(57)【要約】  本開示は、天然抽出物（複数可）およびそれらの分画（複数可）を含有する組成物、ならびに、皮膚、毛髪および爪を処置するためのそのような組成物の使用に関する。例えば、本開示は、（ｉ）ヤーコン葉、（ｉｉ）アモールセコ葉、もしくは（ｉｉｉ）ポルフィリディウムバイオマスの水性抽出物またはそれらの組合せ、および医薬としてまたは化粧品として許容される担体を含有する、美容上の目的で毛髪、皮膚および爪に使用するための組成物に関する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
対象において低色素性皮膚病変の出現を低減するための方法であって、（ｉ）ヤーコン葉、（ｉｉ）アモールセコ葉、もしくは（ｉｉｉ）ポルフィリディウムバイオマスの水性抽出物またはそれらの組合せ、および医薬としてまたは化粧品として許容される担体を含む組成物を皮膚に適用するステップを含む、方法。
【請求項２】
前記組成物が、ヤーコン葉の水性抽出物、および医薬としてまたは化粧品として許容される担体を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記組成物が、アモールセコ葉の水性抽出物、および医薬としてまたは化粧品として許容される担体を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
前記組成物が、ポルフィリディウムバイオマスの水性抽出物、および医薬としてまたは化粧品として許容される担体を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項５】
前記組成物が、Ｌ−メチオニンをさらに含む、請求項１に記載の方法。
【請求項６】
前記（ｉ）ヤーコン葉、（ｉｉ）アモールセコ葉または（ｉｉｉ）ポルフィリディウムバイオマスの供給源が、Ｌ−メチオニンを強化する条件下で成長させたものである、請求項１に記載の方法。
【請求項７】
前記組成物が：安定剤、乳化剤、増粘剤、浸透促進剤、防腐剤、界面活性剤、キレート剤、湿潤剤および抗酸化剤の１つまたは複数を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項８】
前記水性抽出物が、０．２ミクロン超の直径を有する固体粒子を実質的に含まない、請求項１に記載の方法。
【請求項９】
前記低色素性病変が、特発性滴状低メラニン症である、請求項１に記載の方法。
【請求項１０】
前記低色素性病変が、白斑である、請求項１に記載の方法。
【請求項１１】
低色素性病変の発症を遅くする、（ｉｉ）自然な皮膚の色を保つ、（ｉｉｉ）低色素性病変の発症を逆行させる、および／または（ｉｖ）低色素性病変の発症を遅延させる、請求項１に記載の方法。
【請求項１２】
前記水性抽出物が、０．５％（ｗ／ｖ）で少なくとも２ｎｍｏｌ／分／ｍｌの過酸化水素分解活性、または（ｉｉ）０．５％（ｗ／ｖ）で、内因性ケラチノサイト過酸化水素分解活性および排除活性を少なくとも５０％向上させる活性を有する、請求項１に記載の方法。
【請求項１３】
前記組成物が、非変性である、請求項１に記載の方法。
【請求項１４】
高齢者の皮膚の状態を改善するための方法であって、（ｉ）ヤーコン葉、（ｉｉ）アモールセコ葉、もしくは（ｉｉｉ）ポルフィリディウムバイオマスの水性抽出物またはそれらの組合せ、および医薬としてまたは化粧品として許容される担体を含む組成物を、約６５歳を超える対象の皮膚に適用するステップを含む、方法。
【請求項１５】
前記組成物が、ヤーコン葉の水性抽出物、および医薬としてまたは化粧品として許容される担体を含む、請求項１４に記載の方法。
【請求項１６】
前記組成物が、アモールセコ葉の水性抽出物、および医薬としてまたは化粧品として許容される担体を含む、請求項１４に記載の方法。
【請求項１７】
前記組成物が、ポルフィリディウムバイオマスの水性抽出物、および医薬としてまたは化粧品として許容される担体を含む、請求項１４に記載の方法。
【請求項１８】
前記組成物が、Ｌ−メチオニンをさらに含む、請求項１４に記載の方法。
【請求項１９】
前記（ｉ）ヤーコン葉、（ｉｉ）アモールセコ葉または（ｉｉｉ）ポルフィリディウムバイオマスの供給源が、Ｌ−メチオニンを強化する条件下で成長させたものである、請求項１４に記載の方法。
【請求項２０】
前記組成物が：安定剤、乳化剤、増粘剤、浸透促進剤、防腐剤、界面活性剤、キレート剤、湿潤剤および抗酸化剤の１つまたは複数を含む、請求項１４に記載の方法。
【請求項２１】
前記水性抽出物が、０．２ミクロン超の直径を有する固体粒子を実質的に含まない、請求項１４に記載の方法。
【請求項２２】
（ｉ）皮膚の菲薄化を遅くする、または（ｉｉ）皮膚の乾燥を低減する、または（ｉｉｉ）皮膚の掻痒を低減する、または（ｉｖ）血腫発症の重症度を低下させる、または（ｖ）皮膚の表在性創傷の治癒を向上させる、および／または（ｖｉ）皮膚の脆弱性を低下させる、請求項１４に記載の方法。
【請求項２３】
前記水性抽出物が、０．５％（ｗ／ｖ）で少なくとも２ｎｍｏｌ／分／ｍｌの過酸化水素分解活性、または（ｉｉ）０．５％（ｗ／ｖ）で、内因性ケラチノサイト過酸化水素分解活性および排除活性を少なくとも５０％向上させる活性を有する、請求項１４に記載の方法。
【請求項２４】
前記組成物が、非変性である、請求項１４に記載の方法。
【請求項２５】
（ｉ）ヤーコン葉、（ｉｉ）アモールセコ葉、もしくは（ｉｉｉ）ポルフィリディウムバイオマスの水性抽出物、またはそれらの組合せ、および医薬としてまたは化粧品として許容される担体を含む、局所用組成物。
【請求項２６】
ヤーコン葉の水性抽出物、および医薬としてまたは化粧品として許容される担体を含む、請求項２５に記載の局所用組成物。
【請求項２７】
アモールセコ葉の水性抽出物、および医薬としてまたは化粧品として許容される担体を含む、請求項２５に記載の局所用組成物。
【請求項２８】
ポルフィリディウムバイオマスの水性抽出物、および医薬としてまたは化粧品として許容される担体を含む、請求項２５に記載の局所用組成物。
【請求項２９】
Ｌ−メチオニンをさらに含む、請求項２５に記載の組成物。
【請求項３０】
前記（ｉ）ヤーコン葉、（ｉｉ）アモールセコ葉または（ｉｉｉ）ポルフィリディウムバイオマスの供給源が、Ｌ−メチオニンを強化する条件下で成長させたものである、請求項２５に記載の組成物。
【請求項３１】
安定剤、乳化剤、増粘剤、浸透促進剤、防腐剤、界面活性剤、キレート剤、湿潤剤および抗酸化剤の１つまたは複数を含む、請求項２５に記載の局所用組成物。
【請求項３２】
前記水性抽出物が、０．２ミクロン超の直径を有する固体粒子を実質的に含まない、請求項２５に記載の局所用組成物。
【請求項３３】
前記水性抽出物が、０．５％（ｗ／ｖ）で少なくとも２ｎｍｏｌ／分／ｍｌの過酸化水素分解活性、または（ｉｉ）０．５％（ｗ／ｖ）で、内因性ケラチノサイト過酸化水素分解活性および排除活性を少なくとも５０％向上させる活性を有する、請求項２５に記載の局所用組成物。
【請求項３４】
非変性である、請求項１９に記載の局所用組成物。
【請求項３５】
前記組成物を適用するステップが、前記皮膚におけるハイドロジェンペルオキシダーゼの濃度を低下させる、請求項１に記載の方法。
【請求項３６】
前記組成物を適用するステップが、前記高齢者の皮膚におけるハイドロジェンペルオキシダーゼの濃度を低下させる、請求項１４に記載の方法。
【請求項３７】
白髪化を低減するための方法であって、（ｉ）ヤーコン葉、（ｉｉ）アモールセコ葉、もしくは（ｉｉｉ）ポルフィリディウムバイオマスの水性抽出物またはそれらの組合せ、および医薬としてまたは化粧品として許容される担体を含む組成物を、頭皮または無毛ではない皮膚に適用するステップを含む、方法。
【請求項３８】
前記適用が、前記頭皮に対して行われる、請求項３７に記載の方法。
【請求項３９】
前記組成物が、ヤーコン葉の水性抽出物、および医薬としてまたは化粧品として許容される担体を含む、請求項３７に記載の方法。
【請求項４０】
前記組成物が、アモールセコ葉の水性抽出物、および医薬としてまたは化粧品として許容される担体を含む、請求項３７に記載の方法。
【請求項４１】
前記組成物が、ポルフィリディウムバイオマスの水性抽出物、および医薬としてまたは化粧品として許容される担体を含む、請求項３７に記載の方法。
【請求項４２】
前記組成物が：安定剤、乳化剤、増粘剤、浸透促進剤、防腐剤、界面活性剤、キレート剤、湿潤剤および抗酸化剤の１つまたは複数を含む、請求項３７に記載の方法。
【請求項４３】
前記組成物が、Ｌ−メチオニンをさらに含む、請求項３７に記載の方法。
【請求項４４】
前記（ｉ）ヤーコン葉、（ｉｉ）アモールセコ葉または（ｉｉｉ）ポルフィリディウムバイオマスの供給源が、Ｌ−メチオニンを強化する条件下で成長させたものである、請求項３７に記載の方法。
【請求項４５】
前記水性抽出物が、０．２ミクロン超の直径を有する固体粒子を実質的に含まない、請求項３７に記載の方法。
【請求項４６】
前記組成物を適用するステップが、前記頭皮および無毛ではない皮膚におけるハイドロジェンペルオキシダーゼの濃度を低下させる、請求項３７に記載の方法。
【請求項４７】
（ｉ）毛髪の灰色化を遅くする、（ｉｉ）自然な毛髪の色を保つ、（ｉｉｉ）毛髪の灰色化を逆行させる、および／または（ｉｖ）毛髪の灰色化を遅延させる、請求項３７に記載の方法。
【請求項４８】
前記水性抽出物が、０．５％（ｗ／ｖ）で少なくとも２ｎｍｏｌ／分／ｍｌの過酸化水素分解活性、または（ｉｉ）０．５％（ｗ／ｖ）で、内因性ケラチノサイト過酸化水素分解活性および排除活性を少なくとも５０％向上させる活性を有する、請求項３７に記載の方法。
【請求項４９】
前記組成物が、非変性である、請求項３７に記載の方法。
【請求項５０】
前記組成物が、約０．００１％から約９９％の前記水性抽出物を含む、請求項１４に記載の方法。
【請求項５１】
前記組成物が、約０．００１％から約９９％の前記水性抽出物を含む、請求項３７に記載の方法。
【請求項５２】
前記組成物が、約０．００１％から約９９％の前記水性抽出物を含む、請求項２５に記載の局所用組成物。
【発明の詳細な説明】
【背景技術】
【０００１】
背景
白髪化（白髪症）、または色素生成および毛幹内沈着の欠乏は、多くの文化においてきわめて望ましくない、老化の明らかな兆候である。白髪化は、いくつかの内的および外的要因の相互反応から生じる、複雑な現象である。内的要因としては、遺伝子にプログラムされているプロセスが挙げられ、このプロセスにより、若白髪、遺伝性疾患、および自然老化プロセスが引き起こされ得る。外的要因としては、環境的要因（例えば風、高温、タバコの煙、化学物質、ＵＶ照射など）、栄養効果、薬物効果、および情緒的ストレスが挙げられる。これらの要素すべてが、毛髪色素形成の不能に寄与する分子および細胞プロセスを誘導する。
【０００２】
白髪化に対処する主なアプローチは、考古学的には紀元前約１５００年から記録されている毛髪の染色（「カラーリング」）であり、今日でも依然として普及している。しかし、毛髪のカラーリングには、いくつかの制限がある。毛髪のカラーリング領域の境界は、毛髪が成長するにつれて目に見えるようになり、審美的外観は、望ましいものよりも損なわれ、望ましくない老化プロセスが露わになる。毛髪の染色は、健康に悪い、または、毛髪もしくは周囲の皮膚、および環境に悪影響を及ぼす化学物質、例えば過酸化水素の使用を必要とする。専門業者による毛髪の染色は、かなりのコストおよびスケジュール上の負担を伴い、家庭での手順には、大幅な時間的拘束、汚れおよび煩雑さがつきものである。したがって、白髪化の問題を解決するためにより優れた手順および方法を得ることが望ましい。
