(57)【要約】  本発明は、式I：2018521067.tif 000061の化合物又はその塩、及び医薬、化粧品又は農業食品産業におけるそれらの使用に関する。
2018521067.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式I:
【化１】
2018521067.tif 000053
[式中、
nは、1〜6の整数であり;
Xは、CO又はCH2であり;
Yは、NR1R2又はR2又は
【化２】
2018521067.tif 000054
であり;
R1は、H又はアルキル又はアルキル-アリールであり;
R2は、Z-L-R3であり;
Zは、存在しないか、CO又はCH2であり;
Lは、存在しないか、CH=CH又は(CH2)mであり;
mは、1〜6の整数であり;
R3は、少なくとも1つのOH基並びにOH、C1〜C4アルコキシ及びC1〜C4アルキルから選択される1つ若しくは複数の置換基によって置換されたフェニルであるか、又はR3は、少なくとも1つのOH基並びに場合によりOH、C1〜C4アルコキシ及びC1〜C4アルキルから選択される1つ若しくは複数の置換基によって置換されたN-ピリジノニルである]
の化合物及びその塩。
【請求項２】
式II
【化３】
2018521067.tif 000055
を有する、請求項1に記載の化合物又は塩。
【請求項３】
式III
【化４】
2018521067.tif 000056
を有する、請求項1に記載の化合物又は塩。
【請求項４】
式IV
【化５】
2018521067.tif 000057
を有する、請求項1に記載の化合物又は塩。
【請求項５】
式V
【化６】
2018521067.tif 000058
を有する、請求項1に記載の化合物又は塩。
【請求項６】
Z-L-R3が、
【化７】
2018521067.tif 000059
[式中、R5、R6、R9、R10、R11、R16、R17及びR21は、互いに独立して、OH、C1〜C4アルコキシ及びC1〜C4アルキルから選択される]
から選択される、請求項4又は5に記載の化合物又は塩。
【請求項７】
式VI
【化８】
2018521067.tif 000060
を有する、請求項1に記載の化合物又は塩。
【請求項８】
(E)-4,5-ジアミノ-1-(4-(3-(4-ヒドロキシ-3-メトキシフェニル)アクリロイル)ピペラジン-1-イル)ペンタン-1-オン、
(E)-N-(5,6-ジアミノヘキシル)-3-(4-ヒドロキシ-3-メトキシフェニル)アクリルアミド、
4,5-ジアミノ-1-(4-(3,4,5-トリヒドロキシベンゾイル)ピペラジン-1-イル)ペンタン-1-オン、
N-(5,6-ジアミノヘキシル)-3,4,5-トリヒドロキシベンズアミド、
N-(4,5-ジアミノペンチル)-3-(3-ヒドロキシ-2-オキソピリジン-1(2H)-イル)プロパンアミド、
N-(5,6-ジアミノヘキシル)-3-(3-ヒドロキシ-2-オキソピリジン-1(2H)-イル)プロパンアミド、
4,5-ジアミノ-N-(3-(3-ヒドロキシ-2-オキソピリジン-1(2H)-イル)プロピル)ペンタンアミド、
1-(3-(4-(3,4-ジアミノブタノイル)ピペラジン-1-イル)-3-オキソプロピル)-3-ヒドロキシピリジン-2(1H)-オン
1-(2-(4-(4,5-ジアミノペンタノイル)ピペラジン-1-イル)-2-オキソエチル)-3-ヒドロキシピリジン-2(1H)-オン
1-(3-(4-(4,5-ジアミノペンタノイル)ピペラジン-1-イル)-3-オキソプロピル)-3-ヒドロキシピリジン-2(1H)-オン
N-(4,5-ジアミノペンチル)-2-(3-ヒドロキシ-2-メチル-4-オキソピリジン-1(4H)-イル)アセトアミド
N-(5,6-ジアミノヘキシル)-2-(3-ヒドロキシ-2-メチル-4-オキソピリジン-1(4H)-イル)アセトアミド
N-(5,6-ジアミノヘキシル)-3-(3-ヒドロキシ-2-メチル-4-オキソピリジン-1(4H)-イル)プロパンアミド
4,5-ジアミノ-N-(3-(3-ヒドロキシ-2-メチル-4-オキソピリジン-1(4H)-イル)プロピル)ペンタンアミド
1-(2-(4-(4,5-ジアミノペンタノイル)ピペラジン-1-イル)-2-オキソエチル)-3-ヒドロキシ-2-メチルピリジン-4(1H)-オン
1-(3-(4-(4,5-ジアミノペンチル)ピペラジン-1-イル)プロピル)-3-ヒドロキシピリジン-2(1H)-オン
1-(3-((4,5-ジアミノペンチル)(メチル)アミノ)プロピル)-3-ヒドロキシピリジン-2(1H)-オン
1-(5,6-ジアミノヘキシル)-3-ヒドロキシ-2-メチルピリジン-4(1H)-オン
から選択される、請求項1に記載の化合物又は溶媒和物。
【請求項９】
請求項1〜9のいずれか一項に記載の少なくとも1つの化合物又はその薬学的に許容される溶媒和物の1つ及び少なくとも1つの薬学的に許容される賦形剤を含む医薬組成物。
【請求項１０】
医薬としての使用のための、請求項1〜9のいずれか一項に記載の化合物又はその薬学的に許容される塩の1つ。
【請求項１１】
終末糖化産物及び/又は終末脂質過酸化産物の蓄積に関連する疾患又は障害の処置及び/又は予防における、請求項10に記載の使用のための薬学的に許容される化合物又は塩。
【請求項１２】
神経変性疾患、加齢関連の病的状態、糖尿病関連の障害及びがんの処置及び/又は予防における、請求項11に記載の使用のための薬学的に許容される化合物又は塩。
【請求項１３】
神経変性疾患、特にアルツハイマー病及びパーキンソン病から選択される神経変性疾患の処置及び/又は予防における、請求項12に記載の使用のための薬学的に許容される化合物又は塩。
【請求項１４】
アルツハイマー病又はパーキンソン病の処置及び/又は予防における、請求項13に記載の使用のための薬学的に許容される化合物又は塩。
【請求項１５】
加齢関連の疾患及び病的状態の処置及び/又は予防における、請求項12に記載の使用のための薬学的に許容される化合物又は塩。
【請求項１６】
糖尿病に関連がある障害の処置及び/又は予防における、請求項12に記載の使用のための薬学的に許容される化合物又は塩。
【請求項１７】
アテローム性動脈硬化症、網膜症、腎症、ニューロパシー、細小血管症及び大血管症、白内障、アミロイド症、リウマチ障害並びに静脈瘤性潰瘍及び動脈性潰瘍の処置及び/又は予防における、請求項16に記載の使用のための薬学的に許容される化合物又は塩。
【請求項１８】
活性化粧用成分又は農業食品用成分としての、請求項1〜9のいずれか一項に記載の化合物の使用。
【請求項１９】
請求項1〜9のいずれか一項に記載の化合物を含む、化粧用組成物。
【請求項２０】
請求項1〜9のいずれか一項に記載の化合物を含む、農業食品用組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、アルファ-オキソアルデヒド(α-オキソアルデヒド)及びベータ-不飽和のアルファ-アルデヒド(α,β-不飽和アルデヒド)及び金属キレート剤の新規なジアミン誘導体捕捉剤、並びにその使用、特に、AGE(終末糖化産物(Advanced Glycation Endproducts))及び/又はALE(終末脂質過酸化産物(Advanced Lipid Peroxidation Endproducts))の蓄積に関連する疾患又は障害の処置及び/又は予防における使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
解糖及び脂質の過酸化の間、カルボニル化合物が形成され、タンパク質(リジン、アルギニン、システイン等)の求核基と反応して、AGE(「終末糖化産物」)(Pathologie, Biologie、2006年、54巻、405〜419頁)及びALE(「終末脂質過酸化産物」)(Br. J. Pharm.、2008年、153巻、6〜20頁)を与える。したがって、AGEは、タンパク質の遊離のアミン基の、例えば、糖質の酸化的代謝に由来する、グリオキサール(GO)、メチルグリオキサール(MGO)及びデオキシグルコソン(3-DG)等の異なるα-オキソアルデヒド誘導体とのシッフ塩基の形成、続くアマドリ転位後のタンパク質の有害な改変物であると思われる(Diabetes Res. Clin. Pract.、2013年、99巻、261〜271頁)。同様に、ALEは、特に、遷移金属(Cu2+、Fe3+)によって誘導される酸化ストレスの効果の下で、ポリ不飽和脂肪酸の分解に由来するα,β-不飽和アルデヒド、例えば、マロンジアルデヒド(MDA)、アクロレイン、4-ヒドロキシノネナール(4-HNE)又は4-ヒドロキシ-2-ヘキサナール(4-HHE)における、タンパク質のこれらのアミン基の1.2又は1.4マイケル付加後に形成される(Prog. Lipid Res.、2003年、42巻、318〜343頁)。加えて、これらの毒性があるカルボニル誘導体はまた、DNAの塩基との非酵素的プロセスにしたがって反応し、分岐又は非分岐AGE/ALEを与えうる。反応性のカルボニル化合物をD-ラクテート、グリコレート又はアセトールに変換する、(GSH)-依存性グルタチオングリオキサラーゼ系(グリオキサラーゼI及びII)等の酵素的な解毒機構が存在するが、その機能不全は、AGEの蓄積を引き起こしうる。
【０００３】
AGEの蓄積は、2つの主要な生物学的影響を有する。第一に、これらは、特に、例えば、コラーゲン、水晶体タンパク質、フィブロネクチン、アルブミン及びヘモグロビン等の長寿命のタンパク質において観察されるタンパク質の架橋の原因でありうる。このように、この現象は、様々な機能不全(皮膚組織又は血管内皮の弾力性の喪失、皮膚の色素沈着等)及び加齢関連の病的状態(白内障、リウマチ等)の出現において、重要な役割を果たす。したがって、酸化ストレスは、炎症反応及び血栓形成反応の発生に好都合であるが、AGE及びその特異的受容体(RAGE)との間の相互作用を介したアポトーシスにも好都合である。このように、これらの機構は、アテローム性動脈硬化症の出現、及び心血管障害、腎症、網膜症、ニューロパシー等のような糖尿病に関連する、特に、微小血管障害性の様々な合併症の出現に関与する(Biofactors、2012年、38巻、266〜274頁;Int. J. Mol, Med.、2010年、26巻、813〜818頁;Mol. Metabolism、2014年、3巻、94〜108頁)。しかしながら、糖尿病において見られる、反応性酸素種(ROS)の過剰産生により誘導される酸化的不均衡に関連するAGEの蓄積及び抗酸化細胞防御システムの衰えも、脂質過酸化の悪化の原因である(Chem. Biol. Interact.、2008年、171巻、251〜271頁)。したがって、この酸化的カスケードは、並行して、生来のLDL(低密度リポタンパク質)のアポリポタンパク質B及び酸化されたLDLの発生に関与するMDAとの間の複合体等のALEの形成を起こす。その後、後者は、いったん脂質小滴で充填されたマクロファージによって吸収され、アテローム性プラークの構成物質である泡沫細胞に変換される(Int. J. Mol, Med.、2010年、26巻、813〜818頁)。
【０００４】
同様に、酸化ストレス及び脂質過酸化の悪化に続いて、相当な量の神経タンパク質と結合したALEが、例えば、アルツハイマー病及びパーキンソン病等の神経変性疾患を患う患者において見出される。このように、アルツハイマー病の場合において、β-アミロイドカスケードの生理病理学モデルは、疾患の重要なマーカーの1つを構成するβ-アミロイドプラークの蓄積が、有害な酸化カスケードの原因であることを証明する一助である(Trends Mol. Med.、2001年、7巻、548〜554頁;Free Radic. Biol. Med.、2002年、32巻、1050〜1060頁)。実際に、様々な遺伝的及び環境的要因の影響の下、アミロイド前駆体タンパク質(APP)のβ-セクレターゼによる切断は、α-セクレターゼが関与する分解経路の損傷より優先される。その後、凝集後に、金属イオンによって誘導される非毒性のAβモノマーが形成され、酸化ストレスの悪化の原因であるβ-アミロイドプラークを構成する毒性のあるオリゴマーに変換される(Chem. Eur. J.、2012年、18巻、15910〜15920頁;Neurochem. Int.、2013年、62巻、367〜378頁)。最終的には、次の脂質過酸化に由来するα,β-不飽和アルデヒドの神経毒性は、認知症の発生に大いに関与する(Curr. Alzheimer Res.、2011年、8巻、452〜469頁)。後者の中で、タンパク質又は4-HNEのシステイン、ヒスチジン及びリジン残基に関して、最も反応性の化合物であると思われる、アクロレインを挙げることができる。このように、アクロレインは、アルツハイマー病の別の重要なマーカーである、細胞骨格の変化及び神経原線維変化の発生の原因であるALEの形成をもたらす。次いで、4-HNEは、特に、イオンチャネルにおけるALEの形成後、ニューロン膜の不安定化、及び最終的に、アポトーシスの原因であるカルシウムの不均衡を誘導する。加えて、タンパク質のリジン残基におけるMDAの濃縮に由来するALEは、ジヒドロピリジン誘導体の形態で同定することが可能であり、皮膚の老化、及び場合によっては皮膚のがんの発症に寄与するUVに対する皮膚の抵抗性の減少に関与する(Mech. Ageing Dev.、2001年、122巻、735〜755頁)。最後に、MDAは、DNAの塩基、特に、デオキシグアノシンのアミン官能基に対する反応の後に、突然変異誘発剤として挙動することもでき、このようにして、ある種のがんの発症に好都合である(Toxicology、2002年、181〜182頁、219〜222頁)。しかしながら、興味深いことに、このタイプのDNAの修飾は、MGOとの付加体の形態でも文献に記載されている(Chem. Res. Toxicol.、2005年、18巻、1586〜1592頁)。
【０００５】
いくつかの抗AGE/ALE剤が、これまでに文献に記載されている。このように、アミノグアニジン(Pimagedine(登録商標))は、糖尿病の動物モデルにおいて、インビトロ及びインビボで、優れたMGO捕捉剤であることが示されている(Arch. Biochem. Biophys.、2003年、419巻、3〜40頁;Diabetes、2012年、61巻、549〜559頁)。しかしながら、ヒトにおけるフェーズIIIの臨床試験は、弱い血管保護性の抗酸化特性並びに肝臓及び胃腸の副作用を示す確実な結果は得られなかった(Am. J. Nephrol.、2004年、4巻、32〜40頁)。このようにして、この分子に対する治験は、中止された。
【０００６】
しかしながら、いくつかの他の化合物は、インビトロ及びインビボで、AGE及びALEの形成を遅らせるそれらの有効性を示している。Nagaiら(Bioorg. Med. Chem.、2009年、17巻、2310〜2320頁)は、例えば、ピリドキサミン(Pyridorin(登録商標))、2,3-ジアミノフェナジン、チアミン、ベンフォチアミン、TM-2002、テニルセタム並びにLR-9、LR-20、LR-59、LR-74及びLR-90の抗AGE特性だけでなく、PTB(「フェナシルチアゾリウムブロミド」)及びALT-711が、AGE及びALEを破壊することが可能であることを示しているという事実も報告している。抗AGE効果は、カルノシン(Neurosci. Lett.、1997年、238巻、135〜13頁)及びOPB-9195(J. Am. Soc. Nephrol.、2000年、11巻、1719〜1725頁)についても記載されている。OPB-9195に対する最初の臨床試験は、確実な結果をもたらさず、深刻な副作用の発生により中止されなければならなかったことに留意されたい(Pathologie, Biologie、2006年、54巻、405〜419頁)。他の分子に対する試験のほとんどは、臨床試験も中止されたALT-711を除き、いまだに実験段階である。
【０００７】
特許出願である、WO 2006/103274 A1及びWO 2013/050721 A1は、Sasakiらによって以前に合成された2,3-ジアミノプロピオン酸の誘導体及びその抗AGE/ALE特性を記載している。
【０００８】
この様々な業績は、抗AGE剤の開発に主に注目してきたことに留意することが重要である。実際に、可能性のある抗ALE剤の開発に関する研究は、これまでに殆ど実施されていない。これまでに、抗AGE/ALE剤及び金属キレート剤の両方である、多能性の化合物の設計は、いまだに記載されていない。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００９】
【特許文献１】WO 2006/103274 A1
【特許文献２】WO 2013/050721 A1
【特許文献３】WO 2013/030193 A1
【特許文献４】WO 07/011623 A1
【特許文献５】WO 00/64865 A1
【特許文献６】WO 1998/04537 A1
【非特許文献】
【００１０】
【非特許文献１】Pathologie, Biologie、2006年、54巻、405〜419頁
【非特許文献２】Br. J. Pharm.、2008年、153巻、6〜20頁
【非特許文献３】Diabetes Res. Clin. Pract.、2013年、99巻、261〜271頁
【非特許文献４】Prog. Lipid Res.、2003年、42巻、318〜343頁
【非特許文献５】Biofactors、2012年、38巻、266〜274頁
【非特許文献６】Int. J. Mol, Med.、2010年、26巻、813〜818頁
【非特許文献７】Mol. Metabolism、2014年、3巻、94〜108頁
【非特許文献８】Chem. Biol. Interact.、2008年、171巻、251〜271頁
【非特許文献９】Trends Mol. Med.、2001年、7巻、548〜554頁
【非特許文献１０】Free Radic. Biol. Med.、2002年、32巻、1050〜1060頁
【非特許文献１１】Chem. Eur. J.、2012年、18巻、15910〜15920頁
【非特許文献１２】Neurochem. Int.、2013年、62巻、367〜378頁
【非特許文献１３】Curr. Alzheimer Res.、2011年、8巻、452〜469頁
【非特許文献１４】Mech. Ageing Dev.、2001年、122巻、735〜755頁
【非特許文献１５】Toxicology、2002年、181〜182頁
【非特許文献１６】Toxicology、2002年、219〜222頁
【非特許文献１７】Chem. Res. Toxicol.、2005年、18巻、1586〜1592頁
【非特許文献１８】Arch. Biochem. Biophys.、2003年、419巻、3〜40頁
【非特許文献１９】Diabetes、2012年、61巻、549〜559頁
【非特許文献２０】Am. J. Nephrol.、2004年、4巻、32〜40頁
【非特許文献２１】Bioorg. Med. Chem.、2009年、17巻、2310〜2320頁
【非特許文献２２】Neurosci. Lett.、1997年、238巻、135〜13頁
【非特許文献２３】J. Am. Soc. Nephrol.、2000年、11巻、1719〜1725頁
【非特許文献２４】Dermatoendocrinol.、2012年、4巻、259〜270頁
【非特許文献２５】Bioconjug. Chem.、2007年、18巻、1625〜1636頁
【非特許文献２６】J. Med. Chem.、2009年、52巻、4650〜4656頁
【非特許文献２７】Tetrahedron Lett.、2010年、51巻、4147〜4149頁
【非特許文献２８】J. Chem. Soc., Perkin Trans. 1、1999年、2057〜2060頁
【非特許文献２９】Synth. Commun.、2009年、39巻、395〜406頁
【非特許文献３０】Tetrahedron、2003年、59巻、5417〜5423頁
【非特許文献３１】J. Med. Chem.、2010年、53巻、6228〜6239頁
【非特許文献３２】Carbohydr. Res.、2007年、342巻、1510〜1513頁
【非特許文献３３】Synthesis、2011年、57〜64頁
【非特許文献３４】Tetrahedron Lett.、2002年、43巻、7379〜7383頁
【非特許文献３５】J. Med. Chem.、1990年、33巻、1749〜1755頁
【非特許文献３６】Molecules、2015年、20巻、19393〜19405頁
【非特許文献３７】Org. Lett.、2014年、16巻、3196〜3199頁
【非特許文献３８】J. Med. Chem.、1998年、41巻、3347〜3359頁
【非特許文献３９】J. Inorg. Biochem.、2000年、78巻、303〜311頁
【非特許文献４０】J. Heterocyclic Chem.、1994年、31巻、947〜56頁
【非特許文献４１】Bioconjugate Chem.、2005年、16巻、1597〜1609頁
【非特許文献４２】Dalton Trans.、2004年、3772〜3781頁
【非特許文献４３】J. Med. Chem.、2005年、48巻、3891〜3902頁
【非特許文献４４】Int. J. Mol. Sci.、2009年、10巻、5485〜5497頁
【非特許文献４５】Molecules、2012年、17巻、13457〜13472頁
【非特許文献４６】J. Agric. Food Chem.、2004年、52巻、48〜54頁
【非特許文献４７】J. Agric. Food Chem.、2005年、53巻、4290〜4302頁
【非特許文献４８】Bioorg. Med. Chem.、2015年、23巻、1135〜1148頁
【非特許文献４９】Free Radic. Biol. Med.、1992年、13巻、341〜390頁
【非特許文献５０】J. Nutr. Biochem.、2012年、23巻、845〜51頁
【非特許文献５１】J. Agric. Food Chem.、2000年、48巻、3597〜3604頁
【非特許文献５２】J. Agric. Food Chem.、2010年、58巻、9273〜9280頁
【非特許文献５３】Eur. J. Med. Chem.、2014年、83巻、355〜365頁
【非特許文献５４】Chem. Biol. Interact.、2014年、224巻、108〜116頁
【非特許文献５５】Neurochem. Int.、2013年、62巻、620〜625頁
【非特許文献５６】Molecules、2014年、19巻(8号)、12048〜12064頁
【非特許文献５７】J. Pharmacol. Toxicol. Methods.、2007年、56巻(1号)、58〜62頁
【非特許文献５８】The Lancet、1993年、381巻、1251〜1254頁
【非特許文献５９】Toxicol Pathol.、2007年、35巻(4号)、495〜516頁
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１１】
このように、抗AGE/ALE特性を有し、好ましくは、金属キレート剤でもある、新規な化合物についての必要性が依然として存在している。
【課題を解決するための手段】
【００１２】
本発明者らは、ここに、アルファ-オキソアルデヒド(α-オキソアルデヒド)及びベータ-不飽和のアルファアルデヒド(α,β-不飽和アルデヒド)及び金属キレート剤の新規なジアミン誘導体捕捉剤を開発することに成功した。これらの多能性の化合物は、カルボニル化合物の捕捉特性を、金属キレート特性及び抗ラジカル特性と組み合わせた利点を有する。
【００１３】
したがって、本発明は、式Iの化合物、その薬学的に許容される塩、並びに医薬組成物、農業食品用(agrofood)組成物又は化粧用組成物における、これらの化合物又はその薬学的に許容される塩の使用に関する。
【００１４】
第1の態様において、本発明は、式I:
【００１５】
【化１】
2018521067.tif 000003
【００１６】
