(57)【要約】本発明で提供するのは、ＴＩＧＩＴ、ならびにそのアイソフォーム及びホモログに選択的に結合する抗原結合タンパク質（ＡＢＰ）と、そのＡＢＰを含む組成物である。治療方法と診断方法のような、そのＡＢＰの使用方法も提供する。【選択図】図１Ａ
2018533371.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ヒトＴＩＧＩＴ（ｈＴＩＧＩＴ、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１）に特異的に結合する単離された抗原結合タンパク質（ＡＢＰ）であって、以下の６個のＣＤＲ配列を含む、前記ＡＢＰ：
（ａ）配列
2018533371.tif 000097
であって、そのＸ１が、ＡまたはＴである配列（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２８）
を有するＣＤＲ−Ｈ３；
（ｂ）配列
2018533371.tif 000098
であって、そのＸ２が、Ｓ、ＱまたはＧである配列（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２９）
を有するＣＤＲ−Ｈ２；
（ｃ）配列
2018533371.tif 000099
であって、そのＸ３が、ＥまたはＡであり、Ｘ４が、Ｌ、ＶまたはＳである配列（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１３０）
を有するＣＤＲ−Ｈ１；
（ｄ）配列
2018533371.tif 000100
を有するＣＤＲ−Ｌ３；
（ｅ）配列
2018533371.tif 000101
を有するＣＤＲ−Ｌ２；及び
（ｆ）配列
2018533371.tif 000102
を有するＣＤＲ−Ｌ１。
【請求項２】
（ａ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３２のＣＤＲ−Ｈ３と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４０のＣＤＲ−Ｈ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５４のＣＤＲ−Ｈ１と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６４のＣＤＲ−Ｌ３と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６８のＣＤＲ−Ｌ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７１のＣＤＲ−Ｌ１、
（ｂ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３１のＣＤＲ−Ｈ３と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４０のＣＤＲ−Ｈ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５４のＣＤＲ−Ｈ１と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６４のＣＤＲ−Ｌ３と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６８のＣＤＲ−Ｌ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７１のＣＤＲ−Ｌ１、
（ｃ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３１のＣＤＲ−Ｈ３と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３９のＣＤＲ−Ｈ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５１のＣＤＲ−Ｈ１と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６４のＣＤＲ−Ｌ３と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６８のＣＤＲ−Ｌ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７１のＣＤＲ−Ｌ１、
（ｄ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３１のＣＤＲ−Ｈ３と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４０のＣＤＲ−Ｈ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５２のＣＤＲ−Ｈ１と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６４のＣＤＲ−Ｌ３と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６８のＣＤＲ−Ｌ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７１のＣＤＲ−Ｌ１、または
（ｅ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３１のＣＤＲ−Ｈ３と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４１のＣＤＲ−Ｈ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５３のＣＤＲ−Ｈ１と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６４のＣＤＲ−Ｌ３と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６８のＣＤＲ−Ｌ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７１のＣＤＲ−Ｌ１
を含む、請求項１に記載のＡＢＰ。
【請求項３】
（ａ）請求項２（ａ）に記載のＡＢＰが、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１３のＶＨ配列と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２６のＶＬ配列を含むか、
（ｂ）請求項２（ｂ）に記載のＡＢＰが、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２のＶＨ配列と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２６のＶＬ配列を含むか、
（ｃ）請求項２（ａ）に記載のＡＢＰが、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１４のＶＨ配列と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２６のＶＬ配列を含むか、
（ｄ）請求項２（ａ）に記載のＡＢＰが、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５のＶＨ配列と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２６のＶＬ配列を含むか、
（ｅ）請求項２（ｃ）に記載のＡＢＰが、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９のＶＨ配列と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２６のＶＬ配列を含むか、
（ｆ）請求項２（ｄ）に記載のＡＢＰが、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０のＶＨ配列と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２６のＶＬ配列を含むか、または
（ｇ）請求項２（ｅ）に記載のＡＢＰが、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１のＶＨ配列と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２６のＶＬ配列を含む、
請求項２に記載のＡＢＰ。
【請求項４】
（ａ）請求項３（ａ）に記載のＡＢＰが、（ｉ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９９の重鎖と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９２の軽鎖、もしくは（ｉｉ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１００の重鎖と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９２の軽鎖を含むか、
（ｂ）請求項３（ｂ）に記載のＡＢＰが、（ｉ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９７の重鎖と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９２の軽鎖、もしくは（ｉｉ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９８の重鎖と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９２の軽鎖を含むか、
（ｃ）請求項３（ｃ）に記載のＡＢＰが、（ｉ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０１の重鎖と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９２の軽鎖、もしくは（ｉｉ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０２の重鎖と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９２の軽鎖を含むか、
（ｄ）請求項３（ｄ）に記載のＡＢＰが、（ｉ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０３の重鎖と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９２の軽鎖、もしくは（ｉｉ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０４の重鎖と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９２の軽鎖を含むか、
（ｅ）請求項３（ｅ）に記載のＡＢＰが、（ｉ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９０の重鎖と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９２の軽鎖、もしくは（ｉｉ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９１の重鎖と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９２の軽鎖を含むか、
（ｆ）請求項３（ｆ）に記載のＡＢＰが、（ｉ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９３の重鎖と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９２の軽鎖、もしくは（ｉｉ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９４の重鎖と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９２の軽鎖を含むか、または
（ｇ）請求項３（ｇ）に記載のＡＢＰが、（ｉ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９５の重鎖と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９２の軽鎖、もしくは（ｉｉ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９６の重鎖と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９２の軽鎖を含む、
請求項３に記載のＡＢＰ。
【請求項５】
ヒトＴＩＧＩＴ（ｈＴＩＧＩＴ、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１）に特異的に結合する単離された抗原結合タンパク質（ＡＢＰ）であって、以下の６個のＣＤＲ配列を含む、前記ＡＢＰ：
（ａ）配列
2018533371.tif 000103
であって、そのＸ１が、ＳまたはＧである配列（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１３１）
を有するＣＤＲ−Ｈ３；
（ｂ）配列
2018533371.tif 000104
であって、そのＸ２が、ＳまたはＡであり、Ｘ３が、ＳまたはＧである配列（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１３２）
を有するＣＤＲ−Ｈ２；
（ｃ）配列
2018533371.tif 000105
であって、そのＸ４が、ＳまたはＴであり、Ｘ５が、ＳまたはＴであり、Ｘ６が、ＳまたはＫであり、Ｘ７が、ＨまたはＹである配列（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１３３）
を有するＣＤＲ−Ｈ１；
（ｄ）配列
2018533371.tif 000106
を有するＣＤＲ−Ｌ３；
（ｅ）配列
2018533371.tif 000107
を有するＣＤＲ−Ｌ２；及び
（ｆ）配列
2018533371.tif 000108
を有するＣＤＲ−Ｌ１。
【請求項６】
（ａ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２９のＣＤＲ−Ｈ３と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３７のＣＤＲ−Ｈ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４９のＣＤＲ−Ｈ１と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６３のＣＤＲ−Ｌ３と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６７のＣＤＲ−Ｌ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７０のＣＤＲ−Ｌ１、
（ｂ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３０のＣＤＲ−Ｈ３と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３７のＣＤＲ−Ｈ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５０のＣＤＲ−Ｈ１と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６３のＣＤＲ−Ｌ３と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６７のＣＤＲ−Ｌ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７０のＣＤＲ−Ｌ１、
（ｃ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２９のＣＤＲ−Ｈ３と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３８のＣＤＲ−Ｈ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５０のＣＤＲ−Ｈ１と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６３のＣＤＲ−Ｌ３と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６７のＣＤＲ−Ｌ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７０のＣＤＲ−Ｌ１、
（ｄ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２９のＣＤＲ−Ｈ３と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３６のＣＤＲ−Ｈ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４８のＣＤＲ−Ｈ１と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６３のＣＤＲ−Ｌ３と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６７のＣＤＲ−Ｌ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７０のＣＤＲ−Ｌ１、または
（ｅ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２９のＣＤＲ−Ｈ３と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３７のＣＤＲ−Ｈ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５０のＣＤＲ−Ｈ１と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６３のＣＤＲ−Ｌ３と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６７のＣＤＲ−Ｌ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７０のＣＤＲ−Ｌ１
を含む、請求項５に記載のＡＢＰ。
【請求項７】
（ａ）請求項６（ａ）に記載のＡＢＰが、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５のＶＨ配列と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２５のＶＬ配列を含むか、
（ｂ）請求項６（ｂ）に記載のＡＢＰが、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７のＶＨ配列と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２５のＶＬ配列を含むか、
（ｃ）請求項６（ｃ）に記載のＡＢＰが、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８のＶＨ配列と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２５のＶＬ配列を含むか、
（ｄ）請求項６（ｄ）に記載のＡＢＰが、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４のＶＨ配列と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２５のＶＬ配列を含むか、または
（ｅ）請求項６（ｅ）に記載のＡＢＰが、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６のＶＨ配列と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２５のＶＬ配列を含む、
請求項６に記載のＡＢＰ。
【請求項８】
（ａ）請求項７（ａ）に記載のＡＢＰが、（ｉ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８２の重鎖と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８１の軽鎖、もしくは（ｉｉ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８３の重鎖と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８１の軽鎖を含むか、
（ｂ）請求項７（ｂ）に記載のＡＢＰが、（ｉ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８６の重鎖と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８１の軽鎖、もしくは（ｉｉ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８７の重鎖と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８１の軽鎖を含むか、
（ｃ）請求項７（ｃ）に記載のＡＢＰが、（ｉ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８８の重鎖と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８１の軽鎖、もしくは（ｉｉ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８９の重鎖と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８１の軽鎖を含むか、
（ｄ）請求項７（ｄ）に記載のＡＢＰが、（ｉ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７９の重鎖と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８１の軽鎖、もしくは（ｉｉ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８０の重鎖と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８１の軽鎖を含むか、または
（ｅ）請求項７（ｅ）に記載のＡＢＰが、（ｉ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８４の重鎖と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８１の軽鎖、もしくは（ｉｉ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８５の重鎖と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８１の軽鎖を含む、
請求項７に記載のＡＢＰ。
【請求項９】
ヒトＴＩＧＩＴ（ｈＴＩＧＩＴ、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１）に特異的に結合する単離された抗原結合タンパク質（ＡＢＰ）であって、以下の６個のＣＤＲ配列を含む、前記ＡＢＰ：
（ａ）配列
2018533371.tif 000109
であって、そのＸ１が、ＦまたはＬである配列（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１３４）
を有するＣＤＲ−Ｈ３；
（ｂ）配列
2018533371.tif 000110
であって、そのＸ２が、ＬまたはＩであり、Ｘ３が、ＱまたはＲである配列（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１３５）
を有するＣＤＲ−Ｈ２；
（ｃ）配列
2018533371.tif 000111
であって、そのＸ４が、Ｇ、ＰまたはＲであり、Ｘ５が、Ｎ、ＡまたはＥであり、Ｘ６が、ＭまたはＩである配列（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１３６）
を有するＣＤＲ−Ｈ１；
（ｄ）配列
2018533371.tif 000112
を有するＣＤＲ−Ｌ３；
（ｅ）配列
2018533371.tif 000113
を有するＣＤＲ−Ｌ２；及び
（ｆ）配列
2018533371.tif 000114
を有するＣＤＲ−Ｌ１。
【請求項１０】
（ａ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３３のＣＤＲ−Ｈ３と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４３のＣＤＲ−Ｈ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６０のＣＤＲ−Ｈ１と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６５のＣＤＲ−Ｌ３と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６９のＣＤＲ−Ｌ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７２のＣＤＲ−Ｌ１、
（ｂ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３４のＣＤＲ−Ｈ３と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４３のＣＤＲ−Ｈ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６０のＣＤＲ−Ｈ１と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６５のＣＤＲ−Ｌ３と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６９のＣＤＲ−Ｌ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７２のＣＤＲ−Ｌ１、
（ｃ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３３のＣＤＲ−Ｈ３と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４４のＣＤＲ−Ｈ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５９のＣＤＲ−Ｈ１と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６５のＣＤＲ−Ｌ３と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６９のＣＤＲ−Ｌ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７２のＣＤＲ−Ｌ１、
（ｄ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３３のＣＤＲ−Ｈ３と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４２のＣＤＲ−Ｈ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５８のＣＤＲ−Ｈ１と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６５のＣＤＲ−Ｌ３と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６９のＣＤＲ−Ｌ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７２のＣＤＲ−Ｌ１、
（ｅ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３３のＣＤＲ−Ｈ３と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４２のＣＤＲ−Ｈ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５９のＣＤＲ−Ｈ１と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６５のＣＤＲ−Ｌ３と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６９のＣＤＲ−Ｌ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７２のＣＤＲ−Ｌ１、または
（ｆ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３４のＣＤＲ−Ｈ３と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４４のＣＤＲ−Ｈ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６１のＣＤＲ−Ｈ１と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６５のＣＤＲ−Ｌ３と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６９のＣＤＲ−Ｌ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７２のＣＤＲ−Ｌ１
を含む、請求項９に記載のＡＢＰ。
【請求項１１】
（ａ）請求項１０（ａ）に記載のＡＢＰが、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１８のＶＨ配列と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２７のＶＬ配列を含むか、
（ｂ）請求項１０（ｂ）に記載のＡＢＰが、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１９のＶＨ配列と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２７のＶＬ配列を含むか、
（ｃ）請求項１０（ｃ）に記載のＡＢＰが、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２１のＶＨ配列と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２７のＶＬ配列を含むか、
（ｄ）請求項１０（ｄ）に記載のＡＢＰが、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６のＶＨ配列と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２７のＶＬ配列を含むか、
（ｅ）請求項１０（ｅ）に記載のＡＢＰが、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１７のＶＨ配列と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２７のＶＬ配列を含むか、または
（ｆ）請求項１０（ｆ）に記載のＡＢＰが、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２０のＶＨ配列と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２７のＶＬ配列を含む、
請求項１０に記載のＡＢＰ。
【請求項１２】
（ａ）請求項１１（ａ）に記載のＡＢＰが、（ｉ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１０の重鎖と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０７の軽鎖、もしくは（ｉｉ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１１の重鎖と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０７の軽鎖を含むか、
（ｂ）請求項１１（ｂ）に記載のＡＢＰが、（ｉ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１２の重鎖と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０７の軽鎖、もしくは（ｉｉ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１３の重鎖と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０７の軽鎖を含むか、
（ｃ）請求項１１（ｃ）に記載のＡＢＰが、（ｉ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１６の重鎖と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０７の軽鎖、もしくは（ｉｉ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１７の重鎖と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０７の軽鎖を含むか、
（ｄ）請求項１１（ｄ）に記載のＡＢＰが、（ｉ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０５の重鎖と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０７の軽鎖、もしくは（ｉｉ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０６の重鎖と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０７の軽鎖を含むか、
（ｅ）請求項１１（ｅ）に記載のＡＢＰが、（ｉ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０８の重鎖と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０７の軽鎖、もしくは（ｉｉ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０９の重鎖と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０７の軽鎖を含むか、または
（ｆ）請求項１１（ｆ）に記載のＡＢＰが、（ｉ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１４の重鎖と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０７の軽鎖、もしくは（ｉｉ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１５の重鎖と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０７の軽鎖を含む、
請求項１１に記載のＡＢＰ。
【請求項１３】
ヒトＴＩＧＩＴ（ｈＴＩＧＩＴ、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１）に特異的に結合する単離された抗原結合タンパク質（ＡＢＰ）であって、以下の６個のＣＤＲ配列を含む、前記ＡＢＰ：
（ａ）配列
2018533371.tif 000115
を有するＣＤＲ−Ｈ３；
（ｂ）配列
2018533371.tif 000116
であって、そのＸ１が、ＶまたはＩであり、Ｘ２が、ＡまたはＴであり、Ｘ３が、ＱまたはＲである配列（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１３７）
を有するＣＤＲ−Ｈ２；
（ｃ）配列
2018533371.tif 000117
を有するＣＤＲ−Ｈ１；
（ｄ）配列
2018533371.tif 000118
を有するＣＤＲ−Ｌ３；
（ｅ）配列
2018533371.tif 000119
を有するＣＤＲ−Ｌ２；及び
（ｆ）配列
2018533371.tif 000120
を有するＣＤＲ−Ｌ１。
【請求項１４】
（ａ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３５のＣＤＲ−Ｈ３と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４６のＣＤＲ−Ｈ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６２のＣＤＲ−Ｈ１と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６６のＣＤＲ−Ｌ３と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６９のＣＤＲ−Ｌ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７２のＣＤＲ−Ｌ１、
（ｂ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３５のＣＤＲ−Ｈ３と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４７のＣＤＲ−Ｈ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６２のＣＤＲ−Ｈ１と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６６のＣＤＲ−Ｌ３と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６９のＣＤＲ−Ｌ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７２のＣＤＲ−Ｌ１、または
（ｃ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３５のＣＤＲ−Ｈ３と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４５のＣＤＲ−Ｈ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６２のＣＤＲ−Ｈ１と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６６のＣＤＲ−Ｌ３と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６９のＣＤＲ−Ｌ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７２のＣＤＲ−Ｌ１
を含む、請求項１３に記載のＡＢＰ。
【請求項１５】
（ａ）請求項１４（ａ）に記載のＡＢＰが、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２３のＶＨ配列と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２８のＶＬ配列を含むか、
（ｂ）請求項１４（ｂ）に記載のＡＢＰが、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２４のＶＨ配列と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２８のＶＬ配列を含むか、または
（ｃ）請求項１４（ｃ）に記載のＡＢＰが、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２２のＶＨ配列と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２８のＶＬ配列を含む、
請求項１４に記載のＡＢＰ。
【請求項１６】
（ａ）請求項１５（ａ）に記載のＡＢＰが、（ｉ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２１の重鎖と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２０の軽鎖、もしくは（ｉｉ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２２の重鎖と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２０の軽鎖を含むか、
（ｂ）請求項１５（ｂ）に記載のＡＢＰが、（ｉ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２３の重鎖と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２０の軽鎖、もしくは（ｉｉ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２４の重鎖と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２０の軽鎖を含むか、または
（ｃ）請求項１５（ｃ）に記載のＡＢＰが、（ｉ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１８の重鎖と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２０の軽鎖、もしくは（ｉｉ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１９の重鎖と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２０の軽鎖を含む、
請求項１５に記載のＡＢＰ。
【請求項１７】
（ａ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４〜２４から選択されるＶＨ領域のＣＤＲ−Ｈ３に対する同一性が少なくとも約８０％であるＣＤＲ−Ｈ３と、
（ｂ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４〜２４から選択されるＶＨ領域のＣＤＲ−Ｈ２に対する同一性が少なくとも約８０％であるＣＤＲ−Ｈ２と、
（ｃ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４〜２４から選択されるＶＨ領域のＣＤＲ−Ｈ１に対する同一性が少なくとも約８０％であるＣＤＲ−Ｈ１と、
（ｄ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２５〜２８から選択されるＶＬ領域のＣＤＲ−Ｌ３に対する同一性が少なくとも約８０％であるＣＤＲ−Ｌ３と、
（ｅ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２５〜２８から選択されるＶＬ領域のＣＤＲ−Ｌ２に対する同一性が少なくとも約８０％であるＣＤＲ−Ｌ２と、
（ｆ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２５〜２８から選択されるＶＬ領域のＣＤＲ−Ｌ１に対する同一性が少なくとも約８０％であるＣＤＲ−Ｌ１と
を含む、ヒトＴＩＧＩＴ（ｈＴＩＧＩＴ、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１）に特異的に結合する単離された抗原結合タンパク質（ＡＢＰ）。
【請求項１８】
前記ＣＤＲ−Ｈ３、ＣＤＲ−Ｈ２、ＣＤＲ−Ｈ１、ＣＤＲ−Ｌ３、ＣＤＲ−Ｌ２及びＣＤＲ−Ｌ１がそれぞれ、Ｋａｂａｔの番号付け体系、Ｃｈｏｔｈｉａの番号付け体系またはＩＭＧＴの番号付け体系から選択される番号付け体系に従って特定されている、請求項１７に記載のＡＢＰ。
【請求項１９】
前記ＣＤＲ−Ｈ１が、ＣｈｏｔｈｉａとＫａｂａｔの両方の番号付け体系の境界を含めて、ＣｈｏｔｈｉａとＫａｂａｔの番号付け体系の両方によって定義されているように特定されている、請求項１７〜１８のいずれか１項に記載のＡＢＰ。
【請求項２０】
（ａ）前記ＣＤＲ−Ｈ３が、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２９〜３５から選択されるＣＤＲ−Ｈ３、または１個、２個もしくは３個のアミノ酸置換を有するそのバリアントを含み、
（ｂ）前記ＣＤＲ−Ｈ２が、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３６〜４７から選択されるＣＤＲ−Ｈ３、または１個、２個もしくは３個のアミノ酸置換を有するそのバリアントを含み、
（ｃ）前記ＣＤＲ−Ｈ１が、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４８〜５４もしくは５８〜６２から選択されるＣＤＲ−Ｈ１、または１個もしくは２個のアミノ酸置換を有するそのバリアントを含み、
（ｄ）前記ＣＤＲ−Ｌ３が、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６３〜６６から選択されるＣＤＲ−Ｌ３、または１個もしくは２個のアミノ酸置換を有するそのバリアントを含み、
（ｅ）前記ＣＤＲ−Ｌ２が、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６７〜６９から選択されるＣＤＲ−Ｌ２、または１個のアミノ酸置換を有するそのバリアントを含み、
（ｆ）前記ＣＤＲ−Ｌ１が、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７０〜７２から選択されるＣＤＲ−Ｌ１、または１個もしくは２個のアミノ酸置換を有するそのバリアントを含む、
請求項１７〜１９のいずれか１項に記載のＡＢＰ。
【請求項２１】
（ａ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４〜２４から選択されるＶＨ領域に対する同一性が少なくとも約９０％であるＶＨ領域と、
（ｂ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２５〜２８から選択されるＶＬ領域に対する同一性が少なくとも約９０％であるＶＬ領域と
を含む、ヒトＴＩＧＩＴ（ｈＴＩＧＩＴ、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１）に特異的に結合する単離された抗原結合タンパク質（ＡＢＰ）。
【請求項２２】
（ａ）前記ＶＨ領域が、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４〜２４から選択されるＶＨ領域、または１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１１個もしくは１２個のアミノ酸置換を有するそのバリアントを含み、
（ｂ）前記ＶＬ領域が、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２５〜２８から選択されるＶＬ領域、または１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個もしくは１０個のアミノ酸置換を有するそのバリアントを含む、請求項２１に記載のＡＢＰ。
【請求項２３】
前記アミノ酸置換が、保存的アミノ酸置換である、請求項２０または２２のいずれか１項に記載のＡＢＰ。
【請求項２４】
（ａ）ＴＩＧＩＴへの結合について、それぞれ本開示の表５に示されているＭＡＢ１、ＭＡＢ２、ＭＡＢ３、ＭＡＢ４、ＭＡＢ５、ＭＡＢ６、ＭＡＢ７、ＭＡＢ８、ＭＡＢ９、ＭＡＢ１０、ＭＡＢ１１、ＭＡＢ１２、ＭＡＢ１３、ＭＡＢ１４、ＭＡＢ１５、ＭＡＢ１６、ＭＡＢ１７、ＭＡＢ１８、ＭＡＢ１９、ＭＡＢ２０もしくはＭＡＢ２１から選択される抗体と競合するか、
（ｂ）ＴＩＧＩＴへのＣＤ１５５の結合を阻害するか、
（ｃ）ＴＩＧＩＴへのＣＤ１１２の結合を阻害するか、
（ｄ）ＣＤ２２６のＴＩＧＩＴとの連係を阻害するか、
（ｅ）エフェクターＴ細胞もしくはナチュラルキラー（ＮＫ）細胞を活性化するか、
（ｆ）組織中もしくは循環血液中の制御性Ｔ細胞の数を減少させるか、
（ｇ）制御性Ｔ細胞によるエフェクターＴ細胞の抑制を阻害するか、
（ｈ）ＰＶＲＬ１、ＰＶＲＬ２、ＰＶＲＬ３もしくはＰＶＲＬ４のいずれにも特異的に結合しないか、または
（ｉ）（ａ）〜（ｈ）の任意の組み合わせが可能である、
請求項１〜２３のいずれか１項に記載のＡＢＰ。
【請求項２５】
前記ＡＢＰが、（ａ）カニクイザルＴＩＧＩＴ（ｃＴＩＧＩＴ、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２）に特異的に結合するか、（ｂ）前記ＡＢＰの、ｈＴＩＧＩＴに対する親和性よりも低い親和性（より高いＫＤによって示される）で、マウスＴＩＧＩＴ（ｍＴＩＧＩＴ、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３）に結合するか、もしくはｍＴＩＧＩＴに結合しないか、または（ｃ）（ａ）〜（ｂ）の任意の組み合わせが可能である、請求項１〜２４のいずれか１項に記載のＡＢＰ。
【請求項２６】
（ａ）ｃＴＩＧＩＴ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２）に特異的に結合し、（ｂ）前記ＡＢＰの、ｈＴＩＧＩＴ及びｃＴＩＧＩＴに対する親和性よりも低い親和性（より高いＫＤによって示される）で、ｍＴＩＧＩＴ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３）に結合し、（ｃ）ＴＩＧＩＴへのＣＤ１５５結合を阻害する、請求項１〜２５のいずれか１項に記載のＡＢＰ。
【請求項２７】
ＴＩＧＩＴへの結合について、請求項１〜２６のいずれか１項に記載のＡＢＰと競合するＡＢＰであって、（ａ）ｃＴＩＧＩＴ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２）に特異的に結合し、（ｂ）前記ＡＢＰの、ｈＴＩＧＩＴ及びｃＴＩＧＩＴに対する親和性よりも低い親和性（より高いＫＤによって示される）で、ｍＴＩＧＩＴ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３）に結合し、（ｃ）ＴＩＧＩＴへのＣＤ１５５結合を阻害する、前記ＡＢＰ。
【請求項２８】
抗体を含む、請求項１〜２７のいずれか１項に記載のＡＢＰ。
【請求項２９】
前記抗体が、モノクローナル抗体である、請求項２８に記載のＡＢＰ。
【請求項３０】
前記抗体が、ヒト抗体、ヒト化抗体またはキメラ抗体から選択される、請求項２８〜２９のいずれか１項に記載のＡＢＰ。
【請求項３１】
多特異性である、請求項１〜３０のいずれか１項に記載のＡＢＰ。
【請求項３２】
２つ以上の抗原、または１つの抗原上の２つ以上のエピトープに結合する、請求項３１に記載のＡＢＰ。
【請求項３３】
抗体断片を含む、請求項１〜３２のいずれか１項に記載のＡＢＰ。
【請求項３４】
代替足場を含む、請求項１〜３３のいずれか１項に記載のＡＢＰ。
【請求項３５】
免疫グロブリン定常領域を含む、請求項１〜３４のいずれか１項に記載のＡＢＰ。
【請求項３６】
ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧまたはＩｇＭから選択されるクラスの重鎖定常領域を含む、請求項１〜３、５〜７、９〜１１、１３〜１５または１７〜３５のいずれか１項に記載のＡＢＰ。
【請求項３７】
ＩｇＧクラス、及びＩｇＧ４、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２またはＩｇＧ３から選択されるサブクラスの重鎖定常領域を含む、請求項３６に記載のＡＢＰ。
【請求項３８】
バイオレイヤー干渉法によって測定された約１０ｎＭ未満のＫＤで、ｈＴＩＧＩＴ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１）に結合する、請求項１〜３７のいずれか１項に記載のＡＢＰ。
【請求項３９】
バイオレイヤー干渉法によって測定された約５ｎＭ未満のＫＤで、ｈＴＩＧＩＴ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１）に結合する、請求項１〜３８のいずれか１項に記載のＡＢＰ。
【請求項４０】
バイオレイヤー干渉法によって測定された約２ｎＭ未満のＫＤで、ｈＴＩＧＩＴ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１）に結合する、請求項１〜３９のいずれか１項に記載のＡＢＰ。
【請求項４１】
バイオレイヤー干渉法によって測定された約１００ｎＭ未満のＫＤで、ｃＴＩＧＩＴ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２）に結合する、請求項１〜４０のいずれか１項に記載のＡＢＰ。
【請求項４２】
バイオレイヤー干渉法によって測定された約１０ｎＭ未満のＫＤで、ｃＴＩＧＩＴ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２）に結合する、請求項１〜４１のいずれか１項に記載のＡＢＰ。
【請求項４３】
バイオレイヤー干渉アッセイにおいて、ｍＴＩＧＩＴに対して有意な結合を示さない、請求項１〜４２のいずれか１項に記載のＡＢＰ。
【請求項４４】
細胞表面のｍＴＩＧＩＴに、約５０ｎＭ未満のＫＤで結合する、請求項１〜４３のいずれか１項に記載のＡＢＰ。
【請求項４５】
前記ｍＴＩＧＩＴが、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３を含む、請求項４３〜４４のいずれか１項に記載のＡＢＰ。
【請求項４６】
ピログルタミン酸（ｐＥ）残基をそのＮ末端に有するポリペプチド配列を含む、請求項１〜４５のいずれか１項に記載のＡＢＰ。
【請求項４７】
Ｎ末端のＱがｐＥで置換されているＶＨ配列を含む、請求項１〜４６のいずれか１項に記載のＡＢＰ。
【請求項４８】
Ｎ末端のＥがｐＥで置換されているＶＬ配列を含む、請求項１〜４７のいずれか１項に記載のＡＢＰ。
【請求項４９】
Ｎ末端のＱがｐＥで置換されている重鎖配列を含む、請求項１〜４８のいずれか１項に記載のＡＢＰ。
【請求項５０】
Ｎ末端のＥがｐＥで置換されている軽鎖配列を含む、請求項１〜４９のいずれか１項に記載のＡＢＰ。
【請求項５１】
医薬として用いるためのものである、請求項１〜５０のいずれか１項に記載のＡＢＰ。
【請求項５２】
がんまたはウイルス感染症の治療で用いるためのものである、請求項１〜５１のいずれか１項に記載のＡＢＰ。
【請求項５３】
がんの治療で用いるためのＡＢＰであって、前記がんが、固形腫瘍及び血液腫瘍から選択される、請求項５２に記載のＡＢＰ。
【請求項５４】
前の治療に応答しなかった疾患または状態の治療において、医薬として用いるためのものである、請求項１〜５３のいずれか１項に記載のＡＢＰ。
【請求項５５】
前記前の治療が、ＰＤ−１とＰＤ−Ｌ１との間の相互作用を阻害する作用物質を含む治療であった、請求項５４に記載のＡＢＰ。
【請求項５６】
請求項１〜５５のいずれか１項に記載のＡＢＰ、そのＶＨ、そのＶＬ、その軽鎖、その重鎖またはその抗原結合部分をコードする、単離されたポリヌクレオチド。
【請求項５７】
請求項５６に記載のポリヌクレオチドを含むベクター。
【請求項５８】
請求項５６に記載のポリヌクレオチドまたは請求項５７に記載のベクターを含む、宿主細胞。
【請求項５９】
請求項１〜５５に記載のＡＢＰの作製方法であって、請求項５８に記載の宿主細胞において前記ＡＢＰを発現させることと、前記発現させたＡＢＰを単離することを含む、前記方法。
【請求項６０】
請求項１〜５５のいずれか１項に記載のＡＢＰを含む医薬組成物。
【請求項６１】
対象において（ａ）エフェクターＴ細胞活性を向上させること、（ｂ）細胞溶解性Ｔ細胞活性を向上させること、（ｃ）ＮＫ細胞活性を向上させること、（ｄ）ＴＩＧＩＴを介したシグナル伝達を阻害すること、（ｅ）ＴＩＧＩＴへのＣＤ１５５及びもしくはＣＤ１１２の結合を阻害もしくはブロックすること、または（ｆ）（ａ）〜（ｅ）の任意の組み合わせに対して、前記医薬組成物中の前記ＡＢＰの量が十分である、請求項６０に記載の医薬組成物。
【請求項６２】
ＰＤ−１をアンタゴナイズするか、またはＰＤ−Ｌ１がＰＤ−１と相互作用するのをブロックする抗体をさらに含む、請求項６０〜６１のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項６３】
医薬として用いるためのものである、請求項６０〜６２のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項６４】
がんまたはウイルス感染症の治療で用いるためのものである、請求項６０〜６３のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項６５】
がんの治療で用いるための医薬組成物であって、前記がんが、固形腫瘍及び血液腫瘍から選択される、請求項６４に記載の医薬組成物。
【請求項６６】
前の治療に応答しなかった疾患または状態の治療において、医薬として用いるためのものである、請求項６０〜６５のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項６７】
前記前の治療が、ＰＤ−１とＰＤ−Ｌ１との間の相互作用を阻害する作用物質を含む治療であった、請求項６６に記載の医薬組成物。
【請求項６８】
疾患または状態の治療または予防を必要とする対象の疾患または状態の治療または予防方法であって、請求項１〜５５のいずれか１項に記載のＡＢＰ、または請求項６０〜６７のいずれか１項に記載の医薬組成物の有効量を前記対象に投与することを含む、前記方法。
【請求項６９】
前記疾患または状態が、がんまたはウイルス感染症である、請求項６８に記載の方法。
【請求項７０】
前記疾患または状態が、がんであり、前記がんが、固形腫瘍及び血液腫瘍から選択される、請求項６９に記載の方法。
【請求項７１】
免疫応答の調節を必要とする対象における免疫応答の調節方法であって、請求項１〜５５のいずれか１項に記載のＡＢＰ、または請求項６０〜６７のいずれか１項に記載の医薬組成物の有効量を前記対象に投与することを含む、前記方法。
【請求項７２】
１つ以上の追加の治療剤を前記対象に投与することをさらに含む、請求項６８〜７１のいずれか１項に記載の方法。
【請求項７３】
前記追加の治療剤が、ＰＤ−１とＰＤ−Ｌ１との間の相互作用を阻害する作用物質、化学療法剤、免疫刺激剤、放射線及びこれらの組み合わせから選択される、請求項７２に記載の方法。
【請求項７４】
前記追加の治療剤が、ＰＤ−１とＰＤ−Ｌ１との間の相互作用を阻害する作用物質であり、前記ＰＤ−１とＰＤ−Ｌ１との間の相互作用を阻害する作用物質が、抗体、ペプチド模倣体、小分子、またはそのような作用物質をコードする核酸から選択される、請求項７３に記載の方法。
【請求項７５】
前記ＰＤ−１とＰＤ−Ｌ１との間の相互作用を阻害する作用物質が、ペムブロリズマブ、ニボルマブ、アテゾリズマブ、アベルマブ、デュルバルマブ、ＢＭＳ−９３６５５９、スルファモノメトキシン１及びスルファメチゾール２から選択される、請求項７４に記載の方法。
【請求項７６】
前記追加の治療剤が、（ａ）免疫細胞の抑制性レセプターもしくはそのリガンドのシグナル伝達をブロックする作用物質、またはそのような作用物質をコードする核酸、（ｂ）免疫細胞の刺激性レセプターに対するアゴニスト、またはそのようなアゴニストをコードする核酸、（ｃ）サイトカイン、またはサイトカインをコードする核酸、（ｄ）腫瘍溶解性ウイルス、または腫瘍溶解性ウイルスをコードする核酸、（ｅ）キメラ抗原レセプターを発現するＴ細胞、（ｆ）Ｔ細胞に対する二重特異性もしくは多特異性抗体、またはそのような抗体をコードする核酸、（ｇ）抗ＴＧＦ−β抗体、またはそのような抗体をコードする核酸、（ｈ）ＴＧＦ−βトラップ、またはそのようなトラップをコードする核酸、（ｉ）がん関連抗原またはそのような抗原をコードする核酸を含む、がん関連抗原に対するワクチン、及び（ｊ）これらの組み合わせから選択される免疫刺激剤である、請求項７３に記載の方法。
【請求項７７】
前記追加の治療剤が、免疫細胞の抑制性レセプターもしくはそのリガンドのシグナル伝達をブロックする作用物質、またはそのような作用物質をコードする核酸であり、前記抑制性レセプターまたはそのリガンドが、ＣＴＬＡ−４、ＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１、ＰＤ−Ｌ２、ＬＡＧ−３、Ｔｉｍ３、ニューリチン、ＢＴＬＡ、ＣＥＣＡＭ−１、ＣＥＣＡＭ−５、ＶＩＳＴＡ、ＬＡＩＲ１、ＣＤ１６０、２Ｂ４、ＴＧＦ−Ｒ、ＫＩＲ及びこれらの組み合わせから選択される、請求項７６に記載の方法。
【請求項７８】
前記追加の治療剤が、免疫細胞の刺激性レセプターに対するアゴニストまたはそのようなアゴニストをコードする核酸であり、免疫細胞の前記刺激性レセプターが、ＯＸ４０、ＣＤ２、ＣＤ２７、ＣＤＳ、ＩＣＡＭ−１、ＬＦＡ−１（ＣＤ１１ａ／ＣＤ１８）、ＩＣＯＳ（ＣＤ２７８）、４−１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＧＩＴＲ、ＣＤ２８、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＢＡＦＦＲ、ＨＶＥＭ、ＣＤ７、ＬＩＧＨＴ、ＮＫＧ２Ｃ、ＳＬＡＭＦ７、ＮＫｐ８０、ＣＤ１６０、Ｂ７−Ｈ３、ＣＤ８３リガンド及びこれらの組み合わせから選択される、請求項７６に記載の方法。
【請求項７９】
前記追加の治療剤が、ＩＬ−２、ＩＬ−５、ＩＬ−７、ＩＬ−１２、ＩＬ−１５、ＩＬ−２１及びこれらの組み合わせから選択されるサイトカインまたはサイトカインをコードする核酸である、請求項７６に記載の方法。
【請求項８０】
前記追加の治療剤が、単純ヘルペスウイルス、水疱性口内炎ウイルス、アデノウイルス、ニューカッスル病ウイルス、ワクシニアウイルス、マラバウイルス及びこれらの組み合わせから選択される腫瘍溶解性ウイルスまたは腫瘍溶解性ウイルスをコードする核酸である、請求項７６に記載の方法。
【請求項８１】
前記追加の治療剤が、前記ＡＢＰと同じ医薬組成物に調合されている、請求項７２〜８０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項８２】
前記追加の治療剤が、前記ＡＢＰとは異なる医薬組成物に調合されている、請求項７２〜８０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項８３】
前記ＡＢＰを投与する前に、前記追加の治療剤が投与される、請求項７２〜８０または８２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項８４】
前記ＡＢＰを投与した後に、前記追加の治療剤が投与される、請求項７２〜８０または８２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項８５】
前記ＡＢＰと同時に、前記追加の治療剤が投与される、請求項７２〜８４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項８６】
前記対象が、前記方法を行う前に、ＰＤ−１とＰＤ−Ｌ１との間の相互作用を阻害する作用物質で治療したことのある対象である、請求項６８〜８５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項８７】
前記対象が罹患している前記疾患または状態が、前の治療に応答しなかったものである、請求項６８〜８６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項８８】
前記前の治療が、ＰＤ−１とＰＤ−Ｌ１との間の相互作用を阻害する作用物質を含む治療であった、請求項８７に記載の方法。
【請求項８９】
請求項６０〜６１のいずれか１項に記載の医薬組成物と、そのような医薬組成物の使用に関する説明書とを含むキット。
【請求項９０】
追加の治療剤を含む追加の医薬組成物と、そのような追加の治療剤の使用に関する説明書とをさらに含む、請求項８９に記載のキット。
【請求項９１】
前記追加の治療剤が、ＰＤ−１とＰＤ−Ｌ１との間の相互作用を阻害する作用物質、化学療法剤、免疫刺激剤、放射線及びこれらの組み合わせから選択される、請求項９０に記載のキット。
【請求項９２】
前記追加の治療剤が、ＰＤ−１とＰＤ−Ｌ１との間の相互作用を阻害する作用物質であり、前記ＰＤ−１とＰＤ−Ｌ１との間の相互作用を阻害する作用物質が、抗体、ペプチド模倣体、小分子、またはそのような作用物質をコードする核酸から選択される、請求項９１に記載のキット。
【請求項９３】
前記ＰＤ−１とＰＤ−Ｌ１との間の相互作用を阻害する作用物質が、ペムブロリズマブ、ニボルマブ、アテゾリズマブ、アベルマブ、デュルバルマブ、ＢＭＳ−９３６５５９、スルファモノメトキシン１及びスルファメチゾール２から選択される、請求項９２に記載のキット。
【請求項９４】
前記追加の治療剤が、（ａ）免疫細胞の抑制性レセプターもしくはそのリガンドのシグナル伝達をブロックする作用物質、またはそのような作用物質をコードする核酸、（ｂ）免疫細胞の刺激性レセプターに対するアゴニスト、またはそのようなアゴニストをコードする核酸、（ｃ）サイトカイン、またはサイトカインをコードする核酸、（ｄ）腫瘍溶解性ウイルス、または腫瘍溶解性ウイルスをコードする核酸、（ｅ）キメラ抗原レセプターを発現するＴ細胞、（ｆ）Ｔ細胞に対する二重特異性もしくは多特異性抗体、またはそのような抗体をコードする核酸、（ｇ）抗ＴＧＦ−β抗体、またはそのような抗体をコードする核酸、（ｈ）ＴＧＦ−βトラップ、またはそのようなトラップをコードする核酸、（ｉ）がん関連抗原またはそのような抗原をコードする核酸を含む、がん関連抗原に対するワクチン、及び（ｊ）これらの組み合わせから選択される免疫刺激剤である、請求項９１に記載のキット。
【請求項９５】
前記追加の治療剤が、免疫細胞の抑制性レセプターもしくはそのリガンドのシグナル伝達をブロックする作用物質、またはそのような作用物質をコードする核酸であり、前記抑制性レセプターまたはそのリガンドが、ＣＴＬＡ−４、ＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１、ＰＤ−Ｌ２、ＬＡＧ−３、Ｔｉｍ３、ニューリチン、ＢＴＬＡ、ＣＥＣＡＭ−１、ＣＥＣＡＭ−５、ＶＩＳＴＡ、ＬＡＩＲ１、ＣＤ１６０、２Ｂ４、ＴＧＦ−Ｒ、ＫＩＲ及びこれらの組み合わせから選択される、請求項９４に記載のキット。
【請求項９６】
前記追加の治療剤が、免疫細胞の刺激性レセプターに対するアゴニストまたはそのようなアゴニストをコードする核酸であり、免疫細胞の前記刺激性レセプターが、ＯＸ４０、ＣＤ２、ＣＤ２７、ＣＤＳ、ＩＣＡＭ−１、ＬＦＡ−１（ＣＤ１１ａ／ＣＤ１８）、ＩＣＯＳ（ＣＤ２７８）、４−１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＧＩＴＲ、ＣＤ２８、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＢＡＦＦＲ、ＨＶＥＭ、ＣＤ７、ＬＩＧＨＴ、ＮＫＧ２Ｃ、ＳＬＡＭＦ７、ＮＫｐ８０、ＣＤ１６０、Ｂ７−Ｈ３、ＣＤ８３リガンド及びこれらの組み合わせから選択される、請求項９４に記載のキット。
【請求項９７】
前記追加の治療剤が、ＩＬ−２、ＩＬ−５、ＩＬ−７、ＩＬ−１２、ＩＬ−１５、ＩＬ−２１及びこれらの組み合わせから選択されるサイトカインまたはサイトカインをコードする核酸である、請求項９４に記載のキット。
【請求項９８】
前記追加の治療剤が、単純ヘルペスウイルス、水疱性口内炎ウイルス、アデノウイルス、ニューカッスル病ウイルス、ワクシニアウイルス、マラバウイルス及びこれらの組み合わせから選択される腫瘍溶解性ウイルスまたは腫瘍溶解性ウイルスをコードする核酸である、請求項９４に記載のキット。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本願は、２０１５年１０月１日に提出された米国特許仮出願第６２／２３５，９９０号（参照により、その全体が、本明細書に援用される）に基づく利益を主張するものである。
【０００２】
分野
本発明で提供するのは、Ｉｇ及びＩＴＩＭドメインを有するＴ細胞免疫レセプター（ＴＩＧＩＴ）に対する結合特異性を有する抗原結合タンパク質（ＡＢＰ）と、このようなＡＢＰを含む組成物（医薬組成物、診断用組成物を含む）と、キットである。また、本発明で提供するのは、ＴＩＧＩＴ  ＡＢＰの作製方法と、例えば治療目的、診断目的及び研究目的でのＴＩＧＩＴ  ＡＢＰの使用方法である。
【背景技術】
【０００３】
背景
ＴＩＧＩＴは、がんと慢性感染症に対するＴ細胞の応答を制限する共抑制性レセプターとして同定されている。Ｇｒｏｇａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，２０１４，１９２（１  Ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔ）２０３．１５（非特許文献１）（参照により、その全体が援用される）を参照されたい。ＴＩＧＩＴを遮断することは、ＣＤ８＋Ｔ細胞のエフェクター機能の増強と、ウイルスの排除と腫瘍の拒絶との改善に寄与することが示されている。上記の文献を参照されたい。
【０００４】
したがって、ＴＩＧＩＴをアンタゴナイズできる治療剤に対するニーズが存在する。本発明で提供するのは、このニーズを満たすＡＢＰである。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００５】
【非特許文献１】Ｇｒｏｇａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，２０１４，１９２（１  Ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔ）２０３．１５
【発明の概要】
【０００６】
概要
本発明で提供するのは、ＴＩＧＩＴに特異的に結合するＡＢＰと、このようなＡＢＰの使用方法である。
【０００７】
いくつかの実施形態では、このＴＩＧＩＴは、ヒトＴＩＧＩＴ（「ｈＴＩＧＩＴ」、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１）、カニクイザルＴＩＧＩＴ（「ｃＴＩＧＩＴ」、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２）及びマウスＴＩＧＩＴ（「ｍＴＩＧＩＴ」、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３または１３８）から選択される。
【０００８】
いくつかの実施形態では、このＡＢＰは、抗体を含む。いくつかの態様では、この抗体は、モノクローナル抗体である。いくつかの態様では、この抗体は、キメラ抗体である。いくつかの態様では、この抗体は、ヒト化抗体である。いくつかの態様では、この抗体は、ヒト抗体である。いくつかの態様では、上記のＡＢＰは、抗体断片を含む。いくつかの実施形態では、上記のＡＢＰは、代替足場を含む。
【０００９】
いくつかの実施形態では、上記のＴＩＧＩＴは、標的細胞の表面で発現している。いくつかの態様では、ＡＢＰは、標的細胞の表面で発現したＴＩＧＩＴをアンタゴナイズする。
【００１０】
いくつかの実施形態では、標的細胞は、エフェクターＴ細胞、制御性Ｔ細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞及びナチュラルキラーＴ（ＮＫＴ）細胞から選択される。いくつかの態様では、標的細胞は、ヘルパー（ＣＤ４陽性、「ＣＤ４＋」）Ｔ細胞、細胞傷害性（ＣＤ８陽性、「ＣＤ８＋」）Ｔ細胞及びこれらの組み合わせから選択されるエフェクターＴ細胞である。いくつかの態様では、標的細胞は、ＣＤ４＋ＣＤ２５＋Ｆｏｘｐ３＋制御性Ｔ細胞、ＣＤ８＋ＣＤ２５＋制御性Ｔ細胞及びこれらの組み合わせから選択される制御性Ｔ細胞である。
【００１１】
いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰは、ＴＩＧＩＴの阻害と関連する様々な生体作用を誘導する。いくつかの態様では、本発明で提供するＡＢＰは、エフェクターＴ細胞の阻害を防止する。いくつかの態様では、本発明のＡＢＰは、エフェクターＴ細胞を共刺激する。いくつかの態様では、本発明のＡＢＰは、制御性Ｔ細胞によるエフェクターＴ細胞の抑制を阻害する。いくつかの態様では、本発明のＡＢＰは、組織中または体循環中のエフェクターＴ細胞の数を増加させる。いくつかの態様では、この組織は、腫瘍である。いくつかの態様では、この組織は、ウイルスに感染している組織である。
【００１２】
また、提供するのは、本発明で提供する１つ以上のＡＢＰと、そのＡＢＰの使用に関する説明書とを含むキットである。また、提供するのは、本発明で提供する１つ以上の医薬組成物と、その医薬組成物の使用に関する説明書とを含むキットである。
【００１３】
また、提供するのは、本発明で提供するＡＢＰをコードする単離されたポリヌクレオチドと、その一部である。
【００１４】
また、提供するのは、上記のようなポリヌクレオチドを含むベクターである。
【００１５】
また、提供するのは、上記のようなポリヌクレオチドを含む組み換え宿主細胞と、上記のようなベクターを含む組み換え宿主細胞である。
【００１６】
また、提供するのは、本発明で提供するポリヌクレオチド、ベクターまたは宿主細胞を用いて、本発明で提供するＡＢＰを作製する方法である。
【００１７】
また、提供するのは、本発明で提供するＡＢＰと、製薬学的に許容可能な賦形剤とを含む医薬組成物である。
【００１８】
また、提供するのは、疾患または状態の治療または予防を必要とする対象の疾患または状態の治療または予防方法であって、本発明で提供するＡＢＰまたはそのようなＡＢＰを含む医薬組成物を有効量、その対象に投与することを含む方法である。いくつかの態様では、この疾患または状態は、がんである。いくつかの態様では、この疾患または状態は、ウイルス感染症である。いくつかの態様では、この方法は、１つ以上の追加の治療剤を投与することをさらに含む。いくつかの態様では、この追加の治療剤は、免疫刺激剤である。
【００１９】
いくつかの実施形態では、本発明で提供するのは、第１のＡＢＰファミリーであって、そのファミリーのＡＢＰが、以下の６個のＣＤＲ配列を含む、ファミリーである：
（ａ）配列
2018533371.tif 000003
であって、そのＸ１が、ＡまたはＴである配列（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２８）
を有するＣＤＲ−Ｈ３；
（ｂ）配列
2018533371.tif 000004
であって、そのＸ２が、Ｓ、ＱまたはＧである配列（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２９）
を有するＣＤＲ−Ｈ２；
（ｃ）配列
2018533371.tif 000005
であって、そのＸ３が、ＥまたはＡであり、Ｘ４が、Ｌ、ＶまたはＳである配列（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１３０）
を有するＣＤＲ−Ｈ１；
（ｄ）配列
2018533371.tif 000006
を有するＣＤＲ−Ｌ３；
（ｅ）配列
2018533371.tif 000007
を有するＣＤＲ−Ｌ２；及び
（ｆ）配列
2018533371.tif 000008
を有するＣＤＲ−Ｌ１。いくつかの実施形態では、本発明で提供するのは、このような第１のファミリー内のＡＢＰである。
【００２０】
