(57)【要約】  本発明は、ヒトにおける癌を治療する方法であって、それを必要とするヒトに、  （ａ）配列番号１のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１、（ｂ）配列番号２のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２、（ｃ）配列番号３のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３、（ｄ）配列番号７のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１、（ｅ）配列番号８のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２、および（ｆ）配列番号９のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３を含んでなる、ヒトＯＸ４０に結合するモノクローナル抗体の治療上有効量、ならびに、  （ａ）配列番号５４のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１、（ｂ）配列番号５５のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２、（ｃ）配列番号５６のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３、（ｄ）配列番号５７のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１、（ｅ）配列番号５８のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２、および（ｆ）配列番号５９のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３を含んでなる、ヒトＰＤ−１に結合するモノクローナル抗体の治療上有効量を投与することを含む方法を提供する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
ヒトにおける癌を治療する方法であって、それを必要とするヒトに、
（ａ）配列番号１のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１、（ｂ）配列番号２のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２、（ｃ）配列番号３のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３、（ｄ）配列番号７のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１、（ｅ）配列番号８のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２、および（ｆ）配列番号９のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３を含んでなる、ヒトＯＸ４０に結合するモノクローナル抗体の治療上有効量、ならびに、
（ａ）配列番号５４のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１、（ｂ）配列番号５５のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２、（ｃ）配列番号５６のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３、（ｄ）配列番号５７のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１、（ｅ）配列番号５８のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２、および（ｆ）配列番号５９のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３を含んでなる、ヒトＰＤ−１に結合するモノクローナル抗体の治療上有効量
を投与することを含む、前記方法。
【請求項２】
ヒトＯＸ４０に結合するモノクローナル抗体が、配列番号５に示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨ領域、および配列番号１１に示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬ領域を含んでなる、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
ヒトＰＤ−１に結合するモノクローナル抗体が、配列番号５２に示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨ領域、および配列番号５３に示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬ領域を含んでなる、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
ヒトＯＸ４０に結合するモノクローナル抗体が、配列番号５に示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨ領域、および配列番号１１に示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬ領域を含んでなり、かつ、ヒトＰＤ−１に結合するモノクローナル抗体が、配列番号５２に示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨ領域、および配列番号５３に示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬ領域を含んでなる、請求項１に記載の方法。
【請求項５】
ヒトＯＸ４０に結合するモノクローナル抗体が、配列番号４８に示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖、および配列番号４９に示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖を含んでなる、請求項１に記載の方法。
【請求項６】
ヒトＰＤ−１に結合するモノクローナル抗体が、配列番号５０に示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖、および配列番号５１に示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を有する軽鎖を含んでなる、請求項１に記載の方法。
【請求項７】
ヒトＯＸ４０に結合するモノクローナル抗体が、配列番号４８に示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖、および配列番号４９に示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖を含んでなり、かつ、ヒトＰＤ−１に結合するモノクローナル抗体が、配列番号５０に示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖、および配列番号５１に示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を有する軽鎖を含んでなる、請求項１に記載の方法。
【請求項８】
ヒトＯＸ４０に結合するモノクローナル抗体が、配列番号４８に示されるアミノ酸配列を含む重鎖、および配列番号４９に示されるアミノ酸配列を含む軽鎖を含んでなり、かつ、ヒトＰＤ−１に結合するモノクローナル抗体が、配列番号５０に示されるアミノ酸配列を含む重鎖、および配列番号５１に示されるアミノ酸配列を含む軽鎖を含んでなる、請求項１に記載の方法。
【請求項９】
前記癌が固形腫瘍である、請求項１〜８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０】
前記癌が、メラノーマ、肺癌、腎臓癌、乳癌、頭頸部癌、結腸癌、卵巣癌、膵臓癌、肝臓癌、前立腺癌、膀胱癌および胃癌からなる群から選択される、請求項１〜９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１１】
ＯＸ４０に結合するモノクローナル抗体およびヒトＰＤ−１に結合するモノクローナル抗体が同時に投与される、請求項１〜１０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１２】
ヒトＯＸ４０に結合するモノクローナル抗体およびヒトＰＤ−１に結合するモノクローナル抗体が任意の順序で連続して投与される、請求項１〜１０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１３】
ＯＸ４０に結合するモノクローナル抗体および／またはヒトＰＤ−１に結合するモノクローナル抗体が静脈内投与される、請求項１〜１２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１４】
ＯＸ４０に結合するモノクローナル抗体および／またはヒトＰＤ−１に結合するモノクローナル抗体が腫瘍内に投与される、請求項１〜１２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１５】
ＯＸ４０に結合するモノクローナル抗体が、約０．１ｍｇ／ｋｇ〜約１０ｍｇ／ｋｇの用量で投与される、請求項１〜１４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１６】
ＯＸ４０に結合するモノクローナル抗体が、１日１回、週１回、２週間に１回（Ｑ２Ｗ）および３週間に１回（Ｑ３Ｗ）からなる群から選択される頻度で投与される、請求項１〜１５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１７】
ヒトＰＤ−１に結合するモノクローナル抗体が約２００ｍｇの用量で投与される、請求項１〜１６のいずれかに記載の方法。
【請求項１８】
ヒトＰＤ−１に結合するモノクローナル抗体がＱ３Ｗで投与される、請求項１〜１７のいずれかに記載の方法。
【請求項１９】
癌を有するヒトにおける腫瘍サイズを減少させる方法であって、配列番号４８に示されるアミノ酸配列を含む重鎖、および配列番号４９に示されるアミノ酸配列を含む軽鎖を含んでなるヒトＯＸ４０に結合するモノクローナル抗体の治療上有効量、ならびに、配列番号５０に示されるアミノ酸配列を含む重鎖、および配列番号５１に示されるアミノ酸配列を含む軽鎖を含んでなるヒトＰＤ−１のモノクローナル抗体の治療上有効量を、ヒトに投与することを含んでなる、前記方法。
【請求項２０】
前記ヒトが、ＲＥＣＩＳＴ  バージョン１．１による完全応答または部分応答を示す、請求項１９に記載の方法。
【請求項２１】
ヒトＯＸ４０に結合するモノクローナル抗体の静脈内投与の終了後少なくとも１時間〜２時間以内に、ヒトＰＤ−１に結合するモノクローナル抗体の静脈内投与が開始される、請求項１〜１０または１２〜２０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２２】
医薬組成物またはキットであって、
（ａ）配列番号１のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１、（ｂ）配列番号２のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２、（ｃ）配列番号３のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３、（ｄ）配列番号７のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１、（ｅ）配列番号８のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２、および（ｆ）配列番号９のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３を含んでなる、ヒトＯＸ４０に結合するモノクローナル抗体の治療上有効量、ならびに、
（ａ）配列番号５４のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１、（ｂ）配列番号５５のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２、（ｃ）配列番号５６のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３、（ｄ）配列番号５７のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１、（ｅ）配列番号５８のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２、および（ｆ）配列番号５９のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３を含んでなる、ヒトＰＤ−１に結合するモノクローナル抗体の治療上有効量
を含んでなる、前記医薬組成物またはキット。
【請求項２３】
ヒトＯＸ４０に結合するモノクローナル抗体が、配列番号５に示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨ領域、および配列番号１１に示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬ領域を含んでなる、請求項２２に記載の医薬組成物またはキット。
【請求項２４】
ヒトＰＤ−１に結合するモノクローナル抗体が、配列番号５２に示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨ領域、および配列番号５３に示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬ領域を含んでなる、請求項２２に記載の医薬組成物またはキット。
【請求項２５】
ヒトＯＸ４０に結合するモノクローナル抗体が、配列番号５に示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨ領域、および配列番号１１に示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬ領域を含んでなり、かつ、ヒトＰＤ−１に結合するモノクローナル抗体が、配列番号５２に示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨ領域、および配列番号５３に示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬ領域を含んでなる、請求項２２に記載の医薬組成物またはキット。
【請求項２６】
ヒトＯＸ４０に結合するモノクローナル抗体が、配列番号４８に示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖、および配列番号４９に示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖を含んでなる、請求項２２に記載の医薬組成物またはキット。
【請求項２７】
ヒトＰＤ−１に結合するモノクローナル抗体が、配列番号５０に示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖、および配列番号５１に示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を有する軽鎖を含んでなる、請求項２２に記載の医薬組成物またはキット。
【請求項２８】
ヒトＯＸ４０に結合するモノクローナル抗体が、配列番号４８に示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖、および配列番号４９に示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖を含んでなり、かつ、ヒトＰＤ−１に結合するモノクローナル抗体が、配列番号５０に示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖、および配列番号５１に示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を有する軽鎖を含んでなる、請求項２２に記載の医薬組成物またはキット。
【請求項２９】
ヒトＯＸ４０に結合するモノクローナル抗体が、配列番号４８に示されるアミノ酸配列を含む重鎖、および配列番号４９に示されるアミノ酸配列を含む軽鎖を含んでなり、かつ、ヒトＰＤ−１に結合するモノクローナル抗体が、配列番号５０に示されるアミノ酸配列を含む重鎖、および配列番号５１に示されるアミノ酸配列を含む軽鎖を含んでなる、請求項２２に記載の医薬組成物またはキット。
【請求項３０】
請求項２２〜２９のいずれか一項に記載の医薬組成物またはキットと、１つ以上の薬学的に許容される担体とを含む、組み合わせキット。
【請求項３１】
癌の治療のための医薬の製造における、請求項１３〜１５に記載の医薬組成物またはキットの使用。
【発明の詳細な説明】
【関連出願の相互参照】
【０００１】
本出願は、２０１５年８月４日に出願された米国特許出願第６２／２００，７７９号および２０１５年８月１３日に出願された米国特許出願第６２／２０４，５５５号の優先権を主張する。これらの先行出願の開示は、参照により本明細書に組み込まれる。
【０００２】
配列表
本出願は、ＡＳＣＩＩ形式で電子的に提出された配列表を含み、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。２０１６年７月２９日に作成されたこのＡＳＣＩＩコピーの名称はPU65945PCT_SL.txtで、サイズは１１０，１７０バイトである。
【技術分野】
【０００３】
本発明は、哺乳動物における癌を治療する方法、および当該治療に有用な組み合わせ物に関する。特に、本発明は、ヒトＯＸ４０に対するモノクローナル抗体を含む抗ＯＸ４０抗原結合タンパク質（ＡＢＰ）と、ヒトＰＤ−１に対するモノクローナル抗体を含む１つ以上の抗ＰＤ−１  ＡＢＰとの組み合わせ物に関する。
【背景技術】
【０００４】
癌を含む過剰増殖性疾患の効果的な治療は、腫瘍学分野における継続的な目標である。一般に、癌は、細胞の分裂、分化およびアポトーシス細胞死を制御する正常プロセスの調節解除に起因し、無制限増殖、局所増殖および全身転移の可能性を有する悪性細胞の増殖を特徴とする。正常なプロセスの調節解除には、シグナル伝達経路の異常および正常細胞で見られるものとは異なる因子への応答が含まれる。
【０００５】
免疫療法は、過剰増殖性障害を治療するための１つのアプローチである。様々なタイプの癌免疫療法の開発において科学者および臨床医が遭遇する大きなハードルは、腫瘍退縮をもたらす強力な抗腫瘍応答を得るために自己抗原（癌）に対する耐性を破壊することであった。伝統的な、腫瘍を標的とする小分子および大分子の薬剤の開発とは異なり、癌免疫療法は、エフェクター細胞の記憶プールを生成し、より耐久性のある効果を誘導し、再発を最小限にする可能性を有する免疫系の細胞を標的とする。
【０００６】
ＯＸ４０は、免疫系の複数のプロセスに関与する共刺激分子である。抗原結合タンパク質、およびＯＸ−４０受容体に結合し、ＯＸ４０シグナル伝達を調節する抗体は、当該分野で公知であり、例えば癌のための免疫療法として開示される。
【０００７】
ＰＤ−１リガンド、ＰＤ−Ｌ１およびＰＤ−Ｌ２の、Ｔ細胞に見られるＰＤ−１受容体への結合は、Ｔ細胞増殖およびサイトカイン産生を阻害する。いくつかの腫瘍においてＰＤ−１リガンドのアップレギュレーションが起こり、この経路を介したシグナル伝達は、腫瘍の活性Ｔ細胞免疫監視の阻害に寄与し得る。抗原結合タンパク質、およびＰＤ−１受容体に結合し、ＰＤ−Ｌ１およびＰＤ−Ｌ２とのその相互作用を遮断する抗体は、抗腫瘍免疫応答を含むＰＤ−１経路媒介性の免疫応答の阻害を解除し得る。
【０００８】
抗腫瘍Ｔ細胞機能の増強およびＴ細胞増殖の誘導は、癌治療のための強力で新しいアプローチである。３つの免疫腫瘍学抗体（例えば、免疫モジュレーター）が現在市販されている。抗ＣＴＬＡ−４（ＹＥＲＶＯＹ（登録商標）／イピリムマブ）は、Ｔ細胞プライミングの時点で免疫応答を増大させると考えられ、抗ＰＤ−１抗体（ＯＰＤＩＶＯ／ニボルマブおよびＫＥＹＴＲＵＤＡ（登録商標）／ペムブロリズマブ）は、すでにプライミングされ活性化されている腫瘍特異的Ｔ細胞における阻害チェックポイントを緩和することによって、局所腫瘍微小環境で作用すると考えられる。
【０００９】
癌の治療には近年多くの進歩があったが、癌に罹患した個体のより有効かつ／または強化された治療に対する必要性が依然として存在する。抗腫瘍免疫を増強するための治療的アプローチを組み合わせることに関連する本明細書の組み合わせ物および方法は、この必要性を解決するものである。
【発明の概要】
【００１０】
本明細書では、ヒトにおける癌を治療する方法であって、それを必要とするヒトに、（ａ）配列番号１のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１、（ｂ）配列番号２のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２、（ｃ）配列番号３のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３、（ｄ）配列番号７のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１、（ｅ）配列番号８のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２、および（ｆ）配列番号９のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３を含んでなる、ヒトＯＸ４０に結合するモノクローナル抗体の治療上有効量と、ペムブロリズマブ、またはそれと９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の配列同一性を有する抗体とを投与することを含む方法が提供される。また、本明細書では、ヒトＯＸ４０に結合するモノクローナル抗体およびペムブロリズマブを含んでなる医薬組成物およびキットも提供される。
【００１１】
さらに、本明細書では、ヒトにおける癌を治療する方法であって、それを必要とするヒトに、配列番号４に示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の配列同一性を有するのアミノ酸配列を含むＶＨ（可変重鎖）領域、および配列番号１０に示されるアミノ酸配列と少なくとも９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬ（可変軽鎖）領域を含んでなる、ヒトＯＸ４０に結合するモノクローナル抗体の治療上有効量と、ペムブロリズマブ、またはそれと９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の配列同一性を有する抗体とを投与することを含む方法が提供される。また、本明細書では、ヒトＯＸ４０に結合するモノクローナル抗体およびペムブロリズマブを含んでなる医薬組成物およびキットも提供される。
【００１２】
また、本明細書では、ヒトにおける癌を治療する方法であって、それを必要とするヒトに、配列番号５に示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨ（可変重鎖）領域、および配列番号１１に示されるアミノ酸配列と少なくとも９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬ（可変軽鎖）領域を含んでなる、ヒトＯＸ４０に結合するモノクローナル抗体の治療上有効量と、ペムブロリズマブ、またはそれと９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の配列同一性を有する抗体とを投与することを含む方法が提供される。また、本明細書では、ヒトＯＸ４０に結合するモノクローナル抗体およびペムブロリズマブを含んでなる医薬組成物およびキットも提供される。
【００１３】
また、本明細書では、癌を有するヒトにおける腫瘍サイズを減少させる方法であって、該ヒトに、治療上有効量の抗体１０６〜２２２と治療上有効量のペムブロリズマブと投与することを含む方法が提供される。
【００１４】
いくつかの態様では、本開示は、ヒトにおける癌を治療する方法であって、それを必要とするヒトに：
（ａ）配列番号１のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１、（ｂ）配列番号２のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２、（ｃ）配列番号３のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３、（ｄ）配列番号７のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１、（ｅ）配列番号８のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２、および（ｆ）配列番号９のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３を含んでなる、ヒトＯＸ４０に結合するモノクローナル抗体の治療上有効量、ならびに、
（ａ）配列番号５４のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１、（ｂ）配列番号５５のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２、（ｃ）配列番号５６のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３、（ｄ）配列番号５７のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１、（ｅ）配列番号５８のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２、および（ｆ）配列番号５９のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３を含んでなる、ヒトＰＤ−１に結合するモノクローナル抗体の治療上有効量
を投与することを含む方法を提供する。
【００１５】
いくつかの実施形態では、ヒトＯＸ４０に結合するモノクローナル抗体は、配列番号５に示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨ領域、および配列番号１１に示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬ領域を含んでなる。
【００１６】
いくつかの実施形態では、ヒトＰＤ−１に結合するモノクローナル抗体は、配列番号５２に示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨ領域、および配列番号５３に示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬ領域を含んでなる。
【００１７】
いくつかの実施形態では、ヒトＯＸ４０に結合するモノクローナル抗体は、配列番号５に示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨ領域、および配列番号１１に示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬ領域を含んでなり、かつ、前記ＰＤ−１に結合するモノクローナル抗体は、配列番号５２に示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨ領域、および配列番号５３に示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬ領域を含んでなる。
【００１８】
いくつかの実施形態では、ヒトＯＸ４０に結合するモノクローナル抗体は、配列番号４８に示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖、および配列番号４９に示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖を含んでなる。
【００１９】
いくつかの実施形態では、ヒトＰＤ−１に結合するモノクローナル抗体は、配列番号５０に示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖、および配列番号５１に示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖を含んでなる。
【００２０】
いくつかの実施形態では、ヒトＯＸ４０に結合するモノクローナル抗体は、配列番号４８に示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖、および配列番号４９に示されるアミノ酸配列と少なくとも約９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖を含んでなり、かつ、ＰＤ−１に結合するモノクローナル抗体は、配列番号５０に示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖、および配列番号５１に示されるアミノ酸配列と少なくとも約９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖を含んでなる。
【００２１】
いくつかの実施形態では、ヒトＯＸ４０に結合するモノクローナル抗体は、配列番号４８に示されるアミノ酸配列を含む重鎖および配列番号４９に示されるアミノ酸配列を含む軽鎖を含んでなり、ヒトＰＤ−１に結合するモノクローナル抗体は、配列番号５０に示されるアミノ酸配列を含む重鎖および配列番号５１に示されるアミノ酸配列を含む軽鎖を含んでなる。
【００２２】
いくつかの実施形態では、癌は固形腫瘍である。いくつかの実施形態では、癌は、メラノーマ、肺癌、腎臓癌、乳癌、頭頸部癌、結腸癌、卵巣癌、膵臓癌、肝臓癌、前立腺癌、膀胱癌および胃癌からなる群から選択される。
【００２３】
いくつかの実施形態では、ＯＸ４０に結合するモノクローナル抗体およびヒトＰＤ−１に結合するモノクローナル抗体は、同時に投与される。
【００２４】
いくつかの実施形態では、ヒトＯＸ４０に結合するモノクローナル抗体およびヒトＰＤ−１に結合するモノクローナル抗体は、任意の順序で連続して投与される。
【００２５】
いくつかの実施形態では、ＯＸ４０に結合するモノクローナル抗体および／またはヒトＰＤ−１に結合するモノクローナル抗体は、静脈内投与される。
【００２６】
いくつかの実施形態では、ＯＸ４０に結合するモノクローナル抗体および／またはヒトＰＤ−１に結合するモノクローナル抗体は、腫瘍内に投与される。
【００２７】
いくつかの実施形態では、ＯＸ４０に結合するモノクローナル抗体は、約０．１ｍｇ／ｋｇ〜約１０ｍｇ／ｋｇの用量で投与される。
【００２８】
いくつかの実施形態では、ＯＸ４０に結合するモノクローナル抗体は、１日１回、週１回、２週間に１回（Ｑ２Ｗ）および３週間に１回（Ｑ３Ｗ）からなる群から選択される頻度で投与される。
【００２９】
いくつかの実施形態では、ヒトＰＤ−１に結合するモノクローナル抗体は、約２００ｍｇの用量で投与される。
【００３０】
いくつかの実施形態では、ヒトＰＤ−１に結合するモノクローナル抗体は、Ｑ３Ｗで投与される。
【００３１】
いくつかの態様では、本開示は、癌を有するヒトにおける腫瘍サイズを減少させる方法であって、該ヒトに、配列番号４８に示されるアミノ酸配列を含む重鎖および配列番号４９に示されるアミノ酸配列を含む軽鎖を含んでなる、ヒトＯＸ４０に結合するモノクローナル抗体の治療上有効量、配列番号５０に示されるアミノ酸配列を含む重鎖および配列番号５１に示されるアミノ酸配列を含む軽鎖を含んでなる。ヒトＰＤ−１に結合するモノクローナル抗体の治療上有効量を投与することを含む方法を提供する。
【００３２】
いくつかの実施形態では、前記ヒトは、ＲＥＣＩＳＴ  バージョン１．１による完全応答または部分応答を示す。
【００３３】
いくつかの実施形態では、前記ヒトに、ヒトＯＸ４０に結合するモノクローナル抗体の静脈内投与の終了後少なくとも１時間〜２時間以内に、ヒトＰＤ−１に結合するモノクローナル抗体の静脈内投与が開始される、請求項１〜１０または１２〜２０のいずれか一項に記載の方法。
【００３４】
いくつかの態様では、本開示は、医薬組成物またはキットであって、
（ａ）配列番号１のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１、（ｂ）配列番号２のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２、（ｃ）配列番号３のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３、（ｄ）配列番号７のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１、（ｅ）配列番号８のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２、および（ｆ）配列番号９のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３を含んでなる、ヒトＯＸ４０に結合するモノクローナル抗体の治療上有効量、ならびに、
（ａ）配列番号５４のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１、（ｂ）配列番号５５のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２、（ｃ）配列番号５６のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３、（ｄ）配列番号５７のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１、（ｅ）配列番号５８のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２、および（ｆ）配列番号５９のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３を含んでなるヒトＰＤ−１に結合するモノクローナル抗体の治療上有効量を含む医薬組成物またはキットを提供する。
【００３５】
いくつかの実施形態では、ヒトＯＸ４０に結合するモノクローナル抗体は、配列番号５に示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨ領域、および配列番号１１に示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬ領域を含んでなる。
【００３６】
いくつかの実施形態では、ヒトＰＤ−１に結合するモノクローナル抗体は、配列番号５２に示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨ領域、および配列番号５３に示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬ領域を含んでなる。。
【００３７】
いくつかの実施形態では、ヒトＯＸ４０に結合するモノクローナル抗体は、配列番号５に示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨ領域、および配列番号１１に示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬ領域を含んでなり、かつ、ヒトＰＤ−１に結合するモノクローナル抗体は、配列番号５２に示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨ領域、および配列番号５３に示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬを含んでなる。
【００３８】
いくつかの実施形態では、ヒトＯＸ４０に結合するモノクローナル抗体は、配列番号４８に示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖、および配列番号４９に示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖を含んでなる。
【００３９】
いくつかの実施形態では、ヒトＰＤ−１に結合するモノクローナル抗体は、配列番号５０に示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖、および配列番号５１に示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖を含んでなる。
【００４０】
いくつかの実施形態では、ヒトＯＸ４０に結合するモノクローナル抗体は、配列番号４８に示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖、および配列番号４９に示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖を含んでなり、かつ、ヒトＰＤ−１に結合するモノクローナル抗体は、配列番号５０に示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖、および配列番号５１に示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖を含んでなる。
【００４１】
いくつかの実施形態では、ヒトＯＸ４０に結合するモノクローナル抗体は、配列番号４８に示されるアミノ酸配列を含む重鎖および配列番号４９に示されるアミノ酸配列を含む軽鎖を含んでなり、ヒトＰＤ−１に結合するモノクローナル抗体は、配列番号５０に示されるアミノ酸配列を含む重鎖および配列番号５１に示されるアミノ酸配列を含む軽鎖を含んでなる。
【００４２】
いくつかの態様では、本開示は、本明細書に記載の医薬組成物またはキットを、１つ以上の薬学的に許容される担体と共に含んでなる組合せキットを提供する。
【００４３】
いくつかの態様では、本開示は、癌の治療のための医薬の製造における、本明細書に記載の医薬組成物またはキットの使用を提供する。
【００４４】
いくつかの態様では、本開示は、癌の治療に使用するためのキットを提供であって：
（ａ）配列番号１のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１、（ｂ）配列番号２のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２、（ｃ）配列番号３のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３、（ｄ）配列番号７のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１、（ｅ）配列番号８のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２、および（ｆ）配列番号９のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３を含んでなる、ヒトＯＸ４０に結合するモノクローナル抗体の治療上有効量、ならびに、
（ａ）配列番号５４のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１、（ｂ）配列番号５５のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２、（ｃ）配列番号５６のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３、（ｄ）配列番号５７のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１、（ｅ）配列番号５８のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２、および（ｆ）配列番号５９のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３を含んでなる、ヒトＰＤ−１に結合するモノクローナル抗体の治療上有効量、ならびに、
癌の治療に関する使用説明書
を含むキットを提供する。
【００４５】
いくつかの実施形態では、ヒトＯＸ４０に結合するモノクローナル抗体は、配列番号５に示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨ領域、および配列番号１１に示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬ領域を含んでなる。
【００４６】
いくつかの実施形態では、ヒトＰＤ−１に結合するモノクローナル抗体は、配列番号５２に示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨ領域、および配列番号５３に示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬ領域を含んでなる。
【００４７】
いくつかの実施形態では、ヒトＯＸ４０に結合するモノクローナル抗体は、配列番号５に示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨ領域、および配列番号１１に示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬ領域を含んでなり、ヒトＰＤ−１に結合するモノクローナル抗体は、配列番号５２に示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨ領域、および配列番号５３に示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬ領域を含んでなる。
【００４８】
いくつかの実施形態では、ヒトＯＸ４０に結合するモノクローナル抗体は、配列番号４８に示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖、および配列番号４９に示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖を含んでなる。
【００４９】
いくつかの実施形態では、ヒトＰＤ−１に結合するモノクローナル抗体は、配列番号５０に示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖、および配列番号５１に示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖を含んでなる。
【００５０】
いくつかの実施形態では、ヒトＯＸ４０に結合するモノクローナル抗体は、配列番号４８に示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖、および配列番号４９に示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖を含んでなり、かつ、ヒトＰＤ−１に結合するモノクローナル抗体は、配列番号５０に示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖、および配列番号５１に示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖を含んでなる。
【００５１】
いくつかの実施形態では、ヒトＯＸ４０に結合するモノクローナル抗体は、配列番号４８に示されるアミノ酸配列を含む重鎖および配列番号４９に示されるアミノ酸配列を含む軽鎖を含んでなり、ヒトＰＤ−１に結合するモノクローナル抗体は、配列番号５０に示されるアミノ酸配列を含む重鎖および配列番号５１に示されるアミノ酸配列を含む軽鎖を含んでなる。
【００５２】
いくつかの実施形態では、ヒトＯＸ４０に結合するモノクローナル抗体およびヒトＰＤ−１に結合するモノクローナル抗体は、それぞれ、１つ以上の薬学的に許容される担体と共に個別に製剤化される。
【００５３】
いくつかの実施形態では、癌は固形腫瘍である。いくつかの実施形態では、癌は、メラノーマ、肺癌、腎臓癌、乳癌、頭頸部癌、結腸癌、卵巣癌、膵臓癌、肝臓癌、前立腺癌、膀胱癌および胃癌からなる群から選択される。
【００５４】
いくつかの態様では、本開示は、
（ａ）配列番号１のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１、（ｂ）配列番号２のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２、（ｃ）配列番号３のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３、（ｄ）配列番号７のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１、（ｅ）配列番号８のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２、および（ｆ）配列番号９のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３を含んでなる、ヒトＯＸ４０に結合するモノクローナル抗体の治療上有効量、ならびに、
（ａ）配列番号５４のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１、（ｂ）配列番号５５のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２、（ｃ）配列番号５６のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３、（ｄ）配列番号５７のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１、（ｅ）配列番号５８のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２、および（ｆ）配列番号５９のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３を含んでなる、ヒトＰＤ−１に結合するモノクローナル抗体の治療上有効量
を、それを必要とするヒトにおける癌の治療における使用（例えば、同時または連続的使用）を提供する。
【００５５】
いくつかの実施形態では、ヒトＯＸ４０に結合するモノクローナル抗体は、配列番号５に示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨ領域、および配列番号１１に示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬ領域を含んでなる。
【００５６】
いくつかの実施形態では、ヒトＰＤ−１に結合するモノクローナル抗体は、配列番号５２に示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨ領域、配列番号５３に示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬ領域を含んでなる。
【００５７】
いくつかの実施形態では、ヒトＯＸ４０に結合するモノクローナル抗体は、配列番号５に示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨ領域、および配列番号１１に示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬ領域を含んでなり、かつ、ヒトＰＤ−１に結合するモノクローナル抗体は、配列番号５２に示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨ領域、および配列番号５３に示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬ領域を含んでなる。
【００５８】
いくつかの実施形態では、ヒトＯＸ４０に結合するモノクローナル抗体は、配列番号４８に示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨ領域、および配列番号４９に示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬ領域を含んでなる。
【００５９】
いくつかの実施形態では、ヒトＰＤ−１に結合するモノクローナル抗体は、配列番号５０に示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖、および配列番号５１に示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖を含んでなる。
【００６０】
いくつかの実施形態では、ヒトＯＸ４０に結合するモノクローナル抗体は、配列番号４８に示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖、および配列番号４９に示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖を含んでなり、かつ、ヒトＰＤ−１に結合するモノクローナル抗体は、配列番号５０に示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖、および配列番号５１に示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖を含んでなる。
【００６１】
いくつかの実施形態では、ヒトＯＸ４０に結合するモノクローナル抗体は、配列番号４８に示されるアミノ酸配列を含む重鎖および配列番号４９に示されるアミノ酸配列を含む軽鎖を含んでなり、ヒトＰＤ−１に結合するモノクローナル抗体は、配列番号５０に示されるアミノ酸配列を含む重鎖および配列番号５１に示されるアミノ酸配列を含む軽鎖を含んでなる。
【００６２】
いくつかの実施形態では、癌は固形腫瘍である。いくつかの実施形態では、癌は、メラノーマ、肺癌、腎臓癌、乳癌、頭頸部癌、結腸癌、卵巣癌、膵臓癌、肝臓癌、前立腺癌、膀胱癌および胃癌からなる群から選択される。
【００６３】
いくつかの実施形態では、ＯＸ４０に結合するモノクローナル抗体およびヒトＰＤ−１に結合するモノクローナル抗体は、同時に投与される。
【００６４】
いくつかの実施形態では、ヒトＯＸ４０に結合するモノクローナル抗体およびヒトＰＤ−１に結合するモノクローナル抗体は、任意の順序で連続して投与される。
【００６５】
いくつかの実施形態では、ＯＸ４０に結合するモノクローナル抗体および／またはヒトＰＤ−１に結合するモノクローナル抗体は、静脈内に投与される。
【００６６】
いくつかの実施形態では、ＯＸ４０に結合するモノクローナル抗体および／またはヒトＰＤ−１に結合するモノクローナル抗体は、腫瘍内に投与される。
【００６７】
いくつかの実施形態では、ＯＸ４０に結合するモノクローナル抗体は、約０．１ｍｇ／ｋｇ〜約１０ｍｇ／ｋｇの用量で投与される。
【００６８】
いくつかの実施形態では、ＯＸ４０に結合するモノクローナル抗体は、１日１回、週１回、２週間に１回（Ｑ２Ｗ）、および３週間に１回（Ｑ３Ｗ）からなる群から選択される頻度で投与される。
【００６９】
いくつかの実施形態では、ヒトＰＤ−１に結合するモノクローナル抗体は、約２００ｍｇの用量で投与される。
【００７０】
いくつかの実施形態では、ヒトＰＤ−１に結合するモノクローナル抗体は、Ｑ３Ｗで投与される。
【００７１】
いくつかの態様では、本開示は、癌を有するヒトにおける腫瘍のサイズを減少させるために使用（例えば、同時または連続的使用）される、配列番号４８に示されるアミノ酸配列を含む重鎖、および配列番号４９に示されるアミノ酸配列を含む軽鎖を含んでなる、ヒトＯＸ４０に結合するモノクローナル抗体の治療上有効量、ならびに、配列番号５０に示されるアミノ酸配列を含む重鎖、および配列番号５１に示されるアミノ酸配列を含む軽鎖を含んでなる、ヒトＰＤ−１に結合するモノクローナル抗の治療上有効量を提供する。
【００７２】
いくつかの実施形態では、ヒトは、ＲＥＣＩＳＴ  バージョン１．１による完全応答または部分応答を示す。
【００７３】
いくつかの実施形態では、ヒトＯＸ４０に結合するモノクローナル抗体の静脈内投与の終了後少なくとも１時間〜２時間以内に、ヒトＰＤ−１に結合するモノクローナル抗体の静脈内投与が開始される。
【００７４】
いくつかの態様では、本開示は、
（ａ）配列番号１のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１、（ｂ）配列番号２のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２、（ｃ）配列番号３のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３、（ｄ）配列番号７のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１、（ｅ）配列番号８のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２、および（ｆ）配列番号９のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３を含んでなる、ヒトＯＸ４０に結合するモノクローナル抗体の治療上有効量、ならびに、
（ａ）配列番号５４のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１、（ｂ）配列番号５５のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２、（ｃ）配列番号５６のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３、（ｄ）配列番号５７のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１、（ｅ）配列番号５８のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２、および（ｆ）配列番号５９のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３を含んでなる、ヒトＰＤ−１に結合するモノクローナル抗体の治療上有効量の使用であって、それを必要とするヒトにおける癌を治療するための医薬の調製のための使用を提供する。
【００７５】
いくつかの実施形態では、ヒトＯＸ４０に結合するモノクローナル抗体は、配列番号５に示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨ領域、および配列番号１１に示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬ領域を含んでなる。
【００７６】
いくつかの実施形態では、ヒトＰＤ−１に結合するモノクローナル抗体は、配列番号５２に示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨ領域、および配列番号５３に示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬ領域を含んでなる。
【００７７】
いくつかの実施形態では、ヒトＯＸ４０に結合するモノクローナル抗体は、配列番号５に示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨ領域、および配列番号１１に示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬ領域を含んでなり、かつ、ヒトＰＤ−１に結合するモノクローナル抗体は、配列番号５２に示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨ領域、および配列番号５３に示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬ領域を含んでなる。
【００７８】
いくつかの実施形態では、ヒトＯＸ４０に結合するモノクローナル抗体は、配列番号４８に示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖、および配列番号４９に示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖を含んでなる。
【００７９】
いくつかの実施形態では、ヒトＰＤ−１に結合するモノクローナル抗体は、配列番号５０に示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖、および配列番号５１に示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖を含んでなる。
【００８０】
いくつかの実施形態では、ヒトＯＸ４０に結合するモノクローナル抗体は、配列番号４８に示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖、および配列番号４９に示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖を含んでなり、かつ、ヒトＰＤ−１に結合するモノクローナル抗体は、配列番号５０に示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖、および配列番号５１に示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖を含んでなる。
【００８１】
いくつかの実施形態では、ヒトＯＸ４０に結合するモノクローナル抗体は、配列番号４８に示されるアミノ酸配列を含む重鎖および配列番号４９に示されるアミノ酸配列を含む軽鎖を含んでなり、ヒトＰＤ−１に結合するモノクローナル抗体は、配列番号５０に示されるアミノ酸配列を含む重鎖および配列番号５１に示されるアミノ酸配列を含む軽鎖を含んでなる。
【００８２】
いくつかの実施形態では、癌は固形腫瘍である。いくつかの実施形態では、癌は、メラノーマ、肺癌、腎臓癌、乳癌、頭頸部癌、結腸癌、卵巣癌、膵臓癌、肝臓癌、前立腺癌、膀胱癌および胃癌からなる群から選択される。
【００８３】
いくつかの実施形態では、ＯＸ４０に結合するモノクローナル抗体およびヒトＰＤ−１に結合するモノクローナル抗体は、同時に投与される。
【００８４】
いくつかの実施形態では、ヒトＯＸ４０に結合するモノクローナル抗体およびヒトＰＤ−１に結合するモノクローナル抗体は、任意の順序で連続して投与される。
【００８５】
いくつかの実施形態では、ＯＸ４０に結合するモノクローナル抗体および／またはヒトＰＤ−１に結合するモノクローナル抗体は、静脈内に投与される。
【００８６】
いくつかの実施形態では、ＯＸ４０に結合するモノクローナル抗体および／またはヒトＰＤ−１に結合するモノクローナル抗体は、腫瘍内に投与される。
【００８７】
いくつかの実施形態では、ＯＸ４０に結合するモノクローナル抗体は、約０．１ｍｇ／ｋｇ〜約１０ｍｇ／ｋｇの用量で投与される。
【００８８】
いくつかの実施形態では、ＯＸ４０に結合するモノクローナル抗体は、１日１回、週１回、２週間に１回（Ｑ２Ｗ）、および３週間に１回（Ｑ３Ｗ）からなる群から選択される頻度で投与される。
【００８９】
いくつかの実施形態では、ヒトＰＤ−１に結合するモノクローナル抗体は、約２００ｍｇの用量で投与される。
【００９０】
いくつかの実施形態では、ヒトＰＤ−１に結合するモノクローナル抗体は、Ｑ３Ｗで投与される。
【００９１】
いくつかの態様では、本開示は、配列番号４８に示されるアミノ酸配列を含む重鎖、および配列番号４９に示されるアミノ酸配列を含む軽鎖を含んでなる、ヒトＯＸ４０に結合するモノクローナル抗体の治療上有効量、ならびに、配列番号５０に示されるアミノ酸配列を含む重鎖、および配列番号５１に示されるアミノ酸配列を含む軽鎖を含んでなる、ヒトＰＤ−１に結合するモノクローナル抗体の治療上有効量の、癌を有するヒトにおける腫瘍サイズを減少させるための医薬の調製のための使用（例えば、同時または連続的使用）を提供する。
【００９２】
いくつかの実施形態では、ヒトは、ＲＥＣＩＳＴ  バージョン１．１に従って完全応答または部分応答を示す。
【００９３】
いくつかの実施形態では、ヒトＯＸ４０に結合するモノクローナル抗体の静脈内投与の終了後少なくとも１時間〜２時間以内に、ヒトＰＤ−１に結合するモノクローナル抗体の静脈内投与が開始される。
【図面の簡単な説明】
【００９４】
【図１】図１は、本発明の組み合わせ物の抗ＯＸ４０  ＡＢＰの配列、またはその方法もしくは使用、例えばＣＤＲならびにＶＨおよびＶＬ配列を示す。
【図２】図２は、本発明の組み合わせ物の抗ＯＸ４０  ＡＢＰの配列、またはその方法もしくは使用、例えばＣＤＲならびにＶＨおよびＶＬ配列を示す。
【図３】図３は、本発明の組み合わせ物の抗ＯＸ４０  ＡＢＰの配列、またはその方法もしくは使用、例えばＣＤＲならびにＶＨおよびＶＬ配列を示す。
【図４】図４は、本発明の組み合わせ物の抗ＯＸ４０  ＡＢＰの配列、またはその方法もしくは使用、例えばＣＤＲならびにＶＨおよびＶＬ配列を示す。
【図５】図５は、本発明の組み合わせ物の抗ＯＸ４０  ＡＢＰの配列、またはその方法もしくは使用、例えばＣＤＲならびにＶＨおよびＶＬ配列を示す。
【図６】図６は、本発明の組み合わせ物の抗ＯＸ４０  ＡＢＰの配列、またはその方法もしくは使用、例えばＣＤＲならびにＶＨおよびＶＬ配列を示す。
【図７】図７は、本発明の組み合わせ物の抗ＯＸ４０  ＡＢＰの配列、またはその方法もしくは使用、例えばＣＤＲならびにＶＨおよびＶＬ配列を示す。
【図８】図８は、本発明の組み合わせ物の抗ＯＸ４０  ＡＢＰの配列、またはその方法もしくは使用、例えばＣＤＲならびにＶＨおよびＶＬ配列を示す。
【図９】図９は、本発明の組み合わせ物の抗ＯＸ４０  ＡＢＰの配列、またはその方法もしくは使用、例えばＣＤＲならびにＶＨおよびＶＬ配列を示す。
【図１０】図１０は、本発明の組み合わせ物の抗ＯＸ４０  ＡＢＰの配列、またはその方法もしくは使用、例えばＣＤＲならびにＶＨおよびＶＬ配列を示す。
【図１１】図１１は、本発明の組み合わせ物の抗ＯＸ４０  ＡＢＰの配列、またはその方法もしくは使用、例えばＣＤＲならびにＶＨおよびＶＬ配列を示す。
【図１２】図１２は、本発明の組み合わせ物の抗ＯＸ４０  ＡＢＰの配列、またはその方法もしくは使用、例えばＣＤＲならびにＶＨおよびＶＬ配列を示す。
【図１３】図１３ａおよび図３ｂは、生存率が統計的に有意に増加した非臨床マウスモデルにおけるＯＸ８６単剤療法の結果を示す一対の折れ線グラフである；（ａ）試験したすべての用量レベルおよび（ｂ）５μｇ（マイクログラム）用量。
【図１４】図１４は、ＣＴ２６同系マウス腫瘍モデルにおけるＯＸ８６および抗ＰＤ１を示す折れ線グラフである：併用療法対単剤療法。
【図１５】図１５は、研究デザインを示す概略図である。
【図１６】図１６は、ＰＤ−１アンタゴニストおよびＯＸ４０アゴニストの同時投与の抗腫瘍効果を示す一連の４つのパネルである。併用療法は、ＭＣ３８腫瘍発症マウスにおいて、いずれかの薬剤単独による単独療法よりも優れている。ＣＲ（完全応答）；ＰＲ（部分応答）。実験の詳細は実施例２に記載されている。
【発明の具体的説明】
【００９５】
組成物と組み合わせ物
免疫系の機能の改善は、癌に対する免疫療法の目標である。理論に拘束されるものではないが、免疫系が活性化され、効果的に腫瘍の退縮を引き起こすか、または腫瘍を排除するためには、免疫系の様々な部分と腫瘍床との効率的なクロストークがなければならないと考えられる。殺腫瘍効果は、例えば未成熟樹状細胞による抗原の取り込み、および流入領域リンパ節における、成熟樹状細胞によるＭＨＣ  ＩおよびＩＩを介した処理抗原のナイーブＣＤ８（細胞傷害性）およびＣＤ４（ヘルパー）リンパ球への提示という、１つまたは複数のステップに依存する。ナイーブＴ細胞は、樹状細胞等の抗原提示細胞（ＡＰＣ）上のＢ７ファミリーの共刺激分子と結合するＣＴＬＡ−４およびＣＤ２８等の分子を発現する。免疫監視中にＴ細胞をチェックするために、ＡＰＣ上のＢ７は、Ｔリンパ球上の阻害分子であるＣＴＬＡ−４に優先的に結合する。しかしながら、ＡＰＣ上での同種ペプチドの提示を介したＴ細胞受容体（ＴＣＲ）とＭＨＣクラスＩまたはＩＩ受容体との結合により、共刺激分子はＣＴＬＡ−４から解離し、代わりに低親和性刺激分子ＣＤ２８に結合し、Ｔ細胞を活性化および増殖させる。この感作されたＴリンパ球集団の増大は、離れた腫瘍部位に進入する際に、提示された抗原の記憶を保持する。同種抗原を有する腫瘍細胞に遭遇すると、それらは、グランザイムＢおよびパーフォリン等の細胞溶解性メディエーターを介して腫瘍を排除する。この明らかに単純な一連の事象は、いくつかのサイトカイン、共刺激分子およびチェックポイントモジュレーターに大きく依存し、これらの感作Ｔリンパ球を、腫瘍を排除することができる記憶プールに活性化および分化させる。
【００９６】
従って、新たな免疫療法戦略は、Ｔ細胞共刺激分子、例えばＯＸ４０をを標的とすることである。ＯＸ４０（例えばヒトＯＸ４０（ｈＯＸ４０）またはｈＯＸ４０Ｒ）は、数ある細胞の中でも活性化ＣＤ４およびＣＤ８Ｔ細胞上で発現される腫瘍壊死因子受容体ファミリーメンバーである。その機能の１つは、これらの細胞の分化および長期生存にある。ＯＸ４０のリガンド（ＯＸ４０Ｌ）は、活性化抗原提示細胞によって発現される。理論に拘束されるものではないが、本発明の組み合わせ物の抗ＯＸ４０  ＡＢＰ、またはその方法もしくは使用は、例えばＯＸ４０Ｌのような重なり合ったメカニズムで、ＯＸ４０を「関与させる」ことにより、ＯＸ４０を調節し、Ｔ細胞の増殖および／または分化を促進し、長期記憶Ｔ細胞集団を増加させる。従って、本発明の組み合わせ物のＡＢＰ、またはその方法もしくは使用の１つの実施形態では、ＯＸ４０に結合し、関与する。別の実施形態では、本発明の組み合わせ物の抗ＯＸ４０  ＡＢＰ、またはその方法もしくは使用は、ＯＸ４０を調節する。さらなる実施形態では、本発明の組み合わせ物のＡＢＰ、またはその方法もしくは使用は、ＯＸ４０Ｌを模倣することによってＯＸ４０を調節する。別の実施形態では、本発明の組み合わせ物の抗ＯＸ４０  ＡＢＰ、またはその方法もしくは使用は、アゴニスト抗体である。別の実施形態では、本発明の組み合わせ物の抗ＯＸ４０  ＡＢＰ、またはその方法もしくは使用は、ＯＸ４０を調節し、Ｔ細胞の増殖を引き起こす。さらなる実施形態では、本発明の組み合わせ物の抗ＯＸ４０  ＡＢＰ、またはその方法もしくは使用は、ＯＸ４０を調節し、ＣＤ４  Ｔ細胞の増殖を改善、増強、促進または増大させる。別の実施形態では、本発明の組み合わせ物の抗ＯＸ４０  ＡＢＰ、またはその方法もしくは使用は、ＣＤ８  Ｔ細胞の増殖を改善、増強、促進または増大させる。さらなる実施形態では、本発明の組み合わせ物の抗ＯＸ４０  ＡＢＰ、またはその方法もしくは使用は、ＣＤ４およびＣＤ８Ｔ細胞の両方の増殖を改善、増強、促進または増大させる。別の実施形態では、本発明の組み合わせ物の抗ＯＸ４０  ＡＢＰ、またはその方法もしくは使用は、例えばＣＤ４もしくはＣＤ８Ｔ細胞、またはＣＤ４およびＣＤ８Ｔ細胞の両方のＴ細胞機能を増強する。さらなる実施形態では、本発明の組み合わせ物の抗ＯＸ４０  ＡＢＰ、またはその方法もしくは使用は、エフェクターＴ細胞機能を増強する。別の実施形態では、本発明の組み合わせ物の抗ＯＸ４０  ＡＢＰ、またはその方法もしくは使用は、ＣＤ８Ｔ細胞の長期生存を改善、増強、促進または増大させる。さらなる実施形態では、前述の効果のいずれかが腫瘍微小環境において生じる。
【００９７】
