(57)【要約】  本発明は、胸腺間質リンホポエチン媒介信号伝逹を制御するペプチド誘導体、及びこれを含むアレルギー及び喘息疾患の予防及び治療用薬学組成物に関し、より具体的には、化学式１で表示されるペプチド誘導体、及びこれを含むアレルギー及び喘息疾患の予防及び治療用薬学組成物に関する。本発明によると、アレルギー或いは喘息疾患の炎症反応形成を効果的に抑制できるペプチド誘導体及びこれを含む薬学組成物が提供され、これを用いて多様なアレルギー及び喘息疾患を根本的に予防又は治療することができる。
2018511654.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記の化学式１で表示されるペプチド誘導体であって、
【化１】
2018511654.tif 000034
前記化学式１において、Ｒ１は、グアニジンが置換された炭素数１〜４のアルキル基であり、Ｒ２は、アミン基及び下記の化学式２の構造式１から選ばれるいずれか一つであり、Ｒ３は、ヒドロキシ基及び下記の化学式３の構造式２から選ばれるいずれか一つである。
【化２】
2018511654.tif 000035
【化３】
2018511654.tif 000036
【請求項２】
前記化学式１のペプチド誘導体は、下記の化学式４〜化学式１１で表示されるペプチド誘導体のうちいずれか一つであることを特徴とする、請求項１に記載のペプチド誘導体。
【化４】
2018511654.tif 000037
【化５】
2018511654.tif 000038
【化６】
2018511654.tif 000039
【化７】
2018511654.tif 000040
【化８】
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【化９】
2018511654.tif 000042
【化１０】
2018511654.tif 000043
【化１１】
2018511654.tif 000044
【請求項３】
請求項１又は請求項２によるペプチド誘導体又はその塩を有効成分として含有するアレルギー及び喘息疾患の予防及び治療用薬学組成物。
【請求項４】
前記化学式１のペプチド誘導体は、下記の化学式４〜化学式１１で表示されるペプチド誘導体のうちいずれか一つであることを特徴とする、請求項３に記載のアレルギー及び喘息疾患の予防及び治療用薬学組成物。
【化４】
2018511654.tif 000045
【化５】
2018511654.tif 000046
【化６】
2018511654.tif 000047
【化７】
2018511654.tif 000048
【化８】
2018511654.tif 000049
【化９】
2018511654.tif 000050
【化１０】
2018511654.tif 000051
【化１１】
2018511654.tif 000052
【請求項５】
前記アレルギー疾患は、アトピー性皮膚炎、じんま疹又はアレルギー性鼻炎疾患であることを特徴とする、請求項３に記載のアレルギー及び喘息疾患の予防及び治療用薬学組成物。
【請求項６】
前記薬学組成物は、他のアレルギー及び喘息疾患の予防及び治療用薬物、担体、希釈剤、補助剤及び安定化剤からなる群から選ばれた一つ以上の成分をさらに含むことを特徴とする、請求項３に記載のアレルギー及び喘息疾患の予防及び治療用薬学組成物。
【請求項７】
前記安定化剤は、タンパク質、糖質、緩衝剤及びその混合物からなる群から選ばれることを特徴とする、請求項６に記載のアレルギー及び喘息疾患の予防及び治療用薬学組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、胸腺間質リンホポエチン媒介信号伝逹を制御するペプチド誘導体化合物及びこれを有効成分として含有するアレルギー及び喘息疾患の予防及び治療用薬学組成物に関する。
【背景技術】
【０００２】
アレルギー性炎症疾患の治療に気管支拡張剤或いは抗炎症剤を使用すると、主として対症療法であるので一時的には症状緩和効果を示すが、アレルギー疾患の根本的な制御は不可能であり、疾病を根本的に治療できないという短所がある。