いくつかの実施形態では、このような第１のファミリーのＡＢＰは、（ａ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３２のＣＤＲ−Ｈ３と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４０のＣＤＲ−Ｈ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５４のＣＤＲ−Ｈ１と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６４のＣＤＲ−Ｌ３と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６８のＣＤＲ−Ｌ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７１のＣＤＲ−Ｌ１、（ｂ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３１のＣＤＲ−Ｈ３と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４０のＣＤＲ−Ｈ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５４のＣＤＲ−Ｈ１と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６４のＣＤＲ−Ｌ３と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６８のＣＤＲ−Ｌ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７１のＣＤＲ−Ｌ１、（ｃ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３１のＣＤＲ−Ｈ３と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３９のＣＤＲ−Ｈ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５１のＣＤＲ−Ｈ１と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６４のＣＤＲ−Ｌ３と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６８のＣＤＲ−Ｌ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７１のＣＤＲ−Ｌ１、（ｄ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３１のＣＤＲ−Ｈ３と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４０のＣＤＲ−Ｈ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５２のＣＤＲ−Ｈ１と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６４のＣＤＲ−Ｌ３と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６８のＣＤＲ−Ｌ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７１のＣＤＲ−Ｌ１、または（ｅ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３１のＣＤＲ−Ｈ３と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４１のＣＤＲ−Ｈ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５３のＣＤＲ−Ｈ１と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６４のＣＤＲ−Ｌ３と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６８のＣＤＲ−Ｌ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７１のＣＤＲ−Ｌ１を含む。
【００２１】
いくつかの実施形態では、上記のような第１のファミリーのＡＢＰは、（ａ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１３のＶＨ配列と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２６のＶＬ配列、（ｂ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２のＶＨ配列と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２６のＶＬ配列、（ｃ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１４のＶＨ配列と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２６のＶＬ配列、（ｄ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５のＶＨ配列と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２６のＶＬ配列、（ｅ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９のＶＨ配列と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２６のＶＬ配列、（ｆ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０のＶＨ配列と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２６のＶＬ配列、または（ｇ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１のＶＨ配列と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２６のＶＬ配列を含む。
【００２２】
いくつかの実施形態では、上記のような第１のファミリーのＡＢＰは、（ａ）（ｉ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９９の重鎖と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９２の軽鎖もしくは（ｉｉ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１００の重鎖と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９２の軽鎖、（ｂ）（ｉ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９７の重鎖と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９２の軽鎖もしくは（ｉｉ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９８の重鎖と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９２の軽鎖、（ｃ）（ｉ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０１の重鎖と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９２の軽鎖もしくは（ｉｉ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０２の重鎖と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９２の軽鎖、（ｄ）（ｉ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０３の重鎖と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９２の軽鎖もしくは（ｉｉ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０４の重鎖と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９２の軽鎖、（ｅ）（ｉ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９０の重鎖と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９２の軽鎖もしくは（ｉｉ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９１の重鎖と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９２の軽鎖、（ｆ）（ｉ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９３の重鎖と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９２の軽鎖もしくは（ｉｉ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９４の重鎖と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９２の軽鎖、または（ｇ）（ｉ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９５の重鎖と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９２の軽鎖もしくは（ｉｉ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９６の重鎖と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９２の軽鎖を含む。
【００２３】
いくつかの実施形態では、本発明で提供するのは、第２のＡＢＰファミリーであって、そのファミリーのＡＢＰが、以下の６個のＣＤＲ配列を含む、ファミリーである：
（ａ）配列
2018533371.tif 000009
であって、そのＸ１が、ＳまたはＧである配列（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１３１）
を有するＣＤＲ−Ｈ３；
（ｂ）配列
2018533371.tif 000010
であって、そのＸ２が、ＳまたはＡであり、Ｘ３が、ＳまたはＧである配列（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１３２）
を有するＣＤＲ−Ｈ２；
（ｃ）配列
2018533371.tif 000011
であって、そのＸ４が、ＳまたはＴであり、Ｘ５が、ＳまたはＴであり、Ｘ６が、ＳまたはＫであり、Ｘ７が、ＨまたはＹである配列（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１３３）
を有するＣＤＲ−Ｈ１；
（ｄ）配列
2018533371.tif 000012
を有するＣＤＲ−Ｌ３；
（ｅ）配列
2018533371.tif 000013
を有するＣＤＲ−Ｌ２；及び
（ｆ）配列
2018533371.tif 000014
を有するＣＤＲ−Ｌ１。いくつかの実施形態では、本発明で提供するのは、このような第２のファミリー内のＡＢＰである。
【００２４】
いくつかの実施形態では、上記のような第２のファミリーのＡＢＰは、（ａ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２９のＣＤＲ−Ｈ３と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３７のＣＤＲ−Ｈ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４９のＣＤＲ−Ｈ１と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６３のＣＤＲ−Ｌ３と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６７のＣＤＲ−Ｌ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７０のＣＤＲ−Ｌ１、（ｂ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３０のＣＤＲ−Ｈ３と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３７のＣＤＲ−Ｈ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５０のＣＤＲ−Ｈ１と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６３のＣＤＲ−Ｌ３と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６７のＣＤＲ−Ｌ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７０のＣＤＲ−Ｌ１、（ｃ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２９のＣＤＲ−Ｈ３と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３８のＣＤＲ−Ｈ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５０のＣＤＲ−Ｈ１と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６３のＣＤＲ−Ｌ３と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６７のＣＤＲ−Ｌ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７０のＣＤＲ−Ｌ１、（ｄ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２９のＣＤＲ−Ｈ３と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３６のＣＤＲ−Ｈ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４８のＣＤＲ−Ｈ１と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６３のＣＤＲ−Ｌ３と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６７のＣＤＲ−Ｌ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７０のＣＤＲ−Ｌ１、または（ｅ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２９のＣＤＲ−Ｈ３と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３７のＣＤＲ−Ｈ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５０のＣＤＲ−Ｈ１と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６３のＣＤＲ−Ｌ３と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６７のＣＤＲ−Ｌ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７０のＣＤＲ−Ｌ１を含む。
【００２５】
いくつかの実施形態では、上記のような第２のファミリーのＡＢＰは、（ａ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５のＶＨ配列と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２５のＶＬ配列、（ｂ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７のＶＨ配列と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２５のＶＬ配列、（ｃ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８のＶＨ配列と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２５のＶＬ配列、（ｄ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４のＶＨ配列と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２５のＶＬ配列、または（ｅ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６のＶＨ配列と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２５のＶＬ配列を含む。
【００２６】
いくつかの実施形態では、上記のような第２のファミリーのＡＢＰは、（ａ）（ｉ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８２の重鎖と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８１の軽鎖もしくは（ｉｉ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８３の重鎖と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８１の軽鎖、（ｂ）（ｉ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８６の重鎖と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８１の軽鎖もしくは（ｉｉ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８７の重鎖と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８１の軽鎖、（ｃ）（ｉ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８８の重鎖と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８１の軽鎖もしくは（ｉｉ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８９の重鎖と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８１の軽鎖、（ｄ）（ｉ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７９の重鎖と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８１の軽鎖もしくは（ｉｉ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８０の重鎖と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８１の軽鎖、または（ｅ）（ｉ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８４の重鎖と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８１の軽鎖もしくは（ｉｉ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８５の重鎖と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８１の軽鎖を含む。
【００２７】
いくつかの実施形態では、本発明で提供するのは、第３のＡＢＰファミリーであって、そのファミリーのＡＢＰが、以下の６個のＣＤＲ配列を含む、ファミリーである：
（ａ）配列
2018533371.tif 000015
であって、そのＸ１が、ＦまたはＬである配列（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１３４）
を有するＣＤＲ−Ｈ３；
（ｂ）配列
2018533371.tif 000016
であって、そのＸ２が、ＬまたはＩであり、Ｘ３が、ＱまたはＲである配列（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１３５）
を有するＣＤＲ−Ｈ２；
（ｃ）配列
2018533371.tif 000017
であって、そのＸ４が、Ｇ、ＰまたはＲであり、Ｘ５が、Ｎ、ＡまたはＥであり、Ｘ６が、ＭまたはＩである配列（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１３６）
を有するＣＤＲ−Ｈ１；
（ｄ）配列
2018533371.tif 000018
を有するＣＤＲ−Ｌ３；
（ｅ）配列
2018533371.tif 000019
を有するＣＤＲ−Ｌ２；及び
（ｆ）配列
2018533371.tif 000020
を有するＣＤＲ−Ｌ１。いくつかの実施形態では、本発明で提供するのは、このような第３のファミリー内のＡＢＰである。
【００２８】
いくつかの実施形態では、上記のような第３のファミリーのＡＢＰは、（ａ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３３のＣＤＲ−Ｈ３と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４３のＣＤＲ−Ｈ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６０のＣＤＲ−Ｈ１と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６５のＣＤＲ−Ｌ３と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６９のＣＤＲ−Ｌ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７２のＣＤＲ−Ｌ１、（ｂ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３４のＣＤＲ−Ｈ３と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４３のＣＤＲ−Ｈ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６０のＣＤＲ−Ｈ１と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６５のＣＤＲ−Ｌ３と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６９のＣＤＲ−Ｌ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７２のＣＤＲ−Ｌ１、（ｃ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３３のＣＤＲ−Ｈ３と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４４のＣＤＲ−Ｈ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５９のＣＤＲ−Ｈ１と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６５のＣＤＲ−Ｌ３と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６９のＣＤＲ−Ｌ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７２のＣＤＲ−Ｌ１、（ｄ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３３のＣＤＲ−Ｈ３と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４２のＣＤＲ−Ｈ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５８のＣＤＲ−Ｈ１と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６５のＣＤＲ−Ｌ３と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６９のＣＤＲ−Ｌ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７２のＣＤＲ−Ｌ１、（ｅ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３３のＣＤＲ−Ｈ３と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４２のＣＤＲ−Ｈ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５９のＣＤＲ−Ｈ１と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６５のＣＤＲ−Ｌ３と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６９のＣＤＲ−Ｌ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７２のＣＤＲ−Ｌ１、または（ｆ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３４のＣＤＲ−Ｈ３と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４４のＣＤＲ−Ｈ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６１のＣＤＲ−Ｈ１と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６５のＣＤＲ−Ｌ３と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６９のＣＤＲ−Ｌ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７２のＣＤＲ−Ｌ１を含む。
【００２９】
いくつかの実施形態では、上記のような第３のファミリーのＡＢＰは、（ａ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１８のＶＨ配列と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２７のＶＬ配列、（ｂ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１９のＶＨ配列と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２７のＶＬ配列、（ｃ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２１のＶＨ配列と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２７のＶＬ配列、（ｄ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６のＶＨ配列と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２７のＶＬ配列、（ｅ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１７のＶＨ配列と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２７のＶＬ配列、または（ｆ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２０のＶＨ配列と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２７のＶＬ配列を含む。
【００３０】
いくつかの実施形態では、上記のような第３のファミリーのＡＢＰは、（ａ）（ｉ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１０の重鎖と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０７の軽鎖もしくは（ｉｉ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１１の重鎖と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０７の軽鎖、（ｂ）（ｉ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１２の重鎖と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０７の軽鎖もしくは（ｉｉ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１３の重鎖と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０７の軽鎖、（ｃ）（ｉ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１６の重鎖と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０７の軽鎖もしくは（ｉｉ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１７の重鎖と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０７の軽鎖、（ｄ）（ｉ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０５の重鎖と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０７の軽鎖もしくは（ｉｉ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０６の重鎖と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０７の軽鎖、（ｅ）（ｉ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０８の重鎖と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０７の軽鎖もしくは（ｉｉ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０９の重鎖と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０７の軽鎖、または（ｆ）（ｉ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１４の重鎖と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０７の軽鎖もしくは（ｉｉ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１５の重鎖と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０７の軽鎖を含む。
【００３１】
いくつかの実施形態では、本発明で提供するのは、第４のＡＢＰファミリーであって、そのファミリーのＡＢＰが、以下の６個のＣＤＲ配列を含む、ファミリーである：
（ａ）配列
2018533371.tif 000021
を有するＣＤＲ−Ｈ３；
（ｂ）配列
2018533371.tif 000022
であって、そのＸ１が、ＶまたはＩであり、Ｘ２が、ＡまたはＴであり、Ｘ３が、ＱまたはＲである配列（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１３７）
を有するＣＤＲ−Ｈ２；
（ｃ）配列
2018533371.tif 000023
を有するＣＤＲ−Ｈ１；
（ｄ）配列
2018533371.tif 000024
を有するＣＤＲ−Ｌ３；
（ｅ）配列
2018533371.tif 000025
を有するＣＤＲ−Ｌ２；及び
（ｆ）配列
2018533371.tif 000026
を有するＣＤＲ−Ｌ１。いくつかの実施形態では、本発明で提供するのは、このような第４のファミリー内のＡＢＰである。
【００３２】
いくつかの実施形態では、上記のような第４のファミリーのＡＢＰは、（ａ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３５のＣＤＲ−Ｈ３と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４６のＣＤＲ−Ｈ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６２のＣＤＲ−Ｈ１と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６６のＣＤＲ−Ｌ３と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６９のＣＤＲ−Ｌ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７２のＣＤＲ−Ｌ１、（ｂ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３５のＣＤＲ−Ｈ３と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４７のＣＤＲ−Ｈ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６２のＣＤＲ−Ｈ１と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６６のＣＤＲ−Ｌ３と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６９のＣＤＲ−Ｌ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７２のＣＤＲ−Ｌ１、または（ｃ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３５のＣＤＲ−Ｈ３と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４５のＣＤＲ−Ｈ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６２のＣＤＲ−Ｈ１と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６６のＣＤＲ−Ｌ３と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６９のＣＤＲ−Ｌ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７２のＣＤＲ−Ｌ１を含む。
【００３３】
いくつかの実施形態では、上記のような第４のファミリーのＡＢＰは、（ａ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２３のＶＨ配列と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２８のＶＬ配列、（ｂ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２４のＶＨ配列と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２８のＶＬ配列、または（ｃ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２２のＶＨ配列と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２８のＶＬ配列を含む。
【００３４】
いくつかの実施形態では、上記のような第４のファミリーのＡＢＰは、（ａ）（ｉ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２１の重鎖と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２０の軽鎖もしくは（ｉｉ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２２の重鎖と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２０の軽鎖、（ｂ）（ｉ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２３の重鎖と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２０の軽鎖もしくは（ｉｉ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２４の重鎖と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２０の軽鎖、または（ｃ）（ｉ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１８の重鎖と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２０の軽鎖もしくは（ｉｉ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１９の重鎖と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２０の軽鎖を含む。
【００３５】
いくつかの実施形態では、本発明で提供するのは、ヒトＴＩＧＩＴ（ｈＴＩＧＩＴ、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１）に特異的に結合する単離された抗原結合タンパク質（ＡＢＰ）であって、（ａ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４〜２４から選択されるＶＨ領域のＣＤＲ−Ｈ３に対する同一性が少なくとも約８０％であるＣＤＲ−Ｈ３と、（ｂ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４〜２４から選択されるＶＨ領域のＣＤＲ−Ｈ２に対する同一性が少なくとも約８０％であるＣＤＲ−Ｈ２と、（ｃ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４〜２４から選択されるＶＨ領域のＣＤＲ−Ｈ１に対する同一性が少なくとも約８０％であるＣＤＲ−Ｈ１と、（ｄ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２５〜２８から選択されるＶＬ領域のＣＤＲ−Ｌ３に対する同一性が少なくとも約８０％であるＣＤＲ−Ｌ３と、（ｅ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２５〜２８から選択されるＶＬ領域のＣＤＲ−Ｌ２に対する同一性が少なくとも約８０％であるＣＤＲ−Ｌ２と、（ｆ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２５〜２８から選択されるＶＬ領域のＣＤＲ−Ｌ１に対する同一性が少なくとも約８０％であるＣＤＲ−Ｌ１を含むＡＢＰである。いくつかの実施形態では、ＣＤＲ−Ｈ３、ＣＤＲ−Ｈ２、ＣＤＲ−Ｈ１、ＣＤＲ−Ｌ３、ＣＤＲ−Ｌ２及びＣＤＲ−Ｌ１はそれぞれ、Ｋａｂａｔの番号付け体系、Ｃｈｏｔｈｉａの番号付け体系またはＩＭＧＴの番号付け体系から選択される番号付け体系に従って特定されている。いくつかの実施形態では、ＣＤＲ−Ｈ１は、ＣｈｏｔｈｉａとＫａｂａｔの両方の番号付け体系の境界を含め、ＣｈｏｔｈｉａとＫａｂａｔの番号付け体系の両方によって定義されているように特定されている。いくつかの実施形態では、（ａ）ＣＤＲ−Ｈ３は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２９〜３５から選択されるＣＤＲ−Ｈ３、または１個、２個もしくは３個のアミノ酸置換を有するそのバリアントを含み、（ｂ）ＣＤＲ−Ｈ２は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３６〜４７から選択されるＣＤＲ−Ｈ３、または１個、２個もしくは３個のアミノ酸置換を有するそのバリアントを含み、（ｃ）ＣＤＲ−Ｈ１は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４８〜５４もしくは５８〜６２から選択されるＣＤＲ−Ｈ１、または１個もしくは２個のアミノ酸置換を有するそのバリアントを含み、（ｄ）ＣＤＲ−Ｌ３は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６３〜６６から選択されるＣＤＲ−Ｌ３、または１個もしくは２個のアミノ酸置換を有するそのバリアントを含み、（ｅ）ＣＤＲ−Ｌ２は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６７〜６９から選択されるＣＤＲ−Ｌ２、または１個のアミノ酸置換を有するそのバリアントを含み、（ｆ）ＣＤＲ−Ｌ１は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７０〜７２から選択されるＣＤＲ−Ｌ１、または１個もしくは２個のアミノ酸置換を有するそのバリアントを含む。
【００３６】
いくつかの実施形態では、本発明で提供するのは、ヒトＴＩＧＩＴ（ｈＴＩＧＩＴ、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１）に特異的に結合する単離された抗原結合タンパク質（ＡＢＰ）であって、（ａ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４〜２４から選択されるＶＨ領域に対する同一性が少なくとも約９０％であるＶＨ領域と、（ｂ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２５〜２８から選択されるＶＬ領域に対する同一性が少なくとも約９０％であるＶＬ領域を含むＡＢＰである。いくつかの実施形態では、（ａ）ＶＨ領域は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４〜２４から選択されるＶＨ領域、または１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１１個もしくは１２個のアミノ酸置換を有するそのバリアントを含み、（ｂ）ＶＬ領域は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２５〜２８から選択されるＶＬ領域、または１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個もしくは１０個のアミノ酸置換を有するそのバリアントを含む。いくつかの実施形態では、これらのアミノ酸置換は、保存的アミノ酸置換である。
【００３７】
いくつかの実施形態では、上記のＡＢＰのいずれかは、（ａ）ＴＩＧＩＴへの結合について、ＭＡＢ１、ＭＡＢ２、ＭＡＢ３、ＭＡＢ４、ＭＡＢ５、ＭＡＢ６、ＭＡＢ７、ＭＡＢ８、ＭＡＢ９、ＭＡＢ１０、ＭＡＢ１１、ＭＡＢ１２、ＭＡＢ１３、ＭＡＢ１４、ＭＡＢ１５、ＭＡＢ１６、ＭＡＢ１７、ＭＡＢ１８、ＭＡＢ１９、ＭＡＢ２０またはＭＡＢ２１（それぞれ、本開示の表５に示されているようなもの）から選択される抗体と競合するか、（ｂ）ＣＤ１５５のＴＩＧＩＴへの結合を阻害するか、（ｃ）ＣＤ１１２のＴＩＧＩＴへの結合を阻害するか、（ｄ）ＣＤ２２６のＴＩＧＩＴとの連係を阻害するか、（ｅ）エフェクターＴ細胞またはナチュラルキラー（ＮＫ）細胞を活性化するか、（ｆ）組織中もしくは循環血液中の制御性Ｔ細胞の数を減少させるか、（ｇ）制御性Ｔ細胞によるエフェクターＴ細胞の抑制を阻害するか、（ｈ）ＰＶＲＬ１、ＰＶＲＬ２、ＰＶＲＬ３もしくはＰＶＲＬ４のいずれにも特異的に結合しないか、または（ｉ）（ａ）〜（ｈ）の任意の組み合わせが可能である。
【００３８】
いくつかの実施形態では、上記のＡＢＰのいずれかは、（ａ）カニクイザルＴＩＧＩＴ（ｃＴＩＧＩＴ、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２）に特異的に結合するか、（ｂ）マウスＴＩＧＩＴ（ｍＴＩＧＩＴ、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３）に、そのＡＢＰの、ｈＴＩＧＩＴに対する親和性よりも低い親和性（より高いＫＤによって示される）で結合するか、もしくはｍＴＩＧＩＴに結合しないか、または（ｃ）（ａ）〜（ｂ）の任意の組み合わせが可能である。
【００３９】
いくつかの実施形態では、上記のＡＢＰのいずれかは、（ａ）ｃＴＩＧＩＴ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２）に特異的に結合するか、（ｂ）ｍＴＩＧＩＴ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３）に、そのＡＢＰの、ｈＴＩＧＩＴ及びｃＴＩＧＩＴに対する親和性よりも低い親和性（より高いＫＤで示される）で結合し、かつ（ｃ）ＣＤ１５５のＴＩＧＩＴへの結合を阻害する。
【００４０】
いくつかの実施形態では、本発明で提供するのは、ＴＩＧＩＴへの結合について、上記のＡＢＰのいずれかと競合するＡＢＰであって、（ａ）ｃＴＩＧＩＴ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２）に特異的に結合するか、（ｂ）ｍＴＩＧＩＴ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３）に、そのＡＢＰの、ｈＴＩＧＩＴ及びｃＴＩＧＩＴに対する親和性よりも低い親和性（より高いＫＤで示される）で結合し、かつ（ｃ）ＣＤ１５５のＴＩＧＩＴへの結合を阻害するＡＢＰである。
【００４１】
いくつかの実施形態では、上記のＡＢＰのいずれかは、抗体を含む。いくつかの実施形態では、この抗体は、モノクローナル抗体である。いくつかの実施形態では、この抗体は、ヒト抗体、ヒト化抗体またはキメラ抗体から選択される。
【００４２】
いくつかの実施形態では、上記のＡＢＰのいずれかは、多特異性である。いくつかの実施形態では、この多特異性ＡＢＰは、２つ以上の抗原（すなわち、ＴＩＧＩＴと、異なる（ＴＩＧＩＴ以外の）抗原）に結合する。いくつかの実施形態では、この多特異性ＡＢＰは、１つの抗原上の２つ以上のエピトープ（すなわち、ＴＩＧＩＴ上の２つ以上のエピトープ）に結合する。
【００４３】
いくつかの実施形態では、上記のＡＢＰのいずれかは、抗体断片を含む。
【００４４】
いくつかの実施形態では、上記のＡＢＰのいずれかは、代替足場を含む。
【００４５】
いくつかの実施形態では、上記のＡＢＰのいずれかは、免疫グロブリン定常領域を含む。いくつかの実施形態では、ＡＢＰは、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧまたはＩｇＭから選択されるクラスの重鎖定常領域を含む。いくつかの実施形態では、ＡＢＰは、ＩｇＧクラス、及びＩｇＧ４、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２またはＩｇＧ３から選択されるサブクラスの重鎖定常領域を含む。
【００４６】
いくつかの実施形態では、上記のＡＢＰのいずれかは、約１０ｎＭ未満のＫＤ（バイオレイヤー干渉法によって測定したもの）で、ｈＴＩＧＩＴ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１）に結合する。いくつかの実施形態では、上記のＡＢＰのいずれかは、約５ｎＭの未満のＫＤ（バイオレイヤー干渉法によって測定したもの）で、ｈＴＩＧＩＴ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１）に結合する。いくつかの実施形態では、上記のＡＢＰのいずれかは、約２ｎＭ未満のＫＤ（バイオレイヤー干渉法によって測定したもの）で、ｈＴＩＧＩＴ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１）に結合する。いくつかの実施形態では、上記のＡＢＰのいずれかは、約１００ｎＭ未満のＫＤ（バイオレイヤー干渉法によって測定したもの）で、ｃＴＩＧＩＴ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２）に結合する。いくつかの実施形態では、上記のＡＢＰのいずれかは、約１０ｎＭ未満のＫＤ（バイオレイヤー干渉法によって測定したもの）で、ｃＴＩＧＩＴ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２）に結合する。いくつかの実施形態では、上記のＡＢＰのいずれかは、バイオレイヤー干渉アッセイにおいて、ｍＴＩＧＩＴへの有意な結合を示さない。いくつかの実施形態では、上記のＡＢＰのいずれかは、約５０ｎＭ未満のＫＤで、細胞表面ｍＴＩＧＩＴに結合する。いくつかの実施形態では、ｍＴＩＧＩＴは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３を含む。いくつかの実施形態では、ｍＴＩＧＩＴは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１３８を含む。
【００４７】
いくつかの実施形態では、上記のＡＢＰのいずれかは、ピログルタミン酸（ｐＥ）残基をそのＮ末端に有するポリペプチド配列を含む。いくつかの実施形態では、上記のＡＢＰのいずれかは、Ｎ末端のＱがｐＥで置換されているＶＨ配列を含む。いくつかの実施形態では、上記のＡＢＰのいずれかは、Ｎ末端のＥがｐＥで置換されているＶＬ配列を含む。いくつかの実施形態では、上記のＡＢＰのいずれかは、Ｎ末端のＱがｐＥで置換されている重鎖配列を含む。いくつかの実施形態では、上記のＡＢＰのいずれかは、Ｎ末端のＥがｐＥで置換されている軽鎖配列を含む。
【００４８】
いくつかの実施形態では、本発明で提供するのは、医薬として用いるための上記のＡＢＰのいずれかである。いくつかの実施形態では、本発明で提供するのは、がんまたはウイルス感染症の治療で用いるための上記のＡＢＰのいずれかである。いくつかの実施形態では、本発明で提供するのは、がんの治療で用いるための上記のＡＢＰのいずれかであり、そのがんは、固形腫瘍と血液腫瘍から選択される。いくつかの実施形態では、本発明で提供するのは、前の治療に応答しなかった疾患または状態の治療において、医薬として用いるための上記のＡＢＰのいずれかである。いくつかの実施形態では、この前の治療は、ＰＤ−１とＰＤ−Ｌ１との間の相互作用を阻害する作用物質を含む治療であった。
【００４９】
いくつかの実施形態では、本発明で提供するのは、上記のＡＢＰのいずれか、そのＶＨ、そのＶＬ、その軽鎖、その重鎖またはその抗原結合部分をコードする単離されたポリヌクレオチドである。いくつかの実施形態では、本発明で提供するのは、このポリヌクレオチドを含むベクターである。いくつかの実施形態では、本発明で提供するのは、このポリヌクレオチド及び／またはこのベクターを含む宿主細胞である。いくつかの実施形態では、本発明で提供するのは、上記のＡＢＰのいずれかの作製方法であって、上記の宿主細胞において、そのＡＢＰを発現させることと、発現させたＡＢＰを単離することを含む方法である。
【００５０】
いくつかの実施形態では、本発明で提供するのは、上記のＡＢＰのいずれかを含む医薬組成物である。いくつかの実施形態では、この医薬組成物中のＡＢＰの量は、対象において、（ａ）エフェクターＴ細胞の活性を向上させるのに十分な量、（ｂ）細胞溶解性Ｔ細胞の活性を向上させるのに十分な量、（ｃ）ＮＫ細胞の活性を向上させるのに十分な量、（ｄ）ＴＩＧＩＴを介したシグナル伝達を阻害するのに十分な量、（ｅ）ＣＤ１５５及びもしくはＣＤ１１２のＴＩＧＩＴへの結合を阻害もしくはブロックするのに十分な量、または（ｆ）（ａ）〜（ｅ）の任意の組み合わせである。いくつかの実施形態では、上記の医薬組成物のいずれかは、ＰＤ−１をアンタゴナイズするか、またはＰＤ−Ｌ１がＰＤ−１と相互作用するのをブロックする抗体をさらに含む。いくつかの実施形態では、上記の医薬組成物のいずれかは、医薬として用いるためのものである。いくつかの実施形態では、上記の医薬組成物のいずれかは、がんまたはウイルス感染症の治療で用いるためのものである。いくつかの実施形態では、上記の医薬組成物のいずれかは、がんの治療で用いるためのものであり、そのがんは、固形腫瘍と血液腫瘍から選択される。いくつかの実施形態では、上記の医薬組成物のいずれかは、前の治療に応答しなかった疾患または状態の治療において、医薬として用いるためのものである。いくつかの実施形態では、この前の治療は、ＰＤ−１とＰＤ−Ｌ１との間の相互作用を阻害する作用物質を含む治療であった。
【００５１】
いくつかの実施形態では、本発明で提供するのは、疾患または状態の治療または予防を必要とする対象の疾患または状態の治療または予防方法であって、上記のＡＢＰのいずれかまたは上記の医薬組成物のいずれかを有効量、その対象に投与することを含む方法である。いくつかの実施形態では、この疾患または状態は、がんまたはウイルス感染症である。いくつかの実施形態では、この疾患または状態は、がんであり、このがんは、固形腫瘍と血液腫瘍から選択される。いくつかの実施形態では、本発明で提供するのは、免疫応答の調節を必要とする対象の免疫応答の調節方法であって、上記のＡＢＰのいずれかまたは上記の医薬組成物のいずれかを有効量、その対象に投与することを含む方法である。いくつかの実施形態では、上記の方法のいずれかは、１つ以上の追加の治療剤を対象に投与することをさらに含む。いくつかの実施形態では、この追加の治療剤は、ＰＤ−１とＰＤ−Ｌ１との間の相互作用を阻害する作用物質、化学療法剤、免疫刺激剤、放射線及びこれらの組み合わせから選択される。
【００５２】
いくつかの実施形態では、上記の治療方法、ＡＢＰの使用法または医薬組成物の使用法のいずれかで用いるための追加の治療剤は、ＰＤ−１とＰＤ−Ｌ１との間の相互作用を阻害する作用物質であり、ＰＤ−１とＰＤ−Ｌ１との間の相互作用を阻害するこの作用物質は、抗体、ペプチド模倣体、小分子、または上記のような作用物質をコードする核酸から選択される。いくつかの実施形態では、ＰＤ−１とＰＤ−Ｌ１との間の相互作用を阻害するこの作用物質は、ペムブロリズマブ、ニボルマブ、アテゾリズマブ、アベルマブ、デュルバルマブ、ＢＭＳ−９３６５５９、スルファモノメトキシン１及びスルファメチゾール２から選択される。
【００５３】
いくつかの実施形態では、上記の治療方法、ＡＢＰの使用法または医薬組成物の使用法のいずれかで用いるための追加の治療剤は、（ａ）免疫細胞の抑制性レセプターもしくはそのリガンドのシグナル伝達をブロックする作用物質、またはそのような作用物質をコードする核酸、（ｂ）免疫細胞の刺激性レセプターに対するアゴニストまたはそのようなアゴニストをコードする核酸、（ｃ）サイトカインまたはサイトカインをコードする核酸、（ｄ）腫瘍溶解性ウイルスまたは腫瘍溶解性ウイルスをコードする核酸、（ｅ）キメラ抗原レセプターを発現するＴ細胞、（ｆ）Ｔ細胞に対する二重特異性もしくは多特異性抗体、またはそのような抗体をコードする核酸、（ｇ）抗ＴＧＦ−β抗体またはそのような抗体をコードする核酸、（ｈ）ＴＧＦ−βトラップまたはそのようなトラップをコードする核酸、（ｉ）がん関連抗原に対するワクチン（そのような抗原またはそのような抗原をコードする核酸を含む）、及び（ｊ）これらの組み合わせから選択される免疫刺激剤である。いくつかの実施形態では、追加の治療剤は、免疫細胞の抑制性レセプターもしくはそのリガンドのシグナル伝達をブロックする作用物質、またはそのような作用物質をコードする核酸であり、その抑制性レセプターまたはそのリガンドは、ＣＴＬＡ−４、ＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１、ＰＤ−Ｌ２、ＬＡＧ−３、Ｔｉｍ３、ニューリチン、ＢＴＬＡ、ＣＥＣＡＭ−１、ＣＥＣＡＭ−５、ＶＩＳＴＡ、ＬＡＩＲ１、ＣＤ１６０、２Ｂ４、ＴＧＦ−Ｒ、ＫＩＲ及びこれらの組み合わせから選択される。いくつかの実施形態では、追加の治療剤は、免疫細胞の刺激性レセプターに対するアゴニストまたはそのようなアゴニストをコードする核酸であり、免疫細胞のその刺激性レセプターは、ＯＸ４０、ＣＤ２、ＣＤ２７、ＣＤＳ、ＩＣＡＭ−１、ＬＦＡ−１（ＣＤ１１ａ／ＣＤ１８）、ＩＣＯＳ（ＣＤ２７８）、４−１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＧＩＴＲ、ＣＤ２８、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＢＡＦＦＲ、ＨＶＥＭ、ＣＤ７、ＬＩＧＨＴ、ＮＫＧ２Ｃ、ＳＬＡＭＦ７、ＮＫｐ８０、ＣＤ１６０、Ｂ７−Ｈ３、ＣＤ８３リガンド及びこれらの組み合わせから選択される。いくつかの実施形態では、追加の治療剤は、ＩＬ−２、ＩＬ−５、ＩＬ−７、ＩＬ−１２、ＩＬ−１５、ＩＬ−２１及びこれらの組み合わせから選択されるサイトカインまたはサイトカインをコードする核酸である。いくつかの実施形態では、追加の治療剤は、単純ヘルペスウイルス、水疱性口内炎ウイルス、アデノウイルス、ニューカッスル病ウイルス、ワクシニアウイルス、マラバウイルス及びこれらの組み合わせから選択される腫瘍溶解性ウイルスまたは腫瘍溶解性ウイルスをコードする核酸である。
【００５４】
いくつかの実施形態では、追加の治療剤は、ＡＢＰと同じ医薬組成物中に調合されている。いくつかの実施形態では、追加の治療剤は、ＡＢＰとは異なる医薬組成物中に調合されている。いくつかの実施形態では、追加の治療剤は、ＡＢＰを投与する前に投与する。いくつかの実施形態では、追加の治療剤は、ＡＢＰを投与した後に投与する。いくつかの実施形態では、追加の治療剤は、ＡＢＰと同時に投与する。
【００５５】
いくつかの実施形態では、対象は、上記のような方法を行う前に、ＰＤ−１とＰＤ−Ｌ１との間の相互作用を阻害する作用物質で治療したことのある対象である。
【００５６】
いくつかの実施形態では、対象が罹患している疾患または状態は、前の治療に応答しなかったものである。いくつかの実施形態では、この前の治療は、ＰＤ−１とＰＤ−Ｌ１との間の相互作用を阻害する作用物質を含む治療であった。
【００５７】
いくつかの実施形態では、本発明で提供するのは、上記の医薬組成物のいずれかと、その医薬組成物の使用に関する説明書とを含むキットである。いくつかの実施形態では、このキットは、追加の治療剤を含む追加の医薬組成物と、その追加の治療剤の使用に関する説明書とをさらに含む。いくつかの実施形態では、この追加の治療剤は、ＰＤ−１とＰＤ−Ｌ１との間の相互作用を阻害する作用物質、化学療法剤、免疫刺激剤、放射線及びこれらの組み合わせから選択される。いくつかの実施形態では、追加の治療剤は、ＰＤ−１とＰＤ−Ｌ１との間の相互作用を阻害する作用物質であり、ＰＤ−１とＰＤ−Ｌ１との間の相互作用を阻害するこの作用物質は、抗体、ペプチド模倣体、小分子、またはそのような作用物質をコードする核酸から選択される。いくつかの実施形態では、ＰＤ−１とＰＤ−Ｌ１との間の相互作用を阻害するこの作用物質は、ペムブロリズマブ、ニボルマブ、アテゾリズマブ、アベルマブ、デュルバルマブ、ＢＭＳ−９３６５５９、スルファモノメトキシン１及びスルファメチゾール２から選択される。いくつかの実施形態では、追加の治療剤は、（ａ）免疫細胞の抑制性レセプターもしくはそのリガンドのシグナル伝達をブロックする作用物質、またはそのような作用物質をコードする核酸、（ｂ）免疫細胞の刺激性レセプターに対するアゴニストまたはそのようなアゴニストをコードする核酸、（ｃ）サイトカインまたはサイトカインをコードする核酸、（ｄ）腫瘍溶解性ウイルスまたは腫瘍溶解性ウイルスをコードする核酸、（ｅ）キメラ抗原レセプターを発現するＴ細胞、（ｆ）Ｔ細胞に対する二重特異性もしくは多特異性抗体、またはそのような抗体をコードする核酸、（ｇ）抗ＴＧＦ−β抗体またはそのような抗体をコードする核酸、（ｈ）ＴＧＦ−βトラップまたはそのようなトラップをコードする核酸、（ｉ）がん関連抗原に対するワクチン（そのような抗原またはそのような抗原をコードする核酸を含む）及び（ｊ）これらの組み合わせから選択される免疫刺激剤である。いくつかの実施形態では、追加の治療剤は、免疫細胞の抑制性レセプターもしくはそのリガンドのシグナル伝達をブロックする作用物質、またはそのような作用物質をコードする核酸であり、その抑制性レセプターまたはそのリガンドは、ＣＴＬＡ−４、ＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１、ＰＤ−Ｌ２、ＬＡＧ−３、Ｔｉｍ３、ニューリチン、ＢＴＬＡ、ＣＥＣＡＭ−１、ＣＥＣＡＭ−５、ＶＩＳＴＡ、ＬＡＩＲ１、ＣＤ１６０、２Ｂ４、ＴＧＦ−Ｒ、ＫＩＲ及びこれらの組み合わせから選択される。いくつかの実施形態では、追加の治療剤は、免疫細胞の刺激性レセプターに対するアゴニストまたはそのようなアゴニストをコードする核酸であり、免疫細胞のその刺激性レセプターは、ＯＸ４０、ＣＤ２、ＣＤ２７、ＣＤＳ、ＩＣＡＭ−１、ＬＦＡ−１（ＣＤ１１ａ／ＣＤ１８）、ＩＣＯＳ（ＣＤ２７８）、４−１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＧＩＴＲ、ＣＤ２８、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＢＡＦＦＲ、ＨＶＥＭ、ＣＤ７、ＬＩＧＨＴ、ＮＫＧ２Ｃ、ＳＬＡＭＦ７、ＮＫｐ８０、ＣＤ１６０、Ｂ７−Ｈ３、ＣＤ８３リガンド及びこれらの組み合わせから選択される。いくつかの実施形態では、追加の治療剤は、ＩＬ−２、ＩＬ−５、ＩＬ��７、ＩＬ−１２、ＩＬ−１５、ＩＬ−２１及びこれらの組み合わせから選択されるサイトカインまたはサイトカインをコードする核酸である。いくつかの実施形態では、追加の治療剤は、単純ヘルペスウイルス、水疱性口内炎ウイルス、アデノウイルス、ニューカッスル病ウイルス、ワクシニアウイルス、マラバウイルス及びこれらの組み合わせから選択される腫瘍溶解性ウイルスまたは腫瘍溶解性ウイルスをコードする核酸である。
【図面の簡単な説明】
【００５８】
【図１Ａ】図１Ａ〜１Ｂは、実施例でさらに説明されている様々な分子の配列アラインメントを示している。図１Ａは、ヒトＴＩＧＩＴ基準配列、カニクイザルＴＩＧＩＴ基準配列、マウスＴＩＧＩＴ基準配列（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３）及びラットＴＩＧＩＴ基準配列のＴＩＧＩＴ細胞外ドメインの配列アラインメントを示している。
【図１Ｂ】図１Ａ〜１Ｂは、実施例でさらに説明されている様々な分子の配列アラインメントを示している。図１Ｂは、ヒトＴＩＧＩＴとＰＶＲＬ４細胞外ドメインとのアラインメントを示している。
【図２】ＣＤ２８−ＣＴＬＡ４経路とＣＤ２２６−ＴＩＧＩＴ経路との類似性、すなわち、ＴＩＧＩＴの免疫チェックポイント標的としての有用性を示したものである。ＣＤ２２６／ＴＩＧＩＴの共刺激／共阻害の生物現象は、ＣＤ２８／ＣＴＬＡ４の生物現象に似ており、ＴＩＧＩＴは、阻害シグナルをＴ細胞に供給し、その一方で、ＣＤ２２６は、共刺激シグナルをＴ細胞に供給する。ＴＩＧＩＴリガンドのＣＤ１５５とＣＤ１１２は、腫瘍において広範に発現し、免疫抑制環境をもたらす。
【図３】実施例７で説明されているＴＩＧＩＴ  Ｊｕｒｋａｔ／抗ＣＤ３  ＨＴ−１０８０共培養アッセイの概略図を示している。
【図４Ａ】ヒトＴＩＧＩＴを発現している操作されたＪｕｒｋａｔ細胞においてＩＬ−２の産生を誘導する、ＭＡＢ１０とＩｇＧ４アイソタイプ対照の能力を比較した、例示的な実験から得られたＥＣ５０曲線を示している。
【図４Ｂ】カニクイザルＴＩＧＩＴを発現している操作されたＪｕｒｋａｔ細胞においてＩＬ−２の産生を誘導する、ＭＡＢ１０とＩｇＧ４アイソタイプ対照の能力を比較した、例示的な実験から得たＥＣ５０曲線を示している。
【図５Ａ】図５Ａ〜５Ｃは、ヒトＣＤ４＋Ｔ細胞上のＴＩＧＩＴ発現のＦＡＣＳによる解析を示している。図５Ａおよび５Ｂは、無刺激の（図５Ａ）および刺激した（図５Ｂ）ＣＤ４＋Ｔ細胞上のＴＩＧＩＴ、ＰＶＲ及びＣＤ２２６の発現解析を示している一連のグラフを示している。
【図５Ｂ】図５Ａ〜５Ｃは、ヒトＣＤ４＋Ｔ細胞上のＴＩＧＩＴ発現のＦＡＣＳによる解析を示している。図５Ａおよび５Ｂは、無刺激の（図５Ａ）および刺激した（図５Ｂ）ＣＤ４＋Ｔ細胞上のＴＩＧＩＴ、ＰＶＲ及びＣＤ２２６の発現解析を示している一連のグラフを示している。
【図５Ｃ】図５Ａ〜５Ｃは、ヒトＣＤ４＋Ｔ細胞上のＴＩＧＩＴ発現のＦＡＣＳによる解析を示している。図５Ｃは、ナイーブＣＤ４＋Ｔ細胞（ＣＤ４５ＲＡ（ナイーブＴ細胞のマーカー）陽性、右上パネル）とメモリーＣＤ４＋Ｔ細胞（ＣＤ４５ＲＯ（活性化Ｔ細胞のマーカー）陽性、右下パネル）上のＴＩＧＩＴの発現解析を示している。
【図６Ａ】図６Ａ〜図６Ｏは、ＭＡＢによる治療が、ヒトドナーから得た準至適刺激ＰＢＭＣに及ぼす作用を示している。ヒトドナーから得たＰＢＭＣにおいて、ＩＦＮ−γを誘導する能力について、ＭＡＢを試験した（図６Ａ：対照ＩｇＧ４抗体を含む）。
【図６Ｂ】図６Ａ〜図６Ｏは、ＭＡＢによる治療が、ヒトドナーから得た準至適刺激ＰＢＭＣに及ぼす作用を示している。ヒトドナーから得たＰＢＭＣにおいて、ＩＦＮ−γを誘導する能力について、ＭＡＢを試験した（図６Ｂ：ＭＡＢ２を含む）。
【図６Ｃ】図６Ａ〜図６Ｏは、ＭＡＢによる治療が、ヒトドナーから得た準至適刺激ＰＢＭＣに及ぼす作用を示している。ヒトドナーから得たＰＢＭＣにおいて、ＩＦＮ−γを誘導する能力について、ＭＡＢを試験した（図６Ｃ：ＭＡＢ３を含む）。
【図６Ｄ】図６Ａ〜図６Ｏは、ＭＡＢによる治療が、ヒトドナーから得た準至適刺激ＰＢＭＣに及ぼす作用を示している。ヒトドナーから得たＰＢＭＣにおいて、ＩＦＮ−γを誘導する能力について、ＭＡＢを試験した（図６Ｄ：ＭＡＢ４を含む）。
【図６Ｅ】図６Ａ〜図６Ｏは、ＭＡＢによる治療が、ヒトドナーから得た準至適刺激ＰＢＭＣに及ぼす作用を示している。ヒトドナーから得たＰＢＭＣにおいて、ＩＦＮ−γを誘導する能力について、ＭＡＢを試験した（図６Ｅ：ＭＡＢ５を含む）。
【図６Ｆ】図６Ａ〜図６Ｏは、ＭＡＢによる治療が、ヒトドナーから得た準至適刺激ＰＢＭＣに及ぼす作用を示している。ヒトドナーから得たＰＢＭＣにおいて、ＩＦＮ−γを誘導する能力について、ＭＡＢを試験した（図６Ｆ：ＭＡＢ１０を含む）。
【図６Ｇ】図６Ａ〜図６Ｏは、ＭＡＢによる治療が、ヒトドナーから得た準至適刺激ＰＢＭＣに及ぼす作用を示している。ヒトドナーから得たＰＢＭＣにおいて、ＩＦＮ−γを誘導する能力について、ＭＡＢを試験した（図６Ｇ：ＭＡＢ１１を含む）。
【図６Ｈ】図６Ａ〜図６Ｏは、ＭＡＢによる治療が、ヒトドナーから得た準至適刺激ＰＢＭＣに及ぼす作用を示している。ヒトドナーから得たＰＢＭＣにおいて、ＩＦＮ−γを誘導する能力について、ＭＡＢを試験した（図６Ｈ：ＭＡＢ１２を含む）。
【図６Ｉ】図６Ａ〜図６Ｏは、ＭＡＢによる治療が、ヒトドナーから得た準至適刺激ＰＢＭＣに及ぼす作用を示している。ヒトドナーから得たＰＢＭＣにおいて、ＩＦＮ−γを誘導する能力について、ＭＡＢを試験した（図６Ｉ：ＭＡＢ１５を含む）。
【図６Ｊ】図６Ａ〜図６Ｏは、ＭＡＢによる治療が、ヒトドナーから得た準至適刺激ＰＢＭＣに及ぼす作用を示している。ヒトドナーから得たＰＢＭＣにおいて、ＩＦＮ−γを誘導する能力について、ＭＡＢを試験した（図６Ｊ：ＭＡＢ１６を含む）。
【図６Ｋ】図６Ａ〜図６Ｏは、ＭＡＢによる治療が、ヒトドナーから得た準至適刺激ＰＢＭＣに及ぼす作用を示している。ヒトドナーから得たＰＢＭＣにおいて、ＩＦＮ−γを誘導する能力について、ＭＡＢを試験した（図６Ｋ：ＳＥＣ１（ハムスター抗マウスＴＩＧＩＴ）を含む）。
【図６Ｌ】図６Ａ〜図６Ｏは、ＭＡＢによる治療が、ヒトドナーから得た準至適刺激ＰＢＭＣに及ぼす作用を示している。ドナー１から得たＰＢＭＣをＭＡＢ１０で処理すると、いくつかの炎症誘発性サイトカイン（図６Ｌ：腫瘍壊死因子α（ＴＮＦ）を含む）のアップレギュレーションが誘導される。
【図６Ｍ】図６Ａ〜図６Ｏは、ＭＡＢによる治療が、ヒトドナーから得た準至適刺激ＰＢＭＣに及ぼす作用を示している。ドナー１から得たＰＢＭＣをＭＡＢ１０で処理すると、いくつかの炎症誘発性サイトカイン（図６Ｍ：リンホトキシンα（ＬＴ−α）を含む）のアップレギュレーションが誘導される。
【図６Ｎ】図６Ａ〜図６Ｏは、ＭＡＢによる治療が、ヒトドナーから得た準至適刺激ＰＢＭＣに及ぼす作用を示している。ドナー１から得たＰＢＭＣをＭＡＢ１０で処理すると、いくつかの炎症誘発性サイトカイン（図６Ｎ：インターフェロンγ（ＩＦＮ−γ）を含む）のアップレギュレーションが誘導される。
【図６Ｏ】図６Ａ〜図６Ｏは、ＭＡＢによる治療が、ヒトドナーから得た準至適刺激ＰＢＭＣに及ぼす作用を示している。図６Ｏは、ＩＦＮ−γの産生によって測定した、ドナー１から得たＰＢＭＣにおけるＭＡＢ１０のＥＣ５０を示すグラフを示している。
【図７Ａ】図７Ａ〜７Ｅは、ＭＡＢ１０が、ドナー２から得た準至適刺激ＰＢＭＣにおいて、サイトカイン（図７Ａ：ＩＦＮ−γを含む）の分泌に及ぼす作用を示す一連のグラフを示している。ＭＡＢ１０で処理した細胞から得たデータは、黒色の棒として示されており、ＩｇＧ４アイソタイプ対照で処理した細胞から得たデータは、薄灰色の棒として示されている。各棒の抗体濃度は、μｇ／ｍＬで示されている。
【図７Ｂ】図７Ａ〜７Ｅは、ＭＡＢ１０が、ドナー２から得た準至適刺激ＰＢＭＣにおいて、サイトカイン（図７Ｂ：ＴＮＦを含む）の分泌に及ぼす作用を示す一連のグラフを示している。ＭＡＢ１０で処理した細胞から得たデータは、黒色の棒として示されており、ＩｇＧ４アイソタイプ対照で処理した細胞から得たデータは、薄灰色の棒として示されている。各棒の抗体濃度は、μｇ／ｍＬで示されている。
【図７Ｃ】図７Ａ〜７Ｅは、ＭＡＢ１０が、ドナー２から得た準至適刺激ＰＢＭＣにおいて、サイトカイン（図７Ｃ：インターロイキン６（ＩＬ−６）を含む）の分泌に及ぼす作用を示す一連のグラフを示している。ＭＡＢ１０で処理した細胞から得たデータは、黒色の棒として示されており、ＩｇＧ４アイソタイプ対照で処理した細胞から得たデータは、薄灰色の棒として示されている。各棒の抗体濃度は、μｇ／ｍＬで示されている。
【図７Ｄ】図７Ａ〜７Ｅは、ＭＡＢ１０が、ドナー２から得た準至適刺激ＰＢＭＣにおいて、サイトカイン（図７Ｄ：顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ）を含む）の分泌に及ぼす作用を示す一連のグラフを示している。ＭＡＢ１０で処理した細胞から得たデータは、黒色の棒として示されており、ＩｇＧ４アイソタイプ対照で処理した細胞から得たデータは、薄灰色の棒として示されている。各棒の抗体濃度は、μｇ／ｍＬで示されている。
【図７Ｅ】図７Ａ〜７Ｅは、ＭＡＢ１０が、ドナー２から得た準至適刺激ＰＢＭＣにおいて、サイトカイン（図７Ｅ：ＬＴ−αを含む）の分泌に及ぼす作用を示す一連のグラフを示している。ＭＡＢ１０で処理した細胞から得たデータは、黒色の棒として示されており、ＩｇＧ４アイソタイプ対照で処理した細胞から得たデータは、薄灰色の棒として示されている。各棒の抗体濃度は、μｇ／ｍＬで示されている。
【図８Ａ】図８Ａ〜８Ｃは、３人の異なるドナーから得た細胞を用いたＣＤ４＋細胞アッセイにおいて、アンタゴニストの抗ＴＩＧＩＴ抗体ＭＡＢ１０が、ＩＦＮ−γを増加させることを示す一連のグラフを示している。図８Ａは、ドナー１から得たＣＤ４＋細胞から得た結果を示している。左パネルには、ＭＡＢ１０（黒色の棒）またはＩｇＧ４アイソタイプ対照（薄灰色の棒）のいずれかで処理した細胞でのＩＦＮ−γの産生が示されている。このアッセイにおけるＭＡＢ１０のＥＣ５０平均値は、ＩＦＮ−γシグナルの増大の５０％を誘導するのに必要なＭＡＢ１０の濃度を割り出すことによって計算した（右パネルにプロットされている）。
【図８Ｂ】図８Ａ〜８Ｃは、３人の異なるドナーから得た細胞を用いたＣＤ４＋細胞アッセイにおいて、アンタゴニストの抗ＴＩＧＩＴ抗体ＭＡＢ１０が、ＩＦＮ−γを増加させることを示す一連のグラフを示している。図８Ｂは、ドナー２から得たＣＤ４＋細胞から得た結果を示している。左パネルには、ＭＡＢ１０（黒色の棒）またはＩｇＧ４アイソタイプ対照（薄灰色の棒）のいずれかで処理した細胞でのＩＦＮ−γの産生が示されている。このアッセイにおけるＭＡＢ１０のＥＣ５０平均値は、ＩＦＮ−γシグナルの増大の５０％を誘導するのに必要なＭＡＢ１０の濃度を割り出すことによって計算した（右パネルにプロットされている）。
【図８Ｃ】図８Ａ〜８Ｃは、３人の異なるドナーから得た細胞を用いたＣＤ４＋細胞アッセイにおいて、アンタゴニストの抗ＴＩＧＩＴ抗体ＭＡＢ１０が、ＩＦＮ−γを増加させることを示す一連のグラフを示している。図８Ｃは、ドナー３から得たＣＤ４＋細胞から得た結果を示している。左パネルには、ＭＡＢ１０（黒色の棒）またはＩｇＧ４アイソタイプ対照（薄灰色の棒）のいずれかで処理した細胞でのＩＦＮ−γの産生が示されている。このアッセイにおけるＭＡＢ１０のＥＣ５０平均値は、ＩＦＮ−γシグナルの増大の５０％を誘導するのに必要なＭＡＢ１０の濃度を割り出すことによって計算した（右パネルにプロットされている）。
【図９Ａ】作用機序ベースのＰＤ−１／ＴＩＧＩＴ併用バイオアッセイにおいて、ＭＡＢ１０とペムブロリズマブ（抗ＰＤ−１抗体）を１：１の比率で用いたアッセイの結果を示している。各抗体の濃度は、２５μｇ／ｍｌ、１０μｇ／ｍｌ、４μｇ／ｍｌ、１．６μｇ／ｍｌ、０．６４μｇ／ｍｌ、０．２５６μｇ／ｍｌ、０．１０２４μｇ／ｍｌ、０．０４０９６μｇ／ｍｌ及び０．０１６３８４μｇ／ｍｌであった。非標的指向ＩｇＧ４を対照として用いた。図９Ａに示されているように、ＭＡＢ１０とペムブロリズマブを組み合わせた場合のみ（ＥＣ５０は５．０６ｎＭ）、Ｊｕｒｋａｔ細胞においてルシフェラーゼ活性を誘導するのに十分に、結合がブロックされた。ＩｇＧ４対照単独でも、ＩｇＧ４＋ＭＡＢ１０の併用でも、ルシフェラーゼ活性が誘導されなかった。
【図９Ｂ】固定用量（１μｇ／ｍｌ）のペムブロリズマブ（またはＩｇＧ４対照）と、様々な用量のＭＡＢ１０（５０μｇ／ｍｌ、２０μｇ／ｍｌ、８μｇ／ｍｌ、３．２μｇ／ｍｌ、１．２８μｇ／ｍｌ、０．５１２μｇ／ｍｌ、０．２０４８μｇ／ｍｌ、０．０８１９２μｇ／ｍｌ及び０．０３２７６８μｇ／ｍｌ）を用いたアッセイの結果を示している。ＩｇＧ４対照単独でも、ＩｇＧ４＋ＭＡＢ１０の併用でも、ルシフェラーゼ活性が誘導されなかった。
【図１０Ａ】図１０Ａ〜１０Ｄは、細胞内サイトカイン染色を用いた、ヒトドナーから得たＣＤ４＋Ｔ細胞をＣＭＶで刺激したものに対するＭＡＢ１０の作用を示している一連のグラフである。ＣＤ４＋細胞をＭＡＢ１０（黒色の棒）とともにインキュベートすると、ＩｇＧ４対照とインキュベートした細胞（白色の棒）と比べて、エフェクターサイトカイン（図１０Ａ：ＴＮＦを含む）の産生が用量依存的に増大する。
【図１０Ｂ】図１０Ａ〜１０Ｄは、細胞内サイトカイン染色を用いた、ヒトドナーから得たＣＤ４＋Ｔ細胞をＣＭＶで刺激したものに対するＭＡＢ１０の作用を示している一連のグラフである。ＣＤ４＋細胞をＭＡＢ１０（黒色の棒）とともにインキュベートすると、ＩｇＧ４対照とインキュベートした細胞（白色の棒）と比べて、エフェクターサイトカイン（図１０Ｂ：ＩＬ−２を含む）の産生が用量依存的に増大する。
【図１０Ｃ】図１０Ａ〜１０Ｄは、細胞内サイトカイン染色を用いた、ヒトドナーから得たＣＤ４＋Ｔ細胞をＣＭＶで刺激したものに対するＭＡＢ１０の作用を示している一連のグラフである。ＣＤ４＋細胞をＭＡＢ１０（黒色の棒）とともにインキュベートすると、ＩｇＧ４対照とインキュベートした細胞（白色の棒）と比べて、エフェクターサイトカイン（図１０Ｃ：ＩＦＮ−γを含む）の産生が用量依存的に増大する。
【図１０Ｄ】図１０Ａ〜１０Ｄは、細胞内サイトカイン染色を用いた、ヒトドナーから得たＣＤ４＋Ｔ細胞をＣＭＶで刺激したものに対するＭＡＢ１０の作用を示している一連のグラフである。図１０Ｄは、ＭＡＢ１０とインキュベートすると、抗原特異的な活性化ＣＤ４＋Ｔ細胞の割合が増えることを示している。ＣＤ３（成熟Ｔ細胞のマーカー）の発現と、ＴＮＦ及びＩＬ−２の発現について、２０μｇ／ｍＬのＩｇＧ４対照またはＭＡＢ１０で処理した細胞をＦＡＣＳによって解析した。スチューデントＴ検定を用いて、ＭＡＢ１０群とＩｇＧ４対照群（同じ濃度で処理した）との間の統計差を計算した（＊＝ｐ＜０．０５、＊＊＝ｐ＜０．０１、＊＊＊＝ｐ＜０．００５、＊＊＊＊＝ｐ＜０．００１）。
【図１１Ａ】図１１Ａ〜１１Ｄは、ＣＤ８＋細胞を用いた以外は、図１０と同様の一連のグラフであり、ＭＡＢ１０またはＩｇＧ４対照で処理した上記の細胞によるＴＮＦ（図１１Ａ）の産生を示している。
【図１１Ｂ】図１１Ａ〜１１Ｄは、ＣＤ８＋細胞を用いた以外は、図１０と同様の一連のグラフであり、ＭＡＢ１０またはＩｇＧ４対照で処理した上記の細胞によるパーフォリン（図１１Ｂ）の産生を示している。
【図１１Ｃ】図１１Ａ〜１１Ｄは、ＣＤ８＋細胞を用いた以外は、図１０と同様の一連のグラフであり、ＭＡＢ１０またはＩｇＧ４対照で処理した上記の細胞によるグランザイムＢ（図１１Ｃ）の産生を示している。
【図１１Ｄ】図１１Ａ〜１１Ｄは、ＣＤ８＋細胞を用いた以外は、図１０と同様の一連のグラフである。図１１Ｄは、ＭＡＢ１０とインキュベートすると、抗原特異的な活性化ＣＤ８＋Ｔ細胞の割合も増加することを示している。ＣＤ３の発現と、パーフォリン及びグランザイムＢの発現について、２０μｇ／ｍｌのＩｇＧ４対照またはＭＡＢ１０で処理した細胞をＦＡＣＳによって解析した。スチューデントＴ検定を用いて、ＭＡＢ１０群とＩｇＧ４対照群（同じ濃度で処理した）との間の統計差を計算した（＊＝ｐ＜０．０５、＊＊＝ｐ＜０．０１、＊＊＊＝ｐ＜０．００５、＊＊＊＊＝ｐ＜０．００１）。
【図１２Ａ】図１２Ａ〜１２Ｄは、同じドナーから得た細胞を処理した結果を示しており、ＭＡＢ１０による遮断によって、ＣＭＶ特異的なＣＤ８＋Ｔ細胞応答が増幅される。細胞を、ある範囲の濃度のＭＡＢ１０（黒色の棒）またはＩｇＧ４対照（白色の棒）とインキュベートし、パーフォリン＋ グランザイムＢ＋（図１２Ａ）という二重陽性集団のパーセンテージを解析した。スチューデントＴ検定を用いて、ＭＡＢ１０群とＩｇＧ４対照群（同じ濃度で処理した）との間の統計差を計算した（＊＝ｐ＜０．０５、＊＊＝ｐ＜０．０１、＊＊＊＝ｐ＜０．００５、＊＊＊＊＝ｐ＜０．００１）。
【図１２Ｂ】図１２Ａ〜１２Ｄは、同じドナーから得た細胞を処理した結果を示しており、ＭＡＢ１０による遮断によって、ＣＭＶ特異的なＣＤ８＋Ｔ細胞応答が増幅される。図１２Ｂ（パーフォリン＋ グランザイムＢ＋ 解析）は、二重陽性細胞の割合を示しており、２０μｇ／ｍｌの対照抗体（左パネル）または２０μｇ／ｍｌのＭＡＢ１０（右パネル）で処理した細胞を比べている。
