(57)【要約】  対象において外傷性脳損傷を処置するための、方法および組成物が提供される。【特許請求の範囲】
【請求項１】
外傷性脳損傷をそれを患っている対象において処置するための方法であって、Ｎ−メチル−Ｄ−アスパラギン酸（ＮＭＤＡ）受容体アンタゴニストを含む第１の組成物、および、ＣＢ２アゴニスト、内因性ＣＢ２アゴニストを効果的に増加させる剤および／またはアナンダミド（ＡＥＡ）もしくは２−アラキドノイルグリセロール（２−ＡＧ）のレベルを変化させる剤を含む第２の組成物を、対象へ投与することを含む、前記方法。
【請求項２】
第１の組成物が、非競合性ＮＭＤＡ受容体アンタゴニストを含む、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
第１の組成物が、７−ヒドロキシ−デルタ−６−テトラヒドロカンナビノール−１，１−ジメチルヘプチルを含む、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
第１の組成物および／または第２の組成物が、外傷性脳損傷から１２時間以内に投与される、請求項１に記載の方法。
【請求項５】
第１の組成物および／または第２の組成物が、外傷性脳損傷から６時間以内に投与される、請求項１に記載の方法。
【請求項６】
第１の組成物および／または第２の組成物が、外傷性脳損傷から３時間以内に投与される、請求項１に記載の方法。
【請求項７】
第１の組成物が、静脈内に、鼻腔内に、経口で、局所的に、経皮的にまたは吸入経由で、投与される、請求項１に記載の方法。
【請求項８】
第１の組成物が、単回用量として投与される、請求項１に記載の方法。
【請求項９】
第１の組成物が、複数回用量として投与される、請求項１に記載の方法。
【請求項１０】
複数回用量が、外傷性脳損傷に続いて７２時間の期間にわたって投与される、請求項９に記載の方法。
【請求項１１】
第２の組成物が、非カンナビノイドＣＢ２アゴニストを含む、請求項１に記載の方法。
【請求項１２】
第２の組成物が、ＮＭＤＡ受容体にも結合するカンナビノイドＣＢ２アゴニストを含む、請求項１に記載の方法。
【請求項１３】
第２の組成物が、ＡＥＡのレベルを増加させる剤を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項１４】
第２の組成物が、２−ＡＧのレベルを減少させる剤を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項１５】
第２の組成物が、脂肪酸アミド加水分解酵素の阻害剤を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項１６】
第２の組成物が、外傷性脳損傷の１２〜７２時間後に投与される、請求項１に記載の方法。
【請求項１７】
第２の組成物が、外傷性脳損傷に続いて第７日まで、毎日投与される、請求項１に記載の方法。
【請求項１８】
第１の組成物および／または第２の組成物が、外傷性脳損傷の症状が緩和されるまで、毎日または１日おきに投与される、請求項１に記載の方法。
【請求項１９】
外傷性脳損傷をそれを患っている対象において処置するための方法であって、Ｎ−メチル−Ｄ−アスパラギン酸（ＮＭＤＡ）受容体アンタゴニストを含む第１の組成物、および、血液脳関門を越えることを可能とする抗炎症剤を含む第２の組成物を、対象へ投与することを含む、前記方法。
【請求項２０】
第２の組成物が、第１の組成物の投与前、同時、または後に投与される、請求項１に記載の方法。
【請求項２１】
第２の組成物が、第１の組成物の投与前、同時、または後に投与される、請求項１９に記載の方法。
【請求項２２】
処置される外傷性脳損傷が、脳震とうを含む、請求項１に記載の方法。
【請求項２３】
処置される外傷性脳損傷が、脳震とうを含む、請求項１９に記載の方法。
【請求項２４】
外傷性脳損傷の処置のための医薬組成物であって、
Ｎ−メチル−Ｄ−アスパラギン酸（ＮＭＤＡ）受容体アンタゴニスト、
ＣＢ２アゴニスト、内因性ＣＢ２アゴニストを効果的に増加させる剤またはアナンダミド（ＡＥＡ）もしくは２−アラキドノイルグリセロール（２−ＡＧ）のレベルを変化させる剤；および
薬学的に許容し得るビヒクル
を含む、前記組成物。
【請求項２５】
外傷性脳損傷の処置のための医薬組成物であって、
Ｎ−メチル−Ｄ−アスパラギン酸（ＮＭＤＡ）受容体アンタゴニスト；
血液脳関門を越えることを可能とする抗炎症剤；および
薬学的に許容し得るビヒクル
を含む、前記組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
この特許出願は、2015年10月16日に出願された米国仮出願シリアル番号62/242,457号に基づく優先権を主張するものであり、その内容全体が参考により本明細書中に組み込まれる。
【背景技術】
【０００２】
背景
外傷性脳損傷（ＴＢＩ）は、外部からの機械的な力が脳機能不全を引き起こすときに生じる。
外傷性脳損傷は、通常、頭または体への激しい打撃または衝撃によってもたらされる。頭蓋骨を貫通する物体、例えば弾丸などまたは頭蓋骨の破砕片もまた、外傷性脳損傷を引き起こし得る。
【０００３】
ＴＢＩは、近代戦に特徴的な損傷と呼ばれてきた。２００８年に発行されたランド研究所（Rand Corporation）の調査は、イラクまたはアフガニスタンに配備された人のうちの１９．５％もがＴＢＩを持続させたと推定した（RAND; Reports and Bookstore; Research Briefs; RB-9336; Invisible Wounds: Mental Health and Cognitive Care Needs of America's Returning Veterans）。Defense Centers of Excellence for Psychological Health and Traumatic Brain Injury（ＤＣＯＥ）は、１年に１７０万人の人がＴＢＩを患うと推定し、昨年、ほぼ25,000人の軍隊メンバーが新たなＴＢＩと診断されたと報告している（www.（ワールド・ワイド・ウェブ）、拡張子「.health.mil」を付けた「dcoe」）。
【０００４】
外傷性脳損傷は、様々な傷害によって引き起こされ得る。南西アジアにおける作戦では、軽度ＴＢＩ（ｍＴＢＩ）の大多数が爆風曝露によって引き起こされている。ｍＴＢＩは、脳細胞の一時的な機能不全を引き起こすことがある。より重篤な外傷性脳損傷は、打撲傷、組織の裂傷、出血および脳への他の物理的なダメージをもたらし得、これは長期間の合併症または死をもたらし得る。
【０００５】
脳震とうは、頭または体への打撃、転落によって引き起こされる外傷性脳損傷、あるいは頭蓋骨の内部の脳を揺さぶるまたは振動させる別の損傷の１つのタイプである。脳震とうの症状は、軽度から重度まで幅広く、数時間、数日間、数週間、または数カ月間さえ継続し得る。繰り返される脳震とうまたは重度の脳震とうは、運動、学習、または発話に関して長く継続する問題に至ることがある。休息することと、あらゆる頭痛のためのアセトアミノフェンとの組み合わせが、脳震とうから脳を回復させるための最も適切なやり方であると現在考えられている。
