(57)【要約】  本発明はイエダニ寄生を処置または防止する方法に関し、前記方法は、イエダニ寄生場所、またはそこに近接する場所、またはこのような寄生の危険性がある場所に、殺ダニ性感染作用物質を適用することを含む。また、殺ダニ性感染作用物質の使用、殺ダニ性感染作用物質を単離する方法、前記方法によって得られる殺ダニ性感染作用物質、殺ダニ性感染作用物質製剤、それを含む食糧およびダニ誘引剤も包含される。【選択図】図１
2018522074.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
イエダニ寄生を処置または防止する方法であって、イエダニ寄生場所、またはそこに近接する場所、またはこのような寄生の危険性がある場所に、殺ダニ性感染作用物質を適用することを含む方法。
【請求項２】
イエダニ由来アレルゲンの濃度の増大を防止するための殺ダニ性感染作用物質の使用。
【請求項３】
イエダニ由来アレルゲンによって引き起こされる、または増悪される状態（例えば、喘息、アレルギー性鼻炎、皮膚炎、湿疹またはこれらの組み合わせを含む（しかし、これらに限定されない））を防止または処置するための、殺ダニ性感染作用物質の使用。
【請求項４】
イエダニ由来アレルゲンに対する被験者の感作を防止または低減するための殺ダニ性感染作用物質の使用。
【請求項５】
２つ以上の前記感染作用物質の使用を含む、請求項１〜４のいずれか一項に記載の方法または使用。
【請求項６】
前記イエダニが、以下の属：デルマトファゴイデス（Dermatophagoides）属、エウログリフス（Euroglyphus）属またはこれらの組み合わせから選択される１つまたは複数である、請求項１〜５のいずれか一項に記載の方法または使用。
【請求項７】
前記イエダニが、以下の種：デルマトファゴイデス・プテロニシヌス（Dermatophagoides pteronissynus）、デルマトファゴイデス・ファリナエ（Dermatophagoides farinae）、デルマトファゴイデス・ミクロセラス（Dermatophagoides microceras）およびデルマトファゴイデス・シボネイ（Dermatophagoides siboney）、エウログリフス・マイネイ（Euroglyphus maynei）またはこれらの組み合わせから選択される１つまたは複数である、請求項１〜６のいずれか一項に記載の方法または使用。
【請求項８】
前記殺ダニ性感染作用物質が、ウイルス、細菌（例えば、前記細菌は、分泌タンパク毒素によって殺ダニ効果を発揮するバチルス・チューリンゲンシス（Bacillus thuringiensis）、バチルス・スファエリクス（Bacillus sphaericus）、および／またはこれらの変異体もしくは誘導体でないことを条件とする）、真菌、原生動物またはこれらの組み合わせである、請求項１〜７のいずれか一項に記載の方法または使用。
【請求項９】
前記殺ダニ性感染作用物質が細菌である、請求項１〜８のいずれか一項に記載の方法または使用。
【請求項１０】
前記殺ダニ性感染作用物質がバキュロウイルス（Baculoviridae）科のウイルスである、請求項１〜９のいずれか一項に記載の方法または使用。
【請求項１１】
前記殺ダニ性感染作用物質が、ビューベリア（Beauveria）属、微胞子虫門（Microspora）、またはこれらの組み合わせの真菌である、請求項１〜１０のいずれか一項に記載の方法または使用。
【請求項１２】
前記殺ダニ性感染作用物質が、ビューベリア・バシアナ（Beauveria bassiana）種、ビューベリア・ブロングニアルティ（Beauveria brongniartii）種またはこれらの組み合わせの真菌である、請求項１〜１１のいずれか一項に記載の方法または使用。
【請求項１３】
前記殺ダニ性感染作用物質が２つ以上のイエダニ種に感染する、請求項１〜１２のいずれか一項に記載の方法または使用。
【請求項１４】
前記感染作用物質が、家庭、工業、農業または医療の設定／環境に適用される、請求項１および５〜１３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１５】
殺ダニ性感染作用物質を単離するための方法であって、
ａ．ｉ．試験サンプルから提供される候補イエダニまたはその抽出物、および
ｉｉ．標的イエダニまたはその細胞培養物
を混合することにより混合物を形成することと、
ｂ．前記標的イエダニまたはその細胞培養物を有害な病理学的変化の存在または不在についてモニターすることと、
ｃ．有害な病理学的変化の存在が観察されたときに、前記混合物もしくは試験サンプルからまたはその構成要素から、殺ダニ性感染作用物質を単離することと
を含む方法。
【請求項１６】
請求項１５に記載の方法によって得ることができる（例えば、得られた）殺ダニ性感染作用物質であって、好ましくは単離された殺ダニ性感染作用物質。
【請求項１７】
乾燥製剤または液体製剤に配合された殺ダニ性感染作用物質。
【請求項１８】
前記乾燥製剤が固体（好ましくは、粉末）またはペーストである、請求項１７に記載の殺ダニ性感染作用物質。
【請求項１９】
前記感染作用物質がマイクロカプセル化される、請求項１７または１８に記載の殺ダニ性感染作用物質。
【請求項２０】
殺ダニ性感染作用物質（例えば、請求項１６〜１９のいずれか一項に記載の殺ダニ性感染作用物質）を含む食糧またはダニ誘引剤。
【請求項２１】
前記食糧が、肝臓フレーク、ペットフード、酵母および／または小麦粉、ダニ、ダニ物質、死んだダニの死骸、またはこれらの組み合わせを含む、請求項２０に記載の食糧。
【請求項２２】
実質的に実施例および図面に関連して本明細書中に記載されるような方法、使用、殺ダニ性感染作用物質、食糧、またはダニ誘引剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、殺ダニ性感染作用物質と、イエダニ防除におけるその使用とに関する。
【背景技術】
【０００２】
分類学的なクモ（Arachnida）綱は、ダニ（アカリフォルメス（Acariformes）目）およびクモ（アラネアエ（Araneae）目）などの様々な節足動物を包含する。
【０００３】
喘息は、呼吸器系内のアレルギー反応および刺激作用によって引き起こされる慢性疾患である。イエダニは、感作および急性発作の誘発の両方について喘息の主な原因として広く認識されている。実際の原因は、イエダニの糞中に存在するアレルギー応答を刺激するタンパク質（アレルゲン）である。空気中の物質に反応する喘息患者の５０％〜９０％は前記タンパク質に感受性があり、英国の１つの研究では、一般集団の１０％がダニアレルゲンに反応した。この物質への感作は幼児期、恐らく生後３カ月〜６カ月に起こるが、喘息は生涯にわたり、さらなる暴露は発作を誘発し、著しいレベルの呼吸困難および頻繁な入院を伴う。イエダニは通常小さく、成虫は約０．３ｍｍの長さである。１グラムの粉塵は最大５００匹のダニを含有する可能性があり、マットレスには２００万匹を超えるダニが含まれ得る。存在するダニ物質の量は、通常、経時的に増大する。６年間使われた枕の重量の１０分の１はダニおよびダニの残骸で構成され得る。カーペットには、通常、１平方メートル当たり１，０００〜１０，０００匹のダニが存在し得る。雌ダニは、その３カ月の生涯に、２５〜５０個の卵を産むであろう。多くの地域が影響を受けるにもかかわらず、通常、２種のダニが問題の大部分の原因である。これらは、デルマトファゴイデス・プテロニシヌス（Dermatophagoides pteronyssinus）（主にヨーロッパ）、およびデルマトファゴイデス・ファリナエ（Dermatophagoides farinae）（主にアメリカ）である。他のイエダニの中では、エウログリフス・マイネイ（Euroglyphus maynei）が最も重要である。
【０００４】
デルマトファゴイデス（Dermatophagoides）属のダニからの主要なアレルゲンはダニ糞中に存在するＤｅｒタンパク質であり、平均的なダニは、その生涯に毎日２０回糞をするであろう（それ自体の体重の２倍）。ダニおよび糞はいずれも除去するのが非常に困難であり、糞を除去するための機械的な試みはどれも糞の多くを粉砕し、結果として生じる微細なアレルゲン粉塵が空気の移動により分配されることになる。
【０００５】
１５０を超える種が存在する貯蔵ダニは、通常、ヒト由来の物質以外の穀類などの食糧を食べて生きている。貯蔵ダニはイエダニとは分類学的に異なる。
【０００６】
喘息は、世界の工業先進国において拡大しつつある非常に大きい問題であり、発展途上国では新たに出現している疾患である。主要な工業先進国の人口の８％が喘息を患っていると算出されているが、米国疾病予防管理センター（US Centers for Disease Control（ＣＤＣ））からの数字はそれよりもさらに高い。これらのうちの約５分の１は、頻繁な入院を必要とする重度の喘息にかかるであろう。「2014 Global Asthma Report」によると、世界中で１０億の３分の１を超える人が喘息を患っている。
【０００７】
イエダニ寄生は世界的な問題である。イエダニは５０％よりも高い湿度を必要とするので、米国西部の大部分を含む一部の領域はそれほど影響を受けない。十分な自然湿度を有する地域には、米国の東半分（および主要な西部沿海都市）、カナダの人口密集地域、西ヨーロッパのほぼ全域、日本、韓国、ならびに南アメリカ、オーストラリアおよび南アフリカの沿海部が含まれる。それにもかかわらず、イエダニアレルゲン反応性のレベルは、他の地域でも高い。例えば、クウェートは非常に高いレベルを示すことが報告されており、データは、クウェートにおける喘息の死亡率が極めて高いことを示す。これは、人間が自身のために屋内環境を快適にする（例えば、ソフトファニシング（soft furnishing）および加湿器を用いて）場合、同じ環境をイエダニに適したものにするという事実を反映する。従って、イエダニ寄生の世界的レベルは、自然湿度が示し得るレベルよりもはるかに高い。
【０００８】
ほぼ２億人のアメリカ人は、イエダニ寄生により深刻な影響を受ける地域に住んでいる。米国内の喘息のコストは、年間１２０億ドルを超える（９０億ポンドを超える）と算出されている。ヨーロッパの数字はそれよりもさらに高い。カナダの研究では、喘息のコストは主要な工業先進国の人口の１人につき平均して年間２１ポンドであると推定された。英国だけで毎年２，０００人、世界中では２５万人が喘息の結果死亡するであろう。
【０００９】
上記のことにもかかわらず、イエダニ数を低減する普遍的に効果的な方法は存在しない。これは、イエダニ数を低減するために人間の環境を変更することが可能であるが、それには複数のアプローチの協奏的な使用、および複雑で要求の厳しいライフスタイルの変化が必要とされることを意味する。従って、複数の設定に適用可能であり、広範に作用するイエダニ防除戦略の必要性はまだ満たされていない。