【図１２Ｃ】図１２Ａ〜１２Ｄは、同じドナーから得た細胞を処理した結果を示しており、ＭＡＢ１０による遮断によって、ＣＭＶ特異的なＣＤ８＋Ｔ細胞応答が増幅される。細胞を、ある範囲の濃度のＭＡＢ１０（黒色の棒）またはＩｇＧ４対照（白色の棒）とインキュベートし、ＩＦＮ−γ＋ ＴＮＦ＋（図１２Ｃ）という二重陽性集団のパーセンテージを解析した。スチューデントＴ検定を用いて、ＭＡＢ１０群とＩｇＧ４対照群（同じ濃度で処理した）との間の統計差を計算した（＊＝ｐ＜０．０５、＊＊＝ｐ＜０．０１、＊＊＊＝ｐ＜０．００５、＊＊＊＊＝ｐ＜０．００１）。
【図１２Ｄ】図１２Ａ〜１２Ｄは、同じドナーから得た細胞を処理した結果を示しており、ＭＡＢ１０による遮断によって、ＣＭＶ特異的なＣＤ８＋Ｔ細胞応答が増幅される。図１２Ｄ（ＩＦＮ−γ＋ ＴＮＦ＋ 解析）は、二重陽性細胞の割合を示しており、２０μｇ／ｍｌの対照抗体（左パネル）または２０μｇ／ｍｌのＭＡＢ１０（右パネル）で処理した細胞を比べている。
【図１３】図１０〜１２で用いたものと同じドナーから得た細胞に対する、ＭＡＢ１０及びＰＤ−１抗体ペムブロリズマブの併用効果を示すグラフを示している。細胞をＣＭＶ溶解液で刺激し、２μｇ／ｍｌのペムブロリズマブまたは対照ＩｇＧ４、及び１０μｇ／ｍｌ、２０μｇ／ｍｌまたは４０μｇ／ｍｌの対照抗体またはＭＡＢ１０で処理し、ＴＮＦの産生を測定した。４つの細胞群を試験し、ＩｇＧ４対照（白色の棒、一番左の群）、一定量のＩｇＧ４対照及び漸変量のＭＡＢ１０（暗灰色の棒、左から２番目）、一定量のペムブロリズマブ及び漸変量のＩｇＧ４対照（薄灰色の棒、右から２番目）、または一定量のペムブロリズマブ及び漸変量のＭＡＢ１０（黒色の棒、右側の群）で処理した。
【図１４Ａ】図１４Ａ〜図１４Ｃは、ＭＡＢ１０＋ペムブロリズマブによる処理の、３人の異なるドナーから得た細胞に対する作用を示す一連のグラフである。細胞を０．１μｇ／ｍｌのＣＭＶ溶解液で刺激し、２０μｇ／ｍｌのＭＡＢ１０または２０μｇ／ｍｌの対照ＩｇＧ４抗体、及び漸変量のペムブロリズマブで処理してから、ＴＮＦの産生を測定した。図１４Ａは、ドナー１から得た細胞を用いたアッセイの結果を示している。ＭＡＢ１０（黒色の棒）を単独で、または漸増濃度のペムブロリズマブと組み合わせて加えると、対照抗体＋ペムブロリズマブ群（白色の棒）と比べて、ＴＮＦの産生が増大する。加えて、ペムブロリズマブと組み合わせたＭＡＢ１０（黒色の棒）では、ＭＡＢ１０単独と比べて、活性も向上した。スチューデントＴ検定解析を用いて、ＭＡＢ１０単独群とＭＡＢ１０＋ペムブロ群との統計差を計算した（＊＝ｐ＜０．０５、＊＊＝ｐ＜０．０１、＊＊＊＝ｐ＜０．００５、＊＊＊＊＝ｐ＜０．００１）。
【図１４Ｂ】図１４Ａ〜図１４Ｃは、ＭＡＢ１０＋ペムブロリズマブによる処理の、３人の異なるドナーから得た細胞に対する作用を示す一連のグラフである。細胞を０．１μｇ／ｍｌのＣＭＶ溶解液で刺激し、２０μｇ／ｍｌのＭＡＢ１０または２０μｇ／ｍｌの対照ＩｇＧ４抗体、及び漸変量のペムブロリズマブで処理してから、ＴＮＦの産生を測定した。図１４Ｂは、ドナー２から得た細胞を用いたアッセイの結果を示している。ＭＡＢ１０（黒色の棒）を単独で、または漸増濃度のペムブロリズマブと組み合わせて加えると、対照抗体＋ペムブロリズマブ群（白色の棒）と比べて、ＴＮＦの産生が増大する。加えて、ペムブロリズマブと組み合わせたＭＡＢ１０（黒色の棒）では、ＭＡＢ１０単独と比べて、活性も向上した。スチューデントＴ検定解析を用いて、ＭＡＢ１０単独群とＭＡＢ１０＋ペムブロ群との統計差を計算した（＊＝ｐ＜０．０５、＊＊＝ｐ＜０．０１、＊＊＊＝ｐ＜０．００５、＊＊＊＊＝ｐ＜０．００１）。
【図１４Ｃ】図１４Ａ〜図１４Ｃは、ＭＡＢ１０＋ペムブロリズマブによる処理の、３人の異なるドナーから得た細胞に対する作用を示す一連のグラフである。細胞を０．１μｇ／ｍｌのＣＭＶ溶解液で刺激し、２０μｇ／ｍｌのＭＡＢ１０または２０μｇ／ｍｌの対照ＩｇＧ４抗体、及び漸変量のペムブロリズマブで処理してから、ＴＮＦの産生を測定した。図１４Ｃは、ドナー３から得た細胞を用いたアッセイの結果を示している。ＭＡＢ１０（黒色の棒）を単独で、または漸増濃度のペムブロリズマブと組み合わせて加えると、対照抗体＋ペムブロリズマブ群（白色の棒）と比べて、ＴＮＦの産生が増大する。加えて、ペムブロリズマブと組み合わせたＭＡＢ１０（黒色の棒）では、ＭＡＢ１０単独と比べて、活性も向上した。スチューデントＴ検定解析を用いて、ＭＡＢ１０単独群とＭＡＢ１０＋ペムブロ群との統計差を計算した（＊＝ｐ＜０．０５、＊＊＝ｐ＜０．０１、＊＊＊＝ｐ＜０．００５、＊＊＊＊＝ｐ＜０．００１）。
【発明を実施するための形態】
【００５９】
１．定義
別段の定義のない限り、本明細書で用いられているすべての専門用語、表記及びその他の科学用語は、本発明の属する当業者に一般に理解されている意味を有するように意図されている。いくつかのケースでは、明確にするために、及び／または容易な参照のために、一般に理解されている意味を有する用語が、本明細書で定義されており、そのような定義が本明細書に含まれていることは、必ずしも、当該技術分野において概ね理解されている意味と異なることを表すと解釈すべきである訳ではない。本明細書で説明または参照されている技法と手順は概して、当業者による従来の手法（例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ  ４ｔｈ  ｅｄ．（２０１２）Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ，ＮＹで説明されている、広く用いられている分子クローニング手法など）を用いて、十分に理解され、一般に用いられている。適宜、市販のキットと試薬の使用を伴う手順は概して、別段の断りのない限り、メーカーの定めたプロトコールと条件に従って行う。
【００６０】
本明細書で使用する場合、「ａ」、「ａｎ」及び「ｔｈｅ」という単数形には、文脈上明らかに別に解すべき場合を除き、複数の言及物が含まれる。「〜が挙げられる」、「〜のような」などの用語は、特に別段の定めのない限り、含まれるが、それらに限らないことを伝えるように意図されている。
【００６１】
本明細書で使用する場合、特に別段の記載のない限り、「含む」という用語にも、具体的には、列挙されている要素「からなる」とともに、それらの要素「から本質的になる」実施形態が含まれる。例えば、「ダイアボディを含む」多特異性ＡＢＰには、「ダイアボディからなる」多特異性ＡＢＰと、「ダイアボディから本質的になる」多特異性ＡＢＰが含まれる。
【００６２】
「約」という用語は、示されている値と、その値の前後の範囲を示すとともに、これらを含む。特定の実施形態では、「約」という用語は、示されている値の±１０％、±５％または±１％を示す。特定の実施形態では、該当する場合、「約」という用語は、示されている値（複数可）±その値（複数可）の１標準偏差を示す。
【００６３】
「ＴＩＧＩＴ」、「ＴＩＧＩＴタンパク質」及び「ＴＩＧＩＴ抗原」という用語は、本明細書では、天然において細胞によって発現されるか、またはｔｉｇｉｔ遺伝子をトランスフェクションした細胞によって発現されるヒトＴＩＧＩＴ、またはヒトＴＩＧＩＴのいずれかのバリアント（例えばスプライスバリアント及びアレルバリアント）、アイソフォーム及び種相同体を指す目的で同義的に使用されている。いくつかの態様では、ＴＩＧＩＴタンパク質は、天然において、霊長類動物（例えばサルもしくはヒト）、齧歯類動物（例えばマウスもしくはラット）、イヌ、ラクダ、ネコ、ウシ、ヤギ、ウマまたはヒツジによって発現されるＴＩＧＩＴタンパク質である。いくつかの態様では、ＴＩＧＩＴタンパク質は、ヒトＴＩＧＩＴ（ｈＴＩＧＩＴ、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１）である。理論に拘束される訳ではないが、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１の１〜２１位は、シグナルペプチドをコードし、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１の２２〜１４１位は、成熟ＴＩＧＩＴタンパク質の細胞外ドメインをコードし、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１の１４２〜１６２位は、膜貫通ドメインをコードし、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１の１６３〜２４４位は、細胞質ドメインをコードすると考えられている。ｗｗｗ．ｕｎｉｐｒｏｔ．ｏｒｇ／ｕｎｉｐｒｏｔ／Ｑ４９５Ａ１（２０１５年９月２８日にアクセス）のＵｎｉＰｒｏｔ  ＫＢ−Ｑ４９５Ａ１（ＴＩＧＩＴ＿ＨＵＭＡＮ）を参照されたい。いくつかの態様では、ＴＩＧＩＴタンパク質は、カニクイザルＴＩＧＩＴ（ｃＴＩＧＩＴ、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２）である。いくつかの態様では、ＴＩＧＩＴタンパク質は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３に示されている配列を有するマウスＴＩＧＩＴ（ｍＴＩＧＩＴ）である。いくつかの態様では、ＴＩＧＩＴタンパク質は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１３８に示されている配列を有するマウスＴＩＧＩＴ（ｍＴＩＧＩＴ）である。本明細書で使用する場合、「ｍＴＩＧＩＴ」、「ｍｕｒｉｎｅ（マウス）ＴＩＧＩＴ」及び「ｍｏｕｓｅ（マウス）ＴＩＧＩＴ」という用語は、配列番号が明記されていない場合には、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３及び／またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１３８を意味する。いくつかの態様では、ＴＩＧＩＴタンパク質は、完全長または未処理のＴＩＧＩＴタンパク質である。いくつかの態様では、ＴＩＧＩＴタンパク質は、翻訳後修飾によって生成されるトランケート型または処理済みのＴＩＧＩＴタンパク質である。ＴＩＧＩＴは、ＷＵＣＡＭ、ＶＳＩＧ９及びＶｓｔｍ３を含む様々な同義語によっても知られている。
【００６４】
「免疫グロブリン」という用語は、構造上関連するタンパク質であって、１対の軽（Ｌ）鎖と１対の重（Ｈ）鎖という２対のポリペプチド鎖を概して含むタンパク質のクラスを指す。「インタクト免疫グロブリン」では、これらの４本の鎖のすべてが、ジスルフィド結合によって相互接続している。免疫グロブリンの構造については、十分に特徴付けが行われている。例えば、Ｐａｕｌ，Ｆｕｎｄａｍｅｎｔａｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  ７ｔｈ  ｅｄ．，Ｃｈ．５（２０１３）Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ  Ｗｉｌｌｉａｍｓ  ＆  Ｗｉｌｋｉｎｓ，Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ，ＰＡを参照されたい。簡潔に述べると、各重鎖は典型的には、重鎖可変領域（ＶＨ）と重鎖定常領域（ＣＨ）を含む。重鎖定常領域は典型的には、ＣＨ１、ＣＨ２及びＣＨ３と略称される３つのドメインを含む。各軽鎖は典型的には、軽鎖可変領域（ＶＬ）と軽鎖定常領域を含む。軽鎖定常領域は典型的には、ＣＬと略称される１つのドメインを含む。
【００６５】
「抗原結合タンパク質」（ＡＢＰ）という用語は、抗原またはエピトープに特異的に結合する１つ以上の抗原結合ドメインを含むタンパク質を指す。いくつかの実施形態では、抗原結合ドメインは、天然の抗体の特異性と親和性と同程度の特異性と親和性で、抗原またはエピトープに結合する。いくつかの実施形態では、ＡＢＰは、抗体を含む。いくつかの実施形態では、ＡＢＰは、抗体からなる。いくつかの実施形態では、ＡＢＰは、抗体から本質的になる。いくつかの実施形態では、ＡＢＰは、代替足場を含む。いくつかの実施形態では、ＡＢＰは、代替足場からなる。いくつかの実施形態では、ＡＢＰは、代替足場から本質的になる。いくつかの実施形態では、ＡＢＰは、抗体断片を含む。いくつかの実施形態では、ＡＢＰは、抗体断片からなる。いくつかの実施形態では、ＡＢＰは、抗体断片から本質的になる。「ＴＩＧＩＴ  ＡＢＰ」、「抗ＴＩＧＩＴ  ＡＢＰ」または「ＴＩＧＩＴ特異的ＡＢＰ」は、本発明で提供するようなＡＢＰであり、抗原のＴＩＧＩＴに特異的に結合するＡＢＰである。いくつかの実施形態では、ＡＢＰは、ＴＩＧＩＴの細胞外ドメインに結合する。特定の実施形態では、本発明で提供するＴＩＧＩＴ  ＡＢＰは、ＴＩＧＩＴのエピトープのうち、異なる種のＴＩＧＩＴタンパク質間で保存されているエピトープに結合する。
【００６６】
「抗体」という用語は、本明細書では、その最も広い意味で用いられており、この用語には、抗原またはエピトープに特異的に結合する１つ以上の抗原結合ドメインを含む特定のタイプの免疫グロブリン分子が含まれる。抗体としては、具体的には、インタクト抗体（例えばインタクト免疫グロブリン）、抗体断片及び多特異性抗体が挙げられる。抗体は、ＡＢＰの１つのタイプである。
【００６７】
「代替足場」という用語は、１つ以上の領域を多様化して、抗原またはエピトープに特異的に結合する１つ以上の抗原結合ドメインを作製できる分子を指す。いくつかの実施形態では、抗原結合ドメインは、抗体の特異性と親和性と同程度の特異性と親和性で、抗原またはエピトープに結合する。例示的な代替足場としては、フィブロネクチン由来の代替足場（例えばＡｄｎｅｃｔｉｎｓ（商標））、β−サンドイッチ（例えばｉＭａｂ）、リポカリン（例えばＡｎｔｉｃａｌｉｎｓ（登録商標）、ＥＥＴＩ−ＩＩ／ＡＧＲＰ、ＢＰＴＩ／ＬＡＣＩ−Ｄ１／ＩＴＩ−Ｄ２（例えばＫｕｎｉｔｚドメイン）、チオレドキシンペプチドアプタマー、プロテインＡ（例えばＡｆｆｉｂｏｄｙ（登録商標））、アンキリンリピート（例えばＤＡＲＰｉｎ）、γ−Ｂ−クリスタリン／ユビキチン（例えばＡｆｆｉｌｉｎ）、ＣＴＬＤ３（例えばテトラネクチン）、Ｆｙｎｏｍｅｒ及び（ＬＤＬＲ−Ａモジュール）（例えばＡｖｉｍｅｒ）が挙げられる。代替足場に関するさらなる情報は、Ｂｉｎｚ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．，２００５  ２３：１２５７−１２６８、Ｓｋｅｒｒａ，Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｏｐｉｎ．ｉｎ  Ｂｉｏｔｅｃｈ．，２００７  １８：２９５−３０４及びＳｉｌａｃｃｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２０１４，２８９：１４３９２−１４３９８に示されており、これらの文献はそれぞれ、参照により、その全体が本明細書に援用される。代替足場は、ＡＢＰの１つのタイプである。
【００６８】
「抗原結合ドメイン」という用語は、ＡＢＰの部分のうち、抗原またはエピトープに特異的に結合できる部分を意味する。抗原結合ドメインの一例は、抗体のＶＨ−ＶＬ二量体によって形成される抗原結合ドメインである。抗原結合ドメインの別の例は、Ａｄｎｅｃｔｉｎの第１０フィブロネクチンタイプＩＩＩドメイン由来の特定ループの多様化によって形成される抗原結合ドメインである。
【００６９】
「完全長抗体」、「インタクト抗体」及び「全抗体」という用語は、本明細書では、天然の抗体の構造と実質的に類似の構造を有するとともに、Ｆｃ領域を含む重鎖を有する抗体を指す目的で同義的に使用されている。例えば、「完全長抗体」は、ＩｇＧ分子を指す目的で使用するときには、２本の重鎖と２本の軽鎖を含む抗体である。
【００７０】
「Ｆｃ領域」という用語は、免疫グロブリン重鎖のＣ末端領域であって、天然の抗体において、Ｆｃレセプターと、補体系の特定のタンパク質と相互作用するＣ末端領域を意味する。様々な免疫グロブリンのＦｃ領域の構造と、その領域に含まれるグルコシル化部位は、当該技術分野において知られている。Ｓｃｈｒｏｅｄｅｒ  ａｎｄ  Ｃａｖａｃｉｎｉ，Ｊ．Ａｌｌｅｒｇｙ  Ｃｌｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，２０１０，１２５：Ｓ４１−５２（参照により、その全体が援用される）を参照されたい。Ｆｃ領域は、天然のＦｃ領域であっても、当該技術分野または本開示内のいずれかで説明されているように改変したＦｃ領域であってもよい。
【００７１】
ＶＨ領域とＶＬ領域は、超可変性の領域（「超可変領域（ＨＶＲ）」、「相補性決定領域」（ＣＤＲ）ともいう）にさらに細分化でき、ＣＤＲは、それよりも保存されている領域に挟まれている。ＣＤＲよりも保存されている領域は、フレームワーク領域（ＦＲ）という。ＶＨとＶＬはそれぞれ、３つのＣＤＲと４つのＦＲを概ね含み、ＣＤＲとＦＲは、（Ｎ末端からＣ末端に向かって）ＦＲ１−ＣＤＲ１−ＦＲ２−ＣＤＲ２−ＦＲ３−ＣＤＲ３−ＦＲ４という順で並んでいる。ＣＤＲは、抗原の結合に関与し、抗体の抗原特異性と結合親和性に影響を及ぼす。Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ  ５ｔｈ  ｅｄ．（１９９１）Ｐｕｂｌｉｃ  Ｈｅａｌｔｈ  Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ（参照により、その全体が援用される）を参照されたい。
【００７２】
いずれの脊椎動物種の軽鎖も、その定常ドメインの配列に基づき、カッパ（κ）及びラムダ（λ）という２つのタイプのうちの１つに割り当てることができる。
【００７３】
いずれの脊椎動物種の重鎖も、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ及びＩｇＭという５種類のクラス（またはアイソタイプ）のうちの１つに割り当てることができる。これらのクラスはそれぞれ、α、δ、ε、γ及びμと称することもある。ＩｇＧクラスとＩｇＡクラスは、配列と機能の違いに基づき、サブクラスにさらに分けられる。ヒトでは、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１及びＩｇＡ２というサブクラスが発現される。
【００７４】
ＣＤＲのアミノ酸配列の境界は、当業者であれば、Ｋａｂａｔらの上記文献（「Ｋａｂａｔ」の番号付け体系）、Ａｌ−Ｌａｚｉｋａｎｉ  ｅｔ  ａｌ．，１９９７，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，２７３：９２７−９４８（「Ｃｈｏｔｈｉａ」の番号付け体系）、ＭａｃＣａｌｌｕｍ  ｅｔ  ａｌ．，１９９６，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２６２：７３２−７４５（「Ｃｏｎｔａｃｔ」の番号付け体系）、Ｌｅｆｒａｎｃ  ｅｔ  ａｌ．，Ｄｅｖ．Ｃｏｍｐ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，２００３，２７：５５−７７（「ＩＭＧＴ」の番号付け体系）及びＨｏｎｅｇｇｅ  ａｎｄ  Ｐｌｕｃｋｔｈｕｎ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，２００１，３０９：６５７−７０（「ＡＨｏ」の番号付け体系）（これらはそれぞれ、参照により、その全体が援用される）によって説明されているものを含め、多くの既知の番号付け体系のいずれかを用いて判断することができる。
【００７５】
表１には、ＫａｂａｔとＣｈｏｔｈｉａの体系によって特定されるような、ＣＤＲ−Ｌ１、ＣＤＲ−Ｌ２、ＣＤＲ−Ｌ３、ＣＤＲ−Ｈ１、ＣＤＲ−Ｈ２及びＣＤＲ−Ｈ３の位置が示されている。ＣＤＲ−Ｈ１に関しては、残基の番号付けは、ＫａｂａｔとＣｈｏｔｈｉａの番号付け体系の両方を用いて行われている。
【００７６】
ＣＤＲは、例えば、抗体番号付け用ソフトウェア（ｗｗｗ．ｂｉｏｉｎｆ．ｏｒｇ．ｕｋ／ａｂｓ／ａｂｎｕｍ／で入手可能であるとともに、Ａｂｈｉｎａｎｄａｎ  ａｎｄ  Ｍａｒｔｉｎ，Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，２００８，４５：３８３２−３８３９（参照により、その全体が援用される）に説明されているＡｂｎｕｍなど）を用いて割り当ててよい。
【００７７】
（表１）ＫａｂａｔとＣｈｏｔｈｉａの番号付け体系による、ＣＤＲの残基
2018533371.tif 000027
＊ＣＤＲ−Ｈ１のＣ末端は、Ｋａｂａｔの番号付けの慣習を用いて番号付けを行うと、ＣＤＲの長さによって、Ｈ３２とＨ３４の間で変動する。
【００７８】
「ＥＵ番号付け体系」は概して、（例えば、Ｋａｂａｔらの上記文献で報告されているように、）抗体の重鎖定常領域の残基について言及する際に使用する。別段の定めのない限り、ＥＵ番号付け体系を用いて、本明細書に記載されている抗体の重鎖定常領域の残基について言及する。
【００７９】
「抗体断片」は、インタクト抗体の部分（インタクト抗体の抗原結合、すなわち可変領域など）を含む。抗体断片としては、例えば、Ｆｖ断片、Ｆａｂ断片、Ｆ（ａｂ’）２断片、Ｆａｂ’断片、ｓｃＦｖ（ｓＦｖ）断片及びｓｃＦｖ−Ｆｃ断片が挙げられる。
【００８０】
「Ｆｖ」断片は、１つの重鎖可変ドメインと１つの軽鎖可変ドメインが非共有結合で連結した二量体を含む。
【００８１】
「Ｆａｂ」断片は、重鎖可変ドメインと軽鎖可変ドメインに加えて、軽鎖の定常ドメインと、重鎖の第１の定常ドメイン（ＣＨ１）を含む。Ｆａｂ断片は、例えば、組み換え方法によって、または完全長抗体のパパイン消化によって作製できる。
【００８２】
「Ｆ（ａｂ’）２」断片は、ヒンジ領域の近くでジスルフィド結合によって連結された２つのＦａｂ’断片を含む。Ｆ（ａｂ’）２断片は、例えば、組み換え方法によって、またはインタクト抗体のペプシン消化によって作製できる。Ｆ（ａｂ’）断片は、例えば、β−メルカプトエタノールによる処理によって解離できる。
【００８３】
「一本鎖Ｆｖ」、「ｓＦｖ」または「ｓｃＦｖ」抗体断片は、１本のポリペプチド鎖に、ＶＨドメインとＶＬドメインを含む。このＶＨとＶＬは概して、ペプチドリンカーによって連結されている。Ｐｌｕｃｋｔｈｕｎ  Ａ．（１９９４）の文献を参照されたい。いずれかの好適なリンカーを用いてよい。いくつかの実施形態では、リンカーは、（ＧＧＧＧＳ）ｎ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２７）である。いくつかの実施形態では、ｎ＝１、２、３、４、５または６である。Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ｆｒｏｍ  Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ．Ｉｎ  Ｒｏｓｅｎｂｅｒｇ  Ｍ．＆  Ｍｏｏｒｅ  Ｇ．Ｐ．（Ｅｄｓ．），Ｔｈｅ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ  ｏｆ  Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ｖｏｌ．１１３（ｐｐ．２６９−３１５）．Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ（参照により、その全体が援用される）を参照されたい。
【００８４】
「ｓｃＦｖ−Ｆｃ」断片は、Ｆｃドメインに結合したｓｃＦｖを含む。例えば、Ｆｃドメインは、ｓｃＦｖのＣ末端に結合されていてよい。このＦｃドメインは、ｓｃＦｖの可変ドメインの配向（すなわち、ＶＨ−ＶＬまたはＶＬ−ＶＨ）に応じて、ＶＨまたはＶＬの後に位置してよい。当該技術分野において知られているか、または本明細書で説明されているいずれかの好適なＦｃドメインを用いてよい。いくつかのケースでは、このＦｃドメインは、ＩｇＧ４  Ｆｃドメインを含む。
【００８５】
「単一ドメイン抗体」という用語は、抗体の一方の可変ドメインが、他方の可変ドメインの存在なしに、抗原に特異的に結合する分子を指す。単一ドメイン抗体とその断片は、Ａｒａｂｉ  Ｇｈａｈｒｏｕｄｉ  ｅｔ  ａｌ．，ＦＥＢＳ  Ｌｅｔｔｅｒｓ，１９９８，４１４：５２１−５２６及びＭｕｙｌｄｅｒｍａｎｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｔｒｅｎｄｓ  ｉｎ  Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｓｃｉ．，２００１，２６：２３０−２４５（これらはそれぞれ、参照により、その全体が援用される）で説明されている。単一ドメイン抗体は、ｓｄＡｂまたはナノボディとしても知られている。
【００８６】
「多特異性ＡＢＰ」は、連動して２つ以上の異なるエピトープに特異的に結合する２つ以上の異なる抗原結合ドメインを含むＡＢＰである。この２つ以上の異なるエピトープは、同じ抗原（例えば、細胞によって発現される単一のＴＩＧＩＴ分子）上のエピトープであっても、異なる抗原（例えば、同じ細胞によって発現される異なるＴＩＧＩＴ分子、またはＴＩＧＩＴ分子とＴＩＧＩＴ以外の分子）上のエピトープであってもよい。いくつかの態様では、多特異性ＡＢＰは、２つの異なるエピトープに結合する（すなわち、「二重特異性ＡＢＰ」）。いくつかの態様では、多特異性ＡＢＰは、３つの異なるエピトープに結合する（すなわち、「三重特異性ＡＢＰ」）。いくつかの態様では、多特異性ＡＢＰは、４つの異なるエピトープに結合する（すなわち、「四重特異性ＡＢＰ」）。いくつかの態様では、多特異性ＡＢＰは、５つの異なるエピトープに結合する（すなわち、「五重特異性ＡＢＰ」）。いくつかの態様では、多特異性ＡＢＰは、６個、７個、８個またはそれを超える数の異なるエピトープに結合する。それぞれの結合特異性は、いずれかの好適な結合価で存在してよい。多特異性ＡＢＰの例は、本開示の別の箇所に示されている。
【００８７】
「単特異性ＡＢＰ」は、単一のエピトープに特異的に結合する１つ以上の結合部位を含むＡＢＰである。単特異性ＡＢＰの例は、二価である（すなわち、２つの抗原結合ドメインを有する）が、その２つの抗原結合ドメインのそれぞれにおいて、同じエピトープを認識する天然のＩｇＧ分子である。結合特異性は、いずれかの好適な結合価で存在してよい。
【００８８】
「モノクローナル抗体」という用語は、実質的に均一な抗体の集団に由来する抗体を指す。実質的に均一な抗体の集団は、モノクローナル抗体の産生中に通常生じる場合のあるバリアントを除き、実質的に同種であるとともに、同じエピトープ（複数可）に結合する抗体を含む。このようなバリアントは概して、微量に存在するに過ぎない。モノクローナル抗体は典型的には、複数の抗体から単一の抗体を選択することを含むプロセスによって得られるものである。例えば、この選択プロセスは、複数のクローン（ハイブリドーマクローン、ファージクローン、酵母クローン、細菌クローンまたはその他の組み換えＤＮＡクローンのプールなど）から固有なクローンを選択することであることができる。選択した抗体をさらに改変して、例えば、標的に対する親和性を向上させたり（「親和性成熟」）、抗体をヒト化したり、細胞培養におけるその抗体の産生を向上させたり、及び／または対象におけるその抗体の免疫原性を低下させたりできる。
【００８９】
「キメラ抗体」という用語は、重鎖及び／または軽鎖の一部が、特定の供給源または種に由来しており、重鎖及び／または軽鎖の残部が、異なる供給源または種に由来している抗体を指す。
【００９０】
ヒト以外の抗体の「ヒト化」形態は、ヒト以外のその抗体に由来する最小配列を含むキメラ抗体である。ヒト化抗体は概して、１つ以上のＣＤＲの残基が、ヒト以外の抗体（ドナー抗体）の１つ以上のＣＤＲの残基に置き換えられているヒト抗体（レシピエント抗体）である。このドナー抗体は、所望の特異性、親和性または生体作用を有するいずれかの好適なヒト以外の抗体（マウス抗体、ラット抗体、ウサギ抗体、ニワトリ抗体またはヒト以外の霊長類動物抗体など）であることができる。いくつかのケースでは、レシピエント抗体の、選択したフレームワーク領域残基は、ドナー抗体に由来する対応するフレームワーク領域残基によって置き換えられている。ヒト化抗体は、レシピエント抗体にも、ドナー抗体にも見られない残基も含んでよい。このような改変を行って、抗体の機能をさらに改良してよい。さらなる詳細については、Ｊｏｎｅｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，１９８６，３２１：５２２−５２５、Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，１９８８，３３２：３２３−３２９及びＰｒｅｓｔａ，Ｃｕｒｒ．Ｏｐ．Ｓｔｒｕｃｔ．Ｂｉｏｌ．，１９９２，２：５９３−５９６（これらはそれぞれ、参照により、その全体が援用される）を参照されたい。
【００９１】
「ヒト抗体」は、ヒトもしくはヒト細胞によって産生される抗体、またはヒト抗体レパートリーもしくはヒト抗体コード配列（例えば、ヒト供給源から得たか、もしくはデノボで設計したもの）を利用するヒト以外の供給源に由来する抗体のアミノ酸配列に対応するアミノ酸配列を有する抗体である。ヒト抗体からは、ヒト化抗体が明確に除外される。
【００９２】
「単離ＡＢＰ」または「単離核酸」は、その天然環境の成分から分離及び／または回収したＡＢＰまたは核酸である。天然環境の成分には、酵素、ホルモン及びその他のタンパク質性または非タンパク質性物質が含まれることがある。いくつかの実施形態では、単離ＡＢＰは、例えばスピニングカップ配列決定装置の使用によって、Ｎ末端または内部アミノ酸配列の少なくとも１５残基を得るのに十分な程度まで精製する。いくつかの実施形態では、単離ＡＢＰは、還元または非還元条件下でゲル電気泳動（例えばＳＤＳ−ＰＡＧＥ）を行って、クマシーブルーまたは銀染色によって検出することによって、均質になるまで精製する。いくつかの実施形態では、単離ＡＢＰは、組み換え細胞内のインサイチュのＡＢＰを含んでよい。ＡＢＰの天然環境の少なくとも１つの成分が存在しないからである。いくつかの態様では、単離ＡＢＰまたは単離核酸は、少なくとも１回の精製工程によって調製する。いくつかの実施形態では、単離ＡＢＰまたは単離核酸は、少なくとも８０重量％、８５重量％、９０重量％、９５重量％または９９重量％まで精製する。いくつかの実施形態では、単離ＡＢＰまたは単離核酸は、少なくとも８０体積％、８５体積％、９０体積％、９５体積％または９９体積％まで精製する。いくつかの実施形態では、単離ＡＢＰまたは単離核酸は、ＡＢＰまたは核酸を少なくとも８５重量％、９０重量％、９５重量％、９８重量％、９９重量％〜１００重量％含む溶液として提供する。いくつかの実施形態では、単離ＡＢＰまたは単離核酸は、ＡＢＰまたは核酸を少なくとも８５体積％、９０体積％、９５体積％、９８体積％、９９体積％〜１００体積％含む溶液として提供する。
【００９３】
「親和性」とは、分子（例えばＡＢＰ）の１つの結合部位と、その結合パートナー（例えば抗原またはエピトープ）との非共有結合性相互作用の合計の強度を指す。別段の定めのない限り、本明細書で使用する場合、「親和性」とは、結合対のメンバー（例えばＡＢＰと抗原またはエピトープ）間の１：１の相互作用を反映する固有の結合親和性を指す。分子Ｘの、そのパートナーＹに対する親和性は、解離平衡定数（ＫＤ）によって表すことができる。解離平衡定数に寄与する動態成分は、下にさらに詳細に説明されている。親和性は、本明細書に記載されている方法（表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）技術（例えばＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標））またはバイオレイヤー干渉法（例えばＦＯＲＴＥＢＩＯ（登録商標））など）を含め、当該技術分野において知られている一般的な方法によって測定できる。
【００９４】
ＡＢＰの標的分子への結合に関しては、特定の抗原（例えばポリペプチド標的）または特定の抗原上のエピトープ「に結合する」、特定の抗原または特定の抗原上のエピトープ「への特異的結合」、特定の抗原または特定の抗原上のエピトープ「に特異的に結合する」、特定の抗原または特定の抗原上のエピトープ「に対して特異的な」、特定の抗原または特定の抗原上のエピトープ「に選択的に結合する」及び特定の抗原または特定の抗原上のエピトープ「に対して選択的な」という用語は、（例えば非標的分子との）非特異的または非選択的な相互作用とは測定可能な程度に異なる結合を意味する。特異的結合は、例えば、標的分子への結合を測定して、標的分子への結合を、非標的分子への結合と比較することによって測定できる。特異的結合は、標的分子上で認識されるエピトープに似ている対照分子との競合によっても割り出すことができる。そのケースでは、ＡＢＰの標的分子への結合が、その対照分子によって競合的に阻害される場合に、特異的結合が示される。いくつかの態様では、非標的分子に対するＴＩＧＩＴ  ＡＢＰの親和性は、ＴＩＧＩＴに対する親和性の約５０％未満である。いくつかの態様では、非標的分子に対するＴＩＧＩＴ  ＡＢＰの親和性は、ＴＩＧＩＴに対する親和性の約４０％未満である。いくつかの態様では、非標的分子に対するＴＩＧＩＴ  ＡＢＰの親和性は、ＴＩＧＩＴに対する親和性の約３０％未満である。いくつかの態様では、非標的分子に対するＴＩＧＩＴ  ＡＢＰの親和性は、ＴＩＧＩＴに対する親和性の約２０％未満である。いくつかの態様では、非標的分子に対するＴＩＧＩＴ  ＡＢＰの親和性は、ＴＩＧＩＴに対する親和性の約１０％未満である。いくつかの態様では、非標的分子に対するＴＩＧＩＴ  ＡＢＰの親和性は、ＴＩＧＩＴに対する親和性の約１％未満である。いくつかの態様では、非標的分子に対するＴＩＧＩＴ  ＡＢＰの親和性は、ＴＩＧＩＴに対する親和性の約０．１％である。
【００９５】
「ｋｄ」（ｓｅｃ−１）という用語は、本明細書で使用する場合、特定のＡＢＰと抗原の相互作用の解離速度定数を指す。この値は、ｋｏｆｆ値ともいう。
【００９６】
「ｋａ」（Ｍ−１×ｓｅｃ−１）という用語は、本明細書で使用する場合、特定のＡＢＰと抗原の相互作用の会合速度定数を指す。この値は、ｋｏｎ値ともいう。
【００９７】
「ＫＤ」（Ｍ）という用語は、本明細書で使用する場合、特定のＡＢＰと抗原の相互作用の解離平衡定数を指す。ＫＤ＝ｋｄ／ｋａである。いくつかの実施形態では、ＡＢＰの親和性は、そのＡＢＰとその抗原との間の相互作用のＫＤに関して記載されている。明確にするために、当該技術分野において知られているように、ＫＤ値が小さいほど、親和性相互作用が大きいことを示し、ＫＤ値が大きいほど、親和性相互作用が小さいことを示す。
【００９８】
「ＫＡ」（Ｍ−１）という用語は、本明細書で使用する場合、特定のＡＢＰと抗原の相互作用の会合平衡定数を指す。ＫＡ＝ｋａ／ｋｄである。
【００９９】
「親和性成熟」ＡＢＰは、親ＡＢＰ（すなわち、改変ＡＢＰの由来元または設計元であるＡＢＰ）に対して、（例えば１つ以上のＣＤＲまたはＦＲに）１つ以上の改変を有するＡＢＰであって、その改変により、そのＡＢＰの、その抗原に対する親和性が、その改変（複数可）を有さない親ＡＢＰと比べて改善しているＡＢＰである。いくつかの実施形態では、親和性成熟ＡＢＰは、標的抗原に対する親和性がナノモルまたはピコモル単位の値である。親和性成熟ＡＢＰは、当該技術分野において知られている様々な方法を用いて作製してよい。例えば、Ｍａｒｋｓらの文献（Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，１９９２，１０：７７９−７８３、参照により、その全体が援用される）には、ＶＨドメインとＶＬドメインのシャッフリングによる親和性成熟が説明されている。ＣＤＲ及び／またはフレームワーク残基のランダム変異誘発は、例えば、Ｂａｒｂａｓ  ｅｔ  ａｌ．（Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．，１９９４，９１：３８０９−３８１３）、Ｓｃｈｉｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｇｅｎｅ，１９９５，１６９：１４７−１５５、Ｙｅｌｔｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１９９５，１５５：１９９４−２００４、Ｊａｃｋｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１９９５，１５４：３３１０−３３１９９及びＨａｗｋｉｎｓ  ｅｔ  ａｌ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，１９９２，２２６：８８９−８９６（それぞれ、参照により、その全体が援用される）によって説明されている。
【０１００】
「免疫コンジュゲート」は、１つ以上の異種分子（複数可）（治療剤または診断剤など）にコンジュゲートしたＡＢＰである。
【０１０１】
「エフェクター機能」とは、抗体のＦｃ領域によって媒介される生物学的活性を指し、この活性は、抗体アイソタイプによって変化し得る。抗体エフェクター機能の例としては、補体依存性細胞障害（ＣＤＣ）を活性化するＣ１ｑ結合、抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）を活性化するＦｃレセプター結合、及び抗体依存性細胞食作用（ＡＤＣＰ）が挙げられる。
【０１０２】
２つ以上のＡＢＰに関して本明細書で使用するときには、「〜と競合する」または「〜と交差競合する」という用語は、その２つ以上のＡＢＰが、抗原（例えばＴＩＧＩＴ）への結合について競合することを示す。１つの例示的なアッセイでは、ＴＩＧＩＴを表面上にコーティングし、第１のＴＩＧＩＴ  ＡＢＰと接触させた後に、第２のＴＩＧＩＴ  ＡＢＰを加える。別の例示的なアッセイでは、第１のＴＩＧＩＴ  ＡＢＰを表面にコーティングして、ＴＩＧＩＴと接触させてから、第２のＴＩＧＩＴ  ＡＢＰを加える。いずれのアッセイでも、第１のＴＩＧＩＴ  ＡＢＰの存在により、第２のＴＩＧＩＴ  ＡＢＰの結合が低下した場合には、これらのＡＢＰは、互いに競合する。「〜と競合する」という用語には、ＡＢＰの組み合わせのうち、一方のＡＢＰが、もう一方のＡＢＰの結合を低下させるが、逆の順番でＡＢＰを加えると、競合が観察されないものも含まれる。しかしながら、いくつかの実施形態では、第１のＡＢＰと第２のＡＢＰは、加える順番に関わらず、互いの結合を阻害する。いくつかの実施形態では、一方のＡＢＰは、もう一方のＡＢＰのその抗原に対する結合を少なくとも２５％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％または少なくとも９５％低下させる。当業者は、ＴＩＧＩＴに対するＡＢＰの親和性と、ＡＢＰの結合価に基づき、競合アッセイで用いる抗体の濃度を選択できる。この定義で説明されているアッセイは例示的なものであり、当業者は、いずれかの好適なアッセイを用いて、抗体が互いに競合するかを判断できる。好適なアッセイは、例えば、Ｃｏｘ  ｅｔ  ａｌ．，“Ｉｍｍｕｎｏａｓｓａｙ  Ｍｅｔｈｏｄｓ，”ｉｎ  Ａｓｓａｙ  Ｇｕｉｄａｎｃｅ  Ｍａｎｕａｌ［インターネット］、２０１４年１２月２４日アップデート（ｗｗｗ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／ｂｏｏｋｓ／ＮＢＫ９２４３４／、２０１５年９月２９日にアクセス）、Ｓｉｌｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｙｔｏｍｅｔｒｙ，２００１，４４：３０−３７及びＦｉｎｃｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｂｉｏｍｅｄ．Ａｎａｌ．，２０１１，５４：３５１−３５８（それぞれ、参照により、その全体が援用される）で説明されている。
【０１０３】
「エピトープ」という用語は、抗原の部分のうち、ＡＢＰに特異的に結合する部分を意味する。エピトープは、表面に接触可能なアミノ酸残基及び／または糖側鎖からなる場合が多く、特有の３次元構造特性と、特有の電荷特性を有することがある。変性溶媒の存在下で、立体構造エピトープへの結合は喪失し得るが、非立体構造エピトープへの結合は喪失しないという点で、立体構造エピトープと非立体構造エピトープを区別する。エピトープは、結合に直接関与するアミノ酸残基と、結合に直接的には関与しないその他のアミノ酸残基を含んでよい。ＡＢＰが結合するエピトープは、エピトープを割り出すための既知の技法（例えば、異なる点変異を有するＴＩＧＩＴバリアントまたはキメラＴＩＧＩＴバリアントへのＡＢＰの結合の試験など）を用いて割り出すことができる。
【０１０４】
ポリペプチド配列と基準配列との「同一」率は、ポリペプチド配列と基準配列をアラインメントし、必要に応じてギャップを導入して、配列同一率が最大になるようにした後、ポリペプチド配列のアミノ酸残基のうち、基準配列のアミノ酸残基と同一であるアミノ酸残基のパーセンテージとして定義する。アミノ酸配列同一率を割り出すためのアラインメントは、当該技術分野の技術の範囲内である様々な方法で、例えば、公的に入手可能なコンピューターソフトウェア（ＢＬＡＳＴ、ＢＬＡＳＴ−２、ＡＬＩＧＮ、ＭＥＧＡＬＩＧＮ（ＤＮＡＳＴＡＲ）、ＣＬＵＳＴＡＬＷ、ＣＬＵＳＴＡＬ  ＯＭＥＧＡまたはＭＵＳＣＬＥというソフトウェアなど）を用いて行うことができる。当業者であれば、比較する配列の全長にわたる最大整列を達成するのに必要ないずれかのアルゴリズムを含め、配列の整列に適切なパラメーターを決定することができる。
【０１０５】
「保存的置換」または「保存的アミノ酸置換」とは、アミノ酸を化学的または機能的に類似のアミノ酸と置換することを指す。類似のアミノ酸を示している保存的置換表は、当該技術分野において周知である。例として、表２〜４に示されているアミノ酸群は、いくつかの実施形態では、互いに対する保存的置換とみなす。
【０１０６】
（表２）特定の実施形態において、互いに対する保存的置換とみなされる所定のアミノ酸群
2018533371.tif 000028
【０１０７】
（表３）特定の実施形態において、互いに対する保存的置換とみなされる追加の所定のアミノ酸群
2018533371.tif 000029
【０１０８】
（表４）特定の実施形態において、互いに対する保存的置換とみなされるさらなる所定のアミノ酸群
2018533371.tif 000030
【０１０９】
さらなる保存的置換は、例えば、Ｃｒｅｉｇｈｔｏｎ，Ｐｒｏｔｅｉｎｓ：Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅｓ  ａｎｄ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ  ２ｎｄ  ｅｄ．（１９９３）Ｗ．Ｈ．Ｆｒｅｅｍａｎ  ＆  Ｃｏ．，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，ＮＹで見ることができる。親ＡＢＰのアミノ酸残基の１つ以上の保存的置換を行うことによって作製したＡＢＰは、「保存的改変バリアント」という。
【０１１０】
「アミノ酸」という用語は、２０個の一般的な天然アミノ酸を指す。天然アミノ酸としては、アラニン（Ａｌａ、Ａ）、アルギニン（Ａｒｇ、Ｒ）、アスパラギン（Ａｓｎ、Ｎ）、アスパラギン酸（Ａｓｐ、Ｄ）、システイン（Ｃｙｓ、Ｃ）、グルタミン酸（Ｇｌｕ、Ｅ）、グルタミン（Ｇｌｎ、Ｑ）、グリシン（Ｇｌｙ、Ｇ）、ヒスチジン（Ｈｉｓ、Ｈ）、イソロイシン（Ｉｌｅ、Ｉ）、ロイシン（Ｌｅｕ、Ｌ）、リシン（Ｌｙｓ、Ｋ）、メチオニン（Ｍｅｔ、Ｍ）、フェニルアラニン（Ｐｈｅ、Ｆ）、プロリン（Ｐｒｏ、Ｐ）、セリン（Ｓｅｒ、Ｓ）、トレオニン（Ｔｈｒ、Ｔ）、トリプトファン（Ｔｒｐ、Ｗ）、チロシン（Ｔｙｒ、Ｙ）及びバリン（Ｖａｌ、Ｖ）が挙げられる。
【０１１１】
「ベクター」という用語は、本明細書で使用する場合、そのベクターと連結している別の核酸を運搬できる核酸分子を指す。この用語には、自己複製核酸構造体としてのベクターと、そのベクターが導入された宿主細胞のゲノムに組み込まれたベクターが含まれる。特定のベクターは、そのベクターと機能的に連結されている核酸の発現を誘導できる。このようなベクターは、本明細書では、「発現ベクター」という。
【０１１２】
「宿主細胞」、「宿主細胞株」及び「宿主細胞培養物」という用語は、同義的に使用されており、外因性の核酸が導入されている細胞と、そのような細胞の子孫を指す。宿主細胞には、「形質転換体」（または「形質転換細胞」）と「トランスフェクタント」（または「トランスフェクション細胞」）が含まれ、これらにはそれぞれ、初代形質転換細胞または初代トランスフェクション細胞と、それらに由来する子孫が含まれる。このような子孫は、親細胞と核酸含有量が完全には同一ではない場合があるとともに、変異を含むことがある。
【０１１３】
「治療すること」（及びその変形表現（「治療する」または「治療」など））という用語は、治療を必要とする対象の疾患または状態の自然経過を改変しようとする臨床的介入を指す。治療は、予防目的でも、臨床病態の経過中でも行うことができる。望ましい治療効果としては、疾患の発生または再発の予防、症状の緩和、疾患のいずれかの直接または間接的な病理学的帰結の軽減、転移の予防、疾患の進行速度の低下、病態の改善または緩和及び寛解または予後の改善が挙げられる。
【０１１４】
本明細書で使用する場合、「治療有効量」または「有効量」という用語は、本発明で提供するＡＢＰまたは医薬組成物の量であって、対象に投与したときに、疾患または障害を治療するのに有効な量を指す。
【０１１５】
本明細書で使用する場合、「対象」という用語は、哺乳動物の対象を意味する。例示的な対象としては、ヒト、サル、イヌ、ネコ、マウス、ラット、ウシ、ウマ、ラクダ、ヤギ、ウサギ及びヒツジが挙げられる。特定の実施形態では、対象はヒトである。いくつかの実施形態では、対象は、本発明で提供するＡＢＰで治療できる疾患または状態を罹患している。いくつかの態様では、この疾患または状態は、がんである。いくつかの態様では、この疾患または状態は、ウイルス感染症である。
【０１１６】
「添付文書」という用語は、治療用製品または診断用製品（例えばキット）の商用包装物に入れるのが通例である説明書であって、適応、用法、用量、投与、併用療法、禁忌及び／またはその治療用製品または診断用製品の使用に関する警告に関する情報を含む説明書を指す目的で使用する。
【０１１７】
「細胞傷害剤」という用語は、本明細書で使用する場合、細胞の機能を阻害もしくは阻止し、及び／または細胞を死滅もしくは破壊させる物質を指す。
【０１１８】
「化学療法剤」とは、がんの治療において有用な化学化合物を指す。化学療法剤としては、がんの成長を促し得るホルモンの作用を調節、低減、ブロックまたは阻害するように作用する「抗ホルモン剤」または「内分泌療法剤」が挙げられる。
【０１１９】
「細胞増殖抑制剤」という用語は、インビトロまたはインビボのいずれかにおける細胞の成長を阻止する化合物または組成物を指す。いくつかの実施形態では、細胞増殖抑制剤は、Ｓ期の細胞のパーセンテージを低下させる作用物質である。いくつかの実施形態では、細胞増殖抑制剤は、Ｓ期の細胞のパーセンテージを少なくとも約２０％、少なくとも約４０％、少なくとも約６０％または少なくとも約８０％低下させる。
【０１２０】
「腫瘍」という用語は、悪性か良性かに関わらず、あらゆる腫瘍性細胞の成長と増殖、ならびにあらゆる前がん細胞、前がん組織、がん細胞及びがん組織を指す。「がん」、「がん性」、「細胞増殖性障害」、「増殖性障害」及び「腫瘍」という用語は、本明細書で言及する場合、互いに排他的ではない。「細胞増殖性障害」及び「増殖性障害」という用語は、ある程度の異常な細胞増殖に関連付けられる障害を指す。いくつかの実施形態では、細胞増殖性障害は、がんである。いくつかの態様では、腫瘍は、固形腫瘍である。いくつかの態様では、腫瘍は、血液の悪性腫瘍である。
【０１２１】
「医薬組成物」という用語は、医薬組成物の形態において、その組成物に含まれる活性成分の生物学的活性が、対象の治療に有効となるようにするとともに、医薬組成物に供給される量において、対象に対して許容不能な毒性を示す追加の成分を含まない調製物を指す。
【０１２２】
「調節する」及び「調節」という用語は、示されている変数を低下もしくは阻害することか、または活性化もしくは向上させることを指す。
【０１２３】
「向上させる」及び「活性化する」という用語は、示されている変数を１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、１００％、２倍、３倍、４倍、５倍、１０倍、２０倍、５０倍、１００倍またはそれを超える程度向上させることを指す。
【０１２４】
「低下させる」及び「阻害する」という用語は、示されている変数を１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、２倍、３倍、４倍、５倍、１０倍、２０倍、５０倍、１００倍またはそれを超える程度低下させることを指す。
【０１２５】
「アゴナイズする」という用語は、レセプターのシグナル伝達を活性化して、そのレセプターの活性化と関連する生物学的応答を誘導することを指す。「アゴニスト」は、レセプターに結合して、そのレセプターをアゴナイズする物質である。
【０１２６】
「アンタゴナイズする」という用語は、レセプターのシグナル伝達を阻害して、そのレセプターの活性化と関連する生物学的応答を阻害することを指す。「アンタゴニスト」は、レセプターに結合してそのレセプターをアンタゴナイズする物質である。
【０１２７】
「エフェクターＴ細胞」という用語には、Ｔヘルパー（すなわちＣＤ４＋）細胞と、細胞傷害性（すなわちＣＤ８＋）Ｔ細胞が含まれる。ＣＤ４＋エフェクターＴ細胞は、いくつかの免疫プロセス（Ｂ細胞の形質細胞及びメモリーＢ細胞への成熟、ならびに細胞傷害性Ｔ細胞及びマクロファージの活性化を含む）の発達に寄与する。ＣＤ８＋エフェクターＴ細胞は、ウイルス感染細胞と腫瘍細胞を破壊する。エフェクターＴ細胞に関するさらなる情報については、Ｓｅｄｅｒ  ａｎｄ  Ａｈｍｅｄ，Ｎａｔｕｒｅ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．，２００３，４：８３５−８４２（参照により、その全体が援用される）を参照されたい。
【０１２８】
「制御性Ｔ細胞」という用語には、例えば、エフェクターＴ細胞を抑制することによって、免疫寛容を調節する細胞が含まれる。いくつかの態様では、制御性Ｔ細胞は、ＣＤ４＋ＣＤ２５＋Ｆｏｘｐ３＋の表現型を有する。いくつかの態様では、制御性Ｔ細胞は、ＣＤ８＋ＣＤ２５＋の表現型を有する。ＴＩＧＩＴを発現する制御性Ｔ細胞のさらなる情報については、Ｎｏｃｅｎｔｉｎｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｒ．Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．，２０１２，１６５：２０８９−２０９９（参照により、その全体が援用される）を参照されたい。
【０１２９】
「樹状細胞」という用語は、ナイーブＴ細胞を活性化するとともに、Ｂ細胞の成長と分化を刺激することができるプロフェッショナルな抗原提示細胞を指す。
【０１３０】
２．ＴＩＧＩＴ抗原結合タンパク質
２．１．ＴＩＧＩＴの結合と標的細胞
本発明で提供するのは、ＴＩＧＩＴに特異的に結合するＡＢＰである。いくつかの態様では、ＴＩＧＩＴは、ｈＴＩＧＩＴ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１）である。いくつかの態様では、ＴＩＧＩＴは、ｃＴＩＧＩＴ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２）である。いくつかの態様では、ＴＩＧＩＴは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３に示されている配列を有するｍＴＩＧＩＴである。いくつかの態様では、ＴＩＧＩＴは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１３８に示されている配列を有するｍＴＩＧＩＴである。
【０１３１】
いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰは、ｈＴＩＧＩＴ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１）と、ｃＴＩＧＩＴ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２）と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３のｍＴＩＧＩＴに特異的に結合する。いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰは、ｈＴＩＧＩＴ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１）と、ｃＴＩＧＩＴ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２）と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１３８のｍＴＩＧＩＴに特異的に結合する。いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰは、ｈＴＩＧＩＴ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１）と、ｃＴＩＧＩＴ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２）に特異的に結合する。いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰは、ｈＴＩＧＩＴ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１）に特異的に結合する。いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３のｍＴＩＧＩＴには結合しない。いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１３８のｍＴＩＧＩＴには結合しない。
【０１３２】
いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰは、ＴＩＧＩＴの細胞外ドメインに特異的に結合する。
【０１３３】
いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰは、抗体である。いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰは、抗体断片である。いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰは、代替足場である。
【０１３４】
ＴＩＧＩＴは、いずれかの好適な標的細胞の表面上に発現し得る。いくつかの実施形態では、標的細胞は、Ｔ細胞である。いくつかの実施形態では、標的細胞は、エフェクターＴ細胞である。いくつかの実施形態では、標的細胞は、制御性Ｔ細胞である。いくつかの実施形態では、標的細胞は、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞である。いくつかの実施形態では、標的細胞は、ナチュラルキラーＴ（ＮＫＴ）細胞である。
【０１３５】
いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰは、免疫グロブリン分子を含む。いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰは、免疫グロブリン分子からなる。いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰは、免疫グロブリン分子から本質的になる。いくつかの態様では、この免疫グロブリン分子は、抗体を含む。いくつかの態様では、上記の免疫グロブリン分子は、抗体からなる。いくつかの態様では、上記の免疫グロブリン分子は、抗体から本質的になる。
【０１３６】
いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰは、軽鎖を含む。いくつかの態様では、この軽鎖は、κ軽鎖である。いくつかの態様では、軽鎖は、λ軽鎖である。
【０１３７】
いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２６を含むκ軽鎖を含む。
【０１３８】
いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰは、重鎖を含む。いくつかの態様では、この重鎖は、ＩｇＡである。いくつかの態様では、この重鎖は、ＩｇＤである。いくつかの態様では、この重鎖は、ＩｇＥである。いくつかの態様では、この重鎖は、ＩｇＧである。いくつかの態様では、この重鎖は、ＩｇＭである。いくつかの態様では、この重鎖は、ＩｇＧ１である。いくつかの態様では、この重鎖は、ＩｇＧ２である。いくつかの態様では、この重鎖は、ＩｇＧ３である。いくつかの態様では、この重鎖は、ＩｇＧ４である。いくつかの態様では、この重鎖は、ＩｇＡ１である。いくつかの態様では、この重鎖は、ＩｇＡ２である。
【０１３９】
いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５５とＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５６から選択される配列を含むＩｇＧ４重鎖を含む。いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５７とＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２５から選択される配列を含むＩｇＧ１重鎖を含む。
【０１４０】
いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰは、抗体断片を含む。いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰは、抗体断片からなる。いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰは、抗体断片から本質的になる。いくつかの態様では、この抗体断片は、Ｆｖ断片である。いくつかの態様では、この抗体断片は、Ｆａｂ断片である。いくつかの態様では、この抗体断片は、Ｆ（ａｂ’）２断片である。いくつかの態様では、この抗体断片は、Ｆａｂ’断片である。いくつかの態様では、この抗体断片は、ｓｃＦｖ（ｓＦｖ）断片である。いくつかの態様では、この抗体断片は、ｓｃＦｖ−Ｆｃ断片である。いくつかの態様では、この抗体断片は、単一ドメイン抗体の断片である。
【０１４１】
いくつかの実施形態では、本発明で提供する抗体断片は、本明細書に示されている例示的な抗体に由来するものである。いくつかの実施形態では、本発明で提供する抗体断片は、本明細書に示されている例示的な抗体に由来しないものであり、例えば、本発明で提供する方法のうち、抗体断片を得るための方法に従って、デノボで単離してよい。
【０１４２】
いくつかの実施形態では、提供する抗体断片は、ｈＴＩＧＩＴに特異的に結合する。いくつかの実施形態では、本発明で提供する抗体断片は、ｃＴＩＧＩＴに特異的に結合する。いくつかの実施形態では、本発明で提供する抗体断片は、ｍＴＩＧＩＴに特異的に結合する。いくつかの実施形態では、本発明で提供する抗体断片は、ｈＴＩＧＩＴとｃＴＩＧＩＴに特異的に結合する。いくつかの実施形態では、本発明で提供する抗体断片は、ｈＴＩＧＩＴとｍＴＩＧＩＴに特異的に結合する。いくつかの実施形態では、本発明で提供する抗体断片は、ｃＴＩＧＩＴとｍＴＩＧＩＴに特異的に結合する。いくつかの実施形態では、本発明で提供する抗体断片は、ｈＴＩＧＩＴと、ｃＴＩＧＩＴと、ｍＴＩＧＩＴに特異的に結合する。
【０１４３】
いくつかの実施形態では、本発明で提供する抗体に由来する抗体断片は、ｈＴＩＧＩＴに対する親和性（ＫＤによって測定）であって、上記の抗体の親和性の約１．５倍、約２倍、約３倍、約４倍、約５倍、約６倍、約７倍、約８倍、約９倍または約１０倍以内である親和性を保持する。いくつかの実施形態では、本発明で提供する抗体に由来する抗体断片は、ｃＴＩＧＩＴに対する親和性（ＫＤによって測定）であって、上記の抗体の親和性の約１．５倍、約２倍、約３倍、約４倍、約５倍、約６倍、約７倍、約８倍、約９倍または約１０倍以内である親和性を保持する。いくつかの実施形態では、本発明で提供する抗体に由来する抗体断片は、ｍＴＩＧＩＴに対する親和性（ＫＤによって測定）であって、上記の抗体の親和性の約１．５倍、約２倍、約３倍、約４倍、約５倍、約６倍、約７倍、約８倍、約９倍または約１０倍以内である親和性を保持する。いくつかの実施形態では、本発明で提供する抗体に由来する抗体断片は、ｈＴＩＧＩＴとｃＴＩＧＩＴの両方に対する親和性（ＫＤによって測定）であって、上記の抗体の親和性の約１．５倍、約２倍、約３倍、約４倍、約５倍、約６倍、約７倍、約８倍、約９倍または約１０倍以内である親和性を保持する。いくつかの実施形態では、本発明で提供する抗体に由来する抗体断片は、ｈＴＩＧＩＴとｍＴＩＧＩＴの両方に対する親和性（ＫＤによって測定）であって、上記の抗体の親和性の約１．５倍、約２倍、約３倍、約４倍、約５倍、約６倍、約７倍、約８倍、約９倍または約１０倍以内である親和性を保持する。いくつかの実施形態では、本発明で提供する抗体に由来する抗体断片は、ｃＴＩＧＩＴとｍＴＩＧＩＴの両方に対する親和性（ＫＤによって測定）であって、上記の抗体の親和性の約１．５倍、約２倍、約３倍、約４倍、約５倍、約６倍、約７倍、約８倍、約９倍または約１０倍以内である親和性を保持する。いくつかの実施形態では、本発明で提供する抗体に由来する抗体断片は、ｈＴＩＧＩＴ、ｃＴＩＧＩＴ及びｍＴＩＧＩＴの３つのすべてに対する親和性（ＫＤによって測定）であって、上記の抗体の親和性の約１．５倍、約２倍、約３倍、約４倍、約５倍、約６倍、約７倍、約８倍、約９倍または約１０倍以内である親和性を保持する。
【０１４４】
いくつかの実施形態では、本発明で提供する抗体断片は、本明細書で説明されている１つ以上のアッセイまたは生体作用によって測定した場合に、ＴＩＧＩＴをアンタゴナイズする能力を保持する。いくつかの実施形態では、本発明で提供する抗体断片は、ＴＩＧＩＴが、本明細書に記載されているようなそのリガンドの１つ以上と相互作用するのを予防する能力を保持する。
【０１４５】
いくつかの実施形態では、本発明で提供する抗体断片は、ＴＩＧＩＴへの結合について、ＭＡＢ１、ＭＡＢ２、ＭＡＢ３、ＭＡＢ４、ＭＡＢ５、ＭＡＢ６、ＭＡＢ７、ＭＡＢ８、ＭＡＢ９、ＭＡＢ１０、ＭＡＢ１１、ＭＡＢ１２、ＭＡＢ１３、ＭＡＢ１４、ＭＡＢ１５、ＭＡＢ１６、ＭＡＢ１７、ＭＡＢ１８、ＭＡＢ１９、ＭＡＢ２０またはＭＡＢ２１（それぞれ、本開示の表５に示されているようなもの）から選択される抗体と競合する。
【０１４６】
いくつかの実施形態では、本発明で提供する抗体断片は、ＴＩＧＩＴへのＣＤ１５５の結合を阻害する。いくつかの実施形態では、本発明で提供する抗体断片は、ＴＩＧＩＴへのＣＤ１１２の結合を阻害する。いくつかの実施形態では、本発明で提供する抗体断片は、ＣＤ２２６のＴＩＧＩＴとの連係を阻害する。
【０１４７】
いくつかの実施形態では、本発明で提供する抗体断片は、エフェクターＴ細胞またはナチュラルキラー（ＮＫ）細胞を活性化する。いくつかの実施形態では、本発明で提供する抗体断片は、組織中または循環血液中の制御性Ｔ細胞の数を減少させる。いくつかの実施形態では、本発明で提供する抗体断片は、制御性Ｔ細胞によるエフェクターＴ細胞の抑制を阻害する。
【０１４８】
いくつかの実施形態では、本発明で提供する抗体断片は、ＰＶＲＬ１、ＰＶＲＬ２、ＰＶＲＬ３またはＰＶＲＬ４のいずれにも特異的に結合しない。
【０１４９】
いくつかの実施形態では、本発明で提供する抗体断片は、マウスＴＩＧＩＴ（ｍＴＩＧＩＴ、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３）に、その抗体断片の、ｈＴＩＧＩＴに対する親和性よりも低い親和性（より高いＫＤによって示される）で結合するか、またはｍＴＩＧＩＴに結合しない。
【０１５０】
いくつかの実施形態では、本発明で提供する抗体の断片は、その抗体と同じＴＩＧＩＴエピトープに結合する。
【０１５１】
いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰは、モノクローナル抗体である。いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰは、ポリクローナル抗体である。
【０１５２】
いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰは、キメラ抗体を含む。いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰは、キメラ抗体からなる。いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰは、キメラ抗体から本質的になる。いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰは、ヒト化抗体を含む。いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰは、ヒト化抗体からなる。いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰは、ヒト化抗体から本質的になる。いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰは、ヒト抗体を含む。いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰは、ヒト抗体からなる。いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰは、ヒト抗体から本質的になる。
【０１５３】
いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰは、親和性成熟されている。いくつかの態様では、親和性成熟ＡＢＰは、本明細書に示されている例示的なＡＢＰに由来する親和性成熟ＡＢＰである。
【０１５４】
いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰは、代替足場を含む。いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰは、代替足場からなる。いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰは、代替足場から本質的になる。いずれかの好適な代替足場を用いてよい。いくつかの態様では、代替足場は、Ａｄｎｅｃｔｉｎ（商標）、ｉＭＡＢ、Ａｎｔｉｃａｌｉｎ（登録商標）、ＥＥＴＩ−ＩＩ／ＡＧＲＰ、Ｋｕｎｉｔｚドメイン、チオレドキシンペプチドアプタマー、Ａｆｆｉｂｏｄｙ（登録商標）、ＤＡＲＰｉｎ、Ａｆｆｉｌｉｎ、テトラネクチン、Ｆｙｎｏｍｅｒ及びＡｖｉｍｅｒから選択される。
【０１５５】
いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰは、ＴＩＧＩＴの１つ以上のリガンドへのＴＩＧＩＴの結合を阻害する。いくつかの態様では、ＴＩＧＩＴのこのリガンドは、ポリオウイルスレセプター（ＰＶＲ、ＣＤ１５５）及びネクチン−２（ＣＤ１１２、ＰＶＲＬ２）のうちの１つ以上から選択される。いくつかの態様では、本発明のＡＢＰは、ＴＩＧＩＴの１つ以上のリガンドへのＴＩＧＩＴの結合を少なくとも約５０％阻害する。いくつかの態様では、本発明のＡＢＰは、ＴＩＧＩＴの１つ以上のリガンドへのＴＩＧＩＴの結合を少なくとも約７５％阻害する。いくつかの態様では、本発明のＡＢＰは、ＴＩＧＩＴの１つ以上のリガンドへのＴＩＧＩＴの結合を少なくとも約９０％阻害する。いくつかの態様では、本発明のＡＢＰは、ＴＩＧＩＴの１つ以上のリガンドへのＴＩＧＩＴの結合を少なくとも約９５％阻害する。
【０１５６】
いくつかの実施形態では、本発明のＡＢＰは、本明細書に示されている例示的なＡＢＰと競合するＡＢＰである。いくつかの態様では、本明細書に示されている例示的なＡＢＰと競合するＡＢＰは、本発明で提供する例示的なＡＢＰと同じエピトープに結合する。
【０１５７】
いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰは、ＰＶＲＬ４には結合しない。
【０１５８】
抗体が細胞内で発現すると、抗体は、翻訳後に修飾されることが知られている。翻訳後修飾の例としては、重鎖のＣ末端におけるリシンのカルボキシペプチダーゼによる切断、重鎖と軽鎖のＮ末端におけるグルタミンまたはグルタミン酸のピログルタミル化によるピログルタミン酸への修飾、グルコシル化、酸化、脱アミド化及び糖化が挙げられ、このような翻訳後修飾は、様々な抗体で行われることが知られている（Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，２００８，Ｖｏｌ．９７，ｐ．２４２６−２４４７（参照により、その全体が援用される）を参照されたい）。いくつかの実施形態では、本発明のＡＢＰは、翻訳後修飾が行われた抗体またはその抗原結合断片である。翻訳後修飾が行われた抗体またはその抗原結合断片の例としては、重鎖可変領域のＮ末端におけるピログルタミル化及び／または重鎖のＣ末端におけるリシンの欠失が行われた抗体またはその抗原結合断片が挙げられる。Ｎ末端におけるピログルタミル化と、Ｃ末端におけるリシンの欠失による、このような翻訳後修飾は、抗体またはその断片の活性にいずれの影響も及ぼさないことが当該技術分野において知られている（Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，２００６，Ｖｏｌ．３４８，ｐ．２４−３９（参照により、その全体が援用される））。
【０１５９】
２．２．ＴＩＧＩＴ抗原結合タンパク質の配列
２．２．１．ＶＨドメイン
いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４〜２４から選択されるＶＨ配列を含む。いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４のＶＨ配列を含む。いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５のＶＨ配列を含む。いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６のＶＨ配列を含む。いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７のＶＨ配列を含む。いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８のＶＨ配列を含む。いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９のＶＨ配列を含む。いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０のＶＨ配列を含む。いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１のＶＨ配列を含む。いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２のＶＨ配列を含む。いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１３のＶＨ配列を含む。いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１４のＶＨ配列を含む。いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５のＶＨ配列を含む。いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６のＶＨ配列を含む。いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１７のＶＨ配列を含む。いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１８のＶＨ配列を含む。いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１９のＶＨ配列を含む。いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２０のＶＨ配列を含む。いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２１のＶＨ配列を含む。いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２２のＶＨ配列を含む。いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２３のＶＨ配列を含む。いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２４のＶＨ配列を含む。
【０１６０】
いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４〜２４に示されている例示的なＶＨ配列に対する同一性が少なくとも約５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％または９９％であるＶＨ配列を含む。いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４〜２４に示されているＶＨ配列に、最大で１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１１個、１２個、１３個、１４個、１５個、１６個、１７個、１８個、１９個、２０個、２１個、２２個、２３個、２４個または２５個のアミノ酸置換がある配列を含む。いくつかの態様では、これらのアミノ酸置換は、保存的アミノ酸置換である。いくつかの実施形態では、この段落に記載されているＡＢＰは、本明細書では、「バリアント」という。いくつかの実施形態では、このようなバリアントは、例えば、親和性成熟、部位特異的変異誘発、ランダム変異誘発、または当該技術分野において知られているかもしくは本明細書に記載されているいずれかの他の方法によって、本明細書に示されている配列から得られるものである。いくつかの実施形態では、このようなバリアントは、本明細書に示されている配列には由来しないものであり、例えば、本発明で提供する方法のうち、ＡＢＰを得るための方法に従って、デノボで単離してよい。
【０１６１】
２．２．２．ＶＬドメイン
いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２５〜２８から選択されるＶＬ配列を含む。いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２５のＶＬ配列を含む。いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２６のＶＬ配列を含む。いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２７のＶＬ配列を含む。いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２８のＶＬ配列を含む。
【０１６２】
いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２５〜２８に示されている例示的なＶＬ配列に対する同一性が少なくとも約５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％または９９％であるＶＬ配列を含む。いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２５〜２８に示されているＶＬ配列に、最大で１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１１個、１２個、１３個、１４個、１５個、１６個、１７個、１８個、１９個、２０個、２１個、２２個、２３個、２４個または２５個のアミノ酸置換がある配列を含む。いくつかの態様では、これらのアミノ酸置換は、保存的アミノ酸置換である。いくつかの実施形態では、この段落に記載されているＡＢＰは、本明細書では、「バリアント」という。いくつかの実施形態では、このようなバリアントは、例えば、親和性成熟、部位特異的変異誘発、ランダム変異誘発、または当該技術分野において知られているかもしくは本明細書に記載されているいずれかの他の方法によって、本明細書に示されている配列から得られるものである。いくつかの実施形態では、このようなバリアントは、本明細書に示されている配列には由来しないものであり、例えば、本発明で提供する方法のうち、ＡＢＰを得るための方法に従って、デノボで単離してよい。
【０１６３】
２．２．３．ＶＨとＶＬの組み合わせ
いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４〜２４から選択されるＶＨ配列と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２５〜２８から選択されるＶＬ配列を含む。
【０１６４】
いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４のＶＨ配列と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２５のＶＬ配列を含む。いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５のＶＨ配列と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２５のＶＬ配列を含む。いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６のＶＨ配列と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２５のＶＬ配列を含む。いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７のＶＨ配列と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２５のＶＬ配列を含む。いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８のＶＨ配列と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２５のＶＬ配列を含む。いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９のＶＨ配列と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２６のＶＬ配列を含む。いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０のＶＨ配列と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２６のＶＬ配列を含む。いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１のＶＨ配列と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２６のＶＬ配列を含む。いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２のＶＨ配列と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２６のＶＬ配列を含む。いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１３のＶＨ配列と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２６のＶＬ配列を含む。いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１４のＶＨ配列と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２６のＶＬ配列を含む。いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５のＶＨ配列と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２６のＶＬ配列を含む。いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６のＶＨ配列と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２７のＶＬ配列を含む。いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１７のＶＨ配列と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２７のＶＬ配列を含む。いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１８のＶＨ配列と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２７のＶＬ配列を含む。いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１９のＶＨ配列と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２７のＶＬ配列を含む。いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２０のＶＨ配列と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２７のＶＬ配列を含む。いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２１のＶＨ配列と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２７のＶＬ配列を含む。いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２２のＶＨ配列と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２８のＶＬ配列を含む。いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２３のＶＨ配列と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２８のＶＬ配列を含む。いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２４のＶＨ配列と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２８のＶＬ配列を含む。
【０１６５】
いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４のＶＨ配列と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２６のＶＬ配列を含む。いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４のＶＨ配列と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２７のＶＬ配列を含む。いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４のＶＨ配列と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２８のＶＬ配列を含む。
【０１６６】
いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５のＶＨ配列と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２６のＶＬ配列を含む。いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５のＶＨ配列と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２７のＶＬ配列を含む。いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５のＶＨ配列と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２８のＶＬ配列を含む。
【０１６７】
いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６のＶＨ配列と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２６のＶＬ配列を含む。いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６のＶＨ配列と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２７のＶＬ配列を含む。いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６のＶＨ配列と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２８のＶＬ配列を含む。
【０１６８】
いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７のＶＨ配列と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２６のＶＬ配列を含む。いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７のＶＨ配列と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２７のＶＬ配列を含む。いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７のＶＨ配列と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２８のＶＬ配列を含む。
【０１６９】
いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８のＶＨ配列と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２６のＶＬ配列を含む。いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８のＶＨ配列と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２７のＶＬ配列を含む。いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８のＶＨ配列と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２８のＶＬ配列を含む。
【０１７０】
いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９のＶＨ配列と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２５のＶＬ配列を含む。いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９のＶＨ配列と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２７のＶＬ配列を含む。いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９のＶＨ配列と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２８のＶＬ配列を含む。
【０１７１】
いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０のＶＨ配列と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２５のＶＬ配列を含む。いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０のＶＨ配列と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２７のＶＬ配列を含む。いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０のＶＨ配列と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２８のＶＬ配列を含む。
【０１７２】
いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１のＶＨ配列と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２５のＶＬ配列を含む。いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１のＶＨ配列と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２７のＶＬ配列を含む。いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１のＶＨ配列と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２８のＶＬ配列を含む。
【０１７３】
いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２のＶＨ配列と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２５のＶＬ配列を含む。いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２のＶＨ配列と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２７のＶＬ配列を含む。いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２のＶＨ配列と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２８のＶＬ配列を含む。
【０１７４】
いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１３のＶＨ配列と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２５のＶＬ配列を含む。いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１３のＶＨ配列と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２７のＶＬ配列を含む。いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１３のＶＨ配列と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２８のＶＬ配列を含む。
【０１７５】
いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１４のＶＨ配列と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２５のＶＬ配列を含む。いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１４のＶＨ配列と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２７のＶＬ配列を含む。いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１４のＶＨ配列と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２８のＶＬ配列を含む。
【０１７６】
いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５のＶＨ配列と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２５のＶＬ配列を含む。いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５のＶＨ配列と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２７のＶＬ配列を含む。いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５のＶＨ配列と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２８のＶＬ配列を含む。
【０１７７】
いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６のＶＨ配列と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２５のＶＬ配列を含む。いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６のＶＨ配列と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２６のＶＬ配列を含む。いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６のＶＨ配列と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２８のＶＬ配列を含む。
【０１７８】
いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１７のＶＨ配列と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２５のＶＬ配列を含む。いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１７のＶＨ配列と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２６のＶＬ配列を含む。いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１７のＶＨ配列と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２８のＶＬ配列を含む。
【０１７９】
いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１８のＶＨ配列と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２５のＶＬ配列を含む。いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１８のＶＨ配列と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２６のＶＬ配列を含む。いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１８のＶＨ配列と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２８のＶＬ配列を含む。
【０１８０】
いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１９のＶＨ配列と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２５のＶＬ配列を含む。いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１９のＶＨ配列と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２６のＶＬ配列を含む。いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１９のＶＨ配列と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２８のＶＬ配列を含む。
【０１８１】
いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２０のＶＨ配列と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２５のＶＬ配列を含む。いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２０のＶＨ配列と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２６のＶＬ配列を含む。いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２０のＶＨ配列と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２８のＶＬ配列を含む。
【０１８２】
いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２１のＶＨ配列と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２５のＶＬ配列を含む。いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２１のＶＨ配列と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２６のＶＬ配列を含む。いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２１のＶＨ配列と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２８のＶＬ配列を含む。
【０１８３】
いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２２のＶＨ配列と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２５のＶＬ配列を含む。いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２２のＶＨ配列と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２６のＶＬ配列を含む。いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２２のＶＨ配列と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２７のＶＬ配列を含む。
【０１８４】
いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２３のＶＨ配列と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２５のＶＬ配列を含む。いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２３のＶＨ配列と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２６のＶＬ配列を含む。いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２３のＶＨ配列と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２７のＶＬ配列を含む。
【０１８５】
いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２４のＶＨ配列と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２５のＶＬ配列を含む。いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２４のＶＨ配列と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２６のＶＬ配列を含む。いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２４のＶＨ配列と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２７のＶＬ配列を含む。
【０１８６】
いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４〜２４に示されている例示的なＶＨ配列に対する同一性が少なくとも約５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％または９９％であるＶＨ配列と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２５〜２８に示されている例示的なＶＬに対する同一性が少なくとも約５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％または９９％であるＶＬ配列を含む。いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４〜２４に示されているＶＨ配列に、最大で１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１１個、１２個、１３個、１４個、１５個、１６個、１７個、１８個、１９個、２０個、２１個、２２個、２３個、２４個または２５個のアミノ酸置換がある配列と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２５〜２８に示されているＶＬ配列に、最大で１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１１個、１２個、１３個、１４個、１５個、１６個、１７個、１８個、１９個、２０個、２１個、２２個、２３個、２４個または２５個のアミノ酸置換がある配列を含む。いくつかの態様では、これらのアミノ酸置換は、保存的アミノ酸置換である。いくつかの実施形態では、この段落に記載されているＡＢＰは、本明細書では、「バリアント」という。いくつかの実施形態では、このようなバリアントは、例えば、親和性成熟、部位特異的変異誘発、ランダム変異誘発、または当該技術分野において知られているかもしくは本明細書に記載されているいずれかの他の方法によって、本明細書に示されている配列から得られるものである。いくつかの実施形態では、このようなバリアントは、本明細書に示されている配列には由来しないものであり、例えば、本発明で提供する方法のうち、ＡＢＰを得るための方法に従って、デノボで単離してよい。
【０１８７】
２．２．４．ＣＤＲ
いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４〜２４から選択されるＶＨドメインの１〜３個のＣＤＲを含む。いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４〜２４から選択されるＶＨドメインの２〜３個のＣＤＲを含む。いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４〜２４から選択されるＶＨドメインの３個のＣＤＲを含む。いくつかの態様では、これらのＣＤＲは、ＫａｂａｔのＣＤＲである。いくつかの態様では、これらのＣＤＲは、ＣｈｏｔｈｉａのＣＤＲである。いくつかの態様では、これらのＣＤＲは、ＩＭＧＴのＣＤＲである。
【０１８８】
いくつかの実施形態では、ＣＤＲは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４〜２４のＣＤＲ−Ｈ１、ＣＤＲ−Ｈ２またはＣＤＲ−Ｈ３との同一性が少なくとも約５０％、７５％、８０％、８５％、９０％または９５％であるＣＤＲである。いくつかの実施形態では、ＣＤＲ−Ｈ１は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４〜２４から選択されるＶＨドメインのＣＤＲ−Ｈ１に、最大で１個、２個、３個、４個または５個のアミノ酸置換があるＣＤＲ−Ｈ１である。いくつかの実施形態では、ＣＤＲ−Ｈ２は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４〜２４から選択されるＶＨドメインのＣＤＲ−Ｈ２に、最大で１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個または８個のアミノ酸置換があるＣＤＲ−Ｈ２である。いくつかの実施形態では、ＣＤＲ−Ｈ３は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４〜２４から選択されるＶＨドメインのＣＤＲ−Ｈ３に、最大で１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個または８個のアミノ酸置換があるＣＤＲ−Ｈ３である。いくつかの態様では、これらのアミノ酸置換は、保存的アミノ酸置換である。いくつかの実施形態では、この段落に記載されているＡＢＰは、本明細書では、「バリアント」という。いくつかの実施形態では、このようなバリアントは、例えば、親和性成熟、部位特異的変異誘発、ランダム変異誘発、または当該技術分野において知られているかもしくは本明細書に記載されているいずれかの他の方法によって、本明細書に示されている配列から得られるものである。いくつかの実施形態では、このようなバリアントは、本明細書に示されている配列には由来しないものであり、例えば、本発明で提供する方法のうち、ＡＢＰを得るための方法に従って、デノボで単離してよい。
【０１８９】
いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２５〜２８から選択されるＶＬドメインの１〜３個のＣＤＲを含む。いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２５〜２８から選択されるＶＬドメインの２〜３個のＣＤＲを含む。いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２５〜２８から選択されるＶＬドメインの３個のＣＤＲを含む。いくつかの態様では、これらのＣＤＲは、ＫａｂａｔのＣＤＲである。いくつかの態様では、これらのＣＤＲは、ＣｈｏｔｈｉａのＣＤＲである。いくつかの態様では、これらのＣＤＲは、ＩＭＧＴのＣＤＲである。
【０１９０】
いくつかの実施形態では、ＣＤＲは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２５〜２８のＣＤＲ−Ｌ１、ＣＤＲ−Ｌ２またはＣＤＲ−Ｌ３との同一性が少なくとも約５０％、７５％、８０％、８５％、９０％または９５％であるＣＤＲである。いくつかの実施形態では、ＣＤＲ−Ｌ１は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２５〜２８から選択されるＶＬドメインのＣＤＲ−Ｌ１に、最大で１個、２個、３個、４個、５個または６個のアミノ酸置換があるＣＤＲ−Ｌ１である。いくつかの実施形態では、ＣＤＲ−Ｌ２は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２５〜２８から選択されるＶＬドメインのＣＤＲ−Ｌ２に、最大で１個、２個、３個または４個のアミノ酸置換があるＣＤＲ−Ｌ２である。いくつかの実施形態では、ＣＤＲ−Ｌ３は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２５〜２８から選択されるＶＬドメインのＣＤＲ−Ｌ３に、最大で１個、２個、３個、４個または５個のアミノ酸置換があるＣＤＲ−Ｌ３である。いくつかの態様では、これらのアミノ酸置換は、保存的アミノ酸置換である。いくつかの実施形態では、この段落に記載されているＡＢＰは、本明細書では、「バリアント」という。いくつかの実施形態では、このようなバリアントは、例えば、親和性成熟、部位特異的変異誘発、ランダム変異誘発、または当該技術分野において知られているかもしくは本明細書に記載されているいずれかの他の方法によって、本明細書に示されている配列から得られるものである。いくつかの実施形態では、このようなバリアントは、本明細書に示されている配列には由来しないものであり、例えば、本発明で提供する方法のうち、ＡＢＰを得るための方法に従って、デノボで単離してよい。
【０１９１】
いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４〜２４から選択されるＶＨドメインの１〜３個のＣＤＲと、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２５〜２８から選択されるＶＬドメインの１〜３個のＣＤＲを含む。いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４〜２４から選択されるＶＨドメインの２〜３個のＣＤＲと、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２５〜２８から選択されるＶＬドメインの２〜３個のＣＤＲを含む。いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４〜２４から選択されるＶＨドメインの３個のＣＤＲと、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２５〜２８から選択されるＶＬドメインの３個のＣＤＲを含む。いくつかの態様では、これらのＣＤＲは、ＫａｂａｔのＣＤＲである。いくつかの態様では、これらのＣＤＲは、ＣｈｏｔｈｉａのＣＤＲである。いくつかの態様では、これらのＣＤＲは、ＩＭＧＴのＣＤＲである。
【０１９２】
いくつかの実施形態では、ＣＤＲは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４〜２４のＣＤＲ−Ｈ１、ＣＤＲ−Ｈ２またはＣＤＲ−Ｈ３との同一性が少なくとも約５０％、７５％、８０％、８５％、９０％または９５％であり、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２５〜２８のＣＤＲ−Ｌ１、ＣＤＲ−Ｌ２またはＣＤＲ−Ｌ３との同一性が少なくとも約５０％、７５％、８０％、８５％、９０％または９５％であるＣＤＲである。いくつかの実施形態では、ＣＤＲ−Ｈ１は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４〜２４から選択されるＶＨドメインのＣＤＲ−Ｈ１に、最大で１個、２個、３個、４個または５個のアミノ酸置換があるＣＤＲ−Ｈ１であり、ＣＤＲ−Ｈ２は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４〜２４から選択されるＶＨドメインのＣＤＲ−Ｈ２に、最大で１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個または８個のアミノ酸置換があるＣＤＲ−Ｈ２であり、ＣＤＲ−Ｈ３は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４〜２４から選択されるＶＨドメインのＣＤＲ−Ｈ３に、最大で１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個または８個のアミノ酸置換があるＣＤＲ−Ｈ３であり、ＣＤＲ−Ｌ１は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２５〜２８から選択されるＶＬドメインのＣＤＲ−Ｌ１に、最大で１個、２個、３個、４個、５個または６個のアミノ酸置換があるＣＤＲ−Ｌ１であり、ＣＤＲ−Ｌ２は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２５〜２８から選択されるＶＬドメインのＣＤＲ−Ｌ２に、最大で１個、２個、３個または４個のアミノ酸置換があるＣＤＲ−Ｌ２であり、ＣＤＲ−Ｌ３は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２５〜２８から選択されるＶＬドメインのＣＤＲ−Ｌ３に、最大で１個、２個、３個、４個または５個のアミノ酸置換があるＣＤＲ−Ｌ３である。いくつかの態様では、これらのアミノ酸置換は、保存的アミノ酸置換である。いくつかの実施形態では、この段落に記載されているＡＢＰは、本明細書では、「バリアント」という。いくつかの実施形態では、このようなバリアントは、例えば、親和性成熟、部位特異的変異誘発、ランダム変異誘発、または当該技術分野において知られているかもしくは本明細書に記載されているいずれかの他の方法によって、本明細書に示されている配列から得られるものである。いくつかの実施形態では、このようなバリアントは、本明細書に示されている配列には由来しないものであり、例えば、本発明で提供する方法のうち、ＡＢＰを得るための方法に従って、デノボで単離してよい。
【０１９３】
いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２９〜３５から選択されるＣＤＲ−Ｈ３を含む。いくつかの態様では、ＣＤＲ−Ｈ３は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２９〜３５のＣＤＲ−Ｈ３との同一性が少なくとも約５０％、７５％、８０％、８５％、９０％または９５％である。いくつかの態様では、ＣＤＲ−Ｈ３は、ＩＭＧＴの番号付けシステムによるＣＤＲ−Ｈ３である。いくつかの実施形態では、ＣＤＲ−Ｈ３は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２９〜３５から選択されるＣＤＲ−Ｈ３に、最大で１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個または８個のアミノ酸置換があるＣＤＲ−Ｈ３である。いくつかの態様では、これらのアミノ酸置換は、保存的アミノ酸置換である。いくつかの実施形態では、この段落に記載されているＡＢＰは、本明細書では、「バリアント」という。いくつかの実施形態では、このようなバリアントは、例えば、親和性成熟、部位特異的変異誘発、ランダム変異誘発、または当該技術分野において知られているかもしくは本明細書に記載されているいずれかの他の方法によって、本明細書に示されている配列から得られるものである。いくつかの実施形態では、このようなバリアントは、本明細書に示されている配列には由来しないものであり、例えば、本発明で提供する方法のうち、ＡＢＰを得るための方法に従って、デノボで単離してよい。
【０１９４】
いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３６〜４７から選択されるＣＤＲ−Ｈ２を含む。いくつかの態様では、ＣＤＲ−Ｈ２は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３６〜４７のＣＤＲ−Ｈ２との同一性が少なくとも約５０％、７５％、８０％、８５％、９０％または９５％である。いくつかの態様では、ＣＤＲ−Ｈ２は、Ｋａｂａｔの番号付けシステムによるＣＤＲ−Ｈ２である。いくつかの実施形態では、ＣＤＲ−Ｈ２は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３６〜４７から選択されるＣＤＲ−Ｈ２に、最大で１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個または８個のアミノ酸置換があるＣＤＲ−Ｈ２である。いくつかの態様では、これらのアミノ酸置換は、保存的アミノ酸置換である。いくつかの実施形態では、この段落に記載されているＡＢＰは、本明細書では、「バリアント」という。いくつかの実施形態では、このようなバリアントは、例えば、親和性成熟、部位特異的変異誘発、ランダム変異誘発、または当該技術分野において知られているかもしくは本明細書に記載されているいずれかの他の方法によって、本明細書に示されている配列から得られるものである。いくつかの実施形態では、このようなバリアントは、本明細書に示されている配列には由来しないものであり、例えば、本発明で提供する方法のうち、ＡＢＰを得るための方法に従って、デノボで単離してよい。
【０１９５】
いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４８〜５４または５８〜６２から選択されるＣＤＲ−Ｈ１を含む。いくつかの態様では、ＣＤＲ−Ｈ１は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４８〜５４または５８〜６２のＣＤＲ−Ｈ１との同一性が少なくとも約５０％、７５％、８０％、８５％、９０％または９５％である。いくつかの態様では、ＣＤＲ−Ｈ１は、ＣｈｏｔｈｉａとＫａｂａｔの番号付けシステムの両方によって定義されているようなＣＤＲ−Ｈ１に及ぶＣＤＲ−Ｈ１である。いくつかの実施形態では、ＣＤＲ−Ｈ１は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４８〜５４または５８〜６２から選択されるＣＤＲ−Ｈ１に、最大で１個、２個、３個、４個または５個のアミノ酸置換があるＣＤＲ−Ｈ１である。いくつかの態様では、これらのアミノ酸置換は、保存的アミノ酸置換である。いくつかの実施形態では、この段落に記載されているＡＢＰは、本明細書では、「バリアント」という。いくつかの実施形態では、このようなバリアントは、例えば、親和性成熟、部位特異的変異誘発、ランダム変異誘発、または当該技術分野において知られているかもしくは本明細書に記載されているいずれかの他の方法によって、本明細書に示されている配列から得られるものである。いくつかの実施形態では、このようなバリアントは、本明細書に示されている配列には由来しないものであり、例えば、本発明で提供する方法のうち、ＡＢＰを得るための方法に従って、デノボで単離してよい。
【０１９６】
いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２９〜３５から選択されるＣＤＲ−Ｈ３と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３６〜４７から選択されるＣＤＲ−Ｈ２を含む。いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２９〜３５から選択されるＣＤＲ−Ｈ３と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３６〜４７から選択されるＣＤＲ−Ｈ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４８〜５４または５８〜６２から選択されるＣＤＲ−Ｈ１を含む。いくつかの実施形態では、ＣＤＲ−Ｈ３は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２９〜３５のＣＤＲ−Ｈ３との同一性が少なくとも約５０％、７５％、８０％、８５％、９０％または９５％であり、ＣＤＲ−Ｈ２は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３６〜４７のＣＤＲ−Ｈ２との同一性が少なくとも約５０％、７５％、８０％、８５％、９０％または９５％であり、ＣＤＲ−Ｈ１は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４８〜５４または５８〜６２のＣＤＲ−Ｈ１との同一性が少なくとも約５０％、７５％、８０％、８５％、９０％または９５％である。いくつかの実施形態では、ＣＤＲ−Ｈ３は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２９〜３５から選択されるＣＤＲ−Ｈ３に、最大で１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個または８個のアミノ酸置換があるＣＤＲ−Ｈ３であり、ＣＤＲ−Ｈ２は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３６〜４７から選択されるＣＤＲ−Ｈ２に、最大で１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個または８個のアミノ酸置換があるＣＤＲ−Ｈ２であり、ＣＤＲ−Ｈ１は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４８〜５４または５８〜６２から選択されるＣＤＲ−Ｈ１に、最大で１個、２個、３個、４個または５個のアミノ酸置換があるＣＤＲ−Ｈ１である。いくつかの態様では、これらのアミノ酸置換は、保存的アミノ酸置換である。いくつかの実施形態では、この段落に記載されているＡＢＰは、本明細書では、「バリアント」という。いくつかの実施形態では、このようなバリアントは、例えば、親和性成熟、部位特異的変異誘発、ランダム変異誘発、または当該技術分野において知られているかもしくは本明細書に記載されているいずれかの他の方法によって、本明細書に示されている配列から得られるものである。いくつかの実施形態では、このようなバリアントは、本明細書に示されている配列には由来しないものであり、例えば、本発明で提供する方法のうち、ＡＢＰを得るための方法に従って、デノボで単離してよい。
【０１９７】
いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６３〜６６から選択されるＣＤＲ−Ｌ３を含む。いくつかの態様では、ＣＤＲ−Ｌ３は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６３〜６６のＣＤＲ−Ｌ３との同一性が少なくとも約５０％、７５％、８０％、８５％、９０％または９５％である。いくつかの態様では、ＣＤＲ−Ｌ３は、Ｋａｂａｔ、Ｃｈｏｔｈｉａ及びＩＭＧＴの番号付けシステムによるＣＤＲ−Ｌ３である。いくつかの実施形態では、ＣＤＲ−Ｌ３は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６３〜６６から選択されるＣＤＲ−Ｌ３に、最大で１個、２個、３個、４個または５個のアミノ酸置換があるＣＤＲ−Ｌ３である。いくつかの態様では、これらのアミノ酸置換は、保存的アミノ酸置換である。いくつかの実施形態では、この段落に記載されているＡＢＰは、本明細書では、「バリアント」という。いくつかの実施形態では、このようなバリアントは、例えば、親和性成熟、部位特異的変異誘発、ランダム変異誘発、または当該技術分野において知られているかもしくは本明細書に記載されているいずれかの他の方法によって、本明細書に示されている配列から得られるものである。いくつかの実施形態では、このようなバリアントは、本明細書に示されている配列には由来しないものであり、例えば、本発明で提供する方法のうち、ＡＢＰを得るための方法に従って、デノボで単離してよい。
【０１９８】
いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６７〜６９から選択されるＣＤＲ−Ｌ２を含む。いくつかの態様では、ＣＤＲ−Ｌ２は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６７〜６９のＣＤＲ−Ｌ２との同一性が少なくとも約５０％、７５％、８０％、８５％、９０％または９５％である。いくつかの態様では、ＣＤＲ−Ｌ２は、ＫａｂａｔとＣｈｏｔｈｉａの番号付けシステムによるＣＤＲ−Ｌ２である。いくつかの実施形態では、ＣＤＲ−Ｌ２は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６７〜６９から選択されるＣＤＲ−Ｌ２に、最大で１個、２個、３個または４個のアミノ酸置換があるＣＤＲ−Ｌ２である。いくつかの態様では、これらのアミノ酸置換は、保存的アミノ酸置換である。いくつかの実施形態では、この段落に記載されているＡＢＰは、本明細書では、「バリアント」という。いくつかの実施形態では、このようなバリアントは、例えば、親和性成熟、部位特異的変異誘発、ランダム変異誘発、または当該技術分野において知られているかもしくは本明細書に記載されているいずれかの他の方法によって、本明細書に示されている配列から得られるものである。いくつかの実施形態では、このようなバリアントは、本明細書に示されている配列には由来しないものであり、例えば、本発明で提供する方法のうち、ＡＢＰを得るための方法に従って、デノボで単離してよい。
【０１９９】
いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７０〜７２から選択されるＣＤＲ−Ｌ１を含む。いくつかの態様では、ＣＤＲ−Ｌ１は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７０〜７２のＣＤＲ−Ｌ１との同一性が少なくとも約５０％、７５％、８０％、８５％、９０％または９５％である。いくつかの態様では、ＣＤＲ−Ｌ１は、ＫａｂａｔとＣｈｏｔｈｉａの番号付けシステムによるＣＤＲ−Ｌ１である。いくつかの実施形態では、ＣＤＲ−Ｌ１は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７０〜７２から選択されるＣＤＲ−Ｌ１に、最大で１個、２個、３個、４個、５個または６個のアミノ酸置換があるＣＤＲ−Ｌ１である。いくつかの態様では、これらのアミノ酸置換は、保存的アミノ酸置換である。いくつかの実施形態では、この段落に記載されているＡＢＰは、本明細書では、「バリアント」という。いくつかの実施形態では、このようなバリアントは、例えば、親和性成熟、部位特異的変異誘発、ランダム変異誘発、または当該技術分野において知られているかもしくは本明細書に記載されているいずれかの他の方法によって、本明細書に示されている配列から得られるものである。いくつかの実施形態では、このようなバリアントは、本明細書に示されている配列には由来しないものであり、例えば、本発明で提供する方法のうち、ＡＢＰを得るための方法に従って、デノボで単離してよい。
【０２００】
いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６３〜６６から選択されるＣＤＲ−Ｌ３と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６７〜６９から選択されるＣＤＲ−Ｌ２を含む。いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６３〜６６から選択されるＣＤＲ−Ｌ３と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６７〜６９から選択されるＣＤＲ−Ｌ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７０〜７２から選択されるＣＤＲ−Ｌ１を含む。いくつかの実施形態では、ＣＤＲ−Ｌ３は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６３〜６６のＣＤＲ−Ｌ３との同一性が少なくとも約５０％、７５％、８０％、８５％、９０％または９５％であり、ＣＤＲ−Ｌ２は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６７〜６９のＣＤＲ−Ｌ２との同一性が少なくとも約５０％、７５％、８０％、８５％、９０％または９５％であり、ＣＤＲ−Ｌ１は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７０〜７２のＣＤＲ−Ｌ１との同一性が少なくとも約５０％、７５％、８０％、８５％、９０％または９５％である。いくつかの実施形態では、ＣＤＲ−Ｌ３は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６３〜６６から選択されるＣＤＲ−Ｌ３に、最大で１個、２個、３個、４個または５個のアミノ酸置換があるＣＤＲ−Ｌ３であり、ＣＤＲ−Ｌ２は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６７〜６９から選択されるＣＤＲ−Ｌ２に、最大で１個、２個、３個または４個のアミノ酸置換があるＣＤＲ−Ｌ２であり、ＣＤＲ−Ｌ１は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７０〜７２から選択されるＣＤＲ−Ｌ１に、最大で１個、２個、３個、４個、５個または６個のアミノ酸置換があるＣＤＲ−Ｌ１である。いくつかの態様では、これらのアミノ酸置換は、保存的アミノ酸置換である。いくつかの実施形態では、この段落に記載されているＡＢＰは、本明細書では、「バリアント」という。いくつかの実施形態では、このようなバリアントは、例えば、親和性成熟、部位特異的変異誘発、ランダム変異誘発、または当該技術分野において知られているかもしくは本明細書に記載されているいずれかの他の方法によって、本明細書に示されている配列から得られるものである。いくつかの実施形態では、このようなバリアントは、本明細書に示されている配列には由来しないものであり、例えば、本発明で提供する方法のうち、ＡＢＰを得るための方法に従って、デノボで単離してよい。
【０２０１】
いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２９〜３５から選択されるＣＤＲ−Ｈ３と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３６〜４７から選択されるＣＤＲ−Ｈ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４８〜５４または５８〜６２から選択されるＣＤＲ−Ｈ１と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６３〜６６から選択されるＣＤＲ−Ｌ３と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６７〜６９から選択されるＣＤＲ−Ｌ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７０〜７２から選択されるＣＤＲ−Ｌ１を含む。いくつかの実施形態では、ＣＤＲ−Ｈ３は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２９〜３５のＣＤＲ−Ｈ３との同一性が少なくとも約５０％、７５％、８０％、８５％、９０％または９５％であり、ＣＤＲ−Ｈ２は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３６〜４７のＣＤＲ−Ｈ２との同一性が少なくとも約５０％、７５％、８０％、８５％、９０％または９５％であり、ＣＤＲ−Ｈ１は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４８〜５４または５８〜６２のＣＤＲ−Ｈ１との同一性が少なくとも約５０％、７５％、８０％、８５％、９０％または９５％であり、ＣＤＲ−Ｌ３は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６３〜６６のＣＤＲ−Ｌ３との同一性が少なくとも約５０％、７５％、８０％、８５％、９０％または９５％であり、ＣＤＲ−Ｌ２は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６７〜６９のＣＤＲ−Ｌ２との同一性が少なくとも約５０％、７５％、８０％、８５％、９０％または９５％であり、ＣＤＲ−Ｌ１は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７０〜７２のＣＤＲ−Ｌ１との同一性が少なくとも約５０％、７５％、８０％、８５％、９０％または９５％である。いくつかの実施形態では、ＣＤＲ−Ｈ３は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２９〜３５から選択されるＣＤＲ−Ｈ３に、最大で１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個または８個のアミノ酸置換があるＣＤＲ−Ｈ３であり、ＣＤＲ−Ｈ２は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３６〜４７から選択されるＣＤＲ−Ｈ２に、最大で１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個または８個のアミノ酸置換があるＣＤＲ−Ｈ２であり、ＣＤＲ−Ｈ１は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４８〜５４または５８〜６２から選択されるＣＤＲ−Ｈ１に、最大で１個、２個、３個、４個または５個のアミノ酸置換があるＣＤＲ−Ｈ１であり、ＣＤＲ−Ｌ３は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６３〜６６から選択されるＣＤＲ−Ｌ３に、最大で１個、２個、３個、４個または５個のアミノ酸置換があるＣＤＲ−Ｌ３であり、ＣＤＲ−Ｌ２は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６７〜６９から選択されるＣＤＲ−Ｌ２に、最大で１個、２個、３個または４個のアミノ酸置換があるＣＤＲ−Ｌ２であり、ＣＤＲ−Ｌ１は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７０〜７２から選択されるＣＤＲ−Ｌ１に、最大で１個、２個、３個、４個、５個または６個のアミノ酸置換があるＣＤＲ−Ｌ１である。いくつかの態様では、これらのアミノ酸置換は、保存的アミノ酸置換である。いくつかの実施形態では、この段落に記載されているＡＢＰは、本明細書では、「バリアント」という。いくつかの実施形態では、このようなバリアントは、例えば、親和性成熟、部位特異的変異誘発、ランダム変異誘発、または当該技術分野において知られているかもしくは本明細書に記載されているいずれかの他の方法によって、本明細書に示されている配列から得られるものである。いくつかの実施形態では、このようなバリアントは、本明細書に示されている配列には由来しないものであり、例えば、本発明で提供する方法のうち、ＡＢＰを得るための方法に従って、デノボで単離してよい。
【０２０２】
いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２９のＣＤＲ−Ｈ３と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３６のＣＤＲ−Ｈ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４８のＣＤＲ−Ｈ１と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６３のＣＤＲ−Ｌ３と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６７のＣＤＲ−Ｌ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７０のＣＤＲ−Ｌ１を含む。
【０２０３】
いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２９のＣＤＲ−Ｈ３と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３７のＣＤＲ−Ｈ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４９のＣＤＲ−Ｈ１と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６３のＣＤＲ−Ｌ３と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６７のＣＤＲ−Ｌ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７０のＣＤＲ−Ｌ１を含む。
【０２０４】
いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２９のＣＤＲ−Ｈ３と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３７のＣＤＲ−Ｈ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５０のＣＤＲ−Ｈ１と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６３のＣＤＲ−Ｌ３と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６７のＣＤＲ−Ｌ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７０のＣＤＲ−Ｌ１を含む。
【０２０５】
いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３０のＣＤＲ−Ｈ３と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３７のＣＤＲ−Ｈ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５０のＣＤＲ−Ｈ１と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６３のＣＤＲ−Ｌ３と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６７のＣＤＲ−Ｌ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７０のＣＤＲ−Ｌ１を含む。
【０２０６】
いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２９のＣＤＲ−Ｈ３と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３８のＣＤＲ−Ｈ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５０のＣＤＲ−Ｈ１と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６３のＣＤＲ−Ｌ３と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６７のＣＤＲ−Ｌ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７０のＣＤＲ−Ｌ１を含む。
【０２０７】
いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３１のＣＤＲ−Ｈ３と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３９のＣＤＲ−Ｈ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５１のＣＤＲ−Ｈ１と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６４のＣＤＲ−Ｌ３と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６８のＣＤＲ−Ｌ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７１のＣＤＲ−Ｌ１を含む。
【０２０８】
いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３１のＣＤＲ−Ｈ３と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４０のＣＤＲ−Ｈ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５２のＣＤＲ−Ｈ１と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６４のＣＤＲ−Ｌ３と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６８のＣＤＲ−Ｌ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７１のＣＤＲ−Ｌ１を含む。
【０２０９】
いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３１のＣＤＲ−Ｈ３と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４１のＣＤＲ−Ｈ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５３のＣＤＲ−Ｈ１と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６４のＣＤＲ−Ｌ３と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６８のＣＤＲ−Ｌ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７１のＣＤＲ−Ｌ１を含む。
【０２１０】
いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３１のＣＤＲ−Ｈ３と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４０のＣＤＲ−Ｈ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５４のＣＤＲ−Ｈ１と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６４のＣＤＲ−Ｌ３と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６８のＣＤＲ−Ｌ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７１のＣＤＲ−Ｌ１を含む。
【０２１１】
いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３２のＣＤＲ−Ｈ３と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４０のＣＤＲ−Ｈ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５４のＣＤＲ−Ｈ１と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６４のＣＤＲ−Ｌ３と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６８のＣＤＲ−Ｌ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７１のＣＤＲ−Ｌ１を含む。
【０２１２】
いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３２のＣＤＲ−Ｈ３と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４０のＣＤＲ−Ｈ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５４のＣＤＲ−Ｈ１と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６４のＣＤＲ−Ｌ３と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６８のＣＤＲ−Ｌ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７１のＣＤＲ−Ｌ１を含む。
【０２１３】
いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３２のＣＤＲ−Ｈ３と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４０のＣＤＲ−Ｈ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５４のＣＤＲ−Ｈ１と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６４のＣＤＲ−Ｌ３と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６８のＣＤＲ−Ｌ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７１のＣＤＲ−Ｌ１を含む。
【０２１４】
いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３３のＣＤＲ−Ｈ３と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４２のＣＤＲ−Ｈ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５８のＣＤＲ−Ｈ１と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６５のＣＤＲ−Ｌ３と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６９のＣＤＲ−Ｌ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７２のＣＤＲ−Ｌ１を含む。
【０２１５】
いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３３のＣＤＲ−Ｈ３と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４２のＣＤＲ−Ｈ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５９のＣＤＲ−Ｈ１と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６５のＣＤＲ−Ｌ３と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６９のＣＤＲ−Ｌ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７２のＣＤＲ−Ｌ１を含む。
【０２１６】
いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３３のＣＤＲ−Ｈ３と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４３のＣＤＲ−Ｈ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６０のＣＤＲ−Ｈ１と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６５のＣＤＲ−Ｌ３と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６９のＣＤＲ−Ｌ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７２のＣＤＲ−Ｌ１を含む。
【０２１７】
いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３４のＣＤＲ−Ｈ３と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４３のＣＤＲ−Ｈ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６０のＣＤＲ−Ｈ１と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６５のＣＤＲ−Ｌ３と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６９のＣＤＲ−Ｌ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７２のＣＤＲ−Ｌ１を含む。
【０２１８】
いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３４のＣＤＲ−Ｈ３と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４４のＣＤＲ−Ｈ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６１のＣＤＲ−Ｈ１と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６５のＣＤＲ−Ｌ３と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６９のＣＤＲ−Ｌ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７２のＣＤＲ−Ｌ１を含む。
【０２１９】
いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３３のＣＤＲ−Ｈ３と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４４のＣＤＲ−Ｈ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５９のＣＤＲ−Ｈ１と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６５のＣＤＲ−Ｌ３と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６９のＣＤＲ−Ｌ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７２のＣＤＲ−Ｌ１を含む。
【０２２０】
いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３５のＣＤＲ−Ｈ３と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４５のＣＤＲ−Ｈ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６２のＣＤＲ−Ｈ１と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６６のＣＤＲ−Ｌ３と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６９のＣＤＲ−Ｌ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７２のＣＤＲ−Ｌ１を含む。
【０２２１】
いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３５のＣＤＲ−Ｈ３と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４６のＣＤＲ−Ｈ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６２のＣＤＲ−Ｈ１と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６６のＣＤＲ−Ｌ３と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６９のＣＤＲ−Ｌ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７２のＣＤＲ−Ｌ１を含む。
【０２２２】
いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３５のＣＤＲ−Ｈ３と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４７のＣＤＲ−Ｈ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６２のＣＤＲ−Ｈ１と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６６のＣＤＲ−Ｌ３と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６９のＣＤＲ−Ｌ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７２のＣＤＲ−Ｌ１を含む。
【０２２３】
２．２．５．重鎖及び軽鎖
いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４〜２４のＶＨから選択されるＶＨ（または本明細書に記載されているバリアント）と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５５〜５７または１２５から選択される定常領域を含む。いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２５〜２８のＶＬから選択されるＶＬ（または本明細書に記載されているバリアント）と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２６の定常領域を含む。
【０２２４】
いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７９の重鎖を含む。いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８０の重鎖を含む。いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８１の軽鎖を含む。いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＰＢは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７９の重鎖と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８１の軽鎖を含む。いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＰＢは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８０の重鎖と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８１の軽鎖を含む。
【０２２５】
いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８２の重鎖を含む。いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８３の重鎖を含む。いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＰＢは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８２の重鎖と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８１の軽鎖を含む。いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＰＢは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８３の重鎖と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８１の軽鎖を含む。
【０２２６】
いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８４の重鎖を含む。いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８５の重鎖を含む。いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＰＢは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８４の重鎖と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８１の軽鎖を含む。いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＰＢは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８５の重鎖と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８１の軽鎖を含む。
【０２２７】
いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８６の重鎖を含む。いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８７の重鎖を含む。いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＰＢは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８６の重鎖と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８１の軽鎖を含む。いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＰＢは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８７の重鎖と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８１の軽鎖を含む。
【０２２８】
いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８８の重鎖を含む。いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８９の重鎖を含む。いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＰＢは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８８の重鎖と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８１の軽鎖を含む。いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＰＢは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８９の重鎖と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８１の軽鎖を含む。
【０２２９】
いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９０の重鎖を含む。いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９１の重鎖を含む。いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９２の軽鎖を含む。いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＰＢは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９０の重鎖と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９２の軽鎖を含む。いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＰＢは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９１の重鎖と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９２の軽鎖を含む。
【０２３０】
いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９３の重鎖を含む。いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９４の重鎖を含む。いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＰＢは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９３の重鎖と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９２の軽鎖を含む。いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＰＢは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９４の重鎖と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９２の軽鎖を含む。
【０２３１】
いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９５の重鎖を含む。いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９６の重鎖を含む。いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＰＢは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９５の重鎖と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９２の軽鎖を含む。いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＰＢは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９６の重鎖と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９２の軽鎖を含む。
【０２３２】
いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９７の重鎖を含む。いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９８の重鎖を含む。いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＰＢは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９７の重鎖と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９２の軽鎖を含む。いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＰＢは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９８の重鎖と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９２の軽鎖を含む。
【０２３３】
いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９９の重鎖を含む。いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１００の重鎖を含む。いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＰＢは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９９の重鎖と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９２の軽鎖を含む。いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＰＢは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１００の重鎖と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９２の軽鎖を含む。
【０２３４】
いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０１の重鎖を含む。いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０２の重鎖を含む。いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＰＢは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０１の重鎖と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９２の軽鎖を含む。いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＰＢは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０２の重鎖と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９２の軽鎖を含む。
【０２３５】
いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０３の重鎖を含む。いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０４の重鎖を含む。いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＰＢは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０３の重鎖と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９２の軽鎖を含む。いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＰＢは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０４の重鎖と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９２の軽鎖を含む。
【０２３６】
いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０５の重鎖を含む。いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０６の重鎖を含む。いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０７の軽鎖を含む。いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＰＢは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０５の重鎖と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０７の軽鎖を含む。いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＰＢは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０６の重鎖と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０７の軽鎖を含む。
【０２３７】
いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０８の重鎖を含む。いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０９の重鎖を含む。いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＰＢは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０８の重鎖と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０７の軽鎖を含む。いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＰＢは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０９の重鎖と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０７の軽鎖を含む。
【０２３８】
いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１０の重鎖を含む。いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１１の重鎖を含む。いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＰＢは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１０の重鎖と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０７の軽鎖を含む。いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＰＢは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１１の重鎖と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０７の軽鎖を含む。
【０２３９】
いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１２の重鎖を含む。いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１３の重鎖を含む。いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＰＢは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１２の重鎖と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０７の軽鎖を含む。いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＰＢは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１３の重鎖と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０７の軽鎖を含む。
【０２４０】
いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１４の重鎖を含む。いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１５の重鎖を含む。いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＰＢは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１４の重鎖と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０７の軽鎖を含む。いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＰＢは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１５の重鎖と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０７の軽鎖を含む。
【０２４１】
いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１６の重鎖を含む。いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１７の重鎖を含む。いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＰＢは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１６の重鎖と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０７の軽鎖を含む。いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＰＢは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１７の重鎖と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０７の軽鎖を含む。
【０２４２】
いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１８の重鎖を含む。いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１９の重鎖を含む。いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２０の軽鎖を含む。いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＰＢは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１８の重鎖と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２０の軽鎖を含む。いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＰＢは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１９の重鎖と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２０の軽鎖を含む。
【０２４３】
いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２１の重鎖を含む。いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２２の重鎖を含む。いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＰＢは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２１の重鎖と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２０の軽鎖を含む。いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＰＢは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２２の重鎖と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２０の軽鎖を含む。
【０２４４】
いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２３の重鎖を含む。いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２４の重鎖を含む。いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＰＢは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２３の重鎖と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２０の軽鎖を含む。いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＰＢは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２４の重鎖と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２０の軽鎖を含む。
【０２４５】
２．２．６．コンセンサス配列
いくつかの実施形態では、本発明で提供するのは、第１のＡＢＰファミリーであって、そのファミリーのＡＢＰが、以下の６個のＣＤＲ配列を含む、ファミリーである：
（ａ）配列
2018533371.tif 000031
であって、そのＸ１が、ＡまたはＴである配列（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２８）
を有するＣＤＲ−Ｈ３；
（ｂ）配列
2018533371.tif 000032
であって、そのＸ２が、Ｓ、ＱまたはＧである配列（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２９）
を有するＣＤＲ−Ｈ２；
（ｃ）配列
2018533371.tif 000033
であって、そのＸ３が、ＥまたはＡであり、Ｘ４が、Ｌ、ＶまたはＳである配列（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１３０）
を有するＣＤＲ−Ｈ１；
（ｄ）配列
2018533371.tif 000034
を有するＣＤＲ−Ｌ３；
（ｅ）配列
2018533371.tif 000035
を有するＣＤＲ−Ｌ２；及び
（ｆ）配列
2018533371.tif 000036
を有するＣＤＲ−Ｌ１。いくつかの実施形態では、本発明で提供するのは、このような第１のファミリー内のＡＢＰである。
【０２４６】
いくつかの実施形態では、本発明で提供するのは、第２のＡＢＰファミリーであって、そのファミリーのＡＢＰが、以下の６個のＣＤＲ配列を含む、ファミリーである：
（ａ）配列
2018533371.tif 000037
であって、そのＸ１が、ＳまたはＧである配列（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１３１）
を有するＣＤＲ−Ｈ３；
（ｂ）配列
2018533371.tif 000038
であって、そのＸ２が、ＳまたはＡであり、Ｘ３が、ＳまたはＧである配列（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１３２）
を有するＣＤＲ−Ｈ２；
（ｃ）配列
2018533371.tif 000039
であって、そのＸ４が、ＳまたはＴであり、Ｘ５が、ＳまたはＴであり、Ｘ６が、ＳまたはＫであり、Ｘ７が、ＨまたはＹである配列（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１３３）
を有するＣＤＲ−Ｈ１；
（ｄ）配列
2018533371.tif 000040
を有するＣＤＲ−Ｌ３；
（ｅ）配列
2018533371.tif 000041
を有するＣＤＲ−Ｌ２；及び
（ｆ）配列
2018533371.tif 000042
を有するＣＤＲ−Ｌ１。いくつかの実施形態では、本発明で提供するのは、このような第２のファミリー内のＡＢＰである。
【０２４７】
いくつかの実施形態では、本発明で提供するのは、第３のＡＢＰファミリーであって、そのファミリーのＡＢＰが、以下の６個のＣＤＲ配列を含む、ファミリーである：
（ａ）配列
2018533371.tif 000043
であって、そのＸ１が、ＦまたはＬである配列（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１３４）
を有するＣＤＲ−Ｈ３；
（ｂ）配列
2018533371.tif 000044
であって、そのＸ２が、ＬまたはＩであり、Ｘ３が、ＱまたはＲである配列（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１３５）
を有するＣＤＲ−Ｈ２；
（ｃ）配列
2018533371.tif 000045
であって、そのＸ４が、Ｇ、ＰまたはＲであり、Ｘ５が、Ｎ、ＡまたはＥであり、Ｘ６が、ＭまたはＩである配列（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１３６）
を有するＣＤＲ−Ｈ１；
（ｄ）配列
2018533371.tif 000046
を有するＣＤＲ−Ｌ３；
（ｅ）配列
2018533371.tif 000047
を有するＣＤＲ−Ｌ２；及び
（ｆ）配列
2018533371.tif 000048
を有するＣＤＲ−Ｌ１。いくつかの実施形態では、本発明で提供するのは、このような第３のファミリー内のＡＢＰである。
【０２４８】
いくつかの実施形態では、本発明で提供するのは、第４のＡＢＰファミリーであって、そのファミリーのＡＢＰが、以下の６個のＣＤＲ配列を含む、ファミリーである：
（ａ）配列
2018533371.tif 000049
を有するＣＤＲ−Ｈ３；
（ｂ）配列
2018533371.tif 000050
であって、そのＸ１が、ＶまたはＩであり、Ｘ２が、ＡまたはＴであり、Ｘ３が、ＱまたはＲである配列（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１３７）
を有するＣＤＲ−Ｈ２；
（ｃ）配列
2018533371.tif 000051
を有するＣＤＲ−Ｈ１；
（ｄ）配列
2018533371.tif 000052
を有するＣＤＲ−Ｌ３；
（ｅ）配列
2018533371.tif 000053
を有するＣＤＲ−Ｌ２；及び
（ｆ）配列
2018533371.tif 000054
を有するＣＤＲ−Ｌ１。いくつかの実施形態では、本発明で提供するのは、このような第４のファミリー内のＡＢＰである。
【０２４９】
２．２．７．ＡＢＰバリアントの機能特性
上記及び本開示のいずれかの箇所で説明されているように、本発明で提供するのは、本明細書に示されている例示的なＡＢＰ配列に対する同一率、または本明細書に示されている例示的なＡＢＰ配列と比較した場合のアミノ酸残基の置換に基づき定義されているＡＢＰバリアントである。
【０２５０】
いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰのバリアントは、ｈＴＩＧＩＴに対する特異性を有する。いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰのバリアントは、ｃＴＩＧＩＴに対する特異性を有する。いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰのバリアントは、ｍＴＩＧＩＴに対する特異性を有する。いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰのバリアントは、ｈＴＩＧＩＴとｃＴＩＧＩＴに対する特異性を有する。いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰのバリアントは、ｈＴＩＧＩＴとｍＴＩＧＩＴに対する特異性を有する。いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰのバリアントは、ｃＴＩＧＩＴとｍＴＩＧＩＴに対する特異性を有する。いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰのバリアントは、ｈＴＩＧＩＴと、ｃＴＩＧＩＴと、ｍＴＩＧＩＴに対する特異性を有する。
【０２５１】
いくつかの実施形態では、本明細書に示されている例示的なＡＢＰ配列に由来するＡＢＰのバリアントは、ｈＴＩＧＩＴに対する親和性（ＫＤによって測定）であって、その例示的なＡＢＰの親和性の約１．５倍、約２倍、約３倍、約４倍、約５倍、約６倍、約７倍、約８倍、約９倍または約１０倍以内である親和性を保持する。いくつかの実施形態では、本明細書に示されている例示的なＡＢＰ配列に由来するＡＢＰのバリアントは、ｃＴＩＧＩＴに対する親和性（ＫＤによって測定）であって、その例示的なＡＢＰの親和性の約１．５倍、約２倍、約３倍、約４倍、約５倍、約６倍、約７倍、約８倍、約９倍または約１０倍以内である親和性を保持する。いくつかの実施形態では、本明細書に示されている例示的なＡＢＰ配列に由来するＡＢＰのバリアントは、ｍＴＩＧＩＴに対する親和性（ＫＤによって測定）であって、その例示的なＡＢＰの親和性の約１．５倍、約２倍、約３倍、約４倍、約５倍、約６倍、約７倍、約８倍、約９倍または約１０倍以内である親和性を保持する。いくつかの実施形態では、本明細書に示されている例示的なＡＢＰ配列に由来するＡＢＰのバリアントは、ｈＴＩＧＩＴとｃＴＩＧＩＴの両方に対する親和性（ＫＤによって測定）であって、その例示的なＡＢＰの親和性の約１．５倍、約２倍、約３倍、約４倍、約５倍、約６倍、約７倍、約８倍、約９倍または約１０倍以内である親和性を保持する。いくつかの実施形態では、本明細書に示されている例示的なＡＢＰ配列に由来するＡＢＰのバリアントは、ｈＴＩＧＩＴとｍＴＩＧＩＴの両方に対する親和性（ＫＤによって測定）であって、その例示的なＡＢＰの親和性の約１．５倍、約２倍、約３倍、約４倍、約５倍、約６倍、約７倍、約８倍、約９倍または約１０倍以内である親和性を保持する。いくつかの実施形態では、本明細書に示されている例示的なＡＢＰ配列に由来するＡＢＰのバリアントは、ｃＴＩＧＩＴとｍＴＩＧＩＴの両方に対する親和性（ＫＤによって測定）であって、その例示的なＡＢＰの親和性の約１．５倍、約２倍、約３倍、約４倍、約５倍、約６倍、約７倍、約８倍、約９倍または約１０倍以内である親和性を保持する。いくつかの実施形態では、本明細書に示されている例示的なＡＢＰ配列に由来するＡＢＰのバリアントは、ｈＴＩＧＩＴと、ｃＴＩＧＩＴと、ｍＴＩＧＩＴの３つのすべてに対する親和性（ＫＤによって測定）であって、その例示的なＡＢＰの親和性の約１．５倍、約２倍、約３倍、約４倍、約５倍、約６倍、約７倍、約８倍、約９倍または約１０倍以内である親和性を保持する。
【０２５２】
いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰのバリアントは、ＴＩＧＩＴをアンタゴナイズする能力（本明細書に記載されている１つ以上のアッセイまたは生体作用によって測定）を保持している。いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰのバリアントは、ＴＩＧＩＴが、本明細書に記載されているようなそのリガンドの１つ以上と相互作用するのを防ぐ能力を保持している。
【０２５３】
いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰのバリアントは、ＴＩＧＩＴへの結合について、ＭＡＢ１、ＭＡＢ２、ＭＡＢ３、ＭＡＢ４、ＭＡＢ５、ＭＡＢ６、ＭＡＢ７、ＭＡＢ８、ＭＡＢ９、ＭＡＢ１０、ＭＡＢ１１、ＭＡＢ１２、ＭＡＢ１３、ＭＡＢ１４、ＭＡＢ１５、ＭＡＢ１６、ＭＡＢ１７、ＭＡＢ１８、ＭＡＢ１９、ＭＡＢ２０またはＭＡＢ２１（それぞれ、本開示の表５に示されているようなもの）から選択される抗体と競合する。
【０２５４】
いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰのバリアントは、ＴＩＧＩＴへのＣＤ１５５の結合を阻害する。いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰのバリアントは、ＴＩＧＩＴへのＣＤ１１２の結合を阻害する。いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰのバリアントは、ＣＤ２２６のＴＩＧＩＴとの連係を阻害する。
【０２５５】
いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰのバリアントは、エフェクターＴ細胞またはナチュラルキラー（ＮＫ）細胞を活性化する。いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰのバリアントは、組織中または循環血液中の制御性Ｔ細胞の数を減少させる。いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰのバリアントは、制御性Ｔ細胞によるエフェクターＴ細胞の抑制を阻害する。
【０２５６】
いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰのバリアントは、ＰＶＲＬ１、ＰＶＲＬ２、ＰＶＲＬ３またはＰＶＲＬ４のいずれにも特異的に結合しない。
【０２５７】
いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰのバリアントは、マウスＴＩＧＩＴ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３）に、そのＡＢＰの、ｈＴＩＧＩＴに対する親和性よりも低い親和性（より高いＫＤによって示される）で結合するか、またはｍＴＩＧＩＴに結合しない。いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰのバリアントは、マウスＴＩＧＩＴ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１３８）に、そのＡＢＰの、ｈＴＩＧＩＴに対する親和性よりも低い親和性（より高いＫＤによって示される）で結合するか、またはｍＴＩＧＩＴに結合しない。
【０２５８】
いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰのバリアントは、そのＡＢＰと同じＴＩＧＩＴエピトープに結合する。
【０２５９】
２．２．８．ＡＢＰのその他の機能特性
いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰは、下記の（ａ）〜（ｊ）に列挙されている特徴のうちの１つ以上を有する。（ａ）ＴＩＧＩＴへの結合について、ＭＡＢ１、ＭＡＢ２、ＭＡＢ３、ＭＡＢ４、ＭＡＢ５、ＭＡＢ６、ＭＡＢ７、ＭＡＢ８、ＭＡＢ９、ＭＡＢ１０、ＭＡＢ１１、ＭＡＢ１２、ＭＡＢ１３、ＭＡＢ１４、ＭＡＢ１５、ＭＡＢ１６、ＭＡＢ１７、ＭＡＢ１８、ＭＡＢ１９、ＭＡＢ２０もしくはＭＡＢ２１（それぞれ、本開示の表５に示されているようなもの）から選択される抗体と競合するか、（ｂ）ＴＩＧＩＴへのＣＤ１５５の結合を阻害するか、（ｃ）ＴＩＧＩＴへのＣＤ１１２の結合を阻害するか、（ｄ）ＣＤ２２６のＴＩＧＩＴとの連係を阻害するか、（ｅ）エフェクターＴ細胞もしくはナチュラルキラー（ＮＫ）細胞を活性化するか、（ｆ）組織中もしくは循環血液中の制御性Ｔ細胞の数を減少させるか、（ｇ）制御性Ｔ細胞によるエフェクターＴ細胞の抑制を阻害するか、（ｈ）ＰＶＲＬ１、ＰＶＲＬ２、ＰＶＲＬ３もしくはＰＶＲＬ４のいずれにも特異的に結合しないか、（ｉ）カニクイザルＴＩＧＩＴ（ｃＴＩＧＩＴ、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２）に特異的に結合するか、または（ｊ）マウスＴＩＧＩＴ（ｍＴＩＧＩＴ、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３）に、そのＡＢＰの、ｈＴＩＧＩＴに対する親和性よりも低い親和性（より高いＫＤによって示される）で結合するか、もしくはｍＴＩＧＩＴに結合しない。いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰは、上記の（ａ）〜（ｊ）に列挙されている特徴のうちの２つ以上を有する。いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰは、上記の（ａ）〜（ｊ）に列挙されている特徴のうちの３つ以上を有する。いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰは、上記の（ａ）〜（ｊ）に列挙されている特徴のうちの４つ以上を有する。いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰは、上記の（ａ）〜（ｊ）に列挙されている特徴のうちの５つ以上を有する。いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰは、上記の（ａ）〜（ｊ）に列挙されている特徴のうちの６つ以上を有する。いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰは、上記の（ａ）〜（ｊ）に列挙されている特徴のうちの７つ以上を有する。いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰは、上記の（ａ）〜（ｊ）に列挙されている特徴のうちの８つ以上を有する。いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰは、上記の（ａ）〜（ｊ）に列挙されている特徴のうちの９つ以上を有する。いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰは、上記の（ａ）〜（ｊ）に列挙されている特徴のうちの１０個すべてを有する。
【０２６０】
いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰは、下記の（ａ）〜（ｊ）に列挙されている特徴を組み合わせたものを示す。（ａ）ＴＩＧＩＴへの結合について、ＭＡＢ１、ＭＡＢ２、ＭＡＢ３、ＭＡＢ４、ＭＡＢ５、ＭＡＢ６、ＭＡＢ７、ＭＡＢ８、ＭＡＢ９、ＭＡＢ１０、ＭＡＢ１１、ＭＡＢ１２、ＭＡＢ１３、ＭＡＢ１４、ＭＡＢ１５、ＭＡＢ１６、ＭＡＢ１７、ＭＡＢ１８、ＭＡＢ１９、ＭＡＢ２０もしくはＭＡＢ２１（それぞれ、本開示の表５に示されているようなもの）から選択される抗体と競合するか、（ｂ）ＴＩＧＩＴへのＣＤ１５５の結合を阻害するか、（ｃ）ＴＩＧＩＴへのＣＤ１１２の結合を阻害するか、（ｄ）ＣＤ２２６のＴＩＧＩＴとの連係を阻害するか、（ｅ）エフェクターＴ細胞もしくはナチュラルキラー（ＮＫ）細胞を活性化するか、（ｆ）組織中もしくは循環血液中の制御性Ｔ細胞の数を減少させるか、（ｇ）制御性Ｔ細胞によるエフェクターＴ細胞の抑制を阻害するか、（ｈ）ＰＶＲＬ１、ＰＶＲＬ２、ＰＶＲＬ３もしくはＰＶＲＬ４のいずれにも特異的に結合しないか、（ｉ）カニクイザルＴＩＧＩＴ（ｃＴＩＧＩＴ、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２）に特異的に結合するか、または（ｊ）マウスＴＩＧＩＴ（ｍＴＩＧＩＴ、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３）に、そのＡＢＰの、ｈＴＩＧＩＴに対する親和性よりも低い親和性（より高いＫＤによって示される）で結合するか、もしくはｍＴＩＧＩＴに結合しない。いくつかの実施形態では、このようなＡＢＰは、（ａとｂ）、（ａとｃ）、（ａとｄ）、（ａとｅ）、（ａとｆ）、（ａとｇ）、（ａとｈ）、（ａとｉ）、（ａとｊ）、（ｂとａ）、（ｂとｃ）、（ｂとｄ）、（ｂとｅ）、（ｂとｆ）、（ｂとｇ）、（ｂとｈ）、（ｂとｉ）、（ｂとｊ）、（ｃとａ）、（ｃとｂ）、（ｃとｄ）、（ｃとｅ）、（ｃとｆ）、（ｃとｇ）、（ｃとｈ）、（ｃとｉ）、（ｃとｊ）、（ｄとａ）、（ｄとｂ）、（ｄとｃ）、（ｄとｅ）、（ｄとｆ）、（ｄとｇ）、（ｄとｈ）、（ｄとｉ）、（ｄとｊ）、（ｅとａ）、（ｅとｂ）、（ｅとｃ）、（ｅとｄ）、（ｅとｆ）、（ｅとｇ）、（ｅとｈ）、（ｅとｉ）、（ｅとｊ）、（ｆとａ）、（ｆとｂ）、（ｆとｃ）、（ｆとｄ）、（ｆとｅ）、（ｆとｇ）、（ｆとｈ）、（ｆとｉ）、（ｆとｊ）、（ｇとａ）、（ｇとｂ）、（ｇとｃ）、（ｇとｄ）、（ｇとｅ）、（ｇとｆ）、（ｇとｈ）、（ｇとｉ）、（ｇとｊ）、（ｈとａ）、（ｈとｂ）、（ｈとｃ）、（ｈとｄ）、（ｈとｅ）、（ｈとｆ）、（ｈとｇ）、（ｈとｉ）、（ｈとｊ）、（ｉとａ）、（ｉとｂ）、（ｉとｃ）、（ｉとｄ）、（ｉとｅ）、（ｉとｆ）、（ｉとｇ）、（ｉとｈ）、（ｉとｊ）、（ｊとａ）、（ｊとｂ）、（ｊとｃ）、（ｊとｄ）、（ｊとｅ）、（ｊとｆ）、（ｊとｇ）、（ｊとｈ）及び（ｊとｉ）から選択される組み合わせの特徴を示す。いくつかの実施形態では、このようなＡＢＰは、（ａとｂとｃ）、（ａとｂとｄ）、（ａとｂとｅ）、（ａとｂとｆ）、（ａとｂとｇ）、（ａとｂとｈ）、（ａとｂとｉ）、（ａとｂとｊ）、（ａとｃとｂ）、（ａとｃとｄ）、（ａとｃとｅ）、（ａとｃとｆ）、（ａとｃとｇ）、（ａとｃとｈ）、（ａとｃとｉ）、（ａとｃとｊ）、（ａとｄとｂ）、（ａとｄとｃ）、（ａとｄとｅ）、（ａとｄとｆ��、（ａとｄとｇ）、（ａとｄとｈ）、（ａとｄとｉ）、（ａとｄとｊ）、（ａとｅとｂ）、（ａとｅとｃ）、（ａとｅとｄ）、（ａとｅとｆ）、（ａとｅとｇ）、（ａとｅとｈ）、（ａとｅとｉ）、（ａとｅとｊ）、（ａとｆとｂ）、（ａとｆとｃ）、（ａとｆとｄ）、（ａとｆとｅ）、（ａとｆとｇ）、（ａとｆとｈ）、（ａとｆとｉ）、（ａとｆとｊ）、（ａとｇとｂ）、（ａとｇとｃ）、（ａとｇとｄ）、（ａとｇとｅ）、（ａとｇとｆ）、（ａとｇとｈ）、（ａとｇとｉ）、（ａとｇとｊ）、（ａとｈとｂ）、（ａとｈとｃ）、（ａとｈとｄ）、（ａとｈとｅ）、（ａとｈとｆ）、（ａとｈとｇ）、（ａとｈとｉ）、（ａとｈとｊ）、（ａとｉとｂ）、（ａとｉとｃ）、（ａとｉとｄ）、（ａとｉとｅ）、（ａとｉとｆ）、（ａとｉとｇ）、（ａとｉとｈ）、（ａとｉとｊ）、（ａとｊとｂ）、（ａとｊとｃ）、（ａとｊとｄ）、（ａとｊとｅ）、（ａとｊとｆ）、（ａとｊとｇ）、（ａとｊとｈ）、（ａとｊとｉ）、（ｂとａとｊ）、（ｂとａとｃ）、（ｂとａとｄ）、（ｂとａとｅ）、（ｂとａとｆ）、（ｂとａとｇ）、（ｂとａとｈ）、（ｂとａとｉ）、（ｂとｃとｊ）、（ｂとｃとａ）、（ｂとｃとｄ）、（ｂとｃとｅ）、（ｂとｃとｆ）、（ｂとｃとｇ）、（ｂとｃとｈ）、（ｂとｃとｉ）、（ｂとｄとｊ）、（ｂとｄとａ）、（ｂとｄとｃ）、（ｂとｄとｅ）、（ｂとｄとｆ）、（ｂとｄとｇ）、（ｂとｄとｈ）、（ｂとｄとｉ）、（ｂとｅとｊ）、（ｂとｅとａ）、（ｂとｅとｃ）、（ｂとｅとｄ）、（ｂとｅとｆ）、（ｂとｅとｇ）、（ｂとｅとｈ）、（ｂとｅとｉ）、（ｂとｆとｊ）、（ｂとｆとａ）、（ｂとｆとｃ）、（ｂとｆとｄ）、（ｂとｆとｅ）、（ｂとｆとｇ）、（ｂとｆとｈ）、（ｂとｆとｉ）、（ｂとｇとｊ）、（ｂとｇとａ）、（ｂとｇとｃ）、（ｂとｇとｄ）、（ｂとｇとｅ）、（ｂとｇとｆ）、（ｂとｇとｈ）、（ｂとｇとｉ）、（ｂとｈとｊ）、（ｂとｈとａ）、（ｂとｈとｃ）、（ｂとｈとｄ）、（ｂとｈとｅ）、（ｂとｈとｆ）、（ｂとｈとｇ）、（ｂとｈとｉ）、（ｂとｉとｊ）、（ｂとｉとａ）、（ｂとｉとｃ）、（ｂとｉとｄ）、（ｂとｉとｅ）、（ｂとｉとｆ）、（ｂとｉとｇ）、（ｂとｉとｈ）、（ｂとｊとｉ）、（ｂとｊとａ）、（ｂとｊとｃ）、（ｂとｊとｄ）、（ｂとｊとｅ）、（ｂとｊとｆ）、（ｂとｊとｇ）、（ｂとｊとｈ）、（ｃとａとｉ）、（ｃとａとｊ）、（ｃとａとｂ）、（ｃとａとｄ）、（ｃとａとｅ）、（ｃとａとｆ）、（ｃとａとｇ）、（ｃとａとｈ）、（ｃとｂとｉ）、（ｃとｂとｊ）、（ｃとｂとａ）、（ｃとｂとｄ）、（ｃとｂとｅ）、（ｃとｂとｆ）、（ｃとｂとｇ）、（ｃとｂとｈ）、（ｃとｄとｉ）、（ｃとｄとｊ）、（ｃとｄとａ）、（ｃとｄとｂ）、（ｃとｄとｅ）、（ｃとｄとｆ）、（ｃとｄとｇ）、（ｃとｄとｈ）、（ｃとｅとｉ）、（ｃとｅとｊ）、（ｃとｅとａ）、（ｃとｅとｂ）、（ｃとｅとｄ）、（ｃとｅとｆ）、（ｃとｅとｇ）、（ｃとｅとｈ）、（ｃとｆとｉ）、（ｃとｆとｊ）、（ｃとｆとａ）、（ｃとｆとｂ）、（ｃとｆとｄ）、（ｃとｆとｅ）、（ｃとｆとｇ）、（ｃとｆとｈ）、（ｃとｇとｉ）、（ｃとｇとｊ）、（ｃとｇとａ）、（ｃとｇとｂ）、（ｃとｇとｄ）、（ｃとｇとｅ）、（ｃと��とｆ）、（ｃとｇとｈ）、（ｃとｈとｉ）、（ｃとｈとｊ）、（ｃとｈとａ）、（ｃとｈとｂ）、（ｃとｈとｄ）、（ｃとｈとｅ）、（ｃとｈとｆ）、（ｃとｈとｇ）、（ｃとｉとｈ）、（ｃとｉとｊ）、（ｃとｉとａ）、（ｃとｉとｂ）、（ｃとｉとｄ）、（ｃとｉとｅ）、（ｃとｉとｆ）、（ｃとｉとｇ）、（ｃとｊとｈ）、（ｃとｊとｉ）、（ｃとｊとａ）、（ｃとｊとｂ）、（ｃとｊとｄ）、（ｃとｊとｅ）、（ｃとｊとｆ）、（ｃとｊとｇ）、（ｄとａとｈ）、（ｄとａとｉ）、（ｄとａとｊ）、（ｄとａとｂ）、（ｄとａとｃ）、（ｄとａとｅ）、（ｄとａとｆ）、（ｄとａとｇ）、（ｄとｂとｈ）、（ｄとｂとｉ）、（ｄとｂとｊ）、（ｄとｂとａ）、（ｄとｂとｃ）、（ｄとｂとｅ）、（ｄとｂとｆ）、（ｄとｂとｇ）、（ｄとｃとｈ）、（ｄとｃとｉ）、（ｄとｃとｊ）、（ｄとｃとａ）、（ｄとｃとｂ）、（ｄとｃとｅ）、（ｄとｃとｆ）、（ｄとｃとｇ）、（ｄとｅとｈ）、（ｄとｅとｉ）、（ｄとｅとｊ）、（ｄとｅとａ）、（ｄとｅとｂ）、（ｄとｅとｃ）、（ｄとｅとｆ）、（ｄとｅとｇ）、（ｄとｆとｈ）、（ｄとｆとｉ）、（ｄとｆとｊ）、（ｄとｆとａ）、（ｄとｆとｂ）、（ｄとｆとｃ）、（ｄとｆとｅ）、（ｄとｆとｇ）、（ｄとｇとｈ）、（ｄとｇとｉ）、（ｄとｇとｊ）、（ｄとｇとａ）、（ｄとｇとｂ）、（ｄとｇとｃ）、（ｄとｇとｅ）、（ｄとｇとｆ）、（ｄとｈとｇ）、（ｄとｈとｉ）、（ｄとｈとｊ）、（ｄとｈとａ）、（ｄとｈとｂ）、（ｄとｈとｃ）、（ｄとｈとｅ）、（ｄとｈとｆ）、（ｄとｉとｇ）、（ｄとｉとｈ）、（ｄとｉとｊ）、（ｄとｉとａ）、（ｄとｉとｂ）、（ｄとｉとｃ）、（ｄとｉとｅ）、（ｄとｉとｆ）、（ｄとｊとｇ）、（ｄとｊとｈ）、（ｄとｊとｉ）、（ｄとｊとａ）、（ｄとｊとｂ）、（ｄとｊとｃ）、（ｄとｊとｅ）、（ｄとｊとｆ）、（ｅとａとｇ）、（ｅとａとｈ）、（ｅとａとｉ）、（ｅとａとｊ）、（ｅとａとｂ）、（ｅとａとｃ）、（ｅとａとｄ）、（ｅとａとｆ）、（ｅとｂとｇ）、（ｅとｂとｈ）、（ｅとｂとｉ）、（ｅとｂとｊ）、（ｅとｂとａ）、（ｅとｂとｃ）、（ｅとｂとｄ）、（ｅとｂとｆ）、（ｅとｃとｇ）、（ｅとｃとｈ）、（ｅとｃとｉ）、（ｅとｃとｊ）、（ｅとｃとａ）、（ｅとｃとｂ）、（ｅとｃとｄ）、（ｅとｃとｆ）、（ｅとｄとｇ）、（ｅとｄとｈ）、（ｅとｄとｉ）、（ｅとｄとｊ）、（ｅとｄとａ）、（ｅとｄとｂ）、（ｅとｄとｃ）、（ｅとｄとｆ）、（ｅとｆとｇ）、（ｅとｆとｈ）、（ｅとｆとｉ）、（ｅとｆとｊ）、（ｅとｆとａ）、（ｅとｆとｂ）、（ｅとｆとｃ）、（ｅとｆとｄ）、（ｅとｇとｆ）、（ｅとｇとｈ）、（ｅとｇとｉ）、（ｅとｇとｊ）、（ｅとｇとａ）、（ｅとｇとｂ）、（ｅとｇとｃ）、（ｅとｇとｄ）、（ｅとｈとｆ）、（ｅとｈとｇ）、（ｅとｈとｉ）、（ｅとｈとｊ）、（ｅとｈとａ）、（ｅとｈとｂ）、（ｅとｈとｃ）、（ｅとｈとｄ）、（ｅとｉとｆ）、（ｅとｉとｇ）、（ｅとｉとｈ）、（ｅとｉとｊ）、（ｅとｉとａ）、（ｅとｉとｂ）、（ｅとｉとｃ）、（ｅとｉとｄ）、（ｅとｊとｆ）、（ｅとｊとｇ）、（ｅとｊとｈ）、（ｅとｊとｉ）、（ｅとｊとａ）、（ｅとｊとｂ）、（ｅとｊとｃ）、（ｅとｊとｄ）、（ｆとａとｅ）、��ｆとａとｇ）、（ｆとａとｈ）、（ｆとａとｉ）、（ｆとａとｊ）、（ｆとａとｂ）、（ｆとａとｃ）、（ｆとａとｄ）、（ｆとｂとｅ）、（ｆとｂとｇ）、（ｆとｂとｈ）、（ｆとｂとｉ）、（ｆとｂとｊ）、（ｆとｂとａ）、（ｆとｂとｃ）、（ｆとｂとｄ）、（ｆとｃとｅ）、（ｆとｃとｇ）、（ｆとｃとｈ）、（ｆとｃとｉ）、（ｆとｃとｊ）、（ｆとｃとａ）、（ｆとｃとｂ）、（ｆとｃとｄ）、（ｆとｄとｅ）、（ｆとｄとｇ）、（ｆとｄとｈ）、（ｆとｄとｉ）、（ｆとｄとｊ）、（ｆとｄとａ）、（ｆとｄとｂ）、（ｆとｄとｃ）、（ｆとｅとｄ）、（ｆとｅとｇ）、（ｆとｅとｈ）、（ｆとｅとｉ）、（ｆとｅとｊ）、（ｆとｅとａ）、（ｆとｅとｂ）、（ｆとｅとｃ）、（ｆとｇとｄ）、（ｆとｇとｅ）、（ｆとｇとｈ）、（ｆとｇとｉ）、（ｆとｇとｊ）、（ｆとｇとａ）、（ｆとｇとｂ）、（ｆとｇとｃ）、（ｆとｈとｄ）、（ｆとｈとｅ）、（ｆとｈとｇ）、（ｆとｈとｉ）、（ｆとｈとｊ）、（ｆとｈとａ）、（ｆとｈとｂ）、（ｆとｈとｃ）、（ｆとｉとｄ）、（ｆとｉとｅ）、（ｆとｉとｇ）、（ｆとｉとｈ）、（ｆとｉとｊ）、（ｆとｉとａ）、（ｆとｉとｂ）、（ｆとｉとｃ）、（ｆとｊとｄ）、（ｆとｊとｅ）、（ｆとｊとｇ）、（ｆとｊとｈ）、（ｆとｊとｉ）、（ｆとｊとａ）、（ｆとｊとｂ）、（ｆとｊとｃ）、（ｇとａとｄ）、（ｇとａとｅ）、（ｇとａとｆ）、（ｇとａとｈ）、（ｇとａとｉ）、（ｇとａとｊ）、（ｇとａとｂ）、（ｇとａとｃ）、（ｇとｂとｄ）、（ｇとｂとｅ）、（ｇとｂとｆ）、（ｇとｂとｈ）、（ｇとｂとｉ）、（ｇとｂとｊ）、（ｇとｂとａ）、（ｇとｂとｃ）、（ｇとｃとｄ）、（ｇとｃとｅ）、（ｇとｃとｆ）、（ｇとｃとｈ）、（ｇとｃとｉ）、（ｇとｃとｊ）、（ｇとｃとａ）、（ｇとｃとｂ）、（ｇとｄとｃ）、（ｇとｄとｅ）、（ｇとｄとｆ）、（ｇとｄとｈ）、（ｇとｄとｉ）、（ｇとｄとｊ）、（ｇとｄとａ）、（ｇとｄとｂ）、（ｇとｅとｃ）、（ｇとｅとｄ）、（ｇとｅとｆ）、（ｇとｅとｈ）、（ｇとｅとｉ）、（ｇとｅとｊ）、（ｇとｅとａ）、（ｇとｅとｂ）、（ｇとｆとｃ）、（ｇとｆとｄ）、（ｇとｆとｅ）、（ｇとｆとｈ）、（ｇとｆとｉ）、（ｇとｆとｊ）、（ｇとｆとａ）、（ｇとｆとｂ）、（ｇとｈとｃ）、（ｇとｈとｄ）、（ｇとｈとｅ）、（ｇとｈとｆ）、（ｇとｈとｉ）、（ｇとｈとｊ）、（ｇとｈとａ）、（ｇとｈとｂ）、（ｇと
ｉとｃ）、（ｇとｉとｄ）、（ｇとｉとｅ）、（ｇとｉとｆ）、（ｇとｉとｈ）、（ｇとｉとｊ）、（ｇとｉとａ）、（ｇとｉとｂ）、（ｇとｊとｃ）、（ｇとｊとｄ）、（ｇとｊとｅ）、（ｇとｊとｆ）、（ｇとｊとｈ）、（ｇとｊとｉ）、（ｇとｊとａ）、（ｇとｊとｂ）、（ｈとａとｃ）、（ｈとａとｄ）、（ｈとａとｅ）、（ｈとａとｆ）、（ｈとａとｇ）、（ｈとａとｉ）、（ｈとａとｊ）、（ｈとａとｂ）、（ｈとｂとｃ）、（ｈとｂとｄ）、（ｈとｂとｅ）、（ｈとｂとｆ）、（ｈとｂとｇ）、（ｈとｂとｉ）、（ｈとｂとｊ）、（ｈとｂとａ）、（ｈとｃとｂ）、（ｈとｃとｄ）、（ｈとｃとｅ）、（ｈとｃとｆ）、（ｈとｃとｇ）、（ｈとｃとｉ）、（ｈとｃとｊ）、（ｈとｃとａ）、（ｈとｄとｂ）、（ｈとｄとｃ）、（ｈとｄとｅ）、（ｈとｄとｆ）、（ｈとｄとｇ）、（ｈとｄとｉ）、（ｈとｄとｊ）、（ｈとｄとａ）、（ｈとｅとｂ）、（ｈとｅとｃ）、（ｈとｅとｄ）、（ｈとｅとｆ）、（ｈとｅとｇ）、（ｈとｅとｉ）、（ｈとｅとｊ）、（ｈとｅとａ）、（ｈとｆとｂ）、（ｈとｆとｃ）、（ｈとｆとｄ）、（ｈとｆとｅ）、（ｈとｆとｇ）、（ｈとｆとｉ）、（ｈとｆとｊ）、（ｈとｆとａ）、（ｈとｇとｂ）、（ｈとｇとｃ）、（ｈとｇとｄ）、（ｈとｇとｅ）、（ｈとｇとｆ）、（ｈとｇとｉ）、（ｈとｇとｊ）、（ｈとｇとａ）、（ｈとｉとｂ）、（ｈとｉとｃ）、（ｈとｉとｄ）、（ｈとｉとｅ）、（ｈとｉとｆ）、（ｈとｉとｇ）、（ｈとｉとｊ）、（ｈとｉとａ）、（ｈとｊとｂ）、（ｈとｊとｃ）、（ｈとｊとｄ）、（ｈとｊとｅ）、（ｈとｊとｆ）、（ｈとｊとｇ）、（ｈとｊとｉ）、（ｈとｊとａ）、（ｉとａとｂ）、（ｉとａとｃ）、（ｉとａとｄ）、（ｉとａとｅ）、（ｉとａとｆ）、（ｉとａとｇ）、（ｉとａとｈ）、（ｉとａとｊ）、（ｉとｂとａ）、（ｉとｂとｃ）、（ｉとｂとｄ）、（ｉとｂとｅ）、（ｉとｂとｆ）、（ｉとｂとｇ）、（ｉとｂとｈ）、（ｉとｂとｊ）、（ｉとｃとａ）、（ｉとｃとｂ）、（ｉとｃとｄ）、（ｉとｃとｅ）、（ｉとｃとｆ）、（ｉとｃとｇ）、（ｉとｃとｈ）、（ｉとｃとｊ）、（ｉとｄとａ）、（ｉとｄとｂ）、（ｉとｄとｃ）、（ｉとｄとｅ）、（ｉとｄとｆ）、（ｉとｄとｇ）、（ｉとｄとｈ）、（ｉとｄとｊ）、（ｉとｅとａ）、（ｉとｅとｂ）、（ｉとｅとｃ）、（ｉとｅとｄ）、（ｉとｅとｆ）、（ｉとｅとｇ）、（ｉとｅとｈ）、（ｉとｅとｊ）、（ｉとｆとａ）、（ｉとｆとｂ）、（ｉとｆとｃ）、（ｉとｆとｄ）、（ｉとｆとｅ）、（ｉとｆとｇ）、（ｉとｆとｈ）、（ｉとｆとｊ）、（ｉとｇとａ）、（ｉとｇとｂ）、（ｉとｇとｃ）、（ｉとｇとｄ）、（ｉとｇとｅ）、（ｉとｇとｆ）、（ｉとｇとｈ）、（ｉとｇとｊ）、（ｉとｈとａ）、（ｉとｈとｂ）、（ｉとｈとｃ）、（ｉとｈとｄ）、（ｉとｈとｅ）、（ｉとｈとｆ）、（ｉとｈとｇ）、（ｉとｈとｊ）、（ｉとｊとａ）、（ｉとｊとｂ）、（ｉとｊとｃ）、（ｉとｊとｄ）、（ｉとｊとｅ）、（ｉとｊとｆ）、（ｉとｊとｇ）、（ｉとｊとｈ）、（ｊとａとｉ）、（ｊとａとｂ）、（ｊとａとｃ）、（ｊとａとｄ）、（ｊとａとｅ）、（ｊとａとｆ）、（ｊとａとｇ）、（ｊとａとｈ）、（ｊとｂとｉ）、（ｊとｂとａ）、（ｊとｂとｃ）、（ｊとｂとｄ）、（ｊとｂとｅ）、（ｊとｂとｆ）、（ｊとｂとｇ）、（ｊとｂとｈ）、（ｊとｃとｉ）、（ｊとｃとａ）、（ｊとｃとｂ）、（ｊとｃとｄ）、（ｊとｃとｅ）、（ｊとｃとｆ）、（ｊとｃとｇ）、（ｊとｃとｈ）、（ｊとｄとｉ）、（ｊとｄとａ）、（ｊとｄとｂ）、（ｊとｄとｃ）、（ｊとｄとｅ）、（ｊとｄとｆ）、（ｊとｄとｇ）、（ｊとｄとｈ）、（ｊとｅとｉ）、（ｊとｅとａ）、（ｊとｅとｂ）、（ｊとｅとｃ）、（ｊとｅとｄ）、（ｊとｅとｆ）、（ｊとｅとｇ）、（ｊとｅとｈ）、（ｊとｆとｉ）、（ｊとｆとａ）、（ｊとｆとｂ）、（ｊとｆとｃ）、（ｊとｆとｄ）、（ｊとｆとｅ）、（ｊとｆとｇ）、（ｊとｆとｈ）、（ｊとｇとｉ）、（ｊとｇとａ）、（ｊとｇとｂ）、（ｊとｇとｃ）、（ｊとｇとｄ）、（ｊとｇとｅ）、（ｊとｇとｆ）、（ｊとｇとｈ）、（ｊとｈとｉ）、（ｊとｈとａ）、（ｊとｈとｂ）、（ｊとｈとｃ）、（ｊとｈとｄ）、（ｊとｈとｅ）、（ｊとｈとｆ）、（ｊとｈとｇ）、（ｊとｉとｈ）、（ｊとｉとａ）、（ｊとｉとｂ）、（ｊとｉとｃ）、（ｊとｉとｄ）、（ｊとｉとｅ）、（ｊとｉとｆ）及び（ｊとｉとｇ）から選択される組み合わせの特徴を示す。
【０２６１】
２．３．生殖細胞系列
本発明で提供するＡＢＰは、いずれかの好適なＶＨ及びＶＬ生殖細胞系列配列を含んでよい。
【０２６２】
いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰのＶＨ領域は、生殖細胞系列ＶＨ４に由来するものである。いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰのＶＨ領域は、生殖細胞系列ＶＨ１に由来するものである。
【０２６３】
いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰのＶＨ領域は、生殖細胞系列ＶＨ４−３９に由来するものである。いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰのＶＨ領域は、生殖細胞系列ＶＨ４−３１に由来するものである。いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰのＶＨ領域は、生殖細胞系列ＶＨ１−４６に由来するものである。
【０２６４】
いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰのＶＬ領域は、生殖細胞系列ＶＫ３に由来する。
【０２６５】
いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰのＶＬ領域は、生殖細胞系列ＶＫ３−１１に由来するものである。いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰのＶＬ領域は、生殖細胞系列ＶＫ３−２０に由来するものである。いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰのＶＬ領域は、生殖細胞系列ＶＫ３−１５に由来するものである。
【０２６６】
２．４．単特異性及び多特異性ＴＩＧＩＴ抗原結合タンパク質
いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰは、単特異性ＡＢＰである。
【０２６７】
いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰは、多特異性ＡＢＰである。
【０２６８】
いくつかの実施形態では、本発明で提供する多特異性ＡＢＰは、２つ以上の抗原に結合する。いくつかの実施形態では、多特異性抗体は、２つの抗原に結合する。いくつかの実施形態では、多特異性抗体は、３つの抗原に結合する。いくつかの実施形態では、多特異性抗体は、４つの抗原に結合する。いくつかの実施形態では、多特異性抗体は、５つの抗原に結合する。
【０２６９】
いくつかの実施形態では、本発明で提供する多特異性抗体は、ＴＩＧＩＴ抗原上の２つ以上のエピトープに結合する。いくつかの実施形態では、多特異性抗体は、ＴＩＧＩＴ抗原上の２つのエピトープに結合する。いくつかの実施形態では、多特異性抗体は、ＴＩＧＩＴ抗原上の３つのエピトープに結合する。
【０２７０】
多くの多特異性ＡＢＰコンストラクトが、当該技術分野において知られており、本発明で提供するＡＢＰは、任意の好適な多特異性の好適なコンストラクトの形態で提供してよい。
【０２７１】
いくつかの実施形態では、本発明の多特異性ＡＢＰは、共通の軽鎖可変領域とそれぞれ対合する少なくとも２つの異なる重鎖可変領域を含む免疫グロブリン（すなわち「共通軽鎖抗体」）を含む。この共通の軽鎖可変領域は、これらの２つの異なる重鎖可変領域のそれぞれとともに、別個の抗原結合ドメインを形成する。Ｍｅｒｃｈａｎｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．，１９９８，１６：６７７−６８１（参照により、その全体が援用される）を参照されたい。
【０２７２】
いくつかの実施形態では、本発明の多特異性ＡＢＰは、免疫グロブリンであって、その免疫グロブリンの重鎖または軽鎖のＮ末端またはＣ末端の１つ以上に結合した抗体またはその断片を含む免疫グロブリンを含む。Ｃｏｌｏｍａ  ａｎｄ  Ｍｏｒｒｉｓｏｎ，Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．，１９９７，１５：１５９−１６３（参照により、その全体が援用される）を参照されたい。いくつかの態様では、このようなＡＢＰは、四価の二重特異性抗体を含む。
【０２７３】
いくつかの実施形態では、本発明の多特異性ＡＢＰは、少なくとも２つの異なる重鎖可変領域と、少なくとも２つの異なる軽鎖可変領域を含むハイブリッド免疫グロブリンを含む。Ｍｉｌｓｔｅｉｎ  ａｎｄ  Ｃｕｅｌｌｏ，Ｎａｔｕｒｅ，１９８３，３０５：５３７−５４０及びＳｔａｅｒｚ  ａｎｄ  Ｂｅｖａｎ，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，１９８６，８３：１４５３−１４５７（それぞれ、参照により、その全体が援用される）を参照されたい。
【０２７４】
いくつかの実施形態では、本発明の多特異性ＡＢＰは、多特異性を有さない副生物の形成を軽減するように改変されている免疫グロブリン鎖を含む。いくつかの態様では、このＡＢＰは、米国特許第５，７３１，１６８号（参照により、その全体が援用される）に記載されているような「ノブ・イントゥ・ホール」の改変を１つ以上含む。
【０２７５】
いくつかの実施形態では、本発明の多特異性ＡＢＰは、Ｆｃヘテロ多量体のアセンブルを促す１つ以上の静電変性を含む免疫グロブリン鎖を含む。ＷＯ２００９／０８９００４（参照により、その全体が援用される）を参照されたい。
【０２７６】
いくつかの実施形態では、本発明の多特異性ＡＢＰは、二重特異性一本鎖分子を含む。Ｔｒａｕｎｅｃｋｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，ＥＭＢＯ  Ｊ．，１９９１，１０：３６５５−３６５９及びＧｒｕｂｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１９９４，１５２：５３６８−５３７４（それぞれ、参照により、その全体が援用される）を参照されたい。
【０２７７】
いくつかの実施形態では、本発明の多特異性ＡＢＰは、ポリペプチドリンカーによって連結された重鎖可変ドメインと軽鎖可変ドメインを含み、そのリンカーの長さは、所望の多特異性を有する多特異性ＡＢＰのアセンブルを促すように選択されている。例えば、単特異性ｓｃＦｖは概ね、重鎖可変ドメインと軽鎖可変ドメインを、１２個超のアミノ酸残基のポリペプチドリンカーによって連結すると形成される。米国特許第４，９４６，７７８号及び同第５，１３２，４０５号（それぞれ、参照により、その全体が援用される）を参照されたい。いくつかの実施形態では、ポリペプチドリンカー長を１２個未満のアミノ酸残基まで短縮することによって、同じポリペプチド鎖上で、重鎖可変ドメインと軽鎖可変ドメインが対合するのを防ぎ、それにより、１本の鎖に由来する重鎖可変ドメインと軽鎖可変ドメインを、別の鎖上の相補的ドメインと対合させることが可能になる。したがって、得られるＡＢＰは、２本以上のポリペプチド鎖によって付与される各結合部位の特異性を供えた多特異性を有する。３個〜１２個のアミノ酸残基のリンカーによって連結されている重鎖可変ドメインと軽鎖可変ドメインを含むポリペプチド鎖は主に、二量体を形成する（ダイアボディという）。０〜２個のアミノ酸残基のリンカーでは、三量体（トリアボディという）と四量体（テトラボディという）が好ましい。しかしながら、厳密なタイプのオリゴマー形成は、リンカー長に加えて、アミノ酸残基組成と、各ポリペプチド鎖における可変ドメインの順序（例えばＶＨ−リンカー−ＶＬに対して、ＶＬ−リンカー−ＶＨ）に左右されると見られる。当業者は、所望の多特異性に基づき、適切なリンカー長を選択できる。
【０２７８】
いくつかの実施形態では、本発明の多特異性ＡＢＰは、ダイアボディを含む。Ｈｏｌｌｉｎｇｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，１９９３，９０：６４４４−６４４８（参照により、その全体が援用される）を参照されたい。いくつかの実施形態では、本発明の多特異性ＡＢＰは、トリアボディを含む。Ｔｏｄｏｒｏｖｓｋａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ，２００１，２４８：４７−６６（参照により、その全体が援用される）を参照されたい。いくつかの実施形態では、多特異性ＡＢＰは、テトラボディを含む。上記の文献（参照により、その全体が援用される）を参照されたい。
【０２７９】
いくつかの実施形態では、本発明の多特異性ＡＢＰは、三重特異性Ｆ（ａｂ’）３誘導体を含む。Ｔｕｔｔ  ｅｔ  ａｌ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１９９１，１４７：６０−６９（参照により、その全体が援用される）を参照されたい。
【０２８０】
いくつかの実施形態では、本発明の多特異性ＡＢＰは、架橋抗体を含む。米国特許第４，６７６，９８０号、Ｂｒｅｎｎａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ，１９８５，２２９：８１−８３、Ｓｔａｅｒｚ，ｅｔ  ａｌ．Ｎａｔｕｒｅ，１９８５，３１４：６２８−６３１及びＥＰ０４５３０８２（それぞれ、参照により、その全体が援用される）を参照されたい。
【０２８１】
いくつかの実施形態では、本発明の多特異性ＡＢＰは、ロイシンジッパーによってアセンブルされた抗原結合ドメインを含む。Ｋｏｓｔｅｌｎｙ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１９９２，１４８：１５４７−１５５３（参照により、その全体が援用される）を参照されたい。
【０２８２】
いくつかの実施形態では、本発明の多特異性ＡＢＰは、相補的なタンパク質ドメインを含む。いくつかの態様では、この相補的なタンパク質ドメインは、アンカリングドメイン（ＡＤ）と、二量体化及びドッキングドメイン（ＤＤＤ）を含む。いくつかの実施形態では、ＡＤとＤＤＤは、互いに結合し合うことによって、「ドックアンドロック」（ＤＮＬ）アプローチを介して、多特異性ＡＢＰ構造体をアセンブル可能にする。二重特異性ＡＢＰ、三重特異性ＡＢＰ、四重特異性ＡＢＰ、五重特異性ＡＢＰ及び六重特異性ＡＢＰを含む多特異性のＡＢＰをアセンブルしてよい。相補的なタンパク質ドメインを含む多特異性ＡＢＰは、例えば、米国特許第７，５２１，０５６号、同第７，５５０，１４３号、同第７，５３４，８６６号及び同第７，５２７，７８７号（それぞれ、参照により、その全体が援用される）に記載されている。
【０２８３】
いくつかの実施形態では、本発明の多特異性ＡＢＰは、米国特許出願公開第２００８／００６９８２０号（参照により、その全体が援用される）に記載されているような二重作用Ｆａｂ（ＤＡＦ）抗体を含む。
【０２８４】
いくつかの実施形態では、本発明の多特異性ＡＢＰは、２つの親分子を還元してから、その２つの親分子を混合し、再酸化して、ハイブリッド構造体をアセンブルすることによって形成された抗体を含む。Ｃａｒｌｒｉｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，ＰＬｏＳ  Ｏｎｅ，２０１１，６：ｅ２２５３３（参照により、その全体が援用される）を参照されたい。
【０２８５】
いくつかの実施形態では、本発明の多特異性ＡＢＰは、ＤＶＤ−Ｉｇ（商標）を含む。ＤＶＤ−Ｉｇ（商標）は、２つ以上の抗原に結合できる二重可変ドメイン免疫グロブリンである。ＤＶＤ−Ｉｇ（商標）は、米国特許第７，６１２，１８１号（参照により、その全体が援用される）に説明されている。
【０２８６】
いくつかの実施形態では、本発明の多特異性ＡＢＰは、ＤＡＲＴ（商標）を含む。ＤＡＲＴ（商標）は、Ｍｏｏｒｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ，２０１１，１１７：４５４−４５１（参照により、その全体が援用される）に説明されている。
【０２８７】
いくつかの実施形態では、本発明の多特異性ＡＢＰは、ＤｕｏＢｏｄｙ（登録商標）を含む。ＤｕｏＢｏｄｙ（登録商標）は、Ｌａｂｒｉｊｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，２０１３，１１０：５１４５−５１５０、Ｇｒａｍｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，ｍＡｂｓ，２０１３，５：９６２−９７２及びＬａｂｒｉｊｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ，２０１４，９：２４５０−２４６３（それぞれ、参照により、その全体が援用される）に説明されている。
【０２８８】
いくつかの実施形態では、本発明の多特異性ＡＢＰは、別の抗体または断片に結合した抗体断片を含む。この結合は、共有結合であることも、非共有結合であることもできる。この結合が共有結合であるときには、融合タンパク質の形態であっても、化学リンカーを介したものであってもよい。他の抗体に結合した抗体断片を含む多特異性ＡＢＰの例示的な例としては、四価の二重特異性抗体であって、ｓｃＦｖが、ＩｇＧ由来のＣＨ３のＣ末端に融合している抗体が挙げられる。Ｃｏｌｏｍａ  ａｎｄ  Ｍｏｒｒｉｓｏｎ，Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．，１９９７，１５：１５９−１６３を参照されたい。他の例としては、Ｆａｂ分子が、免疫グロブリンの定常領域に結合している抗体が挙げられる。Ｍｉｌｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，２００３，１７０：４８５４−４８６１（参照により、その全体が援用される）を参照されたい。本明細書に記載されているかまたは当該技術分野において知られている断片のいずれかを含め、いずれかの好適な断片を用いてよい。
【０２８９】
いくつかの実施形態では、本発明の多特異性ＡＢＰは、ＣｏｖＸ−Ｂｏｄｙを含む。ＣｏｖＸ−Ｂｏｄｙは、例えば、Ｄｏｐｐａｌａｐｕｄｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，２０１０，１０７：２２６１１−２２６１６（参照により、その全体が援用される）に説明されている。
【０２９０】
いくつかの実施形態では、本発明の多特異性ＡＢＰは、１つ以上の抗原結合ドメインがＦｃ領域に導入されているＦｃａｂ抗体を含む。Ｆｃａｂ抗体は、Ｗｏｚｎｉａｋ−Ｋｎｏｐｐ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｎｇ．Ｄｅｓ．Ｓｅｌ．，２０１０，２３：２８９−２９７（参照により、その全体が援用される）に説明されている。
【０２９１】
いくつかの実施形態では、本発明の多特異性ＡＢＰは、ＴａｎｄＡｂ（登録商標）抗体を含む。ＴａｎｄＡｂ（登録商標）抗体は、Ｋｉｐｒｉｙａｎｏｖ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，１９９９，２９３：４１−５６及びＺｈｕｋｏｖｓｋｙ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ，２０１３，１２２：５１１６（それぞれ、参照により、その全体が援用される）に説明されている。
【０２９２】
いくつかの実施形態では、本発明の多特異性ＡＢＰは、タンデムＦａｂを含む。タンデムＦａｂは、ＷＯ２０１５／１０３０７２（参照により、その全体が援用される）に説明されている。
【０２９３】
いくつかの実施形態では、本発明の多特異性ＡＢＰは、Ｚｙｂｏｄｙ（商標）を含む。Ｚｙｂｏｄｙ（商標）は、ＬａＦｌｅｕｒ  ｅｔ  ａｌ．，ｍＡｂｓ，２０１３，５：２０８−２１８（参照により、その全体が援用される）に説明されている。
【０２９４】
２．５．ＴＩＧＩＴアンタゴナイズ作用
いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰは、結合すると、ＴＩＧＩＴをアンタゴナイズする。
【０２９５】
いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰによるＴＩＧＩＴアンタゴナイズ作用によって、ＣＤ２２６（ＤＮＡＭ−１としても知られている）が二量体化及び／または活性化されるが、このＣＤ２２６は、ＴＩＧＩＴとの直接的な相互作用により、二量体化と機能が損なわれる共刺激レセプターである。Ｇｒｏｇａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，２０１４，１９２（１  Ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔ）２０１３．１５（参照により、その全体が援用される）を参照されたい。図２には、ＣＤ２２６−ＴＩＧＩＴ経路をＣＤ２８／ＣＴＬＡ４経路（共刺激／共阻害生態が似ている）と比較したものが示されている。
【０２９６】
いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰによるＴＩＧＩＴアンタゴナイズ作用によって、相互作用するＣＤ２２６とＣＤ１５５の量が、そのＡＢＰの非存在下で相互作用する量よりも増加する。
【０２９７】
いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰによるＴＩＧＩＴアンタゴナイズ作用によって、エフェクターＴ細胞が活性化する。いくつかの態様では、このエフェクターＴ細胞は、ＣＤ８＋Ｔ細胞である。いくつかの態様では、このエフェクターＴ細胞は、ＣＤ４＋Ｔ細胞である。
【０２９８】
いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰによるＴＩＧＩＴアンタゴナイズ作用によって、ＮＫ細胞が活性化する。いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰによるＴＩＧＩＴアンタゴナイズ作用によって、ＮＫＴ細胞が活性化する。
【０２９９】
いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰによるＴＩＧＩＴアンタゴナイズ作用によって、エフェクターＴ細胞に対する制御性Ｔ細胞の阻害活性が低下する。
【０３００】
いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰによるＴＩＧＩＴアンタゴナイズ作用によって、標的細胞によるＩＬ−２、ＩＬ−６、ＧＭ−ＣＳＦ、ＴＮＦ、ＬＴ−α及び／またはＩＦＮ−γの分泌が増大する。
【０３０１】
いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰによるＴＩＧＩＴアンタゴナイズ作用によって、エフェクターＴ細胞の増殖、生存及び／または機能が増大する。いくつかの態様では、このエフェクターＴ細胞は、ＣＤ４＋エフェクターＴ細胞である。いくつかの態様では、このエフェクターＴ細胞は、ＣＤ８＋エフェクターＴ細胞である。
【０３０２】
いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰによるＴＩＧＩＴアンタゴナイズ作用によって、制御性Ｔ細胞によるエフェクターＴ細胞の抑制が解除される。いくつかの態様では、この制御性Ｔ細胞は、ＣＤ４＋ＣＤ２５＋Ｆｏｘｐ３＋制御性Ｔ細胞である。いくつかの態様では、この制御性Ｔ細胞は、ＣＤ８＋ＣＤ２５＋制御性Ｔ細胞である。
【０３０３】
いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰによるＴＩＧＩＴアンタゴナイズ作用によって、免疫応答が増強される。
【０３０４】
いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰによるＴＩＧＩＴアンタゴナイズ作用によって、腫瘍が予防される。いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰによるＴＩＧＩＴアンタゴナイズ作用によって、腫瘍の発生が遅延する。いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰによるＴＩＧＩＴアンタゴナイズ作用によって、腫瘍のサイズが縮小する。いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰによるＴＩＧＩＴアンタゴナイズ作用によって、腫瘍が消失する。いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰによるＴＩＧＩＴアンタゴナイズ作用によって、転移の数が減少する。
【０３０５】
いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰによるＴＩＧＩＴアンタゴナイズ作用によって、ウイルス疾患が予防される。いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰによるＴＩＧＩＴアンタゴナイズ作用によって、ウイルス疾患の発症が遅延する。いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰによるＴＩＧＩＴアンタゴナイズ作用によって、対象のウイルス量が低下する。いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰによるＴＩＧＩＴアンタゴナイズ作用によって、ウイルス感染症を除去する。
【０３０６】
２．６．ＴＩＧＩＴに対する抗原結合タンパク質の親和性と動態、効能
いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰの、ＴＩＧＩＴに対する親和性（ＫＤによって示される）は、約１０−５Ｍ未満、約１０−６Ｍ未満、約１０−７Ｍ未満、約１０−８Ｍ未満、約１０−９Ｍ未満、約１０−１０Ｍ未満、約１０−１１Ｍ未満または約１０−１２Ｍ未満である。いくつかの実施形態では、本発明のＡＢＰのこの親和性は、約１０−７Ｍ〜１０−１２Ｍである。いくつかの実施形態では、本発明のＡＢＰのこの親和性は、約１０−７Ｍ〜１０−１１Ｍである。いくつかの実施形態では、本発明のＡＢＰのこの親和性は、約１０−７Ｍ〜１０−１０Ｍである。いくつかの実施形態では、本発明のＡＢＰのこの親和性は、約１０−７Ｍ〜１０−９Ｍである。いくつかの実施形態では、本発明のＡＢＰのこの親和性は、約１０−７Ｍ〜１０−８Ｍである。いくつかの実施形態では、本発明のＡＢＰのこの親和性は、約１０−８Ｍ〜１０−１２Ｍである。いくつかの実施形態では、本発明のＡＢＰのこの親和性は、約１０−８Ｍ〜１０−１１Ｍである。いくつかの実施形態では、本発明のＡＢＰのこの親和性は、約１０−９Ｍ〜１０−１１Ｍである。いくつかの実施形態では、本発明のＡＢＰのこの親和性は、約１０−１０Ｍ〜１０−１１Ｍである。
【０３０７】
いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰの、ｈＴＩＧＩＴに対する親和性（実施例４に定められているように、ＦｏｒｔｅＢｉｏによって測定したＫＤによって示される）は、約５．２４×１０−１０Ｍ、約４．５７×１０−１０Ｍ、約３．３２×１０−１０Ｍ、約２．４６×１０−１０Ｍ、約１．９６×１０−１０Ｍ、約３．１１×１０−９Ｍ、約２．５４×１０−９Ｍ、約３．１３×１０−９Ｍ、約２．８３×１０−９Ｍ、約１．７１×１０−９Ｍ、約２．４７×１０−９Ｍ、約２．３５×１０−９Ｍ、約１．４４×１０−９Ｍ、約１．２３×１０−９Ｍ、約５．２６×１０−１０Ｍ、約３．７８×１０−１０Ｍ、約４．２９×１０−１０Ｍまたは約４．４８×１０−１０Ｍから選択される。いくつかの実施形態では、この親和性は、約３．１３×１０−９Ｍ〜約１．９６×１０−１０Ｍの範囲である。いくつかの実施形態では、このＫＤは、約３．１３×１０−９Ｍ以下である。
【０３０８】
いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰの、ｃＴＩＧＩＴに対する親和性（実施例４に定められているように、ＦｏｒｔｅＢｉｏによって測定したＫＤによって示される）は、約２．６４×１０−９Ｍ、約６．５５×１０−９Ｍ、約８．１４×１０−９Ｍ、約６．５７×１０−９Ｍ、約７．９４×１０−８Ｍ、約７．０４×１０−８Ｍ、約１．１０×１０−７Ｍ、約７．２０×１０−８Ｍ、約１．５７×１０−９Ｍ、約８．０２×１０−１０Ｍ、約３．６７×１０−１０Ｍ、約８．９８×１０−１０Ｍ、約１．７５×１０−８Ｍまたは約２．５８×１０−８Ｍ、約９．３５×１０−９Ｍから選択される。いくつかの実施形態では、この親和性は、約１．１０×１０−７Ｍ〜約３．６９×１０−１０Ｍの範囲である。いくつかの実施形態では、このＫＤは、約１．１０×１０−７Ｍ以下である。
【０３０９】
いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰの、ｈＴＩＧＩＴに対する親和性（実施例４に定められているように、溶解平衡法（ＭＳＤ−ＳＥＴ）によって測定したＫＤによって示される）は、約５．４０×１０−１１Ｍ、約１．１０×１０−１０Ｍ、約１．５０×１０−１０Ｍ、約５．６０×１０−１１Ｍ、約４．００×１０−１０Ｍ、約３．８０×１０−１０Ｍ、約２．１０×１０−１０Ｍ、約７．００×１０−１１Ｍ、約４．１０×１０−１１Ｍ、約２．５０×１０−１１Ｍ、約３．００×１０−１１Ｍ、約８．００×１０−１１Ｍ、約８．１０×１０−１２Ｍ、約５．００×１０−１２Ｍまたは約４．９０×１０−１２Ｍから選択される。いくつかの実施形態では、この親和性は、約４．００×１０−１０Ｍ〜約４．９０×１０−１２Ｍの範囲である。いくつかの実施形態では、このＫＤは、約４．００×１０−１０Ｍ以下である。
【０３１０】
いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰの、ｃＴＩＧＩＴに対する親和性（実施例４に定められているように、ＭＳＤ−ＳＥＴによって測定したＫＤによって示される）は、約３．２０×１０−１０Ｍ、約２．３０×１０−１０Ｍ、約３．５０×１０−１１Ｍ、約１．５０×１０−１１Ｍまたは約４．６０×１０−１１Ｍから選択される。いくつかの実施形態では、この親和性は、約３．２０×１０−１０Ｍ〜約１．５０×１０−１１Ｍの範囲である。いくつかの実施形態では、このＫＤは、約３．２０×１０−１０Ｍ以下である。
【０３１１】
いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰの、ｈＴＩＧＩＴに対する親和性（実施例６に定められているように、ＦｏｒｔｅＢｉｏによって測定したＫＤによって示される）は、約７．１×１０−１０Ｍ、約８．１×１０−１１Ｍ、約１．９×１０−１０Ｍ、約５．６×１０−１０Ｍ、約２．４×１０−１０Ｍ、約２．８×１０−１０Ｍ、約１．６×１０−１０Ｍ、約５．８×１０−１０Ｍ、約１．１×１０−９Ｍ、約８．１×１０−１０Ｍ、約４．６×１０−１０Ｍまたは約３．６×１０−１０Ｍから選択される。いくつかの実施形態では、この親和性は、約１．１×１０−９Ｍ〜約８．１×１０−１１Ｍの範囲である。いくつかの実施形態では、このＫＤは、約１．１×１０−９Ｍ以下である。
【０３１２】
いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰの、ｈＴＩＧＩＴに対する親和性（実施例６に定められているように、ＦｏｒｔｅＢｉｏによって測定したＫＤによって示される）は、約２．４×１０−１０Ｍである。いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰの、ｃＴＩＧＩＴに対する親和性（実施例６に定められているように、ＦｏｒｔｅＢｉｏによって測定したＫＤによって示される）は、約６．２×１０−９Ｍである。いくつかの実施形態では、このＫＤは、約６．２×１０−９Ｍ以下である。
【０３１３】
いくつかの実施形態では、Ｊｕｒｋａｔ細胞の表面に発現しているｈＴＩＧＩＴに対する、本発明で提供するＡＢＰの親和性（実施例６に説明されているように、ＫＤによって示される）は、約５．１×１０−１０Ｍである。いくつかの実施形態では、このＫＤは、約５．１×１０−１０Ｍ以下である。
【０３１４】
いくつかの実施形態では、Ｊｕｒｋａｔ細胞の表面に発現しているｃＴＩＧＩＴに対する、本発明で提供するＡＢＰの親和性（実施例６に説明されているように、ＫＤによって示される）は、約４．０×１０−１０Ｍである。いくつかの実施形態では、このＫＤは、約４．０×１０−１０Ｍ以下である。
【０３１５】
いくつかの実施形態では、Ｊｕｒｋａｔ細胞の表面に発現しているｍＴＩＧＩＴ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３）に対する、本発明で提供するＡＢＰの親和性（実施例６に説明されているように、ＫＤによって示される）は、約９．８×１０−９Ｍである。いくつかの実施形態では、このＫＤは、約９．８×１０−９Ｍ以下である。いくつかの実施形態では、このＫＤは、約９．８×１０−９Ｍ以上である。
【０３１６】
いくつかの実施形態では、ヒトＣＤ８＋Ｔ細胞の表面に発現しているｈＴＩＧＩＴに対する、本発明で提供するＡＢＰの親和性（実施例６に説明されているように、ＫＤによって示される）は、約１．３×１０−９Ｍである。いくつかの実施形態では、このＫＤは、約１．３×１０−９Ｍ以下である。
【０３１７】
いくつかの実施形態では、カニクイザルＣＤ８＋Ｔ細胞の表面に発現しているｃＴＩＧＩＴに対する、本発明で提供するＡＢＰの親和性（実施例６に説明されているように、ＫＤによって示される）は、約２．８×１０−９Ｍである。いくつかの実施形態では、このＫＤは、約２．８×１０−９Ｍ以下である。
【０３１８】
いくつかの実施形態では、マウス制御性Ｔ細胞の表面に発現しているｍＴＩＧＩＴ（すなわち、天然において、このような細胞上で見られるｍＴＩＧＩＴ（そのｍＴＩＧＩＴが、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３のものか、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１３８のものかによらないが、これらの配列番号を含む））に対する、本発明で提供するＡＢＰの親和性（実施例６に説明されているように、ＫＤによって示される）は、約２．５×１０−８Ｍである。いくつかの実施形態では、このＫＤは、約２．５×１０−８Ｍ以下である。
【０３１９】
いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰは、ｈＴＩＧＩＴ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１）には、ＸのＫＤで、ｃＴＩＧＩＴ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２）またはｍＴＩＧＩＴ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３もしくは１３８）には、≦１０ＸのＫＤで特異的に結合する。いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰは、ｈＴＩＧＩＴ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１）には、ＸのＫＤで、ｃＴＩＧＩＴ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２）またはｍＴＩＧＩＴ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３もしくは１３８）には、≦５ＸのＫＤで特異的に結合する。いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰは、ｈＴＩＧＩＴ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１）には、ＸのＫＤで、ｃＴＩＧＩＴ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２）またはｍＴＩＧＩＴ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３もしくは１３８）には、≦２ＸのＫＤで特異的に結合する。いくつかの態様では、Ｘは、本開示に記載されているいずれかのＫＤである。いくつかの態様では、Ｘは、０．０１ｎＭ、０．１ｎＭ、１ｎＭ、１０ｎＭ、２０ｎＭ、５０ｎＭまたは１００ｎＭである。
【０３２０】
いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰのＫＤ（ｈＴＩＧＩＴ）：ＫＤ（ｃＴＩＧＩＴ）（実施例４に定められているように、ＦｏｒｔｅＢｉｏによって測定したもの）の比は、約１．９８×１０−１、約２．６１×１０−１、約３．０３×１０−１、約３．５８×１０−１、約６．６２×１０−３、約１．９８×１０−１、約５．３７×１０−３、約３．９０×１０−３、約６．２２×１０−３、約２．９１×１０−１、約４．１４×１０−１、約６．６７×１０−１、約２．１８×１０−１、約１．７８×１０−１、約１．２１×１０−１または約３．０３×１０−１から選択される。いくつかの実施形態では、この比は、約３．９０×１０−３〜約６．６７×１０−１の範囲である。
【０３２１】
いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰのＫＤ（ｈＴＩＧＩＴ）：ＫＤ（ｃＴＩＧＩＴ）（実施例に定められているように、ＦｏｒｔｅＢｉｏによって測定したもの）の比は、約３．８７×１０−２である。
【０３２２】
いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰのＫＤ（ｈＴＩＧＩＴ）：ＫＤ（ｃＴＩＧＩＴ）（実施例４に定められているように、ＭＳＤ−ＳＥＴによって測定したもの）の比は、約３．３３×１０−１、約２．３１×１０−１、約１．０９×１０−１、約１．０７×１０−１または約１．６９×１０−１から選択される。いくつかの実施形態では、この比は、約１．０７×１０−１Ｍ〜約３．３３×１０−１Ｍの範囲である。
【０３２３】
いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰのｋａは、少なくとも約１０４Ｍ−１×ｓｅｃ−１である。いくつかの実施形態では、本発明のＡＢＰのｋａは、少なくとも約１０５Ｍ−１×ｓｅｃ−１である。いくつかの実施形態では、本発明のＡＢＰのｋａは、少なくとも約１０６Ｍ−１×ｓｅｃ−１である。いくつかの実施形態では、本発明のＡＢＰのｋａは、約１０４Ｍ−１×ｓｅｃ−１〜約１０５Ｍ−１×ｓｅｃ−１である。いくつかの実施形態では、本発明のＡＢＰのｋａは、約１０５Ｍ−１×ｓｅｃ−１〜約１０６Ｍ−１×ｓｅｃ−１である。いくつかの実施形態では、このｋａは、少なくとも約１０５Ｍ−１×ｓｅｃ−１である。
【０３２４】
いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰのｈＴＩＧＩＴに対するｋａ（実施例６に定められているように、ＦｏｒｔｅＢｉｏによって測定したもの）は、約３．２×１０５Ｍ−１×ｓｅｃ−１、約７．０×１０５Ｍ−１×ｓｅｃ−１、約７．７×１０５Ｍ−１×ｓｅｃ−１、約１．６×１０６Ｍ−１×ｓｅｃ−１、約２．０×１０６Ｍ−１×ｓｅｃ−１、約１．３×１０６Ｍ−１×ｓｅｃ−１、約１．５×１０６Ｍ−１×ｓｅｃ−１、約１．１×１０６Ｍ−１×ｓｅｃ−１、約４．５×１０５Ｍ−１×ｓｅｃ−１、約７．５×１０５Ｍ−１×ｓｅｃ−１、約８．９×１０５Ｍ−１×ｓｅｃ−１または約１．４×１０６Ｍ−１×ｓｅｃ−１から選択される。いくつかの実施形態では、このｋａは、約３．２×１０５Ｍ−１×ｓｅｃ−１〜約２．０×１０６Ｍ−１×ｓｅｃ−１の範囲である。いくつかの実施形態では、このｋｄは、約２．０×１０６Ｍ以下である。
【０３２５】
いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰのｈＴＩＧＩＴに対するｋａ（実施例６に定められているように、ＦｏｒｔｅＢｉｏによって測定したもの）は、約２．０×１０６Ｍ−１×ｓｅｃ−１である。いくつかの実施形態では、このｋａは、少なくとも約２．０×１０６Ｍ−１×ｓｅｃ−１である。
【０３２６】
いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰのｃＴＩＧＩＴに対するｋａ（実施例６に定められているように、ＦｏｒｔｅＢｉｏによって測定したもの）は、約７．９×１０５Ｍ−１×ｓｅｃ−１である。いくつかの実施形態では、このｋａは、少なくとも約７．９×１０５Ｍ−１×ｓｅｃ−１である。
【０３２７】
いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰのｋｄは、約１０−５ｓｅｃ−１以下である。いくつかの実施形態では、本発明のＡＢＰのｋｄは、約１０−４ｓｅｃ−１以下である。いくつかの実施形態では、本発明のＡＢＰのｋｄは、約１０−３ｓｅｃ−１以下である。いくつかの実施形態では、本発明のＡＢＰのｋｄは、約１０−２ｓｅｃ−１〜約１０−５ｓｅｃ−１である。いくつかの実施形態では、本発明のＡＢＰのｋｄは、約１０−２ｓｅｃ−１〜約１０−４ｓｅｃ−１である。いくつかの実施形態では、本発明のＡＢＰのｋｄは、約１０−３ｓｅｃ−１〜約１０−５ｓｅｃ−１である。
【０３２８】
いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰのｈＴＩＧＩＴに対するｋｄ（実施例６に定められているように、ＦｏｒｔｅＢｉｏによって測定したもの）は、約２．３×１０−４ｓｅｃ−１、約６．３×１０−５ｓｅｃ−１、約１．４×１０−４ｓｅｃ−１、約８．５×１０−４ｓｅｃ−１、約３．８×１０−４ｓｅｃ−１、約３．５×１０−４ｓｅｃ−１、約２．４×１０−４ｓｅｃ−１、約６．６×１０−４ｓｅｃ−１、約５．９×１０−４ｓｅｃ−１または約５．０×１０−４ｓｅｃ−１から選択される。いくつかの実施形態では、このｋｄは、約６．３×１０−５ｓｅｃ−１〜約８．５×１０−４ｓｅｃ−１の範囲である。いくつかの実施形態では、このｋｄは、約８．５×１０−４ｓｅｃ−１未満である。
【０３２９】
いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰのｈＴＩＧＩＴに対するｋｄ（実施例６に定められているように、ＦｏｒｔｅＢｉｏによって測定したもの）は、約３．８×１０−４ｓｅｃ−１である。いくつかの実施形態では、このｋｄは、約３．８×１０−４ｓｅｃ−１未満である。
【０３３０】
いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰのｃＴＩＧＩＴに対するｋｄ（実施例６に定められているように、ＦｏｒｔｅＢｉｏによって測定したもの）は、約４．６×１０−３ｓｅｃ−１である。いくつかの実施形態では、このｋｄは、約４．６×１０−３ｓｅｃ−１未満である。
【０３３１】
いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰのｈＴＩＧＩＴに対するｋａは、約３．２×１０５Ｍ−１×ｓｅｃ−１であり、ｈＴＩＧＩＴに対するｋｄは、約２．３×１０−４ｓｅｃ−１であり、ｈＴＩＧＩＴに対するＫＤは、約７．１×１０−１０Ｍである。いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰのｈＴＩＧＩＴに対するｋａは、約７．０×１０５Ｍ−１×ｓｅｃ−１であり、ｈＴＩＧＩＴに対するｋｄは、約６．３×１０−５ｓｅｃ−１であり、ｈＴＩＧＩＴに対するＫＤは、約８．１×１０−１１Ｍである。いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰのｈＴＩＧＩＴに対するｋａは、約７．７×１０５Ｍ−１×ｓｅｃ−１であり、ｈＴＩＧＩＴに対するｋｄは、約１．４×１０−４ｓｅｃ−１であり、ｈＴＩＧＩＴに対するＫＤは、約１．９×１０−１０Ｍである。いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰのｈＴＩＧＩＴに対するｋａは、約１．６×１０６Ｍ−１×ｓｅｃ−１であり、ｈＴＩＧＩＴに対するｋｄは、約８．５×１０−４ｓｅｃ−１であり、ｈＴＩＧＩＴに対するＫＤは、約５．６×１０−１０Ｍである。いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰのｈＴＩＧＩＴに対するｋａは、約２．０×１０６Ｍ−１×ｓｅｃ−１であり、ｈＴＩＧＩＴに対するｋｄは、約３．８×１０−４ｓｅｃ−１であり、ｈＴＩＧＩＴに対するＫＤは、約２．４×１０−１０Ｍである。いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰのｈＴＩＧＩＴに対するｋａは、約１．３×１０６Ｍ−１×ｓｅｃ−１であり、ｈＴＩＧＩＴに対するｋｄは、約３．５×１０−４ｓｅｃ−１であり、ｈＴＩＧＩＴに対するＫＤは、約２．８×１０−１０Ｍである。いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰのｈＴＩＧＩＴに対するｋａは、約１．５×１０６Ｍ−１×ｓｅｃ−１であり、ｈＴＩＧＩＴに対するｋｄは、約２．４×１０−４ｓｅｃ−１であり、ｈＴＩＧＩＴに対するＫＤは、約１．６×１０−１０Ｍである。いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰのｈＴＩＧＩＴに対するｋａは、約１．１×１０６Ｍ−１×ｓｅｃ−１であり、ｈＴＩＧＩＴに対するｋｄは、約６．６×１０−４ｓｅｃ−１であり、ｈＴＩＧＩＴに対するＫＤは、約５．８×１０−１０Ｍである。いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰのｈＴＩＧＩＴに対するｋａは、約４．５×１０５Ｍ−１×ｓｅｃ−１であり、ｈＴＩＧＩＴに対するｋｄは、約３．５×１０−４ｓｅｃ−１であり、ｈＴＩＧＩＴに対するＫＤは、約１．１×１０−９Ｍである。いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰのｈＴＩＧＩＴに対するｋａは、約７．５×１０５Ｍ−１×ｓｅｃ−１であり、ｈＴＩＧＩＴに対するｋｄは、約５．９×１０−４ｓｅｃ−１であり、ｈＴＩＧＩＴに対するＫＤは、約８．１×１０−１０Ｍである。いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰのｈＴＩＧＩＴに対するｋａは、約８．９×１０５Ｍ−１×ｓｅｃ−１であり、ｈＴＩＧＩＴに対するｋｄは、約３．８×１０−４ｓｅｃ−１であり、ｈＴＩＧＩＴに対するＫＤは、約４．６×１０−１０Ｍである。いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰのｈＴＩＧＩＴに対するｋａは、約１．４×１０６Ｍ−１×ｓｅｃ−１であり、ｈＴ���ＧＩＴに対するｋｄは、約５．０×１０−４ｓｅｃ−１であり、ｈＴＩＧＩＴに対するＫＤは、約３．６×１０−１０Ｍである。いくつかの実施形態では、これらのｋａ、ｋｄ及びＫＤは、実施例６に示されている方法に従って割り出したものである。
【０３３２】
いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰのｈＴＩＧＩＴに対するｋａは、約２．０×１０６Ｍ−１×ｓｅｃ−１であり、ｈＴＩＧＩＴに対するｋｄは、約３．８×１０−４ｓｅｃ−１であり、ｈＴＩＧＩＴに対するＫＤは、約２．４×１０−１０Ｍであり、ｃＴＩＧＩＴに対するｋａは、約７．９×１０５Ｍ−１×ｓｅｃ−１であり、ｃＴＩＧＩＴに対するｋｄは、約４．６×１０−３ｓｅｃ−１であり、ｃＴＩＧＩＴに対するＫＤは、約６．２×１０−９Ｍであり、ｍＴＩＧＩＴ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３）に対するＫＤは、約７．０×１０−７Ｍ超である。いくつかの実施形態では、これらのｋａ、ｋｄ及びＫＤは、実施例６に示されている方法に従って割り出したものである。
【０３３３】
いくつかの実施形態では、ＫＤ、ｋａ及びｋｄは、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）を用いて割り出したものである。いくつかの態様では、ＳＰＲ解析では、ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）の計器を用いる。いくつかの態様では、抗原をカルボキシメチル化デキストランバイオセンサーチップ（ＣＭ４またはＣＭ５）に固定化して、本発明で提供するＡＢＰと接触させる。会合速度定数と解離速度定数は、ＢＩＡｅｖａｌｕａｔｉｏｎ（登録商標）というソフトウェアと１：１ラングミュア結合モデルを用いて計算してよい。いくつかの態様では、このアッセイは、２５℃で行う。いくつかの態様では、このアッセイは、３７℃で行う。
【０３３４】
いくつかの実施形態では、ＫＤ、ｋａ及びｋｄは、バイオレイヤー干渉法（ＢＬＩ）を用いて割り出す。いずれかの好適なＢＬＩ法を用いてよい。いくつかの態様では、ＢＬＩ解析では、ＦＯＲＴＥＢＩＯ（登録商標）の計器を用いる。いくつかの態様では、抗ヒトＩｇＧ  Ｆｃキャプチャー（ＡＨＣ）バイオセンサーを用いて、センサーの表面にＡＢＰをキャプチャーする。続いて、固定化したＡＢＰを、異なる濃度のＴＩＧＩＴと接触させることによって、ＡＢＰと抗原の会合をモニタリングする。続いて、ＴＩＧＩＴを含まない緩衝液において、抗原とＡＢＰの解離を測定する。ＦＯＲＴＥＢＩＯ（登録商標）という解析ソフトウェアの動態モジュールを用いて、会合速度定数と解離速度定数を計算する。いくつかの態様では、このアッセイは、３０℃で行う。
【０３３５】
別の実施形態では、ＫＤは、Ｃｈｅｎ  ｅｔ  ａｌ．Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，１９９９，２９３：８６５−８８１（参照により、その全体が援用される）に説明されているように、放射性標識化抗原結合アッセイによって割り出してよい。
【０３３６】
別の実施形態では、ＫＤは、実施例４に説明されているように、ＭＳＤ−ＳＥＴを用いることによって割り出してよい。
【０３３７】
いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰのＥＣ５０（実施例７に説明されているように、ヒトＴＩＧＩＴ  Ｊｕｒｋａｔ共培養アッセイにおいて、ＩＬ−２の産生によって測定したもの）は、約０．２２ｎＭ、約０．３１ｎＭ、約０．３３ｎＭ、約０．３４ｎＭ、約０．２５ｎＭ、約０．２４ｎＭ、約０．１１ｎＭ、約０．０６ｎＭ、約０．１４ｎＭ、約０．１６ｎＭ、約１．４０ｎＭ、約０．７１ｎＭ、約０．２１ｎＭ、約１．１１ｎＭ、約０．１３ｎＭ、約０．２０ｎＭ、約０．６８ｎＭまたは約０．６１ｎＭである。いくつかの実施形態では、このＥＣ５０は、約０．０６ｎＭ〜約１．４０ｎＭの範囲である。いくつかの実施形態では、このＥＣ５０は、約１．４０ｎＭ以下である。
【０３３８】
いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰのＥＣ５０（実施例７に説明されているように、カニクイザルＴＩＧＩＴ  Ｊｕｒｋａｔ共培養アッセイにおいて、ＩＬ−２の産生によって測定したもの）は、約２．８７ｎＭである。いくつかの実施形態では、このＥＣ５０は、約２．８７ｎＭ以下である。いくつかの実施形態では、上記のようなアッセイにおけるＥＣ５０（ｃＴＩＧＩＴ）：ＥＣ５０（ｈＴＩＧＩＴ）の比は、約２．０５〜約４７．８の範囲である。
【０３３９】
いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰのＥＣ１０（ヒトドナーから単離して、実施例９に説明されているように処理したＰＢＭＣにおけるＴＮＦの産生によって測定したもの）は、約５．０２ｎＭ〜約１８．８６ｎＭの範囲である。いくつかの実施形態では、このＥＣ１０は、約１８．８６ｎＭ以下である。
【０３４０】
いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰのＥＣ５０（ヒトドナーから単離して、実施例９に説明されているように処理したＰＢＭＣにけるＴＮＦの産生によって測定したもの）は、約１２．６０ｎＭ〜約２０．６０ｎＭの範囲である。いくつかの実施形態では、このＥＣ５０は、約２０．６０ｎＭ以下である。
【０３４１】
いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰのＥＣ９０（ヒトドナーから単離して、実施例９に説明されているように処理したＰＢＭＣにおけるＴＮＦの産生によって測定したもの）は、約２２．４９ｎＭ〜約３１．５９ｎＭの範囲である。いくつかの実施形態では、このＥＣ９０は、約３１．５９ｎＭ以下である。
【０３４２】
いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰのＥＣ１０は、約５．０２ｎＭ〜約１８．８６ｎＭの範囲であり、ＥＣ５０は、約１２．６０ｎＭ〜約２０．６０ｎＭの範囲であり、ＥＣ９０は、約２２．４９ｎＭ〜約３１．５９ｎＭの範囲である（いずれのケースにおいても、ヒトドナーから単離して、実施例９に説明されているように処理したＰＢＭＣにおけるＴＮＦの産生によって測定した）。
【０３４３】
いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰのＥＣ１０は、約１１．９４ｎＭ以下であり、ＥＣ５０は、約１６．６０ｎＭ以下であり、ＥＣ９０は、約２７．０４ｎＭ以下である（いずれのケースにおいても、ヒトドナーから単離して、実施例９に説明されているように処理したＰＢＭＣにおけるＴＮＦの産生によって測定した）。
【０３４４】
いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰのＥＣ１０は、約１８．８６ｎＭ以下であり、ＥＣ５０は、約２０．０６ｎＭ以下であり、ＥＣ９０は、約３１．５９ｎＭ以下である（いずれのケースにおいても、ヒトドナーから単離して、実施例９に説明されているように処理したＰＢＭＣにおけるＴＮＦの産生によって測定した）。
【０３４５】
いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰのＥＣ１０は、約５．０２ｎＭ以下であり、ＥＣ５０は、約１２．６０ｎＭ以下であり、ＥＣ９０は、約２２．４９ｎＭ以下である（いずれのケースにおいても、ヒトドナーから単離して、実施例９に説明されているように処理したＰＢＭＣにおけるＴＮＦの産生によって測定した）。
【０３４６】
いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰのＥＣ１０（ヒトドナーから単離して、実施例９に説明されているように処理したＣＤ４＋Ｔ細胞におけるＩＦＮ−γの産生によって測定したもの）は、約０．３７ｎＭ〜約１．０５ｎＭの範囲である。いくつかの実施形態では、このＥＣ１０は、約１．０５ｎＭ以下である。
【０３４７】
いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰのＥＣ５０（ヒトドナーから単離して、実施例９に説明されているように処理したＣＤ４＋Ｔ細胞におけるＩＦＮ−γの産生によって測定したもの）は、約０．９４ｎＭ〜約１．１２ｎＭの範囲である。いくつかの実施形態では、このＥＣ５０は、約１．１２ｎＭ以下である。
【０３４８】
いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰのＥＣ９０（ヒトドナーから単離して、実施例９に説明されているように処理したＣＤ４＋Ｔ細胞におけるＩＦＮ−γの産生によって測定したもの）は、約１．０４ｎＭ〜約２．７２ｎＭの範囲である。いくつかの実施形態では、このようなＥＣ９０は、約２．７２ｎＭ以下である。
【０３４９】
いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰのＥＣ１０は、約０．３７ｎＭ〜約１．０５ｎＭの範囲であり、ＥＣ５０は、約０．９４ｎＭ〜約１．１２ｎＭの範囲であり、ＥＣ９０は、約１．０４ｎＭ〜約２．７２ｎＭの範囲である（いずれのケースにおいても、ヒトドナーから単離して、実施例９に説明されているように処理したＰＢＭＣにおけるＩＦＮ−γの産生によって測定した）。
【０３５０】
いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰのＥＣ１０は、約０．３７ｎＭ以下であり、ＥＣ５０は、約１．００ｎＭ以下であり、ＥＣ９０は、約２．７２ｎＭ以下である（いずれのケースにおいても、ヒトドナーから単離して、実施例９に説明されているように処理したＰＢＭＣにおけるＩＦＮ−γの産生によって測定した）。
【０３５１】
いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰのＥＣ１０は、約０．８５ｎＭ以下であり、ＥＣ５０は、約０．９４ｎＭ以下であり、ＥＣ９０は、約１．０４ｎＭ以下である（いずれのケースにおいても、ヒトドナーから単離して、実施例９に説明されているように処理したＰＢＭＣにおけるＩＦＮ−γの産生によって測定した）。
【０３５２】
いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰのＥＣ１０は、約１．０５ｎＭ以下であり、ＥＣ５０は、約１．１２ｎＭ以下であり、ＥＣ９０は、約１．１９ｎＭ以下である（いずれのケースにおいても、ヒトドナーから単離して、実施例９に説明されているように処理したＰＢＭＣにおけるＩＦＮ−γの産生によって測定した）。
【０３５３】
いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰのＥＣ１０は、約０．７５ｎＭ以下であり、ＥＣ５０は、約１．０２ｎＭ以下であり、ＥＣ９０は、約１．６５ｎＭ以下である（いずれのケースにおいても、ヒトドナーから単離して、実施例９に説明されているように処理したＰＢＭＣにおけるＩＦＮ−γの産生によって測定した）。
【０３５４】
いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰは、ｈＴＩＧＩＴには、約５．２４×１０−１０ＭのＫＤ（ＦｏｒｔｅＢｉｏによって割り出したもの）で、ｃＴＩＧＩＴには、約２．６４×１０−９ＭのＫＤ（ＦｏｒｔｅＢｉｏによって測定したもの）で、ｈＴＩＧＩＴには、約５．４０×１０−１１ＭのＫＤ（ＭＳＤ−ＳＥＴで測定した場合）で、ｃＴＩＧＩＴには、約３．２０×１０−１０ＭのＫＤ（ＭＳＤ−ＳＥＴによって測定したもの）で結合する（いずれのケースにおいても、実施例４に示されている方法に従って割り出したものである）。
【０３５５】
いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰは、ｈＴＩＧＩＴには、約４．５７×１０−１０ＭのＫＤ（ＦｏｒｔｅＢｉｏによって割り出したもの）で、ｃＴＩＧＩＴには、約１．５７×１０−９ＭのＫＤ（ＦｏｒｔｅＢｉｏによって割り出したもの）で、ｈＴＩＧＩＴには、約２．５０×１０−１１ＭのＫＤ（ＭＳＤ−ＳＥＴによって割り出したもの）で、ｃＴＩＧＩＴには、約２．３０×１０−１０ＭのＫＤ（ＭＳＤ−ＳＥＴによって割り出したもの）で結合する（いずれのケースにおいても、実施例４に示されている方法に従って割り出したものである）。
【０３５６】
いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰは、ｈＴＩＧＩＴには、約３．３２×１０−１０ＭのＫＤ（ＦｏｒｔｅＢｉｏによって割り出したもの）で、ｃＴＩＧＩＴには、約８．０２×１０−１０ＭのＫＤ（ＦｏｒｔｅＢｉｏによって割り出したもの）で、ｈＴＩＧＩＴには、約８．１０×１０−１２ＭのＫＤ（ＭＳＤ−ＳＥＴによって割り出したもの）で、ｃＴＩＧＩＴには、約３．５０×１０−１ＭのＫＤ（ＭＳＤ−ＳＥＴによって割り出したもの）で結合する（いずれのケースにおいても、実施例４に示されている方法に従って割り出したものである）。
【０３５７】
いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰは、ｈＴＩＧＩＴには、約２．４６×１０−１０ＭのＫＤ（ＦｏｒｔｅＢｉｏによって割り出したもの）で、ｃＴＩＧＩＴには、約３．６９×１０−１０ＭのＫＤ（ＦｏｒｔｅＢｉｏによって割り出したもの）で、ｈＴＩＧＩＴには、約５．００×１０−１２ＭのＫＤ（ＭＳＤ−ＳＥＴによって割り出したもの）で、ｃＴＩＧＩＴには、約１．５０×１０−１１ＭのＫＤ（ＭＳＤ−ＳＥＴによって割り出したもの）で結合する（いずれのケースにおいても、実施例４に示されている方法に従って割り出したものである）。
【０３５８】
いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰは、ｈＴＩＧＩＴには、約１．９６×１０−１０ＭのＫＤ（ＦｏｒｔｅＢｉｏによって割り出したもの）で、ｃＴＩＧＩＴには、約８．９８×１０−１０ＭのＫＤ（ＦｏｒｔｅＢｉｏによって割り出したもの）で、ｈＴＩＧＩＴには、約４．９０×１０−１２ＭのＫＤ（ＭＳＤ−ＳＥＴによって割り出したもの）で、ｃＴＩＧＩＴには、約４．６０×１０−１１ＭのＫＤ（ＭＳＤ−ＳＥＴによって割り出したもの）で結合する（いずれのケースにおいても、実施例４に示されている方法に従って割り出したものである）。
【０３５９】
いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰは、ｈＴＩＧＩＴには、約３．１１×１０−９ＭのＫＤ（ＦｏｒｔｅＢｉｏによって割り出したもの）で、ｃＴＩＧＩＴには、約１．７５×１０−８ＭのＫＤ（ＦｏｒｔｅＢｉｏによって割り出したもの）で結合する（いずれのケースにおいても、実施例４に示されている方法に従って割り出したものである）。
【０３６０】
いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰは、ｈＴＩＧＩＴに、約２．５４×１０−９ＭのＫＤで結合する（実施例４に示されている方法に従ってＦｏｒｔｅＢｉｏによって割り出したもの）。
【０３６１】
いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰは、ｈＴＩＧＩＴには、約３．１３×１０−９ＭのＫＤ（ＦｏｒｔｅＢｉｏによって割り出したもの）で、ｃＴＩＧＩＴには、約２．５８×１０−８ＭのＫＤ（ＦｏｒｔｅＢｉｏによって割り出したもの）で結合する（いずれのケースにおいても、実施例４に示されている方法に従って割り出したものである）。
【０３６２】
いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰは、ｈＴＩＧＩＴには、約２．８３×１０−９ＭのＫＤ（ＦｏｒｔｅＢｉｏによって割り出したもの）で、ｃＴＩＧＩＴには、約９．３５×１０−９ＭのＫＤ（ＦｏｒｔｅＢｉｏによって割り出したもの）で結合する（いずれのケースにおいても、実施例４に示されている方法に従って割り出したものである）。
【０３６３】
いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰは、ｈＴＩＧＩＴには、約１．７１×１０−９ＭのＫＤ（ＦｏｒｔｅＢｉｏによって割り出したもの）で、ｃＴＩＧＩＴには、約６．５５×１０−９ＭのＫＤ（ＦｏｒｔｅＢｉｏによって割り出したもの）で、ｈＴＩＧＩＴには、約１．１０×１０−１０ＭのＫＤ（ＭＳＤ−ＳＥＴによって割り出したもの）で結合する（いずれのケースにおいても、実施例４に示されている方法に従って割り出したものである）。
【０３６４】
いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰは、ｈＴＩＧＩＴには、約２．４７×１０−９ＭのＫＤ（ＦｏｒｔｅＢｉｏによって割り出したもの）で、ｃＴＩＧＩＴには、約８．１４×１０−９ＭのＫＤ（ＦｏｒｔｅＢｉｏによって割り出したもの）で、ｈＴＩＧＩＴには、約１．５０×１０−１０ＭのＫＤ（ＭＳＤ−ＳＥＴによって割り出したもの）で結合する（いずれのケースにおいても、実施例４に示されている方法に従って割り出したものである）。
【０３６５】
いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰは、ｈＴＩＧＩＴには、約２．３５×１０−９ＭのＫＤ（ＦｏｒｔｅＢｉｏによって割り出したもの）で、ｃＴＩＧＩＴには、約６．５７×１０−９ＭのＫＤ（ＦｏｒｔｅＢｉｏによって割り出したもの）で、ｈＴＩＧＩＴには、約５．６０×１０−１１ＭのＫＤ（ＭＳＤ−ＳＥＴによって割り出したもの）で結合する（いずれのケースにおいても、実施例４に示されている方法に従って割り出したものである）。
【０３６６】
いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰは、ｈＴＩＧＩＴには、約１．４４×１０−９ＭのＫＤ（ＦｏｒｔｅＢｉｏによって割り出したもの）で、ｈＴＩＧＩＴには、約４．００×１０−１０ＭのＫＤ（ＭＳＤ−ＳＥＴによって割り出したもの）で結合する（いずれのケースにおいても、実施例４に示されている方法に従って割り出したものである）。
【０３６７】
いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰは、ｈＴＩＧＩＴには、約１．２３×１０−９ＭのＫＤ（ＦｏｒｔｅＢｉｏによって割り出したもの）で、ｈＴＩＧＩＴには、約３．８０×１０−１０ＭのＫＤ（ＭＳＤ−ＳＥＴによって割り出したもの）で結合する（いずれのケースにおいても、実施例４に示されている方法に従って割り出したものである）。
【０３６８】
いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰは、ｈＴＩＧＩＴには、約５．２６×１０−１０ＭのＫＤ（ＦｏｒｔｅＢｉｏによって割り出したもの）で、ｃＴＩＧＩＴには、約７．９４×１０−８ＭのＫＤ（ＦｏｒｔｅＢｉｏによって割り出したもの）で、ｈＴＩＧＩＴには、約２．１０×１０−１０ＭのＫＤ（ＭＳＤ−ＳＥＴによって割り出したもの）で結合する（いずれのケースにおいても、実施例４に示されている方法に従って割り出したものである）。
【０３６９】
いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰは、ｈＴＩＧＩＴには、約３．７８×１０−１０ＭのＫＤ（ＦｏｒｔｅＢｉｏによって割り出したもの）で、ｃＴＩＧＩＴには、約７．０４×１０−８ＭのＫＤ（ＦｏｒｔｅＢｉｏによって割り出したもの）で、ｈＴＩＧＩＴには、約７．００×１０−１１ＭのＫＤ（ＭＳＤ−ＳＥＴによって割り出したもの）で結合する（いずれのケースにおいても、実施例４に示されている方法に従って割り出したものである）。
【０３７０】
いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰは、ｈＴＩＧＩＴには、約４．２９×１０−１０ＭのＫＤ（ＦｏｒｔｅＢｉｏによって割り出したもの）で、ｃＴＩＧＩＴには、約１．１０×１０−７ＭのＫＤ（ＦｏｒｔｅＢｉｏによって割り出したもの）で、ｈＴＩＧＩＴには、約４．１０×１０−１１ＭのＫＤ（ＭＳＤ−ＳＥＴによって割り出したもの）で結合する（いずれのケースにおいても、実施例４に示されている方法に従って割り出したものである）。
【０３７１】
いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰは、ｈＴＩＧＩＴには、約４．４８×１０−１０ＭのＫＤ（ＦｏｒｔｅＢｉｏによって割り出したもの）で、ｃＴＩＧＩＴには、約７．２０×１０−８ＭのＫＤ（ＦｏｒｔｅＢｉｏによって割り出したもの）で結合する（いずれのケースにおいても、実施例４に示されている方法に従って割り出したものである）。
【０３７２】
いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰは、ｈＴＩＧＩＴには、約３．００×１０−１１ＭのＫＤ（実施例４に示されている方法に従って、ＭＳＤ−ＳＥＴによって割り出したもの）で結合する。
【０３７３】
いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰは、ｈＴＩＧＩＴには、約８．００×１０−１１ＭのＫＤ（実施例４に示されている方法に従って、ＭＳＤ−ＳＥＴによって割り出したもの）で結合する。
【０３７４】
いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰは、ＰＶＲのＴＩＧＩＴへの結合を約２．２ｎＭ、約２．３ｎＭ、約１．６ｎＭ、約１．９ｎＭ、約１．７ｎＭ、約３．２ｎＭ、約２．６ｎＭ、約２．９ｎＭ、約３．３ｎＭ、約２ｎＭ、約２．２ｎＭ、約２．１ｎＭ、約１．８ｎＭ、約６．４ｎＭまたは約１ｎＭのＩＣ５０で阻害する。いくつかの実施形態では、このＩＣ５０は、約１ｎＭ〜約６．４ｎＭの範囲である。いくつかの実施形態では、このＩＣ５０は、約６．４ｎＭ以下である。いくつかの実施形態では、このＩＣ５０は、実施例５に説明されているように割り出したものである。
【０３７５】
いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰは、ＰＶＲＬ２のＴＩＧＩＴへの結合を約１．４ｎＭ、約１．３ｎＭ、約１．２ｎＭ、約１．６ｎＭ、約２ｎＭ、約１．２ｎＭ、約１．１ｎＭ、約１ｎＭ、約１．８ｎＭ、約１．９ｎＭ、約２ｎＭまたは約０．８ｎＭのＩＣ５０で阻害する。いくつかの実施形態では、このＩＣ５０は、約０．８ｎＭ〜約２ｎＭの範囲である。いくつかの実施形態では、このＩＣ５０は、約２ｎＭ以下である。いくつかの実施形態では、このＩＣ５０は、実施例５に説明されているように割り出したものである。
【０３７６】
いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰは、ＰＶＲのＴＩＧＩＴへの結合を約２．２ｎＭのＩＣ５０で阻害するとともに、ＰＶＲＬ２のＴＩＧＩＴへの結合を約１．４ｎＭのＩＣ５０で阻害する。いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰは、ＰＶＲのＴＩＧＩＴへの結合を約２．３ｎＭのＩＣ５０で阻害するとともに、ＰＶＲＬ２のＴＩＧＩＴへの結合を約１．３ｎＭのＩＣ５０で阻害する。いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰは、ＰＶＲのＴＩＧＩＴへの結合を約１．６ｎＭのＩＣ５０で阻害するとともに、ＰＶＲＬ２のＴＩＧＩＴへの結合を約１．２ｎＭのＩＣ５０で阻害する。いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰは、ＰＶＲのＴＩＧＩＴへの結合を約１．９ｎＭのＩＣ５０で阻害するとともに、ＰＶＲＬ２のＴＩＧＩＴへの結合を約１．６ｎＭのＩＣ５０で阻害する。いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰは、ＰＶＲのＴＩＧＩＴへの結合を約１．７ｎＭのＩＣ５０で阻害するとともに、ＰＶＲＬ２のＴＩＧＩＴへの結合を約１．４ｎＭのＩＣ５０で阻害する。いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰは、ＰＶＲのＴＩＧＩＴへの結合を約３．２ｎＭのＩＣ５０で阻害するとともに、ＰＶＲＬ２のＴＩＧＩＴへの結合を約１．４ｎＭのＩＣ５０で阻害する。いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰは、ＰＶＲのＴＩＧＩＴへの結合を約２．６ｎＭのＩＣ５０で阻害するとともに、ＰＶＲＬ２のＴＩＧＩＴへの結合を約２ｎＭのＩＣ５０で阻害する。いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰは、ＰＶＲのＴＩＧＩＴへの結合を約２．９ｎＭのＩＣ５０で阻害するとともに、ＰＶＲＬ２のＴＩＧＩＴへの結合を約１．２ｎＭのＩＣ５０で阻害する。いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰは、ＰＶＲのＴＩＧＩＴへの結合を約１．９ｎＭのＩＣ５０で阻害するとともに、ＰＶＲＬ２のＴＩＧＩＴへの結合を約１．１ｎＭのＩＣ５０で阻害する。いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰは、ＰＶＲのＴＩＧＩＴへの結合を約３．３ｎＭのＩＣ５０で阻害するとともに、ＰＶＲＬ２のＴＩＧＩＴへの結合を約１ｎＭのＩＣ５０で阻害する。いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰは、ＰＶＲのＴＩＧＩＴへの結合を約２ｎＭのＩＣ５０で阻害するとともに、ＰＶＲＬ２のＴＩＧＩＴへの結合を約１．２ｎＭのＩＣ５０で阻害する。いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰは、ＰＶＲのＴＩＧＩＴへの結合を約１．７ｎＭのＩＣ５０で阻害するとともに、ＰＶＲＬ２のＴＩＧＩＴへの結合を約１．２ｎＭのＩＣ５０で阻害する。いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰは、ＰＶＲのＴＩＧＩＴへの結合を約２．１ｎＭのＩＣ５０で阻害するとともに、ＰＶＲＬ２のＴＩＧＩＴへの結合を約１．８ｎＭのＩＣ５０で阻害する。いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰは、ＰＶＲのＴＩＧＩＴへの結合を約２．６ｎＭのＩＣ５０で阻害するとともに、ＰＶＲＬ２のＴＩＧＩＴへの結合を約１．６ｎＭのＩＣ５０で阻害する。いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰは、ＰＶＲのＴＩＧＩＴへの結合を約２．２ｎＭのＩＣ５０で阻害するとともに、ＰＶＲＬ２のＴＩＧＩＴへの結合を約１．１ｎＭのＩＣ５０で阻害する。いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰは、ＰＶＲのＴＩＧＩＴへの結合を約２．１ｎＭのＩＣ５０で阻害するとともに、ＰＶＲＬ２のＴＩＧＩＴへの結合を約１．３ｎＭのＩＣ５０で阻害する。いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰは、ＰＶＲのＴＩＧＩＴへの結合を約２．６ｎＭのＩＣ５０で阻害するとともに、ＰＶＲＬ２のＴＩＧＩＴへの結合を約１．９ｎＭのＩＣ５０で阻害する。いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰは、ＰＶＲのＴＩＧＩＴへの結合を約１．８ｎＭのＩＣ５０で阻害するとともに、ＰＶＲＬ２のＴＩＧＩＴへの結合を約１．９ｎＭのＩＣ５０で阻害する。いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰは、ＰＶＲのＴＩＧＩＴへの結合を約６．４ｎＭのＩＣ５０で阻害するとともに、ＰＶＲＬ２のＴＩＧＩＴへの結合を約２ｎＭのＩＣ５０で阻害する。いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰは、ＰＶＲのＴＩＧＩＴへの結合を約２．３ｎＭのＩＣ５０で阻害するとともに、ＰＶＲＬ２のＴＩＧＩＴへの結合を約１．９ｎＭのＩＣ５０で阻害する。いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰは、ＰＶＲのＴＩＧＩＴへの結合を約１ｎＭのＩＣ５０で阻害するとともに、ＰＶＲＬ２のＴＩＧＩＴへの結合を約０．８ｎＭのＩＣ５０で阻害する。いくつかの実施形態では、このＩＣ５０は、約２ｎＭ以下である。いくつかの実施形態では、このＩＣ５０は、実施例５に説明されているように割り出したものである。
【０３７７】
２．６．１．グルコシル化バリアント
特定の実施形態では、本発明で提供するＡＢＰは、グルコシル化される程度を向上もしくは低下するか、またはグルコシル化されないように改変してよい。ポリペプチドのグルコシル化は典型的には、「Ｎ−結合型」または「Ｏ−結合型」のいずれかである。
【０３７８】
「Ｎ−結合型」グルコシル化とは、糖鎖部分がアスパラギン残基の側鎖に結合することを指す。トリペプチド配列のアスパラギン−Ｘ−セリンとアスパラギン−Ｘ−トレオニン（Ｘは、プロリン以外のいずれかのアミノ酸である）は、糖鎖部分をアスパラギン側鎖に酵素的に結合させるための認識配列である。したがって、これらのトリペプチド配列のいずれかがポリペプチドに存在すると、潜在的なグルコシル化部位が作られる。
【０３７９】
「Ｏ−結合型」グルコシル化とは、糖類であるＮ−アセチルガラクトサミン、ガラクトースまたはキシロースのうちの１つが、ヒドロキシアミノ酸、最も一般的には、セリンまたはトレオニンに結合することを指すが、５−ヒドロキシプロリンまたは５−ヒドロキシリシンも使われることがある。
【０３８０】
本発明で提供するＡＢＰへのＮ−結合型グルコシル化部位の付加、または本発明で提供するＡＢＰからのＮ−結合型グルコシル化部位欠失は、アミノ酸配列を改変して、上記のトリペプチド配列の１つ以上を作製または除去するようにすることによって行ってよい。Ｏ−結合型グルコシル化部位の付加または欠失は、ＡＢＰの配列におけるまたはＡＢＰの配列に対する（場合による）、１つ以上のセリンまたはトレオニン残基の付加、欠失、または置換によって行ってよい。
【０３８１】
いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰは、天然のＡＢＰとは異なるグルコシル化モチーフを含む。本発明で提供するＡＢＰにおいて、いずれかの好適な天然のグルコシル化モチーフを改変できる。免疫グロブリンの構造的特性とグルコシル化特性は、例えば、当該技術分野において知られているとともに、例えば、Ｓｃｈｒｏｅｄｅｒ  ａｎｄ  Ｃａｖａｃｉｎｉ，Ｊ．Ａｌｌｅｒｇｙ  Ｃｌｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，２０１０，１２５：Ｓ４１−５２（参照により、その全体が援用される）に要約されている。
【０３８２】
いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰは、２９７位のアスパラギン（Ａｓｎ２９７）に結合した糖鎖に修飾が施されたＩｇＧ１  Ｆｃ領域を含む。哺乳動物細胞によって産生される天然のＩｇＧ１抗体は典型的には、Ｆｃ領域のＣＨ２ドメインのＡｓｎ２９７にＮ−結合によって概ね結合されている分岐状の二本鎖型糖鎖を含む。Ｗｒｉｇｈｔ  ｅｔ  ａｌ．，ＴＩＢＴＥＣＨ，１９９７，１５：２６−３２（参照により、その全体が援用される）を参照されたい。Ａｓｎ２９７に結合している糖鎖としては、様々な糖鎖（マンノース、Ｎ−アセチルグルコサミン（ＧｌｃＮＡｃ）、ガラクトース及びシアル酸など）と、二本鎖型糖鎖構造の「ステム」において、ＧｌｃＮＡｃに結合したフコースを挙げてよい。
【０３８３】
いくつかの実施形態では、Ａｓｎ２９７に結合している糖鎖を修飾して、ＡＤＣＣが改変されたＡＢＰを作製する。いくつかの実施形態では、糖鎖を改変して、ＡＤＣＣを向上させる。いくつかの実施形態では、糖鎖を改変して、ＡＤＣＣを低下させる。
【０３８４】
いくつかの態様では、本発明で提供するＡＢＰは、Ａｓｎ２９７の位置におけるフコース含有量を天然のＩｇＧ１ドメインよりも低下させたＩｇＧ１ドメインを含む。このようなＦｃドメインは、ＡＤＣＣが向上していることが知られている。Ｓｈｉｅｌｄｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２００２，２７７：２６７３３−２６７４０（参照により、その全体が援用される）を参照されたい。いくつかの態様では、上記のようなＡＢＰは、Ａｓｎ２９７の位置にフコースをまったく含まない。フコースの量は、例えばＷＯ２００８／０７７５４６（参照により、その全体が援用される）に説明されているようないずれかの好適な方法を用いて割り出してよい。
【０３８５】
いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰは、バイセクト糖鎖（ＡＢＰのＦｃ領域に結合した二本鎖型糖鎖のうち、ＧｌｃＮＡｃによってバイセクト化している糖鎖など）を含む。このようなＡＢＰバリアントは、フコシル化が軽減されているか、及び／またはＡＤＣＣ機能が向上していることがある。このようなＡＢＰバリアントの例は、例えば、ＷＯ２００３／０１１８７８、米国特許第６，６０２，６８４号及び米国特許出願公開第２００５／０１２３５４６号（それぞれ、参照により、その全体が援用される）に記載されている。
【０３８６】
本発明で提供するＡＢＰに組み込んでよいその他の例示的なグルコシル化バリアントは、例えば、米国特許出願公開第２００３／０１５７１０８号、同第２００４／００９３６２１号、同第２００３／０１５７１０８号、同第２００３／０１１５６１４号、同第２００２／０１６４３２８号、同第２００４／００９３６２１号、同第２００４／０１３２１４０号、同第２００４／０１１０７０４号、同第２００４／０１１０２８２号、同第２００４／０１０９８６５、国際公開第２０００／６１７３９号、同第２００１／２９２４６号、同第２００３／０８５１１９号、同第２００３／０８４５７０号、同第２００５／０３５５８６号、同第２００５／０３５７７８号、同第２００５／０５３７４２号、同第２００２／０３１１４０号、Ｏｋａｚａｋｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，２００４，３３６：１２３９−１２４９及びＹａｍａｎｅ−Ｏｈｎｕｋｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｔｅｃｈ．Ｂｉｏｅｎｇ．，２００４，８７：６１４−６２２（それぞれ、参照により、その全体が援用される）に記載されている。
【０３８７】
いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰは、そのＦｃ領域に結合している糖鎖に少なくとも１つのガラクトース残基を有するＦｃ領域を含む。このようなＡＢＰバリアントは、ＣＤＣ機能が向上していることがある。このようなＡＢＰバリアントの例は、例えば、ＷＯ１９９７／３００８７、ＷＯ１９９８／５８９６４及びＷＯ１９９９／２２７６４（それぞれ、参照により、その全体が援用される）に記載されている。
【０３８８】
脱フコシル化ＡＢＰを産生できる細胞株の例としては、タンパク質のフコシル化が欠損しているＬｅｃ１３ＣＨＯ細胞（Ｒｉｐｋａ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｒｃｈ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．，１９８６，２４９：５３３−５４５、米国特許出願公開第２００３／０１５７１０８号、ＷＯ２００４／０５６３１２（それぞれ、参照により、その全体が援用される）を参照されたい））と、α−１，６−フコシルトランスフェラーゼ遺伝子またはＦＵＴ８ノックアウトＣＨＯ細胞のようなノックアウト細胞株（Ｙａｍａｎｅ−Ｏｈｎｕｋｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｔｅｃｈ．Ｂｉｏｅｎｇ．，２００４，８７：６１４−６２２、Ｋａｎｄａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．Ｂｉｏｅｎｇ．，２００６，９４：６８０−６８８及びＷＯ２００３／０８５１０７（それぞれ、参照により、その全体が援用される）を参照されたい））が挙げられる。
【０３８９】
いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰは、アグリコシル化ＡＢＰである。アグリコシル化ＡＢＰは、当該技術分野において知られているか、または本明細書に記載されているいずれかの方法を用いて作製できる。いくつかの態様では、アグリコシル化ＡＢＰは、ＡＢＰを改変して、すべてのグルコシル化部位を除去することによって作製する。いくつかの態様では、グルコシル化部位は、ＡＢＰのＦｃ領域からのみ除去する。いくつかの態様では、アグリコシル化ＡＢＰは、グルコシル化できない生物（大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）など）において、そのＡＢＰを発現させるか、または無細胞反応混合物において、そのＡＢＰを発現させることによって作製する。
【０３９０】
いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰは、エフェクター機能がネイティブＩｇＧ１抗体よりも低下している定常領域を有する。いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰのＦｃ領域の定常領域の、Ｆｃレセプターに対する親和性は、ネイティブＩｇＧ１定常領域の、そのＦｃレセプターに対する親和性よりも低い。
【０３９１】
２．７．Ｆｃ領域アミノ酸配列バリアント
特定の実施形態では、本発明で提供するＡＢＰは、天然のＦｃ領域と比較したときに、１つ以上のアミノ酸置換、挿入または欠失を有するＦｃ領域を含む。いくつかの態様では、このような置換、挿入または欠失によって、安定性、グリコシル化またはその他の特徴が改変されたＡＢＰが得られる。いくつかの態様では、このような置換、挿入または欠失により、アグリコシル化ＡＢＰが得られる。
【０３９２】
いくつかの態様では、本発明で提供するＡＢＰのＦｃ領域を改変して、Ｆｃレセプターに対する親和性が改変されたＡＢＰ、または免疫学的不活性が向上したＡＢＰをもたらす。いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰバリアントは、エフェクター機能の一部（ただし、全部ではない）を有する。このようなＡＢＰは、例えば、インビボにおいて、ＡＢＰの半減期が重要であるが、特定のエフェクター機能（例えば補体の活性化及びＡＤＣＣ）が不要であるかまたは有害であるときに有用な場合がある。
【０３９３】
いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰのＦｃ領域は、ヒンジ安定化変異のＳ２２８Ｐ及びＬ２３５Ｅのうちの１つ以上を含むヒトＩｇＧ４  Ｆｃ領域である。Ａａｌｂｅｒｓｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，２００２，１０５：９−１９（参照により、その全体が援用される）を参照されたい。いくつかの実施形態では、このＩｇＧ４  Ｆｃ領域は、Ｅ２３３Ｐ、Ｆ２３４Ｖ及びＬ２３５Ａという変異のうちの１つ以上を含む。Ａｒｍｏｕｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，２００３，４０：５８５−５９３（参照により、その全体が援用される）を参照されたい。いくつかの実施形態では、このＩｇＧ４  Ｆｃ領域は、Ｇ２３６の位置に欠失を含む。
【０３９４】
いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰのＦｃ領域は、Ｆｃレセプターの結合を低下させる１つ以上の変異を含むヒトＩｇＧ１  Ｆｃ領域である。いくつかの態様では、この１つ以上の変異は、Ｓ２２８（例えばＳ２２８Ａ）、Ｌ２３４（例えばＬ２３４Ａ）、Ｌ２３５（例えばＬ２３５Ａ）、Ｄ２６５（例えばＤ２６５Ａ）及びＮ２９７（例えばＮ２９７Ａ）から選択される残基におけるものである。いくつかの態様では、本発明のＡＢＰは、ＰＶＡ２３６の変異を含む。ＰＶＡ２３６とは、ＩｇＧ１の２３３〜２３６位のアミノ酸のアミノ酸配列ＥＬＬＧ、またはＩｇＧ４のＥＦＬＧがＰＶＡに置き換わっていることを意味する。米国特許第９，１５０，６４１号（参照により、その全体が援用される）を参照されたい。
【０３９５】
いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰのＦｃ領域は、Ａｒｍｏｕｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１９９９，２９：２６１３−２６２４、ＷＯ１９９９／０５８５７２及び／または英国特許出願第９８０９９５１８号（それぞれ、参照により、その全体が援用される）に説明されているように改変されている。
【０３９６】
いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰのＦｃ領域は、Ａ３３０Ｓ及びＰ３３１Ｓという変異のうちの１つ以上を含むヒトＩｇＧ２  Ｆｃ領域である。
【０３９７】
いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰのＦｃ領域は、２３８位、２６５位、２６９位、２７０位、２９７位、３２７位及び３２９位から選択される１つ以上の位置に、アミノ酸置換を有する。米国特許第６，７３７，０５６号（参照により、その全体が援用される）を参照されたい。このようなＦｃ変異体としては、２６５位及び２９７位の残基がアラニンに置換されている、いわゆる「ＤＡＮＡ」Ｆｃ変異体を含め、２６５位、２６９位、２７０位、２９７位及び３２７位のアミノ酸のうちの２つ以上に置換を有するＦｃ変異体が挙げられる。米国特許第７，３３２，５８１号（参照により、その全体が援用される）を参照されたい。いくつかの実施形態では、本発明のＡＢＰは、２６５位のアミノ酸にアラニンを含む。いくつかの実施形態では、本発明のＡＢＰは、２９７位のアミノ酸にアラニンを含む。
【０３９８】
特定の実施形態では、本発明で提供するＡＢＰは、ＡＤＣＣを向上させる１つ以上のアミノ酸置換（Ｆｃ領域の２９８位、３３３位及び３３４位の１つ以上における置換など）を有するＦｃ領域を含む。いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰは、Ｌａｚａｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，２００６，１０３：４００５−４０１０（参照により、その全体が援用される）に記載されているように、２３９位、３３２位及び３３０位に１つ以上のアミノ酸置換を有するＦｃ領域を含む。
【０３９９】
いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰは、Ｃ１ｑの結合及び／またはＣＤＣを向上または低下させる１つ以上の改変を含む。米国特許第６，１９４，５５１号、ＷＯ９９／５１６４２及びＩｄｕｓｏｇｉｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，２０００，１６４：４１７８−４１８４（それぞれ、参照により、その全体が援用される）を参照されたい。
【０４００】
いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰは、半減期を延長させる１つ以上の改変を含む。半減期が延長しているとともに、胎児性Ｆｃレセプター（ＦｃＲｎ）への結合が向上しているＡＢＰは、例えば、Ｈｉｎｔｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，２００６，１７６：３４６−３５６及び米国特許出願公開第２００５／００１４９３４号（それぞれ、参照により、その全体が援用される）に記載されている。このようなＦｃバリアントとしては、ＩｇＧの２３８位、２５０位、２５６位、２６５位、２７２位、２８６位、３０３位、３０５位、３０７位、３１１位、３１２位、３１４位、３１７位、３４０位、３５６位、３６０位、３６２位、３７６位、３７８位、３８０位、３８２位、４１３位、４２４位、４２８位及び４３４位というＦｃ領域残基のうちの１つ以上に置換を有するものが挙げられる。
【０４０１】
いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰは、米国特許第７，３７１，８２６号、同第５，６４８，２６０号及び同第５，６２４，８２１号、Ｄｕｎｃａｎ  ａｎｄ  Ｗｉｎｔｅｒ，Ｎａｔｕｒｅ，１９８８，３２２：７３８−７４０、ならびにＷＯ９４／２９３５１（それぞれ、参照により、その全体が援用される）に記載されているような１つ以上のＦｃ領域バリアントを含む。
【０４０２】
２．８．ピログルタミン酸
当該技術分野において知られているように、組み換えタンパク質のＮ末端のグルタメート（Ｅ）とグルタミン（Ｑ）のいずれも、インビトロ及びインビボにおいて、自発的に環化して、ピログルタミン酸（ｐＥ）を形成できる。Ｌｉｕ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２０１１，２８６：１１２１１−１１２１７（参照により、その全体が援用される）を参照されたい。
【０４０３】
いくつかの実施形態では、本発明で提供するのは、Ｎ末端の位置にｐＥ残基を有するポリペプチド配列を含むＡＢＰである。いくつかの実施形態では、本発明で提供するのは、Ｎ末端残基がＱからｐＥに変換されているポリペプチド配列を含むＡＢＰである。いくつかの実施形態では、本発明で提供するのは、Ｎ末端残基がＥからｐＥに変換されているポリペプチド配列を含むＡＢＰである。
【０４０４】
いくつかの実施形態では、本発明で提供するのは、Ｎ末端の位置にｐＥ残基を有するＶＨ配列を含むＡＢＰである。いくつかの実施形態では、本発明で提供するのは、Ｎ末端残基がＱからｐＥに変換されているＶＨ配列を含むＡＢＰである。いくつかの実施形態では、本発明で提供するのは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４〜２４から選択されるＶＨ配列であって、Ｎ末端のＱ残基がｐＥに変換されている配列を含むＡＢＰである。いくつかの実施形態では、本発明で提供するのは、ＡＢＰを含む組成物であって、そのＡＢＰが、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４〜２４から選択されるＶＨを含み、その組成物の上記のＶＨのＮ末端残基の少なくとも約２０％、少なくとも約４０％、少なくとも約６０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％または少なくとも約９９％が、ＱからｐＥに変換されている組成物である。
【０４０５】
いくつかの実施形態では、本発明で提供するのは、Ｎ末端の位置にｐＥ残基を有するＶＬ配列を含むＡＢＰである。いくつかの実施形態では、本発明で提供するのは、Ｎ末端残基がＥからｐＥに変換されているＶＬ配列を含むＡＢＰである。いくつかの実施形態では、本発明で提供するのは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２５〜２８から選択されるＶＬ配列であって、そのＮ末端のＥ残基がｐＥに変換されている配列を含むＡＢＰである。いくつかの実施形態では、本発明で提供するのは、ＡＢＰを含む組成物であって、そのＡＢＰが、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２５〜２８から選択されるＶＬを含み、その組成物の上記のＶＬのＮ末端残基の少なくとも約２０％、少なくとも約４０％、少なくとも約６０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％または少なくとも約９９％が、ＥからｐＥに変換されている組成物である。
【０４０６】
いくつかの実施形態では、本発明で提供するのは、Ｎ末端の位置にｐＥ残基を有する重鎖配列を含むＡＢＰである。いくつかの実施形態では、本発明で提供するのは、Ｎ末端残基がＱからｐＥに変換されている重鎖配列を含むＡＢＰである。いくつかの実施形態では、本発明で提供するのは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７９、８０、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、１００、１０１、１０２、１０３、１０４、１０５、１０６、１０８、１０９、１１０、１１１、１１２、１１３、１１４、１１５、１１６、１１７、１１８、１１９、１２１、１２２、１２３または１２４から選択される重鎖配列であって、そのＮ末端のＱ残基がｐＥに変換されている配列を含むＡＢＰである。いくつかの実施形態では、本発明で提供するのは、ＡＢＰを含む組成物であって、そのＡＢＰが、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７９、８０、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、１００、１０１、１０２、１０３、１０４、１０５、１０６、１０８、１０９、１１０、１１１、１１２、１１３、１１４、１１５、１１６、１１７、１１８、１１９、１２１、１２２、１２３または１２４から選択される重鎖を含み、その組成物の上記の重鎖のＮ末端残基の少なくとも約２０％、少なくとも約４０％、少なくとも約６０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％または少なくとも約９９％が、ＱからｐＥに変換されている組成物である。
【０４０７】
いくつかの実施形態では、本発明で提供するのは、Ｎ末端の位置にｐＥ残基を有する軽鎖配列を含むＡＢＰである。いくつかの実施形態では、本発明で提供するのは、Ｎ末端残基がＥからｐＥに変換されている軽鎖配列を含むＡＢＰである。いくつかの実施形態では、本発明で提供するのは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８１、９２、１０７または１２０から選択される軽鎖配列であって、そのＮ末端のＥ残基がｐＥに変換されている配列を含むＡＢＰである。いくつかの実施形態では、本発明で提供するのは、ＡＢＰを含む組成物であって、そのＡＢＰが、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８１、９２、１０７または１２０から選択される軽鎖を含み、その組成物の上記の軽鎖のＮ末端残基の少なくとも約２０％、少なくとも約４０％、少なくとも約６０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％または少なくとも約９９％が、ＥからｐＥに変換されている組成物である。
【０４０８】
２．９．システイン操作抗原結合タンパク質バリアント
特定の実施形態では、本発明で提供するのは、システイン操作ＡＢＰ（「チオＭＡＢ」として知られている）であり、この操作ＡＢＰは、ＡＢＰの１つ以上の残基が、システイン残基で置換されているものである。特定の実施形態では、この置換残基は、ＡＢＰの溶媒露出部位に存在する。このような残基をシステインで置換することによって、ＡＢＰの溶媒露出部位に、反応性チオール基を導入し、このチオール基を用いて、ＡＢＰを他の部分（薬物部分またはリンカー−薬物部分など）にコンジュゲートして、例えば、免疫コンジュゲート体を作製してよい。
【０４０９】
特定の実施形態では、軽鎖のＶ２０５、重鎖Ｆｃ領域のＡ１１８及び重鎖Ｆｃ領域のＳ４００という残基のうちのいずれか１つ以上が、システインで置換されていてよい。システイン操作ＡＢＰは、例えば、米国特許第７，５２１，５４１号（参照により、その全体が援用される）に説明されているように生成してよい。
【０４１０】
２．９．１．免疫コンジュゲート体
２．９．１．１．抗原結合タンパク質・ポリマーコンジュゲート体
いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰは、ポリマーとコンジュゲートすることによって誘導体化されている。いずれかの好適なポリマーをＡＢＰにコンジュゲートしてよい。
【０４１１】
いくつかの実施形態では、このポリマーは、水溶性ポリマーである。水溶性ポリマーの例示的な例としては、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、エチレングリコール／プロピレングリコールのコポリマー、カルボキシメチルセルロース、デキストラン、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、ポリ−１，３−ジオキソラン、ポリ−１，３，６−トリオキサン、エチレン／無水マレイン酸コポリマー、ポリアミノ酸（ホモポリマーまたはランダムコポリマーのいずれか）、ポリ（ｎ−ビニルピロリドン）−コ−ポリエチレングリコール、プロプロピレングリコールホモポリマー、ポリプロピレンオキサイド／エチレンオキサイドコポリマー、ポリオキシエチル化ポリオール（例えばグリセロール）、ポリビニルアルコール及びこれらの混合物が挙げられる。いくつかの態様では、製造目的では、ポリエチレングリコールプロピオンアルデヒドが、その水中安定性により、有用な場合がある。
【０４１２】
ポリマーは、任意の分子量のものであってよく、分岐していても、していなくてもよい。各ＡＢＰに結合しているポリマーの数は、様々であってよく、２つ以上のポリマーが結合している場合、それらのポリマーは、同じポリマーであっても、異なるポリマーであってもよい。概して、誘導体化のために使用するポリマーの数及び／またはタイプは、考慮事項（ＡＢＰの特定の特性または機能のうち、改善したい特性または機能と、ＡＢＰの意図する用途を含む）に基づき、定めることができる。
【０４１３】
２．９．１．２．抗原結合タンパク質・薬物コンジュゲート体
いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰは、１つ以上の治療剤にコンジュゲートされている。いずれかの好適な治療剤をＡＢＰにコンジュゲートしてよい。例示的な治療剤としては、サイトカイン、ケモカイン、ならびに所望のＴ細胞活性を誘導するその他の作用物質（ＯＸ４０Ｌ、４−１ＢＢＬ、ＴＮＦ−α（本明細書で使用する場合、「ＴＮＦ」）、ＩＬ−２、ＩＬ−１５融合体、ＣＸＣＬ９、ＣＸＣＬ１０、ＩＬ−１０トラップ、ＩＬ−２７トラップ及びＩＬ−３５トラップなど）が挙げられる。サイトカイントラップとその使用は、当該技術分野において知られており、例えば、Ｅｃｏｎｏｍｉｄｅｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，２００３，９：４７−５２（参照により、その全体が援用される）に説明されている。
【０４１４】
３．ＴＩＧＩＴ抗原結合タンパク質の作製方法
３．１．ＴＩＧＩＴ抗原の調製
本発明で提供するＡＢＰの単離のために用いるＴＩＧＩＴ抗原は、インタクトＴＩＧＩＴであっても、ＴＩＧＩＴの断片であってもよい。ＴＩＧＩＴ抗原は、例えば、単離タンパク質、または細胞の表面に発現しているタンパク質の形態であってよい。
【０４１５】
いくつかの実施形態では、ＴＩＧＩＴ抗原は、ＴＩＧＩＴの非天然型バリアント（天然では見られないアミノ酸配列または翻訳後修飾を有するＴＩＧＩＴタンパク質など）である。
【０４１６】
いくつかの実施形態では、ＴＩＧＩＴ抗原は、例えば、細胞内もしくは膜貫通配列、またはシグナル配列を除去することによってトランケートする。いくつかの実施形態では、ＴＩＧＩＴ抗原は、そのＣ末端で、ヒトＩｇＧ１  Ｆｃドメインまたはポリヒスチジンタグに融合する。
【０４１７】
３．２．モノクローナル抗体の作製方法
モノクローナル抗体は、例えば、Ｋｏｈｌｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，１９７５，２５６：４９５−４９７（参照により、その全体が援用される）によって初めて説明されたハイブリドーマ法及び／または組み換えＤＮＡ法（例えば、米国特許第４，８１６，５６７号（参照により、その全体が援用される）を参照されたい）を用いて得てよい。モノクローナル抗体は、例えば、ファージまたは酵母ベースのライブラリーを用いて得てもよい。例えば、米国特許第８，２５８，０８２号及び同第８，６９１，７３０号（それぞれ、参照により、その全体が援用される）を参照されたい。
【０４１８】
ハイブリドーマ法では、マウスまたはその他の適切な宿主動物を免疫して、免疫で用いたタンパク質に特異的に結合する抗体を産生するかまたは産生できるリンパ球を誘発する。あるいは、リンパ球をインビトロで免疫してもよい。その後、好適な融合剤（ポリエチレングリコールなど）を用いて、リンパ球をミエローマ細胞と融合して、ハイブリドーマ細胞を形成する。Ｇｏｄｉｎｇ  Ｊ．Ｗ．，Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ３ｒｄ  ｅｄ．（１９８６）Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ（参照により、その全体が援用される）を参照されたい。
【０４１９】
融合していない親ミエローマ細胞の増殖または生存を阻害する１つ以上の物質を含む好適な培養培地に、上記のハイブリドーマ細胞を播種し、増殖させる。例えば、親ミエローマ細胞が、酵素のヒポキサンチングアニンホスホリボシルトランスフェラーゼ（ＨＧＰＲＴまたはＨＰＲＴ）を欠損している場合には、ハイブリドーマ用の培養培地は典型的には、ヒポキサンチンとアミノプテリンとチミジンを含むことになり（ＨＡＴ培地）、これらの物質が、ＨＧＰＲＴ欠損細胞の増殖を防ぐ。
