(57)【要約】  免疫チェックポイント遮断および造血幹細胞移植、および／または造血幹細胞動員の、新規な相乗的組み合わせは、疾患の治療において相乗効果をもたらす。
2018522901.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
がんまたは感染症から選択される疾患を処置するための方法であって、疾患を処置するための有効量で、疾患を有する対象に、１つ以上の免疫チェックポイント阻害剤を投与すること、および、該対象に、造血幹細胞を投与すること、を含む、前記方法。
【請求項２】
疾患が、１つ以上の免疫チェックポイント阻害剤による単独療法処置に抵抗性である、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
１つ以上の免疫チェックポイント阻害剤がそれぞれ、以下：プログラム・デス１（ＰＤ−１）、プログラム・デスリガンド１（ＰＤ−Ｌ１）、細胞傷害性Ｔリンパ球関連抗原４（ＣＴＬＡ−４）、Ｔ細胞活性化のＶドメインＩｇサプレッサー（ＶＩＳＴＡ）、プログラム・デスリガンド２（ＰＤ−Ｌ２）、インドールアミン２，３−ジオキシゲナーゼ（ＩＤＯ）、アルギナーゼ、Ｂ７ファミリー阻害性リガンドＢ７−Ｈ３、Ｂ７ファミリー阻害性リガンドＢ７−Ｈ４、リンパ球活性化遺伝子３（ＬＡＧ３）、２Ｂ４、ＢおよびＴリンパ球アテニュエーター（ＢＴＬＡ）、Ｔ細胞膜タンパク質３（ＴＩＭ３；ＨＡＶｃｒ２としても知られる）、アデノシンＡ２ａ受容体（Ａ２ａＲ）、キラー阻害性受容体、および／またはシグナル伝達兼転写活性化因子（ＳＴＡＴ）３；のアンタゴニストである、請求項１または２に記載の方法。
【請求項４】
１つ以上の免疫チェックポイント阻害剤がそれぞれ、プログラム・デス１（ＰＤ−１）のアンタゴニスト、プログラム・デスリガンド１（ＰＤ−Ｌ１）のアンタゴニスト、細胞傷害性Ｔリンパ球関連抗原４（ＣＴＬＡ−４）のアンタゴニスト、および／またはＴ細胞活性化のＶドメインＩｇサプレッサー（ＶＩＳＴＡ）のアンタゴニストである、請求項３に記載の方法。
【請求項５】
免疫チェックポイント阻害剤が、プログラム・デス１（ＰＤ−１）アンタゴニストである、請求項４に記載の方法。
【請求項６】
免疫チェックポイント阻害剤が、プログラム・デスリガンド１（ＰＤ−Ｌ１）アンタゴニストである、請求項４に記載の方法。
【請求項７】
免疫チェックポイント阻害剤が、細胞傷害性Ｔリンパ球関連抗原４（ＣＴＬＡ−４）アンタゴニストである、請求項４に記載の方法。
【請求項８】
免疫チェックポイント阻害剤が、Ｔ細胞活性化のＶドメインＩｇサプレッサー（ＶＩＳＴＡ）アンタゴニストである、請求項４に記載の方法。
【請求項９】
ＰＤ−１アンタゴニストが、ＰＤ−１に結合してこれに拮抗する薬剤である、請求項５に記載の方法。
【請求項１０】
ＰＤ−１に結合してこれに拮抗する薬剤が、ＰＤ−１に結合するペプチドである、請求項９に記載の方法。
【請求項１１】
ＰＤ−１に結合してこれに拮抗する薬剤が、ＰＤ−１に選択的に結合するヒト化抗体である、請求項９に記載の方法。
【請求項１２】
ＰＤ−１に選択的に結合するヒト化抗体が、ニボルマブ、ペンブロリズマブ、ピジリズマブ、ＭＥＤＩ−０６８０、ＲＥＧＮ２８１０、またはＡＭＰ−２２４である、請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
ＰＤ−１に選択的に結合するヒト化抗体が、ニボルマブ、ペンブロリズマブまたはピジリズマブである、請求項１１に記載の方法。
【請求項１４】
ＰＤ−Ｌ１アンタゴニストが、ＰＤ−Ｌ１に結合してこれに拮抗する薬剤である、請求項６に記載の方法。
【請求項１５】
ＰＤ−Ｌ１に結合してこれに拮抗する薬剤が、ＰＤ−Ｌ１に結合するペプチドである、請求項１４に記載の方法。
【請求項１６】
ＰＤ−Ｌ１に結合してこれに拮抗する薬剤が、ＰＤ−Ｌ１に選択的に結合するヒト化抗体である、請求項１４に記載の方法。
【請求項１７】
ＰＤ−Ｌ１に選択的に結合するヒト化抗体が、ＢＭＳ−９３６５５９／ＭＤＸ−１１０５、ＭＰＤＬ３２８０Ａ／ＲＧ７４４６／アテゾリズマブ、ＭＳＢ００１０７１８Ｃ／アベルマブ、またはＭＥＤＩ４７３６／デュルバルマブである、請求項１６に記載の方法。
【請求項１８】
ＣＴＬＡ−４アンタゴニストが、ＣＴＬＡ−４に結合してこれに拮抗する薬剤である、請求項７に記載の方法。
【請求項１９】
ＣＴＬＡ−４に結合してこれに拮抗する薬剤が、ＣＴＬＡ−４に結合するペプチドである、請求項１８に記載の方法。
【請求項２０】
ＣＴＬＡ−４に結合してこれに拮抗する薬剤が、ＣＴＬＡ−４に選択的に結合するヒト化抗体である、請求項１８に記載の方法。
【請求項２１】
ＣＴＬＡ−４に選択的に結合するヒト化抗体が、イピリムマブまたはトレメリムマブである、請求項２０に記載の方法。
【請求項２２】
ＣＴＬＡ−４アンタゴニストが、（ｉ）ＣＤ８０、ＣＤ８６、および／またはＣＴＬＡ−４に対するアンチセンス分子、（ｉｉ）ＣＤ８０、ＣＤ８６、および／またはＣＴＬＡ−４に対するアドネクチン、（ｉｉｉ）ＣＤ８０、ＣＤ８６、および／またはＣＴＬＡ−４の一本鎖または二本鎖ＲＮＡｉ阻害剤、または（ｉｖ）ＣＤ８０、ＣＤ８６、またはＣＴＬＡ−４の小分子阻害剤である、請求項７に記載の方法。
【請求項２３】
ＶＩＳＴＡアンタゴニストが、ＶＩＳＴＡに結合してこれに拮抗する薬剤である、請求項８に記載の方法。
【請求項２４】
ＶＩＳＴＡに結合してこれに拮抗する薬剤が、ペプチドである、請求項２３に記載の方法。
【請求項２５】
ＶＩＳＴＡに結合してこれに拮抗する薬剤が、ＶＩＳＴＡに対する阻害抗体である、請求項２３に記載の方法。
【請求項２６】
ＶＩＳＴＡに結合してこれに拮抗する薬剤が、ヒト化抗体である、請求項２３に記載の方法。
【請求項２７】
ＶＩＳＴＡに結合してこれに拮抗する薬剤が、（ｉ）ＶＩＳＴＡに対するアンチセンス分子、（ｉｉ）ＶＩＳＴＡに対するアドネクチン、（ｉｉｉ）ＶＩＳＴＡの一本鎖または二本鎖ＲＮＡｉ阻害剤、または（ｉｖ）ＶＩＳＴＡの小分子阻害剤である、請求項２３に記載の方法。
【請求項２８】
免疫チェックポイント阻害剤が、造血幹細胞移植とは異なる日に投与される、請求項１〜２７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２９】
免疫チェックポイント阻害剤が、造血幹細胞移植と同じ日に投与される、請求項１〜２７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３０】
免疫チェックポイント阻害剤が、造血幹細胞移植とは異なる日に、しかし造血幹細胞移植の１日以内、５日以内、１週間以内、８日以内、２週間以内、３週間以内、１ヶ月以内、２ヶ月以内、または３ヶ月以内に投与される、請求項１〜２７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３１】
免疫チェックポイント阻害剤が、静脈内または皮下に投与される、請求項１〜３０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３２】
対象に造血幹細胞動員剤を投与することをさらに含む、請求項１〜３１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３３】
疾患ががんであり、がんが、黒色腫、扁平上皮癌、基底細胞癌、乳がん、頭頸部癌、甲状腺癌、軟部組織肉腫、骨肉腫、精巣腫瘍、前立腺がん、卵巣がん、膀胱がん、皮膚がん、脳腫瘍、神経膠芽細胞腫、髄芽細胞腫、上衣細胞腫、血管肉腫、血管内皮腫、肥満細胞腫、原発性肝臓がん、小細胞肺がん、非小細胞肺がん、膵臓がん、消化管がん、腎細胞癌、造血器新生物形成、リンパ腫、中皮腫、神経膠芽細胞腫、低悪性度神経膠腫、高悪性度神経膠腫、小児脳腫瘍、髄芽細胞腫、またはそれらの転移性がんである、請求項１〜３２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３４】
がんが、脳、肺、乳房、または黒色腫の転移性または難治性のがんである、請求項３３に記載の方法。
【請求項３５】
がんが、非小細胞肺がん由来の転移性脳腫瘍、黒色腫由来の転移性脳腫瘍、または乳癌由来の転移性脳腫瘍である、請求項３３に記載の方法。
【請求項３６】
がんが、神経膠芽細胞腫、低悪性度神経膠腫、高悪性度神経膠腫、小児脳腫瘍、または髄芽細胞腫である、請求項３３に記載の方法。
【請求項３７】
疾患が感染症である、請求項１〜３２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３８】
感染症が慢性感染症である、請求項３７に記載の方法。
【請求項３９】
感染症が、任意の肝炎、アデノウイルス、ＢＫなどのポリオーマウイルス、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）、単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）、呼吸器合胞体ウイルス（ＲＳＶ）、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）、エプスタイン・バーウイルス（ＥＢＶ）、インフルエンザＡ、Ｂおよび／またはＣ、水疱性口内炎ウイルス（ＶＳＶ）、水疱性口内炎ウイルス（ＶＳＶ）、メチシリン耐性黄色ブドウ球菌（ＭＲＳＡ）を含むブドウ球菌種、肺炎連鎖球菌を含む連鎖球菌種、または移植後感染症である、請求項３７に記載の方法。
【請求項４０】
感染症が、Ａ型肝炎、Ｂ型肝炎、またはＣ型肝炎である、請求項３９に記載の方法。
【請求項４１】
造血幹細胞の供給源が、骨髄、骨髄系統除去細胞（ｌｉｎ−）、ｃＫｉｔ＋精製系統陰性骨髄由来細胞、Ｓｃａ＋精製系統陰性骨髄由来細胞、ｃＫｉｔ＋Ｓｃａ＋精製骨髄由来細胞、ＧＭ−ＣＳＦ、Ｇ−ＣＳＦを用いて宿主骨髄から動員、ＡＭＤ３１００、プレリキサフォル、もしくは分子１，１’−［１，４−フェニレンビス（メチレン）］ビス［１，４，８，１１−テトラアザシクロテトラデカン］を用いて宿主骨髄から動員、臍帯血もしくは臍帯血由来幹細胞、ヒト白血球抗原（ＨＬＡ）適合血液、血液もしくは骨髄由来の間葉系幹細胞、誘導多能性幹細胞から分化した造血幹細胞、動員末梢血、末梢血、ＣＣＲ２＋マーカーで精製したｌｉｎ−細胞を含む造血幹細胞サブセット、系統陰性精製末梢血、またはＣＤ３４＋富化末梢血である、請求項１〜４０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４２】
造血幹細胞の供給源が、骨髄、末梢血、臍帯血、または誘導多能性幹細胞である、請求項１〜４０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４３】
造血幹細胞の供給源が、自己由来である、請求項１〜４２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４４】
造血幹細胞の供給源が同種異系であり、ドナー細胞がレシピエントにＨＬＡ適合である、請求項１〜４２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４５】
造血幹細胞を含有する試料を対象から得て、該対象に該造血幹細胞を投与する前に、in vitroで、試料中の幹細胞の数が増大するように処理する、請求項１〜４３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４６】
造血幹細胞を含有する試料を対象から得て、該対象に該造血幹細胞を投与する前に、in vitroで、試料中の幹細胞のパーセンテージが増加するように処理する、請求項１〜４３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４７】
疾患に対する処置の効果を、対象の腫瘍微小環境または腫瘍流入領域リンパ節内から得られたＴ細胞によるインターフェロンγ（ＩＦＮγ）分泌を測定することによって評価し、ここで、ＩＦＮγの存在が併用療法で増加した場合に、相乗効果が認められる、請求項１〜４６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４８】
造血幹細胞の少なくとも５、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、または５０パーセントが、ＣＣＲ２陽性（ＣＣＲ２＋）、ＣＤ３４陽性（ＣＣＲ２＋）、および／または系統陰性（ｌｉｎ−）細胞である、請求項１〜４７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４９】
対象への投与のための造血幹細胞の２０％以上９８％以下、例えば２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、または９８％が、ＣＣＲ２陽性（ＣＣＲ２＋）、ＣＤ３４陽性（ＣＤ３４＋）、または系統陰性（ｌｉｎ−）である、請求項１〜４８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５０】
対象への投与のための造血幹細胞を、対象への投与前に、ＣＣＲ２陽性（ＣＣＲ２＋）細胞、ＣＤ３４陽性（ＣＤ３４＋）細胞、および／または系統陰性（ｌｉｎ−）細胞についてex vivoで富化する、請求項１〜４７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５１】
対象への投与前に、造血幹細胞をex vivoで処理して、ＣＣＲ２陰性（ＣＣＲ２−）細胞を除去する、請求項１〜４７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５２】
造血幹細胞を、対象への投与前に、フローサイトメトリー分析、マイクロビーズに基づく単離、付着アッセイ、および／またはリガンドに基づく選択によって、ＣＣＲ２＋、ＣＤ３４＋、および／またはｌｉｎ−細胞について選択する、請求項１〜４７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５３】
細胞を、リガンドに基づく選択によって選択し、ここでリガンドが、ＣＣＬ２として知られるＣＣＲ２リガンドである、請求項５２に記載の方法。
【請求項５４】
がんまたは感染症から選択される疾患を処置するための方法であって、疾患を有する対象に、疾患を処置するための有効量で、１つ以上の免疫チェックポイント阻害剤を投与すること、および造血幹細胞動員剤を投与すること、を含む、前記方法。
【請求項５５】
動員剤が、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ）、顆粒球コロニー刺激因子（Ｇ−ＣＳＦ）、ペグ化Ｇ−ＣＳＦ（ペグフィルグラチズム）、レノグラチズム、Ｇ−ＣＳＦのグリコシル化形態、Ｃ−Ｘ−Ｃモチーフケモカイン２（ＣＸＣＬ２）、Ｃ−Ｘ−Ｃケモカイン受容体タイプ４（ＣＸＣＲ−４）、またはプレリキサフォルである、請求項５４に記載の方法。
【請求項５６】
疾患に対する免疫チェックポイント阻害剤療法を受けている対象における、がんまたは感染症から選択される該疾患を処置する方法であって、対象に造血幹細胞を、免疫チェックポイント阻害剤療法と組み合わせて該疾患を処置するための有効量で投与することを含む、前記方法。
【請求項５７】
疾患に対する造血幹細胞移植療法を受けている対象における、がんまたは感染症から選択される該疾患を処置する方法であって、対象に１つ以上の免疫チェックポイント阻害剤を、造血幹細胞移植療法と組み合わせて該疾患を処置するための有効量で投与することを含む、前記方法。
【請求項５８】
がんまたは感染症を有する対象を処置するのに用いるための造血幹細胞であって、ここで該対象が、１つ以上の免疫チェックポイント阻害剤による同時免疫チェックポイント阻害剤処置を受けている、前記造血幹細胞。
【請求項５９】
１つ以上の免疫チェックポイント阻害剤を用いて疾患の処置を受けている対象の処置において使用するための、ＣＣＲ２＋、ＣＤ３４＋、および／またはｌｉｎ−細胞について富化された造血幹細胞。
【請求項６０】
１つ以上の免疫チェックポイント阻害剤を用いて疾患の処置を受けている対象の処置において使用するための、ＣＣＲ２−細胞を実質的に除去した造血幹細胞。
【請求項６１】
疾患が、１つ以上の免疫チェックポイント阻害剤による単独療法処置に抵抗性である、請求項５８〜６０のいずれか一項に記載の造血幹細胞。
【請求項６２】
免疫チェックポイント阻害剤が、以下：プログラム・デス１（ＰＤ−１）、プログラム・デスリガンド１（ＰＤ−Ｌ１）、細胞傷害性Ｔリンパ球関連抗原４（ＣＴＬＡ−４）、Ｔ細胞活性化のＶドメインＩｇサプレッサー（ＶＩＳＴＡ）、プログラム・デスリガンド２（ＰＤ−Ｌ２）、インドールアミン２，３−ジオキシゲナーゼ（ＩＤＯ）、アルギナーゼ、Ｂ７ファミリー阻害性リガンドＢ７−Ｈ３、Ｂ７ファミリー阻害性リガンドＢ７−Ｈ４、リンパ球活性化遺伝子３（ＬＡＧ３）、２Ｂ４、ＢおよびＴリンパ球アテニュエーター（ＢＴＬＡ）、Ｔ細胞膜タンパク質３（ＴＩＭ３）、アデノシンＡ２ａ受容体（Ａ２ａＲ）、および／またはキラー阻害性受容体；のアンタゴニストである、請求項５８〜６１のいずれか一項に記載の造血幹細胞。
【請求項６３】
免疫チェックポイント阻害剤が、以下：プログラム・デス１（ＰＤ−１）、プログラム・デスリガンド１（ＰＤ−Ｌ１）、細胞傷害性Ｔリンパ球関連抗原４（ＣＴＬＡ−４）、および／またはＴ細胞活性化のＶドメインＩｇサプレッサー（ＶＩＳＴＡ）；のアンタゴニストである、請求項６２に記載の造血幹細胞。
【請求項６４】
免疫チェックポイント阻害剤が、プログラム・デス１（ＰＤ−１）アンタゴニストである、請求項６３に記載の造血幹細胞。
【請求項６５】
免疫チェックポイント阻害剤が、プログラム・デスリガンド１（ＰＤ−Ｌ１）アンタゴニストである、請求項６３に記載の造血幹細胞。
【請求項６６】
免疫チェックポイント阻害剤が、細胞傷害性Ｔリンパ球関連抗原４（ＣＴＬＡ−４）アンタゴニストである、請求項６３に記載の造血幹細胞。
【請求項６７】
免疫チェックポイント阻害剤が、Ｔ細胞活性化のＶドメインＩｇサプレッサー（ＶＩＳＴＡ）アンタゴニストである、請求項６３に記載の造血幹細胞。
【請求項６８】
ＰＤ−１アンタゴニストが、ＰＤ−１に結合してこれに拮抗する薬剤である、請求項６４に記載の造血幹細胞。
【請求項６９】
ＰＤ−１に結合してこれに拮抗する薬剤が、ＰＤ−１に結合するペプチドである、請求項６８に記載の造血幹細胞。
【請求項７０】
ＰＤ−１に結合してこれに拮抗する薬剤が、ＰＤ−１に選択的に結合するヒト化抗体である、請求項６８に記載の造血幹細胞。
【請求項７１】
ＰＤ−１に選択的に結合するヒト化抗体が、ニボルマブ、ペンブロリズマブ、ピジリズマブ、ＭＥＤＩ−０６８０、ＲＥＧＮ２８１０、またはＡＭＰ−２２４である、請求項７０に記載の造血幹細胞。
【請求項７２】
ＰＤ−１に選択的に結合するヒト化抗体が、ニボルマブ、ペンブロリズマブまたはピジリズマブである、請求項７０に記載の造血幹細胞。
【請求項７３】
ＰＤ−Ｌ１アンタゴニストが、ＰＤ−Ｌ１に結合してこれに拮抗する薬剤である、請求項６５に記載の造血幹細胞。
【請求項７４】
ＰＤ−Ｌ１に結合してこれに拮抗する薬剤が、ＰＤ−Ｌ１に結合するペプチドである、請求項７３に記載の造血幹細胞。
【請求項７５】
ＰＤ−Ｌ１に結合してこれに拮抗する薬剤が、ＰＤ−Ｌ１に選択的に結合するヒト化抗体である、請求項７３に記載の造血幹細胞。
【請求項７６】
ＰＤ−Ｌ１に選択的に結合するヒト化抗体が、ＢＭＳ−９３６５５９／ＭＤＸ−１１０５、ＭＰＤＬ３２８０Ａ／ＲＧ７４４６／アテゾリズマブ、ＭＳＢ００１０７１８Ｃ／アベルマブ、またはＭＥＤＩ４７３６／デュルバルマブである、請求項７５に記載の造血幹細胞。
【請求項７７】
ＣＴＬＡ−４アンタゴニストが、ＣＴＬＡ−４に結合してこれに拮抗する薬剤である、請求項６６に記載の造血幹細胞。
【請求項７８】
ＣＴＬＡ−４に結合してこれに拮抗する薬剤が、ＣＴＬＡ−４に結合するペプチドである、請求項７７に記載の造血幹細胞。
【請求項７９】
ＣＴＬＡ−４に結合してこれに拮抗する薬剤が、ＣＴＬＡ−４に選択的に結合するヒト化抗体である、請求項７７に記載の造血幹細胞。
【請求項８０】
ＣＴＬＡ−４阻害剤に選択的に結合するヒト化抗体が、イピリムマブまたはトレメリムマブである、請求項７９に記載の造血幹細胞。
【請求項８１】
ＣＴＬＡ−４アンタゴニストが、（ｉ）ＣＤ８０、ＣＤ８６、および／またはＣＴＬＡ−４に対するアンチセンス分子、（ｉｉ）ＣＤ８０、ＣＤ８６、および／またはＣＴＬＡ−４に対するアドネクチン、（ｉｉｉ）ＣＤ８０、ＣＤ８６、および／またはＣＴＬＡ−４の一本鎖または二本鎖ＲＮＡｉ阻害剤、または（ｉｖ）ＣＤ８０、ＣＤ８６、またはＣＴＬＡ−４の小分子阻害剤である、請求項６６に記載の造血幹細胞。
【請求項８２】
ＶＩＳＴＡアンタゴニストが、ＶＩＳＴＡに結合してこれに拮抗する薬剤である、請求項６７に記載の造血幹細胞。
【請求項８３】
ＶＩＳＴＡに結合してこれに拮抗する薬剤が、ペプチドである、請求項８２に記載の造血幹細胞。
【請求項８４】
ＶＩＳＴＡに結合してこれに拮抗する薬剤が、ＶＩＳＴＡに対する阻害抗体である、請求項８２に記載の造血幹細胞。
【請求項８５】
ＶＩＳＴＡに結合してこれに拮抗する薬剤が、ヒト化抗体である、請求項８２に記載の造血幹細胞。
【請求項８６】
ＶＩＳＴＡに結合してこれに拮抗する薬剤が、（ｉ）ＶＩＳＴＡに対するアンチセンス分子、（ｉｉ）ＶＩＳＴＡに対するアドネクチン、（ｉｉｉ）ＶＩＳＴＡの一本鎖または二本鎖ＲＮＡｉ阻害剤、または（ｉｖ）ＶＩＳＴＡの小分子阻害剤である、請求項８２に記載の造血幹細胞。
【請求項８７】
免疫チェックポイント阻害剤が、造血幹細胞移植とは異なる日に投与される、請求項５８〜８６のいずれか一項に記載の造血幹細胞。
【請求項８８】
免疫チェックポイント阻害剤が、造血幹細胞移植と同じ日に投与される、請求項５８〜８６のいずれか一項に記載の造血幹細胞。
【請求項８９】
免疫チェックポイント阻害剤が、造血幹細胞移植とは異なる日に、しかし造血幹細胞移植の１日以内、５日以内、１週間以内、８日以内、２週間以内、３週間以内、１ヶ月以内、２ヶ月以内、または３ヶ月以内に投与される、請求項５８〜８６のいずれか一項に記載の造血幹細胞。
【請求項９０】
免疫チェックポイント阻害剤が、静脈内または皮下に投与される、請求項５８〜８９のいずれか一項に記載の造血幹細胞。
【請求項９１】
対象に造血幹細胞動員剤を投与することをさらに含む、請求項５８〜９０のいずれか一項に記載の造血幹細胞。
【請求項９２】
疾患ががんであり、がんが、黒色腫、扁平上皮癌、基底細胞癌、乳がん、頭頸部癌、甲状腺癌、軟部組織肉腫、骨肉腫、精巣腫瘍、前立腺がん、卵巣がん、膀胱がん、皮膚がん、脳腫瘍、神経膠芽細胞腫、髄芽細胞腫、上衣細胞腫、血管肉腫、血管内皮腫、肥満細胞腫、原発性肝臓がん、小細胞肺がん、非小細胞肺がん、膵臓がん、消化管がん、腎細胞癌、造血器新生物形成、リンパ腫、中皮腫、神経膠芽細胞腫、低悪性度神経膠腫、高悪性度神経膠腫、小児脳腫瘍、髄芽細胞腫、またはそれらの転移性がんである、請求項５８〜９１のいずれか一項に記載の造血幹細胞。
【請求項９３】
がんが、脳、肺、乳房、または黒色腫の転移性または難治性のがんである、請求項９２に記載の造血幹細胞。
【請求項９４】
がんが、非小細胞肺がん由来の転移性脳腫瘍、黒色腫由来の転移性脳腫瘍、または乳癌由来の転移性脳腫瘍である、請求項９２に記載の造血幹細胞。
【請求項９５】
