(57)【要約】本発明は一般に、神経学的障害を処置するためのベクター、組成物、およびこれらを使用する方法であって、疼痛を管理することを含む、方法を提供する。組成物および方法は、疼痛、てんかん、および満腹障害を含む神経学的適応症を処置するためのＧタンパク質共役受容体およびリガンド依存性イオンチャネルの使用を含む。組成物および方法は、神経疾患の処置におけるＧタンパク質共役受容体およびリガンド依存性イオンチャネルを活性化するための合成リガンドの使用をさらに含む。
2018531926.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
神経疾患を処置するための方法であって、生物学的に不活性な作用物質または薬物を前記神経疾患に罹患している対象に投与することを含む、方法。
【請求項２】
前記対象が、Ｇタンパク質共役受容体またはリガンド依存性イオンチャネル（ＬＧＩＣ）を異種的に発現する、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記対象が、Ｇタンパク質共役受容体またはＬＧＩＣを相同的に発現する、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
前記対象が、Ｇタンパク質共役受容体またはＬＧＩＣを異所的に発現する、請求項１に記載の方法。
【請求項５】
前記Ｇタンパク質共役受容体が、デザイナー薬物によって排他的に活性化されるデザイナー受容体（ＤＲＥＡＤＤ）である、請求項２に記載の方法。
【請求項６】
前記ＤＲＥＡＤＤが、ｈＭ４Ｄｉ、ｈＭ３Ｄｑ、ＡｌｓｔＲ、またはＫＯＲ−ＤＲＥＡＤＤである、請求項５に記載の方法。
【請求項７】
前記生物学的に不活性な作用物質が、クロザピン−Ｎ−オキシド、ナルフラフィン、サルビノリンＢ、アラトスタチン、８−クロロ−１１−［４−（１，１−ジドイトリオエチル）ピペラジン−１−イル］−５Ｈ−ジベンゾ［ｂ，ｅ］［１，４］ジアゼピン、または１１−（ピペラジン−１−イル）−５Ｈ−ジベンゾ［ｂ，ｅ］［１，４］ジアゼピンである、請求項３に記載の方法。
【請求項８】
前記ＤＲＥＡＤＤがｈＭ４Ｄｉであり、前記生物学的に不活性な作用物質がクロザピン−Ｎ−オキシドであり、前記神経疾患がてんかんではない、請求項７に記載の方法。
【請求項９】
前記Ｇタンパク質共役受容体または前記ＬＧＩＣが、前記生物学的に不活性な作用物質または前記薬物によって活性化される、請求項２に記載の方法。
【請求項１０】
前記Ｇタンパク質共役受容体または前記ＬＧＩＣがスイッチ受容体である、請求項２に記載の方法。
【請求項１１】
前記投与の前に、前記Ｇタンパク質共役受容体または前記ＬＧＩＣをコードする核酸分子を前記対象に送達することをさらに含む、請求項２に記載の方法。
【請求項１２】
前記核酸分子が、ウイルスベクターで前記対象に送達される、請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
前記ウイルスベクターが、アデノウイルスベクター、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクター、レンチウイルスベクター、または単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）ベクターである、請求項１２に記載の方法。
【請求項１４】
前記ＡＡＶベクターが、ＡＡＶ−６またはＡＡＶ−９に由来する、請求項１３に記載の方法。
【請求項１５】
前記ＡＡＶベクターが、ＡＡＶ６（Ｙ７０５＋７３１Ｆ＋Ｔ４９２Ｖ）、ＡＡＶ９（Ｙ７３１Ｆ）、またはＡＡＶ−７ｍ８である、請求項１３に記載の方法。
【請求項１６】
前記ＡＡＶベクターが配列番号１を含む、請求項１３に記載の方法。
【請求項１７】
前記核酸分子が、非ウイルス法によって前記対象に送達される、請求項１１に記載の方法。
【請求項１８】
前記非ウイルス法が、リポフェクション、ナノ粒子送達、微粒子銃、電気穿孔、超音波処理、またはマイクロインジェクションである、請求項１７に記載の方法。
【請求項１９】
前記神経疾患が疼痛である、請求項１に記載の方法。
【請求項２０】
前記神経疾患が満腹障害である、請求項１に記載の方法。
【請求項２１】
前記満腹障害が、肥満、神経性食欲不振症、または神経性過食症である、請求項２０に記載の方法。
【請求項２２】
前記神経疾患が、アルツハイマー病、パーキンソン病、外傷後ストレス障害（ＰＴＳＤ）、胃食道逆流性疾患（ＧＥＲＤ）、嗜癖、不安、うつ病、記憶喪失、認知症、睡眠時無呼吸、卒中、尿失禁、ナルコレプシー、本態性振戦、運動障害、心房細動、または脳がんである、請求項１に記載の方法。
【請求項２３】
前記Ｇタンパク質共役受容体がＧｉ−またはＧｑ−共役型である、請求項２に記載の方法。
【請求項２４】
前記Ｇタンパク質共役受容体または前記ＬＧＩＣが、興奮性細胞内で選択的に発現される、請求項２に記載の方法。
【請求項２５】
前記興奮性細胞がニューロンまたは筋細胞である、請求項２４に記載の方法。
【請求項２６】
前記ニューロンが後根神経節または感覚ニューロンである、請求項２５に記載の方法。
【請求項２７】
前記投与が、経口、髄腔内、または局部投与を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項２８】
前記送達が、髄腔内、神経節内、頭蓋内、皮下、脊髄内、大槽、または神経内送達を含む、請求項１１に記載の方法。
【請求項２９】
前記生物学的に不活性な作用物質または前記薬物が、前記送達の少なくとも１週間後に投与される、請求項１１に記載の方法。
【請求項３０】
前記生物学的に不活性な作用物質または前記薬物が、０．００１μｇ／ｋｇ〜１０ｍｇ／ｋｇの用量で投与される、請求項１に記載の方法。
【請求項３１】
前記核酸分子が、シナプシン、ＴＲＰＶ１、Ｎａｖ１．７、Ｎａｖ１．８、Ｎａｖ１．９、ＣａｍＫＩＩ、ＮＳＥ、またはアドビリンプロモーターを含む、請求項１１に記載の方法。
【請求項３２】
前記対象が、ヒトである、請求項１に記載の方法。
【請求項３３】
前記対象が獣医学上の動物である、請求項１に記載の方法。
【請求項３４】
神経疾患を処置する方法であって、Ｇタンパク質共役受容体またはＬＧＩＣを異種的に発現する対象に、前記Ｇタンパク質共役受容体もしくは前記ＬＧＩＣを活性化する薬物を投与することを含み、前記薬物が生物学的に不活性な作用物質または合成リガンドである、方法。
【請求項３５】
前記Ｇタンパク質共役受容体がＤＲＥＡＤＤである、請求項３４に記載の方法。
【請求項３６】
前記ＤＲＥＡＤＤが、ｈＭ４Ｄｉ、ｈＭ３Ｄｑ、ＡｌｓｔＲ、またはＫＯＲ−ＤＲＥＡＤＤである、請求項３５に記載の方法。
【請求項３７】
前記Ｇタンパク質共役受容体または前記ＬＧＩＣが、スイッチ受容体である、請求項３４に記載の方法。
【請求項３８】
前記生物学的に不活性な作用物質が、クロザピン−Ｎ−オキシド、ナルフラフィン、サルビノリンＢ、アラトスタチン、８−クロロ−１１−［４−（１，１−ジドイトリオエチル）ピペラジン−１−イル］−５Ｈ−ジベンゾ［ｂ，ｅ］［１，４］ジアゼピン、または１１−（ピペラジン−１−イル）−５Ｈ−ジベンゾ［ｂ，ｅ］［１，４］ジアゼピンである、請求項３４に記載の方法。
【請求項３９】
前記投与が、経口、髄腔内、または局部投与を含む、請求項３４に記載の方法。
【請求項４０】
前記投与の前に、前記対象に前記Ｇタンパク質共役受容体または前記ＬＧＩＣをコードする核酸分子を送達することをさらに含む、請求項３４に記載の方法。
【請求項４１】
前記Ｇタンパク質共役受容体または前記ＬＧＩＣをコードする前記核酸分子が、ウイルスベクターによって送達される、請求項４０に記載の方法。
【請求項４２】
前記ウイルスベクターが、アデノウイルスベクター、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクター、レンチウイルスベクター、または単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）ベクターである、請求項４１に記載の方法。
【請求項４３】
前記ＡＡＶベクターが、ＡＡＶ−６またはＡＡＶ−９に由来する、請求項４２に記載の方法。
【請求項４４】
前記ＡＡＶベクターが、ＡＡＶ６（Ｙ７０５＋７３１Ｆ＋Ｔ４９２Ｖ）、ＡＡＶ９（Ｙ７３１Ｆ）、またはＡＡＶ−７ｍ８である、請求項４２に記載の方法。
【請求項４５】
前記核酸分子が、非ウイルス法によって前記対象に送達される、請求項４０に記載の方法。
【請求項４６】
前記非ウイルス法が、リポフェクション、ナノ粒子送達、微粒子銃、電気穿孔、超音波処理、またはマイクロインジェクションである、請求項４５に記載の方法。
【請求項４７】
前記神経疾患が疼痛である、請求項３４に記載の方法。
【請求項４８】
前記神経疾患が満腹障害である、請求項３４に記載の方法。
【請求項４９】
前記満腹障害が、肥満、神経性食欲不振症、または神経性過食症である、請求項４８に記載の方法。
【請求項５０】
前記神経疾患が、アルツハイマー病、パーキンソン病、外傷後ストレス障害（ＰＴＳＤ）、胃食道逆流性疾患（ＧＥＲＤ）、嗜癖、不安、うつ病、記憶喪失、認知症、睡眠時無呼吸、卒中、ナルコレプシー、尿失禁、本態性振戦、運動障害、心房細動、または脳がんである、請求項３４に記載の方法。
【請求項５１】
前記核酸分子が、シナプシン、ＴＲＰＶ１、Ｎａｖ１．７、Ｎａｖ１．８、Ｎａｖ１．９、ＣａｍＫＩＩ、ＮＳＥ、またはアドビリンプロモーターを含む、請求項４０に記載の方法。
【請求項５２】
神経疾患を処置するための方法であって、Ｇタンパク質共役受容体またはＬＧＩＣを異種的に発現する対象に、前記Ｇタンパク質共役受容体または前記ＬＧＩＣを活性化する薬物を投与することを含み、前記薬物が、前記Ｇタンパク質共役受容体または前記ＬＧＩＣの内因性リガンドではない、方法。
【請求項５３】
前記Ｇタンパク質共役受容体が、ｈＭ４Ｄｉ、ｈＭ３Ｄｑ、ＡｌｓｔＲ、またはＫＯＲ−ＤＲＥＡＤＤである、請求項５２に記載の方法。
【請求項５４】
前記薬物が、クロザピン−Ｎ−オキシド、ナルフラフィン、サルビノリンＢ、アラトスタチン、クロザピン、オランザピン、ペルラピン、フルペルラピン、アロセトロン、８−クロロ−１１−［４−（１，１−ジドイトリオエチル）ピペラジン−１−イル］−５Ｈ−ジベンゾ［ｂ，ｅ］［１，４］ジアゼピン、または１１−（ピペラジン−１−イル）−５Ｈ−ジベンゾ［ｂ，ｅ］［１，４］ジアゼピンである、請求項５２に記載の方法。
【請求項５５】
前記投与の前に、前記Ｇタンパク質共役受容体または前記ＬＧＩＣをコードする核酸分子を前記対象に送達することをさらに含む、請求項５２に記載の方法。
【請求項５６】
前記Ｇタンパク質共役受容体または前記ＬＧＩＣが、興奮性細胞内で選択的に発現される、請求項５２に記載の方法。
【請求項５７】
前記興奮性細胞がニューロンまたは筋細胞を含む、請求項５６に記載の方法。
【請求項５８】
前記ニューロンが、感覚ニューロン、後根神経節、または三叉神経節を含む、請求項５７に記載の方法。
【請求項５９】
前記核酸分子が、ウイルスベクターによって送達される、請求項５５に記載の方法。
【請求項６０】
前記ウイルスベクターが、アデノウイルスベクター、レンチウイルスベクター、またはアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクターである、請求項５９に記載の方法。
【請求項６１】
前記ＡＡＶベクターが、ＡＡＶ−６またはＡＡＶ−９に由来する、請求項６０に記載の方法。
【請求項６２】
前記ＡＡＶベクターが、ＡＡＶ６（Ｙ７０５＋７３１Ｆ＋Ｔ４９２Ｖ）、ＡＡＶ９（Ｙ７３１Ｆ）、またはＡＡＶ−７ｍ８である、請求項６０に記載の方法。
【請求項６３】
前記核酸分子が、非ウイルス法によって前記対象に送達される、請求項５５に記載の方法。
【請求項６４】
前記非ウイルス法が、リポフェクション、ナノ粒子送達、微粒子銃、電気穿孔、超音波処理、またはマイクロインジェクションである、請求項６３に記載の方法。
【請求項６５】
前記薬物が合成リガンドである、請求項５２に記載の方法。
【請求項６６】
前記薬物が、０．００１μｇ／ｋｇ〜１０ｍｇ／ｋｇの用量で投与される、請求項５２に記載の方法。
【請求項６７】
前記神経疾患が、アルツハイマー病、パーキンソン病、疼痛、肥満、食欲不振症、ＰＴＳＤ、ＧＥＲＤ、嗜癖、不安、うつ病、記憶喪失、認知症、睡眠時無呼吸、卒中、ナルコレプシー、尿失禁、本態性振戦、運動障害、心房細動、または脳がんである、請求項５２に記載の方法。
【請求項６８】
神経疾患を処置するための方法であって、対象にＧタンパク質共役受容体またはＬＧＩＣをコードする核酸分子を送達することであって、前記対象が、前記Ｇタンパク質共役受容体または前記ＬＧＩＣを異種的に発現する、送達することと、前記対象に前記Ｇタンパク質共役受容体または前記ＬＧＩＣを活性化する薬物を投与し、それにより前記対象における前記神経疾患を処置することとを含み、前記薬物が、前記Ｇタンパク質共役受容体または前記ＬＧＩＣをコードする前記核酸分子を送達して少なくとも１週間後に前記対象に投与される、方法。
【請求項６９】
前記Ｇタンパク質共役受容体または前記ＬＧＩＣをコードする前記核酸分子が、前記対象にウイルスベクターにより送達される、請求項６８に記載の方法。
【請求項７０】
前記ウイルスベクターが、アデノウイルスベクター、レンチウイルスベクター、またはアデノ随伴（ＡＡＶ）ウイルスベクターである、請求項６９に記載の方法。
【請求項７１】
前記ＡＡＶベクターが、ＡＡＶ−６またはＡＡＶ−９である、請求項７０に記載の方法。
【請求項７２】
前記ＡＡＶベクターが、ＡＡＶ６（Ｙ７０５＋７３１Ｆ＋Ｔ４９２Ｖ）、ＡＡＶ９（Ｙ７３１Ｆ）、またはＡＡＶ−７ｍ８である、請求項７０に記載の方法。
【請求項７３】
前記核酸分子が、非ウイルス法によって前記対象に送達される、請求項６８に記載の方法。
【請求項７４】
前記非ウイルス法が、リポフェクション、ナノ粒子送達、微粒子銃、電気穿孔、超音波処理、またはマイクロインジェクションである、請求項７３に記載の方法。
【請求項７５】
前記神経疾患が、アルツハイマー病、パーキンソン病、疼痛、てんかん、肥満、食欲不振症、ＰＴＳＤ、ＧＥＲＤ、嗜癖、不安、うつ病、記憶喪失、認知症、睡眠時無呼吸、卒中、ナルコレプシー、尿失禁、本態性振戦、運動障害、心房細動、または脳がんである、請求項６８に記載の方法。
【請求項７６】
前記薬物が、クロザピン−Ｎ−オキシド、ナルフラフィン、サルビノリンＢ、アラトスタチン、クロザピン、オランザピン、ペルラピン、フルペルラピン、アロセトロン、８−クロロ−１１−［４−（１，１−ジドイトリオエチル）ピペラジン−１−イル］−５Ｈ−ジベンゾ［ｂ，ｅ］［１，４］ジアゼピン、または１１−（ピペラジン−１−イル）−５Ｈ−ジベンゾ［ｂ，ｅ］［１，４］ジアゼピンである、請求項６８に記載の方法。
【請求項７７】
前記薬物が、０．００１μｇ／ｋｇ〜１０ｍｇ／ｋｇの用量で投与される、請求項６８に記載の方法。
【請求項７８】
前記Ｇタンパク質共役受容体または前記ＬＧＩＣが、興奮性細胞内で選択的に発現される、請求項６８に記載の方法。
【請求項７９】
前記興奮性細胞が、ニューロンまたは筋細胞である、請求項７８に記載の方法。
【請求項８０】
前記ニューロンが、感覚ニューロン、後根神経節、または三叉神経節である、請求項７９に記載の方法。
【請求項８１】
前記薬物を少なくとも３日連続で毎日投与することをさらに含む、請求項６８に記載の方法。
【請求項８２】
神経疾患を処置するための方法であって、Ｇタンパク質共役受容体またはＬＧＩＣを異種的に発現する対象に、前記Ｇタンパク質共役受容体または前記ＬＧＩＣを活性化する薬物を投与することを含み、前記薬物は、前記Ｇタンパク質共役受容体または前記ＬＧＩＣの内因性リガンドではなく、前記薬物は、カッパオピオイド受容体（ＫＯＲ）結合薬ではない、方法。
【請求項８３】
前記Ｇタンパク質共役受容体が、カッパオピオイド受容体（ＫＯＲ）以外のＧタンパク質共役受容体である、請求項８２に記載の方法。
【請求項８４】
前記異種Ｇタンパク質共役受容体が、ＤＲＥＡＤＤである、請求項８２に記載の方法。
【請求項８５】
前記ＤＲＥＡＤＤが、ｈＭ４Ｄｉ、ｈＭ３Ｄｑ、またはＡｌｓｔＲである、請求項８４に記載の方法。
【請求項８６】
前記薬物が、クロザピン−Ｎ−オキシド、ナルフラフィン、サルビノリンＢ、アラトスタチン、クロザピン、オランザピン、ペルラピン、フルペルラピン、アロセトロン、８−クロロ−１１−［４−（１，１−ジドイトリオエチル）ピペラジン−１−イル］−５Ｈ−ジベンゾ［ｂ，ｅ］［１，４］ジアゼピン、または１１−（ピペラジン−１−イル）−５Ｈ−ジベンゾ［ｂ，ｅ］［１，４］ジアゼピンである、請求項８２に記載の方法。
【請求項８７】
前記投与の前に、前記対象に前記Ｇタンパク質共役受容体または前記ＬＧＩＣをコードする核酸分子を送達することをさらに含む、請求項８２に記載の方法。
【請求項８８】
前記Ｇタンパク質共役受容体または前記ＬＧＩＣが、ウイルスベクターによって送達される、請求項８７に記載の方法。
【請求項８９】
前記ウイルスベクターが、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクター、アデノウイルスベクター、レンチウイルスベクター、または単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）ベクターである、請求項８８に記載の方法。
【請求項９０】
前記ＡＡＶベクターが、ＡＡＶ−６またはＡＡＶ−９である、請求項８９に記載の方法。
【請求項９１】
前記ＡＡＶベクターが、ＡＡＶ６（Ｙ７０５＋７３１Ｆ＋Ｔ４９２Ｖ）、ＡＡＶ９（Ｙ７３１Ｆ）、またはＡＡＶ−７ｍ８である、請求項８９に記載の方法。
【請求項９２】
前記核酸分子が、前記対象に非ウイルス法によって送達される、請求項８７に記載の方法。
【請求項９３】
前記非ウイルス法が、リポフェクション、ナノ粒子送達、微粒子銃、電気穿孔、超音波処理、またはマイクロインジェクションである、請求項９２に記載の方法。
【請求項９４】
前記神経疾患が疼痛である、請求項８２に記載の方法。
【請求項９５】
前記神経疾患が満腹障害である、請求項８２に記載の方法。
【請求項９６】
前記満腹障害が、肥満、神経性食欲不振症、または神経性過食症である、請求項９５に記載の方法。
【請求項９７】
前記神経疾患が、アルツハイマー病、パーキンソン病、疼痛、てんかん、肥満、食欲不振症、ＰＴＳＤ、ＧＥＲＤ、嗜癖、不安、うつ病、記憶喪失、認知症、睡眠時無呼吸、卒中、ナルコレプシー、尿失禁、本態性振戦、運動障害、心房細動、または脳がんである、請求項８２に記載の方法。
【請求項９８】
前記Ｇタンパク質共役受容体または前記ＬＧＩＣが、興奮性細胞内で選択的に発現される、請求項８２に記載の方法。
【請求項９９】
前記興奮性細胞がニューロンまたは筋細胞である、請求項９８に記載の方法。
【請求項１００】
前記ニューロンが、感覚ニューロン、後根神経節、または三叉神経節である、請求項９９に記載の方法。
【請求項１０１】
前記投与が、経口、髄腔内、または局部投与を含む、請求項８２に記載の方法。
【請求項１０２】
神経疾患を処置するための方法であって、Ｇタンパク質共役受容体またはＬＧＩＣを異種的に発現する対象に、前記Ｇタンパク質共役受容体または前記ＬＧＩＣを活性化する薬物を投与することを含み、前記薬物は、前記Ｇタンパク質共役受容体または前記ＬＧＩＣの内因性リガンドではなく、前記Ｇタンパク質共役受容体または前記ＬＧＩＣは、感覚ニューロン、後根神経節、三叉神経節、迷走神経、脳、または筋細胞内で選択的に発現される、方法。
【請求項１０３】
前記Ｇタンパク質共役受容体がＤＲＥＡＤＤである、請求項１０２に記載の方法。
【請求項１０４】
前記ＤＲＥＡＤＤが、ｈＭ４Ｄｉ、ｈＭ３Ｄｑ、ＡｌｓｔＲ、またはＫＯＲ−ＤＲＥＡＤＤである、請求項１０３に記載の方法。
【請求項１０５】
前記薬物が、クロザピン−Ｎ−オキシド、ナルフラフィン、サルビノリンＢ、アラトスタチン、クロザピン、オランザピン、ペルラピン、フルペルラピン、アロセトロン、８−クロロ−１１−［４−（１，１−ジドイトリオエチル）ピペラジン−１−イル］−５Ｈ−ジベンゾ［ｂ，ｅ］［１，４］ジアゼピン、または１１−（ピペラジン−１−イル）−５Ｈ−ジベンゾ［ｂ，ｅ］［１，４］ジアゼピンである、請求項１０２に記載の方法。
【請求項１０６】
前記投与の前に、前記Ｇタンパク質共役受容体または前記ＬＧＩＣをコードする核酸分子を前記対象に送達することをさらに含む、請求項１０２に記載の方法。
【請求項１０７】
前記核酸分子が、ウイルスベクターで前記対象に送達される、請求項１０６に記載の方法。
【請求項１０８】
前記ウイルスベクターが、アデノウイルスベクター、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクター、レンチウイルスベクター、または単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）ベクターである、請求項１０７に記載の方法。
【請求項１０９】
前記ＡＡＶベクターが、ＡＡＶ−６またはＡＡＶ−９に由来する、請求項１０８に記載の方法。
【請求項１１０】
前記ＡＡＶベクターが、ＡＡＶ６（Ｙ７０５＋７３１Ｆ＋Ｔ４９２Ｖ）、ＡＡＶ９（Ｙ７３１Ｆ）、またはＡＡＶ−７ｍ８である、請求項１０８に記載の方法。
【請求項１１１】
前記核酸分子が、非ウイルス法によって前記対象に送達される、請求項１０６に記載の方法。
【請求項１１２】
前記非ウイルス法が、リポフェクション、ナノ粒子送達、微粒子銃、電気穿孔、超音波処理、またはマイクロインジェクションである、請求項１１１に記載の方法。
【請求項１１３】
前記神経疾患が疼痛である、請求項１０２に記載の方法。
【請求項１１４】
前記神経疾患がてんかんである、請求項１０２に記載の方法。
【請求項１１５】
前記神経疾患が満腹障害である、請求項１０２に記載の方法。
【請求項１１６】
前記満腹障害が、肥満、神経性食欲不振症、または神経性過食症である、請求項１１５に記載の方法。
【請求項１１７】
前記Ｇタンパク質共役受容体が、Ｇｉ−またはＧｑ−共役型である、請求項１０２に記載の方法。
【請求項１１８】
前記投与が、経口、髄腔内、または局部投与を含む、請求項１０２に記載の方法。
【請求項１１９】
前記送達が、髄腔内、神経節内、頭蓋内、皮下、脊髄内、大槽、または神経内送達を含む、請求項１０６に記載の方法。
【請求項１２０】
前記薬物が、前記送達の少なくとも１週間後に投与される、請求項１０２に記載の方法。
【請求項１２１】
前記薬物が、０．００１μｇ／ｋｇ〜１０ｍｇ／ｋｇの用量で投与される、請求項１０２に記載の方法。
【請求項１２２】
前記核酸分子が、シナプシン、ＴＲＰＶ１、Ｎａｖ１．７、Ｎａｖ１．８、Ｎａｖ１．９、ＣａｍＫＩＩ、ＮＳＥ、またはアドビリンプロモーターを含む、請求項１０２に記載の方法。
【請求項１２３】
前記対象がヒトである、請求項１０２に記載の方法。
【請求項１２４】
対象における神経疾患を処置する方法であって、前記対象にＧタンパク質共役受容体またはＬＧＩＣをコードする核酸分子を送達することと、前記対象に前記Ｇタンパク質共役受容体または前記ＬＧＩＣを活性化する薬物を投与することとを含み、前記薬物は、ＦＤＡに認可されているが、前記神経疾患の処置に関してＦＤＡに認可されていない、方法。
【請求項１２５】
前記Ｇタンパク質共役受容体または前記ＬＧＩＣが、前記対象において発現される、請求項１２４に記載の方法。
【請求項１２６】
前記Ｇタンパク質共役受容体または前記ＬＧＩＣが、前記対象において異種的に発現される、請求項１２５に記載の方法。
【請求項１２７】
前記Ｇタンパク質共役受容体または前記ＬＧＩＣが、前記対象において相同的に発現される、請求項１２６に記載の方法。
【請求項１２８】
前記Ｇタンパク質共役受容体または前記ＬＧＩＣが、前記対象において異所的に発現される、請求項１２７に記載の方法。
【請求項１２９】
前記Ｇタンパク質共役受容体がＤＲＥＡＤＤである、請求項１２４に記載の方法。
【請求項１３０】
前記ＤＲＥＡＤＤが、ｈＭ４Ｄｉ、ｈＭ３Ｄｑ、ＡｌｓｔＲ、またはＫＯＲ−ＤＲＥＡＤＤである、請求項１２９に記載の方法。
【請求項１３１】
神経疾患を処置する方法であって、Ｇタンパク質共役受容体またはＬＧＩＣを異種的に発現する対象に、前記Ｇタンパク質共役受容体または前記ＬＧＩＣを活性化する薬物を投与することを含み、前記薬物が、０．００１μｇ／ｋｇ〜１０ｍｇ／ｋｇの用量で投与される、方法。
【請求項１３２】
前記薬物が、クロザピン−Ｎ−オキシド、ナルフラフィン、サルビノリンＢ、アラトスタチン、クロザピン、オランザピン、ペルラピン、フルペルラピン、アロセトロン、８−クロロ−１１−［４−（１，１−ジドイトリオエチル）ピペラジン−１−イル］−５Ｈ−ジベンゾ［ｂ，ｅ］［１，４］ジアゼピン、または１１−（ピペラジン−１−イル）−５Ｈ−ジベンゾ［ｂ，ｅ］［１，４］ジアゼピンである、請求項１３１に記載の方法。
【請求項１３３】
神経疾患を処置するための方法であって、対象にＧタンパク質共役受容体またはＬＧＩＣをコードする核酸分子を送達することと、前記対象に前記Ｇタンパク質共役受容体または前記ＬＧＩＣを活性化する薬物を投与することとを含み、前記薬物が、前記対象に少なくとも３日連続で毎日投与される、方法。
【請求項１３４】
前記薬物が、前記対象に前記送達の少なくとも１週間後に投与される、請求項１３３に記載の方法。
【請求項１３５】
神経疾患を処置する方法であって、リガンド依存性イオンチャネルを異種的に発現する対象に前記リガンド依存性イオンチャネルを活性化する薬物を投与することを含む、方法。
【請求項１３６】
前記薬物が、グリシンでもベータ−アラニンでもタウリンでもない、請求項１３５に記載の方法。
【請求項１３７】
前記リガンド依存性イオンチャネルが、別個のポリペプチドを元来コードする２つまたはそれよりも多いポリヌクレオチド配列の融合によって作出されるイオン伝導孔ドメインおよびリガンド結合ドメインを含む、請求項１３５に記載の方法。
【請求項１３８】
前記ポリヌクレオチド配列が、ｃｙｓループ受容体遺伝子ファミリーの２つまたはそれよりも多いメンバーを含む、請求項１３７に記載の方法。
【請求項１３９】
前記イオン伝導孔ドメインが、アニオンを伝導する、請求項１３７に記載の方法。
【請求項１４０】
前記イオン伝導孔ドメインがカチオンを伝導する、請求項１３７に記載の方法。
【請求項１４１】
前記リガンド結合ドメインが、クロザピン−Ｎ−オキシド、クロザピン、ペルラピン、オランザピン、アロセトロン、フルペルラピン、またはＮ４’−アルキル置換ＣＮＯ類似体の結合によって活性化される、請求項１３７に記載の方法。
【請求項１４２】
前記リガンド結合ドメインが、ニコチン、バレニクリン、またはガランタミンの結合によって活性化される、請求項１３７に記載の方法。
【請求項１４３】
前記リガンド依存性イオンチャネルが、ＧｌｙＲ−Ｍ、ＧｌｕＣｌ、ＰＳＡＭ−５ＨＴ３ＨＣ、ＰＳＡＭ−ＧｌｙＲ、ＰＳＡＭ−ｎＡＣｈＲ、ＴＲＰＶ１、またはＧＡＢＡＡである、請求項１、３４、５２、６８、８２、１０２、１２４、１３１、１３３、および１３５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１４４】
前記薬物が、イベルメクチン、セラメクチン、ドラメクチン、エマメクチン、エプリノメクチン、アバメクチン、モキシデクチン、ＰＳＥＭ２２Ｓ、ＰＳＥＭ８９Ｓ、ＰＳＥＭ９Ｓ、カプサイシン、またはゾルピデムである、請求項１３５から１４３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１４５】
前記投与の前に、前記対象に前記リガンド依存性イオンチャネルをコードする核酸分子を送達することをさらに含む、請求項１３５に記載の方法。
【請求項１４６】
前記核酸分子が、ウイルスベクターによって前記対象に送達される、請求項１４５に記載の方法。
【請求項１４７】
前記ウイルスベクターが、アデノウイルスベクター、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクター、レンチウイルスベクター、または単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）ベクターである、請求項１４６に記載の方法。
【請求項１４８】
前記ＡＡＶベクターが、ＡＡＶ−６またはＡＡＶ−９に由来する、請求項１４７に記載の方法。
【請求項１４９】
前記ＡＡＶベクターが、ＡＡＶ６（Ｙ７０５＋７３１Ｆ＋Ｔ４９２Ｖ）、ＡＡＶ９（Ｙ７３１Ｆ）、またはＡＡＶ−７ｍ８である、請求項１４７に記載の方法。
【請求項１５０】
前記ＡＡＶベクターが配列番号１を含む、請求項１４７に記載の方法。
【請求項１５１】
前記核酸分子が、非ウイルス法によって前記対象に送達される、請求項１４５に記載の方法。
【請求項１５２】
前記非ウイルス法が、リポフェクション、ナノ粒子送達、微粒子銃、電気穿孔、超音波処理、またはマイクロインジェクションである、請求項１５１に記載の方法。
【請求項１５３】
前記神経疾患が疼痛である、請求項１３５に記載の方法。
【請求項１５４】
前記神経疾患がてんかんである、請求項１３５に記載の方法。
【請求項１５５】
前記神経疾患が満腹障害である、請求項１３５に記載の方法。
【請求項１５６】
前記満腹障害が、肥満、神経性食欲不振症、または神経性過食症である、請求項１５５に記載の方法。
【請求項１５７】
前記神経疾患が、アルツハイマー病、パーキンソン病、外傷後ストレス障害（ＰＴＳＤ）、胃食道逆流性疾患（ＧＥＲＤ）、嗜癖、不安、うつ病、記憶喪失、認知症、睡眠時無呼吸、卒中、尿失禁、ナルコレプシー、本態性振戦、運動障害、心房細動、または脳がんである、請求項１３５に記載の方法。
【請求項１５８】
前記リガンド依存性イオンチャネルが、興奮性細胞内で選択的に発現される、請求項１３５に記載の方法。
【請求項１５９】
前記興奮性細胞が、ニューロンまたは筋細胞である、請求項１５８に記載の方法。
【請求項１６０】
前記ニューロンが、後根神経節、感覚ニューロン、または三叉神経節である、請求項１５９に記載の方法。
【請求項１６１】
前記投与が、経口、髄腔内、または局部投与を含む、請求項１３５に記載の方法。
【請求項１６２】
前記送達が、髄腔内、神経節内、頭蓋内、皮下、脊髄内、大槽、または神経内送達を含む、請求項１４５に記載の方法。
【請求項１６３】
前記薬物が、前記送達の少なくとも１週間後に投与される、請求項１３５に記載の方法。
【請求項１６４】
前記核酸分子が、シナプシン、ＴＲＰＶ１、Ｎａｖ１．７、Ｎａｖ１．８、Ｎａｖ１．９、ＣａｍＫＩＩ、ＮＳＥ、またはアドビリンプロモーターを含む、請求項１４５に記載の方法。
【請求項１６５】
前記対象がヒトである、請求項１３５に記載の方法。
【請求項１６６】
前記対象が獣医学上の動物である、請求項１３５に記載の方法。
【請求項１６７】
神経疾患を処置するための方法であって、リガンド依存性イオンチャネルを異種的に発現する対象に、前記リガンド依存性イオンチャネルを活性化する薬物を投与することを含み、前記薬物が、０．００１μｇ／ｋｇ〜１０ｍｇ／ｋｇの用量で投与される、方法。
【請求項１６８】
前記リガンド依存性イオンチャネルが、ＧｌｙＲ−Ｍ、ＧｌｕＣｌ、ＰＳＡＭ−５ＨＴ３ＨＣ、ＰＳＡＭ−ＧｌｙＲ、ＰＳＡＭ−ｎＡＣｈＲ、ＴＲＰＶ１、またはＧＡＢＡＡである、請求項１６７に記載の方法。
【請求項１６９】
前記薬物が、イベルメクチン、セラメクチン、ドラメクチン、エマメクチン、エプリノメクチン、アバメクチン、モキシデクチン、ＰＳＥＭ２２Ｓ、ＰＳＥＭ８９Ｓ、ＰＳＥＭ９Ｓ、カプサイシン、またはゾルピデムである、請求項１６７に記載の方法。
【請求項１７０】
前記神経疾患が、疼痛、満腹障害、アルツハイマー病、パーキンソン病、てんかん、肥満、食欲不振症、ＰＴＳＤ、ＧＥＲＤ、嗜癖、不安、うつ病、記憶喪失、認知症、睡眠時無呼吸、卒中、ナルコレプシー、尿失禁、本態性振戦、運動障害、心房細動、または脳がんである、請求項１６７に記載の方法。
【請求項１７１】
前記疼痛が、軽減される、請求項１７０に記載の方法。
【請求項１７２】
ニューロン細胞内で作動可能であるプロモーターを含むＡＡＶベクターであって、前記プロモーターが、スイッチ受容体をコードするポリヌクレオチドに作動可能に連結されている、ＡＡＶベクター。
【請求項１７３】
前記プロモーターがニューロン特異的プロモーターである、請求項１７２に記載のＡＡＶベクター。
【請求項１７４】
前記ニューロン特異的プロモーターが、三叉神経節（ＴＧＧ）ニューロンまたは後根神経節（ＤＲＧ）ニューロン内で作動可能なプロモーターである、請求項１７３に記載のＡＡＶベクター。
【請求項１７５】
前記ニューロン特異的プロモーターが、ｈＳＹＮ１プロモーター、カルシウム／カルモジュリン依存性プロテインキナーゼＩＩａプロモーター、チューブリンアルファＩプロモーター、ニューロン特異的エノラーゼプロモーター、血小板由来増殖因子ベータ鎖プロモーター、ＴＲＰＶ１プロモーター、Ｎａｖ１．７プロモーター、Ｎａｖ１．８プロモーター、Ｎａｖ１．９プロモーター、またはアドビリンプロモーターである、請求項１７３または請求項１７４に記載のＡＡＶベクター。
【請求項１７６】
前記ニューロン特異的プロモーターがｈＳＹＮ１プロモーターである、請求項１７３から１７５のいずれか一項に記載のＡＡＶベクター。
【請求項１７７】
前記プロモーターが構成的プロモーターである、請求項１７２または請求項１７３に記載のＡＡＶベクター。
【請求項１７８】
前記構成的プロモーターが、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）最初期プロモーター、ウイルスシミアンウイルス４０（ＳＶ４０）、モロニーネズミ白血病ウイルス（ＭｏＭＬＶ）ＬＴＲプロモーター、ラウス肉腫ウイルス（ＲＳＶ）ＬＴＲ、単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）（チミジンキナーゼ）プロモーター、ワクシニアウイルス由来のＨ５、Ｐ７．５、およびＰ１１プロモーター、伸長因子１−アルファ（ＥＦ１ａ）プロモーター、初期増殖応答１（ＥＧＲ１）、フェリチンＨ（ＦｅｒＨ）、フェリチンＬ（ＦｅｒＬ）、グリセルアルデヒド３−リン酸脱水素酵素（ＧＡＰＤＨ）、真核生物翻訳開始因子４Ａ１（ＥＩＦ４Ａ１）、熱ショック７０ｋＤａタンパク質５（ＨＳＰＡ５）、熱ショックタンパク質９０ｋＤａベータ、メンバー１（ＨＳＰ９０Ｂ１）、熱ショックタンパク質７０ｋＤａ（ＨＳＰ７０）、β−キネシン（β−ＫＩＮ）、ヒトＲＯＳＡ２６プロモーター、ユビキチンＣプロモーター（ＵＢＣ）、ホスホグリセリン酸キナーゼ−１（ＰＧＫ）プロモーター、サイトメガロウイルスエンハンサー／ニワトリβ−アクチン（ＣＡＧ）プロモーター、またはβ−アクチンプロモーターである、請求項１７７に記載のＡＡＶベクター。
【請求項１７９】
前記プロモーターが誘導プロモーターである、請求項１７２または請求項１７３に記載のＡＡＶベクター。
【請求項１８０】
前記誘導プロモーターが、テトラサイクリン応答性プロモーター、エクジソン応答性プロモーター、cumate応答性プロモーター、グルココルチコイド応答性プロモーター、およびエストロゲン応答性プロモーター、ＰＰＡＲ−γプロモーター、またはＲＵ−４８６応答性プロモーターである、請求項１７９に記載のＡＡＶベクター。
【請求項１８１】
前記スイッチ受容体が、リガンド依存性イオンチャネルまたはＧ共役型タンパク質受容体を含む、請求項１７２から１８０のいずれか一項に記載のＡＡＶベクター。
【請求項１８２】
前記スイッチ受容体の活性が、細胞外リガンドによって調節される、請求項１７２から１８１のいずれか一項に記載のＡＡＶベクター。
【請求項１８３】
前記リガンドが、天然に存在しないか、または合成である、請求項１８２に記載のＡＡＶベクター。
【請求項１８４】
前記スイッチ受容体を発現する細胞の活性が、前記細胞外リガンドが前記スイッチ受容体と結合するとき増大し、任意選択で前記活性が電気生理学的活性である、請求項１８２または請求項１８３に記載のＡＡＶベクター。
【請求項１８５】
前記スイッチ受容体が、ｈＭ３Ｄｑ、ＧｓＤ、ＰＳＡＭ−５ＨＴ３ＨＣ、ＰＳＡＭ−ｎＡＣｈＲ、またはＴＲＰＶ１からなる群より選択される、請求項１７２から１８４のいずれか一項に記載のＡＡＶベクター。
【請求項１８６】
前記リガンドが、ＰＳＥＭ２２Ｓ、ＰＳＥＭ９Ｓ、カプサイシン、クロザピン、ペルラピン、アロセトロン、フルペルラピン、オランザピン、クロザピン−Ｎ−オキシド、クロザピン−Ｎ−オキシド類似体：３−クロロ−６−（４−エチルピペラジン−１−イル）−５Ｈ−ベンゾ［ｂ］［１，４］ベンゾジアゼピン、４−（８−クロロ−５Ｈ−ジベンゾ［ｂ，ｅ］［１，４］ジアゼピン−１１−イル）−１，１−ジメチルピペラジン−１−イウムヨージド、３−クロロ−６−（ピペラジン−１−イル）−５Ｈ−ベンゾ［ｂ］［１，４］ベンゾジアゼピン、８−クロロ−１１−［４−（１，１−ジドイトリオエチル）ピペラジン−１−イル］−５Ｈ−ジベンゾ［ｂ，ｅ］［１，４］ジアゼピン、１１−（ピペラジン−１−イル）−５Ｈ−ジベンゾ［ｂ，ｅ］［１，４］ジアゼピン、および１１−（４−エチルピペラジン−１−イル）−５Ｈ−ジベンゾ［ｂ，ｅ］［１，４］ジアゼピンからなる群より選択される、請求項１８２から１８５のいずれか一項に記載のＡＡＶベクター。
【請求項１８７】
前記スイッチ受容体を発現させる細胞の活性が、前記細胞外リガンドが前記スイッチ受容体と結合するとき低下し、任意選択で前記活性が電気生理学的活性である、請求項１８２または請求項１８３に記載のＡＡＶベクター。
【請求項１８８】
前記スイッチ受容体が、ＡｌｓｔＲ、ｈＭ４Ｄｉ、ＫＯＲＤ、ＧｌｕＣｌ、ＰＳＡＭ−ＧｌｙＲ、ＧｌｙＲ−Ｍ、およびＧＡＢＡからなる群より選択される、請求項１８７に記載のＡＡＶベクター。
【請求項１８９】
前記スイッチ受容体が、グリシン受容体（ＧｌｙＲ）ポリペプチドの１つまたは複数のサブユニットを含む、請求項１７２から１８８のいずれか一項に記載のＡＡＶベクター。
【請求項１９０】
前記スイッチ受容体が、グリシン受容体アルファ１サブユニット（ＧｌｙＲα１）ポリペプチドを含む、請求項１７２から１８９のいずれか一項に記載のＡＡＶベクター。
【請求項１９１】
前記ＧｌｙＲα１ポリペプチドが、１個または複数のアミノ酸挿入、欠失、または置換を含む、請求項１８９または請求項１９０に記載のＡＡＶベクター。
【請求項１９２】
前記ＧｌｙＲα１ポリペプチドが、アミノ酸置換：
（ａ）Ｆ２０７ＡおよびＡ２８８Ｇ；
（ｂ）Ａ−１’Ｅ、Ｆ２０７Ａ、およびＡ２２８Ｇ；または
（ｃ）Ａ−１’Ｅ、Ｐ−２’Δ、Ｔ１３’Ｖ、Ｆ２０７Ａ、およびＡ２２８Ｇ
を含む、請求項１８９から１９１のいずれか一項に記載のＡＡＶベクター。
【請求項１９３】
前記リガンドが、イベルメクチン、セラメクチン、ドラメクチン、エマメクチン、エプリノメクチン、アバメクチン、およびモキシデクチンからなる群より選択される、請求項１８９から１９２のいずれか一項に記載のＡＡＶベクター。
【請求項１９４】
前記リガンドがイベルメクチンである、請求項１９３に記載のＡＡＶベクター。
【請求項１９５】
前記スイッチ受容体が、ＧｌｕＣｌαまたはＧｌｕＣｌβポリペプチドを含む、請求項１７２から１８８のいずれか一項に記載のＡＡＶベクター。
【請求項１９６】
前記ＧｌｕＣｌαまたはＧｌｕＣｌβポリペプチドが、１個または複数のアミノ酸挿入、欠失、または置換を含む、請求項１９５に記載のＡＡＶベクター。
【請求項１９７】
前記リガンドが、イベルメクチン、セラメクチン、ドラメクチン、エマメクチン、エプリノメクチン、アバメクチン、およびモキシデクチンからなる群より選択される、請求項１９５または請求項１９６に記載のＡＡＶベクター。
【請求項１９８】
前記スイッチ受容体が、ＰＳＡＭ−５ＨＴ３ＨＣポリペプチドを含む、請求項１７２から１８８のいずれか一項に記載のＡＡＶベクター。
【請求項１９９】
前記ＰＳＡＭ−５ＨＴ３ＨＣポリペプチドが、１個または複数のアミノ酸挿入、欠失、または置換を含む、請求項１９８に記載のＡＡＶベクター。
【請求項２００】
前記リガンドがＰＳＥＭ２２Ｓである、請求項１９８または請求項１９９に記載のＡＡＶベクター。
【請求項２０１】
前記スイッチ受容体が、ＰＳＡＭ−ＧｌｙＲポリペプチドを含む、請求項１７２から１８８のいずれか一項に記載のＡＡＶベクター。
【請求項２０２】
前記ＰＳＡＭ−ＧｌｙＲポリペプチドが、１個または複数のアミノ酸挿入、欠失、または置換を含む、請求項２０１に記載のＡＡＶベクター。
【請求項２０３】
前記リガンドがＰＳＥＭ８９Ｓである、請求項２０１または請求項２０２に記載のＡＡＶベクター。
【請求項２０４】
前記スイッチ受容体が、ＰＳＡＭ−ｎＡＣｈＲポリペプチドを含む、請求項１７２から１８８のいずれか一項に記載のＡＡＶベクター。
【請求項２０５】
前記ＰＳＡＭ−ｎＡＣｈＲポリペプチドが、１個または複数のアミノ酸挿入、欠失、または置換を含む、請求項２０４に記載のＡＡＶベクター。
【請求項２０６】
前記リガンドがＰＳＥＭ９Ｓである、請求項２０４または請求項２０５に記載のＡＡＶベクター。
【請求項２０７】
前記スイッチ受容体が、ＴＲＰＶ１ポリペプチドを含む、請求項１７２から１８８のいずれか一項に記載のＡＡＶベクター。
【請求項２０８】
前記ＴＲＰＶ１ポリペプチドが１個または複数のアミノ酸挿入、欠失、または置換を含む、請求項２０７に記載のＡＡＶベクター。
【請求項２０９】
前記リガンドがカプサイシンである、請求項２０７または請求項２０８に記載のＡＡＶベクター。
【請求項２１０】
前記スイッチ受容体がＧＡＢＡＡポリペプチドを含む、請求項１７２から１８８のいずれか一項に記載のＡＡＶベクター。
【請求項２１１】
前記ＧＡＢＡＡポリペプチドが、１個または複数のアミノ酸挿入、欠失、または置換を含む、請求項２１０に記載のＡＡＶベクター。
【請求項２１２】
前記リガンドがゾルピデムである、請求項２１０または請求項２１１に記載のＡＡＶベクター。
【請求項２１３】
前記スイッチ受容体が、ＡｌｓｔＲポリペプチドを含む、請求項１７２から１８８のいずれか一項に記載のＡＡＶベクター。
【請求項２１４】
前記ＡｌｓｔＲポリペプチドが、１個または複数のアミノ酸挿入、欠失、または置換を含む、請求項２１３に記載のＡＡＶベクター。
【請求項２１５】
前記リガンドがアラトスタチンである、請求項２１３または請求項２１４に記載のＡＡＶベクター。
【請求項２１６】
前記スイッチ受容体がｈＭ４Ｄｉポリペプチドを含む、請求項１７２から１８８のいずれか一項に記載のＡＡＶベクター。
【請求項２１７】
前記ｈＭ４Ｄｉポリペプチドが、１個または複数のアミノ酸挿入、欠失、または置換を含む、請求項２１６に記載のＡＡＶベクター。
【請求項２１８】
前記リガンドが、ＣＮＯ、ナルフラフィン、クロザピン、ペルラピン、オランザピン、アロセトロン、フルペルラピン、およびＮ４’−アルキル置換ＣＮＯ類似体からなる群より選択される、請求項２１６または請求項２１７に記載のＡＡＶベクター。
【請求項２１９】
前記Ｎ４’−アルキル置換ＣＮＯ類似体が、３−クロロ−６−（４−エチルピペラジン−１−イル）−５Ｈ−ベンゾ［ｂ］［１，４］ベンゾジアゼピン、４−（８−クロロ−５Ｈ−ジベンゾ［ｂ，ｅ］［１，４］ジアゼピン−１１−イル）−１，１−ジメチルピペラジン−１−イウムヨージド、３−クロロ−６−（ピペラジン−１−イル）−５Ｈ−ベンゾ［ｂ］［１，４］ベンゾジアゼピン、８−クロロ−１１−［４−（１，１−ジドイトリオエチル）ピペラジン−１−イル］−５Ｈ−ジベンゾ［ｂ，ｅ］［１，４］ジアゼピン、１１−（ピペラジン−１−イル）−５Ｈ−ジベンゾ［ｂ，ｅ］［１，４］ジアゼピン、および１１−（４−エチルピペラジン−１−イル）−５Ｈ−ジベンゾ［ｂ，ｅ］［１，４］ジアゼピンからなる群より選択される、請求項２１８に記載のＡＡＶベクター。
【請求項２２０】
前記スイッチ受容体が、ＫＯＲＤポリペプチドを含む、請求項１７２から１８８のいずれか一項に記載のＡＡＶベクター。
【請求項２２１】
前記ＫＯＲＤポリペプチドが、１個または複数のアミノ酸挿入、欠失、または置換を含む、請求項２２０に記載のＡＡＶベクター。
【請求項２２２】
前記リガンドがサルビノリンＢである、請求項２２０または請求項２２１に記載のＡＡＶベクター。
【請求項２２３】
前記スイッチ受容体がｈＭ３Ｄｑポリペプチドを含む、請求項１７２から１８８のいずれか一項に記載のＡＡＶベクター。
【請求項２２４】
前記ｈＭ３Ｄｑポリペプチドが、１個または複数のアミノ酸挿入、欠失、または置換を含む、請求項２２３に記載のＡＡＶベクター。
【請求項２２５】
前記リガンドが、ＣＮＯ、ナルフラフィン、クロザピン、ペルラピン、オランザピン、アロセトロン、フルペルラピン、およびＮ４’−アルキル置換ＣＮＯ類似体からなる群より選択される、請求項２２３または請求項２２４に記載のＡＡＶベクター。
【請求項２２６】
前記Ｎ４’−アルキル置換ＣＮＯ類似体が、３−クロロ−６−（４−エチルピペラジン−１−イル）−５Ｈ−ベンゾ［ｂ］［１，４］ベンゾジアゼピン、４−（８−クロロ−５Ｈ−ジベンゾ［ｂ，ｅ］［１，４］ジアゼピン−１１−イル）−１，１−ジメチルピペラジン−１−イウムヨージド、３−クロロ−６−（ピペラジン−１−イル）−５Ｈ−ベンゾ［ｂ］［１，４］ベンゾジアゼピン、８−クロロ−１１−［４−（１，１−ジドイトリオエチル）ピペラジン−１−イル］−５Ｈ−ジベンゾ［ｂ，ｅ］［１，４］ジアゼピン、１１−（ピペラジン−１−イル）−５Ｈ−ジベンゾ［ｂ，ｅ］［１，４］ジアゼピン、および１１−（４−エチルピペラジン−１−イル）−５Ｈ−ジベンゾ［ｂ，ｅ］［１，４］ジアゼピンからなる群より選択される、請求項２２５に記載のＡＡＶベクター。
【請求項２２７】
前記スイッチ受容体が、ＧｓＤポリペプチドを含む、請求項１７２から１８８のいずれか一項に記載のＡＡＶベクター。
【請求項２２８】
前記ＧｓＤポリペプチドが、１個または複数のアミノ酸挿入、欠失、または置換を含む、請求項２２７に記載のＡＡＶベクター。
【請求項２２９】
前記リガンドが、ＣＮＯ、ナルフラフィン、クロザピン、ペルラピン、オランザピン、アロセトロン、フルペルラピン、およびＮ４’−アルキル置換ＣＮＯ類似体からなる群より選択される、請求項２２７または請求項２２８に記載のＡＡＶベクター。
【請求項２３０】
前記Ｎ４’−アルキル置換ＣＮＯ類似体が、３−クロロ−６−（４−エチルピペラジン−１−イル）−５Ｈ−ベンゾ［ｂ］［１，４］ベンゾジアゼピン、４−（８−クロロ−５Ｈ−ジベンゾ［ｂ，ｅ］［１，４］ジアゼピン−１１−イル）−１，１−ジメチルピペラジン−１−イウムヨージド、３−クロロ−６−（ピペラジン−１−イル）−５Ｈ−ベンゾ［ｂ］［１，４］ベンゾジアゼピン、８−クロロ−１１−［４−（１，１−ジドイトリオエチル）ピペラジン−１−イル］−５Ｈ−ジベンゾ［ｂ，ｅ］［１，４］ジアゼピン、１１−（ピペラジン−１−イル）−５Ｈ−ジベンゾ［ｂ，ｅ］［１，４］ジアゼピン、および１１−（４−エチルピペラジン−１−イル）−５Ｈ−ジベンゾ［ｂ，ｅ］［１，４］ジアゼピンからなる群より選択される、請求項２２９に記載のＡＡＶベクター。
【請求項２３１】
エピトープタグをコードするポリヌクレオチドをさらに含む、請求項１７２から２３０のいずれか一項に記載のＡＡＶベクター。
【請求項２３２】
前記エピトープタグが、マルトース結合タンパク質（「ＭＢＰ」）、グルタチオンＳトランスフェラーゼ（ＧＳＴ）、ＨＩＳ６、ＭＹＣ、ＦＬＡＧ、Ｖ５、ＶＳＶ−Ｇ、およびＨＡからなる群より選択される、請求項２３１に記載のＡＡＶベクター。
【請求項２３３】
ポリ（Ａ）配列をさらに含む、請求項１７２から２３０のいずれか一項に記載のＡＡＶベクター。
【請求項２３４】
前記ポリ（Ａ）配列が、ＳＶ４０ポリ（Ａ）配列、ウシ成長ホルモンポリ（Ａ）配列（ｂＧＨｐＡ）、またはウサギβ−グロビンポリ（Ａ）配列（ｒβｇｐＡ）である、請求項２３３に記載のＡＡＶベクター。
【請求項２３５】
前記ポリ（Ａ）配列がｂＧＨｐＡである、請求項２３３または請求項２３４に記載のＡＡＶベクター。
【請求項２３６】
１つまたは複数のＡＡＶ２逆方向末端反復（ＩＴＲ）を含む、請求項１７２から２３５のいずれか一項に記載のＡＡＶベクター。
【請求項２３７】
ＡＡＶ１、ＡＡＶ１（Ｙ７０５＋７３１Ｆ＋Ｔ４９２Ｖ）、ＡＡＶ２（Ｙ４４４＋５００＋７３０Ｆ＋Ｔ４９１Ｖ）、ＡＡＶ３（Ｙ７０５＋７３１Ｆ）、ＡＡＶ５、ＡＡＶ５（Ｙ４３６＋６９３＋７１９Ｆ）、ＡＡＶ６、ＡＡＶ６（ＶＰ３バリアントＹ７０５Ｆ／Ｙ７３１Ｆ／Ｔ４９２Ｖ）、ＡＡＶ−７ｍ８、ＡＡＶ８、ＡＡＶ８（Ｙ７３３Ｆ）、ＡＡＶ９、ＡＡＶ９（ＶＰ３バリアントＹ７３１Ｆ）、ＡＡＶ１０（Ｙ７３３Ｆ）、およびＡＡＶ−ＳｈＨ１０からなる群より選択される血清型を含む、請求項１７２から２３６のいずれか一項に記載のＡＡＶベクター。
