(57)【要約】本発明は、非肥満細胞性血液腫瘍性疾患関連全身性肥満細胞症（ＳＭ−ＡＨＮＭＤ）等、進行性全身性肥満細胞症の予防および処置のための方法および組成物を提供する。特に、本発明は、ヒトシグレック−８に結合する抗体もしくはアゴニストまたは前記抗体もしくはアゴニストを含む組成物の投与による、進行性全身性肥満細胞症の予防および処置のための方法を提供する。本発明は、また、ＳＭ−ＡＨＮＭＤ等、進行性全身性肥満細胞症の予防および処置のためのヒトシグレック−８に結合する抗体またはアゴニストを含む製造品またはキットを提供する。
2018533569.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
個体における進行性全身性肥満細胞症を処置または予防するための方法であって、該個体に、ヒトシグレック−８に結合する抗体の有効量を投与するステップを含む、方法。
【請求項２】
前記進行性全身性肥満細胞症が、侵襲性全身性肥満細胞症（ＡＳＭ）、肥満細胞白血病（ＭＣＬ）および非肥満細胞性血液腫瘍性疾患関連全身性肥満細胞症（ＳＭ−ＡＨＮＭＤ）からなる群から選択される、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記ＳＭ−ＡＨＮＭＤが、ＳＭ−骨髄異形成症候群（ＳＭ−ＭＤＳ）、ＳＭ−骨髄増殖性新生物（ＳＭ−ＭＰＮ）、ＳＭ−慢性骨髄単球性白血病（ＳＭ−ＣＭＭＬ）、ＳＭ−慢性好酸球性白血病（ＳＭ−ＣＥＬ）およびＳＭ−急性骨髄性白血病（ＳＭ−ＡＭＬ）からなる群から選択される、請求項２に記載の方法。
【請求項４】
前記進行性全身性肥満細胞症が、好酸球増加症に関連する、請求項１に記載の方法。
【請求項５】
前記進行性全身性肥満細胞症が、クラドリビン、インターフェロン−α、副腎皮質ステロイド、チロシンキナーゼ阻害剤またはこれらの組合せによって適切に制御されない、請求項１〜４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６】
前記個体が、ＫＩＴ  Ｄ８１６Ｖ変異を有する、請求項１〜５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７】
前記抗体が、該抗体の投与前のベースラインレベルと比較して、前記個体から得られる試料におけるシグレック−８を発現する肥満細胞の少なくとも約２０％を枯渇させる、請求項１〜６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８】
前記試料が、組織試料または生体液試料である、請求項７に記載の方法。
【請求項９】
前記生体液試料が、血液試料である、請求項８に記載の方法。
【請求項１０】
前記組織試料が、骨髄試料、皮膚試料、脾臓試料、リンパ節試料、肝臓試料または胃腸管試料である、請求項８に記載の方法。
【請求項１１】
進行性全身性肥満細胞症を有する前記個体における１つまたは複数の症状が、前記抗体の投与前のベースラインレベルと比較して低下する、請求項１〜１０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１２】
前記個体が、前記抗体の投与前に進行性全身性肥満細胞症と診断される、請求項１〜１１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１３】
前記抗体が、重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含み、前記重鎖可変領域が、（ｉ）配列番号６１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｉｉ）配列番号６２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２および（ｉｉｉ）配列番号６３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含み、および／または前記軽鎖可変領域が、（ｉ）配列番号６４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｉｉ）配列番号６５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２および（ｉｉｉ）配列番号６６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む、請求項１〜１２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１４】
前記抗体が、配列番号６のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および／または配列番号１６もしくは２１から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む、請求項１〜１２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１５】
前記抗体が、ヒトＩｇＧ  Ｆｃ領域を含む重鎖Ｆｃ領域を含む、請求項１〜１４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１６】
前記ヒトＩｇＧ  Ｆｃ領域が、ヒトＩｇＧ１を含む、請求項１５に記載の方法。
【請求項１７】
前記抗体が、配列番号７５のアミノ酸配列を含む重鎖、および／または配列番号７６もしくは７７から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖を含む、請求項１〜１２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１８】
前記抗体が、重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含み、前記重鎖可変領域が、（ｉ）配列番号６１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｉｉ）配列番号６２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２および（ｉｉｉ）配列番号６７〜７０から選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含み、および／または前記軽鎖可変領域が、（ｉ）配列番号６４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｉｉ）配列番号６５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２および（ｉｉｉ）配列番号７１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む、請求項１〜１２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１９】
前記抗体が、配列番号１１〜１４から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および／または配列番号２３〜２４から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む、請求項１〜１２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２０】
前記抗体が、配列番号２〜１４から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および／または配列番号１６〜２４から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む、請求項１〜１２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２１】
前記抗体が、配列番号２〜１０から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および／または配列番号１６〜２２から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む、請求項１〜１２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２２】
前記抗体が、以下：
（ａ）以下：
（１）配列番号２６〜２９から選択されるアミノ酸配列を含むＨＣ−ＦＲ１、
（２）配列番号６１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、
（３）配列番号３１〜３６から選択されるアミノ酸配列を含むＨＣ−ＦＲ２、
（４）配列番号６２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、
（５）配列番号３８〜４３から選択されるアミノ酸配列を含むＨＣ−ＦＲ３、
（６）配列番号６３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３および
（７）配列番号４５〜４６から選択されるアミノ酸配列を含むＨＣ−ＦＲ４
を含む重鎖可変領域、ならびに／または
（ｂ）以下：
（１）配列番号４８〜４９から選択されるアミノ酸配列を含むＬＣ−ＦＲ１、
（２）配列番号６４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、
（３）配列番号５１〜５３から選択されるアミノ酸配列を含むＬＣ−ＦＲ２、
（４）配列番号６５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、
（５）配列番号５５〜５８から選択されるアミノ酸配列を含むＬＣ−ＦＲ３、
（６）配列番号６６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３および
（７）配列番号６０のアミノ酸配列を含むＬＣ−ＦＲ４
を含む軽鎖可変領域
を含む、請求項１〜１２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２３】
前記抗体が、以下：
（ａ）以下：
（１）配列番号２６のアミノ酸配列を含むＨＣ−ＦＲ１、
（２）配列番号６１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、
（３）配列番号３４のアミノ酸配列を含むＨＣ−ＦＲ２、
（４）配列番号６２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、
（５）配列番号３８のアミノ酸配列を含むＨＣ−ＦＲ３、
（６）配列番号６３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３および
（７）配列番号４５のアミノ酸配列を含むＨＣ−ＦＲ４
を含む重鎖可変領域、ならびに／または
（ｂ）以下：
（１）配列番号４８のアミノ酸配列を含むＬＣ−ＦＲ１、
（２）配列番号６４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、
（３）配列番号５１のアミノ酸配列を含むＬＣ−ＦＲ２、
（４）配列番号６５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、
（５）配列番号５５のアミノ酸配列を含むＬＣ−ＦＲ３、
（６）配列番号６６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３および
（７）配列番号６０のアミノ酸配列を含むＬＣ−ＦＲ４
を含む軽鎖可変領域
を含む、請求項１〜１２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２４】
前記抗体が、以下：
（ａ）以下：
（１）配列番号２６のアミノ酸配列を含むＨＣ−ＦＲ１、
（２）配列番号６１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、
（３）配列番号３４のアミノ酸配列を含むＨＣ−ＦＲ２、
（４）配列番号６２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、
（５）配列番号３８のアミノ酸配列を含むＨＣ−ＦＲ３、
（６）配列番号６３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３および
（７）配列番号４５のアミノ酸配列を含むＨＣ−ＦＲ４
を含む重鎖可変領域、ならびに／または
（ｂ）以下：
（１）配列番号４８のアミノ酸配列を含むＬＣ−ＦＲ１、
（２）配列番号６４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、
（３）配列番号５１のアミノ酸配列を含むＬＣ−ＦＲ２、
（４）配列番号６５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、
（５）配列番号５８のアミノ酸配列を含むＬＣ−ＦＲ３、
（６）配列番号６６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３および
（７）配列番号６０のアミノ酸配列を含むＬＣ−ＦＲ４
を含む軽鎖可変領域
を含む、請求項１〜１２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２５】
前記抗体が、以下：
（ａ）（ｉ）配列番号８８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｉｉ）配列番号９１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２および（ｉｉｉ）配列番号９４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む重鎖可変領域、ならびに／または（ｉ）配列番号９７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｉｉ）配列番号１００のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２および（ｉｉｉ）配列番号１０３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む軽鎖可変領域、
（ｂ）（ｉ）配列番号８９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｉｉ）配列番号９２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２および（ｉｉｉ）配列番号９５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む重鎖可変領域、ならびに／または（ｉ）配列番号９８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｉｉ）配列番号１０１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２および（ｉｉｉ）配列番号１０４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む軽鎖可変領域、
（ｃ）（ｉ）配列番号９０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｉｉ）配列番号９３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２および（ｉｉｉ）配列番号９６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む重鎖可変領域、ならびに／または（ｉ）配列番号９９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｉｉ）配列番号１０２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２および（ｉｉｉ）配列番号１０５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む軽鎖可変領域
を含む、請求項１〜１２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２６】
前記抗体が、
ａ．配列番号１０６のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；および／または配列番号１０９のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、
ｂ．配列番号１０７のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；および／または配列番号１１０のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、
ｃ．配列番号１０８のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；および／または配列番号１１１のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域
を含む、請求項２５に記載の方法。
【請求項２７】
前記抗体が、モノクローナル抗体である、請求項１〜２６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２８】
前記抗体が、ＩｇＧ１抗体である、請求項１〜２７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２９】
前記抗体が、抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）活性を改善するように操作されている、請求項１〜２８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３０】
前記抗体が、ＡＤＣＣ活性を改善する、Ｆｃ領域における少なくとも１個のアミノ酸置換を含む、請求項２９に記載の方法。
【請求項３１】
前記抗体の重鎖のうち少なくとも１または２つが、フコシル化していない、請求項１〜３０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３２】
前記抗体が、ヒト抗体、ヒト化抗体またはキメラ抗体である、請求項１〜２５および２７〜３１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３３】
前記抗体が、Ｆａｂ、Ｆａｂ’−ＳＨ、Ｆｖ、ｓｃＦｖおよび（Ｆａｂ’）２断片からなる群から選択される抗体断片を含む、請求項１〜３２に記載の方法。
【請求項３４】
前記抗体が、細胞傷害性薬剤、サイトカイン、成長阻害性薬剤、タンパク質キナーゼ阻害剤、副腎皮質ステロイド、抗体または抗がん剤からなる群から選択される１種または複数種の追加的な治療剤と組み合わせて投与される、請求項１〜３３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３５】
進行性全身性肥満細胞症を有する個体におけるシグレック−８を発現する肥満細胞を枯渇させる方法であって、該個体に、ヒトシグレック−８に結合する抗体の有効量を投与するステップを含み、該抗体が、ＡＤＣＣ活性によってシグレック−８を発現する肥満細胞を死滅させる、方法。
【請求項３６】
前記進行性全身性肥満細胞症が、侵襲性全身性肥満細胞症（ＡＳＭ）、肥満細胞白血病（ＭＣＬ）および非肥満細胞性血液腫瘍性疾患関連全身性肥満細胞症（ＳＭ−ＡＨＮＭＤ）からなる群から選択される、請求項３５に記載の方法。
【請求項３７】
前記ＳＭ−ＡＨＮＭＤが、ＳＭ−骨髄異形成症候群（ＳＭ−ＭＤＳ）、ＳＭ−骨髄増殖性新生物（ＳＭ−ＭＰＮ）、ＳＭ−慢性骨髄単球性白血病（ＳＭ−ＣＭＭＬ）、ＳＭ−慢性好酸球性白血病（ＳＭ−ＣＥＬ）およびＳＭ−急性骨髄性白血病（ＳＭ−ＡＭＬ）からなる群から選択される、請求項３６に記載の方法。
【請求項３８】
前記進行性全身性肥満細胞症が、好酸球増加症に関連する、請求項３５に記載の方法。
【請求項３９】
前記進行性全身性肥満細胞症が、クラドリビン、インターフェロン−α、副腎皮質ステロイド、チロシンキナーゼ阻害剤またはこれらの組合せによって適切に制御されない、請求項３５〜３８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４０】
前記個体が、ＫＩＴ  Ｄ８１６Ｖ変異を有する、請求項３５〜３９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４１】
前記抗体が、該抗体の投与前のベースラインレベルと比較して、前記個体から得られる試料におけるシグレック−８を発現する前記肥満細胞の少なくとも約２０％を枯渇させる、請求項３５〜４０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４２】
前記試料が、組織試料または生体液試料である、請求項４１に記載の方法。
【請求項４３】
前記生体液試料が、血液試料である、請求項４２に記載の方法。
【請求項４４】
前記組織試料が、骨髄試料、皮膚試料、脾臓試料、リンパ節試料、肝臓試料または胃腸管試料である、請求項４２に記載の方法。
【請求項４５】
進行性全身性肥満細胞症を有する前記個体における１つまたは複数の症状が、前記抗体の投与前のベースラインレベルと比較して低下する、請求項３５〜４４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４６】
前記個体が、前記抗体の投与前に進行性全身性肥満細胞症と診断される、請求項３５〜４５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４７】
前記抗体が、重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含み、前記重鎖可変領域が、（ｉ）配列番号６１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｉｉ）配列番号６２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２および（ｉｉｉ）配列番号６３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含み、および／または前記軽鎖可変領域が、（ｉ）配列番号６４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｉｉ）配列番号６５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２および（ｉｉｉ）配列番号６６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む、請求項３５〜４６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４８】
前記抗体が、配列番号６のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および／または配列番号１６もしくは２１から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む、請求項３５〜４６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４９】
前記抗体が、ヒトＩｇＧ  Ｆｃ領域を含む重鎖Ｆｃ領域を含む、請求項３５〜４８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５０】
前記ヒトＩｇＧ  Ｆｃ領域が、ヒトＩｇＧ１を含む、請求項４９に記載の方法。
【請求項５１】
前記抗体が、配列番号７５のアミノ酸配列を含む重鎖、および／または配列番号７６もしくは７７から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖を含む、請求項３５〜４６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５２】
前記抗体が、重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含み、該重鎖可変領域が、（ｉ）配列番号６１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｉｉ）配列番号６２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２および（ｉｉｉ）配列番号６７〜７０から選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含み、および／または該軽鎖可変領域が、（ｉ）配列番号６４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｉｉ）配列番号６５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２および（ｉｉｉ）配列番号７１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む、請求項３５〜４６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５３】
前記抗体が、配列番号１１〜１４から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および／または配列番号２３〜２４から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む、請求項３５〜４６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５４】
前記抗体が、配列番号２〜１４から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および／または配列番号１６〜２４から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む、請求項３５〜４６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５５】
前記抗体が、配列番号２〜１０から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および／または配列番号１６〜２２から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む、請求項３５〜４６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５６】
前記抗体が、以下：
（ａ）以下：
（１）配列番号２６〜２９から選択されるアミノ酸配列を含むＨＣ−ＦＲ１、
（２）配列番号６１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、
（３）配列番号３１〜３６から選択されるアミノ酸配列を含むＨＣ−ＦＲ２、
（４）配列番号６２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、
（５）配列番号３８〜４３から選択されるアミノ酸配列を含むＨＣ−ＦＲ３、
（６）配列番号６３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３および
（７）配列番号４５〜４６から選択されるアミノ酸配列を含むＨＣ−ＦＲ４
を含む重鎖可変領域、ならびに／または
（ｂ）以下：
（１）配列番号４８〜４９から選択されるアミノ酸配列を含むＬＣ−ＦＲ１、
（２）配列番号６４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、
（３）配列番号５１〜５３から選択されるアミノ酸配列を含むＬＣ−ＦＲ２、
（４）配列番号６５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、
（５）配列番号５５〜５８から選択されるアミノ酸配列を含むＬＣ−ＦＲ３、
（６）配列番号６６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３および
（７）配列番号６０のアミノ酸配列を含むＬＣ−ＦＲ４
を含む軽鎖可変領域
を含む、請求項３５〜４６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５７】
前記抗体が、以下：
（ａ）以下：
（１）配列番号２６のアミノ酸配列を含むＨＣ−ＦＲ１、
（２）配列番号６１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、
（３）配列番号３４のアミノ酸配列を含むＨＣ−ＦＲ２、
（４）配列番号６２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、
（５）配列番号３８のアミノ酸配列を含むＨＣ−ＦＲ３、
（６）配列番号６３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３および
（７）配列番号４５のアミノ酸配列を含むＨＣ−ＦＲ４
を含む重鎖可変領域、ならびに／または
（ｂ）以下：
（１）配列番号４８のアミノ酸配列を含むＬＣ−ＦＲ１、
（２）配列番号６４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、
（３）配列番号５１のアミノ酸配列を含むＬＣ−ＦＲ２、
（４）配列番号６５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、
（５）配列番号５５のアミノ酸配列を含むＬＣ−ＦＲ３、
（６）配列番号６６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３および
（７）配列番号６０のアミノ酸配列を含むＬＣ−ＦＲ４
を含む軽鎖可変領域
を含む、請求項３５〜４６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５８】
前記抗体が、以下：
（ａ）以下：
（１）配列番号２６のアミノ酸配列を含むＨＣ−ＦＲ１、
（２）配列番号６１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、
（３）配列番号３４のアミノ酸配列を含むＨＣ−ＦＲ２、
（４）配列番号６２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、
（５）配列番号３８のアミノ酸配列を含むＨＣ−ＦＲ３、
（６）配列番号６３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３および
（７）配列番号４５のアミノ酸配列を含むＨＣ−ＦＲ４
を含む重鎖可変領域、ならびに／または
（ｂ）以下：
（１）配列番号４８のアミノ酸配列を含むＬＣ−ＦＲ１、
（２）配列番号６４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、
（３）配列番号５１のアミノ酸配列を含むＬＣ−ＦＲ２、
（４）配列番号６５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、
（５）配列番号５８のアミノ酸配列を含むＬＣ−ＦＲ３、
（６）配列番号６６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３および
（７）配列番号６０のアミノ酸配列を含むＬＣ−ＦＲ４
を含む軽鎖可変領域
を含む、請求項３５〜４６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５９】
前記抗体が、以下：
（ａ）（ｉ）配列番号８８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｉｉ）配列番号９１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２および（ｉｉｉ）配列番号９４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む重鎖可変領域、ならびに／または（ｉ）配列番号９７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｉｉ）配列番号１００のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２および（ｉｉｉ）配列番号１０３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む軽鎖可変領域、
（ｂ）（ｉ）配列番号８９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｉｉ）配列番号９２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２および（ｉｉｉ）配列番号９５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む重鎖可変領域、ならびに／または（ｉ）配列番号９８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｉｉ）配列番号１０１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２および（ｉｉｉ）配列番号１０４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む軽鎖可変領域、
（ｃ）（ｉ）配列番号９０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｉｉ）配列番号９３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２および（ｉｉｉ）配列番号９６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む重鎖可変領域、ならびに／または（ｉ）配列番号９９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｉｉ）配列番号１０２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２および（ｉｉｉ）配列番号１０５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む軽鎖可変領域
を含む、請求項３５〜４６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６０】
前記抗体が、
（ａ）配列番号１０６のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；および／または配列番号１０９のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、
（ｂ）配列番号１０７のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；および／または配列番号１１０のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、
（ｃ）配列番号１０８のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；および／または配列番号１１１のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域
を含む、請求項５９に記載の方法。
【請求項６１】
前記抗体が、モノクローナル抗体である、請求項３５〜６０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６２】
前記抗体が、ＩｇＧ１抗体である、請求項３５〜６１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６３】
前記抗体が、抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）活性を改善するように操作されている、請求項３５〜６２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６４】
前記抗体が、ＡＤＣＣ活性を改善する、Ｆｃ領域における少なくとも１個のアミノ酸置換を含む、請求項６３に記載の方法。
【請求項６５】
前記抗体の重鎖のうち少なくとも１または２つが、フコシル化していない、請求項３５〜６４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６６】
前記抗体が、ヒト抗体、ヒト化抗体またはキメラ抗体である、請求項３５〜５９および６１〜６５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６７】
前記抗体が、Ｆａｂ、Ｆａｂ’−ＳＨ、Ｆｖ、ｓｃＦｖおよび（Ｆａｂ’）２断片からなる群から選択される抗体断片を含む、請求項３５〜６６に記載の方法。
【請求項６８】
前記抗体が、細胞傷害性薬剤、サイトカイン、成長阻害性薬剤、タンパク質キナーゼ阻害剤、副腎皮質ステロイド、抗体または抗がん剤からなる群から選択される１種または複数種の追加的な治療剤と組み合わせて投与される、請求項３５〜６７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６９】
前記個体が、ヒトである、請求項１〜６８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７０】
前記抗体が、該抗体および薬学的に許容されるキャリアを含む医薬組成物中に存在する、請求項１〜６９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７１】
個体における進行性全身性肥満細胞症の処置または予防における使用のための、ヒトシグレック−８に結合する抗体を含む組成物。
【請求項７２】
前記抗体が、Ｆｃ領域と、該Ｆｃ領域に連結されたＮ−グリコシド結合型炭水化物鎖とを含み、該Ｎ−グリコシド結合型炭水化物鎖の５０％未満が、フコース残基を含有する、請求項７１に記載の組成物。
【請求項７３】
前記Ｎ−グリコシド結合型炭水化物鎖の実質的に全てが、フコース残基を含有しない、請求項７２に記載の組成物。
【請求項７４】
前記抗体が、該抗体の投与前のベースラインレベルと比較して、前記個体から得られる試料におけるシグレック−８を発現する肥満細胞の少なくとも約２０％を枯渇させる、請求項７１〜７３のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項７５】
前記試料が、組織試料または生体液試料である、請求項７４に記載の組成物。
【請求項７６】
前記生体液試料が、血液試料である、請求項７５に記載の組成物。
【請求項７７】
前記組織試料が、骨髄試料、皮膚試料、脾臓試料、リンパ節試料、肝臓試料または胃腸管試料である、請求項７５に記載の組成物。
【請求項７８】
進行性全身性肥満細胞症を有する前記個体における１つまたは複数の症状が、前記抗体の投与前のベースラインレベルと比較して低下する、請求項７１〜７７のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項７９】
前記抗体が、細胞傷害性薬剤、サイトカイン、成長阻害性薬剤、タンパク質キナーゼ阻害剤、副腎皮質ステロイド、抗体または抗がん剤からなる群から選択される１種または複数種の追加的な治療剤と組み合わせて投与される、請求項７１〜７８のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項８０】
ヒトシグレック−８に結合する抗体を含む医薬と、進行性全身性肥満細胞症を処置または予防するための、該医薬の投与を必要とする個体における該医薬の投与のための指示を含む添付文書とを含む、製造品。
【請求項８１】
前記進行性全身性肥満細胞症が、侵襲性全身性肥満細胞症（ＡＳＭ）、肥満細胞白血病（ＭＣＬ）および非肥満細胞性血液腫瘍性疾患関連全身性肥満細胞症（ＳＭ−ＡＨＮＭＤ）からなる群から選択される、請求項８０に記載の製造品。
【請求項８２】
前記ＳＭ−ＡＨＮＭＤが、ＳＭ−骨髄異形成症候群（ＳＭ−ＭＤＳ）、ＳＭ−骨髄増殖性新生物（ＳＭ−ＭＰＮ）、ＳＭ−慢性骨髄単球性白血病（ＳＭ−ＣＭＭＬ）、ＳＭ−慢性好酸球性白血病（ＳＭ−ＣＥＬ）およびＳＭ−急性骨髄性白血病（ＳＭ−ＡＭＬ）からなる群から選択される、請求項８１に記載の製造品。
【請求項８３】
前記進行性全身性肥満細胞症が、好酸球増加症に関連する、請求項８０に記載の製造品。
【請求項８４】
前記進行性全身性肥満細胞症が、クラドリビン、インターフェロン−α、副腎皮質ステロイド、チロシンキナーゼ阻害剤またはこれらの組合せによって適切に制御されない、請求項８０〜８３のいずれか一項に記載の製造品。
【請求項８５】
前記個体が、ＫＩＴ  Ｄ８１６Ｖ変異を有する、請求項８０〜８４のいずれか一項に記載の製造品。
【請求項８６】
前記添付文書が、前記処置が、前記抗体を含む前記医薬の投与前のベースラインレベルと比較して、前記個体から得られる試料におけるシグレック−８を発現する肥満細胞の少なくとも約２０％の枯渇において有効であることをさらに示す、請求項８０〜８５のいずれか一項に記載の製造品。
【請求項８７】
前記試料が、組織試料または生体液試料である、請求項８６に記載の製造品。
【請求項８８】
前記生体液試料が、血液試料である、請求項８７に記載の製造品。
【請求項８９】
前記組織試料が、骨髄試料、皮膚試料、脾臓試料、リンパ節試料、肝臓試料または胃腸管試料である、請求項８７に記載の製造品。
【請求項９０】
前記添付文書が、前記処置が、前記抗体を含む前記医薬の投与前のベースラインレベルと比較して、進行性全身性肥満細胞症を有する前記個体における１つまたは複数の症状の低下において有効であることをさらに示す、請求項８０〜８９のいずれか一項に記載の製造品。
【請求項９１】
１種または複数種の追加的な医薬をさらに含む製造品であって、前記添付文書が、シグレック−８に結合する前記抗体を含む前記医薬と組み合わせた、該１種または複数種の追加的な医薬の同時または逐次投与のための指示をさらに含む、請求項８０〜９０のいずれか一項に記載の製造品。
【請求項９２】
前記１種または複数種の追加的な医薬が、細胞傷害性薬剤、サイトカイン、成長阻害性薬剤、タンパク質キナーゼ阻害剤、副腎皮質ステロイド、抗体または抗がん剤からなる群から選択される治療剤を含む、請求項９１に記載の製造品。
【請求項９３】
前記個体が、ヒトである、請求項８０〜９２のいずれか一項に記載の製造品。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願への相互参照
本出願は、その全体が参考として本明細書に援用される、２０１５年１０月２２日に出願された米国仮特許出願第６２／２４５，２１８号に対する優先権を主張する。この出願の開示は、その全体が本明細書中に参考として援用される。
【０００２】
ＡＳＣＩＩテキストファイルにおける配列表の提出
ＡＳＣＩＩテキストファイルにおける次の提出の内容は、その全体が参照により本明細書に援用される；配列表のコンピュータ読み取り可能な形態（ＣＲＦ）（ファイル名：７０１７１２０００４４０ＳＥＱＬＩＳＴ．ｔｘｔ、記録された日付：２０１６年１０月７日、サイズ：９１ＫＢ）。
【０００３】
