(57)【要約】  本発明は、植物搾汁物由来の細胞外小胞体（ｅｘｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ  ｖｅｓｉｃｌｅｓ）を含むことで、皮膚美白、保湿およびシワ改善などの皮膚改善と、発毛および育毛などによる脱毛防止効果に優れた組成物に関する。【選択図】図７
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
植物搾汁物由来の細胞外小胞体（ｅｘｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ  ｖｅｓｉｃｌｅｓ）を有効成分として含む皮膚改善用化粧料組成物。
【請求項２】
前記細胞外小胞体の平均直径は、１００〜２００ｎｍである、請求項１に記載の皮膚改善用化粧料組成物。
【請求項３】
前記細胞外小胞体は、５〜１０μｇ／ｍｌの濃度で含まれる、請求項１に記載の皮膚改善用化粧料組成物。
【請求項４】
前記植物搾汁物は、植物を撹拌速度が２０〜１００ｒｐｍのスクリューで搾汁して得られたものである、請求項１に記載の皮膚改善用化粧料組成物。
【請求項５】
前記植物は、イネ、コムギ、オオムギ、トウモロコシ、ダイズ、ジャガイモ、コムギ、アズキ、エンバクおよびキビを含む食糧作物類；アラビドプシス、ハクサイ、ダイコン、トウガラシ、ニンニク、ショウガ、イチゴ、トマト、スイカ、キュウリ、キャベツ、マクワウリ、カボチャ、ネギ、タマネギ、アスパラガスおよびニンジンを含む野菜作物類；高麗人参、タバコ、ワタ、ゴマ、サトウキビ、サトウダイコン、エゴマ、ピーナッツおよびアブラナを含む特用作物類；リンゴの木、ナシの木、ナツメの木、モモ、キウイフルーツ、ブドウ、ミカン、カキ、オレンジ、ザボン、スモモ、アンズ、ドラゴンフルーツ、マンゴー、ブルーベリー、アボカドおよびバナナを含む果樹類；バラ、グラジオラス、ガーベラ、カーネーション、キク、ユリおよびチューリップを含む花卉類；およびライグラス、レッドクローバー、オーチャードグラス、アルファルファ、トールフェスクおよびペレニアルライグラスを含む飼料作物類から構成された群より選択される１種以上である、請求項１に記載の皮膚改善用化粧料組成物。
【請求項６】
前記皮膚改善は、皮膚保湿、皮膚美白、シワ改善および老化防止のうちの少なくとも１つである、請求項１に記載の皮膚改善用化粧料組成物。
【請求項７】
植物搾汁物由来の細胞外小胞体（ｅｘｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ  ｖｅｓｉｃｌｅｓ）を有効成分として含む皮膚改善用食品組成物。
【請求項８】
前記細胞外小胞体の平均直径は、１００〜２００ｎｍである、請求項７に記載の皮膚改善用食品組成物。
【請求項９】
前記植物搾汁物は、植物を撹拌速度が２０〜１００ｒｐｍのスクリューで搾汁して得られたものである、請求項７に記載の皮膚改善用食品組成物。
【請求項１０】
植物由来の細胞外小胞体（ｅｘｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ  ｖｅｓｉｃｌｅｓ）を有効成分として含む傷治療用薬学的組成物。
【請求項１１】
前記細胞外小胞体の平均直径は、１００〜２００ｎｍである、請求項１０に記載の傷治療用薬学的組成物。
【請求項１２】
前記細胞外小胞体は、５〜１０μｇ／ｍｌの濃度で含まれる、請求項１０に記載の傷治療用薬学的組成物。
【請求項１３】
前記植物搾汁物は、植物を撹拌速度が２０〜１００ｒｐｍのスクリューで搾汁して得られたものである、請求項１０に記載の傷治療用薬学的組成物。
【請求項１４】
前記植物は、イネ、コムギ、オオムギ、トウモロコシ、ダイズ、ジャガイモ、コムギ、アズキ、エンバクおよびキビを含む食糧作物類；アラビドプシス、ハクサイ、ダイコン、トウガラシ、ニンニク、ショウガ、イチゴ、トマト、スイカ、キュウリ、キャベツ、マクワウリ、カボチャ、ネギ、タマネギ、アスパラガスおよびニンジンを含む野菜作物類；高麗人参、タバコ、ワタ、ゴマ、サトウキビ、サトウダイコン、エゴマ、ピーナッツおよびアブラナを含む特用作物類；リンゴの木、ナシの木、ナツメの木、モモ、キウイフルーツ、ブドウ、ミカン、カキ、オレンジ、ザボン、スモモ、アンズ、ドラゴンフルーツ、マンゴー、ブルーベリー、アボカドおよびバナナを含む果樹類；バラ、グラジオラス、ガーベラ、カーネーション、キク、ユリおよびチューリップを含む花卉類；およびライグラス、レッドクローバー、オーチャードグラス、アルファルファ、トールフェスクおよびペレニアルライグラスを含む飼料作物類から構成された群より選択される１種以上である、請求項１０に記載の傷治療用薬学的組成物。
【請求項１５】
植物搾汁物由来の細胞外小胞体（ｅｘｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ  ｖｅｓｉｃｌｅｓ）を有効成分として含む脱毛予防または治療用薬学的組成物。
【請求項１６】
前記細胞外小胞体の平均直径は、１００〜２００ｎｍである、請求項１５に記載の脱毛予防または治療用薬学的組成物。
【請求項１７】
前記細胞外小胞体は、５〜１０μｇ／ｍｌの濃度で含まれる、請求項１５に記載の脱毛予防または治療用薬学的組成物。
【請求項１８】
前記植物搾汁物は、植物を撹拌速度が２０〜１００ｒｐｍのスクリューで搾汁して得られたものである、請求項１５に記載の脱毛予防または治療用薬学的組成物。
【請求項１９】
前記植物は、イネ、コムギ、オオムギ、トウモロコシ、ダイズ、ジャガイモ、コムギ、アズキ、エンバクおよびキビを含む食糧作物類；アラビドプシス、ハクサイ、ダイコン、トウガラシ、ニンニク、ショウガ、イチゴ、トマト、スイカ、キュウリ、キャベツ、マクワウリ、カボチャ、ネギ、タマネギ、アスパラガスおよびニンジンを含む野菜作物類；高麗人参、タバコ、ワタ、ゴマ、サトウキビ、サトウダイコン、エゴマ、ピーナッツおよびアブラナを含む特用作物類；リンゴの木、ナシの木、ナツメの木、モモ、キウイフルーツ、ブドウ、ミカン、カキ、オレンジ、ザボン、スモモ、アンズ、ドラゴンフルーツ、マンゴー、ブルーベリー、アボカドおよびバナナを含む果樹類；バラ、グラジオラス、ガーベラ、カーネーション、キク、ユリおよびチューリップを含む花卉類；およびライグラス、レッドクローバー、オーチャードグラス、アルファルファ、トールフェスクおよびペレニアルライグラスを含む飼料作物類から構成された群より選択される１種以上である、請求項１５に記載の脱毛予防または治療用薬学的組成物。
【請求項２０】
