(57)【要約】ヒトにおけるアトピー性皮膚炎を予防するか、またはヒトにおけるアトピー性皮膚炎を発症するリスクを低減させるのに使用するための、ブドウ球菌エンテロトキシンＧおよびＩ（ＳＥＧおよびＳＥＩ）ならびにブドウ球菌エンテロトキシン様毒素Ｍ、ＮおよびＯ（ＳＥｌＭ、ＳＥｌＮおよびＳＥｌＯ）、またはそれらの混合物からなる群から選択されるスーパー抗原。そのような使用において、スーパー抗原は出生後３ヶ月以内の新生児に粘膜によって投与される。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
ヒトにおけるアトピー性皮膚炎を予防するか、またはヒトにおけるアトピー性皮膚炎を発症するリスクを低減させるのに使用するための、ブドウ球菌エンテロトキシンＧおよびＩ（ＳＥＧおよびＳＥＩ）ならびにブドウ球菌エンテロトキシン様毒素Ｍ、ＮおよびＯ（ＳＥｌＭ、ＳＥｌＮおよびＳＥｌＯ）、またはそれらの混合物からなる群から選択されるスーパー抗原であって、前記スーパー抗原は出生後３ヶ月以内の新生児に粘膜によって投与される、スーパー抗原。
【請求項２】
前記スーパー抗原が、ブドウ球菌エンテロトキシン様毒素Ｍ、ＮおよびＯ（ＳＥｌＭ、ＳＥｌＮ、およびＳＥｌＯ）からなる群から、例えば、ブドウ球菌エンテロトキシン様毒素ＭおよびＮ（ＳＥｌＭおよびＳＥｌＮ）から選択される、請求項１に記載の使用のためのスーパー抗原。
【請求項３】
前記スーパー抗原が、ブドウ球菌エンテロトキシンＧおよびＩ（ＳＥＧおよびＳＥＩ）からなる群から選択される、請求項１に記載の使用のためのスーパー抗原。
【請求項４】
前記スーパー抗原が、出生後２週以内、出生後１０日以内、出生後７日以内、または出生後４日以内の新生児に粘膜によって投与される、請求項１〜３のいずれか一項に記載の使用のためのスーパー抗原。
【請求項５】
前記スーパー抗原が、舌下／嚥下投与などにより経口投与される、請求項１〜４のいずれか一項に記載の使用のためのスーパー抗原。
【請求項６】
前記スーパー抗原が直腸投与される、請求項１〜４のいずれか一項に記載の使用のためのスーパー抗原。
【請求項７】
投与される前記スーパー抗原が、前記スーパー抗原と、薬学的に許容可能な賦形剤および／または担体とを含む医薬組成物中に存在する、請求項１〜６のいずれか一項に記載の使用のためのスーパー抗原。
【請求項８】
前記医薬組成物が、直腸、経口、鼻腔、口腔、または舌下投与用に製剤化される、請求項７に記載の使用のためのスーパー抗原。
【請求項９】
前記医薬組成物が、経口、口腔、または舌下投与用に製剤化される、請求項８に記載の使用のためのスーパー抗原。
【請求項１０】
前記医薬組成物が、直腸投与用に製剤化される、請求項８に記載の使用のためのスーパー抗原。
【請求項１１】
前記アトピー性皮膚炎がウィリアムの基準に従う、請求項１〜１０のいずれか一項に記載の使用のためのスーパー抗原。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ヒトにおけるアトピー性皮膚炎を予防するか、またはヒトにおけるアトピー性皮膚炎を発症するリスクを低減させるための手段に関する。
【背景技術】
【０００２】
アトピー性皮膚炎、またはアトピー性湿疹は小児において最も一般的な炎症性疾患であり、集団の生活の質および医療援助に重大な負担をもたらす。現在、富裕国における小児の２０％が影響を受けている。アトピー性皮膚炎は、典型的な部位における病変の掻痒によって特徴付けられる。診断は臨床基準、通常、ウィリアムの基準（Ｗｉｌｌｉａｍｓ’  ｃｒｉｔｅｒｉａ）に基づく。
【０００３】
ウィリアムの基準
大基準−患者は以下でなければならない：
−  敏感肌状態（または小児が掻いたりもしくは擦ったりしている親／介護者の報告）。
【０００４】
小基準−患者は以下の小基準のうちの３つまたはそれ以上を有さなければならない：
年長（４歳超）／成人、
−  皮膚のしわ（例えば、肘の折り重なる部分、膝の後部、足首の前部、首の周り）のかゆみの病歴
−  喘息またはアレルギー性鼻炎の既往歴
−  昨年の全体的な乾燥皮膚の既往歴
−  目に見える屈曲部の皮膚炎（すなわち肘、膝、手首などにおける皮膚の曲がる部分または折り畳む部分）
−  ２歳未満での発症
４歳未満の小児（早期発症型は必ずしも４歳未満の小児における兆候とは限らない）
−  頬の掻痒の病歴
−  一等親血縁者のアトピー性疾患の病歴
−  頬、額および他の手足の湿疹。
【０００５】
アトピー性皮膚炎は、ＩｇＥ媒介性食物アレルギー、喘息および花粉熱などの他のアトピー性障害を有する個人および家族においてよく見られ、接触皮膚炎、乾癬および脂漏性皮膚炎とは異なる。
【０００６】
アトピー性皮膚炎は皮膚における正常に機能しない抗菌反応に関連し、二次感染がアトピー性皮膚炎を有する患者においてよく見られる。
【０００７】
現在、アトピー性皮膚炎に対する治療は存在していない。既存の治療は重症度および炎症の頻度を低減させることを目的とする。保湿剤および外用副腎皮質ホルモン剤がアトピー性皮膚炎を軽減するために最も一般的に使用されている。しかしながら、当業者に公知である副腎皮質ホルモン剤の使用は、特に長期間の使用後、副作用と関連する。
【０００８】
外用副腎皮質ホルモン剤および保湿剤がアトピー性皮膚炎の症状を軽減するのに効果的ではない場合、タクロリムスまたはピメクロリムスなどの外用カルシニューリン阻害剤が時々使用されている。しかしながら、カルシニューリン阻害剤の使用は、それらが皮膚癌またはリンパ腫に関連しているのであまり好ましくない選択肢である。非常に重症例の場合、シクロスポリン、メトトレキサート、インターフェロンγ−１ｂ、ミコフェノール酸モフェチルおよびアザチオプリンなどの全身免疫抑制剤がアトピー性皮膚炎を治療する際に時々使用されている。
【０００９】
アトピー性皮膚炎の発生の増加を考慮すると、対症療法のためだけでなく、アトピー性皮膚炎の発生の増加に対抗するための手段を提供することが望ましい。
【００１０】
アトピー性皮膚炎の原因は多因子であり、重要なリスク因子として皮膚バリアタンパク質、特にフィラグリンの欠陥を伴う。しかしながら、遺伝因子以外に、生活水準の改善および良好な衛生と並行して世界中で発生が拡大している。幼少期の間の低温殺菌されていないミルクの消費およびイヌへの曝露はアトピー性皮膚炎に対する防御と関連しており、他のアトピー性疾患および状態と共通して、アトピー性皮膚炎は幼少期における微生物刺激の不足によって引き起こされおよび／または悪化すると示唆されている。
