(57)【要約】本明細書では、プログラム死−１（ＰＤ−１）に特異的に結合し、ＰＤ−１の発現及び／または活性を調節する抗体に関連する組成物、方法及び使用を提供する。【選択図】図１Ａ
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
（ａ）配列番号８のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域及び配列番号１３のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域を含む抗体によって認識されるヒトＰＤ−１のエピトープに結合するか；または
（ｂ）ヒトＰＤ−１への結合において、配列番号８のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域及び配列番号１３のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域を含む抗体と競合する
抗体またはその抗原結合断片。
【請求項２】
（ａ）表１に記載の抗体ＰＤ１ＡＢ−１、ＰＤ１ＡＢ−２、ＰＤ１ＡＢ−３、ＰＤ１ＡＢ−４、ＰＤ１ＡＢ−５、もしくはＰＤ１ＡＢ−６の任意の１つのＶＬ相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、ＶＬ  ＣＤＲ２、及びＶＬ  ＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）；及び／または
（ｂ）表２に記載の抗体ＰＤ１ＡＢ−１、ＰＤ１ＡＢ−２、ＰＤ１ＡＢ−３、ＰＤ１ＡＢ−４、ＰＤ１ＡＢ−５、もしくはＰＤ１ＡＢ−６の任意の１つのＶＨ相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、ＶＨ  ＣＤＲ２、及びＶＨ  ＣＤＲ３を含む重鎖可変領域（ＶＨ）
を含む、ＰＤ−１に結合する抗体またはその抗原結合断片。
【請求項３】
（ａ）表３に記載の抗体ＰＤ１ＡＢ−１、ＰＤ１ＡＢ−２、ＰＤ１ＡＢ−３、ＰＤ１ＡＢ−４、ＰＤ１ＡＢ−５、もしくはＰＤ１ＡＢ−６の任意の１つのＶＬフレームワーク１（ＦＲ１）、ＶＬ  ＦＲ２、ＶＬ  ＦＲ３、及びＶＬ  ＦＲ４をさらに含む軽鎖可変領域（ＶＬ）；及び／または
（ｂ）表４に記載の抗体ＰＤ１ＡＢ−１、ＰＤ１ＡＢ−２、ＰＤ１ＡＢ−３、ＰＤ１ＡＢ−４、ＰＤ１ＡＢ−５、もしくはＰＤ１ＡＢ−６の任意の１つのＶＨフレームワーク１（ＦＲ１）、ＶＨ  ＦＲ２、ＶＨ  ＦＲ３、及びＶＨ  ＦＲ４をさらに含む重鎖可変領域（ＶＨ）
を含む、請求項２に記載の抗体またはその抗原結合断片。
【請求項４】
前記ＶＬ  ＣＤＲ１、ＶＬ  ＣＤＲ２、及びＶＬ  ＣＤＲ３がそれぞれ配列番号１、２、及び３のアミノ酸配列を含み、前記ＶＨ  ＣＤＲ１、ＶＨ  ＣＤＲ２、及びＶＨ  ＣＤＲ３がそれぞれ配列番号４、５、及び６のアミノ酸配列を含む、請求項２に記載の抗体またはその抗原結合断片。
【請求項５】
前記ＶＬ  ＣＤＲ１、ＶＬ  ＣＤＲ２、及びＶＬ  ＣＤＲ３がそれぞれ配列番号７、２、及び３のアミノ酸配列を含み、前記ＶＨ  ＣＤＲ１、ＶＨ  ＣＤＲ２、及びＶＨ  ＣＤＲ３がそれぞれ配列番号４、５、及び６のアミノ酸配列を含む、請求項２に記載の抗体またはその抗原結合断片。
【請求項６】
配列番号８のアミノ酸配列を含むＶＬを含む、請求項２に記載の抗体またはその抗原結合断片。
【請求項７】
配列番号９のアミノ酸配列を含むＶＬを含む、請求項２に記載の抗体またはその抗原結合断片。
【請求項８】
配列番号１０のアミノ酸配列を含むＶＬを含む、請求項２に記載の抗体またはその抗原結合断片。
【請求項９】
配列番号１１のアミノ酸配列を含むＶＨを含む、請求項２に記載の抗体またはその抗原結合断片。
【請求項１０】
配列番号１２のアミノ酸配列を含むＶＨを含む、請求項２に記載の抗体またはその抗原結合断片。
【請求項１１】
配列番号１３のアミノ酸配列を含むＶＨを含む、請求項２に記載の抗体またはその抗原結合断片。
【請求項１２】
（ａ）配列番号８のアミノ酸配列を含むＶＬ；及び
（ｂ）配列番号１１のアミノ酸配列を含むＶＨ
を含む、請求項２に記載の抗体またはその抗原結合断片。
【請求項１３】
（ａ）配列番号９のアミノ酸配列を含むＶＬ；及び
（ｂ）配列番号１１のアミノ酸配列を含むＶＨ
を含む、請求項２に記載の抗体またはその抗原結合断片。
【請求項１４】
（ａ）配列番号１０のアミノ酸配列を含むＶＬ；及び
（ｂ）配列番号１１のアミノ酸配列を含むＶＨ
を含む、請求項２に記載の抗体またはその抗原結合断片。
【請求項１５】
（ａ）配列番号８のアミノ酸配列を含むＶＬ；及び
（ｂ）配列番号１２のアミノ酸配列を含むＶＨ
を含む、請求項２に記載の抗体またはその抗原結合断片。
【請求項１６】
（ａ）配列番号９のアミノ酸配列を含むＶＬ；及び
（ｂ）配列番号１２のアミノ酸配列を含むＶＨ
を含む、請求項２に記載の抗体またはその抗原結合断片。
【請求項１７】
（ａ）配列番号１０のアミノ酸配列を含むＶＬ；及び
（ｂ）配列番号１２のアミノ酸配列を含むＶＨ
を含む、請求項２に記載の抗体またはその抗原結合断片。
【請求項１８】
（ａ）配列番号８のアミノ酸配列を含むＶＬ；及び
（ｂ）配列番号１３のアミノ酸配列を含むＶＨ
を含む、請求項２に記載の抗体またはその抗原結合断片。
【請求項１９】
（ａ）配列番号９のアミノ酸配列を含むＶＬ；及び
（ｂ）配列番号１３のアミノ酸配列を含むＶＨ
を含む、請求項２に記載の抗体またはその抗原結合断片。
【請求項２０】
（ａ）配列番号１０のアミノ酸配列を含むＶＬ；及び
（ｂ）配列番号１３のアミノ酸配列を含むＶＨ
を含む、請求項２に記載の抗体またはその抗原結合断片。
【請求項２１】
ヒトＩｇＧ１  Ｆｃ領域またはその変異体を含む、請求項１〜２０のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合断片。
【請求項２２】
ヒトＩｇＧ１−Ｋ３２２Ａ  Ｆｃ領域を含む、請求項１〜２０のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合断片。
【請求項２３】
ヒトＩｇＧ４  Ｆｃ領域またはその変異体を含む、請求項１〜２０のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合断片。
【請求項２４】
ヒトＩｇＧ４Ｐ  Ｆｃ領域を含む、請求項１〜２０のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合断片。
【請求項２５】
ヒトＩｇＧ４ＰＥ  Ｆｃ領域を含む、請求項１〜２０のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合断片。
【請求項２６】
配列番号３６〜４０からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖Ｆｃ領域を含む、請求項１〜２０のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合断片。
【請求項２７】
配列番号４１のアミノ酸配列を含む軽鎖定常領域をさらに含む、請求項２６に記載の抗体またはその抗原結合断片。
【請求項２８】
（ａ）配列番号４１のアミノ酸配列を含む軽鎖定常領域；及び
（ｂ）配列番号３６〜４０からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖Ｆｃ領域
を含む、請求項１〜２０のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合断片。
【請求項２９】
配列番号３１のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む、請求項１〜２８のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合断片。
【請求項３０】
配列番号３２のアミノ酸配列を含む重鎖を含む、請求項１〜２８のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合断片。
【請求項３１】
（ａ）配列番号３１のアミノ酸配列を含む軽鎖；及び
（ｂ）配列番号３２のアミノ酸配列を含む重鎖
を含む、請求項１〜２８のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合断片。
【請求項３２】
配列番号３３のアミノ酸配列を含む重鎖を含む、請求項１〜２８のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合断片。
【請求項３３】
（ａ）配列番号３１のアミノ酸配列を含む軽鎖；及び
（ｂ）配列番号３３のアミノ酸配列を含む重鎖
を含む、請求項１〜２８のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合断片。
【請求項３４】
配列番号３４のアミノ酸配列を含む重鎖を含む、請求項１〜２８のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合断片。
【請求項３５】
（ａ）配列番号３１のアミノ酸配列を含む軽鎖；及び
（ｂ）配列番号３４のアミノ酸配列を含む重鎖
を含む、請求項１〜２８のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合断片。
【請求項３６】
配列番号３５のアミノ酸配列を含む重鎖を含む、請求項１〜２８のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合断片。
【請求項３７】
（ａ）配列番号３１のアミノ酸配列を含む軽鎖；及び
（ｂ）配列番号３５のアミノ酸配列を含む重鎖
を含む、請求項１〜２８のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合断片。
【請求項３８】
ＰＤ−１に結合した場合、配列番号４２のアミノ酸配列中の残基１００〜１０９の少なくとも１つに結合する、請求項１〜３７のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合断片。
【請求項３９】
ＰＤ−１に結合した場合、配列番号４２のアミノ酸配列中の残基１００〜１０５の少なくとも１つに結合する、請求項３８に記載の抗体またはその抗原結合断片。
【請求項４０】
ＰＤ−１に結合した場合、配列番号４２のアミノ酸配列中のＮ３３、Ｔ５１、Ｓ５７、Ｌ１００、Ｎ１０２、Ｇ１０３、Ｒ１０４、Ｄ１０５、Ｈ１０７、及びＳ１０９からなる群から選択される少なくとも１つの残基に結合する、請求項１〜３７のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合断片。
【請求項４１】
ＰＤ−１に結合した場合、配列番号４２のアミノ酸配列中のＮ３３に結合する、請求項４０に記載の抗体またはその抗原結合断片。
【請求項４２】
ＰＤ−１に結合した場合、配列番号４２のアミノ酸配列中のＴ５１に結合する、請求項４０に記載の抗体またはその抗原結合断片。
【請求項４３】
ＰＤ−１に結合した場合、配列番号４２のアミノ酸配列中のＳ５７に結合する、請求項４０に記載の抗体またはその抗原結合断片。
【請求項４４】
ＰＤ−１に結合した場合、配列番号４２のアミノ酸配列中のＬ１００に結合する、請求項４０に記載の抗体またはその抗原結合断片。
【請求項４５】
ＰＤ−１に結合した場合、配列番号４２のアミノ酸配列中のＮ１０２に結合する、請求項４０に記載の抗体またはその抗原結合断片。
【請求項４６】
ＰＤ−１に結合した場合、配列番号４２のアミノ酸配列中のＧ１０３に結合する、請求項４０に記載の抗体またはその抗原結合断片。
【請求項４７】
ＰＤ−１に結合した場合、配列番号４２のアミノ酸配列中のＲ１０４に結合する、請求項４０に記載の抗体またはその抗原結合断片。
【請求項４８】
ＰＤ−１に結合した場合、配列番号４２のアミノ酸配列中のＤ１０５に結合する、請求項４０に記載の抗体またはその抗原結合断片。
【請求項４９】
ＰＤ−１に結合した場合、配列番号４２のアミノ酸配列中のＨ１０７に結合する、請求項４０に記載の抗体またはその抗原結合断片。
【請求項５０】
ＰＤ−１に結合した場合、配列番号４２のアミノ酸配列中のＳ１０９に結合する、請求項４０に記載の抗体またはその抗原結合断片。
【請求項５１】
ＰＤ−１に結合した場合、配列番号４２のアミノ酸配列中のＧ１０３及びＲ１０４に結合する、請求項４０に記載の抗体またはその抗原結合断片。
【請求項５２】
（ａ）Ｔ細胞活性を減衰させる；及び／または
（ｂ）Ｔ細胞の表面上のＰＤ−１発現を下方調節する
請求項１〜５１のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合断片。
【請求項５３】
ヒトＰＤ−１及び／またはサルＰＤ−１に特異的に結合するが、げっ歯類ＰＤ−１には結合しない、請求項１〜５２のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合断片。
【請求項５４】
ＡＤＣＣ活性及び／またはＣＤＣ活性が減衰している、請求項１〜５３のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合断片。
【請求項５５】
Ｔ細胞活性の前記減衰がヒトＰＢＭＣまたは全血試料において生じる、請求項５２に記載の抗体またはその抗原結合断片。
【請求項５６】
Ｔ細胞活性の前記減衰がサイトカイン産生の阻害によって測定される、請求項５２または５５に記載の抗体またはその抗原結合断片。
【請求項５７】
前記抗体またはその抗原結合断片によって阻害される前記サイトカインが、ＩＬ−１、ＩＬ−２、ＩＬ−６、ＩＬ−１２、ＩＬ−１７、ＩＬ−２２、ＩＬ−２３、ＧＭ−ＣＳＦ、ＴＮＦ−α、及び／またはＩＦＮ−γを含む、請求項５６に記載の抗体またはその抗原結合断片。
【請求項５８】
Ｔ細胞の表面上のＰＤ−１発現の前記下方調節が
（ａ）早ければ前記抗体またはその抗原結合断片での処理の４時間後にでも生じる；及び／または
（ｂ）サイトカイン阻害と同時に、もしくはそれに先行して生じる
請求項５２に記載の抗体またはその抗原結合断片。
【請求項５９】
精製ヒトＰＤ−１への結合についてのＫＤが約１００ｐＭ〜約１０ｎＭであり、細胞表面上に発現されるヒトＰＤ−１及び細胞表面上に発現されるサルＰＤ−１への結合についてのＫＤが約１００ｐＭ〜約１０ｎＭである、請求項５３に記載の抗体またはその抗原結合断片。
【請求項６０】
Ｔ細胞活性を減衰させるＥＣ５０が、約１ｐＭ〜約１０ｐＭ、約１０ｐＭ〜約１００ｐＭ、約１００ｐＭ〜約１ｎＭ、約１ｎＭ〜約１０ｎＭ、または約１０ｎＭ〜約１００ｎＭである、請求項５６に記載の抗体またはその抗原結合断片。
【請求項６１】
Ｔ細胞活性の最大減衰率が、少なくとも約１０％、２０％、３０％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、または１００％である、請求項５６に記載の抗体またはその抗原結合断片。
【請求項６２】
ＰＤ−１発現の最大下方調節率が、少なくとも約１０％、２０％、３０％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、または１００％である、請求項５２または５８に記載の抗体またはその抗原結合断片。
【請求項６３】
前記抗体がモノクローナル抗体である、請求項１〜６２のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合断片。
【請求項６４】
前記抗体がヒト化抗体、ヒト抗体、またはキメラ抗体である、請求項１〜６３のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合断片。
【請求項６５】
前記ヒト化抗体が脱免疫化抗体または複合ヒト抗体である、請求項６４に記載の抗体またはその抗原結合断片。
【請求項６６】
Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、ｄｓＦｖ、ダイアボディ、トリアボディ、テトラボディ、または抗体断片から形成された多重特異性抗体である、請求項１〜６５のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合断片。
【請求項６７】
作用物質に結合している、請求項１〜６６のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合断片。
【請求項６８】
前記作用物質が、放射性同位体、金属キレート剤、酵素、蛍光化合物、生物発光化合物、及び化学発光化合物からなる群から選択される、請求項６７に記載の抗体またはその抗原結合断片
【請求項６９】
請求項１〜６８のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合断片、及び医薬品として許容可能な担体を含む組成物。
【請求項７０】
請求項１〜６８のいずれか１項に記載の抗体のＶＨ、ＶＬ、またはＶＨ及びＶＬの両方をコードするヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチド。
【請求項７１】
請求項１〜６８のいずれか１項に記載の抗体の重鎖、軽鎖、または重鎖及び軽鎖の両方をコードするヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチド。
【請求項７２】
プロモーターに作用可能に連結している、請求項７０または７１に記載のポリヌクレオチド。
【請求項７３】
請求項７１または７２に記載のポリヌクレオチドを含むベクター。
【請求項７４】
請求項７１または７２に記載のポリヌクレオチドを含む細胞。
【請求項７５】
請求項７３に記載のベクターを含む細胞。
【請求項７６】
請求項１〜６８のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合断片を産生する単離細胞。
【請求項７７】
請求項１〜６８のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合断片を含むキット。
【請求項７８】
ヒトＰＤ−１のエピトープに特異的に結合する抗体またはその抗原結合断片の作製方法であって、請求項７４〜７６のいずれか１項に記載の細胞を培養して前記抗体またはその抗原結合断片を発現させることを含む前記方法。
【請求項７９】
請求項７０〜７２のいずれか１項に記載のポリヌクレオチドを発現させることを含む、ヒトＰＤ−１のエピトープに特異的に結合する抗体またはその抗原結合断片の作製方法。
【請求項８０】
Ｔ細胞の活性の減衰方法であって、前記Ｔ細胞を有効量の請求項１〜６８のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合断片と接触させることを含む前記方法。
【請求項８１】
Ｔ細胞活性の最大減衰率が、少なくとも約１０％、２０％、３０％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、または１００％である、請求項８０に記載の方法。
【請求項８２】
Ｔ細胞活性の前記減衰がサイトカイン産生の阻害によって測定される、請求項８０または８１に記載の方法。
【請求項８３】
前記サイトカインが、ＩＬ−１、ＩＬ−２、ＩＬ−６、ＩＬ−１２、ＩＬ−１７、ＩＬ−２２、ＩＬ−２３、ＧＭ−ＣＳＦ、ＴＮＦ−α、ＩＦＮ−γ、またはこれらの任意の組合せである、請求項８０〜８２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項８４】
サイトカイン産生の前記阻害が、前記Ｔ細胞の表面上のＰＤ−１発現の下方調節と同時に生じるか、またはこれに続いて生じる、請求項８０〜８３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項８５】
前記Ｔ細胞の表面上のＰＤ−１発現の前記下方調節が、早ければ有効量の抗体またはその抗原結合断片との接触の４時間後にでも生じる、請求項８４に記載の方法。
【請求項８６】
Ｔ細胞の表面上のＰＤ−１発現を下方調節する方法であって、前記Ｔ細胞を有効量の請求項１〜６８のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合断片と接触させることを含む前記方法。
【請求項８７】
前記抗体またはその抗原結合断片によるＰＤ−１発現の最大下方調節率が、少なくとも約１０％、２０％、３０％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、または１００％である、請求項８６に記載の方法。
【請求項８８】
前記Ｔ細胞の表面上のＰＤ−１発現の前記下方調節が、早ければ前記抗体またはその抗原結合断片との接触の４時間後にでも生じる、請求項８６または８７に記載の方法。
【請求項８９】
前記Ｔ細胞の表面上のＰＤ−１発現の前記下方調節がサイトカイン阻害に先行する、請求項８６〜８８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項９０】
前記サイトカインが、ＩＬ−１、ＩＬ−２、ＩＬ−６、ＩＬ−１２、ＩＬ−１７、ＩＬ−２２、ＩＬ−２３、ＧＭ−ＣＳＦ、ＴＮＦ−α、ＩＦＮ−γ、またはこれらの任意の組合せである、請求項８９に記載の方法。
【請求項９１】
Ｔ細胞によるサイトカイン産生を阻害する方法であって、前記Ｔ細胞を有効量の請求項１〜６８のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合断片と接触させることを含む前記方法。
【請求項９２】
前記サイトカインが、ＩＬ−１、ＩＬ−２、ＩＬ−６、ＩＬ−１２、ＩＬ−１７、ＩＬ−２２、ＩＬ−２３、ＧＭ−ＣＳＦ、ＴＮＦ−α、ＩＦＮ−γ、またはこれらの任意の組合せである、請求項９１に記載の方法。
【請求項９３】
前記サイトカインが、ＩＬ−２、ＩＬ−１７、ＩＦＮ−γ、またはこれらの任意の組合せである、請求項８２、８９または９１のいずれか１項に記載の方法。
【請求項９４】
前記サイトカインがＩＬ−２である、請求項９３に記載の方法。
【請求項９５】
前記サイトカインがＩＬ−１７である、請求項９３に記載の方法。
【請求項９６】
前記サイトカインがＩＦＮ−γである、請求項９３に記載の方法。
【請求項９７】
前記サイトカインがＩＬ−１である、請求項８２、８９または９１のいずれか１項に記載の方法。
【請求項９８】
前記サイトカインがＩＬ−６である、請求項８２、８９または９１のいずれか１項に記載の方法。
【請求項９９】
前記サイトカインがＩＬ−１２である、請求項８２、８９または９１のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１００】
前記サイトカインがＩＬ−１７である、請求項８２、８９または９１のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１０１】
前記サイトカインがＩＬ−２２である、請求項８２、８９または９１のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１０２】
前記サイトカインがＩＬ−２３である、請求項８２、８９または９１のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１０３】
前記サイトカインがＧＭ−ＣＳＦである、請求項８２、８９または９１のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１０４】
前記サイトカインがＴＮＦαである、請求項８２、８９または９１のいずれか１項に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願の相互参照
本出願は２０１５年９月２９日に出願された米国仮特許出願第６２／２３４，５３５号に対する優先権の利益を主張し、その開示全体を参照により本明細書に援用する。
１．技術分野
本明細書では、ヒトプログラム死−１（ＰＤ−１）に特異的に結合し、ＰＤ−１の発現及び／または活性を調節する抗体に関連する組成物、方法及び使用を提供する。
【発明の概要】
【０００２】
２．発明の概要
本開示は、ＰＤ−１に結合する抗体などの結合タンパク質をはじめとする、ＰＤ−１（例えばヒトＰＤ−１、配列番号４３）に結合するタンパク質を提供する。抗体をはじめとするそのような結合タンパク質は、ＰＤ−１ポリペプチド、ＰＤ−１断片、及び／またはＰＤ−１エピトープに結合することができる。抗体をはじめとするそのような結合タンパク質は、アゴニストとすることができる（例えばＰＤ−１リガンド様シグナル伝達を誘発する）。いくつかの実施形態において、結合タンパク質は、ＰＤ−１との相互作用についてＰＤ−１リガンド（例えばＰＤ−Ｌ１及びＰＤ−Ｌ２）と競合しない（例えば非遮断抗体）。
【０００３】
本開示は、ある実施形態において、（ｉ）ヒトＰＤ−１に結合する、（ｉｉ）ＰＤ−１リガンド様シグナル伝達を誘発する、ならびに（ｉｉｉ）ＰＤ−１との相互作用についてＰＤ−Ｌ１及び／またはＰＤ−Ｌ２と競合しない、抗体またはその断片をはじめとする結合タンパク質も提供する。
【０００４】
本明細書では、そのような抗体をコードする配列を含むポリヌクレオチド及びベクター、そのようなポリヌクレオチド及びベクターを含む細胞（例えば宿主細胞）、ならびにそのような抗体を含む組成物、試薬、及びキットも提供する。別の態様において、本明細書では、ＰＤ−１活性（例えばＰＤ−１シグナル伝達の活性化）またはＰＤ−１発現レベルの調節方法、診断方法及びそのような抗ＰＤ−１抗体の使用を提供する。
【０００５】
いくつかの実施形態において、結合タンパク質（例えば、抗ＰＤ−１抗体）は６つの相補性決定領域（ＣＤＲ）または６未満のＣＤＲを含む。他の実施形態において、結合タンパク質（例えば、抗ＰＤ−１抗体）は、重鎖可変領域（ＶＨ）ＣＤＲ１、ＶＨ  ＣＤＲ２、ＶＨ  ＣＤＲ３、軽鎖可変領域（ＶＬ）ＣＤＲ１、ＶＬ  ＣＤＲ２、及び／またはＶＬ  ＣＤＲ３から選択される１、２、３、４、５、または６つのＣＤＲを含む。ある実施形態において、結合タンパク質（例えば、抗ＰＤ−１抗体）は、本明細書に記載するようにＰＤ１ＡＢ−１、ＰＤ１ＡＢ−２、ＰＤ１ＡＢ−３、ＰＤ１ＡＢ−４、ＰＤ１ＡＢ−５、またはＰＤ１ＡＢ−６と称するモノクローナル抗体、またはそのヒト化バリアントのＶＨ  ＣＤＲ１、ＶＨ  ＣＤＲ２、ＶＨ  ＣＤＲ３、ＶＬ  ＣＤＲ１、ＶＬ  ＣＤＲ２、及び／またはＶＬ  ＣＤＲ３から選択される１、２、３、４、５、または６つのＣＤＲを含む。いくつかの実施形態において、結合タンパク質（例えば、抗ＰＤ−１抗体）は、ヒト免疫グロブリンアミノ酸配列またはそのバリアントのＶＨ  ＦＲ１、ＶＨ  ＦＲ２、ＶＨ  ＦＲ３、ＶＨ  ＦＲ４、ＶＬ  ＦＲ１、ＶＬ  ＦＲ２、ＶＬ  ＦＲ３、及び／またはＶＬ  ＦＲ４をはじめとするスキャフォールド領域またはフレームワーク領域（ＦＲ）をさらに含む。
【０００６】
いくつかの実施形態において、抗体またはその抗原結合断片は、配列番号８のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域及び配列番号１３のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域を含む抗体によって認識されるヒトＰＤ−１のエピトープに結合する。
【０００７】
他の実施形態において、抗体またはその抗体断片は、ヒトＰＤ−１への結合において、配列番号８のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域及び配列番号１３のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域を含む抗体と競合する。
【０００８】
いくつかの実施形態において、抗体またはその抗原結合断片は、表１に記載の抗体ＰＤ１ＡＢ−１、ＰＤ１ＡＢ−２、ＰＤ１ＡＢ−３、ＰＤ１ＡＢ−４、ＰＤ１ＡＢ−５、またはＰＤ１ＡＢ−６の任意の１つのＶＬ  ＣＤＲ１、ＶＬ  ＣＤＲ２、及びＶＬ  ＣＤＲ３を含むＶＬを含む。
【０００９】
他の実施形態において、抗体またはその抗原結合断片は、表２に記載の抗体ＰＤ１ＡＢ−１、ＰＤ１ＡＢ−２、ＰＤ１ＡＢ−３、ＰＤ１ＡＢ−４、ＰＤ１ＡＢ−５、またはＰＤ１ＡＢ−６の任意の１つのＶＨ  ＣＤＲ１、ＶＨ  ＣＤＲ２、及びＶＨ  ＣＤＲ３を含むＶＨを含む。
【００１０】
他の実施形態において、抗体またはその抗原結合断片は
（ａ）表３に記載の抗体ＰＤ１ＡＢ−１、ＰＤ１ＡＢ−２、ＰＤ１ＡＢ−３、ＰＤ１ＡＢ−４、ＰＤ１ＡＢ−５、またはＰＤ１ＡＢ−６の任意の１つのＶＬ  ＦＲ１、ＶＬ  ＦＲ２、ＶＬ  ＦＲ３、及びＶＬ  ＦＲ４を含むＶＬ；ならびに
（ｂ）表４に記載の抗体ＰＤ１ＡＢ−１、ＰＤ１ＡＢ−２、ＰＤ１ＡＢ−３、ＰＤ１ＡＢ−４、ＰＤ１ＡＢ−５、またはＰＤ１ＡＢ−６の任意の１つのＶＨ  ＦＲ１、ＶＨ  ＦＲ２、ＶＨ  ＦＲ３、及びＶＨ  ＦＲ４を含むＶＨ
を含む。
【００１１】
ある実施形態において、抗体またはその抗原結合断片のＶＬ  ＣＤＲ１、ＶＬ  ＣＤＲ２、及びＶＬ  ＣＤＲ３は、それぞれ配列番号１、２、及び３のアミノ酸配列を含み、抗体またはその抗原結合断片のＶＨ  ＣＤＲ１、ＶＨ  ＣＤＲ２、及びＶＨ  ＣＤＲ３は、それぞれ配列番号４、５、及び６のアミノ酸配列を含む。
【００１２】
さらに別の実施形態において、抗体またはその抗原結合断片のＶＬ  ＣＤＲ１、ＶＬ  ＣＤＲ２、及びＶＬ  ＣＤＲ３は、それぞれ配列番号７、２、及び３のアミノ酸配列を含み、抗体またはその抗原結合断片のＶＨ  ＣＤＲ１、ＶＨ  ＣＤＲ２、及びＶＨ  ＣＤＲ３は、それぞれ配列番号４、５、及び６のアミノ酸配列を含む。
【００１３】
別の実施形態において、抗体またはその抗原結合断片は配列番号８のアミノ酸配列を含むＶＬを含む。いくつかの実施形態において、アミノ酸配列は１つ以上のその保存的改変を含む。
【００１４】
ある実施形態において、抗体またはその抗原結合断片は配列番号９のアミノ酸配列を含むＶＬを含む。いくつかの実施形態において、アミノ酸配列は１つ以上のその保存的改変を含む。
【００１５】
いくつかの実施形態において、抗体またはその抗原結合断片は配列番号１０のアミノ酸配列を含むＶＬを含む。いくつかの実施形態において、アミノ酸配列は１つ以上のその保存的改変を含む。
【００１６】
ある実施形態において、抗体またはその抗原結合断片は配列番号１１のアミノ酸配列を含むＶＨを含む。いくつかの実施形態において、アミノ酸配列は１つ以上のその保存的改変を含む。
【００１７】
他の実施形態において、抗体またはその抗原結合断片は配列番号１２のアミノ酸配列を含むＶＨを含む。いくつかの実施形態において、アミノ酸配列は１つ以上のその保存的改変を含む。
【００１８】
別の実施形態において、抗体またはその抗原結合断片は配列番号１３のアミノ酸配列を含むＶＨを含む。いくつかの実施形態において、アミノ酸配列は１つ以上のその保存的改変を含む。
【００１９】
ある実施形態において、抗体またはその抗原結合断片は、（ａ）配列番号８のアミノ酸配列を含むＶＬ；及び（ｂ）配列番号１１のアミノ酸配列を含むＶＨを含む。
【００２０】
いくつかの実施形態において、抗体またはその抗原結合断片は、（ａ）配列番号９のアミノ酸配列を含むＶＬ；及び（ｂ）配列番号１１のアミノ酸配列を含むＶＨを含む。
【００２１】
他の実施形態において、抗体またはその抗原結合断片は、（ａ）配列番号１０のアミノ酸配列を含むＶＬ；及び（ｂ）配列番号１１のアミノ酸配列を含むＶＨを含む。
【００２２】
一実施形態において、抗体またはその抗原結合断片は、（ａ）配列番号８のアミノ酸配列を含むＶＬ；及び（ｂ）配列番号１２のアミノ酸配列を含むＶＨを含む。
【００２３】
別の実施形態において、抗体またはその抗原結合断片は、（ａ）配列番号９のアミノ酸配列を含むＶＬ；及び（ｂ）配列番号１２のアミノ酸配列を含むＶＨを含む。
【００２４】
ある実施形態において、抗体またはその抗原結合断片は、（ａ）配列番号１０のアミノ酸配列を含むＶＬ；及び（ｂ）配列番号１２のアミノ酸配列を含むＶＨを含む。
【００２５】
いくつかの実施形態において、抗体またはその抗原結合断片は、（ａ）配列番号８のアミノ酸配列を含むＶＬ；及び（ｂ）配列番号１３のアミノ酸配列を含むＶＨを含む。
【００２６】
他の実施形態において、抗体またはその抗原結合断片は、（ａ）配列番号９のアミノ酸配列を含むＶＬ；及び（ｂ）配列番号１３のアミノ酸配列を含むＶＨを含む。
【００２７】
ある実施形態において、抗体またはその抗原結合断片は、（ａ）配列番号１０のアミノ酸配列を含むＶＬ；及び（ｂ）配列番号１３のアミノ酸配列を含むＶＨを含む。
【００２８】
いくつかの実施形態において、ＶＬのアミノ酸配列は１つ以上のその保存的改変を含む。いくつかの実施形態において、ＶＨのアミノ酸配列は１つ以上のその保存的改変を含む。いくつかの実施形態において、ＶＬ及びＶＨのアミノ酸配列は１つ以上のその保存的改変を含む。
【００２９】
いくつかの実施形態において、抗体はヒトＩｇＧ１  Ｆｃ領域を含む。他の実施形態において、抗体はバリアントヒトＩｇＧ１  Ｆｃ領域を含む。
【００３０】
一実施形態において、抗体はヒトＩｇＧ１−Ｋ３２２Ａ  Ｆｃ領域を含む。
【００３１】
いくつかの実施形態において、抗体はヒトＩｇＧ４  Ｆｃ領域を含む。他の実施形態において、抗体はバリアントヒトＩｇＧ４  Ｆｃ領域を含む。
【００３２】
別の実施形態において、抗体はヒトＩｇＧ４Ｐ  Ｆｃ領域を含む。
【００３３】
さらに別の実施形態において、抗体はヒトＩｇＧ４ＰＥ  Ｆｃ領域を含む。
【００３４】
いくつかの実施形態において、抗体またはその抗原結合断片は配列番号４１のアミノ酸配列を含む軽鎖定常領域をさらに含む。
【００３５】
他の実施形態において、抗体またはその抗原結合断片は配列番号３６〜４０からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖Ｆｃ領域をさらに含む。
【００３６】
さらに別の実施形態において、抗体またはその抗原結合断片は、配列番号４１のアミノ酸配列を含む軽鎖定常領域；及び配列番号３６〜４０からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖Ｆｃ領域をさらに含む。
【００３７】
いくつかの実施形態において、抗体またはその抗原結合断片は配列番号３１のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。
【００３８】
別の実施形態において、抗体またはその抗原結合断片は配列番号３２のアミノ酸配列を含む重鎖を含む。
【００３９】
他の実施形態において、抗体またはその抗原結合断片は、（ａ）配列番号３１のアミノ酸配列を含む軽鎖；及び（ｂ）配列番号３２のアミノ酸配列を含む重鎖を含む。
【００４０】
ある実施形態において、抗体またはその抗原結合断片は配列番号３３のアミノ酸配列を含む重鎖を含む。
【００４１】
他の実施形態において、抗体またはその抗原結合断片は、（ａ）配列番号３１のアミノ酸配列を含む軽鎖；及び（ｂ）配列番号３３のアミノ酸配列を含む重鎖を含む。
【００４２】
一実施形態において、抗体またはその抗原結合断片は配列番号３４のアミノ酸配列を含む重鎖を含む。
【００４３】
さらに別の実施形態において、抗体またはその抗原結合断片は、（ａ）配列番号３１のアミノ酸配列を含む軽鎖；及び（ｂ）配列番号３４のアミノ酸配列を含む重鎖を含む。
【００４４】
いくつかの実施形態において、抗体またはその抗原結合断片は配列番号３５のアミノ酸配列を含む重鎖を含む。
【００４５】
他の実施形態において、抗体またはその抗原結合断片は、（ａ）配列番号３１のアミノ酸配列を含む軽鎖；及び（ｂ）配列番号３５のアミノ酸配列を含む重鎖を含む。
【００４６】
ある実施形態において、抗体またはその抗原結合断片は、ＰＤ−１に結合した場合、配列番号４２のアミノ酸配列中の残基１００〜１０９の少なくとも１つに結合する。
【００４７】
いくつかの実施形態において、抗体またはその抗原結合断片は、ＰＤ−１に結合した場合、配列番号４２のアミノ酸配列中の残基１００〜１０５の少なくとも１つに結合する。
【００４８】
特定の実施形態において、抗体またはその抗原結合断片は、ＰＤ−１に結合した場合、配列番号４２のアミノ酸配列中のＮ３３、Ｔ５１、Ｓ５７、Ｌ１００、Ｎ１０２、Ｇ１０３、Ｒ１０４、Ｄ１０５、Ｈ１０７、及びＳ１０９からなる群から選択される少なくとも１つの残基に結合する。
【００４９】
いくつかの実施形態において、抗体またはその抗原結合断片は、ＰＤ−１に結合した場合、配列番号４２のアミノ酸配列中のＮ３３、Ｔ５１、Ｓ５７、Ｌ１００、Ｎ１０２、Ｇ１０３、Ｒ１０４、Ｄ１０５、Ｈ１０７、及びＳ１０９からなる群から選択される２つ以上の残基に結合する。
【００５０】
他の実施形態において、抗体またはその抗原結合断片は、ＰＤ−１に結合した場合、配列番号４２のアミノ酸配列中のＮ３３、Ｔ５１、Ｓ５７、Ｌ１００、Ｎ１０２、Ｇ１０３、Ｒ１０４、Ｄ１０５、Ｈ１０７、及びＳ１０９からなる群から選択される３つ以上の残基に結合する。
【００５１】
ある実施形態において、抗体またはその抗原結合断片は、ＰＤ−１に結合した場合、配列番号４２のアミノ酸配列中のＮ３３、Ｔ５１、Ｓ５７、Ｌ１００、Ｎ１０２、Ｇ１０３、Ｒ１０４、Ｄ１０５、Ｈ１０７、及びＳ１０９からなる群から選択される４つ以上の残基に結合する。
【００５２】
一実施形態において、抗体またはその抗原結合断片は、ＰＤ−１に結合した場合、配列番号４２のアミノ酸配列中のＮ３３、Ｔ５１、Ｓ５７、Ｌ１００、Ｎ１０２、Ｇ１０３、Ｒ１０４、Ｄ１０５、Ｈ１０７、及びＳ１０９からなる群から選択される５つ以上の残基に結合する。
【００５３】
別の実施形態において、抗体またはその抗原結合断片は、ＰＤ−１に結合した場合、配列番号４２のアミノ酸配列中のＮ３３、Ｔ５１、Ｓ５７、Ｌ１００、Ｎ１０２、Ｇ１０３、Ｒ１０４、Ｄ１０５、Ｈ１０７、及びＳ１０９からなる群から選択される６つ以上の残基に結合する。
【００５４】
さらに別の実施形態において、抗体またはその抗原結合断片は、ＰＤ−１に結合した場合、配列番号４２のアミノ酸配列中のＮ３３、Ｔ５１、Ｓ５７、Ｌ１００、Ｎ１０２、Ｇ１０３、Ｒ１０４、Ｄ１０５、Ｈ１０７、及びＳ１０９からなる群から選択される７つ以上の残基に結合する。
【００５５】
さらに別の実施形態において、抗体またはその抗原結合断片は、ＰＤ−１に結合した場合、配列番号４２のアミノ酸配列中のＮ３３、Ｔ５１、Ｓ５７、Ｌ１００、Ｎ１０２、Ｇ１０３、Ｒ１０４、Ｄ１０５、Ｈ１０７、及びＳ１０９からなる群から選択される８つ以上の残基に結合する。
【００５６】
ある実施形態において、抗体またはその抗原結合断片は、ＰＤ−１に結合した場合、配列番号４２のアミノ酸配列中のＮ３３、Ｔ５１、Ｓ５７、Ｌ１００、Ｎ１０２、Ｇ１０３、Ｒ１０４、Ｄ１０５、Ｈ１０７、及びＳ１０９からなる群から選択される９つ以上の残基に結合する。