【０００６】
重篤な脳損傷の後遺症が何年間も研究されており、比較的よく特徴付けられている一方で、爆風に誘発されたｍＴＢＩまたは脳震とう性のｍＴＢＩの後遺症については、より良い理解が必要とされる。現在の文献は、症状の大部分が本質的に感覚神経のものであるということを示唆している（Hoffer et al. Otol Neurotol. 2010 31(2):232-6；Hoffer et al. PLoS ONE 2013 8(1): e54163. doi:10.1371/journal.pone.0054163）。めまい、難聴、頭痛および神経認知機能不全は、頻度の高い後遺症であり、これらは母集団のうちの一部においては時間を経て消散する一方で、多くの個人においてはしつこく続き、および悪化し得る（Hoffer et al. Otol Neurotol. 2010 31(2):232-6）。そのうえ、爆風に続発するｍＴＢＩは時間を経て、これらの患者における神経変性障害の存在を示唆する特性を呈し得る、ということを示唆する新たに出現した多くの文献がある（Woods et al. ACS Chem. Neurosci. 2013 （出版前に電子的に公開） DOI: 10.1021/cn300216h）。
【０００７】
Ｎ−メチル−Ｄ−アスパラギン酸（ＮＭＤＡ）、α−アミノ−３−ヒドロキシ−５−メチル４−イソオキサゾールプロピオン酸（α-amino-3-hydroxy-5-methyl 4-isoxazole proprionate）（ＡＭＰＡ）およびカイニン酸（kainite）、これらの受容体の神経学的ダメージにおける役割を考慮して、研究の取り組みは、細胞死および壊死に至る受容体媒介カルシウム流出を阻害するために、これらの受容体のアンタゴニストを使用することに注目している。
【０００８】
これらのアンタゴニストの研究のいくつかは、ＮＭＤＡ受容体アンタゴニストのサブセットであるカンナビノイドに注目している。例えば、米国特許第5,538,993号、第5,521,215号および第5,284,867号を参照。
【０００９】
しかしながら、ＮＭＤＡ受容体アンタゴニストのデキサナビノールは、第二相および第三相臨床試験において試験された（Shohami E & Biegon A. CNS Neurol Disord Drug Targets. 2014;13(4):567-73）。脳震とうの処置における使用のためのデキサナビノールの先行の研究において、１つの研究は、それが頭蓋内圧を低下させたことを示した。しかしながら、他の研究は、よくても決定的でないように見受けられ、それがグリオーシスおよび以降の免疫カスケードを阻害しないことを見い出した。研究は、脳震とうの処置のための単剤でのデキサナビノールの使用に対する十分な支持を提供することができなかった。
【００１０】
米国特許第6,630,597号は、神経保護薬として、ＮＭＤＡ受容体に実質的に結合しないカンナビノイドの使用を提案する。
脳震とうのための可能な処置としてのカンナビノイドはまた、Shohami et al.（Journal of Neurotrauma 2009, 10(2): 109-119. doi: 10.1089/neu.1993.10.109）、Fernandez-Ruiz et al.（Handb Exp Pharmacol. 2015;231:233-59）およびPryce et al.（Handb Exp Pharmacol. 2015;231:213-31）によっても開示されている。
【００１１】
カンナビノイドＣＢ２受容体もまた、炎症依存性の神経変性のための標的として開示されている（Ashton JC & Glass M. Current Neuropharmacology. 2007;5(2):73-80）。
【００１２】
より最近では、プロゲステロン処置が、ＴＢＩにおける認知の転帰を改善するための可能な剤として研究されていた（Si et al. Neurosci Lett. 2013 Aug 14. pii: S0304-3940(13)00714-3. doi: 10.1016/j.neulet.2013.07.052；Baykara et al. Biotech Histochem. 2013 Jul;88(5):250-7. doi: 10.3109/10520295.2013.769630；およびMeffre et al. Neuroscience. 2013 Feb 12;231:111-24. d10.1016/ j.neuroscience. 2012.11.039）。
【００１３】
爆風に誘発されたｍＴＢＩまたは脳震とう性のｍＴＢＩに関連する感覚神経欠損を予防することまたは処置することにおける使用のための治療剤および方法の同定が求められている。
【発明の概要】
【００１４】
概要
本発明は、対象において外傷性脳損傷を処置するための方法および組成物に関する。
本発明の一側面は、対象において外傷性脳損傷を処置するための方法であって、Ｎ−メチル−Ｄ−アスパラギン酸（ＮＭＤＡ）受容体アンタゴニストを含む第１の組成物、および、血液脳関門を越えることを可能とする抗炎症剤を含む第２の組成物を、対象へ投与することを含む、前記方法に関する。
【００１５】
本発明の別の側面は、対象において外傷性脳損傷を処置するための方法であって、Ｎ−メチル−Ｄ−アスパラギン酸（ＮＭＤＡ）受容体アンタゴニストを含む第１の組成物、および、ＣＢ２アゴニスト、内因性ＣＢ２アゴニストを効果的に増加させる剤および／またはアナンダミド（ＡＥＡ）もしくは２−アラキドノイルグリセロール（２−ＡＧ）のレベルを変化させる剤を含む第２の組成物を、対象へ投与することを含む、前記方法に関する。
【００１６】
一つの非限定的な態様において、投与される第１の組成物は、７−ヒドロキシ−デルタ−６−テトラヒドロカンナビノール−１，１−ジメチルヘプチルを含む。
一つの非限定的な態様において、第２の組成物は、非カンナビノイドＣＢ２アゴニストを含む。
別の非限定的な態様において、第２の組成物は、ＮＭＤＡ受容体にも結合するカンナビノイドＣＢ２アゴニストを含む。
【００１７】
別の非限定的な態様において、第２の組成物は、ＡＥＡのレベルを増加させる剤を含む。
別の非限定的な態様において、第２の組成物は、２−ＡＧのレベルを減少させる剤を含む。
【００１８】
もう一つの非限定的な態様において、第２の組成物は、脂肪酸アミド加水分解酵素の阻害剤を含む。
一つの非限定的な態様において、処置される外傷性脳損傷は、脳震とうである。
【００１９】
本発明のもう一つの側面は、外傷性脳損傷の処置のための組成物に関する。一つの非限定的な態様において、組成物は、Ｎ−メチル−Ｄ−アスパラギン酸（ＮＭＤＡ）受容体アンタゴニスト、および、血液脳関門を越えることを可能とする抗炎症剤を含む。一つの非限定的な態様において、組成物は、Ｎ−メチル−Ｄ−アスパラギン酸（ＮＭＤＡ）受容体アンタゴニスト、および、ＣＢ２アゴニスト、内因性ＣＢ２アゴニストを効果的に増加させる剤および／またはアナンダミド（ＡＥＡ）もしくは２−アラキドノイルグリセロール（２−ＡＧ）のレベルを変化させる剤を含む。