【０００３】
これに関連して、気管支喘息、アトピー性皮膚疾患、アレルギー性鼻炎などの環境疾患は免疫疾患として知られており、Ｔｈ２細胞はアレルギー反応の誘発に中枢的な役割を果たすものとしてよく知られている。ＣＤ４  Ｔ細胞は、リンパ球で抗原に刺激を受けるとき、同時に認識するサイトカイン（ｃｙｔｏｋｉｎｅ）によって多くの種類のＴｈ細胞に分化可能であり、このときに認識するサイトカインが胸腺間質リンホポエチン（ｔｈｙｍｉｃ  ｓｔｒｏｍａｌ  ｌｙｍｐｈｏｐｏｉｅｔｉｎ、ＴＳＬＰ）又はＩＬ−４などのタイプ２サイトカインである場合、これらの細胞は、Ｔｈ２に分化することによってアレルギー反応を誘発する。
【０００４】
併せて、ＣＤ４  Ｔ細胞に抗原を提供する樹枝状細胞もＴＳＬＰの刺激に反応し、Ｔｈ２細胞の分化を促進することが確認されている。また、このように分化されたＴｈ２細胞が肺又は皮膚などのアレルギー誘発場所に移動した後、対応する組織で分泌される各サイトカインも活性化に重要な役割を果たす。
【０００５】
これらのサイトカインにはＴＳＬＰ、ＩＬ−２５、ＩＬ−３３などが含まれており、これらサイトカインのうちＴＳＬＰが最も効果的な役割を果たすものと予測されている。また、動物モデルでＴＳＬＰの分泌を抑制すると、Ｔｈ２細胞の生成及び活性が困難になり、動物に疾病を誘発しないことが明らかになったこともある。また、疾病が進行中の動物もＴＳＬＰを抑制すると疾病が治癒されることが報告されている。以上をまとめると、ＴＳＬＰは、Ｔｈ２細胞の分化及び活性化に全て作用する重要なサイトカインであって、これを制御することがアレルギー疾患の治療に重要であると認識されている。
【０００６】
したがって、従来、ＴＳＬＰをターゲットとした疾病を治療するための多様な技術が報告されている。例えば、大韓民国公開特許公報第２００８−００９９３３０号には、ヒトＴＳＬＰの活性を中和する抗体、及びこれを用いて喘息、アトピー皮膚炎、アレルギー性鼻炎などを治療する技術が開示されている。大韓民国公開特許公報第２００９−００８８９５０号には、ＴＳＬＰに特異的な抗体及びこれを用いた炎症、アレルギー性炎症疾患の治療が開示されている。大韓民国公開特許公報第２０１５−０００６６３９号には、所定の化学式を有する化合物、及びその薬学的に許容可能な塩を有効成分として含有するＴＳＬＰ分泌阻害能を有する薬学組成物が開示されている。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
そこで、本発明においては、ＴＳＬＰによる細胞内信号伝達を制御し、細胞内ＳＴＡＴ５のリン酸化を抑制する効果を発揮することによって、アレルギー及び喘息疾患の予防及び治療に優れた効能を示すペプチド誘導体及びこれを含む薬学組成物を提供する。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
本発明は、前記課題を解決するために、下記の化学式１で表示されるペプチド誘導体を提供する。
【０００９】
【化１】
2018511654.tif 000003
【００１０】
前記化学式１において、Ｒ１は、グアニジンが置換された炭素数１〜４のアルキル基であり、Ｒ２は、アミン基及び下記の化学式２の構造式１から選ばれるいずれか一つであり、Ｒ３は、ヒドロキシ基及び下記の化学式３の構造式２から選ばれるいずれか一つである。
【００１１】
【化２】
2018511654.tif 000004
【００１２】
【化３】
2018511654.tif 000005
【００１３】
本発明の一具現例によると、前記化学式１のペプチド誘導体は、下記の化学式４〜化学式１１で表示されるペプチド誘導体のうちいずれか一つであり得る。
【００１４】
【化４】
2018511654.tif 000006
【００１５】
【化５】
2018511654.tif 000007
【００１６】
【化６】
2018511654.tif 000008
【００１７】
