(57)【要約】  本発明は化学式１で表示される化合物を有効成分として含有する化粧料組成物に関する。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記の化学式１で表示される化合物を有効成分として含有する化粧料組成物：
[化学式１]
【化１】
2018531968.tif 000020
上記の化学式１において、Ｒ１は−ｇｌｃ（２−１）ｇｌｃであり、Ｒ２は−ｇｌｃ−ａｒａ（ｆｕｒ）であるか、または、Ｒ１は−ｇｌｃであり、Ｒ２は−ｇｌｃ−ａｒａ（ｆｕｒ）である。
【請求項２】
前記の化合物の含量は、組成物の全体重量に対して０．００１重量％〜１０重量％である請求項１に記載の化粧料組成物。
【請求項３】
前記の化粧料組成物は抗酸化用である請求項１に記載の化粧料組成物。
【請求項４】
前記の化粧料組成物は抗老化用である請求項１に記載の化粧料組成物。
【請求項５】
前記の化粧料組成物は皮膚美白用である請求項１に記載の化粧料組成物。
【請求項６】
前記の化粧料組成物は皮膚保湿用である請求項１に記載の化粧料組成物。
【請求項７】
前記の化粧料組成物は皮膚シワ改善用である請求項１に記載の化粧料組成物。
【請求項８】
前記の化粧料組成物は抗菌用である請求項１に記載の化粧料組成物。
【請求項９】
前記の化粧料組成物は皮脂調節用である請求項１に記載の化粧料組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ジンセノサイドを有効成分として含有する化粧料組成物に関する。
【０００２】
本出願は、２０１５年１０月３０日に大韓民国特許庁に提出した大韓民国特許出願第１０−２０１５−０１５２４４８号の出願日の利益を主張し、その内容の全部は参照として本明細書に含まれる。
【背景技術】
【０００３】
人参（Ｐａｎａｘ  ｇｉｎｓｅｎｇ）は、地上部の花（実）および茎と、地下部の根（主根、細根）との形態からなっており、その中でも人参地下部が、東洋圏では長い間薬用として使用されている。人参の薬用作用の主要構成成分であるサポニンはジンセノサイド（ｇｉｎｓｅｎｏｓｉｄｅ）とも呼ばれて、人参（ｇｉｎｓｅｎｇ）から分離した配糖体（ｇｌｙｃｏｓｉｄｅ）という意味を有する。人参のジンセノサイドは、プロトパナキサトリオール（ＰＰＴ；Ｒｇ１、Ｒｅ、Ｒｆ、Ｒｈ１、Ｒｇ２）系のジンセノサイドと、プロトパナキサジオール（ＰＰＤ；Ｒｂ１、Ｒｃ、Ｒｂ２、Ｒｂ３、Ｒｄ、Ｒｇ３、Ｒｈ２、コンパウンド−Ｋ）系のジンセノサイドからなっており、このようなジンセノサイドの薬理作用および臨床効果では、中枢神経抑制および興奮作用、蛋白質および核酸生合成促進作用、造血作用、動脈硬化予防、血糖降下作用、ならびに抗疲労および抗ストレス作用などが知られている。
【０００４】
ジンセノサイドは、人参の抽出物をクロマトグラフィーのような機器で分離して収得することのできる成分もあるが、具体的な成分による各量が少量である。
【０００５】
このようなジンセノサイドを酵素を用いて転換する方法が最近開発されて、構造が転換されたジンセノサイド別にその効能が活発に進行されているものの、ジンセノサイドの構造が多様化して、まだ各ジンセノサイド構造によるその効能がまだ具体的に究明されていない内容が多いのが実情である。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
本発明は、抗酸化力が優れ、皮膚老化防止効果が優れ、皮膚保湿効果が優れ、皮膚美白効果が優れ、抗炎症効果、ニキビおよびアトピーなどの皮膚トラブル改善効果、皮脂調節効果、毛穴収縮効果、ならびに血行改善を通じた顔色改善効果が優れた化粧料組成物を提供する。