(57)【要約】本発明は、Ｓｉｇｌｅｃ１５および／またはその結合性リガンドの発現および／または活性をモジュレートすることにより、がんを処置するための方法および組成物、腫瘍に対する免疫応答を増加させるための方法、自己免疫疾患を処置するための方法、ならびに炎症応答を低下させる方法を、それを必要とする被験体において、提供する。がんを処置することを必要とする被験体においてがんを処置する方法であって、有効量のＳｉｇｌｅｃ１５の調節物質を該被験体に投与するステップを含み、該調節物質が、該被験体においてＳｉｇｌｅｃ１５の発現および／または活性を低下させ、それにより、該被験体においてがんを処置する、方法。
2018533591.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
がんを処置することを必要とする被験体においてがんを処置する方法であって、有効量のＳｉｇｌｅｃ１５の調節物質を該被験体に投与するステップを含み、該調節物質が、該被験体においてＳｉｇｌｅｃ１５の発現および／または活性を低下させ、それにより、該被験体においてがんを処置する、方法。
【請求項２】
前記調節物質が、Ｓｉｇｌｅｃ１５の小分子阻害剤、Ｓｉｇｌｅｃ１５に対するアンタゴニスト抗体もしくはその抗原結合性断片、組換えＳｉｇｌｅｃ１５融合タンパク質、またはＳｉｇｌｅｃ１５を標的とする阻害性ペプチドもしくは核酸からなる群から選択される、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記Ｓｉｇｌｅｃ１５融合タンパク質が、Ｓｉｇｌｅｃ１５−Ｆｃ融合タンパク質である、請求項２に記載の方法。
【請求項４】
前記調節物質が、Ｓｉｇｌｅｃ１５と結合性リガンドとの間の相互作用を遮断する、請求項１に記載の方法。
【請求項５】
前記結合性リガンドが、ＭＡＧ、ＬＲＲＣ４Ｃ、およびシアリル−Ｔｎからなる群から選択される、請求項４に記載の方法。
【請求項６】
前記調節物質が、残基１４３に単一の置換変異を有する変異体Ｓｉｇｌｅｃ１５タンパク質である、請求項４に記載の方法。
【請求項７】
前記調節物質が、ＩｇＶドメインの欠失を有する変異体Ｓｉｇｌｅｃ１５タンパク質である、請求項４に記載の方法。
【請求項８】
前記調節物質が、ＭＡＧおよびＬＲＲＣ４Ｃの発現レベルおよび／または活性レベルを低下させる、請求項１に記載の方法。
【請求項９】
前記調節物質が、ＭＡＧの小分子阻害剤、ＭＡＧに対するアンタゴニスト抗体もしくはその抗原結合性断片、組換えＭＡＧ融合タンパク質、ＭＡＧを標的とする阻害性ペプチドもしくは核酸、ＬＲＲＣ４Ｃの小分子阻害剤、ＬＲＲＣ４Ｃに対するアンタゴニスト抗体もしくはその抗原結合性断片、組換えＬＲＲＣ４Ｃ融合タンパク質、またはＬＲＲＣ４Ｃを標的とする阻害性ペプチドもしくは核酸からなる群から選択される、請求項８に記載の方法。
【請求項１０】
前記がんが、脳がん、肺がん、膵がん、黒色腫がん、乳がん、卵巣がん、腎細胞癌、直腸腺癌、肝細胞癌、およびユーイング肉腫からなる群から選択される、請求項１に記載の方法。
【請求項１１】
前記脳がんが、神経膠芽腫である、請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
前記被験体がヒトである、請求項１に記載の方法。
【請求項１３】
腫瘍サイズを縮小させることを必要とする被験体において腫瘍サイズを縮小させる方法であって、有効量のＳｉｇｌｅｃ１５の調節物質を該被験体に投与するステップを含み、該調節物質が、Ｓｉｇｌｅｃ１５の発現および／または活性を低下させ、それにより、該被験体において該腫瘍サイズを縮小させる、方法。
【請求項１４】
前記調節物質が、Ｓｉｇｌｅｃ１５の小分子阻害剤、Ｓｉｇｌｅｃ１５に対するアンタゴニスト抗体もしくはその抗原結合性断片、組換えＳｉｇｌｅｃ１５融合タンパク質、またはＳｉｇｌｅｃ１５を標的とする阻害性ペプチドもしくは核酸からなる群から選択される、請求項１３に記載の方法。
【請求項１５】
前記Ｓｉｇｌｅｃ１５融合タンパク質が、Ｓｉｇｌｅｃ１５−Ｆｃ融合タンパク質である、請求項１４に記載の方法。
【請求項１６】
前記調節物質が、Ｓｉｇｌｅｃ１５と結合性リガンドとの間の相互作用を遮断する、請求項１３に記載の方法。
【請求項１７】
前記結合性リガンドが、ＭＡＧ、ＬＲＲＣ４Ｃ、およびシアリル−Ｔｎからなる群から選択される、請求項１６に記載の方法。
【請求項１８】
前記調節物質が、残基１４３に単一の置換変異を有する変異体Ｓｉｇｌｅｃ１５タンパク質である、請求項１６に記載の方法。
【請求項１９】
前記調節物質が、ＩｇＶドメインの欠失を有する変異体Ｓｉｇｌｅｃ１５タンパク質である、請求項１６に記載の方法。
【請求項２０】
前記調節物質が、ＭＡＧ、ＬＲＲＣ４Ｃ、またはシアリル−Ｔｎの発現および／または活性を低下させる、請求項１３に記載の方法。
【請求項２１】
前記調節物質が、ＭＡＧの小分子阻害剤、ＭＡＧに対するアンタゴニスト抗体もしくはその抗原結合性断片、組換えＭＡＧ融合タンパク質、ＭＡＧを標的とする阻害性ペプチドもしくは核酸、ＬＲＲＣ４Ｃの小分子阻害剤、ＬＲＲＣ４Ｃに対するアンタゴニスト抗体もしくはその抗原結合性断片、組換えＬＲＲＣ４Ｃ融合タンパク質、またはＬＲＲＣ４Ｃを標的とする阻害性ペプチドもしくは核酸からなる群から選択される、請求項２０に記載の方法。
【請求項２２】
前記腫瘍が、脳がん、肺がん、膵がん、黒色腫がん、乳がん、卵巣がん、腎細胞癌、直腸腺癌、肝細胞癌、およびユーイング肉腫からなる群から選択されるがんに関連する、請求項１３に記載の方法。
【請求項２３】
前記脳がんが、神経膠芽腫である、請求項２２に記載の方法。
【請求項２４】
前記被験体がヒトである、請求項１３に記載の方法。
【請求項２５】
がんを有する被験体の生存を延長させる方法であって、有効量のＳｉｇｌｅｃ１５の調節物質を該被験体に投与するステップを含み、該調節物質が、Ｓｉｇｌｅｃ１５の発現および／または活性を低下させ、それにより、該被験体の生存を延長させる、方法。
【請求項２６】
前記調節物質が、Ｓｉｇｌｅｃ１５の小分子阻害剤、Ｓｉｇｌｅｃ１５に対するアンタゴニスト抗体もしくはその抗原結合性断片、組換えＳｉｇｌｅｃ１５融合タンパク質、またはＳｉｇｌｅｃ１５を標的とする阻害性ペプチドもしくは核酸からなる群から選択される、請求項２５に記載の方法。
【請求項２７】
前記Ｓｉｇｌｅｃ１５融合タンパク質が、Ｓｉｇｌｅｃ１５−Ｆｃ融合タンパク質である、請求項２６に記載の方法。
【請求項２８】
前記調節物質が、Ｓｉｇｌｅｃ１５と結合性リガンドとの間の相互作用を遮断する、請求項２５に記載の方法。
【請求項２９】
前記結合性リガンドが、ＭＡＧ、ＬＲＲＣ４Ｃ、およびシアリル−Ｔｎからなる群から選択される、請求項２８に記載の方法。
【請求項３０】
前記調節物質が、残基１４３に単一の置換変異を有する変異体Ｓｉｇｌｅｃ１５タンパク質である、請求項２８に記載の方法。
【請求項３１】
前記調節物質が、ＩｇＶドメインの欠失を有する変異体Ｓｉｇｌｅｃ１５タンパク質である、請求項２８に記載の方法。
【請求項３２】
前記調節物質が、ＭＡＧおよびＬＲＲＣ４Ｃの発現および／または活性を低下させる、請求項２５に記載の方法。
【請求項３３】
前記調節物質が、ＭＡＧの小分子阻害剤、ＭＡＧに対するアンタゴニスト抗体もしくはその抗原結合性断片、組換えＭＡＧ融合タンパク質、ＭＡＧを標的とする阻害性ペプチドもしくは核酸、ＬＲＲＣ４Ｃの小分子阻害剤、ＬＲＲＣ４Ｃに対するアンタゴニスト抗体もしくはその抗原結合性断片、組換えＬＲＲＣ４Ｃ融合タンパク質、またはＬＲＲＣ４Ｃを標的とする阻害性ペプチドもしくは核酸からなる群から選択される、請求項３２に記載の方法。
【請求項３４】
前記がんが、脳がん、肺がん、膵がん、黒色腫がん、乳がん、卵巣がん、腎細胞癌、直腸腺癌、肝細胞癌、およびユーイング肉腫からなる群から選択される、請求項２５に記載の方法。
【請求項３５】
前記脳がんが、神経膠芽腫である、請求項３４に記載の方法。
【請求項３６】
前記被験体がヒトである、請求項２５に記載の方法。
【請求項３７】
腫瘍に対する免疫応答を増加させることを必要とする被験体において腫瘍に対する免疫応答を増加させる方法であって、有効量のＳｉｇｌｅｃ１５の調節物質を該被験体に投与するステップを含み、該調節物質が、Ｓｉｇｌｅｃ１５の発現および／または活性を低下させ、それにより、該被験体において該腫瘍に対する免疫応答を増加させる、方法。
【請求項３８】
前記調節物質が、Ｓｉｇｌｅｃ１５の小分子阻害剤、Ｓｉｇｌｅｃ１５に対するアンタゴニスト抗体もしくはその抗原結合性断片、組換えＳｉｇｌｅｃ１５融合タンパク質、またはＳｉｇｌｅｃ１５を標的とする阻害性ペプチドもしくは核酸からなる群から選択される、請求項３７に記載の方法。
【請求項３９】
前記Ｓｉｇｌｅｃ１５融合タンパク質が、Ｓｉｇｌｅｃ１５−Ｆｃ融合タンパク質である、請求項３８に記載の方法。
【請求項４０】
前記調節物質が、Ｓｉｇｌｅｃ１５と結合性リガンドとの間の相互作用を遮断する、請求項３７に記載の方法。
【請求項４１】
前記結合性リガンドが、ＭＡＧ、ＬＲＲＣ４Ｃ、およびシアリル−Ｔｎからなる群から選択される、請求項４０に記載の方法。
【請求項４２】
前記調節物質が、残基１４３に単一の置換変異を有する変異体Ｓｉｇｌｅｃ１５タンパク質である、請求項４０に記載の方法。
【請求項４３】
前記調節物質が、ＩｇＶドメインの欠失を有する変異体Ｓｉｇｌｅｃ１５タンパク質である、請求項４０に記載の方法。
【請求項４４】
前記調節物質が、ＭＡＧおよびＬＲＲＣ４Ｃの発現および／または活性を低下させる、請求項３７に記載の方法。
【請求項４５】
前記調節物質が、ＭＡＧの小分子阻害剤、ＭＡＧに対するアンタゴニスト抗体もしくはその抗原結合性断片、組換えＭＡＧ融合タンパク質、ＭＡＧを標的とする阻害性ペプチドもしくは核酸、ＬＲＲＣ４Ｃの小分子阻害剤、ＬＲＲＣ４Ｃに対するアンタゴニスト抗体もしくはその抗原結合性断片、組換えＬＲＲＣ４Ｃ融合タンパク質、またはＬＲＲＣ４Ｃを標的とする阻害性ペプチドもしくは核酸からなる群から選択される、請求項４４に記載の方法。
【請求項４６】
前記腫瘍が、脳がん、肺がん、膵がん、黒色腫がん、乳がん、卵巣がん、腎細胞癌、直腸腺癌、肝細胞癌、およびユーイング肉腫からなる群から選択されるがんに関連する、請求項３７に記載の方法。
【請求項４７】
前記脳がんが、神経膠芽腫である、請求項４６に記載の方法。
【請求項４８】
前記被験体がヒトである、請求項３７に記載の方法。
【請求項４９】
自己免疫疾患を処置することを必要とする被験体において自己免疫疾患を処置する方法であって、有効量のＳｉｇｌｅｃ１５の調節物質を該被験体に投与するステップを含み、該調節物質が、該被験体においてＳｉｇｌｅｃ１５の発現および／または活性を増加させ、それにより、該被験体において自己免疫疾患を処置する、方法。
【請求項５０】
前記調節物質が、Ｓｉｇｌｅｃ１５の小分子活性化因子、Ｓｉｇｌｅｃ１５のアゴニスト抗体もしくはその抗原結合性断片、またはＳｉｇｌｅｃ１５の転写および／もしくは翻訳を活性化するタンパク質および核酸からなる群から選択される、請求項４９に記載の方法。
【請求項５１】
前記調節物質が、Ｓｉｇｌｅｃ１５と結合性リガンドとの間の相互作用を促進する、請求項４９に記載の方法。
【請求項５２】
前記結合性リガンドが、ＭＡＧ、ＬＲＲＣ４Ｃ、およびシアリル−Ｔｎからなる群から選択される、請求項５１に記載の方法。
【請求項５３】
前記調節物質が、ＭＡＧおよびＬＲＲＣ４Ｃの発現および／または活性を増加させる、請求項４９に記載の方法。
【請求項５４】
前記調節物質が、ＭＡＧの小分子活性化因子、ＭＡＧに対するアゴニスト抗体もしくはその抗原結合性断片、ＭＡＧの転写および／もしくは翻訳を活性化するタンパク質および核酸、ＬＲＲＣ４Ｃの小分子活性化因子、ＬＲＲＣ４Ｃに対するアゴニスト抗体もしくはその抗原結合性断片、またはＬＲＲＣ４Ｃの転写および／もしくは翻訳を活性化するタンパク質および核酸からなる群から選択される、請求項５３に記載の方法。
【請求項５５】
前記調節物質が、ＭＡＧタンパク質、ＭＡＧタンパク質をコードする核酸、ＬＲＲＣ４Ｃタンパク質またはＬＲＲＣ４Ｃタンパク質をコードする核酸からなる群から選択される、請求項５３に記載の方法。
【請求項５６】
前記自己免疫疾患が、炎症性脳疾患である、請求項４９に記載の方法。
【請求項５７】
前記炎症性脳疾患が、多発性硬化症である、請求項５６に記載の方法。
【請求項５８】
前記被験体がヒトである、請求項４９に記載の方法。
【請求項５９】
自己免疫疾患を処置することを必要とする被験体において自己免疫疾患を処置する方法であって、有効量のＳｉｇｌｅｃ１５タンパク質、Ｓｉｇｌｅｃ１５タンパク質をコードする核酸を前記被験体に投与するステップを含み、それにより、該被験体において自己免疫疾患を処置する、方法。
【請求項６０】
前記Ｓｉｇｌｅｃ１５タンパク質が、全長Ｓｉｇｌｅｃ１５タンパク質、Ｓｉｇｌｅｃ１５の機能性断片、またはＳｉｇｌｅｃ１５のＩｇＶドメインからなる群から選択される、請求項５９に記載の方法。
【請求項６１】
前記自己免疫疾患が、炎症性脳疾患である、請求項５９に記載の方法。
【請求項６２】
前記炎症性脳疾患が、多発性硬化症である、請求項６１に記載の方法。
【請求項６３】
前記被験体がヒトである、請求項５９に記載の方法。
【請求項６４】
脳炎症応答を低下させることを必要とする被験体において脳炎症応答を低下させる方法であって、有効量のＳｉｇｌｅｃ１５の調節物質を該被験体に投与するステップを含み、該調節物質が、Ｓｉｇｌｅｃ１５の発現および／または活性を増加させ、それにより、該被験体において脳炎症応答を低下させる、方法。
【請求項６５】
前記調節物質が、Ｓｉｇｌｅｃ１５の小分子活性化因子、Ｓｉｇｌｅｃ１５のアゴニスト抗体もしくはその抗原結合性断片、またはＳｉｇｌｅｃ１５の転写および／もしくは翻訳を活性化するタンパク質および核酸からなる群から選択される、請求項６４に記載の方法。
【請求項６６】
前記調節物質が、Ｓｉｇｌｅｃ１５と結合性リガンドとの間の相互作用を促進する、請求項６４に記載の方法。
【請求項６７】
前記結合性リガンドが、ＭＡＧ、ＬＲＲＣ４Ｃ、およびシアリル−Ｔｎからなる群から選択される、請求項６６に記載の方法。
【請求項６８】
前記調節物質が、ＭＡＧおよびＬＲＲＣ４Ｃの発現および／または活性を増加させる、請求項６４に記載の方法。
【請求項６９】
前記調節物質が、ＭＡＧの小分子活性化因子、ＭＡＧに対するアゴニスト抗体もしくはその抗原結合性断片、ＭＡＧの転写および／もしくは翻訳を活性化するタンパク質および核酸、ＬＲＲＣ４Ｃの小分子活性化因子、ＬＲＲＣ４Ｃに対するアゴニスト抗体もしくはその抗原結合性断片、またはＬＲＲＣ４Ｃの転写および／もしくは翻訳を活性化するタンパク質および核酸からなる群から選択される、請求項６８に記載の方法。
【請求項７０】
前記調節物質が、ＭＡＧタンパク質、ＭＡＧタンパク質をコードする核酸、ＬＲＲＣ４Ｃタンパク質またはＬＲＲＣ４Ｃタンパク質をコードする核酸からなる群から選択される、請求項６８に記載の方法。
【請求項７１】
前記脳炎症応答が、多発性硬化症に関連する、請求項６４に記載の方法。
【請求項７２】
前記被験体がヒトである、請求項６４に記載の方法。
【請求項７３】
脳炎症応答を低下させることを必要とする被験体において脳炎症応答を低下させる方法であって、有効量のＳｉｇｌｅｃ１５タンパク質、またはＳｉｇｌｅｃ１５タンパク質をコードする核酸を該被験体に投与するステップを含み、それにより、該被験体において脳炎症応答を低下させる、方法。
【請求項７４】
前記Ｓｉｇｌｅｃ１５タンパク質が、全長Ｓｉｇｌｅｃ１５タンパク質、Ｓｉｇｌｅｃ１５の機能性断片、またはＳｉｇｌｅｃ１５のＩｇＶドメインからなる群から選択される、請求項７３に記載の方法。
【請求項７５】
前記脳炎症応答が、多発性硬化症に関連する、請求項７３に記載の方法。
【請求項７６】
前記被験体がヒトである、請求項７３に記載の方法。
【請求項７７】
被験体において自己免疫疾患またはがんを処置するために有用な化合物を同定するための方法であって、
試験化合物を用意するステップと、
Ｓｉｇｌｅｃ１５の発現および／または活性に対する該試験化合物の効果を決定するステップと、
Ｓｉｇｌｅｃ１５の発現および／または活性をモジュレートする化合物を選択し、それにより、該被験体において自己免疫疾患またはがんを処置するために有用な化合物を同定するステップとを含む、方法。
【請求項７８】
Ｓｉｇｌｅｃ１５の発現および／または活性の増加により、前記化合物が自己免疫疾患を処置するために有用であることが示される、請求項７７に記載の方法。
【請求項７９】
Ｓｉｇｌｅｃ１５の発現および／または活性の低下により、前記化合物ががんを処置するために有用であることが示される、請求項７７に記載の方法。
【請求項８０】
腫瘍に対する免疫応答を増加させることを必要とする被験体において腫瘍に対する免疫応答を増加させるために有用な化合物を同定する方法であって、
試験化合物を用意するステップと、
Ｓｉｇｌｅｃ１５の発現および／または活性に対する該試験化合物の効果を決定するステップと、
Ｓｉｇｌｅｃ１５の発現および／または活性を低下させる化合物を選択し、それにより、該被験体において該腫瘍に対する免疫応答を増加させるために有用な化合物を同定するステップとを含む、方法。
【請求項８１】
脳炎症応答を低下させることを必要とする被験体において脳炎症応答を低下させるために有用な化合物を同定する方法であって、
試験化合物を用意するステップと、
Ｓｉｇｌｅｃ１５の発現および／または活性に対する該試験化合物の効果を決定するステップと、
Ｓｉｇｌｅｃ１５の発現および／または活性を増加させる化合物を選択し、それにより、該被験体において脳炎症応答を低下させるために有用な化合物を同定するステップとを含む、方法。
【請求項８２】
Ｓｉｇｌｅｃ１５と、ＭＡＧ、ＬＲＲＣ４Ｃ、およびシアリル−Ｔｎとの間の相互作用をモジュレートする、Ｓｉｇｌｅｃ１５調節物質。
【請求項８３】
Ｓｉｇｌｅｃ１５のＩｇＶドメインに結合する、請求項８２に記載の調節物質。
【請求項８４】
Ｓｉｇｌｅｃ１５の残基１４３を含むエピトープに結合する、請求項８２に記載の調節物質。
【請求項８５】
Ｓｉｇｌｅｃ１５の阻害剤である、請求項８２に記載の調節物質。
【請求項８６】
前記阻害剤が、Ｓｉｇｌｅｃ１５の小分子阻害剤、Ｓｉｇｌｅｃ１５に対するアンタゴニスト抗体もしくはその抗原結合性断片、組換えＳｉｇｌｅｃ１５融合タンパク質、またはＳｉｇｌｅｃ１５を標的とする阻害性ペプチドもしくは核酸からなる群から選択される、請求項８５に記載の調節物質。
【請求項８７】
Ｓｉｇｌｅｃ１５の活性化因子である、請求項８２に記載の調節物質。
【請求項８８】
前記活性化因子が、Ｓｉｇｌｅｃ１５の小分子活性化因子、Ｓｉｇｌｅｃ１５のアゴニスト抗体もしくはその抗原結合性断片、またはＳｉｇｌｅｃ１５の転写および／もしくは翻訳を活性化するタンパク質および核酸からなる群から選択される、請求項８７に記載の調節物質。
【請求項８９】
前記被験体が、依然として自己免疫疾患に罹患していない、請求項１に記載の方法。
【請求項９０】
前記被験体が、依然として自己免疫疾患に罹患していない、請求項１３に記載の方法。
【請求項９１】
前記被験体が、依然として自己免疫疾患に罹患していない、請求項２５に記載の方法。
【請求項９２】
前記被験体が、依然として自己免疫疾患に罹患していない、請求項３７に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願
本願は、２０１５年１１月１０日に出願された米国仮出願第６２／２５３，４３７号に対する優先権を主張する。この出願は、その全体が本明細書に参考として援用される。
【背景技術】
【０００２】
発明の背景
がんは、先進工業国における死亡の主な原因のうちの１つとして知られている。がんは、単一の形質転換細胞の後代が進行性に成長することによって引き起こされる。がんの処置には、患者を死なすことなく全ての悪性細胞を除去または破壊する必要がある。これを実現する魅力的なやり方は、腫瘍の細胞とそれらの正常細胞対応物とを識別する、腫瘍に対する免疫応答を誘導することである。実際に、免疫系には、正常組織に対する毒性を伴わずに腫瘍を特異的に破壊する大きな潜在性がある。異常な細胞を検出し、破壊する免疫系の天然の能力により、多くのがんの発生が防止され得る。さらに、免疫系の長期間の記憶により、がんの再発が防止され得る。
【０００３】
しかし、がん細胞は、時には、がん細胞表面上の腫瘍抗原の発現を低下させ、それにより、免疫系ががん細胞を検出するのを困難にすることによって、免疫系による検出および破壊を回避することができる。あるいは、がん細胞は、それらの表面上に、免疫細胞の不活化を誘導する、または、周囲の環境中の細胞を、免疫応答を抑制し、腫瘍細胞の増殖および生存を促進する物質を放出するように誘導する、タンパク質を発現し得る。したがって、新しい免疫療法剤を開発するために、腫瘍に対する免疫応答をモジュレートする新しい分子を同定することが依然として必要とされている（Sznol  MおよびChen  L、Clin  Cancer  Res、１９巻（５号）：１０２１〜１０３４頁、２０１３年）。
【０００４】
免疫細胞の細胞膜は、種々のグリカン結合性タンパク質によって認識されるシアル酸などの種々のグリカンの高密度コーティングで覆われている。シアル酸結合性免疫グロブリン様レクチン（Ｓｉｇｌｅｃｓ）は、グリカン認識を通じて自然免疫系および適応免疫系における細胞の機能を調節するＩ型膜タンパク質のファミリーである（Kameda  Yら、J.  Bone  Miner.  Res.、２０１３年、２８巻（１２号）：２４４６３〜７５頁）。Ｓｉｇｌｅｃｓタンパク質は、シアル酸結合性構成成分およびＩｇ様分子を含有する。これらは、細胞接着相互作用、ニューロン、脳機能、およびニューロン発達に関与する。Ｓｉｇｌｅｃファミリーには２つのより小さなメンバー：Ｓｉｇｌｅｃ１４およびＳｉｇｌｅｃ１５が存在する。これらの分子はどちらも、リン酸化され得る小さな細胞内ドメインおよび膜内ドメインを有する。これらは、それらのサイズに起因して、細胞膜を越えてシグナルを伝達するために十分に小さい。これらのＳｉｇｌｅｃメンバーは、マウスおよびヒトのどちらにおいても見いだされ、種間で高度に進化的に保存されている。
【０００５】
以前のマイクロアレイデータから、Ｓｉｇｌｅｃ１５が末梢の骨髄系細胞、マクロファージおよび単球に存在することが示されている。Ｓｉｇｌｅｃ１５は、一般に、単球、マクロファージ、樹状細胞、Ｂ細胞および破骨細胞上に発現する。単球、骨髄系細胞およびＢ細胞におけるＳｉｇｌｅｃ１５発現は、ＲＡＮＫリガンドおよびＭ−ＣＳＦにより誘導および上方調節することができる（Stuible  Mら、J  Biol  Chem.、２０１４年、２８９巻（１０号）：６４９８〜５１２頁；Takamiya  Rら、Glycobiology.、２０１３年；２３巻（２号）：１７８〜８７頁）。Ｓｉｇｌｅｃ−１５欠損マウスは、破骨細胞の発生が損なわれることに起因する軽度の大理石骨病を示す（Kameda  Yら、J.  Bone  Miner.  Res.、２８巻（１２号）：２４４６３〜７５頁、２０１３年）。破骨細胞の分化および骨リモデリングにおけるＳｉｇｌｅｃ１５の役割は広範囲にわたって試験されているが、Ｓｉｇｌｅｃ１５の免疫学的機能に関してはほとんど知られていない（Stuible  Mら、J  Biol  Chem.、２０１４年、２８９巻（１０号）：４９８〜５１２頁）。最近の試験により、肺の腫瘍、直腸腺癌および肝細胞癌におけるＳｉｇｌｅｃ１５およびＣＤ６８の発現および共局在が示されており、これらはマクロファージにおける発現も見いだされ、これにより、骨髄系細胞におけるＳｉｇｌｅｃ１５の発現がさらに支持される（Takamiya  Rら、Glycobiology.、２０１３年；２３巻（２号）：１７８〜８７頁）。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００６】
【非特許文献１】Sznol  MおよびChen  L、Clin  Cancer  Res、１９巻（５号）：１０２１〜１０３４頁、２０１３年
【非特許文献２】Kameda  Yら、J.  Bone  Miner.  Res.、２０１３年、２８巻（１２号）：２４４６３〜７５頁
【非特許文献３】Stuible  Mら、J  Biol  Chem.、２０１４年、２８９巻（１０号）：６４９８〜５１２頁
【非特許文献４】Takamiya  Rら、Glycobiology.、２０１３年；２３巻（２号）：１７８〜８７頁
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
したがって、当技術分野において、抗腫瘍および自己免疫性免疫療法の成功率を広げ、それらを十分に活用するために、腫瘍に対する免疫応答をモジュレートする追加的な分子の同定が必要とされている。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
本発明は、少なくとも一部において、Ｓｉｇｌｅｃ１５ががんに対する免疫応答の抑制において欠くことができない役割を果たすという発見に基づき、したがって、がん治療薬の今後の開発のためにＳｉｇｌｅｃ１５経路を操作するための理論的根拠を提供する。特に、Ｓｉｇｌｅｃ１５の発現の低下により、脳腫瘍を有するマウスの腫瘍サイズが縮小し、また、生存が延長されることが発見されている。さらに、脳炎症マウスモデルにおいてＳｉｇｌｅｃ１５とそのリガンドとの間の相互作用を遮断することによって、ならびにＳｉｇｌｅｃ１５ノックアウトマウスにおいてＳｉｇｌｅｃ１５の発現を消滅させることによってＳｉｇｌｅｃ１５活性を阻害することにより、脳炎症が加速された。
【０００９】
したがって、本発明は、Ｓｉｇｌｅｃ１５ならびに／またはその結合性リガンド、例えばＭＡＧ、ＬＲＲＣ４Ｃ、および／もしくはシアリル−Ｔｎの発現および／または活性を阻害または抑制することにより、がんを処置するまたはがんに対する免疫応答を増加させる方法を提供する。別の態様では、本発明は、Ｓｉｇｌｅｃ１５ならびに／またはその結合性リガンド、例えばＭＡＧ、ＬＲＲＣ４Ｃ、および／もしくはシアリル−Ｔｎの発現および／または活性を増加させることにより、被験体において自己免疫疾患を処置する、または炎症応答を低下させる方法を含む。
【００１０】
一態様では、本発明は、がんを処置することを必要とする被験体においてがんを処置する方法であって、有効量のＳｉｇｌｅｃ１５の調節物質を被験体に投与するステップを含み、調節物質が、被験体においてＳｉｇｌｅｃ１５の発現および／または活性を低下させ、それにより、被験体においてがんを処置する、方法を提供する。
【００１１】
一部の実施形態では、調節物質は、Ｓｉｇｌｅｃ１５の小分子阻害剤、Ｓｉｇｌｅｃ１５に対するアンタゴニスト抗体もしくはその抗原結合性断片、組換えＳｉｇｌｅｃ１５融合タンパク質、またはＳｉｇｌｅｃ１５を標的とする阻害性ペプチドもしくは核酸からなる群から選択される。他の実施形態では、Ｓｉｇｌｅｃ１５融合タンパク質は、Ｓｉｇｌｅｃ１５−Ｆｃ融合タンパク質である。
【００１２】
一部の実施形態では、調節物質は、Ｓｉｇｌｅｃ１５と結合性リガンドとの間の相互作用を遮断する。一部の実施形態では、結合性リガンドは、ＭＡＧおよびＬＲＲＣ４Ｃからなる群から選択される。一部の実施形態では、調節物質は、残基１４３に単一の置換変異を有する変異体Ｓｉｇｌｅｃ１５タンパク質である。他の実施形態では、調節物質は、ＩｇＶドメインの欠失を有する変異体Ｓｉｇｌｅｃ１５タンパク質である。他の実施形態では、結合性リガンドは、シアリル−Ｔｎである。一部の実施形態では、調節物質は、可溶性シアリル−Ｔｎ分子である。他の実施形態では、調節物質は、シアリル−Ｔｎに特異的に結合する抗体またはその抗原結合性断片である。
【００１３】
一部の実施形態では、調節物質は、ＭＡＧおよび／またはＬＲＲＣ４Ｃの発現レベルおよび／または活性レベルを低下させる。他の実施形態では、調節物質は、シアリル−Ｔｎを含有するタンパク質の発現レベルおよび／または活性レベルを低下させる。一部の実施形態では、調節物質は、ＭＡＧの小分子阻害剤、ＭＡＧに対するアンタゴニスト抗体もしくはその抗原結合性断片、組換えＭＡＧ融合タンパク質、ＭＡＧを標的とする阻害性ペプチドもしくは核酸、ＬＲＲＣ４Ｃの小分子阻害剤、ＬＲＲＣ４Ｃに対するアンタゴニスト抗体もしくはその抗原結合性断片、組換えＬＲＲＣ４Ｃ融合タンパク質、またはＬＲＲＣ４Ｃを標的とする阻害性ペプチドもしくは核酸からなる群から選択される。
【００１４】
一部の実施形態では、がんは、脳がん、肺がん、膵がん、黒色腫がん、乳がん、卵巣がん、腎細胞癌、直腸腺癌、肝細胞癌、およびユーイング肉腫からなる群から選択される。他の実施形態では、脳がんは、神経膠芽腫である。一部の実施形態では、がんは、結腸がん、類内膜がん、腎がん（例えば、乳頭状腎細胞癌、腎明細胞癌）、肝がん、甲状腺がん、肺がん（例えば、肺腺癌、肺扁平上皮癌）、頭頸部がん、乳がん、子宮頸がん、前立腺がん、膀胱がん、神経膠芽腫、直腸がん、または胆管がんである。一実施形態では、がんは、脳がんである。一実施形態では、がんは、神経膠芽腫である。一実施形態では、がんは、血液由来のがんではない。一実施形態では、がんは、白血病ではない。一実施形態では、がんは、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）ではない。
【００１５】
一部の実施形態では、被験体は、依然として自己免疫疾患に罹患していない。
【００１６】
他の実施形態では、被験体はヒトである。
【００１７】
他の態様では、本発明は、腫瘍サイズを縮小させることを必要とする被験体において腫瘍サイズを縮小させる方法であって、有効量のＳｉｇｌｅｃ１５の調節物質を該被験体に投与するステップを含み、該調節物質が、Ｓｉｇｌｅｃ１５の発現および／または活性を低下させ、それにより、該被験体において該腫瘍サイズを縮小させる、方法を提供する。
