(57)【要約】  本出願で提供されるのは、固形腫瘍を処置する方法であって、有効量のＭＥＤＩ４７３６またはその抗原結合フラグメント、トレメリムマブまたはその抗原結合フラグメントおよびＭＥＤＩ６３８３を投与することを含む方法である。【選択図】図１Ａ
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
対象の固形腫瘍を処置する方法であって、抗ＰＤ−Ｌ１抗体またはその抗原結合フラグメント、抗ＣＴＬＡ−４抗体またはその抗原結合フラグメントおよびＯＸ４０アゴニストを前記対象に投与することを含む方法。
【請求項２】
前記ＯＸ４０アゴニストはＯＸ４０リガンド融合タンパク質または抗ＯＸ４０抗体のうちの１種または複数種である、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記ＯＸ４０リガンド融合タンパク質はＭＥＤＩ６３８３である、請求項２に記載の方法。
【請求項４】
前記抗ＰＤ−Ｌ１抗体はＭＥＤＩ４７３６である、請求項１〜３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５】
前記抗ＣＴＬＡ−４抗体はトレメリムマブである、請求項１〜４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６】
対象の固形腫瘍を処置する方法であって、ＭＥＤＩ４７３６またはその抗原結合フラグメント、トレメリムマブまたはその抗原結合フラグメントおよびＭＥＤＩ６３８３を前記対象に投与することを含む方法。
【請求項７】
前記投与は生存を増加させる、請求項１〜６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８】
前記投与により、ＭＥＤＩ４７３６のみ、トレメリムマブのみまたはＭＥＤ６３８３のみの投与と比較して生存が増加する、請求項７に記載の方法。
【請求項９】
前記投与により、ＭＥＤＩ４７３６およびトレメリムマブの投与、ＭＥＤＩ４７３６およびＭＥＤＩ６３８３の投与ならびにトレメリムマブおよびＭＥＤＩ６３８３の投与と比較して生存が増加する、請求項７に記載の方法。
【請求項１０】
前記投与は腫瘍容積を減少させる、請求項１〜９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１１】
前記投与により、ＭＥＤＩ４７３６のみ、トレメリムマブのみまたはＭＥＤ６３８３のみの投与と比較して腫瘍容積が減少する、請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
前記投与により、ＭＥＤＩ４７３６およびトレメリムマブの投与、ＭＥＤＩ４７３６およびＭＥＤＩ６３８３の投与ならびにトレメリムマブおよびＭＥＤＩ６３８３の投与と比較して腫瘍容積が減少する、請求項１０に記載の方法。
【請求項１３】
前記抗ＰＤ−Ｌ１抗体またはその抗原結合フラグメントの投与は静脈内注入による、請求項１〜１２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１４】
前記抗ＣＴＬＡ−４抗体またはその抗原結合フラグメントの投与は静脈内注入による、請求項１〜１３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１５】
前記ＭＥＤＩ６３８３またはその活性フラグメントの投与は静脈内注入による、請求項１〜１４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１６】
前記固形腫瘍は、卵巣がん、乳がん、結腸直腸がん、前立腺がん、子宮頸がん、子宮がん、精巣がん、膀胱がん、頭頸部がん、黒色腫、膵がん、腎細胞癌または肺がんである、請求項１〜１５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１７】
前記固形腫瘍は三種陰性乳がんである、請求項１６に記載の方法。
【請求項１８】
前記固形腫瘍は非小細胞肺がんである、請求項１７に記載の方法。
【請求項１９】
前記固形腫瘍は扁平上皮のまたは非扁平上皮の非小細胞肺がんである、請求項１８に記載の方法。
【請求項２０】
前記対象はヒト患者である、請求項１〜１９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２１】
有効量の抗ＰＤ−Ｌ１抗体またはその抗原結合フラグメント、抗ＣＴＬＡ−４抗体またはその抗原結合フラグメントおよびＯＸ４０アゴニストと、薬学的に許容される添加剤とを含む医薬組成物。
【請求項２２】
前記ＯＸ４０アゴニストはＭＥＤＩ６３８３である、請求項２１に記載の医薬組成物。
【請求項２３】
前記抗ＰＤ−Ｌ１抗体はＭＥＤＩ４７３６である、請求項２１または２２に記載の医薬組成物。
【請求項２４】
前記抗ＣＴＬＡ−４抗体はトレメリムマブである、請求項２１〜２３のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項２５】
有効量のＭＥＤＩ４７３６またはその抗原結合フラグメント、トレメリムマブまたはその抗原結合フラグメントおよびＭＥＤＩ６３８３と、薬学的に許容される添加剤とを含む医薬組成物。
【請求項２６】
静脈内投与用に製剤化されている請求項２１〜２５のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項２７】
請求項２１〜２６のいずれか一項に記載の医薬組成物と、がんの処置用の指示書とを含むキット。
【請求項２８】
請求項１に記載の方法において前記キットを使用するための指示書をさらに含む請求項２７に記載のキット。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
配列表
本出願は、ＡＳＣＩＩフォーマットで電子的に提出されており、参照により全体として本明細書に組み込まれる配列表を含有する。２０１６年４月１４日に作成された前記ＡＳＣＩＩコピーは、ＢＴＯ−２００ＷＯ１＿ＳＬ．ｔｘｔという名称であり、サイズは３４，４４８バイトである。
【背景技術】
【０００２】
癌は、世界的規模の主要な健康上の負担であり続けている。癌の治療における進歩にもかかわらず、特に現行の療法に抵抗性である進行性疾患または癌を有する患者にとって、より効果的で毒性の低い療法に対する医療上のニーズは依然として満たされないままである。
【０００３】
腫瘍制御において免疫系、特にＴ細胞媒介性細胞傷害性が果たす役割は、明確に認識されている。Ｔ細胞が、疾患の早期および後期のいずれでも癌患者における腫瘍の増殖および生存を制御するという証拠が増大している。しかし、腫瘍特異的Ｔ細胞反応は、癌患者において増加および維持するのが困難である。
【０００４】
顕著な注目を集めているＴ細胞経路は、細胞傷害性Ｔリンパ球抗原４（ＣＴＬＡ−４、ＣＤ１５２）、プログラム細胞死１（Ｂ７−Ｈ１またはＣＤ２７４としても公知であるＰＤ−Ｌ１）及びＯＸ４０（ＣＤ１３４；ＴＮＦＲＳＦ４）を通してシグナル伝達する。
【０００５】
ＣＴＬＡ４は、活性化Ｔ細胞上で発現し、ＣＤ２８媒介性Ｔ細胞活性化後のチェック時におけるＴ細胞反応を維持するための共阻害因子として機能する。ＣＴＬＡ４は、ＴＣＲ関与後の未感作および記憶Ｔ細胞の早期活性化の振幅を調節し、かつ抗腫瘍免疫および自己免疫の両方に影響を及ぼす中心阻害経路の一部になると考えられる。ＣＴＬＡ４はＴ細胞上で排他的に発現し、そのリガンドであるＣＤ８０（Ｂ７．１）およびＣＤ８６（Ｂ７．２）の発現は、主として抗原提示細胞、Ｔ細胞および他の免疫媒介細胞に限定される。ＣＴＬＡ４シグナル伝達経路を遮断する拮抗性抗ＣＴＬＡ４抗体は、Ｔ細胞活性化を増強すると報告されている。１つのそのような抗体イピリムマブは、転移性黒色腫の治療のためにＦＤＡによって２０１１年に承認された。別の抗ＣＴＬＡ４抗体であるトレメリムマブは、進行性黒色腫の治療について第ＩＩＩ相臨床試験において試験されたが、その当時の標準治療（テモゾロミドまたはダカルバジン）と比較して患者の全生存期間を有意には増加させなかった。
【０００６】
ＰＤ−Ｌ１もＴ細胞活性化の制御に関係している受容体およびリガンドの複合系の一部である。正常組織中では、ＰＤ−Ｌ１は、Ｔ細胞、Ｂ細胞、樹状細胞、マクロファージ、間葉系幹細胞、骨髄由来肥満細胞および様々な非造血細胞上で発現する。その正常機能は、その２つの受容体：プログラム細胞死１（ＰＤ−１またはＣＤ２７９としても公知）およびＣＤ８０（Ｂ７−１またはＢ７．１としても公知）との相互作用を通してＴ細胞活性化と耐性との間の平衡を調節することである。ＰＤ−Ｌ１は、さらに腫瘍によっても発現し、腫瘍が宿主免疫系による検知および排除を回避するのに役立つように複数部位で作用する。ＰＤ−Ｌ１は、広範囲の癌において高頻度で発現する。一部の癌では、ＰＤ−Ｌ１の発現には、生存率の低下および不都合な予後が結び付いている。Ｂ７−Ｈ１とその受容体との間の相互作用を遮断する抗体は、ＰＤ−Ｌ１依存性免疫抑制効果を緩和してｉｎ  ｖｉｔｒｏでの抗腫瘍Ｔ細胞の細胞傷害活性を増強することができる。ＭＥＤＩ４７３６は、ＰＤ−１およびＣＤ８０受容体の両方へのＰＤ−Ｌ１の結合を遮断することができるヒトＰＤ−Ｌ１に対して向けられたヒトモノクローナル抗体である。
【０００７】
ＯＸ４０は、活性化されたＣＤ４＋Ｔ細胞およびＣＤ８＋Ｔ細胞上で、調節性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）上でならびにナチュラルキラー（ＮＫ）細胞上で主に見出される腫瘍壊死因子レセプター（ＴＮＦＲ）である。活性化されたＣＤ４＋Ｔ細胞およびＣＤ８＋Ｔ細胞上のＯＸ４０を介したシグナル伝達により、サイトカインの産生、グランザイムおよびパーフォリンの放出ならびにエフェクターＴ細胞およびメモリーＴ細胞のプールの拡大が増強される。加えて、Ｔｒｅｇ細胞上でのＯＸ４０シグナル伝達により、Ｔｒｅｇの増殖が阻害され、Ｔｒｅｇの誘発がシャットダウンされ、およびＴｒｅｇ抑制機能がブロックされる。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
癌および他の疾患に対処するための戦略の開発において、過去１０年間にわたり顕著な進歩が遂げられてきたにもかかわらず、進行性、難治性および転移性疾患を有する患者の臨床選択肢は限定されている。化学療法、照射療法および高用量化学療法は、用量規制が行われるようになってきた。特に現行の治療薬に抵抗性の進行性疾患または癌を有する患者のために、より優れた治療効果、より長い臨床的有益性および改善された安全性プロファイルを有する新規な低毒性の方法および治療薬に対する満たされていない多大なニーズが依然としてある。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
１つの態様では、本発明は、対象（例えばヒト対象）の固形腫瘍を処置する方法であって、抗ＰＤ−Ｌ１抗体（例えばＭＥＤＩ４７３６）またはその抗原結合フラグメント、抗ＣＴＬＡ−４抗体（例えばトレメリムマブ）またはその抗原結合フラグメントおよびＯＸ４０アゴニスト（例えばＭＥＤＩ６３８３）を対象に投与することを含む方法を提供する。
【００１０】
別の態様では、本発明は、対象（例えばヒト対象）の固形腫瘍を処置する方法であって、ＭＥＤＩ４７３６またはその抗原結合フラグメント、トレメリムマブまたはその抗原結合フラグメントおよびＭＥＤＩ６３８３を対象に投与することを含む方法を提供する。
【００１１】
別の態様では、本発明は、有効量の抗ＰＤ−Ｌ１抗体（例えばＭＥＤＩ４７３６）またはその抗原結合フラグメント、抗ＣＴＬＡ−４抗体（例えばトレメリムマブ）またはその抗原結合フラグメントおよびＯＸ４０アゴニスト（例えばＭＥＤＩ６３８３）と、薬学的に許容される添加剤とを含む医薬組成物を提供する。
【００１２】
別の態様では、本発明は、有効量のＭＥＤＩ４７３６またはその抗原結合フラグメント、トレメリムマブまたはその抗原結合フラグメントおよびＭＥＤＩ６３８３またはその活性フラグメントと、薬学的に許容される添加剤とを含む医薬組成物を提供する。
【００１３】
別の態様では、本発明は、本明細書で描写されるいずれかの他の態様に係る医薬組成物と、がんの処置（例えば、本明細で描写されるいずれかの他の態様に係る方法）用の指示書とを含むキットを提供する。
【００１４】
本明細書で描写されるいずれかの態様の様々な実施形態では、ＯＸ４０アゴニストはＯＸ４０リガンド融合タンパク質（例えばＭＥＤＩ６３８３）または抗ＯＸ４０抗体のうちの１種または複数種である。
【００１５】
本明細書で描写されるいずれかの態様の様々な実施形態では、抗ＰＤ−Ｌ１抗体はＭＥＤＩ４７３６である。
【００１６】
本明細書で描写されるいずれかの態様の様々な実施形態では、抗ＣＴＬＡ−４抗体はトレメリムマブである。
【００１７】
本明細書で描写されるいずれかの態様の様々な実施形態では、投与は生存を増加させる。様々な実施形態では、この投与により、ＭＥＤＩ４７３６のみ、トレメリムマブのみまたはＭＥＤ６３８３のみの投与と比較して生存が増加する。さらなる実施形態では、この投与により、ＭＥＤＩ４７３６およびトレメリムマブの投与、ＭＥＤＩ４７３６およびＭＥＤＩ６３８３の投与ならびにトレメリムマブおよびＭＥＤＩ６３８３の投与と比較して生存が増加する。
【００１８】
本明細書で描写されるいずれかの態様の様々な実施形態では、投与は腫瘍容積を減少させる。様々な実施形態では、この投与により、ＭＥＤＩ４７３６のみ、トレメリムマブのみまたはＭＥＤ６３８３のみの投与と比較して腫瘍容積が減少する。さらなる実施形態では、この投与により、ＭＥＤＩ４７３６およびトレメリムマブの投与、ＭＥＤＩ４７３６およびＭＥＤＩ６３８３の投与ならびにトレメリムマブおよびＭＥＤＩ６３８３の投与と比較して腫瘍容積が減少する。
【００１９】
本明細書で描写されるいずれかの態様の様々な実施形態では、抗ＰＤ−Ｌ１抗体（例えばＭＥＤＩ４７３６）またはその抗原結合フラグメントの投与は静脈内注入による。本明細書で描写されるいずれかの態様の様々な実施形態では、抗ＣＴＬＡ−４抗体（例えばトレメリムマブ）またはその抗原結合フラグメントの投与は静脈内注入による。本明細書で描写されるいずれかの態様の様々な実施形態では、ＯＸ４０アゴニスト（例えばＭＥＤＩ６３８３）またはその活性フラグメントの投与は静脈内注入による。本明細書で描写されるいずれかの態様の様々な実施形態では、本医薬組成物は静脈内投与用に製剤化されている。