【請求項２３８】
ＡＡＶ１、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６、ＡＡＶ６（Ｙ７０５Ｆ／Ｙ７３１Ｆ／Ｔ４９２Ｖ）、ＡＡＶ８、ＡＡＶ９、およびＡＡＶ９（Ｙ７３１Ｆ）からなる群より選択される血清型を含む、請求項１７２から２３７のいずれか一項に記載のＡＡＶベクター。
【請求項２３９】
ＡＡＶ６、ＡＡＶ６（Ｙ７０５Ｆ／Ｙ７３１Ｆ／Ｔ４９２Ｖ）、ＡＡＶ９、およびＡＡＶ９（Ｙ７３１Ｆ）からなる群より選択される血清型を含む、請求項１７２から２３８のいずれか一項に記載のＡＡＶベクター。
【請求項２４０】
ＡＡＶ６またはＡＡＶ６（Ｙ７０５Ｆ／Ｙ７３１Ｆ／Ｔ４９２Ｖ）血清型を含む、請求項１７２から２３９のいずれか一項に記載のＡＡＶベクター。
【請求項２４１】
前記プロモーターが、ＤＲＧニューロンまたはＴＧＧニューロン内で作動可能であり、前記スイッチ受容体がＧｌｙＲα１ポリペプチドを含む、請求項１７２に記載のＡＡＶベクター。
【請求項２４２】
前記プロモーターが、ｈＳＹＮ−１プロモーターであり、前記スイッチ受容体が、アミノ酸置換Ｆ２０７ＡおよびＡ２８８Ｇをさらに含むＧｌｙＲα１ポリペプチドを含む、請求項１７２に記載のＡＡＶベクター。
【請求項２４３】
前記ＡＡＶ血清型が、ＡＡＶ１、ＡＡＶ１（Ｙ７０５＋７３１Ｆ＋Ｔ４９２Ｖ）、ＡＡＶ２（Ｙ４４４＋５００＋７３０Ｆ＋Ｔ４９１Ｖ）、ＡＡＶ３（Ｙ７０５＋７３１Ｆ）、ＡＡＶ５、ＡＡＶ５（Ｙ４３６＋６９３＋７１９Ｆ）、ＡＡＶ６、ＡＡＶ６（ＶＰ３バリアントＹ７０５Ｆ／Ｙ７３１Ｆ／Ｔ４９２Ｖ）、ＡＡＶ−７ｍ８、ＡＡＶ８、ＡＡＶ８（Ｙ７３３Ｆ）、ＡＡＶ９、ＡＡＶ９（ＶＰ３バリアントＹ７３１Ｆ）、ＡＡＶ１０（Ｙ７３３Ｆ）、またはＡＡＶ−ＳｈＨ１０であり、前記プロモーターがｈＳＹＮ−１プロモーターであり、前記スイッチ受容体が、アミノ酸置換Ｆ２０７ＡおよびＡ２８８Ｇをさらに含むＧｌｙＲα１ポリペプチドを含む、請求項１７２に記載のＡＡＶベクター。
【請求項２４４】
１つまたは複数のＡＡＶ２  ＩＴＲ、ＡＡＶ６血清型、ｈＳＹＮ−１プロモーター、ならびにアミノ酸置換：
（ａ）Ｆ２０７ＡおよびＡ２８８Ｇ；
（ｂ）Ａ−１’Ｅ、Ｆ２０７Ａ、およびＡ２２８Ｇ；または
（ｃ）Ａ−１’Ｅ、Ｐ−２’Δ、Ｔ１３’Ｖ、Ｆ２０７Ａ、およびＡ２２８Ｇ
をさらに含むＧｌｙＲα１ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを含む、ＡＡＶベクター。
【請求項２４５】
１つまたは複数のＡＡＶ２  ＩＴＲ、ＡＡＶ６（Ｙ７０５Ｆ／Ｙ７３１Ｆ／Ｔ４９２Ｖ）血清型、ｈＳＹＮ−１プロモーター、ならびにアミノ酸置換Ｆ２０７ＡおよびＡ２８８Ｇをさらに含むＧｌｙＲα１ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを含むＡＡＶベクター。
【請求項２４６】
ｂＧＨｐＡをさらに含む、請求項２４２から２４５のいずれか一項に記載のＡＡＶベクター。
【請求項２４７】
ＦＬＡＧエピトープタグをさらに含む、請求項２４２から２４６のいずれか一項に記載のＡＡＶベクター。
【請求項２４８】
自己相補性ＡＡＶ（ｓｃＡＡＶ）ベクターである、請求項１７２から２４７のいずれか一項に記載のＡＡＶベクター。
【請求項２４９】
配列番号１を含む、請求項１７２に記載のＡＡＶベクター。
【請求項２５０】
請求項１７２から２４９のいずれか一項に記載のベクターを含む組成物。
【請求項２５１】
対象における神経疾患を管理、防止、または処置する方法であって、前記対象に請求項１７２から２４９のいずれか一項に記載のＡＡＶベクターを投与することを含む、方法。
【請求項２５２】
前記神経疾患が、満腹障害、アルツハイマー病、パーキンソン病、てんかん、肥満、食欲不振症、ＰＴＳＤ、ＧＥＲＤ、嗜癖、不安、うつ病、記憶喪失、認知症、睡眠時無呼吸、卒中、ナルコレプシー、尿失禁、本態性振戦、運動障害、心房細動、または脳がんである、請求項２５１に記載の方法。
【請求項２５３】
対象における疼痛を管理、防止、または処置する方法であって、前記対象に請求項１７２から２４９のいずれか一項に記載のＡＡＶベクターを投与することを含む、方法。
【請求項２５４】
疼痛を有する対象に痛覚脱失をもたらす方法であって、前記対象に請求項１７２から２４９のいずれか一項に記載のＡＡＶベクターを投与することを含む、方法。
【請求項２５５】
前記疼痛が、急性疼痛または慢性疼痛である、請求項２５３または請求項２５４に記載の方法。
【請求項２５６】
前記疼痛が慢性疼痛である、請求項２５３から２５５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２５７】
前記疼痛が、急性疼痛、慢性疼痛、神経因性疼痛、侵害受容性疼痛、異痛症、炎症性疼痛、炎症性痛覚過敏、ニューロパチー、神経痛、糖尿病性ニューロパチー、ヒト免疫不全ウイルス関連ニューロパチー、神経傷害、関節リウマチの疼痛、変形性関節症の疼痛、やけど、背部痛、目の疼痛、内臓痛、がん疼痛（例えば、骨がん疼痛）、歯の疼痛、頭痛、片頭痛、手根管症候群、線維筋痛症、神経炎、坐骨神経痛、骨盤過敏症、骨盤痛、疱疹後神経痛、術後疼痛、卒中後疼痛、または月経痛である、請求項２５３から２５５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２５８】
前記疼痛が、侵害受容性疼痛である、請求項２５３から２５５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２５９】
前記疼痛が、中枢神経系外傷、挫傷／捻挫、やけど、心筋梗塞および急性膵炎、術後疼痛（任意のタイプの外科手術後の疼痛）、外傷後疼痛、腎仙痛、がん疼痛、および背部痛からなる群より選択される侵害受容性疼痛である、請求項２５３から２５５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２６０】
前記疼痛が、神経因性疼痛である、請求項２５３から２５５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２６１】
前記神経因性疼痛の病因が、末梢神経障害、糖尿病性ニューロパチー、疱疹後神経痛、三叉神経痛、背部痛、がんニューロパチー、ＨＩＶニューロパチー、幻肢痛、手根管症候群、中枢性卒中後疼痛、および慢性アルコール中毒に関連した疼痛、甲状腺機能低下症、尿毒症、多発性硬化症、脊髄損傷、パーキンソン病、てんかん、およびビタミン欠乏症からなる群より選択される、請求項２６０に記載の方法。
【請求項２６２】
前記神経因性疼痛が、関節炎、異痛症、典型的三叉神経痛、三叉神経痛、身体表現性障害、感覚減退、痛覚過敏、神経痛、神経炎、神経原性疼痛、痛覚脱失、有痛性知覚脱失、カウザルギー、坐骨神経痛障害、変形性関節障害、線維筋痛症、内臓疾患、慢性疼痛障害、片頭痛／頭痛、慢性疲労症候群、複合性局所性疼痛症候群、神経ジストロフィー、足底筋膜炎、またはがんに関連した疼痛からなる群より選択される疼痛障害に関連する、請求項２６０に記載の方法。
【請求項２６３】
前記疼痛が、炎症性疼痛である、請求項２５３から２５５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２６４】
前記疼痛が、筋骨格障害、筋肉痛、線維筋痛症、脊椎炎、セロネガティブ（非リウマチ様）関節症、非関節性リウマチ、ジストロフィン異常症、グリコーゲン分解、多発性筋炎、および化膿性筋炎；心臓および血管痛、狭心症によって引き起こされる疼痛、心筋梗塞、僧帽弁狭窄、心膜炎、レイノー現象、強皮症、および骨格筋虚血；頭部の疼痛、片頭痛、群発性頭痛、緊張型頭痛混合頭痛、および血管障害に関連した頭痛；口腔顔面痛、歯の疼痛、耳の疼痛、口内焼灼感症候群、および側頭下顎筋筋膜痛に関連する、請求項２５３から２５５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２６５】
請求項１７２から２４９のいずれか一項に記載のＡＡＶベクターまたは請求項２５０に記載の組成物が、対象に髄腔内投与される、請求項２５３から２５５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２６６】
請求項１７２から２４９のいずれか一項に記載のＡＡＶベクターまたは請求項２５０に記載の組成物が、対象に神経節内投与される、請求項２５３から２５５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２６７】
請求項１７２から２４９のいずれか一項に記載のＡＡＶベクターまたは請求項２５０に記載の組成物が、対象に神経内投与される、請求項２５３から２５５のいずれか一項に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本願は、２０１５年９月１７日に出願された米国仮特許出願第６２／２２０，０７７号、および２０１５年９月１７日に出願された米国仮特許出願第６２／２２０，０８７号の優先権および利益を主張する。これらの出願両方の内容は、全体において参照によって組み込まれる。
【０００２】
電子的に提出されたテキストファイルの記述
本明細書とともに電子的に提出されたテキストファイルの内容は、その全体が参照により本明細書に組み込まれている：配列表のコンピューターで読み込み可能な形式コピー（ファイル名：ＳＷＣＨ＿００４＿０１ＷＯ＿ＳｅｑＬｉｓｔ＿ＳＴ２５．ｔｘｔ、記録された日付：２０１６年９月１６日、ファイルサイズ  １４．６キロバイト）。
【０００３】
本発明は一般に、疼痛を管理することを含めた神経学的障害を処置するための、受容体をコードするウイルスベクター、組成物、および使用の関連した方法に関する。
【背景技術】
【０００４】
世界中の数億人の人々が神経学的障害に冒されている。現在、人を冒す６００を超える異なる神経学的障害が存在すると推定されている。およそ６２０万人の人が毎年卒中のために死亡し、死亡の８０％超が低および中所得国においてである。５０００万人を超える人が世界中でてんかんに罹患している。認知症の人が世界中に３５６０万人存在し、毎年７７０万の新しい症例を伴っていると推定されている。アルツハイマー病は、認知症の最も一般的な原因であり、症例の６０〜７０％に寄与し得る。片頭痛の有病率は、世界中で１０％超である。米国人だけで１億１０００万人超が慢性疼痛に罹患している。神経学的障害の経済的負担はかなりのものである。米国だけで、神経学的障害を処置するためのコストは、１年に８０００億ドル超であると推定されている。神経学的障害の処置の世界的なコストは、２０３０年までに６兆ドルを超えると推定されている。
【０００５】
慢性疼痛は、神経学的障害の一タイプである。緩和されない慢性疼痛は、米国および世界中で極めて重要な健康問題である。医学研究所による報告は、１億１６００万人の米国人が数週間から数年持続する疼痛に罹患しており、５億６０００万ドルを超える年間コストが生じていると推定した。慢性疼痛患者に適切な長期療法は存在せず、社会および個人の両方にとってかなりのコストをもたらしている。疼痛は、身体障害をもたらすことが多く、身体障害を引き起こすほどでないときでさえ、それは、生活の質に重大な効果を有する。ケア送達の環境が最適、例えば、注意深い、十分訓練された医師；オピオイドをすぐに利用できること；アジュバント鎮痛薬の使用；患者管理痛覚脱失の利用可能性；ならびに神経ブロックおよびＩＴポンプの様な手順の証拠に基づく使用などであるときでさえ、疼痛処置は頻繁に失敗する。
【０００６】
慢性疼痛に最も一般に使用される療法は、オピオイド鎮痛薬および非ステロイド性抗炎症薬の施用であるが、これらの薬物は、嗜癖になる可能性があり、副作用、例えば、薬物依存、寛容性、呼吸抑制、鎮静、認知的失敗、幻覚、および他の全身性副作用などを引き起こす場合がある。医薬品の広い使用法にもかかわらず、疼痛緩和のその有効度について成功率が著しく低い。様々な薬物療法を用いた大規模無作為研究により、２または３人の患者に１人のみが少なくとも５０％疼痛緩和を実現することが見出された（Finnerupら、２００５年）。最も開発された薬理学的処置を使用する経過観察研究でも、同じ結果が見出され、疼痛の薬物療法の効力における改善がないことを示した（Finnerupら、Pain、１５０巻（３号）：５７３〜８１頁、２０１０年）。
【０００７】
疼痛を処置するためのより侵襲的な選択肢としては、神経ブロックおよび電気刺激がある。神経ブロックは、脳への疼痛シグナルを遮るための、通常脊髄内の局所的麻酔薬注射であるが、その効果は数週間から数カ月しか続かない。神経ブロックは、ほとんどの場合、推奨される処置選択肢ではない（MailisおよびTaenzer、Pain  Res  Manag.、１７巻（３号）：１５０〜１５８頁、２０１２年）。電気刺激は、電流を供給して疼痛シグナルをブロックすることを伴う。効果は神経ブロックより長く持続し得るが、導線自体のずれ、感染、破損、または電池切れが原因で合併症が生じる。あるレビューによれば、ニューロパチーに対して電気刺激で処置された患者の４０％が、これらのデバイスに関する問題の１つまたは複数を経験したことが見出された（Wolter、２０１４年）。
【０００８】
疼痛を管理するための最も侵襲性で最も好適でない方法は、疼痛を引き起こしている神経またはその切片の完全な外科的除去である。この選択肢は、以前のおよび他の低侵襲性の処置を使い尽くし、これらが効果的でないと判明したときのみ推奨される。高周波神経切除は、熱を使用して問題の神経を破壊し、神経ブロックより長い疼痛緩和をもたらす。しかし、ある研究から、慢性腰仙神経根性疼痛のためのＤＲＧの部分的高周波損傷化において対照群と処置群との差異が無いことが見出された（Geurtsら、２００３年）。疼痛神経を外科的に除去する他の外科的方法も、類似した欠点を被り、感覚消失もしくは運動障害を含めた長期間の深刻な副作用を有し、または他の場所で疼痛を引き起こす。
【０００９】
神経学的障害を処置するための方法は、安全、効率的、かつ費用効果的であるべきである。遺伝子療法は、疼痛の管理を含めて様々な神経疾患の非侵襲性処置選択肢をもたらすことができる。しかしこれまで、遺伝子療法の方法は、神経疾患の処置において広範な使用を見出していない。遺伝子療法にとって重要なことは、特定の細胞型内で関連した標的を過剰発現させ、または抑制するために治療遺伝子を送達することができる安全で高度に効率的な遺伝子送達システムを選択することである。
しかし、安全で効率的であると示された送達システムはほとんどなく、よって、疼痛を管理することを含めた神経学的障害を処置するための遺伝子療法の有望性は、いまだ実現されていない。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【００１０】
【非特許文献１】Finnerupら、Pain、１５０巻（３号）：５７３〜８１頁、２０１０年
【非特許文献２】MailisおよびTaenzer、Pain  Res  Manag.、１７巻（３号）：１５０〜１５８頁、２０１２年
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【００１１】
本発明は、神経学的障害および疾患の遺伝子療法における使用のためのポリヌクレオチド、ベクター、および関連した組成物を提供する。一実施形態では、神経学的障害は、疼痛（例えば、慢性または急性疼痛）である。
【００１２】
一態様では、神経疾患を処置するための方法であって、神経疾患に罹患している対象に生物学的に不活性な作用物質または薬物を投与することを含む、方法が提供されている。一部の実施形態では、神経疾患は、てんかんではない。一部の場合では、対象は、Ｇタンパク質共役受容体またはリガンド依存性イオンチャネル（ＬＧＩＣ）を異種的に発現する。一部の場合では、対象は、Ｇタンパク質共役受容体またはＬＧＩＣを相同的に発現する。一部の場合では、対象は、Ｇタンパク質共役受容体またはＬＧＩＣを異所的に発現する。一部の場合では、Ｇタンパク質共役受容体は、デザイナー薬物によって排他的に活性化されるデザイナー受容体（ＤＲＥＡＤＤ）である。一部の例では、ＤＲＥＡＤＤは、ｈＭ４Ｄｉ、ｈＭ３Ｄｑ、ＡｌｓｔＲ、またはＫＯＲ−ＤＲＥＡＤＤである。一部の場合では、ＬＧＩＣは、ＧｌｙＲ−Ｍ、ＧｌｕＣｌ、ＰＳＡＭ−５ＨＴ３ＨＣ、ＰＳＡＭ−ＧｌｙＲ、ＰＳＡＭ−ｎＡＣｈＲ、ＴＲＰＶ１、またはＧＡＢＡＡである。一部の事例では、生物学的に不活性な作用物質は、クロザピン−Ｎ−オキシド（ＣＮＯ）、ナルフラフィン（Ｃ２８Ｈ３２Ｎ２Ｏ５）、サルビノリンＢ、アラトスタチン、８−クロロ−１１−［４−（１，１−ジドイトリオエチル（dideutrioethyl））ピペラジン−１−イル］−５Ｈ−ジベンゾ［ｂ，ｅ］［１，４］ジアゼピン、または１１−（ピペラジン−１−イル）−５Ｈ−ジベンゾ［ｂ，ｅ］［１，４］ジアゼピンである。一部の場合では、薬物は、イベルメクチン、セラメクチン（ｓｅｌａｍｅｃｔｉｎ）、ドラメクチン（ｄｏｒａｍｅｃｔｉｎ）、エマメクチン（ｅｍａｍｅｃｔｉｎ）、エプリノメクチン（ｅｐｒｉｎｏｍｅｃｔｉｎ）、アバメクチン（ａｂａｍｅｃｔｉｎ）、モキシデクチン（ｍｏｘｉｄｅｃｔｉｎ）、ＰＳＥＭ２２Ｓ、ＰＳＥＭ８９Ｓ、ＰＳＥＭ９Ｓ、カプサイシン、またはゾルピデムである。一部の実施形態では、てんかんではない神経疾患を処置するための方法であって、クロザピン−Ｎ−オキシドである生物学的に不活性な作用物質を前記神経疾患に罹患している対象に投与することを含み、前記対象は、ｈＭ４Ｄｉを発現する、方法が提供されている。一部の場合では、Ｇタンパク質共役受容体またはＬＧＩＣは、生物学的に不活性な作用物質または薬物によって活性化される。一部の場合では、Ｇタンパク質共役受容体またはＬＧＩＣは、スイッチ受容体（ｓｗｉｔｃｈ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ）である。一部の場合では、本方法は、前記投与の前に、Ｇタンパク質共役受容体またはＬＧＩＣをコードする核酸分子を対象に送達することをさらに含む。一部の場合では、核酸分子は、ウイルスベクターで対象に送達される。一部の場合では、ウイルスベクターは、アデノウイルスベクター、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクター、レンチウイルスベクター、または単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）ベクターである。一部の例では、ＡＡＶベクターは、ＡＡＶ−６またはＡＡＶ−９に由来する。一部の例では、ＡＡＶベクターは、ＡＡＶ６（Ｙ７０５＋７３１Ｆ＋Ｔ４９２Ｖ）、ＡＡＶ９（Ｙ７３１Ｆ）、またはＡＡＶ−７ｍ８である。一部の実施形態では、ＡＡＶベクターは、配列番号１を含む。一部の場合では、核酸分子は、非ウイルス法��よって対象に送達される。一部の例では、非ウイルス法は、リポフェクション、ナノ粒子送達、微粒子銃（ｐａｒｔｉｃｌｅ  ｂｏｍｂａｒｄｍｅｎｔ）、電気穿孔、超音波処理、またはマイクロインジェクションである。一部の場合では、神経疾患は、疼痛である。一部の場合では、神経疾患は、満腹障害（ｓａｔｉｅｔｙ  ｄｉｓｏｒｄｅｒ）である。一部の事例では、満腹障害は、肥満、神経性食欲不振症、または神経性過食症である。一部の場合では、神経疾患は、アルツハイマー病、パーキンソン病、外傷後ストレス障害（ＰＴＳＤ）、胃食道逆流性疾患（ＧＥＲＤ）、嗜癖、不安、うつ病、記憶喪失、認知症、睡眠時無呼吸、卒中、尿失禁、ナルコレプシー、本態性振戦、運動障害、心房細動、または脳がんである。一部の場合では、Ｇタンパク質共役受容体は、Ｇｉ−またはＧｑ−共役型である。一部の場合では、Ｇタンパク質共役受容体またはＬＧＩＣは、興奮性細胞内で選択的に発現される。一部の場合では、興奮性細胞は、ニューロンまたは筋細胞である。一部の場合では、ニューロンは、後根神経節または感覚ニューロンである。一部の場合では、投与することは、経口、髄腔内、または局部投与を含む。一部の場合では、送達することは、髄腔内、神経節内、頭蓋内、皮下、脊髄内、大槽、または神経内送達を含む。一部の場合では、生物学的に不活性な作用物質または薬物は、前記送達後少なくとも１週間投与される。一部の場合では、生物学的に不活性な作用物質または薬物は、０．００１μｇ／ｋｇ〜１０ｍｇ／ｋｇの用量で投与される。一部の場合では、核酸分子は、シナプシン、ＴＲＰＶ１、Ｎａｖ１．７、Ｎａｖ１．８、Ｎａｖ１．９、ＣａｍＫＩＩ、ＮＳＥ、またはアドビリン（Ａｄｖｉｌｌｉｎ）プロモーターを含む。一部の場合では、対象は、ヒトである。一部の場合では、対象は、獣医学上の動物である。
【００１３】
別の態様では、神経疾患を処置するための方法であって、Ｇタンパク質共役受容体またはＬＧＩＣを異種的に発現する対象に、Ｇタンパク質共役受容体またはＬＧＩＣを活性化する薬物を投与することを含み、薬物は、生物学的に不活性な作用物質または合成リガンドである、方法を提供する。一部の態様では、神経疾患は、てんかんではない。一部の場合では、Ｇタンパク質共役受容体は、ＤＲＥＡＤＤである。一部の場合では、ＤＲＥＡＤＤは、ｈＭ４Ｄｉ、ｈＭ３Ｄｑ、ＡｌｓｔＲ、またはＫＯＲ−ＤＲＥＡＤＤである。一部の場合では、ＬＧＩＣは、ＧｌｙＲ−Ｍ、ＧｌｕＣｌ、ＰＳＡＭ−５ＨＴ３ＨＣ、ＰＳＡＭ−ＧｌｙＲ、ＰＳＡＭ−ｎＡＣｈＲ、ＴＲＰＶ１、またはＧＡＢＡＡである。一部の場合では、Ｇタンパク質共役受容体またはＬＧＩＣは、スイッチ受容体である。一部の場合では、生物学的に不活性な作用物質は、クロザピン−Ｎ−オキシド、ナルフラフィン（Ｃ２８Ｈ３２Ｎ２Ｏ５）、サルビノリンＢ、アラトスタチン、８−クロロ−１１−［４−（１，１−ジドイトリオエチル）ピペラジン−１−イル］−５Ｈ−ジベンゾ［ｂ，ｅ］［１，４］ジアゼピン、または１１−（ピペラジン−１−イル）−５Ｈ−ジベンゾ［ｂ，ｅ］［１，４］ジアゼピンである。一部の場合では、薬物は、イベルメクチン、セラメクチン、ドラメクチン、エマメクチン、エプリノメクチン、アバメクチン、モキシデクチン、ＰＳＥＭ２２Ｓ、ＰＳＥＭ８９Ｓ、ＰＳＥＭ９Ｓ、カプサイシン、またはゾルピデムである。一部の場合では、投与することは、経口、髄腔内、または局部投与を含む。一部の場合では、本方法は、投与の前に、対象にＧタンパク質共役受容体またはＬＧＩＣをコードする核酸分子を送達することをさらに含む。一部の場合では、Ｇタンパク質共役受容体またはＬＧＩＣをコードする核酸分子は、ウイルスベクターによって送達される。一部の場合では、ウイルスベクターは、アデノウイルスベクター、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクター、レンチウイルスベクター、または単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）ベクターである。一部の例では、ＡＡＶベクターは、ＡＡＶ−６またはＡＡＶ−９に由来する。一部の例では、ＡＡＶベクターは、ＡＡＶ６（Ｙ７０５＋７３１Ｆ＋Ｔ４９２Ｖ）、ＡＡＶ９（Ｙ７３１Ｆ）、またはＡＡＶ−７ｍ８である。一部の実施形態では、ＡＡＶベクターは、配列番号１を含む。一部の場合では、核酸分子は、非ウイルス法によって対象に送達される。一部の場合では、非ウイルス法は、リポフェクション、ナノ粒子送達、微粒子銃、電気穿孔、超音波処理、またはマイクロインジェクションである。一部の場合では、神経疾患は、疼痛である。一部の場合では、神経疾患は、満腹障害である。一部の例では、満腹障害は、肥満、神経性食欲不振症、または神経性過食症である。他の場合では、神経疾患は、アルツハイマー病、パーキンソン病、外傷後ストレス障害（ＰＴＳＤ）、胃食道逆流性疾患（ＧＥＲＤ）、嗜癖、不安、うつ病、記憶喪失、認知症、睡眠時無呼吸、卒中、ナルコレプシー、尿失禁、本態性振戦、運動障害、心房細動、または脳がんである。一部の場合では、核酸分子は、シナプシン、ＴＲＰＶ１、Ｎａｖ１．７、Ｎａｖ１．８、Ｎａｖ１．９、ＣａｍＫＩＩ、ＮＳＥ、またはアドビリンプロモーターを含む。
【００１４】
別の態様では、神経疾患を処置するための方法であって、Ｇタンパク質共役受容体またはＬＧＩＣを異種的に発現する対象に、Ｇタンパク質共役受容体またはＬＧＩＣを活性化する薬物を投与することを含み、薬物は、Ｇタンパク質共役受容体またはＬＧＩＣの内因性リガンドではない、方法が提供されている。一部の場合では、神経疾患は、てんかんではない。一部の場合では、Ｇタンパク質共役受容体は、ｈＭ４Ｄｉ、ｈＭ３Ｄｑ、ＡｌｓｔＲ、またはＫＯＲ−ＤＲＥＡＤＤである。一部の場合では、ＬＧＩＣは、ＧｌｙＲ−Ｍ、ＧｌｕＣｌ、ＰＳＡＭ−５ＨＴ３ＨＣ、ＰＳＡＭ−ＧｌｙＲ、ＰＳＡＭ−ｎＡＣｈＲ、ＴＲＰＶ１、またはＧＡＢＡＡである。一部の場合では、薬物は、クロザピン−Ｎ−オキシド、ナルフラフィン（Ｃ２８Ｈ３２Ｎ２Ｏ５）、サルビノリンＢ、アラトスタチン、クロザピン、オランザピン、ペルラピン、フルペルラピン（ｆｌｕｐｅｒｌａｐｉｎｅ）、アロセトロン、８−クロロ−１１−［４−（１，１−ジドイトリオエチル）ピペラジン−１−イル］−５Ｈ−ジベンゾ［ｂ，ｅ］［１，４］ジアゼピン、または１１−（ピペラジン−１−イル）−５Ｈ−ジベンゾ［ｂ，ｅ］［１，４］ジアゼピンである。一部の場合では、薬物は、イベルメクチン、セラメクチン、ドラメクチン、エマメクチン、エプリノメクチン、アバメクチン、モキシデクチン、ＰＳＥＭ２２Ｓ、ＰＳＥＭ８９Ｓ、ＰＳＥＭ９Ｓ、カプサイシン、またはゾルピデムである。一部の場合では、本方法は、投与の前に、Ｇタンパク質共役受容体またはＬＧＩＣをコードする核酸分子を対象に送達することをさらに含む。一部の場合では、Ｇタンパク質共役受容体またはＬＧＩＣは、興奮性細胞内で選択的に発現される。一部の場合では、興奮性細胞は、ニューロンまたは筋細胞を含む。一部の場合では、ニューロンは、感覚ニューロン、後根神経節、または三叉神経節を含む。一部の場合では、核酸分子は、ウイルスベクターによって送達される。一部の例では、ウイルスベクターは、アデノウイルスベクター、レンチウイルスベクター、またはアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクターである。一部の事例では、ＡＡＶベクターは、ＡＡＶ−６またはＡＡＶ−９に由来する。一部の事例では、ＡＡＶベクターは、ＡＡＶ６（Ｙ７０５＋７３１Ｆ＋Ｔ４９２Ｖ）、ＡＡＶ９（Ｙ７３１Ｆ）、またはＡＡＶ−７ｍ８である。一部の場合では、核酸分子は、非ウイルス法によって対象に送達される。一部の場合では、非ウイルス法は、リポフェクション、ナノ粒子送達、微粒子銃、電気穿孔、超音波処理、またはマイクロインジェクションである。一部の場合では、薬物は、合成リガンドである。一部の場合では、薬物は、０．００１μｇ／ｋｇ〜１０ｍｇ／ｋｇの用量で投与される。一部の場合では、神経疾患は、アルツハイマー病、パーキンソン病、疼痛、肥満、食欲不振症、ＰＴＳＤ、ＧＥＲＤ、嗜癖、不安、うつ病、記憶喪失、認知症、睡眠時無呼吸、卒中、ナルコレプシー、尿失禁、本態性振戦、運動障害、心房細動、または脳がんである。
【００１５】
さらに別の態様では、神経疾患を処置するための方法であって、対象にＧタンパク質共役受容体またはＬＧＩＣをコードする核酸分子を送達することであって、対象は、Ｇタンパク質共役受容体またはＬＧＩＣを異種的に発現する、ことと、対象にＧタンパク質共役受容体またはＬＧＩＣを活性化する薬物を投与し、それにより対象における神経疾患を処置することであって、薬物は、対象にＧタンパク質共役受容体またはＬＧＩＣをコードする核酸分子の送達後少なくとも１週間投与される、こととを含む、方法が提供されている。一部の場合では、Ｇタンパク質共役受容体またはＬＧＩＣをコードする核酸分子は、ウイルスベクターによって対象に送達される。一部の場合では、ウイルスベクターは、アデノウイルスベクター、レンチウイルスベクター、またはアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクターである。一部の例では、ＡＡＶベクターは、ＡＡＶ−６またはＡＡＶ−９である。一部の例では、ＡＡＶベクターは、ＡＡＶ６（Ｙ７０５＋７３１Ｆ＋Ｔ４９２Ｖ）、ＡＡＶ９（Ｙ７３１Ｆ）、またはＡＡＶ−７ｍ８である。一部の場合では、核酸分子は、非ウイルス法によって対象に送達される。一部の事例では、非ウイルス法は、リポフェクション、ナノ粒子送達、微粒子銃、電気穿孔、超音波処理、またはマイクロインジェクションである。一部の場合では、神経疾患は、アルツハイマー病、パーキンソン病、疼痛、てんかん、肥満、食欲不振症、ＰＴＳＤ、ＧＥＲＤ、嗜癖、不安、うつ病、記憶喪失、認知症、睡眠時無呼吸、卒中、ナルコレプシー、尿失禁、本態性振戦、運動障害、心房細動、または脳がんである。一部の場合では、薬物は、クロザピン−Ｎ−オキシド、ナルフラフィン（Ｃ２８Ｈ３２Ｎ２Ｏ５）、サルビノリンＢ、アラトスタチン、クロザピン、オランザピン、ペルラピン、フルペルラピン、アロセトロン、８−クロロ−１１−［４−（１，１−ジドイトリオエチル）ピペラジン−１−イル］−５Ｈ−ジベンゾ［ｂ，ｅ］［１，４］ジアゼピン、または１１−（ピペラジン−１−イル）−５Ｈ−ジベンゾ［ｂ，ｅ］［１，４］ジアゼピンである。一部の場合では、薬物は、イベルメクチン、セラメクチン、ドラメクチン、エマメクチン、エプリノメクチン、アバメクチン、モキシデクチン、ＰＳＥＭ２２Ｓ、ＰＳＥＭ８９Ｓ、ＰＳＥＭ９Ｓ、カプサイシン、またはゾルピデムである。一部の場合では、薬物は、０．００１μｇ／ｋｇ〜１０ｍｇ／ｋｇの用量で投与される。一部の場合では、Ｇタンパク質共役受容体またはＬＧＩＣは、興奮性細胞内で選択的に発現される。一部の場合では、興奮性細胞は、ニューロンまたは筋細胞である。一部の場合では、ニューロンは、感覚ニューロン、後根神経節、または三叉神経節である。一部の場合では、本方法は、少なくとも３日連続で毎日薬物を投与することをさらに含む。
【００１６】
さらに別の態様では、神経疾患を処置するための方法であって、Ｇタンパク質共役受容体またはＬＧＩＣを異種的に発現する対象にＧタンパク質共役受容体またはＬＧＩＣを活性化する薬物を投与することを含み、薬物は、Ｇタンパク質共役受容体またはＬＧＩＣの内因性リガンドではない、方法が提供されている。一部の実施形態では、薬物は、カッパオピオイド受容体（ＫＯＲ）結合薬ではない。一部の場合では、神経疾患は、てんかんではない。一部の場合では、Ｇタンパク質共役受容体は、カッパオピオイド受容体（ＫＯＲ）以外のＧタンパク質共役受容体である。一部の場合では、異種Ｇタンパク質共役受容体は、ＤＲＥＡＤＤである。一部の例では、ＤＲＥＡＤＤは、ｈＭ４Ｄｉ、ｈＭ３Ｄｑ、またはＡｌｓｔＲである。一部の場合では、ＬＧＩＣは、ＧｌｙＲ−Ｍ、ＧｌｕＣｌ、ＰＳＡＭ−５ＨＴ３ＨＣ、ＰＳＡＭ−ＧｌｙＲ、ＰＳＡＭ−ｎＡＣｈＲ、ＴＲＰＶ１、またはＧＡＢＡＡである。一部の場合では、薬物は、クロザピン−Ｎ−オキシド、ナルフラフィン（Ｃ２８Ｈ３２Ｎ２Ｏ５）、サルビノリンＢ、アラトスタチン、クロザピン、オランザピン、ペルラピン、フルペルラピン、アロセトロン、８−クロロ−１１−［４−（１，１−ジドイトリオエチル）ピペラジン−１−イル］−５Ｈ−ジベンゾ［ｂ，ｅ］［１，４］ジアゼピン、または１１−（ピペラジン−１−イル）−５Ｈ−ジベンゾ［ｂ，ｅ］［１，４］ジアゼピンである。一部の場合では、薬物は、イベルメクチン、セラメクチン、ドラメクチン、エマメクチン、エプリノメクチン、アバメクチン、モキシデクチン、ＰＳＥＭ２２Ｓ、ＰＳＥＭ８９Ｓ、ＰＳＥＭ９Ｓ、カプサイシン、またはゾルピデムである。一部の場合では、方法は、投与の前に、対象にＧタンパク質共役受容体またはＬＧＩＣをコードする核酸分子を送達することをさらに含む。一部の場合では、Ｇタンパク質共役受容体またはＬＧＩＣは、ウイルスベクターによって送達される。一部の場合では、ウイルスベクターは、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクター、アデノウイルスベクター、レンチウイルスベクター、または単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）ベクターである。一部の例では、ＡＡＶベクターは、ＡＡＶ−６またはＡＡＶ−９である。一部の例では、ＡＡＶベクターは、ＡＡＶ６（Ｙ７０５＋７３１Ｆ＋Ｔ４９２Ｖ）、ＡＡＶ９（Ｙ７３１Ｆ）、またはＡＡＶ−７ｍ８である。一部の場合では、核酸分子は、非ウイルス法によって対象に送達される。一部の場合では、非ウイルス法は、リポフェクション、ナノ粒子送達、微粒子銃、電気穿孔、超音波処理、またはマイクロインジェクションである。一部の場合では、神経疾患は、疼痛である。他の場合では、神経疾患は、満腹障害である。一部の例では、満腹障害は、肥満、神経性食欲不振症、または神経性過食症である。他の場合では、神経疾患は、アルツハイマー病、パーキンソン病、疼痛、てんかん、肥満、食欲不振症、ＰＴＳＤ、ＧＥＲＤ、嗜癖、不安、うつ病、記憶喪失、認知症、睡眠時無呼吸、卒中、ナルコレプシー、尿失禁、本態性振戦、運動障害、心房細動、または脳がんである。一部の場合では、Ｇタンパク質共役受容体またはＬＧＩＣは、興奮性細胞内で選択的に発現される。一部の例では、興奮性細胞は、ニューロンまたは筋細胞である。一部の場合では、ニューロンは、感覚ニューロン、後根神経節、または三叉神経節である。一部の場合では、投与することは、経口、髄腔内、または局部投与を含む。
【００１７】
別の態様では、神経疾患を処置するための方法であって、Ｇタンパク質共役受容体またはＬＧＩＣを異種的に発現する対象にＧタンパク質共役受容体またはＬＧＩＣを活性化する薬物を投与することを含み、薬物は、Ｇタンパク質共役受容体またはＬＧＩＣの内因性リガンドではなく、Ｇタンパク質共役受容体またはＬＧＩＣは、感覚ニューロン、後根神経節、三叉神経節、迷走神経、脳、または筋細胞内で選択的に発現される、方法が提供されている。一部の場合では、Ｇタンパク質共役受容体は、ＤＲＥＡＤＤである。一部の例では、ＤＲＥＡＤＤは、ｈＭ４Ｄｉ、ｈＭ３Ｄｑ、ＡｌｓｔＲ、またはＫＯＲ−ＤＲＥＡＤＤである。一部の場合では、ＬＧＩＣは、ＧｌｙＲ−Ｍ、ＧｌｕＣｌ、ＰＳＡＭ−５ＨＴ３ＨＣ、ＰＳＡＭ−ＧｌｙＲ、ＰＳＡＭ−ｎＡＣｈＲ、ＴＲＰＶ１、またはＧＡＢＡＡである。一部の場合では、薬物は、クロザピン−Ｎ−オキシド、ナルフラフィン（Ｃ２８Ｈ３２Ｎ２Ｏ５）、サルビノリンＢ、アラトスタチン、クロザピン、オランザピン、ペルラピン、フルペルラピン、アロセトロン、８−クロロ−１１−［４−（１，１−ジドイトリオエチル）ピペラジン−１−イル］−５Ｈ−ジベンゾ［ｂ，ｅ］［１，４］ジアゼピン、または１１−（ピペラジン−１−イル）−５Ｈ−ジベンゾ［ｂ，ｅ］［１，４］ジアゼピンである。一部の場合では、薬物は、イベルメクチン、セラメクチン、ドラメクチン、エマメクチン、エプリノメクチン、アバメクチン、モキシデクチン、ＰＳＥＭ２２Ｓ、ＰＳＥＭ８９Ｓ、ＰＳＥＭ９Ｓ、カプサイシン、またはゾルピデムである。一部の場合では、本方法は、前記投与の前に、Ｇタンパク質共役受容体またはＬＧＩＣをコードする核酸分子を対象に送達することをさらに含む。一部の場合では、核酸分子は、ウイルスベクターで対象に送達される。一部の場合では、ウイルスベクターは、アデノウイルスベクター、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクター、レンチウイルスベクター、または単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）ベクターである。一部の例では、ＡＡＶベクターは、ＡＡＶ−６またはＡＡＶ−９に由来する。一部の例では、ＡＡＶベクターは、ＡＡＶ６（Ｙ７０５＋７３１Ｆ＋Ｔ４９２Ｖ）、ＡＡＶ９（Ｙ７３１Ｆ）、またはＡＡＶ−７ｍ８である。一部の場合では、核酸分子は、非ウイルス法によって対象に送達される。一部の場合では、非ウイルス法は、リポフェクション、ナノ粒子送達、微粒子銃、電気穿孔、超音波処理、またはマイクロインジェクションである。一部の場合では、神経疾患は、疼痛である。他の場合では、神経疾患は、てんかんである。さらに他の場合では、神経障害は、満腹障害である。一部の例では、満腹障害は、肥満、神経性食欲不振症、または神経性過食症である。一部の場合では、Ｇタンパク質共役受容体は、ＧｉまたはＧｑ共役型である。一部の場合では、投与することは、経口、髄腔内、または局部投与を含む。他の場合では、送達することは、髄腔内、神経節内、頭蓋内、皮下、脊髄内、大槽、または神経内送達を含む。一部の場合では、薬物は、送達の少なくとも１週間後に投与される。一部の場合では、薬物は、０．００１μｇ／ｋｇ〜１０ｍｇ／ｋｇの用量で投与される。一部の場合では、核酸分子は、シナ���シン、ＴＲＰＶ１、Ｎａｖ１．７、Ｎａｖ１．８、Ｎａｖ１．９、ＣａｍＫＩＩ、ＮＳＥ、またはアドビリンプロモーターを含む。一部の場合では、対象は、ヒトである。
【００１８】
さらに別の態様では、対象における神経疾患を処置するための方法であって、対象にＧタンパク質共役受容体またはＬＧＩＣをコードする核酸分子を送達することと、対象にＧタンパク質共役受容体またはＬＧＩＣを活性化する薬物を投与することを含み、薬物が、ＦＤＡに認可されているが、神経疾患の処置に関してＦＤＡに認可されていない、方法が提供されている。一部の場合では、Ｇタンパク質共役受容体またはＬＧＩＣは、対象内で発現される。一部の場合では、Ｇタンパク質共役受容体は、対象において異種的に発現される。一部の場合では、Ｇタンパク質共役受容体またはＬＧＩＣは、対象において相同的に発現される。一部の場合では、Ｇタンパク質共役受容体またはＬＧＩＣは、対象において異所的に発現される。一部の場合では、Ｇタンパク質共役受容体は、ＤＲＥＡＤＤである。一部の例では、ＤＲＥＡＤＤは、ｈＭ４Ｄｉ、ｈＭ３Ｄｑ、ＡｌｓｔＲ、またはＫＯＲ−ＤＲＥＡＤＤである。一部の場合では、ＬＧＩＣは、ＧｌｙＲ−Ｍ、ＧｌｕＣｌ、ＰＳＡＭ−５ＨＴ３ＨＣ、ＰＳＡＭ−ＧｌｙＲ、ＰＳＡＭ−ｎＡＣｈＲ、ＴＲＰＶ１、またはＧＡＢＡＡである。
【００１９】
別の態様では、神経疾患を処置するための方法であって、Ｇタンパク質共役受容体またはＬＧＩＣを異種的に発現する対象に、Ｇタンパク質共役受容体またはＬＧＩＣを活性化する薬物を投与することを含み、薬物は、０．００１μｇ／ｋｇ〜１０ｍｇ／ｋｇの用量で投与される、方法が提供されている。一部の場合では、薬物は、クロザピン−Ｎ−オキシド、ナルフラフィン（Ｃ２８Ｈ３２Ｎ２Ｏ５）、サルビノリンＢ、アラトスタチン、クロザピン、オランザピン、ペルラピン、フルペルラピン、アロセトロン、８−クロロ−１１−［４−（１，１−ジドイトリオエチル）ピペラジン−１−イル］−５Ｈ−ジベンゾ［ｂ，ｅ］［１，４］ジアゼピン、または１１−（ピペラジン−１−イル）−５Ｈ−ジベンゾ［ｂ，ｅ］［１，４］ジアゼピンである。一部の場合では、薬物は、イベルメクチン、セラメクチン、ドラメクチン、エマメクチン、エプリノメクチン、アバメクチン、モキシデクチン、ＰＳＥＭ２２Ｓ、ＰＳＥＭ８９Ｓ、ＰＳＥＭ９Ｓ、カプサイシン、またはゾルピデムである。
【００２０】
別の態様では、神経疾患を処置するための方法であって、対象にＧタンパク質共役受容体またはＬＧＩＣをコードする核酸分子を送達することと、対象にＧタンパク質共役受容体またはＬＧＩＣを活性化する薬物を投与することとを含み、薬物は、少なくとも３日連続で毎日対象に投与される、方法が提供されている。一部の場合では、薬物は、対象に送達後少なくとも１週間投与される。
【００２１】
さらに別の態様では、神経疾患を処置するための方法であって、リガンド依存性イオンチャネルを異種的に発現する対象に、リガンド依存性イオンチャネルを活性化する薬物を投与することを含む、方法が提供されている。一部の場合では、薬物は、グリシン、ベータアラニン、またはタウリンではない。一部の態様では、リガンド依存性イオンチャネルは、別個のポリペプチドを元来コードした２つまたはそれよりも多いポリヌクレオチド配列の融合によって作出されるイオン伝導孔ドメインおよびリガンド結合ドメインを含む。一部の実施形態では、ポリヌクレオチド配列は、ｃｙｓループ受容体遺伝子ファミリーの２つまたはそれよりも多いメンバーを含む。一実施形態では、イオン伝導孔ドメインは、アニオンを伝導する。別の実施形態では、イオン伝導孔ドメインは、カチオンを伝導する。一部の場合では、リガンド結合ドメインは、クロザピン−Ｎ−オキシド、クロザピン、ペルラピン、オランザピン、アロセトロン、フルペルラピン、またはＮ４’−アルキル置換ＣＮＯ類似体の結合によって活性化される。ある特定の態様では、リガンド結合ドメインは、ニコチン、バレニクリン、またはガランタミンの結合によって活性化されている。
【００２２】
一部の場合では、リガンド依存性イオンチャネルは、ＧｌｙＲ−Ｍ、ＧｌｕＣｌ、ＰＳＡＭ−５ＨＴ３ＨＣ、ＰＳＡＭ−ＧｌｙＲ、ＰＳＡＭ−ｎＡＣｈＲ、ＴＲＰＶ１、またはＧＡＢＡＡである。一部の場合では、薬物は、イベルメクチン、セラメクチン、ドラメクチン、エマメクチン、エプリノメクチン、アバメクチン、モキシデクチン、ＰＳＥＭ２２Ｓ、ＰＳＥＭ８９Ｓ、ＰＳＥＭ９Ｓ、カプサイシン、またはゾルピデムである。一部の場合では、本方法は、投与の前に、リガンド依存性イオンチャネルをコードする核酸分子を対象に送達することをさらに含む。一部の場合では、核酸分子は、ウイルスベクターによって対象に送達される。一部の場合では、ウイルスベクターは、アデノウイルスベクター、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクター、レンチウイルスベクター、または単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）ベクターである。一部の例では、ＡＡＶベクターは、ＡＡＶ−６またはＡＡＶ−９に由来する。一部の例では、ＡＡＶベクターは、ＡＡＶ６（Ｙ７０５＋７３１Ｆ＋Ｔ４９２Ｖ）、ＡＡＶ９（Ｙ７３１Ｆ）、またはＡＡＶ−７ｍ８である。一部の態様では、ＡＡＶベクターは、配列番号１を含む。一部の場合では、核酸分子は、非ウイルス法によって対象に送達される。一部の場合では、非ウイルス法は、リポフェクション、ナノ粒子送達、微粒子銃、電気穿孔、超音波処理、またはマイクロインジェクションである。一部の場合では、神経疾患は、疼痛である。他の場合では、神経疾患は、てんかんである。他の場合では、神経障害は、満腹障害である。一部の例では、満腹障害は、肥満、神経性食欲不振症、または神経性過食症である。一部の他の場合では、神経疾患は、アルツハイマー病、パーキンソン病、外傷後ストレス障害（ＰＴＳＤ）、胃食道逆流性疾患（ＧＥＲＤ）、嗜癖、不安、うつ病、記憶喪失、認知症、睡眠時無呼吸、卒中、尿失禁、ナルコレプシー、本態性振戦、運動障害、心房細動、または脳がんである。一部の場合では、リガンド依存性イオンチャネルは、興奮性細胞内で選択的に発現される。一部の場合では、興奮性細胞は、ニューロンまたは筋細胞である。一部の場合では、ニューロンは、後根神経節、感覚ニューロン、または三叉神経節である。一部の場合では、投与することは、経口、髄腔内、または局部投与を含む。他の場合では、送達することは、髄腔内、神経節内、頭蓋内、皮下、脊髄内、大槽、または神経内送達を含む。一部の場合では、薬物は、送達の少なくとも１週間後に投与される。一部の場合では、核酸分子は、シナプシン、ＴＲＰＶ１、Ｎａｖ１．７、Ｎａｖ１．８、Ｎａｖ１．９、ＣａｍＫＩＩ、ＮＳＥ、またはアドビリンプロモーターを含む。一部の場合では、対象は、ヒトである。一部の場合では、対象は、獣医学上の動物である。
【００２３】
別の態様では、神経疾患を処置するための方法であって、リガンド依存性イオンチャネルを異種的に発現する対象に、リガンド依存性イオンチャネルを活性化する薬物を投与することを含み、薬物は、０．００１μｇ／ｋｇ〜１０ｍｇ／ｋｇの用量で投与される、方法が提供されている。一部の場合では、リガンド依存性イオンチャネルは、ＧｌｙＲ−Ｍ、ＧｌｕＣｌ、ＰＳＡＭ−５ＨＴ３ＨＣ、ＰＳＡＭ−ＧｌｙＲ、ＰＳＡＭ−ｎＡＣｈＲ、ＴＲＰＶ１、またはＧＡＢＡＡである。一部の場合では、薬物は、イベルメクチン、セラメクチン、ドラメクチン、エマメクチン、エプリノメクチン、アバメクチン、モキシデクチン、ＰＳＥＭ２２Ｓ、ＰＳＥＭ８９Ｓ、ＰＳＥＭ９Ｓ、カプサイシン、またはゾルピデムである。一部の場合では、神経疾患は、疼痛である。一部の場合では、疼痛は、軽減される。
【００２４】
様々な実施形態では、本発明は、ニューロン細胞内で作動可能であるプロモーターであって、スイッチ受容体をコードするポリヌクレオチドに作動可能に連結したプロモーターを含むＡＡＶベクターを部分的に企図する。
【００２５】
特定の実施形態では、プロモーターは、ニューロン特異的プロモーターである。
【００２６】
一部の実施形態では、ニューロン特異的プロモーターは、三叉神経節（ＴＧＧ）ニューロンまたは後根神経節（ＤＲＧ）ニューロン内で作動可能なプロモーターである。
【００２７】
さらなる実施形態では、ニューロン特異的プロモーターは、ｈＳＹＮ１プロモーター、カルシウム／カルモジュリン依存性プロテインキナーゼＩＩａプロモーター、チューブリンアルファＩプロモーター、ニューロン特異的エノラーゼプロモーター、血小板由来増殖因子ベータ鎖プロモーター、ＴＲＰＶ１プロモーター、Ｎａｖ１．７プロモーター、Ｎａｖ１．８プロモーター、Ｎａｖ１．９プロモーター、またはアドビリンプロモーターである。
【００２８】
特定の実施形態では、ニューロン特異的プロモーターは、ｈＳＹＮ１プロモーターである。
【００２９】
追加の実施形態では、プロモーターは、構成的プロモーターである。
【００３０】
特定の実施形態では、構成的プロモーターは、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）最初期プロモーター、ウイルスシミアンウイルス４０（ＳＶ４０）、モロニーネズミ白血病ウイルス（ＭｏＭＬＶ）ＬＴＲプロモーター、ラウス肉腫ウイルス（ＲＳＶ）ＬＴＲ、単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）（チミジンキナーゼ）プロモーター、ワクシニアウイルス由来のＨ５、Ｐ７．５、もしくはＰ１１プロモーター、伸長因子１−アルファ（ＥＦ１ａ）プロモーター、初期増殖応答１（ＥＧＲ１）、フェリチンＨ（ＦｅｒＨ）、フェリチンＬ（ＦｅｒＬ）、グリセルアルデヒド３−リン酸脱水素酵素（ＧＡＰＤＨ）、真核生物翻訳開始因子４Ａ１（ＥＩＦ４Ａ１）、熱ショック７０ｋＤａタンパク質５（ＨＳＰＡ５）、熱ショックタンパク質９０ｋＤａベータ、メンバー１（ＨＳＰ９０Ｂ１）、熱ショックタンパク質７０ｋＤａ（ＨＳＰ７０）、β−キネシン（β−ＫＩＮ）、ヒトＲＯＳＡ２６プロモーター、ユビキチンＣプロモーター（ＵＢＣ）、ホスホグリセリン酸キナーゼ−１（ＰＧＫ）プロモーター、サイトメガロウイルスエンハンサー／ニワトリβ−アクチン（ＣＡＧ）プロモーター、またはβ−アクチンプロモーターである。
【００３１】
一部の実施形態では、プロモーターは、誘導プロモーターである。
【００３２】
追加の実施形態では、誘導プロモーターは、テトラサイクリン応答性プロモーター、エクジソン応答性プロモーター、cumate応答性プロモーター、グルココルチコイド応答性プロモーター、エストロゲン応答性プロモーター、ＰＰＡＲ−γプロモーター、またはＲＵ−４８６応答性プロモーターである。
【００３３】
追加の実施形態では、スイッチ受容体は、リガンド依存性イオンチャネルまたはＧ結合タンパク質受容体を含む。
【００３４】
特定の実施形態では、スイッチ受容体の活性は、細胞外リガンドによって調節される。
【００３５】
特定の実施形態では、リガンドは、天然に存在しないか、または合成である。
【００３６】
さらなる実施形態では、スイッチ受容体を発現する細胞の活性は、細胞外リガンドがスイッチ受容体と結合するとき増大し、任意選択で活性は電気生理学的活性である。
【００３７】
ある特定の実施形態では、スイッチ受容体は、ｈＭ３Ｄｑ、ＧｓＤ、ＰＳＡＭ−５ＨＴ３ＨＣ、ＰＳＡＭ−ｎＡＣｈＲ、またはＴＲＰＶ１からなる群より選択される。
【００３８】
一部の実施形態では、リガンドは、ＰＳＥＭ２２Ｓ、ＰＳＥＭ９Ｓ、カプサイシン、クロザピン、ペルラピン、アロセトロン、フルペルラピン、ナルフラフィン（Ｃ２８Ｈ３２Ｎ２Ｏ５）、オランザピン、クロザピン−Ｎ−オキシド、クロザピン−Ｎ−オキシド類似体：３−クロロ−６−（４−エチルピペラジン−１−イル）−５Ｈ−ベンゾ［ｂ］［１，４］ベンゾジアゼピン、４−（８−クロロ−５Ｈ−ジベンゾ［ｂ，ｅ］［１，４］ジアゼピン−１１−イル）−１，１−ジメチルピペラジン−１−イウムヨージド、３−クロロ−６−（ピペラジン−１−イル）−５Ｈ−ベンゾ［ｂ］［１，４］ベンゾジアゼピン、８−クロロ−１１−［４−（１，１−ジドイトリオエチル）ピペラジン−１−イル］−５Ｈ−ジベンゾ［ｂ，ｅ］［１，４］ジアゼピン、１１−（ピペラジン−１−イル）−５Ｈ−ジベンゾ［ｂ，ｅ］［１，４］ジアゼピン、および１１−（４−エチルピペラジン−１−イル）−５Ｈ−ジベンゾ［ｂ，ｅ］［１，４］ジアゼピンからなる群より選択される。