【０００３】
白髪化を防止する、遅くする、低減するまたは逆行させることができる局所処置を得ることが望ましい。そのような処置を、日常的な皮膚および毛髪ケアのための、単回かつ良心的価格の局所処置として得ることがより望ましい。そのような処置により、刺激がほとんどなく、またはなく、かつ、有害な副作用が少ない、またはない白髪化の解決策が得られるはずであり、また、さらに、他の望ましい頭皮および毛髪の健康、ウエルネスならびに美容に関する利益が得られるはずである。医薬品の処方を必要としない局所処置を得ることがさらに望ましい。
【０００４】
皮膚の老化は、皮膚の分子および構造の機能が、経時的に低下し、ＵＶ曝露によりさらに害が及ぶ、緩やかな慢性的プロセスである。皮膚の老化は、最初に、顔のたるみ、小皺、皺および年齢によるしみといった外観が注目され、続いて、つやがなく、薄い毛髪、眉およびまつ毛、ならびに乾燥し、脆い皮膚および爪といった外観が注目される。アンチエイジング市場は、主に美顔向上を対象とした矯正および解決策を提供している。老化プロセスに寄与する分子および細胞プロセスに影響を与える「アンチエイジング」製品を得ること、ならびに、化粧品効果に留まらないさらなる機能的利益を得ることが望ましい。
【０００５】
５０代半ばの「老化のフリーラジカル理論」は、累積した酸化ダメージと老化の程度を相互に関連付けている。酸化ストレス（または活性酸素（ＲＯＳ）の生成と、ＲＯＳを取り除き、生じたダメージを修復する能力との間の不均衡）は、老化およびＵＶ曝露により増加する一方、老化細胞の抗酸化反応は、変異の蓄積を遅くする。ＲＯＳは、炎症プロセスおよび免疫抑制を誘導し、これらは、バリアのダメージにさらに寄与し、皮膚の完全な状態に害を及ぼす。臨床的データは、酸化ストレスの低減は、皮膚の健康およびウエルネスに寄与し、老化の発現を低減することを示唆している。酸化ストレスを低減するだけではなく、老化細胞の内因性抗酸化反応も向上させる「アンチエイジング」皮膚ケアの解決策を得ることが望ましい。
【０００６】
老化の、より顕著な、および望ましくない兆候の１つは、皮膚色素病変である。ＵＶ曝露した皮膚領域に出現する褐色の斑点（「年齢によるしみ」）は、そのような色素の問題の１つである。さらに、老化により誘導される白い低色素斑（特発性滴状低メラニン症、ＩＧＨ）も日光に曝露した老化皮膚領域に出現し、望ましくない「老けた」見た目のシグナルとなる。これらの患部は、一切のメラニン産生が止まっている可能性があり、これにより、患部に色素の完全な欠乏が引き起こされ、結果的に、醜いが、但し良性な病変を生じる。ＩＧＨ病変は、老齢者および高齢者（≧４０歳）の５０％超で一般的に見出され、その約３０％は、初期ＩＧＨ病変を２０歳前に発症する。
【０００７】
例えばＩＧＨにおいて、斑点状の皮膚色素欠乏に対して利用できる処置はない。自然な皮膚の色を保つ、または、例えばＩＧＨにおいて皮膚の色素を失った領域における斑点の皮膚色素欠乏を防止する、もしくは遅くする、もしくは低減する、もしくは逆行させることができる局所処置を得ることが望ましい。日常的な皮膚ケアのための、単回かつ良心的価格の局所処置のような処置を得ることがより望ましい。そのような処置は、斑点の皮膚色素欠乏に対して、刺激が最小限に留められ、またはなく、かつ、有害な副作用が少ない、またはない解決策が得られるはずであり、また、さらに皮膚の他の望ましい健康、ウエルネスおよび美容に関する利益が得られるはずである。
【０００８】
ＩＧＨは、白斑と混同すべきではなく、皮膚の脱色疾患である。白斑は、皮膚の色素沈着がない白いまだらが体の様々な部分に出現する障害である。白斑病変は、大きいまだらであり、これらは急速に拡大し、日光の曝露または老化に関連しない。白斑は、自己免疫性、遺伝子性、神経性またはウイルス性の原因、および酸化ストレスから生じることがある。白斑は、何年もかけてゆっくり広がるケースもあるが、広がりがきわめて迅速に発生するケースもある。一部の報告は、白いまだらの増加と、身体的または情緒的ストレスを関連付けている。白斑に対して、最も一般的に処方されている処置は、強力な、またはきわめて強力な局所用副腎皮質ステロイドである。残念ながら、患者の約４５パーセントしか、この処置後の数カ月で、一部の皮膚の色を取り戻せていない。光線療法は、まったく効果がなく、ＰＵＶＡ治療でも、同様に満足すべき結果が得られない。
【０００９】
自然な皮膚の色を保つことができる、または、白斑における色素の欠乏を防止する、もしくは遅くする、もしくは低減する、もしくは逆行させる局所処置を得ることが望ましい。日常的な皮膚ケアのための、単回かつ良心的価格の局所処置のような処置を得ることがより望ましい。そのような処置により、刺激がほとんどなく、またはなく、かつ、有害な副作用が少ない、またはない白斑の解決策が得られるはずであり、また、さらに、他の望ましい皮膚の健康、ウエルネスおよび美容に関する利益が得られるはずである。
【００１０】
高齢者の皮膚（一般的に、６５歳またはそれ超の個人の皮膚をいうが、年齢は、多数の要因により変動し得る）は、著しく老化しているので、きわめて脆い。これは、薄く、乾燥し、非常にかゆみがあり、傷つきやすく、創傷、裂傷および感染が生じやすいので、健康およびクオリティオブライフの両方に影響を与える。高齢者の皮膚では、老化プロセスは継続し、拡大する。炎症性浸潤の規模は増大し、創傷治癒および免疫応答は遅延し、体温調節は損なわれ、発汗および皮脂生成は減少する。生涯を通じた環境曝露の累積効果は、高齢者における皮膚の機能的老化をさらに促進させる。これらは、ＵＶ曝露、汚染および喫煙だけではなく、空調、暖房および温水の使用のような要因も含む。疾患、詳細には糖尿病、免疫障害、心臓疾患、腎不全または肝不全、悪性腫瘍および感染症は、皮膚の老化プロセスを促進し、ステロイド、抗凝固剤、抗凝血剤、免疫調節剤のような薬物および癌治療法の継続使用も同様である。緩慢さ、およびライフスタイルの変化は、脱水および皮膚の栄養低下にさらに寄与し、高齢者の皮膚の乾燥および脆弱性を促進し、「ちょっとした傷」およびその所産の増加に寄与する。興味深いことに、老化に関連した高齢者の皮膚の変化は、大半が、光損傷またはライフスタイルではなく自然老化によることが示唆された。
【００１１】
高齢者の皮膚の主な要求は、美顔には関連していないが、体の皮膚の健康および健全性に関連している。乾燥およびかゆみを低減するのに必要なことは、皮膚損傷の規模および重症度を低下させること、皮膚の裂傷を減少させること、血腫を減少させること、ささいな損傷の治癒時間を向上させること、感染の速度を低下させることなどである。残念ながら、こうした高齢者の皮膚の要求に力を注いだ消費者向け製品は、存在してもわずかしかない。高齢者の皮膚は、生物学的性質を向上させ、望ましくない性状、例えば掻痒または脆弱性を、加湿のみの使用よりも優れた手段で低減することから利益を得る。高齢者の皮膚における皮膚の老化プロセスを防止する、遅くする、低減するまたは逆行させることができる局所処置を得ることが望ましい。日常的なケアのための、単回かつ良心的価格の局所処置のような処置を得ることがより望ましい。そのような処置により、刺激がほとんどなく、またはなく、かつ、脆い皮膚に対して有害な副作用が少ない、またはない、高齢者の皮膚の要求に対する解決策が得られるはずであり、また、さらに他の望ましい健康、ウエルネスおよび美化に関する利益が得られるはずである。医薬品の処方を必要としない、そのような単回の局所処置を得ることがさらに望ましい。
【００１２】
高齢患者は、一般的な爪の変化および異栄養症を経験しており、これらは、疼痛を誘導し、日常的活動に影響を与え、美容上の懸念となる。年齢に応じて、爪は、壊れやすく、割れやすくなることがあり、ばち爪（爪がきわめて丸くなる著しい形状の変化）になることがあり、または変色することがある。残念ながら、高齢者の爪ケア、または、爪の全般的健康および健全性に力を注いだ消費者向け製品は存在しない。爪およびその周囲の皮膚、ならびにキューティクルの生物学的性質を向上させ、爪の老化に関連する望ましくない性質を低減する製品を得ることが望ましい。日常的なケアのための、単回かつ良心的価格の局所処置のような製品を得ることがより望ましい。そのような処置により、脆い皮膚に対して刺激がほとんどなく、またはなく、かつ、有害な副作用が少ない、またはない、高齢者の皮膚の要求に対する解決策が得られるはずであり、また、他の望ましい健康、ウエルネスおよび美化に関する利益がさらに得られるはずである。医薬品の処方を必要としない、そのような単回の局所処置を得ることがさらに望ましい。
【発明の概要】
【００１３】
概要
本開示は、天然生成物（複数可）、例えば、ボタニカル抽出物、藻類抽出物、酵母抽出物、菌類抽出物もしくは微生物抽出物、またはそのような抽出物の分画（複数可）、またはそれらの組合せ（複数可）（まとめて「天然抽出物」と定義される）であるが、それらに限定されない天然生成物（複数可）を含む天然抽出物（複数可）の生成物を（例えば、それを必要とする哺乳動物、例としてヒトに）局所送達するための組成物を特徴とする。一例では、本開示の天然抽出物は、（１）活性な、非変性カタラーゼおよび／またはグルタチオンペルオキシダーゼを含有する、あるいは（２）カタラーゼ様活性（例えば、過酸化水素を分解する、または排除する）を有する、あるいは（３）カタラーゼ強化活性（例えば、遺伝子発現、タンパク質翻訳または過酸化水素分解もしくは排除の増進を引き起こす他の活性を向上させる）を有する、あるいは（４）カタラーゼ安定化活性、またはそのような活性の１つもしくは複数の組合せ（まとめて「カタラーゼ関連活性」もしくは「カタラーゼ様活性」と定義される）を有する。別の実施形態では、本開示の天然供給源（例えばボタニカル、植物、藻類、酵母、菌類または微生物）は、Ｌ−メチオニンを用いて成長させる、もしくはそれを強化する、もしくはそれを補充する、もしくはそれを生成するように設計する、もしくはそれと組み合わせることができる、または天然抽出物そのものをＬ−メチオニンと組み合わせることができる。
【００１４】
一実施形態では、本開示は、天然抽出物および医薬品または化粧品担体について記載する。さらに別の例示では、本開示の組成物は、有効なカタラーゼ関連活性を維持すること、およびそのような活性を皮膚、爪または毛嚢内に送達することを可能にする、送達系（複数可）、またはビヒクル（複数可）、または安定化系（複数可）をさらに含む。
【００１５】
本開示に記載されている組成物を、皮膚、毛髪および爪ケアに使用して、皮膚、頭皮、毛髪および爪に、健康およびウエルネスに関する利益をもたらし、皮膚、頭皮、毛髪および爪にアンチエイジングを施し、高齢者の皮膚に関する利益をもたらすことができる。さらに別の特徴では、本開示に記載されている組成物を使用して、皮膚、頭皮、毛髪および爪の老化の兆候、ならびに高齢者の皮膚の兆候の視認性を低減することができる。
【００１６】
