(57)【要約】  本発明は、治療剤を含む腸溶性コーティングリオスフェア（ｌｙｏｓｐｈｅｒｅ）を調製するための工程であって、ａ）治療剤を含むリオスフェア（ｌｙｏｓｐｈｅｒｅ）を提供し；ｂ）このリオスフェア（ｌｙｏｓｐｈｅｒｅ）を腸溶性ポリマーコーティング組成物でコーティングし；ｃ）この腸溶性コーティングリオスフェア（ｌｙｏｓｐｈｅｒｅ）を単離することを含む工程を提供する。他の実施形態において、本発明は、有効量の治療剤および腸溶性ポリマーコーティングを含むリオスフェア（ｌｙｏｓｐｈｅｒｅ）を含む剤形を提供する。いくつかの実施形態において、本工程または剤形中の治療剤は、ポリペプチド、タンパク質、ペプチド、リポペプチド、糖タンパク質、融合タンパク質、タンパク質複合体、サイトカイン、酵素、抗体、オリゴヌクレオチド、ワクチンベクター、小分子、生ウイルス、不活化ウイルス、ウイルス様粒子、ウイルスタンパク質サブユニット、アジュバント、マイクロバイオーム、プレバイオティクス、プロバイオティクスまたはエクトバイオティクス（ｅｃｔｏｂｉｏｔｉｃ）である。本発明のいくつかの実施形態において、経口投与後、腸溶性コーティングリオスフェア（ｌｙｏｓｐｈｅｒｅ）を含有する剤形は、対象における回腸、回腸−盲腸接合部、結腸またはこれらの組み合わせに治療剤を送達させる方法を提供する。【選択図】図１Ａ
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
治療剤を含む腸溶性コーティングリオスフェア（ｌｙｏｓｐｈｅｒｅ）を調製するための工程であって、
ａ）前記治療剤を含むリオスフェア（ｌｙｏｓｐｈｅｒｅ）を提供し；
ｂ）前記リオスフェア（ｌｙｏｓｐｈｅｒｅ）を腸溶性ポリマーコーティング組成物でコーティングし；そして
ｃ）前記腸溶性コーティングリオスフェア（ｌｙｏｓｐｈｅｒｅ）を単離すること
を含む工程。
【請求項２】
段階ｂ）において、前記腸溶性ポリマーコーティング組成物が、アクリル酸またはメタクリル酸コポリマー、カルボン酸含有セルロース系ポリマー、カルボン酸含有ポリ酢酸ビニルコポリマーまたはセラックから選択されるアニオン性ポリマーを含む、請求項１に記載の工程。
【請求項３】
前記アクリル酸またはメタクリル酸コポリマーが、ポリ（メタクリル酸、メタクリル酸メチル）１：１、ポリ（メタクリル酸、メタクリル酸メチル）１：２、ポリ（メタクリル酸、アクリル酸エチル）１：１；またはポリ（アクリル酸メチル、メタクリル酸メチル、メタクリル酸）７：３：１であり、
前記カルボン酸含有セルロース系ポリマーが、ヒドロキシプロピルメチルセルロースフタレート、セルロースアセテートフタレート（ＣＡＰ）、セルロースアセテートトリメリテート、ヒドロキシプロピルメチルセルローススクシネートであり；そして
前記カルボン酸含有ポリ酢酸ビニルコポリマーが、ポリビニルアセテートフタレートである、
請求項２に記載の工程。
【請求項４】
段階ｂ）が、前記リオスフェア（ｌｙｏｓｐｈｅｒｅ）に対して前記腸溶性ポリマーコーティング組成物での噴霧または浸漬コーティングを行うことを含む、請求項１に記載の工程。
【請求項５】
前記コーティング段階ｂ）が、前記リオスフェア（ｌｙｏｓｐｈｅｒｅ）に対して前記腸溶性ポリマーコーティング組成物での噴霧コーティングを行うことを含む、請求項４に記載の工程。
【請求項６】
前記噴霧コーティングが、ボトムスプレーコーティング、タンジェンシャルスプレーコーティングまたはパンコーティングである、請求項５に記載の工程。
【請求項７】
前記腸溶性ポリマーコーティング組成物が、水性媒体中で分散される、請求項６に記載の工程。
【請求項８】
前記コーティングおよび単離工程の結果、少なくとも１０ｗｔ．％の重量増加を有する腸溶性コーティングリオスフェア（ｌｙｏｓｐｈｅｒｅ）が生じる、請求項１に記載の工程。
【請求項９】
前記腸溶性ポリマーコーティング組成物が、可塑剤、粘着防止剤（ｄｅｔａｃｋｉｆｉｅｒ）または界面活性剤をさらに含む、請求項１に記載の工程。
【請求項１０】
段階ａ）での前記リオスフェア（ｌｙｏｓｐｈｅｒｅ）が、
水性媒体中で、前記治療剤、糖および結合ゲル形成剤を混合して、水性媒体混合物を形成させ；
前記水性媒体混合物を単位体積に分け；
前記単位体積を凍結させて、単位形態を形成させ；そして
前記単位形態から水を分離させて、前記リオスフェア（ｌｙｏｓｐｈｅｒｅ）を生じさせること
により調製される、請求項１に記載の工程。
【請求項１１】
前記分離することが、伝導または放射が主要な乾燥下で前記単位形態を乾燥させて前記リオスフェア（ｌｙｏｓｐｈｅｒｅ）を生じさせることを含む、請求項１０に記載の工程。
【請求項１２】
前記分ける、凍結および分離段階が、
固形要素の予め冷却した平坦面上で前記水性媒体混合物を単位体積に分けて、前記単位形態を形成させ；
前記平坦面から前記単位形態を取り除き；そして
伝導または放射が主要な乾燥下で前記単位形態を乾燥させて、前記リオスフェア（ｌｙｏｓｐｈｅｒｅ）を生じさせること
を含む、請求項１０に記載の工程。
【請求項１３】
前記分離することが、真空下で前記単位形態を乾燥させて前記リオスフェア（ｌｙｏｓｐｈｅｒｅ）を生じさせることを含む、請求項１０に記載の工程。
【請求項１４】
前記分ける、凍結および分離段階が、
固形要素の空洞に前記水性媒体混合物を充填し；
空洞壁を通じて前記水性媒体混合物から熱を伝導により抽出することによって、前記空洞中に存在させながら前記水性媒体混合物を凍結させて、前記単位形態を形成させ；
前記空洞から前記単位形態を取り除き；そして
真空下で前記単位形態を乾燥させて、前記リオスフェア（ｌｙｏｓｐｈｅｒｅ）を得ること
を含む、請求項１０に記載の工程。
【請求項１５】
前記結合ゲル形成剤が、セルロース系ポリマー、ポリビニルピロリドン、デンプン、ゼラチン、ポリエチレングリコール、ワックス、天然ゴム、合成ゴムまたはこれらの組み合わせである、請求項１０に記載の工程。
【請求項１６】
前記の結合ゲル形成剤が、ヒドロプロピルメチルセルロース（ｈｙｄｒｏｐｒｏｐｙｌｍｅｔｈｙｌ  ｃｅｌｌｕｌｏｓｅ）、ヒドロキシプロピルセルロース、メチルセルロース、微結晶セルロース、エチルセルロースまたはこれらの組み合わせから選択されるセルロース系ポリマーである、請求項１５に記載の工程。
【請求項１７】
前記結合ゲル形成剤がヒドロキシプロピルメチルセルロースである、請求項１６に記載の工程。
【請求項１８】
前記結合ゲル形成剤が、２〜４０％ｗ／ｖの前記水性媒体混合物を含む、請求項１０に記載の工程。
【請求項１９】
前記糖が、トレハロース、スクロース、グルコース、ガラクトース、マルトース、ラクトース、ラフィノース、フルクトース、サッカロース、マンニトール、ソルビトール、キシリトールまたはこれらの組み合わせである、請求項１０に記載工程。
【請求項２０】
前記糖がトレハロースである、請求項１９に記載の工程。
【請求項２１】
前記糖が、トレハロースおよびマンニトールの組み合わせである、請求項１９に記載の工程。
【請求項２２】
前記水性媒体混合物が少なくとも８％ｗ／ｖの糖を含む、請求項１９に記載の工程。
【請求項２３】
前記糖がトレハロースであり、前記結合ゲル形成剤がヒドロキシプロピルメチルセルロースである、請求項１０に記載の工程。
【請求項２４】
トレハロースとヒドロキシプロピルメチルセルロースとの比が１０：１〜１：５である、請求項２３に記載の工程。
【請求項２５】
前記水性媒体混合物がゼラチン非存在下で混合される、請求項１０に記載の工程。
【請求項２６】
治療剤、および、リオスフェア（ｌｙｏｓｐｈｅｒｅ）上でコーティングされる腸溶性ポリマーを含む前記リオスフェア（ｌｙｏｓｐｈｅｒｅ）を含有する剤形であって、有効量の前記治療剤を含む、剤形。
【請求項２７】
前記リオスフェア（ｌｙｏｓｐｈｅｒｅ）が、糖および結合ゲル形成剤を含む、請求項２６に記載の剤形。
【請求項２８】
前記腸溶性ポリマーコーティングの非存在下でのリオスフェア（ｌｙｏｓｐｈｅｒｅ）の全重量に対して、
前記糖が前記リオスフェア（ｌｙｏｓｐｈｅｒｅ）の２０〜９０％ｗ／ｗであり、
前記結合ゲル形成剤が前記リオスフェア（ｌｙｏｓｐｈｅｒｅ）の１０〜８０％ｗ／ｗである、
請求項２７に記載の剤形。
【請求項２９】
治療剤および第１の腸溶性コーティングを含有する第１のリオスフェア（ｌｙｏｓｐｈｅｒｅ）と；
前記治療剤および第２の腸溶性コーティングを含有する第２のリオスフェア（ｌｙｏｓｐｈｅｒｅ）と、
を含む剤形。
【請求項３０】
前記第１および第２の腸溶性コーティングが、同じ腸溶性ポリマーを含む、請求項２９に記載の剤形。
【請求項３１】
前記第２の腸溶性コーティングリオスフェア（ｌｙｏｓｐｈｅｒｅ）が、前記第１の腸溶性コーティングリオスフェア（ｌｙｏｓｐｈｅｒｅ）よりも１０〜２００重量％多くの腸溶性コーティングを含有する、請求項３０に記載の剤形。
【請求項３２】
前記第２の腸溶性コーティングが、前記第１の腸溶性コーティングよりも高いｐＨで可溶性である、請求項２９に記載の剤形。
【請求項３３】
前記第２の腸溶性コーティングが、６．８以上のｐＨで可溶性であり、前記第１の腸溶性コーティングが５を上回るｐＨで可溶性である、請求項３２に記載の剤形。
【請求項３４】
第１の治療剤および第１の腸溶性コーティングを含有する第１のリオスフェア（ｌｙｏｓｐｈｅｒｅ）と；
第２の治療剤および第２の腸溶性コーティングを含有する第２のリオスフェア（ｌｙｏｓｐｈｅｒｅ）と、
を含む剤形。
【請求項３５】
前記第１のリオスフェア（ｌｙｏｓｐｈｅｒｅ）が、第１の糖および第１の結合ゲル形成剤をさらに含み；
前記第２のリオスフェア（ｌｙｏｓｐｈｅｒｅ）が、第２の糖および第２の結合ゲル形成剤をさらに含み；そして
以下の条件：
前記第１の糖および前記第２の糖が異なること；または
前記第１の結合ゲル形成剤および第２の結合ゲル形成剤が異なること
のうち少なくとも１つが適用される、
請求項３４に記載の剤形。
【請求項３６】
ｐＨ非依存性ポリマーコーティングでコーティングされる治療剤を含むコーティングリオスフェア（ｌｙｏｓｐｈｅｒｅ）と；
前記ｐＨ非依存性ポリマーコーティングを覆う腸溶性ポリマーコーティングと、
を含む剤形。
【請求項３７】
剤形が、カプセル剤、錠剤またはサシェ剤である、請求項２６〜３６の何れか１項に記載の剤形。
【請求項３８】
有効量の治療剤を含むリオスフェア（ｌｙｏｓｐｈｅｒｅ）を含有する剤形を投与することを含む、疾患または障害を処置する方法であって、前記リオスフェア（ｌｙｏｓｐｈｅｒｅ）が、それを必要とする対象への腸溶性コーティングを含有する、方法。
【請求項３９】
処置されている疾患または障害が、小腸または大腸に影響を及ぼす疾患または障害である、請求項３８に記載の方法。
【請求項４０】
処置されている疾患または障害が、炎症性腸疾患またはＣ．ディフィシル（Ｃ．ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ）感染である、請求項３８に記載の方法。
【請求項４１】
治療剤を含有するリオスフェア（ｌｙｏｓｐｈｅｒｅ）を含有する剤形を投与することを含む、対象において空腸、回腸、回腸−盲腸接合部、結腸またはこれらの組み合わせに治療剤を送達させる方法であって、前記リオスフェア（ｌｙｏｓｐｈｅｒｅ）が前記対象への腸溶性コーティングを含有する、方法。
【請求項４２】
請求項１〜４１の何れか１項に記載の、工程、剤形または方法であって、前記治療剤が、ポリペプチド、タンパク質、ペプチド、リポペプチド、糖タンパク質、融合タンパク質、タンパク質複合体、サイトカイン、酵素、抗体、オリゴヌクレオチド、ワクチンベクター、小分子、生ウイルス、不活化ウイルス、ウイルス様粒子、ウイルスタンパク質サブユニット、アジュバント、マイクロバイオーム、プレバイオティクス、プロバイオティクスまたはエクトバイオティクス（ｅｃｔｏｂｉｏｔｉｃ）である、工程、剤形または方法。
【請求項４３】
前記治療剤の分子量が９００ダルトンを超える、請求項４２に記載の、工程、剤形または方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、対象への処方物の経口投与後に、消化管の特定領域、例えば、小腸または結腸に治療剤を送達させるのに有用な医薬処方物を調製するための工程に関する。
【背景技術】
【０００２】
このセクションまたは本願の何れかのセクション中の何れの刊行物の特定も、このような刊行物が本発明に対する先行技術であることを認めるものではない。
【０００３】
結腸および消化管内の他の部位への薬物の選択的送達が可能である医薬処方物の開発には、かなりの関心が寄せられている。結腸への部位特異的送達は、医薬品の開発に一定の利点をもたらす。結腸に特異的な治療剤の送達によって、主に結腸に影響を与える疾患および障害の処置が可能になる。薬物の選択的送達から恩恵を受け得る結腸の障害としては、クローン病および潰瘍性大腸炎、過敏性腸症候群、痙攣性結腸、Ｃ．ディフィシル（Ｃ．ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ）感染、便秘および結腸癌などの消化器系の腸疾患が挙げられるが、限定されるものではない。
【０００４】