[式中、
nは、1〜6の整数であり;
Xは、CO又はCH2であり;
Yは、NR1R2又はR2又は
【００１７】
【化２】
2018521067.tif 000004
【００１８】
であり;
R1は、H又はアルキル又はアルキル-アリールであり;
R2は、Z-L-R3であり;
Zは、存在しないか、CO又はCH2であり;
Lは、存在しないか、CH=CH又は(CH2)mであり;
mは、1〜6の整数であり;
R3は、少なくとも1つのOH基並びにOH、C1〜C4アルコキシ及びC1〜C4アルキルから選択される1つ若しくは複数の置換基によって置換されたフェニルであるか、又はR3は、少なくとも1つのOH基並びに場合によりOH、C1〜C4アルコキシ及びC1〜C4アルキルから選択される1つ若しくは複数の置換基によって置換されたN-ピリジノニルである]
の化合物及びその塩、特に、その薬学的に許容される塩に関する。
【００１９】
1つの不斉炭素原子を含む式Iの化合物は、2つのエナンチオマーの形態で存在する。これらのエナンチオマーだけでなく、ラセミ混合物を含むこれらの混合物は、本発明の一部である。
【００２０】
別の態様において、本発明は、少なくとも1つの本発明の化合物又はその塩の1つ、特に、その薬学的に許容される塩、並びに医薬品、化粧品及び/又は農業食品の見地から許容される少なくとも1つの賦形剤を含む、医薬組成物、化粧用組成物又は農業食品用組成物に関する。
【００２１】
本明細書の上記で示すように、本発明の化合物及びその薬学的に許容される塩は、AGE(終末糖化産物)及び/又はALE(終末脂質過酸化産物)の蓄積に関連する疾患又は障害の処置及び/又は予防における、特定の適用を有する。
【発明を実施するための形態】
【００２２】
本明細書の上記で詳述するように、本発明は、式Iの化合物、並びにその塩、特に、医薬品、化粧品及び/又は農業食品の見地から許容される、その塩に関する。
【００２３】
式Iの化合物及びその好ましい塩は、n、Y、R1、R2、Z、L、m及びR3の1つ、いくつか又はそのそれぞれの1つが、以下の方法で定義されるものである:
nは、1〜4の整数であり;好ましくは、nは、1、2又は3であり;より好ましくは、nは、2又は3であり;
Yは、NR1R2又はR2又は
【００２４】
【化３】
2018521067.tif 000005
【００２５】
であり;
R1は、H、メチル又はベンジルであり;好ましくは、R1は、H又はメチルであり、より好ましくは、R1は、Hであり;
R2は、Z-L-R3であり;
Zは、CO又はCH2であり;
Lは、存在しないか、CH=CH又は(CH2)mであり;好ましくは、Lは、存在しないか、トランス-CH=CH又は(CH2)mであり;
mは、1〜6の整数であり;好ましくは、1〜4の整数であり;より好ましくは、mは、1、2又は3であり;
R3は、少なくとも1つのOH基並びにOH、C1〜C4アルコキシ及びC1〜C4アルキルから選択される1つ若しくは複数の置換基によって置換されたフェニルであるか、又はR3は、少なくとも1つのOH基並びに場合によりOH、C1〜C2アルコキシ及びC1〜C2アルキルから選択される、好ましくは、OH、メトキシ及びメチルから選択される、より好ましくは、OH及びメトキシ若しくはOH及びメチル若しくはOHから選択される、1つ若しくは複数の置換基によって置換されたN-ピリジノニルであり、より好ましくは、R3は、
【００２６】
【化４】
2018521067.tif 000006
【００２７】
から選択される。
【００２８】
特定の実施形態において、式Iの化合物及びその塩は、R2が、
【００２９】
【化５】
2018521067.tif 000007
【００３０】
から選択され、Zが、CO又はCH2であるものである。
【００３１】
実際には、いかなる理論にも縛られることを望まないが、本発明者らは、本発明の化合物の、MGO及びMDAと付加体を形成する能力並びに銅キレート力が、ジアミン基のレベルで得られると考えている。同時に、本発明の化合物の鉄キレート力及び抗ラジカル特性は、フェルラ酸に由来する基(4-ヒドロキシ-3-メトキシフェニル)、没食子酸に由来する基(3,4,5-トリヒドロキシベンゾイル)及びヒドロキシピリジノンに由来する基の結果として得られる。
【００３２】
第1の実施形態において、本発明の化合物は、式II:
【００３３】
【化６】
2018521067.tif 000008
【００３４】
[式中、n及びYは、式Iに関して本明細書の上記で定義した通りである]
の化合物及びその塩、特に、その薬学的に許容される塩である。
【００３５】
第2の実施形態において、本発明の化合物は、式III:
【００３６】
【化７】
2018521067.tif 000009
【００３７】
[式中、n及びYは、式Iに関して本明細書の上記で定義した通りである]
の化合物及びその塩、特に、その薬学的に許容される塩である。
【００３８】
第3の実施形態において、本発明の化合物は、式IV:
【００３９】
【化８】
2018521067.tif 000010
【００４０】
[式中、n、X、R1、Z、L及びR3は、式Iに関して定義した通りである]
の化合物及びその塩、特に、その薬学的に許容される塩である。
【００４１】
好ましい式IVの化合物は、Z-L-R3が、
【００４２】
【化９】
2018521067.tif 000011
【００４３】
[式中、R4、R5、R6、R7、R8、R9、R10、R11、R12、R13、R14、R15、R16、R17、R18、R19、R20及びR21は、互いに独立して、H、OH、C1〜C4アルコキシ及びC1〜C4アルキルから、好ましくは、H、OH、C1〜C2アルコキシ及びC1〜C2アルキルから、好ましくは、H、OH、メトキシ及びメチルから、より好ましくは、H、OH及びメトキシ;H又はOH及びH、メチル又はOHから選択され;但し、R4、R5、R6、R7及びR8の少なくとも1つ、R9、R10、R11、R12及びR13の少なくとも1つ、R14、R15、R16及びR17の少なくとも1つ、R18、R19、R20及びR21の少なくとも1つは、OHである]
から選択される化合物である。
【００４４】
特に好ましい式IVの化合物は、Z-L-R3が、
【００４５】
【化１０】
2018521067.tif 000012
【００４６】
[式中、R5、R6、R9、R10、R11、R16、R17及びR21は、互いに独立して、OH、C1〜C4アルコキシ及びC1〜C4アルキルから、好ましくは、OH、C1〜C2アルコキシ及びC1〜C2アルキルから、好ましくは、OH、メトキシ及びメチルから、より好ましくは、OH及びメトキシ又はOH及びメチル又はOHから選択され;但し、R5及びR6の少なくとも1つ、R9、R10及びR11の少なくとも1つ、R16及びR17の少なくとも1つ、並びにR21の少なくとも1つは、OHである]
から選択される化合物である。特に有利な式IVの化合物は、
-  R5及びR6が、互いに独立して、OH及びC1〜C4アルコキシから、好ましくはOH及びC1〜C2アルコキシから、より好ましくは、OH及びメトキシから選択され;有利には、R5が、C1〜C4アルコキシ、好ましくはC1〜C2アルコキシ、より好ましくは、メトキシであり、R6が、OHであり;
-  R9、R10及びR11が、OHであり;
-  R16及びR17が、互いに独立して、OH及びC1〜C4アルキルから、好ましくはOH及びC1〜C2アルキルから、より好ましくは、OH及びメチルから選択され;有利には、R16が、OHであり、R17が、C1〜C4アルキル、好ましくはC1〜C2アルキル、より好ましくは、メチルであり;
-  R21が、OHである、
化合物である。
【００４７】
実施形態において、式IVの化合物は、Z-L-R3が、
【００４８】
【化１１】
2018521067.tif 000013
【００４９】
[式中、R14、R15、R16、R17、R18、R19、R20及びR21は、互いに独立して、H、OH及びC1〜C4アルキルから、好ましくは、H、OH及びC1〜C2アルキルから、好ましくは、H、OH及びメチルから選択され;但し、R14、R15、R16及びR17の少なくとも1つ、並びにR18、R19、R20及びR21の少なくとも1つは、OHである]
から選択される化合物である。有利には、Z-L-R3は、
【００５０】
【化１２】
2018521067.tif 000014
【００５１】
[式中、R16、R17及びR21は、互いに独立して、OH及びC1〜C4アルキルから、好ましくは、OH及びC1〜C2アルキルから、より好ましくは、OH及びメチルから選択され;但し、R16及びR17の少なくとも1つ、並びにR21の少なくとも1つは、OHである]
から選択される。特に有利な化合物は、
-  R16及びR17が、互いに独立して、OH及びC1〜C4アルキルから、好ましくはOH及びC1〜C2アルキルから、より好ましくは、OH及びメチルから選択され;有利には、R16が、OHであり、R17が、C1〜C4アルキル、好ましくはC1〜C2アルキル、より好ましくは、メチルであり;
-  R21が、OHである、
化合物である。
【００５２】
第4の実施形態において、本発明の化合物は、式V
【００５３】
【化１３】
2018521067.tif 000015
【００５４】
[式中、n、X、Z、L及びR3は、式Iに関して定義した通りである]
の化合物及びその塩、特に、その薬学的に許容される塩である。
【００５５】
好ましい式Vの化合物は、Z-L-R3が、
【００５６】
【化１４】
2018521067.tif 000016
【００５７】
[式中、R4、R5、R6、R7、R8、R9、R10、R11、R12、R13、R14、R15、R16、R17、R18、R19、R20及びR21は、互いに独立して、H、OH、C1〜C4アルコキシ及びC1〜C4アルキルから、好ましくは、H、OH、C1〜C2アルコキシ及びC1〜C2アルキルから、好ましくは、H、OH、メトキシ及びメチルから、より好ましくは、H、OH及びメトキシ;H又はOH及びH、メチル又はOHから選択され;但し、R4、R5、R6、R7及びR8の少なくとも1つ、R9、R10、R11、R12及びR13の少なくとも1つ、R14、R15、R16及びR17の少なくとも1つ、並びにR18、R19、R20及びR21の少なくとも1つは、OHである]
から選択される化合物である。
【００５８】
特に好ましい式Vの化合物は、Z-L-R3が、
【００５９】
【化１５】
2018521067.tif 000017
【００６０】
[式中、R5、R6、R9、R10、R11、R16、R17及びR21は、互いに独立して、OH、C1〜C4アルコキシ及びC1〜C4アルキルから、好ましくは、OH、C1〜C2アルコキシ及びC1〜C2アルキルから、好ましくは、OH、メトキシ及びメチルから、より好ましくは、OH及びメトキシ又はOH及びメチル又はOHから選択され;但し、R5及びR6の少なくとも1つ、R9、R10及びR11の少なくとも1つ、R16及びR17の少なくとも1つは、OHであり、R21は、OHである]
から選択される化合物である。特に有利な式IVの化合物は、
-  R5及びR6が、互いに独立して、OH及びC1〜C4アルコキシから、好ましくはOH及びC1〜C2アルコキシから、より好ましくは、OH及びメトキシから選択され;有利には、R5が、C1〜C4アルコキシ、好ましくはC1〜C2アルコキシ、より好ましくは、メトキシであり、R6が、OHであり;
-  R9、R10及びR11が、OHであり;
-  R16及びR17が、互いに独立して、OH及びC1〜C4アルキルから、好ましくはOH及びC1〜C2アルキルから、より好ましくは、OH及びメチルから選択され;有利には、R16が、OHであり、R17が、C1〜C4アルキル、好ましくはC1〜C2アルキル、より好ましくは、メチルであり;
-  R21が、OHである、
化合物である。
【００６１】
実施形態において、式Vの化合物は、Z-L-R3が、
【００６２】
【化１６】
2018521067.tif 000018
【００６３】
[式中、R14、R15、R16、R17、R18、R19、R20及びR21は、互いに独立して、H、OH及びC1〜C4アルキルから、好ましくは、H、OH及びC1〜C2アルキルから、好ましくは、H、OH及びメチルから選択され;但し、R14、R15、R16及びR17の少なくとも1つ、並びにR18、R19、R20及びR21の少なくとも1つは、OHである]
から選択される化合物である。有利には、Z-L-R3は、
【００６４】
【化１７】
2018521067.tif 000019
【００６５】
[式中、R16、R17及びR21は、互いに独立して、OH及びC1〜C4アルキルから、好ましくは、OH及びC1〜C2アルキルから、好ましくは、OH及びメチルから選択され;但し、R16及びR17の少なくとも1つは、OHであり、R21は、OHである]
から選択される。特に有利な化合物は、
-  R16及びR17が、互いに独立して、OH及びC1〜C4アルキルから、好ましくはOH及びC1〜C2アルキルから、より好ましくは、OH及びメチルから選択され;有利には、R16が、OHであり、R17が、C1〜C4アルキル、好ましくはC1〜C2アルキル、より好ましくは、メチルであり;
-  R21が、OHである、
化合物である。
【００６６】
第5の実施形態において、本発明の化合物は、式VI
【００６７】
【化１８】
2018521067.tif 000020
【００６８】
[式中、n、X、L及びR3は、式Iに関して定義した通りである]
の化合物及びその塩、特に、その薬学的に許容される塩である。
【００６９】
好ましい式VIの化合物は、nが、1若しくは2であり、Xが、CH2であり、及び/又はL-R3が、
【００７０】
【化１９】
2018521067.tif 000021
【００７１】
[式中、R14、R15、R16及びR17は、互いに独立して、H、OH及びC1〜C4アルキルから、好ましくは、H、OH及びC1〜C2アルキルから、好ましくは、H、OH及びメチルから選択され;但し、R14、R15、R16及びR17の少なくとも1つは、OHである]
である化合物である。有利には、L-R3は、
【００７２】
【化２０】
2018521067.tif 000022
【００７３】
[式中、R16及びR17は、互いに独立して、OH及びC1〜C4アルキルから、好ましくは、OH及びC1〜C2アルキルから、より好ましくは、OH及びメチルから選択され;但し、R16及びR17の少なくとも1つは、OHである]
から選択される。特に有利な化合物は、R16が、OHであり、R17が、C1〜C4アルキル、好ましくはC1〜C2アルキル、より好ましくはメチルである化合物である。
【００７４】
特に好ましい本発明の化合物は、本明細書の以下のTable 1(表1)に列挙する化合物である。
【００７５】
【表１Ａ】
2018521067.tif 000023
【００７６】
【表１Ｂ】
2018521067.tif 000024
【００７７】
【表１Ｃ】
2018521067.tif 000025
【００７８】
式Iの化合物は、当業者に公知の反応にしたがって調製することができる。「実施例」部分に記載された反応スキームは、可能な合成アプローチを示す。
【００７９】
α-オキソアルデヒド及び/又はα,β-不飽和アルデヒドを捕捉するこれらの能力、金属をキレートするこれらの能力並びにこれらの抗酸化特性に起因して、本発明の化合物及びその塩、特に、医薬品及び/又は化粧品の見地から許容されるその塩は、医薬品及び/又は化粧品産業における適用を有する。
【００８０】
第2の態様において、したがって、本発明は、医薬としての使用のための本発明の化合物に関する。
【００８１】
より具体的には、本発明の化合物は、このように、終末糖化産物(AGE)及び/又は終末脂質過酸化産物(ALE)の蓄積に関連する疾患又は障害の処置及び/又は予防において、有用である。
【００８２】
これらの疾患又は障害としては、神経変性疾患、酸化ストレス及びカルボニルストレスと関係がある細小血管症及び大血管症、糖尿病関連の障害並びに加齢関連の病的状態が挙げられる。
【００８３】
特定の実施形態において、疾患又は障害は、神経変性疾患、特に、アルツハイマー病及びパーキンソン病から選択される。
【００８４】
別の特定の実施形態において、疾患又は障害は、アテローム性動脈硬化症タイプの酸化ストレス及びカルボニルストレスと関係がある細小血管症及び大血管症から選択される。
【００８５】
別の特定の実施形態において、疾患又は障害は、糖尿病関連の障害、特に、アテローム性動脈硬化症、網膜症、腎症、ニューロパシー、細小血管症及び大血管症、白内障、アミロイド症、リウマチ障害並びに静脈瘤性潰瘍及び動脈性潰瘍から選択される。
【００８６】
別の特定の実施形態において、疾患又は障害は、例えば、白内障及びリウマチ等の加齢関連の病的状態から選択される。
【００８７】
別の態様による本発明は、本発明の化合物又はその薬学的に許容される溶媒和物の1つの有効量の患者への投与を含む、本明細書の上記で示した疾患及び状態の処置のための方法にも関する。好ましくは、患者は、温血動物、より好ましくは、ヒトである。
【００８８】
本発明は、少なくとも1つの本発明の化合物又は少なくとも1つの前記化合物の薬学的に許容される塩、及び薬学的に許容される賦形剤を含む医薬組成物にも関する。前記賦形剤は、所望の医薬品の形態及び投与様式にしたがって、当業者に公知の通常の賦形剤から選択される。
【００８９】
本発明の医薬組成物は、経口、舌下、皮下、筋肉内、静脈内、局所、局在的、気管内、経鼻、経皮又は直腸経路による投与のための医薬組成物から選択することができる。これらの組成物において、本明細書の上記の式Iの有効成分又はその薬学的に許容される溶媒和物は、本明細書の上記で示した疾患又は障害の処置及び/又は予防のために、従来の医薬賦形剤との混合物として、動物及びヒトに、単位投与形態で投与することができる。適切な単位投与形態としては、錠剤、軟カプセル剤及び硬カプセル剤、散剤、顆粒剤等の経口経路による形態、並びに経口の溶液又は懸濁液、舌下、頬側、気管内、眼内、経鼻の投与形態、吸入、局所、経皮、皮下、筋肉内又は静脈内投与形態、直腸投与形態並びにインプラントが挙げられる。局所適用のために、本発明の化合物は、クリーム、ゲル、軟膏又はローションにおいて使用することができる。好ましい実施形態において、これは、経口投与用の医薬組成物である。投与の様式にしたがって、固体、半固体又は液体の形態を有しうる、このような適切な投与形態は、通常、「Remington's Pharmaceutical Sciences」の業績の最新版を参照して、当業者に公知である。
【００９０】
AGEの蓄積は、通常、皮膚組織又は血管内皮の弾力性の喪失及び皮膚の色素沈着等の美容上の影響を有する機能不全に関連するので(Dermatoendocrinol.、2012年、4巻、259〜270頁)、本発明の化合物は化粧用組成物の有効成分として有用である。
【００９１】
[定義]
本明細書の以下の定義及び説明は、明細書及び特許請求の範囲を含む、本出願で使用される用語及び表現に関する。
【００９２】
本発明の化合物の説明のために、使用される用語及び表現は、他に言及しない限り、本明細書の以下の定義にしたがって解釈されなければならない。
【００９３】
単独又は別の基の一部としての「アルキル」という用語は、式CnH2n+1(式中、nは、1以上の整数である)の炭化水素基を指す。
【００９４】
「塩」という用語は、式Iの化合物の酸付加塩を指す。酸付加塩は、塩酸、硝酸、硫酸、リン酸、クエン酸、ギ酸、フマル酸、マレイン酸、酢酸、コハク酸、酒石酸、メタンスルホン酸、p-トルエンスルホン酸、シュウ酸等の、無機酸及び有機酸との塩を包含する。
【００９５】
式Iの化合物への全ての言及は、その塩も示す。
【００９６】
「患者」という用語は、医療的処置を待っているか又は受けている、温血動物、好ましくは、ヒトを指す。
【００９７】
「ヒト」という用語は、両方の性別の、任意の発達段階(すなわち、新生児、幼児、子供、青年及び成人)の対象を指す。実施形態において、ヒトは、青年又は成人、好ましくは、成人である。
【００９８】
「処置する」及び「処置」という用語は、これらの一般的な意味で理解されなければならず、例えば、病態の改善及び抑止を含む。
【００９９】
「予防する」及び「予防」という用語は、疾患又は状態並びに関連する症状の出現を回避するか又は遅らせること、例えば、患者が疾患若しくは状態を発症することを防止するか又は患者が疾患若しくは状態を発症する危険性を低減することを指す。
【０１００】
「治療的有効量」又は「有効量」という用語は、投与される患者において所望の治療的又は予防的結果を達成するのに十分な有効成分(式Iの化合物)の量を指す。
【０１０１】
「薬学的に許容される」又は「薬学的な見地から許容される」という用語は、化合物又は成分が、患者にとって有害ではなく、医薬組成物の枠組みにおいて他の成分と適合性であることを意味する。
【０１０２】
「化粧品的に許容される」という用語は、化合物又は成分が、使用者、特にヒトにとって有害ではなく、化粧用組成物の枠組みにおいて他の成分と適合性であることを意味する。
【０１０３】
「農業食品的な見地から許容される」という用語は、化合物又は成分が、温血動物、特にヒトにとって、その摂取中に、有害ではなく、農業食品用組成物の枠組みにおいて他の成分と適合性であることを意味する。
【０１０４】
本発明は、以下の実施例を参照すればより良く理解されると予想される。これらの実施例は、本発明の特定の実施形態を表すものであって、本発明の範囲を決して限定するものではない。図面は、実験結果を説明するために使用される。
【図面の簡単な説明】
【０１０５】
【図１】様々な研究された化合物の構造を示す図である。
【図２】MGO及び本発明の化合物の間の付加体の形成の動態研究を示す図である。
【図３】37℃で15分インキュベーション後のMGO及び化合物37aの間の付加体の少なくとも3つのタイプの形成の証拠を提供する質量スペクトルを示す図である。
【図４】MDA及び本発明の化合物の間の付加体の形成の動態研究を示す図である。
【図５】37℃で5時間インキュベーション後のMDA及び化合物37aの間の少なくとも1つの付加体の形成の証拠を提供する質量スペクトルを示す図である。
【図６】ヘキサミン緩衝液0.01M/KCl 0.01M(pH=5)中で行われた較正曲線を示す図である。
【図７】ヘキサミン緩衝液0.01M/KCl 0.01M(pH=5)及びMeOHの75/25の混合物中で行われた較正曲線を示す図である。
【図８】異なる本発明の化合物のその濃度によるCu2+の錯体形成%の比較を示す図である。
【図９】そのCu2+キレート特性について試験された化合物37bに関する2つの化合物を示す図である。
【図１０】化合物37b及び遊離のCu2+キレート末端を1つのみ有する2つの関連化合物のその濃度によるCu2+錯体形成%の比較を示す図である。
【図１１】トロロクスの較正曲線(正味のAUC対濃度)を示す図である。示した値は、実施された3つの独立した実験からの、代表的な実験を構成する三連の平均±SEMによって表す。
【図１２】AAPHによって誘導されたフルオレセインの蛍光の減衰曲線を示す図である。示した値は、トロロクスの不存在中(対照)又は異なる濃度での存在中で得られた結果に関し、実施された3つの独立した実験からの、代表的な実験を構成する三連の平均±SEMによって表す。
【図１３】AAPHによって誘導されたフルオレセインの蛍光の減衰曲線を示す図である。示した値は、カルノシンの不存在中(対照)又は異なる濃度での存在中で得られた結果に関し、実施された3つの独立した実験からの、代表的な実験を構成する三連の平均±SEMによって表す。
【図１４】AAPHによって誘導されたフルオレセインの蛍光の減衰曲線を示す図である。示した値は、Dap-Pipの不存在中(対照)又は異なる濃度での存在中で得られた結果に関し、実施された3つの独立した実験からの、代表的な実験を構成する三連の平均±SEMによって表す。
【図１５】AAPHによって誘導されたフルオレセインの蛍光の減衰曲線を示す図である。示した値は、化合物29aの不存在中(対照)又は異なる濃度での存在中で得られた結果に関し、実施された3つの独立した実験からの、代表的な実験を構成する三連の平均±SEMによって表す。
