(57)【要約】本実施形態は、対象における心筋線維化の処置、阻害または防止のための全身投与用に製剤化された硫酸デキストランの使用に関する。【選択図】図１
2018521086.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
対象における心筋線維化の処置、阻害または防止における使用のための前記対象への全身投与用に製剤化された、硫酸デキストランまたは医薬的に許容されるその塩。
【請求項２】
心筋梗塞または心筋虚血に罹患したことがある前記対象における心筋線維化の処置、阻害または防止における使用のための前記対象への全身投与用に製剤化された、請求項１に記載の使用のための硫酸デキストランまたは医薬的に許容されるその塩。
【請求項３】
前記硫酸デキストランまたは医薬的に許容されるその塩が、前記対象への静脈内投与または皮下投与のために製剤化される、請求項１または２に記載の使用のための硫酸デキストランまたは医薬的に許容されるその塩。
【請求項４】
前記硫酸デキストランまたは医薬的に許容されるその塩が、１００００Ｄａ以下の平均分子量を有する、請求項１〜３のいずれか１項に記載の使用のための硫酸デキストランまたは医薬的に許容されるその塩。
【請求項５】
前記平均分子量が、２０００〜１００００Ｄａの範囲内、好ましくは３０００〜１００００Ｄａの範囲内、より好ましくは３５００〜９５００Ｄａの範囲内、４５００〜７５００Ｄａの範囲内など、および好ましくは４５００〜５５００Ｄａの範囲内である、請求項４に記載の使用のための硫酸デキストランまたは医薬的に許容されるその塩。
【請求項６】
前記硫酸デキストランまたは医薬的に許容されるその塩が、１８５０〜２０００Ｄａの範囲内の核磁気共鳴（ＮＭＲ）分光法によって測定される数平均分子量（Ｍｎ）を有する、請求項４に記載の使用のための硫酸デキストランまたは医薬的に許容されるその塩。
【請求項７】
前記硫酸デキストランまたは医薬的に許容されるその塩が、平均で５．１個のグルコース単位と２．６〜２．７のグルコース単位あたりの平均硫酸数とを有する、請求項６に記載の使用のための硫酸デキストランまたは医薬的に許容されるその塩。
【請求項８】
前記硫酸デキストランまたは医薬的に許容されるその塩が、１５〜２０％の範囲で平均硫黄含有量を有する、請求項１〜７のいずれか１項に記載の使用のための硫酸デキストランまたは医薬的に許容されるその塩。
【請求項９】
前記平均硫黄含有量が約１７％である、請求項８に記載の使用のための硫酸デキストランまたは医薬的に許容されるその塩。
【請求項１０】
前記硫酸デキストランまたは医薬的に許容されるその塩が、注射用水溶液として製剤化される、請求項１〜９のいずれか１項に記載の使用のための硫酸デキストランまたは医薬的に許容されるその塩。
【請求項１１】
前記硫酸デキストランまたは医薬的に許容されるその塩が、連続した複数週間（連続した３週間など）にわたる１週間に複数回（３回など）の全身投与のために製剤化される、請求項１〜１０のいずれか１項に記載の使用のための硫酸デキストランまたは医薬的に許容されるその塩。
【請求項１２】
前記硫酸デキストランまたは医薬的に許容されるその塩が、前記対象の体重の０．０５〜５０ｍｇ／ｋｇ、好ましくは前記対象の体重の０．０５〜３０ｍｇ／ｋｇ、およびより好ましくは前記対象の体重の０．１〜１５ｍｇ／ｋｇまたは０．１〜１０ｍｇ／ｋｇの範囲の投与量で投与されるように製剤化される、請求項１〜１１のいずれか１項に記載の使用のための硫酸デキストランまたは医薬的に許容されるその塩。
【請求項１３】
前記対象が、心内膜心筋線維症、心筋梗塞の後の線維症または心房線維症からなる群より選択される疾患または障害に罹患している、請求項１〜１２のいずれか１項に記載の使用のための硫酸デキストランまたは医薬的に許容されるその塩。
【請求項１４】
前記硫酸デキストランまたは医薬的に許容されるその塩が、前記対象の心臓の梗塞領域における間質線維化の処置、阻害または防止における使用のためのものである、請求項１〜１３のいずれか１項に記載の使用のための硫酸デキストランまたは医薬的に許容されるその塩。
【請求項１５】
前記医薬的に許容されるその塩が、硫酸デキストランのナトリウム塩である、請求項１〜１４のいずれか１項に記載の使用のための硫酸デキストランまたは医薬的に許容されるその塩。
【請求項１６】
対象における心筋線維化の処置、阻害または防止のための全身投与用に製剤化される医薬の製造のための硫酸デキストランまたは医薬的に許容されるその塩の使用。
