(57)【要約】本発明は、インテグリンα１０サブユニットまたはその断片または変異体を発現する哺乳類組織を検出し、インテグリンα１０サブユニットに特異的な薬物に投与することによって、中枢神経系の悪性新生物を診断し、治療する方法に関する。【選択図】図１１
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
インテグリンα１０サブユニットに特異的に結合する抗体を含む、中枢神経系における悪性新生物の治療に使用するための組成物。
【請求項２】
前記抗体が、細胞毒性部分、例えば、毒素、化学療法剤、及び放射性物質から選択される細胞毒性部分に共有結合している、請求項１に記載の使用のための組成物。
【請求項３】
前記毒素が、志賀及び志賀様毒素からなる群から選択されるリボソーム不活性化タンパク質；トリコサンチン及びルフィンなどのＩ型リボソーム不活性化タンパク質；リシン、凝集素、及びアブリンなどのＩＩ型リボソーム不活性化タンパク質；及びサポリンなどのリボソーム不活性化タンパク質である、請求項１〜２のいずれか１項に記載の使用のための組成物。
【請求項４】
前記抗体が、サイトカイン、リンホカイン、またはインターフェロンなどの生体応答調節物質に共有結合している、請求項１〜３のいずれか１項に記載の使用のための組成物。
【請求項５】
前記組成物が、１つ以上の化学療法剤をさらに含む、請求項１〜４のいずれか１項に記載の使用のための組成物。
【請求項６】
前記組成物が、少なくとも１つの薬学的に許容される希釈剤、担体、または賦形剤をさらに含む、請求項１〜５のいずれか１項に記載の使用のための組成物。
【請求項７】
前記インテグリンα１０サブユニットが、インテグリンα１０サブユニットの天然に存在する変異体、インテグリンα１０サブユニットのアイソフォーム、またはインテグリンα１０サブユニットのスプライス変異体である、請求項１〜６のいずれか１項に記載の使用のための組成物。
【請求項８】
前記抗体が、インテグリンα１０サブユニットを発現する細胞の細胞死を誘発することができ、及び／または、該細胞の成長及び／または増殖、及び移動を阻害することができる、請求項１〜７のいずれか１項に記載の使用のための組成物。
【請求項９】
前記細胞が、悪性細胞または腫瘍関連細胞である、請求項８に記載の使用のための組成物。
【請求項１０】
前記悪性細胞または腫瘍関連細胞が、グリア細胞；周皮細胞；内皮細胞；造血細胞；幹細胞；及び小膠細胞からなる群から選択される細胞を含む、請求項９に記載の使用のための組成物。
【請求項１１】
前記造血細胞が、造血幹細胞、Ｔ細胞、Ｂ細胞、形質細胞、ＮＫ細胞、樹状細胞、マクロファージ、及び単球からなる群から選択される、請求項１０に記載の使用のための組成物。
【請求項１２】
前記マクロファージが、腫瘍関連マクロファージ（ＴＡＭ）である、請求項１１に記載の使用のための組成物。
【請求項１３】
前記インテグリンα１０サブユニットが、インテグリンα１０β１ヘテロ二量体の一部である、請求項１〜１２のいずれか１項に記載の使用のための組成物。
【請求項１４】
前記治療が、予防、改善、または治癒である、請求項１〜１３のいずれか１項に記載の使用のための組成物。
【請求項１５】
前記治療が、前記対象中でインテグリンα１０サブユニットの検出時に開始される、請求項１〜１４のいずれか１項に記載の使用のための組成物。
【請求項１６】
中枢神経系における悪性新生物に関連付けられた細胞の細胞死を誘発する、及び／または、該細胞の成長及び／または増殖及び／または移動を阻害する方法であって、
前記細胞が、インテグリンα１０サブユニットを発現する、前記方法。
【請求項１７】
哺乳類の中枢神経系の悪性新生物に関連付けられた細胞を検出するのに使用されるインテグリンα１０サブユニットに特異性を有する抗体を含むかまたはからなる薬剤であって、
前記細胞が、インテグリンα１０サブユニットを発現する、前記薬剤。
【請求項１８】
哺乳類の中枢神経系における悪性新生物の検出方法であって、
ａ）インテグリンα１０サブユニットポリペプチドを含む抗原；及び／または
ｂ）インテグリンα１０サブユニットポリペプチドまたはその断片または変異体をコードするポリヌクレオチド転写産物
の存在または不在について、単離された試料中で分析することを含み、
ａ）の前記抗原及び／またはｂ）の前記ポリヌクレオチド転写産物の存在は、前記哺乳類の中枢神経系における悪性新生物を示す、前記方法。
【請求項１９】
悪性または腫瘍関連哺乳類細胞の検出方法であって、
ａ）インテグリンα１０サブユニットポリペプチドを含む第１抗原；及び／または
ｂ）インテグリンα１０サブユニットポリペプチドまたはその断片または変異体をコードする第１ポリヌクレオチド転写産物；及び
ｃ）ＥＧＦＲｖＩＩＩ、Ｎｅｓｔｉｎ、ＰＳＡ−ＮＣＡＭ、ＧＦＡＰ、ＰＤＧＦＲｂ（ＣＤ１４０ｂ）、ＰＥＣＡＭ−１（ＣＤ３１）、ＣＤ４５、ＣＤ６８、ＣＤ１６３、及びＣＤ２０６からなる群から選択されるポリペプチドを含む第２抗原；及び／または
ｄ）ＥＧＦＲｖＩＩＩ、Ｎｅｓｔｉｎ、ＰＳＡ−ＮＣＡＭ、ＧＦＡＰ、ＰＤＧＦＲｂ（ＣＤ１４０ｂ）、ＰＥＣＡＭ−１（ＣＤ３１）、ＣＤ４５、ＣＤ６８、ＣＤ１６３、及びＣＤ２０６からなる群から選択されるポリペプチドまたはその断片または変異体をコードする第２ポリヌクレオチド転写産物；
の存在または不在について、単離された試料中で分析することを含み、
ｃ）の前記第２抗原及び／またはｄ）の前記第２転写産物と共に、ａ）の前記第１抗原及び／またはｂ）の前記第１ポリヌクレオチド転写産物の存在は、前記哺乳類細胞が悪性細胞または腫瘍関連細胞であることを示す、前記方法。
【請求項２０】
前記試料が、悪性細胞または腫瘍関連細胞、例えば、グリア細胞；星状細胞；周皮細胞；内皮細胞；造血細胞；幹細胞；及び小膠細胞からなる群から選択される細胞を含む前記悪性細胞または腫瘍関連細胞を含む、請求項１８〜１９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２１】
前記造血細胞が、造血幹細胞、Ｔ細胞、Ｂ細胞、形質細胞、ＮＫ細胞、樹状細胞、腫瘍関連マクロファージ（ＴＡＭ）などのマクロファージ、及び単球からなる群から選択される、請求項２０に記載の方法。
【請求項２２】
前記細胞が、ＥＧＦＲｖＩＩＩ＋細胞、ネスチン＋細胞、ＰＳＡ−ＮＣＡＭ＋細胞、ＧＦＡＰ＋細胞、ＰＤＧＦＲｂ＋細胞（ＣＤ１４０ｂ＋細胞）、ＰＥＣＡＭ−１＋細胞（ＣＤ３１＋細胞）、ＣＤ４５＋細胞、ＣＤ６８＋細胞、ＣＤ１６３＋細胞、及びＣＤ２０６＋細胞、またはそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される、請求項１９〜２１のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２３】
前記細胞が、インテグリンα１０サブユニット＋及びＥＧＦＲｖＩＩＩ＋細胞である、請求項１９〜２２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２４】
前記細胞が、インテグリンα１０サブユニット＋及びネスチン＋細胞である、請求項１９〜２２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２５】
前記細胞が、インテグリンα１０サブユニット＋及びＰＳＡ−ＮＣＡＭ＋細胞である、請求項１９〜２２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２６】
前記細胞が、インテグリンα１０サブユニット＋及びＧＦＡＰ＋細胞である、請求項１９〜２２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２７】
前記細胞が、インテグリンα１０サブユニット＋及びＰＤＧＦＲｂ＋細胞（ＣＤ１４０ｂ＋細胞）である、請求項１９〜２２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２８】
前記細胞が、インテグリンα１０サブユニット＋及びＰＥＣＡＭ−１＋細胞（ＣＤ３１＋細胞）である、請求項１９〜２２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２９】
前記細胞が、インテグリンα１０サブユニット＋及びＣＤ４５＋細胞である、請求項１９〜２２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３０】
前記細胞が、インテグリンα１０サブユニット＋及びＣＤ６８＋細胞である、請求項１９〜２２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３１】
前記細胞が、インテグリンα１０サブユニット＋及びＣＤ１６３＋細胞である、請求項１９〜２２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３２】
前記細胞が、インテグリンα１０サブユニット＋及びＣＤ２０６＋細胞である、請求項１９〜２２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３３】
前記悪性新生物が、
ａ）以下のものから選択される神経上皮組織の腫瘍
ｉ）毛様細胞性星細胞腫（ＩＣＤ−Ｏ  ９４２１／１、ＷＨＯグレードＩ）、毛様類粘液性星細胞腫（ＩＣＤ−Ｏ  ９４２５／３、ＷＨＯグレードＩＩ）、上衣下巨細胞性星細胞腫（ＩＣＤ−Ｏ  ９３８４／１、ＷＨＯグレードＩ）、多形性黄色星状膠細胞腫（ＩＣＤ−Ｏ  ９４２４／３、ＷＨＯグレードＩＩ）、びまん性星細胞腫（ＩＣＤ−Ｏ  ９４００／３、ＷＨＯグレードＩＩ）、退形成性星細胞腫（ＩＣＤ−Ｏ  ９４０１／３、ＷＨＯグレードＩＩＩ）、膠芽腫（ＩＣＤ−Ｏ  ９４４０／３、ＷＨＯグレードＩＶ）、巨細胞性膠芽腫（ＩＣＤ−Ｏ  ９４４１／３、ＷＨＯグレードＩＶ）、膠肉腫（ＩＣＤ−Ｏ  ９４４２／３、ＷＨＯグレードＩＶ）、膠腫脳腫瘍（ＩＣＤ−Ｏ  ９３８１／３、ＷＨＯグレードＩＩＩ）から選択される星細胞系腫瘍、及び
ｉｉ）乏突起膠腫（ＩＣＤ−Ｏ  ９４５０／３、ＷＨＯグレードＩＩ）、及び退形成性乏突起膠腫（ＩＣＤ−Ｏ  ９４５１／３、ＷＨＯグレードＩＩＩ）から選択される乏突起神経膠腫瘍、及び
ｉｉｉ）乏突起膠星細胞腫（ＩＣＤ−Ｏ  ９３８２／３、ＷＨＯグレードＩＩ）、及び退形成性乏突起星細胞腫（ＩＣＤ−Ｏ  ９３８２／３、ＷＨＯグレードＩＩＩ）  から選択される乏突起膠細胞系腫瘍、及び
ｉｖ）上衣下腫（ＩＣＤ−Ｏ  ９３８３／１、ＷＨＯグレードＩ）、粘液乳頭状上衣腫（ＩＣＤ−Ｏ  ９３９４／１、ＷＨＯグレードＩ）、上衣腫（ＩＣＤ−Ｏ  ９３９１／３、ＷＨＯグレードＩＩ）、退形成性上衣腫（ＩＣＤ−Ｏ  ９３９２／３、ＷＨＯグレードＩＩＩ）から選択される上衣腫瘍、及び
ｖ）脈絡叢乳頭腫（ＩＣＤ−Ｏ  ９３９０／０、ＷＨＯグレードＩ）、非定型脈絡叢乳頭腫（ＩＣＤ−Ｏ  ９３９０／１、ＷＨＯグレードＩＩ）、及び脈絡叢乳頭癌（ＩＣＤ−Ｏ  ９３９０／３、ＷＨＯグレードＩＩＩ）から選択される脈絡叢腫瘍、及び
ｖｉ）星芽細胞腫（ＩＣＤ−Ｏ  ９４３０／３、ＷＨＯグレードＩ）、第３脳室脊索腫様膠腫（ＩＣＤ−Ｏ  ９４４４／１、ＷＨＯグレードＩＩ）、及び血管中心性膠腫（ＩＣＤ−Ｏ  ９４３１／１、ＷＨＯグレードＩ）から選択される他の神経上皮性腫瘍、及び
ｖｉｉ）小脳異形成性神経節細胞腫（レーミッテ・ダクロス病）（ＩＣＤ−Ｏ  ９４９３／０）、線維形成性乳児星細胞腫／神経節膠腫（ＩＣＤ−Ｏ  ９４１２／１、ＷＨＯグレードＩ）、胚芽異形成性神経上皮腫瘍（ＩＣＤ−Ｏ  ９４１３／０、ＷＨＯグレードＩ）、神経節細胞腫（ＩＣＤ−Ｏ  ９４９２／０、ＷＨＯグレードＩ）、神経節膠腫（ＩＣＤ−Ｏ  ９５０５／１、ＷＨＯグレードＩ）、退形成性神経節膠腫（ＩＣＤ−Ｏ  ９５０５／３、ＷＨＯグレードＩＩＩ）、中枢性神経細胞腫（ＩＣＤ−Ｏ  ９５０６／１、ＷＨＯグレードＩＩ）、脳室外神経細胞腫（ＩＣＤ−Ｏ  ９５０６／１、ＷＨＯグレードＩＩ）、小脳脂肪神経細胞腫（ＩＣＤ−Ｏ  ９５０６／１、ＷＨＯグレードＩＩ）、乳頭状グリア神経細胞性腫瘍（ＩＣＤ−Ｏ  ９５０９／１、ＷＨＯグレードＩ）、第４脳室ロゼット形成性グリア神経細胞性腫瘍（ＩＣＤ−Ｏ  ９５０９／１、ＷＨＯグレードＩ）、及び傍神経節腫（ＩＣＤ−Ｏ  ８６８０／１、ＷＨＯグレードＩ）から選択される神経細胞と混合性神経膠腫、及び
ｖｉｉｉ）松果体細胞腫（ＩＣＤ−Ｏ  ９３６１／１、ＷＨＯグレードＩ）、中間型松果体実質腫瘍（ＩＣＤ−Ｏ  ９３６２／３、ＷＨＯグレードＩＩ、ＩＩＩ）松果体芽腫（ＩＣＤ−Ｏ  ９３６２／３、ＷＨＯグレードＩＶ）、松果体部乳頭状腫瘍（ＩＣＤ−Ｏ  ９３９５／３、ＷＨＯグレードＩＩＩ）から選択される松果体領域の腫瘍、及び
ｉｘ）髄芽腫（ＩＣＤ−Ｏ  ９４７０／３、ＷＨＯグレードＩＶ）、大規模な球状髄芽腫（ＩＣＤ−Ｏ  ９４７１／３、ＷＨＯグレードＩＶ）、退形成性髄芽腫（ＩＣＤ−Ｏ  ９４７４／３、ＷＨＯグレードＩＶ）、中枢神経系原始神経外胚葉性腫瘍（ＩＣＤ−Ｏ  ９４７３／３、ＷＨＯグレードＩＶ）、中枢神経系神経芽細胞腫（ＩＣＤ−Ｏ  ９５００／３、ＷＨＯグレードＩＶ）、及び非定型奇形腫様／ラブドイド腫瘍（ＩＣＤ−Ｏ  ９５０８／３、ＷＨＯグレードＩＶ）から選択される胚芽腫瘍、及び
ｂ）以下のものから選択される脳神経と傍脊椎神経の腫瘍
ｉ）神経鞘腫（ＩＣＤ−Ｏ  ９５６０／０、ＷＨＯグレードＩ）
ｉｉ）神経線維腫（ＩＣＤ−Ｏ  ９５４０／０、ＷＨＯグレードＩ）、
ｉｉｉ）神経周膜腫（ＩＣＤ−Ｏ  ９５７１／０、９５７１／３、ＷＨＯグレードＩ、ＩＩ、ＩＩＩ）、及び
ｉｖ）悪性末梢神経鞘腫瘍（ＭＰＮＳＴ）（ＩＣＤ−Ｏ  ９５４０／３、ＷＨＯグレードＩＩ、ＩＩＩ、ＩＶ）、及び
ｃ）以下のものから選択される髄膜腫腫瘍
ｉ）髄膜腫（ＩＣＤ−Ｏ  ９５３０／０、ＷＨＯグレードＩ）、異型性髄膜腫（ＩＣＤ−Ｏ  ９５３９／１、ＷＨＯグレードＩＩ）、退形成性髄膜腫（ＩＣＤ−Ｏ  ９５３０／３、ＷＨＯグレードＩＩＩ）から選択される髄膜細胞腫、及び
ｉｉ）脂肪腫（ＩＣＤ−Ｏ  ８８５０／０）、血管脂肪腫（ＩＣＤ−Ｏ  ８８６１／０）、褐色脂肪腫（ＩＣＤ−Ｏ  ８８８０／０）、脂肪肉腫（ＩＣＤ−Ｏ  ８８５０／３）、孤立性線維性腫瘍（ＩＣＤ−Ｏ  ８８１５／０）、線維肉腫（ＩＣＤ−Ｏ  ８８１０／３）、悪性線維性組織球腫（ＩＣＤ−Ｏ  ８８３０／３）、平滑筋腫（ＩＣＤ−Ｏ  ８８９０／０）、平滑筋肉腫（ＩＣＤ−Ｏ  ８８９０／３）、横紋筋腫（ＩＣＤ−Ｏ  ８９００／０）、横紋筋肉腫（ＩＣＤ−Ｏ  ８９００／３）、軟骨腫（ＩＣＤ−Ｏ  ９２２０／０）、軟骨肉腫（ＩＣＤ−Ｏ  ９２２０／３）、骨腫（ＩＣＤ−Ｏ  ９１８０／０）、骨肉腫（ＩＣＤ−Ｏ  ９１８０／３）、骨軟骨腫（ＩＣＤ−Ｏ  ９２１０／０）、血管腫（ＩＣＤ−Ｏ  ９１２０／０）、類上皮血管内皮腫（ＩＣＤ−Ｏ  ９１３３／１）、血管周皮細胞腫（ＩＣＤ−Ｏ  ９１５０／１、ＷＨＯグレードＩＩ）、退形成性血管周皮細胞腫（ＩＣＤ−Ｏ  ９１５０／３、ＷＨＯグレードＩＩＩ）、及び血管肉腫（ＩＣＤ−Ｏ  ９１２０／３）３．２．２２、カポジ肉腫（ＩＣＤ−Ｏ  ９１４０／３）、ユーイング肉腫−ＰＮＥＴ（ＩＣＤ−Ｏ  ９３６４／３）から選択される間葉腫瘍、及び
ｉｉｉ）拡散黒色症（ＩＣＤ−Ｏ  ８７２８／０）、褐色細胞腫（ＩＣＤ−Ｏ  ８７２８／１）、悪性黒色腫（ＩＣＤ−Ｏ  ８７２０／３）、髄膜黒色腫（ＩＣＤ−Ｏ  ８７２８／３）から選択される原発性黒色腫病変、及び
ｉｖ）血管芽腫（ＩＣＤ−Ｏ  ９１６１／１、ＷＨＯグレードＩ）などのその他の脳脊髄膜病変、及び
ｄ）以下のものから選択される造血系腫瘍
ｉ）悪性リンパ腫（ＩＣＤ−Ｏ  ９５９０／３）４．２、形質細胞腫（ＩＣＤ−Ｏ  ９７３１／３）、及び
ｉｉ）顆粒球性肉腫（ＩＣＤ−Ｏ  ９９３０／３）、及び
ｅ）以下のものから選択されるトルコ鞍部腫瘍
ｉ）頭蓋咽頭腫（ＩＣＤ−Ｏ  ９３５０／１、ＷＨＯグレードＩ）
ｉｉ）顆粒細胞腫瘍（ＩＣＤ−Ｏ  ９５８２／０、ＷＨＯグレードＩ）
ｉｉｉ）下垂体細胞腫（ＩＣＤ−Ｏ  ９４３２／１、ＷＨＯグレードＩ）、及び
ｉｖ）腺下垂体の紡錘形膨大細胞腫（ＩＣＤ−Ｏ  ８９９１／０、ＷＨＯグレードＩ）
からなる群から選択される、請求項１〜３２のいずれか１項に記載の使用のための組成物、薬剤、または方法。
【請求項３４】
前記悪性新生物が、グレードＩＩ、ＩＩＩ、またはＩＶの神経膠腫などの神経膠腫である、請求項１〜３３のいずれか１項に記載の使用のための組成物、薬剤、または方法。
【請求項３５】
前記悪性新生物が、星細胞腫である、請求項１〜３４のいずれか１項に記載の使用のための組成物、薬剤、または方法。
【請求項３６】
前記悪性新生物が、一次性または二次性膠芽腫などの膠芽腫である、請求項１〜３５のいずれか１項に記載の使用のための組成物、薬剤、または方法。
【請求項３７】
前記悪性新生物が、髄芽腫である、請求項１〜３６のいずれか１項に記載の使用のための組成物、薬剤、または方法。
【請求項３８】
前記悪性新生物が、神経芽細胞腫である、請求項１〜３７のいずれか１項に記載の使用のための組成物、薬剤、または方法。
【請求項３９】
前記試料が、脳組織または脊髄組織試料である、請求項３３〜３８のいずれか１項に記載の使用のための組成物。
【請求項４０】
前記試料が、血液試料である、請求項３３〜３９のいずれか１項に記載の使用のための組成物。
【請求項４１】
前記抗体が、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、抗体断片、及び単鎖抗体からなる群から選択される、請求項１〜４０のいずれか１項に記載の使用のための組成物、薬剤、または方法。
【請求項４２】
前記抗体が、モノクローナル抗体である、請求項１〜４１のいずれか１項に記載の使用のための組成物、薬剤、または方法。
【請求項４３】
前記抗体が、非ヒト抗体、キメラ抗体、二重特異性抗体、ヒト化抗体、またはヒト抗体である、請求項１〜４２のいずれか１項に記載の使用のための組成物、薬剤、または方法。
【請求項４４】
少なくとも１つの抗体が、検出可能部分、例えば、フルオロフォア、酵素、または放射性トレーサ、または放射性同位体からなる群から選択される検出可能部分に共有結合している、請求項１〜４３のいずれか１項に記載の使用のための組成物、薬剤、または方法。
【請求項４５】
前記細胞毒性部分及び／または検出可能部分が、結合部分を介して前記抗体またはその抗原結合性断片に間接的に連結している、請求項１〜４４のいずれか１項に記載の使用のための組成物、薬剤、または方法。
【請求項４６】
前記抗体が、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＧ、及びＩｇＭからなる群から選択されるアイソタイプを有する、請求項１〜４５のいずれか１項に記載の使用のための組成物、薬剤、または方法。
【請求項４７】
インテグリンα１０サブユニットに特異的な前記抗体が、
ａ）ドイチェ・ザムルング・フォン・ミクロオルガニスメン・ウント・ツェルクルテューレン・ゲゼルシャフト・ミット・ベシュレンクター・ハフツングに受託番号ＤＳＭ  ＡＣＣ２５８３で寄託されたハイブリドーマ細胞株によって産生されたモノクローナル抗体；または
ｂ）ドイチェ・ザムルング・フォン・ミクロオルガニスメン・ウント・ツェルクルテューレン・ゲゼルシャフト・ミット・ベシュレンクター・ハフツングに受託番号ＤＳＭ  ＡＣＣ２５８３で寄託された前記ハイブリドーマによって産生された前記モノクローナル抗体によって結合したエピトープと同じエピトープへの結合を競合する抗体；または
ｃ）ａ）またはｂ）の断片、前記断片は、前記インテグリンα１０サブユニット鎖の細胞外Ｉドメインに特異的に結合することができる、
である、請求項１〜４６のいずれか１項に記載の使用のための組成物、薬剤、または方法。
【請求項４８】
放射性トレーサに共有結合したインテグリンα１０特異的抗体を含む、抗体薬物複合体。
【請求項４９】
神経膠腫、神経芽細胞腫、または髄芽腫などの中枢神経系の悪性新生物の診断に使用される、請求項４８に記載の抗体薬物複合体。
【請求項５０】
インテグリンα１０特異的抗体、及び放射性トレーサを含む、ナノ粒子。
【請求項５１】
神経膠腫、神経芽細胞腫、または髄芽腫などの中枢神経系の悪性新生物をインビトロ、インサイチュ、またはインビボで検出するためのキットであって、
前記キットは、インテグリンα１０サブユニットに特異的な抗体、インテグリンα１０サブユニット抗原に特異的に結合することができるペプチド、またはインテグリンα１０サブユニット転写産物またはその相補体に特異的にハイブリダイズすることができるポリヌクレオチドプローブ、及び任意に、取扱説明書を含む、前記キット。
【請求項５２】
中枢神経系における悪性新生物に罹患している対象の治療方法であって、
ａ）対象が、請求項３３〜３８のいずれか１項に記載の中枢神経系の悪性新生物に罹患しているかどうかを判断すること；及び
ｂ）インテグリンα１０サブユニットに特異的に結合する抗体の治療的に有効な量を、中枢神経系の悪性新生物と診断された対象に投与すること
を含む、前記方法。
【請求項５３】
中枢神経系における悪性新生物の治療のための治療薬の製造のための、インテグリンα１０サブユニットに特異的に結合する抗体を含む、組成物の使用。
【請求項５４】
哺乳類における腫瘍関連の血管新生の阻害方法であって、
抗インテグリンα１０サブユニット抗体の治療的に有効な量を前記哺乳類に投与することを含む、前記方法。
【請求項５５】
リボソーム不活性化タンパク質などの細胞毒性剤に共有結合した抗インテグリンα１０サブユニット特異的抗体を含む、抗体薬物複合体。
【請求項５６】
前記リボソーム不活性化タンパク質が、志賀及び志賀様毒素；トリコサンチン及びルフィンなどのＩ型リボソーム不活性化タンパク質；リシン、凝集素、及びアブリンなどのＩＩ型リボソーム不活性化タンパク質；及びサポリンからなる群から選択される、請求項５５に記載の抗体薬物複合体。
【請求項５７】
前記インテグリンα１０サブユニットが、インテグリンα１０β１ヘテロ二量体の一部である、請求項１〜５６のいずれか１項に記載の組成物、薬剤、方法、使用、または抗体薬物複合体。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、インテグリンα１０サブユニット発現に基づいて、中枢神経系における悪性腫瘍を検出し、治療する方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
原発性脳腫瘍は、脳組織内で生じる。原発性脳腫瘍にはいくつかのタイプがある。診断される悪性原発性脳腫瘍の最も一般的なタイプは、神経膠腫の群に属する。神経膠腫は、いくつかのタイプのグリア細胞、例えば、星状細胞、乏突起膠細胞、及び上衣細胞から発達し得る。神経膠腫は、成長の可能性、及び腫瘍の悪性度を反映して、悪性度の低いもの（Ｉ）から悪性度の高いもの（ＩＶ）に格付けされる。
【０００３】
膠芽腫（多形性膠芽腫、ＧＢＭとしても知られる）は、神経膠腫の群に属し、悪性度の高い神経膠腫として格付けされる。これは、最も一般的で最も悪性度の高いタイプの原発性脳腫瘍である。世界保健機関の分類に記載されているように、膠芽腫腫瘍は、未分化細胞に囲まれた壊死性組織の小さな領域の存在により特徴付けられる。この特徴、並びに過形成性血管の存在により、この腫瘍は、これらの特徴を有していないグレードＩＩＩ星細胞腫から区別される。形態のみに基づいていない新興分類スキームは、これらの腫瘍をさらに区別する分子差を組み込む可能性がある。従って、膠芽腫は、それらの分子発現パターンに応じて、４つの異なるサブタイプでさらに特徴付けることができる（Ｖｅｒｈａａｋ  ｅｔ  ａｌ，２０１０；Ｄｕｎｎ  ｅｔ  ａｌ，２０１２）。古典的、間葉系、前神経、及び神経サブタイプは、上皮成長因子受容体（ＥＧＦＲ）、神経線維腫症（ＮＦ１）、血小板由来成長因子受容体Ａ（ＰＤＧＦＲＡ）、及びイソクエン酸デヒドロゲナーゼ（ＩＤＨ１）の異常及び遺伝子発現によって定義される。
【０００４】
膠芽腫は、異なる種類の細胞を含有する非常に異質な腫瘍であり、患者間の細胞含有物には大きな変動がある。発達している細胞型は、例えば、星状細胞、乏突起膠細胞、及び線維芽細胞である。腫瘍細胞は、隣接組織に非常に急速に広がって浸潤し、放射線及び化学療法の両方に強い耐性を呈する。この疾患の約２８，０００件の新しい症例が、米国及び欧州連合で毎年診断されている（情報源：米国国立癌記録所）。
【０００５】
膠芽腫は、最も致命的な脳腫瘍である。治療しないと、平均生存期間は、４ヵ月であり、可能な治療をしても、約１５ヵ月である。多くの患者は、診断から６ヵ月よりも長く生存せず、ほとんどは、２年以内に死亡する。５年も生存するのは、ほんのわずかである。
【０００６】
今日現在、具体的な手術前の臨床検査は、ＧＢＭの診断に役立たない。コンピュータ断層撮影、核磁気共鳴画像（コントラスト有無）、陽電子放出断層撮影、及び磁気共鳴分光法を含む、脳のイメージング検査は、診断を行うために不可欠である。診断を確かめるため、脳組織の病理学的検査を行う必要がある。腫瘍遺伝学は、アジュバント療法への応答を予測するのに有用である。しかしながら、今日、異なるタイプの膠芽腫間の治療計画には違いがない。
【０００７】
膠芽腫は、最も一般的かつ最も悪性度の高い、中枢神経系の悪性新生物である。発症率は、２〜３症例／１０００００個体である。今日の治療には、手術、化学療法、及び放射線を伴う。標準治療は、脳圧を下げるための最大限の外科的切除、放射線療法、及びテモゾロミドによる併用療法及びアジュバント化学療法からなる。治療しないと、平均生存期間は、４．５ヵ月であり、利用可能な現在の治療により、これは、１５ヵ月に延ばすことができる。疾患の重篤度のため、脳の膠芽腫及び他の悪性新生物を治療する新薬を見つけることが試みられている。しかしながら、これらも従来の療法のいずれも、膠芽腫患者の任意の著しい改善、または生存率の増加をもたらさない。
【０００８】
従って、神経膠腫を含む、中枢神経系の悪性新生物を検出し、診断し、治療するより効果的な方法を見つけることが急務である。
【発明の概要】
【０００９】
本発明者らは、タンパク質インテグリンα１０β１が、中枢神経系の悪性新生物から得られた組織中で発現されることを見出した。この知見に基づいて、本発明者らは、中枢神経系の悪性新生物を診断し、治療することを目的として、インテグリンα１０サブユニットを検出するための方法及びツールを開発した。
【００１０】
従って、本発明の目的は、患者の中枢神経系における悪性新生物の存在を判断し、これらを治療する方法を提供する。
【００１１】
一態様では、本発明は、インテグリンα１０サブユニットに特異的に結合する抗体を含む、中枢神経系における悪性新生物の治療に使用するための組成物に関する。
【００１２】
別の態様では、本発明は、それを必要とする対象の中枢神経系における悪性新生物を治療する方法であって、インテグリンα１０サブユニットに特異的に結合する抗体を前記対象に投与することを含む方法に関する。
【００１３】
さらに別の態様では、本発明は、中枢神経系における悪性新生物に罹患している対象の治療方法であって、ａ）本明細書に記載された方法に従って、対象が中枢神経系の悪性新生物に罹患しているかどうかを判断すること；及びｂ）前述の実施形態のいずれか１つで定義されたように、インテグリンα１０サブユニットに特異的に結合する抗体の治療的に有効な量を、中枢神経系の悪性新生物と診断された対象に投与することを含む方法に関する。
【００１４】
別の態様では、本発明は、中枢神経系における悪性新生物の治療のための治療薬の製造のための、インテグリンα１０サブユニットに特異的に結合する抗体を含む組成物の使用に関する。
【００１５】
別の態様では、本発明は、哺乳類における腫瘍関連の血管新生の阻害方法であって、前述の態様のいずれか１つに従って、抗インテグリンα１０サブユニット抗体の治療的に有効な量を前記哺乳類に投与することを含む方法に関する。