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本明細書で言及される化合物の名称は、他に特別な言及がなければ米国化粧品協会（Ｃｏｓｍｅｔｉｃ、Ｔｏｉｌｅｔｒｙ  ａｎｄ  Ｆｒａｇｒａｎｃｅ  Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ、ＣＴＦＡ）で発行された国際化粧品原料集（Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｃｏｓｍｅｔｉｃ  Ｉｎｇｒｅｄｉｅｎｔ  Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ、ＩＣＩＤ）に登載されたＩＮＣＩ（Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｎｏｍｅｎｃｌａｔｕｒｅ  Ｃｏｓｍｅｔｉｃ  Ｉｎｇｒｅｄｉｅｎｔ）名称に該当する化合物を意味し、該当名称がＩＮＣＩ名称中に存在しなければ、国際純粋・応用化学連合（Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｕｎｉｏｎ  ｏｆ  Ｐｕｒｅ  ａｎｄ  Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、ＩＵＰＡＣ）で制定したＩＵＰＡＣ命名法による化合物を意味し、ＩＵＰＡＣ命名法による化合物が存在しなければ、本発明が属する技術分野で通用される化合物の名称に対応する化合物を意味する。
【０００８】
本発明は下記の化学式１で表示される化合物を有効成分として含有する化粧料組成物を提供する。
［化学式１］
【化１】
2018531968.tif 000002
【０００９】
上記の化学式１において、Ｒ１は−ｇｌｃ（２−１）ｇｌｃであり、Ｒ２は−ｇｌｃであるか、または、Ｒ１は−ｇｌｃであり、Ｒ２は−ｇｌｃ−ａｒａ（ｆｕｒ）である。
【発明の効果】
【００１０】
本発明による化粧料組成物は、抗酸化力が優れ、皮膚老化防止効果が優れ、皮膚保湿効果が優れ、皮膚美白効果が優れ、抗炎症効果、ニキビおよびアトピーなどの皮膚トラブルの改善効果、皮脂調節効果、毛穴収縮効果、ならびに血行改善を通じた顔色改善効果が優れている。
【発明を実施するための形態】
【００１１】
以下、本発明による化粧料組成物について詳細に説明する。
【００１２】
本発明による化粧料組成物は化学式１で表示される化合物を有効成分として含有する。
［化学式１］
【化２】
2018531968.tif 000003
【００１３】
上記の化学式１において、Ｒ１は−ｇｌｃ（２−１）ｇｌｃであり、Ｒ２は−ｇｌｃであるか、または、Ｒ１は−ｇｌｃであり、Ｒ２は−ｇｌｃ−ａｒａ（ｆｕｒ）である。
【００１４】
本発明の一実施形態において、上記の化合物は化学式１において、Ｒ１は−ｇｌｃ（２−１）ｇｌｃであり、Ｒ２は−ｇｌｃであるジンセノサイドＲｄである。
【００１５】
本発明の一実施形態において、上記の化合物は化学式１において、Ｒ１は−ｇｌｃであり、Ｒ２は−ｇｌｃ−ａｒａ（ｆｕｒ）であるコンパウンドＯである。
【００１６】
本明細書において、ｇｌｃはβ−Ｄ−グルコピラノシル基を意味し、ａｒａ（ｐｙｒ）はＬ−アラビノピラノシル基（ａｒａｂｉｎｏｐｙｒａｎｏｓｙｌ）を意味し、ａｒａ（ｆｕｒ）はＬ−アラビノフラノシル基（ａｒａｂｉｎｏｆｕｒａｎｏｓｙｌ）を意味し、ｒｈａはα−Ｌ−ラムノピラノシル基（ｒｈａｍｎｏｐｙｒａｎｏｓｙｌ）を意味する。
【００１７】
本明細書において、ジンセノサイド（Ｇｉｎｓｅｎｏｓｉｄｅ）は人参から分離されたサポニンの配糖体（ｇｌｙｃｏｓｉｄｅ）を意味する。本発明が属する技術分野において、ジンセノサイドの構造は具体的にジンセノサイドＲｘと命名され、ジンセノサイドＲｘにおいて、“Ｒ”は根（ＲａｄｉｘあるいはＲｏｏｔ）を意味し、“ｘ”はＴＬＣ（Ｔｈｉｎ  Ｌａｙｅｒ  Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ）上に表示されるスポット（ｓｐｏｔ）の移動距離（Ｒｆ値）によって、下側から上側にｏ、ａ、ｂ、ｃ、ｄ、ｅ、ｆ、ｇおよびｈなどの順序で名前を付けたものである。
【００１８】
上記のジンセノサイド命名法によるジンセノサイド化合物およびその構造を示すと下記の表１のようであり、構造は全て上記の化学式１で表示され、化学式中Ｒ１〜Ｒ3の置換基のみ相違する。