【００１１】
アトピー性湿疹の病変は、多くの場合、二次的感染であり、これにより症状が悪化する。黄色ブドウ球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｓｓｕｓ  ａｕｒｅｕｓ、Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）は、湿疹病変および黄色ブドウ球菌感染病変に対するＩｇＥ産生の一般的な汚染要因物であるか、または分泌されたブドウ球菌エンテロトキシンＢ（ＳＥＢ、スーパー抗原）によって、Ｔ細胞反応を刺激し（特許文献１を参照のこと）、症状の悪化と関連する。したがって、スーパー抗原に対するアンタゴニスト（例えば、抗体、抗原結合タンパク質、およびＴ細胞受容体可変領域）の使用は、アトピー性皮膚炎を軽減することが当該分野において示唆されている（特許文献２、特許文献３および特許文献１を参照のこと）。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１２】
【特許文献１】国際公開第２００６／１０４３３６号
【特許文献２】国際公開第２０１１／０２８９８３号
【特許文献３】国際公開第２０１０／０３０１８２号
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１３】
アトピー性皮膚炎の現在の治療は完全に成功しておらず、副作用を有さないわけでもないので、ヒトにおけるアトピー性皮膚炎を予防するか、またはヒトにおけるアトピー性皮膚炎を発症するリスクを少なくとも低減させるための手段を提供することが望まれる。
【課題を解決するための手段】
【００１４】
本発明は、上記に特定した欠陥のうちの１つまたは複数などの、少なくとも１つを緩和、軽減、回避または消失させることを目的とする。したがって、本発明の一態様によれば、ヒトにおけるアトピー性皮膚炎を予防するか、またはヒトにおけるアトピー性皮膚炎を発症するリスクを低減させるのに使用するための、ブドウ球菌エンテロトキシンＧおよびＩ（ＳＥＧおよびＳＥＩ）ならびにブドウ球菌エンテロトキシン様毒素Ｍ、ＮおよびＯ（ＳＥｌＭ、ＳＥｌＮおよびＳＥｌＯ）、またはそれらの混合物からなる群から選択されるスーパー抗原が提供される。このような使用において、スーパー抗原は出生後３ヶ月以内の新生児に粘膜によって投与される。
【００１５】
本発明の一態様によれば、スーパー抗原は、ブドウ球菌エンテロトキシン様毒素Ｍ、ＮおよびＯ（ＳＥｌＭ、ＳＥｌＮおよびＳＥｌＯ）からなる群から選択されるか、またはブドウ球菌エンテロトキシンＧおよびＩ（ＳＥＧおよびＳＥＩ）からなる群から選択される。
【００１６】
本発明の一態様によれば、スーパー抗原は、出生後２週以内、出生後１０日以内、出生後７日以内、または出生後４日以内の新生児に粘膜によって投与される。
【００１７】
本発明の一態様によれば、スーパー抗原は舌下／嚥下投与などによって経口投与されるか、またはスーパー抗原は直腸投与される。
【００１８】
本発明の別の態様によれば、スーパー抗原は、スーパー抗原と、薬学的に許容可能な賦形剤および／または担体とを含む医薬組成物中に存在する。医薬組成物は、直腸、経口、鼻腔、口腔または舌下投与用に製剤化されてもよい。特に、医薬組成物は、経口、口腔もしくは舌下投与用、または直腸投与用に製剤化されてもよい。
【００１９】
本発明のさらなる有益な特徴は従属請求項に定義される。加えて、本発明の有益な特徴は本明細書に開示される実施形態において詳細に述べられる。
【００２０】
これらおよび他の態様、特徴ならびに利点は、添付の図面を参照して本発明の以下の代表的な実施形態の説明から明らかになり、解明できる。
【図面の簡単な説明】
【００２１】
【図１】図１ａは、アトピー性皮膚炎を発症している幼児（ｎ＝４３）および最初の１８ヶ月齢の間、健常なままである幼児（ｎ＝１３０）における腸内黄色ブドウ球菌定着率を示す。図１ｂは、黄色ブドウ球菌が腸内に定着している、幼児における１グラムの糞便当たりの生存黄色ブドウ球菌細胞の数を示す。平均およびＳＤが各時点について与えられる。
【図２】黄色ブドウ球菌が定着している腸に保有されている遺伝子と、最初の２ヶ月齢の間、すなわちアトピー性湿疹が現れる前にそれらの細菌が定着している小児における１８ヶ月齢の臨床的湿疹状態との間の関係を示す潜在構造に対する正射影（ｏｒｔｈｏｇｏｎａｌ  ｐｒｏｊｅｃｔｉｏｎ  ｏｎｔｏ  ｌａｔｅｎｔ  ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ：Ｏ−ＰＬＳ）を示す。この状態はＹとしてモデル化され、Ｙ（アトピー性皮膚炎）と正に関連する細菌遺伝子は図の右側に現れる。対照的に、１８ヶ月齢での健常に関連する細菌遺伝子は左に現れる。バーの高さは変数の寄与を示し、エラーバーは寄与に対する信頼性の欠如である。
【図３】出生後最初の２ヶ月の間の異なる時点における特定の細菌遺伝子（スーパー抗原および付着因子）を保有している黄色ブドウ球菌株が定着している健常な幼児（ｎ＝１３０）およびアトピー性皮膚炎の幼児（ｎ＝４３）の割合を示す。ａ）ｓｅｌｍ−陽性黄色ブドウ球菌、ｂ）ｓｅｃ−陽性黄色ブドウ球菌、ｃ）ｓｅａ−陽性、およびｄ）全てのスクリーニングしたスーパー抗原遺伝子を欠いている黄色ブドウ球菌株。
【発明を実施するための形態】
【００２２】
本発明のいくつかの実施形態は、当業者が本発明を実施することができるように添付の図面を参照して以下により詳細に記載される。しかしながら、本発明は多くの異なる形態で実現することができ、本明細書に示される実施形態に限定されると解釈されるべきではない。むしろ、それらの実施形態は、本開示が全体および完全に、当業者に対して本発明の範囲を全て伝えるように提供される。本実施形態は本発明を限定するものではないが、本発明は添付の特許請求の範囲によってのみ限定される。さらに、添付の図面に例示される特定の実施形態の詳細な説明に使用される専門用語は本発明を限定することを意図するものではない。
【００２３】
