(57)【要約】本発明は、ターゲット遺伝子の発現を調節するUNAオリゴマーを提供する。該UNAオリゴマーはUNAモノマーリンカーを含み、2'−O−メチル基で修飾した1またはそれを超えるヌクレオチド、2'−デオキシ−2'−フルオロ基で修飾した1またはそれを超えるヌクレオチド、および1またはそれを超えるホスホロチオエートまたはキラルホスホロチオエートモノマー間結合を含んでいてもよい。該UNAオリゴマーは、疾患を予防または治療する有効剤として用いることができる。【特許請求の範囲】
【請求項１】
第1鎖および第2鎖を含むUNAオリゴマーであって、各々の鎖は19〜29モノマー長であり、該モノマーはUNAモノマーおよび核酸モノマーを含み、ここに該オリゴマーは14〜29モノマー長の二本鎖構造を有し、ここに該第2鎖はRNA干渉用のガイド鎖であって該第1鎖はRNA干渉用のパッセンジャー鎖であり、およびここにUNAオリゴマーはターゲット遺伝子の発現を低下させる、UNAオリゴマー。
【請求項２】
各々の鎖に1またはそれを超える核酸モノマーの1またはそれを超える化学修飾を含む、請求項1に記載のUNAオリゴマー。
【請求項３】
オリゴマーが2'−O−メチル基で修飾された1またはそれを超えるヌクレオチドを含む、請求項1に記載のUNAオリゴマー。
【請求項４】
オリゴマーが2'−O−メチル基で修飾された1〜9のヌクレオチドを含む、請求項1に記載のUNAオリゴマー。
【請求項５】
オリゴマーが2'−デオキシ−2'−フルオロ基で修飾された1またはそれを超えるヌクレオチドを含む、請求項1に記載のUNAオリゴマー。
【請求項６】
いずれかの鎖における1またはそれを超えるモノマー間結合がホスホロチオエートまたはキラルホスホロチオエート結合である、請求項1に記載のUNAオリゴマー。
【請求項７】
オリゴマーが2'−O−メチル基で修飾された1またはそれを超えるヌクレオチドおよび2'−デオキシ−2'−フルオロ基で修飾された1またはそれを超えるヌクレオチドを含む、請求項1に記載のUNAオリゴマー。
【請求項８】
オリゴマーが、いずれかの鎖に2'−O−メチル基で修飾された1またはそれを超えるヌクレオチド、2'−デオキシ−2'−フルオロ基で修飾された1またはそれを超えるヌクレオチド、および1またはそれを超えるホスホロチオエートまたはキラルホスホロチオエートモノマー間結合を含む、請求項1に記載のUNAオリゴマー。
【請求項９】
オリゴマーが、いずれかの鎖に3またはそれを超えるUNAモノマー、2'−O−メチル基で修飾された1またはそれを超えるヌクレオチド、2'−デオキシ−2'−フルオロ基で修飾された1またはそれを超えるヌクレオチド、および1またはそれを超えるホスホロチオエートまたはキラルホスホロチオエートモノマー間結合を含む、請求項1に記載のUNAオリゴマー。
【請求項１０】
ターゲット遺伝子がB型肝炎ウイルス、TTR、APOB、PCSK9、またはAPOC3のウイルス遺伝子である、請求項1に記載のUNAオリゴマー。
【請求項１１】
配列番号：87である第1鎖および配列番号：88である第2鎖を含む、請求項1に記載のUNAオリゴマー。
【請求項１２】
配列番号：105である第1鎖および配列番号：106である第2鎖を含む、請求項1に記載のUNAオリゴマー。
【請求項１３】
配列番号：239である第1鎖および配列番号：240である第2鎖を含む、請求項1に記載のUNAオリゴマー。
【請求項１４】
配列番号：263である第1鎖および配列番号：264である第2鎖を含む、請求項1に記載のUNAオリゴマー。
【請求項１５】
UNAオリゴマーがイン・ビトロ（in vitro）において長時間持続する活性を有する、請求項1に記載のUNAオリゴマー。
【請求項１６】
UNAオリゴマーがイン・ビボ（in vivo）において長時間持続する効能を有する、請求項1に記載のUNAオリゴマー。
【請求項１７】
請求項1〜16のいずれかに記載の1またはそれを超えるUNAオリゴマーおよび医薬上許容し得る不活性成分、希釈剤または補助剤を含む医薬組成物。
【請求項１８】
ターゲット遺伝子の発現を調節するための請求項1〜16のいずれかに記載の1またはそれを超えるUNAオリゴマーの使用。
【請求項１９】
必要とする対象において、B型肝炎感染症、アミロイド神経障害、アミロイドーシス、トランスサイレチンに関連するアミロイドーシス、高コレステロール血症、コレステロール障害、高トリグリセリド血症、またはリポタンパク質障害を予防または治療することにおける、請求項17記載の組成物の使用。
【請求項２０】
治療剤用の薬物の調製における、請求項17記載の組成物の使用。
【請求項２１】
細胞中のターゲットmRNAの発現レベルを低下させる薬物を調製することにおける、請求項1〜16のいずれかに記載の1またはそれを超えるUNAオリゴマーの使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、遺伝子サイレンシング用のオリゴマーからなる生物製剤および治療法の分野に関する。より詳細には、本発明は、遺伝子調節用の安定し、長時間作用する剤であるオリゴマーの方法、構造および組成物に関する。
配列表
【０００２】
本願はARC1321WO_SL.txtと命名したASCIIファイルとして電子的に提出した配列表を含み、これは出典明示して本明細書の一部とみなす。
【背景技術】
【０００３】
RNA干渉法の課題は、長時間作用する治療剤のためにイン・ビボ（in vivo）で長期間の寿命を有する構造を提供することとされている。1つの試みは、長期間にわたって循環中または他の生物学的環境において有効剤を維持する送達剤を開発することである。
【０００４】
この課題に対する従来のアプローチには、siRNAまたは他の核酸剤のヌクレオチドに修飾を取り込ませてその寿命を向上することが含まれる。しかしながら、これらの方法は、安定性のために妥協して活性の顕著な低下を避けなければならない。
【０００５】
従来の方法のもう1の欠点は、ヌクレオチドに取り込ませることができる構造上の修飾のアベイラビリティーが制限されることである。
【０００６】
また、今まで、構造上の修飾を有するヌクレオチドは、遺伝子サイレンシングおよびRNA剤の特性にわずかな改善しか提供していない。
【０００７】
必要なのは、遺伝子サイレンシングおよび治療ストラテジーのための安定し、長時間作用する医薬成分を提供する構造および組成物である。
【０００８】
長時間作用するガレン剤に対してイン・ビボ(in vivo)での長期間の寿命を提供する構造を有する、RNA干渉ならびに他の治療法において活性である分子に対して続く要望が存在する。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００９】
本発明は、イン・ビトロ（in vitro）で用いた場合またはイン・ビボ（in vivo）で投与した場合に、遺伝子の調節およびモデュレーションに対する効果において長時間作用する治療剤のオリゴマー構造を提供する。
【課題を解決するための手段】
【００１０】
本発明のオリゴマー構造は、1またはそれを超えるUNAモノマーを含むことができる。
【００１１】
本発明は、UNAモノマーを取り込むUNA−含有オリゴマー剤の構造、方法および組成物を提供する。本発明のUNAオリゴマー分子は、遺伝子サイレンシング治療法用の製剤中の有効剤として用いることができる。
【００１２】
特に、本発明は、UNAモノマーとある種の天然のヌクレオチド、非−天然のヌクレオチド、修飾ヌクレオチド、または化学修飾ヌクレオチドとの新規な組合せを取り込むユニークなオリゴマー構造を提供する。
【００１３】
本開示の態様には、薬理学的に活性な分子であるUNAオリゴマーが含まれる。本発明のUNAオリゴマーは、遺伝子発現を調節またはモジュレートするための、およびRNA干渉法ならびにアンチセンスストラテジーにおいて一本鎖または二本鎖の有効な医薬成分として用いることができる。
【００１４】
本開示の実施形態は、1またはそれを超えるUNAモノマーを取り込む広範囲の新規なUNAオリゴマー分子を提供する。
【００１５】
幾つかの態様において、本発明は、UNAモノマーとある種の天然ヌクレオチド、非−天然ヌクレオチド、修飾ヌクレオチド、または化学修飾ヌクレオチドとの新規な組合せを取り込む構造を有する長時間作用するUNAオリゴマーを提供する。
【００１６】
さらなる態様において、本発明は、疾患を予防し、寛解させ、または治療する治療法を提供する。
【００１７】
さらなる態様において、本発明の化合物は、肝炎を含むウイルス感染症、アミロイドーシスおよび関連する疾患、がん、代謝疾患、炎症疾患、肝臓疾患、心臓疾患、皮膚疾患、または骨疾患を予防または治療するための薬物の製造に用いてもよい。
【００１８】
本発明の実施形態には以下のものが含まれる：
【００１９】
各々の鎖が19〜29モノマー長である第1鎖および第2鎖を有するUNAオリゴマーであって、該モノマーはUNAモノマーおよび核酸モノマーを含み、ここに該オリゴマーは14〜29モノマー長の二本鎖構造を有し、ここに該第2鎖はRNA干渉用のガイド鎖であり、該第1鎖はRNA干渉用のパッセンジャー鎖であり、およびここに該UNAオリゴマーはターゲット遺伝子の発現を低下する。
【００２０】
UNAオリゴマーは、各々の鎖中の1またはそれを超える核酸モノマーの1またはそれを超える化学的修飾を有することができる。幾つかの実施形態において、オリゴマーは、2'−O−メチル基で修飾された1またはそれを超えるヌクレオチド、または2'−O−メチル基で修飾された1〜9のヌクレオチド、または2'−デオキシ−2'−フルオロ基で修飾された1またはそれを超えるヌクレオチド、あるいはいずれかの鎖における1またはそれを超えるモノマー間結合はホスホロチオエートまたはキラルホスホロチオエート結合である、1またはそれを超えるヌクレオチドを含むことができる。
【００２１】
UNAオリゴマーは、数ある中でB型肝炎ウイルス、TTR、APOB、PCSK9、およびAPOC3のウイルス遺伝子を含む、いずれかヒト、細菌またはウイルスのターゲット遺伝子をターゲットとすることができる。
