(57)【要約】  本発明は、癌を治療するための組成物、方法、使用およびキットを関する。特に、本発明は、キモトリプシノーゲンをある量で、例えば、約０．１ｍｇ／ｋｇ超で、およびトリプシノーゲンをある量で、例えば、約０．０２ｍｇ／ｋｇ超で投与し、それにより癌を治療することを含む、対象における癌を治療する組成物および方法に関する。本発明はまた、キモトリプシノーゲンおよびトリプシノーゲンを含む、対象における癌を治療するための組成物および方法であって、キモトリプシノーゲン：トリプシノーゲンの重量比は、８：１超である組成物および方法に関する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
キモトリプシノーゲン、トリプシノーゲンおよび薬学的に許容可能な希釈剤、賦形剤または担体を含む、癌を治療するための組成物であって、キモトリプシノーゲンを０．１ｍｇ／ｋｇ以上の量で、およびトリプシノーゲンを０．０２ｍｇ／ｋｇ以上の量で投与するために適合されている組成物。
【請求項２】
前記キモトリプシノーゲンの量が、０．１５ｍｇ／ｋｇまたは０．２５ｍｇ／ｋｇ超である、請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
前記キモトリプシノーゲンの量が、０．４ｍｇ／ｋｇ、１．２ｍｇ／ｋｇ、３．５ｍｇ／ｋｇ、１０ｍｇ／ｋｇ、２０ｍｇ／ｋｇまたは４０ｍｇ／ｋｇ超である、請求項１に記載の組成物。
【請求項４】
前記トリプシノーゲンの量が、０．０３ｍｇ／ｋｇまたは０．０５ｍｇ／ｋｇ超である、請求項１または２に記載の組成物。
【請求項５】
前記トリプシノーゲンの量が、０．０６ｍｇ／ｋｇ、０．２ｍｇ／ｋｇ、０．６ｍｇ／ｋｇ、１．５ｍｇ／ｋｇ、３ｍｇ／ｋｇまたは６ｍｇ／ｋｇ超である、請求項１または２に記載の組成物。
【請求項６】
キモトリプシノーゲンの量が、４５ｍｇ／ｋｇ、１３５ｍｇ／ｋｇ、２５０ｍｇ／ｋｇまたは５００ｍｇ／ｋｇ超である、請求項１に記載の組成物。
【請求項７】
トリプシノーゲンの量が、７ｍｇ／ｋｇ、８ｍｇ／ｋｇ、２０ｍｇ／ｋｇ、４０ｍｇ／ｋｇまたは８０ｍｇ／ｋｇ超である、請求項１〜３のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項８】
キモトリプシノーゲン、トリプシノーゲンおよび薬学的に許容可能な希釈剤、賦形剤または担体を含む、膵臓癌を治療するための医薬組成物であって、キモトリプシノーゲンを５ｍｇ／ｋｇ以上の量で、およびトリプシノーゲンを１．５ｍｇ／ｋｇ以上の量で投与するために適合されている組成物。
【請求項９】
キモトリプシノーゲンが１３ｍｇ／ｋｇ超の量であり、トリプシノーゲンが２ｍｇ／ｋｇ超の量である、請求項８に記載の医薬組成物。
【請求項１０】
キモトリプシノーゲンが４１ｍｇ／ｋｇ以下の量であり、トリプシノーゲンが７ｍｇ／ｋｇ以下の量である、請求項８または９に記載の医薬組成物。
【請求項１１】
キモトリプシノーゲンが約４１ｍｇ／ｋｇの量であり、トリプシノーゲンが約７ｍｇ／ｋｇの量である、請求項８または９に記載の医薬組成物。
【請求項１２】
卵巣癌を治療するための医薬組成物であって、キモトリプシノーゲンを３ｍｇ／ｋｇ以上の量で、およびトリプシノーゲンを０．４ｍｇ／ｋｇ以上の量で投与するために適合されている組成物。
【請求項１３】
キモトリプシノーゲンが少なくとも４ｍｇ／ｋｇ超の量であり、トリプシノーゲンが０．７ｍｇ／ｋｇ超の量である、請求項１２に記載の医薬組成物。
【請求項１４】
キモトリプシノーゲンが１３ｍｇ／ｋｇ以下の量であり、トリプシノーゲンが２．５ｍｇ／ｋｇ以下の量である、請求項１２または１３に記載の医薬組成物。
【請求項１５】
キモトリプシノーゲンが１３ｍｇ／ｋｇの量であり、トリプシノーゲンが２．２ｍｇ／ｋｇの量である、請求項１２または１３に記載の医薬組成物。
【請求項１６】
キモトリプシノーゲンを０．１ｍｇ／ｋｇ以上の量で、およびトリプシノーゲンを０．０２ｍｇ／ｋｇ以上の量で投与し、それにより癌を治療することを含む、対象における癌を治療する方法。
【請求項１７】
前記キモトリプシノーゲンの量が、０．１５ｍｇ／ｋｇまたは０．２５ｍｇ／ｋｇ超である、請求項１６に記載の方法。
【請求項１８】
前記キモトリプシノーゲンの量が、０．４ｍｇ／ｋｇ、１．２ｍｇ／ｋｇ、３．５ｍｇ／ｋｇ、１０ｍｇ／ｋｇ、２０ｍｇ／ｋｇまたは４０ｍｇ／ｋｇ超である、請求項１６または１７に記載の方法。
【請求項１９】
前記トリプシノーゲンの量が、０．０３ｍｇ／ｋｇまたは０．０５ｍｇ／ｋｇ超である、請求項１６または１７に記載の方法。
【請求項２０】
前記トリプシノーゲンの量が、０．０６ｍｇ／ｋｇ、０．２ｍｇ／ｋｇ、０．６ｍｇ／ｋｇ、１．５ｍｇ／ｋｇ、３ｍｇ／ｋｇまたは６ｍｇ／ｋｇ超である、請求項１６または１７に記載の方法。
【請求項２１】
前記キモトリプシノーゲンの量が、４５ｍｇ／ｋｇ、１３５ｍｇ／ｋｇ、２５０ｍｇ／ｋｇまたは５００ｍｇ／ｋｇ超である、請求項１６〜２０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２２】
前記トリプシノーゲンの量が、７ｍｇ／ｋｇ、８ｍｇ／ｋｇ、２０ｍｇ／ｋｇ、４０ｍｇ／ｋｇまたは８０ｍｇ／ｋｇ超である、請求項１６〜２１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２３】
前記癌が、膵臓癌、食道癌、結腸癌、腸癌、前立腺癌、卵巣癌、胃癌、乳癌、悪性黒色腫または肺癌から選択される、請求項１６〜２２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２４】
前記癌が、膵臓癌、結腸癌または卵巣癌である、請求項２３に記載の方法。
【請求項２５】
前記癌が、膵臓癌である、請求項２４に記載の方法。
【請求項２６】
キモトリプシノーゲンおよびトリプシノーゲンを、約４：１〜８：１、約５：１〜７：１の範囲内、または約６：１の重量比で投与する、請求項１〜１５のいずれか一項に記載の組成物、または請求項１６〜２５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２７】
癌の治療のための医薬品の製造におけるキモトリプシノーゲンおよびトリプシノーゲンの使用であって、前記医薬品は、キモトリプシノーゲンを０．１ｍｇ／ｋｇ以上の量で、およびトリプシノーゲンを０．０２ｍｇ／ｋｇ以上の量で投与するために適合されている使用。
【請求項２８】
少なくとも１つの投薬単位を含む、癌の治療するためのキットであって、前記投薬単位は、キモトリプシノーゲン、トリプシノーゲンおよび薬学的に許容可能な希釈剤、賦形剤または担体を含み、前記投薬単位は、キモトリプシノーゲンを０．１ｍｇ／ｋｇ以上の量で、およびトリプシノーゲンを０．０２ｍｇ／ｋｇ以上の量で投与するために適合されているキット。
【請求項２９】
キモトリプシノーゲンおよびトリプシノーゲンを含む、対象における癌を治療するための組成物であって、キモトリプシノーゲン：トリプシノーゲンの重量比は、８：１超である組成物。
【請求項３０】
前記重量比が、１０：１超である、請求項２９に記載の組成物。
【請求項３１】
前記重量比が、１０：１である、請求項３０に記載の組成物。
【請求項３２】
アミラーゼを含有しない、請求項２９または３０に記載の組成物。
【請求項３３】
キモトリプシノーゲンおよびトリプシノーゲンを投与することを含む、対象における癌を治療する方法であって、キモトリプシノーゲン：トリプシノーゲンの重量比は、８：１超であり、それにより前記対象における癌を治療する方法。
【請求項３４】
前記重量比が、１０：１超である、請求項３３に記載の方法。
【請求項３５】
前記重量比が、１０：１である、請求項３４に記載の方法。
【請求項３６】
アミラーゼの投与を含まない、請求項３３〜３５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３７】
癌の治療のための医薬品の製造におけるキモトリプシノーゲンおよびトリプシノーゲンの使用であって、キモトリプシノーゲン：トリプシノーゲンの重量比は、８：１超である使用。
【請求項３８】
前記重量比が、１０：１超である、請求項３７に記載の使用。
【請求項３９】
前記重量比が、１０：１である、請求項３８に記載の使用。
【請求項４０】
前記医薬品が、アミラーゼを含まない、請求項３９に記載の使用。
【請求項４１】
前記癌が、膵臓癌、食道癌、結腸癌、腸癌、前立腺癌、卵巣癌、胃癌、乳癌、肝臓癌、悪性黒色腫、線維肉腫または肺癌のいずれか１つである、請求項３３〜４０のいずれか一項に記載の方法または使用。
【請求項４２】
前記癌が、卵巣癌、黒色腫、脳腫瘍、前立腺癌、結腸直腸癌、肝臓癌または肺癌である、請求項３３〜４０のいずれか一項に記載の方法または使用。
【請求項４３】
前記癌が、膵臓癌、結腸癌または卵巣癌である、請求項３３〜４０のいずれか一項に記載の方法または使用。
【請求項４４】
前記癌が、膵臓癌である、請求項３３〜４０のいずれか一項に記載の方法および使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願の相互参照
本出願は、両方の出願の全内容が参照により全体として本明細書に組み込まれる豪州仮特許出願第２０１５９０４６７８号明細書および米国仮特許出願第６２／３２１３７７号明細書からの優先権を主張する。
【０００２】
本出願は、癌を治療するための組成物、方法、使用およびキットに関する。
【背景技術】
【０００３】
近年、癌の治療におけるプロテアーゼの使用が示唆されてきた。最初に、新鮮膵臓酵素抽出物が考えられる癌療法として企図され、いくつかの良好な実験がＪｅｒｓｅｎマウス肉腫モデルを用いて実施された。マウスにプロテアーゼ酵素トリプシンを注射した後、腫瘍の退縮が観察された。得られた結果は非常に興味が注がれるものであり、ヒト癌患者を治療して腫瘍進行を低減させ、生存時間を延長させるためにヒツジ膵臓から調製された粗製酵素抽出物が使用された。
【０００４】
前酵素（酵素の不活性前駆体形態）の使用は、酵素の経口投与が直面する課題の克服を試みるために使用され、結果は様々であった。セリンプロテアーゼ阻害物質トリプシンの前酵素形態であるトリプシノーゲンを含む前酵素混合物は癌腫の治療において有用であることが示されており、腫瘍細胞の表面において選択的に活性化されると考えられている。トリプシンの作用機序は、腫瘍細胞のタンパク質分解として生じると考えられている。キモトリプシノーゲンおよびトリプシノーゲンを含む組成物は、癌、例として、膵臓癌および結腸癌についてのアッセイにおいて有効であることが示されている（特許文献１）。
【０００５】
しかしながら、新たな、または改善された癌治療を提供することが必要とされている。
【０００６】
本明細書における任意の従来技術への言及は、いかなる管轄においてもこの従来技術が共通一般知識の一部を形成するという認識でも示唆でもなく、またはこの従来技術が当業者により理解され、関連するとみなされ、および／もしくは他の従来技術の一部と組み合わされることが妥当に予測され得るという認識でも示唆でもない。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００７】
【特許文献１】国際公開第２０１１／０４７４３４号パンフレット
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００８】
本発明は、キモトリプシノーゲン、トリプシノーゲンおよび薬学的に許容可能な希釈剤、賦形剤または担体を含む、癌を治療するための組成物であって、キモトリプシノーゲンを０．１ｍｇ／ｋｇ以上の量で、およびトリプシノーゲンを０．０２ｍｇ／ｋｇ以上の量で投与するために適合されている組成物を提供する。
【０００９】
本発明はまた、キモトリプシノーゲンおよびトリプシノーゲンを含む、対象における癌を治療するための組成物であって、キモトリプシノーゲンを１ｍｇ／ｋｇ超の量で、およびトリプシノーゲンを０．２ｍｇ／ｋｇ超の量で含む組成物を提供する。
【００１０】
本発明の任意の態様において、組成物は、キモトリプシノーゲンおよびトリプシノーゲンを含み、またはそれらからなり、キモトリプシノーゲンの量は、１．５ｍｇ／ｋｇ、２ｍｇ／ｋｇ、３．５ｍｇ／ｋｇ、５ｍｇ／ｋｇ、１５ｍｇ／ｋｇ、２０ｍｇ／ｋｇ、４０ｍｇ／ｋｇ、４５ｍｇ／ｋｇ、１３５ｍｇ／ｋｇ、２５０ｍｇ／ｋｇまたは５００ｍｇ／ｋｇ超である。キモトリプシノーゲンおよびトリプシノーゲンの量は、本明細書、例として、表１、４、８、１０および実施例、特に実施例５に記載の任意のｍｇ／ｋｇ値以上であり得る。
【００１１】
本発明の任意の態様において、ヒトにおける癌を治療するための組成物は、キモトリプシノーゲンおよびトリプシノーゲンを含み、またはそれらからなり、キモトリプシノーゲンの量は、０．１ｍｇ／ｋｇ、０．１５ｍｇ／ｋｇ、０．２５ｍｇ／ｋｇ、０．４ｍｇ／ｋｇ、１．２ｍｇ／ｋｇ、３．５ｍｇ／ｋｇ、１０ｍｇ／ｋｇ、２０ｍｇ／ｋｇまたは４０ｍｇ／ｋｇ超である。キモトリプシノーゲンおよびトリプシノーゲンの量は、本明細書、特に実施例５に記載の任意のｍｇ／ｋｇ値以上であり得る。
【００１２】