発明の分野
本発明は、ヒトシグレック−８に結合する抗体もしくはアゴニストまたは前記抗体もしくはアゴニストを含む組成物の投与により、進行性全身性肥満細胞症を予防または処置するための方法に関する。
【背景技術】
【０００４】
発明の背景
全身性肥満細胞症（ＳＭ）は、１種または複数種の皮膚外臓器における新生物肥満細胞の蓄積によって特徴付けられる希少な骨髄増殖性新生物である。２００８年の世界保健機関（ＷＨＯ）分類は、全身性肥満細胞症患者の７種のバリアントおよび１種のサブバリアントを認める。そのようなものとして、皮膚性肥満細胞症（ＣＭ）、無痛性全身性肥満細胞症（ＩＳＭ）、侵襲性全身性肥満細胞症（ＡＳＭ）、非肥満細胞性血液腫瘍性疾患関連全身性肥満細胞症（systemic  mastocytosis  with  an  associated  clonal  hematologic  non-mast  cell  lineage  disease；ＳＭ−ＡＨＮＭＤ）、肥満細胞白血病（ＭＣＬ）、肥満細胞肉腫および皮膚外肥満細胞腫、これに加えて、くすぶり型全身性肥満細胞症（ＳＳＭ）と命名されたＩＳＭのサブバリアントが挙げられる。全身性肥満細胞症におけるメジャーな診断基準は、関連する骨髄における形態学的に異常な肥満細胞の多巣性クラスターの存在である。マイナーな診断基準は、上昇した血清トリプターゼレベル、ＣＤ２５および／またはＣＤ２の異常な肥満細胞発現、ならびにＫＩＴＤ８１６Ｖ変異の存在を含む。進行性全身性肥満細胞症は、肥満細胞の浸潤に起因する臓器損傷によって特徴付けられる。Valentら、Eur.  J.  Clin  Invest.、２００７年、３７巻：４３５〜４５３頁およびValentら、Allergy、２０１４年、６９巻：１２６７〜１２７４頁を参照されたい。
【０００５】
あらゆる形態の全身性肥満細胞症において、肥満細胞脱顆粒の症状を制御するために抗メディエーター薬が使用される。進行性形態の全身性肥満細胞症においては、臓器損傷がよく見られ、患者は、平均余命の低下を示す。このような個体において、クラドリビンおよびインターフェロン−アルファ等の細胞減少性薬剤が、適応外で使用されており、ＫＩＴ  Ｄ８１６Ｖの阻害剤が研究中である。このような患者に対する必要は、著しく満たされていない。
【０００６】
シグレック（シアル酸結合免疫グロブリン様レクチン）は、主に白血球に存在し、細胞表面の複合糖質に付着したシアル酸に対するその特異性によって特徴付けられる、１回膜貫通細胞表面タンパク質である。シグレックファミリーは、哺乳動物において見出される少なくとも１５種のメンバーを含有する（Ｐｉｌｌａｉら、Ａｎｎｕ  Ｒｅｖ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．、３０巻：３５７〜３９２頁、２０１２年）。これらのメンバーは、シアロアドヘシン（ｓｉａｌｏａｄｈｅｓｉｏｎ）（シグレック−１）、ＣＤ２２（シグレック−２）、ＣＤ３３（シグレック−３）、ミエリン関連糖タンパク質（シグレック−４）、シグレック−５、ＯＢＢＰ１（シグレック−６）、ＡＩＲＭ１（シグレック−７）、ＳＡＦ−２（シグレック−８）およびＣＤ３２９（シグレック−９）を含む。シグレック−８は、新規ヒト好酸球タンパク質を同定する試みの一環として最初に発見された。好酸球による発現に加えて、これは、肥満細胞および好塩基球によっても発現される。シグレック−８は、硫酸化グリカン、すなわち、６’−スルホ−シアリルルイスＸまたは６’−スルホ−シアリル−Ｎ−アセチル−Ｓ−ラクトサミンを認識し、肥満細胞機能を阻害することが示された細胞内免疫受容抑制性チロシンモチーフ（ＩＴＩＭ）ドメインを含有する。抗シグレック−８抗体は、肥満細胞生存率に直接的に影響を与えないが、エフェクター機能を有する抗体は、抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（antibody  cell-mediated  cytotoxicity）（ＡＤＣＣ）を誘導することができる。しかし、ＡＤＣＣ活性の重要なメディエーターであるナチュラルキラー（ＮＫ）細胞は、慢性骨髄単球性白血病（ＣＭＭＬ）患者および骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）患者等、一部のＳＭ−ＡＨＮＭＤ患者において欠損していることが報告された。Marcondesら、PNAS、２００８年、１０５巻：２８６５〜２８７０頁およびKiladjianら、Leukemia、２００６年、２０巻：４６３〜４７０頁を参照されたい。加えて、欠損した細胞傷害性および低下した受容体発現が、がん患者の腫瘍関連および末梢血ＮＫ細胞において観察された。Pahlら、Immunobiology、２０１５年、ｄｏｉ：10.1016/j.imbio.2015.07.012を参照されたい。したがって、全身性肥満細胞症患者が、肥満細胞を死滅させるように誘導され得るインタクトなＡＤＣＣ機能を有するかについては不明である。
特許出願、特許公報および科学文献を含む本明細書に引用されるあらゆる参考文献は、個々の参考文献それぞれが具体的かつ個別に参照によりその全体が本明細書に組み入れられると示されているかのように、参照によりその全体が本明細書に組み入れられる。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００７】
【非特許文献１】Valentら、Eur.  J.  Clin  Invest.、２００７年、３７巻：４３５〜４５３頁
【非特許文献２】Valentら、Allergy、２０１４年、６９巻：１２６７〜１２７４頁
【非特許文献３】Pillaiら、Annu  Rev  Immunol.,  ３０巻：３５７〜３９２頁、２０１２年
【非特許文献４】Marcondesら、PNAS、２００８年、１０５巻：２８６５〜２８７０頁
【非特許文献５】Kiladjianら、Leukemia、２００６年、２０巻：４６３〜４７０頁
【非特許文献６】Pahlら、Immunobiology、２０１５年、ｄｏｉ：10.1016/j.imbio.2015.07.012
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００８】
進行性全身性肥満細胞症の予防または処置のための、ヒトシグレック−８に結合する抗体もしくはアゴニストまたはこれらを含む組成物を使用する方法が、本明細書に提供される。進行性全身性肥満細胞症としては、侵襲性全身性肥満細胞症（ＡＳＭ）、肥満細胞白血病（ＭＣＬ）および非肥満細胞性血液腫瘍性疾患関連全身性肥満細胞症（ＳＭ−ＡＨＮＭＤ）が挙げられるがこれらに限定されない。一部の実施形態では、ＳＭ−ＡＨＮＭＤは、ＳＭ−骨髄異形成症候群（ＳＭ−ＭＤＳ）、ＳＭ−骨髄増殖性新生物（ＳＭ−ＭＰＮ）、ＳＭ−慢性骨髄単球性白血病（ＳＭ−ＣＭＭＬ）、ＳＭ−慢性好酸球性白血病（ＳＭ−ＣＥＬ）およびＳＭ−急性骨髄性白血病（ＳＭ−ＡＭＬ）からなる群から選択される。
【０００９】
一態様では、個体における進行性全身性肥満細胞症を処置または予防するための方法であって、個体に、ヒトシグレック−８に結合する抗体またはアゴニストの有効量を投与するステップを含む方法が、本明細書に提供される。本明細書における一部の実施形態では、進行性全身性肥満細胞症は、侵襲性全身性肥満細胞症（ＡＳＭ）、肥満細胞白血病（ＭＣＬ）および非肥満細胞性血液腫瘍性疾患関連全身性肥満細胞症（ＳＭ−ＡＨＮＭＤ）からなる群から選択される。さらなる実施形態では、ＳＭ−ＡＨＮＭＤは、ＳＭ−骨髄異形成症候群（ＳＭ−ＭＤＳ）、ＳＭ−骨髄増殖性新生物（ＳＭ−ＭＰＮ）、ＳＭ−慢性骨髄単球性白血病（ＳＭ−ＣＭＭＬ）、ＳＭ−慢性好酸球性白血病（ＳＭ−ＣＥＬ）およびＳＭ−急性骨髄性白血病（ＳＭ−ＡＭＬ）からなる群から選択される。本明細書における一部の実施形態では、進行性全身性肥満細胞症は、好酸球増加症に関連する。本明細書における一部の実施形態では、進行性全身性肥満細胞症は、クラドリビン、インターフェロン−α、副腎皮質ステロイド、チロシンキナーゼ阻害剤またはこれらの組合せによって適切に制御されない。本明細書における一部の実施形態では、個体は、ＫＩＴ  Ｄ８１６Ｖ変異を有する。本明細書における一部の実施形態では、抗体またはアゴニストは、抗体またはアゴニストの投与前のベースラインレベルと比較して、個体から得られる試料におけるシグレック−８を発現する肥満細胞の少なくとも約２０％を枯渇または低下させる。本明細書における一部の実施形態では、抗体またはアゴニストは、抗体またはアゴニストの投与前のベースラインレベルと比較して、個体から得られる試料におけるシグレック−８を発現する肥満細胞の少なくとも約３０％、約４０％または約５０％を枯渇または低下させる。一部のさらなる実施形態では、試料は、組織試料または生体試料である。さらなる実施形態では、生体液試料は、血液試料である。さらなる実施形態では、組織試料は、骨髄試料、皮膚試料、脾臓試料、リンパ節試料、肝臓試料または胃腸管試料である。本明細書における実施形態の一部では、進行性全身性肥満細胞症を有する個体における１つまたは複数の症状は、ヒトシグレック−８に結合する抗体またはアゴニストの投与前のベースラインレベルと比較して低下する。一部の実施形態では、進行性全身性肥満細胞症を有する個体における１種または複数種の病理学的パラメータは、ヒトシグレック−８に結合する抗体またはアゴニストの投与前のベースラインレベルと比較して、低下または改善される。本明細書における実施形態の一部では、個体は、抗体の投与前に進行性全身性肥満細胞症と診断される。本明細書における実施形態のいずれかでは、個体は、ヒトであってもよい。本明細書における実施形態のいずれかでは、抗体は、抗体および薬学的に許容されるキャリアを含む医薬組成物中に存在することができる。本明細書における実施形態のいずれかでは、アゴニストは、アゴニストおよび薬学的に許容されるキャリアを含む医薬組成物中に存在することができる。
【００１０】
別の態様では、進行性全身性肥満細胞症を有する個体におけるシグレック−８を発現する肥満細胞を枯渇させるための方法であって、個体に、ヒトシグレック−８に結合する抗体またはアゴニストの有効量を投与するステップを含み、抗体またはアゴニストが、ＡＤＣＣ活性によってシグレック−８を発現する肥満細胞を死滅させる、方法が、本明細書に提供される。本明細書における一部の実施形態では、進行性全身性肥満細胞症は、侵襲性全身性肥満細胞症（ＡＳＭ）、肥満細胞白血病（ＭＣＬ）および非肥満細胞性血液腫瘍性疾患関連全身性肥満細胞症（ＳＭ−ＡＨＮＭＤ）からなる群から選択される。さらなる実施形態では、ＳＭ−ＡＨＮＭＤは、ＳＭ−骨髄異形成症候群（ＳＭ−ＭＤＳ）、ＳＭ−骨髄増殖性新生物（ＳＭ−ＭＰＮ）、ＳＭ−慢性骨髄単球性白血病（ＳＭ−ＣＭＭＬ）、ＳＭ−慢性好酸球性白血病（ＳＭ−ＣＥＬ）およびＳＭ−急性骨髄性白血病（ＳＭ−ＡＭＬ）からなる群から選択される。本明細書における一部の実施形態では、進行性全身性肥満細胞症は、好酸球増加症に関連する。本明細書における一部の実施形態では、進行性全身性肥満細胞症は、クラドリビン、インターフェロン−α、副腎皮質ステロイド、チロシンキナーゼ阻害剤またはこれらの組合せによって適切に制御されない。本明細書における一部の実施形態では、個体は、ＫＩＴ  Ｄ８１６Ｖ変異を有する。本明細書における一部の実施形態では、抗体またはアゴニストは、抗体またはアゴニストの投与前のベースラインレベルと比較して、個体から得られる試料におけるシグレック−８を発現する肥満細胞の少なくとも約２０％を枯渇させる。本明細書における一部の実施形態では、抗体またはアゴニストは、抗体またはアゴニストの投与前のベースラインレベルと比較して、個体から得られる試料におけるシグレック−８を発現する肥満細胞の少なくとも約３０％、約４０％または約５０％を枯渇させる。一部のさらなる実施形態では、試料は、組織試料または生体試料である。さらなる実施形態では、生体液試料は、血液試料である。さらなる実施形態では、組織試料は、骨髄試料、皮膚試料、脾臓試料、リンパ節試料、肝臓試料または胃腸管試料である。本明細書における実施形態の一部では、進行性全身性肥満細胞症を有する個体における１つまたは複数の症状は、ヒトシグレック−８に結合する抗体またはアゴニストの投与前のベースラインレベルと比較して低下する。一部の実施形態では、進行性全身性肥満細胞症を有する個体における１種または複数種の病理学的パラメータは、ヒトシグレック−８に結合する抗体またはアゴニストの投与前のベースラインレベルと比較して、低下または改善される。本明細書における実施形態の一部では、個体は、抗体の投与前に進行性全身性肥満細胞症と診断される。本明細書における実施形態のいずれかでは、個体は、ヒトであってもよい。本明細書における実施形態のいずれかでは、抗体は、抗体および薬学的に許容されるキャリアを含む医薬組成物中に存在することができる。本明細書における実施形態のいずれかでは、アゴニストは、アゴニストおよび薬学的に許容されるキャリアを含む医薬組成物中に存在することができる。
【００１１】
別の態様では、個体における進行性全身性肥満細胞症の処置または予防における使用のための、ヒトシグレック−８に結合する抗体またはアゴニストを含む組成物が、本明細書に提供される。一部の実施形態では、抗体は、Ｆｃ領域と、Ｆｃ領域に連結されたＮ−グリコシド結合型炭水化物鎖とを含み、Ｎ−グリコシド結合型炭水化物鎖の５０％未満は、フコース残基を含有する。さらなる実施形態では、Ｎ−グリコシド結合型炭水化物鎖の実質的に全てが、フコース残基を含有しない。本明細書における一部の実施形態では、進行性全身性肥満細胞症は、侵襲性全身性肥満細胞症（ＡＳＭ）、肥満細胞白血病（ＭＣＬ）および非肥満細胞性血液腫瘍性疾患関連全身性肥満細胞症（ＳＭ−ＡＨＮＭＤ）からなる群から選択される。さらなる実施形態では、ＳＭ−ＡＨＮＭＤは、ＳＭ−骨髄異形成症候群（ＳＭ−ＭＤＳ）、ＳＭ−骨髄増殖性新生物（ＳＭ−ＭＰＮ）、ＳＭ−慢性骨髄単球性白血病（ＳＭ−ＣＭＭＬ）、ＳＭ−慢性好酸球性白血病（ＳＭ−ＣＥＬ）およびＳＭ−急性骨髄性白血病（ＳＭ−ＡＭＬ）からなる群から選択される。本明細書における一部の実施形態では、進行性全身性肥満細胞症は、好酸球増加症に関連する。本明細書における一部の実施形態では、進行性全身性肥満細胞症は、クラドリビン、インターフェロン−α、副腎皮質ステロイド、チロシンキナーゼ阻害剤またはこれらの組合せによって適切に制御されない。本明細書における一部の実施形態では、個体は、ＫＩＴ  Ｄ８１６Ｖ変異を有する。本明細書における一部の実施形態では、抗体またはアゴニストは、抗体またはアゴニストの投与前のベースラインレベルと比較して、個体から得られる試料におけるシグレック−８を発現する肥満細胞の少なくとも約２０％を枯渇または低下させる。本明細書における一部の実施形態では、抗体またはアゴニストは、抗体またはアゴニストの投与前のベースラインレベルと比較して、個体から得られる試料におけるシグレック−８を発現する肥満細胞の少なくとも約３０％、約４０％または約５０％を枯渇または低下させる。一部のさらなる実施形態では、試料は、組織試料または生体試料である。さらなる実施形態では、生体液試料は、血液試料である。さらなる実施形態では、組織試料は、骨髄試料、皮膚試料、脾臓試料、リンパ節試料、肝臓試料または胃腸管試料である。本明細書における実施形態の一部では、進行性全身性肥満細胞症を有する個体における１つまたは複数の症状は、ヒトシグレック−８に結合する抗体またはアゴニストの投与前のベースラインレベルと比較して低下する。一部の実施形態では、進行性全身性肥満細胞症を有する個体における１種または複数種の病理学的パラメータは、ヒトシグレック−８に結合する抗体またはアゴニストの投与前のベースラインレベルと比較して、低下または改善される。本明細書における実施形態の一部では、個体は、抗体の投与前に進行性全身性肥満細胞症と診断される。本明細書における実施形態のいずれかでは、個体は、ヒトであってもよい。本明細書における実施形態のいずれかでは、組成物は、薬学的に許容されるキャリアをさらに含むことができる。
【００１２】
別の態様では、進行性全身性肥満細胞症を有する個体におけるシグレック−８を発現する肥満細胞の枯渇における使用のための、ヒトシグレック−８に結合する抗体またはアゴニストを含む組成物であって、抗体またはアゴニストが、ＡＤＣＣ活性によってシグレック−８を発現する肥満細胞を死滅させる、組成物が、本明細書に提供される。一部の実施形態では、抗体は、Ｆｃ領域と、Ｆｃ領域に連結されたＮ−グリコシド結合型炭水化物鎖とを含み、Ｎ−グリコシド結合型炭水化物鎖の５０％未満は、フコース残基を含有する。さらなる実施形態では、Ｎ−グリコシド結合型炭水化物鎖の実質的に全てが、フコース残基を含有しない。本明細書における一部の実施形態では、進行性全身性肥満細胞症は、侵襲性全身性肥満細胞症（ＡＳＭ）、肥満細胞白血病（ＭＣＬ）および非肥満細胞性血液腫瘍性疾患関連全身性肥満細胞症（ＳＭ−ＡＨＮＭＤ）からなる群から選択される。さらなる実施形態では、ＳＭ−ＡＨＮＭＤは、ＳＭ−骨髄異形成症候群（ＳＭ−ＭＤＳ）、ＳＭ−骨髄増殖性新生物（ＳＭ−ＭＰＮ）、ＳＭ−慢性骨髄単球性白血病（ＳＭ−ＣＭＭＬ）、ＳＭ−慢性好酸球性白血病（ＳＭ−ＣＥＬ）およびＳＭ−急性骨髄性白血病（ＳＭ−ＡＭＬ）からなる群から選択される。本明細書における一部の実施形態では、進行性全身性肥満細胞症は、好酸球増加症に関連する。本明細書における一部の実施形態では、進行性全身性肥満細胞症は、クラドリビン、インターフェロン−α、副腎皮質ステロイド、チロシンキナーゼ阻害剤またはこれらの組合せによって適切に制御されない。本明細書における一部の実施形態では、個体は、ＫＩＴ  Ｄ８１６Ｖ変異を有する。本明細書における一部の実施形態では、抗体またはアゴニストは、抗体またはアゴニストの投与前のベースラインレベルと比較して、個体から得られる試料におけるシグレック−８を発現する肥満細胞の少なくとも約２０％を枯渇させる。本明細書における一部の実施形態では、抗体またはアゴニストは、抗体またはアゴニストの投与前のベースラインレベルと比較して、個体から得られる試料におけるシグレック−８を発現する肥満細胞の少なくとも約３０％、約４０％または約５０％を枯渇または低下させる。一部のさらなる実施形態では、試料は、組織試料または生体試料である。さらなる実施形態では、生体液試料は、血液試料である。さらなる実施形態では、組織試料は、骨髄試料、皮膚試料、脾臓試料、リンパ節試料、肝臓試料または胃腸管試料である。本明細書における実施形態の一部では、進行性全身性肥満細胞症を有する個体における１つまたは複数の症状は、ヒトシグレック−８に結合する抗体またはアゴニストの投与前のベースラインレベルと比較して低下する。一部の実施形態では、進行性全身性肥満細胞症を有する個体における１種または複数種の病理学的パラメータは、ヒトシグレック−８に結合する抗体またはアゴニストの投与前のベースラインレベルと比較して、低下または改善される。本明細書における実施形態の一部では、個体は、抗体の投与前に進行性全身性肥満細胞症と診断される。本明細書における実施形態のいずれかでは、個体は、ヒトであってもよい。本明細書における実施形態のいずれかでは、組成物は��薬学的に許容されるキャリアをさらに含むことができる。
【００１３】
一部の態様では、ヒトシグレック−８に結合する抗体またはアゴニストを含む医薬と、進行性全身性肥満細胞症を処置または予防するための、該医薬の投与を必要とする個体における該医薬の投与のための指示を含む添付文書とを含む製造品またはキットも、本明細書に提供される。本明細書における一部の実施形態では、進行性全身性肥満細胞症は、侵襲性全身性肥満細胞症（ＡＳＭ）、肥満細胞白血病（ＭＣＬ）および非肥満細胞性血液腫瘍性疾患関連全身性肥満細胞症（ＳＭ−ＡＨＮＭＤ）からなる群から選択される。さらなる実施形態では、ＳＭ−ＡＨＮＭＤは、ＳＭ−骨髄異形成症候群（ＳＭ−ＭＤＳ）、ＳＭ−骨髄増殖性新生物（ＳＭ−ＭＰＮ）、ＳＭ−慢性骨髄単球性白血病（ＳＭ−ＣＭＭＬ）、ＳＭ−慢性好酸球性白血病（ＳＭ−ＣＥＬ）およびＳＭ−急性骨髄性白血病（ＳＭ−ＡＭＬ）からなる群から選択される。本明細書における一部の実施形態では、進行性全身性肥満細胞症は、好酸球増加症に関連する。本明細書における一部の実施形態では、進行性全身性肥満細胞症は、クラドリビン、インターフェロン−α、副腎皮質ステロイド、チロシンキナーゼ阻害剤またはこれらの組合せによって適切に制御されない。本明細書における一部の実施形態では、個体は、ＫＩＴ  Ｄ８１６Ｖ変異を有する。本明細書における一部の実施形態では、添付文書は、処置が、抗体またはアゴニストを含む医薬の投与前のベースラインレベルと比較して、個体から得られる試料におけるシグレック−８を発現する肥満細胞の少なくとも約２０％の枯渇または低下において有効であることをさらに示す。本明細書における一部の実施形態では、添付文書は、処置が、抗体またはアゴニストの投与前のベースラインレベルと比較して、個体から得られる試料におけるシグレック−８を発現する肥満細胞の少なくとも約３０％、約４０％または約５０％の枯渇または低下において有効であることをさらに示す。一部のさらなる実施形態では、試料は、組織試料または生体試料である。さらなる実施形態では、生体液試料は、血液試料である。さらなる実施形態では、組織試料は、骨髄試料、皮膚試料、脾臓試料、リンパ節試料、肝臓試料または胃腸管試料である。本明細書における実施形態の一部では、添付文書は、処置が、抗体またはアゴニストを含む医薬の投与前のベースラインレベルと比較して、進行性全身性肥満細胞症を有する個体における１つまたは複数の症状の低下または改善において有効であることをさらに示す。一部の実施形態では、添付文書は、処置が、抗体またはアゴニストを含む医薬の投与前のベースラインレベルと比較して、進行性全身性肥満細胞症を有する個体における１種または複数種の病理学的パラメータの低下または改善において有効であることをさらに示す。本明細書における一部の実施形態では、製造品またはキットは、１種または複数種の追加的な医薬をさらに含み、添付文書は、シグレック−８に結合する抗体またはアゴニストを含む医薬と組み合わせた、１種または複数種の追加的な医薬の同時または逐次投与のための指示をさらに含む。一部の実施形態では、１種または複数種の追加的な医薬は、細胞傷害性薬剤、サイトカイン、成長阻害性薬剤、タンパク質キナーゼ阻害剤、副腎皮��ステロイド、抗体または抗がん剤からなる群から選択される治療剤を含む。本明細書における実施形態の一部では、個体は、抗体の投与前に進行性全身性肥満細胞症と診断される。本明細書における実施形態のいずれかでは、個体は、ヒトであってもよい。本明細書における実施形態のいずれかでは、抗体は、抗体および薬学的に許容されるキャリアを含む医薬組成物中に存在することができる。本明細書における実施形態のいずれかでは、アゴニストは、アゴニストおよび薬学的に許容されるキャリアを含む医薬組成物中に存在することができる。
【００１４】
一部の態様では、ヒトシグレック−８に結合する抗体またはアゴニストを含む医薬と、肥満細胞を枯渇させるための、進行性全身性肥満細胞症を有する個体における医薬の投与のための指示を含む添付文書とを含む製造品またはキットであって、抗体またはアゴニストが、ＡＤＣＣ活性によってシグレック−８を発現する肥満細胞を死滅させる、製造品またはキットも、本明細書に提供される。本明細書における一部の実施形態では、進行性全身性肥満細胞症は、侵襲性全身性肥満細胞症（ＡＳＭ）、肥満細胞白血病（ＭＣＬ）および非肥満細胞性血液腫瘍性疾患関連全身性肥満細胞症（ＳＭ−ＡＨＮＭＤ）からなる群から選択される。さらなる実施形態では、ＳＭ−ＡＨＮＭＤは、ＳＭ−骨髄異形成症候群（ＳＭ−ＭＤＳ）、ＳＭ−骨髄増殖性新生物（ＳＭ−ＭＰＮ）、ＳＭ−慢性骨髄単球性白血病（ＳＭ−ＣＭＭＬ）、ＳＭ−慢性好酸球性白血病（ＳＭ−ＣＥＬ）およびＳＭ−急性骨髄性白血病（ＳＭ−ＡＭＬ）からなる群から選択される。本明細書における一部の実施形態では、進行性全身性肥満細胞症は、好酸球増加症に関連する。本明細書における一部の実施形態では、進行性全身性肥満細胞症は、クラドリビン、インターフェロン−α、副腎皮質ステロイド、チロシンキナーゼ阻害剤またはこれらの組合せによって適切に制御されない。本明細書における一部の実施形態では、個体は、ＫＩＴ  Ｄ８１６Ｖ変異を有する。本明細書における一部の実施形態では、添付文書は、処置が、抗体またはアゴニストを含む医薬の投与前のベースラインレベルと比較して、個体から得られる試料におけるシグレック−８を発現する肥満細胞の少なくとも約２０％の枯渇において有効であることをさらに示す。本明細書における一部の実施形態では、添付文書は、処置が、抗体またはアゴニストを含む医薬の投与前のベースラインレベルと比較して、個体から得られる試料におけるシグレック−８を発現する肥満細胞の少なくとも約３０％、約４０％または約５０％の枯渇において有効であることをさらに示す。一部のさらなる実施形態では、試料は、組織試料または生体試料である。さらなる実施形態では、生体液試料は、血液試料である。さらなる実施形態では、組織試料は、骨髄試料、皮膚試料、脾臓試料、リンパ節試料、肝臓試料または胃腸管試料である。本明細書における実施形態の一部では、添付文書は、処置が、抗体またはアゴニストを含む医薬の投与前のベースラインレベルと比較して、進行性全身性肥満細胞症を有する個体における１つまたは複数の症状の低下または改善において有効であることをさらに示す。一部の実施形態では、添付文書は、処置が、抗体またはアゴニストを含む医薬の投与前のベースラインレベルと比較して、進行性全身性肥満細胞症を有する個体における１種または複数種の病理学的パラメータの低下または改善において有効であることをさらに示す。本明細書における一部の実施形態では、製造品またはキットは、１種または複数種の追加的な医薬をさらに含み、添付文書は、シグレック−８に結合する抗体またはアゴニストを含む医薬と組み合わせた、１種または複数種の追加的な医薬の同時または逐次投与のための指示をさらに含む。一部の実施形態では、１種または複数種の追加��な医薬は、細胞傷害性薬剤、サイトカイン、成長阻害性薬剤、タンパク質キナーゼ阻害剤、副腎皮質ステロイド、抗体または抗がん剤からなる群から選択される治療剤を含む。本明細書における実施形態の一部では、個体は、抗体の投与前に進行性全身性肥満細胞症と診断される。本明細書における実施形態のいずれかでは、個体は、ヒトであってもよい。本明細書における実施形態のいずれかでは、抗体は、抗体および薬学的に許容されるキャリアを含む医薬組成物中に存在することができる。本明細書における実施形態のいずれかでは、アゴニストは、アゴニストおよび薬学的に許容されるキャリアを含む医薬組成物中に存在することができる。
【００１５】
他の態様では、個体における進行性全身性肥満細胞症を処置または予防するための方法であって、個体に、ヒトシグレック−８に結合するアゴニストの有効量を投与するステップを含む方法が、本明細書に提供される。本明細書における一部の実施形態では、アゴニストは、６’−スルホ−ｓＬｅＸ含有リガンド、６’−スルホ−ｓＬｅＸ含有オリゴ糖、６’−スルホ−ｓＬｅＸ含有ポリペプチドおよび６’−スルホ−ｓＬｅＸ含有糖タンパク質からなる群から選択される、６’−スルホ−ｓＬｅＸ含有アゴニストである。一部の実施形態では、アゴニストは、ヒトシグレック−８に結合するアゴニスト抗体である。
【００１６】
さらに別の態様では、進行性肥満細胞症を有する個体における肥満細胞を枯渇または低下させるための方法であって、個体に、ヒトシグレック−８に結合するアゴニストの有効量を投与するステップを含む方法が、本明細書に提供される。本明細書における一部の実施形態では、アゴニストは、６’−スルホ−ｓＬｅＸ含有リガンド、６’−スルホ−ｓＬｅＸ含有オリゴ糖、６’−スルホ−ｓＬｅＸ含有ポリペプチドおよび６’−スルホ−ｓＬｅＸ含有糖タンパク質からなる群から選択される、６’−スルホ−ｓＬｅＸ含有アゴニストである。一部の実施形態では、アゴニストは、ヒトシグレック−８に結合するアゴニスト抗体である。
【００１７】
本方法およびそれにおける使用のための組成物の実施形態のいずれかにおいて、抗体は、モノクローナル抗体であってよい。本方法およびそれにおける使用のための組成物の実施形態のいずれかでは、抗体は、ＩｇＧ１抗体であってよい。本方法およびそれにおける使用のための組成物の実施形態のいずれかでは、抗体は、抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）活性を改善するように操作することができる。さらなる実施形態では、抗体は、ＡＤＣＣ活性を改善する、Ｆｃ領域における少なくとも１個のアミノ酸置換を含む。本方法およびそれにおける使用のための組成物の実施形態のいずれかでは、抗体の重鎖のうち１または２つは、フコシル化していなくてよい。本方法およびそれにおける使用のための組成物の実施形態のいずれかにおいて、抗体は、ヒト抗体、ヒト化抗体またはキメラ抗体であってよい。本明細書における使用のための方法および組成物の実施形態の一部では、抗体は、Ｆａｂ、Ｆａｂ’−ＳＨ、Ｆｖ、ｓｃＦｖおよび（Ｆａｂ’）２断片からなる群から選択される抗体断片である。本方法およびそれにおける使用のための組成物の実施形態の一部において、抗体は、Ｆａｂ、Ｆａｂ’−ＳＨ、Ｆｖ、ｓｃＦｖおよび（Ｆａｂ’）２断片からなる群より選択される抗体断片を含む。本明細書における使用のための方法および組成物の実施形態のいずれかでは、抗体は、細胞傷害性薬剤、サイトカイン、成長阻害性薬剤、タンパク質キナーゼ阻害剤、副腎皮質ステロイド、抗体または抗がん剤からなる群から選択される１種または複数種の追加的な治療剤と組み合わせて投与することができる。一部の実施形態において、抗体は、重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含み、重鎖可変領域は、（ｉ）配列番号６１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｉｉ）配列番号６２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２および（ｉｉｉ）配列番号６３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含み、かつ／または軽鎖可変領域は、（ｉ）配列番号６４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｉｉ）配列番号６５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２および（ｉｉｉ）配列番号６６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。一部の実施形態において、抗体は、配列番号６のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および／または配列番号１６もしくは２１から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。一部の実施形態において、抗体は、ヒトＩｇＧ  Ｆｃ領域を含む重鎖Ｆｃ領域を含む。さらなる実施形態において、ヒトＩｇＧ  Ｆｃ領域は、ヒトＩｇＧ１またはヒトＩｇＧ４を含む。さらなる実施形態において、ヒトＩｇＧ４は、アミノ酸置換Ｓ２２８Ｐを含み、アミノ酸残基は、Ｋａｂａｔで規定されたＥＵインデックスに従って番号付けされる。一部の実施形態において、ヒトＩｇＧ１は、配列番号７８のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態において、ヒトＩｇＧ４は、配列番号７９のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態において、抗体は、配列番号７５のアミノ酸配列を含む重鎖；および／または配列番号７６もしくは７７のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。一部の実施形態において、抗体は、重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含み、重鎖可変領域が、（ｉ）配列番号６１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−��１、（ｉｉ）配列番号６２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２および（ｉｉｉ）配列番号６７〜７０から選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含み、かつ／または軽鎖可変領域が、（ｉ）配列番号６４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｉｉ）配列番号６５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２および（ｉｉｉ）配列番号７１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。一部の実施形態において、抗体は、配列番号１１〜１４から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および／または配列番号２３〜２４から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。一部の実施形態において、抗体は、配列番号２〜１４から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；および／または配列番号１６〜２４から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。一部の実施形態において、抗体は、配列番号２〜１０から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；および／または配列番号１６〜２２から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。一部の実施形態において、抗体は、（ａ）（１）配列番号２６〜２９から選択されるアミノ酸配列を含むＨＣ−ＦＲ１；（２）配列番号６１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１；（３）配列番号３１〜３６から選択されるアミノ酸配列を含むＨＣ−ＦＲ２；（４）配列番号６２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２；（５）配列番号３８〜４３から選択されるアミノ酸配列を含むＨＣ−ＦＲ３；（６）配列番号６３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３；および（７）配列番号４５〜４６から選択されるアミノ酸配列を含むＨＣ−ＦＲ４を含む重鎖可変領域、および／または（ｂ）（１）配列番号４８〜４９から選択されるアミノ酸配列を含むＬＣ−ＦＲ１；（２）配列番号６４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１；（３）配列番号５１〜５３から選択されるアミノ酸配列を含むＬＣ−ＦＲ２；（４）配列番号６５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２；（５）配列番号５５〜５８から選択されるアミノ酸配列を含むＬＣ−ＦＲ３；（６）配列番号６６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３；および（７）配列番号６０のアミノ酸配列を含むＬＣ−ＦＲ４を含む軽鎖可変領域を含む。一部の実施形態において、抗体は、（ａ）（１）配列番号２６のアミノ酸配列を含むＨＣ−ＦＲ１；（２）配列番号６１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１；（３）配列番号３４のアミノ酸配列を含むＨＣ−ＦＲ２；（４）配列番号６２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２；（５）配列番号３８のアミノ酸配列を含むＨＣ−ＦＲ３；（６）配列番号６３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３；および（７）配列番号４５のアミノ酸配列を含むＨＣ−ＦＲ４を含む重鎖可変領域；および／または（ｂ）（１）配列番号４８のアミノ酸配列を含むＬＣ−ＦＲ１；（２）配列番号６４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１；（３）配列番号５１のアミノ酸配列を含むＬＣ−ＦＲ２；（４）配列番号６５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２；（５）配列番号５５のアミノ酸配列を含むＬＣ−ＦＲ３；（６）配列番号６６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３；および（７）配列番号６０のアミノ酸配列を含むＬＣ−ＦＲ４を含む軽鎖可変領域を含む。一部の実施形態において、抗体は、（ａ）（１）��列番号２６のアミノ酸配列を含むＨＣ−ＦＲ１；（２）配列番号６１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１；（３）配列番号３４のアミノ酸配列を含むＨＣ−ＦＲ２；（４）配列番号６２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２；（５）配列番号３８のアミノ酸配列を含むＨＣ−ＦＲ３；（６）配列番号６３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３；および（７）配列番号４５のアミノ酸配列を含むＨＣ−ＦＲ４を含む重鎖可変領域；および／または（ｂ）（１）配列番号４８のアミノ酸配列を含むＬＣ−ＦＲ１；（２）配列番号６４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１；（３）配列番号５１のアミノ酸配列を含むＬＣ−ＦＲ２；（４）配列番号６５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２；（５）配列番号５８のアミノ酸配列を含むＬＣ−ＦＲ３；（６）配列番号６６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３；および（７）配列番号６０のアミノ酸配列を含むＬＣ−ＦＲ４を含む軽鎖可変領域を含む。一部の実施形態において、抗体は、（ｉ）配列番号８８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｉｉ）配列番号９１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２および（ｉｉｉ）配列番号９４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む重鎖可変領域；および／または（ｉ）配列番号９７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｉｉ）配列番号１００のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２および（ｉｉｉ）配列番号１０３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む軽鎖可変領域を含む。一部の実施形態において、抗体は、（ｉ）配列番号８９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｉｉ）配列番号９２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２および（ｉｉｉ）配列番号９５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む重鎖可変領域；および／または（ｉ）配列番号９８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｉｉ）配列番号１０１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２および（ｉｉｉ）配列番号１０４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む軽鎖可変領域を含む。一部の実施形態において、抗体は、（ｉ）配列番号９０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｉｉ）配列番号９３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２および（ｉｉｉ）配列番号９６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む重鎖可変領域；および／または（ｉ）配列番号９９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｉｉ）配列番号１０２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２および（ｉｉｉ）配列番号１０５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む軽鎖可変領域を含む。一部の実施形態において、抗体は、配列番号１０６のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；および／または配列番号１０９のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。一部の実施形態において、抗体は、配列番号１０７のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；および／または配列番号１１０のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。一部の実施形態において、抗体は、配列番号１０８のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；および／または配列番号１１１のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。
【００１８】
本明細書に記載されている様々な実施形態の特性のうち１種、一部または全てを組み合わせて、本発明の他の実施形態を形作ることができることを理解されたい。本発明の上述および他の態様は、当業者には明らかになるであろう。本発明の上述および他の実施形態を次の詳細な説明によりさらに記載する。
【図面の簡単な説明】
【００１９】
【図１Ａ−Ｃ】図１Ａ〜図１Ｅは、ＣＤ２５を発現する異常性肥満細胞を含む、全身性肥満細胞症患者の骨髄中の肥満細胞の表面におけるシグレック−８発現を示す一連のヒストグラムである。肥満細胞症患者由来の骨髄吸引物を、ＣＤ１１７、ＩｇＥ受容体（ＩｇＥＲ）、シグレック−８またはＣＤ２５を標的とする蛍光色素標識された抗体と共にインキュベートした。ＣＤ１１７＋ＩｇＥＲ＋肥満細胞のパーセンテージを患者毎に示す：図１Ａ）ＪＧ０１（左パネル）、図１Ｂ）ＪＧ０２（左パネル）、図１Ｃ）ＪＧ０３（左パネル）、図１Ｄ）ＪＧ０４（左パネル）および図１Ｅ）ＪＧ０５（左パネル）。定義された肥満細胞集団における、図１Ａ〜図１Ｅ）シグレック−８発現（患者毎の中央パネル）または図１Ａ〜図１Ｅ）ＣＤ２５発現（患者毎の右パネル）が、アイソタイプ適合した対照抗体と比較して示されている。