【化７】
2018511654.tif 000009
【００１８】
【化８】
2018511654.tif 000010
【００１９】
【化９】
2018511654.tif 000011
【００２０】
【化１０】
2018511654.tif 000012
【００２１】
【化１１】
2018511654.tif 000013
【００２２】
また、本発明は、前記化学式１で表示されるペプチド誘導体又はその塩を有効成分として含有するアレルギー及び喘息疾患の予防及び治療用薬学組成物を提供する。
【００２３】
本発明の一具現例によると、前記化学式１のペプチド誘導体は、下記の化学式４〜化学式１１で表示されるペプチド誘導体のうちいずれか一つであり得る。
【００２４】
【化４】
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【００２５】
【化５】
2018511654.tif 000015
【００２６】
【化６】
2018511654.tif 000016
【００２７】
【化７】
2018511654.tif 000017
【００２８】
【化８】
2018511654.tif 000018
【００２９】
【化９】
2018511654.tif 000019
【００３０】
【化１０】
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【００３１】
【化１１】
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【００３２】
本発明の他の具現例によると、前記アレルギー疾患は、アトピー性皮膚炎、じんま疹又はアレルギー性鼻炎疾患であり得る。
【００３３】
本発明のさらに他の具現例によると、前記薬学組成物は、他のアレルギー及び喘息疾患の予防及び治療用薬物、担体、希釈剤、補助剤及び安定化剤からなる群から選ばれた一つ以上の成分をさらに含み得る。
【００３４】
本発明のさらに他の具現例によると、前記安定化剤は、タンパク質、糖質、緩衝剤及びその混合物からなる群から選ばれ得る。
【発明の効果】
【００３５】
本発明によると、アレルギー或いは喘息疾患の炎症反応の形成を効果的に抑制できるペプチド誘導体及びこれを含む薬学組成物が提供され、これを用いて多様なアレルギー及び喘息疾患を根本的に予防又は治療することができる。
【図面の簡単な説明】
【００３６】
【図１】固相法を用いた本発明に係るＴＳＬＰ結合ペプチド誘導体の合成過程を概略的に示した図である。
【図２】本発明に係るＴＳＬＰ結合ペプチド誘導体のうち、化学式４による化合物の処理による細胞内ＳＴＡＴ５分子のリン酸化変化を示したグラフである。
【図３】本発明に係るＴＳＬＰ結合ペプチド誘導体のうち、化学式５による化合物の処理による細胞内ＳＴＡＴ５分子のリン酸化変化を示したグラフである。
【図４】本発明に係るＴＳＬＰ結合ペプチド誘導体のうち、化学式６による化合物の処理による細胞内ＳＴＡＴ５分子のリン酸化変化を示したグラフである。
【図５】本発明に係るＴＳＬＰ結合ペプチド誘導体のうち、化学式７による化合物の処理による細胞内ＳＴＡＴ５分子のリン酸化変化を示したグラフである。
【図６】本発明に係るＴＳＬＰ結合ペプチド誘導体のうち、化学式８による化合物の処理による細胞内ＳＴＡＴ５分子のリン酸化変化を示したグラフである。
【図７】本発明に係るＴＳＬＰ結合ペプチド誘導体のうち、化学式９による化合物の処理による細胞内ＳＴＡＴ５分子のリン酸化変化を示したグラフである。
【図８】本発明に係るＴＳＬＰ結合ペプチド誘導体のうち、化学式１１による化合物の処理による細胞内ＳＴＡＴ５分子のリン酸化変化を示したグラフである。
【発明を実施するための最良の形態】
【００３７】
以下、本発明をより詳細に説明する。
【００３８】
本発明者は、下記の化学式１の一般式を有する各ペプチド誘導体が、喘息及びアレルギー性疾患を誘導する核心的なサイトカインのうち一つであるＴＳＬＰと、このようなＴＳＬＰと結合するＴＳＬＰ受容体との間の結合を効果的に阻害することを最初に確認し、これに基づいて本発明を完成するに至った。