【００１０】
最も一般的に使用される方法およびその制限は以下の通りである。
【００１１】
寄生された材料を５５℃よりも高温で洗浄することによりダニは死滅し得るが、カーペット、マットレス、およびソフトファニシングなどのダニに有利な場所の多くについては非実用的である。蒸気洗浄は一部のカーペットおよび他の表面に対して可能であるが、これは非常に労働集約的である。いずれの場合も、近くのダニ源からの即時のコロニー形成に対する障害は何もない。
【００１２】
厳密な真空掃除は、存在するダニ糞の量を低減するための試みにおいて使用されることが多いが、通常効果がなく、存在するアレルゲンの量は５〜１０％しか低減されず、生きているダニに対する効果はほとんどない。加えて、真空掃除は、アレルゲン粉塵を放出してはならない場合にはＨＥＰＡフィルタを備えた機械の使用を必要とし、このようなフィルタを有する機械は購入および維持に費用がかかり、これらが効果的であり続けるにはフィルタ交換のために定期的なコストがかかる。このような機械が使用されるとしても、掃除の物理的作用は、アレルゲンが負荷された粉塵を攪拌し、従って暴露を高める可能性がある。
【００１３】
室内空気のろ過または除湿が可能であるが、標準的な家庭内環境では、外部からのアレルゲンまたは湿度の再導入はいずれも頻繁であり、防ぐのはほとんど不可能である。
【００１４】
マットレスおよび寝具類へのダニのアクセスを遮断するバリア方法は一般に使用されているが、これも価値が限られる。第１に、このような方法は、アレルゲンへの暴露の主要な源であるカーペットならびに大部分のソフトファニシングおよび玩具には使用することができない。第２に、このような方法は費用がかかり、この場合も、効果的なバリアを維持すべき場合には定期的な交換を必要とする。それにもかかわらず、バリア方法は、利用可能な最善の選択肢として挙げられることが多い。
【００１５】
カーペット内または表面上のアレルゲンを不活性化することが意図される変性スプレーも利用可能である。しかしながら、これらは頻繁な再適用を必要とし、価値が限られる。
【００１６】
従来の殺ダニ剤は化学薬剤であり、有機リン酸系およびカルバメート系などの殺虫剤を含む。しかしながら、多くのこのような殺虫剤は、政府および規制当局による不利な審査を受けている。１つの主要な化学殺ダニ剤（アカロサン）は喘息を増強することが見出された後に世界中で回収され、この目的のために以前に英国で使用されていた農薬のベンジオカルブは、人間の「急速な中毒」を引き起こすことが言及された。複数の有害作用は、ベンジオカルブについて入手可能な毒性データシートに記載されており、喘息患者は特別なリスクがあることが言及される。最近になって、ネオニコチノイドなどの殺ダニ剤は、環境および野生生物への有害作用と関連されており、これもますます多くの制限を受けている。
【００１７】
化学殺ダニ剤は、浸透が限られているために、イエダニの主要な源である家具または他のパッド入り物品の処置において非常に価値が限られる。これは、無酸素性燻蒸を残す（唯一の利用可能な選択肢として、物品当たり高いコストで数週間を必要とする）。加えて、他のダニ、特に穀類中の貯蔵ダニに関する研究では、化学殺虫剤への耐性が急速に発生し、容認できる用量レベルで完全になり得ることが示される。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１８】
イエダニの防除の改善が必要とされるにもかかわらず、現在の防除方法はコロニー形成場所の範囲全体にわたって適切または適用可能ではない。本発明は、上記の問題の１つまたは複数を解決する。
【課題を解決するための手段】
【００１９】
１つの態様によると、本発明は、イエダニ寄生を処置または防止する方法を提供し、前記方法は、イエダニ寄生場所、またはそこに近接する場所、またはこのような寄生の危険性がある場所に、殺ダニ性感染作用物質を適用することを含む。関連の態様では、本発明は、イエダニ寄生を処置または防止する方法を提供し、前記方法は、イエダニ寄生場所、またはそこに近接する場所に殺ダニ性感染作用物質を適用することを含む。前記方法は、イエダニ寄生を処置または防止するための殺ダニ性感染作用物質の対応する使用を包含する。
【００２０】
関連の態様では、イエダニ由来アレルゲンの濃度の増大を防止するための殺ダニ性感染作用物質の使用が提供される。使用において、前記殺ダニ性感染作用物質は、例えば、家庭、工業、農業または医療の設定／環境に適用される。前記使用は、イエダニ由来アレルゲンの濃度の増大を防止するための対応する方法を包含する。
【００２１】
本発明のさらなる態様は、イエダニ由来アレルゲンによって引き起こされる、または増悪される状態（例えば、喘息、アレルギー性鼻炎、皮膚炎、湿疹またはこれらの組み合わせを含むが、これらに限定されない）を防止または処置するための殺ダニ性感染作用物質の使用を提供する。使用において、前記殺ダニ性感染作用物質は、例えば、家庭、工業、農業または医療の設定／環境に適用される。前記使用は、イエダニ由来アレルゲンによって引き起こされる、または増悪される状態を防止または処置するための対応する方法を包含する。
【００２２】
別の態様では、イエダニ由来アレルゲンに対する被験者の感作を防止または低減するための殺ダニ性感染作用物質の使用が提供される。使用において、前記殺ダニ性感染作用物質は、例えば、家庭、工業、農業または医療の設定／環境に適用される。前記使用は、イエダニ由来アレルゲンに対する被験者の感作を防止または低減するための対応する方法を包含する。
【００２３】
本発明の殺ダニ性感染作用物質は、通常、乾燥製剤または液体製剤として使用される。例として、殺ダニ性感染作用物質は、食糧（例えば、肝臓フレーク、ペットフード、酵母、および／もしくは小麦粉などのダニ食糧、ダニ、ダニ物質、または死んだダニの死骸）、またはダニ誘引剤（例えば、芳香性薬剤、化学誘引剤、またはこれらの組み合わせ）と混合することもできるし、あるいは前記食糧またはダニ誘引剤は殺ダニ性感染作用物質を含むこともできる。使用において、殺ダニ性感染作用物質は、例えば、餌（例えば、乾燥餌）の形態で、食糧および／またはダニ誘引剤によりコーティングされてもよいし、あるいは食糧および／またはダニ誘引剤内に分散されてもよい。前記食糧および／またはダニ誘引剤は、ダニ寄生を処置するために使用される場合に特に有利である。本明細書で使用される「食糧」という用語は、ダニが消費するための物質を意味する。前記食糧は、消費の準備ができた形態であり得る。一実施形態では、食糧は、ダニ、ダニ物質、ダニ死骸またはこれらの組み合わせ（例えば、全体または粉末化、微粉化および／もしくは均質化形態）である。
【００２４】
本発明者らは、イエダニを防除するための新規のアプローチを開発した。これは、殺ダニ性感染作用物質の同定、培養、最適化および開発と、イエダニの中または上に伝染性の感染（作用物質の複製）を確立し、その結果前記イエダニに対する殺ダニ効果を生じるためのその使用とに基づく。
【００２５】
本明細書で使用される「殺ダニ性感染作用物質」は、前記イエダニに感染および／またはコロニー形成することによって、１つまたは複数のイエダニを殺すことができる殺ダニ作用物質を指す。殺ダニ性感染作用物質は、第１のダニ（例えば、候補ダニ）から第２のダニ（例えば、標的ダニ）へ伝染することができる。これは、地理（標的領域）に関しても効力（イエダニ集団全体への暴露の可能性）に関しても、殺ダニ作用物質の「伝播」を容易にするので、特に有利な技術的効果である。いくつかの実施形態では、殺ダニ性感染作用物質は、２つ以上のイエダニ属または種に感染および／またはコロニー形成する。別の実施形態では、殺ダニ性感染作用物質は、１つだけのイエダニ属または種に感染および／またはコロニー形成し得る。従って、本発明は、構造的にも機能的にも従来の殺ダニ作用物質（例えば、化学薬剤、およびバチルス・チューリンゲンシス（Bacillus thuringiensis）またはＢ．スファエリクス（sphaericus）などの細菌からの毒素）（後者は、イエダニの中または上において感染および複製することができない）とは異なる、独特の種類のイエダニ用殺ダニ性感染作用物質を使用する。従って、Ｂ．チューリンゲンシス（thuringiensis）および関連バチルス（Bacillus）種の毒素などの毒素取込みにより作用する非伝染性の作用物質は、本発明から排除される。
【００２６】
いくつかの実施形態では、殺ダニ性感染作用物質はさらなる最適化を受け得る。一実施形態では、殺ダニ性感染作用物質は選択的に繁殖および／または変異誘発されて、改善された効力を有し、そして／あるいはダニにおける順応および／または耐性に対抗する変異殺ダニ性感染作用物質を提供する。従って、一実施形態では、「殺ダニ性感染作用物質」という用語は、殺ダニ性感染作用物質および変異殺ダニ性感染作用物質の両方を包含する。
【００２７】
一実施形態では、殺ダニ性感染作用物質は、ウイルス、細菌、真菌、原生動物、またはこれらの組み合わせを含む（または、からなる）。
【００２８】
一実施形態では、殺ダニ性感染作用物質は細菌である。一実施形態では、殺ダニ性感染作用物質は、ウイルス、例えば、バキュロウイルス（Baculoviridae）科のウイルスである。別の実施形態では、殺ダニ性感染作用物質は、真菌、例えば、ビューベリア（Beauveria）属または微胞子虫門（Microspora）の真菌である。さらなる実施形態では、殺ダニ性感染作用物質は原生動物である。
【００２９】
一実施形態では、ダニの捕食寄生者（特定の宿主の内部または上にその卵を産み、そこから幼虫が孵化し、そして宿主を殺す昆虫と定義される）または捕食者などの多細胞作用物質は、本発明から排除される。
【００３０】
また本発明は、殺ダニ性感染作用物質を単離するための方法も提供し、本方法は、
ａ．ｉ．試験サンプルから提供される候補イエダニまたはその抽出物、および
ｉｉ．標的イエダニまたはその細胞培養物
を混合することにより混合物を形成することと、
ｂ．前記標的イエダニまたはその細胞培養物を有害な病理学的変化の存在または不在についてモニターすることと、
ｃ．有害な病理学的変化の存在が観察されたときに、前記混合物もしくは試験サンプルからまたはその構成要素から、殺ダニ性感染作用物質を単離することと
を含む。
【００３１】
本発明はさらに、上記方法によって得ることができる（例えば、得られた）殺ダニ性感染作用物質を提供する。
【００３２】
一実施形態では、モニタリングにより病理学的変化を同定することができない場合、方法ステップａ．およびｂ．は、異なる候補イエダニ（すなわち、異なる試験サンプルからの）を用いて繰り返される。このシーケンスは、有害な病理学的変化が観察されるまで反復して繰り返すことができる。
【００３３】