【００１６】
別の態様では、本発明は、放射性トレーサまたは細胞毒性部分に共有結合したインテグリンα１０特異的抗体を含む抗体薬物複合体に関する。
【００１７】
別の態様では、本発明は、インテグリンα１０特異的抗体、及び放射性トレーサを含むナノ粒子に関する。
【００１８】
別の態様では、本発明は、神経膠腫などの中枢神経系の悪性新生物をインビトロ、インサイチュ、またはインビボで検出するためのキットであって、インテグリンα１０サブユニットに特異的な抗体、インテグリンα１０サブユニット抗原に特異的に結合することができるペプチド、またはインテグリンα１０サブユニット転写産物またはその相補体に特異的にハイブリダイズすることができるポリヌクレオチドプローブ、及び任意に、取扱説明書を含むキットに関する。
【００１９】
本発明のさらなる目的は、神経膠腫などの中枢神経系の悪性新生物の検出、診断、及び有効かつ標的治療に使用することができる生成物を提供することである。
【００２０】
第１態様では、本発明は、哺乳類の中枢神経系における悪性新生物の検出方法であって、
ｉ）インテグリンα１０サブユニットポリペプチドを含む抗原、または
ｉｉ）インテグリンα１０サブユニットポリペプチドまたはその断片または変異体をコードするポリヌクレオチド転写産物
の存在または不在について、単離された試料中で分析することを含み、
ａ）の前記抗原及び／またはｂ）の前記ポリヌクレオチド転写産物の存在は、前記哺乳類の中枢神経系における悪性新生物を示す方法に関する。
【００２１】
別の態様では、本発明は、哺乳類の中枢神経系における悪性新生物の検出方法であって、
ａ）インテグリンα１０サブユニットポリペプチドまたはインテグリンα１０サブユニットポリヌクレオチド転写産物に特異的に結合することができる分子プローブを哺乳類に投与する工程、前記プローブは、光子を発することができる部分に共有結合している、及び
ｂ）前記部分から発した光子を検出し、中枢神経系またはその一部の画像を形成する工程
を含み、
前記部分からの光子の局在発光が、前記哺乳類の中枢神経系における悪性新生物を示す、方法に関する。
【００２２】
別の態様では、本発明は、哺乳類の中枢神経系における悪性新生物を診断するためのインビトロ診断方法であって、
ａ）インビトロ試料を、インテグリンα１０サブユニットポリペプチドまたはインテグリンα１０サブユニットポリヌクレオチド転写産物に特異的に結合することができる分子プローブに接触させる工程、前記プローブは、光子を発することができる部分に共有結合している、及び
ｂ）前記部分から発した光子を検出し、試料の画像を形成する工程
を含み、
前記部分からの光子の局在発光が、前記哺乳類の中枢神経系における悪性新生物を示す、方法に関する。
【００２３】
別の態様では、本発明は、単離された試料におけるインテグリンα１０サブユニットを検出するためのインビトロ方法であって、
ａ）インテグリンα１０サブユニットポリペプチドを含む抗原、または
ｂ）インテグリンα１０サブユニットポリペプチドまたはその断片または変異体をコードするポリヌクレオチド転写産物、
の存在または不在について、単離された試料中で分析することを含み、
ａ）の抗原及び／またはｂ）のポリヌクレオチド転写産物の存在は、前記哺乳類の中枢神経系における悪性新生物を示す、方法に関する。
【００２４】
別の態様では、本発明は、生体試料中の中枢神経系の悪性新生物をインビトロ、インサイチュ、またはインビボで検出するための、インテグリンα１０サブユニットに特異的に結合する抗インテグリンα１０サブユニット特異的抗体の使用に関する。
【００２５】
別の態様では、本発明は、生体試料中の中枢神経系の悪性新生物をインビトロ、インサイチュ、またはインビボで検出するための、ハイブリダイゼーション反応においてインテグリンα１０サブユニットｍＲＮＡまたはｃＤＮＡに結合するインテグリンα１０サブユニット核酸プローブの使用に関する。
【００２６】
別の態様では、本発明は、中枢神経系の悪性新生物を診断するためのキットの調製におけるインテグリンα１０サブユニット核酸プローブ化合物の使用に関する。
【００２７】
別の態様では、本発明は、中枢神経系の悪性新生物を診断するためのキットの調製における、インテグリンα１０サブユニットに結合する抗インテグリンα１０サブユニット特異的抗体の使用に関する。
【００２８】
別の態様では、本発明は、対象が中枢神経系の悪性新生物を有するかどうかを診断、監視、または判断するための診断剤の製造のためのインテグリンα１０サブユニット核酸プローブ化合物の使用であって、前記診断剤は、生体試料中のインテグリンα１０サブユニットポリヌクレオチドの存在を測定するために製造され、前記試料中の前記インテグリンα１０サブユニットポリヌクレオチドの存在は、前記対象の中枢神経系の悪性新生物を示す、使用に関する。
【００２９】
別の態様では、本発明は、哺乳類が中枢神経系の悪性新生物を有するかどうかを診断、監視、または判断するための診断剤の製造のための、インテグリンα１０サブユニットに結合する抗インテグリンα１０サブユニット特異的抗体の使用であって、前記診断剤は、試料中のインテグリンα１０サブユニットポリペプチドの存在を測定するために製造され、前記試料中の前記インテグリンα１０サブユニットポリペプチドの存在は、前記哺乳類の中枢神経系の悪性新生物を示す、使用に関する。
【図面の簡単な説明】
【００３０】
【図１】脳の悪性新生物、及びそれらの進行の概略図である。悪性新生物は、それらの見かけ上の形態に従って表現型的に分類され、腫瘍の組織学的特徴に基づいて、それらの重篤度に従って格付けされる。この図に示すものは、神経膠腫の主要な分類、及び正常細胞から膠芽腫への推定の腫瘍進行経路である。
【図２】インテグリンα１０は、膠芽腫腫瘍組織から単離された細胞によって発現される。インテグリンα１０に対して指向された抗体を使用することで、免疫蛍光染色で視覚化した膠芽腫細胞株中の膠芽腫細胞でインテグリンα１０が特異的かつ強力に発現されることが示された。
【図３】インテグリンα１０は、膠芽腫組織中の細胞によって発現される。インテグリンα１０に対して指向された抗体を使用することで、免疫蛍光染色で視覚化した膠芽腫組織試料からなる患者の評価材料（ｐａｔｉｅｎｔ  ｍａｔｅｒｉａｌ）中の膠芽腫細胞でインテグリンα１０が特異的かつ強力に発現されることが示された。
【図４】インテグリンα１０は、膠芽腫組織中で検出されるが、影響を受けていない脳組織中では検出されない。図４Ａは、典型的な脳形態を有する患者試料の一部を示すが、図４Ｂは、悪性脳組織（多形性膠芽腫）を有する同じ試料の別の一部を示す。インテグリンα１０サブユニットに対して指向されたポリクローナル抗体（Ｃａｍｐｅｒ  ｅｔ  ａｌ（１９９８）Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ．２７３（３２）：２０３８３−９）を用いて、膠芽腫細胞でインテグリンα１０サブユニットが特異的かつ強力に発現されるが、形態学的に影響を受けていない脳組織ではインテグリンα１０サブユニットの発現は無視できるほどであったことが示された。
【図５】インテグリンα１０の発現は、異なるグレードの神経膠腫で差次的に検出される。インテグリンα１０に対して指向された抗体を使用することで、免疫組織化学染色で視覚化した、グレードＩＩ星細胞腫（少数の細胞；矢印を参照）（Ａ）、グレードＩＩＩ星細胞腫（Ｂ）、グレードＩＶ星細胞腫としても知られる多形性膠芽腫（Ｃ）からなる患者の脳腫瘍組織試料中の細胞でインテグリンα１０が特異的に発現されることが示された。インテグリンα１０の発現は、グレードと共に増加し、グレードＩＩＩ及びＩＶの星細胞腫で強力に発現される。血管中の細胞の陽性染色は、全てのグレードの神経膠腫（Ｄ）で見ることができる。
【図６】神経芽細胞腫及び髄芽腫中のインテグリンα１０の発現。インテグリンα１０に対して指向された抗体を使用することで、免疫組織化学で視覚化したように、患者由来の神経芽細胞腫腫瘍組織（Ａ）、及び髄芽腫腫瘍組織（Ｂ）中の細胞でインテグリンα１０が特異的かつ強力に発現されることが示された。
【図７】インテグリンα１０は、いくつかの脳腫瘍組織中で検出される。差次的遺伝子発現分析、及び患者の脳腫瘍組織材料中の遺伝子発現の検証のために脳癌ｃＤＮＡアレイを用いた。病理学者が検証した組織の高品質の全ＲＮＡから各アレイのｃＤＮＡを合成し、正規化し、２回連続したｑＰＣＲ分析においてベータアクチンで検証し、臨床情報と一緒に分析した。図は、２つのランの平均相対定量（ＲＱ）値を示す。図から分かるように、インテグリンα１０サブユニットのｍＲＮＡは、星細胞腫、退形成性星細胞腫、線維性星細胞腫、多形性膠芽腫、脳の血管周囲細胞腫、髄膜腫、血管腫髄膜腫、異型性髄膜腫、線維性髄膜腫、髄膜皮性髄膜腫、小嚢胞性髄膜腫、分泌性髄膜腫、乏突起膠星細胞腫、退形成性乏突起星細胞腫、乏突起神経膠腫、及び退形成性乏突起神経膠腫で検出することができる。
【図８】膠芽腫組織中の細胞のＣＤ１６３及びＣＤ２０６によるインテグリンα１０の共局在化。図８Ａは、ＤＡＰＩでＤＮＡを標識した脳腫瘍膠芽腫組織の共焦点顕微鏡イメージングを示す。図８Ｂは、位相差顕微鏡で視覚化した組織の顕微鏡イメージングを示す。図８Ｃは、抗ＣＤ１６３抗体を用いた腫瘍組織中のＣＤ１６３発現の共焦点顕微鏡イメージングを示す。図８Ｄは、抗インテグリンα１０サブユニット抗体を用いた腫瘍組織中のインテグリンα１０サブユニット発現の共焦点顕微鏡イメージングを示す。図８Ｅは、組織中の抗ＣＤ２０６抗体を用いた腫瘍組織中のＣＤ２０６発現の共焦点顕微鏡イメージングを示す。図８Ｆは、図８Ａ〜Ｅの複合体を示し、ＣＤ１６３、インテグリンα１０サブユニット、及びＣＤ２０６の共局在化を示す。
【図９】膠芽腫組織中の細胞のＥＧＦＲｖＩＩＩによるインテグリンα１０の共局在化。図９Ａは、ＤＡＰＩでＤＮＡを標識した脳腫瘍膠芽腫組織の共焦点顕微鏡イメージングを示す。図９Ｂは、位相差顕微鏡で視覚化した組織の顕微鏡イメージングを示す。図９Ｃは、抗ＥＧＦＲｖＩＩＩ抗体を用いた腫瘍組織中のＥＧＦＲｖＩＩＩ発現の共焦点顕微鏡イメージングを示す。図９Ｄは、抗インテグリンα１０サブユニット抗体を用いた腫瘍組織中のインテグリンα１０サブユニット発現の共焦点顕微鏡イメージングを示す。図９Ｅは、図９Ａ〜Ｄの複合体を示し、ＥＧＦＲｖＩＩＩ、及びインテグリンα１０サブユニットの共局在化を示す。
【図１０】インテグリンα１０サブユニットに対する抗体は、膠芽腫細胞の球形成を阻害する。この図は、膠芽腫細胞のインテグリンα１０サブユニットに結合しているモノクローナル抗体が、未処理細胞と比較して球形成能を減少させることができたことを示す。この効果は、ＩｇＧ対照抗体で処置した細胞では見られなかった。
【図１１】インテグリンα１０サブユニットに対する抗体は、膠芽腫細胞の生存性及び／または成長を減少させる。この図は、神経膠腫（ＧＢＭ）細胞が、ＷＳＴ−１アッセイを用いて、インテグリンα１０サブユニットに対して非抱合型モノクローナル抗体による治療に敏感であることを示す。抗インテグリンα１０抗体による治療は、未処理細胞と比較して、膠芽腫細胞の細胞生存性及び／または成長を減少させた。
【図１２】インテグリンα１０サブユニットに対する抗体は、膠芽腫細胞の細胞生存及び／または増殖を減少させる。この図は、α１０に対するモノクローナル抗体による膠芽腫細胞の治療後、サポリンに抱合された（α１０抗体に結合している）二次抗体を添加することで、対照抗体による治療と比較して、膠芽腫細胞の生存及び／または増殖が減少したことを示す。
【発明を実施するための形態】
【００３１】
定義
本明細書で使用する場合、「抗インテグリンα１０抗体」または「抗インテグリンα１０サブユニット抗体」は、ヘテロ二量体タンパク質であるインテグリンα１０β１の少なくともα１０サブユニットを認識し、それに結合することができる抗体を指す。これらの抗体は、ヘテロ二量体タンパク質であるインテグリンα１０β１のエピトープを認識する抗体であってもよく、エピトープは、α１０及びβ１サブユニットの両方のアミノ酸残基を含む。
【００３２】
本明細書で使用する場合、「インテグリンα１０」または「インテグリンα１０サブユニット」は、ヘテロ二量体タンパク質であるインテグリンα１０β１のα１０サブユニットを指す。この表示は、α１０サブユニットに結合したβ１サブユニットの存在を除外しないため、インテグリンα１０β１ヘテロ二量体の四次構造を形成する。
【００３３】
本明細書で使用する場合、「二重特異性抗体」は、各々が異なる抗原に結合する２つの異なる可変ドメイン結合部位（Ｆｖ）を有する抗体を指す。
【００３４】
本明細書で使用する場合、「対象」は、齧歯類、ネコ科、イヌ科、及び霊長類などの哺乳類を指す。好ましくは、本発明による対象は、ヒトである。
【００３５】
本明細書で使用する場合、単数形態「ａ」、「ａｎ」、及び「ｔｈｅ」は、文脈がそうではないと明確に述べない限り、複数の指示対象を含む。従って、例えば、「抗体」への参照には、複数のそのような抗体が含まれる。
【００３６】
本明細書で使用する場合、「生体試料」は、任意の対象、及び任意の対象から得られた種々の試料タイプを包含する。開示された方法で有用な生体試料の例としては、対象、液体組織試料、例えば、血液、または固体組織試料、例えば、生検材料または組織培養またはそれ由来の細胞及びその子孫が挙げられるが、これらに限定されない。例えば、生体試料には、対象から収集した組織試料から得られた細胞が含まれる。従って、生体試料は、臨床試料、培養中の細胞、細胞上清、細胞溶解物、及び組織試料、例えば、成人脳などの脳由来の組織試料、脳由来の腫瘍試料を含む中枢神経系由来の組織試料などを包含する。
【００３７】
本明細書で使用する場合、「検出」、「を検出する」、「を検出すること」は、対照を参照して、または参照無しでの（レベルを測定する）定性的及び／または定量的検出が含まれ、所与の標的、具体的には、インテグリンα１０サブユニットという標的の存在、不在、または量の同定をさらに指す。
【００３８】
本明細書で使用する場合、「を分析すること」は、対照を参照して、または参照無しでの（レベルを測定する）定性的及び／または定量的検出が含まれ、所与の標的、具体的には、インテグリンα１０サブユニットという標的の存在、不在、または量の同定をさらに指す。
【００３９】
「放射性トレーサ」または「放射性標識」は、１つ以上の原子が放射性同位体によって置換されており、その放射性崩壊のおかげで、放射性同位体が反応物質から生成物へと辿る経路を追跡することによって、化学反応のメカニズムを探るために使用することができる化学化合物である。
【００４０】
水素、炭素、リン、硫黄、及びヨウ素の放射性同位体は、生化学反応の経路を追跡するのに広く使用されている。放射性トレーサは、細胞または組織などの神経系内の物質の分布を追跡するために使用することもできる。放射性トレーサは、ＰＥＴスキャン、ＳＰＥＣＴスキャン、及びテクネチウムスキャンなどの種々のイメージングシステムの基礎を形成している。用語「放射性トレーサ」には、１３１ヨウ素などの治療用量の放射線を放出する放射性同位体が含まれる。
【００４１】
詳細な説明
本発明者らは驚くべきことに、遺伝子ＩＴＧＡ１０によってコードされるインテグリンα１０サブユニット（ユニプロット：Ｏ７５５７８）が、特に、脳の悪性新生物由来の中枢神経系組織の生検から得られた組織で発現されることを見出した。この知見に基づいて、本発明者らは、インテグリンα１０サブユニットを検出する方法及びツールを開発し、中枢神経系の悪性新生物、及び神経膠腫などのサブタイプを診断及び／または治療することができることを実証した。
【００４２】
Ｉ．中枢神経系の悪性新生物の治療
一態様では、本発明は、１つ以上の中枢神経系の悪性新生物の治療に関する。好ましい実施形態では、治療は、本明細書に記載されるように、特異的な抗インテグリンα１０サブユニット抗体を用いて行われる。抗体は、以下に概説するように、医薬組成物中に含まれるように調製されるのが好ましい。
【００４３】
医薬組成物、及びその投与
一実施形態では、本発明は、本発明による抗体及びその機能的等価物を含む医薬組成物に関する。本発明はさらに、抗体を含む臨床状態を治療するための薬物、前記抗体の投与を含む、中枢神経系の悪性新生物を治療する方法、または臨床状態を治療するための薬物を調製するための前記抗体の使用に関する。
【００４４】
臨床状態は、本明細書で言及される状態のいずれであってもよい。抗インテグリンα１０サブユニット抗体を投与する必要がある個体は、前記状態に罹患しているかまたは前記臨床状態を獲得するリスクのある任意の個体である。好ましくは、個体は、ヒトである。
【００４５】
治療は、治癒、苦痛緩和、改善的治療、及び／または予防的治療であってもよい。
【００４６】
本発明の医薬組成物は、インテグリンα１０サブユニットの細胞外ドメイン内のエピトープ特異的に認識する少なくとも１つの抗体またはその機能的等価物（本明細書の上記及び下記では、「抗インテグリンα１０抗体」または「抗インテグリンα１０サブユニット抗体」と呼ばれる）の医薬有効量を含むのが好ましい。例えば、血液または組織試料中のインテグリンα１０β１を検出するインビトロ目的のために、インテグリンα１０β１の細胞質ドメインを認識することができる抗体を使用してもよい。
【００４７】
本明細書で言及される医薬有効量は、典型的には、前記医薬組成物を受けた個体で所望の反応を誘発する抗インテグリンα１０サブユニット抗体の量である。
【００４８】
抗インテグリンα１０サブユニット抗体の医薬有効量は、投与すべき個体、特に、前記個体のサイズ、並びに臨床状態、及び具体的な投与モードに依る。しかしながら、一般に、１ｍｇ〜５０００ｍｇの範囲で、好ましくは、１０ｍｇ〜３０００ｍｇの範囲で、より好ましくは、５０ｍｇ〜１０００ｍｇの範囲で、例えば、１００ｍｇ〜７５０ｍｇの範囲で、例えば、１５０ｍｇ〜５００ｍｇの範囲で、例えば、２００ｍｇ〜４００ｍｇの範囲で、例えば、２５０ｍｇ〜３５０ｍｇの範囲で、例えば、約３００ｍｇのインテグリンα１０サブユニット抗体を１回投与当たり成人のヒトに投与すべきである。
【００４９】
本発明の組成物は、非経口投与に適した医薬組成物であってもよい。そのような組成物は、湿潤剤または乳化剤、抗酸化剤、ｐＨ緩衝剤、静菌化合物、及び製剤を個体の体液、好ましくは、血液と等張にさせる溶質を含み得る水性及び非水性の滅菌注射溶液；及び懸濁剤または増粘剤を含み得る水性及び非水性の滅菌懸濁液を含むのが好ましい。医薬組成物は、単回投与用または多回投与用容器、例えば、密封アンプル、及びバイアルで提示してもよく、使用直前に滅菌液体担体の添加のみを必要とする凍結乾燥状態で保管してもよい。
【００５０】
好ましくは、本発明の組成物は、細胞、組織、または有機体で使用するために非滅菌または滅菌であってもよい１つ以上の適切な医薬賦形剤、例えば、個体への投与に適した医薬賦形剤を含む。そのような賦形剤としては、生理食塩水、緩衝生理食塩水、デキストロース、水、グリセロール、エタノール、及びこれらの賦形剤の種々の量の組み合わせが挙げられ得るが、これらに限定されない。製剤は、投与モードに適合すべきである。本発明はさらに、本発明の上述の組成物の成分の１つ以上で充填された１つ以上の容器を含むパーツの医薬キットに関する。非水性賦形剤の例は、プロピレングリコール、プロエチレングリコール、オリーブ油などの植物油、及びオレイン酸エチルなどの注射可能な有機エステルが挙げられる。
【００５１】
好ましくは、本発明の医薬組成物は、液体溶液または懸濁液のいずれかとして注射可能な形態で調製され；さらに、注射前に溶液または液体中の懸濁液に適した固体形態も本発明の範囲内である。調製物は、乳化してもよく、またはリポソームに封入されてもよい。
【００５２】
抗インテグリンα１０サブユニット抗体は、単体で、または他の化合物と組み合わせて、同時または任意の順序で順次に投与してもよい。
【００５３】
投与は、例えば、注射または輸液を介して非経口であってもよい。非経口注射は、例えば、脳室内、腫瘍内、静脈内、筋肉内、皮内、または皮下注射であってもよい。好ましくは、前記投与は、注射または輸液による非経口である。
【００５４】
抗インテグリンα１０サブユニット抗体は、できるだけ頻繁に投与すべきであるため、抗インテグリンα１０サブユニット抗体は、１回以上、例えば、少なくとも２回、例えば、少なくとも３回、例えば、少なくとも４回、例えば、少なくとも５回、例えば、１〜１００回の範囲、例えば、１〜５０回の範囲、１〜２５回の範囲、例えば、１〜１０回の範囲で投与してもよい。
【００５５】
好ましくは、２回の投与間は少なくとも１日、例えば、少なくとも２日、例えば、少なくとも３日、例えば、少なくとも５日、例えば、少なくとも１週、例えば、少なくとも２週、例えば、少なくとも１ヵ月、例えば、少なくとも６ヵ月、例えば、少なくとも１年、例えば、少なくとも２年、例えば、少なくとも３年、例えば、少なくとも５年、例えば、少なくとも１０年である。
【００５６】
化学療法剤は、抗インテグリンα１０抗体などのインテグリンα１０結合タンパク質を用いて、神経膠腫などの中枢神経系の悪性新生物を標的にすることができる。他の実施形態では、神経膠腫などの中枢神経系の悪性新生物は、適当なエフェクター機能、例えば、補体を活性化する能力をもつ抗インテグリンα１０サブユニット抗体で治療することができる。
【００５７】
一態様では、本発明は、インテグリンα１０サブユニットに特異的に結合する抗体を含む、中枢神経系における悪性新生物の治療に使用するための組成物に関する。
【００５８】
一実施形態では、抗体は、配列番号２（インテグリンα１０の細胞外ドメイン）を含むかまたはからなるポリペプチドに特異的に結合し、別の実施形態では、抗体は、配列番号３（インテグリンα１０の細胞外Ｉドメイン）を含むかまたはからなるポリペプチドに特異的に結合する。
【００５９】
一実施形態では、抗体は、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、及び、Ｆａｂ断片、Ｆａｂ’断片、Ｆ（ａｂ’）２断片、及びＦｖ断片、例えば、単鎖可変断片（ｓｃＦｖ）、及び単ドメイン抗体からなる群から選択される抗体断片などの抗体断片からなる群から選択される。
【００６０】
治療用途に使用される抗体は、好ましくは、ヒト定常領域をもつ、好ましくは、キメラ、ヒト化、または完全ヒト抗体である。
【００６１】
一実施形態では、抗体が、非ヒト抗体、キメラ抗体、ヒト化抗体、ヒト抗体、または二重特異性抗体などのヘテロ特異的抗体である。
【００６２】
抗体は、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＧ、及びＩｇＭからなる群から選択されるアイソタイプを有してもよい。ＩｇＧアイソタイプは、例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、及びＩｇＧ４からなる群から選択されてもよい。
【００６３】
特定の実施形態では、抗体は、
ａ．ドイチェ・ザムルング・フォン・ミクロオルガニスメン・ウント・ツェルクルテューレン・ゲゼルシャフト・ミット・ベシュレンクター・ハフツングに受託番号ＤＳＭ  ＡＣＣ２５８３で寄託されたハイブリドーマまたはその抗原結合性断片によって産生されたモノクローナル抗体であり、該抗体または抗原結合性断片は、インテグリンα１０鎖の細胞外Ｉドメインに特異的に結合する；または
ｂ．ドイチェ・ザムルング・フォン・ミクロオルガニスメン・ウント・ツェルクルテューレン・ゲゼルシャフト・ミット・ベシュレンクター・ハフツングに受託番号ＤＳＭ  ＡＣＣ２５８３で寄託されたハイブリドーマによって産生されたモノクローナル抗体によって結合したエピトープと同じエピトープへの結合を競合する抗体；または
ｃ．ａ）またはｂ）の断片であり、該断片は、インテグリンα１０サブユニット鎖の細胞外Ｉドメインに特異的に結合することができる、である。
【００６４】
一実施形態では、本発明の抗α１０抗体は、インテグリンα１０β１を介して細胞機能を遮断することができる抗体である。
【００６５】
抗体は、細胞毒性部分、例えば、毒素、化学療法剤、及び放射性物質から選択される細胞毒性部分に共有結合してもよい。
【００６６】
一実施形態では、毒素は、トリコサンチン及びルフィン；リシン、凝集素、及びアブリンなどのＩＩ型リボソーム不活性化タンパク質；及びサポリンからなる群から選択されるリボソーム不活性化タンパク質などのリボソーム不活性化タンパク質である。
【００６７】
一実施形態では、毒素は、サポリンである。サポリンは、２８ＳリボソームＲＮＡ中の特異的ヌクレオチドを脱プリン化し、タンパク質合成を不可逆的に遮断するＮ−グリコシダーゼ活性をもつ３０ｋＤタンパク質の植物酵素である。リボソーム不活性化タンパク質（ＲＩＰ）のよく特徴付けられたファミリーに属する。標的ＳＡＰ抱合体は、分子手術法として知られる技術で使用される強力かつ特異的な損傷剤である。サポリン（植物であるサポナリア・オフィシナリスの種子由来）は、標的化剤、この場合には、抗インテグリンα抗体に結合し、（インビトロまたはインビボで）細胞に投与してもよい。標的化剤は、細胞表面上のその標的を探し出し、それに結合する。抱合体が内面化し、サポリンは、標的化剤から離脱し、リボソームを不活性化し、タンパク質の阻害、最終的には、細胞死を引き起こす。細胞表面マーカーを有さない細胞は影響を受けない。
【００６８】
一実施形態では、化学療法剤は、抗体に共有結合している。他の実施形態では、化学療法剤は、リポソームなどのナノ粒子に封入され、粒子は、それらの表面に結合した抗インテグリンα１０サブユニット抗体を有することによって神経膠腫を標的にする。
【００６９】
サポリンに複合した抗インテグリンα１０サブユニット抗体などの抗体薬物複合体（ＡＤＣ）は、例えば、Ｂｉｄａｒｄ  ａｎｄ  Ｔｒｅｄａｎ（２０１４）Ｔａｒｇ  Ｏｎｃｏｌ  ９：１−８またはＡｇａｒｗａｌ  ａｎｄ  Ｂｅｒｔｏｚｚｉ（２０１５）Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ  Ｃｈｅｍ．２６：１７６−１９２に例示されているように、当業者によって調製してもよい。
【００７０】
一実施形態では、中枢神経系の悪性新生物の治療に使用するための組成物は、サイトカイン、例えば、リンホカイン及びインターフェロンから選択されるサイトカインなどの生体応答調節物質に共有結合している抗体を含む。
【００７１】
治療に使用するための組成物は、１つ以上の化学療法剤などの有効成分、及び任意に、薬学的に許容される希釈剤、担体、または賦形剤をさらに含んでもよい。
【００７２】
本発明の抗体は、一実施形態では、インテグリンα１０サブユニットに特異的であるように設計され、別の実施形態では、インテグリンα１０サブユニットの天然に存在する変異体、例えば、インテグリンα１０サブユニットのアイソフォーム、またはインテグリンα１０サブユニットのスプライス変異体に特異的であるように設計される。
【００７３】
一実施形態では、本発明は、インテグリンα１０β１ヘテロ二量体のα１０及びβ１サブユニットの両方に結合する抗体に関する。
【００７４】
別の実施形態では、本発明は、インテグリンα１０β１ヘテロ二量体のα１０サブユニットに結合するが、β１サブユニットに結合しない抗体に関する。
【００７５】
一実施形態では、抗体は、インテグリンα１０サブユニットを発現する細胞の細胞死を誘発することができ、及び／または、該細胞の成長及び／または増殖を阻害することができる。
【００７６】
一実施形態では、抗体は、インテグリンα１０サブユニットを発現する細胞の細胞死を誘発することができる。一実施形態では、抗体は、インテグリンα１０サブユニットを発現する細胞の成長を阻害することができる。一実施形態では、抗体は、インテグリンα１０を発現する細胞の増殖を阻害することができる。一実施形態では、抗体は、インテグリンα１０を発現する細胞の移動を阻害することができる。
【００７７】