【００２２】
幾つかの実施形態において、UNAオリゴマーはイン・ビトロ（in vitro）において長時間持続する活性を有することができる。
【００２３】
ある種の実施形態において、UNAオリゴマーはイン・ビボ（in vivo）において長時間持続する効能を有することができる。
【００２４】
本発明の実施形態には、1またはそれを超えるUNAオリゴマーおよび医薬上許容し得る不活性成分、希釈剤、または補助剤を有する医薬組成物が含まれる。
【００２５】
UNAオリゴマーの使用には、ターゲット遺伝子の発現を調節することが含まれる。
【００２６】
幾つかの態様において、UNAオリゴマーの使用は、必要とする対象におけるB型肝炎感染症、アミロイド神経障害、アミロイドーシス、トランスサイレチン関連アミロイドーシス、高コレステロール血症、コレステロール障害、高トリグリセリド血症、またはリポタンパク質障害を予防または治療することを含むことができる。
【００２７】
ある種の実施形態において、UNAオリゴマーの使用には、治療法ターゲット用の薬物の調製を含むことができる。
【００２８】
ある種の態様において、UNAオリゴマーの使用には、細胞におけるターゲットmRNAの発現レベルを低下する薬物の調製を含むことができる。
【発明を実施するための形態】
【００２９】
本発明は、イン・ビトロ（in vitro）で使用した場合またはイン・ビボ（in vivo）で投与した場合に、遺伝子調節に対してその効果が長時間作用する治療剤のオリゴマー構造を提供する。本発明のオリゴマー構造には、1またはそれを超えるUNAモノマーが含まれる。
【００３０】
本発明は、UNAモノマーを取り込むUNAモノマー−含有オリゴマー剤の構造、方法および組成物を提供する。本発明のUNAオリゴマー分子は、遺伝子サイレンシング治療法用の製剤中の有効剤として使用することができる。
【００３１】
特に、本発明は、UNAモノマーとある種の天然ヌクレオチド、非−天然ヌクレオチド、修飾ヌクレオチド、または化学的修飾ヌクレオチドとの新規な組合せを取り込むユニークなオリゴマー構造を提供する。
【００３２】
本開示の態様には、薬理学上の活性分子であるUNAモノマー−含有オリゴマーが含まれる。本発明のUNAオリゴマーは、遺伝子発現、RNA干渉法、ならびにアンチセンスストラテジーを調節またはモジュレートする活性な医薬成分として用いることができる。
【００３３】
本開示の実施形態は、1またはそれを超えるUNAモノマーリンカーを取り込む広範囲の新規なUNAオリゴマー分子を提供する。
【００３４】
幾つかの態様において、本発明は、UNAモノマーとある種の天然ヌクレオチド、非−天然ヌクレオチド、修飾ヌクレオチド、または化学的修飾ヌクレオチドとの新規な組合せを取り込む構造を有する、長時間作用するUNAオリゴマーを提供する。
【００３５】
幾つかの態様において、本発明は、遺伝子サイレンシング薬に長時間作用する特性を提供し、有効な治療に要求される用量レベルを低下することができる。
【００３６】
ある種の態様において、本発明は、イン・ビトロ（in vitro）において高められた活性を有するUNAオリゴマーを提供することができる。
【００３７】
幾つかの実施形態において、本発明は、イン・ビボ（in vivo）において高められた効能を有するUNAオリゴマーを提供することができる。
【００３８】
追加の実施形態において、本発明は、より長い機能の半減期を有するUNAオリゴマーを提供することができる。
【００３９】
ある種の実施形態において、本発明は、イン・ビトロ（in vitro）において長時間持続する活性を有するUNAオリゴマーを提供することができる。
【００４０】
特定の実施形態において、本発明は、イン・ビボ（in vivo）において長時間持続する効能を有するUNAオリゴマーを提供することができる。
【００４１】
本発明の実施形態は、さらに、増大した酵素安定性を有するUNAオリゴマーを提供してもよい。
【００４２】
本開示のUNAオリゴマーは、遺伝子発現をモジュレートするために、イン・ビトロ（in vitro）およびイン・ビボ（in vivo）において高められた安定性を提供することができる。
【００４３】
本発明のさらなる態様において、UNAオリゴマーは、疾患または症状を治療する剤として低下した副作用を示すことができる。幾つかの実施形態において、UNAオリゴマーは、疾病を治療する剤としてまたはイン・ビトロ（in vitro）において低下したオフターゲット効果を示すことができる。
【００４４】
UNAモノマー
【００４５】
UNAモノマーは、以下に示すようなプロパン−1，2，3−トリ−イル−トリソキシ構造に基づく小有機分子である：
【化１】
2018512140.tif 000002
ここに、R1およびR2はHであり、R1およびR2はホスホジエステル結合となることができ、塩基はヌクレオ塩基となることができ、R3は以下に記載する官能基である。
【００４６】
もう1の観点において、UNAモノマーの主要原子は、以下のようにIUPAC命名法で描くことができる：
【化２】
2018512140.tif 000003
ここに、オリゴマー鎖の進行の向きは、プロパン残基の1−末端から3−末端への向きである。
【００４７】
ヌクレオ塩基の例には、ウラシル、チミン、シトシン、5−メチルシトシン、アデニン、グアニン、イノシン、ならびに天然および非−天然のヌクレオ塩基アナログが含まれる。
【００４８】
一般的に、UNAモノマーはヌクレオチドではないため、それらはオリゴマーにおいて少なくとも4の形態を示すことができる。第1に、UNAモノマーはオリゴマーにおいて内部モノマーとなることができ、その場合はUNAモノマーは両側で他のモノマーによって挟まれる。この形態では、UNAモノマーは、オリゴマーが二本鎖である場合は塩基対形成に関与することができ、例えば、二本鎖にヌクレオ塩基と他のモノマーとが存在する。
【００４９】
プロパン−1−イル位およびプロパン−3−イル位の両方で挟まれ、式中のR3が−OHである内部モノマーとしてのUNAモノマーの例を以下に示す。
【化３】
2018512140.tif 000004
【００５０】
第2に、UNAモノマーはオリゴマー二本鎖のオーバーハング中のモノマーになることができ、その場合、UNAモノマーは両側で他のモノマーによって挟まれている。この形態において、UNAモノマーは塩基対合に関与しない。UNAモノマーはヌクレオチドとは異なってフレキシブルな有機構造であるため、UNAモノマーを含むオーバーハングはオリゴマーに対してフレキシブルなターミネーターであろう。
【００５１】
UNAモノマーはオリゴマーのオーバーハング中の末端モノマーとなることができ、その場合、UNAモノマーはプロパン−1−イル位またはプロパン−3−イル位のいずれかで1のみのモノマーに結合する。この形態においては、UNAモノマーは塩基対形成に関与しない。UNAモノマーはヌクレオチドとは異なってフレキシブルな有機構造であるため、UNAモノマーを含むオーバーハングはオリゴマーに対してフレキシブルなターミネーターとなることができる。
【００５２】
プロパン−3−イル位に結合した末端モノマーとしてのUNAモノマーの例を以下に示す。
【化４】
2018512140.tif 000005
【００５３】
UNAモノマーはフレキシブルな分子になることができるため、末端モノマーとしてのUNAモノマーは広く異なるコンホメーションを推測することができる。プロパン−3−イル位に結合した末端モノマーとしてのエネルギー最小限化UNAモノマーコンホメーションの例を以下に示す。
【化５】
2018512140.tif 000006
したがって、末端UNAモノマーを有するUNAオリゴマーは、siRNAのような従来の核酸剤とは構造において顕著に異なる。例えば、siRNAは二本鎖中の末端モノマーまたはオーバーハングが安定化されていることを必要としてもよい。一方、末端UNAモノマーの適合性は、異なる特性を有するUNAオリゴマーを提供することができる。
【００５４】
特に、UNAモノマーの構造は、それが天然に生じるヌクレオチドに結合することを許容する。UNAオリゴマーは、UNAモノマー、ならびに天然に生じるヌクレオシドに基づいてもよい種々のヌクレオチドからなる鎖とすることができる。
【００５５】
幾つかの実施形態において、UNAモノマーの官能基R3は、−OR4、−SR4、−NR42、−NH（C＝O）R4、モルホリノ、モルホリン−1−イル、ピペラジン−1−イル、または4−アルカノイル−ピペラジン−1−イルとなることができ、ここにR4は各々の場合について同一または異なり、H、アルキル、コレステロール、脂質分子、ポリアミン、アミノ酸、またはポリペプチドとなることができる。
【００５６】
UNAモノマーは有機分子である。UNAモノマーは、核酸モノマーまたはヌクレオチドではなく、天然に生じるヌクレオシドまたは修飾した天然に生じるヌクレオシドでもない。
【００５７】
本発明のUNAオリゴマーは、合成鎖状分子である。本発明のUNAオリゴマーは、核酸ではなく、オリゴヌクレオチドでもない。
【００５８】
幾つかの実施形態において、上記に示したように、UNAモノマーは、
UNA−A（
2018512140.tif 000007
と命名する）、UNA−U（
2018512140.tif 000008
と命名する）、UNA−C（
2018512140.tif 000009
と命名する）、およびUNA−G（
2018512140.tif 000010
と命名する）となることができる。
【００５９】
本明細書中で用いてもよい記号にはmA、mG、mC、およびmUが含まれ、これらは2'−O−メチル修飾リボヌクレオチドを示す。
【００６０】
本明細書中で用いてもよい記号には小文字のcおよびuが含まれ、これらは2'−O−メチル修飾リボヌクレオチドを示す。
【００６１】
本明細書中で用いてもよい記号にはdTが含まれ、これは2'−デオキシTヌクレオチドを示す。
【００６２】
本明細書中で用いてもよい記号には*が含まれ、これはホスホロチオエート結合を示す。