【００３９】
特定の実施形態では、スイッチ受容体を発現する細胞の活性は、細胞外リガンドがスイッチ受容体と結合するとき低下し、任意選択で活性は電気生理学的活性である。
【００４０】
追加の実施形態では、スイッチ受容体は、ＡｌｓｔＲ、ｈＭ４Ｄｉ、ＫＯＲＤ、ＧｌｕＣｌ、ＰＳＡＭ−ＧｌｙＲ、ＧｌｙＲ−Ｍ、およびＧＡＢＡからなる群より選択される。
【００４１】
ある特定の実施形態では、スイッチ受容体は、グリシン受容体（ＧｌｙＲ）ポリペプチドの１個または複数のサブユニットを含む。
【００４２】
一部の実施形態では、スイッチ受容体は、グリシン受容体アルファ１サブユニット（ＧｌｙＲα１）ポリペプチドを含む。
【００４３】
追加の実施形態では、ＧｌｙＲα１ポリペプチドは、１個または複数のアミノ酸挿入、欠失、または置換を含む。
【００４４】
特定の実施形態では、ＧｌｙＲα１ポリペプチドは、アミノ酸置換Ｆ２０７ＡおよびＡ２８８Ｇを含む。一部の実施形態では、スイッチ受容体は、以下のアミノ酸置換：Ａ−１’Ｅ、Ｐ−２’Δ、Ｔ１３’Ｖ、Ｒ１９’Ｅ、Ｆ２０７Ａ、およびＡ２２８Ｇのうちの１個または複数を含むＧｌｙＲα１サブユニットを含む（Islamら、ACS  Chem.  Neurosci.、DOI:10.1021/acschemneuro.6b00168（２０１６年）を参照）。一実施形態では、スイッチ受容体は、アミノ酸置換Ａ−１’Ｅ、Ｆ２０７Ａ、およびＡ２２８Ｇを含むＧｌｙＲα１サブユニットを含み、リガンドイベルメクチンと特異的に結合する。別の実施形態では、スイッチ受容体は、アミノ酸置換Ａ−１’Ｅ、Ｐ−２’Δ、Ｔ１３’Ｖ、Ｆ２０７Ａ、およびＡ２２８Ｇを含むＧｌｙＲα１サブユニットを含み、リガンドイベルメクチンと特異的に結合する。
【００４５】
ある特定の実施形態では、リガンドは、イベルメクチン、セラメクチン、ドラメクチン、エマメクチン、エプリノメクチン、アバメクチン、およびモキシデクチンからなる群より選択される。
【００４６】
特定の実施形態では、リガンドは、イベルメクチンである。
【００４７】
スイッチ受容体は、ＧｌｕＣｌαまたはＧｌｕＣｌβポリペプチドを含む。
【００４８】
追加の実施形態では、ＧｌｕＣｌαまたはＧｌｕＣｌβポリペプチドは、１個または複数のアミノ酸挿入、欠失、または置換を含む。
【００４９】
追加の実施形態では、リガンドは、イベルメクチン、セラメクチン、ドラメクチン、エマメクチン、エプリノメクチン、アバメクチン、およびモキシデクチンからなる群より選択される。
【００５０】
特定の実施形態では、スイッチ受容体は、ＰＳＡＭ−５ＨＴ３ＨＣポリペプチドを含む。
【００５１】
特定の実施形態では、ＰＳＡＭ−５ＨＴ３ＨＣポリペプチドは、１個または複数のアミノ酸挿入、欠失、または置換を含む。
【００５２】
一部の実施形態では、リガンドは、ＰＳＥＭ２２Ｓである。
【００５３】
ある特定の実施形態では、スイッチ受容体は、ＰＳＡＭ−ＧｌｙＲポリペプチドを含む。
【００５４】
追加の実施形態では、ＰＳＡＭ−ＧｌｙＲポリペプチドは、１個または複数のアミノ酸挿入、欠失、または置換を含む。
【００５５】
特定の実施形態では、リガンドは、ＰＳＥＭ８９Ｓである。
【００５６】
一部の実施形態では、スイッチ受容体は、ＰＳＡＭ−ｎＡＣｈＲポリペプチドを含む。
【００５７】
特定の実施形態では、ＰＳＡＭ−ｎＡＣｈＲポリペプチドは、１個または複数のアミノ酸挿入、欠失、または置換を含む。
【００５８】
ある特定の実施形態では、リガンドは、ＰＳＥＭ９Ｓである。
【００５９】
ある特定の実施形態では、スイッチ受容体は、ＴＲＰＶ１ポリペプチドを含む。
【００６０】
追加の実施形態では、ＴＲＰＶ１ポリペプチドは、１個または複数のアミノ酸挿入、欠失、または置換を含む。
【００６１】
さらなる実施形態では、リガンドは、カプサイシン（Capsacin）である。
【００６２】
追加の実施形態では、スイッチ受容体は、ＧＡＢＡＡポリペプチドを含む。
【００６３】
さらなる実施形態では、ＧＡＢＡＡポリペプチドは、１個または複数のアミノ酸挿入、欠失、または置換を含む。
【００６４】
特定の実施形態では、リガンドは、ゾルピデムである。
【００６５】
追加の実施形態では、スイッチ受容体は、ＡｌｓｔＲポリペプチドを含む。
【００６６】
一部の実施形態では、ＡｌｓｔＲポリペプチドは、１個または複数のアミノ酸挿入、欠失、または置換を含む。
【００６７】
さらなる実施形態では、リガンドは、アラトスタチンである。
【００６８】
ある特定の実施形態では、スイッチ受容体は、ｈＭ４Ｄｉポリペプチドを含む。
【００６９】
さらなる実施形態では、ｈＭ４Ｄｉポリペプチドは、１個または複数のアミノ酸挿入、欠失、または置換を含む。
【００７０】
特定の実施形態では、リガンドは、ＣＮＯ、クロザピン、ペルラピン、オランザピン、アロセトロン、フルペルラピン、ナルフラフィン（Ｃ２８Ｈ３２Ｎ２Ｏ５）、およびＮ４’−アルキル置換ＣＮＯ類似体からなる群より選択される。
【００７１】
特定の実施形態では、Ｎ４’−アルキル置換ＣＮＯ類似体は：３−クロロ−６−（４−エチルピペラジン−１−イル）−５Ｈ−ベンゾ［ｂ］［１，４］ベンゾジアゼピン、４−（８−クロロ−５Ｈ−ジベンゾ［ｂ，ｅ］［１，４］ジアゼピン−１１−イル）−１，１−ジメチルピペラジン−１−イウムヨージド、３−クロロ−６−（ピペラジン−１−イル）−５Ｈ−ベンゾ［ｂ］［１，４］ベンゾジアゼピン、８−クロロ−１１−［４−（１，１−ジドイトリオエチル）ピペラジン−１−イル］−５Ｈ−ジベンゾ［ｂ，ｅ］［１，４］ジアゼピン、１１−（ピペラジン−１−イル）−５Ｈ−ジベンゾ［ｂ，ｅ］［１，４］ジアゼピン、および１１−（４−エチルピペラジン−１−イル）−５Ｈ−ジベンゾ［ｂ，ｅ］［１，４］ジアゼピンからなる群より選択される。
【００７２】
一部の実施形態では、スイッチ受容体は、ＫＯＲＤポリペプチドを含む。
【００７３】
追加の実施形態では、ＫＯＲＤポリペプチドは、１個または複数のアミノ酸挿入、欠失、または置換を含む。
【００７４】
一部の実施形態では、リガンドは、サルビノリンＢである。
【００７５】
ある特定の実施形態では、スイッチ受容体は、ｈＭ３Ｄｑポリペプチドを含む。
【００７６】
追加の実施形態では、ｈＭ３Ｄｑポリペプチドは、１個または複数のアミノ酸挿入、欠失、または置換を含む。
【００７７】
一部の実施形態では、リガンドは、ＣＮＯ、クロザピン、ペルラピン、オランザピン、アロセトロン、フルペルラピン、ナルフラフィン（Ｃ２８Ｈ３２Ｎ２Ｏ５）、およびＮ４’−アルキル置換ＣＮＯ類似体からなる群より選択される。
【００７８】
特定の実施形態では、Ｎ４’−アルキル置換ＣＮＯ類似体は：３−クロロ−６−（４−エチルピペラジン−１−イル）−５Ｈ−ベンゾ［ｂ］［１，４］ベンゾジアゼピン、４−（８−クロロ−５Ｈ−ジベンゾ［ｂ，ｅ］［１，４］ジアゼピン−１１−イル）−１，１−ジメチルピペラジン−１−イウムヨージド、３−クロロ−６−（ピペラジン−１−イル）−５Ｈ−ベンゾ［ｂ］［１，４］ベンゾジアゼピン、８−クロロ−１１−［４−（１，１−ジドイトリオエチル）ピペラジン−１−イル］−５Ｈ−ジベンゾ［ｂ，ｅ］［１，４］ジアゼピン、１１−（ピペラジン−１−イル）−５Ｈ−ジベンゾ［ｂ，ｅ］［１，４］ジアゼピン、および１１−（４−エチルピペラジン−１−イル）−５Ｈ−ジベンゾ［ｂ，ｅ］［１，４］ジアゼピンからなる群より選択される。
【００７９】
ある特定の実施形態では、スイッチ受容体は、ＧｓＤポリペプチドを含む。
【００８０】
さらなる実施形態では、ＧｓＤポリペプチドは、１個または複数のアミノ酸挿入、欠失、または置換を含む。
【００８１】
一部の実施形態では、リガンドは、ＣＮＯ、クロザピン、ペルラピン、オランザピン、アロセトロン、フルペルラピン、ナルフラフィン（Ｃ２８Ｈ３２Ｎ２Ｏ５）、およびＮ４’−アルキル置換ＣＮＯ類似体からなる群より選択される。
【００８２】
追加の実施形態では、Ｎ４’−アルキル置換ＣＮＯ類似体は：３−クロロ−６−（４−エチルピペラジン−１−イル）−５Ｈ−ベンゾ［ｂ］［１，４］ベンゾジアゼピン、４−（８−クロロ−５Ｈ−ジベンゾ［ｂ，ｅ］［１，４］ジアゼピン−１１−イル）−１，１−ジメチルピペラジン−１−イウムヨージド、３−クロロ−６−（ピペラジン−１−イル）−５Ｈ−ベンゾ［ｂ］［１，４］ベンゾジアゼピン、８−クロロ−１１−［４−（１，１−ジドイトリオエチル）ピペラジン−１−イル］−５Ｈ−ジベンゾ［ｂ，ｅ］［１，４］ジアゼピン、１１−（ピペラジン−１−イル）−５Ｈ−ジベンゾ［ｂ，ｅ］［１，４］ジアゼピン、および１１−（４−エチルピペラジン−１−イル）−５Ｈ−ジベンゾ［ｂ，ｅ］［１，４］ジアゼピンからなる群より選択される。
【００８３】
特定の実施形態では、ベクターは、エピトープタグをコードするポリヌクレオチドをさらに含む。
【００８４】
さらなる実施形態では、エピトープタグは、マルトース結合タンパク質（「ＭＢＰ」）、グルタチオンＳトランスフェラーゼ（ＧＳＴ）、ＨＩＳ６、ＭＹＣ、ＦＬＡＧ、Ｖ５、ＶＳＶ−Ｇ、およびＨＡからなる群より選択される。
【００８５】
特定の実施形態では、ベクターは、ポリ（Ａ）配列をさらに含む。
【００８６】
追加の実施形態では、ポリ（Ａ）配列は、ＳＶ４０ポリ（Ａ）配列、ウシ成長ホルモンポリ（Ａ）配列（ｂＧＨｐＡ）、またはウサギβ−グロビンポリ（Ａ）配列（ｒβｇｐＡ）である。
【００８７】
特定の実施形態では、ポリ（Ａ）配列は、ｂＧＨｐＡである。
【００８８】
ある特定の実施形態では、ＡＡＶベクターは、１個または複数のＡＡＶ２逆方向末端反復（ＩＴＲ）を含む。
【００８９】
一部の実施形態では、ＡＡＶベクターは、ＡＡＶ１、ＡＡＶ１（Ｙ７０５＋７３１Ｆ＋Ｔ４９２Ｖ）、ＡＡＶ２（Ｙ４４４＋５００＋７３０Ｆ＋Ｔ４９１Ｖ）、ＡＡＶ３（Ｙ７０５＋７３１Ｆ）、ＡＡＶ５、ＡＡＶ５（Ｙ４３６＋６９３＋７１９Ｆ）、ＡＡＶ６、ＡＡＶ６（ＶＰ３バリアントＹ７０５Ｆ／Ｙ７３１Ｆ／Ｔ４９２Ｖ）、ＡＡＶ−７ｍ８、ＡＡＶ８、ＡＡＶ８（Ｙ７３３Ｆ）、ＡＡＶ９、ＡＡＶ９（ＶＰ３バリアントＹ７３１Ｆ）、ＡＡＶ１０（Ｙ７３３Ｆ）、およびＡＡＶ−ＳｈＨ１０からなる群より選択される血清型を含む。
【００９０】
追加の実施形態では、ＡＡＶベクターは、ＡＡＶ１、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６、ＡＡＶ６（Ｙ７０５Ｆ／Ｙ７３１Ｆ／Ｔ４９２Ｖ）、ＡＡＶ８、ＡＡＶ９、およびＡＡＶ９（Ｙ７３１Ｆ）からなる群より選択される血清型を含む。
【００９１】
ある特定の実施形態では、ＡＡＶベクターは、ＡＡＶ６、ＡＡＶ６（Ｙ７０５Ｆ／Ｙ７３１Ｆ／Ｔ４９２Ｖ）、ＡＡＶ９、およびＡＡＶ９（Ｙ７３１Ｆ）からなる群より選択される血清型を含む。
【００９２】
さらなる実施形態では、ＡＡＶベクターは、ＡＡＶ６またはＡＡＶ６（Ｙ７０５Ｆ／Ｙ７３１Ｆ／Ｔ４９２Ｖ）血清型を含む。
【００９３】
ある特定の実施形態では、プロモーターは、ＤＲＧニューロンまたはＴＧＧニューロン内で作動可能であり、スイッチ受容体は、ＧｌｙＲα１ポリペプチドを含む。
【００９４】
一部の実施形態では、プロモーターは、ｈＳＹＮ−１プロモーターであり、スイッチ受容体は、アミノ酸置換Ｆ２０７ＡおよびＡ２８８Ｇをさらに含むＧｌｙＲα１ポリペプチドを含む。
【００９５】
特定の実施形態では、ＡＡＶ血清型は、ＡＡＶ１、ＡＡＶ１（Ｙ７０５＋７３１Ｆ＋Ｔ４９２Ｖ）、ＡＡＶ２（Ｙ４４４＋５００＋７３０Ｆ＋Ｔ４９１Ｖ）、ＡＡＶ３（Ｙ７０５＋７３１Ｆ）、ＡＡＶ５、ＡＡＶ５（Ｙ４３６＋６９３＋７１９Ｆ）、ＡＡＶ６、ＡＡＶ６（ＶＰ３バリアントＹ７０５Ｆ／Ｙ７３１Ｆ／Ｔ４９２Ｖ）、ＡＡＶ−７ｍ８、ＡＡＶ８、ＡＡＶ８（Ｙ７３３Ｆ）、ＡＡＶ９、ＡＡＶ９（ＶＰ３バリアントＹ７３１Ｆ）、ＡＡＶ１０（Ｙ７３３Ｆ）、またはＡＡＶ−ＳｈＨ１０であり、プロモーターは、ｈＳＹＮ−１プロモーターであり、スイッチ受容体は、アミノ酸置換Ｆ２０７ＡおよびＡ２８８Ｇをさらに含むＧｌｙＲα１ポリペプチドを含む。
【００９６】
様々な実施形態では、本発明は、１つまたは複数のＡＡＶ２  ＩＴＲ、ＡＡＶ６血清型、ｈＳＹＮ−１プロモーター、ならびにアミノ酸置換Ｆ２０７ＡおよびＡ２８８Ｇをさらに含むＧｌｙＲα１ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを含むＡＡＶベクターを部分的に企図する。
【００９７】
様々な実施形態では、本発明は、１つまたは複数のＡＡＶ２  ＩＴＲ、ＡＡＶ６（Ｙ７０５Ｆ／Ｙ７３１Ｆ／Ｔ４９２Ｖ）血清型、ｈＳＹＮ−１プロモーター、ならびにアミノ酸置換Ｆ２０７ＡおよびＡ２８８Ｇをさらに含むＧｌｙＲα１ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを含むＡＡＶベクターを部分的に企図する。一部の態様では、ＡＡＶベクターは、配列番号１を含む。
【００９８】
一部の実施形態では、ＡＡＶベクターは、ｂＧＨｐＡをさらに含む。
【００９９】
ある特定の実施形態では、ＡＡＶベクターは、ＦＬＡＧエピトープタグをさらに含む。
【０１００】
ある特定の実施形態では、ＡＡＶベクターは、自己相補的ＡＡＶ（ｓｃＡＡＶ）ベクターである。
【０１０１】
様々な実施形態では、本発明は、本明細書に記載のベクターの１つまたは複数を含む組成物を部分的に企図する。
【０１０２】
様々な実施形態では、本発明は、疼痛を管理、防止、または処置する方法であって、対象に本明細書に記載のＡＡＶベクターを投与することを含む、方法を部分的に企図する。
【０１０３】
様々な実施形態では、本発明は、疼痛を有する対象に痛覚脱失をもたらす方法であって、対象に本明細書に記載のＡＡＶベクターを投与することを含む、方法を部分的に企図する。
【０１０４】
さらなる実施形態では、疼痛は、急性疼痛または慢性疼痛である。
【０１０５】
一部の実施形態では、疼痛は、慢性疼痛である。
【０１０６】
特定の実施形態では、疼痛は、急性疼痛、慢性疼痛、神経因性疼痛、侵害受容性疼痛、異痛症、炎症性疼痛、炎症性痛覚過敏、ニューロパチー、神経痛、糖尿病性ニューロパチー、ヒト免疫不全ウイルス関連ニューロパチー、神経傷害、関節リウマチの疼痛、変形性関節症の疼痛、やけど、背部痛、目の疼痛、内臓痛、がん疼痛（例えば、骨がん疼痛）、歯の疼痛、頭痛、片頭痛、手根管症候群、線維筋痛症、神経炎、坐骨神経痛、骨盤過敏症、骨盤痛、疱疹後神経痛、術後疼痛、卒中後疼痛、または月経痛である。
【０１０７】
追加の実施形態では、疼痛は、侵害受容性疼痛である。
【０１０８】
ある特定の実施形態では、疼痛は、中枢神経系外傷、挫傷／捻挫、やけど、心筋梗塞および急性膵炎、術後疼痛（任意のタイプの外科手術後の疼痛）、外傷後疼痛、腎仙痛、がん疼痛、および背部痛からなる群より選択される傷害受容性疼痛である。
【０１０９】
一部の実施形態では、疼痛は、神経因性疼痛である。
【０１１０】
追加の実施形態では、神経因性疼痛の病因は、末梢神経障害、糖尿病性ニューロパチー、疱疹後神経痛、三叉神経痛、背部痛、がんニューロパチー、ＨＩＶニューロパチー、幻肢痛、手根管症候群、中枢性卒中後疼痛、および慢性アルコール中毒に関連した疼痛、甲状腺機能低下症、尿毒症、多発性硬化症、脊髄損傷、パーキンソン病、てんかん、およびビタミン欠乏症からなる群より選択される。
【０１１１】
特定の実施形態では、神経因性疼痛は、関節炎、異痛症、典型的三叉神経痛、三叉神経痛、身体表現性障害、感覚減退（hypoesthesis）、痛覚過敏（hypealgesia）、神経痛、神経炎、神経原性疼痛、痛覚脱失、有痛性知覚脱失、カウザルギー（causlagia）、坐骨神経痛障害、変形性関節障害、線維筋痛症、内臓疾患、慢性疼痛障害、片頭痛／頭痛、慢性疲労症候群、複合性局所性疼痛症候群、神経ジストロフィー、足底筋膜炎、またはがんに関連した疼痛からなる群より選択される疼痛障害に関連する。
【０１１２】
さらなる実施形態では、疼痛は、炎症性疼痛である。
【０１１３】
ある特定の実施形態では、疼痛は、筋骨格障害、筋肉痛、線維筋痛症、脊椎炎、セロネガティブ（非リウマチ様）関節症、非関節性リウマチ、ジストロフィン異常症、グリコーゲン分解、多発性筋炎、および化膿性筋炎；心臓および血管痛、狭心症により引き起こされた疼痛、心筋梗塞（myocardical  infarction）、僧帽弁狭窄、心膜炎、レイノー現象、強皮症（scleredoma）および骨格筋虚血；頭部の疼痛、片頭痛、群発性頭痛、緊張型頭痛混合頭痛および血管障害と関連した頭痛；口腔顔面痛、歯の疼痛、耳の疼痛、口内焼灼感症候群、ならびに側頭下顎筋筋膜痛に関連している。
【０１１４】
特定の実施形態では、一方法は、本明細書に企図したＡＡＶベクターまたは組成物の髄腔内投与を含む。
【０１１５】
特定の実施形態では、一方法は、本明細書に企図したＡＡＶベクターまたは組成物の神経節内投与を含む。
【０１１６】
特定の実施形態では、一方法は、本明細書に企図したＡＡＶベクターまたは組成物の神経内投与を含む。
【図面の簡単な説明】
【０１１７】
【図１】図１は、本明細書に開示の組成物を利用する本開示の方法を表す。図１は、中枢神経系との神経コミュニケーションをサイレンシングし、それにより痛覚脱失を有効にもたらし、痛い感覚をブロックするための、損傷した末梢神経と関連した後根神経節内への本開示の治療「スイッチ」受容体（例えば、Ｇタンパク質共役受容体またはリガンド依存性イオンチャネル）の遺伝子挿入を表す。
【０１１８】
【図２】図２Ａ〜２Ｃは、ｈＭ４Ｄｉ、（図２Ｂ）ｈＳＹＮ−ｈＭ３Ｄｑ、および（図２Ｃ）ｈＳＹＮ−ｈＧｌｙＲ（Ｆ２０７Ａ／Ａ２８８Ｇ）の（図２Ａ）ヒトシナプシン（ｈＳＹＮ）プロモーター駆動発現を含めた本開示のスイッチ受容体を送達するためのＡＡＶトランスファーベクターアーキテクチャの非限定的な例を表す。
【０１１９】
【図３】図３は、本明細書に記載の方法および組成物を使用して神経疾患を処置することに用途変更することができるＦＤＡに認可された薬物の非限定的な例を表す。
【０１２０】
【図４】図４は、本明細書に企図した例示的な遺伝子療法ベクターの略図を表す。
【０１２１】
【図５】図５は、ｈＳＹＮ１−ＧｌｙＲα１  Ｆ２０７Ａ／Ａ２８８Ｇ遺伝子療法ベクターの略図を表す。
【０１２２】
【図６】図６は、脊髄および皮膚および深部組織内の疼痛ニューロンおよび経路の略図を表す。図６は、マウスに注射して３週間後における脊髄内、神経節内、および髄腔内投与経路に従う後角および後根神経節ニューロン内のｈＳＹＮ−ｈＧｌｙＲＭ（Ｆ２０７Ａ／Ａ２８８Ｇ）を発現するＡＡＶ６（Ｙ７０５＋７３１Ｆ＋Ｔ４９２Ｖ）ベクターの発現の免疫組織化学分析の結果も示す。
【０１２３】
【図７】図７は、マウスにおける救済神経傷害（spared  nerve  injury）（ＳＮＩ）モデルの略図を表す。図７は、無傷の対側対照と比較したＳＷＢ００１（ｈＳＹＮ−ｈＧｌｙＲＭ（Ｆ２０７Ａ／Ａ２８８Ｇ）を発現するＡＡＶ６ベクター）を注射されたマウスＳＮＩモデルにおける機械的過敏症アッセイ（フォンフライ）の結果を示すグラフも表す。イベルメクチン（１５ｍｇ／ｋｇ）の単回用量は、神経傷害後にＩＰ注射して神経傷害後７〜１０日間の痛覚脱失をもたらした。
【０１２４】
【図８】図８は、無傷の対側対照と比較した、ＳＷＢ００１（ｈＳＹＮ−ｈＧｌｙＲＭ（Ｆ２０７Ａ／Ａ２８８Ｇ）を発現するＡＡＶ６ベクター）を注射したマウスＳＮＩモデルにおける機械的過敏症アッセイ（フォンフライ）の結果を示すグラフを表す。疼痛閾値が図７に記載の実験におけるイベルメクチンのウォッシュアウト後にベースラインレベルに戻った後、イベルメクチン（１０ｍｇ／ｋｇ）の反復投与を、神経傷害の１４日後にＩＰ注射して痛覚脱失をもたらした。
【０１２５】
【図９】図９は、実施例２２に記載の熱引き込み潜伏時間アッセイの個体対象結果を示すグラフを表す。各対象について、イベルメクチン処置前結果を左に示し、イベルメクチン処置後結果を右に示す。
【０１２６】
【図１０】図１０は、実施例２２に記載の熱引き込み潜伏時間アッセイの平均対象結果を示すグラフを表す。イベルメクチン処置前結果を左に示し、イベルメクチン処置後結果を右に示す。
【発明を実施するための形態】
【０１２７】
Ａ．概要
本開示は、神経疾患および障害を処置するための組成物および方法を提供する。組成物は一般に、「スイッチ受容体」と本明細書で呼ばれる治療受容体を含む。一部の例では、スイッチ受容体は、Ｇタンパク質共役受容体（ＧＰＣＲ）またはリガンド依存性イオンチャネル（ＬＧＩＣ）である。本明細書の組成物および方法は、例えば、神経疾患を処置するための遺伝子療法としての特定の使用を見出すことができる。一部の場合では、本方法は、それを必要とする対象に組成物を投与することを提供する。それを必要とする対象は、神経疾患に罹患している対象であり得る。一部の場合では、スイッチ受容体は、神経疾患に罹患している対象において発現される。本方法は、発現されたスイッチ受容体を活性化するリガンドで対象を処置することをさらに提供する。リガンドで処置すると、例えば、スイッチ受容体を発現する興奮性細胞（例えば、ニューロン、筋細胞）の電気生理学的活性を変更し、それにより神経疾患を処置することができる。
【０１２８】
一部の実施形態では、本発明は一般に、疼痛を管理するための遺伝子療法に関する。本明細書に企図される遺伝子療法組成物および方法は、疼痛経路に関与するニューロン細胞にわたって正確な時空間制御を提供し、よって、既存の療法と比較して多数の利点も提供する。いずれの特定の理論にも束縛されることを望まないが、ニューロン細胞を標的にする遺伝子療法を送達すると、長い継続時間にわたる疼痛緩和を媒介し、副作用を低減し、外部ポンプおよび危険な手順から患者を解放することによって生活の質を改善することができることが企図される。さらに、遺伝子療法は、従来の薬物均等物と比較して多数のペイロード利点も提供し、例えば、ある特定のより大きいタンパク質は、組換え産物または低分子類似体として利用可能であり得ないが、ベクター中で治療遺伝子としてコードおよび送達され得るなどである。
【０１２９】
様々な実施形態では、スイッチ受容体をコードするポリヌクレオチドに作動可能に連結したニューロン細胞内で転写物を発現することができる１つまたは複数の発現制御配列を含むウイルスベクターが提供されている。本発明は、外因的に供給され、かつ／または天然に存在しないリガンドと結合するスイッチ受容体は、ウイルスベクターを使用してニューロン細胞に送達することができ、対象における疼痛を安全かつ効率的に管理するためにニューロン細胞の活性、例えば、電気生理学的活性をモジュレートするために使用することができることを企図する。
【０１３０】
特定の実施形態では、リガンド依存性イオンチャネル、ｇタンパク質共役受容体（ＧＰＣＲ）、またはそのサブユニットおよび／もしくは突然変異タンパク質を含むスイッチ受容体に作動可能に連結したニューロン細胞内で活性な発現制御エレメントを含むアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクターを含むパルボウイルスベクターが提供されている。
【０１３１】
本明細書に企図されるベクターおよび組成物は、対象における疼痛の感覚を減弱させるのに使用される。様々な実施形態では、疼痛は、急性疼痛または慢性疼痛である。慢性疼痛は、侵害受容性疼痛または神経因性疼痛であり得る。一実施形態では、疼痛は、神経因性疼痛である。疼痛は、単離された疼痛でもあり得、疼痛は、特定の疾患と関連し得る。
【０１３２】
したがって、本発明は、疼痛管理における遺伝子療法の安全性および効力を改善するための未だ満たされていない臨床的必要性に対処する。
【０１３３】
本発明の実施は、反対に具体的に示されない限り、当技術分野の技術の範囲内の分子生物学および組換えＤＮＡ技法の従来法を利用することになり、これらの多くは、例示の目的で以下に記載されている。このような技法は、文献において完全に説明されている。例えば、Sambrookら、Molecular  Cloning:  A  Laboratory  Manual（２版、１９８９年）；Maniatisら、Molecular  Cloning:  A  Laboratory  Manual（１９８２年）；DNA  Cloning:  A  Practical  Approach、ＩおよびＩＩ巻（D.  Glover編）；  Oligonucleotide  Synthesis  （N.  Gait編、１９８４年）；  Nucleic  Acid  Hybridization  （B.  HamesおよびS.  Higgins編、１９８５年）；  Transcription  and  Translation  （B.  HamesおよびS.  Higgins編、１９８４年）；  Animal  Cell  Culture  （R.  Freshney編、１９８６年）；  A  Practical  Guide  to  Molecular  Cloning  （B.  Perbal編、１９８４年）；HarlowおよびLane編（１９８８年）、Antibodies、A  Laboratory  Manual;  the  series  Methods  In  Enzymology  （Academic  Press,  Inc.）；  PCR  2:  A  Practical  Approach  （M.J.  MacPherson、B.D.  Hames、およびG.R.  Taylor編（１９９５年）を参照）。
【０１３４】
本明細書に引用されたすべての刊行物、特許、および特許出願は、その全体が参照により本明細書に組み込まれている。
Ｂ．定義
【０１３５】
別段に定義されていない限り、本明細書で使用するすべての技術用語および科学用語は、本発明が属する分野の当業者が一般に理解するのと同じ意味を有する。本発明の目的のために、以下の用語を以下に定義する。
【０１３６】
冠詞「１つの（ａ）」、「１つの（ａｎ）」、および「その（ｔｈｅ）」は、冠詞の文法的対象の１または１つを超える（すなわち、少なくとも１つ）を指すのに本明細書で使用される。例として、「要素（ａｎ  ｅｌｅｍｅｎｔ）」は、１つの要素または１つを超える要素を意味する。
【０１３７】
選択肢（例えば、「または」）の使用は、選択肢の１つ、両方、またはこれらの任意の組合せを意味すると理解されるべきである。
【０１３８】
用語「および／または」は、選択肢の一方または両方を意味すると理解されるべきである。
【０１３９】
本明細書では、用語「約」または「およそ」は、参照量、レベル、値、数、頻度、パーセンテージ、寸法、サイズ、量、重量、または長さの１５％、１０％、９％、８％、７％、６％、５％、４％、３％、２％、または１％と同じ程度に変動する量、レベル、値、数、頻度、パーセンテージ、寸法、サイズ、量、重量、または長さを指す。一実施形態では、用語「約」または「およそ」は、量、レベル、値、数、頻度、パーセンテージ、寸法、サイズ、量、重量、または長さ±１５％、±１０％、±９％、±８％、±７％、±６％、±５％、±４％、±３％、±２％、または±１％の約参照量、レベル、値、数、頻度、パーセンテージ、寸法、サイズ、量、重量、または長さの範囲を指す。
【０１４０】
本明細書全体にわたって、脈絡が別段に要求しない限り、単語「含む（comprise）」、「含む（comprises）」および「含む（comprising）」は、述べたステップまたは要素またはステップもしくは要素の群を含めることを暗示するが、任意の他のステップまたは要素またはステップもしくは要素の群の排除を暗示しないと理解されるであろう。特定の実施形態では、用語「含む（include）」、「有する」、「含有する」、および「含む（comprise）」は、同義的に使用される。
【０１４１】
「からなる」は、語句「からなる」に続くものは何でも含み、これらに限定されることを意味する。よって、語句「からなる」は、列挙された要素が必要であるかまたは必須であり、他の要素は存在し得ないことを示す。
【０１４２】
「から本質的になる」は、その語句の後に列挙された任意の要素を含み、かつ列挙された要素の開示において指定された活性または作用を妨害しないか、またはそれに寄与しない他の要素に限定されることを意味する。よって、語句「から本質的になる」は、列挙された要素が必要であるかまたは必須であるが、他の要素は任意選択であり、列挙した要素の活性または作用に影響するか否かに応じて存在してもよく、または存在しなくてもよいことを示す。
【０１４３】
「一実施形態」、「実施形態」、「特定の実施形態」、「関連した実施形態」、「ある特定の実施形態」、「追加の実施形態」、もしくは「さらなる実施形態」、またはこれらの組合せへの本明細書全体にわたる言及は、実施形態に関連して記載された特定の特色、構造、または特徴は、本発明の少なくとも１つの実施形態において含まれることを意味する。よって、本明細書全体にわたる様々な場所での上記の語句の出現は、必ずしもすべて同じ実施形態を指すとは限らない。さらに、特定の特色、構造、または特徴は、１つまたは複数の実施形態における任意の適する様式で組み合わせることができる。
【０１４４】
本明細書では、用語「単離された」は、その天然の状態でそれに通常付随するコンポーネントを実質的または本質的に含まない材料を意味する。特定の実施形態では、用語「得られた」または「由来した」は、単離されたと同義的に使用される。
【０１４５】
用語「対象」、「患者」、および「個体」は、脊椎動物、好ましくは哺乳動物、より好ましくはヒトを指すのに本明細書で互換的に使用される。哺乳動物としては、それだけに限らないが、ネズミ、サル、ヒト、家畜、競技動物、およびペットがある。ｉｎ  ｖｉｖｏで得られた、またはｉｎ  ｖｉｔｒｏで培養された生物学的エンティティの組織、細胞、およびこれらの子孫も包含される。「対象」、「患者」、または「個体」は、本明細書では、本明細書で企図されたベクター、組成物、および方法で処置することができる疼痛を呈する任意の動物を含む。適する対象（例えば、患者）としては、実験動物（マウス、ラット、ウサギ、もしくはモルモットなど）、家畜、および家庭動物またはペット（ネコもしくはイヌなど）がある。非ヒト霊長類は、好ましくは、ヒト患者が含まれる。
【０１４６】
本明細書では、「処置」または「処置すること」は、疼痛の低減と関連した任意の有益なまたは望ましい効果を含み、疼痛の最小限の低減さえ含み得る。処置は、任意選択で、疼痛の低減もしくは寛解、または疼痛の経過の遅延を伴うことができる。「処置」は、必ずしも疾患もしくは状態の完全な根絶もしくは治癒、またはその関連した症状を示さない。
【０１４７】
本明細書では、「防止する」、および「防止される」、「防止すること」などの類似の単語は、疼痛の発生または再発の可能性を防止、阻害、または低減するための手法を示す。これは、疾患もしくは状態の発症もしくは再発を遅延させること、または疼痛の症状の発生もしくは再発を遅延させることも指す。本明細書では、「防止」および類似の単語は、発症または再発の前に疼痛の強度、効果、症状、および／または負担を低減することも含む。
【０１４８】
本明細書では、疼痛の「管理」またはそれを「制御すること」は、疼痛に罹患している対象に痛覚脱失をもたらすことにより、個体の生活の質を改善するための本明細書で企図される組成物または方法の使用を指す。
【０１４９】
本明細書では、用語「量」は、臨床結果を含めた有益なまたは所望の予防または治療効果を実現するのにウイルスの「有効な量」または「有効量」を指す。
【０１５０】
「予防有効量」は、所望の予防結果を実現するのに有効なウイルスの量を指す。典型的には、しかし必ずしもではないが、予防用量は、疾患の前に、またはそのより早期の段階で対象に使用されるので、予防有効量は、治療有効量未満である。
【０１５１】
ウイルスの「治療有効量」は、個体の病態、年齢、性別、および重量、ならびに個体において所望の応答を誘発する幹および前駆細胞の能力などの要因によって変動し得る。治療有効量は、治療的に有益な効果がウイルスの任意の毒性または有害効果を上回るものでもある。用語「治療有効量」は、対象（例えば、患者）を「処置」するのに有効な量を含む。
【０１５２】
生理反応、例えば、電気生理学的活性または細胞活性の量の「増大」または「増強」は、典型的には「統計的に有意な」量であり、未処置細胞内の活性のレベルの１．１、１．２、１．５、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、２０、３０またはそれよりも多い倍（例えば、５００、１０００倍）（すべての整数および間の小数点、ならびに１超、例えば、１．５、１．６、１．７、１．８などを含む）である増大を含み得る。
【０１５３】
生理反応、例えば、電気生理学的活性または細胞活性の量の「低下」または「低減」は、典型的には「統計的に有意な」量であり、未処置細胞内の活性のレベルの１．１、１．２、１．５、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、２０、３０、またはそれよりも多い倍（例えば、５００、１０００倍）（すべての整数およびその間の小数点、ならびに１超、例えば、１．５、１．６、１．７、１．８などを含む）である低下を含み得る。
【０１５４】
「維持する」、または「保存する」、または「維持」、または「変化無し」、または「実質的な変化無し」、または「実質的な低下無し」とは、ビヒクルまたは対照分子／組成物によって引き起こされる応答と同等である生理反応を一般に指す。同等の応答は、参照応答と有意に異なっていないかまたは測定可能に異なっていないものである。
【０１５５】
本明細書では、用語「興奮性細胞」は、依存性イオンチャネルの結果としてその膜電位内で変動を経験する細胞を指す。本明細書に企図される興奮性細胞の例示的な例としては、それだけに限らないが、筋細胞、ニューロン細胞などがある。
【０１５６】
特定の実施形態では、ニューロン細胞は、感覚ニューロンである。感覚ニューロンの例示的な例としては、それだけに限らないが、後根神経節（ＤＲＧ）ニューロンおよび三叉神経節（ＴＧＧ）ニューロンがある。一実施形態では、ニューロン細胞は、末梢知覚神経である。一実施形態では、ニューロン細胞は、阻害性介在ニューロンである。
【０１５７】
「Ｇタンパク質共役受容体」または「ＧＰＣＲ」は、その天然ペプチドまたは非ペプチドリガンドが結合し、受容体が活性化すると、生理的な細胞応答（例えば、細胞増殖または分泌）をもたらすＧタンパク質媒介シグナルを形質導入する、受容体を意味する。Ｇタンパク質共役受容体は、進化的に関連したタンパク質の大ファミリーを形成する。Ｇタンパク質共役受容体ファミリーのメンバーであるタンパク質は、一般に７つの推定上の膜貫通ドメインから構成される。Ｇタンパク質共役受容体は、「７回膜貫通型セグメント（７ＴＭ）受容体」および「ヘプタヘリカル受容体」としても当技術分野で公知である。
【０１５８】
「リガンド依存性イオンチャネル」は、特異的な化学物質によって活性化されるとイオンの通過が可能になる内因性膜貫通タンパク質の大きな群を指す。ほとんどの内因性リガンドは、イオン伝導孔と別個の部位に結合し、結合は、チャネルの開閉を直接引き起こす。内因性リガンドは、細胞外に、例えば、グルタミン酸、ＡＣｈ、およびＧＡＢＡ、または細胞内に、例えば、Ｃａ２＋−活性化カリウムチャネル上のＣａ２＋と結合することができる。リガンド自体は、膜を横断して輸送されないことに留意することが重要である。リガンド結合は、特異的な１種または複数のイオンのチャネルの透過性を劇的に変化させ；事実上、チャネルが不活性であるとき、イオンは通過することができないが、１秒当たり最大で１０７個のイオンが、リガンド結合すると通過を可能にされ得る。
【０１５９】
「受容体−リガンド結合」、「リガンド結合」、および「結合」は、受容体（例えば、Ｇタンパク質共役受容体）とリガンド（例えば、天然リガンド（例えば、ペプチドリガンド）または合成リガンド（例えば、合成低分子リガンド））との物理的相互作用を意味するのに本明細書で互換的に使用される。リガンド結合は、当技術分野で公知の様々な方法（例えば、放射性標識リガンドとの会合の検出）によって測定することができる。
【０１６０】
「結合親和性」は、一般に、受容体の単一結合部位とリガンドとの非共有結合相互作用の総計の強度を指す。別段に示されていない限り、本明細書では、「結合親和性」は、結合対のメンバー（例えば、受容体およびリガンド）間の１：１相互作用を反映する内因性結合親和性を指す。分子ＸのそのパートナーＹに対する親和性は、一般に、解離定数（Ｋｄ）によって表すことができる。親和性は、本明細書に記載のものを含めた当技術分野で公知の一般的な方法によって測定することができる。
【０１６１】
本明細書では、用語「特異的結合親和性」または「特異的に結合する」または「特異的に結合した」または「特異的結合」は、本明細書および特許請求の範囲全体にわたって互換的に使用され、対となった分子の種、例えば、受容体とリガンド間で起こる結合を指す。２つの種の相互作用が非共有結合的結合複合体を産生するとき、起こる結合は、典型的には静電気的、水素結合、または親油性相互作用の結果である。様々な実施形態では、１つまたは複数の種間の特異的結合は、直接的である。一実施形態では、特異的結合の親和性は、バックグラウンド結合より約２倍大きい（非特異的結合）、バックグラウンド結合より約５倍大きい、バックグラウンド結合より約１０倍大きい、バックグラウンド結合より約２０倍大きい、バックグラウンド結合より約５０倍大きい、バックグラウンド結合より約１００倍大きい、もしくはバックグラウンド結合より約１０００倍大きいか、またはそれよりも多い。
【０１６２】
「シグナル伝達」は、リガンド結合の結果としての（例えば、スイッチ受容体へのリガンド結合の結果としての）生化学的または生理反応の生成を指す。
【０１６３】
用語「トリガーすること」は、より高いイオン濃度の領域からより低い濃度の領域に受容体を通じて受動的にイオンを通過させることを可能にするための物理的または化学的刺激後の受容体の開口を指す。
【０１６４】
一般に、「配列同一性」または「配列相同性」は、それぞれ、２つのポリヌクレオチドまたはポリペプチド配列の正確なヌクレオチド対ヌクレオチドまたはアミノ酸対アミノ酸対応を指す。典型的には、配列同一性を判定するための技法は、ポリヌクレオチドのヌクレオチド配列を判定することおよび／またはそれによってコードされるアミノ酸配列を判定すること、およびこれらの配列を第２のヌクレオチドまたはアミノ酸配列と比較することを含む。２つまたはそれよりも多い配列（ポリヌクレオチドまたはアミノ酸）は、これらの「パーセント同一性」を判定することによって比較することができる。核酸配列であってもアミノ酸配列であっても、２つの配列のパーセント同一性は、より短い配列の長さで除し、１００を乗じた２つの整列された配列間の正確なマッチの数である。パーセント同一性は、例えば、国立衛生研究所から入手可能なバージョン２．２．９を含む高度ＢＬＡＳＴコンピュータープログラムを使用して配列情報を比較することによって判定されてもよい。ＢＬＡＳＴプログラムは、KarlinおよびAltschul、Proc.  Natl.  Acad.  Sci.、USA、８７巻：２２６４〜２２６８頁（１９９０年）の、かつAltschulら、J.  Mol.  Biol.、２１５巻：４０３〜４１０頁（１９９０年）；KarlinおよびAltschul、Proc.  Natl.  Acad.  Sci.  USA、９０巻：５８７３〜５８７７頁（１９９３年）；およびAltschulら、Nucleic  Acids  Res.、２５巻：３３８９〜３４０２頁（１９９７年）に論じられた整列法に基づく。簡単に言えば、ＢＬＡＳＴプログラムは、２つの配列のより短い方中の記号の総数で除した同一の整列された記号（一般にヌクレオチドまたはアミノ酸）の数として同一性を定義する。このプログラムは、比較されるタンパク質の全長にわたるパーセント同一性を判定するのに使用され得る。デフォルトパラメータは、例えば、ｂｌａｓｔｐプログラムを用いて短いクエリー配列での検索を最適化するのに提供されている。プログラムは、ＳＥＧフィルターの使用も可能にしてWoottonおよびFederhen、Computers  and  Chemistry、１７巻：１４９〜１６３頁（１９９３年）のＳＥＧプログラムによって判定されるクエリー配列のセグメントをマスクオフする。配列同一性の所望の程度の範囲は、およそ８０％〜１００％およびその間の整数値である。典型的には、開示された配列と主張された配列との間のパーセント同一性は、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９８％である。
【０１６５】
用語「生物医薬品」は、本明細書では、医薬または治療剤として利用することができる生物製剤または生物学的医療製品を含む任意の組成物を指す。生物製剤は、治療剤として使用することができる任意の生物製剤であり得る。生物製剤は、生物源から製造、抽出、または半合成される任意の薬剤であり得る。生物製剤として、限定することなく、タンパク質、核酸分子、細胞、組織、ワクチン、血液または血液コンポーネント、アレルギー誘発物質、遺伝子療法、組換えタンパク質、および組換え核酸分子を挙げることができる。生物医薬品は、限定することなく、追加の療法（生物製剤または合成化学剤）、賦形剤などを含めた追加の作用物質を含み得る。
【０１６６】
用語「外因性の」は、生物体の外部が起源である核酸、タンパク質またはペプチド、低分子化合物などを含めた任意の分子を指すのに本明細書で使用される。対照的に、用語「内因性の」は、生物体の内部が起源である（すなわち、生物体によって天然に産生される）任意の分子を指す。
【０１６７】
用語「異種発現」および「異種的に発現された」は、通常そのタンパク質を発現しない対象におけるタンパク質の発現を指すのに本明細書で使用される。異種発現はまた、タンパク質が発現される対象以外の種に由来するタンパク質を対象が発現することであって、発現を指すこともできる。異種発現は、ウイルスベクター送達、電気穿孔、感染、トランスフェクションなどを含めた、当業者に公知の任意の手段による対象への外因性核酸分子の送達を伴い得る。
【０１６８】
用語「相同発現」および「相同的に発現された」は、タンパク質を通常発現する対象におけるそのタンパク質の過剰発現を指すのに本明細書で使用される。相同発現は、「異所性発現」を包含する場合があり、これは、タンパク質が通常そのタンパク質を発現しない対象の宿主細胞内で発現される（例えば、対象の心筋細胞内でのみ見出されるタンパク質が対象の脳細胞内で発現される）タンパク質の相同発現を指すのに本明細書で使用される。
【０１６９】
用語「野生型」は、自然界に見出されるタンパク質と同一または実質的に同一である分子、典型的にはタンパク質を指すのに本明細書で使用される。タンパク質の同一性は、自然界に通常見出されるタンパク質との配列同一性または相同性のパーセンテージとして一般に測定される。よって、野生型タンパク質は、自然界に通常見出されるタンパク質と少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％、９９．９％、または１００％の配列相同性を共有するタンパク質として想定され得る。
Ｃ．組成物
【０１７０】
一部の態様では、本明細書の開示は、神経疾患または障害を処置するための組成物を提供する。本明細書に想定される組成物は一般に、神経疾患の処置に使用され得る治療剤を含む。本開示の治療剤は、対象に送達される任意の分子（例えば、タンパク質、ＲＮＡ、ＤＮＡ）であり得る。一部の場合では、対象は、神経疾患または状態に罹患している患者である。治療剤は、神経疾患を処置するのに使用することができ、または神経疾患の症状を軽減するのに使用することができる。一部の場合では、対象は健康であり、治療剤は、神経疾患の発症を防止するための予防的治療として使用される。一般に、治療剤は、対象において治療反応を誘発するために対象に送達される。一部の実施形態では、組成物は、疼痛を処置するのに使用される。
Ｄ．スイッチ受容体
【０１７１】
様々な例示的な実施形態では、本発明は、ニューロン細胞の活性を調節するためのスイッチ受容体をコードするポリヌクレオチド、およびこれを含むベクター、およびこれらの組成物の使用を部分的に企図する。本明細書では、用語「スイッチ受容体」は、Ｇタンパク質共役受容体（ＧＰＣＲ）、合成リガンド（ＲＡＳＳＬ）のみで活性化される受容体、デザイナー薬物によって排他的に活性化されるデザイナー受容体（ＤＲＥＡＤＤ）および／またはリガンド依存性イオンチャネル（ＬＧＩＣ）および／またはその突然変異タンパク質を指す。一部の態様では、スイッチ受容体のサブユニットの１個または複数は、異種リガンド、外因性リガンド、および／または合成リガンドに特異的に結合するように操作されている。特定の実施形態では、「スイッチ受容体」は、異種、外因性、および／または合成リガンドに特異的に結合するように操作されたＧＰＣＲ、ＲＡＳＳＬ、ＤＲＥＡＤＤ、もしくはＬＧＩＣ、またはその突然変異タンパク質の１個または複数のサブユニットを指す。本明細書に企図されるスイッチ受容体は、ニューロン細胞を活性化し、阻害し、脱分極させ、かつ／または過分極させるように設計される。
【０１７２】
特定の実施形態では、スイッチ受容体は、天然に存在する受容体に検出可能に結合しない異種、外因性、および／または合成リガンドに特異的に結合するように設計されている。ある特定の実施形態では、異種、外因性、および／または合成リガンドは、スイッチ受容体と特異的に結合してスイッチ受容体を発現する興奮性細胞の活性を調節し、天然に存在する受容体と検出可能に結合するが、天然に存在する受容体と結合する際に生理学的に測定可能な変化を誘発しない。
【０１７３】
特定の実施形態では、スイッチ受容体は、本明細書に企図されるベクターを使用してニューロン細胞内に導入される。特定の場合では、スイッチ受容体が少なくとも１個の宿主細胞内で発現されるように、スイッチ受容体をコードする核酸分子は、対象に送達される。一部の場合では、スイッチ受容体は、対象に直接送達される（すなわち、タンパク質として）。スイッチ受容体は、ニューロン細胞と同じ種または異なる種由来であり得る。スイッチ受容体は、対象内で異種的に発現されるか、または相同的に発現され得る。特定の実施形態では、スイッチ受容体は、スイッチ受容体が異種および／または合成リガンドによってトリガーされるのを可能にし、内因性リガンドの感受性を低下させ、低減し、または無効にするために１個または複数のアミノ酸挿入、欠失、または置換を含む。様々な実施形態では、使用のために選択されるスイッチ受容体は、（ｉ）適する極性および／またはイオン組成物の電流を流し、（ｉｉｉ）神経系内で神経伝達物質として使用されない（ｉｉ）リガンドによって直接ゲートされる（特に、活性化される細胞はニューロン細胞である）はずである。
【０１７４】
一実施形態では、スイッチ受容体は、天然に存在する受容体に検出可能に結合しない異種、外因性、および／または合成リガンドに特異的に結合するように操作されている。スイッチ受容体の細胞外リガンド結合ドメインの原子構造は、当技術分野で公知の方法を使用して判定または予測され得る。高分解能構造は、内因性リガンドへの感受性を無効にする受容体のリガンド結合ドメイン内の突然変異の「合理的な設計」をガイドするのに使用することができる。そのとき「第２の部位」置換は、受容体内でこれらの突然変異を補完し、機能的な（しかし完全に非天然の）受容体−リガンド対を回復させるように内因性リガンド上で作製され得る。別の実施形態では、ドッキングアルゴリズムは、変異型受容体のリガンド結合ドメインへの合成リガンドの結合をモデル化するために使用することができる。特定の実施形態では、あまり標的化されていないか、またはさらにはランダムな突然変異を使用して、天然アゴニストに対する親和性を欠くスイッチ受容体の突然変異体種を作出することもできる。次に潜在的なアゴニスト化合物のライブラリーをスクリーニングして公知の「指向進化」法を使用して有用な非天然アゴニストを同定することができる。
【０１７５】
類似の化学的遺伝子手法は、イオン選択性などのスイッチ受容体の伝導性を変更するのにも有用である。化学的遺伝子手法は、リガンド結合、物理的活性化特性、またはスイッチ受容体の伝導性を変更するのに使用することができる。一非限定例では、スイッチ受容体は、ナトリウムもしくはカルシウムイオンの流入を増大させる代わりに、カリウムイオンの流出を増大させ、または塩化物イオンなどのアニオンの流入を増大させるように操作することができる。このようなスイッチ受容体がニューロン細胞内で発現され、リガンド結合によってトリガーされるとき、操作された受容体は、ニューロン細胞を過分極させ、活性化させることになる。