一実施形態では、有害な病理学的変化が観察されると、標的イエダニまたはその細胞培養物は同じ標的イエダニまたはその細胞培養物の新たな供給物に再導入／継代培養され、新たな標的イエダニまたはその細胞培養物は（同じ）有害な病理学的変化の存在についてモニターされ、それにより、同定された殺ダニ作用物質の伝染性／感染性の確認が提供され得る。
【００３４】
混合物／試験サンプルに関連して、本明細書で使用される「その構成要素」は、対応するその画分、アリコート、抽出物、部分、割当て、成分および／またはセグメントを包含する。
【００３５】
本明細書で使用される「候補ダニ」という用語は、本明細書で定義される殺ダニ性感染作用物質に感染しているか、または前記殺ダニ性感染作用物質に感染している疑いのあるダニを指す。
【００３６】
いくつかの実施形態では、当業者は、「候補ダニ」として選択されるダニが殺ダニ性感染作用物質に感染している確率を改善するために、予備選択ステップを実施してもよい。このようなステップは、標的ダニまたはその細胞培養物による試験のための崩壊コロニーから候補ダニが選択される場合に、適切に使用され得る（実施例４を参照）。予備選択は、殺ダニ性感染作用物質の存在について「候補ダニ」をスクリーニングすることによって実施され得る。任意のスクリーニング方法が使用され得る。例えば、「候補ダニ」は、同じ属および／または種の健康なダニと比べたときのダニの有害な病理学的変化に基づいて選択され得る。一実施形態では、有害な病理学的変化は、例えば、顕微鏡法を用いてモニターされる視覚的な変化である。
【００３７】
一実施形態では、有害な病理学的変化は、イエダニの活力に有害作用を引き起こす。対応する表現型形質は、色の変化、死亡の前および／または後のクチクラの変化および膨張した外観、サイズの変化、活性または発生時間、伸長または硬直した脚、死ダニの外側の粉末状の外観としての胞子の存在、またはこれらの組み合わせを含む。前記有害な病理学的変化は、以下の観察のいずれか１つによってモニターされ得る：
−  色の変化：死ダニにおける黒ずみまたは完全な変色；
−  死亡の前および／または後のクチクラの変化および膨張した外観；
−  肛門または口器により基体に付着した死ダニ；
−  死ダニが萎む、および／または肛門から滲出される液体で満たされる；
−  体の下で脚が伸び、湾曲ではなく硬直する；
−  胞子が死ダニの外側の粉末状の外観として存在するが、死後にだけダニの体にコロニー形成する崩壊作用物質とは異なる；
−  サイズ、または活性、または発生時間の変化；および／または
−  標的ダニタンパク質または核酸マーカーなどのマーカーの変化。
【００３８】
代替的または付加的に、有害な病理学的変化は、免疫学的検出手段および／または核酸ベースの検出手段によってモニターされてもよい。
【００３９】
いくつかの実施形態では、標的ダニの代わりに標的ダニ細胞培養物が使用され得る。標的ダニ細胞培養物の使用は、ウイルスの殺ダニ性感染作用物質を検出するために特に有利であり得る。従って、有害な病理学的変化は、以下の観察の任意の１つまたは複数によってモニターされ得る：標的ダニの細胞死、目に見える細胞変性効果（例えば、細胞円形化、透明帯、プラーク形成、またはこれらの組み合わせ）、有害な影響を受けた細胞の分染（クリスタルバイオレットおよび／またはニュートラルレッドなどの生体染色を適切に用いて）、顕微鏡法（例えば、電子顕微鏡法）、またはこれらの組み合わせ。
【００４０】
一実施形態では、「候補イエダニ」は生ダニである。別の実施形態では、「候補イエダニ」は死ダニである。
【００４１】
いくつかの実施形態では、候補イエダニの抽出物が使用される。本明細書で使用される候補イエダニの「抽出物」は、生ダニおよび／または死ダニに１つまたは複数の処理ステップを適用することにより得ることができる（例えば、得られた）生成物を指す。従って、イエダニは、前記抽出物に存在していなくてもよい。一実施形態では、候補イエダニの抽出物は、１つまたは複数の生ダニおよび／または死ダニを均質化することにより得ることができる（例えば、得られる）。
【００４２】
候補イエダニまたはその抽出物は、任意の適切な試験サンプルから得ることができる。例えば、一実施形態では、試験サンプルは、前記候補イエダニの生息地から得ることができる環境試験サンプルである。当業者は、ダニ生息地の知識を用いて、本発明に従って使用するための環境試験サンプルを得ることができる。イエダニは人間の居住地に近接した位置に生息しており、その主な栄養源を人間に由来する物質から得る。試験サンプルは、家庭、農業、または医療の環境／設定からの粉塵サンプルまたは崩壊したイエダニコロニーであり得る。従って、一実施形態では、環境試験サンプルは、カーペット、寝具類、枕、カーテン、内装材、家具、皮膚、動物の毛皮、動物の寝床、食糧、イエダニの糞またはこれらの組み合わせから得られる。適切には、環境（例えば、農業）試験サンプルは、粉塵、汚れ、土壌またはこれらの組み合わせであり得る。
【００４３】
殺ダニ性感染作用物質を単離するための本発明の方法に関して、候補イエダニまたはその抽出物は、標的イエダニまたはその細胞培養物と混合される。適切には、候補イエダニは、標的イエダニと混合され得る。
【００４４】
本明細書で使用される「標的イエダニまたはその細胞培養物」という用語は、健康なダニまたはその細胞培養物、すなわち、殺ダニ性感染作用物質に感染していないイエダニまたはその細胞培養物を指す。一実施形態では、標的イエダニまたはその細胞培養物は、実験室条件で増殖されたダニコロニーまたはダニ細胞培養物である。一実施形態では、標的ダニの細胞培養物は、細胞のインビトロ培養物を指す。
【００４５】
一実施形態では、標的イエダニまたはその細胞培養物および候補イエダニまたはその抽出物は、同じダニ属および／または種のものである。あるいは、異種間試験が使用され得る（実施例４を参照）。
【００４６】
殺ダニ性感染作用物質を単離するための方法は、標的イエダニまたはその細胞培養物を有害な病理学的変化の存在または不在についてモニターすることを含む。好ましくは、本方法は、有害な病理学的変化の存在をモニターすることを含む。標的イエダニまたはその細胞培養物に対する有害な病理学的変化の存在がうまく観察されたら（従って、殺ダニ性感染作用物質の存在が示される）、前記殺ダニ性感染作用物質は、混合物から（またはその構成要素から）、あるいは試験サンプルから（またはその構成要素から）単離される。有害な病理学的変化は、上記の実施形態で記載される病理学的変化の１つまたは複数であり得る。
【００４７】
一実施形態では、単離された殺ダニ性感染作用物質が提供される。本明細書で使用される「単離する」という用語は、１つまたは複数の汚染物質から（例えば、ダニ死骸から、および／またはアレルゲンから）、殺ダニ性感染作用物質を分離することを意味する。本発明の殺ダニ性感染作用物質は、使用のために、有効量の前記作用物質を含有する形態で提供される。
【００４８】
一実施形態では、殺ダニ性感染作用物質はインビトロで培養される。前記実施形態において、殺ダニ性感染作用物質は、培地中に存在する１つまたは複数の成分（例えば、存在する任意のアレルゲン）から適切に単離され得る。
【００４９】
一実施形態では、イエダニは、以下の、デルマトファゴイデス（Dermatophagoides）属、エウログリフス（Euroglyphus）属またはこれらの組み合わせから選択される。適切には、イエダニは、デルマトファゴイデス・プテロニシヌス（Dermatophagoides pteronissynus）、デルマトファゴイデス・ファリナエ（Dermatophagoides farinae）、デルマトファゴイデス・ミクロセラス（Dermatophagoides microceras）およびデルマトファゴイデス・シボネイ（Dermatophagoides siboney）、またはこれらの組み合わせから選択されるデルマトファゴイデス（Dermatophagoides）種であり得る。別の実施形態では、イエダニは、エウログリフス・マイネイ（Euroglyphus maynei）であり得る。
【００５０】
殺ダニ性感染作用物質は、イエダニによる取込み／接触を増大させる任意の適切な形で配合され得る。作用物質の安定性を改善するために従来の手段が使用されてもよく、前記改善された安定性は、本発明の通りに配合されていない同じ（または、技術的に等価の）殺ダニ性感染作用物質（同じ条件下で試験される）と比べたときの、経時的な活性の保持の改善によって測定され得る。また作用物質は、例えば、固体マトリックスから、あるいは布地、充填材、衣類、寝具類またはこれらの組み合わせへの段階的な含浸によって、これらの生息地のダニによる寄生を防止または軽減するために、長期にわたる持続放出用に配合されてもよい。
【００５１】
一実施形態では、製剤は、イエダニの標的範囲を改善するために、例えば、デルマトファゴイデス・プテロニシヌス（Dermatophagoides pteronissynus）、デルマトファゴイデス・ファリナエ（Dermatophagoides farinae）、デルマトファゴイデス・ミクロセラス（Dermatophagoides microceras）、デルマトファゴイデス・シボネイ（Dermatophagoides siboney）、エウログリフス・マイネイ（Euroglyphus maynei）、またはこれらの組み合わせのイエダニ標的を含むために、複数の殺ダニ性感染作用物質を含有し得る。このような複合薬剤（ａｋａ「パネル」）製剤は自然環境で遭遇されるものとさらに区別される。
【００５２】
一実施形態では、殺ダニ性感染作用物質はマイクロカプセル化される。例として、殺ダニ性感染作用物質を含むマイクロカプセル化カプセルは、通常、約１μｍ〜約１０００μｍ、適切には約１μｍ〜約８００μｍの範囲のサイズである。適切なマイクロカプセル化物質は、デンプン、スチレン無水マレイン酸ハーフエステルまたはこれらの組み合わせの１つまたは複数を含む。
【００５３】
正確な配合は使用中の作用物質により異なり、不活性キャリアに加えて、光保護剤、安定剤、乳化剤、結合剤、緩衝剤、乾燥防止剤、分散剤および他の活性成分、またはこれらの組み合わせを含有し得る。
【００５４】
一実施形態では、殺ダニ性感染作用物質は、濃縮物として、あるいはレディ・トゥ・ユース（ｒｅａｄｙ−ｔｏ−ｕｓｅ）製剤として配合される。殺ダニ性感染作用物質を含む、レディ・トゥ・ユース製剤は、以下の形態のうちの１つまたは複数をとることができる：
ｉ）カーペットまたは他の表面に、好ましくは日常的な洗浄を受けていない領域に、配合された殺ダニ性感染作用物質を散布または噴霧するのに適したキャニスターまたは他の容器；
ｉｉ）浸透チューブを通して内装材または寝具類に導入するのに適した容器。殺ダニ性感染作用物質は、加圧容器からの空気または不活性キャリアガスの流れにより注入されるように配合され得る；
ｉｉｉ）有効なレベルの作用物質を長期にわたって放出させるように設計された固体マトリックス、または布もしくは他の材料に含浸されたもの；および／または