植物搾汁物由来の細胞外小胞体（ｅｘｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ  ｖｅｓｉｃｌｅｓ）を有効成分として含む脱毛改善用化粧料組成物。
【請求項２１】
前記細胞外小胞体の平均直径は、１００〜２００ｎｍである、請求項２０に記載の脱毛改善用化粧料組成物。
【請求項２２】
前記植物搾汁物は、植物を撹拌速度が２０〜１００ｒｐｍのスクリューで搾汁して得られたものである、請求項２０に記載の脱毛改善用化粧料組成物。
【請求項２３】
植物搾汁物由来の細胞外小胞体（ｅｘｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ  ｖｅｓｉｃｌｅｓ）を有効成分として含む脱毛改善用食品組成物。
【請求項２４】
前記細胞外小胞体の平均直径は、１００〜２００ｎｍである、請求項２３に記載の脱毛改善用食品組成物。
【請求項２５】
前記植物搾汁物は、植物を撹拌速度が２０〜１００ｒｐｍのスクリューで搾汁して得られたものである、請求項２３に記載の脱毛改善用食品組成物。
【請求項２６】
スクリューを用いて植物を搾汁して植物搾汁物を得るステップと、
前記植物搾汁物を静置培養するステップと、
培養された植物搾汁物を遠心分離して上澄液を回収するステップと、
前記上澄液を平均気孔サイズが０．１〜１．０μｍの気孔を含む濾過膜で濾過して濾液を回収するステップとを含む、皮膚改善用化粧料組成物の製造方法。
【請求項２７】
前記植物を搾汁するに先立ち、植物を洗浄して不純物を除去するステップをさらに含む、請求項２６に記載の皮膚改善用化粧料組成物の製造方法。
【請求項２８】
前記スクリューは、撹拌速度が２０〜１００ｒｐｍである、請求項２６に記載の皮膚改善用化粧料組成物の製造方法。
【請求項２９】
前記静置培養は、２０〜３０℃で１２〜４８時間行われる、請求項２６に記載の皮膚改善用化粧料組成物の製造方法。
【請求項３０】
前記遠心分離は、１００〜２０，０００ｇで１０〜１２０分間１回以上行われる、請求項２６に記載の皮膚改善用化粧料組成物の製造方法。
【請求項３１】
前記遠心分離は、１００〜５００ｇで１０〜３０分間１次的に行い、１，０００〜２，０００ｇで１０〜３０分間２次的に行った後、５，０００〜２０，０００ｇで３０分〜１時間３次的に行われる、請求項３０に記載の皮膚改善用化粧料組成物の製造方法。
【請求項３２】
前記濾過は、平均気孔サイズが０．２〜０．５μｍの気孔を含む濾過膜を用いて１回以上行われる、請求項２６に記載の皮膚改善用化粧料組成物の製造方法。
【請求項３３】
前記濾過は、平均気孔サイズが０．４〜０．５μｍの気孔を含む濾過膜を用いて１次的に濾過した後、平均気孔サイズが０．２〜０．３μｍの気孔を含む濾過膜を用いて２次的に濾過して行われる、請求項３２に記載の皮膚改善用化粧料組成物の製造方法。
【請求項３４】
スクリューを用いて植物を搾汁して植物搾汁物を得るステップと、
前記植物搾汁物を静置培養するステップと、
培養された植物搾汁物を遠心分離して上澄液を回収するステップと、
前記上澄液を平均気孔サイズが０．１〜１．０μｍの気孔を含む濾過膜で濾過して濾液を回収するステップとを含む、傷治療または傷治療促進用薬学的組成物の製造方法。
【請求項３５】
前記スクリューは、撹拌速度が２０〜１００ｒｐｍである、請求項３４に記載の傷治療または傷治療促進用薬学的組成物の製造方法。
【請求項３６】
スクリューを用いて植物を搾汁して植物搾汁物を得るステップと、
前記植物搾汁物を静置培養するステップと、
培養された植物搾汁物を遠心分離して上澄液を回収するステップと、
前記上澄液を平均気孔サイズが０．１〜１．０μｍの気孔を含む濾過膜で濾過して濾液を回収するステップとを含む、脱毛予防または治療用薬学的組成物の製造方法。
【請求項３７】
前記スクリューは、撹拌速度が２０〜１００ｒｐｍである、請求項３６に記載の脱毛予防または治療用薬学的組成物の製造方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、植物搾汁物由来の細胞外小胞体（ｅｘｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ  ｖｅｓｉｃｌｅｓ）を含むことで、皮膚美白、保湿およびシワ改善などの皮膚改善と、発毛および育毛促進などによる脱毛防止効果に優れた組成物に関する。
【背景技術】
【０００２】
最近、医療技術および公衆衛生の改善に伴い、急速な超高齢化社会が到来している。これによって、生活の質的向上が図られており、若さの維持に対する欲求も増加している。外貌、特に皮膚において最も先に現れる老化を遅延および予防するために、様々な領域で多くの研究が進められている。
【０００３】
一方、シワは皮膚の老化から生じ、老化した皮膚とは、老化の過程に関連する自然的変化の総体である。皮膚の老化は大きく２つに区分されるが、皮膚表面全体において年齢に関連する皮膚機能、構造または形状の変化を示す生理的老化と、紫外線による光老化とに区分される。
【０００４】
皮膚に老化が進むと真皮の変化が著しく現れ、７０歳以降に現れる真皮萎縮は代表的な老化現象である。真皮の変化は、線維芽細胞（Ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔ）の数字とこれらの合成能力の減少によって細胞外基質中の大きい分子量を有する物質の変化で発生する。その具体的な変化は、コラーゲン束の分離、ムコ多糖体の合成減少、コラーゲンと弾力線維（ｅｌａｓｔｉｎ）の数と直径減少、コラーゲンと弾力線維粉砕および血管の膨張などが挙げられる。一般的に、皮膚の水分含有量、コラーゲン含有量および外部環境に対する免疫作用能力など様々な複合的な要因の中でシワの形成に最も大きな影響を及ぼすのは、コラーゲンの生成量とコラーゲンの含有量を減少させるコラーゲン分解酵素であるコラゲナーゼの発現量と活性である。
【０００５】
人間の肌色は、肌内部のメラニン（ｍｅｌａｎｉｎ）の濃度と分布によって決定される。人体皮膚のメラニン細胞で生成されるメラニン色素は、黒い色素と蛋白質の複合形態を有するフェノール系高分子物質であって、紫外線で発生する皮膚損傷を遮断する重要な役割を果たしている。メラニンの生合成には、メラニン細胞に存在するチロシナーゼの作用が最も重要であることが報告されており、チロシナーゼ（ｔｙｒｏｓｉｎａｓｅ）は、アミノ酸の一種であるチロシン（ｔｙｒｏｓｉｎｅ）をメラニン重合体生成の中間産物であるドーパ（ＤＯＰＡ）およびドーパキノン（ｄｏｐａｑｕｉｎｏｎｅ）に変換することにより、皮膚黒化過程に核心的な役割を果たす。
