(57)【要約】  モノクローナル抗Ｄ因子抗体を含む薬学的製剤、並びにその製造及び補体関連の眼疾患の治療のための使用が開示される。製剤は、ランパリズマブを含む抗Ｄ因子抗体の、プレ凍結乾燥、凍結乾燥、及び再構成された安定な液体製剤を含む。【選択図】図３
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
治療的有効量のモノクローナル抗Ｄ因子抗体、ｐＨを５．０と５．４の間に調整するバッファー、凍結乾燥保護剤、及び界面活性剤を含む薬学的製剤。
【請求項２】
ｐＨが約５．３である、請求項１に記載の薬学的製剤。
【請求項３】
凍結乾燥保護剤の抗体に対する比が、凍結乾燥保護剤約６０から１００モル：抗体１モルである、請求項１又は２に記載の薬学的製剤。
【請求項４】
凍結乾燥保護剤の抗体に対する比が、凍結乾燥保護剤約８０モル：抗体１モルである、請求項３に記載の薬学的製剤。
【請求項５】
バッファーがヒスチジンバッファーである、請求項１から４の何れか一項に記載の薬学的製剤。
【請求項６】
ヒスチジンバッファーが、約５ｍＭから約１５ｍＭの量で存在する、請求項５に記載の薬学的製剤。
【請求項７】
ヒスチジンバッファーが、約７ｍＭから約１３ｍＭの量で存在する、請求項６に記載の薬学的製剤。
【請求項８】
凍結乾燥保護剤が一又は複数のポリオールを含む、請求項１から７の何れか一項に記載の薬学的製剤。
【請求項９】
ポリオールの少なくとも１つが還元糖又は非還元糖である、請求項８に記載の薬学的製剤。
【請求項１０】
還元糖がα，α−トレハロースである、請求項９に記載の薬学的製剤。
【請求項１１】
非還元糖がスクロースである、請求項９に記載の薬学的製剤。
【請求項１２】
ポリオールの少なくとも１つが二糖類である、請求項８に記載の薬学的製剤。
【請求項１３】
界面活性剤が一又は複数のポリソルベート及び／又はポロキサマーを含む、請求項１から１０の何れか一項に記載の薬学的製剤。
【請求項１４】
ポリソルベートがポリソルベート２０である、請求項１３に記載の薬学的製剤。
【請求項１５】
前記モノクローナル抗Ｄ因子抗体が、ＨＶＲ１−ＨＣ：ＧＹＴＦＴＮＹＧＭＮ（配列番号３）；ＨＶＲ２−ＨＣ：ＷＩＮＴＹＴＧＥＴＴＹＡＤＤＦＫＧ（配列番号４）；ＨＶＲ３−ＨＣ：ＥＧＧＶＮＮ（配列番号５）のＨＶＲ配列と少なくとも９８％若しくは少なくとも９９％の配列同一性を有する重鎖超可変領域（ＨＶＲ−ＨＣ）、並びに／又はＨＶＲ１−ＬＣ：ＩＴＳＴＤＩＤＤＤＭＮ（配列番号８）；ＨＶＲ２−ＬＣ：ＧＧＮＴＬＲＰ（配列番号９）；及びＨＶＲ３−ＬＣ：ＬＱＳＤＳＬＰＹＴ（配列番号１０）のＨＶＲ−ＬＣ配列と少なくとも９８％若しくは少なくとも９９％の配列同一性を有する軽鎖超可変領域（ＨＶＲ−ＬＣ）を含む、請求項１から１４の何れか一項に記載の薬学的製剤。
【請求項１６】
前記モノクローナル抗Ｄ因子抗体が、ＨＶＲ１−ＨＣ：ＧＹＴＦＴＮＹＧＭＮ（配列番号３）；ＨＶＲ２−ＨＣ：ＷＩＮＴＹＴＧＥＴＴＹＡＤＤＦＫＧ（配列番号４）；ＨＶＲ３−ＨＣ：ＥＧＧＶＮＮ（配列番号５）のＨＶＲ−ＨＣ、並びに／又はＨＶＲ１−ＬＣ：ＩＴＳＴＤＩＤＤＤＭＮ（配列番号８）；ＨＶＲ２−ＬＣ：ＧＧＮＴＬＲＰ（配列番号９）；及びＨＶＲ３−ＬＣ：ＬＱＳＤＳＬＰＹＴ（配列番号１０）のＨＶＲ−ＬＣを含む、請求項１５に記載の薬学的製剤。
【請求項１７】
前記モノクローナル抗Ｄ因子抗体が、配列番号２の重鎖の可変領域配列と少なくとも８５％、若しくは少なくとも９０％、若しくは少なくとも９５％、若しくは少なくとも９８％、若しくは少なくとも９９％の配列同一性を有する重鎖可変領域配列、及び／又は配列番号７の軽鎖の可変領域配列と少なくとも８５％、若しくは少なくとも９０％、若しくは少なくとも９５％、若しくは少なくとも９８％、若しくは少なくとも９９％の配列同一性を有する軽鎖可変領域配列を含む、請求項１５又は１６に記載の薬学的製剤。
【請求項１８】
前記モノクローナル抗Ｄ因子抗体が、配列番号２の重鎖の可変領域配列及び／又は配列番号７の軽鎖の可変領域配列を含む、請求項１７に記載の薬学的製剤。
【請求項１９】
前記モノクローナル抗Ｄ因子抗体が、配列番号２を含む重鎖配列及び／又は配列番号７を含む軽鎖配列を含む、請求項１８に記載の薬学的製剤。
【請求項２０】
前記モノクローナル抗Ｄ因子抗体がＩｇＧ抗体である、請求項１から１９の何れか一項に記載の薬学的製剤。
【請求項２１】
前記モノクローナル抗Ｄ因子抗体がＩｇＧ１抗体である、請求項２０に記載の薬学的製剤。
【請求項２２】
前記モノクローナル抗Ｄ因子抗体が抗体断片である、請求項１から２１の何れか一項に記載の薬学的製剤。
【請求項２３】
抗体断片がＦａｂ断片である、請求項２２に記載の薬学的製剤。
【請求項２４】
前記モノクローナル抗Ｄ因子抗体がヒト化されている、請求項１から２３の何れか一項に記載の薬学的製剤。
【請求項２５】
前記モノクローナル抗Ｄ因子抗体がランパリズマブである、請求項１から２４の何れか一項に記載の薬学的製剤。
【請求項２６】
眼内投与のためのものである、請求項１から２５の何れか一項に記載の薬学的製剤。
【請求項２７】
硝子体内投与のためのものである、請求項２６に記載の薬学的製剤。
【請求項２８】
滅菌されている、請求項１から２７の何れか一項に記載の薬学的製剤。
【請求項２９】
凍結及び融解において安定である、請求項１から２８の何れか一項に記載の薬学的製剤。
【請求項３０】
プレ凍結乾燥製剤である、請求項１から２９の何れか一項に記載の薬学的製剤。
【請求項３１】
−２０℃の保存温度で少なくとも１年間安定である、請求項２０に記載の薬学的製剤。
【請求項３２】
−２０℃の保存温度で少なくとも２年間安定である、請求項３１に記載の薬学的製剤。
【請求項３３】
凍結乾燥されている、請求項１から２９の何れか一項に記載の薬学的製剤。
【請求項３４】
５℃の保存温度で少なくとも１年間安定である、請求項３３に記載の薬学的製剤。
【請求項３５】
５℃の保存温度で少なくとも２年間安定である、請求項３４に記載の薬学的製剤。
【請求項３６】
請求項１から３５の何れか一項に記載の薬学的製剤から調製される再構成水性液体製剤。
【請求項３７】
請求項３３から３５の何れか一項に記載の凍結乾燥製剤の再構成によって直接調製される請求項３６に記載の再構成水性液体製剤。
【請求項３８】
治療的有効量のモノクローナル抗Ｄ因子抗体、ｐＨを５．０と５．４の間に調整する約５ｍＭから約１５ｍＭのヒスチジンバッファー、塩化ナトリウム、凍結乾燥保護剤、及び界面活性剤を含む、プレ凍結乾燥又は凍結乾燥された薬学的製剤。
【請求項３９】
前記モノクローナル抗Ｄ因子抗体が、ＨＶＲ１−ＨＣ：ＧＹＴＦＴＮＹＧＭＮ（配列番号３）；ＨＶＲ２−ＨＣ：ＷＩＮＴＹＴＧＥＴＴＹＡＤＤＦＫＧ（配列番号４）；ＨＶＲ３−ＨＣ：ＥＧＧＶＮＮ（配列番号５）のＨＶＲ配列と少なくとも９８％若しくは少なくとも９９％の配列同一性を有する重鎖超可変領域（ＨＶＲ−ＨＣ）、並びに／又はＨＶＲ１−ＬＣ：ＩＴＳＴＤＩＤＤＤＭＮ（配列番号８）；ＨＶＲ２−ＬＣ：ＧＧＮＴＬＲＰ（配列番号９）；及びＨＶＲ３−ＬＣ：ＬＱＳＤＳＬＰＹＴ（配列番号１０）のＨＶＲ−ＬＣ配列と少なくとも９８％若しくは少なくとも９９％の配列同一性を有する軽鎖超可変領域（ＨＶＲ−ＬＣ）を含む、請求項３８に記載のプレ凍結乾燥又は凍結乾燥された薬学的製剤。
【請求項４０】
前記モノクローナル抗Ｄ因子抗体が、ＨＶＲ１−ＨＣ：ＧＹＴＦＴＮＹＧＭＮ（配列番号３）；ＨＶＲ２−ＨＣ：ＷＩＮＴＹＴＧＥＴＴＹＡＤＤＦＫＧ（配列番号４）；ＨＶＲ３−ＨＣ：ＥＧＧＶＮＮ（配列番号５）の重鎖超可変領域（ＨＶＲ−ＨＣ）、並びに／又はＨＶＲ１−ＬＣ：ＩＴＳＴＤＩＤＤＤＭＮ（配列番号８）；ＨＶＲ２−ＬＣ：ＧＧＮＴＬＲＰ（配列番号９）；及びＨＶＲ３−ＬＣ：ＬＱＳＤＳＬＰＹＴ（配列番号１０）の軽鎖超可変領域（ＨＶＲ−ＬＣ）を含む、請求項３９に記載のプレ凍結乾燥又は凍結乾燥された薬学的製剤。
【請求項４１】
前記モノクローナル抗Ｄ因子抗体が、配列番号２の重鎖と少なくとも８５％、若しくは少なくとも９０％、若しくは少なくとも９５％、若しくは少なくとも９８％、若しくは少なくとも９９％の配列同一性を有する重鎖可変領域配列、及び／又は配列番号７の軽鎖と少なくとも８５％、若しくは少なくとも９０％、若しくは少なくとも９５％、若しくは少なくとも９８％、若しくは少なくとも９９％の配列同一性を有する軽鎖可変領域配列を含む、請求項３９に記載のプレ凍結乾燥又は凍結乾燥された薬学的製剤。
【請求項４２】
前記モノクローナル抗Ｄ因子抗体が、配列番号２を含む重鎖配列及び／又は配列番号７を含む軽鎖配列を含む、請求項４１に記載のプレ凍結乾燥又は凍結乾燥された薬学的製剤。
【請求項４３】
前記モノクローナル抗Ｄ因子抗体がＩｇＧ抗体である、請求項３８から４２の何れか一項に記載のプレ凍結乾燥又は凍結乾燥された薬学的製剤。
【請求項４４】
前記モノクローナル抗Ｄ因子抗体がＩｇＧ１抗体である、請求項４３に記載のプレ凍結乾燥又は凍結乾燥された薬学的製剤。
【請求項４５】
前記モノクローナル抗Ｄ因子抗体が抗体断片である、請求項３８から４４の何れか一項に記載のプレ凍結乾燥又は凍結乾燥された薬学的製剤。
【請求項４６】
抗体断片がＦａｂ断片である、請求項４５に記載のプレ凍結乾燥又は凍結乾燥された薬学的製剤。
【請求項４７】
前記モノクローナル抗Ｄ因子抗体がヒト化されている、請求項３８から４６の何れか一項に記載のプレ凍結乾燥又は凍結乾燥された薬学的製剤。
【請求項４８】
前記モノクローナル抗Ｄ因子抗体がランパリズマブである、請求項４７に記載のプレ凍結乾燥又は凍結乾燥された薬学的製剤。
【請求項４９】
約２５ｍｇ／ｍＬのランパリズマブを含む、請求項４８に記載のプレ凍結乾燥又は凍結乾燥された薬学的製剤。
【請求項５０】
凍結乾燥製剤中の凍結乾燥保護剤の抗体に対する比が、凍結乾燥保護剤約６０から１００モル：抗体１モルである、請求項１から４９の何れか一項に記載のプレ凍結乾燥又は凍結乾燥された薬学的製剤。
【請求項５１】
凍結乾燥製剤中のスクロースの抗体に対する比が、凍結乾燥保護剤約８０モル：抗体１モルである、請求項１から４９の何れか一項に記載のプレ凍結乾燥又は凍結乾燥された薬学的製剤。
【請求項５２】
請求項３８から５１の何れか一項に記載の凍結乾燥された薬学的製剤から調製される再構成水性液体製剤。
【請求項５３】
眼内投与のためのものである、請求項３６、３７又は５２に記載の再構成製剤。
【請求項５４】
硝子体内投与のためのものである、請求項５３に記載の再構成製剤。
【請求項５５】
滅菌されている、請求項５２から５４の何れか一項に記載の再構成製剤。
【請求項５６】
約１００ｍｇ／ｍＬのランパリズマブを含む、請求項５２から５５の何れか一項に記載の再構成製剤。
【請求項５７】
治療的有効量のモノクローナル抗Ｄ因子抗体、約２０ｍＭから約６０ｍＭの塩化ヒスチジン、ポリオール、塩化ナトリウム、及び界面活性剤を含む再構成水性液体薬学的製剤。
【請求項５８】
前記抗Ｄ因子抗体が、ＨＶＲ１−ＨＣ：ＧＹＴＦＴＮＹＧＭＮ（配列番号３）；ＨＶＲ２−ＨＣ：ＷＩＮＴＹＴＧＥＴＴＹＡＤＤＦＫＧ（配列番号４）；ＨＶＲ３−ＨＣ：ＥＧＧＶＮＮ（配列番号５）のＨＶＲ配列と少なくとも９８％若しくは少なくとも９９％の配列同一性を有する重鎖超可変領域（ＨＶＲ−ＨＣ）、並びに／又はＨＶＲ１−ＬＣ：ＩＴＳＴＤＩＤＤＤＭＮ（配列番号８）；ＨＶＲ２−ＬＣ：ＧＧＮＴＬＲＰ（配列番号９）；及びＨＶＲ３−ＬＣ：ＬＱＳＤＳＬＰＹＴ（配列番号１０）のＨＶＲ−ＬＣ配列と少なくとも９８％若しくは少なくとも９９％の配列同一性を有する軽鎖超可変領域（ＨＶＲ−ＬＣ）を含む、請求項５７に記載の再構成製剤。
【請求項５９】
前記モノクローナル抗Ｄ因子抗体が、ＨＶＲ１−ＨＣ：ＧＹＴＦＴＮＹＧＭＮ（配列番号３）；ＨＶＲ２−ＨＣ：ＷＩＮＴＹＴＧＥＴＴＹＡＤＤＦＫＧ（配列番号４）；ＨＶＲ３−ＨＣ：ＥＧＧＶＮＮ（配列番号５）の重鎖超可変領域（ＨＶＲ−ＨＣ）、並びに／又はＨＶＲ１−ＬＣ：ＩＴＳＴＤＩＤＤＤＭＮ（配列番号８）；ＨＶＲ２−ＬＣ：ＧＧＮＴＬＲＰ（配列番号９）；及びＨＶＲ３−ＬＣ：ＬＱＳＤＳＬＰＹＴ（配列番号１０）の軽鎖超可変領域（ＨＶＲ−ＬＣ）を含む、請求項５８に記載の再構成製剤。
【請求項６０】
前記モノクローナル抗Ｄ因子抗体が、配列番号２の重鎖と少なくとも８５％、若しくは少なくとも９０％、若しくは少なくとも９５％、若しくは少なくとも９８％、若しくは少なくとも９９％の配列同一性を有する重鎖可変領域配列、及び／又は配列番号７の軽鎖と少なくとも８５％、若しくは少なくとも９０％、若しくは少なくとも９５％、若しくは少なくとも９８％、若しくは少なくとも９９％の配列同一性を有する軽鎖可変領域配列を含む、請求項５７に記載の再構成製剤。
【請求項６１】
前記モノクローナル抗Ｄ因子抗体が、配列番号２を含む重鎖配列及び／又は配列番号７を含む軽鎖配列を含む、請求項６０に記載の再構成製剤。
【請求項６２】
前記モノクローナル抗Ｄ因子抗体がＩｇＧ抗体である、請求項５７から６１の何れか一項に記載の再構成製剤。
【請求項６３】
前記モノクローナル抗Ｄ因子抗体がＩｇＧ１抗体である、請求項６２に記載の再構成製剤。
【請求項６４】
前記モノクローナル抗Ｄ因子抗体が抗体断片である、請求項５７から６３の何れか一項に記載の再構成製剤。
【請求項６５】
抗体断片がＦａｂ断片である、請求項６４に記載の再構成製剤。
【請求項６６】
前記モノクローナル抗Ｄ因子抗体がヒト化されている、請求項５７から６５の何れか一項に記載の再構成製剤。
【請求項６７】
前記抗Ｄ因子抗体がランパリズマブである、請求項６６に記載の再構成製剤。
【請求項６８】
硝子体内投与のためのものである、請求項５７から６７の何れか一項に記載の再構成製剤。
【請求項６９】
滅菌されている、請求項５７から６８の何れか一項に記載の再構成製剤。
【請求項７０】
約１００ｍｇ／ｍＬのランパリズマブを含む、請求項５７から６９の何れか一項に記載の再構成製剤。
【請求項７１】
約３７から８８ｍＭの塩化ナトリウムに相当するイオン強度を有する、請求項５７から７０の何れか一項に記載の再構成製剤。
【請求項７２】
約６３ｍＭの塩化ナトリウムに相当するイオン強度を有する、請求項７１に記載の再構成製剤。
【請求項７３】
モノクローナル抗Ｄ因子抗体を含む凍結乾燥製剤であって、再構成されると、治療的有効量のモノクローナル抗Ｄ因子抗体、約２０ｍＭから約６０ｍＭの塩化ヒスチジン、ポリオール、塩化ナトリウム、及び界面活性剤を含む、水性液体製剤をもたらす、凍結乾燥製剤。
【請求項７４】
凍結乾燥製剤中のポリオールの抗体に対する比が、ポリオール約８０モル：抗体１モルである、請求項７３に記載の凍結乾燥製剤。
【請求項７５】
凍結乾燥製剤中のポリオールの抗体に対する比が、ポリオール約８０モル：抗体１モルである、請求項７４に記載の凍結乾燥製剤。
【請求項７６】
前記モノクローナル抗Ｄ因子抗体が、ＨＶＲ１−ＨＣ：ＧＹＴＦＴＮＹＧＭＮ（配列番号３）；ＨＶＲ２−ＨＣ：ＷＩＮＴＹＴＧＥＴＴＹＡＤＤＦＫＧ（配列番号４）；ＨＶＲ３−ＨＣ：ＥＧＧＶＮＮ（配列番号５）のＨＶＲ配列と少なくとも９８％若しくは少なくとも９９％の配列同一性を有する重鎖超可変領域（ＨＶＲ）、並びに／又はＨＶＲ１−ＬＣ：ＩＴＳＴＤＩＤＤＤＭＮ（配列番号８）；ＨＶＲ２−ＬＣ：ＧＧＮＴＬＲＰ（配列番号９）；及びＨＶＲ３−ＬＣ：ＬＱＳＤＳＬＰＹＴ（配列番号１０）のＨＶＲ−ＬＣ配列と少なくとも９８％若しくは少なくとも９９％の配列同一性を有する軽鎖超可変領域（ＨＶＲ−ＬＣ）を含む、請求項７３から７５に記載の凍結乾燥製剤。
【請求項７７】
前記モノクローナル抗Ｄ因子抗体が、ＨＶＲ１−ＨＣ：ＧＹＴＦＴＮＹＧＭＮ（配列番号３）；ＨＶＲ２−ＨＣ：ＷＩＮＴＹＴＧＥＴＴＹＡＤＤＦＫＧ（配列番号４）；ＨＶＲ３−ＨＣ：ＥＧＧＶＮＮ（配列番号５）の重鎖超可変領域（ＨＶＲ−ＨＣ）、並びに／又はＨＶＲ１−ＬＣ：ＩＴＳＴＤＩＤＤＤＭＮ（配列番号８）；ＨＶＲ２−ＬＣ：ＧＧＮＴＬＲＰ（配列番号９）；及びＨＶＲ３−ＬＣ：ＬＱＳＤＳＬＰＹＴ（配列番号１０）の軽鎖超可変領域（ＨＶＲ−ＬＣ）を含む、請求項７６に記載の凍結乾燥製剤。
【請求項７８】
前記モノクローナル抗Ｄ因子抗体が、配列番号２の重鎖と少なくとも８５％、若しくは少なくとも９０％、若しくは少なくとも９５％、若しくは少なくとも９８％、若しくは少なくとも９９％の配列同一性を有する重鎖可変領域配列、及び／又は配列番号７の軽鎖と少なくとも８５％、若しくは少なくとも９０％、若しくは少なくとも９５％、若しくは少なくとも９８％、若しくは少なくとも９９％の配列同一性を有する軽鎖可変領域配列を含む、請求項７７に記載の凍結乾燥製剤。
【請求項７９】
前記モノクローナル抗Ｄ因子抗体が、配列番号２を含む重鎖配列及び／又は配列番号７を含む軽鎖配列を含む、請求項７８に記載の凍結乾燥製剤。
【請求項８０】
前記モノクローナル抗Ｄ因子抗体がＩｇＧ抗体である、請求項７３から７９の何れか一項に記載の凍結乾燥製剤。
【請求項８１】
前記モノクローナル抗Ｄ因子抗体がＩｇＧ１抗体である、請求項８０に記載の凍結乾燥製剤。
【請求項８２】
前記モノクローナル抗Ｄ因子抗体が抗体断片である、請求項７３から８１の何れか一項に記載の凍結乾燥製剤。
【請求項８３】
抗体断片がＦａｂ断片である、請求項８２に記載の凍結乾燥製剤。
【請求項８４】
前記モノクローナル抗Ｄ因子抗体がヒト化されている、請求項７３から８３の何れか一項に記載の凍結乾燥製剤。
【請求項８５】
前記抗Ｄ因子抗体がランパリズマブである、請求項８４に記載の凍結乾燥製剤。
【請求項８６】
再構成によって得られる水性液体製剤が、硝子体内投与のためのものである、請求項７３から８５の何れか一項に記載の凍結乾燥製剤。
【請求項８７】
滅菌されている、請求項７３から８６の何れか一項に記載の凍結乾燥製剤。
【請求項８８】
約１００ｍｇ／ｍＬのランパリズマブを含む、請求項７３から８７の何れか一項に記載の凍結乾燥製剤。
【請求項８９】
再構成によって得られる水性液体製剤が、約３７から８８ｍＭの塩化ナトリウムに相当するイオン強度を有する、請求項７３から８８の何れか一項に記載の凍結乾燥製剤。
【請求項９０】
再構成によって得られる水性液体製剤が、約６３ｍＭの塩化ナトリウムに相当するイオン強度を有する、請求項８９に記載の凍結乾燥製剤。
【請求項９１】
５℃の保存温度で少なくとも１年間安定である、請求項７３から９０の何れか一項に記載の凍結乾燥製剤。
【請求項９２】
５℃の保存温度で少なくとも２年間安定である、請求項９１に記載の凍結乾燥製剤。
【請求項９３】
請求項３６及び５２から７２の何れか一項に記載の再構成製剤、又は請求項７３から９２の何れか一項に記載の凍結乾燥製剤の再構成によって得られる水性液体製剤を含む、硝子体内投与のためのシリンジ。
【請求項９４】
薬学的製剤を作製する方法であって、
（ａ）請求項１から９２の何れか一項に記載の製剤を調製することと、
（ｂ）製剤中のモノクローナル抗Ｄ因子抗体の物理安定性、化学安定性又は生物活性を評価することと
を含む方法。
【請求項９５】
補体関連の眼疾患の治療方法であって、必要とする対象に、請求項３６及び５２から７２の何れか一項に記載の再構成製剤、又は請求項７３から９２の何れか一項に記載の凍結乾燥製剤の再構成によって得られる水性液体製剤を投与することを含む、方法。
【請求項９６】
補体関連の眼疾患が、加齢黄斑変性（ＡＭＤ）、糖尿病性網膜症、脈絡膜血管新生（ＣＮＶ）、ブドウ膜炎、糖尿病性黄斑浮腫、病的近視、フォン・ヒッペル・リンドウ病、眼のヒストプラスマ症、網膜中心静脈閉塞症（ＣＲＶＯ）、角膜血管新生、及び網膜血管新生からなる群から選択される、請求項９５に記載の方法。
【請求項９７】
前記ＡＭＤが乾性ＡＭＤである、請求項９６に記載の方法。
【請求項９８】
前記乾性ＡＭＤが地図状萎縮を特徴とする、請求項９７に記載の方法。
【請求項９９】
製剤が硝子体内注射によって投与される、請求項９５から９８の何れか一項に記載の方法。
【請求項１００】
補体関連の眼疾患の治療のための、請求項３６及び５２から７２の何れか一項に記載の再構成製剤、又は請求項７３から９２の何れか一項に記載の凍結乾燥製剤の再構成によって得られる水性液体製剤の使用。
【請求項１０１】
補体関連の眼疾患が、加齢黄斑変性（ＡＭＤ）、糖尿病性網膜症、脈絡膜血管新生（ＣＮＶ）、ブドウ膜炎、糖尿病性黄斑浮腫、病的近視、フォン・ヒッペル・リンドウ病、眼のヒストプラスマ症、網膜中心静脈閉塞症（ＣＲＶＯ）、角膜血管新生、及び網膜血管新生からなる群から選択される、請求項１００に記載の使用。
【請求項１０２】
前記ＡＭＤが乾性ＡＭＤである、請求項１０１に記載の使用。
【請求項１０３】
前記乾性ＡＭＤが地図状萎縮を特徴とする、請求項１０２に記載の使用。
【請求項１０４】
製剤が硝子体内投与のためのものである、請求項１００から１０３の何れか一項に記載の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
配列表