本開示は、哺乳動物の白髪化プロセスを低減する方法も特徴とし、前記方法は、頭皮、または毛髪を有する他の所望の皮膚の領域、または無毛ではない皮膚に、本明細書に記載されている組成物を適用するステップを含む。白髪は、元の自然な毛髪の色から、生物学的プロセス、例えば老化、化学曝露、環境曝露、栄養曝露、薬曝露などにより色が変化し、色が薄まった、または無彩色、または元の自然な毛髪の色よりも明るい、白と黒の中間の毛髪と定義される。ヒトの無毛ではない皮膚は、毛に覆われている、毛髪を成長させることができる、または毛嚢を含有できるヒトの皮膚の領域すべてと定義される。無毛ではない皮膚は、生まれながらに毛髪がないわけではない外表皮膚すべてを指し、指の腹、掌、足の裏、唇、小陰唇および陰茎亀頭に見出される皮膚のみを除外する。白髪化の低減は、自然な毛髪の色を保存すること、または自然な毛髪の色の喪失の量もしくは質を低減すること、または白髪化のプロセスを遅くする、低減する、もしくは逆行させること、または白髪化を防止すること、または白髪化の視認性を低減することを含むが、それらに限定されない。
【００１７】
本開示に記載されている組成物を使用して、皮膚の自然な色を保つ、または皮膚における色素の欠乏、もしくは皮膚の自然な色の不均一な減退を遅くする、もしくは低減する、もしくは遅延させる、もしくは逆行させる、または低色素性皮膚病変（色素を欠乏した病変の「白いしみ」、ＩＧＨおよび白斑病変を含むが、それらに限定されない）の視認性を低減することもできる。そのような病変は、老化により誘導される白色の、または自然な皮膚の色より明るい、または低色素性のしみ（例えば特発性滴状低メラニン症、ＩＧＨ）、および疾患により誘導される色素の欠乏（例えば白斑）を含むが、それらに限定されない。本開示は、哺乳動物の非色素皮膚領域の出現を低減する方法についても記載し、前記方法は、所望の皮膚領域に、上の組成物を適用するステップを含む。
【００１８】
一態様では、本開示は、安全かつ有効量の天然抽出物を含有する組成物を適用することにより、毛髪の自然な色を保つ、または毛嚢の天然色素生成の減退を遅くする、または、白髪化を遅延させる、もしくは遅くする、もしくはその重症度を低下させる、または白髪化の出現を低減する方法に関する。別の態様では、天然抽出物は、Ｌ−メチオニンを補充する、それで強化する、またはそれと組み合わせることができる。
【００１９】
別の態様では、本開示は、安全かつ有効量の天然抽出物を含有する組成物を適用することにより、毛嚢の天然色素生成の減退を防止する、および白髪化の出現を低減する方法に関する。一態様では、天然抽出物は、Ｌ−メチオニンを補充する、それで強化する、またはそれと組み合わせることができる。
【００２０】
さらに別の態様では、本開示は、安全かつ有効量の天然抽出物を含有する組成物を適用することにより、毛嚢の天然色素生成の減退を部分的に、または完全に逆行させ、白髪化の出現を低減する方法に関する。一態様では、天然抽出物は、Ｌ−メチオニンを補充する、それで強化する、またはそれと組み合わせることができる。
【００２１】
別の態様では、本開示は、自然な毛髪の色を保つ、または、毛嚢の天然色素生成の減退を遅くする、もしくは防止する、もしくは逆行させる、または、白髪化の出現を遅くする、もしくは防止する、もしくは逆行させるために、天然抽出物を含む組成物、および、毛髪、頭皮または毛髪を有する他の皮膚領域（無毛ではない皮膚）に組成物を適用するよう使用者に指示する説明書を含む製品を特徴とする。そのような毛に覆われている皮膚領域は、頭皮、頭部、眉、まつ毛、顎髭、口髭、胸部、背中、腕、脚などを含むが、それらに限定されない。
【００２２】
さらに別の態様では、本開示は、自然な毛髪の色を保つ、または、毛嚢の天然色素生成の減退を遅くする、もしくは防止する、もしくは逆行させる、または、白髪化の出現を遅くする、もしくは防止する、もしくは逆行させるために、毛髪、頭皮もしくは毛に覆われている皮膚領域、または無毛ではない皮膚に、天然抽出物を含有する組成物を適用するよう使用者に指示することにより、前記組成物を含む製品を強化する方法を特徴とする。
【００２３】
別の態様では、本開示は、安全かつ有効量の天然抽出物を含有する組成物を適用することにより、皮膚の自然な色を保つ、または老化した皮膚の天然色素生成の不均一な減退を遅くする、または、色素を欠乏した病変（例えばＩＧＨ、「白いしみ」、または白斑）を遅延させる、もしくは遅くする、もしくはその重症度もしくはその病変の視認性を低減する方法に関する。別の態様では、本開示は、安全かつ有効量の天然抽出物を含有する組成物を適用することにより、皮膚の自然な色を保つ、または皮膚の色素欠乏の発症を遅くする、または、しみの多い色素欠乏を遅延させる、もしくは遅くする、もしくはその重症度を低下させる方法に関する。さらに別の態様では、天然抽出物は、Ｌ−メチオニンを補充する、それで強化する、またはそれと組み合わせることができる。
【００２４】
別の態様では、本開示は、安全かつ有効量の天然抽出物を含有する組成物を適用することにより、皮膚の自然な色を保つ、または皮膚の不均一な色素生成の減退を防止する、または、非色素性皮膚病変の出現を低減する方法に関する。さらに別の態様では、天然抽出物は、Ｌ−メチオニンを補充する、それで強化する、またはそれと組み合わせることができる。
【００２５】
さらに別の態様では、本開示は、安全かつ有効量の天然抽出物を含有する組成物を適用することにより、皮膚の色素生成の不均一な減退を部分的にもしくは完全に逆行させる、または、非色素性皮膚病変の出現を低減する方法に関する。さらに別の態様では、天然抽出物は、Ｌ−メチオニンを補充する、それで強化する、またはそれと組み合わせることができる。
【００２６】
別の態様では、本開示は、自然な皮膚の色を保つ、または皮膚における色素生成の減退を遅くする、もしくは防止する、もしくは逆行させる、または、色素沈着がない皮膚病変の出現を遅くする、もしくは防止する、もしくは逆行させるために、天然抽出物を含む組成物、および、罹患した、または所望の皮膚領域に組成物を適用するよう使用者に指示する説明書を含む製品を特徴とする。
【００２７】
さらに別の態様では、本開示は、皮膚の自然な色を保つ、または、皮膚の色素生成における減退を遅くする、もしくは防止する、もしくは逆行させる、または、色素沈着がない皮膚病変の出現を遅くする、もしくは防止する、もしくは逆行させるために、罹患した、または所望の皮膚領域に、天然抽出物を含有する組成物を適用するよう使用者に指示することにより、前記組成物を含む製品を強化する方法を特徴とする。
【００２８】
さらに別の例では、本開示は、安全かつ有効量の天然抽出物を含有する組成物を皮膚（無毛および無毛ではない領域の両方）に適用して、皮膚の健康、ウエルネスおよび外観を向上させることにより、皮膚、頭皮、毛髪および爪の健康およびウエルネスを向上させる、皮膚、毛髪および爪を美化する、アンチエイジングの利益を得る、または高齢者の皮膚の生物学的性質、ならびに健康およびウエルネスを向上させる方法に関する。さらに別の態様では、天然抽出物は、Ｌ−メチオニンを補充する、それで強化する、またはそれと組み合わせることができる。さらに別の態様では、本開示の組成物のアンチエイジングに関する利益は、皺、たるみ、「年齢によるしみ」、ならびに顔の皮膚の老化に関する他の兆候および症状に対する、望ましい構造的、機能的および視覚的効果を含み得る。さらに別の態様では、本開示の組成物の高齢者の皮膚に関する利益は、高齢者の爪、顔の皮膚、頭皮および体の皮膚の構造的および機能的な性質を向上させること、顔の皮膚、頭皮および体の皮膚の乾燥を低減すること、皮膚の掻痒を低減すること、皮膚および爪の脆弱性を低下させること、血腫の量および重症度を低下させること、皮膚裂傷および他の皮膚創傷の量および重症度を低下させること、皮膚の感染症を低減すること、ならびに皮膚創傷の治癒を向上させることを含み得る。体の皮膚は、爪を含むヒトの皮膚領域すべて、特に腕、手、指、脚および足の皮膚をいう。
【００２９】
別の態様では、本開示は、皮膚、頭皮および爪の健康およびウエルネスを向上させる、皮膚の老化の兆候を低減する、または高齢者の皮膚の質の低下および問題に対処するために、天然抽出物を含む組成物、および、罹患したまたは所望の皮膚、頭皮および爪の領域に組成物を適用するよう使用者に指示する説明書を含む製品を特徴とする。
【００３０】
さらに別の態様では、本開示は、皮膚、頭皮および爪の健康およびウエルネスを向上させる、皮膚、頭皮、毛髪および爪の老化の兆候を低減する、または高齢者の皮膚の質の低下および問題に対処するために、罹患した、または所望の皮膚、頭皮および爪の領域に、天然抽出物を含有する組成物を適用するよう使用者に指示することにより、前記組成物を含む製品を強化する方法を特徴とする。
【００３１】
本開示の他の特徴および利点は、本開示の詳細な説明および特許請求の範囲から明らかであろう。当業者は、本明細書の説明に基づいて、本開示を最大限に利用できると考えられる。以下の具体的な実施例は、単なる例示であり、本開示の以下の部分をいかなる手段によっても制限しないと解釈すべきである。特に定義されていない限り、本明細書で使用されるすべての技術および科学用語は、本開示が属する当業者により一般的に理解されるものと同じ意味を有する。また、本明細書において言及されているすべての公報、特許出願、特許および他の参考文献も、参照により本明細書に組み込む。特に指示がない限り、百分率は、重量に対する百分率（例えば％（ｗ／ｖ））である。
詳細な説明
本開示は、ある天然抽出物は、過酸化水素の排除にきわめて有効であるという認識に関し、したがって、これらは、皮膚および毛髪の自然な色を保つ、または、白髪化の出現もしくは脱色した皮膚病変を防止する、もしくは遅くする、もしくは低減する、もしくは逆行させる、または、皮膚、頭皮、毛髪および爪の老化の一般的兆候ならびに高齢者の皮膚の特定の兆候を低減するために使用できる。
【００３２】
アモールセコ（Ｄｅｓｍｏｄｉｕｍ  Ａｄｓｃｅｎｄｅｎｓ、Ｄｅｓｍｏｄｉｕｍ  ｃｏｅｒｕｌｅｕｍ、Ｄ．ｃａｅｓｐｉｔｏｓｕｍ、Ｄ．ｇｌａｕｃｅｓｃｅｎｓ、Ｄ．ｈｅｔｅｒｏｐｈｙｌｌｕｍ、Ｄ．ｏｘａｌｉｄｉｆｏｌｉｕｍ、Ｄ．ｔｒｉｆｌｏｒｕｍ、Ｈｅｄｙｓａｒｕｍ  ａｄｓｃｅｎｄｅｎｓ、Ｈ．ｃａｅｓｐｉｔｏｓｕｍ、Ｍｅｉｂｏｍｉａ  ａｄｓｃｅｎｄｅｎｓ）は、南米原産のエノキグサ亜科の樹木種である。これは、現地では、タマンケイロ、タピアまたはアモールセコとして公知である。河畔林で優先的に成長し、１０〜２０ｍの高さに達する。本質的には常緑樹であるが、暑い夏の数カ月の間は、非常に目を引く葉の生え替わりが生じ、枝全体がある程度まで枯れる。アモールセコ葉粉末は、異物を除き、粉砕され、すり潰されたアモールセコ葉から生成される。この粉末は、食品添加物として使用されている（例えば、ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｎｕｔｒｉｃａｒｇｏ．ｃｏｍ／ｈｅｒｂ−ｐｏｗｄｅｒｓ／ａｍｏｒ−ｓｅｃｏ−ｐｏｗｄｅｒを参照されたい）。
【００３３】