【００１８】
一部の実施形態では、調節物質は、Ｓｉｇｌｅｃ１５の小分子阻害剤、Ｓｉｇｌｅｃ１５に対するアンタゴニスト抗体もしくはその抗原結合性断片、組換えＳｉｇｌｅｃ１５融合タンパク質、またはＳｉｇｌｅｃ１５を標的とする阻害性ペプチドもしくは核酸からなる群から選択される。一部の実施形態では、Ｓｉｇｌｅｃ１５融合タンパク質は、Ｓｉｇｌｅｃ１５−Ｆｃ融合タンパク質である。
【００１９】
一部の実施形態では、調節物質は、Ｓｉｇｌｅｃ１５と結合性リガンドとの間の相互作用を遮断する。一部の実施形態では、結合性リガンドは、ＭＡＧおよびＬＲＲＣ４Ｃからなる群から選択される。他の実施形態では、結合性リガンドは、シアリル−Ｔｎである。一部の実施形態では、調節物質は、残基１４３に単一の置換変異を有する変異体Ｓｉｇｌｅｃ１５タンパク質である。他の実施形態では、調節物質は、ＩｇＶドメインの欠失を有する変異体Ｓｉｇｌｅｃ１５タンパク質である。
【００２０】
一部の実施形態では、調節物質は、ＭＡＧおよびＬＲＲＣ４Ｃの発現および／または活性を低下させる。一部の実施形態では、調節物質は、ＭＡＧの小分子阻害剤、ＭＡＧに対するアンタゴニスト抗体もしくはその抗原結合性断片、組換えＭＡＧ融合タンパク質、ＭＡＧを標的とする阻害性ペプチドもしくは核酸、ＬＲＲＣ４Ｃの小分子阻害剤、ＬＲＲＣ４Ｃに対するアンタゴニスト抗体もしくはその抗原結合性断片、組換えＬＲＲＣ４Ｃ融合タンパク質、またはＬＲＲＣ４Ｃを標的とする阻害性ペプチドもしくは核酸からなる群から選択される。
【００２１】
一部の実施形態では、腫瘍は、脳がん、肺がん、膵がん、黒色腫がん、乳がん、卵巣がん、腎細胞癌、直腸腺癌、肝細胞癌、およびユーイング肉腫からなる群から選択されるがんに関連する。一部の実施形態では、脳がんは、神経膠芽腫である。一部の実施形態では、がんは、結腸がん、類内膜がん、腎がん（例えば、乳頭状腎細胞癌、腎明細胞癌）、肝がん、甲状腺がん、肺がん（例えば、肺腺癌、肺扁平上皮癌）、頭頸部がん、乳がん、子宮頸がん、前立腺がん、膀胱がん、神経膠芽腫、直腸がん、または胆管がんである。一実施形態では、がんは、脳がんである。一実施形態では、がんは、神経膠芽腫である。一実施形態では、がんは、血液由来のがんではない。一実施形態では、がんは、白血病ではない。一実施形態では、がんは、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）ではない。
【００２２】
一部の実施形態では、被験体は、依然として自己免疫疾患に罹患していない。
【００２３】
他の実施形態では、被験体はヒトである。
【００２４】
一つの態様では、本発明は、がんを有する被験体の生存を延長させる方法であって、有効量のＳｉｇｌｅｃ１５の調節物質を該被験体に投与するステップを含み、該調節物質が、Ｓｉｇｌｅｃ１５の発現および／または活性を低下させ、それにより、該被験体の生存を延長させる、方法を提供する。
【００２５】
一部の実施形態では、調節物質は、Ｓｉｇｌｅｃ１５の小分子阻害剤、Ｓｉｇｌｅｃ１５に対するアンタゴニスト抗体もしくはその抗原結合性断片、組換えＳｉｇｌｅｃ１５融合タンパク質、またはＳｉｇｌｅｃ１５を標的とする阻害性ペプチドもしくは核酸からなる群から選択される。一部の実施形態では、Ｓｉｇｌｅｃ１５融合タンパク質は、Ｓｉｇｌｅｃ１５−Ｆｃ融合タンパク質である。
【００２６】
一部の実施形態では、調節物質は、Ｓｉｇｌｅｃ１５と結合性リガンドとの間の相互作用を遮断する。他の実施形態では、結合性リガンドは、ＭＡＧおよびＬＲＲＣ４Ｃからなる群から選択される。他の実施形態では、結合性リガンドは、シアリル−Ｔｎである。一部の実施形態では、調節物質は、残基１４３に単一の置換変異を有する変異体Ｓｉｇｌｅｃ１５タンパク質である。他の実施形態では、調節物質は、ＩｇＶドメインの欠失を有する変異体Ｓｉｇｌｅｃ１５タンパク質である。
【００２７】
一部の実施形態では、調節物質は、ＭＡＧおよびＬＲＲＣ４Ｃの発現および／または活性を低下させる。一部の実施形態では、調節物質は、ＭＡＧの小分子阻害剤、ＭＡＧに対するアンタゴニスト抗体もしくはその抗原結合性断片、組換えＭＡＧ融合タンパク質、ＭＡＧを標的とする阻害性ペプチドもしくは核酸、ＬＲＲＣ４Ｃの小分子阻害剤、ＬＲＲＣ４Ｃに対するアンタゴニスト抗体もしくはその抗原結合性断片、組換えＬＲＲＣ４Ｃ融合タンパク質、またはＬＲＲＣ４Ｃを標的とする阻害性ペプチドもしくは核酸からなる群から選択される。
【００２８】
一部の実施形態では、がんは、脳がん、肺がん、膵がん、黒色腫がん、乳がん、卵巣がん、腎細胞癌、直腸腺癌、肝細胞癌、およびユーイング肉腫からなる群から選択される。一部の実施形態では、脳がんは、神経膠芽腫である。一部の実施形態では、がんは、結腸がん、類内膜がん、腎がん（例えば、乳頭状腎細胞癌、腎明細胞癌）、肝がん、甲状腺がん、肺がん（例えば、肺腺癌、肺扁平上皮癌）、頭頸部がん、乳がん、子宮頸がん、前立腺がん、膀胱がん、神経膠芽腫、直腸がん、または胆管がんである。一実施形態では、がんは、脳がんである。一実施形態では、がんは、神経膠芽腫である。一実施形態では、がんは、血液由来のがんではない。一実施形態では、がんは、白血病ではない。一実施形態では、がんは、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）ではない。
【００２９】
一部の実施形態では、被験体は、依然として自己免疫疾患に罹患していない。
【００３０】
他の実施形態では、被験体はヒトである。
【００３１】
一つの態様では、本発明は、腫瘍に対する免疫応答を増加させることを必要とする被験体において腫瘍に対する免疫応答を増加させる方法であって、有効量のＳｉｇｌｅｃ１５の調節物質を該被験体に投与するステップを含み、該調節物質が、Ｓｉｇｌｅｃ１５の発現および／または活性を低下させ、それにより、該被験体において該腫瘍に対する免疫応答を増加させる、方法を提供する。
【００３２】
一部の実施形態では、調節物質は、Ｓｉｇｌｅｃ１５の小分子阻害剤、Ｓｉｇｌｅｃ１５に対するアンタゴニスト抗体もしくはその抗原結合性断片、組換えＳｉｇｌｅｃ１５融合タンパク質、またはＳｉｇｌｅｃ１５を標的とする阻害性ペプチドもしくは核酸からなる群から選択される。一部の実施形態では、Ｓｉｇｌｅｃ１５融合タンパク質は、Ｓｉｇｌｅｃ１５−Ｆｃ融合タンパク質である。
【００３３】
一部の実施形態では、調節物質は、Ｓｉｇｌｅｃ１５と結合性リガンドとの間の相互作用を遮断する。一部の実施形態では、結合性リガンドは、ＭＡＧおよびＬＲＲＣ４Ｃからなる群から選択される。他の実施形態では、結合性リガンドは、シアリル−Ｔｎである。一部の実施形態では、調節物質は、残基１４３に単一の置換変異を有する変異体Ｓｉｇｌｅｃ１５タンパク質である。他の実施形態では、調節物質は、ＩｇＶドメインの欠失を有する変異体Ｓｉｇｌｅｃ１５タンパク質である。
【００３４】
一部の実施形態では、調節物質は、ＭＡＧおよびＬＲＲＣ４Ｃの発現および／または活性を低下させる。一部の実施形態では、調節物質は、ＭＡＧの小分子阻害剤、ＭＡＧに対するアンタゴニスト抗体もしくはその抗原結合性断片、組換えＭＡＧ融合タンパク質、ＭＡＧを標的とする阻害性ペプチドもしくは核酸、ＬＲＲＣ４Ｃの小分子阻害剤、ＬＲＲＣ４Ｃに対するアンタゴニスト抗体もしくはその抗原結合性断片、組換えＬＲＲＣ４Ｃ融合タンパク質、またはＬＲＲＣ４Ｃを標的とする阻害性ペプチドもしくは核酸からなる群から選択される。
【００３５】
一部の実施形態では、腫瘍は、脳がん、肺がん、膵がん、黒色腫がん、乳がん、卵巣がん、腎細胞癌、直腸腺癌、肝細胞癌、およびユーイング肉腫からなる群から選択されるがんに関連する。一部の実施形態では、脳がんは、神経膠芽腫である。一部の実施形態では、がんは、結腸がん、類内膜がん、腎がん（例えば、乳頭状腎細胞癌、腎明細胞癌）、肝がん、甲状腺がん、肺がん（例えば、肺腺癌、肺扁平上皮癌）、頭頸部がん、乳がん、子宮頸がん、前立腺がん、膀胱がん、神経膠芽腫、直腸がん、または胆管がんである。一実施形態では、がんは、脳がんである。一実施形態では、がんは、神経膠芽腫である。一実施形態では、がんは、血液由来のがんではない。一実施形態では、がんは、白血病ではない。一実施形態では、がんは、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）ではない。
【００３６】
一部の実施形態では、被験体は、依然として自己免疫疾患に罹患していない。
【００３７】
他の実施形態では、被験体はヒトである。
【００３８】
別の態様では、本発明は、自己免疫疾患を処置することを必要とする被験体において自己免疫疾患を処置する方法であって、有効量のＳｉｇｌｅｃ１５の調節物質を該被験体に投与するステップを含み、該調節物質が、該被験体においてＳｉｇｌｅｃ１５の発現および／または活性を増加させ、それにより、該被験体において自己免疫疾患を処置する、方法を提供する。
【００３９】
一部の実施形態では、調節物質は、Ｓｉｇｌｅｃ１５の小分子活性化因子、Ｓｉｇｌｅｃ１５のアゴニスト抗体もしくはその抗原結合性断片、またはＳｉｇｌｅｃ１５の転写および／もしくは翻訳を活性化するタンパク質および核酸からなる群から選択される。
【００４０】
一部の実施形態では、調節物質は、Ｓｉｇｌｅｃ１５と結合性リガンドとの間の相互作用を促進する。一部の実施形態では、結合性リガンドは、ＭＡＧおよびＬＲＲＣ４Ｃからなる群から選択される。他の実施形態では、結合性リガンドは、シアリル−Ｔｎである。一部の実施形態では、調節物質は、ＭＡＧおよびＬＲＲＣ４Ｃの発現および／または活性を増加させる。
【００４１】
一部の実施形態では、調節物質は、ＭＡＧの小分子活性化因子、ＭＡＧに対するアゴニスト抗体もしくはその抗原結合性断片、ＭＡＧの転写および／もしくは翻訳を活性化するタンパク質および核酸、ＬＲＲＣ４Ｃの小分子活性化因子、ＬＲＲＣ４Ｃに対するアゴニスト抗体もしくはその抗原結合性断片、またはＬＲＲＣ４Ｃの転写および／もしくは翻訳を活性化するタンパク質および核酸からなる群から選択される。
【００４２】
他の実施形態では、調節物質は、ＭＡＧタンパク質、ＭＡＧタンパク質をコードする核酸、ＬＲＲＣ４Ｃタンパク質またはＬＲＲＣ４Ｃタンパク質をコードする核酸からなる群から選択される。一つの実施形態では、調節物質は、合成シアリル−Ｔｎ、またはシアリル−Ｔｎを有する合成ペプチドである。
【００４３】
一部の実施形態では、自己免疫疾患は、炎症性脳疾患である。他の実施形態では、炎症性脳疾患は、多発性硬化症である。他の実施形態では、炎症性脳疾患は、実験的自己免疫性脳脊髄炎（ＥＡＥ）である。他の実施形態では、被験体はヒトである。
【００４４】
一つの態様では、本発明は、自己免疫疾患を処置することを必要とする被験体において自己免疫疾患を処置する方法であって、有効量のＳｉｇｌｅｃ１５タンパク質、Ｓｉｇｌｅｃ１５タンパク質をコードする核酸を前記被験体に投与するステップを含み、それにより、該被験体において自己免疫疾患を処置する、方法を提供する。
【００４５】
一部の実施形態では、Ｓｉｇｌｅｃ１５タンパク質は、全長Ｓｉｇｌｅｃ１５タンパク質、Ｓｉｇｌｅｃ１５の機能性断片、またはＳｉｇｌｅｃ１５のＩｇＶドメインからなる群から選択される。
【００４６】
一部の実施形態では、自己免疫疾患は、炎症性脳疾患である。他の実施形態では、炎症性脳疾患は、多発性硬化症である。他の実施形態では、炎症性脳疾患は、実験的自己免疫性脳脊髄炎（ＥＡＥ）である。一部の実施形態では、被験体は、ヒトである。
【００４７】
別の態様では、本発明は、脳炎症応答を低下させることを必要とする被験体において脳炎症応答を低下させる方法であって、有効量のＳｉｇｌｅｃ１５の調節物質を該被験体に投与するステップを含み、該調節物質が、Ｓｉｇｌｅｃ１５の発現および／または活性を増加させ、それにより、該被験体において脳炎症応答を低下させる、方法を提供する。
【００４８】
一部の実施形態では、調節物質は、Ｓｉｇｌｅｃ１５の小分子活性化因子、Ｓｉｇｌｅｃ１５のアゴニスト抗体もしくはその抗原結合性断片、またはＳｉｇｌｅｃ１５の転写および／もしくは翻訳を活性化するタンパク質および核酸からなる群から選択される。
【００４９】
一部の実施形態では、調節物質は、Ｓｉｇｌｅｃ１５と結合性リガンドとの間の相互作用を促進する。一部の実施形態では、結合性リガンドは、ＭＡＧおよびＬＲＲＣ４Ｃからなる群から選択される。他の実施形態では、結合性リガンドは、シアリル−Ｔｎである。他の実施形態では、調節物質は、ＭＡＧおよびＬＲＲＣ４Ｃの発現および／または活性を増加させる。
【００５０】
一部の実施形態では、調節物質は、ＭＡＧの小分子活性化因子、ＭＡＧに対するアゴニスト抗体もしくはその抗原結合性断片、ＭＡＧの転写および／もしくは翻訳を活性化するタンパク質および核酸、ＬＲＲＣ４Ｃの小分子活性化因子、ＬＲＲＣ４Ｃに対するアゴニスト抗体もしくはその抗原結合性断片、またはＬＲＲＣ４Ｃの転写および／もしくは翻訳を活性化するタンパク質および核酸からなる群から選択される。
【００５１】
他の実施形態では、調節物質は、ＭＡＧタンパク質、ＭＡＧタンパク質をコードする核酸、ＬＲＲＣ４Ｃタンパク質またはＬＲＲＣ４Ｃタンパク質をコードする核酸からなる群から選択される。
【００５２】
他の実施形態では、脳炎症応答は、多発性硬化症に関連する。一部の実施形態では、脳炎症応答は、実験的自己免疫性脳脊髄炎（ＥＡＥ）に関連する。一部の実施形態では、被験体はヒトである。
【００５３】
一つの態様では、本発明は、脳炎症応答を低下させることを必要とする被験体において脳炎症応答を低下させる方法であって、有効量のＳｉｇｌｅｃ１５タンパク質、またはＳｉｇｌｅｃ１５タンパク質をコードする核酸を該被験体に投与するステップを含み、それにより、該被験体において脳炎症応答を低下させる、方法を提供する。
【００５４】
一部の実施形態では、Ｓｉｇｌｅｃ１５タンパク質は、全長Ｓｉｇｌｅｃ１５タンパク質、Ｓｉｇｌｅｃ１５の機能性断片、またはＳｉｇｌｅｃ１５のＩｇＶドメインからなる群から選択される。
【００５５】
一部の実施形態では、脳炎症応答は、多発性硬化症に関連する。一部の実施形態では、脳炎症応答は、実験的自己免疫性脳脊髄炎（ＥＡＥ）に関連する。一部の実施形態では、被験体は、ヒトである。
【００５６】
別の態様では、本発明は、被験体において自己免疫疾患またはがんを処置するために有用な化合物を同定するための方法であって、試験化合物を用意するステップと、Ｓｉｇｌｅｃ１５の発現および／または活性に対する該試験化合物の効果を決定するステップと、Ｓｉｇｌｅｃ１５の発現および／または活性をモジュレートする化合物を選択し、それにより、該被験体において自己免疫疾患またはがんを処置するために有用な化合物を同定するステップとを含む、方法を提供する。
【００５７】
一部の実施形態では、Ｓｉｇｌｅｃ１５の発現および／または活性の増加により、化合物が自己免疫疾患を処置するために有用であることが示される。他の実施形態では、Ｓｉｇｌｅｃ１５の発現および／または活性の低下により、化合物ががんを処置するために有用であることが示される。
【００５８】
一つの態様では、本発明は、腫瘍に対する免疫応答を増加させることを必要とする被験体において腫瘍に対する免疫応答を増加させるために有用な化合物を同定する方法であって、試験化合物を用意するステップと、Ｓｉｇｌｅｃ１５の発現および／または活性に対する該試験化合物の効果を決定するステップと、Ｓｉｇｌｅｃ１５の発現および／または活性を低下させる化合物を選択し、それにより、該被験体において該腫瘍に対する免疫応答を増加させるために有用な化合物を同定するステップとを含む、方法が提供される。
【００５９】
別の態様では、本発明は、脳炎症応答を低下させることを必要とする被験体において脳炎症応答を低下させるために有用な化合物を同定する方法であって、試験化合物を用意するステップと、Ｓｉｇｌｅｃ１５の発現および／または活性に対する該試験化合物の効果を決定するステップと、Ｓｉｇｌｅｃ１５の発現および／または活性を増加させる化合物を選択し、それにより、該被験体において脳炎症応答を低下させるために有用な化合物を同定するステップとを含む、方法を提供する。
【００６０】
一つの態様では、本発明は、Ｓｉｇｌｅｃ１５と、ＭＡＧ、ＬＲＲＣ４Ｃ、および／またはシアリル−Ｔｎとの間の相互作用をモジュレートする、Ｓｉｇｌｅｃ１５調節物質を提供する。一部の実施形態では、調節物質は、Ｓｉｇｌｅｃ１５のＩｇＶドメインに結合する。他の実施形態では、調節物質は、Ｓｉｇｌｅｃ１５の残基１４３を含むエピトープに結合する。
【００６１】
一部の実施形態では、調節物質は、Ｓｉｇｌｅｃ１５の阻害剤である。他の実施形態では、阻害剤は、Ｓｉｇｌｅｃ１５の小分子阻害剤、Ｓｉｇｌｅｃ１５に対するアンタゴニスト抗体もしくはその抗原結合性断片、組換えＳｉｇｌｅｃ１５融合タンパク質、またはＳｉｇｌｅｃ１５を標的とする阻害性ペプチドもしくは核酸からなる群から選択される。
【００６２】
一部の実施形態では、調節物質は、Ｓｉｇｌｅｃ１５の活性化因子である。他の実施形態では、活性化因子は、Ｓｉｇｌｅｃ１５の小分子活性化因子、Ｓｉｇｌｅｃ１５のアゴニスト抗体もしくはその抗原結合性断片、またはＳｉｇｌｅｃ１５の転写および／もしくは翻訳を活性化するタンパク質および核酸からなる群から選択される。
【００６３】
特許請求の範囲に記載されている本発明の範囲を限定するものではない以下の図および詳細な説明によって本発明を例示する。
【図面の簡単な説明】
【００６４】
【図１Ａ−Ｂ】図１Ａは、ＲＴ−ＰＣＲを使用した、種々のマウス組織におけるＳｉｇｌｅｃ１５のＲＮＡ発現パターンを示す。図１Ｂは、マイクロアレイ解析を使用した、ヒト組織におけるＳｉｇｌｅｃ１５のＲＮＡ発現パターンを示す。Ｓｉｇｌｅｃ１５は、一般に、単球、マクロファージ、樹状細胞、Ｂ細胞および破骨細胞上に発現する。
【図１Ｃ】図１Ｃは、マイクロアレイ解析に基づくＳｉｇｌｅｃ１５の発現パターンを図式的に示す。Ｓｉｇｌｅｃ１５は、一般に、単球、マクロファージ、樹状細胞、Ｂ細胞および破骨細胞上に発現する。
【００６５】
【図２】図２は、正常組織と比べた、ヒトがんにおけるＳｉｇｌｅｃ１５発現レベルを示す。
【００６６】
【図３Ａ】図３Ａは、ＮＣＩ６０マイクロアレイデータ（ＢｉｏＧＰＳ；任意の単位）を使用して決定された、ヒトがん細胞株におけるヒトＳｉｇｌｅｃ１５の発現を示す。
【図３Ｂ】図３Ｂは、ＦＡＣＳを使用して決定された、ヒトがん細胞株におけるヒトＳｉｇｌｅｃ１５の発現を示す。
【００６７】
【図４Ａ】図４Ａは、Ｓｉｇｌｅｃ１５と、結合性リガンドであるミエリン関連糖タンパク質（ＭＡＧ）およびロイシンリッチリピート含有４Ｃ（ＬＲＲＣ４Ｃ）との間の相互作用を示す。Ｓｉｇｌｅｃ１５とＭＡＧまたはＬＲＲＣ４Ｃとの間の相互作用は、マウスとヒトの間でよく保存されている。
【図４Ｂ】図４Ｂは、Ｏｃｔｅｔストレプトアビジンバイオセンサーを使用して決定した、シアリル−Ｔｎ抗原とＳｉｇｌｅｃ１５−ｍＩｇ融合タンパク質、または対照ｍＩｇとの間の結合を示す。
【００６８】
【図５−１】図５は、正常組織およびがんにおけるＭＡＧのｍＲＮＡ発現を示す。ＭＡＧの発現は、脳または脳関連腫瘍において富化されている。
【図５−２】図５は、正常組織およびがんにおけるＭＡＧのｍＲＮＡ発現を示す。ＭＡＧの発現は、脳または脳関連腫瘍において富化されている。
【図５−３】図５は、正常組織およびがんにおけるＭＡＧのｍＲＮＡ発現を示す。ＭＡＧの発現は、脳または脳関連腫瘍において富化されている。
【００６９】
【図６−１】図６は、正常組織およびがんにおけるＬＲＲＣ４ＣのｍＲＮＡ発現を示す。ＬＲＲＣ４Ｃの発現は、脳がん、乳がん、卵巣がん、腎細胞癌およびユーイング肉腫などのがんにおいて上方調節される。
【図６−２】図６は、正常組織およびがんにおけるＬＲＲＣ４ＣのｍＲＮＡ発現を示す。ＬＲＲＣ４Ｃの発現は、脳がん、乳がん、卵巣がん、腎細胞癌およびユーイング肉腫などのがんにおいて上方調節される。
【図６−３】図６は、正常組織およびがんにおけるＬＲＲＣ４ＣのｍＲＮＡ発現を示す。ＬＲＲＣ４Ｃの発現は、脳がん、乳がん、卵巣がん、腎細胞癌およびユーイング肉腫などのがんにおいて上方調節される。
【００７０】
【図７】図７は、Ｓｉｇｌｅｃ１５−ＭＡＧ相互作用またはＳｉｇｌｅｃ１５−ＬＲＲＣ４Ｃ相互作用に関する結合ドメインを図式的に示す。特に、ＭＡＧおよびＬＲＲＣ４Ｃとの相互作用にはＳｉｇｌｅｃ１５のＩｇＶドメインが必要である。ＩｇＶドメインにおけるＲ１４３Ａ変異により、ＭＡＧまたはＬＲＲＣ４Ｃいずれかとの結合が妨げられ、これにより、どちらのリガンドもＳｉｇｌｅｃ１５のＩｇＶドメインの残基１４３に結合することが示唆される。
【００７１】
【図８】図８Ａは、抗ＣＤ３抗体ＯＫＴ３を用いて刺激し、固定化ヒトＳｉｇｌｅｃ１５または対照ＩｇＧに曝露したＰＢＭＣにおける３Ｈチミジン取り込みのレベルを示す。図８Ｂは、Ｊｕｒｋａｔ  ＮＦ−ＡＴレポーター細胞において、モックプラスミド（モック）、全長ＦＡＳＬＧ（ＦＡＳＬＧ）、全長Ｓｉｇｌｅｃ１５（Ｓｉｇｌｅｃ１５  ＦＬ）、Ｓｉｇｌｅｃ１５外部ドメインおよびＢ７−Ｈ６膜貫通ドメインをコードする構築物（Ｓｉｇｌｅｃ１５  ＡＴＭ）、またはＬＲＲＣ４Ｃを過剰発現している２９３Ｔ．ｍ．ＯＫＴ３細胞と一緒にインキュベートした後に観察されたルシフェラーゼ活性のレベルを示す。
【００７２】
【図９】図９Ａは、固定化抗ＣＤ３、および固定化マウスＳｉｇｌｅｃ−１５−ｍＩｇＧ融合タンパク質（Ｓ１５−ｍＩｇ）または対照ＩｇＧ（ｍＩｇ）のいずれかを用いて刺激したマウス脾細胞における３Ｈチミジン取り込みのレベルを示す。図９Ｂは、固定化抗ＣＤ３、および可溶性マウスＳｉｇｌｅｃ−１５−ｍＩｇＧ融合タンパク質（Ｓ１５−ｍＩｇ）または対照ＩｇＧ（ｍＩｇ）のいずれかを用いて刺激したマウス脾細胞における３Ｈチミジン取り込みのレベルを示す。図９Ｃは、全長マウスＳｉｇｌｅｃ１５（ＫｂＯＶＡ−Ｓ１５）またはモック対照（ＫｂＯＶＡ−対照）を過剰発現している２９３Ｔ−ＫｂＯＶＡ細胞と共培養したＯＴ−１トランスジェニックマウス由来の活性化脾細胞における３Ｈチミジン取り込みのレベルを示す。図９Ｄは、マウスＳｉｇｌｅｃ１５を過剰発現している３種の２９３Ｔ−ＫｂＯＶＡ細胞株におけるＳｉｇｌｅｃ１５発現のレベルを示す。図９Ｅは、Ｓｉｇｌｅｃ１５発現のレベルが上昇している２９３Ｔ−ＫｂＯＶＡ細胞（図９Ｄにおいて決定されたもの）と共培養したＯＴ−１トランスジェニックマウス由来の活性化脾細胞の上清中に存在するＩＦＮ−γのレベルを示す。図９Ｆは、Ｓｉｇｌｅｃ１５発現のレベルが上昇している２９３Ｔ−ＫｂＯＶＡ細胞と共培養したＯＴ−１トランスジェニックマウス由来の活性化脾細胞の上清中に存在するＴＮＦ−αのレベルを示す。
【００７３】
【図１０】図１０Ａは、接着に基づく細胞傷害性アッセイ（ＡＣＥＡ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）によって示される、２９３Ｔ−ＫｂＯＶＡ標的細胞のＯＴ−１  Ｔ細胞による殺滅の用量反応を示す。図１０Ｂは、漸増量のＯＴ−１  Ｔ細胞の存在下での、Ｓｉｇｌｅｃ１５を過剰発現している２９３Ｔ−ＫｂＯＶＡ細胞（２９３Ｔ−ＫｂＯＶＡ−Ｓ１５）の接着シグナルとモックトランスフェクト２９３Ｔ−ＫｂＯＶＡ細胞（２９３Ｔ−ＫｂＯＶＡ−対照）の接着シグナルを比較している。比は、ＯＴ−１  Ｔ細胞の２９３Ｔ−ＫｂＯＶＡ細胞に対する割合を示す。
【００７４】
【図１１】図１１Ａは、実施例８に記載されているＯＴ−１  ｉｎ  ｖｉｖｏ活性化モデルの概略図である。図１１Ｂは、ＯＴ−１／ＲａｇＫＯマウス由来の脾細胞の静脈内移入後の、野生型（ＷＴ）マウスまたはＳｉｇｌｅｃ１５全身ノックアウト（ＫＯ）マウスの血液（左側のパネル）および脾臓（右側のパネル）における総ＣＤ８Ｔ細胞集団中のＯＴ−１細胞の百分率を示す。ＯＴ−１細胞の百分率を、ＯＴ−１四量体を使用したＦＡＣＳ染色によってモニタリングした。図１１Ｃは、抗ＥｄＵ染色によって決定し、ＥｄＵ陽性ＯＴ−１細胞／総ＯＴ−１陽性細胞の百分率として算出した、５日目における血中ＯＴ−１細胞の増殖を示す。図１１Ｄは、単離し、刺激なしで終夜培養し、アネキシンＶについて染色した脾細胞におけるアポトーシスを示す。アポトーシスをアネキシンＶ陽性ＯＴ−１細胞／総ＯＴ−１陽性細胞の百分率として算出した。
【００７５】
【図１２】図１２Ａは、図１１Ａに記載されているスケジュールに従ったＯＴ−１／ＲａｇＫＯマウス由来の脾細胞の静脈内移入後の種々の時点でのマウスの血液における総ＣＤ８Ｔ細胞集団中のＯＴ−１細胞の百分率を示す。ＷＴ、野生型マウス；ＫＯ、Ｓｉｇｌｅｃ１５全身ノックアウトマウス；ＬｙｓＭ−Ｃｒｅ  ＫＯ、マクロファージ特異的Ｓｉｇｌｅｃ１５ノックアウトマウス。図１２Ｂは、ＯＴ−１  Ｔ細胞反応中に評価した、野生型と比較した全身ＫＯマウスおよびＬｙｓＭ−Ｃｒｅ  ＫＯマウスの血漿中のＩＬ−１０のレベルを示す。
【００７６】
【図１３】図１３は、１１カ月齢の野生型（ＷＴ）マウスまたはＳｉｇｌｅｃ１５ノックアウト（Ｓ１５ＫＯ）マウスの血液中の骨髄系細胞、ＣＤ８＋細胞、およびＣＤ４＋細胞の百分率を示す。
【００７７】
【図１４】図１４は、モックプラスミド（対照）、全長ＬＲＲＣ４Ｃ、またはＳｉｇｌｅｃ１５を過剰発現する２９３Ｔ細胞と共培養したマクロファージの上清中のサイトカインレベルを示す。
【００７８】
【図１５】図１５は、Ｓｉｇｌｅｃ１５抗体Ｓ１５ｍ０２はＳｉｇｌｅｃ１５がＭＡＧまたはＬＲＲＣ４Ｃと結合するのを妨害する遮断抗体として作用し、一方、Ｓｉｇｌｅｃ１５抗体Ｓ１５ｍ０３は、Ｓｉｇｌｅｃ１５とＭＡＧまたはＬＲＲＣ４Ｃとの間の相互作用に影響を及ぼさなかったことを示す。
【００７９】
【図１６】図１６は、Ｓｉｇｌｅｃ１５の遮断抗体であるＳ１５ｍ０２の添加により、ＥＡＥマウスにおいて対照ｍＡｂを注射されたまたはＳ１５ｍ０３抗体を受けたそれらの対応物よりも重症の疾患の症状の発生が引き起こされたことを示す。
【００８０】
【図１７】図１７は、ＥＡＥ（実験的自己免疫性脳脊髄炎）マウスへのＳｉｇｌｅｃ１５−Ｆｃ融合タンパク質の添加により、それらのマウスにおける炎症の促進が引き起こされたことを示す。
【００８１】
【図１８】図１８は、Ｓｉｇｌｅｃ１５ノックアウト（ＫＯ）マウス（上の線）が野生型（ＷＴ）マウス（下の線）よりも重症のＥＡＥ疾患の症状を示し、それにより、脳炎症応答の調節におけるＳｉｇｌｅｃ１５の阻害性の役割が示されたことを示す。
【００８２】
【図１９】図１９Ａは、０日目および１日目にＭＯＧペプチドで免疫し、百日咳毒素で追加免疫し、その後、６日目に開始して週２回、合計４回の投薬で、Ｓｉｇｌｅｃ１５−ｍＩｇ融合タンパク質（Ｓｉｇｌｅｃ１５−ｍＩｇ）もしくは対照ｍＩｇ（左側のパネル）、またはＳｉｇｌｅｃ１５−ｈＩｇ融合タンパク質（Ｓｉｇｌｅｃ１５−ｈＩｇ）もしくは対照ｈＩｇ（右側のパネル）１００μｇを用いて処置したＷＴマウスのＥＡＥ臨床スコアを示す。図１９Ｂは、１２日目に対照ｍＩｇで処置したマウスから得、５μｇ／ｍｌのＳｉｇｌｅｃ１５−ｍＩｇ（Ｓ１５−ｍＩｇ）または対照ｍＩｇ（ｍＩｇ）の存在下でＭＯＧペプチド（６０μｇ／ｍｌ）を用いて３日間再刺激した脾細胞における３Ｈ−チミジン取り込みを示す。
【００８３】
【図２０】図２０は、神経膠芽腫を有するマウスにおいて、Ｓｉｇｌｅｃ１５−Ｆｃ処置によってＳｉｇｌｅｃを遮断することにより、腫瘍サイズが有意に縮小したことを示す。
【００８４】
【図２１】図２１は、Ｓｉｇｌｅｃ１５−Ｆｃ処置によってＳｉｇｌｅｃを遮断することにより、神経膠芽腫を有するマウスの生存が有意に延長されたことを示す。
【００８５】
【図２２−１】図２２は、神経膠芽腫を有するマウスの腫瘍サイズの縮小および生存利益の促進に対するＳｉｇｌｅｃ１５−Ｆｃ処置および抗ＰＤＬ１処置の相乗効果を示す。
【図２２−２】図２２は、神経膠芽腫を有するマウスの腫瘍サイズの縮小および生存利益の促進に対するＳｉｇｌｅｃ１５−Ｆｃ処置および抗ＰＤＬ１処置の相乗効果を示す。
【００８６】
【図２３Ａ】図２３Ａは、０日目にルシフェラーゼレポーターを含有するＧＬ２６１神経膠芽腫細胞を頭蓋内接種した野生型（ＷＴ）マウスまたはＳｉｇｌｅｃ１５ノックアウト（Ｓｉｇｌｅｃ１５  ＫＯ）マウスの脳におけるルシフェラーゼ活性を示す。
【図２３Ｂ】図２３Ｂは、ＧＬ２６１細胞の接種後１３日目および１８日目のＷＴマウスおよびＫＯマウスの脳におけるルシフェラーゼ活性の画像を示す。
【図２３Ｃ】図２３Ｃは、ＧＬ２６１を接種したＷＴマウスおよびＫＯマウスの生存曲線を示す。
【００８７】
【図２４Ａ】図２４Ａは、１４日目の両群（ＷＴおよびＫＯ）の脳または脾臓におけるＣＤ８Ｔ細胞の百分率および総数を示す。
【図２４Ｂ】図２４Ｂは、１４日目の両群（ＷＴおよびＫＯ）の脳または脾臓におけるＣＤ４Ｔ細胞の百分率および総数を示す。
【図２４Ｃ−１】図２４Ｃは、１４日目の両群（ＷＴおよびＫＯ）の脳または脾臓における樹状細胞（ＤＣ）、マクロファージ、および小膠細胞の百分率および総数を示す。
【図２４Ｃ−２】図２４Ｃは、１４日目の両群（ＷＴおよびＫＯ）の脳または脾臓における樹状細胞（ＤＣ）、マクロファージ、および小膠細胞の百分率および総数を示す。
【図２４Ｄ】図２４Ｄは、１４日目に得、ＧＬ−２６１腫瘍細胞を用いて終夜再刺激した、腫瘍を有するＷＴマウスまたはＫＯマウス由来の脳リンパ球におけるＩＦＮ−γ陽性ＣＤ８またはＣＤ４Ｔ細胞の百分率および総数を示す。
【００８８】
【図２５】図２５Ａは、抗Ｓｉｇｌｅｃ１５モノクローナル抗体を用いたＦＡＣＳ染色によって決定されたＭＣ３８−Ｓ１５−細胞およびＭＣ３８−Ｓ１５＋細胞におけるＳｉｇｌｅｃ１５発現を示す（図２５Ａ）。図２５Ｂは、Ｂ６マウスにおける、皮下注射による接種後のＭＣ３８−Ｓ１５−細胞およびＭＣ３８−Ｓ１５＋細胞の腫瘍成長を示す（図２５Ｂ）。