がんが、神経膠芽細胞腫、低悪性度神経膠腫、高悪性度神経膠腫、小児脳腫瘍、または髄芽細胞腫である、請求項９２に記載の造血幹細胞。
【請求項９６】
疾患が感染症である、請求項５８〜９１のいずれか一項に記載の造血幹細胞。
【請求項９７】
感染症が慢性感染症である、請求項９６に記載の造血幹細胞。
【請求項９８】
感染症が、任意の肝炎、アデノウイルス、ＢＫなどのポリオーマウイルス、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）、単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）、呼吸器合胞体ウイルス（ＲＳＶ）、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）、エプスタイン・バーウイルス（ＥＢＶ）、インフルエンザＡ、Ｂおよび／またはＣ、水疱性口内炎ウイルス（ＶＳＶ）、水疱性口内炎ウイルス（ＶＳＶ）、メチシリン耐性黄色ブドウ球菌（ＭＲＳＡ）を含むブドウ球菌種、肺炎連鎖球菌を含む連鎖球菌種、または移植後感染症である、請求項９６に記載の造血幹細胞。
【請求項９９】
感染症が、Ａ型肝炎、Ｂ型肝炎、またはＣ型肝炎である、請求項９８に記載の造血幹細胞。
【請求項１００】
造血幹細胞の供給源が、骨髄、骨髄系統除去細胞（ｌｉｎ−）、ｃＫｉｔ＋精製系統陰性骨髄由来細胞、Ｓｃａ＋精製系統陰性骨髄由来細胞、ｃＫｉｔ＋Ｓｃａ＋精製骨髄由来細胞、ＧＭ−ＣＳＦ、Ｇ−ＣＳＦを用いて宿主骨髄から動員、ＡＭＤ３１００、プレリキサフォル、もしくは分子１，１’−［１，４−フェニレンビス（メチレン）］ビス［１，４，８，１１−テトラアザシクロテトラデカン］を用いて宿主骨髄から動員、臍帯血もしくは臍帯血由来幹細胞、ヒト白血球抗原（ＨＬＡ）適合血液、血液もしくは骨髄由来の間葉系幹細胞、誘導多能性幹細胞から分化した造血幹細胞、動員末梢血、末梢血、ＣＣＲ２＋マーカーで精製したｌｉｎ−細胞を含む造血幹細胞サブセット、系統陰性精製末梢血、またはＣＤ３４＋富化末梢血である、請求項５８〜９９のいずれか一項に記載の造血幹細胞。
【請求項１０１】
造血幹細胞の供給源が、骨髄、末梢血、臍帯血、または誘導多能性幹細胞である、請求項５８〜９９のいずれか一項に記載の造血幹細胞。
【請求項１０２】
造血幹細胞の供給源が、自己由来である、請求項５８〜１０１のいずれか一項に記載の造血幹細胞。
【請求項１０３】
造血幹細胞の供給源が同種異系であり、ドナー細胞がレシピエントにＨＬＡ適合である、請求項５８〜１０１のいずれか一項に記載の造血幹細胞。
【請求項１０４】
造血幹細胞を含有する試料を対象から得て、該対象に該造血幹細胞を投与する前に、in vitroで、試料中の幹細胞の数が増大するように処理する、請求項５８〜１０２のいずれか一項に記載の造血幹細胞。
【請求項１０５】
造血幹細胞を含有する試料を対象から得て、該対象に該造血幹細胞を投与する前に、in vitroで、試料中の幹細胞のパーセンテージが増加するように処理する、請求項５８〜１０２のいずれか一項に記載の造血幹細胞。
【請求項１０６】
疾患に対する処置の効果を、対象の腫瘍微小環境または腫瘍流入領域リンパ節内から得られたＴ細胞によるインターフェロンγ（ＩＦＮγ）分泌を測定することによって評価し、ここで、ＩＦＮγの存在が併用療法で増加した場合に、相乗効果が認められる、請求項５８〜１０５のいずれか一項に記載の造血幹細胞。
【請求項１０７】
造血幹細胞の少なくとも５、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、または５０パーセントが、ＣＣＲ２陽性（ＣＣＲ２＋）、ＣＤ３４陽性（ＣＣＲ２＋）、および／または系統陰性（ｌｉｎ−）細胞である、請求項５８〜１０６のいずれか一項に記載の造血幹細胞。
【請求項１０８】
対象への投与のための造血幹細胞の２０％以上９８％以下、例えば２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、または９８％が、ＣＣＲ２陽性（ＣＣＲ２＋）、ＣＤ３４陽性（ＣＤ３４＋）、または系統陰性（ｌｉｎ−）である、請求項５８〜１０７のいずれか一項に記載の造血幹細胞。
【請求項１０９】
対象への投与のための造血幹細胞を、対象への投与前に、ＣＣＲ２陽性（ＣＣＲ２＋）細胞、ＣＤ３４陽性（ＣＤ３４＋）細胞、および／または系統陰性（ｌｉｎ−）細胞についてex vivoで富化する、請求項５８〜１０６のいずれか一項に記載の造血幹細胞。
【請求項１１０】
対象への投与前に、造血幹細胞をex vivoで処理して、ＣＣＲ２陰性（ＣＣＲ２−）細胞を除去する、請求項１〜１０６のいずれか一項に記載の造血幹細胞。
【請求項１１１】
造血幹細胞を、対象への投与前に、フローサイトメトリー分析、マイクロビーズに基づく単離、付着アッセイ、および／またはリガンドに基づく選択によって、ＣＣＲ２＋、ＣＤ３４＋、および／またはｌｉｎ−細胞について選択する、請求項１〜１０６のいずれか一項に記載の造血幹細胞。
【請求項１１２】
細胞を、リガンドに基づく選択によって選択し、ここでリガンドが、ＣＣＬ２として知られるＣＣＲ２リガンドである、請求項１１１に記載の造血幹細胞。
【請求項１１３】
がんまたは感染症を有する対象を処置するのに用いるための免疫チェックポイント阻害剤であって、ここで該対象が、造血幹細胞による同時処置を受けている、前記免疫チェックポイント阻害剤。
【請求項１１４】
がんまたは感染症を有する対象を処置するのに用いるための免疫チェックポイント阻害剤であって、ここで該対象が、造血幹細胞移植および／または造血幹細胞動員剤による同時処置を受けている、前記免疫チェックポイント阻害剤。
【請求項１１５】
疾患が、免疫チェックポイント阻害剤による単独療法処置に抵抗性である、請求項１１３または１１４に記載の免疫チェックポイント阻害剤。
【請求項１１６】
免疫チェックポイント阻害剤が、以下：プログラム・デス１（ＰＤ−１）、プログラム・デスリガンド１（ＰＤ−Ｌ１）、細胞傷害性Ｔリンパ球関連抗原４（ＣＴＬＡ−４）、Ｔ細胞活性化のＶドメインＩｇサプレッサー（ＶＩＳＴＡ）、プログラム・デスリガンド２（ＰＤ−Ｌ２）、インドールアミン２，３−ジオキシゲナーゼ（ＩＤＯ）、アルギナーゼ、Ｂ７ファミリー阻害性リガンドＢ７−Ｈ３、Ｂ７ファミリー阻害性リガンドＢ７−Ｈ４、リンパ球活性化遺伝子３（ＬＡＧ３）、２Ｂ４、ＢおよびＴリンパ球アテニュエーター（ＢＴＬＡ）、Ｔ細胞膜タンパク質３（ＴＩＭ３）、アデノシンＡ２ａ受容体（Ａ２ａＲ）、および／またはキラー阻害性受容体；のアンタゴニストである、請求項１１３〜１１５のいずれか一項に記載の免疫チェックポイント阻害剤。
【請求項１１７】
免疫チェックポイント阻害剤が、以下：プログラム・デス１（ＰＤ−１）、プログラム・デスリガンド１（ＰＤ−Ｌ１）、細胞傷害性Ｔリンパ球関連抗原４（ＣＴＬＡ−４）、またはＴ細胞活性化のＶドメインＩｇサプレッサー（ＶＩＳＴＡ）；のアンタゴニストである、請求項１１６に記載の免疫チェックポイント阻害剤。
【請求項１１８】
免疫チェックポイント阻害剤が、プログラム・デス１（ＰＤ−１）アンタゴニストである、請求項１１７に記載の免疫チェックポイント阻害剤。
【請求項１１９】
免疫チェックポイント阻害剤が、プログラム・デスリガンド１（ＰＤ−Ｌ１）アンタゴニストである、請求項１１７に記載の免疫チェックポイント阻害剤。
【請求項１２０】
免疫チェックポイント阻害剤が、細胞傷害性Ｔリンパ球関連抗原４（ＣＴＬＡ−４）アンタゴニストである、請求項１１７に記載の免疫チェックポイント阻害剤。
【請求項１２１】
免疫チェックポイント阻害剤が、Ｔ細胞活性化のＶドメインＩｇサプレッサー（ＶＩＳＴＡ）アンタゴニストである、請求項１１７に記載の免疫チェックポイント阻害剤。
【請求項１２２】
ＰＤ−１アンタゴニストが、ＰＤ−１に結合してこれに拮抗する薬剤である、請求項１１８に記載の免疫チェックポイント阻害剤。
【請求項１２３】
ＰＤ−１に結合してこれに拮抗する薬剤が、ＰＤ−１に結合するペプチドである、請求項１２２に記載の免疫チェックポイント阻害剤。
【請求項１２４】
ＰＤ−１に結合してこれに拮抗する薬剤が、ＰＤ−１に選択的に結合するヒト化抗体である、請求項１２２に記載の免疫チェックポイント阻害剤。
【請求項１２５】
ＰＤ−１に選択的に結合するヒト化抗体が、ニボルマブ、ペンブロリズマブ、ピジリズマブ、ＭＥＤＩ−０６８０、ＲＥＧＮ２８１０、またはＡＭＰ−２２４である、請求項１２４に記載の免疫チェックポイント阻害剤。
【請求項１２６】
ＰＤ−１に選択的に結合するヒト化抗体が、ニボルマブ、ペンブロリズマブまたはピジリズマブである、請求項１２４に記載の免疫チェックポイント阻害剤。
【請求項１２７】
ＰＤ−Ｌ１アンタゴニストが、ＰＤ−Ｌ１に結合してこれに拮抗する薬剤である、請求項１１９に記載の免疫チェックポイント阻害剤。
【請求項１２８】
ＰＤ−Ｌ１に結合してこれに拮抗する薬剤が、ＰＤ−Ｌ１に結合するペプチドである、請求項１２７に記載の免疫チェックポイント阻害剤。
【請求項１２９】
ＰＤ−Ｌ１に結合してこれに拮抗する薬剤が、ＰＤ−Ｌ１に選択的に結合するヒト化抗体である、請求項１２７に記載の免疫チェックポイント阻害剤。
【請求項１３０】
ＰＤ−Ｌ１に選択的に結合するヒト化抗体が、ＢＭＳ−９３６５５９／ＭＤＸ−１１０５、ＭＰＤＬ３２８０Ａ／ＲＧ７４４６／アテゾリズマブ、ＭＳＢ００１０７１８Ｃ／アベルマブ、またはＭＥＤＩ４７３６／デュルバルマブである、請求項１２９に記載の免疫チェックポイント阻害剤。
【請求項１３１】
ＣＴＬＡ−４アンタゴニストが、ＣＴＬＡ−４に結合してこれに拮抗する薬剤である、請求項１２０に記載の免疫チェックポイント阻害剤。
【請求項１３２】
ＣＴＬＡ−４に結合してこれに拮抗する薬剤が、ＣＴＬＡ−４に結合するペプチドである、請求項１３１に記載の免疫チェックポイント阻害剤。
【請求項１３３】
ＣＴＬＡ−４に結合してこれに拮抗する薬剤が、ＣＴＬＡ−４に選択的に結合するヒト化抗体である、請求項１３１に記載の免疫チェックポイント阻害剤。
【請求項１３４】
ＣＴＬＡ−４に選択的に結合するヒト化抗体が、イピリムマブまたはトレメリムマブである、請求項１３３に記載の免疫チェックポイント阻害剤。
【請求項１３５】
ＣＴＬＡ−４アンタゴニストが、（ｉ）ＣＤ８０、ＣＤ８６、および／またはＣＴＬＡ−４に対するアンチセンス分子、（ｉｉ）ＣＤ８０、ＣＤ８６、および／またはＣＴＬＡ−４に対するアドネクチン、（ｉｉｉ）ＣＤ８０、ＣＤ８６、および／またはＣＴＬＡ−４の一本鎖または二本鎖ＲＮＡｉ阻害剤、または（ｉｖ）ＣＤ８０、ＣＤ８６、またはＣＴＬＡ−４の小分子阻害剤である、請求項１２０に記載の免疫チェックポイント阻害剤。
【請求項１３６】
ＶＩＳＴＡアンタゴニストが、ＶＩＳＴＡに結合してこれに拮抗する薬剤である、請求項１２１に記載の免疫チェックポイント阻害剤。
【請求項１３７】
ＶＩＳＴＡに結合してこれに拮抗する薬剤が、ペプチドである、請求項１３６に記載の免疫チェックポイント阻害剤。
【請求項１３８】
ＶＩＳＴＡに結合してこれに拮抗する薬剤が、ＶＩＳＴＡに対する阻害抗体である、請求項１３６に記載の免疫チェックポイント阻害剤。
【請求項１３９】
ＶＩＳＴＡに結合してこれに拮抗する薬剤が、ヒト化抗体である、請求項１３６に記載の免疫チェックポイント阻害剤。
【請求項１４０】
ＶＩＳＴＡに結合してこれに拮抗する薬剤が、（ｉ）ＶＩＳＴＡに対するアンチセンス分子、（ｉｉ）ＶＩＳＴＡに対するアドネクチン、（ｉｉｉ）ＶＩＳＴＡの一本鎖または二本鎖ＲＮＡｉ阻害剤、および（ｉｖ）ＶＩＳＴＡの小分子阻害剤である、請求項１３６に記載の免疫チェックポイント阻害剤。
【請求項１４１】
免疫チェックポイント阻害剤が、造血幹細胞移植とは異なる日に投与される、請求項１１３〜１４０のいずれか一項に記載の免疫チェックポイント阻害剤。
【請求項１４２】
免疫チェックポイント阻害剤が、造血幹細胞移植と同じ日に投与される、請求項１１３〜１４０のいずれか一項に記載の免疫チェックポイント阻害剤。
【請求項１４３】
免疫チェックポイント阻害剤が、造血幹細胞移植とは異なる日に、しかし造血幹細胞移植の１日以内、５日以内、１週間以内、８日以内、２週間以内、３週間以内、１ヶ月以内、２ヶ月以内、または３ヶ月以内に投与される、請求項１１３〜１４０のいずれか一項に記載の免疫チェックポイント阻害剤。
【請求項１４４】
免疫チェックポイント阻害剤が、静脈内または皮下に投与される、請求項１１３〜１４３のいずれか一項に記載の免疫チェックポイント阻害剤。
【請求項１４５】
対象に造血幹細胞動員剤を投与することをさらに含む、請求項１１３〜１４４のいずれか一項に記載の免疫チェックポイント阻害剤。
【請求項１４６】
疾患ががんであり、がんが、黒色腫、扁平上皮癌、基底細胞癌、乳がん、頭頸部癌、甲状腺癌、軟部組織肉腫、骨肉腫、精巣腫瘍、前立腺がん、卵巣がん、膀胱がん、皮膚がん、脳腫瘍、神経膠芽細胞腫、髄芽細胞腫、上衣細胞腫、血管肉腫、血管内皮腫、肥満細胞腫、原発性肝臓がん、小細胞肺がん、非小細胞肺がん、膵臓がん、消化管がん、腎細胞癌、造血器新生物形成、リンパ腫、中皮腫、神経膠芽細胞腫、低悪性度神経膠腫、高悪性度神経膠腫、小児脳腫瘍、髄芽細胞腫、またはそれらの転移性がんである、請求項１１３〜１４５のいずれか一項に記載の免疫チェックポイント阻害剤。
【請求項１４７】
がんが、脳、肺、乳房、または黒色腫の転移性または難治性のがんである、請求項１４６に記載の免疫チェックポイント阻害剤。
【請求項１４８】
がんが、非小細胞肺がん由来の転移性脳腫瘍、黒色腫由来の転移性脳腫瘍、または乳癌由来の転移性脳腫瘍である、請求項１４６に記載の免疫チェックポイント阻害剤。
【請求項１４９】
がんが、神経膠芽細胞腫、低悪性度神経膠腫、高悪性度神経膠腫、小児脳腫瘍、または髄芽細胞腫である、請求項１４６に記載の免疫チェックポイント阻害剤。
【請求項１５０】
疾患が感染症である、請求項１１３〜１４５のいずれか一項に記載の免疫チェックポイント阻害剤。
【請求項１５１】
感染症が慢性感染症である、請求項１５０に記載の免疫チェックポイント阻害剤。
【請求項１５２】
感染症が、任意の肝炎、アデノウイルス、ＢＫなどのポリオーマウイルス、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）、単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）、呼吸器合胞体ウイルス（ＲＳＶ）、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）、エプスタイン・バーウイルス（ＥＢＶ）、インフルエンザＡ、Ｂおよび／またはＣ、水疱性口内炎ウイルス（ＶＳＶ）、水疱性口内炎ウイルス（ＶＳＶ）、メチシリン耐性黄色ブドウ球菌（ＭＲＳＡ）を含むブドウ球菌種、肺炎連鎖球菌を含む連鎖球菌種、または移植後感染症である、請求項１５０に記載の免疫チェックポイント阻害剤。
【請求項１５３】
感染症が、Ａ型肝炎、Ｂ型肝炎、またはＣ型肝炎である、請求項１５２に記載の免疫チェックポイント阻害剤。
【請求項１５４】
造血幹細胞の供給源が、骨髄、骨髄系統除去細胞（ｌｉｎ−）、ｃＫｉｔ＋精製系統陰性骨髄由来細胞、Ｓｃａ＋精製系統陰性骨髄由来細胞、ｃＫｉｔ＋Ｓｃａ＋精製骨髄由来細胞、ＧＭ−ＣＳＦ、Ｇ−ＣＳＦを用いて宿主骨髄から動員、ＡＭＤ３１００、プレリキサフォル、もしくは分子１，１’−［１，４−フェニレンビス（メチレン）］ビス［１，４，８，１１−テトラアザシクロテトラデカン］を用いて宿主骨髄から動員、臍帯血もしくは臍帯血由来幹細胞、ヒト白血球抗原（ＨＬＡ）適合血液、血液もしくは骨髄由来の間葉系幹細胞、誘導多能性幹細胞から分化した造血幹細胞、動員末梢血、末梢血、ＣＣＲ２＋マーカーで精製したｌｉｎ−細胞を含む造血幹細胞サブセット、系統陰性精製末梢血、またはＣＤ３４＋富化末梢血である、請求項１１３〜１５３のいずれか一項に記載の免疫チェックポイント阻害剤。
【請求項１５５】
造血幹細胞の供給源が、骨髄、末梢血、臍帯血、または誘導多能性幹細胞である、請求項１１３〜１５３のいずれか一項に記載の免疫チェックポイント阻害剤。
【請求項１５６】
造血幹細胞の供給源が、自己由来である、請求項１１３〜１５３のいずれか一項に記載の免疫チェックポイント阻害剤。
【請求項１５７】
造血幹細胞の供給源が同種異系であり、ドナー細胞がレシピエントにＨＬＡ適合である、請求項１１３〜１５３のいずれか一項に記載の免疫チェックポイント阻害剤。
【請求項１５８】
造血幹細胞を含有する試料を対象から得て、該対象に該造血幹細胞を投与する前に、in vitroで、試料中の幹細胞の数が増大するように処理する、請求項１１３〜１５６のいずれか一項に記載の免疫チェックポイント阻害剤。
【請求項１５９】
造血幹細胞を含有する試料を対象から得て、該対象に該造血幹細胞を投与する前に、in vitroで、試料中の幹細胞のパーセンテージが増加するように処理する、請求項１１３〜１５６のいずれか一項に記載の免疫チェックポイント阻害剤。
【請求項１６０】
疾患に対する処置の効果を、対象の腫瘍微小環境または腫瘍流入領域リンパ節内から得られたＴ細胞によるインターフェロンγ（ＩＦＮγ）分泌を測定することによって評価し、ここで、ＩＦＮγの存在が併用療法で増加した場合に、相乗効果が認められる、請求項１１３〜１５９のいずれか一項に記載の免疫チェックポイント阻害剤。
【請求項１６１】
造血幹細胞の少なくとも５、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、または５０パーセントが、ＣＣＲ２陽性（ＣＣＲ２＋）、ＣＤ３４陽性（ＣＣＲ２＋）、および／または系統陰性（ｌｉｎ−）細胞である、請求項１１３〜１６０のいずれか一項に記載の免疫チェックポイント阻害剤。
【請求項１６２】
対象への投与のための造血幹細胞の２０％以上９８％以下、例えば２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、または９８％が、ＣＣＲ２陽性（ＣＣＲ２＋）、ＣＤ３４陽性（ＣＤ３４＋）、または系統陰性（ｌｉｎ−）である、請求項１１３〜１６１のいずれか一項に記載の免疫チェックポイント阻害剤。
【請求項１６３】
対象への投与のための造血幹細胞を、対象への投与前に、ＣＣＲ２陽性（ＣＣＲ２＋）細胞、ＣＤ３４陽性（ＣＤ３４＋）細胞、および／または系統陰性（ｌｉｎ−）細胞についてex vivoで富化する、請求項１１３〜１６０のいずれか一項に記載の免疫チェックポイント阻害剤。
【請求項１６４】
対象への投与前に、造血幹細胞をex vivoで処理して、ＣＣＲ２陰性（ＣＣＲ２−）細胞を除去する、請求項１１３〜１６０のいずれか一項に記載の免疫チェックポイント阻害剤。
【請求項１６５】
造血幹細胞を、対象への投与前に、フローサイトメトリー分析、マイクロビーズに基づく単離、付着アッセイ、および／またはリガンドに基づく選択によって、ＣＣＲ２＋、ＣＤ３４＋、および／またはｌｉｎ−細胞について選択する、請求項１１３〜１６０のいずれか一項に記載の免疫チェックポイント阻害剤。
【請求項１６６】
細胞を、リガンドに基づく選択によって選択し、ここでリガンドが、ＣＣＬ２として知られるＣＣＲ２リガンドである、請求項１６５に記載の免疫チェックポイント阻害剤。
【請求項１６７】
対象を処置する方法であって、
幹細胞動員剤を対象に投与すること、
対象から造血幹細胞を収集すること、
収集した幹細胞を、ＣＣＲ２陽性（ＣＣＲ２＋）、ＣＤ３４陽性（ＣＤ３４＋）、または系統陰性（ｌｉｎ−）細胞について富化すること、
任意に、収集した幹細胞またはＣＣＲ２−細胞を除去すること、
対象に、富化された収集幹細胞を投与すること、および
対象に、免疫チェックポイント阻害剤を投与すること、
を含む、前記方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願
本出願は、35 U.S.C. § 119(e)のもとで、２０１５年７月３１日に出願された米国仮出第62/199,916号、２０１６年２月１８日に出願された米国仮出願第62/296,826号、２０１６年２月１８日に出願された米国仮出第62/296,849号、および２０１６年２月１８日に出願された米国仮出願第62/296,866号の優先権を主張するものであり、これらすべての内容はその全体が参照により本明細書に組み込まれる。
【背景技術】
【０００２】
開示の背景
プログラム・デス１（ＰＤ−１）、プログラム・デスリガンド−１（ＰＤ−Ｌ１）、細胞傷害性Ｔリンパ球関連抗原（ＣＴＬＡ−４）、またはＴ細胞活性化のＶドメインＩｇサプレッサー（ＶＩＳＴＡ）などの免疫チェックポイント分子に結合して免疫チェックポイント遮断を引き起こす、免疫チェックポイント阻害剤の使用は、がんおよび感染症の処置のために研究されている有望なアプローチである。多くのがんの臨床試験における印象的な治療応答にもかかわらず、これらのがんを有する対象のすべてが、免疫チェックポイントの遮断に応答するわけではない。さらに、免疫チェックポイント分子（例えば、ＰＤ−１またはＣＴＬＡ−４）に結合する抗体での処置に対する治療応答が明白ではない、多くのがんが存在する。
【０００３】
がん細胞を含む様々な細胞に対するＣＤ４およびＣＤ８ Ｔ細胞活性の増強は、がんおよび感染症を処置するために研究されている別のアプローチである。１つの戦略では、Ｔリンパ球を抗原で刺激し、ex vivoで増大させ、次いで対象に注入する。これは、養子細胞療法（ＡＣＴ）の一形態である。特定のＡＣＴ戦略は、初期の臨床試験において、がん退行を誘導することが示されている。ＡＣＴは、免疫除去および造血幹細胞移植（ＨＳＣＴ）の後に生じるがんおよび／または感染症を処置するのに、特に有用であり得る。
がんを処置するために研究されているさらに別のアプローチは、造血幹細胞移植（ＨＳＣＴ）および／または造血幹細胞（ＨＳＣ）動員である。ＨＳＣＴおよび／またはＨＳＣ動員は、軽度のリンパ球減少症を誘発する処置と組み合わせた場合、特定の細胞ベースの免疫療法の効果を増強し得る。
【０００４】
免疫チェックポイント遮断のみ、例えば抗ＰＤ１、抗ＰＤ−Ｌ１、抗ＣＴＬＡ−４、または抗ＶＩＳＴＡ媒介性の遮断のみ、およびＨＳＣまたはＨＳＣ動員剤のみの投与は、異なるがんを有する多くの対象において臨床効果を示さない。しかし本開示によれば、ＨＳＣ移入と免疫チェックポイント遮断（例えば、抗ＰＤ−１媒介性遮断または抗ＶＩＳＴＡ媒介性遮断）の組合せは、がんの処置において相乗的であることが見出されている。この相乗作用は、免疫チェックポイント阻害剤とＨＳＣ移植を用いた処置により、免疫チェックポイント遮断に抵抗性であるがんの処置を可能にし、チェックポイント阻害剤抵抗性がんの顕著な長期退縮をもたらし得る。抗ＰＤ−１抗体と造血幹細胞移植の併用処置が、抗ＰＤ−１抗体の単独療法を用いた免疫チェックポイント遮断に対する抵抗性を逆転させるという本開示の発見は、複数の脳腫瘍モデル（例えば、脳幹神経膠腫、皮質神経膠芽細胞腫、および髄芽細胞腫）において実証された。
【発明の概要】
【０００５】
本発明者らは、実験的腫瘍保有マウスに投与された骨髄由来造血幹細胞（ＨＳＣ）が、免疫チェックポイント阻害剤による免疫チェックポイント遮断を受けているマウスの、腫瘍微小環境および腫瘍流入領域リンパ節内の活性化インターフェロンγ（ＩＦＮγ）分泌Ｔ細胞の持続性および生存を促進するという、独自の観察を行った。