理論に拘束されるものではないが、Ｔ調節細胞（Ｔｒｅｇｓ）および腫瘍自体（例えばトランスフォーミング増殖因子（ＴＧＦ−Ｂ）およびインターロイキン−１０（ＩＬ−１０））の両方によって産生されるメディエーターによる、腫瘍部位での潜在的に頑強な免疫抑制応答の遮断も同様に重要である。理論に拘束されるものではないが、癌の重要な免疫病因は、腫瘍床および炎症部位に見られるＴｒｅｇｓの関与であり得る。一般に、Ｔｒｅｇ細胞は循環系に自然に存在し、外部病原体に遭遇して排除した後の警戒状態において、免疫系を平常状態に戻すのを助ける。それらは自己抗原に対する耐性を維持するのに役立ち、機能においては生来抑制的である。それらは表現型的にＣＤ４＋、ＣＤ２５＋、ＦＯＸＰ３＋細胞として特徴付けられる。理論に拘束されるものではないが、ある種の癌を効果的に治療するための寛容を破るために、治療の１つの方法は、腫瘍部位でＴｒｅｇを優先的に排除することである。抗腫瘍応答をもたらすＴｒｅｇの標的化および除去は、免疫原性が低い腫瘍と比較して免疫原性である腫瘍において、より成功している。多くの腫瘍がサイトカイン、例えば前駆体ＣＤ４＋２５＋細胞にＦＯＸＰ３＋表現型を獲得させ、Ｔｒｅｇとして機能させることによって、免疫応答を妨害し得るＴＧＦ−βを分泌する。
【００９８】
本明細書において、例えば、受容体または他の標的に関し、「調節する」とは、本来のまたは従来の受容体の機能を変化させることを意味し、例えば、天然または人工リガンドの受容体または標的に対する結合に影響を及ぼすことを意味し；受容体または標的を介して部分的または全体的なコンフォメーションの変化またはシグナル伝達を開始させることを含み、また、受容体または標的と天然または人工リガンドとの部分的または全体的な結合を阻害することを含む。膜に結合した受容体または標的の場合には、天然または未変化の状態と比較して、受容体または標的が膜中の他のタンパク質または分子と相互作用する方法が変化するか、または膜区画内のいずれかの局在化（または他の分子との共局在）が変化することも含まれる。従って、モジュレーターは、標的または受容体を調節する化合物またはリガンドまたは分子である。調節には、作動化（agonizing）、例えばシグナル伝達、ならびにアンタゴナイズ化、または未変化もしくは未調節状態において生じるシグナル伝達阻害、またはリガンドもしくは化合物もしくは分子との相互作用阻害が含まれる。従って、モジュレーターは、アゴニストまたはアンタゴニストであり得る。さらに、当業者であれば、全てのモジュレーターが１つの標的または受容体に対して絶対選択性を有するわけではなく、その標的または受容体のモジュレーター、例えばモジュレーターは、複数の標的と結合し得るとも考えられることを認識するであろう。
【００９９】
本明細書中で使用される場合、「アゴニスト」という用語は、限定されないが、共シグナル伝達受容体と接触すると、以下に挙げる（１）受容体の刺激または活性化、（２）受容体の活性、機能または存在の促進、増大または増強、誘導または長期化、（３）天然リガンドの１つまたは複数の機能を模倣し、または受容体を介した既知の機能化またはシグナル伝達において見られる１つまたは複数の部分的または全体的なコンフォメーション変化を開始させることによる、標的または受容体と相互作用する天然リガンドまたは分子の１つまたは複数の機能の模倣、受容体を介して１つまたは複数のシグナル伝達事象の開始、かつ／または（４）受容体の発現の増強、増大、促進または誘導のうちの１つまたは複数を引き起こす、抗体に限定されない抗原結合タンパク質を意味する。アゴニスト活性は、限定されないが、細胞シグナル伝達、細胞増殖、免疫細胞活性化マーカー、サイトカイン産生の測定等の従来技術において知られている様々なアッセイによってin vitroで測定することができる。アゴニスト活性はまた、限定されないが、Ｔ細胞増殖またはサイトカイン産生の測定等の代用エンドポイントを測定する様々なアッセイによってin vivoで測定することができる。
【０１００】
本明細書中で使用される場合、「アンタゴニスト」という用語は、共シグナル伝達受容体と接触すると、以下に挙げる（１）受容体の弱力化、阻害もしくは不活性化、および／またはその天然リガンドによる受容体の活性の阻害、（２）受容体の活性、機能または存在の低減、減少または短縮、および／または（３）受容体の発現の低減、減少、無効化のうちの１つまたは複数を引き起こす、抗体に限定されない抗原結合タンパク質を意味する。アンタゴニスト活性は、限定されないが、細胞シグナル伝達、細胞増殖、免疫細胞活性化マーカー、サイトカイン産生の増加または減少の測定等の従来技術において知られている様々なアッセイによってin vitroで測定することができる。アンタゴニスト活性はまた、限定されないが、Ｔ細胞増殖またはサイトカイン産生の測定等の代用エンドポイントを測定する様々なアッセイによってin vivoで測定することができる。
【０１０１】
従って、一つの実施形態では、アゴニスト抗ＯＸ４０  ＡＢＰは、例えば腫瘍環境内において、Ｔ細胞の他のＴ細胞に対する抑制効果を阻害する。
【０１０２】
腫瘍内のＴエフェクター細胞に対するＴｒｅｇの比が、抗腫瘍応答と相関することを示す証拠が蓄積されている。従って、一つの実施形態では、本発明の組み合わせ物のＯＸ４０  ＡＢＰ（抗ＯＸ４０  ＡＢＰ）、またはその方法もしくは使用は、ＯＸ４０を調節してＴエフェクター数および機能を増強し、Ｔｒｅｇ機能を阻害する。
【０１０３】
ＯＸ４０の抗腫瘍効果の促進、増強、改善、増大およびその他の変化は、本発明の組み合わせ物、または方法もしくはその使用の目的である。本明細書中に記載されるのは、本発明の組み合わせ物、またはその方法もしくは使用の抗ＯＸ４０  ＡＢＰと、および本明細書に記載のＰＤ−１モジュレーター（例えば、抗ＰＤ−１  ＡＢＰ）等の他の化合物との組み合わせである。
【０１０４】
従って、本明細書中で使用される「本発明の組み合わせ物」という用語は、抗ＯＸ４０  ＡＢＰ、好適にはアゴニスト抗ＯＸ４０  ＡＢＰ、および抗ＰＤ−１  ＡＢＰ、好適にはアンタゴニスト抗ＰＤ−１  ＡＢＰを含んでなる組み合わせ物を意味し、これらの各々は、本明細書に記載されるように、別々にまたは同時に投与され得る。
【０１０５】
本明細書中で使用される場合、「癌」、「新生物」および「腫瘍」という用語は、互換的に使用され、単数形または複数形のいずれかで、悪性形質転換を受けた細胞、または異常なもしくは調節されていない増殖をもたらす細胞変化を受けた細胞を意味する。そのような変化または悪性形質転換により、通常、そのような細胞は宿主生物にとって病因となり、従って、病因となるかまたはなり得、かつ本発明を必要とするかまたは利益を受ける前癌または前癌細胞は包含されると意図される。原発性癌細胞（すなわち、悪性形質転換の部位の近くから得られた細胞）は、十分に確立された技術、特に組織学的検査によって、非癌性細胞と容易に区別することができる。本明細書中で使用される癌細胞の定義には、原発性癌細胞だけでなく、癌細胞祖先由来の任意の細胞が含まれる。これには、転移した癌細胞、ならびにin vitro培養物および癌細胞由来の細胞株が含まれる。固形腫瘍のような通常発現するタイプの癌を意味する場合、「臨床的に検出可能」な腫瘍は、例えばＣＡＴスキャン、ＭＲイメージング、Ｘ線、超音波もしくは触診等の手段によって、腫瘍の質量に基づいて検出可能な腫瘍であり、かつ／または患者から得られる試料中の１つまたは複数の癌特異的抗原の発現のために検出可能な腫瘍である。換言すれば、本明細書の用語は、臨床医が前癌、腫瘍、in situ増殖、および後期転移性増殖を指すものを含む、任意の段階の細胞、新生物、癌および腫瘍を含む。腫瘍は、造血腫瘍であり得、例えば、液体腫瘍を意味する血液細胞の腫瘍等である。このような腫瘍に基づく臨床症状の具体例としては、慢性骨髄性白血病または急性骨髄球性白血病等の白血病；多発性骨髄腫等の骨髄腫；リンパ腫等が含まれる。
【０１０６】
本明細書中で使用される場合、「薬剤」という用語は、組織、系、動物、哺乳動物、ヒトまたは他の対象において所望の効果を生じる物質を意味すると理解される。従って、「抗新生物剤」という用語は、組織、系、動物、哺乳動物、ヒトまたは他の対象において抗新生物効果を生じる物質を意味すると理解される。また、「剤」は、単一の化合物または２つ以上の化合物の組み合わせまたは組成物であってもよいことも理解されたい。
【０１０７】
本明細書で使用される「治療する」という用語およびその変形は、治療的治療を意味する。特定の症状に関連して、治療は、（１）症状または症状の１つもしくは複数の生物学的徴候を改善すること；（２）（ａ）症状をもたらすまたは原因となる生物学的カスケード内の１つまたは複数のポイント、（ｂ）症状の１つまたは複数の生物学的兆候を阻害すること；（３）症状に関連する１つまたは複数の兆候、作用もしくは副作用、または症状もしくはその治療に関連する１つまたは複数の兆候、作用または副作用を緩和すること；（４）症状の進行、または症状の１つもしくは複数の生物学的兆候を遅らせること、および／または（５）兆候の寛解状態であると考えられる期間において、寛解の期間にわたってさらなる治療をすることなしに、症状の１つまたは複数の生物学的兆候を検出不可能なレベルまで除去または低減することによって、症状の１つまたは複数の生物学的兆候を治癒することを意味する。当業者であれば、特定の疾患または症状について寛解と考えられる期間を理解するであろう。予防的治療もまた本明細書において意図される。当業者であれば、「予防」は絶対的な用語ではないことを理解するであろう。医学において、「予防」とは、症状もしくは生物学的兆候の可能性もしくは重篤度を実質的に低下させるため、またはそのような症状もしくは生物学的兆候の発症を遅延させるための薬物の予防的投与を意味すると理解される。予防的治療は、例えば、対象が癌の強い家族歴を有する場合、または対象が発癌物質に曝された場合等、対象が癌を発症するリスクが高いと考えられる場合に好適である。
【０１０８】
本明細書中で使用される場合、「予防」とは、症状もしくはその生物学的徴候の可能性もしくは重篤度を実質的に低下させるため、またはそのような症状もしくは生物学的兆候の発症を遅延させるための薬物の予防的投与を意味すると理解される。当業者であれば、「予防」は絶対的な用語ではないことを理解するであろう。予防的療法は、例えば、対象が癌の強い家族歴を有する場合、または対象が発癌物質に曝された場合等、対象が癌を発症するリスクが高いと考えられる場合に好適である。
【０１０９】
本明細書で使用する場合、「有効量」という用語は、例えば研究者または臨床医により求められる、組織、系、動物またはヒトの生物学的または医学的応答を誘発する薬剤または医薬品の量を意味する。さらに、「治療上有効量」という用語は、そのような量を受けていない対応する対象と比較して、疾患、障害または副作用の改善された治療、治癒、予防もしくは緩和、または疾患もしくは障害の進行速度の低下させる任意の量を意味する。この用語はまた、その範囲内で、正常な生理学的機能を高めるのに有効な量を含む。
【０１１０】
治療上有効量の本発明の組み合わせ物（または治療上有効量の組み合わせ物の各成分）の投与は、治療上有効量の成分化合物を個別に投与した場合と比較して、１つまたは複数の下記の特性の改善をもたらすという点で、個別の成分化合物よりも有利である：ｉ）最も活性の高い単一の剤よりも大きな抗癌効果、ｉｉ）相乗的または高度に相乗的な抗癌活性、ｉｉｉ）副作用プロファイルが低減した、増強された抗癌活性を提供する投与プロトコル、ｉｖ）毒性効果プロファイルの低減、ｖ）治療ウインドウの増加、またはｖｉ）１つまたは両方の成分化合物の生体利用効率の増大。
【０１１１】
本発明はさらに、本明細書中の１つまたは複数のの成分、および１つまたは複数の薬学的に許容される担体、希釈剤または賦形剤を含む医薬組成物を提供する。本発明の組み合わせ物は、２つの医薬組成物を含んでいてもよく、１つは本発明の抗ＯＸ４０  ＡＢＰ、好適にはアゴニスト抗ＯＸ４０  ＡＢＰを含み、もう１つは抗ＰＤ−１  ＡＢＰ、好適にはアンタゴニスト抗ＰＤ−１  ＡＢＰを含み、これらの各々は、同一または異なる担体、希釈剤または賦形剤を有していてもよい。担体、希釈剤または賦形剤は、製剤の他の成分と適合性があり、医薬製剤化が可能であり、その受容者に有害ではないという意味で許容されなければならない。
【０１１２】
本発明の組み合わせ物の成分およびそのような成分を含んでなる医薬組成物は、任意の順序で、異なる経路で投与することができ、それらを含む成分および医薬組成物は同時に投与することができる。
【０１１３】
本発明の別の態様によれば、本発明の組み合わせ物の成分と１つまたは複数の薬学的に許容される担体、希釈剤または賦形剤とを混合することを含む、医薬組成物の製造方法も提供される。
【０１１４】
本発明の成分は、任意の適切な経路によって投与することができる。いくつかの成分について、好適な経路としては、経口、直腸、鼻、局所（頬側および舌下を含む）、膣および非経口（皮下、筋肉内、静脈内、皮内、くも膜下腔および硬膜外を含む）が含まれる。好適な経路は、例えば、組み合わせ物の受容者の状態および処置される癌によって変化し得ることが理解されるであろう。投与される薬剤の各々は、同じまたは異なる経路によって投与されてもよく、成分は、一緒にまたは別々の医薬組成物中で混合されてもよいことも理解される。
【０１１５】
一つの実施形態では、本発明の組み合わせ物の１つまたは複数の成分は、静脈内投与される。別の実施形態では、本発明の組み合わせ物の１つまたは複数の成分は、腫瘍内投与される。別の実施形態では、本発明の組み合わせ物の１つまたは複数の成分は、全身投与、例えば静脈内投与され、本発明の組み合わせ物の１つまたは複数の他の成分は、腫瘍内投与される。別の実施形態では、本発明の組み合わせ物の成分の全ては、全身投与、静脈内投与される。別の実施形態では、本発明の組み合わせ物の成分の全ては、腫瘍内投与される。いずれかの実施形態では、例えば、この段落では、本発明の成分は、１つまたは複数の医薬組成物として投与される。
【０１１６】
ＯＸ４０に結合する抗原結合タンパク質
「抗原結合タンパク質（ＡＢＰ）」は、抗体と類似の方法で機能する抗体または改変された分子を含む、抗原に結合するタンパク質を意味する。このような代替的な抗体型には、トリアボディー、テトラボディー、ミニ抗体およびミニボディーが含まれる。本明細書における任意の分子の１つまたは複数のＣＤＲが、適切な非免疫グロブリンタンパク質足場（scaffold）または骨格上に配列され得る、アフィボディ、ＳｐＡ足場、ＬＤＬ受容体クラスＡドメイン、アビマー（avimer）（例えば、ＵＳ２００５／００５３９７３、ＵＳ２００５／００８９９３２、ＵＳ２００５／０１６４３０１を参照）またはＥＧＦドメイン等の代替的な足場も含まれる。ＡＢＰは、そのような抗体または他の分子の抗原結合断片も含む。さらに、本発明の組み合わせ物、またはその方法もしくは使用のＡＢＰは、完全長抗体、（Ｆａｂ’）２断片、Ｆａｂ断片、二重特異性もしくは双極性分子、または適切な軽鎖と対になったときのそれらの等価物（ｓｃＦＶ、バイボディー、トリアボディーまたはテトラボディー、Ｔａｎｄａｂｓ等）の形態のＶＨ領域を含み得る。ＡＢＰは、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３またはＩｇＧ４；またはＩｇＭ；ＩｇＡ、ＩｇＥまたはＩｇＤまたはその改変体である抗体を含み得る。従って、抗体の重鎖定常ドメインは選択することができる。軽鎖定常ドメインは、κまたはλ定常ドメインであり得る。ＡＢＰはまた、抗原結合領域および非免疫グロブリン領域を含む、ＷＯ８６／０１５３３に記載されたタイプのキメラ抗体であってもよい。
【０１１７】
従って、本明細書では、本発明の組み合わせ物、またはその方法もしくは使用の抗ＯＸ４０  ＡＢＰ、またはタンパク質は、ＯＸ４０に結合するものであり、好ましい実施形態では、下記の１つまたは複数を行うものである：ＯＸ４０によるシグナル伝達の調節、ＯＸ４０の機能の調節、ＯＸ４０のシグナル伝達の作動化（agonize）、ＯＸ４０の機能の刺激、またはＯＸ４０シグナル伝達の共刺激。当業者であれば、そのような機能を確立するための様々な公知のアッセイを容易に認識するであろう。
【０１１８】
本明細書で使用される「抗体」という用語は、抗原結合ドメイン、および任意に免疫グロブリン様ドメインまたはその断片を有する分子を意味し、モノクローナル抗体（例えば、ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＤまたはＩｇＥおよびその改変体）、組換え抗体、ポリクローナル抗体、キメラ抗体、ヒト化抗体、二極性化抗体、二重特異性抗体およびヘテロコンジュゲート抗体、または閉鎖コンフォメーション多重特異性抗体が含むまれる。「抗体」には、異種、同種異系、同系または他の改変形態が含まれる。抗体は単離または精製されていてもよい。抗体は、組換え体であってもよく、すなわち組換え手段によって産生されてもよく、例えば、参照抗体と９０％同一である抗体は、当技術分野で公知の組換え分子生物学技術を用いて特定の残基の突然変異誘発によって生成され得る。従って、本発明の抗体は、本発明の組み合わせ物、またはその方法もしくは使用の重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含んでなり、天然抗体の構造の形態、または完全長組換え抗体、ａ（Ｆａｂ’）２断片、Ｆａｂ断片、二重特異性もしくは双極性分子、または適切な軽鎖と対になったときのそれらの等価物（ｓｃＦＶ、バイボディー、トリアボディーまたはテトラボディー、Ｔａｎｄａｂｓ等）の形態であり得る。抗体は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３もしくはＩｇＧ４またはその改変体であってもよい。従って、抗体の重鎖定常ドメインは選択することができる。軽鎖定常ドメインは、κまたはλ定常ドメインであり得る。抗体はまた、抗原結合領域および非免疫グロブリン領域を含む、ＷＯ８６／０１５３３に記載されたタイプのキメラ抗体であってもよい。
【０１１９】
当業者であれば、本明細書における組み合わせ物、またはその方法もしくは使用の抗ＯＸ４０  ＡＢＰが、ＯＸ４０のエピトープに結合すること、同様に、本明細書における組み合わせ物、またはその方法もしくは使用の抗ＰＤ−１  ＡＢＰが、ＰＤ−１のエピトープに結合することを理解するであろう。ＡＢＰのエピトープは、ＡＢＰが結合する抗原の領域である。２つのＡＢＰは、それぞれが抗原との結合を競合的に阻害（遮断）する場合、同じまたは重複するエピトープに結合する。すなわち、１つの抗体の１×、５×、１０×、２０×または１００×の過剰は、競合する抗体を欠く対照と比較して、競合結合アッセイにおける測定として、他の結合を少なくとも５０％、好ましくは７５％、９０％またはさらには９９％阻害する（例えば、参照により本明細書に組み込まれる、Junghans et al., Cancer Res. 50:1495, 1990を参照）。あるいは、一方の抗体の結合を低減または排除する、抗原における実質的にすべてのアミノ酸変異が他方の抗体の結合を低減または排除する場合、２つの抗体は同じエピトープを有する。また、例えば一方の抗体の結合を低減または排除するいくつかのアミノ酸変異が他方の抗体の結合を低減または排除する場合、同じエピトープは「重複するエピトープ」を含み得る。
【０１２０】
結合の強さは、本発明の組み合わせ物、または方法もしくは使用のＡＢＰの用量および投与において重要であり得る。一つの実施形態では、本発明のＡＢＰは、その標的（例えば、ＯＸ４０またはＰＤ−１）に高親和性で結合する。例えば、Ｂｉａｃｏｒｅによって測定した場合、抗体は、１〜１０００ｎＭもしくは５００ｎＭ以下の親和性、または２００ｎＭ以下の親和性、または１００ｎＭ以下の親和性、または５０ｎＭの親和性、または５００ｐＭ以下の親和性、または４００ｐＭ以下の親和性、または３００ｐＭ以下の親和性でＯＸ４０、好ましくはヒトＯＸ４０と結合する。さらなる態様では、抗体は、Ｂｉａｃｏｒｅによって測定した場合、約５０ｎＭ〜約２００ｎＭ、または約５０ｎＭ〜約１５０ｎＭの親和性で、ＯＸ４０、好ましくはヒトＯＸ４０と結合する。本発明の一つの態様では、抗体は、１００ｎＭ未満の親和性でＯＸ４０、好ましくはヒトＯＸ４０と結合する。
【０１２１】
さらなる実施形態では、結合はＢｉａｃｏｒｅによって測定される。親和性は、１つの分子、例えば本発明の組み合わせ物、またはその方法もしくは使用の抗体と、別の分子、例えば、その標的抗原との、単一の結合部位における結合強度である。抗体のその標的への結合親和性は、平衡法（例えば、酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）またはラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ））または動力学（例えば、ＢＩＡＣＯＲＥ分析）によって決定され得る。例えば、当技術分野で公知のＢｉａｃｏｒｅ法を用いて結合親和性を測定することができる。
【０１２２】
結合活性は、例えば相互作用の原子価を考慮に入れた、二つの分子と別の分子との複数の部位で互いにおける結合強度の総和である。
【０１２３】
一つの態様では、本発明の組み合わせ物、またはその方法もしくは使用のＡＢＰ、およびＯＸ４０、好ましくはヒトＯＸ４０の相互作用の平衡解離定数（ＫＤ）は、１００ｎＭ以下、１０ｎＭ以下、２ｎＭまたは１ｎＭ以下である。あるいは、ＫＤは５〜１０ｎＭであり得；または１〜２ｎＭであり得る。ＫＤは、１ｐＭ〜５００ｐＭであり得；または５００ｐＭ〜１ｎＭであり得る。当業者であれば、ＫＤの数値が小さいほど、結合が強くなることを理解するであろう。ＫＤの逆数（すなわち１／ＫＤ）は、単位Ｍ−１を有する平衡結合定数（ＫＡ）である。当業者であれば、ＫＡの数値が大きいほど、結合が強くなることを理解するであろう。
【０１２４】
解離速度定数（ｋｄ）または「解離率（off-rate）」は、一方ではＡＢＰと、他方ではＯＸ４０、好ましくはヒトＯＸ４０との複合体の安定性、すなわち１秒当たりに崩壊する複合体の割合を表す。例えば、０．０１ｓ−１のｋｄは１秒当たり１％の複合体の崩壊に相当する。一つの実施形態では、解離速度定数（ｋｄ）は、１×１０−３ｓ−１以下であり、１×１０−４ｓ−１以下であり、１×１０−５ｓ−１以下であり、または１×１０−６ｓ−１以下である。ｋｄは、１×１０−５ｓ−１〜１×１０−４ｓ−１であり得、または１×１０−４ｓ−１〜１×１０−３ｓ−１であり得る。
【０１２５】
本発明の組み合わせ物、またはその方法もしくは使用の抗ＯＸ４０  ＡＢＰと、参照抗体との間の競合、例えば、ＯＸ４０、ＯＸ４０のエピトープまたはＯＸ４０の断片の結合については、競合ＥＬＩＳＡ、ＦＭＡＴまたはＢｉａｃｏｒｅによって決定することができる。一つの態様では、競合アッセイはＢｉａｃｏｒｅによって行われる。この競合にはいくつかの理由が考えられる：２つのタンパク質が同一または重複するエピトープに結合し、結合の立体的阻害があるか、または第１のタンパク質の結合が、第２のタンパク質の結合を阻害するか低減させるコンフォメーションン変化を誘導し得る。
【０１２６】
本明細書で使用される「結合断片」は、抗原結合部位を含み、本明細書で定義されるようなＯＸ４０に結合することができ、限定されないが、親抗体または全長抗体と同じエピトープに結合することができる、本発明の組み合わせ物、またはその方法もしくは使用のＡＢＰの部分または断片を意味する。
【０１２７】
本発明の組み合わせ物、またはその方法もしくは使用のＡＢＰの機能的断片は、本明細書において意図される。
【０１２８】
従って、「結合断片」および「機能断片」は、完全長の抗体のＦｃ断片を欠き、循環からより速く排除され、非特異的組織結合が完全長の抗体より少ない、ＦａｂおよびＦ（ａｂ’）２断片であり得る（Wahl et al., J. Nuc. Med. 24:316-325(1983)）。また、Ｆｖ断片も含まれる（Hochman, J. et al., (1973) Biochemistry 12:1130-1135; Sharon、J. et al. (1976) Biochemistry 15:1591-1594）。これらの様々な断片は、プロテアーゼ切断または化学的切断等の従来技術を用いて製造される（例えば、Rousseaux et al., Meth. Enzymol., 121:663-69(1986)）。
【０１２９】
本明細書で使用される「機能的断片」は、抗原結合部位を含み、親ＡＢＰと同じ標的、例えば、限定されないが同じエピトープに結合することができ、本明細書に記載されるかまたは当該技術分野で公知の１つまたは複数の調節機能または他の機能も保持する、本発明の組み合わせ物、またはその方法もしくは使用のＡＢＰの一部または断片を意味する。
【０１３０】
本発明のＡＢＰは、本発明の組み合わせ物、またはその方法もしくは使用の重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含んでなり、天然抗体の構造の形態であり得、機能的断片は、本明細書に記載される完全長ＡＢＰの結合または１つまたは複数の機能を保持する。従って、本発明の組み合わせ物、またはその方法もしくは使用のＡＢＰの結合断片は、ＶＬまたはＶＨ領域、ａ（Ｆａｂ’）２断片、Ｆａｂ断片、二重特異性もしくは双極性分子の断片、または適切な軽鎖と対になった時のそれらの等価物（例えば、ｓｃＦＶ、バイボディー、トリアボディーまたはテトラボディー、Ｔａｎｄａｂｓ等）を含み得る。
【０１３１】
本明細書で使用される「ＣＤＲ」という用語は、抗原結合タンパク質の相補性決定領域アミノ酸配列を意味する。これらは、免疫グロブリンの重鎖および軽鎖の超可変領域である。免疫グロブリンの可変部には、３つの重鎖ＣＤＲ（またはＣＤＲ領域）および３つの軽鎖ＣＤＲがある。
【０１３２】
当業者であれば、ＣＤＲ配列について様々な番号付け規則があることは明らかであろう：Ｃｈｏｔｈｉａ（Chothia et al. (1989) Nature 342: 877-883）、Ｋａｂａｔ（Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 4th Ed., U.S. Department of Health and Human Services, National Institutes of Health (1987)）、ＡｂＭ（University of Bath）およびＣｏｎｔａｃｔ（University College London）。Ｋａｂａｔ、Ｃｈｏｔｈｉａ、ＡｂＭおよびＣｏｎｔａｃｔの少なくとも２つを使用する最小重複領域は、「最小結合単位」を提供するように決定することができる。最小結合単位は、ＣＤＲのサブ部分であってもよい。抗体の構造およびタンパク質フォールディングは、他の残基がＣＤＲ配列の一部と考えられ、そのように当業者によって理解されることを意味し得る。ＣＤＲ定義のいくつかは、使用される個々の出版物に応じて変化し得ることに留意されたい。
【０１３３】
特に明記しない限り、および／または特定の定義された配列がない限り、本明細書において、「ＣＤＲ」、「ＣＤＲＬ１」（または「ＬＣ  ＣＤＲ１」）、「ＣＤＲＬ２」（または「ＬＣ  ＣＤＲ２」）、「ＣＤＲＬ３」（または「ＬＣ  ＣＤＲ３」）、「ＣＤＲＨ１」（または「ＨＣ  ＣＤＲ１」）、「ＣＤＲＨ２」（または「ＨＣ  ＣＤＲ２」）、「ＣＤＲＨ３」（または「ＨＣ  ＣＤＲ３」）は、既知の慣例のいずれかに従って番号が付けられたアミノ酸配列を意味し、あるいは、ＣＤＲは、可変軽鎖の「ＣＤＲ１」、「ＣＤＲ２」、「ＣＤＲ３」および可変重鎖の「ＣＤＲ１」、「ＣＤＲ２」および「ＣＤＲ３」と称される。特定の実施形態では、番号付けの規則はＫａｂａｔの規則である。
【０１３４】
本明細書で使用される「ＣＤＲ変異体」という用語は、少なくとも１つ、例えば１つ、２つまたは３つのアミノ酸置換、欠失または付加によって修飾されたＣＤＲを意味し、ＣＤＲ変異体を含む改変抗原結合タンパク質は、抗原結合タンパク質の改変前の生物学的特性を実質的に保持する。修飾され得る各ＣＤＲは、単独で、または別のＣＤＲとの組み合わせで修飾され得ることが理解されるであろう。一つの態様では、修飾は、例えば表１に示されるような置換、特に保存的置換である。
【０１３５】
【表１】
2018522044.tif 000002
【０１３６】
例えば、変異体ＣＤＲにおいて、最小結合単位のアミノ酸残基は同じままであり得るが、ＫａｂａｔまたはＣｈｏｔｈｉａの定義の一部としてＣＤＲを含む隣接残基は、保存的アミノ酸残基で置換され得る。
【０１３７】
上記のような改変ＣＤＲまたは最小結合単位を含むこのような抗原結合タンパク質は、本明細書中では「機能的ＣＤＲ改変体」または「機能的結合単位改変体」とも称される。
【０１３８】
抗体は、任意の種のものであってよく、または交差種に投与するのに適するように修飾されていてもよい。例えば、マウス抗体由来のＣＤＲは、ヒトへの投与のためにヒト化されてもよい。任意の実施形態では、抗原結合タンパク質は、任意にヒト化抗体である。
【０１３９】
「ヒト化抗体」は、非ヒトドナー免疫グロブリンに由来するその抗体のＣＤＲを有し、分子の残りの免疫グロブリン由来部分が１つ（または複数）のヒト免疫グロブリンに由来する、改変された抗体のタイプを意味する。さらに、フレームワーク支持残基は、結合親和性を維持するために変更され得る（例えば、Queen et al., Proc. Natl Acad Sci USA, 86:10029-10032 (1989), Hodgson et al., Bio/Technology, 9: 421(1991)）。好適なヒトアクセプター抗体は、ドナー抗体のヌクレオチドおよびアミノ酸配列と同一性を示すことにより、従来のデータベース、例えばＫＡＢＡＴ（登録商標）データベース、Ｌｏｓ  ＡｌａｍｏｓデータベースおよびＳｗｉｓｓ  Ｐｒｏｔｅｉｎデータベースから選択されるものであり得る。ドナー抗体のフレームワーク領域との同一性（アミノ酸ベースで）を特徴とするヒト抗体は、ドナーＣＤＲの挿入のための重鎖定常領域および／または重鎖可変フレームワーク領域を提供するために適切であり得る。軽鎖の定常領域または可変フレームワーク領域を提供することができる適切なアクセプター抗体は、同様の方法で選択することができる。アクセプター抗体の重鎖および軽鎖は、同じアクセプター抗体由来である必要はないことに留意すべきである。先行技術においては、このようなヒト化抗体を産生するいくつかの方法が記載されている−例えば、ＥＰ−Ａ−０２３９４００およびＥＰ−Ａ−０５４９５１参照。
【０１４０】
さらなる実施形態では、ヒト化抗体は、ＩｇＧであるヒト抗体定常領域を有する。別の実施形態では、ＩｇＧは、上記参考文献または特許公報のいずれかに開示される配列である。
【０１４１】
ヌクレオチドおよびアミノ酸配列に関して、「同一」または「同一性」という用語は、最適にアラインメントされ、適切な挿入または欠失と比較された場合の、２つの核酸または２つのアミノ酸配列間の同一性の程度を示す。
【０１４２】
２つの配列間の配列同一性パーセントは、２つの配列の最適なアラインメントに導入する必要があるギャップの数、各ギャップの長さを考慮して、配列において共有される同一位置の数の関数である（すなわち、％同一性＝（同一位置の数／位置の総数）×１００）。配列の比較および２つの配列間の同一性パーセントの決定は、後述するように、数学的アルゴリズムを使用して達成することができる。
【０１４３】
クエリー核酸配列（query nucelic acid sequence）と対象核酸配列（subject nucelic acid sequence）との間の同一性パーセントは、パーセンテージで表される「同一性」値であり、ペアワイズＢＬＡＳＴＮアラインメントを行った後に、対象核酸配列が、クエリー核酸配列に対して１００％のクエリー範囲（query coverage）を有する場合にＢＬＡＳＴＮアルゴリズムにより算出される。クエリー核酸配列と対象核酸配列との間のそのようなペアワイズＢＬＡＳＴＮアライメントは、低複雑度領域用フィルターをオフにした、National Center for Biotechnology Instituteのウェブサイトから入手可能なＢＬＡＳＴＮアルゴリズムのデフォルト設定を使用することによって行われる。重要なこととしては、クエリー核酸配列は、本明細書の１つまたは複数の請求項において規定された核酸配列によって記載され得る。
【０１４４】
クエリーアミノ酸配列（query amino acid sequence）と対象アミノ酸配列（subject amino acid sequence）との間の同一性パーセントは、パーセンテージで表される「同一性」値であり、ペアワイズＢＬＡＳＴＰアラインメントを行った後に、対象アミノ酸配列が、クエリーアミノ酸配列に対して１００％クエリー範囲を有する場合にＢＬＡＳＴＰアルゴリズムによって算出される。クエリーアミノ酸配列と対象アミノ酸配列との間のそのようなペアワイズＢＬＡＳＴＰアライメントは、低複雑度領域用フィルターをオフにした、National Center for Biotechnology Instituteのウェブサイトから入手可能なＢＬＡＳＴＰアルゴリズムのデフォルト設定を使用することによって行われる。重要なこととしては、クエリーアミノ酸配列は、本明細書の１つまたは複数の請求項において規定されたアミノ酸配列によって記載され得る。
【０１４５】
本明細書中の本発明の組み合わせ物、またはその方法もしくは使用のいずれかの実施形態では、ＡＢＰは、示されたまたは引用された配列、例えば本明細書中に開示された配列番号により定義された配列と少なくとも９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９４％、９３％、９２％、９１％または９０％、または８５％、または８０％、または７５％、または７０％の同一性を有する、いずれか１つまたはすべてのＣＤＲ、ＶＨ、ＶＬ、ＨＣ、ＬＣを有し得る。
【０１４６】
ヒトＯＸ４０受容体に結合するＡＢＰは、本明細書中に記載されている（すなわち、本明細書で「抗ＯＸ４０  ＡＢＰ」または「抗ＯＸ４０抗体」と称されることがある抗ＯＸ４０  ＡＢＰおよび抗ヒトＯＸ４０受容体（ｈＯＸ−４０Ｒ）、ならびに／またはそれらの他の変形物）。これらの抗体は、病状がＯＸ４０シグナル伝達に関連する急性または慢性の疾患または症状の治療または予防に有用である。一つの態様では、ヒトＯＸ４０Ｒに結合し、癌治療または疾患に対する治療として有効である、抗原結合タンパク質、またはそのようなタンパク質もしくは抗体の単離されたヒト抗体もしくは機能的断片が、例えば、抗ＰＤ−１ＡＢＰ等の他の化合物、好適にはアンタゴニスト抗ＰＤ１  ＡＢＰとの組み合わせで記載されている。本明細書に開示される抗原結合タンパク質または抗体のいずれかは、医薬品として使用され得る。任意の１つまたは複数の抗原結合タンパク質または抗体は、例えば本明細書中に開示されるもののような、癌を治療するための方法または組成物において使用され得る。
【０１４７】
本明細書に記載される単離された抗体は、ＯＸ４０に結合し、下記の遺伝子によりコードされるＯＸ４０に結合し得る：ＮＣＢＩアクセッション番号ＮＰ＿００３３１７、Ｇｅｎｐｅｐｔアクセッション番号Ｐ２３５１０、またはそれらと９０％の相同性または９０％の相同性を有する遺伝子。本明細書において提供される単離された抗体は、下記のＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号の１つを有するＯＸ４０受容体とさらに結合し得る：ＡＡＢ３９９４４、ＣＡＥ１１７５７またはＡＡＩ０５０７１。
【０１４８】
ＯＸ−４０受容体に結合および／または調節する抗原結合タンパク質および抗体は、当技術分野において公知である。本発明の組み合わせ物、またはその方法もしくはその使用の例示的な抗ＯＸ４０  ＡＢＰは、例えば国際出願日が２０１２年２月９日の国際公開ＷＯ２０１３／０２８２３１（ＰＣＴ／ＵＳ２０１２／０２４５７０）、および国際出願日が２０１１年８月２３日のＷＯ２０１２／０２７３２８（ＰＣＴ／ＵＳ２０１１／０４８７５２）に記載されており、これらはそれぞれ、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる（全ての定義が矛盾せず、本願の規制する程度まで）。
【０１４９】
一つの実施形態では、ＯＸ−４０抗原結合タンパク質は、国際出願日が２０１１年８月２３日のＷＯ２０１２／０２７３２８（ＰＣＴ／ＵＳ２０１１／０４８７５２）に開示されたものである。別の実施形態では、抗原結合タンパク質は、国際出願日が２０１１年８月２３日のＷＯ２０１２／０２７３２８（ＰＣＴ／ＵＳ２０１１／０４８７５２）に開示された抗体のＣＤＲ、または開示されたＣＤＲ配列と９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％または１００％の配列同一性を有するＣＤＲはを含んでなる。さらなる実施形態では、抗原結合タンパク質は、国際出願日が２０１１年８月２３日のＷＯ２０１２／０２７３２８（ＰＣＴ／ＵＳ２０１１／０４８７５２）に開示された抗体のＶＨ、ＶＬまたはその両方、または開示されたＶＨまたはＶＬ配列と少なくとも９０％（例えば、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％または１００％）の配列同一性を有するＶＨまたはＶＬを含んでなる。
【０１５０】
別の実施形態では、ＯＸ−４０抗原結合タンパク質は、国際出願日が２０１２年２月９日のＷＯ２０１３／０２８２３１（ＰＣＴ／ＵＳ２０１２／０２４５７０）に開示されたものである。別の実施形態では、国際出願日が２０１２年２月９日のＷＯ２０１３／０２８２３１（ＰＣＴ／ＵＳ２０１２／０２４５７０）に開示された抗体のＣＤＲ、または開示されたＣＤＲと少なくとも９０％（例えば９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％または１００％）の配列同一性を有するＣＤＲ配列を含んでなる。さらなる実施形態では、抗原結合タンパク質は、国際出願日が２０１２年２月９日のＷＯ２０１３／０２８２３１（ＰＣＴ／ＵＳ２０１２／０２４５７０）に開示された抗体のＶＨ、ＶＬまたはその両方、または開示されたＶＨまたはＶＬ配列と少なくとも９０％（例えば９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％または１００％）の配列同一性を有するＶＨまたはＶＬを含んでなる。
【０１５１】
図１〜１２は、本発明の組み合わせ物、またはその方法もしくは使用の抗ＯＸ４０  ＡＢＰの配列、例えばＡＢＰのＣＤＲおよびＶＨおよびＶＬの配列を示す。別の実施形態では、本発明の組み合わせ物、またはその方法もしくは使用の抗ＯＸ４０  ＡＢＰは、１つまたは複数のＣＤＲまたはＶＨまたはＶＬ配列、または本明細書中の図に示される配列と少なくとも９０％（例えば、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％または１００％）の配列同一性を有する配列を含んでなる。図１は、配列番号１０８の残基１〜３０、３６〜４９、６７〜９８および１２１〜１３１の開示を含む。Ｘ６１０１２は、配列番号１０８として開示される。図２は、配列番号１０９の残基１〜２３、３５〜４９、５７〜８８および１０２〜１１１の開示を含む。ＡＪ３８８６４１は、配列番号１０９として開示される。図３は、配列番号１１０のアミノ酸配列の開示を含む。図４は、配列番号１１１のアミノ酸配列の開示を含む。図５は、配列番号１１２の残基１７〜４６、５２〜６５、８３〜１１４および１２６〜１３６の開示を含む。Ｚ１４１８９は、配列番号１１２として開示される。図６は、配列番号１１３の残基２１〜４３、５５〜６９、７７〜１０８および１１８〜１２７の開示を含む．Ｍ２９４６９は、配列番号１１３として開示される。図７のタンパク質は、配列番号１１４として開示される。図８のタンパク質は、配列番号１１５として開示される。
【０１５２】
図１は、１０６〜２２２、ヒト化１０６〜２２２（Ｈｕ１０６）およびヒトアクセプターＸ６１０１２（ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号）ＶＨ配列のアミノ酸配列のアライメントを示す。アミノ酸残基は１文字コードで示されている。配列上の数字は、Kabat et al.（Sequences of Proteins of Immunological Interests, Fifth edition, NIH Publication No. 91-3242, U.S. Department of Health and Human Services, 1991）による位置を示す。本明細書で請求されるのと同じ配列が配列表に提供され、位置番号は異なっていてもよい。図１において、Kabat et al. (1991)により定義されるＣＤＲ配列は、１０６〜２２２  ＶＨに下線が引かれている。Ｘ６１０１２  ＶＨのＣＤＲ残基は、図中では省略されている。１０６〜２２２  ＶＨフレームワークと相同なヒトＶＨ配列をＧｅｎＢａｎｋデータベース内で検索し、ヒトＸ６１０１２  ｃＤＮＡ（Ｘ６１０１２  ＶＨ）によりコードされるＶＨ配列をヒト化のためのアクセプターとして選択した。１０６〜２２２  ＶＨのＣＤＲ配列を最初にＸ６１０１２  ＶＨの対応する位置に移した。次に、ＣＤＲとの顕著な接触が示唆されている１０６〜２２２可変領域の三次元モデルであるフレームワーク位置において、マウス１０６〜２２２  ＶＨのアミノ酸残基を対応するヒト残基に置換した。これらの置換は、位置４６および９４（Ｈｕ１０６  ＶＨに下線が引かれている）で行われた。さらに、対応するＶ領域サブグループにおいて非典型的であることが見出されたヒトフレームワーク残基を、潜在的な免疫原性を低減するために最も典型的な残基で置換された。この置換は位置１０５（Ｈｕ１０６  ＶＨに二重下線が引かれている）で行った。
【０１５３】
図２は、１０６〜２２２、ヒト化１０６〜２２２（Ｈｕ１０６）およびヒトアクセプターＡＪ３８８６４１（ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号）ＶＬ配列のアミノ酸配列のアライメントを示す。アミノ酸残基は１文字コードで示されている。配列上の数字は、Kabat et al. (1991)による位置を示す。本明細書で請求されるのと同じ配列が配列表に提供され、位置番号は異なっていてもよい。Kabat et al.により定義されるＣＤＲ配列は、１０６〜２２２ＶＨに下線が引かれている。ＡＪ３８８６４１  ＶＬのＣＤＲ残基は、図中では省略されている。１０６〜２２２  ＶＬフレームワークと相同なヒトＶＬ配列をＧｅｎＢａｎｋデータベース内で検索し、ヒトＡＪ３８８６４１  ｃＤＮＡ（ＡＪ３８８６４１  ＶＬ）によりコードされるＶＬ配列をヒト化のためのアクセプターとして選択した。１０６〜２２２  ＶＬのＣＤＲ配列をＡＪ３８８６４１  ＶＬの対応する位置に移した。ヒト化形態ではフレームワーク置換は行われなかった。
【０１５４】
図３は、ＳｐｅＩおよびＨｉｎｄＩＩＩ部位（下線部）に隣接するＨｕ１０６  ＶＨ遺伝子のヌクレオチド配列が、推定されるアミノ酸配列と共に示されていることを示す。アミノ酸残基は１文字コードで示されている。シグナルペプチド配列はイタリック体である。成熟ＶＨのＮ末端アミノ酸残基（Ｑ）には二重下線が引かれている。Kabat et al. (1991)の定義によるＣＤＲ配列には下線が引かれている。本明細書で請求されるのと同じ配列が配列表にも提供され、位置番号は配列表の中で異なっていてもよい。イントロン配列は斜体で記載される。
【０１５５】
図４は、ＮｈｅＩおよびＥｃｏＲＩ部位（下線部）に隣接するＨｕ１０６〜２２２  ＶＬ遺伝子のヌクレオチド配列が、推定されるアミノ酸配列と共に示されていることを示す。アミノ酸残基は１文字コードで示されている。シグナルペプチド配列はイタリック体である。成熟ＶＬのＮ末端アミノ酸残基（Ｄ）には二重下線が引かれている。Kabat et al. (1991)の定義によるＣＤＲ配列には下線が引かれている。イントロン配列は斜体で記載される。本明細書で請求されるのと同じ配列が配列表にも提供され、位置番号は配列表の中で異なっていてもよい。
【０１５６】
図５は、１１９〜１２２、ヒト化１１９〜１２２（Ｈｕ１１９）およびヒトアクセプターＺ１４１８９（ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号）ＶＨ配列のアミノ酸配列のアライメントを示す。アミノ酸残基は１文字コードで示されている。配列上の数字は、Kabat et al.（Sequences of Proteins of Immunological Interests, Fifth edition, NIH Publication No. 91-3242, U.S. Department of Health and Human Services, 1991）による位置を示す。Kabat et al. (1991)により定義されるＣＤＲ配列は、１１９〜１２２  ＶＨに下線が引かれている。Ｚ１４１８９  ＶＨのＣＤＲ残基は、図中では省略されている。１１９〜１２２  ＶＨフレームワークと相同なヒトＶＨ配列をＧｅｎＢａｎｋデータベース内で検索し、ヒトＺ１４１８９  ｃＤＮＡ（Ｚ１４１８９  ＶＨ）によりコードされるＶＨ配列をヒト化のためのアクセプターとして選択した。１１９〜１２２  ＶＨのＣＤＲ配列を最初にＺ１４１８９  ＶＨの対応する位置に移した。次に、ＣＤＲとの顕著な接触が示唆されている１１９〜１２２可変領域の三次元モデルであるフレームワーク位置において、マウス１１９〜１２２  ＶＨのアミノ酸残基を対応するヒト残基に置換した。これらの置換は、図に示すように、位置２６、２７、２８、３０および４７（Ｈｕ１１９  ＶＨ配列に下線が引かれている）で行われた。本明細書で請求されるのと同じ配列が配列表にも提供され、位置番号は配列表の中で異なっていてもよい。
【０１５７】
図６は、１１９〜１２２、ヒト化１１９〜１２２（Ｈｕ１１９）およびヒトアクセプターＭ２９４６９（ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号）ＶＬ配列のアミノ酸配列のアライメントを示す。アミノ酸残基は１文字コードで示されている。配列上の数字は、Kabat et al. (1991)による位置を示す。Kabat et al.により定義されるＣＤＲ配列は、１１９〜１２２  ＶＬに下線が引かれている。Ｍ２９４６９  ＶＬのＣＤＲ残基は、配列中では省略されている。１１９〜１２２  ＶＬフレームワークと相同なヒトＶＬ配列をＧｅｎＢａｎｋデータベース内で検索し、ヒトＭ２９４６９  ｃＤＮＡ（Ｍ２９４６９  ＶＬ）によりコードされるＶＬ配列をヒト化のためのアクセプターとして選択した。１１９〜１２２  ＶＬのＣＤＲ配列をＭ２９４６９  ＶＬの対応する位置に移した。ヒト化形態ではフレームワーク置換は必要なかった。本明細書で請求されるのと同じ配列が配列表にも提供され、位置番号は配列表の中で異なっていてもよい。
【０１５８】
図７は、ＳｐｅＩおよびＨｉｎｄＩＩＩ部位（下線部）に隣接するＨｕ１１９  ＶＨ遺伝子のヌクレオチド配列が、推定されるアミノ酸配列と共に示されていることを示す。アミノ酸残基は１文字コードで示されている。シグナルペプチド配列はイタリック体である。成熟ＶＨのＮ末端アミノ酸残基（Ｅ）には二重下線が引かれている。Kabat et al. (1991)の定義によるＣＤＲ配列には下線が引かれている。イントロン配列は斜体で記載される。本明細書で請求されるのと同じ配列が配列表に提供され、位置番号は配列表の中で異なっていてもよい。
【０１５９】
図８は、ＮｈｅＩおよびＥｃｏＲＩ部位（下線部）に隣接するＨｕ１１９  ＶＬ遺伝子のヌクレオチド配列が、推定されるアミノ酸配列と共に示されていることを示す。アミノ酸残基は１文字コードで示されている。シグナルペプチド配列はイタリック体である。成熟ＶＬのＮ末端アミノ酸残基（Ｅ）に二重下線が引かれている。Kabat et al. (1991)の定義によるＣＤＲ配列には下線が引かれている。イントロン配列は斜体で記載される。本明細書で請求されるのと同じ配列が配列表にも提供され、位置番号は配列表の中で異なっていてもよい。
【０１６０】
図９は、マウス１１９〜４３〜１  ＶＨ  ｃＤＮＡのヌクレオチド配列と推定されるアミノ酸配列を示す。アミノ酸残基は１文字コードで示されている。シグナルペプチド配列はイタリック体である。成熟ＶＨのＮ末端アミノ酸残基（Ｅ）には二重下線が引かれている。Kabat et al.（Sequences of Proteins of Immunological Interests, Fifth edition, NIH Publication No. 91-3242, U.S. Department of Health and Human Services, 1991）の定義によるＣＤＲ配列には下線が引かれている。
【０１６１】
図１０は、マウス１１９〜４３〜１  ＶＬ  ｃＤＮＡのヌクレオチド配列と推定されるアミノ酸配列を示す。アミノ酸残基は１文字コードで示されている。シグナルペプチド配列はイタリック体である。成熟ＶＬのＮ末端アミノ酸残基（Ｄ）には二重下線が引かれている。Kabat et al. (1991)の定義によるＣＤＲ配列には下線が引かれている。
【０１６２】
図１１は、ＳｐｅＩおよびＨｉｎｄＩＩＩ部位（下線部）に隣接する、設計された１１９〜４３〜１  ＶＨ遺伝子のヌクレオチド配列を、推定されるアミノ酸配列と共に示す。アミノ酸残基は１文字コードで示されている。シグナルペプチド配列はイタリック体である。成熟ＶＨのＮ末端アミノ酸残基（Ｅ）には二重下線が引かれている。Kabat et al. (1991)の定義によるＣＤＲ配列には下線が引かれている。イントロン配列は斜体で記載される。
【０１６３】
図１２は、ＮｈｅＩおよびＥｃｏＲＩ部位（下線部）に隣接する、設計された１１９〜４３〜１  ＶＬ遺伝子のヌクレオチド配列を、推定されるアミノ酸配列と共に示す。アミノ酸残基は１文字コードで示されている。シグナルペプチド配列はイタリック体である。成熟ＶＬのＮ末端アミノ酸残基（Ｄ）には二重下線が引かれている。Kabat et al. (1991)の定義によるＣＤＲ配列には下線が引かれている。イントロン配列は斜体で記載される。
【０１６４】
一つの実施形態では、本発明の組み合わせ物、またはその方法もしくは使用の抗ＯＸ４０  ＡＢＰは、１０６〜２２２抗体のＣＤＲ、例えばそれぞれ配列番号１、２および３に示されるアミノ酸配列を有するＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２およびＣＤＲＨ３、ならびに例えばそれぞれ配列番号７、８および９に示されるアミノ酸配列を有するＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２およびＣＤＲＬ３を含んでなる。一つの実施形態では、本発明の組み合わせ物、またはその方法もしくは使用のＡＢＰは、国際出願日が２０１１年８月２３日のＷＯ２０１２／０２７３２８（ＰＣＴ／ＵＳ２０１１／０４８７５２）に記載されているような１０６〜２２２、Ｈｕ１０６またはＨｕ１０６〜２２２抗体のＣＤＲを含んでなる。本明細書中に記載されるように、抗体１０６〜２２２は、ＷＯ２０１２／０２７３２８に開示され、本明細書中に記載されているひとＯＸ４０に結合するヒトモノクローナル抗体であり、それぞれ配列番号１、２および３に示されるアミノ酸配列を有するＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２およびＣＤＲＨ３、ならびに例えばそれぞれ配列番号７、８および９に示されるアミノ酸配列を有するＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２およびＣＤＲＬ３を含んでなる抗体であり、かつ、配列番号４に示されるアミノ酸配列を有するＶＨ、および配列番号１０に示されるアミノ酸配列を有するＶＬを含んでなる抗体である。さらなる実施形態では、本発明の組み合わせ物、またはその方法もしくは使用の抗ＯＸ４０  ＡＢＰは、本明細書の図６〜７に示される１０６〜２２２抗体のＶＨおよびＶＬ領域を含んでなり、例えば、ＶＨは配列番号４に示されるアミノ酸配列を有し、ＶＬは配列番号１０に示されるアミノ酸配列を有する。別の実施形態では、本発明の組み合わせ物、またはその方法もしくは使用のＡＢＰは、配列番号５に示されるアミノ酸配列を有するＶＨ、および配列番号１１に示されるアミノ酸配列を有するＶＬを含んでなる。さらなる実施形態では、本発明の組み合わせ物、またはその方法もしくは使用の抗ＯＸ４０  ＡＢＰは、国際出願日が２０１１年８月２３日のＷＯ２０１２／０２７３２８（ＰＣＴ／ＵＳ２０１１／０４８７５２）に開示されているＨｕ１０６〜２２２抗体または１０６〜２２２抗体またはＨｕ１０６抗体のＶＨおよびＶＬ領域を含んでなる。さらなる実施形態では、本発明の組み合わせ物、またはその方法もしくは使用のＡＢＰは、本段落の配列と少なくとも９０％（例えば９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％または１００％）の配列同一性を有するＣＤＲまたはＶＨまたはＶＬまたは抗体配列を含んでなる。
【０１６５】
別の実施形態では、本発明の組み合わせ物、またはその方法もしくは使用の抗ＯＸ４０  ＡＢＰは、１１９〜１２２抗体のＣＤＲを含んでなり、例えばＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２およびＣＤＲＨ３はそれぞれ配列番号１３、１４および１５に示されるアミノ酸配列を有する。別の実施形態では、本発明の組み合わせ物、またはその方法もしくは使用の抗ＯＸ４０  ＡＢＰは、国際出願日が２０１１年８月２３日のＷＯ２０１２／０２７３２８（ＰＣＴ／ＵＳ２０１１／０４８７５２）に開示されている１１９〜１２２またはＨｕ１１９またはＨｕ１１９〜２２２抗体のＣＤＲを含んでなる。さらなる実施形態では、本発明の組み合わせ物、またはその方法もしくは使用の抗ＯＸ４０  ＡＢＰは、配列番号１６に示されるアミノ酸配列を有するＶＨ、および配列番号２２に示されるアミノ酸配列を有するＶＬを含んでなる。別の実施形態では、本発明の組み合わせ物、またはその方法もしくは使用の抗ＯＸ４０  ＡＢＰは、配列番号１７に示されるアミノ酸配列を有するＶＬ、および配列番号２３に示されるアミノ酸配列を有するＶＬを含んでなる。さらなる実施形態では、本発明の組み合わせ物、またはその方法または使用の抗ＯＸ４０  ＡＢＰは、国際出願日が２０１１年８月２３日のＷＯ２０１２／０２７３２８（ＰＣＴ／ＵＳ２０１１／０４８７５２）に開示されている１１９〜１２２またはＨｕ１１９またはＨｕ１１９〜２２２抗体のＶＨおよびＶＬ領域を含んでなる。さらなる実施形態では、本発明の組み合わせ物、またはその方法もしくは使用のＡＢＰは、例えば国際出願日が２０１１年８月２３日のＷＯ２０１２／０２７３２８（ＰＣＴ／ＵＳ２０１１／０４８７５２）に開示されている、１１９〜２２２またはＨｕ１１９またはＨｕ１１９〜２２２抗体である。さらなる実施形態では、ＡＢＰは、本段落の配列と少なくとも９０％（例えば９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％または１００％）の配列同一性を有するＣＤＲまたはＶＨまたはＶＬまたは抗体配列を含んでなる。
【０１６６】
別の実施形態では、本発明の組み合わせ物、またはその方法もしくは使用の抗ＯＸ４０  ＡＢＰは、国際出願日が２０１２年２月９日のＷＯ２０１３／０２８２３１（ＰＣＴ／ＵＳ２０１２／０２４５７０）に開示される１１９〜４３〜１抗体のＣＤＲを含んでなる。別の実施形態では、本発明の組み合わせ物、またはその方法もしくは使用の抗ＯＸ４０  ＡＢＰは、国際出願日が２０１２年２月９日のＷＯ２０１３／０２８２３１（ＰＣＴ／ＵＳ２０１２／０２４５７０）に開示される１１９〜４３〜１抗体のＣＤＲを含んでなる。さらなる実施形態では、本発明の組み合わせ物、またはその方法もしくは使用の抗ＯＸ４０  ＡＢＰは、１１９〜４３〜１抗体のＶＨ領域の１つおよびＶＬ領域の１つを含んでなる。さらなる実施形態では、本発明の組み合わせ物、またはその方法もしくは使用の抗ＯＸ４０  ＡＢＰは、国際出願日が２０１２年２月９日のＷＯ２０１３／０２８２３１（ＰＣＴ／ＵＳ２０１２／０２４５７０）に開示される１１９〜４３〜１抗体のＶＨおよびＶＬ領域を含んでなる。さらなる実施形態では、本発明の組み合わせ物、またはその方法もしくは使用の抗ＯＸ４０  ＡＢＰは、１１９〜４３〜１または１１９〜４３〜１キメラである。さらなる実施形態では、国際出願日が２０１２年２月９日のＷＯ２０１３０２８２３１に開示されている本発明の組み合わせ物、またはその方法もしくは使用。さらなる実施形態では、本段落に記載される抗ＯＸ４０  ＡＢＰのいずれか１つがヒト化される。さらなる実施形態では、本段落に記載されるＡＢＰのいずれか１つが、ヒト化抗体を産生するように改変される。さらなる実施形態では、本発明の組み合わせ物、またはその方法もしくは使用の抗ＯＸ４０  ＡＢＰは、本段落の配列と少なくとも９０％（例えば、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％または１００％）の配列同一性を有するＣＤＲまたはＶＨまたはＶＬまたは抗体配列を含んでなる。
【０１６７】
別のさらなる実施形態では、本発明の組み合わせ物、またはその方法もしくは使用の任意の抗ＯＸ４０  ＡＢＰの任意のマウスまたはキメラ配列を改変して、ヒト化抗体が作製される。
【０１６８】
一つの実施形態では、本発明の組み合わせ物、またはその方法もしくは使用の抗ＯＸ４０  ＡＢＰは、（ａ）配列番号１のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１；（ｂ）配列番号２のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２；（ｃ）配列番号３のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３；（ｄ）配列番号７のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１；（ｅ）配列番号８のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２；および（ｆ）配列番号９のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３を含んでなる。
【０１６９】
別の実施形態では、本発明の組み合わせ物、またはその方法または使用の抗ＯＸ４０  ＡＢＰは、（ａ）配列番号１３のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１；（ｂ）配列番号１４のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２；（ｃ）配列番号１５のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３；（ｄ）配列番号１９のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１；（ｅ）配列番号２０のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２；および（ｆ）配列番号２１のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３を含んでなる。
【０１７０】
別の実施形態では、本発明の組み合わせ物、またはその方法もしくは使用の抗ＯＸ４０  ＡＢＰは、配列番号１または１３のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号２または１４のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２；および／または配列番号３または１５のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３、またはそれらと９０％の同一性を有する重鎖可変領域ＣＤＲを含んでなる。
【０１７１】
別の実施形態では、本発明の組み合わせ物、またはその方法もしくは使用の抗ＯＸ４０  ＡＢＰは、配列番号７または１９のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号８または２０のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２；および／または配列番号９または２１のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３、またはそれらと９０％の同一性を有する軽鎖可変領域を含んでなる。
【０１７２】
別の実施形態では、本発明の組み合わせ物、またはその方法もしくは使用の抗ＯＸ４０  ＡＢＰは、配列番号１０、１１、２２または２３のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（「ＶＬ」）、または配列番号１０、１１、２２または２３のアミノ酸配列と少なくとも９０％（例えば９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％または１００％）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含んでなる。別の実施形態では、本発明の組み合わせ物、またはその方法もしくは使用の抗ＯＸ４０  ＡＢＰは、配列番号４、５、１６および１７のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（「ＶＨ」）、または配列番号４、５、１６および１７のアミノ酸配列と少なくとも９０％（例えば９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％または１００％）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含んでなる。別の実施形態では、本発明の組み合わせ物、またはその方法もしくは使用抗のＯＸ４０  ＡＢＰは、配列番号５の可変重鎖配列および配列番号１１の可変軽鎖配列、またはそれらと９０％同一性を有する配列を含んでなる。別の実施形態では、本発明の組み合わせ物、またはその方法もしくは使用の抗ＯＸ４０  ＡＢＰは、配列番号１７の可変重鎖配列および配列番号２３の可変軽鎖配列、またはそれらと９０％の同一性を有する配列を含んでなる。
【０１７３】
別の実施形態では、本発明の組み合わせ物、またはその方法もしくは使用の抗ＯＸ４０  ＡＢＰは、配列番号１２または２４の核酸配列、または配列番号１２または２４のヌクレオチド配列と少なくとも９０％（例えば９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％または１００％）の配列同一性を有する核酸配列によってコードされる可変軽鎖を含んでなる。別の実施形態では、本発明の組み合わせ物、またはその方法もしくは使用の抗ＯＸ４０  ＡＢＰは、配列番号６または１８の核酸配列、または配列番号６または１８のヌクレオチド配列と少なくとも９０％（例えば９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％または１００％）の配列同一性を有する核酸配列によってコードされる可変重鎖を含んでなる。
【０１７４】
本明細書では、モノクローナル抗体も提供される。一つの実施形態では、モノクローナル抗体は、配列番号１０もしくは２２のアミノ酸配列、または配列番号１０もしくは２２のアミノ酸配列と少なくとも９０％（例えば、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％または１００％）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む可変軽鎖を含んでなる。さらに、配列番号４もしくは１６のアミノ酸配列、または配列番号４もしくは１６のアミノ酸配列と少なくとも９０％（例えば９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％または１００％）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む可変重鎖を含んでなるモノクローナル抗体も提供される。
【０１７５】
本明細書では、モノクローナル抗体も提供される。一つの実施形態では、モノクローナル抗体は、配列番号１１もしくは２３のアミノ酸配列、または配列番号１１もしくは２３のアミノ酸配列と少なくとも９０％（例えば、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％または１００％）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む可変軽鎖を含んでなる。さらに、配列番号５もしくは１７のアミノ酸配列、または配列番号５もしくは１７のアミノ酸配列と少なくとも９０％（例えば９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％または１００％）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む可変重鎖を含んでなるモノクローナル抗体も提供される。
【０１７６】
本発明の組み合わせ物、またはその方法もしくは使用の別の実施形態には、ＣＤＲ、ＶＨ領域およびＶＬ領域、ならびに抗体および抗体をコードする以下の配列表に開示される核酸が含まれる。
抗体106-222の重鎖:
QVQLVQSGSELKKPGASVKVSCKASGYTFTDYSMHWVRQAPGQGLKWMGWINTETGEPTYADDFKGRFVFSLDTSVSTAYLQISSLKAEDTAVYYCANPYYDYVSYYAMDYWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK  (配列番号48)
抗体106-222の軽鎖:
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCKASQDVSTAVAWYQQKPGKAPKLLIYSASYLYTGVPSRFSGSGSGTDFTFTISSLQPEDIATYYCQQHYSTPRTFGQGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC  (配列番号49)
抗体106-222の重鎖可変領域:
QVQLVQSGSELKKPGASVKVSCKASGYTFTDYSMHWVRQAPGQGLKWMGWINTETGEPTYADDFKGRFVFSLDTSVSTAYLQISSLKAEDTAVYYCANPYYDYVSYYAMDYWGQGTTVTVSS  (配列番号5)
抗体106-222の軽鎖可変領域:
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCKASQDVSTAVAWYQQKPGKAPKLLIYSASYLYTGVPSRFSGSGSGTDFTFTISSLQPEDIATYYCQQHYSTPRTFGQGTKLEIK  (配列番号11)
抗体106-222のCDR配列: 
HC CDR1: Asp Tyr Ser Met His  (配列番号1)
HC CDR2: Trp Ile Asn Thr Glu Thr Gly Glu Pro Thr Tyr Ala Asp Asp Phe Lys Gly (配列番号2)
HC CDR3: Pro Tyr Tyr Asp Tyr Val Ser Tyr Tyr Ala Met Asp Tyr  (配列番号3)
LC CDR1: Lys Ala Ser Gln Asp Val Ser Thr Ala Val Ala  (配列番号7)
LC CDR2: Ser Ala Ser Tyr Leu Tyr Thr  (配列番号8) 
LC CDR3: Gln Gln His Tyr Ser Thr Pro Arg Thr  (配列番号9)
OX40抗体配列表 
<140> UNKNOWN
<141> 2014-02-24
<150> PCT/US2012/024570
<151> 2012-02-09
<150> PCT/US2011/048752
<151> 2011-08-23
<160> 47   
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 5
<212> PRT
<213> Mus sp.