【００８９】
【図２６】図２６は、ＭＣ３８−Ｓ１５＋安定細胞株を接種し、対照抗体、抗Ｓｉｇｌｅｃ１５抗体ｍ０１、またはＳｉｇｌｅｃ１５−ｍＩｇ融合タンパク質を用いて処置したＢ６マウスにおける平均腫瘍サイズを示す。各群における平均腫瘍サイズが示されている。
【００９０】
【図２７】図２７Ａは、リガンドとしての機能を果たすＳｉｇｌｅｃ１５の提唱された作用機構を要約する。図２７Ｂは、受容体としての機能を果たすＳｉｇｌｅｃ１５の提唱された作用機構を要約する。
【発明を実施するための形態】
【００９１】
発明の詳細な説明
本発明は、少なくとも一部において、Ｓｉｇｌｅｃ１５ががんに対する免疫応答の抑制において欠くことができない役割を果たすという発見に基づき、したがって、がん治療薬の今後の開発のためにＳｉｇｌｅｃ１５経路を操作するための理論的根拠を提供する。特に、Ｓｉｇｌｅｃ１５の発現の低下により、脳腫瘍を有するマウスの腫瘍サイズが縮小し、また、生存が延長されることが発見されている。さらに、脳炎症マウスモデルにおいてＳｉｇｌｅｃ１５とそのリガンドとの間の相互作用を遮断することによって、ならびにＳｉｇｌｅｃ１５ノックアウトマウスにおいてＳｉｇｌｅｃ１５の発現を消滅させることによってＳｉｇｌｅｃ１５活性を阻害することにより、脳炎症が悪化した。したがって、本発明は、被験体において、Ｓｉｇｌｅｃ１５ならびに同じ経路内のその結合パートナーの発現および／または活性をモジュレートすることにより、がんを処置する方法、自己免疫疾患を処置する方法、がんに対する免疫応答を調節する方法、および炎症応答を調節する方法を提供する。
【００９２】
Ｉ．定義
本発明をより容易に理解することができるように、最初に特定の用語を定義する。本明細書において特に定義されていなければ、本発明に関連して使用される科学技術用語は、当業者に一般に理解される意味を有するものとする。用語の意味および範囲は明白であるはずであるが、なんらかの潜在的な多義性がある場合には、本明細書において提示される定義がいかなる辞書によるよりもまたは外部の定義にも先行する。本明細書における値の範囲の列挙は、本明細書において別段の指定のない限り、ただ単に、列挙されているまたはその範囲内に入る別々の値のそれぞれを個別に言及する簡潔な方法としての役割を果たすものとし、別々の値のそれぞれがあたかも個別に列挙されたものと同様に本明細書に組み込まれる。
【００９３】
以下の記載では、説明目的で、本発明の詳細な理解をもたらすために、特定の数、材料および構成が記載されている。しかし、これらの特定の詳細を伴わずに本発明を実施することができることが当業者には明らかである。一部の例では、本発明が不明瞭にならないように周知の特徴を省略または簡易化することができる。さらに、本明細書では、「一実施形態」または「ある実施形態」などの句への言及は、実施形態に関連して記載されている特定の特徴、構造または特性が本発明の実施形態の少なくとも１つに含まれることを意味する。本明細書の各所での「一実施形態では」などの句の出現は、全てが同じ実施形態について言及するものとは限らない。
【００９４】
「ａ（１つの）」および「ａｎ（１つの）」および「ｔｈｅ（その）」という用語および同様の指示対象の使用は、本発明の記載に関しては（特に以下の特許請求の範囲と関連して）、本明細書において特に指定がある場合または文脈から明らかに矛盾する場合を除き、単数と複数の両方を包含する（すなわち、１つまたは複数（ｏｎｅ  ｏｒ  ｍｏｒｅ））と解釈されるべきである。例として、「１つの（ａｎ）要素」とは、１つの要素または１つよりも多くの要素を意味する。「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」、「有する（ｈａｖｉｎｇ）」、「含む（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」および「含有する（ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ）」という用語は、特に断りのない限り、オープンエンドの用語（すなわち、「これだけに限定されないが、を含めた（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ，ｂｕｔ  ｎｏｔ  ｌｉｍｉｔｅｄ  ｔｏ）」を意味する）であると解釈されるべきである。
【００９５】
本明細書で使用される場合、「Ｓｉｇｌｅｃ１５」という用語は、シアル酸結合性Ｉｇ様レクチン１５、ＣＤ３３抗原様３、ＣＤ３３分子様３、ＣＤ３３Ｌ３およびＨｓＴ１３６１としても公知であり、シアル酸結合性構成成分およびＩｇ様分子を含有するレクチンファミリータンパク質のメンバーである。ヒトＳｉｇｌｅｃ１５  ｍＲＮＡの配列は、例えば、ＧｅｎＢａｎｋ受託ＧＩ：２２５６３７５３６（ＮＭ＿２１３６０２．２；配列番号１）において見いだすことができる。ヒトＳｉｇｌｅｃ１５ポリペプチド配列の配列は、例えば、ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＧＩ：４  ７１０６０６９（ＮＰ＿９９８７６７．１配列番号２）において見いだすことができる。
【００９６】
本明細書で使用される場合、「ＭＡＧ」という用語は、ミエリン関連糖タンパク質、シアル酸結合性Ｉｇ様レクチン４Ａ、ＳＩＧＬＥＣ４ＡまたはＧＭＡとしても公知であり、Ｉ型膜タンパク質であり、また、免疫グロブリンスーパーファミリーのメンバーである。ＭＡＧは、ＮＯＧＯ−６６の機能的な受容体であり、ニューロンミエリン化に関与すると考えられている。ＭＡＧはまた、骨髄系細胞および特に小膠細胞に存在する。ＭＡＧノックアウト（ＫＯ）マウスには、食作用に関する問題がある。ＭＡＧは、シアリル化された複合糖質に結合し、ある特定のミエリン−ニューロン細胞間相互作用を媒介する。この遺伝子に関しては、異なるアイソフォームをコードする選択的にスプライシングされた転写物が３種記載されている。ヒトＭＡＧ  ｍＲＮＡの配列は、例えば、ＧｅｎＢａｎｋ受託ＧＩ：３１２８３６８４９（ＮＭ＿００２３６１．３；配列番号３）において見いだすことができる。ヒトＭＡＧポリペプチド配列の配列は、例えば、ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＧＩ：１１２２５２５８（ＮＰ＿００２３５２．１配列番号４）において見いだすことができる。
【００９７】
本明細書で使用される場合、「ＬＲＲＣ４Ｃ」という用語は、ロイシンリッチリピート（ＬＲＲ）含有４Ｃ、ネトリン−Ｇ１リガンド、ＮＧＬ１、またはＫＩＡＡ１５８０としても公知である。ＬＲＲＣ４Ｃは、ニューロンに関連する成長、樹状突起形成、および軸索伸長に関連するＬＲＲファミリー分子である。ＬＲＲＣ４Ｃは、興奮性シナプスのシナプス後側に主に局在しており、シナプス前リガンドであるネトリン−Ｇ１と相互作用して興奮性シナプス形成を調節する。ヒトＬＲＲＣ４Ｃ  ｍＲＮＡの配列は、例えば、ＧｅｎＢａｎｋ受託ＧＩ：３８５７２４８１０（ＮＭ＿０２０９２９．２；配列番号５）において見いだすことができる。ヒトＬＲＲＣ４Ｃポリペプチド配列の配列は、例えば、ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＧＩ：５１３１７３７３（ＮＰ＿０６５９８０．１配列番号６）において見いだすことができる。
【００９８】
本明細書で使用される場合、「シアリル−Ｔｎ」という用語は、「ＳＴｎ」、「シアリル−Ｔｎ抗原」、および「Ｎｅｕ５Ａｃα２−６ＧａｌＮＡｃα−Ｏ−Ｓｅｒ／Ｔｈｒ」としても公知であり、Ｔｎ抗原のシアル酸置換型を指す。Ｔｎ抗原は、Ｏ−グリカンとして、グリコシド結合によってセリンまたはトレオニンに連結したＮ−アセチルガラクトサミン（ＧａｌＮＡｃ）オリゴ糖である。シアリル−Ｔｎは、ＧａｌＮＡｃ  α−Ｏ−Ｓｅｒ／Ｔｈｒと連結したシアル酸α−２，６を含有する短縮型Ｏ−グリカンである。シアリル−Ｔｎ発現は、異常なグリコシル化経路の活性化によって引き起こされ、一般には、腫瘍細胞において起こる。シアリル−Ｔｎの生合成は、シアリルトランスフェラーゼＳＴ６ＧａｌＮＡｃ１の発現、およびＣＯＳＭＣ（コア１  β３−Ｇａｌ−Ｔ特異的分子シャペロン）の変異に関連付けられている。シアリル−Ｔｎ発現は、胃がん、結腸がん、乳がん、肺がん、食道がん、前立腺がん、および子宮体がんを含めたヒト癌の８０％超において報告されており、また、予後不良に関連付けられる（Munkley、Int.  J.  Mol.  Sci.（２０１６年）、１７巻（３号）：２７５頁）。
【００９９】
別段の指定がない限り、全体を通して、分子の名称、例えば、Ｓｉｇｌｅｃ１５、ＭＡＧまたはＬＬＲＣ４Ｃは、遺伝子およびタンパク質のどちらも含むことに留意するべきである。したがって、「Ｓｉｇｌｅｃ１５」という用語は、分子に関して使用される場合、Ｓｉｇｌｅｃ１５タンパク質とＳｉｇｌｅｃ１５遺伝子のどちらも含む。
【０１００】
「Ｓｉｇｌｅｃ１５のレベル」という用語は、Ｓｉｇｌｅｃ１５  ｍＲＮＡまたはｃＤＮＡ、および／またはタンパク質濃度のレベル、Ｓｉｇｌｅｃ１５タンパク質、ＤＮＡ、ｍＲＮＡまたはｃＤＮＡの発現、活性、機能、または安定性を包含する。一実施形態では、「レベル」という用語は、本明細書で使用される場合、測定可能なＳｉｇｌｅｃ１５の数量を指す。量は、（ａ）単位体積もしくは細胞当たりの分子、モルもしくは重量で測定される絶対量または（ｂ）例えばデンシトメトリー分析によって測定される相対量のいずれであってもよい。
【０１０１】
本明細書で使用される場合、「Ｓｉｇｌｅｃ１５の調節物質」は、Ｓｉｇｌｅｃ１５のｍＲＮＡ発現および／もしくはタンパク質発現；ならびに／またはＳｉｇｌｅｃ１５のｍＲＮＡおよび／もしくはタンパク質の安定性；ならびに／またはＳｉｇｌｅｃ１５の生物活性をモジュレートする任意の化合物または分子を指す。調節物質は、Ｓｉｇｌｅｃ１５の発現および／または活性を直接または間接的にモジュレートし得る。Ｓｉｇｌｅｃ１５の調節物質は、Ｓｉｇｌｅｃ１５に直接作用する、例えば、Ｓｉｇｌｅｃ１５に結合し、その機能を阻害または活性化する抗体である。別の実施形態では、Ｓｉｇｌｅｃ１５の調節物質は、Ｓｉｇｌｅｃ１５に間接的に作用し（例えば、別の分子、例えば、Ｓｉｇｌｅｃ１５の結合パートナーを通じて）、結果としてＳｉｇｌｅｃ１５の活性の増加または低下をもたらす。本発明の方法における使用に適した例示的な作用物質（agent）としては、干渉性核酸分子（例えば、アンチセンスＲＮＡ、ｓｄＲＮＡ、およびｓｉＲＮＡ）、細胞内抗体、組換え融合タンパク質、阻害性ペプチド、または小分子が挙げられる。本発明の方法における使用に適した作用物質は、以下に詳細に考察されている。
【０１０２】
本明細書で使用される場合、様々な形態の「モジュレートする」という用語は、刺激（例えば、特定の応答または活性を増加させるまたは上方調節すること）および阻害（例えば、特定の応答または活性を低下させるまたは下方調節すること）を含む。一部の実施形態では、調節物質は、Ｓｉｇｌｅｃ１５の阻害剤である。一部の実施形態では、調節物質は、Ｓｉｇｌｅｃ１５の活性化因子である。
【０１０３】
本明細書で使用される場合、「阻害する」という用語は、Ｓｉｇｌｅｃ１５の発現、安定性、および／または生物活性の低下を指す。例えば、「阻害する」という用語は、本明細書に記載されているＳｉｇｌｅｃ１５の発現、安定性、および／または活性を低下させるまたは下方調節する能力を指す。
【０１０４】
本明細書で使用される場合、「刺激する」とは、Ｓｉｇｌｅｃ１５の発現、安定性および／または生物活性の増加を指す。例えば、「刺激する」という用語は、本明細書に記載されているＳｉｇｌｅｃ１５の発現、安定性、および／または活性を増加させるまたは上方調節する能力を指す。
【０１０５】
「Ｓｉｇｌｅｃ１５活性の阻害剤」または「Ｓｉｇｌｅｃ１５アンタゴニスト」とは、本明細書で使用される場合、Ｓｉｇｌｅｃ１５によって媒介される生物活性を部分的にまたは完全に遮断する、阻害する、または中和する任意の分子を含む。一部の実施形態では、Ｓｉｇｌｅｃ１５アンタゴニストは、Ｓｉｇｌｅｃ１５ポリペプチドを阻害する。他の実施形態では、Ｓｉｇｌｅｃ１５アンタゴニストは、Ｓｉｇｌｅｃ１５のリガンド、例えばＭＡＧ、ＬＲＲＣ４Ｃ、またはシアリル−Ｔｎを阻害する。
【０１０６】
「Ｓｉｇｌｅｃ１５活性のアゴニスト」または「Ｓｉｇｌｅｃ１５アゴニスト」は、本明細書で使用される場合、それが結合する抗原の生物活性を部分的にまたは完全に刺激または強化する任意の分子を含む。例示的なＳｉｇｌｅｃ１５アゴニストは、Ｓｉｇｌｅｃ１５に結合し、結合するとＳｉｇｌｅｃ１５を通じたシグナルの伝達を刺激し、Ｓｉｇｌｅｃ１５と天然のリガンド、例えばＭＡＧ、ＬＲＲＣ４Ｃ、またはシアリル−Ｔｎとの相互作用を模倣する。他の例示的なＳｉｇｌｅｃ１５活性のアゴニストは、Ｓｉｇｌｅｃ１５リガンド、例えばＭＡＧ、ＬＲＲＣ４Ｃ、またはシアリル−Ｔｎに結合し、それを通じてシグナルを伝達し、そのリガンドとＳｉｇｌｅｃ１５との相互作用を模倣する。
【０１０７】
「抗体」という用語は、本明細書で使用される場合、２つの重（Ｈ）鎖と２つの軽（Ｌ）鎖がジスルフィド結合によって相互接続した、４つのポリペプチド鎖で構成される免疫グロブリン分子を指すものとする。各重鎖は重鎖可変領域（本明細書ではＨＣＶＲまたはＶＨと略される）および重鎖定常領域で構成される。重鎖定常領域は、３つのドメイン、ＣＨ１、ＣＨ２およびＣＨ３で構成される。各軽鎖は、軽鎖可変領域（本明細書ではＬＣＶＲまたはＶＬと略される）および軽鎖定常領域で構成される。軽鎖定常領域は１つのドメイン、ＣＬで構成される。ＶＨ領域およびＶＬ領域は、相補性決定領域（ＣＤＲ）と称される超可変性の領域と、散在する、より保存されたフレームワーク領域（ＦＲ）と称される領域にさらに細分することができる。各ＶＨおよびＶＬは３つのＣＤＲおよび４つのＦＲで構成され、アミノ末端からカルボキシ末端まで以下の順序：ＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲｌ、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、ＦＲ４で配置されている。
【０１０８】
抗体の「抗原結合性部分」または「抗原結合性断片」（または単に「抗体部分」）という用語は、本明細書で使用される場合、全長抗体の一部、一般に、標的結合性領域または可変領域を指す。抗体断片の例としては、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２およびＦｖ断片が挙げられる。抗体の「機能性断片」という句は、全長抗体と共通した定性的生物活性を有する化合物である。例えば、アンタゴニスト抗Ｓｉｇｌｅｃ１５抗体の機能性断片は、Ｓｉｇｌｅｃ１５によって媒介される生物活性を遮断、阻害、または中和するように、Ｓｉｇｌｅｃ１５に結合し得る。本明細書で使用される場合、「機能性断片」とは、抗体に関しては、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、ダイアボディ、Ｆ（ａｂ）およびＦ（ａｂ’）２断片を指す。「Ｆｖ」断片は、完全な標的認識および結合性部位を含有する最小の抗体断片である。この領域は、重鎖可変ドメイン１つと軽鎖可変ドメイン１つが密接に非共有結合により会合した二量体からなる（ＶＨ−ＶＬ二量体）。この立体配置では、各可変ドメインの３つのＣＤＲが相互作用してＶＨ−ＶＬ二量体の表面上の標的結合性部位が規定される。ｓｃＦｖは、ＶＨドメインとＶＬドメインが相互作用して標的結合性部位を形成するのが可能になるサイズのリンカーペプチドによって接続した１つの重鎖可変ドメインと１つの軽鎖可変ドメインを含有する。集合的に、６つのＣＤＲにより、抗体または抗体断片に標的結合特異性が付与される。しかし、単一の可変ドメイン（または標的に特異的な３つのＣＤＲのみを含む、Ｆｖの半分）であっても、結合性部位全体よりも親和性は低いが、標的を認識し、それに結合する能力を有し得る。
【０１０９】
「アンタゴニスト抗体」または「遮断抗体」という用語は、本明細書で使用される場合、それが結合する抗原の生物活性を阻害するまたは低下させる抗体を指す。例示的なアンタゴニスト抗体は、抗原の生物活性を実質的にまたは完全に阻害する。
【０１１０】
「アゴニスト抗体」という用語は、本明細書で使用される場合、それが結合する抗原の生物活性を刺激または強化する抗体を指す。例示的なアゴニスト抗体は、結合すると抗原を通じたシグナルの伝達を刺激し、抗原と天然のリガンドとの相互作用を模倣する。
【０１１１】
「被験体」という用語は、本明細書では、動物、例えば、霊長類（例えば、ヒト、非ヒト霊長類、例えば、サル、およびチンパンジー）、非霊長類（例えば、ウシ、ブタ、ラクダ、ラマ、ウマ、ヤギ、ウサギ、ヒツジ、ハムスター、モルモット、ネコ、イヌ、ラット、マウス、およびクジラ）を含めた哺乳動物、鳥類（例えば、アヒルまたはガチョウ）、ならびにサメを指すために使用される。ある実施形態では、被験体は、ヒト、例えば、疾患、障害もしくは状態について処置もしくは評価される人間、疾患、障害もしくは状態のリスクがあるヒト、疾患、障害もしくは状態を有するヒト、および／または本明細書に記載されている疾患、障害もしくは状態について処置されるヒトである。一部の実施形態では、被験体は、依然として自己免疫疾患に罹患していない。一実施形態では、被験体は、およそ１歳、およそ２歳、およそ３歳、およそ４歳、およそ５歳、およそ６歳、およそ７歳、およそ８歳、およそ９歳、またはおよそ１０歳である。別の実施形態では、被験体は、およそ５〜１０歳、およそ１０〜１５歳、およそ１５〜２０歳、およそ２０〜２５歳、およそ２５〜３０歳、およそ３０〜３５歳、およそ３５〜４０歳、およそ４０〜４５歳、およそ４５〜５０歳、およそ５０〜５５歳、およそ５５〜６０歳、およそ６０〜６５歳、およそ６５〜７０歳、およそ７０〜７５歳、およそ７５〜８０歳、およそ８０〜８５歳、およそ８５〜９０歳、およそ９０〜９５歳、およそ９５〜１００歳である。上に列挙されている範囲の間に入る値および範囲も本発明の一部であることが意図されている。さらに、上に列挙されている任意の値の組合せを上限および／または下限として使用した値の範囲が含まれるものとする。
【０１１２】
本明細書で使用される場合、「処置すること（ｔｒｅａｔｉｎｇ）」または「処置（ｔｒｅａｔｍｅｎｔ）」という用語は、これだけに限定されないが、検出可能であるか検出可能でないかにかかわらず、１つまたは複数の症状の緩和または好転、障害の程度の低下、障害が安定した（すなわち、悪化しない）状態、障害の好転または軽減を含めた、有益なまたは所望の結果を指す。「処置（ｔｒｅａｔｍｅｎｔ）」はまた、生存を、処置がない場合に予測される生存と比較して延長させることも含む。
【０１１３】
本明細書で使用される場合、「有効量」という用語は、障害もしくはその１つもしくは複数の症状の重症度および／もしくは持続時間を低減するもしくは好転させるため、障害の進行を阻害もしくは防止するため、障害の退縮を引き起こすため、障害に関連する１つもしくは複数の症状の再発、発達、発症もしくは進行を阻害もしくは防止するため、障害を検出するため、または別の療法（例えば、予防剤もしくは治療剤）の予防もしくは治療効果（複数可）を増強もしくは改善するために十分である療法の量を指す。有効量は、１用量よりも多くを必要とする場合がある。
【０１１４】
ＩＩ．本発明の方法。
本発明は、少なくとも一部において、Ｓｉｇｌｅｃ１５が免疫調節において欠くことができない役割を有するという発見に基づく。Ｓｉｇｌｅｃ１５は、破骨細胞分化に関して広範囲にわたって試験されており、そこでは、Ｓｉｇｌｅｃ１５は非免疫学的役割を果たしている。破骨細胞分化におけるその役割に加えて、Ｓｉｇｌｅｃ１５は、本明細書に記載されている通り、Ｔ細胞およびマクロファージを含めた免疫細胞の活性を抑制することによって免疫応答を調節する。したがって、がん細胞または腫瘍微小環境におけるＳｉｇｌｅｃ１５の上方調節により、がんに対する被験体の免疫応答が抑止され得る。さらに、Ｓｉｇｌｅｃ１５の欠損は、自己免疫に関連する状態の一因となり得る。
【０１１５】
理論に束縛されることを望むものではないが、Ｓｉｇｌｅｃ１５が、リガンドとして、および／または受容体として作用することにより、免疫調節機能を果たし得ることが提唱されている（図２７）。Ｓｉｇｌｅｃ１５は、骨髄系細胞において発現し、脳微小環境、がん細胞、および腫瘍微小環境において過剰発現する。Ｓｉｇｌｅｃ１５は、脳、がん細胞、または腫瘍微小環境において過剰発現すると、それはリガンドとして機能し得、そこで、Ｔ細胞応答に直接、または骨髄系細胞を通じて間接的に影響を及ぼし得る。Ｔ細胞および骨髄系細胞はどちらも、Ｓｉｇｌｅｃ１５の免疫抑止機能に関与する受容体（複数可）を発現し得る（図２７Ａ）。それに加えてまたはその代わりに、脳微小環境、がん細胞、または腫瘍微小環境におけるＳｉｇｌｅｃ１５リガンドの発現により、受容体として作用するＳｉｇｌｅｃ１５を通じたシグナルトランスダクションが誘導され得る（図２７Ｂ）。したがって、Ｓｉｇｌｅｃ１５は、骨髄系細胞：Ｔ細胞相互作用、またはＩＬ−１０およびＴＧＦ−ベータなどの免疫抑制性サイトカインを通じたＴ細胞応答に間接的に影響を及ぼし得る。
【０１１６】
種々の態様では、本発明は、Ｓｉｇｌｅｃ１５の活性を促進または阻害することによって免疫機能をモジュレートする方法を対象とする。
【０１１７】
Ａ．Ｓｉｇｌｅｃ１５の発現および／または活性を低下させることによって免疫応答を増加させる方法。
一態様では、本発明は、有効量のＳｉｇｌｅｃ１５の調節物質を被験体に投与することによって被験体において免疫応答または炎症応答を増加させるための方法であって、調節物質が、被験体においてＳｉｇｌｅｃ１５の発現および／または活性を低下させる、方法を提供する。一実施形態では、この方法を使用して、被験体においてＴ細胞、例えばＣＤ４Ｔ細胞および／またはＣＤ８Ｔ細胞の数を増加させることができる。別の実施形態では、この方法を使用して、被験体においてＴ細胞、例えばＣＤ４Ｔ細胞および／またはＣＤ８Ｔ細胞の活性を増加させることができる。
【０１１８】
前述の方法を使用して、被験体において免疫応答を増加させるまたは強化することが有益であると思われる障害を処置することができる。例えば、Ｓｉｇｌｅｃ１５の発現および／または活性を低下させるＳｉｇｌｅｃ１５の調節物質を使用して、がんを処置することを必要とする被験体においてがんを処置することができる。そのような方法は、有効量のＳｉｇｌｅｃ１５の調節物質を、投与することを必要とする被験体に投与するステップを含んでよく、調節物質が、被験体においてＳｉｇｌｅｃ１５の発現レベルおよび／または活性レベルを低下させ、それにより、被験体においてがんを処置する。
【０１１９】
別の態様では、本発明は、腫瘍サイズを縮小させることを必要とする被験体において腫瘍サイズを縮小させるための方法を提供する。方法は、有効量のＳｉｇｌｅｃ１５の調節物質を、投与することを必要とする被験体に投与するステップを含み、調節物質が、被験体においてＳｉｇｌｅｃ１５の発現レベルおよび／または活性レベルを低下させ、それにより、被験体において腫瘍サイズを縮小させる。
【０１２０】
一態様では、本発明は、生存を延長させることを必要とする被験体の生存を延長させるための方法を特徴とする。方法は、有効量のＳｉｇｌｅｃ１５の調節物質を、投与することを必要とする被験体に投与するステップを含み、調節物質が、被験体においてＳｉｇｌｅｃ１５の発現レベルおよび／または活性レベルを低下させ、それにより、被験体の生存を延長させる。
【０１２１】
別の態様では、本発明は、腫瘍に対する免疫応答を増加させることを必要とする被験体において腫瘍に対する免疫応答を増加させるための方法を特徴とする。方法は、有効量のＳｉｇｌｅｃ１５の調節物質を、投与することを必要とする被験体に投与するステップを含み、調節物質が、被験体においてＳｉｇｌｅｃ１５の発現レベルおよび／または活性レベルを低下させ、それにより、被験体において腫瘍に対する免疫応答を増加させる。
【０１２２】
本発明の方法における使用に適したＳｉｇｌｅｃ１５の調節物質としては、Ｓｉｇｌｅｃ１５の発現および／または活性、例えば、Ｓｉｇｌｅｃ１５のｍＲＮＡ発現および／またはタンパク質発現；Ｓｉｇｌｅｃ１５のｍＲＮＡおよび／またはタンパク質の安定性；および／またはＳｉｇｌｅｃ１５の生物活性を調節することが可能な任意の化合物または分子が挙げられる。調節物質は、Ｓｉｇｌｅｃ１５の発現および／または活性を直接または間接的にモジュレートすることが可能である。一部の実施形態では、調節物質は、Ｓｉｇｌｅｃ１５の発現および／または活性を阻害する。Ｓｉｇｌｅｃ１５の阻害性調節物質は、Ｓｉｇｌｅｃ１５に直接作用することができ、例えば、Ｓｉｇｌｅｃ１５に結合し、その機能を阻害するアンタゴニスト抗体である。あるいは、Ｓｉｇｌｅｃ１５の阻害性調節物質は、Ｓｉｇｌｅｃ１５に間接的に（例えば、別の分子、例えば、Ｓｉｇｌｅｃ１５の結合パートナーを通じて）作用し、結果として、活性の低下をもたらす。本発明の方法における使用に適した例示的な調節物質としては、小分子阻害剤、アンタゴニスト抗体もしくはその抗原結合性断片、組換え融合タンパク質（例えば、可溶性Ｓｉｇｌｅｃ１５融合タンパク質、例えば、可溶性Ｓｉｇｌｅｃ１５−Ｆｃ）、阻害性ペプチド、または干渉性核酸分子（例えば、アンチセンスＲＮＡ、ｓｄＲＮＡ、およびｓｉＲＮＡ）が挙げられる。本発明の方法における使用に適した調節物質は、以下に詳細に考察されている。
【０１２３】
本発明のＳｉｇｌｅｃ１５の調節物質は、Ｓｉｇｌｅｃ１５と結合性リガンドとの間の相互作用を遮断することもできる。Ｓｉｇｌｅｃ１５の結合性リガンドは、当技術分野で公知の任意の方法によって同定することができる。例えば、Ｓｉｇｌｅｃ１５と結合性リガンドとの間のタンパク質間相互作用は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏにおいて目的のタンパク質の対の結合を抗体との共沈降物の形成によって決定する共免疫沈降によって同定することができる。あるいは、酵母ツーハイブリッド手法またはファージディスプレイ手法を使用して、Ｓｉｇｌｅｃ１５の結合性リガンドについてスクリーニングすることができる。一部の実施形態では、化学的架橋アッセイ、その後に質量分析を使用して、相互作用タンパク質を同定することができる。
【０１２４】
一部の実施形態では、本発明において使用するために適したＳｉｇｌｅｃ１５の結合性リガンドは、受容体アレイ技術によって同定することができる。受容体アレイ技術は、標的タンパク質の対抗受容体をスクリーニングするための十分に確立された技術である（Zhu  Yら、Nat  Commun、４巻：２０４３頁、２０１３年；Yao  Sら、Immunity、３４巻（５号）：７２９〜７４０頁、２０１１年）。簡単に述べると、受容体アレイは、複数のウェルを含む固体支持体構造を含み、複数のウェルのそれぞれが、受容体タンパク質をコードする遺伝子がトランスフェクトされた細胞を含む。以前に記載されている通り、標的遺伝子（分泌タンパク質をコードする）または標的遺伝子の細胞外ドメイン（膜貫通タンパク質、例えば、免疫調節物質をコードする）をタグ遺伝子（マウスＩｇＧ２ａ  Ｆｃ、ヒトＩｇＧ１  Ｆｃ、ＦＬＡＧ、または６×ＨＩＳ）と遺伝的に融合して、融合遺伝子を調製する（Chapoval、AIら、Mol  Biotechnol、２１巻（３号）：２５９〜２６４頁、２００２年）。個々の融合遺伝子を２９３Ｔ細胞にトランスフェクトしたら、精製した組換え融合タンパク質を使用して、受容体アレイに対してスクリーニングする。タグに対する蛍光標識された二次抗体を適用して、標的タンパク質、例えば本発明の方法に基づいて同定される免疫調節物質の、トランスフェクトされた２９３Ｔ細胞への結合を検出し、Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ  ８２００  Ｃｅｌｌｕｌａｒ  Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ  Ｓｙｓｔｅｍを使用してスクリーニングし、ＣＤＳ  ８２００ソフトウェアによって解析する。前述の参考文献の全内容が参照により本明細書に組み込まれる。
【０１２５】
一部の実施形態では、Ｓｉｇｌｅｃ１５の結合性リガンドは、ＭＡＧである。他の実施形態では、Ｓｉｇｌｅｃ１５の結合性リガンドは、ＬＲＲＣ４Ｃである。他の実施形態では、Ｓｉｇｌｅｃ１５の結合性リガンドは、シアリル−Ｔｎである。
【０１２６】
Ｓｉｇｌｅｃ１５上のそのリガンド、例えばＭＡＧ、ＬＲＲＣ４Ｃ、および／またはシアリル−Ｔｎに対する結合性部位は、当技術分野で公知の任意の方法によって決定することができる。例えば、ドメイン欠失を有するＳｉｇｌｅｃ１５変異体タンパク質は、当技術分野で公知の標準の方法を使用して生成し、精製することができる。一部の実施形態では、本発明の方法における使用に適した調節物質は、リガンド結合に関する活性が低下した変異体Ｓｉｇｌｅｃ１５タンパク質である。例えば、調節物質は、残基１４３に単一の置換変異を有する変異体Ｓｉｇｌｅｃタンパク質であり得る。他の実施形態では、本発明の方法における使用に適した調節物質は、ＩｇＶドメインの欠失を有する変異体Ｓｉｇｌｅｃ１５タンパク質である。
【０１２７】