抗ＰＤ−１、抗ＰＤ−Ｌ１、または抗ＣＴＬＡ−４モノクローナル抗体を用いた免疫チェックポイント遮断は、多くのがん（黒色腫、非小細胞肺がんなど）において重要かつ有効な物理療法（modality）であることが示されており、これは現在、多くのヒト腫瘍に対する有効性、および腫瘍予測バイオマーカーとしての可能性について、評価されている（Mahoney et al., 2015; Shih et al., 2014; Dolan et al., 2014、これらはその全体が参照により本明細書に組み込まれる）。
【０００６】
抗ＶＩＳＴＡモノクローナル抗体を用いた免疫チェックポイント遮断は、マウス腫瘍モデルにおいて、ＣＤ２５、ＩＦＮ−γおよびＴＮＦ−α発現によって評価されるＣＤ８＋Ｔ細胞活性化を上昇させるが、腫瘍増殖には明らかに影響しないことが示されている（Kondo et al. 2015. J. of Immun. V194）。ＶＩＳＴＡはin vitroおよびin vivoの両方でＴ細胞に対して免疫抑制活性を誘導し、ＶＩＳＴＡ遮断は、自己免疫疾患モデルにおいてＴ細胞媒介性免疫を増強する（Wang et al. 2011. JEM 208(3):577-92）。他の免疫療法と組み合わせたＶＩＳＴＡ遮断、例えばＨＳＣＴまたはＨＳＣ動員は、自己免疫の発達およびがんに対する免疫応答を制御する、重要なメディエーターであり得る。
【０００７】
多くのがんにおける印象的な臨床応答にもかかわらず、免疫チェックポイント阻害剤（例えば、抗免疫チェックポイント抗体）による処置に対する応答は現在、処置された患者のサブセットにおいてのみ観察されている。本明細書に開示される結果は、ＨＳＣ移入と免疫チェックポイント阻害剤、例えば抗ＰＤ−１、抗ＰＤ−Ｌ１、抗ＣＴＬＡ−４、または抗ＶＩＳＴＡ抗体の併用処置が、抗免疫チェックポイント抗体単独に対して抵抗性である腫瘍の処置において相乗的であることを示し、ここでその組み合わせは、処置された動物のかなりの部分において治癒的である。ＨＳＣＴと免疫チェックポイント阻害剤による処置の組み合わせは非常に有効であるが、一方、ＨＳＣＴ単独あるいは免疫チェックポイント阻害剤処置単独では、免疫学的または臨床的効果をもたらさない。この結果は、がんを処置するための免疫チェックポイント阻害剤処置に対するＨＳＣ移入の、以前には記載されていない強力な相乗効果を実証する。本開示のいかなる理論にも束縛されることを望むものではないが、本発明者らは、この組み合わせが腫瘍微小環境内のＩＦＮγ陽性Ｔ細胞の持続的な増加を導くことを実証することにより、メカニズムについての洞察を提供する。本発明者らは、免疫チェックポイント阻害剤とＨＳＣ移入（および／またはＨＳＣ動員）の新規な相乗的組み合わせが、抗腫瘍免疫に大きな影響を及ぼすことを提案する。本明細書において、ＨＳＣの、１つ以上の免疫チェックポイント阻害剤と共になされる腫瘍保有宿主への投与が、ＩＦＮγ分泌の増加を導き得ることが提案される。かかる処置は、皮下、全身または頭蓋内腫瘍のいずれかを有する宿主、および放射線または化学療法を受ける腫瘍保有宿主、ならびに放射線または化学療法を受けていない宿主において、特に有用であり得る。この開示は、免疫チェックポイント阻害剤と、ＨＳＣおよび／またはＨＳＣ動員剤とを用いた併用処置の相乗効果を支持する。
【０００８】
本開示の１側面によれば、がんまたは感染症から選択される疾患を処置するための方法であって、疾患を処置するための有効量で、該疾患を有する対象に１つ以上の免疫チェックポイント阻害剤を投与すること、および該対象に、造血幹細胞を投与すること、を含む、前記方法が提供される。
本開示の１側面によれば、がんまたは感染症から選択される疾患を処置するための方法であって、該疾患を有する対象に、疾患を処置するための有効量で、１つ以上の免疫チェックポイント阻害剤を投与すること、および、造血幹細胞動員剤を投与すること、を含む、前記方法が提供される。
【０００９】
本開示の１側面によれば、疾患に対する免疫チェックポイント阻害剤療法を受けている対象における、がんまたは感染症から選択される該疾患を処置する方法であって、対象に造血幹細胞を、免疫チェックポイント阻害剤療法と組み合わせて該疾患を処置するための有効量で投与することを含む、前記方法が提供される。
本開示の１側面によれば、疾患に対する造血幹細胞移植療法を受けている対象における、がんまたは感染症から選択される該疾患を処置する方法であって、対象に１つ以上の免疫チェックポイント阻害剤を、造血幹細胞移植療法と組み合わせて該疾患を処置するための有効量で投与することを含む、前記方法が提供される。
【００１０】
前述の側面および以下の態様のいずれかにおいて、疾患は、例えば、１つ以上の免疫チェックポイント阻害剤による単独療法処置に抵抗性であるものであり得る。前述の側面および以下の態様のいずれかにおいて、１つ以上の免疫チェックポイント阻害剤は、例えば、それぞれ、以下：プログラム・デス１（ＰＤ−１）、プログラム・デスリガンド１（ＰＤ−Ｌ１）、細胞傷害性Ｔリンパ球関連抗原４（ＣＴＬＡ−４）、Ｔ細胞活性化のＶドメインＩｇサプレッサー（ＶＩＳＴＡ）、プログラム・デスリガンド２（ＰＤ−Ｌ２）、インドールアミン２，３−ジオキシゲナーゼ（ＩＤＯ）、アルギナーゼ、Ｂ７ファミリー阻害性リガンドＢ７−Ｈ３、Ｂ７ファミリー阻害性リガンドＢ７−Ｈ４、リンパ球活性化遺伝子３（ＬＡＧ３）、２Ｂ４、ＢおよびＴリンパ球アテニュエーター（ＢＴＬＡ）、Ｔ細胞膜タンパク質３（ＴＩＭ３；ＨＡＶｃｒ２としても知られる）、アデノシンＡ２ａ受容体（Ａ２ａＲ）、キラー阻害性受容体、および／またはシグナル伝達兼転写活性化因子（ＳＴＡＴ）３；のアンタゴニストである。特定の態様において、１つ以上の免疫チェックポイント阻害剤はそれぞれ、プログラム・デス１（ＰＤ−１）のアンタゴニスト、プログラム・デスリガンド１（ＰＤ−Ｌ１）のアンタゴニスト、細胞傷害性Ｔリンパ球関連抗原４（ＣＴＬＡ−４）のアンタゴニスト、および／またはＴ細胞活性化のＶドメインＩｇサプレッサー（ＶＩＳＴＡ）のアンタゴニストである。
【００１１】
前述の側面および態様のいずれかにおいて、ＰＤ−１アンタゴニストは、例えば、ＰＤ−１に結合してこれに拮抗する薬剤である。かかる薬剤は、例えば、ＰＤ−１に結合するペプチドであり得る。かかる薬剤は、ＰＤ−１に選択的に結合するヒト化抗体であり得る。いくつかの態様において、ＰＤ−１に選択的に結合するヒト化抗体は、ニボルマブ、ペンブロリズマブ、ピジリズマブ、ＭＥＤＩ−０６８０、ＲＥＧＮ２８１０またはＡＭＰ−２２４である。いくつかの態様において、ＰＤ−１に選択的に結合するヒト化抗体は、ニボルマブ、ペンブロリズマブまたはピジリズマブである。いくつかの態様において、アンタゴニストは、（ｉ）ＰＤ−１に対するアンチセンス分子、（ｉｉ）ＰＤ−１に対するアドネクチン、（ｉｉｉ）ＰＤ−１の一本鎖または二本鎖ＲＮＡｉ阻害剤、および／または（ｉｖ）ＰＤ−１の小分子阻害剤、である。
【００１２】
前述の側面および態様のいずれかにおいて、ＰＤ−Ｌ１アンタゴニストは、例えば、ＰＤ−Ｌ１に結合してこれに拮抗する薬剤である。かかる薬剤は、例えば、ＰＤ−Ｌ１に結合するペプチドであり得る。かかる薬剤は、ＰＤ−Ｌ１に選択的に結合するヒト化抗体であり得る。いくつかの態様において、ＰＤ−Ｌ１に選択的に結合するヒト化抗体は、ＢＭＳ−９３６５５９／ＭＤＸ−１１０５、ＭＰＤＬ３２８０Ａ／ＲＧ７４４６／アテゾリズマブ、ＭＳＢ００１０７１８Ｃ／アベルマブ、またはＭＥＤＩ４７３６／デュルバルマブである。いくつかの態様において、アンタゴニストは、（ｉ）ＰＤ−Ｌ１に対するアンチセンス分子、（ｉｉ）ＰＤ−Ｌ１に対するアドネクチン、（ｉｉｉ）ＰＤ−Ｌ１の一本鎖または二本鎖ＲＮＡｉ阻害剤、または（ｉｖ）ＰＤ−Ｌ１の小分子阻害剤である。
【００１３】
前述の側面および態様のいずれかにおいて、ＣＴＬＡ−４アンタゴニストは、例えば、ＣＴＬＡ−４に結合してこれに拮抗する薬剤である。かかる薬剤は、例えば、ＣＴＬＡ−４に結合するペプチドであり得る。かかる薬剤は、ＣＴＬＡ−４に選択的に結合するヒト化抗体であり得る。いくつかの態様において、ＣＴＬＡ−４に選択的に結合するヒト化抗体は、イピリムマブまたはトレメリムマブである。いくつかの態様において、ＣＴＬＡ−４アンタゴニストは、（ｉ）ＣＤ８０、ＣＤ８６および／またはＣＴＬＡ−４に対するアンチセンス分子、（ｉｉ）ＣＤ８０、ＣＤ８６および／またはＣＴＬＡ−４に対するアドネクチン、（ｉｉｉ）ＣＤ８０、ＣＤ８６、および／またはＣＴＬＡ−４の一本鎖または二本鎖ＲＮＡｉ阻害剤、または（ｉｖ）ＣＤ８０、ＣＤ８６、またはＣＴＬＡ−４の小分子阻害剤である。
【００１４】
前述の側面および態様のいずれかにおいて、ＶＩＳＴＡアンタゴニストは、例えば、ＶＩＳＴＡに結合してこれに拮抗する薬剤である。かかる薬剤は、例えば、ペプチドであり得る。かかる薬剤は、ＶＩＳＴＡに対する阻害抗体であり得る。いくつかの態様において、ＶＩＳＴＡに結合してこれに拮抗する薬剤は、ヒト化抗体である。いくつかの態様において、ＶＩＳＴＡに結合してこれに拮抗する薬剤は、（ｉ）ＶＩＳＴＡに対するアンチセンス分子、（ｉｉ）ＶＩＳＴＡに対するアドネクチン、（ｉｉｉ）ＶＩＳＴＡの一本鎖または二本鎖ＲＮＡｉ阻害剤、または（ｉｖ）ＶＩＳＴＡの小分子阻害剤である。
【００１５】
前述の態様のいずれかにおいて、免疫チェックポイント阻害剤は、造血幹細胞移植または造血幹細胞動員剤とは異なる日に投与される。前述の態様のいずれかにおいて、免疫チェックポイント阻害剤は、造血幹細胞移植または造血幹細胞動員剤と同じ日に投与される。前述の態様のいずれかにおいて、免疫チェックポイント阻害剤は、造血幹細胞移植または造血幹細胞動員剤とは異なる日に投与されるが、しかし造血幹細胞移植または動員剤の１日以内、５日以内、１週間以内、８日以内、２週間以内、３週間以内、１ヶ月以内、２ヶ月以内、または３ヶ月以内に、投与される。
前述の態様のいずれかにおいて、免疫チェックポイント阻害剤は、例えば、静脈内または皮下に投与される。
【００１６】
前述の態様のいずれかにおいて、方法はさらに、造血幹細胞動員剤を対象に投与することを含む。例示の態様において、動員剤は、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ）、顆粒球コロニー刺激因子（Ｇ−ＣＳＦ）、ペグ化Ｇ−ＣＳＦ（ペグフィルグラチズム）、レノグラチズム、Ｇ−ＣＳＦのグリコシル化形態、Ｃ−Ｘ−Ｃモチーフケモカイン２（ＣＸＣＬ２）、Ｃ−Ｘ−Ｃケモカイン受容体タイプ４（ＣＸＣＲ−４）、またはプレリキサフォルである。
前述の態様のいずれかにおいて、疾患は、例えばがんであり、がんは、黒色腫、扁平上皮癌、基底細胞癌、乳がん、頭頸部癌、甲状腺癌、軟部組織肉腫、骨肉腫、精巣腫瘍、前立腺がん、卵巣がん、膀胱がん、皮膚がん、脳腫瘍、神経膠芽細胞腫、髄芽細胞腫、上衣細胞腫、血管肉腫、血管内皮腫、肥満細胞腫、原発性肝臓がん、小細胞肺がん、非小細胞肺がん、膵臓がん、消化管がん、腎細胞癌、造血器新生物形成、リンパ腫、中皮腫、神経膠芽細胞腫、低悪性度神経膠腫、高悪性度神経膠腫、小児脳腫瘍、髄芽細胞腫、またはそれらの転移性がんである。
【００１７】
前述の態様のいずれかにおいて、がんは、脳、肺、乳房、または黒色腫の転移性または難治性のがんである。前述の態様のいずれかにおいて、がんは、非小細胞肺がん由来の転移性脳腫瘍、黒色腫由来の転移性脳腫瘍、または乳癌由来の転移性脳腫瘍である。前述の態様のいずれかにおいて、がんは、神経膠芽細胞腫、低悪性度神経膠腫、高悪性度神経膠腫、小児脳腫瘍、または髄芽細胞腫である。
前述の態様のいずれかにおいて、疾患は、例えば、感染症である。前述の態様のいずれかにおいて、感染症は慢性感染症である。前述の態様のいずれかにおいて、感染症は、任意の肝炎、アデノウイルス、ＢＫなどのポリオーマウイルス、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）、単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）、呼吸器合胞体ウイルス（ＲＳＶ）、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）、エプスタイン・バーウイルス（ＥＢＶ）、インフルエンザＡ、Ｂおよび／またはＣ、水疱性口内炎ウイルス（ＶＳＶ）、水疱性口内炎ウイルス（ＶＳＶ）、メチシリン耐性黄色ブドウ球菌（ＭＲＳＡ）を含むブドウ球菌種、肺炎連鎖球菌を含む連鎖球菌種、または移植後感染症である。前述の態様のいずれかにおいて、感染症は、Ａ型肝炎、Ｂ型肝炎、またはＣ型肝炎である。
【００１８】
前述の態様のいずれかにおいて、造血幹細胞の供給源は、例えば、骨髄、骨髄系統除去細胞（ｌｉｎ−）、ｃＫｉｔ＋精製系統陰性骨髄由来細胞、Ｓｃａ＋精製系統陰性骨髄由来細胞、ｃＫｉｔ＋Ｓｃａ＋精製骨髄由来細胞、ＧＭ−ＣＳＦ、Ｇ−ＣＳＦを用いて宿主骨髄から動員、ＡＭＤ３１００、プレリキサフォル、もしくは分子１，１’−［１，４−フェニレンビス（メチレン）］ビス［１，４，８，１１−テトラアザシクロテトラデカン］を用いて宿主骨髄から動員、臍帯血もしくは臍帯血由来幹細胞、ヒト白血球抗原（ＨＬＡ）適合血液、血液もしくは骨髄由来の間葉系幹細胞、誘導多能性幹細胞から分化した造血幹細胞、動員末梢血、末梢血、ＣＣＲ２＋マーカーで精製したｌｉｎ−細胞を含む造血幹細胞サブセット、系統陰性精製末梢血、またはＣＤ３４＋富化末梢血である。前述の態様のいずれかにおいて、造血幹細胞の供給源は、骨髄、末梢血、臍帯血、または誘導多能性幹細胞である。前述の態様のいずれかにおいて、造血幹細胞の供給源は、自己由来である。いくつかの態様において、造血幹細胞の供給源は同種異系であり、ドナー細胞はレシピエントにＨＬＡ適合である。
【００１９】
前述の態様のいずれかにおいて、造血幹細胞を含有する試料を得て、対象に該造血幹細胞を投与する前に、in vitroで、試料中の幹細胞の数が増大するように任意に処理する。前述の態様のいずれかにおいて、造血幹細胞を含有する試料を得て、対象に該造血幹細胞を投与する前に、in vitroで、試料中の幹細胞のパーセンテージが増加するように任意に処理する。試料は、自己由来であってもなくてもよい。前述の態様のいずれかにおいて、造血幹細胞の少なくとも５、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、または５０パーセントは、ＣＣＲ２陽性（ＣＣＲ２＋）、ＣＤ３４陽性（ＣＣＲ２＋）、および／または系統陰性（ｌｉｎ−）細胞である。前述の態様のいずれかにおいて、対象への投与のための造血幹細胞の２０％以上９８％以下、例えば２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、または９８％は、ＣＣＲ２陽性（ＣＣＲ２＋）、ＣＤ３４陽性（ＣＤ３４＋）、または系統陰性（ｌｉｎ−）である。
【００２０】
前述の態様のいずれかにおいて、対象への投与のための造血幹細胞を、対象への投与前に、ＣＣＲ２陽性（ＣＣＲ２＋）細胞、ＣＤ３４陽性（ＣＤ３４＋）細胞、および／または系統陰性（ｌｉｎ−）細胞についてex vivoで任意に富化する。前述の態様のいずれかにおいて、対象への投与前に、造血幹細胞をex vivoで任意に処理して、ＣＣＲ２陰性（ＣＣＲ２−）細胞を除去する。前述の態様のいずれかにおいて、造血幹細胞は、対象への投与前に、フローサイトメトリー分析、マイクロビーズに基づく単離、付着アッセイ、および／またはリガンドに基づく選択によって、ＣＣＲ２＋、ＣＤ３４＋、および／またはｌｉｎ−細胞について選択される。いくつかの態様において、細胞は、リガンドに基づく選択によって選択され、ここでリガンドは、ＣＣＬ２として知られるＣＣＲ２リガンドである。
【００２１】
前述の態様のいずれかにおいて、疾患に対する処置の効果は、例えば、対象の腫瘍微小環境または腫瘍流入領域リンパ節内から得られたＴ細胞によるインターフェロンγ（ＩＦＮγ）分泌を測定することによって評価し、ここで、ＩＦＮγの存在が併用療法で増加した場合に、相乗効果が認められる。
前述の態様のいずれかにおいて、養子細胞療法（ＡＣＴ）も、対象に投与することができる。前述の態様のいずれかにおいて、養子細胞療法（ＡＣＴ）は、前記処置の少なくとも１つと十分に近い時間に対象に投与されて、疾患の処置を増強する。
【００２２】
前述の態様のいずれかにおいて、化学療法または放射線を、対象に投与することができる。前述の態様のいずれかにおいて、化学療法または放射線は、前記処置の少なくとも１つと十分に近い時間に対象に投与されて、疾患の処置を増強する。かかる態様において、造血幹細胞は、放射線処置の完了後に対象に投与され得る。かかる態様において、造血幹細胞は、化学療法処置の完了後に対象に投与され得る。かかる態様において、造血幹細胞は、化学療法または放射線処置の完了後６週間以内に、対象に投与され得る。かかる態様において、造血幹細胞は、化学療法または放射線処置の完了の０日、１日、２日、３日、４日、５日、６日、１週間、２週間、３週間、４週間、または６週間後に、対象に投与され得る。かかる態様において、免疫チェックポイント阻害剤は、放射線または化学療法処置の前、同時、または後に投与され得る。かかる態様において、免疫チェックポイント阻害剤は、対象に、化学療法または放射線処置の完了の１日、１週間、２週間、３週間、４週間、５週間または６週間後に、投与され得る。
【００２３】
前述の態様のいずれかにおいて、造血幹細胞を、造血幹細胞を対象に投与する前に、１つ以上の異なるサイトカインで処理することができる。前述の態様のいずれかにおいて、造血幹細胞は、１つ以上の異なるサイトカインと同時に、対象に投与することができる。前述の態様のいずれかにおいて、ＨＳＣと１つ以上の異なるサイトカインとの処置は、免疫チェックポイント阻害剤療法と造血幹細胞移植療法との併用処置の効果を、さらに高めることができる。前述の態様のいずれかにおいて、１つ以上の異なるサイトカインの投与と同時の、ＨＳＣの対象への投与は、免疫チェックポイント阻害剤と造血幹細胞移植療法との併用処置の効果を、さらに高めることができる。いくつかの態様において、１つ以上の異なるサイトカインは、ＩＦＮγ、ＴＮＦα、ＧＭ−ＣＳＦ、Ｇ−ＣＳＦ、Ｆｌ３−リガンド、ＩＬ−１β、ＩＬ−４および／またはＩＬ−６である。前述の態様のいずれかにおいて、造血幹細胞は、ＨＳＣの対象への投与と同じ日、その１日前、２日前、３日前、４日前、または５日前に、１つ以上のサイトカインで処理される。前述の態様のいずれかにおいて、造血幹細胞は、ＨＳＣを対象に投与する、１日、２日、３日、４日または５日前に、１つ以上のサイトカインで処理される。
【００２４】
本開示の１側面によれば、造血幹細胞は、がんまたは感染症を有する対象を処置するのに使用するために提供され、ここで該対象は、１つ以上の免疫チェックポイント阻害剤による同時免疫チェックポイント阻害剤処置を受けている。
本開示の１側面によれば、ＣＣＲ２＋、ＣＤ３４＋、および／またはｌｉｎ−細胞について富化された造血幹細胞が、１つ以上の免疫チェックポイント阻害剤を用いて疾患の処置を受けている対象の処置において使用するために、提供される。
【００２５】
本開示の１側面によれば、ＣＣＲ２−細胞を実質的に除去した造血幹細胞が、１つ以上の免疫チェックポイント阻害剤を用いて疾患の処置を受けている対象の処置において使用するために、提供される。
本開示の１側面によれば、がんまたは感染症を有する対象を処置するのに用いるための免疫チェックポイント阻害剤が提供され、ここで該対象は、造血幹細胞による同時処置を受けている。
【００２６】
本開示の１側面によれば、がんまたは感染症を有する対象を処置するのに用いるための免疫チェックポイント阻害剤が提供され、ここで該対象は、造血幹細胞移植および／または造血幹細胞動員剤による同時処置を受けている。
前述の側面のいずれかにおいて、疾患は、１つ以上の免疫チェックポイント阻害剤による単独療法処置に抵抗性であり得る。
前述の側面のいずれかにおいて、１つより多い異なる免疫チェックポイント阻害剤を、がんまたは感染症を有する対象の処置のための、造血幹細胞および／または造血幹細胞動員剤と組み合わせて、同時に使用することができる。
【００２７】
前述の側面のいずれかにおいて、免疫チェックポイント阻害剤は、例えば、以下：プログラム・デス１（ＰＤ−１）、プログラム・デスリガンド１（ＰＤ−Ｌ１）、細胞傷害性Ｔリンパ球関連抗原４（ＣＴＬＡ−４）、Ｔ細胞活性化のＶドメインＩｇサプレッサー（ＶＩＳＴＡ）、プログラム・デスリガンド２（ＰＤ−Ｌ２）、インドールアミン２，３−ジオキシゲナーゼ（ＩＤＯ）、アルギナーゼ、Ｂ７ファミリー阻害性リガンドＢ７−Ｈ３、Ｂ７ファミリー阻害性リガンドＢ７−Ｈ４、リンパ球活性化遺伝子３（ＬＡＧ３）、２Ｂ４、ＢおよびＴリンパ球アテニュエーター（ＢＴＬＡ）、Ｔ細胞膜タンパク質３（ＴＩＭ３）、アデノシンＡ２ａ受容体（Ａ２ａＲ）、および／またはキラー阻害性受容体；のアンタゴニストである。前述の側面のいずれかにおいて、免疫チェックポイント阻害剤は、以下：プログラム・デス１（ＰＤ−１）、プログラム・デスリガンド１（ＰＤ−Ｌ１）、細胞傷害性Ｔリンパ球関連抗原４（ＣＴＬＡ−４）、および／またはＴ細胞活性化のＶドメインＩｇサプレッサー（ＶＩＳＴＡ）；のアンタゴニストである。
【００２８】
いくつかの態様において、免疫チェックポイント阻害剤は、プログラム・デス１（ＰＤ−１）アンタゴニストである。いくつかの態様において、免疫チェックポイント阻害剤は、プログラム・デスリガンド１（ＰＤ−Ｌ１）アンタゴニストである。いくつかの態様において、免疫チェックポイント阻害剤は、細胞傷害性Ｔリンパ球関連抗原４（ＣＴＬＡ−４）アンタゴニストである。いくつかの態様において、免疫チェックポイント阻害剤は、Ｔ細胞活性化のＶドメインＩｇサプレッサー（ＶＩＳＴＡ）アンタゴニストである。
ＰＤ−１アンタゴニストは、例えば、ＰＤ−１に結合してこれに拮抗する薬剤であり得る。いくつかの態様において、ＰＤ−１に結合してこれに拮抗する薬剤は、ＰＤ−１に結合するペプチドである。いくつかの態様において、ＰＤ−１に結合してこれに拮抗する薬剤は、ＰＤ−１に選択的に結合するヒト化抗体である。いくつかの態様において、ＰＤ−１に選択的に結合するヒト化抗体は、ニボルマブ、ペンブロリズマブ、ピジリズマブ、ＭＥＤＩ−０６８０、ＲＥＧＮ２８１０、またはＡＭＰ−２２４である。いくつかの態様において、ＰＤ−１に選択的に結合するヒト化抗体は、ニボルマブ、ペンブロリズマブまたはピジリズマブである。
【００２９】
ＰＤ−Ｌ１アンタゴニストは、例えば、ＰＤ−Ｌ１に結合してこれに拮抗する薬剤であり得る。いくつかの態様において、ＰＤ−Ｌ１に結合してこれに拮抗する薬剤は、ＰＤ−Ｌ１に結合するペプチドである。いくつかの態様において、ＰＤ−Ｌ１に結合してこれに拮抗する薬剤は、ＰＤ−Ｌ１に選択的に結合するヒト化抗体である。いくつかの態様において、ＰＤ−Ｌ１に選択的に結合するヒト化抗体は、ＢＭＳ−９３６５５９／ＭＤＸ−１１０５、ＭＰＤＬ３２８０Ａ／ＲＧ７４４６／アテゾリズマブ、ＭＳＢ００１０７１８Ｃ／アベルマブ、またはＭＥＤＩ４７３６／デュルバルマブである。
【００３０】
ＣＴＬＡ−４アンタゴニストは、例えば、ＣＴＬＡ−４に結合してこれに拮抗する薬剤であり得る。いくつかの態様において、ＣＴＬＡ−４に結合してこれに拮抗する薬剤は、ＣＴＬＡ−４に結合するペプチドである。いくつかの態様において、ＣＴＬＡ−４に結合してこれに拮抗する薬剤は、ＣＴＬＡ−４に選択的に結合するヒト化抗体である。いくつかの態様において、ＣＴＬＡ−４阻害剤に選択的に結合するヒト化抗体は、イピリムマブまたはトレメリムマブである。いくつかの態様において、ＣＴＬＡ−４アンタゴニストは、（ｉ）ＣＤ８０、ＣＤ８６および／またはＣＴＬＡ−４に対するアンチセンス分子、（ｉｉ）ＣＤ８０、ＣＤ８６および／またはＣＴＬＡ−４に対するアドネクチン、（ｉｉｉ）ＣＤ８０、ＣＤ８６、および／またはＣＴＬＡ−４の一本鎖または二本鎖ＲＮＡｉ阻害剤、または（ｉｖ）ＣＤ８０、ＣＤ８６、またはＣＴＬＡ−４の小分子阻害剤である。