スーパー抗原は、抗原提示細胞上のＭＨＣクラスＩＩ分子との、および全てのＴ細胞の大部分のＴ細胞受容体との結合によって非特異的にＴ細胞の活性化を引き起こす分子のクラスであり、ポリクローナルＴ細胞活性化および大量のサイトカイン放出を生じる。多数の活性化Ｔ細胞はスーパー抗原上の任意の特定のエピトープに特異的でない強い免疫反応を生じる。成熟免疫系を有するヒトにおいて、スーパー抗原への曝露は発疹および発熱などの症状と関連する。症状は重症になる場合があり、さらにショック状態および多臓器障害などの生命を脅かす症状を含む場合がある。
【００２４】
当該分野において公知のように、スーパー抗原は主に黄色ブドウ球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ）および化膿レンサ球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｙｏｇｅｎｅｓ）に関連するが、ストレプトコッカス・エクイ（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｅｑｕｉ）もまた、スーパー抗原を産生することが示されている。
【００２５】
黄色ブドウ球菌によって産生されるスーパー抗原としては、エンテロトキシンＳＥＡ、ＳＥＢ、ＳＥＣ１、ＳＥＣ２、ＳＥＣ３、ＳＥＤ、ＳＥＥ、ＳＥＧ、ＳＥＨ、ＳＥＩ、ＳＥＪ、ＳＥＫ、ＳＥＬ、ＳＥＭ、ＳＥＮ、ＳＥＯ、ＳＥＰ、ＳＥＲ、ＳＥＱ、ＳＥＲ、ＳＥＵ、ＳＥＶおよびＴＳＳＴ−１が挙げられる。スーパー抗原ＳＥＫ、ＳＥＬ、ＳＥＭ、ＳＥＮ、ＳＥＯ、ＳＥＰ、ＳＥＱおよびＳＥＵはまた、当該分野においてＳＥｌＫ、ＳＥｌＬ、ＳＥｌＭ、ＳＥｌＮ、ＳＥＬＯ、ＳＥｌＰ、ＳＥｌＱおよびＳＥｌＵと示される。文字「ｌ」は、それらがエンテロトキシン様であること、すなわちそれらがスーパー抗原特性を有するが、それらが副作用をあまり有し得ないことを示す。
【００２６】
ヒトにおいて、幼児期の複雑な腸内微生物叢の存在は一般にアレルギー発生に対する防御であると見なされている（衛生仮説を参照のこと）。予測されるイムノフローラ（ＩＭＭＵＮＯＦＬＯＲＡ）出生コホートにおいて、他の典型的な成育できる腸内細菌によってではなく、黄色ブドウ球菌による腸内の早期定着、すなわち出生後４週以内の早期定着は、少なくとも出生から最初の１８ヶ月の間、食物アレルギーの発生からの防御と関連することが観察された（国際公開第２００６／００９５０１号、およびＬｕｎｄｅｌｌ，Ａ．Ｃ．ら、Ｉｎｃｒｅａｓｅｄ  ｌｅｖｅｌｓ  ｏｆ  ｃｉｒｃｕｌａｔｉｎｇ  ｓｏｌｕｂｌｅ  ＣＤ１４  ｂｕｔ  ｎｏｔ  ＣＤ８３  ｉｎ  ｉｎｆａｎｔｓ  ａｒｅ  ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  ｗｉｔｈ  ｅａｒｌｙ  ｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ  ｃｏｌｏｎｉｚａｔｉｏｎ  ｗｉｔｈ  Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ  Ｃｌｉｎ  Ｅｘｐ  Ａｌｌｅｒｇｙ、２００７．３７（１）：ｐ．６２−７１を参照のこと）。
【００２７】
アレルギーの発生を予防する際のスーパー抗原の有用性は動物モデルにおいて確認されている（Ｌｏｎｎｑｖｉｓｔ  Ａら、Ｎｅｏｎａｔａｌ  ｅｘｐｏｓｕｒｅ  ｔｏ  ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃａｌ  ｓｕｐｅｒａｎｔｉｇｅｎ  ｉｍｐｒｏｖｅｓ  ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ  ｏｆ  ｏｒａｌ  ｔｏｌｅｒａｎｃｅ  ｉｎ  ａ  ｍｏｕｓｅ  ｍｏｄｅｌ  ｏｆ  ａｉｒｗａｙ  ａｌｌｅｒｇｙ  Ｅｕｒ  Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ、２００９．３９：４４７−４５６を参照のこと）。しかしながらこの効果は新生児においてのみ存在し、成熟免疫系を有する成体哺乳動物においては存在しない。さらに、成熟免疫系は、古典的「食中毒」における原因物質である、スーパー抗原に対して非常に反応性がある。
【００２８】
国際公開第２００６／００９５０１号およびＣｌｉｎ  Ｅｘｐ  Ａｌｌｅｒｇｙ、２００７．３７（１）：ｐ．６２−７１の基本的研究において、食物アレルギーだけでなく、アトピー性皮膚炎も研究された。食物アレルギーの発生と対照的に、初期の黄色ブドウ球菌定着とアトピー性皮膚炎の発生との間に正または逆相関は見出されなかった。さらに、別の研究は、黄色ブドウ球菌が、健康なままの小児よりアトピー性皮膚炎を発生している６ヶ月齢の小児の腸内により多く存在していると報告している（Ｂｊｏｒｋｓｔｅｎ，Ｂ．、Ｅ．Ｓｅｐｐ、Ｋ．Ｊｕｌｇｅ、Ｔ．Ｖｏｏｒ、およびＭ．Ｍｉｋｅｌｓａａｒ．２００１．Ａｌｌｅｒｇｙ  ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  ａｎｄ  ｔｈｅ  ｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ  ｍｉｃｒｏｆｌｏｒａ  ｄｕｒｉｎｇ  ｔｈｅ  ｆｉｒｓｔ  ｙｅａｒ  ｏｆ  ｌｉｆｅ．Ｊ．Ａｌｌｅｒｇｙ  Ｃｌｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１０８：５１６−５２０）。しかしながらこの見解は、国際公開第２００６／００９５０１号およびＣｌｉｎ  Ｅｘｐ  Ａｌｌｅｒｇｙ、２００７．３７（１）：ｐ．６２−７１の基本的研究によって支持されておらず、グループの間で黄色ブドウ球菌定着の差は１週または１ヶ月齢で見られなかった。
【００２９】
本発明者らは、驚くべきことに、いくつかのスーパー抗原を産生する黄色ブドウ球菌による腸内の早期定着、すなわち出生後４週以内の早期定着がアトピー性皮膚炎の発生に対する防御を提供するが、その他は一見したところアトピー性皮膚炎の発生にかかりやすくなることを見出した。特に、ＳＥＡを産生する黄色ブドウ球菌による早期定着は後年にアトピー性皮膚炎を発生しやすくなることが見出された。スーパー抗原を産生する黄色ブドウ球菌株の大多数について、有意な傾向は見られなかった。
【００３０】