【表１】
2018531968.tif 000004
【００１９】
本発明の一実施形態において、上記のジンセノサイドは人参の抽出物から分離することができ、上記人参の抽出物は人参の根、茎、葉または実から、好ましくは人参の根または葉から抽出したものであり得る。しかし、上記人参の抽出物はその抽出部位によって本発明が限定されるものではない。
【００２０】
本発明の一実施形態において、上記人参の抽出物は乾燥された人参の全草または一部位を、水、炭素数１〜４の低級アルコールまたはこれらの混合溶媒、好ましくはメタノールで濾過および減圧濃縮して抽出することができるが、その抽出方法によって本発明が限定されるものではない。
【００２１】
本発明の一実施形態において、上記のジンセノサイドは、好ましくは、上記人参の抽出物に有機溶媒、例えば、ｎ−ヘキサン、酢酸エチル、ｎ−ブタノールなどを順次添加してこれを精製分画した後、クロマトグラフィー、例えば、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（ｓｉｌｉｃａ  ｇｅｌ  ｃｏｌｕｍｎ  ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ）、エルエイチ−２０カラムクロマトグラフィー（ＬＨ−２０  ｃｏｌｕｍｎ  ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ）、薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ；  ｔｈｉｎ  ｌａｙｅｒ  ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ）、高性能液体クロマトグラフィー（ｈｉｇｈ  ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ  ｌｉｑｕｉｄ  ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ）などを用いて分離することができるが、その分離方法によって本発明が限定されるものではない。
【００２２】
本明細書において、人参（Ｐａｎａｘ  ｇｉｎｓｅｎｇ）はウコギ科の多年草を意味する。
【００２３】
本発明の一実施形態において、上記ジンセノサイドの含量は、組成物の全体重量に対して０．００１重量％〜１０重量％である。
【００２４】
本発明による化粧料組成物は、活性酸素の生成および作用を抑制する抗酸化効能に優れている。したがって、本発明の一実施形態において、上記の化粧料組成物は抗酸化用である。
【００２５】
本発明による化粧料組成物は、抗酸化効能が優れ、抗酸化による皮膚老化を防止する効能に優れている。したがって、本発明の一実施形態において、上記の化粧料組成物は抗老化用である。
【００２６】
本発明による化粧料組成物は、チロシナーゼおよびメラニンの生成および作用を抑制する皮膚美白効能に優れている。したがって、本発明の一実施形態において、上記の化粧料組成物は皮膚美白用である。
【００２７】
本発明による化粧料組成物は、皮膚水分量を増加させる能力に優れている。したがって、本発明の一実施形態において、上記の化粧料組成物は皮膚保湿用である。
【００２８】
本発明による化粧料組成物は、皮膚弾力を改善させる能力に優れ、これによる皮膚シワ改善効果に優れている。したがって、本発明の一実施形態において、上記の化粧料組成物は皮膚シワ改善用である。
【００２９】
本発明の一実施形態において、上記の化粧料組成物はニキビ改善用であり、上記の化粧料組成物は、抗菌効果、特にニキビの原因菌に対する抗菌効果に優れて抗菌用であり、また抗炎症効果を提供するため、抗炎症用であり得る。
【００３０】
本発明による化粧料組成物は、皮膚に適用するときに皮脂分泌を抑制させて皮脂分泌調節の効果に優れ、頭皮に適用するときに皮脂分泌を調節してフケの発生を抑制する効果に優れている。したがって、本発明の一実施形態において、上記の化粧料組成物は皮脂調節用である。