本発明の方法における使用に適したＳｉｇｌｅｃ１５の調節物質は、Ｓｉｇｌｅｃ１５経路に関与する活性を阻害することによって、例えば、Ｓｉｇｌｅｃ１５の任意の結合性リガンド、例えばＭＡＧ、ＬＲＲＣ４Ｃ、またはシアリル−Ｔｎの発現および／または活性を低下させることによって、腫瘍に対する免疫応答を増加させ得る。一部の実施形態では、本発明の方法における使用に適した調節物質は、ＭＡＧもしくはＬＲＲＣ４Ｃの小分子阻害剤、ＭＡＧもしくはＬＲＲＣ４Ｃに対するアンタゴニスト抗体もしくはその抗原結合性断片、天然に阻害性である組換えＭＡＧ融合タンパク質、天然に阻害性である組換えＬＲＲＣ４Ｃ融合タンパク質、またはＭＡＧもしくはＬＲＲＣ４Ｃを標的とする阻害性タンパク質もしくは核酸である。他の実施形態では、調節物質は、シアリル−Ｔｎに特異的に結合する抗体またはその抗原結合性断片である。そのような抗体またはその抗原結合性断片は、シアリル−Ｔｎに結合し、シアリル−ＴｎとＳｉｇｌｅｃ１５との会合を遮蔽し得る。他の実施形態では、調節物質は、任意選択で足場、例えば足場ペプチドカップリングした可溶性シアリル−Ｔｎ分子である。本発明の方法における使用に適した調節物質は、以下に詳細に考察されている。
【０１２８】
前述の方法を使用して、被験体において免疫応答を増加させるまたは強化することが有益であると思われる障害を処置することができる。そのような障害としては、これだけに限定されないが、がんが挙げられる。Ｓｉｇｌｅｃ１５の発現および／または活性を低下させるＳｉｇｌｅｃ１５調節物質の投与を、例えば、がんに対する免疫応答を刺激する（例えば、がんに対するＴ細胞応答を刺激する）ため、腫瘍サイズを縮小させるため、および／またはがんを有する被験体の生存を延長させるために使用することができる。
【０１２９】
本明細書に記載されている通り、「がん」という用語は、隣接する組織または体の他の部分に拡散し得る、細胞の制御されない異常な増殖によって引き起こされる疾患の群の１つを指す。がん細胞は、白血病においてように、がん細胞が一緒に集合するまたは分散した細胞として存在する固形腫瘍を形成し得る。Ｓｉｇｌｅｃ１５の発現または活性を低下させることによる処置に適したがんの型としては、これだけに限定されないが、固形腫瘍および／または血液がんが挙げられる。一実施形態では、がんは、上皮起源のものである。前述の方法によって処置することができる例示的ながんの型としては、これだけに限定されないが、副腎がん、肛門がん、胆管がん、膀胱がん、骨がん、脳／ＣＮＳ腫瘍、乳がん、キャッスルマン病、子宮頸がん、結腸／直腸がん、子宮体がん、食道がん、眼がん、胆嚢がん、胃腸がん、腎がん、喉頭・下咽頭がん、白血病、肝がん、肺がん、リンパ腫、皮膚のリンパ腫、悪性中皮腫、多発性骨髄腫、骨髄異形成症候群、鼻腔・副鼻腔がん、鼻咽頭がん、神経芽細胞腫、非ホジキンリンパ腫、口腔・中咽頭がん、骨肉腫、卵巣がん、膵がん、陰茎がん、下垂体腫瘍、前立腺がん、網膜芽細胞腫、横紋筋肉腫、唾液腺がん、皮膚がん、小腸がん、胃がん、精巣がん、胸腺がん、甲状腺がん、子宮肉腫、膣がん、外陰がん、ワルデンシュトレームマクログロブリン血症、およびウィルムス腫瘍が挙げられる。一部の実施形態では、がんは、脳がん、肺がん、膵がん、黒色腫がん、乳がん、卵巣がん、腎細胞癌、直腸腺癌、肝細胞癌、およびユーイング肉腫からなる群から選択される。
【０１３０】
一部の実施形態では、がんは、結腸がん、類内膜がん、腎がん（例えば、乳頭状腎細胞癌、腎明細胞癌）、肝がん、甲状腺がん、肺がん（例えば、肺腺癌、肺扁平上皮癌）、頭頸部がん、乳がん、子宮頸がん、前立腺がん、膀胱がん、神経膠芽腫、直腸がん、または胆管がんである。一実施形態では、がんは、脳がんである。一実施形態では、がんは、神経膠芽腫である。一実施形態では、がんは、血液由来のがんではない。一実施形態では、がんは、白血病ではない。一実施形態では、がんは、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）ではない。
【０１３１】
「有効量」の本発明の調節物質（およびそのような調節物質を含む治療用組成物）の使用は、所望の結果を実現するために必要な投与量で、所望の結果を実現するために必要な期間にわたって有効な量である。例えば、有効量の調節物質は、病態、年齢、性別、生殖の状態、および体重、ならびに生物体において所望の応答を引き出す作用物質の能力などの因子に応じて変動し得る。最適な応答が生じるように投薬レジメンを調整することができる。例えば、いくつかの分割した用量を毎日提供することもでき、状況の緊急性によって示される通り用量を比例して減少させることもできる。
【０１３２】
「処置する（ｔｒｅａｔ）」とは、本明細書で使用される場合、患者、例えば、疾患を患っているまたは疾患が発生するリスクがある患者に利益をもたらす介入を指す。処置することは、患者の状態を改善するため、例えば、１つもしくは複数の症状を軽減するため、または疾患の発症もしくは進行を遅延させるために行う行為および行うことを控える行為を含む。
【０１３３】
一実施形態では、本発明は、がんを処置するための併用療法であって、Ｓｉｇｌｅｃ１５の発現および／または活性を低下させるＳｉｇｌｅｃ１５調節物質を、チェックポイント阻害剤、例えば、ＰＤ−Ｌ１のアンタゴニスト、またはＰＤ−１のアンタゴニストと組み合わせて被験体に投与する、併用療法に関する。ＰＤ−１は、Ｔ細胞がＰＤ−Ｌ１を発現する体内の細胞を攻撃しないようにする、Ｔ細胞上のチェックポイントタンパク質である。一部のがん細胞はＰＤ−Ｌ１を過剰発現し、それにより、Ｔ細胞による検出から逃れることが可能になる。ＰＤ−Ｌ１およびＰＤ−１の阻害剤は、がんに対する免疫応答を上昇させることができ、また、Ｓｉｇｌｅｃ１５活性のアンタゴニストと併せて使用した場合に腫瘍細胞殺滅を相乗的に促進することができる。Ｓｉｇｌｅｃ１５活性のアンタゴニストと併せて使用することができる例示的な抗ＰＤ−Ｌ１阻害性抗体としては、これだけに限定されないが、アテゾリズマブ（Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ）、アベルマブ（Ｐｆｉｚｅｒ）、およびデュルバルマブ（ＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａ）が挙げられる。Ｓｉｇｌｅｃ１５活性のアンタゴニストと併せて使用することができる例示的な抗ＰＤ−１阻害性抗体としては、これだけに限定されないが、ペムブロリズマブ（Ｍｅｒｃｋ）およびニボルマブ（Ｂｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ  Ｓｑｕｉｂｂ）が挙げられる。
【０１３４】
一部の実施形態では、前述の方法は、がんを有する患者を、がんまたは腫瘍微小環境におけるＳｉｇｌｅｃ１５の上方調節についてスクリーニングするスクリーニングステップをさらに含む。例えば、一実施形態では、がん細胞を含有する生体試料を被験体から得、Ｓｉｇｌｅｃ１５発現を決定し、適切な対照、例えば、正常な被験体から得た同等の試料、正常な被験体における発現レベルを示す参照値などと比較する。がん細胞を含有する生体試料におけるＳｉｇｌｅｃ１５の上方調節により、被験体にＳｉｇｌｅｃ１５の発現または活性を低下させる作用物質が有益であることが示される。
【０１３５】
一部の実施形態では、前述の方法は、依然として自己免疫疾患を有する患者をＳｉｇｌｅｃ１５調節物質を用いた処置から除外するスクリーニングステップを含んでよい。他の実施形態では、本発明の方法における使用に適したＳｉｇｌｅｃ１５の調節物質は、被験体において非特異的な自己免疫疾患を引き起こすものではない。Ｓｉｇｌｅｃ１５調節物質を含む処置を受ける被験体は、自己免疫疾患が自然に発生しないように選択することができる。
【０１３６】
Ｂ．Ｓｉｇｌｅｃ１５の発現および／または活性を増加させることによって炎症を低下させる方法。
本発明の別の態様では、有効量のＳｉｇｌｅｃ１５の調節物質を被験体に投与することによって被験体において望ましくない免疫応答または炎症応答を低下させる方法であって、調節物質が、被験体においてＳｉｇｌｅｃ１５の発現および／または活性を増加させる、方法を提供する。一実施形態では、この方法を使用して、被験体においてＴ細胞、例えばＣＤ４Ｔ細胞および／またはＣＤ８Ｔ細胞の数を減少させることができる。別の実施形態では、この方法を使用して、被験体においてＴ細胞、例えばＣＤ４Ｔ細胞および／またはＣＤ８Ｔ細胞の活性を低下させることができる。
【０１３７】
前述の方法を使用して、被験体において免疫応答または炎症応答を低減することが有益であると思われる障害を処置することができる。例えば、Ｓｉｇｌｅｃ１５の発現および／または活性を増加させるＳｉｇｌｅｃ１５の調節物質を使用して、自己免疫疾患を処置することを必要とする被験体において自己免疫疾患を処置することができる。方法は、有効量のＳｉｇｌｅｃ１５の調節物質を被験体に投与するステップを含み、調節物質が、被験体においてＳｉｇｌｅｃ１５の発現および／または活性を増加させ、それにより、被験体において自己免疫疾患を処置する。
【０１３８】
本発明の別の態様は、自己免疫疾患を処置することを必要とする被験体において自己免疫疾患を処置する方法を提供する。方法は、有効量のＳｉｇｌｅｃ１５タンパク質、またはＳｉｇｌｅｃ１５タンパク質をコードする核酸を被験体に投与し、それにより、被験体において自己免疫疾患を処置するステップを含む。
【０１３９】
一態様では、本発明は、脳炎症応答を低下させることを必要とする被験体において脳炎症応答を低下させる方法を特徴とする。方法は、有効量のＳｉｇｌｅｃ１５の調節物質を被験体に投与するステップを含み、調節物質が、Ｓｉｇｌｅｃ１５の発現レベルおよび／または活性レベルを増加させ、それにより、被験体において脳炎症応答を低下させる。
【０１４０】
別の態様では、本発明は、脳炎症応答を低下させることを必要とする被験体において脳炎症応答を低下させる方法を提供する。方法は、有効量のＳｉｇｌｅｃ１５タンパク質、またはＳｉｇｌｅｃ１５タンパク質をコードする核酸を被験体に投与し、それにより、被験体において脳炎症応答を低下させるステップを含む。
【０１４１】
前述の方法における使用に適したＳｉｇｌｅｃ１５の調節物質としては、Ｓｉｇｌｅｃ１５の発現および／または活性を、例えば、Ｓｉｇｌｅｃ１５のｍＲＮＡ発現および／もしくはタンパク質発現；Ｓｉｇｌｅｃ１５のｍＲＮＡおよび／もしくはタンパク質の安定性；ならびに／またはＳｉｇｌｅｃ１５の生物活性をモジュレートすることによって正に調節することが可能な任意の化合物または分子が挙げられる。調節物質は、Ｓｉｇｌｅｃ１５の発現および／または活性を直接または間接的にモジュレートすることが可能である。一部の実施形態では、調節物質は、Ｓｉｇｌｅｃ１５の発現および／または活性を増加させる。Ｓｉｇｌｅｃ１５の刺激性調節物質は、Ｓｉｇｌｅｃ１５に直接作用することが可能である、例えば、Ｓｉｇｌｅｃ１５に結合し、その機能を刺激するアゴニスト抗体である。他の実施形態では、Ｓｉｇｌｅｃ１５の刺激性調節物質は、Ｓｉｇｌｅｃ１５に対して間接的に（例えば、別の分子、例えば、Ｓｉｇｌｅｃ１５の結合パートナーを通じて）作用し、結果として活性の増加をもたらす。本発明の方法における使用に適した例示的な調節物質としては、小分子活性化因子、アゴニスト抗体もしくはその抗原結合性断片、またはＳｉｇｌｅｃ１５の転写および／もしくは翻訳を活性化するタンパク質および核酸が挙げられる。あるいは、本発明の方法における使用のための、Ｓｉｇｌｅｃ１５の発現および／または活性を増加させる調節物質としては、Ｓｉｇｌｅｃ１５タンパク質、またはＳｉｇｌｅｃ１５タンパク質をコードする核酸が挙げられる。一部の実施形態では、Ｓｉｇｌｅｃ１５タンパク質は、全長Ｓｉｇｌｅｃ１５タンパク質、Ｓｉｇｌｅｃ１５の機能性断片、またはＳｉｇｌｅｃ１５のＩｇＶドメインからなる群から選択される。本発明の方法における使用に適した調節物質は、以下に詳細に考察されている。
【０１４２】
本発明のＳｉｇｌｅｃ１５の調節物質は、Ｓｉｇｌｅｃ１５と結合性リガンドとの間の相互作用を促進することもできる。Ｓｉｇｌｅｃ１５の結合性リガンドは、当技術分野で公知の任意の方法によって同定することができる。例えば、Ｓｉｇｌｅｃ１５と結合性リガンドとの間のタンパク質間相互作用は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏにおいて目的のタンパク質の対の結合を抗体との共沈降物の形成によって決定する共免疫沈降アッセイによって同定することができる。あるいは、酵母ツーハイブリッドアッセイまたはファージディスプレイアッセイを使用して、Ｓｉｇｌｅｃ１５に対する結合性リガンドについてスクリーニングすることができる。一部の実施形態では、化学的架橋アッセイ、その後に質量分析を使用して相互作用タンパク質を分析することができる。
【０１４３】
一部の実施形態では、本発明において使用するために適したＳｉｇｌｅｃ１５の結合性リガンドは、本明細書に記載されている受容体アレイ技術によって同定することができる。
【０１４４】
一部の実施形態では、Ｓｉｇｌｅｃ１５の結合性リガンドは、ＭＡＧである。他の実施形態では、Ｓｉｇｌｅｃ１５の結合性リガンドは、ＬＲＲＣ４Ｃである。他の実施形態では、Ｓｉｇｌｅｃ１５の結合性リガンドは、シアリル−Ｔｎである。
【０１４５】
本明細書に記載されている方法のある特定の実施形態の実施における使用に適した例示的なＳｉｇｌｅｃ１５の調節物質は、Ｓｉｇｌｅｃ１５経路に関与する活性を刺激することによって、例えば、Ｓｉｇｌｅｃ１５の結合性リガンド、例えばＭＡＧ、ＬＲＲＣ４Ｃ、および／またはシアリル−Ｔｎの発現および／活性を増加させることによって、炎症を低下させることが可能である。一部の実施形態では、本発明の方法における使用に適した調節物質は、ＭＡＧまたはＬＲＲＣ４Ｃの小分子活性化因子、ＭＡＧまたはＬＲＲＣ４Ｃに対するアゴニスト抗体またはその抗原結合性断片、ＭＡＧまたはＬＲＲＣ４Ｃの転写および／または翻訳を活性化するタンパク質または核酸である。他の実施形態では、本発明の方法における使用に適した調節物質は、ＭＡＧタンパク質またはＭＡＧタンパク質をコードする核酸である。別の実施形態では、本発明の方法における使用に適した調節物質は、ＬＲＲＣ４Ｃタンパク質またはＬＲＲＣ４Ｃタンパク質をコードする核酸である。一実施形態では、調節物質は、合成シアリル−Ｔｎ分子である。例えば、シアリル−Ｔｎは、単独で投与することもでき、足場分子とカップリングさせて、例えば、共有結合または非共有結合によってコンジュゲートさせて投与することもできる。一実施形態では、調節物質は、シアリル−Ｔｎを有する合成ペプチドである。シアリル−Ｔｎは、Ｓｉｇｌｅｃ１５に結合し、それを活性化して、Ｓｉｇｌｅｃ１５活性のアゴニストとしての機能を果たし得る。本発明の方法における使用に適したＳｉｇｌｅｃ１５の発現および／または活性を増加させる調節物質は、以下に詳細に考察されている。
【０１４６】
本発明の方法を用いて処置することができる疾患としては、これだけに限定されないが、自己免疫疾患またはがんが挙げられる。「処置する（ｔｒｅａｔ）」とは、患者、例えば、疾患を患っているまたは疾患が発生するリスクがある患者に利益をもたらす任意の型の処置を指す。処置することは、患者の状態を改善するため、例えば、１つもしくは複数の症状を軽減するため、または疾患の発症もしくは進行を遅延させるために行う行為および行うことを控える行為を含む。
【０１４７】
本明細書に記載されている通り、「自己免疫疾患」とは、体内に通常存在する物質および組織に対する体の異常な免疫応答から生じる疾患であり、それらとしては、これだけに限定されないが、関節リウマチ（ＲＡ）、若年性慢性関節炎（ＪＣＡ）、甲状腺炎、移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）、強皮症、糖尿病、グレーブス病、アレルギー、例えば、これだけに限定されないが、腎移植、心臓移植、骨髄移植、肝移植、膵臓移植、小腸移植、肺移植および皮膚移植の同種間移植に関連する急性または慢性免疫疾患が挙げられる。一部の実施形態では、自己免疫疾患は、炎症性脳疾患である。他の実施形態では、炎症性脳疾患は、多発性硬化症である。他の実施形態では、炎症性脳疾患は、実験的自己免疫性脳脊髄炎（ＥＡＥ）である。
【０１４８】
ＩＩＩ．医薬製剤
本発明のＳｉｇｌｅｃ１５またはＳｉｇｌｅｃ１５の調節物質を含む医薬製剤は、所望の程度の純度を有するタンパク質または核酸を、任意選択の生理的に許容されるキャリア、賦形剤または安定剤（Remington's  Pharmaceutical  Sciences、第１６版、Osol,  A.編（１９８０年））と混合して水溶液、凍結乾燥製剤または他の乾燥製剤の形態にすることによって調製することができる。許容されるキャリア、賦形剤、または安定剤は、使用される投薬量および濃度でレシピエントに対して非毒性であり、それらとして、ホスフェート、シトレート、ヒスチジンおよび他の有機酸などのバッファ；アスコルビン酸およびメチオニンを含めた抗酸化剤；防腐剤（例えば、オクタデシルジメチルベンジルアンモニウムクロリド；塩化ヘキサメトニウム；塩化ベンザルコニウム、塩化ベンゼトニウム；フェノール、ブチルアルコールまたはベンジルアルコール；メチルパラベンもしくはプロピルパラベンなどのアルキルパラベン；カテコール；レゾルシノール；シクロヘキサノール；３−ペンタノール；およびｍ−クレゾール）；低分子量（約１０残基未満）のポリペプチド；血清アルブミン、ゼラチン、もしくは免疫グロブリンなどのタンパク質；ポリビニルピロリドンなどの親水性ポリマー；グリシン、グルタミン、アスパラギン、ヒスチジン、アルギニン、もしくはリシンなどのアミノ酸；グルコース、マンノース、もしくはデキストリンを含めた単糖、二糖、および他の炭水化物；ＥＤＴＡなどのキレート剤；スクロース、マンニトール、トレハロースまたはソルビトールなどの糖；ナトリウムなどの塩形成性対イオン；金属複合体（例えば、Ｚｎ−タンパク質複合体）；ならびに／またはＴｗｅｅｎ（商標）、Ｐｌｕｒｏｎｉｃｓ（商標）もしくはポリエチレングリコール（ＰＥＧ）などの非イオン性界面活性物質が挙げられる。
【０１４９】
本発明における製剤は、処置される特定の適応症に対して必要に応じて１種よりも多くの活性化合物を含有してもよい。例えば、自己免疫疾患を処置する場合、本発明のＳｉｇｌｅｃ１５またはＳｉｇｌｅｃ１５の調節物質を含有する製剤を、自己免疫疾患を処置することが公知の薬物、例えば、メチルプレドニゾロン、ケナログ、メドロール、プレドニゾロン、コルテフ、ヒドロコルチゾン、コルチゾン、トリアムシノロンアセトニド、セレストンソルスパン、酢酸メチルプレドニゾロン、ｏｒａｐｒｅｄ  ＯＤＴ、ｖｅｒｉｐｒｅｄ  ２０、Ｓｏｌｕ−Ｍｅｄｒｏｌまたはメチルプレドニゾロンナトリウムと組み合わせることができる。がんを処置する場合には、本発明のＳｉｇｌｅｃ１５またはＳｉｇｌｅｃ１５の調節物質を含有する製剤を、がんを処置することが公知の薬物、例えば、アビラテロン酢酸エステル、ＡＢＩＴＲＥＸＡＴＥ（メトトレキサート）、ＡＢＲＡＸＡＮＥ（パクリタキセル・アルブミン安定化ナノ粒子製剤）、ＡＤＣＥＴＲＩＳ（ブレンツキシマブベドチン）、Ａｄｏ−トラスツズマブエムタンシン、アドリアマイシン（ＡＤＲＩＡＭＹＣＩＮ）（ドキソルビシン塩酸塩）、ＡＤＲＵＣＩＬ（フルオロウラシル）、アファチニブジマレアート、ＡＦＩＮＩＴＯＲ（エベロリムス）、ＡＬＤＡＲＡ（イミキモド）、アルデスロイキン、アレムツズマブ、ＡＬＩＭＴＡ（ペメトレキセド二ナトリウム）、ＡＬＯＸＩ（パロノセトロン塩酸塩）、ＡＭＢＯＣＨＬＯＲＩＮ（クロラムブシル）、ＡＭＢＯＣＬＯＲＩＮ（クロラムブシル）、アミノレブリン酸、アナストロゾール、アプレピタント、ＡＲＥＤＩＡ（パミドロン酸二ナトリウム）、ＡＲＩＭＩＤＥＸ（アナストロゾール）、ＡＲＯＭＡＳＩＮ（エキセメスタン）、ＡＲＲＡＮＯＮ（ネララビン）、三酸化ヒ素、ＡＲＺＥＲＲＡ（オファツムマブ）、アスパラギナーゼエルウィニアクリサンチミー（Asparaginase  Erwinia  chrysanthemi）、ＡＶＡＳＴＩＮ（ベバシズマブ）、アキシチニブ、アザシチジン、ベンダムスチン塩酸塩、ベバシズマブ、ベキサロテン、ＢＥＸＸＡＲ（トシツモマブおよびＩ１３１ヨウ素トシツモマブ）、ブレオマイシン、ボルテゾミブ、ＢＯＳＵＬＩＦ（ボスチニブ）、カバジタキセル、カボザンチニブ−Ｓ−リンゴ酸塩、ＣＡＭＰＡＴＨ（アレムツズマブ）、ＣＡＭＰＴＯＳＡＲ（塩酸イリノテカン）、カペシタビン、カルボプラチン、カルフィルゾミブ、ＣＥＥＮＵ（ロムスチン）、ＣＥＲＵＢＩＤＩＮＥ（ダウノルビシン塩酸塩）、セツキシマブ、クロラムブシル、シスプラチン、ＣＬＡＦＥＮ（シクロホスファミド）、クロファラビン、ＣＯＭＥＴＲＩＱ（カボザンチニブ−Ｓ−リンゴ酸塩）、ＣＯＳＭＥＧＥＮ（ダクチノマイシン）、クリゾチニブ、シクロホスファミド、ＣＹＦＯＳ（イホスファミド）、シタラビン、ダブラフェニブ、ダカルバジン、ＤＡＣＯＧＥＮ（デシタビン）、ダクチノマイシン、ダサチニブ、ダウノルビシン塩酸塩、デシタビン、デガレリクス、デニロイキンジフチトクス、デノスマブ、デクスラゾキサン塩酸塩、ドセタキセル、ドキソルビシン塩酸塩、ＥＦＵＤＥＸ（フルオロウラシル）、ＥＬＩＴＥＫ（ラスブリカーゼ）、ＥＬＬＥＮＣＥ（エピルビシン塩酸塩）、ＥＬＯＸＡＴＩＮ（オキサリプラチン）、エルトロンボパグオラミン、ＥＭＥＮＤ（アプレピタント）、エンザルタミド、エピルビシン塩酸塩、ＥＲＢＩＴＵＸ（セツキシマブ）、エリブリンメシル酸塩、ＥＲＩＶＥＤＧＥ（ビスモデギブ）、エルロチニブ塩酸塩、ＥＲＷＩＮＡＺＥ（アスパラギナーゼエルウィニアクリサンチミー）、エトポシド、エベロリムス、ＥＶＩＳＴＡ（ラロキシフェン塩酸塩）、エキセメスタン、ＦＡＲＥＳＴＯＮ（トレミフェン）、ＦＡＳＬＯＤＥＸ（フルベストラント）、ＦＥＭＡＲＡ（レトロゾール）、フィルグラスチム、ＦＬＵＤＡＲＡ（リン酸フルダラビン）、リン酸フルダラビン、ＦＬＵＯＲＯＰＬＥＸ（フルオロウラシル）、フルオロウラシル、フォリン酸、ＦＯＬＯＴＹＮ（プララトレキセート）、フルベストラント、ゲフィチニブ、ゲムシタビン塩酸塩、ゲムツズマブオゾガマイシン、ＧＥＭＺＡＲ（ゲムシタビン塩酸塩）、ＧＩＬＯＴＲＩＦ（アファチニブ二マレイン酸塩）、ＧＬＥＥＶＥＣ（メシル酸イマチニブ）、ＨＡＬＡＶＥＮ（エリブリンメシル酸塩）、ＨＥＲＣＥＰＴＩＮ（トラスツズマブ）、ＨＹＣＡＭＴＩＮ（トポテカン塩酸塩）、イブリツモマブチウキセタン、ＩＣＬＵＳＩＧ（ポナチニブ塩酸塩）、イホスファミド、メシル酸イマチニブ、イミキモド、ＩＮＬＹＴＡ（アキシチニブ）、イントロンＡ（組換えインターフェロンアルファ−２ｂ）、ヨウ素１３１トシツモマブおよびトシツモマブ、イピリムマブ、ＩＲＥＳＳＡ（ゲフィチニブ）、塩酸イリノテカン、ＩＳＴＯＤＡＸ（ロミデプシン）、イキサベピロン、ＪＡＫＡＦＩ（ルキソリチニブリン酸塩）、ＪＥＶＴＡＮＡ（カバジタキセル）、Ｋａｄｃｙｌａ（Ａｄｏ−トラスツズマブエムタンシン）、ケオキシフェン（ラロキシフェン塩酸塩）、ＫＥＰＩＶＡＮＣＥ（パリフェルミン）、ＫＹＰＲＯＬＩＳ（カルフィルゾミブ）、二トシル酸ラパチニブ、レナリドミド、レトロゾール、ロイコボリンカルシウム、酢酸ロイプロリド、ロムスチン、LUPRON（酢酸ロイプロリド、ＭＡＲＱＩＢＯ（硫酸ビンクリスチンリポソーム）、ＭＡＴＵＬＡＮＥ（プロカルバジン塩酸塩）、塩酸メクロレタミン、ＭＥＧＡＣＥ（酢酸メゲストロール）、酢酸メゲストロール、ＭＥＫＩＮＩＳＴ（トラメチニブ）、メルカプトプリン、メスナ、ＭＥＴＨＡＺＯＬＡＳＴＯＮＥ（テモゾロミド）、メトトレキサート、マイトマイシン、ＭＯＺＯＢＩＬ（プレリキサホル）、ＭＵＳＴＡＲＧＥＮ（塩酸メクロレタミン）、ＭＵＴＡＭＹＣＩＮ（マイトマイシンＣ）、ＭＹＬＯＳＡＲ（アザシチジン）、ＭＹＬＯＴＡＲＧ（ゲムツズマブオゾガマイシン）、ナノ粒子パクリタキセル（パクリタキセル・アルブミン安定化ナノ粒子製剤）、ＮＡＶＥＬＢＩＮＥ（酒石酸ビノレルビン）、ネララビン、ＮＥＯＳＡＲ（シクロホスファミド）、ＮＥＵＰＯＧＥＮ（フィルグラスチム）、ＮＥＸＡＶＡＲ（ソラフェニブ  トシラート）、ニロチニブ、ＮＯＬＶＡＤＥＸ（クエン酸タモキシフェン）、ＮＰＬＡＴＥ（ロミプロスチム）、オファツムマブ、オマセタキシンメペスクシナート、ＯＮＣＡＳＰＡＲ（ペグアスパラガーゼ）、ＯＮＴＡＫ（デニロイキンジフチトクス）、オキサリプラチン、パクリタキセル、パクリタキセル・アルブミン安定化ナノ粒子製剤、パ���フェルミン、パロノセトロン塩酸塩、パミドロン酸二ナトリウム、パニツムマブ、パゾパニブ塩酸塩、ペグアスパラガーゼ、ペグインターフェロンアルファ−２ｂ、ＰＥＧ−イントロン（ペグインターフェロンアルファ−２ｂ）、ペメトレキセド二ナトリウム、ペルツズマブ、ＰＬＡＴＩＮＯＬ（シスプラチン）、ＰＬＡＴＩＮＯＬ−ＡＱ（シスプラチン）、プレリキサホル、ポマリドミド、ＰＯＭＡＬＹＳＴ（ポマリドミド）、ポナチニブ塩酸塩、プララトレキセート、プレドニゾン、プロカルバジン塩酸塩、ＰＲＯＬＥＵＫＩＮ（アルデスロイキン）、ＰＲＯＬＩＡ（デノスマブ）、ＰＲＯＭＡＣＴＡ（エルトロンボパグオラミン）、ＰＲＯＶＥＮＧＥ（シプロイセルＴ）、ＰＵＲＩＮＥＴＨＯＬ（メルカプトプリン）、二塩化ラジウム−２２３、ラロキシフェン塩酸塩、ラスブリカス（Rasburicas）、組換えインターフェロンアルファ−２ｂ、レゴラフェニブ、レブリミド（レナリドミド）、ＲＨＥＵＭＡＴＲＥＸ（メトトレキサート）、リツキシマブ、ロミデプシン、ロミプロスチム、ルビドマイシン（ダウノルビシン塩酸塩）、ルキソリチニブリン酸塩（Ruxolitinib  Phosphat）、シプロイセルＴ、ソラフェニブトシル酸塩、ＳＰＲＹＣＥＬ（ダサチニブ）、ＳＴＩＶＡＲＧＡ（レゴラフェニブ）、リンゴ酸スニチニブ、ＳＵＴＥＮＴ（リンゴ酸スニチニブ）、ＳＹＬＡＴＲＯＮ（ペグインターフェロンアルファ−２ｂ）、ＳＹＮＯＶＩＲ（サリドマイド）、ＳＹＮＲＩＢＯ（オマセタキシンメペスクシナート）、ＴＡＦＩＮＬＡＲ（ダブラフェニブ）、クエン酸タモキシフェン、ＴＡＲＡＢＩＮＥ  ＰＦＳ（シタラビン）、ＴＡＲＣＥＶＡ（エルロチニブ塩酸塩）、ＴＡＲＧＲＥＴＩＮ（ベキサロテン）、ＴＡＳＩＧＮＡ（ニロチニブ）、ＴＡＸＯＬ（パクリタキセル）、ＴＡＸＯＴＥＲＥ（ドセタキセル）、ＴＥＭＯＤＡＲ（テモゾロミド）、テモゾロミド、テムシロリムス、サリドマイド、ＴＯＰＯＳＡＲ（エトポシド）、トポテカン塩酸塩、トレミフェン、ＴＯＲＩＳＥＬ（テムシロリムス）、トシツモマブおよびＩ１３１ヨウ素トシツモマブ、ＴＯＴＥＣＴ（デキスラゾキサン塩酸塩）、トラメチニブ、トラスツズマブ、ＴＲＥＡＮＤＡ（ベンダムスチン塩酸塩）、ＴＲＩＳＥＮＯＸ（三酸化ヒ素）、ＴＹＫＥＲＢ（二トシル酸ラパチニブ）、バンデタニブ、ＶＥＣＴＩＢＩＸ（パニツムマブ）、ＶｅｌＰ、ＶＥＬＢＡＮ（硫酸ビンブラスチン）、ＶＥＬＣＡＤＥ（ボルテゾミブ）、ＶＥＬＳＡＲ（硫酸ビンブラスチン）、ベムラフェニブ、ＶＥＰＥＳＩＤ（エトポシド）、ＶＩＡＤＵＲ（酢酸ロイプロリド）、ＶＩＤＡＺＡ（アザシチジン）、硫酸ビンブラスチン、硫酸ビンクリスチン、酒石酸ビノレルビン、ビスモデギブ、ＶＯＲＡＸＡＺＥ（グルカルピダーゼ）、ボリノスタット、ＶＯＴＲＩＥＮＴ（パゾパニブ塩酸塩）、ＷＥＬＬＣＯＶＯＲＩＮ（ロイコボリンカルシウム）、ＸＡＬＫＯＲＩ（クリゾチニブ）、ゼローダ（カペシタビン）、ＸＧＥＶＡ（デノスマブ）、ＸＯＦＩＧＯ（二塩化ラジウム−２２３）、ＸＴＡＮＤＩ（エンザルタミド）、ＹＥＲＶＯＹ（イピリムマブ）、ＺＡＬＴＲＡＰ（Ｚｉｖ−アフリベルセプト）、ＺＥＬＢＯＲＡＦ（ベムラフェニブ）、ＺＥＶＡＬＩＮ（イブリツモマブチウキ���タン）、ＺＩＮＥＣＡＲＤ（デキスラゾキサン塩酸塩）、Ｚｉｖ−アフリベルセプト、ゾレドロン酸、ＺＯＬＩＮＺＡ（ボリノスタット）、ＺＯＭＥＴＡ（ゾレドロン酸）、およびＺＹＴＩＧＡ（アビラテロン酢酸エステル）と組み合わせることができる。一実施形態では、Ｓｉｇｌｅｃ１５の調節物質を、ＰＤ−Ｌ１アンタゴニスト、例えば、抗ＰＤ−Ｌ１アンタゴニスト抗体またはその抗原結合性部分と組み合わせることができる。別の実施形態では、Ｓｉｇｌｅｃ１５の調節物質を、ＰＤ−１アンタゴニスト、例えば、抗ＰＤ−１アンタゴニスト抗体またはその抗原結合性部分と組み合わせることができる。
【０１５０】
活性成分は、例えば、コアセルベーション技法によってもしくは界面重合によって調製したマイクロカプセル、例えば、それぞれヒドロキシメチルセルロースマイクロカプセルもしくはゼラチンマイクロカプセルおよびポリ−（メタクリル酸メチル）マイクロカプセル中に、コロイド薬物送達系（例えば、リポソーム、アルブミンマイクロスフェア、マイクロエマルション、ナノ粒子およびナノカプセル）中に、またはマクロエマルション中にパッケージングすることもできる。そのような技法は、Remington's  Pharmaceutical  Sciences、第１６版、Osol,  A.編（１９８０年）に開示されている。
【０１５１】
ｉｎ  ｖｉｖｏ投与のために使用される製剤は、滅菌でなければならない。これは、滅菌濾過膜を通して濾過することによって容易に実現される。
【０１５２】
一般に、組成物の成分は、別々にまたは一緒に混合して単位剤形にするかの何れかで、乾燥した凍結乾燥粉末または水を含まない濃縮物として、活性剤の数量が示されたアンプルまたはサシェなどの密封容器中に入れて供給される。投与形式が注入である場合、組成物を、滅菌の医薬品グレードの水または食塩水を含有する注入ボトルに分配することができる。投与形式が注射によるものである場合、注射用滅菌水または食塩水のアンプルを提供することができ、したがって、成分を投与前に混合することができる。代替の実施形態では、本発明の医薬組成物のうちの１つまたは複数は、薬剤の数量および濃度が示された密封容器中に入った液体の形態で供給される。
【０１５３】
活性剤は、一般には注射液として調製される、非経口投与に適した医薬組成物に組み入れることができる。注射液は、フリントバイアルまたはアンバーバイアル、アンプルまたは充填済みシリンジに入った液体剤形または凍結乾燥した剤形のいずれかで構成され得る。液体または凍結乾燥した剤形（dosage）は、バッファ（例えば、Ｌ−ヒスチジン、コハク酸ナトリウム、クエン酸ナトリウム、リン酸ナトリウムまたはリン酸カリウム、塩化ナトリウム）、凍結保護物質（例えば、スクロース、トレハロースまたはラクトース、増量剤（例えば、マンニトール）、安定剤（例えば、Ｌ−メチオニン、グリシン、アルギニン）、アジュバント（ヒアルロニダーゼ）をさらに含んでよい。