【００５７】
他の実施形態において、抗体またはその抗原結合断片は、ＰＤ−１に結合した場合、配列番号４２のアミノ酸配列中のＮ３３、Ｔ５１、Ｓ５７、Ｌ１００、Ｎ１０２、Ｇ１０３、Ｒ１０４、Ｄ１０５、Ｈ１０７、及びＳ１０９からなる群からの１０個すべての残基に結合する。
【００５８】
一実施形態において、抗体またはその抗原結合断片は、ＰＤ−１に結合した場合、配列番号４２のアミノ酸配列中のＮ３３に結合する。
【００５９】
別の実施形態において、抗体またはその抗原結合断片は、ＰＤ−１に結合した場合、配列番号４２のアミノ酸配列中のＴ５１に結合する。
【００６０】
特定の実施形態において、抗体またはその抗原結合断片は、ＰＤ−１に結合した場合、配列番号４２のアミノ酸配列中のＳ５７に結合する。
【００６１】
１つの具体的な実施形態において、抗体またはその抗原結合断片は、ＰＤ−１に結合した場合、配列番号４２のアミノ酸配列中のＬ１００に結合する。
【００６２】
いくつかの実施形態において、抗体またはその抗原結合断片は、ＰＤ−１に結合した場合、配列番号４２のアミノ酸配列中のＮ１０２に結合する。
【００６３】
他の実施形態において、抗体またはその抗原結合断片は、ＰＤ−１に結合した場合、配列番号４２のアミノ酸配列中のＧ１０３に結合する。
【００６４】
別の実施形態において、抗体またはその抗原結合断片は、ＰＤ−１に結合した場合、配列番号４２のアミノ酸配列中のＲ１０４に結合する。
【００６５】
さらに別の実施形態において、抗体またはその抗原結合断片は、ＰＤ−１に結合した場合、配列番号４２のアミノ酸配列中のＧ１０３及びＲ１０４に結合する。
【００６６】
さらに別の実施形態において、抗体またはその抗原結合断片は、ＰＤ−１に結合した場合、配列番号４２のアミノ酸配列中のＤ１０５に結合する。
【００６７】
いくつかの実施形態において、抗体またはその抗原結合断片は、ＰＤ−１に結合した場合、配列番号４２のアミノ酸配列中のＨ１０７に結合する。
【００６８】
ある実施形態において、抗体またはその抗原結合断片は、ＰＤ−１に結合した場合、配列番号４２のアミノ酸配列中のＳ１０９に結合する。
【００６９】
一実施形態において、ヒトＰＤ−１のエピトープはＰＤ−Ｌ１結合部位とは異なる。別の実施形態において、ヒトＰＤ−１のエピトープはＰＤ−Ｌ２結合部位とは異なる。特定の実施形態において、ヒトＰＤ−１のエピトープはＰＤ−Ｌ１結合部位及びＰＤ−Ｌ２結合部位のどちらとも異なる。
【００７０】
一実施形態において、抗体またはその抗原結合断片は、ヒトＰＤ−１及び／またはサルＰＤ−１（例えば、カニクイザル）に特異的に結合するが、げっ歯類ＰＤ−１には結合しない。
【００７１】
ある実施形態において、抗体またはその抗原結合断片は抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）活性が減衰している。他の実施形態において、抗体またはその抗原結合断片は補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）活性が減衰している。いくつかの実施形態において、抗体またはその抗原結合断片はＡＤＣＣ及び／またはＣＤＣ活性が減衰している。
【００７２】
一態様において、ヒトＰＤ−１のエピトープに結合する抗体またはその抗原結合断片を本明細書で提供するが、この抗体またはその抗原結合断片は、（ａ）Ｔ細胞活性を減衰させる；及び／または（ｂ）Ｔ細胞の表面上のＰＤ−１発現を下方調節する。
【００７３】
一実施形態において、抗体はＴ細胞活性を減衰させる。別の実施形態において、抗体はＴ細胞の表面上のＰＤ−１発現を下方調節する。
【００７４】
いくつかの実施形態において、Ｔ細胞活性の減衰はＴ細胞エフェクター機能によって測定される。
【００７５】
ある実施形態において、抗体またはその抗原結合断片によるＴ細胞活性の減衰はヒトＰＢＭＣまたは全血試料において生じる。
【００７６】
いくつかの実施形態において、Ｔ細胞活性の減衰はサイトカイン産生の阻害によって測定される。
【００７７】
他の実施形態において、抗体またはその抗原結合断片によって阻害されるサイトカインは、ＩＬ−２、ＩＬ−１７、及び／またはＩＦＮ−γを含む。ある実施形態において、サイトカインは、ＩＬ−１、ＩＬ−２、ＩＬ−６、ＩＬ−１２、ＩＬ−１７、ＩＬ−２２、ＩＬ−２３、ＧＭ−ＣＳＦ、ＩＦＮ−γ、及びＴＮＦ−αからなる群から選択される。ある実施形態において、サイトカインはＩＬ−１である。いくつかの実施形態において、サイトカインはＩＬ−２である。他の実施形態において、サイトカインはＩＬ−６である。別の実施形態において、サイトカインはＩＬ−１２である。いくつかの他の実施形態において、サイトカインはＩＬ−１７である。さらに他の実施形態において、サイトカインはＩＬ−２２である。さらに他の実施形態において、サイトカインはＩＬ−２３である。いくつかの実施形態において、サイトカインはＧＭ−ＣＳＦである。他の実施形態において、サイトカインはＩＦＮ−γである。さらに他の実施形態において、サイトカインはＴＮＦ−αである。ある実施形態において、サイトカインはＩＬ−２及びＩＬ−１７である。いくつかの実施形態において、サイトカインはＩＬ−２及びＩＦＮ−γである。さらに他の実施形態において、サイトカインはＩＬ−１７及びＩＦＮ−γである。さらに他の実施形態において、サイトカインはＩＬ−２、ＩＬ−１７、及びＩＦＮ−γである。上述のサイトカインの２つ、３つまたはこれより多くの他の組合せも企図する。
【００７８】
ある実施形態において、Ｔ細胞の表面上のＰＤ−１発現の下方調節は、早ければ抗体またはその抗原結合断片との接触の４時間後にでも生じる。別の実施形態において、下方調節は早ければ接触の６時間後にでも生じる。さらに別の実施形態において、下方調節は早ければ接触の８時間後にでも生じる。さらに別の実施形態において、下方調節は早ければ接触の１０時間後にでも生じる。一実施形態において、下方調節は早ければ接触の１２時間後にでも生じる。別の実施形態において、下方調節は早ければ接触の１４時間後にでも生じる。さらに別の実施形態において、下方調節は早ければ接触の１６時間後にでも生じる。さらに別の実施形態において、下方調節は早ければ接触の１８時間後にでも生じる。一実施形態において、下方調節は早ければ接触の２０時間後にでも生じる。別の実施形態において、下方調節は早ければ接触の２２時間後にでも生じる。さらに別の実施形態において、下方調節は早ければ接触の２４時間後にでも生じる。いくつかの実施形態において、接触は抗体とのものである。他の実施形態において、接触はその抗原結合断片とのものである。
【００７９】
いくつかの実施形態において、Ｔ細胞の表面上のＰＤ−１発現の下方調節はサイトカイン阻害に先行する。一実施形態において、Ｔ細胞の表面上のＰＤ−１発現の下方調節は、早ければ抗体またはその抗原結合断片との接触の４時間後にでも生じ、サイトカイン阻害に先行する。別の実施形態において、下方調節は、早ければ抗体またはその抗原結合断片との接触の６時間後にでも生じ、サイトカイン阻害に先行する。さらに別の実施形態において、下方調節は、早ければ抗体またはその抗原結合断片との接触の８時間後にでも生じ、サイトカイン阻害に先行する。さらに別の実施形態において、下方調節は、早ければ抗体またはその抗原結合断片との接触の１０時間後にでも生じ、サイトカイン阻害に先行する。一実施形態において、下方調節は、早ければ抗体またはその抗原結合断片との接触の１２時間後にでも生じ、サイトカイン阻害に先行する。別の実施形態において、下方調節は、早ければ抗体またはその抗原結合断片との接触の１４時間後にでも生じ、サイトカイン阻害に先行する。さらに別の実施形態において、下方調節は、早ければ抗体またはその抗原結合断片との接触の１６時間後にでも生じ、サイトカイン阻害に先行する。さらに別の実施形態において、下方調節は、早ければ抗体またはその抗原結合断片との接触の１８時間後にでも生じ、サイトカイン阻害に先行する。一実施形態において、下方調節は、早ければ抗体またはその抗原結合断片との接触の２０時間後にでも生じ、サイトカイン阻害に先行する。別の実施形態において、下方調節は、早ければ抗体またはその抗原結合断片との接触の２２時間後にでも生じ、サイトカイン阻害に先行する。さらに別の実施形態において、下方調節は、早ければ抗体またはその抗原結合断片との接触の２４時間後にでも生じ、サイトカイン阻害に先行する。
【００８０】
他の実施形態において、Ｔ細胞の表面上のＰＤ−１発現の下方調節はサイトカイン阻害と同時に生じる。一実施形態において、Ｔ細胞の表面上のＰＤ−１発現の下方調節は、早ければ抗体またはその抗原結合断片との接触の４時間後にでも生じ、サイトカイン阻害と同時に生じる。別の実施形態において、下方調節は、早ければ抗体またはその抗原結合断片との接触の６時間後にでも生じ、サイトカイン阻害と同時に生じる。さらに別の実施形態において、下方調節は、早ければ抗体またはその抗原結合断片との接触の８時間後にでも生じ、サイトカイン阻害と同時に生じる。さらに別の実施形態において、下方調節は、早ければ抗体またはその抗原結合断片との接触の１０時間後にでも生じ、サイトカイン阻害と同時に生じる。一実施形態において、下方調節は、早ければ抗体またはその抗原結合断片との接触の１２時間後にでも生じ、サイトカイン阻害と同時に生じる。別の実施形態において、下方調節は、早ければ抗体またはその抗原結合断片との接触の１４時間後にでも生じ、サイトカイン阻害と同時に生じる。さらに別の実施形態において、下方調節は、早ければ抗体またはその抗原結合断片との接触の１６時間後にでも生じ、サイトカイン阻害と同時に生じる。さらに別の実施形態において、下方調節は、早ければ抗体またはその抗原結合断片との接触の１８時間後にでも生じ、サイトカイン阻害と同時に生じる。一実施形態において、下方調節は、早ければ抗体またはその抗原結合断片との接触の２０時間後にでも生じ、サイトカイン阻害と同時に生じる。別の実施形態において、下方調節は、早ければ抗体またはその抗原結合断片との接触の２２時間後にでも生じ、サイトカイン阻害と同時に生じる。さらに別の実施形態において、下方調節は、早ければ抗体またはその抗原結合断片との接触の２４時間後にでも生じ、サイトカイン阻害と同時に生じる。
【００８１】
さらに他の実施形態において、Ｔ細胞の表面上のＰＤ−１発現の下方調節はサイトカイン阻害の後である。一実施形態において、Ｔ細胞の表面上のＰＤ−１発現の下方調節は、早ければ抗体またはその抗原結合断片との接触の４時間後にでも生じ、サイトカイン阻害の後である。別の実施形態において、下方調節は、早ければ抗体またはその抗原結合断片との接触の６時間後にでも生じ、サイトカイン阻害の後である。さらに別の実施形態において、下方調節は、早ければ抗体またはその抗原結合断片との接触の８時間後にでも生じ、サイトカイン阻害の後である。さらに別の実施形態において、下方調節は、早ければ抗体またはその抗原結合断片との接触の１０時間後にでも生じ、サイトカイン阻害の後である。一実施形態において、下方調節は、早ければ抗体またはその抗原結合断片との接触の１２時間後にでも生じ、サイトカイン阻害の後である。別の実施形態において、下方調節は、早ければ抗体またはその抗原結合断片との接触の１４時間後にでも生じ、サイトカイン阻害の後である。さらに別の実施形態において、下方調節は、早ければ抗体またはその抗原結合断片との接触の１６時間後にでも生じ、サイトカイン阻害の後である。さらに別の実施形態において、下方調節は、早ければ抗体またはその抗原結合断片との接触の１８時間後にでも生じ、サイトカイン阻害の後である。一実施形態において、下方調節は、早ければ抗体またはその抗原結合断片との接触の２０時間後にでも生じ、サイトカイン阻害の後である。別の実施形態において、下方調節は、早ければ抗体またはその抗原結合断片との接触の２２時間後にでも生じ、サイトカイン阻害の後である。さらに別の実施形態において、下方調節は、早ければ抗体またはその抗原結合断片との接触の２４時間後にでも生じ、サイトカイン阻害の後である。
【００８２】
一実施形態において、精製ヒトＰＤ−１への結合についての抗体またはその抗原結合断片のＫＤは約１ｎＭ〜約１００ｎＭである。別の実施形態において、細胞表面上に発現されるヒトＰＤ−１への結合についての抗体またはその抗原結合断片のＫＤは、約１００ｐＭ〜約１０ｎＭである。別の実施形態において、細胞表面上に発現されるサルＰＤ−１への結合についての抗体またはその抗原結合断片のＫＤは、約１００ｐＭ〜約１０ｎＭである。
【００８３】
いくつかの実施形態において、Ｔ細胞活性の減衰についての抗体またはその抗原結合断片のＥＣ５０は、約１ｐＭ〜約１０ｐＭ、約１０ｐＭ〜約１００ｐＭ、約１００ｐＭ〜約１ｎＭ、約１ｎＭ〜約１０ｎＭ、または約１０ｎＭ〜約１００ｎＭである。
【００８４】
他の実施形態において、抗体またはその抗原結合断片によるＴ細胞活性の最大減衰率は、少なくとも約１０％、２０％、３０％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、または１００％である。
【００８５】
別の実施形態において、抗体またはその抗原結合断片によるＰＤ−１発現の最大下方調節率は、少なくとも約１０％、２０％、３０％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、または１００％である。
【００８６】
ある実施形態において、抗体はモノクローナル抗体である。いくつかの実施形態において、抗体はヒト化抗体、ヒト抗体、またはキメラ抗体である。別の実施形態において、ヒト化抗体は脱免疫化抗体または複合ヒト抗体である。ある実施形態において、抗体はヒト化抗体である。具体的な実施形態において、抗体はヒトＰＤ−１に特異的に結合するヒト化抗体である。
【００８７】
ある実施形態において、抗体またはその抗原結合断片は、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、ｄｓＦｖ、ダイアボディ、トリアボディ、またはテトラボディである。いくつかの実施形態において、抗体またはその抗原結合断片は、抗体断片から形成された多重特異性抗体である。他の実施形態において、抗体またはその抗原結合断片は二重特異性抗体である。
【００８８】
いくつかの実施形態において、抗体またはその抗原結合断片は作用物質に結合している。一実施形態において、作用物質は、放射性同位体、金属キレート剤、酵素、蛍光化合物、生物発光化合物、または化学発光化合物である。
【００８９】
本明細書では、本明細書で提供する抗体またはその抗原結合断片を含む組成物も提供する。ある実施形態において、組成物は医薬品として許容可能な担体をさらに含む。
【００９０】
本明細書では、本明細書で提供する抗体のＶＨ、ＶＬ、またはＶＨ及びＶＬの両方をコードするヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチドも提供する
【００９１】
本開示は、ある実施形態において、本明細書で提供する抗体の重鎖、軽鎖、または重鎖及び軽鎖の両方をコードするヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチドも提供する。
【００９２】
ある実施形態において、ポリヌクレオチドはプロモーターに作用可能に連結している。
【００９３】
本明細書では、（ａ）本明細書で提供する抗体のＶＨまたは重鎖をコードするヌクレオチド配列を含む第１ポリヌクレオチド、及び（ｂ）本明細書で提供する抗体のＶＬまたは軽鎖をコードするヌクレオチド配列を含む第２ポリヌクレオチドを含むポリヌクレオチド集団も提供する。ある実施形態において、第１ポリヌクレオチドは第１プロモーターに作用可能に連結しており、第２ポリヌクレオチドは第２プロモーターに作用可能に連結している。
【００９４】
本明細書では、本明細書で提供するポリヌクレオチドを含むベクターも提供する。
【００９５】
本開示は、ある実施形態において、（ａ）本明細書で提供する抗体のＶＨまたは重鎖をコードするヌクレオチド配列を含む第１ベクター、及び（ｂ）本明細書で提供する抗体のＶＬまたは軽鎖をコードするヌクレオチド配列を含む第２ベクターを含むベクター集団も提供する。
【００９６】
本開示は、ある実施形態において、（ａ）第１プロモーターに作用可能に連結している、本明細書で提供する抗体のＶＨまたは重鎖をコードするヌクレオチド配列を含む第１ベクター、及び（ｂ）第２プロモーターに作用可能に連結している、本明細書で提供する抗体のＶＬまたは軽鎖をコードするヌクレオチド配列を含む第２ベクターを含むベクター集団をさらに提供する。
【００９７】
本開示は、ある実施形態において、本明細書で提供するポリヌクレオチドまたはポリヌクレオチド集団を含む細胞を提供する。
【００９８】
本開示は、ある実施形態において、本明細書で提供するベクターまたはベクター集団を含む細胞も提供する。
【００９９】
本開示は、ある実施形態において、本明細書で提供する抗体またはその抗原結合断片を産生する単離細胞をさらに提供する。
【０１００】
本明細書では、（ａ）本明細書で提供する抗体のＶＨまたは重鎖をコードするヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチドを含む第１宿主細胞、及び（ｂ）本明細書で提供する抗体のＶＬまたは軽鎖をコードするヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチドを含む第２宿主細胞を含む細胞集団も提供する。
【０１０１】
本明細書では、（ａ）第１プロモーターに作用可能に連結している、本明細書で提供する抗体のＶＨまたは重鎖をコードするヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチドを含む第１宿主細胞、及び（ｂ）第２プロモーターに作用可能に連結している、本明細書で提供する抗体のＶＬまたは軽鎖をコードするヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチドを含む第２宿主細胞を含む細胞集団をさらに提供する。
【０１０２】
本明細書では、本明細書で提供する抗体またはその抗原結合断片を含むキットも提供する。
【０１０３】
本明細書では、ヒトＰＤ−１のエピトープに特異的に結合する抗体またはその抗原結合断片の作製方法も提供する。ある実施形態において、この方法は、本明細書で提供する細胞を培養して抗体またはその抗原結合断片を発現させることを含む。他の実施形態において、この方法は、本明細書で提供するポリヌクレオチドを発現させることを含む。一実施形態において、ヒトＰＤ−１のエピトープはＰＤ−Ｌ１結合部位とは異なる。別の実施形態において、ヒトＰＤ−１のエピトープはＰＤ−Ｌ２結合部位とは異なる。特定の実施形態において、ヒトＰＤ−１のエピトープはＰＤ−Ｌ１結合部位及びＰＤ−Ｌ２結合部位のどちらとも異なる。
【０１０４】
別の態様において、本明細書では、Ｔ細胞を有効量の本明細書で提供する抗体またはその抗原結合断片と接触させることを含むＴ細胞の活性の減衰方法を提供する。一実施形態において、細胞を本明細書で提供する抗体と接触させる。別の実施形態において、細胞を本明細書で提供する抗体の抗原結合断片と接触させる。一実施形態において、Ｔ細胞活性の最大減衰率は、少なくとも約１０％、２０％、３０％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、または１００％である。いくつかの実施形態において、Ｔ細胞活性の減衰はサイトカイン産生の阻害によって測定される。いくつかの実施形態において、サイトカインは、ＩＬ−２、ＩＬ−１７、ＩＦＮ−γ、またはこれらの任意の組合せからなる群から選択される。ある実施形態において、サイトカインは、ＩＬ−１、ＩＬ−２、ＩＬ−６、ＩＬ−１２、ＩＬ−１７、ＩＬ−２２、ＩＬ−２３、ＧＭ−ＣＳＦ、ＩＦＮ−γ、及びＴＮＦ−αからなる群から選択される。ある実施形態において、サイトカインはＩＬ−１である。いくつかの実施形態において、サイトカインはＩＬ−２である。他の実施形態において、サイトカインはＩＬ−６である。別の実施形態において、サイトカインはＩＬ−１２である。いくつかの他の実施形態において、サイトカインはＩＬ−１７である。さらに他の実施形態において、サイトカインはＩＬ−２２である。さらに他の実施形態において、サイトカインはＩＬ−２３である。いくつかの実施形態において、サイトカインはＧＭ−ＣＳＦである。他の実施形態において、サイトカインはＩＦＮ−γである。さらに他の実施形態において、サイトカインはＴＮＦ−αである。ある実施形態において、サイトカインはＩＬ−２及びＩＬ−１７である。いくつかの実施形態において、サイトカインはＩＬ−２及びＩＦＮ−γである。さらに他の実施形態において、サイトカインはＩＬ−１７及びＩＦＮ−γである。さらに他の実施形態において、サイトカインはＩＬ−２、ＩＬ−１７、及びＩＦＮ−γである。上述のサイトカインの２つ、３つまたはこれより多くの他の組合せも企図する。ある実施形態において、サイトカイン産生の阻害の前に、Ｔ細胞の表面上のＰＤ−１発現の下方調節が生じる。いくつかの実施形態において、Ｔ細胞の表面上のＰＤ−１発現の下方調節は、早ければ抗体またはその抗原結合断片との接触の４時間、６時間、８時間、１０時間、１２時間、１４時間、１６時間、１８時間、２０時間、２２時間、または２４時間後にでも生じる。一実施形態において、下方調節は早ければ接触の４時間後にでも生じ、サイトカイン阻害に先行する。一実施形態において、下方調節は早ければ接触の６時間後にでも生じ、サイトカイン阻害に先行する。一実施形態において、下方調節は早ければ接触の８時間後にでも生じ、サイトカイン阻害に先行する。一実施形態において、下方調節は早ければ接触の１０時間後にでも生じ、サイトカイン阻害に先行する。別の実施形態において、下方調節は早ければ接触の１２時間後にでも生じ、サイトカイン阻害に先行する。一実施形態において、下方調節は早ければ接触の１４時間後にでも生じ、サイトカイン阻害に先行する。他��実施形態において、下方調節は早ければ接触の１６時間後にでも生じ、サイトカイン阻害に先行する。一実施形態において、下方調節は早ければ接触の１８時間後にでも生じ、サイトカイン阻害に先行する。別の実施形態において、下方調節は早ければ接触の２０時間後にでも生じ、サイトカイン阻害に先行する。一実施形態において、下方調節は早ければ接触の２２時間後にでも生じ、サイトカイン阻害に先行する。いくつかの実施形態において、下方調節は早ければ接触の２４時間後にでも生じ、サイトカイン阻害に先行する。いくつかの実施形態において、サイトカイン産生の阻害は、Ｔ細胞の表面上のＰＤ−１発現の下方調節と同時に生じる。一実施形態において、下方調節は早ければ接触の４時間後にでも生じ、サイトカイン阻害と同時に生じる。一実施形態において、下方調節は早ければ接触の６時間後にでも生じ、サイトカイン阻害と同時に生じる。一実施形態において、下方調節は早ければ接触の８時間後にでも生じ、サイトカイン阻害と同時に生じる。一実施形態において、下方調節は早ければ接触の１０時間後にでも生じ、サイトカイン阻害と同時に生じる。別の実施形態において、下方調節は早ければ接触の１２時間後にでも生じ、サイトカイン阻害と同時に生じる。一実施形態において、下方調節は早ければ接触の１４時間後にでも生じ、サイトカイン阻害と同時に生じる。他の実施形態において、下方調節は早ければ接触の１６時間後にでも生じ、サイトカイン阻害と同時に生じる。一実施形態において、下方調節は早ければ接触の１８時間後にでも生じ、サイトカイン阻害と同時に生じる。別の実施形態において、下方調節は早ければ接触の２０時間後にでも生じ、サイトカイン阻害と同時に生じる。一実施形態において、下方調節は早ければ接触の２２時間後にでも生じ、サイトカイン阻害と同時に生じる。いくつかの実施形態において、下方調節は早ければ接触の２４時間後にでも生じ、サイトカイン阻害と同時に生じる。いくつかの実施形態において、サイトカイン産生の阻害は、Ｔ細胞の表面上のＰＤ−１発現の下方調節に先行する。一実施形態において、下方調節は早ければ接触の４時間後にでも生じ、その前にサイトカイン阻害が生じる。一実施形態において、下方調節は早ければ接触の６時間後にでも生じ、その前にサイトカイン阻害が生じる。一実施形態において、下方調節は早ければ接触の８時間後にでも生じ、その前にサイトカイン阻害が生じる。一実施形態において、下方調節は早ければ接触の１０時間後にでも生じ、その前にサイトカイン阻害が生じる。別の実施形態において、下方調節は早ければ接触の１２時間後にでも生じ、その前にサイトカイン阻害が生じる。一実施形態において、下方調節は早ければ接触の１４時間後にでも生じ、その前にサイトカイン阻害が生じる。他の実施形態において、下方調節は早ければ接触の１６時間後にでも生じ、その前にサイトカイン阻害が生じる。一実施形態において、下方調節は早ければ接触の１８時間後にでも生じ、その前にサイトカイン阻害が生じる。別の実施形態において、下方調節は早ければ接触の２０時間後にでも生じ、その前にサイトカイン阻害が生じる。一実施形態において、下方調節は早ければ接触の２２時間��にでも生じ、その前にサイトカイン阻害が生じる。いくつかの実施形態において、下方調節は早ければ接触の２４時間後にでも生じ、その前にサイトカイン阻害が生じる。
【０１０５】
さらに別の態様において、本明細書では、Ｔ細胞を有効量の本明細書で提供する抗体またはその抗原結合断片と接触させることを含む、Ｔ細胞の表面上のＰＤ−１発現を下方調節する方法を提供する。一実施形態において、細胞を本明細書で提供する抗体と接触させる。別の実施形態において、細胞を本明細書で提供する抗体の抗原結合断片と接触させる。一実施形態において、抗体またはその抗原結合断片によるＰＤ−１発現の最大下方調節率は、少なくとも約１０％、２０％、３０％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、または１００％である。別の実施形態において、Ｔ細胞の表面上のＰＤ−１発現の下方調節は、早ければ抗体またはその抗原結合断片との接触の４時間後にでも生じる。一実施形態において、Ｔ細胞の表面上のＰＤ−１発現の下方調節はサイトカイン阻害に先行する。一実施形態において、Ｔ細胞の表面上のＰＤ−１発現の下方調節はサイトカイン阻害と同時に生じる。一実施形態において、Ｔ細胞の表面上のＰＤ−１発現の下方調節の前にサイトカイン阻害が生じる。ある実施形態において、サイトカインは、ＩＬ−２、ＩＬ−１７、ＩＦＮ−γ、またはこれらの任意の組合せである。ある実施形態において、サイトカインは、ＩＬ−１、ＩＬ−２、ＩＬ−６、ＩＬ−１２、ＩＬ−１７、ＩＬ−２２、ＩＬ−２３、ＧＭ−ＣＳＦ、ＩＦＮ−γ、及びＴＮＦ−αからなる群から選択される。ある実施形態において、サイトカインはＩＬ−１である。いくつかの実施形態において、サイトカインはＩＬ−２である。他の実施形態において、サイトカインはＩＬ−６である。別の実施形態において、サイトカインはＩＬ−１２である。他の実施形態において、サイトカインはＩＬ−１７である。さらに他の実施形態において、サイトカインはＩＬ−２２である。さらに他の実施形態において、サイトカインはＩＬ−２３である。いくつかの実施形態において、サイトカインはＧＭ−ＣＳＦである。他の実施形態において、サイトカインはＩＦＮ−γである。さらに他の実施形態において、サイトカインはＴＮＦ−αである。ある実施形態において、サイトカインはＩＬ−２及びＩＬ−１７である。いくつかの実施形態において、サイトカインはＩＬ−２及びＩＦＮ−γである。さらに他の実施形態において、サイトカインはＩＬ−１７及びＩＦＮ−γである。さらに他の実施形態において、サイトカインはＩＬ−２、ＩＬ−１７、及びＩＦＮ−γである。上述のサイトカインの２つ、３つまたはこれより多くの他の組合せも企図する。
【０１０６】
別の態様において、本明細書では、Ｔ細胞を有効量の本明細書に記載の抗体またはその抗原結合断片と接触させることを含む、Ｔ細胞によるサイトカイン産生を阻害する方法を提供する。一実施形態において、細胞を本明細書で提供する抗体と接触させる。別の実施形態において、細胞を本明細書で提供する抗体の抗原結合断片と接触させる。いくつかの実施形態において、サイトカインは、ＩＬ−２、ＩＬ−１７、ＩＦＮ−γ、またはこれらの任意の組合せからなる群から選択される。ある実施形態において、サイトカインは、ＩＬ−１、ＩＬ−２、ＩＬ−６、ＩＬ−１２、ＩＬ−１７、ＩＬ−２２、ＩＬ−２３、ＧＭ−ＣＳＦ、ＩＦＮ−γ、及びＴＮＦ−αからなる群から選択される。ある実施形態において、サイトカインはＩＬ−１である。いくつかの実施形態において、サイトカインはＩＬ−２である。他の実施形態において、サイトカインはＩＬ−６である。別の実施形態において、サイトカインはＩＬ−１２である。他の実施形態において、サイトカインはＩＬ−１７である。さらに他の実施形態において、サイトカインはＩＬ−２２である。さらに他の実施形態において、サイトカインはＩＬ−２３である。いくつかの実施形態において、サイトカインはＧＭ−ＣＳＦである。他の実施形態において、サイトカインはＩＦＮ−γである。さらに他の実施形態において、サイトカインはＴＮＦ−αである。ある実施形態において、サイトカインはＩＬ−２及びＩＬ−１７である。いくつかの実施形態において、サイトカインはＩＬ−２及びＩＦＮ−γである。さらに他の実施形態において、サイトカインはＩＬ−１７及びＩＦＮ−γである。さらに他の実施形態において、サイトカインはＩＬ−２、ＩＬ−１７、及びＩＦＮ−γである。上述のサイトカインの２つ、３つまたはこれより多くの他の組合せも企図する。
【図面の簡単な説明】
【０１０７】
３．図面の簡単な説明
【図１】図１Ａ〜１Ｂは、Ｔ細胞減衰化抗ＰＤ−１抗体（ＰＤ１ＡＢ）が、ＰＤ−１に結合するＰＤ−Ｌ１（ＰＤ−Ｌ１−ＤｙＬ６５０は色素ＤｙＬ６５０と結合したＰＤ−Ｌ１を表す）と競合しないことを示す：（Ａ）ＰＤ１ＡＢ−１、ＰＤ１ＡＢ−２、及びＰＤ１ＡＢ−６；（Ｂ）ＰＤ１ＡＢ−１、ＰＤ１ＡＢ−２、ＰＤ１ＡＢ−３、ＰＤ１ＡＢ−４、及びＰＤ１ＡＢ−５。ＭＤＸ  ４Ｈ１はアンタゴニスト抗体であり、ＰＤ−１へのＰＤ−Ｌ１結合を遮断する。
【０１０８】
【図２】ＰＤ−１：ＰＤ１ＡＢ−６  Ｆａｂ相互作用部位が、ＰＤ−１：ＰＤ−Ｌ１相互作用部位に対してＰＤ−１の遠位側であることを示す。
【０１０９】
【図３】ＰＤ１ＡＢ−６  Ｆａｂが、残基１００〜１０５で構成されるＰＤ−１ループと形成される実質的な相互作用でＰＤ−１βシートに対して結合することを示す。
【０１１０】
【図４】ＰＤ１ＡＢ−６−ＩｇＧ１の重鎖（ＨＣ）及び軽鎖（ＬＣ）ならびにそのバリアントＰＤ１ＡＢ−６−Ｋ３及びＰＤ１ＡＢ−６−４ＰのＨＣのアミノ酸配列を示す。
【０１１１】
【図５】図５Ａ〜５Ｂは、ＣＨＯ細胞上に発現したカニクイザル（Ａ）またはヒト（Ｂ）ＰＤ−１に対するＰＤ１ＡＢ−６−ＩｇＧ１アフィニティーを示す。
【０１１２】
【図６】ＣＤ４＋  Ｔ細胞にゲーティングした活性化ヒトＰＢＭＣへのＰＤ１ＡＢ−６−ＩｇＧ１、アイソタイプ対照、及びヒトＰＤ−Ｌ１  Ｆｃ融合タンパク質（ｈＰＤ−Ｌ１  Ｆｃ）の結合を示す。
【０１１３】
【図７】ＣＤ４＋  Ｔ細胞にゲーティングした活性化カニクイザルＰＢＭＣへのＰＤ１ＡＢ−６−ＩｇＧ１、アイソタイプ対照、及びヒトＰＤ−Ｌ１  Ｆｃ融合タンパク質（ｈＰＤ−Ｌ１  Ｆｃ）の結合を示す。
【０１１４】
【図８】図８Ａ〜８Ｄは、Ｃｉｓｂｉｏ  Ｔａｇ−ｌｉｔｅ（商標）検出を用いての、ＨＥＫ２９３細胞上に発現したＦｃγＲＩ（Ａ）、ＦｃγＲＩＩＩａ（Ｖ１５８）（Ｂ）、またはＦｃγＲＩＩｂ（Ｃ）に結合するＰＤ１ＡＢ−６バリアント、及び（Ｄ）ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩＩａ（Ｖ１５８）、またはＦｃγＲＩＩｂに結合するＰＤ１ＡＢ−６バリアントのＥＣ５０値を示す。
【０１１５】
【図９】図９Ａ〜９Ｃは、ＦＡＣＳを用いての、ＣＨＯ細胞上に発現したＦｃγＲＩＩＩａ（Ｖ１５８）（Ａ）またはＦｃγＲＩ（Ｂ）に結合するＰＤ１ＡＢ−６バリアント、及び（Ｃ）ＦｃγＲＩまたはＦｃγＲＩＩＩａに結合するＰＤ−１抗体バリアントのＥＣ５０値を示す。
【０１１６】
【図１０】図１０Ａ〜１０Ｂは、４人の個別の健康なドナーの代表２人の間のＰＤ１ＡＢ−６バリアント及び対照ヒトＩｇＧ１  ＦｃのＡＤＣＣ活性を示す：（Ａ）ドナー７及び（Ｂ）ドナー８。
【０１１７】
【図１１】ＰＤ１ＡＢ−６バリアントのＣＤＣ活性を示す。データは３つの独立した実験の代表である：（ｉ）ＰＤ１ＡＢ−６−ＩｇＧ１及び抗ヒトＣＤ２０  ＩｇＧ１のＣＤＣ活性；（ｉｉ）ＰＤ１ＡＢ−６−ＩｇＧ１及びＰＤ１ＡＢ−６−Ｋ３のＣＤＣ活性；（ｉｉｉ）ＰＤ１ＡＢ−６−４Ｐ及び市販のヒトＩｇＧ４アイソタイプ対照抗体及びヒトＩｇＧ１  Ｆｃタンパク質のＣＤＣ活性。
【０１１８】
【図１２】刺激後２４時間の培養上清におけるＩＬ−２レベルによって測定した、ヒトＰＢＭＣアッセイにおけるＰＤ１ＡＢ−６バリアントの強力な減衰活性を示す。
【０１１９】
【図１３】ヒト全血アッセイにおけるＰＤ１ＡＢ−６−Ｋ３の活性を示す。グラフは、ＩＦＮ−γ阻害のＥＣ５０を計算するために用いたドナー４からの代表的な曲線を示す。表は、４人の健康なドナーについてのＰＤ１ＡＢ−６バリアント及びＣＴＬＡ４ＩｇによるＩＦＮ−γ阻害のＥＣ５０値を示す。
【０１２０】
【図１４】図１４Ａ〜１４Ｃは、（Ａ）抗ＣＤ３＋抗ＣＤ２８で４８時間活性化させたヒトＰＢＭＣ中のＣＤ３＋  Ｔ細胞上のアイソタイプ対ＰＤ−１染色、（Ｂ）アイソタイプＩｇＧ１対ＰＤ１ＡＢ−６−ＩｇＧ１で処理したＰＢＭＣにおけるＰＤ−１発現（検出抗ＰＤ−１抗体はＰＤ１ＡＢ−６によって遮断されない）、ならびに（Ｃ）抗ＣＤ３＋抗ＣＤ２８及び３つの異なる濃度のアイソタイプＩｇＧ１またはＰＤ１ＡＢ−６−ＩｇＧ１のいずれかで活性化させた、３人の異なるドナー由来のヒトＰＢＭＣ中のＣＤ３＋  Ｔ細胞上でのＰＤ−１発現によって判定した、ＰＤ１ＡＢ−６−ＩｇＧ１によるＰＤ−１発現の下方調節を示す。
【０１２１】
【図１５】図１５Ａ〜１５Ｃは、Ｂｉａｃｏｒｅ（登録商標）Ｔ２００上でのＰＤ−１抗原への（Ａ）ＰＤ１ＡＢ−６−ＩｇＧ１、（Ｂ）ＰＤ１ＡＢ−６−４Ｐ、及び（Ｃ）ＰＤ１ＡＢ−６−Ｋ３結合を示す。
【発明を実施するための形態】
【０１２２】
４．発明を実施するための形態
ヒト及び／またはカニクイザルＰＤ−１をはじめとするＰＤ−１に結合する抗体などの結合タンパク質を本明細書で提供する。いくつかの実施形態において、ヒト及び／またはカニクイザルＰＤ−１に結合する抗体などの本明細書で提供する結合タンパク質は、げっ歯類ＰＤ−１に結合しない。ある実施形態において、本明細書に開示の抗体をはじめとするＰＤ−１結合タンパク質はアゴニストである（例えば、ＰＤ−１リガンドの作用を模倣し、ＰＤ−１シグナル伝達を誘発することができる）。いくつかの実施形態において、本明細書で提供するＰＤ−１に対する抗体などの結合タンパク質は、（ｉ）ヒト及び／またはカニクイザルＰＤ−１に結合する、（ｉｉ）結合についてＰＤ−１リガンド（例えばＰＤ−Ｌ１及び／またはＰＤ−Ｌ２）と競合しない、及び／または（ｉｉｉ）ＰＤ−１シグナル伝達を誘発する。一実施形態において、ＰＤ−１抗体はヒトＰＤ−１に結合する。一実施形態において、ＰＤ−１抗体はカニクイザルＰＤ−１に結合する。一実施形態において、ＰＤ−１抗体はヒトＰＤ−１及びカニクイザルＰＤ−１の両方に結合する。いくつかの実施形態において、ＰＤ−１抗体はＰＤ−１への結合についてＰＤ−Ｌ１と競合しない。他の実施形態において、ＰＤ−１抗体はＰＤ−１への結合についてＰＤ−Ｌ２と競合しない。さらに他の実施形態において、ＰＤ−１抗体はＰＤ−１への結合についてＰＤ−Ｌ１またはＰＤ−Ｌ２のいずれとも競合しない。他の実施形態において、ＰＤ−１抗体はＰＤ−１シグナル伝達を誘発する。具体的な実施形態において、本明細書で提供するＰＤ−１抗体は、ヒトＰＤ−１及びカニクイザルＰＤ−１の両方に結合し、ＰＤ−１への結合についてＰＤ−Ｌ１またはＰＤ−Ｌ２のいずれとも競合せず、かつ、ＰＤ−１シグナル伝達を誘発する。いくつかの実施形態において、結合、競合、及び／またはシグナル伝達は、インビトロで、例えば細胞ベースのアッセイにおいて、アッセイされる。他の実施形態において、結合、競合、及び／またはシグナル伝達は、エクスビボで、例えばＴ細胞機能アッセイにおいて、アッセイされる。他の実施形態において、結合、競合、及び／またはシグナル伝達は、対象（例えば、ヒト対象）由来の試料を用いてアッセイされる。ある実施形態において、アッセイとしては、（１）ヒトまたはカニクイザルＰＢＭＣアッセイ（例えば、実施例５．２．１及び５．２．２を参照）；（２）ヒト全血試料アッセイ（例えば、実施例５．２．１を参照）が挙げられる。ある実施形態において、本明細書に記載するような抗ＰＤ−１抗体などの結合タンパク質は、ＰＤ−Ｌ１及び／またはＰＤ−Ｌ２の天然の生物学的機能と一致する活性を示す。いくつかの実施形態において、活性はインビトロで見られる。他の実施形態において、活性はエクスビボで見られる。
【０１２３】
具体的な実施形態において、本明細書で提供するＰＤ−１に結合する抗体などの結合タンパク質は、ＰＤ−１の結合について互いに競合する共通の特徴を共有する。この競合阻害は、各抗体がＰＤ−１の同じ領域（例えば、同じエピトープ）に結合し、そのため、同様の作用を発揮することを示すことができる。ある実施形態において、本明細書で提供する抗ＰＤ−１抗体としては、抗体ＰＤ１ＡＢ−１、ＰＤ１ＡＢ−２、ＰＤ１ＡＢ−３、ＰＤ１ＡＢ−４、ＰＤ１ＡＢ−５、及び／またはＰＤ１ＡＢ−６に由来するか、またはそれをベースにしたものなどのヒト化抗ＰＤ−１抗体が挙げられる。他の実施形態において、本明細書で提供する抗ＰＤ−１抗体は、結合についてＰＤ１ＡＢ−１、ＰＤ１ＡＢ−２、ＰＤ１ＡＢ−３、ＰＤ１ＡＢ−４、ＰＤ１ＡＢ−５、及び／またはＰＤ１ＡＢ−６に由来するか、またはそれをベースにした抗体と競合する。いくつかの実施形態において、抗ＰＤ−１抗体は表１〜２に記載のＣＤＲ配列を有する。ある実施形態において、抗ＰＤ−１抗体は、ヒトＰＤ−１の特定のドメインまたはエピトープ（例えば、残基１００〜１０５；実施例５．１．４を参照）に結合する。さらに、そのような結合は、本明細書で提供する抗ＰＤ−１抗体によって認識されるエピトープを含む領域中の特定のアミノ酸残基（例えば、Ｇ１０３及びＲ１０４；実施例５．１．４を参照）に主に起因し得る。これらを考え合わせると、本明細書に記載する結果は、表１〜２に記載の１つ以上のＣＤＲを有する抗体を含め、ＰＤ１ＡＢ−６に由来するか、またはそれをベースにした抗ＰＤ−１抗体について観察される作用を、同じまたは類似のエピトープ特異性（例えば、同じまたは類似のＣＤＲ）を有する本明細書で提供する他の抗ＰＤ−１抗体についても推定することができると実証している。例えば、例示的なヒト化抗ＰＤ−１抗体として実施例５．１．２〜３、５．１．７〜１０、５．２．１〜３、及び５．３．１に示すような抗体の活性は、本明細書で提供する抗ＰＤ−１抗体の活性及び作用を代表している。
【０１２４】