【００３９】
【化１】
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【００４０】
前記化学式１において、Ｒ１は、グアニジンが置換された炭素数１〜４のアルキル基であり、Ｒ２は、アミン基及び下記の化学式２の構造式１から選ばれるいずれか一つであり、Ｒ３は、ヒドロキシ基及び下記の化学式３の構造式２から選ばれるいずれか一つである。
【００４１】
【化２】
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【００４２】
【化３】
2018511654.tif 000024
【００４３】
前記化学式１で表示されるペプチド誘導体は、共通的にＨ２Ｎ−Ａｒｇ−Ｇｌｎ−Ａｒｇ−Ａｌａ−Ｓｅｒ−Ａｌａ−ＣＯＯＨのアミノ酸序列を含み、必要に応じて、前記アミノ酸序列のＮ−末端が他の置換基に置換され得る、又は他のアミノ酸残基が前記Ｎ−末端に追加的に付加され得る。
【００４４】
本発明に係るペプチド誘導体は、Ｆｍｏｃ−法を用いて固相法で製造することができる。例えば、Ｃ−末端がアミド化された形態のペプチドを合成するために、Ｆｍｏｃ−Ａｌａ−Ｗａｎｇ−ｒｅｓｉｎ或いはＨ２Ｎ−Ａｌａ−Ｗａｎｇ−ｒｅｓｉｎを出発物質として使用して多様な形態のペプチド誘導体を製造することができる。
【００４５】
例えば、前記方法によって、下記の化学式４〜化学式１１で表示されるペプチド誘導体のうちいずれか一つを製造することができる。
【００４６】
【化４】
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【００４７】
【化５】
2018511654.tif 000026
【００４８】
【化６】
2018511654.tif 000027
【００４９】
【化７】
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【００５０】
【化８】
2018511654.tif 000029
【００５１】
【化９】
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【００５２】
【化１０】
2018511654.tif 000031
【００５３】
【化１１】
2018511654.tif 000032
【００５４】
また、本発明では、前記化学式１で表されるペプチド誘導体又はその塩を有効成分として含有するアレルギー及び喘息疾患の予防及び治療用薬学組成物を提供する。
【００５５】
本発明において、「有効成分として含有する」という用語は、所望の生物学的効果を実現するのに必要な量又は十分な量で該当の成分が含まれることを意味する。実際の適用において有効成分として含まれる量は、対象疾病を治療するための量であって、他の毒性を引き起こさない事項を考慮して決定され得る。例えば、有効成分として含まれる量は、治療される疾病又は病態、投与される組成物の形態、被験体のサイズ、又は疾病又は病態の深刻度などの多様な因子によって変更可能である。本発明の属する分野で通常の技術を有する技術者であれば、過度な実験を伴うことなく、個別的組成物の有効量を経験的に決定することができる。
【００５６】
上述したように、前記化学式１のペプチド誘導体は、前記化学式２〜化学式９で表されるペプチド誘導体のうちいずれか一つのペプチド誘導体であり得る。
【００５７】
本発明に係る薬学組成物は、広範囲なアレルギー及び喘息疾患の予防及び治療に使用可能であるので、これに制限されるわけではないが、前記アレルギー疾患はアトピー性皮膚炎、じんま疹又はアレルギー性鼻炎疾患であり得る。
【００５８】
また、本発明に係る薬学組成物は、他のアレルギー及び喘息疾患の予防及び治療用薬物と共に、複合製剤の形態で投与されてもよく、又は担体、希釈剤、補助剤及び安定化剤などの他の成分を含んでもよい。
【００５９】