【発明を実施するための形態】
【００２０】
詳細な説明
本発明は、対象において外傷性脳損傷を処置するための方法を提供する。一つの非限定的な態様において、処置される外傷性脳損傷は、脳震とうである。
【００２１】
本発明の方法は、外傷性脳損傷を患う対象へ、Ｎ−メチル−Ｄ−アスパラギン酸（ＮＭＤＡ）受容体アンタゴニストを含む第１の組成物を投与することを含む。
【００２２】
本明細書中で使用する「ＮＭＤＡ受容体アンタゴニスト」とはＮ−メチル−Ｄ−アスパラギン酸受容体（ＮＭＤＡ）の作用をアンタゴナイズするかまたは阻害するように働く剤のクラスを包含することを意味する。例は、これに限られるものではないが、ジゾシルピン（ＭＫ−８０１）、ケタミン、メマンチン、フェンシクリジン、ガシクリジン、ＡＰ５、アマンタジン、イボガイン、亜酸化窒素、リルゾール、デキストロファン、ＡＰ−７、チレタミン、ミダフォテル、アプチガネルおよび７−ヒドロキシ−デルタ−６−テトラヒドロカンナビノール−１，１−ジメチルヘプチル（デキサナビノール：ＨＵ−２１１）を包含する。一つの非限定的な態様において、ＮＭＤＡ受容体アンタゴニストは、デキサナビノール、ＧＫ−１１またはガシクリジン、またはフェンサイクリジンなどの非競合ＮＭＤＡ受容体アンタゴニストであるか、または、ジゾシルピンなどの不競合ＮＭＤＡ受容体アンタゴニストである。本発明において有用なＮＭＤＡ受容体アンタゴニストの追加の非限定例が、米国特許第5,521,215号に開示されており、その教示全体が参考により本明細書中に組み込まれる。一つの非限定的な態様において、ＮＭＤＡ受容体アンタゴニストは、７−ヒドロキシ−デルタ−６−テトラヒドロカンナビノール−１，１−ジメチルヘプチル（デキサナビノール：ＨＵ−２１１）である。
【００２３】
一つの非限定的な態様において、第１の組成物は、外傷性脳損傷によって引き起こされる腫脹を阻害するのに有効なレジメンを通じて投与される。
一つの非限定的な態様において、第１の組成物は、外傷性脳損傷から１２時間以内に、またはこれに代えて、外傷性脳損傷から６時間以内に、またはこれに代えて、外傷性脳損傷から３時間以内に、投与される。これらの態様において、第１の組成物は、単回用量または複数回用量として投与されてもよい。
【００２４】
一つの非限定的な態様において第１の組成物の複数回用量は、外傷性脳損傷に続いて７２時間の期間にわたって投与される。
一つの非限定的な態様において、第１の組成物は、外傷性脳損傷の症状が緩和されるまで、毎日または２日毎に投与される。
【００２５】
第１の組成物は、脳へのＮＭＤＡ受容体アンタゴニストの有効量の送達を提供するあらゆる投与経路によって投与されてもよい。投与経路の例は、決してこれらに限定されるものではないが、静脈内、鼻腔内、経口、局所的、経皮的または吸入経由を包含する。
【００２６】
この開示を読んだ当業者には理解されるとおり、投薬量は、処置される損傷の程度、投与の方法、患者の年齢、体重、禁忌等に応じて、主治医により決定され得る。投薬量の非限定例は、１５０ｍｇ以上の単回ｉ．ｖ．用量、および、１日にまたは１日おきに１〜４回のレジメンにおけるｋｇ体重あたり０．０５ｍｇ〜約５０ｍｇの範囲の用量を包含する。
【００２７】
一つの非限定的な態様において、本発明の方法はさらに、血液脳関門を越えることを可能とする抗炎症剤を含む第２の組成物の、対象への投与を含む。抗炎症剤は、外傷性脳損傷によって引き起こされる脳の炎症を阻害するのに有効なあらゆる投薬レジメンに従って投与され得る。抗炎症剤は、ＮＭＤＡ受容体アンタゴニストの投与前、同時、または後に投与され得る。
【００２８】
一つの非限定的な態様において、本発明の方法はさらに、ＣＢ２アゴニスト、内因性ＣＢ２アゴニストを効果的に増加させる剤および／またはアナンダミド（ＡＥＡ）もしくは２−アラキドノイルグリセロール（２−ＡＧ）のレベルを変化させる剤を含む第２の組成物の、対象への投与を含む。
【００２９】
本明細書中で使用する「ＣＢ２アゴニスト」とは、カンナビノイド２受容体を選択的または非選択的な様式で活性化させる剤のクラスを包含することを意味する。一つの非限定的な態様において、ＣＢ２アゴニストは、非カンナビノイドＣＢ２アゴニストである。別の非限定的な態様において、ＣＢ２アゴニストは、ＮＭＤＡ受容体にも結合するカンナビノイドＣＢ２アゴニストである。
【００３０】
一つの非限定的な態様において、第２の組成物は、ある種のマリファナにおける天然の化学物質であるカンナビジオール（ＣＢＤ）を含む。ＣＢＤは、何ら精神活性効果を有しない。ＣＢＤは、ＣＢ２アゴニストとして作用し、広範な抗炎症効果および免疫阻害効果を現す。
【００３１】
これに代えて、または加えて、第２の組成物は、内因性ＣＢ２アゴニストを効果的に増加させる剤および／またはアナンダミド（ＡＥＡ）もしくは２−アラキドノイルグリセロール（２−ＡＧ）のレベルを変化させる剤を含んでもよい。一つの非限定的な態様において、第２の組成物は、ＡＥＡのレベルを増加させる剤を含む。別の非限定的な態様において、第２の組成物は、２−ＡＧのレベルを減少させる剤を含む。一つの非限定的な態様において、第２の組成物は、脂肪酸アミド加水分解酵素の阻害剤を含む。一つの非限定的な態様において、第２の組成物は、ＡＥＡを含む。
【００３２】
一つの非限定的な態様において、第２の組成物は、外傷性脳損傷によって引き起こされるグリオーシスを阻害するのに有効なレジメンを通じて投与される。
第２の組成物は、第１の組成物の投与前、同時、または後に投与され得る。
一つの非限定的な態様において、第１および第２の組成物は、一緒に、両方の治療剤を含む単一組成物へと製剤化される。
【００３３】
一つの非限定的な態様において、第２の組成物は、外傷性脳損傷の１２〜７２時間後に投与される。
一つの非限定的な態様において、第２の組成物は、外傷性脳損傷から１２時間以内に、またはこれに代えて、外傷性脳損傷から６時間以内に、またはこれに代えて、外傷性脳損傷から３時間以内に、投与される。これらの態様において、第２の組成物は、単回用量または複数回用量として投与されてもよい。
【００３４】
一つの非限定的な態様において、第２の組成物は、第１の組成物とともに単一組成物として、外傷性脳損傷から１２時間以内に、またはこれに代えて、外傷性脳損傷から６時間以内に、またはこれに代えて、外傷性脳損傷から３時間以内に、投与される。これらの態様において、第１および第２の組成物は、単回用量または複数回用量として投与されてもよい。
【００３５】
一つの非限定的な態様において、第２の組成物は、外傷性脳損傷に続いて第７日まで、毎日投与される。
一つの非限定的な態様において、第２の組成物は、外傷性脳損傷の症状が緩和されるまで、毎日または１日おきに投与される。
【００３６】
第２の組成物は、脳へのＣＢ２アゴニスト、内因性ＣＢ２アゴニストを効果的に増加させる剤および／またはアナンダミド（ＡＥＡ）もしくは２−アラキドノイルグリセロール（２−ＡＧ）のレベルを変化させる剤の送達を提供するあらゆる投与経路によって投与されてもよい。投与経路の例は、決してこれらに限定されるものではないが、静脈内、鼻腔内、経口、局所的、経皮的または吸入経由を包含する。
