(57)【要約】  本発明は、臭気除去効果を有する新規な菌株、およびそれを使用して家畜排泄物からの臭気を除去するための方法に関する。本発明による菌株は、家畜排泄物から発生した臭気を除去または減少させる優れた能力を有し、したがって、家畜排泄物が生じる家畜小屋を改善するために、または家畜排泄物から無臭の堆肥を調製するために効果的に使用することができる。それに加えて、本発明による臭気除去方法は、既存の施設が継続して使用されることを可能にし、したがって、追加の出費の負担を軽減することができ、家畜のタイプまたは規模に関わらず例外なく使用することもできる。
2018519846.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
（ａ）ノカルディオプシス・シヌスペルシシ（Ｎｏｃａｒｄｉｏｐｓｉｓ  ｓｉｎｕｓｐｅｒｓｉｃｉ）ＳＥ−５０５（受託番号ＫＣＣＭ１１６５３Ｐ）；
（ｂ）ノカルディオプシス・アルバ（Ｎｏｃａｒｄｉｏｐｓｉｓ  ａｌｂａ）ＳＤ−５０３（受託番号ＫＣＣＭ１１６５４Ｐ）；
（ｃ）エンテラクチノコッカス・コプロフィルス（Ｅｎｔｅｒａｃｔｉｎｏｃｏｃｃｕｓ  ｃｏｐｒｏｐｈｉｌｕｓ）ＣＡ−１０８（受託番号ＫＣＣＭ１１６５５Ｐ）；
（ｄ）コリネバクテリウム・エフィシエンス（Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｅｆｆｉｃｉｅｎｓ）ＹＡ−１９１（受託番号ＫＣＣＭ１１６５６Ｐ）；
（ｅ）オセアニタレア・ナンハエンシス（Ｏｃｅａｎｉｔａｌｅａ  ｎａｎｈａｉｅｎｓｉｓ）ＹＡＣ−０９９（受託番号ＫＣＣＭ１１６５７Ｐ）；および
（ｆ）コリネバクテリウム・エフィシエンス（Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｅｆｆｉｃｉｅｎｓ）ＢＡ−０９２（受託番号ＫＣＣＭ１１６５８Ｐ）
からなる群から選択される菌株。
【請求項２】
前記菌株が臭気除去効果を有する、請求項１に記載の菌株。
【請求項３】
請求項１に記載の菌株もしくはその組合せまたはその培養液を含む、臭気除去用組成物。
【請求項４】
前記組成物が家畜排泄物からの臭気を除去するために使用される、請求項３に記載の組成物。
【請求項５】
請求項３に記載の組成物を家畜排泄物に噴霧すること、または請求項３に記載の組成物を前記家畜排泄物と混合することを含む、前記家畜排泄物からの臭気を除去するための方法。
【請求項６】
請求項３に記載の組成物を家畜排泄物に噴霧すること、または請求項３に記載の組成物を前記家畜排泄物と混合することを含む、前記家畜排泄物から無臭の堆肥を調製するための方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、臭気除去効果を有する新規な菌株、およびそれを使用して家畜排泄物から臭気を除去するための方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
最近、家畜産業の開発で、大量の家畜排泄物が、牧場、養豚場、養鶏場等で生じるが、処理施設の不足のためにいかなる浄化処理もせずに廃棄されている。家畜排泄物は有機物質であり、それは、有機肥料として高い価値を有する。家畜排泄物は、微生物による好気性発酵により堆肥にすることができる。しかしながら、家畜排泄物を使用して堆肥にする過程中に発生する臭気は、周辺地域に深刻な被害を引き起こし得る。それ故、家畜排泄物からの臭気を除去することができれば、それは、無臭の堆肥を調製するために有用であろう。
【０００３】
家畜排泄物の処理過程中に発生する臭気は、アンモニアガス、揮発性アミン例えばインドール、イオウ化合物、揮発性低級脂肪酸、ならびに揮発性アルデヒドおよびアルコールから生じて、それらは家畜の腸内微生物による有機物質の分解過程で生成することが知られている。
【０００４】
臭気を除去するための従来の技法には、微生物を使用するバイオフィルター法、活性炭吸着法、生化学的湿式スクラッバー法、およびプラズマ分解法が含まれる。しかしながら、上記の方法は、高濃度の臭気を連続的に除去することに限界を有し、かつ多大な費用がかかるという不利な点を有する。
【０００５】
韓国特許第１０−１１２００９５号に、柑橘類の木鋸屑およびウマ排泄物堆肥を、臭気を減少させる微生物と一緒に使用することにより、ブタ排泄物から臭気を移すかまたは吸着する方法が開示されている。韓国特許公開第２０１２−００６８１９４号には、家畜排泄物肥料を、竹葉とマツ葉の混合物、ラクトバチルス・パラケフィリ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｐａｒａｋｅｆｉｌｉ）および酵母（カンジダ・グラブラータ（Ｃａｎｄｉｄａ  ｇｌａｂｒａｔａ））からなる土着の微生物ならびに１０〜３０重量％の量の無水グルコースで構成される組成物と混合することにより、家畜排泄物から臭気を除去する方法が開示されている。しかしながら、上記の特許に記載された方法は、大規模の家畜排泄物の処理には適当でなく、それは、人工的に培養される微生物の処理効率が、排泄物の腐敗の程度に依存して大幅に変化し、かつ家畜排泄物からの臭気を減少させるために使用される材料を得ることが困難だからである。韓国特許第１０−０３７８６６７号にも、臭気を分解する微生物と５〜１０％の家畜排泄物の組成物を、木鋸屑、籾殻および落ち葉の粉末と一緒に混合して、該混合物を好気的に発酵させることにより堆肥にするための方法が開示されている。韓国特許第１０−０８４８６７７号には、家禽排泄物の１００重量部に基づいて３０〜５０重量部の腐葉土、１０〜３０重量部のリグナムクレイ（lignum clay）、５〜２０重量部の生石灰、５〜２０重量部の廃棄物化石、０．５〜２重量部の好熱微生物を混合して、次に該混合物を５０〜６０℃の温度で５〜７週間発酵させるための方法が開示されている。しかしながら、上記の特許に記載された方法は、添加されるべき賦形剤の量が処理されるべき排泄物の量より多いので非常に非効率的であり、かつ大規模処理のための機械設備投資が必要なので実際的でない。
【０００６】
それ故、家畜排泄物を効率的に処理するために、家畜排泄物からの臭気をより速やかに、かつ経済的に除去または減少させるための方法を開発することが必要とされる。
【発明の概要】
【０００７】
したがって、本発明の目的は、家畜排泄物から発生した臭気を除去する能力を有する新規な菌株を提供することである。