経口投与処方物を使用して消化管にこのような化合物を送達させる能力によって、より好都合な投与およびより良好な患者コンプライアンスがもたらされる。さらに、経口経路を介した消化管への治療剤の局所的送達は、このような化合物の非経口投与に付随する副作用を低減しながら、薬剤の有効性を改善することにつながり得る。結腸は、通過がゆっくりであり、その容積が小さく、その中に激しい撹拌がなく、それにより薬物の安定化に有利な局所状態を生じさせることが可能になるため、好ましい送達部位とされることが多い。結腸はまた、薬物安定性に悪影響を及ぼし得る特定の消化酵素（プロテアーゼ）もない。
【０００５】
時間放出、ｐＨ応答性または微生物誘発性アプローチを含め、消化管への部位特異的送達のためのいくつかのアプローチが採用されている。時間に基づく放出機序を使用する送達系は、ヒトにおける典型的な消化管通過時間を考慮しており、小腸および大腸における薬物の放出を達成しようとする。微生物惹起薬物送達系は、小腸における消化に抵抗しながら、結腸におけるポリマーコーティングを消化するために結腸微生物叢を利用する。ｐＨ応答機序に基づく送達系は、腸における特定部位での薬物送達を標的とするために、腸管の異なる領域に関連するｐＨに基づいて薬物放出を惹起するように設計される。
【０００６】
ｐＨ感受性（腸溶性）コーティングの使用により、小腸への部位特異的送達が長年にわたって達成されてきた。処方物、特にポリマーのタイプを最適化することによって、消化管を伴う特定の標的部位への送達を達成し得る。このアプローチは、小分子治療剤を送達するための腸溶性剤形を提供することに成功している一方で、タンパク質などの生物学的高分子治療剤を送達するためのこのアプローチの使用は、このような腸溶性処方物を調製するために使用される処方および加工方法に対するこのような薬剤の感受性ゆえに、それほど成功していない。
【０００７】
リオフィレート（ｌｙｏｐｈｉｌａｔｅ）の初期調製を含め、生物学的高分子治療剤（例えばタンパク質性薬剤）に関連する感受性の問題を克服するための様々な試みが提案されている。例えば、米国特許第５，５９７，５６２号明細書は、消化管からの顆粒球コロニー刺激因子およびエリスロポエチンの吸収を可能にすることが述べられる医薬製剤を開示する。この特許は、タンパク質、脂肪酸、任意の賦形剤を含有する溶液を緩衝溶液中で凍結乾燥して粉末を形成させることによって薬物製剤が調製されることを開示する。粉末は、カプセルに充填するか、または顆粒に成形するかの何れかのために使用され、次いでこれが腸溶性コーティングされる。
【０００８】
同様に、米国特許第３，８６０，４９０号明細書および同第３，７６７，７９０号明細書は、制御放出処方物を提供するために親水性ポリアクリレートまたはポリメタクリレート中にインフルエンザワクチンを封入することを開示する。米国特許第４，３９７，８４４号明細書は、免疫応答を増加させ、錠剤または錠剤コアを作製するために固形賦形剤とともに処方されると言われる、インフルエンザワクチンの誘導体を含む抗原の化学的誘導体の形成を開示する。欧州特許第Ａ８６／０６６３５号明細書は、経口投与の際に粘膜上皮と相互作用するための免疫原の複合体を開示する。Ｍｅｒｃｉｅｒ，Ｇ．Ｔ  ｅｔ  ａｌ．ｉｎ  Ｏｒａｌ  Ｉｍｍｕｎｉｚａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｒｈｅｓｕｓ  Ｍａｃａｑｕｅｓ  ｗｉｔｈ  Ａｄｅｎｏｖｉｒａｌ  ＨＩＶ  Ｖａｃｃｉｎｅｓ  Ｕｓｉｎｇ  Ｅｎｔｅｒｉｃ−Ｃｏａｔｅｄ  Ｃａｐｓｕｌｅｓ，Ｖａｃｃｉｎｅ  ２５，ｐｐ８６８７−８７０１（２００７）は、凍結乾燥アデノウイルスベクターを含有する腸溶性コーティングされたヒドロキシプロピルメチルセルロースカプセルを開示する。
【０００９】
単位剤形（カプセル／錠剤）を腸管に標的化するために腸溶性コーティングされる、カプセルに充填されるかまたは錠剤に圧縮される従来の凍結乾燥バルク粉末アプローチの使用にはいくつかの欠点がある。凍結乾燥バルク粉末は綿毛状であることが多く、かさ密度が低くなり、その結果、粉体流が不十分となる。粉体流を改善するために、凍結乾燥バルクは、滑沢剤、崩壊剤および充填剤などの他の一般的に使用される医薬賦形剤とともに流動促進剤などの流動を促進する薬剤と混合されることが多い。粉末混合物が適切な流動性にならない場合、カプセル充填または錠剤圧縮などの続く下流加工中の用量装填に一貫性がなくなり、その結果、最終剤形における用量均一性が不良になる。さらに、タンパク質などの高分子は、賦形剤との化学的不安定性のために、賦形剤との混合中に小分子と比較してより容易に不安定化する。さらに、高分子は、錠剤圧縮工程中またはカプセルに充填するために使用される充填工程において高分子に対して誘発される物理的ストレスゆえに、分解しがちである。
【００１０】
さらに、カプセルを腸溶性コーティングする工程において、コーティング段階中にゼラチン殻の軟化が起こり得る。ポリマー性フィルムはまた、コーティング段階中、特に有機溶媒によるコーティングを使用する場合、カプセルへの接着が不十分になり得、その結果、カプセルの剥離および断裂が起こる。コーティング段階から生じる他の欠点としては、カプセル本体およびキャップの分離によって引き起こされるカプセルからの粉末漏出が挙げられる。カプセルの保全性が不十分であると、その結果、腸溶性コーティング工程の乾燥段階中にポリマー性フィルムにひび割れも生じ得る。
【００１１】
貯蔵および適切な剤形へのさらなる加工のために生物学的材料を調製するためにリオフィレート（ｌｙｏｐｈｉｌａｔｅ）が使用されてきたが、一方で、このような材料を調製するための別の技術は、リオスフェア（ｌｙｏｓｐｈｅｒｅ）を調製することを含む。米国特許第３，６５５，８３８号明細書は、診断試験のための様々な生物学的材料を含む様々な溶液の個別の凍結乾燥のための工程を開示する。簡単に述べると、この工程は、各溶液の液滴を液体窒素と直接接触させ、その結果、瞬間的に凍結させることを含む。凍結した液滴を凍結乾燥機に移し、続いて乾燥させる。得られる乾燥球体はリオスフェア（ｌｙｏｓｐｈｅｒｅ）と呼ばれる。第１のリオスフェア（ｌｙｏｓｐｈｅｒｅ）は、その形態および名称が、球形の液滴として凍結され、その後、凍結乾燥されるという事実に負っている。何らかの可能な形態の少量の流体はまた、それらを低温面に接触させることによって、例えば、冷たい熱伝導表面の小さな穴に幾分かの流体を添加し、続いて凍結乾燥することによって、凍結させることもできる。
【００１２】
米国特許第９，１１９，７９４号明細書は、錠剤の形態であるリオスフェア（ｌｙｏｓｐｈｅｒｅ）を形成させるための工程も開示する。このような工程は、経口使用に適切である医薬物質を含有する速崩壊性錠剤をもたらすことが可能であることが開示される。
【００１３】
米国特許出願公開第２０１４／０２９４８７２号明細書は、生物学的材料の凍結乾燥ペレットを調製するための工程を開示する。ペレットは、実質的に球状であると言われ、平坦な固体表面、特に空洞がない表面上で所望の生物学的材料の液体組成物の液滴を凍結させ、続いて凍結液滴を凍結乾燥することによって調製される。これらの工程は、高濃度の所望の生物学的材料、特に治療用タンパク質またはワクチンを有し、再構成時間がバイアル中で調製される凍結乾燥粉末ケーキよりも速い凍結乾燥ペレットを調製するのに有用であると言われる。
【００１４】
特に高分子治療剤に適する腸溶性コーティング剤形を調製するための新規工程が望ましい。患者において回腸、回腸−盲腸接合部、結腸またはこれらの組み合わせに治療剤を特異的に送達させる新規剤形は、医療従事者に疾患または障害を処置するためのさらなる選択肢をもたらす。例えば、過敏性腸疾患またはＣ．ディフィシル（Ｃ．ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ）感染などの特定の障害の治療において、消化管のこのような区分に治療剤を送達させることが特に望ましい。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１５】
【特許文献１】米国特許第５，５９７，５６２号明細書
【特許文献２】米国特許第３，８６０，４９０号明細書
【特許文献３】米国特許第３，７６７，７９０号明細書
【特許文献４】米国特許第４，３９７，８４４号明細書
【特許文献５】欧州特許第Ａ８６／０６６３５号明細書
【特許文献６】米国特許第３，６５５，８３８号明細書
【特許文献７】米国特許第９，１１９，７９４号明細書
【特許文献８】米国特許出願公開第２０１４／０２９４８７２号明細書
【非特許文献】
【００１６】
【非特許文献１】Ｍｅｒｃｉｅｒ，Ｇ．Ｔ  ｅｔ  ａｌ．ｉｎ  Ｏｒａｌ  Ｉｍｍｕｎｉｚａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｒｈｅｓｕｓ  Ｍａｃａｑｕｅｓ  ｗｉｔｈ  Ａｄｅｎｏｖｉｒａｌ  ＨＩＶ  Ｖａｃｃｉｎｅｓ  Ｕｓｉｎｇ  Ｅｎｔｅｒｉｃ−Ｃｏａｔｅｄ  Ｃａｐｓｕｌｅｓ，Ｖａｃｃｉｎｅ  ２５，ｐｐ８６８７−８７０１（２００７）
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１７】
本発明は、このような工程、剤形および送達方法を提供する。
【課題を解決するための手段】
【００１８】
一態様において、本発明は、治療剤を含む腸溶性コーティングリオスフェア（ｌｙｏｓｐｈｅｒｅ）を調製するための工程であって、
ａ）治療剤を含むリオスフェア（ｌｙｏｓｐｈｅｒｅ）を提供し；
ｂ）このリオスフェア（ｌｙｏｓｐｈｅｒｅ）を腸溶性ポリマーコーティング組成物でコーティングし；そして
ｃ）この腸溶性コーティングリオスフェア（ｌｙｏｓｐｈｅｒｅ）を単離すること
を含む工程を提供する。
【００１９】
別の態様において、本発明は、有効量の治療剤および腸溶性ポリマーコーティングを含むリオスフェア（ｌｙｏｓｐｈｅｒｅ）を含む剤形を提供する。
【００２０】
さらに別の態様において、本発明は、
治療剤および第１の腸溶性コーティングを含有する第１のリオスフェア（ｌｙｏｓｐｈｅｒｅ）と；
この治療剤および第２の腸溶性コーティングを含有する第２のリオスフェア（ｌｙｏｓｐｈｅｒｅ）と、
を含む剤形を提供する。
【００２１】
別の態様において、本発明は、
第１の治療剤および第１の腸溶性コーティングを含有する第１のリオスフェア（ｌｙｏｓｐｈｅｒｅ）と；
第２の治療剤および第２の腸溶性コーティングを含有する第２のリオスフェア（ｌｙｏｓｐｈｅｒｅ）と、
を含む剤形を提供する。
【００２２】
さらに別の態様において、本発明は、ｐＨ非依存性ポリマーコーティングでコーティングされた治療剤を含むコーティングリオスフェア（ｌｙｏｓｐｈｅｒｅ）と、ｐＨ非依存性ポリマーコーティングを覆う腸溶性ポリマーコーティングと、を含む剤形を提供する。
【００２３】
別の態様において、本発明は、治療剤を含むリオスフェア（ｌｙｏｓｐｈｅｒｅ）を含有する剤形を投与することを含む、疾患または障害を処置する方法であって、このリオスフェア（ｌｙｏｓｐｈｅｒｅ）が、それを必要とする対象への腸溶性コーティングを含有する、方法を提供する。
【００２４】
さらに別の態様において、本発明は、有効量の治療剤を含有するリオスフェア（ｌｙｏｓｐｈｅｒｅ）を含有する剤形を投与することを含む、対象において空腸、回腸、回腸−盲腸接合部、結腸またはこれらの組み合わせに治療剤を送達させる方法であって、このリオスフェア（ｌｙｏｓｐｈｅｒｅ）が、その患者への腸溶性コーティングを含有する、方法を提供する。
【図面の簡単な説明】
【００２５】
【図１Ａ】図１Ａは、非コーティングミオグロビンと比較した、ｐＨ７．４の１０ｍＭリン酸緩衝食塩水中で溶解後の、λ４１０ｎｍでＵＶ−Ｖｉｓ分光法によって測定した場合の、腸溶性コーティングリオスフェア（ｌｙｏｓｐｈｅｒｅ）からのミオグロビンの収率回収を示す。
【図１Ｂ】図１Ｂは、非コーティングミオグロビンと比較した、ｐＨ７．４の１０ｍＭリン酸緩衝食塩水中で溶解後の、円二色性によって測定した場合の、腸溶性コーティングリオスフェア（ｌｙｏｓｐｈｅｒｅ）からのミオグロビンの二次構造の回収を示す。
【図２】図２は、リオスフェア（ｌｙｏｓｐｈｅｒｅ）を、ＳＧＦ、続いてＦＡＳＳＩＦおよびＳＣｏＦ中で温置したときに、λ４１０ｎｍでＵＶ−Ｖｉｓ分光法によって測定した場合の、経時的な腸溶性コーティングリオスフェア（ｌｙｏｓｐｈｅｒｅ）からのミオグロビンの溶解挙動および放出を示す。
【図３Ａ】図３Ａは、ＵＶ−Ｖｉｓ分光法によって測定した場合の、過酸化水素の存在下での、基質グアヤコールを酸化するミオグロビンの酸化能の能力を示す。
【図３Ｂ】図３Ｂは、人工胃液（ＳＧＦ）、続いて人工空腹時小腸液（ＦＡＳＳＩＦ）および人工結腸液（ＳＣｏＦ）中での溶解後の、腸溶性コーティングリオスフェア（ｌｙｏｓｐｈｅｒｅ）からの、ＵＶ−Ｖｉｓ分光法によって測定した場合の、過酸化水素の存在下で基質グアヤコールを着色生成物に変換するミオグロビンの能力を示す。
【図４】図４は、非コーティング抗ＴＳＬＰ  ｍＡｂと比較した、リオスフェア（ｌｙｏｓｐｈｅｒｅ）を、ＳＧＦ中、続いてＦＡＳＳＩＦおよびＳＣｏＦ中で温置した場合の、経時的な、腸溶性コーティングリオスフェア（ｌｙｏｓｐｈｅｒｅ）からの抗ＴＳＬＰ  ｍＡｂの％溶解度のプロットである。
【図５】図５は、非コーティングおよび凍結抗ＴＳＬＰ  ｍＡｂと比較した、ｐＨ７．４の１０ｍＭリン酸緩衝食塩水中での溶解後の、円二色性によって測定した場合の、腸溶性コーティングリオスフェア（ｌｙｏｓｐｈｅｒｅ）からの抗ＴＳＬＰ  ｍＡｂの二次構造の回収（４５．８％重量ゲーム（ｗｅｉｇｈｔ  ｇａｍｅ））を示す。