一実施形態では、細胞はさらに、ＥＧＦＲｖＩＩＩ、ネスチン、ＰＳＡ−ＮＣＡＭ、ＧＦＡＰ、ＰＤＧＦＲｂ（ＣＤ１４０ｂ）、ＰＥＣＡＭ−１（ＣＤ３１）、ＣＤ４５、ＣＤ６８、ＣＤ１６３、及び／またはＣＤ２０６の１つ以上を発現する。
【００７８】
一実施形態では、細胞はさらに、ＥＧＦＲｖＩＩＩを発現する。一実施形態では、細胞はさらに、ネスチンを発現する。一実施形態では、細胞はさらに、ＰＳＡ−ＮＣＡＭを発現する。
【００７９】
一実施形態では、細胞はさらに、ＧＦＡＰを発現する。一実施形態では、細胞はさらに、ＰＤＧＦＲｂ（ＣＤ１４０ｂ）を発現する。一実施形態では、細胞はさらに、ＰＥＣＡＭ−１（ＣＤ３１）を発現する。一実施形態では、細胞はさらに、ＣＤ４５を発現する。一実施形態では、細胞はさらに、ＣＤ６８を発現する。一実施形態では、細胞はさらに、ＣＤ１６３を発現する。一実施形態では、細胞はさらに、ＣＤ２０６を発現する。
【００８０】
従って、一実施形態では、本発明は、中枢神経系における悪性新生物に関連付けられた細胞の細胞死を誘発し、及び／または、該細胞の成長及び／または増殖を阻害する方法に関し、該細胞は、インテグリンα１０サブユニット、及び任意に、ＥＧＦＲｖＩＩＩ、ネスチン、ＰＳＡ−ＮＣＡＭ、ＧＦＡＰ、ＰＤＧＦＲｂ（ＣＤ１４０ｂ）、ＰＥＣＡＭ−１（ＣＤ３１）、ＣＤ４５、ＣＤ６８、ＣＤ１６３、及び／またはＣＤ２０６の１つ以上を発現する。
【００８１】
一実施形態では、中枢神経系における悪性新生物に関連付けられた細胞は、悪性細胞または腫瘍関連細胞である。
【００８２】
悪性細胞または腫瘍関連細胞の例としては、グリア細胞；星状細胞；周皮細胞；内皮細胞；造血細胞；及び小膠細胞が挙げられる。
【００８３】
一実施形態では、細胞は、グリア細胞である。
【００８４】
造血細胞は、例えば、造血幹細胞、Ｔ細胞、Ｂ細胞、形質細胞、ＮＫ細胞、樹状細胞、マクロファージ、及び単球からなる群から選択されてもよい。
【００８５】
一実施形態では、マクロファージは、腫瘍関連マクロファージ（ＴＡＭ）である。
【００８６】
臨床状態
本発明による臨床状態は、本発明の抗インテグリンα１０サブユニット抗体の投与によって治癒的治療、改善的治療、または予防的治療を含む、本明細書で定義される中枢神経系の悪性新生物のいずれか１つの治療であってもよい。
【００８７】
本明細書の上で定義した組成物は、以下のものからなる群から選択される悪性新生物の治療に使用する：
ａ）以下のものから選択される神経上皮組織の腫瘍
ｉ）毛様細胞性星細胞腫（ＩＣＤ−Ｏ  ９４２１／１、ＷＨＯグレードＩ）、毛様類粘液性星細胞腫（ＩＣＤ−Ｏ  ９４２５／３、ＷＨＯグレードＩＩ）、上衣下巨細胞性星細胞腫（ＩＣＤ−Ｏ  ９３８４／１、ＷＨＯグレードＩ）、多形性黄色星状膠細胞腫（ＩＣＤ−Ｏ  ９４２４／３、ＷＨＯグレードＩＩ）、びまん性星細胞腫（ＩＣＤ−Ｏ  ９４００／３、ＷＨＯグレードＩＩ）、退形成性星細胞腫（ＩＣＤ−Ｏ  ９４０１／３、ＷＨＯグレードＩＩＩ）、膠芽腫（ＩＣＤ−Ｏ  ９４４０／３、ＷＨＯグレードＩＶ）、巨細胞性膠芽腫（ＩＣＤ−Ｏ  ９４４１／３、ＷＨＯグレードＩＶ）、膠肉腫（ＩＣＤ−Ｏ  ９４４２／３、ＷＨＯグレードＩＶ）、膠腫脳腫瘍（ＩＣＤ−Ｏ  ９３８１／３、ＷＨＯグレードＩＩＩ）から選択される星細胞系腫瘍、及び
ｉｉ）乏突起膠腫（ＩＣＤ−Ｏ  ９４５０／３、ＷＨＯグレードＩＩ）、及び退形成性乏突起膠腫（ＩＣＤ−Ｏ  ９４５１／３、ＷＨＯグレードＩＩＩ）から選択される乏突起神経膠腫瘍、及び
ｉｉｉ）乏突起膠星細胞腫（ＩＣＤ−Ｏ  ９３８２／３、ＷＨＯグレードＩＩ）、及び退形成性乏突起星細胞腫（ＩＣＤ−Ｏ  ９３８２／３、ＷＨＯグレードＩＩＩ）から選択される乏突起膠細胞系腫瘍、及び
ｉｖ）上衣下腫（ＩＣＤ−Ｏ  ９３８３／１、ＷＨＯグレードＩ）、粘液乳頭状上衣腫（ＩＣＤ−Ｏ  ９３９４／１、ＷＨＯグレードＩ）、上衣腫（ＩＣＤ−Ｏ  ９３９１／３、ＷＨＯグレードＩＩ）、退形成性上衣腫（ＩＣＤ−Ｏ  ９３９２／３、ＷＨＯグレードＩＩＩ）から選択される上衣腫瘍、及び
ｖ）脈絡叢乳頭腫（ＩＣＤ−Ｏ  ９３９０／０、ＷＨＯグレードＩ）、非定型脈絡叢乳頭腫（ＩＣＤ−Ｏ  ９３９０／１、ＷＨＯグレードＩＩ）、及び脈絡叢乳頭癌（ＩＣＤ−Ｏ  ９３９０／３、ＷＨＯグレードＩＩＩ）から選択される脈絡叢腫瘍、及び
ｖｉ）星芽細胞腫（ＩＣＤ−Ｏ  ９４３０／３、ＷＨＯグレードＩ）、第３脳室脊索腫様膠腫（ＩＣＤ−Ｏ  ９４４４／１、ＷＨＯグレードＩＩ）、及び血管中心性膠腫（ＩＣＤ−Ｏ  ９４３１／１、ＷＨＯグレードＩ）から選択される他の神経上皮性腫瘍、及び
ｖｉｉ）小脳異形成性神経節細胞腫（レーミッテ・ダクロス病）（ＩＣＤ−Ｏ  ９４９３／０）、線維形成性乳児星細胞腫／神経節膠腫（ＩＣＤ−Ｏ  ９４１２／１、ＷＨＯグレードＩ）、胚芽異形成性神経上皮腫瘍（ＩＣＤ−Ｏ  ９４１３／０、ＷＨＯグレードＩ）、神経節細胞腫（ＩＣＤ−Ｏ  ９４９２／０、ＷＨＯグレードＩ）、神経節膠腫（ＩＣＤ−Ｏ  ９５０５／１、ＷＨＯグレードＩ）、退形成性神経節膠腫（ＩＣＤ−Ｏ  ９５０５／３、ＷＨＯグレードＩＩＩ）、中枢性神経細胞腫（ＩＣＤ−Ｏ  ９５０６／１、ＷＨＯグレードＩＩ）、脳室外神経細胞腫（ＩＣＤ−Ｏ  ９５０６／１、ＷＨＯグレードＩＩ）、小脳脂肪神経細胞腫（ＩＣＤ−Ｏ  ９５０６／１、ＷＨＯグレードＩＩ）、乳頭状グリア神経細胞性腫瘍（ＩＣＤ−Ｏ  ９５０９／１、ＷＨＯグレードＩ）、第４脳室ロゼット形成性グリア神経細胞性腫瘍（ＩＣＤ−Ｏ  ９５０９／１、ＷＨＯグレードＩ）、及び傍神経節腫（ＩＣＤ−Ｏ  ８６８０／１、ＷＨＯグレードＩ）から選択される神経細胞と混合性神経膠腫、及び
ｖｉｉｉ）松果体細胞腫（ＩＣＤ−Ｏ  ９３６１／１、ＷＨＯグレードＩ）、中間型松果体実質腫瘍（ＩＣＤ−Ｏ  ９３６２／３、ＷＨＯグレードＩＩ、ＩＩＩ）松果体芽腫（ＩＣＤ−Ｏ  ９３６２／３、ＷＨＯグレードＩＶ）、松果体部乳頭状腫瘍（ＩＣＤ−Ｏ  ９３９５／３、ＷＨＯグレードＩＩＩ）から選択される松果体領域の腫瘍、及び
ｉｘ）髄芽腫（ＩＣＤ−Ｏ  ９４７０／３、ＷＨＯグレードＩＶ）、大規模な球状髄芽腫（ＩＣＤ−Ｏ  ９４７１／３、ＷＨＯグレードＩＶ）、退形成性髄芽腫（ＩＣＤ−Ｏ  ９４７４／３、ＷＨＯグレードＩＶ）、中枢神経系原始神経外胚葉性腫瘍（ＩＣＤ−Ｏ  ９４７３／３、ＷＨＯグレードＩＶ）、中枢神経系神経芽細胞腫（ＩＣＤ−Ｏ  ９５００／３、ＷＨＯグレードＩＶ）、及び非定型奇形腫様／ラブドイド腫瘍（ＩＣＤ−Ｏ  ９５０８／３、ＷＨＯグレードＩＶ）から選択される胚芽腫瘍、及び
ｂ）以下のものから選択される脳神経と傍脊椎神経の腫瘍
ｉ）神経鞘腫（ＩＣＤ−Ｏ  ９５６０／０、ＷＨＯグレードＩ）、
ｉｉ）神経線維腫（ＩＣＤ−Ｏ  ９５４０／０、ＷＨＯグレードＩ）、
ｉｉｉ）神経周膜腫（ＩＣＤ−Ｏ  ９５７１／０、９５７１／３、ＷＨＯグレードＩ、ＩＩ、ＩＩＩ）、及び
ｉｖ）悪性末梢神経鞘腫瘍（ＭＰＮＳＴ）（ＩＣＤ−Ｏ  ９５４０／３、ＷＨＯグレードＩＩ、ＩＩＩ、ＩＶ）、及び
ｃ）以下のものから選択される髄膜腫腫瘍
ｉ）髄膜腫（ＩＣＤ−Ｏ  ９５３０／０、ＷＨＯグレードＩ）、異型性髄膜腫（ＩＣＤ−Ｏ  ９５３９／１、ＷＨＯグレードＩＩ）、退形成性髄膜腫（ＩＣＤ−Ｏ  ９５３０／３、ＷＨＯグレードＩＩＩ）から選択される髄膜細胞腫、及び
ｉｉ）脂肪腫（ＩＣＤ−Ｏ  ８８５０／０）、血管脂肪腫（ＩＣＤ−Ｏ  ８８６１／０）、褐色脂肪腫（ＩＣＤ−Ｏ  ８８８０／０）、脂肪肉腫（ＩＣＤ−Ｏ  ８８５０／３）、孤立性線維性腫瘍（ＩＣＤ−Ｏ  ８８１５／０）、線維肉腫（ＩＣＤ−Ｏ  ８８１０／３）、悪性線維性組織球腫（ＩＣＤ−Ｏ  ８８３０／３）、平滑筋腫（ＩＣＤ−Ｏ  ８８９０／０）、平滑筋肉腫（ＩＣＤ−Ｏ  ８８９０／３）、横紋筋腫（ＩＣＤ−Ｏ  ８９００／０）、横紋筋肉腫（ＩＣＤ−Ｏ  ８９００／３）、軟骨腫（ＩＣＤ−Ｏ  ９２２０／０）、軟骨肉腫（ＩＣＤ−Ｏ  ９２２０／３）、骨腫（ＩＣＤ−Ｏ  ９１８０／０）、骨肉腫（ＩＣＤ−Ｏ  ９１８０／３）、骨軟骨腫（ＩＣＤ−Ｏ  ９２１０／０）、血管腫（ＩＣＤ−Ｏ  ９１２０／０）、類上皮血管内皮腫（ＩＣＤ−Ｏ  ９１３３／１）、血管周皮細胞腫（ＩＣＤ−Ｏ  ９１５０／１、ＷＨＯグレードＩＩ）、退形成性血管周皮細胞腫（ＩＣＤ−Ｏ  ９１５０／３、ＷＨＯグレードＩＩＩ）、及び血管肉腫（ＩＣＤ−Ｏ  ９１２０／３）３．２．２２、カポジ肉腫（ＩＣＤ−Ｏ  ９１４０／３）、ユーイング肉腫−ＰＮＥＴ（ＩＣＤ−Ｏ  ９３６４／３）から選択される間葉腫瘍、及び
ｉｉｉ）拡散黒色症（ＩＣＤ−Ｏ  ８７２８／０）、褐色細胞腫（ＩＣＤ−Ｏ  ８７２８／１）、悪性黒色腫（ＩＣＤ−Ｏ  ８７２０／３）、髄膜黒色腫（ＩＣＤ−Ｏ  ８７２８／３）から選択される原発性黒色腫病変、及び
ｉｖ）血管芽腫（ＩＣＤ−Ｏ  ９１６１／１、ＷＨＯグレードＩ）などのその他の脳脊髄膜病変、及び
ｄ）以下のものから選択される造血系腫瘍
ｉ）悪性リンパ腫（ＩＣＤ−Ｏ  ９５９０／３）４．２、形質細胞腫（ＩＣＤ−Ｏ  ９７３１／３）、及び
ｉｉ）顆粒球性肉腫（ＩＣＤ−Ｏ  ９９３０／３）、及び
ｅ）以下のものから選択されるトルコ鞍部腫瘍
ｉ）頭蓋咽頭腫（ＩＣＤ−Ｏ  ９３５０／１、ＷＨＯグレードＩ）
ｉｉ）顆粒細胞腫瘍（ＩＣＤ−Ｏ  ９５８２／０、ＷＨＯグレードＩ）
ｉｉｉ）下垂体細胞腫（ＩＣＤ−Ｏ  ９４３２／１、ＷＨＯグレードＩ）、及び
ｉｖ）腺下垂体の紡錘形膨大細胞腫（ＩＣＤ−Ｏ  ８９９１／０、ＷＨＯグレードＩ）。
【００８８】
一実施形態では、抗インテグリンα１０抗体または本発明の抗インテグリンα１０抗体を含む組成物によって治療される悪性新生物は、神経膠腫である。
【００８９】
一実施形態では、抗インテグリンα１０抗体または本発明の抗インテグリンα１０抗体を含む組成物によって治療される悪性新生物は、グレードＩＩ、ＩＩＩ、またはＩＶの神経膠腫である。
【００９０】
一実施形態では、抗インテグリンα１０抗体または本発明の抗インテグリンα１０抗体を含む組成物によって治療される悪性新生物は、グレードＩＩ星細胞腫、グレードＩＩＩ星細胞腫またはグレードＩＶ星細胞腫などの星細胞腫である。
【００９１】
一実施形態では、抗インテグリンα１０抗体または本発明の抗インテグリンα１０抗体を含む組成物によって治療される神経膠腫は、膠芽腫である。
【００９２】
一実施形態では、神経膠腫は、一次性膠芽腫である。
【００９３】
一実施形態では、神経膠腫は、二次性膠芽腫である。
【００９４】
一実施形態では、抗インテグリンα１０抗体または本発明の抗インテグリンα１０抗体を含む組成物によって治療される悪性新生物は、髄芽腫である。
【００９５】
一実施形態では、抗インテグリンα１０抗体または本発明の抗インテグリンα１０抗体を含む組成物によって治療される悪性新生物は、神経芽細胞腫である。
【００９６】
一実施形態では、本発明の組成物によって治療される悪性新生物は、星細胞腫、退形成性星細胞腫、脳の血管周囲細胞腫、髄膜腫、血管腫髄膜腫、異型性髄膜腫、線維性髄膜腫、髄膜皮性髄膜腫、分泌性髄膜腫、乏突起膠星細胞腫、退形成性乏突起星細胞腫、乏突起神経膠腫、及び退形成性乏突起神経膠腫からなる群から選択される。
【００９７】
一実施形態では、本発明の組成物によって治療される悪性新生物は、  星細胞系腫瘍、乏突起神経膠腫瘍、上衣細胞腫瘍、混合膠腫、原因不明の神経上皮腫瘍、脈絡叢腫瘍、神経細胞と混合性神経膠腫、松果体実質腫瘍、及び神経芽または膠芽腫エレメントをもつ腫瘍（胎児性腫瘍）、上衣腫、星細胞腫、乏突起神経膠腫、乏突起膠星細胞腫、神経上皮腫瘍、及び神経細胞性腫瘍並びに混合型神経細胞−膠細胞腫瘍からなる群から選択される。
【００９８】
一態様では、本発明は、それを必要とする対象の中枢神経系における悪性新生物を治療する方法であって、インテグリンα１０サブユニットに特異的に結合する抗体を前記対象に投与することを含む方法に関する。前記治療は、予防、改善、または治癒であってもよい。
【００９９】
本明細書の上で定義した治療は、前記対象中のインテグリンα１０サブユニットの検出時に開始されてもよい。
【０１００】
一態様では、本発明は、中枢神経系における悪性新生物に罹患している対象の治療方法であって、
ａ）本明細書で定義された検出方法によって、対象が中枢神経系の悪性新生物に罹患しているかどうかを判断すること；及び
ｂ）インテグリンα１０サブユニットに特異的に結合する抗体の治療的に有効な量を、中枢神経系の悪性新生物と診断された対象に投与することを含む、方法に関する。
【０１０１】
一態様では、本発明は、中枢神経系における悪性新生物の治療のための治療薬の製造のための、インテグリンα１０サブユニットに特異的に結合する抗体を含む組成物の使用に関する。
【０１０２】
別の態様では、本発明は、哺乳類における腫瘍関連の血管新生の阻害方法であって、抗インテグリンα１０サブユニット抗体の治療的に有効な量を前記哺乳類に投与することを含む方法に関する。
【０１０３】
一実施形態では、本発明は、インテグリンα１０サブユニットを発現する細胞の成長及び／または増殖を阻害する方法であって、抗インテグリンα１０サブユニット抗体の有効量を前記細胞に投与することを含む方法に関する。細胞は、本明細書で定義される１つ以上のさらなるマーカーを発現してもよい。特に好ましい実施形態では、前記細胞は、神経膠腫細胞である。前記方法は、インビトロまたはインビボで行ってもよい。
【０１０４】
一実施形態では、本発明は、インテグリンα１０サブユニットを発現する細胞の腫瘍形成または転移の可能性を減少させる方法であって、抗インテグリンα１０サブユニット抗体の有効量を前記細胞に投与することを含む方法に関する。細胞は、本明細書で定義される１つ以上のさらなるマーカーを発現してもよい。特に好ましい実施形態では、前記細胞は、神経膠腫細胞である。前記方法は、インビトロまたはインビボで行ってもよい。本明細書で提示されたデータは、インテグリンα１０サブユニットを発現する神経膠腫（ＧＢＭ）細胞を抗インテグリンα１０サブユニット抗体で治療することが球形成能を著しく減少させることで、抗インテグリンα１０サブユニット抗体による治療が、インテグリンα１０サブユニット発現細胞が腫瘍を形成する能力を阻害または少なくとも減少させることを示していることが示される。
【０１０５】
さらなる実施形態では、治療方法には、本明細書に記載された方法を用いて、中枢神経系の画像を取得して、神経膠腫の位置を検出することを伴い、好ましくは、位置は、３Ｄ空間で検出され、位置についての情報を用いて、次の放射線療法をガイドし、神経膠腫を治療する。
【０１０６】
さらに別の実施形態では、外科医は、インテグリンα１０サブユニット特異的分子プローブを使用して、手術中に神経膠腫の存在を検出することができる。
【０１０７】
ＩＩ．中枢神経系の悪性新生物の検出及び診断
本発明は、哺乳類の中枢神経系における悪性新生物の検出方法であって、
ａ）インテグリンα１０サブユニットポリペプチドを含む抗原、または
ｂ）インテグリンα１０サブユニットポリペプチドまたはその断片または変異体をコードするポリヌクレオチド転写産物
の存在または不在について、単離された試料中で分析することを含み、
ａ）の抗原またはｂ）のポリヌクレオチド転写産物の存在は、前記哺乳類の中枢神経系における悪性新生物を示す、方法にも関する。
【０１０８】
別の態様では、本発明は、哺乳類の中枢神経系における悪性新生物の検出方法であって、
ａ）インテグリンα１０サブユニットポリペプチドまたはインテグリンα１０サブユニットポリヌクレオチド転写産物に特異的に結合することができる分子プローブを哺乳類に投与する工程、前記プローブは、光子を発することができる部分に共有結合している、及び
ｂ）前記部分から発した光子を検出し、中枢神経系またはその一部の画像を形成する工程
を含み、前記部分からの光子の局在発光が、前記哺乳類の中枢神経系における悪性新生物を示す、方法に関する。
【０１０９】
別の態様では、本発明は、哺乳類の中枢神経系における悪性新生物を診断するためのインビトロ診断方法であって、
ａ）インビトロ試料を、インテグリンα１０サブユニットポリペプチドまたはインテグリンα１０サブユニットポリヌクレオチド転写産物に特異的に結合することができる分子プローブに接触させる工程、前記プローブは、光子を発することができる部分に共有結合している、及び
ｂ）前記部分から発した光子を検出し、試料の画像を形成する工程、前記部分からの光子の局在発光が、前記哺乳類の中枢神経系における悪性新生物を示す、方法に関する。
【０１１０】
別の態様では、本発明は、単離された試料におけるインテグリンα１０サブユニットを検出するためのインビトロ方法であって、
ａ）インテグリンα１０サブユニットポリペプチドを含む抗原、または
ｂ）インテグリンα１０サブユニットポリペプチドまたはその断片または変異体をコードするポリヌクレオチド転写産物
の存在または不在について、単離された試料中で分析することを含み、
ａ）の抗原またはｂ）のポリヌクレオチド転写産物の存在は、前記単離された試料中の悪性新生物を示す、方法に関する。
【０１１１】
別の態様では、本発明は、哺乳類の中枢神経系の悪性新生物に関連付けられた細胞を検出するのに使用される、インテグリンα１０サブユニットに特異性を有する抗体を含むかまたはからなる薬剤に関し、細胞は、インテグリンα１０サブユニットを発現する。
【０１１２】
別の態様では、本発明は、哺乳類の中枢神経系における悪性新生物を診断するためのインビトロ診断方法であって、
ａ）前記哺乳類から得られたインビトロ試料を、インテグリンα１０サブユニットポリペプチドまたはインテグリンα１０サブユニットポリヌクレオチド転写産物に特異的に結合することができる分子プローブに接触させる工程、前記プローブは、光子を発することができる部分に共有結合している、及び
ｂ）前記部分から発した光子を検出し、試料の画像を形成する工程、前記部分からの光子の局在発光が、前記哺乳類の中枢神経系における悪性新生物を示す、方法に関する。
【０１１３】
別の態様では、本発明は、哺乳類から得られた単離された試料におけるインテグリンα１０サブユニットを検出するためのインビトロ方法であって、
ａ）インテグリンα１０サブユニットポリペプチドを含む抗原；及び／または
ｂ）インテグリンα１０サブユニットポリペプチドまたはその断片または変異体をコードするポリヌクレオチド転写産物
の存在または不在について、単離された試料中で分析することを含み、
ａ）の抗原及び／またはｂ）のポリヌクレオチド転写産物の存在は、前記哺乳類の中枢神経系における悪性新生物を示す、方法に関する。
【０１１４】
別の態様では、本発明は、生体試料中の中枢神経系の悪性新生物をインビトロ、インサイチュ、またはインビボで検出するための、インテグリンα１０サブユニットに特異的に結合する抗インテグリンα１０サブユニット特異的抗体の使用に関する。
【０１１５】
別の態様では、本発明は、生体試料中の中枢神経系の悪性新生物をインビトロ、インサイチュ、またはインビボで検出するための、ハイブリダイゼーション反応においてインテグリンα１０サブユニットｍＲＮＡまたはｃＤＮＡに結合するインテグリンα１０サブユニット核酸プローブの使用に関する。
【０１１６】
別の態様では、本発明は、中枢神経系の悪性新生物を診断するためのキットの調製におけるインテグリンα１０サブユニット核酸プローブ化合物の使用に関する。
【０１１７】
別の態様では、本発明は、中枢神経系の悪性新生物を診断するためのキットの調製における、インテグリンα１０サブユニットに結合する抗インテグリンα１０サブユニット特異的抗体の使用に関する。
【０１１８】
別の態様では、本発明は、対象が中枢神経系の悪性新生物を有するかどうかを診断、監視、または判断するための診断剤の製造のためのインテグリンα１０サブユニット核酸プローブ化合物の使用に関し、前記診断剤は、生体試料中のインテグリンα１０サブユニットポリヌクレオチドの存在を測定するために製造され、前記試料中の前記インテグリンα１０サブユニットポリヌクレオチドの存在は、前記対象の中枢神経系の悪性新生物を示す。
【０１１９】
別の態様では、本発明は、哺乳類が中枢神経系の悪性新生物を有するかどうかを診断、監視、または判断するための診断剤の製造のための、インテグリンα１０サブユニットに結合する抗インテグリンα１０サブユニット特異的抗体の使用に関し、前記診断剤は、試料中のインテグリンα１０サブユニットポリペプチドの存在を測定するために製造され、前記試料中の前記インテグリンα１０サブユニットポリペプチドの存在は、前記哺乳類の中枢神経系の悪性新生物を示す。
【０１２０】
別の態様では、本発明は、悪性または腫瘍関連哺乳類細胞の検出方法であって、
ａ）インテグリンα１０サブユニットポリペプチドを含む第１抗原；及び／または
ｂ）インテグリンα１０サブユニットポリペプチドまたはその断片または変異体をコードする第１ポリヌクレオチド転写産物；及び
ｃ）ＥＧＦＲｖＩＩＩ、ネスチン、ＰＳＡ−ＮＣＡＭ、ＧＦＡＰ、ＰＤＧＦＲｂ（ＣＤ１４０ｂ）、ＰＥＣＡＭ−１（ＣＤ３１）、ＣＤ４５、ＣＤ６８、ＣＤ１６３、及びＣＤ２０６からなる群から選択されるポリペプチドを含む第２抗原；及び／または
ｄ）ポリペプチドまたはその断片または変異体をコードする第２ポリヌクレオチド転写産物、前記ポリペプチドは、ＥＧＦＲｖＩＩＩ、ネスチン、ＰＳＡ−ＮＣＡＭ、ＧＦＡＰ、ＰＤＧＦＲｂ（ＣＤ１４０ｂ）、ＰＥＣＡＭ−１（ＣＤ３１）、ＣＤ４５、ＣＤ６８、ＣＤ１６３、及びＣＤ２０６からなる群から選択される、
の存在または不在について、単離された試料中で分析することを含む方法に関する。
【０１２１】
ｃ）の第２抗原及び／またはｄ）の第２転写産物と共に、ａ）の第１抗原及び／またはｂ）の第１ポリヌクレオチド転写産物の存在は、前記哺乳類細胞が悪性細胞または腫瘍関連細胞であることを示す。
【０１２２】
別の態様では、本発明は、哺乳類の悪性または腫瘍関連細胞の検出方法であって、
ａ）インテグリンα１０サブユニットポリペプチド及び／またはインテグリンα１０サブユニットポリヌクレオチド転写産物に特異的に結合することができる第１分子プローブを哺乳類に投与する工程；前記第１プローブは、光子を発することができる第１部分に共有結合している；及び
ｂ）ＥＧＦＲｖＩＩＩ、ネスチン、ＰＳＡ−ＮＣＡＭ、ＧＦＡＰ、ＰＤＧＦＲｂ（ＣＤ１４０ｂ）、ＰＥＣＡＭ−１（ＣＤ３１）、ＣＤ４５、ＣＤ６８、ＣＤ１６３、及びＣＤ２０６からなる群から選択されるポリペプチド；及び／またはＥＧＦＲｖＩＩＩ、ネスチン、ＰＳＡ−ＮＣＡＭ、ＧＦＡＰ、ＰＤＧＦＲｂ（ＣＤ１４０ｂ）、ＰＥＣＡＭ−１（ＣＤ３１）、ＣＤ４５、ＣＤ６８、ＣＤ１６３、及びＣＤ２０６からなる群から選択されるポリペプチドをコードするポリヌクレオチド転写産物に特異的に結合することができる第２分子プローブを哺乳類に投与する工程；前記第２プローブは、光子を発することができる第２部分に共有結合している；
ｃ）前記第１及び前記第２部分から発した光子を検出することによって、中枢神経系またはその一部の画像を形成する工程を含む、方法を関する。
【０１２３】
前記第１及び前記第２部分からの光子の局在発光は、前記哺乳類の悪性または腫瘍関連細胞を示す。
【０１２４】
中枢神経系の悪性新生物
悪性新生物は、二通りに分類される。それらは、それらの見かけ上の形態に従って表現型的に分類され、それらの重篤度に従って格付けされる。この格付けは、腫瘍の組織学的特徴にも基づいている。
【０１２５】
神経膠腫では、例えば、悪性新生物は、形態学的に星状細胞様と思われる場合には星細胞腫と命名され、悪性細胞が形態学的に乏突起膠細胞様と思われる場合には乏突起神経膠腫と命名される。混合形態の神経膠腫もあり、その場合には、乏突起膠星細胞腫と命名される。
【０１２６】
腫瘍グレードは、腫瘍がどれだけ速く成長し、広がるかの指標である。腫瘍の細胞、及び腫瘍の組織の構成が、正常な細胞及び組織のものに近い場合、腫瘍は、高分化（悪性度は低い）と呼ばれる。これらの腫瘍は、低分化または未分化である腫瘍（見た目が異常な細胞を有し、より速く成長する（悪性度は高い））よりも遅い速度で成長し、広がる傾向がある。神経膠腫分類例については図１を参照されたい。
【０１２７】
中枢神経系腫瘍のＷＨＯグレード分類は、腫瘍の組織学的特徴に基づいて悪性度スケールを確立している。組織学的グレードは、以下の通りである：ＷＨＯグレードＩには、増殖能が低く、頻繁に離散する性質をもち、及び外科的切除のみの後に治癒の可能性がある病変が含まれる。ＷＨＯグレードＩＩには、一般的に浸潤し、有糸分裂活性が低いが、局所療法後にグレードＩ悪性腫瘍よりも頻繁に再発する病変が含まれる。いくつかの腫瘍型は、より高いグレードの悪性に進行する傾向がある。ＷＨＯグレードＩＩＩには、核異型、及び有糸分裂活性の増加を含む、悪性の組織学的証拠をもつ病変が含まれる。これらの病変は、退形成性組織学及び浸潤能を有する。これらは、通常、積極的なアジュバント療法で治療される。ＷＨＯグレードＩＶには、有糸分裂が活発で、壊死を起こしやすく、一般的に、術前及び術後の急速な進行及び致命的な結果に関連付けられる病変が含まれる。病変は、通常、積極的なアジュバント療法で治療される。
【０１２８】
完全かつ現在の分類について、１９９９年の神経病理学者の国際的なコンセンサス会議で現れ、２０００年に公開された神経系腫瘍の新しい世界保健機関（ＷＨＯ）分類を参照されたい（Ｋｌｅｉｈｕｅｓ  ａｎｄ  Ｃａｖａｎｅｅ，Ｅｄｓ．，２０００：  Ｐａｔｈｏｌｏｇｙ  ａｎｄ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ  ｏｆ  Ｔｕｍｏｕｒｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｎｅｒｖｏｕｓ  Ｓｙｓｔｅｍ．Ｌｙｏｎ，Ｆｒａｎｃｅ：Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ａｇｅｎｃｙ  ｆｏｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ｏｎ  Ｃａｎｃｅｒ．；Ｋｌｅｉｈｕｅｓ  ｅｔ  ａｌ．（２００２）Ｔｈｅ  ＷＨＯ  Ｃｌａｓｓｉｆｉｃａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｔｕｍｏｕｒｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｎｅｒｖｏｕｓ  Ｓｙｓｔｅｍ．Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｎｅｕｒｏｐａｔｈｏｌｏｇｙ  ＆  Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  Ｎｅｕｒｏｌｏｇｙ  ６１：２１５−２２５）。実際の分類は、分子遺伝学特徴、予測因子、及び遺伝性腫瘍症候群の別の章を含む、各腫瘍型の臨床病理学的特徴の広範な説明及び例示によって達成される。
【０１２９】
本開示は、インテグリンα１０サブユニット発現によって特徴付けられる中枢神経系における悪性新生物の検出及び／または治療に関する。従って、一実施形態では、中枢神経系の悪性新生物は、以下のものからなる群から選択される：
ａ）以下のものから選択される神経上皮組織の腫瘍
ｉ）毛様細胞性星細胞腫（ＩＣＤ−Ｏ  ９４２１／１、ＷＨＯグレードＩ）、毛様類粘液性星細胞腫（ＩＣＤ−Ｏ  ９４２５／３、ＷＨＯグレードＩＩ）、上衣下巨細胞性星細胞腫（ＩＣＤ−Ｏ  ９３８４／１、ＷＨＯグレードＩ）、多形性黄色星状膠細胞腫（ＩＣＤ−Ｏ  ９４２４／３、ＷＨＯグレードＩＩ）、びまん性星細胞腫（ＩＣＤ−Ｏ  ９４００／３、ＷＨＯグレードＩＩ）、退形成性星細胞腫（ＩＣＤ−Ｏ  ９４０１／３、ＷＨＯグレードＩＩＩ）、膠芽腫（ＩＣＤ−Ｏ  ９４４０／３、ＷＨＯグレードＩＶ）、巨細胞性膠芽腫（ＩＣＤ−Ｏ  ９４４１／３、ＷＨＯグレードＩＶ）、膠肉腫（ＩＣＤ−Ｏ  ９４４２／３、ＷＨＯグレードＩＶ）、膠腫脳腫瘍（ＩＣＤ−Ｏ  ９３８１／３、ＷＨＯグレードＩＩＩ）から選択される星細胞系腫瘍、及び