【０４２０】
有用なミエローマ細胞は、効率的に融合し、所定の抗体産生細胞による安定した高レベルの抗体産生を補助し、培地条件（ＨＡＴ培地の有無など）に感受性を示す細胞である。とりわけ、好ましいミエローマ細胞株は、マウス腫瘍ＭＯＰ−２１及びＭＣ−１１に由来する株（カリフォルニア州サンディエゴのＳａｌｋ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ  Ｃｅｌｌ  Ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ  Ｃｅｎｔｅｒから入手可能）と、ＳＰ−２またはＸ６３−Ａｇ８−６５３細胞（メリーランド州ロックビルのＡｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎから入手可能）のようなマウスミエローマ株である。ヒトミエローマ細胞株とマウス−ヒトヘテロミエローマ細胞株も、ヒトモノクローナル抗体の産生用として説明されている。例えば、Ｋｏｚｂｏｒ，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１９８４，１３３：３００１（参照により、その全体が援用される）を参照されたい。
【０４２１】
所望の特異性、親和性及び／または生物学的活性を持つ抗体を産生するハイブリドーマ細胞の特定後、限界希釈手順によって、所定のクローンをサブクローニングして、標準的な方法によって増殖させてよい。上記のＧｏｄｉｎｇの文献を参照されたい。この目的用として好適な培養培地としては、例えば、Ｄ−ＭＥＭまたはＲＰＭＩ−１６４０培地が挙げられる。加えて、ハイブリドーマ細胞は、インビボで、動物において腹水腫瘍として増殖させてもよい。
【０４２２】
従来の手順を用いて（例えば、モノクローナル抗体の重鎖と軽鎖をコードする遺伝子に特異的に結合できるオリゴヌクレオチドプローブを用いることによって）、モノクローナル抗体をコードするＤＮＡを容易に単離及び配列決定できる。したがって、このハイブリドーマ細胞は、所望の特性を持つ抗体をコードするＤＮＡの有用な供給源として機能し得る。ＤＮＡは、単離したら、発現ベクターに挿入してよく、その後、そのベクターを宿主細胞（そのベクターをトランスフェクションしなければ抗体を産生しない細菌（例えば大腸菌）、酵母（例えばサッカロミセス属（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ）もしくはピキア属（Ｐｉｃｈｉａ））、ＣＯＳ細胞、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞、またはミエローマ細胞など）にトランスフェクションして、モノクローナル抗体を産生させる。
【０４２３】
３．３．キメラ抗体の作製方法
キメラ抗体の例示的な作製方法は、例えば、米国特許第４，８１６，５６７号及びＭｏｒｒｉｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，１９８４，８１：６８５１−６８５５（それぞれ、参照により、その全体が援用される）に説明されている。いくつかの実施形態では、キメラ抗体は、組み換え技法を用いて、ヒト以外の可変領域（例えば、マウス、ラット、ハムスター、ウザギまたはヒト以外の霊長類動物（サルなど）に由来する可変領域）をヒト定常領域と組み合わせることによって作製する。
【０４２４】
３．４．ヒト化抗体の作製方法
ヒト化抗体は、ヒト以外のモノクローナル抗体の構造的部分の大半またはすべてを、対応するヒト抗体配列と置き換えることによって作製してよい。その結果、抗原特異的な可変またはＣＤＲのみが、ヒト以外の配列で構成されているハイブリッド分子が作られる。ヒト化抗体を得るための方法としては、例えば、Ｗｉｎｔｅｒ  ａｎｄ  Ｍｉｌｓｔｅｉｎ，Ｎａｔｕｒｅ，１９９１，３４９：２９３−２９９、Ｒａｄｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．，１９９８，９５：８９１０−８９１５、Ｓｔｅｉｎｂｅｒｇｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２０００，２７５：３６０７３−３６０７８、Ｑｕｅｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．，１９８９，８６：１００２９−１００３３、ならびに米国特許第５，５８５，０８９号、同第５，６９３，７６１号、同第５，６９３，７６２号及び同第６，１８０，３７０号（それぞれ、参照により、その全体が援用される）に説明されている方法が挙げられる。
【０４２５】
３．５．ヒト抗体の作製方法
ヒト抗体は、当該技術分野において知られている様々な技法によって、例えば、トランスジェニック動物（例えばヒト化マウス）を用いることによって作製できる。例えば、Ｊａｋｏｂｏｖｉｔｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．，１９９３，９０：２５５１、Ｊａｋｏｂｏｖｉｔｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，１９９３，３６２：２５５−２５８、Ｂｒｕｇｇｅｒｍａｎｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｙｅａｒ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏ．，１９９３，７：３３、ならびに米国特許第５，５９１，６６９号、同第５，５８９，３６９号及び同第５，５４５，８０７号（それぞれ、参照により、その全体が援用される）を参照されたい。ヒト抗体は、ファージ−ディスプレイライブラリーから得ることもできる（例えば、Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，１９９１，２２７：３８１−３８８、Ｍａｒｋｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，１９９１，２２２：５８１−５９７、ならびに米国特許第５，５６５，３３２号及び同第５，５７３，９０５号（それぞれ、参照により、その全体が援用される）を参照されたい）。ヒト抗体は、インビトロ活性化Ｂ細胞によって作製してもよい（例えば、米国特許第５，５６７，６１０号及び同第５，２２９，２７５号（それぞれ、参照により、その全体が援用される）を参照されたい）。ヒト抗体は、酵母ベースのライブラリーから得てもよい（例えば、米国特許第８，６９１，７３０号（参照により、その全体が援用される））を参照されたい）。
【０４２６】
３．６．抗体断片の作製方法
本発明で提供する抗体断片は、本明細書に記載されている例示的な方法または当該技術分野において知られている方法を含め、いずれかの好適な方法によって作製してよい。好適な方法としては、組み換え技法と、全抗体のタンパク分解が挙げられる。抗体断片の例示的な作製方法は、例えば、Ｈｕｄｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔ．Ｍｅｄ．，２００３，９：１２９−１３４（参照により、その全体が援用される）に説明されている。ｓｃＦｖ抗体の作製方法は、例えば、Ｐｌｕｃｋｔｈｕｎ，Ｔｈｅ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ  ｏｆ  Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，ｖｏｌ．１１３，Ｒｏｓｅｎｂｕｒｇ  ａｎｄ  Ｍｏｏｒｅ  ｅｄｓ．，Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，ｐｐ．２６９−３１５（１９９４）、ＷＯ９３／１６１８５、ならびに米国特許第５，５７１，８９４号及び同第５，５８７，４５８号（それぞれ、参照により、その全体が援用される）に説明されている。
【０４２７】
３．７．代替足場の作製方法
本発明で提供する代替足場は、本明細書に記載されている例示的な方法または当該技術分野において知られている方法を含め、いずれかの好適な方法によって作製してよい。例えば、Ａｄｎｅｃｔｉｎｓ（商標）の調製方法は、Ｅｍａｎｕｅｌ  ｅｔ  ａｌ．，ｍＡｂｓ，２０１１，３：３８−４８（参照により、その全体が援用される）に説明されている。ｉＭａｂの調製方法は、米国特許出願公開第２００３／０２１５９１４号（参照により、その全体が援用される）に説明されている。Ａｎｔｉｃａｌｉｎｓ（登録商標）の調製方法は、Ｖｏｇｔ  ａｎｄ  Ｓｋｅｒｒａ，Ｃｈｅｍ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．，２００４，５：１９１−１９９（参照により、その全体が援用される）に説明されている。Ｋｕｎｉｔｚドメインの調製方法は、Ｗａｇｎｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｅｍ．＆  Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍ．，１９９２，１８６：１１８−１１４５（参照により、その全体が援用される）に説明されている。チオレドキシンペプチドアプタマーの調製方法は、Ｇｅｙｅｒ  ａｎｄ  Ｂｒｅｎｔ，Ｍｅｔｈ．Ｅｎｚｙｍｏｌ．，２０００，３２８：１７１−２０８（参照により、その全体が援用される）に示されている。Ａｆｆｉｂｏｄｙの調製方法は、Ｆｅｒｎａｎｄｅｚ，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎｉｏｎ  ｉｎ  Ｂｉｏｔｅｃｈ．，２００４，１５：３６４−３７３（参照により、その全体が援用される）に示されている。ＤＡＲＰｉｎの調製方法は、Ｚａｈｎｄ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，２００７，３６９：１０１５−１０２８（参照により、その全体が援用される）に示されている。Ａｆｆｉｌｉｎの調製方法は、Ｅｂｅｒｓｂａｃｈ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，２００７，３７２：１７２−１８５（参照により、その全体が援用される）に示されている。テトラネクチンの調製方法は、Ｇｒａｖｅｒｓｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２０００，２７５：３７３９０−３７３９６（参照により、その全体が援用される）に示されている。Ａｖｉｍｅｒの調製方法は、Ｓｉｌｖｅｒｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈ．，２００５，２３：１５５６−１５６１（参照により、その全体が援用される）に示されている。Ｆｙｎｏｍｅｒの調製方法は、Ｓｉｌａｃｃｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２０１４，２８９：１４３９２−１４３９８（参照により、その全体が援用される）に示されている。
【０４２８】
代替足場に関するさらなる情報は、Ｂｉｎｚ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．，２００５  ２３：１２５７−１２６８及びＳｋｅｒｒａ，Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｏｐｉｎ．ｉｎ  Ｂｉｏｔｅｃｈ．，２００７  １８：２９５−３０４（それぞれ、参照により、その全体が援用される）に示されている。
【０４２９】
３．８．多特異性ＡＢＰの作製方法
本発明で提供する多特異性ＡＢＰは、本明細書に記載されている例示的な方法または当該技術分野において知られている方法を含め、いずれかの好適な方法によって作製してよい。共通軽鎖抗体の作製方法は、Ｍｅｒｃｈａｎｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．，１９９８，１６：６７７−６８１（参照により、その全体が援用される）に説明されている。四価の二重特異性抗体の作製方法は、Ｃｏｌｏｍａ  ａｎｄ  Ｍｏｒｒｉｓｏｎ，Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．，１９９７，１５：１５９−１６３（参照により、その全体が援用される）に説明されている。ハイブリッド免疫グロブリンの作製方法は、Ｍｉｌｓｔｅｉｎ  ａｎｄ  Ｃｕｅｌｌｏ，Ｎａｔｕｒｅ，１９８３，３０５：５３７−５４０及びＳｔａｅｒｚ  ａｎｄ  Ｂｅｖａｎ，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，１９８６，８３：１４５３−１４５７（それぞれ、参照により、その全体が援用される）に説明されている。ノブ・イントゥ・ホールによる改変を用いた免疫グロブリンの作製方法は、米国特許第５，７３１，１６８号（参照により、その全体が援用される）に説明されている。静電変性による免疫グロブリンの作製方法は、ＷＯ２００９／０８９００４（参照により、その全体が援用される）に示されている。二重特異性一本鎖抗体の作製方法は、Ｔｒａｕｎｅｃｋｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，ＥＭＢＯ  Ｊ．，１９９１，１０：３６５５−３６５９及びＧｒｕｂｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１９９４，１５２：５３６８−５３７４（それぞれ、参照により、その全体が援用される）に説明されている。リンカー長が様々であってよい一本鎖抗体の作製方法は、米国特許第４，９４６，７７８号及び同第５，１３２，４０５号（それぞれ、参照により、その全体が援用される）に説明されている。ダイアボディの作製方法は、Ｈｏｌｌｉｎｇｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，１９９３，９０：６４４４−６４４８（参照により、その全体が援用される）に説明されている。トリアボディとテトラボディの作製方法は、Ｔｏｄｏｒｏｖｓｋａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ，２００１，２４８：４７−６６（参照により、その全体が援用される）に説明されている。三重特異性Ｆ（ａｂ’）３誘導体の作製方法は、Ｔｕｔｔ  ｅｔ  ａｌ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１９９１，１４７：６０−６９（参照により、その全体が援用される）に説明されている。架橋抗体の作製方法は、米国特許第４，６７６，９８０号、Ｂｒｅｎｎａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ，１９８５，２２９：８１−８３、Ｓｔａｅｒｚ，ｅｔ  ａｌ．Ｎａｔｕｒｅ，１９８５，３１４：６２８−６３１及びＥＰ０４５３０８２（それぞれ、参照により、その全体が援用される）に説明されている。ロイシンジッパーによってアセンブルする抗原結合ドメインの作製方法は、Ｋｏｓｔｅｌｎｙ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１９９２，１４８：１５４７−１５５３（参照により、その全体が援用される）に説明されている。ＤＮＬのアプローチによるＡＢＰの作製方法は、米国特許第７，５２１，０５６号、同第７，５５０，１４３号、同第７，５３４，８６��号及び同第７，５２７，７８７号（それぞれ、参照により、その全体が援用される）に説明されている。抗体と抗体以外の分子とのハイブリッド体の作製方法は、ＷＯ９３／０８８２９（参照により、その全体が援用される）に説明されている（例えば上記のようなＡＢＰのハイブリッド体）。ＤＡＦ抗体の作製方法は、米国特許出願公開第２００８／００６９８２０号（参照により、その全体が援用される）に説明されている。還元と酸化によるＡＢＰの作製方法は、Ｃａｒｌｒｉｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，ＰＬｏＳ  Ｏｎｅ，２０１１，６：ｅ２２５３３（参照により、その全体が援用される）に説明されている。ＤＶＤ−Ｉｇ（商標）の作製方法は、米国特許第７，６１２，１８１号（参照により、その全体が援用される）に説明されている。ＤＡＲＴ（商標）の作製方法は、Ｍｏｏｒｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ，２０１１，１１７：４５４−４５１（参照により、その全体が援用される）に説明されている。ＤｕｏＢｏｄｙ（登録商標）の作製方法は、Ｌａｂｒｉｊｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，２０１３，１１０：５１４５−５１５０、Ｇｒａｍｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，ｍＡｂｓ，２０１３，５：９６２−９７２及びＬａｂｒｉｊｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ，２０１４，９：２４５０−２４６３（それぞれ、参照により、その全体が援用される）に説明されている。ＩｇＧ由来のＣＨ３のＣ末端に融合したｓｃＦｖを含む抗体の作製方法は、Ｃｏｌｏｍａ  ａｎｄ  Ｍｏｒｒｉｓｏｎ，Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．，１９９７，１５：１５９−１６３（参照により、その全体が援用される）に説明されている。Ｆａｂ分子が免疫グロブリンの定常領域に結合している抗体の作製方法は、Ｍｉｌｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，２００３，１７０：４８５４−４８６１（参照により、その全体が援用される）に説明されている。ＣｏｖＸ−Ｂｏｄｙの作製方法は、Ｄｏｐｐａｌａｐｕｄｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，２０１０，１０７：２２６１１−２２６１６（参照により、その全体が援用される）に説明されている。Ｆｃａｂ抗体の作製方法は、Ｗｏｚｎｉａｋ−Ｋｎｏｐｐ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｎｇ．Ｄｅｓ．Ｓｅｌ．，２０１０，２３：２８９−２９７（参照により、その全体が援用される）に説明されている。ＴａｎｄＡｂ（登録商標）抗体の作製方法は、Ｋｉｐｒｉｙａｎｏｖ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，１９９９，２９３：４１−５６及びＺｈｕｋｏｖｓｋｙ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ，２０１３，１２２：５１１６（それぞれ、参照により、その全体が援用される）に説明されている。タンデムＦａｂの作製方法は、ＷＯ２０１５／１０３０７２（参照により、その全体が援用される）に説明されている。Ｚｙｂｏｄｙ（商標）の作製方法は、ＬａＦｌｅｕｒ  ｅｔ  ａｌ．，ｍＡｂｓ，２０１３，５：２０８−２１８（参照により、その全体が援用される）に説明されている。
【０４３０】
３．９．バリアントの作製方法
いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰは、親ＡＢＰの親和性成熟バリアントであり、このバリアントは、例えば、ファージディスプレイベースの親和性成熟技法を用いて作製してよい。簡潔に述べると、１つ以上のＣＤＲ残基を変異させ、そのバリアントＡＢＰまたはその一部をファージに提示させ、親和性についてスクリーニングしてよい。このような改変は、ＣＤＲ「ホットスポット」、すなわち、体細胞成熟プロセス中に高い頻度で変異が起こるコドンによってコードされる残基（Ｃｈｏｗｄｈｕｒｙ，Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，２００８，２０７：１７９−１９６（参照により、その全体が援用される）を参照されたい）及び／または抗原と接触する残基で行ってよい。
【０４３１】
エラープローンＰＣＲ、鎖シャッフリング及びオリゴヌクレオチド特異的変異誘発（トリヌクレオチド特異的変異誘発（ＴＲＩＭ）など）を含め、いずれかの好適な方法を用いて、ＡＢＰをコードするポリヌクレオチド配列（複数可）に可変性を導入できる。いくつかの態様では、いくつかのＣＤＲ残基（例えば一度に４〜６個の残基）をランダム化する。抗原結合に関与するＣＤＲ残基は、例えば、アラニンスキャンニング変異誘発またはモデリングを用いて、特異的に同定してよい。ＣＤＲ−Ｈ３とＣＤＲ−Ｌ３が特に変異の標的となることが多い。
【０４３２】
多様性を可変領域及び／またはＣＤＲに導入することを用いて、二次ライブラリーを作製できる。続いて、この二次ライブラリーをスクリーニングして、親和性の向上したＡＢＰバリアントを同定する。二次ライブリーの構築と、そのライブラリーからの再選択による親和性成熟は、例えば、Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，２００１，１７８：１−３７（参照により、その全体が援用される）に説明されている。
【０４３３】
３．１０．ベクター、宿主細胞及び組み換え方法
また、本発明で提供するのは、ＴＩＧＩＴ  ＡＢＰをコードする単離核酸と、その核酸を含むベクターと、そのベクターと核酸を含む宿主細胞と、ＡＢＰを作製するための組み換え技法である。
【０４３４】
ＡＢＰの組み換え産生では、そのＡＢＰをコードする核酸（複数可）を単離して、さらなるクローニング（すなわち、ＤＮＡの増幅）または発現のために、その核酸を複製可能なベクターに挿入してよい。いくつかの態様では、この核酸は、例えば、米国特許第５，２０４，２４４号（参照により、その全体が援用される）に説明されているように、相同組み換えによって作製してよい。
【０４３５】
当該技術分野においては、多種多様なベクターが知られている。ベクター成分は概して、例えば、米国特許第５，５３４，６１５号（参照により、その全体が援用される）に説明されているように、シグナル配列、複製起点、１つ以上のマーカー遺伝子、エンハンサー要素、プロモーター及び転写終結配列のうちの１つ以上を含む。
【０４３６】
好適な宿主細胞の例示的な例は、下に示されている。これらの宿主細胞は、限定するようには意図されておらず、いずれかの好適な宿主細胞を用いて、本発明で提供するＡＢＰを作製してよい。
【０４３７】
好適な宿主細胞としては、いずれかの原核（例えば細菌）細胞、下等真核（例えば酵母）細胞または高等真核（例えば哺乳動物）細胞が挙げられる。好適な原核生物としては、真正細菌、例えば、グラム陰性またはグラム陽性生物など、例えば、腸内細菌科（Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒｉａｃｅａｅ）（エシェリキア属（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ）（大腸菌）、エンテロバクター属（Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒ）、エルウィニア属（Ｅｒｗｉｎｉａ）、クレブシエラ属（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ）、プロテウス属（Ｐｒｏｔｅｕｓ）、サルモネラ属（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ）（Ｓ．チフィリウム（Ｓ．ｔｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍ））、セラチア属（Ｓｅｒｒａｔｉａ）（Ｓ．マルセッセンス（Ｓ．ｍａｒｃｅｓｃａｎｓ））、シゲラ属（Ｓｈｉｇｅｌｌａ）、バチルス属（Ｂａｃｉｌｌｉ）（Ｂ．スブチリス（Ｂ．ｓｕｂｔｉｌｉｓ）及びＢ．リケニフォルミス（Ｂ．ｌｉｃｈｅｎｉｆｏｒｍｉｓ））など）、シュードモナス属（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）（Ｐ．エルギノーサ（Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ））及びストレプトミセス属（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ）が挙げられる。１つの有用な大腸菌クローニング宿主は、大腸菌２９４であるが、大腸菌Ｂ、大腸菌Ｘ１７７６及び大腸菌Ｗ３１１０などの他の株も適している。
【０４３８】
原核生物に加えて、糸状菌または酵母のような真核微生物も、ＴＩＧＩＴ  ＡＢＰコードベクターに好適なクローニングまたは発現宿主である。サッカロミセス・セレビシア（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）、すなわち一般的なパン酵母は、広く用いられている下等真核宿主微生物である。しかしながら、シゾサッカロミセス・ポンベ（Ｓｃｈｉｚｏｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｐｏｍｂｅ）、クリベロミセス属（Ｋｌｕｙｖｅｒｏｍｙｃｅｓ）（Ｋ．ラクチス（Ｋ．ｌａｃｔｉｓ）、Ｋ．フラギリス（Ｋ．ｆｒａｇｉｌｉｓ）、Ｋ．ブルガリカス（Ｋ．ｂｕｌｇａｒｉｃｕｓ）、Ｋ．ウィッケラミイ（Ｋ．ｗｉｃｋｅｒａｍｉｉ）、Ｋ．ワルチイ（Ｋ．ｗａｌｔｉｉ）、Ｋ．ドロソフィラム（Ｋ．ｄｒｏｓｏｐｈｉｌａｒｕｍ）、Ｋ．サーモトレランス（Ｋ．ｔｈｅｒｍｏｔｏｌｅｒａｎｓ）及びＫ．マルキシアヌス（Ｋ．ｍａｒｘｉａｎｕｓ））、ヤロウイア属（Ｙａｒｒｏｗｉａ）、ピキア・パストリス（Ｐｉｃｈｉａ  ｐａｓｔｏｒｉｓ）、カンジダ属（Ｃａｎｄｉｄａ）（Ｃ．アルビカンス（Ｃ．ａｌｂｉｃａｎｓ））、トリコデルマ・レーシア（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ  ｒｅｅｓｉａ）、アカパンビ（Ｎｅｕｒｏｓｐｏｒａ  ｃｒａｓｓａ）、シュワニオミセス属（Ｓｃｈｗａｎｎｉｏｍｙｃｅｓ）（Ｓ．オクシデンタリス（Ｓ．ｏｃｃｉｄｅｎｔａｌｉｓ））、ならびに糸状菌、例えば、ペニシリウム属（Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ）、トリポクラジウム属（Ｔｏｌｙｐｏｃｌａｄｉｕｍ）及びアスペルギルス属（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ）（Ａ．ニデュランス（Ａ．ｎｉｄｕｌａｎｓ）及びＡ．ニガー（Ａ．ｎｉｇｅｒ））のような多くのその他の属、種及び株が利用可能かつ有用である。
【０４３９】
有用な哺乳動物宿主細胞としては、ＣＯＳ−７細胞、ＨＥＫ２９３細胞、ベビーハムスター腎臓（ＢＨＫ）細胞、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）、マウスセルトーリ細胞、アフリカミドリザル腎臓細胞（ＶＥＲＯ−７６）などが挙げられる。
【０４４０】
本発明のＴＩＧＩＴ  ＡＢＰを産生させるのに用いる宿主細胞は、様々な培地で培養してよい。例えば、ハムＦ１０、最小必須培地（ＭＥＭ）、ＲＰＭＩ−１６４０及びダルベッコ改変イーグル培地（ＤＭＥＭ）のような市販の培地が、宿主細胞の培養に適している。加えて、Ｈａｍ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｅｔｈ．Ｅｎｚ．，１９７９，５８：４４、Ｂａｒｎｅｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｎａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．，１９８０，１０２：２５５、ならびに米国特許第４，７６７，７０４号、同第４，６５７，８６６号、同第４，９２７，７６２号、同第４，５６０，６５５号及び同第５，１２２，４６９号またはＷＯ９０／０３４３０及びＷＯ８７／００１９５に記載されているいずれかの培地を用いてよい。上記の各参照文献は、参照により、その全体が援用される。
【０４４１】
必要に応じて、これらの培地のいずれにも、ホルモン及び／またはその他の成長因子（インスリン、トランスフェリンまたは上皮細胞成長因子など）、塩（塩化ナトリウム、カルシウム、マグネシウム及びホスフェートなど）、緩衝液（ＨＥＰＥＳなど）、ヌクレオチド（アデノシン及びチミジンなど）、抗生物質、微量要素（通常、マイクロモルの範囲の終濃度で存在する無機化合物として定義する）、ならびにグルコースまたは同等のエネルギー源を添加してよい。いずれかの他の必要な助剤を、当業者であれば分かる適切な濃度で含めてもよい。
【０４４２】
温度、ｐＨなどの培養条件は、発現について選択した宿主細胞で事前に用いた条件であり、当業者には明らかであろう。
【０４４３】
組み換え技法を用いるときには、ＡＢＰは、細胞内に産生させることも、ペリプラズム間隙内に産生させることも、培地に直接分泌させることもできる。ＡＢＰを細胞内に産生させるときには、第１のステップとして、例えば遠心分離または限外ろ過によって、微粒子状の破片（宿主細胞断片または溶解断片のいずれか）を除去する。例えば、Ｃａｒｔｅｒ  ｅｔ  ａｌ．（Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，１９９２，１０：１６３−１６７、参照により、その全体が援用される）に、大腸菌のペリプラズム間隙に分泌されるＡＢＰを単離する手順が説明されている。簡潔に述べると、ナトリウムアセテート（ｐＨ３．５）、ＥＤＴＡ及びフェニルメチルスルホニルフルオリド（ＰＭＳＦ）の存在下で、細胞ペーストを約３０分かけて解凍する。細胞破片は、遠心分離によって除去することができる。
【０４４４】
いくつかの実施形態では、ＡＢＰは、無細胞系で産生させる。いくつかの態様では、この無細胞系は、Ｙｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，ｍＡｂｓ，２０１２，４：２１７−２２５（参照により、その全体が援用される）に説明されているようなインビトロ転写及び翻訳系である。いくつかの態様では、この無細胞系では、真核細胞または原核細胞から得た無細胞抽出物を使用する。いくつかの態様では、この原核細胞は、大腸菌である。例えば、ＡＢＰが、不溶性凝集体として細胞に蓄積する場合、またはペリプラズム発現で得られる収率が低い場合には、ＡＢＰの無細胞発現が有用なことがある。
【０４４５】
ＡＢＰを培地に分泌させる場合には、概して、まず、市販のタンパク質濃縮フィルター、例えば、Ａｍｉｃｏｎ（登録商標）またはＭｉｌｌｉｐｏｒｅ（登録商標）Ｐｅｌｌｃｏｎ（登録商標）という限外ろ過ユニットを用いて、その発現系から得られる上清を濃縮する。上記のステップのいずれかに、ＰＭＳＦのようなプロテアーゼインヒビターを含めて、タンパク質分解を阻害してよいとともに、抗生物質を含めて、外来性の汚染菌の増殖を防いでよい。
【０４４６】
例えば、ヒドロキシアパタイトクロマトグラフィー、ゲル電気泳動、透析及び親和性クロマトグラフィーを用いて、細胞から調製されたＡＢＰ組成物を精製でき、特に、親和性クロマトグラフィーが有用な精製技法である。プロテインＡの親和性リガンドとしての適性は、ＡＢＰに存在するあらゆる免疫グロブリンＦｃドメインの種とアイソタイプに左右される。プロテインＡを用いて、ヒトγ１、γ２またはγ４重鎖を含むＡＢＰを精製できる（Ｌｉｎｄｍａｒｋ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈ．，１９８３，６２：１−１３（参照により、その全体が援用される））。プロテインＧは、すべてのマウスアイソタイプとヒトγ３に有用である（Ｇｕｓｓ  ｅｔ  ａｌ．，ＥＭＢＯ  Ｊ．，１９８６，５：１５６７−１５７５（参照により、その全体が援用される））。
【０４４７】
親和性リガンドが結合するマトリックスは、アガロースであることが最も多いが、他のマトリックスも利用可能である。機械的に安定しているマトリックス（制御細孔ガラスまたはポリ（スチレンジビニル）ベンゼンなど）により、流速が向上可能になり、処理時間の短縮は、アガロースで実現できる。ＡＢＰが、ＣＨ３ドメインを含む場合、精製には、ＢａｋｅｒＢｏｎｄ  ＡＢＸ（登録商標）という樹脂が有用である。
【０４４８】
タンパク質精製のための他の技法（イオン交換カラムでの分画、エタノール沈殿、逆相ＨＰＬＣ、シリカクロマトグラフィー、ヘパリンＳｅｐｈａｒｏｓｅ（登録商標）クロマトグラフィー、クロマトフォーカシング、ＳＤＳ−ＰＡＧＥ及び硫安分画など）も利用可能であり、当業者であれば、これらの技法を適用できる。
【０４４９】
いずれかの予備精製ステップ（複数可）の後、ｐＨが約２．５〜約４．５の溶出用緩衝液を用いるとともに、概して低い塩濃度（例えば約０〜約０．２５Ｍの塩）で行う低ｐＨ疎水性相互作用クロマトグラフィーに、目的のＡＢＰと夾雑物とを含む混合物をかけてよい。
【０４５０】
４．アッセイ
当該技術分野において知られている様々なアッセイを用いて、本発明で提供するＴＩＧＩＴ  ＡＢＰの同定と特徴付けを行ってよい。
【０４５１】
４．１．結合、競合及びエピトープマッピングアッセイ
本発明で提供するＡＢＰの特異的抗原結合活性は、本開示の他の箇所に説明されているように、ＳＰＲ、ＢＬＩ、ＲＩＡ及びＭＳＤ−ＳＥＴを用いることを含むいずれかの好適な方法によって評価してよい。加えて、抗原結合活性は、ＥＬＩＳＡアッセイ及びウエスタンブロットアッセイによって評価してもよい。
【０４５２】
２つのＡＢＰまたはＡＢＰと別の分子（例えば、ＴＩＧＩＴの１つ以上のリガンド）間の競合を測定するためのアッセイは、本開示の別の箇所と、例えば、Ｈａｒｌｏｗ  ａｎｄ  Ｌａｎｅ，Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ  ｃｈ．１４，１９８８，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ，Ｎ．Ｙ（参照により、その全体が援用される）に説明されている。
【０４５３】
本発明で提供するＡＢＰが結合するエピトープをマッピングするアッセイは、例えば、Ｍｏｒｒｉｓ“Ｅｐｉｔｏｐｅ  Ｍａｐｐｉｎｇ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ，”ｉｎ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  ｖｏｌ．６６，１９９６，Ｈｕｍａｎａ  Ｐｒｅｓｓ，Ｔｏｔｏｗａ，Ｎ．Ｊ．（参照により、その全体が援用される）に説明されている。いくつかの実施形態では、このエピトープは、ペプチド競合によって割り出す。いくつかの実施形態では、このエピトープは、質量分析法によって割り出す。いくつかの実施形態では、このエピトープは、結晶解析法によって割り出す。
【０４５４】
４．２．ＴＩＧＩＴアンタゴナイズ作用アッセイ
いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰをスクリーニングして、ＴＩＧＩＴに対するアンタゴナイズ活性を有するＡＢＰの同定または特徴付けを行う。いずれかの好適なアッセイを用いて、このようなＡＢＰの同定または特徴付けを行ってよい。いくつかの態様では、このアッセイでは、エフェクターＴ細胞を、本発明で提供するＡＢＰと接触させた後に、そのエフェクターＴ細胞によって分泌されるサイトカインの量を測定する。いくつかの態様では、このサイトカインは、ＩＬ−２、ＩＬ−６、ＬＴ−α、ＴＮＦ、ＧＭ−ＣＳＦ、ＩＦＮγ及びこれらの組み合わせから選択される。いくつかの態様では、上記のサイトカインは、ｓＣＤ４０Ｌ、ＶＥＧＦ、ＴＧＦ−α、ＲＡＮＴＥＳ、ＰＤＧＦ−ＡＢ／ＢＢ、ＰＤＧＦ−ＡＡ、ＭＩＰ−１β、ＭＩＰ−１α、ＭＤＣ（ＣＣＬ２２）、ＭＣＰ−３、ＭＣＰ−１、ＩＰ−１０、ＩＬ−１７Ａ、ＩＬ−２Ｒα、ＩＬ−１５、ＩＬ−１３、ＩＬ−１２（ｐ７０）、ＩＬ−１２（ｐ４０）、ＩＬ−１０、ＩＬ−９、ＩＬ−８、ＩＬ−７、ＩＬ−５、ＩＬ−４、ＩＬ−３、ＩＬ−２、ＩＬ−２Ｒα、ＩＬ−１ＲＡ、ＩＬ−１β、ＩＬ−１α、ＩＦＮγ、ＩＦＮα２、ＧＲＯ、ＧＭ−ＣＳＦ、Ｇ−ＣＳＦ、フラクタルカイン、Ｆｌｔ−３リガンド、ＦＧＦ−２、エオタキシン、ＥＧＦ及びこれらの組み合わせから選択される。
【０４５５】
いくつかの実施形態では、エフェクター細胞を、ＣＤ３のアゴニストとともに共刺激して、そのエフェクター細胞によるサイトカインの分泌を促す。いくつかの態様では、このＣＤ３アゴニストは、準最大レベルで供給する。
【０４５６】
いくつかの態様では、このアッセイでは、エフェクターＴ細胞を、本発明で提供するＡＢＰと接触させた後に、そのエフェクターＴ細胞の増殖を測定してよい。いくつかの態様では、このエフェクターＴ細胞の増殖は、色素（例えば、カルボキシフルオレセインジアセテートスクシンイミジルエステル、ＣＦＳＥ）の希釈、トリチウム化チミジンの取り込み、発光細胞生存能アッセイまたは当該技術分野において知られているその他のアッセイによって測定する。
【０４５７】
いくつかの態様では、このアッセイでは、制御性Ｔ細胞を、本発明で提供するＡＢＰと接触させた後に、その制御性Ｔ細胞の分化、サイトカインの産生、生存能（例えば生存率）、増殖または抑制活性を測定してよい。
【０４５８】
いくつかの態様では、このアッセイでは、ＮＫ細胞を、本発明で提供するＡＢＰと接触させた後に、そのＮＫ細胞の細胞傷害活性を測定してよい。いくつかの態様では、ＮＫ細胞の細胞傷害活性は、ＮＫの媒介による標的細胞（例えばＫ５６２細胞株）の殺傷を定量する細胞傷害性アッセイを用いて測定する。Ｊａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｎｎ．Ｃｌｉｎ．Ｌａｂ．Ｓｃｉ．，２０１２，４２：４２−４９（参照により、その全体が援用される）を参照されたい。
【０４５９】
いくつかの態様では、上記のアッセイでは、グランザイムＢの量を測定してよい。いくつかの態様では、上記のアッセイでは、パーフォリンの量を測定してよい。
【０４６０】
４．３．エフェクター機能に関するアッセイ
Ｒａｖｅｔｃｈ  ａｎｄ  Ｋｉｎｅｔ，Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１９９１，９：４５７−４９２、米国特許第５，５００，３６２号、同第５，８２１，３３７号、Ｈｅｌｌｓｔｒｏｍ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ  Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，１９８６，８３：７０５９−７０６３、Ｈｅｌｌｓｔｒｏｍ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ  Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，１９８５，８２：１４９９−１５０２、Ｂｒｕｇｇｅｍａｎｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．，１９８７，１６６：１３５１−１３６１、Ｃｌｙｎｅｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ  Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，１９９８，９５：６５２−６５６、ＷＯ２００６／０２９８７９、ＷＯ２００５／１００４０２、Ｇａｚｚａｎｏ−Ｓａｎｔｏｒｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ，１９９６，２０２：１６３−１７１、Ｃｒａｇｇ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ，２００３，１０１：１０４５−１０５２、Ｃｒａｇｇ  ｅｔ  ａｌ．Ｂｌｏｏｄ，２００４，１０３：２７３８−２７４３及びＰｅｔｋｏｖａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｉｎｔ’ｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，２００６，１８：１７５９−１７６９（それぞれ、参照により、その全体が援用される）に説明されているものを含め、当該技術分野において知られている様々なインビトロ及びインビボアッセイを用いて、本発明で提供するＡＢＰによる処理後のエフェクター機能を評価してよい。
【０４６１】
５．医薬組成物
本発明で提供するＡＢＰは、いずれかの適切な医薬組成物に調合して、いずれかの好適な投与経路によって投与できる。好適な投与経路としては、動脈内経路、皮内経路、筋肉内経路、腹腔内経路、静脈内経路、経鼻経路、非経口経路、経肺経路及び皮下経路が挙げられるが、これらに限らない。
【０４６２】
この医薬組成物は、１つ以上の医薬品賦形剤を含んでよい。いずれかの好適な医薬品賦形剤を用いてよく、当業者は、好適な医薬品賦形剤を選択することができる。したがって、下に示されている医薬品賦形剤は、例示するように意図されており、限定するものではない。追加の医薬品賦形剤としては、例えば、Ｈａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｅｘｃｉｐｉｅｎｔｓ，Ｒｏｗｅ  ｅｔ  ａｌ．（Ｅｄｓ．）６ｔｈ  Ｅｄ．（２００９）（参照により、その全体が援用される）に記載されているものが挙げられる。
【０４６３】
いくつかの実施形態では、この医薬組成物は、消泡剤を含む。いずれかの好適な消泡剤を用いてよい。いくつかの態様では、消泡剤は、アルコール、エーテル、油、ワックス、シリコーン、界面活性剤及びこれらの組み合わせから選択される。いくつかの態様では、消泡剤は、鉱油、植物油、エチレンビスステアルアミド、パラフィンワックス、エステルワックス、脂肪アルコールワックス、長鎖脂肪酸アルコール、脂肪酸石鹸、脂肪酸エステル、シリコングリコール、フルオロシリコーン、ポリエチレングリコール−ポリプロピレングリコールコポリマー、ポリジメチルシロキサン−シリコンジオキサイド、エーテル、オクチルアルコール、カプリルアルコール、ソルビタントリオレエート、エチルアルコール、２−エチル−ヘキサノール、ジメチコン、オレイルアルコール、シメチコン及びこれらの組み合わせから選択される。
【０４６４】
いくつかの実施形態では、上記の医薬組成物は、共溶媒を含む。共溶媒の例示的な例としては、エタノール、ポリ（エチレン）グリコール、ブチレングリコール、ジメチルアセトアミド、グリセリン、プロピレングリコール及びこれらの組み合わせが挙げられる。
【０４６５】
いくつかの実施形態では、上記の医薬組成物は、緩衝剤を含む。緩衝剤の例示的な例としては、アセテート、ボレート、カーボネート、ラクテート、マレート、ホスフェート、シトレート、ハイドロキサイド、ジエタノールアミン、モノエタノールアミン、グリシン、メチオニン、グアーガム、モノナトリウムグルタメート及びこれらの組み合わせが挙げられる。
【０４６６】
いくつかの実施形態では、上記の医薬組成物は、担体または充填剤を含む。担体または充填剤の例示的な例としては、ラクトース、マルトデキストリン、マンニトール、ソルビトール、キトサン、ステアリン酸、キサンタンガム、グアーガム及びこれらの組み合わせが挙げられる。
【０４６７】
いくつかの実施形態では、上記の医薬組成物は、界面活性剤を含む。界面活性剤の例示的な例としては、ｄ−αトコフェロール、ベンザルコニウムクロライド、ベンゼトニウムクロライド、セトリミド、セチルピリジニウムクロライド、ドキュセートナトリウム、グリセリルベヘネート、グリセリルモノオレエート、ラウリン酸、マクロゴール１５ヒドロキシステアレート、ミリスチルアルコール、リン脂質、ポリオキシエチレンアルキルエーテル、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル、ポリオキシエチレンステアレート、ポリオキシルグリセリド、ナトリウムラウリルサルフェート、ソルビタンエステル、ビタミンＥポリエチレン（グリコール）サクシネート及びこれらの組み合わせが挙げられる。
【０４６８】
いくつかの実施形態では、上記の医薬組成物は、固結防止剤を含む。固結防止剤の例示的な例としては、カルシウムホスフェート（第三）、ヒドロキシメチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、マグネシウムオキサイド及びこれらの組み合わせが挙げられる。
【０４６９】
上記の医薬組成物とともに用いてよいその他の賦形剤としては、例えば、アルブミン、抗酸化剤、抗細菌剤、抗真菌剤、生体吸収性ポリマー、キレート剤、放出制御剤、希釈剤、分散剤、溶解促進剤、乳化剤、ゲル化剤、軟膏基剤、透過促進剤、保存剤、可溶化剤、溶媒、安定化剤、糖及びこれらの組み合わせが挙げられる。これらの各賦形剤の具体例は、例えば、Ｈａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｅｘｃｉｐｉｅｎｔｓ，Ｒｏｗｅ  ｅｔ  ａｌ．（Ｅｄｓ．）６ｔｈ  Ｅｄ．（２００９），Ｔｈｅ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｐｒｅｓｓ（参照により、その全体が援用される）に記載されている。
【０４７０】
いくつかの実施形態では、上記の医薬組成物は、溶媒を含む。いくつかの態様では、溶媒は、滅菌等張食塩液またはデキストロース溶液のような塩類溶液である。いくつかの態様では、溶媒は、注射用水である。
【０４７１】
いくつかの実施形態では、上記の医薬組成物は、マイクロ粒子またはナノ粒子のような微粒子形態である。マイクロ粒子とナノ粒子は、ポリマーまたは脂質のようないずれかの好適な材料から形成してよい。いくつかの態様では、マイクロ粒子またはナノ粒子は、ミセル、リポソームまたはポリマーソームである。
【０４７２】
水は、一部のＡＢＰの分解を促し得るので、さらに本発明で提供するのは、ＡＢＰを含む無水の医薬組成物と剤形である。
【０４７３】
本発明で提供する無水の医薬組成物と剤形は、無水または低水分含有成分と、低水分または低湿条件を用いて調製できる。製造、包装及び／または保管の際に、水分及び／または湿気と実質的に接触することが予測される場合には、ラクトースと、第一または第二アミンを含む少なくとも１つの活性成分とを含む医薬組成物と剤形は、無水のものであることができる。
【０４７４】
無水医薬組成物は、その無水性が維持されるように調製及び保管する必要がある。したがって、その無水組成物を好適な処方キットに含めることができるように、無水組成物は、水への曝露を防ぐことが知られている材料を用いて包装できる。好適な包装材の例としては、密閉フォイル、プラスチック、単位用量用容器（例えばバイアル）、ブリスターパック及びストリップパックが挙げられるが、これらに限らない。
【０４７５】
５．１．非経口用剤形
特定の実施形態では、本発明で提供するＡＢＰは、非経口用剤形として調合する。非経口用剤形は、様々な経路（皮下経路、静脈内経路（注入及びボーラス注射を含む）、筋肉内経路及び動脈内経路が挙げられるが、これらに限らない）によって、対象に投与できる。これらの投与は典型的には、汚染物に対する、対象生得の防御系を通らないので、非経口用剤形は典型的には、無菌であるか、または対象に投与する前に、滅菌することができる。非経口用剤形の例としては、すぐに注射できる液剤、製薬学的に許容可能な注射用ビヒクルに溶解または懸濁するようになっている乾燥（例えば凍結乾燥）剤、すぐに注射できる懸濁剤、及び乳剤が挙げられるが、これらに限らない。
【０４７６】
非経口用剤形を用意するのに使用できる好適なビヒクルは、当業者に周知である。例としては、注射用水ＵＳＰ、水性ビヒクル（以下に限らないが、ナトリウムクロライド注射液、リンゲル注射液、デキストロース注射液、デキストロース及びナトリウムクロライド注射液及び乳酸リンゲル注射液など）、水混和性ビヒクル（以下に限らないが、エチルアルコール、ポリエチレングリコール及びポリプロピレングリコールなど）、ならびに非水性ビヒクル（以下に限らないが、コーン油、綿実油、ラッカセイ油、ゴマ油、エチルオレエート、イソプロピルミリステート及びベンジルベンゾエートなど）が挙げられるが、これらに限らない。
【０４７７】
非経口用剤形には、本明細書に開示されているＡＢＰのうちの１つ以上の溶解性を向上させる賦形剤も組み込むことができる。
【０４７８】
いくつかの実施形態では、非経口用剤形は、凍結乾燥されている。例示的な凍結乾燥製剤は、例えば、米国特許第６，２６７，９５８号及び同第６，１７１，５８６号、ならびにＷＯ２００６／０４４９０８（それぞれ、参照により、その全体が援用される）に説明されている。
【０４７９】
６．投与量及び投与単位形態
ヒト用治療剤では、医師は、予防または治療的処置に従うとともに、治療する対象に特有の年齢、体重、状態及びその他の要因に従って、最も適切とその医師がみなす薬量を割り出すことになる。
【０４８０】
特定の実施形態では、本発明で提供する組成物は、医薬組成物または単回用量単位形態である。本発明で提供する医薬組成物と単回用量単位形態は、予防または治療用のＡＢＰの１つ以上を予防または治療有効量で含む。
【０４８１】
障害またはその１つ以上の症状の予防または治療に有効となる、ＡＢＰまたは組成物の量は、その疾患または状態の性質及び重症度と、ＡＢＰを投与する経路によって変化することになる。頻度と用量も、投与する具体的な治療剤（例えば治療または予防用の作用物質）、障害、疾患または状態の重症度、投与経路、ならびに対象の年齢、身体、体重、応答及び過去の病歴に応じて、各対象に特有の要因に従って変化することになる。有効な用量は、インビトロまたは動物モデル試験系から得られる用量−応答曲線から推定してよい。
【０４８２】
特定の実施形態では、組成物の例示的な用量としては、対象または試料重量１キログラム当たり、ミリグラムまたはマイクログラム単位の量のＡＢＰ（例えば、１キログラム当たり約１０マイクログラム〜１キログラム当たり約５０ミリグラム、１キログラム当たり約１００マイクログラム〜１キログラム当たり約２５ミリグラム、または１キログラム当たり約１００マイクログラム〜１キログラム当たり約１０ミリグラム）が挙げられる。特定の実施形態では、本発明で提供するＡＢＰの用量のうち、対象の障害またはその１つ以上の症状を予防、治療、管理または改善するする目的で投与するＡＢＰの重量ベースの用量は、対象の体重１ｋｇ当たり０．１ｍｇ、対象の体重１ｋｇ当たり１ｍｇ、対象の体重１ｋｇ当たり２ｍｇ、対象の体重１ｋｇ当たり３ｍｇ、対象の体重１ｋｇ当たり４ｍｇ、対象の体重１ｋｇ当たり５ｍｇ、対象の体重１ｋｇ当たり６ｍｇ、対象の体重１ｋｇ当たり１０ｍｇまたは対象の体重１ｋｇ当たり１５ｍｇ以上である。いくつかのケースでは、当業者には明らかなように、本明細書に開示されている範囲外の、ＡＢＰの用量を用いる必要がある場合もある。さらに、臨床医または治療を行う医師は、対象の応答を踏まえて、治療を中断、調節または終了する方法と時期が分かることも留意される。
【０４８３】
当業者であれば容易に分かるように、疾患及び状態によって異なる治療有効量を適用可能である場合がある。同様に、本明細書に示されている投与量及び投与頻度スケジュールには、上記のような障害を予防、管理、治療または改善するのには十分であるが、本発明で提供するＡＢＰに伴う副作用を発生させるには不十分であるか、またはそのような副作用を軽減するのに十分である量も含まれる。さらに、対象に、本発明で提供する組成物を複数用量、投与するときには、すべての用量が同じである必要はない。例えば、対象に投与する用量を増加させて、その組成物の予防または治療作用を向上させてもよく、あるいは、用量を減少させて、特定の対象に生じている１つ以上の副作用を軽減してもよい。
【０４８４】
特定の実施形態では、治療または予防は、本発明で提供するＡＢＰまたは組成物の１負荷量以上で開始してから、１維持量以上にすることができる。
【０４８５】
特定の実施形態では、本発明で提供するＡＢＰまたは組成物の１用量を投与して、対象の血液または血清において、ＡＢＰの定常状態濃度をもたらすことができる。定常状態濃度は、当業者が利用できる技法に従った測定によって割り出すことも、対象の身体的特徴（身長、体重及び年齢など）に基づくこともできる。
【０４８６】
特定の実施形態では、同じ組成物の投与を繰り返してよく、その投与は、少なくとも１日おき、２日おき、３日おき、５日おき、１０日おき、１５日おき、３０日おき、４５日おき、２カ月おき、７５日おき、３カ月おきまたは６カ月おきであってよい。
【０４８７】
本開示の別の箇所でさらに詳細に論じられているように、本発明で提供するＡＢＰは任意に応じて、疾患または障害を予防または治療するのに有用な１つ以上の追加の作用物質とともに投与してよい。このような追加の作用物質の有効量は、その製剤に存在するＡＢＰの量、障害または治療のタイプ、及び当該技術分野において知られているか、または本明細書に記載されているその他の要因に左右されることがある。
【０４８８】
７．治療への適用
治療に適用する際には、本発明のＡＢＰは、哺乳動物、概してヒトに、製薬学的に許容可能な剤形（当該技術分野において知られている剤形、及び上述した剤形など）で投与する。例えば、本発明のＡＢＰは、ヒトに、ボーラスとして、もしくはある期間にわたる持続注入によって静脈内投与するか、筋肉内経路、腹腔内経路、脳脊髄内経路、皮下経路、関節内経路、滑液嚢内経路、髄腔内経路または腫瘍内経路によって投与してよい。ＡＢＰは、局所的及び全身的な治療効果をもたらすために、腫瘍周囲経路、病巣内経路または病変周囲経路によっても適切に投与される。例えば、卵巣腫瘍の治療では、腹腔内経路が特に有用であることがある。
【０４８９】
本発明で提供するＡＢＰは、ＴＩＧＩＴに関わるいずれかの疾患または状態の治療に有用であることがある。いくつかの実施形態では、この疾患または状態は、抗ＴＩＧＩＴ  ＡＢＰによる治療から効果を得ることのできる疾患または状態である。いくつかの実施形態では、この疾患または状態は、腫瘍である。いくつかの実施形態では、この疾患または状態は、細胞増殖性障害である。いくつかの実施形態では、この疾患または状態は、がんである。いくつかの実施形態では、この疾患または状態は、ウイルス感染症である。
【０４９０】
いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰは、医薬として用いるために供給するものである。いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰは、医薬の製造または調製で用いるために供給するものである。いくつかの実施形態では、この医薬は、抗ＴＩＧＩＴ  ＡＢＰから効果を得ることのできる疾患または状態の治療のためのものである。いくつかの実施形態では、この疾患または状態は、腫瘍である。いくつかの実施形態では、この疾患または状態は、細胞増殖性障害である。いくつかの実施形態では、この疾患または状態は、がんである。いくつかの実施形態では、この疾患または状態は、ウイルス感染症である。
【０４９１】
いくつかの実施形態では、本発明で提供するのは、本発明で提供するＡＢＰを有効量、対象に投与することによって、治療を必要とする対象の疾患または状態を治療する方法である。いくつかの態様では、この疾患または状態は、がんである。いくつかの態様では、この疾患または状態は、ウイルス感染症である。
【０４９２】
いずれかの好適ながんを、本発明で提供するＡＢＰで治療してよい。例示的な好適ながんとしては、例えば、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、副腎皮質癌、肛門がん、虫垂がん、星状細胞腫、基底細胞癌、脳腫瘍、胆管がん、膀胱がん、骨がん、乳がん、気管支腫瘍、原発部位不明癌、心臓腫瘍、子宮頸がん、脊索腫、大腸がん、結腸直腸がん、頭蓋咽頭腫、腺管癌、胚芽腫、子宮体がん、上衣腫、食道がん、鼻腔神経芽細胞腫、線維性組織球腫、ユーイング肉腫、眼がん、胚細胞腫瘍、胆嚢がん、胃がん、消化管カルチノイド腫、消化管間質腫瘍、妊娠性絨毛疾患、神経膠腫、頭頸部がん、肝細胞がん、組織球増殖症、ホジキンリンパ腫、下咽頭がん、眼内黒色腫、膵島細胞腫、カポジ肉腫、腎臓がん、ランゲルハンス細胞組織球増殖症、喉頭がん、口唇がん及び口腔がん、肝臓がん、非浸潤性小葉癌、肺がん、マクログロブリン血症、悪性線維性組織球腫、黒色腫、メルケル細胞癌、中皮腫、原発不明転移性扁平上皮性頸部がん、ＮＵＴ遺伝子関与正中線癌、口腔がん、多発性内分泌腫瘍症候群、多発性骨髄腫、菌状息肉腫、骨髄異形成症候群、骨髄異形成／骨髄増殖性腫瘍、鼻腔及び副鼻腔がん、鼻咽頭がん、神経芽腫、非小細胞肺がん、口腔咽頭がん、骨肉腫、卵巣がん、膵臓がん、乳頭腫症、傍神経節腫瘍、副甲状腺がん、陰茎がん、咽頭がん、褐色細胞腫、下垂体腫瘍、胸膜肺芽腫、中枢神経原発リンパ腫、前立腺がん、直腸がん、腎細胞がん、腎盂及び尿管がん、網膜芽腫、ラブドイド腫瘍、唾液腺がん、セザリー症候群、皮膚がん、小細胞肺がん、小腸がん、軟部組織肉腫、脊髄腫瘍、胃がん、Ｔ細胞リンパ腫、奇形腫、睾丸がん、咽喉がん、胸腺腫及び胸腺がん、甲状腺がん、尿道がん、子宮がん、膣がん、外陰がん、ならびにウィルムス腫瘍が挙げられる。
【０４９３】
いずれかの好適なウイルスを、本発明で提供するＡＢＰで治療してよい。例示的な好適なウイルスとしては、例えば、アデノ随伴ウイルス、アイチウイルス、オーストラリアコウモリリッサウイルス、ＢＫポリオーマウイルス、バンナウイルス、バーマ森林ウイルス、ブニヤンベラウイルス、ラクロスブニヤウイルス、カンジキウサギブニヤウイルス、オナガザルヘルペスウイルス、チャンディプラウイルス、チクングンヤウイルス、コサウイルスＡ、牛痘ウイルス、コクサッキーウイルス、クリミア・コンゴ出血熱ウイルス、デングウイルス、ドーリウイルス、ジュグベウイルス、デュベンヘイジウイルス、東部ウマ脳炎ウイルス、エボラウイルス、エコーウイルス、脳心筋炎ウイルス、エプスタインバーウイルス、ヨーロッパコウモリリッサウイルス、ＧＢウイルスＣ／Ｇ型肝炎ウイルス、ハンターンウイルス、ヘンドラウイルス、Ａ型肝炎ウイルス、Ｂ型肝炎ウイルス、Ｃ型肝炎ウイルス、Ｅ型肝炎ウイルス、デルタ肝炎ウイルス、馬痘ウイルス、ヒトアデノウイルス、ヒトアストロウイルス、ヒトコロナウイルス、ヒトサイトメガロウイルス、ヒトエンテロウイルス、ヒトヘルペスウイルス１、ヒトヘルペスウイルス２、ヒトヘルペスウイルス６、ヒトヘルペスウイルス７、ヒトヘルペスウイルス８、ヒト免疫不全ウイルス、ヒトパピローマウイルス１、ヒトパピローマウイルス２、ヒトパピローマウイルス、ヒトパラインフルエンザ、ヒトパルボウイルスＢ１９、ヒト呼吸器合胞体ウイルス、ヒトライノウイルス、ヒトＳＡＲＳコロナウイルス、ヒトスプーマレトロウイルス、ヒトＴリンパ球向性ウイルス、ヒトトロウイルス、インフルエンザＡウイルス、インフルエンザＢウイルス、インフルエンザＣウイルス、イスファハンウイルス、ＪＣポリオーマウイルス、日本脳炎ウイルス、フニンアレナウイルス、ＫＩポリオーマウイルス、クンジンウイルス、ラゴスコウモリウイルス、ビクトリア湖マールブルグウイルス、ランガトウイルス、ラッサウイルス、ローズデールウイルス、跳躍病ウイルス、リンパ球性脈絡髄膜炎ウイルス、マチュポウイルス、マヤロウイルス、ＭＥＲＳコロナウイルス、麻疹ウイルス、メンゴ脳心筋炎ウイルス、メルケル細胞ポリオーマウイルス、モコラウイルス、伝染性軟属腫ウイルス、サルポックスウイルス、ムンプスウイルス、マレーバレー脳炎ウイルス、ニューヨークウイルス、ニパウイルス、ノーウォークウイルス、オニョンニョンウイルス、オーフウイルス、オロプーシェウイルス、ピチンデウイルス、ポリオウイルス、プンタトロフレボウイルスウイルス、プーマラウイルス、狂犬病ウイルス、リフトバレー熱ウイルス、ローザウイルスＡ、ロスリバーウイルス、ロタウイルスＡ、ロタウイルスＢ、ロタウイルスＣ、風疹ウイルス、サギヤマウイルス、サリウイルスＡ、サシチョウバエ熱シシリー型ウイルス、サッポロウイルス、セムリキ森林ウイルス、ソウルウイルス、サルフォーミーウイルス、サルウイルス５、シンドビスウイルス、サウサンプトンウイルス、セントルイス脳炎ウイルス、ダニ媒介ポワサンウイルス、トルクテノウイルス、トスカーナウイルス、ウークニエミウイルス、ワクシニアウイルス、水痘帯状疱疹ウイルス、痘瘡ウイルス、ベネズエラウマ脳炎ウイルス、水疱性口内炎ウイルス、西部ウマ脳炎ウイルス、ＷＵポリオーマウイルス、ウエストナイルウイルス、ヤバサル腫瘍ウイルス、ヤバ様病ウイルス、黄熱ウイルス、ならびにジカウイルスが挙げられる。
【０４９４】
いくつかの実施形態では、本発明で提供するのは、ＴＩＧＩＴをアンタゴナイズする必要のある対象に、本発明で提供するＡＢＰを有効量投与することによって、その対象の標的細胞において、ＴＩＧＩＴをアンタゴナイズする方法である。いくつかの態様では、本発明で提供するＡＢＰによるＴＩＧＩＴのアンタゴナイズ作用によって、標的細胞によるＩＬ−２、ＬＴ−α、ＩＬ−６、ＴＮＦ、ＧＭ−ＣＳＦ、ＩＦＮγまたはこれらの組み合わせの分泌が増大する。
【０４９５】
いくつかの実施形態では、本発明で提供するのは、エフェクターＴ細胞の増殖、生存及び／または機能を向上させる必要のある対象に、本発明で提供するＡＢＰを有効量投与することによって、その対象において、エフェクターＴ細胞の増殖、生存及び／または機能を向上させる方法である。いくつかの態様では、このエフェクターＴ細胞は、ＣＤ４＋エフェクターＴ細胞である。いくつかの態様では、このエフェクターＴ細胞は、ＣＤ８＋エフェクターＴ細胞である。
【０４９６】
いくつかの実施形態では、本発明で提供するのは、制御性Ｔ細胞によるエフェクターＴ細胞の抑制を解除する必要のある対象に、本発明で提供するＡＢＰを有効量投与することによって、その対象における、制御性Ｔ細胞によるエフェクターＴ細胞の抑制を解除する方法である。いくつかの態様では、この制御性Ｔ細胞は、ＣＤ４＋ＣＤ２５＋Ｆｏｘｐ３＋制御性Ｔ細胞である。いくつかの態様では、この制御性Ｔ細胞は、ＣＤ８＋ＣＤ２５＋制御性Ｔ細胞である。
【０４９７】
いくつかの実施形態では、本発明で提供するのは、ナチュラルキラー（ＮＫ）またはナチュラルキラーＴ（ＮＫＴ）細胞の活性を向上させる必要のある対象に、本発明で提供するＡＢＰを有効量投与することによって、その対象におけるナチュラルキラー（ＮＫ）またはナチュラルキラーＴ（ＮＫＴ）細胞の活性を向上させる方法である。
【０４９８】
いくつかの実施形態では、本発明で提供するのは、免疫応答を増強する必要のある対象に、本発明で提供するＡＢＰを有効量投与することによって、その対象における免疫応答を増強する方法である。
【０４９９】
いくつかの実施形態では、本発明で提供するのは、腫瘍の発生を遅延させる必要のある対象に、本発明で提供するＡＢＰを有効量投与することによって、その対象において腫瘍の発生を遅延させる方法である。
【０５００】
いくつかの実施形態では、本発明で提供するのは、腫瘍の発生を予防する必要のある対象に、本発明で提供するＡＢＰを有効量投与することによって、その対象において腫瘍の発生を予防する方法である。
【０５０１】
いくつかの実施形態では、本発明で提供するのは、がんの発症を遅延させる必要のある対象に、本発明で提供するＡＢＰを有効量投与することによって、その対象において、がんの発症を遅延させる方法である。
【０５０２】
いくつかの実施形態では、本発明で提供するのは、がんの発症を予防する必要のある対象に、本発明で提供するＡＢＰを有効量投与することによって、その対象において、がんの発症を予防する方法である。
【０５０３】
いくつかの実施形態では、本発明で提供するのは、腫瘍のサイズを縮小する必要のある対象に、本発明で提供するＡＢＰを有効量投与することによって、その対象の腫瘍のサイズを縮小する方法である。
【０５０４】
いくつかの実施形態では、本発明で提供するのは、転移の数を減少させる必要のある対象に、本発明で提供するＡＢＰを有効量投与することによって、その対象において転移の数を減少させる方法である。
【０５０５】
いくつかの実施形態では、本発明で提供するのは、ウイルス感染症の発症を遅延する必要のある対象に、本発明で提供するＡＢＰを有効量投与することによって、その対象においてウイルス感染症の発症を遅延する方法である。
【０５０６】
いくつかの実施形態では、本発明で提供するのは、ウイルス感染症の発症を予防する必要のある対象に、本発明で提供するＡＢＰを有効量投与することによって、その対象においてウイルス感染症の発症を予防する方法である。
【０５０７】
いくつかの実施形態では、本発明で提供するのは、ウイルス価を低下させる必要のある対象に、本発明で提供するＡＢＰを有効量投与することによって、その対象においてウイルス価を低下させる方法である。
【０５０８】
いくつかの実施形態では、本発明で提供するのは、ウイルスを除去する必要のある対象に、本発明で提供するＡＢＰを有効量投与することによって、その対象からウイルスを除去する方法である。
【０５０９】
いくつかの実施形態では、本発明で提供するのは、全生存期間、メディアン生存時間または無増悪生存期間を延長する必要のある対象に、本発明で提供するＡＢＰを有効量投与することによって、その対象において、全生存期間、メディアン生存時間または無増悪生存期間を延長する方法である。
【０５１０】
いくつかの実施形態では、本発明で提供するのは、標準ケア治療剤に対して耐性を持つようになった対象に、本発明で提供するＡＢＰを有効量投与することによって、その対象を治療する方法である。いくつかの実施形態では、対象が耐性を持つようになった標準ケア治療剤は、ＰＤ−１インヒビターである。別の実施形態では、対象が耐性を持つようになった標準ケア治療剤は、ＰＤ−Ｌ１インヒビターである。別の実施形態では、対象が耐性を持つようになった標準ケア治療剤は、ＣＴＬＡ−４インヒビターである。
【０５１１】
８．併用療法
いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰは、少なくとも１つの追加の治療剤とともに投与する。いずれかの好適な追加の治療剤を、本発明で提供するＡＢＰとともに投与してよい。いくつかの態様では、この追加の治療剤は、放射線、細胞傷害剤、化学療法剤、細胞増殖抑制剤、抗ホルモン剤、ＥＧＦＲインヒビター、免疫刺激剤、血管新生阻害剤及びこれらの組み合わせから選択する。
【０５１２】
いくつかの実施形態では、この追加の治療剤は、免疫刺激剤を含む。
【０５１３】
いくつかの実施形態では、この免疫刺激剤は、免疫細胞の抑制性レセプターまたはそのリガンドのシグナル伝達をブロックする作用物質である。いくつかの態様では、この抑制性レセプターまたはリガンドは、ＣＴＬＡ−４、ＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１、ＬＡＧ−３、Ｔｉｍ３、ＴＩＧＩＴ、ニューリチン、ＢＴＬＡ、ＫＩＲ及びこれらの組み合わせから選択する。いくつかの態様では、この作用物質は、抗ＰＤ−１抗体（例えばペムブロリズマブまたはニボルマブ）と抗ＰＤ−Ｌ１抗体（例えばアテゾリズマブ）、抗ＣＴＬＡ−４抗体（例えばイピリムマブ）、及びこれらの組み合わせから選択する。いくつかの態様では、この作用物質は、ペムブロリズマブである。いくつかの態様では、この作用物質は、ニボルマブである。いくつかの態様では、この作用物質は、アテゾリズマブである。
【０５１４】
いくつかの実施形態では、追加の治療剤は、ＰＤ−１とＰＤ−Ｌ１との間の相互作用を阻害する作用物質である。いくつかの態様では、ＰＤ−１とＰＤ−Ｌ１との間の相互作用を阻害する追加の治療剤は、抗体、ペプチド模倣体及び小分子から選択する。いくつかの態様では、ＰＤ−１とＰＤ−Ｌ１との間の相互作用を阻害する追加の治療剤は、ペムブロリズマブ、ニボルマブ、アテゾリズマブ、アベルマブ、デュルバルマブ、ＢＭＳ−９３６５５９、スルファモノメトキシン１及びスルファメチゾール２から選択する。いくつかの実施形態では、ＰＤ−１とＰＤ−Ｌ１との間の相互作用を阻害する追加の治療剤は、例えば、Ｗｅｉｎｍａｎｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｈｅｍ  Ｍｅｄ  Ｃｈｅｍ，２０１６，１４：１５７６（ＤＯＩ：１０．１００２／ｃｍｄｃ．２０１５００５６６）（参照により、その全体が援用される）に記載されているように、上記のような活性を有することで当該技術分野において知られているいずれかの治療剤である。いくつかの実施形態では、ＰＤ−１とＰＤ−Ｌ１との間の相互作用を阻害する作用物質は、本発明で提供するＡＢＰと同じ医薬組成物に調合される。いくつかの実施形態では、ＰＤ−１とＰＤ−Ｌ１との間の相互作用を阻害する作用物質は、本発明で提供するＡＢＰとは異なる医薬組成物に調合する。いくつかの実施形態では、ＰＤ−１とＰＤ−Ｌ１との間の相互作用を阻害する作用物質は、本発明で提供するＡＢＰを投与する前に投与する。いくつかの実施形態では、ＰＤ−１とＰＤ−Ｌ１との間の相互作用を阻害する作用物質は、本発明で提供するＡＢＰを投与した後に投与する。いくつかの実施形態では、ＰＤ−１とＰＤ−Ｌ１との間の相互作用を阻害する作用物質は、本発明で提供するＡＢＰと同時に投与するが、その作用物質とＡＢＰは、別の医薬組成物で投与する。
【０５１５】
いくつかの実施形態では、上記の免疫刺激剤は、免疫細胞の共刺激レセプターのアゴニストである。いくつかの態様では、この共刺激レセプターは、ＯＸ４０、ＩＣＯＳ、ＣＤ２７、ＣＤ２８、４−１ＢＢまたはＣＤ４０から選択する。いくつかの実施形態では、このアゴニストは、抗体である。
【０５１６】
いくつかの実施形態では、上記の免疫刺激剤は、サイトカインである。いくつかの態様では、このサイトカインは、ＩＬ−２、ＩＬ−５、ＩＬ−７、ＩＬ−１２、ＩＬ−１５、ＩＬ−２１及びこれらの組み合わせから選択する。
【０５１７】
いくつかの実施形態では、上記の免疫刺激剤は、腫瘍溶解性ウイルスである。いくつかの態様では、この腫瘍溶解性ウイルスは、単純ヘルペスウイルス、水疱性口内炎ウイルス、アデノウイルス、ニューカッスル病ウイルス、ワクシニアウイルス及びマラバウイルスから選択する。
【０５１８】
いくつかの実施形態では、上記の免疫刺激剤は、キメラ抗原レセプターを有するＴ細胞（ＣＡＲ−Ｔ細胞）である。いくつかの実施形態では、上記の免疫刺激剤は、Ｔ細胞に対する二重特異性もしくは多特異性抗体である。いくつかの実施形態では、上記の免疫刺激剤は、抗ＴＧＦ−β抗体である。いくつかの実施形態では、上記の免疫刺激剤は、ＴＧＦ−βトラップである。
【０５１９】
いくつかの実施形態では、上記の追加の治療剤は、腫瘍抗原に対するワクチンである。いずれかの好適な抗原が、そのワクチンの標的であってよい。ただし、その抗原は、本発明で提供する方法によって治療する腫瘍に存在することを条件とする。いくつかの態様では、この腫瘍抗原は、正常な組織における発現レベルと比べて過剰発現している腫瘍抗原である。いくつかの態様では、この腫瘍抗原は、がん精巣抗原、分化抗原、ＮＹ−ＥＳＯ−１、ＭＡＧＥ−Ａ１、ＭＡＲＴ及びこれらの組み合わせから選択する。
【０５２０】
追加の治療剤のさらなる例としては、タキサン（例えば、パクリタキセルもしくはドセタキセル）、プラチナ剤（例えば、カルボプラチン、オキサリプラチン及び／またはシスプラチン）、トポイソメラーゼインヒビター（例えば、イリノテカン、トポテカン、エトポシド及び／またはミトキサントロン）、ホリン酸（例えばロイコボリン）、またはヌクレオシド代謝インヒビター（例えばフルオロウラシル、カペシタビン及び／またはゲムシタビン）が挙げられる。いくつかの実施形態では、追加の治療剤は、ホリン酸、５−フルオロウラシル及び／またはオキサリプラチンである。いくつかの実施形態では、追加の治療剤は、５−フルオロウラシルとイリノテカンである。いくつかの実施形態では、追加の治療剤は、タキサンとプラチナ剤である。いくつかの実施形態では、追加の治療剤は、パクリタキセルとカルボプラチンである。いくつかの実施形態では、追加の治療剤は、ペメトレキセートである。いくつかの実施形態では、追加の治療剤は、ＥＧＦＲ標的剤、ＲＡＦ標的剤またはＭＥＫ標的剤のような標的治療剤である。
【０５２１】
追加の治療剤は、いずれかの好適な手段によって投与してよい。いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰと、追加の治療剤は、同じ医薬組成物に含まれている。いくつかの実施形態では、本発明で提供するＡＢＰと、追加の治療剤は、異なる医薬組成物に含まれている。
【０５２２】
本発明で提供するＡＢＰと、追加の治療剤が、異なる医薬組成物に含まれている実施形態では、ＡＢＰの投与は、追加の治療剤を投与する前、投与するのと同時及び／または投与した後に行うことができる。いくつかの態様では、本発明で提供するＡＢＰと、追加の治療剤の投与は、それぞれの約１カ月以内に行う。いくつかの態様では、本発明で提供するＡＢＰと、追加の治療剤の投与は、それぞれの約１週間以内に行う。いくつかの態様では、本発明で提供するＡＢＰと、追加の治療剤の投与は、それぞれの約１日以内に行う。いくつかの態様では、本発明で提供するＡＢＰと、追加の治療剤の投与は、それぞれの約１２時間以内に行う。いくつかの態様では、本発明で提供するＡＢＰと、追加の治療剤の投与は、それぞれの約１時間以内に行う。
【０５２３】
９．診断方法
対象から得た細胞上でのＴＩＧＩＴの存在を検出する方法も提供する。このような方法を用いて、例えば、本発明で提供するＡＢＰによる治療に対する応答性を予測及び評価してよい。
【０５２４】
いくつかの実施形態では、血液試料を対象から得て、ＴＩＧＩＴを発現している細胞の画分を割り出す。いくつかの態様では、上記のような細胞によって発現されたＴＩＧＩＴの相対量を割り出す。ＴＩＧＩＴを発現している細胞の画分と、そのような細胞によって発現されたＴＩＧＩＴの相対量は、いずれかの好適な方法によって割り出すことができる。いくつかの実施形態では、フローサイトメトリーを用いて、上記のような測定を行う。いくつかの実施形態では、蛍光利用細胞選別（ＦＡＣＳ）を用いて、上記のような測定を行う。末梢血におけるＴＩＧＩＴの発現を評価する方法に関するＬｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ａｕｔｏｉｍｍｕｎｉｔｙ，２００３，２１：８３−９２を参照されたい。
【０５２５】
１０．キット
本発明で提供するＡＢＰを含むキットも提供する。このキットは、本明細書に記載されているような疾患または障害の治療、予防及び／または診断に用いてよい。
【０５２６】
いくつかの実施形態では、このキットは、容器と、該容器の上にあるかまたは該容器に付随するラベルまたは添付文書を含む。好適な容器としては、例えば、瓶、バイアル、シリンジ及び静脈注射用溶液バッグが挙げられる。この容器は、ガラスまたはプラスチックのような様々な材料から形成されていてよい。この容器には、組成物を単独で収容するか、または疾患もしくは障害を治療、予防及び／または診断するのに有効な別の組成物と組み合わせて収容する。この容器は、滅菌アクセスポートを有してよい。例えば、この容器は、静注バッグまたはバイアルである場合には、針によって孔を開けることのできるポートを有してよい。組成物中の少なくとも１つの活性剤は、本発明で提供するＡＢＰである。ラベルまたは添付文書には、所定の状態を治療するために、該組成物を用いることが示されている。
【０５２７】
いくつかの実施形態では、このキットは、（ａ）第１の組成物の入った第１の容器であって、第１の組成物が、本発明で提供するＡＢＰを含む容器と、（ｂ）第２の組成物の入った第２の容器であって、該第２の組成物が、さらなる治療剤を含む容器とを含む。本発明のこの実施形態におけるキットは、該組成物を用いて、特定の状態を治療できることを示す添付文書をさらに含んでよい。
【０５２８】
この代わりに、またはこれに加えて、上記のキットは、製薬学的に許容可能な賦形剤を含む第２（または第３）の容器をさらに含んでよい。いくつかの態様では、この賦形剤は、緩衝剤である。上記のキットは、フィルター、針及びシリンジを含め、商業的及びユーザー的観点から望ましい他の材料をさらに含んでよい。
【０５２９】
１１．他の例示的な実施形態
下に示されている実施形態は、非限定的なものであり、本開示を通じて説明されているものに加えて、本発明の特定の実施形態と態様の実例として示されている。
【０５３０】
実施形態１：ヒトＴＩＧＩＴ（ｈＴＩＧＩＴ）に特異的に結合するとともに、
（ａ）ＣＤ１５５とＣＤ１１２に対するｈＴＩＧＩＴの結合を阻害すること、
（ｂ）Ｔエフェクター細胞の機能を向上させること、
（ｃ）ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞の機能を向上させること、
（ｄ）組織中または循環血液中の制御性Ｔ細胞の数を減少させること、
（ｅ）制御性Ｔ細胞または制御性Ｔ細胞の活性を抑制すること、
（ｆ）ＴＩＧＩＴとＣＤ２２６との連係を阻害するとともに、ネクチン−４（ポリオウイルス−レセプター様４、ＰＶＲＬ４としても知られている）には特異的に結合しないこと
のうちの少なくとも１つを行うことのできる、抗原結合タンパク質。
【０５３１】
実施形態２：以下の特徴のうちの１つ以上を有する、実施形態１に記載の抗原結合タンパク質：
（ａ）モノクローナル抗体であること、
（ｂ）ヒト抗体、ヒト化抗体またはキメラ抗体であること、
（ｃ）二重特異性抗体、多特異性抗体、ダイアボディまたは多価抗体であること、
（ｄ）ＩｇＧ１タイプ、ＩｇＧ２タイプ、ＩｇＧ３タイプ、ＩｇＧ４タイプ、またはＳ２２８Ｐという置換を有するＩｇＧ４アイソタイプのものであること、
（ｅ）抗原結合抗体断片であること、
（ｆ）Ｆａｂ断片、Ｆａｂ’断片、Ｆ（ａｂ’）２断片またはＦｖ断片であること、
（ｇ）一本鎖抗体、単一ドメイン抗体またはナノボディであること。
【０５３２】
実施形態３：ｈＴＩＧＩＴに結合するとともに、
（ａ）細胞性免疫を高め、
（ｂ）Ｔ細胞の活性を向上させ、
（ｃ）細胞溶解性Ｔ細胞（ＣＴＬ）の活性を向上させ、