例えば、本発明に係る組成物の投与形態は、投与しようとするモードによって多様に選択可能であり、これに制限されるわけではないが、例えば、錠剤、丸薬、粉末、カプセル、ゲル、軟膏、流体又は懸濁液などの固体状、半固体状又は液状の投薬形態であってよく、正確な投薬量の単独投与に適した単位投薬の形態で投与され得る。また、前記組成物は、ヒトに投与するための薬学組成物を剤形化するのに一般的に使用される水性基剤キャリアと定義される薬学的に許容可能な一又は複数の担体、希釈剤、補助剤、安定化剤を所望の剤形に依存して含み得る。例えば、希釈剤としては、蒸留水、生理食塩水、リンゲル液、ブドウ糖溶液、及びハンクス（Ｈａｎｋ’ｓ）溶液などを挙げることができる。また、本発明に係る薬学的組成物は、他の一又は複数のアレルギー及び喘息疾患の予防及び治療用薬物製剤又は薬学製剤などと共に複合製剤の形態で投与されてもよく、通常の技術者であれば、多様な種類のアレルギー及び喘息疾患の予防及び治療用薬物を考慮することができる。このような担体、希釈剤、補助剤及び安定化剤などの他の成分の有効量は、成分の溶解性、生物学的活性、他の特性などを考慮して、薬学的に許容可能な製剤を得るのに有効な量である。
【００６０】
また、前記安定化剤は、タンパク質、糖質、緩衝剤及びその混合物からなる群から選ばれ得る。
【発明を実施するための形態】
【００６１】
以下、実施例を通じて本発明をより具体的に説明する。下記の実施例は、本発明の理解を図るものに過ぎず、本発明の範囲を制限するものではない。
【００６２】
実施例１．本発明に係るペプチド誘導体の合成
【００６３】
上述した化学式２〜化学式９の各ペプチド誘導体を下記の方法によって合成した。
【００６４】
各アミノ酸序列は、Ｆｍｏｃ（９−ｆｌｕｏｒｅｎｙｌｍｅｔｈｏｘｙｃａｒｂｏｎｙｌ）をアミノ酸のＮ−アミノ基の保護基（ｐｒｏｔｅｃｔｉｎｇ  ｇｒｏｕｐ）として使用する固相法によって合成した。化学式２〜化学式５の各ペプチド誘導体に対する概略的な合成概要を図１ａ〜図１ｅに示した。一方、図１ａ〜図１ｅに示した各反応に使用された反応物及び反応条件は下記の通りである。
【００６５】
（ａ）（ｉ）ピペリジン２０％／ＤＭＦ、４０分；（ii）Ｆｍｏｃ−Ｓｅｒ−ＯＨ、ＨＢＴＵ、ＤＩＰＥＡ、ＨＯＢｔ、ＤＭＦ、２時間；
【００６６】
（ｂ）（ｉ）ピペリジン２０％／ＤＭＦ、４０分、室温；（ii）Ｆｍｏｃ−Ａｌａ−ＯＨ、ＨＢＴＵ、ＤＩＰＥＡ、ＨＯＢｔ、ＤＭＦ、２時間；
【００６７】
（ｃ）（ｉ）ピペリジン２０％／ＤＭＦ、４０分；（ii）Ｆｍｏｃ−Ａｒｇ（ｐｂｆ）−ＯＨ、ＨＢＴＵ、ＤＩＰＥＡ、ＨＯＢｔ、ＤＭＦ、３時間；
【００６８】
（ｄ）（ｉ）ピペリジン２０％／ＤＭＦ、４０分、室温；（ii）Ｆｍｏｃ−Ｇｌｎ（ｔｒｔ）−ＯＨ、ＨＢＴＵ、ＤＩＰＥＡ、ＨＯＢｔ、ＤＭＦ、３時間；
【００６９】
（ｅ）（ｉ）ピペリジン２０％／ＤＭＦ、４０分；（ii）Ｆｍｏｃ−Ａｒｇ（ｐｂｆ）−ＯＨ、ＨＢＴＵ、ＤＩＰＥＡ、ＨＯＢｔ、ＤＭＦ、３時間；
【００７０】
（ｆ）ＴＦＡ／チオアニソール／Ｈ２Ｏ（９５：２．５：２．５）、３時間；及び
【００７１】
（ｇ）Ａｃ２Ｏ、ＤＩＰＥＡ、ＤＭＦ、１時間
【００７２】
具体的に、Ｆｍｏｃ−Ａｌａ−Ｗａｎｇ  Ｒｅｓｉｎを出発物質として使用し、Ｆｍｏｃ−アミノ酸のカップリングによるペプチド鎖の延長は、Ｎ−ヒドロキシベンゾ−トリアゾール（ＨＯＢｔ）とＯ−（ベンゾトリアゾール−１−イル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ，Ｎ−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート（ＨＢＴＵ）法を用いて進行した。各ペプチドのアミノ末端のＦｍｏｃ−アミノ酸をカップリングさせた後、２０％ピペリジン／Ｎ−メチルピロリドン（ＮＭＰ）溶液でＦｍｏｃ基を除去し、ＮＭＰ及びジクロロメタン（ＤＣＭ）で数回洗浄した後、窒素ガスで乾燥させた。これにＴＦＡ（トリフルオロ酢酸）−チオアニソール−水（９５：２．５：２．５ｖｏｌ．／ｖｏｌ．）溶液を加え、保護基を除去し、レジンからペプチドを分離させた後、ジエチルエーテルでペプチドを沈澱させた。このようにして得た粗ペプチドは、０．１％ＴＦＡが含まれたアセトニトリルと０．１％ＴＦＡが含まれた水を展開溶媒として使用し、アセトニトリル濃度勾配法（ａｃｅｔｏｎｉｔｒｉｌｅ  ｇｒａｄｉｅｎｔ  ｍｅｔｈｏｄ）による逆相−ＨＰＬＣカラムを用いて精製した。