【０１７６】
「異種」リガンドは、スイッチ受容体を発現する細胞の種と異なる種由来であるポリペプチドまたは低分子を指す。異種リガンドは、天然源から単離されたもの、組換えで産生されたもの、または合成のものであり得る。
【０１７７】
「天然に存在するリガンド」は、自然界に見出すことができる生体分子であって、ネイティブなＧＰＣＲまたはリガンド依存性イオンチャネルに結合する、生体分子を指す。
【０１７８】
「合成リガンド」は、自然界に存在せず、天然または化学的手段によって合成されるポリペプチドまたは低分子を指す。合成リガンドは、固有のものであってもよいし、または公知のものであってもよい。
【０１７９】
「低分子」は、約５ｋＤ未満、約４ｋＤ未満、約３ｋＤ未満、約２ｋＤ未満、約１ｋＤ未満、または約５ｋＤ未満の分子量を有する化合物を指す。低分子は、核酸、ペプチド、ポリペプチド、ペプチド模倣体、ペプトイド、炭水化物、脂質、または他の有機もしくは無機分子であり得る。
【０１８０】
特定の実施形態では、本明細書に企図されるスイッチ受容体は、例えば、オンセットおよびオフセット動態（ミリ秒、秒、分、または時間の程度で）を変動させることによって可変時間的制御をもたらし、あるいは異なるウイルスベクターを使用し、かつ／または送達の方法および／もしくは送達部位を変更することによって可変空間分解能をもたらすように設計することもできる。
１．Ｇタンパク質共役受容体（ＧＰＣＲ）
【０１８１】
Ｇタンパク質共役受容体（ＧＰＣＲ）は、外部刺激への細胞応答を媒介するタンパク質受容体の多様なファミリーである。特定の実施形態では、スイッチ受容体は、ＧＰＣＲもしくはその突然変異タンパク質、ＲＡＳＳＬ、またはＤＲＥＡＤＤである。一部の態様では、ＧＰＣＲまたはその突然変異タンパク質、ＲＡＳＳＬ、またはＤＲＥＡＤＤのサブユニットの１つまたは複数は、異種リガンド、外因性リガンド、および／または合成リガンドに特異的に結合するように操作されている。特定の実施形態における使用に適したリガンド、ＲＡＳＳＬ、およびＤＲＥＡＤＤと特異的に結合するＧＰＣＲ、ならびにこれを同定および作製するための方法の例示的例は、Conklinら、２００８年；Peiら、２００８年；NicholsおよびRoth、２００９年；ならびにDongら、２０１０年ａに記載されており、RoganおよびRoth、２０１１年に概説されており、これらのそれぞれは、その全体が本明細書に参照により組み込まれている。
【０１８２】
本開示の組成物は、ＧＰＣＲをコードする核酸分子を含み得る。一部の場合では、ＧＰＣＲは、対象において異種的に発現される。他の場合では、ＧＰＣＲは、対象において相同的に発現される。特定の場合では、ＧＰＣＲは、異所的に発現される（例えば、ニューロン中に）。ＧＰＣＲは、野生型ＧＰＣＲまたは突然変異体ＧＰＣＲを含み得る。ＧＰＣＲは、限定することなく、ヒト、マウス、ラットを含めた哺乳動物；Ｄｒｏｓｏｐｈｉｌａ  ｍｅｌａｎｏｇａｓｔｅｒを含めた昆虫；Ｃａｅｎｏｒｈａｂｄｉｔｉｓ  ｅｌｅｇａｎｓを含めた線虫；および酵母を含めて、ＧＰＣＲが通常発現される本質的に任意の生物体に由来し得る。ＧＰＣＲは、本明細書に記載の方法を使用して、神経疾患を処置するのに対象において発現することができる。一部の例では、対象において発現されるＧＰＣＲは、対象のもの以外の種に由来する。例えば、マウスにおいて通常発現されるＧＰＣＲは、本明細書に開示の方法を使用してヒトにおいて発現させることができる。組成物中に使用されるＧＰＣＲは、野生型ＧＰＣＲと実質的に相同性となり（すなわち、配列同一性を共有し）、例えば、野生型ＧＰＣＲと少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％、９９．９％、または１００％同一となる。
【０１８３】
ＧＰＣＲは、これらが相互作用するシグナル伝達タンパク質に従って分類することができる。理論に束縛されることを望むわけではないが、ＧＰＣＲは、下流シグナル伝達分子（例えば、Ｇタンパク質）に共役して細胞外シグナルを形質導入する。Ｇタンパク質は、興奮性（例えば、Ｇｓ、Ｇｑ／１１、Ｇ１２／１３）または阻害性（例えば、Ｇｉ／ｏ）であり得る。一部の場合では、下流Ｇタンパク質に共役したＧＰＣＲを活性化すると、興奮性細胞（例えば、筋細胞、ニューロン）の電気生理学的活性を変更することができる。ＧＰＣＲは、これらが共役するＧタンパク質のクラスに基づいて選択され得る。ＧＰＣＲは、所望の下流シグナル伝達経路に基づいて本開示の方法を実施するように選択されることになることが当業者に明らかとなる。特定の一例では、阻害性ＧＰＣＲ（すなわち、Ｇｉ／ｏに共役した）は、疼痛を処置するために選択され得る。
【０１８４】
一部の場合では、ＧＰＣＲは、構成的活性（すなわち、細胞内で連続的に活性）であり得る。本実施例では、ＧＰＣＲは、リガンドによる活性化を必要としない場合がある。より特定の場合では、ＧＰＣＲは、リガンドにより活性化される。リガンドは、内因性または外因性リガンドであり得る。一部の例では、ＧＰＣＲは、内因性リガンド（すなわち、対象によって天然に産生されるリガンド）によって活性化される。他の例では、ＧＰＣＲは、外因性リガンド（すなわち、例えば、注射によって対象に送達されるリガンド）によって活性化される。リガンドは、タンパク質、脂質、合成分子、核酸などを含めたＧＰＣＲを活性化する任意の分子であり得る。特定の場合では、リガンドは、神経疾患を処置するためにＧＰＣＲを異種的に発現する対象に送達される。一例では、ＧＰＣＲは、Ｄｒｏｓｏｐｈｉｌａ  ｍｅｌａｎｏｇａｓｔｅｒに由来するアラトスタチン受容体（ＡｌｓｔＲ）であり、リガンドは、アラトスタチンである。
【０１８５】
本明細書に記載の使用に適したＧＰＣＲの非限定的な例としては：ＣＨＲＭ１；ＧＮＲＨＲ；ＧＰＲ７３；ＧＰＲ４５；ＰＴＨＲ１；ＣＨＲＭ２；ＧＮＲＨＲ２；ＧＰＲ７３；ＧＰＲ６３；ＰＴＨＲ２；ＣＨＲＭ３；ＨＲＨ１；ＧＰＲ１０；ＧＰＲ８３；ＳＣＴＲ；ＣＨＲＭ４；ＨＲＨ２；Ｆ２Ｒ；ＰＧＲ１５；ＡＤＣＹＡＰ１Ｒ１；ＣＨＲＭ５；ＨＲＨ３；Ｆ２ＲＬ１；ＰＧＲ１５Ｌ；ＶＩＰＲ１；ＡＤＯＲＡ１；ＨＲＨ４；Ｆ２ＲＬ２；ＧＰＲ１０３；ＶＩＰＲ２；ＡＤＯＲＡ２Ａ；ＦＳＨＲ  ９３；Ｆ２ＲＬ３；ＧＰＲ１０３Ｌ；ＢＡＩ１；ＡＤＯＲＡ２Ｂ；ＬＨＣＧＲ；Ｐ２ＲＹ１；ＧＲＣＡ；ＢＡＩ２；ＡＤＯＲＡ３；ＴＳＨＲ；Ｐ２ＲＹ２；ＰＧＲ１；ＢＡＩ３；Ｐ２ＲＹ１２；ＧＰＲ５４；Ｐ２ＲＹ４；ＨＧＰＣＲ１１；ＣＤ９７；ＧＰＲ１０５；ＬＴＢ４Ｒ；Ｐ２ＲＹ６；ＳＡＬＰＲ；ＥＭＲ１；ＧＰＲ８６；ＬＴＢ４Ｒ２；Ｐ２ＲＹ１１；ＭＡＳ１；ＥＭＲ２；ＧＰＲ８７；ＭＲＧＸ１；ＬＧＲ７；ＧＰＲ９０；ＥＭＲ３；ＡＤＲＡ１Ａ；ＭＲＧＸ２；ＬＧＲ８；Ｐ２Ｙ５；ＰＧＲ１６；ＡＤＲＡ１Ｂ；ＭＲＧＸ３；ＲＧＲ；ＧＰＲ２３；ＬＥＣ１；ＡＤＲＡ１Ｄ；ＭＲＧＸ４；ＨＴＲ１Ａ；Ｐ２Ｙ１０  ２７５；ＬＥＣ２；ＡＤＲＡ２Ａ  ；ＭＲＧＤ；ＨＴＲ１Ｂ；ＦＫＳＧ７９；ＬＥＣ３；ＡＤＲＡ２Ｂ；ＭｒｇＡ１；ＨＴＲ１Ｄ；ＰＧＲ２；ＣＥＬＳＲ１；ＡＤＲＡ２Ｃ；ＭｒｇＡ２；ＨＴＲ１Ｅ；ＰＧＲ３；ＣＥＬＳＲ２；ＡＤＲＢ１；ＭｒｇＡ３；ＨＴＲ１Ｆ；ＡＧＲ９；ＣＥＬＳＲ３；ＡＤＲＢ２  ２１；ＭｒｇＡ４；ＨＴＲ２Ａ；ＣＭＫＬＲ１；ＧＰＲ６４；ＡＤＲＢ３；ＭｒｇＡ５；ＨＴＲ２Ｂ；ＥＢＩ２；ＰＧＲ１７；ＡＤＭＲ；ＭｒｇＡ６；ＨＴＲ２Ｃ；ＧＰＣＲ１５０；ＤＪ２８７Ｇ１４；Ｃ３ＡＲ１；ＭｒｇＡ７；ＨＴＲ４；ＧＰＲ１；ＫＩＡＡ０７５８；Ｃ５Ｒ１；ＭｒｇＡ８；ＨＴＲ５Ａ；ＧＰＲ１５；ＰＧＲ１８；ＧＰＲ７７；ＭｒｇＡ９；ＨＴＲ５Ｂ；ＧＰＲ１７；ＰＧＲ１９；ＡＧＴＲ１；ＭｒｇＡ１０；ＨＴＲ６；ＧＰＲ１８；ＰＧＲ２０；ＡＧＴＲ２；ＭｒｇＡ１１；ＨＴＲ７；ＧＰＲ１９；ＴＥＭ５；ＡＧＴＲＬ１；ＭｒｇＡ１２；ＳＳＴＲ１；ＧＰＲ２０；ＫＩＡＡ１８２８；ＢＲＳ３；ＭｒｇＡ１３；ＳＳＴＲ２；ＧＰＲ２２；ＰＧＲ２１；ＧＲＰＲ  ３１；ＭｒｇＡ１４；ＳＳＴＲ３；ＧＰＲ２５；ＥＴＬ；ＮＭＢＲ；ＭｒｇＡ１５；ＳＳＴＲ４；ＧＰＲ３０；ＦＬＪ１４４５４；ＢＤＫＲＢ１；ＭｒｇＡ１６；ＳＳＴＲ５；ＧＰＲ３１；ＧＰＲ５６；ＢＤＫＲＢ２；ＭｒｇＡ１９；Ｇ２Ａ；ＧＰＲ３２；ＯＡ１；ＣＮＲ１；ＭｒｇＢ１；ＧＰＲ４；ＧＰＲ３３；ＰＧＲ２２；ＣＮＲ２；ＭｒｇＢ２；ＧＰＲ６５；ＧＰＲ３４；ＰＧＲ２３；ＣＣＲ１；ＭｒｇＢ３；ＧＰＲ６８；ＧＰＲ３５；ＰＧＲ２４；ＣＣＲ２；ＭｒｇＢ４；ＥＤＧ１；ＧＰＲ３９；ＰＧＲ２５；ＣＣＲ３；ＭｒｇＢ５；ＥＤＧ２；ＧＰＲ４０；ＰＧＲ２６；ＣＣＲ４；ＭｒｇＢ６；ＥＤＧ３；ＧＰＲ４４；ＰＧＲ２７；ＣＣＲ５  ４１；ＭｒｇＢ８；ＥＤＧ４；ＧＰＲ５５；ＶＬＧＲ１；ＣＣＲ６；ＭｒｇＢ１０；ＥＤＧ５；ＧＰＲ６１；ＣＣＲ７  ４３；ＭｒｇＢ１１；ＥＤＧ６；ＧＰＲ６２；ＣＣＲ８；ＭｒｇＢ１３；ＥＤＧ７；ＧＰＲ７５；ＣＣＲ９；ＧＰＲ２４；ＥＤＧ８；ＧＰＲ８０���ＧＰＲ２；ＳＬＴ；ＴＡＣＲ１；ＧＰＲ８２；ＣＡＳＲ；ＣＣＲＬ１；ＭＣ１Ｒ；ＴＡＣＲ２；ＧＰＲ８４；ＧＡＢＢＲ１；ＣＣＲＬ２；ＭＣ２Ｒ；ＴＡＣＲ３；ＧＰＲ８８；ＧＰＲ５１；ＣＣＢＰ２；ＭＣ３Ｒ；ＴＲＨＲ；ＧＰＲ９１；ＧＰＲＣ５Ｂ；ＣＭＫＢＲ１Ｌ１；ＭＣ４Ｒ；ＴＲＨＲ２；ＧＰＲ９２；ＧＰＲＣ５Ｃ；ＣＭＫＢＲ１Ｌ２；ＭＣ５Ｒ；ＧＰＲ５７；ＧＰＲ１０１；ＧＰＲＣ５Ｄ；ＣＣＸＣＲ１；ＭＴＮＲ１Ａ；ＧＰＲ５８；Ｈ９６３；ＲＡＩ３；ＣＸ３ＣＲ１；ＭＴＮＲ１Ｂ；ＰＮＲ；ＨＧＰＣＲ２；ＧＲＭ１；ＩＬ８ＲＡ；ＧＰＲ５０；ＴＡＲ１；ＨＧＰＣＲ１９；ＧＲＭ２；ＩＬ８ＲＢ；ＧＰＲ６６；ＴＡＲ２；ＨＵＭＮＰＩＩＹ２０；ＧＲＭ３；ＧＰＲ９；ＮＭＵ２Ｒ；ＴＡＲ３；ＭＲＧ；ＧＲＭ４；ＣＸＣＲ４；ＮＰＦＦ１Ｒ；ＴＡＲ４；ＭＲＧＥ；ＧＲＭ５；ＢＬＲ１；ＧＰＲ７４；ＧＰＲ１０２；ＭＲＧＦ；ＧＲＭ６；ＣＸＣＲ６；ＧＰＲ７；ＴＡ７；ＭＲＧＧ；ＧＲＭ７；ＣＣＫＡＲ；ＧＰＲ８；ＴＡ８；ＯＰＮ３；ＧＲＭ８；ＣＣＫＢＲ；ＮＰＹ１Ｒ；ＴＡ１０；ＯＰＮ４；ＧＰＲＣ６Ａ；ＣＹＳＬＴ１；ＮＰＹ２Ｒ；ＴＡ１１；ＰＧＲ４；ＰＧＲ２８；ＣＹＳＬＴ２；ＰＰＹＲ１；ＴＡ１２；ＰＧＲ５；ＤＲＤ１；ＮＰＹ５Ｒ；ＴＡ１４；ＰＧＲ６；ＤＲＤ２；ＮＰＹ６Ｒ；ＴＡ１５；ＰＧＲ７；ＤＲＤ３；ＮＴＳＲ１；ＧＰＲ１４；ＰＧＲ８；ＤＲＤ４；ＮＴＳＲ２；ＡＶＰＲ１Ａ；ＰＧＲ１０；ＦＺＤ１；ＤＲＤ５；ＯＰＲＤ１；ＡＶＰＲ１Ｂ；ＰＧＲ１１；ＦＺＤ２；ＦＹ；ＯＰＲＫ１；ＡＶＰＲ２；ＰＧＲ１２；ＦＺＤ３；ＴＧ１０１９；ＯＰＲＭ１；ＯＸＴＲ；ＰＧＲ１３；ＦＺＤ４；ＨＭ７４；ＯＰＲＬ１；ＧＰＲ４８；ＰＧＲ１４；ＦＺＤ５；ＧＰＲ８１；ＯＰＮ１ＬＷ；ＧＰＲ４９；ＲＤＣ１；ＦＺＤ６；ＥＤＮＲＡ；ＯＰＮ１ＭＷ；ＬＧＲ６；ＲＥ２；ＦＺＤ７；ＥＤＮＲＢ；ＯＰＮ１ＳＷ；ＧＰＲ２７；ＲＲＨ；ＦＺＤ８；ＦＰＲ１；ＲＨＯ；ＧＰＲ８５；ＦＺＤ９；ＦＰＲＬ１；ＨＣＲＴＲ１；ＳＲＥＢ３；ＦＺＤ１０；ＦＰＲＬ２；ＨＣＲＴＲ２；ＧＰＲ３；ＳＭＯＨ；ＦＰＲ−ＲＳ１；ＰＴＡＦＲ；ＧＰＲ６；ＣＡＬＣＲ；ＦＰＲ−ＲＳ２；ＰＴＧＤＲ；ＧＰＲ１２；ＣＡＬＣＲＬ；ＦＰＲ−ＲＳ３；ＰＴＧＥＲ１；ＧＰＲ２１；ＣＲＨＲ１；ＦＰＲ−ＲＳ４；ＰＴＧＥＲ２；ＧＰＲ５２；ＣＲＨＲ２；ＧＡＬＲ１；ＰＴＧＥＲ３；ＧＰＲ２６；ＧＩＰＲ；ＴＭ７ＳＦ１；ＧＡＬＲ２；ＰＴＧＥＲ４；ＧＰＲ７８；ＧＣＧＲ；ＴＭ７ＳＦ１Ｌ１；ＧＡＬＲ３；ＰＴＧＦＲ；ＧＰＲ３７；ＧＬＰ１Ｒ；ＴＭ７ＳＦ１Ｌ２；ＧＨＳＲ；ＰＴＧＩＲ；ＧＰＲ３７Ｌ１；ＧＬＰ２Ｒ；ＴＭ７ＳＦ３；ＧＰＲ３８；ＴＢＸＡ２Ｒ；ＧＰＲ４１；ＧＨＲＨＲ；ＴＰＲＡ４０；およびＧＰＲ４３がある。
【０１８６】
一部の場合では、スイッチ受容体は、合成リガンドのみで活性化される受容体（ＲＡＳＳＬ）である。ＲＡＳＳＬは、合成低分子リガンドにもっぱら応答するように設計されたＧＰＣＲであり得る。ＲＡＳＳＬは、任意のＧＰＣＲ骨格から構成され得、その例は提供されている。一部の場合では、ＲＡＳＳＬは、合成リガンドによって活性化されるように設計される。この場合、ＲＡＳＳＬは、内因性リガンドに応答性でないか、または実質的にあまり応答性でない場合がある。理論に束縛されることを望むわけではないが、この方法は、ＲＡＳＳＬが合成リガンドの存在下でのみ活性化されるように、ＲＡＳＳＬの一時的な制御をもたらすことができる。ＲＡＳＳＬは、５％未満、１０％未満、１５％未満、２０％未満、２５％未満、３０％未満、３５％未満、４０％未満、４５％未満、５０％未満、５５％未満、６０％未満、６５％未満、７０％未満、７５％未満、８０％未満、８５％未満、８６％未満、８７％未満、８８％未満、８９％未満、９０％未満、９１％未満、９２％未満、９３％未満、９４％未満、９５％未満、９６％未満、９７％未満、９８％未満、９９％未満、または１００％未満、内因性リガンドに応答性であり得る。一部の場合では、ＲＡＳＳＬは、別個のタンパク質を元来コードした２つまたはそれよりも多い遺伝子（または遺伝子の部分）の接合から作出される融合タンパク質である。一部の場合では、ＲＡＳＳＬは、野生型ＧＰＣＲと少なくとも部分的に相同性である。一部の場合では、ＲＡＳＳＬは、野生型ＧＰＣＲと少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、または少なくとも９９．９％アミノ酸相同性を共有する。
【０１８７】
一部の態様では、本開示のスイッチ受容体は、デザイナー薬物によって排他的に活性化されるデザイナー受容体（ＤＲＥＡＤＤ）である。一部の場合では、ＤＲＥＡＤＤは、ＲＡＳＳＬである。ＤＲＥＡＤＤは、生物学的に不活性なリガンドによって活性化される任意のＧＰＣＲであり得る。用語「生物学的に不活性な」は、本明細書では、野生型受容体に対して低親和性を有し、低応答性でのリガンド−受容体相互作用を生じるが、スイッチ受容体に対して高親和性を有することができる任意のリガンド（例えば、タンパク質、小分子、脂質、など）（例えば、ＤＲＥＡＤＤ）を指す。生物学的に不活性である任意のリガンドは、一般に、用量が典型的に送達される場所で、スイッチ受容体の非存在下で、生物体上で皆無かそれに近い生理的効果を有する。しかし、スイッチ受容体の存在下で、生物学的に不活性なリガンドは、生物体に対して著しい生理的効果を有し得る（例えば、疼痛緩和）。生物学的に不活性な低分子の使用は、例えば、低リスクの副作用および標的外効果に起因して本明細書に開示の方法によって神経疾患を処置するのに適している場合がある。ＤＲＥＡＤＤは、本明細書に記載の方法を実施するための特定の有用性を見出すことができ、その理由は、ＤＲＥＡＤＤが別段に対象に対して効果を有さない生物学的に不活性な分子によって時間的に制御することができるためである。ＤＲＥＡＤＤは、上述した任意のＧＰＣＲ骨格を使用して設計することができる（例えば、指向進化または合理的な設計を介して）。一部の場合では、合成リガンドによって主に活性化されるように、ＤＲＥＡＤＤは、内因性リガンドに応答性または実質的にあまり応答性でない。ＤＲＥＡＤＤの例としては、限定することなく、Armbrusterら、PNAS、２００７年によって記載されたムスカリン性アセチルコリン受容体（例えば、ｈＭ１Ｄｑ、ｈＭ２Ｄｉ、ｈＭ３Ｄｑ、ｈＭ４Ｄｉ、およびｈＭ５Ｄｑ）上で設計されたもの、およびVardyら、Neuron、２０１５年によって記載されたカッパオピオイド受容体上で設計されたものを含み、これらの参考文献は、参照により本明細書に組み込まれている。一部の場合では、ＤＲＥＡＤＤは、クロザピン−Ｎ−オキシド（例えば、ｈＭ１Ｄｑ、ｈＭ２Ｄｉ、ｈＭ３Ｄｑ、ｈＭ４Ｄｉ、およびｈＭ５Ｄｑ受容体）によって活性化される。一部の場合では、生物学的に不活性な化合物は、Ｎ４’−アルキル置換ＣＮＯ類似体、例えば、化合物４ｂ（３−クロロ−６−（４−エチルピペラジン−１−イル）−５Ｈ−ベンゾ［ｂ］［１，４］ベンゾジアゼピン）；化合物６（４−（８−クロロ−５Ｈ−ジベンゾ［ｂ，ｅ］［１，４］ジアゼピン−１１−イル）−１，１−ジメチルピペラジン−１−イウムヨージド）；化合物１１（３−クロロ−６−（ピペラジン−１−イル）−５Ｈ−ベンゾ［ｂ］［１，４］ベンゾジアゼピン）；化合物１３（８−クロロ−１１−［４−（１，１−ジドイトリオエチル）ピペラジン−１−イル］−５Ｈ−ジベンゾ［ｂ，ｅ］［１，４］ジアゼピン）；および化合物２１（１１−（ピペラジン−１−イル）−５Ｈ−ジベンゾ［ｂ，ｅ］［１，４］ジアゼピン；１１−（４−エチルピペラジン−１−イル）−５Ｈ−ジベンゾ［ｂ，ｅ］［１，４］ジアゼピン）を含めたChenら���ACS  Chem.  Neurosci.、２０１５年に開示された化合物のいずれかなどである。他の場合では、ＤＲＥＡＤＤは、サルビノリンＢによって活性化される（例えば、ＫＯＲ−ＤＲＥＡＤＤ）。任意のＧＰＣＲをＤＲＥＡＤＤとして設計することができ、本発明は、開示したＤＲＥＡＤＤに限定されないことが理解されるべきである。合成リガンドは、生物学的に不活性である本質的に任意の分子であり得る。
【０１８８】
ＤＲＥＡＤＤは、特異的Ｇタンパク質および特異的シグナル伝達経路を活性化するのにＤＲＥＡＤＤの能力に基づいて本明細書に記載の方法を実施するためのスイッチ受容体として選択され得る。シグナル伝達経路は、目的の神経疾患を特異的に処置するように選択することができる。例えば、阻害性Ｇタンパク質、Ｇｉに共役するＤＲＥＡＤＤの使用は、例えば、疼痛を処置するのに適していることができる。Ｇｉに共役するＤＲＥＡＤＤの非限定的な一例は、ｈＭ４Ｄｉである。一部の場合では、ｈＭ４Ｄｉは、クロザピン−Ｎ−オキシドにより活性化される。ｈＭ４Ｄｉを活性化し得るリガンドの他の非限定的な例は、クロザピン、ペルラピン、およびオランザピンがある。別の例では、興奮Ｇタンパク質、Ｇｑに共役するＤＲＥＡＤＤは、例えば、疼痛を処置するのに適する場合がある。Ｇｑに共役するＤＲＥＡＤＤの非限定的な一例は、ｈＭ３Ｄｑである。一部の場合では、ｈＭ３Ｄｑは、クロザピン−Ｎ−オキシド、クロザピン、ペルラピン、またはオランザピンによって活性化される。
【０１８９】
リガンド、ＲＡＳＳＬ、およびＤＲＥＡＤＤと特異的に結合するＧＰＣＲの例示的な例は、それだけに限らないが：５−ヒドロキシトリプタミン受容体、アセチルコリン受容体（ムスカリン性）、アデノシン受容体、接着クラスＧＰＣＲ、アドレナリン受容体、アンギオテンシン受容体、アペリン受容体、胆汁酸受容体、ボンベシン受容体、ブラジキニン受容体、カルシトニン受容体、カルシウム感知受容体、カンナビノイド受容体、ケメリン受容体、ケモカイン受容体、コレシストキニン受容体、クラスフリズルドＧＰＣＲ、補体ペプチド受容体、コルチコトロピン放出因子受容体、ドーパミン受容体、エンドセリン受容体、エストロゲン（Ｇタンパク質共役型）受容体、ホルミルペプチド受容体、遊離脂肪酸受容体、ＧＡＢＡＢ受容体、ガラニン受容体、グレリン受容体、グルカゴン受容体ファミリー、糖タンパク質ホルモン受容体、ゴナドトロピン放出ホルモン受容体、ＧＰＲ１８、ＧＰＲ５５、およびＧＰＲ１１９、ヒスタミン受容体、ヒドロキシカルボン酸受容体、キスペプチン受容体、ロイコトリエン受容体、リゾリン脂質（ＬＰＡ）受容体、リゾリン脂質（Ｓ１Ｐ）受容体、メラニン凝集ホルモン受容体、メラノコルチン受容体、メラトニン受容体、代謝調節型グルタミン酸受容体、モチリン受容体、ニューロメディンＵ受容体、神経ペプチドＦＦ／神経ペプチドＡＦ受容体、神経ペプチドＳ受容体、神経ペプチドＷ／神経ペプチドＢ受容体、神経ペプチドＹ受容体、ニューロテンシン受容体、オピオイド受容体、オレキシン受容体、オキソグルタル酸受容体、Ｐ２Ｙ受容体、副甲状腺ホルモン受容体、ペプチドＰ５１８受容体、血小板活性化因子受容体、プロキネチシン受容体、プロラクチン放出ペプチド受容体、プロスタノイド受容体、プロテイナーゼ−活性化受容体、リラキシンファミリーペプチド受容体、ソマトスタチン受容体、コハク酸受容体、タキキニン受容体、チロトロピン放出ホルモン受容体、トレースアミン受容体、ウロテンシン受容体、バソプレッシンおよびオキシトシン受容体、ならびにＶＩＰおよびＰＡＣＡＰ受容体を含めた任意のＧＰＣＲに由来し得る。
【０１９０】
本明細書に企図された神経疾患を処置する特定の実施形態における使用に適しているＧＰＣＲ−リガンド対の例示的な例を表１に示す。
【表１】
2018531926.tif 000003
【０１９１】
*  3-クロロ-6-(4-エチルピペラジン-1-イル)-5H-ベンゾ[b][1,4]ベンゾジアゼピン、4-(8-クロロ-5H-ジベンゾ[b,e][1,4]ジアゼピン-11-イル)-1,1-ジメチルピペラジン-1-イウムヨージド、3-クロロ-6-(ピペラジン-1-イル)-5H-ベンゾ[b][1,4]ベンゾジアゼピン、8-クロロ-11-[4-(1,1-ジドイトリオエチル)ピペラジン-1-イル]-5H-ジベンゾ[b,e][1,4]ジアゼピン、11-(ピペラジン-1-イル)-5H-ジベンゾ[b,e][1,4]ジアゼピン、または11-(4-エチルピペラジン-1-イル)-5H-ジベンゾ[b,e][1,4]ジアゼピンを含めたChenら、ACS  Chem.  Neurosci.、2015年、PMID25587888に記載のN4’-アルキル置換クロザピンＮオキシド(CNO)類似体
２．リガンド依存性イオンチャネル
【０１９２】
特定の実施形態では、スイッチ受容体は、リガンド依存性イオンチャネル（ＬＧＩＣ）またはその突然変異タンパク質である。ＬＧＩＣは、リガンドの結合に応答して細胞膜を横切ってイオン（例えば、Ｎａ＋、Ｋ＋、Ｃａ＋＋、Ｃｌ−）のフラックスを制御する任意の膜貫通タンパク質であり得る。理論に束縛されることを望むわけではないが、ＬＧＩＣの活性化は、興奮性細胞の電気生理学的活性を変更することができる（すなわち、脱分極する、過分極させる）。ＬＧＩＣは、膜を横断するカチオン、アニオン、または両方の組合せのフラックスを制御することができる。ＬＧＩＣは、チャネルのイオン選択性に基づいて選択され得る。一部の場合では、ＬＧＩＣは、膜を横断する塩化物イオン（Ｃｌ−）のフラックスを制御し、例えば、疼痛を処置するのに適する場合がある。一部の態様では、ＬＧＩＣまたはその突然変異タンパク質のサブユニットの１つまたは複数は、異種リガンド、外因性リガンド、および／または合成リガンドに特異的に結合するように操作されている。特定の実施形態において使用するのに適したＬＧＩＣの例示的な例としては、それだけに限らないが、５−ＨＴ３受容体、酸感知（プロトン依存性）イオンチャネル（ＡＳＩＣ）、上皮ナトリウムチャネル（ＥＮａＣ）、ＧＡＢＡＡ受容体、グリシン受容体、イオンチャネル型グルタミン酸受容体、ＩＰ３受容体、ニコチンアセチルコリン受容体、Ｐ２Ｘ受容体、リアノジン受容体、および亜鉛活性化チャネル（ＺＡＣ）がある。
【０１９３】
一部の態様では、リガンド依存性イオンチャネルは、別個のポリペプチドに元来コードされる２つまたはそれよりも多いポリヌクレオチド配列の融合により作出されるイオン伝導孔ドメインおよびリガンド結合ドメインを含む。一部の実施形態では、ポリヌクレオチド配列は、ｃｙｓループ受容体遺伝子ファミリーの２つまたはそれよりも多いメンバーを含む。一実施形態では、イオン伝導孔ドメインは、アニオンを伝導する。別の実施形態では、イオン伝導孔ドメインは、カチオンを伝導する。
【０１９４】
一部の場合では、ＬＧＩＣは、合成リガンドによって活性化可能であるように操作または修飾される。本明細書に記載の方法を実施するのに適したＬＧＩＣの非限定的な例としては、合成リガンド、イベルメクチンに応答するように操作されたグルタミン酸依存性塩化物チャネル（Frazierら、Journal  of  Biological  Chemistry、２０１２年）；合成リガンドＰＳＥＭ２２Ｓによって活性化されるＰＳＡＭ−５ＨＴ３ＨＣ；合成リガンドＰＳＥＭ８９Ｓによって活性化されるＰＳＡＭ−ＧｌｙＲ、合成リガンドＰＳＥＭ９Ｓによって活性化されるＰＳＡＭ−ｎＡＣｈＲ（Magnusら、Science、２０１１年）；カプサイシンによって活性化されるＴＲＰＶ１；合成リガンドイベルメクチンによって活性化されるＧｌｙＲ−Ｍ（LynaghおよびLynch、Journal  of  Biological  Chemistry、２０１０年）；および合成リガンドゾルピデムによって活性化されるＧＡＢＡ−Ａを含めた薬理学的選択的エフェクター分子（ＰＳＥＭ）によって活性化される薬理学的選択的アクチュエータモジュール（ＰＳＡＭ）がある。
【０１９５】
本明細書に記載の方法を用いて使用するのに適したＬＧＩＣの他の非限定的な例としては：ＨＴＲ３Ａ；ＨＴＲ３Ｂ；ＨＴＲ３Ｃ；ＨＴＲ３Ｄ；ＨＴＲ３Ｅ；ＡＳＩＣ１；ＡＳＩＣ２；ＡＳＩＣ３；ＳＣＮＮ１Ａ；ＳＣＮＮ１Ｂ；ＳＣＮＮ１Ｄ；ＳＣＮＮ１Ｇ；ＧＡＢＲＡ１；ＧＡＢＲＡ２；ＧＡＢＲＡ３；ＧＡＢＲＡ４；ＧＡＢＲＡ５；ＧＡＢＲＡ６；ＧＡＢＲＢ１；ＧＡＢＲＢ２；ＧＡＢＲＢ３；ＧＡＢＲＧ１；ＧＡＢＲＧ２；ＧＡＢＲＧ３；ＧＡＢＲＤ；ＧＡＢＲＥ；ＧＡＢＲＱ；ＧＡＢＲＰ；ＧＡＢＲＲ１；ＧＡＢＲＲ２；ＧＡＢＲＲ３；ＧＬＲＡ１；ＧＬＲＡ２；ＧＬＲＡ３；ＧＬＲＡ４；ＧＬＲＢ；ＧＲＩＡ１；ＧＲＩＡ２；ＧＲＩＡ３；ＧＲＩＡ４；ＧＲＩＤ１；ＧＲＩＤ２；ＧＲＩＫ１；ＧＲＩＫ２；ＧＲＩＫ３；ＧＲＩＫ４；ＧＲＩＫ５；ＧＲＩＮ１；ＧＲＩＮ２Ａ；ＧＲＩＮ２Ｂ；ＧＲＩＮ２Ｃ；ＧＲＩＮ２Ｄ；ＧＲＩＮ３Ａ；ＧＲＩＮ３Ｂ；ＩＴＰＲ１；ＩＴＰＲ２；ＩＴＰＲ３；ＣＨＲＮＡ１；ＣＨＲＮＡ２；ＣＨＲＮＡ３；ＣＨＲＮＡ４；ＣＨＲＮＡ５；ＣＨＲＮＡ６；ＣＨＲＮＡ７；ＣＨＲＮＡ９；ＣＨＲＮＡ１０；ＣＨＲＮＢ１；ＣＨＲＮＢ２；ＣＨＲＮＢ３；ＣＨＲＮＢ４；ＣＨＲＮＧ；ＣＨＲＮＤ；ＣＨＲＮＥ；Ｐ２ＲＸ１；Ｐ２ＲＸ２；Ｐ２ＲＸ３；Ｐ２ＲＸ４；Ｐ２ＲＸ５；Ｐ２ＲＸ６；Ｐ２ＲＸ７；ＲＹＲ１；ＲＹＲ２；ＲＹＲ３；およびＺＡＣＮがある。
【０１９６】
ＴＲＰＶ１、ＴＲＰＭ８、およびＰ２Ｘ２は、構造的特徴およびゲーティング原理を共有する大きいＬＧＩＣファミリーのメンバーである。例えば、ＴＲＰＶ４は、ＴＲＰＶ１と類似して、熱によってトリガーされ、カプサイシンによってトリガーされず；Ｐ２Ｘ３は、ＡＴＰによってトリガーされ、Ｐ２Ｘ２より急速に脱感作される。ＴＲＰＶ１、ＴＲＰＭ８、およびＰ２Ｘ２は、したがって、特定の実施形態において使用するのに適したＬＧＩＣの非限定的な例である。
【０１９７】
一実施形態では、スイッチ受容体は、ＴＲＰＶ１もしくはＴＲＰＭ８受容体またはその突然変異タンパク質である。ＴＲＰＶ１およびＴＲＰＭ８は、末梢神経系の侵害受容ニューロンによって発現されるバニロイドおよびメントール受容体である。両チャネルは、非選択的なナトリウムおよびカルシウム透過性ホモ四量体として機能すると考えられる。さらに、両方のチャネルおよびこれらの主要なアゴニスト−それぞれ、カプサイシン、およびメントールなどの冷却化合物は、これらの中枢神経系に実質的に存在しない。メントールおよびイシリンを含むカプサイシンおよび一部の冷却化合物は、光解離性ブロッキング基の潜在的なアクセプター部位を含有する。光解離性ブロッキング基のアクセプターなどとの会合は、光が、活性リガンドを放出することによって間接トリガーとして作用するリガンド依存性イオンチャネルをもたらす。
【０１９８】
一実施形態では、スイッチ受容体は、Ｐ２Ｘ２受容体またはその突然変異タンパク質であり、Ｐ２Ｘ２は、減感作のその減速によって区別されるＡＴＰ依存性非選択的カチオンチャネルである。Ｐ２Ｘ２は、脱分極電流の選択的にアドレス可能な源として使用され得、全体で天然アゴニストを欠く操作されたチャネルリガンド組合せを生成するためのプラットフォームを提示する。
【０１９９】
本明細書に企図される神経疾患を処置する特定の実施形態における使用に適したＬＧＩＣリガンド対の例示的な例は、表２に示す。
【表２】
2018531926.tif 000004
３．グリシン受容体
【０２００】
特定の実施形態では、スイッチ受容体は、グリシン受容体（ＧｌｙＲ）またはその突然変異タンパク質である。一部の態様では、ＧｌｙＲまたはその突然変異タンパク質のサブユニットの１つまたは複数は、異種リガンド、外因性リガンドおよび／または合成リガンドに特異的に結合するように操作されている。ＧｌｙＲは、中枢神経系（ＣＮＳ）内の高速神経伝達を媒介するリガンド依存性イオンチャネル型受容体のニコチニコイド（nicotinicoid）スーパーファミリーのメンバーである。しかし、ヒトα１サブユニットだけの異種的に発現は、ネイティブなチャネルのものと本質的に同一の薬理学的特性を有する活性グリシン依存性チャネルを再構成するのに十分である。したがって、様々な例示的な実施形態では、スイッチ受容体は、ＧｌｙＲ（例えば、アルファ１、アルファ２、アルファ３、アルファ４、またはベータ）のサブユニットを含み、好ましくは、哺乳動物起源のサブユニットまたはこのようなサブユニットの突然変異タンパク質を含む。特定の実施形態における使用に適したＧｌｙＲの例示的な例は、米国特許第８，９５７，０３６号に記載されており、これは、その全体が本明細書に参照により組み込まれている。
【０２０１】
活性が変更されたＧｌｙＲサブユニットの突然変異形態（突然変異タンパク質）も公知であり、特定の実施形態において使用することができる。例えば、ＧｌｙＲタンパク質のある特定の突然変異タンパク質は、カチオン性イオンチャネルをもたらすなどの変更されたイオンチャネル特性をもたらす（例えば、Δ２５０Ａ２５１Ｅ；Keramidasら、J.  Gen.  Physiol.、１１９巻、３９３頁（２００２年））。他のＧｌｙＲ突然変異タンパク質は、亜鉛相乗作用もしくは亜鉛阻害（Hirzelら、Neuron、５２巻、６７９〜９０頁（２００６年））、アロステリックモジュレーターの親和性（例えば、麻酔薬相乗作用（Hemmingsら、Trends  Pharmacol.  Sci.、２６巻、５０３〜１０頁（２００５年））、またはリガンドの親和性（Rajendraら、Neuron、１４巻、１６９〜１７５頁（１９９５年）；Schrniedenら、Science、２６２巻、２５６〜２５８頁（１９９３年））の部位を欠く。ＧｌｙＲサブユニットの突然変異は、イオン浸透（例えば、アニオン性またはカチオン性選択的チャネル）を選択的に変更し、異種または合成リガンドを認識するために受容体サブユニットのリガンド結合ポケットを再設計することができる。例えば、特定のリガンドのＧｌｙＲタンパク質の感受性および選択性を変更するために、点突然変異は、用量応答曲線を左から右に（すなわち、グリシンにあまり特異的でないまたはより特異的）シフトすることが予期されるＧｌｙＲα１サブユニットで作製することができる。他の突然変異は、ある特定の麻酔薬（例えば、エタノール）に対するＧｌｙＲタンパク質の感受性を変更することができる。例えば、２８７位のメチオニン（Ｍ）がロイシン（Ｌ）（Ｍ２９７Ｌ）に変化させられるマウスグリシンα１受容体サブユニットの突然変異は、揮発性麻酔薬エンフルランに対する感受性が大いに増強される。このようなＧｌｙＲ突然変異タンパク質は、特定の実施形態においてＧｌｙＲタンパク質として利用することができる。
【０２０２】
特定の好適な実施形態では、スイッチ受容体は、その天然リガンドへのＧｌｙＲ結合を無効にする１個または複数のアミノ酸欠失、挿入、または置換を含むＧｌｙＲα１サブユニットを含み、ＧｌｙＲ突然変異タンパク質の異種または合成リガンドへの特異的結合を付与する。好適な一実施形態では、スイッチ受容体は、Ｆ２０７および／またはＡ２２８におけるアミノ酸挿入、欠失、または置換を含むＧｌｙＲα１サブユニットを含む。好適な一実施形態では、スイッチ受容体は、アミノ酸置換Ｆ２０７Ａおよび／またはＡ２２８Ｇを含むＧｌｙＲα１サブユニットを含む。さらに別の好適な実施形態では、アミノ酸置換Ｆ２０７ＡおよびＡ２２８Ｇを含むＧｌｙＲα１サブユニットを含むスイッチ受容体は、リガンドイベルメクチンと特異的に結合する。
【０２０３】
さらに別の好適な実施形態では、スイッチ受容体は、アミノ酸置換Ｆ２０７ＡおよびＡ２２８Ｇを含むＧｌｙＲα１サブユニットを含み、イベルメクチン類似体セラメクチン、ドラメクチン、エマメクチン、エプリノメクチン、ならびにモキシデクチン（ミルベマイシン）およびこれらの類似体に加えてアバメクチンを含めたアベルメクチン（広いクラスとして）と特異的に結合する。
【０２０４】
一部の実施形態では、スイッチ受容体は、以下のアミノ酸置換：Ａ−１’Ｅ、Ｐ−２’Δ、Ｔ１３’Ｖ、Ｒ１９’Ｅ、Ｆ２０７Ａ、およびＡ２２８Ｇ（Islamら、ACS  Chem.  Neurosci.、DOI:10.1021/acschemneuro.6b00168（２０１６年）参照）の１個または複数を含むＧｌｙＲα１サブユニットを含む。一実施形態では、スイッチ受容体は、アミノ酸置換Ａ−１’Ｅ、Ｆ２０７Ａ、およびＡ２２８Ｇを含むＧｌｙＲα１サブユニットを含み、リガンドイベルメクチンと特異的に結合する。別の実施形態では、スイッチ受容体は、アミノ酸置換Ａ−１’Ｅ、Ｐ−２’Δ、Ｔ１３’Ｖ、Ｆ２０７Ａ、およびＡ２２８Ｇを含むＧｌｙＲα１サブユニットを含み、リガンドイベルメクチンと特異的に結合する。
【０２０５】
本明細書に企図される特定の実施形態における使用に適したアベルメクチン類似体の例示的な例は、それだけに限らないが、ＰｕｂＣｈｅｍ化合物データベースにおける既存の類似体を含む（www.ncbi.nlm.nih.gov/pccompound）。
Ｅ．リガンド
【０２０６】
神経疾患（例えば、疼痛）を処置するのに適したリガンドは、本明細書に記載のスイッチ受容体を活性化することができる任意の分子を含み得る。リガンドは、核酸、低分子化合物、タンパク質またはペプチド、脂質、光子などであり得る。本開示のＧＰＣＲ由来スイッチ受容体を活性化するのに適したリガンドの非限定的な例としては：アラトスタチン；ナルフラフィン（Ｃ２８Ｈ３２Ｎ２Ｏ５）、クロザピン−Ｎ−オキシド（ＣＮＯ）；クロザピン；オランザピン；ペルラピン；サルビノリンＢ；アロセトロン；フルペルラピン；および化合物４ｂ（３−クロロ−６−（４−エチルピペラジン−１−イル）−５Ｈ−ベンゾ［ｂ］［１，４］ベンゾジアゼピン）を含めたChenら、ACS  Chem.  Neurosci.、２０１５年に開示された、Ｎ４’−アルキル置換ＣＮＯ類似体；化合物６（４−（８−クロロ−５Ｈ−ジベンゾ［ｂ，ｅ］［１，４］ジアゼピン−１１−イル）−１，１−ジメチルピペラジン−１−イウムヨージド）；化合物１１（３−クロロ−６−（ピペラジン−１−イル）−５Ｈ−ベンゾ［ｂ］［１，４］ベンゾジアゼピン）；化合物１３（８−クロロ−１１−［４−（１，１−ジドイトリオエチル）ピペラジン−１−イル］−５Ｈ−ジベンゾ［ｂ，ｅ］［１，４］ジアゼピン）；および化合物２１（１１−（ピペラジン−１−イル）−５Ｈ−ジベンゾ［ｂ，ｅ］［１，４］ジアゼピン；１１−（４−エチルピペラジン−１−イル）−５Ｈ−ジベンゾ［ｂ，ｅ］［１，４］ジアゼピン）がある。本開示のＬＧＩＣ由来スイッチ受容体を活性化するのに適したリガンドの非限定的な例としては、イベルメクチン、セラメクチン、ドラメクチン、エマメクチン、エプリノメクチン、およびアバメクチンを含めたアベルメクチンファミリー；ミルベメクチン、モキシデクチン、およびネマデクチンを含めたミルベマイシンファミリーのメンバー；ゾルピデム、アルピデム、サリピデム、ネコピデム、ファシプロン、およびＤＳ−１を含めたイミダゾピリジン；カプサイシン、ジヒドロカプサイシン、ノルジヒドロカプサイシン、ホモジヒドロカプサイシン、ホモカプサイシン、およびノニバミドを含めたカプサイシノイド；ＰＳＥＭ２２Ｓ、ＰＳＥＭ８９Ｓ、およびＰＳＥＭ９Ｓを含めた薬理学的選択的エフェクター分子（ＰＳＥＭ）；ならびにＡＴＰがある。一部の場合では、リガンド結合ドメインは、クロザピン−Ｎ−オキシド、クロザピン、ペルラピン、オランザピン、アロセトロン、フルペルラピン、ナルフラフィン（Ｃ２８Ｈ３２Ｎ２Ｏ５）、またはＮ４’−アルキル置換ＣＮＯ類似体の結合によって活性化される。ある特定の態様では、リガンド結合ドメインは、ニコチン、バレニクリン、またはガランタミンの結合によって活性化される。一部の場合では、リガンドは、グリシン、ベータアラニン、またはタウリンでない。
【０２０７】
一部の場合では、リガンドは、本明細書に想定される神経疾患または障害を含まない１つまたは複数の効能に関してＦＤＡに認可されている薬物である。言い換えれば、神経学的障害に罹患している対象は、神経学的障害を処置するのにＦＤＡに認可されていない（すなわち、「オフラベル」効能）ＦＤＡに認可された薬物で処置することができる。図３は、薬物がＦＤＡに認可されていない神経学的障害を処置するのに用途変更することができるＦＤＡに認可された薬物の非限定的な例を提供する。例えば、クロザピンは、このファイリングの時点で、統合失調症の処置に関してＦＤＡに認可されており、不安障害の処置について「オフラベル」でも使用される。クロザピンは、本明細書に記載の組成物および方法を使用して例えば、胃食道逆流障害（ＧＥＲＤ）を処置するのに用途変更することができることが想定される。別の非限定的な例では、ペルラピンは、肥満の処置に用途変更することができる催眠薬である。さらに別の非限定的な例では、イベルメクチンは、慢性疼痛の処置に用途変更することができる抗寄生虫剤である。
Ｆ．ポリヌクレオチド
【０２０８】
様々な例示的な実施形態では、本発明は、ポリヌクレオチド、それだけに限らないが、ＧＰＣＲ、ＲＡＳＳＬ、ＤＲＥＡＤＤ、ＬＧＩＣ、ならびにこれらのサブユニットおよび突然変異タンパク質を含むスイッチ受容体ポリペプチドをコードするポリヌクレオチド、ならびに融合ポリペプチド、ウイルスベクターポリヌクレオチド、ならびにこれらを含む組成物を部分的に企図する。例えば、配列番号１（表４）および図２Ａ〜２Ｃを参照。
【０２０９】
本明細書では、用語「ポリヌクレオチド」、「ヌクレオチド」、「ヌクレオチド配列」、または「核酸」は、互換的に使用される。これらは、任意の長さのヌクレオチドのポリマー形態、デオキシリボヌクレオチドもしくはリボヌクレオチド、またはこれらの類似体を指す。ポリヌクレオチドは、任意の３次元構造体を有し得、公知もしくは未知の任意の機能を果たしうる。以下は、ポリヌクレオチドの非限定的な例である：連鎖解析から定義される遺伝子または遺伝子断片、遺伝子座（複数の遺伝子座）のコードまたは非コード領域、エクソン、イントロン、メッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）、トランスファーＲＮＡ（ｔＲＮＡ）、リボソームＲＮＡ（ｒＲＮＡ）、短鎖干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）、ショートヘアピンＲＮＡ（ｓｈＲＮＡ）、マイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）、リボザイム、ｃＤＮＡ、組換えポリヌクレオチド、分枝ポリヌクレオチド、プラスミド、ベクター、任意の配列の単離ＤＮＡ、任意の配列の単離ＲＮＡ、核酸プローブ、およびプライマー。ポリヌクレオチドは、１個または複数の修飾ヌクレオチド、例えば、メチル化ヌクレオチドおよびヌクレオチド類似体などを含み得る。存在する場合、ヌクレオチド構造体への修飾は、ポリマーのアセンブリーの前後に賦与され得る。ヌクレオチドの配列は、非ヌクレオチドコンポーネントによって中断され得る。ポリヌクレオチドは、標識コンポーネントとのコンジュゲーションなどによって重合後にさらに修飾されてもよい。ポリヌクレオチドは、デオキシリボ核酸（ＤＮＡ）、リボ核酸（ＲＮＡ）、またはＤＮＡ／ＲＮＡハイブリッドであり得る。ポリヌクレオチドは、一本鎖または二本鎖であり得る。ポリヌクレオチドとしては、それだけに限らないが：プレメッセンジャーＲＮＡ（プレｍＲＮＡ）、メッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）、ＲＮＡ、短鎖干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）、ショートヘアピンＲＮＡ（ｓｈＲＮＡ）、マイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）、リボザイム、合成ＲＮＡ、ゲノムＲＮＡ（ｇＲＮＡ）、プラス鎖ＲＮＡ（ＲＮＡ（＋））、マイナス鎖ＲＮＡ（ＲＮＡ（−））、合成ＲＮＡ、ゲノムＤＮＡ（ｇＤＮＡ）、ＰＣＲ増幅ＤＮＡ、相補的ＤＮＡ（ｃＤＮＡ）、合成ＤＮＡ、または組換えＤＮＡがある。ポリヌクレオチドは、少なくとも５、少なくとも１０、少なくとも１５、少なくとも２０、少なくとも２５、少なくとも３０、少なくとも４０、少なくとも５０、少なくとも１００、少なくとも２００、少なくとも３００、少なくとも４００、少なくとも５００、少なくとも１０００、少なくとも５０００、少なくとも１００００、もしくは少なくとも１５０００、またはそれよりも多いヌクレオチド長、リボヌクレオチドもしくはデオキシヌクレオチドまたはいずれかのタイプのヌクレオチドの修飾体、ならびにすべての中間の長さのヌクレオチドのポリマー形態を指す。本脈絡における「中間の長さ」は、引用した値同士間の任意の長さ、例えば、６、７、８、９など、１０１、１０２、１０３など；１５１、１５２、１５３など；２０１、２０２、２０３などを意味することが容易に理解されるであろう。特定の実施形態では、ポリヌクレオチドまたはバリアントは、本明細書に記載のまたは当技術分野で公知の参照配列と少なくともまたは約５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７１％、７２％、７３％、７４％、７５％、７６％、７７％、７８％、７９％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％配列同一性を有し、典型的にはこの場合バリアントは、参照配列の少なくとも１個の生物活性を維持する。
【０２１０】
本明細書では、用語「遺伝子」は、エンハンサー、プロモーター、イントロン、エクソンなどを含むポリヌクレオチド配列を指すことができる。特定の実施形態では、用語「遺伝子」は、ポリヌクレオチド配列がポリペプチドをコードするゲノム配列と同一であるか否かにかかわらず、ポリペプチドをコードするポリヌクレオチド配列を指す。
【０２１１】
「の転写を調節する（regulating）ゲノム配列」または「の転写を調節する（regulates）ゲノム配列」は、遺伝子の転写と関連したポリヌクレオチド配列を指す。一実施形態では、ゲノム配列は、転写を調節し、その理由は、それが転写抑制に寄与する転写因子結合部位と関連した転写またはポリヌクレオチド配列を抑制しまたは低下させるポリペプチドの結合部位であるためである。
【０２１２】
「の転写を調節する（regulating）シス作用配列」または「の転写を調節する（regulates）シス作用ヌクレオチド配列」、または等価物は、遺伝子の転写と関連するポリヌクレオチド配列を指す。一実施形態では、シス作用配列は、転写を調節し、その理由はそれが転写抑制に寄与する転写因子結合部位と関連した転写またはポリヌクレオチド配列を抑制し、または低下させるポリペプチドの結合部位であるためである。
【０２１３】
「調節エレメント」もしくは「シス作用配列」、またはその等価物は、ポリペプチドをコードするポリヌクレオチド配列の転写または発現と関連するポリヌクレオチド配列を含む発現制御配列を指す。
【０２１４】
「誘導性発現の調節エレメント」は、発現されるポリヌクレオチドに作動可能に連結したプロモーター、エンハンサー、またはその機能性断片であるポリヌクレオチド配列を指す。誘導性発現の調節エレメントは、それに作動可能に連結したポリヌクレオチドの発現を増大させるか（オンにするか）、または低下させる（オフにする）エレメントと結合する、分子の存在または非存在に応答する。誘導性発現の例示的な調節エレメントとしては、それだけに限らないが、テトラサイクリン応答性プロモーター、エクジソン応答性プロモーター、cumate応答性プロモーター、グルココルチコイド応答性プロモーター、エストロゲン応答性プロモーター、ＲＵ−４８６応答性プロモーター、ＰＰＡＲ−γプロモーター、および過酸化物誘導プロモーターがある。
【０２１５】
「一過性発現の調節エレメント」は、ポリヌクレオチドヌクレオチド配列を短時間または一時的に発現させるのに使用することができるポリヌクレオチド配列を指す。特定の実施形態では、一過性発現のための１個または複数の調節エレメントは、ポリヌクレオチドの長さ（duration  of  a  polynucleotide）を制限するのに使用することができる。ある特定の実施形態では、ポリヌクレオチド発現の好適な継続時間は、数分、数時間、または数日の程度である。一過性発現の例示的な調節エレメントは、それだけに限らないが、ヌクレアーゼ標的部位、リコンビナーゼ認識部位、および阻害性ＲＮＡ標的部位がある。さらに、ある程度、特定の実施形態では、誘導性発現の調節エレメントは、ポリヌクレオチド発現の継続時間の制御に寄与し得る。
【０２１６】
本明細書では、用語「ポリヌクレオチドバリアント」および「バリアント」などは、以下に定義されるストリンジェントな条件下で参照配列とハイブリダイズする参照ポリヌクレオチド配列またはポリヌクレオチドと実質的な配列同一性をディスプレイするポリヌクレオチドを指す。これらの用語は、少なくとも１個のヌクレオチドの付加、欠失、置換、または修飾によって参照ポリヌクレオチドと区別されるポリヌクレオチドも包含する。したがって、用語「ポリヌクレオチドバリアント」および「バリアント」は、１つまたは複数のヌクレオチドは、異なるヌクレオチドを付加もしくは欠失されるか、またはそれで修飾され、もしくは置き換えられたポリヌクレオチドを含む。この点において、突然変異、付加、欠失、および置換を含めたある特定の変化を、参照ポリヌクレオチドに行うことができ、それにより、変更されたポリヌクレオチドは、参照ポリヌクレオチドの生物学的機能または活性を保持することが当技術分野でよく理解されている。
【０２１７】
一実施形態では、ポリヌクレオチドは、ストリンジェントな条件下で標的核酸配列にハイブリダイズするヌクレオチド配列を含む。「ストリンジェントな条件」下でハイブリダイズするために、互いに少なくとも６０％同一のヌクレオチド配列がハイブリダイズされたままであるハイブリダイゼーションプロトコールを記述する。一般に、ストリンジェントな条件は、既定されたイオン強度およびｐＨで特定配列の熱融点（Ｔｍ）より約５℃低いように選択される。Ｔｍは、標的配列に相補的なプローブの５０％が平衡状態で標的配列にハイブリダイズする温度（規定されたイオン強度、ｐＨ、および核酸濃度下の）である。標的配列は一般に、Ｔｍで過剰に存在するので、プローブの５０％が平衡状態で占有される。
【０２１８】
記述「配列同一性」、または例えば、「に５０％同一の配列」を含む記述は、本明細書では、配列が比較のウィンドウにわたってヌクレオチドごとまたはアミノ酸ごとに同一である程度を指す。よって、「配列同一性のパーセンテージ」は、比較のウィンドウにわたって２つの最適に整列した配列を比較し、同一の核酸塩基（例えば、Ａ、Ｔ、Ｃ、Ｇ、Ｉ）または同一のアミノ酸残基（例えば、Ａｌａ、Ｐｒｏ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｇｌｙ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ｈｉｓ、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ｃｙｓ、およびＭｅｔ）が、両方の配列中で存在する位置の数を判定してマッチした位置の数を得、比較のウィンドウ（すなわち、ウィンドウサイズ）中の位置の総数によってマッチした位置の数を除し、１００で結果を乗じて配列同一性のパーセンテージを得ることによって算出することができる。２つまたはそれよりも多いポリヌクレオチドまたはポリペプチドとの間の配列関係を記述するのに使用される用語は、「参照配列」、「比較ウィンドウ」、「配列同一性」、「配列同一性のパーセンテージ」、および「実質的な同一性」がある。「参照配列」は、長さがヌクレオチドおよびアミノ酸残基を含めて少なくとも１２であるが、頻繁に１５〜１８、しばしば少なくとも２５モノマーユニットである。２つのポリヌクレオチドはそれぞれ、（１）２つのポリヌクレオチド間で類似した配列（すなわち、完全なポリヌクレオチド配列の部分のみ）、（２）２つのポリヌクレオチド間で多岐にわたる配列を含み得、２つ（またはそれよりも多い）のポリヌクレオチド間の配列比較は、「比較ウィンドウ」にわたる２つのポリヌクレオチドの配列を比較することによって典型的には実施され、配列類似性の局所領域を同定および比較する。「比較ウィンドウ」は、配列が２つの配列が最適に整列された後、同じ数の連続した位置の参照配列と比較される少なくとも６連続した位置、通常約５０〜約１００、より通常には約１００〜約１５０の概念上のセグメントを指す。比較ウィンドウは、２つの配列の最適なアラインメントの参照配列（付加または欠失を含まない）と比較して約２０％またはそれ未満の付加または欠失（すなわち、ギャップ）を含み得る。比較ウィンドウを整列させるための配列の最適なアラインメントは、アルゴリズム（ウィスコンシン州遺伝学ソフトウェアパッケージＲｅｌｅａｓｅ７．０、遺伝学コンピューターグループ、５７５、Ｓｃｉｅｎｃｅ  Ｄｒｉｖｅ  Ｍａｄｉｓｏｎ、ＷＩ、ＵＳＡにおけるＧＡＰ、ＢＥＳＴＦＩＴ、ＦＡＳＴＡ、およびＴＦＡＳＴＡ）のコンピューター化されたインプリメンテーションによって、または選択された様々な方法のいずれかによって生成される検査および最良アラインメント（すなわち、比較ウィンドウにわたる最高パーセンテージ相同性をもたらす）によって行われ得る。例えば、Altschulら、１９９７年、Nucl.  Acids  Res.、２５巻：３３８９頁によって開示されたプログラムのＢＬＡＳＴファミリーを参照することができる。配列分析の詳細な考察は、Ausubelら、Current  Protocols  in  Molecular  Biology、John  Wiley  &  Sons  Inc、１９９４年〜１９９８年、１５章のユニット１９．３に見出すことができる。