【請求項１７】
対象において心筋線維化を処置、阻害または防止する方法であって、前記対象に、硫酸デキストランまたは医薬的に許容されるその誘導体を全身投与することを含む、方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本実施形態は一般に、線維化の処置に関し、特に、対象において心筋線維化を処置、阻害または防止するための硫酸デキストランの使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
線維化は、修復プロセスまたは反応プロセスにおける器官または組織での過剰な線維状結合組織の形成を伴うプロセスである。線維化は、反応性状態、良性状態または病的状態である可能性がある。損傷への応答において、繊維化プロセスは瘢痕化と呼称されることがある。
【０００３】
生理学的に線維化は結合組織の沈着を伴い、これは、その下層の器官または組織の構造および機能を消失させ得る。両方ともコラーゲンおよびグリコサミノグリカンを含む結合組織を構築する刺激された細胞を伴うという点で、線維化は瘢痕化のプロセスに類似する。マクロファージおよび損傷組織は、例えば炎症または組織損傷に応答してトランスフォーミング増殖因子β（ＴＧＦβ）を放出する。これが次に線維芽細胞の増殖および活性化を刺激し、それが結合組織を沈着させる。
【０００４】
ＵＳ５，６０５，９３８は、約４０，０００〜２，０００，０００Ｄａの平均分子量を有する硫酸デキストランを含む生体適合性のアニオン性ポリマーが、典型的には手術に関連した線維化、瘢痕形成および術後の癒着を阻害できるということを開示する。このアニオン性ポリマーは線維化病変部に局所投与されるか、あるいは、好ましくは、ジヒドロキシフェニルアラニン（ＤＯＰＡ）およびヒドロキシル含有アミノ酸残基を含む接着タンパク質も含む、粘性の液体またはゲルの形態で器官またはインプラントに浸漬されてもよい。
【０００５】
ＣＮ１０２９７３５９３は、肝線維症を処置するための医薬の調製における硫酸デキストランの使用を開示する。この文献は、硫酸デキストランが星状膠細胞の活性化を阻害しマクロファージを促進してメタロプロテイナーゼを分泌させると述べている。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
対象において心筋線維化を処置、阻害または低減することが一般的な目的である。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
この目的および他の目的は、本明細書に開示されるような実施形態によって叶えられる。
【０００８】
本実施形態の一態様は、対象における心筋線維化の処置、阻害または防止において使用するための対象への全身投与用に製剤化された硫酸デキストランまたは医薬的に許容されるその塩に関する。
【０００９】
本実施形態の別の態様は、対象における心筋線維化の処置、阻害または防止のための全身投与用に製剤化された医薬の製造のための硫酸デキストランまたは医薬的に許容されるその塩の使用に関する。
【００１０】
本実施形態のさらなる態様は、対象において心筋線維化を処置、阻害または防止する方法に関する。方法は、対象に硫酸デキストランまたは医薬的に許容されるその塩を全身投与することを含む。
【００１１】
添付の図面と共に以下の説明を参照することで本実施形態が、そのさらなる目的および利点とともに、最も良好に理解されるであろう。
【図面の簡単な説明】
【００１２】
【図１】図１は、間質線維化の程度の推定を示す。間質線維化の相対面積は、対照群１Ｍと比較した場合の硫酸デキストラン群２Ｍにおける心筋梗塞誘発性の間質線維化の有意な抑制を示した（＊＊一元ＡＮＯＶＡに続くＢｏｎｆｅｒｒｏｎｉのポストホック比較によってＰ＜０．０１）。
【図２】図２Ａ〜２Ｄは、対照群１Ｍからの２匹の動物および硫酸デキストラン群２Ｍからの２匹の動物における線維化の度合いの写真である。
【発明を実施するための形態】
【００１３】
本実施形態は一般に、線維化の処置に関し、特に、対象において心筋線維化を処置、阻害または防止するための硫酸デキストランの使用に関する。
【００１４】
本実施形態は、全身投与された硫酸デキストランまたは医薬的に許容されるその塩が対象において望ましくない線維化の形成を低減でき、特に、虚血組織（特に虚血心臓組織）におけるそのような線維化の形成を低減または阻害できるという発見に基づく。