【図１Ｄ−Ｅ】図１Ａ〜図１Ｅは、ＣＤ２５を発現する異常性肥満細胞を含む、全身性肥満細胞症患者の骨髄中の肥満細胞の表面におけるシグレック−８発現を示す一連のヒストグラムである。肥満細胞症患者由来の骨髄吸引物を、ＣＤ１１７、ＩｇＥ受容体（ＩｇＥＲ）、シグレック−８またはＣＤ２５を標的とする蛍光色素標識された抗体と共にインキュベートした。ＣＤ１１７＋ＩｇＥＲ＋肥満細胞のパーセンテージを患者毎に示す：図１Ａ）ＪＧ０１（左パネル）、図１Ｂ）ＪＧ０２（左パネル）、図１Ｃ）ＪＧ０３（左パネル）、図１Ｄ）ＪＧ０４（左パネル）および図１Ｅ）ＪＧ０５（左パネル）。定義された肥満細胞集団における、図１Ａ〜図１Ｅ）シグレック−８発現（患者毎の中央パネル）または図１Ａ〜図１Ｅ）ＣＤ２５発現（患者毎の右パネル）が、アイソタイプ適合した対照抗体と比較して示されている。
【００２０】
【図２】図２は、全身性肥満細胞症患者の骨髄から単離された肥満細胞におけるシグレック−８発現を示すグラフである。シグレック−８に特異的な抗体（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ、クローン：８３７５３５）を使用したフローサイトメトリーによって、ヒト肥満細胞（ＭＣ）におけるシグレック−８のレベルを決定し、アイソタイプ対照抗体で得られた平均蛍光強度（ＭＦＩ）と比較したＭＦＩの変化として表した。ヒト皮膚試料または肥満細胞症患者（ＪＧ０１、ＪＧ０２）の骨髄吸引物から初代ヒトＭＣを単離した。サイトカインのＳＣＦ、ＩＬ−３、ＩＬ−４、ＩＬ−６およびＩＬ−９の存在下における６週間を超えるｉｎ  ｖｉｔｒｏ培養によって、ＣＤ３４＋造血幹細胞から分化したＭＣを生成した。
【００２１】
【図３】図３Ａ〜図３Ｂは、全身性肥満細胞症患者の骨髄またはＰＢＬ由来のＮＫ細胞への非フコシル化ヒト化抗シグレック−８抗体の結合を示す一連のヒストグラムである。肥満細胞症患者由来のＰＢＬまたは骨髄吸引物を、１ｍｇ／ｍＬの蛍光色素標識された非フコシル化ヒト化抗シグレック−８抗体（抗体２）またはアイソタイプ適合した抗体（アイソタイプ）、ならびにＣＤ１６およびＣＤ５６に対する蛍光色素標識された抗体と共にインキュベートした。図３Ａ）患者ＪＧ０１、図３Ｂ）患者ＪＧ０３、図３Ｃ）患者ＪＧ０４、図３Ｄ）患者ＪＧ０５および図３Ｅ）患者ＪＧ０６由来の試料におけるＣＤ１６＋ＣＤ５６＋ＳＳＣｌｏｗＮＫ細胞への非フコシル化ヒト化抗シグレック−８抗体の結合を、アイソタイプ適合した対照抗体と比較して示す。
【００２２】
【図４】図４Ａ〜図４Ｃは、全身性肥満細胞症患者由来の末梢血白血球（ＰＢＬ）が、シグレック−８陽性標的細胞に対する非フコシル化ヒト化抗シグレック−８抗体誘導性ＡＤＣＣ活性を媒介し得ることを示す一連のグラフである。図４Ａ）５名の全身性肥満細胞症患者（ＪＧ０３、ＪＧ０４、ＪＧ０５、ＪＧ０６およびＪＧ０７）由来のＰＢＬを、エフェクター：標的細胞比１０：１のＲａｍｏｓ  ２Ｃ１０標的細胞株の存在下で、１μｇ／ｍＬ非フコシル化ヒト化抗シグレック−８抗体（抗体２）または表示濃度のアイソタイプ対照抗体（アイソタイプ）と共に４８時間インキュベートした。インキュベーション後に、残留ＣＤ２０＋ＦＳＣｈｉ／ＳＳＣｍｉｄＲａｍｏｓ  ２Ｃ１０標的細胞をフローサイトメトリーによって定量し、残存するパーセンテージを、アイソタイプ対照抗体と共にインキュベートされた試料と比較した。２回の生物学的反復の平均±ＳＤを示す。ｐ＜０．０５での比較をアステリスク（＊）で示す。図４Ｂ）患者ＪＧ０３および図４Ｃ）患者ＪＧ０４由来のＰＢＬを、エフェクター：標的細胞比１０：１のＲａｍｏｓ  ２Ｃ１０標的細胞株の存在下で、増加量の非フコシル化ヒト化抗シグレック−８抗体（抗体２）またはアイソタイプ対照抗体（アイソタイプ）と共にインキュベートした。インキュベーション後に、残留ＣＤ２０＋ＦＳＣｈｉ／ＳＳＣｍｉｄＲａｍｏｓ  ２Ｃ１０標的細胞をフローサイトメトリーによって定量し、残存するパーセンテージを、アイソタイプ対照抗体と共にインキュベートされた試料と比較した。２回の生物学的反復の平均±ＳＤを示す。ｐ＜０．０５での比較をアステリスク（＊）で示す。
【００２３】
【図５】図５Ａ〜図５Ｂは、非自家および自家ＮＫ細胞による、全身性肥満細胞症骨髄肥満細胞に対する非フコシル化ヒト化抗シグレック−８抗体誘導性ＡＤＣＣ活性を示す一連のグラフである。富化された肥満細胞を、１ｍｇ／ｍＬの濃度のアイソタイプ適合した（アイソタイプ）または非フコシル化ヒト化抗シグレック−８抗体（抗体２）のいずれかで処理した。図５Ａ）健康なドナー由来の精製されたＣＤ１６＋ＮＫ細胞（非自家ＮＫ細胞）を、エフェクター：標的細胞比１０：１で、患者ＪＧ０１由来の富化された肥満細胞に添加した。図５Ｂ）患者ＪＧ０７由来の精製されたＣＤ１６＋ＮＫ細胞（自家ＮＫ細胞）を、エフェクター：標的細胞比１０：１で、患者ＪＧ０７由来の富化された肥満細胞に添加した。４８時間のインキュベーション後に残存するＣＤ１１７＋ＩｇＥＲ＋肥満細胞のパーセンテージを、アイソタイプ対照処理群と比較した。
【発明を実施するための形態】
【００２４】
詳細な説明
Ｉ．定義
本発明に関して詳細に記載する前に、本発明が、当然ながら変動し得る特定の組成物または生命システムに限定されないことを理解されたい。本明細書で使用されている用語法が、特定の実施形態を記載することのみを目的としており、限定を目的としないことも理解されたい。本明細書および添付の特許請求の範囲において使用されている通り、単数形「１つの（ａ）」、「１つの（ａｎ）」および「その（ｔｈｅ）」は、内容がそれ以外を明らかに指示しない限り、複数の指示対象を含む。よって、例えば、「分子（ａ  ｍｏｌｅｃｕｌｅ）」と言及される場合、２個またはそれを超える斯かる分子の組合せその他を任意選択で含む。
【００２５】
用語「約」は、本明細書において、本技術分野における当業者であれば容易に分かるそれぞれの値の通常の誤差範囲を指す。本明細書において「約」の値またはパラメータが言及される場合、該値またはパラメータそれ自体に指示される実施形態を含む（および記載する）。
【００２６】
本明細書に記載されている本発明の態様および実施形態が、態様および実施形態を「含む」、「からなる」および「から本質的になる」ことを含むことが理解される。
【００２７】
用語「抗体」は、ポリクローナル抗体、モノクローナル抗体（免疫グロブリンＦｃ領域を有する全長抗体を含む）、ポリエピトープ特異性を有する抗体組成物、多特異性抗体（例えば、二重特異性抗体、ダイアボディ）および単鎖分子ならびに抗体断片（例えば、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２およびＦｖ）を含む。用語「免疫グロブリン」（Ｉｇ）は、本明細書において「抗体」と互換的に使用される。
【００２８】
基本的４鎖抗体単位は、２つの同一軽（Ｌ）鎖および２つの同一重（Ｈ）鎖で構成されたヘテロ四量体糖タンパク質である。ＩｇＭ抗体は、Ｊ鎖と呼ばれる追加的なポリペプチドと共に５個の基本的ヘテロ四量体単位からなり、１０個の抗原結合部位を含有するが、ＩｇＡ抗体は、Ｊ鎖と組み合わせた、重合して多価集合体を形成することができる２〜５個の基本的４鎖単位を含む。ＩｇＧの場合、４鎖単位は一般に、約１５０，０００ダルトンである。各Ｌ鎖は、１個の共有結合性ジスルフィド結合によってＨ鎖に連結される一方、２つのＨ鎖は、Ｈ鎖アイソタイプに応じて１個または複数のジスルフィド結合によって互いに連結される。各ＨおよびＬ鎖は、規則的に間隔をあけた鎖内ジスルフィド架橋も有する。各Ｈ鎖は、Ｎ末端において、可変ドメイン（ＶＨ）に続いて、αおよびγ鎖のそれぞれに対し３個の定常ドメイン（ＣＨ）、μおよびεアイソタイプに対し４個のＣＨドメインを有する。各Ｌ鎖は、Ｎ末端において可変ドメイン（ＶＬ）、続いてその他端に定常ドメインを有する。ＶＬは、ＶＨと整列され、ＣＬは、重鎖の第１の定常ドメイン（ＣＨ１）と整列される。特定のアミノ酸残基は、軽鎖および重鎖可変ドメイン間の界面を形成すると考えられる。ＶＨおよびＶＬの対形成は共に、単一の抗原結合部位を形成する。異なるクラスの抗体の構造および特性に関して、例えば、Ｂａｓｉｃ  ａｎｄ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、第８版、Ｄａｎｉｅｌ  Ｐ．  Ｓｔｉｅｓ、Ａｂｂａ  Ｉ．  ＴｅｒｒおよびＴｒｉｓｔｒａｍ  Ｇ．  Ｐａｒｓｏｌｗ（編）、Ａｐｐｌｅｔｏｎ  ＆  Ｌａｎｇｅ、Ｎｏｒｗａｌｋ、ＣＴ、１９９４年、７１頁、第６章を参照されたい。
【００２９】
いずれかの脊椎動物種由来のＬ鎖は、その定常ドメインのアミノ酸配列に基づき、カッパおよびラムダと呼ばれる明らかに異なる２型の一方に割り当てることができる。その重鎖の定常ドメイン（ＣＨ）のアミノ酸配列に応じて、免疫グロブリンは、異なるクラスまたはアイソタイプに割り当てることができる。それぞれα、δ、ε、γおよびμと命名された重鎖を有する５クラスの免疫グロブリン：ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧおよびＩｇＭが存在する。γおよびαクラスは、ＣＨ配列における相対的に軽微な差および機能に基づいてサブクラスへとさらに分割され、例えば、ヒトは、次のサブクラスを発現する：ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１およびＩｇＡ２。ＩｇＧ１抗体は、アロタイプと名付けられた複数の多型バリアントで存在することができ（ＪｅｆｆｅｒｉｓおよびＬｅｆｒａｎｃ  ２００９年、ｍＡｂｓ、１巻、４号、１〜７頁において概説）、そのうちいずれかが、本発明における使用に適する。ヒト集団における共通アロタイプバリアントは、文字ａ、ｆ、ｎ、ｚによって命名されている。
【００３０】
「単離された」抗体は、その産生環境（例えば、天然または組換えによる）の構成成分から同定、分離および／または回収された抗体である。一部の実施形態において、単離されたポリペプチドは、その産生環境由来のあらゆる他の構成成分との関連を含まない。組換えトランスフェクト細胞に起因するもの等、その産生環境の夾雑構成成分は、抗体の研究、診断または治療的使用に典型的に干渉する材料であり、酵素、ホルモンおよび他のタンパク質性または非タンパク質性溶質を含むことができる。一部の実施形態において、ポリペプチドは、（１）例えば、ローリー方法によって決定される抗体の９５重量％超まで、一部の実施形態において、９９重量％超まで；（１）スピニングカップシークエネーターの使用により、Ｎ末端もしくは内部アミノ酸配列の少なくとも１５残基を得るのに十分な程度まで、または（３）クーマシーブルーもしくは銀染色を使用した非還元もしくは還元条件下のＳＤＳ−ＰＡＧＥによって均一になるまで精製される。単離された抗体は、抗体の天然環境の少なくとも１種の構成成分が存在しないため、組換え細胞内のｉｎ  ｓｉｔｕの抗体を含む。しかし通常、単離されたポリペプチドまたは抗体は、少なくとも１回の精製ステップにより調製される。
【００３１】
用語「モノクローナル抗体」は、本明細書において、実質的に均一な抗体の集団から得られる抗体を指す、すなわち、集団を構成する個々の抗体は、微量で存在し得る可能な天然起源の変異および／または翻訳後修飾（例えば、異性化、アミド化）を除いて同一である。一部の実施形態において、モノクローナル抗体は、重鎖および／または軽鎖にＣ末端切断を有する。例えば、１、２、３、４または５個のアミノ酸残基が、重鎖および／または軽鎖のＣ末端において切断される。一部の実施形態において、Ｃ末端切断は、重鎖からＣ末端リシンを除去する。一部の実施形態において、モノクローナル抗体は、重鎖および／または軽鎖にＮ末端切断を有する。例えば、１、２、３、４または５個のアミノ酸残基が、重鎖および／または軽鎖のＮ末端において切断される。一部の実施形態において、モノクローナル抗体は、高度に特異的であり、単一の抗原部位に向けられている。一部の実施形態において、モノクローナル抗体は、高度に特異的であり、複数の抗原部位に向けられている（二重特異性抗体または多特異性抗体等）。修飾語句「モノクローナル」は、抗体の実質的に均一な集団から得られるという抗体の性状を示し、いずれか特定の方法による抗体の産生を要求するものと解釈するべきではない。例えば、本発明に従って使用するべきモノクローナル抗体は、例えば、ハイブリドーマ方法、組換えＤＮＡ方法、ファージディスプレイ技術、およびヒト免疫グロブリン配列をコードするヒト免疫グロブリン遺伝子座または遺伝子の一部または全体を有する動物においてヒトまたはヒト様抗体を産生するための技術を含む種々の技法によって作製することができる。
【００３２】
用語「裸の抗体」は、細胞傷害性部分または放射性標識にコンジュゲートされていない抗体を指す。
【００３３】
用語「全長抗体」、「インタクト抗体」または「全抗体」は、抗体断片とは対照的に、その実質的にインタクトな形態の抗体を指すように互換的に使用される。特に、全抗体は、Ｆｃ領域を含む重および軽鎖を有する抗体を含む。定常ドメインは、ネイティブ配列定常ドメイン（例えば、ヒトネイティブ配列定常ドメイン）またはそのアミノ酸配列バリアントとなり得る。場合によっては、インタクト抗体は、１種または複数種のエフェクター機能を有することができる。
【００３４】
「抗体断片」は、インタクト抗体の一部、インタクト抗体の抗原結合および／または可変領域を含む。抗体断片の例として、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２およびＦｖ断片；ダイアボディ；線状抗体（米国特許第５，６４１，８７０号、実施例２；Ｚａｐａｔａら、Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｎｇ．８巻（１０号）：１０５７〜１０６２頁［１９９５年］を参照）；抗体断片から形成された単鎖抗体分子および多特異性抗体が挙げられる。
【００３５】
抗体のパパイン消化は、「Ｆａｂ」断片と呼ばれる２個の同一抗原結合性断片と、容易に結晶化する能力を反映する命名であるところの、残余の「Ｆｃ」断片を産生する。Ｆａｂ断片は、一方の重鎖のＨ鎖可変領域ドメイン（ＶＨ）および第１の定常ドメイン（ＣＨ１）と共にＬ鎖全体からなる。各Ｆａｂ断片は、抗原結合に関して一価である、すなわち、単一の抗原結合部位を有する。抗体のペプシン処理は、単一の大型のＦ（ａｂ’）２断片を生じ、これは、異なる抗原結合活性を有し、依然として抗原を架橋することができる２個のジスルフィド結合したＦａｂ断片に大まかに相当する。Ｆａｂ’断片は、抗体ヒンジ領域由来の１個または複数のシステインを含む数個の追加的な残基をＣＨ１ドメインのカルボキシ末端に有するという点において、Ｆａｂ断片とは異なる。Ｆａｂ’−ＳＨは、定常ドメインのシステイン残基（複数可）が遊離チオール基を有するＦａｂ’の本明細書における命名である。Ｆ（ａｂ’）２抗体断片は本来、それらの間にヒンジシステインを有するＦａｂ’断片のペアとして産生された。抗体断片の他の化学的カップリングも公知である。
【００３６】
Ｆｃ断片は、ジスルフィドによって一体に保持された両方のＨ鎖のカルボキシ末端部分を含む。抗体のエフェクター機能は、ある特定の種類の細胞上に存在するＦｃ受容体（ＦｃＲ）によって認識される領域でもあるＦｃ領域における配列によって決定される。
【００３７】
「Ｆｖ」は、完全抗原認識および結合部位を含有する最小抗体断片である。この断片は、緊密な非共有結合性会合した１個の重および１個の軽鎖可変領域ドメインの二量体からなる。これら２個のドメインのフォールディングから、抗原結合のためのアミノ酸残基に寄与し、抗体に抗原結合特異性を付与する６個の高頻度可変性ループ（それぞれＨおよびＬ鎖由来の３個のループ）を発する。しかし、単一の可変ドメイン（または抗原に特異的な３個のＨＶＲのみを含むＦｖの半分）であっても、結合部位全体よりも低い親和性ではあるが、抗原を認識および結合する能力を有する。
【００３８】
「ｓＦｖ」または「ｓｃＦｖ」としても省略される「単鎖Ｆｖ」は、単一のポリペプチド鎖へと接続されたＶＨおよびＶＬ抗体ドメインを含む抗体断片である。一部の実施形態において、ｓＦｖポリペプチドは、ＶＨおよびＶＬドメインの間にポリペプチドリンカーをさらに含み、これは、ｓＦｖが、抗原結合のための所望の構造を形成することを可能にする。ｓＦｖの概説に関しては、Ｐｌｕｃｋｔｈｕｎ、Ｔｈｅ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ  ｏｆ  Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ、１１３巻、ＲｏｓｅｎｂｕｒｇおよびＭｏｏｒｅ編、Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ、２６９〜３１５頁（１９９４年）を参照されたい。
【００３９】
本発明の抗体の「機能断片」は、インタクト抗体の抗原結合もしくは可変領域を一般に含むインタクト抗体の部分、または修飾されたＦｃＲ結合能を保持もしくは有する抗体のＦｖ領域を含む。抗体断片の例として、抗体断片から形成された線状抗体、単鎖抗体分子および多特異性抗体が挙げられる。
【００４０】
本明細書におけるモノクローナル抗体は、重および／または軽鎖の部分が、特定の種に由来するまたは特定の抗体クラスもしくはサブクラスに属する抗体における相当する配列と同一または相同であるが、鎖（複数可）の残りが、別の種に由来するまたは別の抗体クラスもしくはサブクラスに属する抗体における相当する配列と同一または相同である「キメラ」抗体（免疫グロブリン）と共に、所望の生物学的活性を呈する限りにおいて、斯かる抗体の断片を特に含む（米国特許第４，８１６，５６７号；Ｍｏｒｒｉｓｏｎら、Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ、８１巻：６８５１〜６８５５頁（１９８４年））。本明細書における目的のキメラ抗体は、ＰＲＩＭＡＴＩＺＥＤ（登録商標）抗体を含み、この抗体の抗原結合領域は、例えば、目的の抗原でマカクザルを免疫化することによって産生された抗体に由来する。本明細書において、「ヒト化抗体」は、「キメラ抗体」のサブセットとして使用される。
【００４１】
「ヒト化」型の非ヒト（例えば、マウス）抗体は、非ヒト免疫グロブリンに由来する最小配列を含有するキメラ抗体である。一実施形態において、ヒト化抗体は、レシピエントのＨＶＲ由来の残基が、所望の特異性、親和性および／または能力を有するマウス、ラット、ウサギまたは非ヒト霊長類等の非ヒト種（ドナー抗体）のＨＶＲ由来の残基に置き換えられたヒト免疫グロブリン（レシピエント抗体）である。一部の事例において、ヒト免疫グロブリンのＦＲ残基は、相当する非ヒト残基に置き換えられる。さらに、ヒト化抗体は、レシピエント抗体またはドナー抗体に存在しない残基を含むことができる。これらの修飾を為して、結合親和性等、抗体性能をさらに精緻化することができる。一般に、ヒト化抗体は、少なくとも１、典型的には２個の可変ドメインのうち実質的に全てを含み、それによると、高頻度可変性ループの全てまたは実質的に全てが、非ヒト免疫グロブリン配列のものに相当し、ＦＲ領域の全てまたは実質的に全てが、ヒト免疫グロブリン配列のものであるが、ＦＲ領域は、結合親和性、異性化、免疫原性等、抗体性能を改善する１個または複数の個々のＦＲ残基置換を含むことができるであろう。一部の実施形態において、ＦＲにおけるこれらのアミノ酸置換の数は、Ｈ鎖において６個以下であり、Ｌ鎖においては、３個以下である。ヒト化抗体は、典型的にはヒト免疫グロブリンの、免疫グロブリン定常領域（Ｆｃ）の少なくとも部分も任意選択で含むであろう。さらなる詳細に関して、例えば、Ｊｏｎｅｓら、Ｎａｔｕｒｅ  ３２１巻：５２２〜５２５頁（１９８６年）；Ｒｉｅｃｈｍａｎｎら、Ｎａｔｕｒｅ  ３３２巻：３２３〜３２９頁（１９８８年）；およびＰｒｅｓｔａ、Ｃｕｒｒ．  Ｏｐ．  Ｓｔｒｕｃｔ．  Ｂｉｏｌ．２巻：５９３〜５９６頁（１９９２年）を参照されたい。例えば、ＶａｓｗａｎｉおよびＨａｍｉｌｔｏｎ、Ａｎｎ．  Ａｌｌｅｒｇｙ，  Ａｓｔｈｍａ  ＆  Ｉｍｍｕｎｏｌ．１巻：１０５〜１１５頁（１９９８年）；Ｈａｒｒｉｓ、Ｂｉｏｃｈｅｍ．  Ｓｏｃ．  Ｔｒａｎｓａｃｔｉｏｎｓ  ２３巻：１０３５〜１０３８頁（１９９５年）；ＨｕｒｌｅおよびＧｒｏｓｓ、Ｃｕｒｒ．  Ｏｐ．  Ｂｉｏｔｅｃｈ．５巻：４２８〜４３３頁（１９９４年）；ならびに米国特許第６，９８２，３２１号および同第７，０８７，４０９号も参照されたい。一部の実施形態において、ヒト化抗体は、単一の抗原部位に向けられている。一部の実施形態において、ヒト化抗体は、複数の抗原部位に向けられている。代替的ヒト化方法は、米国特許第７，９８１，８４３号および米国特許出願公開第２００６／０１３４０９８号に記載されている。
【００４２】
抗体の「可変領域」または「可変ドメイン」は、抗体の重または軽鎖のアミノ末端ドメインを指す。重鎖および軽鎖の可変ドメインは、それぞれ「ＶＨ」および「ＶＬ」と称することができる。これらのドメインは一般に、抗体の最も可変的な部分であり（同じクラスの他の抗体と比べて）、抗原結合部位を含有する。
【００４３】
用語「高頻度可変領域」、「ＨＶＲ」または「ＨＶ」は、本明細書において使用される場合、配列が高頻度可変性であるおよび／または構造的に定義されたループを形成する抗体可変ドメインの領域を指す。一般に、抗体は、６個のＨＶＲを含む；ＶＨにおける３個（Ｈ１、Ｈ２、Ｈ３）およびＶＬにおける３個（Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３）。ネイティブ抗体において、Ｈ３およびＬ３は、６個のＨＶＲのうち最大の多様性を表示し、Ｈ３は特に、抗体への優れた特異性の付与において特有の役割を果たすと考えられる。例えば、Ｘｕら、Ｉｍｍｕｎｉｔｙ  １３巻：３７〜４５頁（２０００年）；ＪｏｈｎｓｏｎおよびＷｕ、Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  ２４８巻：１〜２５頁（Ｌｏ編、Ｈｕｍａｎ  Ｐｒｅｓｓ、Ｔｏｔｏｗａ、ＮＪ、２００３年））を参照されたい。実際に、重鎖のみからなる天然起源のラクダ科動物（ｃａｍｅｌｉｄ）抗体は、軽鎖の非存在下で機能的かつ安定的である。例えば、Ｈａｍｅｒｓ−Ｃａｓｔｅｒｍａｎら、Ｎａｔｕｒｅ  ３６３巻：４４６〜４４８頁（１９９３年）およびＳｈｅｒｉｆｆら、Ｎａｔｕｒｅ  Ｓｔｒｕｃｔ．  Ｂｉｏｌ．３巻：７３３〜７３６頁（１９９６年）を参照されたい。
【００４４】
多数のＨＶＲの図解が使用されており、本明細書に包含される。Ｋａｂａｔ相補性決定領域（ＣＤＲ）であるＨＶＲは、配列可変性に基づき、最も一般的に使用されている（Ｋａｂａｔら、Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ、第５版、Ｐｕｂｌｉｃ  Ｈｅａｌｔｈ  Ｓｅｒｖｉｃｅ、Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ、Ｂｅｔｈｅｓｄａ、ＭＤ（１９９１年））。Ｃｈｏｔｈｉａ  ＨＶＲは、その代わりに、構造ループの位置を指す（ＣｈｏｔｈｉａおよびＬｅｓｋ、Ｊ．  Ｍｏｌ．  Ｂｉｏｌ．１９６巻：９０１〜９１７頁（１９８７年））。「Ｃｏｎｔａｃｔ」ＨＶＲは、利用できる複雑な結晶構造の解析に基づく。これらのＨＶＲのそれぞれに由来する残基を下に記す。
【表９】
2018533569.tif 000003
【００４５】
他に断りがなければ、可変ドメイン残基（ＨＶＲ残基およびフレームワーク領域残基）は、Ｋａｂａｔら（上掲）に従ってナンバリングする。
【００４６】
「フレームワーク」または「ＦＲ」残基は、本明細書に定義されているＨＶＲ残基以外の可変ドメイン残基である。
【００４７】
表現「Ｋａｂａｔにおける通りの可変ドメイン残基ナンバリング」または「Ｋａｂａｔにおける通りのアミノ酸位置ナンバリング」およびこれらの変種は、Ｋａｂａｔら（上掲）における抗体の編集の重鎖可変ドメインまたは軽鎖可変ドメインに使用されるナンバリング方式を指す。このナンバリング方式を使用して、実際の線状アミノ酸配列は、可変ドメインのＦＲまたはＨＶＲの短縮またはそれへの挿入に相当する、より少ないまたは追加的なアミノ酸を含有することができる。例えば、重鎖可変ドメインは、Ｈ２の残基５２の後に単一のアミノ酸挿入（Ｋａｂａｔによる残基５２ａ）を、また、重鎖ＦＲ残基８２の後に挿入された残基（例えば、Ｋａｂａｔによる残基８２ａ、８２ｂおよび８２ｃ等）を含むことができる。残基のＫａｂａｔナンバリングは、「標準」Ｋａｂａｔナンバリングされた配列との抗体配列の相同性領域におけるアライメントにより、所定の抗体に対して決定することができる。
【００４８】
本明細書における目的のための「アクセプターヒトフレームワーク」は、ヒト免疫グロブリンフレームワークまたはヒトコンセンサスフレームワークに由来するＶＬまたはＶＨフレームワークのアミノ酸配列を含むフレームワークである。ヒト免疫グロブリンフレームワークまたはヒトコンセンサスフレームワーク「に由来する」アクセプターヒトフレームワークは、その同じアミノ酸配列を含むことができる、あるいは先在するアミノ酸配列変化を含有することができる。一部の実施形態において、先在するアミノ酸変化の数は、１０個もしくはそれに満たない、９個もしくはそれに満たない、８個もしくはそれに満たない、７個もしくはそれに満たない、６個もしくはそれに満たない、５個もしくはそれに満たない、４個もしくはそれに満たない、３個もしくはそれに満たないまたは２個もしくはそれに満たない。
【００４９】
参照ポリペプチド配列に関する「パーセント（％）アミノ酸配列同一性」は、配列を整列し、必要であればギャップを導入して、配列同一性の一部としていかなる保存的置換も考慮することなく、最大パーセント配列同一性を達成した後に、参照ポリペプチド配列におけるアミノ酸残基と同一である候補配列におけるアミノ酸残基のパーセンテージとして定義される。パーセントアミノ酸配列同一性を決定する目的のためのアライメントは、当業者の技能範囲内の様々な仕方で、例えば、ＢＬＡＳＴ、ＢＬＡＳＴ−２、ＡＬＩＧＮまたはＭｅｇａｌｉｇｎ（ＤＮＡＳＴＡＲ）ソフトウェア等、公的に利用可能なコンピュータソフトウェアを使用して達成することができる。当業者であれば、比較されている配列の全長にわたる最大アライメントの達成に必要とされるいずれかのアルゴリズムを含む、配列の整列に適切なパラメータを決定することができる。例えば、所定のアミノ酸配列Ｂとの、これに関するまたはこれに対する所定のアミノ酸配列Ａの％アミノ酸配列同一性（あるいは、所定のアミノ酸配列Ｂと、これに関しまたはこれに対し、ある特定の％アミノ酸配列同一性を有するまたは含む所定のアミノ酸配列Ａと表現することができる）は、次の通りに計算される：
１００×分数Ｘ／Ｙ
（式中、Ｘは、ＡおよびＢの該プログラムのアライメントにおける配列により同一マッチとしてスコア化されたアミノ酸残基の数であり、Ｙは、Ｂにおけるアミノ酸残基の総数である）。アミノ酸配列Ａの長さが、アミノ酸配列Ｂの長さに等しくない場合、Ｂに対するＡの％アミノ酸配列同一性が、Ａに対するＢの％アミノ酸配列同一性に等しくならないことが認められよう。
【００５０】
特定のポリペプチドまたは特定のポリペプチドにおけるエピトープ「に結合する」、「に特異的に結合する」または「に特異的な」抗体は、他のいかなるポリペプチドまたはポリペプチドエピトープにも実質的に結合することなく、この特定のポリペプチドまたは特定のポリペプチドにおけるエピトープに結合する抗体である。一部の実施形態において、無関係の非シグレック−８ポリペプチドへの本明細書に記載されている抗シグレック−８抗体（例えば、ヒトシグレック−８に結合する抗体）の結合は、本技術分野で公知の方法（例えば、酵素結合免疫吸着測定法（ＥＬＩＳＡ））によって測定されるシグレック−８への抗体結合の約１０％未満である。一部の実施形態において、シグレック−８に結合する抗体（例えば、ヒトシグレック−８に結合する抗体）は、≦１μＭ、≦１００ｎＭ、≦１０ｎＭ、≦２ｎＭ、≦１ｎＭ、≦０．７ｎＭ、≦０．６ｎＭ、≦０．５ｎＭ、≦０．１ｎＭ、≦０．０１ｎＭまたは≦０．００１ｎＭ（例えば、１０−８Ｍまたはそれに満たない、例えば、１０−８Ｍ〜１０−１３Ｍ、例えば、１０−９Ｍ〜１０−１３Ｍ）の解離定数（Ｋｄ）を有する。
【００５１】
用語「抗シグレック−８抗体」または「ヒトシグレック−８に結合する抗体」は、無関係の非シグレック−８ポリペプチドの他のいずれかのポリペプチドまたはエピトープに実質的に結合することなく、ヒトシグレック−８のポリペプチドまたはエピトープに結合する抗体を指す。
【００５２】
用語「シグレック−８」は、本明細書において、ヒトシグレック−８タンパク質を指す。この用語は、スプライスバリアントまたはアレルバリアントを含むシグレック−８の天然起源のバリアントも含む。例示的なヒトシグレック−８のアミノ酸配列を配列番号７２に示す。別の例示的なヒトシグレック−８のアミノ酸配列を配列番号７３に示す。一部の実施形態において、ヒトシグレック−８タンパク質は、免疫グロブリンＦｃ領域に融合されたヒトシグレック−８細胞外ドメインを含む。免疫グロブリンＦｃ領域に融合された例示的なヒトシグレック−８細胞外ドメインのアミノ酸配列を配列番号７４に示す。配列番号７４における下線を引いたアミノ酸配列は、シグレック−８  Ｆｃ融合タンパク質アミノ酸配列のＦｃ領域を示す。
【化１】
2018533569.tif 000004
【化２】
2018533569.tif 000005
【００５３】
「アポトーシスを誘導する」または「アポトーシス性」である抗体は、アネキシンＶの結合、ＤＮＡの断片化、細胞収縮、小胞体の拡張、細胞断片化および／または膜小胞の形成（アポトーシス小体と呼ばれる）等、標準アポトーシスアッセイによって決定されるプログラム細胞死を誘導する抗体である。例えば、本発明の抗シグレック−８抗体（例えば、ヒトシグレック−８に結合する抗体）のアポトーシス活性は、アネキシンＶで細胞を染色することにより示すことができる。
【００５４】
抗体「エフェクター機能」は、抗体のＦｃ領域（ネイティブ配列Ｆｃ領域またはアミノ酸配列バリアントＦｃ領域）に起因し得る生物学的活性を指し、抗体アイソタイプにより変動する。抗体エフェクター機能の例として：Ｃ１ｑ結合および補体依存性細胞傷害；Ｆｃ受容体結合；抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）；食作用；細胞表面受容体（例えば、Ｂ細胞受容体）の下方調節；およびＢ細胞活性化が挙げられる。
【００５５】
「抗体依存性細胞媒介性細胞傷害」または「ＡＤＣＣ」は、ある特定の細胞傷害性細胞（例えば、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、好中球およびマクロファージ）上に存在するＦｃ受容体（ＦｃＲ）に結合した分泌されたＩｇが、これらの細胞傷害性エフェクター細胞を、抗原を有する標的細胞に特異的に結合させ、その後、細胞毒で標的細胞を死滅させることができる細胞傷害の形態を指す。抗体は、細胞傷害性細胞を「武装（ａｒｍ）」させ、この機構による標的細胞の死滅に必要とされる。ＡＤＣＣを媒介するための主な細胞であるＮＫ細胞は、ＦｃγＲＩＩＩのみを発現する一方、単球は、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩおよびＦｃγＲＩＩＩを発現する。造血細胞におけるＦｃ発現は、ＲａｖｅｔｃｈおよびＫｉｎｅｔ、Ａｎｎｕ．  Ｒｅｖ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．９巻：４５７〜９２頁（１９９１年）の４６４頁の表３に要約されている。一部の実施形態において、本明細書に記載されている抗シグレック−８抗体（例えば、ヒトシグレック−８に結合する抗体）は、ＡＤＣＣを増強する。目的の分子のＡＤＣＣ活性を評価するために、米国特許第５，５００，３６２号または同第５，８２１，３３７号に記載されているもの等、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ  ＡＤＣＣアッセイを行うことができる。斯かるアッセイに有用なエフェクター細胞は、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）およびナチュラルキラー（ＮＫ）細胞を含む。その代わりにまたはその上、目的の分子のＡＤＣＣ活性は、ｉｎ  ｖｉｖｏで、例えば、Ｃｌｙｎｅｓら、ＰＮＡＳ  ＵＳＡ  ９５巻：６５２〜６５６頁（１９９８年）に開示されているもの等、動物モデルにおいて評価することができる。ＡＤＣＣ活性および他の抗体特性を変更する他のＦｃバリアントは、Ｇｈｅｔｉｅら、Ｎａｔ  Ｂｉｏｔｅｃｈ．１５巻：６３７〜４０頁、１９９７年；Ｄｕｎｃａｎら、Ｎａｔｕｒｅ  ３３２巻：５６３〜５６４頁、１９８８年；Ｌｕｎｄら、Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １４７巻：２６５７〜２６６２頁、１９９１年；Ｌｕｎｄら、Ｍｏｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ２９巻：５３〜５９頁、１９９２年；Ａｌｅｇｒｅら、Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ  ５７巻：１５３７〜１５４３頁、１９９４年；Ｈｕｔｃｈｉｎｓら、Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ  ９２巻：１１９８０〜１１９８４頁、１９９５年；Ｊｅｆｆｅｒｉｓら、Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｌｅｔｔ．４４巻：１１１〜１１７頁、１９９５年；Ｌｕｎｄら、ＦＡＳＥＢ  Ｊ  ９巻：１１５〜１１９頁、１９９５年；Ｊｅｆｆｅｒｉｓら、Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｌｅｔｔ  ５４巻：１０１〜１０４頁、１９９６年；Ｌｕｎｄら、Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １５７巻：４９６３〜４９６９頁、１９９６年；Ａｒｍｏｕｒら、Ｅｕｒ  Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ２９巻：２６１３〜２６２４頁、１９９９年；Ｉｄｕｓｏｇｉｅら、Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １６４巻：４１７８〜４１８４頁、２００；Ｒｅｄｄｙら、Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １６４巻：１９２５〜１９３３頁、２０００年；Ｘｕら、Ｃｅｌｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ２００巻：１６〜２６頁、２０００年；Ｉｄｕｓｏｇｉｅら、Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １６６巻：２５７１〜２５７５頁、２００１年；Ｓｈｉｅｌｄｓら、Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ  ２７６巻：６５９１〜６６０４頁、２００１年；Ｊｅ��ｆｅｒｉｓら、Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｌｅｔｔ  ８２巻：５７〜６５頁．２００２年；Ｐｒｅｓｔａら、Ｂｉｏｃｈｅｍ  Ｓｏｃ  Ｔｒａｎｓ  ３０巻：４８７〜４９０頁、２００２年；Ｌａｚａｒら、Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ  １０３巻：４００５〜４０１０頁、２００６年；米国特許第５，６２４，８２１号；同第５，８８５，５７３号；同第５，６７７，４２５号；同第６，１６５，７４５号；同第６，２７７，３７５号；同第５，８６９，０４６号；同第６，１２１，０２２号；同第５，６２４，８２１号；同第５，６４８，２６０号；同第６，１９４，５５１号；同第６，７３７，０５６号；同第６，８２１，５０５号；同第６，２７７，３７５号；同第７，３３５，７４２号；および同第７，３１７，０９１号に開示されているものを含む。
【００５６】
本明細書における用語「Ｆｃ領域」は、ネイティブ配列Ｆｃ領域およびバリアントＦｃ領域を含む免疫グロブリン重鎖のＣ末端領域を定義するように使用されている。免疫グロブリン重鎖のＦｃ領域の境界は変動し得るが、ヒトＩｇＧ重鎖Ｆｃ領域は通常、Ｃｙｓ２２６またはＰｒｏ２３０の位置のアミノ酸残基からそのカルボキシル末端に伸びるものと定義される。本発明の抗体における使用に適したネイティブ配列Ｆｃ領域は、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３およびＩｇＧ４を含む。単一のアミノ酸置換（ＫａｂａｔナンバリングによるＳ２２８Ｐ；ＩｇＧ４Ｐｒｏと命名）を導入して、組換えＩｇＧ４抗体において観察される異質性を消失させることができる。Ａｎｇａｌ，  Ｓ．ら（１９９３年）Ｍｏｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ３０巻、１０５〜１０８頁を参照されたい。
【００５７】
「非フコシル化」または「フコース欠損」抗体は、Ｆｃ領域を含むグリコシル化抗体バリアントを指し、このＦｃ領域に付着した糖質構造は、低下したフコースを有するまたはフコースを欠如する。一部の実施形態において、フコースが低下したまたはフコースを欠如する抗体は、改善されたＡＤＣＣ機能を有する。一部の実施形態において、非フコシル化またはフコース欠損抗体は、細胞株において産生される同じ抗体におけるフコースの量と比べて低下したフコースを有する。本明細書において企図される非フコシル化またはフコース欠損抗体組成物は、組成物における抗体のＦｃ領域に付着したＮ結合型グリカンの約５０％未満が、フコースを含む組成物である。
【００５８】
用語「フコシル化」または「フコシル化された」は、抗体のペプチド骨格に付着したオリゴ糖内のフコース残基の存在を指す。特に、フコシル化抗体は、例えば、ヒトＩｇＧ１
ＦｃドメインのＡｓｎ２９７位における（Ｆｃ領域残基のＥＵナンバリング）、抗体Ｆｃ領域に付着したＮ結合型オリゴ糖の一方または両方における最内側Ｎ−アセチルグルコサミン（ＧｌｃＮＡｃ）残基にα（１，６）結合型フコースを含む。Ａｓｎ２９７は、免疫グロブリンにおける軽微な配列変種により、２９７位の上流または下流の約＋３アミノ酸に、すなわち、２９４〜３００位の間に位置することもできる。
【００５９】
「フコシル化の程度」は、本技術分野で公知の方法によって、例えば、マトリックス支援レーザー脱離イオン化飛行時間型質量分析（ＭＡＬＤＩ  ＴＯＦ  ＭＳ）によって評価されるＮ−グリコシダーゼＦ処理抗体組成物において同定された、全オリゴ糖と比べたフコシル化オリゴ糖のパーセンテージである。「完全にフコシル化された抗体」の組成物において、基本的に全オリゴ糖が、フコース残基を含む、すなわち、フコシル化されている。一部の実施形態において、完全にフコシル化された抗体の組成物は、少なくとも約９０％のフコシル化の程度を有する。したがって、斯かる組成物における個々の抗体は、典型的に、Ｆｃ領域における２個のＮ結合型オリゴ糖のそれぞれにフコース残基を含む。逆に、「完全非フコシル化」抗体の組成物において、基本的にいかなるオリゴ糖もフコシル化されておらず、斯かる組成物における個々の抗体は、Ｆｃ領域における２個のＮ結合型オリゴ糖のいずれにもフコース残基を含有しない。一部の実施形態において、完全非フコシル化抗体の組成物は、約１０％未満のフコシル化の程度を有する。「部分的にフコシル化された抗体」の組成物において、オリゴ糖の一部のみが、フコースを含む。組成物が、Ｆｃ領域におけるＮ結合型オリゴ糖にフコース残基を欠如する基本的にあらゆる個々の抗体も、Ｆｃ領域におけるＮ結合型オリゴ糖の両方にフコース残基を含有する基本的にあらゆる個々の抗体も含まないのであれば、斯かる組成物における個々の抗体は、Ｆｃ領域におけるＮ結合型オリゴ糖の一方または両方にフコース残基を含むことができるまたはどちらにも含まない。一実施形態において、部分的にフコシル化された抗体の組成物は、約１０％〜約８０％（例えば、約５０％〜約８０％、約６０％〜約８０％または約７０％〜約８０％）のフコシル化の程度を有する。
【００６０】
本明細書における「結合親和性」は、分子（例えば、抗体）の単一の結合部位およびその結合パートナー（例えば、抗原）の間の非共有結合性相互作用の強度を指す。一部の実施形態において、シグレック−８（本明細書に記載されているシグレック−８−Ｆｃ融合タンパク質等、二量体の場合がある）に対する抗体の結合親和性は、一般に、解離定数（Ｋｄ）により表すことができる。親和性は、本明細書に記載されている方法を含む、本技術分野で公知の一般的方法により測定することができる。
【００６１】
本明細書における「結合アビディティー」は、分子（例えば、抗体）の複数の結合部位およびその結合パートナー（例えば、抗原）の結合強度を指す。
【００６２】
本明細書における抗体をコードする「単離された」核酸分子は、同定され、これが産生された環境においてこれが通常関連する少なくとも１種の夾雑核酸分子から分離された核酸分子である。一部の実施形態において、単離された核酸は、産生環境と関連するあらゆる構成成分との関連を含まない。本明細書におけるポリペプチドおよび抗体をコードする単離された核酸分子は、これが天然に見出される形態または設定以外の形態である。したがって、単離された核酸分子は、本明細書において細胞中に天然に存在するポリペプチドおよび抗体をコードする核酸から区別される。
【００６３】
用語「医薬製剤」は、活性成分の生物学的活性が有効となることを可能にするような形態の、この製剤が投与される個体にとって容認し難い毒性がある追加的な構成成分を含有しない調製物を指す。斯かる製剤は無菌である。
【００６４】
本明細書における「キャリア」は、用いられている投与量および濃度でこれに曝露される細胞または哺乳動物にとって無毒性の、薬学的に許容されるキャリア、賦形剤または安定剤を含む。多くの場合、生理的に許容されるキャリアは、水性ｐＨ緩衝溶液である。生理的に許容されるキャリアの例として、リン酸塩、クエン酸塩および他の有機酸等のバッファー；アスコルビン酸を含む抗酸化剤；低分子量（約１０残基未満の）ポリペプチド；血清アルブミン、ゼラチンまたは免疫グロブリン等のタンパク質；ポリビニルピロリドン等の親水性ポリマー；グリシン、グルタミン、アスパラギン、アルギニンまたはリシン等のアミノ酸；グルコース、マンノースまたはデキストリンを含む単糖、二糖および他の糖質；ＥＤＴＡ等のキレート剤；マンニトールまたはソルビトール等の糖アルコール；ナトリウム等の塩形成対イオン；および／またはＴＷＥＥＮ（商標）、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）およびＰＬＵＲＯＮＩＣＳ（商標）等の非イオン性界面活性剤が挙げられる。
【００６５】
本明細書において、用語「処置」または「処置する」は、臨床病理学の経過において処置されている個体または細胞の天然の経過を変更するように設計された臨床介入を指す。処置の望ましい効果は、疾患進行速度の減少、疾患状態の回復または緩和、および寛解または改善された予後を含む。例えば、疾患（例えば、進行性全身性肥満細胞症）に関連する１つまたは複数の症状が、軽減または排除される場合、個体はうまく「処置」される。例えば、処置が、疾患に罹った個体のクオリティ・オブ・ライフの増加、疾患処置に必要とされる他の薬物療法の用量の減少、疾患再発の頻度の低下、疾患の重症度の低減、疾患の発症もしくは進行の遅延および／または個体の生存の延長をもたらす場合、個体はうまく「処置」される。
【００６６】
本明細書において、「と併せて」（in  conjunction  with）または「と組み合わせた」（in  combination  with）は、ある処置様式に加えた、別の処置様式の投与を指す。このようなものとして、「と併せて」または「と組み合わせた」は、個体へのある処置様式の投与の前、最中または後における、他の処置様式の投与を指す。