【００３１】
本発明による化粧料組成物は、皮膚に適用するときに毛細血管を拡張させ、血液循環を促進させることによって皮膚に栄養分を円滑に供給し、皮膚老化を抑制させて血色および肌色の改善効果に優れている。したがって、本発明の一実施形態において、上記の化粧料組成物は皮膚血色改善用である。
【００３２】
本発明は、上記の化学式１で表示される化合物を有効成分として含有する化粧料組成物の製造における抗酸化用途を提供する。
【００３３】
本発明は、上記の化学式１で表示される化合物を有効成分として含有する化粧料組成物の製造における抗老化用途を提供する。
【００３４】
本発明は、上記の化学式１で表示される化合物を有効成分として含有する化粧料組成物の製造における皮膚美白用途を提供する。
【００３５】
本発明は、上記の化学式１で表示される化合物を有効成分として含有する化粧料組成物の製造における皮膚保湿用途を提供する。
【００３６】
本発明は、上記の化学式１で表示される化合物を有効成分として含有する化粧料組成物の製造における皮膚シワ改善用途を提供する。
【００３７】
本発明は、上記の化学式１で表示される化合物を有効成分として含有する化粧料組成物の製造におけるニキビ改善用途を提供する。
【００３８】
本発明は、上記の化学式１で表示される化合物を有効成分として含有する化粧料組成物の製造における抗菌用途を提供する。
【００３９】
本発明は、上記の化学式１で表示される化合物を有効成分として含有する化粧料組成物の製造における抗炎症用途を提供する。
【００４０】
本発明は、上記の化学式１で表示される化合物を有効成分として含有する化粧料組成物の製造における皮膚血色改善用途を提供する。
【００４１】
本発明は、上記の化学式１で表示される化合物を有効成分として含有する化粧料組成物の製造における皮脂調節用途を提供する。
【００４２】
本発明は、上記の化学式１で表示される化合物を有効成分として含有する化粧料組成物を、皮膚に塗布する段階を含む抗酸化方法を提供する。
【００４３】
本発明は、上記の化学式１で表示される化合物を有効成分として含有する化粧料組成物を、皮膚に塗布する段階を含む抗老化方法を提供する。
【００４４】
本発明は、上記の化学式１で表示される化合物を有効成分として含有する化粧料組成物を、皮膚に塗布する段階を含む皮膚美白方法を提供する。
【００４５】
本発明は、上記の化学式１で表示される化合物を有効成分として含有する化粧料組成物を、皮膚に塗布する段階を含む皮膚保湿方法を提供する。
【００４６】
本発明は、上記の化学式１で表示される化合物を有効成分として含有する化粧料組成物を、皮膚に塗布する段階を含む皮膚シワ改善方法を提供する。
【００４７】
本発明は、上記の化学式１で表示される化合物を有効成分として含有する化粧料組成物を、皮膚に塗布する段階を含むニキビ改善方法を提供する。
【００４８】
本発明は、上記の化学式１で表示される化合物を有効成分として含有する化粧料組成物を、皮膚に塗布する段階を含む抗菌方法を提供する。
【００４９】
本発明は、上記の化学式１で表示される化合物を有効成分として含有する化粧料組成物を、皮膚に塗布する段階を含む抗炎症方法を提供する。
【００５０】
本発明は、上記の化学式１で表示される化合物を有効成分として含有する化粧料組成物を、皮膚に塗布する段階を含む皮膚血色改善方法を提供する。
【００５１】
本発明は、上記の化学式１で表示される化合物を有効成分として含有する化粧料組成物を、皮膚に塗布する段階を含む皮脂調節方法を提供する。
【００５２】
本発明の組成物は、皮膚外用剤の組成物、特に化粧料組成物として剤形化されることができ、化粧品学的にまたは皮膚科学的に許容可能な媒質または基剤を含有して剤形化されることができる。さらに、本発明の組成物は、局所適用に適合した全ての剤形で提供されることができ、例えば、溶液、水相に油相を分散させて得られるエマルジョン、油相に水相を分散させて得られるエマルジョン、懸濁液、固体、ゲル、粉末、ペースト、泡沫（ｆｏａｍ）またはエアロゾル組成物の剤形で提供されることができる。このような剤形の組成物は、当該分野の通常的な方法によって製造することができる。