【００１５】
線維性疾患は、対象の体内の種々の器官および組織を冒す可能性のある広範囲の医学的状態が包含する。これらの医学的状態は、マトリックスタンパク質をコードする遺伝子の発現上昇を特徴とし、その結果として生じた線維化は、冒された器官または組織の正常な構造を破壊し、最終的にその機能障害または不全をもたらす。
【００１６】
本実施形態は、心臓または心臓組織において形成された線維化の数を減少させることによって線維性疾患の有害作用を処置、阻害または防止するという点において心筋線維化を処置、阻害または防止できる。従って、本実施形態の硫酸デキストランは、有害な、または傷害性の、心筋線維化を処置、阻害または防止できる。
【００１７】
従って、本実施形態の一態様は、対象における心筋線維化の処置、阻害または防止において使用するための対象への全身投与用に製剤化された硫酸デキストランまたは医薬的に許容されるその塩に関する。
【００１８】
米国特許第５，６０５，９３８号を鑑みれば、全身送達された硫酸デキストランが有害な線維化の形成を有意に低減できるということは非常に驚くべきことであった。この特許文献は、局所投与された硫酸デキストランが、とりわけ様々なインプラントの移植に関連した線維化および瘢痕形成を阻害できたということを開示する。この文献では、硫酸デキストランポリマーの負電荷が移植部位における様々な細胞の浸潤の阻害に関与すると推測された。そのような負電荷が細胞浸潤阻害効果を有するには、硫酸デキストランが所望の部位に局所投与される必要がある。従って、米国特許第５，６０５，９３８号では、インプラントが硫酸デキストランで有利にコーティングされた。
【００１９】
本明細書に提示される実験データは、本実施形態の硫酸デキストランが全身投与されてよく、すなわち標的部位に局所投与されなくてよく、それでもその所望の抗線維化効果を発揮できるということを示す。
【００２０】
硫酸デキストランまたは医薬的に許容されるその塩は、対象への全身投与用に製剤化される。一実施形態において、硫酸デキストランまたは医薬的に許容されるその塩は、対象において全身的な効果を達成するための全身投与の例としての非経口投与用に製剤化される。
【００２１】
非経口の投与経路の例としては、静脈内（ｉ．ｖ．）投与、動脈内投与、筋肉内投与、脳内投与、脳室内投与、くも膜下腔内投与および皮下（ｓ．ｃ．）投与が挙げられる。
【００２２】
一実施形態において、硫酸デキストランまたは医薬的に許容されるその塩は、好ましくは、対象への静脈内（ｉ．ｖ．）投与または皮下（ｓ．ｃ．）投与のために製剤化される。従って、ｉ．ｖ．投与およびｓ．ｃ．投与は、硫酸デキストランまたは医薬的に許容されるその塩の全身投与の好ましい例である。
【００２３】
経口送達された硫酸デキストランは、マウス、ラット、ハムスターおよびモルモットにおいて大腸炎および腸の線維化を誘発することが知られている。従って、本明細書で使用される場合、全身投与は、好ましくは、硫酸デキストランまたは医薬的に許容されるその塩の経口投与を除外する。特定の実施形態では、硫酸デキストランまたは医薬的に許容されるその塩の全身投与は、経口投与以外の、好ましくは腸内投与以外の、全身投与である。
【００２４】
一実施形態において、硫酸デキストランまたは医薬的に許容されるその塩は、注射用水溶液として、好ましくはｉ．ｖ．注射用またはｓ．ｃ．注射用の水溶液として、製剤化される。従って、本実施形態の硫酸デキストランまたは医薬的に許容されるその塩は、好ましくは、選択された溶媒または賦形剤を含む注射用水溶液として製剤化される。溶媒は、有利には、水性溶媒、特に緩衝溶液、である。そのような緩衝溶液の非限定的な例は、クエン酸緩衝液（クエン酸一水和物（ＣＡＭ）緩衝液など）またはリン酸緩衝液である。例えば、本実施形態の硫酸デキストランを生理食塩水（０．９％ＮａＣｌ生理食塩水など）中に溶解させた後、必要に応じて、７５ｍＭのＣＡＭで緩衝し、水酸化ナトリウムを用いてｐＨを約５．９に調整できる。また、生理食塩水（すなわちＮａＣｌ（ａｑ））などの注射用水溶液を含む、非緩衝溶液も可能である。さらに、緩衝溶液が望ましい場合には、ＣＡＭ緩衝液およびリン酸緩衝液以外の緩衝系が使用される可能性がある。
【００２５】
硫酸デキストランは、好ましくは、いわゆる低分子量硫酸デキストランである。
【００２６】
以下では、硫酸デキストランの（平均）分子量および硫黄含有量への言及は、硫酸デキストランの任意の医薬的に許容される塩にも適用される。従って、硫酸デキストランの医薬的に許容される塩は、好ましくは、以下の実施形態において説明されるような平均分子量および硫黄含有量を有する。