【００７３】
また、化学式８〜化学式１１の各ペプチド誘導体に対する概略的な合成概要を図１ｆ〜図１ｊに示す。図１ｆ〜図１ｊに示した各反応に使用された反応物及び反応条件は下記の通りである。
【００７４】
（ａ）（ｉ）ピペリジン２０％／ＤＭＦ、４０分；（ii）Ｆｍｏｃ−Ａｌａ−ＯＨ、ＨＢＴＵ、ＤＩＰＥＡ、ＨＯＢｔ、ＤＭＦ、２時間；
【００７５】
（ｂ）（ｉ）ピペリジン２０％／ＤＭＦ、４０分；（ii）Ｆｍｏｃ−Ｓｅｒ−ＯＨ、ＨＢＴＵ、ＤＩＰＥＡ、ＨＯＢｔ、ＤＭＦ、２時間；
【００７６】
（ｃ）（ｉ）ピペリジン２０％／ＤＭＦ、４０分、室温；（ii）Ｆｍｏｃ−Ａｌａ−ＯＨ、ＨＢＴＵ、ＤＩＰＥＡ、ＨＯＢｔ、ＤＭＦ、２時間；
【００７７】
（ｄ）（ｉ）ピペリジン２０％／ＤＭＦ、４０分；（ii）Ｆｍｏｃ−Ａｒｇ（ｐｂｆ）−ＯＨ、ＨＢＴＵ、ＤＩＰＥＡ、ＨＯＢｔ、ＤＭＦ、３時間；
【００７８】
（ｅ）（ｉ）ピペリジン２０％／ＤＭＦ、４０分、室温；（ii）Ｆｍｏｃ−Ｇｌｎ（ｔｒｔ）−ＯＨ、ＨＢＴＵ、ＤＩＰＥＡ、ＨＯＢｔ、ＤＭＦ、３時間；
【００７９】
（ｆ）（ｉ）ピペリジン２０％／ＤＭＦ、４０分；（ii）Ｆｍｏｃ−Ａｒｇ（ｐｂｆ）−ＯＨ、ＨＢＴＵ、ＤＩＰＥＡ、ＨＯＢｔ、ＤＭＦ、３時間；
【００８０】
（ｇ）ＴＦＡ／チオアニソール／Ｈ２Ｏ（９５：２．５：２．５）、３時間；及び
【００８１】
（ｈ）Ａｃ２Ｏ、ＤＩＰＥＡ、ＤＭＦ、１時間
【００８２】
下記に、製造された化学式４〜化学式１１で示される化合物２〜９のそれぞれに対するＮＭＲデータを示した。
【００８３】
化合物２：アミノ酸序列（Ｈ２Ｎ−Ａｒｇ−Ｇｌｎ−Ａｒｇ−Ａｌａ−Ｓｅｒ−Ａｌａ−ＣＯＯＨ）
【００８４】
１Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、Ｄ２Ｏ及びＣＤ３ＣＮ）：δ４．２８（ｍ、５Ｈ）、３．９４（ｔ、Ｊ＝６．３Ｈｚ、１Ｈ）、３．７４（ｄ、Ｊ＝５．１Ｈｚ、２Ｈ）、３．１１（ｍ、６Ｈ）、２．４２（ｔ、Ｊ＝７．１Ｈｚ、１Ｈ）、２．３０（ｔ、Ｊ＝７．１Ｈｚ、１Ｈ）、１．９１−１．４５（ｍ、１０Ｈ）、１．３６（ｄ、Ｊ＝７．５Ｈｚ、３Ｈ）、１．３４（ｄ、Ｊ＝７．９Ｈｚ、３Ｈ）；ＥＳＩ−ＭＳ：ｍ／ｚ  ｃａｌｃｄ  ｆｏｒ  Ｃ２５Ｈ４７Ｎ１３Ｏ９［Ｍ＋Ｈ］＋６８８．８、ｆｏｕｎｄ  ６９０．０
【００８５】
化合物３：アミノ酸序列（ＣＨ３ＣＯＮＨ−Ａｒｇ−Ｇｌｎ−Ａｒｇ−Ａｌａ−Ｓｅｒ−Ａｌａ−ＣＯＯＨ）
【００８６】
１Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、Ｄ２Ｏ）：δ４．３１（ｔ、Ｊ＝５．４Ｈｚ、１Ｈ）、４．２７４．１２（ｍ、５Ｈ）、３．７６（ｄ、Ｊ＝５．３Ｈｚ、２Ｈ）、３．１０（ｔ、Ｊ＝６．６Ｈｚ、４Ｈ）、２．３０（ｔ、Ｊ＝７．１Ｈｚ、４Ｈ）、１．９２（ｓ、３Ｈ）、２．１２−１．７１（ｍ、３Ｈ）、１．７０１．４８（ｍ、８Ｈ）、１．３２（ｄ、Ｊ＝７．３Ｈｚ、３Ｈ）、１．３４（ｄ、Ｊ＝７．９Ｈｚ、３Ｈ）；ＥＳＩ−ＭＳ：ｍ／ｚ  ｃａｌｃｄ  ｆｏｒ  Ｃ２７Ｈ４９Ｎ１３Ｏ１０［Ｍ＋Ｈ］＋７３０．８、ｆｏｕｎｄ  ７３０．９
【００８７】
化合物４：アミノ酸序列（Ｈ２Ｎ−Ａｌａ−Ａｒｇ−Ｇｌｎ−Ａｒｇ−Ａｌａ−Ｓｅｒ−Ａｌａ−ＣＯＯＨ）
【００８８】
１Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、Ｄ２Ｏ）：δ４．４５４．１８（ｍ、６Ｈ）、４．３５（ｍ、６Ｈ）、３．８３（ｄ、Ｊ＝５．３Ｈｚ、２Ｈ）、３．１７（ｔ、Ｊ＝６．５Ｈｚ、４Ｈ）、３．３０３．１１（ｍ、１Ｈ）、２．３５（ｔ、Ｊ＝７．４Ｈｚ、２Ｈ）、２．１７１．９４（ｍ、２Ｈ）、１．９２−１．５４（ｍ、１２Ｈ）、１．４８（ｄ、Ｊ＝７．１Ｈｚ、４Ｈ）、１．３７（ｔ、Ｊ＝６．７Ｈｚ、８Ｈ）；ＥＳＩ−ＭＳ：ｍ／ｚ  ｃａｌｃｄ  ｆｏｒ  Ｃ２８Ｈ５２Ｎ１４Ｏ１０［Ｍ＋Ｈ］＋７５９．８、ｆｏｕｎｄ  ７５９．３