【００２０】
本明細書で描写されるいずれかの態様の様々な実施形態では、固形腫瘍は、卵巣がん、乳がん（例えば三種陰性乳がん（ｔｒｉｐｌｅ  ｎｅｇａｔｉｖｅ  ｂｒｅａｓｔ  ｃａｎｃｅｒ））、結腸直腸がん、前立腺がん、子宮頸がん、子宮がん、精巣がん、膀胱がん、頭頸部がん、黒色腫、膵がん、腎細胞癌、肺がんまたは非小細胞肺がん（例えば扁平上皮のまたは非扁平上皮の非小細胞肺がん）のうちの１種または複数種である。本明細書で描写されるいずれかの態様の様々な実施形態では、対象はヒト患者である。
【００２１】
用語の定義
他に特に規定しない限り、本明細書で使用する全ての技術用語および科学用語は、本発明が属する技術分野の当業者であれば一般に理解する意味と同一の意味を有する。下記の参考文献は、本発明で使用する多数の用語の一般的定義を当業者に提供する：Ｓｉｎｇｌｅｔｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ  ｏｆ  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ  ａｎｄ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ（２ｎｄ  ｅｄ．１９９４）；Ｔｈｅ  Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ  Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ  ｏｆ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ（Ｗａｌｋｅｒ  ｅｄ．，１９８８）；Ｔｈｅ  Ｇｌｏｓｓａｒｙ  ｏｆ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ，５ｔｈ  Ｅｄ．，Ｒ．Ｒｉｅｇｅｒ  ｅｔ  ａｌ．（ｅｄｓ．），Ｓｐｒｉｎｇｅｒ  Ｖｅｒｌａｇ（１９９１）およびＨａｌｅ＆Ｍａｒｈａｍ，Ｔｈｅ  Ｈａｒｐｅｒ  Ｃｏｌｌｉｎｓ  Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ  ｏｆ  Ｂｉｏｌｏｇｙ（１９９１）。本明細書で使用するように、以下の用語は、他に特に規定しない限り、下記においてそれらに属する意味を有する。
【００２２】
「抗腫瘍活性」は、腫瘍細胞の増殖または生存を低下または安定化させる任意の生物活性を意味する。１つの実施形態では、抗腫瘍活性は、抗腫瘍免疫反応である。
【００２３】
「免疫調節薬」は、免疫反応（例えば、抗腫瘍免疫反応）を増強する薬剤を意味する。本発明の典型的な免疫調節薬には、抗体、例えば抗ＣＴＬＡ−４抗体、抗ＰＤ−Ｌ１抗体およびそれらのフラグメントと、タンパク質、例えばＯＸ４０リガンド融合タンパク質、またはそれらのフラグメントとが含まれる。１つの実施形態では、免疫調節薬は、免疫チェックポイント阻害剤である。
【００２４】
「ＯＸ４０ポリペプチド」は、ＮＣＢＩアクセッション番号ＮＰ＿００３３１８との少なくとも約８５％のアミノ酸同一性を有するポリペプチドまたはそのフラグメントを意味する。ＯＸ４０は、抗原により活性化された哺乳動物のＣＤ４＋Ｔリンパ球およびＣＤ８＋Ｔリンパ球の表面上で発現されるレセプターのＴＮＦＲスーパーファミリのメンバーである。例えばＰａｔｅｒｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ２４，１２８１−１２９０（１９８７）、Ｍａｌｌｅｔｔ  ｅｔ  ａｌ．，ＥＭＢＯ  Ｊ  ９，１０６３−１０６８（１９９０）およびＣａｌｄｅｒｈｅａｄ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １５１，５２６１−５２７１（１９９３））を参照されたい。ＯＸ４０はまた、ＣＤ１３４、ＡＣＴ−４およびＡＣＴ３５とも称される。ＯＸ４０レセプター配列は当分野で既知であり、例えばＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号ＡＡＢ３３９４４またはＣＡＥ１１７５７で提供される。
【００２５】
典型的なヒトＯＸ４０アミノ酸配列を下記に提供する（配列番号１８）：
【化１】
2018521008.tif 000003
【００２６】
「ＯＸ４０リガンド」は、ＮＣＢＩアクセッション番号ＮＰ＿００３３１７との少なくとも約８５％のアミノ酸同一性を有するおよびＯＸ４０レセプターに特異的に結合するポリペプチドまたはそのフラグメントを意味する。例えばＢａｕｍ  Ｐ．Ｒ．，ｅｔ  ａｌ．ＥＭＢＯ  Ｊ．１３：３９９２−４００１（１９９４））を参照されたい。用語ＯＸ４０Ｌには、ＯＸ４０リガンド全体、可溶性ＯＸ４０リガンド、および別の部分（例えばタンパク質ドメイン）に共有結合したＯＸ４０リガンドの機能的に活性な部分を含む融合タンパク質が含まれる。また、ＯＸ４０Ｌの定義には、天然に存在するＯＸ４Ｌとはアミノ酸配列が異なるがＯＸ４０レセプターに特異的に結合する能力を保持する多様体も含まれる。ＯＸ４０Ｌの定義には、ＯＸ４０の生物活性を増加させる多様体もさらに含まれる。ＯＸ４０リガンド配列は当分野で既知であり、例えばＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号ＮＰ＿００３３１８で提供される。
【００２７】
典型的なヒトＯＸ４０リガンドアミノ酸配列を下記に提供する（配列番号１９）：
【化２】
2018521008.tif 000004
【００２８】
「ＯＸ４０アゴニスト」は、ＯＸ４０レセプターと特異的に相互作用してＯＸ４０レセプターの生物活性を増加させるＯＸ４０リガンドを意味する。望ましくは、この生物活性は、少なくとも約１０％、２０％、３０％、５０％、７０％、８０％、９０％、９５％またはさらに１００％増加される。所定の態様では、本明細書で開示されるＯＸ４０アゴニストとして、ＯＸ４０結合性ポリペプチド（ＯＸ４０  ｂｉｎｄｉｎｇ  ｐｏｌｙｐｅｐｔｉｄｅ）、例えば抗ＯＸ４０抗体（例えばＯＸ４０アゴニスト抗体）、ＯＸ４０リガンドまたはこれらの分子のフラグメントもしくは誘導体が挙げられる。
【００２９】
「ＯＸ４０抗体」は、ＯＸ４０に特異的に結合する抗体を意味する。ＯＸ４０抗体として、ＯＸ４０に対して特異的であるモノクローナル抗体およびポリクローナル抗体ならびにそれらの抗原結合フラグメントが挙げられる。所定の態様では、本明細書で説明される抗ＯＸ４０抗体はモノクローナル抗体（またはその抗原結合フラグメント）であり、例えばマウスモノクローナル抗体、ヒト化モノクローナル抗体または完全ヒトモノクローナル抗体である。１つの特定の実施形態では、ＯＸ４０抗体はＯＸ４０レセプターアゴニストであり、例えばＷｅｉｎｂｅｒｇ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ  ２９，５７５−５８５（２００６）により説明されているマウス抗ヒトＯＸ４０モノクローナル抗体（９Ｂ１２）である。他の実施形態では、ＯＸ４０に特異的に結合する抗体またはその抗原結合フラグメントは、ｍＡｂ  ９Ｂ１２と同じＯＸ４０エピトープに結合する。
【００３０】
「ＯＸ４０リガンド融合タンパク質（ＯＸ４０Ｌ  ＦＰ）」は、ＯＸ４０レセプターに特異的に結合して免疫応答を増加させるタンパク質を意味する。１つの実施形態では、ＯＸ４０レセプターへのＯＸ４０リガンド融合タンパク質の結合により、Ｔ細胞認識がブーストされて腫瘍抗原に特異的な免疫応答が増強される。典型的なＯＸ４０リガンド融合タンパク質は、「Ｔｒｉｍｅｒｉｃ  ＯＸ４０  Ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎ  Ｆｕｓｉｏｎ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  ａｎｄ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｏｆ  Ｕｓｅ」という表題の米国特許第７，９５９，９２５号明細書で説明されている。例えば米国特許第７，９５９，９２５号明細書、配列番号８（配列番号２０）：
【化３】
2018521008.tif 000005
を参照されたい。他のＯＸ４０リガンド融合タンパク質は例えば米国特許第米国特許第６，３１２，７００号明細書で説明されている。１つの実施形態では、ＯＸ４０リガンド融合タンパク質により腫瘍特異的Ｔ細胞免疫が増強される。１つの実施形態では、ＯＸ４０リガンド融合タンパク質はＭＥＤＩ６３８３である。
【００３１】
「ＰＤ−Ｌ１ポリペプチド」は、ＮＣＢＩアクセッション番号ＮＰ＿００１２５４６３５と少なくとも約８５％のアミノ酸同一性を有し、ＰＤ−１およびＣＤ８０結合活性を有するポリペプチドまたはそのフラグメントを意味する。
【００３２】
「ＰＤ−Ｌ１核酸分子」は、ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを意味する。典型的なＰＤ−Ｌ１核酸分子配列は、ＮＣＢＩアクセッション番号ＮＭ＿００１２６７７０６で提供される。
【００３３】
「抗ＰＤ−Ｌ１抗体」は、選択的にＰＤ−Ｌ１ポリペプチドに結合する抗体を意味する。典型的な抗ＰＤ−Ｌ１抗体は、例えば、参照により本明細書に組み込まれる米国特許出願公開第２０１３００３４５５９号明細書／米国特許第８７７９１０８号明細書および米国特許出願公開第２０１４０３５６３５３号明細書に記載されている。ＭＥＤＩ４７３６は、典型的な抗ＰＤ−Ｌ１抗体である。他の抗ＰＤ−Ｌ１抗体には、ＢＭＳ−９３６５５９（Ｂｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ  Ｓｑｕｉｂｂ）およびＭＰＤＬ３２８０Ａ（Ｒｏｃｈｅ）が含まれる。
【００３４】
ＭＥＤＩ４７３６  ＶＬ（配列番号１）
【化４】
2018521008.tif 000006
【００３５】
ＭＥＤＩ４７３６  ＶＨ（配列番号２）
【化５】
2018521008.tif 000007
【００３６】
ＭＥＤＩ４７３６  ＶＨ  ＣＤＲ１（配列番号３）
ＲＹＷＭＳ
【００３７】
ＭＥＤＩ４７３６  ＶＨ  ＣＤＲ２（配列番号４）
ＮＩＫＱＤＧＳＥＫＹＹＶＤＳＶＫＧ
【００３８】
ＭＥＤＩ４７３６  ＶＨ  ＣＤＲ３（配列番号５）
ＥＧＧＷＦＧＥＬＡＦＤＹ
【００３９】
ＭＥＤＩ４７３６  ＶＬ  ＣＤＲ１（配列番号６）
ＲＡＳＱＲＶＳＳＳＹＬＡ
【００４０】
ＭＥＤＩ４７３６  ＶＬ  ＣＤＲ２（配列番号７）
ＤＡＳＳＲＡＴ
【００４１】
ＭＥＤＩ４７３６  ＶＬ  ＣＤＲ３（配列番号８）
ＱＱＹＧＳＬＰＷＴ
【００４２】
「ＣＴＬＡ−４ポリペプチド」は、ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号ＡＡＬ０７４７３．１またはＴ細胞阻害活性を有するそのフラグメントと少なくとも８５％のアミノ酸配列同一性を有するポリペプチドを意味する。ＡＡＬ０７４７３．１の配列を下記に提供する。（配列番号２１）
【化６】
2018521008.tif 000008
【００４３】
「ＣＴＬＡ−４核酸分子」は、ＣＴＬＡ−４ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを意味する。典型的なＣＴＬＡ−４ポリヌクレオチドは、ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号ＡＡＬ０７４７３で提供される。
【００４４】
「抗ＣＴＬＡ−４抗体」は、選択的にＣＴＬＡ−４ポリペプチドに結合する抗体を意味する。典型的な抗ＣＴＬＡ−４抗体は、例えば、米国特許第６，６８２，７３６号明細書；同第７，１０９，００３号明細書；同第７，１２３，２８１号明細書；同第７，４１１，０５７号明細書；同第７，８２４，６７９号明細書；同第８，１４３，３７９号明細書；同第７，８０７，７９７号明細書；および同第８，４９１，８９５号明細書（その中で、トレメリムマブは１１．２．１に記載されている）で記載されており、上記特許は参照により本明細書に組み込まれる。トレメリムマブは、典型的な抗ＣＴＬＡ−４抗体である。トレメリムマブ配列を下記に提供する。
【００４５】
トレメリムマブ、米国特許第６，６８２，７３６号明細書
トレメリムマブＶＬ（配列番号９）
【化７】
2018521008.tif 000009
【００４６】
トレメリムマブＶＨ（配列番号１０）
【化８】
2018521008.tif 000010
【００４７】
トレメリムマブＶＨ  ＣＤＲ１（配列番号１１）
ＧＦＴＦＳＳＹＧＭＨ
【００４８】
トレメリムマブＶＨ  ＣＤＲ２（配列番号１２）
ＶＩＷＹＤＧＳＮＫＹＹＡＤＳＶ
【００４９】
トレメリムマブＶＨ  ＣＤＲ３（配列番号１３）
ＤＰＲＧＡＴＬＹＹＹＹＹＧＭＤＶ
【００５０】
トレメリムマブＶＬ  ＣＤＲ１（配列番号１４）
ＲＡＳＱＳＩＮＳＹＬＤ
【００５１】
トレメリムマブＶＬ  ＣＤＲ２（配列番号１５）
ＡＡＳＳＬＱＳ
【００５２】
トレメリムマブＶＬ  ＣＤＲ３（配列番号１６）
ＱＱＹＹＳＴＰＦＴ
【００５３】
本開示で使用する用語「抗体」は、免疫グロブリンまたはそのフラグメントもしくは誘導体を意味しており、それがｉｎ  ｖｉｔｒｏまたはｉｎ  ｖｉｖｏのいずれで生成されるかとは無関係に、抗原結合部位を含むあらゆるポリペプチドを含む。この用語には、ポリクローナル抗体、モノクローナル抗体、単一特異性抗体、多重特異性抗体、非特異性抗体、ヒト化抗体、一本鎖抗体、キメラ抗体、合成抗体、組換え抗体、ハイブリッド抗体、突然変異抗体およびグラフト化抗体が含まれるがそれらに限定されない。本開示のために、「無傷抗体」におけるように用語「無傷」によって他の点で修飾されない限り、用語「抗体」にはさらに抗体フラグメント、例えば、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）2、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、Ｆｄ、ｄＡｂなどの抗体フラグメントおよび詳細には、抗原結合機能、すなわち、例えばＣＴＬＡ−４またはＰＤ−Ｌ１に結合する能力を維持する他の抗体フラグメントが含まれる。典型的には、そのようなフラグメントは、抗原結合ドメインを含むであろう。