本開示のいくつかの実施形態において、抗ＰＤ−１抗体などの結合タンパク質は、表１〜２に記載の１つ以上のＣＤＲを含む免疫グロブリン可変領域を含み得る。そのような結合タンパク質（例えば、抗ＰＤ−１抗体）において、ＣＤＲは、１つ以上のスキャフォールド領域またはフレームワーク領域（ＦＲ）と接合され得るが、これはＣＤＲ（複数可）の適切な抗原結合特性が得られるようにＣＤＲ（複数可）を指向させる。そのような結合タンパク質は、本明細書に記載するような抗ＰＤ−１抗体を含め、ＰＤ−１シグナル伝達を誘発することができる。
【０１２５】
４．１一般的な技術
本明細書において記載または参照する技術及び手順には、当業者によって、従来の方法論、例えば、以下に記載の広範に利用されている方法論などを用いて、一般によく理解されている、及び／または通常使用されているものが含まれる：Ｓａｍｂｒｏｏｋ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ（３ｄ  ｅｄ．２００１）；Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ（Ａｕｓｕｂｅｌ  ｅｔ  ａｌ．ｅｄｓ．，２００３）；Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ｆｒｏｍ  Ｂｅｎｃｈ  ｔｏ  Ｃｌｉｎｉｃ（Ａｎ  ｅｄ．２００９）；Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ｍｅｔｈｏｄｓ  ａｎｄ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ（Ａｌｂｉｔａｒ  ｅｄ．２０１０）；及びＡｎｔｉｂｏｄｙ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ  Ｖｏｌｓ  １  ａｎｄ  ２（Ｋｏｎｔｅｒｍａｎｎ  ａｎｄ  Ｄｕｂｅｌ  ｅｄｓ．，２ｄ  ｅｄ．２０１０）。
【０１２６】
４．２用語
別途記載しない限り、本明細書において用いるすべての科学技術用語は、当業者によって一般に理解されるものと同じ意味を有する。本明細書を解釈する目的において、以下の用語の説明が適用され、適当な場合はいつでも、単数形で使用される用語は複数形も含み、その逆も同様である。すべての特許、出願、公開出願、及び他の刊行物は、その全体を参照により援用する。記載の用語のいずれかの説明が参照により本明細書に援用されるいずれかの文献と矛盾する場合には、以下に記載の用語の説明が優先するものとする。
【０１２７】
用語「プログラム死１」、「プログラム細胞死１」、「タンパク質ＰＤ−１」、「ＰＤ−１」、「ＰＤ−１ポリペプチド」、または「ＰＤ１」は、ポリペプチド（「ポリペプチド」及び「タンパク質」は本明細書において同じ意味で用いる）を包含し、特に断らない限り、哺乳類、例えば、霊長類（例えば、ヒト及びｃｙｎｏｍｏｌｇｕｓ  ｍｏｎｋｅｙｓ（カニクイザル）（ｃｙｎｏｍｏｌｇｕｓ（カニクイザル）））、イヌ、ならびにげっ歯類（例えば、マウス及びラット）などをはじめとする任意の脊椎動物起源由来の任意の天然ポリペプチドが含まれる。ある実施形態において、この用語は、そのＳＮＰバリアントをはじめとする「関連ＰＤ−１ポリペプチド」を含む。用語「ＰＤ−１」は、「全長」未プロセシングＰＤ−１、及び細胞におけるプロセシングの結果生じるＰＤ−１の任意の形態も包含する。いくつかの実施形態において、ＰＤ１は配列番号４３のアミノ酸配列を有する。ＧｅｎＢａｎｋ（商標）受託番号Ｕ６４８６３は別の例示的なヒトＰＤ−１核酸配列を提供する。
【０１２８】
「関連ＰＤ−１ポリペプチド」は、ＰＤ−１活性を保持することのできる対立遺伝子バリアント（例えば、ＳＮＰバリアント）；スプライスバリアント；断片；誘導体；置換、欠失、及び挿入バリアント；融合ポリペプチド；ならびに種間ホモログを含む。当業者であれば理解するように、本明細書で提供する抗ＰＤ−１抗体は、ＰＤ−１ポリペプチド、ＰＤ−１ポリペプチド断片、ＰＤ−１抗原、及び／またはＰＤ−１エピトープに結合することができる。「エピトープ」はより大きなＰＤ−１抗原の一部である場合があり、ＰＤ−１抗原はより大きなＰＤ−１ポリペプチド断片の一部である場合があり、そしてまた、ＰＤ−１ポリペプチド断片はより大きなＰＤ−１ポリペプチドの一部である場合がある。ＰＤ−１は天然または変性形態で存在し得る。本明細書に記載のＰＤ−１ポリペプチドは、ヒト組織型から、もしくは別の起源からなど、多様な起源から単離され得るか、または組換え法または合成法によって調製され得る。ＰＤ−１ポリペプチドのオーソログも当該技術分野において公知である。
【０１２９】
ＰＤ−１ポリペプチド「細胞外ドメイン」または「ＥＣＤ」は、膜貫通及び細胞質ドメインを実質的に含まないＰＤ−１ポリペプチドの形態のことをいう。例えば、ＰＤ−１ポリペプチドＥＣＤは、そのような膜貫通及び／または細胞質ドメインを１％未満しか有し得ず、そのようなドメインを０．５％未満しか有さない場合がある。
【０１３０】
用語「ＰＤ１ＡＢ−６−ＩｇＧ１」、「ＰＤ１ＡＢ−６  ＩｇＧ１」、「ＰＤ１ＡＢ−６＿ＩｇＧ１」、「ＩｇＧ１＿ＰＤ１ＡＢ−６」、及び「ＩｇＧ１−ＰＤ１ＡＢ−６」は、同じ意味で用いられ、ＩｇＧ１  Ｆｃ領域を有する抗体ＰＤ１ＡＢ−６のことをいう。ある実施形態において、抗体ＰＤ１ＡＢ−６は、例えば、図４に示すように、ＬＣ＿ＰＤ１ＡＢ−６−ＩｇＧ１（配列番号３１）の軽鎖アミノ酸配列及びＨＣ＿ＰＤ１ＡＢ−６−ＩｇＧ１（配列番号３２）の重鎖アミノ酸配列を含む。
【０１３１】
用語「ＰＤ１ＡＢ−６−Ｋ３」、「ＰＤ１ＡＢ−６−ＩｇＧ１−Ｋ３２２Ａ」、「ＰＤ１ＡＢ−６−Ｋ３２２Ａ」、「ＩｇＧ１＿ＰＤ１ＡＢ−６＿Ｋ３２２Ａ」、「ＩｇＧ１＿ＰＤ１ＡＢ−６＿Ｋ３」、「ＩｇＧ１−ＰＤ１ＡＢ−６−Ｋ３２２Ａ」、及び「ＩｇＧ１−ＰＤ１ＡＢ−６−Ｋ３」は、同じ意味で用いられ、ＩｇＧ１  Ｆｃ領域にＫ３２２Ａ置換を有するＰＤ１ＡＢ−６バリアントのことをいう。ある実施形態において、ＰＤ１ＡＢ−６バリアントは、例えば、図４に示すように、ＨＣ＿ＰＤ１ＡＢ−６−ＩｇＧ１−Ｋ３２２Ａ（配列番号３３）の重鎖アミノ酸配列を有する。
【０１３２】
用語「ＰＤ１ＡＢ−６−４Ｐ」、「ＩｇＧ４Ｐ＿ＰＤ１ＡＢ−６」、「ＩｇＧ４Ｐ−ＰＤ１ＡＢ−６」、「ＰＤ１ＡＢ−６＿ＩｇＧ４Ｐ」、及び「ＰＤ１ＡＢ−６−ＩｇＧ４Ｐ」は、同じ意味で用いられ、ＩｇＧ４Ｐ  Ｆｃ領域を有するＰＤ１ＡＢ−６バリアントのことをいう。ある実施形態において、ＰＤ−１抗体バリアントは、例えば、図４に示すように、ＨＣ＿ＰＤ１ＡＢ−６−ＩｇＧ４Ｐ（配列番号３４）の重鎖アミノ酸配列を有する。
【０１３３】
用語「ＰＤ１ＡＢ−６−４ＰＥ」、「ＩｇＧ４ＰＥ＿ＰＤ１ＡＢ−６」、「ＩｇＧ４ＰＥ−ＰＤ１ＡＢ−６」、及び「ＰＤ１ＡＢ−６＿ＩｇＧ４ＰＥ」、及び「ＰＤ１ＡＢ−６−ＩｇＧ４ＰＥ」は、同じ意味で用いられ、ＨＣ＿ＰＤ１ＡＢ−６−ＩｇＧ４ＰＥ（配列番号３５）というＩｇＧ４ＰＥ重鎖アミノ酸配列を有するＰＤ１ＡＢ−６バリアントのことをいう。
【０１３４】
用語「ＰＤ−１リガンド」は、例えばインビボまたはインビトロで、ＰＤ−１に結合する分子のことをいう。ＰＤ−１リガンドの非限定例としては、自然発生リガンド、例えばＰＤ−１リガンド１（ＰＤ−Ｌ１（Ｂ７−Ｈ１またはＣＤ２７４としても知られる））及びＰＤ−１リガンド２（ＰＤ−Ｌ２（Ｂ７−ＤＣまたはＣＤ２７３としても知られる））、ならびに人工生成リガンドが挙げられる。
【０１３５】
用語「ＰＤ−Ｌ１」及び「ＰＤＬ−１」は、本明細書において同じ意味で用いられ、ＰＤ−１リガンド１（Ｂ７−Ｈ１またはＣＤ２７４としても知られる）のことをいう。
【０１３６】
用語「ＰＤ−１活性」、「ＰＤ−１シグナル伝達」、及び「ＰＤ−１リガンド様シグナル伝達」は、本開示のＰＤ−１に結合する抗体などの結合タンパク質に適用される場合、結合タンパク質（例えば抗体）が、例えばインビボまたはインビトロで、ＰＤ−１リガンドの結合によって誘発される生物学的作用を模倣または調節し、これ以外ではＰＤ−１へのＰＤ−１リガンド結合から得られるはずの生物学的応答を誘発することを意味する。抗ＰＤ−１抗体、例えば、ＰＤ−１（例えば、ヒトＰＤ−１）に結合する抗体またはその断片の結合特異性の評価において、応答が野生型ＰＤ−１リガンド標準の活性の５％以上、例えば１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、１００％、１２５％、１５０％、１７５％、または２００％以上などである場合に、抗体は生物学的応答を誘発するものとみなす。一実施形態において、抗ＰＤ−１抗体またはＰＤ−１リガンドは固定化される（例えば、プラスチック表面またはビーズ上に）。ある実施形態において、抗体は以下の特性を有する：（１）ヒトもしくはカニクイザルＰＢＭＣアッセイ（例えば、実施例４．２．１及び４．２．２を参照）；または（２）ヒト全血試料アッセイ（例えば、実施例４．２．１を参照）において、ＰＤ−１リガンド標準の５％以上の効力レベルを示し、ＥＣ５０が１００ｎＭ以下、例えば、９０ｎＭ、８０ｎＭ、７０ｎＭ、６０ｎＭ、５０ｎＭ、４０ｎＭ、３０ｎＭ、２０ｎＭ、１０ｎＭ、５ｎＭ、２ｎＭ、１ｎＭ、０．５ｎＭ、０．２ｎＭ、または０．１ｎＭである。
【０１３７】
用語「結合タンパク質」は、ヒト及び／またはカニクイザルＰＤ−１をはじめとするＰＤ−１に結合する部分（例えば、ＣＤＲなどの１つ以上の結合領域）、ならびに任意により、結合部分が、ＰＤ−１ポリペプチド、断片、またはエピトープへの結合タンパク質の結合を促進するコンフォメーションをとることを可能とするスキャフォールドまたはフレームワーク部分（例えば、１つ以上のスキャフォールドまたはフレームワーク領域）を含むタンパク質のことをいう。そのような結合タンパク質の例としては、抗体、例えば、ヒト抗体、ヒト化抗体、キメラ抗体、組換え抗体、一本鎖抗体、ダイアボディ、トリアボディ、テトラボディ、Ｆａｂ断片、Ｆ（ａｂ’）２断片、ＩｇＤ抗体、ＩｇＥ抗体、ＩｇＭ抗体、ＩｇＧ１抗体、ＩｇＧ２抗体、ＩｇＧ３抗体、またはＩｇＧ４抗体など、及びこれらの断片が挙げられる。結合タンパク質は、例えば、ＣＤＲまたはＣＤＲ誘導体を移植した代替タンパク質スキャフォールドまたは人工スキャフォールドを含むことができる。そのようなスキャフォールドとしては、例えば結合タンパク質の三次元構造を安定させるために導入された変異を含む抗体由来スキャフォールド、及び例えば生体適合性ポリマーを含む完全に合成によるスキャフォールドが挙げられるが、これらに限定されない。例えば、Ｋｏｒｎｄｏｒｆｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，２００３，Ｐｒｏｔｅｉｎｓ：Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ，Ｆｕｎｃｔｉｏｎ，ａｎｄ  Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ  ５３（１）：１２１−２９；及びＲｏｑｕｅ  ｅｔ  ａｌ．，２００４，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．Ｐｒｏｇ．２０：６３９−５４を参照。加えて、ペプチド抗体模倣物（「ＰＡＭ」）、さらにはフィブロネクチンコンポーネントをスキャフォールドとして利用する抗体模倣物をベースにしたスキャフォールドも用いることができる。本開示の文脈において、結合タンパク質は、例えば解離定数（ＫＤ）が≦１０−７Ｍである場合に、ＰＤ−１に特異的にまたは選択的に結合すると言う。いくつかの実施形態において、結合タンパク質（例えば抗体）は、ＫＤ約１０−７Ｍ〜約１０−１２ＭでＰＤ−１に特異的に結合し得る。ある実施形態において、結合タンパク質（例えば抗体）は、ＫＤ≦１０−８ＭまたはＫＤ≦１０−９Ｍの場合に、高いアフィニティーでＰＤ−１に特異的に結合し得る。一実施形態において、結合タンパク質（例えば抗体）は、Ｂｉａｃｏｒｅ（登録商標）によって測定したＫＤが１×１０−９Ｍ〜１０×１０−９Ｍで精製ヒトＰＤ−１に特異的に結合し得る。別の実施形態において、結合タンパク質（例えば抗体）は、ＫｉｎＥｘＡ（商標）（Ｓａｐｉｄｙｎｅ，Ｂｏｉｓｅ，ＩＤ）によって測定したＫＤが０．１×１０−９Ｍ〜１×１０−９Ｍで精製ヒトＰＤ−１に特異的に結合し得る。さらに別の実施形態において、結合タンパク質（例えば抗体）は、ＫＤが０．１×１０−９Ｍ〜１０×１０−９Ｍで細胞上に発現されたヒトＰＤ−１に特異的に結合する。ある実施形態において、結合タンパク質（例えば抗体）は、ＫＤが０．１×１０−９Ｍ〜１×１０−９Ｍで細胞上に発現されたヒトＰＤ−１に特異的に結合する。いくつかの実施形態において、結合タンパク質（例えば抗体）は、ＫＤが１×１０−９Ｍ〜１０×���０−９Ｍで細胞上に発現されたヒトＰＤ−１に特異的に結合する。ある実施形態において、結合タンパク質（例えば抗体）は、ＫＤ約０．１×１０−９Ｍ、約０．５×１０−９Ｍ、約１×１０−９Ｍ、約５×１０−９Ｍ、約１０×１０−９Ｍ、またはこの任意の範囲もしくは区間で細胞上に発現されたヒトＰＤ−１に特異的に結合する。さらに別の実施形態において、結合タンパク質（例えば抗体）は、ＫＤが０．１×１０−９Ｍ〜１０×１０−９Ｍで細胞上に発現されたカニクイザルＰＤ−１に特異的に結合し得る。ある実施形態において、結合タンパク質（例えば抗体）は、ＫＤが０．１×１０−９Ｍ〜１×１０−９Ｍで細胞上に発現されたカニクイザルＰＤ−１に特異的に結合する。いくつかの実施形態において、結合タンパク質（例えば抗体）は、ＫＤが１×１０−９Ｍ〜１０×１０−９Ｍで細胞上に発現されたカニクイザルＰＤ−１に特異的に結合する。ある実施形態において、結合タンパク質（例えば抗体）は、ＫＤ約０．１×１０−９Ｍ、約０．５×１０−９Ｍ、約１×１０−９Ｍ、約５×１０−９Ｍ、約１０×１０−９Ｍ、またはこの任意の範囲もしくは区間で細胞上に発現されたカニクイザルＰＤ−１に特異的に結合する。
【０１３８】
用語「抗体」、「免疫グロブリン」、または「Ｉｇ」は、本明細書において同じ意味で用いられ、また、最も広義に用いられ、具体的には、例えば、以下に記載するような、個々の抗ＰＤ−１モノクローナル抗体（アゴニスト、アンタゴニスト、中和抗体、全長またはインタクトモノクローナル抗体を含む）、ポリエピトープまたはモノエピトープ特異性を有する抗ＰＤ−１抗体組成物、ポリクローナルまたは一価抗体、多価抗体、少なくとも２つのインタクト抗体から形成される多重特異性抗体（例えば、所望の生物活性を示す限り二重特異性抗体）、一本鎖抗ＰＤ−１抗体、及び抗ＰＤ−１抗体の断片を包含する。抗体は、ヒト、ヒト化、キメラ及び／またはアフィニティー成熟型とすることができ、さらには他の種、例えばマウス及びウサギなど由来の抗体とすることもできる。用語「抗体」は、特定の分子抗原に結合することができ、ポリペプチド鎖の２つの同一のペアで構成される、免疫グロブリンクラスのポリペプチドのうちのＢ細胞のポリペプチド産生物を含むことを意図し、その各ペアは１つの重鎖（約５０〜７０ｋＤａ）及び１つの軽鎖（約２５ｋＤａ）を有し、各鎖の各アミノ末端部分は約１００〜約１３０またはこれより多くのアミノ酸の可変領域を含み、各鎖の各カルボキシ末端部分は定常領域を含む。例えば、Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ（Ｂｏｒｒｅｂａｅｃｋ  ｅｄ．，２ｄ  ｅｄ．１９９５）；及びＫｕｂｙ，Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（３ｄ  ｅｄ．１９９７）を参照。具体的な実施形態において、特定の分子抗原には本明細書で提供する抗体が結合することができ、ＰＤ−１ポリペプチド、ＰＤ−１断片、またはＰＤ−１エピトープが含まれる。抗体としては、限定はしないが、合成抗体、組換え産生抗体、ラクダ化抗体、イントラボディ、抗イディオタイプ（抗Ｉｄ）抗体、及び上記のいずれかの機能的断片（例えば、ＰＤ−１結合断片などの抗原結合断片）も挙げられ、ここで機能的断片とは、断片が由来する抗体の結合活性の一部またはすべてを保持する抗体重鎖または軽鎖ポリペプチドの一部のことをいう。機能的断片（例えば、ＰＤ−１結合断片などの抗原結合断片）の非限定例としては、一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）（例えば、単一特異性、二重特異性などを含む）、Ｆａｂ断片、Ｆ（ａｂ’）断片、Ｆ（ａｂ）２断片、Ｆ（ａｂ’）２断片、ジスルフィド連結Ｆｖ（ｄｓＦｖ）、Ｆｄ断片、Ｆｖ断片、ダイアボディ、トリアボディ、テトラボディ、及びミニボディが挙げられる。特に、本明細書で提供する抗体としては、免疫グロブリン分子及び免疫グロブリン分子の免疫活性部分、例えば、ＰＤ−１抗原に結合する抗原結合部位を含有する抗原結合ドメインまたは分子（例えば、抗ＰＤ−１抗体の１つ以上のＣＤＲ）が挙げられる。そのような抗体断片は、例えば、Ｈａｒｌｏｗ  ａｎｄ  Ｌａｎｅ，Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ（１９８９）；Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌｏｇｙ  ａｎｄ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ：Ａ  Ｃｏｍｐｒｅｈｅｎｓｉｖｅ  Ｄｅｓｋ  Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ（Ｍｙｅｒｓ  ｅｄ．，１９９５）；Ｈｕｓｔｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９９３，Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｐｈｙｓｉｃｓ  ２２：１８９−２２４；Ｐｌｕｃｋｔｈｕｎ  ａｎ���  Ｓｋｅｒｒａ，１９８９，Ｍｅｔｈ．Ｅｎｚｙｍｏｌ．１７８：４９７−５１５；及びＤａｙ，Ａｄｖａｎｃｅｄ  Ｉｍｍｕｎｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ（２ｄ  ｅｄ．１９９０）に見出すことができる。本明細書で提供する抗体は、免疫グロブリン分子の任意のクラス（例えば、ＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、及びＩｇＡ）、または任意のサブクラス（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１、及びＩｇＡ２）のものとすることができる。抗ＰＤ−１抗体はアゴニスト抗体またはアンタゴニスト抗体であり得る。本明細書では、ＰＤ−１シグナル伝達を誘発する抗体をはじめとするＰＤ−１に対するアゴニスト抗体を提供する。具体的な実施形態において、ＰＤ−１に対するアゴニスト抗体は、ＰＤ−１へのＰＤ−Ｌ１及び／またはＰＤ−Ｌ２の結合について競合しない。
【０１３９】
用語「モノクローナル抗体」は、本明細書で用いる場合、実質的に同種の抗体の集団から得られた抗体を指し、例えば、その集団に含まれる個々の抗体は、少量で存在し得る自然発生変異の可能性を除いて同一であり、各モノクローナル抗体は典型的に抗原上の単一のエピトープを認識することになる。具体的な実施形態において、「モノクローナル抗体」は、本明細書で使用する場合、１つのハイブリドーマ細胞またはその他の細胞によって産生される抗体であり、この抗体は、例えば、ＥＬＩＳＡ、または当該技術分野において知られているその他の抗原結合アッセイもしくは競合結合アッセイによって割り出されるように、ＰＤ−１エピトープのみに結合する。用語「モノクローナル」はいかなる特定の抗体作製方法にも限定されない。例えば、本開示において有用なモノクローナル抗体は、Ｋｏｈｌｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，１９７５，Ｎａｔｕｒｅ  ２５６：４９５に初めて記載されたハイブリドーマ法によって調製され得るか、または細菌もしくは真核動物もしくは植物細胞中での組換えＤＮＡ法（例えば米国特許第４，８１６，５６７号を参照）を用いて作製され得る。「モノクローナル抗体」は、例えばＣｌａｃｋｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９９１，Ｎａｔｕｒｅ  ３５２：６２４−２８及びＭａｒｋｓ  ｅｔ  ａｌ．，１９９１，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２２：５８１−９７に記載の技術を用いて、ファージ抗体ライブラリーからも単離され得る。クローナル細胞株及びその細胞株によって発現されるモノクローナル抗体の他の調製方法は、当該技術分野において周知である。例えば、Ｓｈｏｒｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ（Ａｕｓｕｂｅｌ  ｅｔ  ａｌ．ｅｄｓ．，５ｔｈ  ｅｄ．２００２）を参照。モノクローナル抗体を作製する例示的な方法は、本明細書の実施例に示されている。
【０１４０】
「ポリクローナル抗体」は、本明細書で使用する場合、多数のエピトープを有するタンパク質に対する免疫原性応答の際に産生される抗体集団を指すので、そのタンパク質における同じまたは異なるエピトープに向けられる多種多様な抗体を含む。ポリクローナル抗体の産生方法は当該技術分野において公知である（例えば、Ｓｈｏｒｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ（Ａｕｓｕｂｅｌ  ｅｔ  ａｌ．ｅｄｓ．，５ｔｈ  ｅｄ．２００２）を参照）。
【０１４１】
ペプチドまたはポリペプチドとの関連において、用語「断片」は、本明細書で用いる場合、全長アミノ酸配列未満を含むペプチドまたはポリペプチドのことをいう。そのような断片は、例えば、アミノ末端での切断、カルボキシ末端での切断、及び／またはアミノ酸配列からの残基（複数可）の内部欠失から生じ得る。断片は、例えば、選択的ＲＮＡスプライシングまたはインビボプロテアーゼ活性の結果生じ得る。ある実施形態において、ＰＤ−１断片または抗ＰＤ−１抗体断片としては、ＰＤ−１ポリペプチドまたは抗ＰＤ−１抗体のアミノ酸配列の少なくとも５個の連続したアミノ酸残基、少なくとも１０個の連続したアミノ酸残基、少なくとも１５個の連続したアミノ酸残基、少なくとも２０個の連続したアミノ酸残基、少なくとも２５個の連続したアミノ酸残基、少なくとも３０個の連続したアミノ酸残基、少なくとも４０個の連続したアミノ酸残基、少なくとも５０個の連続したアミノ酸残基、少なくとも６０個の連続したアミノ残基、少なくとも７０個の連続したアミノ酸残基、少なくとも８０個の連続したアミノ酸残基、少なくとも９０個の連続したアミノ酸残基、少なくとも１００個の連続したアミノ酸残基、少なくとも１２５個の連続したアミノ酸残基、少なくとも１５０個の連続したアミノ酸残基、少なくとも１７５個の連続したアミノ酸残基、少なくとも２００個の連続したアミノ酸残基、少なくとも２５０、少なくとも３００、少なくとも３５０、少なくとも４００、少なくとも４５０、少なくとも５００、少なくとも５５０、少なくとも６００、少なくとも６５０、少なくとも７００、少なくとも７５０、少なくとも８００、少なくとも８５０、少なくとも９００、または少なくとも９５０個の連続したアミノ酸残基のアミノ酸配列を含むポリペプチドが挙げられる。特定の実施形態において、ＰＤ−１ポリペプチドまたは抗ＰＤ−１抗体の断片は、ポリペプチドまたは抗体の少なくとも１つ、少なくとも２つ、少なくとも３つ、またはこれより多くの機能を保持する。
【０１４２】
「抗原」は、抗体が選択的に結合することのできる所定の抗原である。標的抗原は、ポリペプチド、炭水化物、核酸、脂質、ハプテン、または他の自然発生もしくは合成化合物であり得る。いくつかの実施形態において、標的抗原はポリペプチドである。
【０１４３】
用語「抗原結合断片」、「抗原結合ドメイン」、「抗原結合領域」、及び類似の用語は、抗原と相互作用し、結合作用物質に抗原に対する特異性及びアフィニティーを付与するアミノ酸残基を含む抗体の部分（例えばＣＤＲ）を指す。
【０１４４】
「エピトープ」は、単一の抗体分子が結合する抗原分子表面上の部位であり、抗体の１つ以上の抗原結合領域が結合可能であり、動物、例えば哺乳類（例えばヒト）などにおいて免疫応答を誘発することのできる抗原性または免疫原性活性を有する、例えばＰＤ−１ポリペプチドまたはＰＤ−１ポリペプチド断片などの抗原の表面上の局所的領域などである。免疫原性活性を有するエピトープは、動物において抗体応答を誘発するポリペプチドの部分である。抗原活性を有するエピトープは、例えば、イムノアッセイをはじめとする当該技術分野において周知のいずれかの方法によって割り出されるように、抗体が結合するポリペプチド部分である。抗原エピトープは必ずしも、免疫原性を持つ必要はない。エピトープは多くの場合、化学的に活性な表面分子集団（アミノ酸または糖側鎖など）からなり、特異的な三次元構造特性と、特異的な荷電特性を有する。抗体エピトープは直線状エピトープまたは立体構造エピトープであり得る。直線状エピトープはタンパク質中のアミノ酸の連続配列によって形成される。立体構造エピトープは、タンパク質配列中では不連続であるがタンパク質の三次元構造へのフォールディングで集まるアミノ酸で形成される。誘導型エピトープは、タンパク質の三次元構造が、例えば活性化または別のタンパク質もしくはリガンドの結合に引き続いて、変性コンフォメーションとなった場合に形成される。ある実施形態において、ＰＤ−１エピトープはＰＤ−１ポリペプチドの三次元表面形体である。他の実施形態において、ＰＤ−１エピトープはＰＤ−１ポリペプチドの直線状形体である。一般に、抗原は複数のまたは多数の異なるエピトープを有し、多数の異なる抗体と反応し得る。
【０１４５】
２つの抗体が三次元空間中の同一の、部分的に一致する、または隣接するエピトープを認識する場合、抗体は、「エピトープ」、参照抗体と「実質的に同じエピトープ」、または「同じエピトープ」に結合する。２つの抗体が三次元空間中の同一の、部分的に一致する、または隣接するエピトープに結合するかどうか判定するための最も広く用いられている迅速な方法は、競合アッセイであり、これは複数の異なる様式に構成することができ、例えば、標識化抗原または標識化抗体のいずれかを用いる。いくつかのアッセイにおいて、抗原を９６ウェルプレート上に固定化するか、または細胞表面上に発現させ、標識化抗体の結合を遮断する非標識化抗体の能力を放射性、蛍光、または酵素標識を用いて測定する。
【０１４６】
「エピトープマッピング」は、抗体の標的抗原上の結合部位、またはエピトープを同定するプロセスである。「エピトープビニング」は、抗体が認識するエピトープに基づいて抗体を分類するプロセスである。より具体的には、エピトープビニングは、エピトープ認識特性に基づいて抗体をクラスタリングし、異なる結合特異性を有する抗体を同定するためのコンピュータ処理と組み合わせた競合アッセイを用いて、異なる抗体のエピトープ認識特性を区別する方法及びシステムを含む。
【０１４７】
用語「結合する」または「結合」は、例えば複合体の形成をはじめとする分子間の相互作用のことをいう。相互作用は、例えば、水素結合、イオン結合、疎水性相互作用、及び／またはファンデルワールス相互作用をはじめとする非共有結合性相互作用とすることができる。複合体は、共有結合性または非共有結合性の結合、相互作用、または力によって結合した２つ以上の分子も含むことができる。抗体上の単一の抗原結合部位とＰＤ−１などの標的分子上の単一のエピトープとの間の全非共有結合性相互作用の強度が、そのエピトープに対する抗体もしくは機能的断片のアフィニティーである。一価抗原に対する抗体の解離速度（ｋｏｆｆ）対会合速度（ｋｏｎ）の比（ｋｏｆｆ／ｋｏｎ）が解離定数ＫＤであり、アフィニティーに逆相関する。ＫＤ値が低いほど抗体のアフィニティーは高い。ＫＤの値は抗体及び抗原の異なる複合体で変化し、ｋｏｎ及びｋｏｆｆの両方に依存する。本明細書で提供する抗体の解離定数ＫＤは、本明細書で提供する任意の方法または当業者にとって公知の任意の他の方法を用いて求めることができる。１つの結合部位でのアフィニティーが必ずしも抗体と抗原との間の相互作用の真の強度を反映するとは限らない。複数の繰り返される抗原決定基を含有する複合体抗原、例えば多価ＰＤ−１などが複数の結合部位を含有する抗体と接触する場合、１つの部位における抗体と抗原との相互作用は２つ目の部位における反応の可能性を増加させる。多価抗体と抗原との間のそのような複数の相互作用の強度はアビディティーと呼ばれる。抗体のアビディティーは個々の結合部位のアフィニティーよりも良好な結合能力の尺度であり得る。例えば、高いアビディティーは低いアフィニティーを補うことができ、これは五量体ＩｇＭ抗体で見られることがあり、ＩｇＧよりも低いアフィニティーを有し得るが、多価性に起因するＩｇＭの高いアビディティーが効果的に抗原に結合することを可能とする。
【０１４８】
用語「ＰＤ−１に特異的に結合する抗体」、「ＰＤ−１エピトープに特異的に結合する抗体」、及び類似の用語も本明細書において同じ意味で用いられ、ＰＤ−１ポリペプチド、例えばＰＤ−１抗原、または断片、またはエピトープなど（例えば、ヒトＰＤ−１ポリペプチド、抗原またはエピトープなどのヒトＰＤ−１）に特異的に結合する抗体のことをいう。ＰＤ−１（例えば、ヒトＰＤ−１）に特異的に結合する抗体は、ＰＤ−１の細胞外ドメインまたは細胞外ドメインに由来するペプチドに結合し得る。ＰＤ−１抗原（例えば、ヒトＰＤ−１）に特異的に結合する抗体は、関連抗原（例えば、カニクイザルＰＤ−１）に交差反応を示し得る。ある実施形態において、ＰＤ−１抗原に特異的に結合する抗体は他の抗原と交差反応しない。ＰＤ−１抗原に特異的に結合する抗体は、例えば、イムノアッセイ、Ｂｉａｃｏｒｅ（登録商標）、または当業者に公知の他の技術によって同定することができる。実験技術、例えばラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）及び酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）などを用いて測定した際に、いかなる交差反応性抗原よりも高いアフィニティーでＰＤ−１抗原に結合する場合、抗体はＰＤ−１抗原に特異的に結合する。典型的に、特異的または選択的反応は、バックグラウンド信号またはノイズの少なくとも２倍であり、バックグラウンドの１０倍超の場合もある。例えば、抗体特異性に関する説明にはＦｕｎｄａｍｅｎｔａｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  ３３２−３６（Ｐａｕｌ  ｅｄ．，２ｄ  ｅｄ．１９８９）を参照。「目的の抗原（例えば、ＰＤ−１などの標的抗原）に結合する」抗体は、抗原を発現する細胞または組織への標的化において抗体が治療薬として有用となるように十分なアフィニティーで抗原に結合し、かつ、他のタンパク質とそれほど交差反応しないものである。そのような実施形態において、「非標的」タンパク質への抗体の結合度は、例えば、蛍光活性化細胞ソーティング（ＦＡＣＳ）分析またはＲＩＡによって測定すると、抗体の特定の標的タンパク質への結合の約１０％未満となる。標的分子への抗体の結合に関して、特定のポリペプチドまたは特定のポリペプチド標的上のエピトープへの「特異的結合」、「に特異的に結合する」、または「に対して特異的である」という用語は、測定可能な程度に非特異的相互作用とは異なる結合を意味する。特異的結合は、例えば、一般に結合活性を有しない同様の構造を有する分子である対照分子の結合と比較して分子の結合を判定することによって測定することができる。例えば、特異的結合は、標的に類似である対照分子、例えば、過剰な非標識標的との競合によって、判定することができる。この事例では、特異的結合は、標識した標的のプローブへの結合が、過剰な非標識標的によって競合的に阻害された場合に、示される。用語「抗ＰＤ−１抗体」または「ＰＤ−１に結合する抗体」は、抗体が、例えばＰＤ−１の標的化における診断薬として有用となるように十分なアフィニティーでＰＤ−１に結合することのできる抗体を含む。特定のポリペプチドまたは特定のポリペプチド標的上のエピトープへの「特異的結合」、「に特異的に結合する」、または「に対して特異的である」という用語は、本明細書で用���る場合、分子がいかなる他のポリペプチドまたはポリペプチドエピトープにも実質的に結合することなく、特定のポリペプチドまたは特定のポリペプチド上のエピトープに結合する結合のことをいう。ある実施形態において、ＰＤ−１に結合する抗体は、１０ｎＭ、５ｎＭ、４ｎＭ、３ｎＭ、２ｎＭ、１ｎＭ、０．９ｎＭ、０．８ｎＭ、０．７ｎＭ、０．６ｎＭ、０．５ｎＭ、０．４ｎＭ、０．３ｎＭ、０．２ｎＭ、または０．１ｎＭ．以下の解離定数（ＫＤ）を有する。ある実施形態において、抗ＰＤ−１抗体は、異なる種由来のＰＤ−１の間（例えば、ヒトＰＤ−１とカニクイザルＰＤ−１との間）で保存されているＰＤ−１のエピトープに結合する。
【０１４９】
用語「競合する」は、抗ＰＤ−１抗体（例えば、ＰＤ−１に結合し、標的上の同じエピトープまたは結合部位について競合するアゴニスト抗体及び結合タンパク質）との関連で用いる場合、研究中の抗体（またはその結合断片）が、共通の抗原（例えば、ＰＤ−１またはその結合断片）への参照分子（例えば、参照リガンドまたは参照抗原結合タンパク質、例えば参照抗体など）の特異的結合を防止または阻害するアッセイによって判定される競合を意味する。試験抗体がＰＤ−１（例えば、ヒトＰＤ−１）への結合について参照抗体と競合するかどうか判定するために、多くの種類の競合結合アッセイを用いることができる。採用することのできるアッセイの例としては、固相直接または間接ＲＩＡ、固相直接または間接酵素イムノアッセイ（ＥＩＡ）、サンドイッチ競合アッセイ（例えば、Ｓｔａｈｌｉ  ｅｔ  ａｌ．，１９８３，Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ  ９：２４２−５３を参照）、固相直接ビオチン−アビジンＥＩＡ（例えば、Ｋｉｒｋｌａｎｄ  ｅｔ  ａｌ．，１９８６，Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３７：３６１４−１９を参照）、固相直接標識化アッセイ、固相直接標識化サンドイッチアッセイ（例えば、Ｈａｒｌｏｗ  ａｎｄ  Ｌａｎｅ，Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ（１９８８）を参照）、Ｉ−１２５標識を用いる固相直接標識ＲＩＡ（例えば、Ｍｏｒｅｌ  ｅｔ  ａｌ．，１９８８，Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２５：７−１５を参照）、及び直接標識化ＲＩＡ（Ｍｏｌｄｅｎｈａｕｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，１９９０，Ｓｃａｎｄ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．３２：７７−８２）が挙げられる。典型的には、そのようなアッセイは、固体表面に結合した精製抗原（例えば、ヒトＰＤ−１などのＰＤ−１）、または非標識化試験抗原結合タンパク質（例えば、試験抗ＰＤ−１抗体）もしくは標識化参照抗原結合タンパク質（例えば、参照抗ＰＤ−１抗体）のいずれかを担持する細胞の使用を伴う。競合阻害は、試験抗原結合タンパク質の存在下において固体表面または細胞に結合した標識の量を求めることによって測定され得る。一般に、試験抗原結合タンパク質は過剰に存在する。競合アッセイによって同定される抗体（競合抗体）には、参照抗体と同じエピトープに結合する抗体、及び／または抗体立体障害が生じるほどに、参照が結合するエピトープに十分近位の隣接するエピトープに結合する抗体が含まれる。競合結合を判定する方法に関するさらなる詳細は本明細書に記載されている。一般に、競合抗体タンパク質が過剰に存在する場合、共通の抗原への参照抗体の特異的結合を、少なくとも３０％、例えば４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、または７５％阻害する。場合によっては、少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはこれより多く結合が阻害される。
【０１５０】
「単離」抗体は、抗体が由来する細胞または組織起源からの細胞物質または他のコンタミタンパク質及び／または他のコンタミ成分を実質的に含まないか、化学合成した場合には化学的前駆体または他の化学薬品を実質的に含まない。「細胞物質を実質的に含まない」という文言は、抗体を単離または組換え産生する細胞の細胞成分から抗体が分離されている抗体の調製物を含む。したがって、細胞物質を実質的に含まない抗体としては、異種タンパク質（本明細書において「コンタミタンパク質」とも呼ぶ）を約３０％、２５％、２０％、１５％、１０％、５％、または１％未満（乾燥重量基準）しか有しない抗体の調製物が挙げられる。ある実施形態において、抗体を組換え産生する場合、抗体は培養培地を実質的に含まず、例えば、培養培地はタンパク質調製物の体積の約２０％、１５％、１０％、５％、または１％未満しか占めない。ある実施形態において、抗体を化学合成によって生成する場合、抗体は化学的前駆体または他の化学薬品を実質的に含まず、例えば、タンパク質の合成に関与する化学的前駆体または他の化学薬品から分離される。したがって、そのような抗体の調製物は、化学的前駆体または目的の抗体以外の化合物を約３０％、２５％、２０％、１５％、１０％、５％、または１％未満（乾燥重量基準）しか有しない。コンタミ成分には、限定はしないが、抗体の治療上の使用を妨げる物質も含めることができ、酵素、ホルモン、及び他のタンパク質性または非タンパク質性溶質が含まれ得る。ある実施形態において、（１）ローリー法（Ｌｏｗｒｙ  ｅｔ  ａｌ．，１９５１，Ｊ．Ｂｉｏ．Ｃｈｅｍ．１９３：２６５−７５）によって測定した場合で９５重量％超の抗体に、例えば９６％、９７％、９８％、もしくは９９％などに、（２）スピニングカップ配列決定装置の使用によりＮ末端もしくは内部アミノ酸配列の少なくとも１５個の残基を得るのに十分な程度まで、または（３）クーマシーブルーもしくは銀染色を使用した還元もしくは非還元条件下でＳＤＳ−ＰＡＧＥによって同種になるように、抗体を精製する。単離抗体には、組換え細胞内でインサイチュの抗体が含まれるが、これは、抗体の天然環境の少なくとも１つの構成要素が存在していないためである。しかしながら、通常、単離抗体は、少なくとも１つの精製ステップにより調製されるであろう。具体的な実施形態において、本明細書で提供する抗体は単離されている。
【０１５１】