ｉｖ）ダニと共に使用するのに適した食物材料または誘引剤。食物材料はダニ物質と一緒に提示されてもよいし、あるいはダニ物質をカプセル化するために使用されてもよい。これは、感染したダニ死骸全体を伴う提示または感染したダニ死骸全体のカプセル化を含み得る。
【００５５】
本発明の殺ダニ性感染作用物質の使用は、イエダニ由来アレルゲンの生成の著しい減少をもたらすように、寄生場所のイエダニ集団を低減する。
【００５６】
一実施形態では、殺ダニ性感染作用物質は、適用場所におけるイエダニ寄生の発生を防止する（例えば、イエダニ寄生を「防止する」ことにより）ため、あるいは既に確立されたイエダニ寄生のさらなる集団成長を防止するために使用される。
【００５７】
本明細書で使用される「寄生」という用語は、イエダニによるある領域の望まれないコロニー形成を指す。いくつかの実施形態では、「寄生」という用語は、コロニー形成領域に存在するダニの集団の急速な成長も含む。
【００５８】
「適用する」という用語は、イエダニ寄生、またはそこに近接する場所、またはこのような寄生の危険性がある場所と、殺ダニ性感染作用物質とを接触させることを指す。適切には、そこに近接するまたはこのような寄生の危険性がある場所は、ダニ寄生を支持するために適正な湿度および温度条件を有する場所である。
【００５９】
有利に、本発明の殺ダニ性感染作用物質は（従来の殺ダニ剤とは異なり）、複数のダニ生息地への適用に特に適している。一実施形態では、殺ダニ性感染作用物質は、家庭、工業、農業または医療（例えば、呼吸器内科ユニット、アレルギークリニック、または喘息クリニック）の設定／環境において適用され得る。一実施形態では、殺ダニ性感染作用物質は、布地、例えば、寝具類（例えば、枕の内部またはマットレス）、内装材、パッド入り調度品、ソフト玩具、カーペット、カーテン、充填材、衣類、ソフトファニシングまたはこれらの組み合わせに適用され得る。
【００６０】
殺ダニ性感染作用物質は、殺ダニ効果を達成するために任意の相対濃度で使用または適用され得る。相対濃度は、イエダニコロニー、例えば捕獲イエダニコロニー内の個々の殺ダニ性感染作用物質について評価され得る。投与量は、持続可能な殺ダニ性感染を開始し、それにより複数のイエダニ生息地にわたる殺ダニ効果、従来の（例えば、化学）殺ダニ剤では達成することができない効果を引き起こすように計算され得る。
【００６１】
一実施形態では、複数の殺ダニ性感染作用物質を組み合わせて適用することができ、例えば、少なくとも２、３、４または５つの殺ダニ性感染作用物質が使用可能である。
【００６２】
本発明の殺ダニ性感染作用物質は、イエダニ由来アレルゲンに対する被験者の感作を防止または低減する。「感作」という用語は、イエダニ由来アレルゲンへの暴露により被験者がそれに対するアレルギーを発生するプロセスを指す。通常、イエダニ由来アレルゲンは、イエダニの糞の上もしくは中、および／またはそこから放出される生物学的物質の上もしくは中に存在し得る。一実施形態では、イエダニ由来アレルゲンは、Ｄｅｒタンパク質、例えば、ダニ糞またはダニ物質中に存在するＤｅｒタンパク質である。一実施形態では、Ｄｅｒタンパク質は、Ｄｅｒ  ｐ  １、  Ｄｅｒ  ｆ  １、  Ｄｅｒ  ｍ  １、  Ｄｅｒ  ｓ  １、  Ｄｅｒ  ｐ  ２、Ｄｅｒ  ｆ  ２、Ｄｅｒ  ｓ  ２、Ｄｅｒ  ｐ  ３、Ｄｅｒ  ｆ  ３、Ｄｅｒ  ｓ  ３、Ｄｅｒ  ｐ  ４、Ｄｅｒ  ｆ  ４、Ｄｅｒ  ｐ  ５、Ｄｅｒ  ｆ  ５、Ｄｅｒ  ｐ  ６、Ｄｅｒ  ｆ  ６、Ｄｅｒ  ｐ  ７、Ｄｅｒ  ｆ  ７、Ｄｅｒ  ｐ  ８、Ｄｅｒ  ｐ  ９、Ｄｅｒ  ｆ  ９、Ｄｅｒ  ｐ  １０、Ｄｅｒ  ｆ  １０、Ｄｅｒ  ｇ  １０、Ｄｅｒ  ｐ  １１、Ｄｅｒ  ｆ  １１、Ｄｅｒ  ｐ  １２、Ｄｅｒ  ｆ  １３、Ｄｅｒ  ｐ  １４、Ｄｅｒ  ｆ  １４、Ｄｅｒ  ｐ  １５、Ｄｅｒ  ｆ  １５、Ｄｅｒ  ｆ  １６、Ｄｅｒ  ｆ  １７、Ｄｅｒ  ｐ  １８、Ｄｅｒ  ｆ  １８、Ｄｅｒ  ｐ  ２０、Ｄｅｒ  ｐ  ２１、Ｄｅｒ  ｆ  ２２、Ｄｅｒ  ｐ  ２３、Ｄｅｒ  ｆ  ２４またはこれらの組み合わせである。別の実施形態では、イエダニ由来アレルゲンは、Ｅｕｒタンパク質、例えば、ダニ糞またはダニ物質中に存在するＥｕｒタンパク質である。一実施形態では、Ｅｕｒタンパク質は、Ｅｕｒ  ｍ  １、  Ｅｕｒ  ｍ  ２、Ｅｕｒ  ｍ  ３、Ｅｕｒ  ｍ  ４、Ｅｕｒ  ｍ  １４またはこれらの組み合わせである。
【００６３】
本発明の実施形態は、添付図面を参照しながら単なる例としてこれから説明されるであろう。
【図面の簡単な説明】
【００６４】
【図１】真菌殺虫剤として作用する３つの異なる真菌、すなわちビューベリア・バシアナ（Beauveria bassiana）、およびビューベリア・ブロングニアルティ（Beauveria brongniartii）によるイエダニの処置の結果を示す。データは、栄養分のみで処置した対照群におけるダニの生存の割合として、真菌殺虫剤による処置後のダニの生存を示す。薄灰色のバーは低用量の真菌殺虫剤（２５，０００胞子）からのデータを表し、黒色のバーは高用量の真菌殺虫剤（２２，５００，０００胞子）からのデータを表す。Ｂ．ブロングニアルティ（brongniartii）は高用量のみで試験した。
【図２】罹患したダニ物質からの抽出物中の、電子顕微鏡法（酢酸ウラニルで染色）により観察された粒子を示す。粒子は平均すると直径７５ｎｍである。
【図３】ダニ培養物中の食糧上に存在する白色粉末様菌糸体を示す。
【図４】接種したセルのガラス表面に固着した、死んだＤ．プテロニシヌス（pteronyssinus）を示す。
【発明を実施するための形態】
【００６５】
他に定義されない限り、本明細書で使用される全ての科学技術用語は、本開示が属する技術分野において当業者により一般的に理解されるものと同じ意味を有する。Singleton, et al., DICTIONARY OF MICROBIOLOGY AND MOLECULAR BIOLOGY, 20 ED., John Wiley and Sons, New York(1994)、およびHale & Marham, THE HARPER COLLINS DICTIONARY OF BIOLOGY, Harper Perennial, NY(1991)は、本開示で使用される用語の多数についての一般的な辞書を当業者に提供する。
【００６６】
本開示は、本明細書に開示される例示的な方法および材料により限定されず、本開示の実施形態の実施または試験において、本明細書に記載されるものと類似または等価の任意の方法および材料を使用することができる。数値の範囲は、その範囲を定義する数を包含する。
【００６７】
本明細書で提供される見出しは、全体として本明細書を参照することにより得ることができる本開示の種々の態様または実施形態を限定するものではない。従って、直後に定義される用語は、全体として本明細書を参照することによりさらに十分に定義される。
【００６８】
用語の他の定義は、本明細書全体を通して明らかになり得る。例示的な実施形態がより詳細に記載される前に、本開示が記載される特定の実施形態に限定されず、従って、当然ながら異なり得ることは理解されるべきである。また、本開示の範囲は特許請求の範囲によってのみ限定され得るので、本明細書で使用される用語が特定の実施形態を説明するためだけのものであり、限定を意図しないことも理解されるべきである。
【００６９】
ある範囲の値が提供される場合、その範囲の上限値と下限値との間にある各値も、文脈が他に明白に指示しない限り下限値の単位の１０分の１まで明確に開示されると理解される。規定の範囲内の任意の規定の値または中間値と、その規定の範囲内の任意の他の規定の値または中間値との間のより小さい各範囲は本開示の範囲内に包含される。これらのより小さい範囲の上限値および下限値は、独立して、その範囲内に含まれても除外されてもよく、そのより小さい範囲内にいずれかの限界値が含まれる、またはいずれの限界値も含まれない、または両方の限界値が含まれる各範囲もまた、その規定の範囲内における任意の明確に排除された限界値を前提として、本開示の範囲内に包含される。規定の範囲が一方または両方の限界値を包含する場合、それらの包含される限界値のいずれかまたは両方を排除する範囲も本開示の範囲内に含まれる。
【００７０】
本明細書および特許請求の範囲で使用される場合、文脈が他に明白に指示しない限り、単数形「a」、「an」、および「the」は、複数の指示対照を含むことに注意しなければならない。従って、例えば、「殺ダニ性感染作用物質」への言及は複数のこのような候補殺ダニ性感染作用物質を含み、「単離された殺ダニ性感染作用物質」への言及は、１つまたは複数の単離された殺ダニ性感染作用物質および当業者に知られているその等価物への言及を含み、その他も同様である。
【００７１】
本発明は、以下の図面および実施例を参照しながら単なる例としてこれから説明されるであろう。
【実施例】
【００７２】
材料および方法
生物資源探査
微生物作用物質は、生物資源探査プロセスによって単離される。これは、イエダニを感染させることができる天然に存在する作用物質の単離を含む。種を横断する感染（「人畜共通感染症」）は、多くの場合、より重症の感染を引き起こし得るので、これらの作用物質は、自然界のウイルス、細菌、真菌、または原生動物でよく、環境物質から、イエダニから、または関連種から単離され得る。
【００７３】
様々な源から採取したダニは、実験室で成長させたダニと共培養される。あるいは、ダニを含有する源からの材料は均質化され、実験室で成長させたダニの培養の食糧に導入される。次に、実験室で成長させたダニを病気の出現についてモニターする。病気のダニを単離し、疾患症状について検査してから、新たな培養に導入し、これを疾患関連作用について再度モニターする。
【００７４】
サンプルは、最適に、以下のように分析される。
【００７５】
１）サンプル採取および初期検査
サンプルは、家の中のカーペットおよび寝具類、好ましくは、イエダニ寄生の前歴があるか、あるいはイエダニ寄生を支持するために適正な湿度および温度条件を有するものからの粉塵から得られる。サンプルの採取は、理想的には、ダニの捕獲のために適切なフィルタが挿入された特別に作製された真空掃除機を用いて行なわれるが、他の方法が使用されてもよい。またサンプルは、ダニが豊富な他の源、特に、動物の寝床材料から得られる。ダニを含有するサンプルは、捕食性ダニを除去するために特定の処置を必要とし得る（以下を参照）。
【００７６】