【０１５４】
本発明の組成物、例えば、Ｓｉｇｌｅｃ１５またはＳｉｇｌｅｃ１５の調節物質は、種々の形態であってよい。これらとしては、例えば、液体剤形、半固体剤形および固体剤形、例えば、溶液（例えば、注射液および注入液）、マイクロエマルション、分散液、リポソームまたは懸濁液、錠剤、ピル、粉末、リポソームおよび坐剤が挙げられる。好ましい形態は、意図された投与形式および治療への適用に依存する。本明細書に記載されているＳｉｇｌｅｃ１５またはＳｉｇｌｅｃ１５の調節物質を含む医薬組成物は、特定の組織への投与用に製剤化することができる。例えば、ある特定の実施形態では、Ｓｉｇｌｅｃ１５またはＳｉｇｌｅｃ１５の調節物質を結合組織、脳組織、および／または種々の器官の腫瘍部位に投与することが望ましい場合がある。
【０１５５】
本発明の方法における使用に適したＳｉｇｌｅｃ１５およびＳｉｇｌｅｃ１５の調節物質は、非経口投与（例えば、注射、注入）を含めた任意の適切な手段によって投与することができ、皮下投与、腹腔内投与、肺内投与、および鼻腔内投与によって、ならびに所望であれば局所的処置のために病巣内投与、例えば腫瘍内投与によって投与することができる。非経口的注入としては、静脈内投与、動脈内投与、腹腔内投与、筋肉内投与、皮内投与または皮下投与が挙げられる。さらに、Ｓｉｇｌｅｃ１５およびＳｉｇｌｅｃ１５の調節物質は、パルス注入によって、特に用量を漸減させて適切に投与することができる。投薬は、静脈内注射または皮下注射などの注射によって行うことができる。投与経路は、投与が短期的なものであるか長期的なものであるかなどの様々な要因に応じて選択することができる。局部投与、特に、経皮投与、経粘膜投与、直腸投与、経口投与、または、例えば所望の部位の近くに設置したカテーテルを通じた局所投与を含めた他の投与方法が意図されている。注射、特に静脈内が重要である。
【０１５６】
一部の実施形態では、本発明の方法は、治療有効量の本明細書に記載されているＳｉｇｌｅｃ１５を被験体に投与するステップを含む。一部の実施形態では、本発明の方法は、治療有効量のＳｉｇｌｅｃ１５の調節物質を被験体に投与するステップを含む。治療有効量のＳｉｇｌｅｃ１５またはＳｉｇｌｅｃ１５の調節物質は、被験体において疾患、例えば、自己免疫疾患、またはがんを処置するために十分な量である。治療上有効な本明細書に記載されているＳｉｇｌｅｃ１５またはＳｉｇｌｅｃ１５の調節物質の投薬量は、被験体間でいくらか異なり、被験体の年齢、体重、および状態ならびに送達経路などの因子に依存する。そのような投薬量は、当業者に公知の手順に従って決定することができる。例示的な実施形態では、治療有効量のＳｉｇｌｅｃ１５アンタゴニストは、被験体においてＳｉｇｌｅｃ１５のレベルまたは活性を低下させるために有効な量である。別の例示的な実施形態では、治療有効量のＳｉｇｌｅｃ１５アゴニストは、被験体においてＳｉｇｌｅｃ１５のレベルまたは活性を増加させるために有効な量である。
【０１５７】
一実施形態では、本明細書に記載されている治療方法をヒトに対して実施する。
【０１５８】
ＩＶ．本発明の方法における使用のためのＳｉｇｌｅｃ１５調節物質
上記の通り、Ｓｉｇｌｅｃ１５の発現の低下により、脳腫瘍を有するマウスの腫瘍サイズが縮小し、また、生存が延長される一方で、Ｓｉｇｌｅｃ１５の発現および／または活性の低下により脳炎症が悪化し、これにより、Ｓｉｇｌｅｃ１５ががんおよび炎症に対する免疫応答の調節における免疫調節分子として欠くことができない役割を果たすことが示唆される。したがって、Ｓｉｇｌｅｃ１５の発現および／もしくは活性をモジュレートする、例えば阻害もしくは活性化する分子、ならびに／または、Ｓｉｇｌｅｃ１５の結合パートナー、例えばＭＡＧもしくはＬＲＲＣ４Ｃの発現および／もしくは活性をモジュレートする、例えば阻害もしくは活性化する分子が本発明の方法において有用である。例示的な調節物質は、Ｓｉｇｌｅｃ１５とＳｉｇｌｅｃ１５リガンド（例えば、ＭＡＧ、ＬＲＲＣ４Ｃ、またはシアリル−Ｔｎ）との間の会合をモジュレートする、例えば、阻害または促進することができる。阻害性調節物質（すなわち、阻害剤）または活性化調節物質（すなわち、活性化因子）は、核酸、ポリペプチド、抗体、または小分子化合物であってよい。一部の実施形態では、阻害剤または活性化因子は、転写、ｍＲＮＡ安定性、翻訳、タンパク質安定性／分解、タンパク質修飾、およびタンパク質結合のレベルで機能する。
【０１５９】
Ａ．阻害性調節物質
一部の実施形態では、本発明の方法における使用のための調節物質は、阻害性調節物質である。一部の実施形態では、阻害性調節物質は、小分子、例えば、Ｓｉｇｌｅｃ１５に対する小分子阻害剤、Ｓｉｇｌｅｃ１５の結合性リガンド、例えばＭＡＧ、ＬＲＲＣ４Ｃ、および／またはシアリル−Ｔｎに対する小分子阻害剤である。他の実施形態では、本発明の方法における使用のための阻害性調節物質は、Ｓｉｇｌｅｃ１５および／またはその結合性リガンド、例えばＭＡＧ、ＬＲＲＣ４Ｃ、および／もしくはシアリル−Ｔｎの発現、安定性、および／または活性を特異的に阻害するように作用する細胞内結合性分子である。他の実施形態では、阻害性調節物質は、Ｓｉｇｌｅｃ１５、および／またはその結合性リガンド、例えばＭＡＧまたはＬＲＲＣ４Ｃに対するアンタゴニスト抗体またはその抗原結合性断片である。一部の実施形態では、阻害性調節物質は、Ｓｉｇｌｅｃ１５、および／またはその結合性リガンド、例えばＭＡＧまたはＬＲＲＣ４Ｃに対する組換え融合タンパク質である。他の実施形態では、Ｓｉｇｌｅｃ１５融合タンパク質は、Ｓｉｇｌｅｃ１５−Ｆｃ融合タンパク質である。一部の実施形態では、本発明の方法における使用のための阻害性調節物質は、Ｓｉｇｌｅｃ１５および／またはその結合性リガンド、例えばＭＡＧまたはＬＲＲＣ４Ｃの発現、安定性、および／または活性を特異的に低下させるように作用する核酸分子である。
【０１６０】
本明細書で使用される場合、「細胞内結合性分子」という用語は、タンパク質またはタンパク質をコードする核酸（例えば、ｍＲＮＡ分子）に結合することにより、タンパク質の発現または活性を阻害するように細胞内で作用する分子を含むものとする。
【０１６１】
本発明のＳｉｇｌｅｃ１５の調節物質は、Ｓｉｇｌｅｃ１５と結合性リガンドとの間の相互作用をモジュレートする、例えば、遮断することも可能である。一部の実施形態では、Ｓｉｇｌｅｃ１５の結合性リガンドは、ＭＡＧおよびＬＲＲＣ４Ｃからなる群から選択される。一部の実施形態では、調節物質は、残基１４３に単一の置換変異を有する変異体Ｓｉｇｌｅｃ１５タンパク質である。他の実施形態では、調節物質は、ＩｇＶドメインの欠失を有する変異体Ｓｉｇｌｅｃ１５タンパク質である。一部の実施形態では、Ｓｉｇｌｅｃ１５の調節物質は、Ｓｉｇｌｅｃ１５のＩｇＶドメインに結合する。他の実施形態では、Ｓｉｇｌｅｃ１５の調節物質は、Ｓｉｇｌｅｃ１５の残基１４３に結合する。一部の実施形態では、Ｓｉｇｌｅｃ１５の調節物質は、Ｓｉｇｌｅｃ１５のリガンド、例えばＭＡＧまたはＬＲＲＣ４Ｃ内の、Ｓｉｇｌｅｃ１５とそのリガンドとの間の相互作用が起こる領域に結合する。
【０１６２】
ｉ．阻害性核酸
一実施形態では、本明細書に記載されている方法は、阻害性核酸を使用してＳｉｇｌｅｃ１５および／またはその結合性リガンド、例えばＭＡＧまたはＬＲＲＣ４Ｃを標的とすることを含む。核酸阻害剤は、Ｓｉｇｌｅｃ１５、および／またはその結合性リガンド、例えばＭＡＧまたはＬＲＲＣ４Ｃを標的とし、その発現または活性を阻害する低分子干渉ＲＮＡ（例えば、ＲＮＡｉ因子）をコードするものであってよい。「ＲＮＡｉ因子」という用語は、標的ＲＮＡに対してＲＮＡ干渉を誘導するために十分な配列相補性を有するＲＮＡまたはその類似体を指す。例として、ＲＮＡを作製するために使用することができるＤＮＡも挙げられる。
【０１６３】
ＲＮＡ干渉：ＲＮＡ干渉（ＲＮＡｉ）とは、標的分子（例えば、標的遺伝子、タンパク質またはＲＮＡ）が下方調節される配列特異的または選択的プロセスを指す。一般に、干渉ＲＮＡ（「ＲＮＡｉ」）は、特異的なｍＲＮＡの触媒による分解をもたらし、遺伝子発現を低下させるまたは阻害するためにも使用することができる二本鎖低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）、低分子ヘアピン型ＲＮＡ（ｓｈＲＮＡ）、または一本鎖マイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）である。ＲＮＡ干渉（ＲＮＡｉ）は、二本鎖ＲＮＡ（ｄｓＲＮＡ）により、動物細胞および植物細胞において、ならびに細菌において遺伝子発現の配列特異的調節が誘導されるプロセスである（AravinおよびTuschl、FEBS  Lett.、２６巻：５８３０〜５８４０頁、２００５年；Herbertら、Curr.  Opin.  Biotech.、１９巻：５００〜５０５頁、２００８年；Sharp、Genes  Dev.、１５巻：４８５〜４９０頁、２００１年；Valencia-Sanchezら、Genes  Dev.、２０巻：５１５〜５２４頁、２００６年）。哺乳動物細胞では、ＲＮＡｉは、低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）の２１ヌクレオチド（ｎｔ）２重鎖によって（Chiuら、Mol.  Cell.、１０巻：５４９〜５６１頁、２００２年）、マイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）、機能性低分子ヘアピン型ＲＮＡ（ｓｈＲＮＡ）、またはＤＮＡ鋳型をＲＮＡポリメラーゼＩＩまたはＩＩＩプロモーターと共に使用してｉｎ  ｖｉｖｏにおいて発現させた他のｄｓＲＮＡによって（Zengら、Mol.  Cell、９巻：１３２７〜１３３３頁、２００２年；Paddisonら、Genes  Dev.、１６巻：９４８〜９５８頁、２００２年；Dentiら、Mol.  Ther.、１０巻：１９１〜１９９頁、２００４年；Leeら、Nature  Biotechnol.、２０巻：５００〜５０５頁、２００２年；Paulら、Nature  Biotechnol.、２０巻：５０５〜５０８頁、２００２年；Rossi、Human  Gene  Ther.、１９巻：３１３〜３１７頁、２００８年；Tuschl,  T.、Nature  Biotechnol.、２０巻：４４０〜４４８頁、２００２年；Yuら、Proc.  Natl.  Acad.  Sci.  USA、９９巻（９号）：６０４７〜６０５２頁、２００２年）、誘発することができる。
【０１６４】
ｓｉＲＮＡ分子：「低分子干渉（short  interfering）ＲＮＡ」または「ｓｉＲＮＡ」という用語（「低分子干渉（small  interfering）ＲＮＡ」としても公知）は、約１０〜５０ヌクレオチドの長さ、好ましくは約１５〜２５ヌクレオチドの長さ、より好ましくは約１７ヌクレオチド、約１８ヌクレオチド、約１９ヌクレオチド、約２０ヌクレオチド、約２１ヌクレオチド、約２２ヌクレオチド、約２３ヌクレオチド、約２４ヌクレオチド、または約２５ヌクレオチドの長さであり、鎖が、任意選択で、例えば１つ、２つまたは３つの突出ヌクレオチド（またはヌクレオチド類似体）を含む突出末端を有し、ＲＮＡ干渉を誘導するまたは媒介することが可能なＲＮＡ因子、好ましくは二本鎖因子を指す。天然に存在するｓｉＲＮＡは、細胞のＲＮＡｉ機構によって、より長いｄｓＲＮＡ分子（例えば、＞２５ヌクレオチドの長さ）から生成される。
【０１６５】
一般に、本明細書に記載されている方法では、各鎖が１６〜３０ヌクレオチド、例えば１６ヌクレオチド、１７ヌクレオチド、１８ヌクレオチド、１９ヌクレオチド、２０ヌクレオチド、２１ヌクレオチド、２２ヌクレオチド、２３ヌクレオチド、２４ヌクレオチド、２５ヌクレオチド、２６ヌクレオチド、２７ヌクレオチド、２８ヌクレオチド、２９ヌクレオチド、または３０ヌクレオチドで構成され、一方の鎖が、ｍＲＮＡ内の標的領域と、実質的に同一である、例えば、少なくとも８０％（またはそれよりも高く、例えば、８５％、９０％、９５％、または１００％）同一であり、例えば、３個、２個、１個、または０個のミスマッチのヌクレオチドを有し、他方の鎖が、第１の鎖と相補的である、ｄｓＲＮＡ分子を使用することができる。ｄｓＲＮＡ分子は、化学的に合成することもでき、例えば、ｓｈＲＮＡは、ｉｎ  ｖｉｔｒｏまたはｉｎ  ｖｉｖｏにおいてＤＮＡ鋳型から転写することもできる。ｄｓＲＮＡ分子は、当技術分野で公知の任意の方法を使用して設計することができる。陰性対照ｓｉＲＮＡは、適切なゲノムに対して有意な配列相補性を有するべきではない。そのような陰性対照は、選択されたｓｉＲＮＡのヌクレオチド配列をランダムにスクランブルすることによって設計することができ、相同性検索を実施して、陰性対照が適切なゲノム内の任意の他の遺伝子に対する相同性を欠くことを確実にすることができる。さらに、陰性対照ｓｉＲＮＡは、１つまたは複数の塩基ミスマッチを配列に導入することによって設計することができる。
【０１６６】
本明細書に記載されている方法では、ｓｉＲＮＡ、および、修飾されたｓｉＲＮＡ誘導体、例えば、組成物の特異性および／または薬物動態学などの性質が変化するように、例えば、体内での半減期が増加するように修飾されたｓｉＲＮＡ、例えば、架橋結合したｓｉＲＮＡのどちらも使用することができる。したがって、本発明は、核酸の２つの相補鎖を有し、したがって２つの鎖が架橋結合するｓｉＲＮＡを含むｓｉＲＮＡ誘導体を投与する方法を含む。オリゴヌクレオチド修飾としては、これだけに限定されないが、２’−Ｏ−メチル、２’−フルオロ、２’−Ｏ−メトキシエチル（methyoxyethyl）およびホスホロチオエート、ボラノホスフェート、４’−チオリボースが挙げられる（WilsonおよびKeefe、Curr.  Opin.  Chem.  Biol.、１０巻：６０７〜６１４頁、２００６年；Prakashら、J.  Med.  Chem.、４８巻：４２４７〜４２５３頁、２００５年；Soutschekら、Nature、４３２巻：１７３〜１７８頁、２００４年）。
【０１６７】
一部の実施形態では、ｓｉＲＮＡ誘導体は、３’末端にビオチン分子（例えば、光切断可能なビオチン）、ペプチド（例えば、Ｔａｔペプチド）、ナノ粒子、ペプチド模倣物、有機化合物（例えば、蛍光色素などの色素）、またはデンドリマーを有する。ｓｉＲＮＡ誘導体をこのように修飾することにより、対応するｓｉＲＮＡと比較して、得られたｓｉＲＮＡ誘導体の細胞内取り込みを改善することまたは細胞標的化活性を増強することができ、これは、細胞内でｓｉＲＮＡ誘導体を追跡するために有用であり、あるいは、ｓｉＲＮＡ誘導体の安定性を対応するｓｉＲＮＡと比較して改善することができる。
【０１６８】
阻害性核酸組成物は、コンジュゲートしたものでなくてもよく、組成物の性質、例えば、吸収、有効性、生物学的利用能、および／または半減期などの薬物動態パラメーターを増強するためにナノ粒子などの別の部分とコンジュゲートしたものであってもよい。コンジュゲーションは、当技術分野で公知の方法によって、例えば、Lambertら、Drug  Deliv.  Rev.：４７巻（１号）、９９〜１１２頁、２００１年；Fattalら、J.  Control  Release、５３巻（１〜３号）：１３７〜４３頁、１９９８年；Schwabら、Ann.  Oncol.５巻、補遺４：５５〜８頁、１９９４年；およびGodardら、Eur.  J.  Biochem.、２３２巻（２号）：４０４〜１０頁、１９９５年）の方法を使用して実現することができる。阻害性核酸分子は、当技術分野で公知の任意の方法を使用して標識することもでき、例えば、核酸組成物を、フルオロフォア、例えば、Ｃｙ３、フルオレセイン、またはローダミンで標識することができる。標識は、キット、例えば、ＳＩＬＥＮＣＥＲ（商標）ｓｉＲＮＡ標識キット（Ａｍｂｉｏｎ）を使用して行うことができる。さらに、ｓｉＲＮＡを、例えば、３Ｈ、３２Ｐ、または他の適切な同位元素を使用して放射標識することができる。
【０１６９】
ｓｉＲＮＡ送達：ｓｉＲＮＡを食塩水または他の賦形剤中に入れて直接送達することにより、眼、肺、および中枢神経系などの組織内の標的遺伝子をサイレンシングすることができる（Bitkoら、Nat.  Med.、１１巻：５０〜５５頁（２００５年）；Shenら、Gene  Ther.、１３巻：２２５〜２３４頁（２００６年）；Thakkerら、Proc.  Natl.  Acad.  Sci.  U.S.A.（２００４年））。成体マウスでは、ｓｉＲＮＡの効率的な送達は、大きな体積のｓｉＲＮＡ含有溶液を動物に尾静脈を介して迅速に注射する（５秒以内）「高圧」送達技法によって実現することができる（Lewis、Nature  Genetics、３２巻：１０７〜１０８頁、２００２年）。
【０１７０】
リポソームおよびナノ粒子を使用してｓｉＲＮＡを動物に送達することもできる。リポソーム、例えば安定な核酸−脂質粒子（ＳＮＡＬＰ）、ジオレオイルホスファチジルコリン（ＤＯＰＣ）に基づく送達系、ならびにリポプレックス、例えば、リポフェクタミン２０００、ＴｒａｎｓＩＴ−ＴＫＯを使用した送達方法により、標的ｍＲＮＡが有効に抑止されることが示されている（de  Fougerolles、Human  Gene  Ther.、１９巻：１２５〜１３２頁（２００８年）；Landenら、Cancer  Res.、６５巻：６９１０〜６９１８頁（２００５年）；Luoら、Mol.  Pain、１巻：２９頁（２００５年）；Zimmermannら、Nature、４４１巻：１１１〜１１４頁（２００６年））。ｓｉＲＮＡを、ペプチド、ＲＮＡアプタマー、抗体、またはポリマー、例えば、ダイナミックポリコンジュゲート、シクロデキストリンに基づくナノ粒子、アテロコラーゲン、およびキトサンとコンジュゲートすることにより、ｓｉＲＮＡの安定性および／または取り込みを改善することができる。（Howardら、Mol.  Ther.、１４巻：４７６〜４８４頁（２００６年）；Hu-Lieskovanら、Cancer  Res.、６５巻：８９８４〜８９９２頁（２００５年）；Kumarら、Nature、４４８巻：３９〜４３頁；McNamaraら、Nat.  Biotechnol.、２４巻：１００５〜１０１５頁（２００７年）；Rozemaら、Proc.  Natl.  Acad.  Sci.  U.S.A.、１０４巻：１２９８２〜１２９８７頁（２００７年）；Songら、Nat.  Biotechnol.、２３巻：７０９〜７１７頁（２００５年）；Wolfrumら、Nat.  Biotechnol.、２５巻：１１４９〜１１５７頁（２００７年））。
【０１７１】
ウイルス媒介性送達機構を使用して、例えば、ＲＮＡ  Ｐｏｌ  ＩＩプロモーターによる転写制御下でｓｉＲＮＡを有する組換えアデノウイルスを生成することにより、ｓｉＲＮＡの発現によって標的化遺伝子の特異的なサイレンシングを誘導することもできる。これらの組換えアデノウイルスをＨｅＬａ細胞に感染させることにより、内在性標的遺伝子発現を低減させることが可能になる。ｓｉＲＮＡの標的遺伝子を発現するトランスジェニックマウスに組換えアデノウイルスベクターを注射することにより、ｉｎ  ｖｉｖｏにおける標的遺伝子発現の低下がもたらされる。同文献。動物モデルでは、全胚電気穿孔により、合成ｓｉＲＮＡを移植後マウス胚に効率的に送達することができる（Calegariら、Proc.  Natl.  Acad.  Sci.  USA、９９巻（２２号）：１４２３６〜４０頁（２００２年））。
【０１７２】
ＲＮＡｉを誘導するための、工学的に操作された（engineered）ＲＮＡ前駆体の使用：本明細書に記載されている通り細胞または生物体全体に導入された工学的に操作されたＲＮＡ前駆体により、所望のｓｉＲＮＡ分子の産生がもたらされる。次いで、そのようなｓｉＲＮＡ分子がＲＮＡｉ経路の内在性タンパク質構成成分と会合して、切断、不安定化、および／または翻訳阻害破壊のために特異的なｍＲＮＡ配列に結合し、それを標的とする。このように、工学的に操作されたＲＮＡ前駆体から生じるｓｉＲＮＡによって標的とされたｍＲＮＡは細胞または生物体から枯渇し、それにより、細胞または生物体におけるそのｍＲＮＡによってコードされるタンパク質の濃度の低下がもたらされる。
【０１７３】
アンチセンス：「アンチセンス」核酸は、タンパク質をコードする「センス」核酸と相補的なヌクレオチド配列、例えば、二本鎖ｃＤＮＡ分子のコード鎖と相補的または標的ｍＲＮＡ配列と相補的なヌクレオチド配列を含んでよい。アンチセンス核酸は、標的配列のコード鎖全体に相補的であってもよく、その一部（例えば、標的遺伝子のコード領域）のみに相補的であってもよい。別の実施形態では、アンチセンス核酸分子は、選択された標的遺伝子（例えば、５’非翻訳領域および３’非翻訳領域）をコードするヌクレオチド配列のコード鎖の「非コード領域」に対してアンチセンスである。
【０１７４】
アンチセンス核酸は、標的ｍＲＮＡのコード領域全体と相補的であるが、標的ｍＲＮＡのコード領域または非コード領域の一部のみに対してアンチセンスであるオリゴヌクレオチドであってもよいように設計することができる。例えば、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、標的ｍＲＮＡの翻訳開始部位の周囲の領域、例えば、目的の標的遺伝子ヌクレオチド配列の−１０領域から＋１０領域の間に対して相補的であってよい。アンチセンスオリゴヌクレオチドは、例えば、約７ヌクレオチド、約１０ヌクレオチド、約１５ヌクレオチド、約２０ヌクレオチド、約２５ヌクレオチド、約３０ヌクレオチド、約３５ヌクレオチド、約４０ヌクレオチド、約４５ヌクレオチド、約５０ヌクレオチド、約５５ヌクレオチド、約６０ヌクレオチド、約６５ヌクレオチド、約７０ヌクレオチド、約７５ヌクレオチド、約８０ヌクレオチド、またはそれより多くのヌクレオチドの長さであってよい。
【０１７５】
本発明のアンチセンス核酸は、化学合成および酵素によるライゲーション反応を使用して、当技術分野で公知の手順を使用して構築することができる。例えば、アンチセンス核酸（例えば、アンチセンスオリゴヌクレオチド）は、天然に存在するヌクレオチド、または、分子の生物学的安定性が増加するようにもしくはアンチセンス核酸とセンス核酸との間に形成される２重鎖の物理的安定性が増加するように設計された、多様に修飾されたヌクレオチドを使用して化学的に合成することができ、例えば、ホスホロチオエート誘導体およびアクリジン置換ヌクレオチドを使用することができる。アンチセンス核酸はまた、核酸がアンチセンス方向にサブクローニングされた発現ベクターを使用して生物学的に産生させることもできる（すなわち、挿入された核酸から転写されるＲＮＡは目的の標的核酸に対してアンチセンス方向であり、以下の項にさらに記載されている）。
【０１７６】
Ｓｉｇｌｅｃ１５および／またはその結合性リガンド、例えばＭＡＧおよびＬＲＲＣ４Ｃに関する本明細書に開示されている配列に基づいて、当業者は、本発明に従った使用のために適した任意のいくつものアンチセンス分子を容易に選択し、合成することができる。例えば、標的核酸の長さにわたる１５〜３０ヌクレオチドの一連のオリゴヌクレオチドを含む「遺伝子歩行」を調製し、その後、標的遺伝子発現の阻害について試験することができる。任意選択で、合成および試験するオリゴヌクレオチドの数を減らすためにオリゴヌクレオチド間に５〜１０ヌクレオチドのギャップを残すことができる。一部の実施形態では、アンチセンス分子はＳｉｇｌｅｃ１５のＩｇＶドメインを標的とする。他の実施形態では、アンチセンス分子は、ＭＡＧまたはＬＲＲＣ４Ｃ内の、Ｓｉｇｌｅｃ１５との相互作用が起こる領域を標的とする。一部の実施形態では、アンチセンス分子は、Ｓｉｇｌｅｃ１５の残基１４３にわたる領域を標的とする。
【０１７７】
本発明のアンチセンス核酸分子は、一般には、被験体に投与されるか（例えば、組織部位に直接注射することにより）、またはｉｎ  ｓｉｔｕにおいて生成され、その結果、標的タンパク質をコードする細胞内のｍＲＮＡおよび／またはゲノムＤＮＡとハイブリダイズまたは結合し、それにより、タンパク質の発現を、例えば、転写および／または翻訳を阻害することによって阻害する。あるいは、アンチセンス核酸分子を、選択された細胞を標的とするように改変し、次いで全身投与することができる。全身投与のために、アンチセンス分子を、選択された細胞表面上に発現する受容体または抗原に特異的に結合するように、例えば、細胞表面受容体または抗原に結合するペプチドまたは抗体をアンチセンス核酸分子に連結することによって改変することができる。アンチセンス核酸分子は、本明細書に記載されているベクターを使用して細胞に送達することもできる。アンチセンス分子の十分な細胞内濃度を実現するために、アンチセンス核酸分子が強力なｐｏｌ  ＩＩプロモーターまたはｐｏｌ  ＩＩＩプロモーターの制御下におかれたベクター構築物を使用することができる。
【０１７８】
ＣＲＩＳＰＲ技術：ＣＲＩＳＰＲ複合体をポリヌクレオチドに結合させることにより、標的ポリヌクレオチド（例えば、Ｓｉｇｌｅｃ１５および／またはその結合性リガンド、例えばＭＡＧおよびＬＲＲＣ４ＣのＤＮＡまたはＲＮＡ）の発現を改変することができ、ここで、ＣＲＩＳＰＲ複合体は、標的ポリヌクレオチド内の標的配列とハイブリダイズしたガイド配列と複合体を形成したＣＲＩＳＰＲ酵素を含み、ガイド配列はｔｒａｃｒメイト配列に連結しており、ｔｒａｃｒメイト配列はさらにｔｒａｃｒ配列とハイブリダイズする。一部の実施形態では、ＣＲＩＳＰＲ複合体と標的ポリヌクレオチドとの結合により、標的ポリヌクレオチドの発現の増加がもたらされる。別の実施形態では、ＣＲＩＳＰＲ複合体と標的ポリヌクレオチドとの結合により、標的ポリヌクレオチド（例えば、Ｓｉｇｌｅｃ１５および／またはその結合性リガンド、例えばＭＡＧおよびＬＲＲＣ４ＣのＤＮＡまたはＲＮＡ）の発現の低下がもたらされる。
【０１７９】
規則的な間隔をもってクラスター化された短鎖反復回文配列（ｃｌｕｓｔｅｒｅｄ，ｒｅｇｕｌａｒｌｙ  ｉｎｔｅｒｓｐａｃｅｄ，ｓｈｏｒｔ  ｐａｌｉｎｄｒｏｍｉｃ  ｒｅｐｅａｔ）（ＣＲＩＳＰＲ）技術は、標的化ゲノム編集のためのカスタマイズ可能な特異性を有する、ＲＮＡによりガイドされるヌクレアーゼ生成手法として本発明に含まれる。これらのヌクレアーゼによって媒介されるゲノム編集は、多種多様な生物医学的に重要な細胞型において、および遺伝子操作することが伝統的に困難である生物体において内在性遺伝子を急速に、容易に、かつ効率的に改変するために使用されている。
【０１８０】
一般に、「ＣＲＩＳＰＲ系」という用語は、集合的に、ＣＲＩＳＰＲ関連（「Ｃａｓ」）遺伝子の発現に関与するまたはその活性を導く転写物および他の／エレメントを指し、Ｃａｓ遺伝子、ｔｒａｃｒ（トランス活性化ＣＲＩＳＰＲ）配列（例えば、ｔｒａｃｒ  ＲＮＡまたは活性部分的ｔｒａｃｒ  ＲＮＡ）、ｔｒａｃｒメイト配列（内在性ＣＲＩＳＰＲ系に関しては「ダイレクトリピート」およびｔｒａｃｒ  ＲＮＡによりプロセシングされる部分的ダイレクトリピートを包含する）、ガイド配列（内在性ＣＲＩＳＰＲ系に関しては「スペーサー」とも称される）、またはＣＲＩＳＰＲ遺伝子座に由来する他の配列および転写物をコードする配列を含む。本発明の複数の実施形態では、ガイド配列およびガイドＲＮＡという用語は互換的に使用される。一部の実施形態では、ＣＲＩＳＰＲ系の１つまたは複数のエレメントは、Ｉ型、ＩＩ型、またはＩＩＩ型ＣＲＩＳＰＲ系に由来する。一部の実施形態では、ＣＲＩＳＰＲ系の１つまたは複数のエレメントは、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｙｏｇｅｎｅｓなどの、内在性ＣＲＩＳＰＲ系を含む特定の生物体に由来する。一般に、ＣＲＩＳＰＲ系は、標的配列の部位におけるＣＲＩＳＰＲ複合体の形成を促進するエレメント（内在性ＣＲＩＳＰＲ系に関してはプロトスペーサーとも称される）を特徴とする。ＣＲＩＳＰＲ複合体の形成に関しては、「標的配列」とは、それに対する相補性を有するようにガイド配列を設計する配列を指し、標的配列とガイド配列との間のハイブリダイゼーションにより、ＣＲＩＳＰＲ複合体の形成が促進される。標的配列は、ＤＮＡまたはＲＮＡポリヌクレオチド（例えば、Ｓｉｇｌｅｃ１５および／またはその結合性リガンド、例えばＭＡＧおよびＬＲＲＣ４ＣのＤＮＡまたはＲＮＡ）などの任意のポリヌクレオチドを含み得る。一部の実施形態では、標的配列は、細胞の核内または細胞質内に位置する。
【０１８１】
本発明の好ましい実施形態では、ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ系は、ＩＩ型ＣＲＩＳＰＲ系であり、Ｃａｓ酵素は、ＤＮＡ切断を触媒するＣａｓ９である。Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｙｏｇｅｎｅｓに由来するＣａｓ９または任意の密接に関連するＣａｓ９による酵素作用により、標的部位配列であって、ガイド配列の２０ヌクレオチドにハイブリダイズし、標的配列の２０ヌクレオチドの後ろにプロトスペーサー隣接モチーフ（ＰＡＭ）配列ＮＧＧを有する標的部位配列における二本鎖の破壊が生じる。部位特異的ＤＮＡ認識および切断のためのＣａｓ９を通じたＣＲＩＳＰＲ活性は、ガイド配列、ガイド配列と一部ハイブリダイズするｔｒａｃｒ配列およびＰＡＭ配列によって規定される。ＣＲＩＳＰＲ系のさらなる態様は、KarginovおよびHannon、The  CRISPR  system:  small  RNA-guided  defense  in  bacteria  and  archae、Mol.  Cell、２０１０年、３７巻（１号）：７頁に記載されている。