【０００８】
本発明の別の目的は、上記の菌株を含有する臭気除去用組成物を提供することである。
【０００９】
本発明の別の目的は、該組成物を使用して家畜排泄物からの臭気を除去するための方法を提供することである。
【００１０】
本発明の別の目的は、上記の組成物を使用して家畜排泄物から無臭の堆肥を調製するための方法を提供することである。
【００１１】
上記の目的を達成するために、本発明は、（ａ）ノカルディオプシス・シヌスペルシシ（Ｎｏｃａｒｄｉｏｐｓｉｓ  ｓｉｎｕｓｐｅｒｓｉｃｉ）ＳＥ−５０５（受託番号ＫＣＣＭ１１６５３Ｐ）；（ｂ）ノカルディオプシス・アルバ（Ｎｏｃａｒｄｉｏｐｓｉｓ  ａｌｂａ）ＳＤ−５０３（受託番号ＫＣＣＭ１１６５４Ｐ）；（ｃ）エンテラクチノコッカス・コプロフィルス（Ｅｎｔｅｒａｃｔｉｎｏｃｏｃｃｕｓ  ｃｏｐｒｏｐｈｉｌｕｓ）ＣＡ−１０８（受託番号ＫＣＣＭ１１６５５Ｐ）；（ｄ）コリネバクテリウム・エフィシエンス（Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｅｆｆｉｃｉｅｎｓ）ＹＡ−１９１（受託番号ＫＣＣＭ１１６５６Ｐ）；（ｅ）オセアニタレア・ナンハエンシス（Ｏｃｅａｎｉｔａｌｅａ  ｎａｎｈａｉｅｎｓｉｓ）ＹＡＣ−０９９（受託番号ＫＣＣＭ１１６５７Ｐ）；および（ｆ）コリネバクテリウム・エフィシエンス（Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｅｆｆｉｃｉｅｎｓ）ＢＡ−０９２（受託番号ＫＣＣＭ１１６５８Ｐ）からなる群から選択される菌株を提供する。
【００１２】
それに加えて、本発明は、上記の菌株もしくはその組合せ、またはその培養液を含む、臭気除去用組成物も提供する。
【００１３】
それに加えて、本発明は、上記の組成物を家畜排泄物に噴霧すること、またはそれを家畜排泄物と混合することを含む、家畜排泄物からの臭気を除去するための方法も提供する。
【００１４】
それに加えて、本発明は、上記の組成物を家畜排泄物に噴霧すること、またはそれを家畜排泄物と混合することを含む、家畜排泄物から無臭の堆肥を調製するための方法も提供する。
【００１５】
本発明による菌株は、家畜排泄物から発生した臭気を除去するかまたは減少させる優れた能力を有し、したがって、家畜排泄物から無臭の堆肥を調製するために効果的に使用することができる。それに加えて、本発明による臭気除去方法は、既存の施設の使用を可能にして追加の出費を減少させ、家畜のタイプまたは規模に関わらず例外なく使用することもできる。
【図面の簡単な説明】
【００１６】
【図１】図１は、本発明による６種の菌株の形状を示す顕微鏡写真を提供する。
【図２】図２は、本発明による６種の菌株のコロニー形状を示す写真を提供する。
【図３】図３は、本発明による６種の菌株のＬＳＣ寒天培地およびＴＳＣ寒天培地それぞれにおけるコロニーの形状および色を示す写真を提供する。
【図４】図４は、１６Ｓ  ＤＮＡ配列に基づくＢＡ−０９２菌株の系統樹である。
【図５】図５は、１６Ｓ  ＤＮＡ配列に基づくＹＡ−１９１菌株の系統樹である。
【図６】図６は、１６Ｓ  ＤＮＡ配列に基づくＣＡ−１０８菌株の系統樹である。
【図７】図７は、１６Ｓ  ＤＮＡ配列に基づくＹＡＣ−０９９菌株の系統樹である。
【図８】図８は、１６Ｓ  ＤＮＡ配列に基づくＳＤ−５０３菌株の系統樹である。
【図９】図９は、１６Ｓ  ＤＮＡ配列に基づくＳＥ−５０５菌株の系統樹である。
【図１０】図１０は、本発明による菌株を使用した、排泄物の液体発酵システムおよび堆肥化システムのプロセスを示す模式図を描写する。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１７】
ここで使用する用語「家畜排泄物」は、家畜、例えば、ブタ、ウシ、および家禽から生じた排泄物を指す。
【００１８】
本発明は、
（ａ）ノカルディオプシス・シヌスペルシシ（Ｎｏｃａｒｄｉｏｐｓｉｓ  ｓｉｎｕｓｐｅｒｓｉｃｉ）ＳＥ−５０５（受託番号ＫＣＣＭ１１６５３Ｐ）；
（ｂ）ノカルディオプシス・アルバ（Ｎｏｃａｒｄｉｏｐｓｉｓ  ａｌｂａ）ＳＤ−５０３（受託番号ＫＣＣＭ１１６５４Ｐ）；
（ｃ）エンテラクチノコッカス・コプロフィルス（Ｅｎｔｅｒａｃｔｉｎｏｃｏｃｃｕｓ  ｃｏｐｒｏｐｈｉｌｕｓ）ＣＡ−１０８（受託番号ＫＣＣＭ１１６５５Ｐ）；
（ｄ）コリネバクテリウム・エフィシエンス（Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｅｆｆｉｃｉｅｎｓ）ＹＡ−１９１（受託番号ＫＣＣＭ１１６５６Ｐ）；
（ｅ）オセアニタレア・ナンハエンシス（Ｏｃｅａｎｉｔａｌｅａ  ｎａｎｈａｉｅｎｓｉｓ）ＹＡＣ−０９９（受託番号ＫＣＣＭ１１６５７Ｐ）；および
（ｆ）コリネバクテリウム・エフィシエンス（Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｅｆｆｉｃｉｅｎｓ）ＢＡ−０９２（受託番号ＫＣＣＭ１１６５８Ｐ）
からなる群から選択される菌株を提供する。
【００１９】
該菌株は、排泄物を含有する土壌から単離されて、生化学的および分子生物学的方法により新たな菌株として同定された（例３を参照されたい）。本発明者らは、６種の菌株を、ノカルディオプシス・シヌスペルシシ（Ｎｏｃａｒｄｉｏｐｓｉｓ  ｓｉｎｕｓｐｅｒｓｉｃｉ）ＳＥ−５０５、ノカルディオプシス・アルバ（Ｎｏｃａｒｄｉｏｐｓｉｓ  ａｌｂａ）ＳＤ−５０３、エンテラクチノコッカス・コプロフィルス（Ｅｎｔｅｒａｃｔｉｎｏｃｏｃｃｕｓ  ｃｏｐｒｏｐｈｉｌｕｓ）ＣＡ−１０８、コリネバクテリウム・エフィシエンス（Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｅｆｆｉｃｉｅｎｓ）ＹＡ−１９１、オセアニタレア・ナンハエンシス（Ｏｃｅａｎｉｔａｌｅａ  ｎａｎｈａｉｅｎｓｉｓ）ＹＡＣ−０９９、およびコリネバクテリウム・エフィシエンス（Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｅｆｆｉｃｉｅｎｓ）ＢＡ−０９２と、それぞれ命名して、それらを韓国微生物培養センター（ＫＣＣＭ）に、２０１５年１月８日に寄託した。６種の菌株の受託番号は、それぞれ、ＫＣＣＭ１１６５３Ｐ、ＫＣＣＭ１１６５４Ｐ、ＫＣＣＭ１１６５５Ｐ、ＫＣＣＭ１１６５６Ｐ、ＫＣＣＭ１１６５７ＰおよびＫＣＣＭ１１６５８Ｐである。