【００３７】
この開示を読んだ当業者には理解されるとおり、投薬量は、処置される損傷の程度、投与の方法、患者の年齢、体重、禁忌等に応じて、主治医により決定され得る。
【００３８】
外傷性脳損傷の処置のための医薬組成物もまた、提供される。一つの非限定的な態様において、組成物は、Ｎ−メチル−Ｄ−アスパラギン酸（ＮＭＤＡ）受容体アンタゴニスト、および、血液脳関門を越えることを可能とする抗炎症剤、ならびに、薬学的に許容し得るビヒクルを含む。一つの非限定的な態様において、医薬組成物は、Ｎ−メチル−Ｄ−アスパラギン酸（ＮＭＤＡ）受容体アンタゴニスト、および、ＣＢ２アゴニスト、内因性ＣＢ２アゴニストを効果的に増加させる剤および／またはアナンダミド（ＡＥＡ）もしくは２−アラキドノイルグリセロール（２−ＡＧ）のレベルを変化させる剤、ならびに、薬学的に許容し得るビヒクルを含む。
【００３９】
本明細書中で使用する「薬学的に許容し得るビヒクル」は、治療組成物の活性と適合し得、かつ、対象にとって生理学的に許容し得る、ありとあらゆる溶媒、賦形剤、分散媒、コーティング、抗菌剤および抗真菌剤、等張および吸収遅延剤などを包含する。薬学的に許容し得るビヒクルの例は、緩衝生理食塩水（０．１５Ｍ  ＮａＣｌ）である。薬学的に活性な物質のためのかかる媒体および剤の使用は、当技術分野においてよく知られている。あらゆる従来の媒体または剤が、治療組成物と適合しない限りにおける場合を除いて、それらの医薬投与に好適な組成物における使用が想定される。補助的な活性化合物もまた、組成物中に組み込まれ得る。
【００４０】
治療組成物を含む分散物は、グリセロール中、液体ポリエチレングリコール中、およびこれらの組み合わせ中において、および油中において調製され得る。普通の保管および使用条件下で、これらの製剤は、微生物の増殖を予防するために保存料を含有していてもよい。
【００４１】
注射用途のための好適な医薬組成物は、滅菌された水溶液（水溶性の場合）または分散物および滅菌された注射溶液または分散物の即時調製のための滅菌された粉末を包含する。全ての場合において、組成物は滅菌されていなければならず、容易な注射針通過性（easy syringability）が存在する程度に流動体でなければならない。それは、製造および保管の条件下で安定でなくてはならず、細菌および菌類などの微生物の汚染作用に対して保存されなければならない。ビヒクルは、例えば、水、エタノール、ポリオール（例えば、グリセロール、プロピレングリコール、液体ポリエチレングリコール等）、それらの好適な混合物、および油（例として、植物油）を含有する溶媒又は分散媒であり得る。適正な流動性が、例えば、レシチンなどのコーティングの使用によって、分散物の場合においては必要とされる粒子サイズの維持によって、および界面活性剤の使用によって、維持され得る。
【００４２】
滅菌された注射溶液は、必要量の治療組成物を適切な溶媒中に、必要に応じて上記で列挙された成分の１つまたは組み合わせとともに組み込み、続いて濾過滅菌することにより調製され得る。一般に、分散物は、基本の分散媒および上記で列挙されたものからの必要とされる他の成分を含有する滅菌されたビヒクル中に治療組成物を組み込むことにより調製される。滅菌された注射溶液の調製のための滅菌された粉末の場合においては、好ましい調製の方法は、真空乾燥および凍結乾燥であり、これは、活性成分（すなわち、治療組成物）、任意にこれにプラスして、事前に滅菌濾過されたその溶液からのあらゆる追加の所望の成分、の粉末を産出する。
【００４３】
経口投与のための固体剤形は、摂取可能なカプセル、錠剤、丸剤、ロリポップ剤、粉末、顆粒、エリキシル剤、懸濁剤、シロップ剤、ウエハー剤、舌下錠、トローチ剤等を包含する。かかる固体剤形において、活性化合物は、少なくとも１つの不活性な薬学的に許容し得る賦形剤または希釈剤、または、クエン酸ナトリウムもしくは第二リン酸カルシウムなどの同化可能な可食ビヒクル、および／またはａ）デンプン、ラクトース、スクロース、グルコース、マンニトールおよびケイ酸等の充填剤もしくは増量剤、ｂ）例えばカルボキシメチルセルロース、アルギン酸塩、ゼラチン、ポリビニルピロリドン、スクロースおよびアカシアなどのバインダー、ｃ）グリセロールなどの保湿剤、ｄ）寒天、炭酸カルシウム、バレイショ若しくはタピオカデンプン、アルギン酸、あるケイ酸塩、及び炭酸ナトリウムなどの崩壊剤、ｅ）パラフィンなどの溶解遅延剤、ｆ）第四級アンモニウム化合物などの吸収促進剤、ｇ）例えばセチルアルコールおよびグリセロールモノステアラートなどの湿潤剤、ｈ）カオリンおよびベントナイト粘土などの吸収剤、ならびにｉ）タルク、ステアリン酸カルシウム、ステアリン酸マグネシウム、固体ポリエチレングリコール、ラウリル硫酸ナトリウムおよびそれらの混合物などの滑沢剤と混合されるか、または対象の食事に直接組み込まれる。
【００４４】
カプセル、錠剤及び丸剤の場合においては、剤形は、緩衝剤もまた含んでもよい。同様のタイプの固体組成物を、ラクトースまたは乳糖ならびに高分子量ポリエチレングリコール等の賦形剤を使用する軟および硬充填ゼラチンカプセル中の充填剤としても、採用してもよい。組成物及び製剤中における治療化合物のパーセンテージは、当然ながら変わり得る。かかる治療的に有用な組成物中における治療化合物の量は、好適な投薬量が得られるようになっている。
【００４５】
経口投与のための液体剤形は、薬学的に許容し得るエマルション、溶液、懸濁剤、シロップ剤およびエリキシル剤を包含する。活性化合物に加えて、液体剤形は、当技術分野においてよく使用される不活性希釈剤、例えば、水またはその他の溶媒、可溶化剤および乳化剤、例えばエチルアルコール、イソプロピルアルコール、炭酸エチル、酢酸エチル、ベンジルアルコール、安息香酸ベンジル、プロピレングリコール、１，３−ブチレングリコール、ジメチルホルムアミド、油（特に、綿実、ラッカセイ、コーン、胚芽、オリーブ、ヒマシおよびゴマ油）、グリセロール、テトラヒドロフルフリルアルコール、ポリエチレングリコール、および、ソルビタンの脂肪酸エステル、ならびにそれらの混合物などを含有していてもよい。不活性希釈剤の他に、経口組成物はまた、湿潤剤、乳化剤および懸濁化剤、甘味、香味および着香剤などのアジュバントもまた含み得る。
【００４６】
懸濁剤は、活性化合物に加えて、例えばエトキシ化イソステアリルアルコール、ポリオキシエチレンソルビトールおよびソルビタンエステル、微結晶性セルロース、アルミニウムメタヒドロキシド、ベントナイト、寒天およびトラガカント、ならびにそれらの混合物といった懸濁化剤を含有していてもよい。
【００４７】
治療化合物の医薬組成物はまた、時間をかけた治療化合物の持続的な放出を得るための、時間放出またはデポー形態においても投与され得る。本発明の治療化合物はまた、経皮的にも（例として、治療化合物を、好適なビヒクルとともに、パッチの形態で提供することにより）、投与され得る。
【００４８】