想定外にも、アモールセコ葉粉末は、過酸化水素分解活性を有することが見出された（実施例１を参照されたい）。さらに、ヒトケラチノサイトをアモールセコ葉粉末に曝露させると、過酸化水素を分解する、または除去する際に、ケラチノサイトの内因性細胞活性が向上する（実施例２を参照されたい）。さらに、アモールセコ葉粉末は、過酸化水素により誘導される酸化ストレスに対して強い活性を呈する（実施例３）。これらの結果から、アモールセコ葉粉末は、皮膚、頭皮、爪および毛髪に局所的に使用して、過酸化水素の濃度を低下できるので、本開示において有用となることが示唆される。アモールセコ葉粉末の局所使用は、白髪化の進展を遅くする、遅延させる、およびＴＧ低減するはずである。同様に、アモールセコ葉粉末の局所使用は、脱色した皮膚病変の視認性を低減するはずであり、皮膚、頭皮、毛髪、および爪の老化の兆候を低減し、高齢者の皮膚の性質を向上させることができる。マメ科の他の植物も、ヌスビトハギ属に限らず、類似した生物学的性質を有し得、類似した手段で使用することもできると予想される。
【００３４】
ヤーコン（Ｓｍａｌｌａｎｔｈｕｓ  ｓｏｎｃｈｉｆｏｌｉｕｓ、Ｓｙｎ．：Ｐｏｌｙｍｎｉａ  ｅｄｕｌｉｓ、Ｐ．ｓｏｎｃｈｉｆｏｌｉａ、Ｐｅｒｕｖｉａｎ  ｇｒｏｕｎｄ  ａｐｐｌｅ）は、コロンビアからアルゼンチン北部にかけてのアンデス北部および中央部で、サクサクした食感で甘味のある塊茎状根を目的に昔から栽培されている多年生植物である。ヤーコンは、エクアドルでは一般的に「ヒカマ」と呼ばれており、この関係のない植物と混同されることがある。ヤーコンは、実際には、ヒマワリおよびキクイモに近縁である。
【００３５】
想定外にも、ヤーコン葉粉末は、過酸化水素分解活性または排除活性を有することを見出した（実施例１を参照されたい）。さらに、ヒトケラチノサイトをヤーコン葉粉末に曝露させると、過酸化水素を分解する、または除去する際に、ケラチノサイトの内因性細胞活性が向上する（実施例２を参照されたい）。さらに、ヤーコン葉粉末は、過酸化水素により誘導される酸化ストレスに対して強い活性を呈する（実施例３）。これらの結果から、ヤーコン葉粉末は、皮膚、頭皮、爪および毛髪に対して局所的に使用して、過酸化水素の濃度を低下させ、有益な効果を得ることができることが示唆される。ヤーコン葉粉末の局所使用は、白髪化の進展を遅くする、遅延させる、または低減するはずである。同様に、ヤーコン葉粉末の局所使用は、脱色した皮膚病変の視認性を低減するはずであり、皮膚、頭皮、毛髪および爪の老化の兆候を低減し、高齢者の皮膚の質を向上させることができる。キク科の他の植物も、スマランサス属に限らず、類似した生物学的性質を有し得、類似した手段で使用することもできると予想される。
【００３６】
赤い微細藻類であるポルフィリディウム（属：Ｐｈｙｔｏｃｏｎｉｓ  ｐｕｒｐｕｒｅａ  Ｂｏｒｙ  ｄｅ  Ｓａｉｎｔ−Ｖｉｎｃｅｎｔ，１７９７、Ｐｏｒｐｈｙｒｉｄｉｕｍ  Ｎａｇｅｌｉ、Ｂｙｓｓｕｓ  ｐｕｒｐｕｒｅａ  Ｌａｍａｒｃｋ、Ｏｌｉｖｉａ  ｃｒｕｅｎｔａ  Ｓ．Ｆ．Ｇｒａｙ、Ｏｌｉｖｉａ  ｃｒｕｅｎｔａ  Ｓ．Ｆ．Ｇｒａｙ、Ｐｏｒｐｈｙｒｉｄｉｕｍ  ｃｒｕｅｎｔｕｍ（Ｓ．Ｆ．Ｇｒａｙ）Ｎａｇｅｌｉ、Ｐｏｒｐｈｙｒｉｄｉｕｍ  ｍａｒｉｎｕｍ  Ｋｙｌｉｎ、Ｓａｒｃｏｄｅｒｍａ  ｓａｎｇｕｉｎｅｕｍ  Ｅｈｒｅｎｂｅｒｇ、Ｐｏｒｐｈｙｒｉｄｉｕｍ  ｓｐ．  ＵＴＥＸ  ６３７もしくはＰｏｒｐｈｙｒｉｄｉｕｍ  ｓｐ．  ＵＴＥＸ  ６３７由来株、Ｐｏｒｐｈｙｒｉｄｉｕｍ  ｃｎｉｅｎｔｕｍ  ＵＴＥＸ  １６１もしくはＰｏｒｐｈｙｒｉｄｉｕｍ  ｏｍｅｎｔｕｍ  ＵＴＥＸ  １６１由来株、Ｐｏｒｐｈｙｒｉｄｉｕｍ  ａｅｒｕｇｉｎｅｕｒｎもしくはＰｏｒｐｈｙｒｉｄｉｕｍ  ａｅｒｎｇｉｎｅｕｍ由来株、Ｐｏｒｐｈｙｒｉｄｉｕｍ  ｓｏｒｄｉｄｕｍもしくはＰｏｒｐｈｙｒｉｄｉｕｍ  ｓｏｒｄｉｄｕｍ由来株、またはＰｏｒｐｈｙｒｉｄｉｕｍ  ｐｕｒｐｕｒｅｕｍもしくはＰｏｒｐｈｙｒｉｄｉｕｍ  ｐｕｒｐｕｒｅｕｍ由来株を含むが、それらに限定されないポルフィリディウム）は、単細胞の赤い（紅藻）微細藻類であり、細胞は直径１０〜２０μＭである。その生育地は、真水、汽水、海水および土壌を含み、厳しい気候条件および多量のＵＶ曝露下で成長できる。
【００３７】
藻類の多糖の加工中、分泌された多糖は保持されるが、藻類バイオマス（藻類細胞）は除去される。沈殿した藻類バイオマスは、老廃物とみなされることがあり、これは、多糖の生成中に廃棄される。藻類は、キサンチン誘導体が多く、この誘導体は、栄養的用途のためにバイオマスから抽出されることがある。他には、藻類の色素もバイオマスから抽出されている。
【００３８】
想定外にも、乾燥ポルフィリディウムバイオマスは、過酸化水素分解活性および排除活性を有することを見出した（実施例１を参照されたい）。さらに、ヒトケラチノサイトを乾燥ポルフィリディウムバイオマスに曝露させると、過酸化水素を分解する、および除去する際に、ケラチノサイトの内因性細胞活性が向上する（実施例２を参照されたい）。これらの結果から、乾燥ポルフィリディウムバイオマスは、皮膚、頭皮、爪および毛髪に局所的に使用して、過酸化水素の濃度を低下でき、有益な効果を得られることが示唆される。乾燥ポルフィリディウムバイオマスの局所使用は、白髪化の進展を遅くする、遅延させる、および低減するはずである。同様に、乾燥ポルフィリディウムバイオマスの局所使用は、脱色した皮膚病変の視認性を低減するはずであり、皮膚、頭皮、毛髪、および爪の老化の兆候を低減し、高齢者の皮膚の性質を向上させることができる。チノリモ科または紅藻植物門の他の植物も、ポルフィリディウム属に限らず類似した生物学的性質を有し得、類似した手段で使用することもできると予想される。本開示に適している他の赤い微細藻類の非限定的な例は、単細胞藻類のウシケノリ綱、真正紅藻綱、ベニミドロ目、ディクソニエラ属、または紅藻の他のメンバーを含む。
【００３９】
本開示の正確な濃度、組成物および方法の効果は、処置される領域、末端使用者の年齢、健康状態ならびに皮膚および毛髪のタイプ、処置の持続時間および性質、用いられる特定の組成物、処置される具体的な状態、化粧品としてまたは医薬として許容される、利用される特定の担体、ならびに同様の要因によって異なると考えられる。
【００４０】
本開示は、（１）活性な、非変性カタラーゼおよび／もしくはグルタチオンペルオキシダーゼを含有する、または（２）カタラーゼ様活性を有する、または（３）カタラーゼ増強活性を有する、または（４）カタラーゼ安定化活性を有する、またはそれらの混合を有する、天然抽出物（複数可）またはそれらの分画（複数可）、またはそれらの組合せ（複数可）について説明する。本開示で説明されている天然抽出物は、植物抽出物、藻類抽出物、酵母抽出物、菌類抽出物、微生物抽出物、またはそのような抽出物（複数可）の分画（複数可）、またはそれらの組合せであってよいが、それらに限定されない。
【００４１】
本開示の天然抽出物は、水性である。水性抽出物は、全体的または部分的に水からなり、水そのもの、任意の比率の水性／アルコール性溶媒または、水および化合物、例えばプロピレングリコールを任意の比率で含む溶媒を含むが、それらに限定されない任意の溶媒により抽出された材料である。水性抽出物は、液体形態であってもよく、または固体形態に乾燥させてもよい。
【００４２】
一例では、天然供給源内におけるカタラーゼおよび／またはグルタチオンペルオキシダーゼ生成の向上は、（１）関連性がある遺伝的変異体を選択すること、または（２）遺伝子工学技術を使用すること、または（３）過酸化水素への時間指定曝露および選択的曝露（例えば、定義した増殖フェーズでの連続曝露、パルス曝露）を管理すること、または（４）異なる波長への時間指定曝露および選択的曝露（例えばＵＶ、ブルーライトなど）を管理すること、または（５）抽出用に天然供給源を収集する前に、天然供給源の成長もしくは生物学的性質に影響を与えるある原料（例えば化学物質、栄養剤）を用意すること、またはそれらの組合せにより達成される。
【００４３】
別の例では、天然供給源は、（１）Ｌ−メチオニンが多い栄養条件下で成長できる、または（２）Ｌ−メチオニンの生成を向上させる栄養条件下で成長できる、または、（３）成長中にＬ−メチオニンを補充できる、または（４）Ｌ−メチオニンを生成する、もしくは保持するように設計できる、または（５）天然抽出物の調製および加工中にＬ−メチオニンと組み合わせることができる。Ｌ−メチオニン濃縮抽出物は、本明細書で開示されている組成物および方法すべてに使用でき、皮膚、頭皮、毛髪および爪における過酸化水素の濃度の低下に関して、優れた効果を有すると予想される。一実施例では、植物の施肥は、高レベルのＬ−メチオニンを含む微量栄養素組成物を用いて行われる。別の実施例は、約０．１〜１００ｍＭのＬ−メチオニンを用いた藻類、菌類、酵母および他の微生物の増殖培地の強化に関し、これにより、こうした材料から調製された抽出物中で、メチオニンの増加を引き起こせる。さらに、または代替法として、天然抽出物（例えば、アモールセコ葉粉末、ヤーコン葉粉末または乾燥ポルフィリディウムバイオマス、またはそれらの水性抽出物）は、天然抽出物生成および加工の任意の段階にて、０．１〜１００ｍＭのＬ−メチオニンと組み合わせることができる。
【００４４】
組成物中のＬ−メチオニンの有効な濃度は、罹患した組織（例えば白髪の毛嚢、白斑病変、高齢者の皮膚など）内の過酸化水素の濃度とほぼ同一とすべきである。この濃度は、個人の年齢、性、皮膚のタイプおよび毛髪のタイプに応じて、また、具体的な要求（例えば、低色素性病変、白髪、高齢者の皮膚など）に応じて変動する。濃度が低い（高マイクロモル範囲）ほど、高齢者の皮膚に有効になる一方、濃度が高い（低ミリモル範囲）ほど、白髪および低色素性皮膚病変に影響を与えるために必要とされると考えられる。
【００４５】
別の例では、本開示の天然抽出物は、非変性であり、カタラーゼ酵素またはグルタチオンペルオキシダーゼ酵素のような、安定かつ活性なタンパク質を含有する。「変性」は、Ｂａｎｔａｍ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ（１９９０年版）において、「加熱、Ｘ線または化学物質により引き起こされる、タンパク質の物理的および生理学的性質における変化。これらの変化は、酵素のケースでは、活性を失うことを含む」と定義されている。「非変性生成物」が意味するものは、そのような生成物の派生物（例えば、温度、抽出媒体）の加工により、特定の過酸化水素排除活性が排除されなかった天然生成物である。
【００４６】
さらに別の態様では、本開示の抽出物は、さらに精製して、または濃縮して、または分画して、または組み合わせて、カタラーゼ酵素もしくはグルタチオンペルオキシダーゼ酵素の含有量またはカタラーゼ様活性を増大させることができる。
【００４７】
環境問題への意識は増しており、「環境に優しい」配慮が、生成物および開示に組み込まれている。一例では、本開示の天然供給源は、未使用または「無駄な」天然生成物からなり得る。そのような供給源の例は、畑で収集されない、または、果実、野菜、根茎および穀物が採取される場合は収集され、次いで分離される、および別の方法では廃棄される、または動物飼料とされることもある葉および茎を含むが、それらに限定されない。他の例は、マメの莢または果実および野菜の皮のような、食品加工中に除去される植物部分を含む。別の例は、特定のボタニカル生成物の加工または生成中に除去されるボタニカル部分、例えば、藻類多糖の生成中に除去される藻類バイオマスを含む。
【００４８】