【０２１９】
「単離ポリヌクレオチド」は、本明細書では、天然に存在する状態でその両端にある配列から精製されたポリヌクレオチド、例えば、断片に通常隣接する配列から除去されたＤＮＡ断片を指す。特定の実施形態では、「単離ポリヌクレオチド」は、相補的ＤＮＡ（ｃＤＮＡ）、組換えＤＮＡ、または自然界に存在せず、人の手によって作製された他のポリヌクレオチドを指す。
【０２２０】
ポリヌクレオチドの配向を記述する用語は、５’（通常遊離リン酸基を有するポリヌクレオチドの末端）および３’（通常、遊離ヒドロキシル（ＯＨ）基を有するポリヌクレオチドの末端）を含む。ポリヌクレオチド配列は、５’〜３’配向または３’〜５’配向においてアノテートすることができる。ＤＮＡおよびｍＲＮＡについて、５’〜３’鎖は、「センス」、「プラス」、または「コード」鎖と指定され、その理由は、その配列がプレメッセンジャー（プレｍＲＮＡ）の配列と同一である［ＲＮＡにおけるウラシル（Ｕ）を除く、ＤＮＡにおけるチミン（Ｔ）の代わり］ためである。ＤＮＡおよびｍＲＮＡについて、ＲＮＡポリメラーゼによって転写される鎖である相補的３’〜５’鎖は、「鋳型」、「アンチセンス」、「マイナス」、または「非コード」鎖と指定される。本明細書では、用語「逆配向」は、３’〜５’配向で書かれた５’〜３’配列または５’〜３’配向で書かれた３’〜５’配列を指す。
【０２２１】
用語「両端にある（両端に有する）」は、ポリヌクレオチド配列が、上流のポリヌクレオチド配列および／または下流のポリヌクレオチド（poylnucleotide）配列の間、すなわちその配列に対して５’および／または３’の間にあることを指す。例えば、２つの他のエレメント（例えば、ＩＴＲ）が「両端にある」配列は、一方のエレメントが配列の５’に位置しており、他方が配列の３’に位置しているが、これらの間に介在配列が存在し得ることを示す。
【０２２２】
用語「相補的な」および「相補性」は、塩基対合則によって関連したポリヌクレオチド（すなわち、ヌクレオチドの配列）を指す。例えば、ＤＮＡ配列５’ＡＧＴＣＡＴＧ３’の相補鎖は、３’ＴＣＡＧＴＡＣ５’である。後者の配列は、左に５’末端および右に３’末端５’ＣＡＴＧＡＣＴ３’を有する逆補体として書かれることが多い。その逆補体に等しい配列は、回文配列と言われる。相補性は、核酸の塩基の一部のみが、塩基対合規則によってマッチしている「部分的」であり得る。または、核酸間で「完全な」または「全」相補性が存在し得る。
【０２２３】
用語「核酸カセット」または「発現カセット」は、本明細書では、ポリヌクレオチドから１つまたは複数のＲＮＡを発現させるのに十分であるベクターなどのより大きいポリヌクレオチド内のポリヌクレオチド配列を指す。発現されたＲＮＡは、タンパク質に翻訳され得、他のポリヌクレオチド配列を標的にして切断および／または分解するためのガイドＲＮＡまたは阻害性ＲＮＡとして機能し得る。一実施形態では、核酸カセットは、１つまたは複数の目的のポリヌクレオチドを含有する。別の実施形態では、核酸カセットは、１つまたは複数の目的のポリヌクレオチドに作動可能に連結した１つまたは複数の発現制御配列を含有する。ポリヌクレオチドは、目的のポリヌクレオチドを含む。本明細書では、用語「目的のポリヌクレオチド」は、本明細書で企図される阻害性ポリヌクレオチド、例えば、ＧＰＣＲ、ＲＡＳＳＬ、ＤＲＥＡＤＤ、ＬＧＩＣ、ならびにこれらのサブユニットおよび突然変異タンパク質の転写のための鋳型として機能を果たすポリペプチドまたは融合ポリペプチドまたはポリヌクレオチドをコードするポリヌクレオチドを指す。特定の実施形態では、目的のポリヌクレオチドは、１つまたは複数の酵素活性、例えば、ヌクレアーゼ活性および／またはクロマチンリモデリングもしくはエピジェネティック修飾活性などを有するポリペプチドまたは融合ポリペプチドをコードする。
【０２２４】
ベクターは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、もしくは１０またはそれよりも多い核酸カセットを含み得る。本発明の好適な実施形態では、核酸カセットは、スイッチ受容体、例えば、ＧＰＣＲ、ＲＡＳＳＬ、ＤＲＥＡＤＤ、ＬＧＩＣ、またはこれらのサブユニットもしくは突然変異タンパク質をコードするポリヌクレオチドに作動可能に連結した１つまたは複数の発現制御配列（例えば、ニューロン細胞内で作動可能なプロモーターまたはエンハンサー）を含む。カセットは、単一ユニットとして、他のポリヌクレオチド配列、例えば、プラスミドまたはウイルスベクターから除去し、またはこれらの中に挿入することができる。
【０２２５】
一実施形態では、本明細書に企図したポリヌクレオチドは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、またはそれよりも多くの核酸カセットを含み、これらのうちの任意の数または組合せが同じまたは反対の配向内にあり得る。
【０２２６】
さらに、遺伝コードの縮重の結果として、本明細書で企図されるポリペプチドまたはそのバリアントの断片をコードし得る多くのヌクレオチド配列が存在することを当業者は察知するであろう。これらのポリヌクレオチドの一部は、任意の天然遺伝子のヌクレオチド配列と最小限の相同性を持つ。それにもかかわらず、コドン使用の差異に起因して変動するポリヌクレオチド、例えば、ヒトおよび／または霊長類コドン選択について最適化されているポリヌクレオチドは、本発明によって具体的に企図されている。一実施形態では、特定の対立遺伝子配列を含むポリヌクレオチドが提供される。対立遺伝子は、ヌクレオチドの１個または複数の突然変異、例えば、欠失、付加、および／または置換などの結果として変更されている内因性ポリヌクレオチド配列である。
【０２２７】
ある特定の実施形態では、目的のポリヌクレオチドは、それだけに限らないが、ｓｉＲＮＡ、ｍｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、リボザイム、もしくは別の阻害性ＲＮＡ、またはＲＮＡを阻害するためのシステム、例えば、ＣＲＩＳＰＲ／ＣＡＳ９システムを含めて阻害性ポリヌクレオチドをコードする。特定の実施形態では、目的のポリヌクレオチドは、疼痛に対する感受性の増大と関連している分子、例えば、ＴＮＦα、Ｎａｖ１．１、Ｎａｖ１．３、Ｎａｖ１．６、Ｎａｖ１．７、Ｎａｖ１．８、Ｎａｖ１．９、ＴＲＰＶ１、ＴＲＰＶ２、ＴＲＰＶ３、ＴＲＰＶ４、ＴＲＰＣ、ＴＲＰＰ、ＡＣＣＮ１、ＡＣＣＮ２、ＴＲＰＭ８、ＴＲＰＡ１、Ｐ２ＸＲ３、Ｐ２ＲＹ、ＢＤＫＲＢ１、ＢＤＫＲＢ２、Ｈｔｒ３Ａ、ＡＣＣＮｓ、ＫＣＮＱ、ＨＣＮ２、ＨＣＮ４、ＣＳＦ−１、ＣＡＣＮＡ１Ａ−Ｓ、ＣＡＣＮＡ２Ｄ１、ＩＬ１、ＩＬ６、ＩＬ１２、ＩＬ１８、ＣＯＸ−２、ＮＴＲＫ１、ＮＧＦ、ＧＤＮＦ、ＬＩＦ、ＣＣＬ２、ＣＮＲ２、ＴＬＲ２、ＴＬＲ４、Ｐ２ＲＸ４、Ｐ２ＲＸ７、ＣＣＬ２、ＣＸ３ＣＲ１、およびＢＤＮＦを標的にする阻害性ＲＮＡである。
【０２２８】
本明細書では、用語「ｓｉＲＮＡ」または「短鎖干渉ＲＮＡ」は、動物内の配列特異的な転写後の遺伝子サイレンシング、翻訳阻害、転写阻害、またはエピジェネティックなＲＮＡｉのプロセスを媒介する短いポリヌクレオチド配列を指す（Zamoreら、２０００年、Cell、１０１巻、２５〜３３頁；Fireら、１９９８年、Nature、３９１巻、８０６頁；Hamiltonら、１９９９年、Science、２８６巻、９５０〜９５１頁；Linら、１９９９年、Nature、４０２巻、１２８〜１２９頁；Sharp、１９９９年、Genes  &  Dev.、１３巻、１３９〜１４１頁；およびStrauss、１９９９年、Science、２８６巻、８８６頁）。ある特定の実施形態では、ｓｉＲＮＡは、同じ数のヌクレオシドを有する第１の鎖および第２の鎖を含むが、第１および第２の鎖は、第１および第２の鎖上の２つの末端ヌクレオシドが、相補鎖上の残基と対合されないようにオフセットされる。ある特定の場合では、対合していない２つのヌクレオシドは、チミジン残基である。ｓｉＲＮＡは、ｓｉＲＮＡまたはその断片が標的遺伝子の下方調節を媒介することができるように、標的遺伝子の十分な相同性の領域を含み、かつヌクレオチドの観点から十分な長さのものであるべきである。よって、ｓｉＲＮＡは、標的ＲＮＡと少なくとも部分的に相補的である領域を含む。必ずしもｓｉＲＮＡと標的との間に完全な相補性が存在する必要はないが、対応は、ｓｉＲＮＡまたはその切断産物が標的ＲＮＡのＲＮＡｉ切断などによって配列特異的サイレンシングを指示することが可能になるように十分でなければならない。相補性、または標的鎖との相同性の程度は、アンチセンス鎖において最も重要である。完全な相補性は、特にアンチセンス鎖において所望されることが多いが、一部の実施形態は、標的ＲＮＡに対して１つまたは複数の、しかし好ましくは１０、８、６、５、４、３、２、またはより少ないミスマッチを含む。ミスマッチは、末端領域内で最も許容され、存在する場合、１つまたは複数の末端領域内に、例えば、５’および／または３’末端の６、５、４、または３ヌクレオチド内にある。センス鎖は、分子の全体的な二重鎖特徴を維持するのにアンチセンス鎖と十分に相補的である必要があるだけである。ｓｉＲＮＡの各鎖は、３０、２５、２４、２３、２２、２１、または２０ヌクレオチド長に等しくあり得、またはそれ未満であり得る。鎖は、好ましくは少なくとも１９ヌクレオチド長である。例えば、各鎖は、２１から２５の間のヌクレオチド長であり得る。好適なｓｉＲＮＡは、１７、１８、１９、２９、２１、２２、２３、２４、または２５ヌクレオチド対のデュプレックス領域、ならびに２〜３ヌクレオチドの１つまたは複数のオーバーハング、好ましくは２〜３ヌクレオチドの１つまたは２つの３’オーバーハングを有する。
【０２２９】
本明細書では、用語「ｍｉＲＮＡ」または「マイクロＲＮＡ」は、典型的にはプレｍｉＲＮＡとして公知の約７０ヌクレオチドフォールドバックＲＮＡ前駆構造体から切り取られた２０〜２２ヌクレオチドの小非コードＲＮＡを指す。ｍｉＲＮＡは、ｍｉＲＮＡと標的との間の相補性の程度に依存する２つのやり方の１つにおいてこれらの標的を負に調節する。まず、タンパク質コーディングｍＲＮＡ配列に完全なまたはほぼ完全な相補性で結合するｍｉＲＮＡは、ＲＮＡ媒介干渉（ＲＮＡｉ）経路を誘導する。そのｍＲＮＡ標的の３’非翻訳領域（ＵＴＲ）内で不完全な相補的部位に結合することによってその調節効果を発揮するｍｉＲＮＡは、ＲＮＡｉ経路に使用されるものに類似しているかまたはおそらく同一であるＲＩＳＣ複合体を通じて見かけ上翻訳のレベルで転写後に標的遺伝子発現を抑制する。翻訳制御と一致して、この機構を使用するｍｉＲＮＡは、その標的遺伝子のタンパク質レベルを低減するが、これらの遺伝子のｍＲＮＡレベルは、最小限でのみ影響される。ｍｉＲＮＡは、任意のｍＲＮＡ配列を特異的に標的にすることができる天然に存在するｍｉＲＮＡおよび人工的に設計されたｍｉＲＮＡの両方を包含する。例えば、一実施形態では、当業者は、ヒトｍｉＲＮＡ（例えば、ｍｉＲ−３０またはｍｉＲ−２１）一次転写物または「ｍｉｓｈＲＮＡ」として発現されるショートヘアピンＲＮＡ構築物を設計することができる。この設計は、ヘアピン構築物にＤｒｏｓｈａプロセシング部位を加え、ノックダウン効率を大いに増大させることが示された（Puschら、２００４年）。ヘアピンステムは、２２−ｎｔのｄｓＲＮＡ（例えば、アンチセンスは、所望の標的に完全な相補性を有する）およびヒトｍｉＲ由来の１５〜１９−ｎｔループからなる。ヘアピンの片側または両側にｍｉＲループおよびｍｉＲ３０隣接配列を加えると、マイクロＲＮＡを含まない従来のｓｈＲＮＡ設計と比較したとき発現されるヘアピンのＤｒｏｓｈａおよびＤｉｃｅｒプロセシングが１０倍超増大する。ＤｒｏｓｈａおよびＤｉｃｅｒプロセシングの増大は、発現されるヘアピンについてより大きいｓｉＲＮＡ／ｍｉＲＮＡ産生およびより大きい効能につながる。
【０２３０】
本明細書では、用語「ｓｈＲＮＡ」または「ショートヘアピンＲＮＡ」は、単一の自己相補的ＲＮＡ鎖によって形成される二本鎖構造体を指す。標的遺伝子のコードまたは非コード配列の部分と同一のヌクレオチド配列を含有するｓｈＲＮＡ構築物が阻害に好適である。標的配列と比べて挿入、欠失、および単一点突然変異を有するＲＮＡ配列も阻害に有効であることが見出されている。標的遺伝子の阻害性ＲＮＡと部分との間の９０％超の配列同一性またはさらには１００％配列同一性が好適である。ある特定の好適な実施形態では、ｓｈＲＮＡデュプレックス形成部分の長さは、少なくとも２０、２１、または２２ヌクレオチド長であり、例えば、Ｄｉｃｅｒ依存性切断によって産生されるＲＮＡ産物にサイズが対応する。ある特定の実施形態では、ｓｈＲＮＡ構築物は、長さが少なくとも２５、５０、１００、２００、３００、または４００塩基である。ある特定の実施形態では、ｓｈＲＮＡ構築物は、長さが４００〜８００塩基である。ｓｈＲＮＡ構築物は、ループ配列およびループサイズの変動について高度に寛容性である。
【０２３１】
本明細書では、用語「リボザイム」は、標的ｍＲＮＡの部位特異的切断をすることができる触媒活性ＲＮＡ分子を指す。いくつかのサブタイプ、例えば、ハンマーヘッドおよびヘアピンリボザイムが記載されている。リボザイム触媒活性および安定性は、非触媒性塩基においてリボヌクレオチドをデオキシリボヌクレオチドで置換することによって改善することができる。部位特異的な認識配列でｍＲＮＡを切断するリボザイムは、特定のｍＲＮＡを破壊するのに使用することができ、ハンマーヘッドリボザイムの使用が好適である。ハンマーヘッドリボザイムは、標的ｍＲＮＡと相補的塩基対を形成する隣接領域によって指示される場所でｍＲＮＡを切断する。標的ｍＲＮＡが２つの塩基の以下の配列：５’−ＵＧ−３’を有することが唯一の要件である。ハンマーヘッドリボザイムの構築および産生は、当技術分野で周知である。
【０２３２】
本明細書に企図されるポリヌクレオチドは、コード配列自体の長さにかかわらず、本明細書の他の場所で開示されているように、または当技術分野で公知であるように、これらの全長が相当に変動し得るように他のＤＮＡ配列、例えば、発現制御配列、調節エレメント、プロモーターおよび／またはエンハンサー、非翻訳領域（ＵＴＲ）、コザック配列、ポリアデニル化シグナル、追加の制限酵素部位、複数のクローニング部位、内部リボソームエントリー部位（ＩＲＥＳ）、リコンビナーゼ認識部位（例えば、ＬｏｘＰ、ＦＲＴ、およびＡｔｔ部位）、ガイドＲＮＡ標的部位、終始コドン、転写終結シグナル、ならびに自己切断性ポリペプチドをコードするポリヌクレオチド、エピトープタグと組み合わせることができる。したがって、全長が好ましくは調製の容易さおよび意図された組換えＤＮＡプロトコールにおける使用によって限定されていれば、ほとんど任意の長さのポリヌクレオチド断片を利用することができることが企図されている。
【０２３３】
ポリヌクレオチドは、当技術分野で公知かつ利用可能な様々な確立した技法のいずれかを使用して調製、マニピュレート、および／または発現することができる。所望のポリペプチドを発現させるために、ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列をウイルスベクターなどの適切なベクター中に挿入することができる。好適な実施形態では、ウイルスベクターは、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクターである。
【０２３４】
発現ベクター中に存在する「発現制御配列」、「制御エレメント」、または「調節配列」は、ベクターの非翻訳領域（複製起点、選択カセット、プロモーター、エンハンサー、翻訳開始シグナル（シャインダルガーノ配列またはコザック配列）イントロン、ポリアデニル化配列、転写および翻訳を実行するために宿主細胞タンパク質と相互作用する５’および３’非翻訳領域）である。このようなエレメントは、その強度および特異性が様々となり得る。利用されるベクター系および宿主に応じて、遍在するプロモーターおよび誘導プロモーターを含む任意の数の適する転写および翻訳エレメントを使用することができる。
【０２３５】
特定の実施形態では、本発明の実施において使用するためのポリヌクレオチドは、それだけに限らないが、発現ベクターおよびウイルスベクターを含めたベクターであり、プロモーターおよび／またはエンハンサーなどの外因性、内因性、または異種制御配列を含む。「内因性」制御配列は、ゲノム内の所与の遺伝子と天然に連結されているものである。「外因性」制御配列は、その遺伝子の転写が連結されたエンハンサー／プロモーターによって指示されるように、遺伝子マニピュレーション（すなわち、分子生物学的技法）によって遺伝子に並列で配置されているものである。「異種」制御配列は、遺伝子マニピュレーションされた細胞と異なる種由来である外因性配列である。
【０２３６】
用語「プロモーター」は、本明細書では、ＲＮＡポリメラーゼが結合するポリヌクレオチド（ＤＮＡまたはＲＮＡ）の認識部位を指す。ＲＮＡポリメラーゼは、プロモーターに作動可能に連結したポリヌクレオチドを開始および転写する。特定の実施形態では、哺乳動物細胞内で作動可能なプロモーターは、転写が開始される部位からおよそ２５〜３０塩基上流に位置したＡＴリッチ領域および／または転写のスタートから７０〜８０塩基上流に見出される別の配列、Ｎが任意のヌクレオチドであり得るＣＮＣＡＡＴ領域を含む。特定の実施形態では、ベクターは、１つまたは複数のＲＮＡ  ｐｏｌ  ＩＩおよび／またはＲＮＡ  ｐｏｌ  ＩＩＩプロモーターを含む。
【０２３７】
特定の実施形態における使用に適したＲＮＡ  ｐｏｌ  ＩＩプロモーターの例示的な例には、それだけに限らないが、ニューロン特異的プロモーターが含まれる。
【０２３８】
用語「エンハンサー」は、転写を増強させることができる配列を含有するＤＮＡのセグメントを指し、一部の事例では、別の制御配列と比べたその配向と独立して機能することができる。エンハンサーは、プロモーターおよび／または他のエンハンサーエレメントと協調的または相加的に機能することができる。用語「プロモーター／エンハンサー」は、プロモーターおよびエンハンサー機能の両方をもたらすことができる配列を含有するＤＮＡのセグメントを指す。
【０２３９】
用語「作動可能に連結した」は、記載されたコンポーネントがこれらをその意図された様式で機能することを可能にする関係にある並置を指す。一実施形態では、用語は、核酸発現制御配列（プロモーターおよび／またはエンハンサーなど）または調節エレメントと発現制御配列または調節エレメントが第２の配列に対応する核酸の転写を指示する第２のポリヌクレオチド配列、例えば、目的のポリヌクレオチドとの間の機能的連結を指す。
【０２４０】
本明細書では、用語「構成的発現制御配列」は、作動可能に連結した配列の転写を絶えずまたは連続的に可能にするプロモーター、エンハンサー、またはプロモーター／エンハンサーを指す。構成的発現制御配列は、多種多様な細胞および組織型内での発現を可能にする「遍在する」プロモーター、エンハンサー、もしくはプロモーター／エンハンサー、またはそれぞれ制約された様々な細胞および組織型内での発現を可能にする「細胞特異的な」、「細胞型特異的な」、「細胞系統特異的な」、もしくは「組織特異的な」プロモーター、エンハンサー、もしくはプロモーター／エンハンサーであり得る。
【０２４１】
本発明の特定の実施形態における使用に適した例示的な遍在的な発現制御配列としては、それだけに限らないが、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）最初期プロモーター、ウイルスシミアンウイルス４０（ＳＶ４０）（例えば、早期または後期）、モロニーネズミ白血病ウイルス（ＭｏＭＬＶ）ＬＴＲプロモーター、ラウス肉腫ウイルス（ＲＳＶ）ＬＴＲ、単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）（チミジンキナーゼ）プロモーター、ワクシニアウイルス由来のＨ５、Ｐ７．５、およびＰ１１プロモーター、伸長因子１−アルファ（ＥＦ１ａ）プロモーター、初期増殖応答１（ＥＧＲ１）、フェリチンＨ（ＦｅｒＨ）、フェリチンＬ（ＦｅｒＬ）、グリセルアルデヒド３−リン酸脱水素酵素（ＧＡＰＤＨ）、真核生物翻訳開始因子４Ａ１（ＥＩＦ４Ａ１）、熱ショック７０ｋＤａタンパク質５（ＨＳＰＡ５）、熱ショックタンパク質９０ｋＤａベータ、メンバー１（ＨＳＰ９０Ｂ１）、熱ショックタンパク質７０ｋＤａ（ＨＳＰ７０）、β−キネシン（β−ＫＩＮ）、ヒトＲＯＳＡ  ２６遺伝子座（Irionsら、Nature  Biotechnology、２５巻、１４７７〜１４８２頁（２００７年））、ユビキチンＣプロモーター（ＵＢＣ）、ホスホグリセリン酸キナーゼ−１（ＰＧＫ）プロモーター、ならびにサイトメガロウイルスエンハンサー／ニワトリβ−アクチン（ＣＡＧ）プロモーターがある。
【０２４２】
本明細書に記載の組成物および方法は、細胞または組織内のスイッチ受容体の選択的発現に利用することができる。用語「選択的発現」および「標的特異的発現」は、本明細書で互換的に使用することができ、特異的な細胞または組織型内でのタンパク質または核酸の発現を指す。選択的発現は、１つまたは複数のプロモーターの使用を伴い得る。スイッチ受容体をコードする核酸分子は、特定の細胞または組織型へのスイッチ受容体の発現を指示する１つまたは複数のプロモーターを含み得る。
【０２４３】
特定の実施形態では、所望のポリヌクレオチド配列の細胞型特異的、系統特異的、または組織特異的発現を実現するのに組織特異的プロモーターを使用することが望ましい場合がある。ある特定の実施形態によれば、細胞型特異的プロモーターは、脳内に見出される細胞型に特異的である（例えば、ニューロン、グリア細胞）。組織特異的プロモーターの例示的な例としては、それだけに限らないが、グリア細胞繊維性酸性タンパク質（ＧＦＡＰ）プロモーター（星状細胞発現）、シナプシンプロモーター（ニューロン発現）、およびカルシウム／カルモジュリン依存性プロテインキナーゼＩＩ（ニューロン発現）、チューブリンアルファＩ（ニューロン発現）、ニューロン特異的エノラーゼ（ニューロン発現）、血小板由来増殖因子ベータ鎖（ニューロン発現）、ＴＲＰＶ１プロモーター（ニューロン発現）、Ｎａｖ１．７プロモーター（ニューロン発現）、Ｎａｖ１．８プロモーター（ニューロン発現）、Ｎａｖ１．９プロモーター（ニューロン発現）、またはアドビリンプロモーター（ニューロン発現）がある。
【０２４４】
一部の場合では、スイッチ受容体は、１つもしくは複数のニューロンまたはニューロンの群内で選択的に発現される。１つまたは複数のニューロン内の選択的発現は、１つまたは複数のニューロン特異的プロモーターの使用を伴い得る。ニューロン特異的プロモーターの非限定的な例としては、ヒトシナプシン−１（ＳＹＮ−１）プロモーター、カルシウム−カルモジュリン依存性プロテインキナーゼＩＩＡ（ＣａＭＫＩＩＡ）プロモーター、チューブリンアルファ１プロモーター、ニューロン特異的エノラーゼ（ＮＳＥ）プロモーター、血小板由来増殖因子ベータ鎖プロモーター（ＰＤＧＦＢ）、ＴＲＰＶ１プロモーター、Ｎａｖ１．７プロモーター、Ｎａｖ１．８プロモーター、Ｎａｖ１．９プロモーター、アドビリンプロモーター、ショウジョウバエシングルマインド相同体１（single-minded  homolog  1）（ＳＩＭ１）プロモーター、オキシトシン（ＯＸＴ）プロモーター、アグーチ関連ペプチド（ＡｇＲＰ）プロモーター、プロテインキナーゼＣ−デルタ（ＰＫＣ−デルタ）プロモーター、またはグレリンプロモーターがある。一部の場合では、スイッチ受容体は、感覚ニューロン内で選択的に発現される。一部の場合では、スイッチ受容体は、後根神経節、三叉神経節、Ａ−ベータ繊維、Ａ−デルタ線維、Ｃ−繊維、ＴＲＰＶ１＋ニューロン、Ｎａｖ１．７＋ニューロン、Ｎａｖ１．８＋ニューロン、またはＮａｖ１．９＋ニューロン内で選択的に発現される。他の例示的な例としては、限定することなく、迷走神経、プロオピオメラノコルチン（ＰＯＭＣ）ニューロン、視床下部の室傍核（ＰＶＨ）、視床下部の弓状核、扁桃体中心核の横細区画（lateral  subdivision）、Ｃ６星状神経節、下部食道括約筋迷走神経、筋層間神経叢、視床下核（ＳＴＮ）などがある。スイッチ受容体は、１つまたは複数の介在ニューロン、興奮性ニューロン、または阻害性ニューロン内で発現される。一部の例では、スイッチ受容体、特に、ＬＧＩＣ由来スイッチ受容体は、１個または複数の興奮性細胞または興奮性細胞の群内で発現され得る。興奮性細胞は、細胞膜にわたるイオンフラックスの結果として膜電位の変動を経験する任意の細胞である。興奮性細胞としては、ニューロン細胞、筋細胞などがある。
【０２４５】
一部の場合では、スイッチ受容体は、構成的に発現される（すなわち、連続的に発現される；非特異的発現）。これらの実施例では、スイッチ受容体の発現は、特異的細胞または組織型への直接的なベクターの選択的送達または投与によって制御することができる。例えば、構成的プロモーターの制御下でのスイッチ受容体をコードするベクターは、後根神経節または三叉神経ニューロンに直接的に送達され得る。一部の場合では、スイッチ受容体の広範な発現は、例えば、構成的プロモーターの制御下でのスイッチ受容体をコードするベクターの全身投与によって実現することができる。適する構成的プロモーターの非限定的な例としては、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）最初期プロモーター、シミアンウイルス４０（ＳＶ４０）プロモーター、モロニーネズミ白血病ウイルス（ＭＭＬＶ）ＬＴＲプロモーター、ラウス肉腫ウイルス（ＲＳＶ）ＬＴＲ、単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）チミジンキナーゼプロモーター、ワクシニアウイルス由来のＨ５プロモーター、ワクシニアウイルス由来のＰ７．５プロモーター、ワクシニアウイルス由来のＰ１１プロモーター、伸長因子１−アルファ（ＥＦ１ａ）プロモーター、初期増殖応答１（ＥＧＲ１）プロモーター、フェリチンＨ（ＦｅｒＨ）プロモーター、フェリチンＬ（ＦｅｒＬ）プロモーター、グリセルアルデヒド３−リン酸脱水素酵素（ＧＡＰＤＨ）プロモーター、真核生物翻訳開始因子４Ａ１（ＥＩＦ４Ａ１）プロモーター、熱ショック７０ｋＤａタンパク質５（ＨＳＰＡ５）プロモーター、熱ショックタンパク質９０ｋＤａベータ、メンバー１（ＨＳＰ９０Ｂ１）プロモーター、熱ショックタンパク質７０ｋＤａ（ＨＳＰ７０）プロモーター、β−キネシン（β−ＫＩＮ）プロモーター、ヒトＲＯＳＡ２６プロモーター、ユビキチンＣ（ＵＢＣ）プロモーター、ホスホグリセリン酸キナーゼ−１（ＰＧＫ）プロモーター、サイトメガロウイルスエンハンサー／ニワトリβ−アクチン（ＣＡＧ）プロモーター、およびβ−アクチンプロモーターがある。
【０２４６】
一部の場合では、スイッチ受容体の発現は、誘導性であり得る（すなわち、誘導因子の存在によって制御される）。使用に適した誘導プロモーターの非限定的な例としては、テトラサイクリン応答性プロモーター、エクジソン応答性プロモーター、cumate応答性プロモーター、グルココルチコイド応答性プロモーター、エストロゲン応答性プロモーター、またはＲＵ−４８６応答性プロモーターがある。
【０２４７】
本明細書では、「条件付き発現」は、それだけに限らないが、誘導性発現；抑制性発現；特定の生理的、生物学的、または病態などを有する細胞または組織内の発現を含めた任意のタイプの条件付き発現を指すことができる。この定義は、細胞型または組織特異的な発現を除外するように意図されていない。本発明のある特定の実施形態は、目的のポリヌクレオチドの条件付き発現をもたらし、例えば、発現は、細胞、組織、生物体などを、ポリヌクレオチドを発現させる、または目的のポリヌクレオチドによってコードされるポリヌクレオチドの発現の増大もしくは低下を引き起こす処置または状態に付すことによって制御される。
【０２４８】
誘導プロモーター／システムの例示的な例としては、それだけに限らないが、グルココルチコイドまたはエストロゲン受容体をコードする遺伝子のプロモーターなどのステロイド誘導プロモーター（対応するホルモンを用いた処置による誘導性）、メタロチオネイン（metallothionine）プロモーター（様々な重金属を用いた処置によって誘導性）、ＭＸ−１プロモーター（インターフェロンによって誘導性）、「ＧｅｎｅＳｗｉｔｃｈ」ミフェプリストーン調節可能なシステム（Sirinら、２００３年、Gene、３２３巻：６７頁）、cumate誘導性遺伝子スイッチ（ＷＯ２００２／０８８３４６）、テトラサイクリン依存性調節システムなどがある。
【０２４９】
特定の実施形態における使用に適したプロモーターの例示的な例としては、それだけに限らないが、ニューロン特異的プロモーターがある。
【０２５０】
特定の実施形態では、本明細書に企図されるポリヌクレオチドは、ニューロン特異的プロモーターまたはニューロン細胞内で作動可能なプロモーターを含む。
【０２５１】
特定の実施形態では、本明細書に企図されるポリヌクレオチドは、三叉神経節（ＴＧＧ）ニューロンまたは後根神経節（ＤＲＧ）ニューロン内で作動可能なニューロン特異的プロモーターを含む。
【０２５２】
特定の実施形態では、本明細書に企図されるポリヌクレオチドは、カルシウム／カルモジュリン依存性プロテインキナーゼＩＩプロモーター、チューブリンアルファＩプロモーター、ニューロン特異的エノラーゼプロモーター、血小板由来増殖因子ベータ鎖プロモーター、ｈＳＹＮ１プロモーター、ＴＲＰＶ１プロモーター、Ｎａｖ１．７プロモーター、Ｎａｖ１．８プロモーター、Ｎａｖ１．９プロモーター、およびアドビリンプロモーターからなる群より選択されるニューロン特異的プロモーターを含む。
【０２５３】
一実施形態では、スイッチ受容体をコードするポリヌクレオチドに作動可能に連結したニューロン特異的プロモーターは、ヒトシナプシン１（ＳＹＮ１）プロモーターである。
【０２５４】
特定の実施形態では、本明細書に企図されるポリヌクレオチドは、部位特異的リコンビナーゼによって媒介される組換えのための少なくとも１つの（典型的には２つの）部位を含む。本明細書では、用語「リコンビナーゼ」または「部位特異的リコンビナーゼ」は、１つまたは複数の組換え部位（例えば、２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、７つ、８つ、９つ、１０またはそれよりも多くの）を伴う組換え反応に関与する切り出し可能な（excisive）もしくは統合タンパク質、酵素、コファクター、または付随タンパク質を含み、これは、野生型タンパク質（Landy、Current  Opinion  in  Biotechnology、３巻：６９９〜７０７頁（１９９３年）を参照）、またはこれらの突然変異体、誘導体（例えば、組換えタンパク質配列またはその断片を含有する融合タンパク質）、断片およびバリアントであり得る。本発明の特定の実施形態における使用に適したリコンビナーゼの例示的な例としては、それだけに限らないが、Ｃｒｅ、Ｉｎｔ、ＩＨＦ、Ｘｉｓ、Ｆｌｐ、Ｆｉｓ、Ｈｉｎ、Ｇｉｎ、ΦＣ３１、Ｃｉｎ、Ｔｎ３リゾルベース、ＴｎｄＸ、ＸｅｒＣ、ＸｅｒＤ、ＴｎｐＸ、Ｈｊｃ、Ｇｉｎ、ＳｐＣＣＥ１、およびＰａｒＡがある。
【０２５５】
ポリヌクレオチドは、多種多様な部位特異的リコンビナーゼのいずれかについて１つまたは複数の組換え部位を含み得る。本明細書では、用語「組換え配列」、「組換え部位」、または「部位特異的組換え部位」は、リコンビナーゼが認識および結合する特定の核酸配列を指す。
【０２５６】
例えば、Ｃｒｅリコンビナーゼの１つの組換え部位は、８塩基対コア配列が両端にある２つの１３塩基対逆方向反復（リコンビナーゼ結合部位として機能を果たす）を含む３４塩基対配列であるｌｏｘＰである（Sauer、B.、Current  Opinion  in  Biotechnology、５巻：５２１〜５２７頁（１９９４年）の図１を参照）。他の例示的なｌｏｘＰ部位としては、それだけに限らないが、ｌｏｘ５１１（Hoessら、１９９６年；BethkeおよびSauer、１９９７年）、ｌｏｘ５１７１（LeeおよびSaito、１９９８年）、ｌｏｘ２２７２（LeeおよびSaito、１９９８年）、ｍ２（Langerら、２００２年）、ｌｏｘ７１（Albertら、１９９５年）、およびｌｏｘ６６（Albertら、１９９５年）がある。
【０２５７】
ＦＬＰリコンビナーゼの適する認識部位としては、それだけに限らないが、ＦＲＴ（McLeodら、１９９６年）、Ｆ１、Ｆ２、Ｆ３（SchlakeおよびBode、１９９４年）、Ｆ４、Ｆ５（SchlakeおよびBode、１９９４年）、ＦＲＴ（ＬＥ）（Senecoffら、１９８８年）、ＦＲＴ（ＲＥ）（Senecoffら、１９８８年）がある。
【０２５８】
認識配列の他の例は、ａｔｔＢ、ａｔｔＰ、ａｔｔＬ、およびａｔｔＲ配列であり、これらは、リコンビナーゼ酵素λインテグラーゼ、例えば、ｐｈｉ−ｃ３１によって認識される。φＣ３１  ＳＳＲは、異型部位ａｔｔＢ（長さが３４ｂｐ）とａｔｔＰ（長さが３９ｂｐ）との間でのみ組換えを媒介する（Grothら、２０００年）。それぞれ細菌およびファージゲノム上のファージインテグラーゼの付着部位について名付けられたａｔｔＢおよびａｔｔＰは、ともにφＣ３１ホモ二量体によって結合されやすい不完全な逆方向反復を含有する（Grothら、２０００年）。産物部位、ａｔｔＬおよびａｔｔＲは、さらなるφＣ３１媒介組換えに対して有効に不活性であり（Beltekiら、２００３年）、反応を非可逆性にしている。挿入を触媒するために、ａｔｔＢ担持ＤＮＡは、ａｔｔＰ部位がゲノムａｔｔＢ部位内へ挿入するより容易にゲノムａｔｔＰ部位に挿入することが見出された（Thyagarajanら、２００１年；Beltekiら、２００３年）。よって、典型的なストラテジーは、相同組換えによってａｔｔＰ担持「ドッキング部位」を既定された遺伝子座内に適所配置し、次いでこれは、挿入のためのａｔｔＢ担持インカミング配列と組まれる。
【０２５９】
特定の実施形態では、本明細書に企図されるポリヌクレオチドとしては、１個または複数のポリペプチドをコードする１つまたは複数の目的のポリヌクレオチドがある。特定の実施形態では、ポリペプチドの複数のそれぞれの効率的な翻訳を実現するために、ポリヌクレオチド配列は、自己切断性ポリペプチドをコードする１個または複数のＩＲＥＳ配列またはポリヌクレオチド配列によって分離することができる。
【０２６０】
本明細書では、「内部リボソーム侵入部位」または「ＩＲＥＳ」は、シストロン（タンパク質コード領域）のＡＴＧなどの開始コドンへの直接的な内部リボソーム侵入を促進し、それにより遺伝子のｃａｐ非依存性翻訳をもたらすエレメントを指す。例えば、Jacksonら、１９９０年、Trends  Biochem  Sci、１５巻（１２号）：４７７〜８３頁）ならびにJacksonおよびKaminski、１９９５年、ＲＮＡ、１巻（１０号）：９８５〜１０００頁を参照。当業者によって一般に利用されるＩＲＥＳの例には、米国特許第６，６９２，７３６号に記載のものが含まれる。当技術分野で公知の「ＩＲＥＳ」のさらなる例としては、それだけに限らないが、ピコルナウイルス（Jacksonら、１９９０年）から入手可能なＩＲＥＳおよびウイルスまたは細胞ｍＲＮＡ源から入手可能なＩＲＥＳ、例えば、免疫グロブリン重鎖結合タンパク質（ＢｉＰ）、血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）（Huezら、１９９８年、Mol.  Cell.  Biol.、１８巻（１１号）：６１７８〜６１９０頁）、線維芽細胞増殖因子２（ＦＧＦ−２）、ならびにインスリン様増殖因子（ＩＧＦＩＩ）、翻訳開始因子ｅＩＦ４Ｇ、ならびに酵母転写因子ＴＦＩＩＤおよびＨＡＰ４、Ｎｏｖａｇｅｎから市販されている脳心筋炎（encephelomycarditis）ウイルス（ＥＭＣＶ）（Dukeら、１９９２年、J.  Virol、６６巻（３号）：１６０２〜９頁）、およびＶＥＧＦ  ＩＲＥＳ（Huezら、１９９８年、Mol  Cell  Biol、１８巻（１１号）：６１７８〜９０頁）がある。ＩＲＥＳは、Ｐｉｃｏｒｎａｖｉｒｉｄａｅ、Ｄｉｃｉｓｔｒｏｖｉｒｉｄａｅ、およびＦｌａｖｉｖｉｒｉｄａｅ種のウイルスゲノム内、ならびにＨＣＶ、フレンドネズミ白血病ウイルス（ＦｒＭＬＶ）、およびモロニーネズミ白血病ウイルス（ＭｏＭＬＶ）内でも報告されている。
【０２６１】
一実施形態では、本明細書において企図されるポリヌクレオチドにおいて使用されるＩＲＥＳは、ＥＭＣＶ  ＩＲＥＳである。
【０２６２】
特定の実施形態では、ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドは、コンセンサスコザック配列を含む。本明細書では、用語「コザック配列」は、リボソームの小サブユニットへのｍＲＮＡの最初の結合を大いに容易にし、翻訳を増大させる短いヌクレオチド配列を指す。コンセンサスコザック配列は、（ＧＣＣ）ＲＣＣＡＴＧＧ（配列番号２）であり、式中、Ｒは、プリン（ＡまたはＧ）である（Kozak、１９８６年、Cell.、４４巻（２号）：２８３〜９２頁およびKozak、１９８７年、Nucleic  Acids  Res.、１５巻（２０号）：８１２５〜４８頁）。
【０２６３】
特定の実施形態では、ポリヌクレオチドは、発現されるポリペプチドをコードするポリヌクレオチドのポリアデニル化配列３’を含む。ポリアデニル化配列は、コード配列の３’末端にポリＡテールを付加することによってｍＲＮＡ安定性を促進し、よって翻訳効率の増大に寄与することができる。切断およびポリアデニル化は、ＲＮＡ中のポリ（Ａ）配列によって指示される。哺乳動物プレｍＲＮＡのコアポリ（Ａ）配列は、切断−ポリアデニル化部位が両端にある２つの認識エレメントを有する。典型的には、ほとんど不変のＡＡＵＡＡＡ六量体は、ＵまたはＧＵ残基に富むより可変のエレメントの２０〜５０ヌクレオチド上流にある。初期転写物の切断は、これらの２つのエレメント間で行われ、５’切断産物への最大で２５０アデノシンの付加物に共役される。特定の実施形態では、コアポリ（Ａ）配列は、理想的なポリＡ配列（例えば、ＡＡＴＡＡＡ、ＡＴＴＡＡＡ、ＡＧＴＡＡＡ）である。特定の実施形態では、ポリ（Ａ）配列は、ＳＶ４０ポリＡ配列、ウシ成長ホルモンポリＡ配列（ＢＧＨｐＡ）、ウサギβ−グロビンポリＡ配列（ｒβｇｐＡ）、または当技術分野で公知の別の適する異種もしくは内因性ポリＡ配列である。
Ｇ．ポリペプチド
【０２６４】
本発明は、それだけに限らないが、ＧＰＣＲ、ＲＡＳＳＬ、ＤＲＥＡＤＤ、およびＬＧＩＣポリペプチド、ならびにこれらのサブユニットおよび突然変異タンパク質、ポリペプチド、融合ポリペプチド、ならびにポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを発現するベクターを含めたスイッチ受容体ポリペプチドを含む組成物を部分的に企図する。
【０２６５】
「ポリペプチド」、「ポリペプチド断片」、「ペプチド」、および「タンパク質」は、それとは反対に指定されていない限り、従来の意味に従って、すなわち、任意の長さのアミノ酸の配列またはポリマーとして互換的に使用される。一実施形態では、「ポリペプチド」には、融合ポリペプチドおよび他のバリアントが含まれる。ポリペプチドは、様々な周知の組換えおよび／または合成技法のいずれかを使用して調製することができる。ポリペプチドは、特異的な長さに限定されず、例えば、これらは、全長タンパク質配列、全長タンパク質の断片、または融合タンパク質を含み得、ポリペプチドの翻訳後修飾、例えば、グリコシル化、アセチル化、リン酸化など、ならびに天然に存在する、および天然に存在しない、当技術分野で公知の他の修飾を含み得る。ポリペプチドは、任意のタンパク質、ペプチド、タンパク質断片、またはそのコンポーネントであり得る。ポリペプチドは、自然界に天然に存在するタンパク質、または自然界に通常見出されないタンパク質であり得る。ポリペプチドは、標準的な２０のタンパク質建築アミノ酸から概ねなることができ、またはそれは、修飾されて非標準アミノ酸を組み込むことができる。ポリペプチドは、例えば、リン酸化、アセチル化、アシル化、ホルミル化、アルキル化、メチル化、脂質付加（例えば、パルミトイル化、ミリストイル化、プレニル化など）、ならびに炭水化物付加（例えば、Ｎ結合型およびＯ結合型グリコシル化など）を含めた任意の数の生化学的官能基を付加することにより、典型的には宿主細胞によって修飾することができる。ポリペプチドは、ジスルフィド架橋の形成またはタンパク質分解的切断などの宿主細胞内で構造変化を経ることができる。
【０２６６】
「単離ペプチド」または「単離ポリペプチド」などは、本明細書では、細胞環境から、および細胞の他のコンポーネントとの会合からのペプチドまたはポリペプチド分子のｉｎ  ｖｉｔｒｏ単離、精製、組換え産生、または合成を指し、すなわち、これは、ｉｎ  ｖｉｖｏ物質と有意に会合しない。
【０２６７】
ポリペプチドには、生物学的に活性の「ポリペプチド断片」が含まれる。本明細書では、用語「生物学的活性断片」または「最小限の生物学的活性断片」は、天然に存在するポリペプチド活性の少なくとも１００％、少なくとも９０％、少なくとも８０％、少なくとも７０％、少なくとも６０％、少なくとも５０％、少なくとも４０％、少なくとも３０％、少なくとも２０％、少なくとも１０％、または少なくとも５％を保持するポリペプチド断片を指す。ポリペプチド断片は、アミノ末端欠失、カルボキシル末端欠失、および／または天然に存在する、もしくは組換え産生されたポリペプチドの１個もしくは複数のアミノ酸の内部欠失もしくは置換を有する、単量体であっても多量体であってもよいポリペプチドを指す。ある特定の実施形態では、ポリペプチド断片は、少なくとも５〜約１７００アミノ酸の長さのアミノ酸鎖を含むことができる。ある特定の実施形態では、断片は、少なくとも５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、１００、１１０、１５０、２００、２５０、３００、３５０、４００、４５０、５００、５５０、６００、６５０、７００、７５０、８００、８５０、９００、９５０、１０００、１１００、１２００、１３００、１４００、１５００、１６００、１７００またはそれよりも多いアミノ酸の長さであることが察知されるであろう。
【０２６８】
ポリペプチドは、「ポリペプチドバリアント」を含む。ポリペプチドバリアントは、１個または複数のアミノ酸置換、欠失、付加、および／または挿入において天然に存在するポリペプチドと異なり得る。このようなバリアントは、天然に存在することができ、または例えば、スイッチ受容体ポリペプチド配列の１個または複数のアミノ酸を修飾することによって合成的に生成され（操作され）得る。例えば、特定の実施形態では、スイッチ受容体ポリペプチドの生物学的特性、またはポリペプチドへの１個もしくは複数の置換、欠失、付加、および／もしくは挿入を導入することによってスイッチ受容体の異種および／または合成リガンドへの結合特異性を改善することが望ましくあり得る。好ましくは、ポリペプチドバリアントは、本明細書に企図されるスイッチ受容体ポリペプチドと少なくとも約６５％、７０％、７１％、７２％、７３％、７４％、７５％、７６％、７７％、７８％、７９％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％，８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％のアミノ酸同一性を有するポリペプチドを含む。
【０２６９】
上述したように、本明細書に企図されるポリペプチドは、アミノ酸置換、欠失、トランケーション、および挿入を含めて様々なやり方で変更され得る。特定の実施形態では、スイッチポリペプチドの１個または複数のアミノ酸は、スイッチ受容体に固有なリガンド結合特性を付与するように変更される。このようなマニピュレーションの方法は、当技術分野で一般に公知である。例えば、参照ポリペプチドのアミノ酸配列バリアントは、ＤＮＡ中の突然変異によって調製することができる。突然変異誘発およびヌクレオチド配列変更の方法は、当技術分野で周知である。例えば、Kunkel（１９８５年、Proc.  Natl.  Acad.  Sci.  USA.、８２巻：４８８〜４９２頁）、Kunkelら（１９８７年、Methods  in  Enzymol、１５４巻：３６７〜３８２頁）、米国特許第４，８７３，１９２号、Watson,  J.  D.ら（Molecular  Biology  of  the  Gene、４版、Benjamin/Cummings、Menlo  Park、Calif.、１９８７年）、およびこれらに引用された参考文献を参照。目的のタンパク質の生物活性に影響しない適切なアミノ酸置換に関するガイダンスは、Dayhoffら（１９７８年）Atlas  of  Protein  Sequence  and  Structure（Natl.  Biomed.  Res.  Found.、Washington,D.C.）のモデルにおいて見出すことができる。
【０２７０】
ある特定の実施形態では、バリアントは、１個または複数の保存的置換を含有することになる。「保存的置換」は、ペプチド化学の当業者が、ポリペプチドの二次構造およびヒドロパシー性（hydropathic  nature）が実質的に変化されないことを予期するように、類似の特性を有する別のアミノ酸がアミノ酸で置換されるものである。修飾は、本発明のポリヌクレオチドおよびポリペプチドの構造体において行うことができ、望ましい特徴を有するバリアントまたは誘導体ポリペプチドをコードする機能分子を依然として得る。ポリペプチドのアミノ酸配列を変更して、等価物、またはさらには本発明の改善されたバリアントポリペプチドを作出することが望まれる場合、当業者は、例えば、表３によるコードＤＮＡ配列のコドンの１個または複数を変化させることができる。
【表３】
2018531926.tif 000005
【０２７１】
どのアミノ酸残基が生物活性を無効にすることなく置換、挿入、または欠失され得るかの判定におけるガイダンスは、ＤＮＡＳＴＡＲ（商標）ソフトウェアなどの当技術分野で周知のコンピュータープログラムを使用して見出すことができる。好ましくは、本明細書に開示のタンパク質バリアントにおけるアミノ酸変化は、保存的アミノ酸変化、すなわち、同様に荷電したまたは無荷電アミノ酸の置換である。保存的アミノ酸変化は、これらの側鎖に関連したアミノ酸のファミリーの１つの置換を伴う。天然に存在するアミノ酸は、４つのファミリー：酸性（アスパラギン酸、グルタミン酸）、塩基性（リシン、アルギニン、ヒスチジン）、非極性（アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、フェニルアラニン、メチオニン、トリプトファン）、および無荷電極性（グリシン、アスパラギン、グルタミン、システイン、セリン、トレオニン、チロシン）アミノ酸に一般に分類される。フェニルアラニン、トリプトファン、およびチロシンは、時に芳香族アミノ酸として合同で分類される。ペプチドまたはタンパク質において、アミノ酸の適する保存的置換は、当業者に公知であり、一般に、結果として生じる分子の生物活性を変更することなく行うことができる。当業者は一般に、ポリペプチドの非必須領域内での単一アミノ酸置換は、生物活性を実質的に変更しないことを認識する（例えば、Watsonら、Molecular  Biology  of  the  Gene、４版、１９８７年、The  Benjamin/Cummings  Pub.  Co.、２２４頁を参照）。