【０００６】
一方、環境汚染、自動車の排気ガスなどによってホルモンの不均衡現象が激しくなっている。これによって脱毛発生率が高くなり、発生年齢も低くなっており、皮膚免疫システムの不釣合いがもたらされ、アトピーと乾癬のような多様な皮膚疾患などが発生している。また、インスタント食品、肉類中心の食生活の変化により、幼い年齢にもかかわらず肥満で苦しめられている人口が急激に増加している。
【０００７】
したがって、美的な次元だけでなく、深刻な社会問題となっている様々な現象、例えば、内因性老化と、紫外線によるシワ発生、シミまたはソバカス、肥満、免疫不均衡および脱毛などのような現象を効果的に解決できる物質の開発が深く研究されている。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
本発明の一つの目的は、安全でありながらも、皮膚保湿、皮膚美白、シワ改善および老化防止などの効果に優れた皮膚改善用組成物を提供しようとする。
【０００９】
本発明の他の目的は、安全でありながらも、傷治療またはその促進効果に優れた組成物を提供しようとする。
【００１０】
本発明のさらに他の目的は、安全でありながらも、発毛および育毛促進効果に優れて脱毛を予防または治療できる組成物を提供しようとする。
【課題を解決するための手段】
【００１１】
皮膚（ｓｋｉｎ）は、表皮（ｅｐｉｄｅｒｍｉｓ）、真皮（ｄｅｒｍｉｓ）および皮下組織（ｓｕｂｃｕｔａｎｅｏｕｓ  ｔｉｓｓｕｅ）からなる。皮膚の外層である表皮は、重層扁平上皮（ｓｔｒａｔｉｆｉｅｄ  ｓｑｕａｍｏｕｓ  ｅｐｉｔｈｅｌｉｕｍ）から構成され、外部環境に対する身体の保護障壁として作用する。表皮は、外から、角質層（ｓｔｒａｔｕｍ  ｃｏｒｎｅｕｍ）、透明層（ｓｔｒａｔｕｍ  ｌｕｃｉｄｕｍ）、顆粒層（ｓｔｒａｔｕｍ  ｇｒａｎｕｌｏｓｕｍ）、有棘層（ｓｔｒａｔｕｍ  ｓｐｉｎｏｓｕｍ）および基底層（ｓｔｒａｔｕｍ  ｂａｓａｌｅ）に分けられる。真皮は、表皮と皮下組織（ｓｕｂｃｕｔａｎｅｏｕｓ  ｔｉｓｓｕｅ）との間の層であって、乳頭層（ｐａｐｉｌｌａｒｙ  ｄｅｒｍｉｓ）および網状層（ｒｅｔｉｃｕｌａｒ  ｄｅｒｍｉｓ）に分けられ、表皮にはない血管、コラーゲン、エラスチン線維、毛孔、立毛筋、皮脂腺、汗腺、様々な感覚神経、線維芽細胞および大食細胞などが存在し、皮膚中の最も多い部位を占める。
【００１２】
真皮は主にコラーゲンとエラスチン線維とからなるが、これらは皮膚を支持する役割を果たす。したがって、このような真皮に問題が発生するとシワが生じ、皮膚弾力がなくなって皮膚老化が進む。コラーゲンは、皮膚再生、皮膚含水率、傷治癒およびシワ改善などにおいて最も重要な役割を担うことが知られており、線維芽細胞から生成される。コラーゲンは、水分を多量含有できる機能があって真皮に水分を供給する役割を果たすが、老化するとコラーゲンの水分含有機能が低下してシワが増える。コラーゲンはさらに、傷ができた時、線維芽細胞の持続的なコラーゲン生成で傷部位を埋めて傷治癒の作用もする。
【００１３】
また、現代社会は、多くのストレスによって生体が徐々に損傷を受けており、これによる毛髪損失が大きな社会懸案となっている。毛髪損失は、毛髪成長の不振と毛根細胞の成長促進をする成長因子の欠乏など多様な因子によって誘発される。
【００１４】
このような脱毛は、精神的ストレスで生活の質を低下させ、対人関係や社会生活に多くの支障をきたす。社会生活において、外貌から漂うイメージは非常に印象的に作用し、その外貌の重要性が自尊感や社会生活の見えぬ活力素になるという点で、脱毛の原因と治療への関心がますます高まっている。
【００１５】
本発明の発明者らは、植物搾汁物由来の細胞外小胞体は、皮膚透過度に優れ、皮膚への吸収時、傷治療、皮膚保湿、皮膚美白、シワ改善および老化防止などの効果に優れ、その他、発毛および育毛効果にも優れていることを見出して、本発明に至るようになった。
【００１６】
本発明の一実施形態によれば、植物搾汁物由来の細胞外小胞体（ｅｘｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ  ｖｅｓｉｃｌｅｓ）を有効成分として含む皮膚改善用化粧料組成物を提供する。より好ましくは、前記細胞外小胞体は、５〜１０μｇ／ｍｌの濃度で含まれる。
【００１７】
本発明において、前記植物搾汁物は、植物を撹拌速度が２０〜１００ｒｐｍのスクリューで搾汁して得られたものが、皮膚改善効果に優れた細胞外小胞体を多量含んでいて、好ましい。
【００１８】
本発明の他の実施形態によれば、植物搾汁物由来の細胞外小胞体を有効成分として含む皮膚改善用食品組成物を提供する。より好ましくは、前記細胞外小胞体は、５〜１０μｇ／ｍｌの濃度で含まれる。
【００１９】
本発明において、前記植物搾汁物は、植物を撹拌速度が２０〜１００ｒｐｍのスクリューで搾汁して得られたものが、皮膚改善効果に優れた細胞外小胞体を多量含んでいて、好ましい。
【００２０】
本発明のさらに他の実施形態によれば、植物搾汁物由来の細胞外小胞体を有効成分として含む傷治療用薬学的組成物を提供する。より好ましくは、前記細胞外小胞体は、５〜１０μｇ／ｍｌの濃度で含まれる。
【００２１】
本発明において、前記植物搾汁物は、植物を撹拌速度が２０〜１００ｒｐｍのスクリューで搾汁して得られたものが、傷治療効果に優れた細胞外小胞体を多量含んでいて、好ましい。
【００２２】
本発明のさらに他の実施形態によれば、植物搾汁物由来の細胞外小胞体を有効成分として含む脱毛予防または治療用薬学的組成物を提供する。より好ましくは、前記細胞外小胞体は、５〜１０μｇ／ｍｌの濃度で含まれる。
【００２３】
本発明において、前記植物搾汁物は、植物を撹拌速度が２０〜１００ｒｐｍのスクリューで搾汁して得られたものを使用するのが、発毛および育毛効果に優れた細胞外小胞体を多量含んでいて、好ましい。
【００２４】
本発明のさらに他の実施形態によれば、植物由来の細胞外小胞体を有効成分として含む脱毛改善用化粧料組成物を提供する。より好ましくは、前記細胞外小胞体は、５〜１０μｇ／ｍｌの濃度で含まれる。
【００２５】
本発明において、前記植物搾汁物は、植物を撹拌速度が２０〜１００ｒｐｍのスクリューで搾汁して得られたものが、発毛および育毛効果に優れた細胞外小胞体を多量含んでいて、好ましい。
【００２６】
本発明のさらに他の実施形態によれば、植物由来の細胞外小胞体を有効成分として含む脱毛改善用食品組成物を提供する。より好ましくは、前記細胞外小胞体は、５〜１０μｇ／ｍｌの濃度で含まれる。