本発明の任意の態様において、組成物は、キモトリプシノーゲンおよびトリプシノーゲンを含み、またはそれらからなり、トリプシノーゲンの量は、０．２５ｍｇ／ｋｇ、０．４ｍｇ／ｋｇ、０．６ｍｇ／ｋｇ、０．８ｍｇ／ｋｇ、２ｍｇ／ｋｇ、２．５ｍｇ／ｋｇ、３ｍｇ／ｋｇ、５ｍｇ／ｋｇ、７ｍｇ／ｋｇ、８ｍｇ／ｋｇ、２０ｍｇ／ｋｇ、４０ｍｇ／ｋｇまたは８０ｍｇ／ｋｇ超である。キモトリプシノーゲンおよびトリプシノーゲンの量は、本明細書、例として、表１、４、８、１０および実施例、特に実施例５に記載の任意のｍｇ／ｋｇ値以上であり得る。
【００１３】
本発明の任意の態様において、ヒトにおける癌を治療するための組成物は、キモトリプシノーゲンおよびトリプシノーゲンを含み、またはそれらからなり、トリプシノーゲンの量は、０．０２ｍｇ／ｋｇ、０．０３ｍｇ／ｋｇ、０．０５ｍｇ／ｋｇ、０．０６ｍｇ／ｋｇ、０．２ｍｇ／ｋｇ、０．６ｍｇ／ｋｇ、１．５ｍｇ／ｋｇ、３ｍｇ／ｋｇまたは６ｍｇ／ｋｇ超である。キモトリプシノーゲンおよびトリプシノーゲンの量は、本明細書、特に実施例５に記載の任意のｍｇ／ｋｇ値以上であり得る。
【００１４】
本発明は、キモトリプシノーゲン、トリプシノーゲンおよび薬学的に許容可能な希釈剤、賦形剤または担体を含む、対象における癌を治療するための医薬組成物であって、キモトリプシノーゲンを１ｍｇ／ｋｇ超の量で、およびトリプシノーゲンを０．２ｍｇ／ｋｇ超の量で、または本明細書、特に実施例５に記載の任意の他の量を超える量で含む医薬組成物を提供する。一実施形態において、組成物中に存在する唯一の活性抗腫瘍成分は、キモトリプシノーゲンおよびトリプシノーゲンである。
【００１５】
本発明は、活性成分としてキモトリプシノーゲンおよびトリプシノーゲンを含む、対象における癌を治療するための医薬組成物であって、薬学的に許容可能な希釈剤、賦形剤または担体をさらに含み、キモトリプシノーゲンを１ｍｇ／ｋｇ超の量で、およびトリプシノーゲンを０．２ｍｇ／ｋｇ超の量で、または本明細書、特に実施例５に記載の任意の他の量を超える量で含む医薬組成物を提供する。一実施形態において、組成物中に存在する唯一の活性抗腫瘍成分は、キモトリプシノーゲンおよびトリプシノーゲンである。
【００１６】
本発明は、主成分としてキモトリプシノーゲンおよびトリプシノーゲンを含む、対象における癌を治療するための医薬組成物であって、薬学的に許容可能な希釈剤、賦形剤または担体をさらに含み、キモトリプシノーゲンを１ｍｇ／ｋｇ超の量で、およびトリプシノーゲンを０．２ｍｇ／ｋｇ超の量で、または本明細書、特に実施例５に記載の任意の他の量を超える量で含む医薬組成物を提供する。一実施形態において、組成物中に存在する唯一の活性抗腫瘍成分は、キモトリプシノーゲンおよびトリプシノーゲンである。
【００１７】
本発明は、キモトリプシノーゲン、トリプシノーゲンおよび薬学的に許容可能な希釈剤、賦形剤または担体を含む、対象における膵臓癌を治療するための医薬組成物であって、キモトリプシノーゲンを少なくとも１０ｍｇ／ｋｇ超、好ましくは、１３ｍｇ／ｋｇ超の量で、およびトリプシノーゲンを１．５ｍｇ／ｋｇ超、好ましくは、２ｍｇ／ｋｇ超の量で含む医薬組成物を提供する。好ましくは、キモトリプシノーゲンは、４１ｍｇ／ｋｇ以下の量であり、トリプシノーゲンは７ｍｇ／ｋｇ以下の量である。
【００１８】
本発明は、キモトリプシノーゲン、トリプシノーゲンおよび薬学的に許容可能な希釈剤、賦形剤または担体を含む、対象における卵巣癌を治療するための医薬組成物であって、キモトリプシノーゲンを３ｍｇ／ｋｇ超、好ましくは、４ｍｇ／ｋｇ超の量で、およびトリプシノーゲンを０．４ｍｇ／ｋｇ超、好ましくは、０．７ｍｇ／ｋｇ超の量で含む医薬組成物を提供する。好ましくは、キモトリプシノーゲンは、１３ｍｇ／ｋｇ以下の量であり、トリプシノーゲンは、２．２ｍｇ／ｋｇ以下の量である。
【００１９】
本発明はまた、対象における癌の治療において使用される医薬組成物であって、キモトリプシノーゲン、トリプシノーゲンおよび薬学的に許容可能な希釈剤、賦形剤または担体を含み、キモトリプシノーゲンを１ｍｇ／ｋｇ超の量で、およびトリプシノーゲンを０．２ｍｇ／ｋｇ超の量で、または本明細書、特に実施例５に記載の任意の他の量を超える量で含む医薬組成物を提供する。
【００２０】
本発明はまた、対象における癌の治療において使用される、キモトリプシノーゲン、トリプシノーゲンおよび薬学的に許容可能な希釈剤、賦形剤または担体を含む医薬組成物であって、キモトリプシノーゲンを１ｍｇ／ｋｇ超の量で、およびトリプシノーゲンを０．２ｍｇ／ｋｇ超の量で、または本明細書、特に実施例５に記載の任意の他の量を超える量で含む医薬組成物を提供する。
【００２１】
本発明はまた、キモトリプシノーゲンおよびトリプシノーゲンを含む単位用量組成物であって、単位用量は、キモトリプシノーゲンを６ｍｇ／ｋｇ以上の量で、およびトリプシノーゲンを１ｍｇ以上の量で、または本明細書に記載の任意の他の量以上の量で投与するために適合されている組成物を提供する。好ましくは、キモトリプシノーゲンは、９ｍｇ、１５ｍｇ、２４ｍｇ、７２ｍｇ、２１０ｍｇ、６００ｍｇ、１２００ｍｇ、２４００ｍｇ以上の量である。好ましくは、トリプシノーゲンは、１．５ｍｇ、３ｍｇ、３．５ｍｇ、１２ｍｇ、３６ｍｇ、９０ｍｇ、１８０ｍｇまたは３６０ｍｇ以上の量である。
【００２２】
本発明はまた、癌の治療において使用される組成物であって、トリプシノーゲンを０．２５ｍｇ／ｍｌの濃度において、およびキモトリプシノーゲンを１．５ｍｇ／ｍｌの濃度において含む組成物を提供する。好ましくは、トリプシノーゲンは、４．３、８．７または３０ｍｇ／ｍｌの濃度であり、キモトリプシノーゲンは、２５、５０または１００ｍｇ／ｍｌの濃度である。トリプシノーゲンおよびキモトリプシノーゲンは、本明細書に記載の任意の他の濃度、例えば、実施例に記載のものであり得る。
【００２３】
本発明の任意の態様において、医薬組成物は、キモトリプシノーゲンおよびトリプシノーゲンを含み、それらからなり、またはそれらを投与するために適合されており、キモトリプシノーゲンの量は、１．５ｍｇ／ｋｇ、２ｍｇ／ｋｇ、３．５ｍｇ／ｋｇ、５ｍｇ／ｋｇ、１５ｍｇ／ｋｇ、２０ｍｇ／ｋｇ、４０ｍｇ／ｋｇ、４５ｍｇ／ｋｇ、１３５ｍｇ／ｋｇ、２５０ｍｇ／ｋｇまたは５００ｍｇ／ｋｇ超である。キモトリプシノーゲンおよびトリプシノーゲンの量は、本明細書、例として、表１、４、８、１０および実施例、特に実施例５に記載の任意のｍｇ／ｋｇ値以上であり得る。
【００２４】
本発明の任意の態様において、ヒトに使用される医薬組成物は、キモトリプシノーゲンおよびトリプシノーゲンを含み、それらからなり、またはそれらを投与するために適合されており、キモトリプシノーゲンの量は、０．１ｍｇ／ｋｇ、０．１５ｍｇ／ｋｇ、０．２５ｍｇ／ｋｇ、０．４ｍｇ／ｋｇ、１．２ｍｇ／ｋｇ、３．５ｍｇ／ｋｇ、１０ｍｇ／ｋｇ、２０ｍｇ／ｋｇまたは４０ｍｇ／ｋｇ超である。キモトリプシノーゲンの量は、本明細書、特に実施例５に記載の任意のｍｇ／ｋｇ値以上であり得る。
【００２５】
本発明の任意の態様において、医薬組成物は、キモトリプシノーゲンおよびトリプシノーゲンを含み、それらからなり、またはそれらを投与するために適合されており、投与されるトリプシノーゲンの量は、０．２５ｍｇ／ｋｇ、０．４ｍｇ／ｋｇ、０．６ｍｇ／ｋｇ、０．８ｍｇ／ｋｇ、２ｍｇ／ｋｇ、２．５ｍｇ／ｋｇ、３ｍｇ／ｋｇ、５ｍｇ／ｋｇ、７ｍｇ／ｋｇ、８ｍｇ／ｋｇ、２０ｍｇ／ｋｇ、４０ｍｇ／ｋｇまたは８０ｍｇ／ｋｇ超である。トリプシノーゲンの量は、本明細書、例として、表１、４、８、１０および実施例に記載の任意のｍｇ／ｋｇ値以上であり得る。
【００２６】
本発明の任意の態様において、ヒトに使用される医薬組成物は、キモトリプシノーゲンおよびトリプシノーゲンを含み、それらからなり、またはそれらを投与するために適合されており、投与されるトリプシノーゲンの量は、０．０２ｍｇ／ｋｇ、０．０３ｍｇ／ｋｇ、０．０５ｍｇ／ｋｇ、０．０６ｍｇ／ｋｇ、０．２ｍｇ／ｋｇ、０．６ｍｇ／ｋｇ、１．５ｍｇ／ｋｇ、３ｍｇ／ｋｇまたは６ｍｇ／ｋｇ超である。トリプシノーゲンの量は、本明細書、特に実施例５に記載の任意のｍｇ／ｋｇ値以上であり得る。
【００２７】
本発明は、キモトリプシノーゲンを１ｍｇ／ｋｇ超の量で、およびトリプシノーゲンを０．２ｍｇ／ｋｇ超の量で投与し、それにより癌を治療することを含む、対象における癌を治療する方法を含む。
【００２８】
本発明の任意の方法において、２４時間の期間にわたり単回投与または複数回投与で投与されるキモトリプシノーゲンの量は、１ｍｇ／ｋｇ超であるが、５００ｍｇ／ｋｇ未満である。
【００２９】
本発明の任意の方法において、２４時間の期間にわたり単回用量または複数回用量で投与されるトリプシノーゲンの量は、少なくとも０．２ｍｇ／ｋｇ超であるが、９０ｍｇ／ｋｇ未満である。
【００３０】
本発明は、キモトリプシノーゲンを５００ｍｇ／ｋｇの量で、およびトリプシノーゲンを８３ｍｇ／ｋｇの量で投与し、それにより癌を治療することを含む、対象における癌を治療する方法を提供する。好ましくは、癌は、膵臓癌または卵巣癌である。さらにより好ましくは、膵臓癌は、腺癌である。
【００３１】
本発明は、キモトリプシノーゲンを４０ｍｇ／ｋｇの量で、およびトリプシノーゲンを７ｍｇ／ｋｇの量で投与し、それにより癌を治療することを含む、ヒトにおける癌を治療する方法を提供する。好ましくは、癌は、膵臓癌である。さらにより好ましくは、膵臓癌は、腺癌である。
【００３２】
本発明は、キモトリプシノーゲンを４ｍｇ／ｋｇまたは１３ｍｇ／ｋｇの量で、およびトリプシノーゲンを０．７ｍｇ／ｋｇまたは２ｍｇ／ｋｇの量で投与し、それにより癌を治療することを含む、ヒトにおける癌を治療する方法を提供する。好ましくは、癌は、卵巣癌である。
【００３３】
本発明の任意の方法において、トリプシノーゲンおよびキモトリプシノーゲンの量の投与は、投与１週間後、投与１日後、または好ましくは、投与１時間後に対象においていかなる臨床的に観察可能な有害事象ももたらさない。臨床的に観察可能な有害事象は、体重損失、注射部位における発赤および挙動変化、または本明細書、特に実施例に記載の任意の他の事象の任意の１つ以上であり得る。
【００３４】
本発明の任意の態様において、キモトリプシノーゲンおよびトリプシノーゲンは、１：１もしくは約１：１〜１０：１もしくは約１０：１、４：１もしくは約４：１〜８：１もしくは約８：１、５：１もしくは約５：１〜７：１もしくは約７：１の範囲内、または約６：１の重量比で投与する。さらに、上記の任意の組成物は、キモトリプシノーゲンおよびトリプシノーゲンを、１：１もしくは約１：１〜１０：１もしくは約１０：１、４：１もしくは約４：１〜８：１もしくは約８：１、５：１もしくは約５：１〜７：１もしくは約７：１の範囲内、または約６：１の重量比で有する。
【００３５】
本発明はまた、癌の治療のための医薬品の製造におけるキモトリプシノーゲンおよびトリプシノーゲンの使用であって、医薬品は、キモトリプシノーゲンを１ｍｇ／ｋｇ超の量で、およびトリプシノーゲンを０．２ｍｇ／ｋｇ超の量で、または本明細書、特に実施例５に記載の任意の他の量を超える量で投与するために適合されている使用を提供する。
【００３６】
本発明はまた、少なくとも１つの投薬単位を含む、癌を治療するためのキットであって、投薬単位は、キモトリプシノーゲン、トリプシノーゲンおよび薬学的に許容可能な希釈剤、賦形剤または担体を含み、投薬単位は、キモトリプシノーゲンおよびトリプシノーゲンを、本明細書、例として、表１、４、８および１０、特に実施例５に記載の任意の量またはｍｇ／ｋｇ値以上で投与するために適合されているキットを提供する。
【００３７】
場合により、キットは、１ｍｇ／ｋｇ超の量のキモトリプシノーゲンおよび０．２ｍｇ／ｋｇ超の量のトリプシノーゲン、または本明細書、特に実施例５に記載の任意の他の量を超える量の投薬単位を投与することを使用者に指示する説明書も含む。
【００３８】
本発明の方法および医薬組成物は、癌および転移性癌腫、例として、膵臓癌、食道癌、結腸癌、腸癌、前立腺癌、卵巣癌、脳腫瘍、胃癌、乳癌、肝臓癌、悪性黒色腫または肺癌の治療に有用である。好ましくは、癌は、膵臓癌、結腸癌または卵巣癌である。より好ましくは、癌は、膵臓癌である。
【００３９】
本発明の方法または使用の任意の態様において、方法または使用は、癌を有し、またはその発症リスクがある対象を同定するステップをさらに含む。好ましくは、癌は、本明細書に記載のいずれかのものである。
【００４０】
本発明の任意の態様において、組成物は、アミラーゼを含有せず、または方法もしくは使用は、アミラーゼを投与しない。
【００４１】
本明細書に記載の本発明の任意の態様、実施形態または形態において、投与されるキモトリプシノーゲンの量は、１ｍｇ／ｋｇ、１．５ｍｇ／ｋｇ、２ｍｇ／ｋｇ、３．５ｍｇ／ｋｇ、５ｍｇ／ｋｇ、１５ｍｇ／ｋｇ、２０ｍｇ／ｋｇ、４０ｍｇ／ｋｇ、４５ｍｇ／ｋｇ、１３５ｍｇ／ｋｇ、２５０ｍｇ／ｋｇまたは５００ｍｇ／ｋｇ以上であり得る。投与されるキモトリプシノーゲンは、本明細書、例として、表１、４、８および１０、特に実施例５に記載の任意のｍｇ／ｋｇ値以上であり得る。
【００４２】