【図１６】AAPHによって誘導されたフルオレセインの蛍光の減衰曲線を示す図である。示した値は、化合物29bの不存在中(対照)又は異なる濃度での存在中で得られた結果に関し、実施された3つの独立した実験からの、代表的な実験を構成する三連の平均±SEMによって表す。
【図１７】AAPHによって誘導されたフルオレセインの蛍光の減衰曲線を示す図である。示した値は、化合物30aの不存在中(対照)又は異なる濃度での存在中で得られた結果に関し、実施された3つの独立した実験からの、代表的な実験を構成する三連の平均±SEMによって表す。
【図１８】AAPHによって誘導されたフルオレセインの蛍光の減衰曲線を示す図である。示した値は、化合物30bの不存在中(対照)又は異なる濃度での存在中で得られた結果に関し、実施された3つの独立した実験からの、代表的な実験を構成する三連の平均±SEMによって表す。
【図１９】AAPHによって誘導されたフルオレセインの蛍光の減衰曲線を示す図である示した値は、化合物37aの不存在中(対照)又は異なる濃度での存在中で得られた結果に関し、実施された3つの独立した実験からの、代表的な実験を構成する三連の平均±SEMによって表す。
【図２０】AAPHによって誘導されたフルオレセインの蛍光の減衰曲線を示す図である。示した値は、化合物37bの不存在中(対照)又は異なる濃度での存在中で得られた結果に関し、実施された3つの独立した実験からの、代表的な実験を構成する三連の平均±SEMによって表す。
【図２１】AAPHによって誘導されたフルオレセインの蛍光の減衰曲線を示す図である。示した値は、化合物37cの不存在中(対照)又は異なる濃度での存在中で得られた結果に関し、実施された3つの独立した実験からの、代表的な実験を構成する三連の平均±SEMによって表す。
【図２２】AAPHによって誘導されたフルオレセインの蛍光の減衰曲線を示す図である。示した値は、化合物37dの不存在中(対照)又は異なる濃度での存在中で得られた結果に関し、実施された3つの独立した実験からの、代表的な実験を構成する三連の平均±SEMによって表す。
【図２３】AAPHによって誘導されたフルオレセインの蛍光の減衰曲線を示す図である。示した値は、化合物37fの不存在中(対照)又は異なる濃度での存在中で得られた結果に関し、実施された3つの独立した実験からの、代表的な実験を構成する三連の平均±SEMによって表す。
【図２４】AAPHによって誘導されたフルオレセインの蛍光の減衰曲線を示す図である。示した値は、化合物37iの不存在中(対照)又は異なる濃度での存在中で得られた結果に関し、実施された3つの独立した実験からの、代表的な実験を構成する三連の平均±SEMによって表す。
【図２５】AAPHによって誘導されたフルオレセインの蛍光の減衰曲線を示す図である。示した値は、化合物37jの不存在中(対照)又は異なる濃度での存在中で得られた結果に関し、実施された3つの独立した実験からの、代表的な実験を構成する三連の平均±SEMによって表す。
【図２６】10μMでの本発明の化合物の抗酸化能力(ORACFL)を示す図である。示した結果は、三連で実施された3つの独立した実験の平均±SEMに相当する。*p<0.05;**p<0.01;***p<0.001対トロロクス(スチューデントt検定:p<0.05であれば、差は有意であると考えられる)。
【図２７】第二世代の化合物であるDap-Pipの抗ラジカル特性の評価を示す図である。
【図２８】本発明の化合物29aの抗ラジカル特性の評価を示す図である。
【図２９】本発明の化合物29bの抗ラジカル特性の評価を示す図である。
【図３０】本発明の化合物30bの抗ラジカル特性の評価を示す図である。
【図３１】本発明の化合物37aの抗ラジカル特性の評価を示す図である。
【図３２】本発明の化合物37cの抗ラジカル特性の評価を示す図である。
【図３３】10μMの濃度での、ビタミンE、第二世代のDap-Pip及び様々な本発明の化合物の抗ラジカル特性の比較を示す図である。
【図３４】1μMの濃度での、ビタミンE、第二世代のDap-Pip及び様々な本発明の化合物の抗ラジカル特性の比較を示す図である。
【図３５】24時間処理後の、マウス内皮脳細胞(bEnd.3)に対する本発明の化合物の細胞毒性の研究を示す図である。細胞の生存率を、三連の平均±標準偏差によって表す。(a)化合物29a、化合物29b、化合物30b、化合物37a及び化合物37c;(b)化合物30a及び化合物37b。
【図３６】24時間処理後の、神経細胞として処理された、ラット褐色細胞腫細胞(PC12)に対する本発明の化合物の細胞毒性の研究を示す図である。細胞の生存率を、三連の平均±標準偏差によって表す。(a)化合物29a、化合物29b、化合物30b、化合物37a及び化合物37c;(b)化合物30a及び化合物37b。
【図３７】24時間処理後の、ヒト線維芽細胞(MRC-5)に対する本発明の化合物の細胞毒性の研究を示す図である。細胞の生存率を、三連の平均±標準偏差によって表す。(a)化合物29a、化合物29b、化合物30b、化合物37a及び化合物37c;(b)化合物30a及び化合物37b。
【図３８】48時間処理後の、マウス内皮脳細胞(bEnd.3)に対する本発明の化合物の細胞毒性の研究を示す図である。細胞の生存率を、三連の平均±標準偏差によって表す。(a)化合物29a、化合物29b、化合物30b、化合物37a及び化合物37c;(b)化合物30a及び化合物37b。
【図３９】48時間処理後の、神経細胞として処理された、ラット褐色細胞腫細胞(PC12)に対する本発明の化合物の細胞毒性の研究を示す図である。細胞の生存率を、三連の平均±標準偏差によって表す。(a)化合物29a、化合物29b、化合物30b、化合物37a及び化合物37c;(b)化合物30a及び化合物37b。
【図４０】48時間処理後の、ヒト線維芽細胞(MRC-5)に対する本発明の化合物の細胞毒性の研究を示す図である。細胞の生存率を、三連の平均±標準偏差によって表す。(a)化合物29a、化合物29b、化合物30b、化合物37a及び化合物37c;(b)化合物30a及び化合物37b。
【図４１】24時間処理後の、神経細胞として処理された、ラット褐色細胞腫細胞(PC12)に対する本発明の化合物(29a、29b、30a、30b、37a、37b、37c、37d、37f、37i及び37j)の細胞毒性の研究を示す図である。細胞の生存率を、三連で実施された3つの独立した実験の平均±SEMによって表す。
【図４２】マウス内皮脳細胞(bEnd.3)に対する化合物30bの抗アポトーシス特性の評価を示す図である。bEnd.3細胞を、2mMのMGOの添加前に、10μM又は100μMの30bで30分間前処理し、次いで、24時間インキュベートした。細胞のアポトーシスを、三連の平均±標準偏差によって表す。
【図４３】マウス内皮脳細胞(bEnd.3)に対する化合物37cの抗アポトーシス特性の評価を示す図である。bEnd.3細胞を、2mMのMGOの添加前に、10μM又は100μMの37cで30分間前処理し、次いで、24時間インキュベートした。細胞のアポトーシスを、三連の平均±標準偏差によって表す。
【図４４】神経細胞として処理された、ラット褐色細胞腫細胞(PC12)に対する化合物30bの抗アポトーシス特性の評価を示す図である。PC12細胞を、1mMのMGOの添加前に、10μM又は100μMの30bで30分間前処理し、次いで、24時間インキュベートした。細胞のアポトーシスを、三連の平均±標準偏差によって表す。
【図４５】神経細胞として処理された、ラット褐色細胞腫細胞(PC12)に対する化合物37cの抗アポトーシス特性の評価を示す図である。PC12細胞を、1mMのMGOの添加前に、10μM又は100μMの37cで30分間前処理し、次いで、24時間インキュベートした。細胞のアポトーシスを、三連の平均±標準偏差によって表す。
【図４６】ヒト線維芽細胞(MRC-5)に対する化合物37bの抗アポトーシス特性の評価を示す図である。MRC5細胞を、2mMのMGOの添加前に、10μM又は100μMの37bで1時間前処理し、次いで、24時間インキュベートした。細胞のアポトーシスを、三連の平均±標準偏差によって表す。
【図４７】ヒト線維芽細胞(MRC-5)に対する化合物37cの抗アポトーシス特性の評価を示す図である。MRC5細胞を、2mMのMGOの添加前に、10μM又は100μMの37cで1時間前処理し、次いで、24時間インキュベートした。細胞のアポトーシスを、三連の平均±標準偏差によって表す。
【図４８】神経細胞として処理された、ラット褐色細胞腫細胞(PC12)に対する化合物37cの抗アポトーシス特性の評価を示す図である。PC12細胞を、1mMのMGOの添加前に、10μM又は100μMの37cで1時間前処理し、次いで、24時間インキュベートした。細胞のアポトーシスを、三連で実施された3つの独立した実験の平均±SEMによって表す。*p<0.05;**p<0.01対対照(MGOによって処理されていない細胞)(スチューデントt検定:p<0.05であれば、差は有意であると考えられる)。
【実施例】
【０１０６】
A.合成
I)装置及び方法
様々な反応製品は、Sigma-Aldrich社(Lyons、フランス)から購入し、更に精製せずに使用する。TLCは、Merck 60F254シリカプレートで行い、紫外光(λ=254nm)で観察した後、95%エタノール中のリンモリブデン酸を使用し、続いて最大着色まで加熱して、明らかにした。分取カラムクロマトグラフィーは、Kielselgel60シリカゲル(40〜63μm)(Merck社)でのクロマトグラフィー手法により、又は順相のReveleris(登録商標)(Grace社)フラッシュクロマトグラフィーシステムを使用して、行った。
【０１０７】
NMR分析は、Bruker AC300、400又は600装置で行った。化学シフトは、内部標準として使用した重水素化溶媒に対する百万分率(ppm)で表す。結合定数(J)は、ヘルツ(Hz)で表し、シグナルの多重度は、以下の記号で表す:s(シングレット)、d(ダブレット)、t(トリプレット)、q(カルテット)及びm(マルチプレット)。質量スペクトルは、ポジティブエレクトロスプレーイオン化モード(ESI+)において、MSについてはShimadzu LCMS-2020装置で、HRMSについてはMicromass Q-TOF Ultima装置で得た。
【０１０８】
II)本発明の化合物の合成
1-  出発のジアミンシントンの合成
a)アスパラギン酸及びグルタミン酸からの誘導体(スキーム1)
【０１０９】
【化２１】
2018521067.tif 000026
【０１１０】
*化合物1(Bioconjug. Chem.、2007年、18巻、1625〜1636頁)及び化合物2(J. Med. Chem.、2009年、52巻、4650〜4656頁):
アスパラギン酸から出発してメチルエステルを得ることを可能にする合成(スキーム1)の第1工程は、Wojciechowskiら(Bioconjugate Chem.、2007年、18巻、1625〜1636頁)によって以前に開発されたものであり、この場合において、グルタミン酸に置き換えた。
【０１１１】
*化合物3(WO 2013/030193 A1)及び化合物4(J. Med. Chem.、2009年、52巻、4650〜4656頁):
Ollivierら(Tetrahedron Lett.、2010年、51巻、4147〜4149頁)及びMoreら(J. Med. Chem.、2009年、52巻、4650〜4656頁)は、それぞれ、t-ブチルオキシカルボニル基による、メチルエステル1及びメチルエステル2のアミン基のために使用される保護条件を記載していた。
【０１１２】
*化合物5及び化合物6(J. Chem. Soc., Perkin Trans. 1、1999年、2057〜2060頁):
-15℃で撹拌下、Ar下においた化合物3又は化合物4(38.3〜40.4mmol)の無水THF(150mL)の溶液に、無水THF(50mL)に溶解したトリエチルアミン(1.1当量)及びクロロギ酸エチル(1.4当量)を続けて滴下添加する。-15℃で30分間撹拌後、25%アンモニア溶液(2.5〜2.7当量、最終で16mLの最終容積)を、反応媒体に加え、次いで、-15℃、次いで室温で18時間、撹拌下におく。次いで、THFを減圧下蒸発させ、所望の生成物を、酢酸エチルを使用して、抽出する。有機相を、1NのKHSO4溶液、次いで10%のNaHCO3溶液及びNaCl飽和溶液で洗浄し、Na2SO4で乾燥し、最後に、減圧下蒸発させて、誘導体5又は誘導体6をそれぞれ白色粉末の形態で得る(68%又は77%)。
化合物5: 1H NMR (CDCl3, 300 MHz): δ (ppm) 6.59 (s, 1H); 6.20 (s, 1H); 5.79-5.76 (s, 1H); 4.50-4.49 (m, 1H); 3.65 (s, 3H); 2.91 (dd, J = 16.9 HzおよびJ' = 4.8 Hz, 1H); 2.66 (dd, J = 18.7 HzおよびJ' = 5.7 Hz, 1H); 1.40 (s, 9H).
13C NMR (CDCl3, 75 MHz): δ (ppm) 173.2; 171.9; 155.1; 80.1; 51.7; 49.9; 35.6; 27.9 (3C).
MS (ESI +): m/z = [M + H] 247.1; [M + Na] 269.1; [M + MeCN + Na] 310.1.
HRMS (ESI +): m/z C10H18N2O5Na [M + Na]の計算値 = 269.1113; 実測値 = 269.1103.
【０１１３】
*化合物7及び化合物8:
-10℃で撹拌下においた化合物5又は化合物6(26.4〜28.8mmol)のTHF(100mL)の溶液に、トリフルオロ酢酸無水物(1.5当量)及びトリエチルアミン(3当量)を添加する(Synth. Commun.、2009年、39巻、395〜406頁)。次いで、反応媒体を、同温度で2〜4時間撹拌下におく。次いで、THFを減圧下蒸発させ、所望の生成物を酢酸エチルを使用して、抽出する。有機相を、1NのKHSO4溶液、次いで10%のNaHCO3溶液及びNaCl飽和溶液で洗浄し、Na2SO4で乾燥し、最後に、減圧下蒸発させ、CH2Cl2/MeOHの98:2混合物を使用するシリカカラムによる精製又はCH2Cl2/MeOHの100:0〜90:10勾配を使用する順相のフラッシュクロマトグラフィーによる精製後、誘導体7又は誘導体8をそれぞれ黄色固体の形態で得る(60%又は74%)。
化合物7: 1H NMR (CDCl3, 300 MHz) δ (ppm): 5.61 (s, 1H); 4.90 (m, 1H); 3.75 (s, 3H); 2.86-2.82 (m, 2H); 1.39 (s, 9H).
13C NMR (CDCl3, 75 MHz) δ (ppm): 159.0; 117.9; 80.3; 52.6; 37.4; 28.4 (3C).
MS (ESI +): m/z = [M + H] 229.2; [M + MeCN + Na] 292.1; [2M + Na + H] 480.2.
HRMS (ESI +): m/z C10H16N2O4Na [M + Na]の計算値 = 251.1008; 実測値 = 251.1000.
化合物8: 1H NMR (CDCl3, 600 MHz): δ (ppm) 5.41 (s, 1H); 4.62 (m, 1H); 3.67 (s, 3H); 2.53-2.46 (m, 2H); 2.13-2.10 (m, 2H); 1.41 (s, 9H).
13C NMR (CDCl3, 150 MHz): δ (ppm) 172.6; 154.5; 118.8; 81.2; 52.0; 41.6; 29.6; 28.2 (3C); 28.2.
MS (ESI +): m/z = [M + H] 243.1; [M + Na] 265.1; [M + K] 281.0; [M + MeCN + Na] 306.1.
HRMS (ESI +): m/z C11H18N2O4Na [M + Na]の計算値 = 265.1164; 実測値 = 265.1159.
【０１１４】
*化合物9及び化合物10:
0℃で撹拌下においた化合物7又は化合物8(15.3〜19.8mmol)のメタノール(150mL)の溶液に、ジ-t-ブチルジカーボネート(2当量)及びNiCl2.6H2O(0.1当量)を添加する。次いで、水素化ホウ素ナトリウム(8当量)を、1時間かけて少量ずつ加え、混合物を、室温で3時間、撹拌下におく(Tetrahedron、2003年、59巻、5417〜5423頁)。ジエチレントリアミン(2当量)の添加及び再度の30分〜1時間の撹拌後、メタノールを減圧下蒸発させ、所望の生成物を、酢酸エチルを使用して抽出する。有機相を、NaHCO3飽和溶液、次いでNaCl飽和溶液で洗浄し、Na2SO4で乾燥し、最後に、減圧下蒸発させる。次いで、得られた中間体化合物を、THF/H2Oの1:1混合物(40mL)に溶解し、次いで、4NのLiOH水溶液(4当量)を媒体に加え、1時間〜1時間30分、撹拌下で維持する。THFを減圧下蒸発させ、次いで、混合物を、ジエチルエーテル又は酢酸エチルに入れ、10%のNa2CO3溶液でアルカリ化して、有機相中に残ったメチルエステル及びジ-t-ブチルジカーボネートを除去する。次いで、水性相を、6NのHCl溶液を使用して酸性化し、次いで、所望の生成物を、ジエチルエーテル又は酢酸エチルを使用して抽出する。NaCl飽和溶液で洗浄後、有機相を、最後に、Na2SO4で乾燥し、減圧下蒸発させて、誘導体9又は誘導体10をそれぞれ白色粉末の形態で得る(50%又は67%)。
化合物9: 1H NMR (CDCl3, 300 MHz): δ (ppm) 8.70-8.61 (s, 1H); 5.54-5.41 (s, 1H); 5.15 (s, 1H); 4.00-3.98 (m, 1H); 3.37-3.25 (m, 2H); 2.65-2.59 (m, 2H); 1.43 (s, 18H).
13C NMR (CDCl3, 75 MHz): δ (ppm) 174.7; 174.6; 146.2 (2C); 79.9; 79.8; 48.0; 43.4; 36.4; 28.1 (6C).
MS (ESI +): m/z = [M + H] 319.2; [M + Na] 341.2; [M + MeCN + Na] 382.2.
HRMS (ESI +): m/z C14H26N2O6Na [M + Na]の計算値 = 341.1689; 実測値 = 341.1676.
化合物10: 1H NMR (CDCl3, 300 MHz): δ (ppm) 8.35-8.28 (s, 1H); 5.06 (s, 1H); 4.99-4.96 (s, 1H); 3.72-3.66 (m, 1H); 3.18-3.16 (m, 2H); 2.43-2.37 (m, 2H); 1.87-1.76 (m, 2H); 1.43 (s, 18H).
13C NMR (CDCl3, 75 MHz): δ (ppm) 177.4; 156.8; 156.5; 79.6 (2C); 51.0; 44.6; 30.5; 28.3 (6C), 27.7.
MS (ESI +): m/z = [M + Na] 355.9; [M + MeCN + Na] 396.2.
HRMS (ESI +): m/z C15H28N2O6Na [M + Na]の計算値 = 355.1845; 実測値 = 355.1855.
【０１１５】
b)オルニチン及びリジンの誘導体(スキーム2)
【０１１６】
【化２２】
2018521067.tif 000027
【０１１７】
*化合物11及び12(市販品)
*化合物13(WO 07/011623 A1)及び化合物14(WO 00/64865 A1):
-10℃で撹拌下においた化合物11又は化合物12(1当量)(13.7〜24.5mmol)のTHF(50〜150mL)の溶液に、N-メチルモルホリン(1.1当量)及びクロロギ酸エチル(1.1当量)を続けて添加する。-10℃で20分間撹拌後、25%アンモニア溶液(2.5当量、最終で16mLの最終容積)を、反応媒体に加え、次いで、4時間、保管下におく。次いで、THFを減圧下蒸発させ、所望の生成物を、酢酸エチルを使用して、抽出する。有機相を、1NのKHSO4溶液、次いで10%のNaHCO3溶液及びNaCl飽和溶液で洗浄し、Na2SO4で乾燥し、最後に、減圧下蒸発させて、AcOEt/シクロヘキサンの20:80混合物を使用する再結晶後、誘導体13又は誘導体14をそれぞれ白色粉末の形態で得る(91%又は80%)。
【０１１８】
*化合物15及び化合物16(WO 2000/64865 A1):
-10℃で撹拌下におかれた化合物13又は化合物14(8.1〜10mmol)のTHF(60〜70mL)の溶液に、トリフルオロ酢酸無水物(1.5当量)及びピリジン(3当量)を添加する。次いで、反応媒体を、同温度で2時間撹拌下におく。次いで、THFを減圧下蒸発させ、所望の生成物を、酢酸エチルを使用して、抽出する。有機相を、1NのKHSO4溶液、次いで10%のNaHCO3溶液及びNaCl飽和溶液で洗浄し、Na2SO4で乾燥し、最後に、減圧下蒸発させて、AcOEt/シクロヘキサンの20:80混合物を使用する再結晶後、誘導体15又は誘導体16をそれぞれ白色粉末の形態で得る(99%又は95%)。
化合物15: 1H NMR (CDCl3, 600 MHz): δ (ppm) 7.36-7.29 (m, 5H); 5.11 (s, 1H); 5.08 (s, 2H); 4.96 (s, 1H); 4.55 (m, 1H); 3.24-3.23 (m, 2H); 1.81-1.79 (m, 2H); 1.68-1.65 (m, 2H); 1.44 (s, 9H).
13C NMR (CDCl3, 150 MHz): δ (ppm) 156.6 (2C); 136.4; 128.5 (2C); 128.2; 128.1 (2C); 118.7; 79.1; 66.8; 42.0; 40.0; 29.6; 28.2 (3C); 26.1.
MS (ESI +): m/z = [M + Na] 370.2; [2M + Na] 717.3.
HRMS (ESI +): m/z C18H25N3O4Na [M + Na]の計算値 = 370.1743; 実測値 = 370.1749.
【０１１９】
*化合物17及び化合物18:
0℃で撹拌下においた化合物15又は化合物16(8〜10mmol)のメタノール(60〜80mL)の溶液に、ジ-t-ブチルジカーボネート(2当量)及びNiCl2.6H2O(0.1当量)を添加する。次いで、水素化ホウ素ナトリウム(7当量)を、30分〜1時間かけて少量ずつ加え、混合物を、室温で1時間、撹拌下におく。ジエチレントリアミン(1当量)の添加及び再度の30分〜1時間の撹拌後、メタノールを減圧下蒸発させ、所望の生成物を、酢酸エチルを使用して抽出する。有機相を、NaHCO3飽和溶液、次いでNaCl飽和溶液で洗浄し、Na2SO4で乾燥し、最後に、減圧下蒸発させて、誘導体17又は誘導体18をそれぞれ白色粉末の形態で得る(92%又は89%)。
化合物17: 1H NMR (CDCl3, 300 MHz): δ (ppm) 7.34-7.31 (m, 5H); 5.06 (s, 2H); 5.06 (s, 1H); 4.94 (s, 1H); 4.80-4.77 (s, 1H); 3.58 (m, 1H); 3.21-3.12 (m, 4H); 1.56-1.52 (m, 2H); 1.45-1.44 (m, 2H); 1.43 (s, 18H).
13C NMR (CDCl3, 75 MHz): δ (ppm) 172.0; 156.9 (2C); 136.9; 128.8 (2C); 127.4 (3C); 79.7 (2C); 67.0; 51.5; 44.8; 41.1; 30.4; 28.7 (6C); 26.5.
MS (ESI +): m/z = [M + H] 452.1; [M + Na] 474.0.
HRMS (ESI +): m/z C23H37N3O6Na [M + Na]の計算値 = 474.2580; 実測値 = 474.2560.