しかしながら、ブドウ球菌エンテロトキシンＧおよびＩ（ＳＥＧおよびＳＥＩ）ならびにブドウ球菌エンテロトキシン様毒素Ｍ、ＮおよびＯ（ＳＥｌＭ、ＳＥｌＮおよびＳＥｌＯ）をコードするエンテロトキシン遺伝子クラスター（ｅｇｃ）の一部である遺伝子を保有している黄色ブドウ球菌による早期定着は、１８ヶ月齢によるアトピー性皮膚炎のより低い発生と有意に相関することが見出された。
【００３１】
一見したところ、スーパー抗原と幼児免疫系との間の相互作用は、以前に明らかにされたものよりさらに複雑である。スーパー抗原による幼児免疫系の刺激は、スーパー抗原の種類に応じて、アトピー性皮膚炎の後の発症にかかりやすくなるか、またはそれから防御するように見える。
【００３２】
したがって本発明の実施形態は、ヒトにおけるアトピー性皮膚炎を予防するか、またはヒトにおけるアトピー性皮膚炎を発症するリスクを低減させるのに使用するための、ブドウ球菌エンテロトキシンＧおよびＩ（ＳＥＧおよびＳＥＩ）ならびにブドウ球菌エンテロトキシン様毒素Ｍ、ＮおよびＯ（ＳＥｌＭ、ＳＥｌＮおよびＳＥｌＯ）またはそれらの混合物からなる群から選択されるスーパー抗原に関する。スーパー抗原は、新生児の未成熟免疫系に対してその効果をもたらすように粘膜によって投与される。スーパー抗原は幼児免疫系に対してその効果をもたらすので、スーパー抗原は出生後３ヶ月以内に新生児に投与される。一実施形態によれば、本明細書に使用される場合、アトピー性皮膚炎はウィリアムの基準に従う。
【００３３】
ウィリアムの基準
大基準−患者は以下でなければならない：
−  敏感肌状態（または小児が掻いたりもしくは擦ったりしている親／介護者の報告）。
【００３４】
小基準−患者は以下の小基準のうちの３つまたはそれ以上を有さなければならない：
年長（４歳超）／成人：
−  皮膚のしわ（例えば、肘の折り重なる部分、膝の後部、足首の前部、首の周り）のかゆみの病歴
−  喘息またはアレルギー性鼻炎の既往歴
−  昨年の全体的な乾燥皮膚の既往歴
−  目に見える屈曲部の皮膚炎（すなわち肘、膝、手首などにおける皮膚の曲がる部分または折り畳む部分）
−  ２歳未満での発症
４歳未満の小児（早期発症型は必ずしも４歳未満の小児における兆候とは限らない）
−  頬の掻痒の病歴
−  一等親血縁者のアトピー性疾患の病歴
−  頬、額および他の手足の湿疹。
【００３５】
代替の実施形態は、ヒトにおけるアトピー性皮膚炎を予防するか、またはヒトにおけるアトピー性皮膚炎を発症するリスクを低減させるのに使用するための医薬の製造のための、ブドウ球菌エンテロトキシンＧおよびＩ（ＳＥＧおよびＳＥＩ）ならびにブドウ球菌エンテロトキシン様毒素Ｍ、ＮおよびＯ（ＳＥｌＭ、ＳＥｌＮおよびＳＥｌＯ）またはそれらの混合物からなる群から選択されるスーパー抗原の使用に関する。医薬は出生後３ヶ月以内の新生児に粘膜によって投与される。さらに別の代替の実施形態は、ヒトにおけるアトピー性皮膚炎を予防するか、またはヒトにおけるアトピー性皮膚炎を発症するリスクを低減させる方法であって、スーパー抗原を出生後３ヶ月以内の新生児に粘膜によって投与することを含む、方法に関する。ヒトにおけるアトピー性皮膚炎を予防するか、またはヒトにおけるアトピー性皮膚炎を発症するリスクを低減させるのに使用するための、ブドウ球菌エンテロトキシンＧおよびＩ（ＳＥＧおよびＳＥＩ）ならびにブドウ球菌エンテロトキシン様毒素Ｍ、ＮおよびＯ（ＳＥｌＭ、ＳＥｌＮおよびＳＥｌＯ）またはそれらの混合物からなる群から選択されるスーパー抗原に関して以下に提供される態様はこれらの代替の実施形態に同等に適用可能である。
【００３６】
本発明の基本的研究において、防御効果は、エンテロトキシン様毒素ＳＥｌＭ、ＳＥｌＮおよびＳＥｌＯについてわずかにより有意であった。したがって、スーパー抗原は、ＳＥｌＭおよびＳＥｌＮなどのそれらのスーパー抗原の中から選択され得る。さらに、スーパー抗原はブドウ球菌エンテロトキシンＧまたはＩ（ＳＥＧおよびＳＥＩ）であってもよい。さらに、ＳＥＧ、ＳＥＩ、ＳＥｌＭ、ＳＥｌＮ、およびＳＥｌＯのうちの２、３、もしくは４個の任意の組み合わせ、またはＳＥＧ、ＳＥＩ、ＳＥｌＭ、ＳＥｌＮおよびＳＥｌＯの全てが、ヒトにおけるアトピー性皮膚炎を予防するか、またはヒトにおけるアトピー性皮膚炎を発症するリスクを低減させるのに使用されてもよい。
【００３７】
さらに、天然のスーパー抗原だけでなく、その誘導体もまた、それらがスーパー抗原活性を有する限り、ヒトにおけるアトピー性皮膚炎を予防するか、またはヒトにおけるアトピー性皮膚炎を発症するリスクを低減させるために使用されてもよい。スーパー抗原はタンパク質であるので、アミノ酸置換、欠失または挿入ならびにタンパク質のＮ末端またはＣ末端における付加などの誘導体を得る種々の方法は当業者に公知である。置換、挿入および付加は、天然および非天然のアミノ酸により実施されてもよい。目的の誘導体の１つの種類は、天然スーパー抗原の断片、すなわち完全長タンパク質の配列の一部のみからなるタンパク質およびペプチドであってもよい。さらに、天然スーパー抗原は、精製を容易にするためにＨＩＳタグ、ならびにＰＥＧ部分およびタンパク質の可溶性に影響を与える他の種類の部分により置換されてもよい。一実施形態によれば、本明細書に使用される場合、スーパー抗原は、天然および非天然スーパー抗原、例えば、天然スーパー抗原の誘導体に関する。別の実施形態によれば、本明細書に使用される場合、スーパー抗原は天然スーパー抗原のみに関する。
【００３８】
スーパー抗原は、湿疹を予防するか、または湿疹の発症のリスク低減させるために幼児の免疫系に対してその効果を発揮するので、それは湿疹病変が現れるよりずっと前の出生後早期に投与される。したがって、スーパー抗原は出生後３ヶ月以内に投与される。さらに、アトピー性皮膚炎を発症する個体と、健常な個体との間の定着の頻度の差は出生後早期に最も顕著であることを考慮して（図３を参照のこと）、その効果は出生後のより早い段階でより顕著になり得ることが想定される。一実施形態によれば、スーパー抗原は、出生後２週以内、出生後１０日以内、出生後７日以内、または出生後４日以内に投与される。さらに、スーパー抗原は、１回より多く、例えば２、３、４または５回投与されてもよい。
【００３９】