【００２０】
これらの菌株は、それらの炭素供給源利用能力、成長温度、酵素活性および脂肪酸組成等に関して標準菌株と異なる。
【００２１】
本発明の菌株は、臭気除去効果を有し、特に、家畜排泄物（例えば、ブタ、ウシ、または家禽）またはそれから調製された堆肥等から臭気を除去する効果を有する。
【００２２】
それに加えて、本発明は、上記の菌株もしくはその組合せ、またはその培養液を含む、臭気除去用組成物を提供する。
【００２３】
本発明の一態様において、臭気除去用組成物は、ノカルディオプシス・シヌスペルシシ（Ｎｏｃａｒｄｉｏｐｓｉｓ  ｓｉｎｕｓｐｅｒｓｉｃｉ）ＳＥ−５０５単独またはその培養液を含む。
【００２４】
本発明の別の態様において、臭気除去用組成物は、ノカルディオプシス・アルバ（Ｎｏｃａｒｄｉｏｐｓｉｓ  ａｌｂａ）ＳＤ−５０３単独またはその培養液を含む。
【００２５】
本発明の別の態様において、臭気除去用組成物は、エンテラクチノコッカス・コプロフィルス（Ｅｎｔｅｒａｃｔｉｎｏｃｏｃｃｕｓ  ｃｏｐｒｏｐｈｉｌｕｓ）ＣＡ−１０８単独またはその培養液を含む。
【００２６】
本発明の別の態様において、臭気除去用組成物は、コリネバクテリウム・エフィシエンス（Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｅｆｆｉｃｉｅｎｓ）ＹＡ−１９１単独またはその培養液を含む。
【００２７】
本発明の別の態様において、臭気除去用組成物は、オセアニタレア・ナンハエンシス（Ｏｃｅａｎｉｔａｌｅａ  ｎａｎｈａｉｅｎｓｉｓ）ＹＡＣ−０９９単独またはその培養液を含む。
【００２８】
本発明の別の態様において、臭気除去用組成物は、コリネバクテリウム・エフィシエンス（Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｅｆｆｉｃｉｅｎｓ）ＢＡ−０９２単独でまたはその培養液を含む。
【００２９】
本発明の別の態様において、臭気除去用組成物は、コリネバクテリウム・エフィシエンス（Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｅｆｆｉｃｉｅｎｓ）ＢＡ−０９２とコリネバクテリウム・エフィシエンス（Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｅｆｆｉｃｉｅｎｓ）ＹＡ−１９１との組合せ、またはそれらの培養液を含む。
【００３０】
本発明の別の態様において、臭気除去用組成物は、エンテラクチノコッカス・コプロフィルス（Ｅｎｔｅｒａｃｔｉｎｏｃｏｃｃｕｓ  ｃｏｐｒｏｐｈｉｌｕｓ）ＣＡ−１０８とオセアニタレア・ナンハエンシス（Ｏｃｅａｎｉｔａｌｅａ  ｎａｎｈａｉｅｎｓｉｓ）ＹＡＣ−０９９との組合せ、またはそれらの培養液を含む。
【００３１】
本発明の別の態様において、臭気除去用組成物は、ノカルディオプシス・アルバ（Ｎｏｃａｒｄｉｏｐｓｉｓ  ａｌｂａ）ＳＤ−５０３とノカルディオプシス・シヌスペルシシ（Ｎｏｃａｒｄｉｏｐｓｉｓ  ｓｉｎｕｓｐｅｒｓｉｃｉ）ＳＥ−５０５との組合せ、またはそれらの培養液を含む。
【００３２】
本発明の別の態様において、臭気除去用組成物は、コリネバクテリウム・エフィシエンス（Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｅｆｆｉｃｉｅｎｓ）ＢＡ−０９２、コリネバクテリウム・エフィシエンス（Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｅｆｆｉｃｉｅｎｓ）ＹＡ−１９１、ノカルディオプシス・アルバ（Ｎｏｃａｒｄｉｏｐｓｉｓ  ａｌｂａ）ＳＤ−５０３およびノカルディオプシス・シヌスペルシシ（Ｎｏｃａｒｄｉｏｐｓｉｓ  ｓｉｎｕｓｐｅｒｓｉｃｉ）ＳＥ−５０５の組合せ、またはそれらの培養液を含む。
【００３３】
本発明の別の態様において、臭気除去用組成物は、エンテラクチノコッカス・コプロフィルス（Ｅｎｔｅｒａｃｔｉｎｏｃｏｃｃｕｓ  ｃｏｐｒｏｐｈｉｌｕｓ）ＣＡ−１０８、オセアニタレア・ナンハエンシス（Ｏｃｅａｎｉｔａｌｅａ  ｎａｎｈａｉｅｎｓｉｓ）ＹＡＣ−０９９、ノカルディオプシス・アルバ（Ｎｏｃａｒｄｉｏｐｓｉｓ  ａｌｂａ）ＳＤ−５０３およびノカルディオプシス・シヌスペルシシ（Ｎｏｃａｒｄｉｏｐｓｉｓ  ｓｉｎｕｓｐｅｒｓｉｃｉ）ＳＥ−５０５の組合せ、またはそれらの培養液を含む。
【００３４】
本発明の別の態様において、臭気除去用組成物は、コリネバクテリウム・エフィシエンス（Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｅｆｆｉｃｉｅｎｓ）ＢＡ−０９２、コリネバクテリウム・エフィシエンス（Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｅｆｆｉｃｉｅｎｓ）ＹＡ−１９１、エンテラクチノコッカス・コプロフィルス（Ｅｎｔｅｒａｃｔｉｎｏｃｏｃｃｕｓ  ｃｏｐｒｏｐｈｉｌｕｓ）ＣＡ−１０８、オセアニタレア・ナンハエンシス（Ｏｃｅａｎｉｔａｌｅａ  ｎａｎｈａｉｅｎｓｉｓ）ＹＡＣ−０９９、ノカルディオプシス・アルバ（Ｎｏｃａｒｄｉｏｐｓｉｓ  ａｌｂａ）ＳＤ−５０３およびノカルディオプシス・シヌスペルシシ（Ｎｏｃａｒｄｉｏｐｓｉｓ  ｓｉｎｕｓｐｅｒｓｉｃｉ）ＳＥ−５０５の組合せ、またはそれらの培養液を含む。
【００３５】
各菌株またはそれらの培養液が組み合わされた、臭気除去用組成物の場合、各菌株またはそれらの培養液が同じ比（体積）で組み合わされていることが好ましい。
【００３６】
上記の臭気除去用組成物は、臭気を除去するために効果的であることが知られている、他の化合物、物質およびこれらに類似したものをさらに含有していてもよい。
【００３７】
さらに、本発明は、上記の組成物を家畜排泄物に噴霧すること、またはそれを家畜排泄物と混合することを含む、家畜排泄物からの臭気を除去するための方法を提供する。本発明による臭気除去用組成物は、家畜排泄物自体だけでなく家畜の身体（特に、排泄物で汚染された家畜の身体）にも噴霧することにより、家畜の身体で発生する臭気を除去するために使用することができる。
【００３８】