【００５４】
用語「抗原結合ドメイン」、「抗原結合フラグメント」および「結合フラグメント」は、抗体と抗原との間の特異的結合の原因となるアミノ酸を含む抗体分子の一部を意味する。抗原が大きい場合、抗原結合ドメインは抗原の一部のみに結合できる可能性がある。抗原結合ドメインとの特異的相互作用の原因となる抗原分子の一部分は、「エピトープ」または「抗原決定基」を意味する。抗原結合ドメインは、典型的には抗体軽鎖可変領域（ＶL）および抗体重鎖可変領域（ＶH）を含むが、必ずしも両方を含んではいない。例えば、いわゆるＦｄ抗体フラグメントはＶHドメインのみからなるが、依然として無傷抗体の一部の抗原結合機能を維持する。
【００５５】
抗体の結合フラグメントは、組換えＤＮＡ技術によって、または無傷抗体の酵素的開裂もしくは化学的開裂によって生成される。結合フラグメントには、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖおよび一本鎖抗体が含まれる。「二重特異性」または「二官能性」抗体以外の抗体は、その各々が同一である結合部位を有すると理解されている。酵素であるパパインによる抗体の消化は、「Ｆａｂ」フラグメントとしても公知である２つの同一抗原結合フラグメントおよび抗原結合活性を有していないが、結晶化する能力を有する「Ｆｃ」フラグメントを生じさせる。酵素であるペプシンによる抗体の消化は、その抗体分子の２つの腕が結合したままであり、２つの抗原結合部位を含むＦ（ａｂ’）２フラグメントを生じさせる。Ｆ（ａｂ’）２フラグメントは抗原を架橋結合させる能力を有する。本明細書で使用する場合の「Ｆｖ」は、抗原認識部位および抗原結合部位の両方を維持する抗体の最小フラグメントを意味する。本明細書で使用する場合の「Ｆａｂ」は、軽鎖の定常ドメインおよび重鎖のＣＨＩドメインを含む抗体のフラグメントを意味する。
【００５６】
用語「ｍＡｂ」は、モノクローナル抗体を意味する。本発明の抗体は、限定することなく、完全自然抗体、二重特異性抗体、キメラ抗体、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、一本鎖Ｖ領域フラグメント（ｓｃＦｖ）、融合ポリペプチドおよび非従来型抗体を含む。
【００５７】
本開示では、「含む」、「含んでいる」、「含有する」および「有する」などは、米国特許法においてそれらに属すると見なされている意味を有することができ、「包含する」、「包含している」などを意味することができる。「から本質的になっている」または「から本質的になる」などは制約されず、言及されていることの基本的または新規な特徴が、言及されていることを超える存在によって変化させられない限り、言及されていることを超える存在が許容されるが、先行技術の実施形態は除外される。
【００５８】
本明細書で使用する用語「決定する工程」、「評価する工程」、「アッセイする工程」、「測定する工程」および「検出する工程」は、定量的および定性的決定の両方を意味しており、したがって、用語「決定する工程」は、「アッセイする工程」、「測定する工程」などと互換的に使用される。定量的決定が予定される場合、非分析物の「量を決定する工程」という語句が使用されることが企図されている。定性的および／または定量的決定が予定される場合、非分析物の「レベルを決定する工程」または分析物を「検出する工程」という語句が使用されることが企図されている。
【００５９】
「参照」は、比較の標準を意味する。
【００６０】
「対象」は、ヒトまたは非ヒト哺乳動物、例えば、ウシ、ウマ、イヌ、ヒツジもしくはネコなどを含むがそれらに限定されない哺乳動物を意味する。
【００６１】
本明細書に提供された範囲は、範囲内の全数値についての省略表現であると理解されている。例えば、１〜５０の範囲は、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９または５０からなる群からの任意の数、数の組合せまたは部分範囲を含むと理解されている。
【００６２】
本明細書で使用する用語「治療する」、「治療している」、「治療」などは、疾患および／またはそれに関連する症状を減少または緩和することを意味する。排除されはしないが、疾患または状態を治療することは、その疾患、それに関連する状態または症状が完全に排除されることを必要としないことは理解されるであろう。
【００６３】
詳細に規定しない限り、または文脈から明白ではない限り、本明細書で使用する用語「または」は包括的であると理解されている。詳細に規定しない限り、または文脈から明白ではない限り、本明細書で使用する用語「１つの（ａ）」、「１つの（ａｎ）」および「その（ｔｈｅ）」は単数または複数であると理解されている。
【００６４】
詳細に規定しない限り、または文脈から明白ではない限り、本明細書で使用する用語「約」は、当技術分野における通常の容認範囲内、例えば平均値の２標準偏差内であると理解されている。「約」は、標準値の１０％、９％、８％、７％、６％、５％、４％、３％、２％、１％、０．５％、０．１％、０．０５％または０．０１％内であると理解することができる。文脈から他のことが明白ではない限り、本明細書に提供された全数値は、用語「約」によって修飾される。
【００６５】
本明細書の変量のいずれかの定義における化学基のリストの列挙は、任意の単一基または列挙した基の組合せとしてのその変量の定義を含んでいる。本明細書での変量または態様についての実施形態の列挙は、任意の単一実施形態としての、または任意の他の実施形態またはそれらの部分と組み合わせた実施形態を含んでいる。
【００６６】
本明細書に提供した任意の組成物または方法は、本明細書に提供した他の組成物のいずれかおよび方法の１つ以上と組み合わせることができる。
【図面の簡単な説明】
【００６７】
【図１Ａ】抗ＣＴＬＡ−４抗体、抗ＰＤ−Ｌ１抗体およびＯＸ４０リガンド融合タンパク質の組み合わせによる処置が、これらの薬剤の単剤療法および二重併用療法と比べて腫瘍容積を減少させるのにおよび生存を増加させるのに有効であったことを示す。図１Ａは、試験群の平均腫瘍容積を経時的に示すグラフである。各群の１１匹のＣ５７ＢＬ／６マウスに、ＭＣＡ２０５細胞を１日目に皮下（ＳＣ）接種した。コントロール物質（アイソタイプコントロール）ならびに被験物質  抗ＣＴＬＡ−４  ｍＡｂおよび抗ＰＤ−Ｌ１  ｍＡｂを１１日目、１５日目、１８日目および２２日目に腹腔内（ＩＰ）投与し、被験物質ｍＯＸ４０Ｌ  ＦＰを１１日目および１５日目にＩＰ投与した。被験物質で処置した動物とアイソタイプコントロールで処置した動物との比較を行ない、ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍ  ６．０ソフトウェアを使用して、第６．６節で説明する方法により、群間の差異を統計学的有意性に関して分析した。エラーバーは平均の標準誤差を表す。ＩＰ＝腹腔内、ＳＣ＝皮下、ＴＧＩ＝腫瘍増殖阻害。
【図１Ｂ】抗ＣＴＬＡ−４抗体、抗ＰＤ−Ｌ１抗体およびＯＸ４０リガンド融合タンパク質の組み合わせによる処置が、これらの薬剤の単剤療法および二重併用療法と比べて腫瘍容積を減少させるのにおよび生存を増加させるのに有効であったことを示す。図１Ｂは、アイソタイプコントロール（左側のパネル）および未処置の対象（右側のパネル）の個々の腫瘍容積を経時的に示すグラフを示す。各群の１１匹のＣ５７ＢＬ／６マウスに、ＭＣＡ２０５細胞を１日目に皮下（ＳＣ）接種した。コントロール物質（アイソタイプコントロール）ならびに被験物質  抗ＣＴＬＡ−４  ｍＡｂおよび抗ＰＤ−Ｌ１  ｍＡｂを１１日目、１５日目、１８日目および２２日目に腹腔内（ＩＰ）投与し、被験物質ｍＯＸ４０Ｌ  ＦＰを１１日目および１５日目にＩＰ投与した。被験物質で処置した動物とアイソタイプコントロールで処置した動物との比較を行ない、ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍ  ６．０ソフトウェアを使用して、第６．６節で説明する方法により、群間の差異を統計学的有意性に関して分析した。エラーバーは平均の標準誤差を表す。ＩＰ＝腹腔内、ＳＣ＝皮下、ＴＧＩ＝腫瘍増殖阻害。
【図１Ｃ】抗ＣＴＬＡ−４抗体、抗ＰＤ−Ｌ１抗体およびＯＸ４０リガンド融合タンパク質の組み合わせによる処置が、これらの薬剤の単剤療法および二重併用療法と比べて腫瘍容積を減少させるのにおよび生存を増加させるのに有効であったことを示す。図１Ｃは、抗ＣＴＬＡ−４モノクローナル抗体で処置した対象（ＣＴＬＡ−４  ｍＡｂ、左側のパネル）、抗ＰＤ−Ｌ１モノクローナル抗体で処置した対象（ＰＤ−Ｌ１  ｍＡｂ、中央のパネル）およびＯＸ４０リガンド融合タンパク質で処置した対象（ｍＯＸ４０Ｌ  ＦＰ、右側のパネル）の個々の腫瘍容積を経時的に示すグラフを示す。各群の１１匹のＣ５７ＢＬ／６マウスに、ＭＣＡ２０５細胞を１日目に皮下（ＳＣ）接種した。コントロール物質（アイソタイプコントロール）ならびに被験物質  抗ＣＴＬＡ−４  ｍＡｂおよび抗ＰＤ−Ｌ１  ｍＡｂを１１日目、１５日目、１８日目および２２日目に腹腔内（ＩＰ）投与し、被験物質ｍＯＸ４０Ｌ  ＦＰを１１日目および１５日目にＩＰ投与した。被験物質で処置した動物とアイソタイプコントロールで処置した動物との比較を行ない、ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍ  ６．０ソフトウェアを使用して、第６．６節で説明する方法により、群間の差異を統計学的有意性に関して分析した。エラーバーは平均の標準誤差を表す。ＩＰ＝腹腔内、ＳＣ＝皮下、ＴＧＩ＝腫瘍増殖阻害。
【図１Ｄ】抗ＣＴＬＡ−４抗体、抗ＰＤ−Ｌ１抗体およびＯＸ４０リガンド融合タンパク質の組み合わせによる処置が、これらの薬剤の単剤療法および二重併用療法と比べて腫瘍容積を減少させるのにおよび生存を増加させるのに有効であったことを示す。図１Ｄは、抗ＣＴＬＡ−４モノクローナル抗体および抗ＰＤ−Ｌ１モノクローナル抗体で処置した対象（ＣＴＬＡ−４  ｍＡｂ＋ＰＤ−Ｌ１  ｍＡｂ、左上のパネル）、抗ＰＤ−Ｌ１モノクローナル抗体およびＯＸ４０で処置した対象（ＰＤ−Ｌ１  ｍＡｂ＋ｍＯＸ４０Ｌ  ＦＰ、右上のパネル）ならびに抗ＣＴＬＡ−４モノクローナル抗体およびＯＸ４０リガンド融合タンパク質で処置した対象（ＣＴＬＡ−４  ｍＡｂ＋ｍＯＸ４０Ｌ  ＦＰ、左下のパネル）ならびに抗ＣＴＬＡ−４モノクローナル抗体および抗ＰＤ−Ｌ１モノクローナル抗体およびＯＸ４０の組み合わせで処置した対象（ＣＴＬＡ−４  ｍＡｂ＋ＰＤ−Ｌ１  ｍＡｂ＋ｍＯＸ４０Ｌ  ＦＰ）の個々の腫瘍容積を経時的に示すグラフを示す。各群の１１匹のＣ５７ＢＬ／６マウスに、ＭＣＡ２０５細胞を１日目に皮下（ＳＣ）接種した。コントロール物質（アイソタイプコントロール）ならびに被験物質  抗ＣＴＬＡ−４  ｍＡｂおよび抗ＰＤ−Ｌ１  ｍＡｂを１１日目、１５日目、１８日目および２２日目に腹腔内（ＩＰ）投与し、被験物質ｍＯＸ４０Ｌ  ＦＰを１１日目および１５日目にＩＰ投与した。被験物質で処置した動物とアイソタイプコントロールで処置した動物との比較を行ない、ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍ  ６．０ソフトウェアを使用して、第６．６節で説明する方法により、群間の差異を統計学的有意性に関して分析した。エラーバーは平均の標準誤差を表す。ＩＰ＝腹腔内、ＳＣ＝皮下、ＴＧＩ＝腫瘍増殖阻害。
【図１Ｅ−Ｆ】抗ＣＴＬＡ−４抗体、抗ＰＤ−Ｌ１抗体およびＯＸ４０リガンド融合タンパク質の組み合わせによる処置が、これらの薬剤の単剤療法および二重併用療法と比べて腫瘍容積を減少させるのにおよび生存を増加させるのに有効であったことを示す。図１Ｅは、未処置試験群、アイソタイプコントロール試験群、ＣＴＬＡ−４  ｍＡｂ試験群、ＰＤ−Ｌ１  ｍＡｂ試験群およびｍＯＸ４０Ｌ  ＦＰ試験群での生存率を経時的に示すグラフである。図１Ｆは、ＣＴＬＡ−４  ｍＡｂ＋ＰＤ−Ｌ１  ｍＡｂ試験群、アイソタイプコントロール試験群、ＣＴＬＡ−４  ｍＡｂ＋ｍＯＸ４０Ｌ  ＦＰ試験群、ＰＤ−Ｌ１  ｍＡｂ＋ｍＯＸ４０Ｌ  ＦＰ試験群およびＣＴＬＡ−４  ｍＡｂ＋ＰＤ−Ｌ１  ｍＡｂ＋ｍＯＸ４０Ｌ  ＦＰ  ＦＰ試験群での生存率を経時的に示すグラフである。各群の１１匹のＣ５７ＢＬ／６マウスに、ＭＣＡ２０５細胞を１日目に皮下（ＳＣ）接種した。コントロール物質（アイソタイプコントロール）ならびに被験物質  抗ＣＴＬＡ−４  ｍＡｂおよび抗ＰＤ−Ｌ１  ｍＡｂを１１日目、１５日目、１８日目および２２日目に腹腔内（ＩＰ）投与し、被験物質ｍＯＸ４０Ｌ  ＦＰを１１日目および１５日目にＩＰ投与した。被験物質で処置した動物とアイソタイプコントロールで処置した動物との比較を行ない、ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍ  ６．０ソフトウェアを使用して、第６．６節で説明する方法により、群間の差異を統計学的有意性に関して分析した。エラーバーは平均の標準誤差を表す。ＩＰ＝腹腔内、ＳＣ＝皮下、ＴＧＩ＝腫瘍増殖阻害。
【発明を実施するための形態】
【００６８】
本発明は、抗ＣＴＬＡ−４抗体、抗ＰＤ−Ｌ１抗体およびＯＸ４０アゴニスト（例えばＯＸ４０リガンド融合タンパク質）の組合せを含む、がんの処置に有用である組成物および方法を特徴とする。本明細書において下記で報告するように、マウス腫瘍モデルでは、これらの薬剤による処置によって腫瘍容積が減少し、かつ生存が増加した。
【００６９】
本明細書で提供されるのは固形腫瘍を処置する方法である。この提供される方法は、有効量のＭＥＤＩ４７３６またはその抗原結合フラグメント、トレメリムマブまたはその抗原結合フラグメントおよびＯＸ４０リガンド融合タンパク質またはその活性フラグメントを投与することを含む。様々な実施形態では、この固形腫瘍は、卵巣がん、乳がん（例えば三種陰性乳がん）、結腸直腸がん、前立腺がん、子宮頸がん、子宮がん、精巣がん、膀胱がん、頭頸部がん、黒色腫、膵がん、腎細胞癌および肺がん（例えば非小細胞肺がん（ＮＳＣＬＣ））であるがこれらに限定されない。ＮＳＣＬＣには下記の３つの主なサブタイプが存在する：扁平上皮癌、腺癌および大細胞（未分化）癌。他のサブタイプとして、腺扁平上皮癌および肉腫様癌が挙げられる。