【００２７】
本発明において、前記植物搾汁物は、植物を撹拌速度が２０〜１００ｒｐｍのスクリューで搾汁して得られたものが、発毛および育毛効果に優れた細胞外小胞体を多量含んでいて、好ましい。
【００２８】
本発明のさらに他の実施形態によれば、スクリューを用いて植物を搾汁して植物搾汁物を得るステップと、前記植物搾汁物を静置培養するステップと、培養された植物搾汁物を遠心分離して上澄液を回収するステップと、前記上澄液を平均気孔サイズが０．１〜１．０μｍの気孔を含む濾過膜で濾過して濾液を回収するステップとを含む、皮膚改善用化粧料または食品組成物の製造方法を提供する。
【００２９】
本発明において、前記のような工程により得られる濾液は、細胞外小胞体を多量含み、皮膚透過度に優れ、皮膚への吸収時、傷治療、皮膚保湿、皮膚美白、シワ改善および老化防止などの効果に優れている。
【００３０】
本発明は、前記植物を搾汁するに先立ち、必要に応じては、植物を洗浄して不純物を除去するステップを追加的に行うことができる。
【００３１】
また、本発明において、前記スクリューは、撹拌速度が２０〜１００ｒｐｍの低速スクリューを用いるのが、皮膚改善効果に優れた細胞外小胞体を多量含む植物搾汁物を得ることができて、好ましい。
【００３２】
また、本発明において、前記静置培養は、２０〜３０℃で１２〜４８時間行われる。
【００３３】
また、本発明において、前記遠心分離は、１００〜２０，０００ｇで１０〜１２０分間１回以上行われる。
【００３４】
また、本発明において、前記遠心分離は、１００〜５００ｇで１０〜３０分間１次的に行い、１，０００〜２，０００ｇで１０〜３０分間２次的に行った後、５，０００〜２０，０００ｇで３０分〜１時間３次的に行うことができる。
【００３５】
また、本発明において、前記濾過は、平均気孔サイズが０．２〜０．５μｍの気孔を含む濾過膜を用いて１回以上行われる。好ましくは、平均気孔サイズが０．４〜０．５μｍの気孔を含む濾過膜を用いて１次的に濾過を行った後、平均気孔サイズが０．２〜０．３μｍの気孔を含む濾過膜を用いて２次的に濾過を行うのが、皮膚改善効果に優れた細胞外小胞体を多量含む濾液を得ることができる。
【００３６】
本発明のさらに他の実施形態によれば、スクリューを用いて植物を搾汁して植物搾汁物を得るステップと、前記植物搾汁物を静置培養するステップと、培養された植物搾汁物を遠心分離して上澄液を回収するステップと、前記上澄液を平均気孔サイズが０．１〜１．０μｍの気孔を含む濾過膜で濾過して濾液を回収するステップとを含む、傷治療または傷治療促進用薬学的組成物の製造方法を提供する。
【００３７】
本発明において、前記のような工程により得られる濾液は、細胞外小胞体を多量含み、安全でありながらも、傷治療またはその促進効果に優れている。
【００３８】
本発明は、前記植物を搾汁するに先立ち、必要に応じては、植物を洗浄して不純物を除去するステップを追加的に行うことができる。
【００３９】
また、本発明において、前記スクリューは、撹拌速度が２０〜１００ｒｐｍの低速スクリューを用いるのが、傷治療効果に優れた細胞外小胞体を多量含む植物搾汁物を得ることができて、好ましい。
【００４０】
また、本発明において、前記静置培養は、２０〜３０℃で１２〜４８時間行われる。
【００４１】
また、本発明において、前記遠心分離は、１００〜２０，０００ｇで１０〜１２０分間１回以上行われる。
【００４２】
また、本発明において、前記遠心分離は、１００〜５００ｇで１０〜３０分間１次的に行い、１，０００〜２，０００ｇで１０〜３０分間２次的に行った後、５，０００〜２０，０００ｇで３０分〜１時間３次的に行うことができる。
【００４３】
また、本発明において、前記濾過は、平均気孔サイズが０．２〜０．５μｍの気孔を含む濾過膜を用いて１回以上行われる。好ましくは、平均気孔サイズが０．４〜０．５μｍの気孔を含む濾過膜を用いて１次的に濾過を行った後、平均気孔サイズが０．２〜０．３μｍの気孔を含む濾過膜を用いて２次的に濾過を行うのが、傷治療効果に優れた細胞外小胞体を多量含む濾液を得ることができる。
【００４４】
本発明のさらに他の実施形態によれば、スクリューを用いて植物を搾汁して植物搾汁物を得るステップと、前記植物搾汁物を静置培養するステップと、培養された植物搾汁物を遠心分離して上澄液を回収するステップと、前記上澄液を平均気孔サイズが０．１〜１．０μｍの気孔を含む濾過膜で濾過して濾液を回収するステップとを含む、脱毛予防、改善または治療用薬学的化粧料または食品組成物の製造方法を提供する。
【００４５】
本発明において、前記のような工程により得られる濾液は、細胞外小胞体を多量含み、安全でありながらも、発毛および育毛促進効果に優れている。
【００４６】
本発明は、前記植物を搾汁するに先立ち、必要に応じては、植物を洗浄して不純物を除去するステップを追加的に行うことができる。
【００４７】
また、本発明において、前記スクリューは、撹拌速度が２０〜１００ｒｐｍの低速スクリューを用いるのが、発毛および育毛効果に優れた細胞外小胞体を多量含む植物搾汁物を得ることができて、好ましい。
【００４８】
また、本発明において、前記静置培養は、２０〜３０℃で１２〜４８時間行われる。
【００４９】
また、本発明において、前記遠心分離は、１００〜２０，０００ｇで１０〜１２０分間１回以上行われる。
【００５０】
また、本発明において、前記遠心分離は、１００〜５００ｇで１０〜３０分間１次的に行い、１，０００〜２，０００ｇで１０〜３０分間２次的に行った後、５，０００〜２０，０００ｇで３０分〜１時間３次的に行うことができる。
【００５１】
また、本発明において、前記濾過は、平均気孔サイズが０．２〜０．５μｍの気孔を含む濾過膜を用いて１回以上行われる。好ましくは、平均気孔サイズが０．４〜０．５μｍの気孔を含む濾過膜を用いて１次的に濾過を行った後、平均気孔サイズが０．２〜０．３μｍの気孔を含む濾過膜を用いて２次的に濾過を行うのが、発毛および育毛効果に優れた細胞外小胞体を多量含む濾液を得ることができる。
【００５２】
本明細書において、用語「細胞外小胞体」は、多様な細胞から分泌する膜構造の小さい小嚢を意味し、ナノベジクル（ｎａｎｏｖｅｓｉｃｌｅ）とも定義される。細胞外小胞体の直径は、約３０〜１，０００ｎｍであり、好ましくは、平均直径が１００〜３００ｎｍであり、多嚢体と原形質膜との融合が起こって細胞外環境に放出される小嚢を意味する。
【００５３】