本出願は、ＡＳＣＩＩフォーマットで電子的に提出された配列表を含み、参照によりその全てを本明細書に組み入れる。２０１６年１０月５日に作成された前記ＡＳＣＩＩコピーは、ＧＮＥ−０４１９−ＷＯ＿ＳＬ．ｔｘｔという名称であり、６６，２５２バイトのサイズである。
【０００２】
本発明は、抗Ｄ因子抗体製剤に関する。特に、本発明は、硝子体内投与に好適である、抗Ｄ因子抗体の、プレ凍結乾燥、凍結乾燥、及び再構成された安定な液体製剤に関する。
【背景技術】
【０００３】
加齢黄斑変性（ＡＭＤ）
補体系は、免疫複合体のクリアランス、並びに感染因子、外来抗原、ウイルス感染細胞及び腫瘍細胞に対する免疫応答において中心的な役割を果たす。しかしながら、補体は病的炎症及び自己免疫疾患にも関与する。したがって、補体カスケードの過剰な又は制御されていない活性化を阻害すれば、そのような疾患及び状態を有する患者に対して臨床的に有益となり得るであろう。
【０００４】
補体系は、古典経路、マンノース結合レクチン経路、及び副経路と呼ばれる３つの異なる活性化経路を包含する（V.M. Holers In Clinical Immunology: Principles and Practice, R.R. Rich編, Mosby Press; 1996, 363-391）。古典経路は、通常は抗原−抗体複合体の形成によって活性化されるカルシウム／マグネシウム依存的カスケードである。マンノース結合レクチン（ＭＢＬ）経路は、ＭＢＬが病原体上の糖鎖構造に結合することによって開始され、Ｃ２及びＣ４を切断して活性化Ｃ２ａ、Ｃ２ｂ、Ｃ４ａ及びＣ４ｂを形成するＭＢＬプロテアーゼ（ＭＡＳＰ）の活性化をもたらす。副経路は、ある特定の感受性の表面（例えば、酵母又は細菌の細胞壁多糖類、及びある特定のバイオポリマー物質）へのＣ３の沈着及び活性化によって活性化される、マグネシウム依存的カスケードである。補体経路の活性化は、白血球走化性、マクロファージ、好中球、血小板、マスト細胞及び内皮細胞の活性化、血管透過性、細胞溶解並びに組織傷害が関与する炎症活性を媒介する、例えばＣ３ａ、Ｃ４ａ及びＣ５ａのアナフィラトキシン並びにＣ５ｂ−９の膜侵襲複合体（ＭＡＣ）のような補体タンパク質の生物学的に活性な断片を生じる。
【０００５】
Ｄ因子は、副補体経路の活性化に必須である、高い特異性のセリンプロテアーゼである。それは、Ｃ３ｂへと結合するＢ因子を切断し、副経路Ｃ３／Ｃ５コンバターゼの活性成分である、Ｃ３ｂ／Ｂｂ酵素を生じる。Ｄ因子は、ヒトにおける血漿濃度が非常に低く（１．８μｇ／ｍｌ）、副補体経路の活性化の律速酵素であることが示されているため、阻害の好適な標的であり得る（P.H. Lesavre及びH.J. Muller-Eberhard. (1978) J. Exp. Med. 148: 1498-1510；J.E. Volanakis等 (1985) New Eng. J. Med. 312: 395-401）。
【０００６】
補体活性化の下方制御は、動物モデル及びエクスビボの研究において、例えば、全身性紅斑性狼瘡及び糸球体腎炎、関節リウマチ、心肺バイパス及び血液透析、臓器移植における超急性拒絶反応、心筋梗塞、再灌流傷害、並びに成人性呼吸促迫症候群のようないくつかの疾患の症状を治療するのに有効であることが示されている。さらに、熱傷、重症喘息、アナフィラキシーショック、腸炎、じん麻疹、血管浮腫、脈管炎、多発性硬化症、重症筋無力症、膜性増殖性糸球体腎炎、及びシェーグレン症候群を含む、他の炎症状態及び自己免疫／免疫複合体疾患も、補体活性化と密接に関連する。
【０００７】
加齢黄斑変性（ＡＭＤ）は、視力に重大な結果をもたらす中心網膜の進行性の慢性疾患である。（Lim等 (2012)Lancet 379:1728）。疾患の後期形態は先進国における視力喪失の主な原因である。４０歳以上の白色人種集団において、早期ＡＭＤの有病率は６．８％であると推定され、進行性ＡＭＤは１．５％であると推定される。de Jong (2006) N. Engl. J. Med. 355: 1474。後期ＡＭＤの有病率は加齢とともに劇的に増加し、８０歳を超えると１１．８％にまで上昇する。非滲出型（乾性）と滲出型（湿性）のＡＭＤの２つの型のＡＭＤが存在する。より一般的である乾性型のＡＭＤは、中心網膜（黄斑）の下部の網膜色素上皮（ＲＰＥ）における萎縮性及び肥大性の変化、並びにＲＰＥ上の沈着物（ドルーゼン）が関与する。進行性乾性ＡＭＤは、不可逆的視力喪失を伴う、地図状萎縮（ＧＡ）を含む重大な網膜損傷をもたらす可能性がある。さらに、乾性ＡＭＤを有する患者は、湿性型に進行する可能性もあり、湿性型では、脈絡膜新生血管膜（ＣＮＶＭ）と呼ばれる異常な血管が網膜の下で発生し、液体及び血液を漏出させ、最終的に網膜内及び網膜下の失明を起こす瘢痕を引き起こす。
【０００８】
新しい血管形成（血管新生）を標的とする薬物は、湿性ＡＭＤを治療するための主力となっている。抗ＶＥＧＦＡ抗体断片であるラニビズマブは、湿性ＡＭＤを患う患者の視力改善に非常に有効であることが証明されている。最近の研究は、ＡＭＤと補体カスケードにおける主要なタンパク質との間の関連性を示しており、乾性ＡＭＤを治療するための、特定の補体成分を標的とする数多くの治療が開発されている。
【０００９】
抗Ｄ因子抗体によるＡＭＤの治療
ヒト化抗Ｄ因子抗体は、例えば、米国特許第８２７３３５２号に開示される。Ｄ因子上のエキソサイトへの結合を通じてＤ因子及び副補体経路を強力に阻害するヒト化抗Ｄ因子Ｆａｂ断片（ａＦＤ．ＷＴ、ランパリズマブ；ＦＣＦＤ４５１４Ｓ）は、現在、乾性ＡＭＤに関連するＧＡの治療へ向けて臨床開発中である。Katschke等 (2012) J. Biol. Chem. 287:12886。最近のフェーズＩＩ臨床治験は、ランパリズマブの月１回の硝子体内注射が、進行性乾性ＡＭＤを有する患者におけるＧＡ病変の進行を効果的に減速させることを示した。ＡＭＤに続発する地図状萎縮（ＧＡ）を有する患者における、ランパリズマブの硝子体内注射の有効性と安全性を調査する２つのフェーズＩＩＩ臨床治験（ＧＸ２９１７６及びＧＸ２９１８５）は進行中である。
【００１０】
硝子体内投与のための製剤
網膜疾患の治療のための薬物投与は非常に困難である。眼の解剖学的特徴は、血液網膜関門及び血液房水関門を含む、任意の外来物質に対する複数の障壁を提示する（Duvvuri S等、Expert Opin Biol Ther. 2003;3(1):45-56）。そのような血液眼関門は、眼を感染から保護する防御機構であるが、特に眼の後部の疾患のための薬物を浸透しにくくもする。結果的に、眼への局所送達のような他の送達経路と比べて達成し得る薬物のレベルが限定され、有効性を改善するために、薬物の現場での生物学的利用率（例えば眼での滞在時間）を達成し、かつ維持する高用量投与がしばしば望ましい。一般的に、網膜に薬物を送達するために、硝子体内への直接的な注射（硝子体内送達経路）を要求する侵襲的な薬物送達戦略が必要である。
【００１１】
しかしながら硝子体内注射経路は、いくつかの固有の製剤の課題をもたらす。眼は非常に敏感な器官であり、他の送達経路と比較して、硝子体内注射に許容可能な賦形剤の限定された集合が存在する。硝子体内注射は侵襲的経路であり、各々の新規の注射に伴う感染の、小さいが重大な危険性が常に存在し、したがって、注射の頻度を最小にする動機が存在する（Duvvury等、上述、Urtti A.等、Adv Drug Deliv Rev. 2006;58(11):1131-11351；Ghate D等、Expert Opin Drug Deliv. 2006;3(2):275-287）。
【００１２】
全てのこれらの制約は、容易に克服できない課題を提示する。低投与量（≦０．１ｍＬ）、硝子体内注射のための安全な賦形剤の限定されたレパートリー、及び送達される薬物の固有の物理的化学的特性に対処する必要がある。さらに、硝子体内投与に関連する安全性の配慮は、安定性の問題と相まって、硝子体内使用のための抗Ｄ因子抗体の製剤化を特に困難にするような、製剤の浸透圧及びｐＨに対し制約を課す。Ａｓｐ−Ａｓｐモチーフにおけるアスパラギン酸の異性化及びラセミ化を含む、モノクローナル抗体Ｆａｂ断片と関連する安定性の問題は、例えば、Wang等、J Pharmaceutical Sci 2013; 102(8):2520-2537；Beckley等、J Pharmaceutical Sci 2013; 102(3):947-959；及びZhang等、Analytical Biochemistry 2011; 410:234-243において議論される。
【００１３】
ランパリズマブは、現在、乾性ＡＭＤの進行型である地図状萎縮（ＧＡ）の治療のためのフェーズＩＩＩ臨床治験中である。フェーズＩ／ＩＩランパリズマブ薬物製剤（ＤＰ）は、再構成後、ｐＨ５．５の、４０ｍＭのＬ−ヒスチジン／Ｌ−ヒスチジン塩酸塩（塩化ヒスチジン、ＨｉｓＣｌ）、２０ｍＭの塩化ナトリウム（ＮａＣｌ）、１８０ｍＭのスクロース、及び０．０４％ＰＳ２０中に１００ｍｇ／ｍＬのランパリズマブとして製剤化された。開発中、フェーズＩ／ＩＩＤＰ製剤のバッファー中のランパリズマブの溶解度は、さらなる臨床開発に関して十分ではなかったことが観察された。改善した溶解度を有する一方で、固体状態、及び硝子体内投与に適した浸透圧における可溶性凝集体形成を最小にするための好適な糖対タンパク質比を維持する、抗Ｄ因子製剤を開発するために、代替的な抗Ｄ因子製剤が調査された。
【発明の概要】
【００１４】
本発明は、保存中の抗体分子の安定性を保持しながら、抗Ｄ因子抗体の溶解度の改善を実現する抗Ｄ因子抗体製剤の開発に少なくとも部分的に基づく。
【００１５】
一態様において、本発明は、治療的有効量のモノクローナル抗Ｄ因子抗体、ｐＨを５．０と５．４の間に調整するバッファー、凍結乾燥保護剤、及び界面活性剤を含む薬学的製剤に関する。
【００１６】
いくつかの実施態様において、製剤のｐＨは約５．３である。
【００１７】
いくつかの実施態様において、製剤中の凍結乾燥保護剤の抗体に対する比は、凍結乾燥保護剤約６０から１００モル：抗体１モル、好ましくは凍結乾燥保護剤約８０モル：抗体１モルである。
【００１８】
いくつかの実施態様において、製剤のｐＨを調整するために使用されるバッファーはヒスチジンバッファーであり、それは、例えば、約５ｍＭから約１５ｍＭの量で、又は約７ｍＭから約１３ｍＭの量で存在してもよい。
【００１９】
いくつかの実施態様において、製剤中に存在する凍結乾燥保護剤は、一又は複数のポリオールを含む。
【００２０】
いくつかの実施態様において、ポリオールの少なくとも１つは、例えばα，α−トレハロースのような還元糖、又は例えばスクロースのような非還元糖である。
【００２１】
いくつかの実施態様において、ポリオールの少なくとも１つは二糖類である。
【００２２】
いくつかの実施態様において、製剤中に存在する界面活性剤は、例えばポリソルベート２０及び／又はポロキサマーのような一又は複数のポリソルベートを含む。
【００２３】
いくつかの実施態様において、製剤中に存在するモノクローナル抗Ｄ因子抗体は、ＨＶＲ１−ＨＣ：ＧＹＴＦＴＮＹＧＭＮ（配列番号３）；ＨＶＲ２−ＨＣ：ＷＩＮＴＹＴＧＥＴＴＹＡＤＤＦＫＧ（配列番号４）；ＨＶＲ３−ＨＣ：ＥＧＧＶＮＮ（配列番号５）のＨＶＲ配列と少なくとも９８％若しくは少なくとも９９％の配列同一性を有する重鎖超可変領域（ＨＶＲ−ＨＣ）、並びに／又はＨＶＲ１−ＬＣ：ＩＴＳＴＤＩＤＤＤＭＮ（配列番号８）；ＨＶＲ２−ＬＣ：ＧＧＮＴＬＲＰ（配列番号９）；及びＨＶＲ３−ＬＣ：ＬＱＳＤＳＬＰＹＴ（配列番号１０）のＨＶＲ−ＬＣ配列と少なくとも９８％若しくは少なくとも９９％の配列同一性を有する軽鎖超可変領域（ＨＶＲ−ＬＣ）を含む。
【００２４】
いくつかの実施態様において、モノクローナル抗Ｄ因子抗体は、ＨＶＲ１−ＨＣ：ＧＹＴＦＴＮＹＧＭＮ（配列番号３）；ＨＶＲ２−ＨＣ：ＷＩＮＴＹＴＧＥＴＴＹＡＤＤＦＫＧ（配列番号４）；ＨＶＲ３−ＨＣ：ＥＧＧＶＮＮ（配列番号５）のＨＶＲ−ＨＣ、並びに／又はＨＶＲ１−ＬＣ：ＩＴＳＴＤＩＤＤＤＭＮ（配列番号８）；ＨＶＲ２−ＬＣ：ＧＧＮＴＬＲＰ（配列番号９）；及びＨＶＲ３−ＬＣ：ＬＱＳＤＳＬＰＹＴ（配列番号１０）のＨＶＲ−ＬＣを含む。
【００２５】
いくつかの実施態様において、モノクローナル抗Ｄ因子抗体は、配列番号２の重鎖の可変領域配列と少なくとも８５％、若しくは少なくとも９０％、若しくは少なくとも９５％、若しくは少なくとも９８％、若しくは少なくとも９９％の配列同一性を有する重鎖可変領域配列、及び／又は配列番号７の軽鎖の可変領域配列と少なくとも８５％、若しくは少なくとも９０％、若しくは少なくとも９５％、若しくは少なくとも９８％、若しくは少なくとも９９％の配列同一性を有する軽鎖可変領域配列を含む。
【００２６】
いくつかの実施態様において、モノクローナル抗Ｄ因子抗体は、配列番号２の重鎖の可変領域配列及び／又は配列番号７の軽鎖の可変領域配列を含む。
【００２７】
いくつかの実施態様において、モノクローナル抗Ｄ因子抗体は、配列番号２を含む重鎖配列及び／又は配列番号７を含む軽鎖配列を含む。
【００２８】
いくつかの実施態様において、モノクローナル抗Ｄ因子抗体は、ＩｇＧ１抗体のようなＩｇＧ抗体である。
【００２９】
いくつかの実施態様において、モノクローナル抗Ｄ因子抗体は、Ｆａｂ断片のような抗体断片である。
【００３０】
いくつかの実施態様において、モノクローナル抗Ｄ因子抗体は、ヒト化されている。
【００３１】
いくつかの実施態様において、モノクローナル抗Ｄ因子抗体は、ランパリズマブである。
【００３２】
本明細書における薬学的製剤は、例えば、硝子体内投与を含む眼内投与のためのものであってよい。
【００３３】
様々な実施態様において、本明細書における薬学的製剤は、滅菌されている、並びに／又は凍結及び融解において安定であってよい。
【００３４】
いくつかの実施態様において、薬学的製剤は、プレ凍結乾燥製剤である。
【００３５】
いくつかの実施態様において、プレ凍結乾燥製剤は、−２０℃の保存温度で少なくとも１年間、又は少なくとも２年間安定である。
【００３６】
いくつかの実施態様において、薬学的製剤は、凍結乾燥されている。
【００３７】
いくつかの実施態様において、凍結乾燥薬学的製剤は、５℃の保存温度で少なくとも１年間、又は少なくとも２年間安定である。
【００３８】
別の態様において、本発明は、本明細書に上述されているか、又は他で開示される任意の薬学的製剤から調製される、再構成水性液体製剤に関する。
【００３９】
さらに別の態様において、本発明は、治療的有効量のモノクローナル抗Ｄ因子抗体、ｐＨを５．０と５．４の間に調整する約５ｍＭから約１５ｍＭのヒスチジンバッファー、塩化ナトリウム、凍結乾燥保護剤、及び界面活性剤を含む、プレ凍結乾燥又は凍結乾燥された薬学的製剤に関する。
【００４０】
いくつかの実施態様において、プレ凍結乾燥又は凍結乾燥された薬学的製剤中に存在する抗Ｄ因子抗体は、ＨＶＲ１−ＨＣ：ＧＹＴＦＴＮＹＧＭＮ（配列番号３）；ＨＶＲ２−ＨＣ：ＷＩＮＴＹＴＧＥＴＴＹＡＤＤＦＫＧ（配列番号４）；ＨＶＲ３−ＨＣ：ＥＧＧＶＮＮ（配列番号５）のＨＶＲ配列と少なくとも９８％若しくは少なくとも９９％の配列同一性を有する重鎖超可変領域（ＨＶＲ−ＨＣ）、並びに／又はＨＶＲ１−ＬＣ：ＩＴＳＴＤＩＤＤＤＭＮ（配列番号８）；ＨＶＲ２−ＬＣ：ＧＧＮＴＬＲＰ（配列番号９）；及びＨＶＲ３−ＬＣ：ＬＱＳＤＳＬＰＹＴ（配列番号１０）のＨＶＲ−ＬＣ配列と少なくとも９８％若しくは少なくとも９９％の配列同一性を有する軽鎖超可変領域（ＨＶＲ−ＬＣ）を含む。
【００４１】
いくつかの実施態様において、モノクローナル抗Ｄ因子抗体は、ＨＶＲ１−ＨＣ：ＧＹＴＦＴＮＹＧＭＮ（配列番号３）；ＨＶＲ２−ＨＣ：ＷＩＮＴＹＴＧＥＴＴＹＡＤＤＦＫＧ（配列番号４）；ＨＶＲ３−ＨＣ：ＥＧＧＶＮＮ（配列番号５）の重鎖超可変領域（ＨＶＲ−ＨＣ）、並びに／又はＨＶＲ１−ＬＣ：ＩＴＳＴＤＩＤＤＤＭＮ（配列番号８）；ＨＶＲ２−ＬＣ：ＧＧＮＴＬＲＰ（配列番号９）；及びＨＶＲ３−ＬＣ：ＬＱＳＤＳＬＰＹＴ（配列番号１０）の軽鎖超可変領域（ＨＶＲ−ＬＣ）を含む。
【００４２】
いくつかの実施態様において、モノクローナル抗Ｄ因子抗体は、配列番号２の重鎖と少なくとも８５％、若しくは少なくとも９０％、若しくは少なくとも９５％、若しくは少なくとも９８％、若しくは少なくとも９９％の配列同一性を有する重鎖可変領域配列、及び／又は配列番号７の軽鎖と少なくとも８５％、若しくは少なくとも９０％、若しくは少なくとも９５％、若しくは少なくとも９８％、若しくは少なくとも９９％の配列同一性を有する軽鎖可変領域配列を含む。
【００４３】
いくつかの実施態様において、モノクローナル抗Ｄ因子抗体は、配列番号２を含む重鎖配列及び／又は配列番号７を含む軽鎖配列を含む。
【００４４】
モノクローナル抗Ｄ因子抗体は、例えばＩｇＧ１抗体のような、例えばＩｇＧ抗体であってよい。
【００４５】
いくつかの実施態様において、モノクローナル抗Ｄ因子抗体は、例えばＦａｂ断片のような抗体断片である。
【００４６】
いくつかの実施態様において、モノクローナル抗Ｄ因子抗体は、ヒト化されている。
【００４７】
いくつかの実施態様において、本発明の、プレ凍結乾燥又は凍結乾燥された薬学的製剤に存在する抗Ｄ因子抗体は、ランパリズマブである。
【００４８】
いくつかの実施態様において、プレ凍結乾燥又は凍結乾燥された薬学的製剤は、約２５ｍｇ／ｍＬのランパリズマブを含む。
【００４９】
いくつかの実施態様において、プレ凍結乾燥又は凍結乾燥された薬学的製剤中の凍結乾燥保護剤の抗体に対する比は、凍結乾燥保護剤約６０から１００モル：抗体１モルである。
【００５０】
いくつかの実施態様において、凍結乾燥製剤中の凍結乾燥保護剤の抗体に対する比は、凍結乾燥保護剤約８０モル：抗体１モルである。
【００５１】
別の態様において、本発明は、本明細書に上述されているか、又は他で開示される凍結乾燥薬学的製剤から調製される、再構成水性液体製剤に関する。
【００５２】
いくつかの実施態様において、再構成製剤は、例えば硝子体内投与のような眼内投与のためのものである。
【００５３】
いくつかの実施態様において、再構成製剤は、滅菌されている。
【００５４】
いくつかの実施態様において、再構成製剤は、約１００ｍｇ／ｍＬのランパリズマブを含む。
【００５５】
さらなる態様において、本発明は、治療的有効量のモノクローナル抗Ｄ因子抗体、約２０ｍＭから約６０ｍＭの塩化ヒスチジン、ポリオール、塩化ナトリウム、及び界面活性剤を含む再構成水性液体薬学的製剤に関する。
【００５６】
いくつかの実施態様において、再構成水性液体製剤中に存在する抗Ｄ因子抗体は、ＨＶＲ１−ＨＣ：ＧＹＴＦＴＮＹＧＭＮ（配列番号３）；ＨＶＲ２−ＨＣ：ＷＩＮＴＹＴＧＥＴＴＹＡＤＤＦＫＧ（配列番号４）；ＨＶＲ３−ＨＣ：ＥＧＧＶＮＮ（配列番号５）のＨＶＲ配列と少なくとも９８％若しくは少なくとも９９％の配列同一性を有する重鎖超可変領域（ＨＶＲ−ＨＣ）、並びに／又はＨＶＲ１−ＬＣ：ＩＴＳＴＤＩＤＤＤＭＮ（配列番号８）；ＨＶＲ２−ＬＣ：ＧＧＮＴＬＲＰ（配列番号９）；及びＨＶＲ３−ＬＣ：ＬＱＳＤＳＬＰＹＴ（配列番号１０）のＨＶＲ−ＬＣ配列と少なくとも９８％若しくは少なくとも９９％の配列同一性を有する軽鎖超可変領域（ＨＶＲ−ＬＣ）を含む。
【００５７】
いくつかの実施態様において、再構成製剤は、ＨＶＲ１−ＨＣ：ＧＹＴＦＴＮＹＧＭＮ（配列番号３）；ＨＶＲ２−ＨＣ：ＷＩＮＴＹＴＧＥＴＴＹＡＤＤＦＫＧ（配列番号４）；ＨＶＲ３−ＨＣ：ＥＧＧＶＮＮ（配列番号５）の重鎖超可変領域（ＨＶＲ−ＨＣ）、並びに／又はＨＶＲ１−ＬＣ：ＩＴＳＴＤＩＤＤＤＭＮ（配列番号８）；ＨＶＲ２−ＬＣ：ＧＧＮＴＬＲＰ（配列番号９）；及びＨＶＲ３−ＬＣ：ＬＱＳＤＳＬＰＹＴ（配列番号１０）のＨＶＲ−ＬＣ配列の軽鎖超可変領域（ＨＶＲ−ＬＣ）を含む、モノクローナル抗Ｄ因子抗体を含む。
【００５８】
いくつかの実施態様において、再構成製剤中に存在するモノクローナル抗Ｄ因子抗体は、配列番号２の重鎖と少なくとも８５％、若しくは少なくとも９０％、若しくは少なくとも９５％、若しくは少なくとも９８％、若しくは少なくとも９９％の配列同一性を有する重鎖可変領域配列、及び／又は配列番号７の軽鎖と少なくとも８５％、若しくは少なくとも９０％、若しくは少なくとも９５％、若しくは少なくとも９８％、若しくは少なくとも９９％の配列同一性を有する軽鎖可変領域配列を含む。
【００５９】
いくつかの実施態様において、再構成製剤中に存在するモノクローナル抗Ｄ因子抗体は、配列番号２を含む重鎖配列及び／又は配列番号７を含む軽鎖配列を含む。
【００６０】
いくつかの実施態様において、再構成製剤中に存在するモノクローナル抗Ｄ因子抗体は、ＩｇＧ１抗体のようなＩｇＧ抗体である。
【００６１】
いくつかの実施態様において、再構成製剤中に存在するモノクローナル抗Ｄ因子抗体は、例えばＦａｂ断片のような抗体断片である。
【００６２】
いくつかの実施態様において、再構成製剤中に存在するモノクローナル抗Ｄ因子抗体は、ヒト化されている。