脳震とうは、種々の段階で脳にダメージを引き起こす。最初に、組織のダメージを引き起こす初期影響がある。第二に、脳組織が炎症を通じて腫れ始め、頭蓋内圧の増加をもたらす。脳は、頭蓋骨に囲まれた一定の領域の内にあるので、脳が炎症とともに拡張するにつれて、それは増加した圧力で頭蓋骨を圧迫し、広範な追加のダメージを引き起こす。この炎症は、初期損傷後最初の数時間以内に始まる。ダメージの第三の波は、免疫応答のカスケードが脳組織の中で起こり、白血球の浸潤（白血球およびマクロファージ浸潤）およびサイトカインの放出を引き起こすとき、初期損傷後６〜１２時間以内に始まるグリオーシスと呼ばれるプロセスの結果として生じる。この免疫カスケード自体が、広範な組織損傷の原因である。
【００４９】
このプロセスにおいて２つの異なる受容体に働き掛けることにより、本発明の併用療法は、炎症を予防し、および、グリオーシスおよびこれに関連する免疫カスケードを阻害し、したがって脳震とうならびに他の外傷性脳損傷のための有用な治療法を提供すると期待される。
以下の非限定例は、本発明をさらに例証するために提供される。
【００５０】
例
例１：げっ歯類での研究
選択されたＮＭＤＡアンタゴニストのデキサナビノール（ＨＵ  ２１１としてもまた知られる）およびＣＢ２アゴニストのカンナビジオール（ＣＢＤ）を含む併用療法（本明細書において「ＳＰ処置された」と称される併用療法）の、プラセボ（無処置）と比較したときの、爆風に誘発されたｍＴＢＩまたは脳震とう性のｍＴＢＩの感覚神経の後遺症を低減させる能力を、小げっ歯類モデルにおいて確認する。
【００５１】
これらの研究は、この併用療法の、小げっ歯類モデルにおいて爆風または脳震とうの後で薬を投与したときの、プラセボと比較したときの、爆風に誘発されたｍＴＢＩの脳ならびに聴覚および平衡感覚器官へのダメージを低減させる能力を証左する。加えて、ＳＰ処置された動物対無処置の動物において、組織学的な差異を同定する。ＳＰ処置動物対無処置の動物における、リポデミック（lipodemic）特性のあらゆる差異もまた評価する。
【００５２】
群／ＴＢＩモデルあたり１５匹のラットの８つの初期処置群がある。３つのＴＢＩモデルは、爆風曝露（ＢＬＡＳＴ）、重り落下（weight-drop）閉鎖性頭部損傷モデル（ＣＨＩ）、および流体圧力損傷モデル（ＦＰＩ）である。群は、以下：Ａ群（ＳＰのみ）、Ｂ群（ビヒクルのみ）、Ｃ群（ＢＬＡＳＴ＋ＳＰ）、Ｄ群（ＢＬＡＳＴ＋ビヒクル）、Ｅ群（ＣＨＩ＋ＳＰ）、Ｆ群（ＣＨＩ＋ビヒクル）、Ｇ群（ＦＰＩ＋ＳＰ）、およびＨ群（ＦＰＩ＋ビヒクル）である。群あたり１５匹のラットの使用は、短期的およびより長期的な転帰の検査を可能にする。
【００５３】
全ての群に、曝露前、および曝露後第３日および第７日に、感覚運動、認知および作業記憶機能についての行動試験、聴覚試験、および平衡試験を行う。動物の各群の３分の１を第７日にサクリファイスし（群あたり５匹）、肉眼的検査および一連の組織化学的検査を行う。各群あたり５匹の動物の第二の群には、第３１日にサクリファイスしてその時点でそれらに第７日の動物と同じ最終分析を行う前に、第１４日、第２１日および第３１日に、行動および聴覚試験を行う。最後の５匹の動物は、長期群になり、第３日、第７日、第３１日、第６１日、および、最初の２つの時点の群と同じ組織学的分析のためにそれらをサクリファイスする第９１日に、行動および聴覚試験を行う。
【００５４】
例２：爆風曝露モデル（ＢＬＡＳＴ）
げっ歯類の爆風波管曝露（Rodent Blast Wave Tube Exposures）：衝撃波生成システムは、単一の１２フィートの長さで８インチの内径の凝縮管と並ぶことにより圧力密封状態の嵌合を形成する３フィートの圧縮管から構成される。圧縮管は、産業用圧縮機によって圧力装填（charged）される。油圧作動デバイスが、プラスチックのフィルムの上から凝縮管の摺動部を圧縮管に対して押圧して、圧縮管を密封する。システムを、圧縮チャンバーの選択された圧力までの管理、新たなフィルムを適所に移動させること、非破裂のフィルムの上からの気密な封を形成するための凝縮管の圧縮管への閉鎖、選択された圧力でフィルムを破裂させるための内部のアーマチュアの活性化、ならびに新たな非破裂のフィルムを次の爆風事象のために適所に移動させることのために遠隔操作する。管の出力は、超音速のFriedlanderタイプの過圧／負圧波を生じさせ、これは爆薬爆発からの衝撃圧力波をシミュレートする。２ポンド／平方インチ（ｐｓｉ）または１４．５キロパスカル（ｋＰａ）〜＞５０ｐｓｉ（０．３５メガパスカル）の過圧強度が生成され得る。単一の爆風過圧（ＢＯＰ）についての曝露の研究は、１０〜２０ｐｓｉの間の範囲とする（動物の苦痛軽減（refinement animals）上決定した初期反応に依存する）。
【００５５】
全ての動物は、麻酔し、凝縮管内の一端に挿入されてその１本の足を固定される動物用保持管（animal holding tube）中に置く。動物用保持管は、ラットの頭部背側面を来るべき衝撃波に対向させて動物を位置させる。対象を、管のフィルムの振動膜から１０フィートに位置させ、真正面からの方向でＢＯＰ波を受けさせる。保持管は、生きているが麻酔された動物に対する曝露を行えるようにする麻酔を誘発するためのイソフルランガスを動物に供給することを可能にする。３２チャンネルまであり、それぞれが、０  ５０  ＰＳＩ測定範囲について格付けされているDytran圧力トランスデューサおよびコンピュータとインターフェースをとっている電子コンディショナーと連動して、２５０ｋＨｚの記録速度を有する、Pacific Instruments 6000 DAQを使用して、ＢＯＰ波を、ピーク強度、立ち上がり時間およびＢＯＰ波期間について測定し、および表示する。
【００５６】
曝露は、麻酔された動物が単回の爆風波への曝露を受けることからなる。初期調査は、病理学的効果を実証すると示されている単回の１０〜２０ｐｓｉ（過圧−負圧のシーケンスを有するFriedlander波）の効果を検査する（Balaban et al J Neurosci Methods 2016 pii: S0165-0270(16)00053-4. doi: 10.1016/j.jneumeth.2016.02.001.（印刷前に電子的に公開）を参照）。
【００５７】
例３：閉鎖性頭部損傷モデル（ＣＨＩ）
ラットに、以前にFodaおよびMarmarou（J Neurosurg. 1994 80(2):301-13）によって記載された方法により、軽度ＴＢＩ（ｍＴＢＩ）を経験させる。具体的には、雄のSprague-Dawleyラットを、ガラス鐘中において、３％イソフルラン、７０％  Ｎ２Ｏおよび３０％  Ｏ２で、ポーピンチまたはテールピンチ（paw or tail pinch）への応答がなくなるまで麻酔する。初めの麻酔後、ノーズコーンを通じて動物を１〜２．５％の維持投薬量で維持する。外科手術中に眼が乾かないように、滅菌した眼用潤滑剤を使用する。動物の頭部を剃毛し、クロロヘキサジンで拭き落とす。頭蓋骨を露出させるために切開を行う。スチール製の円板（直径１０ｍｍおよび厚さ３ｍｍ）を、ブレグマおよびラムダ縫合線の間に、頭蓋骨の歯科用アクリルを使用して取り付ける。
【００５８】