【図６】図６は、リオスフェア（ｌｙｏｓｐｈｅｒｅ）を、ＳＧＦ、続いてＦＡＳＳＩＦおよびＳＣｏＦ中で温置した後の、λ２８０ｎｍでＵＶ−Ｖｉｓ分光法によって測定した場合の、腸溶性コーティングリオスフェア（ｌｙｏｓｐｈｅｒｅ）からの抗ｈＰＤ１  ｍＡｂの収率回収を示す。
【図７】図７は、非コーティング抗ｈＰＤ１  ｍＡｂと比較した、ｐＨ７．４の１０ｍＭリン酸緩衝食塩水中での溶解後の、円二色性によって測定した場合の、腸溶性コーティングリオスフェア（ｌｙｏｓｐｈｅｒｅ）からの抗ｈＰＤ１  ｍＡｂの二次構造の回収（６１．４％重量増加）を示す。
【発明を実施するための形態】
【００２６】
本発明は、治療剤を含む腸溶性コーティングリオスフェア（ｌｙｏｓｐｈｅｒｅ）を調製するための工程、本工程を用いて調製される腸溶性コーティングリオスフェア（ｌｙｏｓｐｈｅｒｅ）およびその使用を提供する。
【００２７】
出願人は、消化管の様々な領域への治療剤の標的化送達を可能にする剤形をもたらす腸溶性コーティングリオスフェア（ｌｙｏｓｐｈｅｒｅ）を調製するための工程を発見した。本発明の工程はまた、コーティング段階に耐えるのに十分に頑強（Ｒｏｂｕｓｔ）であり、また消化管の所望の領域に対する腸溶性コーティングの溶解時に治療活性薬剤を放出するリオスフェア（ｌｙｏｓｐｈｅｒｅ）を調製することも含む。
【００２８】
消化管の特定領域を標的とするための投薬として腸溶性コーティングリオスフェア（ｌｙｏｓｐｈｅｒｅ）を用いることは、粉末リオフィレート（ｌｙｏｐｈｉｌａｔｅ）を含有するコーティング剤形の使用と比較した場合、多くの有利な特性をもたらす。リオスフェア（ｌｙｏｓｐｈｅｒｅ）は、粉末リオフィレート（ｌｙｏｐｈｉｌａｔｅ）と比較した場合、比較的緻密である。凍結乾燥粉末とは対照的に、リオスフェア（ｌｙｏｓｐｈｅｒｅ）は、一般的には、許容可能な流動特性を達成するための混合段階を必要としない。本発明の工程によって形成されたリオスフェア（ｌｙｏｓｐｈｅｒｅ）は、それ自身、腸溶性コーティングされているので、リオスフェア（ｌｙｏｓｐｈｅｒｅ）を直接カプセルまたはサシェに充填し得、それによりカプセルをコーティングする必要がなくなる。さらに、腸溶性コーティングリオスフェア（ｌｙｏｓｐｈｅｒｅ）の粒状性によって、これらをカプセル、サシェまたはボトルに収容するための柔軟性が得られる。いくつかの実施形態において、薬物充填量が、最終剤形、例えばカプセルの容積によって制限される粉末リオフィレート（ｌｙｏｐｈｉｌａｔｅ）と比較した場合、腸溶性コーティングリオスフェア（ｌｙｏｓｐｈｅｒｅ）を使用して高薬物充填を達成し得る。
【００２９】
本発明の工程はまた、２つ以上の治療剤を組み合わせた固定剤形を調製することも可能にするが、これは、この工程が、例えばカプセルまたはサシェなどの最終剤形において一緒に組み合わせられ得る別個の治療剤を含有する２つの個別のリオスフェア（ｌｙｏｓｐｈｅｒｅ）集団を別個にコーティング可能だからである。リオスフェア（ｌｙｏｓｐｈｅｒｅ）の別個の集団におけるポリマーおよびコーティングの厚さの選択は、異なる放出プロファイルを調整し、リオスフェア（ｌｙｏｓｐｈｅｒｅ）の各集団に対する消化管の異なる領域を標的にするように操作され得る。
【００３０】
さらに、リオスフェア（ｌｙｏｓｐｈｅｒｅ）を調製することによって、従来の方法でリオフィレート（ｌｙｏｐｈｉｌａｔｅ）を含有する剤形を調製することと比較した場合、製造コストが低下し、特定の治療剤の有効期間が改善され得る。治療剤（例えば生物学的高分子）を含有する従来の凍結乾燥ケーキは、一般に、所望量の薬剤をガラス容器に分注することによって調製されるが、この薬剤は一般的には、適切な安定化剤とともに緩衝溶液中に存在する。次いで、ガラス容器に対して、冷却、凍結、アニーリング、一次乾燥および二次乾燥段階を行う。このようなバイアル凍結乾燥は、熱および物質移動により制限される工程であり、このような制限によって、溶質濃度＞１５％ｗ／ｗでの昇華乾燥工程が顕著に遅くなる。対照的に、高い溶質濃度の組成物は表面／体積比が高いがゆえに、高い溶質濃度、例えば２０％を上回る濃度を有する組成物からリオスフェア（ｌｙｏｓｐｈｅｒｅ）を調製することが可能である。このような組成物は、高濃度の糖および他の安定化剤、例えばスクロース、トレハロース、スクロース／トレハロース混合物、マンニトール、デキストロース、デキストランおよびこのような糖の混合物を有し得、結果的に、従来のリオフィレート（ｌｙｏｐｈｉｌａｔｅ）を調製するために使用される条件下で分解が起こり易いことが多い生物学的高分子剤の温度安定性が改善され得る。リオスフェア（ｌｙｏｓｐｈｅｒｅ）中の高濃度の安定化剤は、最終の剤形において安定性が付加された生物学的高分子剤を提供し、それにより最終剤形の貯蔵寿命に寄与する。
【００３１】
Ｉ．定義および略語
本発明がより容易に理解され得るように、一定の技術および科学用語を以下で具体的に定義する。本文書中の別の箇所で具体的な定めがない限り、本明細書中で使用される全ての他の技術および科学用語は、本明細書中で使用されるのと同様の文脈で使用される場合、本発明が属する技術分野の通常の技術者によって一般的に理解される意味を有する。
【００３２】
添付の特許請求の範囲を含め、本明細書中で使用される場合、「ａ」、「ａｎ」および「ｔｈｅ」などの単語の単数形は、文脈上他に明確に示されない限り、対応する複数の参照物を含む。
【００３３】
「約」は、数値的に定められたパラメータ、例えば本明細書中で論じられる治療剤に対する投与量または処置時間の長さを修飾するために使用される場合、パラメータが、そのパラメータに対して述べられる数値を１０％上回るかまたは下回る程度変動し得ることを意味する。
【００３４】
本明細書および特許請求の範囲を通して使用される場合の、「本質的に〜からなる」および「から本質的になる」または「から本質的になること」などの変形は、あらゆる列挙される要素または要素の群の包含を示し、指定の投与計画、方法または組成物の基本的もしくは新規の特性を実質的に変化させない、列挙される要素と同様の、またはそれとは異なる性質の、他の要素の任意の包含を示す。
【００３５】
「個体」または「動物」または「患者」または「哺乳動物」または「対象」は、何らかの主張される組成物および方法が必要とされるかまたは有益であり得る、何れかの対象、特に哺乳動物対象を意味する。好ましい実施形態において、対象はヒトである。より好ましい実施形態において、対象は成人、すなわち少なくとも１８歳である。
【００３６】
「単離された」は、一般的には、ＲＮＡ、ＤＮＡ、オリゴヌクレオチドまたはタンパク質などの生物学的分子の精製状態を反映するために使用され、このような文脈において、その分子が、核酸、タンパク質、脂質、炭水化物などの他の生物学的分子または細胞デブリおよび増殖培地などの他の物質を実質的に含まないことを意味する。一般に、「単離された」という用語は、本発明の方法を実質的に妨害する量で存在しない限り、他の生物学的分子もしくは物質が全く存在しないこと、または水、緩衝液もしくは塩が存在しないことを指すものではない。
【００３７】
本明細書で使用される場合、「リオスフェア（ｌｙｏｓｐｈｅｒｅ）」は、例えば、実質的に球形または卵形であり得る所定の形状の凍結塊から形成される治療活性剤（またはワクチン、アジュバントの場合）を含む乾燥単体を指し、これは、乾燥させたときに、コーティングおよび包装段階を含むさらなる加工に耐えるのに十分な頑強性を保持する。いくつかの実施形態において、リオスフェア（ｌｙｏｓｐｈｅｒｅ）の直径は、約２〜約１２ｍｍ、好ましくは２〜８ｍｍ、例えば２．５〜６ｍｍまたは２．５〜５ｍｍである。いくつかの実施形態において、リオスフェア（ｌｙｏｓｐｈｅｒｅ）の容積は、約２０〜１００μＬ、好ましくは２０〜１００μＬ、例えば２０〜５０μＬである。リオスフェア（ｌｙｏｓｐｈｅｒｅ）が実質的に球形ではない実施形態において、リオスフェア（ｌｙｏｓｐｈｅｒｅ）のサイズは、そのアスペクト比に関して説明することができ、アスペクト比は、より長い寸法とより短い寸法との比である。リオスフェア（ｌｙｏｓｐｈｅｒｅ）のアスペクト比は、０．５〜２．５、好ましくは０．７５〜２、例えば１〜１．５であり得る。
【００３８】
「薬学的に許容可能」とは、ヒトに投与される場合に、例えば、生理学的に忍容性があり、一般的にはアレルギー性または類似の有害な反応、例えば胃の不調などを生じさせない、「一般的に安全とみなされる」分子実体および組成物を指す。別の実施形態において、この用語は、連邦または州政府の規制機関によって承認されているか、または米国薬局方、または、動物およびとりわけヒトにおける使用のための一般に認められている別の薬局方で挙げられる分子実体および組成物を指す。
【００３９】
「ｐＨ非依存性ポリマーコーティング」は、溶解プロファイルが腸のｐＨに依存しないポリマーコーティングを指す。ｐＨ非依存性ポリマーコーティングの例としては、孔形成剤としてのヒドロキシプロピルメチルセルロースまたはヒドロキシプロピルセルロースを有するエチルセルロース（例えば、ＡｓｈｌａｎｄからのＡｑｕａｒｉｕｓ（登録商標）コーティングシステム；ＣｏｌｏｒｃｏｎからのＳｕｒｅｌｅａｓｅ（登録商標）コーティングシステム）；ポリ酢酸ビニル系ポリマー（単独であるかまたはＢＡＳＦからのＫｏｌｌｉｃｏａｔ  ＩＲ（登録商標）と組み合わせたＫｏｌｌｉｃｏａｔ  ＳＲ（登録商標）／Ｋｏｌｌｉｃｏａｔ  ＳＲ３０Ｄ（登録商標）など）またはポリ（アクリル酸エチル−コ−メタクリル酸メチル−コ−トリメチルアンモニオエチルメタクリレートクロライド）１：２：０．２、または、ポリ（アクリル酸エチル−コ−メタクリル酸メチル−コ−トリメチルアンモニオエチルメタクリレートクロライド）１：２：０．１（Ｅｖｏｎｉｋからの、Ｅｕｄｒａｇｉｔ  ＲＬ（登録商標）、ＲＳ（登録商標）またはこれらの組み合わせなど）が挙げられる。
【００４０】
「糖」は、比較的低分子量の水溶性炭水化物の群の何れかを指す。糖という用語は、還元糖（フルクトースおよびマルトースなど）、非還元糖（スクロースおよびトレハロースなど）、糖アルコール（キシリトールおよびソルビトールなど）および糖酸（グルコン酸および酒石酸など）を含む。
【００４１】
「処置する」または「処置すること」とは、治療剤を必要とする個体に内的または外的に、本明細書中に記載の治療剤を含有する組成物などの治療剤を投与することを意味する。薬剤を必要とする個体としては、薬剤による処置に影響を受け易い症状または障害を有すると診断されているかまたは発症のリスクがある個体、ならびに、第２の治療剤で改善され易い第１の治療剤による処置の１つ以上の有害作用を有するかまたは発症するリスクがある個体が挙げられる。一般的には、治療剤は治療的有効量で投与され、これは１つ以上の有益な結果を生じさせるのに有効な量を意味する。特定の薬剤の治療的有効量は、疾患の症状、処置されている患者の年齢および体重ならびに治療剤に対する患者の感受性、例えば応答能などの要因に従い変動し得る。「処置する」または「処置すること」は、対象における症状、疾患または障害発症の発現を予防することを含む。
【００４２】
以下の試薬および測定単位は、それらの略語によって言及され得る：
ＦａＳＳＩＦ＝人工空腹時小腸液
ｈ＝時間
ｋｇ＝キログラム
ｍＴｏｒｒ＝ミリトル
ｍｉｎ＝分
Ｍｂ＝ミオグロビン
ｍｇ＝ミリグラム
ｍＬ＝ミリリットル
ｍｍ＝ミリメートル
ｍＭ＝ミリモル濃度
ＳＣｏＦ＝人工結腸液
ＳＧＦ＝人工胃液
μＬ＝マイクロリットル
ＩＩ．発明の実施形態
第１の態様において、本発明は、治療剤を含む、腸溶性コーティングリオスフェア（ｌｙｏｓｐｈｅｒｅ）を調製するための工程を提供する。
【００４３】
実施形態番号１において、本発明は、治療剤を含む腸溶性コーティングリオスフェア（ｌｙｏｓｐｈｅｒｅ）を調製するための工程であって、
ａ）治療剤を含むリオスフェア（ｌｙｏｓｐｈｅｒｅ）を提供し；
ｂ）このリオスフェア（ｌｙｏｓｐｈｅｒｅ）を腸溶性ポリマーコーティング組成物でコーティングし；そして
ｃ）この腸溶性コーティングリオスフェア（ｌｙｏｓｐｈｅｒｅ）を単離すること
を含む工程を提供する。
【００４４】
実施形態番号２において、本発明は、実施形態番号１に記載の工程であって、段階ｂ）において、腸溶性ポリマーコーティング組成物が、アクリル酸またはメタクリル酸コポリマー、カルボン酸含有セルロース系ポリマー、カルボン酸含有ポリ酢酸ビニルコポリマーまたはセラックから選択されるアニオン性ポリマーを含む、工程を提供する。
【００４５】
実施形態番号３において、本発明は、実施形態番号２に記載の工程であって、
アクリル酸またはメタクリル酸コポリマーが、ポリ（メタクリル酸、メタクリル酸メチル）１：１、ポリ（メタクリル酸、メタクリル酸メチル）１：２、ポリ（メタクリル酸、アクリル酸エチル）１：１；またはポリ（アクリル酸メチル、メタクリル酸メチル、メタクリル酸）７：３：１である、工程を提供し、
カルボン酸含有セルロース系ポリマーは、ヒドロキシプロピルメチルセルロースフタレート、セルロースアセテートフタレート（ＣＡＰ）、セルロースアセテートトリメリテート、ヒドロキシプロピルメチルセルローススクシネートであり；
カルボン酸含有ポリ酢酸ビニルコポリマーは、ポリビニルアセテートフタレートである。
【００４６】
