(57)【要約】  本開示は、特に、増殖性疾患の処置または予防に使用するための、（ａ）式Ｉもしくは式ＩＩのＭＤＭ２阻害剤または薬学的に許容されるその塩および式ＩＩＩ、式ＩＶ、式Ｖ、もしくは式ＶＩのＰＫＣ経路阻害剤または薬学的に許容されるその塩の組合せを含む組合せ医薬、例えば、製品に関する。本開示は、対応する医薬製剤、使用、方法、組合せ、データキャリア、および関連する開示の実施形態にも関する。本開示は、さらに、増殖性疾患の処置に使用する式Ｉもしくは式ＩＩのＭＤＭ２阻害剤または薬学的に許容されるその塩単独での使用にも関する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
ぶどう膜黒色腫の処置に使用するための、（Ｓ）−１−（４−クロロ−フェニル）−７−イソプロポキシ−６−メトキシ−２−（４−｛メチル−［４−（４−メチル−３−オキソ−ピペラジン−１−イル）−トランス−シクロヘキシルメチル］−アミノ｝−フェニル）−１，４−ジヒドロ−２Ｈ−イソキノリン−３−オンまたは薬学的に許容されるその塩、および（Ｓ）−５−（５−クロロ−１−メチル−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−ピリジン−３−イル）−６−（４−クロロ−フェニル）−２−（２，４−ジメトキシ−ピリミジン−５−イル）−１−イソプロピル−５，６−ジヒドロ−１Ｈ−ピロロ［３，４−ｄ］イミダゾール−４−オンまたは薬学的に許容されるその塩から選択されるマウス二重微小染色体２阻害剤（ＭＤＭ２ｉ）。
【請求項２】
前記ＭＤＭ２ｉが、（Ｓ）−１−（４−クロロ−フェニル）−７−イソプロポキシ−６−メトキシ−２−（４−｛メチル−［４−（４−メチル−３−オキソ−ピペラジン−１−イル）−トランス−シクロヘキシルメチル］−アミノ｝−フェニル）−１，４−ジヒドロ−２Ｈ−イソキノリン−３−オンまたは薬学的に許容されるその塩である、請求項１に記載のＭＤＭ２ｉ。
【請求項３】
前記ＭＤＭ２ｉが、（Ｓ）−５−（５−クロロ−１−メチル−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−ピリジン−３−イル）−６−（４−クロロ−フェニル）−２−（２，４−ジメトキシ−ピリミジン−５−イル）−１−イソプロピル−５，６−ジヒドロ−１Ｈ−ピロロ［３，４−ｄ］イミダゾール−４−オンまたは薬学的に許容されるその塩である、請求項１に記載のＭＤＭ２ｉ。
【請求項４】
（ｉｉｉ）（Ｓ）−１−（４−クロロ−フェニル）−７−イソプロポキシ−６−メトキシ−２−（４−｛メチル−［４−（４−メチル−３−オキソ−ピペラジン−１−イル）−トランス−シクロヘキシルメチル］−アミノ｝−フェニル）−１，４−ジヒドロ−２Ｈ−イソキノリン−３−オンまたは薬学的に許容されるその塩、および（Ｓ）−５−（５−クロロ−１−メチル−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−ピリジン−３−イル）−６−（４−クロロ−フェニル）−２−（２，４−ジメトキシ−ピリミジン−５−イル）−１−イソプロピル−５，６−ジヒドロ−１Ｈ−ピロロ［３，４−ｄ］イミダゾール−４−オンまたは薬学的に許容されるその塩から選択されるＭＤＭ２ｉ、
ならびに、
（ｉｖ）３−（１．Ｈ．−インドール−３−イル）−４−［２−（４−メチル−ピペラジン−１−イル）−キナゾリン−４−イル］−ピロール−２，５−ジオンまたは薬学的に許容されるその塩、３−アミノ−Ｎ−（３−（４−アミノ−４−メチルピペリジン−１−イル）ピリジン−２−イル）−６−（３−（トリフルオロメチル）ピリジン−２−イル）ピラジン−２−カルボキサミドまたは薬学的に許容されるその塩、３−アミノ−Ｎ−（３−（４−アミノピペリジン−１−イル）ピリジン−２−イル）−６−（３−（トリフルオロメトキシ）ピリジン−２−イル）ピラジン−２−カルボキサミドまたは薬学的に許容されるその塩、および３−アミノ−Ｎ−（３−（４−アミノ−４−メチルピペリジン−１−イル）ピリジン−２−イル）−６−（３−（トリフルオロメトキシ）ピリジン−２−イル）ピラジン−２−カルボキサミドまたは薬学的に許容されるその塩から選択される少なくとも１種のプロテインキナーゼＣ経路阻害剤（ＰＫＣｉ）
を含む組合せ医薬。
【請求項５】
同時に、個別に、または逐次的に使用するための、請求項４に記載の組合せ医薬。
【請求項６】
少なくとも１種の薬学的に許容される担体をさらに含有する、請求項４または５に記載の組合せ医薬。
【請求項７】
固定された組合せの形態である、請求項４から６のいずれか一項に記載の組合せ医薬。
【請求項８】
組合せ投与のためのパーツのキットの形態であり、前記ＭＤＭ２ｉおよび前記ＰＫＣｉが、独立して同時に投与されるか、または所定の時間間隔で個別に投与され、特にこの時間間隔によって組合せパートナーが共同的に治療上活性となる、請求項４から７のいずれか一項に記載の組合せ医薬。
【請求項９】
前記ＭＤＭ２ｉおよびＰＫＣｉが、ぶどう膜黒色腫の処置のために共同的に治療上有効な量である、請求項４から８のいずれか一項に記載の組合せ医薬。
【請求項１０】
組合せ製品の形態である、請求項４から９のいずれか一項に記載の組合せ医薬。
【請求項１１】
ぶどう膜黒色腫の処置に使用するための、請求項４から１０のいずれか一項に記載の組合せ医薬。
【請求項１２】
前記ぶどう膜黒色腫が転移性ぶどう膜黒色腫である、請求項１から３のいずれか一項に記載のＭＤＭ２ｉ、または請求項９もしくは１１に記載の組合せ医薬。
【請求項１３】
前記ぶどう膜黒色腫が、ぶどう膜黒色腫の転移を含む、請求項１から３のいずれか一項に記載のＭＤＭ２ｉ、または請求項９、１１もしくは１２に記載の組合せ医薬。
【請求項１４】
前記ぶどう膜黒色腫が、機能的なｐ５３または野生型ＴＰ５３を有する、請求項１から３、１１もしくは１２のいずれか一項に記載のＭＤＭ２ｉ、または請求項９もしくは１１から１３のいずれか一項に記載の組合せ医薬。
【請求項１５】
前記ぶどう膜黒色腫または転移性ぶどう膜黒色腫が、グアニンヌクレオチド結合タンパク質Ｇ（ｑ）アルファサブユニット（ＧＮＡＱ）遺伝子またはグアニンヌクレオチド結合タンパク質Ｇ（ｑ）１１サブユニット（ＧＮＡ１１）遺伝子の変異を特徴とする、請求項９または１１から１４のいずれか一項に記載の組合せ医薬。
【請求項１６】
ぶどう膜黒色腫の処置のために、請求項４から１５のいずれか一項に記載の組合せ医薬を、同時に、個別に、または逐次的に使用することに関する情報、および／または請求項４から１５のいずれか一項に記載の組合せ医薬を、同時に、個別に、または逐次的に投与することを指示するための情報を含むデータキャリアの使用。
【請求項１７】
ぶどう膜黒色腫または転移性ぶどう膜黒色腫に罹患している患者を処置する方法であって、請求項４から１６のいずれか一項に記載の組合せ医薬を、同時に、個別に、または逐次的に前記患者に投与することを含む方法であり、前記組合せ医薬の量は、ぶどう膜黒色腫または転移性ぶどう膜黒色腫の処置において治療上有効な量である、方法。
【請求項１８】
医薬品として併用するための、（ｉ）（Ｓ）−１−（４−クロロ−フェニル）−７−イソプロポキシ−６−メトキシ−２−（４−｛メチル−［４−（４−メチル−３−オキソ−ピペラジン−１−イル）−トランス−シクロヘキシルメチル］−アミノ｝−フェニル）−１，４−ジヒドロ−２Ｈ−イソキノリン−３−オンまたは薬学的に許容されるその塩、および（Ｓ）−５−（５−クロロ−１−メチル−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−ピリジン−３−イル）−６−（４−クロロ−フェニル）−２−（２，４−ジメトキシ−ピリミジン−５−イル）−１−イソプロピル−５，６−ジヒドロ−１Ｈ−ピロロ［３，４−ｄ］イミダゾール−４−オンまたは薬学的に許容されるその塩から選択されるＭＤＭ２ｉ、ならびに（ｉｉ）３−（１．Ｈ．−インドール−３−イル）−４−［２−（４−メチル−ピペラジン−１−イル）−キナゾリン−４−イル］−ピロール−２，５−ジオンまたは薬学的に許容されるその塩、３−アミノ−Ｎ−（３−（４−アミノ−４−メチルピペリジン−１−イル）ピリジン−２−イル）−６−（３−（トリフルオロメチル）ピリジン−２−イル）ピラジン−２−カルボキサミドまたは薬学的に許容されるその塩、３−アミノ−Ｎ−（３−（４−アミノピペリジン−１−イル）ピリジン−２−イル）−６−（３−（トリフルオロメトキシ）ピリジン−２−イル）ピラジン−２−カルボキサミドまたは薬学的に許容されるその塩、および３−アミノ−Ｎ−（３−（４−アミノ−４−メチルピペリジン−１−イル）ピリジン−２−イル）−６−（３−（トリフルオロメトキシ）ピリジン−２−イル）ピラジン−２−カルボキサミドまたは薬学的に許容されるその塩から選択されるＰＫＣｉ。
【請求項１９】
医薬品として併用するための、前記ＭＤＭ２ｉが、（Ｓ）−５−（５−クロロ−１−メチル−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−ピリジン−３−イル）−６−（４−クロロ−フェニル）−２−（２，４−ジメトキシ−ピリミジン−５−イル）−１−イソプロピル−５，６−ジヒドロ−１Ｈ−ピロロ［３，４−ｄ］イミダゾール−４−オンまたは薬学的に許容されるその塩であり、前記ＰＫＣｉが、３−（１．Ｈ．−インドール−３−イル）−４−［２−（４−メチル−ピペラジン−１−イル）−キナゾリン−４−イル］−ピロール−２，５−ジオンまたは薬学的に許容されるその塩である、請求項１８に記載のＭＤＭ２ｉ。
【請求項２０】
医薬品として併用するための、前記ＭＤＭ２ｉが、（Ｓ）−１−（４−クロロ−フェニル）−７−イソプロポキシ−６−メトキシ−２−（４−｛メチル−［４−（４−メチル−３−オキソ−ピペラジン−１−イル）−トランス−シクロヘキシルメチル］−アミノ｝−フェニル）−１，４−ジヒドロ−２Ｈ−イソキノリン−３−オンまたは薬学的に許容されるその塩であり、前記ＰＫＣｉが、３−（１．Ｈ．−インドール−３−イル）−４−［２−（４−メチル−ピペラジン−１−イル）−キナゾリン−４−イル］−ピロール−２，５−ジオンまたは薬学的に許容されるその塩である、請求項１８に記載のＭＤＭ２ｉ。
【請求項２１】
医薬品として併用するための、前記ＭＤＭ２ｉが、（Ｓ）−５−（５−クロロ−１−メチル−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−ピリジン−３−イル）−６−（４−クロロ−フェニル）−２−（２，４−ジメトキシ−ピリミジン−５−イル）−１−イソプロピル−５，６−ジヒドロ−１Ｈ−ピロロ［３，４−ｄ］イミダゾール−４−オンまたは薬学的に許容されるその塩であり、前記ＰＫＣｉが、３−アミノ−Ｎ−（３−（４−アミノ−４−メチルピペリジン−１−イル）ピリジン−２−イル）−６−（３−（トリフルオロメチル）ピリジン−２−イル）ピラジン−２−カルボキサミドまたは薬学的に許容されるその塩である、請求項１８に記載のＭＤＭ２ｉ。
【請求項２２】