【００５３】
また、本発明による組成物は、上記の物質以外に主効果を損傷させない範囲内で、好ましくは、主効果に上昇効果を与え得る他の成分を含むことができる。さらに、本発明による組成物は、保湿剤、エモリエント剤、紫外線吸収剤、防腐剤、殺菌剤、酸化防止剤、ｐＨ調整剤、有機および無機顔料、香料、冷感剤または制汗剤をさらに含むことができる。上記成分の配合量は、本発明の目的および効果を損傷させない範囲内で当業者が容易に選定することができ、その配合量は、組成物の総重量に対して０．００１重量％〜１０重量％、具体的には、０．００１重量％〜１重量％であり得る。
【実施例】
【００５４】
以下、実施例を挙げて本発明をさらに詳細に説明する。しかし、このような実施例は本発明を具体的に説明するためのものであって、このような実施例によって本発明の権利範囲が限定されるものではない。
【００５５】
［参考例１］ジンセノサイドＲｄの準備
本発明の組成物の効能を実験するためのジンセノサイドＲｄとしては、アムボ研究所（Ａｍｂｏ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ）で製造された純品ＧＩＮＳＥＮＯＳＩＤＥ（商品名：Ｇｉｎｓｅｎｏｓｉｄｅ  Ｒｄ)を購入して使用した。
【００５６】
［参考例２］コンパウンドＯの準備
本発明の組成物の効能を実験するためのジンセノサイドＲｄとしては、アムボ研究所で製造された純品ＧＩＮＳＥＮＯＳＩＤＥ（商品名：コンパウンド  Ｏ)を購入して使用した。
【００５７】
［試験例１］活性酸素種（ＲＯＳ：ｒｅａｃｔｉｖｅ  ｏｘｙｇｅｎ  ｓｐｅｃｉｅｓ）の生成抑制効果
角質形成細胞（ｋｅｒａｔｉｎｏｃｙｔｅ；細胞株：ＨａＣａＴ；入手先：ＡＴＣＣ）を２４ウェルプレートの各ウェルに５×１０４個入れて２４時間付着させた。１６時間後、ジンセノサイドＲｄを１％で処理した。このとき、比較のために対照群はジンセノサイドＲｄを処理しなかった。２時間後に培養液を除去した後、各ウェルに１００μｌのリン酸緩衝塩液（ＰＢＳ：Ｐｈｏｓｐｈａｔｅ  Ｂｕｆｆｅｒ  Ｓａｌｉｎｅ）を入れた。この角質形成細胞に紫外線Ｂ（ＵＶＢ）ランプ（Ｍｏｄｅｌ：Ｆ１５Ｔ８、ＵＶ  Ｂ  １５  Ｗ、Ｓａｎｋｙｏ  Ｄｅｎｋｉ社、Ｊａｐａｎ）を用いて紫外線３０ｍＪ／ｃｍ２を照射した後、ＰＢＳを取り出して、各ウェルに角質形成細胞培養液２００μｌを添加した。そこにジンセノサイドＲｄを再処理して、一定時間帯別に紫外線刺激によって増加した活性酸素種の量を定量した。ＲＯＳの量はＲＯＳによって酸化されるＤＣＦ−ＤＡ（ｄｉｃｈｌｏｒｏｆｌｕｏｒｅｓｃｉｎ  ｄｉａｃｅｔａｔｅ）の蛍光を測定するＴａｎの方法を参考にして定量し（Ｔａｎ  ｅｔ  ａｌ．、１９９８、Ｊ．Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ．Ｖｏｌ．１４１、ｐｐ１４２３−１４３２）、ビークルのみ処理した対照群のＲＯＳに対する割合を算出した結果を下記の表２に示した。
【００５８】
【表２】
2018531968.tif 000005
【００５９】
上記の表２の結果から、本発明によるジンセノサイドＲｄおよびコンパウンドＯは、紫外線によって皮膚細胞損傷を起こすことで知られているＲＯＳの生成を効果的に抑制し、紫外線刺激後ＲＯＳの量が紫外線を照射しない場合とほぼ同じ水準でＲＯＳの生成を抑制する程度で、抗酸化効能に極めて優れていることが分かる。したがって、本発明による化粧料組成物が酸化を抑制し、老化を防ぐことによって毛穴が広くなることを予防することができ、さらに皮膚刺激の生成を防御することによって皮膚トラブルを改善させ得ることを確認した。
【００６０】
［試験例２］チロシナーゼ阻害効果