本明細書に記載の本発明の任意の態様、実施形態または形態において、投与されるトリプシノーゲンの量は、０．２ｍｇ／ｋｇ、０．２５ｍｇ／ｋｇ、０．４ｍｇ／ｋｇ、０．６ｍｇ／ｋｇ、０．８ｍｇ／ｋｇ、２ｍｇ／ｋｇ、２．５ｍｇ／ｋｇ、３ｍｇ／ｋｇ、５ｍｇ／ｋｇ、７ｍｇ／ｋｇ、８ｍｇ／ｋｇ、２０ｍｇ／ｋｇ、４０ｍｇ／ｋｇまたは８０ｍｇ／ｋｇ以上であり得る。投与されるトリプシノーゲンは、本明細書、例として、表１、４、８および１０、特に実施例５に記載の任意のｍｇ／ｋｇ値以上であり得る。
【００４３】
本明細書に記載の本発明の任意の態様、実施形態または形態において、ヒトに投与されるキモトリプシノーゲンの量は、０．１ｍｇ／ｋｇ、０．１５ｍｇ／ｋｇ、０．２５ｍｇ／ｋｇ、０．４ｍｇ／ｋｇ、１．２ｍｇ／ｋｇ、３．５ｍｇ／ｋｇ、１０ｍｇ／ｋｇ、２０ｍｇ／ｋｇまたは４０ｍｇ／ｋｇ以上であり得る。キモトリプシノーゲンの量は、本明細書、特に実施例５に記載の任意のｍｇ／ｋｇ値以上であり得る。
【００４４】
本明細書に記載の本発明の任意の態様、実施形態または形態において、ヒトに投与されるトリプシノーゲンの量は、０．０２ｍｇ／ｋｇ、０．０３ｍｇ／ｋｇ、０．０５ｍｇ／ｋｇ、０．０６ｍｇ／ｋｇ、０．２ｍｇ／ｋｇ、０．６ｍｇ／ｋｇ、１．５ｍｇ／ｋｇ、３ｍｇ／ｋｇまたは６ｍｇ／ｋｇ以上であり得る。トリプシノーゲンの量は、本明細書、特に実施例５に記載の任意のｍｇ／ｋｇ値以上であり得る。
【００４５】
好ましくは、本明細書に記載の本発明の任意の態様、実施形態または形態において、投与されるキモトリプシノーゲンの量は、１ｍｇ／ｋｇ〜４１ｍｇ／ｋｇ、１．５ｍｇ／ｋｇ〜５００ｍｇ／ｋｇ、２ｍｇ／ｋｇ〜２５０ｍｇ／ｋｇ、３．５ｍｇ／ｋｇ〜１３５ｍｇ／ｋｇ、５ｍｇ／ｋｇまたは１５ｍｇ／ｋｇ〜４５ｍｇ／ｋｇの範囲内であり得る。投与されるキモトリプシノーゲンは、本明細書、例として、表１、４、８、１０および実施例、特に実施例５に記載の任意の２つのｍｇ／ｋｇ値間の範囲内であり得る。
【００４６】
好ましくは、本明細書に記載の本発明の任意の態様、実施形態または形態において、投与されるトリプシノーゲンの量は、０．２ｍｇ／ｋｇ〜７ｍｇ／ｋｇ、０．２５ｍｇ／ｋｇ〜８０ｍｇ／ｋｇ、０．４ｍｇ／ｋｇ〜４０ｍｇ／ｋｇ、０．６ｍｇ／ｋｇ〜２０ｍｇ／ｋｇ、０．８ｍｇ／ｋｇ〜８ｍｇ／ｋｇ、または２．５ｍｇ／ｋｇ〜８ｍｇ／ｋｇ超であり得る。投与されるトリプシノーゲンは、本明細書、例として、表１、４、８、１０および実施例、特に実施例５に記載の任意の２つのｍｇ／ｋｇ値間の範囲内であり得る。
【００４７】
上記の本発明の任意の組成物において、組成物は、関連するｍｇ、またはｍｇ／ｋｇのキモトリプシノーゲンおよびトリプシノーゲンを対象に投与するために適合させることができる。
【００４８】
本発明はまた、「約」上記の記述値である値を含む上記の本発明の任意の態様を提供する。例えば、本発明のさらなる態様は、５００ｍｇ／ｋｇへの言及が約５００ｍｇ／ｋｇである上記態様のいずれかである。これは、本発明の全ての態様または実施形態について、および全ての値について企図される。
【００４９】
本発明は、キモトリプシノーゲンおよびトリプシノーゲンを含む、対象における癌を治療するための組成物であって、キモトリプシノーゲン：トリプシノーゲンの重量比は、８：１超（すなわち、８以上：１）である組成物を提供する。好ましくは、重量比は、１０：１超である。好ましくは、重量比は、１０：１である。重量比は、８：１、１０：１または８：１〜１０：１であり得る。実施形態のいずれかにおいて、組成物は、好ましくは、アミラーゼを含有せず、すなわち、それは、アミラーゼ不含組成物の投与を含む。
【００５０】
本発明は、キモトリプシノーゲンおよびトリプシノーゲンを投与することを含む、対象における癌を治療する方法であって、キモトリプシノーゲン：トリプシノーゲンの重量比は、８：１超であり、それにより対象における癌を治療する方法を提供する。好ましくは、重量比は、１０：１超である。好ましくは、重量比は、１０：１である。重量比は、８：１、１０：１または８：１〜１０：１であり得る。一実施形態において、本方法は、アミラーゼの投与を含まず、すなわち、それは、アミラーゼ不含組成物の投与を含む。
【００５１】
本発明は、癌の治療のための医薬品の製造におけるキモトリプシノーゲンおよびトリプシノーゲンの使用であって、キモトリプシノーゲン：トリプシノーゲンの重量比は、８：１超である使用を提供する。好ましくは、重量比は、１０：１超である。好ましくは、重量比は、１０：１である。重量比は、８：１、１０：１または８：１〜１０：１であり得る。一実施形態において、医薬品は、アミラーゼを含まない。
【００５２】
好ましくは、癌は、膵臓癌、食道癌、結腸癌、腸癌、前立腺癌、卵巣癌、胃癌、乳癌、肝臓癌、悪性黒色腫、線維肉腫または肺癌のいずれか１つ以上である。好ましくは、癌は、卵巣癌、黒色腫、脳腫瘍、前立腺癌、結腸直腸癌、肝臓癌または肺癌である。好ましくは、癌は、膵臓癌、結腸癌または卵巣癌である。より好ましくは、癌は、膵臓癌である。
【００５３】
本発明の任意の態様において、キモトリプシノーゲンおよびトリプシノーゲンは、静脈内、皮下または筋肉内投与する。
【００５４】
本発明の任意の態様において、キモトリプシノーゲンおよびトリプシノーゲンは、同時または連続投与することができる。
【００５５】
文脈がそうでないことを要求する場合を除き、本明細書において使用される用語「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅ）」およびその用語の変形語、例えば、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ）」および「含んだ（ｃｏｍｐｒｉｓｅｄ）」は、さらなる添加剤も、構成成分も、整数も、ステップも排除するものではない。
【００５６】
本発明のさらなる態様および上記段落に記載の態様のさらなる実施形態は実施例として挙げられ、添付の図面を参照して以下の詳細な説明から明らかになる。
【図面の簡単な説明】
【００５７】
【図１】試験番号１の間のそれぞれの群についての平均体重±ＳＥＭ（ｇ）。処理は、単回静脈内注射として７日間連続で１日１回投与した。処理は、それぞれの群に対して時間差で開始し、最小用量から開始し、次いでそれぞれの後続の日に用量を増加させた。全てのデータ計算および提示について、それぞれの群についての処理の初日を試験０日目と命名する。
【図２】試験番号２の間のそれぞれの群についての平均体重±ＳＥＭ（ｇ）。処理は、単回静脈内注射として７日間連続で１日１回投与した。処理は、それぞれの群に対して時間差で開始し、初日に最小用量から開始し、次いで２日目に用量をトリプシノーゲン／キモトリプシノーゲンＡ、８６．８／５００ｍｇ／ｋｇに増加させた。３日目にトリプシノーゲン／キモトリプシノーゲンＡ、４３．４／２５０ｍｇ／ｋｇによる処理を開始した。全てのデータ計算および提示について、それぞれの群についての処理の初日を試験０日目と命名する。
【図３】雌Ｃ５７ＢＬ／６マウス中で同所接種されたＰａｎ０２マウス膵臓癌細胞に対する組合せで投与されるトリプシノーゲンおよびキモトリプシノーゲンＡの抗腫瘍効力を評価するために実施された実施例３に記載の試験におけるＰＢＳ対照マウス（第１群、ｎ＝８）およびＴ：Ｃ、２７．５ｍｇ／ｋｇ：１６５ｍｇ／ｋｇ（第２群、ｎ＝９）またはＴ：Ｃ、８３．３ｍｇ／ｋｇ：５００ｍｇ／ｋｇ（第３群、ｎ＝１０）を受けたマウスの平均腫瘍重量±ＳＥＭ（ｍｇ）の結果。処理は、単回静脈内注射として試験０日目〜２５日目に１日１回投与した。動物を試験２６日目に終了処理した。
【図４】雌Ｃ５７ＢＬ／６マウス中で同所接種されたＰａｎ０２マウス膵臓癌細胞に対する組合せで投与されるトリプシノーゲンおよびキモトリプシノーゲンＡの抗腫瘍効力を評価するために実施された実施例３に記載の試験における２６日目の第１群（ＰＢＳ、１０ｍｌ／ｋｇ、連日、静脈内）のマウスから摘出された腫瘍の画像。
【図５】雌Ｃ５７ＢＬ／６マウス中で同所接種されたＰａｎ０２マウス膵臓癌細胞に対する組合せで投与されるトリプシノーゲンおよびキモトリプシノーゲンＡの抗腫瘍効力を評価するために実施された実施例３に記載の試験における２６日目の第２群（Ｔ：Ｃ、２７．５ｍｇ／ｋｇ：１６５ｍｇ／ｋｇ）のマウスから摘出された腫瘍の画像。
【図６】雌Ｃ５７ＢＬ／６マウス中で同所接種されたＰａｎ０２マウス膵臓癌細胞に対する組合せで投与されるトリプシノーゲンおよびキモトリプシノーゲンＡの抗腫瘍効力を評価するために実施された実施例３に記載の試験における２６日目の第３群（Ｔ：Ｃ、８３．３ｍｇ／ｋｇ：５００ｍｇ／ｋｇ）のマウスから摘出された腫瘍の画像。
【図７】雌無胸腺ヌードＦｏｘｎ１ｎｕマウス中で同所接種されたＡ２７８０ヒト卵巣癌細胞に対する組合せで投与されるトリプシノーゲンおよびキモトリプシノーゲンＡの抗腫瘍効力を評価するために実施された実施例４に記載の試験における第２群：ビヒクル対照（ＰＢＳ）、第３群：トリプシノーゲン／キモトリプシノーゲンＡ、８３．３／５００ｍｇ／ｋｇ、第４群：トリプシノーゲン／キモトリプシノーゲンＡ、２７．５／１６５ｍｇ／ｋｇ、第５群：トリプシノーゲン／キモトリプシノーゲンＡ、９．１／５４ｍｇ／ｋｇにおける平均腫瘍重量±ＳＥＭ（ｇ）。処理は、単回静脈内注射として１日１回投与した（試験０〜２０日目）。これらの動物を試験２１日目に終了処理した。
【図８】雌無胸腺ヌードＦｏｘｎ１ｎｕマウス中で同所接種されたＡ２７８０ヒト卵巣癌細胞に対する組合せで投与されるトリプシノーゲンおよびキモトリプシノーゲンＡの抗腫瘍効力を評価するために実施された実施例４に記載の試験における第２群：ビヒクル対照（ＰＢＳ）についての試験終了時に摘出された腫瘍の画像。
【図９】雌無胸腺ヌードＦｏｘｎ１ｎｕマウス中で同所接種されたＡ２７８０ヒト卵巣癌細胞に対する組合せで投与されるトリプシノーゲンおよびキモトリプシノーゲンＡの抗腫瘍効力を評価するために実施された実施例４に記載の試験における第３群：トリプシノーゲン／キモトリプシノーゲンＡ、８３．３／５００ｍｇ／ｋｇについての試験終了時に摘出された腫瘍の画像。
【図１０】雌無胸腺ヌードＦｏｘｎ１ｎｕマウス中で同所接種されたＡ２７８０ヒト卵巣癌細胞に対する組合せで投与されるトリプシノーゲンおよびキモトリプシノーゲンＡの抗腫瘍効力を評価するために実施された実施例４に記載の試験における第４群：トリプシノーゲン／キモトリプシノーゲンＡ、２７．５／１６５ｍｇ／ｋｇについての試験終了時に摘出された腫瘍の画像。
【図１１】雌無胸腺ヌードＦｏｘｎ１ｎｕマウス中で同所接種されたＡ２７８０ヒト卵巣癌細胞に対する組合せで投与されるトリプシノーゲンおよびキモトリプシノーゲンＡの抗腫瘍効力を評価するために実施された実施例４に記載の試験における第５群：トリプシノーゲン／キモトリプシノーゲンＡ、９．１／５４ｍｇ／ｋｇについての試験終了時に摘出された腫瘍の画像。
【図１２】Ａ２７８０ヒト卵巣腫瘍細胞の増殖に対するトリプシノーゲンおよびキモトリプシノーゲン単独または組合せの効果。トリプシノーゲンおよびキモトリプシノーゲンの組合せアッセイは、既に測定されたトリプシノーゲンのＩＣ５０（３．１７４ｍｇ／ｍｌ）に基づき１：１、１：２、１：４、１：６、１：８および１：１０の比において実施した。ＣＤＩ値は、記載のとおり計算した。
【図１３】Ｃ８１６１．９ヒト黒色腫細胞の増殖に対するトリプシノーゲンおよびキモトリプシノーゲン単独または組合せの効果。トリプシノーゲンおよびキモトリプシノーゲンの組合せアッセイは、既に測定されたトリプシノーゲンのＩＣ５０（３．９１７ｍｇ／ｍｌ）に基づき１：１、１：２、１：４、１：６、１：８および１：１０の比において実施した。ＣＤＩ値は、記載のとおり計算した。
【図１４】ＤＡＯＹヒト脳腫瘍細胞の増殖に対するトリプシノーゲンおよびキモトリプシノーゲン単独または組合せの効果。トリプシノーゲンおよびキモトリプシノーゲンの組合せアッセイは、既に測定されたトリプシノーゲンのＩＣ５０（２．６５４ｍｇ／ｍｌ）に基づき１：１、１：２、１：４、１：６、１：８および１：１０の比において実施した。ＣＤＩ値は、記載のとおり計算した。
【図１５】ＤＵ１４５ヒト前立腺腫瘍細胞の増殖に対するトリプシノーゲンおよびキモトリプシノーゲン単独または組合せの効果。トリプシノーゲンおよびキモトリプシノーゲンの組合せアッセイは、既に測定されたトリプシノーゲンのＩＣ５０（３．８４３ｍｇ／ｍｌ）に基づき１：１、１：２、１：４、１：６、１：８および１：１０の比において実施した。ＣＤＩ値は、記載のとおり計算した。
【図１６】ＨＣＴ１１６ヒト結腸直腸腫瘍細胞の増殖に対するトリプシノーゲンおよびキモトリプシノーゲン単独または組合せの効果。トリプシノーゲンおよびキモトリプシノーゲンの組合せアッセイは、既に測定されたトリプシノーゲンのＩＣ５０（１６．４３ｍｇ／ｍｌ）に基づき１：１、１：２、１：４、１：６、１：８および１：１０の比において実施した。ＣＤＩ値を記載のとおり計算した。
【図１７】Ｈｅｐ３Ｂ２．１−７ヒト肝腫瘍細胞の増殖に対するトリプシノーゲンおよびキモトリプシノーゲン単独または組合せの効果。トリプシノーゲンおよびキモトリプシノーゲンの組合せアッセイは、既に測定されたトリプシノーゲンのＩＣ５０（２．４８３ｍｇ／ｍｌ）に基づき１：１、１：２、１：４、１：６、１：８および１：１０の比において実施した。ＣＤＩ値は、記載のとおり計算した。