医薬品として併用するための、前記ＭＤＭ２ｉが、（Ｓ）−１−（４−クロロ−フェニル）−７−イソプロポキシ−６−メトキシ−２−（４−｛メチル−［４−（４−メチル−３−オキソ−ピペラジン−１−イル）−トランス−シクロヘキシルメチル］−アミノ｝−フェニル）−１，４−ジヒドロ−２Ｈ−イソキノリン−３−オンまたは薬学的に許容されるその塩であり、前記ＰＫＣｉが、３−アミノ−Ｎ−（３−（４−アミノ−４−メチルピペリジン−１−イル）ピリジン−２−イル）−６−（３−（トリフルオロメチル）ピリジン−２−イル）ピラジン−２−カルボキサミドまたは薬学的に許容されるその塩である、請求項１８に記載のＭＤＭ２ｉ。
【請求項２３】
医薬品として併用するための、前記ＭＤＭ２ｉが、（Ｓ）−１−（４−クロロ−フェニル）−７−イソプロポキシ−６−メトキシ−２−（４−｛メチル−［４−（４−メチル−３−オキソ−ピペラジン−１−イル）−トランス−シクロヘキシルメチル］−アミノ｝−フェニル）−１，４−ジヒドロ−２Ｈ−イソキノリン−３−オンまたは薬学的に許容されるその塩であり、前記ＰＫＣｉが、３−アミノ−Ｎ−（３−（４−アミノピペリジン−１−イル）ピリジン−２−イル）−６−（３−（トリフルオロメトキシ）ピリジン−２−イル）ピラジン−２−カルボキサミドまたは薬学的に許容されるその塩である、請求項１８に記載のＭＤＭ２ｉ。
【請求項２４】
医薬品として併用するための、前記ＭＤＭ２ｉが、（Ｓ）−５−（５−クロロ−１−メチル−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−ピリジン−３−イル）−６−（４−クロロ−フェニル）−２−（２，４−ジメトキシ−ピリミジン−５−イル）−１−イソプロピル−５，６−ジヒドロ−１Ｈ−ピロロ［３，４−ｄ］イミダゾール−４−オンまたは薬学的に許容されるその塩であり、前記ＰＫＣｉが、３−アミノ−Ｎ−（３−（４−アミノピペリジン−１−イル）ピリジン−２−イル）−６−（３−（トリフルオロメトキシ）ピリジン−２−イル）ピラジン−２−カルボキサミドまたは薬学的に許容されるその塩である、請求項１８に記載のＭＤＭ２ｉ。
【請求項２５】
医薬品として併用するための、前記ＭＤＭ２ｉが、（Ｓ）−１−（４−クロロ−フェニル）−７−イソプロポキシ−６−メトキシ−２−（４−｛メチル−［４−（４−メチル−３−オキソ−ピペラジン−１−イル）−トランス−シクロヘキシルメチル］−アミノ｝−フェニル）−１，４−ジヒドロ−２Ｈ−イソキノリン−３−オンまたは薬学的に許容されるその塩であり、前記ＰＫＣｉが、３−アミノ−Ｎ−（３−（４−アミノ−４−メチルピペリジン−１−イル）ピリジン−２−イル）−６−（３−（トリフルオロメトキシ）ピリジン−２−イル）ピラジン−２−カルボキサミドまたは薬学的に許容されるその塩である、請求項１８に記載のＭＤＭ２ｉ。
【請求項２６】
医薬品として併用するための、前記ＭＤＭ２ｉが、（Ｓ）−５−（５−クロロ−１−メチル−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−ピリジン−３−イル）−６−（４−クロロ−フェニル）−２−（２，４−ジメトキシ−ピリミジン−５−イル）−１−イソプロピル−５，６−ジヒドロ−１Ｈ−ピロロ［３，４−ｄ］イミダゾール−４−オンまたは薬学的に許容されるその塩であり、前記ＰＫＣｉが、３−アミノ−Ｎ−（３−（４−アミノ−４−メチルピペリジン−１−イル）ピリジン−２−イル）−６−（３−（トリフルオロメトキシ）ピリジン−２−イル）ピラジン−２−カルボキサミドまたは薬学的に許容されるその塩である、請求項１８に記載のＭＤＭ２ｉ。
【請求項２７】
前記ＭＤＭ２ｉが、（Ｓ）−１−（４−クロロ−フェニル）−７−イソプロポキシ−６−メトキシ−２−（４−｛メチル−［４−（４−メチル−３−オキソ−ピペラジン−１−イル）−トランス−シクロヘキシルメチル］−アミノ｝−フェニル）−１，４−ジヒドロ−２Ｈ−イソキノリン−３−オンまたは薬学的に許容されるその塩である、請求項４から１４のいずれか一項に記載の組合せ医薬、請求項１５に記載のデータキャリアの使用、請求項１６に記載の患者を処置する方法。
【請求項２８】
前記ＭＤＭ２ｉが、（Ｓ）−５−（５−クロロ−１−メチル−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−ピリジン−３−イル）−６−（４−クロロ−フェニル）−２−（２，４−ジメトキシ−ピリミジン−５−イル）−１−イソプロピル−５，６−ジヒドロ−１Ｈ−ピロロ［３，４−ｄ］イミダゾール−４−オンまたは薬学的に許容されるその塩である、請求項４から１５のいずれか一項に記載の組合せ医薬、請求項１６に記載のデータキャリアの使用、請求項１７に記載の患者を処置する方法。
【請求項２９】
前記ＰＫＣｉが、３−（１．Ｈ．−インドール−３−イル）−４−［２−（４−メチル−ピペラジン−１−イル）−キナゾリン−４−イル］−ピロール−２，５−ジオンまたは薬学的に許容されるその塩である、請求項４から１５のいずれか一項に記載の組合せ医薬、請求項１６に記載のデータキャリアの使用、請求項１７に記載の患者を処置する方法。
【請求項３０】
前記ＰＫＣｉが、３−アミノ−Ｎ−（３−（４−アミノ−４−メチルピペリジン−１−イル）ピリジン−２−イル）−６−（３−（トリフルオロメチル）ピリジン−２−イル）ピラジン−２−カルボキサミドまたは薬学的に許容されるその塩である、請求項４から１５のいずれか一項に記載の組合せ医薬、請求項１６に記載のデータキャリアの使用、請求項１７に記載の患者を処置する方法。
【請求項３１】
前記ＰＫＣｉが、３−アミノ−Ｎ−（３−（４−アミノピペリジン−１−イル）ピリジン−２−イル）−６−（３−（トリフルオロメトキシ）ピリジン−２−イル）ピラジン−２−カルボキサミドまたは薬学的に許容されるその塩である、請求項４から１５のいずれか一項に記載の組合せ医薬、請求項１６に記載のデータキャリアの使用、請求項１７に記載の患者を処置する方法。
【請求項３２】
前記ＰＫＣｉが、３−アミノ−Ｎ−（３−（４−アミノ−４−メチルピペリジン−１−イル）ピリジン−２−イル）−６−（３−（トリフルオロメトキシ）ピリジン−２−イル）ピラジン−２−カルボキサミドまたは薬学的に許容されるその塩である、請求項４から１５のいずれか一項に記載の組合せ医薬、請求項１６に記載のデータキャリアの使用、請求項１７に記載の患者を処置する方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本開示は、増殖性疾患の処置または予防に使用する２種類の標的療法、すなわち、ＭＤＭ２阻害剤およびプロテインキナーゼＣ（ＰＫＣ）阻害剤を含む組合せ医薬に関する。本開示は、対応する医薬製剤、使用、方法、組合せ、データキャリア、および関連する開示の実施形態にも関する。本開示は、さらに、増殖性疾患の処置に使用する式Ｉもしくは式ＩＩのＭＤＭ２阻害剤または薬学的に許容されるその塩単独での使用にも関する。
【背景技術】
【０００２】
ぶどう膜黒色腫（ＵＭ）は、成人における眼の最も一般的な癌である（Singh AD. et al., Ophthalmology. 2011;118: 1881-5）。治癒的処置がこれまでに特定されていないため、ＵＭ患者の多くは転移を生じる。
【０００３】
ＵＭ腫瘍の大半は、低分子量ＧＴＰアーゼをコードするＧＮＡＱ（グアニンヌクレオチド結合タンパク質Ｇ（ｑ）アルファサブユニット）遺伝子およびＧＮＡ１１（グアニンヌクレオチド結合タンパク質Ｇ（ｑ）１１サブユニット）遺伝子に変異がある（Harbour JW. Pigment Cell Melanoma Res. 2012;25:171-81）。これらの変異は共に、プロテインキナーゼＣ（ＰＫＣ）経路の活性化を招く。ＰＫＣ経路のアップレギュレーションは、多くの増殖性疾患において制御されていない細胞増殖を生じることに関与するマイトジェン活性化プロテインキナーゼ（ＭＡＰＫ）シグナル伝達経路の構成的活性化を招く下流作用をもたらす。
【０００４】
増殖抑制効果が特定のＰＫＣ経路阻害剤に認められる一方、持続的なＭＡＰＫ経路阻害は認められていない。これまでのところ、ＰＫＣ阻害剤（ＰＫＣｉ）は、患者に対し、単剤としての限定的な有効性を有している（Mochly-Rosen D et al., Nat Rev Drug Discov. 2012 Dec;11(12):937-57）。さらに、ＰＫＣの阻害のみでは、ｉｎ  ｖｉｔｒｏでの細胞死および／またはｉｎ  ｖｉｖｏでの腫瘍退縮を引き起こすことは不可能であった（Chen X, et al., Oncogene. 2014;33:4724-34）。
【０００５】
ｐ５３タンパク質は、そのすべてが腫瘍の悪性増殖を抑制する重要な現象であるＤＮＡ損傷修復、アポトーシス、および細胞周期の停止に関連する多数の標的遺伝子の発現を制御する転写因子である。ＴＰ５３遺伝子は、ヒトの癌において最も高頻度で変異している遺伝子の１つであり、すべての癌の約半分でｐ５３が不活性化されている。さらに、変異していないＴＰ５３遺伝子を有する癌では、一般的にｐ５３は、タンパク質レベルにおいて機能的に不活性化されている。ｐ５３不活性化機構の１つは、ＭＤＭ２（Ｍｏｕｓｅ  ｄｏｕｂｌｅ  ｍｉｎｕｔｅ  ２、マウス二重微小染色体２）タンパク質のヒト相同体とｐ５３との相互作用を介している。ＭＤＭ２タンパク質は、プロテアソームによるｐ５３の分解を引き起こすＥ３ユビキチンリガーゼおよびｐ５３転写活性化の阻害剤として機能する。したがって、ＭＤＭ２はｐ５３腫瘍抑制因子の重要な負の調節因子である。ＭＤＭ２阻害剤は、ＭＤＭ２とｐ５３の間の相互作用を阻害し、これによってｐ５３タンパク質のエフェクター機能を発揮させることができる。ＵＭにおいてＴＰ５３の変異は一般的ではない一方、ＵＭ患者におけるＭＤＭ２タンパク質の高発現またはＰＥＲＰタンパク質のダウンレギュレーションのいずれかによってｐ５３経路が不活性化されることを示唆する報告がある。
【０００６】
ＭＤＭ２阻害剤（ヌトリン−３）とｐ５３の再活性化および腫瘍細胞アポトーシスの誘導（ＲＩＴＡ）との組合せは、相乗的に作用すること、およびトポテカンとの組合せは、ＵＭ細胞株において増殖を阻害することが認められている（De Lange J. et al., Oncogene. 2012;31:1105-16）。しかし、ヌトリン−３およびトポテカンは、限局的な方法でのみｉｎ  ｖｉｖｏで腫瘍増殖を遅延させた。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００７】
以下の開示は、ＵＭ処置のため、ｐ５３のみまたはＰＫＣ経路との組合せのいずれかで二重標的とすることに関連する。この方法では、ＭＤＭ２阻害剤は、増殖性疾患の発生に関与する、恐らく下流の生化学的経路、相互依存している生化学的経路、または単に共存している生化学的経路を標的とする別の化合物の有益な効果を促進する。