【００３１】
ＶＩＳＴＡアンタゴニストは、例えば、ＶＩＳＴＡに結合してこれに拮抗する薬剤であり得る。いくつかの態様において、ＶＩＳＴＡに結合してこれに拮抗する薬剤は、ペプチドである。いくつかの態様において、ＶＩＳＴＡに結合してこれに拮抗する薬剤は、ＶＩＳＴＡに対する阻害抗体である。いくつかの態様において、ＶＩＳＴＡに結合してこれに拮抗する薬剤は、ヒト化抗体である。いくつかの態様において、ＶＩＳＴＡに結合してこれに拮抗する薬剤は、（ｉ）ＶＩＳＴＡに対するアンチセンス分子、（ｉｉ）ＶＩＳＴＡに対するアドネクチン、（ｉｉｉ）ＶＩＳＴＡの一本鎖または二本鎖ＲＮＡｉ阻害剤、または、（ｉｖ）ＶＩＳＴＡの小分子阻害剤である。
【００３２】
いくつかの態様において、免疫チェックポイント阻害剤は、造血幹細胞移植または造血幹細胞動員剤とは異なる日に投与される。いくつかの態様において、免疫チェックポイント阻害剤は、造血幹細胞移植または造血幹細胞動員剤と同じ日に投与される。いくつかの態様において、免疫チェックポイント阻害剤は、造血幹細胞移植または造血幹細胞動員剤とは異なる日に、しかし造血幹細胞移植または造血幹細胞動員剤の１日以内、５日以内、１週間以内、８日以内、２週間以内、３週間以内、１ヶ月以内、２ヶ月以内、または３ヶ月以内に投与される。
いくつかの態様において、免疫チェックポイント阻害剤は、静脈内または皮下に投与される。
【００３３】
前述の態様のいずれかにおいて、方法は任意に、造血幹細胞動員剤を対象に投与することを、さらに含む。いくつかの態様において、動員剤は、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ）、顆粒球コロニー刺激因子（Ｇ−ＣＳＦ）、ペグ化Ｇ−ＣＳＦ（ペグフィルグラチズム）、レノグラチズム、Ｇ−ＣＳＦのグリコシル化形態、Ｃ−Ｘ−Ｃモチーフケモカイン２（ＣＸＣＬ２）、Ｃ−Ｘ−Ｃケモカイン受容体タイプ４（ＣＸＣＲ−４）、またはプレリキサフォルである。
【００３４】
前述の態様のいずれかにおいて、疾患は、例えばがんであり、がんは、黒色腫、扁平上皮癌、基底細胞癌、乳がん、頭頸部癌、甲状腺癌、軟部組織肉腫、骨肉腫、精巣腫瘍、前立腺がん、卵巣がん、膀胱がん、皮膚がん、脳腫瘍、神経膠芽細胞腫、髄芽細胞腫、上衣細胞腫、血管肉腫、血管内皮腫、肥満細胞腫、原発性肝臓がん、小細胞肺がん、非小細胞肺がん、膵臓がん、消化管がん、腎細胞癌、造血器新生物形成、リンパ腫、中皮腫、神経膠芽細胞腫、低悪性度神経膠腫、高悪性度神経膠腫、小児脳腫瘍、髄芽細胞腫、またはそれらの転移性がんである。いくつかの態様において、がんは、脳、肺、乳房、または黒色腫の転移性または難治性のがんである。いくつかの態様において、がんは、非小細胞肺がん由来の転移性脳腫瘍、黒色腫由来の転移性脳腫瘍、または乳癌由来の転移性脳腫瘍である。いくつかの態様において、がんは、神経膠芽細胞腫、低悪性度神経膠腫、高悪性度神経膠腫、小児脳腫瘍、または髄芽細胞腫である。
【００３５】
いくつかの態様において、疾患は、例えば、感染症である。いくつかの態様において、感染症は慢性感染症である。前述の態様のいずれかにおいて、感染症は、任意の肝炎、アデノウイルス、ＢＫなどのポリオーマウイルス、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）、単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）、呼吸器合胞体ウイルス（ＲＳＶ）、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）、エプスタイン・バーウイルス（ＥＢＶ）、インフルエンザＡ、Ｂおよび／またはＣ、水疱性口内炎ウイルス（ＶＳＶ）、水疱性口内炎ウイルス（ＶＳＶ）、メチシリン耐性黄色ブドウ球菌（ＭＲＳＡ）を含むブドウ球菌種、肺炎連鎖球菌を含む連鎖球菌種、または移植後感染症である。いくつかの態様において、感染症は、Ａ型肝炎、Ｂ型肝炎、またはＣ型肝炎である。
【００３６】
前述の態様のいずれかにおいて、造血幹細胞の供給源は、例えば、骨髄、骨髄系統除去細胞（ｌｉｎ−）、ｃＫｉｔ＋精製系統陰性骨髄由来細胞、Ｓｃａ＋精製系統陰性骨髄由来細胞、ｃＫｉｔ＋Ｓｃａ＋精製骨髄由来細胞、ＧＭ−ＣＳＦ、Ｇ−ＣＳＦを用いて宿主骨髄から動員、ＡＭＤ３１００、プレリキサフォル、もしくは分子１，１’−［１，４−フェニレンビス（メチレン）］ビス［１，４，８，１１−テトラアザシクロテトラデカン］を用いて宿主骨髄から動員、臍帯血もしくは臍帯血由来幹細胞、ヒト白血球抗原（ＨＬＡ）適合血液、血液もしくは骨髄由来の間葉系幹細胞、誘導多能性幹細胞から分化した造血幹細胞、動員末梢血、末梢血、ＣＣＲ２＋マーカーで精製したｌｉｎ−細胞を含む造血幹細胞サブセット、系統陰性精製末梢血、またはＣＤ３４＋富化末梢血である。いくつかの態様において、造血幹細胞の供給源は、骨髄、末梢血、臍帯血、または誘導多能性幹細胞である。
【００３７】
前述の態様のいずれかにおいて、造血幹細胞の供給源は自己由来である。前述の態様のいずれかにおいて、造血幹細胞源は同種異系であり、ドナー細胞はレシピエントにＨＬＡ適合である。
いくつかの態様において、造血幹細胞を含有する試料を得て、これは対象に造血幹細胞を投与する前に、in vitroで、試料中の幹細胞のパーセンテージが増加するように処理される。いくつかの態様において、造血幹細胞を含有する試料を得て、これは対象に造血幹細胞を投与する前に、in vitroで、試料内の幹細胞の割合を増加させるために処理される。いくつかの態様において、造血幹細胞の少なくとも５、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、または５０パーセントは、ＣＣＲ２陽性（ＣＣＲ２＋）、ＣＤ３４陽性（ＣＣＲ２＋）、および／または系統陰性（ｌｉｎ−）細胞である。いくつかの態様において、対象への投与のための造血幹細胞の２０％以上９８％以下、例えば２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、または９８％は、ＣＣＲ２陽性（ＣＣＲ２＋）、ＣＤ３４陽性（ＣＤ３４＋）、または系統陰性（ｌｉｎ−）である。いくつかの態様において、対象への投与のための造血幹細胞は、対象への投与前に、ＣＣＲ２陽性（ＣＣＲ２＋）細胞、ＣＤ３４陽性（ＣＤ３４＋）細胞、および／または系統陰性（ｌｉｎ−）細胞についてex vivoで富化される。いくつかの態様において、対象への投与前に、造血幹細胞をex vivoで処理して、ＣＣＲ２陰性（ＣＣＲ２−）細胞を除去する。いくつかの態様において、造血幹細胞は、対象への投与前に、フローサイトメトリー分析、マイクロビーズに基づく単離、付着アッセイ、および／またはリガンドに基づく選択によって、ＣＣＲ２＋、ＣＤ３４＋、および／またはｌｉｎ−細胞について選択される。いくつかの態様において、細胞は、リガンドに基づく選択によって選択され、ここでリガンドは、ＣＣＬ２として知られるＣＣＲ２リガンドである。
【００３８】
いくつかの態様において、疾患に対する処置の効果は、対象の腫瘍微小環境または腫瘍流入領域リンパ節内から得られたＴ細胞によるインターフェロンγ（ＩＦＮγ）分泌を測定することによって評価することができ、ここで、ＩＦＮγの存在が併用療法で増加した場合に、相乗効果が認められる。
前述の態様のいずれかにおいて、養子細胞療法（ＡＣＴ）を、対象に任意に投与することができる。いくつかの態様において、養子細胞療法（ＡＣＴ）は、前記処置の少なくとも１つと十分に近い時間に対象に投与されて、疾患の処置を増強する。
【００３９】
前述の態様のいずれかにおいて、化学療法または放射線を対象に投与することができる。いくつかの態様において、化学療法または放射線は、前記処置の少なくとも１つと十分に近い時間に対象に投与されて、疾患の処置を増強する。
前述の態様のいずれかにおいて、造血幹細胞を対象に投与する前に、造血幹細胞を１つ以上の異なるサイトカインで処理することができる。いくつかの態様において、１つ以上の異なるサイトカインによるＨＳＣの処理は、免疫チェックポイント阻害剤療法と造血幹細胞移植療法との併用処置の効果を、さらに高めることができる。いくつかの態様において、１つ以上の異なるサイトカインは、ＩＦＮγ、ＴＮＦα、ＩＬ−１βおよび／またはＩＬ−６である。
【００４０】
本開示の１側面において、対象を処置するための方法であって、幹細胞動員剤を対象に投与すること、対象から造血幹細胞を収集すること、収集した幹細胞を、ＣＣＲ２陽性（ＣＣＲ２＋）、ＣＤ３４陽性（ＣＤ３４＋）、または系統陰性（ｌｉｎ−）細胞について富化すること、収集した幹細胞またはＣＣＲ２−細胞を任意に除去すること、対象に、富化された収集幹細胞を投与すること、および対象に、免疫チェックポイント阻害剤を投与すること、を含む、前記方法が提供される。
【図面の簡単な説明】
【００４１】
【図１Ａ】図１Ａ、１Ｂおよび１Ｃは、ＨＳＣ同時移入を伴うかまたは伴わないで腫瘍反応性Ｔ細胞の養子移入を受けた、腫瘍保有マウスの実験結果を示す。腫瘍流入領域リンパ節を両方の群で解剖し、Ｔ細胞活性化について分析した。図１Ａは、ＨＳＣ同時移入を受けたマウスが、そうでないマウスと比較してＩＦＮγの増加を有することを実証する、リアルタイムＰＣＲアレイを示す。
【図１Ｂ】図１Ｂは、養子移入された腫瘍特異的Ｔ細胞によるＩＦＮγ分泌の、フローサイトメトリーを用いた分析を示す。
【図１Ｃ】図１Ｃは、フローサイトメトリーを用いた図１Ｂの結果の定量化を示し、図１Ｂの観察を確認する。
【００４２】
【図２Ａ】図２Ａは、ＹＥＴＩマウス（ＩＦＮγ産生時に細胞が蛍光を発するＩＦＮγレポーターマウス）に１０，０００個の星状細胞腫細胞を頭蓋内に移植した場合の、期待される結果を示す。３日目に、マウスは、ＨＳＣの静脈内注射、抗ＰＤ−１抗体の腹腔内注射、またはその両方を受ける。ＹＥＴＩ宿主マウスを用いて、Ｔ細胞活性化が起こっているかどうかを判定することは容易であった。３０日後、腫瘍を切除し、組織スライサーを用いて５００ｍｍスライスに切片化した
【図２Ｂ】図２Ｂは、Olympus IX70倒立蛍光顕微鏡を用いて蛍光を検出し、スライスあたりのＭＦＩを決定することによって定量化したことを示す。抗ＰＤ−１抗体とＨＳＣとを受けた群は、他の群より有意に高いＹＦＰ発現を有していた。
【図２Ｃ】図２Ｃは、ＨＳＣと抗ＰＤ−１抗体の組合せが優れた抗腫瘍保護を示したかどうかを決定するために、その後実施された研究の結果を示す。Ｃ５７ＢＬ／６マウスに、１０，０００個の星状細胞腫細胞を頭蓋内に投与した。３日目に、マウスに、ＨＳＣの静脈内注射、抗ＰＤ−１抗体の腹腔内注射、またはその両方を与えた。群は人道的エンドポイントに従った。抗ＰＤ−１とＨＳＣを投与されたマウスには、４０％の完全治癒があった。
【００４３】
【図３】図３は、特殊なＨＳＣサブセットが、悪性神経膠腫に対する増強された抗腫瘍免疫を媒介することを示す。
【図４】図４は、特殊なＨＳＣサブセットが、髄芽髄芽腫に対する増強された抗腫瘍免疫を媒介することを示す。
【００４４】
【図５】図５は、未処置または、ＨＳＣ、抗ＰＤ１抗体、ＨＳＣと抗ＰＤ１抗体、照射とＨＳＣ、照射と抗ＰＤ１抗体、もしくは照射とＨＳＣと抗ＰＤ１抗体で処置した、頭蓋内腫瘍を受けた免疫応答性（immunocompetent）Ｃ５７ＢＬ／６マウスの生存を示す。抗ＰＤ１抗体が挙げられる。
【図６】図６は、未処置または、ＨＳＣ、抗ＶＩＳＴＡ抗体、もしくはＨＳＣと抗ＰＤ１抗体で処置した、頭蓋内腫瘍を受けた免疫応答性Ｃ５７ＢＬ／６マウスの生存を示す。
【００４５】
【図７】図７は、未処置または、系統陰性造血幹細胞（Ｌｉｎ−ＨＳＣ）、ＣＣＲ２を発現しないＨＳＣ（ＣＣＲ２ｎｅｇ ＨＳＣ）、ＣＣＲ２を発現するＨＳＣ（ＣＣＲ２ｐｏｓ ＨＳＣ）、αＰＤ１、αＰＤ１＋ＨＳＣ、αＰＤ１＋ＣＣＲ２ｎｅｇ ＨＳＣ、もしくはαＰＤ１＋ＣＣＲ２ｐｏｓ ＨＳＣで処置した、頭蓋内腫瘍を受けた免疫応答性Ｃ５７ＢＬ／６マウスの生存を示す。
【００４６】
【図８Ａ−１】図８Ａおよび８Ｂは、未処置マウスおよび、ＨＳＣ、抗ＰＤ１、またはＨＳＣと抗ＰＤ１の両方によって処置したマウスにおける、腫瘍微小環境内の黄色蛍光タンパク質（ＹＦＰ）／ＩＦＮγ＋／ＣＤ３＋リンパ球のフローサイトメトリー分析によって決定された、腫瘍微小環境における総ＣＤ３＋Ｔ細胞のインターフェロンγ（ＩＦＮγ）分泌細胞のパーセント（図８Ａ）、およびフローサイトメトリー分析の定量（図８Ｂ）を示す。
【図８Ａ−２】図８Ａおよび８Ｂは、未処置マウスおよび、ＨＳＣ、抗ＰＤ１、またはＨＳＣと抗ＰＤ１の両方によって処置したマウスにおける、腫瘍微小環境内の黄色蛍光タンパク質（ＹＦＰ）／ＩＦＮγ＋／ＣＤ３＋リンパ球のフローサイトメトリー分析によって決定された、腫瘍微小環境における総ＣＤ３＋Ｔ細胞のインターフェロンγ（ＩＦＮγ）分泌細胞のパーセント（図８Ａ）、およびフローサイトメトリー分析の定量（図８Ｂ）を示す。
【図８Ｂ】図８Ａおよび８Ｂは、未処置マウスおよび、ＨＳＣ、抗ＰＤ１、またはＨＳＣと抗ＰＤ１の両方によって処置したマウスにおける、腫瘍微小環境内の黄色蛍光タンパク質（ＹＦＰ）／ＩＦＮγ＋／ＣＤ３＋リンパ球のフローサイトメトリー分析によって決定された、腫瘍微小環境における総ＣＤ３＋Ｔ細胞のインターフェロンγ（ＩＦＮγ）分泌細胞のパーセント（図８Ａ）、およびフローサイトメトリー分析の定量（図８Ｂ）を示す。
【００４７】
【図９】図９は、未処置または、ＨＳＣ、αＰＤ−１、またはＨＳＣとαＰＤ−１で処置された、頭蓋内腫瘍を受けた免疫応答性Ｃ５７ＢＬ／６マウスにおいて、Ｔ細胞活性化／炎症経路に関与する９２の遺伝子の発現を示す。
【００４８】
詳細な説明
以下の詳細な説明は、本開示の特定の側面の説明のためになされる。本開示の範囲または精神から逸脱することなく、他の側面が企図され、なされ得ることが理解されるべきである。したがって、以下の詳細な説明は、限定的な意味で解釈されるべきではない。本明細書で使用される科学用語および技術用語は、他に特定されない限り、当技術分野で一般的に使用される意味を有する。本明細書で提供される定義は、本明細書で頻繁に使用される特定の用語の理解を容易にするためのものであり、本開示の範囲を限定するものではない。単数形「a」、「an」および「the」は、内容が明確に別を指示しない限り、複数形を包含する。用語「または」は、内容が明確に別を指示しない限り、「および／または」を含む意味で一般に使用される。
【００４９】
がん．本明細書に記載の療法は、既存のまたは確立されたがん、すなわち、対象中に存在しており検出可能ながんの処置を含む。さらに、がんの発生を予防するための、前がん病変（すなわち、腺腫性ポリープまたは細胞異形成）の処置も想定される。本開示に従って処置可能ながんは、以下のがんを含む：黒色腫、扁平上皮癌、基底細胞癌、乳がん、頭頸部癌、甲状腺癌、軟部組織肉腫、骨肉腫、精巣腫瘍、前立腺がん、卵巣がん、膀胱がん、皮膚がん、脳腫瘍、神経膠芽細胞腫、髄芽細胞腫、上衣細胞腫、血管肉腫、血管内皮腫、肥満細胞腫、原発性肝臓がん、小細胞肺がん、非小細胞肺がん、膵臓がん、消化管がん、腎細胞癌、造血器新生物形成、リンパ腫、中皮腫、またはそれらの転移性がん。本開示の態様において、本開示において処置されるがんは、神経膠芽細胞腫、低悪性度神経膠腫、高悪性度神経膠腫、脳幹部神経膠腫、皮質神経膠芽細胞腫、小児脳腫瘍、および髄芽細胞腫を含む。本開示の態様において、がんは、浸潤性頭蓋内神経膠腫である。本開示の態様において、がんは、脳、肺、乳房、または黒色腫の転移性または難治性のがんである。本開示の態様において、がんは、非小細胞肺がん由来の転移性脳腫瘍、黒色腫由来の転移性脳腫瘍、または乳癌由来の転移性脳腫瘍である。本開示の態様において、がんは、脳幹部神経膠腫、皮質神経膠芽細胞腫、および髄芽細胞腫である。
【００５０】
感染症．本開示はまた、感染症の処置との関連においても有用である。一般に、日和見病原性微生物は、ウイルス、真菌、寄生生物、および細菌に分類され得る。ヒトの疾患を引き起こす例示的な病原性ウイルス微生物としては、（限定はされないが）、フィロウイルス、ヘルペスウイルス、肝炎ウイルス、レトロウイルス、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）、オルトミクソウイルス、パラミクソウイルス、トガウイルス、ピコルナウイルス、パポバウイルス、および胃腸炎ウイルスが挙げられる。重篤なヒト疾患を引き起こす例示的な病原性細菌としては、グラム陽性菌：Staphylococcus aureus、Staphylococcus epidermidis、Enterococcus faecalisおよびE.faecium、Streptococcus pneumoniae、およびグラム陰性菌：Pseudomonas aeruginosa、Burkholdia cepacia、Xanthomonas maltophila、Escherichia coli、エンテロバクター属菌、Klebsiella pneumoniae、およびサルモネラ属菌が挙げられる。ヒト疾患を引き起こす例示的な病原性原生生物としては、（限定はされないが）、マラリア例えばPlasmodium falciparumおよびM. ovale、トリパノソーマ症（睡眠病）例えばTrypanosoma cruzei、リーシュマニア症例えばLeischmania donovani、アメーバ症例えばEntamoeba histolyticaが挙げられる。ヒト疾患を引き起こすかまたはこれに関連する例示的な病原性真菌としては、（限定はされないが）、Candida albicans、Histoplasma neoformans、Coccidioides immitisおよびPenicillium marneffeiが挙げられる。態様において、感染症生物は、慢性感染症に関与するものである。特に重要な疾患は、肝炎、アデノウイルス、ＢＫなどのポリオーマウイルス、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）、単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）、呼吸器合胞体ウイルス（ＲＳＶ）、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）、エプスタイン−バールウイルス（ＥＢＶ）、インフルエンザＡ、Ｂ、およびＣ、水疱性口内炎ウイルス（ＶＳＶ）、水疱性口内炎ウイルス（ＶＳＶ）、メチシリン耐性黄色ブドウ球菌（ＭＲＳＡ）を含むブドウ球菌種、肺炎連鎖球菌を含む連鎖球菌種、および移植後感染症である。
【００５１】
抗体．抗体、または免疫グロブリンは、それぞれ約２００個のアミノ酸を含有する２つの同一の軽鎖（Ｌ鎖）、および一般にＬ鎖の少なくとも２倍の長さである２つの同一の重鎖（Ｈ鎖）を含有する、糖タンパク質である。抗体のパラトープは、抗原の特定のエピトープに特異的であり、それらの空間的相補性（結合）は、さらなる作用のために微生物を「標識する」か、またはその作用を直接中和する。抗体は、保存されたグリコシル化部位を含むその結晶性断片（Ｆｃ）領域を介して、免疫応答の他の成分と通信する。５つのＦｃ領域が存在し、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧおよびＩｇＭの５つの異なる抗体アイソタイプをもたらす。ＩｇＤは、抗原に曝露されていないＢ細胞上の抗原受容体として機能し、好塩基球および肥満細胞を活性化し、抗菌因子の産生をもたらす。ＩｇＧは４つの形態で発現され、侵入する病原体に対する抗体ベースの免疫の大部分を提供する。ＩｇＭは、Ｂ細胞の表面上に単量体として、および分泌型で五量体として発現される。ＩｇＭは、体液性（Ｂ細胞媒介性）免疫の初期段階の間、十分なレベルのＩｇＧが存在する前に、病原体を排除する。ＩｇＧはしばしば免疫療法に使用される。
【００５２】
抗体という用語は、最も広い意味で使用され、具体的には、例えば、単一モノクローナル抗体、ポリエピトープ特異性を有する抗体組成物、一本鎖抗体、および抗体の抗原結合断片を含む。抗体は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４のサブタイプ、ＩｇＡ（ＩｇＡ１およびＩｇＡ２を含む）、ＩｇＥ、ＩｇＤまたはＩｇＭなどの、任意の免疫グロブリンからの免疫グロブリン定常ドメインを含み得る。
【００５３】
いくつかの態様において、本明細書で使用される抗体および他の治療分子は、単離されてもよい。単離されるとは、抗体または他の生物学的製剤の文脈において、抗体または他の生物学的製剤がその天然環境から取出されているか、またはその自然状態から変化していることを意味する。このように、単離されたとは、分子がその天然の環境から取出された程度、またはその自然状態から変化した程度を必ずしも反映していない。しかしながら、ある程度まで、または意図された治療目的のために使用できる程度まで精製された、抗体または他の生物学的製剤は、「単離されている」と理解されるであろう。
【００５４】
本明細書で用いられる抗体は、ヒト化されている。非ヒト（例えばネズミ）抗体のヒト化形態は、キメラ免疫グロブリン（全長免疫グロブリンを含む）、免疫グロブリン鎖またはその断片（Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ'、Ｆ（ａｂ'）２、ｓｃＦｖ、または抗体の他の抗原結合サブ配列など）であって、非ヒト免疫グロブリンに由来する最小配列を含むものである。ヒト化抗体は、典型的には、レシピエントの相補性決定領域（ＣＤＲ）由来の残基が、マウス、ラット、またはウサギなどの非ヒト種（ドナー抗体）のＣＤＲ由来の残基によって置換されており、所望の特異性、親和性および能力を有する、ヒト免疫グロブリン（レシピエント抗体）を含む。いくつかの場合において、ヒト免疫グロブリンのＦｖフレームワーク残基は、対応する非ヒト残基によって置換される。ヒト化抗体はまた、レシピエント抗体にも、移入されたＣＤＲまたはフレームワーク配列にも見出されない残基を含み得る。一般に、ヒト化抗体は、ＣＤＲ領域のすべてまたは実質的にすべてが非ヒト免疫グロブリンのものに対応し、かつＦＲ領域のすべてまたは実質的にすべてがヒト免疫グロブリンコンセンサス配列のものである、少なくとも１つの、典型的には２つの可変ドメインのすべてまたは実質的にすべてを含むであろう。ヒト化抗体は最適には、免疫グロブリン定常領域（Ｆｃ）の少なくとも一部、典型的にはヒト免疫グロブリンのものを含む（Jones et al., Nature, 321:522-525 (1986)；Riechmann et al., Nature, 332:323- 327 (1988)；およびPresta, Curr. Op. Struct.  Biol., 2:593-596 (1992)）。抗体のＦｃ領域に対する修飾は十分に確立されており、抗体にその補体依存性細胞傷害性特性を失わせる修飾および細胞膜を横切る抗体の能力を増強する修飾を含む。
【００５５】