【００６７】
本明細書において、用語「予防」または「予防する」は、個体における疾患の発生または再発に関する予防法の提供を含む。個体は、疾患の素因がある、疾患になりやすいまたは疾患発症リスクがある可能性があるが、未だ疾患と診断されていない。一部の実施形態において、本明細書に記載されている抗シグレック−８抗体（例えば、ヒトシグレック−８に結合する抗体）は、疾患（例えば、進行性全身性肥満細胞症）の発症を遅延させるために使用される。
【００６８】
本明細書において、疾患（例えば、進行性全身性肥満細胞症）発症「リスクがある」個体は、検出可能な疾患または疾患症状を有していても有していなくてもよく、本明細書に記載されている処置方法に先立ち検出可能な疾患または疾患症状を呈していてもいなくてもよい。「リスクがある」は、個体が、本技術分野で公知の疾患（例えば、進行性全身性肥満細胞症）の発症と相関する測定可能なパラメータである１種または複数種のリスク因子を有することを意味する。これらのリスク因子のうち１種または複数種を有する個体は、これらのリスク因子の１種または複数がない個体よりも高い疾患発症確率を有する。
【００６９】
「有効量」は、治療的または予防的結果を含む、所望のまたは表示の効果の達成に必要な投与量および期間で、少なくとも有効な量を指す。有効量は、１回または複数の投与でもたらすことができる。「治療有効量」は、特定の疾患の測定可能な改善をもたらすために要求される少なくとも最小濃度である。本明細書における治療有効量は、患者の疾患状態、年齢、性別および体重、ならびに個体において所望の応答を誘発する抗体の能力等の因子に応じて変動し得る。治療有効量は、治療的に有益な効果が、抗体のいかなる毒性または有害効果も上回る量となることもできる。「予防有効量」は、所望の予防的結果の達成に必要な投与量および期間で有効な量を指す。典型的には、ただし必然的にではなく、予防的用量は、疾患のより早期ステージにおいてまたはそれに先立ち個体において使用されるため、予防有効量は、治療有効量未満となり得る。
【００７０】
「慢性」投与は、延長された期間で初期治療効果（活性）を維持するために、急性様式とは対照的に継続的な様式での医薬（複数可）の投与を指す。「間欠的」投与は、中断することなく連続的に為されないが、周期性の性質の処置である。
【００７１】
用語「添付文書」は、治療用製品の使用に関する適応症、用法、投薬量、投与、併用療法、禁忌および／または警告についての情報を含有する、このような治療用製品の販売用パッケージ中に習慣的に含まれる指示を指すものとして使用される。
【００７２】
本明細書において、「個体」または「被験体」は、哺乳動物である。処置目的のための「哺乳動物」は、イヌ、ウマ、ウサギ、ウシ、ブタ、ハムスター、スナネズミ、マウス、フェレット、ラット、ネコ等、ヒト、飼育動物および家畜、ならびに動物園、スポーツまたは愛玩動物を含む。一部の実施形態において、個体または被験体は、ヒトである。
【００７３】
ＩＩ．組成物および方法
Ａ．本発明の方法
個体における進行性全身性肥満細胞症（例えば、ＳＭ−ＡＨＮＭＤ）を処置または予防するための方法であって、個体に、ヒトシグレック−８に結合する本明細書に記載されている抗体（例えば、抗シグレック−８抗体）またはその組成物の有効量を投与するステップを含む方法が本明細書に提供される。個体における進行性全身性肥満細胞症（例えば、ＳＭ−ＡＨＮＭＤ）を処置または予防するための方法であって、個体に、ヒトシグレック−８に結合する本明細書に記載されているアゴニスト（例えば、６’−スルホ−ｓＬｅＸ含有アゴニストまたはアゴニスト抗体）またはその組成物の有効量を投与するステップを含む方法も本明細書に提供される。一部の実施形態において、個体（例えば、ヒト）は、進行性全身性肥満細胞症（例えば、ＳＭ−ＡＨＮＭＤ）と診断されている、または進行性全身性肥満細胞症を発症するリスクがある。.用語「進行性全身性肥満細胞症」は、本明細書において使用する場合、シグレック−８発現肥満細胞の増加した増殖（例えば、増加した数）または活性化に関連する疾患、障害または状態を指すことができる。一部の実施形態では、進行性全身性肥満細胞症は、好酸球（例えば、シグレック−８発現好酸球）の増加した増殖（例えば、増加した数）または活性化に関連する。本発明の抗体およびアゴニストならびにその組成物により処置可能な進行性全身性肥満細胞症の非限定例として、好酸球増加症に関連する進行性全身性肥満細胞症、好酸球増加症を伴わない進行性全身性肥満細胞症、侵襲性全身性肥満細胞症（ＡＳＭ）、肥満細胞白血病（ＭＣＬ）、ならびにＳＭ−骨髄異形成症候群（ＳＭ−ＭＤＳ）、ＳＭ−骨髄増殖性新生物（ＳＭ−ＭＰＮ）、ＳＭ−慢性骨髄単球性白血病（ＳＭ−ＣＭＭＬ）、ＳＭ−慢性好酸球性白血病（ＳＭ−ＣＥＬ）およびＳＭ−急性骨髄性白血病（ＳＭ−ＡＭＬ）等の非肥満細胞性血液腫瘍性疾患関連全身性肥満細胞症（ＳＭ−ＡＨＮＭＤ）が挙げられる。
【００７４】
全身性肥満細胞症（ＳＭ）は、１種または複数種の臓器における新生物肥満細胞の増殖および蓄積によって特徴付けられる希少な骨髄増殖性新生物である。全身性肥満細胞症由来の症状は、肥満細胞による化学的メディエーター（例えば、ヒスタミン）の放出および骨髄、皮膚、脾臓、リンパ節、肝臓および胃腸管等の組織の肥満細胞浸潤から生じる。臓器における肥満細胞の蓄積は、臓器機能を阻害することができ、これは、臓器不全をもたらし得る。全身性肥満細胞症のための世界保健機関（ＷＨＯ）２００８年分類は、この疾患の７種のバリアントに加えて、暫定的サブバリアントを同定した。バリアントは、皮膚性肥満細胞症（ＣＭ）、無痛性全身性肥満細胞症（ＩＳＭ）、侵襲性全身性肥満細胞症（ＡＳＭ）、非肥満細胞性血液腫瘍性疾患関連全身性肥満細胞症（ＳＭ−ＡＨＮＭＤ）、肥満細胞白血病（ＭＣＬ）、肥満細胞肉腫および皮膚外肥満細胞腫、ならびにくすぶり型全身性肥満細胞症（ＳＳＭ）と命名されたＩＳＭの暫定的サブバリアントを含む。Gotlibら、Blood、２０１３年、１２１巻（１３号）：２３９３〜２４０１頁；Valentら、Immunol  Allergy  Clin  North  Am.、２００６年、２６巻（３号）：５１５〜５３４頁；Patnaikら、Arch  Pathol  Lab  Med.、２００７年、１３１巻（５号）：７８４〜７９１頁；Valentら、Eur.  J.  Clin  Invest.、２００７年、３７巻：４３５〜４５３頁；およびValentら、Allergy、２０１４年、６９巻：１２６７〜１２７４頁を参照されたい。全身性肥満細胞症のためのＷＨＯ診断基準は、１種のメジャーな診断基準および４種のマイナーな診断基準を含む。メジャーな診断基準は、個体の骨髄および／または他の皮膚外臓器における肥満細胞凝集塊（凝集塊における＞１５個の肥満細胞）の存在である。４種のマイナーな診断基準を次に示す：１）骨髄または他の皮膚外臓器の生検切片における形態学的に異型の骨髄肥満細胞の存在（浸潤物における肥満細胞の＞２５％が、紡錘形であり、異型形態的特色を有する、または骨髄吸引物スメアにおける全肥満細胞のうち、＞２５％が未成熟もしくは異型である）；２）骨髄、血液または他の皮膚外臓器における肥満細胞が、正常肥満細胞マーカーに追加して、ＣＤ２および／またはＣＤ２５を発現する；３）骨髄、血液または別の皮膚外臓器におけるＫＩＴのコドン８１６における活性化点変異の検出；４）ならびに関連するクローナル骨髄性障害が存在する場合を除いて、血清総トリプターゼが、２０ｎｇ／ｍＬレベルを持続的に超える。上述の４種のマイナーな診断基準のうち１種のマイナーな診断基準と併せたメジャーな診断基準、または上述の４種のマイナーな診断基準のうち３種の診断マイナー基準が、全身性肥満細胞症の診断の確立に要求される。全身性バリアントは、Ｂ所見（finding）（複数可）およびＣ所見（複数可）と称される診断基準の存在によって区別される。Ｂ所見は、生検における＞３０％骨髄肥満細胞および／または血清トリプターゼレベル＞２００ｎｇ／ｍＬ；造血器新生物（ＡＨＮＭＤ）のための診断基準を満たすことのない、増加した骨髄細胞充実性／異形成；ならびに肝臓機能障害を伴わない肝臓の肥大および／または脾機能亢進症を伴わない肥大した脾臓および／または肥大したリンパ節（＞２ｃｍ）を含む。Ｃ所見��、１種または複数の血球減少（絶対好中球数＜１×１０９／Ｌ、Ｈｂ＜１０ｇ／ｄＬまたは血小板＜１００×１０９Ｌ）によって顕在化された骨髄機能不全；肝臓機能障害、腹水および／または門脈圧亢進症を伴う肥大した肝臓；脾機能亢進症を伴う肥大した脾臓；大きな溶骨性病変および／または病的骨折；ならびに胃腸管における肥満細胞浸潤に起因する体重減少を伴う吸収不良を含む。Gotlibら、Blood、２０１３年、１２１巻（１３号）：２３９３〜２４０１頁を参照されたい。
【００７５】
進行性全身性肥満細胞症は典型的に、臓器損傷および生存期間の短縮によって特徴付けられる。異なる種類の進行性全身性肥満細胞症が存在し、そのようなものとして、肥満細胞白血病（ＭＣＬ）、侵襲性全身性肥満細胞症（ＡＳＭ）および非肥満細胞性血液腫瘍性疾患関連全身性肥満細胞症（ＳＭ−ＡＨＮＭＤ）が挙げられる。個体は、全身性肥満細胞症のための診断基準を満たし、Ｃ所見（複数可）診断基準のうち１種または複数種を示し、肥満細胞白血病のエビデンスを示さない場合、ＡＳＭと診断される。ＡＳＭは、著明な線維形成を伴う異型の、多くの場合、未成熟の肥満細胞による多巣性骨髄浸潤によって特徴付けられる。ＫＩＴ  Ｄ８１６Ｖ変異の陽性状態は、ＡＳＭの個体において見出されることが多い。Gotlibら、Blood、２０１３年、１２１巻（１３号）：２３９３〜２４０１頁を参照されたい。個体は、全身性肥満細胞症のための診断基準と共に他の基準を満たす場合、ＭＣＬと診断される。ＭＣＬにおいて、肥満細胞は、骨髄吸引物スメアにおける有核細胞の２０％超を占め、異型未成熟肥満細胞は、低レベルの線維形成を有して、コア生検においてびまん性のさらにまたコンパクトな浸潤を形成する。ＭＣＬの個体は、ＫＩＴ  Ｄ８１６Ｖ変異の陽性状態を示さない場合がある。ＭＣＬは、明らかな臓器損傷なしで存在することができるが、臓器損傷は通常、短期間の内に発症する。ＭＣＬは、典型的ＭＣＬおよび無白血病性ＭＣＬを含む。典型的ＭＣＬにおいて、肥満細胞は、末梢白血球の１０％またはそれよりも多くを構成する。無白血病性ＭＣＬにおいて、末梢白血球の＜１０％が肥満細胞である。Gotlibら、Blood、２０１３年、１２１巻（１３号）：２３９３〜２４０１頁を参照されたい。個体は、全身性肥満細胞症のための診断基準、ならびに骨髄異形成症候群、骨髄増殖性新生物、慢性骨髄単球性白血病、好酸球性障害（例えば、慢性好酸球性白血病）および急性骨髄性白血病等の関連の非肥満細胞性血液腫瘍性疾患（an  associated  clonal  hematologic  non-mast  cell  lineage  disease）のための基準を満たす場合、ＡＭ−ＡＨＮＭＤと診断される。ＳＭ−ＡＨＮＭＤは、ＳＭ−骨髄異形成症候群（ＳＭ−ＭＤＳ）、ＳＭ−骨髄増殖性新生物（ＳＭ−ＭＰＮ）、ＳＭ−慢性骨髄単球性白血病（ＳＭ−ＣＭＭＬ）、ＳＭ−慢性好酸球性白血病（ＳＭ−ＣＥＬ）およびＳＭ−急性骨髄性白血病（ＳＭ−ＡＭＬ）を含む。本明細書において使用する場合、「進行性全身性肥満細胞症」を有する個体は、好酸球増加症を有しても有さなくてもよい。進行性全身性肥満細胞症の症状として、体重減少、皮膚病変、肥大した脾臓、肥大した肝臓、肥大したリンパ節、腹部不快感または疼痛、早期満腹感、貧血、血小板減少症、腹水、骨折、嘔吐、悪心、下痢、潮紅、そう痒、色素性蕁麻疹（uticaria  pigmentosa）、血管浮腫、エピソード性アナフィラキシー様発作（episodic  anaphylactoid  attack）および臓器機能不全が挙げられるがこれらに限定されない。
【００７６】
進行性全身性肥満細胞症を有する個体における処置に対する応答は、本技術分野で周知の方法によって評価することができる。Gotlibら、Blood、２０１３年、１２１巻（１３号）：２３９３〜２４０１頁およびVerstovsek、Eur  J  Haematol.、２０１３年、９０巻（２号）：８９〜９８頁を参照されたい。例えば、進行性全身性肥満細胞症を有する個体における処置に対する応答は、本明細書に記載されている進行性全身性肥満細胞症のいずれかの症状（例えば、皮膚病変）の低下または改善であり得る。別の例では、進行性全身性肥満細胞症を有する個体における処置に対する応答は、腹水または胸水、肝臓機能異常、低アルブミン血症、症候性の著明な脾腫、絶対好中球数、貧血（輸血非依存性および輸血依存性）、血小板減少症（輸血非依存性および輸血依存性）、血清トリプターゼレベル、肥満細胞浸潤、肥満細胞数、肥満細胞脱顆粒、および全身性肥満細胞症の診断基準として本明細書に記載されている他のいずれかの病理学的パラメータ等、本明細書に記載されている病理学的パラメータの低下または改善であり得る。処置に対する応答は、個体における進行性全身性肥満細胞症の完全寛解（ＣＲ）、部分寛解（ＰＲ）または臨床的改善（Ｃｌ）をもたらし得る。
【００７７】
本技術分野で公知であり本明細書に記載されている方法論およびアッセイは、本明細書に記載されている進行性全身性肥満細胞症（例えば、ＳＭ−骨髄異形成症候群（ＳＭ−ＭＤＳ）、ＳＭ−慢性骨髄単球性白血病（ＳＭ−ＣＭＭＬ）、ＳＭ−慢性好酸球性白血病（ＳＭ−ＣＥＬ）、ＡＳＭ等）、本明細書に記載されている進行性全身性肥満細胞症の症状、または本明細書に記載されている進行性全身性肥満細胞症の診断基準のうちいずれかの種類の評価に使用することができる。例えば、肥満細胞負荷は、形態的解析、ならびにコア生検におけるトリプターゼ、ＣＤ１１７およびＣＤ２５の免疫組織化学染色によって定量することができる。その代わりにまたはその上、骨髄吸引物のフローサイトメトリー解析を使用して、肥満細胞のパーセンテージを定量することができる。Gotlibら、Blood、２０１３年、１２１巻（１３号）：２３９３〜２４０１頁；Hermineら、２００８年、PLos  One、３巻：ｅ２２６６頁；およびVerstovsek、Eur  J  Haematol.、２０１３年、９０巻（２号）：８９〜９８頁を参照されたい。
【００７８】
本明細書に提供される方法の一部の実施形態では、本方法は、個体（例えば、患者）を進行性全身性肥満細胞症（例えば、ＳＭ−ＡＨＮＭＤ）と診断するステップ、処置のために進行性全身性肥満細胞症（例えば、ＳＭ−ＡＨＮＭＤ）を有する個体（例えば、患者）を選択するステップ、および／または個体（例えば、患者）が、進行性全身性肥満細胞症（例えば、ＳＭ−ＡＨＮＭＤ）を有するか決定するステップをさらに含む。一部の実施形態では、本方法は、個体を進行性全身性肥満細胞症（例えば、ＳＭ−ＡＨＮＭＤ）と診断するステップ、処置のために進行性全身性肥満細胞症（例えば、ＳＭ−ＡＨＮＭＤ）を有する個体を選択するステップ、および／または個体における進行性全身性肥満細胞症（例えば、ＳＭ−ＡＨＮＭＤ）を処置もしくは予防する前に、個体が、進行性全身性肥満細胞症（例えば、ＳＭ−ＡＨＮＭＤ）を有するか決定するステップをさらに含み、本方法は、ヒトシグレック−８に結合する抗体（例えば、抗シグレック−８抗体）またはアゴニスト（例えば、６’−スルホ−ｓＬｅＸ含有アゴニスト）の有効量を投与するステップを含む。一部の実施形態では、本方法は、個体を進行性全身性肥満細胞症（例えば、ＳＭ−ＡＨＮＭＤ）と診断するステップ、処置のために進行性全身性肥満細胞症（例えば、ＳＭ−ＡＨＮＭＤ）を有する個体を選択するステップ、および／または個体における進行性全身性肥満細胞症（例えば、ＳＭ−ＡＨＮＭＤ）を処置もしくは予防する前に、個体が、進行性全身性肥満細胞症（例えば、ＳＭ−ＡＨＮＭＤ）を有するか決定するステップをさらに含み、本方法は、ヒトシグレック−８に結合する抗体（例えば、抗シグレック−８抗体）またはアゴニスト（例えば、６’−スルホ−ｓＬｅＸ含有アゴニスト）の有効量を投与するステップを含み、それによって、抗体またはアゴニストの投与は、本明細書に記載されている進行性全身性肥満細胞症の１つまたは複数の症状（例えば、皮膚病変）の改善をもたらす。一部の実施形態では、本方法は、個体を進行性全身性肥満細胞症（例えば、ＳＭ−ＡＨＮＭＤ）と診断するステップ、処置のために進行性全身性肥満細胞症（例えば、ＳＭ−ＡＨＮＭＤ）を有する個体を選択するステップ、および／または個体における進行性全身性肥満細胞症（例えば、ＳＭ−ＡＨＮＭＤ）を処置もしくは予防する前に、個体が、進行性全身性肥満細胞症（例えば、ＳＭ−ＡＨＮＭＤ）を有するか決定するステップをさらに含み、本方法は、ヒトシグレック−８に結合する抗体（例えば、抗シグレック−８抗体）またはアゴニスト（例えば、６’−スルホ−ｓＬｅＸ含有アゴニスト）の有効量を投与するステップを含み、それによって、抗体またはアゴニストの投与は、本明細書に記載されている進行性全身性肥満細胞症の１種または複数種の病理学的パラメータ（例えば、肥満細胞浸潤）の改善をもたらす。一部の実施形態では、本方法は、個体を進行性全身性肥満細胞症（例えば、ＳＭ−ＡＨＮＭＤ）と診断するステップ、処置のために進行性全身性肥満細胞症（例えば、ＳＭ−ＡＨＮＭＤ）を有する個体を選択するステップ、および／または個体における進行性全身性肥満細胞症（例えば、ＳＭ−ＡＨＮＭＤ）を処置もしくは予防した後に、個体が、進行性全身性肥満細胞症（例えば、ＳＭ−ＡＨＮＭＤ）を有するか決定するステップをさらに含み、本方法は、ヒトシグレック−８に結合する抗体（例えば、抗シグレック−８抗体）またはアゴニスト（例えば、６’−スルホ−ｓＬｅＸ含有アゴニスト）の有効量を投与するステップを含む。一部の実施形態では、本方法は、個体を進行性全身性肥満細胞症（例えば、ＳＭ−ＡＨＮＭＤ）と診断するステップ、処置のために進行性全身性肥満細胞症（例えば、ＳＭ−ＡＨＮＭＤ）を有する個体を選択するステップ、および／または個体における進行性全身性肥満細胞症（例えば、ＳＭ−ＡＨＮＭＤ）を処置もしくは予防した後に、個体が、進行性全身性肥満細胞症（例えば、ＳＭ−ＡＨＮＭＤ）を有するか決定するステップをさらに含み、本方法は、ヒトシグレック−８に結合する抗体（例えば、抗シグレック−８抗体）またはアゴニスト（例えば、６’−スルホ−ｓＬｅＸ含有アゴニスト）の有効量を投与するステップを含み、それによって、抗体またはアゴニストの投与は、本明細書に記載されている進行性全身性肥満細胞症の１つまたは複数の症状（例えば、皮膚病変）の改善をもたらす。一部の実施形態では、本方法は、個体を進行性全身性肥満細胞症（例えば、ＳＭ−ＡＨＮＭＤ）と診断するステップ、処置のために進行性全身性肥満細胞症（例えば、ＳＭ−ＡＨＮＭＤ）を有する個体を選択するステップ、および／または個体における進行性全身性肥満細胞症（例えば、ＳＭ−ＡＨＮＭＤ）を処置もしくは予防した後に、個体が、進行性全身性肥満細胞症（例えば、ＳＭ−ＡＨＮＭＤ）を有するか決定するステップをさらに含み、本方法は、ヒトシグレック−８に結合する抗体（例えば、抗シグレック−８抗体）またはアゴニスト（例えば、６’−スルホ−ｓＬｅＸ含有アゴニスト）の有効量を投与するステップを含み、それによって、抗体またはアゴニストの投与は、本明細書に記載されている進行性全身性肥満細胞症の１種または複数種の病理学的パラメータ（例えば、肥満細胞浸潤）の改善をもたらす。
【００７９】
一部の実施形態では、個体における進行性全身性肥満細胞症を処置または予防するための方法であって、個体に、ヒトシグレック−８に結合する抗体（例えば、抗シグレック−８抗体）またはアゴニスト（例えば、６’−スルホ−ｓＬｅＸ含有アゴニスト）の有効量を投与するステップを含む方法が、本明細書に提供される。一部の実施形態では、個体における侵襲性全身性肥満細胞症（ＡＳＭ）を処置または予防するための方法であって、個体に、ヒトシグレック−８に結合する抗体（例えば、抗シグレック−８抗体）またはアゴニスト（例えば、６’−スルホ−ｓＬｅＸ含有アゴニスト）の有効量を投与するステップを含む方法が、本明細書に提供される。一部の実施形態では、個体における肥満細胞白血病（ＭＣＬ）を処置または予防するための方法であって、個体に、ヒトシグレック−８に結合する抗体（例えば、抗シグレック−８抗体）またはアゴニスト（例えば、６’−スルホ−ｓＬｅＸ含有アゴニスト）の有効量を投与するステップを含む方法が、本明細書に提供される。一部の実施形態では、個体における非肥満細胞性血液腫瘍性疾患関連全身性肥満細胞症（ＳＭ−ＡＨＮＭＤ）を処置または予防するための方法であって、個体に、ヒトシグレック−８に結合する抗体（例えば、抗シグレック−８抗体）またはアゴニスト（例えば、６’−スルホ−ｓＬｅＸ含有アゴニスト）の有効量を投与するステップを含む方法が、本明細書に提供される。一部の実施形態では、個体におけるＳＭ−骨髄異形成症候群（ＳＭ−ＭＤＳ）を処置または予防するための方法であって、個体に、ヒトシグレック−８に結合する抗体（例えば、抗シグレック−８抗体）またはアゴニスト（例えば、６’−スルホ−ｓＬｅＸ含有アゴニスト）の有効量を投与するステップを含む方法が、本明細書に提供される。一部の実施形態では、個体におけるＳＭ−骨髄増殖性新生物（ＳＭ−ＭＰＮ）を処置または予防するための方法であって、個体に、ヒトシグレック−８に結合する抗体（例えば、抗シグレック−８抗体）またはアゴニスト（例えば、６’−スルホ−ｓＬｅＸ含有アゴニスト）の有効量を投与するステップを含む方法が、本明細書に提供される。一部の実施形態では、個体におけるＳＭ−慢性骨髄単球性白血病（ＳＭ−ＣＭＭＬ）を処置または予防するための方法であって、個体に、ヒトシグレック−８に結合する抗体（例えば、抗シグレック−８抗体）またはアゴニスト（例えば、６’−スルホ−ｓＬｅＸ含有アゴニスト）の有効量を投与するステップを含む方法が、本明細書に提供される。一部の実施形態では、個体におけるＳＭ−慢性好酸球性白血病（ＳＭ−ＣＥＬ）を処置または予防するための方法であって、個体に、ヒトシグレック−８に結合する抗体（例えば、抗シグレック−８抗体）またはアゴニスト（例えば、６’−スルホ−ｓＬｅＸ含有アゴニスト）の有効量を投与するステップを含む方法が、本明細書に提供される。一部の実施形態では、個体におけるＳＭ−急性骨髄性白血病（ＳＭ−ＡＭＬ）を処置または予防するための方法であって、個体に、ヒトシグレック−８に結合する抗体（例えば、抗シグレック−８抗体）またはアゴニスト（例えば、６’−スルホ−ｓＬｅＸ含有アゴニスト）の有効量を投与するステップを含む方法が、本明細書に提供される。一部の実施形態では、進行性全身性肥満細胞症は、好酸球増加症に関連する。一部の実施形態では、進行性全身性肥満細胞症は、好酸球増加症を伴わない。
【００８０】
本明細書における実施形態の一部では、進行性全身性肥満細胞症（例えば、ＳＭ−ＡＨＮＭＤ）を有する個体における１つまたは複数の症状は、ヒトシグレック−８に結合する抗体（例えば、抗シグレック−８抗体）の投与前のベースラインレベルと比較して（例えば、参照値）、低下または改善される。本明細書における実施形態の一部では、進行性全身性肥満細胞症（例えば、ＳＭ−ＡＨＮＭＤ）を有する個体における１つまたは複数の症状は、ヒトシグレック−８に結合するアゴニスト（例えば、６’−スルホ−ｓＬｅＸ含有アゴニスト）の投与前のベースラインレベルと比較して（例えば、参照値）、低下または改善される。一部の実施形態では、進行性全身性肥満細胞症（例えば、ＳＭ−ＡＨＮＭＤ）を有する個体における１つまたは複数の症状は、体重減少、皮膚病変、肥大した脾臓、肥大した肝臓、肥大したリンパ節、腹部不快感または疼痛、早期満腹感、貧血、血小板減少症、腹水、骨折、嘔吐、悪心、下痢、潮紅、そう痒、色素性蕁麻疹、血管浮腫、エピソード性アナフィラキシー様発作および臓器機能不全からなる群から選択される。本明細書における実施形態の一部では、抗体は、抗体および薬学的に許容されるキャリアを含む医薬組成物中に存在する。本明細書における実施形態の一部では、アゴニストは、アゴニストおよび薬学的に許容されるキャリアを含む医薬組成物中に存在する。
【００８１】
本明細書における実施形態の一部では、進行性全身性肥満細胞症（例えば、ＳＭ−ＡＨＮＭＤ）を有する個体における、本明細書に記載されている全身性肥満細胞症の診断基準等、１種または複数種の病理学的パラメータは、ヒトシグレック−８に結合する抗体（例えば、抗シグレック−８抗体）の投与前のベースラインレベルと比較して（例えば、参照値）、低下または改善される。一部の実施形態では、進行性全身性肥満細胞症（例えば、ＳＭ−ＡＨＮＭＤ）を有する個体における１種または複数種の病理学的パラメータは、腹水または胸水、肝臓機能異常、低アルブミン血症、症候性の著明な脾腫、絶対好中球数、貧血（輸血非依存性および輸血依存性）、血小板減少症（輸血非依存性および輸血依存性）、血清トリプターゼレベル、肥満細胞浸潤、肥満細胞数、肥満細胞脱顆粒、および全身性肥満細胞症の診断基準として本明細書に記載されている他のいずれかの病理学的パラメータからなる群から選択される。本明細書における一部の実施形態では、個体は、ヒトである。本明細書における実施形態の一部において、抗体は、抗体および薬学的に許容されるキャリアを含む医薬組成物中に存在する。本明細書における実施形態の一部において、アゴニストは、アゴニストおよび薬学的に許容されるキャリアを含む医薬組成物中に存在する。
【００８２】
本明細書における実施形態の一部では、進行性全身性肥満細胞症（例えば、ＳＭ−ＡＨＮＭＤ）を有する個体は、１種または複数種の治療剤による処置に対し抵抗性である。一部の実施形態では、１種または複数種の治療剤は、細胞傷害性薬剤；サイトカイン；成長阻害性薬剤；タンパク質キナーゼ阻害剤；副腎皮質ステロイド；抗体；ｍＴＯＲ阻害剤；および抗がん剤からなる群から選択される。本明細書における実施形態の一部では、進行性全身性肥満細胞症（例えば、ＳＭ−ＡＨＮＭＤ）を有する個体は、１種または複数種のタンパク質キナーゼ阻害剤による処置に対し抵抗性である。一部の実施形態では、進行性全身性肥満細胞症（例えば、ＳＭ−ＡＨＮＭＤ）を有する個体は、ミドスタウリン、イマチニブ、ニロチニブ、ダサチニブおよび／またはマシチニブ（masitinib）による処置に対し抵抗性である。本明細書における実施形態の一部では、進行性全身性肥満細胞症（例えば、ＳＭ−ＡＨＮＭＤ）を有する個体は、インターフェロン−αによる処置に対し抵抗性である。本明細書における実施形態の一部では、進行性全身性肥満細胞症（例えば、ＳＭ−ＡＨＮＭＤ）を有する個体は、リツキシマブおよび／またはダクリズマブによる処置に対し抵抗性である。本明細書における実施形態の一部では、進行性全身性肥満細胞症（例えば、ＳＭ−ＡＨＮＭＤ）を有する個体は、ＲＡＤ００１による処置に対し抵抗性である。本明細書における実施形態の一部では、進行性全身性肥満細胞症（例えば、ＳＭ−ＡＨＮＭＤ）を有する個体は、リツキシマブおよび／またはダクリズマブによる処置に対し抵抗性である。本明細書における実施形態の一部では、進行性全身性肥満細胞症（例えば、ＳＭ−ＡＨＮＭＤ）を有する個体は、クラドリビン、デニロイキンジフチトクス、レナリドミド、サリドマイドおよび／またはヒドロキシウレアによる処置に対し抵抗性である。このような個体は、本明細書に記載されているヒトシグレック−８に結合する抗体またはアゴニストによる処置から恩恵を被ることができる。一部の実施形態では、本明細書に記載されている１種または複数種の治療剤（例えば、タンパク質キナーゼ阻害剤）による処置に対し抵抗性である進行性全身性肥満細胞症（例えば、ＳＭ−ＡＨＮＭＤ）を有する個体は、本明細書に記載されているヒトシグレック−８に結合する抗体またはアゴニストによる処置に応答する。一部の実施形態では、本明細書に記載されている１種または複数種の治療剤（例えば、タンパク質キナーゼ阻害剤）による処置に対し抵抗性である進行性全身性肥満細胞症（例えば、ＳＭ−ＡＨＮＭＤ）を有する個体は、本明細書に記載されている１種または複数種の治療剤（例えば、タンパク質キナーゼ阻害剤）と組み合わせて投与された、本明細書に記載されているヒトシグレック−８に結合する抗体またはアゴニストによる処置に応答する。
【００８３】
進行性全身性肥満細胞症を有する個体は、ｃ−Ｋｉｔのホスホトランスフェラーゼドメインに活性化点変異を有する場合がある。主な活性化変異は、ｃ−Ｋｉｔの位置８１６におけるアスパラギン酸残基からバリン残基への変異（すなわち、ＫＩＴ  Ｄ８１６Ｖ変異）である。本明細書における実施形態の一部では、進行性全身性肥満細胞症（例えば、ＳＭ−ＡＨＮＭＤ）を有する個体は、ｃ−Ｋｉｔ遺伝子に変異を有する。一部の実施形態では、個体は、ＫＩＴ  Ｄ８１６Ｖ変異を有する。一部の実施形態では、個体は、ＫＩＴ  Ｄ８１６Ｖ変異を有しない。ＫＩＴ  Ｄ８１６Ｖ変異の検出のための方法は、本技術分野で公知である。例えば、Hermineら、２００８年、PLos  One、３巻：ｅ２２６６頁を参照されたい。一部の実施形態では、ＫＩＴ  Ｄ８１６Ｖ変異を有する個体は、細胞傷害性薬剤；サイトカイン；成長阻害性薬剤；タンパク質キナーゼ阻害剤；副腎皮質ステロイド；抗体；ｍＴＯＲ阻害剤；および抗がん剤からなる群から選択される１種または複数種の治療剤による処置に対し抵抗性である。一部の実施形態では、ＫＩＴ  Ｄ８１６Ｖ変異を有する個体は、本明細書に記載されているヒトシグレック−８に結合する抗体またはアゴニストによる処置に応答する。一部の実施形態では、ＫＩＴ  Ｄ８１６Ｖ変異を有する個体は、本明細書に記載されている１種または複数種の治療剤（例えば、タンパク質キナーゼ阻害剤）と組み合わせて投与された、本明細書に記載されているヒトシグレック−８に結合する抗体またはアゴニストによる処置に応答する。
【００８４】
本明細書において互換的に使用される用語「ベースライン」または「ベースライン値」は、治療法（例えば、抗シグレック−８抗体）の投与前の、または治療法の投与の開始時における症状（例えば、肥満細胞浸潤、肥満細胞数、血清トリプターゼレベル、体重減少等）の測定値または特徴付けを指すことができる。本明細書において考慮されるあるタイプの進行性全身性肥満細胞症の症状の低下または改善を決定するために、ベースライン値は、参照値と比較することができる。本明細書において互換的に使用される用語「参照」または「参照値」は、治療法（例えば、抗シグレック−８抗体）の投与後の症状の測定値または特徴付けを指すことができる。参照値は、投与レジメンもしくは処置サイクルの間にまたは投与レジメンもしくは処置サイクルの完了時に、１回または複数回測定することができる。「参照値」は、絶対値；相対値；上限および／または下限を有する値；値の範囲；平均値；中央値；平均的な値；またはベースライン値と比較される値となることができる。同様に、「ベースライン値」は、絶対値；相対値；上限および／または下限を有する値；値の範囲；平均値；中央値；平均的な値；または参照値と比較される値となることができる。参照値および／またはベースライン値は、１個体から、または異なる２個体から、または個体の群（例えば、２、３、４、５またはそれを超える個体の群）から得ることができる。例えば、進行性全身性肥満細胞症（例えば、ＳＭ−ＡＨＮＭＤ）を有する個体は、ヒトシグレック−８に結合する抗体の投与後に、個体におけるヒトシグレック−８に結合する抗体の投与前または投与初期の肥満細胞浸潤のレベル（例えば、ベースライン値）と比較して、肥満細胞浸潤のレベルを低下させ得る（例えば、参照値）。別の例において、進行性全身性肥満細胞症（例えば、ＳＭ−ＡＨＮＭＤ）を有する個体は、ヒトシグレック−８に結合する抗体の投与後に、異なる個体におけるヒトシグレック−８に結合する抗体の投与前または投与初期の肥満細胞浸潤のレベル（例えば、ベースライン値）と比較して、肥満細胞浸潤のレベルを低下させ得る（例えば、参照値）。さらに別の例において、進行性全身性肥満細胞症（例えば、ＳＭ−ＡＨＮＭＤ）を有する個体は、ヒトシグレック−８に結合する抗体の投与後に、個体群におけるヒトシグレック−８に結合する抗体の投与前または投与初期の肥満細胞浸潤のレベル（例えば、ベースライン値）と比較して、肥満細胞浸潤のレベルを低下させ得る（例えば、参照値）。別の例において、進行性全身性肥満細胞症（例えば、ＳＭ−ＡＨＮＭＤ）を有する個体群は、ヒトシグレック−８に結合する抗体の投与後に、個体群におけるヒトシグレック−８に結合する抗体の投与前または投与初期の肥満細胞浸潤のレベル（例えば、ベースライン値）と比較して、肥満細胞浸潤のレベルを低下させ得る（例えば、参照値）。本明細書における実施形態のいずれかでは、ベースライン値は、ヒトシグレック−８に結合する抗体により処置されていない、１個体から、２名の異なる個体から、または個体群（例えば、２、３、４、５名またはそれを超える個体の群）から得ることができる。
【００８５】
一部の実施形態において、本明細書に記載されている個体は、好酸球（例えば、シグレック−８を発現する好酸球）の枯渇または低下のために、ヒトシグレック−８に結合する抗体もしくはアゴニストまたはその組成物の有効量を投与される。一部の実施形態において、抗シグレック−８抗体またはアゴニストは、抗体またはアゴニストの投与前のベースラインレベルと比較して、個体から得られる試料における好酸球（例えば、シグレック−８を発現する好酸球）の少なくとも約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％または約１００％を枯渇または低下させる。一部の実施形態において、抗シグレック−８抗体は、抗体またはアゴニストの投与前のベースラインレベルと比較して、個体から得られる試料における好酸球（例えば、シグレック−８を発現する好酸球）の少なくとも約２０％を枯渇または低下させる。一部の実施形態において、好酸球の枯渇または低下は、抗体またはアゴニストによる処置後の個体由来の試料（例えば、組織試料または生体液試料）における好酸球集団数を、抗体またはアゴニストによる処置前の個体由来の試料における好酸球集団数と比較することにより測定される。一部の実施形態において、好酸球の枯渇または低下は、抗体またはアゴニストによる処置後の個体由来の試料（例えば、組織試料または生体液試料）における好酸球集団数を、抗体処置もしくはアゴニスト処置なしの別の個体由来の試料における好酸球集団数または抗体処置もしくはアゴニスト処置なしの個体由来の試料における平均好酸球集団数と比較することにより測定される。一部の実施形態において、試料は、組織試料（例えば、皮膚試料、骨髄試料、等）である。一部の実施形態において、組織試料は、骨髄試料、皮膚試料、脾臓試料、リンパ節試料、肝臓試料または胃腸管試料である。本明細書における一部の実施形態において、抗体は、組織試料における好酸球を枯渇させる。一部の実施形態において、試料は、生体液試料（例えば、血液試料、尿試料等）である。本明細書における一部の実施形態において、抗体またはアゴニストは、生体液試料（例えば、気管支肺胞洗浄試料）における好酸球を枯渇させる。本明細書における方法の一部の実施形態において、ヒトシグレック−８に結合する抗体もしくはアゴニストまたはその組成物の有効量は、活性化された好酸球のアポトーシスを誘導する。好酸球は、ＩＬ−５、ＧＭ−ＣＳＦ、ＩＬ−３３、ＩＦＮ−γ、ＴＮＦ−αおよびレプチン等が挙げられるがこれらに限定されない、サイトカインまたはホルモンにより活性化または感作することができる。本明細書における方法の一部の実施形態において、ヒトシグレック−８に結合する本明細書に記載されている抗体もしくはアゴニストまたはその組成物の有効量は、休止した好酸球のアポトーシスを誘導する。一部の実施形態において、ヒトシグレック−８に結合する本明細書に記載されている抗体もしくはアゴニストまたはその組成物の有効量は、好酸球に対する抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）活性を有する。一部の実施形態において、ヒトシグレック−８に結合する本明細書に記載されている抗体もしくはアゴニストまたはその組成物の有効量は、��症性メディエーターの好酸球産生を予防または低下させる。例示的な炎症性メディエーターとして、活性酸素種、顆粒タンパク質（例えば、好酸球カチオン性タンパク質、主要塩基性タンパク質、好酸球由来神経毒、好酸球ペルオキシダーゼ等）、脂質メディエーター（例えば、ＰＡＦ、ＰＧＥ１、ＰＧＥ２等）、酵素（例えば、エラスターゼ）、増殖因子（例えば、ＶＥＧＦ、ＰＤＧＦ、ＴＧＦ−α、ＴＧＦ−β等）、ケモカイン（例えば、ＲＡＮＴＥＳ、ＭＣＰ−１、ＭＣＰ−３、ＭＣＰ４、エオタキシン等）およびサイトカイン（例えば、ＩＬ−３、ＩＬ−５、ＩＬ−１０、ＩＬ−１３、ＩＬ−１５、ＩＬ−３３、ＴＮＦ−α等）が挙げられるがこれらに限定されない。
【００８６】
一部の実施形態では、本明細書に記載されている個体は、肥満細胞（例えば、シグレック−８を発現する肥満細胞）の枯渇または低下のために、ヒトシグレック−８に結合する抗体もしくはアゴニストまたはその組成物の有効量を投与される。一部の実施形態では、抗シグレック−８抗体またはアゴニストは、抗体またはアゴニストの投与前のベースラインレベルと比較して、個体から得られる試料におけるシグレック−８を発現する肥満細胞の少なくとも約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％または約１００％を枯渇または低下させる。一部の実施形態では、抗シグレック−８抗体またはアゴニストは、抗体またはアゴニストの投与前のベースラインレベルと比較して、個体から得られる試料におけるシグレック−８を発現する肥満細胞の少なくとも約２０％を枯渇または低下させる。一部の実施形態では、抗シグレック−８抗体またはアゴニストは、抗体またはアゴニストの投与前のベースラインレベルと比較して、個体から得られる試料におけるシグレック−８を発現する肥満細胞の少なくとも約３０％を枯渇または低下させる。一部の実施形態では、抗シグレック−８抗体またはアゴニストは、抗体またはアゴニストの投与前のベースラインレベルと比較して、個体から得られる試料におけるシグレック−８を発現する肥満細胞の少なくとも約４０％を枯渇または低下させる。一部の実施形態では、抗シグレック−８抗体またはアゴニストは、抗体またはアゴニストの投与前のベースラインレベルと比較して、個体から得られる試料におけるシグレック−８を発現する肥満細胞の少なくとも約５０％を枯渇または低下させる。一部の実施形態において、肥満細胞の枯渇または低下は、抗体またはアゴニストによる処置後の個体由来の試料（例えば、組織試料または生体液試料）における肥満細胞集団数を、抗体またはアゴニストによる処置前の個体由来の試料における肥満細胞集団数と比較することにより測定される。一部の実施形態において、肥満細胞の枯渇または低下は、抗体またはアゴニストによる処置後の個体由来の試料（例えば、組織試料または生体液試料）における肥満細胞集団数を、抗体処置もしくはアゴニスト処置なしの別の個体由来の試料における肥満細胞集団数または抗体処置もしくはアゴニスト処置なしの個体由来の試料における平均肥満細胞集団数と比較することにより測定される。一部の実施形態において、試料は、組織試料（例えば、皮膚試料、骨髄試料等）である。一部の実施形態では、組織試料は、骨髄試料、皮膚試料、脾臓試料、リンパ節試料、肝臓試料または胃腸管試料である。一部の実施形態において、試料は、生体液試料（例えば、血液試料、尿試料等）である。一部の実施形態において、ヒトシグレック−８に結合する本明細書に記載されている抗体もしくはアゴニストまたはその組成物の有効量は、肥満細胞に対する抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）活性を有する。一部の実施形態において、肥満細胞の枯渇または低下は、肥満細胞から産生される予め形成または新たに形成された炎症性メディエーターを予防するかまたは低下させる。例示的な炎症性メディエーターとして、ヒスタミン、Ｎ−メチルヒスタミン、酵素（例えば、トリプターゼ、キマーゼ、カテプシン（ｃａｔｈｅｓｐｉｎ）Ｇ、カルボキシペプチダーゼ等）、脂質メディエーター（例えば、プロスタグランジンＤ２、プロスタグランジンＥ２、ロイコトリエンＢ４、ロイコトリエンＣ４、血小板活性化因子、１１−ベータ−プロスタグランジンＦ２等）、ケモカイン（例えば、ＣＣＬ２、ＣＣＬ３、ＣＣＬ４、ＣＣＬ１１（すなわち、エオタキシン）、ＣＸＣＬ１、ＣＸＣＬ２、ＣＸＣＬ３、ＣＸＣＬ１０等）およびサイトカイン（例えば、ＩＬ−３、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−１５、ＩＬ−３３、ＧＭ−ＣＳＦ、ＴＮＦ等）が挙げられるがこれらに限定されない。
【００８７】
一部の実施形態において、本明細書に記載されている個体は、シグレック−８を発現する肥満細胞を枯渇させるために、ヒトシグレック−８に結合する抗体もしくはアゴニストまたはその組成物の有効量を投与され、抗シグレック−８抗体は、ＡＤＣＣ活性によりシグレック−８を発現する肥満細胞を死滅させる。一部の実施形態において、抗シグレック−８抗体またはアゴニストは、抗体またはアゴニストの投与前のベースラインレベルと比較した場合に、個体から得られる試料におけるシグレック−８を発現する肥満細胞の少なくとも約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％または約１００％を枯渇させる。一部の実施形態では、抗シグレック−８抗体またはアゴニストは、抗体またはアゴニストの投与前のベースラインレベルと比較して、個体から得られる試料におけるシグレック−８を発現する肥満細胞の少なくとも約２０％を枯渇させる。一部の実施形態では、抗シグレック−８抗体またはアゴニストは、抗体またはアゴニストの投与前のベースラインレベルと比較して、個体から得られる試料におけるシグレック−８を発現する肥満細胞の少なくとも約３０％を枯渇させる。一部の実施形態では、抗シグレック−８抗体またはアゴニストは、抗体またはアゴニストの投与前のベースラインレベルと比較して、個体から得られる試料におけるシグレック−８を発現する肥満細胞の少なくとも約４０％を枯渇させる。一部の実施形態では、抗シグレック−８抗体またはアゴニストは、抗体またはアゴニストの投与前のベースラインレベルと比較して、個体から得られる試料におけるシグレック−８を発現する肥満細胞の少なくとも約５０％を枯渇させる。一部の実施形態では、肥満細胞の枯渇または殺滅は、抗体またはアゴニストによる処置後の個体由来の試料（例えば、組織試料または生体液試料）における肥満細胞集団数を、抗体またはアゴニストによる処置前の個体由来の試料における肥満細胞集団数と比較することによって測定される。一部の実施形態では、肥満細胞の枯渇または殺滅は、抗体またはアゴニストによる処置後の個体由来の試料（例えば、組織試料または生体液試料）における肥満細胞集団数を、抗体処置もしくはアゴニスト処置なしの別の個体由来の試料における肥満細胞集団数、または抗体処置もしくはアゴニスト処置なしの個体由来の試料における平均肥満細胞集団数と比較することによって測定される。一部の実施形態では、試料は、組織試料（例えば、皮膚試料、骨髄試料等）である。一部の実施形態では、組織試料は、骨髄試料、皮膚試料、脾臓試料、リンパ節試料、肝臓試料または胃腸管試料である。一部の実施形態では、試料は、生体液試料（例えば、血液試料、尿試料等）である。一部の実施形態において、抗シグレック−８抗体は、ＡＤＣＣ活性を改善するように操作された。一部の実施形態において、抗シグレック−８抗体は、ＡＤＣＣ活性を改善するＦｃ領域における少なくとも１個のアミノ酸置換を含む。一部の実施形態において、抗体の重鎖の少なくとも１または２つは、フコシル化されていない。一部の実施形態において、肥満細胞の枯渇または殺滅は、肥満細胞から産生される予め形成または新たに形成された炎症性メディエーターを予防するかまたは低下させる。例示的な炎症性メディエーターとして、ヒスタミン、Ｎ−メチルヒスタミン、酵素（例えば、トリプターゼ、キマーゼ、カテプシンＧ、カルボキシペプチダーゼ等）、脂質メディエーター（例えば、プロスタグランジンＤ２、プロスタグランジンＥ２、ロイコトリエンＢ４、ロイコトリエンＣ４、血小板活性化因子、１１−ベータ−プロスタグランジンＦ２等）、ケモカイン（例えば、ＣＣＬ２、ＣＣＬ３、ＣＣＬ４、ＣＣＬ１１（すなわち、エオタキシン）、ＣＸＣＬ１、ＣＸＣＬ２、ＣＸＣＬ３、ＣＸＣＬ１０等）およびサイトカイン（例えば、ＩＬ−３、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−１３、ＩＬ−１５、ＩＬ−３３、ＧＭ−ＣＳＦ、ＴＮＦ等）が挙げられるがこれらに限定されない。