<400> 1
Asp Tyr Ser Met His 
1               5   
<210> 2
<211> 17
<212> PRT
<213> Mus sp.
<400> 2
Trp Ile Asn Thr Glu Thr Gly Glu Pro Thr Tyr Ala Asp Asp Phe Lys 
1               5                   10                  15      
Gly 
<210> 3
<211> 13
<212> PRT
<213> Mus sp.
<400> 3
Pro Tyr Tyr Asp Tyr Val Ser Tyr Tyr Ala Met Asp Tyr 
1               5                   10              
<210> 4
<211> 122
<212> PRT
<213> Mus sp.
<400> 4
Gln Ile Gln Leu Val Gln Ser Gly Pro Glu Leu Lys Lys Pro Gly Glu 
1               5                   10                  15      
Thr Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr 
20                  25                  30          
Ser Met His Trp Val Lys Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Lys Trp Met 
35                  40                  45              
Gly Trp Ile Asn Thr Glu Thr Gly Glu Pro Thr Tyr Ala Asp Asp Phe 
50                  55                  60                  
Lys Gly Arg Phe Ala Phe Ser Leu Glu Thr Ser Ala Ser Thr Ala Tyr 
65                  70                  75                  80  
Leu Gln Ile Asn Asn Leu Lys Asn Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys 
85                  90                  95      
Ala Asn Pro Tyr Tyr Asp Tyr Val Ser Tyr Tyr Ala Met Asp Tyr Trp 
100                 105                 110         
Gly His Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser 
115                 120         
<210> 5
<211> 122
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<400> 5
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ser Glu Leu Lys Lys Pro Gly Ala 
1               5                   10                  15      
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr 
20                  25                  30          
Ser Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Lys Trp Met 
35                  40                  45              
Gly Trp Ile Asn Thr Glu Thr Gly Glu Pro Thr Tyr Ala Asp Asp Phe 
50                  55                  60                  
Lys Gly Arg Phe Val Phe Ser Leu Asp Thr Ser Val Ser Thr Ala Tyr 
65                  70                  75                  80  
Leu Gln Ile Ser Ser Leu Lys Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 
85                  90                  95      
Ala Asn Pro Tyr Tyr Asp Tyr Val Ser Tyr Tyr Ala Met Asp Tyr Trp 
100                 105                 110         
Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 
115                 120         
<210> 6
<211> 458
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polynucleotide
<400> 6
actagtacca ccatggcttg ggtgtggacc ttgctattcc tgatggcagc tgcccaaagt       60
atccaagcac aggttcagtt ggtgcagtct ggatctgagc tgaagaagcc tggagcctca      120
gtcaaggttt cctgcaaggc ttctggttat accttcacag actattcaat gcactgggtg      180
cgacaggctc caggacaagg tttaaagtgg atgggctgga taaacactga gactggtgag      240
ccaacatatg cagatgactt caagggacgg tttgtcttct ctttggacac ctctgtcagc      300
actgcctatt tgcagatcag cagcctcaaa gctgaggaca cggctgtgta ttactgtgct      360
aatccctact atgattacgt ctcttactat gctatggact actggggtca gggaaccacg      420
gtcaccgtct cctcaggtaa gaatggcctc tcaagctt                              458
<210> 7
<211> 11
<212> PRT
<213> Mus sp.
<400> 7
Lys Ala Ser Gln Asp Val Ser Thr Ala Val Ala 
1               5                   10      
<210> 8
<211> 7
<212> PRT
<213> Mus sp.
<400> 8
Ser Ala Ser Tyr Leu Tyr Thr 
1               5           
<210> 9
<211> 9
<212> PRT
<213> Mus sp.
<400> 9
Gln Gln His Tyr Ser Thr Pro Arg Thr 
1               5                   
<210> 10
<211> 107
<212> PRT
<213> Mus sp.
<400> 10
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser His Lys Phe Met Ser Thr Ser Val Arg 
1               5                   10                  15      
Asp Arg Val Ser Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp Val Ser Thr Ala 
20                  25                  30          
Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Lys Leu Leu Ile 
35                  40                  45              
Tyr Ser Ala Ser Tyr Leu Tyr Thr Gly Val Pro Asp Arg Phe Thr Gly 
50                  55                  60                  
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thr Ile Ser Ser Val Gln Ala 
65                  70                  75                  80  
Glu Asp Leu Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln His Tyr Ser Thr Pro Arg 
85                  90                  95      
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 
100                 105         
<210> 11
<211> 107
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<400> 11
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 
1               5                   10                  15      
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp Val Ser Thr Ala 
20                  25                  30          
Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 
35                  40                  45              
Tyr Ser Ala Ser Tyr Leu Tyr Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 
50                  55                  60                  
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 
65                  70                  75                  80  
Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln His Tyr Ser Thr Pro Arg 
85                  90                  95      
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 
100                 105         
<210> 12
<211> 416
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polynucleotide
<400> 12
gctagcacca ccatggagtc acagattcag gtctttgtat tcgtgtttct ctggttgtct       60
ggtgttgacg gagacattca gatgacccag tctccatcct ccctgtccgc atcagtggga      120
gacagggtca ccatcacctg caaggccagt caggatgtga gtactgctgt agcctggtat      180
caacagaaac caggaaaagc ccctaaacta ctgatttact cggcatccta cctctacact      240
ggagtccctt cacgcttcag tggcagtgga tctgggacgg atttcacttt caccatcagc      300
agtctgcagc ctgaagacat tgcaacatat tactgtcagc aacattatag tactcctcgg      360
acgttcggtc agggcaccaa gctggaaatc aaacgtaagt agaatccaaa gaattc          416
<210> 13
<211> 5
<212> PRT
<213> Mus sp.
<400> 13
Ser His Asp Met Ser 
1               5   
<210> 14
<211> 17
<212> PRT
<213> Mus sp.
<400> 14
Ala Ile Asn Ser Asp Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Pro Asp Thr Met Glu 
1               5                   10                  15      
Arg 
<210> 15
<211> 11
<212> PRT
<213> Mus sp.
<400> 15
His Tyr Asp Asp Tyr Tyr Ala Trp Phe Ala Tyr 
1               5                   10      
<210> 16
<211> 120
<212> PRT
<213> Mus sp.
<400> 16
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Glu 
1               5                   10                  15      
Ser Leu Lys Leu Ser Cys Glu Ser Asn Glu Tyr Glu Phe Pro Ser His 
20                  25                  30          
Asp Met Ser Trp Val Arg Lys Thr Pro Glu Lys Arg Leu Glu Leu Val 
35                  40                  45              
Ala Ala Ile Asn Ser Asp Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Pro Asp Thr Met 
50                  55                  60                  
Glu Arg Arg Phe Ile Ile Ser Arg Asp Asn Thr Lys Lys Thr Leu Tyr 
65                  70                  75                  80  
Leu Gln Met Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Leu Tyr Tyr Cys 
85                  90                  95      
Ala Arg His Tyr Asp Asp Tyr Tyr Ala Trp Phe Ala Tyr Trp Gly Gln 
100                 105                 110         
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ala 
115                 120 
<210> 17
<211> 120
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<400> 17
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 
1               5                   10                  15      
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Glu Tyr Glu Phe Pro Ser His 
20                  25                  30          
Asp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Leu Val 
35                  40                  45              
Ala Ala Ile Asn Ser Asp Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Pro Asp Thr Met 
50                  55                  60                  
Glu Arg Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr 
65                  70                  75                  80  
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 
85                  90                  95      
Ala Arg His Tyr Asp Asp Tyr Tyr Ala Trp Phe Ala Tyr Trp Gly Gln 
100                 105                 110         
Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser 
115                 120 
<210> 18
<211> 451
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polynucleotide
<400> 18
actagtacca ccatggactt cgggctcagc ttggttttcc ttgtccttat tttaaaaagt       60
gtacagtgtg aggtgcagct ggtggagtct gggggaggct tagtgcagcc tggagggtcc      120
ctgagactct cctgtgcagc ctctgaatac gagttccctt cccatgacat gtcttgggtc      180
cgccaggctc cggggaaggg gctggagttg gtcgcagcca ttaatagtga tggtggtagc      240
acctactatc cagacaccat ggagagacga ttcaccatct ccagagacaa tgccaagaac      300
tcactgtacc tgcaaatgaa cagtctgagg gccgaggaca cagccgtgta ttactgtgca      360
agacactatg atgattacta cgcctggttt gcttactggg gccaagggac tatggtcact      420
gtctcttcag gtgagtccta acttcaagct t                                     451
<210> 19
<211> 15
<212> PRT
<213> Mus sp.
<400> 19
Arg Ala Ser Lys Ser Val Ser Thr Ser Gly Tyr Ser Tyr Met His 
1               5                   10                  15  
<210> 20
<211> 7
<212> PRT
<213> Mus sp.
<400> 20
Leu Ala Ser Asn Leu Glu Ser 
1               5           
<210> 21
<211> 9
<212> PRT
<213> Mus sp.
<400> 21
Gln His Ser Arg Glu Leu Pro Leu Thr 
1               5                   
<210> 22
<211> 111
<212> PRT
<213> Mus sp.
<400> 22
Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly 
1               5                   10                  15      
Gln Arg Ala Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Lys Ser Val Ser Thr Ser 
20                  25                  30          
Gly Tyr Ser Tyr Met His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro 
35                  40                  45              
Lys Leu Leu Ile Tyr Leu Ala Ser Asn Leu Glu Ser Gly Val Pro Ala 
50                  55                  60                  
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Asn Ile His 
65                  70                  75                  80  
Pro Val Glu Glu Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln His Ser Arg 
85                  90                  95      
Glu Leu Pro Leu Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys 
100                 105                 110     
<210> 23
<211> 111
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<400> 23
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly 
1               5                   10                  15      
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Lys Ser Val Ser Thr Ser 
20                  25                  30          
Gly Tyr Ser Tyr Met His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro 
35                  40                  45              
Arg Leu Leu Ile Tyr Leu Ala Ser Asn Leu Glu Ser Gly Val Pro Ala 
50                  55                  60                  
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser 
65                  70                  75                  80  
Ser Leu Glu Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln His Ser Arg 
85                  90                  95      
Glu Leu Pro Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 
100                 105                 110     
<210> 24
<211> 428
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polynucleotide
<400> 24
gctagcacca ccatggagac agacacactc ctgttatggg tactgctgct ctgggttcca       60
ggttccactg gtgaaattgt gctgacacag tctcctgcta ccttatcttt gtctccaggg      120
gaaagggcca ccctctcatg cagggccagc aaaagtgtca gtacatctgg ctatagttat      180
atgcactggt accaacagaa accaggacag gctcccagac tcctcatcta tcttgcatcc      240
aacctagaat ctggggtccc tgccaggttc agtggcagtg ggtctgggac agacttcacc      300
ctcaccatca gcagcctaga gcctgaggat tttgcagttt attactgtca gcacagtagg      360
gagcttccgc tcacgttcgg cggagggacc aaggtcgaga tcaaacgtaa gtacactttt      420
ctgaattc                                                               428
<210> 25
<211> 5
<212> PRT
<213> Mus sp.
<400> 25
Asp Ala Trp Met Asp 
1               5   
<210> 26
<211> 19
<212> PRT
<213> Mus sp.
<400> 26
Glu Ile Arg Ser Lys Ala Asn Asn His Ala Thr Tyr Tyr Ala Glu Ser 
1               5                   10                  15      
Val Asn Gly 
<210> 27
<211> 8
<212> PRT
<213> Mus sp.
<400> 27
Gly Glu Val Phe Tyr Phe Asp Tyr 
1               5               
<210> 28
<211> 414
<212> DNA
<213> Mus sp.
<400> 28
atgtacttgg gactgaacta tgtattcata gtttttctct taaatggtgt ccagagtgaa       60
gtgaagcttg aggagtctgg aggaggcttg gtgcaacctg gaggatccat gaaactctct      120
tgtgctgcct ctggattcac ttttagtgac gcctggatgg actgggtccg ccagtctcca      180
gagaaggggc ttgagtgggt tgctgaaatt agaagcaaag ctaataatca tgcaacatac      240
tatgctgagt ctgtgaatgg gaggttcacc atctcaagag atgattccaa aagtagtgtc      300
tacctgcaaa tgaacagctt aagagctgaa gacactggca tttattactg tacgtggggg      360
gaagtgttct actttgacta ctggggccaa ggcaccactc tcacagtctc ctca            414
<210> 29
<211> 138
<212> PRT
<213> Mus sp.
<400> 29
Met Tyr Leu Gly Leu Asn Tyr Val Phe Ile Val Phe Leu Leu Asn Gly 
1               5                   10                  15      
Val Gln Ser Glu Val Lys Leu Glu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln 
20                  25                  30          
Pro Gly Gly Ser Met Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe 
35                  40                  45              
Ser Asp Ala Trp Met Asp Trp Val Arg Gln Ser Pro Glu Lys Gly Leu 
50                  55                  60                  
Glu Trp Val Ala Glu Ile Arg Ser Lys Ala Asn Asn His Ala Thr Tyr 
65                  70                  75                  80  
Tyr Ala Glu Ser Val Asn Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser 
85                  90                  95      
Lys Ser Ser Val Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr 
100                 105                 110         
Gly Ile Tyr Tyr Cys Thr Trp Gly Glu Val Phe Tyr Phe Asp Tyr Trp 
115                 120                 125             
Gly Gln Gly Thr Thr Leu Thr Val Ser Ser 
130                 135             
<210> 30
<211> 448
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polynucleotide
<400> 30
actagtacca ccatgtactt gggactgaac tatgtattca tagtttttct cttaaatggt       60
gtccagagtg aagtgaagct ggaggagtct ggaggaggct tggtgcaacc tggaggatcc      120
atgaaactct cttgtgctgc ctctggattc acttttagtg acgcctggat ggactgggtc      180
cgccagtctc cagagaaggg gcttgagtgg gttgctgaaa ttagaagcaa agctaataat      240
catgcaacat actatgctga gtctgtgaat gggaggttca ccatctcaag agatgattcc      300
aaaagtagtg tctacctgca aatgaacagc ttaagagctg aagacactgg catttattac      360
tgtacgtggg gggaagtgtt ctactttgac tactggggcc aaggcaccac tctcacagtc      420
tcctcaggtg agtccttaaa acaagctt                                         448
<210> 31
<211> 138
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<400> 31
Met Tyr Leu Gly Leu Asn Tyr Val Phe Ile Val Phe Leu Leu Asn Gly 
1               5                   10                  15      
Val Gln Ser Glu Val Lys Leu Glu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln 
20                  25                  30          
Pro Gly Gly Ser Met Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe 
35                  40                  45              
Ser Asp Ala Trp Met Asp Trp Val Arg Gln Ser Pro Glu Lys Gly Leu 
50                  55                  60                  
Glu Trp Val Ala Glu Ile Arg Ser Lys Ala Asn Asn His Ala Thr Tyr 
65                  70                  75                  80  
Tyr Ala Glu Ser Val Asn Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser 
85                  90                  95      
Lys Ser Ser Val Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr 
100                 105                 110         
Gly Ile Tyr Tyr Cys Thr Trp Gly Glu Val Phe Tyr Phe Asp Tyr Trp 
115                 120                 125             
Gly Gln Gly Thr Thr Leu Thr Val Ser Ser 
130                 135             
<210> 32
<211> 11
<212> PRT
<213> Mus sp.
<400> 32
Lys Ser Ser Gln Asp Ile Asn Lys Tyr Ile Ala 
1               5                   10      
<210> 33
<211> 7
<212> PRT
<213> Mus sp.
<400> 33
Tyr Thr Ser Thr Leu Gln Pro 
1               5           
<210> 34
<211> 8
<212> PRT
<213> Mus sp.
<400> 34
Leu Gln Tyr Asp Asn Leu Leu Thr 
1               5               
<210> 35
<211> 378
<212> DNA
<213> Mus sp.
<400> 35
atgagaccgt ctattcagtt cctggggctc ttgttgttct ggcttcatgg tgctcagtgt       60
gacatccaga tgacacagtc tccatcctca ctgtctgcat ctctgggagg caaagtcacc      120
atcacttgca agtcaagcca agacattaac aagtatatag cttggtacca acacaagcct      180
ggaaaaggtc ctaggctgct catacattac acatctacat tacagccagg catcccatca      240
aggttcagtg gaagtgggtc tgggagagat tattccttca gcatcagcaa cctggagcct      300
gaagatattg caacttatta ttgtctacag tatgataatc ttctcacgtt cggtgctggg      360
accaagctgg agctgaaa                                                    378
<210> 36
<211> 126
<212> PRT
<213> Mus sp.
<400> 36
Met Arg Pro Ser Ile Gln Phe Leu Gly Leu Leu Leu Phe Trp Leu His 
1               5                   10                  15      
Gly Ala Gln Cys Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser 
20                  25                  30          
Ala Ser Leu Gly Gly Lys Val Thr Ile Thr Cys Lys Ser Ser Gln Asp 
35                  40                  45              
Ile Asn Lys Tyr Ile Ala Trp Tyr Gln His Lys Pro Gly Lys Gly Pro 
50                  55                  60                  
Arg Leu Leu Ile His Tyr Thr Ser Thr Leu Gln Pro Gly Ile Pro Ser 
65                  70                  75                  80  
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Arg Asp Tyr Ser Phe Ser Ile Ser 
85                  90                  95      
Asn Leu Glu Pro Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gln Tyr Asp 
100                 105                 110         
Asn Leu Leu Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys 
115                 120                 125     
<210> 37
<211> 413
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polynucleotide
<400> 37
gctagcacca ccatgagacc gtctattcag ttcctggggc tcttgttgtt ctggcttcat       60
ggtgctcagt gtgacatcca gatgacacag tctccatcct cactgtctgc atctctggga      120
ggcaaagtca ccatcacttg caagtcaagc caagacatta acaagtatat agcttggtac      180
caacacaagc ctggaaaagg tcctaggctg ctcatacatt acacatctac attacagcca      240
ggcatcccat caaggttcag tggaagtggg tctgggagag attattcctt cagcatcagc      300
aacctggagc ctgaagatat tgcaacttat tattgtctac agtatgataa tcttctcacg      360
ttcggtgctg ggaccaagct ggagctgaaa cgtaagtaca cttttctgaa ttc             413
<210> 38
<211> 126
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<400> 38
Met Arg Pro Ser Ile Gln Phe Leu Gly Leu Leu Leu Phe Trp Leu His 
1               5                   10                  15      
Gly Ala Gln Cys Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser 
20                  25                  30          
Ala Ser Leu Gly Gly Lys Val Thr Ile Thr Cys Lys Ser Ser Gln Asp 
35                  40                  45              
Ile Asn Lys Tyr Ile Ala Trp Tyr Gln His Lys Pro Gly Lys Gly Pro 
50                  55                  60                  
Arg Leu Leu Ile His Tyr Thr Ser Thr Leu Gln Pro Gly Ile Pro Ser 
65                  70                  75                  80  
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Arg Asp Tyr Ser Phe Ser Ile Ser 
85                  90                  95      
Asn Leu Glu Pro Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gln Tyr Asp 
100                 105                 110         
Asn Leu Leu Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys 
115                 120                 125     
<210> 39
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
primer
<400> 39
cgctgttttg acctccatag                                                   20
<210> 40
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
primer
<400> 40
tgaaagatga gctggaggac                                                   20
<210> 41
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
primer
<400> 41
ctttcttgtc caccttggtg                                                   20
<210> 42
<211> 19
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
primer
<400> 42
gctgtcctac agtcctcag                                                    19
<210> 43
<211> 18
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
primer
<400> 43
acgtgccaag catcctcg                                                     18
<210> 44
<211> 1407
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polynucleotide
<400> 44
atgtacttgg gactgaacta tgtattcata gtttttctct taaatggtgt ccagagtgaa       60
gtgaagctgg aggagtctgg aggaggcttg gtgcaacctg gaggatccat gaaactctct      120
tgtgctgcct ctggattcac ttttagtgac gcctggatgg actgggtccg ccagtctcca      180
gagaaggggc ttgagtgggt tgctgaaatt agaagcaaag ctaataatca tgcaacatac      240
tatgctgagt ctgtgaatgg gaggttcacc atctcaagag atgattccaa aagtagtgtc      300
tacctgcaaa tgaacagctt aagagctgaa gacactggca tttattactg tacgtggggg      360
gaagtgttct actttgacta ctggggccaa ggcaccactc tcacagtctc ctcagcctcc      420
accaagggcc catcggtctt ccccctggca ccctcctcca agagcacctc tgggggcaca      480
gcggccctgg gctgcctggt caaggactac ttccccgaac cggtgacggt gtcgtggaac      540
tcaggcgccc tgaccagcgg cgtgcacacc ttcccggctg tcctacagtc ctcaggactc      600
tactccctca gcagcgtggt gaccgtgccc tccagcagct tgggcaccca gacctacatc      660
tgcaacgtga atcacaagcc cagcaacacc aaggtggaca agaaagttga gcccaaatct      720
tgtgacaaaa ctcacacatg cccaccgtgc ccagcacctg aactcctggg gggaccgtca      780
gtcttcctct tccccccaaa acccaaggac accctcatga tctcccggac ccctgaggtc      840
acatgcgtgg tggtggacgt gagccacgaa gaccctgagg tcaagttcaa ctggtacgtg      900
gacggcgtgg aggtgcataa tgccaagaca aagccgcggg aggagcagta caacagcacg      960
taccgtgtgg tcagcgtcct caccgtcctg caccaggact ggctgaatgg caaggagtac     1020
aagtgcaagg tctccaacaa agccctccca gcccccatcg agaaaaccat ctccaaagcc     1080
aaagggcagc cccgagaacc acaggtgtac accctgcccc catcccggga tgagctgacc     1140
aagaaccagg tcagcctgac ctgcctggtc aaaggcttct atcccagcga catcgccgtg     1200
gagtgggaga gcaatgggca gccggagaac aactacaaga ccacgcctcc cgtgctggac     1260
tccgacggct ccttcttcct ctacagcaag ctcaccgtgg acaagagcag gtggcagcag     1320
gggaacgtct tctcatgctc cgtgatgcat gaggctctgc acaaccacta cacgcagaag     1380
agcctctccc tgtctccggg taaatga                                         1407
<210> 45
<211> 469
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<400> 45
Met Tyr Leu Gly Leu Asn Tyr Val Phe Ile Val Phe Leu Leu Asn Gly 
1               5                   10                  15      
Val Gln Ser Glu Val Lys Leu Glu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln 
20                  25                  30          
Pro Gly Gly Ser Met Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe 
35                  40                  45              
Ser Asp Ala Trp Met Asp Trp Val Arg Gln Ser Pro Glu Lys Gly Leu 
50                  55                  60                  
Glu Trp Val Ala Glu Ile Arg Ser Lys Ala Asn Asn His Ala Thr Tyr 
65                  70                  75                  80  
Tyr Ala Glu Ser Val Asn Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser 
85                  90                  95      
Lys Ser Ser Val Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr 
100                 105                 110         
Gly Ile Tyr Tyr Cys Thr Trp Gly Glu Val Phe Tyr Phe Asp Tyr Trp 
115                 120                 125             
Gly Gln Gly Thr Thr Leu Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro 
130                 135                 140                 
Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr 
145                 150                 155                 160 
Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr 
165                 170                 175     
Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro 
180                 185                 190         
Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr 
195                 200                 205             
Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Thr Cys Asn Val 
210                 215                 220                 
Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys 
225                 230                 235                 240 
Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu 
245                 250                 255     
Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr 
260                 265                 270         
Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val 
275                 280                 285             
Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val 
290                 295                 300                 
Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser 
305                 310                 315                 320 
Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu 
325                 330                 335     
Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala 
340                 345                 350         
Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro 
355                 360                 365             
Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln 
370                 375                 380                 
Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala 
385                 390                 395                 400 
Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr 
405                 410                 415     
Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu 
420                 425                 430         
Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser 
435                 440                 445             
Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser 
450                 455                 460                 
Leu Ser Pro Gly Lys 
465                 
<210> 46
<211> 702
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polynucleotide
<400> 46
atgagaccgt ctattcagtt cctggggctc ttgttgttct ggcttcatgg tgctcagtgt       60
gacatccaga tgacacagtc tccatcctca ctgtctgcat ctctgggagg caaagtcacc      120
atcacttgca agtcaagcca agacattaac aagtatatag cttggtacca acacaagcct      180
ggaaaaggtc ctaggctgct catacattac acatctacat tacagccagg catcccatca      240
aggttcagtg gaagtgggtc tgggagagat tattccttca gcatcagcaa cctggagcct      300
gaagatattg caacttatta ttgtctacag tatgataatc ttctcacgtt cggtgctggg      360
accaagctgg agctgaaacg aactgtggct gcaccatctg tcttcatctt cccgccatct      420
gatgagcagt tgaaatctgg aactgcctct gttgtgtgcc tgctgaataa cttctatccc      480
agagaggcca aagtacagtg gaaggtggat aacgccctcc aatcgggtaa ctcccaggag      540
agtgtcacag agcaggacag caaggacagc acctacagcc tcagcagcac cctgacgctg      600
agcaaagcag actacgagaa acacaaagtc tacgcctgcg aagtcaccca tcagggcctg      660
agctcgcccg tcacaaagag cttcaacagg ggagagtgtt ag                         702
<210> 47
<211> 233
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<400> 47
Met Arg Pro Ser Ile Gln Phe Leu Gly Leu Leu Leu Phe Trp Leu His 
1               5                   10                  15      
Gly Ala Gln Cys Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser 
20                  25                  30          
Ala Ser Leu Gly Gly Lys Val Thr Ile Thr Cys Lys Ser Ser Gln Asp 
35                  40                  45              
Ile Asn Lys Tyr Ile Ala Trp Tyr Gln His Lys Pro Gly Lys Gly Pro 
50                  55                  60                  
Arg Leu Leu Ile His Tyr Thr Ser Thr Leu Gln Pro Gly Ile Pro Ser 
65                  70                  75                  80  
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Arg Asp Tyr Ser Phe Ser Ile Ser 
85                  90                  95      
Asn Leu Glu Pro Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gln Tyr Asp 
100                 105                 110         
Asn Leu Leu Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys Arg Thr 
115                 120                 125             
Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu 
130                 135                 140                 
Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro 
145                 150                 155                 160 
Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly 
165                 170                 175     
Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr 
180                 185                 190         
Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His 
195                 200                 205             
Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val 
210                 215                 220                 
Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 
225                 230
【０１７７】
配列番号３９〜４３は、Ｃｈ１１９〜４３〜１の重鎖および軽鎖ｃＤＮＡのＰＣＲ増幅および配列決定に使用されるオリゴヌクレオチドの配列である。
【０１７８】
配列番号４４は、推定アミノ酸配列（配列番号４５）と共に、ｐＣｈ１１９〜４３〜１におけるγ−１重鎖のコード領域のヌクレオチド配列を提供する。アミノ酸残基は１文字コードで示されている。
【０１７９】
配列番号４６は、推定アミノ酸配列（配列番号４７）と共に、ｐＣｈ１１９〜４３〜１におけるκ軽鎖のコード領域のヌクレオチド配列を提供する。アミノ酸残基は１文字コードで示されている。
【０１８０】
ＰＤ−１抗原結合タンパク質
本発明の組み合わせ物、ならびに方法および使用は、ＰＤ−Ｌ１またはＰＤ−Ｌ２等のＰＤ−１リガンドとの結合を阻害するアンタゴニスト分子（抗体等）等の、ＰＤ−１に結合する抗ＰＤ−１抗原結合タンパク質を含む。
【０１８１】
一つの態様では、本発明の組み合わせ物、またはその方法もしくは使用のＰＤ−１  ＡＢＰ、およびＰＤ−１、好ましくはヒトＰＤ−１の相互作用の平衡解離定数（ＫＤ）は、１００ｎＭ以下、１０ｎＭ以下、２ｎＭ以下または１ｎＭ以下である。あるいは、ＫＤは５〜１０ｎＭであり得；または１〜２ｎＭであり得る。ＫＤは、１ｐＭ〜５００ｐＭであり得；または５００ｐＭ〜１ｎＭであり得る。当業者であれば、ＫＤ数値が小さいほど、結合が強くなることを理解するであろう。ＫＤの逆数（すなわち１／ＫＤ）は、単位Ｍ−１を有する平衡結合定数（ＫＡ）である。当業者であれば、ＫＡの数値が大きいほど、結合が強くなることを理解するであろう。
【０１８２】
解離速度定数（ｋｄ）または「解離率（off-rate）」は、一方ではＡＢＰと、他方ではＰＤ−１、好ましくはヒトＰＤ−１との複合体の安定性、すなわち１秒当たりに崩壊する複合体の割合を表す。例えば、０．０１ｓ−１のｋｄは１秒当たり１％の複合体の崩壊に相当する。一つの実施形態では、解離速度定数（ｋｄ）は、１×１０−３ｓ−１以下であり、１×１０−４ｓ−１以下であり、１×１０−５ｓ−１以下であり、または１×１０−６ｓ−１以下である。ｋｄは、１×１０−５ｓ−１〜１×１０−４ｓ−１であり得、または１×１０−４ｓ−１〜１×１０−３ｓ−１であり得る。
【０１８３】
本発明の組み合わせ物、またはその方法もしくは使用の抗ＰＤ−１  ＡＢＰと、参照抗体との間の競合、例えば、ＰＤ−１、ＰＤ−１のエピトープまたはＰＤ−１の断片の結合については、競合ＥＬＩＳＡ、ＦＭＡＴまたはＢｉａｃｏｒｅによって決定することができる。一つの態様では、競合アッセイはＢｉａｃｏｒｅによって行われる。この競合にはいくつかの理由が考えられる：２つのタンパク質が同一または重複するエピトープに結合し、結合の立体的阻害があるか、または第１のタンパク質の結合が、第２のタンパク質の結合を阻害するか低減させるコンフォメーションン変化を誘導し得る。
【０１８４】