したがって、少なくとも（Ｓ）−１−（４−クロロ−フェニル）−７−イソプロポキシ−６−メトキシ−２−（４−｛メチル−［４−（４−メチル−３−オキソ−ピペラジン−１−イル）−トランス−シクロヘキシルメチル］−アミノ｝−フェニル）−１，４−ジヒドロ−２Ｈ−イソキノリン−３−オンもしくは薬学的に許容されるその塩、または（Ｓ）−５−（５−クロロ−１−メチル−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−ピリジン−３−イル）−６−（４−クロロ−フェニル）−２−（２，４−ジメトキシ−ピリミジン−５−イル）−１−イソプロピル−５，６−ジヒドロ−１Ｈ−ピロロ［３，４−ｄ］イミダゾール−４−オンもしくは薬学的に許容されるその塩を含有し、任意選択で３−（１．Ｈ．−インドール−３−イル）−４−［２−（４−メチル−ピペラジン−１−イル）−キナゾリン−４−イル］−ピロール−２，５−ジオンもしくは薬学的に許容されるその塩、３−アミノ−Ｎ−（３−（４−アミノ−４−メチルピペリジン−１−イル）ピリジン−２−イル）−６−（３−（トリフルオロメチル）ピリジン−２−イル）ピラジン−２−カルボキサミドもしくは薬学的に許容されるその塩、３−アミノ−Ｎ−（３−（４−アミノピペリジン−１−イル）ピリジン−２−イル）−６−（３−（トリフルオロメトキシ）ピリジン−２−イル）ピラジン−２−カルボキサミドもしくは薬学的に許容されるその塩、または３−アミノ−Ｎ−（３−（４−アミノ−４−メチルピペリジン−１−イル）ピリジン−２−イル）−６−（３−（トリフルオロメトキシ）ピリジン−２−イル）ピラジン−２−カルボキサミドもしくは薬学的に許容されるその塩をさらに含有する医薬組成物が提供される。
【０００８】
具体的には、本開示は、以下の態様、有利な特徴、および以下の項目に記載される特定の実施形態をそれぞれ単独または組合せで提供する：
１．ぶどう膜黒色腫の処置に使用するための、（Ｓ）−１−（４−クロロ−フェニル）−７−イソプロポキシ−６−メトキシ−２−（４−｛メチル−［４−（４−メチル−３−オキソ−ピペラジン−１−イル）−トランス−シクロヘキシルメチル］−アミノ｝−フェニル）−１，４−ジヒドロ−２Ｈ−イソキノリン−３−オンまたは薬学的に許容されるその塩、および（Ｓ）−５−（５−クロロ−１−メチル−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−ピリジン−３−イル）−６−（４−クロロ−フェニル）−２−（２，４−ジメトキシ−ピリミジン−５−イル）−１−イソプロピル−５，６−ジヒドロ−１Ｈ−ピロロ［３，４−ｄ］イミダゾール−４−オンまたは薬学的に許容されるその塩から選択されるマウス二重微小染色体２阻害剤（ＭＤＭ２ｉ）。
２．ＭＤＭ２ｉが、（Ｓ）−１−（４−クロロ−フェニル）−７−イソプロポキシ−６−メトキシ−２−（４−｛メチル−［４−（４−メチル−３−オキソ−ピペラジン−１−イル）−トランス−シクロヘキシルメチル］−アミノ｝−フェニル）−１，４−ジヒドロ−２Ｈ−イソキノリン−３−オンまたは薬学的に許容されるその塩である、項目１に記載のＭＤＭ２ｉ。
３．ＭＤＭ２ｉが、（Ｓ）−５−（５−クロロ−１−メチル−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−ピリジン−３−イル）−６−（４−クロロ−フェニル）−２−（２，４−ジメトキシ−ピリミジン−５−イル）−１−イソプロピル−５，６−ジヒドロ−１Ｈ−ピロロ［３，４−ｄ］イミダゾール−４−オンまたは薬学的に許容されるその塩である、項目１に記載のＭＤＭ２ｉ。
４．
（ｉ）（Ｓ）−１−（４−クロロ−フェニル）−７−イソプロポキシ−６−メトキシ−２−（４−｛メチル−［４−（４−メチル−３−オキソ−ピペラジン−１−イル）−トランス−シクロヘキシルメチル］−アミノ｝−フェニル）−１，４−ジヒドロ−２Ｈ−イソキノリン−３−オンまたは薬学的に許容されるその塩、および（Ｓ）−５−（５−クロロ−１−メチル−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−ピリジン−３−イル）−６−（４−クロロ−フェニル）−２−（２，４−ジメトキシ−ピリミジン−５−イル）−１−イソプロピル−５，６−ジヒドロ−１Ｈ−ピロロ［３，４−ｄ］イミダゾール−４−オンまたは薬学的に許容されるその塩から選択されるＭＤＭ２ｉ、
ならびに、
（ｉｉ）３−（１．Ｈ．−インドール−３−イル）−４−［２−（４−メチル−ピペラジン−１−イル）−キナゾリン−４−イル］−ピロール−２，５−ジオンまたは薬学的に許容されるその塩、３−アミノ−Ｎ−（３−（４−アミノ−４−メチルピペリジン−１−イル）ピリジン−２−イル）−６−（３−（トリフルオロメチル）ピリジン−２−イル）ピラジン−２−カルボキサミドまたは薬学的に許容されるその塩、３−アミノ−Ｎ−（３−（４−アミノピペリジン−１−イル）ピリジン−２−イル）−６−（３−（トリフルオロメトキシ）ピリジン−２−イル）ピラジン−２−カルボキサミドまたは薬学的に許容されるその塩、および３−アミノ−Ｎ−（３−（４−アミノ−４−メチルピペリジン−１−イル）ピリジン−２−イル）−６−（３−（トリフルオロメトキシ）ピリジン−２−イル）ピラジン−２−カルボキサミドまたは薬学的に許容されるその塩から選択される少なくとも１種のプロテインキナーゼＣ経路阻害剤（ＰＫＣｉ）
を含む組合せ医薬。
５．同時に、個別に、または逐次的に使用するための、項目４に記載の組合せ医薬。
少なくとも１種の薬学的に許容される担体をさらに含有する、項目４または５に記載の組合せ医薬。
６．固定された組合せの形態である、項目４から６のいずれか一項に記載の組合せ医薬。
７．組合せ投与のためのパーツのキット（kit of parts）の形態であり、ＭＤＭ２ｉおよびＰＫＣｉが、独立して同時に投与されるか、または所定の時間間隔で個別に投与され、特にこの時間間隔によって組合せパートナーが共同的に治療上活性になる、項目４から７のいずれか一項に記載の組合せ医薬。
８．ＭＤＭ２ｉおよびＰＫＣｉが、ぶどう膜黒色腫の処置のために共同的に治療上有効な量である、項目４から８のいずれか一項に記載の組合せ医薬。
９．組合せ製品の形態である、項目４から９のいずれか一項に記載の組合せ医薬。
１０．ぶどう膜黒色腫の処置に使用するための、項目４から１０のいずれか一項に記載の組合せ医薬。
１１．ぶどう膜黒色腫が転移性ぶどう膜黒色腫である、項目１から３のいずれか一項に記載のＭＤＭ２ｉ、または項目９もしくは１１に記載の組合せ医薬。
１２．ぶどう膜黒色腫が、ぶどう膜黒色腫の転移を含む、項目１から３のいずれか一項に記載のＭＤＭ２ｉ、または項目９、１１もしくは１２に記載の組合せ医薬。
１３．ぶどう膜黒色腫が、機能的なｐ５３または野生型ＴＰ５３を有する、項目１から３、１１もしくは１２のいずれか一項に記載のＭＤＭ２ｉ、または項目９もしくは１１から１３のいずれか一項に記載の組合せ医薬。
１４．ぶどう膜黒色腫または転移性ぶどう膜黒色腫が、グアニンヌクレオチド結合タンパク質Ｇ（ｑ）アルファサブユニット（ＧＮＡＱ）遺伝子またはグアニンヌクレオチド結合タンパク質Ｇ（ｑ）１１サブユニット（ＧＮＡ１１）遺伝子の変異を特徴とする、項目９または１１から１４のいずれか一項に記載の組合せ医薬。
１５．ぶどう膜黒色腫の処置のために、項目４から１５のいずれか一項に記載の組合せ医薬を、同時に、個別に、または逐次的に使用することに関する情報、および／または項目４から１５のいずれか一項に記載の組合せ医薬を、同時に、個別に、または逐次的に投与することを指示するための情報を含むデータキャリアの使用。
１６．ぶどう膜黒色腫または転移性ぶどう膜黒色腫に罹患している患者を処置する方法であって、項目４から１６のいずれか一項に記載の組合せ医薬を、同時に、個別に、または逐次的に患者に投与することを含む方法であり、組合せ医薬の量は、ぶどう膜黒色腫または転移性ぶどう膜黒色腫の処置において治療上有効な量である。
１７．医薬品として併用するための、（ｉ）（Ｓ）−１−（４−クロロ−フェニル）−７−イソプロポキシ−６−メトキシ−２−（４−｛メチル−［４−（４−メチル−３−オキソ−ピペラジン−１−イル）−トランス−シクロヘキシルメチル］−アミノ｝−フェニル）−１，４−ジヒドロ−２Ｈ−イソキノリン−３−オンまたは薬学的に許容されるその塩、および（Ｓ）−５−（５−クロロ−１−メチル−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−ピリジン−３−イル）−６−（４−クロロ−フェニル）−２−（２，４−ジメトキシ−ピリミジン−５−イル）−１−イソプロピル−５，６−ジヒドロ−１Ｈ−ピロロ［３，４−ｄ］イミダゾール−４−オンまたは薬学的に許容されるその塩から選択されるＭＤＭ２ｉ、ならびに（ｉｉ）３−（１．Ｈ．−インドール−３−イル）−４−［２−（４−メチル−ピペラジン−１−イル）−キナゾリン−４−イル］−ピロール−２，５−ジオンまたは薬学的に許容されるその塩、３−アミノ−Ｎ−（３−（４−アミノ−４−メチルピペリジン−１−イル）ピリジン−２−イル）−６−（３−（トリフルオロメチル）ピリジン−２−イル）ピラジン−２−カルボキサミドまたは薬学的に許容されるその塩、３−アミノ−Ｎ−（３−（４−アミノピペリジン−１−イル）ピリジン−２−イル）−６−（３−（トリフルオロメトキシ）ピリジン−２−イル）ピラジン−２−カルボキサミドまたは薬学的に許容されるその塩、および３−アミノ−Ｎ−（３−（４−アミノ−４−メチルピペリジン−１−イル）ピリジン−２−イル）−６−（３−（トリフルオロメトキシ）ピリジン−２−イル）ピラジン−２−カルボキサミドまたは薬学的に許容されるその塩から選択されるＰＫＣｉ。
１８．医薬品として併用するための、ＭＤＭ２ｉが、（Ｓ）−５−（５−クロロ−１−メチル−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−ピリジン−３−イル）−６−（４−クロロ−フェニル）−２−（２，４−ジメトキシ−ピリミジン−５−イル）−１−イソプロピル−５，６−ジヒドロ−１Ｈ−ピロロ［３，４−ｄ］イミダゾール−４−オンまたは薬学的に許容されるその塩であり、ＰＫＣｉが、３−（１．Ｈ．−インドール−３−イル）−４−［２−（４−メチル−ピペラジン−１−イル）−キナゾリン−４−イル］−ピロール−２，５−ジオンまたは薬学的に許容されるその塩である、項目１８に記載のＭＤＭ２ｉ。
１９．医薬品として併用するための、ＭＤＭ２ｉが、（Ｓ）−１−（４−クロロ−フェニル）−７−イソプロポキシ−６−メトキシ−２−（４−｛メチル−［４−（４−メチル−３−オキソ−ピペラジン−１−イル）−トランス−シクロヘキシルメチル］−アミノ｝−フェニル）−１，４−ジヒドロ−２Ｈ−イソキノリン−３−オンまたは薬学的に許容されるその塩であり、ＰＫＣｉが、３−（１．Ｈ．−インドール−３−イル）−４−［２−（４−メチル−ピペラジン−１−イル）−キナゾリン−４−イル］−ピロール−２，５−ジオンまたは薬学的に許容されるその塩である、項目１８に記載のＭＤＭ２ｉ。
２０．医薬品として併用するための、ＭＤＭ２ｉが、（Ｓ）−５−（５−クロロ−１−メチル−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−ピリジン−３−イル）−６−（４−クロロ−フェニル）−２−（２，４−ジメトキシ−ピリミジン−５−イル）−１−イソプロピル−５，６−ジヒドロ−１Ｈ−ピロロ［３，４−ｄ］イミダゾール−４−オンまたは薬学的に許容されるその塩であり、ＰＫＣｉが、３−アミノ−Ｎ−（３−（４−アミノ−４−メチルピペリジン−１−イル）ピリジン−２−イル）−６−（３−（トリフルオロメチル）ピリジン−２−イル）ピラジン−２−カルボキサミドまたは薬学的に許容されるその塩である、項目１８に記載のＭＤＭ２ｉ。