実施形態番号４において、本発明は、実施形態番号１〜３の何れか１つに記載の工程であって、段階ｂ）がリオスフェア（ｌｙｏｓｐｈｅｒｅ）に対して腸溶性ポリマーコーティング組成物を噴霧または浸漬コーティングすることを含む工程を提供する。
【００４７】
実施形態番号５において、本発明は、実施形態番号４に記載の工程であって、このコーティング段階ｂ）がリオスフェア（ｌｙｏｓｐｈｅｒｅ）に対して腸溶性ポリマーコーティング組成物を噴霧コーティングすることを含む工程を提供する。
【００４８】
実施形態番号６において、本発明は、実施形態番号５に記載の工程であって、この噴霧コーティングが、ボトムスプレーコーティング、タンジェンシャルスプレーコーティングまたはパンコーティングである工程を提供する。好ましくは、この噴霧コーティングは、ボトムスプレーコーティングである。噴霧コーティングは、ワースターカラムの設定を用いて行われ得るか、またはリオスフェア（ｌｙｏｓｐｈｅｒｅ）が中心回転円錐の周囲を移動するワースターカラムなしで行われ得る。
【００４９】
実施形態番号７において、本発明は、実施形態番号１〜６の何れか１つに記載の工程であって、この腸溶性ポリマーコーティング組成物が、水性媒体またはアセトンもしくはイソプロパノールなどの有機溶媒中で分散される工程を提供する。実施形態番号８において、この腸溶性ポリマーコーティング組成物は、水性媒体中で分散される。
【００５０】
実施形態番号９において、本発明は、実施形態番号１〜８の何れか１つに記載の工程であって、このコーティングおよび単離段階により、非コーティングリオスフェア（ｌｙｏｓｐｈｅｒｅ）と比較した場合、少なくとも１０ｗｔ％、一般的には１０〜２００ｗｔ％の重量増加を有する腸溶性コーティングリオスフェア（ｌｙｏｓｐｈｅｒｅ）となる工程を提供する。実施形態番号１０において、重量増加は、３０〜１５０ｗｔ％、例えば６０〜１１０ｗｔ％または８０〜１００ｗｔ％である。
【００５１】
実施形態番号１１において、本発明は、実施形態番号１〜１０の何れか１つに記載の工程であって、腸溶性ポリマーコーティング組成物が、可塑剤、粘着防止剤（ｄｅｔａｃｋｉｆｉｅｒ）または界面活性剤をさらに含む工程を提供する。
【００５２】
実施形態番号１２において、本発明は、実施形態番号１に記載の工程であって、腸溶性ポリマーコーティング組成物でリオスフェア（ｌｙｏｓｐｈｅｒｅ）をコーティングする前に、ｐＨ非依存性ポリマーコーティング組成物でリオスフェア（ｌｙｏｓｐｈｅｒｅ）をコーティングすることをさらに含む工程を提供する。
【００５３】
実施形態番号１３において、本発明は、実施形態番号１〜１２の何れか１つに記載の工程であって、段階ａ）でのリオスフェア（ｌｙｏｓｐｈｅｒｅ）が、
水性媒体中で治療剤、糖および結合ゲル形成剤を混合して、水性媒体混合物を形成させ；
水性媒体混合物を単位体積に分け（ｓｅｇｒｅｇａｔｉｎｇ）；
この単位体積を凍結させて、単位形態を形成させ；そして
この単位形態から水を分離（ｓｅｐａｒａｔｉｎｇ）させて、リオスフェア（ｌｙｏｓｐｈｅｒｅ）を生成させること
により調製される工程を提供する。
【００５４】
実施形態番号１４において、本発明は、実施形態番号１３に記載の工程であって、この分離が、伝導または放射が主要な乾燥下で単位形態を乾燥させて、リオスフェア（ｌｙｏｓｐｈｅｒｅ）を生成させることを含む工程を提供する。
【００５５】
実施形態番号１５において、本発明は、実施形態番号１３および１４の何れか１つに記載の工程であって、前記の分ける、凍結および分離段階が、
固形要素の予め冷却した平坦面上で水性媒体混合物を単位体積に分けて、単位形態を形成させ；
平坦面から単位形態を取り除き；そして
伝導または放射が主要な乾燥下で単位形態を乾燥させて、リオスフェア（ｌｙｏｓｐｈｅｒｅ）を生成させること
を含む工程を提供する。
【００５６】
実施形態番号１６において、本発明は、実施形態番号１３に記載の工程であって、この分離が、真空下で単位形態を乾燥させて、リオスフェア（ｌｙｏｓｐｈｅｒｅ）を生成させることを含む工程を提供する。
【００５７】
実施形態番号１７において、本発明は、実施形態番号１３に記載の工程であって、前記の分ける、凍結および分離段階が、
固形要素の空洞に水性媒体混合物を充填し；
伝導により空洞壁を通じて水性媒体混合物から熱を抽出することによって、空洞中に存在する水性媒体混合物を凍結させて、単位形態を形成させ；
空洞から単位形態を取り除き；そして
真空下で単位形態を乾燥させて、リオスフェア（ｌｙｏｓｐｈｅｒｅ）を得ること
を含む工程を提供する。
【００５８】
実施形態番号１８において、本発明は、実施形態番号１３〜１７の何れか１つに記載の工程であって、前記の結合ゲル形成剤が、セルロース系ポリマー、ポリビニルピロリドン、デンプン、ゼラチン、ポリエチレングリコール、ワックス、天然ゴム、合成ゴムまたはこれらの組み合わせである工程を提供する。特定の実施形態において、結合ゲル形成剤は、コーンスターチ、アルファ化デンプン、ゼラチン；ポリエチレングリコール、ワックス；アラビアゴムアルギン酸ナトリウム、ポリビニルピロリドン、ヒドロキシプロピルセルロース（例えば、Ｎｉｓｓｏ  ＨＰＣ−Ｌ、ＨＰＣ−ＳＬ、ＨＰＣ−ＳＳＬ）、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、メチルセルロース（例えば、ＭｅｔｏｌｏｓｅＳＭ−４）、微結晶セルロース、エチルセルロースおよびヒドロキシエチルセルロースである。
【００５９】
実施形態番号１９において、本発明は、実施形態番号１８に記載の工程であって、前記の結合ゲル形成剤が、ヒドロプロピルメチルセルロース（ｈｙｄｒｏｐｒｏｐｙｌｍｅｔｈｙｌ  ｃｅｌｌｕｌｏｓｅ）、ヒドロキシプロピルセルロース、メチルセルロース、微結晶セルロース、エチルセルロースまたはこれらの組み合わせから選択されるセルロース系ポリマーである工程を提供する。
【００６０】
実施形態番号２０において、本発明は、実施形態番号１８に記載の工程であって、前記の結合ゲル形成剤が、ＨＰＭＣの様々な粘度グレード（例えば、信越化学工業からのＰｈａｒｍａｔｏｓｅ（登録商標）６０３、６４５、６０６、６１５、９０４（３〜１５ｃＰ）；信越化学工業からのＭｅｔｏｌｏｓｅ（登録商標）（ＳＭ、６０ＳＨ；６５ＳＨ；９０ＳＨ）；ＣｏｌｏｒｃｏｎからのＭｅｔｈｏｃｅｌ（登録商標）Ｅ５ＬＶ、Ｅ１５ＬＶから選択され得るヒドロキシプロピルメチルセルロースである工程を提供する。ヒドロキシプロピルメチルセルロースは、好ましくは２〜１５センチポアズ（ｃｐ）、好ましくは２〜１０ｃｐ、例えば２〜６ｃｐの粘度を有する。
【００６１】
実施形態番号２１において、本発明は、実施形態番号１３〜２０の何れか１つに記載の工程であって、前記の結合ゲル形成剤が、約１〜５０％ｗ／ｖの水性媒体混合物、例えば２〜４０％ｗ／ｖ、３〜３０％ｗ／ｖ、４〜２０％ｗ／ｖ、５〜１５％ｗ／ｖまたは７〜１０％ｗ／ｖを含む工程を提供する。
【００６２】
実施形態番号２２において、本発明は、実施形態番号１３〜２１の何れか１つに記載の工程であって、前記の糖が、トレハロース、スクロース、グルコース、ガラクトース、マルトース、ラクトース、ラフィノース、フルクトース、サッカロース、マンニトール、ソルビトール、キシリトールまたはこれらの組み合わせである工程を提供する。
【００６３】
実施形態番号２３において、本発明は、実施形態番号２２に記載の工程であって、前記の糖がトレハロースである工程を提供する。
【００６４】
実施形態番号２４において、本発明は、実施形態番号２２に記載の工程であって、前記の糖がトレハロースとマンニトールとの組み合わせである工程を提供する。いくつかの実施形態において、トレハロースおよびマンニトールは、約７０：３０、６０：４０、５０：５０または４０：６０の比（重量比）で水性媒体混合物中に存在する。
【００６５】
実施形態番号２５において、本発明は、実施形態番号２２〜２４の何れか１つに記載の工程であって、前記の水性媒体混合物が、５〜５０％ｗ／ｖの糖を含む工程を提供する。好ましくは、水性媒体混合物は、５〜３０％ｗ／ｖの糖、例えば７〜２５％ｗ／ｖ、１５〜３０％ｗ／ｖまたは１５〜２５％ｗ／ｖを含む。
【００６６】
実施形態番号２６において、本発明は、実施形態番号１３〜１７の何れか１つに記載の工程であって、結合ゲル形成剤がヒドロキシプロピルメチルセルロースであり、糖がトレハロースである工程を提供する。
【００６７】
実施形態番号２７において、本発明は、実施形態番号２６に記載の工程であって、トレハロースとヒドロキシプロピルメチルセルロースとの比（重量比）が１０：１〜１：５、例えば１０：１〜１．５：１または４：１〜２：１の比などである工程を提供する。
【００６８】
実施形態番号２８において、本発明は、実施形態番号１３〜２７の何れか１つに記載の工程であって、前記の水性媒体混合物が、ゼラチン非存在下で混合される工程を提供する。
【００６９】
第２の態様において、本発明は、腸溶性コーティングリオスフェア（ｌｙｏｓｐｈｅｒｅ）および治療剤を含む剤形を提供する。
【００７０】
実施形態番号２９において、剤形は、実施形態番号１〜２８の何れか１つの工程によって調製される腸溶性コーティングリオスフェア（ｌｙｏｓｐｈｅｒｅ）を含む。
【００７１】
実施形態番号３０において、本発明は、治療剤および腸溶性ポリマーコーティングを含むリオスフェア（ｌｙｏｓｐｈｅｒｅ）を含む剤形を提供し、この剤形は有効量の治療剤を含む。
【００７２】
実施形態番号３１において、本発明は、実施形態番号３０に記載の剤形であって、リオスフェア（ｌｙｏｓｐｈｅｒｅ）が、糖および結合ゲル形成剤をさらに含む剤形を提供する。実施形態番号３２において、結合ゲル形成剤は実施形態番号１８に記載のとおりであり、糖は実施形態番号２２に記載のとおりである。実施形態番号３３において、結合ゲル形成剤は実施形態番号２０に記載のとおりであり、糖は実施形態番２４に記載のとおりである。
【００７３】
実施形態番号３４において、本発明は、実施形態番号３１〜３３の何れか１つに記載の剤形であって、腸溶性ポリマーコーティングの非存在下でのリオスフェア（ｌｙｏｓｐｈｅｒｅ）の全重量に対して、糖が２０〜９０％ｗ／ｗを含み、結合ゲル形成剤が１０〜８０％ｗ／ｗである剤形を提供する。
【００７４】
実施形態番号３５において、本発明は、実施形態番号３１〜３３の何れか１つに記載の剤形であって、腸溶性ポリマーコーティングの非存在下でのリオスフェア（ｌｙｏｓｐｈｅｒｅ）の全重量に対して、糖が３５〜８５％ｗ／ｗを含み、結合ゲル形成剤が１５〜６５％ｗ／ｗである剤形を提供する。
【００７５】
実施形態番号３６において、本発明は、実施形態番号３１〜３３の何れか１つに記載の剤形であって、腸溶性ポリマーコーティングの非存在下でのリオスフェア（ｌｙｏｓｐｈｅｒｅ）の全重量に対して、糖が４５〜７５％ｗ／ｗを含み、結合ゲル形成剤が２５〜５５％ｗ／ｗである剤形を提供する。
【００７６】
実施形態番号３７において、本発明は、
治療剤および第１の腸溶性コーティングを含有する第１のリオスフェア（ｌｙｏｓｐｈｅｒｅ）と；
この治療剤および第２の腸溶性コーティングを含有する第２のリオスフェア（ｌｙｏｓｐｈｅｒｅ）と、
を含む剤形を提供する。
【００７７】
実施形態番号３８において、本発明は、実施形態番号３７に記載の剤形であって、第１および第２の腸溶性コーティングが同じ腸溶性ポリマーを含む剤形を提供する。
【００７８】
実施形態番号３９において、本発明は、実施形態番号３８に記載の剤形であって、第２のリオスフェア（ｌｙｏｓｐｈｅｒｅ）が、第１のリオスフェア（ｌｙｏｓｐｈｅｒｅ）において含有されるものよりも１０〜２００重量％多い腸溶性コーティングを含有する剤形を提供する。例えば、第２のリオスフェア（ｌｙｏｓｐｈｅｒｅ）は、第１のリオスフェア（ｌｙｏｓｐｈｅｒｅ）において含有されるものよりも３０〜１５０％、４０〜１２０％または８０〜１００％多い腸溶性コーティングを含有し得る。
【００７９】
実施形態番号４０において、本発明は、実施形態番号３７に記載の剤形であって、第２の腸溶性コーティングが第１の腸溶性コーティングよりも高いｐＨで可溶性である剤形を提供する。
【００８０】
実施形態番号４１において、本発明は、実施形態番号４０に記載の剤形であって、第２の腸溶性コーティングが６．８以上のｐＨで可溶性であり、第１の腸溶性コーティングが５を上回るｐＨで可溶性である剤形を提供する。
【００８１】
実施形態番号４２において、本発明は、第１の治療剤および第１の腸溶性コーティングを含有する第１のリオスフェア（ｌｙｏｓｐｈｅｒｅ）と；
第２の治療剤および第２の腸溶性コーティングを含有する第２のリオスフェア（ｌｙｏｓｐｈｅｒｅ）と、
を含む剤形を提供する。
【００８２】
実施形態番号４３において、本発明は、実施形態番号４２に記載の剤形であって、第１および第２の腸溶性コーティングが同じ腸溶性ポリマーを含む剤形を提供する。実施形態番号４４において、第１および第２の腸溶性コーティングは、コーティング重量増加が同じである同じ腸溶性ポリマーを含む。
【００８３】
実施形態番号４５において、本発明は、実施形態番号４３に記載の剤形であって、第２のリオスフェア（ｌｙｏｓｐｈｅｒｅ）が、第１のリオスフェア（ｌｙｏｓｐｈｅｒｅ）よりも１０〜２００重量％多い腸溶性コーティングを含有する剤形を提供する。例えば、第２のリオスフェア（ｌｙｏｓｐｈｅｒｅ）は、第１のリオスフェア（ｌｙｏｓｐｈｅｒｅ）よりも３０〜１５０％、４０〜１２０％または８０〜１００％多い腸溶性コーティングを含有し得る。