本明細書において、用語「植物」は、成熟した植物だけでなく、成熟した植物に発育できる植物細胞、植物組織および植物の種子などをすべて含む意味として理解される。
【００５４】
本発明で使用できる植物の種類は特に制限されないが、例えば、イネ、コムギ、オオムギ、トウモロコシ、ダイズ、ジャガイモ、コムギ、アズキ、エンバクおよびキビを含む食糧作物類；アラビドプシス、ハクサイ、ダイコン、トウガラシ、ニンニク、ショウガ、イチゴ、トマト、スイカ、キュウリ、キャベツ、マクワウリ、カボチャ、ネギ、タマネギ、アスパラガスおよびニンジンを含む野菜作物類；高麗人参、タバコ、ワタ、ゴマ、サトウキビ、サトウダイコン、エゴマ、ピーナッツおよびアブラナを含む特用作物類；リンゴの木、ナシの木、ナツメの木、モモ、キウイフルーツ、ブドウ、ミカン、カキ、オレンジ、ザボン、スモモ、アンズ、ドラゴンフルーツ、マンゴー、ブルーベリー、アボカドおよびバナナを含む果樹類；バラ、グラジオラス、ガーベラ、カーネーション、キク、ユリおよびチューリップを含む花卉類；およびライグラス、レッドクローバー、オーチャードグラス、アルファルファ、トールフェスクおよびペレニアルライグラスを含む飼料作物類から構成された群より選択される植物を使用することができる。ただし、本発明で使用できる植物の種類は前記挙げた種類に制限されるものではなく、植物に属すれば制限なく使用可能である。
【００５５】
本明細書において、用語「植物搾汁物」は、機械的な力または回転力で植物の内部に含まれている水分などを外部に流出させて得られた液状の流体を意味するもので、例えば、果汁、野菜汁、植物汁などがあるが、これらに限定されるものではない。
【００５６】
また、本発明において、前記薬学的組成物は、通常の方法による適切な担体、賦形剤または希釈剤を追加的に含んでもよい。本発明の薬学的組成物に含まれる担体、賦形剤および希釈剤としては、ラクトース、デキストロース、スクロース、ソルビトール、マンニトール、キシリトール、エリスリトール、マルチトール、デンプン、アカシアガム、アルギネート、ゼラチン、カルシウムホスフェート、カルシウムシリケート、セルロース、メチルセルロース、微晶質セルロース、ポリビニルピロリドン、メチルヒドロキシベンゾエート、プロピルヒドロキシベンゾエート、タルク、マグネシウムステアレートおよび鉱物油などを使用することができるが、これらに制限されない。
【００５７】
また、本発明に係る薬学的組成物は、それぞれ通常の方法によって、散剤、顆粒剤、錠剤、カプセル剤、懸濁液、エマルジョン、シロップ、エアロゾルなどの経口型剤形、外用剤、坐剤または滅菌注射溶液の形態に剤形化して使用できる。詳細には、製剤化する場合には、通常使用する充填剤、増量剤、結合剤、湿潤剤、崩壊剤、界面活性剤などの希釈剤または賦形剤を用いて調製される。経口投与のための固形製剤には、錠剤、丸剤、散剤、顆粒剤、カプセル剤などが含まれ、このような固形製剤は、前記本発明の薬学的組成物に少なくとも１つ以上の賦形剤、例えば、デンプン、カルシウムカーボネート（ｃａｌｃｉｕｍ  ｃａｒｂｏｎａｔｅ）、スクロース（ｓｕｃｒｏｓｅ）、ラクトース（ｌａｃｔｏｓｅ）、ゼラチンなどを混合して調製される。また、単純な賦形剤のほか、マグネシウムステアレート、タルクのような潤滑剤も使用できる。経口のための液状製剤としては、懸濁剤、内用液剤、乳剤、シロップ剤などが相当するが、よく使用される単純希釈剤である水、リキッドパラフィンのほか、様々な賦形剤、例えば、湿潤剤、甘味剤、芳香剤、保存剤などが含まれてもよい。非経口投与のための製剤には、滅菌された水溶液、非水性溶剤、懸濁剤、乳剤、凍結乾燥製剤および坐剤が含まれる。非水性溶剤、懸濁剤としては、プロピレングリコール（ｐｒｏｐｙｌｅｎｅ  ｇｌｙｃｏｌ）、ポリエチレングリコール、オリーブオイルのような植物性油、エチルオレエートのような注射可能なエステルなどが使用できる。坐剤の基剤としては、ウイテプゾール（ｗｉｔｅｐｓｏｌ）、マクロゴール、トウィーン（ｔｗｅｅｎ）６１、カカオ脂、ラウリン脂、グリセロゼラチンなどが使用できる。
【００５８】
本発明に係る薬学的組成物の投与経路はこれらに限定されるものではないが、口腔、静脈内、筋肉内、動脈内、骨髓内、硬膜内、心臓内、経皮、皮下、腹腔内、鼻腔内、腸管、局所、舌下または直腸が含まれる。経口または非経口投下が好ましい。本発明で使われた用語「非経口」は、皮下、皮内、静脈内、筋肉内、関節内、滑液嚢内、胸骨内、硬膜内、病巣内および頭蓋骨内注射または注入技術を含む。本発明の薬学的組成物はさらに、直腸投与のための坐剤の形態で投与されてもよい。
【００５９】
本発明の薬学的組成物は、使用された特定化合物の活性、年齢、体重、一般的な健康、性別、定式、投与時間、投与経路、排出率、薬物配合および予防または治療される特定疾患の重度を含む様々な要因によって多様に変化可能であり、前記薬学的組成物の投与量は、患者の状態、体重、疾病の程度、薬物の形態、投与経路および期間に応じて異なるが、当業者によって適宜選択可能であり、１日０．０００１〜５０ｍｇ／ｋｇ、または０．００１〜５０ｍｇ／ｋｇで投与することができる。投与は、１日に１回投与してもよく、数回分けて投与してもよい。前記投与量は、いかなる面でも本発明の範囲を限定するものではない。本発明に係る薬学的組成物は、丸剤、糖衣錠、カプセル、液剤、ゲル、シロップ、スラリー、懸濁剤に剤形されてもよい。
【００６０】
本発明において、食品組成物は、各種食品類、例えば、飲料、ガム、お茶、ビタミン複合剤、粉末、顆粒、錠剤、カプセル、お菓子、餠、パンなどの形態に製造される。本発明の食品組成物は、毒性および副作用がほとんどない植物抽出物から構成されたものであるので、予防目的で長期間服用の際にも安心して使用可能である。
【００６１】
本発明において、有効成分として含まれる植物由来の細胞外小胞体、あるいはこれを含む濾液が食品組成物に含まれる時、その量は、全体重量の０．１〜５０％の比率で添加することができる。
【００６２】
ここで、前記食品組成物が飲料形態に製造される場合、指示された比率で前記食品組成物を含有するほかに特別な制限はなく、通常の飲料のように様々な香味剤または天然炭水化物などを追加成分として含有することができる。すなわち、天然炭水化物としてブドウ糖などのモノサッカライド、果糖などのジサッカライド、スクロースなどのおよびポリサッカライド、デキストリン、シクロデキストリンなどのような通常の糖およびキシリトール、ソルビトール、エリスリトールなどの糖アルコールなどを含むことができる。前記香味剤としては、天然香味剤（ソーマチン、ステビア抽出物（例えば、レバウディオサイドＡ、グリチルリチンなど）および合成香味剤（サッカリン、アスパルテームなど）などが挙げられる。