それに加えて、本発明は、家畜排泄物からの臭気が除去された堆肥を調製するための方法であって、上記の組成物を家畜排泄物に噴霧すること、またはそれを家畜排泄物と混合することを含む方法を提供する。
【００３９】
無臭の堆肥を調製するための方法は、家畜排泄物から堆肥を調製する従来の方法に適用することができる。すなわち、無臭の堆肥は、本発明による臭気除去用組成物を家畜排泄物に噴霧するか、またはそれを家畜排泄物と混合することにより調製することができる。
【００４０】
本発明の一態様において、堆肥を調製するための方法は、液体発酵システムおよび堆肥化システムを利用してもよい。
【００４１】
液体発酵システムは、ブタ排泄物および本発明の菌株を発酵タンクに加える工程と、３３±２℃で発酵させて無臭の発酵ブロスを調製する工程と、発酵ブロスを乾燥させる工程とを含んでいてもよい。それに加えて、堆肥化システムは、ブタ排泄物からの前記乾燥させた発酵ブロスを、ウシおよび／または家禽排泄物と混合する工程と、それらを３〜７日間分解させて堆肥を調製する工程とを含んでいてもよい。韓国特許第１４０２６１０号で開示された堆肥化装置を参照してもよい。
【００４２】
この後、本発明を、例を参照して詳細に説明する。しかしながら、例は、本発明の範囲を限定することなく本発明を例示することが意図される。
【００４３】
例１
臭気除去効果を有する菌株の単離
家畜排泄物からの優れた臭気除去効果および家畜排泄物中における優れた成長活性を有する菌株を、以下の手順により単離した。
【００４４】
具体的には、汚染されていない肥沃な土壌の試料を集めて、次に、脱湿させた風を３０℃で使用して乾燥し、含水率を３０％（ｗ／ｗ）以下にした。乾燥された土壌試料を、５０％（ｗ／ｗ）の各種の家畜の未処理排泄物、例えば、ウシ、ブタおよび家禽の排泄物とそれぞれ混合して、８０％の湿度を３３℃で維持しながら好気的に３〜７日間発酵させた。土壌試料の臭気を、直接的な官能的方法により測定して、大幅な臭気減少が観察された試料を選択した。選択された試料を３５℃以下で乾燥させて、未処理排泄物と１：１の比で再び混合して、同じ発酵条件下で発酵させて臭気の程度を検査した。発酵過程が繰り返されたときに、臭気が２４時間以内に除去された試料を、活性な細菌を単離するための検体として選択した。同時に、ブタ排泄物を純水中に懸濁させて、固体含有濃度が３％（ｗ／ｖ）以上になるように希釈した。それに寒天を１．８％（ｗ／ｗ）の濃度で加えた。該懸濁液を滅菌して固形培地を調製した。活性な細菌を単離するための検体を、固形培地上に散布して、１０6ｃｆｕ／ｇ以上の優勢菌株を単離して、単離された優勢菌株を固形培地上に再び散布して臭気除去効果を有する６タイプの菌株を単離した。
【００４５】
例２
単離された菌株の形状および成長特性
＜２−１＞菌株の形状
単離された菌株の特性を検査するために、６タイプの菌株を顕微鏡（１，０００×）により直接観察して、ブタ排泄物寒天培地上に散布して、コロニーの形状および色を観察した。
【００４６】
結果を図１および２に示す。選択された６タイプの菌株は、異なった形状および色を有する。６タイプの菌株を、ＢＡ−０９２、ＹＡ−１９１、ＣＡ−１０８、ＹＡＣ−０９９、ＳＤ−５０３およびＳＥ−５０５と、それぞれ命名した。
＜２−２＞成長特性
一方、菌株の培養特性を種々の培養培地中で比較するために、定性的培養実験を、表１に挙げた典型的な腐敗性および病原性細菌の選択培地、一般細菌培地および排泄物培地で、それぞれ実施した。
【００４７】
結果を表２および図３に示した。
＜表１＞
選択培地のタイプに依存する菌株の評価
【００４８】
【表１】
2018519846.tif 000003
【００４９】
＜表２＞
選択培地中における本発明の菌株の成長特性
【００５０】
【表２】
2018519846.tif 000004
【００５１】
表２および図３に示したように、選択培地における成長特性を比較したとき、単離された活性な菌株は、選択培地に依存して、コロニーの形状および色において有意な差を示した。排泄物培地、例えば、ブタ、ウシおよび家禽の排泄物培地および各未処理排泄物で成長させた活性なスターター細菌により接種された培養物を、表２の選択培地上にそれらを散布することにより比較して、一般的に単離された活性なスターター細菌が優勢であることが観察された。選択培地の特性のため、ＢＰＡ培地の場合には、黒色コロニーが主に増殖して、それはスターター細菌中のＢＡ−０９２およびＹＡ−１９１菌株がＢＰＡ培地で黒色コロニーを示すという結果と一致し、ＬＳ寒天培地におけるコロニー特性は、スターター細菌ＹＡＣ−０９９が培地を暗褐色色素で着色させたという結果と一致した。ＳＤ−５０３とＳＥ−５０５の間でＴＳＣ寒天培地上の黒さの程度にも差があった。
【００５２】
さらに、表２では、活性な細菌の成長が優れていた選択培地の各々で、対照群よりも多数の成長コロニーが検出されて、活性な細菌の特性が期待通りに観察された。放線菌の場合、典型的なＳＤ−５０３およびＳＥ−５０５の菌株が、ＴＳＣ、ＭＳＡ、およびＭＹＰ寒天培地で出現し、その場合、成長活性は、培養時間の経過とともに、選択培地間で優れていた。
【００５３】
一般的に使用される栄養寒天培地（ＮＡ）（ＢＤ、米国）およびトリプシンダイズ寒天培地（ＴＳＡ）（ＢＤ、米国）の成長程度を表３に示した。ＳＤ−５０３菌株は、ＮＡ培地で良好な成長を示し、他の５タイプの菌株は、ＴＳＡ培地で最良の成長を示した。
＜表３＞
培養培地中における本発明の菌株の成長特性
【００５４】
【表３】
2018519846.tif 000005
【００５５】
成長したコロニーの形状および色、代謝物による培地および細菌の色素沈着、ならびに成長の有無の総合的な検査により、６タイプの菌株は異なった菌株であることが示された。
【００５６】
例３
菌株の同定
＜３−１＞生化学的同定
例１で単離された６タイプの菌株を生化学的に同定するために、それらの特性を、ＡＰＩ  ５０ＣＨキット、ＡＰＩ  Ｃｏｒｙｎｅキット（ＢｉｏＭｅｒｉｅｕｘ、フランス）等を使用して、生化学的方法により比較した。結果を表４に示した。
＜表４＞
本発明の菌株の成長特性
【００５７】
【表４−１】
2018519846.tif 000006
【００５８】
【表４−２】
2018519846.tif 000007
【００５９】
【表４−３】
2018519846.tif 000008
【００６０】
＜３−２＞分子生物学的同定