【０２７２】
このような変化を行うことにおいて、アミノ酸のハイドロパシー指数を考慮することができる。タンパク質に双方向生物学的機能を付与することにおけるハイドロパシーアミノ酸指数の重要性は、当技術分野で一般に理解されている（参照により本明細書に組み込まれている、KyteおよびDoolittle、１９８２年）。各アミノ酸は、その疎水性および帯電特性（KyteおよびDoolittle、１９８２年）に基づいてハイドロパシー指数を割り当てられている。これらの値は、イソロイシン（＋４．５）；バリン（＋４．２）；ロイシン（＋３．８）；フェニルアラニン（＋２．８）；システイン／システイン（＋２．５）；メチオニン（＋１．９）；アラニン（＋１．８）；グリシン（−０．４）；トレオニン（−０．７）；セリン（−０．８）；トリプトファン（−０．９）；チロシン（−１．３）；プロリン（−１．６）；ヒスチジン（−３．２）；グルタミン酸（−３．５）；グルタミン（−３．５）；アスパラギン酸（−３．５）；アスパラギン（−３．５）；リシン（−３．９）；およびアルギニン（−４．５）である。
【０２７３】
ある特定のアミノ酸を類似のハイドロパシー指数またはスコアを有する他のアミノ酸によって置換することができ、類似の生物活性を有するタンパク質を依然としてもたらし、すなわち、依然として生物学的機能的に等価なタンパク質を得ることができることが当技術分野で公知である。このような変化を行うことにおいて、ハイドロパシー指数が±２内であるアミノ酸置換が好適であり、±１内のものが特に好適であり、±０．５内のものがさらにより特に好適である。似たアミノ酸の置換を親水性に基づいて有効に行うことができることも当技術分野において理解される。
【０２７４】
米国特許第４，５５４，１０１号に詳述されているように、以下の親水性値がアミノ酸残基に割り当てられている：アルギニン（＋３．０）；リシン（＋３．０）；アスパラギン酸（＋３．０±１）；グルタミン酸（＋３．０±１）；セリン（＋０．３）；アスパラギン（＋０．２）；グルタミン（＋０．２）；グリシン（０）；トレオニン（−０．４）；プロリン（−０．５±１）；アラニン（−０．５）；ヒスチジン（−０．５）；システイン（−１．０）；メチオニン（−１．３）；バリン（−１．５）；ロイシン（−１．８）；イソロイシン（−１．８）；チロシン（−２．３）；フェニルアラニン（−２．５）；トリプトファン（−３．４）。アミノ酸は、類似の親水性値を有する別のものを置換し、依然として生物学的に等価な、特に、免疫学的に等価なタンパク質を得ることができることが理解される。このような変化において、親水性値が±２内であるアミノ酸の置換が好適であり、±１内のものが特に好適であり、±０．５内のものがさらにより特に好適である。
【０２７５】
上記に概説したように、アミノ酸置換は、アミノ酸側鎖置換基の相対的な類似性、例えば、これらの疎水性、親水性、電荷、サイズなどに基づき得る。
【０２７６】
ポリペプチドバリアントには、グリコシル化形態、他の分子との凝集コンジュゲート、および無関係の化学部分（例えば、ペグ化分子）との共有結合性コンジュゲートがさらに含まれる。共有結合バリアントは、アミノ酸鎖において、または当技術分野で公知であるように、ＮもしくはＣ末端残基で見出される基に機能性を連結することによって調製することができる。バリアントには、対立遺伝子バリアント、種バリアント、および突然変異タンパク質も含まれる。タンパク質の機能活性に影響しない領域のトランケーションまたは欠失もバリアントである。
【０２７７】
本発明のポリペプチドは、融合ポリペプチドを含む。特定の実施形態では、融合ポリペプチドおよび融合ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドが提供されている。融合ポリペプチドおよび融合タンパク質は、少なくとも２、３、４、５、６、７、８、９、または１０のポリペプチドセグメントを有するポリペプチドを指す。
【０２７８】
融合ポリペプチドは、それだけに限らないが、細胞透過性ペプチドドメイン（ＣＰＰ）、ＺｎフィンガーＤＮＡ結合ドメイン、ヌクレアーゼドメイン、クロマチンリモデリングドメイン、ヒストン修飾ドメイン、およびエピジェネティックな修飾ドメイン、エピトープタグ（例えば、マルトース結合タンパク質（「ＭＢＰ」）、グルタチオンＳトランスフェラーゼ（ＧＳＴ）、ＨＩＳ６、ＭＹＣ、ＦＬＡＧ、Ｖ５、ＶＳＶ−Ｇ、およびＨＡ）、ポリペプチドリンカー、およびポリペプチド切断シグナルを含めた１つまたは複数のポリペプチドドメインまたはセグメントを含み得る。融合ポリペプチドは、典型的にはＣ末端からＮ末端に連結されているが、Ｃ末端からＣ末端、Ｎ末端からＮ末端、Ｎ末端からＣ末端に連結されている場合もある。融合タンパク質のポリペプチドは、任意の順序で存在し得る。融合ポリペプチドまたは融合タンパク質は、融合ポリペプチドの所望の転写活性が保存される限り、保存的に修飾されたバリアント、多型バリアント、対立遺伝子、突然変異体、部分配列、および種間相同体を含み得る。融合ポリペプチドは、化学合成法によって、もしくは２つの部分間の化学結合によって生成することができ、または一般に他の標準技法を使用して調製することができる。融合ポリペプチドを含むライゲーションされたＤＮＡ配列は、本明細書の他の場所で論じられた通り適する転写または翻訳制御エレメントに作動可能に連結されている。
【０２７９】
融合ポリペプチドは、１個または複数のポリペプチドに連結するように使用することができるリンカーを任意選択で含み得る。ペプチドリンカー配列は、各ポリペプチドがフォールドしてポリペプチドドメインがこれらの所望の機能を発揮することを可能にするために、その適切な二次および三次構造になることを補償するのに十分な距離によって任意の２つまたはそれよりも多いポリペプチドコンポーネントを分離するのに利用することができる。このようなペプチドリンカー配列は、当技術分野における標準技法を使用する融合ポリペプチド中に組み込まれる。適するペプチドリンカー配列は、以下の因子：（１）柔軟なエクステンドされたコンフォメーションを採用するこれらの能力；（２）第１のおよび第２のポリペプチド上の機能性エピトープと相互作用することができる二次構造を採用することのこれらの不能；ならびに（３）ポリペプチド機能性エピトープと反応し得る疎水性または荷電残基の欠如に基づいて選択され得る。好適なペプチドリンカー配列は、Ｇｌｙ、Ａｓｎ、およびＳｅｒ残基を含有する。ＴｈｒおよびＡｌａなどの他の中性付近のアミノ酸をリンカー配列内に使用することもできる。リンカーとして有用に利用され得るアミノ酸配列としては、Marateaら、Gene、４０巻：３９〜４６頁、１９８５年；Murphyら、Proc.Natl.Acad.Sci.USA、８３巻：８２５８〜８２６２頁、１９８６年；米国特許第４，９３５，２３３号、および米国特許第４，７５１，１８０号に開示されたものがある。リンカー配列は、特定の融合ポリペプチドセグメントが機能ドメインを分離し、立体干渉を防止するのに使用することができる非必須Ｎ末端アミノ酸領域を含有するとき、必要とされない。好適なリンカーは、組換え融合タンパク質の一部として合成される典型的には柔軟なアミノ酸部分配列である。リンカーポリペプチドは、間のすべての整数値を含めて１から２００アミノ酸の長さ、１から１００アミノ酸の長さ、または１から５０アミノ酸の長であり得る。
【０２８０】
例示的なリンカーは、それだけに限らないが、以下のアミノ酸配列：ＤＧＧＧＳ（配列番号３）；ＴＧＥＫＰ（配列番号４）（例えば、Liuら、PNAS、５５２５〜５５３０頁（１９９７年）を参照）；ＧＧＲＲ（配列番号５）（Pomerantzら、１９９５年、上記）；（ＧＧＧＧＳ）ｎ（配列番号６）（Kimら、PNAS、９３巻、１１５６〜１１６０頁（１９９６年）；ＥＧＫＳＳＧＳＧＳＥＳＫＶＤ（配列番号７）（Chaudharyら、１９９０年、Proc.  Natl.  Acad.  Sci.  U.S.A.、８７巻：１０６６〜１０７０頁）；ＫＥＳＧＳＶＳＳＥＱＬＡＱＦＲＳＬＤ（配列番号８）（Birdら、１９８８年、Science、２４２巻：４２３〜４２６頁）、ＧＧＲＲＧＧＧＳ（配列番号９）；ＬＲＱＲＤＧＥＲＰ（配列番号１０）；ＬＲＱＫＤＧＧＧＳＥＲＰ（配列番号１１）；ＬＲＱＫｄ（ＧＧＧＳ）２ＥＲＰ（配列番号１２）を含む。代替として、可動性リンカーは、ＤＮＡ−結合部位およびペプチド自体の両方をモデル化することができるコンピュータープログラム（DesjarlaisおよびBerg、PNAS、９０巻：２２５６〜２２６０頁（１９９３年）、PNAS、９１巻：１１０９９〜１１１０３頁（１９９４年））を使用して、またはファージディスプレイ法によって合理的に設計することができる。
【０２８１】
融合ポリペプチドは、本明細書に記載したポリペプチドドメインのそれぞれの間にポリペプチド切断シグナルをさらに含み得る。さらに、ポリペプチド部位は、任意のリンカーペプチド配列中に入れることができる。例示的なポリペプチド切断シグナルとしては、ポリペプチド切断認識部位、例えば、プロテアーゼ切断部位、ヌクレアーゼ切断部位（例えば、希有な制限酵素認識部位、自己切断性リボザイム認識部位）、ならびに自己切断性ウイルスオリゴペプチド（deFelipeおよびRyan、２００４年、Traffic、５巻（８号）；６１６〜２６頁を参照）などがある。
【０２８２】
適するプロテアーゼ切断部位および自己切断ペプチドは、当業者に公知である（例えば、Ryanら、１９９７年、J.  Gener.  Virol.、７８巻、６９９〜７２２頁；Scymczakら（２００４年）、Nature  Biotech.、５巻、５８９〜５９４頁におけるものを参照）。例示的なプロテアーゼ切断部位としては、それだけに限らないが、ポチウイルスＮＩａプロテアーゼの切断部位（例えば、タバコエッチウイルスプロテアーゼ）、ポチウイルスＨＣプロテアーゼ、ポチウイルスＰ１（Ｐ３５）プロテアーゼ、ビオウイルス（byovirus）ＮＩａプロテアーゼ、ビオウイルスＲＮＡ−２コードプロテアーゼ、アフタウイルスＬプロテアーゼ、エンテロウイルス２Ａプロテアーゼ、ライノウイルス２Ａプロテアーゼ、ピコルナ３Ｃプロテアーゼ、コモウイルス２４Ｋプロテアーゼ、ネポウイルス２４Ｋプロテアーゼ、ＲＴＳＶ（ｒｉｃｅ  ｔｕｎｇｒｏ球形ウイルス）３Ｃ様プロテアーゼ、ＰＹＶＦ（パースニップ黄色斑点ウイルス）３Ｃ−様プロテアーゼ、ヘパリン、トロンビン、第Ｘａ因子、およびエンテロキナーゼがある。その高切断ストリンジェンシーに起因して、一実施形態ではＴＥＶ（タバコエッチウイルス）プロテアーゼ切断部位が好適である、例えば、ＥＸＸＹＸＱ（Ｇ／Ｓ）（配列番号１３）、例えば、ＥＮＬＹＦＱＧ（配列番号１４）、およびＥＮＬＹＦＱＳ（配列番号１５）であり、Ｘは、任意のアミノ酸を表す（ＴＥＶによる切断は、ＱとＧまたはＱとＳとの間で起こる）。
【０２８３】
ある特定の実施形態では、自己切断ポリペプチド部位は、２Ａもしくは２Ａ様部位、配列、またはドメインを含む（Donnellyら、２００１年、J.  Gen.  Virol．、８２巻：１０２７〜１０４１頁）。特定の実施形態では、ウイルス２Ａペプチドは、アフタウイルス２Ａペプチド、ポチウイルス２Ａペプチド、またはカルジオウイルス２Ａペプチドである。一実施形態では、ウイルス２Ａペプチドは、口蹄疫ウイルス（ＦＭＤＶ）２Ａペプチド、ウマ鼻炎Ａウイルス（ＥＲＡＶ）２Ａペプチド、Ｔｈｏｓｅａ  ａｓｉｇｎａウイルス（ＴａＶ）２Ａペプチド、ブタテスコウイルス−１（ＰＴＶ−１）２Ａペプチド、Ｔｈｅｉｌｏｖｉｒｕｓ  ２Ａペプチド、および脳心筋炎ウイルス２Ａペプチドからなる群より選択される。
Ｈ．ウイルスベクター
【０２８４】
一部の態様では、スイッチ受容体をコードする核酸分子は、対象に送達される。一部の場合では、スイッチ受容体をコードする核酸分子は、ベクターによって対象に送達される。様々な実施形態では、ベクターは、本明細書に企図される１つまたは複数のポリヌクレオチド配列を含む。用語「ベクター」は、別の核酸分子を移し、または輸送することができる核酸分子を指すのに本明細書で使用される。移された核酸は一般に、ベクター核酸分子に連結され、例えばこの分子中に挿入される。ベクターは、細胞内で自律複製を指示する配列を含み得、または宿主細胞ＤＮＡ内への一体化を可能にするのに十分な配列を含み得る。ベクターは、生物体、細胞、または細胞コンポーネントに標的核酸を送達することができる。一部の場合では、ベクターは、発現ベクターである。「発現ベクター」は、本明細書では、そこに組み込まれる核酸の発現ならびに複製を促進することができるベクター、例えば、プラスミドを指す。典型的には、発現される核酸は、プロモーターおよび／またはエンハンサーに「作動可能に連結しており」、プロモーターおよび／またはエンハンサーによる転写調節制御に付される。特定の場合では、ベクターは、対象に本開示のスイッチ受容体をコードする核酸分子を送達するのに使用される。
【０２８５】
特定の実施形態では、ニューロン細胞内にスイッチ受容体をコードする発現カセットまたはポリヌクレオチドを導入するのに適した任意のベクターを、利用することができる。適するベクターの例示的な例としては、例えば、プラスミド（例えば、ＤＮＡプラスミドまたはＲＮＡプラスミド）、トランスポゾン、コスミド、細菌人工染色体、およびウイルスベクターがある。一部の場合では、ベクターは、環状核酸であり、例えば、プラスミド、ＢＡＣ、ＰＡＣ、ＹＡＣ、コスミド、フォスミドなどである。一部の場合では、環状核酸分子は、対象にスイッチ受容体をコードする核酸分子を送達するのに利用することができる。例えば、スイッチ受容体をコードするプラスミドＤＮＡ分子は、対象の細胞内に導入することができ、それによりスイッチ受容体をコードするＤＮＡ配列がｍＲＮＡ内に転写され、ｍＲＮＡ「メッセージ」は、タンパク質産物へと翻訳される。環状核酸ベクターは一般に、標的タンパク質の発現を調節する調節エレメントを含むことになる。例えば、環状核酸ベクターは、任意の数のプロモーター、エンハンサー、ターミネーター、スプライスシグナル、複製起点、開始シグナルなどを含み得る。
【０２８６】
一部の場合では、ベクターは、レプリコンを含むことができる。レプリコンは、自己複製をすることができる任意の核酸分子であり得る。一部の場合では、レプリコンは、ウイルスに由来するＲＮＡレプリコンである。それだけに限らないが、アルファウイルス、ピコルナウイルス、フラビウイルス、コロナウイルス、ペスチウイルス、ルビウイルス、カリチウイルス（calcivirus）、およびヘパシウイルスを含めて様々な適するウイルス（例えば、ＲＮＡウイルス）が利用可能である。
【０２８７】
一実施形態では、ベクターは、ウイルスベクターである。一部の場合では、ウイルスベクターは、複製欠損ウイルスに由来する。対象に本開示の核酸分子を送達するのに適したウイルスベクターの非限定的な例としては、アデノウイルス、レトロウイルス（例えば、レンチウイルス）、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）、および単純ヘルペス−１（ＨＳＶ−１）に由来するものがある。適するウイルスベクターの例示的な例としては、それだけに限らないが、レトロウイルスベクター（例えば、レンチウイルスベクター）、ヘルペスウイルスベースベクター、およびパルボウイルスベースベクター（例えば、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベースベクター、ＡＡＶ−アデノウイルスキメラベクター、およびアデノウイルスベースベクター）がある。
【０２８８】
用語「パルボウイルス」は、本明細書では、自律複製パルボウイルス、およびデペンドウイルスを含めたすべてのパルボウイルスを包含する。自律性パルボウイルスは、Ｐａｒｖｏｖｉｒｕｓ属、Ｅｒｙｔｈｒｏｖｉｒｕｓ属、Ｄｅｎｓｏｖｉｒｕｓ属、Ｉｔｅｒａｖｉｒｕｓ属およびＣｏｎｔｒａｖｉｒｕｓ属のメンバーを含む。例示的な自律性パルボウイルスとしては、それだけに限らないが、マウスマイニュートウイルス、ウシパルボウイルス、イヌパルボウイルス、ニワトリパルボウイルス、ネコ汎白血球減少症ウイルス、ネコパルボウイルス、ガチョウパルボウイルス、およびＢ１９ウイルスがある。他の自律性パルボウイルスは、当業者に公知である。例えば、Fieldsら、１９９６年、Virology、２巻、６９章（３版、Lippincott-Raven  Publishers）を参照。
【０２８９】
Ｄｅｐｅｎｄｏｖｉｒｕｓ属は、それだけに限らないが、ＡＡＶ１型、ＡＡＶ２型、ＡＡＶ３型、ＡＡＶ４型、ＡＡＶ５型、ＡＡＶ６型、トリＡＡＶ、ウシＡＡＶ、イヌＡＡＶ、ウマＡＡＶ、およびヒツジＡＡＶを含めたアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）を含有する。
【０２９０】
好適な実施形態においては、ベクターは、ＡＡＶベクターである。特定の場合では、ウイルスベクターは、ＡＡＶ−６またはＡＡＶ９ベクターである。一部の実施形態では、ＡＡＶベクターは、配列番号１を含む。
【０２９１】
すべての公知のＡＡＶ血清型のゲノム機構は、類似している。ＡＡＶのゲノムは、長さが約５，０００ヌクレオチド（ｎｔ）未満である線状一本鎖ＤＮＡ分子である。逆方向末端反復（ＩＴＲ）は、非構造複製（Ｒｅｐ）タンパク質および構造（ＶＰ）タンパク質の固有なコードヌクレオチド配列を両端に有する。ＶＰタンパク質（ＶＰｌ、−２、および−３）は、カプシドを形成し、ウイルスの指向性に寄与する。末端１４５ｎｔ  ＩＴＲは、自己相補性であり、組織化されており、その結果、Ｔ字型ヘアピンを形成するエネルギー的に安定な分子内デュプレックスが形成され得る。これらのヘアピン構造は、ウイルスＤＮＡ複製の起源として機能し、細胞ＤＮＡポリメラーゼ複合体のプライマーとして機能を果たす。哺乳動物細胞内での野生型（ｗｔ）ＡＡＶ感染後、Ｒｅｐ遺伝子が発現され、ウイルスゲノムの複製において機能する。
【０２９２】
一部の場合では、ウイルスベクターの外側タンパク質「カプシド」、例えば、ＡＡＶ−１、ＡＡＶ−２、ＡＡＶ−３、ＡＡＶ−４、ＡＡＶ−５、ＡＡＶ−６、ＡＡＶ−７、ＡＡＶ−８、ＡＡＶ−９、ＡＡＶ−１０は、自然界に存在する。特定の場合では、カプシドは、指向性の変更、形質導入効率の増大、または免疫回避など自然界に存在しないある特定の固有な特徴を有するように合成的に操作されている（例えば、指向進化または合理的な設計を通じて）。合理的に設計されたカプシドの例は、ＶＰ３ウイルスカプシドタンパク質上の１つまたは複数の表面曝露チロシン（Ｙ）、セリン（Ｓ）、トレオニン（Ｔ）、およびリシン（Ｋ）残基の突然変異である。ＶＰ３カプシドタンパク質が合成的に操作されており、本明細書に提供する組成物および方法を用いた使用に適用できるウイルスベクターの非限定的な例としては、ＡＡＶ１（Ｙ７０５＋７３１Ｆ＋Ｔ４９２Ｖ）、ＡＡＶ２（Ｙ４４４＋５００＋７３０Ｆ＋Ｔ４９１Ｖ）、ＡＡＶ３（Ｙ７０５＋７３１Ｆ）、ＡＡＶ５（Ｙ４３６＋６９３＋７１９Ｆ）、ＡＡＶ６（Ｙ７０５＋７３１Ｆ＋Ｔ４９２Ｖ）、ＡＡＶ８（Ｙ７３３Ｆ）、ＡＡＶ９（Ｙ７３１Ｆ）、およびＡＡＶ１０（Ｙ７３３Ｆ）がある。指向進化を通じて操作されており、本明細書に提供する組成物および方法を用いた使用に適用できるウイルスベクターの非限定的な例としては、ＡＡＶ−７ｍ８およびＡＡＶ−ＳｈＨ１０が含まれる。
【０２９３】
本明細書の「組換えパルボウイルスまたはＡＡＶベクター」（もしくは「ｒＡＡＶベクター」）は、本明細書に企図される１つまたは複数のポリヌクレオチドを含むベクターを指し、１つまたは複数のＡＡＶ  ＩＴＲを両端に有する。このようなｒＡＡＶベクターは、ＡＡＶ  ｒｅｐおよびｃａｐ遺伝子産物（すなわち、ＡＡＶ  ＲｅｐおよびＣａｐタンパク質）を発現している昆虫宿主細胞内に存在するとき感染性ウイルス粒子内に複製およびパッケージすることができる。より大きい核酸構築物（例えば、染色体内、またはクローニングもしくはトランスフェクションに使用されるプラスミドもしくはバキュロウイルスなどの別のベクター内）中に組み込まれているとき、ｒＡＡＶベクターは、「プロベクター」と典型的には呼ばれ、ＡＡＶパッケージング機能および必要なヘルパー機能の存在下での複製およびキャプシド形成によって「レスキュー」することができる。
【０２９４】
特定の実施形態では、任意のＡＡＶ  ＩＴＲは、ＡＡＶ１、ＡＡＶ２、ＡＡＶ３、ＡＡＶ４、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６、ＡＡＶ７、ＡＡＶ８、ＡＡＶ９、ＡＡＶ１０、ＡＡＶ１１、ＡＡＶ１２、ＡＡＶ１３、ＡＡＶ１４、ＡＡＶ１５、およびＡＡＶ１６由来のＩＴＲを含めたＡＡＶベクターにおいて使用することができる。好適な一実施形態では、本明細書に企図されるＡＡＶベクターは、１つまたは複数のＡＡＶ２  ＩＴＲを含む。
【０２９５】
２つのＩＴＲを含むｒＡＡＶベクターは、約４．４ｋＢのペイロード能力を有する。自己相補性ｒＡＡＶベクターは、第３のＩＴＲを含有し、本明細書で企図されるポリヌクレオチドについてわずか約２．１ｋＢを残してベクターの組換え部分の２本の鎖をパッケージする。一実施形態では、ＡＡＶベクターは、ｓｃＡＡＶベクターである。
【０２９６】
ｒＡＡＶ（約９ｋＢ）のパッケージング能力のおおよそ２倍である拡張されたパッケージング能力は、デュアルｒＡＡＶベクターストラテジーを使用して実現された。本明細書に企図されるｒＡＡＶを産生するのに有用なデュアルベクターストラテジーは、それだけに限らないが、スプライシング（トランススプライシング）、相同組換え（重複）、または２つの組合せ（ハイブリッド）を含む。デュアルＡＡＶトランススプライシングストラテジーでは、スプライスドナー（ＳＤ）シグナルが５’−ハーフベクター（half  vector）の３’末端に配置され、スプライスアクセプター（ＳＡ）シグナルが３’−ハーフベクターの５’末端に配置される。２つの片割れのデュアルＡＡＶベクターおよび逆方向末端反復（ＩＴＲ）媒介ヘッドトゥテールコンカテマー化によって同じ細胞を同時感染させると、トランススプライシングは、成熟したｍＲＮＡおよびフルサイズタンパク質の産生をもたらす（Yanら、２０００年）。トランススプライシングは、筋肉および網膜内の大きい遺伝子を発現させるのに順調に使用されている（Reichら、２００３年；Laiら、２００５年）。代替として、デュアルＡＡＶベクター内に含有された大きい導入遺伝子発現カセットの２つの片割れは相同重複配列を含有し得（５’−ハーフベクターの３’末端で、かつ３’−ハーフベクターの５’末端で、デュアルＡＡＶ重複）、相同組換えによる単一の大きいゲノムの再構成を媒介することになる（Duanら、２００１年）。このストラテジーは、導入遺伝子重複配列の組換え特性に依存する（Ghoshら、２００６年）。第３のデュアルＡＡＶストラテジー（ハイブリッド）は、トランススプライシングベクターに外来遺伝子（すなわち、アルカリホスファターゼ；Ghoshら、２００８年、Ghoshら、２０１１年）由来の高度組換え領域を付加することに基づく。付加された領域は、５’−ハーフベクターにおけるＳＤシグナルの下流およびデュアルＡＡＶ間の組換えを増大させるために、３’−ハーフベクターにおけるＳＡシグナルの上流に配置される。
【０２９７】
「ハイブリッドＡＡＶ」または「ハイブリッドｒＡＡＶ」は、異なるＡＡＶ血清型（かつ好ましくは１つもしくは複数のＡＡＶ  ＩＴＲ由来の異なる血清型の）のカプシドでパッケージされたｒＡＡＶゲノムを指し、別段にシュードタイプｒＡＡＶと呼ばれる場合がある。例えば、ｒＡＡＶタイプ１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、または１６ゲノムは、ＡＡＶタイプ１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、もしくは１６カプシド、またはそのバリアント内でカプシド形成することができ、ただし、ＡＡＶカプシドおよびゲノム（ならびに好ましくは１つまたは複数のＡＡＶ  ＩＴＲ）は、異なる血清型のものである。ある特定の実施形態では、シュードタイプｒＡＡＶ粒子は、タイプ「ｘ／ｙ」のものであると呼ばれ、式中、「ｘ」は、ＩＴＲの源を示し、「ｙ」は、カプシドの血清型を示し、例えば、２／５  ｒＡＡＶ粒子は、ＡＡＶ２由来のＩＴＲおよびＡＡＶ６由来のカプシドを有する。
【０２９８】
一例示的な実施形態では、ＡＡＶベクターは、１種または複数のＡＡＶ  ＩＴＲ、ならびにＡＡＶ１、ＡＡＶ１（Ｙ７０５＋７３１Ｆ＋Ｔ４９２Ｖ）、ＡＡＶ２（Ｙ４４４＋５００＋７３０Ｆ＋Ｔ４９１Ｖ）、ＡＡＶ３（Ｙ７０５＋７３１Ｆ）、ＡＡＶ５、ＡＡＶ５（Ｙ４３６＋６９３＋７１９Ｆ）、ＡＡＶ６、ＡＡＶ６（ＶＰ３バリアントＹ７０５Ｆ／Ｙ７３１Ｆ／Ｔ４９２Ｖ）、ＡＡＶ−７ｍ８、ＡＡＶ８、ＡＡＶ８（Ｙ７３３Ｆ）、ＡＡＶ９、ＡＡＶ９（ＶＰ３バリアントＹ７３１Ｆ）、ＡＡＶ１０（Ｙ７３３Ｆ）、およびＡＡＶ−ＳｈＨ１０からなる群より選択されるＡＡＶ血清型由来の１種または複数のカプシドタンパク質を含む。
【０２９９】
一例示的な実施形態では、ＡＡＶベクターは、１つまたは複数のＡＡＶ２  ＩＴＲ、ならびにＡＡＶ１、ＡＡＶ１（Ｙ７０５＋７３１Ｆ＋Ｔ４９２Ｖ）、ＡＡＶ２（Ｙ４４４＋５００＋７３０Ｆ＋Ｔ４９１Ｖ）、ＡＡＶ３（Ｙ７０５＋７３１Ｆ）、ＡＡＶ５、ＡＡＶ５（Ｙ４３６＋６９３＋７１９Ｆ）、ＡＡＶ６、ＡＡＶ６（ＶＰ３バリアントＹ７０５Ｆ／Ｙ７３１Ｆ／Ｔ４９２Ｖ）、ＡＡＶ−７ｍ８、ＡＡＶ８、ＡＡＶ８（Ｙ７３３Ｆ）、ＡＡＶ９、ＡＡＶ９（ＶＰ３バリアントＹ７３１Ｆ）、ＡＡＶ１０（Ｙ７３３Ｆ）、およびＡＡＶ−ＳｈＨ１０からなる群より選択されるＡＡＶ血清型由来の１つまたは複数のカプシドタンパク質を含む。
【０３００】
一例示的な実施形態では、ＡＡＶベクターは、１つまたは複数のＡＡＶ２  ＩＴＲ、ならびにＡＡＶ１、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６、ＡＡＶ６（ＶＰ３バリアントＹ７０５Ｆ／Ｙ７３１Ｆ／Ｔ４９２Ｖ）、ＡＡＶ８、ＡＡＶ９、およびＡＡＶ９（ＶＰ３バリアントＹ７３１Ｆ）からなる群より選択されるＡＡＶ血清型由来の１つまたは複数のカプシドタンパク質を含む。
【０３０１】
別の例示的な実施形態では、ＡＡＶベクターは、１種または複数のＡＡＶ２  ＩＴＲ、ならびにＡＡＶ６、ＡＡＶ６（ＶＰ３バリアントＹ７０５Ｆ／Ｙ７３１Ｆ／Ｔ４９２Ｖ）、ＡＡＶ９、およびＡＡＶ９（ＶＰ３バリアントＹ７３１Ｆ）からなる群より選択されるＡＡＶ血清型由来の１種または複数のカプシドタンパク質を含む。
【０３０２】
一例示的な実施形態では、ＡＡＶベクターは、１種または複数のＡＡＶ２  ＩＴＲ、ならびにＡＡＶ９およびＡＡＶ９（ＶＰ３バリアントＹ７３１Ｆ）からなる群より選択されるＡＡＶ血清型由来の１種または複数のカプシドタンパク質を含む。
【０３０３】
一例示的な実施形態では、ＡＡＶベクターは、１種または複数のＡＡＶ２  ＩＴＲ、ならびにＡＡＶ６およびＡＡＶ６（ＶＰ３バリアントＹ７０５Ｆ／Ｙ７３１Ｆ／Ｔ４９２Ｖ）からなる群より選択されるＡＡＶ血清型由来の１種または複数のカプシドタンパク質を含む。
【０３０４】
一例示的な実施形態では、ＡＡＶベクターは、１種または複数のＡＡＶ２  ＩＴＲおよびＡＡＶ６血清型由来の１種または複数のカプシドタンパク質を含む。
【０３０５】
一例示的な実施形態では、ＡＡＶベクターは、１つまたは複数のＡＡＶ２  ＩＴＲおよびＡＡＶ６（ＶＰ３バリアントＹ７０５Ｆ／Ｙ７３１Ｆ／Ｔ４９２Ｖ）血清型由来の１種または複数のカプシドタンパク質を含む。
【０３０６】
「宿主細胞」は、本発明の組換えベクターまたはポリヌクレオチドをｉｎ  ｖｉｖｏ、ｅｘ  ｖｉｖｏ、またはｉｎ  ｖｉｔｒｏでトランスフェクトされ、感染されるか、または形質導入された細胞を含む。宿主細胞は、ウイルス産生細胞およびウイルスベクターに感染した細胞を含み得る。特定の実施形態では、宿主細胞は、ｉｎ  ｖｉｖｏで本明細書に企図されたウイルスベクターに感染される。ある特定の実施形態では、用語「標的細胞」は、宿主細胞と互換的に使用され、所望の細胞型の感染細胞を指す。
【０３０７】
高力価ＡＡＶ調製物は、例えば、米国特許第５，６５８，７７６号；同第６，５６６，１１８号；同第６，９８９，２６４号；および同第６，９９５，００６号；米国２００６／０１８８４８４；ＷＯ９８／２２６０７；ＷＯ２００５／０７２３６４；およびＷＯ／１９９９／０１１７６４；ならびにViral  Vectors  for  Gene  Therapy:  Methods  and  Protocols、Machida編、Humana  Press、２００３年；Samulskiら、（１９８９年）、J.  Virology、６３巻、３８２２頁；Xiaoら、（１９９８年）、J.  Virology、７２巻、２２２４頁；Inoueら、（１９９８年）、J.  Virol.、７２巻、７０２４頁に記載された当技術分野で公知の技法を使用して産生することができる。シュードタイプＡＡＶベクターを産生する方法（例えば、ＷＯ００／２８００４）、およびｉｎ  ｖｉｖｏ投与するとその免疫原性を低減するためのＡＡＶベクターの様々な修飾または製剤（例えば、ＷＯ０１／２３００１；ＷＯ００／７３３１６；ＷＯ０４／１１２７２７；ＷＯ０５／００５６１０；ＷＯ９９／０６５６２を参照）も報告されている。
Ｉ．組成物および製剤
【０３０８】
本発明は、本明細書に企図されるポリヌクレオチド、ベクター、およびポリペプチド、ならびに薬学的に許容される担体を含む様々な医薬組成物をさらに含む。これらの医薬組成物は、神経疾患または障害（例えば、疼痛）を処置するのに使用され得る。本明細書では、「薬学的に許容される担体」としては、薬学的に許容される細胞培養基を含めた生理学的に適合性である任意かつすべての溶媒、分散媒、コーティング、抗菌剤および抗真菌剤、等張性および吸収遅延剤などがある。薬学的に許容される担体としては、滅菌注射用溶液または分散液を即席で調製するための滅菌水溶液または分散液、および滅菌粉末などがある。薬学的活性物質のためのこのような培地および作用物質の使用は、当技術分野で周知である。任意の従来の培地または作用物質が本明細書に企図されるベクターと不適合である場合を除いて、本発明の医薬組成物中のその使用も企図される。
【０３０９】
本発明の組成物は、単独で、または１つもしくは複数の他の療法のモダリティーと組み合わせて細胞または動物に投与するための薬学的に許容されるまたは生理学的に許容される溶液中に製剤化された、本明細書に記載の１種または複数のポリペプチド、ポリヌクレオチド、およびこれらを含むベクター、感染細胞などを含み得る。所望される場合、本発明の組成物は、他の作用物質、例えば、サイトカイン、例えば、抗炎症性サイトカイン、増殖因子、ホルモン、低分子、または様々な薬学的活性剤などを組み合わせて投与することができることも理解される。組成物中にやはり含めることができる他のコンポーネントに実質的に制限はなく、ただし、追加の作用物質は、意図された遺伝子療法を送達する組成物の能力に悪影響を及ぼさない。
【０３１０】
一部の場合では、スイッチ受容体をコードする核酸は、非ウイルスまたはベクター手段によって対象に送達される。当業者に公知の任意の方法を使用して、対象に本開示の核酸分子を送達することができる。これらの方法としては、限定することなく、リポフェクション、ナノ粒子送達、微粒子銃、電気穿孔、超音波処理、およびマイクロインジェクションがある。
【０３１１】
一部の態様では、組成物は、例えば、本開示のスイッチ受容体を活性化するためのリガンドを含む。一部の態様では、固形製剤は、スイッチ受容体（例えば、ＧＰＣＲまたはＬＧＩＣ）をコードする核酸分子（例えば、ベクター）を含み得る。一部の態様では、組成物は、例えば、それを必要とする対象への経口投与に特に有用な固形製剤である。一部の場合では、ベクターまたはリガンドは、例えば、約０．１μｇ、０．２μｇ、０．３μｇ、０．４μｇ、０．５μｇ、０．６μｇ、０．７μｇ、０．８μｇ、０．９μｇ、１μｇ、約２μｇ、約３μｇ、約４μｇ、約５μｇ、約６μｇ、約７μｇ、約８μｇ、約９μｇ、約１０μｇ、約２０μｇ、約３０μｇ、約４０μｇ、約５０μｇ、約６０μｇ、約７０μｇ、約８０μｇ、約９０μｇ、約１００μｇ、約１２０μｇ、約１４０μｇ、約１６０μｇ、約１８０μｇ、約２００μｇ、約２２０μｇ、約２４０μｇ、約２６０μｇ、約２８０μｇ、約３００μｇ、約３２０μｇ、約３４０μｇ、約３６０μｇ、約３８０μｇ、約４００μｇ、約４２０μｇ、約４４０μｇ、約４６０μｇ、約４８０μｇ、約５００μｇ、約５２０μｇ、約５４０μｇ、約５６０μｇ、約５８０μｇ、約６００μｇ、約６２０μｇ、約６４０μｇ、約６６０μｇ、約６８０μｇ、約７００μｇ、約７２０μｇ、約７４０μｇ、約７６０μｇ、約７８０μｇ、約８００μｇ、約８２０μｇ、約８４０μｇ、約８６０μｇ、約８８０μｇ、約９００μｇ、約９２０μｇ、約９４０μｇ、約９６０μｇ、約９８０μｇ、約１ｍｇ、約２ｍｇ、約３ｍｇ、約４ｍｇ、約５ｍｇ、約６ｍｇ、約７ｍｇ、約８ｍｇ、約９ｍｇ、約１０ｍｇ、約２０ｍｇ、約３０ｍｇ、約４０ｍｇ、約５０ｍｇ、約６０ｍｇ、約７０ｍｇ、約８０ｍｇ、約９０ｍｇ、約１００ｍｇ、約１２０ｍｇ、約１４０ｍｇ、約１６０ｍｇ、約１８０ｍｇ、約２００ｍｇ、約２２０ｍｇ、約２４０ｍｇ、約２６０ｍｇ、約２８０ｍｇ、約３００ｍｇ、約３２０ｍｇ、約３４０ｍｇ、約３６０ｍｇ、約３８０ｍｇ、約４００ｍｇ、約４２０ｍｇ、約４４０ｍｇ、約４６０ｍｇ、約４８０ｍｇ、約５００ｍｇ、約５２０ｍｇ、約５４０ｍｇ、約５６０ｍｇ、約５８０ｍｇ、約６００ｍｇ、約６２０ｍｇ、約６４０ｍｇ、約６６０ｍｇ、約６８０ｍｇ、約７００ｍｇ、約７２０ｍｇ、約７４０ｍｇ、約７６０ｍｇ、約７８０ｍｇ、約８００ｍｇ、約８２０ｍｇ、約８４０ｍｇ、約８６０ｍｇ、約８８０ｍｇ、約９００ｍｇ、約９２０ｍｇ、約９４０ｍｇ、約９６０ｍｇ、約９８０ｍｇ、約１０００ｍｇ、または１０００ｍｇ超の量で組成物中に存在し得る。
【０３１２】
本明細書に記載の組成物は、液体製剤、固形製剤、またはこれらの組合せを含み得る。製剤の非限定的な例として、錠剤、カプセル剤、ゲル、ペースト、液体溶液、パッチ、ロリポップ、クリーム、またはエアロゾル（すなわち、スプレー剤）を挙げることができる。一部の事例では、治療剤または薬物は、結晶化形態にあり得る。固形製剤は、それを必要とする対象への組成物の経口投与に適する場合がある。一部の場合では、経口投与の低速放出製剤は、胃腸管中の体液と接触して活性剤の制御放出を実現し、血漿中に実質的に一定かつ有効なレベルの活性剤を提供するために調製することができる。結晶形は、生物学的分解性ポリマー、水溶性ポリマー、または両方の混合物のポリマーマトリックス、および任意選択で適する界面活性剤中にこの目的のために包埋され得る。包埋は、ポリマーのマトリックス中にミクロ粒子を組み込むことを本脈絡において意味し得る。制御放出製剤は、公知の分散またはエマルジョンコーティング技術を介して分散されたマイクロ粒子または乳化マイクロ液滴を被包することによっても得られる。
【０３１３】
本開示の組成物は任意の数の賦形剤をさらに含み得る。賦形剤としては、任意かつすべての溶媒、コーティング、香味料、着色剤、滑剤、崩壊剤、防腐剤、甘味料、バインダー、希釈剤、およびビヒクル（または担体）を挙げることができる。一般に、賦形剤は、本開示の治療用組成物に適合する。
【０３１４】
本明細書に企図される医薬組成物において、薬学的に許容される賦形剤および担体溶液の製剤は、例えば、経口、非経口、静脈内、鼻腔内、筋肉内、髄腔内、神経内、神経節内、および脳室内投与および製剤を含めた様々な処置レジメンにおける本明細書に記載の特定の組成物を使用するために適する投薬および処置レジメンの開発と同様に当業者に周知である。
【０３１５】
ある特定の環境において、本明細書に開示の組成物を非経口的に、静脈内に、筋肉内に、腹腔内に、髄腔内に、神経内に、神経節内に、または脳室内に送達することが望ましくなる。遊離塩基または薬理学的に許容される塩としての活性化合物の溶液は、ヒドロキシプロピルセルロースなどの界面活性剤と適切に混合された水中に調製することができる。分散液は、グリセロール、液体ポリエチレングリコール、およびその混合物、ならびに油中に調製することもできる。貯蔵および使用の通常の条件下で、これらの調製物は、微生物の増殖を防止するための防腐剤を含有する。
【０３１６】
注射使用に適した医薬品形態は、滅菌注射用溶液または分散液（米国特許第５，４６６，４６８号、その全体が参照により本明細書に具体的に組み込まれている）を即席で調製するための滅菌水溶液または分散液および滅菌粉末を含む。すべての場合において、形態は、滅菌であるべきであり、注射容易性（easy  syringability）が存在する程度に流体であるべきである。それは、製造および貯蔵の条件下で安定であるべきであり、細菌および真菌などの微生物の汚染作用に対して守られているべきである。担体は、例えば、水、エタノール、ポリオール（例えば、グリセロール、プロピレングリコール、マンニトール、および液体ポリエチレングリコールなど）を含有する溶媒または分散媒、これらの適する混合物、ならびに／または植物油であり得る。適切な流動性は、例えば、レシチンなどのコーティングの使用により、分散液の場合における要求された粒径の維持により、および界面活性剤の使用により維持することができる。微生物の作用の防止は、様々な抗菌剤および抗真菌剤、例えば、パラベン、クロロブタノール、フェノール、ソルビン酸、チメロサールなどにより容易にすることができる。多くの場合では、等張剤、例えば、糖、または塩化ナトリウムを含むことがより好ましくなる。注射用組成物の持続的吸収は、吸収を遅延する作用物質、例えば、モノステアリン酸アルミニウムおよびゼラチンの組成物中に使用することによってもたらすことができる。
【０３１７】
水溶液での投与について、例えば、溶液は、必要であれば適切に緩衝されるべきであり、液体希釈剤は、十分な生理食塩水またはグルコースで最初に等張性にされるべきである。これらの特定の水溶液は、静脈内、筋肉内、皮下、腹腔内、髄腔内、神経内、神経節内、および脳室内の投与に特に適している。これに関連して、利用することができる滅菌水性媒体は、本開示を踏まえると当業者に公知となる。例えば、１投与量を等張性ＮａＣｌ溶液１ｍｌ中に溶解させることができ、皮下注入液１０００ｍｌに添加されるか、または注入予定部位で注射される（例えば、Remington:  The  Science  and  Practice  of  Pharmacy、２０版、Baltimore、MD:  Lippincott  Williams  &  Wilkins、２０００年を参照）。投与量の一部の変動は、処置される対象の条件に応じて必然的に発生する。投与を担う人は、いずれにしても個々の対象について適切な用量を判定することになる。さらに、ヒト投与について、調製物は、滅菌性、発熱原性、ならびにＦＤＡ生物製剤標準局が要求する一般的な安全性および純度標準を満たすべきである。
【０３１８】
滅菌注射用溶液は、上記に列挙した様々な他の成分とともに適切な溶媒中に必要量で活性コンポーネントを組み込み、必要に応じて、その後濾過滅菌が続くことによって調製することができる。一般に、分散液は、基本分散媒および上記に列挙したものから要求される他の成分を含有する滅菌ビヒクル中に様々な滅菌された活性成分を組み込むことによって調製される。滅菌注射用溶液を調製するための滅菌粉末の場合において、調製の好適な方法は、真空乾燥および凍結乾燥技法であり、これは、その以前に滅菌濾過した溶液から活性成分と任意の追加の所望の成分の粉末を生じる。
【０３１９】
本明細書に開示の組成物は、中性または塩形態で製剤化することができる。薬学的に許容される塩は、酸付加塩（タンパク質の遊離アミノ基で形成される）を含み、無機酸、例えば、塩酸もしくはリン酸など、または酢酸、シュウ酸、酒石酸、マンデル酸などの有機酸を用いて形成される。遊離カルボキシル基で形成される塩は、無機塩基、例えば、ナトリウム、カリウム、アンモニウム、カルシウム、または水酸化第二鉄など、およびイソプロピルアミン、トリメチルアミン、ヒスチジン、プロカインなどの有機塩基から導出することもできる。製剤されると、溶液は、投与製剤に適合する様式で、かつ治療上有効である量で投与されることになる。製剤は、様々な剤形、例えば、注射用溶液、薬物放出カプセル剤などで容易に投与される。
【０３２０】
本明細書では、「担体」は、任意かつすべての溶媒、分散媒、ビヒクル、コーティング、希釈剤、抗菌剤および抗真菌剤、等張剤および吸収遅延剤、緩衝液、担体溶液、懸濁液、コロイドなどを含む。医薬活性物質のためのこのような培地および作用物質の使用は、当技術分野で周知である。任意の従来の培地または作用物質が活性成分と不適合である場合を除いて、治療用組成物中のその使用は、企図されている。追加の活性成分を組成物中に組み込むこともできる。
【０３２１】
語句「薬学的に許容される」は、ヒトに投与されるとき、アレルギー性または類似の有害反応を生じさせない分子実体および組成物を指す。活性成分としてタンパク質を含有する水性組成物の調製は、当技術分野においてよく理解されている。典型的には、このような組成物は、液体溶液または懸濁液として、注入可能医薬品として調製され；注射前の液体中の溶液または懸濁液に適した固体形態も調製することができる。調製物は、乳化することもできる。
【０３２２】
ある特定の実施形態では、組成物は、鼻内スプレー剤、吸入、および／または他のエアロゾル送達ビヒクルによって送達され得る。鼻エアロゾルスプレー剤を介して肺に直接的に遺伝子、ポリヌクレオチド、およびペプチド組成物を送達するための方法は、例えば、米国特許第５，７５６，３５３号および米国特許第５，８０４，２１２号（それぞれその全体が参照により本明細書に具体的に組み込まれている）に記載されている。同様に、鼻腔内の微粒子樹脂（Takenagaら、１９９８年）およびリゾホスファチジル−グリセロール化合物を使用する薬物の送達（米国特許第５，７２５，８７１号、その全体が参照により本明細書に具体的に組み込まれている）も、医薬品分野において周知である。同様に、ポリテトラフルオロエチレン支持マトリックスの形態での経粘膜薬物送達も、米国特許第５，７８０，０４５号（その全体が参照により本明細書に具体的に組み込まれている）に記載されている。
【０３２３】
ある特定の実施形態では、送達は、適する宿主細胞内に本発明の組成物を導入するために任意選択でＣＰＰポリペプチドと混合してリポソーム、ナノカプセル、微粒子、ミクロスフェア、脂質粒子、ベシクルなどの使用によって行うことができる。特に、本発明の組成物は、脂質粒子、リポソーム、ベシクル、ナノスフェア、ナノ粒子など内に被包されて送達されるために製剤化することができる。製剤およびこのような送達ビヒクルの使用は、公知および従来技法を使用して実行することができる。本発明の製剤および組成物は、単独で、または療法の１つまたは複数の他のモダリティーと組み合わせて、細胞または動物への投与のために薬学的に許容されるまたは生理学的に許容される溶液（例えば、培養基）中に製剤化された本明細書に記載の任意の数のポリペプチド、ポリヌクレオチド、および低分子の組合せから構成される１つまたは複数の抑制因子および／または活性化因子を含み得る。所望される場合、本発明の組成物は、例えば、細胞、他のタンパク質もしくはポリペプチド、または様々な薬学的活性剤などの他の作用物質と組み合わせて投与することもできる。
【０３２４】
特定の実施形態では、本発明による製剤または組成物は、本明細書で企図される任意の数のポリペプチド、ポリヌクレオチド、およびウイルスベクターの組合せと接触した細胞を含む。
【０３２５】
ある特定の態様では、本発明は、ウイルスベクター、例えば、ｒＡＡＶの送達に適する製剤または組成物を提供する。
【０３２６】
ｅｘ  ｖｉｖｏ送達の例示的な製剤は、当技術分野で公知の様々なトランスフェクション剤、例えば、リン酸カルシウム、電気穿孔、熱ショック、および様々なリポソーム製剤（すなわち、脂質媒介トランスフェクション）などの使用も含み得る。リポソームは、以下により詳細に記載されるように、水性流体の画分を捕捉する脂質二重層である。ＤＮＡは、カチオン性リポソームの外面と自発的に会合し（その電荷によって）、これらのリポソームは、細胞膜と相互作用することになる。
【０３２７】
ある特定の態様では、本発明は、１種または複数の薬学的に許容される担体（付加物）および／または希釈剤（例えば、薬学的に許容される細胞培養基）と一緒に製剤化される本明細書に記載の、治療有効量の１つまたは複数のポリヌクレオチドまたはポリペプチドを含む薬学的に許容される組成物を提供する。
【０３２８】
本発明の特定の実施形態は、医薬品分野において周知であるものなど他の製剤を含み得、例えば、Remington:  The  Science  and  Practice  of  Pharmacy、２０版、Baltimore、MD：  Lippincott  Williams  &  Wilkins、２０００年に記載されている。
Ｊ．方法および効能
【０３２９】
本明細書に開示の組成物および方法は、神経疾患または障害を処置するのに利用することができる。一部の態様では、本明細書に開示のベクターまたは組成物は、神経疾患または障害を処置するための医薬の製造において使用される。
【０３３０】
一部の場合では、本開示の方法および組成物は、てんかんを処置するのに利用される。本明細書に記載の組成物は、てんかん性痙攣を防止または制御するのに使用することができる。てんかん性痙攣は、強直性−間代性、強直性、間代性、ミオクローヌス性、欠神発作または脱力発作として分類され得る。一部の場合では、本明細書の組成物および方法は、約５％、約１０％、約１０％、約１５％、約２０％、約２５％、約３０％、約３５％、約４０％、約４５％、約５０％、約５５％、約６０％、約６５％、約７０％、約７５％、約８０％、約８５％、約９０％、約９５％、約９９％、または１００％、対象が経験するてんかん性痙攣の数を防止または低減することができる。
【０３３１】
一部の場合では、本開示の方法および組成物は、摂食障害を処置するのに利用される。摂食障害は、対象の身体的または精神的な健康に悪影響を及ぼす異常な摂食行動によって定義される精神障害であり得る。一部の場合では、摂食障害は、神経性食欲不振症である。他の場合では、摂食障害は、神経性過食症である。一部の場合では、摂食障害は、異食、反芻障害、回避／制限性食物摂取障害、過食症（ＢＥＤ）、その他の特定された哺食と摂食の障害（ＯＳＦＥＤ）、強迫性過食、ディアブリミア（diabulimia）、神経性健康食症、選択的摂食障害、ドランクオレキシア、妊娠中食欲不振、またはＧｏｕｒｍａｎｄ症候群である。一部の場合では、組成物は、摂食障害と関連した１種または複数の分子の産生を増大または低下させるＧタンパク質共役受容体を含む。他の場合では、組成物は、摂食障害と関連した１種または複数の分子の産生を変更するリガンド依存性イオンチャネルを含む。摂食障害と関連した１つまたは複数の分子は、限定することなく、バソプレッシン、コルチコトロピン−放出ホルモン（ＣＲＨ）、副腎皮質刺激ホルモン（ＡＣＴＨ）、コルチゾール、エピネフリン、またはノルエピネフリン；ならびにセロトニン、ドーパミン、神経ペプチドＹ、レプチン、またはグレリンを含めた視床下部下垂体副腎（ＨＰＡ）系の分子を含み得る。
【０３３２】