幼児の免疫系に影響を与える、例えば刺激することができるようにするために、スーパー抗原は粘膜によって投与される。様々な粘膜による投与経路が当該分野において公知である。粘膜投与のための経路の例には、経口、直腸、および鼻腔経路が含まれる。一実施形態によれば、スーパー抗原は経口投与される。スーパー抗原を経口投与する際に、それは、舌下、口腔または腸内に投与されてもよい。スーパー抗原が経口投与される一実施形態によれば、それは舌下／嚥下投与により投与される。別の実施形態によれば、スーパー抗原は直腸投与される。安全性の観点から、直腸投与はいくつかの利点を与えることができる。
【００４０】
代替のあまり好ましくない実施形態によれば、スーパー抗原は鼻腔投与される。
【００４１】
典型的に、薬学的活性成分であるスーパー抗原は、その投与を容易にするために医薬組成物に製剤化される。スーパー抗原とは別に、医薬組成物は少なくとも１種の薬学的に許容可能な賦形剤および／または担体を含む。担体はまた、示されるビヒクルであってもよい。
【００４２】
医薬組成物は、直腸、経口、鼻腔、口腔または舌下投与用に製剤化されてもよい。好ましくは、医薬組成物は、経口、口腔または舌下投与用に製剤化される。
【００４３】
スーパー抗原を含む医薬組成物は、例えば、錠剤、丸薬、サシェ剤、バイアル、硬質または軟質カプセル、水性または油性懸濁液、水溶液または油性溶液、エマルション、粉末、顆粒、シロップ、エリキシル剤、トローチ剤、再構成可能粉末、液体調製剤、スプレー、クリーム、軟膏（ｓａｌｖｅ）、ゼリー、ゲル、ペースト、軟膏（ｏｉｎｔｍｅｎｔ）、液体エアロゾル、乾燥粉末製剤、またはＨＦＡエアロゾルの形態であってもよい。医薬組成物は、経口、例えば腸内、口腔または舌下経路による投与に適した形態であってもよい。さらに、あまり好ましくないが、それは、吸入または吹送（例えば、鼻腔、気管、気管支）経路による投与のためであってもよい。一実施形態によれば、組成物は、舌下嚥下投与などの舌下投与用である。
【００４４】
治療される対象および投与経路に応じて、組成物は様々な用量で投与されてもよい。細菌スーパー抗原の溶液または懸濁液の投与の提案される用量濃度は、１０〜１００μｇ／ｍｌ、例えば約４０μｇ／ｍｌである。スーパー抗原の用量は、一実施形態によれば、１〜７５０μｇ／ｋｇ体重、例えば１０〜３００μｇ／ｋｇ体重、２０〜２００μｇ／ｋｇ体重、または３０〜１５０μｇ／ｋｇ体重の範囲である。
【００４５】
経口、例えば、腸内、口腔または舌下投与に関して、細菌スーパー抗原は、医薬組成物が得られるように様々な賦形剤および／または担体と組み合わされてもよい。経口、例えば腸内、口腔または舌下投与用の固体医薬組成物は、多くの場合、以下を含む：
−  結合剤（例えば、シロップおよび糖、アカシア、ゼラチン、ソルビトール、トラガカント、ポリビニルピロリドン、ラウリル硫酸ナトリウム、アルファ化トウモロコシデンプン、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ラクトース、デンプン、加工デンプン、アカシアゴム、トラガカントゴム、グアーガム、ペクチン、ワックス結合剤、微結晶性セルロース、メチルセルロース、カルボキシメチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、コポリビドンおよび／またはアルギン酸ナトリウム）、
−  崩壊剤（デンプン、好ましくはトウモロコシ、ジャガイモまたはタピオカデンプン、アルギン酸および特定の複合ケイ酸塩、ポリビニルピロリドン、スクロース、ゼラチン、アカシア、デンプングリコール酸ナトリウム、微結晶性セルロース、クロスカルメロースナトリウム、クロスポビドン、ヒドロキシプロピルメチルセルロースおよび／またはヒドロキシプロピルセルロースなど）、
−  潤滑剤（ステアリン酸マグネシウム、ラウリル硫酸ナトリウム、タルク、シリカポリエチレングリコールワックス、ステアリン酸、パルミチン酸、ステアリン酸カルシウム、カルナウバワックス（ｃａｒｎｕｂａ  ｗａｘ）、硬化植物油、鉱油、ポリエチレングリコールおよび／またはフマル酸ステアリルナトリウムなど）、および／または
−  充填剤（高分子量ポリエチレングリコール、ラクトース、糖、リン酸カルシウム、ソルビトール、グリシンステアリン酸マグネシウム、デンプン、グルコース、ラクトース、スクロース、米粉、チョーク、ゼラチン、微結晶性セルロース、硫酸カルシウム、キシリトールおよび／またはラクチトールを含む）。
【００４６】
さらに、このような固体組成物はまた、防腐剤および／または酸化防止剤を含んでもよい。
【００４７】
経口、例えば、腸内、口腔または舌下投与用の液体医薬組成物は、例えば、溶液、分散系、エマルション、シロップ、もしくはエリキシル剤の形態であってもよいか、または水による再構成のための乾燥粉末もしくは使用前の他の適切なビヒクルとして提示されてもよい。このような液体組成物は、懸濁剤（例えば、ソルビトール、シロップ、メチルセルロース、食用硬化油脂、ゼラチン、ヒドロキシアルキルセルロース、カルボキシメチルセルロース、ステアリン酸アルミニウムゲル、食用硬化油脂）、乳化剤（例えば、レシチン、ソルビタンモノオレエート、またはアカシア）、水性または非水性ビヒクル（食用油、例えば、アーモンドオイル、分割したココナッツオイルを含む）、油性エステル（例えば、グリセリン、プロピレングリコール、ポリエチレングリコールまたはエチルアルコールのエステル）、グリセリン、水または生理食塩水、防腐剤（例えば、メチルまたはプロピルｐ−ヒドロキシベンゾエートまたはソルビン酸）および従来の香味剤、防腐剤、甘味剤または着色剤などの従来の添加剤を含有してもよい。水、エタノール、プロピレングリコール、グリセリンおよびそれらの組み合わせなどの希釈剤もまた、含まれてもよい。
【００４８】
適切な充填剤、結合剤、崩壊剤、潤滑剤およびさらなる賦形剤は当業者に周知である。
【００４９】
スーパー抗原および／またはアレルゲンなどのタンパク質またはポリペプチドの経口製剤の設計の考慮を必要とする製剤要因には、水溶液および非水溶液中のタンパク質またはポリペプチドの溶液挙動、ならびにタンパク質またはポリペプチドの安定性および構造に対するイオン強度、溶液ｐＨ、および溶媒種類の効果が含まれる。タンパク質またはポリペプチドの安定性および構造に対する製剤化の間の温度の効果もまた、考慮されなければならず、同様に経口剤形、特に経口液体剤形、例えばゼラチンカプセルまたはシロップに組み込むための製剤の全体の適合性も考慮されなければならない。