チロシナーゼ酵素としては、キノコ類（Ｍｕｓｈｒｏｏｍ）から抽出されたものでシグマ（ＳＩＧＭＡ）社のものを使用した。先に、基質であるチロシンを蒸留水に溶解させて０．３ｍｇ／ｍｌの溶液として作って、その溶液を１．０ｍｌずつ試験管に入れた後、そこにリン酸カリウム緩衝溶液（０．１ｍｏｌ濃度、ｐＨ６．８）１．０ｍｌおよび蒸留水０．７ｍｌを添加した。
【００６１】
試験物質０．２ｍｌを反応液に入れた後、３７℃恒温槽で１０分間反応させた。このとき陰性対照群（無添加）としては各試験物質の代わりに溶媒のみを０．２ｍｌ入れたもので準備し、陽性対照群としてはアスコルビン酸を使用した。この反応液に２５００ユニット／ｍｌのチロシナーゼ溶液０．１ｍｌずつを入れて再び３７℃恒温槽で１０分間反応させた。この反応液の入った試験管を氷水中に入れて急冷させて反応を停止し、光電子分光分析器で波長４７５ｎｍにおける吸光度を測定し、その結果を下記の表３に示した。それぞれのチロシナーゼ阻害効果は下記の数学式１で算出した。上記の試験はジンセノサイドＲｄおよびコンパウンドＯに対してそれぞれ実施した。
【００６２】
［数学式１］
【数１】
2018531968.tif 000006
【００６３】
【表３】
2018531968.tif 000007
【００６４】
上記の表３の結果から、ジンセノサイドＲｄおよびコンパウンドＯは、チロシナーゼ抑制効果に優れていることが分かり、ジンセノサイドＲｄまたはコンパウンドＯを含有する組成物は、極めて優れた皮膚美白効果を提供し得ることを確認することができる。
【００６５】
［試験例３］Ｂ１６／Ｆ１０メラノーマ細胞を用いるメラニン生成抑制効果
本試験例に使用されるＢ１６／Ｆ１０メラノーマはマウスに由来した細胞株であって、メラニンという黒色色素を分泌する細胞の悪性化で生じた癌細胞である。この細胞の人工培養中に試験物質を処理して、メラニン生成が減少する程度を比較評価した。本試験例に使用されるＢ１６／Ｆ１０メラノーマとしては、大韓民国細胞株銀行（Ｋｏｒｅａｎ  Ｃｅｌｌ  Ｌｉｎｅ  Ｂａｎｋ、ＫＣＬＢ  Ｎｏ：８００８）から分譲を受けて使用した。
【００６６】
Ｂ１６／Ｆ１０メラノーマのメラニンの生合成抑制効果測定は、次のように行った。Ｂ１６／Ｆ１０メラノーマを６ウェルプレートに５×１０５／ウェルで分株して、３７℃、５％ＣＯ２培養器（ＭＣＯ−２０ＡＩＣ、Ｓａｎｙｏ）で約２４時間、１０％ＦＢＳ（ｆｅｔａｌ  ｂｏｖｉｎｅ  ｓｅｒｕｍ）を含有するＤＭＥＭ（Ｄｕｌｂｅｃｃｏ’ｓ  Ｍｏｄｉｆｉｅｄ  Ｅａｇｌｅ’ｓ  Ｍｅｄｉｕｍ）で培養した。ＦＢＳのない新たなＤＭＥＭ培地に試験物質を添加して７２時間経過させた。このとき使用する試験物質は下記の表４に記載の通りである。トリプシン−ＥＤＴＡを処理し、遠心分離して細胞を分離した後、ＤＭＳＯを含有する１Ｎ  ＮａＯＨを用いて９５℃でメラニンを溶解した。ＥＬＩＳＡリーダー（ＤＩｂｉｏｔｅｃｈ、Ｋｏｒｅａ）を用いて４０５ｎｍで吸光度を測定した。試験物質を添加しない細胞を対照群にして、対照群におけるメラニン含量と比較して各試験物質のメラニン生成阻害程度を測定した。数学式２によってメラニン生成抑制率を計算して、その結果を表４に示した。
【００６７】
[数学式２]
【数２】
2018531968.tif 000008
【００６８】
【表４】
2018531968.tif 000009
【００６９】
上記の表４の結果から、ジンセノサイドＲｄまたはコンパウンドＯにおいてはメラニン生成抑制率が上昇され、ジンセノサイドＲｄまたはコンパウンドＯを含有する組成物は、極めて優れた皮膚美白効果を提供し得ることを確認することができる。
【００７０】
［参考例３］剤形例１、２、および比較剤形例１の製造
下記の表５の組成によって通常的な方法で栄養クリームを製造した（単位：重量％）。
【００７１】
【表５】
2018531968.tif 000010
【００７２】
［試験例４］皮膚保湿力増加の効果測定
本発明の組成物の皮膚保湿力の増加に及ぼす効果を測定するために、上記の剤形例１、２、および比較剤形例１を用いて、下記のように評価した。
【００７３】