【００６３】
その他、本発明の食品組成物は、様々な営養剤、ビタミン、鉱物（電解質）、合成風味剤および天然風味剤などの風味剤、着色剤、ペクチン酸およびその塩、アルギン酸およびその塩、有機酸、保護性コロイド増粘剤、ｐＨ調節剤、安定化剤、防腐剤、グリセリン、アルコール、炭酸飲料に使用される炭酸化剤などを含有することができる。
【００６４】
このような成分は、独立してまたは組み合わせて使用可能である。このような添加剤の比率はそれほど重要ではないが、本発明の食品組成物１００重量部あたり０．１〜約５０重量部の範囲で選択されることが一般的である。
【００６５】
また、本発明において、化粧料組成物は、化粧水、栄養ローション、栄養エッセンス、マッサージクリーム、美容入浴添加剤、ボディローション、ボディミルク、バスオイル、ベビーオイル、ベビーパウダー、シャワージェル、シャワークリーム、サンスクリーンローション、サンスクリーンクリーム、日焼けクリーム、スキンローション、スキンクリーム、紫外線遮断用化粧品、クレンジングミルク、脱毛剤｛化粧用｝、フェイスおよびボディローション、フェイスおよびボディクリーム、皮膚美白クリーム、ハンドローション、ヘアローション、化粧用クリーム、ジャスミンオイル、浴用石けん、水石けん、美容石けん、シャンプー、手洗浄剤（ハンドクリーナー）、薬用石けん｛非医療用｝、クリーム石けん、フェイシャルウォッシュ、全身洗浄剤、頭皮洗浄剤、ヘアリンス、化粧石けん、歯美白用ゲル、歯磨き粉などの形態に製造される。このために、本発明の組成物は、化粧料組成物の製造に通常使用する溶媒や、適切な担体、賦形剤または希釈剤をさらに含んでもよい。
【００６６】
本発明の化粧料組成物内にさらに追加される溶媒の種類は特に限定しないが、例えば、水、食塩水、ＤＭＳＯまたはこれらの組み合わせを使用することができ、担体、賦形剤または希釈剤としては、精製水、オイル、ワックス、脂肪酸、脂肪酸アルコール、脂肪酸エステル、界面活性剤、吸湿剤（ｈｕｍｅｃｔａｎｔ）、増粘剤、抗酸化剤、粘度安定化剤、キレート剤、緩衝剤、低級アルコールなどが含まれるが、これらに制限されるわけではない。また、必要に応じて、美白剤、保湿剤、ビタミン、紫外線遮断剤、香水、染料、抗生剤、抗バクテリア剤、抗真菌剤を含むことができる。
【００６７】
前記オイルとしては、水素化植物性油、ヒマシ油、綿実油、オリーブ油、パーム核油、ホホバ油、アボカド油が用いられ、ワックスとしては、密蝋、鯨蝋、カルナウバ、カンデリラ、モンテイン、セレシン、液体パラフィン、ラノリンが用いられる。
【００６８】
脂肪酸としては、ステアリン酸、リノール酸、リノレン酸、オレイン酸が用いられ、脂肪酸アルコールとしては、セチルアルコール、オクチルドデカノール、オレイルアルコール、パンテノール、ラノリンアルコール、ステアリルアルコール、ヘキサデカノールが用いられ、脂肪酸エステルとしては、イソプロピルミリステート、イソプロピルパルミテート、ブチルステアレートが用いられる。界面活性剤としては、当業界で知られた陽イオン界面活性剤、陰イオン界面活性剤および非イオン性界面活性剤が使用可能であり、できる限り天産物由来の界面活性剤が好ましい。
【００６９】
その他にも、化粧品分野で広く知られた吸湿剤、増粘剤、抗酸化剤などを含むことができ、これらの種類と量は、当業界で公知のものによる。
【発明の効果】
【００７０】
本発明で提供する植物由来の細胞外小胞体は、皮膚透過度に優れかつ、吸収時、皮膚保湿、皮膚美白、シワ改善および老化防止などの皮膚改善効果に優れているだけでなく、皮膚に対する刺激や副作用がなく安全である。
【００７１】
また、本発明で提供する植物由来の細胞外小胞体は、傷部位で細胞増殖を促進させ、傷治癒効果に優れた成長因子などの発現量を増加させて、優れた傷治療または傷治療促進活性を有する。
【００７２】
さらに、本発明で提供する植物由来の細胞外小胞体は、発毛および育毛促進効果に優れて脱毛の防止および治療効果に優れ、これを摂取したり皮膚に塗布しても副作用がなく安全である。
【図面の簡単な説明】
【００７３】
【図１】実験例１でドラゴンフルーツ、ドラゴンフルーツの葉、ブルーベリー、アボカド、アスパラガス、マンゴーおよびトウガラシから得られた濾液内に含まれた蛋白質の含有量を測定した結果を示すものである。
【図２】実験例１でダイズ、ニンニクおよびショウガから得られた濾液内に含まれた粒子のサイズ別の含有量を測定した結果を示すものである。
【図３】実験例１でダイズから得られた濾液内に含まれた細胞外小胞体を透過電子顕微鏡（ＴＥＭ）で撮影した写真を示すものである。
【図４】実験例２で標識された細胞外小胞体が線維芽細胞内に吸収された様子を蛍光顕微鏡で撮影した写真を示すものである。
【図５】実験例３で毛乳頭細胞に植物由来の細胞外小胞体を処理した後、細胞生存率の変化を示すものである。
【図６】実験例４で毛乳頭細胞にダイズ由来の細胞外小胞体を処理した後、Ｌｅｆ−１、ベルシカンおよびＧｌｉ−１遺伝子の発現程度を示すものである。
【図７】実験例５で皮膚角質形成細胞にアスパラガス由来の細胞外小胞体を処理した後、細胞生存率の変化を示すものである。
【図８】実験例５で皮膚角質形成細胞にアスパラガス由来の細胞外小胞体を処理した後、細胞数の変化を示すものである。
【図９】実験例６でヒト皮膚線維芽細胞にアスパラガス由来の細胞外小胞体を処理した後、ケラチン細胞成長因子の発現程度を示すものである。
【図１０】実験例６でヒト皮膚線維芽細胞にアスパラガス由来の細胞外小胞体を処理した後、プロコラーゲンの発現程度を示すものである。
【図１１】実験例６でヒト皮膚線維芽細胞にアスパラガス由来の細胞外小胞体を処理した後、線維芽細胞成長因子の発現程度を示すものである。
【図１２】実験例７で黒色腫細胞にアスパラガス由来の細胞外小胞体を処理した後、メラニン含有量の変化を示すものである。
【図１３】実験例８で毛乳頭細胞、脂肪由来の幹細胞、ヒト皮膚線維芽細胞、角質形成細胞にダイズ由来の細胞外小胞体およびエキソソームをそれぞれ処理した後、細胞数の変化を示すものである。
【発明を実施するための形態】
【００７４】
本発明の一実施形態によれば、植物搾汁物由来の細胞外小胞体（ｅｘｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ  ｖｅｓｉｃｌｅｓ）を有効成分として含む皮膚改善用化粧料組成物を提供する。より好ましくは、前記細胞外小胞体は、５〜１０μｇ／ｍｌの濃度で含まれる。