ｉｉ）乏突起膠腫（ＩＣＤ−Ｏ  ９４５０／３、ＷＨＯグレードＩＩ）、及び退形成性乏突起膠腫（ＩＣＤ−Ｏ  ９４５１／３、ＷＨＯグレードＩＩＩ）から選択される乏突起神経膠腫瘍、及び
ｉｉｉ）乏突起膠星細胞腫（ＩＣＤ−Ｏ  ９３８２／３、ＷＨＯグレードＩＩ）、及び退形成性乏突起星細胞腫（ＩＣＤ−Ｏ  ９３８２／３、ＷＨＯグレードＩＩＩ）  から選択される乏突起膠細胞系腫瘍、及び
ｉｖ）上衣下腫（ＩＣＤ−Ｏ  ９３８３／１、ＷＨＯグレードＩ）、粘液乳頭状上衣腫（ＩＣＤ−Ｏ  ９３９４／１、ＷＨＯグレードＩ）、上衣腫（ＩＣＤ−Ｏ  ９３９１／３、ＷＨＯグレードＩＩ）、退形成性上衣腫（ＩＣＤ−Ｏ  ９３９２／３、ＷＨＯグレードＩＩＩ）から選択される上衣腫瘍、及び
ｖ）脈絡叢乳頭腫（ＩＣＤ−Ｏ  ９３９０／０、ＷＨＯグレードＩ）、非定型脈絡叢乳頭腫（ＩＣＤ−Ｏ  ９３９０／１、ＷＨＯグレードＩＩ）、及び脈絡叢乳頭癌（ＩＣＤ−Ｏ  ９３９０／３、ＷＨＯグレードＩＩＩ）から選択される脈絡叢腫瘍、及び
ｖｉ）星芽細胞腫（ＩＣＤ−Ｏ  ９４３０／３、ＷＨＯグレードＩ）、第３脳室脊索腫様膠腫（ＩＣＤ−Ｏ  ９４４４／１、ＷＨＯグレードＩＩ）、及び血管中心性膠腫（ＩＣＤ−Ｏ  ９４３１／１、ＷＨＯグレードＩ）から選択される他の神経上皮性腫瘍、及び
ｖｉｉ）小脳異形成性神経節細胞腫（レーミッテ・ダクロス病）（ＩＣＤ−Ｏ  ９４９３／０）、線維形成性乳児星細胞腫／神経節膠腫（ＩＣＤ−Ｏ  ９４１２／１、ＷＨＯグレードＩ）、胚芽異形成性神経上皮腫瘍（ＩＣＤ−Ｏ  ９４１３／０、ＷＨＯグレードＩ）、神経節細胞腫（ＩＣＤ−Ｏ  ９４９２／０、ＷＨＯグレードＩ）、神経節膠腫（ＩＣＤ−Ｏ  ９５０５／１、ＷＨＯグレードＩ）、退形成性神経節膠腫（ＩＣＤ−Ｏ  ９５０５／３、ＷＨＯグレードＩＩＩ）、中枢性神経細胞腫（ＩＣＤ−Ｏ  ９５０６／１、ＷＨＯグレードＩＩ）、脳室外神経細胞腫（ＩＣＤ−Ｏ  ９５０６／１、ＷＨＯグレードＩＩ）、小脳脂肪神経細胞腫（ＩＣＤ−Ｏ  ９５０６／１、ＷＨＯグレードＩＩ）、乳頭状グリア神経細胞性腫瘍（ＩＣＤ−Ｏ  ９５０９／１、ＷＨＯグレードＩ）、第４脳室ロゼット形成性グリア神経細胞性腫瘍（ＩＣＤ−Ｏ  ９５０９／１、ＷＨＯグレードＩ）、及び傍神経節腫（ＩＣＤ−Ｏ  ８６８０／１、ＷＨＯグレードＩ）から選択される神経細胞と混合性神経膠腫、及び
ｖｉｉｉ）松果体細胞腫（ＩＣＤ−Ｏ  ９３６１／１、ＷＨＯグレードＩ）、中間型松果体実質腫瘍（ＩＣＤ−Ｏ  ９３６２／３、ＷＨＯグレードＩＩ、ＩＩＩ）松果体芽腫（ＩＣＤ−Ｏ  ９３６２／３、ＷＨＯグレードＩＶ）、松果体部乳頭状腫瘍（ＩＣＤ−Ｏ  ９３９５／３、ＷＨＯグレードＩＩ、ＩＩＩ）から選択される松果体領域の腫瘍、及び
ｉｘ）髄芽腫（ＩＣＤ−Ｏ  ９４７０／３、ＷＨＯグレードＩＶ）、大規模な球状髄芽腫（ＩＣＤ−Ｏ  ９４７１／３、ＷＨＯグレードＩＶ）、退形成性髄芽腫（ＩＣＤ−Ｏ  ９４７４／３、ＷＨＯグレードＩＶ）、中枢神経系原始神経外胚葉性腫瘍（ＩＣＤ−Ｏ  ９４７３／３、ＷＨＯグレードＩＶ）、中枢神経系神経芽細胞腫（ＩＣＤ−Ｏ  ９５００／３、ＷＨＯグレードＩＶ）、及び非定型奇形腫様／ラブドイド腫瘍（ＩＣＤ−Ｏ  ９５０８／３、ＷＨＯグレードＩＶ）から選択される胚芽腫瘍、及び
ｂ）以下のものから選択される脳神経と傍脊椎神経の腫瘍
ｉ）神経鞘腫（ＩＣＤ−Ｏ  ９５６０／０、ＷＨＯグレードＩ）、
ｉｉ）神経線維腫（ＩＣＤ−Ｏ  ９５４０／０、ＷＨＯグレードＩ）、
ｉｉｉ）神経周膜腫（ＩＣＤ−Ｏ  ９５７１／０、９５７１／３、ＷＨＯグレードＩ、ＩＩ、ＩＩＩ）、及び
ｉｖ）悪性末梢神経鞘腫瘍（ＭＰＮＳＴ）（ＩＣＤ−Ｏ  ９５４０／３、ＷＨＯグレードＩＩ、ＩＩＩ、ＩＶ）、及び
ｃ）以下のものから選択される髄膜腫腫瘍
ｉ）髄膜腫（ＩＣＤ−Ｏ  ９５３０／０、ＷＨＯグレードＩ）、異型性髄膜腫（ＩＣＤ−Ｏ  ９５３９／１、ＷＨＯグレードＩＩ）、退形成性髄膜腫（ＩＣＤ−Ｏ  ９５３０／３、ＷＨＯグレードＩＩＩ）から選択される髄膜細胞腫、及び
ｉｉ）脂肪腫（ＩＣＤ−Ｏ  ８８５０／０）、血管脂肪腫（ＩＣＤ−Ｏ  ８８６１／０）、褐色脂肪腫（ＩＣＤ−Ｏ  ８８８０／０）、脂肪肉腫（ＩＣＤ−Ｏ  ８８５０／３）、孤立性線維性腫瘍（ＩＣＤ−Ｏ  ８８１５／０）、線維肉腫（ＩＣＤ−Ｏ  ８８１０／３）、悪性線維性組織球腫（ＩＣＤ−Ｏ  ８８３０／３）、平滑筋腫（ＩＣＤ−Ｏ  ８８９０／０）、平滑筋肉腫（ＩＣＤ−Ｏ  ８８９０／３）、横紋筋腫（ＩＣＤ−Ｏ  ８９００／０）、横紋筋肉腫（ＩＣＤ−Ｏ  ８９００／３）、軟骨腫（ＩＣＤ−Ｏ  ９２２０／０）、軟骨肉腫（ＩＣＤ−Ｏ  ９２２０／３）、骨腫（ＩＣＤ−Ｏ  ９１８０／０）、骨肉腫（ＩＣＤ−Ｏ  ９１８０／３）、骨軟骨腫（ＩＣＤ−Ｏ  ９２１０／０）、血管腫（ＩＣＤ−Ｏ  ９１２０／０）、類上皮血管内皮腫（ＩＣＤ−Ｏ  ９１３３／１）、血管周皮細胞腫（ＩＣＤ−Ｏ  ９１５０／１、ＷＨＯグレードＩＩ）、退形成性血管周皮細胞腫（ＩＣＤ−Ｏ  ９１５０／３、ＷＨＯグレードＩＩＩ）、及び血管肉腫（ＩＣＤ−Ｏ  ９１２０／３）３．２．２２、カポジ肉腫（ＩＣＤ−Ｏ  ９１４０／３）、ユーイング肉腫−ＰＮＥＴ（ＩＣＤ−Ｏ  ９３６４／３）から選択される間葉腫瘍、及び
ｉｉｉ）拡散黒色症（ＩＣＤ−Ｏ  ８７２８／０）、褐色細胞腫（ＩＣＤ−Ｏ  ８７２８／１）、悪性黒色腫（ＩＣＤ−Ｏ  ８７２０／３）、髄膜黒色腫（ＩＣＤ−Ｏ  ８７２８／３）から選択される原発性黒色腫病変、及び
ｉｖ）血管芽腫（ＩＣＤ−Ｏ  ９１６１／１、ＷＨＯグレードＩ）などのその他の脳脊髄膜病変、及び
ｄ）以下のものから選択される造血系腫瘍
ｉ）悪性リンパ腫（ＩＣＤ−Ｏ  ９５９０／３）４．２、形質細胞腫（ＩＣＤ−Ｏ  ９７３１／３）、及び
ｉｉ）顆粒球性肉腫（ＩＣＤ−Ｏ  ９９３０／３）、及び
ｅ）以下のものから選択されるトルコ鞍部腫瘍
ｉ）頭蓋咽頭腫（ＩＣＤ−Ｏ  ９３５０／１、ＷＨＯグレードＩ）
ｉｉ）顆粒細胞腫瘍（ＩＣＤ−Ｏ  ９５８２／０、ＷＨＯグレードＩ）
ｉｉｉ）下垂体細胞腫（ＩＣＤ−Ｏ  ９４３２／１、ＷＨＯグレードＩ）、及び
ｉｖ）腺下垂体の紡錘形膨大細胞腫（ＩＣＤ−Ｏ  ８９９１／０、ＷＨＯグレードＩ）からなる群から選択される。
【０１３０】
一実施形態では、本発明の方法によって検出及び／または治療される悪性新生物は、グレードＩＩ、ＩＩＩ、またはＩＶの神経膠腫などの神経膠腫である。別の実施形態では、本発明の方法によって検出及び／または治療される悪性新生物は、星細胞腫である。
【０１３１】
ある特定の実施形態では、悪性新生物は、膠芽腫などの神経膠腫である。本発明によって検出される膠芽腫腫瘍は、星細胞系腫瘍、乏突起神経膠腫瘍、上衣細胞腫瘍、混合膠腫、原因不明の神経上皮腫瘍、脈絡叢腫瘍、神経細胞と混合性神経膠腫、松果体実質腫瘍、及び神経芽または膠芽腫エレメントをもつ腫瘍（胎児性腫瘍）、上衣腫、星細胞腫、乏突起神経膠腫、乏突起膠星細胞腫、神経上皮腫瘍、及び神経細胞性腫瘍並びに混合型神経細胞−膠細胞腫瘍からなる群から選択されてもよい。
【０１３２】
ＩＩＩ．インテグリンα１０サブユニット
インテグリンは、α及びβサブユニットからなるヘテロ二量体である。インテグリンα１０β１ヘテロ二量体は、抗インテグリンα１０サブユニット特異的抗体、及びインテグリンα１０サブユニット結合ペプチド、及びタンパク質によって検出されてもよい。インテグリンα１０β１は、軟骨組織中で最も豊富なコラーゲン結合性インテグリンであり、その発現パターンは、他のコラーゲン結合性インテグリンのものとは異なる。インビトロ及びインビボ研究により、インテグリンα１０β１は、軟骨細胞分化の固有の表現型マーカー、及び適切な軟骨発達に必要な細胞マトリックス相互作用の重要な仲介物質として同定されている（Ｌｕｎｄｇｒｅｎ  Aｋｅｒｌｕｎｄ  ａｎｄ  Ａｓｚｏｄｉ（２０１４）Ａｄｖ  Ｅｘｐ  Ｍｅｄ  Ｂｉｏｌ．８１９：６１−７１）。
【０１３３】
インテグリンα１０β１は、１９９８年に、軟骨細胞上のコラーゲンＩＩ型結合性受容体として同定された（Ｃａｍｐｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，１９９８）。発達中、及び成人組織中の免疫組織化学的分析により、マーカーが軟骨含有組織に制限されて局在化することが実証された（Ｃａｍｐｅｒ  ｅｔ  ａｌ．１９９８，Ｃａｍｐｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，２００１）。マーカーが欠如しているノックアウトマウスは、成長板の組織を壊し、マトリックス中のコラーゲン、及びより短い長骨を減少させ、その細胞構造の重要性をさらに支持している（Ｂｅｎｇｔｓｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，２００５）。アミノ酸配列、変異体、アイソフォーム、及び配列アノテーションは、ユニプロット受託番号Ｏ７５５７８−ＩＴＡ１０＿ＨＵＭＡＮに見ることができる。
【０１３４】
さらに、インテグリンα１０β１は、間葉系幹細胞（ＭＳＣ）上に存在し、凝集培養におけるインビトロ軟骨形成中に増加する。ＭＳＣの広範囲の培養は、インテグリンα１０β１を下方調節するが、培養された間葉系幹細胞を線維芽細胞増殖因子２で処理することで、コラーゲンＩＩ型及びアグリカンなどの軟骨特異的分子と共にインテグリンα１０β１の発現を増加させる。これにより、α１０β１は、軟骨形成能をもつＭＳＣの細胞表面バイオマーカーであることが示される（Ｖａｒａｓ  ｅｔ  ａｌ．，２００７）。
【０１３５】
全脳を含むいくつかの異なるマウス脳構造は、インテグリンα１０サブユニット発現について以前に分析されており、分析した健康な脳構造のいずれにおいてもインテグリンα１０サブユニットは発現されないことが示されている（ＷＯ９９／５１６３９）。
【０１３６】
従って、インテグリンα１０サブユニットは、疾患の優れたバイオマーカーである。従って、本発明は、抗原であるインテグリンα１０サブユニットポリペプチドを、例えば、配列番号１（インテグリンα１０サブユニット）、配列番号２（インテグリンα１０の細胞外ドメイン）、または配列番号３（インテグリンα１０の細胞外Ｉドメイン）に特異的に指向した抗体で検出することに関する。さらに、抗原は、インテグリンα１０サブユニットのアイソフォーム、スプライス変異体、または天然に存在する変異体である抗原である。
【０１３７】
一実施形態では、中枢神経系の悪性新生物は、インテグリンα１０サブユニットの変異体である抗原の存在または不在を検出することによって検出または診断され、前記変異体は、配列番号１、２、または３に少なくとも７０％同一であり、例えば、配列番号１、２、または３に少なくとも７５％同一である変異体、例えば、配列番号１、２、または３に少なくとも８０％同一である変異体、例えば、配列番号１、２、または３に少なくとも８５％同一である変異体、例えば、配列番号１、２、または３に少なくとも９０％同一である変異体、例えば、配列番号１、２、または３に少なくとも９５％同一である変異体、例えば、配列番号１、２、または３に少なくとも９６％同一である変異体、例えば、配列番号１、２、または３に少なくとも９７％同一である変異体、例えば、配列番号１、２、または３に少なくとも９８％同一である変異体、例えば、配列番号１、２、または３に少なくとも９９％同一である変異体、例えば、配列番号１、２、または３に少なくとも９９．５％同一である変異体である。
【０１３８】
一実施形態では、中枢神経系の悪性新生物は、インテグリンα１０サブユニットの断片である抗原の存在または不在を検出することによって検出または診断され、前記断片は、配列番号１の少なくとも１００の連続したアミノ酸、好ましくは、配列番号１の少なくとも２００の連続したアミノ酸、好ましくは、配列番号１の少なくとも３００の連続したアミノ酸、好ましくは、配列番号１の少なくとも４００の連続したアミノ酸、好ましくは、配列番号１の少なくとも５００の連続したアミノ酸、好ましくは、配列番号１の少なくとも６００の連続したアミノ酸、好ましくは、配列番号１の少なくとも７００の連続したアミノ酸、好ましくは、配列番号１の少なくとも８００の連続したアミノ酸、好ましくは、配列番号１の少なくとも９００の連続したアミノ酸、好ましくは、配列番号１の少なくとも１０００の連続したアミノ酸を含む。
【０１３９】
インテグリンα１０サブユニットは、例えば、翻訳時に、本明細書の上で定義したようにインテグリンα１０サブユニット抗原を生成するｍＲＮＡ転写産物の存在について試料を分析することによって、ヌクレオチドレベルを検出することもできる。
【０１４０】
インテグリンα１０サブユニットに対して指向された抗体
一実施形態では、典型的には、生体試料中のインテグリンα１０β１ヘテロ二量体タンパク質の一部としてのインテグリンα１０サブユニットの存在は、免疫反応においてインテグリンα１０サブユニットに結合する抗インテグリンα１０特異的抗体を用いることによって検出される。好ましくは、抗体は、インテグリンα１０サブユニット細胞外ドメインに結合するが、ある特定の実施形態では、抗インテグリンα１０サブユニット抗体は、完全なインテグリンα１０β１ヘテロ二量体複合体に対して重複特異性を有する。これは、本発明の抗体が、α１０及びβ１サブユニットの両方を覆うエピトープに結合することを意味する。
【０１４１】
抗体及びその機能的等価物は、当業者に知られている任意の適当な方法によって産生されてもよい。一実施形態では、本発明の抗体は、ハイブリドーマ細胞株（例えば、ドイチェ・ザムルング・フォン・ミクロオルガニスメン・ウント・ツェルクルテューレン・ゲゼルシャフト・ミット・ベシュレンクター・ハフツングに受託番号ＤＳＭ  ＡＣＣ２５８３で寄託されたｍＡｂ３６５ハイブリドーマ細胞株）中で産生されることで、細胞外α１０β１ドメインに結合する抗体を産生する。前記ハイブリドーマの産生では、インテグリンα１０及びβ１の遺伝子ノックアウトマウスを使用してもよい。ノックアウトマウスは、ＷＯ０３／１０１４９７に記載されており、参照により本明細書に含まれる。
【０１４２】
インテグリンα１０サブユニットの細胞外ドメインまたはＩドメイン内のエピトープを特異的に認識し、それに結合する抗体を産生する１つの方法は、インテグリンα１０サブユニットまたはその断片またはその機能的ホモログの細胞外ドメインまたはＩドメインを哺乳類に投与する工程を含む。インテグリンα１０サブユニットまたはその断片またはその機能的ホモログの前記細胞外ドメインまたはＩドメインは、本明細書に記載されたインテグリンα１０サブユニット断片及びペプチドのいずれであってもよい。前記哺乳類に投与されたインテグリンα１０サブユニットまたはその断片またはその機能的ホモログの細胞外ドメインまたはＩドメインは、本明細書では、「インテグリンα１０サブユニット抗原」または「インテグリンα１０抗原」と指定される。
【０１４３】
一実施形態では、本発明は、インテグリンα１０サブユニットの活性を阻害することができる抗体を産生する方法に関し、前記抗体は、インテグリンα１０サブユニットの細胞外ドメインまたはＩドメイン内のエピトープを特異的に認識する。
【０１４４】
インテグリンα１０サブユニット抗原は、前記哺乳類に１回以上、例えば、２回、例えば、３回、例えば、３〜５回、例えば、５〜１０回、例えば、１０〜２０回、例えば、２０〜５０回、例えば、５０回以上投与してもよい。異なるインテグリンα１０サブユニット抗原を、同じ哺乳類に同時または任意の順序で順次投与することも可能である。
【０１４５】
一般に、インテグリンα１０サブユニット抗原は、投与前に水溶液または懸濁液であるだろう。さらに、インテグリンα１０サブユニット抗原を１つ以上の他の化合物と混合してもよい。例えば、インテグリンα１０サブユニット抗原を１つ以上の適切なアジュバント及び／または１つ以上の担体と混合してもよい。
【０１４６】
アジュバントは、投与された抗原との混和剤が前記抗原への免疫応答を増加させるかあるいは改変させる任意の物質である。適切なアジュバントは、当業者に周知である。
【０１４７】
担体は、足場構造、例えば、抗原が関連することができるポリペプチドまたは多糖である。担体は、アジュバントと独立して存在してもよい。適切な担体は、当業者に周知である。
【０１４８】
モノクローナル抗体、モノクローナル抗体またはポリクローナル抗体の混合物を調製する方法は、当該技術分野で知られており、例えば、Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，Ｂｙ  Ｅｄ  Ｈａｒｌｏｗ，ａｎｄ  Ｄａｖｉｄ  Ｌａｎｅ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，１９８８に記載されている。
【０１４９】
一実施形態では、本発明の抗インテグリンα１０サブユニットは、インテグリンα１０サブユニットの生物活性を阻害することができる抗体である。
【０１５０】
一実施形態では、本発明の抗体は、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＧ、及びＩｇＭからなる群から選択されるアイソタイプを有する。さらなる実施形態では、抗体が、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２（例えば、ＩｇＧ２ａ）、ＩｇＧ３、及びＩｇＧ４からなる群から選択されるＩｇＧアイソタイプなどのＩｇＧアイソタイプである。
【０１５１】
本発明は、インテグリンα１０サブユニットに結合することができるモノクローナル及びポリクローナル抗体の両方、及びそれらの断片、抗原結合断片、及びそれらの組み換えタンパク質を包含する。
【０１５２】
一実施形態では、生体試料中のインテグリンα１０サブユニットの存在を検出するために使用される抗インテグリンα１０サブユニット特異的抗体は、ポリクローナル抗体である。
【０１５３】
一実施形態では、インテグリンα１０サブユニット抗原を検出するために使用される抗体は、抗体断片である。抗体の抗原結合断片は、抗原に特異的に結合する能力を保持する抗体の断片である。本発明の抗体断片の例としては、Ｆａｂ断片、Ｆａｂ’断片、Ｆ（ａｂ’）２断片、及びＦｖ断片、例えば、単鎖可変断片（ｓｃＦｖ）、及び単ドメイン抗体からなる群から選択される抗体断片が挙げられる。
【０１５４】
本発明による抗体は、キメラ抗体、すなわち、異なる種由来の領域を含む抗体であってもよい。キメラ抗体は、例えば、ある種の動物由来の可変領域、別の種の動物由来の定常領域を含んでもよい。例えば、キメラ抗体は、マウスモノクローナル抗体由来の可変領域とヒト由来の定常領域とを有する抗体であってもよい。そのような抗体は、ヒト化抗体と呼ばれることもある。
【０１５５】
一実施形態では、抗体が、異なる特異性をもつ２つの異なる抗原結合部位を含む、タンパク質、またはポリペプチドである二重特異性抗体などのヘテロ特異的抗体である。例えば、二重特異性抗体は、（ａ）インテグリンα１０サブユニット上のエピトープ、及び（ｂ）インテグリンα１０サブユニット上の別のエピトープを認識し、それに結合してもよい。従って、同じ抗原内の２つの異なるエピトープを認識し、それに結合してもよい。用語「ヘテロ特異的抗体」は、異なる特異性をもつ２つ以上の異なる抗原結合部位を有する任意のタンパク質、またはポリペプチドを含むことを意図する。従って、本発明には、インテグリンα１０サブユニットに指向される二重特異性、三重特異性、四重特異性、及び他の多重特異性抗体が含まれるが、これらに限定されない。
【０１５６】
一実施形態では、インテグリンα１０サブユニットに特異的な抗体は、
ａ）ドイチェ・ザムルング・フォン・ミクロオルガニスメン・ウント・ツェルクルテューレン・ゲゼルシャフト・ミット・ベシュレンクター・ハフツングに受託番号ＤＳＭ  ＡＣＣ２５８３で寄託されたハイブリドーマ細胞株によって産生されたモノクローナル抗体；または
ｂ）ドイチェ・ザムルング・フォン・ミクロオルガニスメン・ウント・ツェルクルテューレン・ゲゼルシャフト・ミット・ベシュレンクター・ハフツングに受託番号ＤＳＭ  ＡＣＣ２５８３で寄託された前記ハイブリドーマによって産生された前記モノクローナル抗体によって結合したエピトープと同じエピトープへの結合を競合する抗体；または
ｃ）ａ）またはｂ）の断片、前記断片は、前記インテグリンα１０サブユニット鎖の細胞外Ｉドメインに特異的に結合することができる、である。
【０１５７】
抗インテグリンα１０サブユニット抗体を検出する際に良好な信号対雑音比を得るため、部分を抗体に複合させて、検出を容易にすることが必要な場合がある。
【０１５８】
一実施形態では、抗体は、検出可能部分、例えば、フルオロフォア、酵素、または放射性トレーサからなる群から選択される検出可能部分に共有結合している。インテグリンα１０サブユニット抗原は、インテグリンα１０サブユニット以外のペプチド、タンパク質、またはポリペプチドを検出することによって検出されてもよく、前記他のペプチド、タンパク質、またはポリペプチドは、インテグリンα１０サブユニット抗原に特異的に結合することができる。一実施形態では、前記ペプチド、タンパク質、またはポリペプチドは、酵素、フルオロフォア、または放射性トレーサに連結している。放射性トレーサは、例えば、陽電子放出体またはガンマ放出体から選択されてもよい。
【０１５９】
当業者は、状況及び試料の物理的状態に応じて、抗インテグリンα１０サブユニット抗体を検出するための標準的な実験機器を選択することができる。
【０１６０】
一実施形態では、当業者は、蛍光活性化セルソーティング（ＦＡＣＳ）などのフローサイトメトリーを用いて、検出工程を実施する。
【０１６１】
当該技術分野で周知の典型的な免疫学的方法としては、ウエスタンブロット法、酵素結合免疫測定法（ＥＬＩＳＡ）、放射免疫測定法（ＲＩＡ）、免疫組織化学（ＩＨＣ）、免疫蛍光分析が挙げられるが、これらに限定されない。
【０１６２】
インテグリンα１０サブユニットを検出することは、検出及びイメージング、例えば、臨床イメージングの当該技術分野で周知の方法、例えば、従来の蛍光顕微鏡、共焦点顕微鏡、２光子顕微鏡、誘導放出抑（ＳＴＥＤ）などを用いて達成してもよい。
【０１６３】
インテグリンα１０サブユニットを検出するための分子プローブ
インテグリンα１０サブユニット抗原またはインテグリンα１０サブユニットをコードするポリヌクレオチドの存在についての生体試料の分析は、インテグリンα１０サブユニットｍＲＮＡ、ｃＤＮＡ、またはタンパク質に結合またはハイブリダイズして、生体試料中の発現を検出することができる分子プローブ（タンパク質またはポリヌクレオチド）、またはＰＣＲ、好ましくは、Ｑ−ＰＣＲを用いることによって、実施することもできる。
【０１６４】
一実施形態では、インテグリンα１０サブユニット特異的ポリヌクレオチドプローブは、光子を任意に発することができる検出可能部分に連結している。この実施形態を使用することで、診断または調査される対象に、前記検出可能部分、例えば、フルオロフォアを励起することができる光源を用いて照射してもよい。光子を検出する方法としては、ＰＥＴスキャン、及びＳＰＥＣＴスキャンが挙げられるが、これらに限定されない。
【０１６５】
ある特定の実施形態では、検出可能部分は、フルオロフォア、酵素、または放射性トレーサからなる群から選択される。
【０１６６】
ポリヌクレオチド転写産物は、ＰＣＲ、好ましくは、Ｑ−ＰＣＲを用いて検出してもよい。
【０１６７】
さらなる実施形態では、生体試料中のインテグリンα１０サブユニットの存在は、ハイブリダイゼーション反応において、インテグリンα１０サブユニットＲＮＡまたはｃＤＮＡに結合するインテグリンα１０サブユニット核酸プローブを用いることによって検出される。
【０１６８】
核酸インテグリンα１０特異的標的化成分の例としては、マイクロＲＮＡ、短干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）、及び短ヘアピンＲＮＡ（ｓｈＲＮＡ）などのＤＮＡプローブ、アンチセンスＲＮＡ、またはＲＮＡｉが挙げられる。
【０１６９】
当該技術分野で周知の核酸を検出する典型的な方法としては、ノーザンブロット法、サザンブロット法、ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）、マイクロアレイ、インサイチュハイブリダイゼーションなどが挙げられるが、これらに限定されない。
【０１７０】
さらなる実施形態では、生体試料中のインテグリンα１０サブユニットの存在は、インテグリンα１０サブユニット結合ペプチドまたはタンパク質を用いることによって検出される。そのようなペプチドまたはタンパク質は、組み換え、化学合成、または天然源から精製してもよい。
【０１７１】
さらなる実施形態では、生体試料中のインテグリンα１０サブユニットの存在は、ハイブリダイゼーション反応において、インテグリンα１０サブユニットＲＮＡまたはｃＤＮＡに結合するインテグリンα１０サブユニット特異的抗体、またはインテグリンα１０サブユニット結合ペプチドまたはタンパク質、またはインテグリンα１０サブユニット核酸プローブを用いることによってインビボで検出される。
【０１７２】
細胞表面抗原及びポリヌクレオチドをインビボで検出する典型的な方法は、当該技術分野で周知であり、陽電子放出断層撮影法、Ｘ線コンピュータ断層撮影法（ＣＴ）、核磁気共鳴画像法（ＭＲＩ）、及び機能的磁気共鳴画像法（ｆＭＲＩ）、超音波、及び単一光子放射型コンピュータ断層撮影法（ＳＰＥＣＴ）が挙げられるが、これらに限定されない。特定の細胞表面抗原では、抗体または他の特異的結合タンパク質に結合した放射性トレーサによる免疫標識を用いてインビボイメージングすることができる。
【０１７３】
好ましくは、インビボイメージングに使用される抗体は、小さいサイズ及びエフェクター機能の不在により、Ｆａｂ断片及び単鎖抗体などの抗体断片である。
【０１７４】
方法のさらなる工程は、陽性及び／または陰性対照と検出されたインテグリンα１０サブユニットの量とを比較することで、中枢神経系の悪性新生物を検出することを包含してもよい。これは、陽性染色を陰性から区別することができる特定の実験設定において染色のバックグラウンドレベルを設定し、方法が予想通りに行われたこと、及び陽性染色が前記新生物の真の検出であるかを評価することによって行うことができる。
【０１７５】
さらに、陽性対照は、インテグリンα１０サブユニットを発現することが知られている細胞株または組織を含んでもよい。対照試料の例としては、膠芽腫細胞株が挙げられるが、これらに限定されない。
【０１７６】
さらに、陰性対照は、インテグリンα１０サブユニットを発現しないことが知られている細胞株または組織を含んでもよい。対照試料の例としては、脳、例えば、ヒト脳由来の正常細胞、組織、または細胞株が挙げられるが、これらに限定されない。
【０１７７】
ＩＶ．インテグリンα１０サブユニットと共発現するマーカー
悪性腫瘍細胞は、癌細胞とも呼ばれ、疾患として癌の礎である。これらの細胞は、腫瘍を開始し、腫瘍の進行を推進し、癌を遺伝性疾患として定義する発癌性及び腫瘍抑圧突然変異を有する（Ｈａｎａｈａｎ  ａｎｄ  Ｗｅｉｎｂｅｒｇ（２０１１）Ｃｅｌｌ  １４４（５）：６４６−７４））。
【０１７８】
悪性腫瘍細胞の具体的な特徴は、隣接組織に侵入し、血管に入り、及び遠位部位に転移することである。悪性細胞に加えて、腫瘍微小環境には、非悪性細胞（例えば、線維芽細胞、筋線維芽細胞、内皮細胞、周皮細胞、及び炎症性細胞）、及び腫瘍を取り囲み、腫瘍の成長を支持する分泌タンパク質も含まれる。腫瘍細胞と微小環境間のクロストークは、微小環境の組成物を一方向に変化させ、逆に、微小環境は、腫瘍細胞がどのように成長し、広がるかに影響を及ぼす（Ａｎｓｅｌｌ  ａｎｄ  Ｖｏｎｄｅｒｈｅｉｄｅ（２０１３）Ａｎｓｅｌｌ  ＳＭ，Ｖｏｎｄｅｒｈｅｉｄｅ  ＲＨ（２０１３）Ｃｅｌｌｕｌａｒ  ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｔｕｍｏｕｒ  ｍｉｃｒｏｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔ．Ａｍ  Ｓｏｃ  Ｃｌｉｎ  Ｏｎｃｏｌ  Ｅｄｕｃ  Ｂｏｏｋ）。