本明細書で使用される「結合断片」は、抗原結合部位を含み、本明細書で定義されるようなＰＤ−１に結合することができ、限定されないが、親抗体または全長抗体と同じエピトープに結合することができる、本発明の組み合わせ物、またはその方法もしくは使用のＡＢＰの部分または断片を意味する。
【０１８５】
ヒトＰＤ−１受容体に結合するＡＢＰは、本明細書中に記載されている（すなわち、本明細書で「抗ＰＤ−１  ＡＢＰ」または「抗ＰＤ−１抗体」と称されることがある抗ＰＤ−１  ＡＢＰ、および／またはそれらの他の変形物）。これらの抗体は、病状がＰＤ−１シグナル伝達に関連する急性または慢性の疾患または症状の治療または予防に有用である。一つの態様では、ＰＤ−１に結合し、癌治療または疾患に対する治療として有効である、抗原結合タンパク質、またはそのようなタンパク質もしくは抗体の単離されたヒト抗体もしくは機能的断片が、例えば、抗ＯＸ４０  ＡＢＰ等の他の化合物、好適にはアゴニスト抗ＯＸ４０  ＡＢＰとの組み合わせで記載されている。本明細書に開示される抗原結合タンパク質または抗体のいずれかは、医薬品として使用され得る。任意の１つまたは複数の抗原結合タンパク質または抗体は、例えば本明細書中に開示されるもののような、癌を治療するための方法または組成物において使用され得る。
【０１８６】
本明細書に記載される単離された抗体は、ヒトＰＤ−１に結合し、遺伝子Ｐｄｃｄ１、またはそれと９０％の相同性もしくは９０％の同一性を有する遺伝子もしくはｃＤＮＡ配列によりコードされるヒトＰＤ−１に結合し得る。完全なｈＰＤ−１  ｍＲＮＡ配列は、ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号Ｕ６４８６３において見出すことができる。ヒトＰＤ−１のタンパク質の配列は、ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号ＡＡＣ５１７７３において見出すことができる。
【０１８７】
ＰＤ−１に結合および／または調節する抗原結合タンパク質および抗体は、当技術分野において公知である。本発明の組み合わせ物、またはその方法もしくはその使用の例示的な抗ＰＤ−１  ＡＢＰは、米国特許ＵＳ８，３５４，５０９；ＵＳ８，９００，５８７；ＵＳ８，００８，４４９に開示されており、これらはそれぞれ、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる（全ての定義が矛盾せず、本願の規制する程度まで）。ＰＤ−１抗体および疾患の治療に用いる方法は、米国特許ＵＳ７，５９５，０４８；ＵＳ８，１６８，１７９；ＵＳ８，７２８，４７４；ＵＳ７，７２２，８６８；ＵＳ８，００８，４４９；ＵＳ７，４８８，８０２；ＵＳ７，５２１，０５１；ＵＳ８，０８８，９０５；ＵＳ８，１６８，７５７；ＵＳ８，３５４，５０９；および米国公開ＵＳ２０１１０１７１２２０；ＵＳ２０１１０１７１２１５；およびＵＳ２０１１０２７１３５８に記載されている。ＣＴＬＡ−４およびＰＤ−１抗体の組み合わせは、米国特許ＵＳ９，０８４，７７６に記載されている。
【０１８８】
別のさらなる実施形態では、本発明の組み合わせ物、またはその方法もしくは使用の任意の抗ＰＤ−１  ＡＢＰの任意のマウスまたはキメラ配列を改変して、ヒト化抗体が作製される。
【０１８９】
別の実施形態では、本発明の組み合わせ物、またはその方法もしくは使用の抗ＰＤ−１  ＡＢＰは、ペムブロリズマブのＣＤＲまたはＶＨまたはＶＬまたはＨＣ（重鎖）またはＬＣ（軽鎖）の配列の１つまたは複数（例えば、すべて）、またはそれらと少なくとも９０％（例えば９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％または１００％）の配列同一性を有する配列を含んでなる。
【０１９０】
ペルモリズマブ（permolizumab）のＨＣおよびＬＣ  ＣＤＲを以下に示す。一つの実施形態では、本発明の組み合わせ物、またはその方法もしくはその使用の抗ＰＤ−１  ＡＢＰは、（ａ）ペムブロリズマブの重鎖可変領域ＣＤＲ１；（ｂ）ペムブロリズマブの重鎖可変領域ＣＤＲ２；（ｃ）ペムブロリズマブの重鎖可変領域ＣＤＲ３；（ｄ）ペムブロリズマブの軽鎖可変領域ＣＤＲ１；（ｅ）ペムブロリズマブの軽鎖可変領域ＣＤＲ２；および（ｆ）ペムブロリズマブの軽鎖可変領域ＣＤＲ３を含んでなる。
【０１９１】
別の実施形態では、本発明の組み合わせ物、またはその方法もしくは使用の抗ＰＤ−１は：ペムブロリズマブの重鎖可変領域ＣＤＲ１；ペムブロリズマブの重鎖可変領域ＣＤＲ２および／またはペルモリズマブの重鎖可変領域ＣＤＲ３を含んでなる。
【０１９２】
別の実施形態では、本発明の組み合わせ物、またはその方法もしくは使用の抗ＰＤ−１は、ペムブロリズマブの軽鎖可変領域ＣＤＲ１；ペムブロリズマブの軽鎖可変領域ＣＤＲ２および／またはペムブロリズマブの軽鎖可変領域ＣＤＲ３を含んでなる。
【０１９３】
別の実施形態では、本発明の組み合わせ物、またはその方法もしくは使用の抗ＰＤ−１  ＡＢＰは、ペムブロリズマブの軽鎖可変領域（「ＶＬ」）、またはペムブロリズマブのＶＬのアミノ酸配列と少なくとも９０％（例えば９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％または１００％）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含んでなる。
【０１９４】
別の実施形態では、本発明の組み合わせ物、またはその方法もしくはは使用の抗ＰＤ−１  ＡＢＰは、ペムブロリズマブの重鎖可変領域（「ＶＨ」）、またはペムブロリズマブのＶＨのアミノ酸配列と少なくとも９０％（例えば９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％または１００％）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含んでなる。
【０１９５】
別の実施形態では、本発明の組み合わせ物、またはその方法もしくは使用の抗ＰＤ−１  ＡＢＰは、ペムブロリズマブの軽鎖可変領域（「ＶＬ」）、またはペムブロリズマブのＶＬのアミノ酸配列と少なくとも９０％（例えば９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％または１００％）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含んでなり、かつ、本発明の組み合わせ物、またはその方法もしくは使用の抗ＰＤ−１  ＡＢＰは、ペムブロリズマブの重鎖可変領域（「ＶＨ」）、またはペムブロリズマブのＶＨのアミノ酸配列と少なくとも９０％（例えば９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％または１００％）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含んでなる。
【０１９６】
別の実施形態では、本発明の組み合わせ物、またはその方法もしくは使用の抗ＰＤ−１  ＡＢＰは、ペムブロリズマブの軽鎖（「ＬＣ」）、またはペムブロリズマブのＬＣのアミノ酸配列と少なくとも９０％（例えば９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％または１００％）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含んでなる。
【０１９７】
別の実施形態では、本発明の組み合わせ物、またはその方法もしくは使用の抗ＰＤ−１  ＡＢＰは、ペムブロリズマブの重鎖（「ＨＣ」）、またはペムブロリズマブのＨＣのアミノ酸配列と少なくとも９０％（例えば９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％または１００％）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含んでなる。
【０１９８】
別の実施形態では、本発明の組み合わせ物、またはその方法もしくは使用の抗ＰＤ−１  ＡＢＰは、ペムブロリズマブの軽鎖（「ＬＣ」）、またはペムブロリズマブのＬＣのアミノ酸配列と少なくとも９０％（例えば９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％または１００％）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含んでなり、本発明の組み合わせ物、またはその方法もしくは使用の抗ＰＤ−１  ＡＢＰは、ペムブロリズマブの重鎖（「ＨＣ」）、またはペムブロリズマブのＨＣのアミノ酸配列と少なくとも９０％（例えば９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％または１００％）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含んでなる。
【０１９９】
本発明の組み合わせ物、またはその方法もしくは使用の別の実施形態には、ＣＤＲ、ＶＨ領域およびＶＬ領域、ならびに抗体および抗体をコードする以下の配列表に開示される核酸が含まれる。
【０２００】
抗ＯＸ４０  ＡＢＰ（例えばアゴニストＡＢＰ、例えば抗ｈＯＸ４０  ＡＢＰ、例えば抗体）、例えば本明細書に記載の抗体等は、ＰＤ−１（例えばヒトＰＤ−１）に対するＡＢＰ（例えばアンタゴニストＡＢＰ、例えばアンタゴニスト抗体）と組み合わせて使用することができる。例えば、抗ＯＸ４０抗体は、ペムブロリズマブと組み合わせて使用することができる。
【０２０１】
開発中、ペムブロリズマブ（ＫＥＹＴＲＵＤＡ（登録商標））はＭＫ３４７５として、そしてラムブロリズマブとして知られていた。ペムブロリズマブ（ＫＥＹＴＲＵＤＡ（登録商標））は、イピリムマブ、およびＢＲＡＦ  Ｖ６００突然変異陽性の場合にはＢＲＡＦ阻害剤の後に、切除不能または転移性のメラノーマおよび疾患進行を有する患者の治療のために指示されたヒトプログラム死受容体−１（ＰＤ−１）ブロッキング抗体である。ペムブロリズマブの推奨用量は、疾患の進行または容認できない毒性まで、３週間ごとに３０分にわたり静脈内注入として２ｍｇ／ｋｇ投与される。
【０２０２】
ペムブロリズマブは、ＰＤ−１とそのリガンドであるＰＤ−Ｌ１およびＰＤ−Ｌ２との間の相互作用を遮断するヒト化モノクローナル抗体である。ペムブロリズマブは、約１４９ｋＤａの分子量を有するＩｇＧ４κ免疫グロブリンである。
【０２０３】
注射用ペムブロリズマブは、一回使用のバイアル中の滅菌した、保存料を含まない、白色からオフホワイトの凍結乾燥粉末である。各バイアルを再構成し、静脈内注入のために希釈する。各２ｍＬの再構成溶液は５０ｍｇのペムブロリズマブを含み、Ｌ−ヒスチジン（３．１ｍｇ）、ポリソルベート−８０（０．４ｍｇ）、スクロース（１４０ｍｇ）中に処方される。ｐＨを５．５に調整するために塩酸／水酸化ナトリウムを含むことができる。
【０２０４】
ペムブロリズマブ注射は、静脈内注入のために希釈を必要とする、滅菌し、保存料を含まない、透明からわずかに乳白色で、無色からわずかに黄色の溶液である。各バイアルは、４ｍＬの溶液中に１００ｍｇのペムブロリズマブを含有する。各１ｍＬの溶液は、２５ｍｇのペムブロリズマブを含み、Ｌ−ヒスチジン（１．５５ｍｇ）、ポリソルベート８０（０．２ｍｇ）、スクロース（７０ｍｇ）およびＵＳＰの注射用水中で処方される。
【０２０５】
ＰＤ−１リガンド、ＰＤ−Ｌ１およびＰＤ−Ｌ２の、Ｔ細胞に見られるＰＤ−１受容体への結合は、Ｔ細胞増殖およびサイトカイン産生を阻害する。いくつかの腫瘍においてＰＤ−１リガンドのアップレギュレーションが起こり、この経路を介したシグナル伝達は、腫瘍の活性Ｔ細胞免疫監視の阻害に寄与し得る。ペムブロリズマブは、ＰＤ−１受容体に結合し、抗腫瘍免疫応答を含む、免疫応答のＰＤ−１経路媒介性阻害を解除して、ＰＤ−１受容体とＰＤ−Ｌ１およびＰＤ−Ｌ２との相互作用を遮断するモノクローナル抗体である。同系のマウス腫瘍モデルでは、ＰＤ−１活性を遮断すると腫瘍増殖が減少する。
【０２０６】
ペムブロリズマブは、例えば米国特許第８，３５４，５０９号および同第８，９００，５８７号に記載されている。
【０２０７】
認可された製品は、再構成のために単一使用バイアル中の５０ｍｇの凍結乾燥粉末として入手可能な、活性成分ペムブロリズマブの静脈内注入のための注射用のペムブロリズマブ（ＫＥＹＴＲＵＤＡ（登録商標））である。ペムブロリズマブは、イピリムマブ、およびＢＲＡＦ  Ｖ６００突然変異陽性の場合にはＢＲＡＦ阻害剤の後に、切除不能または転移性のメラノーマおよび疾患進行を有する患者の治療のために承認されている。ペムブロリズマブ（ＫＥＹＴＲＵＤＡ（登録商標））は、ＰＤ−１とそのリガンドであるＰＤ−Ｌ１およびＰＤ−Ｌ２との間の相互作用を遮断するヒト化モノクローナル抗体である。ペムブロリズマブは、約１４９ｋＤａの分子量を有するＩｇＧ４κ免疫グロブリンである。ペムブロリズマブのアミノ酸配列は以下の通りであり、米国特許第８，３５４，５０９号の第１５欄の表に提供されているものと同じ一文字アミノ酸コード命名法を用いて記載される。
ペムブロリズマブの重鎖:
QVQLVQSGVE VKKPGASVKV SCKASGYTFT NYYMYWVRQA PGQGLEWMGG 50
INPSNGGTNF NEKFKNRVTL TTDSSTTTAY MELKSLQFDD TAVYYCARRD 100
YRFDMGFDYW GQGTTVTVSS ASTKGPSVFP LAPCSRSTSE STAALGCLVK・150
DYFPEPVTVS WNSGALTSGV HTFPAVLQSS GLYSLSSVVT VPSSSLGTKT 200
YTCNVDHKPS NTKVDKRVES KYGPPCPPCP APEFLGGPSV FLFPPKPKDT 250
LMISRTPEVT CVVVDVSQED PEVQFNWYVD GVEVHNAKTK PREEQFNSTY 300
VVSVLTVLH QDWLNGKEYK CKVSNKGLPS SIEKTISKAK GQPREPQVYT 350
LPPSQEEMTK NQVSLTCLVK GFYPSDIAVE WESNGQPENN YKTTPPVLDS 400
DGSFFLYSRL TVDKSRWQEG NVFSCSVMHE ALHNHYTQKS LSLSLGK 447  (配列番号50)
ペムブロリズマブの軽鎖:
EIVLTQSPAT LSLSPGERAT LSCRASKGVS TSGYSYLHWY QQKPGQAPRL 50
LIYLASYLES GVPARFSGSG SGTDFTLTIS SLEPEDFAVY YCQHSRDLPL 100
TFGGGTKVEI KRTVAAPSVF IFPPSDEQLK SGTASVVCLL NNFYPREAKV 150
QWKVDNALQS GNSQESVTEQ DSKDSTYSLS STLTLSKADY EKHKVYACEV 200
THQGLSSPVT KSFNRGEC 218  (配列番号51)
ペムブロリズマブの重鎖可変領域:
QVQLVQSGVE VKKPGASVKV SCKASGYTFT NYYMYWVRQA PGQGLEWMGG 50
INPSNGGTNF NEKFKNRVTL TTDSSTTTAY MELKSLQFDD TAVYYCARRD 100
YRFDMGFDYW GQGTTVTVSS   (配列番号52)
ペムブロリズマブの軽鎖可変領域:
EIVLTQSPAT LSLSPGERAT LSCRASKGVS TSGYSYLHWY QQKPGQAPRL 50
LIYLASYLES GVPARFSGSG SGTDFTLTIS SLEPEDFAVY YCQHSRDLPL 100
TFGGGTKVEI K  (配列番号53)
ペムブロリズマブのCDR配列: 
HC CDR1: Asn Tyr Tyr Met Tyr  (配列番号54)
HC CDR2: Gly Ile Asn Pro Ser Asn Gly Gly Thr Asn Phe Asn Glu Lys Phe Lys Asn  (配列番号55)
HC CDR3: Arg Asp Tyr Arg Phe Asp Met Gly Phe Asp Tyr  (配列番号56)
LC CDR1: Arg Ala Ser Lys Gly Val Ser Thr Ser Gly Tyr Ser Tyr Leu His  (配列番号57)
LC CDR2: Leu Ala Ser Tyr Leu Glu Ser  (配列番号58) 
LC CDR3: Gln His Ser Arg Asp Leu Pro Leu Thr  (配列番号59)
米国特許8,354,509からの配列表                  
<210>  
<211>  435
<212>  DNA
<213>  Artificial Sequence
<220> 60
<223>  hPD-1.08A heavy chain variable region
<400>  
atgrgatgga gctgtatcat kctctttttg gtagcaacag ctacaggtgt ccactcccag       60
gtccaactgc agcagcctgg ggctgaactg gtgaagcctg gggcttcagt gaagttgtcc      120
tgcaaggcct ctggctacac cttcaccagt tattatctgt actggatgaa acagaggcct      180
ggacaaggcc ttgagtggat tgggggggtt aatcctagta atggtggtac taacttcagt      240
gagaagttca agagcaaggc cacactgact gtagacaaat cctccagcac agcctacatg      300
caactcagca gcctgacatc tgaggactct gcggtctatt actgtacaag aagggattct      360
aactacgacg ggggctttga ctactggggc caaggcacta ctctcacagt ctcctcagcc      420
aaaacgacac cccca                                                       435
<210>  61
<211>  453
<212>  DNA
<213>  Artificial Sequence
<220>
<223>  hPD-1.08A light chain variable region
<400>  
atggagacag acacactcct gctatgggta ctgctgctct gggttccagg ttccactggt       60
gacattgtgc tgacacagtc tcctacttcc ttagctgtat ctctggggca gagggccacc      120
atctcatgca gggccagcaa aagtgtcagt acatctggct ttagttattt gcactggtac      180
caacagaaac caggacagcc acccaaactc ctcatctttc ttgcatccaa cctagagtct      240
ggggtccctg ccaggttcag tggcagtggg tctgggacag acttcaccct caacatccat      300
cctgtggagg aggaggacgc tgcaacctat tattgtcagc acagttggga gcttccgctc      360
acgttcggtg ctgggaccaa gctggagctg aaacgggctg atgctgcacc aactgtatcc      420
atcttcccac catccagtaa gcttgggaag ggc                                   453
<210>  62
<211>  464
<212>  DNA
<213>  Artificial Sequence
<220>
<223>  hPD-1.09A heavy chain variable region
<400>  
atgraatgca gctgggttat yctctttttg gtagcaacag ctacaggtgt ccactcccag       60
gtccaactgc agcagcctgg ggctgaactg gtgaagcctg ggacttcagt gaagttgtcc      120
tgcaaggctt ctggctacac cttcaccaac tactatatgt actgggtgaa gcagaggcct      180
ggacaaggcc ttgagtggat tggggggatt aatcctagca atggtggtac taacttcaat      240
gagaagttca agaacaaggc cacactgact gtagacagtt cctccagcac aacctacatg      300
caactcagca gcctgacatc tgaggactct gcggtctatt actgtacaag aagggattat      360
aggttcgaca tgggctttga ctactggggc caaggcacca ctctcacagt ctcctcagcc      420
aaaacgacac ccccatccgt ytatcccbtg gcccctggaa gctt                       464
<210>  63
<211>  438
<212>  DNA
<213>  Artificial Sequence
<220>
<223>  hPD-1.09A light chain variable region
<400>  
atggagwcag acacactsct gytatgggta ctgctgctct gggttccagg ttccactggc       60
gacattgtgc tgacacagtc tcctgcttcc ttagctgtat ctctgggaca gagggccgcc      120
atctcatgca gggccagcaa aggtgtcagt acatctggct atagttattt gcactggtac      180
caacagaaac caggacagtc acccaaactc ctcatctatc ttgcatccta cctagaatct      240
ggggtccctg ccaggttcag tggcagtggg tctgggacag acttcaccct caacatccat      300
cctgtggagg aggaggatgc tgcaacctat tactgtcagc acagtaggga ccttccgctc      360
acgttcggta ctgggaccaa gctggagctg aaacgggctg atgctgcacc aactgtatcc      420
atcttcccac catccagt                                                    438
<210>  64
<211>  122
<212>  PRT
<213>  Artificial Sequence
<220>
<223>  hPD-1.08A heavy chain variable region
<400>  
Gln Val Gln Leu Gln Gln Pro Gly Ala Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala 
1               5                   10                  15      
Ser Val Lys Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr 
20                  25                  30          
Tyr Leu Tyr Trp Met Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile 
35                  40                  45              
Gly Gly Val Asn Pro Ser Asn Gly Gly Thr Asn Phe Ser Glu Lys Phe 
50                  55                  60                  
Lys Ser Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr 
65                  70                  75                  80  
Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys 
85                  90                  95      
Thr Arg Arg Asp Ser Asn Tyr Asp Gly Gly Phe Asp Tyr Trp Gly Gln 
100                 105                 110         
Gly Thr Thr Leu Thr Val Ser Ser Ala Lys 
115                 120         
<210>  65
<211>  111
<212>  PRT
<213>  Artificial Sequence
<220>
<223>  hPD-1.08A light chain variable region
<400>  
Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Thr Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly 
1               5                   10                  15      
Gln Arg Ala Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Lys Ser Val Ser Thr Ser 
20                  25                  30          
Gly Phe Ser Tyr Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro 
35                  40                  45              
Lys Leu Leu Ile Phe Leu Ala Ser Asn Leu Glu Ser Gly Val Pro Ala 
50                  55                  60                  
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Asn Ile His 
65                  70                  75                  80  
Pro Val Glu Glu Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln His Ser Trp 
85                  90                  95      
Glu Leu Pro Leu Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys 
100                 105                 110     
<210>  66
<211>  122
<212>  PRT
<213>  Artificial Sequence
<220>
<223>  hPD-1.09A heavy chain variable region
<400>  
Gln Val Gln Leu Gln Gln Pro Gly Ala Glu Leu Val Lys Pro Gly Thr 
1               5                   10                  15      
Ser Val Lys Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr 
20                  25                  30          
Tyr Met Tyr Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile 
35                  40                  45              
Gly Gly Ile Asn Pro Ser Asn Gly Gly Thr Asn Phe Asn Glu Lys Phe 
50                  55                  60                  
Lys Asn Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Ser Ser Ser Ser Thr Thr Tyr 
65                  70                  75                  80  
Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys 
85                  90                  95      
Thr Arg Arg Asp Tyr Arg Phe Asp Met Gly Phe Asp Tyr Trp Gly Gln 
100                 105                 110         
Gly Thr Thr Leu Thr Val Ser Ser Ala Lys 
115                 120         
<210>  67
<211>  111
<212>  PRT
<213>  Artificial Sequence
<220>
<223>  hPD-1.09A light chain variable region
<400>  
Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly 
1               5                   10                  15      
Gln Arg Ala Ala Ile Ser Cys Arg Ala Ser Lys Gly Val Ser Thr Ser 
20                  25                  30          
Gly Tyr Ser Tyr Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro 
35                  40                  45              
Lys Leu Leu Ile Tyr Leu Ala Ser Tyr Leu Glu Ser Gly Val Pro Ala 
50                  55                  60                  
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Asn Ile His 
65                  70                  75                  80  
Pro Val Glu Glu Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln His Ser Arg 
85                  90                  95      
Asp Leu Pro Leu Thr Phe Gly Thr Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys 
100                 105                 110     
<210>  68
<211>  15
<212>  PRT
<213>  Artificial Sequence
<220>
<223>  hPD-1.08A light chain CDR1
<400>  
Arg Ala Ser Lys Ser Val Ser Thr Ser Gly Phe Ser Tyr Leu His 
1               5                   10                  15  
<210>  69
<211>  7
<212>  PRT
<213>  Artificial Sequence
<220>
<223>  hPD-1.08A light chain CDR2
<400>  
Leu Ala Ser Asn Leu Glu Ser 
1               5           
<210>  70
<211>  9
<212>  PRT
<213>  Artificial Sequence
<220>
<223>  hPD-1-08A light chain CDR3
<400>  
Gln His Ser Trp Glu Leu Pro Leu Thr 
1               5                   
<210>  71
<211>  5
<212>  PRT
<213>  Artificial Sequence
<220>
<223>  hPD-1.08A heavy chain CDR1
<400>  
Ser Tyr Tyr Leu Tyr 
1               5   
<210>  72
<211>  17
<212>  PRT
<213>  Artificial Sequence
<220>
<223>  hPD-1.08A heavy chain CDR2
<400>  
Gly Val Asn Pro Ser Asn Gly Gly Thr Asn Phe Ser Glu Lys Phe Lys 
1               5                   10                  15      
Ser 
<210>  73
<211>  11
<212>  PRT
<213>  Artificial Sequence
<220>
<223>  hPD-1.08A heavy chain CDR3
<400>  
Arg Asp Ser Asn Tyr Asp Gly Gly Phe Asp Tyr 
1               5                   10      
<210>  74
<211>  15
<212>  PRT
<213>  Artificial Sequence
<220>
<223>  hPD-1.09A light chain CDR1
<400>  
Arg Ala Ser Lys Gly Val Ser Thr Ser Gly Tyr Ser Tyr Leu His 
1               5                   10                  15  
<210>  75
<211>  7
<212>  PRT
<213>  Artificial Sequence
<220>
<223>  hPD-1.09A light chain CDR2
<400>  
Leu Ala Ser Tyr Leu Glu Ser 
1               5           
<210>  76
<211>  9
<212>  PRT
<213>  Artificial Sequence
<220>
<223>  hPD-1.09A light chain CDR3
<400>  
Gln His Ser Arg Asp Leu Pro Leu Thr 
1               5                   
<210>  77
<211>  5
<212>  PRT
<213>  Artificial Sequence
<220>
<223>  hPD-1.09A heavy chain CDR1
<400>  
Asn Tyr Tyr Met Tyr 
1               5   
<210>  78
<211>  17
<212>  PRT
<213>  Artificial Sequence
<220>
<223>  hPD-1.09A heavy chain CDR2
<400>  
Gly Ile Asn Pro Ser Asn Gly Gly Thr Asn Phe Asn Glu Lys Phe Lys 
1               5                   10                  15      
Asn 
<210>  79
<211>  11
<212>  PRT
<213>  Artificial Sequence
<220>
<223>  hPD-1.09A heavy chain CDR3
<400>  
Arg Asp Tyr Arg Phe Asp Met Gly Phe Asp Tyr 
1               5                   10      
<210>  80
<211>  417
<212>  DNA
<213>  Artificial Sequence
<220>
<223>  109A-H heavy chain variable region
<220>
<221>  sig_peptide
<222>  (1)..(57)
<400>  
atggactgga cctggagcat ccttttcttg gtggcagcac caacaggagc ccactcccaa       60
gtgcagctgg tgcagtctgg agttgaagtg aagaagcccg gggcctcagt gaaggtctcc      120
tgcaaggctt ctggctacac ctttaccaac tactatatgt actgggtgcg acaggcccct      180
ggacaagggc ttgagtggat gggagggatt aatcctagca atggtggtac taacttcaat      240
gagaagttca agaacagagt caccttgacc acagactcat ccacgaccac agcctacatg      300
gaactgaaga gcctgcaatt tgacgacacg gccgtttatt actgtgcgag aagggattat      360
aggttcgaca tgggctttga ctactggggc caagggacca cggtcaccgt ctcgagc         417
<210>  81
<211>  417
<212>  DNA
<213>  Artificial Sequence
<220>
<223>  Codon optimized 109A-H heavy chain variable region
<220>
<221>  sig_peptide
<222>  (1)..(57)
<400>  
atggactgga cctggtctat cctgttcctg gtggccgctc ctaccggcgc tcactcccag       60
gtgcagctgg tgcagtccgg cgtggaggtg aagaagcctg gcgcctccgt caaggtgtcc      120
tgcaaggcct ccggctacac cttcaccaac tactacatgt actgggtgcg gcaggctccc      180
ggccagggac tggagtggat gggcggcatc aacccttcca acggcggcac caacttcaac      240
gagaagttca agaaccgggt gaccctgacc accgactcct ccaccaccac cgcctacatg      300
gagctgaagt ccctgcagtt cgacgacacc gccgtgtact actgcgccag gcgggactac      360
cggttcgaca tgggcttcga ctactggggc cagggcacca ccgtgaccgt gtcctcc         417
<210>  82
<211>  1398
<212>  DNA
<213>  Artificial Sequence
<220>
<223>  Codon optimized 409A-H heavy chain full length
<220>
<221>  sig_peptide
<222>  (1)..(57)
<400>  
atggccgtgc tgggcctgct gttctgcctg gtgaccttcc cttcctgcgt gctgtcccag       60
gtgcagctgg tgcagtccgg cgtggaggtg aagaagcctg gcgcctccgt caaggtgtcc      120
tgtaaggcct ccggctacac cttcaccaac tactacatgt actgggtgcg gcaggcccca      180
ggccagggac tggagtggat gggcggcatc aacccttcca acggcggcac caacttcaac      240
gagaagttca agaaccgggt gaccctgacc accgactcct ccaccacaac cgcctacatg      300
gaactgaagt ccctgcagtt cgacgacacc gccgtgtact actgcgccag gcgggactac      360
cggttcgaca tgggcttcga ctactggggc cagggcacca ccgtgaccgt gtcctccgct      420
agcaccaagg gcccttccgt gttccctctg gccccttgct cccggtccac ctccgagtcc      480
accgccgctc tgggctgtct ggtgaaggac tacttccctg agcctgtgac cgtgagctgg      540
aactctggcg ccctgacctc cggcgtgcac accttccctg ccgtgctgca gtcctccggc      600
ctgtactccc tgtcctccgt ggtgaccgtg ccttcctcct ccctgggcac caagacctac      660
acctgcaacg tggaccacaa gccttccaac accaaggtgg acaagcgggt ggagtccaag      720
tacggccctc cttgccctcc ctgccctgcc cctgagttcc tgggcggacc ctccgtgttc      780
ctgttccctc ctaagcctaa ggacaccctg atgatctccc ggacccctga ggtgacctgc      840
gtggtggtgg acgtgtccca ggaagatcct gaggtccagt tcaattggta cgtggatggc      900
gtggaggtgc acaacgccaa gaccaagcct cgggaggaac agttcaactc cacctaccgg      960
gtggtgtctg tgctgaccgt gctgcaccag gactggctga acggcaagga atacaagtgc     1020
aaggtcagca acaagggcct gccctcctcc atcgagaaaa ccatctccaa ggccaagggc     1080
cagcctcgcg agcctcaggt gtacaccctg cctcctagcc aggaagagat gaccaagaat     1140
caggtgtccc tgacatgcct ggtgaagggc ttctaccctt ccgatatcgc cgtggagtgg     1200
gagagcaacg gccagccaga gaacaactac aagaccaccc ctcctgtgct ggactccgac     1260
ggctccttct tcctgtactc caggctgacc gtggacaagt cccggtggca ggaaggcaac     1320
gtcttttcct gctccgtgat gcacgaggcc ctgcacaacc actacaccca gaagtccctg     1380
tccctgtctc tgggcaag                                                   1398
<210>  83
<211>  393
<212>  DNA
<213>  Artificial Sequence
<220>
<223>  K09A-L-11 light chain variable region
<220>
<221>  sig_peptide
<222>  (1)..(60)
<400>  
atggaagccc cagctcagct tctcttcctc ctgctactct ggctcccaga taccaccgga       60
gaaattgtgt tgacacagtc tccagccacc ctgtctttgt ctccagggga aagagccacc      120
ctctcctgca gggccagcaa aggtgtcagt acatctggct atagttattt gcactggtat      180
caacagaaac ctggccaggc tcccaggctc ctcatctatc ttgcatccta cctagaatct      240
ggcgtcccag ccaggttcag tggtagtggg tctgggacag acttcactct caccatcagc      300
agcctagagc ctgaagattt tgcagtttat tactgtcagc acagcaggga ccttccgctc      360
acgttcggcg gagggaccaa agtggagatc aaa                                   393
<210>  84
<211>  393
<212>  DNA
<213>  Artificial Sequence
<220>
<223>  K09A-L-16 light chain variable region
<220>
<221>  sig_peptide
<222>  (1)..(60)
<400>  
atggaaaccc cagcgcagct tctcttcctc ctgctactct ggctcccaga taccaccgga       60
gaaattgtgc tgactcagtc tccactctcc ctgcccgtca cccctggaga gccggcctcc      120
atctcctgca gggccagcaa aggtgtcagt acatctggct atagttattt gcattggtac      180
ctccagaagc cagggcagtc tccacagctc ctgatctatc ttgcatccta cctagaatct      240
ggggtccctg acaggttcag tggcagtgga tcaggcacag attttacact gaaaatcagc      300
agagtggagg ctgaggatgt tggggtttat tactgccagc atagtaggga ccttccgctc      360
acgtttggcc aggggaccaa gctggagatc aaa                                   393
<210>  85
<211>  393
<212>  DNA
<213>  Artificial Sequence
<220>
<223>  K09A-L-17 light chain variable region
<220>
<221>  sig_peptide
<222>  (1)..(60)
<400>  
atgaggctcc ctgctcagct cctggggctg ctaatgctct gggtctctgg atccagtggg       60
gatattgtga tgacccagac tccactctcc ctgcccgtca cccctggaga gccggcctcc      120
atctcctgca gggccagcaa aggtgtcagt acatctggct atagttattt gcattggtat      180
ctgcagaagc cagggcagtc tccacagctc ctgatctatc ttgcatccta cctagaatct      240
ggagtcccag acaggttcag tggcagtggg tcaggcactg ctttcacact gaaaatcagc      300
agggtggagg ctgaggatgt tggactttat tactgccagc atagtaggga ccttccgctc      360
acgtttggcc aggggaccaa gctggagatc aaa                                   393
<210>  86
<211>  390
<212>  DNA
<213>  Artificial Sequence
<220>
<223>  Codon optimized K09A-L-11 light chain variable region
<220>
<221>  sig_peptide
<222>  (1)..(57)
<400>  
atggcccctg tgcagctgct gggcctgctg gtgctgttcc tgcctgccat gcggtgcgag       60
atcgtgctga cccagtcccc tgccaccctg tccctgagcc ctggcgagcg ggctaccctg      120
agctgcagag cctccaaggg cgtgtccacc tccggctact cctacctgca ctggtatcag      180
cagaagccag gccaggcccc tcggctgctg atctacctgg cctcctacct ggagtccggc      240
gtgcctgccc ggttctccgg ctccggaagc ggcaccgact tcaccctgac catctcctcc      300
ctggagcctg aggacttcgc cgtgtactac tgccagcact cccgggacct gcctctgacc      360
tttggcggcg gaacaaaggt ggagatcaag                                       390
<210>  87
<211>  390
<212>  DNA
<213>  Artificial Sequence
<220>
<223>  Codon optimized K09A-L-16 light chain variable region
<220>
<221>  sig_peptide
<222>  (1)..(57)
<400>  
atggcccctg tgcagctgct gggcctgctg gtgctgttcc tgcctgccat gcggtgcgag       60
atcgtgctga cccagtcccc tctgtccctg cctgtgaccc ctggcgagcc tgcctccatc      120
tcctgccggg cctccaaggg cgtgtccacc tccggctact cctacctgca ctggtatctg      180
cagaagcctg gccagtcccc ccagctgctg atctacctgg cctcctacct ggagtccggc      240
gtgcctgacc ggttctccgg ctccggcagc ggcaccgact tcaccctgaa gatctcccgg      300
gtggaggccg aggacgtggg cgtgtactac tgccagcact cccgggacct gcctctgacc      360
ttcggccagg gcaccaagct ggagatcaag                                       390
<210>  88
<211>  390
<212>  DNA
<213>  Artificial Sequence
<220>
<223>  Codon optimized K09A-L-17 light chain variable region
<220>
<221>  sig_peptide
<222>  (1)..(57)
<400>  
atggcccctg tgcagctgct gggcctgctg gtgctgttcc tgcctgccat gcggtgcgac       60
atcgtgatga cccagacccc tctgtccctg cctgtgaccc ctggcgagcc tgcctccatc      120
tcctgccggg cctccaaggg cgtgtccacc tccggctact cctacctgca ctggtatctg      180
cagaagcctg gccagtcccc tcagctgctg atctacctgg cctcctacct ggagtccggc      240
gtgcctgacc ggttctccgg ctccggaagc ggcaccgctt ttaccctgaa gatctccaga      300
gtggaggccg aggacgtggg cctgtactac tgccagcact cccgggacct gcctctgacc      360
ttcggccagg gcaccaagct ggagatcaag                                       390
<210>  89
<211>  139
<212>  PRT
<213>  Artificial Sequence
<220>
<223>  109A-H heavy chain variable region
<220>
<221>  sig_peptide
<222>  (1)..(19)
<400>  
Met Asp Trp Thr Trp Ser Ile Leu Phe Leu Val Ala Ala Pro Thr Gly 
1               5                   10                  15      
Ala His Ser Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Val Glu Val Lys Lys 
20                  25                  30          
Pro Gly Ala Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe 
35                  40                  45              
Thr Asn Tyr Tyr Met Tyr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu 
50                  55                  60                  
Glu Trp Met Gly Gly Ile Asn Pro Ser Asn Gly Gly Thr Asn Phe Asn 
65                  70                  75                  80  
Glu Lys Phe Lys Asn Arg Val Thr Leu Thr Thr Asp Ser Ser Thr Thr 
85                  90                  95      
Thr Ala Tyr Met Glu Leu Lys Ser Leu Gln Phe Asp Asp Thr Ala Val 
100                 105                 110         
Tyr Tyr Cys Ala Arg Arg Asp Tyr Arg Phe Asp Met Gly Phe Asp Tyr 
115                 120                 125             
Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 
130                 135                 
<210>  90
<211>  466
<212>  PRT
<213>  Artificial Sequence
<220>
<223>  409A-H heavy chain full length
<220>
<221>  sig_peptide
<222>  (1)..(19)
<400>  
Met Ala Val Leu Gly Leu Leu Phe Cys Leu Val Thr Phe Pro Ser Cys 
1               5                   10                  15      
Val Leu Ser Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Val Glu Val Lys Lys 
20                  25                  30          
Pro Gly Ala Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe 
35                  40                  45              
Thr Asn Tyr Tyr Met Tyr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu 
50                  55                  60                  
Glu Trp Met Gly Gly Ile Asn Pro Ser Asn Gly Gly Thr Asn Phe Asn 
65                  70                  75                  80  
Glu Lys Phe Lys Asn Arg Val Thr Leu Thr Thr Asp Ser Ser Thr Thr 
85                  90                  95      
Thr Ala Tyr Met Glu Leu Lys Ser Leu Gln Phe Asp Asp Thr Ala Val 
100                 105                 110         
Tyr Tyr Cys Ala Arg Arg Asp Tyr Arg Phe Asp Met Gly Phe Asp Tyr 
115                 120                 125             
Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly 
130                 135                 140                 
Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser 
145                 150                 155                 160 
Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val 
165                 170                 175     
Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe 
180                 185                 190         
Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val 
195                 200                 205             
Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys Asn Val 
210                 215                 220                 
Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Ser Lys 
225                 230                 235                 240 
Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe Leu Gly Gly 
245                 250                 255     
Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile 
260                 265                 270         
Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu 
275                 280                 285             
Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His 
290                 295                 300                 
Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg 
305                 310                 315                 320 
Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys 
325                 330                 335     
Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu 
340                 345                 350         
Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr 
355                 360                 365             
Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu 
370                 375                 380                 
Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp 
385                 390                 395                 400 
Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val 
405                 410                 415     
Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp 
420                 425                 430         
Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His 
435                 440                 445             
Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu 
450                 455                 460                 
Gly Lys 
465     
<210>  91
<211>  130
<212>  PRT
<213>  Artificial Sequence
<220>
<223>  K09A-L-11 light chain variable region
<220>
<221>  sig_peptide
<222>  (1)..(19)
<400>  
Met Ala Pro Val Gln Leu Leu Gly Leu Leu Val Leu Phe Leu Pro Ala 
1               5                   10                  15      
Met Arg Cys Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu 
20                  25                  30          
Ser Pro Gly Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Lys Gly Val 
35                  40                  45              
Ser Thr Ser Gly Tyr Ser Tyr Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly 
50                  55                  60                  
Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile Tyr Leu Ala Ser Tyr Leu Glu Ser Gly 
65                  70                  75                  80  
Val Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu 
85                  90                  95      
Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln 
100                 105                 110         
His Ser Arg Asp Leu Pro Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu 
115                 120                 125             
Ile Lys 
130 
<210>  92
<211>  130
<212>  PRT
<213>  Artificial Sequence
<220>
<223>  K09A-L-16 light chain variable region
<220>
<221>  sig_peptide
<222>  (1)..(19)
<400>  