【００７０】
抗腫瘍治療
本明細書で提供されるのは、がんを処置する方法であって、抗ＣＴＬＡ４抗体、抗ＰＤ−Ｌ１抗体およびＯＸ４０アゴニスト（例えばＯＸ４０リガンド融合タンパク質、ＯＸ４０アゴニスト抗体）の投与を含む方法である。マウス腫瘍モデルでは、抗ＣＴＬＡ４抗体、抗ＰＤ−Ｌ１抗体およびＯＸ４０リガンド融合タンパク質の投与により、腫瘍容積が減少し、かつ生存が増加した。所定の態様では、固形腫瘍を呈する患者に抗ＣＴＬＡ４抗体（例えばトレメリムマブ）、抗ＰＤ−Ｌ１（ＭＥＤＩ４７３６）およびＯＸ４０リガンド融合タンパク質（例えばＭＥＤＩ６３８３）を投与する。所定の態様では、本明細書で提供される方法に係る抗ＣＴＬＡ４抗体（例えばトレメリムマブ）、抗ＰＤ−Ｌ１（ＭＥＤＩ４７３６）およびＯＸ４０リガンド融合タンパク質（例えばＭＥＤＩ６３８３）の投与は非経口投与（例えば静脈内注入または皮下注射）による。所定の態様では、抗ＣＴＬＡ４抗体（例えばトレメリムマブ）、抗ＰＤ−Ｌ１（ＭＥＤＩ４７３６）およびＯＸ４０リガンド融合タンパク質（例えばＭＥＤＩ６３８３）を単一の医薬組成物として投与する。
【００７１】
抗ＣＴＬＡ４抗体、抗ＰＤ−Ｌ１抗体およびＯＸ４０アゴニストを含むがん治療による効果的な処置として、例えば、原発腫瘍の部位または１つもしくは複数の転移での、がんの進行速度の低下、腫瘍増殖もしくは転移性増殖の遅延もしくは安定化、腫瘍収縮および／または腫瘍退縮が挙げられる。一部の態様では、腫瘍増殖の減少または遅延は統計的に有意であることができる。腫瘍増殖の減少を、ベースラインでの、予想される腫瘍増殖に対しての、大きな患者集団をベースとして予想される腫瘍増殖に対しての、またはコントロール集団の腫瘍増殖に対しての患者の腫瘍の増殖との比較により測定することができる。他の実施形態では、本発明の方法は生存を増加させる。
【００７２】
抗ＣＴＬＡ４抗体、抗ＰＤ−Ｌ１抗体およびＯＸ４０リガンド融合タンパク質を含むがん治療の適用に対する臨床応答を、臨床医に既知の診断技術を使用して評価することができ、この診断技術として、核磁気共鳴撮像（ＭＲＩ）スキャン、ｘ線撮像、コンピュータ断層撮影（ＣＴ）スキャン、フローサイトメトリーまたは蛍光活性化セルソーター（ＦＡＣＳ）分析、組織診、肉眼所見および血液化学が挙げられるがこれらに限定されず、この血液化学として、ＥＬＩＳＡ、ＲＩＡおよびクロマトグラフィーにより検出可能な変化が挙げられるがこれらに限定されない。
【００７３】
Ｔ細胞の調節性経路（Ｍｏｄｕｌａｔｏｒｙ  Ｐａｔｈｗａｙ）
Ｔ細胞が、疾患の早期および後期のいずれでも癌患者において腫瘍の増殖および生存を制御するという証拠が増大している。しかし、腫瘍特異的Ｔ細胞反応は、癌患者において増加および維持するのが困難である。
【００７４】
顕著な注目を集めているＴ細胞調節経路は、細胞傷害性Ｔリンパ球抗原４（ＣＴＬＡ−４、ＣＤ１５２）、プログラム細胞死１（Ｂ７Ｈ−１またはＣＤ２７４としても公知であるＰＤ−Ｌ１）およびＯＸ４０（ＣＤ１３４；ＴＮＦＲＳＦ４）を通してシグナル伝達する。
【００７５】
ＣＴＬＡ−４は、活性化Ｔ細胞上で発現し、ＣＤ２８媒介性Ｔ細胞活性化後のチェック時におけるＴ細胞反応を維持するための共阻害因子として機能する。ＣＴＬＡ−４は、ＴＣＲ関与後の未感作および記憶Ｔ細胞の早期活性化の振幅を調節し、かつ抗腫瘍免疫および自己免疫の両方に影響を及ぼす中心阻害経路の一部になると考えられる。ＣＴＬＡ−４はＴ細胞上で発現し、そのリガンドであるＣＤ８０（Ｂ７．１）およびＣＤ８６（Ｂ７．２）の発現は、主として抗原提示細胞、Ｔ細胞および他の免疫媒介細胞に限定される。ＣＴＬＡ−４シグナル伝達経路を遮断する拮抗性抗ＣＴＬＡ−４抗体は、Ｔ細胞活性化を増強すると報告されている。１つのそのような抗体イピリムマブは、転移性黒色腫の治療のためにＦＤＡによって２０１１年に承認された。別の抗ＣＴＬＡ−４抗体であるトレメリムマブは、進行性黒色腫の治療について第ＩＩＩ相臨床試験において試験されたが、その当時の標準治療（テモゾロミドまたはダカルバジン）と比較して患者の全生存率を有意には増加させなかった。
【００７６】
ＰＤ−Ｌ１もＴ細胞活性化を制御することに関係している受容体およびリガンドの複合系の一部である。正常組織中では、ＰＤ−Ｌ１は、Ｔ細胞、Ｂ細胞、樹状細胞、マクロファージ、間葉系幹細胞、骨髄由来肥満細胞および様々な非造血細胞上で発現する。その正常機能は、その２つの受容体：プログラム細胞死１（ＰＤ−１またはＣＤ２７９としても公知）およびＣＤ８０（Ｂ７−１またはＢ７．１としても公知）との相互作用を通してＴ細胞活性化と耐性との間の平衡を調節することである。ＰＤ−Ｌ１は、さらに腫瘍によっても発現し、腫瘍が宿主免疫系による検知および排除を回避するのに役立つように複数部位で作用する。ＰＤ−Ｌ１は、広範囲の癌において高頻度で発現する。一部の癌では、ＰＤ−Ｌ１の発現には、生存率の低下および不都合な予後が結び付いている。ＰＤ−Ｌ１とその受容体（例えば、ＰＤ−１）との間の相互作用を遮断する抗体は、ＰＤ−Ｌ１依存性免疫抑制効果を緩和してｉｎ  ｖｉｔｒｏでの抗腫瘍Ｔ細胞の細胞傷害活性を増強することができる。
【００７７】
ＯＸ４０（ＣＤ１３４、ＴＮＦＲＳＦ４）は、活性化されたＣＤ４＋Ｔ細胞およびＣＤ８＋Ｔ細胞上で、調節性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）上でならびにナチュラルキラー（ＮＫ）細胞上で主に見出される腫瘍壊死因子レセプター（ＴＮＦＲ）である（Ｃｒｏｆｔ  ｅｔ  ａｌ，２００９）。ＯＸ４０は１種の既知の内因性リガンド、即ちＯＸ４０リガンド（ＯＸ４０Ｌ、ＣＤ１５２、ＴＮＦＳＦ４）を有し、このＯＸ４０リガンドは三量体型で存在し、ＯＸ４０をクラスター化することができ、その結果、Ｔ細胞内で強力な細胞シグナル伝達事象が生じる（Ｃｒｏｆｔ  ｅｔ  ａｌ，２００９）。活性化されたＣＤ４＋Ｔ細胞およびＣＤ８＋Ｔ細胞上のＯＸ４０を介したシグナル伝達により、サイトカインの産生、グランザイムおよびパーフォリンの放出ならびにエフェクターＴ細胞およびメモリーＴ細胞のプールの拡大が増強される（Ｊｅｎｓｅｎ  ｅｔ  ａｌ，２０１０）。加えて、Ｔｒｅｇ細胞上でのＯＸ４０シグナル伝達により、Ｔｒｅｇの増殖が阻害され、Ｔｒｅｇの誘発がシャットダウンされ、およびＴｒｅｇ抑制機能がブロックされる（Ｖｏｏ  ｅｔ  ａｌ，２０１３、Ｖｕ  ｅｔ  ａｌ，２００７）。
【００７８】
免疫組織化学試験および初期フローサイトメトリー分析（ｅａｒｌｙ  ｆｌｏｗ  ｃｙｔｏｍｅｔｒｙ  ａｎａｌｙｓｅｓ）により、広範囲のヒトがんに浸潤するＴ細胞上でＯＸ４０が発現されることが分かった（Ｂａｒｕａｈ  ｅｔ  ａｌ，２０１１、Ｃｕｒｔｉ  ｅｔ  ａｌ，２０１３、Ｌａｄａｎｙｉ  ｅｔ  ａｌ，２００４、Ｐｅｔｔｙ  ｅｔ  ａｌ，２００２、Ｒａｍｓｔａｄ  ｅｔ  ａｌ，２０００、Ｓａｒｆｆ  ｅｔ  ａｌ，２００８、Ｖｅｔｔｏ  ｅｔ  ａｌ，１９９７）。腫瘍浸潤リンパ球上でのＯＸ４０の発現は、いくつかのヒトがんでのより長い生存と相関しており、このことは、ＯＸ４０シグナルが抗腫瘍免疫応答の確立で重要な役割を果たすことができることを示唆する（Ｌａｄａｎｙｉ  ｅｔ  ａｌ，２００４、Ｐｅｔｔｙ  ｅｔ  ａｌ，２００２）。
【００７９】
様々な非臨床マウス腫瘍モデルにおいて、ＯＸ４０のアゴニスト（抗体およびＯＸ４０リガンド融合タンパク質等）の使用に成功しており、有望な結果が得られている（Ｋｊａｅｒｇａａｒｄ  ｅｔ  ａｌ，２０００、Ｎｄｈｌｏｖｕ  ｅｔ  ａｌ，２００１、Ｗｅｉｎｂｅｒｇ  ｅｔ  ａｌ，２０００）。ＯＸ４０アゴニストを介したＴ細胞の共刺激により抗腫瘍活性が促進されており、この抗腫瘍活性は場合によっては永続的であり、後の腫瘍曝露（ｔｕｍｏｒ  ｃｈａｌｌｅｎｇｅ）に対して持続性の防御をもたらした（Ｗｅｉｎｂｅｒｇ  ｅｔ  ａｌ，２０００）。ＯＸ４０アゴニストによる腫瘍増殖阻害にはＴｒｅｇ細胞の阻害およびエフェクターＴ細胞の共刺激が必要であることが分かった（Ｐｉｃｏｎｅｓｅ  ｅｔ  ａｌ，２００８）。
【００８０】
抗ＰＤ−Ｌ１抗体
ＭＥＤＩ４７３６は、ＰＤ−Ｌ１に対して選択的であり、ＰＤ−１およびＣＤ８０受容体へのＰＤ−Ｌ１の結合を遮断する典型的な抗ＰＤ−Ｌ１抗体である。ＭＥＤＩ４７３６は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏでのヒトＴ細胞活性化のＰＤ−Ｌ１媒介性抑制を緩和することができ、Ｔ細胞依存性機序を介して異種移植片モデルにおける腫瘍増殖を阻害する。
【００８１】
本明細書に提供した方法で使用するためのＭＥＤＩ４７３６（またはそのフラグメント）に関する情報は、その開示が参照により全体として本明細書に組み込まれる米国特許第８，７７９，１０８号明細書に見いだすことができる。ＭＥＤＩ４７３６のフラグメント結晶可能（Ｆｃ）ドメインは、補体成分Ｃ１ｑおよび抗体依存性細胞媒介性細胞傷害性（ＡＤＣＣ）を媒介する役割を果たすＦｃγ受容体への結合を低下させるＩｇＧ１重鎖の定常ドメイン内に三重突然変異を含有する。
【００８２】
本明細書に提供した方法で使用するためのＭＥＤＩ４７３６およびその抗原結合フラグメントは、重鎖および軽鎖または重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含む。特定の態様では、本明細書に提供した方法で使用するためのＭＥＤＩ４７３６またはその抗原結合フラグメントは、軽鎖可変領域および重鎖可変領域を含む。特定の態様では、本明細書に提供した方法で使用するためのＭＥＤＩ４７３６またはそのフラグメントは、重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含み、ここで、重鎖可変領域は上記に示したＫａｂａｔ定義のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３配列を含み、軽鎖可変領域は上記に示したＫａｂａｔ定義のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３配列を含む。当業者であれば、当業者に公知のＣｈｏｔｈｉａ定義、Ａｂｍ定義または他のＣＤＲ定義を容易に同定することができるであろう。特定の態様では、本明細書に提供した方法で使用するためのＭＥＤＩ４７３６またはそのフラグメントは、参照により全体として本明細書に組み込まれる米国特許第８，７７９，１０８号明細書に開示された２．１４Ｈ９ＯＰＴ抗体の可変重鎖および可変軽鎖ＣＤＲ配列を含む。
【００８３】
抗ＣＴＬＡ−４抗体
ＣＴＬＡ−４に特異的に結合してＣＴＬＡ−４活性を特異的に阻害する抗体は、抗腫瘍免疫反応を増強するために有用である。本明細書に提供した方法で使用するためのトレメリムマブ（またはその抗原結合フラグメント）に関する情報は、その開示が参照により全体として本明細書に組み込まれる米国特許第６，６８２，７３６号明細書（その中では１１．２．１と記載されている）に見いだすことができる。トレメリムマブ（ＣＰ−６７５，２０６、ＣＰ−６７５、ＣＰ−６７５２０６およびチシリムマブとしても公知）は、ＣＴＬＡ−４に対して高度に選択性であり、ＣＴＬＡ−４のＣＤ８０（Ｂ７．１）およびＣＤ８６（Ｂ７．２）に対する結合を遮断するヒトＩｇＧ2モノクローナル抗体である。トレメリムマブは、ｉｎ  ｖｉｔｒｏでの免疫活性化を生じさせることが証明され、トレメリムマブにより治療された一部の患者が腫瘍退行を示していた。
【００８４】
本明細書に提供した方法で使用するためのトレメリムマブおよびその抗原結合フラグメントは、重鎖および軽鎖または重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含む。特定の態様では、本明細書に提供した方法で使用するためのトレメリムマブまたはその抗原結合フラグメントは、本明細書の上記で示したアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域および本明細書の上記で示した重鎖可変領域を含む。特定の態様では、本明細書に提供した方法で使用するためのトレメリムマブまたはそのフラグメントは、重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含み、ここで、重鎖可変領域は上記に示したＫａｂａｔ定義のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３配列を含み、軽鎖可変領域は上記に示したＫａｂａｔ定義のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３配列を含む。当業者であれば、当業者に公知のＣｈｏｔｈｉａ定義、Ａｂｍ定義または他のＣＤＲ定義を容易に同定することができるであろう。特定の態様では、本明細書に提供した方法で使用するためのトレメリムマブまたはそのフラグメントは、参照により全体として本明細書に組み込まれる米国特許第６，６８２，７３６号明細書に開示された１１．２．１抗体の可変重鎖および可変軽鎖ＣＤＲ配列を含む。
【００８５】
他の抗ＣＴＬＡ−４抗体は、例えば、米国特許出願公開第２００７０２４３１８４号明細書に記載されている。１つの実施形態では、抗ＣＴＬＡ−４抗体は、ＭＤＸ−０１０；ＢＭＳ−７３４０１６とも称されるイピリムマブである。
【００８６】
ＯＸ４０アゴニスト
ＯＸ４０アゴニストは、抗原によるプライミング中にまたはこのプライミング直後にＣＤ４+Ｔ細胞上のＯＸ４０レセプターと相互作用し、その結果、抗原に対するＣＤ４+Ｔ細胞の応答が増加する。抗原特異的なＣＤ４+Ｔ細胞上のＯＸ４０レセプターとＯＸ４０アゴニストとの相互作用により、抗原のみに対する応答と比較してＴ細胞の増殖を増加させることができる。抗原に対する応答の上昇は、ＯＸ４０アゴニストの非存在下と比べて実質的に長い期間にわたり維持され得る。そのため、ＯＸ４０アゴニストを介した刺激は、抗原（例えば腫瘍細胞）のＴ細胞認識をブーストすることにより、抗原特異的な免疫応答を増強する。ＯＸ４０アゴニストは例えば米国特許第６，３１２，７００号明細書、米国特許第７，５０４，１０１号明細書、米国特許第７，６２２，４４４号明細書および米国特許第７，９５９，９２５号明細書で説明されており、これらはそれらの全体が参照により本明細書に組み込まれる。がんの処置でそのようなアゴニストを使用する方法は、例えば国際公開第２０１３／１１９２０２号パンフレットおよび国際公開第２０１３／１３０１０２号パンフレットで説明されており、これらはそれぞれ、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。