本明細書で用いられる抗体は、それらの標的に選択的に結合し、特に以下に結合する：プログラム・デス１（ＰＤ−１）、プログラム・デスリガンド−１（ＰＤ−Ｌ１）、細胞傷害性Ｔリンパ球関連抗原（ＣＴＬＡ）−４、Ｔ細胞活性化のＶドメインＩｇサプレッサー（ＶＩＳＴＡまたはＰＤ−Ｌ３）、プログラム・デスリガンド２（ＰＤ−Ｌ２）、インドールアミン２，３−ジオキシゲナーゼ（ＩＤＯ）、アルギナーゼ（ＡＲＧ１）、Ｂ７ファミリー阻害性リガンドＢ７−Ｈ３、Ｂ７ファミリー阻害性リガンドＢ７−Ｈ４、リンパ球活性化遺伝子３（ＬＡＧ３；ＣＤ２２３としても知られる）、２Ｂ４（ＣＤ２４４としても知られる）、ＢおよびＴリンパ球アテニュエーター（ＢＴＬＡ；ＣＤ２７２としても知られる）、Ｔ細胞膜タンパク質３（ＴＩＭ３；ＨＡＶｃｒ２としても知られる）、アデノシンＡ２ａ受容体（Ａ２ａＲ）、またはキラー阻害性受容体ファミリーのメンバー、例えばキラー細胞免疫グロブリン様受容体（ＫＩＲ）およびＣ型レクチン受容体。ＰＤ−Ｌ１は、ＰＤ−１のリガンドである。ＣＴＬＡ−４は、ＰＤ−１と同様に、免疫チェックポイント分子として機能する。ＶＩＳＴＡは、その細胞外ドメインに、ＰＤ−Ｌ１に対していくらかの相同性（配列相同性により約２５％）を有する、Ｉｇスーパーファミリー阻害リガンドである。
【００５６】
本開示の側面は、免疫チェックポイント分子、例えばＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１、ＣＴＬＡ−４、ＶＩＳＴＡ、ＰＤ−Ｌ２、ＩＤＯ、ＡＲＧ１、Ｂ７−Ｈ３、Ｂ７−Ｈ４、ＬＡＧ３、２Ｂ４、ＢＴＬＡ、ＴＩＭ３、Ａ２ａＲ、および／またはＫＩＲなどに結合および／または拮抗することができる、１つ以上の免疫チェックポイント阻害剤を使用または投与することに関する。免疫チェックポイント分子に選択的に結合する薬剤は、限定することなく、例えば、抗体またはその抗原結合断片、タンパク質またはペプチド、小分子、または核酸であり得る。核酸である免疫チェックポイント分子は、例えば、アンチセンス分子、一本鎖または二本鎖ＤＮＡオリゴヌクレオチド、一本鎖または二本鎖ＲＮＡオリゴヌクレオチド、ペプチド核酸（ＰＮＡ）、一本または二本鎖ＲＮＡｉ分子、ｓｈＲＮＡ、またはｓｉＲＮＡであることができる。小分子は、有機化合物薬物である。免疫チェックポイント分子に選択的に結合する薬剤は、免疫チェックポイント分子配列の核酸またはアミノ酸に結合することができる。免疫チェックポイント分子に選択的に結合する薬剤は、免疫チェックポイント分子の任意の領域に結合することができる。
【００５７】
免疫チェックポイント．免疫チェックポイントとは、自己寛容を維持し、末梢組織における生理学的免疫応答の持続時間および振幅を調節して、副次的な組織損傷を最小限に抑えるために重要な、免疫系に固定された阻害経路を指す。免疫チェックポイント分子は、免疫チェックポイントに対して刺激性または阻害性であり得る。本開示および特許請求の範囲は、「免疫チェックポイント分子」としての、免疫チェックポイントの阻害性分子を指す。免疫チェックポイント分子（例えば、ＰＤ１またはＣＴＬＡ−４）を遮断する薬剤による予備臨床所見は、有効な臨床応答を生じる可能性を有する抗腫瘍免疫を増強する機会を示唆する。本出願は、免疫チェックポイント阻害剤を用いた免疫チェックポイント遮断を、ＨＳＣＴおよび／またはＨＳＣ動員処置と組み合わせることにより、がんまたは感染症を有する対象における処置の効力を増強することを開示する。
【００５８】
免疫チェックポイント阻害剤および免疫チェックポイント遮断．免疫チェックポイント阻害剤は、Ｔ細胞およびいくつかのがん細胞などのいくつかの種類の免疫系細胞によって作られた免疫チェックポイント分子のシグナル伝達を遮断するタイプの薬物である。したがって免疫チェックポイント阻害剤は、免疫チェックポイントの遮断を引き起こすことができる。免疫チェックポイント分子（例えば、ＰＤ１）は、免疫応答のチェックを維持し続けることを助け、Ｔ細胞を、がん細胞を殺させないように保つことができる。これらの分子が遮断されると、免疫系の「ブレーキ」が解除され（免疫系の阻害が低減または遮断され）、Ｔ細胞はがん細胞をより良好に殺すことができる。Ｔ細胞またはがん細胞に見出されるチェックポイントタンパク質の例としては、ＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１およびＣＴＬＡ−４が挙げられる。いくつかの態様において、免疫チェックポイント分子は、タンパク質である。いくつかの態様において、免疫チェックポイント分子は、タンパク質をコードする核酸である。いくつかの態様において、免疫チェックポイント阻害剤は、免疫チェックポイント分子に結合および／または拮抗する。いくつかの態様において、免疫チェックポイント阻害剤は、造血幹細胞移植および／または造血幹細胞動員剤処置と組み合わせて使用されて、がんを有する対象を処置する。いくつかの態様において、免疫チェックポイント阻害剤は、造血幹細胞移植および／または造血幹細胞動員剤処置と組み合わせて使用されて、感染症を有する対象を処置する。
【００５９】
上述したように、本発明によれば、免疫チェックポイント遮断は、造血幹細胞（ＨＳＣ）移植／移入および／またはＨＳＣ動員との併用療法において、使用される。いくつかの態様において、疾患または疾患を有する対象を処置する方法は、ＨＳＣおよび／またはＨＳＣ動員剤を投与すること、プログラム・デス１（ＰＤ−１）、プログラム・デスリガンド１（ＰＤ−Ｌ１）、細胞傷害性Ｔリンパ球関連抗原４（ＣＴＬＡ−４）、および／またはＴ細胞活性化のＶドメインＩｇサプレッサー（ＶＩＳＴＡ）に結合および／または拮抗する薬剤を投与すること、を含む。本開示は、免疫チェックポイント遮断のための、ＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１、ＣＴＬＡ−４、および／またはＶＩＳＴＡの標的化に限定されない。他の阻害性チェックポイント分子も、ＨＳＣ移植および／またはＨＳＣ動員との併用療法において、免疫チェックポイント阻害剤により標的化されてもよく、これは例えば、限定されることなく、以下に結合および／または拮抗する薬剤である：プログラム・デスリガンド２（ＰＤ−Ｌ２）、インドールアミン２，３−デオキシゲナーゼ（ＩＤＯ）、アルギナーゼ（ＡＲＧ１）、Ｂ７ファミリー阻害性リガンドＢ７−Ｈ３、Ｂ７ファミリー阻害性リガンドＢ７−Ｈ４、リンパ球活性化遺伝子３（ＬＡＧ３；ＣＤ２２３としても知られる）、２Ｂ４（ＣＤ２４４としても知られる）、ＢおよびＴリンパ球アテニュエーター（ＢＴＬＡ；ＣＤ２７２としても知られる）、Ｔ細胞膜タンパク質３（ＴＩＭ３；ＨＡＶｃｒ２としても知られる）、アデノシンＡ２ａ受容体（Ａ２ａＲ）、キラー阻害性受容体ファミリーのメンバー（ＫＩＲ）、例えばキラー細胞免疫グロブリン様受容体（ＫＩＲ）およびＣ型レクチン受容体、ならびにシグナル伝達兼転写活性化因子（ＳＴＡＴ３）。いくつかの態様において、免疫チェックポイント分子は、例えば、ＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１、ＣＴＬＡ−４、ＶＩＳＴＡ、ＰＤ−Ｌ２、ＩＤＯ、ＡＲＧ１、Ｂ７−Ｈ３、Ｂ７−Ｈ４、ＬＡＧ３、２Ｂ４、ＢＴＬＡ、ＴＩＭ３、Ａ２ａＲ、ＳＴＡＴ３、またはＫＩＲである。免疫チェックポイント分子に結合および／または拮抗する薬剤は、免疫チェックポイント阻害剤である。
【００６０】
１つ以上の免疫チェックポイント阻害剤．１つ以上の免疫チェックポイント阻害剤は、１つ以上の異なる阻害剤を指す。それぞれの異なる阻害剤は異なる分子構造を有する。２つの異なる阻害剤は、同じ免疫チェックポイント分子に結合してもよく、またはそれぞれが異なる免疫チェックポイント分子に結合してもよい。
本明細書で使用される阻害剤またはアンタゴニストは、免疫チェックポイント分子の活性を阻害、低減、または遮断して、免疫チェックポイント分子が免疫系に及ぼす抑制効果を阻害する分子である。阻害剤またはアンタゴニストは、免疫チェックポイント分子、免疫チェックポイント分子の発現を制御する分子、または免疫チェックポイント分子の活性を媒介する免疫チェックポイント分子のリガンドに、直接結合することができる。阻害剤またはアンタゴニストは、抗体（ヒト化抗体を含む）、小分子、ペプチド、または核酸（例えば、アンチセンス分子、または一本鎖もしくは二本鎖ＲＮＡｉ分子）であってよい。免疫チェックポイント分子の活性は、免疫チェックポイントに対するその抑制効果とされる。免疫チェックポイント阻害剤は、免疫チェックポイント分子の活性を低下させるか、または遮断することができる。
【００６１】
例示的な免疫チェックポイント分子およびアンタゴニスト．
プログラム・デス１（ＰＤ−１）．ヒトにおいて、プログラム細胞死タンパク質１（ＰＤ−１）は、ＰＤＣＤ１遺伝子によってコードされる。ＰＤＣＤ１はまた、ＣＤ２７９（分化クラスター２７９）として指定されている。この遺伝子は、免疫グロブリンスーパーファミリーの細胞表面膜タンパク質をコードする。ＰＤ−１は、２８８アミノ酸の細胞表面タンパク質分子である。ＰＤ−１は、活性化されたＴ細胞、Ｂ細胞、およびマクロファージの表面上に発現される。ＰＤ−１はプロＢ細胞において発現され、それらの分化において役割を果たすと考えられている。T. Shinohara et al., Genomics 23 (3): 704-6 (1995)を参照のこと。ＰＤ−１は、Ｔ細胞レギュレーターの拡大ＣＤ２８／ＣＴＬＡ−４ファミリーのメンバーである。（Y. Ishida et al., " EMBO J.  11 (11): 3887-95, (1992)）。ＰＤ−１は、免疫応答をネガティブに調節し得る。ＰＤ−１は、自己免疫および末梢組織におけるＴ細胞の活性を、感染に対する炎症反応時に制限する。
【００６２】
ＰＤ−１は、Ｂ７ファミリーのメンバーである２つのリガンド、ＰＤ−Ｌ１およびＰＤ−Ｌ２を有する。ＰＤ−Ｌ１タンパク質は、ＬＰＳおよびＧＭ−ＣＳＦ処置に応答してマクロファージおよび樹状細胞（ＤＣ）上で、ならびにＴＣＲおよびＢ細胞受容体シグナル伝達時にＴ細胞およびＢ細胞上で、上方制御されるが、一方休止マウスでは、ＰＤ−Ｌ１ ｍＲＮＡは、心臓、肺、胸腺、脾臓、および腎臓で検出することができる。ＰＤ−Ｌ１は、ＩＦＮ−γによる処置時に、ＰＡ１骨髄腫、Ｐ８１５肥満細胞腫、およびＢ１６黒色腫を含むほとんどすべてのマウス腫瘍細胞株で発現される。ＰＤ−Ｌ１は、いくつかのがんによって高度に発現されることが見出されており、いくつかのＰＤ−１アンタゴニストが、がんの処置のために開発されているか、または承認されている。ＰＤ−Ｌ２発現はより制限され、主にＤＣおよびいくつかの腫瘍系統によって発現される。
【００６３】
プログラム・デス１（ＰＤ−１）アンタゴニスト．本明細書で使用されるＰＤ−１アンタゴニストは、ＰＤ−１タンパク質またはＰＤ−１タンパク質をコードする遺伝子もしくは核酸に結合し、ＰＤ−１活性化を阻害または防止する分子である。理論に束縛されることを望むものではないが、かかる分子は、ＰＤ−１とそのリガンドＰＤ−Ｌ１および／またはＰＤ−Ｌ２との相互作用を、低減または遮断すると考えられている。いくつかの態様において、ＰＤ−１アンタゴニストは、ＨＳＣＴおよび／またはＨＳＣ動員剤処置と組み合わせた場合に、単独で投与された場合よりも、ＰＤ−１アンタゴニストに暴露されていない細胞または生物と比較して、細胞または生物におけるＰＤ−１活性を低減し得る。
【００６４】
ＰＤ−１活性は、ＰＤ−１に選択的に結合し、その活性を遮断する抗体によって妨害され得る。ＰＤ−１の活性はまた、ＰＤ−１に結合する抗体以外の分子によっても、阻害または遮断され得る。かかる分子は小分子であってもよく、または、ＰＤ−１に結合するがＰＤ−１を活性化しない、ＰＤ−Ｌ１およびＰＤ−Ｌ２のペプチド模倣物であってもよい。ＰＤ−１活性に拮抗する分子としては、米国特許公開20130280265、20130237580、20130230514、20130109843、20130108651、20130017199、および20120251537、2011/0271358、EP 2170959B1に記載されているものが挙げられ、これらの開示全体は参照により本明細書に組み込まれる。M. A. Curran, et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 107, 4275 (2010)；S. L. Topalian, et al., New Engl. J. Med. 366, 2443 (2012)；J. R. Brahmer, et al., New Engl. J. Med. 366, 2455 (2012)；およびD.E.  Dolan et al., Cancer Control 21, 3 (2014)も参照のこと、これらのすべてはその全体が参照により本明細書に組み込まれる。本明細書において、例示的なＰＤ−１アンタゴニストとしては、以下が挙げられる：ニボルマブ、これはＢＭＳ−９３６５５８、OPDIVO（登録商標）（Bristol-Meyers Squibb、およびＭＤＸ−１１０６またはＯＮＯ−４５３８としても知られる）としても知られており、ＰＤ−１に対する完全ヒトＩｇＧ４モノクローナル抗体である；ピジリズマブ、これはＣＴ−０１１（CureTech）としても知られており、ＰＤ−１に結合するヒト化ＩｇＧ１モノクローナル抗体である；ＭＫ−３４７５（Merck、およびＳＣＨ ９００４７５としても知られる）、ＰＤ−１に結合するＩｇＧ４抗体；およびペンブロリズマブ（Merck、およびＭＫ−３４７５、ランブロリズマブ、またはKEYTRUDA（登録商標）としても知られる）、ＰＤ−１に結合するヒト化ＩｇＧ４κモノクローナル抗体；ＭＥＤＩ−０６８０（AstraZeneca／MedImmune）、ＰＤ−１に結合するモノクローナル抗体；ＲＥＧＮ２８１０（Regeneron／Sanofi）、ＰＤ−１に結合するモノクローナル抗体。別の例示的なＰＤ−１アンタゴニストは、ＡＭＰ−２２４（Glaxo Smith KlineおよびAmplimmune）であり、これは、ＰＤ−１リガンドであるプログラム細胞死リガンド２（ＰＤ−Ｌ２）の細胞外ドメインおよびヒトＩｇＧ１のＦｃ領域から構成される、組換え融合タンパク質であり、ＰＤ−１に結合する。ＰＤ−１をコードするＤＮＡまたはｍＲＮＡに結合することを妨げる薬剤も、ＰＤ−１阻害剤として作用することができる。例としては、小阻害性抗ＰＤ−１ＲＮＡｉ、抗ＰＤ−１アンチセンスＲＮＡ、またはドミナントネガティブタンパク質が挙げられる。ＰＤＬ−２融合タンパク質ＡＭＰ−２２４（Glaxo Smith KlineおよびAmplimmuneによって共同開発された）は、ＰＤ−１に結合して遮断すると考えられている。いくつかの態様において、抗ＰＤ−１抗体は、造血幹細胞（ＨＳＣ）移入および／またはＨＳＣ動員と組み合わせた処置のために、例えば抗ＰＤ−Ｌ１、抗ＣＴＬＡ−４、および／または抗ＶＩＳＴＡ処置などの追加の免疫チェックポイント遮断とのさらなる組み合わせにおいて、使用し得る。
【００６５】
プログラム・デス−リガンド１（ＰＤ−Ｌ１）．ヒトにおいて、Ｂ７ホモログ１（Ｂ７−Ｈ１）または分化クラスター２７４（ＣＤ２７４）としても知られるプログラム・デスリガンド１（ＰＤ−Ｌ１）は、ＣＤ２７４遺伝子によってコードされる、４０ｋＤａの１型膜貫通タンパク質である。外来抗原は通常、抗原特異的ＣＤ８＋Ｔ細胞などの抗原特異的Ｔ細胞の増殖を引き起こす免疫応答を誘導する。ＰＤ−Ｌ１は、かかる免疫応答を遮断または低下させる、免疫チェックポイント阻害剤である。ＰＤ−Ｌ１は、妊娠、組織同種移植、自己免疫疾患、および肝炎およびがん等の他の疾患状態などの事象の間の免疫系の抑制において、主要な役割を果たし得る。ＰＤ−Ｌ１リガンドは、活性化Ｔ細胞、Ｂ細胞、および骨髄細胞上に見られるその受容体ＰＤ−１に結合し、これによって活性化または阻害を調節する。ＰＤ−１に加えて、ＰＤ−Ｌ１もまた、共刺激分子ＣＤ８０（Ｂ７−１）に対する親和性を有する。ＩＦＮ−γ刺激に際して、ＰＤ−Ｌ１は、Ｔ細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、マクロファージ、骨髄性樹状細胞（ＤＣ）、Ｂ細胞、上皮細胞および血管内皮細胞上で発現される。
【００６６】
ＰＤ−Ｌ１アンタゴニスト．本明細書で使用されるＰＤ−Ｌ１アンタゴニストは、ＰＤ−Ｌ１タンパク質またはＰＤ−Ｌ１タンパク質をコードする遺伝子もしくは核酸に結合し、ＰＤ−１活性化を阻害または防止する分子である。理論に束縛されることを望むものではないが、かかる分子は、ＰＤ−Ｌ１とＰＤ−１との相互作用を、低減または遮断すると考えられている。ＰＤ−Ｌ１活性は、ＰＤ−Ｌ１に選択的に結合してその活性を遮断する分子によって遮断され得る。いくつかの態様において、ＰＤ−Ｌ１アンタゴニストは、ＨＳＣＴおよび／またはＨＳＣ動員剤処置と組み合わせた場合に、単独で投与された場合よりも、ＰＤ−１アンタゴニストに暴露されていない細胞または生物と比較して、細胞または生物におけるＰＤ−Ｌ１活性を低減し得る。抗ＰＤ−Ｌ１抗体は、ＰＤ−Ｌ１と、ＰＤ−１およびＢ７−１（ＣＤ８０としても知られる）との間の相互作用を遮断する。遮断とは、かかるＰＤ−Ｌ１結合を介して媒介される阻害シグナルの伝達を、阻害または防止することを意味する。ＰＤ−Ｌ１アンタゴニストとしては、例えば、以下が挙げられる：ＢＭＳ−９３６５５９、これはＭＤＸ−１１０５（Bristol-Meyers Squibb）としても知られており、ＰＤ−Ｌ１に対する完全ヒト高親和性免疫グロブリン（Ｉｇ）Ｇ４モノクローナル抗体である；ＭＰＤＬ３２８０Ａ、これはＲＧ７４４６またはアテゾリズマブ（Genentech／Roche）としても知られており、ＰＤ−Ｌ１を標的とする操作されたヒトモノクローナル抗体である；ＭＳＢ００１０７１８Ｃ、これはアベルマブ（Merck）としても知られており、ＰＤ−Ｌ１に結合する完全ヒトＩｇＧ１モノクローナル抗体である；および、ＭＥＤＩ４７３（AstraZeneca／MedImmune）、これはその受容体へのＰＤ−Ｌ１結合を遮断する、ヒト免疫グロブリン（Ｉｇ）Ｇ１κモノクローナル抗体である。ＰＤ−Ｌ１をコードするＤＮＡまたはｍＲＮＡに結合する薬剤はまた、ＰＤ−Ｌ１阻害剤としても作用することができ、例えば小阻害性抗ＰＤ−Ｌ１ ＲＮＡｉ、小阻害性抗ＰＤ−Ｌ１ ＲＮＡ、抗ＰＤ−Ｌ１アンチセンスＲＮＡ、またはドミナントネガティブＰＤ−Ｌ１タンパク質である。ＰＤ−Ｌ１に拮抗するアンタゴニストまたは薬剤、例えばＰＤ−Ｌ１抗体またはＰＤ−Ｌ１アンタゴニストとしては、限定はされないが、前述したものおよび、Stewart et al., 2015, 3(9):1052-62；Herbst et al., 2014, Nature Volume: 515:Pages: 563-567；Brahmer et al., N Engl J Med 2012; 366:2455-2465；US8168179；US20150320859；および／またはUS20130309250に開示されているもののいずれかが含まれ得る；これらはすべて、本明細書に参照により組み込まれる。臨床試験において、抗ＰＤ−Ｌ１抗体による処置は、抗ＰＤ−１抗体による処置よりも有害事象が少なかった（Shih et al., 2014）。いくつかの態様において、抗ＰＤ−Ｌ１抗体は、造血幹細胞（ＨＳＣ）移入および／またはＨＳＣ動員と組み合わせた処置のために、例えば抗ＰＤ−１、抗ＣＴＬＡ−４、および／または抗ＶＩＳＴＡ処置などの追加の免疫チェックポイント遮断とのさらなる組み合わせにおいて、使用し得る。
【００６７】
細胞傷害性Ｔリンパ球関連抗原４（ＣＴＬＡ−４）．ＣＴＬＡ−４（ＣＴＬＡ−４または分化クラスター１５２（ＣＤ１５２）としても知られる）は、ヒトにおいてＣＴＬＡ−４遺伝子によってコードされる、膜貫通糖タンパク質である。ＣＴＬＡ−４は、免疫グロブリンスーパーファミリーのメンバーであり、ヘルパーＴ細胞の表面上に発現し、制御性Ｔ細胞に存在して、免疫機能にとって重要となり得る。ＣＴＬＡ−４は、相同なＣＤ２８と同様に、Ｂ７分子、特に、抗原提示細胞（ＡＰＣ）上のＣＤ８０／Ｂ７−１およびＣＤ８６／Ｂ７−２に結合し、それによって阻害シグナルをＴ細胞に送る。ＣＴＬＡ−４は、免疫系を阻害する免疫チェックポイントとして機能し、免疫寛容の維持に重要である。
【００６８】
ＣＴＬＡ−４アンタゴニスト．本明細書で使用されるＣＴＬＡ−４アンタゴニストは、ＣＴＬＡ−４タンパク質またはＣＴＬＡ−４タンパク質をコードする遺伝子もしくは核酸に結合して、ＣＴＬＡ−４活性化を阻害または防止する分子である。理論に束縛されることを望むものではないが、かかる分子は、ＣＴＬＡ−４とそのリガンド、例えばＢ７分子ＣＤ８０／Ｂ７−１およびＣＤ８６／Ｂ７−２との相互作用を、低減または遮断すると考えられる。ＣＴＬＡ−４活性は、ＣＴＬＡ−４に選択的に結合してその活性を遮断するか、またはそのカウンター受容体、例えばＣＤ８０、ＣＤ８６などに選択的に結合してＣＴＬＡ−４の活性を遮断する分子によって、遮断され得る。遮断するとは、ＣＴＬＡ−４を介した阻害シグナルの伝達を阻害または防止することを意味する。いくつかの態様において、抗ＣＴＬＡ−４抗体は、造血幹細胞（ＨＳＣ）移入および／またはＨＳＣ動員と組み合わせた処置のために、例えば抗ＰＤ−１、抗ＣＴＬＡ−４、および／または抗ＶＩＳＴＡ処置などの追加の免疫チェックポイント遮断とのさらなる組み合わせにおいて、使用し得る。
ＣＴＬＡ−４アンタゴニストとしては、例えば、ＣＤ８０、ＣＤ８６および／またはＣＴＬＡ−４に対する阻害抗体；ＣＤ８０、ＣＤ８６、およびＣＴＬＡ−４の小分子阻害剤；ＣＤ８０、ＣＤ８６、および／またはＣＴＬＡ−４に対するアンチセンス分子；ＣＤ８０、ＣＤ８６、および／またはＣＴＬＡ−４に対するアドネクチン；およびＣＤ８０、ＣＤ８６、および／またはＣＴＬＡ−４のＲＮＡｉ阻害剤（一本鎖および二本鎖の両方）が挙げられる。
【００６９】
適切なＣＴＬＡ−４アンタゴニストおよび／または抗ＣＴＬＡ−４抗体としては、ヒト化抗ＣＴＬＡ抗体、例えばＭＤＸ−０１０／イピリムマブ（Bristol-Meyers Squibb）、トレメリムマブ／ＣＰ−６７５，２０６（Pfizer；AstraZeneca）、および以下に記載の抗体が含まれる：ＰＣＴ刊行物WO 2001/014424、ＰＣＴ刊行物WO 2004/035607、米国公開第2005/0201994号、欧州特許第1212422 B1号、米国特許第5,811,097号、第5,855,887号、第6,051,227号、第6,984,720号、第7,034,121号、第8,475,790号、米国公開第2002/0039581号および／または2002/086014号；これらの全開示は、本明細書に参照により組み込まれる。本開示の方法において使用することができる他の抗ＣＴＬＡ−４抗体および／またはＣＴＬＡ−４アンタゴニストとしては、例えば、以下に記載のものが含まれる：Hurwitz et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 95(17):10067-10071 (1998)；Camacho et al., J. Clin. Oncology, 22(145): Abstract No. 2505 (2004)（抗体CP-675206）；Mokyr et al., Cancer Res., 58:5301-5304 (1998)、およびLipson and Drake, Clin Cancer Res; 17(22) November 15, 2011；US8318916；および／またはEP1212422B1；これらはすべて、その全体が本明細書に参照により組み込まれる。
【００７０】