【００２７】
硫酸デキストランは、硫酸化された多糖であり、特に硫酸化されたグルカン（すなわち多くのグルコース分子からなる多糖）である。本明細書で定義される平均分子量は、個々の硫酸化された多糖はこの平均分子量とは異なる分子量を有してよいが当該平均分子量は硫酸化された多糖の平均の分子量を表すということを示す。さらに、これは、硫酸デキストランのサンプルについてのこの平均分子量の付近に分子量の自然な分布が存在するということを意味する。
【００２８】
硫酸デキストランの平均分子量（Ｍｗ）は、典型的には、ゲル排除／浸透クロマトグラフィー、光散乱または粘度などの間接的な方法を用いて決定される。そのような間接的な方法を用いる平均分子量の決定は、カラムおよび溶離液の選択、流速、較正手順等を含む、いくつかの要因に依存するであろう。
【００２９】
平均分子量（Ｍｗ）：
【数１】
2018521086.tif 000003
数値ではなく分子のサイズに対して感度の良い方法（例えば、光散乱法およびサイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）法）の場合に典型的。正規分布が想定される場合には、Ｍｗの両側で重量が同じであり、すなわち、Ｍｗ未満の分子量を有するサンプル中の硫酸デキストラン分子の総重量は、Ｍｗ超の分子量を有するサンプル中の硫酸デキストラン分子の総重量と等しい。
【００３０】
一実施形態において、硫酸デキストランまたは医薬的に許容されるその塩は、好ましくは、４００００Ｄａ以下、より好ましくは２００００Ｄａ以下、特に１００００Ｄａ以下、の平均分子量を有する。
【００３１】
１００００Ｄａを超える分子量の硫酸デキストランは一般に、より低い平均分子量を有する硫酸デキストランと比較して、より低い効果対毒性プロファイルを有する。これは、より大きな硫酸デキストラン分子（＞１００００Ｄａ）については、対象に安全に投与できる硫酸デキストランの最高用量が、好ましい範囲内の平均分子量を有する硫酸デキストランと比較して、より低いということを意味する。結果として、そのようなより大きな硫酸デキストラン分子は、硫酸デキストランがインビボで対象に全身投与される場合には、臨床用途においてあまり適切でない。
【００３２】
一実施形態において、硫酸デキストランまたは医薬的に許容されるその塩は、２０００〜１００００Ｄａの範囲内の平均分子量を有する。別の実施形態では、平均分子量は、２５００〜１００００Ｄａの範囲内である。特定の好ましい実施形態では、平均分子量は、３０００〜１００００Ｄａの範囲内である。
【００３３】
任意選択ではあるが好ましい実施形態では、硫酸デキストラン分子の４０％未満が、３０００Ｄａ未満の分子量を有し、好ましくは、硫酸デキストラン分子の３５％未満（３０％未満または２５％未満など）が、３０００Ｄａ未満の分子量を有する。さらに、または代替的に、硫酸デキストラン分子の２０％未満が、１００００Ｄａ超の分子量を有し、好ましくは、硫酸デキストラン分子の１５％未満（１０％未満または５％未満など）が、１００００Ｄａ超の分子量を有する。従って、特定の実施形態では、硫酸デキストランは、平均分子量付近に実質的に狭い分子量分布を有する。
【００３４】
特定の実施形態では、硫酸デキストランまたは医薬的に許容されるその塩の平均分子量は、３５００〜９５００Ｄａの範囲内（３５００〜８０００Ｄａの範囲内など）である。
【００３５】
別の特定の実施形態では、硫酸デキストランまたは医薬的に許容されるその塩の平均分子量は、４５００〜７５００Ｄａの範囲内である。
【００３６】
さらなる特定の実施形態では、硫酸デキストランまたは医薬的に許容されるその塩の平均分子量は、４５００〜５５００Ｄａの範囲内である。
【００３７】
従って、現在好ましい実施形態では、硫酸デキストランまたは医薬的に許容されるその塩の平均分子量は、好ましくは、約５０００Ｄａであるか、または少なくとも実質的に５０００Ｄａ付近、５０００±５００Ｄａなど、例えば５０００±４００Ｄａ、好ましくは５０００±３００Ｄａもしくは５０００±２００Ｄａ、５０００±１００Ｄａなど、である。従って、一実施形態において、硫酸デキストランまたは医薬的に許容されるその塩の平均分子量は、４．５ｋＤａ、４．６ｋＤａ、４．７ｋＤａ、４．８ｋＤａ、４．９ｋＤａ、５．０ｋＤａ、５．１ｋＤａ、５．２ｋＤａ、５．３ｋＤａ、５．４ｋＤａまたは５．５ｋＤａである。