粉塵サンプルを受け取ったら、ダニ活性の任意の兆候（ダニの運動、脱皮、死ダニなど）について双眼顕微鏡下で検査する。生ダニまたは死ダニのどちらが予想され得るかの決定に役立つように、採取日、採取方法および受取日、ならびに輸送条件についての情報が記録される。すぐに対処することができないサンプルは全て、処理できるようになるまで保守される。生ダニの生存を保証するために十分な食物が提供され、サンプルはパラフィルムで密封される皿または容器内に保持されなければならない。湿度を保持するために、湿った脱脂綿の小片（１ｃｍ３、過剰の水を除去するために絞る）を含む密封可能なプラスチックバッグ内にこれらの皿を入れ、バッグを２５℃のインキュベータに入れる。
【００７７】
次に、サンプルは生ダニの共培養により、または均質化により処理される。
【００７８】
２ａ）共培養
アルミ箔片上に置いた１４．５ｃｍのろ紙片の上で、蓋をした粗い篩（メッシュサイズ２ｍｍ）に粉塵のサンプルを入れる。箔を篩に巻き付け、篩を箔から持ち上げないように注意しながら約３０秒間、円運動を用いて手で振り動かして、微細な粉塵サンプルを過剰な毛髪および繊維（粗い粉塵サンプル）から分離する。微細な粉塵サンプルを標準的なペトリ皿装置に入れる。粗い残骸をプラスチックスクリュートップジャー内に保管し、茶色のガムテープで密封するか、あるいは９ｃｍプラスチックペトリ皿内でパラフィルムにより密封する。ジャーを密封可能なポリエチレンバッグの内部に置き、開口部を茶色のガムテープで固定する。ペトリ皿はバッグ内に入れ、これもガムテープで密封することができる。このサンプルは実験室の周囲条件下または４℃以上の冷蔵で保管することができ、凍結は多くの潜在的な生物学的防除剤を不活性化する可能性があるので、決して凍結させてはならない。
【００７９】
それぞれのサンプル間で篩を適切な消毒薬で洗浄し、アルコールですすぐ。ろ紙および箔は、サンプルの合間に廃棄される。標準的なペトリ皿装置を使用して、全ての非均質化サンプルを保持し、これを、７〜１０日間の初期観察期間中、実験室に受け入れる。
【００８０】
ろ紙片を８０ｍｍガラスペトリ皿の蓋に合うように切断する。材料が多過ぎる場合（この場合は、９０ｍｍガラスペトリ皿を使用する）を除いて、個々のサンプルは皿の中央に置かなければならない。ろ紙の周縁部に３滴の水（約３０μｌの水）をたらすことにより、ろ紙を湿らせる。少量（約０．０１ｇ）の混合食物をサンプルの上に振りかける。混合食物は、１：４：２の割合の魚餌：肝臓：酵母および小麦粉で構成される。これは、前もって作り、必要とされるまで冷凍庫で保持することができる。肝臓は、微細メッシュの篩にかけた乾燥粉末肝臓から調製される。この混合食物培地が実際に生ダニを含まないことを保証するために、５０ｇのアリコートに分割し、少なくとも−１４０℃で少なくとも４時間冷却してから、必要とされるまで−１８℃で保管する。
【００８１】
皿を幅広のパラフィルム片で密封し、１ｃｍ３の湿った脱脂綿と共に密封可能なバッグに入れる。皿およびバッグの両方に粉塵サンプルの番号のラベルを貼り、２５℃のインキュベータに入れる。
【００８２】
および／または
２ｂ）均質化
捕食性種は、実験室成長ダニの培養において信頼できる病理学的効果のアッセイを妨げる可能性がある。捕食性ダニまたは昆虫の存在が疑われる場合、あるいは生ダニが存在しない場合には、サンプルは均質化され得る。これは、存在するあらゆる捕食性ダニまたは他の捕食種を除去し、凝集物または死骸を破壊することにより存在するあらゆる作用物質の回収を最大限にするのに役立つ。
【００８３】
均質化は、高速メカニカル（Wering）ブレンダーを使用する。均質化の時間はサンプルの性質により異なるが、通常、全実行時間が１〜５分の範囲である。存在するあらゆる作用物質へのダニの暴露を増強するために、得られた粉末は次に乾燥肝臓フレーク（上記を参照）と混合され、以下で言及されるように、混合物をダニ培養のための食糧の一部として使用する。
【００８４】
３）生ダニによるサンプルの接種
３ａ）非均質化サンプルの場合
元の粉塵サンプルの一部は、実験室の保存培養からのダニの餌にされる。
【００８５】
各サンプルについて２つの重複（replicate）セルを設定する。セルは接着剤（Prittスティック）を用いて９ｃｍろ紙片をセルの片側に固定することにより構成される。セルを一晩乾燥させるべきであり、翌日に鋭いメスを用いて、ろ紙をセルのエッジとぴったり重なるように切断すべきである。ろ紙のエッジの「唇状のふち」はデシケーター内でセルを持ち上げてチェックする際にひっかかるかもしれないので、これがないことを確実にする。
【００８６】
微細な粉塵のサブサンプルをセルの中央に入れる。双眼顕微鏡を用いた×２０の倍率下で、視野が均一な粉塵層で正確に満たされなければならない。粉塵サンプルの残りは、非吸収性脱脂綿栓で塞いだガラス管（５×２．５ｃｍのソーダガラス試料管）内に保管される。ダニの任意の繁殖培養を保持するために２５℃（あるいは、より長い貯蔵の場合はより低い温度）で８０％を超える相対湿度（適切な水酸化カリウム溶液を用いて）のデシケーターに管を入れる。
【００８７】
セル内の粉塵サンプルの中央にウェルを作り、樹立した実験室株（例えば、デルマトファゴイデス・プテロニシヌス（Dermatophagoides pteronissynus）の実験室株）を用いた実験室培養からの３０匹のイエダニ成虫（オスメス混合）をその中に入れる。微細なラクダの毛のペイントブラシ（サイズ０号、約２〜３本の毛をブラシに残す）を用いてダニを移し、ダニを粉塵サンプルで優しく覆う。ダニがサブサンプル内を移動するのを促すために、非常に少量の食物（０．０１ｇの湿らせた乾燥肝臓）を粉塵の上に置く。
【００８８】
３ｂ）均質化サンプルの場合
１：４：２の割合の魚餌：肝臓：酵母および小麦粉の食物混合物を調製する前に、均質化粉末の一部をダニ食物の乾燥肝臓成分と混合する。双眼顕微鏡を用いた×２０の倍率下で、視野が食物／粉末混合物の均一な層で正確に満たされなければならない。粉塵サンプルの残りは、非吸収性脱脂綿栓で塞いだガラス管（５×２．５ｃｍのソーダガラス試料管）内に保管される。存在するあらゆる作用物質の生存能を維持するために２５℃（あるいは、より長い貯蔵の場合はより低い温度）で８０％を超える相対湿度（適切な水酸化カリウム溶液を用いて）のデシケーターに管を入れる。
【００８９】
各サンプルについて２つの重複セルを設定する。セルは接着剤（Prittスティック）を用いて９ｃｍろ紙片をセルの片側に固定することにより構成される。セルを一晩乾燥させるべきであり、翌日に鋭いメスを用いて、ろ紙をセルのエッジとぴったり重なるように切断すべきである。ろ紙のエッジの「唇状のふち」はデシケーター内でセルを持ち上げてチェックする際にひっかかるかもしれないので、これがないことを確実にする。
【００９０】
セル内の食物の中央にウェルを作り、樹立した実験室株（例えば、デルマトファゴイデス・プテロニシヌス（Dermatophagoides pteronissynus）の実験室株）を用いた実験室培養からの３０匹のイエダニ成虫（オスメス混合）をその中に入れる。微細なラクダの毛のペイントブラシ（サイズ０号、約２〜３本の毛をブラシに残す）を用いてダニを移し、次に、ダニが粉末−食物混合物内を移動するのを促すために食物で優しく覆う。
【００９１】
４）モニタリング
セルの上にガラスシートを置き、２つのブルドッグクリップで固定する。２５℃で９０％を超える相対湿度（適切な水酸化カリウム溶液を用いて）のデシケーター内にセルを入れる。小さいプラスチックタブ型デシケーターが使用されてもよいが、任意の１つのデシケーターには１２個以下のセルが含まれて十分に密封されなければならず、セルは、デシケーターの上部と底部の間の密封よりも高くなってはならない。
【００９２】
７〜１０日後に、ダニの活性、卵、幼虫および第１若虫について培養をチェックする。ダニの数が劇的に減少した任意のサンプルをより定期的にモニターし、ダニを取り出し、個々のガラスセルにおいて小さいグループで培養する。３０〜５０匹のダニ群のさらなる導入を定期的に行う。７日後にダニの数の明らかな減少がなければ、次にサンプルを２〜３日毎に１４日が経過するまでチェックし、１４日が経過した時点で、サンプルを可能であれば１週間に２回チェックするが、次に、より最近のサンプルが優先する。初期観察期間の後、サンプルを最長１か月間（すなわち、最初の検査から４０日間）チェックし、その時点で廃棄してもよいし、あるいは冷凍庫に保管してもよい。
【００９３】
５）病態
以下はどれもダニ病原体の存在を示し得る：
−  色の変化：死ダニにおける黒ずみまたは完全な変色
−  死亡の前および／または後のクチクラの変化および膨張した外観
−  肛門または口器により基体に付着した死ダニ（一部の個々のダニは肛門により基体に付着して自然に死ぬので、これを病原体感染から分離するのは困難であり得る）
−  死ダニが萎む、および／または肛門から滲出される液体で満たされる
−  体の下で脚が伸び、湾曲ではなく硬直する
−  胞子が死ダニの外側に粉末状の外観として存在するが、死後にだけダニの体にコロニー形成する崩壊作用物質とは異なる
−  サイズ、活性または発生時間の変化。
【００９４】
病理学的変化を示すダニはさらに検査され、分析および新たなダニ培養への接種のためにグループに細分された後で、さらに分析される。
【００９５】
ウイルス殺ダニ剤
ウイルスの同定は、透過電子顕微鏡法により実行される。ペレットミキサーを用いて、最大２０匹のダニを０．０５ｍｌの脱イオン水中で均質化する。２０００ｇで２分間の低速遠心分離においてホモジネートを遠心分離する。５μｌの上清および５μｌの２％ホスホタングステン酸カリウム（potassium phosphotungsate）、酢酸ウラニル、または他のネガティブ染色剤を、大きいペトリ皿内のパラフィルム片上に一緒に置く。炭素被覆銅グリッドを液滴上に５分間浮遊させ、次にさらに２０分間空気乾燥させる。グリッドをＴＥＭ（倍率３２，０００〜６４，０００×）で検査し、ウイルス粒子を同定する。
【００９６】
感染の評価のために、上記のように培養セルにおいて病気のダニ１匹当たり２匹の感染していないダニを用いてダニを培養内に導入する。次に、病理学的効果の出現について、再度上記のように、培養をモニターする。このような効果が明らかな場合に、ハンクス平衡塩類溶液（ＨＢＳＳ）中での均質化によりダニ物質を調製する。次にホモジネートを分割し、基準物質を提供するためにアリコートを液体窒素上の気相中に保管する。
【００９７】
ホモジネートの残りを１５０００×ｇで２０分間の遠心分離により清澄化し、次に１３０，０００×ｇで３時間の遠心分離によりホモジネートをペレット化する。ホモジネートから調製したペレットを、１５〜３０％のスクロースの直線的なグラジエントにおいて１３５０００×ｇで２．５時間の遠心分離によりさらに精製する。ウイルス含有バンドの存在についてグラジエントを検査し、０．５ｍｌの画分で回収する。視覚的検出の限度に満たないレベルのウイルスの存在の同定を可能にするために、画分の光学濃度を２５４ｎｍの分光光度法により決定する。さらに、電子顕微鏡法（上記のようなＥＭグリッドにおけるネガティブ染色）によりウイルス粒子の存在について各画分を検査する。標準的な手順によりウイルスから核酸を単離し、次に、配列決定によって、あるいはデオキシリボヌクレアーゼ、リボヌクレアーゼ、およびマングビーンヌクレアーゼによる消化によってさらに特徴付ける。この実験手順は、他の節足動物からウイルスを単離するために使用されるものから誘導される。