動物を次に、外傷デバイスの真下のスポンジマットレス（タイプＥポリウレタンフォーム）の上に移動させる。４５０グラムの重りを、１メートルから垂直管を通して自由落下させる。直腸温プローブを使用して体温をモニターし、脳温度の間接的な測定として側頭筋温をモニターする。偽処置動物には全ての外科手術的な手順を行うが、脳外傷を受けさせない。損傷後、動物には縫合閉鎖を行い、それらのホームケージへ戻して食物および水を自由摂取するように与える。損傷後に動物が食べることが困難である場合には、動物を安楽死させる。動物には、脳損傷の前に尾動脈カテーテルが設置されており、および脳外傷の後で、動物は挿管されていて麻痺薬としてロクロニウムまたはパンクロニウムが投与される。
【００５９】
例４：流体打診損傷モデル（Fluid Percussion Injury Model）（ＰＦＩ）
Sprague-Dawleyラットを、特注の麻酔チャンバー中にて、麻酔の誘発のために３％イソフルランで麻酔する。動物が適切に麻酔されていることを確めるために、トウピンチ（toe pinch）を行う。動物の呼吸数を、視覚的に評価する。次に、イソフルラン麻酔をノーズコーンを通じて維持し、および、以下のとおり、露出した硬膜上に損傷キャップ（injury cap）を設置する：ラットの頭部を剃毛し、クロロヘキサジン溶液で拭き取る；次にラットを定位フレーム中に置き、頭皮を外科手術的に切開する；トレフィンを使用した傍矢状開頭（４．８ｍｍ）を、ブレグマの３．８ｍｍ後方で正中線の２．５ｍｍ側方にて行う；滅菌されたプラスチックの損傷チューブ（injury tube）（長さ１ｃｍにカットされて開頭を完全に充填するように整えられた滅菌された針のプラスチックのコネクタ）を次に露出した硬膜の上から設置し、およびシアノアクリル系接着剤（crynoacrylic adhesive）によって頭蓋骨へ固着させ；次に完全な密封を得るために歯科用アクリルを損傷チューブの周りに注ぎ入れ；アクリルが硬化した後、損傷チューブを、滅菌されたゲルフォームスポンジで、またはLuer-Lokアダプタで塞ぎ、頭皮をステープル留め／縫合して元のとおりにし；動物を麻酔から取り出してそれらのホームケージへ戻す。
【００６０】
前の準備の２４時間後に、ラットを特注の麻酔チャンバーを通じて３％イソフルランで麻酔し、トウピンチを使用して麻酔レベルを決定する。動物をテーブル上に置き、カテーテルを設置して動物に挿管を行うまでノーズコーンを通じて麻酔を投与する。カテーテルは、動脈圧および血液ガスをモニターするために、行動試験を行わない動物については右大腿動脈中に設置し、あるいは行動試験を行う動物については尾動脈に設置する。脳温度を、左側頭筋の中に設置したサーミスタによって間接的に測定し、ＴＢＩの前および以降には、正常温度（３７°Ｃ）レベルに維持する。直腸温もまた、正常温度レベルに維持する。
【００６１】
挿管後、動物を人工呼吸器につなぎ、７０％亜酸化窒素と３０％酸素との混合物中の０．５〜１％イソフルランで換気する。動物を、正常範囲内の動脈血ガスを維持するための機械的人工換気のために、ロクロニウムで麻痺させる。流体打診（Ｆ−Ｐ）デバイスは、ゴム被覆されたプレキシガラスのピストンによって一端が拘束され、トランスデューサー筐体に反対端が嵌合しているプレキシガラスの円筒型の容器、および、ラットの頭蓋骨に適応している中央の損傷スクリューから構成される。システム全体に、３７℃の等張生理食塩水を満たす。無菌の金属の損傷スクリューを、次に、挿管および麻酔されたラットのプラスチックの損傷チューブにしっかりとつなぐ。
【００６２】
ピストンを直撃する金属の振り子の降下、それによって少量の生理食塩水を硬膜外で、閉鎖している頭蓋腔中へと注入し、神経組織の短時間の変位（１８ｍｓｅｃ）を作り出すことにより、損傷を誘発する。もたらされる圧力パルスの振幅を、圧力トランスデューサーによって雰囲気中で測定し、PowerLabチャート記録システム上に記録する。偽処置動物には全ての外科手術的な手順を行うが、Ｆ−Ｐパルスを受けさせない。軽度（１．４〜１．６気圧）の損傷について研究を行う。損傷に続いて、カテーテルを取り出し、切開をステープル留め／縫合閉鎖する。麻酔を中止し、動物は損傷のおよそ３０分後に目覚め、個別のケージ中に置かれ、研究の終了まで食物および水を自由摂取するように補給される。
【００６３】
例５：曝露後の飼育
全ての動物を、曝露前後、および曝露後の回復期間全体の間、STARR Life Sciences, Corp.製品およびパルスオキシメーターを使用して、呼吸数、心拍数および血液酸素飽和度についてモニターする。動物が、極度の痛みの様相を、またはそれらが爆風曝露後に回復しないかもしれないことの様相を示す場合、獣医師が動物を検査する。動物を、痛みの様相について発声、食欲不振、攻撃、防御、および極度の興奮を包含するようにして、入念に観察する。動物は、獣医師の助言に基づいて、安楽死させることも、させないこともある。潜在的な疼痛反応の可能性を回避するために、爆風曝露の直後にケトプロフェンを与える。
【００６４】
痛み評価を、麻酔からの回復直後に開始させて適用する。評価する主な指標は、以下：活動、身体的な外観、発声、歯ぎしり、食餌／飲水行動、および呼吸数、心拍数および酸素飽和度などの生理学的様相とする。もし指標のいずれかが、動物が依然として痛みを感じていることを示唆したら、より高用量を送達するか、または治らない場合は、動物を痛みがあるまま放置することは決してせず、獣医師がラットを安楽死させることに決めてよい。痛みの軽減は、必要に応じて行う。動物に、試験の妨げになる痛みのレベルが見られた場合、機能的測定値の収集は、翌日に延期し得る。その時に、動物の状態を再評価し、および、試験を開始してもよく、または再び遅延させてもよい。ひとたび機能的および認知的測定を、生存している爆風曝露された動物について完了させたら、それらを、組織、体液および血液の収集のために安楽死させる。
【００６５】
例６：げっ歯類モデルのための投薬レジメン
曝露２時間後に、ＳＰに腹腔内（ＩＰ）注射を通じて有効用量の１０ｍｇ／ｋｇのＣＢＤおよび１ｍｇ／ＫｇのＨＵ  ２１１を投与する。この投薬を、追加の７日間、毎日繰り返す。
【００６６】
例７：げっ歯類モデルの行動試験
感覚運動試験：
自発的な前肢の使用：このSchallertおよびLindner（Can J Psychol. 1990 44(2):276-92）によって記載されている試験は、動物が後肢立ちしているかまたは立っている間にその前肢を内転させる傾向を評価することにより、自由意思による自発的な活動の間における前肢の使用を評価する。動物を透明なプラスチックのシリンダー中で５分間ビデオテープ録画する。
【００６７】
ビデオテープを、シリンダーの壁に沿った垂直方向の動きの間における非対称な、および後肢立ちの後の着地のための、前肢の使用の観点で、以下、点数付けし：（ａ）完全な後肢立ちの間における、体重移動動作を始めるために、または壁に沿って垂直姿勢で側方へ移動しながら重心を取り戻すために行う、シリンダーの壁に接触するための左または右の前肢の独立した使用；壁への接触（wall lands）／移動および床への着地を、それぞれ、（ａ）パーセントの同側の（損なわれていない）前肢の使用（同側および対側の置き動作の総数に対して相対的）という観点で表現する。後肢立ちの間において、第一の肢ではっきりと体重の支持をして壁に接触すること（他方の肢で０．５秒以内に壁に接触することなく）を、その肢の独立での壁への置き動作としてスコアに加える。肢の使用比率を、