【００６３】
UNAオリゴマーのモノマー
【００６４】
本明細書中で用いる場合、オリゴマー配列の文脈において、Xなる記号はUNAモノマーを表す。
【００６５】
本明細書で用いる場合、オリゴマー配列の文脈において、Nなる記号はいずれかの天然のヌクレオチドモノマー、または修飾ヌクレオチドモノマーを表す。
【００６６】
本明細書で用いる場合、オリゴマー配列の文脈において、Qなる記号は非−天然、修飾、または化学修飾されたヌクレオチドモノマーを表す。
【００６７】
Qモノマーがオリゴマーの1の鎖に現れ、かつ、他の鎖と対合していない場合、モノマーは結合したいずれかの塩基を有することができる。Qモノマーがオリゴマーの1の鎖に現れ、かつ、他の鎖のモノマーと対合している場合、Qモノマーは他の鎖中の対応する対合した位置のモノマーに相補的である結合したいずれかの塩基を有することができる。
【００６８】
核酸モノマーの例には、当該技術分野で知られているいずれのかかるヌクレオチドも含む、非−天然、修飾、および化学修飾されたヌクレオチドが含まれる。
【００６９】
非−天然、修飾、および化学修飾されたヌクレオチドモノマーの例には、2'−O−メチルリボヌクレオチド、2'−O−メチルプリンヌクレオチド、2'−デオキシ−2'−フルオロリボヌクレオチド、2'−デオキシ−2'−フルオロピリミジンヌクレオチド、2'−デオキシリボヌクレオチド、2'−デオキシプリンヌクレオチド、ユニバーサル塩基ヌクレオチド、5−C−メチル−ヌクレオチド、および逆向きデオキシ脱塩基モノマー残基が含まれる。
【００７０】
非−天然、修飾、および化学修飾されたヌクレオチドモノマーの例には、3'−末端安定化ヌクレオチド、3'−グリセリルヌクレオチド、3'−逆向き脱塩基ヌクレオチド、および3'−逆向きチミジンが含まれる。
【００７１】
非−天然、修飾、および化学修飾されたヌクレオチドモノマーの例には、ロックド（locked）核酸ヌクレオチド（LNA）、2'−O，4'−C−メチレン−（D−リボフラノシル）ヌクレオチド、2'−メトキシエトキシ（MOE）ヌクレオチド、2'−メチル−チオ−エチル、2'−デオキシ−2'−フルオロヌクレオチド、および2'−O−メチルヌクレオチドが含まれる。
【００７２】
非−天然、修飾、および化学修飾されたヌクレオチドモノマーの例には、2'，4’−束縛（constrained）2'−O−メトキシエチル（cMOE）および2'−O−エチル（cEt）修飾DNAが含まれる。
【００７３】
非−天然、修飾、および化学修飾されたヌクレオチドモノマーの例には、2'−アミノヌクレオチド、2'−O−アミノヌクレオチド、2'−C−アリルヌクレオチド、および2'−O−アリルヌクレオチドが含まれる。
【００７４】
非−天然、修飾、および化学修飾されたヌクレオチドモノマーの例には、N6−メチルアデノシンヌクレオチドが含まれる。
【００７５】
非−天然、修飾、および化学修飾されたヌクレオチドモノマーの例には、塩基5−（3−アミノ）プロピルウリジン、5−（2−メルカプト）エチルウリジン、5−ブロモウリジン；8−ブロモグアノシン、または7−デアザアデノシンで修飾されたヌクレオチドモノマーが含まれる。
【００７６】
非−天然、修飾、および化学修飾されたヌクレオチドモノマーの例には、2'−O−アミノプロピル置換型ヌクレオチドが含まれる。
【００７７】
非−天然、修飾、および化学修飾されたヌクレオチドモノマーの例には、ヌクレオチドの2'−OH基を2'−R、2'−OR、2'−ハロゲン、2'−SR、または2'−アミノで置き換えることが含まれ、ここに、RはH、アルキル、アルケニル、またはアルキニルとすることができる。
【００７８】
修飾されたヌクレオチドの幾つかの例は、Saenger，Principles of Nucleic Acid Structure，Springer−Verlag，1984に提供されている。
【００７９】
UNAモノマーリンカーを含むUNAオリゴマー化合物
【００８０】
本発明の態様は、UNA−含有オリゴマー化合物用の構造および組成物を提供することができる。オリゴマー剤は、1またはそれを超えるUNAモノマーを取り込んでもよい。本発明のオリゴマー分子は、遺伝子調節または遺伝子サイレンシング治療法用の製剤中の有効剤として用いることができる。
【００８１】
オリゴマーは一本鎖または二本鎖とすることができ、またはさらなる鎖または非−鎖構造を有していてもよい。
【００８２】
幾つかの実施形態において、本発明は、UNAモノマーとある種の天然のヌクレオチド、非−天然のヌクレオチド、修飾ヌクレオチド、または化学修飾されたヌクレオチドとの新規な組合せを取り込む構造を有するオリゴマー化合物を提供する。
【００８３】
さらなる態様において、オリゴマー化合物は、薬理学上活性な分子とすることができる。本発明のUNAオリゴマーは、遺伝子発現を調節またはモジュレートするための、およびRNA干渉法において活性な医薬成分として、ならびにアンチセンス、RNAブロッキング、およびマイクロ−RNAストラテジーに使用することができる。
【００８４】
本発明のUNAオリゴマーは、以下の式Iの構造を有することができる。
【化６】
2018512140.tif 000011
ここに、L1は結合であり、nは19〜29であり、各々現れる場合についてL2は式−C1−C2−C3−を有するUNAリンカー基であり、RはC2に結合しており、かつ、式−OCH（CH2R3）R5を有し、ここにR3は−OR4、−SR4、−NR42、−NH（C＝O）R4、モルホリノ、モルホリン−1−イル、ピペラジン−1−イル、または4−アルカノイル−ピペラジン−1−イルであり、ここにR4は各々現れる場合について同一または異なり、H、アルキル、コレステロール、脂質分子、ポリアミン、アミノ酸、またはポリペプチドであり、ここにR5はヌクレオ塩基であり、またはL2（R）はリボースのような糖質であり、Rはヌクレオ塩基であり、またはL2は修飾されたリボースのような修飾された糖質であり、およびRはヌクレオ塩基である。ある種の実施形態において、ヌクレオ塩基は修飾されたヌクレオ塩基とすることができる。L1はホスホジエステル結合とすることができる。
【００８５】
本発明のUNAオリゴマーは短鎖分子とすることができる。UNAオリゴマーは、二本鎖対とすることができる。したがって、UNAオリゴマーは二本鎖の第1鎖および二本鎖の第2鎖を有することができ、それは3までの誤対合を生じることができるが、ヌクレオ塩基に関して第1鎖に相補的である。UNAオリゴマー二本鎖は、オーバーハングを有することができる。
【００８６】
幾つかの実施形態において、3'オーバーハングは両方の鎖上に存在することができ、これは2モノマー長とすることができる。例えば、3'オーバーハングはTTまたはuuとすることができる。
【００８７】
幾つかのUNAオリゴマーは、米国特許第8，314，227号、ならびに米国特許出願公開20110313020 A1で論じられている。
【００８８】
UNAオリゴマーのターゲットは、ターゲット核酸とすることができる。幾つかの実施形態において、該ターゲットは対象のいずれかのmRNAとすることができる。UNAオリゴマーは、RNA干渉における遺伝子サイレンシングに対して活性となることができる。
【００８９】
UNAオリゴマーは、一緒になって二本鎖を提供する二本鎖を含んでいてもよい。二本鎖は、パッセンジャー鎖またはセンス鎖といってもよい第1鎖、およびガイド鎖またはアンチセンス鎖といってもよい第2鎖からなっていてもよい。
【００９０】
幾つかの態様において、本発明のUNAオリゴマーは、二本鎖構造のいずれかの鎖または両方の鎖中のいずれかの位置にいずれかの数のホスホロチオエートモノマー間結合を有することができる。
【００９１】
幾つかの実施形態において、UNAオリゴマーの1またはそれを超えるモノマー間結合はホスホジエステル、ジチオエートを含むホスホロチオエート、キラルホスホロチオエート、および他の化学的に修飾された形態とすることができる。
【００９２】
本発明のUNAオリゴマーの例には、一般的に相補的である二本鎖の対が含まれる。したがって、例えば、配列番号：1は二本鎖の第1鎖を表すことができ、配列番号：2は二本鎖の第2鎖を表すことができ、これは第1鎖に相補的である。
【００９３】
例えば、第1鎖中の記号「N」は、第2鎖中の対応する位置のモノマーに相補的であるいずれかのヌクレオチドを表すことができる。本開示の例示的なUNAオリゴマーは、2−モノマー長のオーバーハングと一緒に示しているが、1〜8モノマーまたはより長いオーバーハングを用いることができる。
【００９４】
鎖またはオリゴマー中の「X」は、UNAモノマーを表す。
【００９５】
UNAモノマーがオリゴマーの1の鎖に現れ、かつ、他の鎖と非対合である場合、そのモノマーは結合したいずれかの塩基を有することができる。UNAモノマーがオリゴマーの1の鎖に現れ、かつ、他の鎖のモノマーと対合する場合、そのUNAモノマーは他の鎖中の対応する対合した位置のモノマーに相補的である結合したいずれかの塩基を有することができる。
【００９６】
さらに、オリゴマーがUNAモノマーで終結する場合、末端位置は上記に示した位置のナンバリングに従ってヌクレオチドに対しての5'−末端の代わりに1−末端を有するか、または、ヌクレオチドに対しての3'−末端の代わりに3−末端を有する。例えば、UNAオリゴマー
【化７】
2018512140.tif 000012
は、第1鎖上のUNAモノマー1−末端、第1鎖上のUNAモノマー3−末端、第2鎖上のUNAモノマー3−末端、および第2鎖上のヌクレオチド5'−末端を有する。
【００９７】
幾つかの実施形態において、本発明のUNAオリゴマーは、第1鎖の1−末端に1またはそれを超えるUNAモノマーを有し、第1鎖の3−末端に1またはそれを超えるUNAモノマーを有することができる。
【００９８】
さらなる実施形態において、本発明のUNAオリゴマーは、第2鎖の3−末端に1またはそれを超えるUNAモノマーを有することができる。
【００９９】