【００９８】
作用物質の送達系および安定性が評価され、以下のように投与のために作用物質の安定した形態が調製される。これは、乾燥粉末またはマイクロカプセル化形態のような製剤により例示されるが、作用物質は即時または長期放出のために、液体、ペースト、または固体として調製されてもよい。
【００９９】
細胞培養系からの作用物質の生産（以下を参照）は、送達媒体の任意のアレルゲン効果を最小限にし、感染ダニのコロニーに由来する物質の生産と共に、あるいはその代わりに使用される。後者の場合、遠心分離などの分離技術により、回収前のダニの飢餓により、および／または標準的な技法を用いるＤｅｒおよび他の特定のタンパク質の免疫学的抽出により、アレルゲン含量は低減され得る。
【０１００】
様々なダニおよび他の種を用いて、直接効果およびアレルゲン性の両方の評価と共に、特異性が評価される。この研究の最終段階は、ヒトボランティアによる環境中の安全性試験を含み得る。
【０１０１】
閉塞（occluding）バキュロウイルスは環境的に安定しているので、ウイルス殺ダニ剤はこのようなウイルスにより例示されるが、非閉塞（non-occluding）バキュロウイルス、レオウイルスまたはレオウイルス様作用物質を含む（しかし、これらに限定されない）他のタイプのウイルスも開発され得る。
【０１０２】
ダニ細胞培養物
環境汚染物の持ち越し汚染を最小限にするために、培養のために使用するダニを滅菌水で洗浄し、および／または殺菌性（２５４ｎｍ）ＵＶ照射で処置する。
【０１０３】
ダニ細胞の培養は、原料として浸軟（macerated）イエダニを用いて確立される。これらは、昆虫細胞用に最適化された選択培地に接種される（２０）。これらには、ラクトアルブミン加水分解物（０．６５％）およびイーストレート（yeastolate）（０．５％）、８０％；ウシ胎児血清、２０％を含むミツハシおよびマラモロシュ（Maramorosch）の昆虫培地（アエデス・アルボピクツス（Aedes albopictus）（蚊）細胞株のために使用される通り）と、Ｌ−グルタミンに加えて５００ｍｇ／Ｌの塩化カルシウム、２８００ｍｇ／Ｌの塩化カリウム、３３３０ｍｇ／Ｌのラクトアルブミン加水分解物、３３３０ｍｇ／Ｌのイーストレートを含む、１０％の熱不活性化昆虫細胞培養試験ウシ胎児血清が補充されたグレースの（Grace’s）昆虫培地（スポドプテラ・フルギペルダ（Spodoptera frugiperda）（ヨトウガの一種（fall armyworm））細胞株Ｓｆ９のために使用される通り）が含まれる。細菌の成長を防止するために、培地は全て、組織培養使用のための標準的な抗生物質溶液（例えば、０．０１％の硫酸ストレプトマイシン／０．００６％のペニシリン−Ｇ）が補充されるべきである。
【０１０４】
細胞は、使い捨てプラスチック細胞培養フラスコにおいて２２〜２８℃で培養され、成長表面が被覆されるように培養される。細胞型は顕微鏡法により同定され、次に細胞は、トリプシン（平衡塩類溶液中０．２５％）と共に３７℃において機械的攪拌または消化により継代される。１９％無菌ＤＭＳＯを補充した成長培地中でアリコートを凍結させ、次に液体窒素の上に保管する。二次培養を調製する。細胞型は顕微鏡法により同定され、得られた細胞培養物は、単離したウイルス剤の成長および増殖のために使用される。
【０１０５】
細菌殺ダニ剤
ダニに疾患を引き起こす作用物質は、遠心分離および／またはろ過技術を用いて単離される。潜在的な作用物質を見逃さないことが重要なので、特定のタイプの細菌のための選択は使用されない。
【０１０６】
前のアッセイで殺されたダニまたはダニ細胞から調製される材料は、新たなダニ培養物に再接種される。ダニが再感染により殺される場合、抽出物が調製され、同定可能な細菌の存在について高出力光学顕微鏡法および低出力電子顕微鏡法により検査される。遠心分離による抽出物のさらなる精製は、再評価され得る半精製抽出物をもたらし、この抽出物から、適切なゲル培地上および液体培養物中で、作用物質のストックを調製することができる。このような条件下で成長するのが困難な細菌作用物質は、上記のような条件を用いて生ダニの中で培養される。
【０１０７】
これらの方法により単離された細菌は、染色、形態学的分析および核酸配列決定を含む標準的な分類技法により分類される。本発明はイエダニにおいて生存可能な伝染性の感染を確立する作用物質に限定され、従って、バチルス・チューリンゲンシス（Bacillus thuringiensis）（またはバチルス・ポピラエ（Bacillus popillae）などの関連の作用物質）の任意の変異体を含まない（これらの場合、腸の損傷、および結果としての敗血症を引き起こす結晶性毒素により死滅が媒介される）。
【０１０８】
イエダニの防除を示す精製抽出物に、繰り返しダニ毒性試験、環境安定性、および応答の一貫性を含む様々な検証試験を行うことができる。
【０１０９】
作用物質によるダニの死滅は様々な条件下で精査され、必要とされる場合には選択的繁殖により最適化される。これらの研究は、枕およびマットレスの内部、ならびにカーペットおよび布地を含む、生物学的殺ダニ剤の使用が意図される領域を再現する条件を使用してもよい。
【０１１０】
作用物質の送達系および安定性が評価され、以下のように投与のために作用物質の安定した形態が調製される。
【０１１１】
ダニを含まない培養系からの作用物質の生産は、送達媒体の任意のアレルゲン効果を最小限にするために使用される。しかしながら、個々の細菌を培養するのが困難であると判明したら、感染ダニのコロニーに由来する物質が使用されてもよい。後者の場合、遠心分離などの分離技術により、回収前のダニの飢餓により、および／または標準的な技法を用いるＤｅｒおよび他の特定のタンパク質の免疫学的抽出により、アレルゲン含量は低減され得る。
【０１１２】
様々なダニおよび他の種を用いて、直接効果およびアレルゲン性の両方の評価と共に、特異性が評価される。この研究の最終段階は、ヒトボランティアによる環境中の安全性試験を含み得る。
【０１１３】
原生動物または真菌殺ダニ剤
前のアッセイで殺されたダニから調製される材料は、新たなダニ培養物に再接種される。ダニが再感染により殺される場合、抽出物が調製され、同定可能な作用物質の存在について光学顕微鏡法により検査される。遠心分離による抽出物のさらなる精製は、再評価され得る半精製抽出物をもたらし、この抽出物から適切な培養物系において作用物質のストックを調製することができ、多くのこのような作用物質は宿主ダニの外側では成長が非常に悪いので、生ダニを含んでいてもよい。
【０１１４】
これらの方法により単離された作用物質は、形態学的分析および微小配列決定を含む標準的な分類技法により分類される。
【０１１５】
イエダニの防除を示す精製抽出物は、繰り返しダニ毒性試験、環境安定性、および応答の一貫性を含む様々な検証試験が行われる。
【０１１６】
作用物質によるダニの死滅は様々な条件下で精査され、必要とされる場合には選択的繁殖により最適化される。これらの研究は、枕およびマットレスの内部、ならびにカーペットおよび布地を含む、生物学的殺ダニ剤の使用が意図される領域を再現する条件を使用する。
【０１１７】
作用物質の送達系および安定性が評価され、以下のように投与のために作用物質の安定した形態が調製される。
【０１１８】
ダニを含まない培養系からの作用物質の生産は、送達媒体の任意のアレルゲン効果を最小限にするために最適である。しかしながら、個々の作用物質を培養するのが困難であると判明したら、感染ダニのコロニーに由来する物質が使用されてもよい。後者の場合、遠心分離などの分離技術により、回収前のダニの飢餓により、および／または標準的な技法を用いるＤｅｒおよび他の特定のタンパク質の免疫学的抽出により、アレルゲン含量は低減され得る。
【０１１９】
様々なダニおよび他の種を用いて、直接効果およびアレルゲン性の両方の評価と共に、特異性が評価される。この研究の最終段階は、ヒトボランティアによる環境中の安全性試験を含む。原生動物、真菌または線虫作用物質はそれ自体がアレルゲン性であり得るので、これらの作用物質の安全性試験は特に重要である。
【０１２０】
実施例１：既知の生物学的殺虫剤の効果
昆虫病原性真菌ビューベリア・バシアナ（Beauveria bassiana）、およびビューベリア・ブロングニアルティ（Beauveria brongniartii）の単離菌を病気の昆虫から採取し、特徴付けをし、殺ダニ効果を決定するために、そしてダニ培養法を用いて潜在的な病原体を回収するためのモデルとして、イエダニに対して２つの濃度で試験した。
【０１２１】
２．５×１０４胞子（低用量）または２．２５×１０７胞子（高用量）／接種材料の最終濃度を与えるように、真菌の懸濁液を調整した。次に、ダニが暴露され得る上側表面において、ダニ培養セルの底部のろ紙上に懸濁液を接種した。栄養分のみの対照処置を並行して実行した。
【０１２２】
セルの接種の直後に、少量の食物と共に実験室株の培養成虫イエダニ（ＨＤＭ）を単一のヘアペイントブラシを用いてセル内に入れ（２５匹のダニ／セル）、ブルドッグクリップで固定したガラス蓋でセルを密封した。処置間の相互汚染を防止するために各セルに対して別のグループのダニを使用し、処置の合間に全ての設備をエタノール中で滅菌した。２５℃および９０〜１００％相対湿度の小さいプラスチックデシケータ内にセルを入れた。
【０１２３】
５日後（低用量）または３日および６日後（高用量）にダニの死亡率について培養を検査した（図１）。
【０１２４】
低用量では、Ｂ．バシアナ（bassiana）は最高の効果を示し、５日後に２０％のダニが殺された。
【０１２５】
接種材料を８８０，０００胞子／ダニまで増大させると、Ｂ．バシアナ（bassiana）の殺ダニ活性が増大した。Ｂ．ブロングニアルティ（brongniartii）は、より高用量レベルのみでアッセイした。Ｂ．バシアナ（bassiana）はやはり最も効果的な作用物質であることが示され、６日後に６３％のダニが殺された。
【０１２６】
上記の結果は、イエダニがビューベリア（Beauveria）属の既知の昆虫病原真菌に対して用量依存性の感受性を示すこと、そして生物学的防除剤がイエダニの防除のために潜在的な用途を有していることを実証する。
【０１２７】
これらの真菌により殺されたダニの培養物（以下の実施例２を参照）は、真菌胞子がダニの外側に存在することを示した。
【０１２８】
実施例２：病原性作用物質の回収の実証