【００６３】
いくつかの実施態様において、再構成製剤中に存在する抗Ｄ因子抗体は、ランパリズマブである。
【００６４】
いくつかの実施態様において、再構成製剤は、硝子体内投与のような眼内のためのものである。
【００６５】
いくつかの実施態様において、再構成製剤は、滅菌されている。
【００６６】
いくつかの実施態様において、再構成製剤は、約１００ｍｇ／ｍＬのランパリズマブを含む。
【００６７】
いくつかの実施態様において、再構成製剤は、例えば約６３ｍＭの塩化ナトリウムに相当するイオン強度のような、約３７から８８ｍＭの塩化ナトリウムに相当するイオン強度を有する。
【００６８】
さらなる態様において、本発明は、モノクローナル抗Ｄ因子抗体を含む凍結乾燥製剤に関し、前記凍結乾燥製剤は再構成されると、治療的有効量のモノクローナル抗Ｄ因子抗体、約２０ｍＭから約６０ｍＭの塩化ヒスチジン、ポリオール、塩化ナトリウム、及び界面活性剤を含む水性液体製剤をもたらす。
【００６９】
いくつかの実施態様において、凍結乾燥製剤中のポリオールの抗体に対する比は、ポリオール約８０モル：抗体１モルである。
【００７０】
いくつかの実施態様において、凍結乾燥製剤中に存在する抗Ｄ因子抗体は、ＨＶＲ１−ＨＣ：ＧＹＴＦＴＮＹＧＭＮ（配列番号３）；ＨＶＲ２−ＨＣ：ＷＩＮＴＹＴＧＥＴＴＹＡＤＤＦＫＧ（配列番号４）；ＨＶＲ３−ＨＣ：ＥＧＧＶＮＮ（配列番号５）のＨＶＲ配列と少なくとも９８％若しくは少なくとも９９％の配列同一性を有する重鎖超可変領域（ＨＶＲ）、並びに／又はＨＶＲ１−ＬＣ：ＩＴＳＴＤＩＤＤＤＭＮ（配列番号８）；ＨＶＲ２−ＬＣ：ＧＧＮＴＬＲＰ（配列番号９）；及びＨＶＲ３−ＬＣ：ＬＱＳＤＳＬＰＹＴ（配列番号１０）のＨＶＲ−ＬＣ配列と少なくとも９８％若しくは少なくとも９９％の配列同一性を有する軽鎖超可変領域（ＨＶＲ−ＬＣ）を含む。
【００７１】
いくつかの実施態様において、凍結乾燥製剤中に存在する抗Ｄ因子抗体は、ＨＶＲ１−ＨＣ：ＧＹＴＦＴＮＹＧＭＮ（配列番号３）；ＨＶＲ２−ＨＣ：ＷＩＮＴＹＴＧＥＴＴＹＡＤＤＦＫＧ（配列番号４）；ＨＶＲ３−ＨＣ：ＥＧＧＶＮＮ（配列番号５）の重鎖超可変領域（ＨＶＲ−ＨＣ）、並びに／又はＨＶＲ１−ＬＣ：ＩＴＳＴＤＩＤＤＤＭＮ（配列番号８）；ＨＶＲ２−ＬＣ：ＧＧＮＴＬＲＰ（配列番号９）；及びＨＶＲ３−ＬＣ：ＬＱＳＤＳＬＰＹＴ（配列番号１０）の軽鎖超可変領域（ＨＶＲ−ＬＣ）を含む。
【００７２】
いくつかの実施態様において、凍結乾燥製剤中に存在するモノクローナル抗Ｄ因子抗体は、配列番号２の重鎖と少なくとも８５％、若しくは少なくとも９０％、若しくは少なくとも９５％、若しくは少なくとも９８％、若しくは少なくとも９９％の配列同一性を有する重鎖可変領域配列、及び／又は配列番号７の軽鎖と少なくとも８５％、若しくは少なくとも９０％、若しくは少なくとも９５％、若しくは少なくとも９８％、若しくは少なくとも９９％の配列同一性を有する軽鎖可変領域配列を含む。
【００７３】
いくつかの実施態様において、凍結乾燥製剤中に存在するモノクローナル抗Ｄ因子抗体は、配列番号２を含む重鎖配列及び／又は配列番号７を含む軽鎖配列を含む。
【００７４】
いくつかの実施態様において、凍結乾燥製剤中に存在するモノクローナル抗Ｄ因子抗体は、ＩｇＧ１抗体のようなＩｇＧ抗体である。
【００７５】
いくつかの実施態様において、凍結乾燥製剤中に存在するモノクローナル抗Ｄ因子抗体は、例えばＦａｂ断片のような抗体断片である。
【００７６】
いくつかの実施態様において、凍結乾燥製剤中に存在するモノクローナル抗Ｄ因子抗体は、ヒト化されている。
【００７７】
いくつかの実施態様において、凍結乾燥製剤中に存在する抗Ｄ因子抗体は、ランパリズマブである。
【００７８】
いくつかの実施態様において、本明細書における凍結乾燥製剤の再構成によって得られる水性液体製剤は、硝子体内投与のためのものである。
【００７９】
いくつかの実施態様において、凍結乾燥製剤は、滅菌されている。
【００８０】
いくつかの実施態様において、凍結乾燥製剤は、約１００ｍｇ／ｍＬのランパリズマブを含む。
【００８１】
いくつかの実施態様において、凍結乾燥製剤は、５℃の保存温度で少なくとも１年間、又は少なくとも２年間安定である。
【００８２】
いくつかの実施態様において、凍結乾燥製剤の再構成によって得られる水性液体製剤は、約３７から８８ｍＭの塩化ナトリウムに相当するイオン強度を有する。
【００８３】
いくつかの実施態様において、凍結乾燥製剤の再構成によって得られる水性液体製剤は、約６３ｍＭの塩化ナトリウムに相当するイオン強度を有する。
【００８４】
さらなる態様において、本発明は、本明細書に上述されているか、又は他で開示される任意の再構成製剤を含む、硝子体内注射のためのシリンジに関する。
【００８５】
別の態様において、本発明は、薬学的製剤を作製する方法であって、
（ａ）上述の又は他で開示される任意の製剤を調製することと、
（ｂ）製剤中のモノクローナル抗Ｄ因子抗体の物理安定性、化学安定性又は生物活性を評価することと
を含む方法に関する。
【００８６】
さらに別の態様において、本発明は、補体関連の眼疾患の治療方法であって、必要とする対象に任意の上述の再構成製剤を投与することを含む方法に関する。
【００８７】
いくつかの実施態様において、補体関連の眼疾患は、加齢黄斑変性（ＡＭＤ）、糖尿病性網膜症、脈絡膜血管新生（ＣＮＶ）、ブドウ膜炎、糖尿病性黄斑浮腫、病的近視、フォン・ヒッペル・リンドウ病、眼のヒストプラスマ症、網膜中心静脈閉塞症（ＣＲＶＯ）、角膜血管新生、及び網膜血管新生からなる群から選択される。
【００８８】
いくつかの実施態様において、ＡＭＤは乾性ＡＭＤである。
【００８９】
いくつかの実施態様において、乾性ＡＭＤは、地図状萎縮を特徴とする。
【００９０】
いくつかの実施態様において、製剤は硝子体内注射によって投与される。
【００９１】
異なる態様において、本発明は、補体関連の眼疾患の治療のための、本明細書における任意の再構成製剤の使用に関する。
【００９２】
いくつかの実施態様において、補体関連の眼疾患は、加齢黄斑変性（ＡＭＤ）、糖尿病性網膜症、脈絡膜血管新生（ＣＮＶ）、ブドウ膜炎、糖尿病性黄斑浮腫、病的近視、フォン・ヒッペル・リンドウ病、眼のヒストプラスマ症、網膜中心静脈閉塞症（ＣＲＶＯ）、角膜血管新生、及び網膜血管新生からなる群から選択される。
【００９３】
いくつかの実施態様において、ＡＭＤは乾性ＡＭＤである。
【００９４】
いくつかの実施態様において、乾性ＡＭＤは、地図状萎縮を特徴とする。
【００９５】
いくつかの実施態様において、製剤は、硝子体内投与のためのものである。
【００９６】
全ての実施態様において、プレ凍結乾燥、凍結乾燥、再構成された製剤、及び液体製剤を含む本明細書の製剤は、抗Ｄ因子抗体の変異体を含んでいてもよい。
【００９７】
いくつかの実施態様において、本発明の製剤中に存在するモノクローナル抗Ｄ因子抗体は、抗Ｄ因子抗体の変異体、ＡＦＤ．ｖ１−ＡＦＤ．ｖ１５の重鎖及び／又は軽鎖のＣＤＲ配列（図２０を参照）と少なくとも９０％、又は少なくとも９５％、又は少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有する重鎖超可変領域（ＨＶＲ−ＨＣ）を含む。
【００９８】
いくつかの実施態様において、モノクローナル抗Ｄ因子抗体は、抗Ｄ因子抗体の変異体、ＡＦＤ．ｖ１−ＡＦＤ．ｖ１５の重鎖及び／又は軽鎖のＣＤＲ配列（図２０を参照）を含む。
【００９９】
いくつかの実施態様において、モノクローナル抗Ｄ因子抗体は、抗Ｄ因子抗体の変異体、ＡＦＤ．ｖ１−ＡＦＤ．ｖ１５の軽鎖及び／又は重鎖の可変領域配列（図２１及び２２を参照）と少なくとも８５％、又は少なくとも９０％、又は少なくとも９５％、又は少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有する重鎖可変領域配列を含む。
【０１００】
いくつかの実施態様において、モノクローナル抗Ｄ因子抗体は、抗Ｄ因子抗体の変異体、ＡＦＤ．ｖ１−ＡＦＤ．ｖ１５の軽鎖及び／又は重鎖の可変領域配列（図２１及び２２を参照）を含む。
【０１０１】
いくつかの実施態様において、Ｆａｂ断片の重鎖のＣ末端は、配列ＣＤＫＴＨＸ（配列番号５２）で終了し、ＸはＴ以外の任意のアミノ酸である。本発明は、アミノ酸「ＣＤＫＴＨＴ」（配列番号１１）、「ＣＤＫＴＨＬ」（配列番号１２）、「ＣＤＫＴＨ」（配列番号１３）、「ＣＤＫＴ」（配列番号１４）、「ＣＤＫ」（配列番号１５）、又は「ＣＤ」で終了するＦａｂ断片の重鎖のＣ末端を有する、本明細書に上述されるような抗Ｄ因子抗体及び抗Ｄ因子抗体の変異体（例えばＡＦＤ．ｖ１−ＡＦＤ．ｖ１５）を含む製剤を明示的に含む。Ｃ末端のトランケーションは、熱安定性又は発現を損なうことなく、Ｆａｂに対するＡＨＡ−反応性を排除できる。いくつかの実施態様において、抗Ｄ因子抗体又は抗Ｄ因子抗体の変異体（例えばＡＦＤ．ｖ１−ＡＦＤ．ｖ１５）のＦａｂ断片の重鎖のＣ末端は、「ＣＤＫＴＨＴＣ」（配列番号１６）、「ＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣ」（配列番号１７）、「ＣＤＫＴＨＴＣＰＰＳ」（配列番号１８）、「ＣＤＫＴＨＴＳＰＰＣ」（配列番号１９）、「ＣＤＫＴＨＴＡＰＰＣ」（配列番号２０）、「ＣＤＫＴＨＴＳＧＧＣ」（配列番号２１）、又は「ＣＹＧＰＰＣ」（配列番号２２）で終了する。いくつかの実施態様において、Ｃ末端アミノ酸における遊離システインは、例えばＰＥＧのようなポリマーへのコンジュゲーションが可能である。いくつかの実施態様において、Ｆａｂ断片は、配列番号３１から５１から選択される重鎖定常領域を含む。いくつかの実施態様において、ＦａｂはＩｇＧ２又はＩｇＧ４Ｆａｂである（例えば配列番号４３から５０を参照）（図１９）。いくつかの実施態様において、Ｆａｂは、配列番号４３の重鎖定常領域（ＶＥＲＫ；配列番号２３）を含むＩｇＧ２のＦａｂ断片であるか、又は配列番号４４の重鎖定常領域（ＶＥＲＫＣ；配列番号２４）を含むＩｇＧ２のＦａｂ−Ｃ断片である。いくつかの実施態様において、Ｆａｂは、配列番号４６（ＫＹＧＰＰ；配列番号２６）、配列番号５０（ＫＹＧＰ；配列番号２７）、配列番号４７（ＫＹＧ、配列番号２８）、配列番号４８（ＫＹ）、及び配列番号４９（Ｋ）から選択される重鎖定常領域を含むＩｇＧ４の断片であるか、又は配列番号４５の重鎖定常領域（ＫＹＧＰＰＣ；配列番号２５）を含むＩｇＧ４のＦａｂ−Ｃ断片である。
【０１０２】
既存の抗ヒンジ抗体（ＰＥ−ＡＨＡ）反応を避けるために、Ｃ末端におけるトランケーション及び／又は変異の代わりに、ＩｇＧ２又はＩｇＧ４のＦａｂ断片を使用でき、これらはＰＥ−ＡＨＡ反応を示さないためである。
【０１０３】
いくつかの実施態様において、本発明の製剤中に存在する抗Ｄ因子抗体の変異体は、ＡＦＤ．ｖ８又はＡＦＤ．ｖ１４である。
【図面の簡単な説明】
【０１０４】
【図１】副補体経路におけるＤ因子の役割を示す図である。
【図２】塩基性の電荷変異体のレベルに対するランパリズマブの溶解度の依存性を示す図である。各々の透析は、常温でｐＨ５．６の３０ｍＭのＨｉｓＣｌ及び１２ｍＭのＮａＣｌ中で１１５ｍｇ／ｍＬのランパリズマブを含む。両方のカセットが、同一のロット由来のランパリズマブを含むが、右（Ｂ）のカセット中の試料は、ｐＨ５．５に滴定され、ＩＥＣで２７％の塩基性ピークを含むまでストレスをかけた。出発物質はＩＥＣで７％の塩基性ピークを含んだ（Ａ）。
【図３】ＮａＣｌ濃度と塩基性の電荷変異体のレベルの関数としてのランパリズマブの溶解度を示す図である。各々のバイアルは、実験室の常温でｐＨ５．６の３０ｍＭのＨｉｓＣｌ中で１１５ｍｇ／ｍＬのランパリズマブを含む。各々のバイアル中のｍＭ単位でのＮａＣｌ濃度（０、６、１２、１４、１６、１８、２０、２２、２４）が示される。最初にランパリズマブの完全な溶解度（濁りのない澄んだ溶液）を確保するためには１２ｍＭのＮａＣｌが必要である（Ａ）が、より高いレベルの塩基性の電荷変異体が存在するとき、ランパリズマブの完全な溶解度（濁りのない澄んだ溶液）を確保するためには２４ｍＭのＮａＣｌが必要である（Ｂ）。
【図４】３０℃における、時間の関数としてのＳＥＣによる原体のサイズ変異体を示す図である。
【図５】３０℃における、時間の関数としてのＩＥＣによる原体の電荷変異体を示す図である。
【図６】−２０℃における、時間の関数としてのＳＥＣによる原体のサイズ変異体を示す図である。
【図７】−２０℃における、時間の関数としてのＩＥＣによる原体の電荷変異体を示す図である。
【図８】４０℃／７５％ＲＨにおける、時間の関数としてのＳＥＣによる薬物製剤のサイズ変異体を示す図である。
【図９】製剤中の糖対タンパク質比の関数としての、４０℃／７５％ＲＨにおけるＳＥＣによる薬物製剤の凝集速度を示す図である。
【図１０】０、２及び４週間、４０℃／７５％ＲＨで保存した後の薬物製剤＃１のＳＥＣクロマトグラムの重ね合わせである。
【図１１】４０℃／７５％ＲＨにおける、時間の関数としてのＩＥＣによる薬物製剤の電荷変異体を示す図である。
【図１２】２５℃／６０％ＲＨにおける、時間の関数としてのＳＥＣによる薬物製剤のサイズ変異体を示す図である。
【図１３】５℃における、時間の関数としてのＳＥＣによる薬物製剤のサイズ変異体を示す図である。
【図１４】５℃における、時間の関数としてのＩＥＣによる薬物製剤の電荷変異体を示す図である。
【図１５】ランパリズマブ（ヒト化抗Ｄ因子Ｆａｂ２３８−１）の重鎖のヌクレオチド配列（配列番号１）を示す図である。ヌクレオチド配列は、太字及び下線で示される開始コドン及び終止コドンを有するランパリズマブの重鎖をコードする。図１８における最初のアミノ酸に対応するコドンは太字及び斜体である。
【図１６】ランパリズマブ（ヒト化抗Ｄ因子Ｆａｂ２３８−１）の重鎖のアミノ酸配列（配列番号２）を示す図である。ＨＶＲ−ＨＣ配列は太字及び斜体である。可変領域は、下線を付していない領域であるが、第１の定常ドメインＣＨ１を下線で示す。ＨＶＲ−ＨＣ領域は、ＨＶＲ１−ＨＣ：ＧＹＴＦＴＮＹＧＭＮ（配列番号３）；ＨＶＲ２−ＨＣ：ＷＩＮＴＹＴＧＥＴＴＹＡＤＤＦＫＧ（配列番号４）；ＨＶＲ３−ＨＣ：ＥＧＧＶＮＮ（配列番号５）として示される。図１６はまた、それぞれ配列番号５４−５７、及び３０として、ＦＲ１−ＦＲ４及びＣＨ１配列を開示する。
【図１７】ランパリズマブ（ヒト化抗Ｄ因子Ｆａｂ２３８−１）の軽鎖のヌクレオチド配列（配列番号６）を示す図である。ヌクレオチド配列は、太字及び下線で示される開始コドン及び終止コドンを有するランパリズマブの軽鎖をコードする。図２０における最初のアミノ酸に対応するコドンは太字及び斜体である。
【図１８】ランパリズマブ（ヒト化抗Ｄ因子Ｆａｂ２３８−１）の軽鎖のアミノ酸配列（配列番号７）を示す図である。アミノ酸配列はＮ末端シグナル配列を欠く。ＨＶＲ−ＬＣ配列は太字及び斜体である。可変領域は、下線を付していない領域であるが、第１の定常ドメインＣＬ１を下線で示す。フレームワーク（ＦＲ）領域及びＨＶＲ領域は、ＨＶＲ１−ＬＣ：ＩＴＳＴＤＩＤＤＤＭＮ（配列番号８）；ＨＶＲ２−ＬＣ：ＧＧＮＴＬＲＰ（配列番号９）；ＨＶＲ３−ＬＣ：ＬＱＳＤＳＬＰＹＴ（配列番号１０）として示される。図１８はまた、それぞれ配列番号５８−６１、及び２９として、ＦＲ１−ＦＲ４及びＣＨ１配列を開示する。
【図１９】ＩｇＧ１抗Ｄ因子抗体Ｆａｂ断片のＦａｂ軽鎖定常領域配列（配列番号２９）、並びにＣ末端トランケーションを有する重鎖を含む、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２及びＩｇＧ４抗Ｄ因子抗体の重鎖定常領域配列（配列番号３０−５１）を示す図である。
【図２０】抗Ｄ因子抗体の変異体ＡＦＤ．ｖ１−ＡＦＤ．ｖ１５の軽鎖及び重鎖のＣＤＲ配列を示す図である。ＣＤＲ  Ｌ１配列は、それぞれ配列番号８、６２−６８、６８−７０、６９、６９、６９、６９、６９、及び６９として出現順に並べて開示される。ＣＤＲ  Ｌ２配列「ＧＧＮＴＬＲＰ」及び「ＡＡＳＴＬＱＳ」は、それぞれ配列番号９及び７１として開示される。ＣＤＲ  Ｌ３配列「ＬＱＳＤＳＬＰＹＴ」、「ＱＫＹＮＳＡＰＹＴ」、及び「ＬＱＳＥＳＬＰＹＴ」は、それぞれ配列番号１０、７２、及び７３として開示される。ＣＤＲ  Ｈ１配列「ＮＹＧＭＮ」及び「ＳＹＡＭＮ」は、それぞれ配列番号７４及び７５として開示される。ＣＤＲ  Ｈ２配列「ＷＩＮＴＹＴＧＥＴＴＹＡＤＤＦＫＧ」、「ＷＩＮＴＮＴＧＮＰＴＹＡＱＧＦＴＧ」、「ＷＩＮＴＹＴＧＥＴＴＹＡＥＤＦＫＧ」、及び「ＷＩＳＴＹＴＧＥＴＴＹＡＥＤＦＫＧ」は、それぞれ配列番号４、７６、７７、及び７８として開示される。ＣＤＲ  Ｈ３配列「ＥＧＧＶＮＮ」、「ＥＧＹＦＤＹ」、「ＥＧＧＶＤＮ」、「ＥＧＧＶＱＮ」、及び「ＥＧＧＶＳＮ」は、それぞれ配列番号５、７９、８０、８１、及び８２として開示される。
【図２１】ヒトフレームワーク及びランパリズマブ軽鎖可変領域配列とアラインメントした抗Ｄ因子抗体の変異体ＡＦＤ．ｖ１−ＡＦＤ．ｖ１５の軽鎖可変領域配列のアラインメントを示す図である（出現順でそれぞれ配列番号８３−９４、９２、９２、９２、９２、及び９４）。Ｋａｂａｔの定義によるＣＤＲ配列は下線で示される。
【図２２】ヒトフレームワーク及びランパリズマブ重鎖可変領域配列とアラインメントした抗Ｄ因子抗体の変異体ＡＦＤ．ｖａ−ＡＦＤ．ｖ１５の重鎖可変領域配列のアラインメントを示す図である（出現順でそれぞれ配列番号９５、９６、９５、９５、９５、９５、９５、９７、９７、９７、９７、９７−１０１及び１０１）。Ｋａｂａｔの定義によるＣＤＲ配列は下線で示される。
【図２３−１】表１  スクリーニングされた原体の組成。
【図２３−２】表２  −２０℃で保存された原体の組成の安定性データ。
【図２３−３】表３  ５℃で保存された原体の組成の安定性データ。
【図２３−４】表４  ３０℃で保存された原体の組成の安定性データ。
【図２３−５Ａ】表５Ａ  ５℃で保存された薬物製剤の安定性データ。
【図２３−５Ｂ】表５Ｂ  ５℃で保存された薬物製剤の安定性データ。
【図２３−６Ａ】表６Ａ  ２５℃／６５％ＲＨで保存された薬物製剤の安定性データ。
【図２３−６Ｂ】表６Ｂ  ２５℃／６５％ＲＨで保存された薬物製剤の安定性データ。
【図２３−７Ａ】表７Ａ  ４０℃／７５％ＲＨで保存された薬物製剤の安定性データ。
【図２３−７Ｂ】表７Ｂ  ４０℃／７５％ＲＨで保存された薬物製剤の安定性データ。
【図２３−８】表８  選択時点における製剤１及び７のＥＬＩＳＡ結合データ。
【図２３−９】表９  フェーズＩＩＩランパリズマブ原体の安定性データ。
【図２３−１０Ａ】表１０Ａ  フェーズＩＩＩランパリズマブ薬物製剤の安定性データ。
【図２３−１０Ｂ】表１０Ｂ  フェーズＩＩＩランパリズマブ薬物製剤の安定性データ。
【発明を実施するための形態】
【０１０５】
Ｉ．  定義
本発明をより詳細に説明する前に、本発明は記載された特定の実施態様に限定されず、よって当然のことながら変化し得ることが理解されるべきである。本発明の範囲が添付の特許請求の範囲によってのみ限定されるため、本明細書で使用する用語は、特定の実施態様を説明するためのものにすぎず、限定することを目的とするものではないことも理解されるべきである。
【０１０６】
一定の範囲の値が提供されるとき、文脈が他を明確に指示しない限り、その範囲の上限と下限との間、及び、その述べられた範囲内の他の述べられた値又は中間の値における、各々の中間の値は、その下限の単位の１０分の１まで本発明に包含されることが理解される。これらのより小さい範囲の上限及び下限は、述べられた範囲内の任意の具体的に除外された限定を有することを条件として、独立して本発明に包含されるより小さな範囲に含まれ得る。
【０１０７】
別途定義されない限り、本明細書において使用される技術用語及び科学用語は、本発明の所属する当該技術分野における当業者によって一般に理解されるのと同一の意味を有する。Singleton等、Dictionary of Microbiology and Molecular Biology 2nd ed., J. Wiley & Sons (New York, NY 1994)は、当業者に対し、本願で使用される多くの用語に対する一般的なガイドを提供する。
【０１０８】
本明細書において述べられた全ての刊行物は、共に刊行物が引用されている方法及び／又は物質を開示及び記載するための参照により本明細書に明示的に組み入れる。
【０１０９】