ある種の実施形態において、本発明の二本鎖UNAオリゴマーは、第1鎖の1−末端の1またはそれを超えるUNAモノマー、第1鎖の3−末端の1またはそれを超えるUNAモノマー、および第2鎖の3−末端の1またはそれを超えるUNAモノマーを有することができる。
【０１００】
本発明のUNAオリゴマーは、各鎖が独立して19〜23モノマー長である第1鎖および第2鎖を有していてもよい。
【０１０１】
ある種の実施形態において、本発明のUNAオリゴマーは、19〜23モノマー長である第1鎖を有していてもよい。
【０１０２】
ある種の実施形態において、本発明のUNAオリゴマーは、19〜21モノマー長である二本鎖領域を有していてもよい。
【０１０３】
さらなる実施形態において、本発明のUNAオリゴマーは、19〜23モノマー長である第2鎖を有していてもよい。
【０１０４】
ある種の実施形態において、本発明のUNAオリゴマーは、19モノマー長である第1鎖、および21モノマー長である第2鎖を有していてもよい。
【０１０５】
ある種の実施形態において、本発明のUNAオリゴマーは、20モノマー長である第1鎖、および21モノマー長である第2鎖を有していてもよい。
【０１０６】
ある種の実施形態において、本発明のUNAオリゴマーは、21モノマー長である第1鎖、および21モノマー長である第2鎖を有していてもよい。
【０１０７】
ある種の実施形態において、本発明のUNAオリゴマーは、22モノマー長である第1鎖および21モノマー長である第2鎖を有していてもよい。
【０１０８】
遺伝子発現を阻害するための本発明のUNAオリゴマーは、第1鎖および第2鎖を有することができ、各々の鎖は19〜29モノマー長である。モノマーは、UNAモノマーおよび核酸モノマーとすることができる。オリゴマーは、14〜29モノマー長の二本鎖構造を有することができる。UNAオリゴマーは、ターゲット遺伝子をターゲットとすることができ、従来のsiRNAと比較した場合に低下したオフターゲット効果を示すことができる。幾つかの実施形態において、本発明のUNAオリゴマーは第1鎖および第2鎖を有することができ、各々の鎖は19〜23モノマー長である。
【０１０９】
もう1の態様において、UNAオリゴマーは平滑末端、または1またはそれを超えるオーバーハングを有していてもよい。幾つかの実施形態において、第1鎖および第2鎖は鎖間の連結オリゴマーで連結されていてもよく、1の末端で連結ループと二本鎖領域を形成してもよい。
【０１１０】
ある種の実施形態において、オーバーハングは1または2のモノマー長とすることができる。
【０１１１】
UNAオリゴマーは、細胞中のターゲット核酸の切断を媒介することができる。幾つかのプロセスにおいて、少なくともその一部分がターゲット核酸に相補的になることができるUNAオリゴマーの第2鎖は、ターゲット核酸にハイブリダイズすることができるガイド鎖として作用することができる。
【０１１２】
第2鎖は、RNA Induced Silencing Complex（RISC）に取り込ませることもできる。
【０１１３】
本開示のUNAオリゴマーは、天然に生じる核酸ヌクレオチド、および遺伝子サイレンシング活性で匹敵するその修飾物を含んでいてもよい。
【０１１４】
幾つかの態様において、UNAオリゴマーは、遺伝子発現を阻害することができる二本鎖構築物分子である。
【０１１５】
本明細書で用いる鎖なる語は、モノマーの単一の連続した鎖をいい、その鎖はいずれかの数の内部モノマーおよび2の末端モノマーを含み、各々の末端モノマーは1の末端の1の内部モノマーに結合し、それが鎖を終結するように他の末端のモノマーには結合しない。
【０１１６】
UNAオリゴマーのモノマーは、ホスホジエステル結合、ホスホロチオエート結合、ギャップド（gapped）結合、および他の変形を介して結合してもよい。
【０１１７】
幾つかの実施形態において、UNAオリゴマーは、第1鎖および第2鎖の間の相補性における誤対合を含むことができる。他の実施形態において、UNAオリゴマーは、1、または2、または3の誤対合を有していてもよい。誤対合は、二本鎖領域のいずれの位置に生じてもよい。
【０１１８】
UNAオリゴマーのターゲットは、ターゲット遺伝子のターゲット核酸とすることができる。
【０１１９】
UNAオリゴマーは、二本鎖領域の外側に1または2のオーバーハングを有していてもよい。オーバーハングは、第1鎖または第2鎖の末端の非対合部分とすることができる。第1鎖および第2鎖のオーバーハング部分の長さは、同一または異なるものとすることができる。
【０１２０】
UNAオリゴマーは、少なくとも1の平滑末端を有していてもよい。平滑末端はオーバーハング部分を有さず、平滑末端の二本鎖領域は第1および第2の鎖の両方について同一の位置で終結する。
【０１２１】
UNAオリゴマーはRISCの長さとすることができ、それが25塩基対未満の二本鎖長を有することを意味する。
【０１２２】
ある種の実施形態において、UNAオリゴマーはそれ自体でホールディングし、それ自体にハイブリダイズして、二本鎖領域の末端に連結ループを有する二本鎖領域を形成することができる。
【０１２３】
5のUNAモノマーを含み、1またはそれを超えるQモノマーを含んでいてもよいUNAオリゴマーの例を表1に示す。
【表１−１】
2018512140.tif 000013
【表１−２】
2018512140.tif 000014
【０１２４】
Qモノマーを豊富に含む4のUNAモノマーを含むUNAオリゴマーの例を表2に示す。
【表２−１】
2018512140.tif 000015
【表２−２】
2018512140.tif 000016
【０１２５】
Qモノマーを豊富に含む4のUNAモノマーを含むUNAオリゴマーの例を表3に示す。
【表３−１】
2018512140.tif 000017
【表３−２】
2018512140.tif 000018
【表３−３】
2018512140.tif 000019
【０１２６】
Qモノマーを豊富に含む3のUNAモノマーを含むUNAオリゴマーの例を表4に示す。
【表４−１】
2018512140.tif 000020
【表４−２】
2018512140.tif 000021
【表４−３】
2018512140.tif 000022
【０１２７】
Qモノマーを豊富に含む6のUNAモノマーを含むUNAオリゴマーの例を表5に示す。
【表５−１】
2018512140.tif 000023
【表５−２】
2018512140.tif 000024
【０１２８】
Qモノマーを豊富に含む7のUNAモノマーを含むUNAオリゴマーの例を表6に示す。
【表６−１】
2018512140.tif 000025
【表６−２】
2018512140.tif 000026
【０１２９】
Qモノマーを豊富に含む5のUNAモノマーを含むUNAオリゴマーの例を表7に示す。
【表７−１】
2018512140.tif 000027
【表７−２】
2018512140.tif 000028
【０１３０】
Qモノマーを豊富に含む6のUNAモノマーを含むUNAオリゴマーの例を表8に示す。
【表８−１】
2018512140.tif 000029
【表８−２】
2018512140.tif 000030
【０１３１】
Qモノマーを豊富に含む5のUNAモノマーを含むUNAオリゴマーの例を表9に示す。
【表９−１】
2018512140.tif 000031
【表９−２】
2018512140.tif 000032
【０１３２】
Qモノマーを豊富に含む6のUNAモノマーを含むUNAオリゴマーの例を表10に示す。
【表１０−１】
2018512140.tif 000033
【表１０−２】
2018512140.tif 000034
【０１３３】
Qモノマーを豊富に含む4のUNAモノマーを含むUNAオリゴマーの例を表11に示す。
【表１１−１】
2018512140.tif 000035
【表１１−２】
2018512140.tif 000036
【０１３４】
Qモノマーを豊富に含む5のUNAモノマーを含むUNAオリゴマーの例を表12に示す。
【表１２−１】
2018512140.tif 000037
【表１２−２】
2018512140.tif 000038
【０１３５】
Qモノマーを豊富に含む7またはそれを超えるUNAモノマーを含むUNAオリゴマーの例を表13に示す。
【表１３】
2018512140.tif 000039
【０１３６】
表1〜13に示すオリゴマー構造は、第1鎖（上段）および第2鎖（下段）からなる二本鎖構造である。第1および第2の鎖の各々は、それ自体で、一本鎖分子になることができるオリゴマー分子である。一本鎖分子は、遺伝子発現をモジュレートするために活性になることができる。
【０１３７】
本発明のオリゴマー化合物は、表1〜13に示す構造のいずれか1を有してもよい。本発明のオリゴマー化合物は表1〜13に示す構造のいずれか1を有してもよく、ここに構造は対応する核酸ターゲットをターゲットとするヌクレオ塩基配列を有する。
【０１３８】
本発明のオリゴマー化合物は、表1〜13に示す配列のいずれか1を有していてもよい。
【０１３９】
本発明のオリゴマー化合物は、表1〜13に示す鎖のいずれか1となってもよい。
【０１４０】
幾つかの実施形態において、本発明のオリゴマー化合物は第1鎖および第2鎖を有してもよく、各鎖は独立して19〜23モノマー長であり、ここにUNAモノマーではないいずれのモノマーもQモノマーとすることができる。
【０１４１】
幾つかの実施形態において、本発明のオリゴマー化合物は第1鎖および第2鎖を有してもよく、各鎖は独立して19〜23モノマー長であり、ここにUNAモノマーではないいずれのモノマーもQモノマーとすることができ、ここにQモノマーの数は20未満である。
【０１４２】
幾つかの実施形態において、本発明のオリゴマー化合物は第1鎖および第2鎖を有してもよく、各鎖は独立して19〜23モノマー長であり、ここにUNAモノマーではないいずれのモノマーもQモノマーとすることができ、ここにQモノマーの数は12未満である。
【０１４３】