【００８４】
実施形態番号４６において、本発明は、実施形態番号４２に記載の剤形であって、
第１のリオスフェア（ｌｙｏｓｐｈｅｒｅ）が、第１の糖および第１の結合ゲル形成剤をさらに含み；
第２のリオスフェア（ｌｙｏｓｐｈｅｒｅ）が、第２の糖および第２の結合ゲル形成剤をさらに含み；そして
以下の条件：
第１の糖および第２の糖が異なること；または
第１の結合ゲル形成剤および第２の結合ゲル形成剤が異なること
のうち少なくとも１つが適用される、
剤形を提供する。
【００８５】
実施形態番号４７において、本発明は、ｐＨ非依存性ポリマーコーティングでコーティングされる治療剤を含むコーティングリオスフェア（ｌｙｏｓｐｈｅｒｅ）と、ｐＨ非依存性ポリマーコーティングを覆う腸溶性ポリマーコーティングと、を含む剤形を提供する。
【００８６】
実施形態番号４８において、本発明は、実施形態番号４７に記載の剤形であって、コーティングリオスフェア（ｌｙｏｓｐｈｅｒｅ）が、ｐＨ非依存性ポリマーと腸溶性ポリマーコーティングとの間にバリアポリマーコーティングをさらに含む剤形を提供する。このような実施形態において、バリアポリマーコーティングはｐＨ非依存性コーティングを覆い、腸溶性ポリマーコーティングはバリアポリマーコーティングを覆う。
【００８７】
実施形態番号４９において、本発明は、実施形態番号２９〜４８の何れか１つの剤形であって、カプセル剤、錠剤またはサシェ剤である剤形を提供する。
【００８８】
実施形態番号５０において、本発明は、実施形態番号２９〜４９の何れか１つの剤形であって、治療剤が、剤形の０．００５〜５０ｗｔ．％を含む剤形を提供する。好ましくは、治療剤は、剤形の０．１〜４０ｗｔ．％、例えば、剤形の０．５〜３０ｗｔ．％、１．０〜２０ｗｔ．％、２〜１５ｗｔ．％または３〜１０ｗｔ．％を含む。
【００８９】
実施形態番号５１において、本発明は、実施形態番号２９〜４９の何れか１つの剤形であって、治療剤が、剤形中、０．０１〜５００ｍｇで存在する剤形を提供する。好ましくは、治療剤は、０．０５〜４００ｍｇ、例えば０．１〜３００ｍｇ、０．５〜２００ｍｇ、１〜１００ｍｇ、２〜５０ｍｇまたは３〜２５ｍｇで剤形中に存在する。
【００９０】
第３の態様において、本発明は、有効量の治療剤を含む腸溶性コーティングリオスフェア（ｌｙｏｓｐｈｅｒｅ）を含有する剤形を、それを必要とする対象に投与することを含む、疾患または障害を処置する方法を提供する。
【００９１】
実施形態番号５２において、本方法は、疾患または障害の処置を必要とする対象に対して、治療剤を含むリオスフェア（ｌｙｏｓｐｈｅｒｅ）を含有する剤形を投与することを含む、疾患または障害を処置するためのものであり、ここで、リオスフェア（ｌｙｏｓｐｈｅｒｅ）は腸溶性コーティングを含有する。処置されている疾患または障害は、例えば、小腸または大腸に影響を及ぼす疾患または障害であり得る。このような疾患または障害としては、過敏性腸症候群、セリアック病、憩室炎、嚢炎、直腸炎、粘膜炎、放射線による腸炎、短腸疾患、慢性下痢、胃腸炎、十二指腸炎、空腸炎、消化性潰瘍、カーリング潰瘍、虫垂炎、大腸炎、子宮内膜症、結腸直腸癌、腺癌、炎症性障害、例えば空置大腸炎、虚血性大腸炎、感染性大腸炎、化学性大腸炎、顕微鏡的大腸炎（コラーゲン蓄積大腸炎およびリンパ球性大腸炎を含む。）、非定型大腸炎、偽膜性大腸炎、劇症大腸炎、自閉症腸炎（ａｕｔｉｓｔｉｃ  ｅｎｔｅｒｏｃｏｌｉｔｉｓ）、不確定大腸炎、空回腸炎、回腸炎、回結腸炎、肉芽腫性大腸炎、線維症、移植片対宿主病、胃腸移植片対宿主病およびＣ．ディフィシル（Ｃ．ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ）などのＧＩ管に影響を与える感染が挙げられる。特定の実施形態において、処置されている疾患または障害は、炎症性腸疾患またはＣ．ディフィシル（Ｃ．ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ）感染である。
【００９２】
実施形態番号５３において、本発明は、有効量の治療剤を含有するリオスフェア（ｌｙｏｓｐｈｅｒｅ）を含有する剤形を投与することを含む、対象において空腸、回腸、回腸−盲腸接合部、結腸またはこれらの組み合わせに治療剤を送達させる方法を提供し、ここで、このリオスフェア（ｌｙｏｓｐｈｅｒｅ）は、対象への腸溶性コーティングを含有する。実施形態番号５４において、送達させる方法は、実施形態番号５３で説明されるとおりであり、剤形は、第２の治療剤を含有する非コーティングリオスフェア（ｌｙｏｓｐｈｅｒｅ）をさらに含有する。
【００９３】
実施形態番号５５において、本発明は、実施形態番号５２〜５４の何れか１つに記載の方法であって、対象が哺乳動物患者である方法を提供する。実施形態番号５６において、対象はヒトである。
【００９４】
実施形態番号５７において、本発明は、実施形態番号５２で特定される疾患または障害の何れか１つに対する治療などの治療において使用するための実施形態番号２９〜５１の何れか１つに記載の剤形を提供する。実施形態番号５８において、本発明は、医薬の製造での使用のための、実施形態番号２９〜５１の何れか１つに記載の剤形を提供する。
【００９５】
実施形態番号５９において、本発明は、実施形態番号１〜５８の何れか１つの、工程、剤形、方法または使用であって、治療剤が、ポリペプチド、タンパク質、ペプチド、リポペプチド、糖タンパク質、融合タンパク質、タンパク質複合体、サイトカイン、酵素、抗体、オリゴヌクレオチド、ワクチンベクター、小分子、生ウイルス、不活化ウイルス、ウイルス様粒子、ウイルスタンパク質サブユニット、アジュバント、マイクロバイオーム、プレバイオティクス、プロバイオティクスまたはエクトバイオティクス（ｅｃｔｏｂｉｏｔｉｃ）薬である、工程、剤形、方法または使用を提供する。
【００９６】
実施形態番号６０において、本発明は、実施形態番号５９の工程、剤形、方法または使用であって、治療剤が９００ダルトンよりも大きい分子量を有する、工程、剤形、方法または使用を提供する。
【００９７】
ＩＩＩ．腸溶性コーティング前のリオスフェア（ｌｙｏｓｐｈｅｒｅ）の組成
腸溶性コーティングリオスフェア（ｌｙｏｓｐｈｅｒｅ）内に含有される治療剤には、バイオテクノロジー工程の産物であることが多い高分子または９００ダルトン未満の分子量を有する小分子治療剤の両方を含む、多岐にわたる物質が含まれる。いくつかの実施形態において、治療剤は、ポリペプチド、タンパク質、ペプチド、リポペプチド、糖タンパク質、融合タンパク質、タンパク質複合体、サイトカイン、酵素、抗体、オリゴヌクレオチド、ワクチンベクター、小分子、生ウイルス、不活化ウイルス、ウイルス様粒子、ウイルスタンパク質サブユニット、アジュバントまたはマイクロバイオーム（プレバイオティクス、プロバイオティクスまたはエクトバイオティクス（ｅｃｔｏｂｉｏｔｉｃ））である。
【００９８】
特定の実施形態において、治療剤は、５０個以下のアミノ酸残基を含有するペプチドまたはポリペプチド（長い、連続し、非分岐のペプチド鎖）である。このようなペプチドおよびポリペプチドは、クローン病、潰瘍性大腸炎およびＣ．ディフィシル（Ｃ．ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ）感染などの消化管に影響を及ぼす障害または疾患を処置するために使用され得る。特定の実施形態において、ペプチドは、リポペプチド（例えばラモプラニン）または糖ペプチドなどの誘導体であり得る。
【００９９】
特定の実施形態において、治療剤は、消化管に影響を及ぼす疾患を処置するためにも使用され得るモノクローナル抗体などのアミノ酸残基の１以上の長鎖を含有するタンパク質である。このような抗体の例としては、ゴリムマブ、インフリキシマブ、セルトリズマブ、ウステキヌマブ、アダリムマブおよびＢＩ６５５０６６が挙げられる。
【０１００】
いくつかの実施形態において、モノクローナル抗体は、抗ＣＴＬＡ４（例えばイピリムマブ）、抗ＰＤ−１受容体抗プログラム死−１（例えば、ニボルマブ、ペンブロリズマブ、トレメリムマブ、アテゾリズマブ）などの免疫チェックポイント妨害標的を対象とする。いくつかの実施形態において、治療剤は、ＰＤ−Ｌ１を標的とする抗体（例えば、ＢＭＳ−９３６５５９、ＭＰＤＬ３２８０Ａ、ＭＥＤＩ４７３６）である。
【０１０１】
他の実施形態において、治療剤は、ＤＮＡ、ＲＮＡ（例えばｍＲＮＡ、ｓＲＮＡ）の短い１本鎖セグメントであるオリゴヌクレオチドまたは２００以下の核酸残基を有するその加水分解的に安定な誘導体である。このようなオリゴヌクレオチドは、一般的には、選択された標的配列に相補的である。このようなオリゴヌクレオチドの例としては、ヒトＳｍａｄ７相補的ＤＮＡ配列の領域１０７〜１２８に結合する合成１本鎖Ｏ，Ｏ−結合ホスホロチオエートオリゴヌクレオチドであるＧＥＤ−０３０１が挙げられる。
【０１０２】
他の実施形態において、治療剤は、炎症性腸疾患（例えば、潰瘍性大腸炎、クローン病、原発性または再発性Ｃ．ディフィシル（Ｃ．ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ）感染、Ａｂｘ後腸内菌共生バランス失調）を処置することにおいて有用であり得る、プロバイオティクス、エコバイオティクスまたはこれらの組み合わせ（例えば、ＳＥＲ−１０９（Ｃ．ディフィシル（Ｃ．ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ）に対するマイクロバイオーム治療剤）、ＳＥＲ−１５５（エクトバイオティクス（ｅｃｔｏｂｉｏｔｉｃ）マイクロバイオーム治療剤）、ＳＥＲ−２６２（エクトバイオティクス（ｅｃｔｏｂｉｏｔｉｃ）マイクロバイオーム治療剤）、ＳＥＲ−２８７（潰瘍性大腸炎に対するマイクロバイオーム治療剤））である。例えば、このようなプロバイオティクスとしては、抗炎症効果をもたらすために制御性Ｔ細胞の数を増加させ得るクロストリジウム（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉａ）細菌の株が挙げられ得る。
【０１０３】
いくつかの実施形態において、治療剤は小分子である。例えば、治療剤は、アザチオプリン、メルカプトプリンおよびメトトレキサートなどの炎症性腸疾患を処置することにおいて有用であり得る。
【０１０４】
他の実施形態において、治療剤はワクチンである。例えば、ワクチンは、所望の免疫応答を生じさせるために小腸または大腸で感染し複製し得る複製ワクチンベクターであり得る。ワクチンはまた、所望の全身免疫応答を生じさせるためにパイエル板によって取り込まれ得るタンパク質などの非複製抗原でもあり得る。いくつかの実施形態において、ワクチンは、サイトメガロウイルス、単純ヘルペスウイルス、麻疹、流行性耳下腺炎、風疹、呼吸器合胞体ウイルス、エプスタイン・バーウイルス、狂犬病、Ｂ型肝炎、Ｃ型肝炎および水痘帯状疱疹ウイルスから選択されるエンベロープウイルスである。他の実施形態において、ワクチンは、アデノウイルス、パルボウイルス、ポリオウイルス、ノーウォークウイルスおよびロタウイルスから選択される非エンベロープウイルスである。
【０１０５】
いくつかの実施形態において、ワクチンはウイルス様粒子（ＶＬＰ）である。このようなＶＬＰワクチンとしては、Ｂ型肝炎、チクングニアおよびヒトパピローマウイルスに対するワクチンが挙げられる。
【０１０６】
特定の実施形態において、ワクチンは混合ワクチンである。生ウイルスの混合ワクチンの例は、ＭＭＲ（麻疹、流行性耳下腺炎および風疹）およびＰＲＯＱＵＡＤ（麻疹、流行性耳下腺炎、風疹および水痘）である。
【０１０７】
いくつかの実施形態において、ワクチン抗原は、同一または別個の腸溶性コーティングリオスフェア（ｌｙｏｓｐｈｅｒｅ）の何れかにおいてアジュバントと同時送達され得る。
【０１０８】
本発明の工程において組み込まれるポリペプチド、ペプチド、モノクローナル抗体、オリゴヌクレオチド、エクトバイオティクス（ｅｃｔｏｂｉｏｔｉｃｓ）、プロバイオティクスおよびワクチンは、一般的には、これらの物質を分解から安定化させる緩衝剤（例えば、ヒスチジン緩衝剤、界面活性剤）などのさらなる賦形剤を含む組成物中で提供される。
【０１０９】
本発明の発明者らは、ビーズ摩擦が最小限であり、コーティング工程中の崩壊に耐えるリオスフェア（ｌｙｏｓｐｈｅｒｅ）を生じさせる特定の組成物を発見した。本発明によって提供される組成物によってまた、コーティング工程を促進する適切な流動特性を保有するリオスフェア（ｌｙｏｓｐｈｅｒｅ）も得られる。いくつかの実施形態において、水性媒体中の糖および結合ゲル形成剤を含有する水性媒体中で治療剤を混合して、水性媒体混合物を形成させる。
【０１１０】
水性媒体混合物中に糖が含まれることにより、タンパク質性物質が安定化され、またその結果、リオスフェア（ｌｙｏｓｐｈｅｒｅ）の強剛性が向上する。このような糖の例としては、トレハロース、スクロース、グルコース、ガラクトース、マルトース、ラクトース、ラフィノース、フルクトース、サッカロース、マンニトール、ソルビトール、キシリトールまたはこれらの組み合わせが挙げられる。
【０１１１】