用語「抗体」は、最も広い範囲の意味で使用され、完全長モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、多重特異性抗体（例えば二重特異性抗体）、及び抗体断片を、それらが、抗原結合活性のような所望の生物活性を示す限り、明示的に対象として含む。抗体（Ａｂ）及び免疫グロブリン（Ｉｇ）は、同一の構造的特性を有する糖タンパク質である。抗体が特定の標的に対し結合特異性を示す一方で、免疫グロブリンは、抗体と標的特異性を欠いた他の抗体様分子との両方を含む。天然の抗体及び免疫グロブリンは、通常、約１５０，０００ダルトンのヘテロ四量体の糖タンパク質であり、２つの同一の軽（Ｌ）鎖と２つの同一の重（Ｈ）鎖から構成される。各々の重鎖は、一端に可変ドメイン（ＶＨ）を有し、複数の定常ドメインが後に続く。各々の軽鎖は、一端における可変ドメイン（ＶＬ）とその他端における定常ドメインとを有する。本明細書において使用されるとき、用語「抗体」は、抗原結合活性を保持する抗体断片を明示的に包含する。
【０１１０】
「抗体断片」は、インタクトな抗体が結合する抗原に結合するインタクトな抗体の一部を含む、インタクトな抗体以外の分子を指す。抗体断片の例は、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆａｂ’−ＳＨ、Ｆａｂ’−Ｃ、Ｆａｂ−ＳＨ、Ｆａｂ−Ｃ、Ｆａｂ−Ｃ−ＳＨ、Ｆａｂ’−Ｃ−ＳＨ、Ｆ（ａｂ’）２、二重特異性抗体、直鎖状抗体、単鎖抗体分子（例えばｓｃＦｖ）；及び抗体断片より形成される多重特異性抗体を含むが、これらに限定されない。
【０１１１】
「Ｆａｂ−Ｃ」は、（ヒンジ領域からのシステインのような）その残基の位置に存在する天然のシステインであってもよいか、又は天然のシステインに対応しないＣ末端に付加されたシステインであってもよい、Ｃ末端のシステインを有するＦａｂを指す。非限定的な例のＦａｂ−Ｃ重鎖定常領域は、配列番号３２、４４、及び４５の配列を含む。
【０１１２】
「Ｆａｂ−ＳＨ」は、遊離チオール基を有するＦａｂを指す。いくつかの実施態様において、遊離チオール基は、ＦａｂのＣ末端の最後の１０アミノ酸内に位置する。Ｆａｂ−Ｃ抗体は、典型的にＦａｂ−ＳＨ抗体でもある。さらなる非限定的な例のＦａｂ−ＳＨ重鎖定常領域は、配列番号３４のアミノ酸配列を有する。典型的には、改変されたシステインを含むＦａｂ（すなわちＴＨＩＯＭＡＢであるＦａｂ）は、Ｆａｂ−ＳＨである。
【０１１３】
本明細書において使用されるとき、「抗Ｄ因子抗体」は、本明細書に上述されるように、補体活性化を阻害するか又は実質的に減少させるような様式でＤ因子に特異的に結合する抗体を意味する。いくつかの実施態様において、抗Ｄ因子抗体は、Ｆａｂ断片のような抗体断片（本明細書に上述される）である。
【０１１４】
用語「Ｄ因子」は、本明細書において、天然の配列及び変異体のＤ因子ポリペプチドを指すのに使用される。いくつかの実施態様において、用語「Ｄ因子」は、天然配列の哺乳動物ポリペプチド、より好ましくは、天然配列のヒトポリペプチドを指す。
【０１１５】
用語「可変領域」又は「可変ドメイン」は、抗体の抗原への結合に関与する抗体重鎖又は軽鎖のドメインを指す。天然の抗体の重鎖及び軽鎖の可変ドメイン（それぞれ、ＶＨ及びＶＬ）は、一般的に類似の構造を有し、各々のドメインが４つの保存されたフレームワーク領域（ＦＲ）と３つの超可変領域（ＨＶＲ）を含む。（例えば、Kindt等、Kuby Immunology, 6th ed., W.H. Freeman and Co., p.91 (2007)を参照）。単一のＶＨ又はＶＬドメインは、抗原結合特異性を付与するのに十分であり得る。さらに、特定の抗原に結合する抗体を、相補的なＶＬ又はＶＨドメインのライブラリーをそれぞれスクリーニングするために、抗原に結合する抗体由来のＶＨ又はＶＬドメインを用いて単離してもよい。例えば、Portolano等、J. Immunol. 150:880-887 (1993)；Clarkson等、Nature 352:624-628 (1991)を参照。
【０１１６】
用語「可変」は、可変ドメインの特定の部分が抗体間で配列において大幅に異なり、その特定の部分が、その特定の抗原に対する各々の特定の抗体の結合及び特異性において使用されるという事実を指す。しかしながら、可変性は、抗体の可変ドメイン全体にわたって、均等に分布していない。それは、軽鎖と重鎖の可変ドメインの両方の超可変領域と呼ばれる３つのセグメントに集中している。可変ドメインのより高度の保存された部分は、フレームワーク領域（ＦＲ）と呼ばれる。天然の重鎖及び軽鎖の可変ドメインは、それぞれ、主としてβ−シート構造を採用し、ループ状連結を形成し、場合によりβ−シート構造の部分を形成する３つの超可変領域によって連結される４つのＦＲを含む。各々の鎖中の超可変領域は、ＦＲによって、他の鎖からの超可変領域と共に近接して保持され、抗体の抗原結合部位の形成に寄与する（Kabat等、Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, Md. (1991)を参照）。定常ドメインは、抗体の抗原への結合に直接関与しないが、抗体の抗体依存性細胞傷害性（ＡＤＣＣ）への参加のような様々なエフェクター機能を示す。
【０１１７】
抗体のパパイン消化は、各々が単一の抗原結合部位を有する「Ｆａｂ」断片と呼ばれる２つの同一の抗原結合断片と、容易に結晶化する能力を反映した名前の、残余の「Ｆｃ」断片とを生じる。ペプシン処理は、２つの抗原結合部位を有し、なおも抗原を架橋することのできるＦ（ａｂ’）２断片を生じる。
【０１１８】
Ｆａｂ断片はまた、軽鎖の定常ドメインと、重鎖の第１の定常ドメイン（ＣＨ１）とを含む。Ｆａｂ’断片は、重鎖ＣＨ１ドメインのカルボキシル末端において、抗体ヒンジ領域由来の一又は複数のシステインを含むいくつかの残基を付加している点でＦａｂ断片とは異なる。Ｆａｂ’−ＳＨは、本明細書において、定常ドメインのシステイン残基が少なくとも１つの遊離チオール基を有するＦａｂ’の表示である。Ｆ（ａｂ’）２抗体断片は、元来、それらの間のヒンジシステインを有するＦａｂ’断片の対として生産された。抗体断片の他の化学的カップリングも知られている。
【０１１９】
本明細書において使用されるとき、「Ｆａｂ」は、ＣＨ１ドメイン、又は軽鎖定常領域とジスルフィド結合を形成するのに十分なＣＨ１ドメインの部分を含むが、ＣＨ２ドメイン又はＣＨ３ドメインを含まない重鎖定常領域を含む抗体を指す。本明細書において使用されるとき、Ｆａｂは、ヒンジ領域の一又は複数のアミノ酸を含んでもよい。したがって、本明細書において使用されるとき、用語「Ｆａｂ」は、Ｆａｂ’抗体を包含する。Ｆａｂは、Ｃ末端システインのような非天然のアミノ酸を含んでもよく、この場合、それはＦａｂ−Ｃと呼ばれてもよい。以下に説明するように、用語Ｆａｂ−Ｃはまた、Ｃ末端における天然のシステインを含む、ヒンジ領域の天然のアミノ酸を含むＦａｂをも包含する。いくつかの実施態様において、Ｆａｂは、改変システインを含む（すなわち、ＦａｂはＴＨＩＯＭＡＢであってよい）。
【０１２０】
「Ｆｖ」は、完全な抗原認識部位と抗原結合部位を含む最小の抗体断片である。この領域は、強固に非共有結合した１つの重鎖と１つの軽鎖の可変ドメインのダイマーからなる。各々の可変ドメインの３つの超可変領域が相互作用してＶＨ−ＶＬダイマー表面の抗原結合部位を定義するのはこの構造においてである。まとめると、６つの超可変領域が抗体に抗原結合特異性を付与する。しかしながら、単一の可変ドメイン（又は抗原に特異的な３つの超可変領域のみを含むＦｖの半分）でさえも、完全な結合部位よりも低い親和性においてであるが、抗原を認識して結合する能力を有する。
【０１２１】
本明細書において使用されるとき、用語「超可変領域」又は「ＨＶＲ」は、配列において超可変であり、かつ／又は、構造的に規定されているループ（「超可変ループ」）を形成する、抗体の可変ドメインの各々の領域を指す。一般的に、天然の４つの鎖の抗体は、６つのＨＶＲを含み、３つはＶＨ中であり（Ｈ１、Ｈ２、Ｈ３）、３つはＶＬ中である（Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３）。ＨＶＲは一般的に、超可変ループ由来、及び／又は「相補性決定領域」（ＣＤＲ）由来のアミノ酸残基を含み、後者は最も高い配列可変性であり、かつ／又は抗原認識に関与する。ＨＶＲ−Ｈ３は、抗体に優れた特異性を付与する独特な役割を果たすと信じられている。例えば、Xu 等 (2000) Immunity 13:37-45；Johnson及びWu (2003) in Methods in Molecular Biology 248:1-25 (Lo編、 Human Press, Totowa, N.J.)を参照。「フレームワーク領域」又は「ＦＲ」残基は、本明細書に定義されるような、超可変領域残基以外の可変ドメインの残基である。本明細書において使用されるＨＶＲ領域は、２４−３６（Ｌ１について）、４６−５６（Ｌ２について）、８９−９７（Ｌ３について）、２６−３５Ｂ（Ｈ１について）、４７−６５（Ｈ２について）、及び９３−１０２（Ｈ３について）の位置内に存在する任意の数の残基を含む。したがって、ＨＶＲは、これまでに記載された、
Ａ）２４−３４（Ｌ１）、５０−５２（Ｌ２）、９１−９６（Ｌ３）、２６−３２（Ｈ１）、５３−５５（Ｈ２）、及び９６−１０１（Ｈ３）（Chothia及びLesk, J. Mol. Biol. 196:901-917 (1987)）、
Ｂ）Ｌ１の２４−３４、Ｌ２の５０−５６、Ｌ３の８９−９７、Ｈ１の３１−３５Ｂ、Ｈ２の５０−６５、及びＨ３の９５−１０２（Kabat等、Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD (1991)）、
Ｃ）３０−３６（Ｌ１）、４６−５５（Ｌ２）、８９−９６（Ｌ３）、３０−３５（Ｈ１）、４７−５８（Ｈ２）、９３−１００ａ−ｊ（Ｈ３）（MacCallum等 J. Mol. Biol. 262:732-745 (1996)）
の位置の残基を含む。
【０１２２】
超可変領域は、ＶＬ中の２４−３６又は２４−３４（Ｌ１）、４６−５６又は５０−５６（Ｌ２）及び８９−９７（Ｌ３）、並びに、ＶＨ中の２６−３５Ｂ（Ｈ１）、５０−６５、４７−６５又は４９−６５（Ｈ２）及び９３−１０２、９４−１０２又は９５−１０２（Ｈ３）のような「拡大超可変領域」を含んでもよい。可変ドメインの残基は、それらの定義の各々について、Ｋａｂａｔ等、上述に従って番号が付される。
【０１２３】
ＶＨ中のＣＤＲ１を例外として、ＣＤＲは、一般的に、超可変ループを形成するアミノ酸残基を含む。ＣＤＲはまた、抗原と接触する残基である「特異性決定残基」又は「ＳＤＲ」を含む。ＳＤＲは、短縮型（ａｂｂｒｅｖｉａｔｅｄ）−ＣＤＲ、又はａ−ＣＤＲと呼ばれ、ＣＤＲの領域内に含まれる。例示的なａ−ＣＤＲ（ａ−ＣＤＲ−Ｌ１、ａ−ＣＤＲ−Ｌ２、ａ−ＣＤＲ−Ｌ３、ａ−ＣＤＲ−Ｈ１、ａ−ＣＤＲ−Ｈ２、及びａ−ＣＤＲ−Ｈ３）は、アミノ酸残基、Ｌ１の３１−３４、Ｌ２の５０−５５、Ｌ３の８９−９６、Ｈ１の３１−３５Ｂ、Ｈ２の５０−５８、及びＨ３の９５−１０２に存在する。（Almagro及びFransson, Front. Biosci. 13:1619-1633 (2008)を参照。）
【０１２４】
参照抗体（「出発抗体」又は「親抗体」とも呼ばれる）の「抗体変異体」又は「修飾抗体」は、参照／出発抗体とは異なるアミノ配列を含む抗体であり、参照抗体の一又は複数のアミノ酸残基が修飾されている。一般的に、抗体変異体は、参照抗体と、少なくとも８０％の配列同一性を、好ましくは少なくとも９０％の配列同一性を、より好ましくは少なくとも９５％の配列同一性を、そして最も好ましくは少なくとも９８％の配列同一性を有するであろう。配列同一性のパーセンテージは、最大の相同性を提供するように参照抗体と候補の抗体変異体の配列をアラインメントした後に、例えば、Needleman等、J. Mol. Biol., 48: 443-453 (1970)に記載されるアルゴリズムの変形である、Fitch等、Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 80: 1382-1386 (1983)によって決定される。同一性又は類似性は、本明細書において、配列をアラインメントし、必要ならギャップを導入して、最大パーセントの配列同一性を達成するようにした後の、親抗体の残基と同一（すなわち同一の残基）又は類似（すなわち、共通の側鎖の性質に基づいて同一の群からのアミノ酸残基、以下を参照）の候補の変異体配列のアミノ酸残基のパーセンテージとして定義される。抗体のアミノ酸配列の変異体は、抗体をコードするＤＮＡに適切なヌクレオチド変化を導入することによって、又はペプチド合成によって調製できる。そのような変異体は、例えば、目的の抗体のアミノ酸配列中の残基の欠失、及び／又はそこへの挿入、及び／又はその置換を含む。欠失、挿入、及び置換の任意の組合せが最終的なコンストラクトに到達するためになされるが、但し、最終的なコンストラクトは所望の特性を有する。アミノ酸の変化はまた、グリコシル化部位の数又は位置の変更のような、抗体の翻訳後のプロセスを変更してもよい。抗体の抗体配列変異体を産生する方法は、例えば、参照により本明細書に明示的に組み入れられる米国特許第５５３４６１５号に記載される、ポリペプチドのアミノ酸配列変異体の産生方法と同様である。
【０１２５】
本明細書において使用されるとき、用語「モノクローナル抗体」は、実質的に均一な抗体の集合より取得される抗体、すなわち集合を構成する個別の抗体が、少量で存在し得る起こりうる自然発生の変異を除いて同一であるものを指す。モノクローナル抗体は、高い特異性であり、単一の抗原部位を標的とする。さらに、異なるデターミナント（エピトープ）を標的とする異なる抗体を典型的に含む従来の（ポリクローナル）抗体調製物と比較して、各々のモノクローナル抗体は、抗原上の単一のデターミナントを標的とする。修飾語「モノクローナル」は、実質的に均一な抗体の集合より取得されるという抗体の特性を示し、任意の特定の方法による抗体の産生を必要とするものと解釈されるべきではない。例えば、本発明により使用されるモノクローナル抗体は、最初にKohler等 (1975) Nature 256:495によって記載されたハイブリドーマ法によって作製してもよく、又は組換えＤＮＡ法によって作製してもよい（例えば米国特許第４８１６５６７号を参照）。「モノクローナル抗体」は、例えばClackson等 (1991) Nature 352:624-628及びMarks等 (1991) J. Mol. Biol. 222:581-597に記載される技術を用いるファージ抗体ライブラリーから単離してもよい。
【０１２６】
本明細書におけるモノクローナル抗体は、重鎖及び／又は軽鎖の一部分が、特定の種由来の抗体中又は特定の抗体クラス若しくはサブクラスに属する抗体中の対応する配列と同一であるか又は相同であり、鎖の残余の部分が、別の種由来の抗体中又は別の抗体クラス若しくはサブクラスに属する抗体中の対応する配列と同一であるか又は相同である「キメラ」抗体（免疫グロブリン）を明示的に含み、所望の生物活性を示す限り、そのような抗体の断片を明示的に含む（米国特許第４８１６５６７号、及びMorrison等 (1984) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 81:6851-6855）。
【０１２７】
非ヒト（例えばマウス）抗体の「ヒト化」形態は、非ヒト免疫グロブリンに由来する最小限の配列を含むキメラ抗体である。ほとんどの部分において、ヒト化抗体は、ヒト免疫グロブリン（レシピエント抗体）であり、レシピエントの超可変領域由来の残基が、所望の特異性、親和性、及び能力を有する、マウス、ラット、ウサギ、又は非ヒト霊長類のような非ヒト種（ドナー抗体）の超可変領域由来の残基と置き換えられている。いくつかの例において、ヒト免疫グロブリンのＦｖフレームワーク領域（ＦＲ）の残基は、対応する非ヒトの残基と置き換えられている。さらに、ヒト化抗体は、レシピエント抗体とドナー抗体の何れにも見出せない残基を含んでいてもよい。これらの修飾は、抗体の性能をさらに改良するためになされる。一般的に、ヒト化抗体は、少なくとも１つの、典型的には２つの可変領域の実質的に全てを含み、全て又は実質的に全ての超可変ループは非ヒト免疫グロブリンのそれらに対応し、全て又は実質的に全てのＦＲ領域は、ヒト免疫グロブリン配列のそれらであろう。ヒト化抗体はまた、任意選択的に、免疫グロブリン定常領域（Ｆｃ）の少なくとも一部を、典型的にはヒト免疫グロブリンのそれを含むであろう。詳細は、Jones等 (1986) Nature 321:522-525；Riechmann等 (1988) Nature 332:323-329;及びPresta (1992) Curr. Op. Struct. Biol. 2:593-596を参照。
【０１２８】
抗体を含むタンパク質は、それが、インタクトな立体配座構造及び生物活性を保持している場合、「安定」であると言われる。タンパク質安定性を測定するための様々な技術は当該技術分野に利用可能であり、例えば、Peptide and Protein Drug Delivery, 247-301, Vincent Lee編、Marcel Dekker, Inc., New York, N.Y., Pubs. (1991)及びJones (1993) Adv. Drug Delivery Rev. 10: 29-90に概説がある。「改善した安定性」を有する抗体変異体は、出発の参照抗体と比較してより安定である抗体変異体を指す。好ましくは、改善した安定性を有する抗体変異体は、天然（野生型）抗体の変異体であり、特定のアミノ酸残基が物理安定性、及び／若しくは化学安定性、及び／若しくは生物活性を改善するために、並びに／又は天然の抗体の免疫原性を減少させるために改変されている（Walsh (2000) Nat. Biotech. 18:831-3）。
【０１２９】
用語「異性化」は、異性体、すなわち同一の化学組成物であるが、異なる構造又は配置を有し、したがって一般的に異なる物理的及び化学的特性を有している形態の任意のものに化学化合物を転換する化学プロセスを一般的に指す。本明細書において特に使用されるものは、ポリペプチドの一又は複数のアスパラギン酸（Ｄ又はＡｓｐ）残基が、イソアスパラギン酸（ＩｓｏＡｓｐ）及び／又は環状イミド（Ａｓｕ）残基へと転換されているプロセスである、アスパラギン酸異性化である（Geiger及びClarke (1987) J. Biol. Chem. 262:785-94；Wakankar等 (2007) Biochem. 46:1534-44）。
【０１３０】
用語「脱アミド化」は、一般に、アミド官能基が有機化合物から除去される化学反応を指す。本明細書において特に使用されるものは、ポリペプチドの一又は複数のアスパラギン（Ｎ又はＡｓｎ）残基が、アスパラギン酸（Ｄ又はＡｓｐ）へと転換される、すなわち中性のアミド側鎖が全体的に酸性の性質を有する残基へと転換されるプロセスである、アスパラギン酸脱アミド化である。Xie及びSchowen (1999) J. Pharm. Sci. 88:8-13。
【０１３１】
特定の同定された物理又は化学プロセス（例えば異性化又は脱アミド化）に対するアミノ酸残基の「受けやすさ」は、異性化又は脱アミド化のような同定されたプロセスを受けやすいと同定されている特定のタンパク質分子内の残基を指す。それらの性質は、しばしば、タンパク質の一次及び／又は立体配座構造内の相対的な位置によって決定される。例えば、Ａｓｐ−ＸＸＸモチーフにおける第１のＡｓｐ（ＸＸＸは、Ａｓｐ、Ｇｌｙ、Ｈｉｓ、Ｓｅｒ又はＴｈｒであり得る）はその隣接する残基の関与のためにＡｓｐ異性化を受けやすいが、同一のタンパク質内のいくつかの他のＡｓｐはそのような受けやすさを有しない場合があることが示されている。特定のタンパク質分子内の特定のプロセスに対する残基を同定するためのアッセイは、当該技術分野に公知である。Cacia等、(1996) Biochem. 35:1897-1903を参照。
【０１３２】
本発明の抗Ｄ因子抗体の文脈での「活性のある」又は「活性」又は「生物活性」は、Ｄ因子の生物活性をアンタゴナイズ（部分的又は完全に阻害）する能力である。Ｄ因子アンタゴニストの生物活性の一例は、例えば、補体関連の眼の状態のようなＤ因子関連疾患又は状態の、例えば病状のような状態における測定可能な改善を達成できる能力である。活性は、関連する動物モデル、又はヒト臨床治験を用いる、結合アッセイ、副経路溶血アッセイ（例えば、副経路補体活性又は活性化の阻害を測定するアッセイ）を含む、インビトロ又はインビボ試験において測定できる。
【０１３３】