【０１７９】
腫瘍微小環境組成物は、腫瘍部位に応じて変化する。脳は、特に、小膠細胞、星状細胞、及び脳内皮細胞などの多くの特殊化した細胞型からなる。脳常駐細胞に加えて、脳腫瘍は、異なる集団の造血細胞によって浸潤することも示されている（Ｌｏｒｇｅｒ（２０１２）Ｃａｎｃｅｒｓ  ４：２１８−２４３）。
【０１８０】
多くの異なる細胞型が、癌治療の可能なターゲットである。例えば、脳の血管は、神経膠腫、周皮細胞における癌幹細胞集団の拡張及びメンテナンスに重要であることが示されており、腫瘍血管系とのそれらの相互作用は、動物モデルにおける脳内腫瘍成長に重要であることが示されており、腫瘍への内皮前駆細胞動員を阻害することは、治療的価値がある場合がある。
【０１８１】
血管が、癌細胞に栄養や酸素を供給することで腫瘍成長を促すことが良く認められている。加えて、腫瘍細胞は、血管を使用して、内皮細胞間の反管腔側管部位と星状細胞の終足過程に沿って移動することによって、脳実質を介して広がる。一次性脳腫瘍における癌幹細胞（ＣＳＣ）集団のメンテナンスは、いわゆる血管周囲のニッチの存在にも依る。
【０１８２】
単球系の細胞は、成熟状況に基づいて分類され、それらの子孫には、マクロファージ、及び樹状細胞が含まれる。これらの細胞の分化は、ＣＤ１１ｃ、ＣＤ１４、及びＣＤ６８などの種々の細胞表面マーカーによって定義される。
【０１８３】
単球細胞は、先天性免疫応答に必要不可欠であり、病原体に対する最初の抵抗線として作用しながら、適応免疫応答も活性化する。刺激の種類に応じて、マクロファージは、古典的なＭ１活性化（リポ多糖及びＩＦＮ−γによって刺激）、またはあるいはＭ２活性化（ＩＬ−４及びＩＬ−１３によって刺激）を被る場合がある。得られたＭ１及びＭ２マクロファージは、異なるサイトカインを産生し、先天性免疫応答において異なる機能的役割を有する。例えば、Ｍ１マクロファージは、ＩＬ−１２を分泌し、ＴＨ１細胞発達を促進するが、Ｍ２マクロファージは、ＩＬ−１０を産生し、ＴＨ２細胞の発達を容易にする（Ｓｃｈｍｉｅｄｅｒ  ｅｔ  ａｌ．（２０１２）Ｓｅｍｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｂｉｏｌ．２２：２８９−２９７）。Ｍ１マクロファージは、初期段階の腫瘍に動員され、炎症シグナルに応答して、腫瘍微小環境に浸潤する。その後、Ｍ１マクロファージは、炎症誘発性サイトカイン及びケモカインを放出し、Ｔ細胞及びＮＫ細胞の発達及び分化を促進する。後期段階では、マクロファージは、腫瘍関連マクロファージ（ＴＡＭ）と呼ばれる亜集団に分化する。ＴＡＭは、Ｍ２細胞に分裂して、ＴＨ２分化及び動員を促すサイトカインを放出する。さらに、ＴＡＭは、ＴＧＦ−などの抑制性サイトカインを分泌することで抗腫瘍免疫を阻害し、腫瘍成長の支援に関与している成長因子の血管新生及び発現の増加をもたらす。腫瘍内マクロファージの数または密度の増加は、大多数の悪性腫瘍の進行及び予後の両方と相関していることが、臨床観察により示唆されている（Ｂｉｎｇｌｅ  ｅｔ  ａｌ．（２００２）Ｂｉｎｇｌｅ  Ｌ，Ｂｒｏｗｎ  ＮＪ，Ｌｅｗｉｓ  ＣＥ．（２００２）。腫瘍進行における腫瘍関連マクロファージの役割は、Ｂｉｎｇｌｅ  ｅｔ  ａｌ（２００２）  Ｊ  Ｐａｔｈｏｌ．１９６：２５４−２６５に記載されている。
【０１８４】
実施例７及び図８〜９に示すように、本発明者らは、多くのマーカーが、様々な度合いでインテグリンα１０サブユニットと共発現することを見出した。これらのマーカーとしては、ＥＧＦＲｖＩＩＩ、ネスチン、ＰＳＡ−ＮＣＡＭ、ＧＦＡＰ、ＰＤＧＦＲｂ（ＣＤ１４０ｂ）、ＰＥＣＡＭ−１（ＣＤ３１）、ＣＤ４５、ＣＤ６８、ＣＤ１６３、及びＣＤ２０６が挙げられる。これらの知見に基づいて、本発明者らは、哺乳類の中枢神経系の悪性新生物を含む細胞を検出し、治療する多次元方法を提供する。
【０１８５】
従って、一態様では、本発明は、悪性または腫瘍関連哺乳類細胞の検出方法であって、
ａ）インテグリンα１０サブユニットポリペプチドを含む第１抗原；及び／または
ｂ）インテグリンα１０サブユニットポリペプチドまたはその断片または変異体をコードする第１ポリヌクレオチド転写産物；及び
ｃ）ＥＧＦＲｖＩＩＩ、ネスチン、ＰＳＡ−ＮＣＡＭ、ＧＦＡＰ、ＰＤＧＦＲｂ（ＣＤ１４０ｂ）、ＰＥＣＡＭ−１（ＣＤ３１）、ＣＤ４５、ＣＤ６８、ＣＤ１６３、及びＣＤ２０６からなる群から選択されるポリペプチドを含む第２抗原；及び／または
ｄ）ポリペプチドまたはその断片または変異体をコードする第２ポリヌクレオチド転写産物で、前記ポリペプチドは、ＥＧＦＲｖＩＩＩ、ネスチン、ＰＳＡ−ＮＣＡＭ、ＧＦＡＰ、ＰＤＧＦＲｂ（ＣＤ１４０ｂ）、ＰＥＣＡＭ−１（ＣＤ３１）、ＣＤ４５、ＣＤ６８、ＣＤ１６３、及びＣＤ２０６からなる群から選択される；
の存在または不在について、単離された試料中で分析することを含み、
ｃ）の第２抗原及び／またはｄ）の第２転写産物と共に、ａ）の第１抗原及び／またはｂ）の第１ポリヌクレオチド転写産物の存在は、前記哺乳類細胞が悪性細胞または腫瘍関連細胞であることを示す、方法に関する。
【０１８６】
一態様では、本発明は、哺乳類の悪性または腫瘍関連細胞の検出方法であって、
ａ）インテグリンα１０サブユニットポリペプチド及び／またはインテグリンα１０サブユニットポリヌクレオチド転写産物に特異的に結合することができる第１分子プローブを哺乳類に投与する工程、前記プローブは、光子を発することができる部分に共有結合している、及び
ｂ）ＥＧＦＲｖＩＩＩ、ネスチン、ＰＳＡ−ＮＣＡＭ、ＧＦＡＰ、ＰＤＧＦＲｂ（ＣＤ１４０ｂ）、ＰＥＣＡＭ−１（ＣＤ３１）、ＣＤ４５、ＣＤ６８、ＣＤ１６３、及びＣＤ２０６からなる群から選択されるポリペプチド、及び／またはＥＧＦＲｖＩＩＩ、ネスチン、ＰＳＡ−ＮＣＡＭ、ＧＦＡＰ、ＰＤＧＦＲｂ（ＣＤ１４０ｂ）、ＰＥＣＡＭ−１（ＣＤ３１）、ＣＤ４５、ＣＤ６８、ＣＤ１６３、及びＣＤ２０６からなる群から選択されるポリペプチドをコードするポリヌクレオチド転写産物に特異的に結合することができる第２分子プローブを対象に投与する工程、前記第２プローブは、第２光子を発することができる部分に共有結合している；
ｃ）前記第１及び前記第２部分から発した光子を検出することによって、中枢神経系またはその一部の画像を形成する工程
を含み、
前記第１及び前記第２部分からの光子の局在発光が、前記哺乳類の中枢神経系における悪性新生物を示す、方法に関する。
【０１８７】
ＥＧＦＲｖＩＩＩ
上皮成長因子受容体（ＥＧＦＲ）は、多くの場合、遺伝子増幅の結果として、種々のヒト上皮腫瘍で過剰発現される。ＥＧＦＲ遺伝子増幅のある腫瘍は、ＥＧＦＲ遺伝子再編成を含むことが多く、最も一般的な細胞外ドメイン突然変異は、ＥＧＦＲｖＩＩＩである。異常なＥＧＦＲｖＩＩＩシグナル伝達は、腫瘍進行の推進に重要であることが示されており、予後不良と相関していることが多い。ＥＧＦＲｖＩＩＩは、多形性膠芽腫（ＧＢＭ）をもつ患者のかなりの割合で発現されることが明らかである。しかしながら、他の腫瘍型におけるＥＧＦＲｖＩＩＩの存在は、論争中のままである（Ｇａｎ  ｅｔ  ａｌ（２０１３）ＦＥＢＳ  Ｊ  ２８０（２１）：５３５０−５３７０）。本発明者らは、ＥＧＦＲｖＩＩＩが、悪性細胞中でインテグリンα１０サブユニットと非常に高い程度に共発現することを見出した。従って、本発明の一実施形態では、インテグリンα１０サブユニット抗原とＥＧＦＲｖＩＩＩ抗原を共発現する細胞の検出は、前記細胞が、中枢神経系の悪性新生物の細胞、例えば、前記試料が得られる哺乳類中の神経膠腫の細胞などの悪性細胞であることを示す。別の実施形態では、インテグリンα１０サブユニットポリペプチドをコードするポリヌクレオチド転写産物；及びＥＧＦＲｖＩＩＩポリペプチドをコードするポリヌクレオチド転写産物を含む細胞の検出は、前記細胞が、中枢神経系の悪性新生物の細胞、例えば、前記試料が得られる哺乳類中の神経膠腫の細胞などの悪性細胞であることを示す。
【０１８８】
ネスチン
ネスチンは、ＶＩ型の中間フィラメント（ＩＦ）タンパク質である。これらの中間フィラメントタンパク質は、軸索の肥大成長に関与している神経細胞で主に発現される。ネスチンは、発達中の神経系の種々の領域内、及びインビトロ培養細胞中でＣＮＳ幹細胞を同定するのに最も広く使用されているマーカーである。本発明者らは、ネスチンが、いくつかのＣＮＳ細胞中でインテグリンα１０サブユニットと共発現されることを見出した。従って、本発明の一実施形態では、インテグリンα１０サブユニット抗原とネスチン抗原を共発現する細胞の検出は、前記細胞が、中枢神経系の悪性新生物の細胞、例えば、前記試料が得られる哺乳類中の神経膠腫の細胞などの悪性または腫瘍関連細胞であることを示す。別の実施形態では、インテグリンα１０サブユニットポリペプチドをコードするポリヌクレオチド転写産物；及びネスチンポリペプチドをコードするポリヌクレオチド転写産物を含む細胞の検出は、前記細胞が、中枢神経系の悪性新生物の細胞、例えば、前記試料が得られる哺乳類中の神経膠腫の細胞などの悪性または腫瘍関連細胞であることを示す。
【０１８９】
ＰＳＡ−ＮＣＡＭ
ポリシアル酸化された神経細胞接着分子（ＰＳＡ−ＮＣＡＭ）は、神経細胞を発達させて、移動し、未成熟な脊椎動物の神経系のシナプス形成をするマーカーである。本発明者らは、ＰＳＡ−ＮＣＡＭが、悪性または腫瘍関連細胞中でインテグリンα１０サブユニットと共発現されることを見出した。従って、本発明の一実施形態では、インテグリンα１０サブユニット抗原とＰＳＡ−ＮＣＡＭ抗原を共発現する細胞の検出は、、前記細胞が、中枢神経系の悪性新生物の細胞、例えば、前記試料が得られる哺乳類中の神経膠腫の細胞などの悪性または腫瘍関連細胞であることを示す。
【０１９０】
別の実施形態では、インテグリンα１０サブユニットポリペプチドをコードするポリヌクレオチド転写産物；及びＰＳＡ−ＮＣＡＭポリペプチドをコードするポリヌクレオチド転写産物を含む細胞の検出は、前記細胞が、中枢神経系の悪性新生物の細胞、例えば、前記試料が得られる哺乳類中の神経膠腫の細胞などの悪性または腫瘍関連細胞であることを示す。
【０１９１】
ＧＦＡＰ
グリア線維酸性タンパク質（ＧＦＡＰ）は、星状細胞及び上衣細胞を含む、多数の細胞型の中枢神経系（ＣＮＳ）によって発現される中間フィラメント（ＩＦ）タンパク質である。ＧＦＡＰは、星状細胞の機械的強度のみならず、細胞の形状の維持に役立つと考えられるが、その正確な機能は、それを細胞マーカーとして用いた多くの研究にもかかわらず、あまり理解されていないままである。本発明者らは、ＧＦＡＰが、悪性細胞中でインテグリンα１０サブユニットと共発現されることを見出した。従って、本発明の一実施形態では、インテグリンα１０サブユニット抗原とＧＦＡＰ抗原を共発現する細胞の検出は、、前記細胞が、中枢神経系の悪性新生物の細胞、例えば、前記試料が得られる哺乳類中の神経膠腫の細胞などの悪性または腫瘍関連細胞であることを示す。別の実施形態では、インテグリンα１０サブユニットポリペプチドをコードするポリヌクレオチド転写産物；及びＧＦＡＰポリペプチドをコードするポリヌクレオチド転写産物を含む細胞の検出は、前記細胞が、中枢神経系の悪性新生物の細胞、例えば、前記試料が得られる哺乳類中の神経膠腫の細胞などの悪性または腫瘍関連細胞であることを示す。
【０１９２】
ＰＤＧＦＲｂ（ＣＤ１４０ｂ）
β型血小板由来成長因子受容体は、ＰＤＧＦＲＢ遺伝子によってコードされるヒト中のタンパク質である。この遺伝子は、血小板由来成長因子ファミリーのメンバーのための細胞表面チロシンキナーゼ受容体をコードする。これらの成長因子は、間葉起源の細胞の分裂促進因子である。本発明者らは、ＰＤＧＦＲｂ／ＣＤ１４０ｂが、悪性細胞中でインテグリンα１０サブユニットと共発現されることを見出した。従って、本発明の一実施形態では、インテグリンα１０サブユニット抗原とＰＤＧＦＲｂ／ＣＤ１４０ｂ抗原を共発現する細胞の検出は、前記細胞が、中枢神経系の悪性新生物の細胞、例えば、前記試料が得られる哺乳類中の神経膠腫の細胞などの悪性または腫瘍関連細胞であることを示す。別の実施形態では、インテグリンα１０サブユニットポリペプチドをコードするポリヌクレオチド転写産物；及びＰＤＧＦＲｂ／ＣＤ１４０ｂポリペプチドをコードするポリヌクレオチド転写産物を含む細胞の検出は、前記細胞が、中枢神経系の悪性新生物の細胞、例えば、前記試料が得られる哺乳類中の神経膠腫の細胞などの悪性または腫瘍関連細胞であることを示す。
【０１９３】
ＰＥＣＡＭ−１（ＣＤ３１）
ＣＤ分類３１（ＣＤ３１）としても知られる血小板内皮細胞接着分子（ＰＥＣＡＭ−１）は、ヒト身体からの老人好中球の除去において重要な役割を果たす。ＰＥＣＡＭ−１は、通常、内皮細胞、血小板、マクロファージ、及びクッパー細胞、顆粒球、Ｔ／ＮＫ細胞、リンパ球、巨核球、破骨細胞、好中球で見られる。ＣＤ３１は、類上皮血管内皮腫、類上皮肉腫のような血管内皮腫、他の血管腫瘍、組織球悪性腫瘍、及び形質細胞腫を含む、ある特定の腫瘍でも発現される。カポジ肉腫及び癌腫などのいくつかの肉腫で極めてまれに見られる。本発明者らは、ＰＥＣＡＭ−１（ＣＤ３１）が、悪性細胞中でインテグリンα１０サブユニットと共発現されることを見出した。従って、本発明の一実施形態では、インテグリンα１０サブユニット抗原とＰＥＣＡＭ−１（ＣＤ３１）抗原を共発現する細胞の検出は、前記細胞が、中枢神経系の悪性新生物の細胞、例えば、前記試料が得られる哺乳類中の神経膠腫の細胞などの悪性または腫瘍関連細胞であることを示す。別の実施形態では、インテグリンα１０サブユニットポリペプチドをコードするポリヌクレオチド転写産物；及びＰＥＣＡＭ−１（ＣＤ３１）ポリペプチドをコードするポリヌクレオチド転写産物を含む細胞の検出は、前記細胞が、中枢神経系の悪性新生物の細胞、例えば、前記試料が得られる哺乳類中の神経膠腫の細胞などの悪性または腫瘍関連細胞であることを示す。
【０１９４】
ＣＤ４５
Ｃ型タンパク質チロシンホスファターゼ受容体（ＰＴＰＲＣ）としても知られるＣＤ４５は、ＰＴＰＲＣ遺伝子によってコードされるヒト中の酵素である。ＣＤ４５は、これらの細胞の活性化を支援する赤血球及び形質細胞以外の全ての分化造血細胞で種々の形態で存在するＩ型の膜貫通タンパク質である。ＣＤ４５は、リンパ腫、Ｂ細胞慢性リンパ球性白血病、有毛細胞白血病、及び急性非リンパ球性白血病で発現される。本発明者らは、ＣＤ４５が、悪性細胞中でインテグリンα１０サブユニットと高度に共発現されることを見出した。従って、本発明の一実施形態では、インテグリンα１０サブユニット抗原とＣＤ４５抗原を共発現する細胞の検出は、前記細胞が、中枢神経系の悪性新生物の細胞、例えば、前記試料が得られる哺乳類中の神経膠腫の細胞などの悪性または腫瘍関連細胞であることを示す。
【０１９５】
別の実施形態では、インテグリンα１０サブユニットポリペプチドをコードするポリヌクレオチド転写産物；及びＣＤ４５ポリペプチドをコードするポリヌクレオチド転写産物を含む細胞の検出は、前記細胞が、中枢神経系の悪性新生物の細胞、例えば、前記試料が得られる哺乳類中の神経膠腫の細胞などの悪性または腫瘍関連細胞であることを示す。
【０１９６】
ＣＤ６８
ＣＤ６８（ＣＤ分類６８）は、低密度リポタンパク質に結合する糖タンパク質である。ＣＤ６８は、広範囲の異なる血液細胞及び筋細胞の細胞質顆粒で見られる。単球、組織球、巨細胞、クッパー細胞、及び破骨細胞を含む、マクロファージ系の種々の細胞のマーカーとして特に有用であると考えられる。マクロファージ中の存在は、これらの細胞の増殖または異常に関連する病態、例えば、悪性組織球症、組織球リンパ腫、及びゴーシェ病の診断にも有用にさせる。本発明者らは、ＣＤ６８が、悪性細胞中でインテグリンα１０サブユニットと非常に高い程度に共発現されることを見出した。従って、本発明の一実施形態では、インテグリンα１０サブユニット抗原とＣＤ６８抗原を共発現する細胞の検出は、、前記細胞が、中枢神経系の悪性新生物の細胞、例えば、前記試料が得られる哺乳類中の神経膠腫の細胞などの悪性または腫瘍関連細胞であることを示す。別の実施形態では、インテグリンα１０サブユニットポリペプチドをコードするポリヌクレオチド転写産物；及びＣＤ６８ポリペプチドをコードするポリヌクレオチド転写産物を含む細胞の検出は、前記細胞が、中枢神経系の悪性新生物の細胞、例えば、前記試料が得られる哺乳類中の神経膠腫の細胞などの悪性または腫瘍関連細胞であることを示す。
【０１９７】
ＣＤ１６３
ＣＤ１６３（ＣＤ分類１６３）は、ヘモグロビン−ハプトグロビン複合体のスカベンジャー受容体である。単球／マクロファージ系の細胞をマークすることも示されている。本発明者らは、ＣＤ１６３が、悪性細胞中でインテグリンα１０サブユニットと共発現されることを見出した。従って、本発明の一実施形態では、インテグリンα１０サブユニット抗原とＣＤ１６３抗原を共発現する細胞の検出は、前記細胞が、中枢神経系の悪性新生物の細胞、例えば、前記試料が得られる哺乳類中の神経膠腫の細胞などの悪性または腫瘍関連細胞であることを示す。別の実施形態では、インテグリンα１０サブユニットポリペプチドをコードするポリヌクレオチド転写産物；及びＣＤ１６３ポリペプチドをコードするポリヌクレオチド転写産物を含む細胞の検出は、前記細胞が、中枢神経系の悪性新生物の細胞、例えば、前記試料が得られる哺乳類中の神経膠腫の細胞などの悪性または腫瘍関連細胞であることを示す。
【０１９８】
ＣＤ２０６
マンノース受容体とも呼ばれるＣＤ２０６（ＣＤ分類２０６）は、マクロファージ及び未成熟な樹状細胞の表面に主に存在するが、ヒト皮膚線維芽細胞、及びケラチノサイトなどの皮膚細胞の表面にも発現される。本発明者らは、ＣＤ２０６が、悪性細胞中でインテグリンα１０サブユニットと共発現されることを見出した。従って、本発明の一実施形態では、インテグリンα１０サブユニット抗原とＣＤ２０６抗原を共発現する細胞の検出は、前記細胞が、中枢神経系の悪性新生物の細胞、例えば、前記試料が得られる哺乳類中の神経膠腫の細胞などの悪性または腫瘍関連細胞であることを示す。別の実施形態では、インテグリンα１０サブユニットポリペプチドをコードするポリヌクレオチド転写産物；及びＣＤ２０６ポリペプチドをコードするポリヌクレオチド転写産物を含む細胞の検出は、前記細胞が、中枢神経系の悪性新生物の細胞、例えば、前記試料が得られる哺乳類中の神経膠腫の細胞などの悪性または腫瘍関連細胞であることを示す。
【０１９９】
本発明のデータと文献証拠に基づいて、本発明者らは、インテグリンα１０サブユニットと、ＥＧＦＲｖＩＩＩ、ネスチン、ＰＳＡ−ＮＣＡＭ、ＧＦＡＰ、ＰＤＧＦＲｂ（ＣＤ１４０ｂ）、ＰＥＣＡＭ−１（ＣＤ３１）、ＣＤ４５、ＣＤ６８、ＣＤ１６３、及びＣＤ２０６からなる群から選択されるさらなるポリペプチドとを発現する細胞ポリペプチドを同定する方法を提供する。発現パターンに応じて、細胞は、表１に示すように同定することができる。
【０２００】
本発明に従って分析された試料は、悪性細胞または腫瘍関連細胞を含有する。一実施形態では、インテグリンα１０サブユニットを発現する細胞は、悪性細胞である。一実施形態では、インテグリンα１０サブユニットを発現する細胞は、腫瘍関連細胞である。一実施形態では、悪性細胞または腫瘍−関連細胞は、グリア細胞；幹細胞；前駆細胞；星状細胞；周皮細胞；内皮細胞；造血細胞；及び小膠細胞からなる群から選択される細胞を含む。
【０２０１】
造血細胞は、例えば、造血幹細胞、Ｔ細胞、Ｂ細胞、形質細胞、ＮＫ細胞、樹状細胞、マクロファージ、及び単球からなる群から選択されてもよい。特定の実施形態では、マクロファージは、腫瘍関連マクロファージ（ＴＡＭ）である。
【０２０２】
一実施形態では、細胞は、ＥＧＦＲｖＩＩＩ＋細胞、ネスチン＋細胞、ＰＳＡ−ＮＣＡＭ＋細胞、ＧＦＡＰ＋細胞、ＰＤＧＦＲｂ＋細胞（ＣＤ１４０ｂ＋細胞）、ＰＥＣＡＭ−１＋細胞（ＣＤ３１＋細胞）、ＣＤ４５＋細胞、ＣＤ６８＋細胞、ＣＤ１６３＋細胞、及びＣＤ２０６＋細胞、またはそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される。
【０２０３】
Ｖ．試料
試料は、中枢神経系由来またはから得られる任意の試料であってよい。組織または血液試料を得る方法は、当業者にはルーチンである。ある特定の実施形態では、生体試料は、脳組織試料または脊髄組織試料である。さらなる実施形態では、生体試料は、脳腫瘍組織試料または脊髄腫瘍組織試料である。さらなる実施形態では、生体試料は、血液試料である。
【０２０４】
実施例４及び図５に示すように、全血または血漿などの血液に存在する細胞中でインテグリンα１０サブユニットを検出することも可能である。従って、一実施形態では、中枢神経系の悪性新生物の検出または診断は、血液試料を採取し、前記血液試料中に存在する細胞上または細胞中のインテグリンα１０サブユニットまたはその断片（例えば、配列番号２または３を含む断片）の存在または不在を分析することによって行われる。
【０２０５】
さらなる実施形態では、生体試料は、対象であり、すなわち、インテグリンα１０サブユニット発現の試験は、インビボまたはインサイチュで行われる。手術によって対象から中枢神経系の悪性新生物を除去した後、インテグリンα１０サブユニット特異的抗体、またはインテグリンα１０サブユニット結合ペプチドまたはタンパク質、またはインテグリンα１０サブユニット核酸プローブを使用して、腫瘍から残渣細胞を検出してもよい。これは、脳腫瘍を除去した空間に接触させて、インテグリンα１０サブユニット特異的抗体、またはインテグリンα１０サブユニット結合ペプチドまたはタンパク質、またはインテグリンα１０サブユニット核酸プローブを、腫瘍除去後に現れる空洞に塗布することで行われる。従って、塗布されたインテグリンα１０サブユニット特異的抗体、またはインテグリンα１０サブユニット結合ペプチドまたはタンパク質、またはインテグリンα１０サブユニット核酸プローブは、腫瘍の除去後の空洞に残された神経膠腫腫瘍から任意の残渣細胞を検出する。
【０２０６】
さらなる実施形態では、インテグリンα１０サブユニット特異的抗体、またはインテグリンα１０サブユニット結合ペプチドまたはタンパク質、またはインテグリンα１０サブユニット核酸プローブは、ブラシングまたは噴霧によって、腫瘍除去後に現れる空洞に塗布してもよい。
【０２０７】
インビボで組織または細胞を検出する多くの検出方法が、当業者に知られている。そのようなイメージング方法としては、陽電子放出断層撮影法（ＰＥＴ）、単光子放出コンピュータ断層撮影法（ＳＰＥＣＴ）、Ｘ線コンピュータ断層撮影法（ＣＴ）、核磁気共鳴画像法（ＭＲＩ）、機能的磁気共鳴画像法（ｆＭＲＩ）、及び超音波が挙げられる。
【０２０８】
本発明のさらなる態様は、生体試料中の神経膠腫をインビトロ、インサイチュ、またはインビボで検出するための、インテグリンα１０サブユニット特異的抗体、またはインテグリンα１０サブユニット結合ペプチドまたはタンパク質、またはインテグリンα１０サブユニット核酸プローブの使用である。
【０２０９】
ＶＩ．キット
本開示のさらなる態様は、神経膠腫などの中枢神経系の悪性新生物を生体試料中で検出するためのキットであって、
ａ）インテグリンα１０サブユニットに特異的な抗体、インテグリンα１０サブユニット抗原に結合するペプチド、インテグリンα１０サブユニット転写産物にハイブリダイズすることができるポリヌクレオチドプローブ；または
ｂ）インテグリンα１０サブユニット転写産物を増幅する一対のプライマー；及び
ｃ）任意に、取扱説明書を含む、キットを提供する。
【０２１０】
さらに、前記キットは、インテグリンα１０サブユニットを発現するかまたは発現しないことが知られている細胞株または組織などの陽性及び／または陰性対照試料を含んでもよい。対照試料の例としては、脳、例えば、ヒト脳由来の膠芽腫細胞株、正常細胞、組織、または細胞株が挙げられるが、これらに限定されない。さらなる実施形態では、脳細胞または細胞株は、成人起源である。
【０２１１】
いくつかの実施形態では、キットは、例えば、抗インテグリンα１０サブユニット特異的抗体、またはインテグリンα１０サブユニット抗原に結合しているペプチド、またはインテグリンα１０サブユニットまたはその相補体をコードする核酸プローブを使用する手段を開示している指示書を含む。指示書は、電子形態で書かれていてもよく、または視覚であってもよい。
【０２１２】
いくつかの実施形態では、キットは、キットが設計される特定の用途を容易にするさらなる成分も含んでよい。従って、例えば、キットは、開示された方法の実施のために日常的に使用される緩衝液及び他の試薬を含み得る。そのようなキット及び適当な内容物は、当業者に周知である。
【０２１３】
ある特定の実施形態では、キットは、本明細書の他の箇所に記載されるように、インテグリンα１０サブユニットと共発現または共局在化することが知られている１つ以上のさらなるマーカーを検出するための抗体などのさらなる試薬を含む。
【０２１４】
ＶＩＩ．検出可能部分
本発明の抗インテグリンα１０サブユニット抗体は、検出可能部分を含んでもよく、例えば、抗体は、検出可能部分に共有結合してもよい。
【０２１５】
一実施形態では、抗体は、フルオロフォア、酵素、または放射性トレーサ、または放射性同位体からなる群から選択される検出可能部分に共有結合している。一実施形態では、検出可能部分は、陽電子放出体、及びガンマ放出体から選択される放射性トレーサである。一実施形態では、放射性同位体は、９９ｍＴｃ、１１１Ｉｎ、６７Ｇａ、６８Ｇａ、７２Ａｓ、８９Ｚｒ、１２３Ｉ、及び２０１ＴＩからなる群から選択される。一実施形態では、抗体は、８６ｙ／９０ｙまたは１２４Ｉ／２１１Ａｔなどの一対の検出可能な核種と細胞毒性放射性核種を含む。
【０２１６】
一実施形態では、放射性同位体は、検出可能部分として、かつ、細胞毒性部分としてマルチモーダル方式で同時に作用することができる。
【０２１７】
一実施形態では、検出可能部分は、常磁性同位体、例えば、１５７Ｇｄ、５５Ｍｎ、１６２Ｄｙ、５２Ｃｒ、及び５６Ｆｅからなる群から選択されるものを含むかまたはからなる。一実施形態では、検出可能部分は、ＳＰＥＣＴ、ＰＥＴ、ＭＲＩ、光学または超音波イメージングなどのイメージング技術によって検出可能である。
【０２１８】
一実施形態では、細胞毒性部分及び／または検出可能部分は、結合部分を介して抗体またはその抗原結合性断片に間接的に連結している。結合部分は、例えば、キレート剤、例えば、１，４，７，１０−テトラアザシクロドデカン−１，４，７，１０四酢酸（ＤＯＴＡ）、デフェロキサミン（ＤＦＯ）の誘導体、ジエチレントリアミンペンタ酢酸（ＤＴＰＡ）の誘導体、Ｓ−２−（４−イソチオシアナトベンジル）−１，４，７−トリアザシクロノナン−１，４，７−三酢酸（ＮＯＴＡ）の誘導体、及び１，４，８，１１−テトラアザシクロドデカン−１，４，８，１１−四酢酸（ＴＥＴＡ）の誘導体からなる群から選択されるキレート剤であってもよい。
【０２１９】
項目
［項目１］
インテグリンα１０サブユニットに特異的に結合する抗体を含む、中枢神経系における悪性新生物の治療に使用するための組成物。
［項目２］
抗体が、細胞毒性部分に共有結合している、項目１に記載の使用のための組成物。
［項目３］
細胞毒性部分が、毒素、化学療法剤、及び放射性物質から選択される、項目１〜２のいずれか１項に記載の使用のための組成物。
［項目４］
毒素が、リボソーム不活性化タンパク質である、項目１〜３のいずれか１項に記載の使用のための組成物。
［項目５］
リボソーム不活性化タンパク質が、志賀及び志賀様毒素；トリコサンチン及びルフィンなどのＩ型リボソーム不活性化タンパク質；リシン、凝集素、及びアブリンなどのＩＩ型リボソーム不活性化タンパク質；及びサポリンからなる群から選択される、項目１〜４のいずれか１項に記載の使用のための組成物。
［項目６］