水性媒体混合物中に含まれる結合ゲル形成剤は、リオスフェア（ｌｙｏｓｐｈｅｒｅ）材料の強剛性を高めるための結合剤として作用すること、ならびにコーティング工程中のリオスフェア（ｌｙｏｓｐｈｅｒｅ）の崩壊を防止するゲル形成剤となることの二重の役割がある。結合ゲル形成剤は、セルロース系ポリマー、ポリビニルピロリドン、デンプン、ゼラチン、ポリエチレングリコール、ワックス、天然ゴム、合成ゴムまたはこれらの組み合わせであり得る。
【０１１２】
タンパク質性物質を含有する水性媒体混合物において、腸環境におけるタンパク質の安定性を高めるために、水性媒体混合物中にプロテアーゼ阻害剤が含まれ得る。
【０１１３】
いくつかの実施形態において、水性媒体混合物は、希釈剤、緩衝剤、アミノ酸（例えば、グリシン、グルタミン、アスパラギン、アルギニンまたはリジン）、キレート剤、界面活性剤、ポリオール、増量剤、安定化剤、抗凍結剤、リオプロテクタント（ｌｙｏｐｒｏｔｅｃｔａｎｔ）、可溶化剤、塩、等張剤（例えば、アルカリ金属ハロゲン化物、マンニトール、ソルビトール）、送達ビヒクルおよび微生物防腐剤を含むさらなる任意の賦形剤を含有する。
【０１１４】
ＩＶ．ポリマーコーティング組成物
リオスフェア（ｌｙｏｓｐｈｅｒｅ）のコーティングにおいて使用される腸溶性ポリマーコーティング組成物は、一般的に、アクリル酸またはメタクリル酸コポリマー、カルボン酸含有セルロース系ポリマー、カルボン酸含有ポリ酢酸ビニルコポリマーまたはセラックから選択されるアニオン性ポリマーを含有する。
【０１１５】
いくつかの実施形態において、アクリル酸またはメタクリル酸コポリマーは、ポリ（メタクリル酸、メタクリル酸メチル）１：１、ポリ（メタクリル酸、メタクリル酸メチル）１：２、ポリ（メタクリル酸、アクリル酸エチル）１：１；またはポリ（アクリル酸メチル、メタクリル酸メチル、メタクリル酸）７：３：１である。他の実施形態において、カルボン酸含有セルロース系ポリマーは、ヒドロキシプロピルメチルセルロースフタレート、セルロースアセテートフタレート（ＣＡＰ）、セルロースアセテートトリメリテート、ヒドロキシプロピルメチルセルローススクシネートである。さらに他の実施形態において、カルボン酸含有ポリ酢酸ビニルコポリマーは、ポリビニルアセテートフタレートである。
【０１１６】
上記のポリメタクリレート系のポリマーのいくつかは、Ｅｖｏｎｉｋ  Ｉｎｄｕｓｔｒｉｅｓ，ＧｅｒｍａｎｙからＥＵＤＲＡＧＩＴポリマーとして入手可能である。例えば、ＥＵＤＲＡＧＩＴ  ＦＳ  ３０Ｄは、アクリル酸メチル、メタクリル酸メチルおよびメタクリル酸に基づくアニオン性コポリマーの水性分散液である。これは酸性媒体中で不溶性であるが、ｐＨ７．０を上回ると溶解する。ＥＵＤＲＡＧＩＴ  Ｌ３０Ｄ−５５は、ｐＨ５．５を上回ると溶解するポリ（メタクリル酸−コ−アクリル酸エチル）１：１コポリマーの水性懸濁液である。ＥＵＤＲＡＧＩＴ  Ｓ１００は、ｐＨ７．０を上回ると溶解するメタクリル酸−メタクリル酸メチル（１：２）のコポリマーである。ＥＵＤＲＡＧＩＴ  Ｌ１００は、ｐＨ６．０を上回ると溶解するメタクリル酸−メタクリル酸メチル（１：１）のコポリマーである。
【０１１７】
結腸を標的とするための好ましいアニオンポリマー系としては、５０：５０〜１００：０％ｗ／ｗのＥＵＤＲＡＧＩＴ  ＦＳ  ３０  Ｄ／ＥＵＤＲＡＧＩＴ  Ｌ３０−Ｄ５５の混合物が挙げられる。より好ましい比率は、６０：４０％、７０：３０％、８０：２０％、８５：１５％または９０：１０％または１００％ＥＵＤＲＡＧＩＴ  ＦＳ  ３０Ｄである。
【０１１８】
結腸を標的化するための別の好ましいポリマー系としては、５０：５０〜１００：０％ｗ／ｗ、例えば７０：３０％、８０：２０％、８５：１５％もしくは９０：１０％のＥＵＤＲＡＧＩＴ  Ｓ１００／ＥＵＤＲＡＧＩＴ  Ｌ１００の混合物または１００％ＥＵＤＲＡＧＩＴ  Ｓ１００が挙げられる。
【０１１９】
アニオン性ポリマーに加えて、腸溶性ポリマーコーティング組成物は、可塑剤、粘着防止剤（ｄｅｔａｃｋｉｆｉｅｒ）または界面活性剤（例えばＴｗｅｅｎ２０または８０）をさらに含有し得る。可塑剤としては、クエン酸トリエチル、ステアリン酸、トラセチン、Ｄ−アルファ−トコフェリルポリエチレングリコールスクシネートおよびＳｉｇｍａ−ＡｌｄｒｉｃｈからのＰＥＧ３３５０などの高分子量ポリエチレングリコールポリマーが挙げられる。粘着防止剤（ｄｅｔａｃｋｉｆｉｅｒ）または固着防止剤としては、タルク、グリセリルモノステアレートおよびステアリン酸マグネシウムが挙げられる。界面活性剤としては、ドデシル硫酸ナトリウム、様々なグレードのＣＲＥＭＯＰＨＯＲ（ＢＡＳＦ，Ｌｕｄｗｉｇｓｈａｆｅｎ，Ｇｅｒｍａｎｙ）、ポリソルベート（例えばＴｗｅｅｎ  ２０、４０または８０、ＳＯＬＵＴＯＬ，ＳＰＡＮｓ）およびポリエチレングリコールが挙げられる。
【０１２０】
いくつかの実施形態において、腸溶性ポリマーコーティング組成物用のこのようなさらなる添加剤は、固着防止剤、可塑剤および界面活性剤を含有する水性懸濁液として入手可能である。例えば、これらのさらなる添加剤の組み合わせを含有するＥｖｏｎｉｋ  Ｉｎｄｕｓｔｒｉｅｓ，ＧｅｒｍａｎｙからのＰＬＡＳＡＣＲＹＬが含まれ得る。
【０１２１】
腸溶性コーティングリオスフェア（ｌｙｏｓｐｈｅｒｅ）は、リオスフェア（ｌｙｏｓｐｈｅｒｅ）の凝集を防ぐために、カプセル、サシェまたはボトルに充填される前に、ヒュームドシリカの水性分散液でコーティングされていてもよい。
【０１２２】
いくつかの実施形態において、リオスフェア（ｌｙｏｓｐｈｅｒｅ）は、腸溶性ポリマーコーティングに加えて、ｐＨ非依存性ポリマーコーティングでコーティングされ得る。ｐＨ非依存性ポリマーコーティングの例としては、孔形成剤としてのヒドロキシプロピルメチルセルロースまたはヒドロキシプロピルセルロースを有するエチルセルロース（例えば、ＡｓｈｌａｎｄからのＡｑｕａｒｉｕｓ（登録商標）コーティングシステム；ＣｏｌｏｒｃｏｎからのＳｕｒｅｌｅａｓｅ（登録商標）コーティングシステム）；ポリ酢酸ビニル系ポリマー（単独であるかまたはＢＡＳＦからのＫｏｌｌｉｃｏａｔ  ＩＲ（登録商標）と組み合わせた、Ｋｏｌｌｉｃｏａｔ  ＳＲ（登録商標）／Ｋｏｌｌｉｃｏａｔ  ＳＲ３０Ｄ（登録商標）など）またはポリ（アクリル酸エチル−コ−メタクリル酸メチル−コ−トリメチルアンモニオエチルメタクリレートクロライド）１：２：０．２またはポリ（アクリル酸エチル−コ−メタクリル酸メチル−コ−トリメチルアンモニオエチルメタクリレートクロライド）１：２：０．１（Ｅｖｏｎｉｋからの、Ｅｕｄｒａｇｉｔ  ＲＬ（登録商標）、ＲＳ（登録商標）またはこれらの組み合わせなど）が挙げられる。
【０１２３】
ｐＨ非依存性ポリマーおよび腸溶性ポリマーコーティングを含有するリオスフェア（ｌｙｏｓｐｈｅｒｅ）の特定の実施形態において、リオスフェア（ｌｙｏｓｐｈｅｒｅ）は、ｐＨ非依存性ポリマーおよび腸溶性ポリマーコーティングに加えて、バリアポリマーコーティングを含み得る。バリアポリマーコーティングを形成させるのに適したコーティング組成物としては、Ｃｏｌｏｒｃｏｎ，Ｈａｒｌｅｙｓｖｉｌｌｅ，Ｐｅｎｎｓｙｌｖａｎｉａから入手可能なＳｕｒｅｌｅａｓｅ（登録商標）などの低粘度エチルセルロースコーティングが挙げられる。
【０１２４】
Ｖ．非コーティングリオスフェア（ｌｙｏｓｐｈｅｒｅ）を調製するための工程
いくつかの実施形態において、水性媒体混合物を含有する単位体積は、空洞を含有する固体要素上に形成される。固体要素を混合物の凍結温度を下回る温度に冷却し、空洞を混合物で満たし、空洞中に存在させながら混合物を固化させて単位形態を形成させる。単位形態を真空中で乾燥させてリオスフェア（ｌｙｏｓｐｈｅｒｅ）を得る。開示が参照により本明細書に組み込まれる米国特許第９，１１９，７９４号明細書は、リオスフェア（ｌｙｏｓｐｈｅｒｅ）を形成させるための同様の工程を開示する。
【０１２５】
他の実施形態において、リオスフェア（ｌｙｏｓｐｈｅｒｅ）は、実質的に球状に形成され、平坦な固体表面、特に空洞がない表面上で所望の生物学的材料の液体組成物の液滴を凍結させ、続いて単位形態を凍結乾燥することによって調製される。開示が参照により本明細書に組み込まれる米国特許出願公開第２０１４／０２９４８７２号明細書は、リオスフェア（ｌｙｏｓｐｈｅｒｅ）を形成させるための同様の工程を開示する。
【０１２６】
簡潔には、いくつかの実施形態において、本工程は、実質的に球状である少なくとも１つの液滴を固形で平坦な表面（すなわち、試料ウェルまたは空洞を欠く。）上に分注し、液滴を極低温物質と接触させることなく表面上で液滴を凍結させ、凍結液滴を凍結乾燥して実質的に球状である乾燥ペレットを生成させることを含む。本工程は、固形で平坦な表面上に所望の数の液滴を同時に分注し、液滴を凍結させ、凍結液滴を凍結乾燥することによって、複数の乾燥ペレットを調製するためにハイスループットモードで使用され得る。液体処方物からこの工程によって調製されるペレットは、高濃度の生物学的材料（タンパク質治療剤など）を有し得、一連の乾燥ペレットへと合わせられ得る。
【０１２７】
いくつかの実施形態において、固形で平坦な表面は、−９０℃以下の温度に金属プレートの上面を維持するように適合させたヒートシンクと物理的に接触する底面を含む金属プレートの上面である。金属板の上面が液体処方物の凝固点より十分に低いので、液滴の底面が金属板の上面に接触すると、液滴が基本的に瞬間的に凍結する。
【０１２８】
他の実施形態において、固形で平坦な表面は疎水性であり、分注段階中に０℃を上回るように維持される薄膜の上面を含む。分注された液滴は、処方物の凍結温度を下回る温度に薄膜を冷却することによって凍結される。
【０１２９】
空洞を含有する固体要素上または平坦な表面上の何れかに形成される単位形態からの水の分離は、伝導が主要な乾燥（昇華を使用）、放射が主要な乾燥（マイクロ波を使用）またはこれらの組み合わせ下で単位形態を乾燥させることによって行われ得る。いくつかの実施形態において、単位形態を伝導が主要な乾燥下で乾燥させる。他の実施形態において、単位形態を放射が主要な乾燥下で乾燥させる。
【０１３０】
ＶＩ．ポリマーコーティング工程
本発明の工程において、リオスフェア（ｌｙｏｓｐｈｅｒｅ）は、一般的に、腸溶性ポリマーコーティング組成物で噴霧または浸漬コーティングされる。好ましくは、コーティング段階は、リオスフェア（ｌｙｏｓｐｈｅｒｅ）を腸溶性ポリマーコーティング組成物で噴霧コーティングすることを含む。所望の重量増加は、リオスフェア（ｌｙｏｓｐｈｅｒｅ）を試料採取し、非コーティングリオスフェア（ｌｙｏｓｐｈｅｒｅ）と比較して、コーティングリオスフェア（ｌｙｏｓｐｈｅｒｅ）の実際の重量増加を決定することによって判定し得る。
【０１３１】
個々のリオスフェア（ｌｙｏｓｐｈｅｒｅ）を均一にコーティングするために流動床工程を使用し得る。この工程は、固形リオスフェア（ｌｙｏｓｐｈｅｒｅ）の流動床の底部に噴霧ノズルを提供することを含む。リオスフェア（ｌｙｏｓｐｈｅｒｅ）は、噴霧ノズルを通過して上方に向かって環状粒子流を誘発するように設計される流動化気流とともに移動する。ノズルは、粒子流とともに腸溶性ポリマーコーティング溶液または懸濁液の霧化液滴を噴霧する。通過粒子は、フィルムコート液滴がその表面上に沈着するにつれて、膨張チャンバー（ｅｘｐａｎｓｉｏｎ  ｃｈａｍｂｅｒ）に上向きに移動する。膨張チャンバー（ｅｘｐａｎｓｉｏｎ  ｃｈａｍｂｅｒ）は、粒子がコーティングチャンバーに循環して戻ることが可能であるように気体速度を低下させる。また、これによって、粒子を一時的に互いからさらに分離させ、リオスフェア（ｌｙｏｓｐｈｅｒｅ）凝集および付着の可能性を最小限にすることが可能になる。粒子が膨張チャンバー（ｅｘｐａｎｓｉｏｎ  ｃｈａｍｂｅｒ）内に移動してこれを通過する際に、有機溶剤または水性コーティングビヒクルが蒸発して、発達するフィルムコートの一部としてリオスフェア（ｌｙｏｓｐｈｅｒｅ）表面上に不揮発性のコート処方物成分を残留させる。処理パラメータは、最適なフィルムコート特性を達成するように設定される。このバッチ工程は、各リオスフェア（ｌｙｏｓｐｈｅｒｅ）が所望のコーティングパーセンテージまたはフィルム厚に均一にコーティングされるまで続く。
【０１３２】
いくつかの実施形態において、リオスフェア（ｌｙｏｓｐｈｅｒｅ）をコーティングするために、ボトムスプレーワースター工程が使用される。コーティングのためのこの流動床工程は、優れたコーティング均一性および効率を提供する。この工程は、仕切りを通じてリオスフェア（ｌｙｏｓｐｈｅｒｅ）の流動化を一緒に構築する空気分散プレートおよび仕切りを含有する生成物チャンバーを有する（コーティングゾーン）。ノズルは、製品容器の底部に取り付けられ、コーティングゾーンの中心に置かれる。コーティング工程中のコーティング材料とリオスフェア（ｌｙｏｓｐｈｅｒｅ）との間の距離が短いことにより、噴霧乾燥が最小限に抑えられ、コーティング均一性およびコーティング効率が高くなる。この加工オプションは、流動床のエネルギーおよび制御を使用して、孔がある底部スクリーンからなる特別な挿入物の内部で空気圧による物質移行を生じさせる。殆どの処理空気はチューブ（ワースターカラム）を介して中心に送られ、その結果、ベンチュリー効果が生じるが、これにより、製品が、仕切りの外側から噴霧ノズルを通過して吸い込まれる。いくつかの実施形態において、ワースターカラムは、生成物の流動化中に粒子がその周囲を運動する中心回転円錐と置き換えられ得る。円筒状の仕切りを離れ、円錐状の膨張チャンバー（ｅｘｐａｎｓｉｏｎ  ｃｈａｍｂｅｒ）に入ると、粒子速度が劇的に低下する。過剰な水分はこの組立体内で急速に蒸発し、乾燥製品はコーティングゾーンを通って繰り返し戻り、より多くのコーティング材料を受容する。