【００８８】
一部の実施形態において、本明細書に記載されている個体は、肥満細胞媒介性活性の阻害のために、ヒトシグレック−８に結合する抗体もしくはアゴニストまたはその組成物の有効量を投与される。一部の実施形態では、抗シグレック−８抗体またはアゴニストは、抗体またはアゴニストの投与前のベースラインレベルと比較して、個体から得られる試料における肥満細胞媒介性活性の少なくとも約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％または約１００％を阻害する。一部の実施形態では、抗シグレック−８抗体またはアゴニストは、抗体またはアゴニストの投与前のベースラインレベルと比較して、個体から得られる試料における肥満細胞媒介性活性の少なくとも約２０％を阻害する。一部の実施形態において、肥満細胞媒介性活性の阻害は、抗体またはアゴニストによる処置後の個体由来の試料（例えば、組織試料または生体液試料）における肥満細胞媒介性活性を、抗体またはアゴニストによる処置前の個体由来の試料における肥満細胞媒介性活性と比較することにより測定される。一部の実施形態において、肥満細胞媒介性活性の阻害は、抗体またはアゴニストによる処置後の個体由来の試料（例えば、組織試料または生体液試料）における肥満細胞媒介性活性を、抗体処置もしくはアゴニスト処置なしの別の個体由来の試料における肥満細胞媒介性活性または抗体処置もしくはアゴニスト処置なしの個体由来の試料における平均肥満細胞媒介性活性と比較することにより測定される。一部の実施形態において、試料は、組織試料（例えば、皮膚試料、骨髄試料等）である。一部の実施形態では、組織試料は、骨髄試料、皮膚試料、脾臓試料、リンパ節試料、肝臓試料または胃腸管試料である。一部の実施形態において、試料は、生体液試料（例えば、血液試料、尿試料等）である。一部の実施形態において、肥満細胞媒介性活性の阻害は、肥満細胞脱顆粒の阻害である。一部の実施形態では、肥満細胞媒介性活性の阻害は、臓器および／または骨髄への肥満細胞浸潤の阻害である。一部の実施形態では、肥満細胞媒介性活性の阻害は、サイトカイン放出の阻害である。一部の実施形態では、肥満細胞媒介性活性の阻害は、個体における肥満細胞の数の低下である。一部の実施形態において、肥満細胞媒介性活性の阻害は、肥満細胞からの予め形成または新たに形成された炎症性メディエーターの放出の阻害である。例示的な炎症性メディエーターとして、ヒスタミン、Ｎ−メチルヒスタミン、酵素（例えば、トリプターゼ、キマーゼ、カテプシンＧ、カルボキシペプチダーゼ等）、脂質メディエーター（例えば、プロスタグランジンＤ２、プロスタグランジンＥ２、ロイコトリエンＢ４、ロイコトリエンＣ４、血小板活性化因子、１１−ベータ−プロスタグランジンＦ２等）、ケモカイン（例えば、ＣＣＬ２、ＣＣＬ３、ＣＣＬ４、ＣＣＬ１１（すなわち、エオタキシン）、ＣＸＣＬ１、ＣＸＣＬ２、ＣＸＣＬ３、ＣＸＣＬ１０等）およびサイトカイン（例えば、ＩＬ−３、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−１３、ＩＬ−１５、ＩＬ−３３、ＧＭ−ＣＳＦ、ＴＮＦ等）が挙げられるがこれらに限定されない。
【００８９】
疾患の予防または処置のために、活性薬剤の適切な投与量は、上に定義されている処置しようとする疾患の種類、疾患の重症度および経過、予防または治療目的のいずれのために薬剤が投与されるか、以前の治療法、個体の臨床歴および薬剤に対する応答、ならびに主治医の裁量に依存するであろう。薬剤は、一度にまたは一連の処置にわたって個体に適宜投与される。本明細書に記載されている方法の一部の実施形態において、本明細書に記載されている抗シグレック−８抗体（例えば、ヒトシグレック−８に結合する抗体）またはアゴニストの投与間の間隔は、約１カ月間またはそれより長い。一部の実施形態において、投与間の間隔は、約２カ月間、約３カ月間、約４カ月間、約５カ月間、約６カ月間またはそれより長い。本明細書において、投与間の間隔は、抗体またはアゴニストの１投与と、抗体またはアゴニストの次の投与との間の期間を指す。本明細書において、約１カ月間の間隔は、４週間を含む。したがって、一部の実施形態において、投与間の間隔は、約４週間、約５週間、約６週間、約７週間、約８週間、約９週間、約１０週間、約１１週間、約１２週間、約１６週間、約２０週間、約２４週間またはそれより長い。一部の実施形態において、処置は、抗体またはアゴニストの複数投与を含み、投与間の間隔は、変動し得る。例えば、第１の投与と第２の投与との間の間隔は、約１ヶ月間であり、その後の投与間の間隔は、約３ヶ月間である。一部の実施形態において、第１の投与と第２の投与との間の間隔は、約１ヶ月間であり、第２の投与と第３の投与との間の間隔は、約２ヶ月間であり、その後の投与間の間隔は、約３ヶ月間である。一部の実施形態において、本明細書に記載されている抗シグレック−８抗体（例えば、ヒトシグレック−８に結合する抗体）または本明細書に記載されているアゴニストは、平坦な用量で投与される。一部の実施形態において、本明細書に記載されている抗シグレック−８抗体（例えば、ヒトシグレック−８に結合する抗体）または本明細書に記載されているアゴニストは、用量当たり約０．１ｍｇ〜約１８００ｍｇの投与量で個体に投与される。一部の実施形態において、抗シグレック−８抗体（例えば、ヒトシグレック−８に結合する抗体）またはアゴニストは、用量当たり０．１ｍｇ、０．５ｍｇ、１ｍｇ、５ｍｇ、１０ｍｇ、２０ｍｇ、３０ｍｇ、４０ｍｇ、５０ｍｇ、６０ｍｇ、７０ｍｇ、８０ｍｇ、９０ｍｇ、１００ｍｇ、１５０ｍｇ、２００ｍｇ、２５０ｍｇ、３００ｍｇ、３５０ｍｇ、４００ｍｇ、４５０ｍｇ、５００ｍｇ、５５０ｍｇ、６００ｍｇ、６５０ｍｇ、７００ｍｇ、７５０ｍｇ、８００ｍｇ、８５０ｍｇ、９００ｍｇ、９５０ｍｇ、１０００ｍｇ、１１００ｍｇ、１２００ｍｇ、１３００ｍｇ、１４００ｍｇ、１５００ｍｇ、１６００ｍｇ、１７００ｍｇおよび１８００ｍｇのほぼいずれかの投与量で個体に投与される。一部の実施形態において、本明細書に記載されている抗シグレック−８抗体（例えば、ヒトシグレック−８に結合する抗体）または本明細書に記載されているアゴニストは、用量当たり約１５０ｍｇ〜約４５０ｍｇの投与量で個体に投与される。一部の実施形態において、抗シグレック−８抗体（例えば、ヒトシグレック−８に結合する抗体）またはアゴニストは、用量当たり１５０ｍｇ、２００ｍｇ、２５０ｍｇ、３００ｍｇ、３５０ｍｇ、４００ｍｇおよび４５０ｍｇのほぼいずれかの投与量で個体に投与される。一部の実施形態において、本明細書に記載されている抗シグレック−８抗体（例えば、ヒトシグレック−８に結合する抗体）または本明細書に記載されているアゴニストは、用量当たり約０．１ｍｇ／ｋｇ〜約２０ｍｇ／ｋｇの投与量で個体に投与される。一部の実施形態において、本明細書に記載されている抗シグレック−８抗体（例えば、ヒトシグレック−８に結合する抗体）または本明細書に記載されているアゴニストは、用量当たり約０．０１ｍｇ／ｋｇ〜約１０ｍｇ／ｋｇの投与量で個体に投与される。一部の実施形態において、本明細書に記載されている抗シグレック−８抗体（例えば、ヒトシグレック−８に結合する抗体）または本明細書に記載されているアゴニストは、約０．１ｍｇ／ｋｇ〜約１０ｍｇ／ｋｇまたは約１．０ｍｇ／ｋｇ〜約１０ｍｇ／ｋｇの投与量で個体に投与される。一部の実施形態において、本明細書に記載されている抗シグレック−８抗体は、約０．１ｍｇ／ｋｇ、０．５ｍｇ／ｋｇ、１．０ｍｇ／ｋｇ、１．５ｍｇ／ｋｇ、２．０ｍｇ／ｋｇ、２．５ｍｇ／ｋｇ、３．０ｍｇ／ｋｇ、３．５ｍｇ／ｋｇ、４．０ｍｇ／ｋｇ、４．５ｍｇ／ｋｇ、５．０ｍｇ／ｋｇ、５．５ｍｇ／ｋｇ、６．０ｍｇ／ｋｇ、６．５ｍｇ／ｋｇ、７．０ｍｇ／ｋｇ、７．５ｍｇ／ｋｇ、８．０ｍｇ／ｋｇ、８．５ｍｇ／ｋｇ、９．０ｍｇ／ｋｇ、９．５ｍｇ／ｋｇまたは１０．０ｍｇ／ｋｇのいずれかの投与量で個体に投与される。上述の投薬頻度のいずれかを使用することができる。上述のいずれかの投薬頻度は、本明細書に記載されている方法または組成物の使用において使用することができる。本明細書に記載されている抗体（例えば、ヒトシグレック−８に結合する抗体）または本明細書に記載されているアゴニストによる処置の有効性は、１週間毎〜３カ月間毎に及ぶ間隔で、本明細書に記載されている方法論またはアッセイのいずれかを使用して評価することができる。本明細書に記載されている方法の一部の実施形態において、処置の有効性（例えば、１つまたは複数の症状の低下または改善）は、ヒトシグレック−８に結合する抗体またはアゴニストの投与後に、約１カ月間毎に、約２カ月間毎に、約３カ月間毎に、約４カ月間毎に、約５カ月間毎に、約６カ月間毎にまたはそれより長い間隔で評価される。本明細書に記載されている方法の一部の実施形態において、処置の有効性（例えば、１つまたは複数の症状の低下または改善）は、約１週間毎に、約２週間毎に、約３週間毎に、約４週間毎に、約５週間毎に、約６週間毎に、約７週間毎に、約８週間毎に、約９週間毎に、約１０週間毎に、約１１週間毎に、約１２週間毎に、約１６週間毎に、約２０週間毎に、約２４週間毎にまたはそれより長い間隔で評価される。
【００９０】
ヒトシグレック−８に結合する本明細書に記載されている抗体およびアゴニストは、本明細書に記載されている方法において単独で、または他の薬剤と組み合わせて使用することができる。例えば、ヒトシグレック−８に結合する抗体は、１種または複数種の追加的な治療剤と共投与することができる。本明細書において企図される治療剤として、細胞傷害性薬剤；インターフェロン−α等、サイトカイン；成長阻害性薬剤；ミドスタウリン、イマチニブ、ニロチニブ、ダサチニブおよびマシチニブ等、タンパク質キナーゼ阻害剤；副腎皮質ステロイド；リツキシマブおよびダクリズマブ等、抗体；ＲＡＤ００１等、ｍＴＯＲ阻害剤；ならびにクラドリビン、デニロイキンジフチトクス、レナリドミド、サリドマイドおよびヒドロキシウレア等、抗がん剤が挙げられるがこれらに限定されない。ある特定の実施形態では、１種または複数種の追加的な治療剤は、細胞傷害性薬剤、サイトカイン（例えば、インターフェロン−α）、成長阻害性薬剤、タンパク質キナーゼ阻害剤（例えば、ミドスタウリン等のチロシンキナーゼ阻害剤）、副腎皮質ステロイド、抗体（例えば、リツキシマブ）または抗がん剤（例えば、クラドリビン等の代謝拮抗薬）からなる群から選択される。一部の実施形態では、追加的な治療剤は、チロシンキナーゼ阻害剤である。
上に記すこのような併用療法は、組み合わせた投与（２種またはそれよりも多い治療剤が、同じまたは別々の製剤中に含まれる場合）および別々の投与を包含し、別々の投与の場合、本発明の抗体の投与は、１種または複数種の追加的な治療剤（単数または複数）の投与に先立ち、それと同時に、および／またはその後に行い得る。一部の実施形態では、本明細書に記載されている抗シグレック−８抗体の投与および１種または複数種の追加的な治療剤の投与は、互いの約１ヶ月、約２ヶ月、約３ヶ月、約４ヶ月、約５ヶ月または約６ヶ月以内に行う。一部の実施形態では、本明細書に記載されている抗シグレック−８抗体の投与および１種または複数種の追加的な治療剤の投与は、互いの約１週間、約２週間または約３週間以内に行う。一部の実施形態では、本明細書に記載されている抗シグレック−８抗体の投与および１種または複数種の追加的な治療剤の投与は、互いの約１日、約２日、約３日、約４日、約５日または約６日以内に行う。
【００９１】
シグレック−８のアゴニスト
一態様において、本発明は、本明細書における方法のいずれかにおける使用のためのアゴニストを提供する。一部の実施形態において、アゴニストは、好酸球において発現するシグレック−８に結合し、ｉｎ  ｖｉｔｒｏまたはｉｎ  ｖｉｖｏにおける好酸球のアポトーシスを誘導する薬剤である。一部の実施形態では、アゴニストは、肥満細胞において発現したシグレック−８に結合し、ｉｎ  ｖｉｔｒｏまたはｉｎ  ｖｉｖｏで肥満細胞の活性化を阻害する作用因子である。一部の実施形態では、アゴニストは、肥満細胞において発現したシグレック−８に結合し、ｉｎ  ｖｉｔｒｏまたはｉｎ  ｖｉｖｏで肥満細胞の数を枯渇または低下させる作用因子である。一部の実施形態では、アゴニストは、肥満細胞上に発現されたシグレック−８に結合し、ｉｎ  ｖｉｔｒｏおよびｉｎ  ｖｉｖｏにおいて、ＡＤＣＣ活性によってシグレック−８を発現する肥満細胞を死滅させる薬剤である。一部の実施形態では、アゴニストは、アゴニスト抗体である。一部の実施形態において、アゴニストは、アゴニスト抗体である。一部の実施形態において、アゴニスト抗体（例えば、本明細書に提供される抗体２Ｅ２）は、好酸球によって発現するシグレック−８に架橋し、好酸球における１種または複数種のカスパーゼ（例えば、カスパーゼ−８、カスパーゼ−３およびカスパーゼ−９）の活性化および／またはミトコンドリア膜電位の喪失を誘導する。Ｎｕｔｋｕら、Ｂｉｏｃｈｅｍ  Ｂｉｏｐｈｙｓ  Ｒｅｓ  Ｃｏｍｍｕｎ．、３３６巻：９１８〜９２４頁、２００５年を参照されたい。シグレック−８は、グリカン６’−スルホ−シアリルルイスＸ（本明細書において、６’−スルホ−ｓＬｅＸとも称される）に結合し、このグリカンへの会合は、シグレック−８発現細胞（例えば、好酸球）のアポトーシスを誘導する。Ｈｕｄｓｏｎら、Ｊ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ  Ｅｘｐ  Ｔｈｅｒ．、３３０巻（２号）：６０８〜１２頁、２００９年を参照されたい。本明細書における一部の実施形態において、シグレック−８のアゴニストは、分子（例えば、ポリマー、オリゴ糖、ポリペプチド、糖タンパク質等）に付着または連結された６’−スルホ−ｓＬｅＸを有する分子である。本明細書における一部の実施形態において、アゴニストは、６’−スルホ−ｓＬｅＸ含有アゴニスト分子（例えば、６’−スルホ−ｓＬｅＸ含有リガンド、６’−スルホ−ｓＬｅＸ含有オリゴ糖、６’−スルホ−ｓＬｅＸ含有ポリペプチドおよび６’−スルホ−ｓＬｅＸ含有糖タンパク質）である。
【００９２】
アゴニストは、種々の供給源、例えば、細胞、無細胞調製物、化学ライブラリーおよび天然産物の混合物から同定することができる。斯かるアゴニストは、グリカン６’−スルホ−ｓＬｅＸを含有し、シグレック−８に結合する天然または修飾された基質、リガンド、受容体、オリゴヌクレオチド、ポリペプチドまたは抗体となることができる、あるいはこれらの構造または機能的模倣物となることができる。グリカン６’−スルホ−ｓＬｅＸを含有する斯かる天然または修飾された基質、リガンド、受容体、オリゴヌクレオチドまたは抗体の構造または機能的模倣物は、本明細書において、「６’−スルホ−ｓＬｅＸ含有糖模倣物（ｇｌｙｃｏｍｉｍｅｔｉｃ）」と称される。Ｃｏｌｉｇａｎら、Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  １巻（２号）：第５章、１９９１年を参照されたい。例えば、６’−スルホ−ｓＬｅＸ含有糖模倣物は、シグレック−８の天然リガンドの活性を構造または機能的に模倣する６’−スルホ−ｓＬｅＸで装飾された合成ポリマーに基づくリガンドとなることができる。例えば、本明細書で考慮される糖模倣物に関する、Ｈｕｄｓｏｎら、Ｊ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ  Ｅｘｐ  Ｔｈｅｒ．、３３０巻（２号）：６０８〜１２頁、２００９年を参照されたい。潜在的アゴニストの他の例として、抗体、あるいは一部の事例において、シグレック−８の天然リガンドに密接に関係したオリゴヌクレオチドもしくはポリペプチドまたはシグレック−８に結合する小分子が挙げられる。シグレック−８に結合する特定の多糖リガンド（例えば、６’−スルホ−ｓＬｅＸ含有リガンド）のコンフォメーションおよび望ましい特色を模倣し、好ましくは、目的の元の多糖リガンド（例えば、６’−スルホ−ｓＬｅＸ含有リガンド）の少なくとも一部の望ましくない特色（低い結合親和性、短いｉｎ  ｖｉｖｏ半減期その他等）を回避する合成化合物は、本明細書において、「模倣物」と称される。例えば、本明細書で考慮される模倣物に関する、米国特許第８，１７８，５１２号を参照されたい。
【００９３】
一部の態様において、本明細書に記載されているヒトシグレック−８に結合するアゴニスト（例えば、６’−スルホ−ｓＬｅＸ含有アゴニストまたは抗体）は、好酸球のアポトーシスを誘導する。好酸球のアポトーシスは、本技術分野で周知の方法によって評価することができる。Ｈｕｄｓｏｎら、Ｊ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ  Ｅｘｐ  Ｔｈｅｒ．、３３０巻（２号）：６０８〜１２頁、２００９年およびＮｕｔｋｕら、Ｂｉｏｃｈｅｍ  Ｂｉｏｐｈｙｓ  Ｒｅｓ  Ｃｏｍｍｕｎ．、３３６巻：９１８〜９２４頁、２００５年を参照されたい。例えば、ヒト好酸球は、末梢血から単離され、精製され、ＩＬ−５において２４または７２時間培養され、続いてヒトシグレック−８に結合するアゴニストと共にさらに２４時間インキュベーションされる。次に、アネキシン−Ｖおよびヨウ化プロピジウムで標識した後に、フローサイトメトリー解析により細胞生存を評価する。アゴニスト活性は、好酸球におけるカスパーゼ（例えば、カスパーゼ−８、カスパーゼ−３およびカスパーゼ−９）の活性化および／または好酸球におけるミトコンドリア膜電位の喪失を検出することにより使用して評価することもできる。これらのアッセイは、Ｎｕｔｋｕら、Ｂｉｏｃｈｅｍ  Ｂｉｏｐｈｙｓ  Ｒｅｓ  Ｃｏｍｍｕｎ．、３３６巻：９１８〜９２４頁、２００５年に記載されている。
【００９４】
一部の態様では、本明細書に記載されているヒトシグレック−８に結合するアゴニスト（例えば、６’−スルホ−ｓＬｅＸ含有アゴニストまたは抗体）は、シグレック−８を発現する肥満細胞を枯渇または低下させる。一部の実施形態では、抗シグレック−８抗体は、ＡＤＣＣ活性によってシグレック−８を発現する肥満細胞を死滅させる。ＡＤＣＣ活性を評価するためのアッセイは、本技術分野で周知であり、本明細書に記載されている。例示的なアッセイにおいて、ＡＤＣＣ活性を測定するために、エフェクター細胞および標的細胞が使用される。エフェクター細胞の例として、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、大顆粒リンパ球（ＬＧＬ）、リンホカイン活性化キラー（ＬＡＫ）細胞、ならびにＮＫおよびＬＧＬを含むＰＢＭＣ、または好中球、好酸球およびマクロファージ等の細胞表面にＦｃ受容体を有する白血球が挙げられる。標的細胞は、評価されるべき抗体が認識し得る抗原を細胞表面において発現するいずれかの細胞である。このような標的細胞の例は、細胞表面においてシグレック−８を発現する肥満細胞である（例えば、Ｒａｍｏｓ  ２Ｃ１０標的細胞株）。標的細胞は、細胞溶解の検出を可能にする試薬で標識されていてよい。標識のための試薬の例として、クロム酸ナトリウム（Ｎａ２５１ＣｒＯ４）等、放射性物質が挙げられる。例えば、Immunology、１４巻、１８１頁（１９６８年）；J.  Immunol.  Methods.、１７２巻、２２７頁（１９９４年）；およびJ.  Immunol.  Methods.、１８４巻、２９頁（１９９５年）を参照されたい。
【００９５】
抗体
一態様において、本発明は、ヒトシグレック−８に結合する単離された抗体（例えば、ヒトシグレック−８に結合するアゴニスト抗体）を提供する。一部の実施形態では、本明細書に記載されている抗シグレック−８抗体は、次の特徴のうち１種または複数種を有する：（１）ヒトシグレック−８に結合する；（２）ヒトシグレック−８の細胞外ドメインに結合する；（３）マウス抗体２Ｅ２および／またはマウス抗体２Ｃ４よりも高い親和性でヒトシグレック−８に結合する；（４）マウス抗体２Ｅ２および／またはマウス抗体２Ｃ４よりも高いアビディティーでヒトシグレック−８に結合する；（５）熱シフトアッセイにおいて約７０℃〜７２℃またはそれより高いＴｍを有する；（６）低下した程度のフコシル化を有するまたはフコシル化していない；（７）好酸球において発現したヒトシグレック−８に結合し、好酸球のアポトーシスを誘導する；（８）肥満細胞において発現したヒトシグレック−８に結合し、肥満細胞の数を枯渇または低下させる；（９）肥満細胞において発現したヒトシグレック−８に結合し、肥満細胞のＦｃεＲＩ依存性活性（例えば、ヒスタミン放出、ＰＧＤ２放出、Ｃａ２＋フラックスおよび／またはβ−ヘキソサミニダーゼ放出等）を阻害する；（１０）ＡＤＣＣ活性を改善するように操作されている；ならびに（１１）ＡＤＣＣ活性に対し感受性があるＢ細胞株において発現したヒトシグレック−８に結合し、Ｂ細胞数を枯渇または低下させる。
【００９６】
一態様において、本発明は、ヒトシグレック−８に結合する抗体を提供する。一部の実施形態において、ヒトシグレック−８は、配列番号７２のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態において、ヒトシグレック−８は、配列番号７３のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態において、本明細書に記載されている抗体は、好酸球上に発現するヒトシグレック−８に結合し、好酸球のアポトーシスを誘導する。一部の実施形態において、本明細書に記載されている抗体は、肥満細胞上に発現するヒトシグレック−８に結合し、肥満細胞を枯渇させるかまたは肥満細胞の数を低下させる。一部の実施形態において、本明細書に記載されている抗体は、肥満細胞上に発現するヒトシグレック−８に結合し、肥満細胞媒介性活性を阻害する。
【００９７】
一態様において、本明細書に記載されている抗シグレック−８抗体は、モノクローナル抗体である。一態様において、本明細書に記載されている抗シグレック−８抗体は、抗体断片（抗原結合性断片を含む）、例えば、Ｆａｂ、Ｆａｂ’−ＳＨ、Ｆｖ、ｓｃＦｖまたは（Ｆａｂ’）２断片である。一態様では、本明細書に記載されている抗シグレック−８抗体は、抗体断片（抗原結合性断片を含む）、例えば、Ｆａｂ、Ｆａｂ’−ＳＨ、Ｆｖ、ｓｃＦｖまたは（Ｆａｂ’）２断片を含む。一態様において、本明細書に記載されている抗シグレック−８抗体は、キメラ、ヒト化またはヒト抗体である。一態様において、本明細書に記載されている抗シグレック−８抗体のいずれかは、精製されている。
【００９８】
一態様において、シグレック−８に結合するマウス２Ｅ２抗体およびマウス２Ｃ４抗体と競合する抗シグレック−８抗体が提供される。マウス２Ｅ２抗体およびマウス２Ｃ４抗体と同じエピトープに結合する抗シグレック−８抗体も提供される。シグレック−８に対するマウス抗体、２Ｅ２および２Ｃ４抗体は、米国特許第８，２０７，３０５号；米国特許第８，１９７，８１１号、米国特許第７，８７１，６１２号および米国特許第７，５５７，１９１号に記載されている。
【００９９】
一態様において、シグレック−８への結合に関して本明細書に記載されているいずれかの抗シグレック−８抗体（例えば、ＨＥＫＡ、ＨＥＫＦ、１Ｃ３、１Ｈ１０、４Ｆ１１、２Ｃ４、２Ｅ２）と競合する抗シグレック−８抗体が提供される。本明細書に記載されているいずれかの抗シグレック−８抗体（例えば、ＨＥＫＡ、ＨＥＫＦ、１Ｃ３、１Ｈ１０、４Ｆ１１、２Ｃ４、２Ｅ２）と同じエピトープに結合する抗シグレック−８抗体も提供される。
【０１００】
本発明の一態様において、抗シグレック−８抗体をコードするポリヌクレオチドが提供される。ある特定の実施形態において、抗シグレック−８抗体をコードするポリヌクレオチドを含むベクターが提供される。ある特定の実施形態において、斯かるベクターを含む宿主細胞が提供される。本発明の別の態様において、抗シグレック−８抗体または抗シグレック−８抗体をコードするポリヌクレオチドを含む組成物が提供される。ある特定の実施形態では、本発明の組成物は、本明細書に記載されているような、進行性全身性肥満細胞症（例えば、ＳＭ−ＡＨＮＭＤ）の処置のための医薬品製剤である。ある特定の実施形態では、本発明の組成物は、本明細書に記載されているような、進行性全身性肥満細胞症（例えば、ＳＭ−ＡＨＮＭＤ）の予防のための医薬品製剤である。
【０１０１】
一態様において、マウス抗体２Ｃ４のＨＶＲ配列のうち１、２、３、４、５または６個を含む抗シグレック−８抗体が本明細書において提供される。一態様において、マウス抗体２Ｅ２のＨＶＲ配列のうち１、２、３、４、５または６個を含む抗シグレック−８抗体が本明細書において提供される。一部の実施形態において、ＨＶＲは、Ｋａｂａｔ  ＣＤＲまたはＣｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲである。
【０１０２】
一態様において、マウス抗体１Ｃ３のＨＶＲ配列のうち１、２、３、４、５または６個を含む抗シグレック−８抗体が本明細書において提供される。一態様において、マウス抗体４Ｆ１１のＨＶＲ配列のうち１、２、３、４、５または６個を含む抗シグレック−８抗体が本明細書において提供される。一態様において、マウス抗体１Ｈ１０のＨＶＲ配列のうち１、２、３、４、５または６個を含む抗シグレック−８抗体が本明細書において提供される。一部の実施形態において、ＨＶＲは、Ｋａｂａｔ  ＣＤＲまたはＣｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲである。
【０１０３】
一態様において、重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含む抗シグレック−８抗体であって、重鎖可変領域が、（ｉ）配列番号６１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｉｉ）配列番号６２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２および（ｉｉｉ）配列番号６３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含み、かつ／または軽鎖可変領域が、（ｉ）配列番号６４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｉｉ）配列番号６５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２および（ｉｉｉ）配列番号６６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む抗体が本明細書において提供される。
【０１０４】
一態様において、重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含む抗シグレック−８抗体であって、重鎖可変領域が、（ｉ）配列番号６１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｉｉ）配列番号６２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２および（ｉｉｉ）配列番号６７〜７０から選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含み、かつ／または軽鎖可変領域が、（ｉ）配列番号６４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｉｉ）配列番号６５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２および（ｉｉｉ）配列番号６６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む抗体が本明細書において提供される。
【０１０５】
一態様において、重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含む抗シグレック−８抗体であって、重鎖可変領域が、（ｉ）配列番号６１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｉｉ）配列番号６２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２および（ｉｉｉ）配列番号６３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含み、かつ／または軽鎖可変領域が、（ｉ）配列番号６４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｉｉ）配列番号６５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２および（ｉｉｉ）配列番号７１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む抗体が本明細書において提供される。
【０１０６】
別の態様において、重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含む抗シグレック−８抗体であって、重鎖可変領域が、（ｉ）配列番号６１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｉｉ）配列番号６２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２および（ｉｉｉ）配列番号６７〜７０から選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含み、かつ／または軽鎖可変領域が、（ｉ）配列番号６４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｉｉ）配列番号６５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２および（ｉｉｉ）配列番号７１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む抗体が本明細書において提供される。
【０１０７】
別の態様において、重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含む抗シグレック−８抗体であって、重鎖可変領域が、（ｉ）配列番号８８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｉｉ）配列番号９１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２および（ｉｉｉ）配列番号９４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む、かつ／または軽鎖可変領域が、（ｉ）配列番号９７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｉｉ）配列番号１００のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２および（ｉｉｉ）配列番号１０３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む抗体が本明細書において提供される。
【０１０８】
別の態様において、重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含む抗シグレック−８抗体であって、重鎖可変領域が、（ｉ）配列番号８９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｉｉ）配列番号９２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２および（ｉｉｉ）配列番号９５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む、かつ／または軽鎖可変領域が、（ｉ）配列番号９８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｉｉ）配列番号１０１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２および（ｉｉｉ）配列番号１０４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む抗体が本明細書において提供される。
【０１０９】
別の態様において、重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含む抗シグレック−８抗体であって、重鎖可変領域が、（ｉ）配列番号９０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｉｉ）配列番号９３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２および（ｉｉｉ）配列番号９６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む、かつ／または軽鎖可変領域が、（ｉ）配列番号９９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｉｉ）配列番号１０２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２および（ｉｉｉ）配列番号１０５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む抗体が本明細書において提供される。
【０１１０】
本明細書に記載されている抗シグレック−８抗体は、この抗体が、ヒトシグレック−８に結合する能力を保持するのであれば、いかなる適したフレームワーク可変ドメイン配列を含むこともできる。本明細書において、重鎖フレームワーク領域は、「ＨＣ−ＦＲ１〜ＦＲ４」と命名され、軽鎖フレームワーク領域は、「ＬＣ−ＦＲ１〜ＦＲ４」と命名される。一部の実施形態において、抗シグレック−８抗体は、配列番号２６、３４、３８および４５の重鎖可変ドメインフレームワーク配列（それぞれＨＣ−ＦＲ１、ＨＣ−ＦＲ２、ＨＣ−ＦＲ３およびＨＣ−ＦＲ４）を含む。一部の実施形態において、抗シグレック−８抗体は、配列番号４８、５１、５５および６０の軽鎖可変ドメインフレームワーク配列（それぞれＬＣ−ＦＲ１、ＬＣ−ＦＲ２、ＬＣ−ＦＲ３およびＬＣ−ＦＲ４）を含む。一部の実施形態において、抗シグレック−８抗体は、配列番号４８、５１、５８および６０の軽鎖可変ドメインフレームワーク配列（それぞれＬＣ−ＦＲ１、ＬＣ−ＦＲ２、ＬＣ−ＦＲ３およびＬＣ−ＦＲ４）を含む。
【０１１１】
一実施形態において、抗シグレック−８抗体は、フレームワーク配列および高頻度可変領域を含む重鎖可変ドメインを含み、フレームワーク配列は、ＨＣ−ＦＲ１〜ＨＣ−ＦＲ４配列、それぞれ配列番号２６〜２９（ＨＣ−ＦＲ１）、配列番号３１〜３６（ＨＣ−ＦＲ２）、配列番号３８〜４３（ＨＣ−ＦＲ３）および配列番号４５または４６（ＨＣ−ＦＲ４）を含み、ＨＶＲ−Ｈ１は、配列番号６１のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｈ２は、配列番号６２のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｈ３は、配列番号６３のアミノ酸配列を含む。一実施形態において、抗シグレック−８抗体は、フレームワーク配列および高頻度可変領域を含む重鎖可変ドメインを含み、フレームワーク配列は、ＨＣ−ＦＲ１〜ＨＣ−ＦＲ４配列、それぞれ配列番号２６〜２９（ＨＣ−ＦＲ１）、配列番号３１〜３６（ＨＣ−ＦＲ２）、配列番号３８〜４３（ＨＣ−ＦＲ３）および配列番号４５または４６（ＨＣ−ＦＲ４）を含み、ＨＶＲ−Ｈ１は、配列番号６１のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｈ２は、配列番号６２のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｈ３は、配列番号６７〜７０から選択されるアミノ酸配列を含む。一実施形態において、抗シグレック−８抗体は、フレームワーク配列および高頻度可変領域を含む軽鎖可変ドメインを含み、フレームワーク配列は、ＬＣ−ＦＲ１〜ＬＣ−ＦＲ４配列、それぞれ配列番号４８または４９（ＬＣ−ＦＲ１）、配列番号５１〜５３（ＬＣ−ＦＲ２）、配列番号５５〜５８（ＬＣ−ＦＲ３）および配列番号６０（ＬＣ−ＦＲ４）を含み、ＨＶＲ−Ｌ１は、配列番号６４のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｌ２は、配列番号６５のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｌ３は、配列番号６６のアミノ酸配列を含む。一実施形態において、抗シグレック−８抗体は、フレームワーク配列および高頻度可変領域を含む軽鎖可変ドメインを含み、フレームワーク配列は、ＬＣ−ＦＲ１〜ＬＣ−ＦＲ４配列、それぞれ配列番号４８または４９（ＬＣ−ＦＲ１）、配列番号５１〜５３（ＬＣ−ＦＲ２）、配列番号５５〜５８（ＬＣ−ＦＲ３）および配列番号６０（ＬＣ−ＦＲ４）を含み、ＨＶＲ−Ｌ１は、配列番号６４のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｌ２は、配列番号６５のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｌ３は、配列番号７１のアミノ酸配列を含む。これらの抗体の一実施形態において、重鎖可変ドメインは、配列番号２〜１０から選択されるアミノ酸配列を含み、軽鎖可変ドメインは、配列番号１６〜２２から選択されるアミノ酸配列を含む。これらの抗体の一実施形態において、重鎖可変ドメインは、配列番号２〜１０から選択されるアミノ酸配列を含み、軽鎖可変ドメインは、配列番号２３または２４から選択されるアミノ酸配列を含む。これらの抗体の一実施形態において、重鎖可変ドメインは、配列番号１１〜１４から選択されるアミノ酸配列を含み、軽鎖可変ドメインは、配列番号１６〜２２から選択されるアミノ酸配列を含む。これらの抗体の一実施形態において、重鎖可変ドメインは、配列番号１１〜１４から選択されるアミノ酸配列を含み、軽鎖可変ドメインは、配列番号２３または２４から選択されるアミノ酸配列を含む。これらの抗体の一実施形態において、重鎖可変ドメインは、配列番号６のアミノ酸配列を含み、軽鎖可変ドメインは、配列番号１６のアミノ酸配列を含む。これらの抗体の一実施形態において、重鎖可変ドメインは、配列番号６のアミノ酸配列を含み、軽鎖可変ドメインは、配列番号２１のアミノ酸配列を含む。
【０１１２】
一部の実施形態において、重鎖ＨＶＲ配列は、次のものを含む：
【化３】
2018533569.tif 000006
【０１１３】
一部の実施形態では、重鎖ＨＶＲ配列は、次のものを含む：
【化４】
2018533569.tif 000007
【０１１４】
一部の実施形態において、重鎖ＦＲ配列は、次のものを含む：
【化５】
2018533569.tif 000008
【０１１５】
一部の実施形態において、軽鎖ＨＶＲ配列は、次のものを含む：
【化６】
2018533569.tif 000009
【０１１６】
一部の実施形態において、軽鎖ＨＶＲ配列は、次のものを含む：
【化７】
2018533569.tif 000010
【０１１７】
一部の実施形態において、軽鎖ＦＲ配列は、次のものを含む：
【化８】
2018533569.tif 000011
【０１１８】
一部の実施形態において、ヒトシグレック−８に結合する抗シグレック−８抗体（例えば、ヒト化抗シグレック−８抗体）であって、重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含む抗体であり、
（ａ）
（１）配列番号２６〜２９から選択されるアミノ酸配列を含むＨＣ−ＦＲ１、
（２）配列番号６１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、
（３）配列番号３１〜３６から選択されるアミノ酸配列を含むＨＣ−ＦＲ２、
（４）配列番号６２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、
（５）配列番号３８〜４３から選択されるアミノ酸配列を含むＨＣ−ＦＲ３、
（６）配列番号６３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３および
（７）配列番号４５〜４６から選択されるアミノ酸配列を含むＨＣ−ＦＲ４
を含む重鎖可変ドメイン
および／または
（ｂ）
（１）配列番号４８〜４９から選択されるアミノ酸配列を含むＬＣ−ＦＲ１、
（２）配列番号６４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、
（３）配列番号５１〜５３から選択されるアミノ酸配列を含むＬＣ−ＦＲ２、
（４）配列番号６５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、
（５）配列番号５５〜５８から選択されるアミノ酸配列を含むＬＣ−ＦＲ３、
（６）配列番号６６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３および
（７）配列番号６０のアミノ酸配列を含むＬＣ−ＦＲ４
を含む軽鎖可変ドメイン
を含む抗体が本明細書において提供される。
【０１１９】
一態様において、配列番号２〜１０から選択される重鎖可変ドメインを含む、かつ／または配列番号１６〜２２から選択される軽鎖可変ドメインを含む抗シグレック−８抗体が本明細書において提供される。一態様において、配列番号２〜１０から選択される重鎖可変ドメインを含む、かつ／または配列番号２３もしくは２４から選択される軽鎖可変ドメインを含む抗シグレック−８抗体が本明細書において提供される。一態様において、配列番号１１〜１４から選択される重鎖可変ドメインを含む、かつ／または配列番号１６〜２２から選択される軽鎖可変ドメインを含む抗シグレック−８抗体が本明細書において提供される。一態様において、配列番号１１〜１４から選択される重鎖可変ドメインを含む、かつ／または配列番号２３もしくは２４から選択される軽鎖可変ドメインを含む抗シグレック−８抗体が本明細書において提供される。一態様において、配列番号６の重鎖可変ドメインを含む、かつ／または配列番号１６もしくは２１から選択される軽鎖可変ドメインを含む抗シグレック−８抗体が本明細書において提供される。
【０１２０】
一態様において、配列番号１０６〜１０８から選択される重鎖可変ドメインを含む、かつ／または配列番号１０９〜１１１から選択される軽鎖可変ドメインを含む抗シグレック−８抗体が本明細書において提供される。一態様において、配列番号１０６の重鎖可変ドメインを含む、かつ／または配列番号１０９の軽鎖可変ドメインを含む抗シグレック−８抗体が本明細書において提供される。一態様において、配列番号１０７の重鎖可変ドメインを含む、かつ／または配列番号１１０の軽鎖可変ドメインを含む抗シグレック−８抗体が本明細書において提供される。一態様において、配列番号１０８の重鎖可変ドメインを含む、かつ／または配列番号１１１の軽鎖可変ドメインを含む抗シグレック−８抗体が本明細書において提供される。
【０１２１】