一部の場合では、組成物および方法は、外傷後ストレス障害（ＰＴＳＤ）、胃食道逆流性疾患（gastroesophageal  reflex  disease）（ＧＥＲＤ）、嗜癖（例えば、アルコール、薬物）、不安、うつ病、記憶喪失、認知症、睡眠時無呼吸、卒中、尿失禁、ナルコレプシー、本態性振戦、運動障害、心房細動、がん（例えば、脳腫瘍）、パーキンソン病、またはアルツハイマー病を処置するのに利用される。本明細書の組成物および方法によって処置することができる神経疾患または障害の他の非限定的な例としては、無為、失書症、アルコール依存症、失読症、動脈瘤、一過性黒内障、健忘症、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）、アンジェルマン症候群、失語症、失行症、クモ膜炎、アーノルド・キアリ奇形、アスペルガー症候群、失調症、毛細血管拡張性失調症、注意欠陥多動性障害、聴覚処理障害、自閉症スペクトル、双極性障害、ベル麻痺、上腕神経叢傷害、脳損傷、脳傷害、脳腫瘍、カナバン病、カプグラ妄想、手根管症候群、カウザルギー、中枢性疼痛症候群、橋中央ミエリン溶解、中心核ミオパチー、頭部障害、脳動脈瘤、脳動脈硬化症、脳萎縮症、皮質下梗塞および白質脳症を伴う大脳常染色体優性動脈疾患（ＣＡＤＡＳＩＬ）、脳巨人症、脳性麻痺、脳血管炎、頚部脊椎狭窄、シャルコー−マリー−トゥース病、キアリ奇形、舞踏病（Chorea）、慢性疲労症候群、慢性炎症性脱髄性多発性神経障害（ＣＩＤＰ）、慢性疼痛、コフィン−ローリー症候群、昏睡、複合性局所性疼痛症候群、圧迫性ニューロパチー、先天性顔面両麻痺、大脳皮質基底核変性症、頭蓋動脈炎、頭蓋骨癒合症、クロイツフェルト−ヤコブ病、累積的外傷障害、クッシング症候群、気分循環性障害、巨大細胞性封入体症（ＣＩＢＤ）、サイトメガロウイルス感染症、ダンディー・ウォーカー症候群、ドーソン病、Ｄｅ  Ｍｏｒｓｉｅｒ症候群、Ｄｅｊｅｒｉｎｅ−Ｋｌｕｍｐｋｅ麻痺、デジュリーヌ−ソッタス病、睡眠相後退症候群、認知症、皮膚筋炎、発達性協調障害、糖尿病性ニューロパチー、広汎性硬化症、二重視、ダウン症候群、ドラベ症候群、デュシェンヌ型筋ジストロフィー、構音障害、自律神経障害、計算弱、書字障害、ジスキネジア、失読症、ジストニア、トルコ鞍空洞症候群、脳炎、脳ヘルニア、脳３叉神経領域血管腫、遺糞、遺尿症、てんかん、女性のてんかん知的障害、エルブ麻痺、皮膚紅痛症、エクスプローディングヘッド症候群、ファブリー病、ファール症候群、失神、家族性の痙性麻痺、熱性けいれん、フィッシャー症候群、フリードライヒ失調症、線維筋痛症、フォヴィーユ症候群、胎児性アルコール症候群、脆弱Ｘ症候群、手足などの運動失調症候群（ＦＸＴＡＳ）、ゴーシェ病、全般てんかん熱性けいれんプラス、ゲルストマン症候群、巨細胞性動脈炎、巨細胞封入病、グロボイド細胞白質ジストロフィー、灰白質異所形成、ギランバレー症候群、全般性不安障害、ＨＴＬＶ−１関連脊髄症、ハラーフォルデンシュパッツ病、頭部外傷、頭痛、片側顔面痙攣、遺伝性痙性対麻痺、遺伝性多発神経炎性失調、耳帯状疱疹、帯状疱疹（Herpes  zoster）、平山症候群、ヒルシュスプルング病、ホームズアディ症候群、全前脳症、ハンチントン病、水頭無脳症、水頭症、副腎皮質機能亢進、低酸素、免疫介在脳脊髄炎、封入体筋炎、色��失調症、乳児レフサム病、乳児痙攣、炎症性ミオパチー、頭蓋内嚢胞、頭蓋内高血圧、イソジセントリック１５（Isodicentric  15）、ジュベール症候群、カラク症候群、カーンズ・セイヤー症候群、キンズボーン症候群、クライネ・レビン症候群、クリッペルフェイル症候群、クラッベ病、ラフォラ病、Ｌａｍｂｅｒｔ−Ｅａｔｏｎ筋無力症症候群、ランダウ−クレーフナー症候群、外側髄（ワレンベルグ）症候群、学習障害、リー病、レノックスガスタウト症候群、レッシュ−ナイハン症候群、白質ジストロフィー、白質消失病を伴った白質脳症、レビ小体認知症、脳回欠損、閉じ込め症候群、腰椎椎間板疾患、腰椎脊髄狭窄、ライム病−神経学的後遺症、マシャド−ジョセフ病（脊髄小脳失調症３型）、巨大頭蓋症、巨視症、デバルクマン（Mal  de  debarquement）、皮質下嚢胞をもつ大頭型白質脳症、巨脳症、メルカーソン−ローゼンタール症候群、メニエール病、髄膜炎、メンケス病、異染性白質ジストロフィー、小頭症、小視症、片頭痛、ミラー・フィッシャー症候群、小卒中（一過性脳虚血発作）、ミソフォニア、ミトコンドリアミオパチー、メビウス症候群（Mobius  syndrome）、単子葉筋萎縮、運動能力障害、モヤモヤ病、ムコ多糖症、多梗塞性認知症、多巣性運動ニューロパチー、多発性硬化症、多系統萎縮症、筋ジストロフィー、筋痛性脳脊髄炎、重症筋無力症、骨髄性びらん性硬化症、乳児のミオクローヌス性脳症、ミオクローヌス、ミオパチー、ミオチューブ様ミオパチー、先天性筋緊張症、ナルコレプシー、ニューロベーチェット病、神経線維腫症、神経遮断性悪性症候群、ＡＩＤＳの神経学的兆候、ループスの神経学的後遺症、神経性筋強直症、ニューロンセロイドリポフスチン沈着症、ニューロン移行障害、ニューロパチー、神経症、ニーマン−ピック病、非２４時間睡眠−覚醒障害、非言語的学習障害、Ｏ’Ｓｕｌｌｉｖａｎ−ＭｃＬｅｏｄ症候群、後頭神経痛、潜在性脊髄閉鎖不全配列、大田原症候群、オリーブ橋小脳萎縮症、眼球クローヌスミオクローヌス症候群、視神経炎、起立性低血圧、耳硬化症、酷使症候群、反復視、感覚異常、パーキンソン病、先天性パラミオトニア、悪性腫瘍性疾患、発作、パリー・ロンベルク症候群、ＰＡＮＤＡＳ、ペリツェウス−メルツバッハー病、周期性麻痺、末梢神経障害、広汎性発達障害、光くしゃみ反射、フィタン酸貯蔵病、ピック病、挟まれた神経、下垂体腫瘍、ＰＭＧ、多発ニューロパシー、ポリオ、多小脳回、多発性筋炎、孔脳症、ポリオ後症候群、ヘルペス後神経痛（ＰＨＮ）、体位性低血圧、プラダー−ウィリー症候群、原発性側索硬化症、プリオン病、進行性片側顔面萎縮症、進行性多巣性白質脳症、進行性核上麻痺、顔貌失認、偽腫瘍髄芽腫、四分不明視、四肢麻痺、狂犬病、神経根症、ラムゼイハント症候群Ｉ型、ラムゼイハント症候群ＩＩ型、ラムゼイハント症候群ＩＩＩ型、ラスムッセン脳炎、反射神経血管性ジストロフィー、レフサム病、ＲＥＭ睡眠挙動障害、反復性ストレス傷害、下肢静止不能症候群、レトロウイルス関連脊髄症、レット症候群、ライ症候群、リズミカル運動障害、ロンベルク症候群、舞踏病（Saint  Vitus  dance）、サンドホフ病、シルダー病、脳裂、感覚処理障害、視神経異形成症、振戦赤ちゃん症候群、帯状疱疹（Shingles）、シャイ−ドレーガー症候群、シェーグレン症候群、睡眠時無呼吸、睡眠病、くしゃみ病（snatiation）、ソトス症候群、痙性、脊椎披裂、脊髄損傷、脊髄腫瘍、脊髄性筋萎縮症、球脊髄性筋萎縮症、脊髄小脳失調症、分離脳、スティール−リチャードソン−オルシェウスキー症候群、スティッフパーソン症候群、卒中、スタージ−ウェーバー症候群、スタッタリング、亜急性硬化性全脳炎、皮質下動脈硬化性脳症、表在性鉄沈着症、シドナム舞踏病、失神、共感覚、脊髄空洞症、足根管症候群、遅発性ジスキネジア、遅発性ディスフレニア、ターロヴ嚢胞、テイ−サックス病、側頭動脈炎、側頭葉てんかん、強縮、脊髄係留症候群、トムソン病、胸郭出口症候群、疼痛性チック、トッド麻痺、トゥーレット症状群、毒性脳症、一過性脳虚血発作、伝染性海綿状脳症、横断性脊髄炎、外傷性脳傷害、振戦、抜毛癖、三叉神経痛、熱帯痙性対麻痺、トリパノソーマ症、結節性硬化症、ウンフェルリヒト・ルントボルク病、フォンヒッペル−リンダウ病（ＶＨＬ）、ビリウスク脳脊髄炎（ＶＥ）、ワレンベルグ症候群、ウエスト症候群、むち打ち症、ウィリアムズ症候群、ウィルソン病、またはツェルウェガー症候群を挙げることができる。
【０３３３】
一部の場合では、本明細書に開示の組成物および方法は、脳がんまたは脳腫瘍を処置するのに使用することができる。本明細書に記載のベクターおよび組成物を用いた処置に適用できる脳がんまたは腫瘍の非限定的な例としては、未分化星細胞腫（グレードＩＩＩ神経膠腫）、神経膠星状細胞腫（グレードＩＩ神経膠腫）、脳幹神経膠腫、上衣細胞腫、神経節膠腫、神経節神経腫、神経膠芽腫（グレードＩＶ神経膠腫）、神経膠腫、若年性毛様細胞性星細胞腫（ＪＰＡ）、低悪性度星細胞腫（ＬＧＡ）、髄芽細胞腫、混合グリオーマ、乏突起膠腫、視神経神経膠腫、毛様細胞性星細胞腫（グレードＩ神経膠腫）、および原始神経外胚葉性（ＰＮＥＴ）を含めた神経膠腫；聴神経腫（前庭シュワン腫）、末端肥大症、腺腫、軟骨肉腫、脊索腫、頭蓋咽頭腫、類上皮腫、頸静脈グロムス腫瘍、テント下髄膜腫、髄膜腫、下垂体腺腫、下垂体腫瘍、ラトケ裂溝嚢胞を含めた頭蓋底腫瘍；脳転移、転移性脳腫瘍を含めた転移性がん；脳嚢胞、脈絡叢パピローマ、ＣＮＳリンパ腫、コロイド嚢胞、嚢胞性腫瘍、類皮腫瘍、胚細胞腫、リンパ腫、鼻癌、鼻咽頭腫瘍、松果体腫瘍、松果体芽腫、ピネオサイトーマ、テント上髄膜腫および血管性腫瘍を含めた他の脳腫瘍；神経膠星状細胞腫、上衣細胞腫、髄膜腫、およびシュワン腫を含めた脊髄腫瘍がある。
【０３３４】
一部の態様では、対象における神経疾患または障害を処置するための方法が開示されている。一部の場合では、方法は、神経疾患または障害に罹患している対象に生物学的に不活性な作用物質を投与することを伴う。一部の場合では、対象は、Ｇタンパク質共役受容体を異種的に発現することができる。別の場合では、対象は、リガンド依存性イオンチャネルを異種的に発現することができる。本方法は、生物学的に不活性な作用物質を投与する前に対象にＧＰＣＲまたはＬＧＩＣをコードする核酸分子を送達することをさらに含み得る。特定の例では、ＧＰＣＲまたはＬＧＩＣは、本開示全体に記載されたウイルスベクターによって対象に送達される。一部の場合では、対象は、疼痛のために処置される。他の場合では、対象は、満腹障害（すなわち、摂食障害）について処置される。一部の場合では、対象は、てんかんについて処置されない。
【０３３５】
他の場合では、本方法は、神経疾患に罹患している対象にＧＰＣＲまたはＬＧＩＣをコードする核酸分子を送達することであって、対象はＧＰＣＲまたはＬＧＩＣを異種的に発現する、送達することを含む。本方法は、ＧＰＣＲまたはＬＧＩＣを活性化し、それにより神経疾患を処置する薬物を対象に投与することをさらに含む。一部の場合では、薬物は、対象にＧＰＣＲまたはＬＧＩＣコード核酸を送達して少なくとも１週間後に投与される。さらなる場合では、薬物は、少なくとも３連続日間対象に毎日投与される。一部の実施形態では、本方法は、てんかんでない神経疾患に罹患する対象に、ｈＭ４ＤｉであるＧＰＣＲ、クロザピン−Ｎ−オキシドである生物学的に不活性な作用物質を送達することを含む。
【０３３６】
他の場合では、本方法は、ＧＰＣＲもしくはＬＧＩＣを異種的に発現する対象に、ＧＰＣＲまたはＬＧＩＣを活性化する薬物を投与することであって、薬物は、ＧＰＣＲまたはＬＧＩＣの内因性リガンドでない、投与することを含む。一部の場合では、薬物は、カッパオピオイド受容体（ＫＯＲ）結合薬でない。さらなる場合において、神経疾患は、てんかんではない。なおさらなる場合では、ＧＰＣＲは、カッパオピオイド受容体（ＫＯＲ）以外のＧＰＣＲである。
【０３３７】
なお他の場合では、本方法は、ＧＰＣＲまたはＬＧＩＣを異種的に発現する対象に、ＧＰＣＲまたはＬＧＩＣを活性化する薬物を投与することによって神経疾患を処置することを含む。一部の場合では、ＧＰＣＲまたはＬＧＩＣは、感覚ニューロン、後根神経節、または三叉神経節内で選択的に発現される。
【０３３８】
他の場合では、本方法は、ＧＰＣＲまたはＬＧＩＣを異種的に発現する対象に、ＧＰＣＲまたはＬＧＩＣを活性化する薬物を投与することによって神経疾患を処置することであって、薬物は、ＦＤＡに認可されているが、神経疾患の処置に関してＦＤＡに認可されていない、処置することを含む。
【０３３９】
他の場合では、本方法は、ＧＰＣＲまたはＬＧＩＣを異種的に発現する対象に、ＧＰＣＲまたはＬＧＩＣを活性化する薬物を投与することによって神経疾患を処置することであって、薬物は、０．００１μｇ／ｋｇ〜１０ｍｇ／ｋｇの用量で投与される、処置することを含む。
【０３４０】
一部の態様では、本発明は、対象の海馬内へのＡＡＶ−ｈＳＹＮ−ＧｌｙＲＭの頭蓋内注射、および対象をイベルメクチンで処置して、神経細胞ネットワーク、例えば記憶に関連したネットワークを可逆的にサイレンシングすること（Obenhausら、Front  Mol  Neurosci、２０１６年；９巻：７５頁を参照）を企図する。一部の実施形態では、ＧｌｙＲＭタンパク質は、Ｆ２０７ＡおよびＡ２８８Ｇ突然変異を含む。
【０３４１】
一部の場合では、本発明は、対象におけるパーキンソン病を処置する方法であって、対象にＡＡＶ−ｈＳＹＮ−ｒＭ３ＤＳ、ＡＡＶ−ｈＳＹＮ−ｈＭ３Ｄｑ、およびＡＡＶ−ｈＳＹＮ−ＫＯＲＤから選択されるＡＡＶベクターを投与することと；対象にＣＮＯを投与することとを含む、方法を包含する。一部の場合では、移植されたドーパミンニューロンは、ＡＡＶベクター（Aldrin-Kirkら、Neuron、２０１６年、９０巻（５号）：９５５〜９６８頁を参照）で形質導入される。
【０３４２】
一部の場合では、本発明は、対象におけるアルツハイマー病を処置する方法であって、対象にＡＡＶ−ＣＡＧ−ｈＭ４ＤおよびＡＡＶ−ＣＡＧ−ｈＭ３Ｄから選択されるＡＡＶベクターを投与することと；対象にＣＮＯを投与することとを含む、方法を包含する。一部の実施形態では、ＡＡＶベクターは、くも膜下腔またはＣＡ１内に注射される（Yuanら、J  Neurosci.、２０１６年、３６巻（２号）：６３２〜６４１頁を参照）。
【０３４３】
ある特定の態様では、本発明は、対象における恐怖および／または不安を処置する方法であって、対象にＡＡＶベクター（例えば、ＡＡＶ−ＣａｍＫＩＩ−ｈＭ３Ｄｑ）を投与することと；ＣＮＯを対象に投与することとを含む、方法を包含する。一部の実施形態では、ＡＡＶベクターは、扁桃体内に注射される（Senguptaら、The  Journal  of  Neuroscience、２０１６年、３６巻（２号）：３８５〜３９５頁を参照）。
【０３４４】
本発明は、対象における疼痛を制御、管理、防止、または処置するための組成物および方法を部分的に企図する。「疼痛」は、患者の体における苦痛を与える気分および／または不快な感覚を指す。疼痛感は、軽度および時折から重度および不断の範囲となり得る。疼痛は、急性疼痛または慢性疼痛として分類することができる。疼痛は、侵害受容性疼痛（すなわち、組織損傷によって引き起こされる疼痛）、神経因性疼痛、または心因性疼痛であり得る。一部の場合では、疼痛は、疾患（例えば、がん、関節炎、糖尿病）によって引き起こされるか、またはそれに関連する。他の場合では、疼痛は、傷害（例えば、スポーツ傷害、外傷）によって引き起こされる。本明細書の組成物および方法を用いた処置に適用できる疼痛の非限定的な例としては、末梢神経障害、糖尿病性ニューロパチー、疱疹後神経痛、三叉神経痛、背部痛、がんと関連したニューロパチー、ＨＩＶ／ＡＩＤＳと関連したニューロパチー、幻肢痛、手根管症候群、中枢性卒中後疼痛、慢性アルコール中毒と関連した疼痛、甲状腺機能低下症、尿毒症、多発性硬化症と関連した疼痛、脊髄損傷と関連した疼痛、パーキンソン病と関連した疼痛、てんかん、変形性関節症の疼痛、関節リウマチの疼痛、内臓痛、およびビタミン欠乏症と関連した疼痛を含めた神経因性疼痛；ならびに中枢神経系外傷、挫傷／捻挫、およびやけどと関連した疼痛を含む侵害受容性疼痛；心筋梗塞、急性膵炎、術後疼痛、外傷後疼痛、腎仙痛、がんと関連した疼痛、線維筋痛症と関連した疼痛、手根管症候群と関連した疼痛、ならびに背部痛がある。
【０３４５】
本明細書の組成物および方法は、対象における疼痛のレベルを寛解させるのに利用され得る。一部の場合では、対象における疼痛のレベルは、少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、または１００％寛解される。対象における疼痛のレベルは、様々な方法によって査定することができる。一部の場合では、疼痛のレベルは、自己報告によって査定される（すなわち、ヒト対象は、彼／彼女が経験している疼痛のレベルの口頭報告を表現する）。一部の場合では、疼痛のレベルは、疼痛の行動的指標、例えば、顔の表情、肢移動、発声、不穏状態、およびガーディングによって査定される。これらのタイプの査定は、例えば、対象が自己報告できない場合（例えば、乳児、意識不明の対象、非ヒト対象）に有用であり得る。疼痛のレベルは、対象が組成物を用いた処置の前に経験していた疼痛のレベルと比較して本開示の組成物を用いた処置後に査定され得る。
【０３４６】
様々な実施形態では、対象における疼痛を制御、管理、防止、または処置するための方法は、対象に本明細書に企図される有効量のベクターを投与することを含む。いかなる特定の理論にも束縛されることを望まないが、本発明は、本明細書に開示のベクターを使用することによってニューロン活性をモジュレートして対象における疼痛を軽減することを企図する。
【０３４７】
様々な実施形態では、ニューロン細胞を活性化または脱分極させるスイッチ受容体をコードするベクターが、疼痛感覚を低下させる１つまたは複数のニューロン細胞、例えば、阻害性介在ニューロンに投与される（または導入される）。リガンドの存在下で、スイッチ受容体を発現するニューロン細胞は、これらのニューロン細胞を刺激する鎮痛作用を高めて疼痛に対する感受性を活性化および低下させる。
【０３４８】
様々な実施形態では、ニューロン細胞を不活化または過分極させるスイッチ受容体をコードするベクターは、疼痛に対する疼痛感覚または感受性を増大させる１つまたは複数のニューロン細胞、例えば、侵害受容器、末梢知覚神経、Ｃ繊維、Ａδ繊維、Ａβ繊維、ＤＲＧニューロン、ＴＧＧニューロンなどに投与される（または導入される）。リガンドの存在下で、スイッチ受容体を発現するニューロン細胞が不活化され、疼痛に対する感受性を低下させ、鎮痛作用を高める。
【０３４９】
スイッチ受容体の発現を侵害受容器の亜集団に標的化することは、ベクター（例えば、ＡＡＶ１、ＡＡＶ１（Ｙ７０５＋７３１Ｆ＋Ｔ４９２Ｖ）、ＡＡＶ２（Ｙ４４４＋５００＋７３０Ｆ＋Ｔ４９１Ｖ）、ＡＡＶ３（Ｙ７０５＋７３１Ｆ）、ＡＡＶ５、ＡＡＶ５（Ｙ４３６＋６９３＋７１９Ｆ）、ＡＡＶ６、ＡＡＶ６（ＶＰ３バリアントＹ７０５Ｆ／Ｙ７３１Ｆ／Ｔ４９２Ｖ）、ＡＡＶ−７ｍ８、ＡＡＶ８、ＡＡＶ８（Ｙ７３３Ｆ）、ＡＡＶ９、ＡＡＶ９（ＶＰ３バリアントＹ７３１Ｆ）、ＡＡＶ１０（Ｙ７３３Ｆ）、およびＡＡＶ−ＳｈＨ１０）の選択；プロモーターの選択；ならびに送達手段の１つまたは複数によって実現することができる。
【０３５０】
特定の実施形態では、本明細書に企図される組成物および方法は、疼痛を低減することにおいて有効である。
【０３５１】
本明細書に企図されるベクター、組成物、および方法を用いた処置に適用できる疼痛の例示的な例としては、それだけに限らないが、急性疼痛、慢性疼痛、神経因性疼痛、侵害受容性疼痛、異痛症、炎症性疼痛、炎症性痛覚過敏、ニューロパチー、神経痛、糖尿病性ニューロパチー、ヒト免疫不全ウイルス関連ニューロパチー、神経傷害、関節リウマチの疼痛、変形性関節症の疼痛、やけど、背部痛、目の疼痛、内臓痛、がん疼痛（例えば、骨がん疼痛）、歯の疼痛、頭痛、片頭痛、手根管症候群、線維筋痛症、神経炎、坐骨神経痛、骨盤過敏症、骨盤痛、疱疹後神経痛、術後疼痛、卒中後疼痛、および月経痛がある。
【０３５２】
疼痛は、急性または慢性として分類することができる。「急性疼痛」は、突然に始まり、質において通常鋭い疼痛を指す。急性疼痛は、軽度でほんの一瞬続く場合があり、またはこれは、重度で、数週間または数カ月続き得る。ほとんどの場合、急性疼痛は、３カ月より長く続かず、それは、疼痛の根本的な原因が処置または治癒されたとき消滅する。しかし、緩和されない急性疼痛は、慢性疼痛に至り得る。「慢性疼痛」は、急性疾病もしくは傷害の通常の経過を超えて続き、または３〜６カ月超続き、個体のウェルビーイングに悪影響を及ぼす進行中または再発性の疼痛を指す。特定の実施形態では、用語「慢性疼痛」は、それが継続するべきでないときに継続する疼痛を指す。慢性疼痛は、侵害受容性疼痛または神経因性疼痛であり得る。
【０３５３】
特定の実施形態では、本明細書に企図される組成物および方法は、急性疼痛の低減において有効である。
【０３５４】
特定の実施形態では、本明細書に企図される組成物および方法は、慢性疼痛の低減において有効である。
【０３５５】
臨床的疼痛は、違和感および異常な感受性が患者の症状の中で特色として備わるとき存在する。個体は、様々な疼痛症状を伴って存在し得る。このような症状は、１）鈍い、灼熱、または突き刺すようなであり得る自発性疼痛；２）有害な刺激に対する誇張された疼痛応答（痛覚過敏）；および３）通常無害な刺激（allodynia-Meyerら、１９９４年、Textbook  of  Pain、１３〜４４頁）によってもたらされる疼痛を含む。急性および慢性疼痛の様々な形態に罹患している患者は、類似の症状を有し得、根本的な機構は、異なり得、したがって、異なる処置ストラテジーを必要とし得る。したがって疼痛は、侵害受容性疼痛、炎症性疼痛、および神経因性疼痛を含めた異なる病態生理によるいくつかの異なるサブタイプに分けることもできる。
【０３５６】
特定の実施形態では、本明細書に企図される組成物および方法は、侵害受容性疼痛の低減において有効である。
【０３５７】
特定の実施形態では、本明細書に企図される組成物および方法は、炎症性疼痛の低減において有効である。
【０３５８】
特定の実施形態では、本明細書に企図される組成物および方法は、神経因性疼痛の低減において有効である。
【０３５９】
侵害受容性疼痛は、傷害を引き起こす潜在性を伴って、組織傷害または強い刺激によって誘導される。中等度〜重度の急性の侵害受容性疼痛は、中枢神経系外傷、挫傷／捻挫、やけど、心筋梗塞および急性膵炎、術後疼痛（任意のタイプの外科手術後の疼痛）、外傷後疼痛、腎仙痛、がん疼痛、および背部痛からの疼痛の顕著な特色である。がん疼痛は、慢性疼痛、例えば、腫瘍関連疼痛（例えば、骨疼痛、頭痛、顔面痛、もしくは内臓痛）、またはがん療法（例えば、化学療法後症候群、慢性手術後疼痛症候群、もしくは放射線後症候群）と関連した疼痛であり得る。がん疼痛は、化学療法、免疫療法、ホルモン療法、または放射線療法に応答しても起こり得る。背部痛は、椎間板ヘルニアもしくは断裂した椎間板、または腰椎ファセット関節、仙腸関節、傍脊柱筋群、もしくは後縦靱帯の異常に起因し得る。背部痛は、自然に消散し得るが、背部痛が１２週間超にわたり続く一部の患者では、それは、特に衰弱性であり得る慢性状態となる。
【０３６０】
神経因性疼痛は、神経系において原発病変または機能不全によって開始または引き起こされる疼痛として定義され得る。神経因性疼痛の病因としては、例えば、末梢神経障害、糖尿病性ニューロパチー、疱疹後神経痛、三叉神経痛、背部痛、がんニューロパチー、ＨＩＶニューロパチー、幻肢痛、手根管症候群、中枢性卒中後疼痛、ならびに慢性アルコール中毒、甲状腺機能低下症、尿毒症、多発性硬化症、脊髄損傷、パーキンソン病、てんかん、およびビタミン欠乏症と関連した疼痛がある。
【０３６１】
神経因性疼痛は、疼痛に関連した、または疼痛によって引き起こされる疾患、障害、または状態を指す用語である疼痛障害に関連づけることができる。疼痛障害の例示的な例としては、関節炎、異痛症、典型的三叉神経痛、三叉神経痛、身体表現性障害、感覚減退、痛覚過敏、神経痛、神経炎、神経原性疼痛、痛覚脱失、有痛性知覚脱失、カウザルギー、坐骨神経痛障害、変形性関節障害、線維筋痛症、内臓疾患、慢性疼痛障害、片頭痛／頭痛、慢性疲労症候群、複合性局所性疼痛症候群、神経ジストロフィー、足底筋膜炎、またはがんと関連した疼痛がある。
【０３６２】
炎症過程は、腫大および疼痛をもたらす組織傷害または異物の存在に応答して活性化される、複雑な一連の生化学的および細胞事象である。関節炎の疼痛は、一般的な炎症性疼痛である。
【０３６３】
本明細書に企図されるベクター、組成物、および方法を用いた処置に適用できる他のタイプの疼痛としては、それだけに限らないが、筋肉痛、線維筋痛症、脊椎炎、セロネガティブ（非リウマチ様）関節症、非関節性リウマチ、ジストロフィン異常症、グリコーゲン分解、多発性筋炎、および化膿性筋炎を含む筋骨格障害をもたらす疼痛；狭心症、心筋梗塞、僧帽弁狭窄、心膜炎、レイノー現象、強皮症、および骨格筋虚血によって引き起こされる疼痛を含めた心臓および血管痛；片頭痛（アウラを伴う片頭痛およびアウラを伴わない片頭痛を含む）など頭部の疼痛、群発性頭痛、緊張型頭痛混合頭痛および血管障害に関連した頭痛；ならびに歯の疼痛、耳の疼痛、口内焼灼感症候群、および側頭下顎筋筋膜痛を含めた口腔顔面痛がある。
【０３６４】
ヒト対象が経験した疼痛の量を低減する本明細書に企図された組成物および方法の能力は、様々な疼痛スケールを使用して判定することができる。患者自己報告は、疼痛が低減されるか否かを査定するのに使用することができ、例えば、KatzおよびMelzack（１９９９年）、Surg.  Clin.  North  Am.、７９巻：２３１頁を参照。代替として、観察痛スケールを使用することができる。ＬＡＮＳＳ痛みスケールは、疼痛が低減されるか否かを査定するのに使用することができる；例えば、Bennett（２００１年）、Pain、９２巻：１４７頁を参照。視覚的アナログ痛みスケールを使用することができる；例えば、Schmader（２００２年）、Clin.  J.  Pain、１８巻：３５０頁を参照。Ｌｉｋｅｒｔ痛みスケールを使用することができる；例えば、０は、疼痛なし、５は、中等度の疼痛であり、１０は、あり得る最悪の疼痛である。小児の自己報告痛みスケールは、例えば、Ｆａｃｅｓ痛みスケール；Ｗｏｎｇ−Ｂａｋｅｒ  ＦＡＣＥＳ疼痛評価尺度；およびカラーアナログスケールを含む。成人の自己報告痛みスケールとしては、例えば、視覚的アナログスケール；口頭数値評価尺度；口頭記述子スケール；および短期疼痛インベントリーがある。疼痛測定スケールとしては、例えば、アルダー・ヘイ・トリアージ疼痛スコア（Stewartら（２００４年）、Arch.  Dis.  Child.、８９巻：６２５頁）；行動疼痛スケール（Payenら（２００１年）、Critical  Care  Medicine、２９巻：２２５８頁）；短期疼痛インベントリー（CleelandおよびRyan（１９９４年）、Ann.  Acad.  Med.  Singapore、２３巻：１２９頁）；非言語的疼痛指標のチェックリスト（Feldt（２０００年）、Pain  Manag.  Nurs.、１巻：１３頁）；クリティカルケア疼痛観察ツール（Gelinasら（２００６年）、Am.  J.  Crit.  Care、１５巻：４２０頁）；ＣＯＭＦＯＲＴスケール（Ambuelら（１９９２年）J.  Pediatric  Psychol.、１７巻：９５頁）；Ｄａｌｌａｓ疼痛アンケート調査（Ozgulerら（２００２年）、Spine、２７巻：１７８３頁）；Ｄｏｌｏｒｉｍｅｔｅｒ疼痛指数（Hardyら（１９５２年）、Pain  Sensations  and  Reactions  Baltimore:  The  Williams  &  Wilkins  Co.）；フェイスペインスケール−改訂版（Hicksら（２００１年）、Pain、９３巻：１７３頁）；顔、脚、活動、泣きおよび精神安定性スケール；ＭｃＧｉｌｌ疼痛アンケート調査（Melzack（１９７５年）、Pain、１巻：２７７頁）；記述子ディファレンシャルスケール（GracelyおよびKwilosz（１９８８年）、Pain、３５巻：２７９頁）；数的１１ポイントボックス（Jensenら（１９８９年）、Clin.  J.  Pain、５巻：１５３頁）；数値評価尺度（Hartrickら（２００３年）、Pain  Pract.、３巻：３１０頁）；Ｗｏｎｇ−Ｂａｋｅｒ  ＦＡＣＥＳ疼痛評価尺度；および視覚的アナログスケール（Huskisson（１９８２年）、J.  Rheumatol.、９巻：７６８頁）がある。
【０３６５】
特定の実施形態では、ニューロン細胞内にスイッチ受容体を含むベクターを導入することと、スイッチ受容体を活性化するリガンドを提供することによって細胞の活性を制御し、それにより対象における疼痛を緩和することとを含む方法。本方法は、一般的な中枢神経系うつ病などの標的外効果を伴うことなく疼痛の著しい痛覚脱失をもたらす。ある特定の実施形態では、本方法は、未処置対象と比較して対象における神経因性疼痛における１％、５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれよりも多い低減をもたらす。
【０３６６】
特定の実施形態では、本明細書に企図されるベクターは、１つまたは複数のニューロン細胞内に投与または導入される。ニューロン細胞は、同じタイプのニューロン細胞、または異なるタイプのニューロン細胞の混合集団であり得る。
【０３６７】
一実施形態では、ニューロン細胞は、侵害受容器または末梢知覚神経である。
【０３６８】
感覚ニューロンの例示的な例としては、それだけに限らないが、後根神経節（ＤＲＧ）ニューロンおよび三叉神経節（ＴＧＧ）ニューロンがある。
【０３６９】
一実施形態では、ニューロン細胞は、ニューロン痛み回路に関与した阻害性介在ニューロンである。
【０３７０】
一部の場合では、スイッチ受容体をコードするベクターは、それを必要とする対象に投与される。投与の方法の非限定的な例としては、皮下投与、静脈内投与、筋肉内投与、皮内投与、腹腔内投与、経口投与、注入、頭蓋内投与、髄腔内投与、鼻腔内投与、神経節内投与、脊髄内投与、大槽投与、および神経内投与がある。一部の場合では、投与は、ベクターの液体製剤の注射を伴うことができる。他の場合では、投与は、ベクターの固形製剤の経口送達を伴うことができる。一部の場合では、経口製剤は、食品を用いて投与することができる。特定の実施形態では、ベクターは、１つまたは複数のニューロン細胞内にベクターを導入するために、対象に非経口的に、静脈内に、筋肉内に、腹腔内に、髄腔内に、神経内に、神経節内に、脊髄内に、または脳室内に投与される。様々な実施形態では、ベクターは、ｒＡＡＶである。
【０３７１】
一実施形態では、ＡＡＶは、髄腔内（ＩＴ）または神経節内（ＩＧ）投与によって感覚ニューロンまたは侵害受容器、例えば、ＤＲＧニューロン、ＴＧＧニューロンなどに投与される。
【０３７２】
ＩＴ経路は、脳脊髄液（ＣＳＦ）にＡＡＶを送達する。この投与経路は、例えば、慢性疼痛もしくは他の末梢神経系（ＰＮＳ）または中枢神経系（ＣＮＳ）適応症の処置に適する場合がある。動物では、ＩＴ投与は、大槽を通じてＩＴカテーテルを挿入し、それを腰椎レベルまで尾側に進めることによって実現されている。ヒトにおいて、ＩＴ送達は、腰椎穿刺（ＬＰ）、優れた安全性プロファイルで慣例的なベッドサイド手順によって容易に実施することができる。
【０３７３】
特定の場合において、ベクターは、神経節内投与によって対象に投与することができる。神経節内投与は、１つまたは複数の神経節内に直接的に注射することを伴い得る。ＩＧ経路は、ＤＲＧまたはＴＧＧ柔組織内に直接的にＡＡＶを送達し得る。動物では、ＤＲＧにＩＧ投与は、ヒトにおいて望ましくない開放神経外科的な手順によって実施され、その理由は、それが複雑で侵襲性の手順を必要とするためである。ヒトでは、ＤＲＧを安全に標的にする最小侵襲ＣＴイメージング誘導技法を使用することができる。対流増強送達（ＣＥＤ）の特注針アセンブリーを使用してＡＡＶをＤＲＧ柔組織内に送達することができる。非限定例では、本開示のベクターは、慢性疼痛の処置のために１つまたは複数の後根神経節および／または三叉神経節に送達することができる。別の非限定的な例では、本開示のベクターは、てんかんを処置するために結節神経節（迷走神経）に送達することができる。
【０３７４】
なお別の特定の場合では、ベクターは、頭蓋内投与（すなわち、脳内に直接的に）によって対象に投与することができる。頭蓋内投与の非限定例では、本開示のベクターは、脳の皮質内に送達して、例えば、てんかん性痙攣焦点を処置し、脳室周囲視床下部内に送達して、例えば、満腹障害を処置し、または扁桃体中心核内に送達して、例えば、満腹障害を処置することができる。別の特定の場合では、ベクターを神経内注射によって対象に投与することができる（すなわち、神経内に直接的に）。神経は、処置される適応症に基づいて選択することができ、例えば、坐骨神経内に注射して慢性疼痛を処置し、または迷走神経内に注射しててんかんまたは満腹障害を処置する。なお別の特定の場合では、ベクターは、例えば、知覚神経末端内に皮下注射によって対象に投与して慢性疼痛を処置することができる。
【０３７５】
ベクター用量は、対象に送達されるベクターゲノムユニットの数として表現することができる。「ベクターゲノムユニット」は、本明細書では、一用量で投与される個々のベクターゲノムの数を指す。個々のベクターゲノムのサイズは、一般に使用されるウイルスベクターのタイプに依存することになる。本開示のベクターゲノムは、約１．０キロベース、１．５キロベース、２．０キロベース、２．５キロベース、３．０キロベース、３．５キロベース、４．０キロベース、４．５キロベース、５．０キロベース、５．５キロベース、６．０キロベース、６．５キロベース、７．０キロベース、７．５キロベース、８．０キロベース、８．５キロベース、９．０キロベース、９．５キロベース、１０．０キロベースから１０．０キロベース超までであり得る。したがって、単一ベクターゲノムは、最大で１０，０００塩基対またはそれよりも多いヌクレオチドを含み得る。一部の場合では、ベクター用量は、約１×１０６、２×１０６、３×１０６、４×１０６、５×１０６、６×１０６、７×１０６、８×１０６、９×１０６、１×１０７、２×１０７、３×１０７、４×１０７、５×１０７、６×１０７、７×１０７、８×１０７、９×１０７、１×１０８、２×１０８、３×１０８、４×１０８、５×１０８、６×１０８、７×１０８、８×１０８、９×１０８、１×１０９、２×１０９、３×１０９、４×１０９、５×１０９、６×１０９、７×１０９、８×１０９、９×１０９、１×１０１０、２×１０１０、３×１０１０、４×１０１０、５×１０１０、６×１０１０、７×１０１０、８×１０１０、９×１０１０、１×１０１１、２×１０１１、３×１０１１、４×１０１１、５×１０１１、６×１０１１、７×１０１１、８×１０１１、９×１０１１、１×１０１２、２×１０１２、３×１０１２、４×１０１２、５×１０１２、６×１０１２、７×１０１２、８×１０１２、９×１０１２、１×１０１３、２×１０１３、３×１０１３、４×１０１３、５×１０１３、６×１０１３、７×１０１３、８×１０１３、９×１０１３、１×１０１４、２×１０１４、３×１０１４、４×１０１４、５×１０１４、６×１０１４、７×１０１４、８×１０１４、９×１０１４、１×１０１５、２×１０１５、３×１０１５、４×１０１５、５×１０１５、６×１０１５、７×１０１５、８×１０１５、９×１０１５、１×１０１６、２×１０１６、３×１０１６、４×１０１６、５×１０１６、６×１０１６、７×１０１６、８×１０１６、９×１０１６、１×１０１７、２×１０１７、３×１０１７、４×１０１７、５×１０１７、６×１０１７、７×１０１７、８×１０１７、９×１０１７、１×１０１８、２×１０１８、３×１０１８、４×１０１８、５×１０１８、６×１０１８、７×１０１８、８×１０１８、９×１０１８、１×１０１９、２×１０１９、３×１０１９、４×１０１９、５×１０１９、６×１０１９、７×１０１９、８×１０１９、９×１０１９、１×１０２０、２×１０２０、３×１０２０、４×１０２０、５×１０２０、６×１０２０、７×１０２０、８×１０２０、９×１０２０、またはそれよりも多いベクターゲノムユニットであり得る。
【０３７６】
特定の実施形態では、本明細書に企図されるベクターは、少なくとも約１×１０９ゲノム粒子／ｍＬ、少なくとも約１×１０１０ゲノム粒子／ｍＬ、少なくとも約５×１０１０ゲノム粒子／ｍＬ、少なくとも約１×１０１１ゲノム粒子／ｍＬ、少なくとも約５×１０１１ゲノム粒子／ｍＬ、少なくとも約１×１０１２ゲノム粒子／ｍＬ、少なくとも約５×１０１２ゲノム粒子／ｍＬ、少なくとも約６×１０１２ゲノム粒子／ｍＬ、少なくとも約７×１０１２ゲノム粒子／ｍＬ、少なくとも約８×１０１２ゲノム粒子／ｍＬ、少なくとも約９×１０１２ゲノム粒子／ｍＬ、少なくとも約１０×１０１２ゲノム粒子／ｍＬ、少なくとも約１５×１０１２ゲノム粒子／ｍＬ、少なくとも約２０×１０１２ゲノム粒子／ｍＬ、少なくとも約２５×１０１２ゲノム粒子／ｍＬ、少なくとも約５０×１０１２ゲノム粒子／ｍＬ、または少なくとも約１００×１０１２ゲノム粒子／ｍＬの力価で対象に投与される。ウイルス力価を参照して使用される用語「ゲノム粒子（ｇｐ）」、または「ゲノム等価物」、または「ゲノムコピー」（ｇｃ）は、感染力または機能性にかかわらず組換え型ＡＡＶ  ＤＮＡゲノムを含有するビリオンの数を指す。特定のベクター調製物中のゲノム粒子の数は、本明細書の実施例、または例えば、Clarkら（１９９９年）、Hum.  Gene  Ther.、１０巻：１０３１〜１０３９頁；Veldwijkら（２００２年）、Mol.  Ther.、６巻：２７２〜２７８頁に記載のものなどの手順によって測定することができる。
【０３７７】
本開示のベクターは、流体の体積で投与することができる。一部の場合では、ベクターは、約０．１ｍＬ、０．２ｍＬ、０．３ｍＬ、０．４ｍＬ、０．５ｍＬ、０．６ｍＬ、０．７ｍＬ、０．８ｍＬ、０．９ｍＬ、１．０ｍＬ、２．０ｍＬ、３．０ｍＬ、４．０ｍＬ、５．０ｍＬ、６．０ｍＬ、７．０ｍＬ、８．０ｍＬ、９．０ｍＬ、１０．０ｍＬ、１１．０ｍＬ、１２．０ｍＬ、１３．０ｍＬ、１４．０ｍＬ、１５．０ｍＬ、１６．０ｍＬ、１７．０ｍＬ、１８．０ｍＬ、１９．０ｍＬ、２０．０ｍＬ、または２０．０ｍＬ超の体積で投与され得る。一部の場合では、ベクター用量は、対象に投与されるベクターの濃度または力価として表現され得る。この場合、ベクター用量は、体積当たりベクターゲノムユニットの数（すなわち、ゲノムユニット／体積）として表現され得る。
【０３７８】
特定の実施形態では、本明細書に企図されるベクターは、少なくとも約５×１０９感染単位／ｍＬ、少なくとも約６×１０９感染単位／ｍＬ、少なくとも約７×１０９感染単位／ｍＬ、少なくとも約８×１０９感染単位／ｍＬ、少なくとも約９×１０９感染単位／ｍＬ、少なくとも約１０×１０９感染単位／ｍＬ、少なくとも約１５×１０９感染単位／ｍＬ、少なくとも約２０×１０９感染単位／ｍＬ、少なくとも約２５×１０９感染単位／ｍＬ、少なくとも約５０×１０９感染単位／ｍＬ、または少なくとも約１００×１０９感染単位／ｍＬの力価で対象に投与される。用語「感染ユニット（ｉｕ）」、「感染性粒子」、または「複製ユニット」は、ウイルス力価を参照して使用される場合、例えば、McLaughlinら（１９８８年）、J.  Virol.、６２巻：１９６３〜１９７３頁に記載された通り、複製中心アッセイとしても公知の感染中心アッセイによって測定される場合の感染性および複製可能組換えＡＡＶベクター粒子の数を指す。
【０３７９】
特定の実施形態では、本明細書に企図されるベクターは、少なくとも約５×１０１０形質導入ユニット／ｍＬ、少なくとも約６×１０１０形質導入ユニット／ｍＬ、少なくとも約７×１０１０形質導入ユニット／ｍＬ、少なくとも約８×１０１０形質導入ユニット／ｍＬ、少なくとも約９×１０１０形質導入ユニット／ｍＬ、少なくとも約１０×１０１０形質導入ユニット／ｍＬ、少なくとも約１５×１０１０形質導入ユニット／ｍＬ、少なくとも約２０×１０１０形質導入ユニット／ｍＬ、少なくとも約２５×１０１０形質導入ユニット／ｍＬ、少なくとも約５０×１０１０形質導入ユニット／ｍＬ、または少なくとも約１００×１０１０形質導入ユニット／ｍＬの力価で対象に投与される。用語「形質導入ユニット（ｔｕ）」は、ウイルス力価を参照して使用される場合、本明細書の実施例、または例えば、Xiaoら（１９９７年）Exp.  Neurobiol.、１４４巻：１１３〜１２４頁；もしくはFisherら（１９９６年）、J.  Virol.、７０巻：５２０〜５３２頁（ＬＦＵアッセイ）に記載のものなどの機能アッセイで測定される機能的導入遺伝子産物の産生をもたらす感染性組換えＡＡＶベクター粒子の数を指す。
【０３８０】
ベクター用量は、一般に投与経路によって判定されることになる。特定の例では、神経節内注射は、約０．１ｍＬ〜約１．０ｍＬの体積中約１×１０９〜約１×１０１３ベクターゲノムを含み得る。別の特定の場合では、髄腔内注射は、約１．０ｍＬ〜約１２．０ｍＬの体積中約１×１０１０〜約１×１０１５ベクターゲノムを含み得る。なお別の特定の場合では、頭蓋内注射は、約０．１ｍＬ〜約１．０ｍＬの体積中約１×１０９〜約１×１０１３のベクターゲノムを含み得る。別の特定の場合では、神経内注射は、約０．１ｍＬ〜約１．０ｍＬの体積中約１×１０９〜約１×１０１３ベクターゲノムを含み得る。別の特定の例では、脊髄内注射は、約０．１ｍＬ〜約１．０ｍＬの体積中約１×１０９〜約１×１０１３ベクターゲノムを含み得る。なお別の特定の場合では、大槽注入は、約０．５ｍＬ〜約５．０ｍＬの体積中約５×１０９〜約５×１０１３ベクターゲノムを含み得る。なお別の特定の場合では、皮下注射は、約０．１ｍＬ〜約１．０ｍＬの体積中約１×１０９〜約１×１０１３ベクターゲノムを含み得る。
【０３８１】
一部の場合では、ベクターは、注入によって対象に送達される。注入による対象に送達されるベクター用量は、ベクター注入速度として測定することができる。ベクター注入速度の非限定的な例としては、神経節内、脊髄内、頭蓋内、または神経内投与について１〜１０μｌ／分；および髄腔内または大槽投与について１０〜１０００μｌ／分を含む。一部の場合では、ベクターは、ＭＲＩガイド下対流増強送達（ＣＥＤ）によって対象に送達される。この技法は、脳の大体積にわたって分配されたウイルスの伝播および形質導入の増大を可能にするとともに、針経路に沿ったベクターの逆流を低減する。
【０３８２】
様々な実施形態では、痛覚または疼痛に対する感受性を増大させる１個または複数のニューロン細胞にニューロン細胞を不活化または過分極させるスイッチ受容体をコードするベクターを投与することと、対象にスイッチ受容体を発現させるニューロン細胞と特異的に結合するリガンドを投与し、それにより細胞を不活化し、疼痛に対する感受性を低下させ、鎮痛作用を高めることとを含む方法が提供されている。
【０３８３】
様々な実施形態では、痛覚または疼痛に対する感受性を低下させる１個または複数のニューロン細胞にニューロン細胞を活性化または分極させるスイッチ受容体をコードするベクターを投与することと、対象にスイッチ受容体を発現させるニューロン細胞と特異的に結合するリガンドを投与し、それにより細胞を活性化させ、疼痛に対する感受性を低下させ、鎮痛作用を高めることとを含む方法が提供されている。
【０３８４】
リガンドの製剤は、様々な経路により対象に投与することができる。投与の方法の非限定的な例としては、皮下投与、静脈内投与、筋肉内投与、経皮投与、皮内投与、腹腔内投与、経口投与、注入、頭蓋内投与、髄腔内投与、鼻腔内投与、神経節内投与、および神経内投与がある。一部の場合では、投与は、リガンドの液体製剤の注射を伴うことができる。他の場合では、投与は、リガンドの固形製剤の経口送達を伴うことができる。特定の場合において、リガンドは、経口投与（例えば、ピル、錠剤、カプセル剤など）により投与される。一部の場合では、経口組成物は、食品とともに投与することができる。別の特定の場合では、リガンドは、対象の脳脊髄液（ＣＳＦ）に送達するために髄腔内注射（すなわち、脊髄のくも膜下腔内に）によって投与される。別の特定の場合では、リガンドは、局所的に（例えば、皮膚パッチ、クリーム、ローション剤、軟膏など）に投与される。
【０３８５】
対象に投与されるリガンドの投与量は、絶対的な制限を受けないが、組成物の特質およびその活性成分およびその不要な副作用（例えば、抗体に対する免疫応答）、処置されている対象および処置されている状態のタイプおよび投与の様式に依存することになる。一般に、用量は、治療有効量、例えば、所望の生物学的効果を実現するのに十分な量、例えば、対象によって経験される疼痛のレベルを低下または減弱させるのに有効である量などとなる。特定の実施形態では、用量は、予防的量または有効量にもなり得る。リガンドの治療有効量は、投与経路、処置されている適応症、および／または使用のために選択されるリガンドに依存し得る。
【０３８６】
一実施形態では、リガンドは、ベクターの投与の前に対象に最初に投与される。リガンドの治療有効量は、ベクターの送達後のある時間に対象に投与され得る。一般に、ベクターの送達後、ベクターによってコードされるタンパク質（すなわち、スイッチ受容体）を生成するのに対象の１個または複数の細胞に要求される時間が存在することになる。この時間中、対象にリガンドを投与しても対象に有益となり得ない。この状況下において、ある量のスイッチ受容体が対象の１個または複数の細胞によって産生された後、リガンドを投与することが適する場合がある。
【０３８７】
一実施形態では、リガンドは、ベクターが対象に投与されるおよそ同じ時間に対象に最初に投与される。
【０３８８】
一実施形態では、リガンドは、対象にベクターを投与した後１、２、３、４、５、６、７、８、９、１１、もしくは１２時間、日間、週間、カ月間、または年間最初に投与される。一部の場合では、治療有効量のリガンドは、ベクターを送達して少なくとも１日、２日、３日、４日、５日、６日、７日、８日、９日、１０日、１１日、１２日、１３日、１４日、１５日、１６日、１７日、１８日、１９日、２０日、２１日、２２日、２３日、２４日、２５日、２６日、２７日、２８日、２９日、３０日、または３０日よりも多い後に対象に投与される場合がある。特定の例では、治療有効量のリガンドは、ベクターを送達して少なくとも１週間後に対象に投与される。さらなる例では、治療有効量のリガンドは、少なくとも３連続日毎日対象に投与される。
【０３８９】
本開示のリガンドの治療有効量または用量は、対象の体質量の１ｋｇ当たりのリガンドのｍｇまたはμｇとして表現することができる。一部の事例では、リガンドの治療有効量は、約０．００１μｇ／ｋｇ、約０．００５μｇ／ｋｇ、約０．０１μｇ／ｋｇ、約０．０５μｇ／ｋｇ、約０．１μｇ／ｋｇ、約０．５μｇ／ｋｇ、約１μｇ／ｋｇ、約２μｇ／ｋｇ、約３μｇ／ｋｇ、約４μｇ／ｋｇ、約５μｇ／ｋｇ、約６μｇ／ｋｇ、約７μｇ／ｋｇ、約８μｇ／ｋｇ、約９μｇ／ｋｇ、約１０μｇ／ｋｇ、約２０μｇ／ｋｇ、約３０μｇ／ｋｇ、約４０μｇ／ｋｇ、約５０μｇ／ｋｇ、約６０μｇ／ｋｇ、約７０μｇ／ｋｇ、約８０μｇ／ｋｇ、約９０μｇ／ｋｇ、約１００μｇ／ｋｇ、約１２０μｇ／ｋｇ、約１４０μｇ／ｋｇ、約１６０μｇ／ｋｇ、約１８０μｇ／ｋｇ、約２００μｇ／ｋｇ、約２２０μｇ／ｋｇ、約２４０μｇ／ｋｇ、約２６０μｇ／ｋｇ、約２８０μｇ／ｋｇ、約３００μｇ／ｋｇ、約３２０μｇ／ｋｇ、約３４０μｇ／ｋｇ、約３６０μｇ／ｋｇ、約３８０μｇ／ｋｇ、約４００μｇ／ｋｇ、約４２０μｇ／ｋｇ、約４４０μｇ／ｋｇ、約４６０μｇ／ｋｇ、約４８０μｇ／ｋｇ、約５００μｇ／ｋｇ、約５２０μｇ／ｋｇ、約５４０μｇ／ｋｇ、約５６０μｇ／ｋｇ、約５８０μｇ／ｋｇ、約６００μｇ／ｋｇ、約６２０μｇ／ｋｇ、約６４０μｇ／ｋｇ、約６６０μｇ／ｋｇ、約６８０μｇ／ｋｇ、約７００μｇ／ｋｇ、約７２０μｇ／ｋｇ、約７４０μｇ／ｋｇ、約７６０μｇ／ｋｇ、約７８０μｇ／ｋｇ、約８００μｇ／ｋｇ、約８２０μｇ／ｋｇ、約８４０μｇ／ｋｇ、約８６０μｇ／ｋｇ、約８８０μｇ／ｋｇ、約９００μｇ／ｋｇ、約９２０μｇ／ｋｇ、約９４０μｇ／ｋｇ、約９６０μｇ／ｋｇ、約９８０μｇ／ｋｇ、約１ｍｇ／ｋｇ、約２ｍｇ／ｋｇ、約３ｍｇ／ｋｇ、約４ｍｇ／ｋｇ、約５ｍｇ／ｋｇ、約６ｍｇ／ｋｇ、約７ｍｇ／ｋｇ、約８ｍｇ／ｋｇ、約９ｍｇ／ｋｇ、約１０ｍｇ／ｋｇ、または１０ｍｇ／ｋｇ超であり得る。
【０３９０】
特定の実施形態では、対象に投与されるリガンドの用量は、１キログラム当たり少なくとも約０．００１マイクログラム（μｇ／ｋｇ）、少なくとも約０．００５μｇ／ｋｇ、少なくとも約０．０１μｇ／ｋｇ、少なくとも約０．０５μｇ／ｋｇ、少なくとも約０．１μｇ／ｋｇ、少なくとも約０．５μｇ／ｋｇ、１キログラム当たり０．００１ミリグラム（ｍｇ／ｋｇ）、少なくとも約０．００５ｍｇ／ｋｇ、少なくとも約０．０１ｍｇ／ｋｇ、少なくとも約０．０５ｍｇ／ｋｇ、少なくとも約０．１ｍｇ／ｋｇ、少なくとも約０．５ｍｇ／ｋｇ、少なくとも約１ｍｇ／ｋｇ、少なくとも約２ｍｇ／ｋｇ、少なくとも約３ｍｇ／ｋｇ、少なくとも約４ｍｇ／ｋｇ、少なくとも約５ｍｇ／ｋｇ、少なくとも約５ｍｇ／ｋｇ、少なくとも約６ｍｇ／ｋｇ、少なくとも約７ｍｇ／ｋｇ、少なくとも約８ｍｇ／ｋｇ、少なくとも約８ｍｇ／ｋｇ、少なくとも約９ｍｇ／ｋｇ、または少なくとも約１０またはそれよりも多いｍｇ／ｋｇである。
【０３９１】
特定の実施形態では、対象に投与されるリガンドの用量は、少なくとも約０．００１μｇ／ｋｇ〜少なくとも約１０ｍｇ／ｋｇ、少なくとも約０．０１μｇ／ｋｇ〜少なくとも約１０ｍｇ／ｋｇ、少なくとも約０．１μｇ／ｋｇ〜少なくとも約１０ｍｇ／ｋｇ、少なくとも約１μｇ／ｋｇ〜少なくとも約１０ｍｇ／ｋｇ、少なくとも約０．０１ｍｇ／ｋｇ〜少なくとも約１０ｍｇ／ｋｇ、少なくとも約０．１ｍｇ／ｋｇ〜少なくとも約１０ｍｇ／ｋｇ、または少なくとも約１ｍｇ／ｋｇ〜少なくとも約１０ｍｇ／ｋｇ、またはその任意の介在範囲である。
【０３９２】
一部の態様では、リガンドの治療有効量は、モル濃度として表現することができる（すなわち、Ｍまたはｍｏｌ／Ｌ）。一部の場合では、リガンドの治療有効量は、約１ｎＭ、２ｎＭ、３ｎＭ、４ｎＭ、５ｎＭ、６ｎＭ、７ｎＭ、８ｎＭ、９ｎＭ、１０ｎＭ、２０ｎＭ、３０ｎＭ、４０ｎＭ、５０ｎＭ、６０ｎＭ、７０ｎＭ、８０ｎＭ、９０ｎＭ、１００ｎＭ、２００ｎＭ、３００ｎＭ、４００ｎＭ、５００ｎＭ、６００ｎＭ、７００ｎＭ、８００ｎＭ、９００ｎＭ、１ｍＭ、２ｍＭ、３ｍＭ、４ｍＭ、５ｍＭ、６ｍＭ、７ｍＭ、８ｍＭ、９ｍＭ、１０ｍＭ、２０ｍＭ、３０ｍＭ、４０ｍＭ、５０ｍＭ、６０ｍＭ、７０ｍＭ、８０ｍＭ、９０ｍＭ、１００ｍＭ、２００ｍＭ、３００ｍＭ、４００ｍＭ、５００ｍＭ、６００ｍＭ、７００ｍＭ、８００ｍＭ、９００ｍＭ、１０００ｍＭ、またはそれよりも多い場合がある。