【０１３３】
ペレットを充填し、カプセルまたはサシェを密封して、剤形中に特定の用量を収容するために設計された標準的な自動カプセルまたはサシェ充填装置を用いて、コーティングリオスフェア（ｌｙｏｓｐｈｅｒｅ）がカプセル／サシェに充填され得る。あるいは、コーティングリオスフェア（ｌｙｏｓｐｈｅｒｅ）は、高密度ポリエチレンボトルにバルク包装され得る。
【０１３４】
［実施例］
以下の実施例は、本発明をより明確に説明するために提供されるものであり、本発明の範囲を限定するものと解釈されるべきではない。
【０１３５】
［実施例１］
ミオグロビン（Ｍｂ）を含有する腸溶性コーティングリオスフェア（ｌｙｏｓｐｈｅｒｅ）の調製、コーティング重量増加、ビーズの保全性および酸化機能の評価
この実施例は、タンパク質に適用される場合の本発明の工程を示す。この実施例において、ミオグロビン（Ｍｂ）をモデルタンパク質とした。
【０１３６】
調製
モデルタンパク質としてミオグロビン（Ｍｂ）を使用して、凍結ビーズを調製するために、ハイスループットカスタム液体ハンドラー（Ｂｅｃｋｍａｎ−Ｃｏｕｌｔｅｒ，Ｂｒｅａ，ＣａｌｉｆｏｒｎｉａからのＢｉｏｍｅｋ（登録商標）ＦＸ）を使用した。Ｍｂビーズは、１４％トレハロース、７％ＨＰＭＣ中に２ｍｇ／ｍＬの濃度で調製した。次いで、凍結ビーズを、−５０℃の予め冷却した棚に移し、ビーズを以下に挙げる手順に従って乾燥させた；
ａ．追加の凍結：−５０℃、保持時間３０分；−５０℃のコンデンサー温度および真空３０ｍＴｏｒｒ；
ｂ．乾燥：
（ｉ）段階１：ランプ時間０分で−５０℃、そして３０ｍＴｏｒｒの圧力で１２０分の保持時間。
【０１３７】
（ｉｉ）段階２：ランプ時間１００分で１５℃、そして３０ｍＴｏｒｒの圧力で１４４０分の保持時間；および
（ｉｉｉ）段階３：３０分のランプ時間で３０℃、そして３０ｍＴｏｒｒの圧力で３００分の保持時間。
【０１３８】
乾燥後、ビーズを下記のようにコーティング工程に供した。
【０１３９】
コーティングは、ワースターカラムを備えたボトムスプレーを使用したＭｉｎｉ−Ｇｌａｔｔ流動床コーティング装置（Ｇｌａｔｔ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｒａｍｓｅｙ，Ｎｅｗ  Ｊｅｒｓｅｙ）において、または、ワースターカラムを使用せずにディスクジェット技術（Ｒｏｂｅｒｔ  Ｂｏｓｃｈ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  Ｉｎｃ．からのＳｏｌｉｄｌａｂ  ２流動床システム）を使用することを使用することによって行った。
【０１４０】
機能性コーティングのためのポリマー：９０％  ＥＵＤＲＡＧＩＴ  ＦＳ  ３０  Ｄ；１０％  ＥＵＤＲＡＧＩＴ  Ｌ３０  Ｄ−５５。
【表１】
2018534280.tif 000003
【０１４１】
コーティング溶液の調製：個々の賦形剤の重量を上記で概説するように測定した。撹拌器を用いて５分間にわたり混合を継続しながら、ＥＵＤＲＡＧＩＴ  ＦＳ  ３０  ＤをＰＬＡＳＡＣＲＹＬ  Ｔ２０に添加した。その後、さらに５分間撹拌を継続しながら、ＥＵＤＲＡＧＩＴ  Ｌ  ３０  Ｄ−５５を少量の水と一緒に上記溶液に添加した。最後に、ＰＬＡＳＡＣＲＹＬ  ＨＴＰ２０を残りの水とともに添加し、混合物をさらに１０分間撹拌した。噴霧前にコーティング溶液を最終的に５０メッシュのスクリーンに通してふるい分けを行った。
【０１４２】
運転の開始前に流動床を２５℃の流入空気温度に予熱した。
【０１４３】
バッチ運転中のＭｉｎｉ−Ｇｌａｔｔに対する加工パラメータ（バッチサイズ１〜５ｇ）
ノズル径：０．５ｍｍ
気流：０．１５〜０．２０ｂａｒ
噴霧速度：１．５〜２．０ｇ／分
製品温度：２２〜２６℃
噴霧圧力：０．５〜０．６ｂａｒ
バッチ運転中のＳｏｌｉｄＬａｂ２に対する加工パラメータ（１２５ｇ〜２５０ｇ）
流入空気湿度：６ｇ／ｋｇ（静電気を減少させるための運転開始時）から一連の運転に対して１ｇ／ｋｇ
微小気候：０．１ｂａｒ
ノズル径：１．０ｍｍ
気流：６５〜１００ｃｆｍ
噴霧速度：工程の開始時に５〜１５ｇ／分／ｇｕｎ
製品温度：２０〜２５℃
噴霧圧力：０．５〜０．６ｂａｒ
コーティング重量増加およびタンパク質回収の評価
特定の時間間隔でコーティング工程を停止させ、２０個のビーズの重量を測定して、非コーティングリオスフェア（ｌｙｏｓｐｈｅｒｅ）と比較して、コーティング工程中の実際の重量増加を決定することによって、コーティング重量増加を判定した。目標の重量増加が達成されたか否かに応じて、さらなるコーティングを継続するかまたは中止した。コーティング溶液の噴霧を停止させた後、続いてリオスフェア（ｌｙｏｓｐｈｅｒｅ）をコーティング後１〜２分間乾燥させた。あるいは、より大きなバッチでは、リオスフェア（ｌｙｏｓｐｈｅｒｅ）上に噴霧される固形物の理論量に基づいて重量増加を決定し、予め決定された重量増加のために必要な量のコーティング溶液を噴霧した後にコーティングを停止した。噴霧終了時に、Ａｅｒｏｓｉｌ（ヒュームドシリカ）を１０％ｗ／ｗで水に添加し、保管中の粘着を回避するためにペレット上に噴霧してもよかった。
【０１４４】
乾燥したコーティングビーズをそれらの重量増加について特徴評価し、ＵＶ−Ｖｉｓ分光法を用いて１０ｍＭ  ＰＢＳ緩衝液ｐＨ７．４中での溶解後にそれらの濃度を決定した。二次構造の濃度は、円二色性（ＣＤ）を用いて決定した（それぞれ図１Ａおよび１Ｂ）。図１Ａで示されるように、４１０ｎｍでの吸光度を用いて決定した場合のＭｂ濃度を比較することによって、相当量の収率回収が観察された。４１０ｎｍでの吸光度は、Ｍｂのヘムポケットにおけるヘムの存在を示す。非コーティングビーズを対照として使用した。４１０ｎｍでの吸光度および１７９，０００ｃｍ−１Ｍ−１の吸光係数を用いて測定した場合の濃度から、コーティングされたＭｂに対するパーセンテージ回収率が高いことが示唆された（図１Ａ、３４％および５２％の体重増加に対してそれぞれ約１０９％および約９４％回収）。溶液中のポリマーの存在がＵＶベースラインを妨害するので、得られた回収物は慎重に使用すべきであることに留意すること。ＣＤスペクトルにおける２０８および２２２ｎｍでの二重極小の比較に基づいて、コーティングビーズ中に相当量の二次構造が保持され、このことから、このようにして得られたリオスフェア（ｌｙｏｓｐｈｅｒｅ）処方物がコーティング工程に適していたことが示唆された。ＣＤを用いて決定した場合、二次構造から、コーティングされたＭｂの相当量の構造も示唆される（図１Ｂ、３４％の重量増加に対しておよそ９４％、５２％の重量増加に対しておよそ８４％）。
【０１４５】
ビーズの保全性の評価
ビーズは、人工胃液（ＳＧＦ、ｐＨ１．８）および人工空腹時小腸液（ＦＡＳＳＩＦ、最終ｐＨ６．５）中での溶解の間、続いて人工結腸液（ＳＣｏＦ、最終ｐＨ７．２）中での溶解中の、ビーズの保全性についても試験した。具体的には、実験設定には、１００ｍＬのパドル付き溶解容器を用いた多段階溶解試験が含まれた。簡潔に述べると、４０個のリオスフェア（ｌｙｏｓｐｈｅｒｅ）ビーズをシンカー（ｓｉｎｋｅｒ）に入れ、３０ｍＬのＳＧＦに浸漬し、続いて１０ｍＬのＦａＳＳＩＦ液を添加して、ＳＧＦおよびＦａＳＳＩＦ中でそれぞれ最長で１時間および２時間、リオスフェア（ｌｙｏｓｐｈｅｒｅ）溶解を測定した。最後に、１０ｍＬのＳＣｏＦ（人工結腸液）を溶解容器中の既存の液体に添加し、それにより最終ｐＨを７．２とし、ＳＣｏＦ中のＭｂ放出を２時間まで評価した。各流体の添加後、１ｃｍの経路長の石英キュベットを用いてＵＶ−Ｖｉｓ吸光度を集めた。結果から、重量増加がより大きいと（５２％の重量増加、図２）、ＳＧＦおよびＦＡＳＳＩＦ液の添加後でさえもビーズの保全性が維持され、ＳＣｏＦの添加時にのみ相当量の活性物質（Ｍｂ）が放出されたことが示唆される（＞８０％、図２）。コーティングビーズとは対照的に、非コーティングＭｂビーズはＳＧＦの添加時に瞬間的に溶解し、経時的に溶液から析出したことに注目されたい。
【０１４６】
上記のように、４１０ｎｍでの吸光度は、Ｍｂのヘムポケットにおけるヘムの存在を示す。これらのデータから、ポリマー重量増加がより大きいと、非コーティングまたは重量増加がより低いコーティングのビーズと比較して、人工胃液および人工腸液（ｐＨ６．５）における早すぎるタンパク質放出および分解が阻止されることが示唆される。
【０１４７】
コーティングリオスフェア（ｌｙｏｓｐｈｅｒｅ）からのＭｂの酸化機能の評価
Ｍｂは生体系における酵素ではないが、過酸化水素の存在下で、ｏ−メトキシフェノール（グアヤコール）などの多数の基質を酸化するＭｂの能力が文献で知られている。グアヤコールの酸化の結果、４７０ｎｍ前後の吸光度最大を有する有色生成物が生じ、リアルタイムでＭｂ活性を監視するための好都合な手段がもたらされる（図３Ａ）。４７０ｎｍでの吸光度を監視することによって、非コーティングビーズおよびコーティングビーズ（それぞれ３４％および５２％の重量増加）におけるＭｂ活性を追跡した（図３Ｂ）。これらのアッセイは、経時的な生成物形成の急速な増加を示した。個々の濃度とともに非コーティングＭｂおよびコーティングＭｂに対する初速度（最初の６０のデータ点を使用して測定した場合）を表１で示す。初期酵素速度は、２．７９ｘ１０−３／ｓ（非コーティングＭｂの場合）からコーティングビーズの場合の３．２３〜３．３３ｘ１０−３／ｓへと明らかな上昇を示し、このことから、Ｍｂコーティングビーズにおいてヘムの機能性が維持されていることが示された。この結果からコーティング後の酵素活性の上昇が示唆されるものの、その上昇は小さく、おそらくアッセイの変動性の範囲内であった。アッセイの変動性（表１）は、非コーティングビーズの場合約５％であり、コーティングビーズの場合約９％であった。ポリマーが吸光度ベースラインを妨害する可能性もある。それにもかかわらず、活性データ（図３Ｂおよび表１）とともに溶解試験（図２）から、コーティング工程が、人工胃液および人工小腸液の溶解中にビーズの保全性を保護するだけでなく、Ｍｂの機能性も保つことが示唆される。
【表２】
2018534280.tif 000004
【０１４８】
［実施例２］
抗胸腺間質性リンパ球新生因子（ＴＳＬＰ）ｍＡｂを含有する腸溶性コーティングリオスフェア（ｌｙｏｓｐｈｅｒｅ）の調製、溶解挙動
この実施例は、抗体に適用される場合の本発明の工程を示す。この実施例において、抗ＴＳＬＰ  ｍＡｂをモデル抗体とした。抗ＴＳＬＰ抗体の説明は、米国特許第８，６３７，０１９号明細書で見出され得る。抗ＴＳＬＰ抗体の重鎖（配列番号１）および軽鎖（配列番号２）の配列は配列表で示す。
【０１４９】
調製
上記のように、高スループットカスタム液体ハンドラー（Ｂｉｏｍｅｋ（登録商標）ＦＸ）を用いて、１０ｍｇ／ｍＬの抗ＴＳＬＰ  ｍＡｂからなるモデル抗体処方物の凍結５０μＬ活性ビーズを調製した。具体的には、この処方物は、１４％トレハロース、７％ＨＰＭＣ、１．５０％スクロース、２．１３ｍＭヒスチジン、０．００４％ＰＳ−８０中の１０ｍｇ／ｍＬ抗ＴＳＬＰ  ｍＡｂからなっていた。次いで、凍結ビーズを予め冷却した−５０℃の棚に移し、下記で挙げる条件を使用してビーズを乾燥させた：
ａ．追加の凍結：−５０℃の棚；−５０℃のコンデンサー温度および真空３０ｍＴｏｒｒ；
ｂ．乾燥：
（ｉ）段階１：−５０℃、３０ｍＴｏｒｒの圧力で３０分間保持
（ｉｉ）段階２：０．４℃／分の速度で１５℃まで上昇させ、そして３０ｍＴｏｒｒの圧力で１４４０分間保持
（ｉｉｉ）段階３：０．２℃／分のランプ速度で３０℃まで上昇させ、そして３０ｍＴｏｒｒの圧力で３００分間の保持時間。
【０１５０】
乾燥後、ビーズをＮＡＬＧＥＮＥボトルに移し、さらに処理するまで２〜８℃で保存した。
【０１５１】
乾燥後、ビーズを下記のようにコーティング工程に供した。
【０１５２】
ワースターカラムとともにボトムスプレーを使用するＭｉｎｉ−Ｇｌａｔｔ流動床コーティング装置でコーティングを行った。
【０１５３】
コーティング溶液組成：１０％ＥＵＤＲＡＧＩＴ  Ｌ３０  Ｄ−５５；９０％ＥＵＤＲＡＧＩＴ  ＦＳ  ３０Ｄ（Ｌ／Ｓコーティングリオスフェア（ｌｙｏｓｐｈｅｒｅ）を調製するため）。
【表３】
2018534280.tif 000005
【０１５４】
コーティング溶液の調製：個々の賦形剤の重量を上記で概説するように測定した。撹拌器を用いて５分間にわたり混合を継続しながら、ＥＵＤＲＡＧＩＴ  ＦＳ  ３０  ＤをＰＬＡＳＡＣＲＹＬ  Ｔ２０に添加した。その後、さらに５分間撹拌を継続しながら、ＥＵＤＲＡＧＩＴ  Ｌ  ３０  Ｄ−５５を水と一緒に上記溶液に添加した。最後に、ＰＬＡＳＡＣＲＹＬ  ＨＴＰ２０を残りの水とともに添加し、さらに１０分間撹拌した。噴霧前にコーティング溶液を最終的に５０メッシュのスクリーンに通してふるい分けを行った。
【０１５５】
コーティング溶液組成：１００％ＥＵＤＲＡＧＩＴ  ＦＳ  ３０Ｄ（Ｓ−コーティングリオスフェア（ｌｙｏｓｐｈｅｒｅ）を調製するため）。
【表４】
2018534280.tif 000006
【０１５６】
コーティング溶液の調製：個々の賦形剤の重量を上記で概説するように測定した。ＰＬＡＳＡＣＲＹＬ  Ｔ２０を使用前に振盪した。概要の量のＥＵＤＲＡＧＩＴ分散液および水をＰＬＡＳＡＣＲＹＬ  Ｔ２０懸濁液に添加し、プロペラ撹拌器を用いて１０分間撹拌した。噴霧前にコーティング溶液を最終的に５０メッシュのスクリーンに通してふるい分けを行った。