【００８７】
ＯＸ４０アゴニストとして、ＯＸ４０結合分子、例えば結合ポリペプチド、例えばＯＸ４０リガンド（「ＯＸ４０Ｌ」）またはそのＯＸ４０結合フラグメント、多様体もしくは誘導体、例えば可溶性細胞外リガンドドメインおよびＯＸ４０Ｌ融合タンパク質、ならびに抗ＯＸ４０抗体（例えば、ヒト化モノクローナル抗体等のモノクローナル抗体）またはその抗原結合フラグメント、多様体もしくは誘導体が挙げられるがこれらに限定されない。抗ＯＸ４０モノクローナル抗体の例が例えば米国特許第５，８２１，３３２号明細書および米国特許第６，１５６，８７８号明細書で説明されており、これらの開示はそれらの全体が参照により本明細書に組み込まれる。所定の実施形態では、抗ＯＸ４０モノクローナル抗体は、Ｗｅｉｎｂｅｒｇ，Ａ．Ｄ．，ｅｔ  ａｌ．Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ  ２９，５７５−５８５（２００６）で説明されている９Ｂ１２またはその抗原結合フラグメント、多様体もしくは誘導体であり、この文献はその全体が参照により本明細書に組み込まれる。
【００８８】
所定の態様では、本開示は、ヒト化抗ＯＸ４０抗体またはその抗原結合フラグメントを提供し、この抗原フラグメントは抗体ＶＨおよび抗体ＶＬを含み、このＶＬは、参照アミノ酸配列
【化９】
2018521008.tif 000011
と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％または１００％同一のアミノ酸配列を含む。
【００８９】
１つの態様では、本開示は、ヒト化抗ＯＸ４０抗体またはその抗原結合フラグメントを提供し、この抗原結合フラグメントは抗体ＶＨおよび抗体ＶＬを含み、このＶＬはアミノ酸配列
【化１０】
2018521008.tif 000012
を含み、このＶＨはアミノ酸配列
【化１１】
2018521008.tif 000013
を含む。
【００９０】
所定の態様では、本開示は、ヒト化抗ＯＸ４０抗体またはその抗原結合フラグメントを提供し、この抗原結合フラグメントは、抗体重鎖またはそのフラグメントと抗体軽鎖またはそのフラグメントとを含み、この重鎖はアミノ酸配列
【化１２】
2018521008.tif 000014
を含み、この軽鎖はアミノ酸配列
【化１３】
2018521008.tif 000015
を含む。
【００９１】
他の実施形態では、ＯＸ４０に特異的に結合する抗体またはその抗原結合フラグメントは、ｍＡｂ  ９Ｂ１２と同じＯＸ４０エピトープに結合する。
【００９２】
典型的なヒト化ＯＸ４０抗体がＭｏｒｒｉｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍａｙ  ２００７；４４（１２）：３１１２−３１２１で説明されており、下記の配列（配列番号２７）：
【化１４】
2018521008.tif 000016
を有する。
【００９３】
９Ｂ１２は、ヒトＯＸ４０（ＣＤ１３４）の細胞外ドメインに対する抗ＯＸ４０  ｍＡｂであるマウスＩｇＧ１である（Ｗｅｉｎｂｅｒｇ，Ａ．Ｄ．，ｅｔ  ａｌ．Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ  ２９，５７５−５８５（２００６））。ＯＸ４０シグナル伝達のためにアゴニスト応答を誘発する９Ｂ１２の能力、安定性、およびハイブリドーマによる９Ｂ１２の高レベル産生という理由で、抗ＯＸ４０モノクローナル抗体のパネルから９Ｂ１２を選択した。臨床的応用での使用の場合、９Ｂ１２  ｍＡｂをリン酸緩衝生理食塩水、ｐＨ７．０で平衡化し、９Ｂ１２  ｍＡｂの濃度をダイアフィルトレーションで５．０ｍｇ／ｍｌに調節する。
【００９４】
「ＯＸ４０リガンド」（「ＯＸ４０」）（または、腫瘍壊死因子リガンドスーパーファミリーのメンバー４、ｇｐ３４、ＴＡＸ転写活性化糖タンパク質−１（ＴＡＸ  ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎａｌｌｙ−ａｃｔｉｖａｔｅｄ  ｇｌｙｃｏｐｒｏｔｅｉｎ−１）およびＣＤ２５２と様々に命名される）は主に抗原提示細胞（ＡＰＣ）上で見出され、活性化されたＢ細胞上で、樹枝状細胞（ＤＣ）上で、ランゲルハンス細胞上で、形質細胞様（ｐｌａｍａｃｙｔｏｉｄ）ＤＣ上でおよびマクロファージ上で誘発され得る（Ｃｒｏｆｔ，Ｍ．，（２０１０）Ａｎｎ  Ｒｅｖ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ２８：５７−７８）。他の細胞（活性化されたＴ細胞、ＮＫ細胞、肥満細胞、内皮細胞および平滑筋細胞等）は、炎症性サイトカインに応答してＯＸ４０Ｌを発現することができる（同上）。ＯＸ４０ＬはＯＸ４０レセプターに特異的に結合する。ヒトタンパク質は米国特許第６，１５６，８７８号明細書で説明されている。マウスＯＸ４０Ｌは米国特許第５，４５７，０３５号明細書で説明されている。ＯＸ４０Ｌは細胞の表面上で発現され、細胞内ドメイン、膜貫通ドメインおよび細胞外レセプター結合ドメインを含む。例えば米国特許第５，４５７，０３５号明細書、米国特許第６，３１２，７００号明細書、米国特許第６，１５６，８７８号明細書、米国特許第６，２４２，５６６号明細書、米国特許第６，５２８，０５５号明細書、米国特許第６，５２８，６２３号明細書、米国特許第７，０９８，１８４号明細書および米国特許第７，１２５，６７０号明細書で説明されているように、細胞内ドメインおよび膜貫通ドメインを欠失させることにより、機能的に活性な可溶型のＯＸ４０Ｌを生成することができ、これらの明細書の開示は全ての目的のために本明細書に組み込まれる。機能的に活性な形態のＯＸ４０Ｌは、ＯＸ４０に特異的に結合する能力を保持する形態であり、即ち、ＯＸ４０「レセプター結合ドメイン」を持つ形態である。一例は、ヒトＯＸ４０Ｌのアミノ酸５１〜１８３である。ＯＸ４０Ｌ分子または誘導体のＯＸ４０に特異的に結合する能力を測定する方法を下記で論じる。ＯＸ４０Ｌおよびその誘導体（例えば、ＯＸ４０結合ドメインを含む誘導体）を製造する方法および使用する方法が米国特許第６，１５６，８７８号明細書、米国特許第６，２４２，５６６号明細書、米国特許第６，５２８，０５５号明細書、米国特許第６，５２８，６２３号明細書、米国特許第７，０９８，１８４号明細書および米国特許第７，１２５，６７０号明細書で説明されており、これらの明細書には、ヒト免疫グロブリン（「Ｉｇ」）Ｆｃ領域等の他のペプチドに結合した可溶型のＯＸ４０Ｌを含むタンパク質も説明されており、このタンパク質は、培養細胞からのＯＸ４０Ｌリガンドの精製を容易にするためにまたは哺乳動物へのｉｎ  ｖｉｖｏでの投与後に分子の安定性を増強するために作製され得る（米国特許第５，４５７，０３５号明細書および米国特許第７，９５９，９２５号明細書も参照されたい。これらの両方はそれらの全体が参照により本明細書に組み込まれる）。
【００９５】
本明細書で使用する場合、用語「ＯＸ４０Ｌ」には、ＯＸ４０リガンド全体、可溶性ＯＸ４０リガンド、およびＯＸ４０リガンドの機能的に活性な部分が含まれる。また、ＯＸ４０Ｌの定義には、天然に存在するＯＸ４０リガンド分子とはアミノ酸配列が異なるがＯＸ４０レセプターに特異的に結合する能力を保持するＯＸ４０リガンド多様体も含まれる。そのような多様体が、米国特許第５，４５７，０３５号明細書、米国特許第６，１５６，８７８号明細書、米国特許第６，２４２，５６６号明細書、米国特許第６，５２８，０５５号明細書、米国特許第６，５２８，６２３号明細書、米国特許第７，０９８，１８４号明細書および米国特許第７，１２５，６７０号明細書で説明されている。関連する実施形態では、本開示は、ＯＸ４０に特異的に結合する能力（例えばアミノ酸５１〜１８３）を失っているＯＸ４０Ｌの変異体を提供し、この変異体では、ヒトＯＸ４０Ｌのレセプター結合ドメインの１８０位でフェニルアラインがアラニンに置き換えられている（Ｆ１８０Ａ）。
【００９６】
ＯＸ４０アゴニストは、ＯＸ４０Ｌの１つまたは複数のドメインが１つまたは複数のさらなるタンパク質ドメインに共有結合している融合タンパク質を含む。ＯＸ４０アゴニストとして使用され得る典型的なＯＸ４０Ｌ融合タンパク質が米国特許第６，３１２，７００号明細書で説明されており、この開示はその全体が参照により本明細書に組み込まれる。１つの実施形態では、ＯＸ４０アゴニストは、多量体（例えば三量体または六量体）ＯＸ４０Ｌ融合タンパク質へと自己集合するＯＸ４０Ｌ融合ポリペプチドを含む。そのような融合タンパク質が例えば米国特許第７，９５９，９２５号明細書で説明されており、この明細書はその全体が参照により本明細書に組み込まれる。多量体ＯＸ４０Ｌ融合タンパク質は、このタンパク質の高度に安定な三量体および六量体へと自発的に集合する能力に起因して、対象（特にヒト対象）中での抗原特異的免疫応答の増強での効力の増大を示す。
【００９７】
別の実施形態では、多量体型へと集合することができるＯＸ４０アゴニストは融合ポリペプチドを含み、この融合ポリペプチドは、Ｎ末端からＣ末端への方向に、免疫グロブリンドメイン（この免疫グロブリンドメインはＦｃドメインを含む）と、三量体化ドメイン（この三量体化ドメインはコイルドコイル三量体化ドメインを含む）と、レセプター結合ドメイン（このレセプター結合ドメインはＯＸ４０レセプター結合ドメインであり、例えばＯＸ４０ＬまたはそのＯＸ４０結合フラグメント、多様体もしくは誘導体である）とを含み、この融合ポリペプチドは、三量体融合タンパク質へと自己集合することができる。１つの態様では、多量体型へと集合することができるＯＸ４０アゴニストは、ＯＸ４０レセプターに結合することができる、および少なくとも１種のＯＸ４０媒介性活性（ｍｅｄｉａｔｅｄ  ａｃｔｉｖｉｔｙ）を刺激することができる。所定の態様では、ＯＸ４０アゴニストはＯＸ４０リガンドの細胞外ドメインを含む。
【００９８】
多量体型へと集合することができるＯＸ４０アゴニストの三量体化ドメインは、個々のＯＸ４０Ｌ融合ポリペプチド分子の三量体タンパク質への自己集合を促進にするのに役立つ。そのため、三量体化ドメインを有するＯＸ４０Ｌ融合ポリペプチドは、三量体ＯＸ４０Ｌ融合タンパク質へと自己集合する。１つの態様では、三量体化ドメインはイソロイシンジッパードメインまたは他のコロイドコイルポリペプチド構造である。典型的なコロイドコイル三量体化ドメインとして、ＴＲＡＦ２（ＧＥＮＢＡＮＫ（登録商標）アクセッション番号Ｑ１２９３３、アミノ酸２９９〜３４８；トロンボスポンジン１（アクセッション番号ＰＯ７９９６、アミノ酸２９１〜３１４；マトリリン−４（アクセッション番号Ｏ９５４６０、アミノ酸５９４〜６１８；ＣＭＰ（マトリリン−１）（アクセッション番号ＮＰ−００２３７０、アミノ酸４６３〜４９６；ＨＳＦ１（アクセッション番号ＡＡＸ４２２１１、アミノ酸１６５〜１９１；およびキュビリン（アクセッション番号ＮＰ−００１０７２、アミノ酸１０４〜１３８が挙げられる。所定の具体的な態様では、三量体化ドメインとして、ＴＲＡＦ２三量体化ドメイン、マトリリン−４三量体化ドメインまたはこれらの組み合わせが挙げられる。
【００９９】
ＭＥＤＩ６３８３は、ＴＮＦＲスーパーファミリのメンバーであるヒトＯＸ４０レセプターに特異的に結合するおよびこのヒトＯＸ４０レセプターによるシグナル伝達を生じさせるヒトＯＸ４０リガンドＩｇＧ４Ｐ融合タンパク質である。ＭＥＤＩ６３８３は下記の３種の別々のドメインで構成されている：（１）ホモ三量体を形成するおよびＯＸ４０レセプターに結合するヒトＯＸ４０リガンド細胞外レセプター結合ドメイン（ＲＢＤ）、（２）ＯＸ４０リガンドＲＢＤのホモ三量体構造を安定化させるＴＮＦＲ関連因子２に由来するイソロイシンジッパー三量体化ドメイン、ならびに（３）ＯＸ４０レセプターに結合した場合に融合タンパク質のＦｃγレセプターのクラスター形成を容易にするおよび２組のＯＸ４０リガンドＲＢＤホモ三量体の安定性を促進するためにヒンジ領域（ＩｇＧ４Ｐ）中でセリンからプロリンへの置換を含むヒトＩｇＧ４フラグメント結晶化可能ガンマ（Ｆｃγ）ドメイン。
【０１００】
特定の実施形態では、ＯＸ４０アゴニストはその血清半減期を増加させるために改変されている。例えば、異種分子（例えば血清アルブミン、抗体Ｆｃ領域またはＰＥＧ）へのコンジュゲーションにより、ＯＸ４０アゴニストの血清半減期を増加させることができる。所定の実施形態では、ＯＸ４０アゴニストを他の治療薬または毒素にコンジュゲートさせて、免疫複合体および／または融合タンパク質を形成することができる。所定の態様では、ＯＸ４０アゴニストを、投与が容易となるようにおよび活性剤の安定性を促進するように製剤化することができる。
【０１０１】
抗体
ＣＴＬＡ−４およびＰＤ−Ｌ１に選択的に結合するならびにＣＴＬＡ−４およびＰＤ−Ｌ１の結合または活性化を阻害する抗体は、本発明の方法で有用である。ＯＸ４０に選択的に結合するおよびＯＸ４０を活性化する抗体は、本発明の方法で有用である。
【０１０２】
一般に、抗体は、例えば従来のハイブリドーマ技術（Ｋｏｈｌｅｒ  ａｎｄ  Ｍｉｌｓｔｅｉｎ（１９７５）Ｎａｔｕｒｅ，２５６：４９５−４９９）、組換えＤＮＡ法（米国特許第４，８１６，５６７号明細書）または抗体、ライブラリーを用いて実施されるファージ提示法（Ｃｌａｃｋｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．（１９９１）Ｎａｔｕｒｅ，３５２：６２４−６２８；Ｍａｒｋｓ  ｅｔ  ａｌ．（１９９１）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，２２２：５８１−５９７）を使用して作成できる。他の抗体生成技術については、Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，ｅｄｓ．Ｈａｒｌｏｗ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，１９８８を参照されたい。本発明は、いずれかの特定の入手源、起源種、製造方法に限定されない。