【００３８】
特定の実施形態では、上記で提示されるような硫酸デキストランまたは医薬的に許容されるその塩の平均分子量は、平均Ｍｗであり、好ましくは、ゲル排除／浸透クロマトグラフィー、サイズ排除クロマトグラフィー、光散乱または粘度に基づいた方法によって決定される。
【００３９】
特定の実施形態では、硫酸デキストランまたは医薬的に許容されるその塩は、平均で約５個の、または５個より僅かに多い、グルコース単位からなり、少なくとも２．０（少なくとも２．５など）のグルコース単位あたりの平均硫酸数を有する。
【００４０】
硫酸デキストランは、デキストランのポリアニオン性誘導体であり、硫黄を含む。本実施形態の硫酸デキストランの平均硫黄含有量は、好ましくは１５〜２０％であり、より好ましくは約１７％であり、これは一般に、グルコシル残基あたり約２個の、または少なくとも２個の硫酸基に相当する。特定の実施形態では、硫酸デキストランの硫黄含有量は、好ましくは、対応するデキストラン分子の硫黄含有量の最大限に等しいか、または少なくともその付近である。
【００４１】
特定の実施形態では、本実施形態の硫酸デキストランは、１８５０〜２０００Ｄａの範囲内の、核磁気共鳴（ＮＭＲ）分光法によって測定される数平均分子量（Ｍｎ）を有する。
【００４２】
別の特定の実施形態では、本実施形態の硫酸デキストランは、平均で５．１個のグルコース単位と２．６〜２．７のグルコース単位あたりの平均硫酸数とを有し、これは、典型的には、１８５０〜２０００Ｄａの範囲内の、核磁気共鳴（ＮＭＲ）分光法によって測定される数平均分子量（Ｍｎ）をもたらす。
【００４３】
数平均分子量（Ｍｎ）：
【数２】
2018521086.tif 000004
典型的には、末端基のアッセイ（例えばＮＭＲ分光法またはクロマトグラフィー）によって得られる。正規分布が想定される場合には、Ｍｎの両側で同数の硫酸デキストラン分子を見出すことができ、すなわち、Ｍｎ未満の分子量を有するサンプル中の硫酸デキストラン分子の数は、Ｍｎ超の分子量を有するサンプル中の硫酸デキストラン分子の数と等しい。
【００４４】
本実施形態に従って使用できる硫酸デキストランまたは医薬的に許容されるその塩は、ＷＯ２０１６／０７６７８０で説明されている。
【００４５】
本実施形態による硫酸デキストランは、硫酸デキストランの医薬的に許容される塩として提供されてよい。そのような医薬的に許容される塩は、例えば、硫酸デキストランのナトリウム塩またはカリウム塩を包含する。
【００４６】
本実施形態の硫酸デキストランまたは医薬的に許容されるその塩の好適な用量範囲は、対象のサイズおよび体重、それについて対象が処置される状態、ならびに他の検討事項に応じて変動する可能性がある。特にヒト対象の場合、可能な用量範囲は、１μｇ／ｋｇ体重〜１５０ｍｇ／ｋｇ体重、好ましくは１０μｇ／ｋｇ体重〜１００ｍｇ／ｋｇ体重である可能性がある。
【００４７】
好ましい実施形態では、硫酸デキストランまたは医薬的に許容されるその塩は、０．０５〜５０ｍｇ／ｋｇ（対象の体重）、好ましくは０．０５もしくは０．１〜４０ｍｇ／ｋｇ（対象の体重）、より好ましくは０．０５もしくは０．１〜３０ｍｇ／ｋｇ（対象の体重）、または０．１〜２５ｍｇ／ｋｇ（対象の体重）、または０．１〜１５ｍｇ／ｋｇ（対象の体重）または０．１〜１０ｍｇ／ｋｇ（対象の体重）、の範囲内の投与量で全身投与されるように製剤化される。
【００４８】
本実施形態の硫酸デキストランまたは医薬的に許容されるその塩の全身投与は、好ましくは、それがなければ対象において線維化（特に有害な線維化）を引き起こす可能性のある事象または状態の発生後にできるだけ早く開始される。例えば、線維化は、損傷または対象において虚血もしくは心血管疾患を引き起こす他の状態の後に発生することが多い。そのような場合には、硫酸デキストランまたは医薬的に許容されるその塩の全身投与は、好ましくは、損傷または虚血もしくは心血管疾患を引き起こす他の状態の検出または診断の後にできるだけ早く実施される。
【００４９】
硫酸デキストランまたは医薬的に許容されるその塩の全身投与は、必ずしも現在の医学的状態の処置に限定される必要はないが、代替的に、またはさらに、予防のために使用される可能性がある。言い換えれば、本実施形態の硫酸デキストランは、心筋線維化を引き起こすか誘発する可能性がある医療処置（手術など）を受ける予定である対象に全身投与される可能性がある。
【００５０】