化合物18: 1H NMR (CDCl3, 300 MHz): δ (ppm) 7.34-7.29 (m, 5H); 5.07 (s, 2H); 4.98-4.91 (s, 2H); 4.72 (s, 1H); 3.56 (m, 1H); 3.17-3.13 (m, 4H); 1.46-1.41 (m, 6H); 1.41 (m, 18H).
13C NMR (CDCl3, 75 MHz): δ (ppm) 176.3; 155.8 (2C); 136.0; 127.8 (2C); 127.4 (3C); 78.7 (2C); 65.9; 50.5; 43.9; 39.8; 31.6; 29.1; 27.7 (6C); 22.1.
MS (ESI +): m/z = [M + H] 466.3; [M + Na] 488.3.
HRMS (ESI +): m/z C24H39N3O6Na [M + Na]の計算値 = 488.2737; 実測値 = 488.2730.
【０１２０】
*化合物19及び化合物20:
化合物17又は化合物18(1.1〜5.7mmol)のメタノール(10〜40mL)の溶液に、Pd/C(10%m/m)を添加する。反応媒体を、真空下、室温で30分間撹拌下におき、次いで、6時間、H2流下で維持する。次いで、紙上でろ過し、メタノールを、減圧下蒸発させて、誘導体19又は誘導体20をそれぞれ白色粉末の形態で得る(92%又は100%)。
化合物19: 1H NMR (CDCl3, 600 MHz): δ (ppm) 4.98 (s, 1H); 4.96 (s, 1H); 3.56 (m, 1H); 3.18-3.12 (m, 2H); 2.74 (s, 2H); 2.74 (m, 2H); 1.48-1.43 (m, 4H); 1.41 (s, 18H).
13C NMR (CDCl3, 150 MHz): δ (ppm) 156.7; 156.3; 79.3 (2C); 51.2; 44.7; 41.6; 30.1; 29.3; 28.4 (6C).
MS (ESI +): m/z = [M + H] 318.2; [M + Na] 340.2.
HRMS (ESI +): m/z C15H31N3O4 [M + H]の計算値 = 318.2393; 実測値 = 318.2379.
化合物20: 1H NMR (CDCl3, 300 MHz): δ (ppm) 4.99 (s, 2H); 4.76-4.73 (s, 2H); 3.55 (m, 1H); 3.10 (m, 2H); 2.61-2.59 (m, 2H); 1.57 (m, 2H); 1.37 (m, 22H).
13C NMR (CDCl3, 75 MHz): δ (ppm) 170.8; 167.9; 78.9 (2C); 51.0; 44.4; 41.5; 33.1; 32.4; 28.0 (6C); 22.7.
MS (ESI +): m/z = [M + H] 332.2; [M + Na] 354.2.
HRMS (ESI +): m/z C16H33N3O4 [M + H]の計算値 = 332.2549; 実測値 = 332.2564.
【０１２１】
2- Ra又はNR'aRb基のカップリング
a)シュードペプチドカップリング
α-  方法A(スキーム3)
【０１２２】
【化２３】
2018521067.tif 000028
【０１２３】
*第1工程:酸官能基を持つ誘導体10、誘導体33a〜b、誘導体41a〜b(0.4〜3.0mmol)のジクロロメタン又は1,4-ジオキサン(10〜25mL)の溶液に、N-ヒドロキシスクシンイミド(1.1〜1.5当量)及びDCC(1〜1.2当量)を続けて添加する。反応媒体を、室温で24時間撹拌下で維持し、次いで、真空下でろ過する。次いで、ろ液を減圧下蒸発させて、酸の活性化中間体を得る。
【０１２４】
*第2工程:アミン誘導体20、アミン誘導体26、アミン誘導体27、アミン誘導体35又はアミン誘導体42(1〜1.7当量)をジクロロメタン(8〜30mL)に溶解し、トリエチルアミン(0〜4当量)と室温で30分間反応させる。次いで、酸の活性化中間体(1当量)を、反応媒体に加え、次いで、室温で18時間、撹拌下におく。次いで、有機相を、1NのHCl溶液、次いでNaHCO3溶液及びNaCl飽和溶液で洗浄し、Na2SO4で乾燥し、最後に、減圧下蒸発させて、シリカカラムでの精製(CH2Cl2/MeOH 98:2〜95:5)後に、化合物21a〜b、化合物22a〜b、化合物23c〜f又は化合物23jを得る(25〜82%)(Table 2(表2))。
【０１２５】
β-  方法B(スキーム4)
【０１２６】
【化２４】
2018521067.tif 000029
【０１２７】
0℃で撹拌下におかれた酸官能基を持つ誘導体である33b、41a〜b(1〜6.5mmol)のジクロロメタン、DMF又はTHF(25〜100mL)の溶液に、1-エチル-3-(3-ジメチルアミノプロピル)-カルボジイミド塩酸塩(1.2当量)、1-ヒドロキシベンゾトリアゾール一水和物(1.1〜1.2当量)を続けて添加する。0℃で30分間撹拌後、アミン誘導体19、アミン誘導体20又はアミン誘導体27(1当量)を、反応媒体中のトリエチルアミン(1.2当量)に加え、次いで、室温で4〜18時間、撹拌下で維持する。DMF又はTHFを蒸発させ、ジクロロメタンに残留物を入れた後、有機相をNaCl飽和溶液で洗浄し、Na2SO4で乾燥し、最後に、減圧下蒸発させて、シリカカラム(AcOEt/シクロヘキサン60:40又はAcOEt/MeOH 80:20)での精製後、化合物23a〜b、化合物23g〜i又は化合物23kを得る(51%〜86%)(Table 2(表2))。
【０１２８】
【表２Ａ】
2018521067.tif 000030
【０１２９】
【表２Ｂ】
2018521067.tif 000031
【０１３０】
化合物21a: 1H NMR (CDCl3, 300 MHz): δ (ppm) 7.63 (d, J = 15.0 Hz, 1H); 7.09 (dd, J1 = 8.4 Hz, J2 = 1.8 Hz, 1H); 6.99 (d, J = 1.8 Hz, 1H); 6.91 (d, J = 8.1 Hz, 1H); 6.67 (d, J = 15.3 Hz, 1H); 6.08 (s, 1H); 4.93 (s, 2H); 3.92 (s, 3H); 3.73-3.50 (m, 9H); 3.20 (t, J = 5.4 Hz, 2H); 2.45-2.39 (m, 2H); 1.86-1.80 (m, 2H); 1.42 (s, 18H).
13C NMR (CDCl3, 75 MHz): δ (ppm) 170.8; 170.5; 165.5 (2C); 147.2; 146.4; 143.4; 127.1; 121.7; 114.4; 113.3; 109.5; 77.5 (2C); 55.6; 51.0; 44.8; 44.2 (2C); 41.3 (2C); 29.1; 27.9 (6C); 27.5.
MS (ESI +): m/z = [M + H] 577.3; [M + Na] 599.3.
HRMS (ESI +): m/z C29H44N4O8 [M + Na]の計算値 = 599.3057; 実測値 = 599.3043.
化合物21b: 1H NMR (CDCl3, 300 MHz): δ (ppm) 7.52 (d, J = 15.6 Hz, 1H); 7.02 (dd, J1 = 8.1 Hz, J2 = 1.8 Hz, 1H); 6.96 (d, J = 1.8 Hz, 1H); 6.87 (d, J = 8.1 Hz, 1H); 6.31 (d, J = 15.6 Hz, 1H); 6.28 (s, 1H); 5.01-4.99 (s, 1H); 4.84-4.82 (s, 1H); 3.86 (s, 3H); 3.59-3.58 (m, 1H); 3.34-3.33 (m, 2H); 3.16 (m, 2H); 1.57-1.55 (m, 2H); 1.42 (m, 22H).
13C NMR (CDCl3, 75 MHz): δ (ppm) 167.4 (2C); 157.3; 148.3; 147.8; 141.6; 128.4; 122.9; 119.5; 115.8; 110.8; 80.4 (2C); 56.8; 52.2; 45.3; 39.9; 33.1; 30.6; 29.3 (6C); 23.7.
MS (ESI +): m/z = [M + H] 508.2; [M + Na] 530.2.
HRMS (ESI +): m/z C26H41N3O7Na [M + Na]の計算値 = 530.2842; 実測値 = 530.2856.
化合物22a: 1H NMR (CDCl3, 300 MHz): δ (ppm) 7.40-7.33 (m, 12H); 7.28-7.26 (m, 3H); 6.65 (s, 2H); 5.12 (s, 4H); 5.10 (s, 2H); 3.65-3.19 (m, 11H); 2.42-2.39 (m, 2H); 1.90-1.84 (m, 2H); 1.70-1.64 (m, 2H); 1.43 (s, 18H).
13C NMR (CDCl3, 75 MHz): δ (ppm) 171.0; 169.9; 156.5; 156.2; 152.5 (2C); 139.7; 137.3; 136.5 (2C); 129.9; 128.4 (6C); 128.0; 127.8 (2C); 127.1 (6C); 107.1 (2C); 79.2 (2C); 75.0; 71.0 (2C); 51.2; 45.0 (2C); 44.4; 41.5 (2C); 33.7; 29.3; 28.2 (6C).
MS (ESI +): m/z = [M + H] 823.3; [M + Na] 845.3.
HRMS (ESI +): m/z C47H58N4O9Na [M + Na]の計算値 = 845.4101; 実測値 = 845.4138.
化合物22b: 1H NMR (CDCl3, 300 MHz): δ (ppm) 7.38-7.28 (m, 12H); 7.28-7.26 (m, 3H); 7.17 (s, 2H); 6.62 (s, 1H); 5.13 (s, 4H); 5.09 (s, 2H); 4.97 (s, 1H); 4.78-4.75 (s, 1H); 3.63-3.62 (m, 1H); 3.40 (m, 2H); 3.20-3.18 (m, 2H); 1.62 (m, 2H); 1.46-1.44 (m, 22H).
13C NMR (CDCl3, 75 MHz): δ (ppm) 167.2; 156.2 (2C); 152.8 (2C); 141.1; 137.6; 136.9 (2C); 130.3; 128.6 (6C); 128.3; 128.1 (2C); 127.7 (6C); 107.0 (2C); 79.6 (2C); 75.3 (2C); 71.5; 51.4; 44.2; 39.5; 32.1; 29.2; 28.5 (6C); 22.8.
MS (ESI +): m/z = [M - 3Bn + 3H + Na] 506.3; [M + H + Na] 777.2.
HRMS (ESI +): m/z C44H55N3O8Na [M + Na]の計算値 = 776.3887; 実測値 = 776.3905.
化合物23a: 1H NMR (CDCl3, 300 MHz): δ (ppm) 7.38-7.28 (m, 5H); 7.22-7.19 (s, 1H); 7.08 (dd, J1 = 6.9 Hz, J2 = 1.5 Hz, 1H); 6.70 (dd, J1 = 7.5 Hz, J2 = 1.2 Hz, 1H); 6.04 (t, J = 7.2 Hz, 1H); 5.07-5.01 (s, 2H); 4.93-4.90 (s, 1H); 4.28-4.18 (m, 2H); 3.51-3.47 (m, 1H); 3.05-3.03 (m, 4H); 2.63 (t, J = 6.0 Hz, 2H); 2.27-1.40 (s, 9H); 1.38 (s, 9H); 1.32-1.17 (m, 4H).
13C NMR (CDCl3, 75 MHz): δ (ppm) 169.7 (2C); 157.7; 156.1; 148.1; 135.4; 130.0; 128.1 (2C); 127.7; 127.2 (2C); 115.1; 104.4; 78.7 (2C); 70.3; 50.5; 46.5; 44.6; 38.6; 34.5; 29.4; 27.9 (6C); 25.0.
MS (ESI +): m/z = [M + H] 573.2; [M + Na] 595.1.
HRMS (ESI +): m/z C30H44N4O7Na [M + Na]の計算値 = 595.3108; 実測値 = 595.3098.
化合物23b: 1H NMR (CDCl3, 300 MHz): δ (ppm) 7.36-7.25 (m, 5H); 7.06 (dd, J1 = 6.9 Hz, J2 = 1.5 Hz, 1H); 6.99 (s, 1H); 6.66 (dd, J1 = 7.5 Hz, J2 = 1.5 Hz, 1H); 6.00 (t, J = 7.2 Hz, 1H); 5.00 (s, 1H); 5.00 (s, 2H); 4.83-4.80 (s, 1H); 4.21 (t, J = 6.3 Hz, 2H); 3.50-3.48 (m, 1H); 3.07-3.00 (m, 4H); 2.65 (t, J = 6.0 Hz, 2H); 1.38 (s, 18H); 1.33-1.23 (m, 6H).
13C NMR (CDCl3, 75 MHz): δ (ppm) 170.1 (2C); 158.1 (2C); 148.5; 135.9; 130.3; 128.5 (2C); 128.1; 127.4 (2C); 115.6; 104.7; 79.2 (2C); 70.6; 51.1; 47.0; 44.6; 38.8; 35.0; 32.0; 28.9; 28.3 (6C); 22.7.
MS (ESI +): m/z = [M + H] 587.5; [M + Na] 609.3.
HRMS (ESI +): m/z C31H46N4O7Na [M + Na]の計算値 = 609.3264; 実測値 = 609.3254.
化合物23c: 1H NMR (CDCl3, 300 MHz): δ (ppm) 7.40 (s, 1H); 7.38-7.25 (m, 5H); 6.95 (d, J = 6.0 Hz, 1H); 6.67 (d, J = 6.8 Hz, 1H); 6.10 (t, J = 7.2 Hz, 1H); 5.40-5.23 (s, 2H); 5.03 (s, 2H); 4.00 (t, J = 5.1 Hz, 2H); 3.61-3.59 (m, 1H); 3.11 (m, 4H); 2.33-2.26 (m, 2H); 1.87-1.61 (m, 4H); 1.35 (s, 18H).
13C NMR (CDCl3, 75 MHz): δ (ppm) 172.3 (2C); 156.4; 156.2; 148.2; 135.6; 128.5; 128.2 (2C); 128.0; 127.8 (2C); 115.5; 105.8; 79.0 (2C); 70.4; 50.9; 46.8; 44.2; 35.7; 32.6; 30.3; 28.8; 28.0 (6C).
MS (ESI +): m/z = [M + H] 573.5; [M + Na] 595.4.
HRMS (ESI +): m/z C30H44N4O7Na [M + Na]の計算値 = 595.3108; 実測値 = 595.3078.
化合物23d: 1H NMR (CDCl3, 300 MHz): δ (ppm) 7.32-7.18 (m, 5H); 7.01 (d, J = 6.1 Hz, 1H); 6.56 (d, J = 5.4 Hz, 1H); 5.92 (t, J = 6.9 Hz, 1H); 5.62-5.60 (s, 1H); 5.03-4.97 (s, 1H); 4.97 (s, 2H); 4.14 (t, J = 6.3 Hz, 2H); 3.81-3.79 (m, 1H); 3.54-3.32 (m, 8H); 3.23-3.13 (m, 2H); 2.79 (t, J = 6.0 Hz, 2H); 2.57-2.38 (m, 2H); 1.30 (s, 18H). 13C NMR (CDCl3, 75 MHz): δ (ppm) 168.7; 168.6; 157.8; 156.2; 155.2; 142.0; 135.6; 129.8; 128.1 (2C); 127.5; 126.8 (2C); 115.1; 104.1, 79.1 (2C); 70.2; 48.6; 46.7; 44.8 (2C); 43.1; 41.0 (2C); 34.7; 31.2; 27.9 (6C). MS (ESI +): m/z = [M + H] 642.3; [M + Na] 664.3.
HRMS (ESI +): m/z C33H47N5O8Na [M + Na]の計算値 = 664.3322; 実測値 = 664.3322.
化合物23e: 1H NMR (CDCl3, 400 MHz): δ (ppm) 7.38 (d, J = 7.1 Hz, 2H); 7.32 (t, J = 7.5 Hz, 2H); 7.26 (t, J = 7.8 Hz, 1H); 7.27 (m, 1H); 6.65 (d, J = 7.5 Hz, 1H); 6.05 (t, J = 7.0 Hz, 1H); 5.06 (s, 2H); 5.04-5.02 (s, 2H); 4.76-4.69 (m, 2H); 3.75-3.41 (m, 9H); 3.17-3.14 (m, 2H); 2.40-2.34 (m, 2H); 1.85-1.63 (m, 2H); 1.39 (s, 18H).
13C NMR (CDCl3, 100 MHz): δ (ppm) 171.3; 165.6 (2C); 158.0; 156.1; 148.3; 135.9; 129.6; 128.5 (2C); 127.9; 127.2 (2C); 115.9; 104.8; 79.3 (2C); 70.7; 51.4; 49.2; 45.2; 44.8; 44.4; 42.0; 41.4; 29.7; 28.3 (6C); 27.8.
MS (ESI +): m/z = [M - Boc + 2H] 542.3; [M + H] 642.3; [M + Na] 664.3.
HRMS (ESI +): m/z C33H47N5O8Na [M + Na]の計算値 = 664.3322; 実測値 = 664.3324.
化合物23f: 1H NMR (CDCl3, 300 MHz): δ (ppm) 7.42 (d, J = 6.6 Hz, 2H); 7.37-7.28 (m, 3H); 7.11 (d, J = 5.9 Hz, 1H); 6.65 (d, J = 6.2 Hz, 1H); 6.02 (t, J = 7.2 Hz, 1H); 5.08 (s, 2H); 4.94-4.93 (s, 2H); 4.24 (t, J = 6.3 Hz, 2H); 3.54-3.32 (m, 9H); 3.17 (t, J = 5.4 Hz, 2H); 2.89 (t, J = 6.3 Hz, 2H); 2.41-2.34 (m, 2H); 1.94-1.82 (m, 2H); 1.40 (s, 18H).
13C NMR (CDCl3, 75 MHz): δ (ppm) 171.4 (2C); 158.6; 156.7; 149.1; 140.1; 138.2; 130.7; 128.9 (2C); 128.4; 127.7 (2C); 115.9; 104.9; 87.1; 87.0; 71.1; 51.8; 47.6; 45.9 (2C); 45.0; 41.9 (2C); 32.0; 30.1; 28.7 (6C); 28.3.
MS (ESI +): m/z = [M + H] 656.3; [M + Na] 678.3.
HRMS (ESI +): m/z C34H49N5O8Na [M + Na]の計算値 = 678.3479; 実測値 = 678.3474.
化合物23g: 1H NMR (CD3OD, 300 MHz): δ (ppm) 7.61 (d, J = 7.5 Hz, 1H); 7.41-7.31 (m, 5H); 6.46 (d, J = 7.5 Hz, 1H); 5.05 (s, 2H); 4.68 (s, 2H); 3.58-3.54 (m, 1H); 3.23-3.18 (m, 2H); 3.12-2.97 (m, 2H); 2.07 (s, 3H); 1.58-1.30 (m, 22H).
13C NMR (CD3OD, 75 MHz): δ (ppm) 175.6; 168.5; 163.7; 158.7; 147.3; 145.9; 143.0; 138.8; 130.4 (2C); 129.8 (2C); 129.6; 117.4; 80.4; 80.3; 75.0; 57.2; 52.2; 45.8; 40.9; 31.2; 29.1 (6C); 27.2; 13.3.
MS (ESI +): m/z = [M + Na] 595.3.
HRMS (ESI +): m/z C30H44N4O7Na [M + Na]の計算値 = 595.3108; 実測値 = 595.3121.
化合物23h: 1H NMR (CD3OD, 300 MHz): δ (ppm) 7.62 (d, J = 7.2 Hz, 1H); 7.42-7.32 (m, 5H); 6.47 (d, J = 7.2 Hz, 1H); 5.06 (s, 2H); 4.68 (s, 2H); 3.56-3.54 (m, 1H); 3.23-3.18 (m, 2H); 3.14-2.98 (m, 2H); 2.08 (s, 3H); 1.49-1.35 (m, 24H).
13C NMR (CD3OD, 75 MHz): δ (ppm) 175.3; 168.2; 161.1; 158.7; 147.0; 145.6; 142.7; 138.5; 130.2 (2C); 129.5 (2C); 129.3; 117.1; 80.1; 80.0; 74.7; 56.9; 52.1; 45.5; 40.6; 33.1; 30.1; 28.9 (6C); 24.4; 13.0.
MS (ESI +): m/z = [M + Na] 609.3.
HRMS (ESI +): m/z C31H46N4O7Na [M + Na]の計算値 = 609.3264; 実測値 = 609.3271.
化合物23i: 1H NMR (CDCl3, 400 MHz): δ (ppm) 7.70 (s, 1H); 7.37-7.30 (m, 6H); 6.28 (d, J = 5.6 Hz, 1H); 5.40 (s, 1H); 5.18 (s, 1H); 5.06 (s, 2H); 4.10-4.06 (m, 2H); 3.51-3.49 (m, 1H); 3.24-3.04 (m, 4H); 2.65-2.50 (m, 4H); 2.12 (s, 3H); 1.44-1.37 (m, 4H); 1.37 (s, 18H).
13C NMR (CDCl3, 75 MHz): δ (ppm) 173.6; 169.1; 157.0; 156.4; 145.8; 141.6; 139.2; 137.2; 128.9; 128.4 (2C); 128.3 (2C); 116.9; 79.2 (2C); 72.9; 52.3; 50.1; 44.4; 39.1; 36.2; 35.0; 31.9; 28.4 (6C); 22.7; 12.4.
MS (ESI +): m/z = [M + H] 601.3; [M + Na] 623.3.
HRMS (ESI +): m/z C32H49N4O7 [M + H]の計算値 = 601.3601; 実測値 = 601.3621.
化合物23j: 1H NMR (CDCl3, 300 MHz): δ (ppm) 7.58-7.55 (s, 1H); 7.37-7.24 (m, 6H); 6.32 (d, J = 5.6 Hz, 1H); 5.47-5.45 (s, 2H); 5.08 (s, 2H); 3.80-3.77 (m, 2H); 3.54-3.53 (m, 1H); 3.24-3.10 (m, 4H); 2.22 (t, J = 4.9 Hz, 2H); 2.03 (s, 3H); 1.93-1.70 (m, 4H); 1.36 (s, 18H).
13C NMR (CDCl3, 75 MHz): δ (ppm) 173.8; 173.3; 156.9 (2C); 146.3; 141.4; 139.0; 137.4; 129.0 (2C); 128.4 (2C); 128.2; 117.1; 79.6 (2C); 73.1; 51.9; 51.3; 44.4; 36.2; 32.9; 30.7; 29.2; 28.4 (6C), 12.4.
MS (ESI +): m/z = [M + H] 587.3; [M + Na] 609.3.
HRMS (ESI +): m/z C31H46N4O7Na [M + Na]の計算値 = 609.3264; 実測値 = 609.3265.
化合物23k: 1H NMR (CDCl3, 400 MHz): δ (ppm) 7.35-7.28 (m, 6H); 6.42 (d, J = 7.2 Hz, 1H); 5.17 (s, 2H); 5.03 (s, 2H); 4.83 (m, 2H); 3.60-3.42 (m, 9H); 3.19 (m, 2H); 2.43-2.37 (m, 2H); 2.04 (s, 3H); 1.88-1.67 (m, 2H); 1.43 (s, 18H).
13C NMR (CDCl3, 100 MHz): δ (ppm) 173.1; 171.4; 164.5; 157.0; 156.3; 145.6; 144.1; 140.8; 137.6; 129.0 (2C); 128.7 (2C); 128.4; 116.3; 79.6 (2C); 73.8; 55.3; 51.6; 45.1; 44.7; 42.5; 41.7; 41.4; 29.7; 28.6 (6C); 28.0; 13.0.