【００７５】
本発明の他の実施形態によれば、植物搾汁物由来の細胞外小胞体を有効成分として含む皮膚改善用食品組成物を提供する。
【００７６】
本発明のさらに他の実施形態によれば、植物搾汁物由来の細胞外小胞体を有効成分として含む傷治療用薬学的組成物を提供する。
【００７７】
本発明のさらに他の実施形態によれば、植物搾汁物由来の細胞外小胞体を有効成分として含む脱毛予防または治療用薬学的組成物を提供する。
【００７８】
本発明のさらに他の実施形態によれば、植物由来の細胞外小胞体を有効成分として含む脱毛改善用化粧料組成物を提供する。
【００７９】
本発明のさらに他の実施形態によれば、植物由来の細胞外小胞体を有効成分として含む脱毛改善用食品組成物を提供する。
【実施例】
【００８０】
以下、本発明の好ましい実施形態を説明する。しかし、本発明の実施形態は種々の異なる形態に変形可能であり、本発明の範囲が以下に説明する実施形態に限定されるものではない。また、本発明の実施形態は、当該技術分野における平均的な知識を有する者に本発明をより完全に説明するために提供されるものである。
【００８１】
＜実施例＞
［実施例１］
ドラゴンフルーツ、ドラゴンフルーツの葉、ブルーベリー、アボカド、アスパラガス、マンゴー、ササゲ（ｃｏｗｐｅａ）、トウガラシ、ザクロおよびウコンを蒸留水で洗浄した後、撹拌速度が４０ｒｐｍの低速スクリューで搾汁して得られた液状の植物汁を篩にかけて浮遊物を除去した。この後、２５℃で１０分間培養し、２，０００ｇで３０分間遠心分離して上澄液を分離した後、ポリビニリデンジフルオライド材質の０．４５μｍの気孔を含む濾過膜で濾過し、この後、同一材質の０．２２μｍの気孔を含む濾過膜で濾過して濾液を得た。
【００８２】
［実験例１］
前記実施例１で得られた濾液内に含まれた細胞外小胞体の含有量および分布を確認するために、ブラッドフォード蛋白質アッセイ（Ｂｒａｄｆｏｒｄ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ａｓｓａｙ）を用いて、ドラゴンフルーツ、ドラゴンフルーツの葉、ブルーベリー、アボカド、アスパラガス、マンゴーおよびトウガラシから得られた濾液内に含まれた蛋白質の含有量を測定して、その結果を図１にグラフで示した。また、ＮＴＡ（Ｎａｎｏｐａｒｔｉｃｌｅ  ｔｒａｃｋｉｎｇ  ａｎａｌｙｓｉｓ）により、ダイズ、ニンニクおよびショウガから得られた濾液に含まれた細胞外小胞体のサイズ別の分布と粒子数を測定して、その結果を下記表１および図２に示し、透過電子顕微鏡（ＴＥＭ）を用いて、ダイズから得られた濾液内に含まれた細胞外小胞体の写真を撮影して図３に示した。
【００８３】
【表１】
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【００８４】
図１に示されるように、ドラゴンフルーツ、ドラゴンフルーツの葉、ブルーベリー、アボカド、アスパラガス、マンゴーおよびトウガラシから得られた濾液には相当量の蛋白質、すなわち、細胞外小胞体が含まれていると見られ、特に、アボカドとアスパラガスから得られた濾液に多い含有量で含まれていることを確認することができた。
【００８５】
また、図２および表１に示されるように、ダイズ、ニンニクおよびショウガに含まれた粒子の平均サイズは１００〜２００ｎｍであり、図３の透過電子顕微鏡写真をみても、これらの粒子が球状構造を有すると見られることから、前記植物から得られた濾液内に含まれた粒子が細胞外小胞体に相当することを再び確認することができた。
【００８６】
［実験例２］
線維芽細胞２×１０４細胞／ｍｌを２４ウェルに接種し、２４時間後にササゲ（ｃｏｗｐｅａ）から得られた細胞外小胞体をＰＫＨ２６レッド蛍光細胞リンカーキット（Ｓｉｇｍａ）で標識した後、前記線維芽細胞に処理した。６時間培養後、１μｍのＤＡＰＩをＰＢＳで希釈して、５分間暗い空間下で培養し、ＰＢＳで洗浄した後、蛍光顕微鏡で撮影して、その結果を図４に示した。
【００８７】
図４に示されるように、ＰＫＨ２６標識された植物由来の細胞外小胞体が線維芽細胞の細胞質内に移動したことを確認することができた。
【００８８】
これにより、本発明に係る植物由来の細胞外小胞体を皮膚などに塗布する場合、皮膚、さらにひいては、細胞内に吸収が容易に行われて優れた効果を確保できることが分かる。
【００８９】
［実験例３］
毛乳頭細胞（Ｄｅｒｍａｌ  ｐａｐｉｌｌａ  ｃｅｌｌ、ＤＰＣ）２×１０４細胞／ｍｌを２４ウェルプレート（ＳＰＬ、Ｋｏｒｅａ）に同一に分注した。２４時間の安定化時間後、実施例１で得られた細胞外小胞体を含む濾液を細胞に４８時間処理した。ＭＴＳ試薬（Ｐｒｏｍｅｇａ、ＵＳＡ）と細胞の基本培地（ＦＢＳ  ｆｒｅｅ、１％ｐ／ｓ）を１：５の比率で希釈して、各ウェルあたり５００μｌずつ分注し、１時間３０分反応後、４９０ｎｍの波長における吸光度を測定し、細胞生存率の変化を評価して、その結果を図５にグラフで示した。ただし、陽性対照群には１０％ウシ胎児血清（ＦＢＳ）を処理し、陰性対照群には何ら処理をしなかった。
【００９０】
図５に示されるように、ドラゴンフルーツの葉、アスパラガス、トウガラシおよびウコン由来の細胞外小胞体を処理した場合、細胞生存率が増加したことを確認することができ、特に、アスパラガス由来の細胞外小胞体を処理した場合、細胞生存率が著しく向上したことを確認することができた。
【００９１】
［実験例４］
毛乳頭細胞（ＤＰＣ）５×１０５細胞／ｍｌを６０ｍｍのディッシュ（ＳＰＬ、Ｋｏｒｅａ）に同一に分注し、実施例１で得られた細胞外小胞体を含むダイズ由来の濾液を細胞に４８時間処理した。この後、ＲＮＡ分離キット（Ｑｕｉａｇｅｎ、ＵＳＡ）を用いて細胞からＲＮＡを分離した後、ｃＤＮＡ合成キット（Ｉｎｔｒｏｎｂｉｏ、Ｋｏｒｅａ）を用いて分離されたＲＮＡ１μｇに対するプライマーを合成した。プライマーは１０ｐｍｏｌ／μｌの濃度で使用し、２Ｘサイバーグリーンマスターミックス（Ｔａｋａｒａ、Ｊａｐａｎ）を添加して、ＬＥＦ−１（Ｌｙｍｐｈｏｉｄ  ｅｎｈａｎｃｅｒ−ｂｉｎｄｉｎｇ  ｆａｃｔｏｒ−１）、ベルシカン（Ｖｅｒｓｉｃａｎ）、Ｇｌｉ−１およびＰｔｃ−１（ｔｈｅ  ｐａｔｃｈｅｄ  ｐｒｏｔｅｉｎ−１）遺伝子の発現程度を検出して、その結果を図６にグラフで示した。ただし、対照群には何ら処理をしなかった。
【００９２】