【０１０３】
免疫グロブリンとしても公知である無傷抗体は、典型的にはそれぞれおよそ２５ｋＤａの２本の軽（Ｌ）鎖と、それぞれおよそ５０ｋＤａの２本の重（Ｈ）鎖とから構成される四量体グリコシル化タンパク質である。λ鎖およびκ鎖と指定される２つのタイプの軽鎖は、抗体内で見いだされる。重鎖の定常ドメインのアミノ酸配列に依存して、免疫グロブリンは５つの主要なクラス：Ａ、Ｄ、Ｅ、ＧおよびＭに指定することができ、これらのうちのいくつかは、さらにサブクラス（アイソタイプ）、例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１およびＩｇＡ２に分類することができる。
【０１０４】
様々なクラスの免疫グロブリンのサブユニット構造および三次元配置は、当技術分野において周知である。抗体構造の総説については、上記のＨａｒｌｏｗらを参照されたい。簡単には、各軽鎖は、１つのＮ末端可変ドメイン（ＶＬ）および１つの定常ドメイン（ＣＬ）から構成される。各重鎖は、１つのＮ末端可変ドメイン（ＶＨ）、３または４つの定常ドメイン（ＣＨ）および１つのヒンジ領域から構成される。ＶＨに最も近位のＣＨドメインは、ＣＨ１と指名されている。ＶＨおよびＶＬドメインは、相補性決定領域（ＣＤＲ）と呼ばれる超可変配列の３つの領域にとっての足場を形成するフレームワーク領域（ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３およびＦＲ４）と呼ばれる相当に保存された配列の４つの領域からなる。ＣＤＲは、抗原との特異的相互作用の役割を果たす大多数の残基を含有する。３つのＣＤＲは、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３と呼ばれる。重鎖上のＣＤＲ構成成分はＨ１、Ｈ２およびＨ３と呼ばれるが、他方では、軽鎖上のＣＤＲ構成成分はそれに合わせてＬ１、Ｌ２およびＬ３と呼ばれる。ＣＤＲ３および特にＨ３は、抗原結合ドメイン内の分子多様性の最大の起源である。例えば、Ｈ３は、２個のアミノ酸残基のように短い場合があるか、または２６超の場合がある。
【０１０５】
Ｆａｂフラグメント（抗原結合フラグメント）は、定常領域間のジスルフィド結合によって共有的に結合されたＶＨ−ＣＨ１およびＶＬ−ＣＬドメインからなる。Ｆｖ内の非共有結合ＶＨおよびＶＬドメインが宿主細胞内で共発現した場合に解離する傾向を克服するために、いわゆる一本鎖（ｓｃ）Ｆｖフラグメント（ｓｃＦｖ）を構築することができる。ｓｃＦｖ内では、柔軟性および適正に長いポリペプチドはＶＨのＣ末端をＶＬのＮ末端に、またはＶＬのＣ末端をＶＨのＮ末端へ結合させる。最も一般には、１５残基（Ｇｌｙ４Ｓｅｒ）３ペプチド（配列番号２８）は、リンカーとして使用されるが、他のリンカーも当技術分野において公知である。
【０１０６】
抗体多様性は、可変領域および様々な体性事象の組合せアセンブリをコードする複数の生殖系遺伝子の結果である。体性事象には、完全ＶＨ領域を作成するための多様性（Ｄ）を備える可変遺伝子区分と接合（Ｊ）遺伝子区分との組合せ、ならびに完全ＶＬ領域を作成するための可変遺伝子および接合遺伝子区分の組合せが含まれる。組合せ方法自体は不正確であり、Ｖ（Ｄ）Ｊ接合部でのアミノ酸の消失または付加を生じさせる。これらの多様性の機序は、抗原曝露前に発達中のＢ細胞内で発生する。抗原刺激後、Ｂ細胞内で発現した抗体遺伝子は体性突然変異を受ける。
【０１０７】
生殖系遺伝子区分の推定数、これらの区分の無作為組合せおよび無作為ＶＨ−ＶＬ対合に基づくと１．６×１０7種までの抗体を作成することができた（Ｆｕｎｄａｍｅｎｔａｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，３ｒｄ  ｅｄ．，ｅｄ．Ｐａｕｌ，Ｒａｖｅｎ  Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，Ｎ．Ｙ．，１９９３）。抗体多様性（例えば、体性突然変異）の原因となる他の方法を考慮に入れると、１×１０１０より多い種の異なる抗体を潜在的に生成することができたと考えられる（Ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎ  Ｇｅｎｅｓ，２ｎｄ  ｅｄ．，ｅｄｓ．Ｊｏｎｉｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，Ｃａｌｉｆ．，１９９５）。抗体多様性には多数の工程が関係しているため、独立して生成された抗体がＣＤＲ内で同一またはさらには実質的に類似したアミノ酸配列を有する可能性は極めて低い。
【０１０８】
本明細書には、典型的な抗ＣＴＬＡ−４、および抗ＰＤ−Ｌ１  ＣＤＲが提供される。ＣＤＲを運ぶための構造は、一般にはＣＤＲが天然型ＶＨおよびＶＬのＣＤＲに対応する場所に位置している抗体重鎖もしくは軽鎖またはその一部分であろう。免疫グロブリン可変ドメインの構造および場所は、例えば、Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，Ｎｏ．９１−３２４２，Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ  Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎｓ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，Ｍｄ．，１９９１に記載されたように決定することができる。
【０１０９】
本発明の抗体（例えば、抗ＣＴＬＡ−４、抗ＰＤ−Ｌ１、抗ＯＸ４０）は、任意選択的に抗体定常領域またはそれらの部分を含むことができる。例えば、ＶＬドメインは、そのＣ末端でヒトＣκまたはＣλ鎖を含む抗体軽鎖定常ドメインに付着している場合がある。同様に、ＶＨドメインに基づく特異的抗原結合ドメインは任意の抗体アイソトープ、例えば、ＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＥおよびＩｇＭ、ならびにＩｇＧ１およびＩｇＧ４を含むがそれらに限定されないアイソトープサブクラスのいずれかに由来する免疫グロブリン重鎖の全部または一部に付着している場合がある。
【０１１０】
当業者であれば、本発明の抗体は、ＣＴＬＡ−４およびＰＤ−１と若干相違するタンパク質を検出、測定および阻害するために使用できることを認識するであろう。抗体は、標的タンパク質が本明細書に記載した隣接アミノ酸の少なくとも１００、８０、６０、４０または２０の任意の配列と少なくとも約６０％、７０％、８０％、９０％、９５％以上同一である配列を含む限り、結合の特異性を維持すると見込まれている。同一性率は、例えば、Ａｌｔｓｈｕｌ  ｅｔ  ａｌ．（１９９０）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，２１５：４０３−４１０，ｔｈｅ  ａｌｇｏｒｉｔｈｍ  ｏｆ  Ｎｅｅｄｌｅｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．（１９７０）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，４８：４４４−４５３に記載されたＢａｓｉｃ  Ｌｏｃａｌ  Ａｌｉｇｎｍｅｎｔ  Ｔｏｏｌ（ＢＬＡＳＴ）またはＭｅｙｅｒｓ  ｅｔ  ａｌ．（１９８８）Ｃｏｍｐｕｔ．Ａｐｐｌ．Ｂｉｏｓｃｉ．，４：１１−１７のアルゴリズムなどの標準整列アルゴリズムによって決定される。
【０１１１】
配列相同性分析に加えて、エピトープマッピング（例えば、Ｅｐｉｔｏｐｅ  Ｍａｐｐｉｎｇ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ，ｅｄ．Ｍｏｒｒｉｓ，Ｈｕｍａｎａ  Ｐｒｅｓｓ，１９９６を参照されたい）と、二次および三次構造分析とを実施すると、開示された抗体および抗原とそれらとの錯体とによって推定される特異的３Ｄ構造を同定することができる。そのような方法には、Ｘ線結晶学（Ｅｎｇｓｔｏｍ（１９７４）Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｅｘｐ．Ｂｉｏｌ．，１１：７−１３）および本出願に開示した抗体の仮想表現のコンピューターモデリング（Ｆｌｅｔｔｅｒｉｃｋ  ｅｔ  ａｌ．（１９８６）Ｃｏｍｐｕｔｅｒ  Ｇｒａｐｈｉｃｓ  ａｎｄ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｍｏｄｅｌｉｎｇ，ｉｎ  Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｃｏｍｍｕｎｉｃａｔｉｏｎｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ，Ｎ．Ｙ．）が含まれるがそれらに限定されない。
【０１１２】
誘導体
本発明の抗体（例えば、抗ＣＴＬＡ−４、抗ＰＤ−Ｌ１、抗ＯＸ４０）は、それらの標的に特異的に結合する能力を維持しているこれらの配列の変異体を含むことができる。そのような変異体は、当技術分野において周知である技術を使用する当業者により、これらの抗体の配列から導出されることができる。例えば、アミノ酸置換、欠失または付加は、ＦＲ内および／またはＣＤＲ内で作成することができる。ＦＲ内の変化は、通常、抗体の安定性および免疫原性を改善するために設計されるが、ＣＤＲ内の変化は、典型的には抗体のその標的に対する親和性を高めるために設計される。ＦＲの変異体は、天然型免疫グロブリンアロタイプをさらに含んでいる。そのような親和性を高める変化は、ＣＤＲを変化させる工程および抗体のその標的に対する親和性を試験する工程を含むルーチン技術によって経験的に決定することができる。例えば、保存的アミノ酸置換は、本明細書に開示したＣＤＲのいずれか１つで作成できる。様々な変化は、Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，２ｎｄ  ｅｄ．，Ｏｘｆｏｒｄ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｐｒｅｓｓ，ｅｄ．Ｂｏｒｒｅｂａｅｃｋ，１９９５に記載された方法に従って作成できる。これらには、配列内で機能的に均等なアミノ酸残基をコードし、したがって「サイレント」変化をコードする様々なコドンの置換によって変化させられるヌクレオチド配列が含まれるがそれらに限定されない。例えば、非極性アミノ酸には、アラニン、ロイシン、イソロイシン、バリン、プロリン、フェニルアラミン、トリプトファンおよびメチオニンが含まれる。極性天然アミノ酸には、グリシン、セリン、トレオニン、システイン、チロシン、アスパラギンおよびグルタミンが含まれる。正荷電（塩基性）アミノ酸には、アルギニン、リシンおよびヒスチジンが含まれる。負荷電（酸性）アミノ酸には、アスパラギン酸およびグルタミン酸が含まれる。
【０１１３】
本発明の抗体の誘導体およびアナログは、組換え法および合成法（Ｍａｎｉａｔｉｓ（１９９０）Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ，Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，２ｎｄ  ｅｄ．，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ，Ｎ．Ｙ．，およびＢｏｄａｎｓｋｙ  ｅｔ  ａｌ．（１９９５）Ｔｈｅ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｅｐｔｉｄｅ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，２ｎｄ  ｅｄ．，Ｓｐｒｉｎｇ  Ｖｅｒｌａｇ，Ｂｅｒｌｉｎ，Ｇｅｒｍａｎｙ）を含む、当技術分野において周知である様々な技術によって作成できる。
【０１１４】
１つの実施形態では、本発明のＶＨドメインのアミノ酸配列変異体であるＶＨドメインを作成するための方法は、本明細書に開示したＶＨドメインのアミノ酸配列内に１つ以上のアミノ酸を付加する、欠失させる、置換する、または挿入する工程、任意選択的にこのように提供されたＶＨドメインを１つ以上のＶＬドメインと結合する工程、およびＶＨドメインまたはＶＨ／ＶＬの１つ以上の組合せを抗原への特異的結合について試験する工程を含む。本明細書に開示したＶＬドメインの１つ以上の配列変異体が１つ以上のＶＨドメインと結合される類似の方法を使用できる。
【０１１５】
類似のシャッフリングまたはコンビナトリアル技術もβ−ラクタマーゼ遺伝子に関連する技術について記載しているが、そのアプローチが抗体生成のために使用できることを観察しているＳｔｅｍｍｅｒ（Ｎａｔｕｒｅ（１９９４）３７０：３８９−３９１）によっても開示されている。
【０１１６】
別の実施形態では、１つ以上の選択されたＶＨおよび／またはＶＬ遺伝子のランダム突然変異導入法を使用して本明細書に開示した配列に由来する１つ以上の配列を有する新規なＶＨまたはＶＬ領域を生成することができる。１つのそのような技術であるエラープローンＰＣＲは、Ｇｒａｍ  ｅｔ  ａｌ．（Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．（１９９２）８９：３５７６−３５８０）によって記載されている。
【０１１７】
使用できる別の方法は、ＶＨまたはＶＬ遺伝子のＣＤＲに突然変異誘発を方向付けることである。そのような技術は、Ｂａｒｂａｓ  ｅｔ  ａｌ．（Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．（１９９４）９１：３８０９−３８１３）およびＳｃｈｉｅｒ  ｅｔ  ａｌ．（Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．（１９９６）２６３：５５１−５６７）によって開示されている。
【０１１８】
同様に、１つ以上または３つ全てのＣＤＲは、ある範囲のＶＨまたはＶＬドメインに移植することができ、これらはその後にＣＴＬＡ−４またはＰＤ−Ｌ１に対して特異的な抗原結合フラグメントについてスクリーニングされる。