高用量の真菌作用物質を用いる実験において、死ダニを培養物から取り出し、高湿度を提供して真菌の発芽を支持するために、１％水道水の寒天上に置いた。
【０１２９】
真菌処置からのダニの死骸において腐生性真菌の成長が認められたが、対照処置からのダニでは認められなかった。上記のように、昆虫病原性真菌は通常宿主に侵入し、その中で複製した後、クチクラを通して破裂し、死骸の表面に胞子を生じる。このタイプの胞子形成は、死骸上の粉末状胞子の高密度の層の存在と、（あったとしても）わずかな菌糸とを特徴とする。ダニが死んだときにその上に存在するが死の原因ではない胞子は、ダニが死んだ後に発芽し、ダニを栄養に用いて菌糸として成長し得る。このタイプの成長は、ダニ表面に緩く成長するまばらな鎖様の構造を特徴とする。腐生成長が認められるという事実は、これらの接種方法を用いてダニが胞子と接触し、感染したことを示す。
【０１３０】
この一連の実験により、生物資源探査研究に使用した培養系内のダニはその環境中に存在する感染作用物質と接触し、それを捕集し得ること、従って、提唱される方法がこのような作用物質を培養環境から抽出する際に効果的であることが確認された。
【０１３１】
実施例３：粉塵サンプルからの病原体の同定
ダニ培養方法を用いて、環境物質の１３４個のサンプルを殺ダニ作用物質の存在についてアッセイした。これらは以下のものからなる：
イエダニ寄生の前歴がある家の中（またはイエダニ寄生を支持するために適正な湿度および温度条件）のカーペットからの粉塵の６０個のサンプル。
【０１３２】
２８個の家庭内サンプルは、モバイルサンプリングキット（ダニ捕獲のためにフィルタが挿入された、特別に作製された真空掃除機）を用いて局所的に採取した。２８個のサンプルのうち、１４個はマットレスから、１４個はカーペットからサンプリングした。
【０１３３】
局所的に入手したヒツジの寝床からの１０個のサンプル。これらのサンプルは、多くの場合、サンプルに曝露されたイエダニを殺し得る捕食性ダニを含有した。
【０１３４】
米国の供給源から供給された３６個のサンプル。１８個はカーペットから、１８個はマットレスから入手した。
【０１３５】
ハウスダストのサンプルは、局所的な家庭内環境から採取した。このサンプルは初期検査ではダニ活性の証拠を示さず、単一のセルに移した。採取の１３日後に実験室培養からのダニ（実験室株からの３０匹の成虫イエダニ）を加えた。接種の１０日後に病気のダニを同定した。これらのダニは、怠惰で動きが遅いように見えた。これらは膨張しており、変形または被覆されたかのようにクチクラの外観がくすんでいた。これらのダニを個々に小さいセルに移した。
【０１３６】
３日後に「病気の」ダニの５０％が死んでおり、ダニ表面に普通でない特徴が示された。洗浄により崩壊が起こり、構造的完全性の低下が実証された。
【０１３７】
透過電子顕微鏡法を用いて洗浄の残渣およびダニ物質を検査した。ダニ物質を１．５ｍｌの酢酸ウラニル（２％）中で浸軟させ、炭素被覆銅グリッドを液滴上に５分間浮遊させた。グリッドを２０分間空気乾燥させてから、×３６，０００〜６４，０００の倍率で検査した。酢酸ウラニルで染色した規則的な粒子を観察した。これらは平均すると直径７５ｎｍ（おおよそ）であり、ウイルスに予想されるサイズ範囲内に入る（図２）。
【０１３８】
サイズおよび染色特性ならびに生じた病理学的効果に基づいて、ハウスダストのサンプルは、イエダニ用の生物学的防除剤（すなわち、殺ダニ性感染作用物質）の家庭内サンプルからの単離を例証する。
【０１３９】
観察されるようなダニの死滅は、１３４サンプルのうちの１つによる接種からダニにおける病理学的効果の生成を実証し、このサンプルは、容易に入手可能な源から採取されたハウスダストのサンプルである。
【０１４０】
実施例４：崩壊したダニコロニーからの病原体の同定
代替的な感染作用物質源の可能性についての例において、これまで健康だったデルマトファゴイデス・ファリナエ（Dermatophagoides farinae）のコロニー培養物は、数が減少していることが観察され、ダニは普通でない運動性レベルの低下を示した。約１か月にわたって、生きている成虫ダニがほとんど見られなくなるまでコロニーは減少し続けた。
【０１４１】
約２週間後に、残っているコロニー培養物をそのデシケーターから取り出し、＋４℃の密封したポリバッグに入れた。７０％エタノールを用いてデシケーターを清浄にし、別の昆虫飼育場（insectary）に保持されたストックから代替コロニーを播種した。作用物質の明白な真菌性のために、そして真菌は交差特異的（cross-specific）活性を示すことが分かっているので、異なる種の健康なダニに対する真菌作用物質の任意の病原性効果を決定するために、保管したコロニー材料を続いて予備的な接種実験に使用した。
【０１４２】
この実験のために、約２５匹の健康な成虫または最終段階の未熟体（すなわち、第三若虫）Ｄ．プテロニシヌス（pteronyssinus）の４つのグループを、健康なコロニーストックから４つの新しい標準８ｃｍ×８ｃｍセルに移した。
【０１４３】
清浄なスパチュラを用いて、それぞれの種の３つのセルのそれぞれに約０．０５ｇのコロニー崩壊培養物を加えた。使用の前に、培養物を室温で約１時間平衡化させ、続いて生ダニの存在について実体顕微鏡下で観察した；何も見えなかった（いくつかの死ダニが見られた）。対照の役割を果たすそれぞれの種からの残りのセルに、清浄なスパチュラを用いて約０．０５ｇの新たな食物（標準的な予め調製した３：１の酵母／小麦粉混合物）を加えた。
【０１４４】
周囲温度（２２〜２５℃）および約７５％相対湿度の２つのデシケーター（それぞれの種に対して１つ）内にガラスを上にしてセルを入れ、全部で１か月間、病的状態の兆候および死亡数について数日ごとに観察した。接種の２０日後に、セルをホットランプの１５〜２０ｃｍ上方に２〜３分間保持して、セルの上部に置いた（ガラスを置き換える）黒色粘着ビニルシート上にダニを追い立てることにより、各セルから生存しているダニをカウントした。
【０１４５】
観察期間にわたって、セル内に存在する、生きている成虫ダニの数の全体的な減少が観察されたが、Ｄ．プテロニシヌス（pteronyssinus）対照は１匹の成虫ダニにより増大された。Ｄ．プテロニシヌス（pteronyssinus）は、対照セルと比べて３６〜５２％の成虫数の減少を示した（表１）。
【０１４６】
対照セルのダニは実験を通して健康に見え、ダニまたは培地（食糧）上に真菌成長の証拠はなかった。２週間後に、播種した全てのセルにおいて真菌成長のいくらかの証拠が明白であった。真菌は培地の粉末様の白色化として提示され、小さい菌糸が見られるだけである（図３）。成長は培地だけに限定されるようであり、ダニの動きを物理的に妨害しなかった。実験的に接種した両方の種のセル内の一部のダニは怠惰（特に、セルのガラストップを横切る運動性の低下）に見えた。さらに、接種されたセル内の一部のダニは、ガラス表面に固着して死んでおり、ダニの上および周囲に目に見える白色粉末様物質があった（図４）。
【０１４７】
【表１】
2018522074.tif 000003
【０１４８】
結論として、真菌として提示される殺ダニ性感染作用物質は、実験的に播種したセルにおけるいくつかの個体の運動性の低下として現れる、病的状態を引き起こすと思われる。遅い動きおよび死は播種したセルのガラス表面で見られ、成虫ダニの数は対照と比べて平均して４６％減少した。
【０１４９】
条項：
１）感染作用物質を含有する適切な製剤において生物学的防除生成物を適用することによってイエダニ寄生を処置または防止する方法であって、前記作用物質は、このような寄生の場所において、またはそこに近接して、イエダニの伝染性の感染を確立することにより殺ダニ効果を生じることができる。
【０１５０】
２）２つ以上の感染作用物質を含有する生物学的防除生成物を適用することによってイエダニ寄生を処置または防止する方法であって、前記作用物質は、このような寄生の場所において、またはそこに近接して、伝染性の感染を確立することにより殺ダニ効果を生じることができる。
【０１５１】
３）デルマトファゴイデス・プテロニシヌス（Dermatophagoides pteronissynus）、デルマトファゴイデス・ファリナエ（Dermatophagoides farinae）またはエウログリフス・マイネイ（Euroglyphus maynei）により例示される（しかし、これらに限定されない）、既知の種から選択される２種以上のイエダニを感染させる、条項１または条項２に従う生物学的防除生成物を適用することによってイエダニ寄生を処置または防止する方法。
【０１５２】
４）殺ダニ特性を有する作用物質を含有する条項１、２または３に従う生物学的防除生成物であって、その感染の作用物質は、バキュロウイルス（Baculoviridae）科のメンバーであり得るウイルスまたはダニを感染させる任意の他のウイルスである。
【０１５３】
５）天然に存在するダニの感染の作用物質を含有する条項１、２または３に従う生物学的防除生成物であって、その感染の作用物質は、毒素の効果により作用するバチルス・チューリンゲンシス（Bacillus thuringiensis）およびその変異体（これらは伝染性の感染を確立しないので本条項から排除される）以外の細菌である。
【０１５４】
６）天然に存在するダニの感染の作用物質を含有する条項１、２または３に従う生物学的防除生成物であって、その感染の作用物質は、ビューベリア（Beauveria）属、微胞子虫門（Microspora）の真菌、またはダニを感染させる任意の他の真菌であり得る真菌である。
【０１５５】
７）天然に存在するダニの感染の作用物質を含有する条項１、２または３に従う生物学的防除生成物であって、その感染の作用物質は原生動物である。
【０１５６】
８）条項４、５、６または７（またはこれらの組み合わせ）に従う成分を有する条項１、２または３に従う作用物質の使用方法であって、生成物は、ダニ由来アレルゲンによって引き起こされる、または増悪される任意の状態（喘息、アレルギー性鼻炎、皮膚炎または湿疹を含む（しかし、これらに限定されない））の処置として家庭内環境において適用される。
【０１５７】
９）条項４、５、６または７（またはこれらの組み合わせ）に従う成分を有する条項１、２または３に従う作用物質の使用方法であって、生成物は、ダニアレルゲンへの感作を防止する手段として家庭内環境において適用される。
【０１５８】
１０）商業、工業または医療環境におけるダニ由来アレルゲンによって引き起こされる、または増悪される任意の状態（喘息、アレルギー性鼻炎または湿疹を含む（しかし、これらに限定されない））の処置としての、条項４、５、６または７（またはこれらの組み合わせ）に従う成分を有する条項１、２または３に従う作用物質の使用方法。
【０１５９】
１１）商業、工業または医療環境におけるダニアレルゲンへの感作を防止する手段としての、条項４、５、６または７（またはこれらの組み合わせ）に従う成分を有する条項１、２または３に従う作用物質の使用方法。