リボソーム不活性化タンパク質が、サポリンである、項目１〜５のいずれか１項に記載の使用のための組成物。
［項目７］
抗体が、生体応答調節物質に共有結合している、項目１〜６のいずれか１項に記載の使用のための組成物。
［項目８］
生体応答調節物質が、リンホカインまたはインターフェロンなどのサイトカインである、項目１〜７のいずれか１項に記載の使用のための組成物。
［項目９］
組成物が、１つ以上の化学療法剤をさらに含む、項目１〜８のいずれか１項に記載の使用のための組成物。
［項目１０］
組成物が、少なくとも１つの薬学的に許容される希釈剤、担体、または賦形剤をさらに含む、項目１〜９のいずれか１項に記載の使用のための組成物。
［項目１１］
インテグリンα１０サブユニットが、インテグリンα１０サブユニットの天然に存在する変異体、インテグリンα１０サブユニットのアイソフォーム、またはインテグリンα１０サブユニットのスプライス変異体である、項目１〜１０のいずれか１項に記載の使用のための組成物。
［項目１２］
抗体が、インテグリンα１０サブユニットを発現する細胞の細胞死を誘発することができ、及び／または、該細胞の成長及び／または増殖を阻害することができる、項目１〜１１のいずれか１項に記載の使用のための組成物。
［項目１３］
細胞が、悪性細胞または腫瘍関連細胞である、項目１〜１２のいずれか１項に記載の使用のための組成物。
［項目１４］
悪性細胞または腫瘍関連細胞が、グリア細胞；周皮細胞；内皮細胞；造血細胞；小膠細胞、及び幹細胞からなる群から選択される細胞を含む、項目１〜１３のいずれか１項に記載の使用のための組成物。
［項目１５］
造血細胞が、造血幹細胞、Ｔ細胞、Ｂ細胞、形質細胞、ＮＫ細胞、樹状細胞、マクロファージ、及び単球からなる群から選択される、項目１〜１４のいずれか１項に記載の使用のための組成物。
［項目１６］
マクロファージが、腫瘍関連マクロファージ（ＴＡＭ）である、項目１〜１５のいずれか１項に記載の使用のための組成物。
［項目１７］
中枢神経系における悪性新生物が、インテグリンα１０サブユニットを発現する細胞に関連付けられている、項目１〜１６のいずれか１項に記載の使用のための組成物。
［項目１８］
インテグリンα１０サブユニットが、インテグリンα１０β１ヘテロ二量体の一部である、項目１〜１７のいずれか１項に記載の使用のための組成物。
［項目１９］
それを必要とする対象の中枢神経系における悪性新生物を治療する方法であって、インテグリンα１０サブユニットに特異的に結合する抗体の臨床的に有効な量を前記対象に投与することを含む、方法。
［項目２０］
前記治療が、予防、改善、または治癒である、項目１〜１９のいずれか１項に記載の治療方法。
［項目２１］
前記治療が、対象中でインテグリンα１０サブユニットの検出時に開始される、項目１〜２０のいずれか１項に記載の治療方法。
［項目２２］
中枢神経系における悪性新生物に関連付けられた細胞の細胞死を誘発する、及び／または、該細胞の成長及び／または増殖を阻害する方法であって、細胞が、インテグリンα１０サブユニットを発現する、方法。
［項目２３］
哺乳類の中枢神経系の悪性新生物に関連付けられた細胞を検出するのに使用されるインテグリンα１０サブユニットに特異性を有する抗体を含むかまたはからなる薬剤であって、細胞が、インテグリンα１０サブユニットを発現する、薬剤。
［項目２４］
哺乳類の中枢神経系における悪性新生物の検出方法であって、
ａ）インテグリンα１０サブユニットポリペプチド及び／またはインテグリンα１０サブユニットポリヌクレオチド転写産物に特異的に結合することができる分子プローブを哺乳類に投与する工程、前記プローブは、光子を発することができる部分に共有結合している、及び
ｂ）前記部分から発した光子を検出し、中枢神経系またはその一部の画像を形成する工程
を含み、
前記部分からの光子の局在発光が、前記哺乳類の中枢神経系における悪性新生物を示す、方法。
［項目２５］
哺乳類の中枢神経系における悪性新生物の検出方法であって、
ａ）インテグリンα１０サブユニットポリペプチドを含む抗原；及び／または
ｂ）インテグリンα１０サブユニットポリペプチドまたはその断片または変異体をコードするポリヌクレオチド転写産物
の存在または不在について、単離された試料中で分析することを含み、
ａ）の抗原及び／またはｂ）のポリヌクレオチド転写産物の存在は、哺乳類の中枢神経系における悪性新生物を示す、方法。
［項目２６］
哺乳類の中枢神経系における悪性新生物を診断するためのインビトロ診断方法であって、
ａ）インビトロ試料を、インテグリンα１０サブユニットポリペプチドまたはインテグリンα１０サブユニットポリヌクレオチド転写産物に特異的に結合することができる分子プローブに接触させる工程、前記プローブは、光子を発することができる部分に共有結合している、及び
ｂ）前記部分から発した光子を検出し、試料の画像を形成する工程
を含み、
前記部分からの光子の局在発光が、前記哺乳類の中枢神経系における悪性新生物を示す、方法。
［項目２７］
単離された試料におけるインテグリンα１０サブユニットを検出するためのインビトロ方法であって、
ａ）インテグリンα１０サブユニットポリペプチドを含む抗原；及び／または
ｂ）インテグリンα１０サブユニットポリペプチドまたはその断片または変異体をコードするポリヌクレオチド転写産物、
の存在または不在について、単離された試料中で分析することを含み、
ａ）の抗原及び／またはｂ）のポリヌクレオチド転写産物の存在は、前記哺乳類の中枢神経系における悪性新生物を示す、方法。
［項目２８］
生体試料中の中枢神経系の悪性新生物をインビトロ、インサイチュ、またはインビボで検出するための、インテグリンα１０サブユニットポリペプチドに特異的に結合することができる抗インテグリンα１０サブユニット抗体の使用。
［項目２９］
生体試料中の中枢神経系の悪性新生物をインビトロ、インサイチュ、またはインビボで検出するための、ハイブリダイゼーション反応においてインテグリンα１０サブユニットｍＲＮＡまたはｃＤＮＡに特異的に結合することができるインテグリンα１０サブユニット核酸プローブの使用。
［項目３０］
中枢神経系の悪性新生物を診断するためのキットの調製におけるインテグリンα１０サブユニット核酸プローブ化合物の使用。
［項目３１］
中枢神経系の悪性新生物を診断するためのキットの調製における抗インテグリンα１０サブユニット特異的抗体の使用。
［項目３２］
哺乳類が中枢神経系の悪性新生物を有するかどうかを診断、監視、または判断するための診断剤の製造のためのインテグリンα１０サブユニット核酸プローブ化合物の使用であって、前記診断剤は、生体試料中のインテグリンα１０サブユニットポリヌクレオチドの存在を測定するために製造され、
前記試料中の前記インテグリンα１０サブユニットポリヌクレオチドの存在は、前記哺乳類の中枢神経系の悪性新生物を示す、使用。
［項目３３］
哺乳類が中枢神経系の悪性新生物を有するかどうかを診断、監視、または判断するための診断剤の製造のための抗インテグリンα１０サブユニット特異的抗体の使用であって、前記診断剤は、試料中のインテグリンα１０サブユニットポリペプチドの存在を測定するために製造され、前記試料中の前記インテグリンα１０サブユニットポリペプチドの存在は、前記哺乳類の中枢神経系の悪性新生物を示す、使用。
［項目３４］
悪性または腫瘍関連哺乳類細胞の検出方法であって、
ａ）インテグリンα１０サブユニットポリペプチドを含む第１抗原；及び／または
ｂ）インテグリンα１０サブユニットポリペプチドまたはその断片または変異体をコードする第１ポリヌクレオチド転写産物；及び
ｃ）ＥＧＦＲｖＩＩＩ、ネスチン、ＰＳＡ−ＮＣＡＭ、ＧＦＡＰ、ＰＤＧＦＲｂ（ＣＤ１４０ｂ）、ＰＥＣＡＭ−１（ＣＤ３１）、ＣＤ４５、ＣＤ６８、ＣＤ１６３、及びＣＤ２０６からなる群から選択されるポリペプチドを含む第２抗原；及び／または
ｄ）ポリペプチドまたはその断片または変異体をコードする第２ポリヌクレオチド転写産物で、前記ポリペプチドは、ＥＧＦＲｖＩＩＩ、ネスチン、ＰＳＡ−ＮＣＡＭ、ＧＦＡＰ、ＰＤＧＦＲｂ（ＣＤ１４０ｂ）、ＰＥＣＡＭ−１（ＣＤ３１）、ＣＤ４５、ＣＤ６８、ＣＤ１６３、及びＣＤ２０６からなる群から選択される；
の存在または不在について、単離された試料中で分析することを含み、
ｃ）の第２抗原及び／またはｄ）の第２転写産物と共に、ａ）の第１抗原及び／またはｂ）の第１ポリヌクレオチド転写産物の存在は、哺乳類細胞が悪性細胞または腫瘍関連細胞であることを示す、方法。
［項目３５］
哺乳類の悪性または腫瘍関連細胞の検出方法であって、
ａ）インテグリンα１０サブユニットポリペプチド及び／またはインテグリンα１０サブユニットポリヌクレオチド転写産物に特異的に結合することができる第１分子プローブを哺乳類に投与する工程；前記第１プローブは、光子を発することができる第１部分に共有結合している；及び
ｂ）ＥＧＦＲｖＩＩＩ、ネスチン、ＰＳＡ−ＮＣＡＭ、ＧＦＡＰ、ＰＤＧＦＲｂ（ＣＤ１４０ｂ）、ＰＥＣＡＭ−１（ＣＤ３１）、ＣＤ４５、ＣＤ６８、ＣＤ１６３、及びＣＤ２０６からなる群から選択されるポリペプチド；及び／またはＥＧＦＲｖＩＩＩ、ネスチン、ＰＳＡ−ＮＣＡＭ、ＧＦＡＰ、ＰＤＧＦＲｂ（ＣＤ１４０ｂ）、ＰＥＣＡＭ−１（ＣＤ３１）、ＣＤ４５、ＣＤ６８、ＣＤ１６３、及びＣＤ２０６からなる群から選択されるポリペプチドをコードするポリヌクレオチド転写産物に特異的に結合することができる第２分子プローブを哺乳類に投与する工程；前記第２プローブは、第２光子を発することができる部分に共有結合している；
ｃ）前記第１及び前記第２部分から発した光子を検出することによって、中枢神経系またはその一部の画像を形成する工程、前記第１及び前記第２部分からの光子の局在発光が、前記哺乳類の悪性または腫瘍関連細胞を示す
を含む、方法。
［項目３６］
前記試料が、悪性細胞または腫瘍関連細胞を含む、項目１〜３５のいずれか１項に記載の薬剤、方法、または使用。
［項目３７］
悪性細胞または腫瘍関連細胞が、グリア細胞；星状細胞；周皮細胞；内皮細胞；造血細胞；小膠細胞、及び幹細胞からなる群から選択される細胞を含む、項目１〜３６のいずれか１項に記載の薬剤、方法、または使用。
［項目３８］
造血細胞が、造血幹細胞、Ｔ細胞、Ｂ細胞、形質細胞、ＮＫ細胞、樹状細胞、マクロファージ、及び単球からなる群から選択される、項目１〜３７のいずれか１項に記載の薬剤、方法、または使用。
［項目３９］
マクロファージが、腫瘍関連マクロファージ（ＴＡＭ）である、項目１〜３８のいずれか１項に記載の薬剤、方法、または使用。
［項目４０］
前記細胞が、ＥＧＦＲｖＩＩＩ＋細胞、ネスチン＋細胞、ＰＳＡ−ＮＣＡＭ＋細胞、ＧＦＡＰ＋細胞、ＰＤＧＦＲｂ＋細胞（ＣＤ１４０ｂ＋細胞）、ＰＥＣＡＭ−１＋細胞（ＣＤ３１＋細胞）、ＣＤ４５＋細胞、ＣＤ６８＋細胞、ＣＤ１６３＋細胞、及びＣＤ２０６＋細胞、またはそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される、項目１〜３９のいずれか１項に記載の薬剤、方法、または使用。
［項目４１］
前記細胞が、インテグリンα１０サブユニット＋及びＥＧＦＲｖＩＩＩ＋細胞である、項目１〜４０のいずれか１項に記載の薬剤、方法、または使用。
［項目４２］
前記細胞が、インテグリンα１０サブユニット＋及びネスチン＋細胞である、項目１〜４１のいずれか１項に記載の薬剤、方法、または使用。
［項目４３］
前記細胞が、インテグリンα１０サブユニット＋及びＰＳＡ−ＮＣＡＭ＋細胞である、項目１〜４２のいずれか１項に記載の薬剤、方法、または使用。
［項目４４］
前記細胞が、インテグリンα１０サブユニット＋及びＧＦＡＰ＋細胞である、項目１〜４３のいずれか１項に記載の薬剤、方法、または使用。
［項目４５］
前記細胞が、インテグリンα１０サブユニット＋及びＰＤＧＦＲｂ＋細胞（ＣＤ１４０ｂ＋細胞）である、項目１〜４４のいずれか１項に記載の薬剤、方法、または使用。
［項目４６］
前記細胞が、インテグリンα１０サブユニット＋及びＰＥＣＡＭ−１＋細胞（ＣＤ３１＋細胞）である、項目１〜４５のいずれか１項に記載の薬剤、方法、または使用。
［項目４７］
前記細胞が、インテグリンα１０サブユニット＋及びＣＤ４５＋細胞である、項目１〜４６のいずれか１項に記載の薬剤、方法、または使用。
［項目４８］
前記細胞が、インテグリンα１０サブユニット＋及びＣＤ６８＋細胞である、項目１〜４７のいずれか１項に記載の薬剤、方法、または使用。
［項目４９］
前記細胞が、インテグリンα１０サブユニット＋及びＣＤ１６３＋細胞である、項目１〜４８のいずれか１項に記載の薬剤、方法、または使用。
［項目５０］
前記細胞が、インテグリンα１０サブユニット＋及びＣＤ２０６＋細胞である、項目１〜４９のいずれか１項に記載の薬剤、方法、または使用。
［項目５１］
ａ）ＥＧＦＲｖＩＩＩ、ネスチン、ＰＳＡ−ＮＣＡＭ、ＧＦＡＰ、ＰＤＧＦＲｂ（ＣＤ１４０ｂ）、ＰＥＣＡＭ−１（ＣＤ３１）、ＣＤ４５、ＣＤ６８、ＣＤ１６３、及びＣＤ２０６からなる群から選択されるポリペプチドを含む抗原；及び／または
ｂ）ポリペプチドまたはその断片または変異体をコードするポリヌクレオチド転写産物、前記ポリペプチドは、ＥＧＦＲｖＩＩＩ、ネスチン、ＰＳＡ−ＮＣＡＭ、ＧＦＡＰ、ＰＤＧＦＲｂ（ＣＤ１４０ｂ）、ＰＥＣＡＭ−１（ＣＤ３１）、ＣＤ４５、ＣＤ６８、ＣＤ１６３、及びＣＤ２０６からなる群から選択される
の少なくとも１つを検出することをさらに含む、項目１〜５０のいずれか１項に記載の薬剤、方法、または使用。
［項目５２］
悪性新生物が、
ａ）以下のものから選択される神経上皮組織の腫瘍
ｉ）毛様細胞性星細胞腫（ＩＣＤ−Ｏ  ９４２１／１、ＷＨＯグレードＩ）、毛様類粘液性星細胞腫（ＩＣＤ−Ｏ  ９４２５／３、ＷＨＯグレードＩＩ）、上衣下巨細胞性星細胞腫（ＩＣＤ−Ｏ  ９３８４／１、ＷＨＯグレードＩ）、多形性黄色星状膠細胞腫（ＩＣＤ−Ｏ  ９４２４／３、ＷＨＯグレードＩＩ）、びまん性星細胞腫（ＩＣＤ−Ｏ  ９４００／３、ＷＨＯグレードＩＩ）、退形成性星細胞腫（ＩＣＤ−Ｏ  ９４０１／３、ＷＨＯグレードＩＩＩ）、膠芽腫（ＩＣＤ−Ｏ  ９４４０／３、ＷＨＯグレードＩＶ）、巨細胞性膠芽腫（ＩＣＤ−Ｏ  ９４４１／３、ＷＨＯグレードＩＶ）、膠肉腫（ＩＣＤ−Ｏ  ９４４２／３、ＷＨＯグレードＩＶ）、膠腫脳腫瘍（ＩＣＤ−Ｏ  ９３８１／３、ＷＨＯグレードＩＩＩ）から選択される星細胞系腫瘍、及び
ｉｉ）乏突起膠腫（ＩＣＤ−Ｏ  ９４５０／３、ＷＨＯグレードＩＩ）、及び退形成性乏突起膠腫（ＩＣＤ−Ｏ  ９４５１／３、ＷＨＯグレードＩＩＩ）から選択される乏突起神経膠腫瘍、及び
ｉｉｉ）乏突起膠星細胞腫（ＩＣＤ−Ｏ  ９３８２／３、ＷＨＯグレードＩＩ）、及び退形成性乏突起星細胞腫（ＩＣＤ−Ｏ  ９３８２／３、ＷＨＯグレードＩＩＩ）から選択される乏突起膠細胞系腫瘍、及び
ｉｖ）上衣下腫（ＩＣＤ−Ｏ  ９３８３／１、ＷＨＯグレードＩ）、粘液乳頭状上衣腫（ＩＣＤ−Ｏ  ９３９４／１、ＷＨＯグレードＩ）、上衣腫（ＩＣＤ−Ｏ  ９３９１／３、ＷＨＯグレードＩＩ）、退形成性上衣腫（ＩＣＤ−Ｏ  ９３９２／３、ＷＨＯグレードＩＩＩ）から選択される上衣腫瘍、及び
ｖ）脈絡叢乳頭腫（ＩＣＤ−Ｏ  ９３９０／０、ＷＨＯグレードＩ）、非定型脈絡叢乳頭腫（ＩＣＤ−Ｏ  ９３９０／１、ＷＨＯグレードＩＩ）、及び脈絡叢乳頭癌（ＩＣＤ−Ｏ  ９３９０／３、ＷＨＯグレードＩＩＩ）から選択される脈絡叢腫瘍、及び
ｖｉ）星芽細胞腫（ＩＣＤ−Ｏ  ９４３０／３、ＷＨＯグレードＩ）、第３脳室脊索腫様膠腫（ＩＣＤ−Ｏ  ９４４４／１、ＷＨＯグレードＩＩ）、及び血管中心性膠腫（ＩＣＤ−Ｏ  ９４３１／１、ＷＨＯグレードＩ）から選択される他の神経上皮性腫瘍、及び
ｖｉｉ）小脳異形成性神経節細胞腫（レーミッテ・ダクロス病）（ＩＣＤ−Ｏ  ９４９３／０）、線維形成性乳児星細胞腫／神経節膠腫（ＩＣＤ−Ｏ  ９４１２／１、ＷＨＯグレードＩ）、胚芽異形成性神経上皮腫瘍（ＩＣＤ−Ｏ  ９４１３／０、ＷＨＯグレードＩ）、神経節細胞腫（ＩＣＤ−Ｏ  ９４９２／０、ＷＨＯグレードＩ）、神経節膠腫（ＩＣＤ−Ｏ  ９５０５／１、ＷＨＯグレードＩ）、退形成性神経節膠腫（ＩＣＤ−Ｏ  ９５０５／３、ＷＨＯグレードＩＩＩ）、中枢性神経細胞腫（ＩＣＤ−Ｏ  ９５０６／１、ＷＨＯグレードＩＩ）、脳室外神経細胞腫（ＩＣＤ−Ｏ  ９５０６／１、ＷＨＯグレードＩＩ）、小脳脂肪神経細胞腫（ＩＣＤ−Ｏ  ９５０６／１、ＷＨＯグレードＩＩ）、乳頭状グリア神経細胞性腫瘍（ＩＣＤ−Ｏ  ９５０９／１、ＷＨＯグレードＩ）、第４脳室ロゼット形成性グリア神経細胞性腫瘍（ＩＣＤ−Ｏ  ９５０９／１、ＷＨＯグレードＩ）、及び傍神経節腫（ＩＣＤ−Ｏ  ８６８０／１、ＷＨＯグレードＩ）から選択される神経細胞と混合性神経膠腫、及び
ｖｉｉｉ）松果体細胞腫（ＩＣＤ−Ｏ  ９３６１／１、ＷＨＯグレードＩ）、中間型松果体実質腫瘍（ＩＣＤ−Ｏ  ９３６２／３、ＷＨＯグレードＩＩ、ＩＩＩ）松果体芽腫（ＩＣＤ−Ｏ  ９３６２／３、ＷＨＯグレードＩＶ）、松果体部乳頭状腫瘍（ＩＣＤ−Ｏ  ９３９５／３、ＷＨＯグレードＩＩＩ）から選択される松果体領域の腫瘍、及び
ｉｘ）髄芽腫（ＩＣＤ−Ｏ  ９４７０／３、ＷＨＯグレードＩＶ）、大規模な球状髄芽腫（ＩＣＤ−Ｏ  ９４７１／３、ＷＨＯグレードＩＶ）、退形成性髄芽腫（ＩＣＤ−Ｏ  ９４７４／３、ＷＨＯグレードＩＶ）、中枢神経系原始神経外胚葉性腫瘍（ＩＣＤ−Ｏ  ９４７３／３、ＷＨＯグレードＩＶ）、中枢神経系神経芽細胞腫（ＩＣＤ−Ｏ  ９５００／３、ＷＨＯグレードＩＶ）、及び非定型奇形腫様／ラブドイド腫瘍（ＩＣＤ−Ｏ  ９５０８／３、ＷＨＯグレードＩＶ）から選択される胚芽腫瘍、及び
ｂ）以下のものから選択される脳神経と傍脊椎神経の腫瘍
ｉ）神経鞘腫（ＩＣＤ−Ｏ  ９５６０／０、ＷＨＯグレードＩ）、
ｉｉ）神経線維腫（ＩＣＤ−Ｏ  ９５４０／０、ＷＨＯグレードＩ）、
ｉｉｉ）神経周膜腫（ＩＣＤ−Ｏ  ９５７１／０、９５７１／３、ＷＨＯグレードＩ、ＩＩ、ＩＩＩ）、及び
ｉｖ）悪性末梢神経鞘腫瘍（ＭＰＮＳＴ）（ＩＣＤ−Ｏ  ９５４０／３、ＷＨＯグレードＩＩ、ＩＩＩ、ＩＶ）、及び
ｃ）以下のものから選択される髄膜腫腫瘍
ｉ）髄膜腫（ＩＣＤ−Ｏ  ９５３０／０、ＷＨＯグレードＩ）、異型性髄膜腫（ＩＣＤ−Ｏ  ９５３９／１、ＷＨＯグレードＩＩ）、退形成性髄膜腫（ＩＣＤ−Ｏ  ９５３０／３、ＷＨＯグレードＩＩＩ）から選択される髄膜細胞腫、及び
ｉｉ）脂肪腫（ＩＣＤ−Ｏ  ８８５０／０）、血管脂肪腫（ＩＣＤ−Ｏ  ８８６１／０）、褐色脂肪腫（ＩＣＤ−Ｏ  ８８８０／０）、脂肪肉腫（ＩＣＤ−Ｏ  ８８５０／３）、孤立性線維性腫瘍（ＩＣＤ−Ｏ  ８８１５／０）、線維肉腫（ＩＣＤ−Ｏ  ８８１０／３）、悪性線維性組織球腫（ＩＣＤ−Ｏ  ８８３０／３）、平滑筋腫（ＩＣＤ−Ｏ  ８８９０／０）、平滑筋肉腫（ＩＣＤ−Ｏ  ８８９０／３）、横紋筋腫（ＩＣＤ−Ｏ  ８９００／０）、横紋筋肉腫（ＩＣＤ−Ｏ  ８９００／３）、軟骨腫（ＩＣＤ−Ｏ  ９２２０／０）、軟骨肉腫（ＩＣＤ−Ｏ  ９２２０／３）、骨腫（ＩＣＤ−Ｏ  ９１８０／０）、骨肉腫（ＩＣＤ−Ｏ  ９１８０／３）、骨軟骨腫（ＩＣＤ−Ｏ  ９２１０／０）、血管腫（ＩＣＤ−Ｏ  ９１２０／０）、類上皮血管内皮腫（ＩＣＤ−Ｏ  ９１３３／１）、血管周皮細胞腫（ＩＣＤ−Ｏ  ９１５０／１、ＷＨＯグレードＩＩ）、退形成性血管周皮細胞腫（ＩＣＤ−Ｏ  ９１５０／３、ＷＨＯグレードＩＩＩ）、及び血管肉腫（ＩＣＤ−Ｏ  ９１２０／３）３．２．２２、カポジ肉腫（ＩＣＤ−Ｏ  ９１４０／３）、ユーイング肉腫−ＰＮＥＴ（ＩＣＤ−Ｏ  ９３６４／３）から選択される間葉腫瘍、及び
ｉｉｉ）拡散黒色症（ＩＣＤ−Ｏ  ８７２８／０）、褐色細胞腫（ＩＣＤ−Ｏ  ８７２８／１）、悪性黒色腫（ＩＣＤ−Ｏ  ８７２０／３）、髄膜黒色腫（ＩＣＤ−Ｏ  ８７２８／３）から選択される原発性黒色腫病変、及び
ｉｖ）血管芽腫（ＩＣＤ−Ｏ  ９１６１／１、ＷＨＯグレードＩ）などのその他の脳脊髄膜病変、及び
ｄ）以下のものから選択される造血系腫瘍
ｉ）悪性リンパ腫（ＩＣＤ−Ｏ  ９５９０／３）４．２、形質細胞腫（ＩＣＤ−Ｏ  ９７３１／３）、及び
ｉｉ）顆粒球性肉腫（ＩＣＤ−Ｏ  ９９３０／３）、及び
ｅ）以下のものから選択されるトルコ鞍部腫瘍
ｉ）頭蓋咽頭腫（ＩＣＤ−Ｏ  ９３５０／１、ＷＨＯグレードＩ）、
ｉｉ）顆粒細胞腫瘍（ＩＣＤ−Ｏ  ９５８２／０、ＷＨＯグレードＩ）、
ｉｉｉ）下垂体細胞腫（ＩＣＤ−Ｏ  ９４３２／１、ＷＨＯグレードＩ）、及び
ｉｖ）腺下垂体の紡錘形膨大細胞腫（ＩＣＤ−Ｏ  ８９９１／０、ＷＨＯグレードＩ）
からなる群から選択される、項目１〜５１のいずれか１項に記載の使用のための組成物、薬剤、方法、または使用。
［項目５３］
悪性新生物が、
ａ）以下のものから選択される神経上皮組織の腫瘍
ｉ）毛様細胞性星細胞腫（ＩＣＤ−Ｏ  ９４２１／１、ＷＨＯグレードＩ）、毛様類粘液性星細胞腫（ＩＣＤ−Ｏ  ９４２５／３、ＷＨＯグレードＩＩ）、上衣下巨細胞性星細胞腫（ＩＣＤ−Ｏ  ９３８４／１、ＷＨＯグレードＩ）、多形性黄色星状膠細胞腫（ＩＣＤ−Ｏ  ９４２４／３、ＷＨＯグレードＩＩ）、びまん性星細胞腫（ＩＣＤ−Ｏ  ９４００／３、ＷＨＯグレードＩＩ）、退形成性星細胞腫（ＩＣＤ−Ｏ  ９４０１／３、ＷＨＯグレードＩＩＩ）、膠芽腫（ＩＣＤ−Ｏ  ９４４０／３、ＷＨＯグレードＩＶ）、巨細胞性膠芽腫（ＩＣＤ−Ｏ  ９４４１／３、ＷＨＯグレードＩＶ）、膠肉腫（ＩＣＤ−Ｏ  ９４４２／３、ＷＨＯグレードＩＶ）、膠腫脳腫瘍（ＩＣＤ−Ｏ  ９３８１／３、ＷＨＯグレードＩＩＩ）から選択される星細胞系腫瘍、及び
ｉｉ）乏突起膠腫（ＩＣＤ−Ｏ  ９４５０／３、ＷＨＯグレードＩＩ）、及び退形成性乏突起膠腫（ＩＣＤ−Ｏ  ９４５１／３、ＷＨＯグレードＩＩＩ）から選択される乏突起神経膠腫瘍、及び
ｉｉｉ）乏突起膠星細胞腫（ＩＣＤ−Ｏ  ９３８２／３、ＷＨＯグレードＩＩ）、及び退形成性乏突起星細胞腫（ＩＣＤ−Ｏ  ９３８２／３、ＷＨＯグレードＩＩＩ）から選択される乏突起膠細胞系腫瘍、及び
ｉｖ）上衣下腫（ＩＣＤ−Ｏ  ９３８３／１、ＷＨＯグレードＩ）、粘液乳頭状上衣腫（ＩＣＤ−Ｏ  ９３９４／１、ＷＨＯグレードＩ）、上衣腫（ＩＣＤ−Ｏ  ９３９１／３、ＷＨＯグレードＩＩ）、退形成性上衣腫（ＩＣＤ−Ｏ  ９３９２／３、ＷＨＯグレードＩＩＩ）から選択される上衣腫瘍、及び
ｖ）脈絡叢乳頭腫（ＩＣＤ−Ｏ  ９３９０／０、ＷＨＯグレードＩ）、非定型脈絡叢乳頭腫（ＩＣＤ−Ｏ  ９３９０／１、ＷＨＯグレードＩＩ）、及び脈絡叢乳頭癌（ＩＣＤ−Ｏ  ９３９０／３、ＷＨＯグレードＩＩＩ）から選択される脈絡叢腫瘍、及び
ｖｉ）星芽細胞腫（ＩＣＤ−Ｏ  ９４３０／３、ＷＨＯグレードＩ）、第３脳室脊索腫様膠腫（ＩＣＤ−Ｏ  ９４４４／１、ＷＨＯグレードＩＩ）、及び血管中心性膠腫（ＩＣＤ−Ｏ  ９４３１／１、ＷＨＯグレードＩ）から選択される他の神経上皮性腫瘍、及び
ｖｉｉ）小脳異形成性神経節細胞腫（レーミッテ・ダクロス病）（ＩＣＤ−Ｏ  ９４９３／０）、線維形成性乳児星細胞腫／神経節膠腫（ＩＣＤ−Ｏ  ９４１２／１、ＷＨＯグレードＩ）、胚芽異形成性神経上皮腫瘍（ＩＣＤ−Ｏ  ９４１３／０、ＷＨＯグレードＩ）、神経節細胞腫（ＩＣＤ−Ｏ  ９４９２／０、ＷＨＯグレードＩ）、神経節膠腫（ＩＣＤ−Ｏ  ９５０５／１、ＷＨＯグレードＩ）、退形成性神経節膠腫（ＩＣＤ−Ｏ  ９５０５／３、ＷＨＯグレードＩＩＩ）、中枢性神経細胞腫（ＩＣＤ−Ｏ  ９５０６／１、ＷＨＯグレードＩＩ）、脳室外神経細胞腫（ＩＣＤ−Ｏ  ９５０６／１、ＷＨＯグレードＩＩ）、小脳脂肪神経細胞腫（ＩＣＤ−Ｏ  ９５０６／１、ＷＨＯグレードＩＩ）、乳頭状グリア神経細胞性腫瘍（ＩＣＤ−Ｏ  ９５０９／１、ＷＨＯグレードＩ）、第４脳室ロゼット形成性グリア神経細胞性腫瘍（ＩＣＤ−Ｏ  ９５０９／１、ＷＨＯグレードＩ）、及び傍神経節腫（ＩＣＤ−Ｏ  ８６８０／１、ＷＨＯグレードＩ）から選択される神経細胞と混合性神経膠腫、及び
ｖｉｉｉ）松果体細胞腫（ＩＣＤ−Ｏ  ９３６１／１、ＷＨＯグレードＩ）、中間型松果体実質腫瘍（ＩＣＤ−Ｏ  ９３６２／３、ＷＨＯグレードＩＩ、ＩＩＩ）松果体芽腫（ＩＣＤ−Ｏ  ９３６２／３、ＷＨＯグレードＩＶ）、松果体部乳頭状腫瘍（ＩＣＤ−Ｏ  ９３９５／３、ＷＨＯグレードＩＩＩ）から選択される松果体領域の腫瘍、及び
ｉｘ）髄芽腫（ＩＣＤ−Ｏ  ９４７０／３、ＷＨＯグレードＩＶ）、大規模な球状髄芽腫（ＩＣＤ−Ｏ  ９４７１／３、ＷＨＯグレードＩＶ）、退形成性髄芽腫（ＩＣＤ−Ｏ  ９４７４／３、ＷＨＯグレードＩＶ）、中枢神経系原始神経外胚葉性腫瘍（ＩＣＤ−Ｏ  ９４７３／３、ＷＨＯグレードＩＶ）、中枢神経系神経芽細胞腫（ＩＣＤ−Ｏ  ９５００／３、ＷＨＯグレードＩＶ）、及び非定型奇形腫様／ラブドイド腫瘍（ＩＣＤ−Ｏ  ９５０８／３、ＷＨＯグレードＩＶ）から選択される胚芽腫瘍、及び
ｂ）以下のものから選択される脳神経と傍脊椎神経の腫瘍
ｉ）神経鞘腫（ＩＣＤ−Ｏ  ９５６０／０、ＷＨＯグレードＩ）、
ｉｉ）神経線維腫（ＩＣＤ−Ｏ  ９５４０／０、ＷＨＯグレードＩ）、
ｉｉｉ）神経周膜腫（ＩＣＤ−Ｏ  ９５７１／０、９５７１／３、ＷＨＯグレードＩ、ＩＩ、ＩＩＩ）、及び
ｉｖ）悪性末梢神経鞘腫瘍（ＭＰＮＳＴ）（ＩＣＤ−Ｏ  ９５４０／３、ＷＨＯグレードＩＩ、ＩＩＩ、ＩＶ）、及び
ｃ）以下のものから選択される髄膜腫腫瘍
ｉ）髄膜腫（ＩＣＤ−Ｏ  ９５３０／０、ＷＨＯグレードＩ）、異型性髄膜腫（ＩＣＤ−Ｏ  ９５３９／１、ＷＨＯグレードＩＩ）、退形成性髄膜腫（ＩＣＤ−Ｏ  ９５３０／３、ＷＨＯグレードＩＩＩ）から選択される髄膜細胞腫、及び
ｉｉ）脂肪腫（ＩＣＤ−Ｏ  ８８５０／０）、血管脂肪腫（ＩＣＤ−Ｏ  ８８６１／０）、褐色脂肪腫（ＩＣＤ−Ｏ  ８８８０／０）、脂肪肉腫（ＩＣＤ−Ｏ  ８８５０／３）、孤立性線維性腫瘍（ＩＣＤ−Ｏ  ８８１５／０）、線維肉腫（ＩＣＤ−Ｏ  ８８１０／３）、悪性線維性組織球腫（ＩＣＤ−Ｏ  ８８３０／３）、平滑筋腫（ＩＣＤ−Ｏ  ８８９０／０）、平滑筋肉腫（ＩＣＤ−Ｏ  ８８９０／３）、横紋筋腫（ＩＣＤ−Ｏ  ８９００／０）、横紋筋肉腫（ＩＣＤ−Ｏ  ８９００／３）、軟骨腫（ＩＣＤ−Ｏ  ９２２０／０）、軟骨肉腫（ＩＣＤ−Ｏ  ９２２０／３）、骨腫（ＩＣＤ−Ｏ  ９１８０／０）、骨肉腫（ＩＣＤ−Ｏ  ９１８０／３）、骨軟骨腫（ＩＣＤ−Ｏ  ９２１０／０）、血管腫（ＩＣＤ−Ｏ  ９１２０／０）、類上皮血管内皮腫（ＩＣＤ−Ｏ  ９１３３／１）、血管周皮細胞腫（ＩＣＤ−Ｏ  ９１５０／１、ＷＨＯグレードＩＩ）、退形成性血管周皮細胞腫（ＩＣＤ−Ｏ  ９１５０／３、ＷＨＯグレードＩＩＩ）、及び血管肉腫（ＩＣＤ−Ｏ  ９１２０／３）３．２．２２、カポジ肉腫（ＩＣＤ−Ｏ  ９１４０／３）、ユーイング肉腫−ＰＮＥＴ（ＩＣＤ−Ｏ  ９３６４／３）から選択される間葉腫瘍、及び
ｉｉｉ）拡散黒色症（ＩＣＤ−Ｏ  ８７２８／０）、褐色細胞腫（ＩＣＤ−Ｏ  ８７２８／１）、悪性黒色腫（ＩＣＤ−Ｏ  ８７２０／３）、髄膜黒色腫（ＩＣＤ−Ｏ  ８７２８／３）から選択される原発性黒色腫病変、及び
ｉｖ）血管芽腫（ＩＣＤ−Ｏ  ９１６１／１、ＷＨＯグレードＩ）などのその他の脳脊髄膜病変
からなる群から選択される、項目１〜５２のいずれか１項に記載の使用のための組成物、薬剤、方法、または使用。
［項目５４］
悪性新生物が、
ａ）以下のものから選択される神経上皮組織の腫瘍
ｉ）毛様細胞性星細胞腫（ＩＣＤ−Ｏ  ９４２１／１、ＷＨＯグレードＩ）、毛様類粘液性星細胞腫（ＩＣＤ−Ｏ  ９４２５／３、ＷＨＯグレードＩＩ）、上衣下巨細胞性星細胞腫（ＩＣＤ−Ｏ  ９３８４／１、ＷＨＯグレードＩ）、多形性黄色星状膠細胞腫（ＩＣＤ−Ｏ  ９４２４／３、ＷＨＯグレードＩＩ）、びまん性星細胞腫（ＩＣＤ−Ｏ  ９４００／３、ＷＨＯグレードＩＩ）、退形成性星細胞腫（ＩＣＤ−Ｏ  ９４０１／３、ＷＨＯグレードＩＩＩ）、膠芽腫（ＩＣＤ−Ｏ  ９４４０／３、ＷＨＯグレードＩＶ）、巨細胞性膠芽腫（ＩＣＤ−Ｏ  ９４４１／３、ＷＨＯグレードＩＶ）、膠肉腫（ＩＣＤ−Ｏ  ９４４２／３、ＷＨＯグレードＩＶ）、膠腫脳腫瘍（ＩＣＤ−Ｏ  ９３８１／３、ＷＨＯグレードＩＩＩ）から選択される星細胞系腫瘍、及び