【００５０】
鼻腔投与または吸入による投与に関して、スーパー抗原は、溶液、乾燥粉末または懸濁液の形態で送達されてもよい。投与は、投与者によって絞り出されるか、もしくはポンプで注入されるポンプ噴霧容器によって、または適切な推進剤、例えば、ジクロロジフルオロメタン、トリクロロフルオロメタン、ジクロロテトラフルオロエタン、二酸化炭素または他の適切なガスを使用した加圧容器もしくはネブライザーからのエアロゾルスプレー提示によって行われてもよい。細菌スーパー抗原はまた、担体物質（例えば糖類）と組み合わせた微粉化した粉末として、またはミクロスフェアとして乾燥粉末吸入具によって投与されてもよい。吸入具、ポンプスプレーまたはエアロゾルスプレーは単回または複数回用量であってもよい。投薬量は、計量した量の活性化合物を送達するバルブにより制御されてもよい。鼻腔投与、特に吸入による投与は、スーパー抗原を投与するためのあまり好ましくない経路を表す。
【００５１】
さらに説明するまでもなく、当業者は、前述の説明を用いて本発明をその完全な程度まで実施できると考えられる。したがって上記の好ましい特定の実施形態は単なる例示であり、本開示を限定するものと決して解釈されるべきではない。
【００５２】
本発明は特定の実施形態を参照して上記に記載されているが、本明細書に示される特定の形態に限定することを意図するものではない。むしろ、本発明は添付の特許請求の範囲のみによって限定され、例えば上記の実施形態と異なる特定の上記以外の実施形態がこれらの添付の特許請求の範囲内で同等に可能である。
【００５３】
請求項において、「含む／含んでいる」という用語は、他の要素または工程の存在を排除するものではない。さらに、個々の特徴が異なる請求項に含まれてもよいが、それらは可能な場合、有益には、組み合わされてもよく、異なる請求項に含まれるものは、特徴の組み合わせが実施可能ではない、および／または有益ではないことを示すわけではない。
【００５４】
さらに、単数の参照は複数を排除しない。「一つの（ａ、ａｎ）」、「第１の」、「第２の」などの用語は複数を除外しない。
【実施例】
【００５５】
材料および方法
対象
Ｓａｈｌｇｒｅｎｓｋａ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｈｏｓｐｉｔａｌ、Ｇｏｔｅｂｏｒｇ、スウェーデンにおいて１９９８年〜２００３年に生まれた全部で１７３人のスウェーデンの新生児は、幼児腸内定着パターンと、その後のアレルギー発症との関係を調査するＡＬＬＥＲＧＹＦＬＯＲＡ出生コホート研究に含まれた（Ａｄｌｅｒｂｅｒｔｈ，Ｉ．ら（２００７）．「Ｇｕｔ  ｍｉｃｒｏｂｉｏｔａ  ａｎｄ  ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  ｏｆ  ａｔｏｐｉｃ  ｅｃｚｅｍａ  ｉｎ  ３  Ｅｕｒｏｐｅａｎ  ｂｉｒｔｈ  ｃｏｈｏｒｔｓ．」  Ｊ  Ａｌｌｅｒｇｙ  Ｃｌｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １２０（２）：３４３−３５０）。家族、住居状況、送達様式、給餌パターン、病気、医薬などの背景因子を親が毎日記録し、６、１２および１８ヶ月に研究看護師による電話インタビューの間にデータを取った。全ての親は、彼らの子供がこの研究に参加することについて記載されたインフォームドコンセントを提供した。この研究は、Ｅｔｈｉｃｓ  Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  ｏｆ  Ｇｏｔｈｅｎｂｕｒｇ、スウェーデン（Ｒ４４８−９７およびＯ４４６−００）によって承認された。
【００５６】
臨床検査
小児を、１８ヶ月齢にて、またはアレルギーを示唆する症状が最初に発生したときに臨床検査をした。アトピー性皮膚炎はウィリアムの基準に従って診断した（Ｈ．Ｃ．ＷＩＬＬＩＡＭＳら  「Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃ  Ｃｒｉｔｅｒｉａ  ｆｏｒ  Ａｔｏｐｉｃ  Ｄｅｒｍａｔｉｔｉｓ」  Ｂｒｉｔｉｓｈ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｄｅｒｍａｔｏｌｏｇｙ、Ｖｏｌｕｍｅ  １３１、Ｉｓｓｕｅ  ３、３８３−３９６ページ、Ｓｅｐｔｅｍｂｅｒ  １９９４）。食物アレルギー、アレルギー性鼻炎および喘息は標準的なプロトコルに従って診断した（Ｈｅｓｓｅｌｍａｒ，Ｂ．ら、（２０１３）  「Ｐａｃｉｆｉｅｒ  ｃｌｅａｎｉｎｇ  ｐｒａｃｔｉｃｅｓ  ａｎｄ  ｒｉｓｋ  ｏｆ  ａｌｌｅｒｇｙ  ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ．」  Ｐｅｄｉａｔｒｉｃｓ  １３１（６）：ｅ１８２９−１８３７）。
【００５７】
幼児の腸内微生物叢からの黄色ブドウ球菌の単離
直腸試料を３日目に得、好気的および半定量的に培養した。糞便試料を、１、２、４および８週齢ならびに６、１２および１８ヶ月齢に得、主要な嫌気性および好気性細菌について定量的に培養した。ブドウ球菌培養、種形成および菌株分類のために使用した方法は以前に記載されている（Ｌｉｎｄｂｅｒｇ，Ｅ．ら、（２０００）．「Ｌｏｎｇ−ｔｉｍｅ  ｐｅｒｓｉｓｔｅｎｃｅ  ｏｆ  ｓｕｐｅｒａｎｔｉｇｅｎ−ｐｒｏｄｕｃｉｎｇ  Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ  ｓｔｒａｉｎｓ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ  ｍｉｃｒｏｆｌｏｒａ  ｏｆ  ｈｅａｌｔｈｙ  ｉｎｆａｎｔｓ．」  Ｐｅｄｉａｔｒ  Ｒｅｓ  ４８（６）：７４１−７４７、Ａｄｌｅｒｂｅｒｔｈ，Ｉ．ら（２００７）．「Ｇｕｔ  ｍｉｃｒｏｂｉｏｔａ  ａｎｄ  ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  ｏｆ  ａｔｏｐｉｃ  ｅｃｚｅｍａ  ｉｎ  ３  Ｅｕｒｏｐｅａｎ  ｂｉｒｔｈ  ｃｏｈｏｒｔｓ．」  Ｊ  Ａｌｌｅｒｇｙ  Ｃｌｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １２０（２）：３４３−３５０．）。簡潔に述べると、黄色ブドウ球菌株をスタフィロコッカス寒天培地での２日間の好気性培養後に単離した。サイズ、形状、色または透明度の異なるコロニーを個々に数え上げ、各々の種類のうちの１つのコロニーをグラム染色およびコアグラーゼ反応に基づいて種分化し、その後、純粋培養し、−８０℃にて凍結保存した。一人の幼児からの全ての黄色ブドウ球菌単離株を、幼児内の異なる株の同定のためにＲＡＰＤ（ランダム増幅多型ＤＮＡ）によって分析し、異なる幼児からの単離株は比較しなかった。