用語「補体関連の障害」は、最も広い範囲の意味で使用され、過剰な又は制御されていない補体活性化に関連する障害を含む。それらは、心肺バイパス手術における補体活性化；急性心筋梗塞、動脈瘤、脳卒中、出血性ショック、圧挫損傷、多臓器不全、低血圧ショック、腸虚血又は虚血を引き起こす他の事象に続く虚血再灌流に起因する補体活性化を含む。補体活性化はまた、重症熱傷、エンドトキシン血症、敗血症性ショック、成人性呼吸促迫症候群、血液透析、アナフィラキシーショック、重症喘息、血管浮腫、クローン病、鎌状赤血球貧血、連鎖球菌感染後糸球体腎炎、及び膵炎のような炎症状態と関連することが示されている。障害は、薬物の副作用、薬物アレルギー、ＩＬ−２誘導性血管漏出症候群、又は放射線診断造影剤アレルギーの結果であり得る。それはまた、全身性紅斑性狼瘡、重症筋無力症、関節リウマチ、アルツハイマー病、及び多発性硬化症のような自己免疫疾患を含む。補体活性化はまた、移植片拒絶反応と関連する。補体活性化はまた、加齢黄斑変性、糖尿病性網膜症、及び他の虚血関連網膜症、脈絡膜血管新生（ＣＮＶ）、ブドウ膜炎、糖尿病性黄斑浮腫、病的近視、フォン・ヒッペル・リンドウ病、眼のヒストプラスマ症、網膜中心静脈閉塞症（ＣＲＶＯ）、角膜血管新生、及び網膜血管新生のような眼疾患と関連する。
【０１３４】
用語「補体関連の眼の状態（complement-associated eye condition）」又は「補体関連の眼の状態（complement-associated ocular condition）」は、最も広い範囲の意味で使用され、病状が、古典経路及び副経路、特に補体の副経路を含む補体に関連する全ての眼の状態を含む。補体関連の眼の状態は、限定なしに、乾性及び湿性（非滲出及び滲出）型、脈絡膜血管新生（ＣＮＶ）、ブドウ膜炎、糖尿病性及び他の虚血関連網膜症を含む加齢黄斑変性の全ステージのような黄斑変性疾患、並びに、糖尿病性黄斑浮腫、病的近視、フォン・ヒッペル・リンドウ病、眼のヒストプラスマ症、網膜中心静脈閉塞症（ＣＲＶＯ）、角膜血管新生、及び網膜血管新生のような他の眼内新生血管疾患を含む。一例において、補体関連の眼の状態は、非滲出型（例えば、中間乾性ＡＭＤ又は地図状萎縮（ＧＡ））及び滲出型（例えば湿性ＡＭＤ（脈絡膜血管新生（ＣＮＶ）））ＡＭＤ、糖尿病性網膜症（ＤＲ）、眼内炎、及びブドウ膜炎を含む加齢黄斑変性（ＡＭＤ）を含む。さらなる例において、非滲出型ＡＭＤは、硬いドルーゼン、柔らかいドルーゼン、地図状萎縮及び／又は色素凝集の存在を含み得る。一例において、補体関連の眼の状態は、早期ＡＭＤ（例えば、複数の小さいものから一又は複数の非過剰な中間サイズのドルーゼンまでを含む）、中間ＡＭＤ（例えば、過剰な中間ドルーゼンから一又は複数の大きいドルーゼンまでを含む）、及び進行性のＡＭＤ（例えば、地図上萎縮又は進行性湿性ＡＭＤ（ＣＮＶ）を含む）を含む加齢黄斑変性（ＡＭＤ）を含む。（Ferris等、AREDS Report No. 18；Sallo等、Eye Res., 34(3): 238-40 (2009)；Jager等、New Engl. J. Med., 359(1): 1735 (2008)）。さらなる例において、中間乾性ＡＭＤは、大きな融合性のドルーゼンを含み得る。さらなる例において、地図状萎縮は、光受容体及び／又は網膜色素上皮（ＲＰＥ）喪失を含み得る。さらなる例において、地図状萎縮の領域は、小さいか又は大きくてもよく、黄斑部又は末梢網膜にあってもよい。一例において、補体関連の眼の状態は、中間乾性ＡＭＤである。一例において、補体関連の眼の状態は、地図状萎縮である。一例において、補体関連の眼の状態は、湿性ＡＭＤ（脈絡膜血管新生（ＣＮＶ））である。
【０１３５】
本明細書において「ＧＡ」とも呼ばれる「地図状萎縮」は、本明細書において使用されるとき、光受容体の喪失に関連する網膜色素上皮（ＲＰＥ）の変性を含む疾患である。ＧＡは、乾性ＡＭＤの進行型である。
【０１３６】
本明細書において使用されるとき、「ＧＡ領域」は、網膜の解剖学的構造（例えば光受容体及び網膜色素上皮（ＲＰＥ））の喪失を表す分離した領域を指す。ＧＡ領域は、眼底自発蛍光（ＦＡＦ）及びデジタルカラー眼底写真（ＣＦＰ）のような標準的なイメージング技術によって測定される。
【０１３７】
本明細書において使用されるとき、「早期ＡＭＤ」は、複数の小さい（＜６３μｍ）ドルーゼン又は＞１の中間ドルーゼン（＞６３μｍ及び＜１２５μｍ）を特徴とする疾患である。
【０１３８】
本明細書において使用されるとき、「中間ＡＭＤ」は、多くの中間又は１＞の大きいドルーゼン（＞１２５μｍ）を特徴とし、しばしば網膜色素上皮の過剰な色素沈着又は低色素沈着を伴う疾患である。
【０１３９】
本明細書において使用されるとき、「進行性ＡＭＤ」は、地図状萎縮（ＧＡ）又は新生血管（乾性）ＡＭＤを特徴とする疾患である。
【０１４０】
「治療」は、障害の発症を防ぐか、又は障害の病状を改変する意図をもって実施される介入である。したがって、「治療」は、治療的処置と予防的（ｐｒｏｐｈｙｌａｃｔｉｃ）又は予防的（ｐｒｅｖｅｎｔａｔｉｖｅ）手段の両方を指す。治療の必要のあるものは、障害をすでに有するもの、及び障害を予防すべきものを含む。免疫関連疾患の治療において、治療剤は、免疫応答の成分の応答の度合いを直接的に改変し得るか、又は、疾患が、例えば抗生物質、抗真菌剤、抗炎症薬、化学療法薬などの他の治療剤による治療により感受性となるようにし得る。
【０１４１】
補体関連の障害のような疾患の「病状」は、患者の健康を損なう全ての現象を含む。これは、限定なしに、異常又は制御できない細胞増殖（好中球の、好酸球の、単球の、リンパ球の細胞）、抗体産生、自己抗体産生、補体産生、隣接する細胞の正常な機能との干渉、異常なレベルでのサイトカイン又は他の分泌産物の放出、任意の炎症性又は免疫学的応答の抑制又は悪化、炎症細胞（好中球、好酸球、単球、リンパ球）の細胞空間への浸潤などを含む。
【０１４２】
本明細書において使用されるとき、用語「哺乳動物」は、ヒト、高等霊長類、飼育動物及び家畜、並びに動物園の、スポーツ用又はペット動物、例えばウマ、ブタ、ウシ、イヌ、ネコ及びフェレットなどを限定なしに含む、哺乳動物に分類される任意の動物を指す。本発明のいくつかの実施態様において、哺乳動物はヒトである。
【０１４３】
一又は複数のさらなる治療剤と「組み合わせた」投与は、同時（並列）及び任意の順序での逐次的投与を含む。
【０１４４】
「治療的有効量」は、例えば、補体関連の眼の状態のような標的とする疾患又は状態の、例えば病状のような状態における測定可能な改善を達成するのに必要とされる「Ｄ因子抗体」の量である。
【０１４５】
「薬学的に許容される」賦形剤（ビヒクル、添加剤）は、使用される活性成分の有効な用量を提供するために、対象の哺乳動物に対し合理的に投与することができるものである。
【０１４６】
「安定な」製剤は、例えば抗Ｄ因子抗体のようなタンパク質が、その中で、保存の際に、その物理安定性及び／又は化学安定性及び／又は生物活性を、基本的に保持するものである。タンパク質安定性を測定するための様々な技術は当該技術分野に利用可能であり、例えば、Peptide and Protein Drug Delivery, 247-301, Vincent Lee編、Marcel Dekker, Inc., New York, N.Y., Pubs. (1991)及びJones, A. Adv. Drug Delivery Rev. 10: 29-90 (1993)に総説がある。安定性は、選択された温度で選択された期間、測定できる。一実施態様において、製剤は、室温若しくは４０℃で少なくとも１カ月安定であり、かつ／又は２−８℃で少なくとも１年間、好ましくは少なくとも２年間安定である。別の実施態様において、プレ凍結乾燥製剤（本明細書において「原体」又は「ＤＳ」としても呼ばれる）は、−２０℃の保存温度で、少なくとも１年間、又は少なくとも２年間、又は少なくとも３年間、又は少なくとも５年間安定である。さらなる実施態様において、凍結乾燥製剤は、５℃の保存温度で、少なくとも１年間、又は少なくとも２年間、又は少なくとも３年間、又は少なくとも４年間、又は少なくとも５年間安定である。さらに、製剤は、好ましくは、製剤の凍結（例えば−７０℃まで）と融解の後も安定である。
【０１４７】
抗Ｄ因子抗体のようなタンパク質は、色及び／若しくは透明度の目視検査によって、又はＵＶ光散乱若しくはサイズ排除クロマトグラフィーによる測定によって、凝集、沈殿、及び／又は変性の兆候を全く示さない場合、薬学的製剤において「物理安定性を保持している」。
【０１４８】
例えば抗Ｄ因子抗体のようなタンパク質は、所定の時間における化学安定性が、タンパク質が以下に定義されるようなその生物活性をなおも保持すると考えられるようなものである場合、薬学的製剤において「化学安定を保持している」。化学安定性は、タンパク質の化学変成形態を検出及び定量することによって評価できる。化学変成は、例えばサイズ排除クロマトグラフィー、ＳＤＳ−ＰＡＧＥ、及び／又はマトリクス支援レーザー脱離イオン化／飛行時間型質量分析（ＭＡＬＤＩ／ＴＯＦ  ＭＳ）を用いて評価できるサイズ改変（例えば切り出し）を含んでもよい。他のタイプの化学変成は、例えば、イオン交換クロマトグラフィー又によって評価できる電荷変化（例えば脱アミド化の結果として生じるもの）を含む。
【０１４９】
例えば抗Ｄ因子抗体のような抗体は、例えば抗原結合アッセイにおいて決定されるときに、所定の時間における抗体の生物活性が、薬学的製剤が調製されたときに示した生物活性の約１０％の範囲内（アッセイ誤差内）である場合、薬学的製剤において「生物活性を保持している」。抗体の他の「生物活性」は、本明細書において以下に詳述する。
【０１５０】
「等張性」によって、目的の製剤が、ヒト血液と基本的に同一の浸透圧を有していることを意味する。等張性製剤は、一般的に約２５０から３５０ｍＯｓｍ／ｋｇの浸透圧を有する。等張性は、例えば、蒸気圧又はアイスフリージング型の浸透圧計を用いて測定できる。
【０１５１】
用語「凍結乾燥保護剤」は、例えば抗体のようなタンパク質を、凍結乾燥により生じる損傷から保護するような、化学化合物又は分子のような物質を指す。好ましくは、凍結乾燥保護剤はポリオールである。
【０１５２】
「ポリオール」は、複数のヒドロキシル基を有する物質であり、糖（還元及び非還元糖）、糖アルコール、及び糖酸を含む。本明細書において好ましいポリオールは、約６００Ｄ未満（例えば約１２０から約４００Ｄの範囲）の分子量を有する。「還元糖」は、金属イオンを還元できるか又はタンパク質中のリジン及び他のアミノ基と共有結合的に反応できるヘミアセタール基を含むものであり、「非還元糖」は、これらの還元糖の性質を有しないものである。還元糖の例は、フルクトース、マンノース、マルトース、ラクトース、アラビノース、キシロース、リボース、ラムノース、ガラクトース、及びグルコースである。非還元糖は、スクロース、トレハロース、ソルボース、メレジトース、及びラフィノースを含む。マンニトール、キシリトール、エリスリトール、スレイトール、ソルビトール、及びグリセロールは、糖アルコールの例である。糖酸に関して、これらは、Ｌ−グルコネート及びそれらの金属塩を含む。製剤が、凍結−融解安定性であることが望まれる場合、ポリオールは、好ましくは、凍結温度（例えば−２０℃）において結晶化して製剤中の抗体を不安定にするようなことがないものである。ポリオールの混合物を含むポリオールは、本発明の製剤中の凍結乾燥保護剤として使用できる。スクロース及びトレハロースのような非還元糖は、本明細書における抗Ｄ因子抗体製剤における凍結乾燥保護剤として好ましく、スクロースはトレハロースよりも好ましい。
【０１５３】
本明細書において使用されるとき、「バッファー」は、その酸−塩基共役成分の作用によってｐＨにおける変化に抵抗する緩衝溶液を指す。本発明のバッファーは５．０から５．４の範囲のｐＨを有し、最も好ましくは約５．３のｐＨを有する。この範囲にｐＨを制御するであろうバッファーの例は、ヒスチジン、酢酸塩（例えば酢酸ナトリウム）、コハク酸塩（コハク酸ナトリウムのような）、グルコン酸塩、クエン酸塩、及び他の有機酸バッファーを含む。凍結−融解安定性である製剤が望まれる場合、バッファーは好ましくはリン酸塩ではない。用語「バッファー」は、本明細書における製剤において所望のｐＨを提供するのに好適な２以上のバッファーの組合せを明示的に含む。
【０１５４】
本明細書において使用されるとき、「界面活性剤」は表面活性剤を指し、典型的には非イオン性界面活性剤である。本発明の製剤は、一又は複数の界面活性剤を含む。したがって、用語「界面活性剤」は、２以上の界面活性剤の混合物を明示的に含む。好適な界面活性剤の例は、ポリソルベート（例えば、ポリソルベート２０及びポリソルベート８０）；ポロキサマー（例えばポロキサマー１８８）；トリトン；ドデシル硫酸ナトリウム（ＳＤＳ）；ラウレル硫酸ナトリウム；ナトリウムオクチルグルコシド；ラウリル−、ミリスチル−、リノレイル−、又はステアリル−スルホベタイン；ラウリル−、ミリスチル−、リノレイル−、又はステアリル−サルコシン；リノレイル−、ミリスチル−、又はセチル−ベタイン；ラウロアミドプロピル−、コカミドプロピル−、リノールアミドプロピル−、ミリスタミドプロピル−、パルミドプロピル−、又はイソステアラミドプロピル−ベタイン（例えばラウロアミドプロピル）；ミリスタミドプロピル−、パルミドプロピル−、又はイソステアラミドプロピル−ジメチルアミン；ナトリウムメチルココイル−、又はジナトリウムメチルオレイル−タウレート；ポリエチルグリコール、ポリプロピルグリコール、並びにエチレン及びプロピレングリコールの共重合体（例えば、Ｐｌｕｒｏｎｉｃｓ、ＰＦ６８など）を含む。いくつかの実施態様において、本明細書における界面活性剤は、例えばポリソルベート２０又はポロキサマーのようなポリソルベートである。
【０１５５】
「防腐剤」は、製剤中に含めることができ、その中での細菌の作用を基本的に低減し、したがって例えば、多回使用製剤の生産を容易にする化合物である。潜在的な防腐剤の例は、オクタデシルジメチルベンジルアンモニウムクロリド、ヘキサメトニウムクロライド、ベンザルコニウムクロライド（アルキル基が長鎖化合物であるアルキルベンジルジメチルクロライドの混合物）、及びベンゼルトニウムクロリドを含む。他のタイプの防腐剤は、フェノール、ブチル及びベンジルアルコールのような芳香族アルコール、メチル又はプロピルパラベンのようなアルキルパラベン、カテコール、レゾルシノール、シクロヘキサノール、３−ペンタノール、並びにｍ−クレゾールを含む。用語「防腐剤」は、２以上の防腐剤の混合物を明示的に含む。本明細書において最も好ましい防腐剤は、ベンジルアルコールである。
【０１５６】
用語「長時間作用型送達」、「徐放性」、及び「制御放出」は、治療薬の延長若しくは持続放出又は生物学的利用率を達成するために、製剤、剤形、デバイス、又は他のタイプの技術を用いる送達機構を記載するのに一般的に使用される。それは、全身性循環若しくは対象、又は細胞、組織、器官、関節、領域などを含む（がこれらには限定されない）対象における作用の局所的部位に対し、薬物の延長若しくは持続放出又は生物学的利用率を提供する技術を指してもよい。さらに、これらの用語は、製剤又は剤形からの薬物の放出を延長若しくは持続させるために使用される技術を指してもよいか、又はそれらは、対象に対する薬物の生物学的利用率若しくは薬物動態若しくは作用持続時間を持続若しくは延長させるために使用される技術を指してもよいか、又は製剤によって生じる薬力学的効果を持続若しくは延長させるために使用される技術を指してもよい。「長時間作用型製剤」、「徐放性製剤」、又は「制御放出製剤」は、長時間作用型送達を提供するのに使用される薬学的製剤、剤形、又は他の技術である。一態様において、制御放出は、薬物の局所的な生物学的利用率、特に眼内送達の文脈において眼での滞在時間を改善するのに使用される。「向上した眼での滞在時間」は、送達した眼内薬物が、品質の面（活性を維持する）と量的な面（有効量）の両方において有効なままでいる、送達後の期間を指す。高用量及び制御放出に加えて、又はそれらの代わりに、薬物は、増加したインビボの半減期を達成するために、例えばＰＥＧ化を介して、翻訳後に修飾することができる。
【０１５７】
ＩＩ．詳細な説明
抗Ｄ因子抗体製剤
本明細書における本発明は、モノクローナル抗Ｄ因子抗体を含む薬学的製剤、並びにそれらの生産及び補体関連の眼の疾患の治療における使用に関する。
【０１５８】
一態様において、製剤に存在する抗Ｄ因子抗体は、ヒト化モノクローナル抗Ｄ因子抗体である。非ヒト抗体のヒト化の方法は、当該技術分野において周知である。一般的に、ヒト化抗体は、非ヒトの供給源からそれに導入される一又は複数のアミノ酸残基を有する。これらの非ヒトアミノ酸残基はしばしば、「移入（ｉｍｐｏｒｔ）」残基と呼ばれ、典型的には「移入」可変ドメインから得られる。ヒト化は、げっ歯類のＣＤＲ又はＣＤＲ配列を、ヒト抗体の対応する配列に置換することによって、Ｗｉｎｔｅｒと同僚の方法（Jones等 (1986) Nature 321:522-525；Riechmann等 (1988) Nature 332:323-327；Verhoeyen等 (1988) Science 239:1534-1536）に従って基本的に実施できる。したがって、そのような「ヒト化」抗体は、インタクトなヒト可変ドメインより実質的に少ない部分が、非ヒト種からの対応する配列によって置換されている、キメラ抗体である（米国特許第４８１６５６７号）。実際に、ヒト化抗体は、典型的にはヒト抗体であり、いくつかのＣＤＲ残基と、可能性のあるいくつかのＦＲ残基が、げっ歯類の抗体の類似部位からの残基によって置換されている。
【０１５９】
ヒト化抗体の作製に使用される重鎖と軽鎖の両方のヒト可変ドメインの選択は、抗体がヒトの治療の使用を目的とするとき、抗原性及び／又はＨＡＭＡ反応（ヒト抗マウス抗体）を低減するために、場合によっては重要であり得る。ＨＡＭＡ反応の低減又は排除は一般的に、好適な治療剤の臨床開発の、重要な側面である。例えば、Khaxzaeli等 (1988) J. Natl. Cancer Inst 80:937；Jaffers等 (1986) Transplantation 41:572；Shawler等(1985) J. Immunol. 135:1530；Sears等 (1984) J. Biol. Response Mod. 3:138；Miller等 (1983) Blood 62:988；Hakimi等 (1991) J. Immunol. 147:1352；Reichmann等 (1988) Nature 332:323；Junghans等 (1990) Cancer Res. 50:1495を参照。本明細書に記載されるように、本発明は、ＨＡＭＡ反応を低減又は排除するようにヒト化された抗体を提供する。これらの抗体の変異体は、以下にさらに説明されるもののいくつかの、当該技術分野において公知の常套的方法を用いてさらに得ることができる。いわゆる「ベストフィット」法によると、げっ歯類抗体の可変ドメインの配列は、既知のヒト可変ドメイン配列のライブラリー全体に対してスクリーニングされる。げっ歯類のＶドメイン配列に最も近いヒトＶドメイン配列が同定され、その中のヒトフレームワーク領域（ＦＲ）はヒト化抗体に受け入れられる（Sims等 (1993) J. Immunol. 151:2296；Chothia等 (1987) J. Mol. Biol.196:901）。別の方法は、軽鎖又は重鎖の特定のサブグループの全てのヒト抗体のコンセンサス配列に由来する特定のフレームワーク領域を使用する。同一のフレームワークが、いくつかの異なるヒト化抗体において使用できる（Carter等 (1992) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 89:4285；Presta等 (1993) J. Immunol. 151:2623）。
【０１６０】
例えば、本明細書に記載される抗体由来のアミノ酸配列は、フレームワーク及び／又超可変配列の多様化のための出発（親）の配列としての役割を果たす。出発の超可変配列が結合する選択されたフレームワーク配列は、本明細書において、アクセプター（ａｃｃｅｐｔｏｒ）ヒトフレームワークと呼ばれる。アクセプターヒトフレームワークは、ヒト免疫グロブリン（それらのＶＬ及び／又はＶＨ領域）からのものであるか、又はそれに由来してもよい一方で、ヒトコンセンサスフレームワーク配列からのものであるか、又はそれに由来してもよく、そのようなフレームワークは、ヒト患者において、最小限の免疫原性を有するか又は免疫原性を全く有しないことが証明されている。本明細書における目的のための「アクセプターヒトフレームワーク」は、ヒト免疫グロブリンフレームワーク由来、又はヒトコンセンサスフレームワーク由来のＶＬ又はＶＨフレームワークのアミノ酸配列を含むフレームワークである。ヒト免疫グロブリンフレームワーク又はヒトコンセンサスフレームワーク「に由来する」アクセプターヒトフレームワークは、それらと同一のアミノ酸配列を含んでもよいか、又は、既存のアミノ酸配列変化を含んでもよい。既存のアミノ酸変化が存在する場合、好ましくは５以下、及び好ましくは４以下、又は３以下の、既存のアミノ酸変化が存在する。いくつかの実施態様において、ＶＨアクセプターヒトフレームワークは、ＶＨヒト免疫グロブリンフレームワーク配列又はヒトコンセンサスフレームワーク配列と、配列において同一である。いくつかの実施態様において、ＶＬアクセプターヒトフレームワークは、ＶＬヒト免疫グロブリンフレームワーク配列又はヒトコンセンサスフレームワーク配列と、配列において同一である。「ヒトコンセンサスフレームワーク」は、ヒト免疫グロブリンＶＬ又はＶＨフレームワーク配列の選択において、最も一般的に存在するアミノ酸残基を表すフレームワークである。一般的に、ヒト免疫グロブリンＶＬ又はＶＨ配列の選択は、可変ドメイン配列のサブグループ由来である。一般的に、配列のサブグループは、Ｋａｂａｔ等に示されるようなサブグループである。いくつかの実施態様において、ＶＬに関して、サブグループは、Ｋａｂａｔ等に示されるようなサブグループｋａｐｐａ  Ｉである。いくつかの実施態様において、ＶＨに関して、サブグループは、Ｋａｂａｔ等に示されるようなサブグループＩＩＩである。