例１で単離された６タイプの菌株を分子生物学的に同定するために、ＳＤ−５０３菌株を栄養寒天培地（ＢＤ、米国）上に散布して、他の５タイプの菌株をトリプシンダイズ寒天培地（ＢＤ、米国）上に散布した。菌株を３〜５日間３７℃で培養した。生じたコロニーを１ｍｌの蒸留水中に高濃度で懸濁させて、ゲノムＤＮＡを、Ａｃｃｕｐｒｅｐ（登録商標）ゲノムＤＮＡ抽出キット（Ｂｉｏｎｅｅｒ、韓国）を使用して抽出した。抽出されたゲノムＤＮＡを電気泳動によって同定した。菌株の１６Ｓ  ｒＤＮＡの塩基配列を分析するために、上で抽出されたゲノムＤＮＡをテンプレートとして、並びに２７Ｆプライマー（５’−ＡＧＡＧＴＴＴＧＡＴＣＭＴＧＧＣＴＣＡＧ−３’、配列番号１）および１４９２Ｒプライマー（５’−ＴＡＣＧＧＹＴＡＣＣＴＴＧＴＴＡＣＧＡＣＴＴ−３’、配列番号２）を使用して、ＰＣＲを実施した。ＰＣＲは、９４℃／１分、５５℃／１分および７２℃／１分の条件で、合計３５サイクル実施した。ＤＮＡ増幅後、約１５００ｂｐの１６Ｓ  ｒＤＮＡが電気泳動により同定された。増幅された１６Ｓ  ｒＤＮＡをＡｃｃｕｐｒｅｐ  ＰＣＲ精製キット（Ｂｉｏｎｅｅｒ、韓国）を使用して精製した。精製された１６Ｓ  ｒＤＮＡをｐＧＥＭ（登録商標）−Ｔ  Ｅａｓｙベクター（Ｐｒｏｍｅｇａ）に連結して、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）ＤＨ５αを、生じたベクターで形質転換させた。プラスミドＤＮＡを形質転換体から抽出して、次に塩基配列を、２７Ｆプライマー、１４９２Ｒプライマー、５３０Ｆプライマー（５’−ＧＴＧＣＣＡＧＣＭＧＣＣＧＣＧＧ−３’、配列番号３）および１１００Ｒプライマー（５’−ＧＧＧＴＴＧＣＧＣＴＣＧＴＴＧ−３’、配列番号４）を使用して自動ＤＮＡ配列アナライザー（ＡＢＩ３１００、Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍ  Ｉｎｃ．、米国）により分析した。その後、塩基配列を組み合わせて、それらの関係および１６ｓ  ｒＤＮＡ類似性をＥｚＴａｘｏｎサーバー（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｅｚｂｉｏｃｌｏｕｄ．ｎｅｔ／ｅｚｔａｘｏｎ，Ｋｉｍ  ｅｔ  ａｌ．，２０１２）を使用して調べた。
【００６１】
１６Ｓ  ｒＤＮＡの遺伝子配列分析の結果を表５に示した。
＜表５＞
１６Ｓ  ｒＤＮＡの塩基配列を使用する菌株の同定
【００６２】
【表５】
2018519846.tif 000009
【００６３】
ＢＡ−０９２およびＹＡ−１９１菌株の１６Ｓ  ｒＤＮＡの塩基配列は、それぞれ、配列番号５および配列番号６で示され、この２種の菌株の１６Ｓ  ｒＤＮＡの塩基配列は、標準菌株のコリネバクテリウム・エフィシエンス（Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｅｆｆｉｃｉｅｎｓ）ＹＳ−３１４菌株と比較して、それぞれ、９９．５９％および９９．５３％の相同性を有することが見出された。コリネバクテリウム・エフィシエンス（Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｅｆｆｉｃｉｅｎｓ）ＢＡ−０９２およびＹＡ−１９１菌株の１６Ｓ  ｒＤＮＡの塩基配列に基づいて、関係する標準菌株間の関係を描いた系統樹を、図４および５にそれぞれ示す。
【００６４】
ＣＡ−１０８菌株の１６Ｓ  ｒＤＮＡの塩基配列は配列番号７で示され、菌株の１６Ｓ  ｒＤＮＡの塩基配列は、標準菌株のエンテラクチノコッカス・コプロフィルス（Ｅｎｔｅｒａｃｔｉｎｏｃｏｃｃｕｓ  ｃｏｐｒｏｐｈｉｌｕｓ）ＹＩＭ１００５９０菌株と比較して、９７．５９％の相同性を有することが見出された。エンテラクチノコッカス・コプロフィルス（Ｅｎｔｅｒａｃｔｉｎｏｃｏｃｃｕｓ  ｃｏｐｒｏｐｈｉｌｕｓ）ＣＡ−１０８菌株の１６Ｓ  ｒＤＮＡの塩基配列に基づいて、関係する標準菌株間の関係を描いた系統樹を図６に示す。
【００６５】
ＹＡＣ−０９９菌株の１６Ｓ  ｒＤＮＡの塩基配列は配列番号８で示され、菌株の１６Ｓ  ｒＤＮＡの塩基配列は、標準菌株のオセアニタレア・ナンハエンシス（Ｏｃｅａｎｉｔａｌｅａ  ｎａｎｈａｉｅｎｓｉｓ）ＹＩＭ１００５９０菌株と比較して、９８．８２％の相同性を有することが見出された。オセアニタレア・ナンハエンシス（Ｏｃｅａｎｉｔａｌｅａ  ｎａｎｈａｉｅｎｓｉｓ）ＹＡＣ−０９９菌株の１６Ｓ  ｒＤＮＡの塩基配列に基づいて、関係する標準菌株間の関係を描いた系統樹を図７に示す。
【００６６】
ＳＤ−５０３菌株の１６Ｓ  ｒＤＮＡの塩基配列は配列番号９で示され、菌株の１６Ｓ  ｒＤＮＡの塩基配列は、標準菌株のノカルディオプシス・アルバ（Ｎｏｃａｒｄｉｏｐｓｉｓ  ａｌｂａ）ＤＳＭ４３３７７菌株と比較して、９７．８５％の相同性を有することが見出された。ノカルディオプシス・アルバ（Ｎｏｃａｒｄｉｏｐｓｉｓ  ａｌｂａ）ＳＤ−５０３菌株の１６Ｓ  ｒＤＮＡの塩基配列に基づいて、関係する標準菌株間の関係を描いた系統樹を図８に示す。
【００６７】
ＳＥ−５０５菌株の１６Ｓ  ｒＤＮＡの塩基配列は、配列番号１０で示され、菌株の１６Ｓ  ｒＤＮＡの塩基配列は、標準菌株のノカルディオプシス・シヌスペルシシ（Ｎｏｃａｒｄｉｏｐｓｉｓ  ｓｉｎｕｓｐｅｒｓｉｃｉ）ＨＭ６菌株と比較して、９７．９１％の相同性を有することが見出された。ノカルディオプシス・シヌスペルシシ（Ｎｏｃａｒｄｉｏｐｓｉｓ  ｓｉｎｕｓｐｅｒｓｉｃｉ）ＳＥ−５０５菌株の１６Ｓ  ｒＤＮＡの塩基配列に基づいて、関係する標準菌株間の関係を描いた系統樹を図９に示す。
【００６８】
上記の結果に基づいて、ＢＡ−０９２およびＹＡ１９１の菌株を、それぞれ、コリネバクテリウム・エフィシエンス（Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｅｆｆｉｃｉｅｎｓ）と同定し；ＣＡ−１０８菌株をエンテラクチノコッカス・コプロフィルス（Ｅｎｔｅｒａｃｔｉｎｏｃｏｃｃｕｓ  ｃｏｐｒｏｐｈｉｌｕｓ）と同定し；ＹＡＣ−０９９菌株をオセアニタレア・ナンハエンシス（Ｏｃｅａｎｉｔａｌｅａ  ｎａｎｈａｉｅｎｓｉｓ）と同定し；ＳＤ−５０３菌株をノカルディオプシス・アルバ（Ｎｏｃａｒｄｉｏｐｓｉｓ  ａｌｂａ）と同定し；およびＳＥ−５０５菌株をノカルディオプシス・シヌスペルシシ（Ｎｏｃａｒｄｉｏｐｓｉｓ  ｓｉｎｕｓｐｅｒｓｉｃｉ）と同定して、それらを表６におけるように命名して、韓国微生物の培養センター（ＫＣＣＭ）に、２０１５年１月８日に寄託した。