２１．医薬品として併用するための、ＭＤＭ２ｉが、（Ｓ）−１−（４−クロロ−フェニル）−７−イソプロポキシ−６−メトキシ−２−（４−｛メチル−［４−（４−メチル−３−オキソ−ピペラジン−１−イル）−トランス−シクロヘキシルメチル］−アミノ｝−フェニル）−１，４−ジヒドロ−２Ｈ−イソキノリン−３−オンまたは薬学的に許容されるその塩であり、ＰＫＣｉが、３−アミノ−Ｎ−（３−（４−アミノ−４−メチルピペリジン−１−イル）ピリジン−２−イル）−６−（３−（トリフルオロメチル）ピリジン−２−イル）ピラジン−２−カルボキサミドまたは薬学的に許容されるその塩である、項目１８に記載のＭＤＭ２ｉ。
２２．医薬品として併用するための、ＭＤＭ２ｉが、（Ｓ）−１−（４−クロロ−フェニル）−７−イソプロポキシ−６−メトキシ−２−（４−｛メチル−［４−（４−メチル−３−オキソ−ピペラジン−１−イル）−トランス−シクロヘキシルメチル］−アミノ｝−フェニル）−１，４−ジヒドロ−２Ｈ−イソキノリン−３−オンまたは薬学的に許容されるその塩であり、ＰＫＣｉが、３−アミノ−Ｎ−（３−（４−アミノピペリジン−１−イル）ピリジン−２−イル）−６−（３−（トリフルオロメトキシ）ピリジン−２−イル）ピラジン−２−カルボキサミドまたは薬学的に許容されるその塩である、項目１８に記載のＭＤＭ２ｉ。
２３．医薬品として併用するための、ＭＤＭ２ｉが、（Ｓ）−５−（５−クロロ−１−メチル−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−ピリジン−３−イル）−６−（４−クロロ−フェニル）−２−（２，４−ジメトキシ−ピリミジン−５−イル）−１−イソプロピル−５，６−ジヒドロ−１Ｈ−ピロロ［３，４−ｄ］イミダゾール−４−オンまたは薬学的に許容されるその塩であり、ＰＫＣｉが、３−アミノ−Ｎ−（３−（４−アミノピペリジン−１−イル）ピリジン−２−イル）−６−（３−（トリフルオロメトキシ）ピリジン−２−イル）ピラジン−２−カルボキサミドまたは薬学的に許容されるその塩である、項目１８に記載のＭＤＭ２ｉ。
２４．医薬品として併用するための、ＭＤＭ２ｉが、（Ｓ）−１−（４−クロロ−フェニル）−７−イソプロポキシ−６−メトキシ−２−（４−｛メチル−［４−（４−メチル−３−オキソ−ピペラジン−１−イル）−トランス−シクロヘキシルメチル］−アミノ｝−フェニル）−１，４−ジヒドロ−２Ｈ−イソキノリン−３−オンまたは薬学的に許容されるその塩であり、ＰＫＣｉが、３−アミノ−Ｎ−（３−（４−アミノ−４−メチルピペリジン−１−イル）ピリジン−２−イル）−６−（３−（トリフルオロメトキシ）ピリジン−２−イル）ピラジン−２−カルボキサミドまたは薬学的に許容されるその塩である、項目１８に記載のＭＤＭ２ｉ。
２５．医薬品として併用するための、ＭＤＭ２ｉが、（Ｓ）−５−（５−クロロ−１−メチル−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−ピリジン−３−イル）−６−（４−クロロ−フェニル）−２−（２，４−ジメトキシ−ピリミジン−５−イル）−１−イソプロピル−５，６−ジヒドロ−１Ｈ−ピロロ［３，４−ｄ］イミダゾール−４−オンまたは薬学的に許容されるその塩であり、ＰＫＣｉが、３−アミノ−Ｎ−（３−（４−アミノ−４−メチルピペリジン−１−イル）ピリジン−２−イル）−６−（３−（トリフルオロメトキシ）ピリジン−２−イル）ピラジン−２−カルボキサミドまたは薬学的に許容されるその塩である、項目１８に記載のＭＤＭ２ｉ。
２６．ＭＤＭ２ｉが、（Ｓ）−１−（４−クロロ−フェニル）−７−イソプロポキシ−６−メトキシ−２−（４−｛メチル−［４−（４−メチル−３−オキソ−ピペラジン−１−イル）−トランス−シクロヘキシルメチル］−アミノ｝−フェニル）−１，４−ジヒドロ−２Ｈ−イソキノリン−３−オンまたは薬学的に許容されるその塩である、項目４から１４のいずれか一項に記載の組合せ医薬、項目１５に記載のデータキャリアの使用、項目１６に記載の患者を処置する方法。
２７．ＭＤＭ２ｉが、（Ｓ）−５−（５−クロロ−１−メチル−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−ピリジン−３−イル）−６−（４−クロロ−フェニル）−２−（２，４−ジメトキシ−ピリミジン−５−イル）−１−イソプロピル−５，６−ジヒドロ−１Ｈ−ピロロ［３，４−ｄ］イミダゾール−４−オンまたは薬学的に許容されるその塩である、項目４から１５のいずれか一項に記載の組合せ医薬、項目１６に記載のデータキャリアの使用、項目１７に記載の患者を処置する方法。
２８．ＰＫＣｉが、３−（１．Ｈ．−インドール−３−イル）−４−［２−（４−メチル−ピペラジン−１−イル）−キナゾリン−４−イル］−ピロール−２，５−ジオンまたは薬学的に許容されるその塩である、項目４から１５のいずれか一項に記載の組合せ医薬、項目１６に記載のデータキャリアの使用、項目１７に記載の患者を処置する方法。
２９．ＰＫＣｉが、３−アミノ−Ｎ−（３−（４−アミノ−４−メチルピペリジン−１−イル）ピリジン−２−イル）−６−（３−（トリフルオロメチル）ピリジン−２−イル）ピラジン−２−カルボキサミドまたは薬学的に許容されるその塩である、項目４から１５のいずれか一項に記載の組合せ医薬、項目１６に記載のデータキャリアの使用、項目１７に記載の患者を処置する方法。
３０．ＰＫＣｉが、３−アミノ−Ｎ−（３−（４−アミノピペリジン−１−イル）ピリジン−２−イル）−６−（３−（トリフルオロメトキシ）ピリジン−２−イル）ピラジン−２−カルボキサミドまたは薬学的に許容されるその塩である、項目４から１５のいずれか一項に記載の組合せ医薬、項目１６に記載のデータキャリアの使用、項目１７に記載の患者を処置する方法。
３１．ＰＫＣｉが、３−アミノ−Ｎ−（３−（４−アミノ−４−メチルピペリジン−１−イル）ピリジン−２−イル）−６−（３−（トリフルオロメトキシ）ピリジン−２−イル）ピラジン−２−カルボキサミドまたは薬学的に許容されるその塩である、項目４から１５のいずれか一項に記載の組合せ医薬、項目１６に記載のデータキャリアの使用、項目１７に記載の患者を処置する方法。
【図面の簡単な説明】
【０００９】
【図１】ＵＭ細胞株の大半に細胞死が生じるＰＫＣおよびＭＤＭ２の共阻害。（Ａ）化合物Ｃ（ＰＫＣの阻害）および化合物Ａ（ＭＤＭ２の阻害）をそれぞれ最終濃度５００ｎＭおよび１μＭで使用した。化合物Ａまたは／および化合物Ｃによる処置下での増殖曲線。細胞生存率を３日ごとに測定し、６日目に化合物を交換した。すべての細胞株はＧＮＡＱ／１１変異を有していた。３回の平均値には±ＳＥＭを表示した。（Ｂ）ＧＮＡＱ／１１変異のない対照細胞株。
【図２】ＵＭ細胞株の大半に細胞死が生じるＰＫＣおよびＭＤＭ２の共阻害。ウェスタンブロットによる分子分析。アポトーシスをｃＰＡＲＰによって評価した。ｐＭＡＲＣＫＳおよびｐＰＫＣｄを、化合物Ｃの活性に対する薬力学的マーカーとして使用し、ｐ５３およびｐ２１を、化合物Ａの活性に対する薬力学的マーカーとして使用した。
【図３】化合物Ａと化合物Ｃの組合せのｉｎ  ｖｉｔｒｏ評価。検討したすべての細胞株を相乗効果スコア（synergy score）順に並べたヒストグラム。右側：ドットプロットは、検討したすべての細胞株のＡｍａｘ値（ｙ軸）および相乗効果スコア（ｘ軸）を示す。
【図４】５種のＵＭのＰＤＸにおける化合物Ａと化合物Ｃの組合せのｉｎ  ｖｉｖｏでの有効性。腫瘍増殖は、各群のＲＴＶ（相対的腫瘍体積）の平均値±ＳＤをプロットすることによって評価した。
【図５】５種のＵＭのＰＤＸにおける化合物Ａおよび化合物Ｃのｉｎ  ｖｉｖｏでの有効性。化合物Ａおよび化合物Ｃで処置したマウスの全奏効率（ＯＲＲ）を、次の式：［（Ｖｔ／Ｖｃ）−１］（式中、ＶｔおよびＶｃは、それぞれ処置終了に相当する時点における、処置したマウスの腫瘍体積および対応する対照群の腫瘍体積の中央値である）で算出された化合物Ａおよび化合物Ｃのぞれぞれで処置したマウスの相対的腫瘍体積の変化（ＲＴＶＶ）として定義した。
【図６】化合物Ｂに関する特定の用量反応曲線。化合物Ｂを様々なＵＭ細胞株に対して検討し、各用量反応曲線を表示した。
【図７】ＵＭ９２．１細胞株において、ＰＫＣ阻害剤である化合物ＣをＭｄｍ２阻害剤である化合物Ｂと組み合わせることによる、増殖に対するｉｎ  ｖｉｔｒｏでの効果。ここに示すのは、ＵＭ細胞株において、化合物Ｂと化合物Ｃの組合せに対する増殖阻害およびＬｏｅｗｅ（ＡＤＤ）過剰阻害に関するマトリックスである。この組合せによって、相乗的増殖抑制効果が得られた（相乗効果スコア＝２．４２）。
【図８】ＵＭ９２．１細胞株において、ＰＫＣ阻害剤である化合物ＤをＭｄｍ２阻害剤である化合物Ｂと組み合わせることによる、増殖に対するｉｎ  ｖｉｔｒｏでの効果。ここに示すのは、ＵＭ細胞株において、化合物Ｂと化合物Ｄの組合せに対する増殖阻害およびＬｏｅｗｅ（ＡＤＤ）過剰阻害に関するマトリックスである。この組合せによって、相乗的増殖抑制効果が得られた（相乗効果スコア＝２．２４）。
【発明を実施するための形態】
【００１０】
サンプル化合物を用いて成功した実験に基づき、特定のＭＤＭ２阻害剤（Ｍｄｍ２ｉ）をＰＫＣ阻害剤（ＰＫＣｉ）と組み合わせることによって、ぶどう膜黒色腫を処置するための有効な方法が得られると断定した。本開示は、ぶどう膜黒色腫の処置に使用する特定のＭＤＭ２阻害剤（Ｍｄｍ２ｉ）を提供する。本開示は、（ｉ）式Ｉもしくは式ＩＩのＭＤＭ２阻害剤（Ｍｄｍ２ｉ）または薬学的に許容されるその塩および（ｉｉ）式ＩＩＩ、式ＩＶ、式Ｖ、もしくは式ＶＩのＰＫＣ阻害剤または薬学的に許容されるその塩を含む組合せ医薬も提供する。
【００１１】
本開示は、好ましくはＵＭ患者に対し、単剤および組合せで使用する場合、増殖抑制活性を示す化合物に関する。当然、本方法は、前記化合物の投与または併用投与によって増殖性疾患を処置する方法に関する。
【００１２】
本開示は、（ｉ）式Ｉもしくは式ＩＩのＭＤＭ２阻害剤または薬学的に許容されるその塩および（ｉｉ）式ＩＩＩ、式ＩＶ、式Ｖ、もしくは式ＶＩのＰＫＣ阻害剤（ＰＫＣｉ）または薬学的に許容されるその塩を含む組合せ医薬を提供する。
【００１３】
ｐ５３を単独でまたはＰＫＣ経路と組み合わせて標的とすることによって、本明細書で提供される医薬組成物および組合せ医薬が、驚くべきことに、ＵＭまたは転移性ＵＭの処置に有用であることを発見した。本明細書に記載されている医薬組成物ならびに医薬の組合および／または投与計画は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏでの細胞死、腫瘍の安定化、さらにはｉｎ  ｖｉｖｏでの腫瘍退縮の誘導を引き起こし、ある組合せでは、ｉｎ  ｖｉｖｏでの腫瘍の縮小率が驚くほど高かった。
【００１４】
ＭＤＭ２阻害剤は、式Ｉの（Ｓ）−１−（４−クロロ−フェニル）−７−イソプロポキシ−６−メトキシ−２−（４−｛メチル−［４−（４−メチル−３−オキソ−ピペラジン−１−イル）−トランス−シクロヘキシルメチル］−アミノ｝−フェニル）−１，４−ジヒドロ−２Ｈ−イソキノリン−３−オン（化合物Ａ）であってよい：