【図１８】ＨＴ−２９ヒト結腸直腸腫瘍細胞の増殖に対するトリプシノーゲンおよびキモトリプシノーゲン単独または組合せの効果。トリプシノーゲンおよびキモトリプシノーゲンの組合せアッセイは、既に測定されたトリプシノーゲンのＩＣ５０（１５．１２ｍｇ／ｍｌ）に基づき１：１、１：２、１：４、１：６、１：８および１：１０の比において実施した。ＣＤＩ値は、記載のとおり計算した。
【図１９】ＨｕＨ−７ヒト肝腫瘍細胞の増殖に対するトリプシノーゲンおよびキモトリプシノーゲン単独または組合せの効果。トリプシノーゲンおよびキモトリプシノーゲンの組合せアッセイは、既に測定されたトリプシノーゲンのＩＣ５０（３．９３４ｍｇ／ｍｌ）に基づき１：１、１：２、１：４、１：６、１：８および１：１０の比において実施した。ＣＤＩ値は、記載のとおり計算した。
【図２０】ＮＣＩ−Ｈ４６０ヒト肺腫瘍細胞の増殖に対するトリプシノーゲンおよびキモトリプシノーゲン単独または組合せの効果。トリプシノーゲンおよびキモトリプシノーゲンの組合せアッセイは、既に測定されたトリプシノーゲンのＩＣ５０（４．０２８ｍｇ／ｍｌ）に基づき１：１、１：２、１：４、１：６、１：８および１：１０の比において実施した。ＣＤＩ値は、記載のとおり計算した。
【発明を実施するための形態】
【００５８】
本明細書に開示および定義される本発明は、本文または図面に挙げられ、またはそれらから明らかな個々の特徴部の２つ以上の全ての代替組合せに及ぶことが理解される。これらの異なる組合せの全ては、本発明の種々の代替態様を構成する。
【００５９】
目下、本発明のある実施形態が詳細に参照される。本発明は実施形態とともに記載される一方、本発明は、本発明をそれらの実施形態に限定するものでないことが理解される。対照的に、本発明は、特許請求の範囲により定義される本発明の範囲内に含まれ得る全ての代替物、改変、および均等物をカバーするものとする。
【００６０】
当業者は、本発明の実施において使用することができる、本明細書に記載のものと類似または同等の多くの方法および材料を認識する。本発明は、記載される方法および材料に決して限定されない。本明細書に開示および定義される発明は、本文または図面に挙げられ、またはそれらから明らかな個々の特徴部の２つ以上の全ての代替組合せに及ぶことが理解される。これらの異なる組合せの全ては、本発明の種々の代替態様を構成する。
【００６１】
本明細書に言及される特許および刊行物の全ては、参照により全体として組み込まれる。
【００６２】
本明細書を解釈する目的のため、単数形で使用される用語は複数形も含み、その逆も同様である。
【００６３】
本発明は、キモトリプシノーゲンおよびトリプシノーゲンを、従来使用されるよりも顕著に多い量において投与することができるという驚くべき知見に基づく。これは、単回投与において、または１日の期間にわたり生じ得る。驚くべきことに、これらの顕著に多い量のキモトリプシノーゲンおよびトリプシノーゲン（実に１００倍多い量）は、いかなる重大な有害臨床事象もなしで投与することができる。さらに、これらのより多い量は、インビボでいくつかの腫瘍タイプの重量を低減させることが示される。本発明は、癌の治療における重要な利益を提供する。それというのも、従来使用されるものよりも多い有効用量のキモトリプシノーゲンおよびトリプシノーゲンを安全に投与し、それによりより大きい治療ウインドウを提供することができるためである。
【００６４】
キモトリプシノーゲン（本明細書において「Ｃ」と略記することができる）は、タンパク質を以下のアミノ酸：チロシン、トリプトファン、フェニルアラニンおよびロイシンにおいて優先的に開裂する酵素キモトリプシンの前酵素形態である。キモトリプシンは、キモトリプシンＡ、キモトリプシンＢ（例として、Ｂ１およびＢ２形態を）、キモトリプシンＣ、ａ−キマロフト（ｃｈｙｍａｒｏｐｈｔｈ）、アバザイム（ａｖａｚｙｍｅ）、キマール（ｃｈｙｍａｒ）、キモテスト（ｃｈｙｍｏｔｅｓｔ）、エンゼオン（ｅｎｚｅｏｎ）、クイマール（ｑｕｉｍａｒ）、クイモトラーゼ（ｑｕｉｍｏｔｒａｓｅ）、α−キマール、α−キモトリプシンＡ、α−キモトリプシンと称することができ、またはそれらを含む。キモトリプシンＣは、ブタキモトリプシノーゲンＣから、またはプロカルボキシペプチダーゼＡのウシサブユニットＩＩから形成され得、タンパク質を以下のアミノ酸：チロシン、トリプトファン、フェニルアラニン、ロイシン、メチオニン、グルタミン、およびアスパラギンにおいて優先的に開裂する。キモトリプシノーゲンとしては、キモトリプシノーゲンＢ１およびキモトリプシノーゲンＢ２が挙げられる。
【００６５】
トリプシノーゲン（本明細書において「Ｔ」と略記することができる）は、タンパク質をアルギニンおよびリジンにおいて優先的に開裂するトリプシンの前酵素形態である。トリプシンは、α−トリプシン、β−トリプシン、コクナーゼ、パレンザイム（ｐａｒｅｎｚｙｍｅ）、パレンジモール（ｐａｒｅｎｚｙｍｏｌ）、トリプタール（ｔｒｙｐｔａｒ）、トリピュア（ｔｒｙｐｕｒｅ）、疑似トリプシン、トリプターゼ、トリプセリム（ｔｒｉｐｃｅｌｌｉｍ）、精子受容体ヒドロラーゼβ−トリプシンと称することができ、またはそれらを含み、トリプシノーゲンから１つのペプチド結合の開裂により形成され得る。さらなるペプチド結合開裂は、αおよび他のアイソフォームを産生する。複数のカチオン性およびアニオン性トリプシンは、多くの脊椎動物の膵臓から、および下等種、例として、ザリガニ、昆虫（コクナーゼ）および微生物（ストレプトマイシン生産菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ  ｇｒｉｓｅｕｓ）から単離することができる。消化の間の正常のプロセスにおいて、不活性トリプシノーゲンは腸内粘膜中に存在するエンテロペプチダーゼにより活性化され、セリンプロテアーゼであり、次いで塩基性アミノ酸／タンパク質のカルボキシル側上でペプチド結合を開裂するように作用する酵素トリプシンを形成する。
【００６６】
本発明の任意の態様において使用されるトリプシノーゲンおよびキモトリプシノーゲンは、単離、精製、実質的に精製された組換え体または合成物であり得る。
【００６７】
前酵素トリプシノーゲンおよびキモトリプシノーゲンは、キモトリプシンクラス３．４．２１．１もしくは３．４．２１．２またはクラス３．４．２１．４からのトリプシンから選択され、または任意の他の好適な資源（国際生化学・分子生物学連合の命名法委員会（Ｎｏｍｅｎｃｌａｔｕｒｅ  Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｕｎｉｏｎ  ｏｆ  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ａｎｄ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ）の分類に従ってグループ化されたクラス）から選択される酵素の前駆体であり得る。これらの酵素は市販されており、ヒト、ウシまたはブタ起源のものであり得る。
【００６８】
本明細書において使用される「本明細書に記載の任意の他の量」または「本明細書に記載の任意のｍｇ／ｋｇ値」は、実施例、例として表１、４、８および１０のいずれかに記載の任意の量またはｍｇ／ｋｇ値を含む。
【００６９】
本発明は、５０、６０、７０、８０、９０、１００ｋｇ以上のヒト体重および１．１、１．２、１．３、１．４、１．５、１．６、１．７、１．８ｍ２以上の体表面積に基づき本明細書において言及されるｍｇ／ｋｇの全ての量についてのヒト変換を含む。具体的には、ヒト投与についての１ｋｇ当たりの量、および計算方法は、実施例５において言及される。
【００７０】
挙げられるとおり、前酵素形態は、インサイチューで活性型になる酵素の不活性化形態を本質的に提供する（例えば、インビボまたはインビトロ活性化）。例えば、前酵素の活性化（前酵素の活性酵素への変換）は、腫瘍細胞の表面との接触時に生じ得る。前酵素トリプシノーゲンおよびキモトリプシノーゲンは、腫瘍細胞との接触時で、および健常細胞との非接触時に酵素トリプシンおよびキモトリプシンに選択的に活性されることが考えられている。前酵素の使用は、活性酵素のインサイチューでの提供に伴う課題、例えば、目的とする腫瘍細胞標的への到達前の不所望な反応または酵素の不活性化を低減させる。
【００７１】
腫瘍細胞に関連して、プロテアーゼ酵素は、細胞壁のペプチド鎖中に存在するアミド結合を開裂することにより悪性細胞の細胞壁を分解するように作用し得る（タンパク質分解）。非悪性細胞中に存在し、細胞壁の分解における酵素の効果を阻害または低減させるプロテアーゼ阻害物質は、悪性腫瘍細胞中では不存在であることも理解されている。タンパク質分解活性を提供することに加え、プロテアーゼ前酵素は、腫瘍細胞中でのβ−カテニンおよびＥ−カドヘリンの発現を上方調節し得る。細胞間接着は、細胞表面におけるβ−カテニンおよびＥ−カドヘリン間の複合体形成または結合により促進され、したがって、β−カテニンおよびＥ−カドヘリンの発現の増加は細胞間接着の向上をもたらし、それにより腫瘍細胞の転移の低減をもたらす。プロテアーゼ前酵素は、他の細胞活性、例えば、増加した免疫認識または分化の増加も提供し得る。
【００７２】
重大な有害事象、体験または反応は任意の好ましくない医療上の出来事であり、それは、任意の用量において死亡をもたらし、生命を脅かし（対象が即死リスクを負う）、対象／対象の入院もしくは入院期間の延長を要求し、長期的もしくは重大な障害、無能力をもたらし、または先天異常／出生異常である。
【００７３】
臨床的に観察可能な有害事象は、医薬品を投与された対象または臨床試験対象における任意の好ましくない医療上の出来事である。臨床的に観察可能な有害事象は、本明細書、特に実施例に記載の事象または観察のいずれか１つを含み得る。典型的には、観察の期間は、投与後約１週間、投与後約１日間、または好ましくは、投与後約１時間である。観察の期間は、用量の投与間の時間であり得る。
【００７４】
「治療すること」または「治療」は、目的が癌またはその拡散（転移）を予防、改善、低減または減速（減弱）させる治療的治療および予防的または防止的措置の両方を指す。
【００７５】
本発明の任意の方法において、以下の効果の１つ以上：悪性腫瘍の再発の低減、悪性腫瘍の転移の低減、腫瘍の数またはサイズの低減、腫瘍細胞の分化、細胞間接着を促進するための悪性腫瘍中でのβ−カテニンおよびＥ−カドヘリンの発現、ならびに転移の低減、免疫認識を妨げる腫瘍細胞能の低減を観察することができる。
【００７６】
「予防すること」、「予防」、「予防的」または「防止的」は、病態、疾患、障害、または表現型、例として、異常または症状の発生の回避、またはその妨害、それからの防御、またはその発生の保護を指す。予防が必要とされる対象は、病態を発症する傾向があり得る。
【００７７】
用語「改善する」または「改善」は、病態、疾患、障害、または表現型、例として、異常または症状の減少、低減または排除を指す。治療が必要とされる対象は、既に病態を有し得、または病態を有する傾向があり得、または病態を予防すべき者であり得る。
【００７８】
「対象」は、哺乳動物を含む。哺乳動物は、ヒトであり得、または家畜、動物園用動物、もしくはコンパニオンアニマルであり得る。特に、本発明の方法は、ヒトの医学的治療に好適である一方、それらは、獣医的治療、例として、コンパニオンアニマル、例えば、イヌおよびネコ、ならびに家畜、例えば、ウマ、ウシおよびヒツジ、または動物園用動物、例えば、ネコ科、イヌ科、ウシ科、および有蹄動物の治療にも適用可能であることが特に企図される。対象は、癌または他の障害に罹患していてもよく、癌にも他の障害にも罹患していなくてもよい（すなわち、検出可能な疾患を有さない）。
【００７９】
ヒト対象の典型的な体重は、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、１００、１０５または１１０ｋｇ以上であり得る。
【００８０】
用語「治療有効量」は、癌またはその拡散（転移）を治療し、予防し、または改善し得る組成物、または組成物中の薬剤もしくは化合物の量を指す。治療有効量は、癌の治療に関して実験的および定型的に決定することができ、平均余命の増加をもたらす。
【００８１】
本明細書において使用される「投与するために適合されている」は、トリプシノーゲンおよびキモトリプシノーゲンを単回投与または複数回投与において規定の量または濃度において投与する能力を有する組成物を指す。
【００８２】
本明細書に記載の本発明の方法は、新生物および関連病態、癌、腫瘍、悪性および転移性病態の治療を含む。本発明の方法または医薬組成物により治療することができる固形腫瘍および転移に関連する組織および器官としては、限定されるものではないが、胆管、膀胱、血液、脳、乳房、子宮頸部、結腸、子宮内膜、食道、頭部、頸部、腎臓、咽頭、肝臓、肺、髄質、メラニン、卵巣、膵臓、前立腺、直腸、腎、網膜、皮膚、胃、精巣、甲状腺、尿路、および子宮が挙げられる。癌は、癌腫であり得、上皮中で、または上皮細胞から発症し得る。癌は、肉腫であり得、結合組織中で発症し得る。