MS (ESI +): m/z = [M + H] 656.4; [M + Na] 678.3.
HRMS (ESI +): m/z C34H49N5O8Na [M + Na]の計算値 = 678.3479; 実測値 = 678.3464.
【０１３１】
γ-  ピペラジンとのアスパラギン酸及びグルタミン酸に由来するシントンのカップリング(スキーム5)
【０１３２】
【化２５】
2018521067.tif 000032
【０１３３】
ベンジルピペラジン-1-カルボキシレートを、t-ブチル4-ベンジルオキシカルボニルピペラジン-1-カルボキシレートの方法によるDenerら(WO 1998/04537 A1)により開発された方法に準じることによって合成した。このようにしてt-ブチルピペラジン-1-カルボキシレートを、Moussaら(J. Med. Chem.、2010年、53巻、6228〜6239頁)によって記載された手順にしたがって得る。次いで、これ(18.8mmol)を、ジクロロメタン(50mL)中のトリエチルアミン(1.2当量)と、0℃で10分間反応させる。次いで、ベンジルクロロホルメート(1.2当量)のジクロロメタン(30mL)の溶液を媒体に加え、室温で18時間、撹拌下におく。次いで、ジクロロメタンを減圧下蒸発させ、残留物を酢酸エチルに入れる。最後に、有機相を1MのKHSO4溶液及び5%のNaHCO3溶液、次いでNaCl飽和溶液で洗浄し、Na2SO4で乾燥し、最後に、減圧下蒸発させて、シリカカラム(CH2Cl2/MeOH 99:1)での精製後、t-ブチル4-ベンジルオキシカルボニルピペラジン-1-カルボキシレートを白色粉末の形態で得る(87%)。最後に、この中間体(10.9mmol)を、市販の4NのHClの1,4-ジオキサン溶液(20当量)の存在中、1,4-ジオキサン(15mL)に溶解する。次いで、反応媒体を、室温で45分間、撹拌下におく。1,4-ジオキサンを、減圧下蒸発させ、残留物をエーテル中で粉砕して、真空下でろ過後、ベンジルピペラジン-1-カルボキシレートを、白色粉末の形態で得る(92%)。
【０１３４】
*化合物24及び化合物25:
第1工程:化合物9又は化合物10(3.1〜4.5mmol)のジクロロメタン(25〜30mL)の溶液に、N-ヒドロキシスクシンイミド(1.2〜1.5当量)及びDCC(1.1〜1.2当量)を続けて添加する。反応媒体を、室温で1時間30分〜24時間撹拌下で維持し、次いで、真空下でろ過する。次いで、ろ液を減圧下蒸発させて、酸の活性化中間体を得る。
【０１３５】
第2工程:ベンジルピペラジン-1-カルボキシレート(1.2当量)をジクロロメタン(40mL)に溶解し、トリエチルアミン(3当量)と、室温で30分間反応させる。次いで、酸の活性化中間体(1当量)を、反応媒体に加え、次いで、室温で15〜24時間、撹拌下におく。次いで、有機相を、1NのHCl溶液、次いでNaHCO3飽和溶液及びNaCl飽和溶液で洗浄し、Na2SO4で乾燥し、最後に、減圧下蒸発させて、シリカカラム(CH2Cl2/MeOH 98:2)での精製後、化合物24又は化合物25を白色粉末の形態で得る(77%又は97%)。
【０１３６】
化合物24: 1H NMR (CDCl3, 300 MHz): δ (ppm) 7.33 (m, 5H); 5.69 (s, 1H); 5.12 (s, 2H); 5.03 (s, 1H); 3.89 (m, 1H); 3.62-3.45 (m, 10H); 2.65-2.41 (m, 2H); 1.40 (s, 18H).
13C NMR (CDCl3, 75 MHz): δ (ppm) 173.0; 163.7; 161.1; 147.7; 132.4; 128.9 (2C); 128.5; 128.3 (2C); 81.2 (2C); 67.8; 49.7; 45.9; 44.1 (2C); 41.8 (2C); 35.3; 28.7 (6C).
MS (ESI +): m/z = [M + H] 521.3; [M + Na] 543.2.
HRMS (ESI +): m/z C26H40N4O7Na [M + Na]の計算値 = 543.2795; 実測値 = 543.2794.
化合物25: 1H NMR (CDCl3, 300 MHz): δ (ppm) 7.36-7.32 (m, 5H); 5.13 (s, 2H); 4.92 (s, 2H); 3.60-3.44 (m, 9H); 3.20-3.16 (m, 2H); 2.41-2.38 (m, 2H); 1.83-1.81 (m, 2H); 1.40 (s, 18H).
13C NMR (CDCl3, 75 MHz): δ (ppm) 170.8; 164.1; 163.8; 154.7; 136.0; 128.2 (2C); 127.8; 127.6 (2C); 79.0 (2C); 67.1; 51.1; 44.8 (2C); 44.3; 43.4; 41.1 (2C); 29.2; 28.0 (6C); 27.5.
MS (ESI +): m/z = [M + H] 535.3; [M + Na] 557.3.
HRMS (ESI +): m/z C27H42N4O7Na [M + Na]の計算値 = 557.2951; 実測値 = 557.2945.
【０１３７】
*化合物26及び化合物27:
化合物24又は化合物25(0.7〜2.7mmol)のメタノール(8〜30mL)の溶液に、Pd/C(10%m/m)を添加する。反応媒体を、真空下、室温で30分間撹拌下におき、次いで、6時間、H2流下で維持する。次いで、紙上でろ過し、メタノールを、減圧下蒸発させて、誘導体26又は誘導体27をそれぞれ白色粉末の形態で得る(100%又は96%)。
化合物26: 1H NMR (CDCl3, 300 MHz): δ (ppm) 7.33 (s, 1H); 5.69-5.66 (s, 1H); 5.12 (s, 1H); 3.89-3.88 (m, 1H); 3.66-3.23 (m, 8H); 2.93-2.83 (m, 2H); 2.67-2.43 (m, 2H); 1.41 (s, 18H).
13C NMR (CDCl3, 75 MHz): δ (ppm) 167.1; 157.5; 155.4; 79.1 (2C); 48.6; 45.0; 44.6; 43.1; 40.9; 34.8; 27.9 (6C).
MS (ESI +): m/z = [M + H] 387.3; [M + Na] 409.3.
HRMS (ESI +): m/z C18H34N4O5Na [M + Na]の計算値 = 409.2427; 実測値 = 409.2418.
化合物27: 1H NMR (CDCl3, 300 MHz): δ (ppm) 5.13-5.09 (s, 2H); 3.56-3.52 (m, 3H); 3.39-3.36 (m, 2H); 3.15-3.12 (m, 2H); 2.80-2.76 (m, 4H); 2.37-2.31 (m, 2H); 1.81-1.63 (m, 2H); 1.37 (s, 18H).
13C NMR (CDCl3, 75 MHz): δ (ppm) 170.8; 156.5; 156.2; 80.3; 79.1; 51.3; 46.0; 45.3; 44.5; 42.6; 41.5; 29.4; 28.2 (6C); 27.7.
MS (ESI +): m/z = [M + H] 401.4; [M + Na] 423.3.
HRMS (ESI +): m/z C19H36N4O5Na [M + Na]の計算値 = 423.2583; 実測値 = 423.2573.
【０１３８】
b)フェルラ酸又は没食子酸に由来する基を持つ化合物
α-  没食子酸に由来するシントンR'a-OHの調製
没食子酸からのフェノール性基の3つのO-ベンジル化は、文献(Carbohydr. Res.、2007年、342巻、1510〜1513頁)に記載されている。
【０１３９】
β-  没食子酸に由来するR'a基の脱ベンジル化(スキーム6)
【０１４０】
【化２６】
2018521067.tif 000033
【０１４１】
化合物22a又は化合物22b(0.5mmol)のメタノール(20mL)の懸濁液に、Pd/C(10%m/m)を添加する。反応媒体を、真空下、室温で30分間撹拌下におき、次いで、6時間、H2流下で維持する。次いで、紙上でろ過し、メタノールを、減圧下蒸発させて、誘導体28a又は誘導体28b(出発生成物とは異なってメタノールに可溶性)をそれぞれ白色粉末又はオレンジ色油状物の形態で得る(99%又は100%)。
化合物28a: 1H NMR (CD3OD, 400 MHz): δ (ppm) 6.45 (s, 2H); 3.59-3.43 (m, 8H); 3.32-3.31 (m, 1H); 3.06-3.01 (m, 2H); 2.47-2.45 (m, 2H); 2.01-1.70 (m, 2H); 1.43 (s, 18H).
13C NMR (CD3OD, 100 MHz): δ (ppm) 172.4; 171.9; 157.3 (2C); 157.0; 145.8 (2C); 135.3; 125.0; 106.3 (2C); 78.7 (2C); 50.5; 45.1 (2C); 43.8; 42.3 (2C); 33.5; 29.1; 27.4 (6C).
MS (ESI +): m/z = [M + H] 553.1; [M + Na] 575.1.
HRMS (ESI +): m/z C26H40N4O9Na [M + Na]の計算値 = 575.2693; 実測値 = 575.2719.
化合物28b: 1H NMR (CDCl3, 300 MHz): δ (ppm) 7.25 (s, 3H); 6.84 (s, 2H); 5.43 (s, 1H); 5.24-5.21 (s, 2H); 3.15-3.04 (m, 5H); 1.41-1.35 (m, 22H); 1.20-1.16 (m, 2H).
13C NMR (CDCl3, 75 MHz): δ (ppm) 168.4; 156.7; 156.4; 144.3 (2C); 135.7; 124.6; 106.9 (2C); 79.1 (2C); 50.7; 44.2; 39.5; 31.9; 29.2; 27.9 (6C); 22.6.
MS (ESI +): m/z = [M + H] 484.2; [M + Na] 506.3.
HRMS (ESI +): m/z C23H37N3O8Na [M + Na]の計算値 = 506.2478; 実測値 = 506.2501.
【０１４２】
γ-  ジアミン基の最後の脱保護(スキーム7)
【０１４３】
【化２７】
2018521067.tif 000034
【０１４４】
化合物21a、化合物21b、化合物28a又は化合物28b(0.3〜0.4mmol)を、市販の4NのHClの1,4-ジオキサン溶液(20当量)の存在中、1,4-ジオキサン(7〜12mL)に溶解する。次いで、反応媒体を、室温で45分〜6時間、撹拌下におく。1,4-ジオキサンを減圧下蒸発させ、残留物をエーテル中で粉砕する。真空下で蒸発後(高吸湿性の生成物)、得られた沈殿物を凍結乾燥して、誘導体29a、誘導体29b、誘導体30a又は誘導体30bをそれぞれ黄色粉末又はベージュ色粉末の形態で得る(75%、66%、100%又は57%)。
化合物29a: 1H NMR (d6-DMSO, 300 MHz): δ (ppm) 9.52 (s, 1H); 8.57 (s, 2H); 8.46 (s, 2H); 7.44 (d, J = 15.0 Hz, 1H); 7.33 (s, 1H); 7.10 (m, 2H); 6.79 (d, J = 8.4 Hz, 1H); 3.83 (s, 3H); 3.71-3.45 (m, 9H); 3.12 (m, 2H); 2.60-2.58 (m, 2H); 1.89 (m, 2H).
13C NMR (d6-DMSO, 75 MHz): δ (ppm) 169.7; 165.0; 162.9; 148.5; 142.4; 126.4; 122.5; 115.3; 114.2; 111.2; 55.7; 48.7; 39.7 (5C); 28.1; 25.3.
MS (ESI +): m/z = [M + H] 377.2.
HRMS (ESI +): m/z C19H29N4O4 [M + H]の計算値 = 377.2189; 実測値 = 377.2198.
化合物29b: 1H NMR (d6-DMSO, 300 MHz): δ (ppm) 8.49 (s, 4H); 8.11-8.09 (s, 1H); 7.30 (d, J = 15.9 Hz, 1H); 7.11 (d, J = 1.8 Hz, 1H); 6.97 (dd, J1 = 8.4 HzおよびJ2 = 1.8 Hz, 1H); 6.79 (d, J = 8.1 Hz, 1H); 6.49 (d, J = 15.9 Hz, 1H); 3.78 (s, 3H); 3.42-3.39 (m, 1H); 3.17-3.05 (m, 4H); 1.64-1.62 (m, 2H); 1.46-1.40 (m, 4H).
13C NMR (d6-DMSO, 75 MHz): δ (ppm) 165.3; 148.2; 147.7; 138.7; 126.3; 121.4; 119.0; 115.6; 110.7; 55.4; 48.9; 38.1 (2C); 29.5; 28.6; 21.7.
MS (ESI +): m/z = [M + H] 308.1.
HRMS (ESI +): m/z C16H26N3O3 [M + H]の計算値 = 308.1974; 実測値 = 308.1986.
化合物30a: 1H NMR (d6-DMSO, 300 MHz): δ (ppm) 8.65 (s, 2H); 8.55 (s, 2H); 6.37 (s, 2H); 3.49-3.48 (m, 9H); 3.13 (m, 2H); 2.59 (t, J = 4.8 Hz, 2H); 1.90-1.88 (m, 2H).
13C NMR (d6-DMSO, 75 MHz): δ (ppm) 169.5; 169.3; 145.3 (2C); 134.5; 124.9; 106.3 (2C); 48.5; 40.0 (2C); 39.7; 38.3; 27.8; 25.0.
MS (ESI +): m/z = [M + H] 352.9.
HRMS (ESI +): m/z C16H25N4O5 [M + H]の計算値 = 353.1825; 実測値 = 353.1813.
化合物30b: 1H NMR (d6-DMSO, 300 MHz): δ (ppm) 8.47 (s, 4H); 8.11 (s, 1H); 6.82 (s, 2H); 3.24-3.07 (m, 5H); 1.65-1.35 (m, 6H).
13C NMR (d6-DMSO, 75 MHz): δ (ppm) 166.5; 145.4; 136.1; 125.0; 106.8 (2C); 49.0; 40.4 (2C); 29.6; 28.8; 21.8.
MS (ESI +): m/z = [M + H] 284.2.
HRMS (ESI +): m/z C13H22N3O4 [M + H]の計算値 = 284.1610; 実測値 = 284.1612.
【０１４５】
c)ヒドロキシピリジノン基22を持つ化合物
α-  シントンR'a-OH及びR'a-NHRbの調製
*3-ベンジルオキシピリジン-2-オンタイプのシントンR'a-OH及びR'a-NHRbの調製(スキーム7):
【０１４６】
【化２８】
2018521067.tif 000035
【０１４７】
*化合物31(Synthesis、2011年、57〜64頁):
2,3-ジヒドロキシピリジン(135mmol)のアセトニトリル(120mL)の溶液に、フッ化セシウム(0.1当量)及びアクリロニトリル(3当量)を添加する(Tetrahedron Lett.、2002年、43巻、7379〜7383頁;Synthesis、2011年、57〜64頁)。反応媒体を、16時間加熱還流する。次いで、アセトニトリルを減圧下蒸発させ、所望の生成物を、酢酸エチルを使用して、抽出する。有機相を、10%のNa2CO3溶液、次いでNaCl飽和溶液で洗浄し、Na2SO4で乾燥し、最後に、減圧下蒸発させて、AcOEt/シクロヘキサンの50:50混合物中での再結晶後、誘導体31を白色粉末の形態で得る(93%)。
【０１４８】
*化合物32(Synthesis、2011年、57〜64頁):
誘導体32を、2011年のArumugamら(Synthesis、2011年、57〜64頁)によって記載された合成にしたがって調製した。
【０１４９】
*化合物33a(J. Med. Chem.、1990年、33巻、1749〜1755頁、Molecules、2015年、20巻、19393〜19405頁):
第1工程:2,3-ジヒドロキシピリジン(50mmol)をエチルブロモアセテート(5当量)に添加する。次いで、反応媒体を、Ar下、48時間加熱還流し、最後に、酢酸エチル中での沈殿及び真空下でのろ過後、所望の生成物を得る。
【０１５０】
第2工程:この中間体(18mmol)のMeOH/H2Oの9:1混合物(150mL)の溶液に、10.5NのNaOH溶液(2当量)を添加する。次いで、反応媒体を、30分間加熱還流する。次いで、塩化ベンジル(2当量)を、室温で30分かけて、滴下して加え、混合物を、再度、18時間加熱還流する。真空下でのろ過、及び減圧下でのメタノールの蒸発後、水性相を、ジクロロメタンを使用して抽出し、次いで、6NのHClを使用して酸性化する。最後に、所望の生成物を、ジクロロメタンを使用して抽出する。有機相を、NaCl飽和溶液で洗浄し、Na2SO4で乾燥し、減圧下蒸発させて、誘導体33aを白色粉末の形態で得る(36%)。
【０１５１】
°化合物33b:
化合物32(1当量)の水(20mL/mmol)の溶液に、水酸化ナトリウム(12.5当量)を添加する。次いで、反応媒体を1時間加熱還流し、次いで、酢酸エチルを使用して抽出して、残った原料物質を除去する。次いで、水性相を、6NのHCl溶液を使用して酸性化し、所望の化合物を、酢酸エチルを使用して抽出する。有機相を、NaCl飽和溶液を使用して洗浄し、Na2SO4で乾燥し、最後に、減圧下蒸発させて、誘導体33を黄色がかった粉末の形態で得る(65%)。
化合物33b: 1H NMR (CDCl3, 300 MHz): δ (ppm) 7.43-7.32 (m, 5H); 7.25 (dd, J1 = 6.9 HzおよびJ2 = 1.5 Hz, 1H); 6.87 (dd, J1 = 7.3 HzおよびJ2 = 1.8 Hz, 1H); 6.09 (t, J = 7.2 Hz, 1H); 4.99 (s, 2H); 4.07 (t, J = 6.9 Hz, 2H); 2.65 (t, J = 6.9 Hz, 2H).
13C NMR (CDCl3, 75 MHz): δ (ppm) 171.9; 156.5; 147.5; 136.2; 130.1; 128.0 (2C); 127.5; 127.4 (2C); 115.1; 103.4; 69.4; 45.0; 32.5.
MS (ESI +): m/z = [M + H] 273.8.
HRMS (ESI +): m/z C15H15NO4Na [M + Na]の計算値 = 296.0899; 実測値 = 296.0893.
【０１５２】
*化合物34:
0℃で撹拌下においた化合物32(7.9mmol)のメタノール(80mL)の溶液に、ジ-t-ブチルジカーボネート(2当量)及びNiCl2.6H2O(0.1当量)を添加する。次いで、水素化ホウ素ナトリウム(7当量)を、30分かけて少量ずつ加え、混合物を、室温で1時間、撹拌下におく。ジエチレントリアミン(1当量)の添加及び再度1時間の撹拌後、メタノールを減圧下蒸発させ、所望の生成物を、酢酸エチルを使用して抽出する。有機相を、NaHCO3飽和溶液、次いでNaCl飽和溶液で洗浄し、Na2SO4で乾燥し、最後に、減圧下蒸発させて、誘導体34を白色がかった粉末の形態で得る(84%)。
化合物34: 1H NMR (CDCl3, 400 MHz): δ (ppm) 7.33 (d, J = 7.6 Hz, 2H); 7.25 (t, J = 6.8 Hz, 2H); 7.19 (t, J = 6.8 Hz, 1H); 6.80 (d, J = 6.3 Hz, 1H); 6.55 (d, J = 7.4 Hz, 1H); 5.96 (t, J = 7.3 Hz, 1H); 5.49 (s, 1H); 5.01 (s, 2H); 3.95 (t, J = 6.3 Hz, 2H); 3.01-2.96 (m, 2H); 1.81-1.75 (m, 2H); 1.33 (s, 9H).
13C NMR (CDCl3, 100 MHz): δ (ppm) 158.3; 155.9; 148.5; 135.8; 128.4; 128.3 (2C); 127.8; 127.1 (2C); 115.1; 105.2; 78.6; 70.5; 46.0; 36.3; 29.7; 28.3 (3C).
MS (ESI +): m/z = [M + H] 358.9; [M + Na] 380.9.
HRMS (ESI +): m/z C20H26N2O4Na [M + Na]の計算値 = 381.1790; 実測値 = 381.1782.
【０１５３】
*化合物35:
化合物34(2.4mmol)を、市販の4NのHClの1,4-ジオキサン溶液(20当量)の存在中、1,4-ジオキサン(10mL)に溶解する。次いで、反応媒体を、室温で18時間、撹拌下におく。1,4-ジオキサンを、減圧下蒸発させ、残留物をエーテル中で粉砕して、真空下でろ過後、誘導体35を、ベージュ色粉末の形態で得る(100%)。
化合物35: 1H NMR (d6-DMSO, 300 MHz): δ (ppm) 8.06-8.05 (s, 2H); 7.45-7.33 (m, 6H); 6.93 (d, J = 7.5 Hz, 1H); 6.18 (t, J = 7.2 Hz, 1H); 5.01 (s, 2H); 4.00 (t, J = 6.9 Hz, 2H); 2.75 (t, J = 7.2 Hz, 2H); 1.98-1.93 (m, 2H).
13C NMR (d6-DMSO, 75 MHz): δ (ppm) 175.1; 147.6; 136.1; 129.5; 128.0 (2C); 127.5 (3C); 115.3; 104.1; 69.4; 45.4; 35.9; 26.5.
MS (ESI +): m/z = [M + H] 259.1; [M + H + MeCN] 300.2.
HRMS (ESI +): m/z C15H19N2O2 [M + H]の計算値 = 259.1436; 実測値 = 259.1447.
【０１５４】
°化合物39:
化合物34(1.5mmol)のDMF(3mL)の溶液に、水素化ナトリウム(1.4当量)を添加する。室温で10分間撹拌後、ヨウ化メチル(1.2当量)を加え、混合物を、室温で18時間撹拌下におく(Org. Lett.、2014年、16巻、3196〜3199頁)。減圧下でDMFの蒸発後、残留物を酢酸エチルに入れる。有機相をNaCl飽和溶液で洗浄し、Na2SO4で乾燥し、最後に、減圧下蒸発させて、シリカカラム(AcOEt/MeOH 50:50)での精製後、誘導体39を黄色油状物の形態で得る(91%)。
化合物39: 1H NMR (CDCl3, 400 MHz): δ (ppm) 7.40 (d, J = 8.0 Hz, 2H); 7.31 (t, J = 8.5 Hz, 2H); 7.26 (t, J = 7.2 Hz, 1H); 6.93-6.86 (m, 1H); 6.61 (d, J1 = 7.4 HzおよびJ2 = 1.6 Hz, 1H); 5.99 (t, J = 7.1 Hz, 1H); 5.07 (s, 2H); 3.92 (t, J = 7.2 Hz, 2H); 3.27 (m, 2H); 2.82 (s, 3H); 1.96 (t, J = 7.2 Hz, 2H); 1.41 (s, 9H).
13C NMR (CDCl3, 100 MHz): δ (ppm) 158.2; 149.0; 136.4; 128.6 (2C); 128.0; 127.4 (2C); 115.5; 104.8; 79.6; 70.8; 47.8; 45.8; 34.1; 28.5 (3C); 27.1.
MS (ESI +): m/z = [M + H] 373.2; [M + Na] 395.2.