【０１１９】
免疫グロブリン可変ドメインの一部分は本明細書に実質的に記載した少なくとも１つのＣＤＲ、および任意選択的に本明細書に規定したｓｃＦｖフラグメント由来の介在フレームワーク領域を含むであろう。その部分はＦＲ１およびＦＲ４のいずれかまたは両方の少なくとも約５０％を含むことができ、その５０％はＦＲ１のＣ末端５０％およびＦＲ４のＮ末端５０％である。可変ドメインの実質的部分のＮ末端またはＣ末端にある追加の残基は、通常、天然型可変ドメイン領域と結び付いていない残基であってよい。例えば、組換えＤＮＡ技術による抗体の構築は、クローニングまたは他の操作工程を容易にするために導入されたリンカーによってコードされるＮ末端またはＣ末端残基の導入を生じさせる可能性がある。他の操作工程には、免疫グロブリン重鎖定常領域、他の可変ドメイン（例えば、ダイアボディの生成における）または下記でより詳細に考察するタンパク性標識を含む別のタンパク質配列に可変ドメインを結合するためのリンカーの導入が含まれる。
【０１２０】
当業者であれば、本発明の抗体がＶＬまたはＶＨドメインいずれかからの単一ＣＤＲのみを含有する抗原結合フラグメントを含む可能性があることを認識するであろう。一本鎖特異的結合ドメインのいずれか１つは、例えばＣＴＬＡ−４およびＰＤ−Ｌ１に結合することができる２ドメイン特異的抗原結合フラグメントを形成することのできる相補的ドメインについてスクリーニングするために使用できる。
【０１２１】
本明細書に記載した本発明の抗体（例えば、抗ＣＴＬＡ−４および／または抗ＰＤ−Ｌ１）は、別の機能的分子、例えば、別のペプチドまたはタンパク質（アルブミン、別の抗体など）に結合させることができる。例えば、抗体は、化学的架橋結合によって、または組換え法によって結合させることができる。抗体は、さらに様々な非タンパク性ポリマー、例えば、ポリエチレングリコール、ポリプロピレングリコールまたはポリオキシアルキレンのうちの１つに、米国特許第４，６４０，８３５号明細書；同第４，４９６，６８９号明細書；同第４，３０１，１４４号明細書；同第４，６７０，４１７号明細書；同第４，７９１，１９２号明細書；または同第４，１７９，３３７号明細書に規定した方法で結合させることができる。抗体は、例えば、それらの循環中半減期を増加させるために、ポリマーへの共有結合によって化学的に修飾することができる。典型的なポリマーおよびそれらに付着させるための方法は、さらに米国特許第４，７６６，１０６号明細書；同第４，１７９，３３７号明細書；同第４，４９５，２８５号明細書および同第４，６０９，５４６号明細書に示されている。
【０１２２】
本明細書に開示した抗体は、自然パターンと異なるグリコシル化パターンを有するようにさらに変化させることができる。例えば、１つ以上の炭水化物成分を欠失させることができ、および／または１つ以上のグリコシル化部位を最初の抗体に付加することができる。本明細書に開示した抗体へのグリコシル化部位の付加は、当技術分野において公知のグリコシル化部位コンセンサス配列を含有するためにアミノ酸配列を変化させることによって遂行することができる。抗体上の炭水化物成分の数を増加させる別の手段は、抗体のアミノ酸残基へのグリコシドの化学的または酵素的カップリングによる。そのような方法は、国際公開第８７／０５３３０号パンフレットおよびＡｐｌｉｎ  ｅｔ  ａｌ．（１９８１）ＣＲＣ  Ｃｒｉｔ．Ｒｅｖ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．，２２：２５９−３０６に記載されている。抗体からの任意の炭水化物成分の除去は、例えば、Ｈａｋｉｍｕｄｄｉｎ  ｅｔ  ａｌ．（１９８７）Ａｒｃｈ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．，２５９：５２およびＥｄｇｅ  ｅｔ  ａｌ．（１９８１）Ａｎａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．，１１８：１３１ならびにＴｈｏｔａｋｕｒａ  ｅｔ  ａｌ．（１９８７）Ｍｅｔｈ．Ｅｎｚｙｍｏｌ．，１３８：３５０によって記載されたように化学的または酵素的に実施することができる。抗体は、検出可能または機能的標識を用いてタグ付けすることもできる。検出可能な標識には、従来型化学を使用してさらに抗体に付着させることもできる放射性標識、例えば１３１Ｉまたは９９Ｔｃが含まれる。検出可能な標識には、酵素標識、例えばホースラディッスペルオキシダーゼまたはアルカリホスファターゼがさらに含まれる。検出可能な標識には、化学的成分、例えば、特異的同族検出可能成分、例えば、標識アビジンへの結合を介して検出できるビオチンがさらに含まれる。
【０１２３】
ＣＤＲ配列が本明細書に規定したＣＤＲ配列とごくわずかにのみ相違する抗体は、本発明の範囲内に含まれる。典型的には、アミノ酸は、類似の電荷、疎水性または立体化学的特徴を有する関連アミノ酸によって置換される。そのような置換は、当業者の技術の範囲内に含まれるであろう。ＣＤＲとは相違して、ＦＲには抗体の結合特性に有害な影響を及ぼすことなくより実質的な変化を加えることができる。ＦＲへの変化には、非ヒト由来をヒト化する、または抗原接触もしくは結合部位を安定化するために重要である所定のフレームワーク残基を操作する工程、例えば定常領域のクラスまたはサブクラスを変化させる工程、例えば米国特許第５，６２４，８２１号明細書および同第５，６４８，２６０号明細書ならびにＬｕｎｄ  ｅｔ  ａｌ．（１９９１）Ｊ．Ｉｍｍｕｎ．１４７：２６５７−２６６２およびＭｏｒｇａｎ  ｅｔ  ａｌ．（１９９５）Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  ８６：３１９−３２４に記載されているようにＦｃ受容体結合などのエフェクター機能を変化させる可能性がある特異的アミノ酸残基を変化させる工程またはそれに定常領域が由来する種を変化させる工程が含まれるがそれらに限定されない。
【０１２４】
当業者であれば、上記に記載した修飾は全く排他的ではないこと、および多数の他の修飾が本開示の教示に照らせば当業者には明白であろうことを理解するであろう。
【０１２５】
共同療法
本発明の組み合わせを使用する（例えば本明細書で提供される抗ＣＴＬＡ−４抗体、抗ＰＤ−Ｌ１抗体またはそれらの抗原結合フラグメントとＯＸ４０アゴニストまたはその抗原結合フラグメントとを使用する）固形腫瘍を有する患者の処置により、相加効果または相乗効果を得ることができる。本明細書で使用する場合、用語「相乗」は、療法の組み合わせ（例えば、抗ＣＴＬＡ−４抗体、抗ＰＤ−Ｌ１抗体またはそれらの抗原結合フラグメントとＯＸ４０リガンド融合タンパク質との組み合わせ）を意味する。
【０１２６】
療法の組合せ（例えば、抗ＣＴＬＡ−４抗体、抗ＰＤ−Ｌ１抗体またはそれらの抗原結合フラグメントとＯＸ４０リガンド融合タンパク質との組み合わせ）の相乗効果は、充実性腫瘍を有する患者への低用量の１種以上の治療薬および／または前記治療薬の低頻度投与の使用を許容する。低用量の治療薬を利用し、および／または前記療法を低頻度で投与する能力は、充実性腫瘍の治療における前記療法の有効性を低下させることなく、対象への前記療法の投与に関連する毒性を減少させる。さらに、相乗効果は、充実性腫瘍の管理、治療または緩和における治療薬の改良された有効性を生じさせることができる。治療薬の組合せの相乗効果は、いずれかの単剤療法の使用に関連する有害または望ましくない副作用を回避または減少させることができる。
【０１２７】
共同療法では、抗ＣＴＬＡ−４抗体、抗ＰＤ−Ｌ１抗体またはそれらの抗原結合フラグメントとＯＸ４０リガンド融合タンパク質との組み合わせを同じ医薬組成物に任意選択で含めることができる、または１つもしくは複数の別々の医薬組成物に含めてもよい。所定の態様では、本開示における医薬組成物は薬学的に許容される非毒性の無菌担体を含み、例えば生理食塩水、非毒性緩衝液、保存料および同類のものを含む。本明細書で開示されている処置方法での使用に適した剤形が例えばＲｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ（Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏ．）１６ｔｈ  ｅｄ．（１９８０）で説明されている。
【０１２８】
キット
本発明は、抗腫瘍活性を増強するためのキットを提供する。１つの実施形態では、このキットは、抗ＣＴＬＡ−４抗体、抗ＰＤ−Ｌ１抗体およびＯＸ４０アゴニスト（例えばＯＸ４０リガンド融合タンパク質）を含む治療用組成物を含む。
【０１２９】
一部の実施形態では、キットは、治療用組成物を含有する無菌容器を含む。そのような容器は、箱、アンプル、ボトル、バイアル、チューブ、バッグ、パウチ、ブリスターパックまたは当技術分野において公知の他の好適な容器形であってよい。そのような容器は、プラスチック、グラス、ラミネート紙、金属箔または医薬品を保持するために好適な他の材料から製造することができる。
【０１３０】
必要に応じて、キットは、本発明の治療用組合せを投与するための説明書をさらに含む。特定の実施形態では、取扱説明書には、下記：治療薬の説明；抗腫瘍活性を増強するための投与スケジュールおよび投与；安全上の注意；警告；適応；禁忌；過量投与に関する情報；有害反応；動物薬理学；臨床試験および／または参考文献のうちの少なくとも１つが含まれる。取扱説明書は、（存在する場合）容器上に直接的に、または容器に貼り付けられたラベルとして、または容器内もしくは容器とともに提供される別個のシート、パンフレット、カードもしくはホルダーとして印刷されてよい。
【０１３１】
本発明の実施は、他に特に指示しない限り、当業者の知識範囲内に明確に含まれる分子生物学（組換え技術を含む）、微生物学、細胞生物学、生化学および免疫学の従来型技術を使用する。そのような技術は、文献、例えば、“Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ”，ｓｅｃｏｎｄ  ｅｄｉｔｉｏｎ ADDIN ENRfu （Ｓａｍｂｒｏｏｋ，１９８９）；“Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ” ADDIN ENRfu （Ｇａｉｔ，１９８４）；“Ａｎｉｍａｌ  Ｃｅｌｌ  Ｃｕｌｔｕｒｅ” ADDIN ENRfu （Ｆｒｅｓｈｎｅｙ，１９８７）；“Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ” ADDIN ENRfu   “Ｈａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ” ADDIN ENRfu （Ｗｅｉｒ，１９９６）；“Ｇｅｎｅ  Ｔｒａｎｓｆｅｒ  Ｖｅｃｔｏｒｓ  ｆｏｒ  Ｍａｍｍａｌｉａｎ  Ｃｅｌｌｓ” ADDIN ENRfu （Ｍｉｌｌｅｒ  ａｎｄ  Ｃａｌｏｓ，１９８７）；“Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ” ADDIN ENRfu （Ａｕｓｕｂｅｌ，１９８７）；“ＰＣＲ：Ｔｈｅ  Ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ  Ｃｈａｉｎ  Ｒｅａｃｔｉｏｎ”， ADDIN ENRfu （Ｍｕｌｌｉｓ，１９９４）；“Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ” ADDIN ENRfu （Ｃｏｌｉｇａｎ，１９９１）で十分に説明されている。これらの技術は、本発明のポリヌクレオチドおよびポリペプチドの製造に適用することができ、したがって、本発明を製造および実施する際に考慮に入れることができる。下記のセクションでは、特定の実施形態のために特に有用な技術について考察する。
【０１３２】
下記の実施例は、当業者に本発明のアッセイ、スクリーニングおよび治療方法の作製方法および使用方法についての完全な開示および説明を提供できるように提示するものであり、本発明者らが本発明と見なすものの範囲を限定することは意図されていない。
【実施例】
【０１３３】
実施例１．ＯＸ４０リガンド融合タンパク質、抗ＣＴＬＡ−４抗体および抗ＰＤ−Ｌ１抗体の組み合わせは、同系モデルにおいてがん細胞株の増殖を阻害した
ｍＯＸ４０Ｌ  ＦＰ（マウスＯＸ４０リガンド融合タンパク質）、抗ＰＤ−Ｌ１（１０Ｆ．９Ｇ２）および抗ＣＴＬＡ−４（９Ｄ９）の抗腫瘍活性を、マウス同系肉腫モデルであるＭＣＡ２０５において単剤療法、二重併用療法または三重併用療法として評価した。１０Ｆ．９Ｇ２および９Ｄ９と組み合わせたｍＯＸ４０Ｌ  ＦＰの投与により、コントロール物質または上記薬剤のいずれかのみまたは二重併用の投与と比べて大きい抗腫瘍活性が生じた。
【０１３４】
被験物質を下記の通りに得た：抗ＣＴＬＡ−４（９Ｄ９、ＢｉｏＸｃｅｌｌ、Ｗｅｓｔ  Ｌｅｂａｎｏｎ、ＮＨ）、抗ＰＤ−Ｌ１（１０Ｆ．９Ｇ２、ＢｉｏＸｃｅｌｌ、Ｗｅｓｔ  Ｌｅｂａｎｏｎ、ＮＨ）およびＯＸ４０Ｌ  ＦＰ（マウスＯＸ４０Ｌ融合タンパク質、ＭｅｄＩｍｍｕｎｅ、Ｇａｉｔｈｅｒｓｂｕｒｇ、ＭＤ）。ＭＥＤＩ６３８３、ＭＥＤＩ４７３６およびトレメリムマブはそれぞれ、マウスのＯＸ４０、ＰＤ−Ｌ１またはＣＴＬＡ−４を認識しない。マウスＯＸ４０に結合し、ＯＸ４０シグナル伝達を生じさせるマウスＯＸ４０リガンドＩｇＧ１融合タンパク質（ｍＯＸ４０Ｌ  ＦＰ）を生成し、ＭＥＤＩ６３８３の代わりのマウスＯＸ４０アゴニストとして使用した。１０Ｆ．９Ｇ２はマウスＰＤ−Ｌ１に対する市販のラットＩｇＧ２ｂ抗体であり、９Ｄ９はマウスＣＴＬＡ−４に対する市販のマウスＩｇＧ２ｂ抗体である。従って、効果および／または活性は、ヒトにおけるもの（例えばヒト抗体、ヒトアミノ酸配列等を使用する場合）に対応すると予想される。コントロール物質を下記の通りに得た：ＯＸ４０Ｌ  ＦＰ  Ｙ１８２Ａ（ＹからＡへのアミノ酸置換を有するマウスＯＸ４０リガンド融合タンパク質、ＭｅｄＩｍｍｕｎｅ、Ｇａｉｔｈｅｒｓｂｕｒｇ、ＭＤ）、マウスＩｇＧ２ｂアイソタイプコントロール（ＭＰＣ−１１、ＢｉｏＸｃｅｌｌ、Ｗｅｓｔ  Ｌｅｂａｎｏｎ、ＮＨ）およびラットＩｇＧ２ｂアイソタイプコントロール（ＭＰＣ−１１、ＢｉｏＸｃｅｌｌ、Ｗｅｓｔ  Ｌｅｂａｎｏｎ、ＮＨ）。Ｙ１８２Ａ変異マウスＯＸ４０ＬマウスＩｇＧ１融合タンパク質コントロールは、レセプター結合ドメイン中の１８２位での単一アミノ酸変異（ＹからＡへのアミノ酸変化）を有するｍＯＸ４０Ｌ  ＦＰを含み、このｍＯＸ４０Ｌ  ＦＰは、ｍＯＸ４０ＬのマウスＯＸ４０への結合を妨げるがｍＯＸ４０Ｌの全体構造には影響を及ぼさない。ＯＸ４０Ｌ  ＦＰ  Ｙ１８２Ａは天然のマウスＯＸ４０またはヒトＯＸ４０に結合せず、そのためＯＸ４０Ｌ：ＯＸ４０相互作用の陰性コントールとして働く。