一部の実施形態において、配列番号２〜１４から選択されるアミノ酸配列に対し少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインを含む抗シグレック−８抗体が本明細書において提供される。一部の実施形態において、配列番号１０６〜１０８から選択されるアミノ酸配列に対し少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインを含む抗シグレック−８抗体が本明細書において提供される。一部の実施形態において、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％配列同一性を有するアミノ酸配列は、参照配列と比べて置換、挿入または欠失を含有するが、このアミノ酸配列を含む抗体は、ヒトシグレック−８に結合する能力を保持する。一部の実施形態において、置換、挿入または欠失（例えば、１、２、３、４または５アミノ酸）は、ＨＶＲの外側の領域（すなわち、ＦＲ）において生じる。一部の実施形態において、抗シグレック−８抗体は、配列番号６のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインを含む。一部の実施形態において、抗シグレック−８抗体は、配列番号１０６〜１０８から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインを含む。
【０１２２】
一部の実施形態において、配列番号１６〜２４から選択されるアミノ酸配列に対し少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを含む抗シグレック−８抗体が本明細書において提供される。一部の実施形態において、配列番号１０９〜１１１から選択されるアミノ酸配列に対し少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを含む抗シグレック−８抗体が本明細書において提供される。一部の実施形態において、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％配列同一性を有するアミノ酸配列は、参照配列と比べて置換、挿入または欠失を含有するが、このアミノ酸配列を含む抗体は、ヒトシグレック−８に結合する能力を保持する。一部の実施形態において、置換、挿入または欠失（例えば、１、２、３、４または５アミノ酸）は、ＨＶＲの外側の領域（すなわち、ＦＲ）において生じる。一部の実施形態において、抗シグレック−８抗体は、配列番号１６または２１のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを含む。一部の実施形態において、抗シグレック−８抗体は、配列番号１０９〜１１１から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインを含む。
【０１２３】
一態様において、本発明は、（ａ）表１に示すＶＨ  ＨＶＲから選択される１、２もしくは３個のＶＨ  ＨＶＲおよび／または（ｂ）表１に示すＶＬ  ＨＶＲから選択される１、２もしくは３個のＶＬ  ＨＶＲを含む抗シグレック−８抗体を提供する。
【０１２４】
一態様において、本発明は、（ａ）表２に示すＶＨ  ＨＶＲから選択される１、２もしくは３個のＶＨ  ＨＶＲおよび／または（ｂ）表２に示すＶＬ  ＨＶＲから選択される１、２もしくは３個のＶＬ  ＨＶＲを含む抗シグレック−８抗体を提供する。
【０１２５】
一態様において、本発明は、（ａ）表３に示すＶＨ  ＦＲから選択される１、２、３もしくは４個のＶＨ  ＦＲおよび／または（ｂ）表３に示すＶＬ  ＦＲから選択される１、２、３もしくは４個のＶＬ  ＦＲを含む抗シグレック−８抗体を提供する。
【０１２６】
一部の実施形態において、表４に示す抗体、例えば、ＨＡＫＡ抗体、ＨＡＫＢ抗体、ＨＡＫＣ抗体等の重鎖可変ドメインおよび／または軽鎖可変ドメインを含む抗シグレック−８抗体が本明細書において提供される。
【表１】
2018533569.tif 000012
【表２】
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【表３−１】
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【表３−２】
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【表３−３】
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【表３−４】
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【表４−１】
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【表４−２】
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【表４−３】
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【表４−４】
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【表４−５】
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【０１２７】
それぞれα、δ、ε、γおよびμと命名された重鎖を有する５クラスの免疫グロブリン：ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧおよびＩｇＭが存在する。γおよびαクラスは、サブクラスにさらに分けられ、例えば、ヒトは、次のサブクラスを発現する：ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１およびＩｇＡ２。ＩｇＧ１抗体は、アロタイプと命名される複数の多型バリアントで存在することができ（ＪｅｆｆｅｒｉｓおよびＬｅｆｒａｎｃ  ２００９年、ｍＡｂｓ  １巻、４号１〜７頁において概説）、そのうちいずれかが、本明細書における実施形態の一部における使用に適する。ヒト集団における共通アロタイプバリアントは、文字ａ、ｆ、ｎ、ｚまたはこれらの組合せによって命名されるバリアントである。本明細書における実施形態のいずれかにおいて、抗体は、ヒトＩｇＧ  Ｆｃ領域を含む重鎖Ｆｃ領域を含むことができる。さらなる実施形態において、ヒトＩｇＧ  Ｆｃ領域は、ヒトＩｇＧ１またはＩｇＧ４を含む。一部の実施形態において、ヒトＩｇＧ４は、アミノ酸置換Ｓ２２８Ｐを含み、このアミノ酸残基は、Ｋａｂａｔにおける通りのＥＵインデックスに従ってナンバリングされる。一部の実施形態において、ヒトＩｇＧ１は、配列番号７８のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態において、ヒトＩｇＧ４は、配列番号７９のアミノ酸配列を含む。
【０１２８】
一部の実施形態において、配列番号７５のアミノ酸配列を含む重鎖、および／または配列番号７６もしくは７７から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖を含む抗シグレック−８抗体が本明細書において提供される。一部の実施形態において、抗体は、配列番号８７のアミノ酸配列を含む重鎖、および／または配列番号７６のアミノ酸配列を含む軽鎖を含むことができる。一部の実施形態では、抗シグレック−８抗体は、活性化された好酸球のアポトーシスを誘導する。一部の実施形態では、抗シグレック−８抗体は、休止している好酸球のアポトーシスを誘導する。一部の実施形態では、抗シグレック−８抗体は、活性化された好酸球を枯渇させ、肥満細胞活性化を阻害する。一部の実施形態では、抗シグレック−８抗体は、肥満細胞を枯渇または低下させ、肥満細胞活性化を阻害する。一部の実施形態では、抗シグレック−８抗体は、肥満細胞の数を枯渇（depleted）または低下させる。一部の実施形態では、抗シグレック−８抗体は、ＡＤＣＣ活性によって肥満細胞を死滅させる。本明細書における一部の実施形態では、抗体は、組織（例えば、骨髄）におけるシグレック−８を発現する肥満細胞を枯渇または低下させる。本明細書における一部の実施形態では、抗体は、生体液（例えば、血液）におけるシグレック−８を発現する肥満細胞を枯渇または低下させる。
【０１２９】
１．抗体親和性
一部の態様において、本明細書に記載されている抗シグレック−８抗体は、マウス抗体２Ｅ２および／またはマウス抗体２Ｃ４と比較した場合に、ほぼ同じもしくはより高い親和性および／またはより高いアビディティーでヒトシグレック−８に結合する。ある特定の実施形態において、本明細書に提供される抗シグレック−８抗体は、≦１μＭ、≦１５０ｎＭ、≦１００ｎＭ、≦５０ｎＭ、≦１０ｎＭ、≦１ｎＭ、≦０．１ｎＭ、≦０．０１ｎＭまたは≦０．００１ｎＭ（例えば、１０−８Ｍまたはそれに満たない、例えば、１０−８Ｍ〜１０−１３Ｍ、例えば、１０−９Ｍ〜１０−１３Ｍ）の解離定数（Ｋｄ）を有する。一部の実施形態において、本明細書に記載されている抗シグレック−８抗体は、マウス抗体２Ｅ２および／またはマウス抗体２Ｃ４よりも約１．５倍、約２倍、約３倍、約４倍、約５倍、約６倍、約７倍、約８倍、約９倍または約１０倍高い親和性で、ヒトシグレック−８に結合する。本明細書における一部の実施形態において、抗シグレック−８抗体は、配列番号６のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域および／または配列番号１６もしくは２１から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。
【０１３０】
一実施形態において、抗シグレック−８抗体の結合親和性は、表面プラズモン共鳴アッセイにより決定することができる。例えば、ＫｄまたはＫｄ値は、固定化された抗原ＣＭ５チップにより約１０の応答単位（ＲＵ）で２５℃にてＢＩＡｃｏｒｅ（商標）−２０００またはＢＩＡｃｏｒｅ（商標）−３０００（ＢＩＡｃｏｒｅ，Ｉｎｃ．、Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ、Ｎ．Ｊ．）を使用することにより測定することができる。簡潔に説明すると、カルボキシメチル化デキストランバイオセンサーチップ（ＣＭ５、ＢＩＡｃｏｒｅ（登録商標）Ｉｎｃ．）は、供給元の指示に従ってＮ−エチル−Ｎ’−（３−ジメチルアミノプロピル）−カルボジイミド塩酸塩（ＥＤＣ）およびＮ−ヒドロキシスクシンイミド（ＮＨＳ）により活性化される。捕捉抗体（例えば、抗ヒト−Ｆｃ）は、１０ｍＭ酢酸ナトリウム、ｐＨ４．８で希釈され、その後、流速３０μｌ／分で注射し、抗シグレック−８抗体でさらに固定化する。動態測定のため、二量体シグレック−８の２倍系列希釈を、０．０５％Ｔｗｅｅｎ２０含有ＰＢＳ（ＰＢＳＴ）において２５℃、流速およそ２５μｌ／分で注射する。会合および解離センサーグラムを同時に適合することにより、単純１対１ラングミュア結合モデル（ＢＩＡｃｏｒｅ（登録商標）評価ソフトウェアバージョン３．２）を使用して、会合速度（ｋｏｎ）および解離速度（ｋｏｆｆ）を計算する。平衡解離定数（Ｋｄ）は、比ｋｏｆｆ／ｋｏｎとして計算する。例えば、Ｃｈｅｎ，  Ｙ．ら（１９９９年）Ｊ．  Ｍｏｌ．  Ｂｉｏｌ．２９３巻：８６５〜８８１頁を参照されたい。
【０１３１】
別の実施形態において、バイオレイヤーインターフェロメトリーを使用して、シグレック−８に対する抗シグレック−８抗体の親和性を決定することができる。例示的なアッセイにおいて、シグレック−８−Ｆｃタグ付けタンパク質は、抗ヒト捕捉センサー上に固定化され、増加濃度のマウス、キメラまたはヒト化抗シグレック−８  Ｆａｂ断片と共にインキュベートされて、例えば、Ｏｃｔｅｔ  Ｒｅｄ  ３８４  Ｓｙｓｔｅｍ（ＦｏｒｔｅＢｉｏ）等の機器を使用して親和性測定値を得る。
【０１３２】
抗シグレック−８抗体の結合親和性は、例えば、関連技術分野において周知の標準技法を使用して、Ｍｕｎｓｏｎら、Ａｎａｌ．  Ｂｉｏｃｈｅｍ．、１０７巻：２２０頁（１９８０年）に記載されているＳｃａｔｃｈａｒｄ解析によって決定することもできる。Ｓｃａｔｃｈａｒｄ，  Ｇ．、Ａｎｎ．  Ｎ．Ｙ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．５１巻：６６０頁（１９４７年）も参照されたい。
【０１３３】
２．抗体アビディティー
一実施形態において、抗シグレック−８抗体の結合アビディティーは、表面プラズモン共鳴アッセイにより決定することができる。例えば、ＫｄまたはＫｄ値は、ＢＩＡｃｏｒｅ  Ｔ１００を使用することにより測定することができる。捕捉抗体（例えば、ヤギ−抗ヒト−Ｆｃおよびヤギ−抗マウス−Ｆｃ）は、ＣＭ５チップ上に固定化される。フローセルは、抗ヒトまたは抗マウス抗体により固定化することができる。ある温度および流速、例えば、２５℃、流速３０μｌ／分でアッセイを行う。二量体シグレック−８は、アッセイバッファーにおいて様々な濃度で、例えば、１５ｎＭ〜１．８８ｐＭに及ぶ濃度で希釈する。抗体を捕捉し、高速注射、続いて解離を行う。バッファー、例えば、５０ｍＭグリシンｐＨ１．５でフローセルを再生する。空の参照セルおよび複数のアッセイバッファー注射により結果をブランク作成し、１：１グローバルフィットパラメータにより解析する。
【０１３４】
３．競合アッセイ
競合アッセイを使用して、２種の抗体が、同一もしくは立体的に重複するエピトープを認識することにより、同じエピトープに結合するか、または一方の抗体が、抗原への別の抗体の結合を競合的に阻害するか決定することができる。このようなアッセイは、本技術分野で公知である。典型的には、抗原または抗原発現細胞が、マルチウェルプレートに固定化され、標識抗体の結合を遮断する非標識抗体の能力が測定される。斯かる競合アッセイに一般的な標識は、放射性標識または酵素標識である。一部の実施形態において、本明細書に記載されている抗シグレック−８抗体は、細胞（例えば、好酸球または肥満細胞）の細胞表面に存在するエピトープへの結合に関して、本明細書に記載されている２Ｅ２抗体と競合する。一部の実施形態において、本明細書に記載されている抗シグレック−８抗体は、細胞（例えば、好酸球または肥満細胞）の細胞表面に存在するエピトープへの結合に関して、配列番号１のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインおよび配列番号１５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む抗体と競合する。一部の実施形態において、本明細書に記載されている抗シグレック−８抗体は、細胞（例えば、好酸球または肥満細胞）の細胞表面に存在するエピトープへの結合に関して、本明細書に記載されている２Ｃ４抗体と競合する。一部の実施形態において、本明細書に記載されている抗シグレック−８抗体は、細胞（例えば、好酸球または肥満細胞）の細胞表面に存在するエピトープへの結合に関して、配列番号２のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン（米国特許第８，２０７，３０５号に見出されるものと同様に）および配列番号４のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（米国特許第８，２０７，３０５号に見出されるものと同様に）を含む抗体と競合する。
【０１３５】
４．熱的安定性
一部の態様において、本明細書に記載されている抗シグレック−８は、熱シフトアッセイにおいて少なくとも約７０℃、少なくとも約７１℃または少なくとも約７２℃の融解温度（Ｔｍ）を有する。例示的な熱シフトアッセイにおいて、ヒト化抗シグレック−８抗体を含む試料を、ｑＰＣＲサーマルサイクラーにおいて１サイクル毎に１℃増加させつつ７１サイクルにわたり蛍光色素（Ｓｙｐｒｏ  Ｏｒａｎｇｅ）と共にインキュベートして、Ｔｍを決定する。本明細書における一部の実施形態において、抗シグレック−８抗体は、マウス２Ｅ２抗体および／またはマウス２Ｃ４抗体と比較した場合に、同様のまたはより高いＴｍを有する。本明細書における一部の実施形態において、抗シグレック−８抗体は、配列番号６のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および／または配列番号１６もしくは２１から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。一部の実施形態において、抗シグレック−８抗体は、キメラ２Ｃ４抗体と比較した場合に同じまたはより高いＴｍを有する。一部の実施形態において、抗シグレック−８抗体は、配列番号８４のアミノ酸配列を含む重鎖および配列番号８５のアミノ酸配列を含む軽鎖を有する抗体と比較した場合に同じまたはより高いＴｍを有する。
【０１３６】
５．生物学的活性アッセイ
一部の態様において、本明細書に記載されている抗シグレック−８抗体は、好酸球のアポトーシスを誘導する。一部の他の態様において、本明細書に記載されている抗シグレック−８抗体は、肥満細胞を枯渇させる。細胞のアポトーシスを評価するためのアッセイは、本技術分野において周知であり、例えば、アネキシンＶによる染色およびＴＵＮＮＥＬアッセイが挙げられる。例示的な細胞アポトーシスアッセイにおいて、血液試料由来の新鮮バフィーコートを培地に再懸濁し、９６ウェルＵ字底プレートで平板培養する。抗シグレック−８抗体の一連の系列５倍希釈を各ウェルに添加し、このプレートを３７℃、５％ＣＯ２で４時間より長くインキュベートする。ＰＢＳに希釈したパラホルムアルデヒドで細胞を固定し、顕微鏡を使用した検出のための好酸球に特異的なコンジュゲートされた抗体で染色する。バフィーコートが抗シグレック−８抗体の存在下でインキュベートされないときと比較した場合に、バフィーコートが抗シグレック−８抗体の存在下でインキュベートされたときの総末梢血白血球における好酸球集団を評価する。別の例示的なアッセイにおいて、血液試料から精製された好酸球（例えば、Ｍｉｌｔｅｎｙｉ好酸球単離キット）を培地に再懸濁し、ＩＬ−５の存在または非存在下で一晩培養する。培養した好酸球をその後、遠心分離によって収集し、培地に再懸濁し、９６ウェルＵ字底プレートで平板培養する。抗シグレック−８抗体の一連の系列５倍希釈を各ウェルに添加し、このプレートを３７℃、５％ＣＯ２で４時間より長くインキュベートする。本技術分野において周知の標準技法を使用して細胞を固定し、アネキシン−Ｖで染色し、顕微鏡を使用して好酸球の数を検出する。精製された細胞が抗シグレック−８抗体の存在下でインキュベートされないときと比較した場合に、精製された細胞が抗シグレック−８抗体の存在下でインキュベートされたときの試料における好酸球集団を評価する。
【０１３７】
一部の態様において、本明細書に記載されている抗シグレック−８抗体は、ＡＤＣＣ活性を誘導する。一部の他の態様において、本明細書に記載されている抗シグレック−８抗体は、ＡＤＣＣ活性によりシグレック−８を発現する肥満細胞を死滅させる。一部の実施形態において、組成物は、非フコシル化（すなわち、アフコシル化（ａｆｕｃｏｓｙｌａｔｅｄ））抗シグレック−８抗体を含む。一部の実施形態において、本明細書に記載されている非フコシル化抗シグレック−８抗体を含む組成物は、部分的にフコシル化された抗シグレック−８抗体を含む組成物と比較した場合に、ＡＤＣＣ活性を増強する。ＡＤＣＣ活性を評価するためのアッセイは、本技術分野において周知であり、本明細書に記載されている。例示的なアッセイにおいて、ＡＤＣＣ活性を測定するために、エフェクター細胞および標的細胞が使用される。エフェクター細胞の例として、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、大型顆粒リンパ球（ＬＧＬ）、リンホカイン活性化キラー（ＬＡＫ）細胞ならびにＮＫおよびＬＧＬを含むＰＢＭＣ、または好中球、好酸球およびマクロファージ等、細胞表面にＦｃ受容体を有する白血球が挙げられる。エフェクター細胞は、目的の疾患（例えば、進行性全身性肥満細胞症）を有する個体を含むいずれかの供給源から単離することができる。標的細胞は、評価しようとする抗体が認識できる抗原を細胞表面に発現するいずれかの細胞である。斯かる標的細胞の例は、細胞表面にシグレック−８を発現する好酸球である。このような標的細胞の別の例は、細胞表面においてシグレック−８を発現する肥満細胞（例えば、進行性全身性肥満細胞症を有する個体由来の肥満細胞）である。このような標的細胞の別の例は、細胞表面においてシグレック−８を発現する細胞株（例えば、Ｒａｍｏｓ細胞株）である（例えば、Ｒａｍｏｓ  ２Ｃ１０）。標的細胞は、細胞溶解の検出を可能にする試薬で標識され得る。標識のための試薬の例として、クロム酸ナトリウム（Ｎａ２ ５１ＣｒＯ４）等、放射性物質が挙げられる。例えば、Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、１４巻、１８１頁（１９６８年）；Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  Ｍｅｔｈｏｄｓ、１７２巻、２２７頁（１９９４年）；およびＪ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  Ｍｅｔｈｏｄｓ、１８４巻、２９頁（１９９５年）を参照されたい。
【０１３８】
肥満細胞における抗シグレック−８抗体のＡＤＣＣおよびアポトーシス活性を評価するための別の例示的なアッセイにおいて、ヒト肥満細胞は、公開されたプロトコールに従ってヒト組織（例えば、骨髄）または生体液（例えば、血液）から単離される（Ｇｕｈｌら、Ｂｉｏｓｃｉ．  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．  Ｂｉｏｃｈｅｍ．、２０１１年、７５巻：３８２〜３８４頁；Ｋｕｌｋａら、Ｉｎ  Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、２００１年、（Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ，  Ｉｎｃ．））、または例えば、Ｙｏｋｏｉら、Ｊ  Ａｌｌｅｒｇｙ  Ｃｌｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．、２００８年、１２１巻：４９９〜５０５頁に記載されている通りにヒト造血幹細胞から分化される。精製された肥満細胞は、無菌９６ウェルＵ字底プレートにおける完全ＲＰＭＩ培地に再懸濁され、０．０００１ｎｇ／ｍｌ〜１０μｇ／ｍｌの間に及ぶ濃度における抗シグレック−８抗体の存在または非存在下で３０分間インキュベートされる。精製されたナチュラルキラー（ＮＫ）細胞または新鮮ＰＢＬありまたはなしで、試料をさらに４〜４８時間インキュベートして、ＡＤＣＣを誘導する。肥満細胞を検出するための蛍光コンジュゲート抗体（ＣＤ１１７およびＦｃεＲ１）ならびに生きているおよび死んでいるまたは瀕死の細胞を識別するためのアネキシン−Ｖおよび７ＡＡＤを使用したフローサイトメトリーにより、アポトーシスまたはＡＤＣＣによる細胞殺滅を解析する。製造元の指示に従ってアネキシン−Ｖおよび７ＡＡＤ染色を行う。
【０１３９】
本明細書に記載されている抗シグレック−８抗体によって誘導されるＡＤＣＣ活性は、実施例１に記載されている方法を含む、本明細書に記載されている方法を使用してアッセイすることができる。
【０１４０】
一部の態様において、本明細書に記載されている抗シグレック−８抗体は、肥満細胞媒介性活性を阻害する。肥満細胞トリプターゼは、総肥満細胞数および活性化のバイオマーカーとして使用されてきた。例えば、血液または尿中の総および活性トリプターゼならびにヒスタミン、Ｎ−メチルヒスタミンおよび１１−ベータ−プロスタグランジンＦ２を測定して、肥満細胞の低下を評価することができる。例えば、例示的な肥満細胞活性アッセイに関して、米国特許出願公開第２０１１０２９３６３１号を参照されたい。
【０１４１】
抗体調製
本明細書に記載されている抗体（例えば、ヒトシグレック−８に結合する抗体）は、抗体を作製するための本技術分野において利用できる技法を使用して調製されるが、そのうち例示的な方法について次のセクションでより詳細に記載する。
【０１４２】
１．抗体断片
本発明は、抗体断片を包含する。抗体断片は、酵素消化等の伝統的な手段または組換え技法によって作製することができる。ある特定の状況下で、全抗体ではなく抗体断片を使用する利点がある。ある特定の抗体断片の概説に関しては、Ｈｕｄｓｏｎら（２００３年）Ｎａｔ．  Ｍｅｄ．９巻：１２９〜１３４頁を参照されたい。
【０１４３】
抗体断片の産生のための様々な技法が開発された。伝統的には、このような断片は、インタクト抗体のタンパク質分解的消化により得られた（例えば、Ｍｏｒｉｍｏｔｏら、Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ  ａｎｄ  Ｂｉｏｐｈｙｓｉｃａｌ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ２４巻：１０７〜１１７頁（１９９２年）；およびＢｒｅｎｎａｎら、Ｓｃｉｅｎｃｅ、２２９巻：８１頁（１９８５年）を参照）。しかし、このような断片は現在、組換え宿主細胞によって直接的に産生することができる。Ｆａｂ、ＦｖおよびＳｃＦｖ抗体断片は全て、Ｅ．ｃｏｌｉにおいて発現させ、それから分泌させることができ、よって、大量のこのような断片の手軽な産生を可能にする。抗体断片は、上述の抗体ファージライブラリーから単離することができる。あるいは、Ｆａｂ’−ＳＨ断片をＥ．ｃｏｌｉから直接的に回収し、化学的にカップリングして、Ｆ（ａｂ’）２断片を形成することができる（Ｃａｒｔｅｒら、Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  １０巻：１６３〜１６７頁（１９９２年））。別のアプローチによると、Ｆ（ａｂ’）２断片は、組換え宿主細胞培養物から直接的に単離することができる。サルベージ受容体結合エピトープ残基を含む、ｉｎ  ｖｉｖｏ半減期が増加したＦａｂおよびＦ（ａｂ’）２断片が、米国特許第５，８６９，０４６号に記載されている。抗体断片の産生のための他の技法は、当業者には明らかとなろう。ある特定の実施形態において、抗体は、単鎖Ｆｖ断片（ｓｃＦｖ）である。ＷＯ９３／１６１８５；米国特許第５，５７１，８９４号；および同第５，５８７，４５８号を参照されたい。ＦｖおよびｓｃＦｖは、定常領域を欠くインタクトな組み合わせ部位を有する唯一の種である；よって、これらは、ｉｎ  ｖｉｖｏ使用における非特異的結合低下に適する可能性がある。ｓｃＦｖ融合タンパク質を構築して、ｓｃＦｖのアミノまたはカルボキシ末端のいずれかにおけるエフェクタータンパク質の融合体を生じることができる。Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ、Ｂｏｒｒｅｂａｅｃｋ編（上掲）を参照されたい。例えば抗体断片は、例えば、米国特許第５，６４１，８７０号に記載されている「線状抗体」となることもできる。斯かる線状抗体は、単一特異性または二重特異性となり得る。
【０１４４】
２．ヒト化抗体
本発明は、ヒト化抗体を包含する。非ヒト抗体をヒト化するための様々な方法が、本技術分野で公知である。例えば、ヒト化抗体は、非ヒト供給源から導入された１個または複数のアミノ酸残基を有することができる。このような非ヒトアミノ酸残基は多くの場合、「移入」残基と称され、これは典型的には、「移入」可変ドメインから得られる。ヒト化は基本的に、高頻度可変領域配列をヒト抗体の相当する配列の代わりに置換することにより、Ｗｉｎｔｅｒの方法に従って行うことができる（Ｊｏｎｅｓら（１９８６年）Ｎａｔｕｒｅ  ３２１巻：５２２〜５２５頁；Ｒｉｅｃｈｍａｎｎら（１９８８年）Ｎａｔｕｒｅ  ３３２巻：３２３〜３２７頁；Ｖｅｒｈｏｅｙｅｎら（１９８８年）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２３９巻：１５３４〜１５３６頁）。したがって、斯かる「ヒト化」抗体は、キメラ抗体であり（米国特許第４，８１６，５６７号）、インタクトなヒト可変ドメインに実質的に満たないものが、非ヒト種由来の相当する配列によって置換されている。実際には、ヒト化抗体は典型的には、いくつかの高頻度可変領域残基およびおそらくいくつかのＦＲ残基が、齧歯類抗体における類似性部位由来の残基によって置換されたヒト抗体である。
【０１４５】
ヒト化抗体の作製において使用するべき軽および重両方のヒト可変ドメインの選択は、抗原性の低下に重要となり得る。いわゆる「ベストフィット（ｂｅｓｔ−ｆｉｔ）」方法によると、齧歯類（例えば、マウス）抗体の可変ドメインの配列が、公知ヒト可変ドメイン配列のライブラリー全体に対しスクリーニングされる。続いて、齧歯類の配列に最も近縁のヒト配列が、ヒト化抗体のヒトフレームワークとして受け入れられる（Ｓｉｍｓら（１９９３年）Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５１巻：２２９６頁；Ｃｈｏｔｈｉａら（１９８７年）Ｊ．  Ｍｏｌ．  Ｂｉｏｌ．１９６巻：９０１頁）。別の方法は、軽または重鎖の特定のサブグループのあらゆるヒト抗体のコンセンサス配列に由来する特定のフレームワークを使用する。いくつかの異なるヒト化抗体に同じフレームワークを使用することができる（Ｃａｒｔｅｒら（１９９２年）Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ、８９巻：４２８５頁；Ｐｒｅｓｔａら（１９９３年）Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．、１５１巻：２６２３頁）。
【０１４６】
抗体が、抗原に対する高い親和性および他の好ましい生物学的特性を保持しつつヒト化されることがさらに一般に望ましい。この目標を達成するため、一方法に従って、ヒト化抗体は、親およびヒト化配列の三次元モデルを使用して、親配列および様々な概念的ヒト化産物の解析のプロセスにより調製される。三次元免疫グロブリンモデルは、一般的に利用でき、当業者には馴染み深い。選択された候補免疫グロブリン配列の可能な三次元コンフォメーションを図解および表示するコンピュータプログラムを利用できる。このような表示の点検は、候補免疫グロブリン配列の機能における残基の可能性の高い役割の解析、すなわち、その抗原に結合する候補免疫グロブリンの能力に影響を与える残基の解析を可能にする。このようにして、標的抗原（複数可）に対する親和性増加等、所望の抗体特徴が達成できるように、レシピエントおよび移入配列からＦＲ残基を選択し、組み合わせることができる。一般に、高頻度可変領域残基は、直接的におよび最も実質的に、抗原結合への影響に関与する。
【０１４７】
３．ヒト抗体
本発明のヒト抗シグレック−８抗体は、ヒト由来ファージディスプレイライブラリーから選択されるＦｖクローン可変ドメイン配列（複数可）と公知ヒト定常ドメイン配列（複数可）を組み合わせることにより構築することができる。あるいは、本発明のヒトモノクローナル抗シグレック−８抗体は、ハイブリドーマ方法によって作製することができる。ヒトモノクローナル抗体の産生のためのヒトミエローマおよびマウス−ヒトヘテロミエローマ細胞株は、例えば、Ｋｏｚｂｏｒ、Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．、１３３巻：３００１頁（１９８４年）；Ｂｒｏｄｅｕｒら、Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ  Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ  ａｎｄ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ、５１〜６３頁（Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ，  Ｉｎｃ．、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ、１９８７年）；およびＢｏｅｒｎｅｒら、Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．、１４７巻：８６頁（１９９１年）によって記載されている。
【０１４８】
免疫化により、内在性免疫グロブリン産生の非存在下でヒト抗体の完全レパートリーを産生することができるトランスジェニック動物（例えば、マウス）を産生することが可能である。例えば、キメラおよび生殖系列変異体マウスにおける抗体重鎖連結領域（ＪＨ）遺伝子のホモ接合型欠失が、内在性抗体産生の完全阻害をもたらすことが記載されている。斯かる生殖系列変異体マウスへのヒト生殖系列免疫グロブリン遺伝子アレイの移行は、抗原負荷によるヒト抗体の産生をもたらすであろう。例えば、Ｊａｋｏｂｏｖｉｔｓら、Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ、９０巻：２５５１頁（１９９３年）；Ｊａｋｏｂｏｖｉｔｓら、Ｎａｔｕｒｅ、３６２巻：２５５頁（１９９３年）；Ｂｒｕｇｇｅｒｍａｎｎら、Ｙｅａｒ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．、７巻：３３頁（１９９３年）を参照されたい。
【０１４９】
遺伝子シャッフリングを使用して、非ヒト（例えば、齧歯類）抗体からヒト抗体を得ることもでき、このヒト抗体は、出発非ヒト抗体と同様の親和性および特異性を有する。「エピトープインプリンティング」とも呼ばれるこの方法に従い、本明細書に記載されているファージディスプレイ技法によって得られる非ヒト抗体断片の重または軽鎖可変領域のいずれかを、ヒトＶドメイン遺伝子のレパートリーと置き換え、非ヒト鎖／ヒト鎖ｓｃＦｖまたはＦａｂキメラの集団を作り出す。抗原による選択は、非ヒト鎖／ヒト鎖キメラｓｃＦｖまたはＦａｂの単離をもたらし、ヒト鎖は、一次ファージディスプレイクローンにおける相当する非ヒト鎖の除去により破壊された抗原結合部位を修復する、すなわち、エピトープは、ヒト鎖パートナーの選択を支配する。残存非ヒト鎖を置き換えるために、このプロセスを反復すると、ヒト抗体が得られる（ＰＣＴ  ＷＯ９３／０６２１３、１９９３年４月１日公開を参照）。ＣＤＲグラフトによる非ヒト抗体の伝統的なヒト化とは異なり、この技法は、非ヒト起源のＦＲ残基もＣＤＲ残基も持たない完全なヒト抗体を提供する。
【０１５０】
４．二重特異性抗体
二重特異性抗体は、少なくとも２種の異なる抗原に対し結合特異性を有するモノクローナル抗体である。ある特定の実施形態において、二重特異性抗体は、ヒトまたはヒト化抗体である。ある特定の実施形態において、結合特異性のうち一方は、シグレック−８に対するものであり、他方は、他のいずれかの抗原に向けられている。ある特定の実施形態において、二重特異性抗体は、シグレック−８の２種の異なるエピトープに結合することができる。二重特異性抗体を使用して、シグレック−８を発現する細胞に細胞傷害性薬剤を局在化させることもできる。二重特異性抗体は、全長抗体または抗体断片（例えば、Ｆ（ａｂ’）２二重特異性抗体）として調製することができる。
【０１５１】
二重特異性抗体を作製するための方法は、本技術分野で公知である。ＭｉｌｓｔｅｉｎおよびＣｕｅｌｌｏ、Ｎａｔｕｒｅ、３０５巻：５３７頁（１９８３年）、ＷＯ９３／０８８２９、１９９３年５月１３日公開およびＴｒａｕｎｅｃｋｅｒら、ＥＭＢＯ  Ｊ．、１０巻：３６５５頁（１９９１年）を参照されたい。二重特異性抗体作製のさらなる詳細に関しては、例えば、Ｓｕｒｅｓｈら、Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ、１２１巻：２１０頁（１９８６年）を参照されたい。二重特異性抗体は、架橋されたまたは「ヘテロコンジュゲート」抗体を含む。例えば、ヘテロコンジュゲートにおける抗体の一方は、アビジンにカップリングすることができ、他方はビオチンにカップリングすることができる。ヘテロコンジュゲート抗体は、任意の簡便な架橋方法を使用して作製することができる。適した架橋剤は、本技術分野において周知であり、多数の架橋技法と共に米国特許第４，６７６，９８０号に開示されている。
【０１５２】
５．シングルドメイン抗体
一部の実施形態において、本発明の抗体は、シングルドメイン抗体である。シングルドメイン抗体は、抗体の重鎖可変ドメインの全体もしくは部分または軽鎖可変ドメインの全体もしくは部分を含む単一のポリペプチド鎖である。ある特定の実施形態において、シングルドメイン抗体は、ヒトシングルドメイン抗体である（Ｄｏｍａｎｔｉｓ，Ｉｎｃ．、Ｗａｌｔｈａｍ、Ｍａｓｓ．；例えば、米国特許第６，２４８，５１６（Ｂ１）号を参照）。一実施形態において、シングルドメイン抗体は、抗体の重鎖可変ドメインの全体または部分からなる。
【０１５３】
６．抗体バリアント
一部の実施形態において、本明細書に記載されている抗体のアミノ酸配列修飾（複数可）が企図される。例えば、抗体の結合親和性および／または他の生物学的特性を改善することが望ましくなり得る。抗体のアミノ酸配列バリアントは、抗体をコードするヌクレオチド配列に適切な変化を導入することにより、あるいはペプチド合成により調製することができる。斯かる修飾は、例えば、抗体のアミノ酸配列内の残基からの欠失および／またはそれへの挿入および／またはその置換を含む。欠失、挿入および置換のいずれかの組合せを為して、最終構築物に到達することができるが、この最終構築物が、所望の特徴を保有することを条件とする。アミノ酸変更は、配列が作製されるときに対象抗体アミノ酸配列に導入することができる。
【０１５４】
変異誘発に好まれる位置である、抗体のある特定の残基または領域の同定に有用な方法は、ＣｕｎｎｉｎｇｈａｍおよびＷｅｌｌｓ（１９８９年）Ｓｃｉｅｎｃｅ、２４４巻：１０８１〜１０８５頁によって記載されている「アラニンスキャニング変異誘発」と呼ばれる。それによると、残基または標的残基の群が同定され（例えば、ａｒｇ、ａｓｐ、ｈｉｓ、ｌｙｓおよびｇｌｕ等、荷電残基）、中性または負電荷アミノ酸（例えば、アラニンまたはポリアラニン）によって置き換えられて、抗原とアミノ酸との相互作用に影響を与える。置換に対する機能的感受性を実証するアミノ酸位置は続いて、置換部位にまたはそれに代えてさらに別のまたは他のバリアントを導入することにより精緻化される。よって、アミノ酸配列変種を導入するための部位は既定であるが、変異の性質それ自体は既定である必要はない。例えば、所定の部位における変異の性能を解析するために、ａｌａスキャニングまたはランダム変異誘発が、標的コドンまたは領域において行われ、発現した免疫グロブリンが、所望の活性に関してスクリーニングされる。
【０１５５】
アミノ酸配列挿入は、１残基から１００またはそれを超える残基を含有するポリペプチドの長さに及ぶアミノおよび／またはカルボキシル末端融合、ならびに単一または複数のアミノ酸残基の配列内挿入を含む。末端挿入の例として、Ｎ末端メチオニル残基を有する抗体が挙げられる。抗体分子の他の挿入バリアントは、抗体の血清半減期を増加させる酵素またはポリペプチドへの抗体のＮまたはＣ末端の融合を含む。
【０１５６】
一部の実施形態において、モノクローナル抗体は、重鎖および／または軽鎖にＣ末端切断を有する。例えば、１、２、３、４または５アミノ酸残基が、重鎖および／または軽鎖のＣ末端において切断される。一部の実施形態において、Ｃ末端切断は、重鎖からＣ末端リシンを除去する。一部の実施形態において、モノクローナル抗体は、重鎖および／または軽鎖にＮ末端切断を有する。例えば、１、２、３、４または５アミノ酸残基が、重鎖および／または軽鎖のＮ末端において切断される。一部の実施形態において、モノクローナル抗体のトランケート型は、組換え技法によって作製することができる。
【０１５７】
ある特定の実施形態において、本発明の抗体は、抗体がグリコシル化される程度を増加または減少させるように変更される。ポリペプチドのグリコシル化は、典型的には、Ｎ結合型またはＯ結合型のいずれかである。Ｎ結合型は、アスパラギン残基の側鎖への糖質部分の付着を指す。トリペプチド配列、アスパラギン−Ｘ−セリンおよびアスパラギン−Ｘ−スレオニン（式中、Ｘは、プロリンを除くいずれかのアミノ酸である）は、アスパラギン側鎖への糖質部分の酵素による付着の認識配列である。よって、ポリペプチドにおけるこれらのトリペプチド配列のいずれかの存在は、潜在的グリコシル化部位を生じる。Ｏ結合型グリコシル化は、５−ヒドロキシプロリンまたは５−ヒドロキシリシンを使用してもよいが、最も一般的にはセリンまたはスレオニンであるヒドロキシアミノ酸への糖、Ｎ−アセチルガラクトサミン（Ｎ−ａｃｅｙｌｇａｌａｃｔｏｓａｍｉｎｅ）、ガラクトースまたはキシロースのうち１種の付着を指す。
【０１５８】
抗体に対するグリコシル化部位の付加または欠失は、上述のトリペプチド配列（Ｎ結合型グリコシル化部位のための）のうち１種または複数が作出または除去されるように、アミノ酸配列を変更することにより簡便に達成される。変更は、本来の抗体の配列に対する１個または複数のセリンまたはスレオニン残基の付加、欠失または置換によって為すこともできる（Ｏ結合型グリコシル化部位のため）。
【０１５９】
抗体が、Ｆｃ領域を含む場合、それに付着した糖質を変更することができる。例えば、抗体のＦｃ領域に付着したフコースを欠如する、成熟糖質構造を有する抗体が、米国特許出願公開第２００３／０１５７１０８号（Ｐｒｅｓｔａ，  Ｌ．）に記載されている。ＵＳ２００４／００９３６２１（Ｋｙｏｗａ  Ｈａｋｋｏ  Ｋｏｇｙｏ  Ｃｏ．，  Ｌｔｄ）も参照されたい。抗体のＦｃ領域に付着した糖質において二分（ｂｉｓｅｃｔｉｎｇ）Ｎ−アセチルグルコサミン（ＧｌｃＮＡｃ）を有する抗体は、ＷＯ２００３／０１１８７８、Ｊｅａｎ−Ｍａｉｒｅｔらおよび米国特許第６，６０２，６８４号、Ｕｍａｎａらにおいて参照される。抗体のＦｃ領域に付着したオリゴ糖において少なくとも１個のガラクトース残基を有する抗体は、ＷＯ１９９７／３００８７、Ｐａｔｅｌらに報告されている。そのＦｃ領域に付着した変更された糖質を有する抗体に関して、ＷＯ１９９８／５８９６４（Ｒａｊｕ，  Ｓ．）およびＷＯ１９９９／２２７６４（Ｒａｊｕ，  Ｓ．）も参照されたい。修飾されたグリコシル化を有する抗原結合分子に関して、ＵＳ２００５／０１２３５４６（Ｕｍａｎａら）も参照されたい。
【０１６０】
ある特定の実施形態において、グリコシル化バリアントは、Ｆｃ領域に付着した糖質構造が、フコースを欠如するＦｃ領域を含む。斯かるバリアントは、改善されたＡＤＣＣ機能を有する。任意選択で、Ｆｃ領域は、ＡＤＣＣをさらに改善する１個または複数のアミノ酸置換をそこにさらに含み、例えば、Ｆｃ領域の２９８、３３３および／または３３４位（残基のＥｕナンバリング）における置換が挙げられる。「脱フコシル化（ｄｅｆｕｃｏｓｙｌａｔｅｄ）」または「フコース欠損」抗体に関する刊行物の例として：ＵＳ２００３／０１５７１０８；ＷＯ２０００／６１７３９；ＷＯ２００１／２９２４６；ＵＳ２００３／０１１５６１４；ＵＳ２００２／０１６４３２８；ＵＳ２００４／００９３６２１；ＵＳ２００４／０１３２１４０；ＵＳ２００４／０１１０７０４；ＵＳ２００４／０１１０２８２；ＵＳ２００４／０１０９８６５；ＷＯ２００３／０８５１１９；ＷＯ２００３／０８４５７０；ＷＯ２００５／０３５５８６；ＷＯ２００５／０３５７７８；ＷＯ２００５／０５３７４２；Ｏｋａｚａｋｉら、Ｊ．  Ｍｏｌ．  Ｂｉｏｌ．３３６巻：１２３９〜１２４９頁（２００４年）；Ｙａｍａｎｅ−Ｏｈｎｕｋｉら、Ｂｉｏｔｅｃｈ．  Ｂｉｏｅｎｇ．８７巻：６１４頁（２００４年）が挙げられる。脱フコシル化抗体を産生する細胞株の例として、タンパク質フコシル化を欠損するＬｅｃ１３  ＣＨＯ細胞（Ｒｉｐｋａら、Ａｒｃｈ．  Ｂｉｏｃｈｅｍ．  Ｂｉｏｐｈｙｓ．２４９巻：５３３〜５４５頁（１９８６年）；米国特許出願公開第２００３／０１５７１０８（Ａ１）号、Ｐｒｅｓｔａ，  Ｌ；およびＷＯ２００４／０５６３１２（Ａ１）、Ａｄａｍｓら、特に、実施例１１）と、アルファ−１，６−フコシル基転移酵素遺伝子、ＦＵＴ８、ノックアウトＣＨＯ細胞（Ｙａｍａｎｅ−Ｏｈｎｕｋｉら、Ｂｉｏｔｅｃｈ．  Ｂｉｏｅｎｇ．８７巻：６１４頁（２００４年））等のノックアウト細胞株と、β１，４−Ｎ−アセチルグルコサミン転移酵素ＩＩＩ（ＧｎＴ−ＩＩＩ）およびゴルジμ−マンノシダーゼＩＩ（ＭａｎＩＩ）を過剰発現する細胞が挙げられる。