HRMS (ESI +): m/z C21H29N2O4 [M + H]の計算値 = 373.2127; 実測値 = 373.2137.
【０１５５】
*3-ベンジルオキシ-2-メチルピリジン-4-オンタイプのシントンR'a-OH及びR'a-NHRbの調製(スキーム8):
【０１５６】
【化２９】
2018521067.tif 000036
【０１５７】
°化合物40(J. Med. Chem.、1998年、41巻、3347〜3359頁、J. Inorg. Biochem.、2000年、78巻、303〜311頁):
マルトール(79.3mmol)のメタノール(80mL)の溶液に、10.5NのNaOHの溶液(1.1当量)を添加する。次いで、反応媒体を、30分間加熱還流する。次いで、塩化ベンジル(1.2当量)を、室温で30分かけて、滴下して加え、混合物を、再度18時間加熱還流する。真空下でろ過後、メタノールを減圧下蒸発させ、次いで、残留物を水に入れ、所望の生成物を、ジクロロメタンを使用して抽出する。有機相を、5%のNaOH溶液、次いで、NaCl飽和溶液で洗浄し、Na2SO4で乾燥し、最後に、減圧下蒸発させて、誘導体40を黄色油状物の形態で得る(88%)。
【０１５８】
°化合物41a(J. Heterocyclic Chem.、1994年、31巻、947〜56頁)及び化合物41b(J. Inorg. Biochem.、2000年、78巻、303〜311頁):
NaOH(3当量)のEtOH/H2Oの1:1混合物(100mL)の溶液に、化合物40(18.5mmol)及びグリシン酸ナトリウム又はβ-アラニン(2当量)を添加する(Bioconjugate Chem.、2005年、16巻、1597〜1609頁)。次いで、反応媒体を、18時間加熱還流する。エタノールの真空下での蒸発後、残留物を水に入れ、酢酸エチルを使用して抽出して、残った原料物質を除去する。次いで、水性相を減圧下濃縮し、6NのHCl溶液を使用して酸性化し、最後に、沈殿、真空下でのろ過及び水での洗浄後、誘導体41a又は誘導体41bを白色がかった粉末の形態で得る(48%又は45%)。
【０１５９】
°化合物42(Dalton Trans.、2004年、3772〜3781頁):
NaOH(0.5当量)のEtOH/H2Oの1:1混合物(20mL)の溶液に、化合物40(18.5mmol)及び1,3-ジアミノプロパン(1.1当量)を添加する。次いで、反応媒体を、18時間加熱還流する。エタノールの真空下での蒸発後、水性相を6NのHClを使用して酸性化し、酢酸エチルを使用して抽出して、残った原料物質を除去する。次いで、水性相を、6NのNaOH溶液を使用して中和し、所望の生成物を、酢酸エチルを使用して抽出する。有機相を、NaCl飽和溶液で洗浄し、Na2SO4で乾燥し、最後に、減圧下蒸発させる。市販の4NのHClの1,4-ジオキサン溶液(5当量)の存在中、1,4-ジオキサン(20mL)中、室温で2時間の中間体化合物の撹拌、及び1,4-ジオキサンの減圧下での蒸発後、得られた残留物を、エーテル中で粉砕して、誘導体42を白色粉末の形態で得る(48%)。
【０１６０】
β-  「リンカー」に対して行われた様々な薬理学的調節(pharmacomodulations)
*化合物23fのカルボニル基の還元(スキーム9):
【０１６１】
【化３０】
2018521067.tif 000037
【０１６２】
化合物23f(1mmol)のTHF(100mL)の溶液に、2Mのボラン/ジメチルスルフィドの錯体のTHF溶液(5当量)を滴下添加する(J. Med. Chem.、2005年、48巻、3891〜3902頁)。次いで、反応媒体を、2時間加熱還流する。冷却後、ボランを、MeOHを使用して捕捉し、混合物を、再度18時間加熱還流する。真空下でのMeOHの蒸発後、残留物を、EtOH/1NのNaOHの5:1混合物に入れ、2時間還流させる。エタノールの蒸発後、最後に、水性相を、酢酸エチルを使用して抽出する。有機相をNaCl飽和溶液で洗浄し、Na2SO4で乾燥し、減圧下蒸発させて、シリカカラム(AcOEt/MeOH 50:50)での精製後、誘導体43を無色油状物の形態で得る(44%)。
化合物43: 1H NMR (CDCl3, 400 MHz): δ (ppm) 7.40 (d, J = 7.3 Hz, 2H); 7.32 (t, J = 7.2 Hz, 2H); 7.26 (t, J = 7.8 Hz, 1H); 6.93 (d, J = 6.8 Hz, 1H); 6.61 (d, J = 7.4 Hz, 1H); 5.96 (t, J = 7.1 Hz, 1H); 5.27 (s, 3H); 5.08 (m, 2H); 4.98 (s, 1H); 3.99 (t, J = 6.8 Hz, 2H); 3.57 (m, 1H); 3.14 (m, 2H); 2.43-2.31 (m, 10H); 1.92 (t, J = 6.8 Hz, 2H); 1.54-1.52 (m, 2H); 1.40 (m, 20H).
13C NMR (CDCl3, 100 MHz): δ (ppm) 158.5 (2C); 149.0; 136.8; 129.8; 128.7 (2C); 128.1; 127.5 (2C); 115.7; 104.5; 79.4 (2C); 70.9; 58.2; 54.8 (2C); 53.4; 53.0; 51.2; 48.2; 45.1; 30.7; 29.9; 28.6 (6C); 26.0; 23.2.
MS (ESI +): m/z = [M + H] 628.3; [M + Na] 650.3.
HRMS (ESI +): m/z C34H54N5O6 [M + H]の計算値 = 628.4074; 実測値 = 628.4080.
【０１６３】
*化合物23cのN-メチル化類似物及び脱カルボニル化類似物の調製(スキーム10):
【０１６４】
【化３１】
2018521067.tif 000038
【０１６５】
°化合物44
第1工程:化合物39(0.7mmol)を、市販の4NのHClの1,4-ジオキサン溶液(20当量)の存在中、1,4-ジオキサン(2mL)に溶解する。次いで、反応媒体を、室温で6時間、撹拌下におく。ジオキサンを減圧下蒸発させ、残留物を、エーテル中で粉砕して、対応するアンモニア塩酸塩を、沈殿物の形態で得る。
【０１６６】
第2工程:0℃で撹拌下におかれた化合物10(0.8mmol)のDMF(20mL)の溶液に、1-エチル-3-(3-ジメチルアミノプロピル)-カルボジイミド塩酸塩(1.2当量)、1-ヒドロキシベンゾトリアゾール一水和物(1.1当量)を続けて添加する。0℃で30分間撹拌後、中間体のアミン誘導体(1当量)を、反応媒体中のトリエチルアミン(1.2当量)に入れ、次いで、室温で18時間、撹拌下で維持する。DMFを蒸発させ、残留物を酢酸エチルに入れた後、有機相を1NのHCl溶液、NaHCO3溶液、次いでNaCl飽和溶液で洗浄し、Na2SO4で乾燥し、最後に、減圧下蒸発させて、シリカカラム(AcOEt/MeOH 50:50)での精製後、化合物45を得る(89%)。
化合物44: 1H NMR (CDCl3, 400 MHz): δ (ppm) 7.39 (d, J = 7.1 Hz, 2H); 7.31 (t, J = 7.6 Hz, 2H); 7.27-7.25 (m, 1H); 7.01 (d, J = 6.5 Hz, 1H); 6.61 (d, J = 7.5 Hz, 1H); 5.99 (t, J = 7.1 Hz, 1H); 5.06 (s, 2H); 5.02 (m, 2H); 3.95-3.88 (m, 2H); 3.60-3.59 (m, 1H); 3.46-3.29 (m, 2H); 3.17-3.15 (m, 2H); 2.95 (s, 3H); 2.43-2.29 (m, 2H); 2.02-1.92 (m, 2H); 1.85-1.77 (m, 2H); 1.39 (s, 18H).
13C NMR (CDCl3, 100 MHz): δ (ppm) 173.0; 158.4 (2C); 149.2; 136.6; 129.7; 128.8 (2C); 128.3; 127.6 (2C); 115.9; 104.9; 79.5; 79.4; 71.0; 51.7; 48.1; 45.3; 45.1; 35.4; 30.1; 28.6 (6C); 27.9; 27.0.
MS (ESI +): m/z = [M + Na] 609.3.
HRMS (ESI +): m/z C31H46N4O7Na [M + Na]の計算値 = 609.3264; 実測値 = 609.3268.
【０１６７】
°化合物45
化合物44(0.5mmol)のTHF(30mL)の溶液に、2Mのボラン/ジメチルスルフィドの錯体のTHF溶液(2.5当量)を滴下添加する。次いで、反応媒体を、2時間加熱還流する。冷却後、ボランを、MeOHを使用して捕捉し、混合物を、再度18時間加熱還流する。真空下でのMeOHの蒸発後、残留物を、EtOH/1NのNaOHの5:1混合物に入れ、2時間還流させる。エタノールの蒸発後、最後に、水性相を、酢酸エチルを使用して抽出する。有機相をNaCl飽和溶液で洗浄し、Na2SO4で乾燥し、減圧下蒸発させて、シリカカラム(AcOEt/MeOH 70:30)での精製後、誘導体45を茶色粉末の形態で得る(82%)。
化合物45: 1H NMR (CDCl3, 400 MHz): δ (ppm) 7.41 (d, J = 7.3 Hz, 2H); 7.33 (t, J = 6.7 Hz, 2H); 7.26 (t, J = 6.8 Hz, 1H); 6.94 (d, J = 6.9 Hz, 1H); 6.63 (d, J = 7.4 Hz, 1H); 6.00 (t, J = 7.2 Hz, 1H); 5.08 (s, 2H); 5.08 (s, 2H); 5.06-5.01 (m, 2H); 3.99 (t, J = 6.7 Hz, 2H); 3.58 (m, 1H); 3.16-3.15 (m, 2H); 2.37-2.30 (m, 4H); 2.17 (s, 3H); 1.92 (t, J = 7.1 Hz, 2H); 1.51-1.50 (m, 2H); 1.40 (m, 20H).
13C NMR (CDCl3, 100 MHz): δ (ppm) 158.2 (2C); 149.0; 136.5; 129.6; 128.6 (2C); 128.0; 127.4 (2C); 115.7; 104.6; 79.3 (2C); 70.8; 57.2; 54.4; 51.3; 48.1; 45.0; 41.6; 30.7; 28.5 (6C); 23.4; 21.1.
MS (ESI +): m/z = [M + H] 573.4; [M + Na] 595.3.
HRMS (ESI +): m/z C31H49N4O6 [M + H]の計算値 = 573.3652; 実測値 = 573.3664.
【０１６８】
*アミド官能基を持たない脂肪族「リンカー」担体の調製(スキーム11):
【０１６９】
【化３２】
2018521067.tif 000039
【０１７０】
°化合物46:
NaOH(0.5当量)のEtOH/H2Oの1:1混合物(120mL)の溶液に、化合物40(5.1mmol)及び化合物20(0.7当量)を添加する。次いで、反応媒体を、24時間加熱還流する(Dalton Trans.、2004年、3772〜3781頁)。エタノールの真空下での蒸発後、水性相を6NのHClを使用して中和し、酢酸エチルを使用して抽出する。有機相をNaCl飽和溶液で洗浄し、Na2SO4で乾燥し、最後に、減圧下蒸発させて、シリカカラム(AcOEt/MeOH 90:10)での精製後、誘導体46を黄色粉末の形態で得る(61%)。
化合物46: 1H NMR (CDCl3, 400 MHz): δ (ppm) 7.38 (d, J = 6.7 Hz, 2H); 7.32-7.26 (m, 3H); 7.16 (d, J = 7.5 Hz, 1H); 6.39 (d, J = 7.5 Hz, 1H); 5.03 (s, 2H); 4.95-4.93 (s, 2H); 3.71-3.76 (m, 2H); 3.59 (m, 1H); 3.14 (m, 2H); 2.06 (s, 3H); 1.66-1.55 (m, 2H); 1.40-1.35 (m, 22H).
13C NMR (CDCl3, 100 MHz): δ (ppm) 173.5; 156.6 (2C); 146.4; 141.0; 138.3; 137.9; 129.3 (2C); 128.4 (2C); 128.1; 117.5; 79.7 (2C); 73.1; 53.9; 51.2; 44.7; 32.6; 30.9; 28.5 (6C); 23.0; 12.5.
MS (ESI +): m/z = [M + H] 530.3.
HRMS (ESI +): m/z C29H44N3O6 [M + H]の計算値 = 530.3230; 実測値 = 530.3245.
【０１７１】
γ- R'a基の脱ベンジル化(スキーム12)
【０１７２】
【化３３】
2018521067.tif 000040
【０１７３】
化合物23a〜k、化合物43、化合物45又は化合物46(0.2〜1.6mmol)のメタノール(5〜40mL)の溶液に、Pd/C(10%m/m)を添加する。反応媒体を、真空下、室温で30分間撹拌下におき、次いで、6時間、H2流下で維持する。次いで、紙上でろ過し、メタノールを、減圧下蒸発させて、誘導体36a〜nを得る(60%〜100%)(Table 3(表3))。
【０１７４】
【表３Ａ】
2018521067.tif 000041
【０１７５】
【表３Ｂ】
2018521067.tif 000042
【０１７６】
化合物36a: 1H NMR (CDCl3, 600 MHz): δ (ppm) 6.95 (d, J = 6.7 Hz, 1H); 6.92 (s, 1H); 6.82 (d, J = 7.2 Hz, 1H); 6.14 (t, J = 7.1 Hz, 1H); 5.18 (s, 1H); 5.04-5.03 (s, 1H); 4.25 (m, 2H); 3.56-3.54 (m, 1H); 3.17-3.16 (m, 2H); 3.09 (m, 2H); 2.68 (t, J = 6.4 Hz, 2H); 1.50-1.40 (m, 22H).
13C NMR (CDCl3, 150 MHz): δ (ppm) 170.3; 158.7; 157.0; 156.7; 146.7; 128.6; 115.2; 107.2; 79.7 (2C); 50.8; 47.3; 44.8; 39.5; 35.5; 29.9; 28.6 (6C); 25.7.
MS (ESI +): m/z = [M + H] 483.3; [M + Na] 505.3.
HRMS (ESI +): m/z C23H38N4O7Na [M + Na]の計算値 = 505.2638; 実測値 = 505.2644.
化合物36b: 1H NMR (CDCl3, 300 MHz): δ (ppm) 6.96 (dd, J1 = 6.9 HzおよびJ2 = 1.5 Hz, 1H); 6.80 (dd, J1 = 7.4 HzおよびJ2 = 1.5 Hz, 1H); 6.52-6.51 (s, 1H); 6.12 (t, J = 7.2 Hz, 1H); 5.04 (s, 1H); 4.88-4.86 (s, 1H); 4.26 (t, J = 6.3 Hz, 2H); 3.55-3.53 (m, 1H); 3.13-3.08 (m, 4H); 2.68 (t, J = 6.3 Hz, 2H); 1.79-1.50 (m, 2H); 1.40 (s, 18H); 1.35-1.23 (m, 4H).
13C NMR (CDCl3, 75 MHz): δ (ppm) 169.7; 158.3 (2C); 146.2; 128.2; 114.6; 106.7; 79.5 (2C); 51.1; 46.9; 44.3; 38.8; 35.1; 31.9; 28.8; 28.2 (6C); 22.6.
MS (ESI +): m/z = [M - 2Boc + 3H] 296.9; [M - Boc + 2H] 397.0; [M + H] 497.1; [M + Na] 519.1.
HRMS (ESI +): m/z C24H40N4O7Na [M + Na]の計算値 = 519.2795; 実測値 = 519.2801.
化合物36c: 1H NMR (CDCl3, 300 MHz): δ (ppm) 7.34 (s, 1H); 6.89 (dd, J1 = 6.9 HzおよびJ2 = 1.2 Hz, 1H); 6.83 (d, J = 7.2 Hz, 1H); 6.19 (t, J = 6.9 Hz, 1H); 5.33-5.23 (s, 2H); 4.06 (t, J = 5.2 Hz, 2H); 3.67-3.64 (m, 1H); 3.28-3.17 (m, 4H); 2.30 (t, J = 7.2 Hz, 2H); 1.93 (t, J = 6.3 Hz, 2H); 1.95-1.60 (m, 2H); 1.40 (s, 18H).
13C NMR (CDCl3, 75 MHz): δ (ppm) 173.3; 172.4; 158.6; 156.8; 146.5; 127.0; 114.6; 107.6; 79.4 (2C); 51.2; 47.1; 44.5; 35.9; 33.0; 29.3; 28.2 (6C); 25.4.
MS (ESI +): m/z = [M + H] 483.4; [M + Na] 505.3.
HRMS (ESI +): m/z C23H38N4O7Na [M + Na]の計算値 = 505.2638; 実測値 = 505.2652.
化合物36d: 1H NMR (CDCl3, 600 MHz): δ (ppm) 7.03-7.01 (m, 1H); 6.80 (d, J = 7.3 Hz, 1H); 6.10 (t, J = 7.1 Hz, 1H); 5.66 (s, 1H); 4.98 (s, 1H); 4.27 (t, J = 7.1 Hz, 2H); 3.89 (m, 1H); 3.66-3.31 (m, 8H); 3.23-3.21 (m, 2H); 2.87-2.85 (m, 2H); 2.67-2.46 (m, 2H); 1.39 (s, 18H).
13C NMR (CDCl3, 150 MHz): δ (ppm) 169.5; 169.0; 158.6; 157.0; 156.1; 146.5; 128.9; 115.1; 107.0; 79.8; 79.7; 49.5; 47.3; 45.8 (2C); 43.9; 41.8 (2C); 35.4; 32.1; 28.6 (6C).
MS (ESI +): m/z = [M - 2Boc + 3H] 352.1; [M - Boc + 2H] 452.2; [M + H] 552.2; [M + Na] 574.2.
HRMS (ESI +): m/z C26H41N5O8Na [M + Na]の計算値 = 574.2853; 実測値 = 574.2849.
化合物36e: 1H NMR (CDCl3, 400 MHz): δ (ppm) 6.80 (d, J = 6.4 Hz, 2H); 6.18 (t, J = 7.1 Hz, 1H); 5.06-4.99 (s, 2H); 4.85-4.71 (m, 2H); 3.86-3.38 (m, 9H); 3.21-3.15 (m, 2H); 2.46-2.32 (m, 2H); 1.92-1.64 (m, 2H); 1.40 (s, 18H).
13C NMR (CDCl3, 100 MHz): δ (ppm) 171.6; 165.4; 158.9; 157.2; 156.6; 146.7; 128.1; 114.9; 107.2; 79.8 (2C); 51.6; 49.9; 45.2; 44.8; 42.5; 41.8; 41.5; 30.0; 28.6 (6C); 28.2.
MS (ESI +): m/z = [M + H] 552.3; [M + Na] 574.3.
HRMS (ESI +): m/z C26H41N5O8Na [M + Na]の計算値 = 574.2853; 実測値 = 574.2832.
化合物36f: 1H NMR (CDCl3, 400 MHz): δ (ppm) 7.01-7.00 (m, 1H); 7.76 (d, J = 7.1 Hz, 1H); 6.09 (t, J = 6.9 Hz, 1H); 5.04 (s, 2H); 4.23 (t, J = 5.9 Hz, 2H); 3.67-3.36 (m, 9H); 3.12 (m, 2H); 2.83 (m, 2H); 2.36-2.30 (m, 2H); 1.80-1.62 (m, 2H); 1.35 (s, 18H).
13C NMR (CDCl3, 100 MHz): δ (ppm) 171.3; 169.0; 158.6; 156.7; 156.4; 146.5; 128.6; 114.8; 106.7; 79.3 (2C); 51.4; 47.1; 45.2; 44.4 (2C); 41.6 (2C); 31.7; 29.4; 28.4 (6C); 27.7. MS (ESI +): m/z = [M + H] 566.3; [M + Na] 588.3.
HRMS (ESI +): m/z C27H43N5O8Na [M + Na]の計算値 = 588.3009; 実測値 = 588.2980.
化合物36g: 1H NMR (CDCl3, 400 MHz): δ (ppm) 7.49 (d, J = 4.8 Hz, 1H); 6.33 (d, J = 4.8 Hz, 1H); 4.70 (s, 2H); 3.53-3.51 (m, 1H); 3.19-3.17 (m, 2H); 3.07-2.91 (m, 2H); 2.26 (s, 3H); 1.56-1.44 (m, 4H); 1.42 (s, 18H).
13C NMR (CDCl3, 100 MHz): δ (ppm) 169.9; 167.1; 157.3; 157.0; 145.5; 139.0; 131.9; 111.1; 78.6 (2C); 55.5; 50.5; 44.1; 39.2; 29.6; 27.4 (6C); 25.4; 10.7.
MS (ESI +): m/z = [M + H] 483.2.
HRMS (ESI +): m/z C23H38N4O7Na [M + Na]の計算値 = 505.2638; 実測値 = 505.2636.
化合物36h: 1H NMR (CDCl3, 400 MHz): δ (ppm) 7.57 (d, J = 4.8 Hz, 1H); 6.41 (d, J = 4.8 Hz, 1H); 4.77 (s, 2H); 3.57 (m, 1H); 3.14-3.11 (m, 2H); 3.02-2.98 (m, 2H); 2.34 (s, 3H); 1.58-1.49 (m, 2H); 1.40 (s, 20H); 1.39-1.35 (m, 2H).
13C NMR (CDCl3, 100 MHz): δ (ppm) 169.9; 167.1; 157.3; 157.0; 145.5; 139.0; 131.9; 111.1; 78.6 (2C); 55.5; 50.7; 44.0; 39.1; 31.6; 28.7; 27.4 (6C); 22.9; 10.7.
MS (ESI +): m/z = [M + H] 497.3; [M + Na] 519.2.
HRMS (ESI +): m/z C24H40N4O7Na [M + Na]の計算値 = 519.2795; 実測値 = 519.2789.
化合物36i: 1H NMR (CDCl3, 400 MHz): δ (ppm) 7.56 (d, J = 7.2 Hz, 1H); 6.37 (d, J = 7.2 Hz, 1H); 4.37-4.33 (m, 2H); 3.53 (m, 1H); 3.13-3.07 (m, 2H); 3.00-2.95 (m, 2H); 2.64 (t, J = 6.5 Hz, 2H); 2.46 (s, 3H); 1.44 (s, 18H); 1.44-1.40 (m, 4H); 1.40-1.23 (m, 2H).
13C NMR (CDCl3, 100 MHz): δ (ppm) 171.5; 170.8; 158.5; 158.2; 147.1; 139.0; 132.5; 112.5; 80.0 (2C); 51.4; 50.3; 45.4; 40.2; 37.6; 32.9; 30.0; 28.8 (6C); 24.3; 11.8.
MS (ESI +): m/z = [M + H] 511.3; [M + Na] 533.2.
HRMS (ESI +): m/z C25H42N4O7Na [M + Na]の計算値 = 533.2951; 実測値 = 533.2935.
化合物36j: 1H NMR (CDCl3, 400 MHz): δ (ppm) 7.39 (m, 2H); 6.31 (m, 1H); 5.40-5.33 (s, 2H); 3.95 (m, 2H); 3.55 (m, 1H); 3.40-3.13 (m, 4H); 2.35 (s, 3H); 2.24 (m, 2H); 1.96-1.60 (m, 4H), 1.40 (s, 18H).