Met Ala Pro Val Gln Leu Leu Gly Leu Leu Val Leu Phe Leu Pro Ala 
1               5                   10                  15      
Met Arg Cys Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val 
20                  25                  30          
Thr Pro Gly Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ala Ser Lys Gly Val 
35                  40                  45              
Ser Thr Ser Gly Tyr Ser Tyr Leu His Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly 
50                  55                  60                  
Gln Ser Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Leu Ala Ser Tyr Leu Glu Ser Gly 
65                  70                  75                  80  
Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu 
85                  90                  95      
Lys Ile Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Gln 
100                 105                 110         
His Ser Arg Asp Leu Pro Leu Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu 
115                 120                 125             
Ile Lys 
130 
<210>  93
<211>  130
<212>  PRT
<213>  Artificial Sequence
<220>
<223>  K09A-L-17 light chain variable region
<220>
<221>  sig_peptide
<222>  (1)..(19)
<400>  
Met Ala Pro Val Gln Leu Leu Gly Leu Leu Val Leu Phe Leu Pro Ala 
1               5                   10                  15      
Met Arg Cys Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val 
20                  25                  30          
Thr Pro Gly Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ala Ser Lys Gly Val 
35                  40                  45              
Ser Thr Ser Gly Tyr Ser Tyr Leu His Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly 
50                  55                  60                  
Gln Ser Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Leu Ala Ser Tyr Leu Glu Ser Gly 
65                  70                  75                  80  
Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Ala Phe Thr Leu 
85                  90                  95      
Lys Ile Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Leu Tyr Tyr Cys Gln 
100                 105                 110         
His Ser Arg Asp Leu Pro Leu Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu 
115                 120                 125             
Ile Lys 
130 
<210>  94
<211>  469
<212>  PRT
<213>  Artificial Sequence
<220>
<223>  109A-H heavy chain full length
<220>
<221>  sig_peptide
<222>  (1)..(19)
<400>  
Met Ala Val Leu Gly Leu Leu Phe Cys Leu Val Thr Phe Pro Ser Cys 
1               5                   10                  15      
Val Leu Ser Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Val Glu Val Lys Lys 
20                  25                  30          
Pro Gly Ala Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe 
35                  40                  45              
Thr Asn Tyr Tyr Met Tyr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu 
50                  55                  60                  
Glu Trp Met Gly Gly Ile Asn Pro Ser Asn Gly Gly Thr Asn Phe Asn 
65                  70                  75                  80  
Glu Lys Phe Lys Asn Arg Val Thr Leu Thr Thr Asp Ser Ser Thr Thr 
85                  90                  95      
Thr Ala Tyr Met Glu Leu Lys Ser Leu Gln Phe Asp Asp Thr Ala Val 
100                 105                 110         
Tyr Tyr Cys Ala Arg Arg Asp Tyr Arg Phe Asp Met Gly Phe Asp Tyr 
115                 120                 125             
Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly 
130                 135                 140                 
Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly 
145                 150                 155                 160 
Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val 
165                 170                 175     
Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe 
180                 185                 190         
Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val 
195                 200                 205             
Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val 
210                 215                 220                 
Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys 
225                 230                 235                 240 
Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu 
245                 250                 255     
Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr 
260                 265                 270         
Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val 
275                 280                 285             
Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val 
290                 295                 300                 
Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser 
305                 310                 315                 320 
Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu 
325                 330                 335     
Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala 
340                 345                 350         
Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro 
355                 360                 365             
Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln 
370                 375                 380                 
Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala 
385                 390                 395                 400 
Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr 
405                 410                 415     
Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu 
420                 425                 430         
Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser 
435                 440                 445             
Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser 
450                 455                 460                 
Leu Ser Pro Gly Lys 
465                 
<210>  95
<211>  237
<212>  PRT
<213>  Artificial Sequence
<220>
<223>  K09A-L-11 light chain full length
<220>
<221>  sig_peptide
<222>  (1)..(19)
<400>  
Met Ala Pro Val Gln Leu Leu Gly Leu Leu Val Leu Phe Leu Pro Ala 
1               5                   10                  15      
Met Arg Cys Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu 
20                  25                  30          
Ser Pro Gly Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Lys Gly Val 
35                  40                  45              
Ser Thr Ser Gly Tyr Ser Tyr Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly 
50                  55                  60                  
Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile Tyr Leu Ala Ser Tyr Leu Glu Ser Gly 
65                  70                  75                  80  
Val Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu 
85                  90                  95      
Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln 
100                 105                 110         
His Ser Arg Asp Leu Pro Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu 
115                 120                 125             
Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser 
130                 135                 140                 
Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn 
145                 150                 155                 160 
Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala 
165                 170                 175     
Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys 
180                 185                 190         
Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp 
195                 200                 205             
Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu 
210                 215                 220                 
Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 
225                 230                 235         
<210>  96
<211>  237
<212>  PRT
<213>  Artificial Sequence
<220>
<223>  K09A-L-16 light chain full length
<220>
<221>  sig_peptide
<222>  (1)..(19)
<400>  
Met Ala Pro Val Gln Leu Leu Gly Leu Leu Val Leu Phe Leu Pro Ala 
1               5                   10                  15      
Met Arg Cys Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val 
20                  25                  30          
Thr Pro Gly Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ala Ser Lys Gly Val 
35                  40                  45              
Ser Thr Ser Gly Tyr Ser Tyr Leu His Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly 
50                  55                  60                  
Gln Ser Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Leu Ala Ser Tyr Leu Glu Ser Gly 
65                  70                  75                  80  
Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu 
85                  90                  95      
Lys Ile Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Gln 
100                 105                 110         
His Ser Arg Asp Leu Pro Leu Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu 
115                 120                 125             
Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser 
130                 135                 140                 
Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn 
145                 150                 155                 160 
Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala 
165                 170                 175     
Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys 
180                 185                 190         
Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp 
195                 200                 205             
Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu 
210                 215                 220                 
Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 
225                 230                 235         
<210>  97
<211>  237
<212>  PRT
<213>  Artificial Sequence
<220>
<223>  K09A-L-17 light chain full length
<220>
<221>  sig_peptide
<222>  (1)..(19)
<400>  
Met Ala Pro Val Gln Leu Leu Gly Leu Leu Val Leu Phe Leu Pro Ala 
1               5                   10                  15      
Met Arg Cys Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val 
20                  25                  30          
Thr Pro Gly Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ala Ser Lys Gly Val 
35                  40                  45              
Ser Thr Ser Gly Tyr Ser Tyr Leu His Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly 
50                  55                  60                  
Gln Ser Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Leu Ala Ser Tyr Leu Glu Ser Gly 
65                  70                  75                  80  
Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Ala Phe Thr Leu 
85                  90                  95      
Lys Ile Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Leu Tyr Tyr Cys Gln 
100                 105                 110         
His Ser Arg Asp Leu Pro Leu Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu 
115                 120                 125             
Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser 
130                 135                 140                 
Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn 
145                 150                 155                 160 
Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala 
165                 170                 175     
Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys 
180                 185                 190         
Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp 
195                 200                 205             
Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu 
210                 215                 220                 
Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 
225                 230                 235         
【０２０８】
別の例として、抗ＯＸ４０抗体は、ニボルマブ（ＯＰＤＩＶＯ（登録商標））と組み合わせて使用することができる。ニボルマブ（ＯＰＤＩＶＯ（登録商標））は、下記の患者の治療のために指示された、プログラム死受容体−１（ＰＤ−１）ブロッキング抗体である：
−イピリムマブおよびＢＲＡＦ  Ｖ６００突然変異陽性の場合にはＢＲＡＦ阻害剤の後の、切除不能または転移性のメラノーマおよび疾患進行。この症状は、腫瘍の応答率および応答の耐久性に基づいた加速承認の下で承認されている。この症状の継続的な承認は、確認試験における臨床的有益性の検証および説明を条件とされ得る。
−プラチナベースの化学療法の進行中またはその後の転移性扁平上皮性非小細胞肺癌。
【０２０９】
ニボルマブ（ＯＰＤＩＶＯ（登録商標））の推奨用量は、疾患の進行または容認できない毒性まで、２週間ごとに６０分にわたり静脈内注入として３ｍｇ／ｋｇである。
【０２１０】
ＰＤ−１リガンド、ＰＤ−Ｌ１およびＰＤ−Ｌ２の、Ｔ細胞に見られるＰＤ−１受容体への結合は、Ｔ細胞増殖およびサイトカイン産生を阻害する。いくつかの腫瘍においてＰＤ−１リガンドのアップレギュレーションが起こり、この経路を介したシグナル伝達は、腫瘍の活性Ｔ細胞免疫監視の阻害に寄与し得る。
【０２１１】
ニボルマブは、ＰＤ−１受容体に結合し、抗腫瘍免疫応答を含む、免疫応答のＰＤ−１経路媒介性阻害を解除して、ＰＤ−１受容体とＰＤ−Ｌ１およびＰＤ−Ｌ２との相互作用を遮断するヒト免疫グロブリンＧ４（ＩｇＧ４）モノクローナル抗体である。同系のマウス腫瘍モデルでは、ＰＤ−１活性を遮断すると腫瘍増殖が減少する。
【０２１２】
米国特許第８，００８，４４９号は、７つの抗ＰＤ−１  ＨｕＭＡｂ：１７Ｄ８、２Ｄ３、４Ｈ１、５Ｃ４（本明細書ではニボルマブまたはＢＭＳ−９３６５５８とも呼ばれる）、４Ａ１１、７Ｄ３および５Ｆ４を例示する。米国特許第８，７７９，１０５号も参照のこと。これらの抗体のいずれか１つ、またはそのＣＤＲ（またはこれらのいずれかと少なくとも９０％（例えば９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％または１００％）の配列同一性を有するアミノ酸配列）が本明細書に記載の組成物および方法に使用され得る。
【０２１３】
ペムブロリズマブは、例えば米国特許第８，３５４，５０９号および同第８，９００，５８７号に記載されている。
【０２１４】
認可された製品は、再構成のために単一使用バイアル中の５０ｍｇの凍結乾燥粉末として入手可能な、活性成分ペムブロリズマブの静脈内注入のための注射用のペムブロリズマブ（ＫＥＹＴＲＵＤＡ（登録商標））である。ペムブロリズマブは、イピリムマブ、およびＢＲＡＦ  Ｖ６００突然変異陽性の場合にはＢＲＡＦ阻害剤の後に、切除不能または転移性のメラノーマおよび疾患進行を有する患者の治療のために承認されている。ペムブロリズマブ（ＫＥＹＴＲＵＤＡ（登録商標））は、ＰＤ−１とそのリガンドであるＰＤ−Ｌ１およびＰＤ−Ｌ２との間の相互作用を遮断するヒト化モノクローナル抗体である。ペムブロリズマブは、約１４９ｋＤａの分子量を有するＩｇＧ４κ免疫グロブリンである。ペムブロリズマブのアミノ酸配列は以下の通りであり、米国特許第８，３５４，５０９号の第１５欄の表に提供されているものと同じ一文字アミノ酸コード命名法を用いて記載される。
ニボルマブの重鎖:
QVQLVESGGGVVQPGRSLRLDCKASGITFSNSGMHWVRQAPGKGLEWVAVIWYDGSKRYYADSVKGRFTISRDNSKNTLFLQMNSLRAEDTAVYYCATNDDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK (配列番号98)
ニボルマブの軽鎖:
EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYDASNRATGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCQQSSNWPRTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC (配列番号99)
ニボルマブの重鎖可変領域:
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg 
1               5                   10                  15      
Ser Leu Arg Leu Asp Cys Lys Ala Ser Gly Ile Thr Phe Ser Asn Ser 
20                  25                  30          
Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 
35                  40                  45              
Ala Val Ile Trp Tyr Asp Gly Ser Lys Arg Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 
50                  55                  60                  
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Phe 
65                  70                  75                  80  
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 
85                  90                  95      
Ala Thr Asn Asp Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser 
100                 105                 110         
Ser (配列番号100)
ニボルマブの軽鎖可変領域:
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly 
1               5                   10                  15      
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Tyr 
20                  25                  30          
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile 
35                  40                  45              
Tyr Asp Ala Ser Asn Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly 
50                  55                  60                  
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro 
65                  70                  75                  80  
Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Ser Asn Trp Pro Arg 
85                  90                  95      
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys (配列番号101)
100                 105
【０２１５】
ニボルマブのＣＤＲ配列：
ＨＣ  ＣＤＲ１：Asn Ser Gly Met His（配列番号１０２）
ＨＣ  ＣＤＲ２：Val Ile Trp Tyr Asp Gly Ser Lys Arg Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly（配列番号１０３）
ＨＣ  ＣＤＲ３：Asn Asp Asp Tyr（配列番号１０４）
ＬＣ  ＣＤＲ１：Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Tyr Leu Ala（配列番号１０５）
ＬＣ  ＣＤＲ２：Asp Ala Ser Asn Arg Ala Thr（配列番号１０６）
ＬＣ  ＣＤＲ３：Gln Gln Ser Ser Asn Trp Pro Arg Thr（配列番号１０７）
【０２１６】
別の実施形態では、本発明の組み合わせ物、またはその方法もしくは使用の抗ＰＤ−１  ＡＢＰは、ニボルマブの１つまたは複数（例えばすべて）のＣＤＲまたはＶＨまたはＶＬまたはＨＣ（重鎖）またはＬＣ（軽鎖）、またはそれらと少なくとも９０％（例えば９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％または１００％）の配列同一性を有する配列を含んでなる。
【０２１７】
ニボルマブのＨＣおよびＬＣ  ＣＤＲが本明細書において提供される。一つの実施形態では、本発明の組み合わせ物、またはその方法もしくは使用の抗ＰＤ−１  ＡＢＰは、（ａ）ニボルマブの重鎖可変領域ＣＤＲ１、（ｂ）ニボルマブの重鎖可変領域ＣＤＲ２、（ｃ）ニボルマブの重鎖可変領域ＣＤＲ３、（ｄ）ニボルマブの軽鎖可変領域ＣＤＲ１、（ｅ）ニボルマブの軽鎖可変領域ＣＤＲ２、および（ｆ）ニボルマブの軽鎖可変領域ＣＤＲ３を含んでなる。
【０２１８】
別の実施形態では、本発明の組み合わせ物、またはその方法もしくは使用の抗ＰＤ−１は、ニボルマブの重鎖可変領域ＣＤＲ１、ニボルマブの重鎖可変領域ＣＤＲ２および／またはニボルマブの重鎖可変領域ＣＤＲ３を含んでなる。
【０２１９】
別の実施形態では、本発明の組み合わせ物、またはその方法もしくは使用の抗ＰＤ−１は、ニボルマブの軽鎖可変領域ＣＤＲ１、ニボルマブの軽鎖可変領域ＣＤＲ２および／またはニボルマブの軽鎖可変領域ＣＤＲ３を含んでなる。
【０２２０】
別の実施形態では、本発明の組み合わせ物、またはその方法もしくは使用の抗ＰＤ−１  ＡＢＰは、ニボルマブの軽鎖可変領域（「ＶＬ」）、またはニボルマブのＶＬと少なくとも９０％（例えば９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％または１００％）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含んでなる。
【０２２１】
別の実施形態では、本発明の組み合わせ物、またはその方法もしくは使用の抗ＰＤ−１  ＡＢＰは、ニボルマブの重鎖可変領域（「ＶＨ」）、またはニボルマブのＶＨと少なくとも９０％（例えば９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％または１００％）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含んでなる。
【０２２２】
別の実施形態では、本発明の組み合わせ物、またはその方法もしくは使用の抗ＰＤ−１  ＡＢＰは、ニボルマブの軽鎖可変領域（「ＶＬ」）、またはニボルマブのＶＬのアミノ酸配列と少なくとも９０％（例えば９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％または１００％）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含んでなり、かつ、本発明の組み合わせ物、またはその方法もしくは使用の抗ＰＤ−１  ＡＢＰは、ニボルマブの重鎖可変領域（「ＶＨ」）、またはニボルマブのＶＨのアミノ酸配列と少なくとも９０％（例えば９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％または１００％）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含んでなる。
【０２２３】
別の実施形態では、本発明の組み合わせ物、またはその方法もしくは使用の抗ＰＤ−１  ＡＢＰは、ニボルマブの軽鎖（「ＬＣ」）、またはニボルマブのＬＣのアミノ酸配列と少なくとも９０％（例えば９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％または１００％）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含んでなる。
【０２２４】
別の実施形態では、本発明の組み合わせ物、またはその方法もしくは使用の抗ＰＤ−１  ＡＢＰは、ニボルマブの重鎖（「ＨＣ」）、またはニボルマブのＨＣのアミノ酸配列と少なくとも９０％（例えば９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％または１００％）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含んでなる。
【０２２５】
別の実施形態では、本発明の組み合わせ物、またはその方法もしくは使用の抗ＰＤ−１  ＡＢＰは、ニボルマブの軽鎖（「ＬＣ」）、またはニボルマブのＬＣのアミノ酸配列と少なくとも９０％（例えば９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％または１００％）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含んでなり、本発明の組み合わせ物、またはその方法もしくは使用の抗ＰＤ−１  ＡＢＰは、ニボルマブの重鎖（「ＨＣ」）、またはニボルマブのＨＣのアミノ酸配列と少なくとも９０％（例えば９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％または１００％）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含んでなる。
【０２２６】
本発明の組み合わせ物、またはその方法もしくは使用の他の実施形態には、ＣＤＲ、ＶＨ領域およびＶＬ領域、ならびにＨＣおよびＬＣ、ならび抗体および抗体をコードするに以下の配列表に開示される核酸が含まれる。
【０２２７】
抗ＯＸ４０  ＡＢＰ（例えばアゴニストＡＢＰ、例えば抗ｈＯＸ４０  ＡＢＰ、例えば抗体）、例えば本明細書に記載の抗体等は、ＰＤ−１（例えばヒトＰＤ−１）に対するＡＢＰ（例えばアンタゴニストＡＢＰ、例えばアンタゴニスト抗体）と組み合わせて使用することができる。例えば、抗ＯＸ４０抗体は、ニボルマブと組み合わせて使用することができる。
【０２２８】
従って、一つの実施形態では、治療を必要とするヒトにおける癌を治療するための方法であって、配列番号４に示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨ領域、および配列番号１０に示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬ領域を含んでなる、ヒトＯＸ４０に結合するモノクローナル抗体の治療上有効量、およびペムブロリズマブ、またはそれと少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の同一性を有する抗体を投与することを含む方法が提供される。一つの実施形態では、ＯＸ４０に結合するモノクローナル抗体は、配列番号４に示されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号１０に示されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含んでなる。
【０２２９】
一つの態様では、癌は固形腫瘍である。一つの態様では、癌は、メラノーマ、肺癌、腎臓癌、乳癌、頭頸部癌、結腸癌、卵巣癌、膵臓癌、肝臓癌、前立腺癌、膀胱癌、胃癌から選択される。別の態様では、癌は、ＮＳＣＬＣ、頭頸部扁平上皮癌（ＳＣＣＨＮ）、腎細胞癌（ＲＣＣ）、メラノーマ、膀胱癌、軟部組織肉腫（ＳＴＳ）、トリプルネガティブ乳癌（ＴＮＢＣ）およびマイクロサテライト不安定性を示す結腸直腸癌（ＭＳＩ  ＣＲＣ）から選択される。
【０２３０】
一つの実施形態では、ＯＸ４０に結合するモノクローナル抗体は、抗体１０６〜２２２である。一つの実施形態では、ＯＸ４０に結合するモノクローナル抗体およびペムブロリズマブは、同時に投与される。一つの実施形態では、ＯＸ４０に結合するモノクローナル抗体およびペムブロリズマブは、任意の順序で連続して投与される。一つの実施形態では、ＯＸ４０に結合するモノクローナル抗体および／またはペムブロリズマブは、静脈内に投与される。好適には、ＯＸ４０に結合するモノクローナル抗体および／またはペムブロリズマブは、腫瘍内に投与される。
【０２３１】
一つの実施形態において、ＯＸ４０に結合するモノクローナル抗体は、約０．１ｍｇ／ｋｇ〜約１０ｍｇ／ｋｇの用量で投与される。ＯＸ４０に結合するモノクローナル抗体は、１日１回、週１回、２週間に１回（Ｑ２Ｗ）および３週間に１回（Ｑ３Ｗ）から選択される頻度で投与され得る。好適には、ＯＸ４０に結合する抗体は、３週間に１回投与される。一つの態様では、ペムブロリズマブは、２００ｍｇ  Ｑ３Ｗの用量で投与される。
【０２３２】
一つの実施形態では、配列番号５に示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨ領域、および配列番号１１に示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬ領域を含んでなる、ＯＸ４０に結合するモノクローナル抗体の治療上有効量、ならびにペムブロリズマブ、またはそれと少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の同一性を有する抗体を含んでなる医薬組成物が提供される。好適には、ＯＸ４０に結合するモノクローナル抗体は、配列番号５に示されるアミノ酸配列を含む可変重鎖、および配列番号１１に示されるアミノ酸配列を含む可変軽鎖を含んでなる。好適には、医薬組成物ペムブロリズマブを含む。
【０２３３】
また、本発明の一部として、本発明の薬学的組成物と、１つまたは複数の薬学的に許容される担体とを含む組み合わせ物キットが提供される。
【０２３４】
本発明はまた、癌の治療のための医薬の製造における本発明の医薬組成物またはキットの使用を提供する。
【０２３５】
一つの実施形態では、本発明は、治療上有効量の抗体１０６〜２２２および治療上有効量のペムブロリズマブをヒトに投与することを含む、癌を有するヒトにおける腫瘍サイズを減少させる方法を提供する。一つの態様では、ヒトは、ＲＥＣＩＳＴ  バージョン１．１による完全応答または部分応答を示す。
【０２３６】
本明細書中に記載の方法（例えばヒトにおける癌を治療する方法および／または腫瘍サイズを減少させる方法）のいくつかの実施形態では、第１にヒトＯＸ４０に結合するモノクローナル抗体（例えば、配列番号５に示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨ領域、および配列番号１１に示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬ領域を含んでなるヒトＯＸ４０に結合するモノクローナル抗体）（例えば抗体１０６〜２２２）（例えばその治療上有効量）がヒトに投与され、第２にペムブロリズマブ（またはそれと９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の配列同一性を有する抗体）（例えばその治療上有効量）が投与される。いくつかの実施形態では、ヒトＯＸ４０に結合するモノクローナル抗体（例えば配列番号５に示されるアミノ酸配列と９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨ領域、および配列番号１１に示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬ領域を含んでなるヒトＯＸ４０に結合するモノクローナル抗体）（例えば抗体１０６〜２２２）が静脈内に投与される（例えば静脈内注入）。いくつかの実施形態では、ペムブロリズマブ（またはそれと９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の配列同一性を有する抗体）が静脈内に投与される。いくつかの実施形態では、ヒトＯＸ４０に結合するモノクローナル抗体（例えば配列番号５に示されるアミノ酸配列と９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨ領域、および配列番号１１に示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬ領域を含んでなるヒトＯＸ４０に結合するモノクローナル抗体）（例えば抗体１０６〜２２２）の投与の終了後少なくとも１時間〜２時間以内に、ペムブロリズマブ（またはそれと９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の配列同一性を有する抗体）が対象に投与される。いくつかの実施形態では、ヒトＯＸ４０に結合するモノクローナル抗体（例えば配列番号５に示されるアミノ酸配列と９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨ領域、および配列番号１１に示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬ領域を含んでなるヒトＯＸ４０に結合するモノクローナル抗体）（例えば抗体１０６〜２２２）の注入（例えば静脈内注入）の終了後少なくとも１時間〜２時間以内に、ペムブロリズマブ（またはそれと９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の配列同一性を有する抗体）がヒトの静脈内に投与される。いくつかの実施形態では、ＯＸ４０に結合するモノクローナル抗体は、約０．００３ｍｇ／ｋｇ〜約１０ｍｇ／ｋｇ（例えば０．１ｍｇ／ｋｇ〜約１０ｍｇ／ｋｇ）（例えばＱ３Ｗ）の用量で投与される。いくつかの実施形態では、ペムブロリズマブは、２００ｍｇ（例えばＱ３Ｗ）の用量で投与される。
【０２３７】
本明細書中に記載の方法（例えばヒトにおける癌を治療する方法および／または腫瘍サイズを減少させる方法）のいくつかの実施形態では、第１にヒトＯＸ４０に結合するモノクローナル抗体配列番号５に示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨ領域、および配列番号１１に示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬ領域を含んでなるヒトＯＸ４０に結合するモノクローナル抗体）（例えば抗体１０６〜２２２）（例えばその治療上有効量）が（ばヒトへ）静脈内に投与され（例えば静脈内注入）、第２にペムブロリズマブ（またはそれと９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の配列同一性を有する抗体）（例えばその治療上有効量）が投与され、ヒトＯＸ４０に結合するモノクローナル抗体（例えば配列番号５に示されるアミノ酸配列と９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨ領域、および配列番号１１に示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬ領域を含んでなるヒトＯＸ４０に結合するモノクローナル抗体）（例えば抗体１０６〜２２２）の注入（例えば静脈内注入）の終了後少なくとも１時間〜２時間以内に、ペムブロリズマブ（またはそれと９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の配列同一性を有する抗体）がヒトの静脈内に投与される。いくつかの実施形態では、ＯＸ４０に結合するモノクローナル抗体は、約０．００３ｍｇ／ｋｇ〜約１０ｍｇ／ｋｇ（例えば０．１ｍｇ／ｋｇ〜約１０ｍｇ／ｋｇ）（例えばＱ３Ｗ）の用量で投与される。いくつかの実施形態では、ペムブロリズマブは、２００ｍｇ（例えばＱ３Ｗ）の用量で投与される。
【０２３８】
治療の方法
本発明の組み合わせ物は、ＯＸ４０の関与（例えばアゴニスト的関与）および／またはＰＤ−１の関与（例えばアンタゴニスト的関与）が有益である障害において有用であると考えられる。
【０２３９】
従って、本発明は、治療、特にＯＸ４０の関与（例えばアゴニスト的関与）および／またはＰＤ−１の関与（例えばアンタゴニスト的関与）が有益である障害、特に癌の治療の治療における使用のための組み合わせ物を提供する。
【０２４０】
本発明のさらなる態様は、本発明の組み合わせ物を投与することを含む、ＯＸ４０の関与（例えばアゴニスト的関与）および／またはＰＤ−１の関与（例えばアンタゴニスト的関与）がある障害の治療方法を提供する。
【０２４１】
本発明のさらなる態様は、ＯＸ４０の関与（例えばアゴニスト的関与）および／またはＰＤ−１の関与（例えばアンタゴニスト的関与）がある障害を治療するための医薬の製造における本発明の組み合わせ物の使用を提供し、それは有益である。好ましい実施形態では、障害は癌である。
【０２４２】
本発明の組み合わせ物による治療に適した癌の例としては、限定されないが、原発性および転移形態の両方の頭頸部癌、乳癌、肺癌、結腸癌、卵巣癌および前立腺癌が含まれる。好適には、癌は、脳（神経膠腫）、グリア芽細胞腫、星状細胞腫、多形性グリア芽腫、Ｂａｎｎａｙａｎ−Ｚｏｎａｎａ症候群、Ｃｏｗｄｅｎ病、Ｌｈｅｒｍｉｔｔｅ−Ｄｕｃｌｏｓ病、乳癌、炎症性乳癌、Ｗｉｌｍ’ｓ腫瘍、Ｅｗｉｎｇ’ｓ肉腫、横紋筋肉腫、上衣種、髄芽種、結腸癌、頭頸部癌、腎臓癌、肺癌、肝臓癌、メラノーマ、卵巣癌、膵臓癌、前立腺癌、肉腫、骨肉種、骨の巨細胞腫瘍、甲状腺癌、リンパ芽球性Ｔ細胞白血病、慢性骨髄性白血病、慢性リンパ球性白血病、有毛細胞白血病、急性リンパ芽球性白血病、急性骨髄性白血病、ＡＭＬ、慢性好中球性白血病、急性リンパ芽球性Ｔ細胞白血病、形質細胞種、免疫芽球性大細胞白血病、マントル細胞白血病、多発性骨髄腫巨核芽球性白血病、多発性骨髄腫、急性巨核球性白血病、前骨髄球性白血病、赤白血病、悪性リンパ腫、Ｈｏｄｇｋｉｎ’ｓリンパ腫、非Ｈｏｄｇｋｉｎ’ｓリンパ腫、リンパ芽球性Ｔ細胞リンパ腫、Ｂｕｒｋｉｔｔ’ｓリンパ腫、濾胞性リンパ腫、神経芽細胞腫、膀胱癌、尿路上皮癌、肺癌、外陰癌、子宮頸癌、子宮内膜癌、腎臓癌、中皮腫、食道癌、唾液腺癌、肝細胞癌、胃癌、鼻咽頭癌、口腔癌、口癌、ＧＩＳＴ（胃腸間質腫瘍）および精巣癌が含まれる。
【０２４３】
さらに、治療される癌の例としては、Ｂａｒｒｅｔ’ｓ腺癌；胆道癌；乳癌；子宮頸癌；胆管細胞癌；グリア芽細胞種、星状細胞腫（例えば、多形性グリア芽腫）および上衣腫および二次性ＣＮＳ腫瘍（すなわち、中枢神経系外に由来する腫瘍の中枢神経系への転移）等の中枢神経系腫瘍；大腸結腸癌を含む結腸直腸癌；胃癌；頭頸部扁平上皮癌を含む頭頸部癌；急性リンパ芽球性白血病、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、骨髄異形成性症候群、慢性骨髄性白血病、Ｈｏｄｇｋｉｎ’ｓリンパ腫、非Ｈｏｄｇｋｉｎ’ｓリンパ腫、巨核芽球性白血病、多発性骨髄腫および赤白血病等の白血病およびリンパ腫を含む血液癌；肝細胞癌；小細胞肺癌および非小細胞肺癌を含む肺癌；卵巣癌；子宮内膜癌；膵臓癌；下垂体腺腫；前立腺癌；腎臓癌；肉腫；メラノーマを含む皮膚癌；甲状腺癌が含まれる。
【０２４４】
好適には、本発明は、脳（神経膠腫）、グリア芽細胞腫、星状細胞腫、多形性グリア芽腫、Ｂａｎｎａｙａｎ−Ｚｏｎａｎａ症候群、Ｃｏｗｄｅｎ病、Ｌｈｅｒｍｉｔｔｅ−Ｄｕｃｌｏｓ病、乳癌、結腸癌、頭頸部癌、腎臓癌、肺癌、肝臓癌、メラノーマ、卵巣癌、膵臓癌、前立腺癌、肉腫および甲状腺癌から選択される癌の重篤度を治療または軽減する方法に関する。
【０２４５】
好適には、本発明は、卵巣癌、乳癌、膵臓癌および前立腺癌から選択される癌の重篤度を治療または軽減するための方法に関する。
【０２４６】
好適には、本発明は、ＮＳＣＬＣ（非小細胞肺癌）、頭頸部扁平上皮癌（ＳＣＣＨＮ）、腎細胞癌（ＲＣＣ）、メラノーマ、膀胱癌、軟部組織肉腫（ＳＴＳ）、トリプルネガティブ乳癌（ＴＮＢＣ）およびマイクロサテライト不安定性を示す結腸直腸癌腫（ＭＳＩ  ＣＲＳ）の重篤度を治療または軽減する方法に関する。
【０２４７】
好適には、本発明は、メラノーマ、例えば転移性メラノーマの重篤度を治療または軽減するための方法に関する。
【０２４８】
好適には、本発明は、扁平上皮性非小細胞肺癌、例えば転移性扁平上皮性非小細胞肺癌の重篤度を治療または軽減するための方法に関する。
【０２４９】
好適には、本発明は、ヒトを含む哺乳動物における前癌性症候群の重篤度を治療または軽減するための方法であって、前癌性症候群が、頸部上皮内腫瘍、意義不明のモノクローナル高ガンマグロブリン結晶（ＭＧＵＳ）、骨髄異形成症候群、再生不良性貧血、頸部病変、皮膚血管腫（前メラノーマ）、前立腺上皮性（腺管内）新生物（ＰＩＮ）、in situ腺管癌（ＤＣＩＳ）、大腸ポリープおよび重度の肝炎または肝硬変から選択される方法に関する。
【０２５０】
本発明の組み合わせ物は、単独で、または１つもしくは複数の他の治療剤と組み合わせて使用することができる。従って、本発明は、さらなる態様において、本発明の組み合わせ物と、さらなる該組み合わせ物を含む治療剤、組成物および医薬とを含む組み合わせ物、該さらなる組み合わせ物、組成物および医薬の治療、特にＯＸ４０、例えばＯＸ４０のアゴニズムおよび／またはＰＤ−１、例えばＰＤ−１のアンタゴニズムの関与の影響を受けやすい疾患の治療における使用を提供する。
【０２５１】
この実施形態では、本発明の組み合わせ物は、癌治療の他の治療方法と共に使用され得る。特に、抗新生物治療において、他の化学療法剤、ホルモン剤、抗体剤との併用療法、ならびに上記のもの以外の外科および／または放射線治療が想定される。従って、本発明の併用療法には、本発明の組み合わせ物、または方法もしくは使用の抗ＯＸ４０  ＡＢＰ、および／または本発明の組み合わせ物、またはその方法もしくは使用の抗ＰＤ−１  ＡＢＰの投与、ならびに他の抗新生物剤を含む他の治療剤の任意の使用が含まれる。そのような薬剤の組み合わせ物は、一緒にまたは別々に投与されてもよく、別々に投与される場合、時間的に近いまたは遠い任意の順序で同時にまたは連続して投与され得る。一つの実施形態では、医薬組み合わせ物は、抗ＯＸ４０  ＡＢＰ、好適にはアゴニスト抗ＯＸ４０  ＡＢＰ、および抗ＰＤ−１  ＡＢＰ、好適にはアンタゴニスト抗ＰＤ１  ＡＢＰ、ならびに任意に少なくとも１つのさらなる抗新生物剤を含む。
【０２５２】
一つの実施形態では、さらなる抗癌治療は、外科的治療および／または放射線治療である。
【０２５３】
一つの実施形態では、さらなる抗癌治療は、少なくとも１つのさらなる抗新生物剤である。
【０２５４】
治療されている感受性の腫瘍に対して活性を有する任意の抗新生物剤が、組み合わせ物において使用され得る。典型的な有用な抗新生物剤としては、限定されないが、ジテルペノイドおよびビンカアルカロイド等の抗微小管剤；白金配位錯体；窒素マスタード、オキサザホスホリン、アルキルスルホネート、ニトロソウレアおよびトリアゼン等のアルキル化剤；アントラサイクリン、アクチノマイシンおよびブレオマイシン等の抗生物質剤；エピポドフィロトキシン等のトポイソメラーゼＩＩ阻害剤；プリンおよびピリミジン類似体および抗葉酸化合物等の代謝拮抗物質；カンプトテシン等のトポイソメラーゼＩ阻害剤；ホルモンおよびホルモン類似体；シグナル伝達経路阻害剤；非受容体チロシン血管新生阻害剤；免疫療法剤；アポトーシス促進剤；および細胞周期シグナル伝達阻害剤が挙げられる。
【０２５５】
抗微小管剤または抗有糸分裂剤：抗微小管剤または抗有糸分裂剤は、細胞周期のＭ期または有糸分裂段階中の腫瘍細胞の微小管に対して活性な相特異的薬剤である。抗微小管剤の例としては、限定されないが、ジテルペノイドおよびビンカアルカロイドが含まれる。
【０２５６】
天然源に由来するジテルペノイドは、細胞周期のＧ２／Ｍ期に作用する相特異的抗癌剤である。ジテルペノイドは、微小管のβ−チューブリンサブユニットと結合することによって、このタンパク質を安定化させると考えられている。次いで、このタンパク質の分解の分解が阻害され、有糸分裂を停止し、細胞死に至ると考えられる。ジテルペノイドの例としては、限定されないが、パクリタキセルおよびその類似体であるドセタキセルが挙げられる。
【０２５７】
（２Ｒ，３Ｓ）−Ｎ−ベンゾイル−３−フェニルイソセリンとの、５β，２０−エポキシ−１，２α，４，７β，１０β，１３α−ヘキサ−ヒドロキシタクス−１１−エン−９−オン  ４，１０−ジアセテート  ２−ベンゾエート  １３−エステルであるパクリタキセルは、太平洋イチイTaxus brevifoliaから単離された天然ジテルペン生成物であり、、注射用溶液ＴＡＸＯＬ（登録商標）として市販されている。それはテルペン類のタキサンファミリーのメンバーである。パクリタキセルは、米国における難治性卵巣癌の治療における臨床使用のために承認されており（Markman et al., Yale Journal of Biology and Medicine, 64:583, 1991; McGuire et al., Ann. lntem, Med., 111 :273, 1989）、および乳癌の治療のために承認されている（Holmes et al., J. Nat. Cancer Inst., 83:1797, 1991）。それは皮膚における新生物治療のための潜在的候補であり（Einzig et al., Proc. Am. Soc. Clin. Oncol., 20:46）、頭頚部癌における新生物治療のための潜在的候補である（Forastire et al., Sem. Oncol., 20:56, 1990）。この化合物はまた、多嚢胞腎疾患（Woo et al., Nature, 368:750, 1994）、肺癌およびマラリアの治療の可能性を示す。パクリタキセルを用いた患者の治療は、閾値濃度（５０ｎＭ）を上回る投与期間に関連する骨髄抑制（多細胞系統、Ignoff, R. J. et al., Cancer Chemotherapy Pocket Guide, 1998）をもたらす（Kearns, C. M. et al., Seminars in Oncology, 3(6), p.16-23, 1995）。
【０２５８】
５β−２０−エポキシ−１，２α，４，７β，１０β、１３α−ヘキサヒドロキシタクス−１１−エン−９−オン  ４−アセテート  ２−ベンゾエート３水和物との、（２Ｒ，３Ｓ）−Ｎ−カルボキシ−３−フェニルイソセリン、Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチルエステル、１３−エステルであるドセタキセルは、注射用溶液ＴＡＸＯＴＥＲＥ（登録商標）として市販されている。ドセタキセルは、乳癌の治療に適応される。ドセタキセルは、ヨーロッパイチイの針葉から抽出された天然前駆体である１０−デアセチル−バッカチンＩＩＩを用いて任意の量に調製されるパクリタキセルの半合成誘導体である。
【０２５９】
ビンカアルカロイドは、マメ科植物由来の相特異的抗新生物剤である。ビンカアルカロイドは、チューブリンに特異的に結合することによって細胞周期のＭ期（有糸分裂）に作用する。結果として、結合したチューブリン分子は微小管に重合することができなくなる。有糸分裂は中期で停止し、細胞死に至ると考えられている。ビンカアルカロイドの例としては、限定されないが、ビンブラスチン、ビンクリスチンおよびビノレルビンが挙げられる。
【０２６０】
ビンブラスチン、すなわちビンカレウコブラスチンサルフェートは、注射用溶液ＶＥＬＢＡＮ（登録商標）として市販されている。ビンブラスチンは様々な固形腫瘍の第２選択療法であり得るが、精巣癌およびＨｏｄｇｋｉｎ’ｓ病を含む様々なリンパ腫；およびリンパ球性リンパ腫および組織球性リンパ腫の治療において主に適応される。骨髄抑制はビンブラスチンの用量制限副作用である。
【０２６１】
ビンクリスチン、すなわちビンカレウコブラスチン、２２−オキソ−、サルフェートは、注射用溶液ＯＮＣＯＶＩＮ（登録商標）として市販されている。ビンクリスチンは急性白血病の治療に適応しており、Ｈｏｄｇｋｉｎ’ｓリンパ腫および非Ｈｏｄｇｋｉｎ’ｓリンパ腫の治療レジメンでの使用も見出されている。脱毛症および神経学的効果は、ビンクリスチンの最も一般的な副作用であり、程度は低いが、骨髄抑制および胃腸粘膜炎の影響が生じる。
【０２６２】
注射用溶液ビノレルビンタータレート（ＮＡＶＥＬＢＩＮＥ（登録商標））として市販されているビノレルビン、すなわち３’，４’−ジデヒドロ−４’−デオキシ−Ｃ’−ノルビンカレウコブラスチン［Ｒ−（Ｒ＊，Ｒ＊）−２，３−ジヒドロキシブタンジオエート（１：２）（塩）］は、半合成ビンカアルカロイドである。ビノレルビンは、様々な固形腫瘍、特に非小細胞肺癌、進行性乳癌、およびホルモン不応性前立腺癌の治療において、単一薬剤またはシスプラチン等の他の化学療法剤と組み合わせて適応される。骨髄抑制はビノレルビンの最も一般的な用量制限副作用である。
【０２６３】
白金配位錯体：白金配位錯体は、ＤＮＡと相互作用する非相特異的な抗癌剤である。白金錯体は腫瘍細胞に侵入し、アクア化され、腫瘍に有害な生物学的影響を引き起こすＤＮＡとの内部および鎖間架橋を形成する。白金配位錯体の例としては、限定されないが、オキサリプラチン、シスプラチンおよびカルボプラチンが挙げられる。
【０２６４】
シスプラチン、すなわちシス−ジアミンジクロロ白金は、注射用溶液ＰＬＡＴＩＮＯＬ（登録商標）として市販されている。シスプラチンは、転移性の精巣癌および卵巣癌および進行性膀胱癌の治療において主に適応される。
【０２６５】
カルボプラチン、白金、ジアミン［１，１−シクロブタンジカルボキシレート（２−）−Ｏ，Ｏ’］は、注射用溶液ＰＡＲＡＰＬＡＴＩＮ（登録商標）として市販されている。カルボプラチンは、進行性卵巣癌の第１および第２選択療法において主に適応される。
【０２６６】
アルキル化剤：アルキル化剤は、非相抗癌特異的薬剤および強力な求電子剤である。典型的には、アルキル化剤は、リン酸、アミノ、スルフヒドリル、ヒドロキシル、カルボキシルおよびイミダゾール基等のＤＮＡ分子の求核部分を介して、アルキル化によってＤＮＡに共有結合を形成する。そのようなアルキル化は、核酸機能を破壊し、細胞死をもたらす。アルキル化剤の例としては、限定されないが、シクロホスファミド、メルファランおよびクロラムブシル等の窒素マスタード；カルムスチン等のニトロソウレア；およびダカルバジン等のトリアゼンが挙げられる。
【０２６７】
シクロホスファミド、すなわち２−［ビス（２−クロロエチル）アミノ］テトラヒドロ−２Ｈ−１，３，２−オキサザホスホリン  ２−オキシド一水和物は、注射用溶液または錠剤としてＣＹＴＯＸＡＮ（登録商標）として市販されている。シクロホスファミドは、悪性リンパ腫、多発性骨髄腫および白血病の治療において、単一薬剤または他の化学療法剤と組み合わせて適応される。
【０２６８】
メルファラン、すなわち４−［ビス（２−クロロエチル）アミノ］−Ｌ−フェニルアラニンは、注射用溶液または錠剤としてＡＬＫＥＲＡＮ（登録商標）として市販されている。メルファランは、卵巣の多発性骨髄腫および非切除上皮癌の緩和治療に適応される。骨髄抑制はメルファランの最も一般的な用量制限副作用である。
【０２６９】
クロラムブシル、すなわち４−［ビス（２−クロロエチル）アミノ］ベンゼンブタン酸は、錠剤ＬＥＵＫＥＲＡＮ（登録商標）として市販されている。クロラムブシルは、リンパ肉腫、巨細胞性リンパ腫およびＨｏｄｇｋｉｎ’ｓ病等の慢性リンパ性白血病および悪性リンパ腫の緩和治療に適応される。
【０２７０】
ブスルファン、すなわち１，４−ブタンジオールジメタンスルホネートは、錠剤ＭＹＬＥＲＡＮ（登録商標）として市販されている。ブスルファンは、慢性骨髄性白血病の緩和治療に適応される。
【０２７１】
カルムスチン、すなわち１，３−［ビス（２−クロロエチル）−１−ニトロソウレアは、凍結乾燥材料の単一バイアルＢｉＣＮＵ（登録商標）として市販されている。カルムスチンは、単一薬剤として、または脳腫瘍、多発性骨髄腫、Ｈｏｄｇｋｉｎ’ｓ病および非Ｈｏｄｇｋｉｎ’ｓリンパ腫のための他の薬剤と組み合わせて、緩和治療に適応される。
【０２７２】
ダカルバジン、すなわち５−（３，３−ジメチル−１−トリアゼノ）−イミダゾール−４−カルボキサミドは、材料の単一バイアルＤＴＩＣ−Ｄｏｍｅ（登録商標）として市販されている。ダカルバジンは、転移性悪性黒色腫の治療のために適応され、Ｈｏｄｇｉｋｎ’ｓ病の第２選択治療のために他の薬剤と組み合わせて適応される。
【０２７３】
抗生物質抗新生物薬：抗生物質抗新生物薬は、ＤＮＡと結合またはインターカレートする非相特異的物質である。典型的には、そのような作用は、細胞死をもたらす核酸の通常の機能を妨害する、安定なＤＮＡ複合体または鎖破断をもたらす。抗生物質抗新生物剤の例としては、限定されないが、ダクチノマイシン等のアクチノマイシン、ダウノルビシンおよびドキソルビシン等のアントラサイクリン、およびブレオマイシンが挙げられる。
【０２７４】
アクチノマイシンＤとしても知られるダクチノマイシンは、ＣＯＳＭＥＧＥＮ（登録商標）として注射可能な形態で市販されている。ダクチノマイシンは、Ｗｉｌｍ’ｓ腫瘍および横紋筋肉腫の治療に適応される。
【０２７５】