【００５８】
各株を一連のマルチプレックスＰＣＲによって３０の細菌遺伝子（スーパー抗原、毒素および付着因子を含む）に関して分析した（Ｎｏｗｒｏｕｚｉａｎ，Ｆ．Ｌ．ら、（２０１１）．「Ａｄｈｅｓｉｎ  ａｎｄ  ｓｕｐｅｒａｎｔｉｇｅｎ  ｇｅｎｅｓ  ａｎｄ  ｔｈｅ  ｃａｐａｃｉｔｙ  ｏｆ  Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ  ｔｏ  ｃｏｌｏｎｉｚｅ  ｔｈｅ  ｉｎｆａｎｔｉｌｅ  ｇｕｔ．」  Ｊ  Ｉｎｆｅｃｔ  Ｄｉｓ  ２０４（５）：７１４−７２１）。以下の病原性因子をコードする以下の遺伝子を分析した：黄色ブドウ球菌エンテロトキシン（ＳＥ）Ａ−Ｄ（ｓｅａ−ｄ）およびＳＥＨ（ｓｅｈ）；エンテロトキシン様（ＳＥｌ）Ｋ（ｓｅｌｋ）、ＳＥｌＬ（ｓｅｌｌ）、ＳＥｌＭ（ｓｅｌｍ）、ＳＥｌＯ（ｓｅｌｏ）、ＳＥｌＲ（ｓｅｌｒ）、ＳＥｌＰ（ｓｅｌｐ）およびＳＥｌＱ（ｓｅｌｑ）；毒素性ショック症候群ＴＳＳＴ−１（ｔｓｔ）；表皮剥脱毒素Ａ、ＢおよびＤ（ｅｔａ、ｅｔｂ、およびｅｔｄ）；β−溶血素（ｈｌｂ）；表皮細胞分化抑制因子毒素Ａ〜Ｃ（ｅｄｉｎ）；ＰＶＬ（ｐｖｌ）および白血球毒素Ｍ（ｌｕｋＭ）；フィブリノゲン結合タンパク質（ｆｉｂ）、クランピング因子ＡおよびＢ（ｃｌｆＡおよびｃｌｆＢ）、エラスチン結合タンパク質（ｅｂｐ）、ラミニン結合タンパク質（ｌｂｐ）、コラーゲン結合タンパク質（ｃｂｐ）、骨シアロタンパク質結合タンパク質（ｂｓｐ）、フィブロネクチン結合タンパク質ＡおよびＢ（ｆｎｂｐＡおよびｆｎｂｐＢ）を含む付着因子、ならびにａｇｒアレル多型（ａｇｒ１〜４）。
【００５９】
統計的分析
フィッシャーの正確確率検定を使用して割合を比較した。ＳＩＭＣＡ−Ｐ（Ｕｍｅｔｒｉｃｓ  ＡＢ、Ｕｍｅａ、スウェーデン）を使用して多変量分析を実施した。潜在構造に対する正射影（Ｏ−ＰＬＳ）を使用して、最初の１８ヶ月齢での黄色ブドウ球菌病原性遺伝子と、臨床的湿疹状態との間の関連性を明らかにした。この方法は主成分分析（ＰＣＡ）の回帰発生である。Ｏ−ＰＬＳにおいて、クラスタリングデータはＹ変数、この場合、アトピー性皮膚炎の発症に関連する。
【００６０】
結果
合計１７３人の幼児の通常の糞便試料を観察し、症状の最初の出現時および１８ヶ月齢にアレルギーを診断した。症状が初めて出た年齢を登録した。
【００６１】
幼児の２５パーセント（４３／１７３）は、最初の１８ヶ月齢の間、アトピー性皮膚炎を発症した。それらのうち、１４／４３（３３％）はまた、他のアレルギーの兆候を示した。すなわち、１８ヶ月齢で食物アレルギー（ｎ＝６）、喘息（ｎ＝４）、食物アレルギーおよび喘息（ｎ＝２）、食物アレルギーおよびアレルギー性鼻炎（ｎ＝１）ならびに喘息およびアレルギー性鼻炎（ｎ＝１）。
【００６２】
黄色ブドウ球菌株の定着率および集団計数
最初の１８ヶ月齢の間、異なる時点において黄色ブドウ球に対して糞便試料陽性を生じた小児の割合を図１ａに示す。黄色ブドウ球菌による定着は健常な群において２ヶ月齢までに最大に達し、一方で、湿疹群において６ヶ月齢まで増加し、その後、両方の群で減少した。
【００６３】
腸内の黄色ブドウ球菌による定着は２ヶ月齢まで健常な群においてわずかに高かったが（図１ａを参照のこと）、その差はいずれの時点でも有意ではなかった：
【００６４】
【表１】
2018521138.tif 000002
【００６５】
６ヶ月齢後の定着率の減少は健常な群において、より顕著であったが（図１ａを参照のこと）、これらの２つの群の間で定着化率の有意な差はなかった：
【００６６】
【表２】
2018521138.tif 000003
【００６７】
幼児から得た糞便中の黄色ブドウ球菌の計数は出生後最初の１ヶ月の間高く、その後急激に減少した（図１ｂ）。このことは、最初の皮膚細菌である黄色ブドウ球菌が、多くの従来の連続して、より複雑な微生物叢との競争に耐えることができず、したがって集団の数が減少したことを表す。
【００６８】
黄色ブドウ球菌の集団の数は、後でアトピー性皮膚炎を発症した幼児または健康なままの幼児の間で異なる時点はなかった。
【００６９】
健常な幼児および皮膚炎が初めて現れる前に湿疹を示す幼児に定着している腸内黄色ブドウ球菌株における保有遺伝子
本発明者らは、１３８個の黄色ブドウ球菌株、すなわちアトピー性皮膚炎を発症していない９３人の幼児から得た１１２個の株および出生後の最初の１８ヶ月の間にアトピー性皮膚炎を発症した２１人の幼児に由来する２６個の株における保有遺伝子を試験した。本発明者らは、湿疹を発症するリスクに影響を与える細菌要因、および微生物叢に対する湿疹疾患の作用がない細菌要因に興味を持ったので、本発明者らは最初の２ヶ月齢からの菌株のみを研究することを選択した。２ヶ月齢で既に確立されたアトピー性皮膚炎を有する少数の小児を分析から排除した。
【００７０】
潜在構造に対する正射影（Ｏ−ＰＬＳ）を使用して、出生後の最初の２ヶ月の間に幼児に定着している腸内黄色ブドウ球菌株の細菌遺伝子と、１８ヶ月齢でのアトピー性皮膚炎の有無との間の関連性を決定した（疾患は低年齢で提示されるが、２ヶ月齢より後である）。図２は、健常な状態と関連する腸内黄色ブドウ球菌の細菌遺伝子を示す。これらの要因は図の左側に示される。それらは、ｅｇｃ（ｓｅｇ、ｓｅｉ、ｓｅｌｍ、ｓｅｌｎおよびｓｅｌｏ）ならびにｓｅｃ遺伝子および付着因子遺伝子ｃｂｐおよびｅｂｐによってコードされるスーパー抗原遺伝子を含んだ。対照的に、１８ヶ月齢でアトピー性皮膚炎を有することと関連する細菌遺伝子は図の右側に示される（バーが大きくなると、寄与は大きくなり、エラーバーが小さくなると、寄与はより信頼性がある）。それらは付着因子遺伝子ｆｉｂおよびアクセサリー調節遺伝子（ＡＧＲ）を含む。ほとんどまたは全く分離に寄与していない遺伝子は図から省いている。