本実施形態の硫酸デキストランまたは医薬的に許容されるその塩は、単回ボーラス注射の形態でなどの、１回の投与で全身投与されてよい。このボーラス投与量は、患者に非常に迅速に注射されてよいが、硫酸デキストラン溶液が患者に数分間にわたって注入されるように時間をかけて有利に注入される（５〜１０分間以上など）。
【００５１】
代替的に、本実施形態の硫酸デキストランまたは医薬的に許容されるその塩は、処置期間中に複数回（すなわち、少なくとも２回）、全身投与されてよい。従って、本実施形態の硫酸デキストランは、説明用の実施例のように、１日に１回または複数回、１週間に１回または複数回、１ヵ月に１回または複数回、全身投与される可能性がある。
【００５２】
特定の実施形態では、硫酸デキストランまたは医薬的に許容されるその塩は、連続した複数週間（少なくとも連続した２〜５週間など、好ましくは少なくとも連続した３週間）にわたる１週間に複数回（２〜５回など、好ましくは３回）の全身投与のために製剤化される。
【００５３】
一実施形態において、硫酸デキストランまたは医薬的に許容されるその塩の全身投与は、対象において有害な線維化を引き起こす事象または状態の後にできるだけ早く（上述されるような虚血事象または心筋梗塞の後にできるだけ早く、など）開始される可能性がある。代替的に、全身投与は、有害な線維化を引き起こす事象または状態の後の一定期間に開始される可能性がある。そのように全身投与を遅らせることの理由は、線維化プロセスが一般に、線維化を引き起こす事象または状態の後に一定時間を要するからである。例えば、硫酸デキストランまたは医薬的に許容されるその塩の全身投与は、対象において有害な線維化を引き起こす事象または状態に続く最初の週の内に、または１週間後から、開始される可能性がある。
【００５４】
一実施形態において、対象は、哺乳動物対象であり、好ましくは霊長類であり、より好ましくはヒト対象である。本実施形態は特に、ヒト対象において心筋線維化を処置、阻害または防止することを対象とするが、本実施形態はまた、あるいは代替的に、獣医学用途において使用されてもよい。動物対象の非限定的な例としては、霊長類、ネコ、イヌ、ブタ、ウマ、マウス、ラットが挙げられる。
【００５５】
一実施形態において、対象は、心筋線維化（特に、有害な（ｄｅｔｒｉｍｅｎｔａｌ）、有害な（ｄｅｌｅｔｅｒｉｏｕｓ）、または傷害性の線維化）を引き起こす疾患、状態または障害に罹患している。そのような有害な（ｄｅｔｒｉｍｅｎｔａｌ）、有害な（ｄｅｌｅｔｅｒｉｏｕｓ）、または傷害性の線維化は、冒された器官または組織の正常な構造の破壊を引き起こし、最終的にその機能障害または不全をもたらす。これは、有害な（ｄｅｔｒｉｍｅｎｔａｌ）、有害な（ｄｅｌｅｔｅｒｉｏｕｓ）、または傷害性の線維化が、その線維化が発生する器官または組織に負の有害な影響を及ぼすであろう線維状組織の過剰な沈着の病的状態または病的線維化であることを意味する。
【００５６】
従って、一実施形態において、硫酸デキストランまたは医薬的に許容されるその塩は、器官または組織の機能障害を引き起こす対象の心臓または心臓組織における線維状組織の過剰な沈着を引き起こす病的線維化の処置、阻害または防止において使用するためのものである。
【００５７】
特定の実施形態では、線維化を引き起こす疾患、状態または障害は、心内膜心筋線維症、心筋梗塞の後の線維症または心房線維症からなる群より選択される。
【００５８】
硫酸デキストランまたは医薬的に許容されるその塩は従って、上述の疾患、状態または障害のいずれかの線維化要素を処置、阻害または防止するために使用される。従って、硫酸デキストランまたは医薬的に許容されるその塩は、必ずしも上記の疾患、状態または障害それ自体を処置、阻害または防止するわけではないが、線維化プロセスを低減し、それにより、上記の疾患、状態または障害がもたらす線維化組織の量を低減する。
【００５９】
一実施形態において、全身投与用に製剤化された硫酸デキストランまたは医薬的に許容されるその塩は、心筋線維化を患う対象において心筋線維化を処置、阻害または防止するために使用される。
【００６０】
細胞外マトリックス（線維状結合組織）の病的蓄積は、糖尿病である患者および糖尿病でない患者の両方において心臓の心不全（ＣＨＦ）の主な誘因であり、心室壁の進行性の硬化および心臓の収縮性の喪失をもたらす。心不全は世界的な健康問題であり、先に心筋梗塞（ＭＩ）を有する患者において最も一般的に出現する。梗塞した心筋および梗塞していない心筋の両方で見られる、線維化に起因する心臓のリモデリングは、心室機能の障害の発達の主要な決定因子であると認識されており、予後不良をもたらすと認識されている。