ｉｉ）髄芽腫（ＩＣＤ−Ｏ  ９４７０／３、ＷＨＯグレードＩＶ）、大規模な球状髄芽腫（ＩＣＤ−Ｏ  ９４７１／３、ＷＨＯグレードＩＶ）、退形成性髄芽腫（ＩＣＤ−Ｏ  ９４７４／３、ＷＨＯグレードＩＶ）、中枢神経系原始神経外胚葉性腫瘍（ＩＣＤ−Ｏ  ９４７３／３、ＷＨＯグレードＩＶ）、中枢神経系神経芽細胞腫（ＩＣＤ−Ｏ  ９５００／３、ＷＨＯグレードＩＶ）、及び非定型奇形腫様／ラブドイド腫瘍（ＩＣＤ−Ｏ  ９５０８／３、ＷＨＯグレードＩＶ）から選択される胚芽腫瘍、及び
ｂ）以下のものから選択される髄膜腫腫瘍
ｉ）髄膜腫（ＩＣＤ−Ｏ  ９５３０／０、ＷＨＯグレードＩ）、異型性髄膜腫（ＩＣＤ−Ｏ  ９５３９／１、ＷＨＯグレードＩＩ）、退形成性髄膜腫（ＩＣＤ−Ｏ  ９５３０／３、ＷＨＯグレードＩＩＩ）から選択される髄膜細胞腫、及び
ｉｉ）脂肪腫（ＩＣＤ−Ｏ  ８８５０／０）、血管脂肪腫（ＩＣＤ−Ｏ  ８８６１／０）、褐色脂肪腫（ＩＣＤ−Ｏ  ８８８０／０）、脂肪肉腫（ＩＣＤ−Ｏ  ８８５０／３）、孤立性線維性腫瘍（ＩＣＤ−Ｏ  ８８１５／０）、線維肉腫（ＩＣＤ−Ｏ  ８８１０／３）、悪性線維性組織球腫（ＩＣＤ−Ｏ  ８８３０／３）、平滑筋腫（ＩＣＤ−Ｏ  ８８９０／０）、平滑筋肉腫（ＩＣＤ−Ｏ  ８８９０／３）、横紋筋腫（ＩＣＤ−Ｏ  ８９００／０）、横紋筋肉腫（ＩＣＤ−Ｏ  ８９００／３）、軟骨腫（ＩＣＤ−Ｏ  ９２２０／０）、軟骨肉腫（ＩＣＤ−Ｏ  ９２２０／３）、骨腫（ＩＣＤ−Ｏ  ９１８０／０）、骨肉腫（ＩＣＤ−Ｏ  ９１８０／３）、骨軟骨腫（ＩＣＤ−Ｏ  ９２１０／０）、血管腫（ＩＣＤ−Ｏ  ９１２０／０）、類上皮血管内皮腫（ＩＣＤ−Ｏ  ９１３３／１）、血管周皮細胞腫（ＩＣＤ−Ｏ  ９１５０／１、ＷＨＯグレードＩＩ）、退形成性血管周皮細胞腫（ＩＣＤ−Ｏ  ９１５０／３、ＷＨＯグレードＩＩＩ）、及び血管肉腫（ＩＣＤ−Ｏ  ９１２０／３）３．２．２２、カポジ肉腫（ＩＣＤ−Ｏ  ９１４０／３）、ユーイング肉腫−ＰＮＥＴ（ＩＣＤ−Ｏ  ９３６４／３）から選択される間葉腫瘍、及び
ｉｉｉ）拡散黒色症（ＩＣＤ−Ｏ  ８７２８／０）、褐色細胞腫（ＩＣＤ−Ｏ  ８７２８／１）、悪性黒色腫（ＩＣＤ−Ｏ  ８７２０／３）、髄膜黒色腫（ＩＣＤ−Ｏ  ８７２８／３）から選択される原発性黒色腫病変、及び
ｉｖ）血管芽腫（ＩＣＤ−Ｏ  ９１６１／１、ＷＨＯグレードＩ）などのその他の脳脊髄膜病変
からなる群から選択される、項目１〜５３のいずれか１項に記載の使用のための組成物、薬剤、方法、または使用。
［項目５５］
悪性新生物が、神経膠腫である、項目１〜５４のいずれか１項に記載の使用のための組成物、薬剤、方法、または使用。
［項目５６］
悪性新生物が、グレードＩＩ、ＩＩＩ、またはＩＶの神経膠腫である、項目１〜５５のいずれか１項に記載の使用のための組成物、薬剤、方法、または使用。
［項目５７］
悪性新生物が、星細胞腫である、項目１〜５６のいずれか１項に記載の使用のための組成物、薬剤、方法、または使用。
［項目５８］
悪性新生物が、膠芽腫である、項目１〜５７のいずれか１項に記載の使用のための組成物、薬剤、方法、または使用。
［項目５９］
脳の悪性新生物が、膠芽腫、髄芽腫、神経芽細胞腫、星細胞腫、退形成性星細胞腫、脳の血管周囲細胞腫、髄膜腫、血管腫髄膜腫、異型性髄膜腫、線維性髄膜腫、髄膜皮性髄膜腫、分泌性髄膜腫、乏突起膠星細胞腫、退形成性乏突起星細胞腫、乏突起神経膠腫、及び退形成性乏突起神経膠腫からなる群から選択される、項目１〜５８のいずれか１項に記載の使用のための組成物、薬剤、方法、または使用。
［項目６０］
膠芽腫腫瘍が、星細胞系腫瘍、乏突起神経膠腫瘍、上衣細胞腫瘍、混合膠腫、原因不明の神経上皮腫瘍、脈絡叢腫瘍、神経細胞と混合性神経膠腫、松果体実質腫瘍、及び神経芽または膠芽腫エレメントをもつ腫瘍（胎児性腫瘍）、上衣腫、星細胞腫、乏突起神経膠腫、乏突起膠星細胞腫、神経上皮腫瘍、及び神経細胞性腫瘍並びに混合型神経細胞−膠細胞腫瘍からなる群から選択される、項目１〜５９のいずれか１項に記載の使用のための組成物、薬剤、方法、または使用。
［項目６１］
前記試料が、脳組織または脊髄組織試料である、項目１〜６０のいずれか１項に記載の使用のための組成物、薬剤、方法、または使用。
［項目６２］
前記試料が、脳腫瘍組織試料である、項目１〜６１のいずれか１項に記載の使用のための組成物、薬剤、方法、または使用。
［項目６３］
前記試料が、血液試料である、項目１〜６２のいずれか１項に記載の使用のための組成物、薬剤、方法、または使用。
［項目６４］
前記検出または診断が、全血試料または血漿試料などの血液試料中に存在する細胞に基づいている、項目１〜６３のいずれか１項に記載の使用のための組成物、薬剤、方法、または使用。
［項目６５］
前記方法または使用が、インテグリンα１０サブユニットに特異的な１つ以上の抗体を用いることによって行われる、項目１〜６４のいずれか１項に記載の使用のための組成物、薬剤、方法、または使用。
［項目６６］
前記抗原が、アイソフォーム、インテグリンα１０サブユニットのスプライス変異体または天然に存在する変異体である、項目１〜６５のいずれか１項に記載の使用のための組成物、薬剤、方法、または使用。
［項目６７］
前記抗原が、インテグリンα１０サブユニット（配列番号１）を含む、項目１〜６６のいずれか１項に記載の使用のための組成物、薬剤、方法、または使用。
［項目６８］
前記抗原が、インテグリンα１０サブユニット（配列番号２）の細胞外ドメインを含む、項目１〜６７のいずれか１項に記載の使用のための組成物、薬剤、方法、または使用。
［項目６９］
前記抗原が、インテグリンα１０サブユニット（配列番号３）のＩドメインを含む、項目１〜６８のいずれか１項に記載の使用のための組成物、薬剤、方法、または使用。
［項目７０］
抗体が、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、抗体断片、または単鎖抗体からなる群から選択される、項目１〜６９のいずれか１項に記載の使用のための組成物、薬剤、方法、または使用。
［項目７１］
前記抗体が、モノクローナル抗体である、項目１〜７０のいずれか１項に記載の使用のための組成物、薬剤、方法、または使用。
［項目７２］
前記抗体が、ポリクローナル抗体である、項目１〜７１のいずれか１項に記載の使用のための組成物、薬剤、方法、または使用。
［項目７３］
抗体が、非ヒト抗体、キメラ抗体、二重特異性抗体、ヒト化抗体、またはヒト抗体である、項目１〜７２のいずれか１項に記載の使用のための組成物、薬剤、方法、または使用。
［項目７４］
抗体が、配列番号１（インテグリンα１０サブユニット）に特異的に結合する、項目１〜７３のいずれか１項に記載の使用のための組成物、薬剤、方法、または使用。
［項目７５］
抗体が、配列番号２（インテグリンα１０の細胞外ドメイン）に特異的に結合する、項目１〜７４のいずれか１項に記載の使用のための組成物、薬剤、方法、または使用。
［項目７６］
抗体が、配列番号３（インテグリンα１０の細胞外Ｉドメイン）に特異的に結合する、項目１〜７５のいずれか１項に記載の使用のための組成物、薬剤、方法、または使用。
［項目７７］
少なくとも１つの抗体が、検出可能部分に共有結合している、項目１〜７６のいずれか１項に記載の使用のための組成物、薬剤、方法、または使用。
［項目７８］
少なくとも１つの抗体が、フルオロフォア、酵素、または放射性トレーサ、または放射性同位体からなる群から選択される検出可能部分に共有結合している、項目１〜７７のいずれか１項に記載の使用のための組成物、薬剤、方法、または使用。
［項目７９］
前記抗体が、陽電子放出体、またはガンマ放出体から選択される放射性トレーサに連結している、項目１〜７８のいずれか１項に記載の使用のための組成物、薬剤、方法、または使用。
［項目８０］
放射性同位体が、９９ｍＴｃ、１１１Ｉｎ、６７Ｇａ、６８Ｇａ、７２Ａｓ、８９Ｚｒ、１２３Ｉ、及び２０１ＴＩからなる群から選択される、項目１〜７９のいずれか１項に記載の使用のための組成物、薬剤、方法、または使用。
［項目８１］
抗体が、８６ｙ／９０ｙまたは１２４Ｉ／２１１Ａｔなどの一対の検出可能な放射性核種と細胞毒性放射性核種を含む、項目１〜８０のいずれか１項に記載の使用のための組成物、薬剤、方法、または使用。
［項目８２］
放射性同位体が、検出可能部分として、かつ、細胞毒性部分としてマルチモーダル方式で同時に作用することができる、項目１〜８１のいずれか１項に記載の使用のための組成物、薬剤、方法、または使用。
［項目８３］
前記検出可能部分が、常磁性同位体を含むかまたはからなる、項目１〜８２のいずれか１項に記載の使用のための組成物、薬剤、方法、または使用。
［項目８４］
常磁性同位体が、１５７Ｇｄ、５５Ｍｎ、１６２Ｄｙ、５２Ｃｒ、及び５６Ｆｅからなる群から選択される、項目１〜８３のいずれか１項に記載の使用のための組成物、薬剤、方法、または使用。
［項目８５］
検出可能部分が、ＳＰＥＣＴ、ＰＥＴ、ＭＲＩ、光学または超音波イメージングなどのイメージング技術によって検出可能である、項目１〜８４のいずれか１項に記載の使用のための組成物、薬剤、方法、または使用。
［項目８６］
細胞毒性部分及び／または検出可能部分が、結合部分を介して抗体またはその抗原結合性断片に間接的に連結している、項目１〜８５のいずれか１項に記載の使用のための組成物、薬剤、方法、または使用。
［項目８７］
結合部分が、キレート剤である、項目８６に記載の使用のための組成物、薬剤、方法または使用。
［項目８８］
キレート剤が、１，４，７，１０−テトラアザシクロドデカン−１，４，７，１０四酢酸（ＤＯＴＡ）、デフェロキサミン（ＤＦＯ）の誘導体、ジエチレントリアミンペンタ酢酸（ＤＴＰＡ）の誘導体、Ｓ−２−（４−イソチオシアナトベンジル）−１，４，７−トリアザシクロノナン−１，４，７−三酢酸（ＮＯＴＡ）の誘導体、及び１，４，８，１１−テトラアザシクロドデカン−１，４，８，１１−四酢酸（ＴＥＴＡ）の誘導体からなる群から選択される、項目１〜８７のいずれか１項に記載の使用のための組成物、薬剤、方法、または使用。
［項目８９］
抗体が、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＧ、及びＩｇＭからなる群から選択されるアイソタイプを有する、項目１〜８８のいずれか１項に記載の使用のための組成物、薬剤、方法、または使用。
［項目９０］
抗体が、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、及びＩｇＧ４からなる群から選択されるＩｇＧアイソタイプなどのＩｇＧアイソタイプである、項目１〜８９のいずれか１項に記載の使用のための組成物、薬剤、方法、または使用。
［項目９１］
抗体断片が、Ｆａｂ断片、Ｆａｂ’断片、Ｆ（ａｂ’）２断片、及びＦｖ断片、例えば、単鎖可変断片（ｓｃＦｖ）、及び単ドメイン抗体からなる群から選択される、項目１〜９０のいずれか１項に記載の使用のための組成物、薬剤、方法、または使用。
［項目９２］
インテグリンα１０サブユニットに特異的な前記抗体が、
ａ）ドイチェ・ザムルング・フォン・ミクロオルガニスメン・ウント・ツェルクルテューレン・ゲゼルシャフト・ミット・ベシュレンクター・ハフツングに受託番号ＤＳＭ  ＡＣＣ２５８３で寄託されたハイブリドーマ細胞株によって産生されたモノクローナル抗体；または
ｂ）ドイチェ・ザムルング・フォン・ミクロオルガニスメン・ウント・ツェルクルテューレン・ゲゼルシャフト・ミット・ベシュレンクター・ハフツングに受託番号ＤＳＭ  ＡＣＣ２５８３で寄託された前記ハイブリドーマによって産生された前記モノクローナル抗体によって結合したエピトープと同じエピトープへの結合を競合する抗体；または
ｃ）ａ）またはｂ）の断片、前記断片は、前記インテグリンα１０サブユニット鎖の細胞外Ｉドメインに特異的に結合することができる、
である、項目１〜９１のいずれか１項に記載の使用のための組成物、薬剤、方法、または使用。
［項目９３］
前記抗原が、インテグリンα１０サブユニット抗原に特異的に結合することができるペプチドの結合を検出することによって検出される、項目１〜９２のいずれか１項に記載の使用のための組成物、薬剤、方法、または使用。
［項目９４］
前記検出が、蛍光活性化セルソーティング（ＦＡＣＳ）などのフローサイトメトリーを用いて行われる、項目１〜９３のいずれか１項に記載の使用のための組成物、薬剤、方法、または使用。
［項目９５］
前記方法が、光子を発することができる部分に連結した１つ以上のインテグリンα１０サブユニット特異的ポリヌクレオチドプローブを用いることによって行われる、項目１〜９４のいずれか１項に記載の使用のための組成物、薬剤、方法、または使用。
［項目９６］
ポリヌクレオチド転写産物が、ＰＣＲ、好ましくは、Ｑ−ＰＣＲによって検出される、項目１〜９５のいずれか１項に記載の使用のための組成物、薬剤、方法、または使用。
［項目９７］
検出可能部分が、フルオロフォア、酵素、または放射性トレーサからなる群から選択される、項目１〜９６のいずれか１項に記載の使用のための組成物、薬剤、方法、または使用。
［項目９８］
光子を発することができる部分が、フルオロフォアである、項目１〜９７のいずれか１項に記載の使用のための組成物、薬剤、方法、または使用。
［項目９９］
前記フルオロフォアを励起することができる光源で哺乳類を照射する、項目１〜９８のいずれか１項に記載の使用のための組成物、薬剤、方法、または使用。
［項目１００］
ＰＥＴスキャンまたはＳＰＥＣＴスキャンを用いて光子を検出する、項目１〜９９のいずれか１項に記載の使用のための組成物、薬剤、方法、または使用。
［項目１０１］
哺乳類が、ヒトである、項目１〜１００のいずれか１項に記載の使用のための組成物、薬剤、方法、または使用。
［項目１０２］
放射性トレーサに共有結合したインテグリンα１０特異的抗体を含む、抗体薬物複合体。
［項目１０３］
神経膠腫、神経芽細胞腫、または髄芽腫などの中枢神経系の悪性新生物の診断に使用される、項目１〜１０２のいずれか１項に記載の抗体薬物複合体。
［項目１０４］
インテグリンα１０特異的抗体、及び放射性トレーサを含む、ナノ粒子。
［項目１０５］
神経膠腫などの中枢神経系の悪性新生物をインビトロ、インサイチュ、またはインビボで検出するためのキットであって、キットは、インテグリンα１０サブユニットに特異的な抗体、インテグリンα１０サブユニット抗原に特異的に結合することができるペプチド、またはインテグリンα１０サブユニット転写産物またはその相補体に特異的にハイブリダイズすることができるポリヌクレオチドプローブ、及び任意に、取扱説明書を含む、キット。
［項目１０６］
中枢神経系における悪性新生物に罹患している対象の治療方法であって、
ａ）対象が、項目１〜１０５のいずれか１項に記載の中枢神経系の悪性新生物に罹患しているかどうかを判断すること；及び
ｂ）項目１〜１０５のいずれか１項に記載のインテグリンα１０サブユニットに特異的に結合する抗体の治療的に有効な量を、中枢神経系の悪性新生物と診断された対象に投与すること
を含む、方法。
［項目１０７］
インテグリンα１０サブユニットの検出が、
ａ．前記対象から生体試料を得る工程、
ｂ．ｉ）またはｉｉ）の存在または不在について、前記試料中で分析する工程、
ｉ）インテグリンα１０サブユニットポリペプチド、または
ｉｉ）インテグリンα１０サブユニットポリペプチドまたはその断片または変異体をコードするポリヌクレオチド転写産物、
を含み、
インテグリンα１０サブユニットポリペプチドまたはポリヌクレオチド転写産物の存在が、前記哺乳類の中枢神経系における悪性新生物を示し、インテグリンα１０サブユニットポリペプチドまたはポリヌクレオチド転写産物の不在が、中枢神経系の悪性新生物の不在を示す、項目１〜１０６のいずれか１項に記載の方法。
［項目１０８］
検出が、インテグリンα１０サブユニットに特異的に結合する抗体を用いて行われる、項目１〜１０７のいずれか１項に記載の方法。
［項目１０９］
抗体が、検出可能部分に結合している、項目１〜１０８のいずれか１項に記載の方法。
［項目１１０］
検出可能部分が、フルオロフォア、酵素、または放射性トレーサからなる群から選択される、項目１〜１０９のいずれか１項に記載の方法。
［項目１１１］
インテグリンα１０サブユニットの検出が、分子プローブまたは抗体が、インテグリンα１０サブユニットポリペプチドまたはポリヌクレオチドに特異的に結合することができるペプチドに結合していることを検出することによって達成される、項目１〜１１０のいずれか１項に記載の方法。
［項目１１２］
試料が、脳組織試料である、項目１〜１１１のいずれか１項に記載の方法。
［項目１１３］
試料が、脳腫瘍組織試料である、項目１〜１１２のいずれか１項に記載の方法。
［項目１１４］
試料が、血液試料である、項目１〜１１３のいずれか１項に記載の方法。
［項目１１５］
前記検出が、項目１〜１１４のいずれか１項で定義されるように行われる、項目１〜１１４のいずれか１項に記載の方法。
［項目１１６］
対象が、ヒトなどの哺乳類である、項目１〜１１５のいずれか１項に記載の方法、または使用のための組成物。
［項目１１７］
中枢神経系における悪性新生物の治療のための治療薬の製造のための、インテグリンα１０サブユニットに特異的に結合する抗体を含む、組成物の使用。
［項目１１８］
哺乳類における腫瘍関連の血管新生の阻害方法であって、
項目１〜１１７のいずれか１項に記載の抗インテグリンα１０サブユニット抗体の治療的に有効な量を前記哺乳類に投与することを含む、方法。
［項目１１９］
リボソーム不活性化タンパク質に共有結合したインテグリンα１０サブユニット特異的抗体を含む、抗体薬物複合体。
［項目１２０］
リボソーム不活性化タンパク質が、志賀及び志賀様毒素；トリコサンチン及びルフィンなどのＩ型リボソーム不活性化タンパク質；リシン、凝集素、及びアブリンなどのＩＩ型リボソーム不活性化タンパク質；及びサポリンからなる群から選択される、項目１〜１１９のいずれか１項に記載の抗体薬物複合体。
［項目１２１］
リボソーム不活性化タンパク質が、サポリンである、項目１〜１２０のいずれか１項に記載の抗体薬物複合体。
［項目１２２］
インテグリンα１０サブユニットが、インテグリンα１０β１ヘテロ二量体の一部である、項目１〜１２１のいずれか１項に記載の組成物、薬剤、方法、使用、または抗体薬物複合体。
【実施例】
【０２２０】
実施例１：膠芽腫脳腫瘍から単離された細胞上のインテグリンα１０サブユニット発現
ルンド大学病院で外科生検として収集した脳腫瘍組織試料から得られた、患者材料から得られた細胞株を、１０％ＦＢＳ及び１％Ｐｅｎ  Ｓｔｒｅｐが補充されたＤＭＥＭ培地中で３７℃、５％ＣＯ２で培養した。細胞を７０〜９０％コンフルエンスに成長させた。細胞をＰＢＳ（０．１Ｍ、ｐＨ７．４）で洗浄し、トリプシン処理後、専門的な顕微鏡スライド（Ｉｂｉｄｉ、Ｇｅｒｍａｎｙ）の底に移動した。細胞を５０〜１００％コンフルエンスに成長させた後に、固定し、免疫蛍光標識を行った。
【０２２１】
細胞の免疫蛍光標識を以下のプロトコルで行った：
１．細胞培地を除去／吸引した。細胞を冷却（＜１０℃）４％ＰＦＡ中で１０〜２０分間固定した。
２．ＰＢＳ（０．１Ｍ、ｐＨ７．４）中で細胞を２×５分間すすいだ。
３．ブロッキング溶液（０．０２％ＴｒｉｔｏｎＸ−１００を含有するＰＢＳ）で細胞を２０分間インキュベートした。
４．０．００１％（０．１〜０．００１％＊）ＴｒｉｔｏｎＸ−１００及び１％ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）を含有するＰＢＳ（０．１Ｍ、ｐＨ７．４）で細胞を２０分間インキュベートした。
５．０．００１％（０．１〜０．００１％＊）ＴｒｉｔｏｎＸ−１００及び１％ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）を含有するＰＢＳ（０．１Ｍ、ｐＨ７．４）で希釈した原発性抗体、１μｇ／ｍｌ  α１０ＭＡｂ（１〜２μｇ）で細胞を９０分間インキュベートした。
６．ＰＢＳ（ｐＨ７．４）で細胞を２×１０分間すすいだ後、０．００１％（０．１〜０．００１％＊）ＴｒｉｔｏｎＸ−１００及び１％ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）を含有するＰＢＳ（０．１Ｍ、ｐＨ７．４）で希釈した二次抗体、１：１５０（ヤギ中で作製した抗マウスＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ４８８及び抗ウサギＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ５６８、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、ＵＳＡ）で３０分間インキュベートした。
７．ＰＢＳ（０．１Ｍ、ｐＨ７．４）で細胞を１＋２×７分間すすいだ。
８．ＤＡＰＩ（ＰＢＳ中０．１μＭ）で細胞を＞１０分間インキュベートした。
【０２２２】
ここで使用されるように、倒立顕微鏡を介した分析には取り付けを必要としなかった。イメージング及び分析については、共焦点顕微鏡を使用した。
【０２２３】
結論として、インテグリンα１０に対して指向された抗体（ｍＡｂ３６５、（ＷＯ９９／５１６３９））を用いることで、驚くべきことに、インテグリンα１０が、神経膠腫の攻撃的な形態である膠芽腫（神経膠腫グレードＩＶ、多形性膠芽腫）由来の膠芽腫細胞上で特異的かつ強力に発現されることが示された（図２）。
【０２２４】
実施例２：免疫蛍光で視覚化した、膠芽腫患者由来の脳腫瘍組織中のインテグリンα１０サブユニット発現
脳腫瘍組織試料を、ルンド大学病院で、患者から外科生検として収集した。
組織を５μｍ（ＭＩＣＲＯＭ  ＨＭ  ３６０ミクロトーム）切片にし、スーパーフロストプラススライド（Ｍｅｎｚｅｌ−Ｇｌａｓｅｒ、ＧｍｂＨ）上に収集した。切片を直接またはアセトンで固定した後に免疫標識に使用した（−２０℃で１００％、１０分間、以下参照）。新鮮凍結組織をＴｉｓｓｕｅＴｅｋ（Ｓａｋｕｒａ、Ｊｐｎ）に埋め込んだ。（ＭＩＣＲＯＭ  ＨＭ  ５００  ＯＭクライオスタットで作製した）切片１０μｍをスーパーフロストプラススライド上に収集した。アセトンで固定した後に、切片を免疫標識に使用した（−２０℃で１００％、１０分間、以下参照）。
【０２２５】
抗原賦活化後、以下のプロトコルに従った：
１．ＰＢＳ中で、５分間室温ですすぐ／緩衝する。
２．１％ＢＳＡを含有するＰＢＳで、２０分間室温で遮断する。
３．ＰＢＳ（ＰＢＳ−ＴｒｉｔｏｎＸ−１００）で、５分間室温ですすぐ。
４．０．０３％Ｈ２Ｏ２（ＰＢＳ中）で切片を１０分間室温でインキュベートする（内因性ペルオキシダーゼ活性のために急冷）。
５．ＰＢＳで５分間×２回室温ですすぐ。
６．１％ＢＳＡ  ０．０５％ＴｒｉｔｏｎＸ−１００を含有するＰＢＳ）で希釈した原発性抗体、α１０ＰＡｂ  １μｇ／ｍｌ（０．６〜１．２μｇ／ｍｌ）で切片をインキュベートする。
−一晩（約１６〜１８時間）４℃にて。
７．ＰＢＳで５分間×２回（スライド／切片と同じ温度）すすぐ。
８．抱合型二次抗体を３０分（抗ウサギ）間室温で塗布する（１％ＢＳＡ  ０．０５％ＴｒｉｔｏｎＸ−１００を含有するＰＢＳで希釈）。
９．ＰＢＳで５分間×２回室温ですすぐ。
１０．ＤＡＢ／０．０３％Ｈ２Ｏ２溶液中で１〜１０分間室温でインキュベート／反応させる。
１１．ＰＢＳで５分間×２回室温ですすぐ。
【０２２６】
免疫標識切片の対比染色：
１．ヘマトキシリン（Ｍａｙｅｒｓ）で２分間室温でインキュベートする。
２．ＰＢＳで３分間室温ですすぐ。
３．ＰＢＳで２分間室温で洗浄する。
【０２２７】
取り付け：
以下の浸漬を介して切片を脱水する
１．エタノール７０％、９６％、１００％×２回、各濃度で２分間。
２．キシレン≧３分間×２回。
３．Ｐｅｒｔｅｘ（登録商標）（Ｈｉｓｔｏｌａｂ、Ｓｗｅｄｅｎ）中にスライドを取り付け、ガラススライド（２２×３０〜５０ｍｍ）でスリップを覆う。
【０２２８】
分析及び書類作成：明視野顕微鏡は、細胞関連、特に、パラフィン薄切片（５μｍ）での全体標識分布の良好な検出をもたらす。
【０２２９】
機器：１０×／０．３及び２０×／０．５のプランアポクロマート対物レンズを用いたライカＤＭＲＥ顕微鏡。デジタル画像（１３６０×１０２４ピクセル）は、ライカＤＣＦ５００  ＣＣＤカメラ、及び画像取得ソフトウェアＬＡＳ（ライカ・アプリケーション・スイート）ｖ４．４で取得した。
【０２３０】
結論として、ポリクローナルインテグリンα１０に対して指向された抗体を用いることで、驚くべきことに、インテグリンα１０サブユニットが、ルンド大学病院で患者から外科生検として収集した腫瘍組織試料中の膠芽腫細胞上で特異的かつ強力に発現されることが示された（図３）。
【０２３１】
実施例３：免疫組織化学で視覚化した、罹患していない脳組織中の発現と比較した、膠芽腫患者由来の脳腫瘍組織中のインテグリンα１０サブユニットの発現
一見罹患していない領域由来、及び（２名の独立した病理学者によって診断された）悪性脳組織をもつ領域由来の患者脳組織試料をルンド大学病院で患者から外科生検として収集した。
パラフィン切片を脱パラフィン化し、キシレン、次いで、標準プロトコルに従ってエタノール系、及び水中でスライドの浸漬を介して再水和した。
パラフィン切片をアセトンで後固定した後、ＰＢＳで５分間×２回すすいだ。
スライドを酸性緩衝溶液−クエン酸緩衝液（１０ｍＭクエン酸ナトリウム、０．０５％Ｔｗｅｅｎ２０、ｐＨ６．０）に浸漬することによる抗原賦活化、及び加熱処理によって、パラフィン切片を処理した。抗原賦活化後、以下のプロトコルに従った：
１．ＰＢＳ中で、５分間室温ですすぐ／緩衝する。
２．１％ＢＳＡを含有するＰＢＳで、２０分間室温で遮断する。
３．ＰＢＳ（ＰＢＳ−ＴｒｉｔｏｎＸ１００）で、５分間室温ですすぐ。
４．０．０３％Ｈ２Ｏ２（ＰＢＳ中）で切片を１０分間室温でインキュベートする（内因性ペルオキシダーゼ活性のために急冷）。
５．ＰＢＳで５分間×２回室温ですすぐ。
６．１％ＢＳＡ  ０．０５％ＴｒｉｔｏｎＸ−１００を含有するＰＢＳ）で希釈した原発性抗体、α１０ＰＡｂ  １μｇ／ｍｌ（０．６〜１．２μｇ／ｍｌ）で切片をインキュベートする。
−一晩（約１６〜１８時間）４℃にて。
７．ＰＢＳで５分間×２回（スライド／切片と同じ温度）すすぐ。
８．抱合型二次抗体を３０分（抗ウサギ）間室温で塗布する（１％ＢＳＡ  ０．０５％ＴｒｉｔｏｎＸ１００を含有するＰＢＳで希釈）。
９．ＰＢＳで５分間×２回室温ですすぐ。
１０．ＤＡＢ／０．０３％Ｈ２Ｏ２溶液中で１〜１０分間室温でインキュベート／反応させる。
１１．ＰＢＳで５分間×２回室温ですすぐ。
【０２３２】
免疫標識切片の対比染色：
１．ヘマトキシリン（Ｍａｙｅｒｓ）で２分間室温でインキュベートする。
２．ＰＢＳで３分間室温ですすぐ。
３．ＰＢＳで２分間室温で洗浄する。
【０２３３】
取り付け：
以下の浸漬を介して切片を脱水する
１．エタノール７０％、９６％、１００％×２回、各濃度で２分間。
２．キシレン≧３分間×２回。
３．Ｐｅｒｔｅｘ（登録商標）（Ｈｉｓｔｏｌａｂ、Ｓｗｅｄｅｎ）中にスライドを取り付け、ガラススライド（２２×３０〜５０ｍｍ）でスリップを覆う。
【０２３４】
分析及び書類作成：明視野顕微鏡は、細胞関連、特に、パラフィン薄切片（５μｍ）での全体標識分布の良好な検出をもたらす。
【０２３５】
機器：１０×／０．３及び２０×／０．５のプランアポクロマート対物レンズを用いたライカＤＭＲＥ顕微鏡。デジタル画像（１３６０×１０２４ピクセル）は、ライカＤＣＦ５００  ＣＣＤカメラ、及び画像取得ソフトウェアＬＡＳ（ライカ・アプリケーション・スイート）ｖ４．４で取得した。
【０２３６】