【０１６１】
アクセプターがヒト免疫グロブリン由来である場合、ドナーフレームワーク配列を、ヒトフレームワーク配列の集合における様々なヒトフレームワーク配列とアラインメントすることによるドナーフレームワーク配列に対する相同性に基づいて選択されるヒトフレームワーク配列を任意選択的に選択してもよく、最も相同であるフレームワーク配列をアクセプターとして選択してもよい。アクセプターヒトフレームワークは、公のデータベースで利用可能なヒト抗体生殖系列配列からのもの、又はそれ由来のものであってよい。
【０１６２】
いくつかの実施態様において、本明細書におけるヒトコンセンサスフレームワークは、ＶＨサブグループＶＩＩ及び／又はＶＬ  ｋａｐｐａサブグループＩコンセンサスフレームワーク配列からのもの、又はそれ由来のものである。
【０１６３】
いくつかの実施態様において、抗Ｄ因子抗体の産生に使用されるヒトフレームワークテンプレートは、ＶＨ鎖のためのＶＩ−４．１ｂ＋（ＶＨ７ファミリー）とＪＨ４ｄの組合せ、及び／又はＶＬ鎖のためのＤＰＫ４（ＶκＩファミリー）とＪＫ２の組合せを含むテンプレートからのフレームワーク配列を含んでもよい。
【０１６４】
アクセプターが、ヒト免疫グロブリンからのものかヒトコンセンサスフレームワークからのものかにかかわらず、選択されたヒトフレームワーク配列と配列について同一であってよい一方で、アクセプター配列はまた、ヒト免疫グロブリン配列又はヒトコンセンサスフレームワーク配列に対する既存のアミノ酸置換を含んでもよい。これらの既存の置換は、好ましくは最小限であり、通常、ヒト免疫グロブリン配列又はコンセンサスフレームワーク配列に対して、４、３、２又は１のアミノ酸の違いのみである。
【０１６５】
非ヒト抗体の超可変領域残基は、ＶＬ及び／又はＶＨのアクセプターヒトフレームワークに組み入れられる。例えば、Ｋａｂａｔ  ＣＤＲ残基に相当する残基、Ｃｈｏｔｈｉａ超可変ループ残基、Ａｂｍ残基、及び／又は接触残基を組み入れてよい。任意選択的に、２４−３６又は２４−３４（Ｌ１）、４６−５６又は５０−５６（Ｌ２）及び８９−９７（Ｌ３）、２６−３５Ｂ（Ｈ１）、５０−６５、４７−６５又は４９−６５（Ｈ２）及び９３−１０２、９４−１０２又は９５−１０２（Ｈ３）のような拡張超可変領域残基を組み入れる。
【０１６６】
本明細書における抗体は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、及びＩｇＧ４を含む免疫グロブリン分子の全てのクラス及びサブクラスを含み、ＩｇＧ１抗体が好ましい。
【０１６７】
いくつかの実施態様において、本明細書における製剤中に存在する抗Ｄ因子抗体は、ヒト化抗Ｄ因子抗体の抗原結合断片であり、例えば、Ｆａｂ断片又はＦ（ａｂ’）２断片であり、好ましくはＦａｂ断片である。
【０１６８】
Ｆａｂ抗体断片は、小さいサイズ、短い血清半減期、及びエフェクター機能の欠如の利益を提供し、多くの治療用途において有益である。したがって、Ｆａｂ分子は、過去の投薬が持続しない一過性の全身性活性が望ましいとき、又は投与及び活性が、眼のような末梢の区画に局在化するとき、有利である。しかしながら、いくつかのプロテアーゼがＩｇＧ１抗体のヒンジ領域において抗体を切断し、ネオエピトープに対する抗ヒンジ抗体（ＡＨＡ）を生じることが知られている。血清中に既存のＡＨＡは、サロゲートＦｃとして作用でき、抗体断片に欠如しているＦｃの性質を再導入でき、これは望ましくない。
【０１６９】
Ｆａｂ分子は、典型的には抗体の上部ヒンジ部分を含む。この抗体の上部ヒンジ領域は、ＦａｂとＦｃ領域の間のリンカーとして機能するが、Ｆａｂ分子においては、構造的役割も機能的役割も有していない。Ｆａｂ分子の組換え発現は、含まれる上部ヒンジ領域の長さの画定において柔軟性をもたらす。上部ヒンジ領域のＣ末端トランケーション及び／又はＦａｂ断片の変異は、検出可能な既存のＡＨＡを有しないネオエピトープをもたらし得、関連する問題を排除する実際的な経路を提供することが見出された。
【０１７０】
Ｃ末端トランケーションを有する重鎖を含む、抗Ｄ因子抗体の軽鎖及び重鎖の定常領域配列を、図１９に示す。
【０１７１】
抗Ｄ因子抗体のＦａｂ断片の軽鎖定常領域配列を、配列番号２９として図１９に示す。いくつかの実施態様において、Ｆａｂ断片の重鎖のＣ末端は、配列ＣＤＫＴＨＸ（配列番号５２）で終了し、ＸはＴ以外の任意のアミノ酸である。本発明は、アミノ酸「ＣＤＫＴＨＴ」（配列番号１１）、「ＣＤＫＴＨＬ」（配列番号１２）、「ＣＤＫＴＨ」（配列番号１３）、「ＣＤＫＴ」（配列番号１４）、「ＣＤＫ」（配列番号１５）、又は「ＣＤ」で終了するＦａｂ断片の重鎖のＣ末端を有する抗Ｄ因子抗体を含む製剤を明示的に含む。Ｃ末端におけるトランケーション及び／又は変異は、熱安定性又は発現を損なうことなく、Ｆａｂに対するＡＨＡ−反応性を排除できる。いくつかの実施態様において、Ｆａｂ断片の重鎖のＣ末端は、アミノ酸「ＣＤＫＴＨＴＣ」（配列番号１６）、「ＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣ」（配列番号１７）、「ＣＤＫＴＨＴＣＰＰＳ」（配列番号１８）、「ＣＤＫＴＨＴＳＰＰＣ」（配列番号１９）、「ＣＤＫＴＨＴＡＰＰＣ」（配列番号２０）、「ＣＤＫＴＨＴＳＧＧＣ」（配列番号２１）、又は「ＣＹＧＰＰＣ」（配列番号２２）で終了する。いくつかのそのような実施態様において、Ｃ末端アミノ酸における遊離システインは、例えばＰＥＧのようなポリマーへのコンジュゲーションが可能である。いくつかの実施態様において、Ｆａｂ断片は、配列番号３０から４２（図１９）から選択されるＩｇＧ１重鎖定常領域を含む。いくつかの実施態様において、ＦａｂはＩｇＧ２又はＩｇＧ４のＦａｂである（例えば配列番号３７−４３を参照）（図１９）。いくつかの実施態様において、Ｆａｂは、配列番号４３の重鎖定常領域（ＶＥＲＫ；配列番号２３）を含むＩｇＧ２のＦａｂ断片であるか、又は配列番号４４の重鎖定常領域（ＶＥＲＫＣ；配列番号２４）を含むＩｇＧ２のＦａｂ−Ｃ断片である。いくつかの実施態様において、Ｆａｂは、配列番号４６（ＫＹＧＰＰ；配列番号２６）、配列番号５０（ＫＹＧＰ；配列番号２７）、配列番号４７（ＫＹＧ、配列番号２８）、配列番号４８（ＫＹ）、及び配列番号４９（Ｋ）から選択される重鎖定常領域を含むＩｇＧ４の断片であるか、又は配列番号４５の重鎖定常領域（ＫＹＧＰＰＣ；配列番号２５）を含むＩｇＧ４のＦａｂ−Ｃ断片である。既存の抗ヒンジ抗体（ＰＥ−ＡＨＡ）反応を避けるために、Ｃ末端におけるトランケーション及び／又は変異の代わりに、ＩｇＧ１又はＩｇＧ４のＦａｂ断片を使用でき、これらはＰＥ−ＡＨＡ反応を示さないためである。
【０１７２】
抗体は、様々な安定性の問題を有する。抗体の相補性決定領域（ＤＣＲ）は、その非柔軟性及び溶媒への接近可能性のために、翻訳後修飾を受けやすい。ＣＤＲ内のＴｒｐ酸化、Ａｓｎ脱アミド化及びＡｓｐ異性化に起因する化学分解が報告されている。
【０１７３】
いくつかの実施態様において、本明細書における抗Ｄ因子抗体は、Ａｓｐ−Ｘａａモチーフを含む抗体のような、アスパルチル（Ａｓｐ）残基の異性化を受けやすいヒト化モノクローナル抗体であり、Ｘａａａは、少なくとも１つの重鎖及び／又は軽鎖の超可変領域（ＨＶＲ）において、Ａｓｐ、Ｇｌｙ、Ｈｉｓ、Ｓｅｒ又はＴｈｒである。
【０１７４】
いくつかの実施態様において、本発明の製剤中に存在するモノクローナル抗Ｄ因子抗体は、ＨＶＲ１−ＨＣ：ＧＹＴＦＴＮＹＧＭＮ（配列番号３）；ＨＶＲ２−ＨＣ：ＷＩＮＴＹＴＧＥＴＴＹＡＤＤＦＫＧ（配列番号４）；ＨＶＲ３−ＨＣ：ＥＧＧＶＮＮ（配列番号５）のＨＶＲ配列と少なくとも９０％、若しくは少なくとも９５％、若しくは少なくとも９８％、若しくは少なくとも９９％の配列同一性を有する重鎖超可変領域（ＨＶＲ−ＨＣ）、並びに／又はＨＶＲ１−ＬＣ：ＩＴＳＴＤＩＤＤＤＭＮ（配列番号８）；ＨＶＲ２−ＬＣ：ＧＧＮＴＬＲＰ（配列番号９）；及びＨＶＲ３−ＬＣ：ＬＱＳＤＳＬＰＹＴ（配列番号１０）のＨＶＲ−ＬＣ配列と少なくとも少なくとも９０％、若しくは少なくとも９５％、若しくは９８％、若しくは少なくとも９９％の配列同一性を有する軽鎖超可変領域（ＨＶＲ−ＬＣ）を含む。
【０１７５】
いくつかの実施態様において、モノクローナル抗Ｄ因子抗体は、ＨＶＲ１−ＨＣ：ＧＹＴＦＴＮＹＧＭＮ（配列番号３）；ＨＶＲ２−ＨＣ：ＷＩＮＴＹＴＧＥＴＴＹＡＤＤＦＫＧ（配列番号４）；ＨＶＲ３−ＨＣ：ＥＧＧＶＮＮ（配列番号５）のＨＶＲ−ＨＣ、並びに／又はＨＶＲ１−ＬＣ：ＩＴＳＴＤＩＤＤＤＭＮ（配列番号８）；ＨＶＲ２−ＬＣ：ＧＧＮＴＬＲＰ（配列番号９）；及びＨＶＲ３−ＬＣ：ＬＱＳＤＳＬＰＹＴ（配列番号１０）のＨＶＲ−ＬＣを含む。
【０１７６】
いくつかの実施態様において、モノクローナル抗Ｄ因子抗体は、配列番号２の重鎖の可変領域配列と少なくとも８５％、若しくは少なくとも９０％、若しくは少なくとも９５％、若しくは少なくとも９８％、若しくは少なくとも９９％の配列同一性を有する重鎖可変領域配列、及び／又は配列番号７の軽鎖の可変領域配列と少なくとも８５％、若しくは少なくとも９０％、若しくは少なくとも９５％、若しくは少なくとも９８％、若しくは少なくとも９９％の配列同一性を有する軽鎖可変領域配列を含む。
【０１７７】
いくつかの実施態様において、モノクローナル抗Ｄ因子抗体は、配列番号２の重鎖の可変領域配列及び／又は配列番号７の軽鎖の可変領域配列を含む。
【０１７８】
いくつかの実施態様において、モノクローナル抗Ｄ因子抗体は、配列番号２を含む重鎖配列及び／又は配列番号７を含む軽鎖配列を含む。
【０１７９】
いくつかの実施態様において、本発明の製剤中に存在するモノクローナル抗Ｄ因子抗体は、抗Ｄ因子抗体の変異体、ＡＦＤ．ｖ１−ＡＦＤ．ｖ１５の重鎖及び／又は軽鎖のＣＤＲ配列（図２０を参照）と少なくとも９０％、又は少なくとも９５％、又は少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有する重鎖超可変領域（ＨＶＲ−ＨＣ）を含む。
【０１８０】
いくつかの実施態様において、モノクローナル抗Ｄ因子抗体は、抗Ｄ因子抗体の変異体、ＡＦＤ．ｖ１−ＡＦＤ．ｖ１５の重鎖及び／又は軽鎖のＣＤＲ配列（図２０を参照）を含む。
【０１８１】
いくつかの実施態様において、モノクローナル抗Ｄ因子抗体は、抗Ｄ因子抗体の変異体、ＡＦＤ．ｖ１−ＡＦＤ．ｖ１５の軽鎖及び／又は重鎖の可変領域配列（図２１及び２２を参照）と少なくとも８５％、又は少なくとも９０％、又は少なくとも９５％、又は少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有する重鎖可変領域配列を含む。
【０１８２】
いくつかの実施態様において、モノクローナル抗Ｄ因子抗体は、抗Ｄ因子抗体の変異体、ＡＦＤ．ｖ１−ＡＦＤ．ｖ１５の軽鎖及び／又は重鎖の可変領域配列（図２１及び２２を参照）を含む。
【０１８３】
いくつかの実施態様において、Ｆａｂ断片の重鎖のＣ末端は、配列ＣＤＫＴＨＸ（配列番号５２）で終了し、ＸはＴ以外の任意のアミノ酸である。本発明は、アミノ酸「ＣＤＫＴＨＴ」（配列番号１１）、「ＣＤＫＴＨＬ」（配列番号１２）、「ＣＤＫＴＨ」（配列番号１３）、「ＣＤＫＴ」（配列番号１４）、「ＣＤＫ」（配列番号１５）、又は「ＣＤ」で終了するＦａｂ断片の重鎖のＣ末端を有する、抗Ｄ因子抗体の変異体（例えばＡＦＤ．ｖ１−ＡＦＤ．ｖ１５）を含む製剤を明示的に含む。上述のように、Ｃ末端におけるトランケーション及び／又は変異は、熱安定性又は発現を損なうことなく、Ｆａｂに対するＡＨＡ−反応性を排除できる。いくつかの実施態様において、抗Ｄ因子抗体の変異体（例えばＡＦＤ．ｖ１−ＡＦＤ．ｖ１５）のＦａｂ断片の重鎖のＣ末端は、アミノ酸「ＣＤＫＴＨＴＣ」（配列番号１６）、「ＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣ」（配列番号１７）、「ＣＤＫＴＨＴＣＰＰＳ」（配列番号１８）、「ＣＤＫＴＨＴＳＰＰＣ」（配列番号１９）、「ＣＤＫＴＨＴＡＰＰＣ」（配列番号２０）、「ＣＤＫＴＨＴＳＧＧＣ」（配列番号２１）、又は「ＣＹＧＰＰＣ」（配列番号２２）で終了する。いくつかのそのような実施態様において、Ｃ末端アミノ酸における遊離システインは、例えばＰＥＧのようなポリマーへのコンジュゲーションが可能である。いくつかの実施態様において、Ｆａｂ断片は、配列番号３０から４２から選択されるＩｇＧ１重鎖定常領域を含む。いくつかの実施態様において、ＦａｂはＩｇＧ２又はＩｇＧ４のＦａｂである（例えば配列番号４３から５１を参照）（図１９）。したがって、いくつかの実施態様において、Ｆａｂは、配列番号４３の重鎖定常領域（ＶＥＲＫ；配列番号２３）を含むＩｇＧ２のＦａｂ断片であるか、又は配列番号４４の重鎖定常領域（ＶＥＲＫＣ；配列番号２４）を含むＩｇＧ２のＦａｂ−Ｃ断片である。いくつかの実施態様において、Ｆａｂは、配列番号４６（ＫＹＧＰＰ；配列番号２６）、配列番号５０（ＫＹＧＰ；配列番号２７）、配列番号４７（ＫＹＧ；配列番号２８）、配列番号４８（ＫＹ）、及び配列番号４９（Ｋ）から選択される重鎖定常領域を含むＩｇＧ４の断片であるか、又は配列番号４５の重鎖定常領域（ＫＹＧＰＰＣ；配列番号２５）を含むＩｇＧ４のＦａｂ−Ｃ断片である。
【０１８４】
既存の抗ヒンジ抗体（ＰＥ−ＡＨＡ）反応を避けるために、Ｃ末端におけるトランケーション及び／又は変異の代わりに、ＩｇＧ１又はＩｇＧ４のＦａｂ断片を使用でき、これらはＰＥ−ＡＨＡ反応を示さないためである。
【０１８５】
いくつかの実施態様において、抗Ｄ因子抗体は、ランパリズマブである。
【０１８６】
いくつかの実施態様において、抗体は、抗Ｄ因子抗体の変異体ＡＦＤ．ｖ８又はＡＦＤ．ｖ１４である。
【０１８７】
本明細書における抗Ｄ因子抗体の変異体を含む本発明の製剤中に含まれる抗Ｄ因子抗体を、様々な非タンパク性ポリマー分子の１つに抗体をコンジュゲートさせることによって、さらに共有結合的に修飾することもできる。抗体−ポリマーコンジュゲートは、ポリマーで抗体を誘導体化するための任意の好適な技術を用いて作製できる。本発明は、抗体又は抗体断片とポリマーとの間の任意の特定のタイプの結合を利用するコンジュゲートに限定されないことが理解されよう。
【０１８８】
一態様において、本発明のコンジュゲートは、ポリマーが特定の部位又は親抗体の特定の部位に共有結合し、すなわち、ポリマーの結合が特定の領域若しくは特定のアミノ酸残基又は親抗体若しくは抗体断片中の残基を標的とする種を含む。ポリマーの部位特異的コンジュゲーションは、親抗体又は抗体断片中のシステイン残基への結合によって最も一般的に達成される。そのような実施態様において、カップリング化学は、例えば、親抗体中のジスルフィド架橋ではないシステイン残基の遊離スルフヒドリル基を利用することができる。ポリマーは、マレイミド、スルフヒドリル、チオール、トリフラート、テシラート、アジリジン、エクシラン、及び５−ピリジル官能基のような、親抗体上の遊離スルフヒドリル基又はチオール基と特異的に反応することができる任意の官能基によって活性化できる。米国特許第４１７９３３７号、米国特許第７１２２６３６号、及びJevsevar等 (2010) Biotech. J. 5:113-128に記載されるプロトコール及び系のような、選択されたカップリング系の化学に好適な任意のプロトコールを用いて、ポリマーを親抗体へと結合することができる。
【０１８９】
いくつかの実施態様において、親抗体中に天然に存在する一又は複数のシステイン残基を、ポリマーコンジュゲーションの結合部位として使用する。いくつかの実施態様において、ポリマーのための特異的な結合部位（一又は複数）を提供することを目的として、一又は複数のシステイン残基を、親抗体の選択された部位（一又は複数）へと改変して導入する。
【０１９０】
一態様において、本発明は、抗体断片−ポリマーコンジュゲートを含む製剤を包含し、抗体断片はＦａｂであり、ポリマーは、軽鎖及び重鎖を連結する鎖間ジスルフィド結合を通常形成するＦａｂ断片の軽鎖又は重鎖中の一又は複数のシステイン残基へと結合する。
【０１９１】
別の態様において、本発明は、抗体断片−ポリマーコンジュゲートを含む製剤を包含し、抗体断片はＦａｂ’（Ｆａｂ−Ｃを含む）であり、ポリマー結合は、Ｆａｂ’断片（Ｆａｂ−Ｃを含む）のヒンジ領域を標的とする。いくつかの実施態様において、抗体断片のヒンジ領域に天然に存在する一又は複数のシステイン残基は、ポリマーへの結合に使用される。いくつかの実施態様において、ポリマーのための特異的な結合部位（一又は複数）を提供することを目的として、一又は複数のシステイン残基を、Ｆａｂ’断片（Ｆａｂ−Ｃを含む）のヒンジ領域へと改変して導入する。システイン改変された抗体は、以前に記載されている（米国特許出願公開第２００７／００９２９４０号及びJunutula, J. R.等、J. Immunol Methods, Vol. 332(l-2), pp. 41-52 (2008)、全ては、参照によりその全てを本明細書に組み入れる）。いくつかの実施態様において、システイン改変抗体は、親抗体であり得る。これらは、特定の位置、典型的には、例えばＣＬ又はＣＨ１のような定常領域に、遊離システインを有する抗体断片の作製に有用である。システインを含むよう改変された親抗体は、「ＴｈｉｏＭａｂ」と呼ばれてもよく、そのようなシステイン改変抗体から作製されるＦａｂ断片は、作製方法に関わりなく「ＴｈｉｏＭａｂ」又は「ＴｈｉｏＦａｂ」と呼ばれてもよい。以前に記載されたように（例えば、米国特許出願公開第２００７／００９２９４０号及びJunutula, J. R.等、J. Immunol Methods, Vol. 332(l-2), pp. 41-52 (2008)を参照）、置き換えられた（「改変された」）システイン（Ｃｙｓ）残基を有する変異体は、新規に導入された改変されたシステインのチオール基の反応性について評価される。チオールの反応性の値は、０から１．０の範囲の相対的な数値であり、任意のシステイン改変抗体について測定できる。反応性チオール基を有することに加え、ＴｈｉｏＭａｂは、それらが抗原結合能を保持するように選択すべきである。システイン改変抗体の設計、選択及び調製は、以前に詳細に記載された（例えば国際公開第２０１１／０６９１０４号を参照でき、それは参照により本明細書に組み入れる）。改変システインは、好ましくは重鎖又は軽鎖の定常ドメインに導入される。そのため、システイン改変抗体は、それらの野生型、親抗体対応物の抗原結合能を好ましくは保持するであろうし、そのため、特異的に抗原に結合可能である。いくつかの実施態様において、本発明の、抗Ｄ因子抗体の変異体のＦａｂ断片は、ポリマーコンジュゲーションのための１つの結合部位を提供することを目的として、Ｃ’末端において１つのシステインを付加することによって修飾されている。別のいくつかの実施態様において、本発明の抗Ｄ因子抗体の変異体のＦａｂ断片は、ポリマーコンジュゲーションのための２つの結合部位を提供することを目的として、Ｃ’末端において４つの付加的な残基Ｃｙｓ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｃｙｓ（配列番号５３）を付加することによって修飾されている。
【０１９２】
１つの一般に使用される抗体コンジュゲーションはＰＥＧ化であり、一又は複数のポリエチレングリコール（ＰＥＧ）ポリマーが、抗体の定常領域へと共有結合している。米国特許第４１７９３３７号、米国特許第７１２２６３６号を参照できる。異なるサイズ（例えば約５００Ｄから約３００，０００Ｄ）及び形状（例えば線状又は分岐）のＰＥＧポリマーは、当該技術分野において公知であり、広く使用される。本発明に有用なポリマーは、市販されていてもよく（例えば、日本油脂株式会社、Ｎｅｋｔａｒ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ、Ｃｒｅａｔｉｖｅ  ＰＥＧＷｏｒｋｓより）又は、通常の化学手順を用いて市販の出発物質から調製してもよい。ＰＥＧ化は、抗体薬の物理的及び科学的特性を変化させ、改善された安定性、減少した免疫原性、延長した循環寿命及び増加した滞留時間のような改善された薬物動態学的挙動をもたらし得る。