【００１５】
【化１】
2018522936.tif 000002
【００１６】
式Ｉの化合物Ａは、国際公開第２０１１／０７６７８６号に記載されるとおりに調製することができる。
【００１７】
ＭＤＭ２阻害剤は、式ＩＩの（Ｓ）−５−（５−クロロ−１−メチル−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−ピリジン−３−イル）−６−（４−クロロ−フェニル）−２−（２，４−ジメトキシ−ピリミジン−５−イル）−１−イソプロピル−５，６−ジヒドロ−１Ｈ−ピロロ［３，４−ｄ］イミダゾール−４−オン（化合物Ｂ）であってもよい：
【００１８】
【化２】
2018522936.tif 000003
【００１９】
式ＩＩの化合物は、国際公開第２０１３／１１１１０５号に記載されるとおりに調製することができ、本組合せ医薬に使用されるのに好ましい化合物でもある。
【００２０】
本発明の組合せ医薬における組合せパートナーとして、ＰＫＣ阻害剤は、式ＩＩＩの３−（１．Ｈ．−インドール−３−イル）−４−［２−（４−メチル−ピペラジン−１−イル）−キナゾリン−４−イル］−ピロール−２，５−ジオン（化合物Ｃ）であってよい：
【００２１】
【化３】
2018522936.tif 000004
【００２２】
式ＩＩＩの化合物は、国際公開第０２／３８５６１号に記載されるとおりに調製することができる。
【００２３】
本明細書で用いるＰＫＣ阻害剤は、式ＩＶの３−アミノ−Ｎ−（３−（４−アミノ−４−メチルピペリジン−１−イル）ピリジン−２−イル）−６−（３−（トリフルオロメチル）ピリジン−２−イル）ピラジン−２−カルボキサミド（化合物Ｄ）であってもよい：
【００２４】
【化４】
2018522936.tif 000005
【００２５】
Ｍｄｍ２ｉとの組合せに用いる別の考えられるＰＫＣ阻害剤は、式Ｖの３−アミノ−Ｎ−（３−（４−アミノピペリジン−１−イル）ピリジン−２−イル）−６−（３−（トリフルオロメトキシ）ピリジン−２−イル）ピラジン−２−カルボキサミド（化合物Ｅ）である：
【００２６】
【化５】
2018522936.tif 000006
【００２７】
本明細書で用いる別のＰＫＣ阻害剤は、式ＶＩの３−アミノ−Ｎ−（３−（４−アミノ−４−メチルピペリジン−１−イル）ピリジン−２−イル）−６−（３−（トリフルオロメトキシ）ピリジン−２−イル）ピラジン−２−カルボキサミド（化合物Ｆ）であってもよい：
【００２８】
【化６】
2018522936.tif 000007
【００２９】
式ＩＶ、Ｖ、およびＶＩの化合物は、国際出願番号ＰＣＴ／ＩＢ２０１５／０５５９５１に記載されるとおりに調製することができる。
【００３０】
本開示は、本明細書に提示される開示によると有用な化合物の薬学的に許容されるすべての塩を含む実施形態を包含する。本明細書で用いる場合、「薬学的に許容される塩」は、既存の酸または塩基部分をその塩の形態に変換することよって親化合物を改変する開示された化合物の誘導体を指す。薬学的に許容される塩の例として、以下に限定されないが、アミンなどの塩基性残基の無機酸または有機酸の塩、カルボン酸などの酸性残基のアルカリ塩または有機塩などが含まれる。本開示の薬学的に許容される塩として、例えば、非毒性の無機酸または有機酸から形成される、親化合物の従来の非毒性塩が含まれる。本開示の薬学的に許容される塩は、従来の化学的方法によって、塩基性または酸性部分を含む親化合物から合成することができる。通常、このような塩は、水中もしくは有機溶媒中またはその２つの混合液中で（通常、エーテル、酢酸エチル、エタノール、イソプロパノール、またはアセトニトリルなどの非水性媒体が好ましい）、これらの化合物の遊離酸または遊離塩基の形態を、適切な塩基または酸の化学量論量と反応させることによって調製することができる。適当な塩の一覧は、Remington’s Pharmaceutical Sciences, 17thed., Mack Publishing Company, Easton, Pa., 1985, p. 1418およびJournal of Pharmaceutical Science, 66, 2 (1977)に記載されており、各文献は、参照によってその全体が本明細書に組み込まれる。例えば、塩は、硫酸塩または重硫酸塩である。
【００３１】
化合物、特に化合物Ｄ、Ｅ、およびＦ（すなわち、それぞれ式ＩＶ、Ｖ、およびＶＩ）は、薬学的に許容されるプロドラッグの形態であってよい。本明細書で用いる場合、「薬学的に許容されるプロドラッグ」という用語は、可能な場合、本開示の化合物の双性イオン形態と同様に、健全な医学的判断の範囲内で、過度の毒性、刺激、アレルギー反応などを伴うことなく、ヒトおよび下等動物の組織と接触させて使用するために適当であり、妥当な利益／リスク比に見合った、かつそれらの意図された使用に有効な本発明の化合物のプロドラッグを指す。「プロドラッグ」という用語は、ｉｎ  ｖｉｖｏ、例えば、血中での加水分解によって速やかに変換され、上記の式の親化合物が得られる化合物を指す。詳細な検討は、T. Higuchi and V. Stella, Pro-drugs as Novel Delivery Systems, Vol. 14 of the A.C.S. Symposium SeriesおよびEdward B. Roche, ed., Bioreversible Carriers in Drug Design, American Pharmaceutical Association and Pergamon Press, 1987に記載されており、両文献は、参照によって本明細書に組み込まれる。
【００３２】
本明細書で用いる場合、「薬学的に許容される」という語句は、健全な医学的判断の範囲内で、過度の毒性、刺激、アレルギー反応、または他の異常もしくは合併症を伴うことなく、ヒトおよび動物の組織と接触させて使用するために適当であり、妥当な利益／リスク比に見合った、化合物、材料、組成物、および／または剤形を指す。
【００３３】
本明細書に記載されている化合物、例えば、ＭＤＭ２阻害剤および／またはＰＫＣ阻害剤は、特に、以下に定義される追加の助剤を任意選択で含んでよい組合せ医薬に使用するため、組み合わせて使用するように意図されている。これらすべての材料は、組合せ中の「有効成分」と言える。両方の用語（例えば、化合物および有効成分）は、これらの材料の薬学的に許容される塩、プロドラッグ、互変異性体、Ｎ−酸化物、または水和物などの溶媒和物を包含すると理解されるべきである。本開示を読むにあたり、本出願の組合せは、前述のすべての異形体（variants）、さらにその異形体のいずれか１種単独または２種以上であってこのような異形体すべてではない組合せを包含すると理解されるべきである。
【００３４】
本開示は、それを必要とする患者の処置に使用するための、（ｉ）式Ｉもしくは式ＩＩのＭＤＭ２阻害剤または薬学的に許容されるその塩および（ｉｉ）式ＩＩＩ、式ＩＶ、式Ｖ、もしくは式ＶＩのＰＫＣ阻害剤または薬学的に許容されるその塩を含む組合せ医薬を提供する。本明細書に記載されている化合物から成る組合せ医薬は、ぶどう膜黒色腫（ＵＭ）患者の処置に使用することができる。ぶどう膜黒色腫は転移性ＵＭであってもよい。代わりに、組合せは、ＵＭの転移を標的とするために使用することもできる。特に、組合せは、ＵＭまたは転移性ＵＭ患者であって、ＵＭが機能的なｐ５３または野生型ＴＰ５３を有する、患者の処置に適している。癌のこのようなタンパク質または遺伝子の状態によって、前記癌の患者が、本開示の組合せに対し、より一層応答するようになることが期待される。同様に、ＧＮＡＱまたはＧＮＡ１１遺伝子のいずれかにおける変異を特徴とする、その転移を含むぶどう膜黒色腫または転移性ぶどう膜黒色腫における組合せの効果は、さらに向上することが期待される。機能的なｐ５３または野生型ＴＰ５３およびＧＮＡＱまたはＧＮＡ１１遺伝子のいずれかにおける変異を有する患者において、臨床的応答は、最も顕著であることが期待される。したがって、本開示の組合せ医薬は、ＵＭ転移を含むＵＭまたは転移性ＵＭの患者であって、ＵＭが機能的なｐ５３または野生型ＴＰ５３を有し、ＧＮＡＱまたはＧＮＡ１１遺伝子のいずれかにおける変異を特徴とする、患者の処置に使用するために最も適している。
【００３５】
本開示は、組合せ医薬、特に、本明細書に記載されている１種または複数の化合物および少なくとも１種の薬学的に許容される担体を含有する組合せ医薬製品にも関する。
【００３６】
本明細書で用いる場合、「組合せ医薬（pharmaceutical combination）」という用語は、２種以上の有効成分の使用もしくは混合または組合せで得られる製品を意味する。本明細書で用いる場合、組合せ医薬は、有効成分の固定された組合せおよび固定されていない組合せの両方を含むと理解されるべきである。「固定された組合せ（fixed combination）」という用語は、有効成分、例えば、式（Ｉ）の化合物および１種または複数の組合せパートナーが、単一のものまたは投与剤形として同時に患者に投与されることを意味する。このような場合において用語は、１単位の投与形態に含まれる固定用量の組合せを指す。「固定されていない組合せ（non-fixed combination）」または「パーツのキット」という用語は共に、有効成分、例えば、本開示の化合物ならびに１種もしくは複数の組合せパートナーおよび／または１種もしくは複数の助剤が、具体的な時間制限なしに、特に、組合せパートナーが協同効果、例えば、相乗効果を示す時間間隔で、同時に、並行して、または逐次的にのいずれかで、複数の個別のものとして独立して患者に投与されるまたは併用投与されることを意味し、このような投与によって、患者の体内で２種の化合物の治療上有効な濃度が得られる。「固定されていない組合せ」という用語は、カクテル療法、例えば、３種以上の有効成分の投与にも適用する。したがって、「固定されていない組合せ」という用語は、本明細書に記載されている化合物を、互いに独立して、すなわち、同時にまたは異なる時点で投与することができるという意味で、特に、投与、使用、組成物、または製剤を定義する。「固定されていない組合せ」という用語は、単剤を、異なる量の有効成分をその中に含有する、それぞれ独立した製剤の１種または複数の固定された組合せの製品と一緒に使用することも包含すると理解されるべきである。「固定されていない組合せ」という用語と同様に、本明細書に記載されている組合せ製品は、有効成分（本明細書に記載されている化合物を含む）を包含し、組合せパートナーが、互いに独立して販売されてもいる完全に別々の医薬剤形または医薬製剤として投与されることも理解されるべきである。固定されていない組合せの使用説明書は、例えば、リーフレットもしくは同様のものを包装に同封することで、または医師および／もしくは医療スタッフに提供される他の情報で提供され、または提供されてもよい。このため、独立した製剤、または製剤、製品もしくは組成物のパーツは、同時に投与することができ、または経時的にずらして投与すること、すなわちパーツのキットの各パーツはそれぞれ、パーツのキットの任意のパーツと異なる時点および／または等しいもしくは様々な時間間隔で投与することができる。特に、投与の時間間隔は、パーツを組み合わせて使用することによって処置する疾患に対する効果が、化合物Ｉ〜ＩＶのうちの１つのみを使用することによって得られる効果より大きく／より有効となるように選択される；したがって、本明細書に記載されている組合せ医薬に用いられる化合物は、共同的に活性となる。組合せ医薬として投与される式ＩまたはＩＩの化合物と式ＩＩＩ〜ＶＩの化合物の総量の比は、処置する特定の患者亜群の必要性または、例えば、患者の年��、性別、体重などによって生じ得る単独の患者の必要性により良く適応させるため、変更または調整することができる。