【００６１】
従って、線維化は、例えば心内膜心筋線維症、心筋梗塞の後の線維症または心房線維症の形態で心臓において発生する可能性がある（心筋線維化）。線維化は、心筋の部位での虚血の後に発生することが多く、これは、心臓壁の硬化、収縮性の喪失および心臓のリモデリングという点において、重篤な負の結果をもたらす可能性がある。
【００６２】
一実施形態において、硫酸デキストランまたは医薬的に許容されるその塩は、心筋梗塞または心臓における別の虚血状態（例えば心筋虚血）に罹患したことがある対象における心筋線維化の処置、阻害または防止において使用するためのものである。
【００６３】
特定の実施形態では、硫酸デキストランまたは医薬的に許容されるその塩は、対象の心臓の梗塞領域における間質線維化の処置、阻害または防止において使用するためのものである。
【００６４】
本明細書で提示される実験データは、硫酸デキストランが心筋梗塞モデルにおいて抗線維化効果を有するということを示す。硫酸デキストランは、有意により少ない心筋線維化をもたらし、特に、試験対象の梗塞領域において有意により少ない間質線維化をもたらした。
【００６５】
線維化はまた、対象における心臓または心臓組織の移植と関連して発生する可能性もある。従って、硫酸デキストランまたは医薬的に許容されるその塩は、心臓または心臓組織の移植を受ける予定であるか最近受けた対象に全身投与されてよい。そのような移植される心臓組織の非限定的な例としては、心臓弁等が挙げられる。
【００６６】
硫酸デキストランまたは医薬的に許容されるその塩はまた、対象の心臓における、または対象の心臓と関連した、医療機器（ペースメーカー、ステント、プロテーゼなど）の移植と関連して対象に全身投与されてもよい。従って、病的な心筋線維化はまた、医療機器の移植の後に発生する可能性もある。
【００６７】
本実施形態の別の態様は、対象における心筋線維化の処置、阻害または防止のための全身投与用に製剤化された医薬の製造のための硫酸デキストランまたは医薬的に許容されるその塩の使用に関する。
【００６８】
本実施形態のさらなる態様は、対象において心筋線維化を処置、阻害または防止する方法に関する。方法は、硫酸デキストランまたは医薬的に許容されるその塩を対象に全身投与することを含む。
【００６９】
実験
【００７０】
心筋梗塞モデルにおける硫酸デキストランの抗線維化効果の評価
本研究では、心筋梗塞（ＭＩ）のラットモデルでの線維化の阻害または低減における硫酸デキストランの効果を評価した。
【００７１】
材料および方法
ラットにおける心筋梗塞モデルは、壁内縫合（ｉｎｔｒａｍｕｒａｌ  ｓｔｉｔｃｈ）による永久的な左冠動脈の結紮を伴った。この手術は血流の閉塞を引き起こし、その後、重度の虚血性損傷および心臓壁の梗塞に至った。
【００７２】
平均体重が研究開始時（０日目）に１７８ｇであった合計１２０匹の雌のＳＤラットをＨａｒｌａｎ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ（イスラエル）から取得した。市販のげっ歯類用飼料（Ｔｅｋｌａｄ  Ｃｅｒｔｉｆｉｅｄ  Ｇｌｏｂａｌ  １８％  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｄｉｅｔ）を自由摂食で動物に与えた。動物は、自治体供給から得たオートクレーブおよび酸性化された飲料水（ｐＨは２．５〜３．５）に自由にアクセスできた。動物を、新鮮な空気の適切な供給（１時間に最低１５回の空気交換）を伴う空調管理および濾過（ＨＥＰＡ  Ｆ６／６）された標準的な実験室条件下に収容した。動物を、１２時間と１２時間の明暗周期で２０〜２４℃の温度範囲および３０〜７０％のＲＨ範囲を伴う気候制御環境中で飼育した。
【００７３】
１５ｍｇ／ｋｇまたは３ｍｇ／ｋｇの用量で皮下注射するために、５〜７ｋＤａの範囲内の平均分子量を有する硫酸デキストランを０．９％ＮａＣｌ（生理食塩水）（Ｔｅｖａ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｉｎｄｕｓｔｒｉｅｓ  Ｌｔｄ）中に溶解させた。
【００７４】