図４Ａは、一見罹患していない脳形態を有する患者試料の一部を示すが、図４Ｂは、悪性脳組織（多形性膠芽腫）を有する同じ試料の別の一部を示す。結論として、インテグリンα１０サブユニットに対して指向されたポリクローナル抗体（Ｃａｍｐｅｒ  ｅｔ  ａｌ（１９９８）Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ．２７３（３２）：２０３８３−９）を用いることで、インテグリンα１０サブユニットが、膠芽腫細胞上で特異的かつ強力に発現されるが、形態学的に罹患していない脳組織ではインテグリンα１０サブユニットの発現は無視できるほどであったことが示された。
【０２３７】
実施例４：異なるグレードの神経膠腫を有する患者由来の脳腫瘍組織試料中のインテグリンα１０サブユニット発現
大学病院から外科生検としてまたは死後に収集した脳腫瘍組織試料からなる患者材料を使用した。
組織を５μｍ（ＭＩＣＲＯＭ  ＨＭ  ３６０ミクロトーム）切片にし、スーパーフロストプラススライド（Ｍｅｎｚｅｌ−Ｇｌａｓｅｒ、ＧｍｂＨ）上に収集した。切片を直接またはアセトンで後固定した後に免疫標識に使用した（−２０℃で１００％、１０分間、以下参照）。
【０２３８】
新鮮凍結組織をＴｉｓｓｕｅＴｅｋ（Ｓａｋｕｒａ、Ｊｐｎ）に埋め込んだ。（ＭＩＣＲＯＭ  ＨＭ  ５００  ＯＭクライオスタットで作製した）切片１０μｍをスーパーフロストプラススライド上に収集した。アセトンで後固定した後に、切片を免疫標識に使用した（−２０℃で１００％、１０分間、以下参照）。
【０２３９】
１．凍結切片（切りたてまたは深冷凍結）：切片を３７℃で約２０分間空気乾燥し、切片を室温に到達させる。
２．ＰＢＳで＞５分間×２回すすぐ。
３．アセトンで切片を後固定した後、ＰＢＳで５分間×２回すすぐ。
４．シリコーンバリア（「ＰＡＰペン」）を切片の周りに塗布する。
５．０．０５％（０．１〜０．００１）ＴｒｉｔｏｎＸ−１００及び１％ＢＳＡを含有するＰＢＳで３０分間室温でインキュベート／遮断する。
６．ＰＢＳで１回×２分間すすぐ。
７．他の抗原（特異性についてまず個々に評価、及び最適な作業希釈）に対して作製した抗体と混合した原発性抗体（「カクテル」）、α１０  ＰＡｂ  １．２μｇ／ｍｌ（０．６〜１．２μｇ／ｍｌ）（０．０５％ＴｒｉｔｏｎＸ−１００及び１％ＢＳＡを含有するＰＢＳで希釈）で１６〜１８時間、４〜８℃でインキュベートする。
８．同時の蛍光可視化では、２つのエピトープ、原発性及び二次抗体をそれぞれ、混合物、「カクテル」として塗布する。
９．ＰＢＳで１分間すすいだ後、２回×５分間すすぐ。
１０．１：１５０に希釈した（異なる宿主動物の原発性抗体に対する）混合物中のフルオロフォア抱合型二次Ａｂ／Ａｂ（以下参照）で切片を３０〜４５分間、室温でインキュベートする。
【０２４０】
多重標識（高アフィニティ精製された、主にＦａｂ２断片）用の二次抗体は、ウサギ、マウス、またはヤギＩｇＧに対してまたはニワトリＩｇＹに対してロバまたはヤギ中で作製した（Ｊａｃｋｓｏｎ、ＵＳＡまたはＩｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、ＵＳＡ）。１％ＢＳＡを含有するＰＢＳ中で希釈した。同時の蛍光可視化では、２つのエピトープ、原発性及び二次抗体を混合物、「カクテル」として塗布する。
１１．ＰＢＳ−ＴｒｉｔｏｎＸ−１００で２分間すすぐ。
１２．ＰＢＳで１回×５分間すすぐ。
１３．ＰＢＳで希釈した細胞小器官（核）染色ＤＡＰＩ、０．１  μＭで１５分間インキュベートする。
１４．ＰＢＳで２回×５分間すすぐ。
１５．「抗退色溶液」：ＰｒｏＬｏｎｇ  Ｇｏｌｄ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、ＵＳＡ）中で取り付け、カバーガラスを載せる。
【０２４１】
分析−免疫蛍光−共焦点レーザー走査顕微鏡：
共焦点顕微鏡は、高分解能、標識の高信号対雑音比、及び特定の波長信号検出をもたらした。共焦点顕微鏡画像の分析のみが、（Ｚスタック光学切片、及び三次元再構築を介して）標識の構造局在化、細胞外／細胞内局在化、及び共局在化を解像することができる。
【０２４２】
機器：
３０５〜６３３ｎｍ間の励起用レーザー、及び４２０〜６５０ｎｍ間の放射検出用レーザーを利用したＺｅｉｓｓ  ＬＳＭ  ５１０  ＭＥＴＡ共焦点顕微鏡で検体を検査した。３つの免疫蛍光チャネル、１つのＤＡＰＩチャネル、及び１つの明視野ＤＩＣチャネルを有する、２０×／０．８プランアポクロマート、及び４０×／１．３油浸漬プランアポクロマート対物レンズで画像を取得した。
【０２４３】
１０２４×１０２４のピクセルフレームサイズ（ピクセル幅０．２２μｍ）または「ズーム」（より小さい領域を走査）のいずれかの４０×／１．３対物レンズ、及び最大解像度のためのナイキスト最適サンプリング周波数（ピクセル幅０．１１５μｍ）で、連続した共焦点面のＺスタック（ＤＩＣ無）を得た。連続した共焦点面間のステップサイズは、ナイキスト最適サンプリング周波数（０．４８μｍ）に従った。
【０２４４】
結論として、インテグリンα１０に対して指向された抗体（Ｃａｍｐｅｒ  ｅｔ  ａｌ（１９９８）Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ．２７３（３２）：２０３８３−９）を用いることで、驚くべきことに、インテグリンα１０が、（少数の細胞上で）グレードＩＩ星細胞腫、グレードＩＩＩ星細胞腫、多形性膠芽腫としても知られるグレードＩＶ星細胞腫からなる患者材料、脳腫瘍組織試料上で特異的に発現されることが示された（図５Ａ〜Ｃ）。興味深いことに、インテグリンα１０の発現は、グレードと共に増加し、グレードＩＩＩ及びＩＶの星細胞腫で強力に発現される。
【０２４５】
全グレードの星細胞腫における血管または血液充満領域中の細胞は陽性染色であることに留意されたい（図５Ｄ）。
【０２４６】
実施例５：免疫組織化学で視覚化した、神経芽細胞腫及び髄芽腫由来の患者腫瘍組織試料中のインテグリンα１０サブユニットの発現
ルンド大学及びウプサラ大学病院から外科試料として収集した神経芽細胞腫及び髄芽腫組織の検体からなる患者材料を使用した。パラフィン切片を脱パラフィン化し、キシレン、次いで、標準プロトコルに従ってエタノール系、及び水中でスライドの浸漬を介して再水和した。パラフィン切片をアセトンで後固定した後、ＰＢＳで５分間×２回すすいだ。スライドを酸性緩衝溶液−クエン酸緩衝液（１０ｍＭクエン酸ナトリウム、０．０５％Ｔｗｅｅｎ２０、ｐＨ６．０）に浸漬することによる抗原賦活化、及び加熱処理によって、パラフィン切片を処理した。抗原賦活化後、以下のプロトコルに従った：
１．ＰＢＳ中で、５分間室温ですすぐ／緩衝する。
２．１％ＢＳＡを含有するＰＢＳで、２０分間室温で遮断する。
３．ＰＢＳ（ＰＢＳ−ＴｒｉｔｏｎＸ１００）で、５分間室温ですすぐ。
４．０．０３％Ｈ２Ｏ２（ＰＢＳ中）で切片を１０分間室温でインキュベートする（内因性ペルオキシダーゼ活性のために急冷）。
５．ＰＢＳで５分間×２回室温ですすぐ。
６．１％ＢＳＡ  ０．０５％ＴｒｉｔｏｎＸ１００を含有するＰＢＳ）で希釈した原発性抗体、α１０ＰＡｂ  １μｇ／ｍｌ（０．６〜１．２μｇ／ｍｌ）で切片をインキュベートする。
−一晩（約１６〜１８時間）４℃にて。
７．ＰＢＳで５分間×２回（スライド／切片と同じ温度）すすぐ。
８．抱合型二次抗体を３０分（抗ウサギ）間室温で塗布する（１％ＢＳＡ  ０．０５％ＴｒｉｔｏｎＸ１００を含有するＰＢＳで希釈）。
９．ＰＢＳで５分間×２回室温ですすぐ。
１０．ＤＡＢ／０．０３％Ｈ２Ｏ２溶液中で１〜１０分間室温でインキュベート／反応させる。
１１．ＰＢＳで５分間×２回室温ですすぐ。
【０２４７】
免疫標識切片の対比染色：
１．ヘマトキシリン（Ｍａｙｅｒｓ）で２分間室温でインキュベートする。
２．ＰＢＳで３分間室温ですすぐ。
３．ＰＢＳで２分間室温で洗浄する。
【０２４８】
取り付け：
以下の浸漬を介して切片を脱水する
１．エタノール７０％、９６％、１００％×２回、各濃度で２分間。
２．キシレン≧３分間×２回。
３．Ｐｅｒｔｅｘ（登録商標）（Ｈｉｓｔｏｌａｂ、Ｓｗｅｄｅｎ）中にスライドを取り付け、ガラススライド（２２×３０〜５０ｍｍ）でスリップを覆う。
【０２４９】
機器：１０×／０．３及び２０×／０．５のプランアポクロマート対物レンズを用いたライカＤＭＲＥ顕微鏡。デジタル画像（１３６０×１０２４ピクセル）は、ライカＤＣＦ５００  ＣＣＤカメラ、及び画像取得ソフトウェアＬＡＳ（ライカ・アプリケーション・スイート）ｖ４．４で取得した。
分析及び書類作成：明視野顕微鏡は、細胞関連、特に、パラフィン薄切片（５μｍ）での全体標識分布の良好な検出をもたらす。
【０２５０】
結論として、インテグリンα１０サブユニットが、悪性神経芽細胞腫及び髄芽腫由来の患者腫瘍組織試料中の細胞で特異的かつ強力に発現されることを見出す（図６）。
【０２５１】
実施例６：定量的ＰＣＲによる患者由来の脳腫瘍中のα１０  ＲＮＡ発現の分析
ルンド大学病院で患者から外科生検として収集した脳腫瘍組織試料の定量的ＰＣＲは、インテグリンα１０サブユニットを検出するためのプライマーを用いて行った。差次的遺伝子発現分析、及び異なる脳腫瘍由来の患者組織材料中の遺伝子発現の検証のために脳癌ｃＤＮＡアレイ（ＯｒｉＧｅｎｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ  Ｉｎｃ．）を使用した。病理学者が検証した組織の高品質の全ＲＮＡから各アレイのｃＤＮＡを合成し、正規化し、２回連続したｑＰＣＲ分析においてベータアクチンで検証し、臨床情報と一緒に分析した。インテグリンα１０サブユニットのリアルタイムＰＣＲ検出は、遺伝子特異的プライマーとＴａｑＭａｎプローブ（遺伝子発現アッセイＨＳ００１７４６２３＿ｍ１、Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）を用いて行われ、製造者が推奨するように実行した。使用した検出システムは、ＩＣｙｃｌｅｒ（Ｂｉｏ−Ｒａｄ）であった。脳癌組織インテグリンα１０サブユニット発現を健康な脳組織に対して正規化し、インテグリンα１０サブユニットの相対定量値（ＲＱ）を算出した。図７は、２つのランの平均相対定量値を示す。ＲＱは、２−ΔΔＣｔとして定義し、ΔΔＣｔ＝ΔＣｔ腫瘍試料−ΔＣｔ正常脳組織であり、ΔＣｔは、ＣｔＩＴＧＡ１０−Ｃｔベータ−アクチンから得られる。
【０２５２】
図７から分かるように、インテグリンα１０サブユニットは、驚くべきことに、星細胞腫、退形成性星細胞腫、線維性星細胞腫、多形性膠芽腫、脳の血管周囲細胞腫、髄膜腫、血管腫髄膜腫、異型性髄膜腫、線維性髄膜腫、髄膜皮性髄膜腫、小嚢胞性髄膜腫、分泌性髄膜腫、乏突起膠星細胞腫、退形成性乏突起星細胞腫、乏突起神経膠腫、及び退形成性乏突起神経膠腫を含むいくつかの脳腫瘍で検出される。
【０２５３】
実施例７：インテグリンα１０サブユニットと他のマーカーの共発現の分析
腫瘍は、異種性であり、多くの異なる細胞型からなる。神経膠腫（ＧＢＭ）中のインテグリンα１０サブユニット発現に対して陽性である異なるタイプの細胞を示すため、ルンド大学病院から外科生検としてまたは死後に収集した脳腫瘍の膠芽腫組織試料中で、異なる細胞型を典型的かつ特異的に免疫標識するいくつかのマーカーを使用した。
【０２５４】
試料調製
新鮮凍結組織をＴｉｓｓｕｅＴｅｋ（Ｓａｋｕｒａ、Ｊｐｎ）に埋め込んだ。（ＭＩＣＲＯＭ  ＨＭ  ５００  ＯＭクライオスタットで作製した）切片１０μｍをスーパーフロストプラススライド上に収集した。アセトンで後固定した後に、切片を免疫標識に使用した（−２０℃で１００％、１０分間）。
【０２５５】
凍結切片（切りたてまたは深冷凍結）を３７℃で約２０分間空気乾燥された。切片を室温に到達させると、ＰＢＳで５分間×２回すすいだ。アセトンで切片を後固定した後、ＰＢＳですすぎ２回を行った（５分間×２回）。シリコーンバリア（「ＰＡＰペン」）を切片の周りに塗布した。０．０５％（０．１〜０．００１）ＴｒｉｔｏｎＸ−１００及び１％ＢＳＡを含有するＰＢＳで３０分間室温で切片をインキュベートした後、ＰＢＳで１回×２分間すすいだ。他の抗原（特異性についてまず個々に評価、及び最適な作業希釈）に対して作製した抗体と混合した原発性抗体、α１０  ＰＡｂ  １．２μｇ／ｍｌ（０．６〜１．２μｇ／ｍｌ）（０．０５％ＴｒｉｔｏｎＸ−１００及び１％ＢＳＡを含有するＰＢＳで希釈）で１６〜１８時間、４〜８℃で切片をインキュベートした。同時の蛍光可視化では、２つのエピトープ、原発性及び二次抗体をそれぞれ、混合物（「カクテル」）として塗布した。切片をＰＢＳで１分間すすいだ後、２回×５分間すすぎ、１：１５０に希釈した混合物中のフルオロフォア抱合型二次Ａｂ／Ａｂで３０〜４５分間、室温でインキュベートした。
【０２５６】
多重標識（高アフィニティ精製された、主にＦａｂ２断片）用の二次抗体は、ウサギ、マウス、またはヤギＩｇＧに対してまたはニワトリＩｇＹに対してロバまたはヤギ中で作製した（Ｊａｃｋｓｏｎ、ＵＳＡまたはＩｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、ＵＳＡ）。１％ＢＳＡを含有するＰＢＳ中で希釈した。同時の蛍光可視化では、２つのエピトープ、原発性及び二次抗体を混合物、「カクテル」として塗布した。切片をＰＢＳ−ＴｒｉｔｏｎＸ−１００で２分間すすぎ、ＰＢＳで１回×５分間すすいだ。ＰＢＳで希釈した細胞小器官（核）染色ＤＡＰＩ、０．１μＭで切片を１５分間インキュベートし、ＰＢＳで２回×５分間すすいだ。「抗退色溶液」：ＰｒｏＬｏｎｇ  Ｇｏｌｄ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、ＵＳＡ）中で切片を取り付け、カバーガラスを載せた。
【０２５７】
【表１】
2018511569.tif 000003
【０２５８】
分析：
分析は、共焦点レーザー走査顕微鏡で行った。共焦点顕微鏡は、高分解能、標識の高信号対雑音比、及び特定の波長信号検出をもたらした。共焦点顕微鏡画像の分析のみが、（Ｚスタック光学切片、及び三次元再構築を介して）標識の構造局在化、細胞外／細胞内局在化、及び共局在化を解像することができる。
【０２５９】
３０５〜６３３ｎｍ間の励起用レーザー、及び４２０〜６５０ｎｍ間の放射検出用レーザーを利用したＺｅｉｓｓ  ＬＳＭ  ５１０  ＭＥＴＡ共焦点顕微鏡で検体を検査した。３つの免疫蛍光チャネル、１つのＤＡＰＩチャネル、及び１つの明視野ＤＩＣチャネルを有する、２０×／０．８プランアポクロマート、及び４０×／１．３油浸漬プランアポクロマート対物レンズで画像を取得した。
【０２６０】
１０２４×１０２４のピクセルフレームサイズ（ピクセル幅０．２２μｍ）または「ズーム」（より小さい領域を走査）のいずれかの４０×／１．３対物レンズ、及び最大解像度のためのナイキスト最適サンプリング周波数（ピクセル幅０．１１５μｍ）で、連続した共焦点面のＺスタック（ＤＩＣ無）を得た。連続した共焦点面間のステップサイズは、ナイキスト最適サンプリング周波数（０．４８μｍ）に従った。
【０２６１】
異なるマーカーと共存するインテグリンα１０の定量的分析は、デジタル化画像データを用いて行った。データは、異なる標識を表す単一チャネルから分析した。細胞核の同定を通じて関心領域（ＲＯＩ）をまず同定した。核の周り１マイクロメートルの領域には、マーカーの共発現の分析を使用した。陽性染色の閾値は、経験豊富な顕微鏡オペレータによる肉眼検査によって決定され、５％に設定された。
【０２６２】
結果：以下の表１は、インテグリンα１０サブユニットと共発現するマーカーの発現パターンを示す。抗原に対して指向された抗体は、左手の列に示す。抗原（免疫表現型）を発現すると予想される異なる細胞型は、真ん中の列に示す。インテグリンα１０による各マーカーの共発現の程度は、右の列に示す。
【０２６３】
【表２】
2018511569.tif 000004
【０２６４】
ＣＤ１６３、ＣＤ２０６、及びインテグリンα１０サブユニットの共発現と共局在化を図８に示し、ＥＧＦＲｖＩＩＩ、及びインテグリンα１０サブユニットの共発現と共局在化を図９に示す。
【０２６５】
実施例８：移動アッセイ
悪性細胞は、広がって転移する移動に依る。インテグリンα１０がこの細胞プロセスに重要であるかを解明するために、移動アッセイが行われる。
【０２６６】
移動アッセイは、ＣｙｔｏＳｅｌｅｃｔ細胞移動アッセイキット（Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌａｂｓ’、ＵＳ）を用いて行われる。これは、細胞を上部チャンバから下部区画に移動させる２チャンバシステムであり、化学誘引物質培地で充填されている。チャンバは、積極的に移動している細胞だけを通過させる膜で分離される。例えば、一次培養または樹立細胞株から得られた神経膠腫細胞（ＧＢＭ）を、アキュターゼを用いて採取し、ウシ胎児血清（ＦＣＳ）がない培地中に再懸濁し、ＣｙｔｏＳｅｌｅｃｔインサートの上部区画に移した。インテグリンα１０サブユニットに対するモノクローナル非抱合型及び／または抗体薬物抱合体（ＡＤＣ）抗体、またはＩｇＧ対照抗体を用いて、移動アッセイを行う。３７℃で２４〜４８時間インキュベーション後、インサートを収集し、下面に付着している細胞を固定し、染色し、定量化する。
【０２６７】
インテグリンα１０サブユニットに対する抗体でインキュベートした神経膠腫細胞は、移動能の減少を示す。
【０２６８】
実施例９：アポトーシス−細胞形態、及びフローサイトメトリーの分析
細胞は、生存するために細胞外マトリックスへのインテグリン接着に依存している。これらのインテグリン−マトリックス結合が破壊されると、細胞はアポトーシスに入り得る。インテグリンα１０結合が破壊された場合に、神経膠腫（ＧＢＭ）細胞でアポトーシスの誘発が生じるかどうかを明らかにするために、アポトーシスアッセイを行う。
【０２６９】
神経膠腫細胞（ＧＢＭ）を６ウェルプレートで培養し、一晩インキュベートし、アポトーシスを決定する。インテグリンα１０サブユニットに対する非抱合型またはＡＤＣモノクローナル抗体、またはＩｇＧ対照抗体を翌日に添加する。倒立顕微鏡を用いて形態変化を観察し、処理の７２時間後にフローサイトメトリー分析用に細胞を採取し、早期及び後期アポトーシスを観察する。インテグリンα１０サブユニット抗体によって誘発されたアポトーシスの程度は、７−ＡＡＤ（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）によるＦＩＴＣアネキシンＶアポトーシス検出キットなどの市販のアポトーシス検出キットで決定し、フローサイトメトリーでデータを分析する。フローサイトメトリー分析では、アネキシンＶ−ＦＩＴＣ単陽性細胞は、早期アポトーシス細胞を表す。アネキシンＶ−ＦＩＴＣ、及び７−ＡＡＤ（７−アミノ−アクチノマイシンＤ）二重陽性染色細胞は、後期アポトーシス細胞を表す。７−ＡＡＤの陽性染色は、細胞の壊死集団のみを表す。
【０２７０】
インテグリンα１０サブユニットに対する抗体でインキュベートした神経膠腫細胞は、アポトーシスの強化を示す。
【０２７１】
実施例１０：インテグリンα１０サブユニット対するモノクローナル抗体で処理した神経膠腫細胞（ＧＢＭ）の球形成能
細胞集団の自己複製能を決定することで、異種移植の際に腫瘍をインビボで誘発する能力を決定する通常のインビトロアッセイは、球形成アッセイである。
【０２７２】
ウプサラ大学のヒト神経膠腫細胞培養（ＨＧＣＣ）バイオバンク由来の神経膠腫細胞株（ＧＢＭ）をこのアッセイで使用し、これらの細胞は、Ｘｉｅ  ｅｔ  ａｌ．２０１５（ＥＢｉｏＭｅｄｉｃｉｎｅ．１５；２（１０）：１３５１−６３）に記載されるように、外科生検として収集した脳腫瘍組織試料から得られた患者材料由来である。５０Ｘ  Ｂ２７、１００Ｘ  Ｎ２、１％  Ｐｅｎ  Ｓｔｒｅｐ、ｂＦＧＦ（１０ｎｇ／ｍｌ）、及びＥＧＦ（１０ｎｇ／ｍｌ）が補充されたＤＭＥＭ／Ｆ１２  ｗ／Ｇｌｕｔａｍａｘ及びＮｅｕｒｏｂａｓａｌ培地（１：１）中で３７℃、５％ＣＯ２で細胞を培養した。
【０２７３】
球形成能を評価するため、細胞をアキュターゼで処理し、収集し、４分間３００ｘｇで遠心分離した後、培地中に再懸濁した。アッセイを９６ウェルプレートで行い、ウェル当たり５０００個の細胞を播種した。インテグリンα１０サブユニットに対するモノクローナル抗体またはＩｇＧ対照抗体の濃度を変えながら細胞を処理した。全ての処理は、三つ組みで行った。３７℃、５％ＣＯ２でインキュベーションした７日後、各ウェルの顕微鏡画像を撮影し、１００μｍの直径に到達した球をカウントした。
【０２７４】
結論として、インテグリンα１０サブユニットに対するモノクローナル抗体を用いることで、神経膠腫細胞は、未処理細胞と比較して、球形成能の減少を示す。この効果は、ＩｇＧ対照抗体で処理した細胞には見られなかった（図１０）。
【０２７５】
実施例１１：インテグリンα１０サブユニットに対する抗体で処理した神経膠腫細胞（ＧＢＭ）の生存性及び成長
癌の特徴の１つは、悪性細胞中の持続的な増殖シグナルである。抗インテグリンα１０サブユニット抗体が神経膠腫細胞の生存性及び増殖を阻害することができるかを明らかにするために、ＷＳＴ−１（Ｒｏｃｈｅ、ＤＥ）及びＸＴＴなどの比色細胞生存性アッセイを行った。比色細胞生存性アッセイは、代謝的に活性な細胞中で着色ホルマザン化合物に還元されるテトラゾリウム塩を含む。従って、ホルマザン染料の量は、生細胞の数と相関する。
【０２７６】
細胞生存性アッセイでは、一次培養から得られた神経膠腫細胞をアキュターゼで処理し、収集し、４分間３００ｘｇで遠心分離した後、培地中で再懸濁した。いくつかの神経膠腫（ＧＢＭ）細胞株を使用した。ルンド大学からの１つは、１０％ＦＢＳと１％Ｐｅｎ  Ｓｔｒｅｐが補充されたＤＭＥＭ培地中で培養したが、ＨＧＣＣ細胞株は、５０Ｘ  Ｂ２７、１００Ｘ  Ｎ２、１％Ｐｅｎ  Ｓｔｒｅｐ、ｂＦＧＦ（１０ｎｇ／ｍｌ）、及びＥＧＦ（１０ｎｇ／ｍｌ）が補充されたＤＭＥＭ／Ｆ１２  ｗ／Ｇｌｕｔａｍａｘ及びＮｅｕｒｏｂａｓａｌ培地（１：１）中で３７℃、５％ＣＯ２で培養した。ウェル当たりの５０００個の細胞の密度を使用し、９６ウェルプレートをラミニン（Ｃｕｌｔｒｅｘ（登録商標）マウスラミニンＩ、Ｒ＆Ｄ  ｓｙｓｔｅｍｓ）で被覆し、ＨＧＣＣ細胞を良好にプラスチック接着した。翌日、インテグリンα１０サブユニットに対する非抱合型モノクローナル抗体の濃度を変えながら添加した。インテグリンα１０サブユニットに対する非抱合型モノクローナル抗体とサポリンに抱合された二次抗体との組み合わせで細胞を処理した（ＡＴＳｂｉｏ、ＵＳ）。これは、良好なインビトロモデルシステムである。対照として、未処理細胞、並びに対照抗体を使用した。全ての処理は、三つ組みで行った。細胞を３７℃、５％ＣＯ２でさらに７２時間培養した。１０〜５０μｌテトラゾリウム塩試薬を各ウェルに添加した後、３７℃で１〜４時間インキュベーションすることで、細胞生存性を評価した。プレートを穏やかに振動させ、４５０〜５００ナノメートルの波長で分光光度計（ＳｐｅｃｔｒａＭａｘ  ｉ３）を用いて、試料の吸光度を測定した。
【０２７７】
図１１で分かるように、インテグリンα１０サブユニットのみに対する非抱合型モノクローナル抗体による処理は、未処理の神経膠腫（ＧＢＭ）細胞と比較して、細胞生存性及び／または増殖を著しく減少させた。図１２は、対照抗体と比較して、サポリンに抱合された二次抗体と組み合わせて、インテグリンα１０サブユニットに対するモノクローナル抗体で処理した神経膠腫（ＧＢＭ）細胞の生存及び／または成長が減少したことを示す。
【０２７８】
実施例１２：中枢神経系（中枢神経系）における悪性腫瘍の治療のための候補標的としてインテグリンα１０β１の機能評価のインビボネズミモデル
抗癌剤として抗インテグリンα１０抗体を含む非抱合型インテグリンα１０抗体または抱合型インテグリンα１０抗体（抗体薬物複合体、ＡＤＣ）の抗腫瘍効果を実証するために、免疫不全マウスの同所定位脳腫瘍異種移植モデルを使用する。ヒト腫瘍細胞は、免疫不全マウスの脳に移植する。癌細胞を同所に注入する方法は、Ｊｏｏ  ＫＭ  ｅｔ  ａｌ．２０１３（Ｃｅｌｌ  Ｒｅｐ．３，２６０〜７３）で本質的に記載されるように行われる。
【０２７９】
インテグリンα１０に対する非抱合型／ＡＤＣモノクローナル抗体、または対照抗体の異なる用量を、悪性細胞移植時、及び新生物の誘導後の異なる時点でモデル動物に投与する。抗体は、静脈内、腫瘍内、または脳室内注射で導入される。インテグリンα１０特異的抗体の治療効果は、抗インテグリンα１０で処理した動物を対照抗体で処理した動物と比較することで評価する。
【０２８０】
試薬の治療的価値の評価は、臓器、細胞、及び分子の分析、並びに生存に基づいた多数の病理学的比較によって行われる。病理学的特色、及びマーカーの例は、
−腫瘍サイズ
−腫瘍成長速度
−形態学的、分子、及び病理組織学的特徴
−侵襲性
−悪性マーカーの遺伝子発現
−細胞周期ステータス
−アポトーシス
【０２８１】
本実験の目標の１つは、毒性反応を引き起こすかまたは誘発することなく試薬の最も効果的な用量を決定することである。より詳細な実験計画を含む、インビボの戦略的セットアップの主要で一般的な工程を以下に紹介する：
【０２８２】
詳細な実験計画
一般に、開始日（０日目）、すなわち、正常な移植宿主への新生物細胞の注射から、宿主動物中で腫瘍が完全に発症するまでの神経膠腫の発症は、選ばれた異種移植モデルに応じて約２〜２０週間である。研究は、３つの異なるステージに分割する：
１．開始
２．進行
３．終結
【０２８３】
ステージ１、開始：
悪性細胞の注射前、以下の工程を０日目に行う。
移植用細胞の調製：
ａ）腫瘍細胞株、または
ｂ）原発性悪性細胞懸濁液を得るために腫瘍解離
【０２８４】
マウス脳への同所移植では、定位装置を製造者の指示に従って準備する。
【０２８５】
外科手順：
少なくとも５匹の動物を各注射条件、及び各時点で使用する。
ａ）術前動物の準備（動物の麻酔、消毒、固定）
ｂ）術前細胞の準備（細胞洗浄、及び計数）
ｃ）手順ケア（麻酔及び外科手順のメンテナンス）
ｄ）細胞の注入
ｅ）動物のケア、及びモニタリング
【０２８６】
ステージ２、進行：
実験動物は、治療レジメンに基づいて４つの群に分割する。
群は、
１．１群：未処理群。抗体による処理無し。
２．２群：対照群。対照抗体による処理。
３．３群：ＩＴＧＡ１０群。インテグリンα１０サブユニットに対する非抱合型／ＡＤＣ抗体による処理。
【０２８７】
ステージ３、終結：
動物は、確立されたプロトコルに従って犠牲にし、形態学的、分子、及び病理組織学的特徴、侵襲性、悪性マーカーの遺伝子発現データ、細胞周期ステータス、及びアポトーシスに関する必要な全ての情報を取得するために、脳腫瘍を単離する。
【０２８８】
実施例１３：配列の概要
配列番号１：ヒトインテグリンα１０サブユニット
配列番号２：ヒトインテグリンα１０サブユニットの細胞外ドメイン
配列番号３：ヒトインテグリンα１０サブユニットのＩドメイン
配列番号４：ホモサピエンスインテグリンサブユニット  α１０前駆体、ｍＲＮＡ、完全ｃｄｓ
【図１】
2018511569.tif 000005
【図２】
2018511569.tif 000006
【図３】
2018511569.tif 000007
【図４Ａ】
2018511569.tif 000008
【図４Ｂ】
2018511569.tif 000009
【図５−１】
2018511569.tif 000010
【図５−２】
2018511569.tif 000011
【図６Ａ】
2018511569.tif 000012
【図６Ｂ】
2018511569.tif 000013
【図７】
2018511569.tif 000014
【図８】
2018511569.tif 000015
【図９】
2018511569.tif 000016
【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【配列表】
2018511569000001.app
【国際調査報告】
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