13C NMR (CDCl3, 100 MHz): δ (ppm) 174.2; 169.8; 157.7 (2C); 146.8; 137.5; 129.3; 111.6; 80.2 (2C); 52.2; 51.6; 44.9; 36.8; 33.5; 31.4; 30.2; 28.7 (6C); 12.1.
MS (ESI +): m/z = [M + H] 497.2; [M + Na] 519.3.
HRMS (ESI +): m/z C24H40N4O7Na [M + Na]の計算値 = 519.2795; 実測値 = 519.2795.
化合物36k: 1H NMR (CDCl3, 400 MHz): δ (ppm) 7.26 (m, 1H); 6.35 (m, 1H); 5.98 (s, 2H); 5.13 (m, 2H); 4.88 (m, 1H); 3.67-3.66 (m, 8H); 3.14 (m, 2H); 2.35 (m, 2H); 2.17 (s, 3H); 1.80-1.63 (m, 2H), 1.40 (s, 18H).
13C NMR (CDCl3, 100 MHz): δ (ppm) 171.6; 168.9; 164.5; 156.9 (2C); 142.8; 138.6; 128.5; 111.5; 79.6 (2C); 55.0; 50.7; 45.2; 44.9; 44.6; 42.1; 41.5; 29.9; 28.4 (6C); 28.1; 12.2.
MS (ESI +): m/z = [M + H] 566.3; [M + Na] 588.3.
HRMS (ESI +): m/z C27H43N5O8Na [M + Na]の計算値 = 588.3009; 実測値 = 588.3002.
化合物36l: 1H NMR (CDCl3, 400 MHz): δ (ppm) 6.83 (d, J = 6.8 Hz, 1H); 6.76 (d, J = 7.3 Hz, 1H); 6.11 (t, J = 7.1 Hz, 1H); 5.17-5.08 (s, 2H); 4.02 (t, J = 6.9 Hz, 2H); 3.56 (m, 1H); 3.15-3.12 (m, 4H); 2.91-2.83 (m, 6H); 2.57-2.56 (m, 2H); 2.12 (m, 2H); 1.80-1.78 (m, 2H); 1.37 (m, 22H).
13C NMR (CDCl3, 100 MHz): δ (ppm) 159.0; 157.2; 156.3; 147.0; 127.4; 114.3; 107.1; 79.7 (2C); 56.9; 54.4; 51.1; 50.2 (2C); 48.4; 44.7 (2C); 30.1; 28.6 (6C); 27.3; 25.5; 21.2.
MS (ESI +): m/z = [M + H] 538.3.
HRMS (ESI +): m/z C27H48N5O6 [M + H]の計算値 = 538.3605; 実測値 = 538.3611.
化合物36m: 1H NMR (CDCl3, 400 MHz): δ (ppm) 6.85 (d, J = 6.6 Hz, 1H); 6.77 (dd, J1 = 7.3 HzおよびJ2 = 1.5Hz, 1H); 6.12 (t, J = 7.1 Hz, 1H); 5.07 (s, 2H); 4.02-3.88 (m, 2H); 3.59 (m, 1H); 3.16 (m, 2H); 2.34-2.32 (m, 4H); 2.16 (s, 3H); 1.90 (t, J = 6.6 Hz, 2H); 1.51 (m, 4H); 1.41 (s, 18H).
13C NMR (CDCl3, 100 MHz): δ (ppm) 159.3; 156.9 (2C); 147.1; 127.6; 113.7; 106.8; 79.5 (2C); 57.5; 54.5; 51.4; 48.3; 45.1; 42.0; 31.4; 28.6 (6C); 26.8; 24.4.
MS (ESI +): m/z = [M + H] 483.4; [M + Na] 505.3.
HRMS (ESI +): m/z C24H43N4O6 [M +]の計算値 = 483.3183; 実測値 = 483.3172.
化合物36n: 1H NMR (CDCl3, 400 MHz): δ (ppm) 7.86 (m, 1H); 7.03-7.02 (m, 2H); 5.19-5.10 (m, 2H); 4.19 (m, 2H); 3.59 (m, 1H); 3.13 (m, 2H); 2.51 (s, 3H); 1.84-1.78 (m, 2H); 1.39-1.38 (m, 22H).
13C NMR (CDCl3, 100 MHz): δ (ppm) 161.5; 157.1; 156.6; 144.5; 138.4; 137.5; 112.3; 79.6 (2C); 56.3; 51.2; 44.6; 32.3; 30.3; 28.6 (6C); 22.8; 12.8.
MS (ESI +): m/z = [M + H] 440.3.
HRMS (ESI +): m/z C22H38N3O6 [M + H]の計算値 = 440.2761; 実測値 = 440.2749.
【０１７７】
δ-  ジアミン基の最後の脱保護(スキーム13)
【０１７８】
【化３４】
2018521067.tif 000043
【０１７９】
化合物36a〜n又は化合物23b(0.2〜1.7mmol)を、市販の4NのHClの1,4-ジオキサン溶液(20当量)の存在中、1,4-ジオキサン(4〜10mL)に溶解する。次いで、反応媒体を、室温で45分〜16時間、撹拌下におく。ジオキサンを減圧下蒸発させ、残留物をエーテル中で粉砕する。真空下で蒸発後(高吸湿性の生成物)、得られた沈殿物を凍結乾燥して、誘導体37a〜n又は誘導体38を得る(78%〜100%)(Table 4(表4))。
【０１８０】
【表４Ａ】
2018521067.tif 000044
【０１８１】
【表４Ｂ】
2018521067.tif 000045
【０１８２】
化合物37a: 1H NMR (D2O, 400 MHz): δ (ppm) 7.16 (dd, J1 = 6.8 HzおよびJ2 = 1.4 Hz, 1H); 7.05 (dd, J1 = 7.5 HzおよびJ2 = 1.4 Hz, 1H); 6.41 (t, J = 7.1 Hz, 1H); 4.30 (t, J = 6.4 Hz, 2H); 3.67-3.64 (m, 1H); 3.35-3.34 (m, 2H); 3.18 (t, J = 6.7 Hz, 2H); 2.72 (t, J = 6.4 Hz, 2H); 1.76-1.57 (m, 4H).
13C NMR (D2O, 100 MHz): δ (ppm) 173.3; 158.5; 145.5; 129.4; 118.8; 108.5; 49.0; 47.4; 40.9; 38.7; 35.3; 27.5; 24.1.
MS (ESI +): m/z = [M + H] 283.1.
HRMS (ESI +): m/z C13H23N4O3 [M + H]の計算値 = 283.1770; 実測値 = 283.1765.
化合物37b: 1H NMR (d6-DMSO, 300 MHz): δ (ppm) 8.59 (s, 4H); 8.10-8.07 (s, 1H); 7.08 (dd, J1 = 6.9 HzおよびJ2 = 1.5 Hz, 1H); 6.70 (dd, J1= 7.2 HzおよびJ2 = 1.5 Hz, 1H); 6.07 (t, J = 7.2 Hz, 1H); 4.10 (t, J = 6.9 Hz, 2H); 3.40-3.38 (m, 1H); 3.09-3.00 (m, 4H); 2.53-2.49 (m, 2H); 1.63-1.58 (m, 2H); 1.19 (m, 4H).
13C NMR (d6-DMSO, 75 MHz): δ (ppm) 169.6; 157.8; 146.8; 128.6; 115.0; 105.4; 49.1; 45.9; 40.6; 38.2; 34.8; 29.7; 28.6; 21.9.
MS (ESI +): m/z = [M + H] 296.9.
HRMS (ESI +): m/z C14H25N4O3 [M + H]の計算値 = 297.1927; 実測値 = 297.1914.
化合物37c: 1H NMR (d6-DMSO, 300 MHz): δ (ppm) 8.63 (s, 2H); 8.54 (s, 2H); 8.30 (s, 1H); 7.20 (dd, J1 = 6.8 HzおよびJ2 = 1.5 Hz, 1H); 6.72 (dd, J1 = 7.2 HzおよびJ2 = 1.8 Hz, 1H); 6.11 (t, J = 6.9 Hz, 1H); 3.96-3.87 (m, 2H); 3.49-3.46 (m, 1H); 3.11-3.04 (m, 4H); 2.32-2.31 (m, 2H); 1.90-1.75 (m, 4H).
13C NMR (d6-DMSO, 75 MHz): δ (ppm) 171.2; 157.6; 146.6; 128.2; 114.8; 105.5; 48.7; 46.6; 40.3; 35.8; 30.8; 28.7; 26.1.
MS (ESI +): m/z = [M + H] 283.0.
HRMS (ESI +): m/z C13H23N4O3 [M + H]の計算値 = 283.1810; 実測値 = 283.1800.
化合物37d: 1H NMR (D2O, 400 MHz): δ (ppm) 7.20 (d, J = 6.4 Hz, 1H); 7.03 (d, J = 6.6 Hz, 1H); 6.39 (t, J = 6.9 Hz, 1H); 4.32-4.28 (m, 1H); 4.06-4.02 (m, 2H); 3.69-3.45 (m, 8H); 3.17-3.10 (m, 2H); 3.04-3.01 (m, 2H); 2.99-2.95 (m, 2H).
13C NMR (D2O, 100 MHz): δ (ppm) 172.8; 171.5; 168.8; 158.5; 129.5; 118.9; 108.3; 47.1; 45.5; 45.3; 44.7; 44.3; 41.5; 40.7; 33.2; 31.5.
MS (ESI +): m/z = [M + H] 352.2.
HRMS (ESI +): m/z C16H26N5O4 [M + H]の計算値 = 352.1985; 実測値 = 352.1977.
化合物37e: 1H NMR (D2O, 400 MHz): δ (ppm) 7.14-7.08 (m, 2H); 6.44 (m, 1H); 5.01 (s, 2H); 3.94-3.85 (m, 1H); 3.66 (m, 8H); 3.17 (m, 2H); 2.78-2.76 (m, 2H); 2.13-2.08 (m, 2H).
13C NMR (D2O, 100 MHz): δ (ppm) 172.5; 167.2; 158.7; 145.4; 130.1; 119.2; 108.3; 51.2; 49.2; 44.6; 44.1; 42.9; 41.7; 41.3; 28.5; 25.3.
MS (ESI +): m/z = [M + H] 352.2.
HRMS (ESI +): m/z C16H26N5O4 [M + H]の計算値 = 352.1985; 実測値 = 352.1981.
化合物37f: 1H NMR (D2O, 400 MHz): δ (ppm) 7.20 (d, J = 6.3 Hz, 1H); 7.03 (d, J = 6.4 Hz, 1H); 6.39 (t, J = 6.8 Hz, 1H); 4.30 (t, J = 6.3 Hz, 2H); 3.75-3.60 (m, 4H); 3.55-3.52 (m, 5H); 3.37-3.35 (m, 2H); 2.98-2.95 (m, 2H); 2.74-2.68 (m, 2H); 2.11-2.03 (m, 2H).
13C NMR (D2O, 100 MHz): δ (ppm) 172.7; 161.7; 158.8; 145.3; 129.5; 118.6; 108.3; 49.0; 47.0; 45.1; 44.4; 41.5; 41.2; 40.6; 31.4; 28.3; 25.2.
MS (ESI +): m/z = [M + H] 366.2.
HRMS (ESI +): m/z C17H28N5O4 [M + H]の計算値 = 366.2146; 実測値 = 366.2134.
化合物37g: 1H NMR (CD3OD, 400 MHz): δ (ppm) 8.22 (d, J = 5.8 Hz, 1H); 7.16 (d, J = 5.8 Hz, 1H); 5.29 (s, 2H); 3.66-3.61 (m, 1H); 3.35-3.31 (m, 4H); 2.53 (s, 3H); 1.90-1.73 (m, 4H).
13C NMR (CD3OD, 100 MHz): δ (ppm) 167.1; 160.7; 145.0; 144.3; 141.2; 111.5; 59.4; 51.0; 42.4; 40.1; 29.1; 26.2; 13.3.
MS (ESI +): m/z = [M + H] 283.2.
HRMS (ESI +): m/z C13H23N4O3 [M + H]の計算値 = 283.1770; 実測値 = 283.1772.
化合物37h: 1H NMR (CD3OD, 400 MHz): δ (ppm) 8.15 (d, J = 6.8 Hz, 1H); 7.12 (d, J = 6.6 Hz, 1H); 5.22 (s, 2H); 3.58-3.56 (m, 1H); 3.29-3.25 (m, 4H); 2.48 (s, 3H); 1.81-1.73 (m, 2H); 1.62-1.49 (m, 4H).
13C NMR (CD3OD, 100 MHz): δ (ppm) 166.8; 160.4; 144.8; 143.9; 140.8; 111.4; 59.1; 50.9; 42.9; 40.3; 31.0; 29.7; 23.2; 12.9.
MS (ESI +): m/z = [M + H] 297.2; [M + Na] 319.2.
HRMS (ESI +): m/z C14H25N4O3 [M + H]の計算値 = 297.1927; 実測値 = 297.1913.
化合物37i: 1H NMR (D2O, 400 MHz): δ (ppm) 7.97 (d, J = 6.6 Hz, 1H); 7.18 (d, J = 7.0 Hz, 1H); 4.68 (t, J = 6.4 Hz, 2H); 3.71-3.65 (m, 1H); 3.38-3.37 (m, 2H); 3.16 (t, J = 6.7 Hz, 2H); 3.08-3.04 (s, 1H); 2.88 (t, J = 6.5 Hz, 2H); 2.56 (s, 3H); 1.85-1.74 (m, 2H); 1.52-1.38 (m, 4H).
13C NMR (D2O, 100 MHz): δ (ppm) 171.3 (2C); 158.2; 142.4; 138.7; 110.9; 52.7; 49.2; 40.8; 38.9; 35.8; 29.6; 27.9; 21.6; 12.3.
MS (ESI +): m/z = [M + H] 311.2.
HRMS (ESI +): m/z C15H27N4O3 [M + H]の計算値 = 311.2083; 実測値 = 311.2075.
化合物37j: 1H NMR (D2O, 400 MHz): δ (ppm) 8.28 (d, J = 6.5 Hz, 1H); 7.13 (d, J = 6.5 Hz, 1H); 4.44 (m, 2H); 3.33-3.29 (m, 5H); 2.64 (s, 3H); 2.57 (m, 2H); 2.08-2.07 (m, 4H).
13C NMR (D2O, 100 MHz): δ (ppm) 174.9; 159.8; 145.2; 143.4; 139.4; 111.7; 55.7; 50.6; 41.9; 37.3; 32.2; 31.0; 27.1; 12.8.
MS (ESI +): m/z = [M + H] 297.2.
HRMS (ESI +): m/z C14H25N4O3 [M + H]の計算値 = 297.1927; 実測値 = 297.1931.
化合物37k: 1H NMR (D2O, 400 MHz): δ (ppm) 8.01 (d, J = 6.8 Hz, 1H); 7.19 (d, J = 6.9 Hz, 1H); 5.53 (s, 2H); 3.72-3.55 (m, 9H); 3.41-3.39 (m, 2H); 2.81-2.75 (m, 2H); 2.47 (s, 3H); 2.16-2.08 (m, 2H).
13C NMR (D2O, 100 MHz): δ (ppm) 172.4; 165.2; 159.4; 143.4; 142.5; 139.9; 111.1; 57.2; 49.1; 44.5; 44.1; 42.2; 41.4; 40.7; 28.5; 25.3; 12.5.
MS (ESI +): m/z = [M + H] 366.2.
HRMS (ESI +): m/z C17H28N5O4 [M + H]の計算値 = 366.2141; 実測値 = 366.2133.
化合物37l: 1H NMR (d6-DMSO, 400 MHz): δ (ppm) 6.83 (d, J = 6.8 Hz, 1H); 6.76 (d, J = 7.3 Hz, 1H); 6.11 (t, J = 7.1 Hz, 1H); 5.17-5.08 (s, 2H); 4.02 (t, J = 6.9 Hz, 2H); 3.56 (m, 1H); 3.15-3.12 (m, 4H); 2.91-2.83 (m, 6H); 2.57-2.56 (m, 2H); 2.12 (m, 2H); 1.80-1.78 (m, 2H); 1.37 (m, 22H).
13C NMR (d6-DMSO, 100 MHz): δ (ppm) 159.0; 157.2; 156.3; 147.0; 127.4; 114.3; 107.1; 79.7 (2C); 56.9; 54.4; 51.1; 50.2 (2C); 48.4; 44.7 (2C); 30.1; 28.6 (6C); 27.3; 25.5; 21.2.
MS (ESI +): m/z = [M + H] 338.3.
HRMS (ESI +): m/z C17H32N5O2 [M + H]の計算値 = 338.2556; 実測値 = 338.2552.
化合物37m: 1H NMR (CD3OD, 400 MHz): δ (ppm) 7.49 (m, 1H); 7.14 (m, 1H); 6.60-6.59 (m, 1H); 4.34-4.30 (m, 2H); 3.82-3.78 (m, 1H); 3.40-3.34 (m, 4H); 3.31-3.26 (m, 2H); 2.95 (s, 3H); 2.35-2.31 (m, 2H); 2.03-1.91 (m, 4H).
13C NMR (CD3OD, 100 MHz): δ (ppm) 158.8; 147.8; 130.1; 121.2; 112.2; 56.8; 54.6; 50.3; 49.8; 42.1; 40.9; 28.5; 25.4; 21.2.
MS (ESI +): m/z = [M + H] 283.2.
HRMS (ESI +): m/z C14H27N4O2 [M +]の計算値 = 283.2134; 実測値 = 283.2133.
化合物37n: 1H NMR (CD3OD, 400 MHz): δ (ppm) 8.25 (d, J = 7.0 Hz, 1H); 7.13 (d, J = 6.9 Hz, 1H); 4.42 (t, J = 7.6 Hz, 2H); 3.64-3.61 (m, 1H); 3.31-3.27 (m, 2H); 2.64 (s, 3H); 1.93-1.82 (m, 4H); 1.57-1.56 (m, 2H).
13C NMR (CD3OD, 100 MHz): δ (ppm) 159.5; 145.0; 143.1; 139.6; 111.8; 57.4; 50.6; 42.0; 31.0; 30.7; 22.7; 12.7.
MS (ESI +): m/z = [M + H] 240.2.
HRMS (ESI +): m/z C12H22N3O2 [M + H]の計算値 = 240.1712; 実測値 = 240.1713.
化合物38: 1H NMR (CD3OD, 400 MHz): δ (ppm) 7.46 (s, 2H); 7.37-7.27 (m, 3H); 6.58 (m, 1H); 5.21 (m, 2H); 4.40 (m, 2H); 3.62 (m, 1H); 3.32-3.31 (m, 2H); 3.19 (m, 2H); 2.77 (m, 2H); 1.80 (m, 2H); 1.53 (m, 4H).
13C NMR (CD3OD, 100 MHz): δ (ppm) 171.4;157.1; 147.2; 135.7; 130.3; 128.6 (2C); 128.2; 127.8 (2C); 119.3; 109.5; 71.0; 49.6; 40.8; 38.5; 34.7; 32.4; 29.7; 28.3; 21.8.
MS (ESI +): m/z = [M + H] 387.2.
HRMS (ESI +): m/z C21H31N4O3 [M + H]の計算値 = 387.2396; 実測値 = 387.2382.