【０１９３】
上述のように、最も好ましくは、抗Ｄ因子抗体は、ランパリズマブである。
【０１９４】
ランパリズマブは、ヒトＩｇＧ１アイソタイプに基づく、ヒト化抗Ｄ因子モノクローナル抗体の抗原結合断片（Ｆａｂ）である。ランパリズマブは大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ（Ｅ．  Ｃｏｌｉ））において産生され、鎖間及び鎖内ジスルフィド結合を含む、１つの部分的な重鎖と１つの軽鎖からなる。ランパリズマブは、補体Ｄ因子を標的とする。Ｄ因子は、副補体経路の活性化における律速酵素である、高い特異性のキモトリプシン様セリンプロテアーゼである。Ｄ因子の基質は、別の副経路セリンプロテアーゼであるＢ因子である。Ｄ因子による切断に続いて、Ｂ因子は、タンパク質分解において活性であるＢｂ因子へと転換し、副補体経路を開始する。副補体経路の増大した活性は、加齢黄斑変性（ＡＭＤ）の発症に関連する、ブルッフ膜上に存在する細胞傷害性沈着物であるドルーゼンにおいて見出されている。（Despriet DD等、(2006).Complement factor H polymorphism, complement activators, and risk of age-related macular degeneration. JAMA 296 (3): 301-9。ＡＭＤにおける副経路補体活性化の役割は、遺伝学によってさらに支持されており、副補体経路の負の調節因子であるＨ因子の変異が、ＡＭＤ発症の増大したリスクと強く相関することを示している。ランパリズマブ活性は、副経路に特異的であり、古典経路活性化に対して阻害効果を一切示さない。ランパリズマブは、Ｄ因子媒介性のＢ因子の切断を阻害し、副補体経路の活性化を防ぎ、それによって、活性化補体成分の炎症及び細胞傷害活性を阻害する（Atkinson JP及びFrank MM (2006) Bypassing Complement: Evolutionary Lessons and Future Implications.  J Clin Invest 116(5):1215-18）。
【０１９５】
ＩＴＶ投与を目的とする、６−ｃｃ  ＵＳＰ／Ｐｈ．Ｅｕｒ．Ｔｙｐｅ１ガラスバイアル中の、滅菌され、白色から淡黄色の凍結乾燥された散剤としてのランパリズマブ薬物製剤（ＤＰ）を含む薬学的組成物は、国際公開第２０１５／０２３５９６号に記載される。各々のガラスバイアルは、公称４０ｍｇのランパリズマブを含んだ。注射のための滅菌水（ＳＷＦＩ）、ＵＳＰ／Ｐｈ．Ｅｕｒ．による薬物製剤の再構成が必要とされた。再構成の後、薬物製剤は、４０ｍＭのＬ−ヒスチジン塩酸塩，２０ｍＭの塩化ナトリウム、１８０ｍＭのスクロース、０．０４％（ｗ／ｖ）のポリソルベート２０、ｐＨ５．５中１００ｍｇ／ｍＬのランパリズマブとして製剤化された。薬物製剤は、防腐剤を一切含まず、単回使用にのみ好適であった。
【０１９６】
一態様において、本発明は、プレ乾燥、凍結乾燥、及び再構成された製剤を含む、改善されたランパリズマブ製剤に関する。
【０１９７】
本発明によって対処される１つの問題は、硝子体のｐＨが約７．４であり、ランパリズマブ製剤にとって許容可能な最大のｐＨによって平衡をとる必要があることである。実際、ランパリズマブは、許容可能なｐＨ範囲（約ｐＨ５．８）の上限において、限定された溶解度を有する。溶解度は、製剤のイオン強度を増加させるか、又は製剤のｐＨを低下させることによって改善できる。しかしながら、ヒトの硝子体に酸性溶液を注射することは安全性の問題が生じるため、ｐＨを比較的狭い限定にとどめる必要がある。溶解度は、製剤中のＮａＣｌ濃度を増加させることによってｐＨを低下させることなく改善してもよい。しかしながら、製剤中のＮａＣｌの１ｍＭの増加は、浸透圧を維持するために約２ｍＭのスクロースを除去する。これまでの研究は、凍結乾燥タンパク質の凝集速度は、より低い糖対タンパク質比において製剤化されるとき、顕著に高くなることを示している。（Cleland, JL等 (2001). A Specific Molar Ratio of Stabilizer to Protein is Required for Storage Stability of a Lyophilized Monoclonal Antibody. J Pharm Sci: 90(3):310-21）。したがって、このアプローチは、ＤＰが硝子体内投与のために安全であると考えられるようにほぼ等張性である必要があるため、最適より低い糖の濃度をもたらす。したがって、好適な糖対タンパク質比及び溶解度を維持し、安全性の要件を満たすため、ＤＰの安定性を維持する一方で、同時にランパリズマブの溶解度を改善するための他の方法を調査する必要がある。
【０１９８】
投与経路は、製剤の浸透圧及びｐＨに対して制約を与えるのみではなく、使用できる賦形剤の種類も制限する。例えば、酢酸は揮発性であり、凍結乾燥中に製剤から除去され得るため、ヒスチジンアセテートのような成分は、再構成の前に凍結乾燥する本発明の製剤における使用に好適ではない。
【０１９９】
本発明は、５．５未満のｐＨであり、なおも硝子体内投与に好適である、抗Ｄ因子抗体を含む眼内、特に硝子体内投与に好適な抗Ｄ因子抗体の改善された薬学的製剤を提供する。好ましくは、ｐＨは、５．０、５．１、５．２、５．３、又は５．４である。製剤は、好適なｐＨで製剤を提供する任意のバッファーを含むことができ、好ましくは、リン酸／クエン酸バッファーのような二重バッファーの使用を排除する。例示的な好適なバッファーは、クエン酸ナトリウム、コハク酸ナトリウム、及びヒスチジンバッファーを含む。本発明の目的のため、要求されるｐＨを提供するのみでなく、凍結乾燥保護の特性をも有しているヒスチジンバッファーが好ましい。
【０２００】
いくつかの実施態様において、抗Ｄ因子抗体製剤は、凍結乾燥され、投与前に再構成される。したがって、本明細書における製剤は、好ましくは、一又は複数の凍結乾燥保護剤を含む。凍結乾燥保護剤は上に定義されるように、スクロース又はトレハロースのようなポリオール（糖）；グルタミン酸一ナトリウム又はヒスチジンのようなアミノ酸；ベタインのようなメチルアミン；硫酸マグネシウムのような離液系列の塩；例えばグリセリン、エリスリトール、グリセロール、アラビトール、キシリトール、ソルビトール、及びマンニトールのような三価以上の糖アルコールのようなポリオール；プロピレングリコール；ポリエチレングリコール；Ｐｌｕｒｏｎｉｃｓ；並びにそれらの組合せを含む。好ましい凍結乾燥保護剤は、トレハロース又はスクロースのような非還元ポリオールであり、好ましくはスクロースである。
【０２０１】
本明細書における製剤は、一又は複数の増量剤、すなわち、凍結乾燥混合物に質量を加え、凍結乾燥ケーキの物理構造に寄与する（例えば、開気孔構造を維持する実質的に均一である凍結乾燥ケーキの生産を促進する）化合物を含んでもよい。例示的な増量剤は、マンニトール、グリシン、ポリエチレングリコール、及びソルビトールを含む。
【０２０２】
本明細書における製剤は、一又は複数の界面活性剤（例えばポリソルベート）をさらに含んでもよく、これが再構成タンパク質の凝集を低減し、かつ／又は再構成製剤中の粒子の形成を低減することができることが本明細書において観察されている。所望なら、界面活性剤を、プレ凍結乾燥製剤、凍結乾燥製剤、及び／又は再構成製剤（しかしながら好ましくはプレ凍結乾燥製剤）に添加することができる。
【０２０３】
再構成製剤は、長期間の保存を目的としていないため、本明細書における製剤中の防腐剤の存在は、一般的に必要とされない。しかしながら、防腐剤を含む製剤を調製することができる。潜在的な防腐剤の例は、オクタデシルジメチルベンジルアンモニウムクロリド、ヘキサメトニウムクロライド、ベンザルコニウムクロライド（アルキル基が長鎖化合物であるアルキルベンジルジメチルアンモニウムクロライドの混合物）、及びベンゼトニウムクロライドを含む。他のタイプの防腐剤は、フェノール、ブチル及びベンジルアルコールのような芳香族アルコール、メチル又はプロピルパラベンのようなアルキルパラベン、カテコール、レゾルシノール、シクロヘキサノール、３−ペンタノール、及びｍ−クレゾールを含む。本明細書において最も好ましい防腐剤は、ベンジルアルコールである。
【０２０４】
いくつかの実施態様において、本明細書における製剤は、モノクローナル抗Ｄ因子抗体、ｐＨを５．０−５．４の範囲に調整するのに好適なバッファー、ポリオール、及び界面活性剤を含む。好ましくは、ｐＨは約５．３であり、バッファーはヒスチジンバッファーであり、ポリオールはスクロースであり、界面活性剤はポリソルベートである。
【０２０５】
いくつかの実施態様において、同一の成分が、プレ凍結乾燥、凍結乾燥、再構成された製剤中に存在する。
【０２０６】
いくつかの実施態様において、プレ凍結乾燥製剤は、約２５ｍｇ／ｍＬの抗Ｄ因子抗体を含む。
【０２０７】
いくつかの実施態様において、再構成製剤は、約１００ｍｇ／ｍｌの抗Ｄ因子抗体を含む。
【０２０８】
抗Ｄ因子抗体製剤の使用
Ｄ因子をそれらの標的として認識する抗体を含む本発明の製剤は、補体関連の眼の障害を治療するために使用してもよい。補体関連の眼の障害は、例えば、乾性及び湿性（非滲出及び滲出）型、脈絡膜血管新生（ＣＮＶ）、ブドウ膜炎、糖尿病性及び他の虚血関連網膜症、眼内炎を含む加齢黄斑変性（ＡＭＤ）の全ステージのような黄斑変性疾患、並びに、糖尿病性黄斑浮腫、病的近視、フォン・ヒッペル・リンドウ病、眼のヒストプラスマ症、網膜中心静脈閉塞症（ＣＲＶＯ）、角膜血管新生、及び網膜血管新生のような他の眼内新生血管疾患を含む。
【０２０９】
一例において、補体関連の眼の障害は、非滲出型（湿性）及び滲出型（乾性又は萎縮性）ＡＭＤ、脈絡膜血管新生（ＣＮＶ）、糖尿病性網膜症（ＤＲ）、眼内炎、及びブドウ膜炎を含む加齢黄斑変性（ＡＭＤ）を含む。
【０２１０】
別の例において、ＡＭＤは、地図状萎縮を特徴とする進行型を含む乾性ＡＭＤである。
【０２１１】
一例において、補体関連の眼の状態は、地図状萎縮である。一例において、補体関連の眼の状態は、湿性ＡＭＤ（脈絡膜血管新生（ＣＮＶ））である。
【０２１２】
本明細書における抗Ｄ因子抗体製剤は、眼内投与、好ましくは硝子体内注射によって投与される。典型的な用量は、１眼当たり約１０ｍｇを、４若しくは６週間ごとに、又は２−６週間ごとに、又は２週間ごとに、硝子体内注射によって投与される。
【０２１３】
いくつかの実施態様において、本明細書における製剤は、失明をもたらし得る進行性の状態である、加齢黄斑変性（ＡＭＤ）の進行型である地図状萎縮（ＧＡ）を治療するために使用される。有効性は、黄斑内のＧＡ病変のサイズ及び型に関する情報を提供するために使用される画像技術である眼底自発蛍光（ＦＡＦ）のような公知の技術によって測定されるような、ベースラインからの罹患した眼のＧＡ病変領域における平均変化として定義される、ＧＡ疾患進行速度の低下を測定することによって評価できる。有効性の副次的評価項目は、患者の視覚機能に対するランパリズマブの影響を評価することに焦点を当てている。
【０２１４】
本発明の抗Ｄ因子製剤は、一又は複数の追加の治療剤と組み合わせて使用してもよい。ある実施態様において、追加の治療剤は、補体関連の眼の疾患の治療に好適な治療剤である。いくつかの実施態様において、追加の治療剤は、例えば湿性ＡＭＤのような、眼における望ましくない血管新生と関連する眼の障害の治療に好適である。いくつかの実施態様において、追加の治療剤は、別の抗Ｄ因子抗体のような別のＤ因子アンタゴニストを含む、別の補体を標的とする治療剤である。
【０２１５】
例えば、本明細書における抗Ｄ因子抗体製剤は、抗ＶＥＧＦ抗体のような有効量のＶＥＧＦアンタゴニストと組み合わせて、任意選択的に別の抗Ｄ因子抗体のような別のＤ因子アンタゴニストと組み合わせて投与してもよい。抗ＶＥＧＦ抗体は、例えば、２０１５年２月２６日に発行された米国特許第６８８４８７９号、国際公開第９８／４５３３１号、国際公開第２００５／０１２３５９号、国際公開第２００５／０４４８５３号、及び国際公開第９８／４５３３１号に記載される。様々な実施態様において、本明細書における抗Ｄ因子抗体製剤と組み合わせて投与するための抗ＶＥＧＦ薬は、ＡＶＡＳＴＩＮ（登録商標）（ベバシズマブ）及び／又はＬＵＣＥＮＴＩＳ（登録商標）（ラニビズマブ）を含み、任意選択的に、少なくとも１つの追加のＤ因子アンタゴニスト／抗体と組み合わせる。
【０２１６】
本明細書における抗Ｄ因子抗体製剤は、例えば抗ＨＴＲＡ１抗体のような有効量のＨＴＲＡ１アンタゴニストと組み合わせて、任意選択的に少なくとも１つの追加のＤ因子アンタゴニスト／抗体と組み合わせて投与してもよい。抗ＨＴＲＡ１抗体は、例えば国際公開第２０１３０５５９９８号Ａ１に記載される。
【０２１７】
本明細書における抗Ｄ因子抗体製剤は、例えば抗アンジオポエチン−２（Ａｎｇ２）抗体のような有効量のＡｎｇ２アンタゴニストと組み合わせて、任意選択的に少なくとも１つの追加のＤ因子アンタゴニスト／抗体と組み合わせて投与してもよい。抗Ａｎｇ２抗体は、例えば米国特許出願公開第２００９０３０４６９４号Ａ１に開示される。
【０２１８】
本明細書における抗Ｄ因子抗体製剤は、抗ＴＩＥ２抗体のような有効量のＴＩＥ２アンタゴニストと組み合わせて、任意選択的に少なくとも１つの追加のＤ因子アンタゴニスト／抗体と組み合わせてさらに投与してもよい。抗ＴＩＥ２抗体は、米国特許第６３７６６５３号に記載される。
【０２１９】
本明細書における抗Ｄ因子抗体と組み合わせた投与に好適な他の治療剤は、古典又は副補体経路の様々な成分のアンタゴニスト（補体阻害剤）である。したがって、本明細書における製剤は、Ｃ１、Ｃ２、Ｃ３、Ｃ４、Ｃ５、Ｃ６、Ｃ７、Ｃ８、及びＣ９補体の成分の一又は複数のアンタゴニストと組み合わせて投与してもよい。いくつかの実施態様において、本明細書における抗Ｄ因子製剤は、抗Ｃ２及び／又は抗Ｃ４及び／又は抗Ｃ５抗体のようなＣ２及び／又はＣ４及び／又はＣ５補体成分のアンタゴニストと組み合わされる。そのような抗体は、当該技術分野において公知であり、かつ／又は市販される。抗Ｃ５抗体であるエクリズマブ（Ａｌｅｘｉｏｎ、Ｃｈｅｓｈｉｒｅ、ＣＴ、ＵＳＡ）は、発作性夜間ヘモグロビン尿症（ＰＮＨ）及び非典型溶血性尿毒症症候群（ａＨＵＳ）の治療のために承認されている。他の補体阻害剤は、例えば、米国特許出願公開第２００５００３６９９１号Ａ１に開示される。したがって、本明細書における抗Ｄ因子抗体製剤は、抗Ｃ２及び抗Ｃ５抗体を限定なしに含む有効量の一又は複数の補体阻害剤と組み合わせて、任意選択的に少なくとも１つの追加のＤ因子アンタゴニスト／抗体と組み合わせて投与してもよい。
【０２２０】
抗Ｄ因子抗体は、２つ以上の列挙された治療剤と組み合わせて投与してもよく、一般的に、眼における望ましくない血管新生と関連した眼の障害を含む、補体関連の眼の疾患の治療に好適な２つ以上の治療剤と組み合わせられる。ＶＥＧＦ、ＨＴＲＡ１、Ａｎｇ２及びＴＩＥ２の２つ以上へと結合する二重特異性及び多重特異性抗体又は２つ以上の補体成分は、本発明の抗Ｄ因子製剤と組み合わせて、任意選択的に、別の抗Ｄ因子アンタゴニスト／抗体と組み合わせて、使用できる治療剤の群に、明示的に含まれる。
【０２２１】
本明細書における混合投与は、別々の製剤又は単一の薬学的製剤を使用する共投与、及び両方の（又は全ての）活性剤がその生物活性を同時に発揮する期間が一般的に存在する逐次的投与を何れかの順序で含む。
【０２２２】
これらの第２の医薬は、本明細書に上述するように使用されるものと同一の用量及び投与経路において、又は約１％から９９％の従来使用される用量において、一般的に使用される。そのような第２の医薬が使用される場合、好ましくは、それらは抗Ｄ因子抗体又はその抗原結合断片が存在しない場合よりも低い量で使用され、特に、抗体による最初の投与を超えた後続する投与において、それらによって引き起こされる副作用を排除又は減少させる。
【０２２３】
第２の医薬が、抗体曝露と共に有効量で投与される場合、それは任意の曝露と共に、例えば１回のみの曝露と共に、又は１回を超える曝露と共に投与してもよい。いくつかの実施態様において、第２の医薬は、最初の曝露と共に投与される。いくつかの実施態様において、第２の医薬は、最初及び第２の曝露と共に投与される。いくつかの実施態様において、第２の医薬は、全ての曝露と共に投与される。
【０２２４】
混合投与は、別々の製剤又は単一の薬学的製剤を使用する共投与（並列投与）、及び両方の（又は全ての）活性剤がその生物活性を同時に発揮する期間が好ましくは存在する逐次的投与を何れかの順序で含む。いくつかの実施態様において、最初の曝露の後、そのような薬剤の量は、減少させられるか又は排除され、プレドニゾン及びシクロホスファミドのような副作用を有する薬剤、特に薬剤がコルチコステロイドであるとき、薬剤に対する対象の曝露を減らすようにされる。いくつかの実施態様において、第２の医薬の量は、減少も排除もされない。
【０２２５】
本発明のさらなる詳細は、次の非限定的な例によって説明される。次の例は、例示のために提供されるものであり、限定のためのものではない。例において言及される市販の試薬は、別途指示がない限り製造者の取扱説明書に従って使用された。
【０２２６】
次の例において、用語、原体（ＤＰ）及び薬物製剤（ＤＰ）は、次のように定義される。
原体（ＤＳ）は、充填及び凍結乾燥前の、医薬品有効成分を含む、凍結された又は液体状の製剤を指す。
薬物製剤（ＤＰ、凍結乾燥）は、バイアル又は他の容器中の、医薬品有効成分を含む、凍結乾燥された固形製剤を指す。
薬物製剤（ＤＰ、再構成）は、希釈剤がバイアル又は他の容器へと添加された後の、医薬品有効成分を含む液体状製剤を指す。
薬物製剤（ＤＰ、限定する用語なし）は、バイアル又は他の容器中の、医薬品有効成分を含む、凍結乾燥された固形製剤を指す。
【０２２７】
次の例において、ＤＰは、ＤＳと比較して４倍濃縮されている。
【実施例】
【０２２８】
実施例１
物質及び方法
次の例における研究に使用された全ての原体（ＤＳ）及び薬物製剤（ＤＰ）製剤を、Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ  １０ｋＤａ  Ｐｅｌｌｉｃｏｎ  ＸＬ  ５０限外濾過カセット（Ｃａｔ  ＃  ＰＸＣ０１０Ｃ５０）を備えるＭｉｌｌｉｐｏｒｅ  Ｌａｂｓｃａｌｅ（商標）ＴＦＦ  Ｓｙｓｔｅｍを用いてそれぞれのダイアフィルトレーションバッファー（糖も界面活性剤も含まない）中で透析した。糖及び界面活性剤を、コンディショニングバッファーによる希釈を通じて、それぞれの製剤に添加した。
【０２２９】
Ａ．ＮａＣｌ濃度測定
５．０−５．５の許容可能なＤＰのｐＨ範囲、９０−１１０ｍｇ／ｍＬの範囲のタンパク質濃度、及び４０ｍＭのＨｉｓＣｌ濃度を有するＤＰにおける強固なランパリズマブ溶解度を確実にするためのＮａＣｌの適切なレベルを決定するために、溶解度試験を実施した。ランパリズマブは、最初に、ｐＨ５．６の３０ｍＭのＨｉｓＣｌに対して、徹底的に透析した。ランパリズマブは、この溶液に完全に溶解性ではない。次いで、水、１ＭストックからのＮａＣｌ、及びｐＨ５．６の３０ｍＭのＨｉｓＣｌを、透析されたランパリズマブと透明なガラスのＨＰＬＣバイアル（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  Ｃａｔ  ＃  Ｃ４０１０−Ｖ１）中で組み合わせて、１１５ｍｇ／ｍＬの最終タンパク質濃度と４０ｍＭまでの変動するＮａＣｌ濃度を有する試料を作製した。選択される条件は、試料の状態と最大の許容可能なｐＨ、最大の許容可能なタンパク質濃度、及び最小の予想されるＨｉｓＣｌ濃度（潜在的なドナン効果を説明）との間のギャップを提供する。試料を、実験室の常温で保持して、塩基性の電荷変異体のレベルの関数として溶解度依存性を調査した。
【０２３０】
Ｂ．製剤スクリーニング
溶解度試験から最適な標的ｐＨ及びＮａＣｌレベルが決定された後、スクリーニングするべき一連の製剤を決定した。製剤１及び３は、凍結保護剤凍結乾燥保護剤として使用される糖の型（それぞれスクロース及びトレハロース）以外は同一である。製剤２及び４は、より低い糖濃度及び高いタンパク質濃度を有して、劣った糖対タンパク質比をもたらす、製剤１及び３の凝集速度を調査するために、スクリーニングに含める。製剤５は、製剤から塩化ナトリウムが除去されたＤＰ安定性を調査するために含め、ＤＰ中のランパリズマブ溶解度が製剤１と同等であることを確実にするように塩化ヒスチジンの濃度を増加する。塩化ナトリウムは、凍結乾燥ケーキの崩壊温度を減少させると知られている。したがって、製剤６は、凍結乾燥中及び保存中のケーキの物理安定性に対する、より高いＮａＣｌの影響を調べるために含める。製剤１、３、５及び６の糖濃度は、標的のＤＰ浸透圧がおよそ３３０ｍＯｓｍ／ｋｇとなるように選択した。製剤７は、試験の対照として含めた。