【００７１】
アトピー性皮膚炎の発症に関連する腸内黄色ブドウ球菌株の中で異なるエンテロトキシン、毒素および付着因子遺伝子の保有率もまた、表１に示す。
【００７２】
【表３】
2018521138.tif 000004
【００７３】
最もよく見られるスーパー抗原遺伝子は、ｓｅｇ、ｓｅｉ、ｓｅｌｍ、ｓｅｌｎおよびｓｅｌｏであり、全てエンテロトキシン遺伝子クラスター（ｅｇｃ）によってコードされる。エンテロトキシンＳＥｌＭをコードする遺伝子は、後でアトピー性皮膚炎を発症する幼児由来の株と比較して、後で健常な幼児由来の株においてよく見られる（ｐ＝０．００３）。同様の傾向がｓｅｌｎ（ｐ＝０．０２）およびｓｅｌｏ遺伝子（ｐ＝０．０７）のそれぞれについて見られた。対照的に、アトピー性皮膚炎を発症した幼児から得た黄色ブドウ球菌株は、しばしば、アトピー性皮膚炎を発症しなかった幼児由来の黄色ブドウ球菌株と比較して、ＳＥＡスーパー抗原をコードするｓｅａ遺伝子および表皮剥脱毒素をコードするｅｔａ遺伝子を保有する傾向があったが、その差は統計的有意性に到達しなかった。全ての調査したスーパー抗原遺伝子の欠如は、健常なままの幼児由来の株より、後でアトピー性皮膚炎を発症した幼児由来の株の中でよく見られたが、その差は有意ではなかった（表１）。
【００７４】
これらの結果は、出生後早い段階で特にＳＥｌＭおよびＳＥｌＯであるが、同様にエンテロトキシン遺伝子クラスター（ｅｇｃ）における遺伝子によってコードされる他のスーパー抗原、すなわちブドウ球菌エンテロトキシンＧおよびＩ（ＳＥＧおよびＳＥＩ）ならびにブドウ球菌エンテロトキシン様毒素Ｎ（ＳＥｌＮ）への曝露が、アトピー性皮膚炎の後年での発症に対する防御効果を提供することを示す。したがって、新生児へのスーパー抗原ＳＥｌＭおよびＳＥｌＯの粘膜投与が、ヒトにおけるアトピー性皮膚炎を予防するか、またはヒトにおけるアトピー性皮膚炎を発症するリスクを低減させるために使用できると結論付けることができる。さらに、同様にエンテロトキシン遺伝子クラスター（ｅｇｃ）における遺伝子によってコードされる、他のスーパー抗原、すなわちブドウ球菌エンテロトキシンＧおよびＩ（ＳＥＧおよびＳＥＩ）ならびにブドウ球菌エンテロトキシン様毒素Ｎ（ＳＥｌＮ）が、ヒトにおけるアトピー性皮膚炎を予防するか、またはヒトにおけるアトピー性皮膚炎を発症するリスクを低減させるのに有用であり得る。
【００７５】
ａｇｒアレル１は健常なままの幼児から得た黄色ブドウ球菌株の中でよく見られる傾向があったが（ｐ＝０．０８）、ａｇｒアレル２は後の期間において湿疹を発症した幼児由来の黄色ブドウ球菌の中で豊富にあった（ｐ＝０．０７）。これらの２つの黄色ブドウ球菌のコレクションにおけるａｇｒ３の分布はおおよそ同様であり、少しの株がａｇｒ４に属していた（表２）。
【００７６】
健常な幼児および他のアレルギーを有さない湿疹の幼児から得た腸内黄色ブドウ球菌株における保有細菌遺伝子
アトピー性皮膚炎を有する４３人の幼児のうちの１４人もまた、他のアレルギーの兆候も発症した。これらの幼児から得た株は除外し、病原性遺伝子プロファイルが、健常な幼児に定着する黄色ブドウ球菌と、後で湿疹の幼児に定着する黄色ブドウ球菌株との間で依然として異なるかどうかを調べた。
【００７７】
【表４】
2018521138.tif 000005
【００７８】
表２に示されるように、ｅｇｃの一部であるスーパー抗原遺伝子（ｓｅｇ、ｓｅｉ、ｓｅｌｍ、ｓｅｌｎ、およびｓｅｌｏ）を保有している黄色ブドウ球菌株は、後でアトピー性皮膚炎を発症する幼児においてより健常な幼児において依然として顕著によく見られた（表２）。対照的に、スーパー抗原遺伝子ｓｅａは、健常なままである幼児と比較して湿疹を発症する幼児に定着している株の中で、より頻繁に見られた。全てのスクリーニングしたスーパー抗原遺伝子を欠いている株は、後で湿疹を発症する小児において著しく豊富であった（表２）。
【００７９】
表２の結果は表１に見られる傾向を確認するだけでなく、ｅｇｃによってコードされる全てのスーパー抗原について、より明確であり（すなわち低いＰ値）、これらのスーパー抗原が、他のアトピーの兆候と比較して、湿疹を予防するか、または湿疹を発症するリスクを低減させるのに特に効果的であり得ることを示唆している。
【００８０】
興味深いことに、スーパー抗原遺伝子ｓｅｃについてのＰ値は変化しないままであり（０．２）、このスーパー抗原はアトピー性皮膚炎の発症を予防するのに特に効果的であると確認されない。
【００８１】
出生後最初の２ヶ月の間に特定の病原性要因遺伝子を保有する黄色ブドウ球菌株が定着した幼児の頻度
図３は、異なる時点において特定の細菌遺伝子を保有する黄色ブドウ球菌が定着した小児の割合を示す。健常な小児および後でアトピー性皮膚炎を発症する幼児を別々に示した。この分析により、ｅｇｃによってコードされる遺伝子（すなわちｓｅｌｍ）を保有する黄色ブドウ球菌が、後でアトピー性皮膚炎を発症する幼児と比較して健常な幼児においてよく見られたことが確認され、さらにこの分析により、差が初期の採取時点において最も顕著であることが示される（１５％対２％、３日齢でｐ＝０．０３）（図３ａ）。ｓｅｃ遺伝子を有する黄色ブドウ球菌株の保有は、健常なままである幼児においてよく見られる傾向があったが（図３ｂ）、ｓｅａを保有する株、ならびに全てのスクリーニングしたスーパー抗原遺伝子を欠いている株に関して反対のことが当てはまった（図３ｃ〜ｄ）。
【００８２】
まとめると、得られた結果は、出生後早期に、特にＳＥｌＭおよびＳＥｌＯであるが、同様にエンテロトキシン遺伝子クラスター（ｅｇｃ）における遺伝子によってコードされる他のスーパー抗原、一般にすなわちブドウ球菌エンテロトキシンＧおよびＩ（ＳＥＧおよびＳＥＩ）ならびにブドウ球菌エンテロトキシン様毒素Ｎ（ＳＥｌＮ）への曝露が、アトピー性皮膚炎の後年の発症に対する防御効果を提供することを示す。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【国際調査報告】
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