４本の鎖の抗体ユニットは、２本の同一な軽鎖（Ｌ）と２本の同一な重鎖（Ｈ）とから構成されるヘテロ四量体糖タンパク質である。ＩｇＧの場合、４本鎖ユニットは、概して約１５０，０００ダルトンである。各Ｌ鎖は、１つのジスルフィド共有結合によってＨ鎖に連結されているが、一方で２本のＨ鎖は、Ｈ鎖アイソタイプに応じて１つ以上のジスルフィド結合によって互いに連結されている。各々のＨ鎖及びＬ鎖はまた、規則的に離間した鎖間ジスルフィド架橋も有する。各Ｈ鎖は、Ｎ末端に可変ドメイン（ＶＨ）を有し、続いてα鎖及びγ鎖のそれぞれについては３つの定常ドメイン（ＣＨ）、ならびにμ及びεアイソタイプについては４つのＣＨドメインを有する。各Ｌ鎖は、Ｎ末端に可変ドメイン（ＶＬ）を有し、続いてその反対側の端部に定常ドメイン（ＣＬ）を有する。ＶＬは、ＶＨと整列しており、ＣＬは、重鎖の第１の定常ドメイン（ＣＨ１）と整列している。特定のアミノ酸残基が軽鎖可変ドメインと重鎖可変ドメインとの間に界面を形成すると考えられている。ＶＨとＶＬとが一緒に対合することにより、単一の抗原結合部位が形成される。異なるクラスの抗体の構造及び特性については、例えば、Ｂａｓｉｃ  ａｎｄ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  ７１（Ｓｔｉｔｅｓ  ｅｔ  ａｌ．ｅｄｓ．，８ｔｈ  ｅｄ．１９９４）を参照されたい。
【０１５２】
用語「重鎖」は、抗体に関して用いる場合、約５０〜７０ｋＤａのポリペプチド鎖のことをいい、そのアミノ末端部分は約１２０〜１３０またはこれより多くのアミノ酸の可変領域を含み、カルボキシ末端部分は定常領域を含む。定常領域は、重鎖定常領域のアミノ酸配列に基づいて、アルファ（α）、デルタ（δ）、イプシロン（ε）、ガンマ（γ）、及びミュー（μ）と呼ばれる５つの異なるタイプ（例えばアイソタイプ）の１つとすることができる。異なる重鎖ではサイズが異なり、α、δ、及びγはおよそ４５０アミノ酸を含有する一方で、μ及びεはおよそ５５０アミノ酸を含有する。軽鎖と結合すると、これらの異なるタイプの重鎖は、それぞれＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、及びＩｇＭという抗体の５つのよく知られたクラス（例えば、アイソタイプ）を生じ、ＩｇＧには４つのサブクラス、すなわちＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、及びＩｇＧ４が含まれる。重鎖はヒト重鎖とすることができる。
【０１５３】
用語「軽鎖」は、抗体に関して用いる場合、約２５ｋＤａのポリペプチド鎖のことをいい、そのアミノ末端部分は約１００〜約１１０またはこれより多くのアミノ酸の可変領域を含み、カルボキシ末端部分は定常領域を含む。軽鎖の概ねの長さは、２１１〜２１７個のアミノ酸分である。定常ドメインのアミノ酸配列に基づいてカッパ（κ）またはラムダ（λ）と呼ばれる２つの異なるタイプがある。軽鎖アミノ酸配列は当該技術分野において公知である。軽鎖はヒト軽鎖とすることができる。
【０１５４】
用語「可変領域」、「可変ドメイン」、「Ｖ領域」、または「Ｖドメイン」は、一般に軽鎖または重鎖のアミノ末端に位置し、重鎖では約１２０〜１３０アミノ酸及び軽鎖では約１００〜１１０アミノ酸の長さを有する、抗体の軽鎖または重鎖の一部のことをいい、特定の抗体それぞれの特定の抗原に対する結合及び特異性に用いられる。重鎖の可変領域は「ＶＨ」と呼ばれる場合がある。軽鎖の可変領域は「ＶＬ」と呼ばれる場合がある。用語「可変」は、可変領域の特定のセグメントの配列が抗体の間で広く異なることを意味する。Ｖ領域は、抗原結合を媒介し、かつ特定の抗体の特定の抗原に対する特異性を定める。しかしながら、可変性は、可変領域の１１０アミノ酸の全長にわたって均等に分布しているわけではない。むしろ、Ｖ領域は、それぞれ９〜１２アミノ酸長の「超可変領域」と呼ばれる可変性が高い（例えば、極度に可変性が高い）短い領域によって隔てられた、約１５〜３０アミノ酸のフレームワーク領域（ＦＲ）と呼ばれる可変性が低い（例えば、比較的不変の）連なりからなる。重鎖及び軽鎖の可変領域はそれぞれ、概してβシート構造をとる４つのＦＲを含み、ＦＲは３つの超可変領域によって連結されており、超可変領域は、βシート構造を連結するループを形成し、場合によってはβシート構造の一部を形成する。各鎖中の超可変領域はＦＲによって互いに近くに位置し、他の鎖の超可変領域とともに、抗体の抗原結合部位の形成に寄与する（例えば、Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ（５ｔｈ  ｅｄ．１９９１）を参照）。定常領域は抗原への抗体の結合に直接関与しないが、様々なエフェクター機能、例えば、抗体依存性細胞傷害性（ＡＤＣＣ）及び補体依存性細胞傷害性（ＣＤＣ）における抗体の関与などを示す。可変領域は異なる抗体間で配列が広く異なる。具体的な実施形態において、可変領域はヒト可変領域である。
【０１５５】
用語「Ｋａｂａｔにおける可変領域残基の番号付け」または「Ｋａｂａｔにおけるアミノ酸位の番号付け」及びそれらの変化形は、Ｋａｂａｔら（上記）における抗体の集合物の重鎖可変領域または軽鎖可変領域に用いられる番号付けシステムを指す。この番号付けシステムを用いると、実際の直鎖アミノ酸配列は、可変ドメインのＦＲまたはＣＤＲの短縮、または挿入に相当するより少ないまたは追加のアミノ酸を含む場合がある。例えば、重鎖可変ドメインは、残基５２の後の単一のアミノ酸挿入（Ｋａｂａｔによると残基５２ａ）ならびに残基８２の後の３つの挿入残基（例えば、Ｋａｂａｔによると残基８２ａ、８２ｂ、及び８２ｃなど）を含み得る。残基のＫａｂａｔ番号付けは、所与の抗体について、抗体の配列の相同な領域における「標準」Ｋａｂａｔ番号付け配列とのアラインメントによって決定され得る。Ｋａｂａｔ番号付けシステムは、一般に可変ドメインにおける残基（およそ、軽鎖の残基１〜１０７及び重鎖の残基１〜１１３）について言及する場合に用いられる（例えば、Ｋａｂａｔら（上記））。「ＥＵ番号付けシステム」または「ＥＵインデックス」は、一般に免疫グロブリン重鎖定常領域内の残基について言及する場合に用いられる（例えば、Ｋａｂａｔら（上記）で報告されているＥＵインデックス）。「ＫａｂａｔにおけるＥＵインデックス」は、ヒトＩｇＧ  １  ＥＵ抗体の残基番号付けを指す。他の番号付けシステムが、例えば、ＡｂＭ、Ｃｈｏｔｈｉａ、Ｃｏｎｔａｃｔ、ＩＭＧＴ、及びＡＨｏｎによって記載されている。
【０１５６】
「ＣＤＲ」は、免疫グロブリン（Ｉｇもしくは抗体）ＶＨ  βシートフレームワークの非フレームワーク領域中の３つの超可変領域（Ｈ１、Ｈ２もしくはＨ３）のうちの１つ、または抗体ＶＬ  βシートフレームワークの非フレームワーク領域中の３つの超可変領域（Ｌ１、Ｌ２もしくはＬ３）のうちの１つのことをいう。したがって、ＣＤＲはフレームワーク領域配列中に散在した可変領域配列である。ＣＤＲ領域は当業者にとって公知であり、例えば、Ｋａｂａｔによって抗体可変（Ｖ）ドメイン中で最も超可変性の領域と定義されている（Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．，１９９７，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２５２：６６０９−１６；Ｋａｂａｔ，１９７８，Ａｄｖ．Ｐｒｏｔ．Ｃｈｅｍ．３２：１−７５）。ＣＤＲ領域配列は、Ｃｈｏｔｈｉａによっても、保存されたβシートフレームワークの一部でなく、そのため、異なるコンフォメーションに適応することのできる残基と構造的に定義されている（Ｃｈｏｔｈｉａ  ａｎｄ  Ｌｅｓｋ，１９８７，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１−１７）。両方の用語とも当該技術分野においてよく認知されている。ＣＤＲ領域配列は、ＡｂＭ、Ｃｏｎｔａｃｔ、及びＩＭＧＴによっても定義されている。カノニカル抗体可変領域中のＣＤＲの位置は、多数の構造の比較によって決定されている（Ａｌ−Ｌａｚｉｋａｎｉ  ｅｔ  ａｌ．，１９９７，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２７３：９２７−４８；Ｍｏｒｅａ  ｅｔ  ａｌ．，２０００，Ｍｅｔｈｏｄｓ  ２０：２６７−７９）。超可変領域中の残基の数は異なる抗体で様々であるので、カノニカル位に対する追加の残基は慣習的に、カノニカル可変領域番号付け方式（Ａｌ−Ｌａｚｉｋａｎｉら（上記））における残基番号の隣にａ、ｂ、ｃなどを付けて番号付けされる。そのような命名法も同様に当業者にとって公知である。
【０１５７】
本明細書で使用される場合、「超可変領域」、「ＨＶＲ」、または「ＨＶ」という用語は、配列が超可変性であり、及び／または構造的に定義されたループを形成する抗体可変領域の領域を指す。一般に、抗体は６つの超可変領域を含み、このうち３つがＶＨにあり（Ｈ１、Ｈ２、Ｈ３）、３つがＶＬにある（Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３）。いくつかの超可変領域記述法が使用されており、本明細書に包含される。Ｋａｂａｔ相補性決定領域（ＣＤＲ）は、配列可変性に基づくものであり、最も一般的に使用されている（例えば、Ｋａｂａｔら（上記）を参照）。Ｃｈｏｔｈｉａは、代わりに、構造ループの位置を指す（例えば、Ｃｈｏｔｈｉａ  ａｎｄ  Ｌｅｓｋ，１９８７，Ｊ．  Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１−１７を参照）。Ｃｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲ−Ｈ１ループの末端は、Ｋａｂａｔ番号付け規則を用いて番号付けした場合、ループの長さに応じてＨ３２〜Ｈ３４の間で変化する（これは、Ｋａｂａｔ番号付け方式ではＨ３５Ａ及びＨ３５Ｂに挿入があるためであり、３５Ａも３５Ｂも存在しなければ、ループは３２で終了し、３５Ａのみ存在すれば、ループは３３で終了し、３５Ａ及び３５Ｂの両方が存在すれば、ループは３４で終了する）。ＡｂＭ超可変領域は、ＫａｂａｔのＣＤＲとＣｈｏｔｈｉａの構造的ループとの折衷物であり、Ｏｘｆｏｒｄ  ＭｏｌｅｃｕｌａｒのＡｂＭ抗体モデリングソフトウェアによって使用されている（例えば、Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ  Ｖｏｌ．２（Ｋｏｎｔｅｒｍａｎｎ  ａｎｄ  Ｄｕｂｅｌ  ｅｄｓ．，２ｄ  ｅｄ．２０１０）を参照）。「ｃｏｎｔａｃｔ」超可変領域は、利用可能な複合体結晶構造の分析に基づく。これらの超可変領域またはＣＤＲのそれぞれからの残基を以下に記載する。
【０１５８】
最近、ＩｍＭｕｎｏＧｅｎｅＴｉｃｓ（ＩＭＧＴ）Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ  Ｓｙｓｔｅｍ（登録商標）という汎用番号付けシステムが開発され、広く採用されている（Ｌａｆｒａｎｃ  ｅｔ  ａｌ．，２００３，Ｄｅｖ．Ｃｏｍｐ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２７（１）：５５−７７）。ＩＭＧＴは、ヒト及び他の脊椎動物の免疫グロブリン（ＩＧ）、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）、及び主要組織適合性複合体（ＭＨＣ）に特化した統合情報システムである。本明細書では、アミノ酸配列及び軽鎖または重鎖中の位置の両方の観点でＣＤＲという。免疫グロブリン可変ドメインの構造中のＣＤＲの「位置」は、種間で保存されており、ループと呼ばれる構造中に存在するので、構造的特徴に従って可変ドメイン配列をアラインメントする番号付けシステムを用いることによって、ＣＤＲ及びフレームワーク残基が容易に同定される。この情報は、典型的にはヒト抗体由来の受容体フレームワークへのある種の免疫グロブリン由来のＣＤＲ残基の移植及び置換に用いることができる。別の番号付けシステム（ＡＨｏｎ）が、Ｈｏｎｅｇｇｅｒ  ａｎｄ  Ｐｌｕｃｋｔｈｕｎ，２００１，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．３０９：６５７−７０によって開発されている。例えばＫａｂａｔ番号付けシステムをはじめとする番号付けシステムとＩＭＧＴ固有番号付けシステムとの対応は、当業者にとって公知である（例えば、Ｋａｂａｔ（上記）；Ｃｈｏｔｈｉａ  ａｎｄ  Ｌｅｓｋ（上記）；Ｍａｒｔｉｎ（上記）；Ｌｅｆｒａｎｃら（上記）を参照）。いくつかの実施形態において、ＣＤＲはＩＭＧＴ番号付けシステムによって定義される通りである。他の実施形態において、ＣＤＲはＫａｂａｔ番号付けシステムによって定義される通りである。ある実施形態において、ＣＤＲはＡｂＭ番号付けシステムによって定義される通りである。他の実施形態において、ＣＤＲはＣｈｏｔｈｉａシステムによって定義される通りである。さらに他の実施形態において、ＣＤＲはＣｏｎｔａｃｔ番号付けシステムによって定義される通りである。
【表１】
2018533973.tif 000003
【０１５９】
超可変領域は、以下の「伸長超可変領域」を含み得る：ＶＬ中の２４−３６または２４−３４（Ｌ１）、４６−５６または５０−５６（Ｌ２）、及び８９−９７または８９−９６（Ｌ３）、ならびにＶＨ中の２６−３５または２６−３５Ａ（Ｈ１）、５０−６５または４９−６５（Ｈ２）、及び９３−１０２、９４−１０２、または９５−１０２（Ｈ３）。本明細書で用いる場合、用語「ＨＶＲ」及び「ＣＤＲ」は同じ意味で用いる。
【０１６０】
用語「定常領域」または「定常ドメイン」は、抗原への抗体の結合に直接関与しないが、様々なエフェクター機能、例えばＦｃ受容体との相互作用などを示す軽鎖及び重鎖のカルボキシ末端部分のことをいう。この用語は、抗原結合部位を含有する可変領域である免疫グロブリンの残りの部分と比較してより保存されたアミノ酸配列を有する免疫グロブリン分子の部分を指す。定常領域は、重鎖のＣＨ１、ＣＨ２、及びＣＨ３領域ならびに軽鎖のＣＬ領域を含有し得る。
【０１６１】
用語「フレームワーク」または「ＦＲ」は、ＣＤＲに隣接する可変領域残基のことをいう。ＦＲ残基は、例えば、キメラ、ヒト化、ヒト、ドメイン抗体、ダイアボディ、直鎖抗体、及び二重特異性抗体に存在する。ＦＲ残基は超可変領域残基またはＣＤＲ残基以外の可変ドメイン残基である。
【０１６２】
本明細書における用語「Ｆｃ領域」は、免疫グロブリン重鎖のＣ末端領域を定義するために用いられ、例えば、天然配列Ｆｃ領域、組換えＦｃ領域、及びバリアントＦｃ領域が含まれる。免疫グロブリン重鎖のＦｃ領域の境界は変化し得るが、ヒトＩｇＧ重鎖Ｆｃ領域は多くの場合、Ｃｙｓ２２６位のアミノ酸残基から、またはＰｒｏ２３０から、そのカルボキシル末端まで伸びると定義される。Ｆｃ領域のＣ末端リシン（ＥＵ番号付け方式によると残基４４７）は、例えば、抗体の産生もしくは精製の間に、または抗体の重鎖をコードする核酸を組換え操作することによって、除去されてもよい。したがって、インタクトな抗体の組成物は、全Ｋ４４７残基が除去された抗体集団、Ｋ４４７残基が除去されない抗体集団、及びＫ４４７残基を有する抗体と有しない抗体との混合物を有する抗体集団を含んでもよい。
【０１６３】
「機能的Ｆｃ領域」は、天然配列Ｆｃ領域の「エフェクター機能」を保有する。例示的な「エフェクター機能」としては、Ｃ１ｑ結合；ＣＤＣ；Ｆｃ受容体結合；ＡＤＣＣ；ファゴサイトーシス；細胞表面受容体（例えば、Ｂ細胞受容体）の下方調節などが挙げられる。そのようなエフェクター機能は、一般に、Ｆｃ領域と結合領域または結合ドメイン（例えば、抗体可変領域またはドメイン）との結合を必要とし、開示するような様々なアッセイを使用して評価することができる。
【０１６４】
「天然配列Ｆｃ領域」は、天然に存在するＦｃ領域のアミノ酸配列と同一であり、ヒトによる操作、改変、及び／または変化（例えば、単離、精製、選別、可変領域などの他の配列の包含または混合）が行われていないアミノ酸配列を含む。天然配列ヒトＩｇＧ１  Ｆｃ領域には、天然配列ヒトＩｇＧ１  Ｆｃ領域（非Ａ及びＡアロタイプ）；天然配列ヒトＩｇＧ２  Ｆｃ領域；天然配列ヒトＩｇＧ３  Ｆｃ領域；及び天然配列ヒトＩｇＧ４  Ｆｃ領域、ならびにこれらの自然発生バリアントが含まれる。例えば、天然ヒトＩｇＧ１  Ｆｃ領域アミノ酸配列を以下に示す。
【化１】
2018533973.tif 000004
（配列番号３６、Ｋ３２２を強調）
例示的な天然ヒトＩｇＧ４  Ｆｃ領域配列を以下に示す。
【化２】
2018533973.tif 000005
（配列番号３８、Ｓ２２８及びＬ２３５を強調）
【０１６５】
「バリアントＦｃ領域」は、少なくとも１つのアミノ酸改変（例えば、置換、付加、または欠失）によって天然配列Ｆｃ領域のものとは異なるアミノ酸配列を含む。ある実施形態において、バリアントＦｃ領域は、天然配列Ｆｃ領域または親ポリペプチドのＦｃ領域と比較して少なくとも１個のアミノ酸置換、例えば、約１個〜約１０個のアミノ酸置換、または、約１個〜約５個のアミノ酸置換を、天然配列Ｆｃ領域または親ポリペプチドのＦｃ領域内に有する。本明細書におけるバリアントＦｃ領域は、天然配列Ｆｃ領域及び／または親ポリペプチドのＦｃ領域と少なくとも約８０％の相同性、またはそれらと少なくとも約９０％の相同性、例えば、それらと少なくとも約９５％の相同性を有することができる。例えば、ヒトＩｇＧ１  Ｆｃアミノ酸配列中の３３２位で１つのアミノ酸ＫがＡに変化したバリアントであるＩｇＧ１−Ｋ３２２Ａ  Ｆｃ領域を以下に示す。
【化３】
2018533973.tif 000006
（配列番号３７、Ｋ３２２Ａ置換を強調）
ヒトＩｇＧ４  Ｆｃアミノ酸配列中の２２８位で１つのアミノ酸ＳがＰに変化した例示的なバリアントであるＩｇＧ４Ｐ  Ｆｃ領域を以下に示す。
【化４】
2018533973.tif 000007
（配列番号３９、Ｓ２２８Ｐ置換を強調）
ヒトＩｇＧ４  Ｆｃアミノ酸配列中の２２８及び２３５位で２つのアミノ酸が変化した例示的なバリアントであるＩｇＧ４ＰＥ  Ｆｃ領域を以下に示す。
【化５】
2018533973.tif 000008
（配列番号４０、Ｓ２２８Ｐ及びＬ２３５Ｅ置換を強調）
【０１６６】
用語「バリアント」は、ＰＤ−１または抗ＰＤ−１抗体との関係で用いる場合、天然または非改変配列と比較して１つ以上（例えば、約１〜約２５、約１〜約２０、約１〜約１５、約１〜約１０、または約１〜約５など）のアミノ酸配列置換、欠失、及び／または付加を含むペプチドまたはポリペプチドのことをいう場合がある。例えば、ＰＤ−１バリアントは、天然ＰＤ−１のアミノ酸配列に対する１つ以上（例えば、約１〜約２５、約１〜約２０、約１〜約１５、約１〜約１０、または約１〜約５など）の変化の結果生じ得る。同様に例として、抗ＰＤ−１抗体のバリアントは、天然のまたは事前に改変されていない抗ＰＤ−１抗体のアミノ酸配列に対する１つ以上（例えば、約１〜約２５、約１〜約２０、約１〜約１５、約１〜約１０、または約１〜約５など）の変化の結果生じ得る。バリアントは自然発生、例えば対立遺伝子またはスプライスバリアントなどの場合もあれば、人工的に構築される場合もある。ポリペプチドバリアントは、バリアントをコードする対応する核酸分子から調製され得る。具体的な実施形態において、ＰＤ−１バリアントまたは抗ＰＤ−１抗体バリアントは、それぞれ少なくともＰＤ−１または抗ＰＤ−１抗体の機能的活性を保持する。具体的な実施形態において、抗ＰＤ−１抗体バリアントは、ＰＤ−１に結合する、及び／またはＰＤ−１活性に対し拮抗的である。具体的な実施形態において、抗ＰＤ−１抗体バリアントは、ＰＤ−１に結合する、及び／またはＰＤ−１活性に対し作用的である。ある実施形態において、バリアントは、ＰＤ−１または抗ＰＤ−１抗体ＶＨもしくはＶＬ領域もしくは小領域、例えば１つ以上のＣＤＲなどをコードする核酸分子の一塩基多型（ＳＮＰ）バリアントによってコードされる。
【０１６７】
「インタクト」抗体は、抗原結合部位に加えてＣＬならびに少なくとも重鎖定常領域ＣＨ１、ＣＨ２及びＣＨ３を含むものである。定常領域としては、ヒト定常領域またはそのアミノ酸配列バリアントが挙げられ得る。ある実施形態において、インタクト抗体は１つ以上のエフェクター機能を有する。
【０１６８】
「抗体断片」は、インタクト抗体の一部、例えばインタクト抗体の抗原結合または可変領域などを含む。抗体断片の例としては、限定はしないが、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、及びＦｖ断片；ダイアボディ及びジ−ダイアボディ（例えば、Ｈｏｌｌｉｇｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，１９９３，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．９０：６４４４−４８；Ｌｕ  ｅｔ  ａｌ．，２００５，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２８０：１９６６５−７２；Ｈｕｄｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，２００３，Ｎａｔ．Ｍｅｄ．９：１２９−３４；ＷＯ  ９３／１１１６１；ならびに米国特許第５，８３７，２４２号及び６，４９２，１２３号を参照）；一本鎖抗体分子（例えば、米国特許第４，９４６，７７８号；５，２６０，２０３号；５，４８２，８５８号；及び５，４７６，７８６号を参照）；二重可変ドメイン抗体（例えば、米国特許第７，６１２，１８１号を参照）；単一可変ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）（例えば、Ｗｏｏｌｖｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９９９，Ｉｍｍｕｎｏｇｅｎｅｔｉｃｓ  ５０：９８−１０１；及びＳｔｒｅｌｔｓｏｖ  ｅｔ  ａｌ．，２００４，Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ．１０１：１２４４４−４９を参照）；ならびに抗体断片から形成された多重特異性抗体が挙げられる。
【０１６９】
治療用抗体の「機能的断片」、「結合断片」、または「抗原結合断片」は、インタクト抗体に起因する生物学的機能のいくつかまたはすべてでないとしても少なくとも１つ、少なくとも標的抗原への結合を含む機能を示す（例えば、ＰＤ−１結合断片またはＰＤ−１に結合する断片）。
【０１７０】
用語「融合タンパク質」は、本明細書で用いる場合、抗体のアミノ酸配列及び異種ポリペプチドまたはタンパク質のアミノ酸配列（例えば、通常であればその抗体の一部でないポリペプチドまたはタンパク質（例えば、非抗ＰＤ−１抗原結合抗体））を含むポリペプチドのことをいう。用語「融合」は、ＰＤ−１または抗ＰＤ−１抗体との関係で用いる場合、ペプチドもしくはポリペプチド、もしくは断片、バリアント、及び／またはこれらの誘導体と異種ペプチドまたはポリペプチドとの接合のことをいう。ある実施形態において、融合タンパク質はＰＤ−１または抗ＰＤ−１抗体の生物活性を保持する。ある実施形態において、融合タンパク質はＰＤ−１抗体ＶＨ領域、ＶＬ領域、ＶＨ  ＣＤＲ（１、２、もしくは３つのＶＨ  ＣＤＲ）、及び／またはＶＬ  ＣＤＲ（１、２、もしくは３つのＶＬ  ＣＤＲ）を含み、この融合タンパク質はＰＤ−１エピトープ、ＰＤ−１断片、及び／またはＰＤ−１ポリペプチドに結合する。
【０１７１】
用語「天然」は、生物材料、例えば核酸分子、ポリペプチド、宿主細胞などとの関連で用いる場合、天然に存在し、人間による操作、改変、及び／または変化（例えば、単離、精製、選別）が行われていないもののことをいう。
【０１７２】
本明細書で提供する抗体は、重鎖及び／または軽鎖の一部分が、特定の種に由来するか、または特定の抗体クラスもしくはサブクラスに属する抗体における対応する配列と同一または相同である一方で、鎖（複数可）の残りが、別の種に由来するか、または別の抗体クラスもしくはサブクラスに属する抗体における対応する配列と同一または相同である「キメラ」抗体、ならびにかかる抗体の断片を含むことができるが、これは、それらが所望の生物活性を呈する場合に限る（米国特許第４，８１６，５６７号；及びＭｏｒｒｉｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９８４，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８１：６８５１−５５を参照）。
【０１７３】
非ヒト（例えばマウス）抗体の「ヒト化」形態は、天然ＣＤＲ残基が、所望の特異性、アフィニティー及び能力を有する非ヒト種、例えばマウス、ラット、ウサギ、または非ヒト霊長類など（例えば、ドナー抗体）の対応するＣＤＲ由来の残基によって置き換えられているヒト免疫グロブリン（例えば、レシピエント抗体）を含むキメラ抗体である。場合によっては、ヒト免疫グロブリンの１つ以上のＦＲ領域残基が対応する非ヒト残基によって置き換えられる。さらに、ヒト化抗体は、レシピエント抗体またはドナー抗体には見られない残基を含んでもよい。これらの改変は、抗体性能をさらに改良するために行われる。ヒト化抗体重鎖または軽鎖は、少なくとも１つ以上の可変領域の実質的にすべてを含むことができ、ＣＤＲのすべてまたは実質的にすべてが非ヒト免疫グロブリンのものに対応し、ＦＲのすべてまたは実質的にすべてがヒト免疫グロブリン配列のものである。ある実施形態において、ヒト化抗体は、免疫グロブリン定常領域（Ｆｃ）の少なくとも一部分、典型的にはヒト免疫グロブリンのものを含む。さらなる詳細については、Ｊｏｎｅｓ  ｅｔ  ａｌ．，１９８６，Ｎａｔｕｒｅ３２１：５２２−２５；Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９８８，Ｎａｔｕｒｅ  ３３２：３２３−２９；Ｐｒｅｓｔａ，１９９２，Ｃｕｒｒ．Ｏｐ．Ｓｔｒｕｃｔ．Ｂｉｏｌ．２：５９３−９６；Ｃａｒｔｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，１９９２，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８９：４２８５−８９；米国特許第６，８００，７３８号；６，７１９，９７１号；６，６３９，０５５号；６，４０７，２１３号；及び６，０５４，２９７号を参照。
【０１７４】
「ヒト抗体」は、ヒトにより産生される、及び／または本明細書で開示されるヒト抗体を作製するための技術のうちのいずれかを使用して産生された抗体のアミノ酸配列に対応するアミノ酸配列を有するものである。ヒト抗体のこの定義は、非ヒト抗原結合残基を含むヒト化抗体を具体的には除外する。ヒト抗体は、当該技術分野において公知の様々な技術を用いて産生することができ、ファージディスプレイライブラリー（Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍ  ａｎｄ  Ｗｉｎｔｅｒ，１９９１，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２７：３８１；Ｍａｒｋｓ  ｅｔ  ａｌ．，１９９１，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２２：５８１）及び酵母ディスプレイライブラリー（Ｃｈａｏ  ｅｔ  ａｌ．，２００６，Ｎａｔｕｒｅ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  １：７５５−６８）が挙げられる。Ｃｏｌｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ａｎｄ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｈｅｒａｐｙ  ７７（１９８５）；Ｂｏｅｒｎｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，１９９１，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４７（１）：８６−９５；及びｖａｎ  Ｄｉｊｋ  ａｎｄ  ｖａｎ  ｄｅ  Ｗｉｎｋｅｌ，２００１，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．５：３６８−７４に記載されている方法もヒトモノクローナル抗体の調製に利用可能である。ヒト抗体は、抗原攻撃に応答して当該抗体を産生するように改変されており、内因性遺伝子座は無効にされた遺伝子導入動物、例えば、マウスに抗原を投与することによって調製することができる（例えば、ＸＥＮＯＭＯＵＳＥ（商標）技術に関してＪａｋｏｂｏｖｉｔｓ，１９９５，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．６（５）：５６１  ６６；Ｂｒｕｇｇｅｍａｎｎ  ａｎｄ  Ｔａｕｓｓｉｎｇ，１９９７，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．８（４）：４５５−５８；ならびに米国特許第６，０７５，１８１号及び６，１５０，５８４号を参照）。また、例えば、ヒトＢ細胞ハイブリドーマ技術によって生成されるヒト抗体に関しては、Ｌｉ  ｅｔ  ａｌ．，２００６，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  １０３：３５５７−６２を参照。
【０１７５】
「アフィニティー成熟」抗体は、その１つ以上のＨＶＲに１つ以上の改変（例えば、変化、付加、及び／または欠失をはじめとするアミノ酸配列変異）を有し、結果として、そうした改変（複数可）を有しない親抗体と比較して、抗原に対する抗体のアフィニティーが向上しているものである。アフィニティー成熟抗体は、標的抗原に対してｎＭ、さらにはｐＭのアフィニティーを有することができる。アフィニティー成熟抗体は当該技術分野において公知の手順によって産生される。総説については、Ｈｕｄｓｏｎ  ａｎｄ  Ｓｏｕｒｉａｕ，２００３，Ｎａｔｕｒｅ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ  ９：１２９−３４；Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍ，２００５，Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２３：１１０５−１６；Ｑｕｉｒｏｚ  ａｎｄ  Ｓｉｎｃｌａｉｒ，２０１０，Ｒｅｖｉｓｔａ  Ｉｎｇｅｎｅｒｉａ  Ｂｉｏｍｅｄｉａ  ４：３９−５１を参照。
【０１７６】
「遮断」抗体または「アンタゴニスト」抗体は、それが結合する抗原の生物活性を阻害または低減するものである。例えば、遮断抗体またはアンタゴニスト抗体は、抗原の生物活性を実質的にまたは完全に阻害し得る。
【０１７７】
「アゴニスト」抗体は、応答を誘発する抗体、例えば、目的のポリペプチド（例えば、ＰＤ−Ｌ１）の機能的活性の少なくとも１つを模倣するものである。アゴニスト抗体としては、例えば、リガンド模倣体である抗体が挙げられるが、ここで、リガンドは細胞表面受容体に結合し、その結合が細胞間細胞シグナル伝達経路を介して細胞シグナル伝達または活性を誘発するものであり、この抗体は類似の細胞シグナル伝達または活性化を誘発する。ＰＤ−１の「アゴニスト」は、例えばＰＤ−１を発現する細胞内などで、ＰＤ−１の生物活性の１つ以上を活性化させることのできる、またはそれとは別様に増加させることのできる分子のことをいう。いくつかの実施形態において、ＰＤ−１のアゴニスト（例えば、本明細書に記載のアゴニスト抗体）は、例えば、ＰＤ−１タンパク質を発現する細胞の活性化及び／または細胞シグナル伝達経路を活性化させる、またはそれとは別様に増加させることによって作用し、それによって、アゴニストの不在下でのＰＤ−１媒介生物活性と比較して細胞のＰＤ−１媒介生物活性を増加させ得る。いくつかの実施形態において、本明細書で提供する抗体は、ＰＤ−１シグナル伝達を誘発する抗体をはじめとするＰＤ−１に対するアゴニスト抗体である。
【０１７８】
「結合アフィニティー」は一般に、分子（例えば、抗体などの結合タンパク質）の単一の結合部位とその結合パートナー（例えば、抗原）との間の非共有結合性相互作用の合計の強度のことをいう。別途指定されない限り、本明細書で使用されるとき、「結合アフィニティー」は、結合対のメンバー（例えば、抗体及び抗原）間の１：１の相互作用を反映する、本来の結合アフィニティーを指す。結合分子Ｘの、その結合パートナーＹに対するアフィニティーは一般に、解離定数（ＫＤ）によって表すことができる。アフィニティーは、本明細書に記載される方法を含む、当該技術分野で既知の一般的な方法によって測定することができる。低アフィニティー抗体は、概して、抗原にゆっくり結合し、容易に解離する傾向があるが、高アフィニティー抗体は、概して、抗原により早く結合し、より長く結合したままである傾向がある。結合アフィニティーの種々の測定方法が当該技術分野で知られており、これらのいずれも、本開示において使用することができる。具体的な例示的実施形態としては以下が挙げられる。一実施形態において、「ＫＤ」または「ＫＤ値」は、当該技術分野において公知のアッセイによって、例えば結合アッセイによって測定され得る。ＫＤは、例えば、目的の抗体のＦａｂ型及び抗原で実施されるＲＩＡで測定され得る（Ｃｈｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９９９，Ｊ．Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ  ２９３：８６５  ８１）。ＫＤまたはＫＤ値は、Ｂｉａｃｏｒｅ（登録商標）による、例えば、Ｂｉａｃｏｒｅ（登録商標）ＴＭ−２０００またはＢｉａｃｏｒｅ（登録商標）ＴＭ−３０００を用いた表面プラズモン共鳴アッセイを用いることによって、または例えばＯｃｔｅｔ（登録商標）ＱＫ３８４システムを用いたバイオレイヤー干渉法によっても測定され得る。「オン速度」または「会合の速度」または「会合速度」または「ｋｏｎ」も、例えば、Ｂｉａｃｏｒｅ（登録商標）ＴＭ−２０００もしくはＢｉａｃｏｒｅ（登録商標）ＴＭ−３０００、またはＯｃｔｅｔ（登録商標）ＱＫ３８４システムを用いて、上記と同じ表面プラズモン共鳴またはバイオレイヤー干渉法で求められ得る。
【０１７９】
用語「阻害」または「阻害する」は、本明細書で用いる場合、部分的な（例えば１％、２％、５％、１０％、２０％、２５％、５０％、７５％、９０％、９５％、９９％など）または完全な（すなわち１００％）阻害のことをいう。
【０１８０】
用語「減衰させる」、「減衰」、または「減衰した」は、本明細書で用いる場合、特性、活性、作用、または値の部分的な（例えば１％、２％、５％、１０％、２０％、２５％、５０％、７５％、９０％、９５％、９９％など）または完全な（すなわち１００％）低下のことをいう。
【０１８１】
「抗体エフェクター機能」は、抗体のＦｃ領域（例えば、天然配列Ｆｃ領域またはアミノ酸配列バリアントＦｃ領域）に起因する生物活性を指し、抗体のアイソタイプに応じて多様である。抗体エフェクター機能の例としては、限定はしないが、Ｃ１ｑ結合；ＣＤＣ；Ｆｃ受容体結合；ＡＤＣＣ；ファゴサイトーシス；細胞表面受容体（例えば、Ｂ細胞受容体）の下方調節；及びＢ細胞活性化が挙げられる。
【０１８２】
「Ｔ細胞エフェクター機能」は、限定はしないが、細胞傷害性Ｔ細胞、Ｔヘルパー細胞、及びメモリーＴ細胞をはじめとする様々な種類のＴ細胞に起因する生物活性のことをいう。Ｔ細胞エフェクター機能の例としては、Ｔ細胞増殖の増加、サイトカインの分泌、サイトトキシンの放出、膜結合型分子の発現、標的細胞の殺傷、マクロファージの活性化、及びＢ細胞の活性化が挙げられる。
【０１８３】
「抗体依存性細胞媒介性細胞傷害性」または「ＡＤＣＣ」は、特定の細胞傷害性細胞（例えば、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、好中球、及びマクロファージ）上に存在するＦｃ受容体（ＦｃＲ）に分泌型免疫グロブリンが結合することにより、これらの細胞傷害性エフェクター細胞が抗原担持標的細胞に特異的に結合し、続いてサイトトキシンにより標的細胞を死滅させることを可能にする、細胞傷害性の形態を指す。抗体は、細胞傷害性細胞を「武装」し、そのような殺傷には必須である。ＡＤＣＣを媒介するための主要な細胞であるＮＫ細胞は、ＦｃγＲＩＩＩのみを発現するが、一方で単球は、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩ、及びＦｃγＲＩＩＩを発現する。造血細胞上でのＦｃＲ発現は公知である（例えば、Ｒａｖｅｔｃｈ  ａｎｄ  Ｋｉｎｅｔ，１９９１，Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．９：４５７  ９２を参照）。目的の分子のＡＤＣＣ活性を評価するために、インビトロＡＤＣＣアッセイ（例えば、米国特許第５，５００，３６２号及び５，８２１，３３７号を参照）を実施することができる。そのようなアッセイに有用なエフェクター細胞としては、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）及びナチュラルキラー（ＮＫ）細胞が挙げられる。代替または追加として、目的の分子のＡＤＣＣ活性は、インビボで、例えば動物モデルにおいて評価され得る（例えば、Ｃｌｙｎｅｓ  ｅｔ  ａｌ．，１９９８，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９５：６５２−５６を参照）。ＡＤＣＣ活性がほとんどまたは全くない抗体が選択して用いられ得る。
【０１８４】
「抗体依存性細胞ファゴサイトーシス」または「ＡＤＣＰ」は、特定のファゴサイトーシス細胞（例えば、好中球、単球、及びマクロファージ）上に存在するＦｃ受容体（ＦｃＲ）に免疫グロブリンが結合することにより、これらのファゴサイトーシス細胞が抗原担持標的細胞に特異的に結合し、続いて標的細胞を死滅させることを可能にする、単球またはマクロファージ媒介ファゴサイトーシスによる標的細胞の破壊のことをいう。目的の分子のＡＤＣＰ活性を評価するために、インビトロＡＤＣＰアッセイ（例えば、Ｂｒａｃｈｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，２００７，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ  ３２３：１６０−７１を参照）を実施することができる。そのようなアッセイに有用なファゴサイトーシス細胞としては、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）、ＰＢＭＣから精製した単球、または単核型に分化したＵ９３７細胞が挙げられる。代替または追加として、目的の分子のＡＤＣＰ活性は、インビボで、例えば動物モデルにおいて評価され得る（例えば、Ｗａｌｌａｃｅ  ｅｔ  ａｌ．，２００１，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ  ２４８：１６７  ８２を参照）。ＡＤＣＰ活性がほとんどまたは全くない抗体が選択して用いられ得る。