本開示の抽出物は、比色アッセイまたは分光光度アッセイ、例えばＣａｙｍａｎ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ（＃７０７００２）のカタラーゼアッセイキット、ＢｉｏＶｉｓｉｏｎ  Ｉｎｃ．のカタラーゼ活性比色／蛍光アッセイキット（＃Ｋ７７３−１００）、Ｓｉｇｍａ  Ａｌｄｒｉｃｈカタラーゼ（ＥＣ  １．１１．１．６）の酵素アッセイキット、ＡｍｐｌｅｘＡＥ  Ｒｅｄのカタラーゼアッセイキット（＃Ａ２２１８０）の分子プローブなどを使用して、過酸化水素排除活性について試験できる。そのようなアッセイは、試料内におけるカタラーゼ活性のピコ単位での検出に感受性である。カタラーゼ酵素そのものは、標準手順を使用して、抽出物内でも検出および定量できるが、タンパク質が存在すると活性を確保できないので、天然抽出物を定義するためには活性アッセイが好ましく、また、使用される。
【００４９】
別の例では、本開示の天然抽出物は、カタラーゼ様活性、すなわち、過酸化水素を、直接的にまたは間接的に分解する、または排除する能力を含有し、損なわれていないカタラーゼまたはグルタチオンペルオキシダーゼ酵素は含有しない。一態様では、そのような抽出物は、さらに濃縮して、または精製して、または分画して、または組み合わせて、カタラーゼ様活性の大きさを増強することができる。別の態様では、そのような抽出物は、上に記載したものと類似したアッセイを使用して、過酸化水素排除活性について試験でき、そのようなアッセイは、反応生成物を測定し、酵素濃度は測定しない。したがって、そのような抽出物は、過酸化水素排除活性により定義できる。
【００５０】
比較的大きい分子量の局所的に適用される作用剤は、十分に送達するビヒクルで適切に製剤化された場合は、毛球において薬理学的に活性な濃度に達する潜在性を有する。送達は、内毛根鞘および外毛根鞘の接合を経由して発生し、高分子量の分子は、毛幹を直に取り巻く小胞構造に限局される。（Ｊ  Ｐｈａｒｍ  Ｓｃｉ．１９９７年、８６（９）：１０２２〜９頁。Ｄｅｓｃｒｉｐｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｉｎｔｒａ  ｆｏｌｌｉｃｕｌａｒ  ｄｅｌｉｖｅｒｙ  ｏｆ  ｌａｒｇｅ  ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  ｗｅｉｇｈｔ  ｍｏｌｅｃｕｌｅｓ  ｔｏ  ｆｏｌｌｉｃｌｅｓ  ｏｆ  ｈｕｍａｎ  ｓｃａｌｐ  ｓｋｉｎ  ｉｎ  ｖｉｔｒｏ．Ｌｉｅｂ  ＬＭ、Ｌｉｉｍａｔｔａ  ＡＰ、Ｂｒｙａｎ  ＲＮ、Ｂｒｏｗｎ  ＢＤ、Ｋｒｕｅｇｅｒ  ＧＧ）。しかし、有効な濃度および効き目を上昇および向上させるために、毛嚢に、または皮膚に直接的に送達される、低分子量の活性成分を有することが望ましい場合もある。さらに別の実施例では、本開示のカタラーゼ様活性を含有する天然抽出物は、サイズ分画し、選択し、次いで濃縮し、または組み合わせて、組成物内の、望ましい活性を有する低分子量の原料の濃度を上昇させることができる。一態様では、望ましい活性を有する原料の分子量は、カタラーゼのものより小さい。別の態様では、望ましい活性を有する原料の分子量は、１ｋＤａより小さい。受動的な皮膚浸透に対しては、約０．５ｋＤａの大きさが最大と考えられる（Ｂｏｓ  ＪＤ、Ｍｅｉｎａｒｄｉ  ＭＭＨＭ．Ｔｈｅ  ５００  Ｄａｌｔｏｎ  ｒｕｌｅ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  ｓｋｉｎ  ｐｅｎｅｔｒａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｃｈｅｍｉｃａｌ  ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ  ａｎｄ  ｄｒｕｇｓ．Ｅｘｐ  Ｄｅｒｍａｔｏｌ．２０００年９：１６５〜１６頁）］。さらに別の態様では、望ましい活性を有する原料の分子量は、約０．５ｋＤａより小さい。
【００５１】
本開示の天然抽出物は、皮膚、または爪、または毛嚢の内因性カタラーゼ酵素または内因性グルタチオンペルオキシダーゼ酵素の遺伝子発現、またはタンパク質翻訳、または安定性、または活性を向上させることができる。一態様では、そのような抽出物は、さらに濃縮して、または精製して、または分画して、または組み合わせて、そのような活性を向上させることができる。一態様では、そのような抽出物は、過酸化水素排除活性により定義できる。
【００５２】
さらに別の実施例では、皮膚、頭皮、爪、または毛嚢の内因性カタラーゼ酵素および／またはグルタチオンペルオキシダーゼ酵素の発現、または安定性、または活性を向上させる本開示の抽出物は、サイズ分画し、かつ選択し、次いで濃縮して、または組み合わせて、組成物中において望ましい活性を有する低分子量原料の濃度を上昇させることができる。一態様では、皮膚、爪、頭皮または毛嚢の内因性カタラーゼおよび／またはグルタチオンペルオキシダーゼ酵素の発現、または安定性、または活性を向上させる原料の分子量は、カタラーゼのものより小さい。別の態様では、皮膚または毛嚢の内因性カタラーゼおよび／またはグルタチオンペルオキシダーゼ酵素の発現、または安定性、または活性を向上させる原料の分子量は、１ｋＤａより小さい。さらに別の態様では、皮膚または毛嚢の内因性カタラーゼおよび／またはグルタチオンペルオキシダーゼ酵素の発現、または安定性、または活性を向上させる原料の分子量は、０．５ｋＤａより小さい。
【００５３】
本開示の天然抽出物は、皮膚、頭皮、毛髪もしくは爪、または関連性があるｉｎ  ｖｉｔｒｏ系におけるカタラーゼおよび／またはグルタチオンペルオキシダーゼ増強活性について評価できる。そのようなｉｎ  ｖｉｔｒｏ系は、例えばＭａｔＴｅｋ  ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎから商業的に得られる表皮、または皮膚、または表皮−皮膚の構成、例えばＡＴＴＣから商業的に得られるメラノサイト、表皮のケラチノサイト、皮膚の線維芽細胞または小胞のケラチノサイトの単層、例えばヒトおよび動物生検、培養したヘアプラグ（ｈａｉｒ  ｐｌｕｇ）などから得られる、毛髪の有無を問わない皮膚の外植片を含むが、それらに限定されない。そのようなアッセイの実施例は、様々な時点（例えば２４、４８および９６時間）で、安全かつ有効な濃度の範囲を使用して、本開示の抽出物の有無を問わない生物学的試料のインキュベーションを含む。生物学的試料は、上記のアッセイを使用して、過酸化水素排除活性について、均一化し、試験することができる、または、生物学的試料は、公知の手順を使用して、刺激のバイオマーカー、感作のバイオマーカー、炎症反応、抗酸化反応などについて試験することができる。さらに、生物学的試料は、標準分子手順を使用して、内因性カタラーゼおよび／またはグルタチオンペルオキシダーゼ酵素、または他の細胞の抗酸化酵素が向上させた発現または安定性について試験できる。さらに、生物学的試料が刺激を受ける（例えばＵＶ照射または過酸化水素の曝露で）ことがあり、生存能力ならびに生物学的反応、ならびにカタラーゼおよび／またはグルタチオンペルオキシダーゼ発現および活性は、公知かつ有効なアッセイを使用して、例えばカタラーゼおよび／またはグルタチオンペルオキシダーゼ発現または活性、刺激、感作、炎症反応、抗酸化反応などについて評価できる。生存能力は、例えば標準ＭＴＴアッセイで評価できる。刺激および炎症反応は、標準ＥＬＩＳＡ技術を使用して、炎症性サイトカイン、例えばＩＬ−１アルファの培地中への放出を測定することにより評価できる。抗酸化反応は、標準アッセイで、例えば、ＡＢＴＳ（トロロックス当量）またはＤＰＰＨキットを使用して測定できる。カタラーゼおよび／またはグルタチオンペルオキシダーゼ発現および安定性は、標準技術、例えばＱＰＣＲまたはタンパク質の免疫活性を長期間にわたって使用して評価できる。
【００５４】
本開示の新規な組成物は、水性天然抽出物を含有し、これは、例えば流体または固体といった多くの形態で存在し得る。一実施例では、水性天然生成物は、懸濁液の形態である。天然懸濁液を作る一手段は、非加熱の、または乾燥させた天然供給源を液体（例えば水）中に約１０分から数時間浸すことであり、その後、完全に水和させて圧縮して、またはすり潰して、原料を抽出した。加圧破断、音波処理および粉砕（例えば、ジェットミルおよびボールミルは、低温および凍結条件下で行われることがある）のような手順は、抽出を改善するためにすり潰しの代わりに使用して、生物学的材料を崩壊させることができる。懸濁液は濾過して、任意の残部を除去できる。一実施例では、懸濁液は、０．２ミクロン孔径のフィルターを使用して濾過する。天然の懸濁液は、例えばトレイ乾燥、スピン乾燥、ロータリー乾燥、スピンフラッシュ乾燥、フリーズドライ（ｆｒｅｅｚｅ  ｄｒｙｉｎｇ）、または凍結乾燥（ｌｙｏｐｈｉｌｉｚａｔｉｏｎ）により乾燥できる。
【００５５】
別の実施例は、天然供給源を圧縮し、天然の材料を圧縮することにより作り出された「ジュース」を収集することである。採取後、懸濁液は濾過して、任意の残部を除去できる。一実施例では、懸濁液は、０．２ミクロン孔径のフィルターを使用して濾過する。
【００５６】
本開示で使用される天然懸濁液および溶液は、非加熱の天然供給源を使用してもよく、または、乾燥した、粉末状の天然供給源および液体から作られていてもよい。粉末は、天然供給源（例えばボタニカル成分、藻類、菌類または微生物培養物など）から粉砕（例えば加圧破断、音波処理、ジェットミルまたはボールミルなど）し、乾燥（例えば凍結乾燥、スピン乾燥、噴霧乾燥、トレイ乾燥、スピンフラッシュ乾燥、フリーズドライなど）させてもよく、生じた粉末は、濾過しても、またはしなくてもよい。一実施例では、懸濁液または溶液を、０．２ミクロン孔径フィルターを使用して濾過する。そのような調製した懸濁液または溶液は、約０．０１から約９０重量％の乾燥粉末を有し得る。
【００５７】
別の実施例は、例えば、上に記載した凍結乾燥、噴霧乾燥またはフリーズドライした懸濁液などから作られている天然抽出物の粉末の使用であり、これに液体を添加し、濾過または均一化の有無は問わない。
【００５８】
他の公知の抽出方法も使用して、本開示で使用される活性成分を作り出すことができる。例えば、活性成分は、エタノール／水混合物を使用し、続いて、調製物の特定のカタラーゼおよび／またはグルタチオンペルオキシダーゼ活性またはカタラーゼ関連活性が保持される手段で、抽出物からエタノールを除去して、すり潰した天然供給源から抽出できるが、それらに限定されない。分画の公知の方法を使用して、本開示の望ましい活性を分離および濃縮する、または天然抽出物をサイズ分画する、または阻害活性もしくは望ましくない活性を取り除くことができる。
【００５９】
一実施例では、本開示の天然抽出物は、界面動電位（ゼータ）の分画および分離を使用して（例えばＺｅｔａ  Ｆｒａｃｔｉｏｎ（商標）技術（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｓｃ．ａｋｚｏｎｏｂｅｌ．ｃｏｍ／ｅｎ／ｐｅｒｓｏｎａｌｃａｒｅ／Ｐａｇｅｓ／ｚｅｔａ−ｆｒａｃｔｉｏｎ．ａｓｐｘ）で）生成できる。Ｚｅｔａ  Ｆｒａｃｔｉｏｎ技術は、生物学的供給源、例えば植物「ジュース」から、細胞内の成分を選択的に単離でき、分離するための外部溶媒の使用を伴わない。活性カタラーゼおよび／もしくはグルタチオンペルオキシダーゼを有する、またはカタラーゼ様活性を有する標的の分画は、界面動電位（ゼータ）に基づいて機械的に分離して、本開示の組成物に使用できる。ｚｅｔａ  ｆｒａｃｔｉｏｎは、上に記載したように、さらに加工する（例えば濾過する、乾燥させる、組み合わせる）ことができる。