【０２３１】
ＤＳ試料を、１ｍＬのアリコートでオートクレーブされた２ｃｃのガラスバイアル中に充填し、１３ｍｍ液体ストッパーで栓をし、１３ｍｍアルミニウムフリップトップキャップで蓋をした。ＤＳ試料を、２ｍＬのアリコートでオートクレーブされた６ｃｃのガラスバイアル中に充填し、凍結乾燥前に２０ｍｍの凍結乾燥ストッパーで部分的に栓をした。凍結乾燥後に、バイアルを２０ｍｍアルミニウムフリップトップキャップで蓋をした。全てのＤＰ製剤は、凍結乾燥後、０．６−０．８％（ｗ／ｗ）の水分を含んだ。ＤＰ製剤は、最終容量５００μＬまで精製水で再構成し、ランパリズマブ及び全ての賦形剤の濃度が凍結乾燥前のＤＳにおけるものの４倍となるようにした。再構成容量は、各々の試料で、製剤組成物に依存して４４０−４５２μＬで変動した。
【０２３２】
Ｃ．アッセイ
色、外観、及び透明度
試料の外観を、白色蛍光灯を備えた光検査ステーションを用いて精製水に対して視覚的に評価した。ＤＰの外観を、再構成の前後で評価した。
【０２３３】
濁度
濁度（前方散乱）を、３４０、３４５、３５０、３５５、及び３６０ｎｍにおけるＵＶ吸光度を平均することによって評価した。水でブランクしたＡｇｉｌｅｎｔ  ＨＰ８４５３分光光度計を使用して、１ｃｍの経路長の石英キュベット内で試料をニートで分析した。
【０２３４】
ｐＨ
溶液のｐＨは、ｐＨ＝４．００及び７．００の溶液で標準化されたＭｅｔｔｌｅｒ−Ｔｏｌｅｄｏ  Ｓｅｖｅｎ  Ｍｕｌｔｉ  ｐＨメーターを用いて測定した。
【０２３５】
ＵＶスキャン（重量測定で希釈）によるタンパク質濃度
ＨＰ８４５３  ＵＶ分光光度計を使用したＵＶスキャンによりランパリズマブ濃度を測定した。ランパリズマブＤＳ製剤バッファーを用いて試料を約０．５ｍｇ／ｍＬまで重量測定で希釈した。吸収を、１ｃｍの経路長の石英キュベット中で測定した。ＤＳ製剤バッファーで装置をブランクした。タンパク質濃度を、２７８ｎｍにおける吸光度（Ａ２７８）、３２０ｎｍにおける吸光度（Ａ３２０）、希釈倍率（Ｄ）、及び１．３９（ｍｇ／ｍＬ）−１ｃｍ−１の吸光係数εを用いて、次の式に従って計算した。
2018531980.tif 000003
希釈倍率は、次の式に従って計算し、式中ｍは質量である。
Ｄ＝（１．０５ｇ／ｍＬ×ｍ希釈試料）／（１．０１ｇ／ｍＬ×ｍ試料）
タンパク質濃度を、各々の試料の二重の希釈及び吸光度測定を用いて測定した。
【０２３６】
サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ−ＨＰＬＣ）による分子サイズ分布
ランパリズマブ試料の分子サイズ分布を、２８０ｎｍのＵＶ検出を備えたＡｇｉｌｅｎｔ  １２００高圧液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）システムを使用して、ＴｏｓｏＨａａｓ  ＴＳＫ  Ｇ２０００ＳＷＸＬ（７．８ｍｍ×３００ｍｍ）サイズ排除カラム上でサイズ変異体を分離することによって決定した。試料を移動相（０．２Ｍのリン酸カリウム、０．２５Ｍの塩化カリウム、ｐＨ６．２）で約２ｍｇ／ｍＬの濃度に希釈し、注入まで２−８℃で保存した。３５μＬの試料注入を、０．７ｍＬ／分の流速を用いて常温で分析した。ランパリズマブのロットＦＣＤ５０８−１を、参照物質として注入し、ＤＳ製剤バッファーを試薬ブランクとして使用した。ピーク領域をベースラインに対して積分した。二重の試料の注入を、分子サイズ分布を決定するために使用した。
【０２３７】
イオン交換クロマトグラフィー（ＩＥＣ）による電荷異種性
ランパリズマブ試料の電荷異種性を、Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  ＰｒｏＰａｃ（登録商標）ＳＡＸ−１０、４×２５０ｍｍ強陰イオン交換カラム上で２８０ｎｍのＵＶ検出を備えるＡｇｉｌｅｎｔ  １２００高圧液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）システムを用いて電荷変異体を分離することによって決定した。試料を、ｐＨ８．２の２０ｍＭの２−アミノ−２−メチル−１，３−プロパンジオール（ＡＭＰＤ）で２ｍｇ／ｍＬまで希釈し、ＮＡＰ（商標）５カラムを用いて２０ｍＭのＡＭＰＤへとバッファー交換し、注入まで２−８℃で保存した。５０μＬの試料注入を、５０分にわたるｐＨ８．２のＡＭＰＤ中、２５ｍＭから２００ｍＭのＮａＣｌの直線勾配を用いて４０℃で０．８ｍＬ／分の流速で、カラム上で分離した。次いで、カラムをｐＨ８．２におけるＡＭＰＤ中５００ｍＭのＮａＣｌで１０分間洗浄した。ロットＦＣＤ５０８−１を、参照物質として注入し、ＤＳ製剤バッファーを試薬ブランクとして使用した。
【０２３８】
キャピラリー電気泳動−ドデシル硫酸ナトリウム（非還元）（ＣＥ−ＳＤＳ）
非還元ランパリズマブ試料の純度を、ＬＩＦ検出を備えるキャピラリー電気泳動（ＣＥ）Ｂｅｃｋｍａｎ  ＰＡ８００  ｐｌｕｓ  ｓｙｓｔｅｍを用いて測定した。１６分間の泳動時間において１５ｋＶの電圧差を３１ｃｍのキャピラリーに（検出器まで１０ｃｍ）わたって印加することによって、分離を得た。キャピラリーの温度を２０℃に維持した。試料をドデシル硫酸ナトリウム（ＳＤＳ）によって変性し、３−（２−フロイル）キノロン−２−カルボキシアルデヒド（ＦＱ染料）によって蛍光標識した。ランパリズマブを、参照物質として注入し、ＤＳ製剤バッファーを試薬ブランクとして使用した。ピーク領域をベースラインに対して積分し、補正されたピーク領域（ＣＰＡ）をもたらすために、ピーク領域の値を移動時間で割った。充填する試料を少なくするために、製剤１試料のみが、選択時点においてＮＲ  ＣＥ−ＳＤＳによって観察された。
【０２３９】
ＥＬＩＳＡによる結合
高結合ポリスチレンマイクロタイタープレートのウェルをＤ因子でコーティングし、洗浄し、製剤バッファー中の様々な濃度のランパリズマブに対して曝露し、洗浄した。次いで、プレートをヤギ抗Ｆ（ａｂ’）２−ＨＲＰ抗体に曝露し、洗浄した。次いで、各々のウェルにＳｕｒｅＢｌｕｅ  Ｒｅｓｅｒｖｅ溶液を添加し、０．６Ｎ硫酸の添加前にインキュベートした。次いで、各々のウェルの光学濃度値を４５０ｎｍ（６５０ｎｍの参照吸光度）で測定し、各々のウェルにおけるランパリズマブ濃度を測定した。
【０２４０】
ライトオブスキュレーション（Ｌｉｇｈｔ  Ｏｂｓｃｕｒａｔｉｏｎ）による肉眼では見えない粒子
ＨＩＡＣ９７０３粒子カウンターを用いて、２、５、１０、２５、及び５０μｍ以上のサイズの肉眼では見えない粒子を計数した。１試料当たり、各々０．４ｍＬの全部で４回の注入を実施した。報告される粒子の計数は、最後の３回のランの平均を示す（最初のランは棄却した）。
【０２４１】
水分
体積Ｋａｒｌ  Ｆｉｓｃｈｅｒ水分アッセイは次のように実施した。単一のＤＰバイアルからのケーキを粉砕して、１５ｍＬの試料チューブに入れ、Ｈｙｄｒａｎａｌ（登録商標）Ｃｏｍｐｏｓｉｔｅ  ２  ｖｏｌｕｍｅｔｒｉｃ  Ｋａｒｌ  Ｆｉｓｃｈｅｒ試薬で充填した、Ｍｉｔｓｕｂｉｓｈｉ  Ｍｏｄｅｌ  ＲＶ  ２ＡＪ−５１１  ＴＩＸロボット滴定システムを用いて分析した。装置は、試料分析の前に酒石酸ナトリウム二水和物で標準化する。
【０２４２】
浸透圧
ランパリズマブ試料の浸透圧を、Ａｄｖａｎｃｅｄ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ  ３３００浸透圧計を使用して３重で、氷点降下法によって測定した。
【０２４３】
実施例２
製剤試験
ランパリズマブ製剤は次の成分を含んだ：ヒスチジン塩酸塩一水和物、ヒスチジン遊離塩基、塩化ナトリウム、スクロース、トレハロース二水和物、及びポリソルベート２０。スクリーニングされた原体（ＤＳ）製剤のリストは表１に説明する。
【０２４４】
結果
Ａ．安定剤濃度測定
ランパリズマブの溶解度が塩基性の電荷変異体のレベルの関数であることを検証するために、新鮮なランパリズマブとストレスを受けているランパリズマブを同時に、ｐＨ５．６の３０ｍＭのＨｉｓＣｌ及び１２ｍＭのＮａＣｌに対して透析し、１１５ｍｇ／ｍＬの最終濃度とした。新鮮な物質をｐＨ５．５、０．１ＮのＨＣｌに滴定し、それを５０℃で１８時間インキュベートし、次にそれを４０℃で１８時間インキュベートしてストレスを受けているランパリズマブを作製した。生じる試料は、ＩＥＣによると２７％の塩基性の電荷変異体を含んだ。
【０２４５】
図２は、新鮮な物質は、透析後、常温で完全に溶解性（濁りのない澄んだ溶液）であるが、ストレスを受けている物質はそうではない（濁りのある白色溶液）ことを示す。
【０２４６】
図３は、１１％の塩基性の電荷変異体を含むランパリズマブが、ｐＨ５．６の３０ｍＭのＨｉｓＣｌ中で１１５ｍｇ／ｍＬで製剤化されるとき、溶解度（濁りのない澄んだ溶液）を維持するために１２ｍＭのＮａＣｌが必要とされることを示す。しかしながら、試料が、塩基性の電荷変異体のレベルが２３％になるまで室温で２３日間保存されたとき、溶解度を維持するために２４ｍＭのＮａＣｌが必要とされる。常温での保存中に酸性の電荷変異体における変化を全く観察しなかった。このＮａＣｌ濃度はまた、ライトオブスキュレーションを介してＵＳＰ＜７８９＞基準を満たすために十分に低い肉眼では見えない粒子のレベルを可能にする。
【０２４７】
Ｂ．製剤スクリーニング
１．ＤＳ
リアルタイム、加速及びストレス条件における、バイアル中に保存されたＤＳ製剤の生データを、表２、３、及び４にそれぞれ示す。４週間までの３０℃（ストレス条件）における保存中、ＤＳ製剤間でのサイズ変異体又は電荷変異体の形成速度の違いを全く観察しなかった（それぞれ図４及び図５）。零次反応速度論を仮定すると、ＩＥＣによる主ピーク損失率は、製剤１−６について１２．４−１２．９％／週で変化した。製剤７のＤＳの力価は、３０℃で４週間の保存の後、９８％から８７％の結合（Ｑ１２７１３）に減少した。
【０２４８】
８週間までの５℃（加速条件）における保存中、ＤＳ製剤間でのサイズ変異体又は電荷変異体の形成速度の違いを全く観察しなかった。２４週間までの−２０℃におけるＤＳ保存中、何れの製剤においてもＳＥＣによるサイズ変異体又は電荷変異体のレベルの変化を観察しなかった（それぞれ図６及び図７）。１２週間の−２０℃での保存の後、製剤１のＤＳにおいてＮＲ  ＣＥ−ＳＤＳによるサイズ変異体のレベルの変化を全く観察しなかった（データ示さず）。全てのＤＳ製剤において、遊離アミノ酸分析によって測定して、その標的値の８％内のヒスチジン濃度を含んでいることを見出した。
【０２４９】
２．ＤＰ
リアルタイム、加速及びストレス条件における、保存されたＤＰ製剤の生データを、表５Ａ及び５Ｂ、６Ａ及び６Ｂ、並びに７Ａ及び７Ｂにそれぞれ示す。ゼロ時点における製剤１、３、５、及び６の浸透圧は、予想通り、全て３３０±１０ｍＯｓｍ／ｋｇであった。４週間までの４０℃／７５％ＲＨ（ストレス条件）におけるＤＰ保存中のサイズ変異体の変化を図８に示す。製剤３及び４におけるサイズ変異体形成の増加は、それぞれ製剤１及び２におけるものよりも大きかった。これは、ストレス条件下で、スクロースが、トレハロースと比べて良好にＤＰにおけるランパリズマブ凝集を制限することを示す。図９は、４０℃／７５％ＲＨにおける凝集速度が、ＤＰ中の糖対タンパク質比と負に相関することを示す。ゼロ時点と２週間及び４週間の４０℃／７５％ＲＨでの保存後との製剤１のＳＥＣクロマトグラムの重ね合わせを図１０に示す。ストレス条件下でＤＰ中に形成される最初のサイズ変異体は、ダイマー種であり、４週間までのストレス条件下で最小の高分子量種が形成された。４週間までの４０℃／７５％ＲＨにおけるＤＰ保存中の電荷変異体レベルの変化を図１１に示す。製剤間での電荷変異体の形成速度の明確な傾向を全く観察しなかった。しかしながら、スクロース系製剤は、トレハロース系製剤と比べて、より低いレベルの電荷変異体を有しているように見える。
【０２５０】
１２週間までの２５℃／６０％ＲＨ（加速条件）におけるＤＰ保存中のサイズ変異体の変化を図１２に示す。２５℃／６０％ＲＨにおける凝集速度は、４０℃／７５％ＲＨにおける凝集速度とよく相関し、高温でのＤＰ保存中のランパリズマブ凝集を制限する点において、トレハロースがスクロースに対し、劣っていることをさらに実証する。１２週間までの２５℃／６０％ＲＨ（加速条件）における保存中、全ての製剤間での電荷変異体の形成速度の違いを全く観察しなかった（データ示さず）。２４週間までの５℃における保存中、ＤＰにおいてＳＥＣによるサイズ変異体又は電荷変異体のレベルの変化を全く観察しなかった（それぞれ図１３及び図１４）。１２週間の５℃での保存の後、製剤１のＤＰにおいてＮＲ  ＣＥ−ＳＤＳによるサイズ変異体のレベルの変化を全く観察しなかった（データ示さず）。
【０２５１】
議論
Ａ．ＮａＣｌ濃度測定
図２は、所与の溶液におけるランパリズマブの溶解度が、塩基性の電荷変異体のレベルが増加するときに、減少することを示す。したがって、ランパリズマブの溶解度を確保するために必要なＮａＣｌ濃度を決定するとき、塩基性の電荷変異体のレベルを制御することが重要である。図３に示される溶解度試験は、１００±１０ｍｇ／ｍＬのタンパク質濃度における５．５までのＤＰのｐＨ、２８±４ｍＭのＮａＣｌ濃度、及び４０±１０ｍＭのＨｉｓＣｌ濃度が、ＤＳにおける製造の可変性を可能にし、２２％までの塩基性の電荷変異体を含むランパリズマブの強固な溶解度を保証することを支持する。
【０２５２】
Ｂ．製剤スクリーニング
６カ月間の−２０℃の保存、８週間の５℃の保存、又は４週間の３０℃の保存の後、候補のＤＳ製剤間において、サイズ又は電荷変異体の形成速度の違いを全く検出しなかった。したがって、製剤の選択は、ＤＰ製剤の安定性の評価に基づいた。
【０２５３】
凍結乾燥保護剤の選択
製剤１及び２とそれぞれ比較したＤＰ製剤３及び４の凝集速度に基づいて、加速及びストレス条件下のスクロース凝集を最小化する点において、トレハロースがスクロースほど効果的でないように見える（図８及び１２）。さらに、電荷変異体のレベルは、ストレス条件下において、スクロースを含む対応する製剤と比べてトレハロースを含むＤＰ製剤でより速く増加した（図１１）。したがって、スクロースを、ランパリズマブ製剤のための凍結乾燥保護剤種として選択した。低い含水量において、凍結乾燥タンパク質／トレハロース系は、タンパク質／スクロース系と比べてより高いガラス転移速度を有する（Duddu等 (1997). The Relationship Between Protein Aggregation and Molecular Mobility Below the Glass Transition Temperature of Lyophilized Formulations Containing a Monoclonal Antibody. Pharm Research 14(5):596-600；Pikal MJ等 (2008). Solid State Chemistry of Proteins: II. The Correlation of Storage Stability of Freeze-Dried Human Growth Hormone (hGH) with Structure and Dynamics in the Glassy Solid. J Pharm Sci: 97(12):5106-21）が、これまでにスクロースが、凝集及び化学分解速度を減少するための優れた凍結乾燥保護剤であることが示されている（Ｐｉｋａｌ等、上述）。Ｐｉｋａｌ等は、化学分解及び凝集速度は、保存温度と固形製剤のガラス転移温度との差よりも中性子散乱により測定される高速ダイナミック時定数と相関する可能性があり、スクロースはトレハロースよりも高速ダイナミックの抑制を大きく示すと示唆する（Ｐｉｋａｌ等、上述）。ゼロ時点において、全てのＤＰ製剤の水分レベルは、０．６と０．８％ｗ／ｗの間であり、したがって残留水分がスクロース及びトレハロースベースの製剤の間の分解速度の違いを説明できるという可能性は低い。
【０２５４】
製剤の選択
予想通り、ストレス条件下において、ＤＰにおける凝集速度は、糖対タンパク質比と負に相関した（図９）。これは、製剤中のスクロースの量を最大化することが理想的であることを示す。製剤１及び５は、スクリーニングされた６つの製剤（対照を計数していない）で最大のスクロースレベルを有した。調査された全ての保存条件下において、製剤１と製剤５の間で、ＤＳ又はＤＰの安定性において違いが全く観察されなかった。しかしながら、製剤の選択時において、４０ｍＭより多いＨｉｓＣｌを含む溶液の硝子体内投与について公知の臨床経験が存在しなかった。製剤５は、６４ｍＭのＨｉｓＣｌを含み、したがって、ＤＰの緩衝能を増加させることによって追加の臨床的リスクを提示する。したがって、硝子体の平衡化されたｐＨは、他の製剤と比較して、製剤５の投与の際により低いであろう。したがって、製剤１は、より低い臨床的リスクを提示するため、製剤５よりも好ましい。さらに、１５ｍＭのＮａＣｌを含む製剤６において、ケーキ崩壊又は過度の不安定性を全く観察しなかった。これは、製剤１における７ｍＭのＮａＣｌは、凍結ケーキの崩壊又は巨視的な物理不安定性をもたらす可能性が低いことを示す。
【０２５５】
選択された製剤で製剤化される原体（プレ凍結乾燥）及び薬物製剤（凍結乾燥）は、表９並びに１０Ａ及び１０Ｂに説明される安定性データによって証明されるように、原体に対して−２０℃及び薬物製剤に対して５℃という推奨される保存条件下において、２年まで安定である。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７】
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【図１８】
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【図１９−１】
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【図１９−２】
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【図２０】
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【図２１】
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【図２２】
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【図２３−１】
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【図２３−２】
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【図２３−３】
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【図２３−４】
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【図２３−５Ａ】
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【図２３−５Ｂ】
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【図２３−６Ａ】
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【図２３−６Ｂ】
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【図２３−７Ａ】
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【図２３−７Ｂ】
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【図２３−８】
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【図２３−９】
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【図２３−１０Ａ】
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【図２３−１０Ｂ】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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