＜表６＞
寄託された菌株の名称
【００６９】
【表６】
2018519846.tif 000010
【００７０】
例４
次世代ゲノムシーケンシング（ＮＧＳ）による染色体の配列分析
ゲノムＤＮＡを例１で単離された６タイプの菌株から得て、染色体の配列を次世代ゲノムシーケンシング（ＮＧＳ）により分析した。ゲノムＤＮＡの配列を、Ｉｌｌｕｍｉｎａ  Ｍｉ−Ｓｅｑを使用して配列決定してリードを発生させ、Ｖｅｌｖｅｔ（バージョン１．２．１０）をＧｅｎｏｍｅ  ｄｅ  ｎｏｖｏアセンブリープログラムとして使用してアセンブルした。
【００７１】
各菌株のゲノム配列決定の作業を、ＢｉｏＰｒｏｊｅｃｔとして、国立バイオテクノロジー情報センター（ＮＣＢＩ）のウェブサイト（ｈｔｔｐｓ：／／ｓｕｂｍｉｔ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／ｓｕｂｓ／ｂｉｏｐｒｏｊｅｃｔ／）に登録して、以下の受託番号が与えられた。
−  ノカルディオプシス・シヌスペルシシ（Ｎｏｃａｒｄｉｏｐｓｉｓ  ｓｉｎｕｓｐｅｒｓｉｃｉ）ＳＥ−５０５（ＰＲＪＮＡ２７８７０３）；
−  ノカルディオプシス・アルバ（Ｎｏｃａｒｄｉｏｐｓｉｓ  ａｌｂａ）ＳＤ−５０３（ＰＲＪＮＡ２７８７０１）；
−  オセアニタレア・ナンハエンシス（Ｏｃｅａｎｉｔａｌｅａ  ｎａｎｈａｉｅｎｓｉｓ）ＹＡＣ−０９９（ＰＲＪＮＡ２７８６９８）
−  エンテラクチノコッカス・コプロフィルス（Ｅｎｔｅｒａｃｔｉｎｏｃｏｃｃｕｓ  ｃｏｐｒｏｐｈｉｌｕｓ）ＣＡ−１０８（ＰＲＪＮＡ２７８６９７）；
−  コリネバクテリウム・エフィシエンス（Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｅｆｆｉｃｉｅｎｓ）ＹＡ−１９１（ＰＲＪＮＡ２７８６９６）；
−  コリネバクテリウム・エフィシエンス（Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｅｆｆｉｃｉｅｎｓ）ＢＡ−０９２（ＰＲＪＮＡ２７８６９４）。
【００７２】
さらに、各菌株のゲノム配列を、全ゲノムショットガン（ＷＧＳ）としてＮＣＢＩ（ｈｔｔｐｓ：／／ｓｕｂｍｉｔ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／ｓｕｂｓ／ｗｇｓ／）に登録して、以下の受託番号を確保した。
−  ノカルディオプシス・シヌスペルシシ（Ｎｏｃａｒｄｉｏｐｓｉｓ  ｓｉｎｕｓｐｅｒｓｉｃｉ）ＳＥ−５０５（ＬＡＦＧ００００００００）；
−  ノカルディオプシス・アルバ（Ｎｏｃａｒｄｉｏｐｓｉｓ  ａｌｂａ）ＳＤ−５０３（ＬＡＦＦ００００００００）；
−  オセアニタレア・ナンハエンシス（Ｏｃｅａｎｉｔａｌｅａ  ｎａｎｈａｉｅｎｓｉｓ）ＹＡＣ−０９９（ＬＡＦＥ００００００００）；
−  エンテラクチノコッカス・コプロフィルス（Ｅｎｔｅｒａｃｔｉｎｏｃｏｃｃｕｓ  ｃｏｐｒｏｐｈｉｌｕｓ）ＣＡ−１０８（ＬＡＦＤ００００００００）；
−  コリネバクテリウム・エフィシエンス（Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｅｆｆｉｃｉｅｎｓ）ＹＡ−１９１（ＬＡＦＣ００００００００）；
−  コリネバクテリウム・エフィシエンス（Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｅｆｆｉｃｉｅｎｓ）ＢＡ−０９２（ＬＡＦＢ００００００００）。
【００７３】
例５
本発明の菌株と標準菌株の間の特性の比較
本発明の菌株と標準菌株の特性、例えば、炭素供給源利用能力、成長温度、酵素活性および脂肪酸組成等における差を調べた。
【００７４】
ＢＡ−０９２およびＹＡ−０９１菌株の炭素供給源利用能力および成長温度の結果を、下の表７に示した。
＜表７＞
ＢＡ−０９２およびＹＡ−０９１菌株の炭素供給源利用能力および成長温度
【００７５】
【表７】
2018519846.tif 000011
【００７６】
表７に示したように、ＢＡ−０９２菌株は、標準菌株ＹＳ−３１４と異なって、マンノースおよびマルトースを利用する能力を有さず、４５℃で成長しなかった。それに加えて、ＹＡ−０９１菌株も、標準菌株ＹＳ−３１４と異なって、４５℃で成長しなかった。それ故、本発明の菌株ＢＡ−０９２およびＹＡ−０９１は、当技術分野で公知のコリネバクテリウム・エフィシエンス（Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｅｆｆｉｃｉｅｎｓ）標準菌株と異なった特性を有することが確認された。
【００７７】
それに加えて、ＣＡ−１０８菌株とエンテラクチノコッカス・コプロフィルス（Ｅｎｔｅｒａｃｔｉｎｏｃｏｃｃｕｓ  ｃｏｐｒｏｐｈｉｌｕｓ）標準菌株ＹＩＭ１００５９０の間の炭素供給源利用能力における差（Ｃａｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｉｎｔ．Ｊ．Ｓｙｓｔ．Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ．６２：２７１０−２７１６、２０１２）を下の表８に示した。
＜表８＞
ＹＩＭ１００５９０とＣＡ−１０８菌株の炭素供給源利用能力における差
【００７８】
【表８】
2018519846.tif 000012
【００７９】
表８に示したように、ＣＡ−１０８菌株は、標準菌株ＹＩＭ１００５９０と異なって、７タイプの炭素、例えば、Ｄ−アラビトール、Ｎ−アセチルグルコサミン、Ｄ−マンニトール、Ｄ−マンノース、スクロース、Ｄ−サリシン、Ｄ−ソルビトールを利用する能力を有しなかった。それ故、本発明のＣＡ−１０８菌株は、当技術分野で公知のエンテラクチノコッカス・コプロフィルス（Ｅｎｔｅｒａｃｔｉｎｏｃｏｃｃｕｓ  ｃｏｐｒｏｐｈｉｌｕｓ）標準菌株と異なった特性を有することが確認された。
【００８０】
それに加えて、ＹＡＣ−０９９菌株とオセアニタレア・ナンハエンシス（Ｏｃｅａｎｉｔａｌｅａ  ｎａｎｈａｉｅｎｓｉｓ）標準菌株ＪＬＴ１４８８の間の炭素供給源利用能力および酵素活性における差（Ｆｕ  ｅｔ  ａｌ．，Ｉｎｔ．Ｊ．Ｓｙｓｔ．Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ．６２：２４９０−２４９４、２０１２）を下の表９に示した。