【０１６０】
１２）環境源または耐性もしくは他のダニから単離された作用物質の天然に存在する変異体から単離および選択することにより、殺ダニ剤としてのその効力を最適化するため、またはイエダニによる耐性の発生に対抗するために、条項４〜７のいずれかに規定される作用物質の順応または選択的繁殖を含む方法。
【０１６１】
１３）亜硝酸、紫外光、または他の変異原性作用物質の使用により、殺ダニ剤としての効力を最適化するため、またはイエダニによる耐性の発生に対抗するために、条項４〜７のいずれかに規定される作用物質の突然変異または順応を含む方法。
【０１６２】
１４）寝具類、枕、カーペット、カーテン、内装材およびソフトファニシングを含む（しかし、これらに限定されない）ダニ生息地を散布、粉末の注入、または他の手段により処置するための、安定した乾燥粉末製剤（マイクロカプセル化形態を含む）中に条項４〜７のいずれかに規定される作用物質を含有する、条項１、２または３に規定される生成物の使用。
【０１６３】
１５）液体、ペーストまたは固体を含む（しかし、これらに限定されない）別のタイプの製剤中に条項４〜７のいずれかに規定される作用物質を含有する、条項１、２または３に規定される生成物の使用であって、餌場における使用を含む（しかし、これらに制限されない）。
【０１６４】
１６）ダニと共に使用するのに適した食物材料または誘引剤を含む別のタイプの製剤中に条項４〜７のいずれかに規定される作用物質を含有する、条項１、２または３に規定される生成物の使用。食物材料はダニ物質と一緒に提示されてもよいし、あるいはダニ物質をカプセル化するために使用されてもよい。これは、感染したダニ死骸全体を伴う提示または感染したダニ死骸全体のカプセル化を含み得る。
【０１６５】
１７）例えば、固体マトリックスから、あるいは布地、充填材、衣類または寝具類への含浸により、これらの生息地のダニによる寄生を防止または軽減するために、長期にわたる持続放出用に配合された条項４〜７のいずれかに規定される作用物質を含有する、条項１、２または３に規定される生成物の使用。
【０１６６】
１８）ダニコロニーまたは培養ダニ細胞を用いて、天然に存在する病原体または疾患を引き起こす生物に対してダニおよびダニ抽出物からの物質をスクリーニングし、このような系においてその殺ダニ効果を最適化することによる、条項４〜７のいずれかに規定される作用物質を含有する、条項１、２または３に規定される生成物の開発。
【０１６７】
１９）実質的に上文に記載される通りの本発明。
【０１６８】
本発明の範囲および趣旨から逸脱することなく、記載される本発明の方法およびシステムの種々の修正および変化は当業者には明らかであろう。本発明は特定の好ましい実施形態と関連して記載されているが、特許請求される本発明がこのような特定の実施形態に不当に限定されてはならないことは理解されるべきである。実際に、生化学およびバイオテクノロジーまたは関連分野の当業者には明らかである、本発明を実行するための記載されるモードの種々の修正は、以下の特許請求の範囲の範囲内にあることが意図される。
【図１】
2018522074.tif 000004
【図２】
2018522074.tif 000005
【図３】
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【図４】
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【手続補正書】
【提出日】平成30年4月5日(2018.4.5)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
イエダニ由来アレルゲンの濃度の増大を防止するための殺ダニ性感染作用剤であって、イエダニの中または上に伝染性の感染（作用剤の複製）をすることができ、そのために、イエダニの中または上において感染および複製することができない化学薬剤および殺ダニ作用剤（例えば、バチルス・チューリンゲンシス（Bacillus thuringiensis）またはバチルス・スファエリクス（Bacillus sphaericus）などの細菌からの毒素）とは構造的にも機能的にも異なる、殺ダニ性感染作用剤。
【請求項２】
イエダニ由来アレルゲンによって引き起こされる、または増悪される状態（例えば、喘息、アレルギー性鼻炎、皮膚炎、湿疹またはこれらの組み合わせを含む（しかし、これらに限定されない））を防止または処置するための、殺ダニ性感染作用剤であって、イエダニの中または上に伝染性の感染（作用剤の複製）をすることができ、そのためにイエダニの中または上において感染および複製することができない化学薬剤および殺ダニ作用剤（例えば、バチルス・チューリンゲンシス（Bacillus thuringiensis）またはバチルス・スファエリクス（Bacillus sphaericus）などの細菌からの毒素）とは構造的にも機能的にも異なる、殺ダニ性感染作用剤。
【請求項３】
イエダニ由来アレルゲンに対する被験者の感作を防止または低減するための殺ダニ性感染作用剤であって、イエダニの中または上に伝染性の感染（作用剤の複製）をすることができ、そして、そのためにイエダニの中または上において感染および複製することができない化学薬剤および殺ダニ性感染作用剤（例えば、バチルス・チューリンゲンシス（Bacillus thuringiensis）またはバチルス・スファエリクス（Bacillus sphaericus）などの細菌からの毒素）とは構造的にも機能的にも異なる、殺ダニ性感染作用剤。
【請求項４】
前記イエダニが、以下の属：デルマトファゴイデス（Dermatophagoides）属、エウログリフス（Euroglyphus）属またはこれらの組み合わせから選択される１つまたは複数である、請求項１〜３のいずれか一項に記載の殺ダニ性感染作用剤。
【請求項５】
前記イエダニが、以下の種：デルマトファゴイデス・プテロニシヌス（Dermatophagoides pteronissynus）、デルマトファゴイデス・ファリナエ（Dermatophagoides farinae）、デルマトファゴイデス・ミクロセラス（Dermatophagoides microceras）およびデルマトファゴイデス・シボネイ（Dermatophagoides siboney）、エウログリフス・マイネイ（Euroglyphus maynei）またはこれらの組み合わせから選択される１つまたは複数である、請求項１〜４のいずれか一項に記載の殺ダニ性感染作用剤。
【請求項６】
前記殺ダニ性感染作用剤が、ウイルス、細菌（例えば、前記細菌は、分泌タンパク毒素によって殺ダニ効果を発揮するバチルス・チューリンゲンシス（Bacillus thuringiensis）、バチルス・スファエリクス（Bacillus sphaericus）、および／またはこれらの変異体もしくは誘導体でないことを条件とする）、真菌、原生動物またはこれらの組み合わせである、請求項１〜５のいずれか一項に記載の殺ダニ性感染作用剤。
【請求項７】
前記殺ダニ性感染作用剤が細菌である、請求項１〜６のいずれか一項に記載の殺ダニ性感染作用剤。
【請求項８】
前記殺ダニ性感染作用剤がバキュロウイルス（Baculoviridae）科のウイルスである、請求項１〜７のいずれか一項に記載の殺ダニ性感染作用剤。
【請求項９】
前記殺ダニ性感染作用剤が、ビューベリア（Beauveria）属、微胞子虫門（Microspora）、またはこれらの組み合わせの真菌である、請求項１〜８のいずれか一項に記載の殺ダニ性感染作用剤。
【請求項１０】
前記殺ダニ性感染作用剤が、ビューベリア・バシアナ（Beauveria bassiana）種、ビューベリア・ブロングニアルティ（Beauveria brongniartii）種またはこれらの組み合わせの真菌である、請求項１〜９のいずれか一項に記載の殺ダニ性感染作用剤。
【請求項１１】
前記殺ダニ性感染作用剤が２つ以上のイエダニ種に感染する、請求項１〜１０のいずれか一項に記載の殺ダニ性感染作用剤。
【請求項１２】
請求項１〜１１のいずれか一項に記載の殺ダニ性感染作用剤を２つ以上含む、組成物。
【請求項１３】
イエダニ寄生を処置または防止する方法であって、イエダニ寄生場所、またはそこに近接する場所、またはこのような寄生の危険性がある場所に、請求項１〜１１のいずれか一項に記載の殺ダニ性感染作用剤又は請求項１２に記載の組成物を適用することを含む、方法。
【請求項１４】
前記殺ダニ性感染作用剤が、布地、寝具類、内装材、パッド入り調度品、ソフト玩具、カーペット、カーテン、充填材、衣類、ソフトファニシングまたはこれらの組み合わせに適用される、請求項１３に記載の方法。
【請求項１５】
請求項１〜１１のいずれか一項に記載の殺ダニ性感染作用剤を単離するための方法であって、
ａ．ｉ．試験サンプルから提供される候補イエダニまたはその抽出物、および
ｉｉ．標的イエダニまたはその細胞培養物
を混合することにより混合物を形成することと、
ｂ．前記標的イエダニまたはその細胞培養物を有害な病理学的変化の存在または不在についてモニターすることと、
ｃ．有害な病理学的変化の存在が観察されたときに、前記混合物もしくは試験サンプルからまたはその構成要素から、殺ダニ性感染作用剤を単離することと
を含む方法。
【請求項１６】
イエダニ寄生を処置または防止するためのレディ・トゥ・ユース製剤であって、
請求項１〜１１のいずれか一項に記載の殺ダニ性感染作用剤を含み、
以下の形態のうちの１つまたは複数をとる製剤：
ｉ）カーペットまたは他の表面に、好ましくは日常的な洗浄を受けていない領域に、配合された殺ダニ性感染作用剤を散布または噴霧するのに適したキャニスターまたは他の容器；
ｉｉ）浸透チューブを通して内装材または寝具類に導入するのに適した容器であって、好ましくは、製剤が加圧容器からの空気または不活性キャリアガスの流れにより注入される、容器；
ｉｉｉ）有効なレベルの作用剤を長期にわたって放出させるように設計された固体マトリックス、または布もしくは他の材料に含浸されたもの；および／または
ｉｖ）前記ダニと共に使用するのに適した食物材料であって、好ましくは、殺ダニ性感染作用剤をカプセル化する、食物材料、または誘引剤。
【請求項１７】
乾燥製剤または液体製剤である、請求項１６に記載の製剤。
【請求項１８】
前記乾燥製剤が固体（好ましくは、粉末）またはペーストである、請求項１７に記載の製剤。
【請求項１９】
前記殺ダニ性感染作用剤がマイクロカプセル化される、請求項１７または１８に記載の製剤。
【請求項２０】
前記食物材料が、肝臓フレーク、ペットフード、酵母および／または小麦粉、ダニ、ダニ物質、死んだダニの死骸、またはこれらの組み合わせを含む、請求項１６に記載の製剤。
【国際調査報告】
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