【０１８２】
Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｙｏｇｅｎｅｓ  ＳＦ３７０由来のＩＩ型ＣＲＩＳＰＲ遺伝子座は、４つの遺伝子、Ｃａｓ９、Ｃａｓ１、Ｃａｓ２、およびＣｓｎ１のクラスター、ならびに２つの非コードＲＮＡエレメント、ｔｒａｃｒ  ＲＮＡおよび短いひと続きの非反復配列（スペーサー、それぞれ約３０ｂｐ）によって間が空いた反復配列（ダイレクトリピート）の特有のアレイを含有する。この系では、標的化ＤＮＡ二本鎖切断（ＤＳＢ）が４つの逐次的なステップで生じる。第１に、２つの非コードＲＮＡ、プレｃｒＲＮＡアレイおよびｔｒａｃｒ  ＲＮＡがＣＲＩＳＰＲ遺伝子座から転写される。第２に、ｔｒａｃｒ  ＲＮＡがプレｃｒＲＮＡのダイレクトリピートとハイブリダイズし、次いで、それがプロセシングされて、個々のスペーサー配列を含有する成熟ｃｒＲＮＡになる。第３に、成熟ｃｒＲＮＡ：ｔｒａｃｒ  ＲＮＡ複合体は、ｃｒＲＮＡのスペーサー領域とプロトスペーサーＤＮＡとの間のヘテロ二本鎖形成を介して、Ｃａｓ９をプロトスペーサーおよび対応するＰＡＭからなるＤＮＡ標的に導く。最後に、Ｃａｓ９によりＰＡＭの上流の標的ＤＮＡの切断が媒介されて、プロトスペーサー内にＤＳＢが生じる。ＣＲＩＳＰＲ系のいくつかの態様をさらに改善して、ＣＲＩＳＰＲ標的化の効率および多用途性を増加させることができる。最適なＣａｓ９活性は、遊離のＭｇ２＋の、哺乳動物の核に存在するものよりも高いレベルでの利用可能性に依存し得（例えば、Jinekら、２０１２年、Science、３３７巻：８１６頁を参照されたい）、プロトスペーサーのすぐ下流のＮＧＧモチーフに対する選好により、ヒトゲノムにおいて平均で１２ｂｐごとに標的とする能力が制限される。
【０１８３】
前述の阻害性核酸戦略を、シアリル−Ｔｎのレベルを低下させるためにも使用することができる。例えば、ＲＮＡ干渉、ｓｉＲＮＡ分子、アンチセンス核酸、および／またはＣＲＩＳＰＲ技術を使用して、シアリル−Ｔｎの形成に関与する酵素の発現レベルをモジュレートすることができる。本明細書に記載されている通り、シアリル−Ｔｎは、ＧａｌＮＡｃ  α−Ｏ−Ｓｅｒ／Ｔｈｒにα−２，６連結したシアル酸を含有する短縮型Ｏ−グリカンである。シアリル−Ｔｎの合成に関与する例示的な酵素としては、シアル酸転移酵素ＳＴ６ＧａｌＮＡｃ１およびＣＯＳＭＣ（コア１β３−Ｇａｌ−Ｔ特異的分子シャペロン）が挙げられる。例えば阻害性核酸を使用した、シアリル−Ｔｎ産生に関与する酵素、例えばシアル酸転移酵素ＳＴ６ＧａｌＮＡｃ１またはＣＯＳＭＣなどのモジュレーションを使用して、ｉｎ  ｖｉｖｏまたはｉｎ  ｖｉｔｒｏにおけるシアリル−Ｔｎのレベルを低下させることができる。
【０１８４】
ｉｉ．アンタゴニスト抗体
本発明は、さらに、Ｓｉｇｌｅｃ１５ならびに／またはその結合性リガンド、例えばＭＡＧ、ＬＲＲＣ４Ｃ、および／もしくはシアリル−Ｔｎを阻害し、それにより、Ｓｉｇｌｅｃ１５の発現および／または活性を低下させ、がんに対する免疫応答を促進するアンタゴニスト抗体を含む方法および組成物を意図している。
【０１８５】
一部の実施形態では、Ｓｉｇｌｅｃ１５ならびに／またはその結合性リガンド、例えばＭＡＧ、ＬＲＲＣ４Ｃ、および／もしくはシアリル−Ｔｎのアンタゴニスト抗体またはその抗原結合性部分により、Ｓｉｇｌｅｃ１５ならびに／またはその結合性リガンド、例えばＭＡＧ、ＬＲＲＣ４Ｃ、および／もしくはシアリル−Ｔｎの発現および／または活性が低下する。
【０１８６】
一部の実施形態では、Ｓｉｇｌｅｃ１５のアンタゴニスト抗体および／またはＳｉｇｌｅｃ１５リガンド、例えばＭＡＧ、ＬＲＲＣ４Ｃ、および／もしくはシアリル−Ｔｎのアンタゴニスト抗体またはその抗原結合性部分により、Ｓｉｇｌｅｃ１５とその結合性リガンド、例えばＭＡＧ、ＬＲＲＣ４Ｃ、および／またはシアリル−Ｔｎとの間の相互作用が遮断される。一部の実施形態では、Ｓｉｇｌｅｃ１５ならびに／またはその結合性リガンド、例えばＭＡＧ、ＬＲＲＣ４Ｃ、および／もしくはシアリル−Ｔｎのアンタゴニスト抗体またはその抗原結合性部分は、Ｓｉｇｌｅｃ１５のＩｇＶドメインに結合する。他の実施形態では、Ｓｉｇｌｅｃ１５ならびに／またはその結合性リガンド、例えばＭＡＧ、ＬＲＲＣ４Ｃ、および／もしくはシアリル−Ｔｎのアンタゴニスト抗体またはその抗原結合性部分は、Ｓｉｇｌｅｃ１５の残基１４３に結合する。一部の実施形態では、Ｓｉｇｌｅｃ１５ならびに／またはその結合性リガンド、例えばＭＡＧ、ＬＲＲＣ４Ｃ、および／もしくはシアリル−Ｔｎのアンタゴニスト抗体またはその抗原結合性部分は、Ｓｉｇｌｅｃ１５のリガンド、例えばＭＡＧ、ＬＲＲＣ４Ｃ、および／またはシアリル−Ｔｎ内の、Ｓｉｇｌｅｃ１５とそのリガンドとの間の相互作用が起こる領域に結合する。
【０１８７】
一実施形態では、アンタゴニスト抗体またはその抗原結合性部分は、Ｓｉｇｌｅｃ１５の細胞外エピトープに結合する。例えば、アンタゴニスト抗体またはその抗原結合性部分は、Ｓｉｇｌｅｃ１５に、Ｓｉｇｌｅｃ１５とＳｉｇｌｅｃ１５リガンド、例えばＭＡＧ、ＬＲＲＣ４Ｃ、および／またはシアリル−Ｔｎとの間の相互作用に関与する細胞外エピトープにおいて結合し得る。そのような抗体は、Ｓｉｇｌｅｃ１５とＳｉｇｌｅｃ１５リガンド、例えばＭＡＧ、ＬＲＲＣ４Ｃ、および／またはシアリル−Ｔｎとの間の相互作用を部分的に、または完全に遮断し得る。例示的な実施形態では、抗Ｓｉｇｌｅｃ１５アンタゴニスト抗体またはその抗原結合性部分は、Ｓｉｇｌｅｃ１５に、残基１４３を含むエピトープにおいて結合する。一実施形態では、アンタゴニスト抗Ｓｉｇｌｅｃ１５抗体は、Ｓｉｇｌｅｃ１５を通じたシグナルを伝達しない。一実施形態では、アンタゴニスト抗Ｓｉｇｌｅｃ１５抗体は、Ｓｉｇｌｅｃ１５のエンドサイトーシスを誘導する。別の実施形態では、アンタゴニスト抗Ｓｉｇｌｅｃ１５抗体は、Ｓｉｇｌｅｃ１５のエンドサイトーシスを誘導しない。
【０１８８】
抗Ｓｉｇｌｅｃ１５抗体を、Ｓｉｇｌｅｃ１５の機能に拮抗する能力について、標準の方法を使用してスクリーニングすることができる。例示的な抗Ｓｉｇｌｅｃ１５アンタゴニスト抗体としては、本明細書に記載されているＳ１５ｍ０３およびＳ１５ｍ０２が挙げられる。Ｓ１５ｍ０３またはＳ１５ｍ０２に由来する抗体またはその抗原結合性断片は、Ｓｉｇｌｅｃ１５アンタゴニストとしても有用であり得る。例えば、Ｓ１５ｍ０３またはＳ１５ｍ０２の誘導体は、Ｓ１５ｍ０３またはＳ１５ｍ０２のキメラバリアント、ヒト化バリアント、またはヒトバリアントであり得る。例示的なＳ１５ｍ０３またはＳ１５ｍ０２の誘導体は、Ｓ１５ｍ０３またはＳ１５ｍ０２の相補性決定領域（ＣＤＲ）を１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、または６つ含む。例えば、Ｓ１５ｍ０３またはＳ１５ｍ０２の誘導体は、Ｓ１５ｍ０３またはＳ１５ｍ０２の重鎖および／または軽鎖ＣＤＲ３を含有し得る。別の例では、Ｓ１５ｍ０３またはＳ１５ｍ０２の誘導体は、Ｓ１５ｍ０３またはＳ１５ｍ０２の重鎖および／または軽鎖ＣＤＲ２を含有し得る。別の例では、Ｓ１５ｍ０３またはＳ１５ｍ０２の誘導体は、Ｓ１５ｍ０３またはＳ１５ｍ０２の重鎖および／または軽鎖ＣＤＲ１を含有し得る。別の例では、Ｓ１５ｍ０３またはＳ１５ｍ０２の誘導体は、Ｓ１５ｍ０３またはＳ１５ｍ０２の重鎖および／または軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３を含有し得る。好ましい実施形態では、Ｓ１５ｍ０３またはＳ１５ｍ０２の誘導体は、Ｓｉｇｌｅｃ１５についてＳ１５ｍ０３またはＳ１５ｍ０２の抗原結合特異性を維持する。
【０１８９】
一実施形態では、抗Ｓｉｇｌｅｃ１５抗体は、その内容全体が参照により本明細書に組み込まれる、２０１６年９月２１日出願の米国仮特許出願第６２／３９７，７９４号に記載されている抗体である。
【０１９０】
Ｓｉｇｌｅｃ１５アンタゴニストとして有用であり得る他の例示的な抗Ｓｉｇｌｅｃ１５抗体としては、これだけに限定されないが、ｍＡｂ  Ａ９Ｅ８（ＵＳ９，４４７，１９２に記載されている）、ｍＡｂ  ＤＳ−１５０１（Ｄａｉｉｃｈｉ  Ｓａｎｋｙｏ）、ｍＡｂ  ３２Ａ１（ＵＳ８，５７５，３１６に記載されている）、ｍＡｂ  ＡＢ−２５Ｅ９（Ａｌｅｔｈｉａ  Ｂｉｏｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ）、ｍＡｂ  ２５Ｂ８、ｍＡｂ  ２５Ｅ６、およびｍＡｂ  ２５Ｅ９（ＵＳ９，３８８，２４２に記載されている）が挙げられる。ＵＳ９，４４７，１９２、ＵＳ８，５７５，３１６、およびＵＳ９，３８８，２４２の全内容は、参照により本明細書に組み込まれる。他の例示的な抗Ｓｉｇｌｅｃ１５抗体としては、前述の抗Ｓｉｇｌｅｃ１５抗体と結合について競合する抗体、および／または前述の抗Ｓｉｇｌｅｃ１５抗体と同じもしくは重複するＳｉｇｌｅｃ１５のエピトープに結合する抗体が挙げられる。一実施形態では、Ｓｉｇｌｅｃ１５アンタゴニストは、ｍＡｂ  Ａ９Ｅ８またはその抗原結合性断片ではない。別の実施形態では、Ｓｉｇｌｅｃ１５アンタゴニストは、ｍＡｂ  ＤＳ−１５０１またはその抗原結合性断片ではない。別の実施形態では、Ｓｉｇｌｅｃ１５アンタゴニストは、ｍＡｂ  ＡＢ−２５Ｅ９またはその抗原結合性断片ではない。
【０１９１】
一実施形態では、アンタゴニスト抗体またはその抗原結合性部分は、ＭＡＧの細胞外エピトープに結合する。例えば、アンタゴニスト抗体またはその抗原結合性部分は、ＭＡＧに、ＭＡＧとＳｉｇｌｅｃ１５との間の相互作用に関与する細胞外エピトープにおいて結合し得る。そのような抗体は、ＭＡＧとＳｉｇｌｅｃ１５との間の相互作用を部分的に、または完全に遮断し得る。例示的な実施形態では、抗ＭＡＧアンタゴニスト抗体またはその抗原結合性部分は、ＭＡＧに、Ｓｉｇｌｅｃ１５の残基１４３と相互作用するエピトープにおいて結合する。一実施形態では、アンタゴニスト抗ＭＡＧ抗体は、ＭＡＧを通じたシグナルを伝達しない。
【０１９２】
一実施形態では、アンタゴニスト抗体またはその抗原結合性部分は、ＬＲＲＣ４Ｃの細胞外エピトープに結合する。例えば、アンタゴニスト抗体またはその抗原結合性部分は、ＬＲＲＣ４Ｃに、ＬＲＲＣ４ＣとＳｉｇｌｅｃ１５との間の相互作用に関与する細胞外エピトープにおいて結合し得る。そのような抗体は、ＬＲＲＣ４ＣとＳｉｇｌｅｃ１５との間の相互作用を部分的に、または完全に遮断し得る。例示的な実施形態では、抗ＬＲＲＣ４Ｃアンタゴニスト抗体またはその抗原結合性部分は、ＬＲＲＣ４Ｃに、Ｓｉｇｌｅｃ１５の残基１４３と相互作用するエピトープにおいて結合する。一実施形態では、アンタゴニスト抗ＬＲＲＣ４Ｃ抗体は、ＬＲＲＣ４Ｃを通じたシグナルを伝達しない。
【０１９３】
一実施形態では、アンタゴニスト抗体またはその抗原結合性部分は、シアリル−Ｔｎに結合する。そのような抗体は、シアリル−ＴｎとＳｉｇｌｅｃ１５との間の相互作用を部分的に、または完全に遮断し得る。例示的な実施形態では、抗シアリル−Ｔｎアンタゴニスト抗体またはその抗原結合性部分は、シアリル−Ｔｎに、Ｓｉｇｌｅｃ１５と相互作用するエピトープにおいて結合する。一実施形態では、アンタゴニスト抗シアリル−Ｔｎ抗体は、シアリル−Ｔｎを含有するポリペプチドを通じたシグナルを伝達しない。
【０１９４】
本発明の方法における使用に適したアンタゴニスト抗体は、当技術分野で公知の様々なアッセイ（例えば、Antibodies:  A  Laboratory  Manual、第２版、Greenfield編、２０１４年を参照されたい）によって同定し、それらの物理的／化学的性質および／もしくは生物活性についてスクリーニングする（例えば、ファージディスプレイを使用して）、または特徴付けることができる。抗体の、その抗原に対する結合特異性は、ＥＬＩＳＡ、ウエスタンブロット、または表面プラズモン共鳴などの当技術分野において公知の方法によって試験することができる。
【０１９５】
抗体は、例えば、参照により本明細書に組み込まれる米国特許第４，８１６，５６７号に記載されている当技術分野で公知の組換え方法および組成物を使用して産生させることができる。例えば、抗Ｓｉｇｌｅｃ１５抗体をコードする単離された核酸を使用して発現用の宿主細胞を形質転換する。そのような核酸は、抗体のＶＬを含むアミノ酸配列および／またはＶＨを含むアミノ酸配列（例えば、抗体の軽鎖および／または重鎖）をコードするものであってよい。さらなる実施形態では、そのような核酸を含む１つまたは複数のベクター（例えば、発現ベクター）が提供される。さらなる実施形態では、そのような核酸を含む宿主細胞が提供される。そのような一実施形態では、宿主細胞は、抗体のＶＬを含むアミノ酸配列および抗体のＶＨを含むアミノ酸配列をコードする核酸を含むベクター、または抗体のＶＬを含むアミノ酸配列をコードする核酸を含む第１のベクターおよび抗体のＶＨを含むアミノ酸配列をコードする核酸を含む第２のベクターを含む（例えば、それにより形質転換されている）。一実施形態では、宿主細胞は、真核細胞、例えば、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞またはリンパ系細胞（例えば、Ｙ０、ＮＳ０、Ｓｐ２０細胞）である。
【０１９６】
抗Ｓｉｇｌｅｃ１５抗体の組換えによる産生のために、抗体をコードする核酸を単離し、さらなるクローニングおよび／または宿主細胞における発現のために、１つまたは複数のベクターに挿入する。そのような核酸は、従来の手順を使用して容易に単離し、配列決定することができる（例えば、抗体の重鎖および軽鎖をコードする遺伝子に特異的に結合することが可能なオリゴヌクレオチドプローブを使用することによって）。
【０１９７】
抗体をコードするベクターのクローニングまたは発現に適した宿主細胞としては、本明細書に記載されている原核細胞または真核細胞が挙げられる。例えば、特に、グリコシル化およびＦｃエフェクター機能が必要ない場合に、細菌において抗体を産生させることができる。細菌における抗体断片およびポリペプチドの発現に関しては、例えば、米国特許第５，６４８，２３７号、同第５，７８９，１９９号、および同第５，８４０，５２３号を参照されたい。発現後、抗体を可溶性画分中の細菌細胞ペーストから単離し、さらに精製することができる。
【０１９８】
原核生物に加えて、グリコシル化経路が「ヒト化」されており、その結果、部分的にまたは完全にヒトグリコシル化されたパターンを有する抗体の産生をもたらす真菌株および酵母株を含めた、糸状菌または酵母などの真核微生物が、抗体をコードするベクターの適切なクローニングまたは発現宿主である。Gerngross、Nat.  Biotech.、２２巻：１４０９〜１４１４頁（２００４年）、およびLiら、Nat.  Biotech.、２４巻：２１０〜２１５頁（２００６年）、を参照されたい。
【０１９９】
グリコシル化抗体の発現に適した宿主細胞はまた、多細胞生物体（無脊椎動物および脊椎動物）からも得られる。無脊椎動物細胞の例としては、植物細胞および昆虫細胞が挙げられる。昆虫細胞と併せて、特にＳｐｏｄｏｐｔｅｒａ  ｆｒｕｇｉｐｅｒｄａ細胞のトランスフェクションのために使用することができる多数のバキュロウイルス株が同定されている。
【０２００】
脊椎動物細胞も宿主として使用することができる。例えば、懸濁液中での成長に適合させた哺乳動物細胞株が有用であり得る。有用な哺乳動物宿主細胞株の他の例は、ＳＶ４０によって形質転換されたサル腎臓ＣＶ１株（ＣＯＳ−７）；ヒト胎児由来腎臓株（例えば、Grahamら、J.  Gen  Virol.、３６巻：５９頁（１９７７年）、に記載されている２９３または２９３細胞）；ベビーハムスター腎臓細胞（ＢＨＫ）；マウスセルトリ細胞（例えば、Mather、Biol.  Reprod.、２３巻：２４３〜２５１頁（１９８０年）、に記載されているＴＭ４細胞）；サル腎臓細胞（ＣＶ１）；アフリカミドリザル腎臓細胞（ＶＥＲＯ−７６）；ヒト子宮頸癌細胞（ＨＥＬＡ）；イヌ腎臓細胞（ＭＤＣＫ；バッファローラット肝細胞（ＢＲＬ  ３Ａ）；ヒト肺細胞（Ｗ１３８）；ヒト肝細胞（Ｈｅｐ  Ｇ２）；マウス乳房腫瘍（ＭＭＴ  ０６０５６２）；例えば、Matherら、Annals  N.Y.  Acad.  Sci.、３８３巻：４４〜６８頁（１９８２年）、に記載されているＴＲ１細胞；ＭＲＣ  ５細胞；およびＦＳ４細胞である。他の有用な哺乳動物宿主細胞株としては、ＤＨＦＲ−ＣＨＯ細胞（Urlaubら、Proc.  Natl.  Acad.  Sci.  USA、７７巻：４２１６頁（１９８０年））を含めたチャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞；ならびにＹ０、ＮＳ０およびＳｐ２／０などの骨髄腫細胞株が挙げられる。抗体産生に適したある特定の哺乳動物宿主細胞株の概説については、例えば、YazakiおよびWu、Methods  in  Molecular  Biology、２４８巻（B.  K.  C.  Lo編、Humana  Press、Totowa、N.J.）、２５５〜２６８頁（２００３年）、を参照されたい。
【０２０１】
ｉｉｉ．小分子阻害剤
Ｓｉｇｌｅｃ１５タンパク質の活性を特異的に阻害するために使用することができる他の阻害性調節物質は、Ｓｉｇｌｅｃ１５活性を直接阻害する、またはＳｉｇｌｅｃ１５とその結合性リガンド、例えばＭＡＧ、ＬＲＲＣ４Ｃ、および／もしくはシアリル−Ｔｎとの間の相互作用を阻害する化学化合物である。そのような化合物は、天然物であってもコンビナトリアルケミストリーライブラリーのメンバーであってもよく、下に詳細に記載されているスクリーニングアッセイを使用して同定することができる。
【０２０２】
一部の実施形態では、本発明の小分子阻害剤は、Ｓｉｇｌｅｃ１５とその結合性リガンドとの間の相互作用を遮断し得る。例えば、小分子阻害剤は、Ｓｉｇｌｅｃ１５のＩｇＶドメインに結合する。他の実施形態では、本発明の小分子阻害剤は、ＭＡＧ、ＬＲＲＣ４Ｃ、またはシアリル−Ｔｎの、Ｓｉｇｌｅｃ１５のＩｇＶドメインと相互作用する領域に結合し、それにより、Ｓｉｇｌｅｃ１５とそのリガンド、例えばＭＡＧ、ＬＲＲＣ４Ｃ、またはシアリル−Ｔｎとの間の相互作用を遮断し得る。
【０２０３】
一部の実施形態では、小分子阻害剤を、Ｓｉｇｌｅｃ１５のドメインと相同性を共有するドメインと結合するように選択する。例えば、本発明の小分子は、Ｓｉｇｌｅｃ１５のＩｇＶドメインと少なくとも５０％同一、少なくとも６０％同一、少なくとも７０％同一、少なくとも８０％同一、少なくとも９０％同一、または少なくとも９５％または９９％同一であるドメインを対象とし得る。そのような小分子は、おそらくＳｉｇｌｅｃ１５内の、例えばＳｉｇｌｅｃ１５のＩｇＶドメインと機能的に類似したタンパク質ドメインに結合することが可能である。
【０２０４】
本発明の小分子阻害剤は、Ｓｉｇｌｅｃ１５のＩｇＶドメインに由来する特定のモチーフまたはコンセンサス配列にも結合し得、それにより、小分子阻害剤がＳｉｇｌｅｃファミリーのメンバーの間で共有されるドメインに特異的に結合することが可能である。別の実施形態では、本発明の小分子は、タンパク質の３次元構造を表すタンパク質モチーフまたはコンセンサス配列に結合する。そのようなモチーフまたはコンセンサス配列は、連続したアミノ酸の連なりではなく、Ｓｉｇｌｅｃ１５の３次元フォールディングの結果もたらされる非直線状のアミノ酸配置（すなわち、構造モチーフ）を表す。そのようなモチーフの例は、Ｓｉｇｌｅｃ１５のＩｇＶドメインに基づいて設計されたモチーフである。そのようなモチーフおよびコンセンサス配列は、当技術分野で公知の任意の方法に従って設計することができる。
【０２０５】
一部の実施形態では、小分子は、Ｓｉｇｌｅｃ１５タンパク質の特異的な配列、例えば、Ｓｉｇｌｅｃ１５の残基１４３に結合する。
【０２０６】
ｉｖ．融合タンパク質または変異体タンパク質
アンタゴニストとして機能し、Ｓｉｇｌｅｃ１５の活性を阻害するＳｉｇｌｅｃ１５タンパク質のバリアントまたはＳｉｇｌｅｃ１５の結合性リガンド（例えば、ＭＡＧおよびＬＲＲＣ４Ｃ）のバリアントを本発明の方法において使用することができる。例えば、抗Ｓｉｇｌｅｃ１５アンタゴニスト抗体と同様に遮断性タンパク質として機能するＳｉｇｌｅｃ１５のＦｃ融合タンパク質を本発明における阻害性調節物質として使用することができる。例示的な実施形態では、Ｓｉｇｌｅｃ１５−Ｆｃ融合タンパク質アンタゴニストは、可溶性Ｓｉｇｌｅｃ１５−Ｆｃ融合タンパク質である。あるいは、リガンドに対する結合活性が低下したＳｉｇｌｅｃ１５変異体も本発明の方法における使用のための阻害性調節物質として機能することになる。例えば、残基１４３に単一の置換変異を有するＳｉｇｌｅｃ１５変異体、またはＩｇＶドメインを有さないＳｉｇｌｅｃ１５変異体を本発明における阻害性調節物質として使用することができる。
【０２０７】
一部の実施形態では、Ｓｉｇｌｅｃ１５の結合性リガンド（例えば、ＭＡＧおよびＬＲＲＣ４Ｃ）のバリアントは、Ｓｉｇｌｅｃ１５とその結合性リガンドとの間の相互作用を遮断する。一部の実施形態では、抗Ｓｉｇｌｅｃ１５アンタゴニスト抗体と同様に遮断性タンパク質として機能するＭＡＧまたはＬＲＲＣ４ＣのＦｃ融合タンパク質を本発明における阻害性調節物質として使用することができる。別の例では、シアリル−Ｔｎを含有するタンパク質は、Ｓｉｇｌｅｃ１５と結合し、それを隔離することにより、遮断剤として機能し得る。あるいは、Ｓｉｇｌｅｃ１５に対する結合活性が低下したＭＡＧまたはＬＲＲＣ４Ｃ変異体も、本発明の方法における使用のための阻害性調節物質として機能することになる。例えば、Ｓｉｇｌｅｃ１５のＩｇＶドメインとの相互作用を消滅させる変異を有するＭＡＧまたはＬＲＲＣ４Ｃ変異体を本発明における阻害性調節物質として使用することができる。
【０２０８】
本発明の方法における使用のためのＳｉｇｌｅｃ１５および／またはその結合性リガンド、例えばＭＡＧまたはＬＲＲＣ４Ｃの組換え融合タンパク質は、当技術分野で公知の方法に従って組換えベクターから生成することができる。組換えベクターは、Ｓｉｇｌｅｃ１５タンパク質をコードする核酸を、宿主細胞における核酸の発現に適した形態で含んでよい。一部の実施形態では、ＩｇＧのＦｃドメインをコードする核酸配列を、発現ベクターにおいて、Ｓｉｇｌｅｃ１５および／またはその結合性リガンド、例えばＭＡＧおよびＬＲＲＣ４Ｃなどの目的のタンパク質またはその機能的セグメントをコードする核酸分子と作動可能に連結することができる。次いで、得られた融合タンパク質を、抗Ｆｃ抗体を用いるものなどの当技術分野において認められている方法によって細胞から容易に精製することができる。
【０２０９】
一部の実施形態では、組換えベクターは、発現のために使用される宿主細胞に基づいて選択された、発現させる核酸配列に作動可能に連結した１つまたは複数の調節配列を含んでよい（すなわち、組換え発現ベクター）。組換え発現ベクター内で、「作動可能に連結した」とは、目的のヌクレオチド配列と調節配列（複数可）が、ヌクレオチド配列の発現が可能になる（例えば、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ転写／翻訳系において、またはベクターを宿主細胞に導入する場合には宿主細胞において）様式で連結していることを意味するものとする。「調節配列」という用語は、プロモーター、エンハンサーおよび他の発現制御エレメント（例えば、ポリアデニル化シグナル）を含むものとする。そのような調節配列は、例えば、Goeddel、Methods  in  Enzymology:  Gene  Expression  Technology、１８５巻、Academic  Press、San  Diego、CA（１９９１年）に記載されている。調節配列は、多くの型の宿主細胞においてヌクレオチド配列の構成的発現を導くもの、およびある特定の宿主細胞においてのみヌクレオチド配列の発現を導くもの（例えば、組織特異的調節配列）を含む。発現ベクターの設計は、例えば、形質転換される宿主細胞の選択、所望のタンパク質の発現レベルなどのような因子に依存し得ることが当業者には理解されよう。本発明の発現ベクターを宿主細胞に導入して、それにより、本明細書に記載されている核酸によりコードされる融合タンパク質またはペプチドを含めたタンパク質またはペプチドを産生させることができる。
【０２１０】
本発明の組換え発現ベクターは、ポリペプチドまたはその機能性断片を原核細胞（例えば、Ｅ．ｃｏｌｉ）または真核細胞（例えば、バキュロウイルス発現ベクターを使用する昆虫細胞、酵母細胞または哺乳動物細胞）において発現させるために設計することができる。適切な宿主細胞としては、これだけに限定されないがＥ．ｃｏｌｉ細胞、Ｂａｃｉｌｌｕｓ細胞、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ細胞、Ｐｏｃｈｉａ細胞、ＮＳ０細胞、ＣＯＳ細胞、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞、骨髄腫細胞、または本明細書に記載されている細胞を挙げることができる。
【０２１１】
本発明の別の態様は、本発明の組換えベクターが導入された宿主細胞に関する。「宿主細胞」および「組換え宿主細胞」という用語は、本明細書では互換的に使用される。そのような用語は、特定の対象の細胞だけではなく、そのような細胞の後代または潜在的な後代も指すことが理解される。次の世代には、変異または環境の影響のいずれかに起因するある特定の改変が生じる可能性があるので、そのような後代は、実際には親細胞と同一でない可能性があるが、それでも、本明細書で使用されるこの用語の範囲に含まれる。
【０２１２】
ベクターＤＮＡは、従来の形質転換またはトランスフェクション技法によって原核細胞または真核細胞に導入することができる。本明細書で使用される場合、「形質転換」および「トランスフェクション」という用語は、リン酸カルシウムまたは塩化カルシウム共沈澱、ＤＥＡＥデキストラン媒介性トランスフェクション、リポフェクション、または電気穿孔を含めた、外来核酸を宿主細胞に導入するための当技術分野で認められている種々の技法を指すものとする。
【０２１３】
ｖ．Ｓｉｇｌｅｃ１５由来ペプチド
本発明の方法における使用のための阻害性調節物質は、Ｓｉｇｌｅｃ１５および／またはその結合性リガンドのアミノ酸配列（例えば、配列番号２、４および６として本明細書に開示されている配列）に由来するペプチド化合物である。特に、阻害性化合物は、Ｓｉｇｌｅｃ１５と結合性リガンド、例えばＭＡＧ、ＬＲＲＣ４Ｃ、またはシアリル−Ｔｎとの相互作用を媒介するＳｉｇｌｅｃ１５（またはその模倣物）の一部を含み、したがって、Ｓｉｇｌｅｃ１５とこのペプチド化合物の接触により、Ｓｉｇｌｅｃ１５とその結合性リガンド、例えばＭＡＧ、ＬＲＲＣ４Ｃ、またはシアリル−Ｔｎとの間の相互作用が競合的に阻害される。例えば、ＩｇＶドメイン内のアミノ酸配列を含むＳｉｇｌｅｃ１５由来のペプチドが阻害性調節物質としての機能を果たし得る。あるいは、Ｓｉｇｌｅｃ１５の残基１４３の周囲のアミノ酸配列を含むＳｉｇｌｅｃ１５由来のペプチドが阻害性調節物質としての機能を果たし得る。他の実施形態では、Ｓｉｇｌｅｃ１５との相互作用が起こる領域内のアミノ酸配列を含むＭＡＧまたはＬＲＲＣ４Ｃ由来のペプチドが阻害性調節物質としての機能を果たし得る。
【０２１４】
本発明のペプチド化合物は、細胞にペプチドをコードする発現ベクターを導入することにより、細胞において細胞内で作製することができる。そのような発現ベクターは、標準の技法によって作製することができる。ペプチドを別のタンパク質またはペプチドとの融合物（例えば、ＧＳＴ融合物）として細胞内で発現させることができる。細胞内でのペプチドの組換えによる合成の代わりに、ペプチドを、標準のペプチド合成技法を使用した化学合成によって作製することができる。次いで、合成されたペプチドを、ペプチドを細胞に導入するための当技術分野で公知の種々の手段（例えば、リポソームなど）によって細胞に導入することができる。
【０２１５】
Ｂ．刺激性調節物質
一部の実施形態では、本発明の方法における使用のための調節物質は、刺激性調節物質であり、その刺激性調節物質は、炎症を低下させることを必要とする被験体において、Ｓｉｇｌｅｃ１５および／またはその結合性リガンド、例えばＭＡＧ、ＬＲＲＣ４Ｃ、もしくはシアリル−Ｔｎの発現および／または活性を増加させ、それにより、炎症を低下させる。そのような刺激性調節物質の例としては、タンパク質、核酸分子、例えば、核酸分子を含む発現ベクター、および細胞においてＳｉｇｌｅｃ１５および／またはその結合性リガンド、例えばＭＡＧ、ＬＲＲＣ４Ｃ、もしくはシアリル−Ｔｎの発現および／または活性を刺激する小分子が挙げられる。
【０２１６】
本明細書で使用される場合、「核酸分子」という用語は、ＤＮＡ分子（例えば、ｃＤＮＡまたはゲノムＤＮＡ）およびＲＮＡ分子（例えば、ｍＲＮＡ）およびヌクレオチド類似体を使用して生成されたＤＮＡまたはＲＮＡの類似体を含むものとする。核酸分子は、一本鎖であっても二本鎖であってもよいが、二本鎖ＤＮＡであることが好ましい。本発明の方法において使用される核酸分子は、標準の分子生物学技法を使用して単離することができる。
【０２１７】