Ｔ細胞活性化のＶドメインＩｇサプレッサー（ＶＩＳＴＡ）．Ｔ細胞活性化のＶドメインＩｇサプレッサー（ＶＩＳＴＡ）（ＰＤ−Ｈ１、ＰＤ−１ホモログ、またはＤｉｅｓ１としても知られる）は、Ｔ細胞機能のネガティブ調節因子である。ＶＩＳＴＡは、１つのＩｇ−Ｖ様ドメインを有しかつその配列がＣＤ２８およびＢ７ファミリーのメンバーのＩｇ−Ｖドメインに類似する、７つのエキソンからなる３０９ａａ Ｉ型膜貫通タンパク質である。ＶＩＳＴＡは、腫瘍微小環境（ＴＭＥ）および造血細胞で高度に発現される。これはまた、マクロファージ、樹状細胞、好中球、ナチュラルキラー細胞、およびナイーブおよび活性化Ｔ細胞でも発現される。その発現は、骨髄性抗原提示細胞（ＡＰＣ）およびＴ細胞上で高度に制御され、一方低レベルは、ＣＤ４＋Ｔ細胞、ＣＤ８＋Ｔ細胞およびＴreg細胞上に見出される。ＶＩＳＴＡは、ＰＤ−１リガンドであるＰＤ−Ｌ１といくつかの配列相同性を示すが、これら２つの免疫チェックポイント阻害剤は構造的に異なり、異なるシグナル伝達経路を有する。ＶＩＳＴＡの遮断は、マウスにおいて抗腫瘍免疫応答を増強することが示されているが、一方ヒトにおいては、関連するＰＤ−１経路の遮断は、臨床的免疫療法試験において大きな可能性を示している。ＶＩＳＴＡは、Ｔ細胞の活性化を抑制するネガティブチェックポイント調節因子であり、その遮断は、ヒトのがんに対する有効な免疫療法戦略となり得る。（Wang et al., 2011. JEM. 208(3):577-92.；Lines et al., 2014. Cancer Res. 74(7):1924-32.；Kondo et al. 2015. J. of Immuno.V194.；WO2011120013；US20140105912；US20140220012；US20130177557、US20130177557；これらの全体は、参照により本明細書に組み込まれる）。
【００７１】
ＶＩＳＴＡアンタゴニスト．本明細書で使用されるＶＩＳＴＡアンタゴニストは、ＶＩＳＴＡタンパク質またはＶＩＳＴＡタンパク質をコードする遺伝子もしくは核酸に結合し、ＶＩＳＴＡ活性化を阻害または防止する分子である。理論に束縛されることを望むものではないが、かかる分子は、ＶＩＳＴＡとそのリガンド（単数または複数）との相互作用を、低減または遮断すると考えられている。ＶＩＳＴＡ活性は、ＶＩＳＴＡに選択的に結合してその活性を遮断する分子によって、遮断され得る。ＶＩＳＴＡアンタゴニストである分子または薬剤としては、ＶＩＳＴＡに結合するペプチド、ＶＩＳＴＡに対するアンチセンス分子、ＶＩＳＴＡを分解または阻害するために標的化された一本鎖または二本鎖ＲＮＡｉ分子、ＶＩＳＴＡの小分子阻害剤、抗ＶＩＳＴＡ抗体、ＶＩＳＴＡに対する阻害抗体、およびＶＩＳＴＡに選択的に結合して阻害するヒト化抗体が含まれる。ＶＩＳＴＡのアンタゴニストまたはＶＩＳＴＡに拮抗する薬剤、例えば抗ＶＩＳＴＡ抗体およびＶＩＳＴＡアンタゴニストは、限定はされないが、以下に開示されたもののいずれかを含み得る：Liu et al. 2015. PNAS. 112(21):6682-6687；Wang et al., 2011. JEM. 208(3):577-92；Lines et al., 2014. Cancer Res. 74(7):1924-32；Kondo et al. 2015. J. of Immuno.V194；WO2015097536、EP2552947、WO2011120013、US20140056892、US8236304, WO2014039983、US20140105912、US20140220012、US20130177557；WO2015191881；US20140341920；CN105246507；および／またはUS20130177557、これらはすべて、その全体が本明細書中に参照により組み込まれる。いくつかの態様において、抗ＶＩＳＴＡ抗体は、造血幹細胞（ＨＳＣ）移入および／またはＨＳＣ動員と組み合わせた処置のために、例えば抗ＰＤ−１、抗ＣＴＬＡ−４、および／または抗ＶＩＳＴＡ処置などの追加の免疫チェックポイント遮断とのさらなる組み合わせにおいて、使用し得る。
【００７２】
他の免疫抑制分子および免疫チェックポイント阻害剤．ＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１、ＣＴＬＡ−４、およびＶＩＳＴＡ以外の分子は、造血幹細胞および／または造血幹細胞動員剤の処置と組み合わせた、免疫チェックポイント分子に結合および／または拮抗する１つ以上の免疫チェックポイント阻害剤／薬剤により、標的化されてもよい。いくつかの態様において、１つ以上の免疫チェックポイント阻害剤はそれぞれ、ＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１、ＣＴＬＡ−４、ＶＩＳＴＡ、ＰＤ−Ｌ２、ＩＤＯ、ＡＲＧ１、Ｂ７−Ｈ３、Ｂ７−Ｈ４、ＬＡＧ３、２Ｂ４、ＢＴＬＡ、ＴＩＭ３、Ａ２ａＲ、ＫＩＲ、および／またはＳＴＡＴ３の、アンタゴニストである。
【００７３】
プログラム・デスリガンド２（ＰＤ−Ｌ２）．ヒトＰＤ−Ｌ２は、Ｂ７樹状細胞分子Ｂ７−ＤＣ、Ｂｔｄｃ、ＰＤ−１リガンド２、ＰＤ−１リガンド２、ＰＤＣＤ１リガンド２、ブチロフィリンＢ７−ＤＣ、およびｂＡ５７４Ｆ１１．２としても知られており、これは、ＰＤＣＤ１ＬＧ２遺伝子（分化クラスター２７３／ＣＤ２７３としても知られる）によってコードされるタンパク質である。ＰＤ−Ｌ２は主に、抗原提示細胞、Ｔ細胞および他の免疫細胞、およびいくつかの非免疫細胞によって誘導可能な様式で、主にＴｈ２関連サイトカインを介して発現される、阻害性分子である。検討のために、Rozali et al., Clinical and Developmental Immunology, 2012 (2012)を参照のこと。ＰＤ−Ｌ２によるＰＤ−１の関与は、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）媒介性の増殖およびＣＤ４＋Ｔ細胞によるサイトカイン産生を、劇的に阻害する。低抗原濃度では、ＰＤ−Ｌ２−ＰＤ−１相互作用は、強力なＢ７−ＣＤ２８シグナルを阻害する。対照的に、高抗原濃度では、ＰＤ−Ｌ２−ＰＤ−１相互作用は、サイトカイン産生を低減するが、Ｔ細胞の増殖を阻害しない（Latchman et al., Nature Immunology, 2(3):261-268 (2001)）。
本明細書で使用されるＰＤ−Ｌ２アンタゴニストは、ＰＤ−Ｌ２タンパク質またはＰＤ−Ｌ２タンパク質をコードする遺伝子もしくは核酸に結合し、ＰＤ−Ｌ２活性化を阻害または防止する分子である。理論に束縛されることを望むものではないが、かかる分子は、ＰＤ−Ｌ２とそのリガンド（単数または複数）（例えばＰＤ−１）との相互作用を、低減または遮断すると考えられている。
【００７４】
インドールアミン２，３−ジオキシゲナーゼ（ＩＤＯ）．ＩＤＯは、ＩＮＤＯおよびＩＤＯ−１としても知られており、これはインドールアミン２，３−ジオキシゲナーゼ（ＩＤＯ）（トリプトファンのＮ−ホルミル−キヌレニンへの異化作用の第１段階および律速段階を触媒するヘム酵素）をコードする遺伝子である。ＩＤＯは、腫瘍細胞および浸潤骨髄細胞によって発現される免疫阻害性分子である、細胞質ゾル代謝酵素である。ＩＤＯ酵素は、種々の腫瘍細胞型および抗原提示細胞（ＡＰＣ）によって過剰発現され、トリプトファン異化およびトリプトファンのキヌレニンへの変換に関与する。この酵素は、Ｄ−トリプトファン、Ｌ−トリプトファン、５−ヒドロキシ−トリプトファン、トリプタミン、およびセロトニンを含む、複数のトリプトファン基質に作用する。この酵素は、様々な病態生理学的プロセス、例えば抗菌および抗腫瘍防御、神経病理学、免疫調節および抗酸化活性などにおいて、役割を果たすと考えられている。樹状細胞、単球およびマクロファージにおけるその発現を通して、この酵素は、必須アミノ酸トリプトファンの細胞周囲異化によってＴ細胞の挙動を調節する。ＩＤＯ酵素は、競合阻害剤または自殺基質として作用するその基質の分子類似体により、腫瘍内炎症を増強するために阻害することができる。多くのがんにおいて抑制される免疫系の活性化は、ＩＤＯ１発現腫瘍細胞に対する細胞傷害性Ｔリンパ球（ＣＴＬ）応答を誘導し得る。トリプトファン除去は、Ｔリンパ球の増殖および活性化を阻害し、Ｔ細胞抑制によって引き起こされる免疫抑制に関連する。
【００７５】
本明細書で使用されるＩＤＯアンタゴニストは、ＩＤＯタンパク質またはＩＤＯタンパク質をコードする遺伝子もしくは核酸に結合し、ＩＤＯ活性化を阻害または防止する分子である。理論に束縛されることを望むものではないが、かかる分子は、ＩＤＯの活性を低下させるか、または遮断すると考えられている。例示的なＩＤＯアンタゴニストは、例えば、ＩＤＯ阻害剤エパカドスタット、ＮＬＧ９１９、およびインドールアミン２，３−ジオキシゲナーゼペプチドワクチンである。
【００７６】
エパカドスタットは、経口的に利用可能なヒドロキシアミジン、およびインドールアミン２，３−ジオキシゲナーゼ（ＩＤＯ１）の阻害剤であり、潜在的な免疫調節および抗腫瘍活性を有する。エパカドスタットは、トリプトファンのキヌレニンへの酸化を担う酵素ＩＤＯ１を標的とし、これに結合する。腫瘍細胞においてＩＤＯ１を阻害し、キヌレニンを減少させることにより、エパカドスタットは、樹状細胞（ＤＣ）、ＮＫ細胞およびＴリンパ球を含む様々な免疫細胞の増殖および活性化、ならびにインターフェロン（ＩＦＮ）産生、および腫瘍関連調節性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）の低減を、増加および回復させる。
【００７７】
ＮＬＧ９１９は、インドールアミン２，３−ジオキシゲナーゼ１（ＩＤＯ１）の経口的に利用可能な阻害剤であり、潜在的な免疫調節活性および抗腫瘍活性を有する。投与されると、ＮＬＧ９１９は、必須アミノ酸トリプトファンのキヌレニンへの酸化を担うサイトゾル酵素であるＩＤＯ１を標的とし、これに結合する。腫瘍細胞においてＩＤＯ１を阻害し、キヌレニンを減少させることにより、この薬剤はトリプトファンレベルを上昇させ、樹状細胞（ＤＣ）、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、Ｔリンパ球を含む様々な免疫細胞の増殖および活性化を回復させ、腫瘍関連調節性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）の低減を引き起こす。
【００７８】
インドールアミン２，３−ジオキシゲナーゼペプチドワクチンは、免疫調節酵素インドールアミン２，３−ジオキシゲナーゼ（ＩＤＯ）に対するペプチドワクチンであり、潜在的な免疫調節活性および抗腫瘍活性を有する。インドールアミン２，３−ジオキシゲナーゼペプチドワクチンによるワクチン接種は、免疫系を活性化して、ＩＤＯ発現細胞に対する免疫応答を誘導することができる。これは、樹状細胞（ＤＣ）、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、およびＴリンパ球を含む様々な免疫細胞の増殖および活性化を増加および回復させ、ＩＤＯ発現腫瘍細胞を根絶し得る。
【００７９】
アルギナーゼ（ＡＲＧ１）．ＡＲＧ１は、免疫阻害性分子である別の代謝酵素である。これは、骨髄由来のサプレッサー細胞によって産生される。アルギナーゼは、アルギニンのオルニチンおよび尿素への加水分解を触媒する。哺乳動物アルギナーゼの少なくとも２つのアイソフォームが存在し（Ｉ型およびＩＩ型）、これらは、組織分布、細胞下局在、免疫学的交差反応性、および生理学的機能が異なる。この遺伝子によってコードされるＩ型アイソフォームは、細胞質ゾル酵素であり、主に肝臓で尿素サイクルの構成要素として発現される。この酵素の遺伝的欠損は、高アンモニア血症を特徴とする常染色体劣性疾患であるアルギニン血症をもたらす。異なるアイソフォームをコードする２つの転写バリアントが、この遺伝子について見出されている。
【００８０】
本明細書で使用されるＡＲＧ１アンタゴニストは、ＡＲＧ１タンパク質またはＡＲＧ１タンパク質をコードする遺伝子もしくは核酸に結合し、ＡＲＧ１活性化を阻害または防止する分子である。理論に束縛されることを望むものではないが、かかる分子は、ＡＲＧ１の活性を低減または遮断すると考えられている。アルギナーゼ酵素は、競合阻害剤または自殺基質として作用するその基質の分子類似体により、腫瘍内炎症を増強するために阻害することができる。
Ｂ７ファミリー阻害性リガンドＢ７−Ｈ３およびＢ７−Ｈ４．Ｂ７ファミリーメンバーおよびその既知のリガンドは、免疫グロブリンスーパーファミリーに属する。Ｂ７ファミリーは、共刺激性および阻害性受容体を有する。多数のＢ７ファミリー阻害性リガンド、例えばＢ７−Ｈ３（ＣＤ２７６としても知られる）およびＢ７−Ｈ４（Ｂ７−Ｓ１、Ｂ７ｘおよびＶＣＴＮ１としても知られる）などは、定義された受容体をまだ有していないが、マウスノックアウト実験は、これらのリガンドについての免疫阻害の役割を支持する。Ｂ７−Ｈ３およびＢ７−Ｈ４は、腫瘍細胞または腫瘍浸潤細胞上で上方制御される。Ｂ７−Ｈ３は、腫瘍脈管構造の内皮細胞上で上方制御され得、またＢ７−Ｈ４は、腫瘍関連マクロファージ上で発現されることが報告されている。Ｂ７−Ｈ４は、腫瘍細胞および腫瘍関連マクロファージによって発現され、腫瘍逃避（tumor escape）に役割を果たす。がんの前臨床マウスモデルは、多くの個々の免疫チェックポイントＢ７ファミリーのリガンドまたは受容体の遮断が、抗腫瘍免疫を増強することができ、協調的に発現される受容体の二重遮断が、相加的または相乗的抗腫瘍活性を生じさせることを示している。多数のこれらの免疫チェックポイント標的のための阻害剤／アンタゴニストは、臨床に入るか、または積極的に開発されている。
【００８１】
本明細書で使用されるＢ７ファミリーメンバーアンタゴニストは、Ｂ７ファミリーメンバータンパク質またはＢ７ファミリーメンバータンパク質をコードする遺伝子もしくは核酸に結合し、Ｂ７ファミリーメンバーの活性化を阻害または防止する分子である。理論に束縛されることを望むものではないが、かかる分子は、Ｂ７ファミリーメンバー、例えばＢ７−Ｈ３またはＢ７−Ｈ４と、そのリガンド（単数または複数）との相互作用を、低減または遮断すると考えられている。例示的なＢ７−Ｈ３アンタゴニストとしては、例えば、エノブリツズマブ（MacroGenics、ＭＧＡ２７１としても知られる）、これはＢ７−Ｈ３を標的とするＦｃ最適化モノクローナル抗体であり、およびＭＧＤ００９、これはＢ７−Ｈ３とＣＤ３を標的とする二重親和性再標的化（ＤＡＲＴ（登録商標））分子である（MacroGenics）、が挙げられる。遮断抗体または小分子阻害剤は、例えば、ＬＡＧ３、２Ｂ４、ＢＴＬＡ、ＴＩＭ３、Ａ２ａＲ、およびキラー阻害性受容体ファミリー、本開示の文脈においてこれらに結合および／または拮抗する薬剤により標的化され得る分子について、現在入手可能である。
【００８２】
リンパ球活性化遺伝子３（ＬＡＧ３）．ＬＡＧ３（ＣＤ２３３としても知られる）は、免疫グロブリンスーパーファミリー（ＩｇＳＦ）に属し、４つの細胞外Ｉｇ様ドメインを含む。これは、主要組織適合複合体（ＭＨＣ）クラスＩＩに結合する。腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）上のＬＡＧ−３発現は、腫瘍媒介性の免疫抑制に関連する。ＬＡＧ３は、ＴＲｅｇ細胞の機能を増強する役割を有することが示されている。ＬＡＧ３は、ＴＲｅｇ細胞に対するその役割から独立して、ＣＤ８＋エフェクターＴ細胞機能を阻害する。ＬＡＧ３の既知のリガンドは、主要組織適合複合体（ＭＨＣ）クラスＩＩである。ＭＨＣクラスＩＩ分子は、いくつかの上皮癌で、一般にＩＦＮγに応答して上方制御され、腫瘍浸潤マクロファージおよび樹状細胞上で発現される。Ｔ細胞応答のＬＡＧ３媒介性の阻害における、ＬＡＧ３−ＭＨＣクラスＩＩ相互作用の役割は不明であり、なぜならば、ＬＡＧ３−ＭＨＣクラスＩＩ相互作用を遮断しないＬＡＧ３抗体がそれでも、Ｔ細胞増殖およびエフェクター細胞機能をin vitroおよびin vivoで増強するからである。この相互作用は、ＴＲｅｇ細胞機能を増強するＬＡＧ３の役割にとって、最も重要であり得る。ＬＡＧ３は、ＴＲｅｇ細胞およびアネルギー性Ｔ細胞の両方で協調的に上方制御される種々の免疫チェックポイント受容体の１つであり、これらの受容体の同時遮断は、１つの受容体のみの遮断と比較して、このアネルギー状態の反転を増強することができる。特に、ＰＤ１およびＬＡＧ３は、アネルギー性または消耗性（exhausted）Ｔ細胞上で、一般に共発現される。ＬＡＧ３とＰＤ１の二重遮断は、慢性感染の設定において、アネルギーを、腫瘍特異的ＣＤ８＋Ｔ細胞およびウイルス特異的ＣＤ８＋Ｔ細胞の間で相乗的に逆転させた。
【００８３】
本明細書で使用されるＬＡＧ３アンタゴニストは、ＬＡＧ３タンパク質またはＬＡＧ３タンパク質をコードする遺伝子もしくは核酸に結合し、ＬＡＧ３活性化を阻害または防止する分子である。理論に束縛されることを望むものではないが、かかる分子は、ＬＡＧ３とそのリガンド（単数または複数）との相互作用を、低減または遮断すると考えられている。例示的なＬＡＧ３アンタゴニストは、ＢＭＳ−９８６０１６（Bristol-Myers Squibb）であり、これは潜在的な免疫チェックポイント阻害および抗腫瘍活性を有するＬＡＧ−３に結合するモノクローナル抗体である。投与されると、ＢＭＳ−９８６０１６は、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）上でＬＡＧ−３に結合する。これにより、抗原特異的Ｔリンパ球が活性化され、細胞傷害性Ｔ細胞媒介性腫瘍細胞溶解が増強され、腫瘍増殖の低減がもたらされる。
２Ｂ４．２Ｂ４（ＣＤ２４４およびＳＬＡＭｆ４としても知られる）は、３８ｋＤのＩ型膜貫通タンパク質であり、免疫グロブリンスーパーファミリー分子のＣＤ２サブセットのメンバーである（Lee et al., 2004; Vaidya et al., 2005）。これは、非主要組織適合複合体（ＭＨＣ）制限死滅を媒介するナチュラルキラー（ＮＫ）細胞およびいくつかのＴ細胞上で発現される細胞表面受容体をコードする遺伝子（２Ｂ４）によって、コードされる。２Ｂ４受容体を介したＮＫ細胞と標的細胞との間の相互作用は、ＮＫ細胞の細胞溶解活性を調節すると考えられている。２Ｂ４は、慢性ウイルス感染後に除去された細胞で発現すると同定された、共阻害性分子である。これは、ＮＫ細胞、単球、好塩基球および好酸球上で発現され、マウスとヒトの両方でＣＤ８＋Ｔ細胞のサブセット上で誘導的に発現される（Liu et al., JEM, 211(2):297-311 (2014)およびその中の参考文献を参照）。代替的に、異なるアイソフォームをコードする転写スプライスバリアントが、ヒト２Ｂ４遺伝子について見出されている。
【００８４】
ＢおよびＴリンパ球アテニュエーター（ＢＴＬＡ）．ＢＴＬＡ（ＢおよびＴリンパ球関連、ＢＴＬＡ−１、およびＣＤ２７２としても知られる）は、免疫グロブリンスーパーファミリーのメンバーをコードする遺伝子である。コードされたタンパク質は、単一の免疫グロブリン（Ｉｇ）ドメインを含み、阻害シグナルを伝達して免疫応答を抑制する受容体である。代替的スプライシングは、複数の転写バリアントをもたらす。この遺伝子の多型は、慢性関節リウマチのリスク上昇と関連している。ＢＴＬＡは、Ｂｔｌａノックアウトマウスで観察されたＴ細胞応答の増強に基づいて、Ｔ細胞上の阻害性受容体として最初に同定された。続いて、特定の腫瘍細胞型（例えば黒色腫）および腫瘍関連内皮細胞上に発現されるヘルペスウイルス侵入メディエーター（ＨＶＥＭ；ＴＮＦＲＳＦ１４としても知られる）が、ＢＴＬＡリガンドであることが示された。これは、ＴＮＦファミリーメンバーが免疫グロブリンスーパー遺伝子ファミリーメンバーと相互作用する、稀なケースである。活性化されたウイルス特異的ＣＤ８＋Ｔ細胞でのＢＴＬＡ発現レベルはかなり低いが、黒色腫患者の腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）では非常に高くなり得る。ＢＴＬＡｈｉＴ細胞は、そのリガンドであるＨＶＥＭの存在下で阻害される。したがって、ＢＴＬＡは、腫瘍微小環境におけるＴ細胞の関連阻害性受容体であり得る。
本明細書で使用されるＢＴＬＡアンタゴニストは、ＢＴＬＡタンパク質またはＢＴＬＡタンパク質をコードする遺伝子もしくは核酸に結合し、ＢＴＬＡ活性化を阻害または防止する分子である。理論に束縛されることを望むものではないが、かかる分子は、ＢＴＬＡとそのリガンド（単数または複数）との相互作用を、低減または遮断すると考えられている。
【００８５】
Ｔ細胞膜タンパク質３（ＴＩＭ３）．ＴＩＭ３（Ａ型肝炎ウイルス細胞受容体２／ＨＡＶｃｒ２、ＣＤ３６６、ＫＩＭ−３、ＴＩＭＤ３、Ｔｉｍ−３、およびＴＩＭＤ−３としても知られる）遺伝子は、免疫グロブリンスーパーファミリーに属するタンパク質およびＴＩＭファミリーのタンパク質をコードする。ＣＤ４陽性Ｔヘルパーリンパ球は、それらのサイトカイン分泌パターンに基づいて、１型（Ｔｈ１）および２型（Ｔｈ２）に分けることができる。Ｔｈ１細胞は、細胞内病原体および遅延型過敏反応に対する細胞媒介性免疫に関与しているのに対して、Ｔｈ２細胞は、細胞外寄生虫感染の制御およびアトピー性およびアレルギー性疾患の促進に関与している。ＴＩＭ３タンパク質は、マクロファージの活性化を制御し、Ｔｈ１媒介性自己および同種免疫応答を阻害し、免疫学的寛容を促進する、Ｔｈ１特異的細胞表面タンパク質である。そのリガンドがガレクチン９（乳がんを含む種々の種類のがんにおいて上方制御されるガレクチン）であるＴＩＭ３は、Ｔヘルパー１（ＴＨ１）細胞応答を阻害し、ＴＩＭ３抗体は抗腫瘍免疫を増強する。ＴＩＭ３は、腫瘍特異的ＣＤ８＋Ｔ細胞上でＰＤ１と同時発現することが報告されており、両方の分子の二重遮断は、がん−精巣抗原、ＮＹ−ＥＳＯ−１によって刺激された場合に、ヒトＴ細胞のin vitro増殖およびサイトカイン産生を有意に高める。動物モデルでは、ＰＤ１およびＴＩＭ３の協調遮断は、それぞれの個々の分子の遮断からはわずかな効果しか観察されない状況において、抗腫瘍免疫応答および腫瘍拒絶反応を増強することが報告された。
本明細書で使用されるＴＩＭ３アンタゴニストは、ＴＩＭ３タンパク質またはＴＩＭ３タンパク質をコードする遺伝子もしくは核酸に結合し、ＴＩＭ３活性化を阻害または防止する分子である。理論に束縛されることを望むものではないが、かかる分子は、ＴＩＭ３とそのリガンド（単数または複数）との相互作用を、低減または遮断すると考えられている。
【００８６】