【０１５７】
運転の開始前に流動床を２５℃の流入空気温度に予熱した。
【０１５８】
バッチ運転中のＭｉｎｉ−Ｇｌａｔｔに対する加工パラメータ
ノズル径：０．５ｍｍ
気流：０．１５〜０．２０ｂａｒ
噴霧速度：１．５〜２．０ｇ／分
製品温度：ＥＵＤＲＡＧＩＴ  ＦＳ３０Ｄ（１００％）の場合２１〜２５℃、ＥＵＤＲＡＧＩＴ  ＦＤ３０Ｄ／Ｌ３０Ｄの場合２５〜３０℃
噴霧圧力：０．５〜０．７ｂａｒ
コーティング重量増加の評価
特定の時間間隔でコーティング工程を停止させ、ｎ＝２０個のビーズの重量を測定して、非コーティングリオスフェア（ｌｙｏｓｐｈｅｒｅ）と比較して、コーティング工程中の実際の重量増加を決定することによって、コーティング重量増加を判定した。目標の重量増加が達成されたか否かに応じて、さらなるコーティングを継続した。この測定値もまた、コーティング溶液中の固形分含量に基づいてビーズ上に噴霧されたコーティング溶液の量に基づいて得られた理論値と比較した。コーティング溶液の噴霧を停止させた後、続いてリオスフェア（ｌｙｏｓｐｈｅｒｅ）をコーティング後約２〜４分間、流動床で乾燥させた。コーティングリオスフェア（ｌｙｏｓｐｈｅｒｅ）（Ｌ／ＳコーティングＷＧ１）の１バッチは９６％の重量増加でリオスフェア（ｌｙｏｓｐｈｅｒｅ）を有し、一方で他方（ＳコーティングＷＧ４）は１００％重量増加でリオスフェア（ｌｙｏｓｐｈｅｒｅ）をコーティングされた。
【０１５９】
ビーズの保全性およびリオスフェア（ｌｙｏｓｐｈｅｒｅ）溶解の評価
リオスフェア（ｌｙｏｓｐｈｅｒｅ）の溶解特性を決定するための方法の簡単な説明を以下に提供する。具体的には、実験設定には、１００ｍＬのパドル付き溶解容器を用いた多段階溶解試験が含まれた。簡潔に述べると、１０単位のリオスフェア（ｌｙｏｓｐｈｅｒｅ）をシンカー（ｓｉｎｋｅｒ）に入れ、３０ｍＬのＳＧＦに浸漬し、続いて１０ｍＬのＦａＳＳＩＦ液を添加してＳＧＦおよびＦａＳＳＩＦ中でそれぞれ最長で１時間および２時間リオスフェア（ｌｙｏｓｐｈｅｒｅ）溶解を測定した。最後に、１０ｍＬのＳＣｏＦを溶解容器中の既存の培地に添加し、それにより最終ｐＨが７．２になった。ＳＣｏＦにおける薬物放出を２４時間まで評価した。
【０１６０】
図４は、時間の関数としての、溶解した薬物のパーセンテージのプロットである。非コーティングリソスフェア（ｌｙｓｏｓｐｈｅｒｅ）（ａＴＳＬＰ、非コーティング）はＳＧＦ中で全薬物を放出し、ＦａＳＳＩＦおよびＳＣｏＦ中で薬物濃度は徐々に低下し、腸溶性ポリマー保護の欠如ゆえに分解（例えばアンフォールディング凝集など）の可能性がある。対照的に、ＥＵＤＲＡＧＩＴ  ＦＳ３０Ｄ／Ｌ３０Ｄ−５５（Ｌ／ＳコーティングＷＧ１）またはＥＵＤＲＡＧＩＴ  ＦＳ３０Ｄ（ＳコーティングＷＧ４）を用いた腸溶性コーティングリオスフェア（ｌｙｏｓｐｈｅｒｅ）は、ＳＧＦ中での薬物放出は最小限に抑えられ、ＦａＳＳＩＦ中での放出は＜２０％となり、残りの薬物はその後の２４時間以降にわたり放出された。
【０１６１】
非コーティング試料は、最初の１時間の終了時にＳＧＦ中で完全に分散したが、コーティング試料は無傷であり、薬物の早すぎる放出を妨げる機能性コートが保たれたことが実証された。ＦａＳＳＩＦにおいて、ＦａＳＳＩＦ中での薬物放出が＜２０％であることで示されるように、Ｌ／ＳコーティングＷＧ１およびＳコーティングＷＧ４試料は、ＦＡＳＳＩＦ中で対照的に無傷のままである。コーティング試料は、結腸液中で分散し始め、図４で示されるように、２４時間の時点で全てが完全に分散した。
【０１６２】
コーティングリオスフェア（ｌｙｏｓｐｈｅｒｅ）の溶解後のタンパク質濃度および二次構造の決定
コーティング後に、４５．８％の重量増加があった１０ｍｇ／ｍＬビーズに対して、ＵＶ−Ｖｉｓ分光法を用いてタンパク質濃度について特徴を評価し、円二色性（ＣＤ）を用いて二次構造について特徴を評価した。比較のために、凍結液体ビーズおよび非コーティングビーズの特徴も評価した。
【０１６３】
これらの分析のために、それぞれに対する全部で２０個のビーズを２０ｍＬの０．０１Ｍ  ＰＢＳ、ｐＨ７．４（最終抗ＴＳＬＰ  ｍＡｂ濃度はおよそ０．５ｍｇ／ｍＬ）に入れ、２〜８℃で一晩溶解させ、続いて３７℃で４時間溶解させた。Ａｇｉｌｅｎｔ  ＵＶ−Ｖｉｓ分光計を用いて、２８０ｎｍでのＵＶ吸光度（Ａｂｓ２８０ｎｍ）を測定した（下記表２参照）。凍結ビーズおよび液体対照と比較して、コーティングビーズおよび非コーティングビーズについてＡｂｓ２８０ｎｍに有意差はなかった。この結果から、乾燥工程、コーティング工程および何らかの操作段階中にタンパク質が顕著に失われなかったことが示される。
【表５】
2018534280.tif 000007
【０１６４】
非コーティング乾燥ビーズおよび液体凍結ビーズと比較したコーティングビーズのＣＤスペクトルを図５で示す。０．１ｍｇ／ｍＬの抗ＴＳＬＰ  ｍＡｂの濃度に希釈した上記の試料についてＣＤスペクトルを測定した。０．１ｃｍ経路長のキュベットを用いて２００〜２６０ｎｍの範囲でデータを回収した。２ｎｍの帯域幅で２０ｎｍ／分の連続走査を使用した。ＣＤ吸光度に有意差は認められず、このことから、コーティングおよび操作工程が抗ＴＳＬＰ  ｍＡｂの二次構造に顕著な影響を及ぼさなかったことが示唆された。
【０１６５】
［実施例３］
抗ヒトプログラム死受容体（抗ｈＰＤ−１）ｍＡＢを含有する腸溶性コーティングリオスフェア（ｌｙｏｓｐｈｅｒｅ）の調製および溶解挙動
この実施例は、抗体に適用される場合の本発明の工程を示す。この実施例において、抗ｈＰＤ−１  ｍＡｂをモデル抗体とした。抗ｈＰＤ−１  ｍＡｂの説明は、その開示が本明細書中で完全に記載されているように、参照により本明細書によって組み込まれる、米国特許第８，３５４，５０９号明細書で見出し得る。
【０１６６】
調製
上記のように、高スループットカスタム液体ハンドラー（Ｂｉｏｍｅｋ（登録商標）ＦＸ）を用いて、それぞれ５ｍｇ／ｍＬおよび１０ｍｇ／ｍＬの抗ｈＰＤ−１  ｍＡｂおよび抗ｈＰＤ−１  ｍＡｂからなるモデル抗体処方物の凍結５０μＬ活性ビーズを調製した。具体的には、この処方物は、１４％トレハロース、７％ＨＰＭＣ、１．４％スクロース、２ｍＭヒスチジン、０．００４％ＰＳ−８０中の５ｍｇ／ｍＬ  抗ｈＰＤ−１  ｍＡｂ、または、１４％トレハロース、７％ＨＰＭＣ、１．４％スクロース、２ｍＭヒスチジン、０．００４％ＰＳ−８０中の１０ｍｇ／ｍＬの抗ｈＰＤ−１  ｍＡｂからなっていた。次いで、凍結ビーズを予め冷却した−５０℃の棚に移し、下記で挙げる条件を使用してビーズを乾燥させた：
ａ．追加の凍結：−５０℃の棚；−５０℃のコンデンサー温度および真空３０ｍＴｏｒｒ；
ｂ．乾燥：
（ｉ）段階１：−５０℃、３０ｍＴｏｒｒの圧力で３０分間保持
（ｉｉ）段階２：０．４℃／分のランプ速度で１５℃、そして、３０ｍＴｏｒｒの圧力で１４４０分間の保持時間
（ｉｉｉ）段階３：０．２℃／分のランプ速度で３０℃、そして、３０ｍＴｏｒｒの圧力で３００分間の保持時間。
【０１６７】
乾燥後、ビーズをＮＡＬＧＥＮＥボトルに移し、さらに処理するまで２〜８℃で保存した。
【０１６８】
乾燥後、ビーズを下記のようにコーティング工程に供した。
【０１６９】
コーティング溶液組成：１０％ＥＵＤＲＡＧＩＴ  Ｌ３０  Ｄ−５５；９０％ＥＵＤＲＡＧＩＴ  ＦＳ  ３０Ｄ（Ｌ／Ｓコーティングリオスフェア（ｌｙｏｓｐｈｅｒｅ）を調製するため）。
【表６】
2018534280.tif 000008
【０１７０】
コーティング溶液の調製：個々の賦形剤の重量を上記で概説するように測定した。撹拌器を用いて５分間にわたり混合を継続しながら、ＥＵＤＲＡＧＩＴ  ＦＳ  ３０  ＤをＰＬＡＳＡＣＲＹＬ  Ｔ２０に添加した。その後、さらに５分間撹拌を継続しながら、ＥＵＤＲＡＧＩＴ  Ｌ３０  Ｄ−５５を水とともに上記溶液に添加した。最後に、ＰＬＡＳＡＣＲＹＬ  ＨＴＰ２０を残りの水とともに添加し、混合物をさらに１０分間撹拌した。噴霧前にコーティング溶液を最終的に５０メッシュのスクリーンに通してふるい分けを行った。
【０１７１】
運転の開始前に流動床を２５℃の流入空気温度に予熱した。
【０１７２】
バッチ運転中のＭｉｎｉ−Ｇｌａｔｔに対する加工パラメータ
ノズル径：０．５ｍｍ
気流：０．１５〜０．２５ｂａｒ
噴霧速度：１．５〜２．０ｇ／分
製品温度：ＥＵＤＲＡＧＩＴ  ＦＤ３０Ｄ／Ｌ３０Ｄの場合２５〜３０℃
噴霧圧：０．５〜０．７５ｂａｒ
コーティング重量増加の評価
特定の時間間隔でコーティング工程を停止させ、２０個のビーズの重量を測定して、非コーティングリオスフェア（ｌｙｏｓｐｈｅｒｅ）と比較して、コーティング工程中の実際の重量増加を決定することによって、コーティング重量増加を判定した。目標の重量増加が達成されたか否かに応じて、さらなるコーティングを適用した。この測定値もまた、コーティング溶液中の固形分含量に基づいてビーズ上に噴霧されたコーティング溶液の理論的な量と比較した。コーティング溶液の噴霧を停止させた後、続いてリオスフェア（ｌｙｏｓｐｈｅｒｅ）をコーティング後約２〜４分間、流動床で乾燥させた。コーティングリオスフェア（ｌｙｏｓｐｈｅｒｅ）は、６１．４％の重量増加があった。
ビーズの保全性およびリオスフェア（ｌｙｏｓｐｈｅｒｅ）溶解の評価
図６は、溶出時間の関数として監視した場合の、ＥＵＤＲＡＧＩＴ  Ｌ３０Ｄ−５５／ＦＳ３０Ｄ（図中のＬ／ＳコーティングＷＧ２）によるポリマーコーティングリオスフェア（ｌｙｏｓｐｈｅｒｅ）に対する、抗ｈＰＤ１  ｍＡｂの２８０ｎｍでのベースライン補正吸光度のプロットである。最初に、１０個のビーズ（５ｍｇ／ｍＬの抗ｈＰＤ１  ｍＡｂとともにそれぞれ１００μＬ）を３０ｍＬの人工胃液（ＳＧＦ、ｐＨ１．８）中で溶解させ、１時間混合した後に吸光度スペクトルを回収した。ＦＡＳＳＩＦ液（１０ｍＬ）を溶解装置に添加し、撹拌を２時間継続した。その後、ＳＣｏＦ（１０ｍＬ）を溶解装置に添加し、吸光度を３０分間隔で次の２時間監視し、その後２４時間の時点で最後の試料採取を行った。
【０１７３】
このデータから、機能的なコーティングリオスフェア（ｌｙｏｓｐｈｅｒｅ）が無傷のままであり、ＳＧＦ中での早すぎるタンパク質放出を防ぎ、ＦａＳＳＩＦ中で薬物放出が誘発され、一方でタンパク質放出の大部分がＳＣｏＦ（人工結腸液）中で起こることが示唆される。
【０１７４】
コーティングリオスフェア（ｌｙｏｓｐｈｅｒｅ）の溶解後の濃度および二次構造の決定
コーティング後に、１０ｍｇ／ｍＬの抗ｈＰＤ−１  ｍＡｂビーズに対して、ＵＶ−Ｖｉｓ分光法を用いてタンパク質濃度について特徴を評価し、円二色性（ＣＤ）を用いて二次構造について特徴を評価した。比較のために、凍結液体ビーズおよび非コーティングビーズの特徴も評価した。
【０１７５】
これらの分析のために、それぞれに対する全部で２０個のビーズを２０ｍＬの０．０１Ｍ  ＰＢＳ、ｐＨ７．４（最終抗ｈＰＤ−１  ｍＡｂ濃度はおよそ０．５ｍｇ／ｍＬ）に入れ、２〜８℃で一晩溶解させ、続いて３７℃で４時間溶解させた。Ａｇｉｌｅｎｔ  ＵＶ−Ｖｉｓ分光計を用いて、２８０ｎｍでのＵＶ吸光度（Ａｂｓ２８０ｎｍ）を測定した（下記表３参照）。凍結ビーズと比較して、非コーティングビーズおよびコーティングビーズについてＡｂｓ２８０ｎｍにより調べたところ、約３〜７％の抗ｈＰＤ−１  ｍＡｂの損失があった。この結果から、乾燥工程、コーティング工程および操作段階中に失われたタンパク質は最小限であったことが示される。
【表７】
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【０１７６】
非コーティング乾燥ビーズおよび液体凍結ビーズと比較したコーティングビーズのＣＤスペクトルを図７で示す。０．１ｍｇ／ｍＬの抗ｈＰＤ−１  ｍＡｂの濃度に希釈した上記の試料についてＣＤスペクトルを測定した。０．１ｃｍ経路長のキュベットを用いて２００〜２６０ｎｍの範囲でデータを回収した。２ｎｍの帯域幅で２０ｎｍ／分の連続走査を使用した。ＣＤシグナルに有意差は認められず、このことから、コーティングおよび操作工程が抗ｈＰＤ−１  ｍＡｂの二次構造に顕著な影響を及ぼさなかったことが示唆された。
【０１７７】
本発明は、本明細書中に記載の特定の実施形態によって範囲が限定されるものではない。実際に、本明細書に記載のものに加えて、本発明の様々な改変が、上記の記載から当業者にとって明らかになるであろう。このような改変は、添付の特許請求の範囲の範囲内に入るものとする。
【図１Ａ】
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【図１Ｂ】
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【図２】
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【図３Ａ】
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【図３Ｂ】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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