【００３７】
本明細書で用いる場合、「併用投与」または「組合せ投与」という用語または同様のものは、本明細書に記載されている１種または複数の化合物を、選択された組合せパートナーと一緒に、その必要がある単独の対象（例えば、患者または対象）に投与することを包含する意味があり、また、本化合物は、必ずしも同じ投与経路でおよび／または同時に投与されない処置方法を含むことを意図する。
【００３８】
本明細書で定義される「医薬組成物」という用語は、温血動物に影響する特定の疾患または状態を予防または処置するため、温血動物、例えば、哺乳動物またはヒトに投与される、少なくとも１つの有効成分または治療薬を含有する混合物または溶液（エマルジョンはどうか）を指す。
【００３９】
本明細書で定義される「パーツのキット」という用語は、特に、前述で定義した組合せパートナーである（ｉ）および（ｉｉ）を指し、すなわち、（Ｓ）−１−（４−クロロ−フェニル）−７−イソプロポキシ−６−メトキシ−２−（４−｛メチル−［４−（４−メチル−３−オキソ−ピペラジン−１−イル）−トランス−シクロヘキシルメチル］−アミノ｝−フェニル）−１，４−ジヒドロ−２Ｈ−イソキノリン−３−オンまたは薬学的に許容されるその塩および（Ｓ）−５−（５−クロロ−１−メチル−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−ピリジン−３−イル）−６−（４−クロロ−フェニル）−２−（２，４−ジメトキシ−ピリミジン−５−イル）−１−イソプロピル−５，６−ジヒドロ−１Ｈ−ピロロ［３，４−ｄ］イミダゾール−４−オンまたは薬学的に許容されるその塩から選択されるＭＤＭ２ｉである（ｉ）、ならびに３−（１．Ｈ．−インドール−３−イル）−４−［２−（４−メチル−ピペラジン−１−イル）−キナゾリン−４−イル］−ピロール−２，５−ジオンまたは薬学的に許容されるその塩、３−アミノ−Ｎ−（３−（４−アミノ−４−メチルピペリジン−１−イル）ピリジン−２−イル）−６−（３−（トリフルオロメチル）ピリジン−２−イル）ピラジン−２−カルボキサミドまたは薬学的に許容されるその塩、３−アミノ−Ｎ−（３−（４−アミノピペリジン−１−イル）ピリジン−２−イル）−６−（３−（トリフルオロメトキシ）ピリジン−２−イル）ピラジン−２−カルボキサミドまたは薬学的に許容されるその塩、および３−アミノ−Ｎ−（３−（４−アミノ−４−メチルピペリジン−１−イル）ピリジン−２−イル）−６−（３−（トリフルオロメトキシ）ピリジン−２−イル）ピラジン−２−カルボキサミドまたは薬学的に許容されるその塩から選択される少なくとも１つのプロテインキナーゼＣ経路阻害剤（ＰＫＣｉ）である（ｉｉ）は、単独で投与することができる、または区別された量の組合せパートナーである（ｉ）および（ｉｉ）との様々な固定された組合せによって、すなわち、同時にまたは異なる時点で投与することができる。このため、パーツのキットのパーツは、例えば、同時に投与することができ、または経時的にずらして、すなわちパーツのキットの任意のパーツと異なる時点および等しいまたは様々な時間間隔で投与することができる。組合せ製剤として投与される組合せパートナー（ｉ）と組合せパートナー（ｉｉ）の総量の比は、例えば、処置する患者亜群の必要性または単独の患者の必要性に適応させるため、変更することができる。
任意の開示された実施形態における組合せパートナーＩ〜ＶＩは、共同的に（予防上または特に治療上）活性となるように製剤化され、または使用されることが好ましい。このことは、具体的には、少なくとも１つの有益な効果があることを意味し、例えば、組合せパートナーＩ〜ＶＩの効果が相互に増強すること、具体的には、相乗効果、例えば、相加効果を上回る効果、追加の有利な効果（例えば、どの単独の化合物にも認められていないさらなる治療効果）、少ない副作用、組合せパートナーＩ〜ＶＩの片方または両方の非有効量での組合せによる治療効果、および非常に好ましくは、組合せパートナーＩ〜ＶＩの明瞭な相乗効果である。
【００４０】
「共同的に治療上活性な（jointly therapeutically active）」または「共同的な治療効果（jointly therapeutic effect）」という用語は、治療薬、例えば、有効成分が、経時的にずらした方法、特に、好ましい時間間隔による順序の特異的な方法のいずれかで、処置される温血動物、特にヒトに投与される場合、好ましくは相乗的な相互作用（共同的な治療効果）を示すことを意味する。この場合に当たるかどうかは、特に、両方の化合物が、処置されるヒトの血中に少なくとも特定の時間間隔の間存在することを示す、血中濃度を追跡することによって判断され得る。
【００４１】
本明細書で用いる場合、「患者」または「対象」という用語は動物を指す。通常、動物は哺乳動物である。患者は、例えば、霊長類（例えば、ヒト）、ウシ、ヒツジ、ヤギ、ウマ、イヌ、ネコ、ウサギ、ラット、マウス、魚類、鳥類などをも指す。特定の実施形態において、患者は霊長類である。さらに他の実施形態において、患者はヒトである。
【００４２】
本明細書で用いる場合、「担体」または「薬学的に許容される担体」という用語は、当業者に知られているように（例えば、Remington's Pharmaceutical Sciences, 18th Ed. Mack Printing Company, 1990, pp. 1289- 1329参照）、任意のおよびすべての溶媒、分散媒、コーティング剤、界面活性剤、抗酸化剤、保存剤（例えば、抗菌剤、抗真菌剤）、等張剤、吸収遅延剤、塩、保存剤、薬剤、薬物安定剤、結合剤、添加物、崩壊剤、滑沢剤、甘味剤、香料、着色料など、およびその組合せを含む。任意の従来の担体が有効成分と不適合である限りを除き、治療用組成物または医薬組成物におけるその使用が検討される。
【００４３】
本開示に記載の組合せ医薬製品（固定された組合せもしくは固定されていない組合せとしてまたはパーツのキットとして、例えば、固定された組合せおよび／または組合せパートナーの片方もしくは両方の個別の製剤の組合せとして、または組合せパートナーの個別の製剤のキットとして）は、本開示の組合せおよび１種または複数の薬学的に許容される担体材料（担体、添加物）を含む。組合せ医薬またはそれを構成している組合せパートナーは、経口投与、非経口投与、および直腸投与などの特定の投与経路のために製剤化することができる。さらに、本開示の組合せ製品は、固形剤形（カプセル剤、錠剤、丸薬、顆粒剤、散剤、または坐剤を含むが、これらに限定されるものではない）、または液体剤形（溶液、懸濁剤、またはエマルジョンを含むが、これらに限定されるものではない）に形成することができる。組合せ製品および／またはその組合せパートナー（化合物、有効成分）は、滅菌などの従来の製薬工程を用いることができ、かつ／または保存剤、安定剤、湿潤剤、乳化剤、および緩衝液などのアジュバントに加え、従来の不活性希釈剤、潤滑剤、または緩衝剤を含有することができる。
【００４４】
本開示は、組合せ製剤、または医薬の固定された組合せもしくはこのような製剤および組合せの組合せなど、同時にまたは逐次的に使用する組合せ製品に関する。
【００４５】
本開示の併用療法において、本開示によると有用な化合物は、同じまたは異なる製造業者によって製造および／または製剤化が行われてよい。さらに、組合せパートナーは、併用療法で一緒に使用されることがある：（ｉ）医師に組合せ製品が発売される前（例えば、本開示の化合物および他の治療薬を含むキットの場合）、（ｉｉ）投与直前に医師自身によって（または医師の指導の下）、（ｉｉｉ）患者自身で、例えば、本開示の化合物および他の治療薬の逐次投与の際。
【００４６】
本組合せまたはぶどう膜黒色腫の処置における上記および下記のとおりのその使用に関する情報は、例えば、製品情報リーフレット、製品特性の概要、パンフレット、マーケティング資料、ウェブページ、またはこのような情報が、例えば、コンピュータ、ＵＳＢスティックまたはＣＤなどのデータキャリアに保存または使用されている場合など、データキャリアで提示することができる。（ｉ）式Ｉもしくは式ＩＩのＭＤＭ２ｉまたは薬学的に許容されるその塩、および（ｉｉ）式ＩＩＩ、式ＩＶ、式Ｖ、もしくは式ＶＩのＰＫＣｉまたは薬学的に許容されるその塩を、同時にまたは逐次的に使用することに関する情報を含むデータキャリアが開示されている。データキャリアは、例えば、製品情報リーフレットまたはラベル、包装、パンフレット、もしくはウェブページの指導といった形式で、（ｉ）式Ｉもしくは式ＩＩのＭＤＭ２ｉまたは薬学的に許容されるその塩、および（ｉｉ）式ＩＩＩ、式ＩＶ、式Ｖ、もしくは式ＶＩのＰＫＣｉまたは薬学的に許容されるその塩を、癌の処置のために、同時にまたは逐次的に投与するための指導に使用され得る。データキャリアは、２つの組合せパートナーが、一緒に製剤化されておらず、個別に提供または販売されている場合に特に有用である。パートナーそれぞれは、本開示の組合せ医薬における組合せパートナーの使用の可能性について情報をもたらすまたは指示するデータキャリアと一緒に提供されてよく、またはデータキャリアを取り外しても、別々に提供されてもよい。データキャリアは、両方のパートナーが一緒に提供もしくは販売される、固定された組合せまたは状態の場合でも同じ目的で使用することができる。
【００４７】
特定の実施形態において、上記の組合せ医薬、使用、投与、組成物、方法、製品、または製剤のいずれかは、１種または複数の（例えば、３種）他の助剤をさらに投与することを含む。
【００４８】
したがって、本開示は、追加の実施形態において、組合せ医薬、特に治療上有効な量の（ｉ）ＭＤＭ２ｉおよび（ｉｉ）ＰＫＣｉ、またはそれぞれ薬学的に許容されるその塩、ならびに治療効果のある薬剤（本明細書で「追加の助剤」を意味する）、例えば、別の有効成分を少なくとも３分の１含有する医薬組成物または製品に関する。追加の助剤は、好ましくは、抗癌剤および抗炎症剤から成る群から選択され、特には、抗癌剤である。
【００４９】
本開示に記載の対応する組合せ医薬を一緒に形成する組合せパートナー（例えば、本明細書に記載されている各化合物）は、固定されている医薬組成物を形成するために混合してよく、または個別にもしくはほぼ同時（すなわち、他の原薬（複数可）の前、それと同時、その後）に投与してもよい。
【００５０】
本出願の組合せ医薬を含有する医薬組成物は、有効成分を１種または複数の公知の担体、例えば、
ａ）希釈剤、例えば、ラクトース、デキストロース、スクロース、マンニトール、ソルビトール、セルロースおよび／またはグリシン、