アデノシンＡ２ａ受容体（Ａ２ａＲ）．Ａ２ａＲ遺伝子（ＲＤＣ８およびＡＤＯＲＡ２としても知られる）は、グアニンヌクレオチド結合タンパク質（Ｇタンパク質）共役受容体（ＧＰＣＲ）スーパーファミリーのメンバーをコードし、これはクラスおよびサブタイプに細分される。受容体は、細胞外キュー（cue）に応答して細胞内シグナル伝達経路を活性化する、７パス膜貫通タンパク質である。Ａ２ＡＲは、Ｔ細胞の細胞表面上で高度に発現され、かつアデノシンによる活性化に際してそれらの増殖および活性化を阻害する、Ｇタンパク質共役受容体である。アデノシンはしばしば、がん細胞によって過剰に産生される。Ａ２Ａサブタイプのアデノシン（リガンド）受容体であるＡ２ａＲタンパク質は、アデノシンを好ましい内在性アゴニストとして使用し、Ｇタンパク質のＧ（ｓ）およびＧ（ｏｌｆ）ファミリーと優先的に相互作用して、細胞内ｃＡＭＰレベルを上昇させる。これは多くの生物学的機能において、例えば心臓のリズムや循環、脳や腎臓の血流、免疫機能、痛みの調節、および睡眠などにおいて、重要な役割を果たす。これは、炎症性疾患および神経変性疾患などの病態生理学的状態に関与している。代替的スプライシングは、複数の転写バリアントをもたらす。上流のＳＰＥＣＣ１Ｌ（カルポニン相同性およびコイルドコイルドメイン１様を有する精子抗原）およびＡＤＯＲＡ２Ａ（アデノシンＡ２ａ受容体）遺伝子配列からなるリードスルー転写物が同定されたが、非コーディングであると考えられている。Ａ２ａＲは、ＣＤ４＋Ｔ細胞を駆動してＦＯＸＰ３を発現させ、それによってＴ細胞に発達させることに部分的により、Ｔ細胞応答を阻害する。この受容体の欠損は、感染に対する増強された、時には病的な炎症反応をもたらす。Ａ２ａＲ受容体は腫瘍免疫に特に関連するが、その理由は、腫瘍における細胞ターンオーバーからの細胞死の割合が高く、死んで行く細胞がアデノシンを放出するためである。さらに、ＴＲｅｇ細胞は、細胞外ＡＴＰをＡＭＰに変換する高レベルの細胞外酵素ＣＤ３９（ＮＴＰＤａｓｅ１としても知られる）および、ＡＭＰをアデノシンに変換するＣＤ７３（５'−ＮＴとしても知られる）を発現する。アデノシンによるＡ２ａＲ関与がＴ細胞を駆動してＴＲｅｇ細胞となることを考えると、これは、腫瘍内で自己増幅ループを生成することができる。腫瘍は、Ａ２ａＲ（Ａｄｏｒａ２ａとも呼ばれる）ノックアウトマウスにおいてよりゆっくりと増殖し、腫瘍ワクチンは、これらのマウスの確立された腫瘍に対してはるかに有効である。
【００８７】
本明細書で使用されるＡ２ａＲアンタゴニストは、Ａ２ａＲタンパク質またはＡ２ａＲタンパク質をコードする遺伝子もしくは核酸に結合し、Ａ２ａＲ活性化を阻害または防止する分子である。理論に束縛されることを望むものではないが、かかる分子は、Ａ２ａＲとそのリガンド（単数または複数）との相互作用を、低減または遮断すると考えられている。Ａ２ａＲは、アデノシン結合を遮断する抗体、またはアデノシン類似体（それらのいくつかはＡ２ａＲにかなり特異的である）のいずれかによって、阻害され得る。これらの薬剤はパーキンソン病の臨床試験に使用されているが、がん患者においては臨床的に試験されていない。例示的なＡ２ａＲアンタゴニストは、限定はされないが、アデノシンＡ２Ａ受容体アンタゴニストＰＢＦ−５０９である。ＰＢＦ−５０９は、経口的に生物学的利用可能なアデノシンＡ２Ａ受容体（Ａ２ＡＲ）アンタゴニストであり、潜在的抗腫瘍活性を有する。投与されると、Ａ２ＡＲアンタゴニストＰＢＦ−５０９は、Ｔリンパ球に発現するＡ２ＡＲに選択的に結合して阻害する。これはＴリンパ球のアデノシン／Ａ２ＡＲ媒介性阻害を無効にし、腫瘍細胞に対するＴ細胞媒介性免疫応答を活性化し、それにより感受性腫瘍細胞の増殖を低減する。
【００８８】
キラー阻害性受容体（ＫＩＲ）．免疫グロブリンスーパーファミリーのメンバーであるＫＩＲは、ＮＫ細胞の表面上に発現される。キラー細胞免疫グロブリン様受容体（ＫＩＲ）は、ナチュラルキラー細胞およびＴ細胞のサブセットによって発現される、膜貫通糖タンパク質である。ＫＩＲ遺伝子は多型であり、相同性が高く、１Ｍｂ白血球受容体複合体（ＬＲＣ）内の１９ｑ１３．４染色体上のクラスターに見出される。ＫＩＲ遺伝子クラスターの遺伝子含量はハプロタイプ間で異なるが、ただしいくつかの「フレームワーク」遺伝子は、すべてのハプロタイプ（ＫＩＲ３ＤＬ３、ＫＩＲ３ＤＰ１、ＫＩＲ３ＤＬ４、ＫＩＲ３ＤＬ２）に見出される。ＫＩＲタンパク質は、細胞外免疫グロブリンドメインの数（２Ｄまたは３Ｄ）、およびそれらが長い（Ｌ）または短い（Ｓ）細胞質ドメインを有するかどうかにより、分類される。長い細胞質ドメインを有するＫＩＲタンパク質は、免疫チロシンベース阻害モチーフ（ＩＴＩＭ）を介したリガンド結合時に阻害シグナルを伝達するが、一方短い細胞質ドメインを有するＫＩＲタンパク質は、ＩＴＩＭモチーフを欠き、代わりにＴＹＲＯタンパク質チロシンキナーゼ結合タンパク質と会合して、活性化シグナルを伝達する。ＫＩＲは、構造に基づき次の２つのクラスに分類され得る阻害性受容体の広いカテゴリーである：キラー細胞免疫グロブリン様受容体（ＫＩＲ）およびＣ型レクチン受容体、これらはＩＩ型膜貫通受容体である。これらの受容体は、ＮＫ細胞の死滅活性の重要な調節因子として最初に記載されたが、多くはＴ細胞およびＡＰＣに発現する。Ｔ細胞およびＡＰＣ（例えば、樹状細胞）に対するそれらの阻害的役割の重要性は、あまり研究されていないが、結果として生じるＮＫ細胞の活性化は、強力な抗腫瘍活性を提供することができる。多くのキラー阻害性受容体は、ヒト白血球抗原（ＨＬＡ；ヒトＭＨＣ分子）のサブセットに特異的であり、アレル特異性を有する。しかしながら、他の受容体は、広く発現された分子を認識する；例えば、Ｃ型レクチン受容体ＫＬＲＧ１は、Ｅ−カドヘリンを認識する。それらの阻害性受容体が適切に関与していない場合の、抗腫瘍免疫応答におけるＮＫ細胞の潜在的価値は、ドナーＮＫ阻害性受容体とレシピエントＨＬＡアレルとの間のミスマッチによって誘発される、同種異系骨髄移植における移植片対腫瘍効果の著しい増強によって、最もよく例示される。いくつかのＫＩＲタンパク質のリガンドは、ＨＬＡクラスＩ分子のサブセットである；したがって、ＫＩＲタンパク質は、免疫応答の調節において重要な役割を果たすと考えられている。任意のキラー阻害性受容体のアンタゴニストが、本開示の文脈において使用され得る。
【００８９】
本明細書で使用されるＫＩＲアンタゴニストは、ＫＩＲタンパク質またはＫＩＲタンパク質をコードする遺伝子もしくは核酸に結合し、ＫＩＲ活性化を阻害または防止する分子である。理論に束縛されることを望むものではないが、かかる分子は、ＫＩＲとそのリガンド（単数または複数）との相互作用を、低減または遮断すると考えられている。例示的なＫＩＲアンタゴニストは、リリルマブ（Bristol-Myers Squibb）であり、これは、潜在的な免疫チェックポイント阻害活性および抗腫瘍活性を有する、キラー細胞免疫グロブリン様受容体（ＫＩＲ）に対する完全ヒト化モノクローナル抗体である。投与されると、リリルマブはＫＩＲに結合し、それによってＫＩＲリガンドの、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞上のＫＩＲへの結合を妨げる。これらの阻害性受容体を遮断することにより、ＮＫ細胞は活性化され、がん細胞を攻撃して腫瘍細胞死をもたらす。
【００９０】
シグナル伝達兼転写活性化因子（ＳＴＡＴ３）．ＳＴＡＴ３遺伝子によってコードされるタンパク質は、ＳＴＡＴタンパク質ファミリーのメンバーである。サイトカインおよび成長因子に応答して、ＳＴＡＴファミリーメンバーは受容体関連キナーゼによりリン酸化され、次いで細胞核に転位するホモまたはヘテロ二量体を形成し、そこで転写活性化因子として作用する。タンパク質のＳＴＡＴファミリーの７つのメンバーが、哺乳動物において同定されている：ＳＴＡＴ１、２、３、４、５ａ、５ｂ、および６。すべてのファミリーメンバーは、６つの異なる構造ドメイン：Ｎ末端、コイルドコイル、ＤＮＡ結合、Ｓｒｃ相同性２（ＳＨ２）およびトランス活性化ドメインを共有し、およびＣ末端（ＳＴＡＴ３の場合はＴｙｒ７０５）にクリティカルなチロシン（Ｔｙｒ）残基を含み、これは活性化の間にリン酸化される。ＳＴＡＴ３タンパク質は、ＩＦＮ、ＥＧＦ、ＩＬ５、ＩＬ６、ＨＧＦ、ＬＩＦおよびＢＭＰ２を含む種々のサイトカインおよび成長因子に応答して、リン酸化によって活性化される。このタンパク質は、細胞刺激に応答して様々な遺伝子の発現を媒介し、したがって、細胞増殖およびアポトーシスなどの多くの細胞プロセスにおいて、重要な役割を果たす。小さなＧＴＰアーゼＲａｃ１は、このタンパク質に結合し、その活性を調節することが示されている。ＰＩＡＳ３タンパク質は、このタンパク質の特異的阻害剤である。この遺伝子の突然変異は、幼児発症型多系統自己免疫疾患および高免疫グロブリンＥ症候群に関連する。代替的スプライシングは、異なるアイソフォームをコードする複数の転写バリアントをもたらす。
【００９１】
本明細書で用いるＳＴＡＴ３アンタゴニストは、ＳＴＡＴ３タンパク質またはＳＴＡＴ３タンパク質をコードする遺伝子もしくは核酸に結合し、ＳＴＡＴ３活性化を阻害または防止する分子である。理論に束縛されることを望むものではないが、かかる分子は、ＳＴＡＴ３とそのリガンド（単数または複数）との相互作用を、低減または遮断すると考えられている。ＳＴＡＴ３のアンタゴニストである小分子化合物の例は、ＮＳＣ７４８５９（Ｓ３Ｉ−２０１）、ＮＳＣ４２０６７、ＮＳＣ５９２６３、ＮＳＣ７５９１２、ＮＳＣ１１４２１、ＮＳＣ９１５２９、およびＮＳＣ２６３４３５である（米国特許第7960434 B2号参照）。ＳＴＡＴ３阻害剤／アンタゴニストの他の多くの例は、Yue and Turkson, Expert Opin Investig Drugs, 2009, 18(1):45-56に見出すことができ、これは参照により本明細書に組み込まれる。
【００９２】
記載される阻害性免疫チェックポイント分子のアンタゴニストは、本開示の文脈において使用され得る。阻害性免疫分子である他の分子のアンタゴニストは、本開示の文脈において使用され得る。いくつかの態様において、任意の免疫阻害性分子のアンタゴニストを、造血幹細胞および／または造血幹細胞動員剤と組み合わせて疾患を有する対象の処置のために使用することができ、ここで疾患は、がんまたは感染症である。いくつかの態様において、ＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１、ＣＴＬＡ−４、ＶＩＳＴＡ、ＰＤ−Ｌ２、ＩＤＯ、ＡＲＧ１、Ｂ７−Ｈ３、Ｂ７−Ｈ４、ＬＡＧ３、２Ｂ４、ＢＴＬＡ、ＴＩＭ３、Ａ２ａＲ、ＫＩＲ、および／またはＳＴＡＴ３のアンタゴニストは、造血幹細胞（ＨＳＣ）移入および／またはＨＳＣ動員処置と組み合わせた処置のために、例えば抗ＰＤ−１、抗ＣＴＬＡ−４、および／または抗ＶＩＳＴＡ処置などの追加の免疫チェックポイント遮断とのさらなる組み合わせにおいて、使用し得る。
【００９３】
造血幹細胞．血液幹細胞とも呼ばれる造血幹細胞（ＨＳＣ）は、血液および骨髄中に見出され、それ自体を再生することができ、白血球、赤血球、および血小板を含む血液および免疫細胞などの様々な特殊細胞に分化することができる、未熟細胞である。ＨＳＣは、骨髄から循環血液に動員することができる。ＨＳＣは、血液細胞の絶え間ない再生を促進し、毎日何十億もの新しい血液細胞を産生する。
【００９４】
造血幹細胞移植（ＨＳＣＴ）．造血幹細胞（ＨＳＣ）移植（ＨＳＣＴまたはＨＳＣ移入）は、通常は末梢血、骨髄または臍帯血に由来するＨＳＣの移植である。２種類のＨＳＣＴを対象に使用することができる：対象自身の幹細胞を使用する、自家幹細胞移植；または、レシピエントに対して遺伝的に類似しＨＬＡ適合性であるドナーの幹細胞が対象に移植される、同種異系幹細胞移植。本開示のいくつかの態様において、自家幹細胞が、ＨＳＣＴに使用される。本開示のいくつかの態様において、対象にＨＬＡ適合性の同種異系幹細胞が、ＨＳＣＴに使用される。自家ＨＳＣＴでは、幹細胞を含有する試料を対象から取り出して保存し、後に対象に移植する。
【００９５】
ＨＳＣは、試料中の血球の全集団のわずかな部分を占めるため、これをがんまたは感染症治療のために対象に投与する前に、自己または同種異系ＨＳＣの数を増加させることが有利となり得る。本開示のいくつかの態様において、造血幹細胞は、それらを処置のために対象に移植する前に、収集および増大される。本開示のいくつかの態様において、造血幹細胞は、それらを処置のために対象に移植する前に、試料から収集、増大、および選択される。いくつかの態様において、造血幹細胞を含む試料が得られ、造血幹細胞を対象に投与する前に、in vitroで、試料中の幹細胞の数を増大するために処理される。いくつかの態様において、造血幹細胞を含む試料が得られ、造血幹細胞を対象に投与する前に、in vitroで、試料中の幹細胞のパーセンテージを増加させるために処理される。
【００９６】
態様において、幹細胞を、移植に使用される材料中で富化することができる。態様において、富化は、対象から収集された他の細胞に対して、幹細胞の増殖／増大を選択的に刺激することにより、行うことができる。別の態様において、幹細胞は、対象から収集された他の細胞から幹細胞を単離することにより、富化することができる。かかる選択は、いわゆる陽性選択または陰性選択であり得る。陽性選択において、幹細胞は、幹細胞上にあるが他の細胞上には存在しないことが知られているマーカーに基づいて、単離される。いくつかの態様において、陽性選択において、幹細胞は、マーカーＣＣＲ２＋、ＣＤ３４＋および／またはｌｉｎ−に基づいて単離され、それによってＨＳＣを陽性マーカーについて富化する。陰性選択において、幹細胞ではない細胞が同定され、かかる他の細胞上のマーカーに基づいて除去されて、幹細胞を残す。いくつかの態様において、陰性選択において、幹細胞は、マーカーＣＣＲ２−に基づいて単離される。陰性選択において、ＨＳＣをex vivoで処理してＣＣＲ２−細胞を除去し、それにより、ＨＳＣを対象に投与する前に、陽性マーカーＣＣＲ２＋、ＣＤ３４＋および／またはｌｉｎ−についてＨＳＣを富化する。かかる選択手順は当業者に知られており、限定はされないが、フローサイトメトリー分析、マイクロビーズに基づく単離、付着アッセイ、および／またはリガンドに基づく選択を含む。いくつかの態様において、リガンドに基づく選択は、ＣＣＲ２リガンド、例えばＣＣＬ２の存在に基づく。いくつかの態様において、富化されたＨＳＣは、対象への投与前にin vitroで増殖され得る。いくつかの態様において、富化されたＨＳＣはin vitroで増殖され得、そして対象への投与の前に、ＣＣＲ２＋、ＣＤ３４＋、および／またはｌｉｎ−について再度、陽性選択され得る。いくつかの態様において、富化されたＨＳＣをin vitroで増殖させ、ＣＣＲ２−細胞について陰性選択し、ここでＣＣＲ２−細胞を、ＨＳＣを対象に投与する前に再び除去することができる。いくつかの態様において、ＣＣＲ２−細胞の除去後、ＣＣＲ２−ＨＳＣの出発集団の２０％未満が残る。いくつかの態様において、ＣＣＲ２−細胞の除去後、ＣＣＲ２−ＨＳＣの出発集団の１５％未満、１０％未満、５％未満、２％未満、さらには１％未満が残る。いくつかの態様において、対象にＨＳＣを投与する前にＣＣＲ２−細胞を除去すると、投与のためのＨＳＣであって、１％、２％、３％、４％、５％、６％、７％、８％、９％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、または８０％以下のＣＣＲ２−ＨＳＣを含む前記ＨＳＣがもたらされる。いくつかの態様において、ＣＣＲ２＋、ＣＤ３４＋、および／またはｌｉｎ−細胞についての陽性選択後；ＣＣＲ２＋、ＣＤ３４＋、および／またはｌｉｎ−細胞についての陽性選択および陽性選択された細胞の増殖後；またはＣＣＲ２＋、ＣＤ３４＋および／またはｌｉｎ−細胞についての陽性選択、陽性選択された細胞の増殖、およびＣＣＲ２＋、ＣＤ３４＋および／またはｌｉｎ−細胞についての第２の陽性選択後であって、かつＨＳＣの投与前に、投与のためのＨＳＣは、少な��とも２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、または９８％のＣＣＲ２＋、ＣＤ３４＋、および／またはｌｉｎ−ＨＳＣを含む。
【００９７】
本明細書における造血幹細胞の源としては、以下が挙げられる：骨髄系統除去細胞（ｌｉｎ−）、ｃＫｉｔ＋精製系統陰性骨髄由来細胞、Ｓｃａ＋精製系統陰性骨髄由来細胞、ｃＫｉｔ＋Ｓｃａ＋精製骨髄由来細胞、Ｇ−ＣＳＦを用いて宿主骨髄から動員、ＡＭＤ３１００、プレリキサフォル、もしくは分子１，１’−［１，４−フェニレンビス（メチレン）］ビス［１，４，８，１１−テトラアザシクロテトラデカン］を用いて宿主骨髄から動員、臍帯血もしくは臍帯血由来幹細胞、ヒト白血球抗原（ＨＬＡ）適合血液、血液もしくは骨髄由来の間葉系幹細胞、誘導多能性幹細胞から分化した造血幹細胞、動員末梢血、末梢血、ＣＣＲ２＋マーカーで精製したｌｉｎ−細胞を含む造血幹細胞サブセット、系統陰性精製末梢血、またはＣＤ３４＋富化末梢血。本開示のいくつかの態様において、ＨＳＣの供給源は骨髄である。本開示のいくつかの態様において、ＨＳＣの供給源は、自己由来または同種異系であり、ここで任意に、供給源は、骨髄、末梢血、臍帯血、臍帯血幹細胞または誘導多能性幹細胞である。
【００９８】
造血幹細胞動員剤．本開示のいくつかの態様において、造血幹細胞動員剤が対象に投与される。ＨＳＣ動員とは、対象の骨髄から対象の末梢血への、ＨＳＣの動員を指す。本出願において、ＨＳＣ動員剤としては、以下を含む：顆粒球コロニー刺激因子（Ｇ−ＣＳＦ）、ペグ化Ｇ−ＣＳＦ（ペグフィルグラチズム）、レノグラチズム、Ｇ−ＣＳＦのグリコシル化形態、Ｃ−Ｘ−Ｃモチーフケモカイン２（ＣＸＣＬ２）、Ｃ−Ｘ−Ｃケモカイン受容体タイプ４（ＣＸＣＲ−４）、またはプレリキサフォル。
【００９９】
併用処置または併用療法．併用処置または療法とは、併用される２つの療法を指す。併用は、単一剤形としてもよいが、より典型的には、別々の投薬レジメンを用いて別々の用量で行われる。態様において、併用療法とは、造血幹細胞移植療法および／または造血幹細胞動員剤処置と組み合わせた、免疫チェックポイント阻害剤療法を意味し得る。免疫チェックポイント阻害剤療法とは、疾患（例えば、がんまたは感染症）を有する対象の、１つ以上の免疫チェックポイント阻害剤を対象に投与することによる処置を指す。造血幹細胞移植療法とは、疾患（例えば、がんまたは感染症）を有する対象の、造血幹細胞の投与による処置を指す。これは、造血幹細胞動員剤の対象への投与と併用してもよい。造血幹細胞は、対象に投与する前に、本明細書での開示のように、増殖させ、マーカーに基づいて予め選択し、サイトカインで処理し、および／またはサイトカインと共に投与してもよい。いくつかの態様において、対象は、当技術分野において一般的に知られている方法である化学療法および／または放射線処置を、免疫チェックポイント阻害剤および造血幹細胞移植併用療法と、同時に受ける。かかる態様において、造血幹細胞は、放射線処置の完了後に、対象に投与され得る。かかる態様において、造血幹細胞は、化学療法処置の完了後に、対象に投与され得る。かかる態様において、造血幹細胞は、化学療法または放射線処置の完了後６週間以内に、対象に投与され得る。かかる態様において、造血幹細胞は、化学療法または放射線処置の完了の０日、１日、２日、３日、４日、５日、６日、１週間、２週間、３週間、４週間、５週間、または６週間後に、投与され得る。かかる態様において、免疫チェックポイント阻害剤は、放射線または化学療法処置の前、これと同時、または後に、投与され得る。かかる態様において、免疫チェックポイント阻害剤は、化学療法または放射線処置の完了の、１日、１週間、２週間、３週間、４週間、５週間または６週間後に、対象に投与され得る。
【０１００】
単独療法処置．単独療法処置とは、造血幹細胞移植処置および／または造血幹細胞動員剤処置を伴わない、１つ以上の免疫チェックポイント阻害剤による処置を指す。
【０１０１】
対象．「対象」とは、哺乳動物、例えばヒト、非ヒト霊長類、イヌ、ネコ、ヒツジ、ウマ、ウシ、ブタ、マウス、ラット、げっ歯類またはヤギなどを意味する。重要な態様において、対象および／または哺乳動物は、ヒトである。
【０１０２】
処置．「処置する」、「処置すること」、「処置」および「療法」は、対象が状態に罹患している間に生じて、状態（もしくは状態に関連する症状）の重篤度を低下させる、または状態（もしくは状態に関連する症状）の進行を遅延または遅らせる行為を包含する。これは治療的処置である。
【０１０３】
有効量．対象は、本開示の溶液の有効量で処置される。薬剤の「有効量」とは、一般に、所望の生物学的応答を誘発する、すなわちその状態を処置するのに十分な量をいう。当業者に理解されるように、本明細書に記載される薬剤の有効量は、処置される状態、投与様式、および対象の年齢、体組成、および健康などの因子に依存して、変化し得る。
【０１０４】
治療的処置のためには、有効量は、状態の処置において治療上の利益を提供するか、または状態に関連する１つ以上の症状を低減もしくは排除するのに、十分な量である。これは、全体の療法を改善し、症状または状態の原因を低減または回避し、または別の治療剤の治療効果を高める量を包含し得る。
【０１０５】
一般に有効量は、対象における免疫応答を増強するために投与される。特定の疾患または状態に関連して、「免疫応答を増強する」とは、疾患または状態の１つ以上の症状、例えば、がんの１つ以上の症状または感染症の１つ以上の症状の、発生を阻止し、その進行を阻害し、発生を逆転させ、または、その他でこれを低減または軽減することを意味する。さらに有効量は、対象におけるがん細胞または感染性病原体の増殖を、遅らせる、停止させる、または逆行させるような量であってもよい。
注射用の造血幹細胞の例示的な有効量は、対象の体重１ｋｇ当たり約２×１０６個の細胞である。注射用の造血幹細胞の例示的な有効量は、この量を上回っても下回ってもよい。例としては、約１、１．５、２、２．５、３、３．５、４、４．５、５、５．５、６、６．５または７×１０６細胞／ｋｇが含まれる。
【０１０６】
当技術分野で使用される薬剤の例示的な有効量は、以下の通りである：
抗免疫チェックポイント抗体：０．０１ｍｇ／ｋｇ〜２０ｍｇ／ｋｇを１〜４週間ごと。態様において、かかる投与は、がんまたは感染症が持続する限り続く。態様において、投与は、例えば、１５６週間までであり得る。
【０１０７】
抗ＰＤ−１抗体：０．０１ｍｇ／ｋｇ〜２０ｍｇ／ｋｇを１〜４週間ごと。態様において、かかる投与は、がんまたは感染症が持続する限り続く。態様において、投与は、例えば、１５６週間までであり得る。態様において、ペンブロリズマブは、１０ｍｇ／ｋｇを２週間ごと、１０ｍｇ／ｋｇを３週間ごと、または２ｍｇ／ｋｇを３週間ごとに、例えば９６週間まで投与でき；ニボルマブは、０．１〜１０ｍｇ／ｋｇを２週間ごとに、例えば９６週間まで投与することができ；ピジリズマブは、０．１〜１０ｍｇ／ｋｇを１週間ごと、０．１〜１０ｍｇ／ｋｇを２週間ごと、または０．１〜１０ｍｇ／ｋｇを３週間ごとに、例えば９６週間まで投与することができる。態様において、ＭＥＤＩ−０６８０は、２週間に１回、最大１年間、投与することができる。態様において、ＲＥＧＮ２８１０は、２週間に１回投与することができる。態様において、ＡＭＰ２２４は、１０ｍｇ／ｋｇを２週間に１回、投与することができる。
【０１０８】
抗ＰＤ−Ｌ１抗体：０．０１ｍｇ／ｋｇ〜２０ｍｇ／ｋｇを１〜４週間ごとに対象に投与する。態様において、かかる投与は、がんまたは感染症が持続する限り続く。態様において、投与は、例えば、１５６週間までであり得る。態様において、ＢＭＳ−９３６５５９／ＭＤＸ−１１０５は、例えば、１、３または１０ｍｇ／ｋｇで２週間ごとに、２年間まで投与することができ；ＭＰＤＬ３２８０Ａ／ＲＧ７４４６は、例えば、１２００ｍｇを３週間ごとに、１年まで、または２年まで、または疾患の進行まで、投与することができ；ＭＳＢ００１０７１８Ｃ／アベルマブは、例えば１０ｍｇ／ｋｇで２週間に１回、疾患が進行するまで投与することができ；およびＭＥＤＩ４７３６は、例えば、１、２、３または４週間ごとに１年まで、または２年まで、投与することができる。いくつかの薬剤の有効量は、現在臨床試験において試験されており、それに応じて変化し得る。
【０１０９】