対側／（同側＋対側）
として算出する。
【００６８】
認知試験：
認知機能の分析は、水迷路を使用した空間的ナビゲーションの評価を伴う。ＴＢＩに続いて数多くの時点での動物の活動を評価すること（ＴＢＩが招く結果を少なくさせるようにデザインされた治療的な処置法の有効性を評価する場合など）に主に向けられた実験は、各試験セッションの間において動物が新たなプラットフォームの場所を学習することを必要とする簡素な位置タスクおよび作業記憶タスクを伴う「取得」の枠組みを主に頼りにする。このプロトコルは、外科手術前の水迷路における事前訓練または試験を伴わない。
【００６９】
使用する水迷路は、２５℃の水で満たした円形のプール（直径１２２ｃｍ；深さ６０ｃｍ）であり、２ポンドの白色の非毒性の塗料を加えることで不透明にされている。迷路は、静かな、窓のない部屋に、様々な目立つ迷路外の手掛かりとともに配置する。北（Ｎ）、東（Ｅ）、南（Ｓ）および西（Ｗ）として指定された周縁の４点は、スタート位置としての役割を果たし、および、迷路を４つの四分円に分割する。タスクの要求に従って変わる場所で、円形のプラットフォーム（直径１０ｃｍ）が水面の１．５ｃｍ下に設置される。動物の移動は、泳ぎの経路を記録するＣＣＤビデオによってビデオテープ録画する。この動物の泳ぎの経路を、次に、Ethovision（Noldus）ソフトウェアプログラムで分析する。このプログラムは、経路の長さ、プラットフォームに到達するまでの遅れ（秒）、水迷路の各四分円において費やした時間、および泳ぎの速度を、決定する。
【００７０】
プラットフォームを、迷路の北東の四分円中に配置する。各動物には、各日に４回の６０秒の試行を受けさせる。ラットが首尾よくプラットフォームの場所を見つけた場合には、１０秒間留まらせる；そうでない場合には、１０秒の間、プラットフォームの上に乗せる。試行間の間隔は２〜４分であり、その間においてラットは熱ランプの下に置かれる。動物に、感覚運動試験の後で試験を行う。
【００７１】
探査の試行は、プラットフォームを取り除いて動物を西の位置から放すこと、および、動物の泳ぎパターンを６０秒間ビデオテープ録画することから構成される。傷つけられていない動物は、大半の時間を、以前に隠れたプラットフォームがあった四分円中で泳ぐことに費やすはずである。
【００７２】
作業記憶タスクのために、動物に６０秒与えて水中の（手掛かりなしの）プラットフォームを見つけ出させる。ラットが６０秒以内にプラットフォームを見つけ出すことができなかった場合、動物を１０秒間プラットフォーム上に置く。同じラットについて１つの試行に続いて５秒後に２回目の同一の試行を実施する。ラットは、各ペア試行の間に、４分間、熱ランプの下に置かれる。上記のとおりラットの群について行った後、プラットフォームを迷路の次の場所へ移動させ、この場所で手順を繰り返す。各日に、各ラットについて５対のペア試行を行う。
【００７３】
新規物体認知タスクは、オープンフィールド領域（open-field arena）において、２つの異なる種類の物体を用いて実施する。両方の物体は、高さおよび体積が一致するが、形状および外観が異なるものとする。動物に、何もない領域を探らせ、馴化の間においては、等距離に２つの同一の物体を置いたこのなじみのある領域に動物をさらす。翌日に、動物に、なじみのある物体および新規物体の存在下でオープンフィールドを探らせて、長期認識記憶を試験する。各物体を探ることに費やした時間および判別指数パーセントを記録する。
【００７４】
例８：げっ歯類モデルの聴覚および平衡試験
聴性脳幹応答（ＡＢＲ）：
聴覚閾値を、頭頂（参照）、右乳様突起（負）および左後肢に設置した皮下の白金針電極を通じて聴性脳幹応答によって決定する。デジタル的に生成された刺激は、全体的な期間が５ｍｓの台形包絡線を有する３〜３０ｋＨｚの間の１０２４の特定周波数のバースト音から構成される。台形は、３ｍｓのプラトーおよび１ｍｓの立ち上がりおよび立ち下がりで現れる。刺激は、コンピュータ制御された減衰器を通って挿入形イヤホン（Etymotic Research ER-2）へと送られる。挿入形イヤホンの音声送達管は、鼓膜から約５ｍｍに位置させる。挿入形イヤホンの出力は、鼓膜から４〜５ｍｍ離れた位置の音圧レベルを測定することにより校正する。
【００７５】
４５分の記録手順の間において、動物を、プラスチックの拘束管中に置く。記録電極からの電気的応答は、増幅され（１００，０００ｘ）、フィルタリングされ（１００＝３０００Ｈｚ）、およびコンピュータ中のシグナルプロセッシングボード上のＡ／Ｄ変換器へ供給される。各レベルにおいて８００〜１２００のサンプルを平均する。刺激は、１６／秒の速度で現れ、および刺激レベルは、閾値に到達するまで１０ｄＢずつ段階を下げて変えられ、次に確認するために５ｄＢずつ段階的に上げられる。閾値は、はっきりした応答が見られる最も低いレベルと、次のより低く応答が見られないレベルとの間の中間点として定義される。ＡＢＲを、再現性のあるＩＩ波の応答として決定する。
【００７６】
前庭誘発筋電位（ＶＥＭＰ）：
平衡機能を試験するための前庭筋電位（ｃＶＥＭＰ）を、外傷の前に、および外傷後の複数の時点で第３０日まで測定する。測定は、プリアンプに取り付けられた皮下の針電極およびデータ取得システム（Intelligent Hearing Systems）を用いて行う。球形嚢を刺激する音刺激に応答して、首の筋肉に設置された皮下電極によって前庭誘発筋電位（ＶＥＭＰ）を測定する。
【００７７】
記録に続いて、動物を１５分毎に、麻酔からの回復について、および歩行可能になったら１時間に１回、それらが麻酔から完全に回復して正常に行動するまで、観察する。非処置の動物における残存機能を、処置された動物と比較する。平衡の問題、旋回行動および痛みなどの潜在的な副作用をモニターする。急性試験において、動物を２４、４８および７２時間で（免疫組織化学および遺伝子発現）、または締めくくりの慢性試験で（組織学的分析）、安楽死させる。これらの研究から、介入のための臨界的な時間、用量応答、および最適処置期間が確立される。
【００７８】
例９：げっ歯類モデルにおける組織病理学
組織採取：
行動試験後、動物を安楽死させ、組織を以下のやり方で収集する：
組織学のために、ケタミン（１５０ｍｇ／ｋｇ）およびキシラジン（１０ｍｇ／ｋｇ）の過剰投与下またはイソフルラン麻酔下、ラットを経心的に生理食塩水で、続いて４％パラホルムアルデヒドで灌流する。頭部、肝臓および腎臓を取り出し、同じ固定剤中で後固定する。脱灰した頭部または抽出した脳のいずれかを、組織病理学的分析のために使用する。
【００７９】