図６に示されるように、ダイズ由来の細胞外小胞体を処理した場合、Ｌｅｆ−１、ベルシカンおよびＧｌｉ−１遺伝子の発現程度が増加することを確認することができた。ここで、前記Ｌｅｆ−１は、毛嚢形態の形成と分化を促進する遺伝子であり、ベルシカンは、毛嚢形態の形成誘導、毛髪再生および毛髪成長維持に関連する遺伝子であり、Ｇｌｉ−１は、毛嚢形態の形成と毛髪成長を促進する遺伝子である。
【００９３】
したがって、前記結果により、本発明に係る植物由来の細胞外小胞体は、発毛および育毛促進効果に優れていることが分かる。
【００９４】
［実験例５］
皮膚角質形成細胞（ＨａＣａｔ）２×１０４細胞／ｍｌを２４ウェルプレート（ＳＰＬ、Ｋｏｒｅａ）に同一に分注した。２４時間の安定化時間後、実施例１で得られた細胞外小胞体を含むアスパラガス由来の濾液を０．５μｇ、１μｇおよび５μｇの量で細胞に４８時間処理した。ＭＴＳ試薬（Ｐｒｏｍｅｇａ、ＵＳＡ）と細胞の基本培地（ＦＢＳ  ｆｒｅｅ、１％ｐ／ｓ）を１：５の比率で希釈して、各ウェルあたり５００μｌずつ分注し、１時間３０分反応後、４９０ｎｍの波長における吸光度を測定し、細胞生存率を評価して、その結果を図７にグラフで示し、細胞数を測定して、対照群対比の細胞数の変化を図８にグラフで示した。ただし、対照群には何ら処理をしなかった。
【００９５】
図７および図８に示されるように、アスパラガス由来の細胞外小胞体を処理した場合、濃度依存的に角質形成細胞であるＨａＣａｔ細胞の増殖が増加することを確認することができた。
【００９６】
［実験例６］
ヒト皮膚線維芽細胞（ｈｕｍａｎ  ｄｉｐｌｏｉｄ  ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔ、ＨＤＦ）５×１０４細胞／ウェルの濃度で培養皿に付着させた後、実施例１で得られた細胞外小胞体を含むアスパラガス由来の濾液を５μｇおよび１０μｇの量で処理した。４８時間培養後、各細胞でイントロンプレミックス（ｉｎｔｒｏｎ  ｐｒｅｍｉｘ）を用いてｃＤＮＡを合成し、これを用いてリアルタイムＰＣＲを行った。それぞれの処理群の細胞で皮膚老化防止および再生関連遺伝子であるケラチン細胞成長因子（Ｋｅｒａｔｉｎｏｃｙｔｅ  ｇｒｏｗｔｈ  ｆａｃｔｏｒ）、プロコラーゲン（ｐｒｏｃｏｌｌａｇｅｎ）および線維芽細胞成長因子（ｂａｓｉｃ  ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔ  ｇｒｏｗｔｈ  ｆａｃｔｏｒ）の発現程度を確認して、その結果を図９〜図１１にグラフで示した。
【００９７】
図９〜図１１に示されるように、アスパラガス由来の細胞外小胞体を処理した場合、ケラチン細胞成長因子、プロコラーゲンおよび線維芽細胞成長因子の発現程度が増加することを確認することができ、特に、アスパラガス由来の濾液を５μｇの量で処理した時にさらに発現量が増加することを確認することができた。
【００９８】
これにより、本発明に係る植物由来の細胞外小胞体は、皮膚老化防止および再生効果に優れ、さらにひいては、傷治療にも効果があることが分かる。
【００９９】
［実験例７］
黒色腫細胞（Ｂ１６Ｆ１０）５×１０４細胞／ｍｌを６ウェルプレート（ＳＰＬ、Ｋｏｒｅａ）に同一に分注した。２４時間の安定化時間後、実施例１で得られた細胞外小胞体を含むアスパラガス由来の濾液（０．５μｇ、１μｇ、５μｇ）とメラニン誘導ａ−ＭＳＨ０．５μｇを細胞に処理した。７２時間培養後に上澄液を除去し、冷ＰＢＳ２ｍｌで１回洗浄した後、１Ｎ  ＮａＯＨをウェルあたり５５０μｌずつ添加して細胞を溶かした後、ピペットで１．５ｍｌに細胞収獲（ｈａｒｖｅｓｔ）し、１００℃で３０分間沸かした後、１３，０００ｒｐｍで遠心分離し、上澄液を新しいチューブに移した。上澄液１００μｌを９６ウェルプレートに移した後、Ａ４５０ｎｍで対照群対比のメラニン含有量の変化を測定して、その結果を図１２にグラフで示した。ただし、陽性対照群にはａ−ＭＳＨのみを０．５μｇで処理し、陰性対照群には何ら処理をしなかった。
【０１００】
図１２に示されるように、ａ−ＭＳＨでメラニンの形成を誘導した対照群対比、アスパラガス由来の細胞外小胞体を処理した場合、メラニン含有量が減少したことを確認することができた。
【０１０１】
これにより、本発明に係る植物由来の細胞外小胞体は、皮膚美白効果に優れていることが分かる。
【０１０２】
［実験例８］
ササゲを撹拌速度が４０ｒｐｍの低速スクリューで搾汁した後、３００ｇで１０分、１，２００ｇで２０分、１０，０００ｇで３０分間遠心分離して大きい粒子を除去した後、上澄液のみを取って、超遠心分離機器を用いて１００，０００ｇで１時間１０分間遠心分離して、最終的に沈んだペレットを回収して、ササゲからエキソソームを抽出した。
【０１０３】
この後、毛乳頭細胞（ＤＰＣ）、脂肪由来の幹細胞（Ａｄｉｐｏｃｙｔｅ−ｄｅｒｉｖｅｄ  ｓｔｅｍ  ｃｅｌｌ）、ヒト皮膚線維芽細胞（ＨＤＦ）および角質形成細胞（ＨａＣａＴ）それぞれを２×１０４細胞／ｍｌで２４ウェルプレート（ＳＰＬ、Ｋｏｒｅａ）に同一に分注した。２４時間の安定化時間後、前記のように得られたササゲ（ｃｏｗｐｅａ）由来のエキソソームと、実施例１で得られたササゲ由来の細胞外小胞体を４８時間処理した。この後、細胞数を測定して、対照群対比の細胞数の変化を図１３にグラフで示した。ただし、対照群には何ら処理をしなかった。
【０１０４】
図１３に示されるように、本発明に係る植物由来の細胞外小胞体がエキソソームより細胞増殖効果に優れていることを確認することができた。
【０１０５】
これにより、本発明に係る植物由来の細胞外小胞体は、傷治療、皮膚改善および脱毛治療効果に優れていることが分かり、植物から本発明に係る細胞外小胞体を抽出することが、エキソソームを抽出する工程より簡単である。
【０１０６】
以上、本発明を上記の実施例を中心として説明したが、これは例示に過ぎず、本発明は本発明の技術分野における通常の知識を有する者に自明な多様な変形および均等なその他の実施例を以下に添付した請求範囲内で行うことができるという事実を理解しなければならない。
【産業上の利用可能性】
【０１０７】
本発明は、植物搾汁物由来の細胞外小胞体（ｅｘｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ  ｖｅｓｉｃｌｅｓ）を用いることで、皮膚美白、保湿およびシワ改善などの皮膚改善と、発毛および育毛促進などによる脱毛防止が可能である。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【国際調査報告】
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