幾つかの実施形態において、本発明のオリゴマー化合物は第1鎖および第2鎖を有してもよく、各鎖は独立して19〜23モノマー長であり、ここにUNAモノマーではないいずれのモノマーもQモノマーとすることができ、ここにQモノマーの数は10未満である。
【０１４４】
幾つかの実施形態において、本発明のオリゴマー化合物は第1鎖および第2鎖を有してもよく、各鎖は独立して19〜23モノマー長であり、ここにUNAモノマーではないいずれのモノマーもQモノマーとすることができ、ここにQモノマーの数は8未満である。
【０１４５】
幾つかの実施形態において、本発明のオリゴマー化合物は第1鎖および第2鎖を有してもよく、各鎖は独立して19〜23モノマー長であり、ここにUNAモノマーではないいずれのモノマーもQモノマーとすることができ、ここにQモノマーの数は1〜20である。
【０１４６】
幾つかの実施形態において、本発明のオリゴマー化合物は第1鎖および第2鎖を有してもよく、各鎖は独立して19〜23モノマー長であり、ここにUNAモノマーではないいずれのモノマーもQモノマーとすることができ、ここにQモノマーの数は1〜15である。
【０１４７】
幾つかの実施形態において、本発明のオリゴマー化合物は第1鎖および第2鎖を有してもよく、各鎖は独立して19〜23モノマー長であり、ここにUNAモノマーではないいずれのモノマーもQモノマーとすることができ、ここにQモノマーの数は1〜9である。
【０１４８】
幾つかの実施形態において、本発明のオリゴマー化合物は第1鎖および第2鎖を有してもよく、各鎖は独立して19〜23モノマー長であり、ここにUNAモノマーではないいずれのモノマーも2'−O−メチル修飾リボヌクレオチドとすることができる。
【０１４９】
幾つかの実施形態において、本発明のオリゴマー化合物は第1鎖および第2鎖を有してもよく、各鎖は独立して19〜23モノマー長であり、ここにUNAモノマーではないいずれのモノマーも2'−O−メチル修飾リボヌクレオチドとすることができ、ここに2'−O−メチル修飾リボヌクレオチドの数は20未満である。
【０１５０】
幾つかの実施形態において、本発明のオリゴマー化合物は第1鎖および第2鎖を有してもよく、各鎖は独立して19〜23モノマー長であり、ここにUNAモノマーではないいずれのモノマーも2'−O−メチル修飾リボヌクレオチドとすることができ、ここに2'−O−メチル修飾リボヌクレオチドの数は12未満である。
【０１５１】
幾つかの実施形態において、本発明のオリゴマー化合物は第1鎖および第2鎖を有してもよく、各鎖は独立して19〜23モノマー長であり、ここにUNAモノマーではないいずれのモノマーも2'−O−メチル修飾リボヌクレオチドとすることができ、ここに2'−O−メチル修飾リボヌクレオチドの数は10未満である。
【０１５２】
幾つかの実施形態において、本発明のオリゴマー化合物は第1鎖および第2鎖を有してもよく、各鎖は独立して19〜23モノマー長であり、ここにUNAモノマーではないいずれのモノマーも2'−O−メチル修飾リボヌクレオチドとすることができ、ここに2'−O−メチル修飾リボヌクレオチドの数は8未満である。
【０１５３】
幾つかの実施形態において、本発明のオリゴマー化合物は第1鎖および第2鎖を有してもよく、各鎖は独立して19〜23モノマー長であり、ここにUNAモノマーではないいずれのモノマーも2'−O−メチル修飾リボヌクレオチドとすることができ、ここに2'−O−メチル修飾リボヌクレオチドの数は1〜20である。
【０１５４】
幾つかの実施形態において、本発明のオリゴマー化合物は第1鎖および第2鎖を有してもよく、各鎖は独立して19〜23モノマー長であり、ここにUNAモノマーではないいずれのモノマーも2'−O−メチル修飾リボヌクレオチドとすることができ、ここに2'−O−メチル修飾リボヌクレオチドの数は1〜15である。
【０１５５】
幾つかの実施形態において、本発明のオリゴマー化合物は第1鎖および第2鎖を有してもよく、各鎖は独立して19〜23モノマー長であり、ここにUNAモノマーではないいずれのモノマーも2'−O−メチル修飾リボヌクレオチドとすることができ、ここに2'−O−メチル修飾リボヌクレオチドの数は1〜9である。
【０１５６】
本発明のオリゴマー化合物は一本鎖分子であってもよく、ここに一本鎖は表1〜13に示す鎖のいずれか1である。
【０１５７】
幾つかの実施形態において、本発明のオリゴマー化合物は、19〜23モノマー長である一本鎖を有していてもよく、ここにUNAモノマーではないいずれのモノマーもQモノマーとすることができる。
【０１５８】
幾つかの実施形態において、本発明のオリゴマー化合物は、19〜23モノマー長である一本鎖を有していてもよく、ここにUNAモノマーではないいずれのモノマーもQモノマーとすることができ、ここにQモノマーの数は20未満である。
【０１５９】
幾つかの実施形態において、本発明のオリゴマー化合物は、19〜23モノマー長である一本鎖を有していてもよく、ここにUNAモノマーではないいずれのモノマーもQモノマーとすることができ、ここにQモノマーの数は12未満である。
【０１６０】
幾つかの実施形態において、本発明のオリゴマー化合物は、19〜23モノマー長である一本鎖を有していてもよく、ここにUNAモノマーではないいずれのモノマーもQモノマーとすることができ、ここにQモノマーの数は10未満である。
【０１６１】
幾つかの実施形態において、本発明のオリゴマー化合物は、19〜23モノマー長である一本鎖を有していてもよく、ここにUNAモノマーではないいずれのモノマーもQモノマーとすることができ、ここにQモノマーの数は8未満である。
【０１６２】
幾つかの実施形態において、本発明のオリゴマー化合物は、19〜23モノマー長である一本鎖を有していてもよく、ここにUNAモノマーではないいずれのモノマーもQモノマーとすることができ、ここにQモノマーの数は1〜20である。
【０１６３】
幾つかの実施形態において、本発明のオリゴマー化合物は、19〜23モノマー長である一本鎖を有していてもよく、ここにUNAモノマーではないいずれのモノマーもQモノマーとすることができ、ここにQモノマーの数は1〜15である。
【０１６４】
幾つかの実施形態において、本発明のオリゴマー化合物は、19〜23モノマー長である一本鎖を有していてもよく、ここにUNAモノマーではないいずれのモノマーもQモノマーとすることができ、ここにQモノマーの数は1〜9である。
【０１６５】
幾つかの実施形態において、本発明のオリゴマー化合物は、19〜23モノマー長である一本鎖を有していてもよく、ここにUNAモノマーではないいずれのモノマーも2'−O−メチル修飾リボヌクレオチドとすることができる。
【０１６６】
幾つかの実施形態において、本発明のオリゴマー化合物は、19〜23モノマー長である一本鎖を有していてもよく、ここにUNAモノマーではないいずれのモノマーも2'−O−メチル修飾リボヌクレオチドとすることができ、ここに2'−O−メチル修飾リボヌクレオチドの数は20未満である。
【０１６７】
幾つかの実施形態において、本発明のオリゴマー化合物は、19〜23モノマー長である一本鎖を有していてもよく、ここにUNAモノマーではないいずれのモノマーも2'−O−メチル修飾リボヌクレオチドとすることができ、ここに2'−O−メチル修飾リボヌクレオチドの数は12未満である。
【０１６８】
幾つかの実施形態において、本発明のオリゴマー化合物は、19〜23モノマー長である一本鎖を有していてもよく、ここにUNAモノマーではないいずれのモノマーも2'−O−メチル修飾リボヌクレオチドとすることができ、ここに2'−O−メチル修飾リボヌクレオチドの数は10未満である。
【０１６９】
幾つかの実施形態において、本発明のオリゴマー化合物は、19〜23モノマー長である一本鎖を有していてもよく、ここにUNAモノマーではないいずれのモノマーも2'−O−メチル修飾リボヌクレオチドとすることができ、ここに2'−O−メチル修飾リボヌクレオチドの数は8未満である。
【０１７０】
幾つかの実施形態において、本発明のオリゴマー化合物は、19〜23モノマー長である一本鎖を有していてもよく、ここにUNAモノマーではないいずれのモノマーも2'−O−メチル修飾リボヌクレオチドとすることができ、ここに2'−O−メチル修飾リボヌクレオチドの数は1〜20である。
【０１７１】
幾つかの実施形態において、本発明のオリゴマー化合物は、19〜23モノマー長である一本鎖を有していてもよく、ここにUNAモノマーではないいずれのモノマーも2'−O−メチル修飾リボヌクレオチドとすることができ、ここに2'−O−メチル修飾リボヌクレオチドの数は1〜15である。
【０１７２】
幾つかの実施形態において、本発明のオリゴマー化合物は、19〜23モノマー長である一本鎖を有していてもよく、ここにUNAモノマーではないいずれのモノマーも2'−O−メチル修飾リボヌクレオチドとすることができ、ここに2'−O−メチル修飾リボヌクレオチドの数は1〜9である。
【０１７３】
疾患を治療する方法
【０１７４】
本発明の方法には、哺乳動物対象における種々の疾患の治療および予防が含まれる。対象はヒトとすることができる。
【０１７５】
本発明の方法において、治療または予防を必要とする対象に、有効量の本発明のオリゴマー化合物を投与することができる。対象はヒトまたは哺乳動物とすることができる。
【０１７６】
有効量の本発明のオリゴマー化合物の有効量は、0.001 mg／kg〜50.0 mg／kgの範囲の用量とすることができる。
【０１７７】
本発明の方法において、ターゲットmRNA発現は少なくとも5日間、対象において低下することができる。ある種の実施形態において、ターゲットmRNA発現は少なくとも10日、または15日間、対象において低下することができる。
【０１７８】
本開示の方法において、本発明のオリゴマー化合物の投与は、炎症反応を生じない。
【０１７９】
さらなる実施形態において、本発明は、細胞を本発明のオリゴマー化合物によって処理することによって、該細胞中のターゲット遺伝子の発現を阻害する方法を含む。
【０１８０】
追加の実施形態において、本発明は、哺乳動物にUNAオリゴマーを含む組成物を投与することによって、該哺乳動物におけるターゲット遺伝子の発現を阻害する方法を含む。