乾燥皮膚に分類された４０〜５０代の成人男女５０名を、それぞれ剤形例１、２、および比較剤形例１の３個群に対して１０名ずつ３組に分けて、栄養クリームを毎日２回ずつ４週間顔面に塗布するようにした。塗布開始前と、塗布後１週間、２週間、４週間経過した時点と、そして塗布を中止した２週間経過（総６週間経過）後に、恒温、恒湿条件（２４℃、相対湿度４０％）において、皮膚水分量測定器（Ｃｏｒｎｅｏｍｅｔｅｒ  ＣＭ８２５、Ｃ＋Ｋ  Ｅｌｅｃｔｒｏｎｉｃ  Ｃｏ．、ドイツ）で皮膚水分量を測定した。その結果を下記の表６に示した。表６の結果は、試験開始直前に測定した皮膚水分量測定器の値を基準にして一定期間処置した後の測定値の増加分を百分率で表示したものである。
【００７４】
【表６】
2018531968.tif 000011
【００７５】
上記の表６の結果を見ると、比較剤形例１を塗布した場合には塗布が行われた４週間までは約３０％以下の水分増加率を示すが、塗布を中止した後には皮膚水分量が急激に減少した。これに対して、ジンセノサイドＲｄまたはコンパウンドＯを含有する剤形例１または剤形例２を塗布した場合には、塗布を中止した後にも３０％以上の皮膚水分増加率を示すことを確認することができる。これを通じて本発明の組成物は皮膚保湿力効果に優れていることが分かる。
【００７６】
［試験例５］抗菌力効果の測定
ジンセノサイドＲｄおよびコンパウンドＯの抗菌力を評価するために抗菌実験を実施した。具体的な実験方法は次の通りである。
【００７７】
実験に使用したスタフィロコッカスアウレウス（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ）、エシェリキアコリ（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ）、シュードモナスエルギノーサ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）菌株はトリプチケース大豆培地（Ｔｒｙｐｔｉｃａｓｅ  Ｓｏｙ  Ｂｒｏｔｈ）で培養し、カンジダアルビカンス（Ｃａｎｄｉｄａ  ａｌｂｉｃａｎｓ）、アスペルギルスニガー（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｎｉｇｅｒ）菌株はサブローデキストロース培地（Ｓａｂｏｕｒａｕｄ  Ｄｅｘｔｒｏｓｅ  Ｂｒｏｔｈ）で培養した。培養液を各培地に１／１００（カンジダアルビカンス菌株は１／１０）の希釈した希釈液を試験菌液として使用した。アスペルギルスニガーは２×１０８ｃｆｕ／ｍｌになるように製造した胞子懸濁液を試験菌液として使用した。
【００７８】
各培地１５ｍｌに上記の試験菌液を０．１５ｍｌ添加してよく混合したものを希釈溶液として使用した。
【００７９】
９６ディープウェルプレート（９６  ｄｅｅｐ  ｗｅｌｌ  ｐｌａｔｅ）１番行にジンセノサイドＲｄ１０ｐｐｍを１６μｌずつ入れ、希釈溶液を１８４μｌずつ入れた。残りのウェルには希釈溶液１００μｌずつを入れた。１番行の混合液をよく混合して１００μｌを取って２番行に入れてよく混合した後、再び１００μｌを取って３番行に入れる方式で２倍ずつ希釈させた。
【００８０】
スタフィロコッカスアウレウス（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ）、エシェリキアコリ（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ）、シュードモナスエルギノーサ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）は３２℃恒温槽で培養し、カンジダアルビカンス（Ｃａｎｄｉｄａ  ａｌｂｉｃａｎｓ）、アスペルギルスニガー（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｎｉｇｅｒ）は２５℃恒温槽で培養した。４８時間後に菌の増殖可否を懸濁度と顕微鏡で確認して、最小阻害濃度（ＭＩＣ：Ｍｉｎｉｍａｌ  Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ  Ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ）値を決定し、その結果を下記の表７に示した。上記のジンセノサイドＲｄをコンパウンドＯに代替して試験を同一な過程で実施した。その結果も下記の表７に示した。