【０１８５】
「Ｆｃ受容体」または「ＦｃＲ」は、抗体のＦｃ領域に結合する受容体を表す。例示的なＦｃＲは天然配列ヒトＦｃＲである。さらに、例示的なＦｃＲは、ＩｇＧ抗体に結合するもの（例えば、ガンマ受容体）であり、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩ、及びＦｃγＲＩＩＩサブクラスの受容体が挙げられ、これらの受容体の対立遺伝子バリアント及び選択的スプライシング形態も含む。ＦｃγＲＩＩ受容体には、ＦｃγＲＩＩＡ（「活性化受容体」）及びＦｃγＲＩＩＢ（「阻害受容体」）が含まれ、これらは、主にその細胞質ドメインが異なる類似のアミノ酸配列を有する（例えば、Ｄａｅｒｏｎ，１９９７，Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５：２０３−３４を参照）。様々なＦｃＲが公知である（例えば、Ｒａｖｅｔｃｈ  ａｎｄ  Ｋｉｎｅｔ，１９９１，Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．９：４５７−９２；Ｃａｐｅｌ  ｅｔ  ａｌ．，１９９４，Ｉｍｍｕｎｏｍｅｔｈｏｄｓ  ４：２５−３４；及びｄｅ  Ｈａａｓ  ｅｔ  ａｌ．，１９９５，Ｊ．Ｌａｂ．Ｃｌｉｎ．Ｍｅｄ．１２６：３３０−４１を参照）。他のＦｃＲも、将来同定されるものを含めて、本明細書における「ＦｃＲ」という用語に包含される。この用語はまた、母体ＩｇＧの胎児への移送を担う胎児性受容体ＦｃＲｎを含む（例えば、Ｇｕｙｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，１９７６，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１１７：５８７−９３；及びＫｉｍ  ｅｔ  ａｌ．，１９９４，Ｅｕ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２４：２４２９−３４を参照）。ＦｃＲへの結合が改善または減少された抗体バリアントが記載されている（例えば、ＷＯ  ２０００／４２０７２；米国特許第７，１８３，３８７号；７，３３２，５８１号；及び７．３３５，７４２号；Ｓｈｉｅｌｄｓ  ｅｔ  ａｌ．２００１，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．９（２）：６５９１−６０４を参照）。
【０１８６】
「補体依存性細胞傷害性」または「ＣＤＣ」とは、補体の存在下での標的細胞の溶解を指す。古典的補体経路の活性化は、コグネイト抗原に結合した（適当なサブクラスの）抗体への補体系の第１成分（Ｃ１ｑ）の結合によって開始される。補体活性化を評価するために、ＣＤＣアッセイ（例えば、Ｇａｚｚａｎｏ−Ｓａｎｔｏｒｏ  ｅｔ  ａｌ．，１９９６，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ  ２０２：１６３を参照）が実施され得る。Ｆｃ領域アミノ酸配列が改変されたポリペプチドバリアント（バリアントＦｃ領域を有するポリペプチド）及びＣ１ｑ結合能力の増加または低減が記載されている（例えば、米国特許第６，１９４，５５１号；ＷＯ  １９９９／５１６４２；Ｉｄｕｓｏｇｉｅ  ｅｔ  ａｌ．，２０００，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６４：４１７８−８４を参照）。ＣＤＣ活性がほとんどまたは全くない抗体が選択して用いられ得る。
【０１８７】
用語「同一性」とは、配列をアラインメントして比較することによって判定される、２つ以上のポリペプチド分子または２つ以上の核酸分子の配列間の関係のことをいう。参照ポリペプチド配列に対する「アミノ酸配列同一性パーセント（％）」は、最大の配列同一性パーセントが得られるように配列をアライメントし、必要な場合はギャップを導入した後の、いかなる保存的置換も配列同一性の一部とみなさない、参照ポリペプチド配列中のアミノ酸残基と同一である候補配列中のアミノ酸残基のパーセンテージとして定義される。アミノ酸配列同一性パーセントを決定する目的のためのアライメントは、当該技術分野における技術の範囲内である種々の方式で、例えばＢＬＡＳＴ、ＢＬＡＳＴ−２、ＡＬＩＧＮ、またはＭＥＧＡＬＩＧＮ（ＤＮＡＳｔａｒ，Ｉｎｃ．）ソフトウェアなどの、公的に利用可能なコンピュータソフトウェアを使用して、達成することができる。当業者は、比較されている配列の完全長にわたる最大のアライメントを得るために必要とされる任意のアルゴリズムを含む、配列をアライメントするために適切なパラメータを決定することができる。
【０１８８】
アミノ酸残基／位の「改変」は、元のアミノ酸配列と比較した直線状アミノ酸配列の変化のことをいい、この変化は当該アミノ酸残基／位が関わる配列変異の結果生じる。例えば、典型的な改変としては、別のアミノ酸での残基の置換（例えば、保存的もしくは非保存的置換）、当該残基／位の隣への１つ以上（例えば、一般に５、４、もしくは３未満）のアミノ酸の挿入、及び／または当該残基／位の欠失が挙げられる。
【０１８９】
ポリペプチドとの関連において、用語「アナログ」は、本明細書で用いる場合、ＰＤ−１ポリペプチド、ＰＤ−１ポリペプチドの断片、または抗ＰＤ−１抗体に類似または同一の機能を有するポリペプチドのことをいうが、必ずしもＰＤ−１ポリペプチド、ＰＤ−１ポリペプチドの断片、もしくは抗ＰＤ−１抗体と類似もしくは同一のアミノ酸配列を含む必要なく、またはＰＤ−１ポリペプチド、ＰＤ−１ポリペプチドの断片、もしくは抗ＰＤ−１抗体と類似もしくは同一の構造を有する必要はない。類似のアミノ酸配列を有するポリペプチドは、以下の少なくとも１つを満たすポリペプチドのことをいう：（ａ）本明細書で提供するＰＤ−１ポリペプチド、ＰＤ−１ポリペプチドの断片、もしくは抗ＰＤ−１抗体アミノ酸配列と少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、もしくは少なくとも９９％同一のアミノ酸配列を有するポリペプチド；（ｂ）少なくとも５アミノ酸残基、少なくとも１０アミノ酸残基、少なくとも１５アミノ酸残基、少なくとも２０アミノ酸残基、少なくとも２５アミノ酸残基、少なくとも３０アミノ酸残基、少なくとも４０アミノ酸残基、少なくとも５０アミノ酸残基、少なくとも６０アミノ残基、少なくとも７０アミノ酸残基、少なくとも８０アミノ酸残基、少なくとも９０アミノ酸残基、少なくとも１００アミノ酸残基、少なくとも１２５アミノ酸残基、もしくは少なくとも１５０アミノ酸残基の、本明細書に記載のＰＤ−１ポリペプチド、ＰＤ−１ポリペプチドの断片、もしくは抗ＰＤ−１抗体（もしくはそのＶＨもしくはＶＬ領域）をコードするヌクレオチド配列に、ストリンジェントな条件の下でハイブリダイズするヌクレオチド配列によってコードされるポリペプチド（例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ（２００１）；及びＭａｎｉａｔｉｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ（１９８２）を参照）；または（ｃ）本明細書に記載のＰＤ−１ポリペプチド、ＰＤ−１ポリペプチドの断片、もしくは抗ＰＤ−１抗体（もしくはそのＶＨもしくはＶＬ領域）をコードするヌクレオチド配列と少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、もしくは少なくとも９９％同一のヌクレオチド配列によってコードされるポリペプチド。本明細書で提供するＰＤ−１ポリペプチド、ＰＤ−１ポリペプチドの断片、または抗ＰＤ−１抗体と類似の構造を有するポリペプチドは、本明細書で提供するＰＤ−１ポリペプチド、ＰＤ−１ポリペプチドの断片、または抗ＰＤ−１抗体と類似の二次、三次、または四次構造を有するポリペプチドのことをいう。ポリペプチドの構造は、限定はしないが���Ｘ線結晶構造解析、核磁気共鳴、及び結晶学的電子顕微鏡法をはじめとする当業者にとって公知の方法によって決定することができる。
【０１９０】
ポリペプチドとの関連において、用語「誘導体」は、本明細書で用いる場合、アミノ酸残基置換、欠失、または付加の導入によって改変されている、ＰＤ−１ポリペプチド、ＰＤ−１ポリペプチドの断片、またはＰＤ−１ポリペプチドに結合する抗体のアミノ酸配列を含むポリペプチドのことをいう。用語「誘導体」は、本明細書で用いる場合、例えば、ポリペプチドへの任意のタイプの分子の共有結合によって、化学修飾されている、ＰＤ−１ポリペプチド、ＰＤ−１ポリペプチドの断片、またはＰＤ−１ポリペプチドに結合する抗体のこともいう。例えば、限定するものではないが、ＰＤ−１ポリペプチド、ＰＤ−１ポリペプチドの断片、または抗ＰＤ−１抗体は、例えば、グリコシル化、アセチル化、ペグ化、リン酸化、アミド化、公知の保護／ブロック基による誘導体化、タンパク質分解切断、化学的切断、細胞リガンドまたは他のタンパク質への連結などの増加または減少によって化学修飾され得る。誘導体は、付加される分子の種類または位置のいずれかが自然発生のまたは元のペプチドまたはポリペプチドとは異なるように修飾される。誘導体は、ペプチドまたはポリペプチド上に本来存在する１つ以上の化学基の欠失をさらに含む。さらに、ＰＤ−１ポリペプチド、ＰＤ−１ポリペプチドの断片、または抗ＰＤ−１抗体の誘導体は、１つ以上の非古典的アミノ酸を含有し得る。ポリペプチド誘導体は、本明細書で提供するＰＤ−１ポリペプチド、ＰＤ−１ポリペプチドの断片、または抗ＰＤ−１抗体と類似または同一の機能を有する。
【０１９１】
用語「宿主」は、本明細書で用いる場合、動物、例えば哺乳類（例えば、ヒト）などのことをいう。
【０１９２】
用語「宿主細胞」は、本明細書で用いる場合、核酸分子を形質移入され得る特定の対象細胞及びそのような細胞の子孫または潜在的な子孫のことをいう。そのような細胞の子孫は、世代を重ねるうちに生じ得る変異もしくは環境的な影響または宿主細胞ゲノム中への核酸分子の組込みのために、核酸分子を形質移入された親細胞と同一でない場合がある。
【０１９３】
用語「ベクター」は、宿主細胞中に核酸配列を導入するために、例えば本明細書に記載の抗ＰＤ−１抗体をコードする核酸配列をはじめとする核酸配列を担持または包含するために用いられる物質のことをいう。使用可能なベクターとしては、例えば、発現ベクター、プラスミド、ファージベクター、ウイルスベクター、エピソーム、及び人工染色体が挙げられ、宿主細胞の染色体中への安定組込みのために作用可能な選択配列またはマーカーを含むことができる。加えて、ベクターは１つ以上の選択マーカー遺伝子及び適切な発現制御配列を含むことができる。包含させることのできる選択マーカー遺伝子は、例えば、抗生物質もしくはトキシンに対する耐性をもたらすか、栄養要求性欠損を補うか、または培養培地中にはない不可欠な栄養を供給する。発現制御配列としては、構成的プロモーター及び誘導性プロモーター、転写エンハンサー、転写ターミネーターなどを挙げることができ、当該技術分野において公知である。２つ以上の核酸分子を共発現させる場合（例えば、抗体重鎖及び軽鎖または抗体ＶＨ及びＶＬの両方）、両方の核酸分子を、例えば、単一の発現ベクター中に、または別々の発現ベクター中に挿入することができる。単一ベクター発現では、コーディング核酸は、１つの共通の発現制御配列に、または異なる発現制御配列、例えば１つの誘導性プロモーター及び１つの構成的プロモーターなどに作用的に連結させることができる。宿主細胞内への核酸分子の導入は、当該技術分野において公知の方法を用いて確認することができる。そのような方法としては、例えば、核酸分析、例えばｍＲＮＡのノーザンブロットもしくはポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）増幅、遺伝子産物の発現に対するイムノブロッティングなど、または導入された核酸配列もしくはその対応する遺伝子産物の発現を試験するための他の好適な分析法が挙げられる。核酸分子は、所望の産生物（例えば、本明細書に記載の抗ＰＤ−１抗体）を産生するのに十分な量で発現させることが当業者には理解されており、さらに、当該技術分野において公知の方法を用いて、十分な発現を得るために発現レベルを最適化することができると理解されている。
【０１９４】
「単離核酸」は、他のゲノムＤＮＡ配列、ならびに天然配列に本来付随するタンパク質または複合体、例えばリボソーム及びポリメラーゼなどから実質的に分離されている核酸、例えばＲＮＡ、ＤＮＡ、または混合核酸である。「単離」核酸分子は、その核酸分子の天然起源中に存在する他の核酸分子から分離されているものである。さらに、「単離」核酸分子、例えばｃＤＮＡ分子などは、組換え技術によって産生した場合には他の細胞物質、もしくは培養培地を実質的に含まないか、または化学合成した場合には化学的前駆体もしくは他の化学薬品を実質的に含まないことができる。具体的な実施形態において、本明細書に記載の抗体をコードする１つ以上の核酸分子は単離または精製される。この用語は、その自然発生環境から取り出された核酸配列を包含し、組換えまたはクローン化ＤＮＡ単離体及び化学合成アナログまたは異種系によって生物学的に合成したアナログが含まれる。実質的に純粋な分子にはその分子の単離形態が含まれ得る。
【０１９５】
本明細書において同義的に用いられる、「ポリヌクレオチド」または「核酸」は、任意の長さのヌクレオチドのポリマーを指し、ＤＮＡ及びＲＮＡを含む。ヌクレオチドは、デオキシリボヌクレオチド、リボヌクレオチド、修飾ヌクレオチドもしくは塩基、及び／またはそれらのアナログ、またはＤＮＡもしくはＲＮＡポリメラーゼにより、もしくは合成反応によりポリマーに組み込むことができる任意の基質であり得る。ポリヌクレオチドは、メチル化ヌクレオチド及びそのアナログなどの修飾ヌクレオチドを含んでよい。本明細書で使用される場合、「オリゴヌクレオチド」は、短い、一般に一本鎖の合成ポリヌクレオチドのことをいい、必ずしもそうとは限らないが、一般に約２００ヌクレオチド長未満である。「オリゴヌクレオチド」及び「ポリヌクレオチド」という用語は、相互排他的ではない。ポリヌクレオチドに関する上記の説明は、等しく完全にオリゴヌクレオチドに適用可能である。本開示の抗ＰＤ−１抗体を産生する細胞としては、抗体をコードする核酸が導入された親ハイブリドーマ細胞ならびに細菌及び真核宿主細胞が挙げられ得る。好適な宿主細胞は下記で開示する。
【０１９６】
別途明記しない限り、本明細書に開示のいずれの一本鎖ポリヌクレオチド配列の左端も５’末端であり、二本鎖ポリヌクレオチド配列の左方向を５’方向と呼ぶ。新生ＲＮＡ転写物が５’から３’へ付加される方向を転写方向と呼び、ＲＮＡ転写物と同じ配列を有するＤＮＡ鎖上の配列領域で５’からＲＮＡ転写物の５’末端までを「上流配列」と呼び、ＲＮＡ転写物と同じ配列を有するＤＮＡ鎖上の配列領域で３’からＲＮＡ転写物の３’末端までを「下流配列」と呼ぶ。
【０１９７】
用語「コーディング核酸」またはその文法的同義語は、核酸分子に関して用いる場合、転写してｍＲＮＡを産生することができ、その後、ポリペプチド及び／またはその断片に翻訳される、天然状態の、または当業者に公知の方法によって操作された核酸分子のことをいう。アンチセンス鎖はそのような核酸分子の相補鎖であり、それからコーディング配列を推測することができる。
【０１９８】
用語「組換え抗体」は、組換え手段によって調製、発現、作製、または単離される抗体のことをいう。組換え抗体は、宿主細胞に形質移入した組換え発現ベクターを用いて発現させた抗体、組換えコンビナトリアル抗体ライブラリーから単離された抗体、ヒト免疫グロブリン遺伝子で遺伝子導入及び／または染色体導入した動物（例えば、マウスもしくはウシ）から単離した抗体（例えば、Ｔａｙｌｏｒ  ｅｔ  ａｌ．，１９９２，Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．２０：６２８７−９５を参照）、または他のＤＮＡ配列への免疫グロブリン遺伝子配列のスプライシングを伴う任意の他の手段によって調製、発現、作製、もしくは単離された抗体とすることができる。そのような組換え抗体は、ヒト生殖細胞系免疫グロブリン配列（Ｋａｂａｔら（上記）を参照）に由来するものをはじめとする可変及び定常領域を有することができる。しかし、ある実施形態において、そのような組換え抗体には、インビトロ変異誘発（または、ヒトＩｇ配列を遺伝子導入した動物を用いる場合は、インビボ体細胞変異誘発）が実施され得るので、組換え抗体のＶＨ及びＶＬ領域のアミノ酸配列は、ヒト生殖細胞系ＶＨ及びＶＬ配列に由来及び関連するが、インビボでのヒト抗体生殖細胞系レパートリー中に天然で存在しない場合がある配列である。
【０１９９】
用語「検出可能なプローブ」は、検出可能なシグナルを発生させる組成物のことをいう。この用語は、限定はしないが、その活性によって検出可能なシグナルを発生させる任意の蛍光団、発色団、放射線標識、酵素、抗体または抗体断片などを含む。
【０２００】
用語「検出可能な剤」は、試料または対象中の所望の分子、例えば本明細書に記載の抗ＰＤ−１抗体などの実在または存在を確認するために用いることのできる物質のことをいう。検出可能な剤は、可視化することが可能な物質または別の方法で（例えば定量によって）判定及び／または測定することが可能な物質とすることができる。
【０２０１】
用語「診断薬」は、疾患、障害、または病態の診断に役立つ、対象に投与される物質のことをいう。そのような物質は、疾患誘発プロセスの所在を明らかにする、正確な位置を示す、及び／または確定するために用いることができる。ある実施形態において、診断薬としては、本明細書に記載の抗ＰＤ−１抗体に結合させた物質で、対象に投与した場合または対象由来の試料と接触させた場合に、ＰＤ−１媒介疾患の診断に役立つものが挙げられる。
【０２０２】
用語「組成物」は、特定の成分（例えば、本明細書で提供する抗体）を、任意により特定の量で含有する生成物を包含することを意図する。
【０２０３】
本明細書で使用される「担体」には、用いられる投与量及び濃度でそれに曝露されている細胞または哺乳類にとって無毒である、医薬品として許容可能な担体、賦形剤、または安定剤が含まれる。多くの場合、生理的に許容される担体はｐＨ緩衝水溶液である。生理的に許容される担体の例としては、リン酸、クエン酸、及び他の有機酸などの緩衝液；アスコルビン酸を含む抗酸化剤；低分子量（約１０アミノ酸残基未満）ポリペプチド；血清アルブミン、ゼラチン、もしくは免疫グロブリンなどのタンパク質；ポリビニルピロリドンなどの親水性ポリマー；グリシン、グルタミン、アスパラギン、アルギニン、もしくはリシンなどのアミノ酸；グルコース、マンノース、もしくはデキストリンを含む、単糖類、二糖類、及び他の炭水化物；ＥＤＴＡなどのキレート剤；マンニトールもしくはソルビトールなどの糖アルコール；ナトリウムなどの塩形成対イオン；及び／またはＴＷＥＥＮ（商標）、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、及びＰＬＵＲＯＮＩＣＳ（商標）などの非イオン性界面活性剤が挙げられる。用語「担体」は、希釈剤、アジュバント（例えば、フロイントアジュバント（完全もしくは不完全））、賦形剤、または媒体とすることもできる。医薬品担体をはじめとするそのような担体は、無菌液体、例えば、水、及び石油、動物、植物、または合成起源のものをはじめとする油、例えばピーナッツ油、大豆油、鉱油、ゴマ油などとすることができる。組成物（例えば医薬組成物）が静脈内投与される場合、水が典型的な担体である。生理食塩水ならびにデキストロース及びグリセロールの水溶液も、特に注射溶液用の液体担体として用いることができる。好適な賦形剤（例えば医薬品賦形剤）としては、デンプン、グルコース、ラクトース、スクロース、ゼラチン、麦芽、米、小麦粉、白亜、シリカゲル、ステアリン酸ナトリウム、モノステアリン酸グリセロール、タルク、塩化ナトリウム、乾燥脱脂乳、グリセロール、プロピレン、グリコール、水、エタノールなどが挙げられる。組成物は、必要に応じて、少量の湿潤剤もしくは乳化剤、またはｐＨ緩衝剤を含有することもできる。組成物は、溶液、懸濁液、乳濁液、錠剤、丸薬、カプセル、粉末、徐放性製剤などの形態をとることができる。製剤をはじめとする経口組成物は、医薬品グレードのマンニトール、ラクトース、デンプン、ステアリン酸マグネシウム、サッカリンナトリウム、セルロース、炭酸マグネシウムなどの標準的な担体を含むことができる。好適な医薬品担体の例は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ  ａｎｄ  Ｇｅｎｎａｒｏ，  Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ（１８ｔｈ  ｅｄ．１９９０）に記載されている。医薬品化合物をはじめとする組成物は、好適な量の担体と共に、例えば単離または精製形態の抗ＰＤ−１抗体を含有し得る。
【０２０４】
本明細書で用いる場合、用語「医薬品として許容可能」は、動物、特にヒトにおける使用について、連邦もしくは州政府の規制機関によって承認されているか、または米国薬局方、欧州薬局方、もしくは他の一般に認知されている薬局方に記載されていることを意味する。
【０２０５】
用語「賦形剤」は、一般に希釈剤、媒体、保存剤、結合剤、または安定剤として用いられる不活性物質のことをいい、限定はしないが、タンパク質（例えば、血清アルブミンなど）、アミノ酸（例えば、アスパラギン酸、グルタミン酸、リシン、アルギニン、グリシン、ヒスチジンなど）、脂肪酸及びリン脂質（例えば、アルキルスルホネート、カプリレートなど）、界面活性剤（例えば、ＳＤＳ、ポリソルベート、非イオン性界面活性剤など）、糖類（例えば、スクロース、マルトース、トレハロースなど）、及びポリオール（例えば、マンニトール、ソルビトールなど）が挙げられる。Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ  ａｎｄ  Ｇｅｎｎａｒｏ，Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ（１８ｔｈ  ｅｄ．１９９０）も参照されたいが、その全体を参照により本明細書に援用する。
【０２０６】
用語「対象」及び「患者」は同じ意味で用いられ得る。本明細書で用いる場合、ある実施形態において、対象は、哺乳類、例えば非霊長類（例えば、ウシ、ブタ、ウマ、ネコ、イヌ、ラットなど）または霊長類（例えば、サル及びヒト）などである。具体的な実施形態において、対象はヒトである。
【０２０７】
「投与する」または「投与」は、例えば、粘膜、皮内、静脈内、筋肉内送達、及び／または本明細書に記載の、もしくは当該技術分野において公知の物理的送達の任意の他の方法などによって、体外に存在する物質（例えば、本明細書に記載の抗ＰＤ−１抗体）を患者に注入する、または別の方法で物理的に送達する行為のことをいう。
【０２０８】
用語「有効量」は、本明細書で用いる場合、所望の結果をもたらすのに十分な、本明細書で提供する抗体または医薬組成物の量のことをいう。
【０２０９】
用語「約」及び「およそ」は、所与の値または範囲の２０％以内、１５％以内、１０％以内、９％以内、８％以内、７％以内、６％以内、５％以内、４％以内、３％以内、２％以内、１％以内、またはこれ未満を意味する。
【０２１０】
「実質的にすべて」は、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または約１００％のことをいう。
【０２１１】
「実質的に同様の」または「実質的に同じ」という表現は、当業者が、２つの値の間の差はその値（例えば、ＫＤ値）によって測定される生物学的特徴に関して生物学的及び／または統計的有意性がほとんどまたは全くないと考えるほど、２つの数値（例えば、一方が本開示の抗体に関連し、他方が参照抗体に関連する）の間の類似性が十分に高いことを表す。例えば、２つの値の間の差は、参照抗体についての値に応じて、約５０％未満、約４０％未満、約３０％未満、約２０％未満、約１０％未満、または約５％未満であり得る。
【０２１２】
「実質的に増加」、「実質的に減少」、または「実質的に異なる」という表現は、本明細書で用いる場合、当業者が、２つの値の間の差はその値によって測定される生物学的特徴に関して統計的有意であると考えるほど、２つの数値（例えば、一方が本開示の抗体に関連し、他方が参照抗体に関連する）の間の差が十分に大きいことを表す。例えば、その２つの値の間の差は、参照抗体についての値に応じて、約１０％超、約２０％超、約３０％超、約４０％超、または約５０％超であり得る。
【０２１３】
４．３組成物及びその作製方法
本明細書では、ＰＤ−１ポリペプチド、ＰＤ−１ポリペプチド断片、ＰＤ−１ペプチド、またはＰＤ−１エピトープに結合する抗体を提供する。
【０２１４】
ある実施形態において、本明細書で提供する抗体はヒト及び／またはカニクイザルＰＤ−１に結合する。一実施形態において、ＰＤ−１抗体はヒトＰＤ−１に結合する。一実施形態において、ＰＤ−１抗体はカニクイザルＰＤ−１に結合する。一実施形態において、ＰＤ−１抗体はヒトＰＤ−１及びカニクイザルＰＤ−１の両方に結合する。他の実施形態において、本明細書で提供する抗体はげっ歯類ＰＤ−１に結合しない。
【０２１５】
いくつかの実施形態において、抗ＰＤ−１抗体はＰＤ−１の細胞外ドメイン（ＥＣＤ）に結合する。ある実施形態において、抗ＰＤ−１抗体は、ＰＤ−Ｌ１結合部位と異なるＰＤ−１のＥＣＤ中のエピトープに結合する。ある実施形態において、抗ＰＤ−１抗体は、ＰＤ−Ｌ２結合部位と異なるＰＤ−１のＥＣＤ中のエピトープに結合する。ある実施形態において、抗ＰＤ−１抗体は、ＰＤ−Ｌ１及びＰＤ−Ｌ２結合部位の両方と異なるＰＤ−１のＥＣＤ中のエピトープに結合する。
【０２１６】
本明細書で提供する抗ＰＤ−１抗体のＰＤ−１ポリペプチドへの結合を競合的に遮断する抗体も提供する。
【０２１７】
ＰＤ−１ポリペプチドへの結合について本明細書で提供する抗ＰＤ−１抗体と競合する抗体も提供する。
【０２１８】
いくつかの実施形態において、抗ＰＤ−１抗体はＰＤ−１ポリペプチドへのＰＤ−Ｌ１の結合を遮断しない。いくつかの実施形態において、抗ＰＤ−１抗体はＰＤ−１ポリペプチドへのＰＤ−Ｌ２の結合を遮断しない。いくつかの実施形態において、抗ＰＤ−１抗体はＰＤ−１ポリペプチドへのＰＤ−Ｌ１またはＰＤ−Ｌ２の結合を遮断しない。
【０２１９】
いくつかの実施形態において、抗ＰＤ−１抗体はＰＤ−１ポリペプチドへの結合についてＰＤ−Ｌ１と競合しない。いくつかの実施形態において、抗ＰＤ−１抗体はＰＤ−１ポリペプチドへの結合についてＰＤ−Ｌ２と競合しない。いくつかの実施形態において、抗ＰＤ−１抗体はＰＤ−１ポリペプチドへの結合についてＰＤ−Ｌ１またはＰＤ−Ｌ２と競合しない。
【０２２０】
ある実施形態において、ＰＤ−１へのＰＤ−Ｌ１の結合は抗体によって阻害されない。他の実施形態において、ＰＤ−１へのＰＤ−Ｌ２の結合は抗体によって阻害されない。具体的な実施形態において、ＰＤ−１へのＰＤ−Ｌ１の結合もＰＤ−１へのＰＤ−Ｌ２の結合も抗体によって阻害されない。
【０２２１】
本明細書で提供する抗ＰＤ−１抗体は、例えば診断薬または検出可能な剤に結合または組換え融合させることもできる。抗ＰＤ−１抗体を含む組成物をさらに提供する。
【０２２２】
本明細書では、ＰＤ−１ポリペプチド、ＰＤ−１ポリペプチド断片、ＰＤ−１ペプチド、またはＰＤ−１エピトープに結合する抗ＰＤ−１抗体の免疫グロブリン重鎖、軽鎖、ＶＨ領域、ＶＬ領域、ＶＨ  ＣＤＲ１、ＶＨ  ＣＤＲ２、ＶＨ  ＣＤＲ３、ＶＬ  ＣＤＲ１、ＶＬ  ＣＤＲ２、及び／またはＶＬ  ＣＤＲ３をコードする単離核酸分子も提供する。
【０２２３】
ＰＤ−１ポリペプチド、ＰＤ−１ポリペプチド断片、ＰＤ−１ペプチド、またはＰＤ−１エピトープに結合する抗ＰＤ−１抗体をコードする核酸分子を含むベクター及び宿主細胞をさらに提供する。ＰＤ−１ポリペプチド、ＰＤ−１ポリペプチド断片、ＰＤ−１ペプチド、またはＰＤ−１エピトープに結合する抗体の作製方法も提供する。
【０２２４】
４．３．１抗ＰＤ−１抗体
一実施形態において、本開示は、本明細書において診断薬として有用となり得る抗ＰＤ−１抗体を提供する。例示的な抗体としては、ポリクローナル、モノクローナル、ヒト化、ヒト、二重特異性、及びヘテロコンジュゲート抗体、ならびにアフィニティーまたは他の特性が向上したこれらのバリアントが挙げられる。
【０２２５】
いくつかの実施形態において、本明細書では、ＰＤ−１ポリペプチド、ＰＤ−１ポリペプチド断片、ＰＤ−１ペプチド、またはＰＤ−１エピトープをはじめとするＰＤ−１に結合する抗体を提供する。ある実施形態において、本明細書で提供する抗体はヒト及び／またはカニクイザルＰＤ−１に結合する。他の実施形態において、本明細書で提供する抗体はげっ歯類ＰＤ−１（例えば、マウスＰＤ−１）に結合しない。一実施形態において、本明細書で提供する抗体はヒトＰＤ−１に結合する。別の実施形態において、本明細書で提供する抗体はカニクイザルＰＤ−１に結合する。別の実施形態において、本明細書で提供する抗体はヒトＰＤ−１及びカニクイザルＰＤ−１に結合する。いくつかの実施形態において、本明細書で提供する抗体はヒトＰＤ−１に結合し、げっ歯類ＰＤ−１（例えば、マウスＰＤ−１）には結合しない。いくつかの実施形態において、本明細書で提供する抗体はカニクイザルＰＤ−１に結合し、げっ歯類ＰＤ−１（例えば、マウスＰＤ−１）には結合しない。いくつかの実施形態において、本明細書で提供する抗体は、ヒトＰＤ−１に結合し、カニクイザルＰＤ−１に結合し、げっ歯類ＰＤ−１（例えば、マウスＰＤ−１）には結合しない。いくつかの実施形態において、抗ＰＤ−１抗体はＰＤ−１ポリペプチドへのＰＤ−Ｌ１の結合を遮断しない。いくつかの実施形態において、抗ＰＤ−１抗体はＰＤ−１ポリペプチドへのＰＤ−Ｌ２の結合を遮断しない。いくつかの実施形態において、抗ＰＤ−１抗体はＰＤ−１ポリペプチドへのＰＤ−Ｌ１またはＰＤ−Ｌ２の結合を遮断しない。他の実施形態において、抗ＰＤ−１抗体は、ＰＤ−１ポリペプチド、ＰＤ−１ポリペプチド断片、ＰＤ−１ペプチド、またはＰＤ−１エピトープをはじめとするＰＤ−１に結合するヒト化抗体（例えば、ヒト定常領域を含む）である。
【０２２６】
ある実施形態において、抗ＰＤ−１抗体は、本明細書で提供するマウスモノクローナル抗体の任意の１つのＶＨ領域、ＶＬ領域、ＶＨ  ＣＤＲ１、ＶＨ  ＣＤＲ２、ＶＨ  ＣＤＲ３、ＶＬ  ＣＤＲ１、ＶＬ  ＣＤＲ２、及び／またはＶＬ  ＣＤＲ３、例えば表１〜６に示すアミノ酸配列などを含む。したがって、いくつかの実施形態において、本明細書で提供する単離抗体またはその機能的断片は、以下からの１、２、及び／または３つの重鎖ＣＤＲ、及び／または１、２、及び／または３つの軽鎖ＣＤＲを含む：表１〜２に示すような、（ａ）抗体ＰＤ１ＡＢ−１、（ｂ）抗体ＰＤ１ＡＢ−２、（ｃ）抗体ＰＤ１ＡＢ−３、（ｄ）抗体ＰＤ１ＡＢ−４、（ｅ）抗体ＰＤ１ＡＢ−５、または（ｆ）抗体ＰＤ１ＡＢ−６。
表１．ＶＬ  ＣＤＲアミノ酸配列
【表２】
2018533973.tif 000009
表２．ＶＨ  ＣＤＲアミノ酸配列
【表３】
2018533973.tif 000010
【０２２７】
いくつかの実施形態において、本明細書で提供する抗体は、６つのＣＤＲ、例えば、表１〜２で特定したＶＨ  ＣＤＲ１、ＶＨ  ＣＤＲ２、ＶＨ  ＣＤＲ３、ＶＬ  ＣＤＲ１、ＶＬ  ＣＤＲ２、及び／またはＶＬ  ＣＤＲ３を含むかまたはそれらからなる。いくつかの実施形態において、本明細書で提供する抗体は６つ未満のＣＤＲを含むことができる。いくつかの実施形態において、抗体は、表１〜２で特定したＶＨ  ＣＤＲ１、ＶＨ  ＣＤＲ２、ＶＨ  ＣＤＲ３、ＶＬ  ＣＤＲ１、ＶＬ  ＣＤＲ２、及び／またはＶＬ  ＣＤＲ３からなる群から選択される１、２、３、４、または５つのＣＤＲを含むかまたはそれらからなる。いくつかの実施形態において、抗体は、以下からなる群から選択されるモノクローナル抗体のＶＨ  ＣＤＲ１、ＶＨ  ＣＤＲ２、ＶＨ  ＣＤＲ３、ＶＬ  ＣＤＲ１、ＶＬ  ＣＤＲ２、及び／またはＶＬ  ＣＤＲ３からなる群から選択される１、２、３、４、または５つのＣＤＲを含むかまたはそれらからなる：本明細書に記載の（ａ）抗体ＰＤ１ＡＢ−１、（ｂ）抗体ＰＤ１ＡＢ−２、（ｃ）抗体ＰＤ１ＡＢ−３、（ｄ）抗体ＰＤ１ＡＢ−４、（ｅ）抗体ＰＤ１ＡＢ−５、及び（ｆ）抗体ＰＤ１ＡＢ−６。したがって、いくつかの実施形態において、抗体は、表１〜２で特定したＶＨ  ＣＤＲ１、ＶＨ  ＣＤＲ２、ＶＨ  ＣＤＲ３、ＶＬ  ＣＤＲ１、ＶＬ  ＣＤＲ２、及び／またはＶＬ  ＣＤＲ３のいずれかの１、２、３、４、または５つのＣＤＲを含むかまたはそれらからなる。
【０２２８】
いくつかの実施形態において、本明細書で提供する抗体は、表２に記載した１つ以上（例えば１、２、または３）のＶＨ  ＣＤＲを含む。他の実施形態において、本明細書で提供する抗体は、表１に記載した１つ以上（例えば１、２、または３）のＶＬ  ＣＤＲを含む。さらに他の実施形態において、本明細書で提供する抗体は、表２に記載した１つ以上（例えば１、２、または３）のＶＨ  ＣＤＲ及び表１に記載した１つ以上のＶＬ  ＣＤＲを含む。したがって、いくつかの実施形態において、抗体は配列番号４のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＣＤＲ１を含む。いくつかの実施形態において、抗体は配列番号５のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＣＤＲ２を含む。いくつかの実施形態において、抗体は配列番号６のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＣＤＲ３を含む。いくつかの実施形態において、抗体は、表２に示すようなＶＨ  ＣＤＲ１、ＶＨ  ＣＤＲ２、ＶＨ  ＣＤＲ３アミノ酸配列（複数可）の任意の１つから独立して選択されるＶＨ  ＣＤＲ１及び／またはＶＨ  ＣＤＲ２及び／またはＶＨ  ＣＤＲ３を含む。いくつかの実施形態において、抗体は、配列番号１及び７の任意の１つのアミノ酸配列を有するＶＬ  ＣＤＲ１を含む。別の実施形態において、抗体は配列番号２のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＣＤＲ２を含む。いくつかの実施形態において、抗体は配列番号３のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＣＤＲ３を含む。いくつかの実施形態において、抗体は、表１に示すようなＶＬ  ＣＤＲ１、ＶＬ  ＣＤＲ２、ＶＬ  ＣＤＲ３アミノ酸配列の任意の１つから独立して選択されるＶＬ  ＣＤＲ１及び／またはＶＬ  ＣＤＲ２及び／またはＶＬ  ＣＤＲ３を含む。
【０２２９】
ある実施形態において、本明細書で提供する抗体は、以下を含むＶＨ領域：（１）配列番号４のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＣＤＲ１；（２）配列番号５のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＣＤＲ２；及び（３）配列番号６のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＣＤＲ３；ならびに以下を含むＶＬ領域：（１）配列番号１のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＣＤＲ１；（２）配列番号２のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＣＤＲ２；及び（３）配列番号３のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＣＤＲ３を含む。
【０２３０】
ある実施形態において、本明細書で提供する抗体は、以下を含むＶＨ領域：（１）配列番号４のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＣＤＲ１；（２）配列番号５のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＣＤＲ２；及び（３）配列番号６のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＣＤＲ３；ならびに以下を含むＶＬ領域：（１）配列番号７のアミノ酸を有するＶＬ  ＣＤＲ１；（２）配列番号２のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＣＤＲ２；及び（３）配列番号３のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＣＤＲ３を含む。
【０２３１】
いくつかの実施形態において、本明細書で提供する抗体は、以下を含むＶＨ領域を含む：（１）配列番号４のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＣＤＲ１；（２）配列番号５のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＣＤＲ２；及び（３）配列番号６のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＣＤＲ３。
【０２３２】
他の実施形態において、本明細書で提供する抗体は、以下を含むＶＬ領域を含む：（１）配列番号１のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＣＤＲ１；（２）配列番号２のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＣＤＲ２；及び（３）配列番号３のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＣＤＲ３。
【０２３３】
いくつかの実施形態において、本明細書で提供する抗体は、以下を含むＶＬ領域を含む：（１）配列番号７のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＣＤＲ１；（２）配列番号２のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＣＤＲ２；及び（３）配列番号３のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＣＤＲ３。
【０２３４】