【０１８３】
B.物理化学的研究
I)HPLC分析による、本発明の化合物(29a、29b、30a、30b;37a、37b、37c、37d、37f、37i、37j)及びα-オキソアルデヒド又はα,β-不飽和アルデヒドの付加体の形成の評価
1-  原理
試験される化合物を、MGO又はMDAの存在中、37℃でインキュベートする。次いで、MGO又はMDAとの付加体の形成について報告することを目的とする動態研究を、HPLC分析により行う。
【０１８４】
2-  方法
a)溶液の調製
試験される化合物(30μmol)を、PBS(1.5mL)に溶解する。次いで、水(250μmol)中の40%のMGOの水溶液(qsp 1.25mL)を調製し、並行して、MDAビス-(ジOEt)-アセタール(250μmol)を、1NのHCl(2当量)の水(qsp 1.25mL)の溶液と、室温で1時間反応させる。0.05NのNaOH水溶液も、反応媒体(5mL)を中和するために必要である。
【０１８５】
b)37℃での混合物のインキュベーション
次いで、試験される化合物の溶液(625μL、媒体中の最終濃度=10mM)を、0.05NのNaOH(0.5mL)の存在中、即時調製したMGO又はMDAの溶液(125μL、媒体中の最終濃度=20mM)と反応させる。
【０１８６】
次いで、各種の混合物を、オーブン中、37℃で24時間インキュベートする。
【０１８７】
c)HPLCによる分析
各混合物(100μL)のサンプリングを、一定の時間間隔(0.25、0.5、1、5及び24時間)で行い、反応を停止させるために-20℃で保管する。室温で、MeCN/H2Oの98:2混合物で希釈後、HPLC分析を、H2O+0.1%HCOOH/MeCN+0.1%HCOOH溶媒の勾配(98/2で2分間、次いで55/45で2分間及び45/55で3分間)、40℃で0.3mL/分の流速、及び1μLの注入量(「検出モード:スキャン、インターフェース電圧:チューニングファイル、DL電圧:100V、Q-アレイDC:40V、Q-アレイRF:40V」)を使用するWaters Acquityカラムで分離後、Shimadzu LCMS-2020装置(190nmでのUVクロマトグラム、及びポジティブエレクトロスプレーイオン化モード(ESI+)の質量スペクトル)で行う。まず始めに、ブランクを、捕捉剤なしの反応媒体を含有する溶液を使用して行う。次いで、10mMの遊離の捕捉剤の溶液を、陰性対照として使用し、カルノシンを、文献の参照として使用する。次いで、MGO又はMDAと形成した付加体(通常、tR=4.1〜6.8分)の割合を、UVスペクトルの対応するピークの曲線下の面積の測定後、残った遊離の捕捉剤(通常、tR=0.8〜4.6分)の量に関して測定する(測定は代表試料について行う)。
【０１８８】
3-  結果及び考察
a)MGOとの付加体の形成の評価(図2)
まず始めに、遊離の捕捉剤の消失は、本発明の新規化合物との付加体は、第二世代の誘導体(Dap-Pip及びDap-(nBu)Pip)又はカルノシンとの付加体よりはるかに速いという、様々なMGOとの付加体の利点に対して観察される(図2)。したがって、ジアミン官能基に関してカルボニル基の分離と関係がある、MGO捕捉剤としてのこの新規な系統のジアミン誘導体の有効性の向上を実証することが可能であった。ヒドロキシピリジノン基を持つ化合物37a、化合物37b、化合物37c、化合物37f、化合物37i及び化合物37jは、加えて、ヒドララジンの活性に匹敵する活性及び15分インキュベーション後の遊離の捕捉剤のほぼ完全な消失を伴い、最も反応性が高いと思われる。我々は、ピラジン環(AdB)を持つ1:2タイプの多数の付加体の観測への頻繁な変更を伴う、可能性があるMGOとの付加体(2分子のMGOに対して捕捉剤1分子である、1:1タイプの付加体A(AdA);1:2タイプの付加体B(AdB);2:1タイプの付加体C(AdC))の3つのタイプを特定することも可能であった(図3)。最後に、化合物29aを用いて得られた結果は、HPLC分析中に、この場合における遊離の捕捉剤及びMGOとの付加物の間の分離を得ることができなかったので、グラフで表すことができなかったことに留意されたい(ND=決定できない)。しかしながら、遊離の捕捉剤に関する大多数のAdBの存在への傾向は、5時間反応後に形成されると思われる。
【０１８９】
b)MDAとの付加体の形成の評価(図4)
特に、2,3-ジヒドロ-1H-1,4-ジアゼピン環を持つ付加体(付加体D(AdD))の形成は、全ての本発明の化合物で観察される(図4及び図5)。誘導体30b、誘導体37c、誘導体37d、誘導体37f、誘導体37i及び誘導体37jは、1時間後、MDAとの付加体(>81%の付加体)の利益のために試験された捕捉剤の消失の結果を伴って、最も反応性が高いことを示した。化合物29aを用いて得られた結果は、MGOのように、HPLC分析中に、遊離の捕捉剤及びMDAとの付加物の間のいずれの分離も見出すことができなかったので、再度、グラフで表すことができなかったことに留意されたい(ND=決定できない)。この場合において、遊離の捕捉剤に関する大多数のAdDの存在への傾向は、24時間反応後にのみ形成されると思われる。
【０１９０】
II)紫外/可視光分光測定法による、本発明の化合物(29a、29b、30a、30b;37a、37b、37c、37d、37f、37i、37j)のCu2+キレート特性の評価
1-  原理:
試験される化合物を、Cu2+の存在中、室温で10分間インキュベートする。残った遊離のCu2+の量を、ムレキシドによる錯体形成後、決定する(Int. J. Mol. Sci.、2009年、10巻、5485〜5497頁;Molecules、2012年、17巻、13457〜13472頁)。Cu2+/ムレキシド(オレンジ)錯体の485nmでの吸光度(A485)及び遊離のムレキシド(ピンク)の520nmでの吸光度(A520)の測定は、実際に紫外/可視光分光測定法によって行われる。次いで、残った遊離のCu2+の量を、事前に得たCu2+の濃度によるA485/A520の比を与える線形較正の方程式を使用して評価する。これより、最終的に、試験された化合物によるCu2+の錯体形成の割合が推定された。
【０１９１】
2-  方法:
a)溶液の調製
まず始めに、1NのHCl溶液を使用してpHを5に調節したヘキサミン緩衝液0.01M/KCl 0.01M(qsp 200mL)を調製する。次いで、この緩衝液中に0.5mMのCuSO4.5H2O(20mL)及び0.25mMのCuSO4.5H2O(100mL)を溶解させ、これを較正曲線を得るために最初に使用する。1mMのムレキシド水溶液も、ヘキサミン緩衝液0.01M/KCl 0.01M又は緩衝液及びMeOHの75/25混合物(6.2mL)中の、4.2mMの試験される化合物のストック溶液と同様に、即時調製(10mL)しなければならない。
【０１９２】
b)室温での混合物のインキュベーション
様々な濃度の試験される化合物を、ヘキサミン緩衝液0.01M/KCl 0.01M(pH=5)(Table 5(表5))、又は緩衝液及びMeOHの75/25混合物中に、溶血用チューブ中で、分配する(Table 6(表6))。次いで、0.25mMのCuSO4.5H2Oの溶液(1mL)を添加し、これを室温で10分間インキュベートする。最後に、1mMのムレキシド水溶液(0.1mL)を加え、再度、室温で1分間インキュベートする。次いで、吸光度を、紫外/可視光分光測定法(V-650 JASCO分光計)によって、485nm(A485)及び520nm(A520)で測定する(測定は三連で行う)。ヘキサミン緩衝液0.01M/KCl 0.01M(pH=5)(2mL)及び水(0.1mL)を含有するブランク、並びにCu2+キレート剤としての文献の参照としてエチレンジアミン(EDA)を使用する。
【０１９３】
【表５】
2018521067.tif 000046
【０１９４】
【表６】
2018521067.tif 000047
【０１９５】
溶血用チューブ中で、ヘキサミン緩衝液0.01M/KCl 0.01M(pH=5)中(Table 7(表7))、又は緩衝液及びMeOHの75/25混合物中(Table 8(表8))の様々な濃度のCuSO4.5H2Oの分配後、較正曲線を事前に作成する(測定は三連で行う)。1mMのムレキシド水溶液(0.1mL)を加えた後、これを、室温で1分間インキュベートし、最後に、吸光度を、紫外/可視光分光測定法によって、485nm(A485)及び520nm(A520)で測定する。
【０１９６】
【表７】
2018521067.tif 000048
【０１９７】
【表８】
2018521067.tif 000049
【０１９８】
3-  結果及び考察:
a)較正曲線
試験される化合物による錯体形成後の遊離のCu2+の残存量を決定し、最終的にCu2+の錯体形成力を評価することを可能にする方程式の直線が得られる(図6、図7)。
【０１９９】
b)試験化合物のCu2+キレート特性の比較
まず始めに、本発明の新規化合物は、第二世代の誘導体(Dap-Pip及びDap-(nBu)Pip)よりも良好なCu2+キレート剤であると思われる(図8)。このように、化合物30b、化合物37b、化合物37i及び化合物37jは、特に化合物30bについて、文献の参照として使用したEDAに近い、錯化力が最も活性であることが示されている。同じ系統内で、化合物37a及び化合物37bのCu2+キレート特性の比較は(化合物37bが化合物37aよりも良好な錯化剤)、末端ジアミン基を持つ炭素鎖の延長が、活性を改善すると予想されるように思われることを示す。実際に、カルボニル官能基の分離は、ジアミン基のキレート能力の相乗作用を可能にする。しかしながら、炭素鎖がリジンにも由来する化合物30b及び化合物37bで得られた結果に関して、化合物29bで得られた不十分な結果は、分子の反対側に導入されたフェルラ酸、没食子酸又はヒドロキシピリジノンに由来する基のCu2+の錯体形成における組み合わされた介入を示唆している。したがって、この仮定を評価するために、我々は、化合物37b、及び1つのみ遊離のCu2+キレート末端を有する2つの関連化合物(化合物36b及び化合物38)のCu2+キレート特性を比較した(図9及び図10)。このように、ジアミン基の欠損(化合物36b)は、ヒドロキシピリジノン基(化合物38)の結果に反して、任意の結果は殆どないことが示され、したがって、実際には、本発明の新規化合物のCu2+キレート活性のためには必須であると思われる。加えて、化合物37c及び化合物37jで得られた結果の比較は、3-ヒドロキシピリジン-2-オンのモチーフに関して、3-ヒドロキシ-2-メチルピリジン-4-オンのモチーフのより高いCu2+の錯化力を示す。最後に、化合物29a及び化合物29bで得られた不十分な結果を考慮すると、フェルラ酸に由来する基は、最も興味を感じられないCu2+の錯化力を有すると思われる。
【０２００】
III)ORAC試験(「酸素ラジカル吸収能力」)による、本発明の化合物(29a、29b、30a、30b;37a、37b、37c、37d、37f、37i、37j)の抗酸化特性の評価
1-  原理:
本発明の化合物の抗酸化特性を、フルオレセインを使用するORACFL試験を使用して、評価した(J. Agric. Food Chem.、2004年、52巻、48〜54頁;J. Agric. Food Chem.、2005年、53巻、4290〜4302頁)。このように、AAPH(2,2'-アゾビス(2-メチルプロピオンアミジン)二塩酸塩)の存在中、37℃で発生した過酸化物ラジカルを、この蛍光センサーと反応させて、非蛍光生成物を得る。次いで、試験化合物の保護効果を、経時的なフルオレセインの蛍光の減衰曲線にしたがって、抗酸化剤の不存在に相当する対照のものに関して、試料の曲線下面積(AUC)を測定することにより、決定することができる。
【０２０１】
ビタミンEの水溶性類似物であるトロロクス(6-ヒドロキシ-2,5,7,8-テトラメチルクロマン-2-カルボン酸)を、10μMで試験された化合物の抗酸化能力(ORACFL)を計算するために、標準として使用し、トロロクス当量(TE)のμmol/試験化合物のμmolで表す。このようにして、この値は、様々な濃度のトロロクスによる曲線下面積を与える線形較正の方程式を使用して得られる(Bioorg. Med. Chem.、2015年、23巻、1135〜1148頁)(図11)。
【０２０２】
2-  方法:
フルオレセイン(FL)の溶液(12nM;150μL)を、黒の96ウェルプレート(Dutscher、Brumath、フランス)に入れる。D-PBSに溶解した試験される化合物(1〜20μM;25μL)又はトロロクス(1〜50μM;25μL)を、各ウェルに添加する。37℃での最低30分間のインキュベーション中にプレートを平衡化した後、即時調製したAAPHの溶液(30mM;25μL)を使用して、ラジカル反応を開始する。蛍光(λEx:485nm;λEm:520nm)を、温度制御したTecan Infinite(登録商標)200PROマイクロプレートリーダーを使用して、90秒ごとに60サイクルで測定する(測定は、3つの独立した実験中に三連で行う)。
【０２０３】
3-  結果及び考察:
本発明の化合物は、特に、カルノシンで見られた非常に低い活性と比較して、かなりの抗酸化能力(Table 9(表9):ORACFL≧1μmol TE/μmol)を示した。加えて、フェルラ酸、没食子酸又はヒドロキシピリジノンのモチーフに由来する基の導入は、第二世代のDap-Pip誘導体について活性が見られないことを考慮すると、これらの抗酸化特性の獲得のために必須であると思われる。このように、化合物30b及び化合物37cは、最も高い活性を示し、したがって、これらのそれぞれの系統におけるリーダーを保つ。化合物37c及び化合物37jで得られた結果の比較は、この場合において、3-ヒドロキシピリジン-2-オンのモチーフの良好な抗酸化能力について好適であったことに留意されたい。
【０２０４】
【表９】
2018521067.tif 000050
【０２０５】
C.インビトロでの生物学的評価
I)本発明の化合物(29a、29b、30a、30b;37a、37b、37c)のインビトロの抗ラジカル特性の評価
1-  原理:
様々な化合物の抗ラジカル特性を、低密度リポタンパク質(LDL)の酸化のインビトロモデルにおける脂質の過酸化の阻害によって決定する(Free Radic. Biol. Med.、1992年、13巻、341〜390頁)。脂質の過酸化は、LDLに存在するポリ不飽和脂肪酸の二重結合のフリーラジカルによる攻撃によって開始される。これは、CH2基から水素原子の脱離をもたらす。この不安定なラジカルは、転位して、次いで、より安定な配置、すなわち共役ジエンをもたらす。開始すると、LDLの酸化は、フリーラジカルによって発生する脂質の過酸化の連鎖反応である。LDLのインビトロでの酸化は、水溶性の化合物である2,2'-アゾビス(2-メチルプロピオンアミジン)二塩酸塩(AAPH)の添加によって、37℃で誘導され、その自発的熱分解中にフリーラジカルが発生する。
【０２０６】
2-  方法:
簡潔には、96ウェルプレート中で行われる酸化は、20μLのD-PBSに溶解した試験される化合物の様々な溶液(0.1〜100μMの最終濃度)の存在中又は不存在中で、160μLのLDL(100μg/mL)での、D-PBS中の2mMのAAPHの溶液20μLの添加によって、37℃で誘導される。AAPHを添加しないLDL単独を、陰性対照として使用する。それぞれの酸化を2回行う。酸化の間、共役ジエンの形成に続いて、温度制御されたTECAN分光光度計を使用して、37℃で8時間、10分間ごとに234nmで光学密度を測定する。インビトロのこのモデルにおいて強力な抗酸化剤であると認識されているビタミンE(α-トコフェロール)を、参照分子として使用する(J. Nutr. Biochem.、2012年、23巻、845〜51頁)。
【０２０７】
3-  結果及び考察:
第二世代のDap-Pip誘導体は、高濃度(100μM)であっても、いかなる抗ラジカル効果も示さない(図27)。
【０２０８】
フェルラ酸に由来する化合物29a及び化合物29bも、同様の挙動を示す(図28及び図29)。実際に、結果は、これらの生成物が25〜100μMの範囲の濃度では抗酸化剤であるが、より低い濃度(0.1〜10μM)では酸化促進剤になることを示す。
【０２０９】
没食子酸に由来する化合物30bは、50〜100μMの範囲の濃度では強い酸化促進剤であるが、最も低い濃度(0.1〜10μM)では強い抗酸化剤になる(図30)。
【０２１０】
ヒドロキシピリジノン基を持つ化合物37a及び化合物37bも同様の挙動を示す。これらは、1〜100μMの範囲の濃度で向上した抗酸化効果を有する(図31及び図32)。
【０２１１】
1〜10μMのより低い濃度では、本発明の化合物30b、化合物37a及び化合物37cは、第二世代のDap-Pip誘導体、及び更にビタミンEよりも高い、抗ラジカル特性を有する(図33及び図34)。したがって、両方の従来の関連誘導体だけではなく、参照生成物に関しても、この第三世代の抗酸化剤化合物の有効性を実証することができた。
【０２１２】
むしろ、化合物30bの非典型的な挙動(低濃度では、抗酸化剤、及び高濃度では酸化促進剤)は、まだ研究されていない。それどころか、化合物29a及び化合物29bのプロファイル(低濃度では酸化促進剤、及び高濃度では抗酸化剤)は、文献に記載されたある最近の業績において同意することができる(J. Agric. Food Chem.、2000年、48巻、3597〜3604頁;J. Agric. Food Chem.、2010年、58巻、9273〜9280頁)。
【０２１３】
最終的に、ヒドロキシピリジノン基を持つ化合物37a及び化合物37cが、約1μMの低濃度で、最適の抗酸化特性を有すると思われる。
【０２１４】
II)本発明の化合物の細胞毒性の研究
本発明の化合物の細胞毒性の研究のため、及びその抗アポトーシス特性の評価のために使用する細胞株を、本発明の化合物の、化粧品における使用、又は特に、アテローム性動脈硬化症及び神経変性疾患の処置及び/若しくは予防における使用の目的のために、上述の特許請求の範囲を考慮して選択した。このように、これらの様々な研究は、ヒト線維芽細胞(MRC-5)、マウス内皮脳細胞(bEnd.3)及び神経細胞として処置されたラット褐色細胞腫細胞(PC12)で行うことが可能であった(Eur. J. Med. Chem.、2014年、83巻、355〜365頁;Chem. Biol. Interact.、2014年、224巻、108〜116頁;Neurochem. Int.、2013年、62巻、620〜625頁)。
【０２１５】
1-  原理:
細胞生存率を、代謝的に活性な細胞によるテトラゾリウムの塩(WST-8)の変換の検出に基づく比色分析方法によって評価する(CCK-8 kit、Sigma社、Lyons、フランス)(Molecules、2014年、19巻(8号)、12048〜12064頁;J. Pharmacol. Toxicol. Methods.、2007年、56巻(1号)、58〜62頁)。生細胞は、WST-8(2-(2-メトキシ-4-ニトロフェニル)-3-(4-ニトロフェニル)-5-(2,4-ジスルホフェニル)-2H-テトラゾリウム)、一ナトリウム塩)からオレンジ色のホルマザンに低減するミトコンドリアのデヒドロゲナーゼを有し、これを、1-メトキシPMS(1-メトキシ-5-メチルフェナジニウムメチルスルフェート)の存在中で、培地にすぐに溶解する。37℃で1時間インキュベーション後、ホルマザンの吸光度を450nmで測定する。吸光度は、生細胞の数に直接比例する。
【０２１６】
2-  方法:
簡潔には、細胞を、96ウェルプレート中、ウェル当たり5.103個の細胞の割合で、100μLの適切な培地中、サブコンフルエンスまで播種する。次いで、細胞をD-PBSで洗浄し、次いで、24時間及び48時間、三連で、様々な濃度(10μM、100μM)の試験される生成物で処理する。陽性対照を、10%のDMSOで行う。次いで、CCK-8(10μL)の溶液を、37℃で1時間のインキュベーションのために各ウェルに添加する。吸光度の測定を、Perkin Elmer 2103 Envision(登録商標)マイクロプレートリーダーを使用して、450nmで行う。
【０２１７】
細胞の生存率を、代表的な実験を形成する三連の平均±標準偏差、又は三連で実施された三つの独立した実験の平均±標準偏差によって、対照(未処理の細胞)の%として表す。
【０２１８】
3-  結果及び考察:
【０２１９】
【表１０】
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【０２２０】
【表１１】
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【０２２１】
これらの最初の結果(測定は、三連で行い、代表的な実験を形成する)から形成される一般的な傾向は、24時間処理後(Table 10(表10)、図35、図36、図37)、又は48時間処理後(Table 11(表11)、図38、図39、図40)に、10及び100μMで試験された3つの細胞株に対する、本発明の化合物の先天的な低い細胞毒性及び更に細胞毒性がないことを明らかにする。しかしながら、特に、化合物29a、化合物30b及び化合物37cについて、特に、100μMの高濃度では、いくらか満足できるデータを示していない。このように、化合物30bは、100μMで、PC12細胞に対する48時間の処置後の細胞生存率における無視できない減少の起点である(67%対照)。しかしながら、この細胞毒性は、その抗ラジカル特性のインビトロでの評価中に、高濃度で既に観察されている、その酸化促進性により説明することができる(図30)。最終的には、10μM以下の濃度で最も興味深い誘導体について、ビタミンEよりも高い抗ラジカル活性が見出され(図33、図34)、本発明の化合物の細胞毒性に対するこれらの最初の結果は、非常に有望であると思われる。
【０２２２】
最後に、本発明の化合物の細胞毒性がないことは、3つの独立した実験を三連で実施する間、PC12細胞に対する24時間の処理後に確認することが可能であった(図41)。
【０２２３】
III)異なる細胞株に対する本発明の化合物(29a、29b、30a、30b;37a、37b、37c)の抗アポトーシス特性の評価
1-  原理:
アポトーシスは、高度に制御された細胞死のための本質的にプログラムされた細胞機構であり、これは、生理学的又は病理学的な刺激に対する生物の応答を構成し、細胞の産生及び除去の間の不均衡を引き起こす。このプログラムされた死の機構は、組織のホメオスタシスを維持することを可能にする。形態学的に、アポトーシスは、クロマチン及び細胞質の濃縮を伴う、細胞の進行性の退縮、続く細胞断片(ヌクレオソーソーム間の断片化)又はアポトーシス体の形成をもたらすDNAの規則的で特徴的な断片化に相当する。アポトーシスの不適切な制御は、がん、自己免疫疾患、アルツハイマー病等の多くの病態において、主要な役割を果たす(The Lancet、1993年、381巻、1251〜1254頁;Toxicol Pathol.、2007年、35巻(4号)、495〜516頁)。
【０２２４】
様々な研究は、メチルグリオキサール(MGO)が多くの細胞タイプにおいてアポトーシスを誘導することを示している(Int. J. Mol, Med.、2010年、26巻、813〜818頁)。
【０２２５】
細胞のアポトーシスは、一方がDNAに対し、他方がヒストンに対する、2つのマウスモノクローナル抗体を使用する、ELISA方法によって評価される(ELISAPLUS Cell Death Detection kit、Roche社、Meylan、フランス)。この技術は、細胞溶解物の細胞質分画中のモノ及びオリゴヌクレオソームを特異的に測定することを可能にする。
【０２２６】
2-  方法:
簡潔には、細胞を、96ウェルプレート又は24ウェルプレート中、bEnd.3及びPC12に対しては5.103細胞/ウェルの割合で、MRC5に対しては75.103細胞/ウェルの割合で、適切な培地中、サブコンフルエンスまで播種する。次いで、細胞をPBSで洗浄し、様々な濃度(10μM、100μM)の試験される生成物で、三連で、30分〜1時間(PC12及びbEnd.3細胞)、又は1時間(MRC5細胞)、37℃で処理する。次いで、MGOの溶液(PC12細胞については1mM、bEnd.3及びMRC5細胞については2mM)を、24時間のインキュベーションのために添加する。それぞれの細胞タイプに対するMGOの濃度は、文献及び我々が実施した細胞毒性試験(CCK8)にしたがって選択した。次いで、溶解した溶液を、室温で30分間、各ウェルに添加する。次いで、細胞溶解物を、10分間200gで遠心分離する。次いで、この細胞溶解物の20μLを、供給者によって説明された手順にしたがって、ELISAのために使用する。このように、細胞溶解物を、DNAの断片化を評価することを可能にする抗ヒストン抗体で覆われたプレートに適用する。次いで、抗DNA抗体と結合したペルオキシダーゼは、その基質であるABTS(ジアンモニウム2,2'-アジノ-ビス(3-エチルベンゾチアゾリン-6-スルホネート)及びH2O2の存在中で反応して、光学密度がアポトーシスのレベルを示す、緑色の誘導体を与える。吸光度の測定を、Perkin Elmer 2103 Envision(登録商標)マイクロプレートリーダーを使用して、405nmで行う。陽性対照は、MGO単独の存在中で行う。
【０２２７】
細胞のアポトーシスを、代表的な実験を形成する三連の平均±標準偏差、又は三連で実施された三つの独立した実験の平均±標準偏差によって表す。
【０２２８】
3-  結果及び考察:
化合物30b及び化合物37cは、マウス内皮脳細胞(bEnd.3)に対するMGOによるアポトーシスの誘導後、10μMで始まる非常に興味深い抗アポトーシス特性を示した(図42、図43)。したがって、アテローム性動脈硬化症の処置及び/又は予防において本発明の化合物を使用する目的で、酸化ストレス及びカルボニルストレスに関連する有害な細胞カスケードを遅らせることが可能であると思われる。
【０２２９】
化合物37cは、神経細胞として処理されたラット褐色細胞腫細胞(PC12)に対するMGOによるアポトーシスの誘導後、10μMで始まる非常に興味深い抗アポトーシス特性を明らかにした(図44、図45)。したがって、神経変性疾患の処置及び/又は予防において本発明の化合物を使用する目的で、酸化ストレス及びカルボニルストレスに関連する有害な細胞カスケードを遅らせることが可能であると思われる。化合物30bについては、この傾向が100μMで確認される。
【０２３０】
化合物37b及び化合物37cは、ヒト線維芽細胞(MRC-5)に対するMGOによるアポトーシスの誘導後、100μMで、有望な抗アポトーシス特性を有する(図46、図47)。したがって、皮膚の早期の老化の予防のために、化粧品産業において本発明の化合物を適用する目的で、酸化ストレス及びカルボニルストレスに関連する有害な細胞カスケードを遅らせることが可能であると思われる。
【０２３１】
最後に、神経細胞として処理された、ラット褐色細胞腫細胞(PC12)に対するMGOによるアポトーシスの誘導後、100μMでの化合物37cの抗アポトーシス特性は、三連で実施された3つの独立した実験中に確認することが可能であった(図48)。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７】
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【図１８】
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【図１９】
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【図２０】
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【図２１】
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【図２２】
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【図２３】
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【図２４】
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【図２５】
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【図２６】
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【図２７】
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【図２８】
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【図２９】
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【図３０】
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【図３１】
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【図３２】
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【図３３】
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【図３４】
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【図３５】
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【図３６】
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【図３７】
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【図３８】
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【図３９】
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【図４０】
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【図４１】
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【図４２】
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【図４３】
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【図４４】
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【図４５】
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【図４６】
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【図４７】
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【図４８】
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【国際調査報告】
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