【０１８１】
TTRに対するUNAオリゴマー
【０１８２】
本発明の実施形態は、TTRをターゲットとした有効剤であるオリゴマー分子を提供することができる。
【０１８３】
TTRをターゲットとした本発明のUNAオリゴマーの例を表14〜17に示す。表14および15は「センス」および「アンチセンス」対を表し、表16および17はさらなる「センス」および「アンチセンス」対を表す。例えば、配列番号：237および238はセンスおよびアンチセンス対である。
【表１４】
2018512140.tif 000040
【表１５】
2018512140.tif 000041
【表１６】
2018512140.tif 000042
【表１７】
2018512140.tif 000043
【０１８４】
例えば、UNAオリゴマーは配列番号：87である鎖を有していてもよい。UNAオリゴマーは配列番号：88である鎖を有していてもよい。UNAオリゴマーは配列番号：87である鎖、および配列番号：88である鎖を有していてもよい。これらのUNAオリゴマーは、TTRのターゲット配列に対応するヌクレオ塩基配列を有することができる。これらのUNAオリゴマーは、配列番号：237〜284のいずれかに対応するヌクレオ塩基配列を有することができる。
【０１８５】
例えば、UNAオリゴマーは、配列番号：105である鎖を有していてもよい。UNAオリゴマーは、配列番号：106である鎖を有していてもよい。UNAオリゴマーは、配列番号：105である鎖、および配列番号：106である鎖を有していてもよい。これらのUNAオリゴマーは、TTRのターゲット配列に対応するヌクレオ塩基配列を有することができる。これらのUNAオリゴマーは、配列番号：237〜284のいずれかに対応するヌクレオ塩基配列を有することができる。
【０１８６】
UNAオリゴマーは、配列番号：239である第1鎖および配列番号：240である第2鎖を含んでいてもよい。
【０１８７】
UNAオリゴマーは、配列番号：263である第1鎖および配列番号：264である第2鎖を含んでいてもよい。
【０１８８】
APOB用のUNAオリゴマー
【０１８９】
本発明の実施形態は、APOBをターゲットとした有効剤であるオリゴマー分子を提供することができる。
【０１９０】
TTRをターゲットとした本発明のUNAオリゴマーの例を表18および19に示す。表18および19は、「センス」および「アンチセンス」対を表す。例えば、配列番号：285および286は、センスおよびアンチセンス対である。
【表１８】
2018512140.tif 000044
【表１９】
2018512140.tif 000045
【０１９１】
例えば、UNAオリゴマーは、配列番号：87である鎖を有していてもよい。UNAオリゴマーは、配列番号：88である鎖を有していてもよい。UNAオリゴマーは、配列番号：87である鎖、および配列番号：88である鎖を有していてもよい。これらのUNAオリゴマーは、APOBのターゲット配列に対応するヌクレオ塩基配列を有することができる。これらのUNAオリゴマーは、配列番号：285〜304のいずれかに対応するヌクレオ塩基配列を有することができる。
【０１９２】
例えば、UNAオリゴマーは配列番号：105である鎖を有していてもよい。UNAオリゴマーは配列番号：106である鎖を有していてもよい。UNAオリゴマーは配列番号：105である鎖、および配列番号：106である鎖を有していてもよい。これらのUNAオリゴマーは、APOBのターゲット配列に対応するヌクレオ塩基配列を有することができる。これらのUNAオリゴマーは、配列番号：285〜304のいずれかに対応するヌクレオ塩基配列を有することができる。
【０１９３】
UNAオリゴマーは、配列番号：287である第1鎖および配列番号：288である第2鎖を含んでいてもよい。
【０１９４】
UNAオリゴマーは、配列番号：291である第1鎖および配列番号：292である第2鎖を含んでいてもよい。
【０１９５】
PCSK9に対するUNAオリゴマー
【０１９６】
本発明の実施形態は、PCSK9をターゲットとした有効剤であるオリゴマー分子を提供することができる。
【０１９７】
PCSK9をターゲットとした本発明のUNAオリゴマーの例を表20および21に示す。表20および21は、「センス」および「アンチセンス」対を示す。例えば、配列番号：305および306は、センスおよびアンチセンス対である。
【表２０】
2018512140.tif 000046
【表２１】
2018512140.tif 000047
【０１９８】
例えば、UNAオリゴマーは、配列番号：87である鎖を有していてもよい。UNAオリゴマーは配列番号：88である鎖を有していてもよい。UNAオリゴマーは、配列番号：87である鎖、および配列番号：88である鎖を有していてもよい。これらのUNAオリゴマーは、PCSK9のターゲット配列に対応するヌクレオ塩基配列を有することができる。これらのUNAオリゴマーは、配列番号：305〜316のいずれかに対応するヌクレオ塩基配列を有することができる。
【０１９９】
例えば、UNAオリゴマーは、配列番号：105である鎖を有していてもよい。UNAオリゴマーは、配列番号：106である鎖を有していてもよい。UNAオリゴマーは、配列番号：105である鎖、および配列番号：106である鎖を有していてもよい。これらのUNAオリゴマーは、PCSK9のターゲット配列に対するヌクレオ塩基配列を有することができる。これらのUNAオリゴマーは、配列番号：305〜316のいずれかに対応するヌクレオ塩基配列を有することができる。
【０２００】
UNAオリゴマーは、配列番号：305である第1鎖および配列番号：306である第2鎖を有していてもよい。
【０２０１】
APOC3に対するUNAオリゴマー
【０２０２】
本発明の実施形態は、APOC3をターゲットとした有効剤であるオリゴマー分子を提供することができる。
【０２０３】
APOCIIIをターゲットとした本発明のUNAオリゴマーの例を、表22および23に示す。表22および23は、「センス」および「アンチセンス」対を表す。例えば、配列番号：317および318は、センスおよびアンチセンス対である。
【表２２】
2018512140.tif 000048
【表２３】
2018512140.tif 000049
【０２０４】
例えば、UNAオリゴマーは、配列番号：87である鎖を有していてもよい。UNAオリゴマーは、配列番号：88である鎖を有していてもよい。UNAオリゴマーは、配列番号：87である鎖、および配列番号：88である鎖を有していてもよい。これらのUNAオリゴマーは、APOC3のターゲット配列に対応するヌクレオ塩基配列を有することができる。これらのUNAオリゴマーは、配列番号：317〜332のいずれかに対応するヌクレオ塩基配列を有することができる。
【０２０５】
例えば、UNAオリゴマーは、配列番号：105である鎖を有していてもよい。UNAオリゴマーは、配列番号106である鎖を有していてもよい。UNAオリゴマーは、配列番号105である鎖および配列番号106である鎖を有していてもよい。これらのUNAオリゴマーは、APOC3のターゲット配列に対応するヌクレオ塩基配列を有することができる。これらのUNAオリゴマーは、配列番号：317〜332のいずれかに対応するヌクレオ塩基配列を有することができる。
【０２０６】
UNAオリゴマーは、配列番号：319である第1鎖および配列番号：320である第2鎖を含んでいてもよい。
【０２０７】
UNAオリゴマーは、配列番号：321である第1鎖および配列番号：322である第2鎖を含んでいてもよい。
【０２０８】
HBVに対するUNAオリゴマー
【０２０９】
本発明の実施形態は、HBVをターゲットとした有効剤であるオリゴマー分子を提供することができる。
【０２１０】
HBVをターゲットとした本発明のUNAオリゴマーの例を表24〜27に示す。表24および25は「センス」および「アンチセンス」対を表し、表26および27はさらなる「センス」および「アンチセンス」対を表す。例えば、配列番号：333および353はセンスおよびアンチセンス対であり、配列番号：352〜372についても同じである。
【表２４】
2018512140.tif 000050
【表２５】
2018512140.tif 000051
【表２６】
2018512140.tif 000052
【表２７】
2018512140.tif 000053
【０２１１】
例えば、UNAオリゴマーは配列番号：87である鎖を有していてもよい。UNAオリゴマーは配列番号：88である鎖を有していてもよい。UNAオリゴマーは配列番号：87である鎖および配列番号：88である鎖を有していてもよい。これらのUNAオリゴマーは、B型肝炎ウイルス（HBV）のウイルス遺伝子のターゲット配列に対応するヌクレオ塩基配列を有することができる。これらのUNAオリゴマーは、配列番号：333〜414のいずれかに対応するヌクレオ塩基配列を有することができる。
【０２１２】
例えば、UNAオリゴマーは配列番号：105である鎖を有していてもよい。UNAオリゴマーは配列番号：106である鎖を有していてもよい。UNAオリゴマーを有していてもよい。UNAオリゴマーは、配列番号：105である鎖、および配列番号：106である鎖を有していてもよい。これらのUNAオリゴマーは、B型肝炎ウイルス（HBV）のウイルス遺伝子のターゲット配列に対応するヌクレオ塩基配列を有することができる。これらのUNAオリゴマーは、配列番号： 333〜414のいずれかに対応するヌクレオ塩基配列を有することができる。
【０２１３】
疾患を治療する方法
【０２１４】
本発明の方法には、哺乳動物対象における種々の疾患の治療および予防が含まれる。対象は、ヒトまたは哺乳動物とすることができる。
【０２１５】
本発明の方法において、治療または予防を必要とする対象には、有効量の本発明のオリゴマー化合物を投与することができる。
【０２１６】