＜表９＞ＪＬＴ１４８８とＹＡＣ−０９９菌株の間の炭素供給源利用能力および酵素活性における差
【００８１】
【表９】
2018519846.tif 000013
【００８２】
表９に示したように、ＹＡＣ−０９９菌株は、標準菌株ＪＬＴ１４８８と異なって、炭素供給源、例えば、Ｄ−アミグダリンおよびＮ−アセチルグルコサミンを利用する能力を有さず、アルカリ性ホスファターゼおよびベータグルコシダーゼの酵素活性を示さなかった。それ故、本発明のＹＡＣ−０９９菌株は、当技術分野で公知のオセアニタレア・ナンハエンシス（Ｏｃｅａｎｉｔａｌｅａ  ｎａｎｈａｉｅｎｓｉｓ）標準菌株と異なった特性を有することが確認された。
【００８３】
それに加えて、ＳＤ−５０３菌株と標準菌株ＤＳＭ４３３７７の間の炭素供給源利用能力における差（Ｇｒｕｎｄ  ａｎｄ  Ｋｒｏｐｐｅｎｓｔｅｄｔ，Ｉｎｔ．Ｊ．Ｓｙｓｔ．Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ．４０：５−１１，１９９０）および細胞内脂肪酸組成の分析結果を下の表１０および表１１に示した。
＜表１０＞
ＤＳＭ４３３７７とＳＤ−５０３菌株の間の炭素供給源利用能力における差
【００８４】
【表１０】
2018519846.tif 000014
【００８５】
＜表１１＞
ＤＳＭ４３３７７とＳＤ−５０３の菌株の間の細胞内脂肪酸組成の分析結果
【００８６】
【表１１】
2018519846.tif 000015
【００８７】
表１０および表１１に示したように、ＳＤ−５０３菌株は、標準菌株ＤＳＭ４３３７７と異なって、炭素供給源、例えば、グルコース、フルクトース、セロビオース、スクロースおよびエスクリンを利用する能力を有しなかった。その上、ＳＤ−５０３菌株は、標準菌株ＤＳＭ４３３７７のものと比較して異なった細胞内脂肪酸組成を示した。それ故、本発明のＳＤ−５０３菌株は、当技術分野で公知の標準菌株ノカルディオプシス・アルバ（Ｎｏｃａｒｄｉｏｐｓｉｓ  ａｌｂａ）と異なった特性を有することが確認された。
【００８８】
それに加えて、ＳＥ−５０５菌株と標準菌株ＨＭ６の間の炭素供給源利用能力における差（Ｈａｍｅｄｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｉｎｔ．Ｊ．Ｓｙｓｔ．Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ．６０、２３４６−２３５２，２０１０）および細胞内脂肪酸組成の分析結果を、下の表１２および表１３に示した。
＜表１２＞
ＨＭ６とＳＥ−５０５菌株の間の炭素供給源利用能力における差
【００８９】
【表１２】
2018519846.tif 000016
【００９０】
＜表１３＞
ＨＭ６およびＳＥ−５０５菌株の細胞内脂肪酸組成の分析結果
【００９１】
【表１３】
2018519846.tif 000017
【００９２】
表１２および表１３に示したように、ＳＥ−５０５菌株は、標準菌株ＨＭ６と異なって、炭素供給源、例えば、Ｄ−ガラクトース、メリビオース、サッカロース、ラクトース、マンニトール、マンノース、ラムノース、Ｄ−キシロースおよびデンプンを利用する能力を有さず、１５％ＮａＣｌで成長せず、硝酸塩を還元しなかった。その上、ＳＥ−５０５菌株は、標準菌株ＨＭ６のものと比較して異なった細胞内脂肪酸組成を示した。それ故、本発明のＳＥ−５０５菌株は、当技術分野で公知の標準菌株ノカルディオプシス・シヌスペルシシ（Ｎｏｃａｒｄｉｏｐｓｉｓ  ｓｉｎｕｓｐｅｒｓｉｃｉ）と異なった特性を有することが確認された。
【００９３】
例６
本発明の菌株およびそれらの組合せの臭気除去効果
＜６−１＞ブタ排泄物に対する臭気除去効果
ブタ排泄物を、本発明で単離されて選択された６タイプの菌株の単独または組合せで処理して、次に臭気の変化を測定した。
【００９４】
６種の菌株の中で、ＢＡ−０９２、ＹＡ−１９１、ＣＡ−１０８、ＹＡＣ−０９９およびＳＥ−５０５の菌株を、２００ｍｌのＴＳＢ液体培地中において３３℃で５日間、震盪培養した。ＳＤ−５０３菌株は、２００ｍｌの栄養液体培地中において３３℃で５日間震盪培養した。対照菌株として、ＢＡ−０９２およびＹＡ−１９１と密接に関係するコリネバクテリウム・グルタミクム（Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｇｌｕｔａｍｉｃｕｍ）ＫＣＴＣ１４４５の菌株、ＣＡ−１０８およびＹＡＣ−０９９と密接に関係するジョージニア・サティヤナラヤナイ（Ｇｅｏｒｇｅｎｉａ  ｓａｔｙａｎａｒａｙａｎａｉ）ＫＣＴＣ１９８０２菌株、ならびにＳＤ−５０３およびＳＥ−５０５と密接に関係するノカルディオプシス・アルバ（Ｎｏｃａｒｄｉｏｐｓｉｓ  ａｌｂａ）亜種アルバ（ａｌｂａ）ＫＣＴＣ９６１６菌株を使用した。対照菌株は、２００ｍｌのＴＳＢ培地中において３３℃で５日間培養した。次に、該培養液を、個別にまたは組み合わせて（当量比）下の表１６に示したように、排泄物と８０：２０の体積比で混合して、次に３３℃で１日震盪培養した。培養後、培養液を滅菌ペトリ皿（１５０×２５ｍｍ）に移して、５Ｌの密封容器中に２０分間置いた。上部のガスを集めた後、複合臭気、アンモニア、硫化水素等を、下の表１４に挙げた携帯装置および使い捨て検出管を用いて測定して、臭気の程度を、表１５に示した判定基準に従って、直接的な官能的方法により測定した。結果を下の表１６に示した。
＜表１４＞
臭気測定方法および測定された臭気
【００９５】
【表１４】
2018519846.tif 000018
【００９６】
＜表１５＞
直接的な官能的方法の判定基準
【００９７】
【表１５】
2018519846.tif 000019
【００９８】
＜表１６＞
本発明による菌株の単独または組合せにより処理されたブタ排泄物からの臭気
【００９９】
【表１６】
2018519846.tif 000020
【０１００】
表１６に示したように、本発明による菌株は、単独または組合せで、未処理対照および対照菌株と比較したときに、はるかに優る臭気除去効果を示した。
＜６−２＞ブタ排泄物堆肥に対する臭気除去効果
本発明による菌株のブタ排泄物堆肥に対する臭気除去効果を調べるために、例＜６−１＞における排泄物の代わりに粉砕された米ぬかを使用して、試験を実施した。