【００８３】
本発明の方法および医薬組成物は、以下のタイプの癌および転移性癌腫：膵臓癌、食道癌、結腸癌、腸癌、前立腺癌、卵巣癌、胃癌、乳癌、悪性黒色腫または肺癌の治療に有用である。好ましくは、癌は、膵臓癌、結腸癌または卵巣癌である。より好ましくは、癌は、膵臓癌である。
【００８４】
本発明の方法および医薬組成物は、例えば、腫瘍細胞アポトーシス、細胞間接着、分化および免疫原性（免疫系による標的化および除去）を増加させることにより癌を治療する多重効果アプローチを提供し得る。したがって、免疫系を抑制し、または損傷させ得るいかなる他の治療も不存在下で治療を実施することが有益である。
【００８５】
本発明の方法または使用には、増殖性障害（例えば、腫瘍）の治療または予防に指向される他の慣用の抗癌治療アプローチを補充することができる。例えば、このような方法は、防止的癌予防、術後の癌再発および転移の予防において、ならびに他の慣用の癌療法のアジュバントとして使用することができる。
【００８６】
本発明の医薬組成物は、例えば、慣用の固体または液体ビヒクルまたは希釈剤、ならびに所望の投与方式に適切なタイプの医薬添加剤（例えば、賦形剤、結合剤、保存剤、安定剤、着香剤など）を技術、例えば、医薬配合物の分野において周知のものに従って用いることにより配合することができる。
【００８７】
本発明の医薬組成物は、任意の好適な手段により、例えば、経口投与で、例えば、錠剤、カプセル剤、顆粒剤もしくは散剤の形態で；舌下投与で；バッカル投与で；非経口投与で、例えば、皮下投与、静脈内投与、筋肉内投与、もしくは嚢内注射もしくは注入技術（例えば、滅菌注射水または非水性液剤もしくは懸濁液として）により；経鼻投与で、例えば、吸入スプレーにより；局所投与で、クリーム剤もしくは軟膏剤の形態で；または直腸投与で、例えば、坐剤の形態で；非毒性の薬学的に許容可能なビヒクルまたは希釈剤を含有する投薬単位配合物で投与することができる。これらは、例えば、即時放出または徐放に好適な形態で、例えば、デバイス、例えば、皮下インプラント、カプセル化スフェロイドまたは浸透圧ポンプの使用により投与することができる。
【００８８】
霊長類、例えば、ヒトに加え、種々の他の哺乳動物を第１０の態様の方法に従って治療することができる。例えば、哺乳動物、例として、限定されるものではないが、ウシ、ヒツジ、ヤギ、ウマ、イヌ、ネコ、モルモット、ラットまたは他のウシ科、ヒツジ科、ウマ科、イヌ科、ネコ科、げっ歯類もしくはネズミ種を治療することができる。
【００８９】
本明細書において使用される用語「薬学的に許容可能な」は、そのレシピエントに有害でない担体、希釈剤または賦形剤を意味する。
【００９０】
用語「の投与」およびまたは「投与すること」は、治療が必要とされる個体への提供を意味すると理解されるべきである。
【００９１】
治療が必要とされる個体は、本明細書に記載の癌のいずれか１つを有し、またはそれを発症するリスクがあると診断された個体であり得る。
【００９２】
本発明の医薬組成物、およびその製剤または配合物は、組成物の構成成分、すなわち、キモトリプシノーゲンおよびトリプシノーゲンを一緒に混合することにより調製することができる。混合は、連続的または同時に実施することができる。
【００９３】
本発明の医薬組成物は、単位剤形で利便的に提供することができ、薬学の分野において周知の方法のいずれかにより調製することができる。全ての方法は、活性剤およびプロテアーゼ前酵素を、１つ以上のアクセサリー成分を構成する担体と会合させるステップを含む。一般に、医薬組成物は、活性剤およびプロテアーゼ前酵素を液体担体または微粉固体担体またはその両方と均等および緊密に会合させ、次いで必要な場合、生成物を所望の配合物に成形することにより調製される。活性剤およびプロテアーゼ前酵素は、単回または反復投与後に疾患のプロセスまたは状態に対する所望の効果を産生するために十分な量の単位剤形で提供される。
【００９４】
本発明の医薬組成物は、例えば、錠剤、トローチ剤、ロゼンジ剤、水性もしくは油性懸濁液、分散性散剤または顆粒剤、エマルション、硬もしくは軟カプセル剤、またはシロップ剤もしくはエリキシル剤としての経口使用に好適な形態であり得る。経口使用が意図される組成物は、医薬組成物の製造の分野に公知の任意の方法に従って調製することができ、そのような組成物は、薬学的に洗練され、口当たりが良い製剤を提供するために甘味剤、着香剤、着色剤および保存剤からなる群から選択される１つ以上の薬剤を含有し得る。錠剤は、第１および第２の態様のプロテアーゼ前酵素および活性剤を、錠剤の製造に好適な非毒性の薬学的に許容可能な賦形剤との混合物で含有する。これらの賦形剤は、例えば、不活性希釈剤、例えば、炭酸カルシウム、炭酸ナトリウム、ラクトース、リン酸カルシウムまたはリン酸ナトリウム；顆粒および崩壊剤、例えば、コーンスターチ、またはアルギン酸；結合剤、例えば、デンプン、ゼラチンまたはアカシア、および滑沢剤、例えば、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸またはタルクであり得る。錠剤は、未被覆であり得、またはそれらは、胃腸管中での崩壊および吸収を遅延させ、それにより長期間にわたる持続作用を提供するための公知の技術により被覆されていてよい。例えば、時間遅延材料、例えば、グリセリルモノステアレートまたはグリセリルジアステアレートを用いることができる。これらは、制御放出のための浸透圧治療錠剤を形成するために被覆されていてもよい。
【００９５】
経口使用のための配合物は、第１および第２の態様のプロテアーゼ前酵素および活性剤が不活性固体希釈剤、例えば、炭酸カルシウム、リン酸カルシウムもしくはカオリンと混合される硬ゼラチンカプセル剤として、または第１および第２の態様のプロテアーゼ前酵素および活性剤が水もしくは油性媒体、例えば、ピーナッツ油、流動パラフィン、もしくはオリーブ油と混合される軟ゼラチンカプセル剤として提供することもできる。
【００９６】
水性懸濁液は、活性剤およびプロテアーゼ前酵素を、水性懸濁液の製造に好適な賦形剤との混合物で含有する。このような賦形剤は、懸濁化剤、例えば、カルボキシメチルセルロースナトリウム、メチルセルロース、ヒドロキシ−プロピルメチルセルロース、アルギン酸ナトリウム、ポリビニル−ピロリドン、ｎ−メチル−ピロリドン、トラガカントゴムおよびアカシアゴムであり、分散剤または湿潤剤は、天然存在ホスファチド、例えば、レシチン、またはアルキレンオキシドと脂肪酸との縮合生成物、例えば、ステアリン酸ポリオキシエチレン、またはエチレンオキシドと長鎖脂肪族アルコールとの縮合生成物、例えば、ヘプタデカエチレンオキシセタノール、またはエチレンオキシドと、脂肪酸およびヘキシトールに由来する部分エステルとの縮合生成物、例えば、ポリオキシエチレンソルビトールモノオレエート、またはエチレンオキシドと、脂肪酸および無水ヘキシトールに由来する部分エステルとの縮合生成物、例えば、ポリエチレンソルビタンモノオレエートであり得る。水性懸濁液は、１つ以上の保存剤、例えば、エチル、またはｎ−プロピル、ｐ−ヒドロキシベンゾエート、１つ以上の着色剤、１つ以上の着香剤、および１つ以上の甘味剤、例えば、スクロースまたはサッカリンも含有し得る。
【００９７】
油性懸濁液は、活性剤およびプロテアーゼ前酵素を植物油、例えば、ラッカセイ油、オリーブ油、ゴマ油もしくはヤシ油中で、または鉱油、例えば、流動パラフィン中で懸濁させることにより配合することができる。油性懸濁液は、増粘剤、例えば、蜜蝋、硬パラフィンまたはセチルアルコールを含有し得る。甘味剤、例えば、上記のもの、および着香剤を添加して口当たりが良い経口製剤を提供することができる。これらは、酸化防止剤、例えば、アスコルビン酸の添加により保存することができる。
【００９８】
水の添加による水性懸濁液の調製に好適な分散性散剤および顆粒剤は、第１および第２の態様のプロテアーゼ前酵素および活性剤を、分散剤または湿潤剤、懸濁化剤および１つ以上の保存剤との混合物で提供する。好適な分散剤または湿潤剤および懸濁化剤は、既に上記のものにより例示される。追加の賦形剤、例えば、甘味剤、着香剤および着色剤も存在し得る。
【００９９】
本発明の医薬組成物は、水中油型エマルションの形態でもあり得る。油相は、植物油、例えば、オリーブ油もしくはラッカセイ油、または鉱油、例えば、流動パラフィンまたはそれらの混合物であり得る。好適な乳化剤は、天然存在ゴム、例えば、アカシアゴムまたはトラガカントゴム、天然存在ホスファチド、例えば、ダイズ、レシチン、および脂肪酸および無水ヘキシトールに由来するエステルまたは部分エステル、例えば、ソルビタンモノオレエート、および前記部分エステルとエチレンオキシドとの縮合生成物、例えば、ポリオキシエチレンソルビタンモノオレエートであり得る。エマルションは、甘味剤および着香剤も含有し得る。
【０１００】
シロップ剤およびエリキシル剤は、甘味剤、例えば、グリセロール、プロピレングリコール、ソルビトールおよびスクロースと配合することができる。これらは、粘滑剤、保存剤ならびに着香剤および着色剤も含有し得る。
【０１０１】
本発明の医薬組成物は、無菌注射水性または油性懸濁液の形態であり得る。この懸濁液は、上記の好適な分散剤または湿潤剤および懸濁化剤を使用して公知の技術に従って配合することができる。第１および第２の態様の医薬組成物は、非毒性の非経口的に許容可能な希釈剤または溶媒中の滅菌注射溶液または懸濁液であり得、例えば、１，３−ブタンジオール中溶液としてもよい。用いることができる許容可能なビヒクルおよび溶媒には、水、リンガー液および等張塩化ナトリウム溶液がある。さらに、滅菌固定油が、溶媒または懸濁化媒体として慣用的に用いられる。この目的のため、任意の無刺激固定油、例として、合成モノまたはジグリセリドを用いることができる。さらに、脂肪酸、例えば、オレイン酸が注射剤の調製において使用される。
【０１０２】
特定の実施形態において、本発明の医薬組成物は、薬物の直腸投与のための坐剤として配合される。これらの配合物は、第１および第２の態様のプロテアーゼ前酵素および活性剤を、常温において固体であるが、直腸温度において液体であり、したがって、直腸中で融解して薬物を放出する好適な無刺激賦形剤と混合することにより調製することができる。このような材料としては、ココアバターおよびポリエチレングリコールが挙げられる。直腸投与は、酵素の経口投与に関連する胃腸管中での腸内肝臓ファーストパス効果を排除するために使用することができる。
【０１０３】
本発明の医薬組成物は、リポソーム中で配合することもできる。当分野において公知のとおり、リポソームは、一般に、リン脂質または他の脂質物質に由来する。リポソームは、水性媒体中で分散される単層または多層水和液晶により形成される。リポソームを形成し得る任意の非毒性の生理学的に許容可能で代謝可能な脂質を使用することができる。リポソーム配合物は、安定剤、保存剤、賦形剤などを含有し得る。好ましい脂質は、リン脂質およびホスファチジルコリン、天然物および合成物の両方である。リポソームを形成する方法は、当分野において公知である。
【０１０４】
本発明の医薬組成物は、投与についての説明書と一緒に容器、パック、または分注器中に含めることができる。医薬組成物のプロテアーゼ前酵素および活性剤、ならびに場合により、追加の活性剤は、本明細書に記載の本発明の使用または方法において同時または異なる時間において別個にまたは一緒に摂取すべき容器、パック、または分注器中で離隔された構成成分として提供することができる。
【０１０５】
本明細書に開示および定義される本発明は、本文または図面に挙げられ、またはそれらから明らかな個々の特徴部の２つ以上の全ての代替組合せに及ぶことが理解される。これらの異なる組合せの全てが、本発明の種々の代替態様を構成する。
【実施例】
【０１０６】
実施例１
有害臨床事象が観察されず、またはいかなる有害臨床事象も後続の投薬により消散される最大許容および実行可能用量を決定するための投薬試験を完了した。投薬試験プロトコルを以下に設定する。
【０１０７】
それぞれの処理日に、トリプシノーゲンおよびキモトリプシノーゲンＡをリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）中で溶解させて１ｍｇ／ｍＬの原液を得た。トリプシノーゲン／キモトリプシノーゲンＡの要求される濃度の投薬溶液は、原液をＰＢＳ中で一緒に希釈してそれぞれの所望の最終濃度に到達させることにより調製した。
【０１０８】
試験番号１のため、トリプシノーゲン／キモトリプシノーゲンＡの０．０２５４／０．１５２１、０．０３８１／０．２２８２、０．０５７２／０．３４２３および０．０８５８／０．５１３５ｍｇ／ｍＬにおける投薬溶液を調製した。
【０１０９】
この試験のため、処理をそれぞれの群の動物に１０ｍＬ／ｋｇの投薬容量で、７日間連続で１日１回投与した。それぞれの動物に投与される投薬溶液の容量は、投薬直前に計測された個々の体重に基づき計算し、調整した。
【０１１０】