【００６０】
さらに別の実施例では、本開示の非加熱の、または乾燥した天然供給源は、上に記載したようにすり潰し、または粉砕し、液体（例えば水）中で懸濁し、次いで、機械的な均一化、または微粉化（例えば音波処理、または混合によるせん断、または均一化、または他の公知の任意の半固体加工で、これらは低温もしくは凍結条件下で行われることがある）を施して、ホモジネートを作り出すことができる（その結果、天然供給源の細胞またはバイオマスは、破壊される、または破断される）。次いで、生じた懸濁液は、（例えば、例えば５００〜１，０００ＲＰＭで１０分間の遠心分離により、または類似した手順により）分離でき、上澄みは、さらにサイズ選択できる（例えば大きさが０．２ミクロン以下の粒子では、例えばサイズ濾過膜、限外濾過などにより）。例えば、粒径０．２ミクロン以下の生じた懸濁液または溶液は、「そのままで」本開示の組成物に使用できる、または標準手順を使用して乾燥させて（例えば凍結乾燥、スピン乾燥、噴霧乾燥、トレイ乾燥、スピンフラッシュ乾燥、フリーズドライなど）、さらに精製された天然抽出物を作り出すことができる。そのようなプロセスは、いずれも、天然抽出物の生物学的活性を低下させ得る、または排除し得る過度な熱を作り出さないはずである。
【００６１】
組成物における水性抽出物の量は、処置される領域、末端使用者の年齢、健康状態ならびに皮膚および毛髪のタイプ、処置の持続時間および性質、用いられる特定の組成物、化粧品としてまたは医薬として許容される、利用される特定の担体、ならびに同様の要因によって異なると考えられる。例えば、いくつかの例において、水性抽出物は、液体形態（例えば溶液または懸濁液）で使用されると考えられる。したがって、組成物は、体積ベースで、０．００１〜９９．９％、０．００５〜９０％、０．０１〜５０％、０．０５〜２５％、０．１〜２０％、０．５〜２０％、１〜１０％、０．０１〜２５％、０．０５〜１０％、０．１〜５％などを含有し得る。他のいくつかの例では、水性抽出物は、固体もしくは粉末形態で、または乾燥した液体の粉末形態で使用されると考えられる。したがって、組成物は、体積当たりの重量ベースで、０．００１〜２５％、０．００５〜２０％、０．０１〜１０％、０．０５〜５％、０．００１〜５％、０．００５〜１０％などを含有し得る。他のいくつかの例では、組成物中の水性抽出物の量は、組成物中に存在する抽出物に使用される天然供給源粉末の当量に対して評価できる。そのような組成物は、体積当たりの重量ベースで、０．００１〜２５％、０．００５〜２０％、０．０１〜１０％、０．０５〜５％、０．００１〜５％、０．００５〜１０％などを含有できる。
化粧品または医薬担体
有用な組成物は、１つもしくは複数の防腐剤、または１つもしくは複数の抗酸化剤、または１つもしくは複数のキレート剤、またはそれらの組合せを含み得る安定化系を含み得る。防腐剤は、微生物の分解を実質的に防止するために有用である。防腐剤の例は、フェノキシエタノール、パラベンおよび天然の防腐剤を含むが、それらに限定されず、これらは、当業者に公知である。他の防腐剤の例は、以下、「Ｃｏｓｍｅｔｉｃ  Ｈａｎｄｂｏｏｋ」と呼ぶ、Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｃｏｓｍｅｔｉｃ  Ｉｎｇｒｅｄｉｅｎｔ  Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ  ａｎｄ  Ｈａｎｄｂｏｏｋ、ＷｅｎｎｉｎｇｅｒおよびＭｃＥｗｅｎ編（ＣＴＦＡ、第７版、１９９７年）の１６５４〜５５頁に見出すことができる。組成物は、重量に対して約０．０１％から約２０％の防腐剤を含み得る（より好ましくは、場合により、重量に対して約０．５％から約５％）。微生物の混入は、ガンマ線照射、もしくは電子ビーム照射、もしくはＸ線照射など、精密濾過、または、本開示に記載されている特定の活性の排除を引き起こさない他の標準手順（例えば短時間の加熱処理）によっても排除することができる。
【００６２】
抗酸化剤および／またはキレート剤も、組成物の保存可能期間および安定性を増強するために使用できる。抗酸化剤は、製剤の安定化および生物学的効き目の両方のために添加してよい。抗酸化剤化合物およびそれらの誘導体は、水溶性抗酸化剤、例えばスルフヒドリル化合物およびそれらの誘導体（例えば、メタ重亜硫酸ナトリウムおよびＮ−アセチルシステイン）、リポ酸およびジヒドロリポ酸、レスベラトロール、アセチルシステイン（Ｉｎｉｆｅｒｉｎｅ（登録商標））またはラクトフェリン、ならびにアスコルビン酸およびアスコルビン酸誘導体（例えば、パルミチン酸アスコルビルおよびアスコルビルポリペプチド）を含むが、それらに限定されない。本開示の組成物における使用に適している油溶性抗酸化剤は、ブチル化ヒドロキシトルエン、レチノイド（例えば、レチノールおよびパルミチン酸レチニル）、トコフェロール（例えば、酢酸トコフェロール）、トコトリエノール、およびユビキノンを含むが、それらに限定されない。本開示の組成物における使用に適している抗酸化剤を含有する天然抽出物は、フラボノイドおよびイソフラボノイドおよびそれらの誘導体（例えば、ゲニステインおよびジアドゼイン（diadzein））を含有する抽出物、レスベラトロールを含有する抽出物、ポリフェノールを含有する抽出物などを含むが、それらに限定されない。そのような天然抽出物の例は、ブドウ種子、チャ、マツ樹皮、アロエベラ、プロポリスまたはマメ科植物の抽出物を含むが、それらに限定されない。特定の抗酸化剤活性を有する小分子は、カタラーゼ模倣物、ＳＯＤ模倣物、サレム（salem）−Ｍｎ複合体（例えばＥＵＫファミリーの化合物）などを含むが、それらに限定されず、これらも、本開示の組成物における使用に適している。抗酸化剤の他の例は、Ｃｏｓｍｅｔｉｃ  Ｈａｎｄｂｏｏｋの１６１２〜１３頁に見出せる。本開示の組成物は、抗酸化剤を、組成物の重量に対して約０．００１％から約２０％（例えば、重量に対して約０．０１％から約１０％）の量で含み得る。
【００６３】
キレート剤も、組成物の安定化を促す際に有用である。キレート剤の例は、ＥＤＴＡおよびそれらの誘導体（例えば、ＥＤＴＡ二ナトリウムおよびＥＤＴＡ二カリウム）、Ｉｎｉｆｅｒｉｎｅ（登録商標）、ラクトフェリンおよびクエン酸を含むが、それらに限定されない。キレート剤の他の例は、Ｃｏｓｍｅｔｉｃ  Ｈａｎｄｂｏｏｋの１６２６頁で列挙されている。本開示の組成物は、キレート剤を、組成物の重量に対して約０．００１％から約２０％（例えば、重量に対して約０．０１％から約１０％）の量で含み得る。
【００６４】
増粘剤（例えば、増粘剤または粘度向上剤）を使用して、有用な組成物の粘度を変更することができる。組成物の望ましい粘度は、使用目的（例えば、シャンプー、コンディショナー、ムース、クリーム、ローション、軟膏、セラム、スプレー、ゲル、スティックなどとして）によって決まる。例えば、浴用製品または洗浄製品のような用途では、組成物の粘度は、水溶液と同様に比較的低いはずである。クリーム、ローション、またはゲルとしての用途は、やや高い粘度（例えば、約１００ｃｐｓから１００，０００ｃｐｓ）を有すると考えられる。本開示の組成物に添加して、粘度を変更できる増粘剤は、ポリマー、例えばセピゲルまたはポリアクリレート（例えば、ポリアクリルアミド、他のカルボマー）または多糖（例えばキトサン）を含む。粘度変更剤の他の例は、Ｃｏｓｍｅｔｉｃ  Ｈａｎｄｂｏｏｋの１６９２〜９７頁で列挙されている。適切な粘度を達成するために、本開示の組成物は、重量に対して、約０．０１％から約２０％（例えば、重量に対して約０．１％から約５％）の増粘剤を含み得る。
追加の化粧活性剤
天然抽出物を含有する組成物は、他の化粧活性剤（例えば、合成化合物（複数可）、または天然供給源から単離される化合物（複数可）、または組織に対する化粧効果もしくは治療効果を有する化合物の混合物を含有する天然抽出物（複数可））も含有し得る。本明細書に記載されている有用な組成物は、天然生成物（複数可）に加えて、皮膚、毛髪および爪に有益な他の作用剤も含有し得る。そのような作用剤の例は、抗炎症剤（例えば副腎皮質ステロイド、ＮＳＡＩＤまたは抗炎症活性を有するボタニカル抽出物、例えばアロエベラ）、かゆみ止め剤、局所用鎮痛剤、抗酸化剤（例えばビタミンＣおよび誘導体、ビタミンＥおよび誘導体、抗酸化活性を有するボタニカル抽出物）、カタラーゼ様またはＳＯＤ様活性（例えばサレムＭＮ化合物、例としてＥＵＫ作用剤のファミリー）を有する作用剤、表皮、皮膚および小胞再生剤ならびに皮膚向上剤、毛髪および爪組織再生剤（例えばレチノイド、レチノイド誘導体、レチノール、レチナール、アルファヒドロキシ酸、コエンザイム−Ｑ、増殖因子などを含む）、抗生物質および抗微生物剤、抗真菌剤、抗酵母剤、抗寄生生物剤、免疫系向上剤、フケ防止剤およびてかり防止剤（例えばミコナゾール、ケトコナゾール、エルビオール、イトラコナゾール、コールタールなどの作用剤を含む）、洗剤、界面活性剤、保湿剤、栄養剤、ビタミン、ミネラル、エネルギー増強剤、毛髪または爪の成長促進剤、毛髪の成長遅延剤、皮膚コンディショニング剤、臭気防止剤（例えば臭気マスキング剤またはｐＨ変化剤）、デオドラント、制汗剤、着色剤、色素、色マスキング剤、色素生成向上剤または色素送達向上剤（例えばペプチド、ＰＡＲ−２活性化物質、ＭＣ１Ｒリガンド、アルファＭＳＨおよびその模倣物質など）、色素生成向上剤または色素生成阻害剤、メチオニンスルホキシド還元酵素活性に影響を与える作用剤（例えば、メチオニンの酸化を防止できるＬ−メチオニン）、ならびに皮膚、頭皮、毛髪または爪のウエルネスおよび美容を強化する、当業者に公知の他の作用剤を含むが、それらに限定されない。
【００６５】
本明細書に記載されている有用な組成物は、皮膚、頭皮、毛髪または爪に対する組成物の使用者の感覚を向上させる化合物も含有し得る。そのような化合物の例は、油、シリコーン（例えばシロキサンポリマー、例としてジメチコン）、ポリマー、多糖および皮膚コンディショニング剤、例えば皮膚軟化剤、および湿潤剤を含むが、それらに限定されない。そのような皮膚コンディショニング剤のいくつかの例は、Ｃｏｓｍｅｔｉｃ  Ｈａｎｄｂｏｏｋの１６５６〜１６７０頁に見出される。さらに、本明細書の有用な組成物は、本開示の分野の当業者に公知の従来の化粧用アジュバント、例えば着色剤（例として染料および色素）、乳白剤（例えば、二酸化チタン）および香料を含有できる。そのような本開示の組成物を含有する組成物および製剤は、当業者に周知の方法論を使用して調製できる。
形態
本開示の組成物は、化粧品としてまたは医薬として許容される形態および担体、例えば溶液、懸濁液、エマルション（マイクロエマルションおよびナノエマルションを含む）、ローション、クリーム、ゲル、スティック、スプレー、軟膏、クレンジング液、ウォッシュ、固形バー、シャンプー、毛髪コンディショナー、ネイルポリッシュ、ネイルストレングスナー、ペースト、フォーム、粉末、ムース、シェービングクリーム、シェービングゲル、ワイプ、パッチ、ヒドロゲル、フィルム形成生成物、マスク、液滴、粘膜接着剤などと使用できるが、それらに限定されない。
【００６６】