加えて、本発明のUNAオリゴマーは、イン・ビトロ（in vitro）において高められた活性、ならびにイン・ビボ（in vivo）において高められた効能を提供してもよい。
【０２１７】
さらに、本発明のUNAオリゴマーは、増大した酵素安定性を提供してもよい。
【０２１８】
また、本発明のUNAオリゴマーは、イン・ビトロ（in vitro）において長時間持続する活性、ならびにイン・ビボ（in vivo）において長時間持続する効能を提供することができる。
【０２１９】
本発明のUNAオリゴマーは、遺伝子導入後6日に、イン・ビトロ（in vitro）において少なくとも50%の活性を保持することができる。
【０２２０】
本発明のUNAオリゴマーは、遺伝子導入後6日に、イン・ビトロ（in vitro）において少なくとも80%の活性を保持することができる。
【０２２１】
本発明のUNAオリゴマーは、投与後6日に、イン・ビボ（in vivo）において少なくとも30%の効能を保持することができる。
【０２２２】
本発明のUNAオリゴマーは、投与後6日に、イン・ビボ（in vivo）において少なくとも50%の効能を保持することができる。
【０２２３】
本発明のUNAオリゴマーは、長時間作用する特性を提供することができ、有効な治療法に要求される用量レベルを減少することができる。
【０２２４】
有効量の本発明のオリゴマー化合物は、0.001 mg／kg〜50.0 mg／kgの範囲の用量とすることができる。
【０２２５】
本発明の方法において、ターゲットmRNA発現は、少なくとも5日間、対象において低下することができる。ある種の実施形態において、ターゲットmRNA発現は、少なくとも10日間、または15日間、対象において低下することができる。
【０２２６】
本開示の方法において、オリゴマー化合物の投与は炎症反応を引き起こさない。
【０２２７】
さらなる実施形態において、本発明には、本発明のオリゴマー化合物で細胞を処理することによって該細胞におけるターゲット遺伝子の発現を阻害する方法が含まれる。
【０２２８】
追加の実施形態において、本発明には、本発明のオリゴマー化合物を含む組成物を哺乳動物に投与することによって該哺乳動物においてターゲット遺伝子の発現を阻害する方法が含まれる。
【０２２９】
幾つかの実施形態において、トランスサイレチン核酸、TTRをターゲットとしたUNAオリゴマーは、必要とする患者においてアミロイド神経障害、アミロイドーシス、またはトランスサイレチンに関連するアミロイドーシスを予防または治療するための有効剤として用いることができる。
【０２３０】
さらなる実施形態において、アポリポタンパク質B核酸、APOBをターゲットとしたUNAオリゴマーは、必要とする対象において高コレステロール血症、またはコレステロール障害を予防または治療するための有効剤として用いることができる。
【０２３１】
追加の実施形態において、プロ蛋白質転換酵素サブチリシン／ケキシン9核酸、PCSK9をターゲットとしたUNAオリゴマーは、必要とする対象において高コレステロール血症、またはコレステロール障害を予防または治療するための有効剤として用いることができる。
【０２３２】
ある種の実施形態において、アポリポタンパク質C−III核酸、APOC3またはAPOCIIIをターゲットとしたUNAオリゴマーは、必要とする対象において高トリグリセリド血症、またはリポタンパク質障害を予防または治療するための有効剤として用いることができる。
【０２３３】
幾つかの実施形態において、HBVゲノム、HBV（B型肝炎ウイルス）の配列をターゲットとしたUNAオリゴマーは、必要とする対象においてHBV感染症と関連する疾患を予防または治療するための有効剤として用いることができる。
【０２３４】
医薬組成物
【０２３５】
幾つかの態様において、本発明は、オリゴマー化合物および医薬上許容し得る不活性成分を含む医薬組成物を提供する。
【０２３６】
医薬組成物は、局所または全身投与することができる。幾つかの態様において、医薬組成物はいずれかのモダリティーの投与をすることができる。ある種の態様において、投与は静脈内、皮下、肺、筋肉内、腹膜内、経皮、経口、または経鼻投与とすることができる。
【０２３７】
本発明の実施形態には、液体製剤中にオリゴマー化合物を含む医薬組成物が含まれる。
【０２３８】
幾つかの実施形態において、医薬組成物は、カチオン性脂質、アニオン性脂質、ステロール、ペグ化脂質、および前記したもののいずれかの組合せから選択される1またはそれを超える脂質を含んでいてもよい。
【０２３９】
ある種の実施形態において、医薬組成物は、リポソームを実質的に含まないものとすることができる。
【０２４０】
さらなる実施形態において、医薬組成物は、リポソームまたはナノ粒子を含むことができる。
【０２４１】
本発明の活性分子を送達するための脂質および脂質組成物の幾つかの例は、出典明示して本明細書の一部とみなすWO／2015／074085に提供されている。
【０２４２】
追加の実施形態において、医薬組成物は、ウイルスまたは細菌ベクター内にオリゴマー化合物を含むことができる。
【０２４３】
本開示の医薬組成物は、当該技術分野で知られている不活性成分、希釈剤または賦形剤を含んでいてもよい。医薬組成物の例は、例えば、Remington's Pharmaceutical Sciences，Mack Publishing Co.（A.R. Gennaro編，1985）に記載されている。
【０２４４】
医薬組成物用の賦形剤の例には、抗酸化剤、懸濁化剤、分散剤、保存料、緩衝剤、等張剤および界面活性剤が含まれる。
【０２４５】
実施例
【０２４６】
実施例1：ルシフェラーゼレポーターアッセイ
【０２４７】
ルシフェラーゼ−系レポータープラスミドは、psiCHECK（商標）2ベクター（Promega，Madison，WI）に基づいて構築した。レポーターp（1〜20）は、psiCHECK（商標）2中のSV40促進ウミシイタケ・ルシフェラーゼ遺伝子の終結コドン下流のマルチクローニング領域にクローニングしたEco RI消化部位に対してポジション1〜2500の配列を含むオリゴヌクレオチドを用いて作製し、これは人工の3'UTR配列の調節下でウミシイタケ・ルシフェラーゼ遺伝子を発現させる。ついで、ウミシイタケ・ルシフェラーゼ活性を、転写安定性および翻訳効率に対する人工3'UTRの効果のインジケーターとして用いた。psiCHECK（商標）−2ベクターは、構成的に発現するホタル・ルシフェラーゼ遺伝子も含み、これはトランスフェクション効率を正常にする内部対照として作用する。
【０２４８】
トランスフェクションの1日前に、合計5，000のHepB3細胞（American Type Culture Collection）を96−ウェルプレートのウェルに平板した。細胞は、0.1 mMの非必須アミノ酸および10%のFBS（Life Technologies，Carlsbad，CA）を補充した100μlのDMEM（Life Technologies，Carlsbad，CA）中、37℃にてインキュベートした。トランスフェクションの直前に、培養培地を90μlの新鮮な培地に交換した。レポータープラスミドおよびUNAオリゴマーはトランスフェクション試薬と同時トランスフェクションし、製造業者指示書に従って、Lipofectamine（商標）3000（Life Technologies,Carlsbad,CA）を用いてレポータープラスミド（100ng）および種々の量のUNAオリゴマーをP3000と一緒に細胞にトランスフェクトした。
【０２４９】
Dual−Luciderase Reporter Assay System（DLR assay system，Promega，Madison，WI）を用いて、psiCHECK2に基づくレポーターシステムに対してデュアル−レポーターアッセイを行った。遺伝子導入から24時間後に、細胞はリン酸緩衝塩類溶液で1回ていねいに洗浄した。Passive Lysis Buffer（Promega，Madison，WI）の50μlウェルを細胞に加え、室温にて20分間、ゆっくりと動かしながらインキュベートした。ルシフェラーゼ活性は、Cytation 3イメージリーダー（BioTek，Winooski，VT）を用いて測定し、レポーター発現に対するUNAオリゴマーの効果は、ウミシイタケ／ホタルの比に基づいて計算して細胞数およびトランスフェクション効率を正規化した。
【０２５０】
実施例2：UNAオリゴマーの安定性
【０２５１】
UNAオリゴマーの安定性を判定するプロトコールは、ヘビ毒PDE IまたはFBSに対して測定した。UNAオリゴマー（1〜10μM）は、20mM  Tris−HCl（pH8.0）、100mM  NaCl、15mM  MgCl2または10〜50%のFBS（最終濃度）中、Crotalus adamanteus毒からの2X10-4単位／μLのホスホジエステラーゼI（code#：VPH，Worthington Biochemial，USA）と37℃にてインキュベートした。0.5、1および2時間後に、アリコート（3μL）を混合物から採取し、5.3μLの0.5M EDTA（pH8.0）と混合することによって反応を停止した。試料は、電気泳動用の15%の本来のポリアクリルアミドゲルにロードした。ゲルは、SYBR SAFEで染色し、UV下で視覚化した。
【０２５２】
実施例3：UNAオリゴマーの長寿命
【０２５３】
イン・ビトロ（in vitro）またはイン・ビボ（in vivo）でのUNAオリゴマーの長寿命を判定するプロトコール。セルラインまたはマウス組織からのトータルRNA試料を単離する。逆転写反応は、RNA試料、50nMのステム−ループRTプライマーと一緒にSuperScript III First−鎖（Life Technologies）を用いて行う。すべての逆転写酵素反応は、3回行った。リアル−タイムPCRは、400nMのユニバーサルプライマー、400nMの−特異的プライマー、および300nMのTaqManプローブを用いる標準TaqMan PCRキットプロトコールを用いて、Applied Biosystems 7900HT配列検出システムで行う。1μlのcDNAテンプレートを最終体積25μlの反応物に添加する。すべての反応は、テンプレート対照およびRT試料を用いないで3回行う。反応物は、384−ウェルプレート中、95℃にて10分間インキュベートし、つづいて95℃にて15秒間および60℃にて1分間の40サイクルでインキュベートする。すべての反応は、3回行う。蛍光が固定した閾値を過ぎる分画サイクル数として定義される閾値サイクル（CT）値を、合成UNAオリゴマーからの標準曲線を用いて絶対コピー数に変換する。