試験番号１のため、マウスを体重ごとに４匹のマウスの４つの群に無作為化した。この試験において使用される投薬レジメンを表１にまとめる。トリプシノーゲンおよびキモトリプシノーゲンＡを組合せで、単回静脈内尾静脈注射（静脈内）として１０ｍＬ／Ｋｇの用量において投与した。それぞれの群についてのトリプシノーゲンおよびキモトリプシノーゲンの最終濃度は、０．２５４／１．５２１、０．３８１／２．２８２、０．５７２／３．４２３および０．８５８／５．１３５ｍｇ／ｋｇ（それぞれ第１群、第２群、第３群および第４群）であった。
【０１１１】
試験番号１におけるそれぞれの群についての処理は時間差で開始し、最小用量のトリプシノーゲン／キモトリプシノーゲンＡから開始し、次いでそれぞれの後続の試験日に用量を増加させた。全てのデータ計算および提示について、それぞれの群についての処理の初日を試験０日目と命名する。
【０１１２】
それぞれの試験の初日に、第１群の１匹のマウスをトリプシノーゲン／キモトリプシノーゲンＡにより最小用量（試験番号１についての０．２５４／１．５２１ｍｇ／ｋｇ）において処理した。処理２時間以内に長期の重度の有害効果が存在しなかったため、それらの群のそれぞれの残り３匹のマウスを同様に処理した。
【０１１３】
第１群マウスにおける初回処理２４時間以内に長期の重度の有害効果が存在しなかったため、第２群の１匹のマウスを試験番号１についてのトリプシノーゲン／キモトリプシノーゲンＡ、０．３８１／２．２８２ｍｇ／ｋｇにより処理した。この処理の２時間以内に可視的な毒性徴候が存在しなかったため、それらの群のそれぞれの残りのマウスは同一処理を受けた。
【０１１４】
試験番号１についてのトリプシノーゲン／キモトリプシノーゲンＡについての残りの２つの用量（０．５７２／３．４２３および０．８５８／５．１３５ｍｇ／ｋｇ）について、それぞれ第３群および第４群の動物に対してこの様式で処理を継続した。
【０１１５】
それぞれの試験のそれぞれの群の全ての動物は、７日間連続の連日処理を受けた。
【０１１６】
死亡率  死亡率確認を試験の間、１日１回、午前中に実施した。
【０１１７】
臨床観察  動物を臨床徴候（例えば、不健康、挙動変化）について試験の間、１日２回確認した。
【０１１８】
体重  体重を、全ての動物について処理初日、次いで処理期間の間、ならびに最終処理後７日間、連日記録した。
【０１１９】
【表１】
2018533612.tif 000002
【０１２０】
臨床観察についての評価基準：
歩行：跛行、不全麻痺、完全麻痺＝異常
【０１２１】
体温：高温または低温＝異常
【０１２２】
呼吸のタイプ：呼吸促迫；表在呼吸または強制呼吸＝異常
【０１２３】
下痢：ケージ床上の軟便、ケージ床上の糞便のプールまたは取扱時の漏れ＝異常
【０１２４】
身体状態（参照文献：Ｕｌｌｍａｎ−Ｃｕｌｌｅｒｅ  ＆  Ｆｏｌｔｚ．Ｌａｂ．Ａｎｉｍａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  １９９９；４９：３１９）：ＢＣ１＝動物は衰弱しており；ＢＣ２＝動物は健康不良状態であり；ＢＣ３＝動物は健康状態であり；ＢＣ４＝動物は栄養過剰の健康状態（ｏｖｅｒ−ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｅｄ）であり；ＢＣ５＝動物は肥満である
【０１２５】
試験番号１についての臨床観察および有害事象
有害臨床徴候は、試験の間、いずれの動物においても観察されなかった。
【０１２６】
体重変化
それぞれの群について試験過程（試験０日目〜１３日目）にわたり平均体重増加が存在した（トリプシノーゲンおよびキモトリプシノーゲンＡにより、０．２５４／１．５２１、０．３８１／２．２８２、０．５７２／３．４２３および０．８５８／５．１３５ｍｇ／ｋｇにおいて処理された動物について初回体重の２．５９％、７．４８％、７．９７％および２．０３％；それぞれ第１群、第２群、第３群および第４群（表２および図１）。動物は、体重を初回体重の１５％を超えて損失しなかった（表３）。
【０１２７】
実施例２
驚くべきことに、試験番号１におけるトリプシノーゲンおよびキモトリプシノーゲンＡの量は、上記実施例２の結果から示されるとおり、十分許容された。これは、これらの量が従来使用される量を顕著に上回ることを考慮すると、予期されなかった。これらの結果に関して、トリプシノーゲンおよびキモトリプシノーゲンＡの組合せの量を従来使用される量よりもかなり多い量において使用してさらなる試験の試験番号２を実施した。
【０１２８】
試験番号２のため、トリプシノーゲンおよびキモトリプシノーゲンＡの原液をそれぞれ５および６ｍｇ／ｍＬにおいて調製した。原液をＰＢＳ中でさらに希釈してトリプシノーゲン／キモトリプシノーゲンＡの、第１群のための０．２５６／１．５ｍｇ／ｍｌの投薬溶液を調製した。第２群および第３群のため、トリプシノーゲンおよびキモトリプシノーゲンＡの原液をそれぞれ３０および１００ｍｇ／ｍＬにおいて調製した。
【０１２９】
原液をＰＢＳ中でさらに希釈してトリプシノーゲン／キモトリプシノーゲンＡの、第２群のための８．６８／５０ｍｇ／ｍｌ、および第３群のための４．３４／２５ｍｇ／ｍｌの投薬溶液を調製した。５０ｍｇ／ｍｌの濃度において、キモトリプシノーゲンＡは、尾静脈注射についてほぼ粘度限界であることが留意された。
【０１３０】
試験番号２のため、１２匹のマウスを体重ごとに４匹のマウスの３つの群に無作為化した。試験に使用される投薬レジメンを表４にまとめる。トリプシノーゲンおよびキモトリプシノーゲンを組合せで、単回静脈内尾静脈注射（静脈内）として１０ｍＬ／Ｋｇの用量において投与した。それぞれの群についてのトリプシノーゲンおよびキモトリプシノーゲンの最終濃度は、２．６／１５、８６．８／５００および４３．４／２５０ｍｇ／ｋｇ（それぞれ第１群、第２群および第３群）であった。
【０１３１】
試験番号２のそれぞれの群についての処理は時間差で開始し、最小用量のトリプシノーゲン／キモトリプシノーゲンＡから開始し、次いでそれぞれの後続の試験日に用量を増加させた。全てのデータ計算および提示のため、それぞれの群についての処理の初日を試験０日目と命名する。
【０１３２】
それぞれ試験の初日に、第１群の１匹のマウスをトリプシノーゲン／キモトリプシノーゲンＡにより最小用量２．６／１５ｍｇ／ｋｇにおいて処理した。処理２時間以内に長期の重度の有害効果が存在しなかったため、それらの群のそれぞれの残り３匹のマウスを同様に処理した。
【０１３３】
第１群マウスにおける初回処理２４時間以内に長期の重度の有害効果が存在しなかったため、第２群の１匹のマウスをトリプシノーゲン／キモトリプシノーゲンＡ、試験番号２のための８６．８／５００ｍｇ／ｋｇにより処理した。この処理の２時間以内に可視的な毒性徴候が存在しなかったため、それらの群のそれぞれの残りのマウスは同一処理を受けた。
【０１３４】
試験番号２のためのトリプシノーゲン／キモトリプシノーゲンＡについての残りの用量（４３．４／２５０ｍｇ／ｋｇ）について第３群の動物に対してこの様式で処理を継続した。
【０１３５】
試験番号２についての臨床観察および有害事象
トリプシノーゲンおよびキモトリプシノーゲンＡにより２．６／１５、および４３．４／２５０ｍｇ／ｋｇ；それぞれ第１群および第３群）（表５）において処理された動物において有害臨床徴候は観察されなかった。
【０１３６】
尾上の皮膚の発赤および注射部位における尾静脈中の一時的な微小塊形成は、観察された唯一の有害事象であり、最大用量群（トリプシノーゲン／キモトリプシノーゲンＡ、８６．８／５００ｍｇ／ｋｇ）における投薬直後に生じ、次回用量投与の時間までに消散した（表５）。臨床徴候は、適切な用量投与を妨害しなかった。
【０１３７】
体重変化
それぞれの群について試験過程（試験０日目〜１３日目）にわたり平均体重増加が存在した（トリプシノーゲンおよびキモトリプシノーゲンＡ、２．６／１５、８６．８／５００および４３．４／２５０ｍｇ／ｋｇにより処理された動物についての初回体重の６．９８％、４．３０％および６．６１％；それぞれ第１群、第２群および第３群）（表６および図２）。動物は、体重を初回体重の１５％を超えて損失しなかった（表７）。
【０１３８】
【表２】
2018533612.tif 000003
【０１３９】
【表３】
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【０１４０】
【表４】
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【０１４１】
【表５】
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【０１４２】
【表６】
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【０１４３】
【表７】
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【０１４４】
【表８】
2018533612.tif 000009
【０１４５】
実施例３
雌Ｃ５７ＢＬ／６マウス中で同所接種されたＰａｎ０２マウス膵臓癌細胞に対する組合せで投与されるトリプシノーゲンおよびキモトリプシノーゲンＡの抗腫瘍効力を評価するための試験を実施した。
【０１４６】
細胞系
Ｐａｎ０２マウス膵臓腫瘍細胞は、Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ（Ｆｒｅｄｅｒｉｃｋ，ＭＤ，ＵＳＡ）から調達した。
【０１４７】
腫瘍細胞培養
Ｐａｎ０２マウス膵臓腫瘍細胞（作業ストックＶＰ−Ｓｔｏｃｋ１２３５）を、１０％のＦＢＳ、１％のＧｌｕｔａＭＡＸ（商標）および１％のペニシリン−ストレプトマイシンが補給されたＲＰＭＩ１６４０細胞培養培地中で培養し、５％のＣＯ２が補給された加湿細胞培養インキュベーター中で３７℃において増殖させた。細胞をトリプシン処理により回収し（第７継代）、ＨＢＳＳ中で２回洗浄し、カウントした（トリパンブルー排除を使用）。最終細胞密度をＨＢＳＳ：Ｍａｔｒｉｇｅｌ（商標）（１：１、ｖ／ｖ）により５×１０７個のＰａｎ０２細胞／ｍＬに調整した。
【０１４８】
接種懸濁液中のＭａｔｒｉｇｅｌ（商標）の使用は、腫瘍の生着率を増加させ得る早期血管化を支持することが公知であり、したがって、腫瘍サイズ変動を減少させる潜在性を有する。
【０１４９】
腫瘍細胞接種
４０匹のＣ５７ＢＬ／６雌マウスに腹腔内注射麻酔（ケタミン（１４ｍｇ／ｍＬ）／キシラジン（０．９ｍｇ／ｍＬ））下で接種した。接種前、切開部位における皮膚を局所ポビドンヨード溶液、次いでアルコールにより拭った。切開を行って膵臓を露出させた。針を膵尾部中に直接導入し、１×１０６個のＰａｎ０２細胞からなる２０μＬの細胞懸濁液を排出させた。
【０１５０】
外科処置時および翌日に鎮痛のためにマウスにＢｕｐｒｅｎｅｘ（ブプレノルフィンＨＣｌ、０．０１ｍｇ／ｍＬ）の２００μＬのボーラス用量を皮下投与した。
【０１５１】
腫瘍生着率測定
１０匹の無作為に選択された動物（第０群）を接種７日後に安楽死させて膵臓中の腫瘍のサイズおよび生着率を評価した。膵臓を摘出し、腫瘍の存在について試験した。
【０１５２】
腫瘍の存在は、それらの動物の１０匹全ての膵臓中で確認された。
【０１５３】
無作為化
良好な腫瘍生着率の確認の２日後、３０匹の残りの動物を体重に基づき１０匹の３つの群に無作為化した（接種９日後；試験０日目）。
【０１５４】
化合物配合
それぞれの処理日に、トリプシノーゲンおよびキモトリプシノーゲンＡをリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）中で溶解させて１ｍｇ／ｍＬの原液を得た。トリプシノーゲン／キモトリプシノーゲンＡの２．７５／１６．５および８．３３／５０ｍｇ／ｍＬ（１：６の比）における投薬溶液を、最初にトリプシノーゲン溶液をＰＢＳ中で希釈し、次いでキモトリプシノーゲンＡを添加することにより調製した。
【０１５５】
化合物投与
この試験において使用される投薬レジメンを表８にまとめる。
【０１５６】
生着率評価のために割り当てられた動物（第０群）は未処理のままとした。
【０１５７】
ビヒクル対照（ＰＢＳ；第１群）およびトリプシノーゲン／キモトリプシノーゲンＡ（単回注射での組合せ）を、２７．５／１６５（第２群）および８３．３／５００ｍｇ／ｋｇ（第３群）の用量において、１日１回、１０ｍＬ／ｋｇの投薬容量において静脈内投与した。それぞれの動物に投与される投薬溶液の容量は、投薬直前に計測された個々の体重に基づき計算し、調整した。
【０１５８】
処理は、試験０日目（接種９日後）に開始した。処理は、第１群、第２群および第３群の動物に２６日間連続で投与した。
【０１５９】
終了手順
全ての生着率評価動物ならびに第１群、第２群および第３群の動物は、承認された標準的手順により二酸化炭素吸入を介して安楽死させた。
【０１６０】
試料回収
終了時、全ての動物から腫瘍を無傷で膵臓を摘出した。膵臓組織から腫瘍を単離し、秤量し、次いで撮影した（図４〜６）。第４群および第５群の試料のそれぞれからの２５ｍｇの腫瘍部分を−８０℃において貯蔵し、さらなる分析のためにＡｄａｐｔｉｖｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ  Ｃｏｒｐ．に輸送した。
【０１６１】
計算