一部の実施形態では、本発明の方法における使用に適した刺激性調節物質は、Ｓｉｇｌｅｃ１５タンパク質である。例えば、刺激性調節物質は、全長Ｓｉｇｌｅｃ１５タンパク質、Ｓｉｇｌｅｃ１５の機能性断片、またはＳｉｇｌｅｃ１５のＩｇＶドメインである。刺激性調節物質は、Ｓｉｇｌｅｃ１５とその結合性リガンド、例えばＭＡＧ、ＬＲＲＣ４Ｃ、またはシアリル−Ｔｎとの間の相互作用を促進する。他の実施形態では、本発明の方法における使用に適した刺激性調節物質は、Ｓｉｇｌｅｃ１５タンパク質をコードする核酸分子である。例えば、ｃＤＮＡ（全長または部分的ｃＤＮＡ配列）を組換え発現ベクターにクローニングし、ベクターを、標準の分子生物学技法を使用して細胞にトランスフェクトする。ｃＤＮＡは、例えば、ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）を使用して増幅することによって、または適切なｃＤＮＡライブラリーをスクリーニングすることによって得ることができる。
【０２１８】
一部の実施形態では、本発明の方法における使用に適した刺激性調節物質は、Ｓｉｇｌｅｃ１５タンパク質の結合性リガンド、例えば、ＭＡＧ、ＬＲＲＣ４Ｃ、またはシアリル−Ｔｎである。刺激性調節物質は、Ｓｉｇｌｅｃ１５とその結合性リガンドとの間の相互作用を促進する。他の実施形態では、本発明の方法における使用に適した刺激性調節物質は、Ｓｉｇｌｅｃ１５タンパク質の結合性リガンド、例えば、ＭＡＧおよびＬＲＲＣ４Ｃをコードする核酸分子である。
【０２１９】
一部の実施形態では、本発明の方法における使用のための刺激性調節物質は、Ｓｉｇｌｅｃ１５および／またはその結合性リガンド、例えばＭＡＧ、ＬＲＲＣ４Ｃ、もしくはシアリル−Ｔｎの発現、安定性、および／または活性を特異的に活性化するように作用する細胞内結合性分子である。本明細書で使用される場合、「細胞内結合性分子」という用語は、タンパク質またはタンパク質をコードする核酸（例えば、ｍＲＮＡ分子）に結合することにより、タンパク質の発現または活性を増加させるように細胞内で作用する分子を含むものとする。
【０２２０】
他の実施形態では、刺激性調節物質は、Ｓｉｇｌｅｃ１５、および／またはその結合性リガンド、例えばＭＡＧまたはＬＲＲＣ４Ｃに対するアゴニスト抗体またはその抗原結合性断片である。Ｓｉｇｌｅｃ１５、および／またはその結合性リガンド、例えばＭＡＧまたはＬＲＲＣ４Ｃに対するそのようなアゴニスト抗体は、本明細書に記載されている方法を使用して同定し、生成することができる。
【０２２１】
一実施形態では、刺激性調節物質は、Ｓｉｇｌｅｃ１５融合タンパク質である。例示的な実施形態では、刺激性Ｓｉｇｌｅｃ１５融合タンパク質を、例えば、細胞上、または固体支持体、例えばビーズ上に固定化する。例えば、膜アンカーＳｉｇｌｅｃ１５−Ｆｃ融合タンパク質は、Ｓｉｇｌｅｃ１５またはＳｉｇｌｅｃ１５結合性リガンドの活性を増加させ得、Ｓｉｇｌｅｃ１５アゴニストとして機能し得る。別の実施形態では、アゴニストは、ＦｃＲ結合性に変異を含有するＳｉｇｌｅｃ−Ｆｃ融合タンパク質である。
【０２２２】
一部の実施形態では、本明細書に記載されているＣＲＩＳＰＲ技術に基づいてＳｉｇｌｅｃ１５および／またはその結合性リガンド、例えばＭＡＧおよびＬＲＲＣ４Ｃの発現および／または活性を活性化するために、刺激性核酸を使用することができる。
【０２２３】
Ｓｉｇｌｅｃ１５タンパク質および／またはその結合性リガンド、例えばＭＡＧ、ＬＲＲＣ４Ｃ、もしくはシアリル−Ｔｎの活性を特異的に活性化するために使用することができる他の刺激性調節物質は、Ｓｉｇｌｅｃ１５活性を直接活性化する、または、Ｓｉｇｌｅｃ１５および／またはその結合性リガンド、例えばＭＡＧ、ＬＲＲＣ４Ｃ、もしくはシアリル−Ｔｎとの間の相互作用を促進する化学化合物である。そのような化合物は、下に詳細に記載されている通り、そのような化合物を選択するスクリーニングアッセイを使用して同定することができる。
【０２２４】
Ｖ．スクリーニングアッセイ
Ｓｉｇｌｅｃ１５活性に影響を及ぼす調節物質は、公知のものであってよく（例えば、Ｓｉｇｌｅｃ１５活性に干渉する抗体、またはＳｉｇｌｅｃ１５変異体タンパク質）、または本明細書に記載されている方法を使用して同定することができる。本発明は、他の調節物質、すなわち、Ｓｉｇｌｅｃ１５の発現および／または活性をモジュレートする候補または試験化合物または調節物質（例えば、ペプチド、小分子または他の薬物）を同定するため、および他の調節物質の活性を試験または最適化するための方法（本明細書では「スクリーニングアッセイ」とも称される）を提供する。
【０２２５】
一部の実施形態では、Ｓｉｇｌｅｃ１５および／もしくはその結合性リガンド、例えばＭＡＧ、ＬＲＲＣ４Ｃ、もしくはシアリル−Ｔｎに結合する、またはＳｉｇｌｅｃ１５もしくはその結合性リガンド、例えばＭＡＧ、ＬＲＲＣ４Ｃ、もしくはシアリル−Ｔｎの発現および／もしくは活性に対する刺激効果もしくは阻害効果を有する分子を同定することができる。
【０２２６】
一実施形態では、Ｓｉｇｌｅｃ１５またはその結合性リガンド、例えばＭＡＧ、ＬＲＲＣ４Ｃ、もしくはシアリル−Ｔｎの発現、翻訳後修飾、または活性を直接モジュレートする化合物の能力を、本発明のスクリーニングアッセイを使用して指標として測定する。
【０２２７】
本発明の方法によって同定された、Ｓｉｇｌｅｃ１５またはその結合性リガンド、例えばＭＡＧ、ＬＲＲＣ４Ｃ、もしくはシアリル−Ｔｎの発現、安定性、および／または活性を阻害することができる調節物質は、がんを処置することを必要とする被験体においてがんを処置するため、腫瘍サイズを縮小させるまたは生存を延長させることを必要とする被験体の腫瘍サイズを縮小させるまたは生存を延長させるため、または腫瘍に対する免疫応答を増加させることを必要とする被験体において腫瘍に対する免疫応答を増加させるための有用な候補化合物として有用である。
【０２２８】
本発明の方法によって同定された、Ｓｉｇｌｅｃ１５またはその結合性リガンド、例えばＭＡＧ、ＬＲＲＣ４Ｃ、もしくはシアリル−Ｔｎの発現、安定性、および／または活性を増加させることができる調節物質は、自己免疫疾患を処置することまたは自己免疫疾患を処置することを必要とする被験体において、自己免疫疾患を処置するため、または炎症応答を低下させるために有用な候補化合物として有用である。
【０２２９】
例えば、一態様では、本発明は、被験体において自己免疫疾患またはがんを処置するために有用な化合物を同定するための方法を提供する。方法は、試験化合物（または複数の試験化合物）を用意するステップと、Ｓｉｇｌｅｃ１５の発現および／または活性に対する試験化合物の効果を決定するステップと、Ｓｉｇｌｅｃ１５の発現および／または活性をモジュレートする化合物を選択し、それにより、被験体において自己免疫疾患またはがんを処置するために有用な化合物を同定するステップとを含む。一部の実施形態では、Ｓｉｇｌｅｃ１５の発現および／または活性の増加により、化合物が自己免疫疾患を処置するために有用であることが示される。他の実施形態では、Ｓｉｇｌｅｃ１５の発現および／または活性の低下により、化合物ががんを処置するために有用であることが示される。
【０２３０】
別の態様では、本発明は、腫瘍に対する免疫応答を増加させることを必要とする被験体において腫瘍に対する免疫応答を増加させるために有用な化合物を同定するための方法を提供する。方法は、試験化合物（または複数の試験化合物）を用意するステップと、Ｓｉｇｌｅｃ１５の発現および／または活性に対する試験化合物の効果を決定するステップと、Ｓｉｇｌｅｃ１５の発現および／または活性を低下させる化合物を選択し、それにより、被験体において腫瘍に対する免疫応答を増加させるために有用な化合物を同定するステップとを含む。
【０２３１】
さらに別の態様では、本発明は、脳炎症応答を低下させることを必要とする被験体において脳炎症応答を低下させるために有用な化合物を同定するための方法を提供する。方法は、試験化合物（または複数の試験化合物）を用意するステップと、Ｓｉｇｌｅｃ１５の発現および／または活性に対する試験化合物の効果を決定するステップと、Ｓｉｇｌｅｃ１５の発現および／または活性を増加させる化合物を選択し、それにより、被験体において脳炎症応答を低下させるために有用な化合物を同定するステップとを含む。
【０２３２】
調節物質、候補化合物または試験化合物の例としては、これだけに限定されないが、核酸（例えば、ＤＮＡおよびＲＮＡ）、炭水化物、脂質、タンパク質、ペプチド、ペプチド模倣物、小分子および他の薬物が挙げられる。調節物質は、生物学的ライブラリー；空間的にアドレス可能な並行固相または液相ライブラリー；デコンボリューションを必要とする合成ライブラリー方法；「１ビーズ１化合物」ライブラリー方法；およびアフィニティークロマトグラフィー選択を使用した合成ライブラリー方法を含めた、当技術分野で公知のコンビナトリアルライブラリー方法における多数の手法のいずれかを使用して得ることができる。生物学的ライブラリー手法はペプチドライブラリーに限定されるが、他の４つの手法は、ペプチド、非ペプチドオリゴマーまたは化合物の小分子ライブラリーに適用可能である（Lam（１９９７年）、Anticancer  Drug  Des.、１２巻：１４５頁；米国特許第５，７３８，９９６号；および米国特許第５，８０７，６８３号、前述の参考文献のそれぞれの全内容が参照により本明細書に組み込まれる）。
【０２３３】
分子ライブラリーを合成するための方法の例は、当技術分野において、例えば、DeWittら（１９９３年）、Proc.  Natl.  Acad.  Sci.  USA、９０巻：６９０９頁；Erbら（１９９４年）、Proc.  Natl.  Acad.  Sci.  USA、９１巻：１１４２２頁；Zuckermannら（１９９４年）、J.  Med.  Chem.、３７巻：２６７８頁；Choら（１９９３年）、Science、２６１巻：１３０３頁；Carrellら（１９９４年）、Angew.  Chem.  Int.  Ed.  Engl.、３３巻：２０５９頁；Carellら（１９９４年）、Angew.  Chem.  Int.  Ed.  Engl.、３３巻：２０６１頁；およびGallopら（１９９４年）、J.  Med.  Chem.、３７巻：１２３３頁（前述の参考文献のそれぞれの全内容が参照により本明細書に組み込まれる）において見いだすことができる。化合物のライブラリーは、提示すること、例えば、溶液中（例えば、Houghten（１９９２年）、Bio/Techniques、１３巻：４１２〜４２１頁）、またはビーズ上（Lam（１９９１年）、Nature、３５４巻：８２〜８４頁）、チップ上（Fodor（１９９３年）Nature、３６４巻：５５５〜５５６頁）、細菌上（米国特許第５，２２３，４０９号）、胞子上（特許第５，５７１，６９８号；同第５，４０３，４８４号；および同第５，２２３，４０９号）、プラスミド上（Cullら（１９９２年）、Proc.  Natl.  Acad.  Sci.  USA、８９巻：１８６５〜１８６９頁）もしくはファージ上（ScottおよびSmith（１９９００  Science、２４９巻：３８６〜３９０頁；Devlin（１９９０年）Science、２４９巻：４０４〜４０６頁；Cwirlaら（１９９０年）、Proc.  Natl.  Acad.  Sci.  USA、８７巻：６３７８〜６３８２頁；およびFelici（１９９１年）J.  Mol.  Biol.、２２２巻：３０１〜３１０頁）に提示することができる。前述の参考文献のそれぞれの全内容が参照により本明細書に組み込まれる。
【０２３４】
試験化合物を、Ｓｉｇｌｅｃ１５タンパク質またはＳｉｇｌｅｃ１５が直接相互作用する分子、例えば、ＭＡＧまたはＬＲＲＣ４Ｃを発現する細胞と接触させることができる。例えば、試験化合物を、タンパク質（複数可）を天然に発現する、またはタンパク質（複数可）を発現するように細胞にタンパク質をコードする発現ベクターを導入することによって工学的に操作された細胞と接触させることができる。
【０２３５】
あるいは、試験化合物を、タンパク質（複数可）を含む無細胞組成物（例えば、例えば精製された天然または組換えタンパク質を含む細胞抽出物または組成物）に供することができる。
【０２３６】
Ｓｉｇｌｅｃ１５またはＳｉｇｌｅｃ１５の結合性リガンド、例えばＭＡＧ、ＬＲＲＣ４Ｃ、またはシアリル−Ｔｎの発現および／または活性をモジュレートする化合物は、種々の「読み取り」を使用して同定することができる。
【０２３７】
例えば、細胞に発現ベクターをトランスフェクトし、試験化合物の存在下および不在下でインキュベートし、Ｓｉｇｌｅｃ１５の発現に対するまたはＳｉｇｌｅｃ１５によって調節される生物学的応答に対する化合物の効果を決定することができる。Ｓｉｇｌｅｃ１５の生物活性は、標準の技法に従ってｉｎ  ｖｉｖｏまたはｉｎ  ｖｉｔｒｏにおいて決定される活性を含む。活性は、結合性リガンド、例えばＭＡＧ、ＬＲＲＣ４Ｃ、またはシアリル−Ｔｎとの会合などの直接的な活性であり得る。あるいは、活性は、脳炎症応答の増加などの間接的な活性である。
【０２３８】
試験化合物がＳｉｇｌｅｃ１５タンパク質の発現をモジュレートするかどうかを決定するために、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ転写アッセイを実施することができる。試験化合物がＳｉｇｌｅｃ１５  ｍＲＮＡ発現をモジュレートするかどうかを決定するために、定量的ＰＣＲまたはリアルタイムＰＣＲなどの種々の方法体系を実施することができる。
【０２３９】
種々のレポーター遺伝子が当技術分野で公知であり、本発明のスクリーニングアッセイにおける使用に適している。適切なレポーター遺伝子の例としては、クロラムフェニコールアセチルトランスフェラーゼ、ベータガラクトシダーゼ、アルカリホスファターゼ、緑色蛍光タンパク質、またはルシフェラーゼをコードする遺伝子が挙げられる。これらの遺伝子産物の活性を測定するための標準の方法は、当技術分野で公知である。
【０２４０】
種々の細胞型がスクリーニングアッセイにおいて指標細胞として使用するのに適している。低レベルの内在性Ｓｉｇｌｅｃ１５を発現し、そこで、組換えタンパク質を発現するように工学的に操作された細胞株を使用することが好ましい。対象アッセイにおいて使用するための細胞としては、真核細胞が挙げられる。例えば、一実施形態では、細胞は、酵母細胞などの真菌細胞である。別の実施形態では、細胞は、植物細胞である。さらに別の実施形態では、細胞は、脊椎動物細胞、例えば、トリ細胞または哺乳動物細胞（例えば、マウス細胞、またはヒト細胞）である。
【０２４１】
例えば、Ｓｉｇｌｅｃ１５を発現させるために使用することができる組換え発現ベクターは、当技術分野で公知である。例えば、まず、標準の分子生物学技法を使用してｃＤＮＡを組換え発現ベクターに導入する。ｃＤＮＡは、例えば、ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）を使用して増幅することによって、または適切なｃＤＮＡライブラリーをスクリーニングすることによって得ることができる。関与するシグナルトランスダクション経路（例えば、ヒト、マウスおよび酵母）におけるｃＤＮＡのヌクレオチド配列または分子は当技術分野で公知であり、標準のＰＣＲ方法によってｃＤＮＡの増幅を可能にするＰＣＲプライマーを設計するため、または標準のハイブリダイゼーション方法を使用してｃＤＮＡライブラリーをスクリーニングするために使用することができるハイブリダイゼーションプローブを設計するために使用することができる。
【０２４２】
別の実施形態では、試験化合物を、タンパク質（複数可）を含む無細胞組成物（例えば、例えば精製された天然または組換えタンパク質のいずれかを含む細胞抽出物または組成物）に供することができる。宿主細胞または培養培地において組換え方法によって発現させたＳｉｇｌｅｃ１５は、タンパク質を精製するための標準の方法を使用して宿主細胞または細胞培養培地から単離することができる。例えば、イオン交換クロマトグラフィー、ゲル濾過クロマトグラフィー、限外濾過、電気泳動、および抗体を用いた免疫アフィニティー精製を使用して、無細胞組成物において使用することができる精製または半精製されたタンパク質を産出することができる。あるいは、目的のタンパク質を発現する細胞の溶解物または抽出物を、無細胞組成物として使用するために調製することができる。
【０２４３】
一実施形態では、Ｓｉｇｌｅｃ１５が関与するシグナルトランスダクション経路におけるＳｉｇｌｅｃ１５活性または結合性リガンドの活性を特異的にモジュレートする化合物を、Ｓｉｇｌｅｃ１５とその結合性リガンドとの相互作用をモジュレートするそれらの能力に基づいて同定する。結合性リガンドは、ｍＲＮＡ分子であってもタンパク質分子、例えばＭＡＧまたはＬＲＲＣ４Ｃであってもよい。タンパク質間相互作用の検出を可能にする適切なアッセイ（例えば、免疫沈降、ツーハイブリッドアッセイなど）またはＳｉｇｌｅｃ１５とｍＲＮＡとの間の相互作用の検出を可能にする適切なアッセイ（例えば、電気泳動移動度シフトアッセイ、ＤＮＡｓｅ  Ｉフットプリンティングアッセイなど）が当技術分野で公知である。そのようなアッセイを試験化合物の存在下、および不在下で実施することにより、これらのアッセイを、結合性リガンドを伴うＳｉｇｌｅｃ１５の活性をモジュレートする（例えば、阻害するまたは増強する）化合物を同定するために使用することができる。
【０２４４】
主題のスクリーニングアッセイにおいて同定された化合物を、Ｓｉｇｌｅｃ１５によって調節される生物学的応答の１つまたは複数をモジュレートする方法において使用することができる。そのような化合物（複数可）を、本明細書に記載されている医薬組成物として製剤化し、その後にそれらを細胞と接触させることが望ましい場合があることが理解されよう。
【０２４５】
上記の種々の方法のうちの１つにより、例えばＳｉｇｌｅｃ１５の発現または活性を直接または間接的にモジュレートする試験化合物が同定されたら、次いで、選択された試験化合物（または「目的の化合物」）を、細胞に対するその効果について、例えば、目的の化合物と細胞をｉｎ  ｖｉｖｏ（例えば、目的の化合物を生物体に投与することによって）またはｅｘ  ｖｉｖｏ（例えば、細胞を生物体から単離し、単離された細胞を目的の化合物と接触させることによって、または、あるいは、目的の化合物を細胞株と接触させることによって）のいずれかで接触させ、細胞に対する目的の化合物の効果を適切な対照（例えば、無処置の細胞、または生物学的応答をモジュレートしない対照化合物もしくはキャリアで処置した細胞）と比較して決定することによってさらに評価することができる。
【０２４６】
別の態様では、本発明は、本明細書に記載されているアッセイの２つまたはそれよりも多くの組合せに関する。例えば、細胞に基づくアッセイまたは無細胞アッセイを使用して調節物質を同定することができ、Ｓｉｇｌｅｃ１５またはＳｉｇｌｅｃ１５が相互作用するタンパク質の活性を増加または低下させる調節物質の能力をｉｎ  ｖｉｖｏにおいて、例えば、動物、例えば、例えば神経膠芽腫腫瘍モデルについての、動物モデルなどにおいて確認することができる。
【０２４７】
さらに、本明細書に記載されている通り同定された、Ｓｉｇｌｅｃ１５またはＳｉｇｌｅｃ１５が関与するシグナル伝達経路内の分子の調節物質（例えば、アンチセンス核酸分子、または特異的抗体、または小分子）は、動物モデルにおいて、そのような調節物質を用いた処置の有効性、毒性、または副作用を決定するために使用することができる。あるいは、本明細書に記載されている通り同定された調節物質は、動物モデルにおいて、そのような調節物質の作用機構を決定するために使用することができる。
【０２４８】
別の実施形態では、同様のスクリーニングアッセイを使用して、Ｓｉｇｌｅｃ１５の活性および／または発現を間接的にモジュレートする化合物を、例えば、上記のスクリーニングアッセイなどのスクリーニングアッセイを、Ｓｉｇｌｅｃ１５が相互作用する分子、例えば、ＭＡＧ、ＬＲＲＣ４Ｃ、もしくはシアリル−Ｔｎ、または経路内でＳｉｇｌｅｃ１５の上流もしくは下流のいずれかで作用する任意の分子を使用して実施することによって同定することができることが理解されよう。
【０２４９】
本発明のスクリーニングアッセイによって同定された化合物は、本明細書に記載されている疾患、例えば、がん、または自己免疫疾患を処置するために有用な候補治療用化合物とみなされる。したがって、本発明は、スクリーニングアッセイにおいて同定された化合物、ならびに、本明細書に記載されている疾患の処置、防止、またはその発生もしくは進行の遅延におけるそれらの投与および使用の方法も包含する。
【０２５０】
本発明は記載されている特定のアッセイ方法、または試験作用物質および実験条件に限定されないことが理解されるべきである。なぜなら、該方法および作用物質は変更し得るからである。本明細書において使用される用語法は、特定の実施形態を説明するためだけのものであり、限定することを意図するものでないことも理解されるべきである。
【０２５１】
いかなる形でも限定することを意図しない以下の実施例によって本発明をさらに例証する。本出願全体を通して引用されている全ての参考文献、特許および公開特許出願の全内容、ならびに図面は、これにより参照により本明細書に組み込まれる。
【実施例】
【０２５２】
（実施例１）
ゲノムスケールＴ細胞活性アレイ技術によるＳｉｇｌｅｃ１５の同定
免疫療法のための標的のヒトゲノムワイド検索を行うために、ゲノムスケールＴ細胞活性アレイ（ＧＳ−ＴＣＡＡ）を開発した。ＧＳ−ＴＣＡＡ構築のために、Ｑｉａｇｅｎミニプレップキットを使用してヒト膜ゲノムの９０％を網羅する６４０２種のヒト膜ｃＤＮＡを調製し、定量し、希釈した。
【０２５３】
４つの１５３６ウェルプレートを含有するヒト受容体アレイのセットを遠心沈澱させ（６００ｇ、２分）、その後、逆トランスフェクションを行った。簡単に述べると、１５３６ウェルアレイプレートに、リポフェクタミン３０００（７μｌ  ｌｉｐｏ／ｍｌ）を含有するｏｐｔｉＭＥＭをウェル当たり２μｌを、ロボットディスペンサー（Ｍｕｌｔｉｄｒｏｐ  Ｃｏｍｂｉ、Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を使用して分注し、直ちに、超高速オービタルシェーカーによって１分間振盪させた。全てのプレートを室温で２０分間保管し、その後、Ｔ細胞刺激のために２９３Ｔ．２Ａ．ｍ．抗ＣＤ３細胞をＭｕｌｔｉｄｒｏｐによって添加した（ウェル当たり４μｌ中２０００個の細胞）。その後、プレートをさらに遠心沈殿させて（１０００ｇ、４分）、各ウェルの内側の気泡を取り除いた後、３７℃でインキュベートした。Ｔ細胞レポーター細胞、または初代Ｔ細胞（細胞４０００個）、例えば、異なるＧＦＰレポーターを有する工学的に操作されたジャーカット細胞株などをトランスフェクションの２４時間後にアレイプレートにローディングした。Ｔ細胞と２９３Ｔに基づくＴ細胞刺激物質を１２時間共培養した後にＩｎＣｅｌｌ  ｉｍａｇｅ  ａｎａｌｙｚｅｒ（ＧＥ）によってプレートイメージングを実施した。Ｃｅｌｌｐｒｏｆｉｌｅｒソフトウェアを使用した最適なイメージング分析後、潜在的な調節機能を有する遺伝子候補を同定した。例えば、分子がＴ細胞活性のモジュレートにおいて有効でない場合、ＧＦＰシグナルは同様のままになる。分子がＴ細胞活性に関する刺激シグナルとして作用する場合には、相対的により強力なＧＦＰシグナルが検出される。あるいは、分子が阻害性である場合には、はるかに弱いＧＦＰシグナルが観察される。ゲノムスケールＴ細胞活性アレイに基づいて、Ｓｉｇｌｅｃ１５が免疫調節物質として同定され、これにより、Ｓｉｇｌｅｃ１５が免疫学的機能を有し得ることが示唆された。
【０２５４】
（実施例２）
脳および骨髄に関連するＳｉｇｌｅｃ１５の発現
種々のマウス組織においてマウスｃＤＮＡライブラリー（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）を用いたＲＴ−ＰＣＲを使用してＳｉｇｌｅｃ１５発現を評価した。Ｓｉｇｌｅｃ１５プラスミド（Ｏｒｉｇｅｎｅ）を陽性対照として使用した。結果が図１Ａに示されている。ヒト組織におけるＳｉｇｌｅｃ１５  ＲＮＡ発現のマイクロアレイ解析（ＢｉｏＧＰＳ．ｏｒｇ）が図１Ｂに示されている。このデータから、Ｓｉｇｌｅｃ１５が、正常状態下で、ヒトおよびマウスのどちらにおいても脳および骨髄に関連する細胞において発現することが示される。ＢｉｏＧＰＳからのマイクロアレイデータが図１Ｃに示されており、それにより、Ｓｉｇｌｅｃ１５が、単球、マクロファージ、樹状細胞、Ｂ細胞、および破骨細胞において発現することが実証される。したがって、Ｓｉｇｌｅｃ１５は、脳に関連する疾患、および／または免疫応答の調節において生理機能を有し得る。
【０２５５】
（実施例３）
がんにおけるＳｉｇｌｅｃ１５の発現
ヒトがんにおけるＳｉｇｌｅｃ１５発現のメタ分析を、ＴＣＧＡがんマイクロアレイデータベースを使用して実施した。多くのヒトがんにおけるＳｉｇｌｅｃ１５  ｍＲＮＡ発現を正常組織対応物と比較した（図２）。元のデータセットを、ＵＣＳＣ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｇｅｎｏｍｉｃｓ  Ｂｒｏｗｓｅｒ  ｓｏｆｔｗａｒｅ（ｈｔｔｐｓ：／／ｇｅｎｏｍｅ−ｃａｎｃｅｒ．ｕｃｓｃ．ｅｄｕ）を使用して正規化し、Ｒプログラムを使用して解析した。このデータから、Ｓｉｇｌｅｃ１５が多くのヒトがんにおいて過剰発現し、がんの発生および進行において役割を果たし得ることが示される。
【０２５６】
Ｓｉｇｌｅｃ１５発現をいくつかのヒトがん細胞株においても評価した。ヒトがん細胞株におけるＳｉｇｌｅｃ１５の発現をＮＣＩ６０マイクロアレイ（ＢｉｏＧＰＳ）によって決定した（図３Ａ、発現値が任意の単位で示されている）。いくつかのヒトがん細胞株を抗Ｓｉｇｌｅｃ１５抗体ｍ０３で染色した。抗体ｍ０３は、ＮＺＢ／Ｗ  Ｆ１マウスをマウスＳｉｇｌｅｃ１５外部ドメイン融合タンパク質で免疫し、ヒトＳｉｇｌｅｃ１５と交差反応させることによって生成した。染色された細胞を、Ｓｉｇｌｅｃ１５発現についてＦＡＣＳを使用して分析した（図３Ｂ）。このデータから、Ｓｉｇｌｅｃ１５がヒト腫瘍細胞株においても上方調節されることが示される。
【０２５７】
（実施例４）
受容体アレイ技術による、Ｓｉｇｌｅｃ１５のリガンドとしてのＭＡＧまたはＬＲＲＣ４Ｃの同定
Ｓｉｇｌｅｃ１５のリガンドを同定するために、Ｓｉｇｌｅｃ１５−Ｆｃ融合タンパク質を、各分子の細胞外ドメインをマウスまたはヒトＦｃタグと融合することによって生成し（Dong  Hら、Nat  Med.、１９９９年；５巻（１２号）：１３６５〜９頁）、新しく確立されたゲノムスケールヒト受容体アレイにおいてスクリーニングした（Yao,  Sら、Immunity、２０１１年、３４巻（５号）：７２９〜４０頁）。簡単に述べると、６，２００種を超える遺伝子を含有する完全なヒト膜遺伝子ライブラリーを収集し、維持し、ＯＰＴＩ−ＭＥＭ培地によって希釈し、ロボットシステムによって４つの１，５３６ウェルプレートに４０ｎｇ／ウェルで個別に入れた。リポフェクタミン２０００を各ウェルに添加し、プラスミドと３０分にわたって混合した。その後、ＨＥＫ２９３Ｔ細胞２０００個を各ウェルに添加して一過性トランスフェクションを実施した。トランスフェクションの８時間後に、１０ｎｇのヒトＳｉｇｌｅｃ１５−Ｆｃおよび抗Ｆｃ  ＦＭＡＴ青色二次抗体を各ウェルに添加した。トランスフェクションの２４時間後に、Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ  ８２００細胞検出システムを使用してプレートを読み取り、ＣＤＳ  ８２００ソフトウェアを使用して解析した。ヒトＦｃ受容体遺伝子がアッセイに対する内部陽性対照としての機能を果たした。
【０２５８】
Ｓｉｇｌｅｃ１５のリガンドについて２つの陽性ヒット：ミエリン関連糖タンパク質（ＭＡＧ）およびロイシンリッチリピート含有４Ｃ（ＬＲＲＣ４Ｃ）が同定された（図４Ａ）。ＭＡＧはＳｉｇｌｅｃ４とも称され、主に脳において見いだされ、ニューロンミエリン化に関与する。ＭＡＧはまた、骨髄系細胞、特に小膠細胞にも存在する。ＭＡＧノックアウト（ＫＯ）マウスには食作用に関する問題がある。ＬＲＲＣ４Ｃは、ニューロンに関連する成長、樹状突起形成、および軸索伸長に関連するＬＲＲファミリー分子である。ＬＲＲＣ４Ｃは、興奮性シナプスのシナプス後側に主に局在しており、シナプス前リガンドであるネトリン−Ｇ１と相互作用して興奮性シナプス形成を調節する。ＭＡＧの発現は、脳または脳関連腫瘍において富化されていることが示されており（図５）、また、ＬＲＲＣ４Ｃ  ｍＲＮＡレベルも、脳がん、乳がん、卵巣がん、腎細胞癌およびユーイング肉腫などのいくつかの種類のがんにおいて上方調節された（図６）。Ｓｉｇｌｅｃ１５がシアリル−Ｔｎと相互作用することが以前報告されている。この知見を確認するために、シアリル−Ｔｎ抗原Ｎｅｕ５Ａｃ  α２−６ＧａｌＮＡｃとＳｉｇｌｅｃ１５融合タンパク質（Ｓｉｇｌｅｃ１５−ｍＩｇ）の結合を、Ｏｃｔｅｔストレプトアビジンバイオセンサー（ＦｏｒｔｅＢｉｏ）を使用して測定した。ＯｃｔｅｔストレプトアビジンバイオセンサーにＮｅｕＡａ−２−６  ＧａｌＮａｃ−ビオチン（Ｇｌｙｃｏｔｅｃｈ、５０μｇ／ｍｌ）を予め入れ、Ｓｉｇｌｅｃ１５−ｍＩｇまたは対照ｍＩｇ（１００μｇ／ｍｌから開始した２倍段階希釈物）のいずれかに対する応答を経時的に決定した（図４Ｂ）。シアリル−Ｔｎ発現は多くのヒトがんおよびマウスがんにおいて実証されている。したがって、シアリル−Ｔｎは、Ｓｉｇｌｅｃ１５についてのリガンド／受容体としての機能を果たす追加的な結合パートナーであり得る。
【０２５９】