本明細書では、表１〜２に記載した１つ以上（例えば１、２、または３）のＶＨ  ＣＤＲ及び１つ以上（例えば１、２、または３）のＶＬ  ＣＤＲを含む抗体も提供する。特に、本明細書ではＶＨ  ＣＤＲ１（配列番号４）及びＶＬ  ＣＤＲ１（配列番号１または７）を含む抗体を提供する。一実施形態において、抗体はＶＨ  ＣＤＲ１（配列番号４）及びＶＬ  ＣＤＲ２（配列番号２）を含む。他の実施形態において、抗体はＶＨ  ＣＤＲ１（配列番号４）及びＶＬ  ＣＤＲ３（配列番号３）を含む。別の実施形態において、抗体はＶＨ  ＣＤＲ２（配列番号５）及びＶＬ  ＣＤＲ１（配列番号１または７）を含む。いくつかの実施形態において、抗体はＶＨ  ＣＤＲ２（配列番号５）及びＶＬ  ＣＤＲ２（配列番号２）を含む。一実施形態において、抗体はＶＨ  ＣＤＲ２（配列番号５）及びＶＬ  ＣＤＲ３（配列番号３）を含む。別の実施形態において、抗体はＶＨ  ＣＤＲ３（配列番号６）及びＶＬ  ＣＤＲ１（配列番号１または７）を含む。他の実施形態において、抗体はＶＨ  ＣＤＲ３（配列番号６）及びＶＬ  ＣＤＲ２（配列番号２）を含む。いくつかの実施形態において、抗体はＶＨ  ＣＤＲ３（配列番号６）及びＶＬ  ＣＤＲ３（配列番号３）を含む。別の実施形態において、抗体は、ＶＨ  ＣＤＲ１（配列番号４）、ＶＨ  ＣＤＲ２（配列番号５）、及びＶＬ  ＣＤＲ１（配列番号１または７）を含む。一実施形態において、抗体は、ＶＨ  ＣＤＲ１（配列番号４）、ＶＨ  ＣＤＲ２（配列番号５）、及びＶＬ  ＣＤＲ２（配列番号２）を含む。他の実施形態において、抗体は、ＶＨ  ＣＤＲ１（配列番号４）、ＶＨ  ＣＤＲ２（配列番号５）、及びＶＬ  ＣＤＲ３（配列番号３）を含む。別の実施形態において、抗体は、ＶＨ  ＣＤＲ２（配列番号５）、ＶＨ  ＣＤＲ３（配列番号６）、及びＶＬ  ＣＤＲ１（配列番号１または７）を含む。いくつかの実施形態において、抗体は、ＶＨ  ＣＤＲ２（配列番号５）、ＶＨ  ＣＤＲ３（配列番号６）、及びＶＬ  ＣＤＲ２（配列番号２）を含む。一実施形態において、抗体は、ＶＨ  ＣＤＲ２（配列番号５）、ＶＨ  ＣＤＲ３（配列番号６）、及びＶＬ  ＣＤＲ３（配列番号３）を含む。別の実施形態において、抗体は、ＶＨ  ＣＤＲ１（配列番号４）、ＶＨ  ＣＤＲ３（配列番号６）、及びＶＬ  ＣＤＲ１（配列番号１または７）を含む。他の実施形態において、抗体は、ＶＨ  ＣＤＲ１（配列番号４）、ＶＨ  ＣＤＲ３（配列番号６）、及びＶＬ  ＣＤＲ２（配列番号２）を含む。いくつかの実施形態において、抗体は、ＶＨ  ＣＤＲ１（配列番号４）、ＶＨ  ＣＤＲ３（配列番号６）、及びＶＬ  ＣＤＲ３（配列番号３）を含む。別の実施形態において、抗体は、ＶＨ  ＣＤＲ１（配列番号４）、ＶＬ  ＣＤＲ１（配列番号１または７）、及びＶＬ  ＣＤＲ２（配列番号２）を含む。一実施形態において、抗体は、ＶＨ  ＣＤＲ１（配列番号４）、ＶＬ  ＣＤＲ１（配列番号１または７）、及びＶＬ  ＣＤＲ３（配列番号３）を含む。他の実施形態において、抗体は、ＶＨ  ＣＤＲ１（配列番号４）、ＶＬ  ＣＤＲ２（配列番号２）、及びＶＬ  ＣＤＲ３（配列番号３）を含む。別の実施形態において、抗体は、ＶＨ  ＣＤＲ２（配列番号５）、ＶＬ  ＣＤＲ１（配列番号１または７）、及びＶＬ  ��ＤＲ２（配列番号２）を含む。いくつかの実施形態において、抗体は、ＶＨ  ＣＤＲ２（配列番号５）、ＶＬ  ＣＤＲ１（配列番号１または７）、及びＶＬ  ＣＤＲ３（配列番号３）を含む。一実施形態において、抗体は、ＶＨ  ＣＤＲ２（配列番号５）、ＶＬ  ＣＤＲ２（配列番号２）、及びＶＬ  ＣＤＲ３（配列番号３）を含む。別の実施形態において、抗体は、ＶＨ  ＣＤＲ３（配列番号６）、ＶＬ  ＣＤＲ１（配列番号１または７）、及びＶＬ  ＣＤＲ２（配列番号２）を含む。他の実施形態において、抗体は、ＶＨ  ＣＤＲ３（配列番号６）、ＶＬ  ＣＤＲ１（配列番号１または７）、及びＶＬ  ＣＤＲ３（配列番号３）を含む。いくつかの実施形態において、抗体は、ＶＨ  ＣＤＲ３（配列番号６）、ＶＬ  ＣＤＲ２（配列番号２）、及びＶＬ  ＣＤＲ３（配列番号３）を含む。別の実施形態において、抗体は、ＶＨ  ＣＤＲ１（配列番号４）、ＶＨ  ＣＤＲ２（配列番号５）、ＶＨ  ＣＤＲ３（配列番号６）、及びＶＬ  ＣＤＲ１（配列番号１または７）を含む。一実施形態において、抗体は、ＶＨ  ＣＤＲ１（配列番号４）、ＶＨ  ＣＤＲ２（配列番号５）、ＶＨ  ＣＤＲ３（配列番号６）、及びＶＬ  ＣＤＲ２（配列番号２）を含む。他の実施形態において、抗体は、ＶＨ  ＣＤＲ１（配列番号４）、ＶＨ  ＣＤＲ２（配列番号５）、ＶＨ  ＣＤＲ３（配列番号６）、及びＶＬ  ＣＤＲ３（配列番号３）を含む。別の実施形態において、抗体は、ＶＨ  ＣＤＲ１（配列番号４）、ＶＨ  ＣＤＲ２（配列番号５）、ＶＬ  ＣＤＲ１（配列番号１または７）、及びＶＬ  ＣＤＲ２（配列番号２）を含む。いくつかの実施形態において、抗体は、ＶＨ  ＣＤＲ１（配列番号４）、ＶＨ  ＣＤＲ２（配列番号５）、ＶＬ  ＣＤＲ１（配列番号１または７）、及びＶＬ  ＣＤＲ３（配列番号３）を含む。一実施形態において、抗体は、ＶＨ  ＣＤＲ１（配列番号４）、ＶＨ  ＣＤＲ２（配列番号５）、ＶＬ  ＣＤＲ２（配列番号２）、及びＶＬ  ＣＤＲ３（配列番号３）を含む。別の実施形態において、抗体は、ＶＨ  ＣＤＲ１（配列番号４）、ＶＨ  ＣＤＲ３（配列番号６）、ＶＬ  ＣＤＲ１（配列番号１または７）、及びＶＬ  ＣＤＲ２（配列番号２）を含む。他の実施形態において、抗体は、ＶＨ  ＣＤＲ１（配列番号４）、ＶＨ  ＣＤＲ３（配列番号６）、ＶＬ  ＣＤＲ１（配列番号１または７）、及びＶＬ  ＣＤＲ３（配列番号３）を含む。いくつかの実施形態において、抗体は、ＶＨ  ＣＤＲ１（配列番号４）、ＶＨ  ＣＤＲ３（配列番号６）、ＶＬ  ＣＤＲ２（配列番号２）、及びＶＬ  ＣＤＲ３（配列番号３）を含む。別の実施形態において、抗体は、ＶＨ  ＣＤＲ２（配列番号５）、ＶＨ  ＣＤＲ３（配列番号６）、ＶＬ  ＣＤＲ１（配列番号１または７）、及びＶＬ  ＣＤＲ２（配列番号２）を含む。一実施形態において、抗体は、ＶＨ  ＣＤＲ２（配列番号５）、ＶＨ  ＣＤＲ３（配列番号６）、ＶＬ  ＣＤＲ１（配列番号１または７）、及びＶＬ  ＣＤＲ３（配列番号３）を含む。他の実施形態において、抗体は、ＶＨ  ＣＤＲ２（配列番号５）、ＶＨ  ＣＤＲ３（配列番号６）、ＶＬ  ＣＤＲ２（配列番号２）、及びＶＬ  ＣＤＲ３（配列番号３）を含む。別の実施形態において、抗体は、ＶＨ  ＣＤＲ１（配列番号４）、ＶＨ  ＣＤＲ２（配���番号５）、ＶＨ  ＣＤＲ３（配列番号６）、ＶＬ  ＣＤＲ１（配列番号１または７）、及びＶＬ  ＣＤＲ２（配列番号２）を含む。いくつかの実施形態において、抗体は、ＶＨ  ＣＤＲ１（配列番号４）、ＶＨ  ＣＤＲ２（配列番号５）、ＶＨ  ＣＤＲ３（配列番号６）、ＶＬ  ＣＤＲ１（配列番号１または７）、及びＶＬ  ＣＤＲ３（配列番号３）を含む。一実施形態において、抗体は、ＶＨ  ＣＤＲ１（配列番号４）、ＶＨ  ＣＤＲ２（配列番号５）、ＶＨ  ＣＤＲ３（配列番号６）、ＶＬ  ＣＤＲ２（配列番号２）、及びＶＬ  ＣＤＲ３（配列番号３）を含む。別の実施形態において、抗体は、ＶＨ  ＣＤＲ１（配列番号４）、ＶＨ  ＣＤＲ２（配列番号５）、ＶＬ  ＣＤＲ１（配列番号１または７）、ＶＬ  ＣＤＲ２（配列番号２）、及びＶＬ  ＣＤＲ３（配列番号３）を含む。他の実施形態において、抗体は、ＶＨ  ＣＤＲ１（配列番号４）、ＶＨ  ＣＤＲ３（配列番号６）、ＶＬ  ＣＤＲ１（配列番号１または７）、ＶＬ  ＣＤＲ２（配列番号２）、及びＶＬ  ＣＤＲ３（配列番号３）を含む。いくつかの実施形態において、抗体は、ＶＨ  ＣＤＲ２（配列番号５）、ＶＨ  ＣＤＲ３（配列番号６）、ＶＬ  ＣＤＲ１（配列番号１または７）、ＶＬ  ＣＤＲ２（配列番号２）、及びＶＬ  ＣＤＲ３（配列番号３）を含む。別の実施形態において、抗体は、ＶＨ  ＣＤＲ１（配列番号４）、ＶＬ  ＣＤＲ１（配列番号１または７）、ＶＬ  ＣＤＲ２（配列番号２）、及びＶＬ  ＣＤＲ３（配列番号３）を含む。一実施形態において、抗体は、ＶＨ  ＣＤＲ２（配列番号５）、ＶＬ  ＣＤＲ１（配列番号１または７）、ＶＬ  ＣＤＲ２（配列番号２）、及びＶＬ  ＣＤＲ３（配列番号３）を含む。他の実施形態において、抗体は、ＶＨ  ＣＤＲ３（配列番号６）、ＶＬ  ＣＤＲ１（配列番号１または７）、ＶＬ  ＣＤＲ２（配列番号２）、及びＶＬ  ＣＤＲ３（配列番号３）を含む。別の実施形態において、抗体は、表１〜２に記載したＶＨ  ＣＤＲ及びＶＬ  ＣＤＲのその任意の組合せを含む。
【０２３５】
さらに別の態様において、本明細書に開示のＣＤＲとしては、関連抗体の群に由来するコンセンサス配列が挙げられる（例えば、表１〜２を参照）。本明細書に記載する場合、「コンセンサス配列」は、複数の配列の間で共通の保存アミノ酸及び所与のアミノ酸配列内で変化する可変アミノ酸を有するアミノ酸配列のことをいう。
【０２３６】
いくつかの実施形態において、本明細書で提供する単離抗体またはその機能的断片は、以下からの１、２、３、及び／または４つの重鎖ＦＲ、及び／または１、２、３、及び／または４つの軽鎖ＦＲをさらに含む：表３〜４に示すような、（ａ）抗体ＰＤ１ＡＢ−１、（ｂ）抗体ＰＤ１ＡＢ−２、（ｃ）抗体ＰＤ１ＡＢ−３、（ｄ）抗体ＰＤ１ＡＢ−４、（ｅ）抗体ＰＤ１ＡＢ−５、または（ｆ）抗体ＰＤ１ＡＢ−６。
表３．ＶＬ  ＦＲアミノ酸配列
【表４】
2018533973.tif 000011
表４．ＶＨ  ＦＲアミノ酸配列
【表５】
2018533973.tif 000012
【０２３７】
ある実施形態において、本明細書で提供する単離抗体またはその機能的断片は、以下からの１、２、３、及び／または４つの重鎖ＦＲをさらに含む：表４に示すような、（ａ）抗体ＰＤ１ＡＢ−１、（ｂ）抗体ＰＤ１ＡＢ−２、（ｃ）抗体ＰＤ１ＡＢ−３、（ｄ）抗体ＰＤ１ＡＢ−４、（ｅ）抗体ＰＤ１ＡＢ−５、または（ｆ）抗体ＰＤ１ＡＢ−６。いくつかの実施形態において、抗体重鎖ＦＲ（複数可）は抗体ＰＤ１ＡＢ−１からのものである。いくつかの実施形態において、抗体重鎖ＦＲ（複数可）は抗体ＰＤ１ＡＢ−２からのものである。他の実施形態において、抗体重鎖ＦＲ（複数可）は抗体ＰＤ１ＡＢ−３からのものである。ある実施形態において、抗体重鎖ＦＲ（複数可）は抗体ＰＤ１ＡＢ−４からのものである。他の実施形態において、抗体重鎖ＦＲ（複数可）は抗体ＰＤ１ＡＢ−５からのものである。別の実施形態において、抗体重鎖ＦＲ（複数可）は抗体ＰＤ１ＡＢ−６からのものである。
【０２３８】
いくつかの実施形態において、本明細書で提供する単離抗体またはその機能的断片は、以下からの１、２、３、及び／または４つの軽鎖ＦＲをさらに含む：表３に示すような、（ａ）抗体ＰＤ１ＡＢ−１、（ｂ）抗体ＰＤ１ＡＢ−２、（ｃ）抗体ＰＤ１ＡＢ−３、（ｄ）抗体ＰＤ１ＡＢ−４、（ｅ）抗体ＰＤ１ＡＢ−５、または（ｆ）抗体ＰＤ１ＡＢ−６。いくつかの実施形態において、抗体軽鎖ＦＲ（複数可）は抗体ＰＤ１ＡＢ−１からのものである。いくつかの実施形態において、抗体軽鎖ＦＲ（複数可）は抗体ＰＤ１ＡＢ−２からのものである。他の実施形態において、抗体軽鎖ＦＲ（複数可）は抗体ＰＤ１ＡＢ−３からのものである。ある実施形態において、抗体軽鎖ＦＲ（複数可）は抗体ＰＤ１ＡＢ−４からのものである。他の実施形態において、抗体軽鎖ＦＲ（複数可）は抗体ＰＤ１ＡＢ−５からのものである。別の実施形態において、抗体軽鎖ＦＲ（複数可）は抗体ＰＤ１ＡＢ−６からのものである。
【０２３９】
ある実施形態において、本明細書に記載の抗体またはその断片は、以下を含むＶＨ領域を含む：（１）配列番号１９及び２４からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＶＨ  ＦＲ１；（２）配列番号２０のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＦＲ２；（３）配列番号２１及び２３からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＶＨ  ＦＲ３；及び／または（４）配列番号２２のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＦＲ４。ある実施形態において、本明細書に記載の抗体またはその断片は、以下を含むＶＨ領域を含む：（１）配列番号１９のアミノ酸を有するＶＨ  ＦＲ１；（２）配列番号２０のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＦＲ２；（３）配列番号２１のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＦＲ３；及び／または（４）配列番号２２のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＦＲ４。ある実施形態において、本明細書に記載の抗体またはその断片は、以下を含むＶＨ領域を含む：（１）配列番号１９のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＦＲ１；（２）配列番号２０のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＦＲ２；（３）配列番号２３のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＦＲ３；及び／または（４）配列番号２２のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＦＲ４。ある実施形態において、本明細書に記載の抗体またはその断片は、以下を含むＶＨ領域を含む：（１）配列番号２４のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＦＲ１；（２）配列番号２０のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＦＲ２；（３）配列番号２１のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＦＲ３；及び／または（４）配列番号２２のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＦＲ４。ある実施形態において、本明細書に記載の抗体またはその断片は、以下を含むＶＨ領域を含む：（１）配列番号２４のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＦＲ１；（２）配列番号２０のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＦＲ２；（３）配列番号２３のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＦＲ３；及び／または（４）配列番号２２のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＦＲ４。具体的な実施形態において、抗体は、上で参照したＶＨ  ＦＲ１、ＶＨ  ＦＲ２、ＶＨ  ＦＲ３、及びＶＨ  ＦＲ４の４つすべてを含むＶＨ領域を含む。
【０２４０】
したがって、いくつかの実施形態において、ヒト化抗体は、配列番号１９及び２４からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＶＨ  ＦＲ１を含むＶＨ領域を含む。一実施形態において、ヒト化抗体は、配列番号１９のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＦＲ１を含むＶＨ領域を含む。一実施形態において、ヒト化抗体は、配列番号２４のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＦＲ１を含むＶＨ領域を含む。いくつかの実施形態において、ヒト化抗体は、配列番号２０のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＦＲ２を含むＶＨ領域を含む。いくつかの実施形態において、ヒト化抗体は、配列番号２１及び２３からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＶＨ  ＦＲ３を含むＶＨ領域を含む。一実施形態において、ヒト化抗体は、配列番号２１のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＦＲ３を含むＶＨ領域を含む。一実施形態において、ヒト化抗体は、配列番号２３のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＦＲ３を含むＶＨ領域を含む。他の実施形態において、ヒト化抗体は、配列番号２２のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＦＲ４を含むＶＨ領域を含む。
【０２４１】
ある実施形態において、本明細書に記載の抗体またはその断片は、以下を含むＶＬ領域を含む：（１）配列番号１４のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＦＲ１；（２）配列番号１５のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＦＲ２；（３）配列番号１６及び１８からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＶＬ  ＦＲ３；及び／または（４）配列番号１７のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＦＲ４。いくつかの実施形態において、ＶＬ領域は以下を含む：（１）配列番号１４のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＦＲ１；（２）配列番号１５のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＦＲ２；（３）配列番号１６のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＦＲ３；及び／または（４）配列番号１７のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＦＲ４。他の実施形態において、ＶＬ領域は以下を含む：（１）配列番号１４のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＦＲ１；（２）配列番号１５のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＦＲ２；（３）配列番号１８のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＦＲ３；及び／または（４）配列番号１７のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＦＲ４。
【０２４２】
したがって、いくつかの実施形態において、ヒト化抗体は、配列番号１４のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＦＲ１を含むＶＬ領域を含む。ある実施形態において、ヒト化抗体は、配列番号１５のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＦＲ２を含むＶＬ領域を含む。他の実施形態において、ヒト化抗体は、配列番号１６及び１８からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＶＬ  ＦＲ３を含むＶＬ領域を含む。一実施形態において、ヒト化抗体は、配列番号１６のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＦＲ３を含むＶＬ領域を含む。他の実施形態において、ヒト化抗体は、配列番号１８のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＦＲ３を含むＶＬ領域を含む。さらに他の実施形態において、ヒト化抗体は、配列番号１７のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＦＲ４を含むＶＬ領域を含む。
【０２４３】
ある実施形態において、本明細書に記載の抗体またはその断片は、ＶＨ領域及びＶＬ領域を含み、ＶＨ領域は以下を含み：（１）配列番号１９及び２４からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＶＨ  ＦＲ１；（２）配列番号２０のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＦＲ２；（３）配列番号２１及び２３からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＶＨ  ＦＲ３；及び／または（４）配列番号２２のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＦＲ４；ＶＬ領域は以下を含む：（１）配列番号１４のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＦＲ１；（２）配列番号１５のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＦＲ２；（３）配列番号１６及び１８からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＶＬ  ＦＲ３；及び／または（４）配列番号１７のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＦＲ４。いくつかの実施形態において、抗体は、上で参照したＶＨ  ＦＲ１、ＶＨ  ＦＲ２、ＶＨ  ＦＲ３、及びＶＨ  ＦＲ４の４つすべてを含むＶＨ領域を含む。他の実施形態において、抗体は、上で参照したＶＬ  ＦＲ１、ＶＬ  ＦＲ２、ＶＬ  ＦＲ３、及びＶＬ  ＦＲ４の４つすべてを含むＶＬ領域を含む。さらに他の実施形態において、抗体は、上で参照したＶＨ  ＦＲ１、ＶＨ  ＦＲ２、ＶＨ  ＦＲ３、及びＶＨ  ＦＲ４の４つすべてを含むＶＨ領域、ならびに上で参照したＶＬ  ＦＲ１、ＶＬ  ＦＲ２、ＶＬ  ＦＲ３、及びＶＬ  ＦＲ４の４つすべてを含むＶＬ領域を含む。
【０２４４】
いくつかの実施形態において、抗体またはその断片は、ＶＨ領域及びＶＬ領域を含み、ＶＨ領域は以下を含み：（１）配列番号１９のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＦＲ１；（２）配列番号２０のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＦＲ２；（３）配列番号２１のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＦＲ３；及び／または（４）配列番号２２のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＦＲ４；ＶＬ領域は以下を含む：（１）配列番号１４のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＦＲ１；（２）配列番号１５のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＦＲ２；（３）配列番号１６のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＦＲ３；及び／または（４）配列番号１７のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＦＲ４。いくつかの実施形態において、抗体は、上で参照したＶＨ  ＦＲ１、ＶＨ  ＦＲ２、ＶＨ  ＦＲ３、及びＶＨ  ＦＲ４の４つすべてを含むＶＨ領域を含む。他の実施形態において、抗体は、上で参照したＶＬ  ＦＲ１、ＶＬ  ＦＲ２、ＶＬ  ＦＲ３、及びＶＬ  ＦＲ４の４つすべてを含むＶＬ領域を含む。さらに他の実施形態において、抗体は、上で参照したＶＨ  ＦＲ１、ＶＨ  ＦＲ２、ＶＨ  ＦＲ３、及びＶＨ  ＦＲ４の４つすべてを含むＶＨ領域、ならびに上で参照したＶＬ  ＦＲ１、ＶＬ  ＦＲ２、ＶＬ  ＦＲ３、及びＶＬ  ＦＲ４の４つすべてを含むＶＬ領域を含む。
【０２４５】
いくつかの実施形態において、抗体またはその断片は、ＶＨ領域及びＶＬ領域を含み、ＶＨ領域は以下を含み：（１）配列番号１９のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＦＲ１；（２）配列番号２０のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＦＲ２；（３）配列番号２１のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＦＲ３；及び／または（４）配列番号２２のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＦＲ４；ＶＬ領域は以下を含む：（１）配列番号１４のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＦＲ１；（２）配列番号１５のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＦＲ２；（３）配列番号１８のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＦＲ３；及び／または（４）配列番号１７のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＦＲ４。いくつかの実施形態において、抗体は、上で参照したＶＨ  ＦＲ１、ＶＨ  ＦＲ２、ＶＨ  ＦＲ３、及びＶＨ  ＦＲ４の４つすべてを含むＶＨ領域を含む。他の実施形態において、抗体は、上で参照したＶＬ  ＦＲ１、ＶＬ  ＦＲ２、ＶＬ  ＦＲ３、及びＶＬ  ＦＲ４の４つすべてを含むＶＬ領域を含む。さらに他の実施形態において、抗体は、上で参照したＶＨ  ＦＲ１、ＶＨ  ＦＲ２、ＶＨ  ＦＲ３、及びＶＨ  ＦＲ４の４つすべてを含むＶＨ領域、ならびに上で参照したＶＬ  ＦＲ１、ＶＬ  ＦＲ２、ＶＬ  ＦＲ３、及びＶＬ  ＦＲ４の４つすべてを含むＶＬ領域を含む。
【０２４６】
いくつかの実施形態において、抗体またはその断片は、ＶＨ領域及びＶＬ領域を含み、ＶＨ領域は以下を含み：（１）配列番号１９のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＦＲ１；（２）配列番号２０のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＦＲ２；（３）配列番号２３のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＦＲ３；及び／または（４）配列番号２２のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＦＲ４；ＶＬ領域は以下を含む：（１）配列番号１４のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＦＲ１；（２）配列番号１５のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＦＲ２；（３）配列番号１６のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＦＲ３；及び／または（４）配列番号１７のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＦＲ４。いくつかの実施形態において、抗体は、上で参照したＶＨ  ＦＲ１、ＶＨ  ＦＲ２、ＶＨ  ＦＲ３、及びＶＨ  ＦＲ４の４つすべてを含むＶＨ領域を含む。他の実施形態において、抗体は、上で参照したＶＬ  ＦＲ１、ＶＬ  ＦＲ２、ＶＬ  ＦＲ３、及びＶＬ  ＦＲ４の４つすべてを含むＶＬ領域を含む。さらに他の実施形態において、抗体は、上で参照したＶＨ  ＦＲ１、ＶＨ  ＦＲ２、ＶＨ  ＦＲ３、及びＶＨ  ＦＲ４の４つすべてを含むＶＨ領域、ならびに上で参照したＶＬ  ＦＲ１、ＶＬ  ＦＲ２、ＶＬ  ＦＲ３、及びＶＬ  ＦＲ４の４つすべてを含むＶＬ領域を含む。
【０２４７】
いくつかの実施形態において、抗体またはその断片は、ＶＨ領域及びＶＬ領域を含み、ＶＨ領域は以下を含み：（１）配列番号１９のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＦＲ１；（２）配列番号２０のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＦＲ２；（３）配列番号２３のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＦＲ３；及び／または（４）配列番号２２のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＦＲ４；ＶＬ領域は以下を含む：（１）配列番号１４のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＦＲ１；（２）配列番号１５のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＦＲ２；（３）配列番号１８のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＦＲ３；及び／または（４）配列番号１７のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＦＲ４。いくつかの実施形態において、抗体は、上で参照したＶＨ  ＦＲ１、ＶＨ  ＦＲ２、ＶＨ  ＦＲ３、及びＶＨ  ＦＲ４の４つすべてを含むＶＨ領域を含む。他の実施形態において、抗体は、上で参照したＶＬ  ＦＲ１、ＶＬ  ＦＲ２、ＶＬ  ＦＲ３、及びＶＬ  ＦＲ４の４つすべてを含むＶＬ領域を含む。さらに他の実施形態において、抗体は、上で参照したＶＨ  ＦＲ１、ＶＨ  ＦＲ２、ＶＨ  ＦＲ３、及びＶＨ  ＦＲ４の４つすべてを含むＶＨ領域、ならびに上で参照したＶＬ  ＦＲ１、ＶＬ  ＦＲ２、ＶＬ  ＦＲ３、及びＶＬ  ＦＲ４の４つすべてを含むＶＬ領域を含む。
【０２４８】
いくつかの実施形態において、抗体またはその断片は、ＶＨ領域及びＶＬ領域を含み、ＶＨ領域は以下を含み：（１）配列番号２４のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＦＲ１；（２）配列番号２０のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＦＲ２；（３）配列番号２１のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＦＲ３；及び／または（４）配列番号２２のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＦＲ４；ＶＬ領域は以下を含む：（１）配列番号１４のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＦＲ１；（２）配列番号１５のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＦＲ２；（３）配列番号１６のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＦＲ３；及び／または（４）配列番号１７のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＦＲ４。いくつかの実施形態において、抗体は、上で参照したＶＨ  ＦＲ１、ＶＨ  ＦＲ２、ＶＨ  ＦＲ３、及びＶＨ  ＦＲ４の４つすべてを含むＶＨ領域を含む。他の実施形態において、抗体は、上で参照したＶＬ  ＦＲ１、ＶＬ  ＦＲ２、ＶＬ  ＦＲ３、及びＶＬ  ＦＲ４の４つすべてを含むＶＬ領域を含む。さらに他の実施形態において、抗体は、上で参照したＶＨ  ＦＲ１、ＶＨ  ＦＲ２、ＶＨ  ＦＲ３、及びＶＨ  ＦＲ４の４つすべてを含むＶＨ領域、ならびに上で参照したＶＬ  ＦＲ１、ＶＬ  ＦＲ２、ＶＬ  ＦＲ３、及びＶＬ  ＦＲ４の４つすべてを含むＶＬ領域を含む。
【０２４９】
いくつかの実施形態において、抗体またはその断片は、ＶＨ領域及びＶＬ領域を含み、ＶＨ領域は以下を含み：（１）配列番号２４のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＦＲ１；（２）配列番号２０のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＦＲ２；（３）配列番号２１のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＦＲ３；及び／または（４）配列番号２２のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＦＲ４；ＶＬ領域は以下を含む：（１）配列番号１４のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＦＲ１；（２）配列番号１５のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＦＲ２；（３）配列番号１８のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＦＲ３；及び／または（４）配列番号１７のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＦＲ４。いくつかの実施形態において、抗体は、上で参照したＶＨ  ＦＲ１、ＶＨ  ＦＲ２、ＶＨ  ＦＲ３及びＶＨ  ＦＲ４の４つすべてを含むＶＨ領域を含む。他の実施形態において、抗体は、上で参照したＶＬ  ＦＲ１、ＶＬ  ＦＲ２、ＶＬ  ＦＲ３及びＶＬ  ＦＲ４の４つすべてを含むＶＬ領域を含む。さらに他の実施形態において、抗体は、上で参照したＶＨ  ＦＲ１、ＶＨ  ＦＲ２、ＶＨ  ＦＲ３、及びＶＨ  ＦＲ４の４つすべてを含むＶＨ領域、ならびに上で参照したＶＬ  ＦＲ１、ＶＬ  ＦＲ２、ＶＬ  ＦＲ３、及びＶＬ  ＦＲ４の４つすべてを含むＶＬ領域を含む。
【０２５０】
いくつかの実施形態において、抗体またはその断片は、ＶＨ領域及びＶＬ領域を含み、ＶＨ領域は以下を含み：（１）配列番号２４のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＦＲ１；（２）配列番号２０のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＦＲ２；（３）配列番号２３のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＦＲ３；及び／または（４）配列番号２２のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＦＲ４；ＶＬ領域は以下を含む：（１）配列番号１４のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＦＲ１；（２）配列番号１５のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＦＲ２；（３）配列番号１６のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＦＲ３；及び／または（４）配列番号１７のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＦＲ４。いくつかの実施形態において、抗体は、上で参照したＶＨ  ＦＲ１、ＶＨ  ＦＲ２、ＶＨ  ＦＲ３、及びＶＨ  ＦＲ４の４つすべてを含むＶＨ領域を含む。他の実施形態において、抗体は、上で参照したＶＬ  ＦＲ１、ＶＬ  ＦＲ２、ＶＬ  ＦＲ３、及びＶＬ  ＦＲ４の４つすべてを含むＶＬ領域を含む。さらに他の実施形態において、抗体は、上で参照したＶＨ  ＦＲ１、ＶＨ  ＦＲ２、ＶＨ  ＦＲ３、及びＶＨ  ＦＲ４の４つすべてを含むＶＨ領域、ならびに上で参照したＶＬ  ＦＲ１、ＶＬ  ＦＲ２、ＶＬ  ＦＲ３、及びＶＬ  ＦＲ４の４つすべてを含むＶＬ領域を含む。
【０２５１】
いくつかの実施形態において、抗体またはその断片は、ＶＨ領域及びＶＬ領域を含み、ＶＨ領域は以下を含み：（１）配列番号２４のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＦＲ１；（２）配列番号２０のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＦＲ２；（３）配列番号２３のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＦＲ３；及び／または（４）配列番号２２のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＦＲ４；ＶＬ領域は以下を含む：（１）配列番号１４のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＦＲ１；（２）配列番号１５のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＦＲ２；（３）配列番号１８のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＦＲ３；及び／または（４）配列番号１７のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＦＲ４。いくつかの実施形態において、抗体は、上で参照したＶＨ  ＦＲ１、ＶＨ  ＦＲ２、ＶＨ  ＦＲ３、及びＶＨ  ＦＲ４の４つすべてを含むＶＨ領域を含む。他の実施形態において、抗体は、上で参照したＶＬ  ＦＲ１、ＶＬ  ＦＲ２、ＶＬ  ＦＲ３、及びＶＬ  ＦＲ４の４つすべてを含むＶＬ領域を含む。さらに他の実施形態において、抗体は、上で参照したＶＨ  ＦＲ１、ＶＨ  ＦＲ２、ＶＨ  ＦＲ３、及びＶＨ  ＦＲ４の４つすべてを含むＶＨ領域、ならびに上で参照したＶＬ  ＦＲ１、ＶＬ  ＦＲ２、ＶＬ  ＦＲ３、及びＶＬ  ＦＲ４の４つすべてを含むＶＬ領域を含む。
【０２５２】