【０２５４】
実施例4：HBVをターゲットとするUNAオリゴマーの用量依存的な阻害効果が、HBV結合部位を有するレポーター構築物でトランスフェクトしたHep3B細胞で観察された。
【０２５５】
本発明のUNAオリゴマーは、表28に示すようなIC50を示すことが見出された。表28においては、UNAオリゴマーは、同じ参照位置を有する表24〜27に示す構造に対応する。
【表２８−１】
2018512140.tif 000054
【表２８−２】
2018512140.tif 000055
【０２５６】
表28の実験結果は、UNAオリゴマーが遺伝子発現をモジュレートすることについて安定した、驚くべき長時間持続する活性を提供することを示している。ルシフェラーゼレポーターによって測定したUNAオリゴマーの活性は、遺伝子導入から6日後にピコモル範囲であった。
【０２５７】
実施例5：加えて、実験結果において、HBVをターゲットとした本発明のUNAオリゴマーは、イン・ビトロ（in vitro）において高められた活性、ならびにイン・ビボ（in vivo）において高められた効能を提供している。
【０２５８】
さらに、実験結果において、HBVをターゲットとした本発明のUNAオリゴマーは、増大した酵素安定性を提供している。
【０２５９】
また、実験結果において、HBVをターゲットした本発明のUNAオリゴマーは、イン・ビトロ（in vitro）において長時間持続する活性、ならびにイン・ビボ（in vivo）において長時間持続する効能を提供している。
【０２６０】
HBVをターゲットとした本発明のUNAオリゴマーは、長時間作用する特性を提供し、有効な治療に要求される用量レベルを低下している。
【０２６１】
実施例6：UNAオリゴマーの用量依存的な阻害効果が、表29に示すようにHepG2細胞において観察された。
【表２９】
2018512140.tif 000056
【０２６２】
表29の実験結果は、TTR UNAオリゴマーがTTR遺伝子発現の安定した、効力のあるノックダウンを提供したことを示している。
【０２６３】
実施例7：TTR UNAオリゴマーの用量依存的な阻害効果が、表30に示すようにHepG2細胞において観察された。
【表３０】
2018512140.tif 000057
【０２６４】
表30の実験結果は、TTR UNAオリゴマーがTTR遺伝子発現の安定した、効力のあるノックダウンを提供したことを示している。
【０２６５】
実施例8：加えて、実験結果において、TTRをターゲットとした本発明のUNAオリゴマーは、イン・ビトロ（in vitro）において高められた活性、ならびにイン・ビボ（in vivo）において高められた効能を提供している。
【０２６６】
さらに、実験結果において、TTRをターゲットとした本発明のUNAオリゴマーは、増大した酵素安定性を提供している。
【０２６７】
また、実験結果において、TTRをターゲットとした本発明のUNAオリゴマーは、イン・ビトロ（in vitro）において長時間持続する活性、ならびにイン・ビボ（in vivo）において長時間持続する効能を提供する。
【０２６８】
TTRをターゲットとした本発明のUNAオリゴマーは、長時間作用する特性を提供し、有効な治療に要求される用量レベルを低下した。
【０２６９】
実施例9：APOBをターゲットとしたUNAオリゴマーの用量依存的な阻害効果が、表31において示すように、マウスHepa1−6細胞において観察された。
【表３１】
2018512140.tif 000058
【０２７０】
表31の実験結果は、APOB  UNAオリゴマーがAPOB遺伝子発現の安定した、効力のあるノックダウンを提供したことを示している。
【０２７１】
実施例10：APOBをターゲットとしたUNAオリゴマーの用量依存的な阻害効果が、表32に示すように、マウスHep3B細胞において観察された。
【表３２】
2018512140.tif 000059
【０２７２】
表32の実験結果は、APOB UNAオリゴマーがAPOB遺伝子発現の安定した、効力のあるノックダウンを提供したことを示している。
【０２７３】
実施例11：加えて、実験結果において、APOBをターゲットとした本発明のUNAオリゴマーは、イン・ビトロ（in vitro）において高められた活性、ならびにイン・ビボ（in vivo）において高められた効能を提供している。
【０２７４】
さらに、実験結果において、APOBをターゲットとした本発明のUNAオリゴマーは、増大した酵素安定性を提供している。
【０２７５】
また、実験結果において、APOBをターゲットとした本発明のUNAオリゴマーは、イン・ビトロ（in vitro）において長時間持続する活性、ならびにイン・ビボ（in vivo）において長時間持続する効能を提供している。
【０２７６】
APOBをターゲットとした本発明のUNAオリゴマーは、長時間作用する特性を提供し、有効な治療に要求される用量レベルを低下させる。
【０２７７】
実施例12：PCSK9をターゲットとしたUNAオリゴマーの用量依存的な阻害効果が、表33に示すようにマウスHepa1−6細胞で観察された。
【表３３】
2018512140.tif 000060
【０２７８】
表33の実験結果は、PCSK9  UNAオリゴマーがPCSK9遺伝子発現の安定した、効力のあるノックダウンを提供したことを示している。
【０２７９】
実施例13：PCSK9をターゲットとしたUNAオリゴマーの用量依存的な阻害効果が、表34に示すようにマウスHep3B細胞で観察された。
【表３４】
2018512140.tif 000061
【０２８０】
表34の実験結果は、PCSK9  UNAオリゴマーがPCSK9遺伝子発現の安定した、効力のあるノックダウンを提供したことを示している。
【０２８１】
実施例14：加えて、実験結果において、PCSK9をターゲットとした本発明のUNAオリゴマーは、イン・ビトロ（in vitro）において高められた活性を提供し、ならびにイン・ビボ（in vivo）において高められた効能を提供している。
【０２８２】
さらに、実験結果において、PCSK9をターゲットとした本発明のUNAオリゴマーは、増大した酵素安定性を提供している。
【０２８３】
また、実験結果において、PCSK9をターゲットとした本発明のUNAオリゴマーは、イン・ビトロ（in vitro）において長時間持続する活性を提供し、ならびにイン・ビボ（in vivo）において長時間持続する効能を提供している。
【０２８４】
PCSK9をターゲットとした本発明のUNAオリゴマーは、長時間作用する特性を提供し、有効な治療に要求される用量レベルを低下している。
【０２８５】
実施例15：APOC3をターゲットとしたUNAオリゴマーの用量依存的な阻害効果が、表35に示すように、マウスHep3B細胞において認められた。
【表３５】
2018512140.tif 000062
【０２８６】
表35の実験結果は、APOC3  UNAオリゴマーがAPOC3遺伝子発現の安定した、効力のあるノックダウンを提供したことを示している。
【０２８７】
実施例16：加えて、実験結果において、APOC3をターゲットとした本発明のUNAオリゴマーは、イン・ビトロ（in vitro）において高められた活性、ならびにイン・ビボ（in vivo）において高められた効能を提供している。
【０２８８】
さらに、実験結果において、APOC3をターゲットとした本発明のUNAオリゴマーは、増大した酵素安定性を提供している。
【０２８９】
また、実験結果において、APOC3をターゲットとした本発明のUNAオリゴマーは、イン・ビトロ（in vitro）において長時間持続する活性、ならびにイン・ビボ（in vivo）において長時間持続する効能を提供している。
【０２９０】
APOC3をターゲットとした本発明のUNAオリゴマーは、長時間作用する特性を提供し、有効な治療に要求される用量レベルを低下している。
【０２９１】
本明細書に具体的に言及したすべての刊行物、特許および文献は、出典明示して本明細書の一部とみなす。
【０２９２】
本発明は変化してもよいため、記載した特定の方法、プロトコール、材料および試薬に限定されるものではないことは理解される。本明細書中で用いる用語は、特定の実施形態を説明する目的のためだけであり、添付する特許請求の範囲に包含される本発明の範囲を限定することを意図しないことは理解される。
【０２９３】
本明細書および添付する特許請求の範囲で用いる単数形「a」、「an」、および「the」には文書が明らかに述べていない限りは複数のものも参照していることは注記する。そのうえに、「a」（または「an」）、「1またはそれを超える」および「少なくとも1」は本明細書中では相互交換可能に用いることができる。また、「含む」、「含む」、「包含する」、および「有する」なる用語は相互交換可能に用いることができることも注記する。
【０２９４】
さらに詳述しなくても、当業者であれば上記の記載に基づいて本発明をその最大限の範囲で利用することができる。したがって、以下の具体的な実施形態は、単に説明目的であって、いかなる場合においても本開示の残りのものを限定するものではない。
【０２９５】
本明細書に開示するすべての特徴は、いずれかの組合せで組合せてもよい。本明細書に開示する各々の特徴は、同一、等価または同様の目的を今日する別の特徴によって置き換わってもよい。
【配列表】
2018512140000001.app
【国際調査報告】
2018512140.tif 000063
2018512140.tif 000064