【０１６１】
野生型ＣＨＯ細胞において産生された同じ抗体におけるフコースの量と比べて低下したフコースを有する抗体が、本明細書において企図される。例えば、抗体は、ネイティブＣＨＯ細胞（例えば、ネイティブＦＵＴ８遺伝子を含有するＣＨＯ細胞等、ネイティブグリコシル化パターンを産生するＣＨＯ細胞）によって産生された場合よりも少量のフコースを有する。ある特定の実施形態において、本明細書において提供される抗シグレック−８抗体は、そのＮ結合型グリカンの約５０％、４０％、３０％、２０％、１０％、５％または１％未満がフコースを含む抗体である。ある特定の実施形態において、本明細書において提供される抗シグレック−８抗体は、そのＮ結合型グリカンのいずれもフコースを含まない抗体である、すなわち、抗体は、完全にフコースを含有しない、またはフコースを持たない、またはフコシル化されていない、またはアフコシル化されている。フコースの量は、例えばＷＯ２００８／０７７５４６に記載されているＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ質量分析によって測定される、Ａｓｎ２９７に付着したあらゆる糖構造の和と比べて（例えば、複合的、ハイブリッドおよび高マンノース構造）、Ａｓｎ２９７における糖鎖内のフコースの平均量を計算することにより決定することができる。Ａｓｎ２９７は、Ｆｃ領域における約２９７位に位置するアスパラギン残基を指す（Ｆｃ領域残基のＥｕナンバリング）；しかし、Ａｓｎ２９７は、抗体における軽微な配列変種により、２９７位の約±３アミノ酸上流または下流に、すなわち、２９４〜３００位の間に位置することもできる。一部の実施形態において、抗体の重鎖の少なくとも１または２つは、フコシル化されていない。
【０１６２】
一実施形態において、抗体は、その血清半減期を改善するように変更される。抗体の血清半減期を増加させるために、例えば、米国特許第５，７３９，２７７号に記載されている通り、サルベージ受容体結合エピトープを抗体（特に、抗体断片）に取り込ませることができる。本明細書において、用語「サルベージ受容体結合エピトープ」は、ＩｇＧ分子のｉｎ  ｖｉｖｏ血清半減期の増加の原因となる、ＩｇＧ分子（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３またはＩｇＧ４）のＦｃ領域のエピトープを指す（ＵＳ２００３／０１９０３１１、米国特許第６，８２１，５０５号；米国特許第６，１６５，７４５号；米国特許第５，６２４，８２１号；米国特許第５，６４８，２６０号；米国特許第６，１６５，７４５号；米国特許第５，８３４，５９７号）。
【０１６３】
別の種類のバリアントは、アミノ酸置換バリアントである。このようなバリアントは、異なる残基によって置き換えられた少なくとも１個のアミノ酸残基を抗体分子に有する。置換変異誘発のための目的の部位は、高頻度可変領域を含むが、ＦＲ変更も企図される。保存的置換は、表５の見出し「好まれる置換」に示す。斯かる置換が、生物学的活性に望ましい変化をもたらす場合、表５において「例示的な置換」と命名される、またはアミノ酸クラスを参照しつつさらに後述する、より実質的な変化を導入し、その産物をスクリーニングすることができる。
【表５】
2018533569.tif 000023
【０１６４】
抗体の生物学的特性における実質的な修飾は、（ａ）例えば、シートもしくはヘリックスコンフォメーションとしての、置換の区域におけるポリペプチド骨格の構造、（ｂ）標的部位における分子の電荷もしくは疎水性、またはｃ）側鎖の嵩の維持におけるその効果が有意に異なる置換を選択することにより達成される。アミノ酸は、その側鎖の特性の類似性に従ってグループ化することができる（Ａ．  Ｌ．  Ｌｅｈｎｉｎｇｅｒ、Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、第２版、７３〜７５頁、Ｗｏｒｔｈ  Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ、Ｎｅｗ
Ｙｏｒｋ（１９７５年））：
（１）非極性：Ａｌａ（Ａ）、Ｖａｌ（Ｖ）、Ｌｅｕ（Ｌ）、Ｉｌｅ（Ｉ）、Ｐｒｏ（Ｐ）、Ｐｈｅ（Ｆ）、Ｔｒｐ（Ｗ）、Ｍｅｔ（Ｍ）
（２）無電荷極性：Ｇｌｙ（Ｇ）、Ｓｅｒ（Ｓ）、Ｔｈｒ（Ｔ）、Ｃｙｓ（Ｃ）、Ｔｙｒ（Ｙ）、Ａｓｎ（Ｎ）、Ｇｌｎ（Ｑ）
（３）酸性：Ａｓｐ（Ｄ）、Ｇｌｕ（Ｅ）
（４）塩基性：Ｌｙｓ（Ｋ）、Ａｒｇ（Ｒ）、Ｈｉｓ（Ｈ）
【０１６５】
あるいは、天然起源の残基は、共通側鎖特性に基づき群に分けることができる：
（１）疎水性：ノルロイシン、Ｍｅｔ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ；
（２）中性親水性：Ｃｙｓ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ；
（３）酸性：Ａｓｐ、Ｇｌｕ；
（４）塩基性：Ｈｉｓ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ；
（５）鎖の配向性に影響を与える残基：Ｇｌｙ、Ｐｒｏ；
（６）芳香族：Ｔｒｐ、Ｔｙｒ、Ｐｈｅ。
【０１６６】
非保存的置換は、これらのクラスのうちあるクラスから別のクラスへのメンバーの交換を必要とするであろう。斯かる置換された残基は、保存的置換部位または残存（非保存）部位へと導入することもできる。
【０１６７】
１種類の置換バリアントは、親抗体（例えば、ヒト化またはヒト抗体）のうち１個または複数の高頻度可変領域残基の置換に関与する。一般に、さらなる開発のために選択されるその結果得られたバリアント（複数可）は、これを作製する元になった親抗体と比べて修飾された（例えば、改善された）生物学的特性を有するであろう。斯かる置換バリアントを作製するための簡便な仕方は、ファージディスプレイを使用した親和性成熟化に関与する。簡潔に説明すると、いくつかの高頻度可変領域部位（例えば、６〜７部位）を変異させて、各部位にあらゆる可能なアミノ酸置換を作製する。このように作製された抗体は、各粒子内にパッケージされたファージコートタンパク質（例えば、Ｍ１３の遺伝子ＩＩＩ産物）の少なくとも一部への融合体として繊維状ファージ粒子からディスプレイされる。次に、ファージディスプレイされたバリアントは、その生物学的活性（例えば、結合親和性）に関してスクリーニングされる。修飾のための候補高頻度可変領域部位を同定するために、スキャニング変異誘発（例えば、アラニンスキャニング）を行って、抗原結合に有意に寄与する高頻度可変領域残基を同定することができる。その代わりにまたはその上、抗原−抗体複合体の結晶構造を解析して、抗体および抗原の間の接触点を同定することが有益となり得る。斯かる接触残基および隣接する残基は、本明細書に詳述されている技法を含む、本技術分野で公知の技法に従った置換の候補である。斯かるバリアントが作製されたら、バリアントのパネルを、本明細書に記載されている技法を含む本技術分野で公知の技法を使用したスクリーニングに付し、１種または複数種の関連アッセイにおいて優れた特性を有する抗体をさらなる開発のために選択することができる。
【０１６８】
抗体のアミノ酸配列バリアントをコードする核酸分子は、本技術分野で公知の種々の方法によって調製される。このような方法として、天然供給源からの単離（天然起源のアミノ酸配列バリアントの場合）、または先に調製されたバリアントもしくは非バリアントバージョンの抗体のオリゴヌクレオチド媒介性（または部位特異的）変異誘発、ＰＣＲ変異誘発およびカセット変異誘発による調製が挙げられるがこれらに限定されない。
【０１６９】
本発明の抗体のＦｃ領域に１個または複数のアミノ酸修飾を導入し、これにより、Ｆｃ領域バリアントを作製することが望ましくなり得る。Ｆｃ領域バリアントは、ヒンジシステインの位置を含む１個または複数のアミノ酸位置にアミノ酸修飾（例えば、置換）を含むヒトＦｃ領域配列（例えば、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３またはＩｇＧ４  Ｆｃ領域）を含むことができる。一部の実施形態において、Ｆｃ領域バリアントは、ヒトＩｇＧ４  Ｆｃ領域を含む。さらなる実施形態において、ヒトＩｇＧ４  Ｆｃ領域は、アミノ酸置換Ｓ２２８Ｐを含み、このアミノ酸残基は、Ｋａｂａｔにおける通りのＥＵインデックスに従ってナンバリングされる。
【０１７０】
本明細書および本技術分野が教示するところに従って、一部の実施形態において、本発明の抗体が、野生型カウンターパート抗体と比較して１個または複数の変更を、例えば、Ｆｃ領域に含むことができることが企図される。それにもかかわらず、このような抗体は、その野生型カウンターパートと比較した場合に、治療的有用性に必要とされる実質的に同じ特徴を保持するであろう。例えば、ＷＯ９９／５１６４２に記載されている通り、例えば、変更された（すなわち、改善または縮小された）Ｃ１ｑ結合および／または補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）をもたらすであろう、ある特定の変更をＦｃ領域に為すことができることが考えられる。Ｆｃ領域バリアントの他の例に関して、ＤｕｎｃａｎおよびＷｉｎｔｅｒ、Ｎａｔｕｒｅ  ３２２巻：７３８〜４０頁（１９８８年）；米国特許第５，６４８，２６０号；米国特許第５，６２４，８２１号；およびＷＯ９４／２９３５１も参照されたい。ＷＯ００／４２０７２（Ｐｒｅｓｔａ）およびＷＯ２００４／０５６３１２（Ｌｏｗｍａｎ）は、ＦｃＲに対し改善または縮小された結合を有する抗体バリアントについて記載する。これらの特許公報の内容は、特に参照により本明細書に組み入れられる。Ｓｈｉｅｌｄｓら、Ｊ．  Ｂｉｏｌ．  Ｃｈｅｍ．９巻（２号）：６５９１〜６６０４頁（２００１年）も参照されたい。増加された半減期および胎児への母系ＩｇＧの移行の原因となる、新生児Ｆｃ受容体（ＦｃＲｎ）への改善された結合を有する抗体（Ｇｕｙｅｒら、Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．１１７巻：５８７頁（１９７６年）およびＫｉｍら、Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．２４巻：２４９頁（１９９４年））は、ＵＳ２００５／００１４９３４Ａ１（Ｈｉｎｔｏｎら）に記載されている。このような抗体は、ＦｃＲｎへのＦｃ領域の結合を改善する、１個または複数の置換をその中に有するＦｃ領域を含む。変更されたＦｃ領域アミノ酸配列および増加または減少されたＣ１ｑ結合能を有するポリペプチドバリアントは、米国特許第６，１９４，５５１Ｂ１号、ＷＯ９９／５１６４２に記載されている。これらの特許公報の内容は、特に参照により本明細書に組み入れられる。Ｉｄｕｓｏｇｉｅら、Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６４巻：４１７８〜４１８４頁（２０００年）も参照されたい。
【０１７１】
７．ベクター、宿主細胞および組換え方法
本発明の抗体の組換え産生のため、これをコードする核酸を単離し、さらなるクローニング（ＤＮＡの増幅）または発現のために複製可能なベクターに挿入する。抗体をコードするＤＮＡは、従来手順を使用して（例えば、抗体の重および軽鎖をコードする遺伝子に特異的に結合することができるオリゴヌクレオチドプローブを使用することにより）容易に単離および配列決定される。多くのベクターを利用できる。ベクターの選択は、一部には、使用するべき宿主細胞に依存する。一般に、宿主細胞は、原核生物または真核生物（一般には哺乳動物）起源のいずれかである。ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＤおよびＩｇＥ定常領域を含むいかなるアイソタイプの定常領域をこの目的のために使用してもよく、いかなるヒトまたは動物種から斯かる定常領域を得てもよいことが認められよう。
【０１７２】
原核生物宿主細胞を使用した抗体の作製：
ａ）ベクター構築
本発明の抗体のポリペプチド構成成分をコードするポリヌクレオチド配列は、標準組換え技法を使用して得ることができる。所望のポリヌクレオチド配列は、ハイブリドーマ細胞等、抗体産生細胞から単離および配列決定することができる。あるいは、ポリヌクレオチドは、ヌクレオチド合成機またはＰＣＲ技法を使用して合成することができる。得られた後に、ポリペプチドをコードする配列は、原核生物宿主において異種ポリヌクレオチドを複製および発現することができる組換えベクターに挿入する。利用できる本技術分野で公知の多くのベクターを本発明の目的のために使用することができる。適切なベクターの選択は、主に、ベクターに挿入されるべき核酸のサイズおよびベクターで形質転換されるべき特定の宿主細胞に依存するであろう。各ベクターは、その機能（異種ポリヌクレオチドの増幅もしくは発現またはその両方）およびこれが存在する特定の宿主細胞との適合性に応じて様々な構成成分を含有する。ベクター構成成分として、複製起点、選択マーカー遺伝子、プロモーター、リボソーム結合部位（ＲＢＳ）、シグナル配列、異種核酸挿入物および転写終結配列が一般に挙げられるがこれらに限定されない。
【０１７３】
一般に、宿主細胞と適合性の種に由来するレプリコンおよび対照配列を含有するプラスミドベクターは、このような宿主に関連して使用される。ベクターは通常、複製部位と共に、形質転換細胞における表現型選択をもたらすことができるマーキング配列を保有する。例えば、Ｅ．ｃｏｌｉは典型的に、Ｅ．ｃｏｌｉ種に由来するプラスミドであるｐＢＲ３２２を使用して形質転換される。ｐＢＲ３２２は、アンピシリン（Ａｍｐ）およびテトラサイクリン（Ｔｅｔ）抵抗性をコードする遺伝子を含有し、これにより、形質転換細胞を同定するための容易な手段を提供する。ｐＢＲ３２２、その派生体または他の微生物プラスミドまたはバクテリオファージは、内在性タンパク質の発現のために微生物によって使用され得るプロモーターを含有することもできるまたは含有するように修飾することもできる。特定の抗体の発現のために使用されるｐＢＲ３２２派生体の例は、Ｃａｒｔｅｒら、米国特許第５，６４８，２３７号に詳細に記載されている。
【０１７４】
加えて、宿主微生物と適合性であるレプリコンおよび対照配列を含有するファージベクターは、このような宿主に関連した形質転換ベクターとして使用することができる。例えば、λＧＥＭ．ＴＭ．−１１等、バクテリオファージは、Ｅ．ｃｏｌｉ  ＬＥ３９２等、感受性宿主細胞の形質転換に使用することができる組換えベクターの作製において利用することができる。
【０１７５】
本発明の発現ベクターは、ポリペプチド構成成分のそれぞれをコードする２個またはそれを超えるプロモーター−シストロンペアを含むことができる。プロモーターは、その発現をモジュレートするシストロンの上流（５’）に位置する非翻訳調節配列である。原核生物プロモーターは、典型的には、２種のクラス、誘導性および構成的に分類される。誘導性プロモーターは、培養条件の変化、例えば、栄養素の存在もしくは非存在または温度変化に応答して、その制御下でシストロンの転写のレベル増加を開始するプロモーターである。
【０１７６】
種々の潜在的宿主細胞によって認識される多数のプロモーターが周知である。制限酵素消化により供給源ＤＮＡからプロモーターを除去し、本発明のベクターへと単離されたプロモーター配列を挿入することにより、選択されたプロモーターは、軽または重鎖をコードするシストロンＤＮＡに作動可能に連結することができる。ネイティブプロモーター配列および多くの異種プロモーターの両方を使用して、標的遺伝子の増幅および／または発現を方向付けることができる。一部の実施形態において、一般に、ネイティブ標的ポリペプチドプロモーターと比較した場合に、より優れた転写および発現した標的遺伝子のより高い収量を可能にするため、異種プロモーターが利用される。
【０１７７】
原核生物宿主による使用に適したプロモーターは、ＰｈｏＡプロモーター、β−ガラクタマーゼ（ｇａｌａｃｔａｍａｓｅ）およびラクトースプロモーター系、トリプトファン（ｔｒｐ）プロモーター系ならびにｔａｃまたはｔｒｃプロモーター等のハイブリッドプロモーターを含む。しかし、細菌において機能的な他のプロモーター（他の公知細菌またはファージプロモーター等）も同様に適する。これらのヌクレオチド配列は発表されているため、当業者であれば、任意の必要とされる制限部位を供給するためのリンカーまたはアダプターを使用して、操作可能にこれらを標的の軽および重鎖をコードするシストロンにライゲーションすることができる（Ｓｉｅｂｅｎｌｉｓｔら（１９８０年）Ｃｅｌｌ  ２０巻：２６９頁）。
【０１７８】
本発明の一態様において、組換えベクター内の各シストロンは、膜を横切っての発現したポリペプチドのトランスロケーションを方向付ける分泌シグナル配列構成成分を含む。一般に、シグナル配列は、ベクターの構成成分となり得る、あるいはベクターに挿入される標的ポリペプチドＤＮＡの一部となり得る。本発明の目的のために選択されるシグナル配列は、宿主細胞によって認識およびプロセシングされる（すなわち、シグナルペプチダーゼによって切断される）配列となるべきである。異種ポリペプチドにとってネイティブなシグナル配列を認識およびプロセシングしない原核生物宿主細胞のため、シグナル配列は、アルカリホスファターゼ、ペニシリナーゼ、Ｉｐｐまたは熱安定性エンテロトキシンＩＩ（ＳＴＩＩ）リーダー、ＬａｍＢ、ＰｈｏＥ、ＰｅｌＢ、ＯｍｐＡおよびＭＢＰからなる群から例えば選択される原核生物シグナル配列によって置換される。本発明の一実施形態において、発現系の両方のシストロンで使用されるシグナル配列は、ＳＴＩＩシグナル配列またはそのバリアントである。
【０１７９】
別の態様において、本発明に係る免疫グロブリンの産生は、宿主細胞の細胞質において起こることができ、したがって、各シストロン内に分泌シグナル配列の存在を必要としない。これに関して、免疫グロブリン軽および重鎖は、細胞質内で発現され、フォールドされ、アセンブルされて、機能的免疫グロブリンを形成する。ある特定の宿主系統（例えば、Ｅ．ｃｏｌｉ  ｔｒｘＢ−系統）は、ジスルフィド結合形成に好ましい細胞質条件を提供し、これにより、発現したタンパク質サブユニットの適切なフォールディングおよびアセンブリを可能にする。ＰｒｏｂａおよびＰｌｕｃｋｔｈｕｎ、Ｇｅｎｅ、１５９巻：２０３頁（１９９５年）。
【０１８０】
本発明の抗体は、分泌され適切にアセンブルされた本発明の抗体の収量を最大化するために、発現されたポリペプチド構成成分の定量的な比をモジュレートすることができる発現系を使用することにより産生することもできる。斯かるモジュレーションは、少なくとも一部には、ポリペプチド構成成分の翻訳強度を同時にモジュレートすることにより達成される。
【０１８１】
翻訳強度をモジュレートするための一技法は、Ｓｉｍｍｏｎｓら、米国特許第５，８４０，５２３号に開示されている。これは、シストロン内の翻訳開始領域（ＴＩＲ）のバリアントを利用する。所定のＴＩＲのため、一連のアミノ酸または核酸配列バリアントをある範囲の翻訳強度で作り出し、これにより、特異的な鎖の所望の発現レベルにこの因子を調整するための簡便な手段を提供することができる。ＴＩＲバリアントは、アミノ酸配列を変更し得るコドン変化をもたらす従来の変異誘発技法によって作製することができる。ある特定の実施形態において、ヌクレオチド配列の変化は、サイレントである。ＴＩＲにおける変更は、例えば、シグナル配列における変更と共に、シャインダルガーノ配列の数またはスペーシングの変更を含むことができる。変異体シグナル配列を作製するための一方法は、シグナル配列のアミノ酸配列を変化させない（すなわち、変化がサイレントである）、コード配列の開始における「コドンバンク」の作製である。これは、各コドンの第３のヌクレオチド位置を変化させることにより達成することができる；その上、ロイシン、セリンおよびアルギニン等、一部のアミノ酸は、バンクの作製において複雑さを加えることができる複数の第１および第２の位置を有する。この変異誘発方法は、Ｙａｎｓｕｒａら（１９９２年）ＭＥＴＨＯＤＳ：  Ａ  Ｃｏｍｐａｎｉｏｎ  ｔｏ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌ．４巻：１５１〜１５８頁に詳細に記載されている。
【０１８２】
一実施形態において、ベクターのセットが、その中のシストロン毎にある範囲のＴＩＲ強度で作製される。この限定されたセットは、各鎖の発現レベルの比較と共に、様々なＴＩＲ強度組合せ下における所望の抗体産物の収量をもたらす。ＴＩＲ強度は、Ｓｉｍｍｏｎｓら、米国特許第５，８４０，５２３号に詳細に記載されている通り、レポーター遺伝子の発現レベルを定量することにより決定することができる。翻訳強度比較に基づき、所望の個々のＴＩＲが選択されて、本発明の発現ベクター構築物において組み合わされる。
【０１８３】
本発明の抗体の発現に適した原核生物宿主細胞は、グラム陰性またはグラム陽性生物等、古細菌および真正細菌を含む。有用な細菌の例として、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ（例えば、Ｅ．ｃｏｌｉ）、Ｂａｃｉｌｌｉ（例えば、Ｂ．ｓｕｂｔｉｌｉｓ）、Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒｉａ、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ種（例えば、Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）、Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ  ｔｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍ、Ｓｅｒｒａｔｉａ  ｍａｒｃｅｓｃａｎｓ、Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ、Ｐｒｏｔｅｕｓ、Ｓｈｉｇｅｌｌａ、Ｒｈｉｚｏｂｉａ、ＶｉｔｒｅｏｓｃｉｌｌａまたはＰａｒａｃｏｃｃｕｓが挙げられる。一実施形態において、グラム陰性細胞が使用される。一実施形態において、Ｅ．ｃｏｌｉ細胞が、本発明のための宿主として使用される。Ｅ．ｃｏｌｉ系統の例として、系統Ｗ３１１０（Ｂａｃｈｍａｎｎ、Ｃｅｌｌｕｌａｒ  ａｎｄ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ、２巻（Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ，  Ｄ．Ｃ．：Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｓｏｃｉｅｔｙ  ｆｏｒ  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ、１９８７年）、１１９０〜１２１９頁；ＡＴＣＣ寄託番号２７，３２５）および遺伝子型Ｗ３１１０  ΔｆｈｕＡ（ΔｔｏｎＡ）ｐｔｒ３  ｌａｃ  Ｉｑ  ｌａｃＬ８  ΔｏｍｐＴΔ（ｎｍｐｃ−ｆｅｐＥ）ｄｅｇＰ４１  ｋａｎＲを有する系統３３Ｄ３を含むその派生体（米国特許第５，６３９，６３５号）が挙げられる。Ｅ．ｃｏｌｉ  ２９４（ＡＴＣＣ３１，４４６）、Ｅ．ｃｏｌｉ  Ｂ、Ｅ．ｃｏｌｉλ  １７７６（ＡＴＣＣ３１，５３７）およびＥ．ｃｏｌｉ  ＲＶ３０８（ＡＴＣＣ３１，６０８）等、他の系統およびその派生体も適している。これらの例は、限定的ではなく説明的である。定義された遺伝子型を有する上述の細菌のうちいずれかの派生体を構築するための方法は、本技術分野で公知であり、例えば、Ｂａｓｓら、Ｐｒｏｔｅｉｎｓ、８巻：３０９〜３１４頁（１９９０年）に記載されている。細菌の細胞におけるレプリコンの複製能（ｒｅｐｌｉｃａｂｉｌｉｔｙ）を考慮に入れて適切な細菌を選択することが一般に必要である。ｐＢＲ３２２、ｐＢＲ３２５、ｐＡＣＹＣ１７７またはｐＫＮ４１０等、周知のプラスミドが、レプリコンの供給に使用される場合、例えば、Ｅ．ｃｏｌｉ、ＳｅｒｒａｔｉａまたはＳａｌｍｏｎｅｌｌａ種は、宿主として適切に使用することができる。典型的には、宿主細胞は、最小量のタンパク質分解酵素を分泌するべきであり、望ましくは、追加的なプロテアーゼ阻害剤を細胞培養において取り込むことができる。
【０１８４】
ｂ）抗体産生
宿主細胞は、上述の発現ベクターで形質転換され、プロモーターを誘導するため、形質転換体を選択するため、または所望の配列をコードする遺伝子を増幅するための、必要に応じて修飾された従来の栄養培地において培養される。
【０１８５】
形質転換は、ＤＮＡが、染色体外エレメントとしてまたは染色体組み込み体により複製可能となるような、原核生物宿主へのＤＮＡの導入を意味する。使用する宿主細胞に応じて、形質転換は、斯かる細胞に適切な標準技法を使用して行われる。塩化カルシウムを用いたカルシウム処理は、実質的な細胞壁障壁を含有する細菌細胞のために一般に使用される。形質転換のための別の方法は、ポリエチレングリコール／ＤＭＳＯを用いる。使用されるさらに別の技法は、エレクトロポレーションである。
【０１８６】
本発明のポリペプチドの産生に使用される原核細胞は、本技術分野で公知の、選択された宿主細胞の培養に適した培地において育成される。適した培地の例として、ルリアブロス（ＬＢ）に必要な栄養素補充物質を加えたものが挙げられる。一部の実施形態において、培地は、発現ベクターの構築に基づき選ばれる選択用薬剤も含有して、この発現ベクターを含有する原核細胞の成長を選択的に可能にする。例えば、アンピシリン抵抗性遺伝子を発現する細胞の成長のために、培地にアンピシリンが添加される。
【０１８７】
炭素、窒素および無機リン酸塩源に加えて任意の必要な補充物質が、単独でまたは複合的窒素源等の別の補充物質もしくは培地との混合物として導入されて、適切な濃度で含まれていてもよい。任意選択で、培養培地は、グルタチオン、システイン、シスタミン、チオグリコレート、ジチオエリトリトールおよびジチオスレイトールからなる群より選択される１種または複数種の還元剤を含有することができる。
【０１８８】
原核生物宿主細胞は、適した温度で培養される。ある特定の実施形態において、Ｅ．ｃｏｌｉの成長のため、成長温度は、約２０℃から約３９℃、約２５℃から約３７℃の範囲であるか、または約３０℃である。培地のｐＨは、主に宿主生物に応じて、約５〜約９に及ぶいずれかのｐＨとなり得る。ある特定の実施形態において、Ｅ．ｃｏｌｉのため、ｐＨは、約６．８〜約７．４または約７．０である。
【０１８９】
誘導性プロモーターが、本発明の発現ベクターにおいて使用される場合、タンパク質発現は、プロモーターの活性化に適した条件下で誘導される。本発明の一態様において、ＰｈｏＡプロモーターが、ポリペプチドの転写を制御するために使用される。したがって、形質転換された宿主細胞は、誘導のためのリン酸塩制限培地において培養される。ある特定の実施形態において、リン酸塩制限培地は、Ｃ．Ｒ．Ａ．Ｐ．培地である（例えば、Ｓｉｍｍｏｎｓら、Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  Ｍｅｔｈｏｄｓ（２００２年）２６３巻：１３３〜１４７頁を参照）。本技術分野で公知の通り、用いられているベクター構築物に従って、種々の他の誘導因子を使用することができる。
【０１９０】
一実施形態において、本発明の発現したポリペプチドは、宿主細胞の周辺質に分泌され、そこから回収される。タンパク質回収は、典型的には、一般に、浸透圧ショック、超音波処理または溶解等の手段による微生物の崩壊に関与する。細胞が崩壊されたら、細胞デブリまたは細胞全体は、遠心分離または濾過によって除去することができる。タンパク質は、例えば、親和性樹脂クロマトグラフィーによってさらに精製することができる。あるいは、タンパク質は、培養培地へと輸送され、そこに単離されてもよい。細胞をこの培養物から除去し、産生されたタンパク質のさらなる精製のために培養上清を濾過および濃縮することができる。発現したポリペプチドは、ポリアクリルアミドゲル電気泳動（ＰＡＧＥ）およびウエスタンブロットアッセイ等、一般的に公知の方法を使用してさらに単離および同定することができる。
【０１９１】
本発明の一態様において、抗体産生は、発酵プロセスにより大量に行われる。様々な大規模フェドバッチ（ｆｅｄ−ｂａｔｃｈ）発酵手順が、組換えタンパク質の産生のために利用できる。大規模発酵は、少なくとも１０００リットルの容量、ある特定の実施形態において、約１，０００〜１００，０００リットルの容量を有する。このような発酵槽は、酸素および栄養素、特にグルコースを分布させるための撹拌機羽根車を使用する。小規模発酵は一般に、およそ１００リットル以下の容積測定的容量の発酵槽における発酵を指し、約１リットル〜約１００リットルに及び得る。
【０１９２】
発酵プロセスにおいて、タンパク質発現の誘導は、典型的には、細胞が適した条件下で所望の密度、例えば、約１８０〜２２０のＯＤ５５０まで成長した後に開始され、このステージにおいて、細胞は定常期初期にある。本技術分野で公知かつ上述の通り、用いられているベクター構築物に従って、種々の誘導因子を使用することができる。誘導に先立ちより短い期間、細胞を育成することができる。細胞は通常、約１２〜５０時間誘導されるが、より長いまたはより短い誘導時間を使用してもよい。
【０１９３】
本発明のポリペプチドの産生収量および質を改善するために、様々な発酵条件を修飾することができる。例えば、分泌された抗体ポリペプチドの適切なアセンブリおよびフォールディングを改善するために、Ｄｓｂタンパク質（ＤｓｂＡ、ＤｓｂＢ、ＤｓｂＣ、ＤｓｂＤおよび／またはＤｓｂＧ）またはＦｋｐＡ（シャペロン活性を有するペプチジルプロリルｃｉｓ，ｔｒａｎｓ−イソメラーゼ）等、シャペロンタンパク質を過剰発現する追加的なベクターを使用して、宿主原核細胞を同時形質転換することができる。シャペロンタンパク質は、細菌宿主細胞において産生された異種タンパク質の適切なフォールディングおよび溶解度を容易にすることが実証された。Ｃｈｅｎら（１９９９年）Ｊ．  Ｂｉｏｌ．  Ｃｈｅｍ．２７４巻：１９６０１〜１９６０５頁；Ｇｅｏｒｇｉｏｕら、米国特許第６，０８３，７１５号；Ｇｅｏｒｇｉｏｕら、米国特許第６，０２７，８８８号；ＢｏｔｈｍａｎｎおよびＰｌｕｃｋｔｈｕｎ（２０００年）Ｊ．  Ｂｉｏｌ．  Ｃｈｅｍ．２７５巻：１７１００〜１７１０５頁；ＲａｍｍおよびＰｌｕｃｋｔｈｕｎ（２０００年）Ｊ．  Ｂｉｏｌ．  Ｃｈｅｍ．２７５巻：１７１０６〜１７１１３頁；Ａｒｉｅら（２００１年）Ｍｏｌ．  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．３９巻：１９９〜２１０頁。
【０１９４】
発現した異種タンパク質（特に、タンパク質分解に感受性のタンパク質）のタンパク質分解を最小化するために、タンパク質分解酵素を欠損したある特定の宿主系統を本発明のために使用することができる。例えば、宿主細胞系統を修飾して、プロテアーゼＩＩＩ、ＯｍｐＴ、ＤｅｇＰ、Ｔｓｐ、プロテアーゼＩ、プロテアーゼＭｉ、プロテアーゼＶ、プロテアーゼＶＩおよびこれらの組合せ等、公知の細菌プロテアーゼをコードする遺伝子に遺伝的変異（複数可）を生じることができる。いくつかのＥ．ｃｏｌｉプロテアーゼ欠損系統を利用することができ、例えば、Ｊｏｌｙら（１９９８年）（上掲）；Ｇｅｏｒｇｉｏｕら、米国特許第５，２６４，３６５号；Ｇｅｏｒｇｉｏｕら、米国特許第５，５０８，１９２号；Ｈａｒａら、Ｍｉｃｒｏｂｉａｌ  Ｄｒｕｇ  Ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ、２巻：６３〜７２頁（１９９６年）に記載されている。
【０１９５】
一実施形態において、タンパク質分解酵素を欠損し、１種または複数種のシャペロンタンパク質を過剰発現するプラスミドにより形質転換されたＥ．ｃｏｌｉ系統が、本発明の発現系における宿主細胞として使用される。
【０１９６】
ｃ）抗体精製
一実施形態において、本明細書における産生された抗体タンパク質は、さらに精製されて、さらなるアッセイおよび使用のために実質的に均一な調製物を得る。本技術分野で公知の標準タンパク質精製方法を用いることができる。次の手順は、適した精製手順に例示的である：免疫親和性またはイオン交換カラムにおける分画、エタノール沈殿、逆相ＨＰＬＣ、ＤＥＡＥ等、シリカまたはカチオン交換樹脂におけるクロマトグラフィー、クロマトフォーカシング、ＳＤＳ−ＰＡＧＥ、硫酸アンモニウム沈殿および例えば、Ｓｅｐｈａｄｅｘ  Ｇ−７５を使用したゲル濾過。
【０１９７】
一態様において、固相に固定化されたプロテインＡが、本発明の抗体産物の免疫親和性精製のために使用される。プロテインＡは、抗体のＦｃ領域に高親和性で結合する、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅａｓ由来の４１ｋＤの細胞壁タンパク質である。Ｌｉｎｄｍａｒｋら（１９８３年）Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  Ｍｅｔｈ．６２巻：１〜１３頁。プロテインＡが固定化される固相は、ガラスもしくはシリカ表面を含むカラム、またはポア制御（ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  ｐｏｒｅ）ガラスカラムまたはケイ酸カラムであり得る。一部の適用において、カラムは、グリセロール等の試薬でコーティングされて、夾雑物の非特異的接着性を予防する可能性がある。
【０１９８】
精製の第１のステップとして、上述の細胞培養物に由来する調製物をプロテインＡ固定化固相にアプライして、プロテインＡへの目的の抗体の特異的結合を可能にすることができる。続いて、固相を洗浄して、固相に非特異的に結合した夾雑物を除去する。最後に、溶出により固相から目的の抗体を回収する。
【０１９９】
真核生物宿主細胞を使用した抗体の作製：
真核生物宿主細胞における使用のためのベクターは一般に、次の非限定的構成成分のうち１種または複数を含む：シグナル配列、複製起点、１種または複数種のマーカー遺伝子、エンハンサーエレメント、プロモーターおよび転写終結配列。
【０２００】
ａ）シグナル配列構成成分
真核生物宿主細胞における使用のためのベクターは、目的の成熟タンパク質またはポリペプチドのＮ末端に特異的な切断部位を有する、シグナル配列または他のポリペプチドを含有することもできる。選択された異種シグナル配列は、宿主細胞により認識およびプロセシングされる（すなわち、シグナルペプチダーゼによって切断される）配列となり得る。哺乳動物細胞発現において、哺乳動物シグナル配列およびウイルス分泌リーダー、例えば、単純ヘルペスｇＤシグナルが利用できる。斯かる前駆体領域のためのＤＮＡは、抗体をコードするＤＮＡに読み取り枠でライゲーションされる。
【０２０１】
ｂ）複製起点
一般に、複製起点構成成分は、哺乳動物発現ベクターには必要とされない。例えば、ＳＶ４０起点は、典型的には、初期プロモーターを含有するという理由でのみ使用することができる。
【０２０２】
ｃ）選択遺伝子構成成分
発現およびクローニングベクターは、選択可能マーカーとも命名される選択遺伝子を含有することができる。典型的な選択遺伝子は、（ａ）抗生物質もしくは他の毒素、例えば、アンピシリン、ネオマイシン、メトトレキセートもしくはテトラサイクリンに対する抵抗性を付与する、（ｂ）関連する場合、栄養要求性欠乏を補完する、または（ｃ）複合培地から得ることができない重大な栄養素を供給するタンパク質をコードする。
【０２０３】
選択スキームの一例は、宿主細胞の成長を停止させるための薬物を利用する。異種遺伝子による形質転換が成功した細胞は、薬物抵抗性を付与するタンパク質を産生し、これにより、この選択レジメンを生き残る。斯かる優性選択の例は、薬物、ネオマイシン、ミコフェノール酸およびハイグロマイシンを使用する。
【０２０４】
哺乳動物細胞に適した選択可能マーカーの別の例は、ＤＨＦＲ、チミジンキナーゼ、メタロチオネイン−Ｉおよび−ＩＩ、霊長類メタロチオネイン遺伝子、アデノシンデアミナーゼ、オルニチンデカルボキシラーゼ等、抗体核酸を取り込む能力のある細胞の同定を可能にするマーカーである。
【０２０５】
例えば、一部の実施形態において、ＤＨＦＲ選択遺伝子で形質転換された細胞は先ず、ＤＨＦＲの競合的アンタゴニストであるメトトレキセート（Ｍｔｘ）を含有する培養培地において全形質転換体を培養することにより同定される。一部の実施形態において、野生型ＤＨＦＲが用いられる場合に適切な宿主細胞は、ＤＨＦＲ活性を欠損したチャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞株である（例えば、ＡＴＣＣ  ＣＲＬ−９０９６）。
【０２０６】
あるいは、抗体、野生型ＤＨＦＲタンパク質およびアミノグリコシド３’−ホスホトランスフェラーゼ（ＡＰＨ）等の別の選択可能マーカーをコードするＤＮＡ配列で形質転換または同時形質転換された宿主細胞（特に、内在性ＤＨＦＲを含有する野生型宿主）は、アミノグリコシド系抗生物質、例えば、カナマイシン、ネオマイシンまたはＧ４１８等、この選択可能マーカーのための選択用薬剤を含有する培地における細胞成長により選択することができる。米国特許第４，９６５，１９９号を参照されたい。宿主細胞は、グルタミンシンテターゼ（ＧＳ）を欠損した細胞株を含む、ＮＳ０、ＣＨＯＫ１、ＣＨＯＫ１ＳＶまたは派生体を含むことができる。哺乳動物細胞のための選択可能マーカーとしてのＧＳの使用のための方法は、米国特許第５，１２２，４６４号および米国特許第５，８９１，６９３号に記載されている。
【０２０７】
ｄ）プロモーター構成成分
発現およびクローニングベクターは通常、宿主生物によって認識され、目的のポリペプチド（例えば、抗体）をコードする核酸に作動可能に連結されたプロモーターを含有する。プロモーター配列は、真核生物で公知である。例えば、実際ではあらゆる真核生物遺伝子は、転写が開始される部位からおよそ２５〜３０塩基上流に位置するＡＴリッチ領域を有する。多くの遺伝子の転写開始から７０〜８０塩基上流に見出された別の配列は、ＣＮＣＡＡＴ領域であり、Ｎは、いかなるヌクレオチドでもよい。大部分の真核生物遺伝子の３’端には、コード配列の３’端へのポリＡテイルの付加のためのシグナルとなり得るＡＡＴＡＡＡ配列がある。ある特定の実施形態において、これらの配列のいずれかまたは全てを、真核生物発現ベクターに適切に挿入することができる。
【０２０８】
哺乳動物宿主細胞におけるベクターからの転写は、例えば、ポリオーマウイルス、鶏痘ウイルス、アデノウイルス（アデノウイルス２等）、ウシパピローマウイルス、トリ肉腫ウイルス、サイトメガロウイルス、レトロウイルス、Ｂ型肝炎ウイルスおよびサルウイルス４０（ＳＶ４０）等、ウイルスのゲノムから、あるいは異種哺乳動物プロモーター、例えば、アクチンプロモーターまたは免疫グロブリンプロモーターから、熱ショックプロモーターから得られるプロモーターによって制御される、ただし、斯かるプロモーターは、宿主細胞系と適合性であること。
【０２０９】
ＳＶ４０ウイルスの初期および後期プロモーターは、ＳＶ４０ウイルス複製起点も含有するＳＶ４０制限断片として簡便に得られる。ヒトサイトメガロウイルスの最初期プロモーターは、ＨｉｎｄＩＩＩ  Ｅ制限断片として簡便に得られる。ベクターとしてウシパピローマウイルスを使用して哺乳動物宿主においてＤＮＡを発現するための系は、米国特許第４，４１９，４４６号に開示されている。この系の修飾は、米国特許第４，６０１，９７８号に記載されている。単純ヘルペスウイルス由来のチミジンキナーゼプロモーターの制御下でのマウス細胞におけるヒトβ−インターフェロンｃＤＮＡの発現について記載するＲｅｙｅｓら、Ｎａｔｕｒｅ  ２９７巻：５９８〜６０１頁（１９８２年）も参照されたい。あるいは、ラウス肉腫ウイルス末端反復配列をプロモーターとして使用することができる。
【０２１０】
ｅ）エンハンサーエレメント構成成分
高等真核生物による本発明の抗体をコードするＤＮＡの転写は、多くの場合、ベクターにエンハンサー配列を挿入することにより増加する。多くのエンハンサー配列が、哺乳動物遺伝子（グロビン、エラスターゼ、アルブミン、α−フェトプロテインおよびインスリン）から現在公知である。しかし典型的には、真核細胞ウイルス由来のエンハンサーが使用されるであろう。例として、複製起点の後方（ｌａｔｅ  ｓｉｄｅ）（ｂｐ１００〜２７０）のＳＶ４０エンハンサー、ヒトサイトメガロウイルス初期プロモーターエンハンサー、マウスサイトメガロウイルス初期プロモーターエンハンサー、複製起点の後方のポリオーマエンハンサーおよびアデノウイルスエンハンサーが挙げられる。真核生物プロモーターの活性化のためのエンハンサーエレメントについて記載するＹａｎｉｖ、Ｎａｔｕｒｅ  ２９７巻：１７〜１８頁（１９８２年）も参照されたい。エンハンサーは、抗体ポリペプチドコード配列に対し５’位または３’位においてベクターにスプライスすることができるが、一般に、プロモーターから５’の部位に位置する。
【０２１１】
ｆ）転写終結構成成分
真核生物宿主細胞において使用される発現ベクターは、転写の終結およびｍＲＮＡの安定化に必要な配列を含有することもできる。斯かる配列は、真核生物またはウイルスＤＮＡまたはｃＤＮＡの５’および場合により３’非翻訳領域から一般的に利用できる。このような領域は、抗体をコードするｍＲＮＡの非翻訳部分におけるポリアデニル化断片として転写されるヌクレオチドセグメントを含有する。有用な転写終結構成成分の１種は、ウシ成長ホルモンポリアデニル化領域である。ＷＯ９４／１１０２６およびそこに開示されている発現ベクターを参照されたい。
【０２１２】
ｇ）宿主細胞の選択および形質転換
本明細書におけるベクターにおけるＤＮＡのクローニングまたは発現に適した宿主細胞は、脊椎動物宿主細胞を含む、本明細書に記載されている高等真核生物細胞を含む。培養（組織培養）における脊椎動物細胞の繁殖は、ルーチン手順となった。有用な哺乳動物宿主細胞株の例は、ＳＶ４０によって形質転換されたサル腎臓ＣＶ１系列（ＣＯＳ−７、ＡＴＣＣ  ＣＲＬ  １６５１）；ヒト胚性腎臓系列（懸濁培養における育成のためにサブクローニングされた２９３または２９３細胞、Ｇｒａｈａｍら、Ｊ．  Ｇｅｎ  Ｖｉｒｏｌ．３６巻：５９頁（１９７７年））；ベビーハムスター腎臓細胞（ＢＨＫ、ＡＴＣＣ  ＣＣＬ  １０）；チャイニーズハムスター卵巣細胞／−ＤＨＦＲ（ＣＨＯ、Ｕｒｌａｕｂら、Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ  ７７巻：４２１６頁（１９８０年））；マウスセルトリ細胞（ＴＭ４、Ｍａｔｈｅｒ、Ｂｉｏｌ．  Ｒｅｐｒｏｄ．２３巻：２４３〜２５１頁（１９８０年））；サル腎臓細胞（ＣＶ１  ＡＴＣＣ  ＣＣＬ  ７０）；アフリカミドリザル腎臓細胞（ＶＥＲＯ−７６、ＡＴＣＣ  ＣＲＬ−１５８７）；ヒト子宮頸癌細胞（ＨＥＬＡ、ＡＴＣＣ  ＣＣＬ  ２）；イヌ腎臓細胞（ＭＤＣＫ、ＡＴＣＣ  ＣＣＬ  ３４）；バッファローラット（ｂｕｆｆａｌｏ  ｒａｔ）肝臓細胞（ＢＲＬ  ３Ａ、ＡＴＣＣ  ＣＲＬ  １４４２）；ヒト肺細胞（Ｗ１３８、ＡＴＣＣ  ＣＣＬ  ７５）；ヒト肝臓細胞（Ｈｅｐ  Ｇ２、ＨＢ  ８０６５）；マウス乳房腫瘍（ＭＭＴ  ０６０５６２、ＡＴＣＣ  ＣＣＬ５１）；ＴＲＩ細胞（Ｍａｔｈｅｒら、Ａｎｎａｌｓ  Ｎ．Ｙ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．３８３巻：４４〜６８頁（１９８２年））；ＭＲＣ５細胞；ＦＳ４細胞；ＣＨＯＫ１細胞、ＣＨＯＫ１ＳＶ細胞または派生体およびヒトヘパトーマ系列（Ｈｅｐ  Ｇ２）である。