Ｓｉｇｌｅｃ１５とＭＡＧまたはＬＲＲＣ４Ｃとの間の相互作用の特異性をフローサイトメトリー分析によってさらに検証した。フローサイトメトリー染色のための抗体は全てＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ（Ｓａｎ  Ｊｏｓｅ、ＣＡ）またはｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ（Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ、ＣＡ）から購入した。Ｓｉｇｌｅｃ１５融合タンパク質は、ＭＡＧまたはＬＲＲＣ４ＣをトランスフェクトしたＨＥＫ２９３Ｔ細胞には強力に結合したが、対照細胞には結合せず、また、抗Ｓｉｇｌｅｃ１５  ｍＡｂを含めることにより、この相互作用が完全に遮断された。実際に、Ｓｉｇｌｅｃ１５とＭＡＧまたはＬＲＲＣ４Ｃとの間の相互作用は、マウスとヒトの間でよく保存されている。図４Ａにおいて実証されている通り、ヒトＳｉｇｌｅｃ１５は、ヒトＭＡＧおよびマウスＭＡＧのどちらにも結合することができ、マウスＳｉｇｌｅｃ１５もまた、マウスＬＲＲＣ４およびヒトＬＲＲＣ４の両方を認識することができ、これにより、種間相互作用が示唆される。
【０２６０】
（実施例５）
ＭＡＧおよびＬＲＲＣ４Ｃに対するＳｉｇｌｅｃ１５の結合ドメインの同定
ＭＡＧまたはＬＲＲＣ４Ｃに対するＳｉｇｌｅｃ１５の結合ドメインを決定するために、ドメイン欠失を有するＳｉｇｌｅｃ１５変異体を構築し、精製した。Ｓｉｇｌｅｃ１５は、細胞内ドメイン、膜貫通ドメイン、ＩｇＣドメインおよびＩｇＶドメインを含有する。ヒトまたはマウスＳｉｇｌｅｃ１５を以前に記載されているものと同様のＰＣＲ方法によって作製した（Sedy  JRら、Nat  Immunol.、２００５年；６巻（１号）：９０〜８頁）。以前の刊行物に従ってＳｉｇｌｅｃ１５点変異を選択し、ＰＣＲを使用して生成した（Cheung  TCら、Proc  Natl  Acad  Sci  U  S  A.、２００５年；１０２巻（３７号）：１３２１８〜２３頁；Compaan  DMら、J  Biol  Chem.、２００５年；２８０巻（４７号）：３９５５３〜６１頁）。図７において実証されている通り、Ｓｉｇｌｅｃ１５からのＩｇＶドメインの欠失により、Ｓｉｇｌｅｃ１５とＭＡＧおよびＬＲＲＣ４Ｃとの間の相互作用が完全に消失した。さらに、ＩｇＶドメインの残基１４３における点変異（Ｒ１４３Ａ変異）によってもＳｉｇｌｅｃ１５とＭＡＧまたはＬＲＲＣ４Ｃとの間の相互作用を排除することができ、これにより、Ｓｉｇｌｅｃ１５のＩｇＶドメインがＭＡＧまたはＬＲＲＣ４Ｃとの相互作用、より詳細には、ＩｇＶドメイン内のＲ１４３残基が関与する相互作用に必要であることが示唆される。
【０２６１】
（実施例６）
Ｓｉｇｌｅｃ１５はＴ細胞活性を直接阻害する
ヒトＴ細胞活性に対するＳｉｇｌｅｃ１５の効果を決定するために、ヒトＰＢＭＣを、固定化抗ＣＤ３抗体（０．０３μｇ／ｍｌから１μｇ／ｍｌまでにわたる）、および固定化ヒトＳｉｇｌｅｃ１５−ｍＩｇＧ融合タンパク質（Ｓ１５−ｍＩｇ）または対照マウスＩｇＧ（ｍＩｇ）（５μｇ／ｍｌ）のいずれかを用いて７２時間にわたって刺激した。１６時間後に、増殖したＴ細胞における３Ｈチミジン取り込みを分析した（図８Ａ）。Ｓ１５−ｍＩｇに曝露した細胞では３Ｈチミジン取り込みのレベルが有意に低下し、これにより、Ｓｉｇｌｅｃ１５をリガンドとして接触させることによりＴ細胞増殖が低減することが示された。
【０２６２】
膜結合型ＯＫＴ３発現構築物を、抗ヒトＣＤ３抗体ＯＫＴ３のｓｃＦｖ断片をコードする核酸とＣＤ１４をコードする核酸を融合することによって生成した。この構築物を２９３Ｔ細胞にトランスフェクトして、細胞表面上にＯＫＴ３  ｓｃＦｖを発現する２９３Ｔ．ｍ．ＯＫＴ３細胞を生成した。Ｊｕｒｋａｔ  ＮＦ−ＡＴルシフェラーゼレポーター細胞を、モックプラスミド、全長ＦＡＳＬＧ（Ｆａｓリガンド）、ＬＲＲＣ４Ｃ、Ｓｉｇｌｅｃ１５、または、Ｂ７−Ｈ６膜貫通ドメインを有するＳｉｇｌｅｃ１５外部ドメインをコードする遺伝子（Ｓｉｇｌｅｃ１５  ＡＴＭ）を過剰発現している２９３Ｔ．ｍ．ＯＫＴ３細胞と１２時間共培養した。共培養の４時間後にルシフェラーゼ活性をモニタリングした（図８Ｂ）。この系では、ＦＡＳＬＧの過剰発現により、ＮＦ−ＡＴシグナルがモックプラスミドと比較してほぼ排除された。さらに、Ｓｉｇｌｅｃ１５全長またはＳｉｇｌｅｃ１５  ＡＴＭのいずれかの発現により、同様にＮＦ−ＡＴルシフェラーゼシグナルを有意に阻害することができることが観察された。
【０２６３】
前述の実験から、リガンドとして作用するヒトＳｉｇｌｅｃ１５がＴ細胞活性を阻害し得ることが示される。
【０２６４】
マウスＳｉｇｌｅｃ１５がマウスＴ細胞の活性を同様に阻害することを確認するために、マウスＳｉｇｌｅｃ１５への曝露後のマウス脾細胞における３Ｈチミジン取り込みを分析した。マウス脾細胞を固定化抗ＣＤ３（０μｇ／ｍｌから２μｇ／ｍｌまでにわたる）で刺激し、固定化または可溶性マウスＳｉｇｌｅｃ１５−ｍＩｇＧ融合タンパク質（Ｓ１５−ｍＩｇ）または対照マウスＩｇＧ（ｍＩｇ）（５μｇ／ｍｌ）に７２時間にわたって曝露させた。増殖したＴ細胞におけるチミジン取り込みを１６時間後に分析した。固定化Ｓｉｇｌｅｃ１５−ｍＩｇＧに曝露した細胞における３Ｈチミジン取り込みが図９Ａに示されている。可溶性Ｓｉｇｌｅｃ１５−ｍＩｇＧに曝露した細胞における３Ｈチミジン取り込みが図９Ｂに示されている。マウスＳ１５−ｍＩｇに曝露した細胞では、３Ｈチミジン取り込みのレベルが低下し、これにより、Ｓｉｇｌｅｃ１５リガンドとの接触によりマウス脾細胞の増殖が低減することが示された。
【０２６５】
２９３Ｔ細胞に、ＯＶＡペプチド（ＳＩＩＮＦＥＫＬ）と融合したＨ２−Ｋｂをコードするプラスミドをトランスフェクトして２９３Ｔ−Ｋｂ−ＯＶＡ細胞を生成した。次いで、細胞に全長Ｓｉｇｌｅｃ１５をコードするレンチウイルスベクターを感染させて２９３Ｔ−Ｋｂ−ＯＶＡ−Ｓ１５細胞を生成した。種々のＳｉｇｌｅｃ１５発現を有するいくつかの細胞株をＦＡＣＳスクリーニングによって単離した。Ｈ−２ｋｂ  ＯＶＡ  ＳＩＩＮＦＥＫＬペプチドを認識するＯＶＡ特異的ＴＣＲについてトランスジェニックであるＯＴ−１マウスをＴｈｅ  Ｊａｃｋｓｏｎ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙから入手した。ＯＴ−１トランスジェニックマウス由来の脾細胞を、ＳＩＩＮＦＥＫＬペプチドとそれに加えてＩＬ−２を用いて３日間予め活性化した。次いで、活性化した細胞を、全長マウスＳｉｇｌｅｃ１５（ＫｂＯＶＡ−Ｓ１５）またはモックトランスフェクト対照（ＫｂＯＶＡ−対照）を過剰発現している２９３Ｔ−ＫｂＯＶＡ細胞と３日間共培養した。増殖したＴ細胞における３Ｈチミジン取り込みを１６時間後に分析した（図９Ｃ）。２９３Ｔ−ＫｂＯＶＡ細胞の状況でＳｉｇｌｅｃ１５に曝露した脾細胞では３Ｈチミジン取り込みのレベルが低下し、これにより、細胞に基づくＳｉｇｌｅｃ１５との接触によりマウス脾細胞の増殖が低減することが示された。
【０２６６】
ＦＡＣＳ分析、その後の抗Ｓｉｇｌｅｃ１５抗体ｍ０３を用いた染色によって示される通り、マウスＳｉｇｌｅｃ１５を過剰発現している３種の２９３Ｔ−ＫｂＯＶＡ細胞株において異なるレベルのマウスＳｉｇｌｅｃ１５発現が同定された（図９Ｄ）。ＯＴ−１トランスジェニックマウス由来の脾細胞を上記の通りＳＩＩＮＦＥＫＬペプチドおよびＩＬ−２を用いて予め活性化した。次いで、活性化脾細胞を、図９Ｄに示されている通りＳｉｇｌｅｃ１５発現のレベルが上昇している２９３Ｔ−ＫｂＯＶＡ細胞株と３日間共培養した。上清中のＩＦＮ−γレベル（図９Ｅ）、およびＴＮＦ−αレベル（図９Ｆ）をＣｙｔｏｍｅｔｒｉｃ  Ｂｅａｄ  Ａｒｒａｙ（ＣＢＡ）（ＢＤ  Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ）によって測定した。ＩＦＮ−γおよびＴＮＦ−α産生はＳｉｇｌｅｃ１５発現のレベルの上昇とともに低減し、これにより、Ｓｉｇｌｅｃ１５によりＴ細胞機能が用量依存的に阻害されることが示された。
【０２６７】
（実施例７）
細胞関連Ｓｉｇｌｅｃ１５によりＴ細胞の細胞傷害性が低下する
接着に基づく細胞傷害性アッセイを使用して、Ｔ細胞の細胞傷害性に対するＳｉｇｌｅｃ１５の効果および腫瘍殺滅との関連性を調査した。
【０２６８】
２９３Ｔ−ＫｂＯＶＡ標的細胞を３８４  Ｅ−プレート（ＡＣＥＡ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）にウェル当たり細胞１０４個の密度で入れ、終夜成長させた。プレートに接着する細胞により、増大する電気シグナルが生成される。乱されないままであれば、電気シグナルは経時的に増大し、次いで、細胞の過成長に起因して減退する。この系における抗原特異的Ｔ細胞の効果を試験するために、２９３Ｔ−ＫｂＯＶＡ標的細胞を異なる比の予め活性化したＯＴ−１  Ｔ細胞（０：１から２：１までにわたる）と共培養した。経時的に成長する標的細胞の接着シグナルが図１０Ａに示されている。２９３Ｔ−ＫｂＯＶＡ標的細胞のＯＴ−１  Ｔ細胞による殺滅のレベルに関して用量反応関係が観察された。アッセイにおいて存在するＯＴ−１  Ｔ細胞：２９３Ｔ−ＫｂＯＶＡ標的細胞の比が高いほど、検出されるシグナルが小さくなり、これにより、ＯＴ−１  Ｔ細胞の量が増加するとともに検出される生きた２９３Ｔ−ＫｂＯＶＡ標的細胞が少なくなることが示された。
【０２６９】
この系では、種々の比のＯＴ−１  Ｔ細胞の存在下で、Ｓｉｇｌｅｃ１５の過剰発現を伴う標的細胞（２９３Ｔ−ＫｂＯＶＡ−Ｓ１５）のＴ細胞による殺滅をＳｉｇｌｅｃ１５陰性である標的細胞（２９３Ｔ−ＫｂＯＶＡ−対照）のＴ細胞による殺滅と比較した。Ｔ細胞の不在下（０：１の比）では、Ｓｉｇｌｅｃ１５を過剰発現している２９３Ｔ−ＫｂＯＶＡ細胞のシグナルは対照細胞よりも弱かった。しかし、Ｔ細胞（１：１または２：１の比）の存在下では、Ｓｉｇｌｅｃ１５を過剰発現している細胞でより高いシグナルが生成され、これは、Ｔ細胞殺滅に対する抵抗性を示す（図１０Ｂ）。このデータから、細胞関連Ｓｉｇｌｅｃ１５（例えば、Ｓｉｇｌｅｃ１５を発現している腫瘍細胞に対して）により、細胞がＴ細胞の細胞傷害性に対して抵抗性になり得ることが示される。
【０２７０】
（実施例８）
Ｓｉｇｌｅｃ１５の欠損により、Ｔ細胞応答の増大が引き出される
野生型（ＷＴ）マウスまたはＳｉｇｌｅｃ１５全身ノックアウト（ＫＯ）マウスに、図１１Ａのスケジュールに従ってＯＴ−１／ＲａｇＫＯマウス由来の脾細胞を静脈内（ｉ．ｖ．）に受けさせた。簡単に述べると、マウスに、２×１０６個の脾細胞を−１日目に受けさせ、ＯＶＡペプチド１００μｇとそれに加えてポリｉ：ｃ、１００μｇを０日目に腹腔内に（ｉ．ｐ．）追加免疫した。総ＣＤ８Ｔ細胞集団に対するＯＴ−１細胞の百分率を、血液中のものは４日目に、および脾臓中のものは５日目に評価した（図１１Ｂ）。ＯＴ−１細胞の百分率を、ＯＴ−１四量体を使用したＦＡＣＳ染色によって決定した。
【０２７１】
血液中および脾臓中の抗原特異的ＣＤ８Ｔ細胞の百分率はＳｉｇｌｅｃ１５  ＫＯマウスにおいてＷＴマウスと比較して上昇した。この結果により、Ｓｉｇｌｅｃ１５の阻害効果を取り除くことにより、Ｔ細胞が抗原初回刺激によりロバストに応答することが可能になることが示唆される。
【０２７２】
図１１Ａに示されている通り、−１日目にＯＴ−１  Ｔ細胞をＷＴマウスまたはＳ１５ＫＯマウスに注射し、その後、０日目にペプチド刺激を行った。マウスに、５−エチニル−２’−デオキシウリジン（ＥｄＵ）（０．８ｍｇ／ｍｌ）を飲料水中に入れて与え、これを０日目に開始し、２日ごとに交換した。５日目に抗ＥｄＵ染色によって血中ＯＴ−１細胞の増殖を分析し、ＥｄＵ陽性ＯＴ−１細胞／総ＯＴ−１陽性細胞の百分率として算出した（図１１Ｃ）。脾細胞も単離し、刺激なしで終夜培養し、アネキシンＶについて染色した。アポトーシスをアネキシンＶ陽性ＯＴ−１細胞／総ＯＴ−１陽性細胞によって算出した（図１１Ｄ）。
【０２７３】
（実施例９）
骨髄由来Ｓｉｇｌｅｃ１５はｉｎ  ｖｉｖｏにおけるＳｉｇｌｅｃ１５機能に大きく関与する
Ｓｉｇｌｅｃ１５応答に関与する細胞集団を確認するために、マクロファージ特異的Ｓｉｇｌｅｃ１５ノックアウトマウス（ＬｙｓＭ−Ｃｒｅ  ＫＯ）を開発し、これにより、どの細胞がＳｉｇｌｅｃ１５を発現し、Ｔ細胞を阻害するかを分析することを可能にした。ＭＭＲＲＣ（Ｍｕｔａｎｔ  Ｍｏｕｃｅ  Ｒｅｓｏｕｒｃｅ＆Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｃｅｎｔｅｒｓ）から購入したＳｉｇｌｅｃ１５条件付きノックアウトマウス（Ｓｔｒａｉｎ  Ｂ６．Ｃｇ−Ｓｉｇｌｅｃ１５ｔｍ１．１Ｃｆｇ／Ｍｍｕｃｄ；参照番号ＭＭＲＲＣ：０３２７２３−ＵＣＤ）をＬｙｓＭ−Ｃｒｅマウス（Ｊａｘ  Ｌａｂｓ）と戻し交配してＬｙｓＭ−Ｃｒｅ  Ｓｉｇｌｅｃ１５ノックアウトマウスを生成した。実験を実施する前に、これらのマウスを後でＣ５７／ＢＬ６マウスと６世代にわたって戻し交配した。
【０２７４】
実施例８に記載されているＯＴ−１  Ｔ細胞移行系を使用して、Ｓｉｇｌｅｃ１５全身ノックアウトマウス（ＫＯ）におけるＯＴ−１  Ｔ細胞の拡大とマクロファージ特異的Ｓｉｇｌｅｃ１５ノックアウトマウス（ＬｙｓＭ−Ｃｒｅ  ＫＯ）におけるＯＴ−１  Ｔ細胞の拡大を比較した。血液を異なる時点で採取し、総ＣＤ８Ｔ細胞集団中のＯＴ−１細胞の百分率を決定した（図１２Ａ）。ＯＴ−１  Ｔ細胞の拡大は、ＷＴでは３日目にピークに達し、ＫＯマウスの２つの型ではそれよりも後にピークに達した。Ｔ細胞が最初の拡大後に収縮する相である収縮相はどちらのＫＯモデルにおいても高いまま維持され、これにより、Ｓｉｇｌｅｃ１５阻害の不在下ではＴ細胞がより多い数で維持されることが示唆される。Ｓｉｇｌｅｃ１５全身ＫＯおよびＬｙｓＭ−Ｃｒｅ  ＫＯは同様に挙動し、これにより、マクロファージがＳｉｇｌｅｃ１５分子の阻害効果に大きく関与し得ることが示唆される。全身ＫＯマウスおよびＬｙｓＭ−Ｃｒｅ  ＫＯマウスの血漿中のＩＬ−１０レベルもＯＴ−１  Ｔ細胞反応中に評価し、野生型と比較した（図１２Ｂ）。全身ＫＯマウスおよびＬｙｓＭ−Ｃｒｅ  ＫＯマウスの血漿中では野生型と比べてより低いレベルのＩＬ−１０が同定された。
【０２７５】
（実施例１０）
Ｓｉｇｌｅｃ１５の欠損の内在性免疫細胞プールに対する影響はわずかである
ノックアウトマウスにおけるＳｉｇｌｅｃ１５の欠損が免疫細胞の内在性プールの組成に影響を及ぼすかどうかを決定するために、野生型（ＷＴ）マウスおよびＳｉｇｌｅｃ１５ノックアウト（Ｓ１５ＫＯ）マウスの血液中の骨髄系集団、ＣＤ８集団、またはＣＤ４集団の百分率を１１カ月齢時に決定した（図１３）。
【０２７６】
これらのデータから、Ｓｉｇｌｅｃ１５  ＫＯマウスでは抗原特異的Ｔ細胞応答が有意に増強されるが、これらのマウスは、正常状態下では明白な遺伝性免疫表現型（骨髄性免疫細胞またはＴ細胞のいずれか）を有さないことが実証される。この所見から、Ｓｉｇｌｅｃ１５が誘導された発現パターンおよび／または機能性で作動し得ることが示される。
【０２７７】
（実施例１１）
細胞に基づくＳｉｇｌｅｃ１５によりマクロファージ応答が阻害される
マウス腹腔マクロファージを、モックプラスミドを過剰発現している２９３Ｔ細胞（対照）、全長ＬＲＲＣ４Ｃ、またはＳｉｇｌｅｃ１５と、種々の用量のＬＰＳの存在下で２４時間共培養した。上清中のサイトカインレベルをＣｙｔｏｍｅｔｒｉｃ  Ｂｅａｄ  Ａｒｒａｙ（ＣＢＡ）（ＢＤ  Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ）によって測定した。マクロファージによるＩＬ−６、ＴＮＦ−α、およびＴＧＦ−β１の産生は、細胞を、Ｓｉｇｌｅｃ１５を過剰発現している細胞と共培養した場合に低減し（図１４）、このデータから、細胞に基づくＳｉｇｌｅｃ１５により骨髄系細胞応答が直接阻害されることが示される。したがって、Ｓｉｇｌｅｃ１５は、リガンドとして、骨髄系細胞およびＴ細胞の両方を通じて、免疫系に対して阻害活性が課されるように作用し得る。
【０２７８】
（実施例１２）
ＥＡＥマウスにおけるＳｉｇｌｅｃ１５とＭＡＧまたはＬＲＲＣ４Ｃとの間の相互作用の遮断の影響
脳炎症性疾患の調節におけるＳｉｇｌｅｃ１５とＭＡＧまたはＬＲＲＣ４Ｃとの間の相互作用の役割を決定するために、実験的自己免疫性脳脊髄炎（ＥＡＥ）のマウスモデルを使用した。ＥＡＥは、脊髄および脳に影響を及ぼし、麻痺を引き起こす、脳炎および脱髄の炎症モデルである。ＥＡＥモデルは、ヒト炎症性脱髄性疾患である多発性硬化症（ＭＳ）のモデルとして広く使用されている。麻痺の程度はＥＡＥスコアによって定量することができる。
【０２７９】
簡単に述べると、雌Ｃ５７ＢＬ／６マウス（６〜１０週齢）をＮａｔｉｏｎａｌ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ、ＮＩＨ（Ｆｒｅｄｅｒｉｃｋ、ＭＤ）から購入した。８〜１２週齢のＣ５７ＢＬ／６マウスを０日目に完全フロイントアジュバント（ＣＦＡ）（Ｄｉｆｃｏ）中に乳化したＭＯＧペプチド（３５−５５）１００μｇを皮下に免疫してＥＡＥを誘導した。ＰＢＳ  ２００μｌ中百日咳毒素（Ｓｉｇｍａ）４００ｎｇを２回、０日目および２日目に注射した。各マウスに、２００μｇのＳｉｇｌｅｃ１５  ｍＡｂ（Ｓ１５ｍ０２、Ｓ１５ｍ０３）または対照抗体、または示されている融合タンパク質を、７日目および１０日目に腹腔内注射した。マウス抗マウスＳｉｇｌｅｃ１５  ｍＡｂは、ＮＺＢ／Ｗ  Ｆ１マウスをマウスＳｉｇｌｅｃ１５−Ｉｇ融合タンパク質で免疫することによって生成した。融合タンパク質は全て、各分子の細胞外ドメインをマウスまたはヒトＦｃタグと融合することによって生成した（Dong  Hら、Nat  Med.、１９９９年；５巻（１２号）：１３６５〜９頁）。
【０２８０】
疾患の重症度を、以前に記載されている通り以下の尺度に基づいてスコア化した：０、疾患なし；１、尾部麻痺；２、不全対麻痺；３、対麻痺；４、前肢衰弱を伴う対麻痺または麻痺；５、瀕死または死亡（Stromnes  IMら、Nature  protocols.、２００６年；１巻（４号）：１８１０〜９頁）。図１５には、Ｓｉｇｌｅｃ１５抗体クローンＳ１５ｍ０２が、Ｓｉｇｌｅｃ１５がＭＡＧまたはＬＲＲＣ４Ｃと結合するのを妨害する遮断抗体として作用したことが例示された。結果として、Ｓ１５ｍ０２抗体を受けたマウスでは、対照ｍＡｂを注射されたまたはＳ１５ｍ０３抗体を受けたそれらの対応物よりも重症の疾患の症状が発生し（図１６）、これにより、Ｓｉｇｌｅｃ１５とＭＡＧまたはＬＲＲＣ４Ｃとの間の相互作用が脳における炎症応答の調節において必要不可欠であることが示唆される。結果を、ＥＡＥマウスをＳｉｇｌｅｃ１５−Ｆｃ融合タンパク質Ｓｉｇｌｅｃ１５−ｍＩｇで処置することによってさらに確認した。マウスがＳｉｇｌｅｃ１５−Ｆｃ融合タンパク質を受けた後、ＥＡＥは加速した（図１７）。
【０２８１】
（実施例１３）
脳炎症応答の抑制におけるＳｉｇｌｅｃ１５の役割
Ｓｉｇｌｅｃ１５が脳炎症の調節において役割を果たすことを確認するために、Ｓｉｇｌｅｃ１５ノックアウト（ＫＯ）マウスモデルをＭＭＲＲＣ（ＵＣ  Ｄａｖｉｓ）から購入した（Taoら、J  Immunol.、２００８年；１８０巻（１０号）：６６４９〜５５頁）。野生型（ＷＴ）マウスおよびＳｉｇｌｅｃ１５ノックアウトマウスをどちらもＭＯＧ（３３−３５）ペプチドで免疫して実験的自己免疫性脳脊髄炎（ＥＡＥ）を誘導し、その後、ＥＡＥ疾患の臨床スコアを測定した。図１８において実証されている通り、Ｓｉｇｌｅｃ１５  ＫＯマウスはＷＴマウスよりも重症のＥＡＥ疾患の症状を示し、これにより、脳炎症応答の調節におけるＳｉｇｌｅｃ１５の阻害性の役割が示される。
【０２８２】
（実施例１４）
Ｓｉｇｌｅｃ１５の欠損により自己免疫が増強される
野生型（ＷＴ）マウスおよびＳｉｇｌｅｃ１５ノックアウト（Ｓｉｇｌｅｃ１５  ＫＯ）マウスをＭＯＧペプチドで免疫してＥＡＥを誘導した。全てのマウスを０日目および１日目に百日咳毒素を用いて追加免疫した。ＷＴマウスおよびＳｉｇｌｅｃ１５  ＫＯマウスのＥＡＥ臨床スコアを決定し、Ｓｉｇｌｅｃ１５  ＫＯマウスがＷＴマウスよりも重症のＥＡＥ疾患の症状を示すことが確認された。
【０２８３】
野生型（ＷＴ）マウスの別々のコホートをＭＯＧペプチドで免疫し、０日目および１日目に百日咳毒素で追加免疫し、その後、Ｓｉｇｌｅｃ１５−ｍＩｇ融合タンパク質（Ｓｉｇｌｅｃ１５−ｍＩｇ）または対照ｍＩｇ、またはＳｉｇｌｅｃ１５−ｈＩｇ融合タンパク質（Ｓｉｇｌｅｃ１５−ｈＩｇ）または対照ｈＩｇ（１００μｇ）を用いた処置を６日目に開始して週２回、合計４回の投薬で行った。ＥＡＥ臨床スコアを経時的に評価した（図１９Ａ）。１２日目に、対照ｍＩｇで処置したマウス由来の脾細胞を、５μｇ／ｍｌのＳｉｇｌｅｃ１５−ｍＩｇ（Ｓ１５−ｍＩｇ）または対照ｍＩｇ（ｍＩｇ）の存在下でＭＯＧペプチド（６０μｇ／ｍｌ）を用いて３日間再刺激した。さらに１６時間インキュベートした後、両群における３Ｈ−チミジン取り込みを測定した（図１９Ｂ）。このデータから、可溶性Ｓｉｇｌｅｃ１５−ｍＩｇがｉｎ  ｖｉｖｏにおいてアンタゴニストとして挙動し、抗原特異的Ｔ細胞応答を刺激し得ることが示される。この機構的試験により、脳炎症モデル（ＥＡＥ）におけるＳｉｇｌｅｃ１５融合タンパク質の機能的役割に関する本発明者らの理解が増進する。
【０２８４】
（実施例１５）
脳がんにおける免疫応答の抑制におけるＳｉｇｌｅｃ１５の役割
がんにおける免疫応答の調節におけるＳｉｇｌｅｃ１５の影響を試験するために、脳腫瘍モデルを使用した。Ｃ５７ＢＬ／６マウスに、腫瘍サイズを定量するために使用するルシフェラーゼレポーターを含有するＧＬ２６１腫瘍細胞を頭蓋内注射した。腫瘍の注射後４日目に、マウスに低線量全脳放射線療法を受けさせ、次いで５日目および１０日目に、Ｓｉｇｌｅｃ１５−Ｆｃまたは対照Ｉｇを用いて処置した。両群の腫瘍サイズを集中的にモニタリングした。図２０および２１において実証されている通り、Ｓｉｇｌｅｃ１５−Ｆｃ処置によるＳｉｇｌｅｃ１５の遮断により、腫瘍サイズが有意に縮小し（図２０）、また、マウスの生存が延長された（図２１）。Ｓｉｇｌｅｃ１５−Ｆｃで処置したマウスでは、抗ＰＤ−Ｌ１抗体を用いて処置した場合に相乗効果も示され、腫瘍の縮小および生存利益における抗ＰＤ−Ｌ１の有効性が著しく促進された（図２２）。これらの結果により、Ｓｉｇｌｅｃ１５の活性を遮断または他のやり方で阻害することにより、がんに対する免疫応答を増強することができることが示唆される。
【０２８５】
（実施例１６）
腫瘍を有するマウスにおける腫瘍関連ＣＤ８Ｔ細胞の有意な浸潤
上で実証されている通り、Ｓｉｇｌｅｃ１５は脳において発現する。野生型（ＷＴ）およびＳｉｇｌｅｃ１５ノックアウト（Ｓｉｇｌｅｃ１５  ＫＯ）脳腫瘍モデルにおけるＴ細胞の数および活性を調査した。ＷＴマウスまたはＳｉｇｌｅｃ１５  ＫＯマウスに、０日目にＧＬ２６１神経膠芽腫細胞を頭蓋内接種した。異なる時点で、ルシフェラーゼ活性を測定することによって脳内の腫瘍量をモニタリングした（図２３Ａ）。ＧＬ２６１細胞の接種後１３日目および１８日目にＷＴマウスおよびＫＯマウスの脳におけるルシフェラーゼ活性をイメージングした（図２３Ｂ）。ＧＬ２６１を接種したＷＴマウスおよびＫＯマウスの生存曲線から、Ｓｉｇｌｅｃ１５  ＫＯマウスがＷＴよりも長く生存することが実証される（図２３Ｃ）。１４日目に、両群から一部のマウスを屠殺した。脳または脾臓におけるＣＤ８Ｔ細胞（図２４Ａ）、ＣＤ４Ｔ細胞（図２４Ｂ）、または骨髄系細胞集団（図２４Ｃ）の数および百分率をモニタリングした。さらに、腫瘍を有するＷＴマウスまたはＫＯマウス由来の脳リンパ球を、ＧＬ−２６１腫瘍細胞を用いて終夜再刺激し、ＩＦＮ−γ陽性ＣＤ８またはＣＤ４Ｔ細胞の百分率および総数を決定した（図２４Ｄ）。
【０２８６】
Ｓｉｇｌｅｃ１５  ＫＯマウスの腫瘍部位では機能的ＣＤ８Ｔ細胞の有意な浸潤が同定されたが、ＷＴマウスの腫瘍部位では同定されなかった。脾臓では差異がないので、この効果は腫瘍に関連するものである。さらに、脳樹状細胞／マクロファージ集団において有意差が観察された。このデータから、Ｓｉｇｌｅｃ１５が腫瘍部位における免疫細胞応答に影響を及ぼし得ることが示される。特に、腫瘍／脳微小環境におけるＳｉｇｌｅｃ１５発現により、Ｔ細胞および／または骨髄系細胞を阻害し、腫瘍に対する免疫応答を停止させることができる。
【０２８７】
（実施例１７）
Ｓｉｇｌｅｃ１５を発現している腫瘍細胞の成長
ＭＣ３８結腸腺癌細胞に、Ｓｉｇｌｅｃ１５（Ｓ１５＋）または対照（Ｓ１５−）をコードするレンチウイルス発現構築物を感染させた。レンチウイルス感染後、ＦＡＣＳを使用してＭＣ３８−Ｓ１５−細胞集団およびＭＣ３８−Ｓ１５＋細胞集団を選別した。ＭＣ３８−Ｓ１５−細胞およびＭＣ３８−Ｓ１５＋細胞におけるＳｉｇｌｅｃ１５発現を、モノクローナル抗体を用いたＦＡＣＳ染色によって確認した（図２５Ａ）。Ｂ６マウスに、ＭＣ３８−Ｓ１５−細胞およびＭＣ３８−Ｓ１５＋細胞（マウス当たり細胞０．４Ｍ個）を皮下接種し、腫瘍成長をモニタリングした（図２５Ｂ）。Ｓｉｇｌｅｃ１５を発現しているＭＣ３８細胞に由来する腫瘍は、Ｓｉｇｌｅｃ１５発現を欠くＭＣ３８細胞に由来する腫瘍よりも大きかった。
【０２８８】
（実施例１８）
Ｓｉｇｌｅｃ１５アンタゴニストにより、Ｓｉｇｌｅｃ１５を発現している腫瘍細胞の成長が阻害される
ＭＣ３８−Ｓ１５＋安定細胞株をＢ６マウスに皮下接種した（マウス当たり細胞０．４Ｍ個）。マウスを、対照抗体、抗Ｓｉｇｌｅｃ１５抗体ｍ０１、またはＳ１５−ｍＩｇ（ｉ．ｐ．、２００μｇ／マウス）を用いて、６日目に処置し、その後、４日ごとに、合計４回の投薬で処置した。各群における平均腫瘍サイズが図２６に示されている。Ｓｉｇｌｅｃ１５アンタゴニストｍ０１またはＳ１５−ｍＩｇを用いて処置したマウスでは腫瘍サイズが有意に縮小した。
【０２８９】
等価物
当業者は、常套的な実験だけ（no  more  that）を使用して、本明細書に記載されている本発明の特定の実施形態に対する多くの等価物を理解するか、または確認することができる。そのような等価物は、以下の特許請求の範囲に包含されるものとする。
【図１Ａ−Ｂ】
2018533591.tif 000003
【図１Ｃ】
2018533591.tif 000004
【図２】
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【図３Ａ】
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【図３Ｂ】
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【図４Ａ】
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【図４Ｂ】
2018533591.tif 000009
【図５−１】
2018533591.tif 000010
【図５−２】
2018533591.tif 000011
【図５−３】
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【図６−１】
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【図６−２】
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【図６−３】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７】
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【図１８】
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【図１９】
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【図２０】
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【図２１】
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【図２２−１】
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【図２２−２】
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【図２３Ａ】
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【図２３Ｂ】
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【図２３Ｃ】
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【図２４Ａ】
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【図２４Ｂ】
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【図２４Ｃ−１】
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【図２４Ｃ−２】
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【図２４Ｄ】
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【図２５】
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【図２６】
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【図２７】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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