本明細書では、表３〜４に記載した１つ以上（例えば１、２、３、または４つ）のＶＨ  ＦＲ及び１つ以上（例えば１、２、３、または４つ）のＶＬ  ＦＲを含む抗体も提供する。特に、本明細書では、ＶＨ  ＦＲ１（配列番号１９または２４）及びＶＬ  ＦＲ１（配列番号１４）を含む抗体を提供する。一実施形態において、抗体はＶＨ  ＦＲ１（配列番号１９または２４）及びＶＬ  ＦＲ２（配列番号１５）を含む。いくつかの実施形態において、抗体はＶＨ  ＦＲ１（配列番号１９または２４）及びＶＬ  ＦＲ３（配列番号１６または１８）を含む。別の実施形態において、抗体はＶＨ  ＦＲ１（配列番号１９または２４）及びＶＬ  ＦＲ４（配列番号１７）を含む。他の実施形態において、抗体はＶＨ  ＦＲ２（配列番号２０）及びＶＬ  ＦＲ１（配列番号１４）を含む。一実施形態において、抗体はＶＨ  ＦＲ２（配列番号２０）及びＶＬ  ＦＲ２（配列番号１５）を含む。いくつかの実施形態において、抗体はＶＨ  ＦＲ２（配列番号２０）及びＶＬ  ＦＲ３（配列番号１６または１８）を含む。別の実施形態において、抗体はＶＨ  ＦＲ２（配列番号２０）及びＶＬ  ＦＲ４（配列番号１７）を含む。一実施形態において、抗体はＶＨ  ＦＲ３（配列番号２１）及びＶＬ  ＦＲ１（配列番号１４）を含む。他の実施形態において、抗体はＶＨ  ＦＲ３（配列番号２１）及びＶＬ  ＦＲ２（配列番号１５）を含む。別の実施形態において、抗体はＶＨ  ＦＲ３（配列番号２１）及びＶＬ  ＦＲ３（配列番号１６または１８）を含む。いくつかの実施形態において、抗体はＶＨ  ＦＲ３（配列番号２１）及びＶＬ  ＦＲ４（配列番号１７）を含む。一実施形態において、抗体はＶＨ  ＦＲ４（配列番号２２）及びＶＬ  ＦＲ１（配列番号１４）を含む。別の実施形態において、抗体はＶＨ  ＦＲ４（配列番号２２）及びＶＬ  ＦＲ２（配列番号１５）を含む。一実施形態において、抗体はＶＨ  ＦＲ４（配列番号２２）及びＶＬ  ＦＲ３（配列番号１６または１８）を含む。いくつかの実施形態において、抗体はＶＨ  ＦＲ４（配列番号２２）及びＶＬ  ＦＲ４（配列番号１７）を含む。別の実施形態において、抗体は、ＶＨ  ＦＲ１（配列番号１９または２４）、ＶＨ  ＦＲ２（配列番号２０）、及びＶＬ  ＦＲ１（配列番号１４）を含む。他の実施形態において、抗体は、ＶＨ  ＦＲ１（配列番号１９または２４）、ＶＨ  ＦＲ２（配列番号２０）、及びＶＬ  ＦＲ２（配列番号１５）を含む。一実施形態において、抗体は、ＶＨ  ＦＲ１（配列番号１９または２４）、ＶＨ  ＦＲ２（配列番号２０）、及びＶＬ  ＦＲ３（配列番号１６または１８）を含む。別の実施形態において、抗体は、ＶＨ  ＦＲ１（配列番号１９または２４）、ＶＨ  ＦＲ２（配列番号２０）、及びＶＬ  ＦＲ４（配列番号１７）を含む。いくつかの実施形態において、抗体は、ＶＨ  ＦＲ２（配列番号２０）、ＶＨ  ＦＲ３（配列番号２１または２３）、及びＶＬ  ＦＲ１（配列番号１４）を含む。一実施形態において、抗体は、ＶＨ  ＦＲ２（配列番号２０）、ＶＨ  ＦＲ３（配列番号２１または２３）、及びＶＬ  ＦＲ２（配列番号１５）を含む。別の実施形態において、抗体は、ＶＨ  ＦＲ２（配列番号２０）、ＶＨ  ＦＲ３（配列番号２１または２３）、及びＶＬ  ＦＲ３���配列番号１６または１８）を含む。他の実施形態において、抗体は、ＶＨ  ＦＲ２（配列番号２０）、ＶＨ  ＦＲ３（配列番号２１または２３）、及びＶＬ  ＦＲ４（配列番号１７）を含む。いくつかの実施形態において、抗体は、ＶＨ  ＦＲ１（配列番号１９または２４）、ＶＬ  ＦＲ１（配列番号１４）、及びＶＬ  ＦＲ２（配列番号１５）を含む。別の実施形態において、抗体は、ＶＨ  ＦＲ１（配列番号１９または２４）、ＶＬ  ＦＲ１（配列番号１４）、及びＶＬ  ＦＲ３（配列番号１６または１８）を含む。一実施形態において、抗体は、ＶＨ  ＦＲ１（配列番号１９または２４）、ＶＬ  ＦＲ１（配列番号１４）、及びＶＬ  ＦＲ４（配列番号１７）を含む。一実施形態において、抗体は、ＶＨ  ＦＲ１（配列番号１９または２４）、ＶＬ  ＦＲ２（配列番号１５）及びＶＬ  ＦＲ３（配列番号１６または１８）を含む。別の実施形態において、抗体は、ＶＨ  ＦＲ１（配列番号１９または２４）、ＶＬ  ＦＲ２（配列番号１５）及びＶＬ  ＦＲ４（配列番号１７）を含む。いくつかの実施形態において、抗体は、ＶＨ  ＦＲ１（配列番号１９または２４）、ＶＬ  ＦＲ３（配列番号１６または１８）、及びＶＬ  ＦＲ４（配列番号１７）を含む。他の実施形態において、抗体は、ＶＨ  ＦＲ２（配列番号２０）、ＶＬ  ＦＲ１（配列番号１４）、及びＶＬ  ＦＲ２（配列番号１５）を含む。別の実施形態において、抗体は、ＶＨ  ＦＲ２（配列番号２０）、ＶＬ  ＦＲ１（配列番号１４）、及びＶＬ  ＦＲ３（配列番号１６または１８）を含む。一実施形態において、抗体は、ＶＨ  ＦＲ２（配列番号２０）、ＶＬ  ＦＲ１（配列番号１４）、及びＶＬ  ＦＲ４（配列番号１７）を含む。いくつかの実施形態において、抗体は、ＶＨ  ＦＲ２（配列番号２０）、ＶＬ  ＦＲ２（配列番号１５）、及びＶＬ  ＦＲ３（配列番号１６または１８）を含む。別の実施形態において、抗体は、ＶＨ  ＦＲ２（配列番号２０）、ＶＬ  ＦＲ２（配列番号１５）及びＶＬ  ＦＲ４（配列番号１７）を含む。一実施形態において、抗体は、ＶＨ  ＦＲ２（配列番号２０）、ＶＬ  ＦＲ３（配列番号１６または１８）、及びＶＬ  ＦＲ４（配列番号１７）を含む。別の実施形態において、抗体は、ＶＨ  ＦＲ３（配列番号２１または２３）、ＶＬ  ＦＲ１（配列番号１４）、及びＶＬ  ＦＲ２（配列番号１５）を含む。他の実施形態において、抗体は、ＶＨ  ＦＲ３（配列番号２１または２３）、ＶＬ  ＦＲ１（配列番号１４）、及びＶＬ  ＦＲ３（配列番号１６または１８）を含む。いくつかの実施形態において、抗体は、ＶＨ  ＦＲ３（配列番号２１または２３）、ＶＬ  ＦＲ１（配列番号１４）、及びＶＬ  ＦＲ４（配列番号１７）を含む。別の実施形態において、抗体は、ＶＨ  ＦＲ３（配列番号２１または２３）、ＶＬ  ＦＲ２（配列番号１５）及びＶＬ  ＦＲ３（配列番号１６または１８）を含む。一実施形態において、抗体は、ＶＨ  ＦＲ３（配列番号２１または２３）、ＶＬ  ＦＲ２（配列番号１５）及びＶＬ  ＦＲ４（配列番号１７）を含む。一実施形態において、抗体は、ＶＨ  ＦＲ３（配列番号２１または２３）、ＶＬ  ＦＲ３（配列番号１６または１８）、及びＶＬ  ＦＲ４（配列番号１７）を含む。別の実施形態において、抗体は、ＶＨ  ＦＲ４��配列番号２２）、ＶＬ  ＦＲ１（配列番号１４）、及びＶＬ  ＦＲ２（配列番号１５）を含む。いくつかの実施形態において、抗体は、ＶＨ  ＦＲ４（配列番号２２）、ＶＬ  ＦＲ１（配列番号１４）、及びＶＬ  ＦＲ３（配列番号１６または１８）を含む。他の実施形態において、抗体は、ＶＨ  ＦＲ４（配列番号２２）、ＶＬ  ＦＲ１（配列番号１４）、及びＶＬ  ＦＲ４（配列番号１７）を含む。別の実施形態において、抗体は、ＶＨ  ＦＲ４（配列番号２２）、ＶＬ  ＦＲ２（配列番号１５）、及びＶＬ  ＦＲ３（配列番号１６または１８）を含む。一実施形態において、抗体は、ＶＨ  ＦＲ４（配列番号２２）、ＶＬ  ＦＲ２（配列番号１５）及びＶＬ  ＦＲ４（配列番号１７）を含む。いくつかの実施形態において、抗体は、ＶＨ  ＦＲ４（配列番号２２）、ＶＬ  ＦＲ３（配列番号１６または１８）、及びＶＬ  ＦＲ４（配列番号１７）を含む。別の実施形態において、抗体は、ＶＨ  ＦＲ１（配列番号１９または２４）、ＶＨ  ＦＲ２（配列番号２０）、ＶＨ  ＦＲ３（配列番号２１）、及びＶＬ  ＦＲ１（配列番号１４）を含む。一実施形態において、抗体は、ＶＨ  ＦＲ１（配列番号１９または２４）、ＶＨ  ＦＲ２（配列番号２０）、ＶＨ  ＦＲ３（配列番号２１）、及びＶＬ  ＦＲ２（配列番号１５）を含む。他の実施形態において、抗体は、ＶＨ  ＦＲ１（配列番号１９または２４）、ＶＨ  ＦＲ２（配列番号２０）、ＶＨ  ＦＲ３（配列番号２１）、及びＶＬ  ＦＲ３（配列番号１６または１８）を含む。別の実施形態において、抗体は、ＶＨ  ＦＲ１（配列番号１９または２４）、ＶＨ  ＦＲ２（配列番号２０）、ＶＨ  ＦＲ３（配列番号２１）、及びＶＬ  ＦＲ４（配列番号１７）を含む。いくつかの実施形態において、抗体は、ＶＨ  ＦＲ１（配列番号１９または２４）、ＶＨ  ＦＲ２（配列番号２０）、ＶＨ  ＦＲ４（配列番号２２）、及びＶＬ  ＦＲ１（配列番号１４）を含む。一実施形態において、抗体は、ＶＨ  ＦＲ１（配列番号１９または２４）、ＶＨ  ＦＲ２（配列番号２０）、ＶＨ  ＦＲ４（配列番号２２）、及びＶＬ  ＦＲ２（配列番号１５）を含む。別の実施形態において、抗体は、ＶＨ  ＦＲ１（配列番号１９または２４）、ＶＨ  ＦＲ２（配列番号２０）、ＶＨ  ＦＲ４（配列番号２２）、及びＶＬ  ＦＲ３（配列番号１６または１８）を含む。一実施形態において、抗体は、ＶＨ  ＦＲ１（配列番号１９または２４）、ＶＨ  ＦＲ２（配列番号２０）、ＶＨ  ＦＲ４（配列番号２２）、及びＶＬ  ＦＲ４（配列番号１７）を含む。いくつかの実施形態において、抗体は、ＶＨ  ＦＲ１（配列番号１９または２４）、ＶＨ  ＦＲ３（配列番号２１または２３）、ＶＨ  ＦＲ４（配列番号２２）、及びＶＬ  ＦＲ１（配列番号１４）を含む。別の実施形態において、抗体は、ＶＨ  ＦＲ１（配列番号１９または２４）、ＶＨ  ＦＲ３（配列番号２１または２３）、ＶＨ  ＦＲ４（配列番号２２）、及びＶＬ  ＦＲ２（配列番号１５）を含む。他の実施形態において、抗体は、ＶＨ  ＦＲ１（配列番号１９または２４）、ＶＨ  ＦＲ３（配列番号２１または２３）、ＶＨ  ＦＲ４（配列番号２２）、及びＶＬ  ＦＲ３（配列番号１６または１８）を含む。一実施形態において、抗体は、ＶＨ  ＦＲ１（配列番号１９または���４）、ＶＨ  ＦＲ３（配列番号２１または２３）、ＶＨ  ＦＲ４（配列番号２２）、及びＶＬ  ＦＲ４（配列番号１７）を含む。別の実施形態において、抗体は、ＶＨ  ＦＲ２（配列番号２０）、ＶＨ  ＦＲ３（配列番号２１または２３）、ＶＨ  ＦＲ４（配列番号２２）、及びＶＬ  ＦＲ１（配列番号１４）を含む。いくつかの実施形態において、抗体は、ＶＨ  ＦＲ２（配列番号２０）、ＶＨ  ＦＲ３（配列番号２１または２３）、ＶＨ  ＦＲ４（配列番号２２）、及びＶＬ  ＦＲ２（配列番号１５）を含む。一実施形態において、抗体は、ＶＨ  ＦＲ２（配列番号２０）、ＶＨ  ＦＲ３（配列番号２１または２３）、ＶＨ  ＦＲ４（配列番号２２）、及びＶＬ  ＦＲ３（配列番号１６または１８）を含む。別の実施形態において、抗体は、ＶＨ  ＦＲ２（配列番号２０）、ＶＨ  ＦＲ３（配列番号２１または２３）、ＶＨ  ＦＲ４（配列番号２２）、及びＶＬ  ＦＲ４（配列番号１７）を含む。他の実施形態において、抗体は、ＶＨ  ＦＲ１（配列番号１９または２４）、ＶＨ  ＦＲ２（配列番号２０）、ＶＬ  ＦＲ１（配列番号１４）、及びＶＬ  ＦＲ２（配列番号１５）を含む。いくつかの実施形態において、抗体は、ＶＨ  ＦＲ１（配列番号１９または２４）、ＶＨ  ＦＲ２（配列番号２０）、ＶＬ  ＦＲ１（配列番号１４）、及びＶＬ  ＦＲ３（配列番号１６または１８）を含む。別の実施形態において、抗体は、ＶＨ  ＦＲ１（配列番号１９または２４）、ＶＨ  ＦＲ２（配列番号２０）、ＶＬ  ＦＲ１（配列番号１４）、及びＶＬ  ＦＲ４（配列番号１７）を含む。一実施形態において、抗体は、ＶＨ  ＦＲ１（配列番号１９または２４）、ＶＨ  ＦＲ２（配列番号２０）、ＶＬ  ＦＲ２（配列番号１５）、及びＶＬ  ＦＲ３（配列番号１６または１８）を含む。一実施形態において、抗体は、ＶＨ  ＦＲ１（配列番号１９または２４）、ＶＨ  ＦＲ２（配列番号２０）、ＶＬ  ＦＲ２（配列番号１５）、及びＶＬ  ＦＲ４（配列番号１７）を含む。別の実施形態において、抗体は、ＶＨ  ＦＲ１（配列番号１９または２４）、ＶＨ  ＦＲ２（配列番号２０）、ＶＬ  ＦＲ３（配列番号１６または１８）、及びＶＬ  ＦＲ４（配列番号１７）を含む。いくつかの実施形態において、抗体は、ＶＨ  ＦＲ１（配列番号１９または２
４）、ＶＨ  ＦＲ３（配列番号２１）、ＶＬ  ＦＲ１（配列番号１４）、及びＶＬ  ＦＲ２（配列番号１５）を含む。他の実施形態において、抗体は、ＶＨ  ＦＲ１（配列番号１９または２４）、ＶＨ  ＦＲ３（配列番号２１）、ＶＬ  ＦＲ１（配列番号１４）、及びＶＬ  ＦＲ３（配列番号１６または１８）を含む。別の実施形態において、抗体は、ＶＨ  ＦＲ１（配列番号１９または２４）、ＶＨ  ＦＲ３（配列番号２１）、ＶＬ  ＦＲ１（配列番号１４）、及びＶＬ  ＦＲ４（配列番号１７）を含む。一実施形態において、抗体は、ＶＨ  ＦＲ１（配列番号１９または２４）、ＶＨ  ＦＲ３（配列番号２１）、ＶＬ  ＦＲ２（配列番号１５）、及びＶＬ  ＦＲ３（配列番号１６または１８）を含む。いくつかの実施形態において、抗体は、ＶＨ  ＦＲ１（配列番号１９または２４）、ＶＨ  ＦＲ３（配列番号２１）、ＶＬ  ＦＲ２（配列番号１５）、及びＶＬ  ＦＲ４（配列番号１７）を含む。別の実施形態において、抗体は、ＶＨ  ＦＲ１（配列番号１９または２４）、ＶＨ  ＦＲ３（配列番号２１）、ＶＬ  ＦＲ３（配列番号１６または１８）、及びＶＬ  ＦＲ４（配列番号１７）を含む。一実施形態において、抗体は、ＶＨ  ＦＲ１（配列番号１９または２４）、ＶＨ  ＦＲ４（配列番号２２）、ＶＬ  ＦＲ１（配列番号１４）、及びＶＬ  ＦＲ２（配列番号１５）を含む。他の実施形態において、抗体は、ＶＨ  ＦＲ１（配列番号１９または２４）、ＶＨ  ＦＲ４（配列番号２２）、ＶＬ  ＦＲ１（配列番号１４）、及びＶＬ  ＦＲ３（配列番号１６または１８）を含む。別の実施形態において、抗体は、ＶＨ  ＦＲ１（配列番号１９または２４）、ＶＨ  ＦＲ４（配列番号２２）、ＶＬ  ＦＲ１（配列番号１４）、及びＶＬ  ＦＲ４（配列番号１７）を含む。いくつかの実施形態において、抗体は、ＶＨ  ＦＲ１（配列番号１９または２４）、ＶＨ  ＦＲ４（配列番号２２）、ＶＬ  ＦＲ２（配列番号１５）、及びＶＬ  ＦＲ３（配列番号１６または１８）を含む。一実施形態において、抗体は、ＶＨ  ＦＲ１（配列番号１９または２４）、ＶＨ  ＦＲ４（配列番号２２）、ＶＬ  ＦＲ２（配列番号１５）、及びＶＬ  ＦＲ４（配列番号１７）を含む。別の実施形態において、抗体は、ＶＨ  ＦＲ１（配列番号１９または２４）、ＶＨ  ＦＲ４（配列番号２２）、ＶＬ  ＦＲ３（配列番号１６または１８）、及びＶＬ  ＦＲ４（配列番号１７）を含む。一実施形態において、抗体は、ＶＨ  ＦＲ２（配列番号２０）、ＶＨ  ＦＲ３（配列番号２１）、ＶＬ  ＦＲ１（配列番号１４）、及びＶＬ  ＦＲ２（配列番号１５）を含む。いくつかの実施形態において、抗体は、ＶＨ  ＦＲ２（配列番号２０）、ＶＨ  ＦＲ３（配列番号２１）、ＶＬ  ＦＲ１（配列番号１４）、及びＶＬ  ＦＲ３（配列番号１６または１８）を含む。別の実施形態において、抗体は、ＶＨ  ＦＲ２（配列番号２０）、ＶＨ  ＦＲ３（配列番号２１）、ＶＬ  ＦＲ１（配列番号１４）、及びＶＬ  ＦＲ４（配列番号１７）を含む。他の実施形態において、抗体は、ＶＨ  ＦＲ２（配列番号２０）、ＶＨ  ＦＲ３（配列番号２１）、ＶＬ  ＦＲ２（配列番号１５）、及びＶＬ  ＦＲ３（配列番号１６または１８）を含む。一実施形態において、抗体は、ＶＨ  ＦＲ２（配列番号２０）、ＶＨ  Ｆ��３（配列番号２１）、ＶＬ  ＦＲ２（配列番号１５）、及びＶＬ  ＦＲ４（配列番号１７）を含む。別の実施形態において、抗体は、ＶＨ  ＦＲ２（配列番号２０）、ＶＨ  ＦＲ３（配列番号２１）、ＶＬ  ＦＲ３（配列番号１６または１８）、及びＶＬ  ＦＲ４（配列番号１７）を含む。いくつかの実施形態において、抗体は、ＶＨ  ＦＲ２（配列番号２０）、ＶＨ  ＦＲ４（配列番号２２）、ＶＬ  ＦＲ１（配列番号１４）、及びＶＬ  ＦＲ２（配列番号１５）を含む。一実施形態において、抗体は、ＶＨ  ＦＲ２（配列番号２０）、ＶＨ  ＦＲ４（配列番号２２）、ＶＬ  ＦＲ１（配列番号１４）、及びＶＬ  ＦＲ３（配列番号１６または１８）を含む。別の実施形態において、抗体は、ＶＨ  ＦＲ２（配列番号２０）、ＶＨ  ＦＲ４（配列番号２２）、ＶＬ  ＦＲ１（配列番号１４）、及びＶＬ  ＦＲ４（配列番号１７）を含む。他の実施形態において、抗体は、ＶＨ  ＦＲ２（配列番号２０）、ＶＨ  ＦＲ４（配列番号２２）、ＶＬ  ＦＲ２（配列番号１５）、及びＶＬ  ＦＲ３（配列番号１６または１８）を含む。いくつかの実施形態において、抗体は、ＶＨ  ＦＲ２（配列番号２０）、ＶＨ  ＦＲ４（配列番号２２）、ＶＬ  ＦＲ２（配列番号１５）、及びＶＬ  ＦＲ４（配列番号１７）を含む。別の実施形態において、抗体は、ＶＨ  ＦＲ２（配列番号２０）、ＶＨ  ＦＲ４（配列番号２２）、ＶＬ  ＦＲ３（配列番号１６または１８）、及びＶＬ  ＦＲ４（配列番号１７）を含む。一実施形態において、抗体は、ＶＨ  ＦＲ３（配列番号２１または２３）、ＶＨ  ＦＲ４（配列番号２２）、ＶＬ  ＦＲ１（配列番号１４）、及びＶＬ  ＦＲ２（配列番号１５）を含む。一実施形態において、抗体は、ＶＨ  ＦＲ３（配列番号２１または２３）、ＶＨ  ＦＲ４（配列番号２２）、ＶＬ  ＦＲ１（配列番号１４）、及びＶＬ  ＦＲ３（配列番号１６または１８）を含む。別の実施形態において、抗体は、ＶＨ  ＦＲ３（配列番号２１または２３）、ＶＨ  ＦＲ４（配列番号２２）、ＶＬ  ＦＲ１（配列番号１４）、及びＶＬ  ＦＲ４（配列番号１７）を含む。いくつかの実施形態において、抗体は、ＶＨ  ＦＲ３（配列番号２１または２３）、ＶＨ  ＦＲ４（配列番号２２）、ＶＬ  ＦＲ２（配列番号１５）、及びＶＬ  ＦＲ３（配列番号１６または１８）を含む。他の実施形態において、抗体は、ＶＨ  ＦＲ３（配列番号２１または２３）、ＶＨ  ＦＲ４（配列番号２２）、ＶＬ  ＦＲ２（配列番号１５）、及びＶＬ  ＦＲ４（配列番号１７）を含む。別の実施形態において、抗体は、ＶＨ  ＦＲ３（配列番号２１または２３）、ＶＨ  ＦＲ４（配列番号２２）、ＶＬ  ＦＲ３（配列番号１６または１８）、及びＶＬ  ＦＲ４（配列番号１７）を含む。一実施形態において、抗体は、ＶＨ  ＦＲ１（配列番号１９または２４）、ＶＬ  ＦＲ１（配列番号１４）、ＶＬ  ＦＲ２（配列番号１５）、及びＶＬ  ＦＲ３（配列番号１６または１８）を含む。いくつかの実施形態において、抗体は、ＶＨ  ＦＲ１（配列番号１９または２４）、ＶＬ  ＦＲ１（配列番号１４）、ＶＬ  ＦＲ２（配列番号１５）、及びＶＬ  ＦＲ４（配列番号１７）を含む。別の実施形態において、抗体は、ＶＨ  ＦＲ１（配列番号１９または２４）、ＶＬ  ＦＲ１（配列番号１４）、ＶＬ  ���Ｒ３（配列番号１６または１８）、及びＶＬ  ＦＲ４（配列番号１７）を含む。一実施形態において、抗体は、ＶＨ  ＦＲ１（配列番号１９または２４）、ＶＬ  ＦＲ２（配列番号１５）、ＶＬ  ＦＲ３（配列番号１６または１８）、及びＶＬ  ＦＲ４（配列番号１７）を含む。他の実施形態において、抗体は、ＶＨ  ＦＲ２（配列番号２０）、ＶＬ  ＦＲ１（配列番号１４）、ＶＬ  ＦＲ２（配列番号１５）、及びＶＬ  ＦＲ３（配列番号１６または１８）を含む。別の実施形態において、抗体は、ＶＨ  ＦＲ２（配列番号２０）、ＶＬ  ＦＲ１（配列番号１４）、ＶＬ  ＦＲ２（配列番号１５）、及びＶＬ  ＦＲ４（配列番号１７）を含む。いくつかの実施形態において、抗体は、ＶＨ  ＦＲ２（配列番号２０）、ＶＬ  ＦＲ１（配列番号１４）、ＶＬ  ＦＲ３（配列番号１６または１８）、及びＶＬ  ＦＲ４（配列番号１７）を含む。一実施形態において、抗体は、ＶＨ  ＦＲ２（配列番号２０）、ＶＬ  ＦＲ２（配列番号１５）、ＶＬ  ＦＲ３（配列番号１６または１８）、及びＶＬ  ＦＲ４（配列番号１７）を含む。別の実施形態において、抗体は、ＶＨ  ＦＲ３（配列番号２１または２３）、ＶＬ  ＦＲ１（配列番号１４）、ＶＬ  ＦＲ２（配列番号１５）、及びＶＬ  ＦＲ３（配列番号１６または１８）を含む。一実施形態において、抗体は、ＶＨ  ＦＲ３（配列番号２１または２３）、ＶＬ  ＦＲ１（配列番号１４）、ＶＬ  ＦＲ２（配列番号１５）、及びＶＬ  ＦＲ４（配列番号１７）を含む。いくつかの実施形態において、抗体は、ＶＨ  ＦＲ３（配列番号２１または２３）、ＶＬ  ＦＲ１（配列番号１４）、ＶＬ  ＦＲ３（配列番号１６または１８）、及びＶＬ  ＦＲ４（配列番号１７）を含む。別の実施形態において、抗体は、ＶＨ  ＦＲ３（配列番号２１または２３）、ＶＬ  ＦＲ２（配列番号１５）、ＶＬ  ＦＲ３（配列番号１６または１８）、及びＶＬ  ＦＲ４（配列番号１７）を含む。他の実施形態において、抗体は、ＶＨ  ＦＲ４（配列番号２２）、ＶＬ  ＦＲ１（配列番号１４）、ＶＬ  ＦＲ２（配列番号１５）、及びＶＬ  ＦＲ３（配列番号１６または１８）を含む。一実施形態において、抗体は、ＶＨ  ＦＲ４（配列番号２２）、ＶＬ  ＦＲ１（配列番号１４）、ＶＬ  ＦＲ２（配列番号１５）、及びＶＬ  ＦＲ４（配列番号１７）を含む。別の実施形態において、抗体は、ＶＨ  ＦＲ４（配列番号２２）、ＶＬ  ＦＲ１（配列番号１４）、ＶＬ  ＦＲ３（配列番号１６または１８）、及びＶＬ  ＦＲ４（配列番号１７）を含む。いくつかの実施形態において、抗体は、ＶＨ  ＦＲ４（配列番号２２）、ＶＬ  ＦＲ２（配列番号１５）、ＶＬ  ＦＲ３（配列番号１６または１８）、及びＶＬ  ＦＲ４（配列番号１７）を含む。一実施形態において、抗体は、ＶＨ  ＦＲ１（配列番号１９または２４）、ＶＨ  ＦＲ２（配列番号２０）、ＶＨ  ＦＲ３（配列番号２１または２３）、ＶＨ  ＦＲ４（配列番号２２）、及びＶＬ  ＦＲ１（配列番号１４）を含む。別の実施形態において、抗体は、ＶＨ  ＦＲ１（配列番号１９または２４）、ＶＨ  ＦＲ２（配列番号２０）、ＶＨ  ＦＲ３（配列番号２１または２３）、ＶＨ  ＦＲ４（配列番号２２）、及びＶＬ  ＦＲ２（配列番号１５）を含む。他の実施形態において、抗体は、ＶＨ  ＦＲ��（配列番号１９または２４）、ＶＨ  ＦＲ２（配列番号２０）、ＶＨ  ＦＲ３（配列番号２１または２３）、ＶＨ  ＦＲ４（配列番号２２）、及びＶＬ  ＦＲ３（配列番号１６または１８）を含む。いくつかの実施形態において、抗体は、ＶＨ  ＦＲ１（配列番号１９または２４）、ＶＨ  ＦＲ２（配列番号２０）、ＶＨ  ＦＲ３（配列番号２１または２３）、ＶＨ  ＦＲ４（配列番号２２）、及びＶＬ  ＦＲ４（配列番号１７）を含む。別の実施形態において、抗体は、ＶＨ  ＦＲ１（配列番号１９または２４）、ＶＨ  ＦＲ２（配列番号２０）、ＶＨ  ＦＲ３（配列番号２１または２３）、ＶＬ  ＦＲ１（配列番号１４）、及びＶＬ  ＦＲ２（配列番号１５）を含む。一実施形態において、抗体は、ＶＨ  ＦＲ１（配列番号１９または２４）、ＶＨ  ＦＲ２（配列番号２０）、ＶＨ  ＦＲ３（配列番号２１または２３）、ＶＬ  ＦＲ１（配列番号１４）、及びＶＬ  ＦＲ３（配列番号１６または１８）を含む。一実施形態において、抗体は、ＶＨ  ＦＲ１（配列番号１９または２４）、ＶＨ  ＦＲ２（配列番号２０）、ＶＨ  ＦＲ３（配列番号２１または２３）、ＶＬ  ＦＲ１（配列番号１４）、及びＶＬ  ＦＲ４（配列番号１７）を含む。別の実施形態において、抗体は、ＶＨ  ＦＲ１（配列番号１９または２４）、ＶＨ  ＦＲ２（配列番号２０）、ＶＨ  ＦＲ３（配列番号２１または２３）、ＶＬ  ＦＲ２（配列番号１５）、及びＶＬ  ＦＲ３（配列番号１６または１８）を含む。いくつかの実施形態において、抗体は、ＶＨ  ＦＲ１（配列番号１９または２４）、ＶＨ  ＦＲ２（配列番号２０）、ＶＨ  ＦＲ３（配列番号２１または２３）、ＶＬ  ＦＲ２（配列番号１５）、及びＶＬ  ＦＲ４（配列番号１７）を含む。他の実施形態において、抗体は、ＶＨ  ＦＲ１（配列番号１９または２４）、ＶＨ  ＦＲ２（配列番号２０）、ＶＨ  ＦＲ３（配列番号２１または２３）、ＶＬ  ＦＲ３（配列番号１６または１８）、及びＶＬ  ＦＲ４（配列番号１７）を含む。別の実施形態において、抗体は、ＶＨ  ＦＲ１（配列番号１９または２４）、ＶＨ  ＦＲ２（配列番号２０）、ＶＨ  ＦＲ４（配列番号２２）、ＶＬ  ＦＲ１（配列番号１４）、及びＶＬ  ＦＲ２（配列番号１５）を含む。一実施形態において、抗体は、ＶＨ  Ｆ
Ｒ１（配列番号１９または２４）、ＶＨ  ＦＲ２（配列番号２０）、ＶＨ  ＦＲ４（配列番号２２）、ＶＬ  ＦＲ１（配列番号１４）、及びＶＬ  ＦＲ３（配列番号１６または１８）を含む。いくつかの実施形態において、抗体は、ＶＨ  ＦＲ１（配列番号１９または２４）、ＶＨ  ＦＲ２（配列番号２０）、ＶＨ  ＦＲ４（配列番号２２）、ＶＬ  ＦＲ１（配列番号１４）、及びＶＬ  ＦＲ４（配列番号１７）を含む。別の実施形態において、抗体は、ＶＨ  ＦＲ１（配列番号１９または２４）、ＶＨ  ＦＲ２（配列番号２０）、ＶＨ  ＦＲ４（配列番号２２）、ＶＬ  ＦＲ２（配列番号１５）、及びＶＬ  ＦＲ３（配列番号１６または１８）を含む。一実施形態において、抗体は、ＶＨ  ＦＲ１（配列番号１９または２４）、ＶＨ  ＦＲ２（配列番号２０）、ＶＨ  ＦＲ４（配列番号２２）、ＶＬ  ＦＲ２（配列番号１５）、及びＶＬ  ＦＲ４（配列番号１７）を含む。他の実施形態において、抗体は、ＶＨ  ＦＲ１（配列番号１９または２４）、ＶＨ  ＦＲ２（配列番号２０）、ＶＨ  ＦＲ４（配列番号２２）、ＶＬ  ＦＲ３（配列番号１６または１８）、及びＶＬ  ＦＲ４（配列番号１７）を含む。別の実施形態において、抗体は、ＶＨ  ＦＲ１（配列番号１９または２４）、ＶＨ  ＦＲ３（配列番号２１または２３）、ＶＨ  ＦＲ４（配列番号２２）、ＶＬ  ＦＲ１（配列番号１４）、及びＶＬ  ＦＲ２（配列番号１５）を含む。いくつかの実施形態において、抗体は、ＶＨ  ＦＲ１（配列番号１９または２４）、ＶＨ  ＦＲ３（配列番号２１または２３）、ＶＨ  ＦＲ４（配列番号２２）、ＶＬ  ＦＲ１（配列番号１４）、及びＶＬ  ＦＲ３（配列番号１６または１８）を含む。一実施形態において、抗体は、ＶＨ  ＦＲ１（配列番号１９または２４）、ＶＨ  ＦＲ３（配列番号２１または２３）、ＶＨ  ＦＲ４（配列番号２２）、ＶＬ  ＦＲ１（配列番号１４）、及びＶＬ  ＦＲ４（配列番号１７）を含む。別の実施形態において、抗体は、ＶＨ  ＦＲ１（配列番号１９または２４）、ＶＨ  ＦＲ３（配列番号２１または２３）、ＶＨ  ＦＲ４（配列番号２２）、ＶＬ  ＦＲ２（配列番号１５）、及びＶＬ  ＦＲ３（配列番号１６または１８）を含む。一実施形態において、抗体は、ＶＨ  ＦＲ１（配列番号１９または２４）、ＶＨ  ＦＲ３（配列番号２１または２３）、ＶＨ  ＦＲ４（配列番号２２）、ＶＬ  ＦＲ２（配列番号１５）、及びＶＬ  ＦＲ４（配列番号１７）を含む。いくつかの実施形態において、抗体は、ＶＨ  ＦＲ１（配列番号１９または２４）、ＶＨ  ＦＲ３（配列番号２１または２３）、ＶＨ  ＦＲ４（配列番号２２）、ＶＬ  ＦＲ３（配列番号１６または１８）、及びＶＬ  ＦＲ４（配列番号１７）を含む。別の実施形態において、抗体は、ＶＨ  ＦＲ２（配列番号２０）、ＶＨ  ＦＲ３（配列番号２１または２３）、ＶＨ  ＦＲ４（配列番号２２）、ＶＬ  ＦＲ１（配列番号１４）、及びＶＬ  ＦＲ２（配列番号１５）を含む。他の実施形態において、抗体は、ＶＨ  ＦＲ２（配列番号２０）、ＶＨ  ＦＲ３（配列番号２１または２３）、ＶＨ  ＦＲ４（配列番号２２）、ＶＬ  ＦＲ１（配列番号１４）、及びＶＬ  ＦＲ３（配列番号１６または１８）を含む。一実施形態において、抗体は、ＶＨ  ＦＲ２（配列番号２０）、ＶＨ  ＦＲ３（配列番号２１または２３）、ＶＨ  ＦＲ４（配列番号２２）、ＶＬ  ＦＲ１（配列番号１４）、及びＶＬ  ＦＲ４（配列番号１７）を含む。別の実施形態において、抗体は、ＶＨ  ＦＲ２（配列番号２０）、ＶＨ  ＦＲ３（配列番号２１または２３）、ＶＨ  ＦＲ４（配列番号２２）、ＶＬ  ＦＲ２（配列番号１５）、及びＶＬ  ＦＲ３（配列番号１６または１８）を含む。いくつかの実施形態において、抗体は、ＶＨ  ＦＲ２（配列番号２０）、ＶＨ  ＦＲ３（配列番号２１または２３）、ＶＨ  ＦＲ４（配列番号２２）、ＶＬ  ＦＲ２（配列番号１５）、及びＶＬ  ＦＲ４（配列番号１７）を含む。一実施形態において、抗体は、ＶＨ  ＦＲ２（配列番号２０）、ＶＨ  ＦＲ３（配列番号２１または２３）、ＶＨ  ＦＲ４（配列番号２２）、ＶＬ  ＦＲ３（配列番号１６または１８）、及びＶＬ  ＦＲ４（配列番号１７）を含む。別の実施形態において、抗体は、ＶＨ  ＦＲ１（配列番号１９または２４）、ＶＨ  ＦＲ２（配列番号２０）、ＶＬ  ＦＲ１（配列番号１４）、ＶＬ  ＦＲ２（配列番号１５）、及びＶＬ  ＦＲ３（配列番号１６または１８）を含む。他の実施形態において、抗体は、ＶＨ  ＦＲ１（配列番号１９または２４）、ＶＨ  ＦＲ２（配列番号２０）、ＶＬ  ＦＲ１（配列番号１４）、ＶＬ  ＦＲ２（配列番号１５）、及びＶＬ  ＦＲ４（配列番号１７）を含む。いくつかの実施形態において、抗体は、ＶＨ  ＦＲ１（配列番号１９または２４）、ＶＨ  ＦＲ２（配列番号２０）、ＶＬ  ＦＲ１（配列番号１４）、ＶＬ  ＦＲ３（配列番号１６または１８）、及びＶＬ  ＦＲ４（配列番号１７）を含む。別の実施形態において、抗体は、ＶＨ  ＦＲ１（配列番号１９または２４）、ＶＨ  ＦＲ２（配列番号２０）、ＶＬ  ＦＲ２（配列番号１５）、ＶＬ  ＦＲ３（配列番号１６または１８）、及びＶＬ  ＦＲ４（配列番号１７）を含む。一実施形態において、抗体は、ＶＨ  ＦＲ１（配列番号１９または２４）、ＶＨ  ＦＲ３（配列番号２１または２３）、ＶＬ  ＦＲ１（配列番号１４）、ＶＬ  ＦＲ２（配列番号１５）、及びＶＬ  ＦＲ３（配列番号１６または１８）を含む。一実施形態において、抗体は、ＶＨ  ＦＲ１（配列番号１９または２４）、ＶＨ  ＦＲ３（配列番号２１または２３）、ＶＬ  ＦＲ１（配列番号１４）、ＶＬ  ＦＲ２（配列番号１５）、及びＶＬ  ＦＲ４（配列番号１７）を含む。別の実施形態において、抗体は、ＶＨ  ＦＲ１（配列番号１９または２４）、ＶＨ  ＦＲ３（配列番号２１または２３）、ＶＬ  ＦＲ１（配列番号１４）、ＶＬ  ＦＲ３（配列番号１６または１８）、及びＶＬ  ＦＲ４（配列番号１７）を含む。いくつかの実施形態において、抗体は、ＶＨ  ＦＲ１（配列番号１９または２４）、ＶＨ  ＦＲ３（配列番号２１または２３）、ＶＬ  ＦＲ２（配列番号１５）、ＶＬ  ＦＲ３（配列番号１６または１８）、及びＶＬ  ＦＲ４（配列番号１７）を含む。他の実施形態において、抗体は、ＶＨ  ＦＲ１（配列番号１９または２４）、ＶＨ  ＦＲ４（配列番号２２）、ＶＬ  ＦＲ１（配列番号１４）、ＶＬ  ＦＲ２（配列番号１５）、及びＶＬ  ＦＲ３（配列番号１６または１８）を含む。別の実施形態において、抗体は、ＶＨ  ＦＲ１（配列番号１９または２４）、ＶＨ  ＦＲ４（配列番号２２）、Ｖ��  ＦＲ１（配列番号１４）、ＶＬ  ＦＲ２（配列番号１５）、及びＶＬ  ＦＲ４（配列番号１７）を含む。一実施形態において、抗体は、ＶＨ  ＦＲ１（配列番号１９または２４）、ＶＨ  ＦＲ４（配列番号２２）、ＶＬ  ＦＲ１（配列番号１４）、ＶＬ  ＦＲ３（配列番号１６または１８）、及びＶＬ  ＦＲ４（配列番号１７）を含む。いくつかの実施形態において、抗体は、ＶＨ  ＦＲ１（配列番号１９または２４）、ＶＨ  ＦＲ４（配列番号２２）、ＶＬ  ＦＲ２（配列番号１５）、ＶＬ  ＦＲ３（配列番号１６または１８）、及びＶＬ  ＦＲ４（配列番号１７）を含む。別の実施形態において、抗体は、ＶＨ  ＦＲ２（配列番号２０）、ＶＨ  ＦＲ３（配列番号２１または２３）、ＶＬ  ＦＲ１（配列番号１４）、ＶＬ  ＦＲ２（配列番号１５）、及びＶＬ  ＦＲ３（配列番号１６または１８）を含む。一実施形態において、抗体は、ＶＨ  ＦＲ２（配列番号２０）、ＶＨ  ＦＲ３（配列番号２１または２３）、ＶＬ  ＦＲ１（配列番号１４）、ＶＬ  ＦＲ２（配列番号１５）、及びＶＬ  ＦＲ４（配列番号１７）を含む。他の実施形態において、抗体は、ＶＨ  ＦＲ２（配列番号２０）、ＶＨ  ＦＲ３（配列番号２１または２３）、ＶＬ  ＦＲ１（配列番号１４）、ＶＬ  ＦＲ３（配列番号１６または１８）、及びＶＬ  ＦＲ４（配列番号１７）を含む。別の実施形態において、抗体は、ＶＨ  ＦＲ２（配列番号２０）、ＶＨ  ＦＲ３（配列番号２１または２３）、ＶＬ  ＦＲ２（配列番号１５）、ＶＬ  ＦＲ３（配列番号１６または１８）、及びＶＬ  ＦＲ４（配列番号１７）を含む。いくつかの実施形態において、抗体は、ＶＨ  ＦＲ２（配列番号２０）、ＶＨ  ＦＲ４（配列番号２２）、ＶＬ  ＦＲ１（配列番号１４）、ＶＬ  ＦＲ２（配列番号１５）、及びＶＬ  ＦＲ３（配列番号１６または１８）を含む。一実施形態において、抗体は、ＶＨ  ＦＲ２（配列番号２０）、ＶＨ  ＦＲ４（配列番号２２）、ＶＬ  ＦＲ１（配列番号１４）、ＶＬ  ＦＲ２（配列番号１５）、及びＶＬ  ＦＲ４（配列番号１７）を含む。別の実施形態において、抗体は、ＶＨ  ＦＲ２（配列番号２０）、ＶＨ  ＦＲ４（配列番号２２）、ＶＬ  ＦＲ１（配列番号１４）、ＶＬ  ＦＲ３（配列番号１６または１８）、及びＶＬ  ＦＲ４（配列番号１７）を含む。一実施形態において、抗体は、ＶＨ  ＦＲ２（配列番号２０）、ＶＨ  ＦＲ４（配列番号２２）、ＶＬ  ＦＲ２（配列番号１５）、ＶＬ  ＦＲ３（配列番号１６または１８）、及びＶＬ  ＦＲ４（配列番号１７）を含む。いくつかの実施形態において、抗体は、ＶＨ  ＦＲ３（配列番号２１または２３）、ＶＨ  ＦＲ４（配列番号２２）、ＶＬ  ＦＲ１（配列番号１４）、ＶＬ  ＦＲ２（配列番号１５）、及びＶＬ  ＦＲ３（配列番号１６または１８）を含む。別の実施形態において、抗体は、ＶＨ  ＦＲ３（配列番号２１または２３）、ＶＨ  ＦＲ４（配列番号２２）、ＶＬ  ＦＲ１（配列番号１４）、ＶＬ  ＦＲ２（配列番号１５）、及びＶＬ  ＦＲ４（配列番号１７）を含む。他の実施形態において、抗体は、ＶＨ  ＦＲ３（配列番号２１または２３）、ＶＨ  ＦＲ４（配列番号２２）、ＶＬ  ＦＲ１（配列番号１４）、ＶＬ  ＦＲ３（配列番号１６または１８）、及びＶＬ  ＦＲ４（配列番号１７）を含む。一実施形���において、抗体は、ＶＨ  ＦＲ３（配列番号２１または２３）、ＶＨ  ＦＲ４（配列番号２２）、ＶＬ  ＦＲ２（配列番号１５）、ＶＬ  ＦＲ３（配列番号１６または１８）、及びＶＬ  ＦＲ４（配列番号１７）を含む。別の実施形態において、抗体は、ＶＨ  ＦＲ１（配列番号１９または２４）、ＶＬ  ＦＲ１（配列番号１４）、ＶＬ  ＦＲ２（配列番号１５）、ＶＬ  ＦＲ３（配列番号１６または１８）、及びＶＬ  ＦＲ４（配列番号１７）を含む。いくつかの実施形態において、抗体は、ＶＨ  ＦＲ２（配列番号２０）、ＶＬ  ＦＲ１（配列番号１４）、ＶＬ  ＦＲ２（配列番号１５）、ＶＬ  ＦＲ３（配列番号１６または１８）、及びＶＬ  ＦＲ４（配列番号１７）を含む。一実施形態において、抗体は、ＶＨ  ＦＲ３（配列番号２１または２３）、ＶＬ  ＦＲ１（配列番号１４）、ＶＬ  ＦＲ２（配列番号１５）、ＶＬ  ＦＲ３（配列番号１６または１８）、及びＶＬ  ＦＲ４（配列番号１７）を含む。別の実施形態において、抗体は、ＶＨ  ＦＲ４（配列番号２２）、ＶＬ  ＦＲ１（配列番号１４）、ＶＬ  ＦＲ２（配列番号１５）、ＶＬ  ＦＲ３（配列番号１６または１８）、及びＶＬ  ＦＲ４（配列番号１７）を含む。他の実施形態において、抗体は、ＶＨ  ＦＲ１（配列番号１９または２４）、ＶＨ  ＦＲ２（配列番号２０）、ＶＨ  ＦＲ３（配列番号２１または２３）、ＶＨ  ＦＲ４（配列番号２２）、ＶＬ  ＦＲ１（配列番号１４）、及びＶＬ  ＦＲ２（配列番号１５）を含む。いくつかの実施形態において、抗体は、ＶＨ  ＦＲ１（配列番号１９または２４）、ＶＨ  ＦＲ２（配列番号２０）、ＶＨ  ＦＲ３（配列番号２１または２３）、ＶＨ  ＦＲ４（配列番号２２）、ＶＬ  ＦＲ１（配列番号１４）、及びＶＬ  ＦＲ３（配列番号１６または１８）を含む。別の実施形態において、抗体は、ＶＨ  ＦＲ１（配列番号１９または２４）、ＶＨ  ＦＲ２（配列番号２０）、ＶＨ  ＦＲ３（配列番号２１または２３）、ＶＨ  ＦＲ４（配列番号２２）、ＶＬ  ＦＲ１（配列番号１４）、及びＶＬ  ＦＲ４（配列番号１７）を含む。一実施形態において、抗体は、ＶＨ  ＦＲ１（配列番号１９または２４）、ＶＨ  ＦＲ２（配列番号２０）、ＶＨ  ＦＲ３（配列番号２１または２３）、ＶＨ  ＦＲ４（配列番号