０日目と、任意の所与の日（Ｘ日目）との間の体重の平均変化率（％ＢＷ変化）は、式：
％ＢＷ変化＝平均（ＢＷ試験Ｘ日目）／平均（ＢＷ試験０日目）×１００％−１００％
（式中、ＢＷ試験０日目＝０日目における初回値であり、ＢＷ試験Ｘ日目＝Ｘ日目の現在値である）
を使用して計算した。
【０１６２】
対照群に対する処理群についての平均腫瘍重量の変化率は、以下の式：
変化率＝（（平均対照−平均処理）／平均対照）×１００
を使用して計算した。
【０１６３】
統計的計算
全ての統計的計算は、Ｐｒｉｓｍ６Ｍａｃ  ＯＳＸ版（ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｓｏｆｔｗａｒｅ  Ｉｎｃ，Ｌａ  Ｊｏｌｌａ，ＣＡ，ＵＳＡ）を使用して実施した。
【０１６４】
全てのデータセットの正規性は、コルモゴロフ・スミルノフ（ＫＳ）正規性検定を使用して検定した。
【０１６５】
対応のあるｔ検定を使用してそれぞれの群の試験０日目と終了日との間で、処理群内で体重が有意に変化したか否かを決定した。
【０１６６】
試験終了時における腫瘍重量の比較を、一元配置分散分析（ＡＮＯＶＡ）を使用して第１群と第２群と第３群との間で行った。群間の有意差は、Ｈｏｌｍ−Ｓｉｄａｋ多重比較検定を使用して決定した。
【０１６７】
ｐ値≦０．０５を有意であるとみなした。
【０１６８】
結果および観察
体重変化
ビヒクル対照により２６日間処理された動物（ＰＢＳ；第１群）においてわずかな（有意でない）平均体重損失（初回体重の０．５４％）が存在した。
【０１６９】
全ての他の群は、平均体重増加を示した；トリプシノーゲン／キモトリプシノーゲンＡにより２７．５／１６５および８３．３／５００ｍｇ／ｋｇにおいて２６日間処理された群について初回体重の０．８２％および２．７２％（それぞれ第２群および第３群）。
【０１７０】
化合物の効力
ビヒクル対照（ＰＢＳ；２１４．８ｍｇ；第１群）と比較してトリプシノーゲン／キモトリプシノーゲンＡにより８３．３／５００ｍｇ／ｋｇにおいて２６日間処理された動物における平均腫瘍重量の有意な（ｐ≦０．０５）低減（３０．２ｍｇ；８５．９％の阻害率；第３群）が存在したが、トリプシノーゲン／キモトリプシノーゲンＡ、２７．５／１６５ｍｇ／ｋｇ（１９６．５ｍｇ；８．５％の阻害率；第２群）とビヒクル対照との間では存在しなかった（表９および図３）。
【０１７１】
結論
２７．５／１６５または８３．３／５００ｍｇ／ｋｇの用量における単回静脈内注射として組合せで投与されるトリプシノーゲンおよびキモトリプシノーゲンＡによる連日処理の抗腫瘍効力を、雌Ｃ５７ＢＬ／６マウス中で同所接種されたＰａｎ０２マウス膵臓癌細胞に対して評価した。
【０１７２】
終了時における腫瘍重量の計測は、この試験における処理２６日後、対照処理動物と比較して高用量トリプシノーゲン／キモトリプシノーゲンＡにより処理された動物における有意な（ｐ≦０．０５）抗腫瘍効力を示した。
【０１７３】
【表９】
2018533612.tif 000010
【０１７４】
【表１０】
2018533612.tif 000011
【０１７５】
実施例４
雌無胸腺ヌードＦｏｘｎ１ｎｕマウス中で同所接種されたＡ２７８０ヒト卵巣癌細胞に対する組合せで投与されるトリプシノーゲンおよびキモトリプシノーゲンＡの抗腫瘍効力を評価するための試験を実施した。
【０１７６】
細胞系
Ａ２７８０ヒト卵巣癌腫細胞は、Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ（Ｆｒｅｄｅｒｉｃｋ，ＭＤ，ＵＳＡ）から調達した。
【０１７７】
腫瘍細胞培養
Ａ２７８０ヒト卵巣癌細胞（作業ストックＶＰ−Ｓｔｏｃｋ１２７７）を、１０％のＦＢＳ、１％のＧｌｕｔａＭＡＸ（商標）および１％のペニシリン−ストレプトマイシンが補給されたＤＭＥＭ中で培養し、５％のＣＯ２が補給された加湿細胞培養インキュベーター中で３７℃において増殖させた。細胞をトリプシン処理により回収し（第８継代）、ＨＢＳＳ中で２回洗浄し、カウントした（トリパンブルー排除を使用）。最終細胞密度をＨＢＳＳ：Ｍａｔｒｉｇｅｌ（商標）（１：１、ｖ／ｖ）により２．０×１０８個の細胞／ｍＬに調整した。
【０１７８】
接種懸濁液中のＭａｔｒｉｇｅｌ（商標）の使用は、腫瘍の生着率を増加させ得る早期血管化を支持することが公知であり、したがって、腫瘍サイズ変動を減少させる潜在性を有する。
【０１７９】
腫瘍細胞接種
６０匹の無胸腺ヌードＦｏｘｎ１ｎｕマウスに腹腔内注射麻酔（ケタミン（１４ｍｇ／ｍＬ）／キシラジン（０．９ｍｇ／ｍＬ））下で接種した。接種前、切開部位における皮膚をアルコールにより拭った。切開を行って卵巣を露出させた。針を卵巣中に直接導入し、１×１０６個のＡ２７８０細胞からなる５μＬの細胞懸濁液を排出させた。
【０１８０】
外科処置時および翌日に鎮痛のためにマウスにＢｕｐｒｅｎｅｘ（ブプレノルフィンＨＣｌ、０．０１ｍｇ／ｍＬ）の２００μＬのボーラス用量を皮下投与した。
【０１８１】
無作為化
動物を、接種７日後（試験０日目）に体重に基づき１２匹の５つの群および２４匹の１つの群に無作為化した。
【０１８２】
化合物配合
トリプシノーゲンおよびキモトリプシノーゲンＡを、それぞれの処理日にリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）中で溶解させてそれぞれ３０および１００ｍｇ／ｍＬの原液を得た。トリプシノーゲン／キモトリプシノーゲンＡの８．３３／５０、２．７５／１６．５および０．９１／５．４ｍｇ／ｍＬ（１：６の比）における投薬溶液を、最初にトリプシノーゲン溶液をＰＢＳ中で希釈し、次いでキモトリプシノーゲンＡを添加することにより調製した。
【０１８３】
化合物投与
この試験において使用される投薬レジメンを表１０にまとめる。
【０１８４】
第１群の動物は腫瘍生着率評価のために未処理のままとした。
【０１８５】
ビヒクル対照（ＰＢＳ；第２群）ならびにトリプシノーゲンおよびキモトリプシノーゲンＡを８３．３／５００、２７．５／１６５および９．１／５４ｍｇ／ｋｇ（それぞれ第３群、第４群および第５群；単回注射での組合せ）の用量において、１日１回、１０ｍＬ／ｋｇの投薬容量で静脈内尾静脈注射を介して投与した（１群当たり１２匹の動物）。それぞれの動物に投与される投薬溶液の容量は、投薬直前に計測された個々の体重に基づき計算し、調整した。処理は、試験０日目に開始し、２１日間連続で投与した。
【０１８６】
腫瘍生着率測定
第１群の未処理動物を処理開始７日後に（接種１４日後）に安楽死させて卵巣中の腫瘍のサイズおよび生着率を評価した。
【０１８７】
１２匹全ての動物の卵巣中で腫瘍の存在が確認され、次いで全ての動物について腫瘍を摘出卵巣から単離し、秤量した。腫瘍撮影画像を図８〜１１に提示する。
【０１８８】
終了手順
全ての動物は、承認された標準的手順により二酸化炭素吸入を介して安楽死させた（第１群〜第５群）。
【０１８９】
試料回収
終了時、全ての動物から腫瘍を無傷で卵巣を摘出した。卵巣組織から腫瘍を単離し、秤量した。２１日間の処理を受けた動物（第２群〜第５群）からの腫瘍も撮影した。
【０１９０】
計算
０日目と、任意の所与の日（Ｘ日目）との間の体重の平均変化率（％ＢＷ変化）は、式：
％ＢＷ変化＝平均（ＢＷ試験Ｘ日目）／平均（ＢＷ試験０日目）×１００％−１００％
（式中、ＢＷ試験０日目＝０日目の初回値であり、ＢＷ試験Ｘ日目＝Ｘ日目の現在値である）
を使用して計算した。
【０１９１】
対照群に対する処理群についての腫瘍増殖の阻害率は、以下の式：
阻害率＝（（平均対照−平均処理）／平均対照）×１００
を使用して計算した。
【０１９２】
統計的計算
全ての統計的計算は、Ｐｒｉｓｍ６Ｍａｃ  ＯＳＸ版（ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｓｏｆｔｗａｒｅ  Ｉｎｃ，Ｌａ  Ｊｏｌｌａ，ＣＡ，ＵＳＡ）を使用して実施した。
【０１９３】
全てのデータセットの正規性は、ダゴスティーノ・パーソンのオムニバス正規性検定を使用して検定した。
【０１９４】
対応のあるｔ検定を使用して試験０日目と試験終了との間で、２１日間の処理を受けた群（第２群〜第５群）内で体重が有意に変化したか否かを決定した。データが正規分布でなかった場合、有意性は、ウィルコクソンの対応のある符号付き順位検定を使用して決定した。
【０１９５】
試験終了時における腫瘍重量の比較は、一元配置分散分析（ＡＮＯＶＡ）を使用して２１日間の処理を受けた群（第２群〜第５群）間で行った。
【０１９６】
ｐ値≦０．０５を有意であるとみなした。
【０１９７】
結果および観察
体重変化
未処理動物において試験０日目と７日目との間で有意な（ｐ≦０．０５）平均体重増加が存在した（初回体重の４．３３％；第１群）。
【０１９８】
ビヒクル対照（ＰＢＳ；初回体重の６．５６％；第２群）および全ての用量のトリプシノーゲン／キモトリプシノーゲンＡ（８３．３／５００、２７．５／１６５および９．１／５４ｍｇ／ｋｇ；初回体重の８．６０％、６．００％および３．８９％；それぞれ第３群、第４群および第５群）により２１日間処理された群において試験０日目と２１日目との間で平均体重増加が存在した。体重増加は、低用量処理（第５群）を除き全ての群において有意であった（ｐ≦０．０５）。
【０１９９】
化合物の効力
ビヒクル対照（ＰＢＳ；２０６２．２ｍｇ；第２群）と比較して中および低用量トリプシノーゲン／キモトリプシノーゲンＡ（２７．５／１６５および９．１／５４ｍｇ／ｋｇ；９５７．３および１０７４．２ｍｇ；５３．６％および４７．９％；それぞれ第４群および第５群）により２１日間処理された動物において平均腫瘍重量の有意な（ｐ≦０．０５）低減が存在したが、高用量トリプシノーゲン／キモトリプシノーゲンＡ（８３．３／５００ｍｇ／ｋｇ；１７６２．２ｍｇ；１４．５％；第３群）では存在しなかった（表１１および図７）。
【０２００】
生着率評価のために７日目に安楽死させた未処理動物（第１群）についての腫瘍重量は、分析に含めなかった。
【０２０１】
結論
８３．３／５００、２７．５／１６５または９．１／５４ｍｇ／ｋｇの用量における単回静脈内注射として組合せで投与されるトリプシノーゲンおよびキモトリプシノーゲンＡによる連日処理の抗腫瘍効力を、雌無胸腺ヌードＦｏｘｎ１ｎｕマウス中で同所接種されたＡ２７８０ヒト卵巣癌細胞に対して評価した。
【０２０２】
終了時における腫瘍重量の計測は、この試験における２１日間の処理後にビヒクル対照処理動物と比較して中および低用量トリプシノーゲン／キモトリプシノーゲンＡにより処理された動物において有意な（ｐ≦０．０５）抗腫瘍効力を示した。有意な抗腫瘍効力は、以下の高用量処理後には観察されなかった。
【０２０３】
【表１１】
2018533612.tif 000012
【０２０４】
【表１２】
2018533612.tif 000013
【０２０５】
実施例５
ヒト用量変換は、参照により本明細書に組み込まれるＵ．Ｓ．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ  ａｎｄ  Ｈｕｍａｎ  Ｓｅｒｖｉｃｅｓ  Ｆｏｏｄ  ａｎｄ  Ｄｒｕｇ  Ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ  Ｃｅｎｔｅｒ  ｆｏｒ  Ｄｒｕｇ  Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ（ＣＤＥＲ），Ｅｓｔｉｍａｔｉｎｇ  ｔｈｅ  Ｍａｘｉｍｕｍ  Ｓａｆｅ  Ｓｔａｒｔｉｎｇ  Ｄｏｓｅ  ｉｎ  Ｉｎｉｔｉａｌ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｔｒｉａｌｓ  ｆｏｒ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ  ｉｎ  Ａｄｕｌｔ  Ｈｅａｌｔｈｙ  Ｖｏｌｕｎｔｅｅｒｓ．Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ，ＭＤ  ２００５に記載の関連方法のいずれかによるものであり得る。
【０２０６】
例えば、マウスに投与された用量からのヒト等価用量は、以下のとおり決定することができる：
ヒト等価用量（ＨＥＤ、ｍｇ／ｋｇ）＝動物用量（ｍｇ／ｋｇ）×動物Ｋ÷ヒトＫ（式中、Ｋは、体重と体表面積との関係を反映する相関係数である）
【０２０７】
典型的な成人（体重６０ｋｇ、体表面積１．６ｍ２）についてＫは３７であり、マウスＫは３である。例えば、本明細書に記載の５００ｍｇ／ｋｇの量は、等価ヒト用量について約４１ｍｇ／ｋｇに変換することができ、この式を使用する他の例示的変換としては、以下のものが挙げられる：
キモトリプシノーゲン：
マウス（ｍｇ／ｋｇ）：１．５、２、３．５、５、１５、４５、１３５、２５０および５００。
ヒト（ｍｇ／ｋｇ）：０．１２、０．１６、０．２８、０．４、１．２、３．６、１１、２０および４１
トリプシノーゲン：
マウス（ｍｇ／ｋｇ）：０．２５、０．４、０．６、０．８、２．５、８、２０、４０および８０。
ヒト（ｍｇ／ｋｇ）：０．０２、０．０３、０．０５、０．０６５、０．２、０．６５、１．６、３．２および６．５。