質量分光イメージング（Mass Spectrometric Imaging）のために、ケタミン（１５０ｍｇ／ｋｇ）およびキシラジン（１０ｍｇ／ｋｇ）の過剰投与下またはイソフルラン麻酔下、ラットを経心的に生理食塩水で灌流して血液を浄化する。脳を次に速やかに取り出し、固体ＣＯ２（ドライアイス）で冷却されたイソペンタン中で冷凍する。
【００８０】
分子生物学のために、ケタミン（１５０ｍｇ／ｋｇ）およびキシラジン（１０ｍｇ／ｋｇ）の過剰投与下またはイソフルラン麻酔下、ラットを断首し、迅速に脳および腎臓／肝臓などの組織を取り出して液体窒素中で冷凍し、使用まで−８０℃にて保管する。
【００８１】
組織プロセッシング組織病理学：
適切な生存時間の後、偽処置ラットおよび外傷を受けることに曝されたラットをペントバルビタールナトリウム（１００ｍｇ／ｋｇ、ｉ．ｐ．）で麻酔し、経心的に０．１Ｍ  ＰＢＳで、続いて過ヨウ素酸−リシン−パラホルムアルデヒド固定剤で灌流する。無傷の頭部を、４％パラホルムアルデヒド中で２４時間、室温で後固定し、１０％ギ酸中で化学的ｌ試験基準（chemical l testing criterion）まで脱灰し、および終夜５％硫酸ナトリウム中で中和する。パラフィン中に埋設した後、切片を水平面中において８〜１０ｍでカットする。２５枚目毎の切片を、標準的な組織病理学的分析のためにヘマトキシリンおよびエオシンで染色する。
【００８２】
免疫組織化学のために、切片のセットを以下の溶液中で順に、室温でインキュベートする：０．１Ｍ  ＰＢＳ中の５％正常ロバ血清（ＮＤＳ）で２時間；０．１Ｍ  ＰＢＳ中の一次抗血清で７２時間および０．１Ｍ  ＰＢＳで１５分間。抗体を次に、ＡＢＣペルオキシダーゼ法または免疫蛍光法のいずれかで可視化する。爆風曝露を行った脱灰された頭部に採用される一次抗体は、神経および非神経マーカー、例えばスーパーオキシドディスムターゼ２、インターロイキン８受容体、ケモカインＣＸＣモチーフ受容体３、アンジオポエチン１、血管内皮増殖因子Ａ、ＴＮＦ−アルファ、およびマトリックスメタロプロテイナーゼ２などを包含する。
【００８３】
質量分光イメージング：
動物を、損傷後第１、３または７日に安楽死させる。ケタミン／キシラジン（１００ｍｇ／ｋｇ；１０ｍｇ／ｋｇ）麻酔下、各ラットの胸を開き、頭部を、上行大動脈中に設置されたカテーテルを通じて５０〜１００ｍｌのリン酸緩衝生理食塩水で室温で灌流し、血液を頭部から上大動脈中の開口を通じて流し出させる。灌流液からほとんど血液が取り除かれたら、頭蓋骨を注意深く開き、脳を解剖する。髄膜を取り出した後、各脳を、固体ＣＯ２中でのビーカーの浸漬により予冷された約３０ｍｌの冷イソペンタンを含んだ小さなビーカー中で速やかに冷凍し、次に取り出し、個別にアルミニウム箔で包み、切片化するまで−８０℃で保管する。脳を、前頭面において１８ミクロンの厚さで、クリオスタット（Leica Microsystems CM3050S, Bannockburn, IL）を使用して切片化する。
【００８４】
組織切片に直径６ｎｍの銀ナノ粒子（ＡｇＮＰ）を、ナノ粒子注入機（nanoparticle implanter）（Ionwerks, Houston, TX）を使用して埋め込む。Thermo Scientific MALDI LTQ-XL-Orbitrap（Thermo Fisher Scientific, San Jose, CA）およびXcaliburソフトウェアを、マトリックス支援レーザー脱離（ＭＡＬＤＩ）質量分光イメージング（ＭＳＩ）データ取得のために使用する。冠状断面の画像を、陽及び陰イオンモードにおいて収集したデータから、カスタムソフトウェアパッケージ（Ionwerks, Houston, TX）を使用して構築し、これはＭＡＴＬＡＢにおけるさらなる統計的分析のためのＭＳピークデータをエクスポートする。
【手続補正書】
【提出日】平成30年8月29日(2018.8.29)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
外傷性脳損傷をそれを患っている対象において処置するための方法に使用するための第１の組成物および第２の組成物であって、
前記使用が、Ｎ−メチル−Ｄ−アスパラギン酸（ＮＭＤＡ）受容体アンタゴニストを含む第１の組成物、および、ＣＢ２アゴニスト、内因性ＣＢ２アゴニストを効果的に増加させる剤および／またはアナンダミド（ＡＥＡ）もしくは２−アラキドノイルグリセロール（２−ＡＧ）のレベルを変化させる剤を含む第２の組成物を、対象へ投与することを含む、前記組成物。
【請求項２】
第１の組成物が、非競合性ＮＭＤＡ受容体アンタゴニストを含む、請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
第１の組成物が、７−ヒドロキシ−デルタ−６−テトラヒドロカンナビノール−１，１−ジメチルヘプチルを含む、請求項１に記載の組成物。
【請求項４】
第１の組成物および／または第２の組成物が、外傷性脳損傷から１２時間以内に投与され、または第１の組成物および／または第２の組成物が、外傷性脳損傷から６時間以内に投与され、または第１の組成物および／または第２の組成物が、外傷性脳損傷から３時間以内に投与される、請求項１に記載の組成物。
【請求項５】
第１の組成物が、静脈内に、鼻腔内に、経口で、局所的に、経皮的にまたは吸入経由で、投与される、請求項１に記載の組成物。
【請求項６】
第１の組成物が、単回用量として投与される、請求項１に記載の組成物。
【請求項７】
第１の組成物が、複数回用量として投与され、複数回用量が、外傷性脳損傷に続いて７２時間の期間にわたって投与される、請求項１に記載の組成物。
【請求項８】
第２の組成物が、非カンナビノイドＣＢ２アゴニストを含むか、または、第２の組成物が、ＮＭＤＡ受容体にも結合するカンナビノイドＣＢ２アゴニストを含む、請求項１に記載の組成物。
【請求項９】
第２の組成物が、ＡＥＡのレベルを増加させる剤を含むか、または第２の組成物が、２−ＡＧのレベルを減少させる剤を含む、請求項１に記載の組成物。
【請求項１０】
第２の組成物が、脂肪酸アミド加水分解酵素の阻害剤を含む、請求項１に記載の組成物。
【請求項１１】
第２の組成物が、外傷性脳損傷の１２〜７２時間後に投与されるか、または第２の組成物が、外傷性脳損傷に続いて第７日まで、毎日投与される、請求項１に記載の組成物。
【請求項１２】
第１の組成物および／または第２の組成物が、外傷性脳損傷の症状が緩和されるまで、毎日または１日おきに投与される、請求項１に記載の組成物。
【請求項１３】
第２の組成物が、第１の組成物の投与前、同時または後に投与される、請求項１に記載の組成物。
【請求項１４】
処置される外傷性脳損傷が、脳震とうを含む、請求項１に記載の組成物。
【請求項１５】
外傷性脳損傷の処置のための医薬組成物であって、
Ｎ−メチル−Ｄ−アスパラギン酸（ＮＭＤＡ）受容体アンタゴニスト、
ＣＢ２アゴニスト、内因性ＣＢ２アゴニストを効果的に増加させる剤またはアナンダミド（ＡＥＡ）もしくは２−アラキドノイルグリセロール（２−ＡＧ）のレベルを変化させる剤、または
血液脳関門を越えることを可能とする抗炎症剤；および
薬学的に許容し得るビヒクル
を含む、前記組成物。
【国際調査報告】
2018534362.tif 000002