【０２１３】
宿主細胞は、抗体産生のために上述の発現またはクローニングベクターにより形質転換され、プロモーターを誘導するため、形質転換体を選択するため、または所望の配列をコードする遺伝子を増幅するために、必要に応じて修飾された従来の栄養培地において培養される。
【０２１４】
ｈ）宿主細胞の培養
本発明の抗体の産生に使用される宿主細胞は、種々の培地において培養することができる。ＨａｍのＦ１０（Ｓｉｇｍａ）、最小必須培地（（ＭＥＭ）、Ｓｉｇｍａ）、ＲＰＭＩ−１６４０（Ｓｉｇｍａ）およびダルベッコ変法イーグル培地（（ＤＭＥＭ）、Ｓｉｇｍａ）等、市販の培地は、宿主細胞の培養に適する。加えて、Ｈａｍら、Ｍｅｔｈ．  Ｅｎｚ．５８巻：４４頁（１９７９年）、Ｂａｒｎｅｓら、Ａｎａｌ．  Ｂｉｏｃｈｅｍ．１０２巻：２５５頁（１９８０年）、米国特許第４，７６７，７０４号；同第４，６５７，８６６号；同第４，９２７，７６２号；同第４，５６０，６５５号；もしくは同第５，１２２，４６９号；ＷＯ９０／０３４３０；ＷＯ８７／００１９５；または米国再発行特許（Ｕ．Ｓ．  Ｐａｔ．  Ｒｅ．）３０，９８５に記載されている培地のいずれかを宿主細胞のための培養培地として使用することができる。これらの培地のいずれも、ホルモンおよび／または他の増殖因子（インスリン、トランスフェリンまたは上皮増殖因子等）、塩（塩化ナトリウム、カルシウム、マグネシウムおよびリン酸塩等）、バッファー（ＨＥＰＥＳ等）、ヌクレオチド（アデノシンおよびチミジン等）、抗生物質（ＧＥＮＴＡＭＹＣＩＮ（商標）薬物等）、微量元素（マイクロモル濃度範囲内の最終濃度で通常存在する無機化合物として定義）ならびにグルコースまたは等価なエネルギー源を必要に応じて補充することができる。他のいずれかの補充物質が、当業者に公知の適切な濃度で含まれていてもよい。温度、ｐＨその他等、培養条件は、発現のために選択された宿主細胞により以前に使用された条件であり、当業者には明らかとなろう。
【０２１５】
ｉ）抗体の精製
組換え技法を使用する場合、抗体は、細胞内に産生することができる、あるいは培地に直接的に分泌することができる。抗体が、細胞内に産生される場合、第１のステップとして、宿主細胞または溶解された断片のあらゆる粒子状デブリは、例えば、遠心分離または限外濾過により除去することができる。抗体が、培地に分泌される場合、斯かる発現系から得た上清は、市販のタンパク質濃縮フィルター、例えば、ＡｍｉｃｏｎまたはＭｉｌｌｉｐｏｒｅ  Ｐｅｌｌｉｃｏｎ限外濾過ユニットを使用して先ず濃縮することができる。ＰＭＳＦ等、プロテアーゼ阻害剤が、タンパク質分解を阻害するために前述ステップのいずれかに含まれていてよく、抗生物質が、偶発的な夾雑物の成長を予防するために含まれていてよい。
【０２１６】
細胞から調製された抗体組成物は、例えば、ヒドロキシルアパタイトクロマトグラフィー、ゲル電気泳動、透析および親和性クロマトグラフィーを使用して精製することができ、親和性クロマトグラフィーが、簡便な技法である。親和性リガンドとしてのプロテインＡの適合性は、抗体に存在するいずれかの免疫グロブリンＦｃドメインの種およびアイソタイプに依存する。プロテインＡを使用して、ヒトγ１、γ２またはγ４重鎖に基づく抗体を精製することができる（Ｌｉｎｄｍａｒｋら、Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ６２巻：１〜１３頁（１９８３年））。プロテインＧは、全マウスアイソタイプおよびヒトγ３に推奨される（Ｇｕｓｓら、ＥＭＢＯ  Ｊ．５巻：１５６７  １５７５頁（１９８６年））。親和性リガンドが付着するマトリックスは、アガロースであってよいが、他のマトリックスも利用できる。ポア制御ガラスまたはポリ（スチレンジビニル）ベンゼン等、機械的に安定的なマトリックスは、アガロースにより達成され得るものよりも速い流速およびより短い処理時間を可能にする。抗体が、ＣＨ３ドメインを含む場合、Ｂａｋｅｒｂｏｎｄ  ＡＢＸ（商標）樹脂（Ｊ．Ｔ．Ｂａｋｅｒ、Ｐｈｉｌｌｉｐｓｂｕｒｇ、Ｎ．Ｊ．）が、精製に有用である。イオン交換カラムにおける分画、エタノール沈殿、逆相ＨＰＬＣ、シリカにおけるクロマトグラフィー、ヘパリンにおけるクロマトグラフィー、アニオンまたはカチオン交換樹脂（ポリアスパラギン酸カラム等）におけるＳＥＰＨＡＲＯＳＥ（商標）クロマトグラフィー、クロマトフォーカシング、ＳＤＳ−ＰＡＧＥおよび硫酸アンモニウム沈殿等、タンパク質精製のための他の技法も、回収しようとする抗体に応じて利用できる。
【０２１７】
任意の予備的精製ステップ（複数可）の後に、目的の抗体および夾雑物を含む混合物は、例えば、低塩濃度（例えば、約０〜０．２５Ｍ塩）で行われる約２．５〜４．５の間のｐＨの溶出バッファーを使用した低ｐＨ疎水性相互作用クロマトグラフィーにより、さらなる精製に付すことができる。
【０２１８】
一般に、研究、検査および臨床用途における使用のための抗体を調製するための様々な方法論は、本技術分野において十分に確立されており、上述の方法論と一貫しており、および／または当業者によって特定の目的の抗体に適切であると考慮される。
【０２１９】
非フコシル化抗体の産生
フコシル化の程度が低下した抗体を調製するための方法が本明細書に提供されている。例えば、本明細書において企図される方法として、タンパク質フコシル化が欠損した細胞株の使用（例えば、Ｌｅｃ１３  ＣＨＯ細胞、アルファ−１，６−フコシル基転移酵素遺伝子ノックアウトＣＨＯ細胞、β１，４−Ｎ−アセチルグルコサミン転移酵素ＩＩＩを過剰発現する細胞およびゴルジμ−マンノシダーゼＩＩをさらに過剰発現する細胞等）および抗体の産生に使用される細胞培養培地におけるフコースアナログ（複数可）の添加が挙げられるがこれらに限定されない。Ｒｉｐｋａら、Ａｒｃｈ．  Ｂｉｏｃｈｅｍ．  Ｂｉｏｐｈｙｓ．２４９巻：５３３〜５４５頁（１９８６年）；米国特許出願公開第２００３／０１５７１０８（Ａ１）号、Ｐｒｅｓｔａ，  Ｌ；ＷＯ２００４／０５６３１２（Ａ１）；Ｙａｍａｎｅ−Ｏｈｎｕｋｉら、Ｂｉｏｔｅｃｈ．  Ｂｉｏｅｎｇ．８７巻：６１４頁（２００４年）；および米国特許第８，５７４，９０７号を参照されたい。抗体のフコース含量を低下させるための追加的な技法は、米国特許出願公開第２０１２／０２１４９７５号に記載されているＧｌｙｍａｘｘ技術を含む。抗体のフコース含量を低下させるための追加的な技法は、抗体の産生に使用される細胞培養培地における１種または複数種のグリコシダーゼ阻害剤の添加も含む。グリコシダーゼ阻害剤は、α−グルコシダーゼＩ、α−グルコシダーゼＩＩおよびα−マンノシダーゼＩを含む。一部の実施形態において、グリコシダーゼ阻害剤は、α−マンノシダーゼＩの阻害剤である（例えば、キフネンシン）。
【０２２０】
本明細書において、「コアのフコシル化」は、Ｎ結合型グリカンの還元末端におけるＮ−アセチルグルコサミン（「ＧｌｃＮＡｃ」）へのフコースの付加（「フコシル化」）を指す。斯かる方法によって産生された抗体およびその組成物も提供される。
【０２２１】
一部の実施形態において、Ｆｃ領域（またはドメイン）に結合した複合Ｎ−グリコシド結合型糖鎖のフコシル化が低下する。本明細書において、「複合Ｎ−グリコシド結合型糖鎖」は、典型的に、アスパラギン２９７（Ｋａｂａｔの番号に従う）に結合されるが、複合Ｎ−グリコシド結合型糖鎖は、他のアスパラギン残基に連結されてもよい。「複合Ｎ−グリコシド結合型糖鎖」は、コア構造の非還元末端にマンノースのみが取り込まれた高マンノース型の糖鎖を除外するが、１）コア構造の非還元末端側が、ガラクトース−Ｎ−アセチルグルコサミン（「ｇａｌ−ＧｌｃＮＡｃ」とも称される）の１個または複数の分枝を有し、Ｇａｌ−ＧｌｃＮＡｃの非還元末端側が、シアル酸、二分Ｎ−アセチルグルコサミンその他を任意選択で有する複合型；または２）コア構造の非還元末端側が、高マンノースＮ−グリコシド結合型糖鎖および複合Ｎ−グリコシド結合型糖鎖の両方の分枝を有するハイブリッド型を含む。
【０２２２】
一部の実施形態において、「複合Ｎ−グリコシド結合型糖鎖」は、コア構造の非還元末端側が、ガラクトース−Ｎ−アセチルグルコサミン（「ｇａｌ−ＧｌｃＮＡｃ」とも称される）の０、１個または複数の分枝を有し、Ｇａｌ−ＧｌｃＮＡｃの非還元末端側が、シアル酸、二分Ｎ−アセチルグルコサミンその他等の構造を任意選択でさらに有する複合型を含む。
【０２２３】
本方法によると、典型的には、ごく微量のフコースが、複合Ｎ−グリコシド結合型糖鎖（複数可）に取り込まれる。例えば、様々な実施形態において、組成物中、抗体の約６０％未満、約５０％未満、約４０％未満、約３０％未満、約２０％未満、約１５％未満、約１０％未満、約５％未満または約１％未満が、フコースによりコアがフコシル化されている。一部の実施形態において、組成物中、抗体の実質的に全てが、フコースによりコアがフコシル化されていない（すなわち、約０．５％未満が、フコシル化されている）。一部の実施形態において、組成物中、抗体の約４０％超、約５０％超、約６０％超、約７０％超、約８０％超、約９０％超、約９１％超、約９２％超、約９３％超、約９４％超、約９５％超、約９６％超、約９７％超、約９８％超または約９９％超が、フコシル化されていない。
【０２２４】
一部の実施形態において、Ｎ−グリコシド結合型炭水化物鎖の実質的に全てが、フコース残基を含有しない（すなわち、約０．５％未満が、フコース残基を含有する）抗体が本明細書において提供される。一部の実施形態において、抗体重鎖の少なくとも１または２つがフコシル化されていない抗体が本明細書において提供される。
【０２２５】
上述の通り、種々の哺乳動物宿主−発現ベクター系を利用して、抗体を発現させることができる。一部の実施形態において、培養培地は、フコースを補充されない。一部の実施形態において、有効量のフコースアナログが、培養培地に添加される。この文脈において、「有効量」は、抗体の複合Ｎ−グリコシド結合型糖鎖へのフコース取り込みを、少なくとも約１０％、少なくとも約２０％、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％または少なくとも約５０％減少させるのに十分なアナログの量を指す。一部の実施形態において、本方法によって産生された抗体は、フコースアナログの非存在下で培養された宿主細胞から産生された抗体と比較した場合に、少なくとも約１０％、少なくとも約２０％、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％または少なくとも約５０％のコアがフコシル化されていないタンパク質（例えば、コアのフコシル化が欠如している）を含む。
【０２２６】
フコースが糖鎖の還元端におけるＮ−アセチルグルコサミンに結合されていない糖鎖、対、フコースが糖鎖の還元端におけるＮ−アセチルグルコサミンに結合されている糖鎖の含量（例えば、比）は、例えば、実施例に記載されている通りに決定することができる。他の方法は、ヒドラジン分解または酵素消化（例えば、Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｔｉｏｎ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ２３巻：Ｍｅｔｈｏｄ  ｆｏｒ  Ｓｔｕｄｙｉｎｇ  Ｇｌｙｃｏｐｒｏｔｅｉｎ  Ｓｕｇａｒ  Ｃｈａｉｎ（Ｊａｐａｎ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  Ｓｏｃｉｅｔｉｅｓ  Ｐｒｅｓｓ）、Ｒｅｉｋｏ  Ｔａｋａｈａｓｈｉ編集（１９８９年）を参照）、放出された糖鎖の蛍光標識または放射性同位元素標識と、続くクロマトグラフィーによる標識された糖鎖の分離を含む。また、放出された糖鎖の組成は、ＨＰＡＥＣ−ＰＡＤ方法によって鎖を解析することにより決定することができる（例えば、Ｊ．  Ｌｉｑ  Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒ．６巻：１５５７頁（１９８３年）を参照）（全般的には、米国特許出願公開第２００４／０１１０２８２号を参照）。
【０２２７】
Ｂ．本発明の組成物
一部の態様において、本明細書に記載されている抗シグレック−８抗体（例えば、シグレック−８に結合する抗体）または本明細書に記載されているアゴニストのいずれかを含む組成物（例えば、医薬組成物）も本明細書に提供される。一部の態様において、本明細書に記載されている抗シグレック−８抗体を含む組成物であって、抗体が、Ｆｃ領域と、Ｆｃ領域に連結されたＮ−グリコシド結合型炭水化物鎖とを含み、Ｎ−グリコシド結合型炭水化物鎖の約５０％未満が、フコース残基を含有する組成物が本明細書において提供される。一部の実施形態において、抗体は、Ｆｃ領域と、Ｆｃ領域に連結されたＮ−グリコシド結合型炭水化物鎖とを含み、Ｎ−グリコシド結合型炭水化物鎖の約４５％、約４０％、約３５％、約３０％、約２５％、約２０％または約１５％未満が、フコース残基を含有する。一部の態様において、本明細書に記載されている抗シグレック−８抗体を含む組成物であって、抗体が、Ｆｃ領域と、Ｆｃ領域に連結されたＮ−グリコシド結合型炭水化物鎖とを含み、Ｎ−グリコシド結合型炭水化物鎖の実質的に全てが、フコース残基を含有しない組成物が本明細書において提供される。
【０２２８】
任意選択の薬学的に許容されるキャリア、賦形剤または安定剤と、所望の程度の純度を有する活性成分とを混合することにより、貯蔵のための治療用製剤が調製される（Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ、第２０版、Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ  Ｗｉｌｌｉａｍｓ  ＆  Ｗｉｋｌｉｎｓ，  Ｐｕｂ．、Ｇｅｎｎａｒｏ編、Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ、Ｐａ．２０００年）。許容されるキャリア、賦形剤または安定剤は、用いられている投与量および濃度ではレシピエントに対し無毒性であり、バッファー、アスコルビン酸、メチオニン、ビタミンＥ、二亜硫酸ナトリウム含む抗酸化剤；保存料、等張化剤（ｉｓｏｔｏｎｉｃｉｆｉｅｒ）、安定剤、金属錯体（例えば、Ｚｎ−タンパク質錯体）；ＥＤＴＡ等のキレート剤および／または非イオン性界面活性剤を含む。
【０２２９】
特に、安定性がｐＨ依存性である場合、バッファーを使用して、治療上の有効性を最適化する範囲にｐＨを制御することができる。バッファーは、約５０ｍＭ〜約２５０ｍＭに及ぶ濃度で存在することができる。本発明による使用に適した緩衝剤は、有機および無機酸ならびにこれらの塩の両方を含む。例えば、クエン酸塩、リン酸塩、コハク酸塩、酒石酸塩、フマル酸塩、グルコン酸塩、シュウ酸塩、乳酸塩、酢酸塩である。その上、バッファーは、ヒスチジンおよびＴｒｉｓ等のトリメチルアミン塩で構成され得る。
【０２３０】
保存料を添加して微生物の成長を予防することができ、これは典型的には、約０．２％〜１．０％（ｗ／ｖ）の範囲内で存在する。本発明による使用に適した保存料は、オクタデシルジメチルベンジル塩化アンモニウム；塩化ヘキサメトニウム；ハロゲン化ベンザルコニウム（例えば、塩化物、臭化物、ヨウ化物）、塩化ベンゼトニウム；チメロサール、フェノール、ブチルまたはベンジルアルコール；メチルまたはプロピルパラベン等のアルキルパラベン；カテコール；レゾルシノール；シクロヘキサノール、３−ペンタノールおよびｍ−クレゾールを含む。
【０２３１】
「安定剤」として公知の場合もある等張化剤は、組成物における液体の張度を調整または維持するために存在することができる。タンパク質および抗体等、大型の荷電生体分子と共に使用される場合、これは、アミノ酸側鎖の荷電基と相互作用し、これにより、分子間および分子内相互作用の可能性を減らすことができるため、多くの場合「安定剤」と命名される。等張化剤は、他の成分の相対量を考慮に入れつつ、約０．１％〜約２５重量％の間または約１〜約５重量％の間のいずれかの量で存在することができる。一部の実施形態において、等張化剤は、グリセリン、エリスリトール、アラビトール、キシリトール、ソルビトールおよびマンニトール等、多価糖アルコール、三価またはより高次の糖アルコールを含む。
【０２３２】
追加的な賦形剤は、次のうち１種または複数として機能し得る薬剤を含む：（１）増量剤、（２）溶解促進剤（ｓｏｌｕｂｉｌｉｔｙ  ｅｎｈａｎｃｅｒ）、（３）安定剤および（４）変性または容器壁への接着を予防する薬剤。斯かる賦形剤は、次のものを含む：多価糖アルコール（上に列挙）；アラニン、グリシン、グルタミン、アスパラギン、ヒスチジン、アルギニン、リシン、オルニチン、ロイシン、２−フェニルアラニン、グルタミン酸、スレオニン等、アミノ酸；スクロース、ラクトース、ラクチトール、トレハロース、スタキオース、マンノース、ソルボース、キシロース、リボース、リビトール、ミオイニシトース（ｍｙｏｉｎｉｓｉｔｏｓｅ）、ミオイノシトール（ｍｙｏｉｎｉｓｉｔｏｌ）、ガラクトース、ガラクチトール、グリセロール、シクリトール（例えば、イノシトール）、ポリエチレングリコール等、有機糖または糖アルコール；尿素、グルタチオン、チオクト酸、チオグリコール酸ナトリウム、チオグリセロール、α−モノチオグリセロールおよびチオ硫酸ナトリウム等、含硫還元剤；ヒト血清アルブミン、ウシ血清アルブミン、ゼラチンまたは他の免疫グロブリン等、低分子量タンパク質；ポリビニルピロリドン等、親水性ポリマー；単糖（例えば、キシロース、マンノース、フルクトース、グルコース）；二糖（例えば、ラクトース、マルトース、スクロース）；ラフィノース等、三糖；ならびにデキストリンまたはデキストラン等、多糖。
【０２３３】
非イオン性界面活性剤または洗剤（「湿潤剤」としても公知）は、治療剤の可溶化を助けると共に、撹拌誘導性凝集から治療タンパク質を保護するために存在することができ、これは、活性治療タンパク質または抗体の変性を引き起こすことなく、製剤をせん断表面応力に曝露させることもできる。非イオン性界面活性剤は、約０．０５ｍｇ／ｍｌ〜約１．０ｍｇ／ｍｌまたは約０．０７ｍｇ／ｍｌ〜約０．２ｍｇ／ｍｌの範囲内で存在する。一部の実施形態において、非イオン性界面活性剤は、約０．００１％〜約０．１％ｗ／ｖまたは約０．０１％〜約０．１％ｗ／ｖまたは約０．０１％〜約０．０２５％ｗ／ｖの範囲内で存在する。
【０２３４】
適した非イオン性界面活性剤は、ポリソルベート（２０、４０、６０、６５、８０等）、ポロクサマー（ｐｏｌｙｏｘａｍｅｒ）（１８４、１８８等）、ＰＬＵＲＯＮＩＣ（登録商標）ポリオール、ＴＲＩＴＯＮ（登録商標）、ポリオキシエチレンソルビタンモノエーテル（ＴＷＥＥＮ（登録商標）−２０、ＴＷＥＥＮ（登録商標）−８０等）、ラウロマクロゴール４００、ステアリン酸ポリオキシル４０、ポリオキシエチレン水素付加ヒマシ油１０、５０および６０、グリセロールモノステアレート、スクロース脂肪酸エステル、メチルセルロース（ｃｅｌｌｕｏｓｅ）ならびにカルボキシメチルセルロースを含む。使用することができるアニオン性洗剤は、ラウリル硫酸ナトリウム、スルホコハク酸ジオクチルナトリウムおよびスルホン酸ジオクチルナトリウムを含む。カチオン性洗剤は、塩化ベンザルコニウムまたは塩化ベンゼトニウムを含む。
【０２３５】
製剤は、ｉｎ  ｖｉｖｏ投与に使用するためには、無菌でなければならない。製剤は、滅菌濾過膜を通した濾過により滅菌することができる。本明細書における治療用組成物は一般に、無菌アクセスポートを有する容器、例えば、静脈内溶液バッグまたは皮下注射針により穿刺可能な共栓を有するバイアルに入れられる。
【０２３６】
投与の経路は、適した方式での長期間に及ぶ単一または複数のボーラスまたは注入、例えば、皮下、静脈内、腹腔内、筋肉内、動脈内、病巣内もしくは関節内経路による注射または注入、局所的投与、吸入または徐放もしくは延長放出手段による等、公知かつ受け入れられた方法に従う。
【０２３７】
本明細書における製剤は、処置されている特定の適応症の必要に応じて、１種より多くの活性化合物、好ましくは、互いに有害な影響を与えない相補的な活性を有する化合物を含有することもできる。その代わりにまたはその上、組成物は、細胞傷害性薬剤、サイトカイン（例えば、インターフェロン−α）、成長阻害性薬剤、タンパク質キナーゼ阻害剤（例えば、ミドスタウリン等のチロシンキナーゼ阻害剤）、副腎皮質ステロイド、抗体（例えば、リツキシマブ）または抗がん剤（例えば、クラドリビン等の代謝拮抗薬）のうち１種または複数種を含むことができる。このような活性化合物は、意図される目的に有効な量で組み合わされて適切に存在する。
【０２３８】
ＩＩＩ．製造品またはキット
別の態様では、本明細書に記載されている抗シグレック−８抗体（例えば、ヒトシグレック−８に結合する抗体）または本明細書に記載されているアゴニストを含む製造品またはキットが提供される。製造品またはキットは、本発明の方法における抗体またはアゴニストの使用のための指示をさらに含むことができる。よって、ある特定の実施形態では、製造品またはキットは、個体における進行性全身性肥満細胞症を処置または予防するための方法であって、個体に、抗シグレック−８抗体またはヒトシグレック−８に結合するアゴニストの有効量を投与するステップを含む方法における、抗シグレック−８抗体またはヒトシグレック−８に結合するアゴニストの使用のための指示を含む。ある特定の実施形態では、製造品は、ヒトシグレック−８に結合する抗体またはアゴニストを含む医薬と、進行性全身性肥満細胞症を処置または予防するための、該医薬の投与を必要とする個体における該医薬の投与のための指示を含む添付文書とを含む。一部の実施形態では、進行性全身性肥満細胞症は、侵襲性全身性肥満細胞症（ＡＳＭ）、肥満細胞白血病（ＭＣＬ）および非肥満細胞性血液腫瘍性疾患関連全身性肥満細胞症（ＳＭ−ＡＨＮＭＤ）からなる群から選択される。一部の実施形態では、ＳＭ−ＡＨＮＭＤは、ＳＭ−骨髄異形成症候群（ＳＭ−ＭＤＳ）、ＳＭ−骨髄増殖性新生物（ＳＭ−ＭＰＮ）、ＳＭ−慢性骨髄単球性白血病（ＳＭ−ＣＭＭＬ）、ＳＭ−慢性好酸球性白血病（ＳＭ−ＣＥＬ）およびＳＭ−急性骨髄性白血病（ＳＭ−ＡＭＬ）からなる群から選択される。一部の実施形態では、進行性全身性肥満細胞症は、好酸球増加症に関連する。一部の実施形態では、進行性全身性肥満細胞症は、クラドリビン、インターフェロン−α、副腎皮質ステロイド、チロシンキナーゼ阻害剤またはこれらの組合せによって適切に制御されない。一部の実施形態では、個体は、ＫＩＴに変異を有する。一部の実施形態では、個体は、ＫＩＴ  Ｄ８１６Ｖ変異を有する。一部の実施形態では、添付文書は、処置が、抗体またはアゴニストを含む医薬の投与前のベースラインレベルと比較して、個体から得られる試料におけるシグレック−８を発現する肥満細胞の少なくとも約２０％の枯渇において有効であることをさらに示す。一部の実施形態では、試料は、組織試料または生体液である。一部の実施形態では、生体液試料は、血液または尿である。一部の実施形態では、組織試料は、皮膚または骨髄である。一部の実施形態では、添付文書は、処置が、医薬の投与前のベースラインレベルと比較して、進行性全身性肥満細胞症を有する個体における１つまたは複数の症状の低下において有効であることをさらに示す。一部の実施形態では、個体は、抗体またはアゴニストを含む医薬の投与前に、進行性全身性肥満細胞症と診断される。ある特定の実施形態では、個体は、ヒトである。
【０２３９】
製造品またはキットは、容器をさらに含むことができる。適した容器は、例えば、ボトル、バイアル（例えば、デュアルチャンバーバイアル）、シリンジ（シングルまたはデュアルチャンバーシリンジ等）および試験管を含む。容器は、ガラスまたはプラスチック等、種々の材料でできていてよい。容器は、製剤を保持する。
【０２４０】
製造品またはキットは、容器上にあるかまたは容器に付随する、製剤の再構成および／または使用に関する指示を示すことができるラベルまたは添付文書をさらに含むことができる。ラベルまたは添付文書は、製剤が、個体における進行性全身性肥満細胞症を処置または予防するための、皮下、静脈内または他の投与機序に有用であるまたはこれらが意図されることをさらに示すことができる。製剤を保持する容器は、使い捨てバイアルであっても多重使用バイアルであってもよく、これは、再構成された製剤の反復投与を可能にする。製造品またはキットは、適した希釈液を含む第２の容器をさらに含むことができる。製造品またはキットは、他のバッファー、希釈液、フィルター、針、シリンジおよび添付文書と使用指示を含む、商業的、治療的および使用者の見地から望ましい他の材料をさらに含むことができる。
【０２４１】
具体的な実施形態において、本発明は、単一用量投与単位のためのキットを提供する。斯かるキットは、シングルまたはマルチチャンバーの両方の予め充填されたシリンジを含む、治療抗体の水性製剤の容器を含む。例示的な予め充填されたシリンジは、Ｖｅｔｔｅｒ  ＧｍｂＨ、ドイツ、ラーフェンスブルクから入手できる。
【０２４２】
別の実施形態において、自動注射装置における投与のための、本明細書に記載されている製剤を含む製造品またはキットが本明細書において提供される。自動注射器は、起動すると、患者または管理者の追加的な必要な動作なしでその内容物を送達する注射装置として説明することができる。送達速度が一定でなければならず、送達時間が僅かな間よりも長い場合、これは、治療用製剤のセルフメディケーションに特に適する。
【０２４３】
別の態様において、本明細書に記載されている抗シグレック−８抗体（例えば、ヒトシグレック−８に結合する抗体）または本明細書に記載されているアゴニストを含む製造品またはキットが提供される。製造品またはキットは、本発明の方法における抗体またはアゴニストの使用のための指示をさらに含むことができる。よって、ある特定の実施形態では、製造品またはキットは、個体における進行性全身性肥満細胞症を処置または予防するための方法であって、個体に、抗シグレック−８抗体またはヒトシグレック−８に結合するアゴニストの有効量を投与するステップを含む方法における、抗シグレック−８抗体またはヒトシグレック−８に結合するアゴニストの使用のための指示を含む。ある特定の実施形態では、製造品またはキットは、ヒトシグレック−８に結合する抗体またはアゴニストを含む医薬と、進行性全身性肥満細胞症を処置または予防するための、該医薬の投与を必要とする個体における該医薬の投与のための指示を含む添付文書とを含む。
【０２４４】
本発明は、個体における進行性全身性肥満細胞症を処置または予防するための、１種または複数種の追加的な医薬（例えば、第２の医薬）と組み合わせた、本明細書に記載されている抗シグレック−８抗体（例えば、ヒトシグレック−８に結合する抗体）または本明細書に記載されているアゴニストを含む製造品またはキットも提供する。製造品またはキットは、本発明の方法における、１種または複数種の追加的な医薬と組み合わせた抗体またはアゴニストの使用のための指示をさらに含むことができる。例えば、本明細書における製造品またはキットは、任意選択で、第２の医薬を含む容器をさらに含み、この場合、抗シグレック−８抗体またはアゴニストが、第１の医薬であり、この製造品またはキットは、ラベルまたは添付文書に、有効量の第２の医薬で個体を処置するための指示をさらに含む。よって、ある特定の実施形態では、製造品またはキットは、個体における進行性全身性肥満細胞症を処置または予防するための方法における、１種または複数種の追加的な医薬と組み合わせた抗シグレック−８抗体またはヒトシグレック−８に結合するアゴニストの使用のための指示を含む。ある特定の実施形態では、製造品またはキットは、ヒトシグレック−８に結合する抗体またはアゴニストを含む医薬（例えば、第１の医薬）と、１種または複数種の追加的な医薬と、１種または複数種の追加的な医薬（例えば、第２の医薬）と組み合わせた第１の医薬の投与のための指示を含む添付文書とを含む。一部の実施形態では、１種または複数種の追加的な医薬は、細胞傷害性薬剤、サイトカイン（例えば、インターフェロン−α）、成長阻害性薬剤、タンパク質キナーゼ阻害剤（例えば、ミドスタウリン等のチロシンキナーゼ阻害剤）、副腎皮質ステロイド、抗体（例えば、リツキシマブ）または抗がん剤（例えば、クラドリビン等の代謝拮抗薬）である。
【０２４５】
本明細書に記載されている態様および実施形態は、単なる説明目的のものであり、これを踏まえた様々な修正または変更が、当業者に示唆され、これが本願の精神および範囲内ならびに添付の特許請求の範囲内に含まれるべきであることが理解される。
【０２４６】
本発明は、次の実施例を参照することによって、より十分に理解されるであろう。しかし、実施例は、本発明の範囲を限定するものと解釈するべきではない。本明細書に記載されている実施例および実施形態が、単なる説明目的であり、これを踏まえた様々な修正または変更が、当業者に示唆され、本願および添付の特許請求の範囲の精神および範囲内に含まれるべきであることが理解される。
【実施例】
【０２４７】
（実施例１）
全身性肥満細胞症患者由来の細胞における抗シグレック−８抗体のＩｎ  ｖｉｔｒｏ活性
全身性肥満細胞症（ＳＭ）を有する個体由来の血液および骨髄試料における抗シグレック−８抗体の活性を調査した。
【０２４８】
材料と方法
抗体
本研究において使用された抗シグレック−８抗体は、ＩｇＧ４アイソタイプを有するヒト化抗体（本明細書において「抗体１」と称される）、抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）活性を増強する目的のため非フコシル化ＩｇＧ１κ定常領域を有するように操作されたヒト化抗体（本明細書において「抗体２」と称される）、およびＡｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ（登録商標）６４７にコンジュゲートされた、ＩｇＧ１κアイソタイプを有するマウス抗体（本明細書において「マウス１Ｈ１０抗体」と称される）を含んだ（表６）。ヒト細胞のｉｎ  ｖｉｔｒｏ特徴付けに使用された抗体は、表７に見出すことができる。
【表６】
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【表７】
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【０２４９】
末梢血白血球およびナチュラルキラー細胞の単離
全身性肥満細胞症患者から、新鮮なヒト血液（ヘパリンナトリウムで抗凝固処理）を得た。製造業者の指示に従って、１×ＲＢＣ溶解バッファー（ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ、００−４３００−５４）における２ラウンドの赤血球（ＲＢＣ）溶解により血液を処理した。末梢血白血球（ＰＢＬ）細胞ペレットを、５０ｍＬリン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）で２回洗浄し、遠心分離し、１０％ウシ胎仔血清を含有するＲＰＭＩ−１６４０、１０ｍＬに懸濁し、４０μｍナイロンフィルターに通した。白血球を計数した。ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞単離キット（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ  Ｂｉｏｔｅｃｈ、＃１３０−０９２−６５７）を使用して、全身性肥満細胞症患者の末梢血細胞からＮＫ細胞をさらに単離した。富化された集団を計数し、１０％ウシ胎仔血清を含有するＲＰＭＩ−１６４０に懸濁した。
【０２５０】
全身性肥満細胞症患者骨髄吸引物からの細胞の単離および肥満細胞のＣＤ１１７＋富化
全身性肥満細胞症患者から、新鮮なヒト骨髄吸引物（ヘパリンナトリウムで抗凝固処理）を得た。製造業者の指示に従って、１×ＲＢＣ溶解バッファー（ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ、００−４３００−５４）における１ラウンドの赤血球（ＲＢＣ）溶解により、骨髄吸引物を処理した。細胞ペレットを、５０ｍＬリン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）で２回洗浄し、遠心分離し、１０％ウシ胎仔血清（ＦＣＳ）を含有するＲＰＭＩ−１６４０、１０ｍＬに懸濁し、４０μｍナイロンフィルターに通した。細胞を計数した。肥満細胞富化が行われる試料では、精製された細胞は、代わりに１００ｎｇ／ｍｌ  ｒｈＳＣＦ（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ、２５５−ＳＣ）を含有するＰＢＳ、５ｍＬに懸濁した。細胞を計数し、製造業者の指示に従ったＣＤ１１７マイクロビーズキット（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ  Ｂｉｏｔｅｃｈ、＃１３０−０９１−３３２）による正の選択によって、ＣＤ１１７＋高肥満細胞を富化した。富化された集団を計数し、１０％ウシ胎仔血清（ＦＣＳ）を含有し、１００ｎｇ／ｍｌ  ｒｈＳＣＦを含有するＲＰＭＩ−１６４０に懸濁した。
【０２５１】
シグレック−８発現Ｒａｍｏｓ細胞株の生成
ＡＤＣＣおよび補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）活性に対し感受性があるヒトＢ細胞の細胞株であるＲａｍｏｓに全長シグレック−８をトランスフェクトして、シグレック−８を発現する安定にトランスフェクトされた細胞株を生成した。シグレック−８の均一で安定した発現を有するクローン（２Ｃ１０）を同定した（本明細書において「Ｒａｍｏｓ  ２Ｃ１０標的細胞」と称される）。Ｒａｍｏｓ  ２Ｃ１０標的細胞は、細胞当たりおよそ５１，０００個のシグレック−８分子を発現した。
【０２５２】
全身性肥満細胞症患者由来のＰＢＬを使用した、シグレック−８＋標的細胞に対する非フコシル化抗シグレック−８抗体誘導性ＡＤＣＣ枯渇アッセイ
患者血液から単離されたＰＢＬを、１０％ＦＣＳを含有する１００μＬ培地中ウェル当たり５×１０５個の細胞で９６ウェルプレート（Ｆａｌｃｏｎ、３５３０７７）に播種した。肥満細胞と同様のレベルでシグレック−８を発現するシグレック−８トランスフェクトＲａｍｏｓ細胞（Ｒａｍｏｓ  ２Ｃ１０標的細胞）を、ウェル当たり５×１０４個の細胞で添加した（エフェクター：標的細胞比１０：１）。非フコシル化（fuscosylated）ヒト化抗シグレック−８抗体（抗体２）またはヒトＩｇＧ１アイソタイプ対照抗体を培地に希釈し、１０μｇ／ｍＬから１ｐｇ／ｍＬの１０倍希釈系列で細胞に添加した。細胞を４８時間、３７℃、５％ＣＯ２中でインキュベートした。プレートを３００ｇで２分間遠心分離し、上清を除去した。フローサイトメトリー解析のために細胞を、蛍光活性化細胞選別（ＦＡＣＳ）バッファーにおいて、Ｒａｍｏｓ細胞のマーカーであるＣＤ２０に結合する抗体と、生存判別色素７−アミノアクチノマイシンＤ（７−ＡＡＤ）で４℃にて２０分間染色した（表７を参照）。次に、プレートを３００ｇで２分間遠心分離し、上清を除去した。細胞をＰＢＳ中の１％パラホルムアルデヒドに懸濁し、ＦＡＣＳ  Ｃａｌｉｂｕｒ機器（Ｂｅｃｔｏｎ、Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ  ａｎｄ  Ｃｏｍｐａｎｙ）においてフローサイトメトリーによって解析した。ヒトＩｇＧ１アイソタイプ対照と比較した、非フコシル化（fuscosylated）ヒト化抗シグレック−８抗体（抗体２）の存在下におけるＣＤ２０＋、ＳＳＣ／ＦＳＣｈｉＲａｍｏｓ  ２Ｃ１０標的細胞の喪失によって、Ｒａｍｏｓ  ２Ｃ１０標的細胞枯渇を測定した。
【０２５３】
結果
７名の全身性肥満細胞症患者由来の骨髄または血液試料が解析に含まれた（ＳＳＭ、ｎ＝１；ＡＳＭ、ｎ＝１；およびＳＭ−ＡＨＮＭＤ、ｎ＝５（サブタイプはＳＭ−ＣＭＭＬ、ｎ＝３；ＳＭ−ＭＤＳ、ｎ＝１；ＳＭ−ＣＥＬ、ｎ＝１））。各全身性肥満細胞症患者の人口統計学的および臨床的特色は、骨髄および血液試料を得たときに取得した（表８）。全身性肥満細胞症研究集団における全患者が白人であった。６名の患者がＫＩＴ  Ｄ８１６Ｖ陽性であった。試料収集のときに、処置は、ミドスタウリン（ｎ＝２）；クラドリビン（ｎ＝１）；副腎皮質ステロイド（ｎ＝１）を含んでおり；３名の患者は、いかなる生物学的または細胞減少性療法も受けていなかった。
【表８】
2018533569.tif 000026
【０２５４】
各全身性肥満細胞症患者（ＪＧ０１〜ＪＧ０５）由来の抗凝固処理された骨髄吸引物は、溶解によってＲＢＣを排除し、ＣＤ１１７、ＦｃεＲ１α／ＩｇＥＲ、ＣＤ４５およびシグレック−８（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ、クローン：８３７５３５）またはＣＤ１１７、ＦｃεＲ１α／ＩｇＥＲおよびＣＤ２５に対する抗体のカクテルで、残存する白血球を標識した。フローサイトメトリーによって試料を評価し、肥満細胞の表面におけるシグレック−８発現を決定した。骨髄における肥満細胞は、ＣＤ１１７受容体（ＣＤ１１７＋）およびＩｇＥのＦｃ断片の高親和性Ｉ受容体アルファポリペプチドＦｃεＲ１α（ＩｇＥＲ＋）の存在によって特徴付けた。患者毎にＣＤ１１７＋ＩｇＥＲ＋肥満細胞のパーセンテージを得て、このような肥満細胞をシグレック−８発現の解析に関してゲーティングした（図１Ａ〜図１Ｅ、患者毎に左パネル）。シグレック−８（図１Ａ〜図１Ｅ、患者毎に中央パネル）およびＣＤ２５（図１Ａ〜図１Ｅ、患者毎に右パネル）の発現を、肥満細胞（ＣＤ１１７＋ＩｇＥＲ＋）における適合されたアイソタイプ対照抗体と比較して評価した。全骨髄試料が、検出可能なＣＤ１１７＋肥満細胞を示した。全ての生存可能な肥満細胞（ＣＤ１１７＋ＩｇＥＲ＋）の表面において、高レベルのシグレック−８発現が確認された（図１Ａ〜図１Ｅ、患者毎に中央パネル）。全身性肥満細胞症患者の骨髄由来の肥満細胞におけるシグレック−８の発現レベルは、初代ヒト皮膚から単離された肥満細胞におけるシグレック−８の発現レベルに匹敵した、またはこれよりも高かった（図２）。肥満細胞不死細胞株またはｉｎ  ｖｉｔｒｏで分化した肥満細胞におけるシグレック−８の発現レベルは、ヒトから直接的に単離された初代肥満細胞におけるシグレック−８の発現レベルよりも実質的に低かった（図２）。異なる治療を受けているまたは治療を受けていない患者の間で、シグレック−８発現における差は観察されなかった。
【０２５５】
非フコシル化ヒト化抗シグレック−８抗体に会合する全身性肥満細胞症患者由来のＮＫ細胞の能力を評価した。全身性肥満細胞症患者（ＪＧ０３、ＪＧ０４、ＪＧ０５およびＪＧ０６）由来のＰＢＬ、または全身性肥満細胞症患者（ＪＧ０１）由来の骨髄吸引物を、１μｇ／ｍＬの蛍光色素標識された非フコシル化ヒト化抗シグレック−８抗体またはアイソタイプ適合した抗体、ならびにＣＤ１６およびＣＤ５６に対する蛍光色素標識された抗体と共にインキュベートした。次に、細胞をＦＡＣＳによって評価した。骨髄またはＰＢＬ中のＮＫ細胞（ＣＤ１６＋ＣＤ５６＋ＳＳＣｌｏｗ）のパーセンテージを、検査した各患者から得て、ＮＫ細胞に結合する非フコシル化ヒト化抗シグレック−８抗体またはアイソタイプ適合した抗体の解析のため、このようなＮＫ細胞をゲーティングした。患者ＪＧ０１の骨髄中のＮＫ細胞（ＣＤ１６＋ＣＤ５６＋ＳＳＣｌｏｗ）のパーセンテージは、１．３％であった。患者ＪＧ０３、ＪＧ０４、ＪＧ０５およびＪＧ０６のＰＢＬ中のＮＫ細胞（ＣＤ１６＋ＣＤ５６＋ＳＳＣｌｏｗ）のパーセンテージは、それぞれ１．７％、１．４％、４．３％および６．０％であった。全身性肥満細胞症患者由来のＮＫ細胞に、非フコシル化ヒト化抗シグレック−８抗体が会合した（図３Ａ〜図３Ｅ）。
【０２５６】
ＡＤＣＣ活性は、一部のがん患者において欠損していることが報告されている。Marcondesら、PNAS、２００８年、１０５巻：２８６５〜２８７０頁；Kiladjianら、Leukemia、２００６年、２０巻：４６３〜４７０頁；Pahlら、Immunobiology、２０１５年、ｄｏｉ：10.1016/j.imbio.2015.07.012；およびChengら、Cell.  Mol.  Immunol.、２０１３年、１０巻：２３０〜２５２頁、２０１３年を参照されたい。全身性肥満細胞症患者が、インタクトなＡＤＣＣ機能を有するかどうかは不明である。全身性肥満細胞症患者においてＡＤＣＣを誘導する非フコシル化ヒト化抗シグレック−８抗体（抗体２）の能力を評価するために、シグレック−８トランスフェクト標的細胞株、Ｒａｍｏｓ  ２Ｃ１０標的細胞株を使用したアッセイを開発した。ＡＤＣＣ活性に対し感受性があるヒトＢ細胞株であるＲａｍｏｓ細胞から、Ｒａｍｏｓ  ２Ｃ１０標的細胞株を生成した。エフェクター細胞として末梢血白血球を使用して、１μｇ／ｍＬの非フコシル化（fuscosylated）ヒト化抗シグレック−８抗体（抗体２）は、全身性肥満細胞症患者由来のＰＢＬ調製物においてインキュベートした場合、Ｒａｍｏｓ  ２Ｃ１０標的細胞株の強力な枯渇を示し、これは、ＡＤＣＣ媒介性殺滅と一致した。ＡＤＣＣは、検査した全５種の試料において観察された（図４Ａ）。増加量の非フコシル化（fuscosylated）ヒト化抗シグレック−８抗体（抗体２）の用量設定を、２名の患者由来の試料において行った。患者ＪＧ０３および患者ＪＧ０４由来の試料において強力なＡＤＣＣ活性が観察され、それぞれ４９ｎｇ／ｍＬ（図４Ｂ）および６５ｎｇ／ｍＬ（図４Ｃ）の抗シグレック−８抗体の、標的枯渇に対するＥＣ５０を有した。
【０２５７】
肥満細胞における非フコシル化ヒト化抗シグレック−８抗体のＡＤＣＣ活性を評価した。ＣＤ１１７標的化磁気ビーズを利用して、患者ＪＧ０１および患者ＪＧ０７の骨髄吸引物由来の肥満細胞を富化した。富化された肥満細胞を、精製したＮＫエフェクター細胞の存在下で、１μｇ／ｍＬの濃度のアイソタイプ適合した（アイソタイプ）または非フコシル化ヒト化抗シグレック−８抗体（抗体２）のいずれかで処理した。肥満細胞における有意な抗シグレック−８媒介性ＡＤＣＣ活性が観察され、非自家ＮＫ細胞を使用して６９％平均低下（図５Ａ）であり、または自家ＮＫ細胞を使用して７６％平均低下（図５Ｂ）であり、非フコシル化ヒト化抗シグレック−８抗体が、これらの患者において肥満細胞負荷を低下させる潜在力を有することが示された。
【０２５８】
【化９−１】
2018533569.tif 000027
【化９−２】
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【化９−３】
2018533569.tif 000029
【化９−４】
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【化９−５】
2018533569.tif 000031
【化９−６】
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【化９−７】
2018533569.tif 000033
【化９−８】
2018533569.tif 000034
【図１Ａ−Ｃ】
2018533569.tif 000035
【図１Ｄ−Ｅ】
2018533569.tif 000036
【図２】
2018533569.tif 000037
【図３】
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【図４】
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【図５】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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2018533569.tif 000042
2018533569.tif 000043
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