キモトリプシノーゲン：
マウス（ｍｇ／ｋｇ）：１５、５４  １６５、２５０、５００。
ヒト（ｍｇ／ｋｇ）：１．２、４．４、１３、２０および４１。
トリプシノーゲン：
マウス（ｍｇ／ｋｇ）：２．６、９、２７．５、４３．４、８３．３、８６．８。
ヒト（ｍｇ／ｋｇ）：０．２、０．７、２．２、３．５、６．７５および７。
【０２０８】
本発明は、５０、６０、７０、８０、９０、１００ｋｇ以上のヒト体重および１．１、１．２、１．３、１．４、１．５、１．６、１．７、１．８ｍ２以上の体表面積に基づく、本明細書、例として、表１、４、８および１０ならびに本文献のいずれかの他箇所に言及されるｍｇ／ｋｇの全ての量についてのヒト変換を含む。
【０２０９】
本明細書に記載のヒト等価用量は、体表面積に基づく用量変換についてＣＤＥＲ‘Ｅｓｔｉｍａｔｉｎｇ  ｔｈｅ  Ｍａｘｉｍｕｍ  Ｓａｆｅ  Ｓｔａｒｔｉｎｇ  Ｄｏｓｅ  ｉｎ  Ｉｎｉｔｉａｌ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｔｒｉａｌｓ  ｆｏｒ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ  ｉｎ  Ａｄｕｌｔ  Ｈｅａｌｔｈｙ  Ｖｏｌｕｎｔｅｅｒｓ’に記載の方法を使用して導く。ＣＤＥＲ文献に記載の方法に対する任意のバリエーションを、本明細書に記載のとおり、マウスに投与される投薬量からの適切なヒト用量の決定に利用することもできることが認識される（例えば、一部の場合、体表面積ではなく体重に基づき用量スケーリングすることが適切であり得る）。さらに、当業者は、若年ヒト（すなわち、未成年のヒト）に適切な用量を決定する方法、および本発明の方法を適用することができる非ヒト生物における適切な用量を決定する方法にも精通している。当業者は、意図される投与方法（例えば、静脈内、筋肉内、皮下、局所、経口または他の投与方法）に応じて適切な用量を調整する方法にも精通している。
【０２１０】
実施例６
８：１超のキモトリプシノーゲンとトリプシノーゲンとの比を試験するための以下の実験を実施した。
【０２１１】
材料および方法
材料
【０２１２】
【表１３】
2018533612.tif 000014
【０２１３】
細胞培養
以下の表（表１２）は、全てのＩＣ５０測定および組合せアッセイにおいて使用される増殖条件およびウェル当たりの細胞の初回細胞播種密度を示す。細胞を９５％の空気／５％のＣＯ２が補給された加湿細胞培養インキュベーター中で３７℃において培養した。
【０２１４】
【表１４】
2018533612.tif 000015
【０２１５】
以下の全ての細胞系は、Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ）（Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ，ＭＤ，ＵＳＡ）から調達した：７８６−０、ＡＣＨＮ、ＢＴ−４７４、ＤＡＯＹ、ＤＵ１４５、Ｇ−３６１、ＨＣＴ１１６、ＨＣＴ−１５、Ｈｅｐ３Ｂ２．１−７、ＨＬ−６０、ＨＴ−１０８０、ＨＴ−２９、ＭＣＦ−７、ＭＤＡ−ＭＢ−２３１、ＭＥＳ−ＳＡ、ＮＣＩ−Ｈ４６０、ＮＣＩ−Ｈ８２、ＰＣ−３、Ｒａｊｉ、ＳＫ−ＯＶ−３、Ｕ−８７ＭＧ。
【０２１６】
Ａ２７８０細胞系は、Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ（ＮＣＩ）（Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ，ＵＳＡ）から調達した。
【０２１７】
Ｃ８１６１．９細胞系は、Ｇａｖｉｎ  Ｒｏｂｅｒｔｓｏｎ博士研究室（Ｃｏｌｌｅｇｅ  ｏｆ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，Ｐｅｎｎｓｙｌｖａｎｉａ  Ｓｔａｔｅ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｈｅｒｓｈｅｙ，ＰＡ，ＵＳＡ）から調達した。
【０２１８】
ＨｕＨ−７細胞系は、Ｊａｐａｎｅｓｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｂｉｏｒｅｓｏｕｒｃｅｓ（ＪＣＲＢ）細胞バンク（大阪、日本）から調達した。
【０２１９】
ＳＮＢ−１９細胞系は、Ｄｅｕｔｓｃｈｅ  Ｓａｍｍｌｕｎｇ  ｖｏｎ  Ｍｉｋｒｏｏｒｇａｎｉｓｍｅｎ  ｕｎｄ  Ｚｅｌｌｋｕｌｔｕｒｅｎ（ＤＳＭＺ）（Ｇｅｒｍａｎ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｍｉｃｒｏｏｒｇａｎｉｓｍｓ  ａｎｄ  Ｃｅｌｌ  Ｃｕｌｔｕｒｅｓ）（Ｂｒａｕｎｓｃｈｗｅｉｇ，Ｇｅｒｍａｎｙ）から調達した。
【０２２０】
全ての細胞系を第１０継代までアッセイにおいて利用した。
【０２２１】
試験品
【０２２２】
【表１５】
2018533612.tif 000016
【０２２３】
【表１６】
2018533612.tif 000017
【０２２４】
試験品配合
トリプシノーゲンおよびキモトリプシノーゲンを適切な細胞培養培地中で直接溶解させ、細胞に直ちに添加した。
【０２２５】
細胞増殖アッセイ
組合せアッセイのため、試験品を細胞に播種２４時間後に添加した。試験品濃度はそれぞれの細胞系についてトリプリケートで試験した。試験品の添加７２時間後、ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｂｌｕｅ（登録商標）アッセイを全てのプレートに対して実施した。
【０２２６】
組合せアッセイにおいて使用されるトリプシノーゲンの濃度は、単一試験品実験から計算されたＩＣ５０に基づいた。それぞれの個々の細胞系についてのトリプシノーゲンの濃度により、キモトリプシノーゲンの濃度を以下の比：１：１、１：２、１：４、１：６、１：８および１：１０（トリプシノーゲン：キモトリプシノーゲン）において決定した。対照は、増殖培地のみおよび未処理細胞と増殖培地（未処理対照）からなるものであった。
【０２２７】
使用されるアッセイ対照は、ビヒクルとしてのリン酸緩衝生理食塩水対照および陽性対照としてのＴｒｉｔｏｎ−ｘ１００に対するビヒクルとしての増殖培地対照および増殖培地のみ（バックグラウンド）であった。バックグラウンド減算は、ＩＣ５０値の測定について実施しなかった。
【０２２８】
試験品含有培地中での細胞のインキュベーション後、１０μＬのＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｂｌｕｅ（登録商標）をそれぞれのウェルに添加し、次いで細胞と最大６時間インキュベートした。Ｓｐｅｃｔｒａｍａｘ  Ｇｅｍｉｎｉ  ＸＰＳ蛍光光度計（５６０ｎｍ励起、５９０ｎｍ蛍光）を使用して蛍光を計測した。全てのデータを記録し、解釈のためにＭｉｃｒｏｓｏｆｔ（登録商標）Ｅｘｃｅｌスプレッドシートに入力した。
【０２２９】
計算
ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｂｌｕｅ（登録商標）アッセイから回収されたデータを、ＩＣ５０測定のために用量応答曲線としてプロットした。相対蛍光単位（ＲＦＵ）を化合物濃度に対してプロットした。これらのプロットにおいて、Ｘ軸（化合物濃度）を対数スケールで表した。ＩＣ５０濃度は、ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍバージョン６．０ｅＭａｃ  ＯＳＸ版（ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｓｏｆｔｗａｒｅ，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ  Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ，ＵＳＡ）を使用して可変傾斜曲線フィッティングアルゴリズムを介してそれぞれの化合物について最大阻害濃度（ＩＣ）の半数（５０％）として計算した。
【０２３０】
組合せ試験のため、薬物相互作用係数（ＣＤＩ）を以下の式：
【数１】
2018533612.tif 000018
（式中、ＴＣは、トリプシノーゲンおよびキモトリプシノーゲンの組合せの増殖阻害であり、Ｔは、単一剤トリプシノーゲンの増殖阻害であり、Ｃは、単一剤キモトリプシノーゲンの増殖阻害である）に従って計算した。１未満のＣＤＩ値はトリプシノーゲンおよびキモトリプシノーゲンの薬物相乗作用を示す一方、１超の値はそれらの拮抗相互作用を示す。
【０２３１】
ヒト癌におけるトリプシノーゲンおよびキモトリプシノーゲンによる細胞増殖阻害
Ａ２７８０卵巣腫瘍細胞の増殖に対するトリプシノーゲン（Ｔ）およびキモトリプシノーゲン（Ｃ）単独または組合せの効果を図１２に示す。Ａ２７８０卵巣腫瘍細胞の増殖阻害の最大レベルは、１：８（Ｔ：Ｃ）超、例えば、１：１０（Ｔ：Ｃ）の比について観察された。表１３（真下）参照。
【０２３２】
【表１７】
2018533612.tif 000019
【０２３３】
Ｃ８１６１．９黒色腫細胞の増殖に対するトリプシノーゲンおよびキモトリプシノーゲン単独または組合せの効果を図１３に示す。Ｃ８１６１．９黒色腫細胞の増殖阻害の最大レベルは、１：８（Ｔ：Ｃ）超、例えば、１：１０（Ｔ：Ｃ）の比について観察された。表１４（真下）参照。
【０２３４】
【表１８】
2018533612.tif 000020
【０２３５】
ＤＡＯＹ脳腫瘍細胞の増殖に対するトリプシノーゲンおよびキモトリプシノーゲン単独または組合せの効果を図１４に示す。ＤＡＯＹ脳腫瘍細胞の増殖阻害の最大レベルは、１：８（Ｔ：Ｃ）超、例えば、１：１０（Ｔ：Ｃ）の比について観察された。表１５（真下）参照。
【０２３６】
【表１９】
2018533612.tif 000021
【０２３７】
ＤＵ１４５前立腺腫瘍細胞の増殖に対するトリプシノーゲンおよびキモトリプシノーゲン単独または組合せの効果を図１５に示す。ＤＵ１４５前立腺腫瘍細胞の増殖阻害の最大レベルは、１：８（Ｔ：Ｃ）超、例えば、１：１０（Ｔ：Ｃ）の比について観察された。表１６（真下）参照。
【０２３８】
【表２０】
2018533612.tif 000022
【０２３９】
ＨＣＴ１１６結腸直腸腫瘍細胞の増殖に対するトリプシノーゲンおよびキモトリプシノーゲン単独または組合せの効果を図１６に示す。ＨＣＴ１１６結腸直腸腫瘍細胞の増殖阻害の最大レベルは、１：８（Ｔ：Ｃ）超、例えば、１：１０（Ｔ：Ｃ）の比について観察された。表１７（真下）参照。
【０２４０】
【表２１】
2018533612.tif 000023
【０２４１】
Ｈｅｐ３Ｂ２．１−７肝腫瘍細胞の増殖に対するトリプシノーゲンおよびキモトリプシノーゲン単独または組合せの効果を図１７に示す。Ｈｅｐ３Ｂ２．１−７肝腫瘍細胞の増殖阻害の最大レベルは、１：８（Ｔ：Ｃ）超、例えば、１：１０（Ｔ：Ｃ）の比について観察された。表１８（真下）参照。
【０２４２】
【表２２】
2018533612.tif 000024
【０２４３】
ＨＴ−２９結腸直腸腫瘍細胞の増殖に対するトリプシノーゲンおよびキモトリプシノーゲン単独または組合せの効果を図１８に示す。ＨＴ−２９結腸直腸腫瘍細胞の増殖阻害の最大レベルは、１：８（Ｔ：Ｃ）超、例えば、１：１０（Ｔ：Ｃ）の比について観察された。表１９（真下）参照。
【０２４４】
【表２３】
2018533612.tif 000025
【０２４５】
ＨｕＨ−７肝腫瘍細胞の増殖に対するトリプシノーゲンおよびキモトリプシノーゲン単独または組合せの効果を図１９に示す。ＨｕＨ−７肝腫瘍細胞の増殖阻害の最大レベルは、１：８（Ｔ：Ｃ）超、例えば、１：１０（Ｔ：Ｃ）の比について観察された。表２０（真下）参照。
【０２４６】
【表２４】
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【０２４７】
ＮＣＩ−Ｈ４６０肺腫瘍細胞の増殖に対するトリプシノーゲンおよびキモトリプシノーゲン単独または組合せの効果を図２０に示す。ＮＣＩ−Ｈ４６０肺腫瘍細胞の増殖阻害の最大レベルは、１：８（Ｔ：Ｃ）超、例えば、１：１０（Ｔ：Ｃ）の比について観察された。表２１（真下）参照。
【０２４８】
【表２５】
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【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７】
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【図１８】
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【図１９】
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【図２０】
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【国際調査報告】
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