ｂ）滑沢剤、例えば、シリカ、タルク、ステアリン酸、そのマグネシウム塩もしくはカルシウム塩、および／またはポリエチレングリコール、さらに錠剤用に、
ｃ）結合剤、例えば、ケイ酸アルミウニムマグネシウム、デンプンペースト、ゼラチン、トラガカント、メチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウムおよび／またはポリビニルピロリドン、所望とあれば
ｄ）崩壊剤、例えば、デンプン、寒天、アルギン酸もしくはそのナトリウム塩、または発泡性混合物、ならびに
ｅ）吸収剤、着色剤、香料、および甘味剤
から成る群から選択される１種または複数の担体と一緒に含有する錠剤またはゼラチンカプセルであってよい。
【００５１】
錠剤は、当該分野に周知の方法によって、フィルムコーティングまたは腸溶コーティングされてよい。
【００５２】
経口投与用の適当な組成物は、特に、有効量の１種もしくは複数のまたは固定された組合せ製剤の場合はそれぞれの組合せパートナー（有効成分）を、錠剤、トローチ剤、水性もしくは油性懸濁液、分散性散剤もしくは顆粒剤、エマルジョン、硬もしくは軟カプセル剤、またはシロップ剤もしくはエリキシル剤の剤形中に含有する。経口用として意図された組成物は、医薬組成物の製造に関する分野に公知の任意の方法によって調製され、このような組成物は、薬学的に洗練された口当たりの良い製剤を提供するため、甘味剤、香料、着色剤、および保存剤から成る群から選択される１種または複数の薬剤を含有することができる。錠剤は、錠剤の製造に適した無毒性の薬学的に許容される添加物と混合して有効成分を含有してよい。これらの添加物は、例えば、炭酸カルシウム、炭酸ナトリウム、ラクトース、リン酸カルシウム、またはリン酸ナトリウムなどの不活性希釈剤、造粒剤および崩壊剤、例えば、トウモロコシデンプンまたはアルギン酸、結合剤、例えば、デンプン、ゼラチン、またはアカシアゴム、および潤滑剤、例えば、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸、またはタルクである。錠剤は、コーティングされていない、または胃腸管における崩壊および吸収を遅延させ、それによってより長期間にわたって持続的な活性をもたらすため、公知の技術によってコーティングされている。例えば、モノステアリン酸グリセリンまたはジステアリン酸グリセリンなどの時間遅延物質が使用され得る。経口用製剤は、有効成分を不活性の固体希釈剤、例えば、炭酸カルシウム、リン酸カルシウム、もしくはカオリンと混合した硬ゼラチンカプセル、または有効成分を水もしくは油性媒体、例えば、ラッカセイ油、流動パラフィンもしくはオリーブ油と混合した軟ゼラチンカプセルとして提供することができる。組成物に用いられるＭｄｍ２阻害剤の投与量は、変更してもよく、例えば、投与経路、患者の性別、体重、疾患の病期などによって異なる。
【００５３】
非経口投与用組成物およびそれ以外のものは、当該分野で公知の方法によって調製され得る。
【００５４】
下記の実施例は、本開示を例証し、具体的な実施形態を提示するが、本開示の範囲を限定するものではない。
［実施例］
【実施例１】
【００５５】
化合物Ａまたは化合物Ｃを用いた単独療法ならびに化合物Ａおよび化合物Ｃを用いた併用療法
【００５６】
ぶどう膜黒色腫の前臨床モデル
ＵＭ疾患の代表的な５種のＰＤＸを使用した：ＭＰ４２、ＭＰ４６、ＭＰ５５、ＭＭ３３、およびＭＭ５２（表１）。これらのＰＤＸの主な分子的特徴は表１に記載されている。
【００５７】
ｉｎ  ｖｉｖｏ所見を裏付けるため、原発腫瘍または転移腫瘍のいずれかから単離した１５個の細胞モデルを本実験で使用した。記載されたとおり、ＭＰ３８、ＭＰ４１、ＭＰ４６、ＭＰ６５、ＭＭ２８、およびＭＭ６６細胞株は、本発明者らの研究施設で樹立された。９２．１およびＭｅｌ２０２細胞株は、Ｅｕｒｏｐｅａｎ  Ｓｅａｒｃｈａｂｌｅ  Ｔｕｍｏｕｒ  Ｌｉｎｅ  Ｄａｔａｂａｓｅ（Ｔｕｂｉｎｇｅｎ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ、Ｇｅｒｍａｎｙ）から、ならびにＭＲＣ５およびＲＰＥ１株は、ＡＴＣＣから購入した。ＯＭＭ１、ＯＭＭ２．５、Ｍｅｌ２８５、およびＭｅｌ２９０細胞は、Ｐ．Ａ．Ｖａｎ  Ｄｅｒ  Ｖｅｌｄｅｎ（Ｌｅｉｄｅｎ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ、Ｔｈｅ  Ｎｅｔｈｅｒｌａｎｄｓ）による好意で提供された。細胞株は、１０％ＦＢＳ（９２．１、Ｍｅｌ２０２、ＯＭＭ１、ＯＭＭ２．５、Ｍｅｌ２８５、Ｍｅｌ２９０、ＭＲＣ５、ＲＰＥ１）または２０％ＦＢＳ（ＭＰ３８、ＭＰ４１、ＭＰ４６、ＭＰ６５、ＭＭ２８、ＭＭ６６）を添加し、ペニシリンを１００Ｕ／ｍｌおよびストレプトマイシンを１００μｇ／ｍｌ（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を補足したＲＰＭＩ−１６４０で培養された。ヒト脈絡膜から単離した正常なメラニン細胞の２つの初代培養物は、Ｇ．Ｌｉｏｔ（Ｉｎｓｔｉｔｕｔ  Ｃｕｒｉｅ、Ｆｒａｎｃｅ）による好意で提供された。これらの細胞は、１０％ＦＢＳ、ペニシリン／ストレプトアビジン、ＦＧＦ２を１０ｎｇ／ｍｌ、ＩＢＭＸを０．１ｍＭ、およびコレラ毒素を１０ｎｇ／ｍｌで添加したＨａｍ／Ｆ１２培地で培養された。薬物試験の間、ＰＫＣ経路に対する干渉を避けるため、ＩＢＭＸおよびコレラ毒素を培地から除去した。これらの培養細胞の塩基配列を解析することで、それらがメラニン細胞由来であることおよびＧＮＡＱ／１１変異がないことを検証した。すべての細胞は、マイコプラズマを含まないことが証明され、３７℃、５％ＣＯ２の加湿雰囲気下で管理された。
【００５８】
化合物
化合物Ａ：（Ｓ）−１−（４−クロロ−フェニル）−７−イソプロポキシ−６−メトキシ−２−（４−｛メチル−［４−（４−メチル−３−オキソ−ピペラジン−１−イル）−トランス−シクロヘキシルメチル］−アミノ｝−フェニル）−１，４−ジヒドロ−２Ｈ−イソキノリン−３−オン（ＭＤＭ２阻害剤）
化合物Ｂ：（Ｓ）−５−（５−クロロ−１−メチル−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−ピリジン−３−イル）−６−（４−クロロ−フェニル）−２−（２，４−ジメトキシ−ピリミジン−５−イル）−１−イソプロピル−５，６−ジヒドロ−１Ｈ−ピロロ［３，４−ｄ］イミダゾール−４−オン（ＭＤＭ２阻害剤）
化合物Ｃ：３−（１．Ｈ．−インドール−３−イル）−４−［２−（４−メチル−ピペラジン−１−イル）−キナゾリン−４−イル］−ピロール−２，５−ジオン（ＰＫＣ阻害剤）
化合物Ｄ：３−アミノ−Ｎ−（３−（４−アミノ−４−メチルピペリジン−１−イル）ピリジン−２−イル）−６−（３−（トリフルオロメチル）ピリジン−２−イル）ピラジン−２−カルボキサミド（ＰＫＣ阻害剤）
【００５９】
本試験で使用されたすべての薬剤（化合物Ａおよび化合物Ｃ）は、Ｎｏｖａｒｔｉｓ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｆｏｒ  Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ（ＮＩＢＲ、Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ、ＵＳＡ）から入手された。化合物Ｃは、古典的（α、β）プロテインキナーゼＣ（ＰＫＣ）の選択的阻害剤であり、新規（δ、ε、η、θ）ＰＫＣアイソフォームに対しても活性を有する。化合物ＡはＭＤＭ２の選択的阻害剤である。ｉｎ  ｖｉｖｏ投与のため、すべての化合物を、２０％プロピレングリコール＋５０％ソルトール（ｓｏｌｕｔｏｌ）（２０％）＋３０％ＰＢＳで希釈した。対照群をこの溶液（溶媒）で処置した。化合物Ｃは、ｉｎ  ｖｉｖｏ実験計画に従って、１日２回、５日／週、１日量１２０または２４０ｍｇ／ｋｇで経口投与された。化合物Ａは、５日／週、１日量１００ｍｇ／ｋｇで経口投与された。
【００６０】
ｉｎ  ｖｉｔｒｏ実験のため、化合物の粉末を、最終濃度１０ｍＭでＤＭＳＯに溶解し、等分して−２０℃で保存した。各実験計画に従って、さらに希釈液を作成した。
【００６１】
ｉｎ  ｖｉｖｏ薬物試験の実験
Ｉｎｓｔｉｔｕｔ  Ｃｕｒｉｅで飼育した生後４〜６週のＳＣＩＤマウスを用いた。３０〜６０ｍｍ３の腫瘍断片を、肩甲骨間脂肪体に皮下移植した。腫瘍サイズが約５０〜１５０ｍｍ３に達した際、マウスを対照群または処置群に無作為に割り付けた。各実験では、１群当たり６〜９匹の間のマウスが用いられた。腫瘍の体積が２５００ｍｍ３に達した際、異種移植マウスを屠殺した。
【００６２】
腫瘍増殖は、キャリパーを用いて２つの直交腫瘍直径を週２回測定することによって評価された。各腫瘍体積、相対的腫瘍体積（ＲＴＶ）、および腫瘍増殖阻害（ＴＧＩ）を、定法に従って算出した。腫瘍の安定または退縮は、実験終了時にＲＴＶ＜１として定義された。個別のマウスのばらつきによって各化合物および組合せに対する反応を評価するため、本発明者らは、各マウスを１つの腫瘍を有するものとみなした。本発明者らは、処置したマウスそれぞれの相対的腫瘍体積の変化（ＲＴＶＶ）：ＲＴＶＶ＝Ｖｔ／Ｖｃ（式中、Ｖｔは、処置したマウスの腫瘍体積であり、Ｖｃは、処置終了時における対応する対照群の腫瘍体積の中央値である）を定義した。各マウスについて、式：ＯＲＲ＝［（ＲＴＶＶ）−１］を用いて全奏効率を算出した。ＯＲＲが−０．５を下回る場合、腫瘍は療法に反応していると判断された。データを各対照群に対して正規化したため、独立したｉｎ  ｖｉｖｏ実験の結果を統合することができた。
実験は、Ｆｒｅｎｃｈ  Ｅｔｈｉｃａｌ  Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅの勧告を遵守し、治験責任医師の監督下で実施された。実験計画および動物飼育は、Ｆｒｅｎｃｈ  Ｅｔｈｉｃａｌ  Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ（Ａｇｒｅｅｍｅｎｔ  Ｃ７５−０５−１８、Ｆｒａｎｃｅ）およびＩｎｓｔｉｔｕｔ  Ｃｕｒｉｅの倫理委員会によって提出された施設のガイドラインに準拠した。
【００６３】
ｉｎ  ｖｉｖｏ実験の統計的検定
ＲＴＶＶに基づく両側Ｍａｎｎ−Ｗｈｉｔｎｅｙ検定を用いて、ＴＧＩの２×２比較を行った。腫瘍の比率に基づき、特定のＲＴＶまたはＯＲＲとのすべての対比較のため、両側Ｆｉｓｈｅｒの正確確率検定を用いた。すべての統計的検定は、両側のｐ値を算出して両側的に行われた。ｐ≦０．０５（９５％信頼区間）の場合、結果は統計的に有意であると判断された。
【００６４】
薬剤組合せの細胞生存率アッセイ
６×６マトリックス作成後、細胞を適切な濃度で９６ウェルプレートに播種した。３連にするため、細胞株ごとに３つのプレートを準備した。翌日、マトリックス希釈方式後、各薬剤を加えた。１：３の連続希釈物を測定し、ＤＭＳＯ対照を含む合計６つの連続希釈物の結果を得た。２つの薬剤の最終濃度が、２つの最大用量の範囲内での単独療法によって、その完全な有効性を示すよう、各化合物の最大の薬剤濃度を調整した。細胞生存率は、薬剤処置の５日後、ＭＴＴアッセイ（Ｓｉｇｍａ）を用いて測定された。分光光度計を用いて比色結果を読み取った。結果は、ＤＭＳＯで処置した対照と比較した代謝的に不活性な細胞の相対的百分率（増殖阻害の百分率）として示された。各実験手順において、細胞株のパネル全体に対し、すべての異なる組合せが検討された。薬剤の組合せそれぞれについて少なくとも独立した２組が得られるまで、実験を繰り返した。