【００８９】
化合物５：アミノ酸序列（ＣＨ３ＣＯＮＨ−Ａｌａ−Ａｒｇ−Ｇｌｎ−Ａｒｇ−Ａｌａ−Ｓｅｒ−Ａｌａ−ＣＯＯＨ）
【００９０】
１Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、Ｄ２Ｏ）：δ４．３１（ｔ、Ｊ＝５．６Ｈｚ、１Ｈ）、４．２６４．１１（ｍ、５Ｈ）、３．７６（ｄ、Ｊ＝５．２Ｈｚ、２Ｈ）、３．５５（ｔ、Ｊ＝７．１Ｈｚ、４Ｈ）、３．０９（ｔ、Ｊ＝６．８Ｈｚ、２Ｈ）、１．９２（ｓ、３Ｈ）、２．０５−１．４５（ｍ、１１Ｈ）、１．３１（ｄ、Ｊ＝７．３Ｈｚ、３Ｈ）、１．３０（ｄ、Ｊ＝７．２Ｈｚ、３Ｈ）、１．２４（ｄ、Ｊ＝７．２Ｈｚ、３Ｈ）；ＥＳＩ−ＭＳ：ｍ／ｚ  ｃａｌｃｄ  ｆｏｒ  Ｃ３０Ｈ５４Ｎ１４Ｏ１１［Ｍ＋Ｈ］＋８０１．９、ｆｏｕｎｄ  ８０１．６
【００９１】
化合物６：アミノ酸序列（Ｈ２Ｎ−Ａｒｇ−Ｇｌｎ−Ａｒｇ−Ａｌａ−Ｓｅｒ−Ａｌａ−Ｔｒｐ−ＣＯＯＨ）
【００９２】
１Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、Ｄ２Ｏ）：δ７．６５（ｄ、Ｊ＝７．８Ｈｚ、１Ｈ）、７．４８（ｄ、Ｊ＝８．１Ｈｚ、１Ｈ）、７．２６−７．１０（ｍ、３Ｈ）、４．４２−４．１９（ｍ、５Ｈ）、４．０３（ｔ、Ｊ＝６．５Ｈｚ、１Ｈ）、３．８０−３．６６（ｍ、２Ｈ）、３．４２−２．９８（ｍ、６Ｈ）、２．３７（ｔ、Ｊ＝７．５Ｈｚ、２Ｈ）、２．１４−１．５３（ｍ、１１Ｈ）、１．３７（ｄ、Ｊ＝７．２Ｈｚ、３Ｈ）、１．２５（ｄ、Ｊ＝７．２Ｈｚ、３Ｈ）；ＬＲＭＳ  ＥＳＩ  ｍ／ｚ  ｃａｌｃｄ  ｆｏｒ  Ｃ３７Ｈ５９Ｎ１５Ｏ１０［Ｍ＋Ｈ］＋８７４．０、ｆｏｕｎｄ  ８７５．０
【００９３】
化合物７：アミノ酸序列（ＣＨ３ＣＯＮＨ−Ａｒｇ−Ｇｌｎ−Ａｒｇ−Ａｌａ−Ｓｅｒ−Ａｌａ−Ｔｒｐ−ＣＯＯＨ）
【００９４】
１Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、Ｄ２Ｏ）：δ７．５７（ｄ、Ｊ＝７．８Ｈｚ、１Ｈ）、７．４１（ｄ、Ｊ＝８．１Ｈｚ、１Ｈ）、７．２０−７．０３（ｍ、３Ｈ）、４．３０−４．１１（ｍ、５Ｈ）、３．７４−３．５９（ｍ、２Ｈ）、３．３５−３．００（ｍ、６Ｈ）、２．２８（ｔ、Ｊ＝７．４Ｈｚ、２Ｈ）、２．０８−１．４５（ｍ、１４Ｈ）、１．３０（ｄ、Ｊ＝７．２Ｈｚ、３Ｈ）、１．１８（ｄ、Ｊ＝７．２Ｈｚ、３Ｈ）；ＬＲＭＳ  ＥＳＩ  ｍ／ｚ  ｃａｌｃｄ  ｆｏｒ  Ｃ３９Ｈ６１Ｎ１５Ｏ１１［Ｍ＋Ｈ］＋９１６．０、ｆｏｕｎｄ  ９１６．８
【００９５】
化合物８：アミノ酸序列（Ｈ２Ｎ−Ａｌａ−Ａｒｇ−Ｇｌｎ−Ａｒｇ−Ａｌａ−Ｓｅｒ−Ａｌａ−Ｔｒｐ−ＣＯＯＨ）
【００９６】
１Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、Ｄ２Ｏ）：δ７．５５（ｄ、Ｊ＝７．２Ｈｚ、１Ｈ）、７．３９（ｄ、Ｊ＝８．１Ｈｚ、１Ｈ）、７．２０−７．０１（ｍ、３Ｈ）、４．３２−４．１１（ｍ、７Ｈ）、４．０５−３．９４（ｍ、１Ｈ）、３．７３−３．５８（ｍ、２Ｈ）、３．３４−３．００（ｍ、６Ｈ）、２．２７（ｔ、Ｊ＝７．７Ｈｚ、２Ｈ）、２．０５−１．４７（ｍ、１１Ｈ）、１．４１（ｄ、Ｊ＝７．２Ｈｚ、３Ｈ）、１．２７（ｄ、Ｊ＝７．２Ｈｚ、３Ｈ）、１．１５（ｄ、Ｊ＝７．２Ｈｚ、３Ｈ）；ＬＲＭＳ  ＥＳＩ  ｍ／ｚ  ｃａｌｃｄ  ｆｏｒ  Ｃ４０Ｈ６４Ｎ１６Ｏ１１［Ｍ＋Ｈ］＋９４５．０、ｆｏｕｎｄ  ９４５．８
【００９７】
化合物９：アミノ酸序列（ＣＨ３ＣＯＮＨ−Ａｌａ−Ａｒｇ−Ｇｌｎ−Ａｒｇ−Ａｌａ−Ｓｅｒ−Ａｌａ−Ｔｒｐ−ＣＯＯＨ）
【００９８】
１Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、Ｄ２Ｏ）：δ７．６２（ｄ、Ｊ＝７．５Ｈｚ、１Ｈ）、７．４５（ｄ、Ｊ＝８．１Ｈｚ、１Ｈ）、７．２５−７．０７（ｍ、３Ｈ）、４．３５−４．１４（ｍ、７Ｈ）、３．７９−３．６３（ｍ、２Ｈ）、３．４０−３．０６（ｍ、６Ｈ）、２．３２（ｔ、Ｊ＝７．２Ｈｚ、２Ｈ）、２．１１−１．５０（ｍ、１４Ｈ）、１．３４（ｄ、Ｊ＝７．５Ｈｚ、３Ｈ）、１．３２（ｄ、Ｊ＝８．４Ｈｚ、３Ｈ）、１．２２（ｄ、Ｊ＝６．９Ｈｚ、３Ｈ）；ＬＲＭＳ  ＥＳＩ  ｍ／ｚ  ｃａｌｃｄ  ｆｏｒ  Ｃ４２Ｈ６６Ｎ１６Ｏ１２［Ｍ＋Ｈ］＋９８７．１、ｆｏｕｎｄ  ９８８．２
【００９９】
実施例２．ＦＡＣＳを用いた細胞基盤の効能評価
【０１００】
ＴＳＬＰとＴＳＬＰ受容体との間の結合は多様な信号伝達経路を活性化するが、主にＪＡＫ／ＳＴＡＴ経路を活用する。また、ＴＳＬＰ信号伝逹は、ＳＴＡＴ分子のうちＳＴＡＴ５を特徴的にリン酸化させることがよく知られている。よって、本発明に係る各化合物がＴＳＬＰとＴＳＬＰ受容体との間の結合を効果的に阻害するかどうかを確認するためには、このような結合によって活性化されるＪＡＫ／ＳＴＡＴ経路におけるＳＴＡＴ５分子のリン酸化の程度を確認すればよい。本発明に係る各化合物がＴＳＬＰとＴＳＬＰ受容体との間の結合を効果的に阻害する場合、ＳＴＡＴ５分子のリン酸化水準が阻害される。
【０１０１】
このような事実を確認するために、本実施例では下記のような実験を行った。ヒト肥満細胞株（Ｈｕｍａｎ  ｍａｓｔ  ｃｅｌｌ  ｌｉｎｅ）であるＨＭＣ−１を培養し、９６−ウェルプレートに適正量の細胞を維持した。上等液を除去し、ＴＳＬＰ（１００ｎｇ／ｍＬ）と適正濃度（０．３μＭ、３μＭ、３０μＭ）のペプチドとを混合して細胞上に３０分間処理した後、細胞をサイトフィックス（ｃｙｔｏｆｉｘ）で固定した。続いて、各細胞に対して透過化緩衝溶液（ｐｅｒｍｅａｂｉｌｉｚａｔｉｏｎ  ｂｕｆｆｅｒ）で透過化を進行した後、抗−ｐＳＴＡＴ５抗体で細胞内染色を３０分間４℃で進行した。各細胞を同一の緩衝溶液で３回洗浄した後、流細胞分析機（ｆｌｏｗ  ｃｙｔｏｍｅｔｒｙ）で分析した。図２〜図８は、化合物２〜７及び化合物９の処理による細胞内ＳＴＡＴ５分子のリン酸化変化を示したグラフを示す。また、下記の表１は、化合物２〜５をそれぞれ０．３μＭ、３μＭ、３０μＭの濃度で加えた場合、対照群に対する細胞内ＳＴＡＴ５分子のリン酸化程度を示す。ここでは、対照群としてサイトカインであるＴＳＬＰのみを処理した場合を示し、細胞内ＳＴＡＴ５分子のリン酸化は１００％である。
【０１０２】
【表１】
2018511654.tif 000033
【産業上の利用可能性】
【０１０３】
以上説明したように、本発明に係る各ペプチド誘導体は、アレルギー及び喘息疾患の誘発に核心的な役割を果たすサイトカインであるＴＳＬＰとＴＳＬＰ受容体との間の結合を効果的に抑制することができる。したがって、本発明によると、ＴＳＬＰが媒介となる信号伝達を抑制することによって、アレルギー及び喘息疾患の根本的な予防及び治療が可能になる。
【図１ａ】
2018511654.tif 000053
【図１ｂ】
2018511654.tif 000054
【図１ｃ】
2018511654.tif 000055
【図１ｄ】
2018511654.tif 000056
【図１ｅ】
2018511654.tif 000057
【図１ｆ】
2018511654.tif 000058
【図１ｇ】
2018511654.tif 000059
【図１ｈ】
2018511654.tif 000060
【図１ｊ】
2018511654.tif 000061
【図２】
2018511654.tif 000062
【図３】
2018511654.tif 000063
【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
2018511654.tif 000067
【図８】
2018511654.tif 000068
【国際調査報告】
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