【０１０１】
培養された菌株単独または組合せの培養液を、滅菌され粉砕された米ぬかと、１：１の重量比で混合して、次に例＜６−１＞と同じ様式で、３３℃で３日間培養した。次に、臭気の程度を例＜６−１＞と同じ様式で測定した。結果を下の表１７に示した。
＜表１７＞
本発明による菌株の単独または組合せによる処理後のブタ排泄物堆肥の臭気の程度
【０１０２】
【表１７】
2018519846.tif 000021
【０１０３】
表１７に示したように、本発明による菌株は、単独または組合せで、未処理対照および対照菌株と比較して優る臭気除去効果を示した。
【０１０４】
例７
本発明の菌株の豚舎およびブタに対する臭気除去効果
本発明の６種の菌株の各々を、排泄物固形培地（ブタ排泄物；３〜４％Ｂｒｉｘ、０．５％酵母抽出物で構成される）に散布して培養した。その後、培地中で成長した細菌のみを集めて、少なくとも１０倍の純水に懸濁させた。懸濁液を豚舎の内側および外側ならびにブタの身体に均一に噴霧して、臭気の変化を、例６におけると同様に直接的な官能的方法により測定した。結果として、豚舎の内側および外側の臭気は完全に消失し、ブタ身体からの臭気も完全に消失した。
【０１０５】
例８
本発明の菌株を使用する家畜排泄物堆肥の調製および臭気の測定
図１０に示したプロセスに従って、本発明の菌株を使用して家畜排泄物から堆肥を調製した。具体的には、本発明の菌株を使用して、ブタ排泄物を液体発酵（液体発酵システム）、続いて固体発酵（堆肥化システム）に供して、堆肥を調製した。システムに関しては、韓国特許第１４０２６１０号を参照した。
【０１０６】
堆肥にする前と後の臭気成分の変化を分析した。結果を表１８に示した。
＜表１８＞
排泄物処理の前および後における臭気成分変化の測定
【０１０７】
【表１８】
2018519846.tif 000022
【０１０８】
表１８に示したように、少しも臭気がない堆肥を、本発明の菌株を用いて排泄物を処理することにより調製することができることが確認された。
【０１０９】
調製例１：ブタ排泄物からの臭気を除去するためのスターター細菌溶液の調製
本発明の６種の菌株の各々を、滅菌されたＴＳＢ培地または栄養液体培地中で１〜５日間培養した。次に、各培養液を、３〜４％Ｂｒｉｘブタ排泄物および０．５％酵母抽出物を含有するブタ排泄物寒天培地上に散布した。寒天培地を３３℃で１〜５日間インキュベートした。成長した細菌をスクレーパーでこすり落として、滅菌された１０％（ｖ／ｖ）グリセリン、０．８％（ｗ／ｖ）生理食塩水、０．５％（ｗ／ｖ）酵母抽出物等を含有する保存溶液中に懸濁させた。懸濁液を単独でまたは組合せで使用して、臭気を除去するためのスターター細菌溶液を調製した。
【０１１０】
調製例２：ウシ排泄物からの臭気を除去するためのスターター細菌溶液の調製
本発明の６種の菌株の各々を、滅菌されたＴＳＢ培地または栄養液体培地中で１〜５日間培養した。次に、各培養液を、３〜４％Ｂｒｉｘウシ排泄物および０．５％酵母抽出物を含有するウシ排泄物寒天培地上に散布した。寒天培地を３３℃で１〜５日間インキュベートした。成長した細菌をスクレーパーでこすり落として、滅菌された１０％（ｖ／ｖ）グリセリン、０．８％（ｗ／ｖ）生理食塩水、０．５％（ｗ／ｖ）酵母抽出物等を含有する保存溶液中に懸濁させた。懸濁液を単独でまたは組合せで使用して、臭気を除去するためのスターター細菌溶液を調製した。
【０１１１】
調製例３：家禽排泄物からの臭気を除去するためのスターター細菌溶液の調製
本発明の６種の菌株の各々を、滅菌されたＴＳＢ培地または栄養液体培地中で１〜５日間培養した。次に、各培養液を３〜４％Ｂｒｉｘ家禽排泄物および０．５％酵母抽出物を含有する家禽排泄物寒天培地上に散布した。寒天培地を３３℃で１〜５日間インキュベートした。成長した細菌を、スクレーパーでこすり落として、滅菌された１０％（ｖ／ｖ）グリセリン、０．８％（ｗ／ｖ）生理食塩水、０．５％（ｗ／ｖ）酵母抽出物等を含有する保存溶液中に懸濁させた。懸濁液を単独でまたは組合せで使用して、臭気を除去するためのスターター細菌溶液を調製した。
【０１１２】
調製例４：豚舎に噴霧するための液体組成物の調製
本発明の６種の菌株の各々を、滅菌されたＴＳＢ培地または栄養液体培地中で１〜５日間培養した。次に、各培養液を４０００×ｇで１０分間遠心分離して、次に蒸留水で洗浄して細菌のみを得た。得られた細菌を、次に滅菌された１０％（ｖ／ｖ）グリセリン、０．８％（ｗ／ｖ）生理食塩水、０．５％（ｗ／ｖ）酵母抽出物等を含有する保存溶液中に懸濁させた。懸濁液を単独でまたは組合せで使用して、豚舎に噴霧するための液体組成物を調製した。豚舎に噴霧するために調製された液体組成物を豚舎またはブタの身体に噴霧するときに１０倍に希釈した。
【０１１３】
調製例５：臭気を除去するための固体組成物の調製
本発明の６種の菌株の各々を、滅菌されたＴＳＢ培地または栄養液体培地中で１〜５日間培養した。次に、各培養液の５００Ｌを４０００×ｇで１０分間遠心分離して、蒸留水で２回洗浄して各菌株の細菌を得た。次に、得られた各菌株の細菌を１００Ｌの純水中に懸濁させ、１０ｋｇのデキストリンと混合して噴霧乾燥した。乾燥された材料を単独でまたは組合せで使用して、臭気を除去するための固体組成物を調製した。
【０１１４】
【表１９】
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【０１１５】
【表２０】
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【０１１６】
【表２１】
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【０１１７】
【表２２】
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【０１１８】
【表２３】
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【０１１９】
【表２４】
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【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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