【００６５】
ｉｎ  ｖｉｔｒｏにおける組合せの活性評価
本発明者らは、用量採取および適用範囲に応じて調整し、高い阻害レベルで組合せ効果に有利となるよう重み付けする用量マトリックス全体の重み付け「相乗効果スコア」を算出する、Ｌｏｅｗｅアルゴリズムを用いて得られたデータを使用した（Lehar et al. 2009）。相乗効果スコアおよびアイソボログラムを生成し、組合せ力価を定量化した。自己交差で認められる相乗効果スコアの変化（薬剤と同薬剤；理論上の相乗効果スコアは０）と比較した場合、２より高い相乗効果スコアは、有意であると判断された（Lehar et al. 2009）。
【００６６】
細胞増殖アッセイおよび細胞死の評価
０日目、細胞を、適切な濃度で、３組の９６ウェルプレートに播種した。各細胞株に対して４つの条件が検討された：ＤＭＳＯ、薬剤Ａ、薬剤Ｃ、および薬剤Ａ＋Ｃ。１日目、各薬剤を各ウェルに加えた。薬剤の最適濃度は、組合せ実験から選択された：化合物Ｃは５００ｎＭ、化合物Ａは１μＭで使用された。各処置条件に対して同じ百分率のＤＭＳＯを得るため、各混合物中のＤＭＳＯの量を調整した。６日目、化合物を補充した。３日目、６日目、および９日目、ＣｅｌｌＴｉｔｅｒＧｌｏアッセイ（Ｐｒｏｍｅｇａ）を用いて生存率を測定した。分光光度計を用いて発光を読み取った。３組の平均値を算出し、±ＳＥＭを表示した。すべての細胞株を同時に検討し、結果の再現性を確認するため、少なくとも２つの独立した実験が実施された。
【００６７】
ウェスタンブロット分析
細胞を、直径１０ｃｍのシャーレで培養し、ＤＭＳＯまたは単剤もしくは組合せとして各薬剤を用いて７２時間処置した。標準の手順によって、ウェスタンブロット分析を実施した。サンプル間の正規化のため、ＧＡＰＤＨが用いられた。一次抗体を、適切な希釈法でＴＢＳＴ＋０．５％ＢＳＡに希釈し、４℃で一晩インキュベートした。本試験で用いたすべての抗体は、補足材料に記載されている。ＨＲＰと結合した二次抗体を用いて、シグナルを検出した（Ｊａｃｋｓｏｎ  ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ）。ＬＡＳ−３０００  Ｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｔ  Ｉｍａｇｅ  ａｎａｌｙｚｅｒおよびＩｍａｇｅ  Ｇａｕｇｅ  ｓｏｆｔｗａｒｅを用いて、発光シグナルを検出した。
【００６８】
【表１】
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【００６９】
結果から化合物Ａと化合物Ｃとの組合せ活性が確認され、ＰＫＣおよびＭＤＭ２の共阻害が、ＧＮＡＱ／１１変異を有するＵＭ患者にとって価値のある治療的手段であることが示唆される（図１〜５）。
【００７０】
ｉｎ  ｖｉｔｒｏ所見によって、ＰＫＣおよびＭＤＭ２の共阻害は、ＧＮＡＱ／１１変異を有するＵＭモデルに対する有効な組合せ戦略であることが示された。どちらの併用処置も、検討した細胞モデルの８０％を超える細胞で、アポトーシスの誘導を引き起こした（図１〜３）。
【００７１】
ｉｎ  ｖｉｖｏ所見によって、ＰＫＣおよびＭＤＭ２の共阻害は、ＧＮＡＱ／１１変異を有するＵＭのＰＤＸに対する、ＰＫＣおよびＭＤＭ２阻害後に特に強力な腫瘍の縮小を伴う有効な組合せ戦略であることが示された（図４〜５）。
【実施例２】
【００７２】
化合物Ｂまたは化合物Ａの単独療法および化合物Ｂと化合物Ｃまたは化合物Ｄの併用療法
【００７３】
合計６種のＵＭ細胞株におけるＭＤＭ２阻害剤の有効性を試験した（図６）。ＭＤＭ２およびＰＫＣ阻害剤の組合せの有効性を、１種のＵＭ細胞株で試験した。単剤として化合物Ｂが、６種の細胞株のうち５種の増殖を強力に阻害したことは、ナノモルＩＣ５０値によって明白である（表２）。どちらのＰＫＣ阻害剤も、化合物Ｂとの組合せで、同様の作用を示したが、化合物Ｄは、単剤としてより有効であったことは注目に値する。（Lehar et al. 2009）に記載されるとおり、Ｌｏｅｗｅモデルを用いて相乗効果を算出し、スコアが２を上回る場合、相乗効果を示すものとした（図７および８）。
【００７４】
【表２】
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【００７５】
方法
すべての化合物を１００％ＤＭＳＯ（Ｓｉｇｍａ、カタログ番号Ｄ２６５０）に溶解し、使用するまで濃度１０ｍＭにて−２０℃で保存した。化合物を、連続して２倍希釈し、４×濃度で深さ３００μＬの３８４ウェルプレート（ＢｒａｎｄＴｅｃｈ、カタログ番号７０１３５５）に配置した。次に、４×化合物プレートの１０μＬに細胞３０μＬをスタンプし、１×最終濃度が得られた。化合物Ｂは、濃度０．０〜２μＭの範囲で使用した。化合物Ｃは、濃度０．０〜１μＭの範囲で使用し、化合物Ｄは、濃度０．０〜１μＭの範囲で使用した。
【００７６】
細胞株を、３７℃、５％ＣＯ２のインキュベーター内で培養し、Ｔ−７５フラスコ内で増殖させた。すべての条件において、細胞を、凍結保存から解凍し、１：３希釈によって１回以上の継代培養によって増殖させ、３８４ウェルに播種する前にＶｉＣｅｌｌカウンター（Ｂｅｃｋｍａｎ−Ｃｏｕｌｔｅｒ）を用いて計数し、生存率を測定した。細胞株を分割して増殖させるため、０．２５％トリプシン−ＥＤＴＡ（ＧＩＢＣＯ、カタログ番号２５２００）を用いて、細胞をフラスコから剥離した。すべての細胞株は、Ｉｄｅｘｘ  Ｒａｄｉｌ（Ｃｏｌｕｍｂｉａ、ＭＯ、ＵＳＡ）で実施されるＰＣＲ検出方法によってマイコプラズマに汚染されていないことを確認し、ＳＮＰパネルの検出によって正確に同定された。
【００７７】
７２時間のＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏ（商標）（ＣＴＧ）アッセイによって細胞増殖を測定し、示されたすべての結果は、少なくとも３回の測定結果である。ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏ（商標）アッセイのため、組織培養処理済み３８４ウェルプレート（Ｃｏｓｔａｒ、カタログ番号３７０７）に細胞を分注し、培地の最終体積を３０μＬ、細胞密度を１ウェル当たり１０００個とした。播種の１２〜２４時間後、各化合物の希釈系列１０μＬを、細胞を含むプレートに移し、化合物の濃度を上記の範囲とし、ＤＭＳＯの最終濃度を０．１６％とした。プレートを７２時間インキュベートし、細胞増殖に対する化合物の効果を、ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏ（商標）ルミネセンス細胞生存率アッセイ（Luminescent Cell Viability Assay）（Ｐｒｏｍｅｇａ）およびＶｉｃｔｏｒ（商標）Ｘ４プレートリーダー（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ）を用いて判定した。
【００７８】
ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏ（登録商標）ルミネセンス細胞生存率アッセイは、代謝的に活性な細胞の存在を示す、存在するＡＴＰの定量に基づいて培養液中の生細胞数を測定する均質法である。この方法は、Technical Bulletin, TB288 Promegaに詳細に記載されている。簡潔に述べると、上記のとおり、細胞を不透明なマルチウェルプレートの培地に播種した。背景発光の値を得るため、細胞を含まない培地を含む対照ウェルも準備した。その後、各ウェル中の細胞培養培地の体積に等しい体積のＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏ（登録商標）試薬を加え、オービタルシェーカー上で内容物を６０分間混合して細胞溶解を誘発させた。次に、プレートリーダーを用いて発光を記録した。
【００７９】
Ｃｈａｌｉｃｅソフトウエア（ＣｏｍｂｉｎａｔｏＲｘ、Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ  ＭＡ）を用いて増殖阻害%および過剰阻害を分析した。ＤＭＳＯと比較した増殖阻害％は、阻害と表記されたパネルに示されており、期待量を上回る阻害量は、（ＡＤＤ過剰阻害と表記された）パネルに示されている。化合物Ｃの濃度は、最終行の左から右に示され、化合物Ｂの濃度は、左端の列の下から上に増加している。残りすべての格子のポイントには、２つの軸に示された単剤の濃度に相当する２種の阻害剤の組合せから得られた結果が表記されている。（Lehar et al. 2009）に記載されるとおり、Ｃｈａｌｉｃｅ  Ａｎａｌｙｓｅｒを用いて細胞増殖のデータ分析を行った。過剰阻害は、２種の薬剤が用量相加的に作用する場合の期待される効果と比較した増殖に対する効果を評価するＬｏｅｗｅ相乗効果モデルを用いて算出された。正数は、相乗効果が増大している範囲を示す。
【００８０】
ＩＣ５０は、５０％のＣＴＧシグナルを５０％阻害する化合物の濃度である。ＸＬｆｉｔ  Ｍｉｃｒｏｓｏｆｔ  Ｅｘｃｅｌ（商標）アドインバージョン５．２．０．０（ＩＤＢＳ  Ｅｎａｂｌｉｎｇ  Ｓｃｉｅｎｃｅ）のモデル番号２０３を用いて、ＩＣ５０を算出した。（Lehar et al. 2009）に記載されるとおり、相乗効果スコアおよびＩＣ５０算出を確定した。
【図１−１】
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【図１−２】
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【図１−３】
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【図２−１】
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【図２−２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７−１】
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【図７−２】
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【図８−１】
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【図８−２】
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【国際調査報告】
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