【０３９３】
リガンドの治療有効量は、それぞれの日に１回または１回超投与することができる。一部の場合では、リガンドの治療有効量は、必要に応じ投与される（例えば、疼痛緩和が必要とされるとき）。リガンドは、連続的に投与され得る（例えば、処置レジメンの継続時間について中断なく毎日）。一部の場合では、処置レジメンは、１週間未満、１週間、２週間、３週間、１カ月、または１カ月超であり得る。一部の場合では、リガンドの治療有効量は、１日、少なくとも２連続日、少なくとも３連続日、少なくとも４連続日、少なくとも５連続日、少なくとも６連続日、少なくとも７連続日、少なくとも８連続日、少なくとも９連続日、少なくとも１０連続日、または少なくとも１０連続日超にわたって投与される。特定の場合において、リガンドの治療有効量は、３日連続で投与される。一部の場合では、リガンドの治療有効量は、週に１回、週に２回、週に３回、週に４回、週に５回、週に６回、週に７回、週に８回、週に９回、週に１０回、週に１１回、週に１２回、週に１３回、週に１４回、週に１５回、週に１６回、週に１７回、週に１８回、週に１９回、週に２０回、週に２５回、週に３０回、週に３５回、週に４０回、または週に４０回超投与することができる。一部の場合では、リガンドの治療有効量は、１日１回、１日２回、１日３回、１日４回、１日５回、１日６回、１日７回、１日８回、１日９回、１日１０回、または１日１０回超投与することができる。一部の場合では、リガンドの治療有効量は、少なくとも１時間毎、少なくとも２時間毎、少なくとも３時間毎、少なくとも４時間毎、少なくとも５時間毎、少なくとも６時間毎、少なくとも７時間毎、少なくとも８時間毎、少なくとも９時間毎、少なくとも１０時間毎、少なくとも１１時間毎、少なくとも１２時間毎、少なくとも１３時間毎、少なくとも１４時間毎、少なくとも１５時間毎、少なくとも１６時間毎、少なくとも１７時間毎、少なくとも１８時間毎、少なくとも１９時間毎、少なくとも２０時間毎、少なくとも２１時間毎、少なくとも２２時間毎、少なくとも２３時間毎、または少なくとも毎日投与される。用量のリガンドは、連続的に、あるいは１日１、２、３、４、もしくは５回；１週間に１、２、３、４、５、６、もしくは７回、１カ月に１、２、３、もしくは４回、２、３、４、５、もしくは６カ月に１回、１年に１回、またはさらにはより長い間隔で対象に投与される場合がある。処置の継続時間は、１日、１、２、もしくは３週間、１、２、３、４、５、７、８、９、１０、もしくは１１カ月、１、２、３、４、５、もしくはそれよりも多い年数、またはそれよりも長く続き得る。
【０３９４】
本明細書に開示の方法および組成物によって処置される対象は、ヒトであり得、または非ヒト動物であり得る。本明細書で使用される用語「処置する」およびその文法的な同義語は、一般に、疾患の症状を低減、排除、または防止する組成物または方法の使用を指し、治療上の利益および／または予防的利益を実現することを含む。治療上の利益とは、処置されている根本的な障害または状態の根絶または寛解を意味する。処置の予防的利益としては、状態のリスクを低減すること、状態の進展を遅らせること、または状態の発生の見込みを低下させることがある。
【０３９５】
非ヒト動物の非限定的な例としては、非ヒト霊長類、家畜動物、家庭内ペット、および実験動物がある。例えば、非ヒト動物は、類人猿（例えば、チンパンジー、ヒヒ、ゴリラ、もしくはオランウータン）、旧世界サル（例えば、アカゲザル）、新世界サル、イヌ、ネコ、バイソン、ラクダ、ウシ、シカ、ブタ、ロバ、ウマ、ラバ、ラマ、ヒツジ、ヤギ、バッファロー、トナカイ、ヤク、マウス、ラット、ウサギ、または任意の他の非ヒト動物であり得る。本明細書に記載の組成物および方法は、獣医学上の動物の処置に適用できる。獣医学上の動物としては、限定することなく、イヌ、ネコ、ウマ、ウシ、ヒツジ、マウス、ラット、モルモット、ハムスター、ウサギ、ヘビ、カメ、およびトカゲがある。
Ｋ．キット
【０３９６】
本発明に有用な組成物および試薬は、本発明の特定の実施形態の適用を容易にするためのキット中に梱包することができる。一部の実施形態では、キットは、本明細書に企図されるポリヌクレオチド、ベクター、または組成物を含むキットが提供されている。一実施形態では、キットは、本明細書に企図される組換えウイルスを含む。本明細書に企図されるキットの実施形態は、指示書も含み得る。指示書は、それだけに限らないが、キットインサート上に印刷されたもの、１つまたは複数の容器に印刷されたもの、およびコンピューター可読記憶媒体などの電子記憶媒体上に提供される電子的に記憶される指示書を含めた任意の所望の形態であり得る。
【０３９７】
キットは、本開示の方法を実施するのに適した任意のコンポーネントを含み得る。一場合において、キットは、生物医薬品組成物を含み得る。生物医薬品組成物は、１つまたは複数の治療有効用量で提供することができる。一場合において、生物医薬品組成物は、ＧＰＣＲまたはＬＧＩＣをコードするベクターを含み得る。他の場合では、キットは、ベクター中に本開示のＧＰＣＲまたはＬＧＩＣをクローニングするのに適した空ベクターおよび試薬を含み得る。ＧＰＣＲまたはＬＧＩＣをクローニングするのに適した試薬の非限定的な例としては、ＧＰＣＲまたはＬＧＩＣ核酸配列を増幅するための試薬、例えば、鋳型ＤＮＡまたはＲＮＡ、逆転写酵素、プライマー、ｄＮＴＰ、ＤＮＡポリメラーゼ、および緩衝液など；ＧＰＣＲまたはＬＧＩＣをクローニングするための試薬、例えば、制限エンドヌクレアーゼ（すなわち、制限酵素）、ＤＮＡリガーゼ、および緩衝液などがある。
【０３９８】
一部の場合では、キットは、本明細書に記載の１種または複数の治療有効用量のリガンドを含み得る。一部の場合では、キットは、１つまたは複数の治療有効用量のクロザピン−Ｎ−オキシドを含む。他の場合では、キットは、１種または複数の治療有効用量のサルビノリンＢを含む。
【０３９９】
キットは、経口投与のための錠剤製剤中に治療有効用量の任意の組成物を含み得る。他の場合では、キットは、髄腔内、神経節内、神経内、頭蓋内、脊髄内（intrapsinal）、または皮下投与のための液体製剤中に治療有効用量の任意の組成物を含み得る。組成物は、本明細書に記載の任意の製剤中に提供され得る（すなわち、錠剤、ゲル、クリームなど）。一部の場合では、キットは、乾燥した（すなわち、凍結乾燥した）または粉末形態中の任意の組成物を含み得る。乾燥または粉末薬物は、液体溶液（すなわち、食塩液）で再構成して液体製剤を形成することができる。ベクターおよびリガンド組成物は、別個に（例えば、別個のキット中に）提供することができる。キットは、本明細書に記載の１つまたは複数の賦形剤（すなわち、防腐剤、担体など）をさらに含み得る。
【０４００】
キットは、組成物の投与に適した任意のデバイスをさらに含み得る。例えば、医薬組成物の注射製剤を含むキットは、皮下投与に適した針および注射部位を滅菌するためのアルコールワイプを含み得る。
【０４０１】
一部の場合では、キットは、薬物発見のための試薬および材料を含み得る。この特質のキットは、化合物をスクリーニングするのに適した細胞を含有し得る。一部の場合では、細胞は、一次ニューロン、星状細胞、またはグリア細胞であり得る。一部の場合では、細胞は、神経幹細胞または神経前駆細胞から生成されるニューロンである。ニューロンは、人工多能性幹細胞（ｉＰＳ）から生成され得る。ｉＰＳ細胞は、多能性状態に復帰した操作された細胞（例えば、線維芽細胞、皮膚細胞など）であり得る。一部の場合では、ｉＰＳ細胞は、対象または患者に由来し得る。一部の場合では、患者は、疾患に罹患し得る。一部の場合では、ｉＰＳ細胞は、ニューロンを生成するために試薬および指示書を含むキットで提供することができる。本明細書に記載の細胞は、バイアル中に（例えば、凍結状態で）、または培養の準備ができた皿上に提供され得る。キットは、本開示の細胞を増殖させるのに適した細胞培養基を含み得る。他の場合では、キットは、対象から細胞を収集し、ｉＰＳ細胞を生成するための計測器および試薬を含み得る。例えば、キットは、対象から皮膚細胞（または皮膚生検）を収集するためのツールおよび収集された皮膚細胞（例えば、トランスフェクション試薬、ｉＰＳマーカー遺伝子（例えば、Ｏｃｔ４、ＳＯＸ２、ＮＡＮＯＧなど）の発現のための一連のプラスミド）からｉＰＳ細胞を生成するための一連の試薬を含み得る。化合物をスクリーニングするためのキットは、ＧＰＣＲまたはＬＧＩＣをコードするベクターまたは核酸分子を含有し得る。一部の場合では、キットは、スクリーニングのための１つまたは複数の候補化合物を含み得る。一部の場合では、候補化合物は、ＧＰＣＲまたはＬＧＩＣのリガンドである。特定の例では、キットは、ニューロン中の標的ＧＰＣＲまたはＬＧＩＣを活性化する化合物をスクリーニングするための試薬およびツールを含み得る。キットは、細胞培養条件下でニューロン活性を測定するためのツール（例えば、パッチクランプシステム、電圧感受性染料など）をさらに含み得る。
【０４０２】
一部の場合では、キットは、指示書とともに提供される場合がある。指示書は、キット中で提供することができ、またはこれらは、電子的に（例えば、ワールドワイドウェブ上で）アクセスすることができる。指示書は、本開示の組成物をどのように使用するかについての情報を提供することができる。指示書は、本開示のデバイスをどのように使用するかについての情報をさらに提供することができる。指示書は、本開示の方法をどのように実施するかについての情報を提供することができる。一部の場合では、指示書は、投薬情報を提供することができる。一部の場合では、指示書は、作用機序、薬物の製剤、有害なリスク、禁忌などの薬物情報を提供することができる。一部の場合では、キットは、診療所または病院での投与のために医師または医療提供者が購入する。一部の場合では、キットは、研究所が購入し、候補化合物をスクリーニングするのに使用される。
【０４０３】
本発明は、以下の実施例によってより完全に記載されることになる。しかし、本発明は、多くの異なる形態で具現化することができ、本明細書に示した実施形態に限定されると解釈されるべきでない、むしろ、これらの実施形態は、本開示が徹底的かつ完全となり、当業者に本発明の射程を完全に伝えることになるように提供される。
【表４−１】
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【表４−２】
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【表４−３】
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【表４−４】
2018531926.tif 000009
【表４−５】
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【実施例】
【０４０４】
（実施例１）
ｈＳＹＮ１−ＧｌｙＲ  αｌｐｈａ１  Ｆ２０７Ａ／Ａ２８８Ｇ  ＡＡＶベクターの構築。
Ｖ２７２−ｐＦＢ−ｉｎＣａｐ６（Ｙ７０５＋Ｙ７３１Ｆ＋Ｔ４９２Ｖ）−ｉｎＲｅｐ−Ｋａｎのクローニング
導入されるＳｂｆＩ部位および突然変異（Ｔ４９２Ｖ）を含有する３９０ｂｐ  ｃａｐ６断片は、プライマー２７９３Ｆおよび２７９４Ｒで増幅されるＰＣＲである。導入されたＢｓｉＷＩ部位および突然変異（Ｔ４９２Ｖ）を含有する４４０ｂｐ  ｃａｐ６断片は、プライマー２７９５Ｆおよび２７９６Ｒで増幅されるＰＣＲである。増幅産物は、ゲル電気泳動によって単離され、精製される。
【０４０５】
精製された３９０ｂｐおよび４４０ｂｐ  ＰＣＲ産物は、重複ＰＣＲに付されてプライマー２７９３Ｆおよび２７９６Ｒを含む８１０ｂｐ  ｃａｐ６断片が生成される。増幅産物は、ゲル電気泳動によって単離され、精製される。
【０４０６】
精製された８１０ｂｐ  ｃａｐ６断片は、ＳｂｆＩおよびＢｓｉＷＩで消化され、ＳｂｆＩおよびＢｓｉＷＩで消化されたＶ２２０ベクター中にライゲーションされてＶ２７２−ｐＦＢ−ｉｎＣａｐ６（Ｙ７０５＋７３１Ｆ＋Ｔ４９２Ｖ）−ｉｎＲｅｐ−Ｋａｎが生成される。
【０４０７】
プライマー配列：
【表５】
2018531926.tif 000011
ＳＷＢ０１−ｐＦＢ−ｈＳｙｎ−Ｇｌｙ（Ｆ２０７Ａ＋Ａ２８８Ｇ）のクローニング
【０４０８】
以下の断片がＰＣＲ増幅される：（ａ）ｈＳｙｎプロモーター（５１０ｂｐ）は、鋳型としてｈＳＹＮプラスミドを使用してプライマー２７９９Ｆおよび２８００ＲでＰＣＲ増幅される；（ｂ）グリシン受容体アルファ１断片（frament）（６５２ｂｐ）は、鋳型として野生型グリシン受容体アルファ１プラスミドを使用してプライマー２８０１Ｆおよび２８０２ＲでＰＣＲ増幅される；（ｃ）グリシン受容体アルファ１断片（２６６ｂｐ）は、鋳型としてプライマー２８０３Ｆおよび２８０４Ｒならびに野生型グリシン受容体アルファ１プラスミドでＰＣＲ増幅される；（ｄ）グリシン受容体アルファ１断片（４６１ｂｐ）は、鋳型としてプライマー２８０５Ｆおよび２８０６Ｒならびに野生型グリシン受容体アルファ１プラスミドでＰＣＲ増幅される；（ｅ）ｂＧＨｐＡ断片（２８２ｂｐ）は、鋳型としてＶ２６１を使用してプライマー２８０７Ｆ、２８０８Ｆ、および２８０９ＲでＰＣＲ増幅される。増幅産物は、ゲル電気泳動によって単離され、精製される。
【０４０９】
精製されたＰＣＲ断片は、重複ＰＣＲ内で使用され、以下のより大きい断片を生成する：（１）断片（ａ）、（ｂ）、および（ｃ）は、プライマー２７９９Ｆおよび２８０４Ｒを用いて重複ＰＣＲを使用して一緒に接合される（１３３８ｂｐ）；（２）断片（ｃ）、（ｄ）、および（ｅ）は、プライマー２８０３Ｆおよび２８０９Ｒを用いて重複ＰＣＲを使用して一緒に接合される（９７１ｂｐ）。増幅産物は、ゲル電気泳動によって単離され、精製される。
【０４１０】
断片１は、ＫｐｎＩおよびＡｖｒＩＩで消化され、断片２は、ＡｖｒＩＩおよびＳｐｈＩで消化される。これらの断片は、ＫｐｎＩおよびＳｐｈＩで消化されたｐＦＢ−ｓｃ−ＥＧＦＰ中にライゲーションされて、ＳＷＢ０１−ｐＦＢ−ｈＳｙｎ−Ｇｌｙ（Ｆ２０７Ａ＋Ａ２８８Ｇ）を生成する。
【０４１１】
プライマー配列：
【表６】
2018531926.tif 000012
【０４１２】
１×１０１３ベクターゲノム（ｖｇ）／ｍＬで、組換えバキュロウイルスは、ＡＡＶ６−Ｇｌｙ（ｈＳＹＮ−ＧｌｙＲ（Ｆ２０７Ａ／Ａ２８８Ｇ）−ＦＬＡＧおよびＡＡＶ６（Ｙ７０５Ｆ＋Ｙ７３１Ｆ＋Ｔ４９２Ｖ）−Ｇｌｙ（ｈＳＹＮ−ＧｌｙＲ（Ｆ２０７Ａ／Ａ２８８Ｇ）−ＦＬＡＧを産生するのに生成される。
（実施例２）
慢性疼痛のげっ歯類モデルの処置。
慢性疼痛誘導および処置
【０４１３】
０日目：慢性疼痛は、確立された末梢神経傷害法、例えば、慢性狭窄部傷害（ＣＣＩ、ＣＣＩ／ＣＦＡ）または救済神経傷害（ＳＮＩ）モデルなどを使用してげっ歯類三叉神経節または後根神経節において誘導される。BennettおよびXie、Pain、１９８８年、DecosterdおよびWoolf、  Pain.、２０００年、およびImamura、Kawamoto、およびNakanishi、Exp.  Brain  Res.、１９９７年を参照。一部の事例では、神経傷害は、ウイルスベクター注射後に起こり得る。
【０４１４】
７日目：およそ１．０〜１０μＬの体積中のＡＡＶ６（Ｙ７０５Ｆ＋Ｙ７３１Ｆ＋Ｔ４９２Ｖ）−ＨＳＹＮ−ＧＬＹＲ（Ｆ２０７Ａ／Ａ２８８Ｇ）−ＦＬＡＧまたはＡＡＶ６−ＧＬＹ（ＨＳＹＮ−ＧＬＹＲ（Ｆ２０７Ａ／Ａ２８８Ｇ）−ＦＬＡＧの１０８〜１０１０ベクターゲノムの神経節内または髄腔内注射は、公表された方法を使用して１つまたは複数の後根神経節または三叉神経節で実施される。Vit、Ohara、Sundbergら、Mol  Pain.、２００９年およびTowne、Fischer、Kosticら、J  Neurosci  Methods.、２０１１年およびPertinら、Mol  Pain.、２００９年を参照。
【０４１５】
ＣＣＩまたはＳＮＩ後２〜１２週間目：イベルメクチンは、１日当たり０．１〜１０．０ｍｇ／ｋｇの最終用量について経口強制飼養（ＰＯ）、腹腔内注射（ＩＰ）、皮下注射（ＳＣ）を介して、または飲料水で投与される。疼痛および不安行動アッセイは、オペラントアッセイ、フォンフライフィラメントを介する機械的異痛症／痛覚過敏、Ｈａｒｇｒｅａｖｅｓ法を介する熱的な異痛症／痛覚過敏、高架式十字迷路法を介する不安挙動を含む確立した痛覚アッセイを使用して痛覚脱失のレベルを定量化するのに実施される。総説Odd-Geir  Berge.、Br  J  Pharmacol.、２０１１年を参照。
【０４１６】
疼痛関連挙動または不安は、対照に対して１０％〜５００％の定量化可能な改善を伴ったイベルメクチンの存在下でのみ測定可能な程度に低減されるであろう。疼痛関連挙動における痛覚脱失または低減は、イベルメクチンを受けていない生理食塩水対照中で検出可能とならない。
遺伝子発現アッセイ
【０４１７】
ウイルスベクター注射後１〜５２週間目：ＡＡＶ６（Ｙ７０５Ｆ＋Ｙ７３１Ｆ＋Ｔ４９２Ｖ）−ＨＳＹＮ−ＧＬＹＲ（Ｆ２０７Ａ／Ａ２８８Ｇ）−ＦＬＡＧまたはＡＡＶ６−ＧＬＹ（ＨＳＹＮ−ＧＬＹＲ（Ｆ２０７Ａ／Ａ２８８Ｇ）−ＦＬＡＧの注射後、神経節が、抗ＦＬＡＧ抗体でＧｌｙＲ−ＦＬＡＧ導入遺伝子発現について回収され、処理され、切り出され、顕微鏡的に分析され、ＮＦ２００、ペリフェリン、ＩＢ４、サブスタンスＰ、ＴＲＰＶ１、ＣＧＲＰ、ＴｒｋＡ、アドビリン、ＡＴＦ３、Ｉｂａ１、ＮＰＹ、ＰＫＣｙ、またはＧＦＡＰに対する抗体で対比染色される。
【０４１８】
遺伝子発現は、ニューロンに主に検出可能であり、局在化しており、周囲の非ニューロン組織および細胞がほとんどないことになる。遺伝子発現は、対側対照組織内で存在しないことになる。
（実施例３）
慢性疼痛に罹患している患者の処置。
【０４１９】
慢性疼痛に罹患する患者は、本明細書に開示の組成物および方法を使用して処置される。患者は、脊髄のくも膜下腔内（すなわち、髄腔内）に１２．０ｍＬの体積のＡＡＶ−ｈＳＹＮ１−ｈＭ４Ｄｉの１０１５ベクターゲノムで１日目に処置される。本実施例では、ＡＡＶベクターは、選択的ニューロン発現についてヒトシナプシン−１（ＳＹＮ１）プロモーターの制御下でヒトムスカリン性ＤＲＥＡＤＤ、ｈＭ４Ｄｉをコードする。注射して２週間後、患者は、クロザピン−Ｎ−オキシド（ＣＮＯ）の処方箋のために診療所に戻る。患者は、必要に応じ、経口的に１００μＭ  ＣＮＯを自己投与する（すなわち、疼痛エピソード中）。
（実施例４）
慢性疼痛に罹患している患者の処置。
【０４２０】
非限定例では、慢性神経根性疼痛に罹患する患者は、本明細書に開示の組成物および方法を使用して処置される。患者は、１つまたは複数の後根神経節内に直接的に送達される（すなわち、腰椎、頚部、胸郭ＤＲＧへの神経節内対流強化送達）１．０ｍＬの体積のＡＡＶ−ｈＳＹＮ１−ＧｌｙＲ−Ｍの１０１３ベクターゲノムで１日目に処置される。本実施例では、ＡＡＶベクターは、選択的ニューロン発現についてヒトシナプシン−１（ＳＹＮ１）プロモーターの制御下でＦ２０７Ａ／Ａ２８８Ｇ突然変異、ＧｌｙＲ−Ｍを宿すヒトグリシン受容体をコードする。注射して２週間後、患者は、イベルメクチン（ＩＶＭ）の処方箋のために診療所に戻る。患者は、必要に応じ、経口的に０．１ｍｇ／ｋｇ  ＩＶＭを自己投与する（すなわち、疼痛エピソード中）。
（実施例５）
慢性疼痛に罹患している患者の処置。
【０４２１】
非限定例では、慢性頭蓋顔面疼痛（例えば、三叉神経痛または側頭下顎（termporomandibular）関節機能不全）に罹患している患者は、本明細書に開示の組成物および方法を使用して処置される。患者は、三叉神経節内に直接的に送達される（すなわち、神経節内対流増強送達）１．０ｍＬの体積のＡＡＶ−ｈＳＹＮ１−ＧｌｙＲ−Ｍの１０１３ベクターゲノムで１日目に処置される。本実施例では、ＡＡＶベクターは、選択的ニューロン発現についてヒトシナプシン−１（ＳＹＮ１）プロモーターの制御下でＦ２０７Ａ／Ａ２８８Ｇ突然変異、ＧｌｙＲ−Ｍを宿すヒトグリシン受容体をコードする。注射して２週間後、患者は、イベルメクチン（ＩＶＭ）の処方箋のために診療所に戻る。患者は、必要に応じ、経口的に０．１ｍｇ／ｋｇ  ＩＶＭを自己投与する（すなわち、疼痛エピソード中）。
（実施例６）
慢性膵臓痛に罹患している患者の処置。
【０４２２】
非限定例では、慢性膵臓痛（例えば、膵炎または膵がん）に罹患している患者は、本明細書に開示の組成物および方法を使用して処置される。患者は、腹腔神経叢内（すなわち、神経内）に直接的に送達される１．０ｍＬの体積のＡＡＶ−ｈＳＹＮ１−ＧｌｙＲ−Ｍの１０１３ベクターゲノムで１日目に処置される。本実施例では、ＡＡＶベクターは、選択的ニューロン発現についてヒトシナプシン−１（ＳＹＮ１）プロモーターの制御下でＦ２０７Ａ／Ａ２８８Ｇ突然変異、ＧｌｙＲ−Ｍを宿すヒトグリシン受容体をコードする。注射して２週間後、患者は、イベルメクチン（ＩＶＭ）の処方箋のために診療所に戻る。患者は、必要に応じ、経口的に０．１ｍｇ／ｋｇ  ＩＶＭを自己投与する（すなわち、疼痛エピソード中）。
（実施例７）
肥満に罹患する患者の処置。
【０４２３】
非限定例では、肥満に罹患している患者は、本明細書に開示の組成物および方法を使用して処置される。患者は、胃枝迷走神経内（すなわち、神経内）に直接送達される１．０ｍＬの体積のＡＡＶ−グレリン−ＧｌｙＲ−Ｍの１０１３ベクターゲノムで１日目に処置される。本実施例では、ＡＡＶベクターは、選択的ニューロン発現についてヒトグレリンプロモーターの制御下でＦ２０７Ａ／Ａ２８８Ｇ突然変異、ＧｌｙＲ−Ｍを宿すヒトグリシン受容体をコードする。注射して２週間後、患者は、イベルメクチン（ＩＶＭ）の処方箋のために診療所に戻る。患者は、過剰の体重減少について（すなわち、食欲抑制について）毎日経口的に０．１ｍｇ／ｋｇ  ＩＶＭを自己投与する。
（実施例８）
肥満に罹患する患者の処置。
【０４２４】
非限定例では、肥満に罹患する患者は、本明細書に開示の組成物および方法を使用して処置される。患者は、膵臓を神経支配する後根神経節内（すなわち、神経節内）に直接的に送達される１．０ｍＬの体積のＡＡＶ−ＴＲＰＶ１−ＧｌｙＲ−Ｍの１０１３ベクターゲノムで１日目に処置される。本実施例では、ＡＡＶベクターは、侵害受容器内の選択的ニューロン発現についてヒトＴＲＰＶ１プロモーターの制御下でＦ２０７Ａ／Ａ２８８Ｇ突然変異、ＧｌｙＲ−Ｍを宿すヒトグリシン受容体をコードする。注射して２週間後、患者は、イベルメクチン（ＩＶＭ）の処方箋のために診療所に戻る。患者は、過剰の体重減少について毎日経口的に０．１ｍｇ／ｋｇ  ＩＶＭを自己投与する。
（実施例９）
肥満に罹患している患者の処置。
【０４２５】
非限定例では、肥満に罹患している患者は、本明細書に開示の組成物および方法を使用して処置される。患者は、視床下部中の室傍核（ＰＶＨ）内に直接的に送達される（すなわち、頭蓋内、対流増強送達）１．０ｍＬの体積のＡＡＶ−ＳＩＭ１−ｈＭ３Ｄｑの１０１３ベクターゲノムで１日目に処置される。本実施例では、ＡＡＶベクターは、プロ−オピオメラノコルチン（ＰＯＭＣ）ニューロン内での選択的ニューロン発現および食欲不振誘発性経路の最終刺激についてヒトシングルマインデッドファミリーＢＨＬＨ転写因子１（ＳＩＭ１）プロモーター（Single-Minded  Family  BHLH  Transcription  Factor  1(SIM1)  promoter）の制御下でヒトムスカリン性ＤＲＥＡＤＤ、ｈＭ３Ｄｑをコードする。注射して２週間後、患者は、クロザピンの処方箋のために診療所に戻る。患者は、過剰の体重減少について（すなわち、食欲抑制について）毎日経口的に０．１５ｍｇ／ｋｇクロザピンを自己投与する。
（実施例１０）
肥満に罹患する患者の処置。
【０４２６】
非限定例では、肥満に罹患する患者は、本明細書に開示の組成物および方法を使用して処置される。患者は、視床下部内の室傍核（ＰＶＨ）内（すなわち、頭蓋内）に直接的に送達される１．０ｍＬの体積のＡＡＶ−ＯＸＴ−ｈＭ３Ｄｑの１０１３ベクターゲノムで１日目に処置される。本実施例では、ＡＡＶベクターは、選択的ニューロン発現および食欲不振誘発性経路の最終刺激についてヒトオキシトシン（ＯＸＴ）プロモーターの制御下でヒトムスカリン性ＤＲＥＡＤＤ、ｈＭ３Ｄｑをコードする。注射して２週間後、患者は、ペルラピンの処方箋のために診療所に戻る。患者は、過剰の体重減少について（すなわち、食欲抑制について）経口的に毎日、０．５ｍｇ／ｋｇのペルラピン（ヒプノジン）を自己投与する。
（実施例１１）
肥満に罹患している患者の処置。
【０４２７】
非限定例では、肥満に罹患している患者は、本明細書に開示の組成物および方法を使用して処置される。患者は、視床下部の弓状核内（すなわち、頭蓋内）に直接的に送達される１．０ｍＬの体積のＡＡＶ−ＡｇＲＰ−ＫＯＲＤの１０１３ベクターゲノムで１日目に処置される。本実施例では、ＡＡＶベクターは、選択的ニューロン発現および食欲促進経路の最終阻害についてヒトアグーチ関連ペプチド（ＡｇＲＰ）プロモーターの制御下でヒトカッパオピオイド受容体ＤＲＥＡＤＤ、ＫＯＲＤをコードする。注射して２週間後、患者は、サルビノリン−Ｂの処方箋のために診療所に戻る。患者は、過剰の体重減少について（すなわち、食欲抑制について）経口的に毎日、０．１ｍｇ／ｋｇサルビノリン−Ｂを自己投与する。
（実施例１２）
肥満に罹患している患者の処置。
【０４２８】
非限定例では、肥満に罹患している患者は、本明細書に開示の組成物および方法を使用して処置される。患者は、扁桃体中心核（ＣＥＡ）の横細区画（ＣＥＩ）内（すなわち、頭蓋内）に直接的に送達される１．０ｍＬの体積のＡＡＶ−ＰＫＣ−δ−ｈＭ３Ｄｑの１０１３ベクターゲノムで１日目に処置される。本実施例では、ＡＡＶベクターは、ＣＥＡ  ＧＡＢＡ作動性ニューロンにおける選択的ニューロン発現についてヒトタンパク質キナーゼＣ−δ（ＰＫＣ−δ）プロモーターの制御下でヒトムスカリン性ＤＲＥＡＤＤ、ｈＭ３Ｄｑをコードする。注射して２週間後、患者は、クロザピンの処方箋のために診療所に戻る。患者は、過剰の体重減少について（すなわち、食欲抑制について）経口的に毎日０．１５ｍｇ／ｋｇクロザピンを自己投与する。
（実施例１３）
ＰＴＳＤに罹患している患者の処置。
【０４２９】
非限定例では、外傷後ストレス障害（ＰＴＳＤ）に罹患している患者は、本明細書に開示の組成物および方法を使用して処置される。患者は、Ｃ６星状神経節内（すなわち、神経節内）に直接的に送達される１．０ｍＬの体積のＡＡＶ−ｈＳＹＮ１−ｈＭ４Ｄｉの１０１３ベクターゲノムで１日目に処置される。本実施例では、ＡＡＶベクターは、選択的ニューロン発現についてヒトシナプシン−１（ｈＳＹＮ１）プロモーターの制御下で、ヒトムスカリン性ＤＲＥＡＤＤ、ｈＭ４Ｄｉをコードする。注射して２週間後、患者は、クロザピンの処方箋のために診療所に戻る。患者は、ＰＴＳＤ症状について（すなわち、不安について）経口的に毎日０．１５ｍｇ／ｋｇクロザピンを自己投与する。
（実施例１４）
うつ病に罹患している患者の処置。
【０４３０】
非限定例では、処置抵抗性うつ病（ＴＲＤ）に罹患している患者は、本明細書に開示の組成物および方法を使用して処置される。患者は、迷走神経内（すなわち、神経内）に直接的に送達される１．０ｍＬの体積のＡＡＶ−ｈＳＹＮ１−ＧｌｙＲ−Ｍの１０１３ベクターゲノムで１日目に処置される。本実施例では、ＡＡＶベクターは、選択的ニューロン発現についてヒトシナプシン−１（ｈＳＹＮ１）プロモーターの制御下でＦ２０７Ａ／Ａ２８８Ｇ突然変異、ＧｌｙＲ−Ｍを宿すヒトグリシン受容体をコードする。注射して２週間後、患者は、イベルメクチン（ＩＶＭ）の処方箋のために診療所に戻る。患者は、うつ病症状について経口的に毎日、０．１ｍｇ／ｋｇ  ＩＶＭを自己投与する。
（実施例１５）
ＧＥＲＤに罹患している患者の処置。
【０４３１】
非限定例では、胃食道逆流性疾患（ＧＥＲＤ）に罹患する患者は、本明細書に開示の組成物および方法を使用して処置される。患者は、下部食道括約筋（ＬＥＳ）迷走神経および筋層間神経叢内（すなわち、神経内）に直接的に送達される１．０ｍＬの体積のＡＡＶ−ｈＳＹＮ１−ｈＭ３Ｄｑの１０１３ベクターゲノムで１日目に処置される。本実施例では、ＡＡＶベクターは、選択的ニューロン発現についてヒトシナプシン−１（ｈＳＹＮ１）プロモーターの制御下で、ヒトムスカリン性ＤＲＥＡＤＤ、ｈＭ３Ｄｑをコードする。注射して２週間後に、患者は、クロザピンの処方箋のために診療所に戻る。患者は、ＧＥＲＤの症状（すなわち、酸の逆流）について経口的に毎日、０．１５ｍｇ／ｋｇクロザピンを自己投与する。
（実施例１６）
ＧＥＲＤに罹患している患者の処置。
【０４３２】
非限定例では、胃食道逆流性疾患（ＧＥＲＤ）に罹患している患者は、本明細書に開示の組成物および方法を使用して処置される。患者は、下部食道括約筋（ＬＥＳ）平滑筋内（すなわち、筋肉内）に直接的に送達される１．０ｍＬの体積のＡＡＶ−ＣＡＧ−ｈＭ３Ｄｑの１０１３のベクターゲノムで１日目に処置される。本実施例では、ＡＡＶベクターは、ＬＥＳ筋細胞の発現についてハイブリッドニワトリ−ベータアクチン（ＣＡＧ）プロモーターの制御下で、ヒトムスカリン性ＤＲＥＡＤＤ、ｈＭ３Ｄｑをコードし、平滑筋緊張を最終的に増大させた。注射して２週間後、患者は、クロザピンの処方箋のために診療所に戻る。患者は、ＧＥＲＤの症状（すなわち、酸の逆流）について経口的に毎日０．１５ｍｇ／ｋｇクロザピンを自己投与する。
（実施例１７）
てんかんに罹患している患者の処置。
【０４３３】
非限定例では、てんかんに関連した発作に罹患している患者は、本明細書に開示の組成物および方法を使用して処置される。患者は、迷走神経内（すなわち、神経内）に直接的に送達される１．０ｍＬの体積のＡＡＶ−ｈＳＹＮ１−ＧｌｙＲ−Ｍの１０１３ベクターゲノムで１日目に処置される。本実施例では、ＡＡＶベクターは、選択的ニューロン発現についてヒトシナプシン−１（ｈＳＹＮ１）プロモーターの制御下でＦ２０７Ａ／Ａ２８８Ｇ突然変異、ＧｌｙＲ−Ｍを宿すヒトグリシン受容体をコードする。注射して２週間後、患者は、イベルメクチン（ＩＶＭ）の処方箋のために診療所に戻る。患者は、てんかん症状（すなわち、発作）について経口的に毎日０．１ｍｇ／ｋｇ  ＩＶＭを自己投与する。
（実施例１８）
てんかんに罹患している患者の処置。
【０４３４】
非限定例では、てんかんに関連した発作に罹患している患者は、本明細書に開示の組成物および方法を使用して処置される。患者は、運動皮質などの所定の発作焦点内（すなわち、頭蓋内）に直接的に送達される１．０ｍＬ体積のＡＡＶ−ＣａｍＫＩＩα−ＫＯＲＤの１０１３ベクターゲノムで１日目に処置される。本実施例では、ＡＡＶベクターは、興奮性ニューロン内の選択的ニューロン発現についてヒトカルシウム／カルモジュリン依存性プロテインキナーゼＩＩα（ＣａｍＫＩＩα）プロモーターの制御下で、ヒトカッパオピオイド受容体ＤＲＥＡＤＤ、ＫＯＲＤをコードする。注射して２週間後に、患者は、サルビノリン−Ｂの処方箋のために診療所に戻る。患者は、てんかん症状（すなわち、発作）について経口的に毎日０．１ｍｇ／ｋｇサルビノリン−Ｂを自己投与する。
（実施例１９）
運動障害に罹患している患者の処置。
【０４３５】
非限定例では、運動障害（例えば、パーキンソン振戦）に罹患している患者は、本明細書に開示の組成物および方法を使用して処置される。患者は、視床下核内（すなわち、頭蓋内ＳＴＮ）に直接的に送達される１．０ｍＬの体積のＡＡＶ−ＣａｍＫＩＩα−ＫＯＲＤの１０１３ベクターゲノムで１日目に処置される。本実施例では、ＡＡＶベクターは、興奮性ニューロン内の選択的ニューロン発現についてヒトカルシウム／カルモジュリン依存性プロテインキナーゼＩＩα（ＣａｍＫＩＩα）プロモーターの制御下で、ヒトカッパオピオイド受容体ＤＲＥＡＤＤ、ＫＯＲＤをコードする。注射して２週間後、患者は、サルビノリン−Ｂの処方箋のために診療所に戻る。患者は、運動障害症状（すなわち、振戦）について経口的に毎日０．１ｍｇ／ｋｇサルビノリン−Ｂを自己投与する。
（実施例２０）
スイッチ受容体を発現するウイルスベクターを用いた疼痛の処置。
【０４３６】
スイッチ受容体を発現するウイルスベクターの使用は、その全体が参照により本明細書に組み込まれているIyer,  S.  M.ら、Optogenetic  and  chemogenetic  strategies  for  sustained  inhibition  of  pain.、Sci.  Rep.  ６巻、３０５７０頁；doi:  10.1038/srep30570（２０１６年）に示された通り、疼痛を阻害するのに使用することができる。
【０４３７】
簡単に言えば、雌のＣ５７ＢＬ／６マウスの坐骨神経に、ヒトシナプシン−１プロモーターの制御下でＳｗｉＣｈＲ−ｅＹＦＰを担持するＡＡＶ６ベクターで注射した。ＳｗｉＣｈＲは、ステップ機能阻害性チャネルロドプシンである。注射の２〜３週間後に、ＳｗｉＣｈＲの強い発現を、一次求心性侵害受容器全体にわたって検出した。同文献。ＡＡＶ６−ｈＳｙｎ−ＳｗｉＣｈＲ−ｅＹＦＰを注射されたマウスから得た解離した培養された後根神経節（ＤＲＧ）からの記録は、ＳｗｉＣｈＲは、青色光パルスに応答性であり、照射中入力耐性の著しい低下を誘導することを示した。同文献。経皮送達された青色光は、ＳｗｉＣｈＲ−発現マウスにおける侵害受容アッセイに影響した。ＳｗｉＣｈＲ、ＹＦＰ、または塩化物伝導阻害性チャネルロドプシンｉＣ１Ｃ２を発現するマウス上の盲目機械的閾値（Blinded  mechanical  threshold）アッセイは、青色光は、ＹＦＰ＋マウスではなく、ｉＣ１Ｃ２＋およびＳｗｉＣｈＲ＋マウスにおける機械的引っ込め閾値および熱潜伏時間尺度における大きい、統計的に有意な増大を生じることを示した。同文献。熱引き込み潜伏時間は、改良Ｈａｒｇｒｅａｖｅｓ装置を使用して査定した。培養されたＳｗｉＣｈＲ＋ＤＲＧニューロンにおいて、単回１秒青色光パルスは、光パルス中だけでなく、その後数秒間にわたって電気的に誘発された活動電位の阻害を誘導するのに十分であり、光刺激後６０秒という遅くに観察される高いスパイク阻害確率を伴った。同文献。予期された通り、オプトジェネティック阻害は、ＳｗｉＣｈＲチャネルを閉じさせる赤色光で照射することによって急速に終わらせることができる。同文献。ＳｗｉＣｈＲのこの「ポスト光」阻害特性は、ｉｎ  ｖｉｖｏで保持され、マウスにおける「ポスト光」期間中のオプトジェネティック阻害を可能にする。同文献。適切にタイミングの取られた追加の光パルスは、ＳｗｉＣｈＲ媒介阻害の継続期間を延長するのに使用することができる。時間的に低密度の青色光パルスの１時間後でさえ、ＳｗｉＣｈＲ＋マウスは、単回青色光パルス後に観察された閾値の上昇から統計的に区別不能であった安定に上昇した疼痛閾値を示した。同文献。ＹＦＰ＋マウスは、収縮閾値の著しい変化を示さなかった。同文献。ホルマリン試験（一般に使用される疼痛アッセイ、その第Ｉ相は、侵害受容器の直接的な活性化によって主に推進され、その第ＩＩ相は、炎症性および脊髄促進機構によって部分的に推進される）は、形質導入された無髄一次求心性のオプトジェネティック阻害は、ＳｗｉＣｈＲ＋マウスにおける侵害受容器誘発第Ｉ相疼痛挙動を低減するのに十分であったが、第ＩＩ相で観察されたより広い炎症反応を和らげるのに不十分であったことを示した。同文献。
【０４３８】
一次求心性侵害受容器におけるｈＭ４Ｄ（Ｇｉ）ＤＲＥＡＤＤの発現により、機械的および熱的痛覚の阻害が可能になった。同文献。雌Ｃ５７ＢＬ／６マウスに、ＡＡＶ６−ｈＳｙｎ−ＨＡ−ｈＭ４Ｄ（Ｇｉ）−ＩＲＥＳ−ｍＣｉｔｒｉｎｅを神経内に注射したところ、ｍＣｉｔｒｉｎｅ発現が小径侵害受容器において観察された。同文献。ｈＭ４Ｄ＋マウスに腹腔内クロザピン−Ｎ−オキシド（ＣＮＯ）を投与すると、機械的引っ込め閾値が増大した。同文献。Ｈａｒｇｒｅａｖｅｓ閾値の強い阻害が、ｈＭ４Ｄ＋マウスにＣＮＯ投与した後に観察され、熱的感覚の化学遺伝学的阻害を実証した。同文献。
（実施例２１）
スイッチ受容体を発現するウイルスベクターを用いた救済神経障害モデルにおける疼痛の処置。
【０４３９】
ＡＡＶベクター産生
【０４４０】
ヒトα−１  ＧｌｙＲＭ（Ｆ２０７Ａ＋Ａ２８８Ｇ）−ＦＬＡＧ  ｃＤＮＡのヒトシナプシン−１（ｈＳＹＮ）プロモーター駆動発現を含有する発現カセットを、標準分子生物学技法を使用して構築した（ベクターの記述について図５および配列番号１も参照）。このカセットを、精製され、Ｓｆ９昆虫細胞内にトランスフェクトされた自己相補性ＡＡＶ  ｂａｃｍｉｄ内にサブクローニングし、組換えバキュロウイルス（bacuvlovirus）を産生し、次いで増幅した。Ｓｆ９細胞を、ｈＳＹＮ−ＧｌｙＲＭカセットを含有する増幅された組換えバキュロウイルスならびにＲｅｐおよびＡＡＶ６（Ｙ７０５＋７３１Ｆ＋Ｔ４９２Ｖ）Ｃａｐ遺伝子を含有する別の組換えバキュロウイルスを使用して二重感染させて組換えＡＡＶベクターを産生した。これらのベクターを精製し、ウイルス力価を、ｑＰＣＲ（２．１５ｅ１３  ｖｇ／ｍｌ）を使用して判定し、ＳＤＳ−ＰＡＧＥを使用してＡＡＶベクターの純度を検証した（Ｖｉｒｏｖｅｋ）。
【０４４１】
後角へのＡＡＶ脊髄注射
【０４４２】
背側半側椎弓切除は、腰椎拡大のレベルで行って腰椎脊髄の２つのセグメント（約１．５〜２ｍｍ）を露出させ、その後硬膜を切開し、反転させた。ウイルス溶液をガラスマイクロピペット（鉱油で予め満たされている）中に装填した。マイクロピペットを定位装置に据え付けられた手動式マイクロインジェクターに接続した。ウイルス溶液を後角（左側）に向けた。露出領域内で体軸に沿って、それぞれ２４０ｎｌの６回の注射を等距離線形様式で実施した。各注射後、１分の休憩時間を順守し、次いで筋層を縫合し、皮膚をステープルで閉じ、動物を加熱パッドで回復させた後、動物をそのホームケージに戻した。動物を、最後の挙動試験後、組織分析のために潅流した。
【０４４３】
後根神経節（ＤＲＧ）内へのＡＡＶ神経節内注射
【０４４４】
注射は、ホウケイ酸ガラスキャピラリー（０．７８／１ｍｍ内／外径）を細い先端まで引き出してマイクロインジェクションポンプ内に据え付けられたシリンジにポリエチレンチューブ（０．４／０．８ｍｍ内／外径）によって取り付けることにより実施した。針は、外側に振られた定位フレームの拡張アーム（針のみを保持およびマニピュレートするのに使用する）上に据え付けた。チューブ、シリンジ、および針はすべて、水で満たした。１マイクロリットルの空気を針中に吸い上げ、その後ウイルスベクター溶液１．１μｌを吸い上げた。針を各注射についてこの容積で別個に装填した。動物は、手術前に麻酔した。背中正中線に沿った切開の後に、Ｌ４およびＬ５  ＤＲＧを、椎骨部横突起の除去により露出した。ＤＲＧの上にある神経上膜を開放し、ガラス針を露出した神経節の表面から４００μｍの深さまで神経節内に挿入した。ガラスキャピラリー先端部周辺の組織の密閉を可能にするための３分の遅延の後、ウイルス溶液１．１μｌを０．２μｌ／分の速度で注射した。２分のさらなる遅延の後、針を取り出した。Ｌ４神経節に最初に注射し、その後Ｌ５神経節に注射した。脊髄の上に覆い被さる筋肉を５〜０縫合糸で一緒に緩く縫合し、創傷を閉じた。動物を３７℃で回復させ、術後痛覚脱失を行った。
【０４４５】
マウスにおけるＡＡＶ髄腔内注射
【０４４６】
マウスを最初に麻酔し、次いで垂直に配置し、頭を定位フレーム内に固定した。切開を首の付け根に行って項部稜中の溝を露出した。脳脊髄液が漏れ出る深さまで大槽膜中に切開を行った（１〜２ｍｍ）。次いで、４ｃｍ  ３２Ｇ髄腔内カテーテルを、腰椎脊髄の方向に徐々に挿入し、皮膚を、カテーテル周囲を縫合することによって閉じた。次いでマウスを回復させた。次いでマウスを麻酔し、ベクター（６μｌ）を投与した。カテーテルを６μｌのＰＢＳでフラッシュし、次いで除去し、マウスを回復させた。
【０４４７】
行動実験および疼痛モデル
【０４４８】
神経因性疼痛状態を模倣するモデルにおいて機械的過敏症を生じさせるために、救済神経傷害（ＳＮＩ）モデル、機械的異痛症の有効なモデルを使用した（Shieldsら、２００３年、The  Journal  of  Pain、４巻、４６５〜４７０頁）。このモデルは、共通腓骨および腓腹神経の切出し、ならびに脛骨枝の単離によって産生した（図７を参照）。機械的引っ込め閾値を、持ち上げられたワイヤーメッシュのグリッドにマウスを配置し、フォンフライフィラメントで後肢の足底面を刺激することによって査定した。ＣｈａｐｌａｎおよびＹａｋｓｈのアップダウン法を使用して収縮閾値を判定した後ＡＡＶ−ＧｌｙＲＭを脊髄注射した。脊髄の後角中にベクターを片側注射して３週間後、動物を再び試験してこれらの機械的引っ込め閾値が変化しなかったことを検証した。ベクター注射の同側および反対側の後肢を試験した。研究に含まれた動物のいずれも、ＧｌｙＲＭ導入遺伝子を含有するＡＡＶの注射から生じる閾値の変化を有さなかった。運動協調性を、３３ｒｐｍの最大速度でロータロッド（Ｓｔｏｅｌｔｉｎｇ、ＵＳＡ）の加速を使用して試験した。マウスがロータロッド上で費やした継続時間を記録し、カットオフは３００秒であった。各マウスは、３回の訓練試行を踏み、２時間後に試験した。引き続いて、すべてのマウスにイベルメクチン（１５ｍｇ／ｋｇまたは１０ｍｇ／ｋｇ）の単回ＩＰ注射を行い、収縮閾値をＳＮＩ後１、２、５、７、および１３日目にアップダウン法を使用して再び試験した。１５ｍｇ／ｋｇで試験したとき、機械的過敏症の完全な反転が観察された。反対側で変化はなく、すなわち、イベルメクチンは、ベクターの非存在下で測定可能な効果を有さなかった。反転は、少なくとも５日続いた。１３日目に、閾値が傷害後ベースラインに戻ったとき、１０ｍｇ／ｋｇをＩＰ注射し、再び、非傷害ベースライン閾値への回復が観察された。これらの動物を４８時間追跡し、閾値は、ベースラインで留まった。次いで動物を組織診断のために潅流した。
【０４４９】
ヒトα−１  ＧｌｙＲＭ（Ｆ２０７Ａ＋Ａ２８８Ｇ）（ＳＷＢ００１またはＡＡＶ−ＧｌｙＲＭとも呼ばれる）のヒトシナプシン−１（ｈＳＹＮ）プロモーター駆動発現を含有するＡＡＶベクターは、反対側無傷対照側と比較して、イベルメクチンを単回ＩＰ注射後、７〜１０日の継続時間にわたってＳＮＩモデルにおいて１００％痛覚脱失を生じた（図７を参照）。１３日目までのイベルメクチンウォッシュアウト後、イベルメクチン投薬を繰り返すと、ＳＮＩモデルにおいて１００％の痛覚脱失がもたらされた（図８を参照）。
【０４５０】
組織処理および免疫組織化学
【０４５１】
免疫組織化学検査を以前に記載した通り実施した（Brazら、Neuron、７４巻（４号）：６６３〜６７５頁、２０１２年）。簡単に言えば、マウスを、ケタミン（６０ｍｇ／ｋｇ）／キシラジン（８ｍｇ／ｋｇ）／アセプロマジン（３ｍｇ／ｋｇ）の混合食塩液で麻酔し、０．１Ｍ生理食塩水リン酸塩緩衝液（ＰＢＳ）で経心的に潅流し、その後ＰＢＳ中の４％パラホルムアルデヒド（ＰＦＡ）で潅流した。次いで脊髄を椎弓切除によって抽出し、同じ固定液中で２時間ポスト固定し、４℃で３０％スクロース／ＰＢＳ溶液中で凍結保護した。腰仙後根神経節（ＤＲＧ）も解剖し、同じポスト固定および凍結保護プロトコールを実施した。
【０４５２】
腰椎脊髄切片を、クリオスタット（Ｌｅｉｃａ  Ｍｉｃｒｏｓｙｓｔｅｍｓ）を使用してカットした。横断切片（２５μｍ−厚さ）を、ＰＢＳを含有する４８−ウェルプレートに配置し、４℃で貯蔵した。ＤＲＧをＴｉｓｓｕｅＴｅｋ  ＯＣＴ化合物（Ｂａｙｅｒ）中に包埋した。横断切片（１４μｍ）をカットし、Ｓｕｐｅｒｆｒｏｓｔ  Ｐｌｕｓスライド（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、Ｒｏｃｋｆｏｒｄ、ＩＬ）上に据え付け、室温で１時間乾燥させ、４℃で貯蔵した。組織切片をＰＢＳ／０．３％トリトンＸ−１００（ＰＢＳ−Ｔ；Ｓｉｇｍａ、Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ、ＭＯ）中で３回洗浄し、１０％正常なヤギ血清／ＰＢＳ／０．３％トリトンＸ−１００（ＮＧＳＴ）中で１時間インキュベートし、一次抗体を添加する前に、１％  ＮＧＳＴ溶液中で室温（ＲＴ）にて一晩インキュベートした。次いで切片をＰＢＳ−Ｔ溶液で３回洗浄し、Ａｌｅｘａフルオロフォアコンジュゲート二次抗体とともにＲＴにて１時間インキュベートした。切片をＰＢＳで３回洗浄し、空気乾燥させ、Ａｑｕａ  Ｐｏｌｙｍｏｎｔ（Ｐｏｌｙｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｉｎｃ．、Ｗａｒｒｉｎｇｔｏｎ、ＵＳＡ）を使用してカバースリップを掛けた。一次ＦＬＡＧ抗体（ウサギ、１：４０００；Ｓｉｇｍａ  ＃Ｆ７４２５）は、ＧｌｙＲＭ−ＦＬＡＧ導入遺伝子発現を検出するのに使用した。一次染色は、１％  ＮＧＳＴ中１：８００で希釈された、Ａｌｅｘａフルオロフォアにコンジュゲートした対応する二次抗体で明らかになった。免疫染色した切片をＺｅｉｓｓ  ＬＳＭ７００直立共焦点蛍光顕微鏡で画像化した。ヒトα−１  ＧｌｙＲＭ（Ｆ２０７Ａ＋Ａ２８８Ｇ）のヒトシナプシン−１（ｈＳＹＮ）プロモーター駆動発現を含有するＡＡＶベクターのロバストな発現が、複数の投与経路を介して注射の３週間後に観察された（図６）。
（実施例２２）
スイッチ受容体を発現するウイルスベクターを用いた処置の熱的疼痛感受性に対する効果。
【０４５３】
ＡＡＶ注射および熱引き込み潜伏時間アッセイ
【０４５４】
０日目に、アルファ１  ＧｌｙＲ（Ｆ２０７Ａ−Ａ２８８Ｇ）導入遺伝子を含有するＡＡＶベクター１０マイクロリットルの三叉神経節両側注射を成体スプラーグドーリーラットに実施した。ＡＡＶ注射の２カ月後、イベルメクチン１０ｍｇ／ｋｇの単回ＩＰ注射をラットに投与した。翌日、ラットは、ウィスカーパッドを含めてではなく、ラットの頬の毛皮を剃り落すことによって熱潜伏時間アッセイについて準備した。次いでこれらを２．７５インチ直径×８インチ透明ポリカーボネート円柱内に配置し、環境に順化させた。ラットは、自身を自然に配置され、これらの鼻は、シリンダー開口部のちょうど外側にある。ビデオモニタリング下で、次いでラットを、剃られた頬の範囲上でおよそ１ｍｍ×０．５ｍｍの標的サイズを投影するように焦点を当てた２Ｗ、赤外線（８０８ｎｍ）レーザー照射のビームに曝露した。次いで、ラットは、突然の頭の位置の変化（引っ込め反射）を伴ってレーザーによって生成された熱に応答した。次いでシーケンスを各サイドで最大１０回試行を繰り返した。レーザー照射オンセットと頭部引っ込め反射との間の潜伏時間を、フレームバイフレーム分析を可能にするビデオエディティングソフトウェアを用いてビデオから測定した。
【０４５５】
結果
【０４５６】
個々の対象の結果を図９に示し、平均結果を図１０に示した。イベルメクチンで処置前の試験ラットの平均熱引き込み潜伏時間は、２．６９秒であった。イベルメクチン（１０ｍｇ／ｋｇ）のＩＰ投与後、平均引き込み潜伏時間は、５．１９秒であると判定され、対応のあるｔ検定ｐ値＝０．０５４であった。したがって、イベルメクチン処置は、熱的疼痛感受性における９２．９％の痛感鈍麻閾値シフトをもたらした。
【０４５７】
上述した様々な実施形態は、さらなる実施形態を提供するように組み合わせることができる。本明細書で参照され、かつ／または出願データシートに列挙された米国特許、米国特許出願公開、米国特許出願、外国特許、外国特許出願、および非特許刊行物のすべては、各個々の刊行物、特許、または特許出願が、参照により組み込まれるように具体的かつ個別に示された場合と同じ程度に、その全体が参照により本明細書に組み込まれている。本実施形態の態様を改変して、必要であれば様々な特許、出願、および刊行物の概念を利用して、なおさらなる実施形態を提供することができる。
【０４５８】
これらのおよび他の変更を、上記詳細な説明を踏まえると本実施形態に行うことができる。一般に、以下の特許請求の範囲において、使用される用語は、本明細書および特許請求の範囲に開示した具体的な実施形態に特許請求の範囲を限定するように解釈されるべきではなく、このような特許請求の範囲に権利が与えられる均等物の全射程に沿ってすべての可能な実施形態を含むように解釈されるべきである。したがって、特許請求の範囲は、本開示によって限定されない。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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