ダウノルビシン、すなわち（８Ｓ−シス−）−８−アセチル−１０−［（３−アミノ−２，３，６−トリデオキシ−α−Ｌ−リキソ−ヘキソピラノシル）オキシ］−７，８，９，１０−テトラヒドロ−６，８，１１−トリヒドロキシ−１−メトキシ−５，１２−ナフタセンジオン塩酸塩は、ＤＡＵＮＯＸＯＭＥ（登録商標）としてリポソーム注射形態として、またはＣＥＲＵＢＩＤＩＮＥ（登録商標）として注射剤として市販されている。ダウノルビシンは、急性非リンパ性白血病および進行性ＨＩＶ関連Ｋａｐｏｓｉ’ｓ肉腫の治療における寛解誘導に適応される。
【０２７６】
ドキソルビシン、すなわち（８Ｓ，１０Ｓ）−１０−［（３−アミノ−２，３，６−トリデオキシ−α−Ｌ−リキソ−ヘキソピラノシル）オキシ］−８−グリコロイル、７，８，９，１０−テトラヒドロ−６，８，１１−トリヒドロキシ−１−メトキシ−５，１２−ナフタセンジオン塩酸塩は、ＲＵＢＥＸ（登録商標）またはＡＤＲＩＡＭＹＣＩＮ  ＲＤＦ（登録商標）として注射可能な形態で市販されている。ドキソルビシンは、主に急性リンパ芽球性白血病および急性骨髄芽球性白血病の治療に適応するが、一部の固形腫瘍およびリンパ腫の治療にも有用な成分である。
【０２７７】
ブレオマイシン、すなわちStreptomyces verticillus株から単離された細胞傷害性グリコペプチド抗生物質の混合物は、ＢＬＥＮＯＸＡＮＥ（登録商標）として市販されている。ブレオマイシンは、単一薬剤または他の薬剤と組み合わせて、扁平上皮細胞癌、リンパ腫および精巣癌の緩和治療として適応されている。
【０２７８】
トポイソメラーゼＩＩ阻害剤：トポイソメラーゼＩＩ阻害剤としては、限定されないが、エピポドフィロトキシンが挙げられる。
【０２７９】
エピポドフィロトキシンは、マンドレーク植物由来の相特異的抗新生物剤である。エピポドフィロトキシンは、典型的には、トポイソメラーゼＩＩおよびＤＮＡとの三元複合体を形成し、ＤＮＡ鎖切断を引き起こすことによって、細胞周期のＳ期およびＧ２期の細胞に影響を及ぼす。鎖切断が増加することにより細胞死が生じる。エピポドフィロトキシンの例としては、限定されないが、エトポシドおよびテニポシドが挙げられる。
【０２８０】
エトポシド、すなわち４’−デメチル−エピポドフィロトキシン  ９［４，６−０−（Ｒ）−エチリデン−β−Ｄ−グルコピラノシド］は、ＶｅＰＥＳＩＤ（登録商標）として注射用溶液またはカプセルとして市販されており、一般にＶＰ−１６として知られている。エトポシドは、精巣癌および非小細胞肺癌の治療において、単一薬剤として、または他の化学療法剤と組み合わせて適応される。
【０２８１】
テニポシド、すなわち４’−デメチル−エピポドフィロトキシン  ９［４，６−０−（Ｒ）−テニリデン−β−Ｄ−グルコピラノシド］は、ＶＵＭＯＮ（登録商標）として注射用溶液として市販されており、ＶＭ−２６として一般に知られている。テニポシドは、小児における急性白血病の治療において、単一薬剤として、または他の化学療法剤と組み合わせて適応される。
【０２８２】
代謝拮抗新生物剤：代謝拮抗新生物剤は、ＤＮＡ合成を阻害することにより、またはプリンもしくはピリミジン塩基合成を阻害し、それによってＤＮＡ合成を制限することによって細胞周期のＳ期（ＤＮＡ合成）に作用する相特異的抗新生物剤である。その結果Ｓ期が進行せず、細胞死に至る。代謝拮抗新生物剤の例としては、限定されないが、フルオロウラシル、メトトレキセート、シタラビン、メカプトプリン、チオグアニンおよびゲムシタビンが挙げられる。
【０２８３】
５−フルオロウラシル、すなわち５−フルオロ−２，４−（１Ｈ，３Ｈ）ピリミジンジオンは、フルオロウラシルとして市販されている。５−フルオロウラシルの投与は、チミジル酸合成の阻害をもたらし、ＲＮＡおよびＤＮＡの両方にも組み込まれる。その結果は、典型的には細胞死である。５−フルオロウラシルは、乳癌、結腸癌、直腸癌、胃癌および膵臓癌の治療において、単一薬剤として、または他の化学療法剤と組み合わせて適応される。他のフルオロピリミジン類似体としては、５−フルオロデオキシウリジン（フロクスウリジン）および５−フルオロデオキシウリジンモノホスフェートが挙げられる。
【０２８４】
シタラビン、すなわち４−アミノ−１−β−Ｄ−アラビノフラノシル−２（１Ｈ）−ピリミジノンは、ＣＹＴＯＳＡＲ−Ｕ（登録商標）として市販されており、Ａｒａ−Ｃとして一般に知られている。シタラビンは、伸長中のＤＮＡ鎖へのシタラビンの末端取り込みによりＤＮＡ鎖の伸長を阻害することによって、Ｓ期で細胞相特異性を示すと考えられている。シタラビンは、急性白血病の治療において、単一薬剤として、または他の化学療法剤と組み合わせて適応される。他のシチジン類似体としては、５−アザシチジンおよび２’，２’−ジフルオロデオキシシチジン（ゲムシタビン）が挙げられる。
【０２８５】
メルカプトプリン、すなわち１，７−ジヒドロ−６Ｈ−プリン−６−チオン一水和物は、ＰＵＲＩＮＥＴＨＯＬ（登録商標）として市販されている。メルカプトプリンは、まだ特定されていない機構によりＤＮＡ合成を阻害することによって、Ｓ期に細胞相特異性を示す。メルカプトプリンは、急性白血病の治療において、単一薬剤として、または他の化学療法剤と組み合わせて適応される。有用なメルカプトプリン類似体はアザチオプリンである。
【０２８６】
チオグアニン、すなわち２−アミノ−１，７−ジヒドロ−６Ｈ−プリン−６−チオンは、ＴＡＢＬＯＩＤ（登録商標）として市販されている。チオグアニンは、まだ特定されていない機構によりＤＮＡ合成を阻害することによって、Ｓ期に細胞相特異性を示す。チオグアニンは、急性白血病の治療において、単一薬剤として、または他の化学療法剤と組み合わせて適応される。他のプリン類似体としては、ペントスタチン、エリスロヒドロキシノニルアデニン、フルダラビンホスフェートおよびクラドリビンが挙げられる。
【０２８７】
ゲムシタビン、すなわち２’−デオキシ−２’，２’−ジフルオロシチジン一塩酸塩（β−異性体）は、ＧＥＭＺＡＲ（登録商標）として市販されている。ゲムシタビンは、Ｇ１／Ｓ境界を通る細胞の進行を遮断することによって、Ｓ期で細胞相特異性を示す。ゲムシタビンは、局所進行性非小細胞肺癌の治療においてシスプラチンと組み合わせて、また局所進行性膵臓癌の治療において単独で適応される。
【０２８８】
メトトレキサート、すなわちＮ−［４［［（２，４−ジアミノ−６−プテリジニル）メチル］メチルアミノ］ベンゾイル］−Ｌ−グルタミン酸は、メトトレキセートナトリウムとして市販されている。メトトレキセートは、プリンヌクレオチドおよびチミジル酸の合成に必要とされるジヒドロ葉酸レダクターゼの阻害を介して、ＤＮＡ合成、修復および／または複製を阻害することによって、Ｓ期に特異的に細胞相効果を示す。メトトレキセートは、絨毛癌、髄膜白血病、非Ｈｏｄｇｋｉｎ’ｓリンパ腫、ならびに乳癌、頭部癌、頚部癌、卵巣癌および膀胱癌の癌腫の治療において、単一薬剤として、または他の化学療法剤と組み合わせて適応される。
【０２８９】
トポイソメラーゼＩ阻害剤：カンプトテシンおよびカンプトテシン誘導体を含むカンプトテシンは、トポイソメラーゼＩ阻害剤として入手可能または開発中である。カンプトテシンの細胞傷害活性は、そのトポイソメラーゼＩ阻害活性に関連していると考えられている。カンプトテシンの例としては、限定されないが、イリノテカン、トポテカン、および下記の７−（４−メチルピペラジノ−メチレン）−１０，１１−エチレンジオキシ−２０−カンプトテシンの様々な光学的形態が挙げられる。
【０２９０】
イリノテカンＨＣｌ、すなわち（４Ｓ）−４，１１−ジエチル−４−ヒドロキシ−９−［（４−ピペリジノピペリジノ）カルボニルオキシ］−１Ｈ−ピラノ［３’，４’，６,７］インドリジノ［１，２−ｂ］キノリン−３，１４（４Ｈ，１２Ｈ）−ジオン塩酸塩は、注射用溶液ＣＡＭＰＴＯＳＡＲ（登録商標）として市販されている。イリノテカンは、その活性代謝物ＳＮ−３８とともに、トポイソメラーゼＩ−ＤＮＡ複合体に結合するカンプトテシンの誘導体である。細胞傷害性は、トポイソメラーゼＩ：ＤＮＡ：イリンテカンまたはＳＮ−３８と複製酵素との三元複合体の相互作用によって引き起こされる回復不能な二本鎖切断の結果として生じると考えられている。イリノテカンは結腸または直腸の転移性癌の治療に適応される。
【０２９１】
トポテカンＨＣｌ、すなわち（Ｓ）−１０−［（ジメチルアミノ）メチル］−４−エチル−４，９−ジヒドロキシ−１Ｈ−ピラノ［３’，４’，６，７］インドリジノ［１，２−ｂ］キノリン−３，１４−（４Ｈ，１２Ｈ）−ジオン一塩酸塩は、注射用溶液ＨＹＣＡＭＴＩＮ（登録商標）として市販されている。トポテカンは、トポイソメラーゼＩ−ＤＮＡ複合体に結合し、ＤＮＡ分子のねじれ歪みに応答してトポイソメラーゼＩにより引き起こされる単鎖切断の再結合を阻害するカンプトテシンの誘導体である。トポテカンは、卵巣癌および小細胞肺癌の転移性癌の第２選択治療として適応されている。
【０２９２】
ホルモンおよびホルモン類似体：ホルモンおよびホルモン類似体は、ホルモンと癌の増殖の増大および／または欠損の関係性がある癌を治療するための有用な化合物である。癌治療に有用なホルモンおよびホルモン類似体の例としては、限定されないが、悪性リンパ腫および小児における急性白血病の治療に有用なプレドニゾンおよびプレドニゾロン等の副腎皮質ステロイド；副腎皮質癌およびエストロゲン受容体を含むホルモン依存性乳癌の治療に有用な、アナストロゾール、レトラゾール、ボラゾールおよびエキセメスタン等の他のアロマターゼ阻害剤；ホルモン依存性乳癌および子宮内膜癌の治療に有用な、メゲストロールアセテート等のプロゲスチン；前立腺癌および良性前立腺肥大の治療に有用な、エストロゲン、アンドロゲン、およびフルタミド、ニルタミド、ビカルタミド、シプロテロンアセテート、ならびにフィナステリドおよびデュタステリド等の５α−レダクターゼ等の抗アンドロゲン；ホルモン依存性乳癌および他の感受性癌の治療に有用な、タモキシフェン、トレミフェン、ラロキシフェン、ドロロキシフェン、ヨードキシフェン等の抗エストロゲン、ならびに米国特許第５，６８１，８３５号、同第５，８７７，２１９号および同第６，２０７，７１６号に記載されているような選択的エストロゲン受容体モジュレーター（ＳＥＲＭＳ）；および、前立腺癌の治療のために黄体形成ホルモン（ＬＨ）および／または卵胞刺激ホルモン（ＦＳＨ）の放出を刺激するゴナドトロピン放出ホルモン（ＧｎＲＨ）およびその類似体、例えばゴセレリンアセテートおよびルプロリド等のＬＨＲＨアゴニストおよびアンタゴニストが挙げられる。
【０２９３】
シグナル伝達経路阻害剤：シグナル伝達経路阻害剤は、細胞内変化を引き起こす化学的プロセスを遮断または阻害する阻害剤である。本明細書中で使用される場合、この変化は細胞の増殖または分化である。本発明において有用なシグナル伝達阻害剤としては、受容体チロシンキナーゼ、非受容体チロシンキナーゼ、ＳＨ２／ＳＨ３ドメインブロッカー、セリン／スレオニンキナーゼ、ホスホチジルイノシトール−３キナーゼ、ミオイノシトールシグナル伝達およびＲａｓ癌遺伝子の阻害剤が挙げられる。
【０２９４】
いくつかのタンパク質チロシンキナーゼは、細胞増殖の調節に関与する様々なタンパク質中の特定のチロシル残基のリン酸化を触媒する。そのようなタンパク質チロシンキナーゼは、受容体または非受容体キナーゼとして広く分類することができる。
【０２９５】
受容体チロシンキナーゼは、細胞外リガンド結合ドメイン、膜貫通ドメインおよびチロシンキナーゼドメインを有する膜貫通タンパク質である。受容体チロシンキナーゼは、細胞増殖の調節に関与し、一般に増殖因子受容体と呼ばれる。例えば過剰発現または突然変異によりもたらされるこれらのキナーゼの多くの不適切または制御されていない活性化、異常なキナーゼ増殖因子受容体活性は、制御されていない細胞増殖をもたらすことが示されている。従って、このようなキナーゼの異常な活性は、悪性組織増殖と関連している。その結果、このようなキナーゼの阻害剤は、癌の治療方法を提供することができる。増殖因子受容体としては、例えば表皮増殖因子受容体（ＥＧＦｒ）、血小板由来増殖因子受容体（ＰＤＧＦｒ）、ｅｒｂＢ２、ｅｒｂＢ４、ｒｅｔ、血管内皮増殖因子受容体（ＶＥＧＦｒ）、免疫グロブリン様および表皮成長因子同一ドメイン（ＴＩＥ−２）を有するチロシンキナーゼ、インスリン増殖因子（ＩＧＦ１）受容体、マクロファージコロニー刺激因子（ｃｆｍｓ）、ＢＴＫ、ｃｋｉｔ、ｃｍｅｔ、線維芽細胞増殖因子（ＦＧＦ）受容体、Ｔｒｋ受容体（ＴｒｋＡ、ＴｒｋＢおよびＴｒｋＣ）受容体、エフリン（ｅｐｈ）受容体、およびＲＥＴプロトオンコジーンが挙げられる。いくつかの増殖受容体の阻害剤は開発中であり、リガンドアンタゴニスト、抗体、チロシンキナーゼ阻害剤およびアンチセンスオリゴヌクレオチドが挙げられる。増殖因子受容体および増殖因子受容体機能を阻害する薬剤は、例えば、Kath, John C., Exp. Opin. Ther. Patents (2000) 10(6):803-818; Shawver et al DDT Vol 2, No. 2 February 1997; and Lofts, F. J. et al, “Growth factor receptors as targets”, New Molecular Targets for Cancer Chemotherapy, ed. Workman, Paul and Kerr, David, CRC press 1994, Londonに記載されている。
【０２９６】
増殖因子受容体キナーゼではないチロシンキナーゼは、非受容体チロシンキナーゼと呼ばれる。抗癌剤の標的または潜在的な標的である、本発明において有用な非受容体型チロシンキナーゼとしては、ｃＳｒｃ、Ｌｃｋ、Ｆｙｎ、Ｙｅｓ、Ｊａｋ、ｃＡｂｌ、ＦＡＫ（局所接着キナーゼ）、ＢｒｕｔｏｎｓチロシンキナーゼおよびＢｃｒ−Ａｂｌが挙げられる。そのような非受容体キナーゼ、および非受容体チロシンキナーゼ機能を阻害する薬剤は、Sinh, S. and Corey, S.J., (1999) Journal of Hematotherapy and Stem Cell Research 8 (5): 465 - 80; and Bolen, J.B., Brugge, J.S., (1997) Annual review of Immunology. 15: 371-404に記載されている。
【０２９７】
ＳＨ２／ＳＨ３ドメインブロッカーは、ＰＩ３−Ｋ  ｐ８５サブユニット、Ｓｒｃファミリーキナーゼ、アダプター分子（Ｓｈｃ、Ｃｒｋ、Ｎｃｋ、Ｇｒｂ２）およびＲａｓ−ＧＡＰを含む様々な酵素またはアダプタータンパク質において、ＳＨ２またはＳＨ３ドメイン結合を破壊する物質である。抗癌剤の標的としてのＳＨ２／ＳＨ３ドメインは、Smithgall, T.E. (1995), Journal of Pharmacological and Toxicological Methods. 34(3) 125-32に開示されている。
【０２９８】
セリン／スレオニンキナーゼの阻害剤は、Ｒａｆキナーゼ（ｒａｆｋ）、マイトジェンまたは細胞外調節キナーゼ（ＭＥＫ）、および細胞外調節キナーゼ（ＥＲＫ）のブロッカーを含むＭＡＰキナーゼカスケードブロッカー；およびＰＫＣ（α、β、γ、ε、μ、λ、ι、ζ）のブロッカーを含むプロテインキナーゼＣファミリーメンバーブロッカーを含む。ＩｋＢキナーゼファミリー（ＩＫＫａ、ＩＫＫｂ）、ＰＫＢファミリーキナーゼ、ａｋｔキナーゼファミリーメンバー、およびＴＧＦβ受容体キナーゼ。そのようなセリン／スレオニンキナーゼおよびその阻害剤は、Yamamoto, T., Taya, S., Kaibuchi, K., (1999), Journal of Biochemistry. 126 (5) 799-803；Brodt, P, Samani, A., and Navab, R. (2000), Biochemical Pharmacology, 60. 1101-1107；Massague, J., Weis-Garcia, F. (1996)  Cancer Surveys. 27:41-64；Philip, P.A., and Harris, A.L. (1995), Cancer Treatment and Research. 78: 3-27；Lackey, K. et al Bioorganic and Medicinal Chemistry Letters, (10), 2000, 223-226；米国特許第６，２６８，３９１号；およびMartinez-Iacaci, L., et al, Int. J. Cancer (2000), 88(1), 44-52に記載されている。
【０２９９】
ＰＩ３−キナーゼ、ＡＴＭ、ＤＮＡ−ＰＫおよびＫｕのブロッカーを含む、ホスホチジルイノシトール−３キナーゼファミリーメンバーの阻害剤も、本発明において有用である。このようなキナーゼは、Abraham, R.T. (1996), Current Opinion in Immunology. 8 (3) 412-8；Canman, C.E., Lim, D.S. (1998), Oncogene 17 (25) 3301-3308；Jackson, S.P. (1997), International Journal of Biochemistry and Cell Biology. 29 (7):935-8；およびZhong, H. et al, Cancer res, (2000) 60(6), 1541-1545において議論されている。
【０３００】
また、本発明においては、ホスホリパーゼＣブロッカーおよびミオイノシトール類似体等のミオイノシトールシグナル伝達阻害剤も有用である。このようなシグナル阻害剤は、Powis, G., and Kozikowski A., (1994) New Molecular Targets for Cancer Chemotherapy ed., Paul Workman and David Kerr, CRC press 1994, Londonに記載されている。
【０３０１】
シグナル伝達経路阻害剤の別の群は、Ｒａｓ  Ｏｎｃｏｇｅｎｅの阻害剤である。そのような阻害剤としては、ファルネシルトランスフェラーゼ、ゲラニル−ゲラニルトランスフェラーゼ、およびＣＡＡＸプロテアーゼの阻害剤、ならびにアンチセンスオリゴヌクレオチド、リボザイムおよび免疫療法が含まれる。そのような阻害剤は、野生型変異体ｒａｓを含む細胞におけるｒａｓ活性化を阻害し、それによって抗増殖剤として作用することが示されている。Ｒａｓ  Ｏｎｃｏｇｅｎｅの阻害は、Scharovsky, O.G., Rozados, V.R., Gervasoni, S.I. Matar, P. (2000), Journal of Biomedical Science. 7(4) 292-8；Ashby, M.N. (1998), Current Opinion in Lipidology. 9 (2) 99 - 102；およびBioChim. Biophys. Acta, (19899) 1423(3):19-30において議論されている。
【０３０２】
上述したように、受容体キナーゼリガンド結合に対する抗体アンタゴニストは、シグナル伝達阻害剤としても作用し得る。このシグナル伝達経路阻害剤の群には、受容体チロシンキナーゼの細胞外リガンド結合ドメインに対するヒト化抗体の使用が含まれる。例えば、Ｉｍｃｌｏｎｅ  Ｃ２２５  ＥＧＦＲ特異的抗体（Green, M.C. et al, Monoclonal Antibody Therapy for Solid Tumors, Cancer Treat. Rev., (2000), 26(4), 269-286を参照）；Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ（登録商標）ｅｒｂＢ２抗体（Tyrosine Kinase Signalling in Breast cancer: erbB Family Receptor Tyrosine Kinases, Breast cancer Res., 2000, 2(3), 176-183を参照）；および２ＣＢ  ＶＥＧＦＲ２特異的抗体（Brekken, R.A. et al, Selective Inhibition of VEGFR2 Activity by a monoclonal Anti-VEGF antibody blocks tumor growth in mice, Cancer Res. (2000) 60, 5117-5124を参照）である。
【０３０３】
抗血管新生剤：非受容体ＭＥＫ発生阻害剤（non-receptor MEKngiogenesis inhibitors）を含む抗血管新生剤も有用であり得る。血管内皮成長因子の効果を阻害するもの等の抗血管新生剤（例えば、抗血管内皮細胞増殖因子抗体であるベバシズマブ［Ａｖａｓｔｉｎ（商標）］、および他の機構によって作用する化合物（例えばリノマイド、インテグリンαｖβ３機能の阻害剤、エンドスタチンおよびアンジオスタチン））である。
【０３０４】
免疫療法剤：免疫療法レジメンで使用される薬剤もまた、式（Ｉ）の化合物と組み合わせて有用であり得る。免疫療法的アプローチとしては、例えば、インターロイキン２、インターロイキン４または顆粒球−マクロファージコロニー刺激因子等のサイトカインによるトランスフェクション等の、患者の腫瘍細胞の免疫原性を高めるためのex vivoおよびin vivoアプローチを含む免疫療法アプローチ、Ｔ細胞アネルギーを減少させるアプローチ、サイトカインでトランスフェクトされた樹状細胞等のトランスフェクトされた免疫細胞を用いるアプローチ、サイトカインでトランスフェクトされた腫瘍細胞系を用いるアプローチ、および抗イディオタイプ抗体を用いるアプローチが挙げられる。
【０３０５】
プロアポトーシス剤：プロアポトーシスレジメンで使用される薬剤（例えば、ｂｃｌ−２アンチセンスオリゴヌクレオチド）もまた、本発明の組み合わせにおいて使用され得る。
【０３０６】
細胞周期シグナル伝達阻害剤：細胞周期シグナル伝達阻害剤は、細胞周期の制御に関与する分子を阻害する。サイクリン依存性キナーゼ（ＣＤＫ）と呼ばれるプロテインキナーゼファミリーおよびそれらとサイクリンと呼ばれるタンパク質ファミリーとの相互作用は、真核細胞サイクルの進行を制御する。異なるサイクリン／ＣＤＫ複合体の協調的な活性化および不活性化は、細胞周期の正常な進行に必要である。細胞周期シグナル伝達のいくつかの阻害剤が開発中である。例えば、ＣＤＫ２、ＣＤＫ４およびＣＤＫ６を含むサイクリン依存性キナーゼおよびその阻害剤の例は、例えば、Rosania et al, Exp. Opin. Ther. Patents (2000) 10(2):215-230に記載されている。
【０３０７】
一つの実施形態では、本発明の組み合わせ物は、抗ＯＸ４０  ＡＢＰおよびＰＤ−１モジュレーター（例えば抗ＰＤ−１  ＡＢＰ）、および抗微小管剤、白金配位錯体、アルキル化剤、抗生物質剤、トポイソメラーゼＩＩ阻害剤、代謝拮抗物質、トポイソメラーゼＩ阻害剤、ホルモンおよびホルモン類似体、シグナル伝達経路阻害剤、非受容体チロシンＭＥＫ発生阻害剤、免疫療法剤、プロアポトーシス剤、ならびに細胞周期シグナル伝達阻害剤から選択される少なくとも１つの抗新生物剤を含む。
【０３０８】
一つの実施形態では、本発明の組み合わせ物は、抗ＯＸ４０  ＡＢＰおよびＰＤ−１モジュレーター（例えば抗ＰＤ−１  ＡＢＰ）、ならびにジテルペノイドおよびビンカアルカロイドから選択される抗微小管剤である少なくとも１つの抗新生物剤を含む。
【０３０９】
さらなる実施形態では、少なくとも１つの抗新生物剤は、ジテルペノイドである。
【０３１０】
さらなる実施形態では、少なくとも１つの抗新生物剤は、ビンカアルカロイドである。
【０３１１】
一つの実施形態では、本発明の組み合わせ物は、抗ＯＸ４０  ＡＢＰおよびＰＤ−１モジュレーター（例えば抗ＰＤ−１  ＡＢＰ）、および白金配位複合体である少なくとも１つの抗新生物剤を含む。
【０３１２】
さらなる実施形態では、少なくとも１つの抗新生物剤は、パクリタキセル、カルボプラチンまたはビノレルビンである。
【０３１３】
さらなる実施形態では、少なくとも１つの抗新生物剤はカルボプラチンである。
【０３１４】
さらなる実施形態において、少なくとも１つの抗新生物剤はビノレルビンである。
【０３１５】
さらなる実施形態において、少なくとも１つの抗新生物剤はパクリタキセルである。
【０３１６】
一つの実施形態では、本発明の組み合わせ物は、抗ＯＸ４０  ＡＢＰおよびＰＤ−１モジュレーター（例えば抗ＰＤ−１  ＡＢＰ）、およびシグナル伝達経路阻害剤である少なくとも１つの抗新生物剤を含む。
【０３１７】
さらなる実施形態では、シグナル伝達経路阻害剤は、増殖因子受容体キナーゼＶＥＧＦＲ２、ＴＩＥ２、ＰＤＧＦＲ、ＢＴＫ、ｅｒｂＢ２、ＥＧＦｒ、ＩＧＦＲ−１、ＴｒｋＡ、ＴｒｋＢ、ＴｒｋＣまたはｃ−ｆｍｓの阻害剤である。
【０３１８】
さらなる実施形態では、シグナル伝達経路阻害剤は、セリン／スレオニンキナーゼｒａｆｋ、ａｋｔまたはＰＫＣ−ｚｅｔａの阻害剤である。
【０３１９】
さらなる実施形態では、シグナル伝達経路阻害剤は、ｓｒｃファミリーのキナーゼから選択される非受容体チロシンキナーゼの阻害剤である。
【０３２０】
さらなる実施形態では、シグナル伝達経路阻害剤はｃ−ｓｒｃの阻害剤である。
【０３２１】
さらなる実施形態では、シグナル伝達経路阻害剤は、ファルネシルトランスフェラーゼおよびゲラニルゲラニルトランスフェラーゼの阻害剤から選択されるＲａｓ  ｏｎｃｏｇｅｎｅの阻害剤である。
【０３２２】
さらなる実施形態では、シグナル伝達経路阻害剤は、ＰＩ３Ｋからなる群から選択されるセリン／スレオニンキナーゼの阻害剤である。
【０３２３】
さらなる実施形態では、シグナル伝達経路阻害剤は、ＥＧＦｒ／ｅｒｂＢ２二重阻害剤、例えばＮ−｛３−クロロ−４−［（３−フルオロベンジル）オキシ］フェニル｝−６−［５−（｛［２−（メタンスルホニル）エチル］アミノ｝メチル）−２−フリル］−４−キナゾリンアミン（下記構造）である：
【化１】
2018522044.tif 000003
【０３２４】
一つの実施形態では、本発明の組み合わせ物は、式Ｉの化合物またはその塩または溶媒和物、および細胞周期シグナル伝達阻害剤である少なくとも１つの抗新生物剤を含む。
【０３２５】
さらなる実施形態では、細胞周期シグナル伝達阻害剤は、ＣＤＫ２、ＣＤＫ４またはＣＤＫ６の阻害剤である。
【０３２６】
一つの実施形態では、本発明の方法および使用における哺乳動物はヒトである。
【０３２７】
すでに示したように、本発明の組み合わせ物（抗ＯＸ４０  ＡＢＰおよびＰＤ−１モジュレーター（例えば抗ＰＤ−１  ＡＢＰ））の治療上有効量がヒトに投与される。典型的には、投与される本発明の剤の治療上有効量は、例えば対象の年齢および体重、治療を必要とする正確な症状、症状の重篤度、製剤の性質、ならびに投与経路を含む多くの要因に依存する。最終的に、治療上有効量は担当医師の裁量で決定される。
【実施例】
【０３２８】
以下の実施例は、例示のみを目的としており、決して本発明の範囲を限定するものではない。
【０３２９】
実施例１
進行性の固形腫瘍を有する選択された対象における、単独投与またはペムブロリズマブを含む抗癌剤との組み合わせ投与された抗体１０６〜２２２の非盲検用量漸増研究
免疫療法チェックポイント阻害剤によるネガティブＴ細胞調節経路の阻害を介した抗腫瘍Ｔ細胞活性の刺激は、メラノーマおよび非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）の治療において非常に良好な結果をもたらした。免疫療法抗癌剤の開発のための魅力的な標的を提供する別のアプローチは、Ｔ細胞機能を増強するための共刺激経路の調節である。ＯＸ４０は、主に活性化ＣＤ４＋およびＣＤ８＋Ｔ細胞上に発現する強力な共刺激受容体である。ＯＸ４０アゴニストは、非臨床モデルにおいて抗腫瘍免疫を増強し、腫瘍のない生存を改善することが示されており、ＯＸ４０アゴニストモノクローナル抗体（ｍＡｂ）は、現在、第Ｉ相臨床試験で評価されている。抗体１０６〜２２２（本明細書中に記載される、配列番号１、２および３に示されるアミノ酸配列を有するＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２およびＣＤＲＨ３、ならびに例えば配列番号７、８および９に示される配列をそれぞれ有するＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２およびＣＤＲＬ３を含んでなる抗体、ならびに配列番号５に示されるアミノ酸配列を有するＶＨ領域、および配列番号１１に示されるアミノ酸配列を有するＶＬ領域を含んでなる抗体）は、ヒト化野生型免疫グロブリンＧ１（ＩｇＧ１）抗ＯＸ４０アゴニストｍＡｂ（抗ヒトＯＸ４０アゴニストモノクローナル抗体）であり、現在の研究のパート１において、単剤治療として評価されている。抗体１０６〜２２２は、例えば、ＷＯ２０１２／０２７３２８および本出願の図面にも記載されている。
【０３３０】
抗癌免疫応答は多段階プロセスであり、腫瘍は抗腫瘍応答を遮断するために冗長なメカニズムを利用することが予測され、そのような場合、併用療法が必要となる可能性が高い。ＯＸ４０アゴニストとプログラム死受容体−１（ＰＤ−１）阻害剤とを組み合わせることは、癌免疫サイクルにおいて２つの異なるステップを標的とし、ＰＤ−１の阻害が、ＰＤ−１とプログラム死リガンド１（ＰＤ−Ｌ１）およびプログラム死リガンド２（ＰＤ−Ｌ２）との相互作用を遮断し、免疫応答のＰＤ−１経路介在阻害を解除するのに対し、ＯＸ４０アゴニズムは、Ｔ細胞のプライム化／活性化を増大させると予想される。非臨床データに基づいて、ＯＸ４０アゴニストおよびＰＤ−１阻害剤の併用療法は、単剤治療と比較して、相乗的抗腫瘍活性を有すると予想される。抗体１０６〜２２２とＰＤ−１阻害剤ペムブロリズマブとの組み合わせについては、現在の研究のパート２で評価されている。
【０３３１】
目標／評価項目
本研究の第一の目的は、抗体１０６〜２２２について、単剤療法（パート１）またはペムブロリズマブとの併用（パート２）で、選択された進行性または再発性固形腫瘍を有する対象に静脈内投与された場合の安全性および許容性を評価し、最大許容用量（ＭＴＤ）または最大投与用量（ＭＡＤ）を特定することにある。第二の目的としては、抗腫瘍活性の評価；単独投与した場合の抗体１０６〜２２２についての薬物動態（ＰＫ）の特徴付け；ペムブロリズマブと組み合わせて投与した場合の抗体１０６〜２２２についてのＰＫの特徴付け；血液および腫瘍微小環境における薬力学的活性の評価；および単独投与された場合の抗体１０６〜２２２、またはペムブロリズマブと組み合わせて投与された場合の抗体１０６〜２２２についての免疫原性の決定が挙げられる。
【０３３２】
・安全性評価項目：有害事象（ＡＥ）、重篤な有害事象（ＳＡＥ）、用量制限毒性（ＤＬＴ）、ＡＥによる使用中止、投薬の減少または遅延、および安全性評価の変更（例えば実験室的パラメータ、バイタルサインおよび心臓パラメータ）。
・抗腫瘍活性評価項目：対象応答率（ＯＲＲ）および疾患制御率（ＤＣＲ）（完全応答［ＣＲ］＋部分応答［ＰＲ］＋安定疾患［ＳＤ］≧１２週間）、応答時間、応答持続時間、進行しない生存（ＰＦＳ）、ならびに全生存期間（ＯＳ）。別段の特定がない限り、すべての応答評価項目は、固形腫瘍（ＲＥＣＩＳＴ）  ｖ１．１の応答評価基準およびｉｒＲＥＣＩＳＴ（免疫関連ＲＥＣＩＳＴ）によって評価した。
・ＰＫ評価項目：血漿抗体１０６〜２２２および血清ペムブロリズマブの濃度、ならびに最大観察濃度（Ｃｍａｘ）、投与期間にわたる濃度−時間曲線下の面積（ＡＵＣ（０−τ））および最小観察濃度（Ｃｍｉｎ）を含むＰＫパラメータ。
・薬力学的評価項目：末梢におけるＴ細胞の表現型、量および活性状態と共に、抗体１０６〜２２２による、リンパ球ＯＸ４０の受容体膜発現および占有率の評価。腫瘍浸潤リンパ球および重要な表現型マーカーを発現する他の免疫細胞の数についての免疫組織化学（ＩＨＣ）による腫瘍生検の評価。
・免疫原性評価項目：検出可能な抗薬物抗体（ＡＤＡ）を発現する対象の数およびパーセンテージ。
【０３３３】
全体設計
この研究は、選択された進行性または再発性固形腫瘍を有する対象に静脈内投与された抗体１０６〜２２２の安全性、許容性、ＰＫ、薬物力学および予備的臨床活性を評価するために設計された、ヒトにおける最初（ＦＴＩＨ）の、オープンラベル（open-label）の、非ランダム化の多施設共同研究である。この研究は、２つのパートで実施され、各パートは、用量漸増段階とそれに続くコホート拡大段階とからなる。パート１では、抗体１０６〜２２２単剤療法が評価され、パート２ではペムブロリズマブと併用した抗体１０６〜２２２が評価された。抗体１０６〜２２２は、まず、漸増用量での単独療法として評価された。許容され、薬力学的活性を示す抗体１０６〜２２２の用量が同定されると、パート２の登録が開始された。パート２では、一定量のペムブロリズマブを用いて漸増用量の抗体１０６〜２２２が評価された。漸増用量からコホートへの研究の移行、および単剤療法（パート１）からペムブロリズマブ併用療法（パート２）への研究の移行は、プロトコル運営員会の指導の下に行われた。運営委員会による権限、会員資格、役割および責任は運営委員会検証（Steering Committee Charter）に記載されている。この研究の最新のデータの検討までの間、運営委員会の指針の下で、プロトコルは、その後、抗体１０６〜２２２とのさらなる抗癌剤の組み合わせの調査を含むように改訂され得る。
【０３３４】
治療手段と期間
この研究には、スクリーニング期間、治療期間および調査期間が含まれる。対象は、治療開始の約４週間前に適格性についてスクリーニングされた。抗体１０６〜２２２による最大治療期間は４８週間であり、ペムブロリズマブによる最大治療期間は２年であった。安全性評価の調査期間は、最後の投与日から最低３ヶ月後であった。治療後調査期間には、確認された疾患進行（ＰＤ）までの１２週間ごとの疾患評価が含まれる。ＰＤに続いて、生存状態を評価するために３ヶ月ごとに対象に接触した。
【０３３５】
パート１では、抗体１０６〜２２２単剤療法の漸増用量は、０．００３ｍｇ／ｋｇの抗体１０６〜２２２の開始用量で開始され、３週間ごとに１回（Ｑ３Ｗ）投与された。パート２では、抗体１０６〜２２２とペムブロリズマブとの併用療法の漸増用量は、Ｑ３Ｗで投与する固定用量２００ｍｇのペムブロリズマブ、および本研究のパート１における薬力学的活性を示した抗体１０６〜２２２単剤療法の許容量を２用量レベル下回る開始用量の抗体１０６〜２２２で開始された。投与量の調整は、許容性および安全性の問題に対処可能なものであった。
【０３３６】
対象のタイプと数
本研究は、ＮＳＣＬＣ、頭頸部扁平上皮癌（ＳＣＣＨＮ）、腎細胞癌（ＲＣＣ）、メラノーマ、膀胱癌、軟部組織肉腫（ＳＴＳ）、トリプルネガティブ乳癌（ＴＮＢＣ）およびマイクロサテライト不安定性を示す結腸直腸癌腫（ＭＳＩ  ＣＲＣ）を含む腫瘍タイプを有する約１８０名の対象に対して行われた。
【０３３７】
分析
研究の漸増用量段階の間、その後の投与レベルを決定するために試験が実施されている間に、安全性、ＰＫおよび薬力学的マーカーのデータを検査した。各投薬コホートの後、継続的再評価法（ＣＲＭ）分析を用いて、観察されたＤＬＴに基づいて次の用量レベルを推奨した。
【０３３８】
各拡大コホートでは、臨床活動、安全性、ＰＫおよび薬力学的マーカーデータを継続的に検査し、各コホート内の登録は、不利または有利な結果に応じて縮小または拡大された。臨床的活動の証拠が不十分な場合には、腫瘍応答データをモニターし、腫瘍コホートを終了させた。無益性終了規則は、Lee & Liu [Lee, 2008]の方法論に基づいている。ＣＲＭ推奨の用量漸増レベル、無益性終了規則、事後確率はガイドラインに過ぎず、データの全体がチームの意思決定において検討される。
【０３３９】
研究の理論的根拠
免疫療法チェックポイント阻害剤によるネガティブＴ細胞調節経路の阻害を介した抗腫瘍Ｔ細胞活性の刺激は、メラノーマおよびＮＳＣＬＣの治療において非常に良好な結果をもたらしている。免疫療法抗癌剤の開発のための魅力的な標的を提供する別のアプローチは、Ｔ細胞機能を増強するための共刺激経路の調節である。ＯＸ４０は、主に活性化ＣＤ４＋およびＣＤ８＋Ｔ細胞上に発現する強力な共刺激受容体である。ＯＸ４０アゴニストは、非臨床モデルにおいて抗腫瘍免疫を増強し、腫瘍のない生存を改善することが示されており、ＯＸ４０アゴニストｍＡｂは、現在、第Ｉ相臨床試験において評価されている。抗体１０６〜２２２は、ヒト化野生型ＩｇＧ１抗ＯＸ４０アゴニストｍＡｂであり、現在の研究のパート１で単剤治療として評価されている。
【０３４０】
抗癌免疫応答は多段階プロセスであり、腫瘍は抗腫瘍応答を遮断するために冗長なメカニズムを利用することが予測され、そのような場合、併用療法が必要となる可能性が高い。ＯＸ４０アゴニストとＰＤ−１阻害剤とを組み合わせることは、癌免疫サイクルにおいて２つの異なるステップを標的とし、ＰＤ−１の阻害が、ＰＤ−１とＰＤ−Ｌ１およびＰＤ−Ｌ２との相互作用を遮断し、免疫応答のＰＤ−１経路介在阻害を解除するのに対し、ＯＸ４０アゴニズムは、Ｔ細胞のプライム化／活性化を増加させると予想される。非臨床データに基づいて、ＯＸ４０アゴニストおよびＰＤ−１阻害剤の併用療法は、単剤治療と比較して、相乗的抗腫瘍活性を有すると予想される。抗体１０６〜２２２とＰＤ−１阻害剤ペムブロリズマブとの組み合わせについては、現在の研究のパート２で評価されている。
【０３４１】
このＦＴＩＨの、オープンラベルの用量漸増試験は、選択された進行性または再発性の固形腫瘍を有する対象における、抗体１０６〜２２２の単剤療法（パート１）、ペムブロリズマブと組み合わせ（パート２）の、潜在的な追加の両方との組み合わせにおける、安全性、ＰＫ、薬物力学および予備的臨床活性を評価するものである。
【０３４２】
簡単な背景
免疫療法は、過去数年間にわたり、形質転換的抗癌治療戦略として浮上してきた。特に、チェックポイント阻害剤によるネガティブＴ細胞調節経路の阻害は、最初はメラノーマの治療において、そして最近では、ＮＳＣＬＣを含むさらなる適応症に拡大して、非常に良好な結果をもたらしている。イピリムマブおよびペムブロリズマブは、細胞傷害性Ｔリンパ球関連抗原４（ＣＴＬＡ−４）経路およびＰＤ−１経路の活性をそれぞれ遮断し、それによりＴ細胞プライム化およびＴ細胞エフェクター機能を、負の調節効果から解放するｍＡｂであり、これらの初期チェックポイント阻害剤の例である。
【０３４３】
エフェクターＴ細胞機能を負に調節する調節機構に加えて、共刺激経路も抗癌剤の開発のために魅力的な調節標的である。ＯＸ４０（ＣＤ１３４）は、ＣＤ４＋およびＣＤ８＋Ｔ細胞の両方の抗原依存性刺激、およびそれらとそれらの同族リガンド（活性化抗原上で発現されるＯＸ４０Ｌ）との相互作用の後に誘導される、膜貫通受容体の腫瘍壊死因子受容体（ＴＮＦＲ）のメンバーであり、一般的に、Ｔ細胞活性化のプロセス中に共刺激シグナルを伝達するように機能する。血液および末梢組織では、ＯＸ４０の発現は、直近に活性化されたＣＤ４＋およびＣＤ８＋細胞の小サブセットに限定されているが、腫瘍において、浸潤するＴリンパ球はＯＸ４０陽性細胞について富化され、直接および間接（例えばサイトカイン放出）的な機構を介してＴ細胞の活性化、増殖および生存を増大させるように機能する［Betting, 2009; Croft, 2010］。エフェクターＴ細胞に対する機能に加えて、ＯＸ４０は、免疫応答に対する阻害効果を有する傾向のある腫瘍浸潤調節Ｔ細胞（Ｔｒｅｇｓ）上でも発現される。実際に、動物の腫瘍モデルにおける抗ＯＸ４０抗体の有効性は、腫瘍微小環境に存在する腫瘍特異的Ｔｒｅｇの枯渇にもある程度依存する［Bulliard, 2014; Marabelle, 2013］。抗ＣＴＬＡ４抗体および抗ＧＩＴＲ（グルココルチコイド誘発性ＴＮＦＲファミリー関連遺伝子）抗体について示されているように、この腫瘍内Ｔｒｅｇの枯渇は、免疫チェックポイント抗体のin vivo抗腫瘍活性にとって重要であり、腫瘍微小環境に存在する活性化ＦｃγＲ陽性骨髄細胞によって媒介される［Bulliard, 2013; Selby, 2013; Simpson, 2013］。ＯＸ４０シグナル伝達は、部分的に阻害性サイトカインであるインターロイキン１０（ＩＬ−１０）の放出を遮断し、それによってエフェクターＴ細胞免疫応答をさらに促進することによって、誘導されたＴｒｅｇの活性を遮断することが示されている［Ito, 2006］。最後に、ＯＸ４０は、ＮＫ媒介性抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）を刺激すると考えられるナチュラルキラー（ＮＫ）細胞上にも見出すことができる［Liu, 2008］。同様に、これらの潜在的作用機序は、アゴニスト剤を用いたＯＸ４０の刺激を新規な抗癌免疫療法の魅力
的な標的にする。
【０３４４】
抗体１０６〜２２２
背景
抗体１０６〜２２２は、ヒト化野生型ＩｇＧ１抗ＯＸ４０アゴニストｍＡｂである。抗体１０６〜２２２は、エフェクターＣＤ４＋Ｔ細胞の増殖を促進し、ＩＬ−１０産生ＣＤ４＋１型調節（Ｔｒ１）細胞の誘導を阻害し、天然Ｔｒｅｇ（ｎＴｒｅｇｓ）の抑制機能を遮断し、ＦｃＲ陽性細胞上のＦｃドメインを介する抗体の架橋によるＯＸ４０シグナル伝達を増大すると予測されるＦｃＲへ結合することを含む、in vitroでのいくつかの作用機序を実証した。重要なことに、ＯＸ４０の活性化は、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）の関与に依存して、Ｔ細胞に対して共刺激シグナルを与えることが示され、抗体１０９〜２２２が、試験されたモデルにおいてスーパーアゴニストではないことが示唆された。
【０３４５】
抗体１０６〜２２２は、カニクイザルのＯＸと適切に交差反応し、この種における薬理学、薬物力学、ＰＫおよび毒物学を評価する。カニクイザルにおける単回および反復投与試験は、抗体１０６〜２２２がＯＸ４０陽性細胞に結合することを示した。抗体１０６〜２２２は、げっ歯類ＯＸ４０と交差反応しないが、マウスＯＸ４０の代用ｍＡｂ（ＯＸ８６）は、同系腫瘍モデルの範囲内で、単剤効果および様々な他の免疫療法剤との併用の相乗効果の両方についてin vivoの非臨床的証拠を得るために使用された。
【０３４６】
抗体１０６〜２２２の非臨床薬物動態
抗体１０６〜２２２の非臨床的ＰＫを、腹腔内（ＩＰ）への単回投与後のマウスにおいて、また、静脈内（ＩＶ）への単回および反復投与後のカニクイザルにおいて調べた。
【０３４７】
単回用量のＩＰ投与後の雄マウスにおける抗体１０６〜２２２のＰＫは、ｍＡｂに典型的な濃度プロファイル（非常に遅い血漿クリアランスおよび定常状態での分布の低さ）を有し［Wang, 2008］、抗体１０６〜２２２が主に全身循環に限定されることを示唆した。マウスＯＸ４０との交差反応性の欠如のため、標的のＰＫ発現への影響はこの種では評価できなかった。
【０３４８】
ｍＡｂに典型的な同様のＰＫプロファイルが、サルで観察された。オスのカニクイザル（ｎ＝３）への２ｍｇ／ｋｇの単回静脈内投与後、抗体１０６〜２２２で治療したすべての動物を、３１．８〜３９．９μｇ／ｍＬの同様のＣｍａｘ値を示し、５日間にわたり同様の全身曝露（ＡＵＣ０−１６８ｈ）を示した。全ての治療動物において、約７〜１４日目に、免疫原性応答に典型的なクリアランスの劇的な変化が観察され、すべての動物がＡＤＡ架橋アッセイにおいてＡＤＡについて陽性であることが確認された。
【０３４９】
カニクイザルにおける４週間にわたる１０または１００ｍｇ／ｋｇ／週の反復用量ＩＶの投与後、抗体１０６〜２２２の平均ＡＵＣ０−１６８ｈおよびＣｍａｘの値は、第１週および第４週の両方の用量で男性および女性の間で同様であった。抗体１０６〜２２２に対する全身暴露（性別平均ＡＵＣ０−１６８ｈおよびＣｍａｘの値によって定義される）は、用量に比例して増加した（ｎ＝３／群）。第１週から第４週までの抗体１０６〜２２２の性別平均ＡＵＣ０−１６８ｈおよびＣｍａｘの値の上昇は、両方の用量で１．９〜２．９倍の範囲であった。霊長類ＡＤＡ形成のために、サルにおける１０ｍｇ／ｋｇ／週の４回目の投与後に血漿濃度の低下の例が観察された。
【０３５０】
抗体１０６〜２２２の非臨床安全性
毒物学プログラムをカニクイザルで行った。これらのサルは、組織におけるＯＸ４０受容体発現、オルソロガスタンパク質配列同一性、およびＣＤ４＋Ｔ細胞上のヒトおよびサルの両方のＯＸ４０受容体に対する抗体１０６〜２２２の同様の用量依存的結合に基づいて適切な種であることが示された。正常ヒト組織におけるＯＸ４０分布のＩＨＣ評価は、いくつかの組織においてＴ細胞のサブセットであると考えられる細胞またはリンパ球凝集体において陽性染色を示した。これらの結果は、マイクロアレイ遺伝子発現データベース（Gene Logic, Ocimum Biosolutions, LLC、Houston, TX, USA）の評価の結果と全体的に一致している。
【０３５１】
抗体１０６〜２２２は、１００ｍｇ／ｋｇ／週までの用量で４週間、毎週ＩＶ投与した後、サルにおいて許容性が良好であった。
【０３５２】
１０ｍｇ／ｋｇ／週以下で投与されたサルにおいて、ＡＤＡが観察され、用量に反比例して発生した。ＰＫ／薬力学試験では、それぞれ２または１０ｍｇ／ｋｇ／週で投与されたすべてのサル（ｎ＝３）または２匹もしくは３匹のサルが、それぞれ投与（２ｍｇ／ｋｇ／週）後７日目に劇的なクリアランスの増加を示し、ＡＤＡ陽性であることが確認された。抗体１０６〜２２２を週１回４週間にわたり投与し、６週間の非投与期間を与えたサルでは、１０ｍｇ／ｋｇ／週で投与した１０匹のサルのうち２匹でＡＤＡが検出され、１匹のサル（力価＞１００００）は週１回４週間にわたる投与の後に曝露の減少を示し、非投与期間まで検出可能なＡＤＡを示さなかったもう１匹のサル（力価＝１０００）は曝露の減少と明確な関連を示さなかった。ＡＤＡは非投与期間に維持された動物でのみ認められたので、この試験においてこの用量で終末検体動物の毒性を決定する能力はＡＤＡによって損なわれなかった。ヒト化タンパク質を投与された動物におけるＡＤＡの生成は、一般に、ヒトにおけるＡＤＡ形成の可能性を予測するものではない。
【０３５３】
４Ｔ１乳癌細胞を有するＢＡＬＢ／ｃマウスによるin vivo同系有効性試験では、≧２０μｇのＯＸ８６（ＯＸ４０受容体に対するラット野生型ＩｇＧ１  ｍＡｂ）を週２回３週間にわたり（５回の投与）投与した大多数のマウスにおいて、死亡率およびアナフィラキシーと一致する臨床観察が観察された。他の同系細胞型と同等の用量および期間を投与された同バッチのＯＸ８６を有するＢＡＬＢ／ｃまたはＣ５７ＢＬ／６マウスのいずれかを用いた別の有効性試験において許容性の問題が生じなかったため、この効果は、この特定のモデルにおいて特有のものであると考えられる。ラット抗ＰＤ−１もしくはハムスターＰＤ−Ｌ１［Mall, 2014］、または腫瘍投与のみ［duPre, 2007］を用いた４Ｔ１腫瘍マウスを用いて、他の研究者によっても同様の効果が観察されている。今日まで、アナフィラキシーは、ＯＸ４０アゴニストｍＡｂまたは承認されたＰＤ−１療法を受けている対象では報告されていない［Curti, 2013; KEYTRUDA（登録商標） Prescribing Information, 2014; OPDIVO（登録商標） Prescribing Information, 2014］。従って、上記のデータおよび文献の知見に基づいて、ＯＸ８６を投与された４Ｔ１腫瘍マウスに見られるアナフィラキシーはモデル特異的であり、提案された安全監視戦略（ＡＤＡおよび急性過敏反応のリアルタイムモニタリング、Dose and Safety Management Guidelines Sectionを参照）は、この影響の潜在的なリスクに適切に対応している。
【０３５４】
サイトカイン放出を誘導するための抗体１０６〜２２２の可能性が研究されている。全血または単離された末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を用いたヒトのin vitroアッセイでは、（事前の抗ＣＤ３および抗ＣＤ２８刺激の有無にかかわらず）可溶性または固定化された抗体１０６〜２２２に応答するサイトカインの放出は観察されなかった。しかしながら、サイトカイン放出の可能性をさらに調査するために、ヒトＰＢＭＣをより高い（１０倍）の細胞密度でインキュベートし、固定化抗体１０６〜２２２とともにインキュベートし、代わりに最大レベルの固定化抗ＣＤ３（１０および１００倍低い）で刺激して、より感度の高いアッセイ条件を提供した。これらのアッセイでは、抗ＣＤ３単独と比較して増加したサイトカイン産生（ＩＬ−２、ＩＦＮγ、ＴＮＦα）が観察された。抗ＣＤ３および抗ＣＤ２８刺激の前に、ＯＸ４０発現をアップレギュレートし、インキュベーション期間をより長くするする（２４時間と比較して４８〜７２時間）ために、固定化抗体１０６〜２２２を有する単離されたヒトＣＤ４＋Ｔ細胞を用いて、増殖に伴う同様のサイトカインの増加が観察された。投薬期間の４週間までの０．０３〜１００ｍｇ／ｋｇ／週の用量範囲の反復投与サル研究では、最初の投与の４時間または２４時間のいずれかにおいて、または２週目の投与後４時間において、抗体１０６〜２２２に関連する血漿サイトカインレベルの変化は見られなかった。抗体１０６〜２２２が投与された対象におけるサイトカイン放出のレベルが低いことが薬理動態の一部として活性化Ｔ細胞によって予測されるのに対して、応答は、これらのin vitroアッセイによっては完全に予測されず、密接な臨床モニタリングが計画される。
【０３５５】
単回投与安全性薬理試験は、抗体１０６〜２２２では実施されていない。心臓機能の評価は、サルにおける４週間の毒性試験のうち３週間目に行われ、心拍数、心電図（ＥＣＧ）波形評価、および修正されたＱＴ間隔持続時間（ＱＴｃ）評価が評価された。これらの心臓血管測定値に対する抗体１０６〜２２２関連の影響はなく、抗体の呼吸または全身作用効果の臨床的観察もなかった。
【０３５６】
観察された副作用レベル（ＮＯＡＥＬ）のいずれも１００ｍｇ／ｋｇ／週ではなく、最大用量（第４週の性別平均平均ＡＵＣ０−１６８ｈ：５９４ｍｇ．ｈ／ｍＬ、範囲５４８〜６３４ｍｇ．ｈ／ｍＬ；Ｃｍａｘ：４．８８ｍｇ／ｍＬ、範囲４．２７〜５．４６ｍｇ／ｍＬ）が試験された。
【０３５７】
抗体１０６〜２２２の非臨床活性および薬物力学
in vitro研究
抗体１０６〜２２２は、エフェクターＣＤ４＋Ｔ細胞増殖を促進し、ＣＤ４＋Ｔｒ１細胞を産生するＩＬ−１０の誘導を阻害し、ｎＴｒｅｇの抑制機能を遮断し、ＦｃＲ陽性細胞上のＦｃドメインを介する抗体の架橋によるＯＸシグナル伝達を阻害すると予測されるＦｃＲに結合することを含む、in vitroでのいくつかの作用機序を実証した。
【０３５８】
抗体１０６〜２２２は、カニクイザル（Ｋｄ４０８ｎＭ）およびヒト（Ｋｄ４．９ｎＭ）由来の組換えＯＸ４０細胞外ドメインに特異的に結合するが、関連するヒト受容体ＤｃＲ３およびＣＤ４０には結合しない。抗体１０６〜２２２は、同様のＥＣ５０値（それぞれ０．３５および０．３０μｇ／ｍＬ）で活性化カニクイザルおよびヒトＣＤ４＋Ｔ細胞の両方に結合した。これらのデータは、組換えＯＸ４０への結合について観察された親和性の差異が、細胞表面ＯＸ４０への結合を真に反映していないことを示唆している。
【０３５９】
多くの抗ＴＮＦＲファミリー抗体（抗ＯＸ４０を含む）は、様々なＦｃγＲを発現する組織における細胞：細胞相互作用中にin vivoで起こりうる高密度抗体複合体および共刺激の形成を必要とすると考えられる［White, 2013］。ＯＸ４０抗体の場合、プラスチック組織培養プレートの表面に抗体を固定化し、プレート結合抗体上に細胞をインキュベートすることによりin vitroで模倣することができる。重要なことに、ＯＸ４０活性化は、ＴＣＲの関与（例えばＣＤ３ライゲーション）に依存して、Ｔ細胞に対して共刺激シグナルを与え、抗体１０６〜２２２は、ＴＣＲシグナルの非存在下で試験したin vitro系におけるスーパーアゴニストではないことが示唆された。抗体１０６〜２２２（固定化）は、平均ＥＣ５０値０．７２μｇ／ｍＬ（４．８ｎＭ）で固定化抗ＣＤ３活性化カニクイザルＣＤ４＋Ｔ細胞の増殖を刺激し、平均ＥＣ５０値０．１９μｇ／ｍＬ（１．３ｎＭ）で活性化ヒトＣＤ４＋Ｔ細胞の抗ＣＤ３誘導増殖を刺激した。
【０３６０】
ＯＸ４０アゴニスト抗体は、ヒトＴｒｅｇの抑制機能を低下させることが示された。ヒト精製ＣＤ４＋Ｔ細胞を、ビタミンＤ３およびデキサメタゾンを用いて誘導Ｔｒｅｇに分化させ、ヒトＣＤ３２ａ（ＦｃγＲＩＩＡ）発現Ｌ細胞（ＦｃγＲＩＩＡによる抗体架橋を促進することができる）と共に培養した。分化段階中の溶液中の抗体１０６〜２２２の添加により、ナイーブＴ細胞がＩＬ−１０＋Ｔｒ１細胞に分化するのを防ぐことができた。
【０３６１】
ＩｇＧ１抗体について予想されたように、抗体１０６〜２２２はカニクイザルおよびヒトのＦｃＲγｓ（およびヒト補体Ｃ１ｑ）に結合し、レポーターアッセイ系において低レベルであるが測定可能なレベルのレポーターＦｃγＲＩＩＩＡ関与を示した。ＡＤＣＣアッセイでは、ＯＸ４０＋標的細胞株のいくつかの細胞溶解物が、抗体１０６〜２２２治療で観察された。しかしながら、ヒト初代ＰＢＭＣアッセイでは、抗体１０６〜２２２は、一般に、ＣＤ４＋およびＣＤ８＋Ｔ細胞の生存に影響を与えなかった。ＰＢＭＣ  ＡＤＣＣデータの統計解析は、抗体１０６〜２２２による生存率に対するロバスト効果を支持しなかった。すべての場合において、抗体１０６〜２２２による生存率の低下は、抗ＣＤ５２または抗ＣＤ２０陽性対照抗体で観察されたよりも少なかった。全体として、これらのin vitroの知見は、抗体１０６〜２２２がin vivoでＯＸ４０＋標的細胞のＡＤＣＣを引き起こす可能性を有することを示唆しているが、効果はドナー間で一貫しておらず、これらのin vitroはin vivoでの免疫微小環境を完全に反映するものではない。
【０３６２】
in vivo研究
単回ＩＶ用量（２ｍｇ／ｋｇ）の抗体１０６〜２２２を投与したカニクイザルでは、２日目にＯＸ４０＋／ＣＤ４＋Ｔ細胞の割合が一時的に減少し、７日目までに回復し、抗体１０６〜２２２が、末梢血中のＯＸ４０＋細胞に結合し、これらの細胞がこれらの細胞の枯渇ではなく辺縁趨向（margination）を反映している可能性があることが示唆された。反復投与ＩＶ試験では、カニクイザルに抗体１０６〜２２２（１０ｍｇ／ｋｇ／週）を４週間投与した。単回投与研究で観察されたように、末梢血Ｔ細胞上の遊離ＯＸ４０の割合は、試験期間中持続したビヒクル群と比較して、抗体１０６〜２２２で治療した群で減少した。これは、間接的に、抗体１０６〜２２２が投薬後にＯＸ４０＋細胞に結合したことを示唆する。ＯＸ４０陽性細胞は、非競合的抗ＯＸ４０抗体を用いて検出することができたので、枯渇していないと考えられた。Ｔ細胞活性化マーカーの変化の明らかな証拠は、いずれの研究においても、非治療群と比較して、治療群における末梢血、脾臓またはリンパ節において観察されなかった。ＯＸ４０陽性細胞はまた、治療群および非治療群の両方でこれらの組織で検出され、細胞が抗体１０６〜２２２によって組織中で枯渇しなかったことが示唆された。いずれの研究においても、治療に関連した臨床的観察はなかった。
【０３６３】
マウスＯＸ４０に対する代用ｍＡｂ（ＯＸ８６）を使用して、同系腫瘍モデルにおける単独療法活性についてのインビボ非臨床的証拠を得た。一連の実験では、ＣＴ２６マウス結腸癌腫を有するメスのＢＡＬＢ／ｃマウス（ｎ＝１０／群）に、リン酸緩衝化生理食塩水中の１〜４００μｇ／マウスの範囲のＯＸ８６を、週２回ＩＰ投与で３週間にわたり投与した。全ての用量において、対照群と比較して生存率の有意な増加が示された（図１３ａおよびｂ）。抗ＯＸ８６と抗体１０６〜２２２との間の同様の効力を仮定すると、前臨床で有効性が実証された曝露は、ヒト対象において達成可能であると予測される。
【０３６４】
追加のin vivo実験を、Ａ２０マウスリンパ腫細胞株腫瘍を有するＢＡＬＢ／ｃマウスを用いて行ったところ、穏やかな腫瘍縮小が示され、Ｂ１６Ｆ１０マウスメラノーマ細胞株腫瘍を有するＣ５７ＢＬ／６マウスで、腫瘍縮小または生存に有意な影響は認められなかった。さらに、ヒト化マウスモデルが利用できないため、マウス養子細胞移動（ＡＣＴ）モデル、ＭＣ３８／ｇｐ１００を用いて、in vivoで抗体１０６〜２２２を評価した。全体として、ＡＣＴモデルはロバストではなく、非常に変動する結果をもたらした。
【０３６５】
同系腫瘍モデルにおけるin vivo研究も、抗ＰＤ−１抗体および抗ＣＴＬＡ−４抗体と組み合わせた抗体１０６〜２２２を用いて行った。抗ＰＤ−１併用研究を以下に簡単に説明する。
【０３６６】
ペムブロリズマブ
ペムブロリズマブの詳細な背景情報については、ペムブロリズマブＩＢ／承認ラベルを参照されたい［KEYTRUDA（登録商標） Prescribing Information, 2014; Merck Sharp & Dohme Corp, 2014］。
【０３６７】
治療標的としてのＰＤ−１
ＰＤ−１受容体−リガンド相互作用は、免疫制御を抑制するために腫瘍によってハイジャックされる主要な経路である［Pedoeem, 2014］。健康な状態で活性化されたＴ細胞の細胞表面上に発現されるＰＤ−１の正常な機能は、自己免疫応答を含む望ましくないまたは過剰の免疫応答をダウンモジュレーションすることである。ＰＤ−１（遺伝子Ｐｄｃｄ１によりコードされる）は、そのリガンド（ＰＤ−Ｌ１および／またはＰＤ−Ｌ２）の関与の際に抗原受容体シグナル伝達を負に調節することが示されているＣＤ２８およびＣＴＬＡ−４に関連するＩｇスーパーファミリーメンバーである。マウスＰＤ−１単独の構造［Zhang, 2004］およびそのリガンドとの複合体が初めて解明され［Lazar-Molnar, 2008；Lin，2008］、さらに最近ではヒトＰＤ−１細胞外領域のＮＭＲベースの構造およびそのリガンドとの相互作用の分析も報告されている［Cheng, 2013］。ＰＤ−１およびファミリーメンバーは、リガンド結合に関与するＩｇ可変型（Ｖ型）ドメインおよびシグナル伝達分子の結合に関与する細胞質尾部を含むＩ型膜貫通糖タンパク質である。ＰＤ−１の細胞質尾部には、２つのチロシンベースのシグナル伝達モチーフ、免疫受容体チロシンベースの阻害モチーフ（ＩＴＩＭ）および免疫受容体チロシンベースのスイッチモチーフ（ＩＴＳＭ）が含まれる。Ｔ細胞刺激後、ＰＤ−１はチロシンホスファターゼＳＨＰ−１およびＳＨＰ−２をその細胞質尾部のＩＴＳＭモチーフに動員し、ＣＤ３  Ｔ細胞シグナル伝達カスケードに関与する、ＣＤ３ζ、ＰＫＣθおよびＺＡＰ７０等のエフェクター分子の脱リン酸化を導く［Sheppard, 2004］。ＰＤ−１がＴ細胞応答をダウンモジュレーションするメカニズムは、ＣＴＬＡ−４と類似しているが、ＣＴＬＡ−４とは異なる［Ott, 2013］。ＰＤ−１は、末梢ＣＤ４＋およびＣＤ８＋Ｔ細胞、Ｂ細胞、ＴｒｅｇおよびＮＫ細胞を含む活性化リンパ球上に発現することが示されている［Yao, 2014］。発現はまた、ＣＤ４−ＣＤ８−（二重陰性）Ｔ細胞［Nishimura, 1996］ならびにマクロファージのサブセット［Huang, 2009］および樹状細胞［Pea-Cruz, 2010］のサブセット上で、胸腺発達中に示されている。ＰＤ−１のリガンド（ＰＤ−Ｌ１およびＰＤ−Ｌ２）は、構成的に発現されるか、または様々な細胞型で誘導され得る［Keir, 2008］。ＰＤ−Ｌ１は、様々な非造血組織、特に血管内皮細胞上で低レベルで発現するが、ＰＤ−Ｌ２タンパク質はリンパ組織または慢性炎症環境において見られる抗原提示細胞上でのみ検出可能に発現する［Keir, 2008］。両方のリガンドは、細胞外領域においてＩｇＶ様およびＩｇＣ様ドメインの両方、および既知のシグナル伝達モチーフを有さない短い細胞質領域を含むＩ型膜貫通型受容体である。いずれかのＰＤ−１リガンドのＰＤ−１への結合により、Ｔ細胞受容体を介して誘発されるＴ細胞活性化が阻害される。ＰＤ−Ｌ２は、リンパ器官における免疫Ｔ細胞活性化を制御すると考えられているが、ＰＤ−Ｌ１は末梢組織における不適正なＴ細胞機能を弱める働きをする。健康な器官はＰＤ−Ｌ１を（少しでもある場合には）ごくわずかに発現するが、様々な癌が、このＴ細胞阻害剤を十分なレベルで発現することが示されており［Karim, 2009、Taube, 2012］、腫瘍特異的Ｔ細胞上のＰＤ−１受容体との相互作用を介して腫瘍による免疫回避に重要な役割を果たす［Sanmamed, 2014］。結果として、ＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１経路は、癌における治療介入の魅力的な標的である［Topalian, 2012］。
【０３６８】
ペムブロリズマブの背景と臨床試験
ペムブロリズマブ［ＫＥＹＴＲＵＤＡ（登録商標）（米国）；従来、ＭＫ−３４７５およびＳＣＨ９０００４７５として知られていた］は、ＰＤ−１とそのリガンドであるＰＤ−Ｌ１およびＰＤ−Ｌ２との間の相互作用を直接遮断するように設計されたＩｇＧ４／κアイソタイプの強力かつ高度に選択的なヒト化ｍＡｂである。現在、ペムブロリズマブは米国で承認されており、イピリムマブおよびＢＲＡＦ  Ｖ６００突然変異陽性の場合にはＢＲＡＦ阻害剤［ＫＥＹＴＲＵＤＡ（登録商標） Prescribing Information, 2014, Poole, 2014］の後に、切除不能または転移性のメラノーマおよび疾患進行を有する対象のための治療に適応される。米国で規制当局の承認を受けた最初の抗ＰＤ−１療法であり、現在ＥＵで規制審査中である。
【０３６９】
進行中の臨床試験は、進行性メラノーマ、ＮＳＣＬＣ、頭頸部癌、尿路上皮癌、胃癌、ＴＮＢＣ、Ｈｏｄｇｋｉｎ’ｓリンパ腫および他の多くの進行性固形腫瘍適応症および血液悪性腫瘍において行われている。研究の詳細については、ＩＢ［Merck Sharp & Dohme Corp, 2014］を参照されたい。
【０３７０】
ペムブロリズマブ投与量選択の根拠
単剤のペムブロリズマブの安全性と臨床活性を評価するために、オープンラベル第Ｉ相試験（ＫＥＹＮＯＴＥ−００１）が実施された。この試験の用量漸増パートは、進行性固形腫瘍を有する対象において、２週間ごとに投与される（Ｑ２Ｗ）３つの用量レベル、１ｍｇ／ｋｇ、３ｍｇ／ｋｇおよび１０ｍｇ／ｋｇを評価した。３つの用量レベルはすべて十分に許容され、用量制限毒性は観察されなかった。ペムブロリズマブについての最初のヒト研究では、すべての用量レベル（１ｍｇ／ｋｇ、３ｍｇ／ｋｇおよび１０ｍｇ／ｋｇ  Ｑ２Ｗ）において標的関与の証拠および腫瘍サイズ縮小の客観的証拠が示された。ＭＴＤは特定されていない。
【０３７１】
ＫＥＹＮＯＴＥ−００１では、２ｍｇ／ｋｇ対１０ｍｇ／ｋｇのペムブロリズマブをＱ３Ｗで投与されたメラノーマ対象の２つの無作為化コホート評価が完了し、１０ｍｇ／ｋｇのＱ３Ｗ対１０ｍｇ／ｋｇのＱ２Ｗの無作為化コホート評価も完了した。臨床効果および安全性データは、これらの用量での有効性応答または安全性プロファイルにおける臨床的に重要な差異がないことを示す。例えば、コホートＢ２において、従来イピリムマブ療法を受けていた進行性メラノーマ対象は、２ｍｇ／ｋｇ対１０ｍｇ／ｋｇのＱ３Ｗのペムブロリズマブを投与されるように無作為化された。ＯＲＲは、２ｍｇ／ｋｇの群で２６％（２１／８１）であり、１０ｍｇ／ｋｇの群で２６％（２０／７６）であった［Robert, 2014］。薬物関連ＡＥ、３−５薬剤関連ＡＥ、重篤な薬剤関連ＡＥ、ＡＥによる死亡または中断の対象の割合は、群間で同等であるか、１０ｍｇ／ｋｇの群で低かった。コホートＢ３では、進行性メラノーマ対象（従来のイピリムマブ療法とは無関係）を、１０ｍｇ／ｋｇのＱ２Ｗ対１０ｍｇ／ｋｇのＱ３Ｗのペムブロリズマブを投与されるように無作為化した。ＯＲＲは、１０ｍｇ／ｋｇ  Ｑ２Ｗ群では３０．９％（３８／１２３）であり、１０ｍｇ／ｋｇＱ３Ｗ群では２４．８％（３０／１２１）であった。薬物関連ＡＥ、３−５薬剤関連ＡＥ、重篤な薬剤関連ＡＥ、ＡＥによる死亡または中断の対象の割合は、群間で同等であった。
【０３７２】
Ｑ２ＷおよびＱ３Ｗで投与したペムブロリズマブのＰＫデータ分析により、全身クリアランスが遅く、分布の量が限られ、半減期が長いことが示された［Merck Sharp & Dohme Corp, 2014］。薬力学データ（ＩＬ−２放出アッセイ）により、周辺標的関与が耐久性である（＞２１日間）ことが示唆された。この初期のＰＫおよび薬力学データは、Ｑ３Ｗ投与スケジュールを試験する科学的根拠を提供するものである。Ｑ３Ｗ投与は対象にとってより便利であるため、Ｑ３Ｗ投与がはさらに研究された。
【０３７３】
固形腫瘍における２ｍｇ／ｋｇおよび同等の用量のペムブロリズマブのさらなる探索の理論的根拠は、１）メラノーマ対象において２ｍｇ／ｋｇまたは１０ｍｇ／ｋｇのＱ３Ｗのいずれかで投与された場合のペムブロリズマブの同様の有効性および安全性、２）２ｍｇ／ｋｇ  Ｑ３Ｗ〜１０ｍｇ／ｋｇ  Ｑ３Ｗの用量範囲における有効性と安全性の両方についてのペムブロリズマブの平らな曝露−応答関係、３）腫瘍負荷またはペムブロリズマブの分布行動への影響の欠如（集団ＰＫモデルにより評価された）、および４）ペムブロリズマブ標的関与の動態が腫瘍型によって有意に変化しないということに基づくものである。
【０３７４】
２００ｍｇのＱ３Ｗ固定投与レジメンの選択は、ペムブロリズマブの集団ＰＫモデルを用いて行ったシミュレーションに基づいており、３週間ごとの２００ｍｇの固定用量が、１）３週間ごとの２ｍｇ／ｋｇお用量により得られる２）メラノーマに確立された曝露範囲で個々の対象の曝露を最大効力応答と関連させて維持し、３）寛容で安全なメラノーマで確立された曝露範囲で個々の対象を曝露する。
【０３７５】
固定用量レジメンは、医師にとってより簡単で便利であり、投薬ミスの可能性を低減する。固定投与計画は、治療施設におけるロジスティックチェーンの複雑さを軽減し、廃棄物を削減する。
【０３７６】
ＯＸ４０アゴニストとＰＤ−１阻害剤の組み合わせの理論的根拠
抗癌免疫応答は、抗原のプロセシングおよび提示、Ｔ細胞のプライム化および活性化、腫瘍浸潤、ならびにその後の活性化されたエフェクターＴ細胞による破壊を含む多段階プロセスである［Chen, 2013］。これらの各段階は、抗癌免疫応答を阻害するための冗長なメカニズムを悪性腫瘍に与え、負に調節することができる。いくつかの場合において、腫瘍は単一のメカニズムに高度に依存し、このような場合、単一の免疫調節療法で有意な臨床活性を達成する可能性がある。しかしながら、腫瘍はしばしば抗腫瘍免疫応答を遮断するために冗長なメカニズムを利用することが予測される。このような例においては、併用療法が必要とされると考えられる。最近では、組み合わせ免疫療法の恩恵の例として、転移性メラノーマを有する対象において、イピリムマブ（抗ＣＴＬＡ−４）とニボルマブ（抗ＰＤ−１）の組み合わせによって得られた臨床データが記載されている［Wolchok, 2013］。
【０３７７】
ＯＸ４０アゴニストと抗ＰＤ−１剤を組み合わせる理論的根拠は、これらの２つの薬剤が癌免疫サイクルにおいて異なるステップを標的とするという事実に基づいている。イピリムマブ／ニボルマブの組み合わせと同様に、抗体１０６〜２２２は、抗ＰＤ−１剤ペムブロリズマブが腫瘍においてエフェクターＴ細胞上のＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１経路の阻害効果を阻害して、抗腫瘍Ｔ細胞の初回抗原刺激／活性化を増大させると予想される。最近、Guo et al.では、マウスＩＤ８卵巣癌モデルにおけるＰＤ−１遮断およびＯＸ４０アゴニズムの組み合わせについての相乗的抗腫瘍活性が報告されている。併用療法の活性は、ＣＤ４＋およびＣＤ８＋細胞の増加およびＣＤ４＋ＦｏｘＰ３＋ＴｒｅｇおよびＣＤ１１ｂ＋Ｇｒ−１＋骨髄抑制細胞の減少と関連していた［Guo, 2014］。
【０３７８】
マウスＯＸ４０に対する代用ｍＡｂ（ＯＸ８６）を使用して、同系腫瘍モデルにおけるＰＤ−１阻害剤との併用相乗作用についてのインビボ非臨床的証拠を得た。一連の実験では、ＣＴ２６マウス結腸癌細胞株の腫瘍を有するメスのＢＡＬＢ／ｃマウス（ｎ＝１０／群）に、１〜４００μｇ／マウスのＯＸ８６と２０または２００μｇ／マウスの抗ＰＤ−１  ｍＡｂと組み合わせて、週２回４週間にわたってＩＰ投与した。ＯＸ８６および抗ＰＤ−１  ｍＡｂ単独療法はいずれも、生理食塩水およびアイソタイプ対照と比較して、腫瘍体積を減少させ、生存率を増加させたが、ＯＸ８６／抗ＰＤ−１の組み合わせは、単剤療法と比較して生存率を有意に上昇させ、良好な許容性を示した（図１４）。組み合わせ効果および生存率についての同様の結果が、Ａ２０マウスリンパ腫細胞株腫瘍を有するメスのＢＡＬＢ／ｃマウスについても報告されていが、Ｂ１６Ｆ１０マウスメラノーマ細胞系腫瘍を有するメスＣ５７ＢＬ／６マウスでは、相乗効果または相加効果は報告されていない。
【０３７９】
【表２】
2018522044.tif 000004
2018522044.tif 000005
2018522044.tif 000006
2018522044.tif 000007
【０３８０】
研究設計
全体設計