抗ＣＴＬＡ−４抗体：０．０１ｍｇ／ｋｇ〜２０ｍｇ／ｋｇを１〜４週間ごと。態様において、かかる投与は、がんまたは感染症が持続する限り続く。態様において、投与は、例えば、１５６週間までであり得る。態様において、ＭＤＸ−０１０／イピリムマブは、０．３ｍｇ／ｋｇ、３ｍｇ／ｋｇ、６ｍｇ／ｋｇ、または１０ｍｇ／ｋｇで３週間ごとに、４用量もしくは４サイクル、または３２用量まで、１２週間ごとの維持療法の提供とともに、投与し得る。トレメリムマブ／ＣＰ−６７５，２０６は、３ｍｇ／ｋｇ、６ｍｇ／ｋｇ、１０ｍｇ／ｋｇまたは１５ｍｇ／ｋｇで１２週間ごとに、４用量、または８用量まで、投与することができる。いくつかの薬剤の有効量は、現在臨床試験において試験されており、それに応じて変化し得る。
【０１１０】
抗ＶＩＳＴＡ抗体：０．０１ｍｇ／ｋｇ〜２０ｍｇ／ｋｇを、１〜４週間ごとに対象に投与する。態様において、かかる投与は、がんまたは感染症が持続する限り続く。態様において、投与は、例えば、１５６週間までであり得る。いくつかの薬剤の有効量は、将来の臨床試験の結果に応じて変化し得る。
【０１１１】
動員剤：かかる薬剤は、幹細胞を骨髄から末梢血に動員するのに十分な量で与えられる。特定の動員剤に対するかかる量は、例えば、１日あたり１μｇ／ｋｇ〜２０μｇ／ｋｇのＧ−ＣＳＦ、好ましくは１日あたり５μｇ／ｋｇまたは１０μｇ／ｋｇのＧ−ＣＳＦ；１〜２０ｍｇのＰＥＧ化Ｇ−ＣＳＦ、好ましくは６ｍｇまたは１２ｍｇのＰＥＧ化Ｇ−ＣＳＦ；１日あたり１〜２０μｇ／ｋｇのＰＥＧ化Ｇ−ＣＳＦ；１日当たり１〜２０μｇ／ｋｇのレノグラチズム；１日当たり１〜４０μｇ／ｍ２のＣ−Ｘ−Ｃケモカイン受容体タイプ４（ＣＸＣＲ−４）；１〜４０μｇ／ｍ２／日のプレリキサフォルである。
【０１１２】
投与方法．本開示のいくつかの態様において、免疫チェックポイント阻害剤は、静脈内に投与される（静脈内（ＩＶ）注入）。抗体はまた、当分野で知られている他の投与様式を介して投与され得る。かかる投与様式には、吸入、摂取および局所適用が含まれる。経口投与も治療のために可能であるが、しかしこの投与形態は、抗体などの特定の生物学的製剤にとってより困難である。ＨＳＣＴはしばしば化学療法と共に投与され、これは様々な方法で投与することができる。本開示の態様において、ＨＳＣ動員剤は、経口、皮下、筋肉内、静脈内、脳室内、髄腔内、腹腔内、動脈内、膀胱内（intravesicularly）、または胸膜内に、好ましくは静脈内に投与される。
【０１１３】
養子細胞療法（ＡＣＴまたは養子細胞移入）。養子細胞療法は、免疫機能および他の特性を細胞と共に伝達する目的での、細胞の患者内への移入である。細胞は、最も一般的に免疫由来であり、例えば、Ｔ細胞であり、自己由来または同種異系であり得る。同種異系細胞ではなく自己細胞の移入は、移植片対宿主病の問題を最小化する。ＡＣＴは、ウイルス感染の処置のため、および／またはがんの退縮の軽減に使用することができる。免疫抑制またはアブレーション処置（例えば、化学または放射線の処置）を受ける対象において、例えば、ＨＳＣＴ、臓器移植、および特定のタイプのがんを含む幹細胞移植（これらにおいては、免疫再構成はしばしば遅く不完全であり、悪性腫瘍のリスクがある）と関連して、感染および／または悪性腫瘍のリスクが増大する。免疫抑制後の期間の対象におけるＡＣＴの使用は、抗腫瘍免疫を含む免疫を増強し、また免疫抑制後の期間においてワクチン効力を増加させる可能性により、対象にとって有利であると考えられる。腫瘍特異的Ｔ細胞のＡＣＴは、マウス系およびヒト系の固形腫瘍の処置に、有効であることが示されている。態様において、ＡＣＴは、ＨＳＣ注入またはＨＳＣ動員剤の投与と共に使用され、ここでＨＳＣの添加は、ＩＦＮγ分泌の増加によって示されるように、対象の免疫応答を増加させる。
【実施例】
【０１１４】
例１．造血幹細胞（ＨＳＣ）は腫瘍流入領域リンパ節微小環境を変化させ、抗腫瘍免疫を増強する。ＨＳＣ移入は、腫瘍保有宿主においてＩＦＮγを分泌する抗腫瘍Ｔ細胞の増加をもたらす。
腫瘍特異的Ｔ細胞の静脈内注入および樹状細胞による皮内ワクチン接種からなる養子細胞療法（ＡＣＴ）を、頭蓋内腫瘍保有マウスに、ＨＳＣの静脈内注入を伴うかまたは伴わないで、投与した。Ｔ細胞は、インターフェロンγプロモーターの制御下で黄色蛍光タンパク質（ＹＦＰ）を有するマウスに由来するため、活性化されると蛍光を発する。腫瘍流入領域リンパ節（子宮頸部節）は、腫瘍保有マウスからＡＣＴ＋ＨＳＣ後に収集し、ＲＮＡを抽出し、Ｔ細胞活性化マーカーのパネルの発現について、ＰＣＲアレイで調べた。＋ＨＳＣリンパ節における遺伝子の相対発現は、図１Ａにヒートマップとして示されている。インターフェロンγの顕著な増加が、赤い四角で表されるようにして示され（図１Ａのカラー版で見られるＤ６）、これはＩＦＮγ発現を示す。Ｔ細胞をフローサイトメトリーにより、図１ＢでＹＦＰ（ＩＦＮγ）発現（ｘ軸上に示す）について調べた。ナイーブマウスはＩＦＮγの発現が１％未満であったが、in vitroで増大させた腫瘍特異的Ｔ細胞は、約３．５％の細胞反応性を示した。ＨＳＣなしのＡＣＴの後、活性化状態は〜６４．３％のＩＦＮγ分泌Ｔ細胞に増加した。ＨＳＣの添加は、ＨＳＣの存在下で＞９０％の陽性で著しくＩＦＮγ分泌を増強した。各群におけるＩＦＮγ＋Ｔ細胞の計算を、図１Ｃに示す。
【０１１５】
養子細胞療法：Ｃ５７ＢＬ／６マウス（Jackson Laboratories）には、１０４個のＫＲ１５８Ｂ星状細胞腫細胞を、右尾状核に定位的に０日目に移植した。次いでマウスに、単一用量の非骨髄破壊性（ＮＭＡ）５Ｇｙまたは骨髄破壊性（ＭＡ）９Ｇｙの全身照射（ＴＢＩ）を、４日目に投与した。造血幹細胞移入を受けたマウスに、５×１０４のｌｉｎ−骨髄由来幹細胞を、ＴＢＩの２４時間以内に静脈内注射した。１０７の腫瘍特異的Ｔリンパ球の静脈内注射を、ＴＢＩ後１６時間から２４時間の間に投与した。この後直ちに、２．５×１０５の全腫瘍ＲＮＡパルスＤＣの皮内ワクチン接種を行った。ＤＣワクチン２および３を、毎週間隔で投与した。
【０１１６】
造血幹細胞（ＨＳＣ）単離．Ｃ５７ＢＬ／６マウスの骨髄を、マウスの大腿骨および脛骨から採取した。次いで、塩化アンモニウムベースの溶解溶液（BD biosciencesのPharmLyse）を用いて赤血球を溶解し、単核細胞を残した。Miltenyi Biotecマウス系統（ｌｉｎ−）除去キットを用いて、これらの細胞を製造者の指示に従って単離した。細胞をMiltenyiビオチン標識抗体カクテルで標識し、続いてビーズ結合二次抗体で標識した。次いで、この溶液を滅菌磁気カラムに通して、ｌｉｎ−造血幹細胞（ＨＳＣ）を単離した。ＨＳＣを滅菌リン酸緩衝生理食塩水に再懸濁し、単離から２時間以内にマウスに静脈内注射した。処置したマウスは、５０，０００〜１００，０００のＨＳＣを１００μｌの最終容量で得た。
【０１１７】
養子移入のための腫瘍特異的Ｔ細胞の生成．全ＲＮＡを、ＫＲ１５８Ｂ−ｌｕｃ腫瘍から単離し、BTX Single Waveform Elctroporation System（Harvard Apparatus）を用いて、骨髄由来ＤＣにエレクトロポレーションした。ナイーブマウスに、全腫瘍ＲＮＡパルスＤＣを皮内ワクチン接種し、７日後に脾臓を採取し、脾細胞をex vivoで、ＲＮＡパルスＤＣおよび１００ＩＵのＩＬ−２（R&D Systems）を用いて７日間増大した。Ｔ細胞を、野生型Ｃ５７ＢＬ／６マウス（Jackson Laboratories, Bar Harbor, ME, stock #000664）、Ｃ５７ＢＬ／６バックグラウンドのＤｓＲｅｄトランスジェニックマウス（Jackson Laboratories, stock #006051）、またはＣ５７ＢＬ／６バックグラウンドのＧＦＰトランスジェニックマウス（Jackson Laboratories, stock #004353）いずれかの、初回刺激を受けた脾臓から増大させた。腫瘍反応性Ｔ細胞は、in vitroでの活性化の５〜７日後に静脈内養子移入した。
【０１１８】
ＲＮＡパルス樹状細胞（ＤＣ）ワクチンの生成．樹状細胞（ＤＣ）をＣ５７ＢＬ／６マウスの骨髄から、以前に公表されたプロトコルを変更して用いて、単離した。簡潔には、Ｃ５７ＢＬ／６マウスの大腿骨および脛骨を採取し、骨髄をＲＰＭＩ（LifeTechnologies）＋１０％ＦＢＳ（LifeTechnologies）で洗い流した。赤血球を１０ｍＬのPharmlyse（BD Bioscience）で溶解し、単核細胞をＣＤＣＭ（ＲＰＭＩ−１６４０、５％ＦＢＳ、１ＭのＨＥＰＥＳ（LifeTechnologies）、５０μＭ、５５ｍＭのβ−メルカプトエタノール（LifeTechnologies）、１００ｍＭのピルビン酸ナトリウム（LifeTechnologies）、１０ｍＭの非必須アミノ酸（LifeTechnologies）、２００ｍＭのＬグルタミン（LifeTechnologies）、１０μｇのＧＭ−ＣＳＦ（R&D Systems）、１０μｇのＩＬ−４（R&D Systems）、５．５ｍＬのペニシリン／ストレプトマイシン（LifeTechnologies））に再懸濁させ、これを、組織培養物で処理した６ウェルプレートに、１０６細胞／ｍＬの密度および総容量３ｍＬ／ウェルで播種した。非付着性細胞を３日目に捨てた。７日目に非付着性細胞を収集し、１００ｍｍの組織処理培養皿上に、１０６細胞／ｍＬの密度および総容量５ｍＬ／皿で再播種した。２４時間後、得られた細胞を、ＫＲ１５８Ｂ−ｌｕｃ細胞（RNeasy、Qiagen）から単離された２５μｇの全ＲＮＡでエレクトロポレーションした。ＲＮＡパルスＤＣを翌日収集し、ＰＢＳに最終濃度２．５×１０６細胞で懸濁し、１００μｌの細胞懸濁液を、皮内注射により投与した。
【０１１９】
図１Ａは、７週齢の雌性Ｃ５７ＢＬ／６マウスが、１０，０００個の星状細胞腫細胞を頭蓋内核に頭蓋内注射されたことを示す。４日目に、全マウスに５Ｇｙの非骨髄破壊性全身照射を与えた。群１は、腫瘍特異的Ｔ細胞の養子移入およびＤＣワクチンのみを受けた。群２は、Ｔ細胞の養子移入、ＤＣワクチン、およびＨＳＣ移入を受けた。両方の群からリンパ節を採取し、ＲＮＡを単離した。Ｔ細胞活性化に関連する遺伝子を調べるＰＣＲアレイを、リンパ節からのＲＮＡ上で実行した。この図は、ＨＳＣ移入を受けたマウスのリンパ節における発現を、受けていないマウスと比較して示す。結果は、ＨＳＣを受けた群におけるＩＦＮγ発現の有意な増加を示す。
【０１２０】
図１Ｂおよび１Ｃは、図１Ａと同じ実験であって、ＩＦＮγプロモーター上で黄色蛍光タンパク質（ＹＦＰ）を発現するＹＥＴＩマウスから生成されたＴ細胞を用いた実験の結果を示す。したがって、抗腫瘍機能（ＩＦＮγ分泌）を有する細胞は、フローサイトメトリーを用いて容易に検出可能である。これらのマウスの脾臓を、新たに生成した腫瘍特異的Ｔ細胞と同様に、ＹＦＰについて分析した。脾細胞ではＹＦＰはほとんどまたは全く認められず、in vitroで増大されたＴ細胞の３〜７％のみが、ＹＦＰを発現した。これらの細胞を次に、腫瘍保有マウスへの養子移入のために、５Ｇｙ非骨髄破壊性宿主コンディショニングの状況において使用した。群１は、Ｔ細胞およびＤＣワクチンのみを受け、群２は、ＨＳＣ、Ｔ細胞およびＤＣワクチンを受けた。腫瘍流入領域リンパ節を切除し、ＹＦＰ発現について分析した。群２（Ｔ細胞、ＤＣワクチン、およびＨＳＣ移入）のマウスは、Ｔ細胞活性化の有意な増加を明らかにした。ＨＳＣ移入は、腫瘍保有宿主においてＩＦＮγを分泌する抗腫瘍Ｔ細胞の増加をもたらす。図２は、ＨＳＣと免疫チェックポイント阻害剤の組み合わせが、腫瘍浸潤宿主細胞によるＩＦＮγ分泌の増加を増強することを示す。
【０１２１】
例２．造血幹細胞（ＨＳＣ）は腫瘍微小環境を変化させ、免疫チェックポイント遮断に対する反応性を回復させる。ＨＳＣと免疫チェックポイント阻害剤の組み合わせは、腫瘍浸潤宿主細胞によるＩＦＮγ分泌の増加を増強する。
ＨＳＣがリンパ節の微小環境を変化させ、ＩＦＮγ産生によって示されるように、Ｔ細胞の活性化の増加を許容するという観察は、ＨＳＣ移入の、頭蓋内腫瘍内の腫瘍微小環境および免疫細胞の活性化状態に対する影響を試験することを、我々に促した。腫瘍微小環境は著しく免疫抑制性であることが知られており、抗腫瘍免疫細胞の停止および免疫学的腫瘍拒絶の失敗をもたらす。本発明者らは、ＨＳＣ移入単独が、図２Ａおよび図２Ｂに示すように、腫瘍内ＩＦＮγ分泌細胞の増加をもたらすことを示した。この増加は、抗ＰＤ−１モノクローナル抗体ＰＤ１遮断によって誘発されたものよりも大きかった。しかし、ＨＳＣ移入単独または抗ＰＤ−１モノクローナル抗体処置単独では、腫瘍保有動物において有意な方法で生存を延長することができなかった（図２Ｃ）。しかし、ＨＳＣ＋抗ＰＤ−１抗体の組み合わせは、ＩＦＮγ分泌によって示されるように、腫瘍内免疫活性化において顕著な相乗作用を示し（図２Ｂ）、処置された動物の＞４０％において、顕著な改善された生存および長期治癒をもたらした（図２Ｃ）。これらの結果は、抗ＰＤ−１抗体で処置した動物における腫瘍微小環境の変更および抗腫瘍免疫の増強における、ＨＳＣの新規な役割を実証する。これらの効果は、難治性腫瘍が抗ＰＤ−１抗体処置に対して感受性になることを可能にする。免疫チェックポイント遮断を誘導する抗ＰＤ−１モノクローナル抗体処置を、ＨＳＣの投与と組み合わせた結果は、他の免疫チェックポイント阻害剤、例えばＣＴＬＡ−４を標的とするアンタゴニストが、ＨＳＣとの併用療法において有用であり得ることを、本発明者らに示唆する。本明細書に開示された、免疫チェックポイント遮断を誘導する抗ＰＤ−１モノクローナル抗体処置を、ＨＳＣ投与と組み合わせた相乗効果は、他の免疫チェックポイント、例えばＰＤ−Ｌ１、ＣＴＬＡ−４および／またはＶＩＳＴＡを標的とするアンタゴニストが、ＨＳＣとの併用療法に有用であることを示唆する。
【０１２２】
ＨＳＣ療法とＣＴＬＡ−４アンタゴニストによる処置を組み合わせると、決定的な結果は得られなかった（データ示さず）。しかし、ＨＳＣ移入とＰＤ−１またはＶＩＳＴＡ拮抗作用の併用療法で得られた結果は、他の免疫チェックポイントアンタゴニストが、ＨＳＣ移入と組み合わされた場合に、相乗効果をもたらし得ることを示している。免疫チェックポイント（単数または複数）に拮抗する複数の薬剤による処置を、ＨＳＣ移入と組み合わせると、相乗効果をもたらし得る。いくつかの態様において、１つ以上の免疫チェックポイント分子、例えばＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１、ＣＴＬＡ−４、および／またはＶＩＳＴＡ、に拮抗する１つ以上の薬剤を、ＨＳＣＴ療法との併用療法で投与する。いくつかの態様において、相乗効果は、１つ以上の免疫チェックポイント分子、例えばＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１、ＣＴＬＡ−４および／またはＶＩＳＴＡ、に拮抗する１つ以上の薬剤を、ＨＳＣ移入および／またはＨＳＣ動員処置と組み合わせて投与することにより生じ得る。
【０１２３】
例３．ＨＳＣ移入と免疫チェックポイント阻害剤の併用療法の相乗効果は、放射線療法によってさらに増強される。
免疫応答性Ｃ５７ＢＬ／６マウスに頭蓋内腫瘍を与え、次いで７つの群に分けた：群１：腫瘍のみ；群２：系統陰性造血幹細胞（ＨＳＣ）；群３：抗ＰＤ１抗体（αＰＤ１）；群４：ＨＳＣ＋αＰＤ１；群５：５００ｒａｄの全身照射＋ＨＳＣ；群６：５００ｒａｄの全身照射＋αＰＤ１；および群７：５００ｒａｄの全身照射＋ＨＳＣ＋αＰＤ１。全身照射については、５００ｒａｄの単回用量のＸ線照射を腫瘍移植の４日後に投与した。静脈内ＨＳＣ投与については、滅菌生理食塩水中の１０５細胞の単回用量を１００μｌの最終容量で、腫瘍移植の５日後に投与した。腹腔内αＰＤ１については、１０ｍｇ／ｋｇを５日ごとに合計４用量投与し、開始用量は腫瘍移植の５日後であった。
【０１２４】
図５は、実験結果を示す：生存中央値は、腫瘍のみの対照群における４５日から、ＨＳＣ＋αＰＤ１を受けた動物における５２日まで、有意に延長された（ｐ＝０．０１０４）。生存中央値はまた、５００ｒａｄの全身照射＋ＨＳＣ＋αＰＤ１を受けた群において、腫瘍のみの対照と比較して、有意に延長された（ｐ＝０．００２８）。重要なことに、ＨＳＣ＋αＰＤ１を受けた群は、αＰＤ１のみの群と比較して、生存中央値において有意な利益を示した（ｐ＝０．０２３７）。照射を付加することにより、照射＋ＨＳＣ＋αＰＤ１を受けた腫瘍保有マウス（８６日）は、照射＋αＰＤ１を受けた群（４５日）より、生存中央値が有意に延長した（ｐ＝０．００１８）。ＨＳＣ＋αＰＤ１群と照射＋ＨＳＣ＋αＰＤ１群との間の生存に、統計学的有意差はなかった（ｐ＝０．０４３９３）。
【０１２５】
例４．ＨＳＣ処置と、抗ＶＩＳＴＡ抗体を用いた免疫チェックポイント遮断との併用は、抗ＶＩＳＴＡ抵抗性腫瘍を有するマウスの生存の増加をもたらす。
免疫応答性Ｃ５７ＢＬ／６マウスに頭蓋内腫瘍を与え、次いで４つの群に分けた：群１：腫瘍のみ；群２：系統陰性造血幹細胞（ＨＳＣ）；群３：Ｔ細胞活性化のＶドメインＩｇサプレッサーに対する抗体（ＶＩＳＴＡ）（αＶＩＳＴＡ）；および群４：ＨＳＣ＋αＶＩＳＴＡ。静脈内ＨＳＣ投与については、滅菌生理食塩水中の１０５細胞の単回用量を１００μｌの最終容量で、腫瘍移植の５日後に投与した。腹腔内αＶＩＳＴＡについては、３００ｕｇの用量を３日ごとに、合計４用量投与した。
【０１２６】
図６は、実験結果を示す：生存中央値は、腫瘍のみの対照群の４３日から、ＨＳＣ＋αＶＩＳＴＡを受けた動物での４６日間に、有意に延長された（ｐ＝０．０３３２）。これらの結果は、他の免疫チェックポイント阻害剤を、ＨＳＣ療法と組み合わせて、対象において標的化することができ、疾患、例えばがんおよび／または感染症を処置し、生存を増加させ得ることを示す。
【０１２７】
例５：ＣＣＲ２陽性（ＣＣＲ２ｐｏｓまたはＣＣＲ２＋）ＨＳＣは、αＰＤ１処置と組み合わせたＨＳＣ療法の効果を増強する。
免疫応答性Ｃ５７ＢＬ／６マウスに頭蓋内神経膠腫を与え、８つの群に分けた：群１：腫瘍のみ；群２：系統陰性造血幹細胞（ＨＳＣ）；群３：ＣＣＲ２を発現しないＨＳＣ（ＣＣＲ２ｎｅｇ ＨＳＣ）；群４：ＣＣＲ２を発現するＨＳＣ（ＣＣＲ２ｐｏｓ ＨＳＣ）；群５：αＰＤ１；群６：αＰＤ１＋ＨＳＣ；群７：αＰＤ１＋ＣＣＲ２ｎｅｇ ＨＳＣ；および群８：αＰＤ１＋ＣＣＲ２ｐｏｓ ＨＳＣ。ＨＳＣ上の、系統コミットメントマーカーの陰性発現選択（系統陰性（Ｌｉｎ−））および、ＣＣＲ２の陽性選択（ＣＣＲ２ｐｏｓ）は、単独で、およびαＰＤ１処置と組み合わせて、実施した。ＣＣＲ２＋ＨＳＣ選択のために、骨髄由来細胞を、磁気系統欠損キット（Miltenyi Biotec）を用いて最初に単離した。得られたＨＳＣを次に、ビオチン化抗ＣＣＲ２抗体（Miltenyi Biotec）を用いて染色した。次いで、磁気ビーズにコンジュゲートした抗ビオチン抗体を添加し、次いで細胞懸濁液を磁気カラムに通した。得られた細胞画分は、ＣＣＲ２ｎｅｇ ＨＳＣおよびＣＣＲ２ｐｏｓ ＨＳＣであった。
【０１２８】
結果を図７に示す：αＰＤ１＋ＣＣＲ２ｐｏｓ ＨＳＣを受けた群の生存中央値は、ＨＳＣ＋αＰＤ１を受けた群より有意に増加した（ｐ＝０．０３２３）。これは予期せぬ発見であり、これまで、ＣＣＲ２ｐｏｓ ＨＳＣが免疫を増強することは記述されていなかった。ＣＣＲ２＋ＨＳＣのこの特殊なサブセットの使用は、免疫チェックポイント遮断と組み合わせるとより有益であり得る。
【０１２９】
例６．ＰＤ−１遮断と組み合わせたＨＳＣ移入は、リンパ球機能を増強し、腫瘍微小環境におけるＴ細胞活性化を維持する−ＩＦＮγ産生が腫瘍微小環境において維持される。
免疫応答性マウスに頭蓋内腫瘍を与え、４つの群に分けた：群１：腫瘍のみ；群２：腫瘍＋ＨＳＣ；群３：腫瘍＋αＰＤ−１；群４：腫瘍＋ＨＳＣ＋αＰＤ−１。腫瘍保有宿主として用いられるマウスは、インターフェロンγ（ＩＦＮγ）を分泌するときに黄色蛍光タンパク質（ＹＦＰ）を発現する。静脈内ＨＳＣ投与については、滅菌生理食塩水中の１０５細胞の単回用量を１００μｌの最終容量で、腫瘍移植の５日後に投与した。腹腔内αＰＤ１については、１０ｍｇ／ｋｇ用量を５日ごとに合計４用量投与し、開始用量は腫瘍移植の５日後であった。
【０１３０】
結果を図８Ａおよび８Ｂに示す：未処置マウスおよびＨＳＣ、抗ＰＤ１、またはＨＳＣと抗ＰＤ１両方のいずれかで処置したマウスにおける腫瘍微小環境内の、ＹＦＰ／ＩＦＮγ＋ＣＤ３＋リンパ球のフローサイトメトリー分析（図８Ａ）による定量化（図８Ｂ）。結果は、併用療法で処置した群におけるＣＤ３＋Ｔ細胞によるＩＦＮγ分泌が、有意に増加することを示す（ｐ値＝０．００１）。これは、ＨＳＣ＋抗ＰＤ１処置が、抗腫瘍反応性を有する腫瘍浸潤リンパ球の頻度の増加をもたらすことを実証する。
【０１３１】
例７．ＨＳＣは、ＰＤ−１遮断と共に腫瘍微小環境におけるリンパ球機能を増強する。
免疫応答性Ｃ５７ＢＬ／６マウスに頭蓋内腫瘍を与え、４つの群に分けた：群１：腫瘍のみ；群２：腫瘍＋ＨＳＣ；群３：腫瘍＋αＰＤ−１；および群４：腫瘍＋ＨＳＣ＋αＰＤ−１。静脈内ＨＳＣ投与については、滅菌生理食塩水中の１０５細胞の単回用量を１００μｌの最終容量で、腫瘍移植の１４日後に投与した。腹腔内αＰＤ１については、１０ｍｇ／ｋｇ用量を５日ごとに合計４用量投与し、開始用量は腫瘍移植の１４日後であった。腫瘍移植の３５日後、腫瘍を採取し、ＲＮＡを市販のキット（Qiagen）を用いて単離した。試料からのＲＮＡを、Ｔ細胞およびＢ細胞活性化ＲＴ２ ＰＣＲアレイ（SA Biosciences）を用いて、製造者の指示に従って分析した。
【０１３２】
ＨＳＣのみ、抗ＰＤ１のみ、またはＨＳＣ＋抗ＰＤ１の両方で処置したマウスからの腫瘍の遺伝的分析を行った。結果を図９に示す：遺伝子発現ヒートマップの拡大部分は、Ｔ細胞活性化／炎症経路に関与する多数の遺伝子、例えばＦａｓ１、ＩＦＮγおよびＴＮＦが、群４（腫瘍＋ＨＳＣ＋αＰＤ−１処置）において、高度に上方制御されることを示す。結果は、組み合わせのＨＳＣ＋抗ＰＤ１処置が、ＩＦＮγを含む活性化細胞傷害性Ｔ細胞に関連するマーカーを増加させることを実証する。我々はまた、Ｔ細胞遊走（migration）の既知のメディエーターであるケモカインの上方制御も見出した。
【図１Ａ】
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【図１Ｂ】
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【図１Ｃ】
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【図２Ａ】
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【図２Ｂ】
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【図２Ｃ】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８Ａ−１】
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【図８Ａ−２】
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【図８Ｂ】
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【図９】
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【国際調査報告】
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