（ｄ）ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞の活性を向上させ、
（ｅ）ＴＩＧＩＴを介したシグナル伝達のアンタゴニストであり、
（ｆ）ＴＩＧＩＴのシグナル伝達を阻害し、
（ｇ）ＰＶＲとＴＩＧＩＴとの間の相互作用を阻害またはブロックし、
（ｈ）ＴＩＧＩＴと、ＣＤ１５５リガンド及び／またはＣＤ１１２との相互作用を阻害またはブロックするが、ＰＶＲとＣＤ２２６との間の相互作用を阻害しない
有効量の抗体を含む、医薬組成物。
【０５３３】
実施形態４：実施形態１または実施形態２に記載の抗原結合タンパク質を含む、医薬組成物。
【０５３４】
実施形態５：有効量の抗ＰＤ−１抗体をさらに含む、実施形態４に記載の医薬組成物。
【０５３５】
実施形態６：以下の特徴のうちの１つ以上を有する、実施形態１に記載の抗原結合タンパク質：
（ａ）ヒトＴＩＧＩＴポリペプチドもしくはそのバリアントに、または本明細書に別段に示されているように、約２０ｎＭ未満のＫＤで結合すること、または
（ｂ）カニクイザル（ｃｙｎｏｍｏｌｇｕｓ  ｍｏｎｋｅｙ）（「カニクイザル（ｃｙｎｏｍｏｌｇｕｓ）」または「ｃｙｎｏ」ともいう）ＴＩＧＩＴポリペプチドもしくはそのバリアントに、または本明細書に別段に示されているように、約２００ｎＭ未満のＫＤで結合すること、
（ｃ）マウスＴＩＧＩＴポリペプチドもしくはそのバリアントに、または本明細書に別段に示されているように、約２００ｎＭ未満のＫＤで結合すること、あるいは
（ｄ）（ａ）、（ｂ）、（ｃ）のうちの少なくとも２つの組み合わせ。
【０５３６】
実施形態７：ヒトＴＩＧＩＴへの結合について、基準抗原結合タンパク質と競合するかまたは競合できる抗原結合タンパク質であって、該基準抗原結合タンパク質が、実施形態１に記載の抗原結合タンパク質である、該抗原結合タンパク質。
【０５３７】
実施形態８：前記抗原結合タンパク質と基準抗体が、ヒトＴＩＧＩＴへの結合について、交差競合するかまたは交差競合できる、実施形態７に記載の抗原結合タンパク質。
【０５３８】
実施形態９：ヒト重鎖定常領域またはその断片もしくはバリアントを含む重鎖定常領域を含み、該定常領域バリアントが、最大で２０個の保存的改変アミノ酸置換を含む、実施形態１に記載の抗原結合タンパク質。
【０５３９】
実施形態１０：ヒトＴＩＧＩＴへの結合について、ＣＤ１５５タンパク質及び／またはＣＤ１１２タンパク質と競合するかまたは競合できる、実施形態１に記載の抗原結合タンパク質。
【０５４０】
実施形態１１：Ｔ細胞に特異的な形で、ＴＩＧＩＴのシグナル伝達をアンタゴナイズできる、実施形態１に記載の抗原結合タンパク質。
【０５４１】
実施形態１２：ヒトＴＩＧＩＴ（ｈＴＩＧＩＴ）に結合でき、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４８〜６２のＶＨＣＤＲ１アミノ酸配列と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３６〜４７のＶＨＣＤＲ２アミノ酸配列と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２９〜３５のＶＨＣＤＲ３アミノ酸配列とを含む重鎖可変領域（ＶＨ）と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７０〜７２のＶＬＣＤＲ１アミノ酸配列と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６７〜６９のＶＬＣＤＲ２アミノ酸配列と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６３〜６６のＶＬＣＤＲ３アミノ酸配列とを含む軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む、単離された抗体分子。
【０５４２】
実施形態１３：実施形態１に記載の抗原結合タンパク質をコードする単離核酸。
【０５４３】
実施形態１４：実施形態１３に記載の核酸を含む発現ベクター。
【０５４４】
実施形態１５：実施形態１４に記載のベクターを含む、原核宿主細胞または真核宿主細胞。
【０５４５】
実施形態１６：原核宿主細胞または真核宿主細胞において、実施形態１３に記載の核酸を発現させるステップと、組み換えタンパク質を該細胞または細胞培養上清から回収するステップとを含む、組み換えタンパク質の作製方法。
【０５４６】
実施形態１７：がんまたは炎症性疾患を罹患している対象の治療方法であって、実施形態１に記載の抗原結合タンパク質の有効量を含む医薬組成物を該対象に投与するステップを含む、該方法。
【０５４７】
実施形態１８：がんが、固形がんである、実施形態１７に記載の方法。
【０５４８】
実施形態１９：がんが、血液がんである、実施形態１７に記載の方法。
【０５４９】
実施形態２０：免疫系機能を調節する必要のあるヒト対象における免疫系機能の調節の方法であって、該免疫系が調節されるような条件で、実施形態１に記載の抗原結合タンパク質の有効量を含む医薬組成物と、該ヒト対象のＴ細胞集団とを接触させるステップを含む、該方法。
【０５５０】
実施形態２１：対象における免疫応答の誘導または増強方法であって、先行実施形態のいずれかに記載の抗原結合タンパク質、二重特異性抗体または複合体化抗原結合タンパク質を含む医薬組成物を、該対象に投与するステップを含み、該免疫応答が、腫瘍抗原に対して起きるものである、該方法。
【０５５１】
実施形態２２：以下のうちの１つ以上を対象において実現するのに十分な量で、前記抗原結合タンパク質、二重特異性抗体または複合体化抗原結合タンパク質が投与される、実施形態２１に記載の方法：
（ａ）エフェクターＴ細胞の活性の、制御性Ｔ細胞による抑制を軽減すること、
（ｂ）制御性Ｔ細胞のレベルを低下させること、
（ｃ）エフェクターＴ細胞の活性化、
（ｄ）エフェクターＴ細胞の増殖を誘導または増強すること、
（ｅ）腫瘍の成長を阻害すること、
（ｆ）腫瘍の退縮を誘導すること。
【０５５２】
実施形態２３：以下のうちの１つ以上をさらに含む、実施形態２２に記載の方法：
（ａ）化学療法を行うこと、
（ｂ）放射線療法を行うこと、または
（ｃ）１つ以上の追加の治療剤を投与すること。
【０５５３】
実施形態２４：追加の治療剤が免疫刺激剤を含む、実施形態２３に記載の方法。
【０５５４】
実施形態２５：免疫刺激剤が、免疫細胞の抑制性レセプターに対するアンタゴニストを含む、実施形態２４に記載の方法。
【０５５５】
実施形態２６：抑制性レセプターが、ＣＴＬＡ−４、ＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１、ＰＤ−Ｌ２、ＬＡＧ−３、Ｔｉｍ３、ニューリチン、ＢＴＬＡ、ＣＥＣＡＭ−１、ＣＥＣＡＭ−５、ＶＩＳＴＡ、ＬＡＩＲ１、ＣＤ１６０、２Ｂ４、ＴＧＦ−ＲまたはＫＩＲである、実施形態２５に記載の方法。
【０５５６】
実施形態２７：免疫刺激剤が、免疫細胞の共刺激レセプターのアゴニストを含む、実施形態２４に記載の方法。
【０５５７】
実施形態２８：共刺激レセプターが、ＯＸ４０、ＣＤ２、ＣＤ２７、ＣＤＳ、ＩＣＡＭ−１、ＬＦＡ−１（ＣＤ１１ａ／ＣＤ１８）、ＩＣＯＳ（ＣＤ２７８）、４−１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＧＩＴＲ、ＣＤ２８、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＢＡＦＦＲ、ＨＶＥＭ、ＣＤ７、ＬＩＧＨＴ、ＮＫＧ２Ｃ、ＳＬＡＭＦ７、ＮＫｐ８０、ＣＤ１６０、Ｂ７−Ｈ３またはＣＤ８３リガンドである、実施形態２７に記載の方法。
【０５５８】
実施形態２９：免疫刺激剤がサイトカインを含む、実施形態２４に記載の方法。
【０５５９】
実施形態３０：サイトカインが、ＩＬ−２、ＩＬ−５、ＩＬ−７、ＩＬ−１２、ＩＬ−１５またはＩＬ−２１である、実施形態２９に記載の方法。
【０５６０】
実施形態３１：免疫刺激剤が、腫瘍溶解性ウイルスを含む、実施形態２４に記載の方法。
【０５６１】
実施形態３２：腫瘍溶解性ウイルスが、単純ヘルペスウイルス、水疱性口内炎ウイルス、アデノウイルス、ニューカッスル病ウイルス、ワクシニアウイルスまたはマラバウイルスである、実施形態３１に記載の方法。
【０５６２】
実施形態３３：前記免疫刺激剤が、キメラ抗原操作Ｔ細胞を含む、実施形態２４に記載の方法。
【０５６３】
実施形態３４：前記免疫刺激剤が、Ｔ細胞に対する二重特異性または多特異性抗体を含む、実施形態２４に記載の方法。
【０５６４】
実施形態３５：前記追加の治療剤が、抗ＴＧＦ−β抗体またはＴＧＦβレセプタートラップを含む、実施形態２３に記載の方法。
【０５６５】
実施形態３６：前記医薬組成物の投与によって、Ｔ−エフェクター細胞の増殖が誘導もしくは増強されるか、Ｔ細胞におけるＩ−κＢ及び／またはＮＦ−κＢが調節されるか、Ｔ細胞におけるＴＩＧＩＴの活性もしくはＴ−エフェクター細胞におけるＴ細胞レセプター誘導性のシグナル伝達が調節されるか、またはこれらの組み合わせが行われる、実施形態２０〜３５のいずれか１つに記載の方法。
【０５６６】
実施形態３７：ＴＩＧＩＴリガンドとＴＩＧＩＴとの相互作用を阻害できる、実施形態１に記載の抗原結合タンパク質を含む試験化合物のスクリーニング方法であって、
ＴＩＧＩＴリガンドとＴＩＧＩＴとを含む試料を、該化合物と接触させるステップと、
該試料中のＴＩＧＩＴリガンドとＴＩＧＩＴとの相互作用が、該化合物と接触させていない試料中のＴＩＧＩＴリガンドとＴＩＧＩＴとの相互作用と比べて低下しているか判定することによって、該化合物と接触した試料中のＴＩＧＩＴリガンドとＴＩＧＩＴとの相互作用の低下により、該化合物が、ＴＩＧＩＴリガンドとＴＩＧＩＴとの相互作用を阻害する化合物として同定されるステップ
を含む、該方法。
【０５６７】
実施形態３８：ＴＩＧＩＴポリペプチドのＩＴＩＭドメインのリン酸化を阻害できる、実施形態１に記載の抗原結合タンパク質。
【０５６８】
実施形態１Ａ：ＴＩＧＩＴに特異的に結合する単離された抗原結合タンパク質（ＡＢＰ）であって、該抗体が、
（ａ）ＴＩＧＩＴへの結合について、ＭＡＢ１、ＭＡＢ２、ＭＡＢ３、ＭＡＢ４、ＭＡＢ５、ＭＡＢ６、ＭＡＢ７、ＭＡＢ８、ＭＡＢ９、ＭＡＢ１０、ＭＡＢ１１、ＭＡＢ１２、ＭＡＢ１３、ＭＡＢ１４、ＭＡＢ１５、ＭＡＢ１６、ＭＡＢ１７、ＭＡＢ１８、ＭＡＢ１９、ＭＡＢ２０もしくはＭＡＢ２１（それぞれ、本開示の表５に示されているもの）から選択される抗体と競合するか、
（ｂ）ＴＩＧＩＴへのＣＤ１５５の結合を阻害するか、
（ｃ）ＴＩＧＩＴへのＣＤ１１２の結合を阻害するか、
（ｄ）ＣＤ２２６のＴＩＧＩＴとの連係を阻害するか、
（ｅ）エフェクターＴ細胞もしくはＮＫ細胞を活性化するか、
（ｆ）組織中もしくは循環血液中の制御性Ｔ細胞の数を減少させるか、
（ｇ）制御性Ｔ細胞によるエフェクターＴ細胞の抑制を阻害するか、
（ｈ）ＰＶＲＬ１、ＰＶＲＬ２、ＰＶＲＬ３もしくはＰＶＲＬ４のいずれにも特異的に結合しないか、または
（ｉ）（ａ）〜（ｈ）の任意の組み合わせが可能
である、該ＡＢＰ。
【０５６９】
実施形態２Ａ：ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４〜２４から選択されるＶＨ領域のＣＤＲ−Ｈ３、またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４〜２４から選択されるＶＨ領域のＣＤＲ−Ｈ３に対する同一性が少なくとも約８０％であるＣＤＲ−Ｈ３を含む、実施形態１Ａに記載のＡＢＰ。
【０５７０】
実施形態３Ａ：ＣＤＲ−Ｈ３が、Ｋａｂａｔ、ＣｈｏｔｈｉａまたはＩＭＧＴの番号付け体系に従って特定されている、実施形態２Ａに記載のＡＢＰ。
【０５７１】
実施形態４Ａ：ＣＤＲ−Ｈ３が、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２９〜３５から選択される、実施形態２Ａ〜３Ａのいずれかに記載されているＡＢＰ。
【０５７２】
実施形態５Ａ：ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４〜２４から選択されるＶＨ領域のＣＤＲ−Ｈ２、またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４〜２４から選択されるＶＨ領域のＣＤＲ−Ｈ２に対する同一性が少なくとも約８０％であるＣＤＲ−Ｈ２を含む、実施形態１Ａ〜４Ａのいずれかに記載のＡＢＰ。
【０５７３】
実施形態６Ａ：ＣＤＲ−Ｈ２が、Ｋａｂａｔ、ＣｈｏｔｈｉａまたはＩＭＧＴの番号付け体系に従って特定されている、実施形態５Ａに記載のＡＢＰ。
【０５７４】
実施形態７Ａ：ＣＤＲ−Ｈ２が、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３６〜４７から選択される、実施形態５Ａ〜６Ａのいずれかに記載のＡＢＰ。
【０５７５】
実施形態８Ａ：ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４〜２４から選択されるＶＨ領域のＣＤＲ−Ｈ１、またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４〜２４から選択されるＶＨ領域のＣＤＲ−Ｈ１に対する同一性が少なくとも約８０％であるＣＤＲ−Ｈ１を含む、実施形態１Ａ〜７Ａのいずれかに記載のＡＢＰ。
【０５７６】
実施形態９Ａ：ＣＤＲ−Ｈ１が、Ｋａｂａｔ、Ｃｈｏｔｈｉａ、Ｋａｂａｔ及びＣｈｏｔｈｉａ、またはＩＭＧＴの番号付け体系に従って特定されている、実施形態８Ａに記載のＡＢＰ。
【０５７７】
実施形態１０Ａ：ＣＤＲ−Ｈ１が、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４８〜５４と５８〜６２から選択される、実施形態８Ａ〜９Ａのいずれかに記載のＡＢＰ。
【０５７８】
実施形態１１Ａ：ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２５〜２８から選択されるＶＬ領域のＣＤＲ−Ｌ３、またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２５〜２８から選択されるＶＬ領域のＣＤＲ−Ｌ３に対する同一性が少なくとも約８０％であるＣＤＲ−Ｌ３を含む、実施形態１Ａ〜１０Ａのいずれかに記載のＡＢＰ。
【０５７９】
実施形態１２Ａ：ＣＤＲ−Ｌ３が、Ｋａｂａｔ、ＣｈｏｔｈｉａまたはＩＭＧＴの番号付け体系に従って特定されている、実施形態１１Ａに記載のＡＢＰ。
【０５８０】
実施形態１３Ａ：ＣＤＲ−Ｌ３が、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６３〜６６から選択される、実施形態１１Ａ〜１２Ａのいずれかに記載のＡＢＰ。
【０５８１】
実施形態１４Ａ：ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２５〜２８から選択されるＶＬ領域のＣＤＲ−Ｌ２、またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２５〜２８から選択されるＶＬ領域のＣＤＲ−Ｌ２に対する同一性が少なくとも約８０％であるＣＤＲ−Ｌ２を含む、実施形態１Ａ〜１３Ａのいずれかに記載のＡＢＰ。
【０５８２】
実施形態１５Ａ：ＣＤＲ−Ｌ２が、Ｋａｂａｔ、ＣｈｏｔｈｉａまたはＩＭＧＴの番号付け体系に従って特定されている、実施形態１４Ａに記載のＡＢＰ。
【０５８３】
実施形態１６Ａ：ＣＤＲ−Ｌ２が、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６７〜６９から選択される、実施形態１４Ａ〜１５Ａのいずれかに記載のＡＢＰ。
【０５８４】
実施形態１７Ａ：ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２５〜２８から選択されるＶＬ領域のＣＤＲ−Ｌ１、またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２５〜２８から選択されるＶＬ領域のＣＤＲ−Ｌ１に対する同一性が少なくとも約８０％であるＣＤＲ−Ｌ１を含む、実施形態１Ａ〜１６Ａのいずれかに記載のＡＢＰ。
【０５８５】
実施形態１８Ａ：ＣＤＲ−Ｌ１が、Ｋａｂａｔ、ＣｈｏｔｈｉａまたはＩＭＧＴの番号付け体系に従って特定されている、実施形態１７Ａに記載のＡＢＰ。
【０５８６】
実施形態１９Ａ：ＣＤＲ−Ｌ１が、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７０〜７２から選択される、実施形態１７Ａ〜１８Ａのいずれかに記載のＡＢＰ。
【０５８７】
実施形態２０Ａ：ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４〜２４から選択されるＶＨ領域を含む、実施形態１Ａ〜１９Ａのいずれかに記載のＡＢＰ。
【０５８８】
実施形態２１Ａ：ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２５〜２８から選択されるＶＬ領域を含む、実施形態１Ａ〜２０Ａのいずれかに記載のＡＢＰ。
【０５８９】
実施形態２２Ａ：ＴＩＧＩＴが、ｈＴＩＧＩＴ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１）、ｃＴＩＧＩＴ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２）及びｍＴＩＧＩＴ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３または１３８）から選択される、実施形態１Ａ〜２１Ａのいずれかに記載のＡＢＰ。
【０５９０】
実施形態２３Ａ：抗体を含む、実施形態１Ａ〜２２Ａのいずれかに記載のＡＢＰ。
【０５９１】
実施形態２４Ａ：抗体が、ＭＡＢ１、ＭＡＢ２、ＭＡＢ３、ＭＡＢ４、ＭＡＢ５、ＭＡＢ６、ＭＡＢ７、ＭＡＢ８、ＭＡＢ９、ＭＡＢ１０、ＭＡＢ１１、ＭＡＢ１２、ＭＡＢ１３、ＭＡＢ１４、ＭＡＢ１５、ＭＡＢ１６、ＭＡＢ１７、ＭＡＢ１８、ＭＡＢ１９、ＭＡＢ２０またはＭＡＢ２１（それぞれ、本開示の表５に示されているもの）から選択される抗体に関して示されているように組み合わされたＶＨとＶＬを含む、実施形態２３Ａに記載のＡＢＰ。
【０５９２】
実施形態２５Ａ：ＭＡＢ１、ＭＡＢ２、ＭＡＢ３、ＭＡＢ４、ＭＡＢ５、ＭＡＢ６、ＭＡＢ７、ＭＡＢ８、ＭＡＢ９、ＭＡＢ１０、ＭＡＢ１１、ＭＡＢ１２、ＭＡＢ１３、ＭＡＢ１４、ＭＡＢ１５、ＭＡＢ１６、ＭＡＢ１７、ＭＡＢ１８、ＭＡＢ１９、ＭＡＢ２０またはＭＡＢ２１（それぞれ、本開示の表５に示されているもの）から選択される抗体である、実施形態２４Ａに記載のＡＢＰ。
【０５９３】
実施形態２６Ａ：前記抗体がモノクローナル抗体である、実施形態２３Ａ〜２５Ａのいずれかに記載のＡＢＰ。
【０５９４】
実施形態２７Ａ：前記抗体が、キメラ抗体、ヒト化抗体またはヒト抗体である、実施形態２３Ａ〜２６Ａのいずれかに記載のＡＢＰ。
【０５９５】
実施形態２８Ａ：多特異性である、実施形態１Ａ〜２７Ａのいずれかに記載のＡＢＰ。
【０５９６】
実施形態２９Ａ：抗体断片を含む、実施形態１Ａ〜２８Ａのいずれかに記載のＡＢＰ。
【０５９７】
実施形態３０Ａ：代替足場を含む、実施形態１Ａ〜２９Ａのいずれかに記載のＡＢＰ。
【０５９８】
実施形態３１Ａ：免疫グロブリン定常領域を含む、実施形態１Ａ〜３０Ａのいずれかに記載のＡＢＰ。
【０５９９】
実施形態３２Ａ：ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧまたはＩｇＭから選択される抗体を含む、実施形態１Ａ〜３１Ａのいずれかに記載のＡＢＰ。
【０６００】
実施形態３３Ａ：ＩｇＧ４、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２またはＩｇＧ３から選択されるＩｇＧを含む、実施形態３２Ａに記載のＡＢＰ。
【０６０１】
実施形態３４Ａ：ｈＴＩＧＩＴ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１）に、約２０ｎＭ未満の親和性で結合する、実施形態１Ａ〜３３Ａのいずれかに記載のＡＢＰ。
【０６０２】
実施形態３５Ａ：ｃＴＩＧＩＴ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２）に、約２００ｎＭ未満の親和性で結合する、実施形態１Ａ〜３４Ａのいずれかに記載のＡＢＰ。
【０６０３】
実施形態３６Ａ：ｍＴＩＧＩＴ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３または１３８）に、約２００ｎＭ未満の親和性で結合する、実施形態１Ａ〜３５Ａのいずれかに記載のＡＢＰ。
【０６０４】
実施形態３７Ａ：実施形態１Ａ〜３６Ａのいずれかに記載のＡＢＰ、そのＶＨもしくはＶＬ、またはその抗原結合部分をコードする、単離されたポリヌクレオチド。
【０６０５】
実施形態３８Ａ：実施形態３７Ａに記載のポリヌクレオチドを含むベクター。
【０６０６】
実施形態３９Ａ：実施形態３８Ａに記載のベクターを含む宿主細胞。
【０６０７】
実施形態４０Ａ：実施形態１Ａ〜３６Ａのいずれかに記載のＡＢＰの作製方法であって、実施形態３９Ａに記載の宿主細胞において該ＡＢＰを発現させることと、発現した該ＡＢＰを単離することを含む、該方法。
【０６０８】
実施形態４１Ａ：実施形態１Ａ〜３６Ａのいずれかに記載のＡＢＰを含む医薬組成物。
【０６０９】
実施形態４２Ａ：実施形態４１Ａに記載の医薬組成物であって、
対象において（ａ）エフェクターＴ細胞の活性を向上させること、（ｂ）細胞溶解性Ｔ細胞の活性を向上させること、（ｃ）ＮＫ細胞の活性を向上させること、（ｄ）ＴＩＧＩＴを介したシグナル伝達を阻害すること、（ｅ）ＴＩＧＩＴへのＣＤ１５５及びもしくはＣＤ１１２の結合を阻害もしくはブロックすること、または（ｆ）（ａ）〜（ｅ）の任意の組み合わせに対して、該医薬組成物中のＡＢＰの量が十分である、該医薬組成物。
【０６１０】
実施形態４３Ａ：ＰＤ−１をアンタゴナイズする抗体をさらに含む、実施形態４１Ａ〜４２Ａのいずれかに記載の医薬組成物。
【０６１１】
実施形態４４Ａ：治療または予防を必要とする対象の疾患または状態の治療または予防方法であって、実施形態１Ａ〜３６Ａのいずれかに記載のＡＢＰ、または実施形態４１Ａ〜４３Ａのいずれかに記載の医薬組成物の有効量を該対象に投与することを含む、方法。
【０６１２】
実施形態４５Ａ：前記疾患または状態が、がんまたはウイルス感染症である、実施形態４４Ａに記載の方法。
【０６１３】
実施形態４６Ａ：免疫応答の調節を必要とする対象における免疫応答の調節方法であって、実施形態１Ａ〜３６Ａのいずれかに記載のＡＢＰ、または実施形態４１Ａ〜４３Ａのいずれかに記載の医薬組成物の有効量を該対象に投与することを含む、該方法。
【０６１４】
実施形態４７Ａ：１つ以上の追加の治療剤を前記対象に投与することをさらに含む、実施形態４４Ａ〜４６Ａのいずれかに記載の方法。
【０６１５】
実施形態４８Ａ：追加の治療剤が、ＰＤ−１アンタゴニスト抗体、化学療法剤、免疫刺激剤及び放射線から選択される、実施形態４７Ａに記載の方法。
【０６１６】
実施形態４９Ａ：追加の治療剤が、免疫細胞の抑制性レセプターまたはそのリガンドのシグナル伝達をブロックする免疫刺激剤である、実施形態４７Ａに記載の方法。
【０６１７】
実施形態５０Ａ：前記抑制性レセプターまたはそのリガンドが、ＣＴＬＡ−４、ＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１、ＰＤ−Ｌ２、ＬＡＧ−３、Ｔｉｍ３、ニューリチン、ＢＴＬＡ、ＣＥＣＡＭ−１、ＣＥＣＡＭ−５、ＶＩＳＴＡ、ＬＡＩＲ１、ＣＤ１６０、２Ｂ４、ＴＧＦ−Ｒ、ＫＩＲ及びこれらの組み合わせから選択される、実施形態４９Ａに記載の方法。
【０６１８】
実施形態５１Ａ：追加の治療剤が、免疫細胞の刺激性レセプターに対するアゴニストである免疫刺激剤である、実施形態４８Ａに記載の方法。
【０６１９】
実施形態５２Ａ：免疫細胞の刺激性レセプターが、ＯＸ４０、ＣＤ２、ＣＤ２７、ＣＤＳ、ＩＣＡＭ−１、ＬＦＡ−１（ＣＤ１１ａ／ＣＤ１８）、ＩＣＯＳ（ＣＤ２７８）、４−１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＧＩＴＲ、ＣＤ２８、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＢＡＦＦＲ、ＨＶＥＭ、ＣＤ７、ＬＩＧＨＴ、ＮＫＧ２Ｃ、ＳＬＡＭＦ７、ＮＫｐ８０、ＣＤ１６０、Ｂ７−Ｈ３、ＣＤ８３リガンド及びこれらの組み合わせから選択される、実施形態５１Ａに記載の方法。
【０６２０】
実施形態５３Ａ：追加の治療剤が、サイトカインである免疫刺激剤である、実施形態４８Ａに記載の方法。
【０６２１】
実施形態５４Ａ：サイトカインが、ＩＬ−２、ＩＬ−５、ＩＬ−７、ＩＬ−１２、ＩＬ−１５、ＩＬ−２１及びこれらの組み合わせから選択される、実施形態５３Ａに記載の方法。
【０６２２】
実施形態５５Ａ：追加の治療剤が、腫瘍溶解性ウイルスである免疫刺激剤である、実施形態４８Ａに記載の方法。
【０６２３】
実施形態５６Ａ：腫瘍溶解性ウイルスが、単純ヘルペスウイルス、水疱性口内炎ウイルス、アデノウイルス、ニューカッスル病ウイルス、ワクシニアウイルス、マラバウイルス及びこれらの組み合わせから選択される、実施形態５５Ａに記載の方法。
【０６２４】
実施形態５７Ａ：免疫刺激剤が、キメラ抗原レセプターを発現するＴ細胞を含む、実施形態４８Ａに記載の方法。
【０６２５】
実施形態５８Ａ：免疫刺激剤が、Ｔ細胞に対する二重特異性または多特異性抗体を含む、実施形態４８Ａに記載の方法。
【０６２６】
実施形態５９Ａ：免疫刺激剤が、抗ＴＧＦ−β抗体、ＴＧＦ−βトラップまたはこれらの組み合わせを含む、実施形態４８Ａに記載の方法。
【０６２７】
実施形態６０Ａ：免疫刺激剤が、がん関連抗原に対するワクチンを含む、実施形態４８Ａに記載の方法。
【０６２８】
実施形態６１Ａ：ＴＩＧＩＴのリガンドとＴＩＧＩＴとの相互作用を阻害できるＡＢＰのスクリーニング方法であって、以下を含む方法：
（ａ）ＴＩＧＩＴのリガンドとＴＩＧＩＴとを含む試料を、実施形態１Ａ〜３６Ａのいずれかに記載のＡＢＰと接触させること、及び
（ｂ）該ＡＢＰの存在下において、ＴＩＧＩＴのリガンドのＴＩＧＩＴへの結合が、該ＡＢＰの非存在下における、ＴＩＧＩＴのリガンドのＴＩＧＩＴへの結合と比較して低下しているか判定すること。
【実施例】
【０６２９】
以下は、本発明の方法と組成物の実施例である。ここに示されている一般的な説明を踏まえれば、様々な他の実施形態を実施できることが分かる。
【０６３０】
実施例１：ＴＩＧＩＴ抗原結合タンパク質の選択
例えば、ＷＯ２００９０３６３７９、ＷＯ２０１０１０５２５６、ＷＯ２０１２００９５６８及びＸｕ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｎｇ．Ｄｅｓ．Ｓｅｌ．，２０１３，２６：６６３−６７０（それぞれ、参照により、その全体が援用される）で概ね説明されているように、また、より具体的には、下に示されているように、ＩｇＧフォーマットで、酵母細胞の表面に発現及び提示されるヒト抗体の合成ライブラリーから、ＴＩＧＩＴ  ＡＢＰを選択した。組み換えライブラリーから単離されるＡＢＰの配列と特徴は、表５に示されている。
【０６３１】
ＷＯ２００９０３６３７９、ＷＯ２０１０１０５２５６、ＷＯ２０１２００９５６８及びＸｕ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｎｇ．Ｄｅｓ．Ｓｅｌ．，２０１３，２６：６６３−６７０（それぞれ、参照により、その全体が援用される）に説明されているように、それぞれ多様性が約１０９である８つのナイーブヒト合成酵母ライブラリーを増殖させた。最初の２ラウンドの選択では、Ｓｉｅｇｅｌ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈ．，２００４，２８６：１４１−１５３に説明されているように、Ｍｉｌｔｅｎｙｉ  ＭＡＣＳ（登録商標）システムを用いた磁気ビーズソーティング技法を行った。簡潔に述べると、ＦＡＣＳ洗浄バッファー（ホスフェート緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）／０．１％ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ））において、酵母細胞（約１０１０細胞／ライブラリー）を、ビオチン化ＴＩＧＩＴ−Ｆｃ抗原とともにインキュベートした。氷冷した洗浄バッファー５０ｍｌで１回洗浄後、その細胞ペレットを４０ｍＬの洗浄バッファーに再懸濁し、その酵母に、５００μｌのｓｔｒｅｐｔａｖｉｄｉｎ  ＭｉｃｒｏＢｅａｄｓ（商標）（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ  Ｂｉｏｔｅｃ）を加えて、１５分、４℃でインキュベートした。次に、酵母をペレット化し、５ｍＬの洗浄バッファーに再懸濁し、Ｍｉｌｔｅｎｙｉ  ＬＳカラムに充填した。５ｍＬを充填した後、カラムを３回、３ｍｌのＦＡＣＳ洗浄バッファーで洗浄した。続いて、カラムを磁場から取り出し、酵母を５ｍＬの増殖培地で溶出してから、一晩増殖させた。フローサイトメトリーを用いて、下記の選別ラウンドを行った。約１×１０８個の酵母をペレット化し、３回、洗浄バッファーで洗浄し、漸減濃度のビオチン化ＴＩＧＩＴ−Ｆｃ融合抗原（１００〜１ｎＭ）とともに、平衡条件下、室温でインキュベートした。続いて、酵母を２回洗浄し、ＬＣ−ＦＩＴＣ（希釈率１：１００）と、ＳＡ−６３３（希釈率１：５００）またはＥＡ−ＰＥ（希釈率１：５０）のいずれかの二次試薬で１５分、４℃で染色した。氷冷した洗浄バッファーで２回洗浄した後、細胞ペレットを０．４ｍＬの洗浄バッファーに再懸濁し、ストレーナーキャップ付きソートチューブに移した。ＦＡＣＳ  ＡＲＩＡソーター（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）を用いて選別を行い、ソートゲートを割り当てて、特異的結合体に関して、バックグラウンド対照と比較して選択を行った。ＣＨＯ細胞に由来する可溶性膜タンパク質を用いて、非特異的結合体の数を減少させる（ＷＯ２０１４１７９３６３及びＸｕ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｎｇ．Ｄｅｓ．Ｓｅｌ．，２０１３，２６：６６３−６７０（それぞれ、参照により、その全体が援用される）を参照されたい）とともに、ＴＩＧＩＴ−Ｆｃ抗原を用いて、ＴＩＧＩＴに対する親和性の向上した結合体を同定するために、次の選択ラウンドを用いた。最後の選別ラウンド後、酵母を播種し、特徴付けと、親和性成熟のためのクローンの指定のために、個々のコロニーを取った。
【０６３２】
実施例２：親和性成熟
軽鎖の多様化、ＣＤＲ−Ｈ１及びＣＤＲ−Ｈ２の多様化、ならびにＶＨ変異誘発の実施という３つの成熟策を用いて、ナイーブクローンの最適化を行った。
【０６３３】
軽鎖の多様化：ナイーブ産物（上記）から重鎖プラスミドを抽出し、１×１０６の多様性の軽鎖ライブラリーに形質転換した。各ラウンドで、１０ｎＭまたは１ｎＭのビオチン化ＴＩＧＩＴ−Ｆｃ抗原を用いて、上記のように、ＭＡＣＳソーティングで１ラウンド、ＦＡＣＳソーティングで２ラウンド、選択を行った。
【０６３４】
ＣＤＲ−Ｈ１及びＣＤＲ−Ｈ２の選択：１×１０８の多様性のＣＤＲ−Ｈ１とＣＤＲ−Ｈ２バリアントを有する事前に作製したライブラリーに、軽鎖多様化手順から選択したクローンに由来するＣＤＲ−Ｈ３を組み換え、単量体ＨＩＳ−ＴＩＧＩＴ抗原を用いて、選択を行った。平衡条件下、室温で、漸減濃度のビオチン化ＨＩＳ−ＴＩＧＩＴ抗原（１００〜１ｎＭ）を用いることによって、親和性圧力を加えた。
【０６３５】
ＶＨｍｕｔの選択：ＣＤＲ−Ｈ１とＣＤＲ−Ｈ２の選択手順から得たクローンに対して、エラープローンＰＣＲベースの重鎖変異誘発によって、追加の親和性成熟ラウンドを行った。概ね上記されているように、抗原としてＨＩＳ−ＴＩＧＩＴを用いて、ただし、すべての選択ラウンドにおいて、ＦＡＣＳソーティングを用いることを加えて、選択を行った。
【０６３６】
実施例３：抗体の作製と精製
さらなる特徴付けのため、十分な量の選択した抗体を作製するために、酵母クローンを飽和するまで増殖してから、４８時間、３０℃で、振とうしながら誘導した。誘導後、酵母細胞をペレット化し、精製のために、上清を回収した。プロテインＡカラムを用いて、ＩｇＧを精製し、酢酸（ｐＨ２．０）で溶出した。パパイン消化によってＦａｂ断片を作製し、ＫａｐｐａＳｅｌｅｃｔ（登録商標）（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ  ＬｉｆｅＳｃｉｅｎｃｅｓ）で精製した。
【０６３７】
メーカーのプロトコール（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ）による、Ｅｘｐｉ２９３細胞の一過性トランスフェクション、ＣＨＯ細胞の一過性トランスフェクションまたはＣＨＯ細胞の安定発現によっても、抗体を作製した。プロテインＡクロマトグラフィーによって、抗体を精製した。
【０６３８】
（表５）ＴＩＧＩＴ  ＡＢＰの配列と生殖細胞系列（ＧＬ）
2018533371.tif 000055
2018533371.tif 000056
2018533371.tif 000057
2018533371.tif 000058
2018533371.tif 000059
2018533371.tif 000060
2018533371.tif 000061
１ＣｈｏｔｈｉａとＫａｂａｔの両方の番号付けシステムの境界を含め、ＣｈｏｔｈｉａとＫａｂａｔの番号付けシステムの両方によって定義されるようなＣＤＲ−Ｈ１を含む。
２Ｋａｂａｔの番号付けシステムによる。
３ＩＭＧＴの番号付けシステムによる。
４ＫａｂａｔとＣｈｏｔｈｉａの番号付けシステムによる。
５ＫａｂａｔとＣｈｏｔｈｉａの番号付けシステムによる。
６Ｋａｂａｔと、Ｃｈｏｔｈｉａと、ＩＭＧＴの番号付けシステムによる。
【０６３９】
実施例４：抗体の特徴付け
ＦｏｒｔｅＢｉｏによるＫＤの測定：ＦＯＲＴＥＢＩＯ（登録商標）によるバイオレイヤー干渉法（ＢＬＩ）を用いて、組み換え単量体のヒトＴＩＧＩＴ、マウスＴＩＧＩＴ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３）、カニクイザルＴＩＧＩＴへの抗体の定量的な結合を測定した。所定の抗体の親和性測定は概ね、Ｅｓｔｅｐ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍａｂｓ，２０１３，５：２７０−２７８（参照により、その全体が援用される）に説明されているように行った。ＦＯＲＴＥＢＩＯによる親和性測定は、ＩｇＧをオンラインでＡＨＱセンサーに充填することによって行った。センサーをオフラインでアッセイバッファーにおいて３０分平衡化してから、オンラインで６０秒、ベースラインの確立についてモニタリングした。ＩｇＧを充填したセンサーを単一濃度の抗原（１００ｎＭ）に３分曝露した。その後、解離速度の測定のために、センサーをアッセイバッファーに３分移した。１：１結合モデルを用いて、動態を解析した。単一濃度のヒトＴＩＧＩＴ、カニクイザルＴＩＧＩＴ及びマウスＴＩＧＩＴ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３）に結合する抗体のＫＤ測定値をまとめたものが、下記の表６に示されている。
【０６４０】
ＭＳＤ−ＳＥＴによるＫＤの測定：単量体組み換えヒトＴＩＧＩＴ及びカニクイザルＴＩＧＩＴに結合する所定の抗体の溶解平衡親和性の測定を概ね、上記のように行った。上記のＥｓｔｅｐらの文献（参照により、その全体が援用される）を参照されたい。簡潔に述べると、ＰＢＳ＋０．１％ＩｇＧフリーＢＳＡ（ＰＢＳＦ）において、抗原（ＴＩＧＩＴモノマー）を１０〜１００ｐＭで一定に保って、ＦａｂまたはｍＡｂの３〜５倍の段階希釈液（１０ｐＭ〜１０ｎＭで開始）とともにインキュベートして、溶解平衡滴定（ＳＥＴ）を行った。抗体（ＰＢＳ中に２０ｎＭ）を標準的な結合ＭＳＤ−ＥＣＬプレートに、一晩、４℃または室温で３０分コーティングした。続いて、プレートをＢＳＡによって３０分、７００ｒｐｍで振とうしながらブロックしてから、洗浄バッファー（ＰＢＳＦ＋０．０５％Ｔｗｅｅｎ２０）で３回洗浄した。ＳＥＴ試料をプレートにアプライして、１５０秒、７００ｒｐｍで振とうしながらインキュベートしてから、１回洗浄した。プレートにキャプチャーされた抗原を、ＰＢＳＦ中の２５０ｎｇ／ｍＬのスルホタグ標識ストレプトアビジンで、プレート上で３分インキュベートすることによって検出した。プレートを洗浄バッファーで３回洗浄してから、界面活性剤とともに、１×Ｒｅａｄ  Ｂｕｆｆｅｒ  Ｔを用いて、ＭＳＤ  Ｓｅｃｔｏｒ  Ｉｍａｇｅｒ２４００という計器で読み取った。遊離抗原の割合を、プリズムにおける滴定抗体の関数としてプロットし、二次方程式にフィッティングして、ＫＤを求めた。スループットを高めるために、ＳＥＴ試料の調製を含め、ＭＳＤ−ＳＥＴ実験を通じて、液体処理ロボットを使用した。
【０６４１】
（表６）ヒトＴＩＧＩＴ、ＣｙｎｏＴＩＧＩＴ及びマウスＴＩＧＩＴ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３）に対するＫＤの測定
2018533371.tif 000062
Ｎ．Ｂ．：結合体がなかったか、または結合体が弱かった
Ｐ．Ｆ．：フィット性が劣っていた（１：１フィッティングモデルベースでは、結合応答が良好で、ＫＤが報告不能であった）
Ｎ．Ｄ．：ＭＳＤによる親和性測定を行わなかった
【０６４２】
実施例５：ＴＩＧＩＴリガンドのブロック性の測定
細胞表面ＴＩＧＩＴ結合アッセイを用いることによって、定量的なリガンドブロック調査を行った。ヒトＴＩＧＩＴを発現しているＪｕｒｋａｔ細胞への蛍光標識ＰＶＲ−ＦｃまたはＰＶＲＬ２−Ｆｃの結合をフローサイトメトリーによって測定した。各抗体が、ＰＶＲ−ＦｃまたはＰＶＲＬ２−Ｆｃの結合をブロックする能力を測定するとともに、表７に示されているＩＣ５０値を割り出すために、各試験抗体の希釈系列をＴＩＧＩＴ  Ｊｕｒｋａｔ細胞とともにインキュベートした。
【０６４３】
（表７）抗体パネルにおけるリガンドブロックＩＣ５０値
2018533371.tif 000063
【０６４４】
実施例６：ＴＩＧＩＴに対する抗体の親和性と交差反応性を測定するための追加のＴＩＧＩＴ結合アッセイ
結合動態をさらに正確に測定するために、ヒトＴＩＧＩＴに対する抗体の結合の親和性を複数濃度の抗原によって測定した。加えて、バイオレイヤー干渉法（ＢＬＩ）とフローサイトメトリーを用いて、ヒトＴＩＧＩＴ、マウスＴＩＧＩＴ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３）、カニクイザルＴＩＧＩＴへのＭＡＢ１０の定量的な結合を測定した。図１Ａは、異なる種のＴＩＧＩＴのアラインメントを示している。ＴＩＧＩＴタンパク質全体における同一率が、下記の表８にまとめられている。
【０６４５】
（表８）異なる種のＴＩＧＩＴタンパク質間の同一率
2018533371.tif 000064
【０６４６】
ヒトＴＩＧＩＴ、カニクイザルＴＩＧＩＴ及びマウスＴＩＧＩＴに対する抗体の結合の動態測定
Ｏｃｔｅｔ（登録商標）ＱＫｅという計器（ＦｏｒｔｅＢｉｏ）を用いて、実施例４で上記した方法と同様であるが、複数濃度の抗原を用いた方法で、ヒトＴＩＧＩＴ−Ｈｉｓに対する抗体結合の結合親和性と動態を測定した。加えて、カニクイザルＴＩＧＩＴ−Ｈｉｓ及びマウスＴＩＧＩＴ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３）−ＨｉｓへのＭＡＢ１０の結合を測定した。抗ＴＩＧＩＴ抗体をセンサーにキャプチャーしてから、単離体ＴＩＧＩＴタンパク質を会合／解離させる方策を用いて、アッセイにおける多価結合効果（ａｖｉｄｉｔｙ  ｅｆｆｅｃｔ）を回避した。１×動態バッファー（ＦｏｒｔｅＢｉｏ）をアッセイバッファーとして用いて、ＢＬＩ解析を２９℃で行った。まず、抗ヒトＩｇＧ  Ｆｃキャプチャー（ＡＨＣ）バイオセンサー（ＦｏｒｔｅＢｉｏ）をあらかじめ、アッセイバッファーに５分超浸漬した。抗ＴＩＧＩＴ抗体（５μｇ／ｍＬ）をセンサーに３００秒キャプチャーした。続いて、センサーをアッセイバッファーに１２０秒浸漬して、ベースラインを確立してから、各ＴＩＧＩＴタンパク質に対する結合を測定した。続いて、センサーを、実験に応じて様々な濃度のヒトＴＩＧＩＴ−Ｈｉｓ（１２．４〜０．８ｎＭもしくは６．２〜０．８ｎＭ、アッセイバッファー中の２倍希釈液）、カニクイザルＴＩＧＩＴ−Ｈｉｓ（２４．６〜１．５ｎＭもしくは１２．３〜１．５ｎＭ、アッセイバッファー中の２倍希釈液、ＭＡＢ１０に対するのみ）、またはマウスＴＩＧＩＴ−Ｈｉｓ（３０３〜４．７ｎＭ、アッセイバッファー中の２倍希釈液、ＭＡＢ１０に対するのみ）に、３００秒または６００秒間浸漬して、会合を測定した。センサーをアッセイバッファーに、実験に応じて６００秒、１２００秒または１８００秒間浸漬することによって、ＴＩＧＩＴの解離を測定した（６００秒は、マウスＴＩＧＩＴ−Ｈｉｓに対する場合のみに用いた）。いずれのステップにおいても、攪拌速度は１０００ｒｐｍであった。
【０６４７】
Ｏｃｔｅｔ（登録商標）Ｄａｔａ  Ａｎａｌｙｓｉｓ  Ｓｏｆｔｗａｒｅ  Ｖｅｒｓｉｏｎ８．２．０．７によって、リファレンスサブトラクション、解離ベースのステップ間補正、１対１結合モデル及びグローバルフィッティング（Ｒｍａｘ  ｕｎｌｉｎｋｅｄ  ｂｙ  ｓｅｎｓｏｒ）を用いて、動態パラメーターを求めた。会合速度定数（ｋａ）、解離速度定数（ｋｄ）及び平衡定数（ＫＤ）の値を個々に、実験にわたって平均したが、ヒトＴＩＧＩＴに対する抗体結合のデータをまとめたものは、表９に示されている。単量体のヒトＴＩＧＩＴ、カニクイザルＴＩＧＩＴ及びマウスＴＩＧＩＴ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３）へのＭＡＢ１０の結合をまとめたものは、表１０に示されている。
【０６４８】
（表９）複数濃度における、ヒトＴＩＧＩＴへのＴＩＧＩＴ抗体の結合動態
2018533371.tif 000065
【０６４９】
（表１０）ヒト、カニクイザル及びマウスへのＭＡＢ１０の結合に関する動態パラメーター
2018533371.tif 000066
＊最小限の結合（非常に低い結合応答）により、ＫＤを求めることができなかったことから、いずれの結合も、計器の感度限界未満であったことが示されている。
【０６５０】
ＴＩＧＩＴを発現するように操作した細胞に対する結合のＫＤの測定
フローサイトメトリーを用いて、操作細胞株における細胞表面ＴＩＧＩＴへのＭＡＢ１０の結合のＫＤを測定した。ヒトＴＩＧＩＴまたはカニクイザルＴＩＧＩＴを安定的に発現するように、Ｊｕｒｋａｔ細胞（急性Ｔ細胞白血病、ＡＴＣＣ（登録商標）ＴＩＢ−１５２（商標））を操作し、マウスＴＩＧＩＴ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３）を安定的に発現するように、ＣＨＯ−Ｋ１細胞を操作した。ＫＤの値は、表１１に示されている。細胞表面のヒトＴＩＧＩＴ及びカニクイザルＴＩＧＩＴへのＭＡＢ１０の結合のＫＤの値は、非常に近い。
【０６５１】
（表１１）操作細胞上の細胞表面ＴＩＧＩＴへのＭＡＢ１０の結合のＫＤの測定
2018533371.tif 000067
【０６５２】
初代細胞への結合のＫＤの測定
フローサイトメトリーを用いて、初代細胞上の細胞表面ＴＩＧＩＴへのＭＡＢ１０の結合のＫＤを測定した。ヒトＰＢＭＣとカニクイザルＰＢＭＣのいずれにおいても、検出可能なＴＩＧＩＴの発現は、ＣＤ８＋Ｔ細胞で最も高かったので、これらの種においては、ＣＤ８＋Ｔ細胞を用いて、ＭＡＢ１０の初代細胞への結合を算出した。解析のために、ＣＤ８＋Ｔ細胞は、リンパ球のサイズと粒度を持つ細胞であって、ＣＤ３＋ＣＤ４−ＣＤ８＋という組み合わせの分子マーカーを発現した細胞として定義した。同様に、ＭＡＢ１０の結合性は、マウスＴｒｅｇで最も高かったので、マウスＴｒｅｇをＭＡＢ１０の結合性の算出に用いた。マウスＴｒｅｇは、リンパ球のサイズと粒度を持つＣＤ４＋ＣＤ８−ＣＤ２５＋Ｆｏｘｐ３＋細胞として定義した。ＫＤの値は、表１２に示されている。初代細胞の細胞表面のヒトＴＩＧＩＴ及びカニクイザルＴＩＧＩＴへのＭＡＢ１０の結合ＫＤの値は、非常に近い。
【０６５３】
（表１２）初代細胞上の細胞表面ＴＩＧＩＴへのＭＡＢ１０の結合のＫＤの測定
2018533371.tif 000068
【０６５４】
ヒトＰＶＲＬ４への抗体結合
抗ＴＩＧＩＴ抗体の特異性を確かめるために、ＴＩＧＩＴに最も密接に関係するＩｇファミリーメンバーであるヒトＰＶＲＬ４（相同性に関する細胞外領域における同一性が２９％）への結合をＢＬＩによって測定した。図１Ｂは、ヒトＴＩＧＩＴとＰＶＲＬ４細胞外ドメインとのアラインメントを示している。１×動態バッファーをアッセイバッファーとして用いて、ＢＬＩ解析を３０℃で行った。まず、ＡＨＣセンサーをあらかじめ、アッセイバッファーに５分超浸漬した。抗体（５μｇ／ｍＬ）をセンサーに３００秒間キャプチャーした。続いて、センサーをアッセイバッファーに１２０秒間浸漬して、ベースラインを確立してから、ヒトＰＶＲＬ４−Ｈｉｓタンパク質への結合を測定した。続いて、センサーをヒトＰＶＲＬ４−Ｈｉｓ（アッセイバッファー中に２００ｎＭ）に２００秒間浸漬して、会合を測定した。続いて、センサーをアッセイバッファーに２００秒浸漬することによって、ＰＶＲＬ４の解離を測定した。Ｏｃｔｅｔ（登録商標）Ｄａｔａ  Ａｎａｌｙｓｉｓ  Ｓｏｆｔｗａｒｅ  Ｖｅｒｓｉｏｎ８．２．０．７を用いて、結果を解析した。ＭＡＢ１〜ＭＡＢ２１は、ＰＶＲＬ４に結合しなかったので、本明細書に開示されているＭＡＢは、ＴＩＧＩＴに対する特異性が高いことが示された。
【０６５５】
実施例７：抗ＴＩＧＩＴ抗体で処理後、ヒトＴＩＧＩＴのシグナル伝達に応答するように操作したＪｕｒｋａｔ細胞におけるＩＬ−２の産生
２つの操作細胞株を用いて、抗体の、ＴＩＧＩＴの機能を阻害する能力を試験するためのアッセイを展開した。この共培養アッセイは、ＴＩＧＩＴを発現しているＴ細胞と、ＴＩＧＩＴリガンド（ＰＶＲ及びＰＶＲＬ２）を発現している第２の細胞との相互作用を模倣するように、すなわち、ＴＩＧＩＴがＴ細胞の活性化を抑制する能力を模すように展開した。この相互作用により、ＴＩＧＩＴ発現細胞において、Ｔ細胞の機能（例えば、サイトカインの放出）が阻害される。Ｊｕｒｋａｔ細胞（急性Ｔ細胞白血病）は通常、（抗ＣＤ３及び抗ＣＤ２８アゴニスト抗体を用いて）Ｔ細胞レセプターを刺激すると、ＩＬ−２を発現する。ＰＶＲ及び／またはＰＶＲＬ２が存在し、ＰＶＲ及び／またはＰＶＲＬ２がＴＩＧＩＴに結合して、抑制シグナルがＪｕｒｋａｔ細胞に供給されると、Ｊｕｒｋａｔ細胞におけるＴＩＧＩＴの発現により、抗ＣＤ３／ＣＤ２８アゴニスト抗体によって誘導されるＩＬ−２の発現が低下する。したがって、Ｊｕｒｋａｔ細胞株を操作して、ヒトＴＩＧＩＴを発現するようにした。
【０６５６】
第２の細胞株のＨＴ−１０８０（ヒト線維肉腫細胞株、ＡＴＣＣ（登録商標）ＣＣＬ１２１（商標））を操作して、活性化シグナルをＴＩＧＩＴ  Ｊｕｒｋａｔ細胞に供給できる膜係留型抗ＣＤ３一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）抗体を発現するようにした。また、この活性化シグナルは、可溶性抗ＣＤ２８アゴニスト抗体を含めることによって増強した。ＨＴ−１０８０細胞は天然において、高レベルのＰＶＲとＰＶＲＬ２を発現するので、ＴＩＧＩＴ  Ｊｕｒｋａｔ／抗ＣＤ３  ＨＴ−１０８０共培養アッセイにおいて、ＴＩＧＩＴに対するリガンドをもたらす。この共培養アッセイでは、ＴＩＧＩＴアンタゴニスト抗体は、ネガティブコントロール抗体よりも、ＩＬ−２の産生を増大させる。このアッセイシステムの概要は、図３に示されている。
【０６５７】
この共培養アッセイを用いて、ある用量範囲の抗体による処理によって、抗ＴＩＧＩＴ抗体のＥＣ５０を割り出した。ＥＣ５０は、抗ＴＩＧＩＴ抗体のＭＡＢ１〜ＭＡＢ２１と、ハムスター抗マウス抗体ＳＥＣ１（実施例８を参照されたい）と、市販の抗ヒト抗ＴＩＧＩＴ抗体のＭＢＳＡ４３（例えばｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅから入手可能、カタログ番号１６−９５００）について測定した。上記のように、処理から２４時間後に上清を回収し、ＩＬ−２  ＥＬＩＳＡによって解析した。ヒトＴＩＧＩＴ  Ｊｕｒｋａｔ細胞において、実験によって割り出したＥＣ５０値をまとめたものが、表１３に示されている。表１３で見てとれるように、このアッセイでは、ＭＡＢ１３、ＭＡＢ１４、ＭＡＢ１６及びＳＥＣ１以外のすべてのＭＡＢは、市販の抗体ＭＢＳＡ４３よりも優れていた。
【０６５８】
（表１３）ヒトＴＩＧＩＴ  Ｊｕｒｋａｔ共培養アッセイにおけるＥＣ５０の平均値
2018533371.tif 000069
【０６５９】
加えて、抗ＣＤ３  ｓｃＦｖ  ＨＴ１０８０細胞のサブクローニング単離体を用いて、Ｊｕｒｋａｔ共培養アッセイをＭＡＢ１０で繰り返した。図４Ａは、ＭＡＢ１０とＩｇＧ４対照を比較した例示的な実験から得られたＥＣ５０曲線を示している。この実験を３回行ったところ、平均ＥＣ５０は、０．１１ｎＭであった。
【０６６０】
ヒトＴＩＧＩＴ発現Ｊｕｒｋａｔ細胞に関して上で説明したように、ＨＴ−１０８０抗ＣＤ３ｓｃＦｖ細胞を用いて、カニクイザルＴＩＧＩＴ発現Ｊｕｒｋａｔ細胞と可溶性抗ヒトＣＤ２８の存在下で、共培養刺激アッセイをセットアップした。図４Ｂは、ＭＡＢ１０とＩｇＧ４対照を比較した例示的な実験から得られたＥＣ５０曲線を示している。図４Ｂに示されているように、ＭＡＢ１０は、カニクイザルＴＩＧＩＴを発現しているＪｕｒｋａｔ細胞において、ＩＬ−２の産生を誘導するが、ＩｇＧ４アイソタイプ対照は誘導しない。カニクイザルＴＩＧＩＴ  Ｊｕｒｋａｔ／抗ＣＤ３  ＨＴ−１０８０共培養アッセイにおけるＭＡＢ１０の平均ＥＣ５０は、２．８７ｎＭであることが分かった。
【０６６１】
実施例８：抗ＴＩＧＩＴ抗体「ＳＥＣ１」の特徴付け
さらなる調査を行って、ハムスター抗ＴＩＧＩＴ抗体１０Ａ７（例えば、米国特許出願公開第２００９０２５８０１３号に開示されている）の特徴付けを行った。この調査で使用するために、抗体１０Ａ７を２つの異なる方法で再フォーマットした。第１の方法は、ハムスター可変領域と、ヒトＩｇＧ４  Ｓ２２８Ｐ（ヒトＳ２２８Ｐ重鎖、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７３）と、ヒトκ定常領域（ＭＡＢ１０で用いられている定常領域、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７５）を有するキメラ抗体を作製するものであった。第２の方法は、ハムスター可変領域と、マウスＩｇＧ２ａ  Ｎ２９７Ａと、マウスκ定常領域（重鎖：ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７７、軽鎖：ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７９）を有するキメラ抗体を作製するものであった。これらの抗体の可変領域は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７４、７６、７８及び８０に示されている。再フォーマットしたこれらの１０Ａ７抗体は、本明細書では「ＳＥＣ１」という。
【０６６２】
組み換えヒトＴＩＧＩＴ、カニクイザルＴＩＧＩＴ及びマウスＴＩＧＩＴへのＳＥＣ１の結合の動態測定
ＢＬＩを用いて、Ｏｃｔｅｔ  ＱＫｅという計器によって、ヒトＴＩＧＩＴ−Ｈｉｓ、カニクイザルＴＩＧＩＴ−Ｈｉｓ及びマウスＴＩＧＩＴ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３）−ＨｉｓへのＳＥＣ１マウスＩｇＧ２ａ  Ｎ２９７Ａの結合の結合親和性と動態を測定した。ＳＥＣ１をセンサーにキャプチャーしてから、単量体ＴＩＧＩＴタンパク質の会合／解離を行う方策を用いて、アッセイにおける多価結合効果を回避した。１×動態バッファー（ＦｏｒｔｅＢｉｏ）をアッセイバッファーとして用いて、ＢＬＩ解析を２９℃で行った。まず、抗マウスＩｇＧ  Ｆｃキャプチャー（ＡＭＣ）バイオセンサー（ＦｏｒｔｅＢｉｏ）をあらかじめアッセイバッファーに５分超浸漬した。ＳＥＣ１マウスＩｇＧ２ａ  Ｎ２９７Ａ（５μｇ／ｍＬ）をセンサーに３００秒間キャプチャーした。続いて、センサーをアッセイバッファーに１２０秒浸漬して、ベースラインを確立してから、各ＴＩＧＩＴタンパク質に対する結合を測定した。続いて、センサーを様々な濃度のヒトＴＩＧＩＴ−Ｈｉｓ（３３．８〜１．２５ｎＭ、アッセイバッファー中の３倍希釈液）、カニクイザルＴＩＧＩＴ−Ｈｉｓ（３０２．８〜０．４２ｎＭ、アッセイバッファー中の３倍希釈液）またはマウスＴＩＧＩＴ−Ｈｉｓ（３３〜１．２２ｎＭ、アッセイバッファー中の３倍希釈液）に３００秒間浸漬して、会合を測定した。続いて、センサーをアッセイバッファーに６００秒間浸漬することによって、ＴＩＧＩＴの解離を測定した。いずれのステップにおいても、攪拌速度は１０００ｒｐｍであった。Ｏｃｔｅｔ（登録商標）Ｄａｔａ  Ａｎａｌｙｓｉｓ  Ｓｏｆｔｗａｒｅで、リファレンスサブトラクション、解離ベースのステップ間補正、１対１結合モデル及びグローバルフィッティング（Ｒｍａｘ  ｕｎｌｉｎｋｅｄ  ｂｙ  ｓｅｎｓｏｒ）を用いて、動態パラメーターとセンサーグラムを求めた。ＫＤの値は、表１４に示されている。
【０６６３】
（表１４）ＴＩＧＩＴへのＳＥＣ１  ＩｇＧ２ａ  Ｎ２９７Ａの結合に関する動態パラメーター
2018533371.tif 000070
【０６６４】
初代細胞への結合のＫＤ測定値
実施例６で説明したように、フローサイトメトリーを用いて、初代細胞上の細胞表面ＴＩＧＩＴへのＳＥＣ１（ＩｇＧ４  Ｓ２２８Ｐ）の結合のＫＤを測定した。ヒトＰＢＭＣとカニクイザルＰＢＭＣのいずれにおいても、検出可能なＴＩＧＩＴの発現は、ＣＤ８＋Ｔ細胞で最も高かったので、これらの種においては、ＣＤ８＋Ｔ細胞を用いて、初代細胞へのＳＥＣ１の結合を算出した。解析のために、ＣＤ８＋Ｔ細胞は、リンパ球のサイズと粒度を持つ細胞であって、ＣＤ３＋ＣＤ４−ＣＤ８＋という組み合わせの分子マーカーを発現した細胞として定義した。同様に、ＴＩＧＩＴの発現は、マウスＴｒｅｇで最も高かったので、マウスＴｒｅｇをその算出に用いた。マウスＴｒｅｇは、リンパ球のサイズと粒度を持つＣＤ４＋ＣＤ８−ＣＤ２５＋Ｆｏｘｐ３＋細胞として定義した。ＫＤの値は、表１５に示されている。
【０６６５】
（表１５）初代細胞上の細胞表面ＴＩＧＩＴへのＳＥＣ１の結合のＫＤの測定
2018533371.tif 000071
【０６６６】
操作ＴＩＧＩＴ  Ｊｕｒｋａｔ／抗ＣＤ３  ＨＴ−１０８０アッセイ
ＳＥＣ１は、実施例７で説明した操作ヒトＴＩＧＩＴ  Ｊｕｒｋａｔ／抗ＣＤ３  ＨＴ−１０８０共培養アッセイにおいて、ＴＩＧＩＴの機能をアンタゴナイズする。実験を３回行ったところ、平均ＥＣ５０は、８．５ｎＭであった。これに対して、このアッセイにおけるＭＡＢ１０の平均ＥＣ５０は、０．１４ｎＭである。
【０６６７】
ＭＡＢ１０と同様に、ＳＥＣ１は、リガンドブロック抗体として説明されており、いずれの抗体も、操作ＴＩＧＩＴ  Ｊｕｒｋａｔ／抗ＣＤ３  ｓｃＦｖ  ＨＴ−１０８０共培養アッセイにおいて、ＴＩＧＩＴの機能を阻害する。
【０６６８】
実施例９：ＭＡＢ１０で処理した後の準至適刺激ヒトＴ細胞におけるサイトカインの産生の増大
健常なドナーから得たヒト初代Ｔ細胞を用いたインビトロ細胞系において、ＭＡＢ１０が有効であるかを割り出すために、調査を展開した。ＰＢＭＣ混合物内におけるＴ細胞の刺激と、ＰＢＭＣから単離した後のＣＤ４＋Ｔ細胞の刺激という２つの異なるアッセイ形態を用いた。ＴＩＧＩＴは、疲弊腫瘍内ＣＤ８＋Ｔ細胞、ＮＫ細胞及び制御性Ｔ細胞に発現する。この調査は、より入手しやすいＴＩＧＩＴ発現ヒト初代Ｔ細胞を同定及び獲得して、腫瘍内標的細胞のサロゲート系として使用するように設計した。
【０６６９】
ＣＤ４＋Ｔ細胞では、ＴＩＧＩＴの発現は主にメモリー細胞（ＣＤ４５ＲＯ＋）に限られる。ＣＤ４＋Ｔ細胞の準至適刺激により、ＴＩＧＩＴ−リガンド相互作用の阻害後のＩＦＮ−γの産生の増大を測定することによって、ＭＡＢ１０の有効性のアッセイが可能になる。
【０６７０】
ヒト初代Ｔ細胞は、健常なドナーから得た。全末梢血単核球（ＰＢＭＣ）を白血球アフェレーシス調製物から単離し、続いて、ＣＤ４＋Ｔ細胞をＰＢＭＣから単離した。
【０６７１】
Ｆｉｃｏｌｌ（登録商標）密度勾配液を用いて、ＰＢＭＣを精製した。続いて、ＰＢＭＣを用いて、メーカーのプロトコールに従って、陰性選択（ＣＤ４Ｔ細胞単離キット、Ｍｉｌｔｅｎｙｉ）を用いてＣＤ４＋細胞を精製した。
【０６７２】
ヒトＣＤ４＋Ｔ細胞上の主要マーカーのＦＡＣＳ解析
プレートに結合した抗ＣＤ３抗体（１μｇ／ｍｌ）と可溶性抗ＣＤ２８抗体（２μｇ／ｍｌ）で、ＣＤ４＋Ｔ細胞を６０時間、準至適刺激した。染色及びＦＡＣＳ解析では、無刺激試料と刺激試料から得た細胞を用いた。染色では、抗ＴＩＧＩＴ−ＰＥ−Ｃｙ７、抗ＰＶＲ−ＰＥ、抗ＣＤ４−ＡＰＣ−ｅＦｌｕｏｒ７８０及び抗ＣＤ４５ＲＡ−ＡＰＣ、抗ＣＤ４５ＲＯ  ＰｅｒＣＰ−ｅＦｌｕｏｒ７１０、ならびにＣＤ２２６−ＦＩＴＣという抗体を用いた。フローサイトメトリーによって、ＢＤ  ＬＳＲＦｏｒｔｅｓｓａ（商標）という計器を用いて、細胞を解析した。
【０６７３】
ＰＢＭＣの準至適刺激は、低濃度の抗ＣＤ３抗体（０．２μｇ／ｍＬ）を加えることによって行った。ＣＤ４＋Ｔ細胞の準至適刺激は、１μｇ／ｍＬの抗ＣＤ３抗体と２μｇ／ｍＬの可溶性抗ＣＤ２８抗体で事前にコーティングした９６ウェルの平底プレートで細胞を培養することによって行った。６０時間の培養後、上清を回収し、ＥＬＩＳＡ、ＡｌｐｈａＬＩＳＡ（登録商標）またはマルチプレックス／Ｌｕｍｉｎｅｘ（登録商標）技術を用いたサイトカインの定量に備えて凍結した。ＭＡＢ１０を加えた事による効果を、非特異的対照ＩｇＧ４抗体を加えた場合と比較した。
【０６７４】
精製ＣＤ４＋Ｔ細胞を無刺激なままにするか、またはプレートに結合した抗ＣＤ３抗体（１μｇ／ｍｌ）と可溶性抗ＣＤ２８抗体（２μｇ／ｍｌ）を用いて、６０時間刺激した。刺激なし細胞（図５Ａ）と刺激あり細胞（図５Ｂ）の両方において、ＦＡＣＳ解析を行った。集団のパーセンテージと平均蛍光強度（ＭＦＩ）を算出した。活性化前と活性化後の細胞マーカーであるＴＩＧＩＴ、ＰＶＲ及びＣＤ２２６の発現解析により、ＰＶＲのパーセンテージとＣＤ２２６陽性細胞のパーセンテージのいずれも、活性化後に増えたことが示された。ＴＩＧＩＴでは、これらの活性化条件によって、ＴＩＧＩＴ陽性細胞のパーセンテージがわずかに増えたが、ＭＦＩの値から、陽性細胞集団において、ＴＩＧＩＴの発現が明らかにアップレギュレーションしたことが示された。ＦＡＣＳ解析により、ＴＩＧＩＴの発現は主にメモリー細胞（ＣＤ４５ＲＯ＋）に限られたことも確認された。代表的なドナーから得たＣＤ４＋Ｔ細胞を、マーカーのＣＤ４５ＲＡ（ナイーブＴ細胞マーカー）とＣＤ４５ＲＯ（活性化、すなわちメモリーＴ細胞マーカー）に対して染色して、ナイーブＴ細胞とメモリーＴ細胞を区別した。これらの各集団内で、ＴＩＧＩＴの発現レベルを解析した（図５Ｃを参照されたい）。
【０６７５】
異なる濃度のＭＡＢまたは対照ＩｇＧ４抗体の存在下で、可溶性抗ＣＤ３抗体（０．２μｇ／ｍＬ）を用いて、健常なドナーから得た精製ＰＢＭＣを６０時間刺激した。細胞培養液の上清を回収し、それを用いて、炎症誘発性サイトカインの産生を測定した。２人のヒトドナーから得た試料の解析（図６Ａ〜６Ｋに示されている）から、各ＭＡＢによる処理によって、ＩＦＮ−γのアップレギュレーションが誘導されることが示されている。続いて、ＭＡＢ１０を用いて、ドナー１から得たＰＢＭＣにおいて、腫瘍壊死因子α（ＴＮＦ、図６Ｌ）、リンホトキシンα（ＬＴ−α、図６Ｍ）及びインターフェロンγ（ＩＦＮ−γ、図６Ｎ）を含むいくつかの炎症誘発性サイトカインの産生を誘導した。ＩＦＮ−γのＥＣ５０のグラフ解析は、図６Ｏに示されている。ドナー２から得たＰＢＭＣをＭＡＢ１０で同様に処理して、図７Ａ（ＩＦＮ−γ）、図７Ｂ（ＴＮＦ）、図７Ｃ（ＩＬ−６）、図７Ｄ（ＧＭ−ＣＳＦ）及び図７Ｅ（ＬＴ−α）に示されているように、サイトカインを誘導した。このアッセイにおける、試験した２人のドナーにおけるＭＡＢ１０のＥＣ５０値は、ＩＦＮ−γ、ＴＮＦ及びＬＴ−αシグナルの５０％の増加を誘導するのに必要なＭＡＢ１０の濃度を割り出したところ、平均で約１６ｎＭであった。２人のドナーのＴＮＦデータをまとめたもの（図６）は、表１６に示されている。
【０６７６】
（表１６）２人のドナーのデータのまとめ（ＴＮＦの解析）
2018533371.tif 000072
【０６７７】
異なる濃度の対照ＩｇＧ４抗体またはＭＡＢ１０の存在下で、プレートに結合した抗ＣＤ３抗体（１μｇ／ｍＬ）と可溶性抗ＣＤ２８抗体（２μｇ／ｍＬ）を用いて、３人の異なる健常なドナーから得た精製ＣＤ４＋Ｔ細胞を６０時間刺激した。細胞培養液の上清を回収し、それを用いて、ＩＦＮ−γの産生レベルを測定した。
【０６７８】
これらの準至適刺激ＣＤ４＋Ｔ細胞では、ＭＡＢ１０を加えると、３人のすべてのドナーにおいて、ＩＦＮ−γが用量依存的にアップレギュレーションし、このことは、ＭＡＢ１０の抗ＴＩＧＩＴアンタゴニスト機能を示している（図８Ａ（ドナー１）、図８Ｂ（ドナー２）及び図８Ｃ（ドナー３）を参照されたい）。ＭＡＢ１０（黒色の棒）またはＩｇＧ４アイソタイプ対照（薄灰色の棒）のいずれかで処理した細胞におけるＩＦＮ−γの産生は、各図の左パネルに示されている。ＩＦＮ−γシグナルの５０％の増加を誘導するのに必要なＭＡＢ１０の濃度を割り出すことによって、このアッセイにおけるＭＡＢ１０のＥＣ５０の平均値を算出したところ、１．０２ｎＭであった（図８Ａ〜８Ｃのそれぞれの右パネルでプロットされている）。これらのデータは、表１７にまとめられている。
【０６７９】
（表１７）３人のドナーのデータのまとめ
2018533371.tif 000073
【０６８０】
上記のように、非特異的対照ＩｇＧ４抗体と比べた場合、ＭＡＢ１０を準至適刺激ヒトＴ細胞に加えると、ＴＩＧＩＴの機能がアンタゴナイズされ、炎症誘発性サイトカイン（例えばＩＦＮ−γとＴＮＦ）のアップレギュレーションが誘導される。この作用は、用量依存的であり、単離ＣＤ４＋Ｔ細胞アッセイにおける推定ＥＣ５０は、１ｎＭである。これらのデータから、正常な初代ヒトＴ細胞におけるＭＡＢ１０のインビトロでの有効性が示されている。
【０６８１】
実施例１０：ＰＤ−１／ＴＩＧＩＴ併用バイオアッセイにおけるＭＡＢ１０の特徴付け
ＰＤ−１は、活性化Ｔ細胞及びＢ細胞で発現する免疫抑制性レセプターであり、腫瘍抗原と自己抗原に対する免疫応答の調節において重要な役割を果たす。隣接細胞で、ＰＤ−１と、そのいずれかのリガンド（ＰＤ−Ｌ１またはＰＤ−Ｌ２）が結合すると、Ｔ細胞レセプター（ＴＣＲ）のシグナル伝達とＴＣＲ媒介性の増殖、転写活性及びサイトカインの産生が阻害される。ＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１相互作用をブロックするように設計された治療用抗体とＦｃ融合タンパク質は、様々ながん治療のための臨床試験において、有望な成果を示している。
【０６８２】
ＰＤ−１／ＴＩＧＩＴコンビネーションバイオアッセイ（Ｐｒｏｍｅｇａ）は、ＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１相互作用及びＴＩＧＩＴ／ＣＤ１５５相互作用を併せてブロックするように設計された抗体及びその他の生物製剤の効能と安定性を測定するのに使用できる作用ベースアッセイの生態関連機構である。このアッセイは、ＰＤ−１／ＴＩＧＩＴエフェクター細胞（ヒトＰＤ−１、ＴＩＧＩＴ及びルシフェラーゼレポーターを安定的に発現するＪｕｒｋａｔ  Ｔ細胞である）と、ＰＤ−Ｌ１／ＣＤ１５５  ＡＰＣ／ＣＨＯ−Ｋ１細胞（ヒトＰＤ−Ｌ１、ヒトＣＤ１５５及び細胞表面タンパク質（このケースではＴＩＧＩＴ）を安定的に発現するとともに、抗原非依存的に同種ＴＣＲを活性化するように設計されたＣＨＯ−Ｋ１細胞である）という２つの遺伝子操作細胞株からなる。
【０６８３】
これらの２つのタイプの細胞を共培養すると、ＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１相互作用とＴＩＧＩＴ／ＣＤ１５５相互作用が、ＴＣＲのシグナル伝達とルシフェラーゼ活性を阻害する。ＴＩＧＩＴに結合して、リガンドの結合（例えばＣＤ１５５）をブロックする抗体、例えば、本明細書に開示されているか、または当該技術分野において知られているＡＢＰと、ＰＤ−１とそのリガンド（例えばＰＤ−Ｌ１）との相互作用をブロックする第２の抗体とを組み合わせて加えると、阻害シグナルが放出され、ＴＣＲのシグナル伝達とＮＦＡＴ媒介性のルシフェラーゼ活性が得られる。
【０６８４】
図９Ａは、ＭＡＢ１０とペムブロリズマブ（抗ＰＤ−１抗体）を１：１の比率で用いたアッセイの結果を示している。各抗体の濃度は、２５μｇ／ｍｌ、１０μｇ／ｍｌ、４μｇ／ｍｌ、１．６μｇ／ｍｌ、０．６４μｇ／ｍｌ、０．２５６μｇ／ｍｌ、０．１０２４μｇ／ｍｌ、０．０４０９６μｇ／ｍｌ及び０．０１６３８４μｇ／ｍｌであった。非標的指向ＩｇＧ４を対照として用いた。図に示されているように、ＭＡＢ１０とペムブロリズマブの組み合わせ（ＥＣ５０は５．０６ｎＭ）のみが、Ｊｕｒｋａｔ細胞においてルシフェラーゼ活性を誘導するほど十分に、結合をブロックした。ＩｇＧ４対照単独の場合も、ＩｇＧ４＋ＭＡＢ１０の組み合わせの場合も、ルシフェラーゼ活性は誘導されなかった。
【０６８５】
続いて、１μｇ／ｍｌの固定用量のペムブロリズマブ（及び１μｇ／ｍｌの固定用量のＩｇＧ４対照）と、様々な用量のＭＡＢ１０（５０μｇ／ｍｌ、２０μｇ／ｍｌ、８μｇ／ｍｌ、３．２μｇ／ｍｌ、１．２８μｇ／ｍｌ、０．５１２μｇ／ｍｌ、０．２０４８μｇ／ｍｌ、０．０８１９２μｇ／ｍｌ及び０．０３２７６８μｇ／ｍｌ）で、このアッセイを繰り返した。図９Ｂに示されているように、固定用量のペムブロリズマブでは、低レベルのルシフェラーゼ活性化の誘導が見られたが、ペムブロリズマブとＭＡＢ１０の組み合わせの方が、かなり有効にルシフェラーゼを誘導し、ＥＣ５０は０．７８ｎＭであった。図９Ａにおけるように、ＩｇＧ４対照単独の場合も、ＩｇＧ４＋ＭＡＢ１０の組み合わせの場合も、ルシフェラーゼ活性は誘導されなかった。
【０６８６】
実施例１１：ＭＡＢ１０とペムブロリズマブによるＣＭＶ＋Ｔ細胞の併用療法
リンパ増殖アッセイを用いて、サイトメガロウイルス陽性（ＣＭＶ＋）Ｔ細胞におけるＴ細胞応答について試験した。ＣＭＶ抗原反応性についてスクリーニングした個々のドナーから得たＰＢＭＣをＡｓｔａｒｔｅ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃｓ（ワシントン州ボセル）から購入した。ＣＭＶ感染細胞の細胞溶解液も、Ａｓｔａｒｔｅ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃｓから購入した。ＰＢＭＣを播種し、その試料中のＣＭＶ＋Ｔ細胞を刺激する細胞溶解液を加えることによって、抗原特異的な刺激を行った。ＭＡＢ１０、ＩｇＧ４対照及び／または抗ＰＤ−１抗体ペムブロリズマブを加えた。細胞を５日間培養し、その上清を回収し、エフェクターサイトカインＴＮＦの産生について解析した。ＩＬ−２、ＩＦＮ−γ、パーフォリン及びグランザイム−Ｂを含むその他のエフェクター分子に対する細胞内サイトカイン染色を行って、さらなるデータを集めた。
【０６８７】
１人のドナー（ドナー１）から得た細胞を刺激して、上記のように培養した。図１０に示されているように、ＣＤ４＋細胞にゲーティングを行うことによって、ＭＡＢ１０（黒色の棒）とインキュベートすると、ＴＮＦ（図１０Ａ）、ＩＬ−２（図１０Ｂ）及びＩＦＮ−γ（図１０Ｃ）を含むエフェクターサイトカインの産生が用量依存的に、ＩｇＧ４対照とインキュベートした細胞（白色の棒）を上回る程度で増大する（細胞内染色によって測定した場合）。また、ＭＡＢ１０とインキュベートすると、図１０Ｄに示されているように、抗原特異的な活性化ＣＤ４＋Ｔ細胞の割合が増加する（２０μｇ／ｍｌのＩｇＧ４対照またはＭＡＢ１０で処理した細胞をＦＡＣＳによって、ＣＤ３（成熟Ｔ細胞のマーカー）の発現とＴＮＦ及びＩＬ−２の発現により解析した）。
【０６８８】
ＣＤ８＋細胞にゲーティングを行ったところ、同様の結果が得られた。図１１に示されているように、ゲーティングしたＣＤ８＋細胞では、ＭＡＢ１０（黒色の棒）とインキュベートすると、ＴＮＦ（図１１Ａ）、パーフォリン（図１１Ｂ）及びグランザイムＢ（図１１Ｃ）を含むエフェクターサイトカインの産生が用量依存的に、ＩｇＧ４対照とインキュベートした細胞（白色の棒）よりも増大する。パーフォリンとグランザイムＢは、活性化細胞傷害性Ｔリンパ球のマーカーである。また、ＭＡＢ１０とインキュベートすると、図１１Ｄに示されているように、抗原特異的な活性化ＣＤ８＋Ｔ細胞の割合が増加する。２０μｇ／ｍｌのＩｇＧ４対照またはＭＡＢ１０で処理した細胞を、ＦＡＣＳによって、ＣＤ３の発現とパーフォリン及びグランザイムＢの発現により解析した。
【０６８９】
同じドナーから得た細胞を同様の実験セットで用いて、ＭＡＢ１０による遮断により、ＣＭＶ特異的なＣＤ８＋Ｔ細胞の応答が増幅することを示した。細胞を、ある範囲の濃度のＭＡＢ１０（黒色の棒）またはＩｇＧ４対照（白色の棒）とインキュベートし、二重陽性集団であるパーフォリン＋グランザイムＢ＋（図１２Ａ）またはＩＦＮ−γ＋ＴＮＦ＋（図１２Ｃ）のパーセンテージを解析した。図１２Ｂ（パーフォリン＋グランザイムＢ＋解析）と図１２Ｄ（ＩＦＮ−γ＋ＴＮＦ＋解析）では、二重陽性細胞の割合を、２０μｇ／ｍｌの対照抗体（左パネル）または２０μｇ／ｍｌのＭＡＢ１０（右パネル）で処理した細胞で比較したものが示されている。ＭＡＢ１０で処理した細胞の方が、対照で処理した細胞よりも、エフェクターサイトカインの産生が非常に多かった。
【０６９０】
上記と同じドナーを用いて、ＭＡＢ１０とＰＤ−１抗体ペムブロリズマブの併用効果を試験した。細胞を、上記のようなＣＭＶ溶解液で刺激し、２μｇ／ｍｌのペムブロリズマブまたは対照ＩｇＧ４と、１０μｇ／ｍｌ、２０μｇ／ｍｌまたは４０μｇ／ｍｌの対照抗体またはＭＡＢ１０で処理して、その上清におけるＴＮＦの産生を測定した。図１３に示されているように、４つの細胞群を試験し、ＩｇＧ４対照（白色の棒、一番左の群）、一定量のＩｇＧ４対照と漸変量のＭＡＢ１０（暗灰色の棒、左から２番目）、一定量のペムブロリズマブと漸変量のＩｇＧ４対照（薄灰色の棒、右から２番目）、または一定量のペムブロリズマブと漸変量のＭＡＢ１０（黒色の棒、右側の群）で処理した。ペムブロリズマブとＭＡＢ１０の組み合わせは、単剤で観察される作用を上回って、ＴＮＦの産生を増大させた。
【０６９１】
上記のアッセイを用いて、この組み合わせを３人の異なるドナーで再度試験した。細胞をＣＭＶ溶解液で刺激し、２０μｇ／ｍｌのＭＡＢ１０または２０μｇ／ｍｌの対照ＩｇＧ４抗体と、漸変量のペムブロリズマブで処理し、ＴＮＦの産生を測定した。図１４Ａ（ドナー１）、図１４Ｂ（ドナー２）及び図１４Ｃ（ドナー３）に示されているように、ＭＡＢ１０（黒色の棒）を単独で、または漸増濃度のペムブロリズマブと組み合わせて加えると、対照抗体＋ペムブロリズマブ群（白色の棒）よりも、ＴＮＦの産生が増大する。加えて、ペムブロリズマブと組み合わせたＭＡＢ１０（黒色の棒）では、ＭＡＢ１０単独と比べて、活性も向上した。統計差は、ＭＡＢ１０単独とＭＡＢ１０＋ペムブロリズマブ群との間で、スチューデントＴ検定解析を用いて算出した（＊＝ｐ＜０．０５、＊＊＝ｐ＜０．０１、＊＊＊＝ｐ＜０．００５、＊＊＊＊＝ｐ＜０．００１）。
【０６９２】
総合すると、実施例で示されたデータにより、抗原特異的なリコールアッセイにおけるＭＡＢ１０の単剤としての明確な用量依存的作用が示されている。加えて、これらのデータにより、複数のドナーにおいて、ＭＡＢ１０とペムブロリズマブを組み合わせたときの有効性の向上が示されており、これにより、本明細書に開示されているＡＢＰとＰＤ−１インヒビターまたはＰＤ−Ｌ１インヒビターの併用治療剤としての価値が示されている。
【０６９３】
参照による援用
本明細書に引用されているすべての特許文献及び非特許文献のすべての開示内容はそれぞれ、参照により、あらゆる目的において、その全体が援用される。
【０６９４】
その他の実施形態
上に示した本開示には、独立した有用性のある複数の別個の発明を含めることができる。これらの各発明は、その好ましい形態（複数可）で開示されているが、本明細書に開示及び例示されているような、その具体的実施形態は、多くの変形形態が可能であるので、限定的な意味で考えるべきではない。本発明の主題には、本明細書に開示されている様々な要素、特徴、機能及び／または特性のあらゆる新規かつ非自明な組み合わせ及びサブコンビネーションが含まれる。以下の特許請求の範囲には、新規かつ非自明とみなした特定の組み合わせとサブコンビネーションが具体的に示されている。特徴、機能、要素及び／または特性の別段の組み合わせ及びサブコンビネーションで具現化される発明は、本願、本願に基づく優先権を主張する出願、または関連出願において請求できる。このような請求も、異なる発明に対するか、同じ発明に対するかを問わず、元の請求と比べて範囲が広いか、狭いか、等しいか、異なるかを問わず、本開示の発明の主題に含まれるものとみなす。
【０６９５】
付録Ａ：配列参照表
2018533371.tif 000074
2018533371.tif 000075
2018533371.tif 000076
2018533371.tif 000077
2018533371.tif 000078
2018533371.tif 000079
2018533371.tif 000080
2018533371.tif 000081
2018533371.tif 000082
2018533371.tif 000083
2018533371.tif 000084
2018533371.tif 000085
2018533371.tif 000086
2018533371.tif 000087
2018533371.tif 000088
2018533371.tif 000089
2018533371.tif 000090
2018533371.tif 000091
2018533371.tif 000092
2018533371.tif 000093
2018533371.tif 000094
2018533371.tif 000095
2018533371.tif 000096
【図１Ａ】
2018533371.tif 000121
【図１Ｂ】
2018533371.tif 000122
【図２】
2018533371.tif 000123
【図３】
2018533371.tif 000124
【図４Ａ】
2018533371.tif 000125
【図４Ｂ】
2018533371.tif 000126
【図５Ａ】
2018533371.tif 000127
【図５Ｂ】
2018533371.tif 000128
【図５Ｃ】
2018533371.tif 000129
【図６Ａ】
2018533371.tif 000130
【図６Ｂ】
2018533371.tif 000131
【図６Ｃ】
2018533371.tif 000132
【図６Ｄ】
2018533371.tif 000133
【図６Ｅ】
2018533371.tif 000134
【図６Ｆ】
2018533371.tif 000135
【図６Ｇ】
2018533371.tif 000136
【図６Ｈ】
2018533371.tif 000137
【図６Ｉ】
2018533371.tif 000138
【図６Ｊ】
2018533371.tif 000139
【図６Ｋ】
2018533371.tif 000140
【図６Ｌ】
2018533371.tif 000141
【図６Ｍ】
2018533371.tif 000142
【図６Ｎ】
2018533371.tif 000143
【図６Ｏ】
2018533371.tif 000144
【図７Ａ】
2018533371.tif 000145
【図７Ｂ】
2018533371.tif 000146
【図７Ｃ】
2018533371.tif 000147
【図７Ｄ】
2018533371.tif 000148
【図７Ｅ】
2018533371.tif 000149
【図８Ａ】
2018533371.tif 000150
【図８Ｂ】
2018533371.tif 000151
【図８Ｃ】
2018533371.tif 000152
【図９Ａ】
2018533371.tif 000153
【図９Ｂ】
2018533371.tif 000154
【図１０Ａ】
2018533371.tif 000155
【図１０Ｂ】
2018533371.tif 000156
【図１０Ｃ】
2018533371.tif 000157
【図１０Ｄ】
2018533371.tif 000158
【図１１Ａ】
2018533371.tif 000159
【図１１Ｂ】
2018533371.tif 000160
【図１１Ｃ】
2018533371.tif 000161
【図１１Ｄ】
2018533371.tif 000162
【図１２Ａ】
2018533371.tif 000163
【図１２Ｂ】
2018533371.tif 000164
【図１２Ｃ】
2018533371.tif 000165
【図１２Ｄ】
2018533371.tif 000166
【図１３】
2018533371.tif 000167
【図１４Ａ】
2018533371.tif 000168
【図１４Ｂ】
2018533371.tif 000169
【図１４Ｃ】
2018533371.tif 000170
【配列表】
2018533371000001.app
【国際調査報告】
2018533371.tif 000171
2018533371.tif 000172
2018533371.tif 000173
2018533371.tif 000174
2018533371.tif 000175
2018533371.tif 000176