【０１３５】
Ｃ５７ＢＬ／６マウス中でＭＣＡ２０５同系腫瘍を下記の通りに確立した。ＭＣＡ２０５細胞をＰｒｏｖｉｄｅｎｃｅ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｃｅｎｔｅｒ（Ｐｏｒｔｌａｎｄ、ＯＲ）から得て、１０％ウシ胎仔血清（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、Ｃａｒｌｓｂａｄ、ＣＡ）が補充されたＲＰＭＩ  １６４０培地（Ｒｏｓｗｅｌｌ  Ｐａｒｋ  Ｍｅｍｏｒｉａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ  １６４０培地、Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、Ｃａｒｌｓｂａｄ、ＣＡ）中で増殖させた。ＭＣＡ２０５は、化学的に誘発されたマウス軟組織肉腫腫瘍細胞である。７〜９週齢の雌のＣ５７ＢＬ／６マウス（Ｈａｒｌａｎ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｉｎｃ．、Ｉｎｄｉａｎａｐｏｌｉｓ、ＩＮ）の右脇腹への、リン酸緩衝生理食塩水０．１ｍＬに懸濁した２．５×１０5個のＭＣＡ２０５細胞の皮下（ＳＣ）注射により、同種移植を確立した。本試験では、雌のＣ５７ＢＬ／６マウス（合計１０８匹）を使用した。移植から１１日後、１つのコホート当たり１８５ｍｍ3±１ｍｍ3の平均容積まで腫瘍が増殖した後にＣ５７ＢＬ／６マウスを無作為に割り当てた。群の名称、動物の数、用量レベルおよび投与スケジュールを表１に示す。
【０１３６】
【表１】
2018521008.tif 000017
【０１３７】
全ての被験物質およびコントロール物質を腹腔内（ＩＰ）注射により投与した。動物の代替はなかった。マウスの全体的な健康状態を有害な臨床兆候に関して毎日モニタリングし、体重に関して隔週でモニタリングした。後肢の麻痺、呼吸促迫、２０％の体重減少、２０００ｍｍ3を超える腫瘍容積または潰瘍性腫瘍もしくは壊死性腫瘍が認められた場合、動物をＣＯ2で窒息させて直ちに人道的に屠殺した。全ての実験を、実験動物の人道的な扱いおよびケアに関するＡＡＡＬＡＣおよびＭｅｄＩｍｍｕｎｅ  ＩＡＣＵＣのガイドラインに従って行なった。
【０１３８】
１週間に３回または２回ノギスを使用して腫瘍を測定し、下記式：腫瘍容積＝［長さ（ｍｍ）×幅（ｍｍ）2］／２（長さをより大きいサイズと定義し、幅を長さに垂直なより小さいサイズと定義した）を使用して腫瘍容積を算出した。各群の抗腫瘍効果を腫瘍増殖阻害（ＴＧＩ）として表し、このＴＧＩを下記の通りに算出した：ＴＧＩパーセント＝（１−Ｔ／Ｃ）×１００（Ｔ＝最終投与後の処置群からの最終腫瘍容積およびＣ＝最終投与後のコントロール群からの最終腫瘍容積）。処置後に測定可能な腫瘍がなかった場合には、腫瘍増殖応答を完全応答（ＣＲ）と分類した。
【０１３９】
一方向ＡＮＯＶＡを使用して平均腫瘍容積の差異を決定した。有意なＦ検定の場合には、ＤｕｎｎｅｔｔまたはＳｉｄａｋの多重比較検定を用いた（該当する場合）。適用可能な場合、不等分散性を説明するために腫瘍容積にｌｏｇ１０変換を適用した。ｐ値＜０．０５を有意と見なした。ログランク検定を使用して対の生存曲線を比較した。多重比較にＢｏｎｆｅｒｒｏｎｉ補正を適用してファミリーワイズエラー率を制御した。分析にＰｒｉｓｍ  ６．０３  ｆｏｒ  Ｗｉｎｄｏｗｓを使用した。Ｐ値＜０．０５（未補正）を有意と見なした。
【０１４０】
単剤としてのｍＯＸ４０Ｌ  ＦＰ、抗ＣＴＬＡ−４  ｍＡｂおよび抗ＰＤ−Ｌ１  ｍＡｂによる処置群のマウスは、未処置群のマウスおよびアイソタイプコントロール群のマウスと比較してＭＣＡ２０５腫瘍細胞の増殖が低下した（表２、図１Ａ）。抗ＣＴＬＡ−４  ｍＡｂおよび抗ＰＤ−Ｌ１  ｍＡｂの組み合わせによるマウスの処置により、それぞれの各薬剤のみと比較してＭＣＡ２０５腫瘍細胞の類似のレベルの腫瘍増殖が生じた（表２、図１Ａ）。抗ＰＤ−Ｌ１  ｍＡｂまたは抗ＣＴＬＡ−４  ｍＡｂと組み合わせたｍＯＸ４０Ｌ  ＦＰによるマウスの処置は、抗ＰＤ−Ｌ１  ｍＡｂおよび抗ＣＴＬＡ−４  ｍＡｂのみまたはコントロール群と比較してＭＣＡ２０５腫瘍細胞の増殖を低下させたが、ｍＯＸ４０Ｌ  ＦＰのみと比較してＭＣＡ２０５腫瘍細胞の増殖を低下させなかった（表２、図１Ａ）。抗ＰＤ−Ｌ１  ｍＡｂおよび抗ＣＴＬＡ−４  ｍＡｂと組み合わせたｍＯＸ４０Ｌ  ＦＰによるマウスの処置は、コントロール群、各治療薬のみまたは薬剤のいずれか２つの組み合わせと比較してＭＣＡ２０５腫瘍細胞の増殖を低下させた（表２、図１Ａ）。
【０１４１】
【表２】
2018521008.tif 000018
【０１４２】
同系モデルでは、個々の動物間の応答の不均一性が観測されることが多い。しかしながら、ｍＯＸ４０Ｌ  ＦＰ、抗ＣＴＬＡ−４  ｍＡｂおよび抗ＰＤ−Ｌ１  ｍＡｂに対する応答の増加は、併用療法で使用された場合、個々の動物腫瘍増殖グラフ（図１Ｂ〜図１Ｄ）から明らかであった。未処置動物およびアイソタイプコントロール処置動物を、大きな腫瘍サイズに起因して４５日までに安楽死させた（図１Ｂ）。
【０１４３】
抗ＰＤ−Ｌ１  ｍＡｂと組み合わせた抗ＣＴＬＡ−４  ｍＡｂの投与により、同じ用量レベルでの単剤療法としてのいずれかの抗体のみによる処置と比べて（ＴＧＩの割合およびＣＲの数で定義したように）抗腫瘍活性が増加しなかった（表２、図１Ｃ）。抗ＣＴＬＡ−４  ｍＡｂで処置した１１匹のマウスのうちの０匹および抗ＰＤ−Ｌ１  ｍＡｂのみで処置した１１匹のうちの１匹と比較して、組み合わせ群における１１匹のマウスのうちの０匹で完全応答を観測した（表２）。
【０１４４】
ｍＯＸ４０Ｌ  ＦＰと組み合わせた抗ＣＴＬＡ−４  ｍＡｂの投与により、同じ用量レベルでの単剤療法としてのｍＯＸ４０Ｌ  ＦＰにみによる処置と比べて（同様のＴＧＩの割合およびＣＲの数で定義したように）抗腫瘍活性が類似しており（表２、図１Ｄ）、同じ用量レベルでの単剤療法としての抗ＣＴＬＡ−４  ｍＡｂのみによる処置と比べて（ＴＧＩの割合およびＣＲの数で定義したように）抗腫瘍活性が大きかった（表２、図１Ｄ）。抗ＣＴＬＡ−４  ｍＡｂで処置した１１匹のうちの０匹およびｍＯＸ４０Ｌ  ＦＰのみで処置した１１匹のマウスのうちの２匹と比較して、併用群では１１匹のマウスのうちの５匹で完全応答を観測した（表２）。
【０１４５】
ｍＯＸ４０Ｌ  ＦＰと一緒に組み合わせた抗ＣＴＬＡ−４  ｍＡｂおよび抗ＰＤ−Ｌ１  ｍＡｂの投与により、それぞれ同じ用量レベルでの単剤療法としての各薬剤のみによる処置または二重併用療法による処置と比べて（より高いＴＧＩおよびＣＲのより大きい数で定義したように）抗腫瘍活性が増加した（表２、図１Ｄ）。抗ＣＴＬＡ−４／ＰＤ−Ｌ１  ｍＡｂの組み合わせで処置した１１匹のうちの０匹、抗ＣＴＬＡ−４／ｍＯＸ４０Ｌ  ＦＰの組み合わせで処置した１１匹のマウスのうちの５匹および抗ＰＤ−Ｌ１／ｍＯＸ４０Ｌ  ＦＰの組み合わせで処置した１１匹のマウスのうちの３匹と比較して、三重併用群での１１匹のマウスのうちの８匹で完全応答を観測した（表２）。
【０１４６】
未処置のマウスまたはアイソタイプコントロールもしくは抗ＣＴＬＡ−４  ｍＡｂを投与したマウスはいずれも試験終了まで生存しておらず、マウスの平均生存期間はそれぞれ、２３日、２３日および２９日であった（図１Ｅ）。抗ＰＤ−Ｌ１  ｍＡｂまたはｍＯＸ４０Ｌ  ＦＰの投与により、各薬剤に関して平均生存期間が３１日に増加した。抗ＰＤ−Ｌ１  ｍＡｂおよびｍＯＸ４０Ｌ  ＦＰそれぞれの投与後、１１匹のマウスのうちの１匹および１１匹のうちの２匹が７０日目の試験終了まで生存した（図１Ｅ）。
【０１４７】
抗ＰＤ−Ｌ１  ｍＡｂと組み合わせた抗ＣＴＬＡ−４  ｍＡｂの投与により、同じ用量レベルで単剤療法として使用した場合のいずれかの抗体のみによる処置と比べて活性が増加しなかった（図１Ｆ）。２９日（抗ＣＴＬＡ−４  ｍＡｂ）および３１日（抗ＰＤ−Ｌ１  ｍＡｂ）と比較して、平均生存期間は３１日であった。いずれの動物も試験終了まで生存していなかった。
【０１４８】
ｍＯＸ４０Ｌ  ＦＰと組み合わせた抗ＣＴＬＡ−４  ｍＡｂの投与により、同じ用量レベルで単剤療法として使用した場合のいずれかの抗体のみによる処置と比較して活性が増加した（図１Ｆ）。３１日（抗ＰＤ−Ｌ１  ｍＡｂ）および３１日（ｍＯＸ４０Ｌ  ＦＰ）と比較して、平均生存期間は４５日であった。加えて、１１匹のマウスのうちの１匹（抗ＰＤ−Ｌ１  ｍＡｂ）および１１匹のマウスのうちの２匹（ｍＯＸ４０  ＦＰ）と比較して、抗ＰＤ−Ｌ１  ｍＡｂ／ｍＯＸ４０Ｌ  ＦＰ併用群での１１匹のマウスのうちの３匹が試験終了まで生存した。
【０１４９】
抗ＰＤ−Ｌ１  ｍＡｂおよびｍＯＸ４０Ｌ  ＦＰと組み合わせた抗ＣＴＬＡ−４の投与により、同じ用量レベルでのいずれかの薬剤のみによる処置または薬剤の二重併用による処置と比較して活性が増加した（図１Ｆ）。試験終了まで生存した動物の数に起因して、三重併用群の平均生存期間を算出することができなかった。加えて、抗ＣＴＬＡ−４／ＰＤ−Ｌ１  ｍＡｂの組み合わせで処置した１１匹のうちの０匹（ｐ＝０．０００２、有意）、抗ＣＴＬＡ−４／ｍＯＸ４０Ｌ  ＦＰの組み合わせで処置した１１匹のマウスのうちの５匹（ｐ＞０．０５、非有意）および抗ＰＤ−Ｌ１／ｍＯＸ４０Ｌ  ＦＰの組み合わせで処置した１１匹のマウスのうちの３匹（ｐ＝０．２１、非有意）と比較して（多重比較用のＢｏｎｆｅｒｒｏｎｉ補正を使用する生存曲線のペアワイズ比較）、三重併用群での１１匹の動物のうちの８匹が試験終了まで生存した（図１Ｆ）。
【０１５０】
他の実施形態
上記の説明から、本明細書に記載した本発明を様々な使用および条件に採用するために、それに対する変更形態および修飾形態をなし得ることは明白であろう。そのような実施形態も添付の特許請求項の範囲内に含まれる。
【０１５１】
本明細書の変量のいずれかの定義における要素のリストの列挙は、いずれかの単一要素または列挙した要素の組合せ（もしくは部分組合せ）としてのその変量の定義を含んでいる。本明細書での１つの実施形態の列挙は、任意の単一実施形態としての、または任意の他の実施形態もしくはそれらの部分と組み合わせた実施形態を含んでいる。
【０１５２】
本明細書において言及した全特許および刊行物は、各独立特許および刊行物が明確におよび個別に参照により組み込まれていると指示されたのと同程度まで参照により本明細書に組み込まれる。
【０１５３】
配列表
配列番号１  ＭＥＤＩ４７３６  ＶＬ
＞ＰＣＴ／ＵＳ２０１０／０５８００７  生物：ホモサピエンスからのＰＣＴ／ＵＳ２０１０／０５８００７＿７７  配列７７
【化１５】
2018521008.tif 000019
配列番号２  ＭＥＤＩ４７３６  ＶＨ
＞ＰＣＴ／ＵＳ２０１０／０５８００７  生物：ホモサピエンスからのＰＣＴ／ＵＳ２０１０／０５８００７＿７２配列７２
【化１６】
2018521008.tif 000020
配列番号３−ＭＥＤＩ４７３６  ＶＨ  ＣＤＲ１
＞ＰＣＴ／ＵＳ２０１０／０５８００７  生物：ホモサピエンスからのＰＣＴ／ＵＳ２０１０／０５８００７＿７３配列７３
ＲＹＷＭＳ
配列番号４−ＭＥＤＩ４７３６  ＶＨ  ＣＤＲ２
＞ＰＣＴ／ＵＳ２０１０／０５８００７  生物：ホモサピエンスからのＰＣＴ／ＵＳ２０１０／０５８００７＿７４配列７４
ＮＩＫＱＤＧＳＥＫＹＹＶＤＳＶＫＧ
配列番号５−ＭＥＤＩ４７３６  ＶＨ  ＣＤＲ３
＞ＰＣＴ／ＵＳ２０１０／０５８００７  生物：ホモサピエンスからのＰＣＴ／ＵＳ２０１０／０５８００７＿７５配列７５
ＥＧＧＷＦＧＥＬＡＦＤＹ
配列番号６−ＭＥＤＩ４７３６  ＶＬ  ＣＤＲ１
＞ＰＣＴ／ＵＳ２０１０／０５８００７  生物：ホモサピエンスからのＰＣＴ／ＵＳ２０１０／０５８００７＿７８配列７８
ＲＡＳＱＲＶＳＳＳＹＬＡ
配列番号７−ＭＥＤＩ４７３６  ＶＬ  ＣＤＲ２
＞ＰＣＴ／ＵＳ２０１０／０５８００７  生物：ホモサピエンスからのＰＣＴ／ＵＳ２０１０／０５８００７＿７９配列７９
ＤＡＳＳＲＡＴ
配列番号８−ＭＥＤＩ４７３６  ＶＬ  ＣＤＲ３
＞ＰＣＴ／ＵＳ２０１０／０５８００７  生物：ホモサピエンスからのＰＣＴ／ＵＳ２０１０／０５８００７＿８０配列８０
ＱＱＹＧＳＬＰＷＴ
配列番号９  トレメリムマブ
＞米国特許第６，６８２，７３６号明細書からの配列番号２２
【化１７】
2018521008.tif 000021
配列番号１０  トレメリムマブ  ＶＨ
＞米国特許第６，６８２，７３６号明細書からの配列番号９
【化１８】
2018521008.tif 000022
配列番号１１−トレメリムマブ  ＶＨ  ＣＤＲ１
ＧＦＴＦＳＳＹＧＭＨ
配列番号１２−トレメリムマブ  ＶＨ  ＣＤＲ２
ＶＩＷＹＤＧＳＮＫＹＹＡＤＳＶ
配列番号１３−トレメリムマブ  ＶＨ  ＣＤＲ３
ＤＰＲＧＡＴＬＹＹＹＹＹＧＭＤＶ
配列番号１４−トレメリムマブ  ＶＬ  ＣＤＲ１
ＲＡＳＱＳＩＮＳＹＬＤ
配列番号１５−トレメリムマブ  ＶＬ  ＣＤＲ２
ＡＡＳＳＬＱＳ
配列番号１６−トレメリムマブ  ＶＬ  ＣＤＲ３
ＱＱＹＹＳＴＰＦＴ
配列番号１７−ＭＥＤＩ６３８３  ＯＸ４０アゴニスト
【化１９】
2018521008.tif 000023
【図１Ａ】
2018521008.tif 000024
【図１Ｂ】
2018521008.tif 000025
【図１Ｃ】
2018521008.tif 000026
【図１Ｄ】
2018521008.tif 000027
【図１Ｅ−Ｆ】
2018521008.tif 000028
【配列表】
2018521008000001.app
【国際調査報告】
2018521008.tif 000029
2018521008.tif 000030
2018521008.tif 000031