出版物、特許または特許出願が具体的に及び個別に、参照によりその全体が組み込まれるのと同じ範囲で、参照により本明細書に組み込まれる。本発明の上述の方法、医薬組成物及びキットの様々な修正及び変更は、特許請求された本発明の範囲及び趣旨から逸脱することなく、当業者には明白であろう。本開示は特定の実施形態に関連して記載されているが、それが更なる変更ができ、及び請求される本発明がこのような特定の実施形態に過度に限定されてはならないことは理解されよう。実際、当業者にとって明らかである本開示に従った方法を実施するための記載されている方法の種々の変更は、請求された本発明の範囲内であることを意図する。本出願は、一般的に本開示の原理に従った及び当該技術内の周知の慣行内である本開示からのこのような発展を含む、本開示の任意の変形、用途または適用例も対象することを目的とし、そこで本開示は上述の本質的な特徴に関連し、かつそれに適用され得る。
【図１Ａ】
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【図１Ｂ】
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【図２Ａ】
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【図２Ｂ】
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【図３Ａ】
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【図３Ｂ】
2018533571.tif 000009
【図３Ｃ】
2018533571.tif 000010
【図４Ａ】
2018533571.tif 000011
【図４Ｂ】
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【図５Ａ】
2018533571.tif 000013
【図５Ｂ】
2018533571.tif 000014
【図５Ｃ】
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【図６Ａ】
2018533571.tif 000016
【図６Ｂ】
2018533571.tif 000017
【図６Ｃ】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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