本開示の組成物は、チューブ、密閉パケット、ジャー、ポンプ、ボトル、缶、綿撒糸、タウレット（ｔｏｗｌｅｔ）、ディスペンサー、ワイプ、スプレー缶などでパッケージできる。気密または遮光パッケージ（例えばアルミニウムチューブ、アルミニウムポケット、ポンプ、またはラミネートチューブ）も、生成物の安定性をさらに向上させるために使用できる。
【００６７】
一態様では、本開示の組成物は、活性カタラーゼおよび／もしくはグルタチオンペルオキシダーゼ酵素またはカタラーゼ関連活性の維持を可能にする送達系をさらに含み、活性タンパク質を場合により含む活性成分を、毛嚢、または爪、または皮膚中に送達する。そのような送達系は、ミクロおよびナノ粒子、リポソーム、アスパソーム、オルガノゲル、ニオソーム、トランスフェロソーム、パッチ、ミクロおよびナノニードル、ミクロおよびナノカプセル、ミクロおよびナノスポンジ、フィルム、ポリマーなどを含み得る。
組成物および方法
本開示は、哺乳動物の白髪化プロセスを低減する方法であって、頭皮または他の望ましい無毛ではない皮膚領域に、安全かつ有効量の本開示の組成物を適用するステップを含む、方法を特徴とする。適用の頻度は、処置される領域、末端使用者の年齢、健康状態、毛髪のタイプおよび皮膚のタイプ、処置の持続時間および性質、用いられる特定の組成物、化粧品としてまたは医薬として許容される、利用される特定の担体、ならびに同様の要因によって異なると考えられる。例えば、いくつかの例において、適用は、定期的であってよいが、他の例では適用は１日１回または２回であってよい。
【００６８】
さらに、本開示は、哺乳動物の皮膚に対して、非色素性病変（例えば年齢により誘導される、もしくはＵＶにより誘導される色素を欠乏したしみ、またはＩＧＨ、または白斑）を低減する方法であって、皮膚領域に、安全かつ有効量の本開示の組成物を適用するステップを含む、方法を特徴とする。適用の頻度は、処置される領域、末端使用者の年齢、健康状態および皮膚のタイプ、処置の持続時間および性質、用いられる特定の組成物、化粧品としてまたは医薬として許容される、利用される特定の担体、ならびに同様の要因によって異なると考えられる。例えば、いくつかの例において、適用は、定期的であってよいが、他の例では適用は１日１回または２回であってよい。
【００６９】
さらに、本開示は、皮膚、頭皮、毛髪および爪の老化の兆候および症状を低減し、高齢者の皮膚の生物学的性質ならびに健康状態および健全性を向上させる方法であって、安全かつ有効量の本開示の組成物を必要とする皮膚、頭皮、毛髪または爪の領域に適用するステップを含む、方法も特徴とする。適用の頻度は、処置される領域、末端使用者の年齢、健康および皮膚のタイプ、処置の持続時間および性質、用いられる特定の組成物、化粧品としてまたは医薬として許容される、利用される特定の担体、ならびに同様の要因によって異なると考えられる。例えば、いくつかの例において、適用は、定期的であってよいが、他の例では適用は１日１回または２回であってよい。
【００７０】
本明細書で使用されている、「安全かつ有効量」は、毛髪、爪または皮膚に対して望ましい効果を誘導するのに十分であるが、重篤な副作用を避けるのに十分な少なさの組成物の量を意味する。安全かつ有効量の組成物は、処置される領域、末端使用者の年齢、健康状態、毛髪のタイプおよび皮膚のタイプ、処置の持続時間および性質、用いられる特定の組成物、化粧品としてまたは医薬として許容される、利用される特定の担体、ならびに同様の要因によって異なると考えられる。
【００７１】
本開示は、その詳細な説明と併せて記載されているが、先述の説明は、本開示を例証し、その範囲を制限しないよう意図されていることが理解される。
実施例１
この試験は、試験剤の過酸化水素崩壊活性を評価した。カタラーゼアッセイキットは、Ｃａｙｍａｎ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏ．（Ａｎｎ  Ａｒｂｏｒ、ＭＩ）から得た。このアッセイは、Ｐｕｒｐａｌｄ（４−アミノ−３−ヒドラジノ−５−メルカプト−１，２，４−トリアゾール）を比色アッセイにおける色原体として使用して、過酸化水素排除活性（例えばカタラーゼ活性）を測定する。試験は、過酸化水素の存在下でのメタノールとの反応に基づき、試料に存在する有効な活性に比例する、５４０ｎｍでの光学密度（ＯＤ）の変化を伴う。色原体として使用されるＰｕｒｐａｌｄは、生成されたホルムアルデヒドと二環式複素環を形成し、酸化の際に無色から紫色に変化する。
【００７２】
天然物質の試料粉末を、水またはＰＢＳ中に５％（ｗ／ｖ）で懸濁し、音波処理して、材料をサブミクロン粒子に破壊し、均一化し、１，０００ＲＰＭで１０分間遠心分離して、不溶性材料を除去した。各試験材料に対して連続希釈液を調製し、アッセイ緩衝液中で、メタノールおよび過酸化水素と混合した。反応を室温にて２０分間置いた。すべての試料を、アッセイ緩衝液で処理した試料（陰性対照として使用した）と比較した。ウシ肝臓に由来するカタラーゼ酵素標準は、陽性対照として使用した。水酸化カリウム、Ｐｕｒｐａｌｄおよび過ヨウ素酸カリウムを添加した後で、５４０ｎｍでの光学密度の変化を評価した。
【００７３】
この試験の結果は、表１で示されている。これらの結果から、アモールセコおよびヤーコンの乾燥葉粉末ならびに乾燥ポルフィリディウムバイオマスが、高い過酸化水素排除活性を所有することが示されている。
【００７４】
参照として、また、比較のために、文献（Ｎａｄｉｒａ  Ｂｉｎｔｅ  Ｓａｍａｄ、Ｔｒｉｓｈｎａ  Ｄｅｂｎａｔｈ、Ｍｉｃｈａｅｌ  Ｙｅ、Ａｂｕｌ  Ｈａｓｎａｔ、Ｂｅｏｎｇ  Ｏｕ  Ｌｉｍ．  Ｉｎ  ｖｉｔｒｏ  ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔ  ａｎｄ  ａｎｔｉ−ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ  ａｃｔｉｖｉｔｉｅｓ  ｏｆ  Ｋｏｒｅａｎ  ｂｌｕｅｂｅｒｒｙ（Ｖａｃｃｉｎｉｕｍ  ｃｏｒｙｍｂｏｓｕｍ  Ｌ．）ｅｘｔｒａｃｔｓ．Ａｓｉａｎ  Ｐａｃ  Ｊ  Ｔｒｏｐ  Ｂｉｏｍｅｄ  ４（１０）：８０７〜８１５頁（２０１４年））は、強い抗酸化活性を有することが公知であるコリアンブルーベリー（Ｋｏｒｅａｎ  ｂｌｕｅｂｅｒｒｙ）（Ｖａｃｃｉｎｉｕｍ  ｃｏｒｙｍｂｏｓｕｍ  Ｌ．）葉抽出物２種に言及している。これらの抽出物は、０．３３％（ｗ／ｖ）で０．６７ｎｍｏｌ／分／ｍｌまでのカタラーゼ活性を有すると記録されている。その一方、本開示の天然抽出物は、より低い（０．１％  ｗ／ｖ）濃度で、１．５〜２．８ｎｍｏｌ／分／ｍｌの範囲の活性を有していた。
【００７５】
【表１】
2018534337.tif 000002
【００７６】
これらの結果から、アモールセコおよびヤーコンの乾燥葉粉末ならびに乾燥ポルフィリディウムバイオマスは、高い過酸化水素排除活性を有するので、本開示の局所用調製物に使用するためには、約０．００１％（ｗ／ｖ）から、それ超の濃度で適切であることが指し示される。
実施例２
この試験は、培養した通常のヒトケラチノサイトの内因性の細胞の過酸化水素分解活性および排除活性に対する試験材料の効果を評価した。Ｐｕｒｐａｌｄ（４−アミノ−３−ヒドラジノ−５−メルカプト−１，２，４−トリアゾール）を比色アッセイにおける色原体として使用して過酸化水素分解活性を測定するために、処置した細胞のタンパク質溶解物を使用した。試験は、過酸化水素の存在下でのメタノールとの反応に基づき、試料に存在する有効な活性に比例する、５４０ｎｍでの光学密度（ＯＤ）の変化を伴っていた。色原体として使用されるＰｕｒｐａｌｄは、生成されたホルムアルデヒドと二環式複素環を形成し、酸化の際に無色から紫色に変化する。
【００７７】
天然試験剤の試料粉末を、５％  ｗ／ｖのリン酸塩緩衝液（１×ＰＢＳ）中で懸濁し、音波処理により均一化した。続いて１，０００ＲＰＭで１０分間スピンし、０．２μｍシリンジフィルターを使用して濾過することにより上澄みを滅菌した。
【００７８】
次いで、試料（５％懸濁液の濾過した上澄みを音波処理した）を、望ましい試験濃度に連続希釈した。初期の正常ヒト表皮ケラチノサイト（ＮＨＥＫ）を、６−ウェルプレートにシードし、２４時間培養した。続いて、培地中の０．００５、０．０５および０．５％の（濃度は元の５％懸濁液を指す）試験材料で、または試験材料なしで、細胞を１日１回３日間処理した。細胞を４日目に採取し、次いで、溶解し、ＢＳＡ−Ｂｒａｄｆｏｒｄアッセイを使用して、溶解物における総タンパク濃度を測定した。細胞溶解物を、アッセイ緩衝液中でメタノールおよび過酸化水素と混合した。反応を室温にて２０分間置いた。すべての試料をアッセイ緩衝液で処理した細胞（陰性対照として使用した）と比較した。ウシ肝臓に由来するカタラーゼ酵素標準を陽性対照として使用した。水酸化カリウム、Ｐｕｒｐａｌｄおよび過ヨウ素酸カリウムを添加した後で、５４０ｎｍでの光学密度の変化を評価した。アッセイのために平均吸光度を計算し、各試料に対する陰性対照および標準から減算した。
【００７９】
この試験の結果は、表２で示されている。これらの結果は、未処理のケラチノサイトの内因性活性と比較した、処理したケラチノサイト内における、各試験剤により誘導される過酸化水素分解活性を示す。いずれの試験材料によっても、ケラチノサイトの過酸化水素を排除する内因性活性において、用量反応性の増加が生じた。未処理のケラチノサイトは、１．５±０．２ユニット／ｍｇタンパク質（Ｕ／ｍｇ）の活性を示し、０．５％（ｗ／ｖ）の試験剤は、この活性を、２１０％超（３．２±０．１（Ｕ／ｍｇ））まで増加させることができた。
【００８０】
参照として、また、比較のために、０．００５％で強い抗酸化活性を有するＣａｍｅｌｌｉａ  ｊａｐｏｎｉｃａ抽出物は、ＨａＣａＴケラチノサイトのカタラーゼ活性を約５０％のみ向上させた、および抗酸化活性のために濃縮した１０％のＳａｒｇａｓｓｕｍ  ｍｕｔｉｃｕｍ抽出物のエタノール分画は、２５％のみＨａＣａＴ細胞カタラーゼ活性を向上させたとについて報告されていた［Ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔ  Ｅｆｆｅｃｔｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｅｔｈａｎｏｌ  Ｅｘｔｒａｃｔ  ｆｒｏｍ  Ｆｌｏｗｅｒ  ｏｆ  Ｃａｍｅｌｌｉａ  ｊａｐｏｎｉｃａ  ｖｉａ  Ｓｃａｖｅｎｇｉｎｇ  ｏｆ  Ｒｅａｃｔｉｖｅ  Ｏｘｙｇｅｎ  Ｓｐｅｃｉｅｓ  ａｎｄ  Ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ  ｏｆ  Ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔ  Ｅｎｚｙｍｅｓ．  Ｍｅｉ  Ｊｉｎｇ  Ｐｉａｏ、Ｅｕｎ  Ｓｏｏｋ  Ｙｏｏ、Ｙｏｕｎｇ  Ｓａｎｇ  Ｋｏｈ、Ｈｅｅ  Ｋｙｏｕｎｇ  Ｋａｎｇ，Ｊｕｎｏｈ  Ｋｉｍ、Ｙｏｎｇ  Ｊｉｎ  Ｋｉｍ、Ｈａｋ  Ｈｅｅ  ＫａｎｇおよびＪｉｎ  Ｗｏｎ  Ｈｙｕｎ、Ｉｎｔ．Ｊ．Ｍｏｌ．Ｓｃｉ．２０１１年、１２：２６１８〜２６３０頁）、（Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ  Ｅｆｆｅｃｔ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｅｔｈｙｌ  Ａｃｅｔａｔｅ  Ｆｒａｃｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｓａｒｇａｓｓｕｍ  ｍｕｔｉｃｕｍ  Ａｇａｉｎｓｔ  Ｕｌｔｒａｖｉｏｌｅｔ  Ｂ−Ｉｒｒａｄｉａｔｅｄ  Ｄａｍａｇｅ  ｉｎ  Ｈｕｍａｎ  Ｋｅｒａｔｉｎｏｃｙｔｅｓ．  Ｍｅｉ  Ｊｉｎｇ  Ｐｉａｏ、Ｗｅｏｎ  Ｊｏｎｇ  Ｙｏｏｎ、Ｈｅｅ  Ｋｙｏｕｎｇ  Ｋａｎｇ、Ｅｕｎ  Ｓｏｏｋ  Ｙｏｏ、Ｙｏｕｎｇ  Ｓａｎｇ  Ｋｏｈ、Ｄｏｎｇ  Ｓａｍ  Ｋｉｍ、Ｎａｍ  Ｈｏ  ＬｅｅおよびＪｉｎ  Ｗｏｎ  Ｈｙｕｎ、Ｉｎｔ．Ｊ．Ｍｏｌ．Ｓｃｉ．２０１１年、１２：８１４６〜８１６０頁）。