この研究は、選択された進行性または再発性固形腫瘍を有する対象に静脈内投与された抗体１０６〜２２２の安全性、許容性、ＰＫ、薬物力学および予備的臨床活性を評価するために設計された、ＦＴＩＨの、オープンラベルの、非ランダム化の多施設共同研究である。
【０３８１】
この研究は、２つのパートで実施され、各パートは用量漸増段階とそれに続くコホート拡大段階からなる（図１５参照）。パート１では、抗体１０６〜２２２単剤療法が評価され、パート２ではペムブロリズマブと併用して抗体１０６〜２２２が評価された。図１５に示されるように、抗体１０６〜２２２は、漸増用量での単剤療法として最初に評価される。許容され、薬力学的活性を示す抗体１０６〜２２２の用量が同定されると、パート２の登録が開始された。パート２では、漸増用量の抗体１０６〜２２２が、固定用量のペムブロリズマブとともに最初に評価される。各パートには、最大３つの腫瘍の拡張コホートも含まれる。
【０３８２】
本研究は、ＮＳＣＬＣ、ＳＣＣＨＮ、ＲＣＣ、メラノーマ、膀胱癌、ＳＴＳ、ＴＮＢＣおよびＭＳＩ  ＣＲＣを含む可能性のある腫瘍タイプを有する約１８０名の対象に対して行われた。研究の用量漸増段階では、前述の腫瘍タイプのいずれかを有する対象を含むことができ、本研究のコホート拡張段階では、各拡張コホートは、上記リストから選択された１つの特定の腫瘍タイプを有する対象に対して行った。研究の各パートには、最大３つの拡張コホートを含めることができる。
【０３８３】
対象の病状および疫学調査後（postbaseline visit）の疾患進行の判定は、ＲＥＣＩＳＴ  ｖ１．１およびｉｒＲＥＣＩＳＴによる放射線検査のその場にいる研究者の評価によって評価され、疾患の進行に起因する治療中止の決定は、ｉｒＲＥＣＩＳＴに基づいて行われるが、一次評価項目分析ではＲＥＣＩＳＴ  ｖ１．１が使用される。スキャンは集中的に収集され、中央の放射線検査またはレビューのオプションを考慮して保存される。
【０３８４】
研究中の安全性、ＰＫおよびその他の臨床データを考慮して、研究結果の客観的解釈を提供するための運営委員会、主要決定のための指針が確立される。運営委員会の委任には、用量漸増からコホート拡大への移行、パート１からパート２への研究の移行、拡大コホートに含める特定の腫瘍タイプの選択、推奨されるフェーズ２用量（ＲＰ２Ｄ）の選択の指針が含まれ；研究チームはまた、１つのパートから別のパートへの研究の移行のためにＧＳＫメディカルガバナンスからの支持を求める。ＭＴＤおよびＲＰ２Ｄの最終決定においては、利用可能なすべての安全性と許容性のデータが考慮される。この研究の最新のデータの検討までの間、運営委員会の指針の下で、プロトコルは、その後、抗体１０６〜２２２とのさらなる抗癌剤の組み合わせの調査を含むように改訂され得る。運営委員会による権限、会員資格、役割および責任は運営委員会憲章に記載されている。運営委員会の重要な決定事項は文書化され、参加したすべて研究責任者（ＰＩ）および制度審査委員会（ＩＲＢ）／独立倫理委員会（ＩＥＣ）に報告される。
【０３８５】
用量漸増
最初の２つの用量レベル（表２参照）について、これらの用量レベルのそれぞれに１名の対象を登録して、加速滴定設計を計画した。各対象は、４週間のＤＬＴ評価期間を完了しなければならず、次の用量レベルに進むかどうかの決定が行われる前に、利用可能な安全性データを検討しなければならない。対象がＤＬＴを受ける場合、表２に示すように、それにより改変された３＋３デザインの実施が開始される。ＤＬＴ以外の理由で対象が４週間のＤＬＴ評価期間の完了前に研究から離脱する場合、対象が変更される。
【０３８６】
その後の投与量レベルについては、表２に示すように、改変３＋３デザインが用量漸増に使用される。第３の投与量レベルで治療した最初の３名の対象は、次の対象の治療が開始される前に、各対象における初期の安全性データを評価するために、１週間離れて治療が開始される。同じ用量レベルまたは次のより高い用量レベルでのさらなる対象の登録をするか否かの決定をする前に、最初の４週間の治療の利用可能な安全性データの評価が、少なくとも３名の対象から必要とされる。ＤＬＴ以外の理由で４週間の治療が完了する前に研究から離脱した対象は、変更することができる。第３の用量レベルのコホートが完了した後、その後の用量レベルは、最初に４名の対象に登録され、対象は少なくとも２４時間離れて治療が開始される。
【０３８７】
３名のうちの１名（または４名のうちの１名）が特定の用量レベルでＤＬＴを受けた場合、追加の対象がその用量レベルで登録され、合計６名の対象がその用量レベルで治療される。６名のうちの少なくとも２名が特定の用量レベルでＤＬＴを受けた場合、より低い（または中間の）用量レベルが探究され、ＭＴＤをより特徴づけることができる。運営委員会は、（ｉ）コホートにおいてすでに募集された６名の対象において観察された安全性プロファイルに基づいて、所定の毒性の頻度のさらなる評価が正当に評価されるか、または用量選択を補助するための薬理学マーカーがさらに評価される場合、所定の用量漸増コホートを最大で合計１２名の対象にまで拡大することを提案することができ、いずれの場合にも、確認されたＤＬＴの発生率が３３％を超えてはならない。用量漸増の決定は、各サイトで管理されているコピーおよび研究ファイルを用いて書面で文書化される。
【０３８８】
【表３】
2018522044.tif 000008
【０３８９】
パート１Ａ：単剤療法用量漸増
抗体１０６〜２２２の単剤療法の用量漸増は、Ｑ３Ｗで投与される抗体１０６〜２２２の０．００３ｍｇ／ｋｇの開始用量で開始される（Dose Justification Sectionを参照）。表３は、各用量レベル増加について選択され得る最大用量を例示する。用量の最大増加は３．３３倍以下である。毒性が過剰である場合、または用量選択を補助するための薬力学的マーカーのさらなる評価が正当である場合、表３の中程度の用量レベル、または３週間ごとに１回以外のスケジュールを検討することができる。
【０３９０】
【表４】
2018522044.tif 000009
【０３９１】
パート２Ａ：併用用量漸増（抗体１０６〜２２２＋ペムブロリズマブ）
抗体１０６〜２２２＋ペムブロリズマブ併用療法の用量漸増は、Ｑ３Ｗで投与される固定用量２００ｍｇのペムブロリズマブ、および本研究のパート１Ａにおいて薬力学的活性を示した抗体１０６〜２２２単剤療法の許容量を少なくとも２用量レベル下回る開始用量の抗体１０６〜２２２で開始された。抗体１０６〜２２２とペムブロリズマブとの潜在的な組み合わせの例を表４に記載する。この例では、研究のパート１Ａにおいて、少なくとも３名の対象において、１ｍｇ／ｋｇの用量の抗体１０６〜２２２が許容された。
【０３９２】
【表５】
2018522044.tif 000010
【０３９３】
パート２Ａの開始用量コホートにおける併用用量が許容されない場合、２００ｍｇのペムブロリズマブと組み合わせてより低い用量の抗体１０６〜２２２を評価することができる。ペムブロリズマブの用量は、試験中２００ｍｇに固定されたままである。
【０３９４】
Dose Excalation Sectionに記載されているように、用量漸増は、併用投与レジメンのＭＴＤが特定されるまで進行する。用量漸増の決定には、研究者、ＧＳＫメディカルモニタ、薬物動態学者および統計学者によって検討される、対象が試験を受けている間の過去のコホートの安全性プロファイルを含む、利用可能なすべてのデータが考慮される。その後のコホートための用量漸増決定および理論的根拠は、各サイトで管理されているコピーと研究ファイルを用いて書面で文書化される。
【０３９５】
さらなる安全性、ＰＫおよび薬力学データの収集を容易にするために、コホートは用量漸増中に登録された３〜６名の対象を超えて最大１２名まで拡大することができる。用量増大期を開始する前に、パート１Ｂおよび２Ｂのために選択した抗体１０６〜２２２の用量で、合計１２名の対象を治療して、その用量での安全性、ＰＫおよび薬力学データをよりよく特徴付けることができる。
【０３９６】
用量制限毒性
すべての毒性は、国立がん研究所−有害事象の共通毒性基準（ＮＣＩ−ＣＴＣＡＥ）（バージョン４．０）を用いて評価される。
【０３９７】
ＡＥは、臨床的に関連しており、治療の最初の４週間（すなわち２８日）の間に研究治療に帰属し（少なくとも、おそらくまたは場合によって）と研究者に見なされ、表５に列挙される基準の少なくとも１つに該当する場合、ＤＴＬとみなされる。ＡＥが基礎疾患と関連していると考えられる場合、ＡＥはＤＬＴではない。パート２では、ペムブロリズマブで起こることが知られており、推奨される対症療法により２週間以内に制御されるグレード３の毒性は用量制限とみなされないかもしれない。
【０３９８】
【表６】
2018522044.tif 000011
【０３９９】
対象が治療の最初の４週間でＤＬＴを経験した場合、研究者が、研究継続が最善の目的であると考えない限り（例えば、腫瘍退縮、症候性疾患の改善および／またはＤＬＴのタイプが、後のサイクルで、例えば、前投薬によって予防可能であると考えられる場合）対象は研究治療を停止される。そのような場合、同じまたはより低い用量で研究治療を継続する前にスポンサーの承認を得る必要がある。
【０４００】
用量変更アルゴリズムを含む毒性管理の指針は、Dose and Safety Management Guidelines Sectionに記載されており、イピリムマブ、およびペムブロリズマブ等のＰＤ−１阻害剤の開発以来、免疫関連有害事象（ｉｒＡＥ）の管理経験に基づいている。Dose and Safety Management Guidelines Sectionは、非血液性ＡＥの管理についての一般的な指針、ｉｒＡＥの管理についての一般的な指針（非免疫性有害事象に関する一般的な指針）、ｉｒＡＥの同定と評価の一般原則（免疫性有害事象に関する一般原則）、および肝毒性（肝毒性管理のセクション）、胃腸事象（胃腸事象（下痢または大腸炎）管理のセクション）、皮膚毒性（皮膚毒性管理のセクション）、内分泌事象（内分泌事象管理のセクション）、肺炎（肺炎管理管理のセクション）、血液性事象（血液事象管理のセクション）、ブドウ膜炎／虹彩炎（ブドウ膜炎／虹彩炎のセクション）、輸液反応または重度のサイトカイン放出（輸液反応または重症サイトカイン放出症（ｓＣＲＳ）の管理のセクション）、および投薬遅延（投薬遅延のセクション）についての特定の指針を含む。
【０４０１】
コホートの拡大
安全性、ＰＫ、薬力学的活性および臨床活性に関する追加データを収集するために、パート１Ａおよび２Ａの用量レベル（用量漸増）を、本研究のパート１Ｂおよび２Ｂのコホート拡大のために選択することができる。
【０４０２】
各拡大コホートには、単一の腫瘍タイプの対象が含まれ、選択された用量レベルで治療される約２０名の対象が登録される。パート１Ｂとパート２Ｂの両方で、最大３つの拡大コホートがコホートごとに１つの徴候で登録される。腫瘍の適応症の選択は、それぞれパート１Ａおよびパート２Ａで生成されたデータに部分的に基づいている。運営委員会は、利用可能な予備安全性、ＰＫ、薬力学的および臨床的活動のデータを考慮して、３つのコホートすべての用量レベル指標を選択する。どの用量レベルを拡大するか、そしてコホート拡大のためにどの腫瘍タイプを選択するかを決定する際に考慮してもよい基準は：
・標的関与および薬力学的活性：観察されたＯＸ４０受容体占有率および薬力学的活性。薬力学的活性は、全血におけるＴ細胞活性化および増殖のマーカーの評価によって決定される。リンパ球の数および活性化状態の変化も評価され、個々の反応ならびに腫瘍内の免疫細胞集団と相関する（Biomarkers/Pharmacodynamic Markers Section参照）。
・許容性：抗体１０６〜２２２または併用薬剤のいずれかのＤＬＴ頻度、特定関心のＡＥ（ＡＥＳＩ）および用量変更の程度。
・臨床活性：少なくとも１２週間のＳＤおよび／または軽度の反応を含む臨床反応の証拠
を含む。
【０４０３】
１０名の対象が特定の拡大コホートに登録された後、運営委員会は、その拡大コホートにおいて最大約２０名の対象まで継続的な増加を推奨することができる。各コホートに追加される１０名の対象は、最初の１０名の対象と同じ投与量レベルで治療されることが予想されるが、運営委員会は最新のデータに基づいて異なる用量レベルの探索を推奨するかもしれない。
【０４０４】
コホート拡大のために選択された用量レベルおよび腫瘍タイプの選択は、書面でサイトに伝えられる。
【０４０５】
対象内用量漸増
次の場合を除いて、対象内用量は増加されない。パート１Ｂについて選択された用量を決定において、パート１Ａにおいて低用量で治療されている対象は、パート１Ｂ用量への漸増／滴定のために考慮され得る。そのような対象について、用量を漸増するかどうかの決定は、事案ごとに研究者とＧＳＫメディカルモニタの合意の後に行われます。
【０４０６】
この研究のパート２では、対象内用量は増加されない。
【０４０７】
治療手段と期間
この研究には、スクリーニング期間、治療期間および調査期間が含まれる。対象は、治療開始の約４週間前に適格性についてスクリーニングされる。抗体１０６〜２２２による最大治療期間は４８週間であり、ペムブロリズマブによる最大治療期間は２年である（表６）。安全性評価の調査期間は、最後の投与日から最低３ヶ月である。治療後調査期間には、確認された疾患進行（ＰＤ）までの１２週間ごとの疾患評価が含まれる。ＰＤに続いて、生存状態を評価するために３ヶ月ごとに対象に接触する。
【０４０８】
確認されたＰＲまたはＣＲを有する対象は、応答持続時間の間調査され、再発／進行の時点で、抗体１０６〜２２２を用いたさらなる治療の対象となり得る。対象が追加の治療を受けるかどうかの決定は、事案ごとに治療研究者およびスポンサー／メディカルモニタによって検討され、合意される。
【０４０９】
【表７】
2018522044.tif 000012
【０４１０】
対象のタイプと数
用量レベルの数値およびＭＴＤに達するレベルは、事前に決定することはできない。適切な数の対象が、さらなる研究のための推奨用量を確立するために研究に登録される。合計で最大約１８０名の対象がこの２パート研究に登録したと推定される（パート１Ａおよび２Ａ［用量漸増］の約６０名の対象；パート１Ｂおよび２Ｂ［コホートの拡大］の約１２０名の対象）。
【０４１１】
パート１Ａおよびパート２Ａでは、ＤＬＴ以外の理由で４週間の治療が完了する前に対象が途中で離脱した場合、対象の補充は研究者と協議の上、スポンサーの裁量で登録することがでる。研究のパート１Ｂおよび２Ｂでは、対象は交換されない。
【０４１２】
デザイン正当化
この研究は、単剤療法として、抗ＰＤ−１であるペムブロリズマブと組み合わせて、抗体１０６〜２２２の安全性、許容性、薬力学的効果および予備的臨床活性を評価する。単独療法の安全性、許容性および薬力学は、最初の２つの用量レベルについての加速滴定設計を含む改変３＋３用量漸増で評価される。用量漸増の後に、定義された対象集団における拡大コホートが続く。明確な薬力学的免疫活性化の実証において、抗体１０６〜２２２とペムブロリズマブとの組み合わせの探索は、継続的な単独療法の探索と並行して開始することができる。２００ｍｇの固定用量のペムブロリズマブと組み合わせた抗体１０６〜２２２の用量漸増は、その時点で安全であることが実証されている抗体１０６〜２２２つの用量より少なくとも２用量レベル低い抗体１０６〜２２２の用量で開始される。
【０４１３】
用量漸増段階において、対象は、抗ＯＸ４０療法（例えば、免疫療法に対する応答性を有することが既に報告されている適応症、予測された免疫原性および／またはＯＸ４０の発現）に応答する可能性のある選択された固形腫瘍に登録される。用量漸増で評価される腫瘍のタイプは、ＮＳＣＬＣ、ＳＣＣＨＮ、ＲＣＣ、メラノーマ、膀胱癌、ＳＴＳ、ＴＮＢＣおよびＭＳＩ  ＣＲＣである。
【０４１４】
これらの組織学のほぼすべてが、抗ＣＴＬＡ−４および／または抗ＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１療法に対する以前の応答を実証している［Zamarin, 2015］。さらに、遺伝子発現データは、これらの腫瘍タイプのすべてがＯＸ４０の少なくとも中程度の発現を有することを示唆している［TCGA, 2014］。
【０４１５】
ペムブロリズマブとの併用の包含は、発生初期の潜在的形質転換活性を同定する傾向に基づいている。抗体１０６〜２２２は単剤療法として有意な臨床活性を有することが期待されるが、分子の完全な可能性は他の薬剤、特に免疫療法と組み合わせて見出される可能性が高い。ペムブロリズマブは、癌免疫のサイクルの異なる側面を標的にしており、主にグレード１または２の事象の毒性プロファイルを有し、前臨床データが相乗効果の可能性を強く支持するため、抗体１０６〜２２２の理想的な組み合わせパートナーである。
【０４１６】
抗体１０６〜２２２／ペムブロリズマブの併用（パート２）への登録を開始する前に十分な安全性と薬力学データが得られるように、安全性、薬力学および有効性を含む利用可能な臨床データが運営委員会によって審査される。研究チームはまた、研究のパート２を開始するために、ＧＳＫ医療ガバナンスからの支持を求める。パート２を開くことを決定すると、その決定は文書化され、参加するすべてのＰＩおよびＩＲＢ／ＩＥＣに報告される。
【０４１７】
線量の正当性
パート１：開始用量
ヒト用医薬品登録のための技術要件の調和に関する国際協議会（ＩＣＨ）のＳ９指針によると、最も関連性の高い種（カニクイザル）における最大の非重大毒性用量（ＨＮＳＴＤ）の１／６に基づいて開始用量を計算することで、〜１６ｍｇ／ｋｇ／週の開始用量を生じる。予想される最小生物学的影響レベル（ＭＡＢＥＬ）を決定することにより、０．００３ｍｇ／ｋｇの抗体１０６〜２２２  Ｑ３Ｗより控えめな開始用量がこのＦＴＩＨ研究の安全な開始用量として選択された。マウスにおけるカニクイザルのＰＫ、抗体１０６〜２２２結合特性およびＯＸ８６有効性データ、ならびにＯＸ４０経路をアゴナイズする従来の臨床経験の考察によって推測される、予測されるヒト抗体１０６〜２２２曝露も開始用量の選択の要因とした。
【０４１８】
予測される曝露：０．０３ｍｇ／ｋｇ〜１００ｍｇ／ｋｇの範囲の単回投与および反復投与で、いくつかのカニクイザル研究で抗体１０６〜２２２のＰＫを評価した。抗体１０６〜２２２の曝露は、ほぼ用量比例であった。試験した用量レベルにわたって、ＰＫプロファイルは標的媒介性の性質の証拠を示さなかった。これらの結果は、相対成長法（allometric method）がヒトＰＫを予測するのに適切であることを示唆しており、さらに、抗体１０６〜２２２のヒトＰＫは、同じアイソタイプのｍＡｂのＰＫに類似すると予想される。７０ｋｇの対象に対して３Ｌの血漿容量を仮定すると、０．０３μｇ／ｍＬのＣｍａｘが０．００３ｍｇ／ｋｇの用量で予測される。
【０４１９】
非臨床安全性：反復投与毒性試験において、抗体１０６〜２２２は、０．０３〜１００ｍｇ／ｋｇ／週の範囲の用量で４週間にわたり毎週ＩＶ投与した後、カニクイザルにおいて良好な許容性を示した。これらの研究では、Ｔ細胞調節に関連するものを含めて、試験品に関連する変化はなかった。ＮＯＡＥＬは、ヒト等価線量（ＨＥＤ）を計算する方法にかかわらず、提案された臨床開始用量をはるかに上回る最高用量の１００ｍｇ／ｋｇ／週と決定された。
【０４２０】
重篤なサイトカイン放出の可能性：スーパーアゴニストＴＧＮ１４１２について観察されるように、過剰のサイトカイン応答を誘導する抗体１０６〜２２２の可能性を評価するために、いくつかの調査を行った。in vitroおよびex vivoのデータは、ＯＸ４０が、Ｔ細胞のわずかな割合、すなわち、リンパ節および脾臓等の血液および組織における直近で活性化されたエフェクターおよび調節性Ｔ細胞上でのみ発現されることを示す。さらに、ＴＣＲおよびＣＤ２８経路を介した刺激は、ＯＸ４０アゴニズムを伴う最適なＴ細胞活性化のために必要とされる。サイトカイン放出を誘導するための抗体１０６〜２２２の可能性を評価するために、一連の条件をin vitroで調べた。いくつかのアッセイでは、サイトカイン放出の証拠は観察されなかった。しかしながら、予め活性化されたＣＤ４＋Ｔ細胞に固定された抗体１０６〜２２２を用いる最も感度の高いアッセイ条件下では、サイトカイン産生（ＩＬ−２、ＩＦＮγおよび腫瘍壊死因子α［ＴＮＦ−α］）の増加が観察された。反復投与サル毒性試験（０．０３〜１００ｍｇ／ｋｇの用量）およびＣＴ２６マウス腫瘍モデルにおけるin vivoサイトカインモニタリングは、過剰なサイトカイン放出を示さなかった。これらのデータは、抗体１０６〜２２２がスーパーアゴニストではなく、重篤なサイトカイン放出症候群（ｓＣＲＳ）の可能性が低いことを示唆している。
【０４２１】
ＭＡＢＥＬ判定：ＭＡＢＥＬ評価は、初代ヒト標的細胞とのin vitro結合実験により特徴づけられる受容体占有率に基づく。受容体占有は、標的細胞における抗体１０６〜２２２シグナル伝達の一般的特徴付けを提供し、また、抗体１０６〜２２２の個々の生物学的効果は、対象の安全性への影響に関してまだ優先順位付けされていないので、生物活性の代用として受容体占有を使用することは適切である。抗体１０６〜２２２のそのリガンドおよび標的細胞への結合は、細胞活性化およびＯＸ４０発現の程度に応じて異なる結合係数を生じるいくつかの実験において特徴付けられた。
【０４２２】
血液中のＯＸ４０発現は、直近で活性化されたＣＤ４＋およびＣＤ８＋細胞の小さなサブセットに限定されている［Croft, 2010］。ex vivo研究では、健康なボランティアからのヒト血液またはＰＢＭＣ培養物中のＯＸ４０＋Ｔ細胞の頻度は＜１％の範囲であった。また癌患者では、腫瘍部位および排液リンパ節と比較して、末梢血においてＯＸ４０の発現が低かった［Vetto, 1997］。これらの知見に基づいて、低いが定量可能なレベルのＯＸ４０結合を示した非刺激ヒト全血結合アッセイは、末梢血におけるＯＸ４０応答の最も代表的なものと考えられ、ＭＡＢＥＬを決定するために選択された。抗体１０６〜２２２は、１．４５μｇ／ｍＬのＥＣ５０値（４人のドナーに由来するプールされたデータ）で濃度依存的に全血中のリンパ球に結合することが示された。最初の０．００３ｍｇ／ｋｇ用量について予測される０．０７μｇ／ｍＬのＣｍａｘを用いて、ヒト全血におけるリンパ球への結合に基づいて５％の受容体占有率が予測される（この実験における１０％受容体占有に対応するＭＡＢＥＬ用量は０．００７ｍｇ／ｋｇである）。および以下の受容体占有率の計算では、遊離および総抗体１０６〜２２２の間の差異は無視できると仮定していることに留意されたい、すなわち受容体占有率＝Ｃｍａｘ／（ＥＣ５０＋Ｃｍａｘ）である。このアプローチは、特定のレベルの標的発現を仮定するアプローチと比較して、より高い受容体占有率およびより保存的な用量推定値をもたらす。
【０４２３】
特定の組織におけるＯＸ４０発現は、末梢血で観察されるよりも高くなり得る；例えば、脾臓において、さらには腫瘍の微環境下においてである。通常のカニクイザルでは、抗体１０６〜２２２が良好に許容され、ＯＸ４０＋リンパ球の２〜３０％の頻度がリンパ組織（脾臓）で検出された。癌患者の腫瘍および排液リンパ節では、活性化ＣＤ４＋／ＯＸ４０＋Ｔ細胞の頻度は、末梢血の０％と比較して、腫瘍および排出リンパ節試料で３０％までであると報告されている［Vetto, 1997］。従って、細胞が活性化され、ＯＸ４０発現が高度にアップレギュレートされる刺激ＯＸ４０結合実験からのデータは、腫瘍および排液リンパ節組織における抗体１０６〜２２２に対するＯＸ４０応答のより代表的なものであると予想される。刺激されたＰＢＭＣについては、最大半分の結合が典型的には０．１μｇ／ｍＬ〜０．３μｇ／ｍＬの間で達成され、同様に、抗体１０６〜２２２は０．１９μｇ／ｍＬの平均ＥＣ５０値で活性化ヒトＣＤ４＋Ｔ細胞に結合した。末梢組織におけるモノクローナル抗体濃度は、血清中の時間適合濃度よりも実質的に低いと予想される［Tabrizi, 2010；Shah, 2013］。所定の腫瘍組織に対して２５％の抗体生体分布係数［Shah, 2013］を仮定すると、ピーク濃度は、刺激されたPBMCまたはＣＤ４＋Ｔ細胞アッセイについて０．２μｇ／ｍＬの結合ＥＣ５０を使用した場合、８％以下の受容体占有率をもたらす≦０．０１８μｇ／ｍＬであると予想される。末梢血中の０．０７μｇ／ｍＬのＣｍａｘに０．２μｇ／ｍＬの刺激された結合ＥＣ５０を適用すると、２６％の予測受容体占有率が得られる。しかしながら、この予測は、刺激されたアッセイが患者の血液中で予想されるよりもはるかに大きな細胞活性化度を有するため、臨床的なＯＸ４０応答の代表とはみなされない。
【０４２４】
要約すると、０．００３ｍｇ／ｋｇの開始用量は、血液中（刺激されていない結合実験に基づく）、ならびに腫瘍組織および排出リンパ節（刺激された結合実験に基づく）において、ＯＸ４０受容体の１０％未満の占有率をもたらすと想定され、一般に、免疫アゴニストに対する受容体関与の安全なレベルが想定される。
【０４２５】
ＯＸ４０アゴニズムの臨床経験：ＭＥＤＩ６４６９の臨床経験は、０．１〜２ｍｇ／ｋｇの抗体を単一サイクルで投与された対象において、サイトカイン放出症候群（ＣＲＳ）または他の重度の毒性を示さなかった［Curti, 2013］。ＭＥＤＩ６４６９は、０．１、０．４および２ｍｇ／ｋｇの用量レベルの単一サイクルの有効性に有意な用量依存性の差を示さなかった。ＭＥＤＩ６４６９投与に応答したＫｉ−６７発現の変化によって測定されたＴ細胞増殖の刺激によって定義される最大生物活性は、０．４ｍｇ／ｋｇ用量レベルで達成された。ＥＬＩＳＡ［Curti, 2013］によって測定される結合についてのＥＣ５０が０．０４８μｇ／ｍＬである場合、ＭＥＤＩ６４６９の効力は、抗体１０６〜２２２の効力に匹敵する（またはおそらく高い）と考えられる。Ｃｍａｘと結合を予測するために、上記と同じ方法を用いて、０．０４８μｇ／ｍＬの結合定数を有する開始用量０．１ｍｇ／ｋｇのＭＥＤＩ６４６９［Curti, 2013］は、Ｃｍａｘでの中心循環において９８％の予測受容体占有率をもたらし、０．００３ｍｇ／ｋｇの抗体１０６〜２２２の開始用量がさらに支持された。
【０４２６】
臨床的利益の可能性：ＯＸ４０経路を作動させる効果は、マウスＯＸ４０に対する代用ｍＡｂである抗ＯＸ８６抗体で評価した。ＣＴ２６マウス結腸癌モデルでは、最も感度の高い実験において、１マウス当たり５μｇという低い用量で強い効力が観察された（図１３ｂ）。抗ＯＸ８６と抗体１０６〜２２２との間の効力が同様であると仮定し、全身クリアランスについて０．６７（体表面正規化）または０．７５（４分の１パワー測定（quarter power scaling））の相対成長率指数を有する測定アプローチに基づくクリアランスを用い、マウスおよびヒトの体重０．０２５ｋｇおよび７０ｋｇをそれぞれ用いると、ＨＥＤはＡＵＣが有効性を促進すると推測される０．０１５または０．０２７ｍｇ／ｋｇであると推定される。Ｃｍａｘが有効性を促進し、分配ベースの測定アプローチの量を使用すると仮定すると、ＨＥＤは分布体積に対して１の相対成長率であると推測される０．２ｍｇ／ｋｇであると推測される。従って、開始用量は、対象における予測される治療用量範囲の下限に位置すると予測される。
【０４２７】
投与頻度：ＭＥＤＩ６４６９を主要なバイオマーカーとする臨床研究において、Ｔ細胞におけるＫｉ−６７発現は、最初の投与後約１４日で最大刺激を示した［Curti, 2013］。Ｋｉ−６７刺激は、最初の投与の約２８日後（またはサイクルの最後の投薬の２３日後）に減少した。これらのバイオマーカー変動および標準ＩｇＧ１  ｍＡｂ  ＰＫ（２週間より長い終期排泄半減期）の予測に基づいて、抗体１０６〜２２２についてのＱ３Ｗの投与頻度が選択された。この投与頻度はまた、ラベル当たりＱ３Ｗも投与される計画された組み合わせパートナーであるペムブロリズマブによる投与のための対象の利便性を高める。
【０４２８】
要約すると、試験２０１２１２における抗体１０６〜２２２のＱ３Ｗでの０．００３ｍｇ／ｋｇの投与開始用量は、安全で許容可能であると予想される。対象は、抗体１０６〜２２２投与後の延長された臨床観察、および可能性のある過剰なサイトカイン放出の可能性があるすべての対象をモニターおよび治療するための他の措置を受ける。
【０４２９】
パート２：開始用量
組み合わせのＰＫに影響を与える薬物−薬物相互作用は、抗体１０６〜２２２およびペムブロリズマブについては推測されない。直接免疫刺激剤ではなくチェックポイント阻害剤として、ペムブロリズマブは、抗体１０６〜２２２に応答して過剰なサイトカイン放出の可能性を実質的に増加させるとは予想されないが、特異的な相乗作用を先験的に排除することはできない。ＣＴ２６マウス有効性実験では、試験したすべての用量レベルにおいて、抗ＰＤ−１組み合わせとＯＸ８６単独療法群とで過度の免疫刺激の指標に関する差は認められなかった。単独療法と同様に、マウス１匹当たり５μｇという低いＯＸ８６用量（２００μｇの抗ＰＤ−１マウス相同体と組み合わせて）で強力な有効性が見られ、組み合わせ投与は許容性が良好であった。
【０４３０】
パート２／併用用量−漸増段階のための抗体１０６〜２２２の開始用量は、単独療法の用量増加の間に許容されることが示されている用量より少なくとも２用量レベル低い。この決定は、ペムブロリズマブが添加された場合に、抗体１０６〜２２２の１０倍低い用量が十分な安全性マージンを与えるべきであるという許容に基づいている。
【０４３１】
ペムブロリズマブの投与量は２００ｍｇ  ＩＶ  Ｑ３Ｗである。
【０４３２】
利点：リスクアセスメント
以下のセクションでは、このプロトコルのリスク評価と緩和戦略の概要を説明する。
抗体１０６〜２２２を用いてサルで実施された毒物学研究において、有害作用は観察されなかった。さらに、マウスモデルにおける抗体１０６〜２２２およびラット代用抗体を用いた非臨床データは、ＣＲＳを重要な懸念事項として示唆していない（非臨床モデルの限界が認識されている）。
【０４３３】
他のアゴニスト性抗ＯＸ４０抗体は、重度のサイトカイン放出の形跡なく、対象において従来投与されたきた［Curti, 2013］。ＭＥＤＩ６４６９（現在は、Ｍｅｄｉｍｍｕｎｅ／ＡＺによって開発されているマウスＩｇＧ１  ｍＡｂ）は、一時的なリンパ球減少症およびグレード１／２のインフルエンザ様症状を初期毒性として伴ったが、０．１〜２ｍｇ／ｋｇ（週３回の単回投与）で十分な許容性を示した。抗体１０６〜２２２の提案された開始用量は、ＭＥＤＩ６４６９を用いた研究で投与されたものよりも十分に低い。
【０４３４】
さらに、ＯＸ４０は、ごく一部のＴ細胞、主に直近で活性化されたエフェクターＴ細胞およびＴｒｅｇｓで発現される。これにより、ｓＣＲＳの可能性が大幅に制限される。ＯＸ４０はスーパーアゴニストではなく、最適なＴ細胞活性化のためにＴＣＲおよびＣＤ２８による刺激を必要とする。
【０４３５】
抗体１０６〜２２２の作用機序のために、チェックポイント阻害剤のような他の免疫調節剤に一般に関連する毒性もまた、抗体１０６〜２２２の投与後に生じ得る。しかしながら、これらの毒性は非臨床モデルでは見られなかった。表７は、このプロトコルのリスク評価と緩和戦略を示す。
【０４３６】
【表８】
2018522044.tif 000013
【０４３７】
全体的なメリット：リスクの結論
この研究は、オープンラベルの用量漸増試験であり、この薬剤のＦＴＩＨ試験であり、標準的治療法では耐久性寛解が期待されない再発性／難治性固形腫瘍の対象において実施される。抗体１０６〜２２２はin vivoで非臨床活性を有するが、抗体１０６〜２２２が臨床活性を有するかどうかは不明であるので、抗体１０６〜２２２に起因する個々の対象の有益な効果は不明である。この研究で得られたデータは、より多くの有益な個体を同定するのに役立ち、または抗体１０６〜２２２からの副作用を有する可能性がある。研究参加者は、試験中に行われた医療検査およびスクリーニングの恩恵を受ける可能性がある。
【０４３８】
研究集団および中止基準の選択
包括および除外基準からの偏差は、研究の科学的完全性、規制上の受容性、または対象の安全性を潜在的に危険にする可能性があるため、許可されていない。従って、プロトコルに規定されている基準に準拠することが不可欠である。
【０４３９】
試験対象患者基準
試験に登録できる対象は、次のすべての基準を満たしている必要がある。
１．署名入りの書面によるインフォームド・コンセントを提供する。
２．男性と女性の対象、年齢≧１８歳（同意が得られた時点）。
３．特定の腫瘍タイプに適した標準治療後に進行した、または標準的治療法の効果がなく、非許容性であり、または不適当であるとされた、局所進行性、再発性または転移性固体悪性腫瘍の組織学的文書化。対象は、ケアと治験療法の両方の基準を含む進行性の疾患に対して、５つ以上の先行治療を受けてはならない。標的治療が標準治療である分子変化を有する癌を有する対象は、登録前にその腫瘍タイプについて適切な標的療法を受けるべきである。
４．以下の固形腫瘍を有する対象はスクリーニングの対象である：ＮＳＣＬＣ、ＳＣＣＨＮ、ＲＣＣ、メラノーマ、膀胱癌、ＳＴＳ、ＴＮＢＣおよびＭＳＩ  ＣＲＣ。
５．最初の診断から試験開始までの任意の時点で得られた腫瘍組織の生検。スクリーニングの間に得られた新鮮な生検が好ましいが、新鮮な生検を得ることが実行可能でない場合には、保存腫瘍検体は許容可能である。パート１Ｂおよびパート２Ｂ部については、いずれのアーカイブ腫瘍標本も治験薬を開始してから３ヶ月以内に入手していなければならない。
６．ＲＥＣＩＳＴバージョン１．１ごとの測定可能な疾患。放射線学的評価または写真評価によって測定できない触診可能な病変は、唯一の測定可能な病変として利用されないことがある。
７．東部協力腫瘍学グループ（ＥＣＯＧ）の成績ステータス（ＰＳ）０−１。
８．少なくとも１２週間の平均余命。
９．適切な臓器機能（表８参照）
【０４４０】
【表９】
2018522044.tif 000014
１０．脚ブロックを有する対象についは、Ｆｒｉｄｅｒｉｃｉａの公式に基づいて心拍数に対して補正されたＱＴ持続時間（ＱＴｃＦ）が＜４５０ミリ秒またはＱＴｃＦ＜４８０ミリ秒。
ＱＴｃＦは、Ｆｒｉｄｅｒｉｃｉａの式、機械読み取りまたは手動での過剰読み取りに基づいて心拍数に対して補正されたＱＴ間隔である。
１１．フランスでは、対象は、社会保障カテゴリーの所属者または受益者のいずれかに属している場合のみ、この調査に含める資格がある。
１２．女性対象：妊娠していない（妊娠中の血清β−ヒト絨毛性ゴナドトロピン（β−ｈＣＧ）検査で確認された）、授乳しておらず、以下の条件の少なくとも１つが当てはまる場合、
ａ．非生殖能力は以下のように定義される：
・閉経前の女性で、次のいずれかを有する女性：
・確認された卵管結紮
・両側卵管閉塞の調査確認を伴う確認された子宮鏡下卵管閉塞術
・子宮摘出術
・確認された両側卵巣摘出術
・自閉性無月経の１２ヶ月として定義される閉経後（疑わしい症例では、卵胞刺激ホルモン（ＦＳＨ）と閉経と一致するエストラジオールレベルを有する血液サンプル（確認レベルの検査基準範囲参照））。女性がホルモン補充療法（ＨＲＴ）を受けており、閉経状態が疑わしい場合、研究中にＨＲＴを継続したい場合は、非常に効果的な避妊法の１つを使用する必要がある。そうでなければ、研究登録前に閉経後の状態を確認できるようにＨＲＴを中止しなければならない。
ｂ．生殖能力は、妊娠を回避するための非常に有効な方法のＧＳＫ修正リストの下にリストされている選択肢の１つに従うことに同意する。治験薬の最後の投与と調査訪問の完了。
繁殖可能性雌（ＦＲＰ）の妊娠を避けるための非常に有効な方法のＧＳＫ修正リスト
このリストは、同じ性交渉相手とのＦＲＰ、彼らが好む普通の生活様式である場合、または陰茎−膣の性交から長期間および持続的に禁欲を続けている対象には適用されない。
・製品ラベルに記載されているように、年間１％未満の故障率を示す避妊用の皮下インプラント
・製品ラベルに記載されているように、年率１％未満の故障率を有する子宮内装置または子宮内システム［Hatcher, 2007］
・経口避妊薬、併用またはプロゲストゲン単独［Hatcher, 2007］
・注射可能なプロゲストゲン［Hatcher, 2007］
・避妊用膣リング［Hatcher, 2007］
・経皮避妊パッチ［Hatcher, 2007］
・女性対象が研究に参加する前に精子不全症を記録した男性パートナーの滅菌。この男性はその対象の唯一のパートナーである［Hatcher, 2007］
【０４４１】
これらの許容される避妊方法は、一貫して、正しく、そして製品ラベルに従って使用された場合にのみ有効である。治験責任医師は、対象がこれらの避妊方法を適切に使用する方法を理解できるようにする責任がある。
１３．妊娠可能性のある女性パートナーを持つ男性対象は、治験薬の最初の投与時から治験薬の最後の投与の１２０日後まで、以下の避妊要件を満たさなければならない。
ａ．精子不全の文書化による精管切除
ｂ．以下の避妊オプションのいずれかの男性用コンドーム＋パートナー使用：
・製品ラベルに記載されているように、年間１％未満の故障率を示す避妊用の皮下インプラント［Hatcher, 2007］
・製品ラベルに記載されているように、年率１％未満の故障率を有する子宮内装置または子宮内システム［Hatcher, 2007］
・経口避妊薬、併用またはプロゲストゲン単独［Hatcher, 2007］
・注射可能なプロゲストーゲン［Hatcher, 2007］
・避妊用膣リング［Hatcher, 2007］
・経皮避妊パッチ［Hatcher, 2007］
これらの許容される避妊方法は、一貫して、正しく、そして製品ラベルに従って使用された場合にのみ有効である。治験責任医師は、対象がこれらの避妊方法を適切に使用する方法を理解できるようにする責任がある。
【０４４２】
除外基準
以下の基準のいずれかが該当する場合、対象は本試験に含めることができない。
１．以下の薬剤による前処置（先の治療の最後の投与から、抗体１０６〜２２２の最初の投与まで）：
・ＯＸ４０、ＣＤ２７、ＣＤ１３７（４−１ＢＢ）、ＣＤ３５７（ＧＩＴＲ）を含むＴＮＦＲアゴニスト：いつでも。
・チェックポイント阻害剤（ＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１、ＣＴＬＡ−４阻害剤を含む）：８週間以内。
・化学療法、標的治療、生物学的治療を含むその他の抗癌治療：４週間以内または５半減期のいずれか短い方。ＲＥＣＩＳＴ  バージョン１．１による評価のために、少なくとも１つの照射されていない測定可能な病変が利用可能である場合、以前の放射線療法は許容される。四肢骨骨転移のための緩和放射線療法のための研究薬物の開始の前に少なくとも２週間、胸部、脳または内臓への放射線照射のためには４週間が必要である。
・治験療法：対象が臨床試験に参加し、治験薬を受領した場合：治験薬の３０日以内または半減期（いずれか短い方）。先の治験薬の最後の投与と治験薬の最初の投与の間に、少なくとも１４日間は経過していなければならない。注：薬剤がＴＮＦＲアゴニストまたはチェックポイント阻害剤である場合、上記の除外が優先される。
２．研究薬物の開始から４週間以内に、核因子−κＢリガンド（ＲＡＮＫＬ）阻害剤（例えば、デノスマブ）の受容体活性化剤による前処理。
３．前の同種異系または自己骨髄移植または他の固形器官移植
４．前の治療からの毒性：
・研究治療の中止につながる以前の免疫療法に関連したグレード３の毒性を有する対象は対象外である。
・以前の治療に関連する毒性が≧グレード１（治療法を用いて管理されている脱毛症または内分泌療法を除く）まで解決されていない対象は対象外である
５．以下に記載するものを除く研究中の疾患以外の悪性腫瘍
・対象が無病で２年以上経過した他の悪性腫瘍で、主任研究者およびＧＳＫメディカルモニターの見解では、現在標的とされている悪性腫瘍に対するこの臨床試験の効果の評価に影響を与えないものは、この臨床試験に含めることができる
６．以下のものを除く、中枢神経系（ＣＮＳ）転移：
・ＣＮＳ転移を以前に治療した対象で無症候性であり、治験薬の初回投与の２週間前にステロイドまたは抗発作抑制薬を必要としなかった対象。
注：癌性髄膜炎を有する対象は、臨床的安定性にかかわらず除外される。
７．血液製剤（血小板または赤血球を含む）の輸血またはコロニー刺激因子（顆粒球コロニー刺激因子［Ｇ−ＣＳＦ］、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子［ＧＭ−ＣＳＦ］、組換えエリスロポエチン）が、最初の試験薬の投与の２週間以内に投与された
８．研究治療の最初の投与の４週間前の主要治療。対象は、研究治療を開始する前に、任意の手術（大規模または軽度）および／またはその合併症から完全に回復していなければならない
９．過去２年以内に全身治療（すなわち、疾患改変剤、コルチコステロイドまたは免疫抑制剤の使用）を必要とする能動的自己免疫疾患。置換治療（例えば、副腎または下垂体不全のためのチロキシンまたは生理的コルチコステロイド置換療法等）は、全身治療の一形態とは考えられない
１０．研究治療の初回投与前２８日以内に全身免疫抑制薬の使用を必要とする同時の病状。局所、吸入、または鼻腔内コルチコステロイドを含む内分泌障害またはステロイドの治療のための生理学的用量のコルチコステロイドは、対象が安定した投与量である場合に継続することができる
１１．有効な感染、既知のヒト免疫不全ウイルス感染、またはＢ型肝炎表面抗原またはＣ型肝炎の陽性検査
１２．現在進行中の肝臓または胆道疾患（ギルバート症候群または無症候性胆石、肝転移、または治験責任医師の評価ごとに安定した慢性肝疾患を除く）
注：安定した慢性肝疾患は、腹水、脳症、凝固障害、低アルブミン血症、食道または胃静脈瘤、持続性黄疸、または肝硬変がないことによって一般的に定義されるべきである
１３．既知の薬物またはアルコール乱用
１４．急性憩室炎、炎症性腸疾患、腹腔内膿瘍、または胃腸閉塞の最近の病歴（過去６ヶ月以内）
１５．４週間以内に生ワクチンを投与される
１６．試験治療を開始してから４週間以内のアレルゲン脱感作療法の最近の経歴
１７．他のｍＡｂに対する重度の過敏症の病歴
１８．次のいずれかを含む心血管リスクの履歴または証拠：
・重度の制御不能な心臓不整脈の最近の（過去６ヶ月以内の）履歴、または第２度（タイプＩＩ）または第３度の房室遮断を含む臨床的に有意なＥＣＧ異常の履歴
・入院前の過去６ヶ月以内の心筋症、心筋梗塞、急性冠動脈症候群（不安定狭心症を含む）、冠動脈血管形成術、ステント留置またはバイパス移植が確認される
・ニューヨーク心臓協会機能分類システム（NYHA, 1994）で定義されているうっ血性心不全（クラスＩＩ、ＩＩＩ、またはＩＶ）の記録
・症候性心膜炎の最近の（過去６ヶ月以内）の病歴
１９．特発性肺線維症、肺炎、間質性肺疾患、または組織性肺炎の病歴、または活動性非感染性肺炎の証拠
注：以前の放射線療法および／または治療を必要としない無症候性の放射線誘発性肺炎に関連した肺における放射線照射後の変化は、研究者および医学的モニタによって合意されていれば許される
２０．制御不能の症候性腹水または胸水の最近の病歴（６ヶ月以内）
２１．対象の安全を妨げたり、インフォームドコンセントを得たり、研究手続きを遵守したりする可能性がある、重大な、そして／または不安定な既存の医学的、精神障害または他の状態
２２．例外的にＩＲＢの将来の承認（議長または指名者による）が認められない限り、治験現場にいる直属の家族（例えば、配偶者、親／法定保護者、兄弟姉妹または子供）特定の対象のこの基準に合わせる
【０４４３】
スクリーニングの失敗
スクリーンニング失敗対象の明確な報告を確保し、標準統合報告試験（ＣＯＮＳＯＲＴ）の発行要件を満たし、および規制当局からの問い合わせに対応するためには、スクリーニング失敗情報の最小セットは、人口統計、スクリーニング失敗の詳細、適合基準および任意のＳＡＥを含むことが必要である。
【０４４４】
中止／停止基準
肝化学停止基準のセクションで定義された、肝臓の化学的性質のための基準を止める会議等、疾患の進行（ｉｒＲＥＣＩＳＴによって決定される）、死亡、または許容できない毒性を、次のいずれかが先に発生しない限り対象は、予定の時間の間、試験治療を受ける。さらに、研究治療は以下の理由のために永続的に中止されることもある：
・プロトコルからの偏差
・対象または代理人の請求（対象または代理人による同意の撤回）
・研究者の裁量
・対象の調査の消失
・研究の終了または完了
・＞４９日の注入の遅れを有する対象（すなわち、２名の対象は投与＋７日を失った）には、治療の治験責任者およびスポンサー／メディカルモニターが継続的な治療をサポートする強力な証拠があるに同意しない限り、試験薬を中止する
注意：特定の治療の組み合わせで毒性による研究治療の一つの永続的に中止を必要とする対象は、永続的に（残りのエージェントとの継続的な治療が治療の研究者によって合意されない限り、および／メディカルモニターをスポンサー）の両方の治療を中止しなければならないことの組み合わせで中断の理由を記録しなければならない。治療中止訪問（ＴＤＶ）は、治験薬を中止することを決定してから３０日以内に行わなければならない
・研究治療のさらなる投与を妨げる病気
・投与量および安全管理ガイドライン（安全管理ガイドライン）に記載されている治験薬の中止基準が満たされている
・ＱＴｃＦ停止基準セクションに記載されている基準を満たしている
・臨床劣化セクションの停止規則に記載されている基準を満たしている
【０４４５】
主な理由研究の治療が永続的に中止された場合は、対象の医療記録と電子症例報告書（ｅＣＲＦ）に文書化しなければならない。
【０４４６】
疾病の進行を伴わずに治験治療を永続的に中止するすべての対象は、以下の時期までプロトコルスケジュールに従って疾患進行のために追跡される：
・新しい抗癌治療が開始される
・病気の進行
・死
【０４４７】
ＣＲを有する対象は、最初の画像化がＣＲを示した後、少なくとも４週間は撮像による応答の確認を必要とする。少なくとも６ヶ月間治療され、最初のＣＲが宣言された日を少なくとも２回以上治療したＲＥＣＩＳＴ  １．１について、確認された完全応答を達成した対象に対して、抗体１０６〜２２２および／またはペムブロリズマブの早期中止を検討することができる。
【０４４８】
対象が試験治療から永続的に中断されると、対象は研究治療再開または再チャレンジセクションおよび以下のシナリオに記載されている場合を除き、再治療を許されない。  
【０４４９】
治験責任医師とスポンサー／メディカルモニターとの間の協議の後、ＰＲまたはＣＲの最良の総合的な対応後に進行する対象の再治療は、ケースバイケースで検討することができます。
【０４５０】
試験治療を永続的に中止するすべての対象は、最後の投与日から最低６ヶ月間追跡される。安全性評価のフォローアップ期間は、最後の投与日から最低３ヶ月である。治療後追跡調査期間には、文書化されたＰＤまで１２週間ごとの疾患評価が含まれる。ＰＤに続いて、対象に生存状態を評価するために３ヶ月ごとに接触する。
【０４５１】
対象が毒性のために自発的に治療を中止した場合は、「ＡＥ」がｅＣＲＦの永続的中止の主な理由として記録される。
【０４５２】
試験治療を中止するすべての対象は、時間およびイベント表に指定されているように、中断時および試験後の治療経過観察中に安全性評価を受ける。
【０４５３】
肝化学停止基準
肝化学の中止とモニタリング基準の向上は、対象の安全性を保証し、肝事象の病因を評価するために設計されている（食品医薬品局［ＦＤＡ］前臨床臨床肝臓安全指針と一致する）。
http://www.fda.gov/downloads/Drugs/GuidanceComplianceRegulatoryInformation/Guidances/UCM174090.pdf
【０４５４】
以下の基準のいずれかが満たされている場合は、治験治療を中止する必要がある。
【表１０】
2018522044.tif 000015
【０４５５】
肝毒性の管理に関する追加のガイダンスについては、肝毒性セクションの管理を参照されたい。
【０４５６】
治験の再開または再挑戦
対象が肝化学停止基準を満たしている場合、次の場合を除いて研究治療で対象を再起動／再挑戦されない：
・ＧＳＫメディカルガバナンスの承認が認められている
・必要に応じて、倫理および／またはＩＲＢの承認が得られる
・治療の再開／再挑戦のための別個の同意が対象によって署名される
【０４５７】
ＱＴｃＦ停止基準
・ＱＴｃＦ補正式は、個々の対象ごとに使用して、試験の適格性および中止を決定する必要がある。この式は、対象が登録された後は変更または置換することはできない。
・ＱＴｃＦは、短時間（例えば、５〜１０分）の記録期間にわたって得られた３回のＥＣＧの単一または平均ＱＴｃＦ値に基づくべきである。
【０４５８】
対象が次のいずれかの基準を満たしている場合は、それらを中止する必要がある。
・ＱＴｃＦ＞５００ミリ秒
または
・ＱＴｃＦのベースラインからの変化＞６０ミリ秒
【０４５９】
以下の脚ブロックを持つ対象の場合は、以下の中止基準に従う。
【表１１】
2018522044.tif 000016
【０４６０】
臨床的悪化のための停止規則
蓄積された臨床的証拠は、抗腫瘍免疫応答を活性化する薬剤に対する客観的応答の発生が、数週間または数ヶ月の遅い動態に続く可能性があり、新しい病変または拡大病変の出現を伴う初期の明白な進行が起こるのに対し、特定の指標病変が対抗する（「混合応答」）ことを示唆する。従って、少なくとも４週間後に次の画像評価で進行が確認されるまで、明らかな進行を経験している対象に治療を継続させることは合理的である。これらの考慮事項は、対象が臨床的に悪化しているかどうか、および継続的な治療から何の利益も受けないかどうかについての臨床的判断によってバランスされるべきである。
【０４６１】
このような悪化は、治験責任医師の意見では、疾患の進行に起因する臨床事象の後に起こると評価され、治験継続の継続によって逆転する可能性は低く、そのため治験の恩恵を受けておらず、かつ、支持療法（例えば、ビスホスホネートおよび／または骨誘導性放射線療法、胸腔穿刺、または滲出液を蓄積するための穿刺術）の追加によっては管理することができない。治療を中止する決定は、スポンサーの医療モニターと話し合わなければならない。治験責任医師の意見では、臨床的利益の欠如を示唆する事象の例としては、限定されないが、以下のものが含まれる：
・ベースラインから少なくとも２ポイントのＥＣＯＧ  ＰＳ減少
・以下によって定義されるスケルトン関連のイベント
・癌の関与領域における病理学的骨折
・骨への癌関連手術、および／または
・脊髄または神経根圧縮
・新しいＣＮＳ転移の発生
・新しい抗腫瘍治療の開始が、そのような文書化された臨床事象がなくても、対象にとって有益であるとみなされた設定
【０４６２】
対象と研究の完了
対象は、スクリーニング評価を完了し、少なくとも１回の研究治療を受け、ＴＤＶを受けた場合、または研究を終了するスポンサーの決定時に進行中の研究治療を受けている場合、研究が完了したとみなされる。
【０４６３】
パート１（用量漸増フェーズ）とパート２（拡張コホート）の両方について、完了した対象は、中止／停止基準セクションに記載されている理由で試験治療を中止し、ＴＤＶを完了したか、または研究治療を受けている間に死亡したかの者をいう。
【０４６４】
研究の終わりは最後の対象の最後の訪問として定義される。
【０４６５】
研究治療
研究製品およびその他の研究治療
「研究治療」という用語は、プロトコルデザインごとに対象が投与を受けた製品の任意の組み合わせを記載するために、プロトコル全体を通して使用される。従って、研究治療は、個々の研究治療またはそれらの研究治療の組み合わせを指すことがある。
【０４６６】
抗体１０６〜２２２は、研究者または対象の医学的監督下で、各試験場の対象に静脈内投与される。この試験のパート２では、ペムブロリズマブと併用して投与すると、まず、抗体１０６〜２２２が投与される。管理日時はソース文書に文書化され、ｅＣＲＦに報告される。
【０４６７】
この研究のパート２では、研究者または対象の医学的監督の下で、抗体１０６〜２２２注入の終了後少なくとも１時間および２時間以内に開始する対象に、ペムブロリズマブを静脈内投与する（表９）。管理日時はソース文書に文書化され、ｅＣＲＦに報告される。
【０４６８】
治験責任医師または設計者によって投与される薬物については、試験治療の投与者および試験参加者の同定は、試験治療を実施する人以外の試験現場スタッフのメンバーが投与時に確認する。研究治療投与の特定の時間（例えば、最初の投与のための週の時間；各投与のための１日の時間）は、ＰＫサンプリング時点および研究訪問手順を考慮する必要がある。注入は、管理上の理由のみ（例えば、休日の周りの注入を予定する）のために、計画された治療日の前または後に最大７２時間投与することができる。
【０４６９】
スタディリファレンスマニュアル（ＳＲＭ）には、抗体１０６〜２２２用量の計算、および抗体１０６〜２２２およびペムブロリズマブ注入の両方の調製、およびこれらの注入の投与のための具体的な指示が含まれている。
【０４７０】
【表１２】
2018522044.tif 000017
【０４７１】
治療の割り当て
対象は、研究期間中一貫したままであるユニークな対象番号によって同定される。
【０４７２】
必要なスクリーニング評価がすべて完了すると、資格のある対象は、治験責任医師または許可されたスタッフによって、ＧＳＫ指定登録および投薬注文システムに登録される。
【０４７３】
対象は、スクリーニング評価を完了する順序で（すなわち、研究はランダム化されていない）、治療を研究するように割り当てられる。
【０４７４】
計画された用量調整
投与量および安全管理ガイドライン
このセクションでは、用量変更アルゴリズムを含む明確な安全管理ガイドラインが、下記で治療される対象について提供される：
・抗体１０６〜２２２
・ペムブロリズマブ。
注意：治験責任医師が研究治療を永続的に中止するよう指示された場合、これらの指示は、中止／停止基準セクションで説明されているように必須である。
【０４７５】
利用可能な用量変更ガイドラインの概要を表１０に示す。
【０４７６】
すべてのＡＥは、ＮＣＩ−ＣＴＣＡＥ（バージョン４．０）（http://ctep.cancer.gov）に従って採点される。すべての用量変更および用量変更の理由は、ｅＣＲＦに文書化しなければならない。
【０４７７】
【表１３】
2018522044.tif 000018
【０４７８】
免疫関連有害事象の一般的ガイドライン
ｉｒＡＥは、研究治療の曝露に関連し、病因が不明であり、免疫関連機構と一致する任意の器官の臨床的に重要なＡＥとして定義される。潜在的なｉｒＡＥを暗示する可能性のある有害事象には、特別の注意を払うべきである。ｉｒＡＥは、最初の用量の直後または治療の最後の投与の数ヶ月後に起こり得る。
【０４７９】
ｉｒＡＥの早期承認と治療の開始は、多くのｉｒＡＥがステロイドやその他の免疫抑制剤の使用により可逆的であるため、合併症のリスクを軽減するために重要である［Pardoll, 2012; Weber, 2012］。ｉｒＡＥが疑われる場合、対象は次回訪問を待つのではなく、できるだけ早く研究現場に戻るべきである。新規または悪化したｉｒＡＥを経験した対象は、調査場所でより頻繁に接触および／または評価されるべきである。
【０４８０】
ｉｒＡＥが疑われる場合は、ｉｒＡＥを診断する前に、新生物、感染性、代謝性、毒素、またはその他の病因を排除するための徹底的な評価を行うべきである。免疫関連の毒性の診断を支持するためには、血清学的、免疫学的および組織学的（生検）のデータを考慮する必要があります。可能なｉｒＡＥを調査するときは、適切な医療専門家との相談を考慮する必要がある。
【０４８１】
ｉｒＡＥによって最も頻繁に冒される器官には、急速な再生速度のために皮膚および結腸が含まれる。影響を受けにくい組織は、肺、肝臓、下垂体および甲状腺である。軽度のｉｒＡＥは通常対症療法で治療され、投与の遅延や中止は必要ない。より高度で永続的な低悪性度のｉｒＡＥは、全身性ステロイドが効果的でない場合、全身性ステロイドまたは他の免疫抑制剤（ＴＮＦ遮断薬等）の治療および投与を中断または中止する必要がある。
【０４８２】
免疫関連有害事象の一般原則同定と評価
治験管理の実施前に、治験責任医師は、時間および事象に関する表で説明されるように、対象のＡＥ、付随する薬剤、およびバイタルサイン、検査結果、ＥＣＧ、ＥＣＯＧ  ＰＳ、身体検査所見、応答等の臨床評価結果を考慮し、新しいまたは悪化したｉｒＡＥを監視し、継続的な投与が適切であることを確認する。
【０４８３】
ＡＥＳＩは潜在的な免疫学的病因の事象として定義される。最近、他の免疫調節療法による治療後に報告されたこのような事象には、グレード大腸炎、ブドウ膜炎、肝炎、肺炎、≧グレード３の下痢、内分泌障害、および特異的な皮膚毒性ならびに免疫介在性の他の事象重症筋無力症、非感染性心筋炎、または非感染性心膜炎に限定されている。
【０４８４】
ＡＥＳＩと合致する可能性のある兆候や症状を経験した対象の場合、サイトは直ちにＥメールおよび電話でイベントのＧＳＫメディカルモニターに通知することが強く推奨される。研究者とスポンサー／メディカルモニターとの間の議論の後、ＡＥＳＩの対象となる可能性のある事象の文書化が行われるべきである。免疫学的病因の明確な確認がない場合でも、ＡＥＳＩの資格を得ることができる。これらのイベントの多くは、ＳＡＥとしての資格を得ることもできる。詳細については、ＳＲＭを参照されたい。
【０４８５】
他に特定されていない臨床的に有害な毒物に関する一般ガイドライン
ＡＥＳＩに関する具体的なガイダンスが提供されているが、具体的に記載されていないその他の臨床的に重要な薬物関連毒性が発生し、用量変更を正当化する可能性がある。
【０４８６】
治験責任医師は、用量および安全管理ガイドラインのセクションに記載されているガイドラインに従って、試験治療の中断または永続的な中断が正当なものである可能性のある、グレード３以上の臨床的に重要な非血液学的薬物関連毒性についてＧＳＫメディカルモニターに連絡する必要がある。それ以外の場合、現行のガイドラインの範囲外で個別の議論が必要な症例については、必要に応じてＧＳＫメディカルモニターに連絡して話し合うことが推奨される。
【０４８７】
最後の注入から１２週間以内に毒性が０〜１のグレードに達しない場合は、スポンサーとの協議の上、治験治療を永続的に中止すべきである。治験責任医師とスポンサーの合意により、１２週間後もまだ２年生のＡＥ検査を受けている対象は、無症候性で管理されている場合に限り、治験を継続することができる。
【０４８８】
治験治療の再挑戦で同じＡＥの再発を経験した対象については、ＧＳＫメディカルモニターと治験責任医師の間の相談が行われ、対象が治験を継続すべきかどうかを判断する必要がある。治験治療の再挑戦と同程度またはそれ以上のＳＡＥの再発は、治験治療の永続的な中止をもたらすはずである。
【０４８９】
肝毒性の管理
治療に出現する肝毒性の場合、併用薬物、ウイルス性肝炎および他の感染症、胆管結石症および肝転移ならびに筋炎等の潜在的な寄与因子が調査されるべきである。肝機能障害に寄与している可能性のある肝毒性であることが知られている併用薬は、肝機能の回復を可能にするために、中止されるか代替薬剤で置き換えられるべきである。一般に理解されるように、アルカリホスファターゼまたは胆道損傷の非存在下で、ＡＳＴまたはＡＬＴ＞３ｘＵＬＮおよび付随するビリルビン≧２．０×ＵＬＮ（＞３５％直接ビリルビン）は、有意な肝臓損傷を示唆する。ｅＣＲＦの肝臓事象アルコール摂取形態にアルコール使用を記録する。肝機能障害は、臨床的徴候および症状が肝腫瘍病変の進行を示したとしても、十分に評価されなければならない。潜在的な悪性腫瘍の進行を記録するために、画像検査を行う必要がある。発生時の肝毒性管理ガイドラインを表１１に示す。
【０４９０】
【表１４】
2018522044.tif 000019
2018522044.tif 000020
2018522044.tif 000021
2018522044.tif 000022
【０４９１】
肝臓事象調査評価
・ウイルス性肝炎血清学：Ａ型肝炎ＩｇＭ抗体；Ｂ型肝炎表面抗原およびＢ型肝炎コア抗体（ＩｇＭ）；Ｃ型肝炎ＲＮＡ；サイトメガロウイルスＩｇＭ抗体；エプスタイン−バールウイルスカプシド抗原ＩｇＭ抗体（または利用できない場合は、異好性抗体またはモノスポット試験を行う）。Ｅ型肝炎ＩｇＭ抗体
・定量的Ｂ型肝炎ＤＮＡおよびデルタ型肝炎抗体：試験開始時にＢ型慢性Ｂ型肝炎を有する患者（陽性Ｂ型肝炎表面抗原によって同定されたもの）のみ。肝炎デルタ抗体アッセイが実施できない場合、それは肝炎Ｄ  ＲＮＡウイルス（必要な場合）のポリメラーゼ連鎖反応で置き換えることができる［Le Gal, 2005］。
・ＰＫ分析のための血液試料（最終投与後２８日以内に採取）：血液サンプルを採取する前のＰＫ血液採取日時および試験治療の最終投与日時をｅＣＲＦに記録する。最後の投与の日時が不明な場合は、対象の最善の近似を提供する。最後の用量の日時を近似できない場合、または上記の期間にＰＫサンプルを収集できない場合は、ＰＫサンプルを取得しない。
・血清クレアチンホスホキナーゼ（ＣＰＫ）および乳酸デヒドロゲナーゼ（ＬＤＨ）
・総ビリルビン≧２ｘＵＬＮの場合、分画ビリルビン
・好酸球増多を評価するために、完全な血球数の差を求める
・ＡＥ報告書に肝障害または過敏症の臨床症状の出現または悪化を記録する
・アセトアミノフェン、ハーブ療法、カウンター薬を使用したその他の薬剤を含む、併用薬の報告書に併用薬の使用を記録する
・肝臓事象アルコール摂取事例報告書にアルコール使用を記録する
・ビリルビンまたはＩＮＲ基準の場合：
・抗核抗体、抗平滑筋抗体、１型抗肝臓腎臓ミクロソーム抗体、および定量的全ＩｇＧ（またはガンマグロブリン）
・血清アセトアミノフェン付加物高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）アッセイ（前週のアセトアミノフェン使用の可能性がある、またはそうである可能性のある対象の肝障害へのアセトアミノフェン寄与の可能性を定量化する）
・肝臓疾患を評価する肝臓イメージング（超音波、磁気共鳴、またはコンピュータ断層撮影）および／または肝生検；完全な肝臓イメージングおよび／または肝臓生検ｅＣＲＦフォーム。
【０４９２】
消化器イベントの管理（下痢または大腸炎）
徴候／症状には、下痢、便秘、腹痛、痙攣および／または鼓脹、吐き気および／または嘔吐、発熱を伴ったまたは伴わない便中の血液および／または粘液、直腸出血、腸の穿孔、およびイレウスが含まれる。
【０４９３】
差別的診断：転移性疾患、細菌性または寄生虫性感染症、ウイルス性胃腸炎、または便性白血球、糞便培養物およびクロストリジウム・ディフィシル力価の検査による炎症性腸疾患の最初の兆候等の他の原因を除外するすべての試みが行われるべきである。胃腸イベントのための用量変更指針を表１２に示す。
【０４９４】
【表１５】
2018522044.tif 000023
2018522044.tif 000024
【０４９５】
皮膚毒性の管理
鑑別診断：転移性疾患、感染症、アレルギー性皮膚炎等の他の原因を除外するためのすべての試みが行われるべきである。表１３に、皮膚毒性に関する用量変更のガイドラインを示す。
【０４９６】
【表１６】
2018522044.tif 000025
【０４９７】
内分泌事象の管理
徴候／症状には、疲労、衰弱、頭痛、精神状態および／または行動変化、発熱、視力障害、寒冷不耐性、腹痛、異常な排便習慣、食欲不振、悪心および／または嘔吐、および低血圧が含まれる。内分泌事象には、副腎不全、甲状腺機能低下症、下垂体炎、下垂体機能低下症、甲状腺機能低下症、甲状腺疾患、および甲状腺炎のＡＥの項が含まれることがある。
【０４９８】
内分泌事象の用量変更ガイドラインを表１４に示す。
【表１７】
2018522044.tif 000026
【０４９９】
１．１．１．１．肺炎の管理
兆候／症状には、呼吸困難、乾咳、喀血、発熱、胸痛および／または緊張、異常呼吸音、および疲労が含まれ得るが、これらに限定されない。症状が新たな心臓異常または悪化する心臓異常を示している場合は、追加の検査および／または心臓病の診察を考慮する必要がある。肺炎事象には、肺炎、間質性肺疾患、急性間質性肺炎等のＡＥの用語が含まれる。
【０５００】
症状が新たな心臓異常または悪化する心臓異常を示している場合は、追加の検査および／または心臓病の診察を考慮する必要がある。
【０５０１】
鑑別診断：転移性疾患や細菌やウイルス感染等の他の原因を除外するためのすべての試みが行われるべきである。肺炎の診断が疑われる対象は、治療関連肺炎が除外されるまで、以下のガイダンスに従って管理することが重要である。潜在的な感染病因と肺炎の両方の治療を並行して行うことが正当である。ステロイド治療による疑いのある肺炎の治療の管理は、抗生物質の治療試験では遅らされるべきではない。代替的な診断が確立された場合、対象は以下のような管理を必要としない。ＡＥは病因にかかわらず報告されるべきである。肺炎の用量変更のガイドラインを表１５に示す。
【０５０２】
【表１８】
2018522044.tif 000027
【０５０３】
１．１．１．２．血液事象の管理
血液学的事象の用量変更ガイダンスを表１６に示す。
【表１９】
2018522044.tif 000028
【０５０４】
ぶどう膜炎／虹彩炎
転移性疾患、感染症または他の眼疾患（例えば、緑内障または白内障）等の他の原因を除外するために、すべての試みを行うべきである。しかしながら、ＡＥは病因に関係なく報告されるべきである。ブドウ膜炎／虹彩炎の用量変更ガイドラインを表１７に示す。
【０５０５】
【表２０】
2018522044.tif 000029
【０５０６】
輸液反応または重度のサイトカイン放出症候群（ｓＣＲＳ）の管理
輸液反応は、ｍＡｂの投与に関連する十分に文書化されたＡＥである。注入反応は、典型的には、薬物注入開始後３０分〜２時間以内に発症するが、症状は４８時間まで遅延することがある。輸液反応の発生率はｍＡｂ剤によって異なり、ＩｇＥ依存性アナフィラキシーおよび非ＩｇＥ依存性アナフィラキシー様過敏症の両方を含む輸液関連反応を引き起こすことが知られている複数のメカニズムがある。サイトカイン放出症候群であり、重篤な場合、サイトカイン「ストーム」は、注入反応に伴う免疫系活性化の後遺症として同定されている。
【０５０７】
輸液反応
輸液反応は体内の臓器系に影響を与える可能性がある。ほとんどが重度で軽度であるが、重度で致死的な反応も起こる。グループとして、注入反応（サイトカイン媒介性およびアレルギー性の両方を含む）は、通常、薬物注入の間、または薬物注入の数時間内に起こる。場合によっては、投与後１〜２日で反応が起こることがある。化学療法投与中の有害反応を評価するためのＮＣＩ−ＣＴＣＡＥ（バージョン４．０）は、輸液反応の重症度を評価し、アレルギー反応およびアナフィラキシーのための別の評価尺度を評価するためのスケールを有する。これらの別個の評価尺度の使用は、研究目的のために注入反応の性質を分類するのに有用であり得るが、対象がアレルギー性の注入反応または非アレルギー性の注入反応を有するかどうかは明らかではないため、それらは臨床ケアには有用ではない。
【０５０８】
臨床的な輸液反応は、潮紅、かゆみ、蕁麻疹および／または血管浮腫、反復性咳、急性鼻詰まり、息切れ、胸部圧迫、喘鳴、咽喉閉鎖または窒息感、および／または声質、脱力、頻脈（または頻度は低いものの除脈）、低血圧、高血圧、および／または意識消失、吐き気、嘔吐、腹部痙攣、および／または下痢、切迫した破滅の感覚、トンネル視、めまいおよび／または発作、重度の背中、胸部もしくは骨盤の痛みを示す。
【０５０９】
サイトカイン放出症候群
サイトカイン関連毒性（ＣＲＳとしても知られる）は、強い免疫活性化の結果として生じる非抗原特異的毒性である。現代の免疫療法を使用して臨床的利益を媒介するために典型的に必要とされる免疫活性化の規模は、より自然な環境で生じる免疫活性化のレベルを上回る。免疫療法がより強力になるにつれて、ＣＲＳはますます認識されるようになってきている。
【０５１０】
ＣＲＳに伴う症状および症状の重症度は大きく異なり、管理はこれらの対象の間の条件によって複雑になる可能性がある。発熱は特徴的であり、ＣＲＳの多くの特徴は感染を模倣する。対象が４０℃を超える温度を経験することは珍しいことではない。
【０５１１】
潜在的に生命を脅かすＣＲＳの合併症には、心機能障害、成人呼吸窮迫症候群、神経毒性、腎不全および／または肝不全、および播種性血管内凝固が含まれる。特に懸念される心機能障害は急速に発症し、重度であるが、典型的には可逆的である。
【０５１２】
そのＡＥの発生に近い臨床的状況におけるこのＡＥの正確な病因を決定することは困難であり、典型的な注入反応とＣＲＳとを区別することは困難である。これらの事象の臨床的提示には広い共通性があるので、即時治療は病因に関して変化しない。
【０５１３】
これらの事象の根底にある病因をよりよく理解するために、任意の等級の注入反応／ＣＲＳの発生中に血清トリプターゼ、Ｃ反応性タンパク質（ＣＲＰ）、フェリチン、およびサイトカインパネルを描くべきである。血清トリプターゼ、ＣＲＰおよびフェリチンパネルは、ＰＩの指定された地方試験所で実施する必要がある。血清サイトカインパネルは、ＧＳＫ指定研究室で実施される。これらの結果は、表１８に概説されているように、ＡＥの病因を（遡及的ではあるが）理解するのに役立つであろう。
【０５１４】
【表２１】
2018522044.tif 000030
【０５１５】
治験薬の過剰投与による治療