【００８１】
【表７】
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【００８２】
［試験例６］皮脂減少効果の測定
上記の剤形例１、２、および比較剤形例１の皮脂分泌抑制効果を調べるために次のように評価した。皮脂分泌が多いと感じる被験者男女３０名を選定して、指定された部位に剤形例１、２、および比較剤形例１の栄養クリームを４週間、毎日塗布するようにした。皮脂減少の効果に対する判定については、皮脂量測定器（Ｓｅｂｕｍｅｔｅｒ  ＳＭ８１０、Ｃ＋Ｋ  Ｅｌｅｃｔｒｏｎｉｃ  Ｃｏ．、ドイツ）を使用して２週間および４週間経過後の平均皮脂減少率（％）をそれぞれ測定した。その結果を下記の表８に示した。
【００８３】
【表８】
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【００８４】
上記の表８の結果から、本発明によるジンセノサイドＲｄを有効成分として含有する剤形例１は、これを含有しない比較剤形例１よりも過剰に分泌される皮脂を効果的に抑制できることが分かる。さらに、本発明によるコンパウンドＯを有効成分として含有する剤形例２は、これを含有しない比較剤形例１よりも過剰に分泌される皮脂を効果的に抑制できることが分かる。
【００８５】
以下、本発明による組成物の製剤例を説明するが、薬学組成物および化粧料組成物は様々な剤形に応用することができ、これは本発明を限定しようとするものではなく、単に具体的に説明するためのものである。
【００８６】
［製剤例１］化粧水
下記の表９に記載の組成で通常の方法によって化粧水を製造する。
【００８７】
【表９】
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【００８８】
［製剤例２］栄養クリーム
下記の表１０に記載の組成で通常の方法によって栄養クリームを製造する。
【００８９】
【表１０】
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【００９０】
［製剤例３］マッサージクリーム
下記の表１１に記載の組成で通常の方法によってマッサージクリームを製造する。
【００９１】
【表１１】
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【００９２】
［製剤例４］パック
下記の表１２に記載の組成で通常の方法によってパックを製造する。
【００９３】
【表１２】
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【００９４】
［製剤例５］ゲル
下記の表１３に記載の組成で通常の方法によってゲルを製造する。
【００９５】
【表１３】
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【００９６】
［製剤例６］軟膏
下記の表１４に記載の組成で通常の方法によって軟膏を製造する。
【００９７】
【表１４】
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【００９８】
以上で本発明の特定な部分を詳細に記述したところ、当業界の通常の知識を持った者においてこのような具体的な技術は単なる好ましい実施形態であって、これにより本発明の範囲が制限されない点は明白である。したがって、本発明の実質的な範囲は添付の請求項とこれらの均等物によって定義され得る。
【国際調査報告】
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