【００８１】
【表２ａ】
2018534337.tif 000003
【００８２】
【表２ｂ】
2018534337.tif 000004
【００８３】
活性（Ｕ）は、ｎｍｏｌ／分／ｍＬと定義される。活性は、各細胞溶解物試料中の総タンパク量に対して標準化され、Ｕ／ｍｇと定義される。
【００８４】
これらの結果から、ヒトケラチノサイトのヤーコン葉粉末、またはアモールセコ葉粉末、または乾燥ポルフィリディウムバイオマス粉末への曝露は、ケラチノサイトの内因性細胞活性の向上を引き起こし、これにより、過酸化水素を除去する、分解するまたは排除する能力を増強することが示される。これらの結果は、こうした作用剤は、皮膚、頭皮、毛髪および爪に局所的に使用して、過酸化水素の濃度を低下させるので、本開示において有用となり得ることを示唆している。ヤーコン葉粉末、またはアモールセコ葉粉末または乾燥ポルフィリディウムバイオマス粉末のいずれかの局所使用は、白髪化の進展を遅くし、遅延させ、および低減し、これは、内因性過酸化水素レベルが高くなることにより開始される、また、向上するはずである。同様に、ヤーコン葉粉末、またはアモールセコ葉粉末、または乾燥ポルフィリディウムバイオマスの局所使用は、脱色した皮膚病変の進展および視認性、皮膚、頭皮、毛髪および爪の老化の兆候、ならびに高齢者の皮膚に関連する問題を低減するはずである。
実施例３
この試験の目的は、過酸化水素による傷害に反応した、培養ヒト表皮のケラチノサイトにおける、試験材料の細胞内における抗酸化活性を評価することであった。細胞を、試験材料で処理し、Ｈ２ＤＣＦＤＡで標識し、その後、過酸化水素に曝露した。相対蛍光は、細胞内における活性酸素（ＲＯＳ）に対する指標として測定した。試験は、未処理および過酸化水素のみで処理した試料と比較すると、細胞内の有効な抗酸化活性に比例した蛍光の変化を伴っていた。
【００８５】
試験剤は、使用するまで室温にて保管した。試料粉末を、リン酸塩緩衝液（１×ＰＢＳ）中に懸濁して、１０ｍｇ／ｍＬ（１％  ｗ／ｖ）保存溶液を作り、１分間ボルテックスし、氷上にて、３０〜５０％の出力で１０分間音波処理し、４℃にて、１０００ｒｐｍで１０分間遠心分離し、０．２μｍシリンジフィルターを使用して上澄みを滅菌した。そのような均一化した溶液を、各試験材料に対して調製した。
【００８６】
初期の正常ヒト表皮ケラチノサイト（ＮＨＥＫ）を、９６−ウェルプレートにシードし、７５〜８０％に達するまで培養した。続いて、培地中の試験材料で、または試験材料なしで、細胞を２４時間処理した。試験材料は、新しいＥｐｉＬｉｆｅ培地中の保存溶液を希釈（１：１０）することにより作り出して、最終濃度を０．０５および０．１％（ｗ／ｖ）とした。未処理細胞は、等しい体積の新しいＥｐｉＬｉｆｅ媒体に試験材料なしで入れた。２４時間目に、細胞浸透性の２’，７’−ジクロロフルオレシンジアセテート（Ｈ２ＤＣＦＤＡ）で細胞を６０分間標識し、過酸化水素処理（２５０μＭ）で、細胞内ＲＯＳレベルを３０分間誘導した。プレートリーダーを使用して、４９２ｎｍ（励起）および５３５ｎｍ（発光）の相対蛍光を測定した。
【００８７】
平均蛍光を各試料について計算し、陰性対照として使用した未処理（Ｈ２Ｏ２なし）細胞と比較した。細胞をＨ２Ｏ２のみで処理することにより生じた結果から、過酸化水素は、細胞内ＲＯＳレベルの上昇を指し示す相対蛍光を有意に上昇させることが示された。
【００８８】
この試験の結果は、表３で示されている。アモールセコ葉抽出物およびヤーコン葉抽出物は、０．０５％（ｗ／ｖ）および０．１％（ｗ／ｖ）で試験した場合、相対蛍光を有意に低下させた。アモールセコ葉抽出物は、細胞内の抗ＲＯＳ活性を誘導して、９２〜１００％阻害した。ヤーコン葉抽出物は、４９〜６７％の阻害を引き起こした。ポルフィリディウムバイオマス抽出物は、蛍光分析が、このアッセイの読み出しをマスキングする強い自己蛍光を記録したので、この試験では評価できなかった。
【００８９】
【表３ａ】
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【００９０】
【表３ｂ】
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【００９１】
これらの結果から、ヒトケラチノサイトのヤーコン葉粉末またはアモールセコ葉粉末への曝露は、生体内の細胞が過酸化水素を除去する、分解するまたは排除する能力を向上させることが示される。これらの結果は、こうした作用剤は、皮膚、頭皮、毛髪および爪に局所的に使用して、過酸化水素の濃度を低下させるので、本開示において有用となり得ることを示唆している。以前の結果（実施例１および実施例２）は、乾燥ポルフィリディウムバイオマスが、ヤーコンまたはアモールセコ葉抽出物よりもカタラーゼ活性を増加させることを示したので、乾燥ポルフィリディウムバイオマスは、このアッセイでも優れた結果を生むであろうことが予想される。
【００９２】
ヤーコン葉粉末、またはアモールセコ葉粉末または乾燥ポルフィリディウムバイオマス粉末のいずれかの局所使用は、白髪化の進展を遅くし、遅延させ、および低減し、これは、内因性過酸化水素レベルが高くなることにより、開始される、また、向上するはずである。同様に、ヤーコン葉粉末、またはアモールセコ葉粉末、または乾燥ポルフィリディウムバイオマスの局所使用は、脱色した皮膚病変の進展および視認性、皮膚、頭皮、毛髪および爪の老化の兆候、ならびに高齢者の皮膚に関連する問題を低減するはずである。
【００９３】
これらの研究による知識を組み合わせると、本開示の天然の作用剤を用いた局所処置は、作用剤そのものの過酸化水素排除活性を送達し、ケラチノサイトの内因性過酸化水素崩壊活性または排除活性をさらに向上させることができると予想される。こうした作用剤の有効性は、約０．００１％（天然粉末のｗ／ｖ）から、それ超の高い濃度で期待される。
実施例４
天然抽出物ゲル製剤の調製。天然抽出物は、水またはリン酸塩緩衝液または他の水溶液中で懸濁される天然供給源の液体試料（懸濁液）として、または試料粉末として調製して、例えば１０〜１００ｍｇ／ｍＬ（１〜１０％  ｗ／ｖ）保存懸濁液を作ることができる。懸濁液は、例えば１〜１０分間混合される（例えばボルテックスされる）べきであり、次いで、天然の材料は、例えば４℃にてサイズ縮小して、細胞を崩壊させるべきである（例えば加圧破断、ジェットミル、ボールミル、または、例えば３０〜５０％の出力での、例えば１０分間の音波処理により）。次いで、大きい粒子は、分離されるべきであり（例えば、５００〜１０００ｒｐｍで、４℃にて１０分間の遠心分離により）、沈殿物は廃棄されるべきである。上澄みは、製剤中に直接使用できる、または、さらなるサイズ選択を施すことができる（例えば、懸濁液または溶液は、０．２ミクロン孔径フィルターを使用して濾過できる）。生じた天然物質の均一化溶液は、製剤中に直接使用できる、またはさらに乾燥させ（例えば凍結乾燥、噴霧乾燥またはフリーズドライさせ）、製剤中に乾燥粉末として使用することができる。
【００９４】
本発明に適している、いくつかのゲル組成物の限られた実施例は、表４で示唆されている。防腐剤（例えばＰｈｅｎｏｎｉｐ（登録商標）、フェノキシエタノール）、および／またはキレート剤（例えばＥＤＴＡ二ナトリウム）、および／または湿潤剤（例えばグリセリン）が、最初に天然抽出物（液体形態、または液体、例えば水中に懸濁した粉末）に添加され得る。このステップでは、天然抽出物の混合物に、油溶性シリコーン、皮膚軟化剤、粘度ビルダーまたは乳化剤（例えばシクロメチコン、ジメチコン、ポリソルベート２０、アルミニウムデンプンオクチルスクシネート、ヤシ脂肪酸スクロース、ＰＥＧ−６トリカプリル／カプリン酸グリセリル）をさらに添加することも可能である。増粘剤（複数可）（例えばＳｅｐｉｇｅｌ（登録商標）、ＰｏｌｙＡｑｕｏｌ  ２Ｗ）の第２の混合物を、抗酸化剤（例えばＢＨＴ）を伴って調製することが示唆される。次いで、２つの混合物は、均一になるまで、組み合わせ、混合されるべきである。次いで、他の抗酸化剤（例えばアスコルビン酸、アスコルビルリン酸ナトリウム、ラクトフェリンまたはトコフェロール）を組み合わせた混合に添加し、均等に混合して、生じたゲルを形成する。
【００９５】
【表４】
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【００９６】
実施例５
天然抽出物の水中油製剤の調製。天然抽出物は、実施例４と同様にして調製できる。水中油エマルションの２つの実施例は、表５で提示されている。このタイプの製剤を調製するために、脂質相の原料は、約５０〜８５℃にて組み合わせられ、混合されるべきであり、次いで、約４０〜６０℃に冷却されるべきである。別の容器では、増粘剤は、水性の天然抽出物または水もしくは水溶液中で再構成される粉末の天然抽出物と、ゆっくり組み合わせることができる。例えば、水性相の残りを約１０分間混合した後で、原料を添加し、混合し、次いで、脂質相の可能な限りのほぼ最低温度に加熱できる。次いで、２つの相を組み合わせて、例えば約１０分間混合し、室温に冷却することができる。追加の活性剤は、両方の相の中で、または混合の後で組み合わせることができる。本開示に記載されている生物学的活性は、過剰な熱が望ましい活性を低下させ得るので、モニターされるべきである。
【００９７】
【表５】
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【００９８】
実施例６
天然抽出物の油中水製剤の調製。天然抽出物は、実施例４と同様にして調製できる。油中水製剤の２つの実施例は、表６で提示されている。このタイプの製剤を調製するために、皮膚軟化剤（例えばミネラル油）を溶融させてよい。次いで、他の油相原料を添加してよく、混合物を例えば約７５℃に加熱して、均一な混合を可能にすることができる。水性相の原料は、別々に混合でき、液体油相の可能な限りの最低温度に温められるべきであり（一方、天然抽出物の生物学的活性の保持が確認される）、次いで、２つの混合物は、凝結するまで撹拌させてよい。追加の活性剤は、両方の相の中で、または混合の後で組み合わせることができる。
【００９９】
【表６】
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【０１００】
本開示は、その詳細な説明と併せて記載されている一方、先述の説明は、本開示を例証し、その範囲を制限しないよう意図されていることが理解される。
【国際調査報告】
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