抗体１０６〜２２２過剰摂取
過剰投与は、意図された用量よりも少なくとも５０％多い用量の投与として定義される。過剰摂取の場合、研究者は以下を行うべきである：
・直ちにメディカルモニターに通知する
・ＡＥ／ＳＡＥおよび実験室の異常について少なくとも１３０日間、対象に密接にモニターする
・メディカルモニターによって要求された場合（事案に応じて決定）、研究治療の最終投与日から２８日以内にＰＫ分析のための血漿サンプルを得る
・ｅＣＲＦに過剰投与の量と過剰投与の期間を記録する。
【０５１６】
用量の中断または改変に関する決定は、対象の臨床評価に基づいて、医学的モニターとの協議の下、研究者によって行われる。
【０５１７】
抗体１０６〜２２２には、過剰服用のための特別な解毒剤はない。過剰投与が疑われる場合には、対象の臨床状態によって指示される適切な支持的臨床的ケアを開始すべきである。
【０５１８】
ペムブロリズマブの過剰摂取
ペムブロリズマブの過剰投与は、ペムブロリズマブの１０００ｍｇ以上と定義される。ペムブロリズマブの過剰投与の治療に関する具体的な情報はないん。過剰摂取の場合、対象は毒性の兆候がないか厳密に観察されるべきである。臨床的に指示されていれば、適切な補助療法を行うべきである。
【０５１９】
研究終了後の治療
治験責任医師は、対象の病状の調査後のケアを考慮していることを確認する責任がある。
【０５２０】
試験治療を永続的に中止した後の疾患の進行および／または生存のために追跡されるべき対象の追跡調査については、「中止／停止基準セクションおよび時間および事象の表」セクションを参照のこと。
【０５２１】
併用薬および非薬物療法
対象は、治験治療の最初の投与時から試験の終了時（最終試験訪問）まで、新しい薬物療法を開始する前に治験責任医師に通知するように指示される。試験中に服用された非処方薬およびハーブ製品を含む、併用薬は、ｅＣＲＦに記録される。最低要件は、薬剤名、用量、および投与日を記録することである。さらに、以前のすべての抗癌治療の完全なリストがｅＣＲＦに記録される。
【０５２２】
併用薬に関する質問は、説明のためにＧＳＫメディカルモニターに指示する必要がある。
【０５２３】
将来の変更が許可／禁止薬物リストになされた場合、正式な文書がＧＳＫによって提供され、試験ファイルに保存される。そのような変更は、手紙の形式で調査サイトに伝達される。
【０５２４】
【表２２】
2018522044.tif 000031
2018522044.tif 000032
2018522044.tif 000033
2018522044.tif 000034
2018522044.tif 000035
2018522044.tif 000036
【表２３】
2018522044.tif 000037
2018522044.tif 000038
2018522044.tif 000039
【０５２５】
スクリーニングと重大なベースライン評価
人口統計およびベースライン評価
生年月日、性別、人種、民族性等、次のような人口統計が取り込まれる。
【０５２６】
研究母集団および退院基準の選択セクションに記載された包含／除外基準に関連して、医療／投薬／家族歴を評価する。
【０５２７】
インフォームドコンセントの署名に先立って得られた、対象者の日常的な臨床管理（例えば、血球計数、ＥＣＧ、スキャン等）の一部として実施される手順は、手順がプロトコル定義の基準を満たしていれば、スクリーニングまたはベースライン目的研究の期間内に実施された。
【０５２８】
重要なベースライン評価
心血管病歴／リスク因子（ｅＣＲＦで詳述）はスクリーニング時に評価される。
【０５２９】
標的および非標的病変のベースライン確認
・すべてのベースライン病変評価は、最初の投与の２８日前に行う必要がある。
・１０ｍｍ未満の短軸を有するリンパ節は非病的であると考えられ、記録または追跡すべきではない。
・短軸が１５ｍｍ未満、短軸が１０ｍｍの病理学的リンパ節は、測定不可能とみなされる。
・短軸１５ｍｍの病理学的リンパ節は測定可能と考えられ、標的病変として選択することができる。しかし、他の適切な標的病変が利用可能である場合、リンパ節を標的病変として選択すべきではない。
・臓器あたり最大２病変までの測定可能な病変と、関与するすべての臓器を代表する合計５病変を標的病変として同定し、ベースライン時に記録し測定する必要がある。これらの病変は、それらのサイズ（最も長い直径を有する病変）および正確な反復測定（イメージング技術または臨床的のいずれか）に基づいて選択されるべきである。
注：他の適切な標的病変が利用可能である場合、嚢胞性転移を表すと考えられる嚢胞性病変は、標的病変として選択されるべきではない。
注：以前に照射され、照射後に進行していないと示されていない測定可能な病変は、標的病変として考慮されるべきではない。
・コンピュータ断層撮影法（ＣＴ）または磁気共鳴画像法（ＭＲＩ）によって評価することができる、識別可能な軟部組織成分を有する溶解性骨病変または混合溶解性芽球病変は、測定可能とみなすことができる。骨スキャン、フルオロデオキシグルコース−陽電子放射断層撮影（ＦＤＧ−ＰＥＴ）スキャンまたはＸ線は、骨病変を測定するための適切なイメージング技術とは考えられていない。
・他のすべての病変（または病気の部位）は、非標的として同定されるべきであり、またベースライン時に記録されるべきである。非標的病変は器官別に分類されます。これらの病変の測定は必ずしも必要ではないが、それぞれの有無はフォローアップ中に留意すべきである。
【０５３０】
胸部、腹部、および骨盤のコントラストを有するＣＴスキャン、対象の基礎疾患によって示される他の領域、および触診可能な病変の臨床的疾患評価は、ベースラインで必要とされる。頭頸部癌の対象の場合、頭頸部のＣＴまたはＭＲＩが必要です。各ベースライン後の評価では、これらのスキャンによって特定された疾患部位の評価が必要である。
注：ＣＴスキャンが好ましいが、ＭＲＩはベースライン疾患評価、特に、ベースライン状態を確認するために使用された方法が直接比較を容易にするための治療研究において一貫して使用されるという条件で、ＣＴスキャンがコントラストに対するアレルギーのために禁忌である対象に対して、ベースライン疾患評価の代替方法として使用され得る。
【０５３１】
プロトコルごとにＣＲとＰＲの確認が必要である。確認の評価は、応答の基準が最初に満たされてから４〜６週間以内に行われなければならず、次回の予定された評価で実施されることがある。次のプロトコルスケジュール評価の前に確認評価が行われる場合、次のプロトコルスケジュール評価が依然として必要である（例えば、予定されていない評価とは無関係に各プロトコルスケジュール時点で評価が行われなければならない）。
【０５３２】
効能
抗癌活性の評価
病変の評価方法と時期、疾患の評価、疾患の進行および奏効基準はＲＥＣＩＳＴ（バージョン１．１）［Eisenhauer, 2009］およびｉｒＲＥＣＩＳＴ（以下に概説）に従って実施される。ｉｒＲＥＣＩＳＴは治療の決定を決定するために使用され、抗癌活動の主要な分析に使用される。
・病気評価モダリティには、イメージング（例えば、ＣＴスキャン、ＭＲＩ、骨スキャン、単純Ｘ線撮影）および身体検査（触診可能な／表面的な病変について示される）が含まれ得る。
・ベースラインの疾患評価は、抗体１０６〜２２２の最初の投与の４週間前、その後の１２週間ごと、および最終的な試験訪問時に完了する。抗癌活動の評価のスケジュールについては、時間およびイベントの表を参照されたい。
・評価はカレンダースケジュールで実施する必要があり、投与中断／遅延の影響を受けてはならない。
・ベースライン後の評価では、フレキシブルなスケジューリングを可能にするために７日の時間帯が許可されます。対象の研究からの離脱の１２週間前に最後のＸ線撮影評価が行われ、ＰＤが記録されていない場合、研究からの離脱時に疾患評価を得るべきである。
・疾患が応答する対象（ＣＲまたはＰＲのいずれか）は、応答が実証された評価日の４週間後に確認された疾患評価を実施すべきである。治験責任医師の裁量により、より頻繁に疾患評価を行うことができる。
・ベースラインとそれに続く評価との比較可能性を保証するため、同じ評価方法と同じ手法を使用して応答を評価する。
【０５３３】
安全性
すべての安全性評価の計画されたタイムポイントは、時間および事象の表に示されている。
【０５３４】
有害事象および重篤な有害事象
調査官とその指名者は、ＡＥまたはＳＡＥの定義に合致する事象の検出、確認、および報告を担当する。
【０５３５】
有害事象および重大な有害事象情報を収集するための期間および頻度
・ＡＥおよびＳＡＥは、研究治療の開始時から、時間およびイベントテーブルで指定された時点でフォローアップ連絡先まで収集される。
・治験開始前にインフォームドコンセントを得た後に開始する医療事象は、ｅＣＲＦの病歴／現状医療セクションに記録することができる。
・任意のＡＥＳＩおよび重篤な有害事象は、関連するとして（例えば、プロトコルによって義務付けられた手順、侵襲的な検査、または既存の治療法の変更）の参加を検討するために評価またはＧＳＫの製品に関連するまでの治験薬の最終投与から最大９０日後の研究に参加した時間対象同意から記録される。この間に他の抗癌剤を開始する場合、ＡＥＳＩおよびＳＡＥは、最後の投与の３０日後または他の抗癌剤の開始（いずれか遅い方）の開始まで記録する必要がありる。ＳＡＥは２４時間以内にスポンサーに電子媒体または紙で報告する必要がある
・ＡＥＳＩとＳＡＥはすべて記録され、２４時間以内にＧＳＫに報告される。
・研究者は、以前の研究対象で積極的にＡＥまたはＳＡＥを求める義務はない。しかしながら、研究者は、いつでも、死を含めて、任意のＳＡＥを知った場合、対象は研究から排出された後、彼／彼女は合理的に研究処置に関連したイベントを検討したり、参加を検討、研究者は、速やかにＧＳＫに通知する必要がある。
注：ＡＥとＳＡＥの因果関係を記録、評価、評価する方法と、ＳＡＥレポートを完成してＧＳＫに送信する手順。
【０５３６】
各ＥＣＧ検査の前に、対象は約１０分間休息するべきである。対象は準臥位または仰臥位でなければならない。その後のすべてのＥＣＧ検査で同じ位置を使用する必要がある。
【０５３７】
この研究のパート１では、ＥＣＧ測定は特定の時間に３回実施される。他の全ての測定は、単一のＥＣＧ測定として行うことができる。
【０５３８】
試験に参加する間または試験治療の最後の投与から３０日以内に臨床的に有意に異常であると考えられる値を有するすべての検査室検査は、値が正常またはベースラインに戻るまで繰り返されるべきである。この値が治験責任医師が合理的と判断した期間内に正常値に戻らない場合は、病因を特定し、スポンサーが通知する必要がある。
【０５３９】
薬物動態
血液試料収集サンプルコレクション
抗体１０６〜２２２およびペムブロリズマブのＰＫ分析のための血液サンプルは、時間およびイベント表のセクション（表２０）に記載された時点で収集される。各血液サンプル採取の実際の日時は、ｅＣＲＦに記録される。完全なＰＫモニタリングを確実にするために、ＰＫサンプルのタイミングを変更してもよく、および／または追加の時点でＰＫサンプルを取得してもよい。ＰＫ血液サンプルの採取、処理、保管、出荷手順の詳細は、ＳＲＭに記載されている。
【０５４０】
血漿ペムブロリズマブ濃度の分析のために、血漿抗体１０６〜２２２濃度および血液試料（３ｍＬ）の分析のための血液試料（１ｍＬ）を、表２０に示す時間にすべての対象から収集する。
【０５４１】
ＳＲＭには、処理、保管、出荷手順が用意されています。
【０５４２】
血液サンプル分析
抗体１０６〜２２２およびペムブロリズマブについての血漿または血清分析は、ＰＴＳ−ＤＭＰＫ／Ｓｃｉｎｏｖｏ、ＧＳＫまたはMerck Sharp & Dohme Corpの制御下で行われ、その詳細はＳＲＭに含まれる。抗体１０６〜２２２およびペムブロリズマブの濃度は、現在承認されている生物分析法を用いて、それぞれ血漿および血清試料中で測定される。生データは、生物分析サイト（ＳＲＭに詳述）に保管される。血漿または血清を抗体１０６〜２２２およびペムブロリズマブについて分析したら、残りの血漿を他の化合物関連代謝物について分析し、その結果を別個のＰＴＳ−ＤＭＰＫ／Ｓｃｉｎｏｖｏ、ＧＳＫまたはMerck Sharp & Dohmeプロトコルで報告することができる。
【０５４３】
バイオマーカー／薬力学マーカー
血液バイオマーカー
血液試料収集し、フローサイトメトリーによって分析して、ＯＸ４０受容体に対する抗体１０６〜２２２の結合およびリンパ球に対するその薬力学的効果を評価する。ＯＸ４０受容体の占有率は、治療後、選択された治療間隔で、抗体１０６〜２２２の投与前に決定される。Ｔ細胞、Ｂ細胞およびＮＫ細胞の数ならびにＴ細胞のサブセットは、フローサイトメトリーによって全血で同時に評価される。Ｔ細胞の活性化および増殖状態も、同じ試料中で同時に評価される。
【０５４４】
ＰＢＭＣおよび血漿の単離のために血液試料も採取する。血漿サンプルは、Ｔ細胞活性化に関連した循環可溶性因子の分析に使用され、アッセイの利用可能性に応じて可溶性ＯＸ４０および可溶性ＯＸ４０−薬物複合体について分析され得る。ＩＦＮ−γ、ＴＮＦ−α、ＩＬ−２、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ  １０、ＩＬ−８、ＩＬ−１２ｐ７０の存在が含まれるが、  ＩＬ−１３、およびＩＬ−１７、ならびに腫瘍抗原、自己抗原またはウイルス抗原に対する抗体が挙げられる。
【０５４５】
全血から単離されたＰＢＭＣは、骨髄由来サプレッサー細胞、その後の機能解析またはＴ細胞レパートリーの多様性の評価を含むが、これに限定されない免疫調節集団のようなさらなる細胞型のフローサイトメトリーのために保存および保存され、臨床応答との関係、および抗体１０６〜２２２による治療への応答の変化が含まれる。ＰＢＭＣの機能状態は、ＩＦＮ−γ、ＩＬ−２、ＴＮＦα、ＩＬ−１７、グランザイムＢおよびＣＤ１０７ａを含むがこれらに限定されないサイトカインの発現について分析することができる。ＰＢＭＣはまた、免疫関連シグネチャーにおける治療関連変化を決定するために、ゲノム（ＤＮＡ）および遺伝子発現（ＲＮＡまたはタンパク質）改変について評価され得る。
【０５４６】
腫瘍組織
用量拡大コホートの少なくとも１０人の対象における保存腫瘍組織ならびに新鮮な治療前および治療後の生検と、可能であれば用量漸増コホートにおいて、腫瘍浸潤に対する表現型および機能的免疫細胞マーカーの発現についてＩＨＣによって評価するリンパ球（ＴＩＬ）および他の免疫細胞、ならびに腫瘍細胞の表面上の免疫シグナル伝達マーカーを検出し、抗腫瘍免疫応答を理解する。さらに、可能であれば、進行時に得られた腫瘍組織サンプルについて同様の分析を行う。さらに、腫瘍組織を配列決定して、ＴＣＲ多様性を評価し、応答と相関する任意のＤＮＡ／ＲＮＡ／タンパク質変化について評価することもできる。
【０５４７】
他のバイオマーカーは、追加データによって決定されるように評価することができる。
【０５４８】
サンプル採取、処理、保管、出荷の詳細は、ＳＲＭに記載されている。
【０５４９】
遺伝学
遺伝子研究に関する情報は、付録７に含まれている。
【０５５０】
データ管理
この研究では、対象データはＧＳＫ定義のｅＣＲＦに入力され、ＧＳＫまたは被指名者に電子的に送信され、検証データシステム内の他のソースから提供されたデータと組み合わされる。
【０５５１】
臨床データの管理は、該当するＧＳＫ基準およびデータクリーニング手順に従って実施され、データの完全性を保証する。例えば、データのエラーおよび不一致を除去する。
【０５５２】
ＡＥおよび付随する医薬品の用語は、ＭｅｄＤＲＡ（規制活動のための医学辞典）および内部の有効性のある医薬品辞書、ＧＳＫＤｒｕｇを使用してコード化される。
【０５５３】
ｅＣＲＦ（照会および監査証跡を含む）はＧＳＫによって保持され、捜査官のコピーとして維持するために捜査官にコピーが送られる。ＧＳＫポリシーに従って、件名の頭文字は収集されず、ＧＳＫに送信されない。
【０５５４】
データ分析に関する考慮事項
用量漸増コホートでは、バイオマーカーおよびＰＫデータならびに以前のコホートの安全性プロファイルを含む、利用可能なすべてのデータに基づいて用量が段階的に増強される。さらに、継続的再評価法（Ｎ−ＣＲＭ）分析［Neuenschwander, 2008］の推奨用量を計算することがでる。Ｎ−ＣＲＭは、ベイジアン適応型用量−漸増方式の一種である。この方法は完全に適応性があり、各投与量割り当ての時点で利用可能なすべてのＤＬＴ情報を利用する。Fixed and Adaptive Clinical Trial Simulator（ＦＡＣＴＳ）は、Ｎ−ＣＲＭ分析の実施に使用される。試験に登録された全ての対象に関するＤＬＴ情報は、推定された用量−毒性関係を更新し、次回の漸増／脱漸増の決定において３＋３設計に加えて支援情報を提供するために使用される。３＋３アルゴリズムは線量増強の第一の基準として使用されることが期待される。
【０５５５】
拡張段階は、予備効力を評価するように設計されている。安全性、反応および薬力学データを含む蓄積データを評価するために、無益性の評価が行われ、登録が一時停止されることがある。この方法論は、計画されたすべての対象が募集されるまで登録が継続されれば成功の予測確率に基づいている［Lee, 2008］。
【０５５６】
パート１：単剤投与量の拡張については、各コホートに１０人の対象が登録された後、観察された反応の数を使用して、表２１に要約されている規則に従って更なる登録を誘導することができる。
【表２４】
2018522044.tif 000040
【０５５７】
１０人の対象から始まり、最大サンプルサイズが２０であることを考慮すると、この設計は、真の応答率が３０％であるとき、タイプＩエラーレート（Ω）は０．１２８であり、パワーは８８％である。この試行は効能の早期終了を意図したものではなく、成功の予測確率が１％以下であれば無益性を評価するように設計されている。無益性を評価するためのタイプＩの誤り率、出力、および成功の予測確率は、代替仮説の下で、最小および最大のサンプルサイズ、無益性停止率、および最適化基準の選択を明示することから導かれた。Ｂａｙｅｓｉａｎ以前は、ベータ（０．１、０．９）であり、平均応答率１０％の比較的非有益な分布であった。帰無仮説のもとでは、真の応答率が１０％であれば、デザインの予測サンプルサイズは拡張コホートにつき１６人の対象であり、早期終了確率は７３％である。代替仮説のもとでは、真の応答率が３０％であれば、デザインの予測サンプルサイズは拡張コホートにつき２０件であり、早期終了確率は６％である。
【０５５８】
これらの動作特性は、無益性評価の規則が守られていることを前提としている。そうでない場合、試験が２０人の対象が評価されるまで登録を続け、タイプ１の全体的な誤り率は０．１２８から０．１３３に増加し、８８％から８９％に増加する。
【０５５９】
併用コホートの拡張段階の無力評価ルールを作成するための統計的アプローチは、どの腫瘍タイプが研究のために選択されるかによって決定される単独療法フェーズのものと同様である。さらに、ＰＫおよびバイオマーカーデータがコホート間の臨床活動における強い類似性を示唆している場合、ベイジアン階層モデルを使用してコホート間で情報を共有することができる。
【０５６０】
ＣＲＭが推奨する用量漸増レベル、無益性の評価ルール、事後確率はガイドラインに過ぎず、データの全体が意思決定の際にチームによって検討される。
【０５６１】
分析集団
全ての治療された集団は、少なくとも１用量の抗体１０６〜２２２を投与されたすべての対象として定義される。この分析集団に基づいて安全性と抗がん活動を評価する。
【０５６２】
ＰＫ集団は、ＰＫ試料が得られ分析された全処理集団からの全ての対象からなる。
【０５６３】
抗癌活性分析
全ての治療された集団は、抗癌活性分析に使用されます。これはフェーズＩ試験であるため、臨床上の証拠と対応基準に基づいて抗癌活性が評価される。データが正当なものであれば、応答データは線量レベルで要約される。
【０５６４】
データが正当なものである場合は、ＰＦＳと応答期間が計算され、各対象についてリストされる。ＰＦＳは、臨床的または放射線学的評価または原因による死亡のいずれか早い時期に起こった場合に、初回投与日から疾患進行日までの時間として定義される。応答期間は、ＣＲまたはＰＲの最初に記録された証拠から、全体的な応答（すなわち、未確認または確認されたＣＲまたはＰＲ）を達成する対象の間の何らかの原因による疾患の進行または死亡までの時間として定義される。対象が確認された日付のイベントを持っていない場合、最後の適切な評価の日にＰＦＳが検閲される。中止規則に関する詳細は、ＲＡＰに記載されている。データが必要な場合は、Ｋａｐｌａｎ−Ｍｅｉｅｒ法を使用してＰＦＳを要約する。
【０５６５】
２次分析
薬物動態分析
薬物動態パラメータ
抗体１０６〜２２２およびペムブロリズマブのＰＫ分析は、ＧＳＫまたはMerck Sharp & Dohme Corp.の臨床薬理モデリングおよびシミュレーション（ＣＰＭＳ）部門の責任となる。
【０５６６】
薬  物濃度−時間データのＰＫ分析は、ＣＰＭＳ、Quantitative Sciences、ＧＳＫの指示の下で非コンパートメント法によって実施される。データが許可されている場合、次のＰＫパラメータが決定される。
・Ｃｍａｘ
・Ｃｍａｘまでの時間（ｔｍａｘ）
・Ｃｍｉｎ
・血漿濃度−時間曲線（ＡＵＣ（０−ｔ）、ＡＵＣ（０−τ）（反復投与）および／またはＡＵＣ（０−∞）
・見掛け終末相除去速度定数（λｚ）（単回投与）
・見掛け終末相半減期（ｔ１／２）（単回投与）
・親薬物（ＣＬ）の全身クリアランス
【０５６７】
薬物動態データの統計解析
ＰＫパラメータデータの統計分析は、ＧＳＫのＣｌｉｎｉｃａｌ  Ｓｔａｔｉｓｔｉｃｓの責任で行われる。
【０５６８】
薬物濃度−時間データは、各対象について列挙され、コホートによって各時点での記述統計によって要約される。ＰＫパラメータデータは、対象ごとにリストアップされ、コホートによる記述統計によって要約される。
【０５６９】
この研究からのデータは、別個に報告される集団ＰＫ分析のための他の研究からのデータと組み合わせてもよい。
【０５７０】
薬物動態学／薬力学解析
薬力学サンプルから得られたデータは、記述的および／または図式的に要約され、保証されている場合には、探索的ＰＫ／薬力学的分析を行い、用量選択決定を通知する。
【０５７１】
免疫原性分析
血清試料を採取し、抗体１０６〜２２２およびペムブロリズマブに結合する抗体の存在について試験する。抗抗体１０６〜２２２および抗ペムブロリズマブ抗体を試験するための血清サンプルは、時間およびイベントスケジュール（時間およびイベント表セクション）に記載されているように収集される。各血液サンプル収集の実際の日時が記録されます。血液サンプル採取（採取する採取量を含む）、処理、保管、および出荷手順の詳細は、ＳＲＭに記載されている。
【０５７２】
計画された免疫原性サンプルのタイミングおよび数は、適切な安全監視を保証するために、新たに入手可能なデータに基づいて、研究の過程で変更され得る。１）対象の意見で臨床的に重要な過敏症反応の場合、または２）対象が研究から離脱する場合には、対象から血液サンプルを採取し、免疫原性試験を行うべきである。３０日後、１２週後、および２４週後に再発した。研究から早期に離脱した対象については、免疫原性試験は、最後の投与の３０日後、１２週間後、および２４週間後の退院時および追跡時に行われる。
【０５７３】
血清は、段階的試験スキーム：スクリーニング、確認および滴定工程を用いて現在承認されている分析方法を用いて、抗抗体１０６〜２２２抗体の存在について試験される。処置の緊急ＡＤＡの存在は、アッセイのバリデーション中に決定された生体分析的に決定されたカットポイントを用いた抗体１０６〜２２２架橋型ＡＤＡアッセイを用いて決定される。カットポイント以上の値を有する抗体１０６〜２２２を投与した後に採取したサンプルは、治療に出現したＡＤＡ陽性と考えられる。これらのＡＤＡ陽性試料を確証アッセイでさらに評価し、陽性試料が力価の評価によってさらに特徴付けられることを確認する。抗抗体１０６〜２２２抗体試験の結果は、試験終了時に報告され、発生率および力価を含む。投薬された対象における抗体１０６〜２２２に対する抗体の存在または非存在が分析され、次いで記述的および／または図的に提示される。
【０５７４】
その他の分析
翻訳研究の分析
翻訳研究調査の結果は、主要な臨床研究報告書（ＣＳＲ）に報告される可能性がある。すべての比較の対象となるすべてのエンドポイントは、データに応じて記述的および／または図的に要約される。
【０５７５】
翻訳研究の詳細な分析については、ＲＡＰで扱われる。
【０５７６】
新規バイオマーカー分析
これらのバイオマーカー検査の結果は、主要な臨床研究報告とは別に報告されるかもしれない。すべての比較の対象となるすべてのエンドポイントは、データに応じて記述的および／または図的に要約される。
【０５７７】
新規なバイオマーカーをさらに特徴付けるために、追加の探索的分析を行うことができる。
【０５７８】
薬理遺伝学的分析
ＰＧｘ分析の詳細については、付録７およびＰＧｘ  ＲＡＰを参照されたい。
【０５７９】
参考文献
Andrade RJ, Robles M, Lucena MI.  Rechallenge in drug-induced liver injury: the attractive hazard.  Expert Opin Drug Saf. 2009; 8:709-714.  
Betting DJ, Yamada RE, Kafi K, Said J, van Rooijen N, Timmerman JM.  Intratumoral But Not Systemic Delivery of CpG Oligodeoxynucleotide Augments the Efficacy of Anti-CD20 Monoclonal Antibody Therapy Against B Cell Lymphoma.  J Immunother. 2009;32:622-631.
Brennan FR, Morton LD, Spindeldreher S, Kiessling A, Allenspach R, Hey A, et al. Safety and immunotoxicity assessment of immunomodulatory monoclonal antibodies. mAbs. 2010; 2:233-255.  
Bulliard, Y., Jolicoeur, R., Windman, M., Rue, S. M., Ettenberg, S., Knee, D. A., Brogdon, J. L. (2013). Activating Fcγ receptors contribute to the antitumor activities of immunoregulatory receptor-targeting antibodies. The Journal of Experimental Medicine, 210(9), 1685-93. http://doi.org/10.1084/jem.20130573
Bulliard, Y., Jolicoeur, R., Zhang, J., Dranoff, G., Wilson, N. S., & Brogdon, J. L. (2014). OX40 engagement depletes intratumoral Tregs via activating FcγRs, leading to antitumor efficacy. Immunology and Cell Biology. http://doi.org/10.1038/icb.2014.26
Chen DS, Mellman I. Oncology meets immunology: The cancer-immunity cycle. Immunity. 2013; 39:1-10.  
Cheng X, Veverka V, Radhakrishnan A, Waters LC, Muskett FW, Morgan SH, et al. Structure and interactions of the human programmed cell death 1 receptor. J Biol Chem. 2013; 288:11771-11785.  
Croft M. Control of Immunity by theTNFR-Related Molecule OX40 (CD134). Ann Rev Immunol. 2010;28:57-78.
Curti BD, Kovacsovics-Bankowski M, Morris N, Walker E, Chisholm L, Floyd K, et al. OX40 is a potent immune-stimulating target in late-stage cancer patients. Cancer Res. 2013; 73:7189-7198.  
duPre’ SA, Hunter Jr. KW. Murine Mammary carcinoma 4T1 induces a leukemoid reaction with spelnomegaly: Association with tumor-derived growth factors. Exp Mol Pathol. 2007; 82:12-24.
Eisenhauer EA, Therasse P, Bogaerts J, Schwartz LH, Sargent D, Ford R, et al. New response evaluation criteria in solid tumors: Revised RECIST guidelines (version 1.1). Eur J Cancer. 2009; 45:228-247.  
Guo Z, Wang X, Cheng, D, et al.  PD-1 blockade and OX40 triggering synergistically protects against tumor growth in a murine model of ovarian cancer. PLOS ONE.  2014;9:1-10
Hatcher RA, Trussell J, Nelson AL, Cates W Jr, Stewart F, Kowal D, editors. Contraceptive Technology. 19th edition. New York: Ardent Media, 2007; 24. Table 3-2.  
Huang X, Venet F, Wang YL, Lepape A, Yuan Z, Chen Y, et al. PD-1 expression by macrophages plays a pathologic role in altering microbial clearance and the innate inflammatory response to sepsis. Proc Natl Acad Sci U S A. 2009; 106:6303-6308.  
Hunt, CM.  Mitochondrial and immunoallergic injury increase risk of positive drug rechallenge after drug-induced liver injury: A systematic review.  Hepatol. 2010; 52:2216-2222.  
Ito T, Wang YH, Duramad O, Hanabuchi S, Perng OA, et al. OX40 ligand shuts down IL-10-producing regulatory T cells. PNAS USA. 2006;103:13138-43.
James LP, Letzig L, Simpson PM, Capparelli E, Roberts DW, Hinson JA, et al. Pharmacokinetics of acetaminophen-adduct in adults with acetaminophen overdose and acute liver failure. Drug Metab Dispos. 2009; 37:1779-1784.  
Karim R, Jordanova ES, Piersma SJ, Kenter GG, Chen L, Boer JM, et al. Tumor-expressed B7-H1 and B7-DC in relation to PD-1+ T-cell infiltration and survival of patients with cervical carcinoma. Clin Cancer Res. 2009; 15:6341-6347.  
Keir ME, Butte MJ, Freeman GJ, Sharpe AH. PD-1 and its ligands in tolerance and immunity. Ann Rev Immunol. 2008; 26:677-704.  
KEYTRUDA (pembrolizumab) prescribing information. Merck Sharp & Dohme Corporation, Whitehouse Station, New Jersey, USA, September 2014.  
Lazar-Molnar E, Yan Q, Cao E, Ramagopal U, Nathenson SG, Almo SC. Crystal structure of the complex between programmed death-1 (PD-1) and its ligand PD-L2. Proc Natl Acad Sci U S A. 2008; 105:10483-10488.  
Le Gal F, Gordien E, Affolabi D, Hanslik T, Alloui C, Deny P, et al.  Quantification of hepatitis delta virus RNA in serum by consensus real-time pcr indicates different patterns of virological response to interferon therapy in chronically infected patients.  J Clin Microbiol. 2005; 43:2363-2369. 
Lee DW, Gardner R, Porter DL, Louis CU, Ahmed N, Jensen M,et al. Current concepts in the diagnosis and management of cytokine release syndrome. Blood. 2014; 124:188-195.  
Lee JJ, Liu DD. A predictive probability design for Phase II cancer clinical trials. Clin Trials. 2008; 5:93-106.  
Levey AS, Stevens LA, Schmid CH, Zhang Y, Castro AF, Feldman HI, et al.A New Equation to Estimate Glomerular Filtration Rate. Ann Intern Med. 2009; 150:604-612.
Lin DY, Tanaka Y, Iwasaki M, Gittis AG, Su H.-P, Mikami B, et al. The PD-1/PD-L1 complex resembles the antigen-binding Fv domains of antibodies and T cell receptors. Proc Natl Acad Sci U S A. 2008; 105:3011-3016. 
Liu C, Lou Y, Lizee G, Qin H, Liu S, et al. Plasmacytoid dendritic cells induceNKcell-dependent,tumor antigen-specific T cell cross-priming and tumor regression in mice. J Clin Invest. 2008;118:1165-75.
Mall C, Sckisel GD, Mirsoian A, Grossenbacher SK, Murphy WJ. Monoclonal antibody therapies targeting immune checkpoints induce fatal anaphylactic reactions in a murine model of breast cancer. J Immunother Cancer. 2014; 2:P111.
Marabelle, A., Kohrt, H., Sagiv-Barfi, I., Ajami, B., Axtell, R., Zhou, G., Levy, R. (2013). Depleting tumor-specific Tregs at a single site eradicates disseminated tumors. Journal of Clinical Investigation, Jun 3; 123(6), 2447-2463. http://doi.org/10.1172/JCI64859
Maude SL, Barrett D, Teachey DT, Grupp SA. Managing cytokine release syndrome associated with novel T cell-engaging therapies. Cancer J. 2014; 20:119-222.  
Merck Sharp & Dohme Corp.  Investigator’s brochure for pembrolizumab. 19-Dec-2014
Neuenschwander B, Branson M, Gsponer T. Critical aspects of the Bayesian approach to phase I cancer trials. Statistics Med. 2008; 27:2420-2439.  
Nishimura H, Agata Y, Kawasaki A, Sato M, Imamura S, Minato N, et al. Developmentally regulated expression of the PD-1 protein on the surface of double-negative (CD4-CD8-) thymocytes. Int Immunol. 1996; 8:773-780.  
NYHA: The Criteria Committee of the New York Heart Association (NYHA).  Nomenclature and criteria for diagnosis of diseases of the heart and great vessels. 9th Ed. Boston, Mass: Little, Brown & Co.; 1994:253-256.  
Oken, MM, Creech, RH, Tormey, DC, Horton, J, Davis, TE, McFadden, ET, et al. Toxicity and response criteria of the Eastern Cooperative Oncology Group. Am J Clin Oncol. 1982; 5:649-655.  
OPDIVO(R) (nivolumab) prescribing information. Britol-Myers Squibb Company, Princeton, New Jersey, USA, December 2014.  
Ott PA, FS Hodi, Robert C. CTLA-4 and PD-1/PD-L1 blockade: new immunotherapeutic modalities with durable clinical benefit in melanoma patients. Clin Cancer Res. 2013; 19:5300-5309.  
Papay JI, Clines D, Rafi R, Yuen N, Britt SD, Walsh JS, et al.  Drug-induced liver injury following positive drug rechallenge. Regul Tox Pharm. 2009; 54:84-90. 
Pardoll DM. The blockade of immune checkpoints in cancer immunotherapy. Nature Rev Cancer. 2012; 12:252-264.  
Pea-Cruz V, McDonough SM, Diaz-Griffero F, Crum CP, Carrasco RD, Freeman GJ. PD-1 on immature and PD-1 ligands on migratory human Langerhans cells regulate antigen-presenting cell activity. J Invest Dermatol. 2010; 130:2222-2230.  
Pedoeem A, Azoulay-Alfaguter I, Strazza M, Silverman GJ, Mor A.  Programmed death-1 pathway in cancer and autoimmunity. Clin Immunol. 2014; 153:145-52.  
Poole RM. Pembrolizumab: First Global Approval. Drugs. 2014.  
Robert C, Ribas A, Wolchok JD, Hodi FS, Hamid O, Kefford R, et al. Anti-programmed-death-receptor-1 treatment with pembrolizumab in ipilimumab-refractory advanced melanoma: A randomised dose-comparison cohort of a phase 1 trial. Lancet. 2014; 384:1109-1117.  
Sanmamed MF, Chen L. Inducible expression of B7-H1 (PD-L1) and its selective role in tumor site immune modulation. Cancer J. 2014; 20:256-261.  
Schwartz LB. Diagnostic value of tryptase in anaphylaxis and mastocytosis. Immunol Allergy Clin. 2006; 26:451-463.  
Selby, M. J., Engelhardt, J. J., Quigley, M., Henning, K. A., Chen, T., Srinivasan, M., & Korman, A. J. (2013). Anti-CTLA-4 Antibodies of IgG2a Isotype Enhance Antitumor Activity through Reduction of Intratumoral Regulatory T Cells. Cancer Immunology Research. http://doi.org/10.1158/2326-6066.CIR-13-0013
Shah, DK, Betts, AM. Antibody biodistribution coefficients: Inferring tissue concentrations of monoclonal antibodies based on the plasma concentrations in several preclinical species and human. mAbs.2013; 5:2, 297-305.
Sheppard KA, Fitz LJ, Lee JM, Benander C, George JA, Wooters J, et al. PD-1 inhibits T-cell receptor induced phosphorylation of the ZAP70/CD3zeta signalosome and downstream signaling to PKCtheta. FEBS Lett. 2004; 574:37-41.  
Simpson, T. R., Li, F., Montalvo-Ortiz, W., Sepulveda, M. A., Bergerhoff, K., Arce, F., Quezada, S. A. (2013). Fc-dependent depletion of tumor-infiltrating regulatory T cells co-defines the efficacy of anti-CTLA-4 therapy against melanoma. The Journal of Experimental Medicine, 210(9), 1695-710. http://doi.org/10.1084/jem.20130579
Tabrizi,M, Bornstein, GG, Suria H. Biodistribution Mechanisms of Therapeutic Monoclonal Antibodies in Health and Disease. The AAPS Journal. 2010, Vol. 12, No. 1, March 2010.
Taube JM, Anders RA, Young GD, Xu H, Sharma R, McMiller TL, et al. Colocalization of inflammatory response with B7-h1 expression in human melanocytic lesions supports an adaptive resistance mechanism of immune escape. Sci Transl Med. 2012; 4:Article 127ra37.  
TCGA Research Network: http://cancergenome.nih.gov. Accessed August 2014.  
Topalian SL, Drake CG, Pardoll DM. Targeting the PD-1/B7-H1(PD-L1) pathway to activate anti-tumor immunity. Curr Opin Immunol. 2012; 24:207-212. 
Vetto JT, Lum S, Morris A, Sicotte M, Davis J, Lemon M, Weinberg A. Presence of the T-cell activation marker OX-40 on tumor infiltrating lymphocytes and draining lymph node cells from patients with melanoma and head and neck cancers. Am J Surg. 1997 Sep;174(3):258-65 
Wang W, Wang EQ, Balthasar JP. Monoclonal Antibody Pharmacokinetics and Pharmacodynamics. Clin Pharmacol Ther. 2008; 84:548-558.  
Weber JS, Kahler KC, Hauschild A. Management of immune-related adverse events and kinetics of response with ipilimumab. J Clin Oncol. 2012; 30:2691-2697.  
White AL, Chan HT, French RR, Beers SA, Cragg MS, Johnson PW, Glennie MJ.  FcγRΙΙB controls the potency of agonistic anti-TNFR mAbs.  Cancer Immunol Immunother. 2013 May;62(5):941-8.
Wolchok JD, Hoos A, O’Day S, Weber JS, Hamid O, Lebbe C, et al. Guidelines for the Evaluation of Immune Therapy Activity in Solid Tumors: Immune-Related Response Criteria. Clin Cancer Res 2009;15(23): 7412-20.
Wolchok JD, Kluger H, Callahan MK, Postow MA, Rizvi NA, Lesokhin AM, et al. Nivolumab plus ipilimumab in advanced melanoma. N Engl J Med. 2013; 369:122-133.  
Yao S, Chen L. PD-1 as an immune modulatory receptor. Cancer J (United States). 2014; 20:262-264.  
Zamarin D, Postow MA. Immune checkpoint modulation: Rational design of combination strategies. Pharmacol Ther. 2015 Jan 10 pii: S0163-7258(15)00004-2. doi: 10.1016/j.pharmthera.2015.01.003. [Epub ahead of print].  
Zhang X, Schwartz J-CD, Guo X, Bhatia S, Cao E, Lorenz M,et al.  Structural and functional analysis of the costimulatory receptor programmed death-1. Immunity. 2004; 20: 337-347.  
【０５８０】
【表２５】
2018522044.tif 000041
2018522044.tif 000042
2018522044.tif 000043
2018522044.tif 000044
2018522044.tif 000045
【０５８１】
【表２６】
2018522044.tif 000046
【０５８２】
疾患、疾病の進行および反応基準の評価のためのガイドライン−ＲＥＣＩＳＴ  バージョン１．１
評価ガイドライン
次の点に注意を要する：
・病変を評価するためには、該当する場合はコントラストの使用を含む同じ診断方法を使用する必要がある。造影剤は画像取得ガイドラインに従って使用する必要がある。
・すべての測定は、ルーラーまたはキャリパーを使用して、ミリメートル（ｍｍ）単位で行われ、記録されるべきである。
・超音波は、疾患評価の適切な方法ではない。新たな病変が超音波によって同定された場合、ＣＴまたはＭＲＩによる確認が必要である。
・フルオロデオキシグルコース（ＦＤＧ）−ＰＥＴは、一般的に進行中の疾患評価には適していない。しかし、ＦＤＧ−ＰＥＴは、陽性ＦＤＧ−ＰＥＴスキャンがＣＴ／ＭＲＩ上に存在する病気の新しい部位と相関するか、またはベースラインＦＤＧ−ＰＥＴが以前は新しい病変の部位に対して陰性であった病気の新しい部位を確認するのに有用であり得る。ＦＤＧ−ＰＥＴは、すべての可能性のある骨疾患部位の調査を可能にし、ＦＤＧ−ＰＥＴがすべての評価で実施されるという条件付きで、標準的な骨スキャンの代わりに使用することもできる。
・ＰＥＴ／ＣＴが実施された場合、必要な解剖学的カバレッジと規定されたコントラストの使用を含む、診断品質まで実施される場合、ＣＴコンポーネントは標準応答アセスメントのためにのみ使用することができる。評価の方法は、ｅＣＲＦにＣＴとして記載する必要がある。
【０５８３】
臨床検査：臨床的に検出された病変は、それらが表面的である場合（例えば、皮膚の結節）にのみ測定可能と考えられる。皮膚病変の場合、病変の大きさを測定する定規／キャリパーを含むカラー写真による確認が必要である。
【０５８４】
ＣＴおよびＭＲＩ：コントラスト強調ＣＴと５ｍｍ連続スライスが推奨される。測定可能なベースライン病変の最小サイズはスライスの厚さの２倍でなければならず、スライスの厚さが５ｍｍの場合、最小の病変のサイズは１０ｍｍである。ＭＲＩは許容されるが、使用する場合、スキャンシーケンスの技術仕様は、疾患のタイプおよび部位の評価のために最適化され、病変は、同じ撮像検査の使用によって同じ解剖学的平面内で測定されなければならない。可能な限り、同じスキャナを使用する必要がある。
【０５８５】
Ｘ線：一般に、病変の定義が悪いため、標的病変の測定にはＸ線を使用すべきではない。胸部Ｘ線の病変は、曝気された肺によって明確に定義され囲まれていれば、測定可能と考えられる。胸部ＣＴは胸部Ｘ線よりも好ましい。
【０５８６】
脳スキャン：脳スキャンが必要な場合は、強調ＣＴをコントラストするにはコントラスト強調ＭＲＩが好ましい。
【０５８７】
病気の評価のためのガイドライン
測定可能および測定不可能な定義
測定可能な病変：
少なくとも１つの次元（最長の次元）で正確に測定することができる非結節性病変
・スキャンスライスの厚さが５ｍｍ以下の場合、ＭＲＩまたはＣＴで≧１０ｍｍ。スライス厚さが５ｍｍより大きい場合、測定可能な病変の最小サイズは、スライス厚の少なくとも２倍でなければならない（例えば、スライス厚さが１０ｍｍである場合、測定可能な病変は≧２０ｍｍでなければならない）。
・臨床検査または医療写真による１０ｍｍのキャリパー／ルーラー測定。
・胸部Ｘ線による２０ｍｍ。
・さらに、リンパ節は病理学的に拡大し、ＣＴまたはＭＲＩ（スライス厚さは５ｍｍを超えないことが推奨される）によって評価された場合、短軸の１５ｍｍである。ベースラインおよびフォローアップでは、短軸のみが測定される。
【０５８８】
測定不能な病変：
他のすべての病変には、測定不能な病変（最も長い直径＜１０ｍｍまたは病変リンパ節が１０ｍｍ以上、短軸が＜１５ｍｍ未満）、ならびに測定不能な病変（leptomeningeal disease）、腹水、胸膜炎炎症性乳房疾患、皮膚または肺のリンパ節の関与、再現性のある造影技術によって測定不可能な身体検査によって同定された腹部腫瘤／腹部組織塊状部が含まれる。
【０５８９】
測定可能な病気：少なくとも１つの測定可能な病変の存在。放射線学的評価または写真評価によって測定できない触診可能な病変は、唯一の測定可能な病変として利用されないことがある。
【０５９０】
測定不可能な病気：測定できない病変のみが存在する。注：測定不可能な疾患はプロトコルごとに認められていない。
【０５９１】
免疫関連のＲＥＣＩＳＴ応答基準
【表２７】
2018522044.tif 000047
【０５９２】
測定可能な全腫瘍量に基づく抗腫瘍応答
ＲＥＣＩＳＴ  ｖ１．１および免疫関連ＲＥＣＩＳＴ基準［Wolchok, 2009］に基づく修正ＲＥＣＩＳＴ基準については、初期指標および測定可能な新しい病変が考慮される。ベースラインの腫瘍評価では、すべての指標病変（最大５病変合計（および全臓器あたり２病変最大））の測定平面における最長直径（ＳＬＤ）の合計が計算される。注：リンパ節がＳＬＤに含まれている場合は、リンパ節の短軸のみが合計に追加される。短軸は、リンパ節または結節塊の最長直径に対する最も長い垂直直径である。その後の腫瘍評価では、ベースライン指数病変および新たに測定可能な病変（≧１０ｍｍ；臓器あたり５つの新しい病変：５つの新しい皮膚病変および１０の内臓病変）のＳＬＤを合計して腫瘍の総量を提供する：
腫瘍の負担＝ＳＬＤ指標病変＋ＳＬＤ新たな測定可能な病変
【０５９３】
免疫関連ＲＥＣＩＳＴ基準を用いた時点応答評価
評価時点ごとの腫瘍負荷の変化率は、従来のおよび新しい測定可能な病変のサイズおよび成長速度を示す。各腫瘍の評価において、指標および新たな測定可能な病変における応答は、腫瘍負荷の変化（ｉｒＰＤを除外した後）に基づいて定義される。腫瘍負荷の減少は、ベースライン測定値（すなわち、スクリーニング時のすべての指標病変のＳＬＤ）と比較して評価しなければならない。
【０５９４】
非標的病変の評価
非標的病変に対する応答評価の定義は以下の通りである：
・完全反応（ＣＲ）：すべての非標的病変が消滅する。ベースラインにおいて疾患の部位として同定された全てのリンパ節は、非病的（例えば、１０ｍｍ未満の短軸）でなければならない。
・非ＣＲ／非ＰＤ：ベースライン≧１０ｍｍ短軸で疾患部位として同定された１つ以上の非標的病変またはリンパ節の持続性。
・進行性疾患（ＰＤ）：既存の非標的病変の明瞭な進行。
・該当なし（ＮＡ）：ベースライン時に非標的病変はなかった。
・評価不能（ＮＥ）：上記の４つの定義のいずれにも分類できない。
注意：
・測定可能な疾患の存在下では、非標的疾患のみに基づく進行は、標的疾患におけるＳＤまたはＰＲの存在下でさえも、腫瘍の全体的な負担が治療の中止に値するように十分に増加するように、実質的な悪化を必要とする。
・評価スケジュールに基づいて特定の時点で評価されない非標的病変の部位は、応答判定から除外されなければならない（例えば、非標的応答は「評価不能」である必要はない）。
【０５９５】
新しい病変
疾患の進行を示す新しい悪性腫瘍は明白でなければならない。ベースラインでスキャンされていない解剖学的部位のフォローアップで特定された病変は、新たな病変とみなされる。
【０５９６】
どんな不確かな新しい病変も引き続き従うべきである。治療は、次の予定された評価まで治験責任医師の裁量で続けることができる。次の評価で新しい病変が明白であると考えられる場合、進行を記録する必要がある。
【０５９７】
全体的な応答の評価
表２３は、ベースライン時に測定可能な疾患を有する対象の新たな病変の出現の有無にかかわらず、標的病変および非標的病変における腫瘍応答の可能性のある全ての組み合わせについての個々の時点での全体的な応答を示す。
【表２８】
2018522044.tif 000048
【０５９８】
最良の全体的な応答の評価
最良の全体的応答は、治療の開始から疾患の進行／再発まで記録された最良の応答であり、治験責任医師が各時点で応答を評価することに基づいてプログラムによって決定される。
・ＳＤのステータスを付与するには、最初の投与後少なくとも１回、最低限の間隔でＳＤ基準を満たしている必要がある。
・ＳＤの最小時間が満たされない場合、最良の応答は後続の評価に依存する。例えば、ＰＤの評価がＳＤの評価に続き、ＳＤが最小時間要件を満たさない場合、最良の応答はＰＤである。あるいは、最小の時間基準を満たしていないＳＤ評価の後にフォローアップに失われた対象は、評価不能であるとみなされる。
確認基準：
ＰＲまたはＣＲのステータスを付与するには、応答の基準が最初に満たされてから４週間（２８日）以上の間、確認的疾患評価を実施すべきである。
【０５９９】
ＥＣＯＧパフォーマンスステータス
【表２９】
2018522044.tif 000049
【０６００】
付録７：遺伝的研究
遺伝的研究の目的と分析
遺伝学的研究の目的は、遺伝的変異体と以下の関係を調べることである：
・抗体１０６〜２２２またはペムブロリズマブまたはそれに付随する医薬品を含む医薬品への応答。
・ＮＳＣＬＣ、ＳＣＣＨＮ、ＲＣＣ、メラノーマ、膀胱、ＳＴＳ、ＴＮＢＣまたはＭＳＩ  ＣＲＣ、感受性、重症度、および進行および関連状態
【０６０１】
研究が進行中または研究の完了後に、遺伝的データが生成され得る。遺伝学的評価には、集中した候補遺伝子アプローチおよび／またはゲノム全体にわたる多数の遺伝的変異体の検査（全ゲノム解析）が含まれ得る。遺伝学的分析は、研究で収集されたデータを利用し、上記で強調した目的を理解することに限定される。分析は、これらの研究目的を調査するために複数の臨床研究からのデータを用いて行うことができる。
【０６０２】
適切な記述方法および／または統計分析方法が使用される。計画された分析の詳細な説明は、分析の開始前に報告および分析計画（ＲＡＰ）に文書化されます。計画された分析および遺伝子検査の結果は、臨床的ＲＡＰおよび研究報告の一部として、または必要に応じて別個の遺伝学的ＲＡＰおよび報告のいずれかで報告される。
【０６０３】
調査対象母集団
研究に登録された対象はすべて、遺伝子研究に参加することができる。同種骨髄移植を受けた対象は、遺伝子研究から除外されなければならない。
【０６０４】
研究の評価と手順
成功した遺伝子研究の重要な要素は、臨床研究中のサンプルの収集である。先験的仮説が同定されていない場合でも、サンプルの収集は、疾患および医学的応答の変動を理解するのに役立つ将来の遺伝子分析を可能にする可能性がある。
・デオキシリボ核酸（ＤＮＡ）抽出のために６ｍＬの血液サンプルが採取される。対象がすべての適格性要件を満たし、遺伝子研究のためのインフォームドコンセントを提供した後、ベースライン訪問時に血液サンプルを採取する。遺伝子サンプルの採取と出荷の手順は、実験室マニュアルに記載されている。血液サンプルからのＤＮＡは、サンプルの完全性を確認するために品質管理分析を受けることができる。サンプルの品質に関する懸念がある場合、サンプルが破壊される可能性がある。元のサンプルを利用することができないため、重複サンプルが必要でない限り、血液サンプルは１回で採取される。
【０６０５】
遺伝学的試料は、研究における他の試料およびデータを標識するために使用されたのと同じ研究特異的番号で標識（または「コード」）される。この番号は、調査者またはサイトスタッフが追跡するか、対象にリンクすることができる。コード化されたサンプルは、個人的な識別子（名前や社会保障番号など）を持たない。
【０６０６】
サンプルは安全に保存され、最後の対象が試験を完了した後１５年まで保管することができ、ＧＳＫはサンプルを早期に破壊する可能性がある。ＧＳＫまたはＧＳＫを扱う研究者（例えば、他の研究者）は、本プロトコールに記載された目的のために、インフォームドコンセント形式で研究から収集したサンプルのみを使用する。サンプルは、ＧＳＫ医薬品をサポートするためのコンパニオン診断の開発の一部として使用することができる。
【０６０７】
対象はいつでもサンプルを破壊するよう要求することができる。
【０６０８】
インフォームドコンセント
遺伝子研究に参加したくない対象は、依然として研究に参加する可能性がある。遺伝子研究のために血液サンプルを採取する前に、遺伝学的インフォームドコンセントを取得しなければならない。
【０６０９】
研究からの離脱
遺伝学的研究に参加することに同意した対象が、追跡調査に失われた以外の理由で臨床試験を中止した場合、採取された場合、遺伝学的試料に関する以下の選択肢の１つを選択する：
・遺伝学的研究に継続的に参加し、その場合、遺伝的ＤＮＡ試料は保持される
・遺伝子研究への参加を中止し、遺伝子ＤＮＡサンプルを破壊する
【０６１０】
対象が何らかの理由で遺伝学的研究の同意を取り消したり、サンプルの破壊を要請した場合、治験責任医師は適切な文書を完成させ、ＧＳＫで指定された期間内にサンプルの破壊を要請し、部分的な研究の記録は保存される。
【０６１１】
遺伝子型データは、研究中または研究終了後に生成され、研究中に分析されてもよいし、将来の分析のために保存されてもよい。
・対象が遺伝学的研究の同意を撤回し、遺伝子型データが分析されていない場合、それは分析されず、将来の研究に使用されない。
・撤回された同意の時点で分析された遺伝的データは、必要に応じて引き続き保存され、使用される。
【０６１２】
画面およびベースラインの失敗
遺伝子研究のサンプルが採取され、その対象が研究への参加のエントリー基準を満たさないと判定された場合、研究者はその遺伝子サンプルが破壊されることを対象に指示すべきである。このプロセスは、同意およびサンプル調整プロセスの一環として完了するため、このプロセスを完了するために必要な書式はない。この例では、サンプル破壊フォームはサイトファイルに含めることはできない。
【０６１３】
研究成果の提供と対象の遺伝的データの機密性
ＧＳＫは、臨床研究報告書の遺伝学的研究成果を要約するか、別々に研究結果を科学雑誌に掲載することがある。
【０６１４】
ＧＳＫは、インフォームドコンセントと一貫して科学的理解を深めるために、他の科学者と遺伝子研究データを共有することがある。ＧＳＫは、法律で要求されている場合を除き、研究の時点で対象の医療に関係のないことが分かっていない個々の遺伝子型判定結果を対象、家族、保険会社、または雇用者に通知しない。これは、遺伝学的研究から生成された情報は一般的に本質的に暫定的であるため、結果の意義および科学的妥当性は不確定であるという事実に起因する。さらに、研究室で生成されたデータは、臨床医療に含めるための規制要件を満たしていない可能性がある。
【０６１５】
実施例２
Ｃ５７／ＢＬ６株と同系のＭＣ３８結腸腺癌腫瘍モデルを使用して、抗ＯＸ４０アゴニスト抗体と抗ＰＤ−１アンタゴニスト抗体との組み合わせを用いた改善された抗腫瘍活性の証拠を提供した。この実験は、ＭＣ３８腫瘍保有マウスの抗腫瘍応答を、マウス抗マウスＰＤ−１モノクローナル抗体（抗ＰＤ−１）単独療法、ラット抗マウスＯＸ４０単剤療法抗体、クローンＯＸ−８６、（抗ＯＸ４０）およびこれらの２つの薬剤との併用療法を同時に投与する。この研究では、抗ＰＤ−１を５ｍｇ／ｋｇ、腹腔内（ＩＰ）、４サイクルごとに５日ごとに投与した。抗ＯＸ４０は、４サイクルごとに５日ごとに１０ｍｇ／ｋｇ、ＩＰで投与した。アイソタイプコントロールアームは、アイソタイプＩｇＧ１のアデノウイルスヘキソン２５に特異的なマウスモノクローナル抗体（５ｍｇ／ｋｇ、ＩＰ、４サイクル毎に５日ごと）と、ヒトＩＬ−１に特異的なラットモノクローナル抗体１０ｍｇ／ｋｇ、ＩＰで、４サイクルごとに５日毎に投与されるアイソタイプＩｇＧ１の４μｇを含む。平均腫瘍体積が１１５ｍｍ３に達したときに治療を開始した（０日目）。
【０６１６】
図１６に示した結果から明らかなように、ＰＤ−１アンタゴニストおよび抗ＯＸ４０アゴニストとの併用療法の平均抗腫瘍応答は、抗ＯＸ４０単剤治療（ｐ＝０．００００５  １８日目に、抗ＰＤ−１（ｐ＝０．００００５両側ｐ値のＧｅｈａｎ−Ｂｒｅｓｌｏｗノンパラメトリック検定）単剤処置を行った。図１６に示すように、これらの２つの薬剤は、測定可能な腫瘍が残らないように１２回の完全回帰のうち５回、および１８日目の腫瘍容積が０日目の開始腫瘍容積よりも小さい１２回の部分回帰のうちの７回を示した。エージェント治療群。異なる処置に対する応答の統計的有意性は、フィッシャー・エフェクトペアワイズ試験を用いて測定し、その結果を表２４に示す。処置忍容性は、動物の体重を監視することによって評価した。単一剤または併用療法の投与に関連して有意な体重減少はなく、治療が十分に許容されたことを示した。３匹の動物の死亡（アイソタイプ対照群の２匹、組み合わせ群の１匹）は、闘争関連傷に起因するようであり、治療に関連しなかった。
【０６１７】
【表３０】
2018522044.tif 000050
【表３１】
2018522044.tif 000051
【図１】
2018522044.tif 000052
【図２】
2018522044.tif 000053
【図３】
2018522044.tif 000054
【図４】
2018522044.tif 000055
【図５】
2018522044.tif 000056
【図６】
2018522044.tif 000057
【図７】
2018522044.tif 000058
【図８】
2018522044.tif 000059
【図９】
2018522044.tif 000060
【図１０】
2018522044.tif 000061
【図１１】
2018522044.tif 000062
【図１２】
2018522044.tif 000063
【図１３】
2018522044.tif 000064
【図１４】
2018522044.tif 000065
【図１５】
2018522044.tif 000066
【図１６】
2018522044.tif 000067
【国際調査報告】
2018522044.tif 000068
2018522044.tif 000069
2018522044.tif 000070
2018522044.tif 000071