手術の日に、９０ｍｇ／ｋｇのケタミンと１０ｍｇ／ｋｇのキシラジンとの組み合わせで動物を麻酔し、動物に挿管して機械で通気した。ＭＩを誘発するために、麻酔下で、左開胸術によってラットの胸部を開き、心膜を除去し、壁内縫合により近位左冠動脈を永久的に閉塞させた（Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ  ２００８，  １１７：  １３８８−１３９６）。手術から２時間後、全ての処置群の各動物に硫酸デキストランまたは生理食塩水ビヒクルを表１に従ってｓ．ｃ．注射した。
【００７５】
【表１】
2018521086.tif 000005
【００７６】
ＭＩの誘発後３６日目に、ＣＯ２の吸入によってラットを屠殺し、心臓を回収して緩衝化ホルマリン溶液中で固定した。標準的な組織学的手順を用いて通例のパラフィン包埋を行った。
【００７７】
線維化の評価のためにマッソン・トリクローム染色を用いた。心臓を横方向に切断して、パラフィンに包埋された５つの切片にした。５つの５μｍのパラフィン切片は、Ｌｉｋａのミクロトーム上で作製した。標準的なマッソンのトリクロームプロトコルに従って、全ての切片を染色した。コラーゲン線維は青に染色され、核は黒に染色され、バックグラウンドは赤に染色された。コンピュータイメージングシステムで切片を可視化し、ＩｍａｇｅＪプログラムを用いて梗塞のサイズをマークして算出した。各動物について、結紮糸を含む切片を含む５つの連続切片を分析し、各心臓についての全ての切片の平均値を統計解析のための１つの値として扱った。
【００７８】
統計解析は、反復測定のための二元ＡＮＯＶＡに続くＢｏｎｆｅｒｒｏｎｉのポストホックテストによって行った。
【００７９】
心筋線維化の分析の結果
マッソン・トリクローム染色で染色した心臓の切片において、梗塞の辺縁領域における間質線維化を手作業で評価した。間質線維化の面積を左心室の総面積のパーセントとして算出した。各ラットについて、５つの断面を分析した。梗塞の辺縁ゾーンにおける間質線維化の程度を図１に示す。
【００８０】
間質線維化の程度は、対照のビヒクル処置群１Ｍ（２２．７±１．９％）と比較して硫酸デキストラン処置群２Ｍ（１１．９±０．９％）で有意に低かった。間質線維化の程度はまた、他の硫酸デキストラン処置群３Ｍ〜５Ｍでもより低かったが、その差は有意ではなかった。
【００８１】
硫酸デキストランの効果は、主に、ＭＩの後に線維化が発達している期間中のようである。従って、３週間にわたる硫酸デキストランでの処置を含む処置群２Ｍでは、線維化が有意に低減したが、より短い処置を伴う他の群（３Ｍ〜５Ｍ）における効果は、それほど明白ではなかった。これは、心筋梗塞のラットモデルにおける線維化の病態形成と一致するようである（Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｐａｔｈｏｌｏｇｙ  １９９５，  １４７（２）：３２５−３３８）。この論文は、梗塞した心臓組織における線維化プロセスが皮膚の創傷および心臓の非梗塞領域における線維化とは異なって制御されるということを開示する。
【００８２】
図２Ａ〜２Ｄは、群１Ｍからの２匹の動物（図２Ａおよび２Ｂ）および群２Ｍからの２匹の動物（図２Ｃおよび２Ｄ）における線維化の度合いの写真である。図中の矢印は、青に染色された線維化領域を示す。
【００８３】
従って、これらの結果は、硫酸デキストラン処置が、ビヒクル対照処置群と比較して、梗塞から５週間後における線維化を有意に低減するということを明らかにした。従って、硫酸デキストランは、心筋梗塞の後の線維形成を低減できる。
【００８４】
上記で説明される実施形態は、いくつかの説明用の本発明の例として理解されるべきである。当業者であれば、本発明の範囲から逸脱することなく、これらの実施形態に様々な改変、組み合わせ、および変更を加えることができるということを理解するであろう。特に、異なる実施形態における異なる部分的解決策は、技術的に可能な場合には、他の構成で組み合わせることができる。しかし、本発明の範囲は、添付の特許請求の範囲によって規定される。
【図１】
2018521086.tif 000006
【図２Ａ】
2018521086.tif 000007
【図２Ｂ】
2018521086.tif 000008
【図２Ｃ】
2018521086.tif 000009
【図２Ｄ】
2018521086.tif 000010
【国際調査報告】
2018521086.tif 000011
2018521086.tif 000012
2018521086.tif 000013
2018521086.tif 000014
2018521086.tif 000015