２２）、ＶＬ  ＦＲ２（配列番号１５）、及びＶＬ  ＦＲ３（配列番号１６または１８）を含む。一実施形態において、抗体は、ＶＨ  ＦＲ１（配列番号１９または２４）、ＶＨ  ＦＲ２（配列番号２０）、ＶＨ  ＦＲ３（配列番号２１または２３）、ＶＨ  ＦＲ４（配列番号２２）、ＶＬ  ＦＲ２（配列番号１５）、及びＶＬ  ＦＲ４（配列番号１７）を含む。別の実施形態において、抗体は、ＶＨ  ＦＲ１（配列番号１９または２４）、ＶＨ  ＦＲ２（配列番号２０）、ＶＨ  ＦＲ３（配列番号２１または２３）、ＶＨ  ＦＲ４（配列番号２２）、ＶＬ  ＦＲ３（配列番号１６または１８）、及びＶＬ  ＦＲ４（配列番号１７）を含む。いくつかの実施形態において、抗体は、ＶＨ  ＦＲ１（配列番号１９または２４）、ＶＨ  ＦＲ２（配列番号２０）、ＶＨ  ＦＲ３（配列番号２１または２３）、ＶＬ  ＦＲ１（配列番号１４）、ＶＬ  ＦＲ２（配列番号１５）、及びＶＬ  ＦＲ３（配列番号１６または１８）を含む。他の実施形態において、抗体は、ＶＨ  ＦＲ１（配列番号１９または２４）、ＶＨ  ＦＲ２（配列番号２０）、ＶＨ  ＦＲ３（配列番号２１または２３）、ＶＬ  ＦＲ１（配列番号１４）、ＶＬ  ＦＲ２（配列番号１５）、及びＶＬ  ＦＲ４（配列番号１７）を含む。別の実施形態において、抗体は、ＶＨ  ＦＲ１（配列番号１９または２４）、ＶＨ  ＦＲ２（配列番号２０）、ＶＨ  ＦＲ３（配列番号２１または２３）、ＶＬ  ＦＲ１（配列番号１４）、ＶＬ  ＦＲ３（配列番号１６または１８）、及びＶＬ  ＦＲ４（配列番号１７）を含む。一実施形態において、抗体は、ＶＨ  ＦＲ１（配列番号１９または２４）、ＶＨ  ＦＲ２（配列番号２０）、ＶＨ  ＦＲ３（配列番号２１または２３）、ＶＬ  ＦＲ２（配列番号１５）、ＶＬ  ＦＲ３（配列番号１６または１８）、及びＶＬ  ＦＲ４（配列番号１７）を含む。いくつかの実施形態において、抗体は、ＶＨ  ＦＲ１（配列番号１９または２４）、ＶＨ  ＦＲ２（配列番号２０）、ＶＨ  ＦＲ４（配列番号２２）、ＶＬ  ＦＲ１（配列番号１４）、ＶＬ  ＦＲ２（配列番号１５）、及びＶＬ  ＦＲ３（配列番号１６または１８）を含む。別の実施形態において、抗体は、ＶＨ  ＦＲ１（配列番号１９または２４）、ＶＨ  ＦＲ２（配列番号２０）、ＶＨ  ＦＲ４（配列番号２２）、ＶＨ  ＦＲ１（配列番号１４）、ＶＬ  ＦＲ２（配列番号１５）、及びＶＬ  ＦＲ４（配列番号１７）を含む。一実施形態において、抗体は、ＶＨ  ＦＲ１（配列番号１９または２４）、ＶＨ  ＦＲ２（配列番号２０）、ＶＨ  ＦＲ４（配列番号２２）、ＶＬ  ＦＲ１（配列番号１４）、ＶＬ  ＦＲ３（配列番号１６または１８）、及びＶＬ  ＦＲ４（配列番号１７）を含む。他の実施形態において、抗体は、ＶＨ  ＦＲ１（配列番号１９または２４）、ＶＨ  ＦＲ２（配列番号２０）、ＶＨ  ＦＲ４（配列番号２２）、ＶＬ  ＦＲ２（配列番号１５）、ＶＬ  ＦＲ３（配列番号１６または１８）、及びＶＬ  ＦＲ４（配列番号１７）を含む。別の実施形態において、抗体は、ＶＨ  ＦＲ１（配列番号１９または２４）、ＶＨ  ＦＲ３（配列番号２１または２３）、ＶＨ  ＦＲ４（配列番号２２）、ＶＬ  ＦＲ１（配列番号１４）、ＶＬ  ＦＲ２（配列番号１５）、及びＶＬ  ＦＲ３（配列番号１６または１８）を含む。��くつかの実施形態において、抗体は、ＶＨ  ＦＲ１（配列番号１９または２４）、ＶＨ  ＦＲ３（配列番号２１または２３）、ＶＨ  ＦＲ４（配列番号２２）、ＶＬ  ＦＲ１（配列番号１４）、ＶＬ  ＦＲ２（配列番号１５）、及びＶＬ  ＦＲ４（配列番号１７）を含む。一実施形態において、抗体は、ＶＨ  ＦＲ１（配列番号１９または２４）、ＶＨ  ＦＲ３（配列番号２１または２３）、ＶＨ  ＦＲ４（配列番号２２）、ＶＬ  ＦＲ１（配列番号１４）、ＶＬ  ＦＲ３（配列番号１６または１８）、及びＶＬ  ＦＲ４（配列番号１７）を含む。別の実施形態において、抗体は、ＶＨ  ＦＲ１（配列番号１９または２４）、ＶＨ  ＦＲ３（配列番号２１または２３）、ＶＨ  ＦＲ４（配列番号２２）、ＶＬ  ＦＲ２（配列番号１５）、ＶＬ  ＦＲ３（配列番号１６または１８）、及びＶＬ  ＦＲ４（配列番号１７）を含む。一実施形態において、抗体は、ＶＨ  ＦＲ２（配列番号２０）、ＶＨ  ＦＲ３（配列番号２１または２３）、ＶＨ  ＦＲ４（配列番号２２）、ＶＬ  ＦＲ１（配列番号１４）、ＶＬ  ＦＲ２（配列番号１５）、及びＶＬ  ＦＲ３（配列番号１６または１８）を含む。いくつかの実施形態において、抗体は、ＶＨ  ＦＲ２（配列番号２０）、ＶＨ  ＦＲ３（配列番号２１または２３）、ＶＨ  ＦＲ４（配列番号２２）、ＶＬ  ＦＲ１（配列番号１４）、ＶＬ  ＦＲ２（配列番号１５）、及びＶＬ  ＦＲ４（配列番号１７）を含む。別の実施形態において、抗体は、ＶＨ  ＦＲ２（配列番号２０）、ＶＨ  ＦＲ３（配列番号２１または２３）、ＶＨ  ＦＲ４（配列番号２２）、ＶＬ  ＦＲ１（配列番号１４）、ＶＬ  ＦＲ３（配列番号１６または１８）、及びＶＬ  ＦＲ４（配列番号１７）を含む。他の実施形態において、抗体は、ＶＨ  ＦＲ２（配列番号２０）、ＶＨ  ＦＲ３（配列番号２１または２３）、ＶＨ  ＦＲ４（配列番号２２）、ＶＬ  ＦＲ２（配列番号１５）、ＶＬ  ＦＲ３（配列番号１６または１８）、及びＶＬ  ＦＲ４（配列番号１７）を含む。一実施形態において、抗体は、ＶＨ  ＦＲ１（配列番号１９または２４）、ＶＨ  ＦＲ２（配列番号２０）、ＶＬ  ＦＲ１（配列番号１４）、ＶＬ  ＦＲ２（配列番号１５）、ＶＬ  ＦＲ３（配列番号１６または１８）、及びＶＬ  ＦＲ４（配列番号１７）を含む。別の実施形態において、抗体は、ＶＨ  ＦＲ１（配列番号１９または２４）、ＶＨ  ＦＲ３（配列番号２１または２３）、ＶＬ  ＦＲ１（配列番号１４）、ＶＬ  ＦＲ２（配列番号１５）、ＶＬ  ＦＲ３（配列番号１６または１８）、及びＶＬ  ＦＲ４（配列番号１７）を含む。いくつかの実施形態において、抗体は、ＶＨ  ＦＲ１（配列番号１９または２４）、ＶＨ  ＦＲ４（配列番号２２）、ＶＬ  ＦＲ１（配列番号１４）、ＶＬ  ＦＲ２（配列番号１５）、ＶＬ  ＦＲ３（配列番号１６または１８）、及びＶＬ  ＦＲ４（配列番号１７）を含む。一実施形態において、抗体は、ＶＨ  ＦＲ２（配列番号２０）、ＶＨ  ＦＲ３（配列番号２１または２３）、ＶＬ  ＦＲ１（配列番号１４）、ＶＬ  ＦＲ２（配列番号１５）、ＶＬ  ＦＲ３（配列番号１６または１８）、及びＶＬ  ＦＲ４（配列番号１７）を含む。別の実施形態において、抗体は、ＶＨ  ＦＲ２（配列番号２０）、ＶＨ  ＦＲ４（配列番号２２）、ＶＬ  ＦＲ１（配��番号１４）、ＶＬ  ＦＲ２（配列番号１５）、ＶＬ  ＦＲ３（配列番号１６または１８）、及びＶＬ  ＦＲ４（配列番号１７）を含む。他の実施形態において、抗体は、ＶＨ  ＦＲ３（配列番号２１または２３）、ＶＨ  ＦＲ４（配列番号２２）、ＶＬ  ＦＲ１（配列番号１４）、ＶＬ  ＦＲ２（配列番号１５）、ＶＬ  ＦＲ３（配列番号１６または１８）、及びＶＬ  ＦＲ４（配列番号１７）を含む。いくつかの実施形態において、抗体は、ＶＨ  ＦＲ１（配列番号１９または２４）、ＶＨ  ＦＲ２（配列番号２０）、ＶＨ  ＦＲ３（配列番号２１または２３）、ＶＨ  ＦＲ４（配列番号２２）、ＶＬ  ＦＲ１（配列番号１４）、ＶＬ  ＦＲ２（配列番号１５）、及びＶＬ  ＦＲ３（配列番号１６または１８）を含む。別の実施形態において、抗体は、ＶＨ  ＦＲ１（配列番号１９または２４）、ＶＨ  ＦＲ２（配列番号２０）、ＶＨ  ＦＲ３（配列番号２１または２３）、ＶＨ  ＦＲ４（配列番号２２）、ＶＬ  ＦＲ１（配列番号１４）、ＶＬ  ＦＲ２（配列番号１５）、及びＶＬ  ＦＲ４（配列番号１７）を含む。一実施形態において、抗体は、ＶＨ  ＦＲ１（配列番号１９または２４）、ＶＨ  ＦＲ２（配列番号２０）、ＶＨ  ＦＲ３（配列番号２１または２３）、ＶＨ  ＦＲ４（配列番号２２）、ＶＬ  ＦＲ１（配列番号１４）、ＶＬ  ＦＲ３（配列番号１６または１８）、及びＶＬ  ＦＲ４（配列番号１７）を含む。一実施形態において、抗体は、ＶＨ  ＦＲ１（配列番号１９または２４）、ＶＨ  ＦＲ２（配列番号２０）、ＶＨ  ＦＲ３（配列番号２１または２３）、ＶＨ  ＦＲ４（配列番号２２）、ＶＬ  ＦＲ２（配列番号１５）、ＶＬ  ＦＲ３（配列番号１６または１８）、及びＶＬ  ＦＲ４（配列番号１７）を含む。別の実施形態において、抗体は、ＶＨ  ＦＲ１（配列番号１９または２４）、ＶＨ  ＦＲ２（配列番号２０）、ＶＨ  ＦＲ３（配列番号２１または２３）、ＶＬ  ＦＲ１（配列番号１４）、ＶＬ  ＦＲ２（配列番号１５）、ＶＬ  ＦＲ３（配列番号１６または１８）、及びＶＬ  ＦＲ４（配列番号１７）を含む。いくつかの実施形態において、抗体は、ＶＨ  ＦＲ１（配列番号１９または２４）、ＶＨ  ＦＲ２（配列番号２０）、ＶＨ  ＦＲ４（配列番号２２）、ＶＬ  ＦＲ１（配列番号１４）、ＶＬ  ＦＲ２（配列番号１５）、ＶＬ  ＦＲ３（配列番号１６または１８）、及びＶＬ  ＦＲ４（配列番号１７）を含む。他の実施形態において、抗体は、ＶＨ  ＦＲ１（配列番号１９または２４）、ＶＨ  ＦＲ３（配列番号２１または２３）、ＶＨ  ＦＲ４（配列番号２２）、ＶＬ  ＦＲ１（配列番号１４）、ＶＬ  ＦＲ２（配列番号１５）、ＶＬ  ＦＲ３（配列番号１６または１８）、及びＶＬ  ＦＲ４（配列番号１７）を含む。一実施形態において、抗体は、ＶＨ  ＦＲ２（配列番号２０）、ＶＨ  ＦＲ３（配列番号２１または２３）、ＶＨ  ＦＲ４（配列番号２２）、ＶＬ  ＦＲ１（配列番号１４）、ＶＬ  ＦＲ２（配列番号１５）、ＶＬ  ＦＲ３（配列番号１６または１８）、及びＶＬ  ＦＲ４（配列番号１７）を含む。いくつかの実施形態において、抗体は、表３〜４に記載したＶＨ  ＦＲ（配列番号１９〜２４）及びＶＬ  ＦＲ（配列番号１４〜１８）のその任意の組合せを含む。
【０２５３】
いくつかの実施形態において、本明細書で提供する抗体はＶＨ領域またはＶＨドメインを含む。他の実施形態において、本明細書で提供する抗体はＶＬ領域またはＶＬドメインを含む。ある実施形態において、本明細書で提供する抗体は、（ｉ）ＶＨドメインもしくはＶＨ領域；及び／または（ｉｉ）ＶＬドメインもしくはＶＬ領域の組合せを有する。さらに他の実施形態において、本明細書で提供する抗体は、表５〜６に記載の配列番号８〜１３からなる群から選択される（ｉ）ＶＨドメインもしくはＶＨ領域；及び／または（ｉｉ）ＶＬドメインもしくはＶＬ領域の組合せを有する。さらに他の実施形態において、本明細書で提供する抗体は、表５〜６に記載の抗体ＰＤ１ＡＢ−１、ＰＤ１ＡＢ−２、ＰＤ１ＡＢ−３、ＰＤ１ＡＢ−４、ＰＤ１ＡＢ−５、またはＰＤ１ＡＢ−６の任意の１つの（ｉ）ＶＨドメインもしくはＶＨ領域；及び／または（ｉｉ）ＶＬドメインもしくはＶＬ領域の組合せを有する。
【０２５４】
ある実施形態において、本明細書で提供する抗体は、以下を含むＶＨ領域：（１）配列番号４のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＣＤＲ１；（２）配列番号５のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＣＤＲ２；及び（３）配列番号６のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＣＤＲ３；ならびに表５に記載の配列番号８〜１０からなる群から選択されるＶＬ領域を含む。いくつかの実施形態において、ＶＬ領域は配列番号８のアミノ酸配列を有する。他の実施形態において、ＶＬ領域は配列番号９のアミノ酸配列を有する。いくつかの実施形態において、ＶＬ領域は配列番号１０のアミノ酸配列を有する。
【０２５５】
他の実施形態において、本明細書で提供する抗体は、表６に記載の配列番号１１〜１３からなる群から選択されるＶＨ領域；ならびに以下を含むＶＬ領域を含む：（１）配列番号１及び７からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＶＬ  ＣＤＲ１；（２）配列番号２のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＣＤＲ２；及び（３）配列番号３のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＣＤＲ３。さらにいくつかの実施形態において、本明細書で提供する抗体は、表６に記載の配列番号１１〜１３からなる群から選択されるＶＨ領域；ならびに以下を含むＶＬ領域を含む：（１）配列番号１のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＣＤＲ１；（２）配列番号２のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＣＤＲ２；及び（３）配列番号３のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＣＤＲ３。さらに他の実施形態において、本明細書で提供する抗体は、表６に記載の配列番号１１〜１３からなる群から選択されるＶＨ領域；ならびに以下を含むＶＬ領域を含む：（１）配列番号７のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＣＤＲ１；（２）配列番号２のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＣＤＲ２；及び（３）配列番号３のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＣＤＲ３。いくつかの実施形態において、ＶＨ領域は配列番号１１のアミノ酸配列を有する。いくつかの実施形態において、ＶＨ領域は配列番号１２のアミノ酸配列を有する。いくつかの実施形態において、ＶＨ領域は配列番号１３のアミノ酸配列を有する。
表５．ＶＬドメインアミノ酸配列
【表６】
2018533973.tif 000013
表６．ＶＨドメインアミノ酸配列
【表７】
2018533973.tif 000014
【０２５６】
本明細書では、ＰＤ−１ポリペプチド、ＰＤ−１ポリペプチド断片、ＰＤ−１ペプチド、またはＰＤ−１エピトープに結合する抗ＰＤ−１抗体の免疫グロブリン重鎖、軽鎖、ＶＨ領域、ＶＬ領域、ＶＨ  ＣＤＲ１、ＶＨ  ＣＤＲ２、ＶＨ  ＣＤＲ３、ＶＬ  ＣＤＲ１、ＶＬ  ＣＤＲ２、及び／またはＶＬ  ＣＤＲ３をコードする単離核酸分子も提供する。抗体ＰＤ１ＡＢ−１、ＰＤ１ＡＢ−２、ＰＤ１ＡＢ−３、ＰＤ１ＡＢ−４、ＰＤ１ＡＢ−５、及びＰＤ１ＡＢ−６の任意の１つのＶＬ領域及びＶＨ領域の例示的な核酸配列を表７〜８に示す
表７．ＶＬ核酸配列
【表８】
2018533973.tif 000015
2018533973.tif 000016
表８．ＶＨ核酸配列
【表９−１】
2018533973.tif 000017
【表９−２】
2018533973.tif 000018
【０２５７】
いくつかの実施形態において、本明細書で提供する抗体はＰＤ１ＡＢ−１のＶＨ及びＶＬアミノ酸配列を有する。いくつかの実施形態において、抗体は、配列番号１１のＶＨアミノ酸配列、及び配列番号８のＶＬアミノ酸配列を含む。
【０２５８】
他の実施形態において、本明細書で提供する抗体はＰＤ１ＡＢ−２のＶＨ及びＶＬアミノ酸配列を有する。いくつかの実施形態において、抗体は、配列番号１１のＶＨアミノ酸配列、及び配列番号９のＶＬアミノ酸配列を含む。
【０２５９】
いくつかの実施形態において、本明細書で提供する抗体はＰＤ１ＡＢ−３のＶＨ及びＶＬアミノ酸配列を有する。いくつかの実施形態において、抗体は、配列番号１２のＶＨアミノ酸配列、及び配列番号１０のＶＬアミノ酸配列を含む。
【０２６０】
他の実施形態において、本明細書で提供する抗体はＰＤ１ＡＢ−４のＶＨ及びＶＬアミノ酸配列を有する。いくつかの実施形態において、抗体は、配列番号１２のＶＨアミノ酸配列、及び配列番号９のＶＬアミノ酸配列を含む。
【０２６１】
いくつかの実施形態において、本明細書で提供する抗体はＰＤ１ＡＢ−５のＶＨ及びＶＬアミノ酸配列を有する。いくつかの実施形態において、抗体は、配列番号１３のＶＨアミノ酸配列、及び配列番号９のＶＬアミノ酸配列を含む。
【０２６２】
他の実施形態において、本明細書で提供する抗体はＰＤ１ＡＢ−６のＶＨ及びＶＬアミノ酸配列を有する。いくつかの実施形態において、抗体は、配列番号１３のＶＨアミノ酸配列、及び配列番号８のＶＬアミノ酸配列を含む。
【０２６３】
ある実施形態において、ＰＤ−１ポリペプチド（例えば、ＰＤ−１、例えばヒトＰＤ−１のＥＣＤ）に特異的に結合する本明細書に記載の抗体またはその抗原結合断片は、軽鎖及び重鎖を含み、軽鎖は以下のアミノ酸配列を有する定常領域を含む：
ＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ（配列番号４１）。
【０２６４】
他の実施形態において、ＰＤ−１ポリペプチド（例えば、ＰＤ−１、例えばヒトＰＤ−１のＥＣＤ）に特異的に結合する本明細書に記載の抗体またはその抗原結合断片は、軽鎖及び重鎖を含み、重鎖は以下のアミノ酸配列を有するヒトＩｇＧ１  Ｆｃ領域を含む：
【化６】
2018533973.tif 000019
（配列番号３６、Ｋ３２２を強調）。
いくつかの実施形態において、ＰＤ−１ポリペプチド（例えば、ＰＤ−１、例えばヒトＰＤ−１のＥＣＤ）に特異的に結合する本明細書に記載の抗体またはその抗原結合断片は、軽鎖及び重鎖を含み、重鎖は配列番号３６のアミノ酸配列を有するヒトＩｇＧ１  Ｆｃ領域を含まない。
【０２６５】
ある実施形態において、ＰＤ−１ポリペプチド（例えば、ＰＤ−１、例えばヒトＰＤ−１のＥＣＤ）に特異的に結合する本明細書に記載の抗体またはその抗原結合断片は、軽鎖及び重鎖を含み、重鎖は以下のアミノ酸配列を有するヒトＩｇＧ１−Ｋ３２２Ａ  Ｆｃ領域を含む：
【化７】
2018533973.tif 000020
（配列番号３７、Ｋ３２２Ａ置換を強調）。
【０２６６】
いくつかの実施形態において、ＰＤ−１ポリペプチド（例えば、ＰＤ−１、例えばヒトＰＤ−１のＥＣＤ）に特異的に結合する本明細書に記載の抗体またはその抗原結合断片は、軽鎖及び重鎖を含み、重鎖は以下のアミノ酸配列を有するヒトＩｇＧ４  Ｆｃ領域を含む：
【化８】
2018533973.tif 000021
（配列番号３８、Ｓ２２８及びＬ２３５を強調）。
【０２６７】
別の実施形態において、ＰＤ−１ポリペプチド（例えば、ＰＤ−１、例えばヒトＰＤ−１のＥＣＤ）に特異的に結合する本明細書に記載の抗体またはその抗原結合断片は、軽鎖及び重鎖を含み、重鎖は以下のアミノ酸配列を有するヒトＩｇＧ４Ｐ  Ｆｃ領域を含む：
【化９】
2018533973.tif 000022
（配列番号３９、Ｓ２２８Ｐ置換を強調）。
【０２６８】
さらに別の実施形態において、ＰＤ−１ポリペプチド（例えば、ＰＤ−１、例えばヒトＰＤ−１のＥＣＤ）に特異的に結合する本明細書に記載の抗体またはその抗原結合断片は、軽鎖及び重鎖を含み、重鎖は以下のアミノ酸配列を有するヒトＩｇＧ４ＰＥ  Ｆｃ領域を含む：
【化１０】
2018533973.tif 000023
（配列番号４０、Ｓ２２８Ｐ及びＬ２３５Ｅ置換を強調）。
いくつかの実施形態において、ＰＤ−１ポリペプチド（例えば、ＰＤ−１、例えばヒトＰＤ−１のＥＣＤ）に特異的に結合する本明細書に記載の抗体またはその抗原結合断片は、軽鎖及び重鎖を含み、重鎖は配列番号４０のアミノ酸配列を有するヒトＩｇＧ４ＰＥ  Ｆｃ領域を含まない。
【０２６９】
さらに別の実施形態において、ＰＤ−１ポリペプチド（例えば、ＰＤ−１、例えばヒトＰＤ−１のＥＣＤ）に特異的に結合する本明細書に記載の抗体またはその抗原結合断片は、軽鎖及び重鎖を含み、軽鎖は配列番号４１のアミノ酸配列を有する定常領域を含み、重鎖は配列番号３６〜４０からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＦｃ領域を含む。
【０２７０】
ある実施形態において、ＰＤ−１ポリペプチド（例えば、ＰＤ−１、例えばヒトＰＤ−１のＥＣＤ）に特異的に結合する本明細書で提供する抗体は、軽鎖及び重鎖を含み、軽鎖は以下のアミノ酸配列を含む：
ＤＩＶＭＴＱＳＰＤＳＬＡＶＳＬＧＥＲＡＴＩＮＣＫＳＧＱＳＶＬＹＳＳＮＱＫＮＦＬＡＷＹＱＱＫＰＧＱＰＰＫＬＬＩＹＷＡＳＴＲＥＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＡＥＤＶＡＶＹＹＣＨＱＹＬＹＳＷＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ（配列番号３１、ＬＣ＿ＰＤ１ＡＢ−６−ＩｇＧ１）。
【０２７１】
いくつかの実施形態において、ＰＤ−１ポリペプチド（例えば、ＰＤ−１、例えばヒトＰＤ−１のＥＣＤ）に特異的に結合する本明細書で提供する抗体は、軽鎖及び重鎖を含み、重鎖は以下のアミノ酸配列を含む：
【化１１】
2018533973.tif 000024
（配列番号３２、ＨＣ＿ＰＤ１ＡＢ−６−ＩｇＧ１、Ｋ３２２を強調）。
【０２７２】
他の実施形態において、ＰＤ−１ポリペプチド（例えば、ＰＤ−１、例えばヒトＰＤ−１のＥＣＤ）に特異的に結合する本明細書で提供する抗体は、軽鎖及び重鎖を含み、重鎖は以下のアミノ酸配列を含む：
【化１２】
2018533973.tif 000025
（配列番号３３、ＨＣ＿ＰＤ１ＡＢ−６−ＩｇＧ１−Ｋ３２２Ａ、Ｋ３２２Ａ置換を強調）。
【０２７３】
別の実施形態において、ＰＤ−１ポリペプチド（例えば、ＰＤ−１、例えばヒトＰＤ−１のＥＣＤ）に特異的に結合する本明細書で提供する抗体は、軽鎖及び重鎖を含み、重鎖は以下のアミノ酸配列を含む：
【化１３】
2018533973.tif 000026
（配列番号３４、ＨＣ＿ＰＤ１ＡＢ−６−ＩｇＧ４Ｐ、ＩｇＧ４Ｐ  Ｆｃ主鎖をイタリック体として下線を引いた）。
【０２７４】
さらに別の実施形態において、ＰＤ−１ポリペプチド（例えば、ＰＤ−１、例えばヒトＰＤ−１のＥＣＤ）に特異的に結合する本明細書で提供する抗体は、軽鎖及び重鎖を含み、重鎖は以下のアミノ酸配列を含む：
【化１４】
2018533973.tif 000027
（配列番号３５、ＨＣ＿ＰＤ１ＡＢ−６−ＩｇＧ４ＰＥ、ＩｇＧ４ＰＥ  Ｆｃ主鎖をイタリック体として下線を引いた）。
【０２７５】
特定の一実施形態において、ＰＤ−１ポリペプチド（例えば、ＰＤ−１、例えばヒトＰＤ−１のＥＣＤ）に特異的に結合する本明細書で提供する抗体は、軽鎖及び重鎖を含み、（ｉ）軽鎖は配列番号３１のアミノ酸配列を含み；（ｉｉ）重鎖は配列番号３２のアミノ酸配列を含む。
【０２７６】
別の特定の実施形態において、ＰＤ−１ポリペプチド（例えば、ＰＤ−１、例えばヒトＰＤ−１のＥＣＤ）に特異的に結合する本明細書で提供する抗体は、軽鎖及び重鎖を含み、（ｉ）軽鎖は配列番号３１のアミノ酸配列を含み；（ｉｉ）重鎖は配列番号３３のアミノ酸配列を含む。
【０２７７】
さらに別の特定の実施形態において、ＰＤ−１ポリペプチド（例えば、ＰＤ−１、例えばヒトＰＤ−１のＥＣＤ）に特異的に結合する本明細書で提供する抗体は、軽鎖及び重鎖を含み、（ｉ）軽鎖は配列番号３１のアミノ酸配列を含み；（ｉｉ）重鎖は配列番号３４のアミノ酸配列を含む。
【０２７８】
さらに別の特定の実施形態において、ＰＤ−１ポリペプチド（例えば、ＰＤ−１、例えばヒトＰＤ−１のＥＣＤ）に特異的に結合する本明細書で提供する抗体は、軽鎖及び重鎖を含み、（ｉ）軽鎖は配列番号３１のアミノ酸配列を含み；（ｉｉ）重鎖は配列番号３５のアミノ酸配列を含む。
【０２７９】
さらに別の態様において、ＰＤ−１への結合について例示的な抗体または機能的断片の１つと競合する抗体を提供する。そのような抗体も本明細書で例示する抗体の１つと同じエピトープ、または部分的に一致するエピトープに結合し得る。例示的な抗体と競合するか、または同じエピトープに結合する抗体及び断片は類似の機能的特性を示すと予想される。例示的な抗原結合タンパク質及び断片は、表１〜６のものをはじめとする本明細書で提供するＶＨ及びＶＬ領域、ならびにＣＤＲを有するものが挙げられる。したがって、具体例として、提供する抗体としては、以下を含む抗体と競合するものが挙げられる：（ａ）表１〜２に記載の抗体について記載したＣＤＲの１、２、３、４、５、もしくは６つすべて；（ｂ）表５〜６に記載の抗体について記載したＶＨ及びＶＬ領域から選択されるＶＨ及びＶＬ；または（ｃ）表５〜６に記載の抗体について指定したＶＨ及びＶＬを含む２つの軽鎖及び２つの重鎖。いくつかの実施形態において、抗体はＰＤ１ＡＢ−１である。いくつかの実施形態において、抗体はＰＤ１ＡＢ−２である。いくつかの実施形態において、抗体はＰＤ１ＡＢ−３である。いくつかの実施形態において、抗体はＰＤ１ＡＢ−４である。いくつかの実施形態において、抗体はＰＤ１ＡＢ−５である。いくつかの実施形態において、抗体はＰＤ１ＡＢ−６である。
【０２８０】
別の態様において、本明細書で提供する抗体またはその抗原結合断片は、ヒトＰＤ−１またはカニクイザルＰＤ−１の、エピトープをはじめとする領域に結合する。例えば、いくつかの実施形態において、本明細書で提供する抗体は、ヒトＰＤ−１のアミノ酸残基３３〜１０９を含むヒトＰＤ−１の領域（配列番号４２）に結合する。さらに別の態様において、本明細書で提供する抗体はヒトＰＤ−１の特定のエピトープに結合する。
【０２８１】
ある実施形態において、抗体またはその抗原結合断片は、ＰＤ−１に結合した場合、配列番号４２のアミノ酸配列中の残基１００〜１０９（配列番号４３）の少なくとも１つに結合する。いくつかの実施形態において、抗体またはその抗原結合断片は、ＰＤ−１に結合した場合、配列番号４２のアミノ酸配列中の残基１００〜１０５（配列番号４４）の少なくとも１つに結合する。
【０２８２】
特定の実施形態において、抗体またはその抗原結合断片は、ＰＤ−１に結合した場合、配列番号４２のアミノ酸配列中のＮ３３、Ｔ５１、Ｓ５７、Ｌ１００、Ｎ１０２、Ｇ１０３、Ｒ１０４、Ｄ１０５、Ｈ１０７、及びＳ１０９からなる群から選択される少なくとも１つの残基に結合する。いくつかの実施形態において、抗体またはその抗原結合断片は、ＰＤ−１に結合した場合、配列番号４２のアミノ酸配列中のＬ１００、Ｎ１０２、Ｇ１０３、Ｒ１０４、Ｄ１０５、Ｈ１０７、及びＳ１０９からなる群から選択される少なくとも１つの残基に結合する。
【０２８３】
いくつかの実施形態において、抗体またはその抗原結合断片は、ＰＤ−１に結合した場合、配列番号４２のアミノ酸配列中のＮ３３、Ｔ５１、Ｓ５７、Ｌ１００、Ｎ１０２、Ｇ１０３、Ｒ１０４、Ｄ１０５、Ｈ１０７、及びＳ１０９からなる群から選択される２つ以上の残基に結合する。
【０２８４】
他の実施形態において、抗体またはその抗原結合断片は、ＰＤ−１に結合した場合、配列番号４２のアミノ酸配列中のＮ３３、Ｔ５１、Ｓ５７、Ｌ１００、Ｎ１０２、Ｇ１０３、Ｒ１０４、Ｄ１０５、Ｈ１０７、及びＳ１０９からなる群から選択される３つ以上の残基に結合する。
【０２８５】
ある実施形態において、抗体またはその抗原結合断片は、ＰＤ−１に結合した場合、配列番号４２のアミノ酸配列中のＮ３３、Ｔ５１、Ｓ５７、Ｌ１００、Ｎ１０２、Ｇ１０３、Ｒ１０４、Ｄ１０５、Ｈ１０７、及びＳ１０９からなる群から選択される４つ以上の残基に結合する。
【０２８６】
一実施形態において、抗体またはその抗原結合断片は、ＰＤ−１に結合した場合、配列番号４２のアミノ酸配列中のＮ３３、Ｔ５１、Ｓ５７、Ｌ１００、Ｎ１０２、Ｇ１０３、Ｒ１０４、Ｄ１０５、Ｈ１０７、及びＳ１０９からなる群から選択される５つ以上の残基に結合する。
【０２８７】
別の実施形態において、抗体またはその抗原結合断片は、ＰＤ−１に結合した場合、配列番号４２のアミノ酸配列中のＮ３３、Ｔ５１、Ｓ５７、Ｌ１００、Ｎ１０２、Ｇ１０３、Ｒ１０４、Ｄ１０５、Ｈ１０７、及びＳ１０９からなる群から選択される６つ以上の残基に結合する。
【０２８８】
さらに別の実施形態において、抗体またはその抗原結合断片は、ＰＤ−１に結合した場合、配列番号４２のアミノ酸配列中のＮ３３、Ｔ５１、Ｓ５７、Ｌ１００、Ｎ１０２、Ｇ１０３、Ｒ１０４、Ｄ１０５、Ｈ１０７、及びＳ１０９からなる群から選択される７つ以上の残基に結合する。
【０２８９】
さらに別の実施形態において、抗体またはその抗原結合断片は、ＰＤ−１に結合した場合、配列番号４２のアミノ酸配列中のＮ３３、Ｔ５１、Ｓ５７、Ｌ１００、Ｎ１０２、Ｇ１０３、Ｒ１０４、Ｄ１０５、Ｈ１０７、及びＳ１０９からなる群から選択される８つ以上の残基に結合する。
【０２９０】
ある実施形態において、抗体またはその抗原結合断片は、ＰＤ−１に結合した場合、配列番号４２のアミノ酸配列中のＮ３３、Ｔ５１、Ｓ５７、Ｌ１００、Ｎ１０２、Ｇ１０３、Ｒ１０４、Ｄ１０５、Ｈ１０７、及びＳ１０９からなる群から選択される９つ以上の残基に結合する。
【０２９１】
他の実施形態において、抗体またはその抗原結合断片は、ＰＤ−１に結合した場合、配列番号４２のアミノ酸配列中のＮ３３、Ｔ５１、Ｓ５７、Ｌ１００、Ｎ１０２、Ｇ１０３、Ｒ１０４、Ｄ１０５、Ｈ１０７、及びＳ１０９からなる群からの１０個すべての残基に結合する。
【０２９２】
別の実施形態において、抗体またはその抗原結合断片は、ＰＤ−１に結合した場合、配列番号４２のアミノ酸配列中のＮ３３に結合する。別の実施形態において、抗体またはその抗原結合断片は、ＰＤ−１に結合した場合、配列番号４２のアミノ酸配列中のＴ５１に結合する。特定の実施形態において、抗体またはその抗原結合断片は、ＰＤ−１に結合した場合、配列番号４２のアミノ酸配列中のＳ５７に結合する。１つの具体的な実施形態において、抗体またはその抗原結合断片は、ＰＤ−１に結合した場合、配列番号４２のアミノ酸配列中のＬ１００に結合する。いくつかの実施形態において、抗体またはその抗原結合断片は、ＰＤ−１に結合した場合、配列番号４２のアミノ酸配列中のＮ１０２に結合する。他の実施形態において、抗体またはその抗原結合断片は、ＰＤ−１に結合した場合、配列番号４２のアミノ酸配列中のＧ１０３に結合する。別の実施形態において、抗体またはその抗原結合断片は、ＰＤ−１に結合した場合、配列番号４２のアミノ酸配列中のＲ１０４に結合する。さらに別の実施形態において、抗体またはその抗原結合断片は、ＰＤ−１に結合した場合、配列番号４２のアミノ酸配列中のＧ１０３及びＲ１０４に結合する。さらに別の実施形態において、抗体またはその抗原結合断片は、ＰＤ−１に結合した場合、配列番号４２のアミノ酸配列中のＤ１０５に結合する。いくつかの実施形態において、抗体またはその抗原結合断片は、ＰＤ−１に結合した場合、配列番号４２のアミノ酸配列中のＨ１０７に結合する。ある実施形態において、抗体またはその抗原結合断片は、ＰＤ−１に結合した場合、配列番号４２のアミノ酸配列中のＳ１０９に結合する。上で参照したアミノ酸ＰＤ−１結合部位の２、３、４、５、６、７、８、９、１０またはこれより多くの任意の組合せも企図する。
【０２９３】
一態様において、本明細書では、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＰＤ−１活性及び／または発現を調節する（例えば、ＰＤ−１シグナル伝達を活性化させる、及び／またはＰＤ−１発現を阻害する）ことのできる抗体を提供する。ある実施形態において、ヒトＰＤ−１のＥＣＤに特異的に結合し、少なくとも１つのＰＤ−１活性（例えば、サイトカイン産生の阻害）を活性化させる（例えば、部分的に活性化させる）本明細書で提供する抗体であるＰＤ−１アゴニストを本明細書で提供する。ある実施形態において、本明細書で提供するＰＤ−１アゴニストは、ヒトＰＤ−１のＥＣＤに特異的に結合し、ＰＤ−１発現を下方調節する本明細書で提供する抗体である。ある実施形態において、本明細書では、ＰＤ−１に特異的に結合し、（ａ）例えばサイトカイン産生の阻害によって判定した場合にＴ細胞活性を減衰させる；及び／または（ｂ）細胞でのＰＤ−１発現を下方調節する抗体を提供する。ある実施形態において、本明細書では、（ａ）例えばサイトカイン産生の阻害によって判定した場合にＴ細胞活性を減衰させる；（ｂ）細胞でのＰＤ−１発現を下方調節する；及び／または（ｃ）ＰＤ−１へのＰＤ−Ｌ１及び／またはＰＤ−Ｌ２結合を阻害しないＰＤ−１に特異的に結合する抗体を提供する。ある実施形態において、ＰＤ−１に特異的に結合する抗体は、ヒトＰＤ−１のＥＣＤ、またはそのヒトＰＤ−１のＥＣＤのエピトープに結合する。ある実施形態において、抗体は、ＰＤ−Ｌ１結合部位とは異なるヒトＰＤ−１のＥＣＤのエピトープに特異的に結合する。ある実施形態において、抗体は、ＰＤ−Ｌ２結合部位とは異なるヒトＰＤ−１のＥＣＤのエピトープに特異的に結合する。ある実施形態において、抗体は、ＰＤ−Ｌ１及びＰＤ−Ｌ２結合部位の両方と異なるヒトＰＤ−１のＥＣＤのエピトープに特異的に結合する。ある実施形態において、ＰＤ−１へのＰＤ−Ｌ１の結合は抗体によって阻害されない。他の実施形態において、ＰＤ−１へのＰＤ−Ｌ２の結合は抗体によって阻害されない。具体的な実施形態において、ＰＤ−１へのＰＤ−Ｌ１の結合もＰＤ−１へのＰＤ−Ｌ２の結合も抗体によって阻害されない。
【０２９４】
ＰＤ−１活性は、当該技術分野において公知または記載されているものなどのＰＤ−１の任意の活性に関係し得る。ＰＤ−１活性及びＰＤ−１シグナル伝達は本明細書において同じ意味で用いられる。ある態様において、ＰＤ−１活性は、ＰＤ−１に結合するＰＤ−１リガンド（例えば、ＰＤ−Ｌ１）によって誘発される。ＰＤ−１の発現レベルは、本明細書に記載または当業者にとって公知の方法（例えば、ウエスタンブロッティング、ＥＬＩＳＡ、免疫組織化学、またはフローサイトメトリー）によって評価することができる。ある実施形態において、本明細書では、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＰＤ−１発現を減少させる抗体を提供する。ある実施形態において、本明細書では、ＰＤ−１に特異的に結合し、Ｔ細胞活性を減衰させる抗体を提供する。ある実施形態において、本明細書では、ＰＤ−１に特異的に結合し、サイトカイン産生を阻害する抗体を提供する。ある実施形態において、本明細書では、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＰＤ−１シグナル伝達を活性化させる（例えば部分的に活性化させる）抗体を提供する。ある実施形態において、ＰＤ−１に特異的に結合する抗体は、ヒトＰＤ−１のＥＣＤ、またはそのヒトＰＤ−１のＥＣＤのエピトープに結合する。ある実施形態において、抗体は、ＰＤ−Ｌ１結合部位とは異なるヒトＰＤ−１のＥＣＤのエピトープに特異的に結合する。ある実施形態において、抗体は、ＰＤ−Ｌ２結合部位とは異なるヒトＰＤ−１のＥＣＤのエピトープに特異的に結合する。ある実施形態において、抗体は、ＰＤ−Ｌ１及びＰＤ−Ｌ２結合部位の両方と異なるヒトＰＤ−１のＥＣＤのエピトープに特異的に結合する。ある実施形態において、ＰＤ−１へのＰＤ−Ｌ１の結合は抗体によって阻害されない。他の実施形態において、ＰＤ−１へのＰＤ−Ｌ２の結合は抗体によって阻害されない。具体的な実施形態において、ＰＤ−１へのＰＤ−Ｌ１の結合もＰＤ−１へのＰＤ−Ｌ２の結合も抗体によって阻害されない。
【０２９５】
ある実施形態において、本明細書で提供する抗ＰＤ−１抗体はＴ細胞活性を減衰させる（例えば部分的に減衰させる）。いくつかの実施形態において、本明細書で提供する抗ＰＤ−１抗体はＴ細胞活性を少なくとも約１０％減衰させる。いくつかの実施形態において、本明細書で提供する抗ＰＤ−１抗体はＴ細胞活性を少なくとも約１５％減衰させる。いくつかの実施形態において、本明細書で提供する抗ＰＤ−１抗体はＴ細胞活性を少なくとも約２０％減衰させる。いくつかの実施形態において、本明細書で提供する抗ＰＤ−１抗体はＴ細胞活性を少なくとも約２５％減衰させる。いくつかの実施形態において、本明細書で提供する抗ＰＤ−１抗体はＴ細胞活性を少なくとも約３０％減衰させる。いくつかの実施形態において、本明細書で提供する抗ＰＤ−１抗体はＴ細胞活性を少なくとも約３５％減衰させる。いくつかの実施形態において、本明細書で提供する抗ＰＤ−１抗体はＴ細胞活性を少なくとも約４０％減衰させる。いくつかの実施形態において、本明細書で提供する抗ＰＤ−１抗体はＴ細胞活性を少なくとも約４５％減衰させる。いくつかの実施形態において、本明細書で提供する抗ＰＤ−１抗体はＴ細胞活性を少なくとも約５０％減衰させる。いくつかの実施形態において、本明細書で提供する抗ＰＤ−１抗体はＴ細胞活性を少なくとも約５５％減衰させる。いくつかの実施形態において、本明細書で提供する抗ＰＤ−１抗体はＴ細胞活性を少なくとも約６０％減衰させる。いくつかの実施形態において、本明細書で提供する抗ＰＤ−１抗体はＴ細胞活性を少なくとも約６５％減衰させる。いくつかの実施形態において、本明細書で提供する抗ＰＤ−１抗体はＴ細胞活性を少なくとも約７０％減衰させる。いくつかの実施形態において、本明細書で提供する抗ＰＤ−１抗体はＴ細胞活性を少なくとも約７５％減衰させる。いくつかの実施形態において、本明細書で提供する抗ＰＤ−１抗体はＴ細胞活性を少なくとも約８０％減衰させる。いくつかの実施形態において、本明細書で提供する抗ＰＤ−１抗体はＴ細胞活性を少なくとも約８５％減衰させる。いくつかの実施形態において、本明細書で提供する抗ＰＤ−１抗体はＴ細胞活性を少なくとも約９０％減衰させる。いくつかの実施形態において、本明細書で提供する抗ＰＤ−１抗体はＴ細胞活性を少なくとも約９５％減衰させる。いくつかの実施形態において、本明細書で提供する抗ＰＤ−１抗体はＴ細胞活性を少なくとも約９８％減衰させる。いくつかの実施形態において、本明細書で提供する抗ＰＤ−１抗体はＴ細胞活性を少なくとも約９９％減衰させる。いくつかの実施形態において、本明細書で提供する抗ＰＤ−１抗体はＴ細胞活性を少なくとも約１００％減衰させる。ある実施形態において、本明細書で提供する抗ＰＤ−１抗体は、Ｔ細胞活性を少なくとも約２５％〜約６５％減衰させる（例えば部分的に減衰させる）ことができる。具体的な実施形態において、Ｔ細胞活性減衰は本明細書に記載の方法によって評価される。いくつかの実施形態において、Ｔ細胞活性減衰は当業者にとって公知の方法によって評価される。ある実施形態において、Ｔ細胞活性減衰は、いかなる抗ＰＤ−１抗体もない場合の刺激の存在下でのＴ細胞活性に対してである。ある実施形態において、Ｔ細胞活性減衰は、非関連抗体（例えば、ＰＤ−１に特異的に結合しない抗体）がある場合の刺激の存在下でのＴ細胞活性に対してである。Ｔ細胞活性の非限定例はサイトカインの分泌である。いくつかの実施形態において、サイトカインは、ＩＬ−２、ＩＬ−１７、ＩＦＮ−γ、またはこれらの任意の組合せからなる群から選択される。ある実施形態において、サイトカインは、ＩＬ−１、ＩＬ−２、ＩＬ−６、ＩＬ−１２、ＩＬ−１７、ＩＬ−２２、ＩＬ−２３、ＧＭ−ＣＳＦ、ＩＦＮ−γ、及びＴＮＦ−αからなる群から選択される。ある実施形態において、サイトカインはＩＬ−１である。いくつかの実施形態において、サイトカインはＩＬ−２である。他の実施形態において、サイトカインはＩＬ−６である。別の実施形態において、サイトカインはＩＬ−１２である。他の実施形態において、サイトカインはＩＬ−１７である。さらに他の実施形態において、サイトカインはＩＬ−２２である。さらに他の実施形態において、サイトカインはＩＬ−２３である。いくつかの実施形態において、サイトカインはＧＭ−ＣＳＦである。他の実施形態において、サイトカインはＩＦＮ−γである。さらに他の実施形態において、サイトカインはＴＮＦ−αである。ある実施形態において、サイトカインはＩＬ−２及びＩＬ−１７である。いくつかの実施形態において、サイトカインはＩＬ−２及びＩＦＮ−γである。さらに他の実施形態において、サイトカインはＩＬ−１７及びＩＦＮ−γである。さらに他の実施形態において、サイトカインはＩＬ−２、ＩＬ−１７、及びＩＦＮ−γである。
【０２９６】
具体的な実施形態において、本明細書で提供する抗体（例えば、抗体ＰＤ１ＡＢ−１、ＰＤ１ＡＢ−２、ＰＤ１ＡＢ−３、ＰＤ１ＡＢ−４、ＰＤ１ＡＢ−５、もしくはＰＤ１ＡＢ−６の任意の１つもしくはその抗原結合断片、または抗体ＰＤ１ＡＢ−１、ＰＤ１ＡＢ−２、ＰＤ１ＡＢ−３、ＰＤ１ＡＢ−４、ＰＤ１ＡＢ−５、もしくはＰＤ１ＡＢ−６の任意の１つのＣＤＲを含む抗体）は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＬ−２分泌（例えば、細胞、例えばＴ細胞から）を阻害する。一実施形態において、本明細書で提供する抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＬ−２分泌を少なくとも約５％阻害する。いくつかの実施形態において、本明細書で提供する抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＬ−２分泌を少なくとも約１０％阻害する。別の実施形態において、本明細書で提供する抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＬ−２分泌を少なくとも約１５％阻害する。他の実施形態において、本明細書で提供する抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＬ−２分泌を少なくとも約２０％阻害する。一実施形態において、本明細書で提供する抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＬ−２分泌を少なくとも約２５％阻害する。別の実施形態において、本明細書で提供する抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＬ−２分泌を少なくとも約３０％阻害する。いくつかの実施形態において、本明細書で提供する抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＬ−２分泌を少なくとも約３５％阻害する。一実施形態において、本明細書で提供する抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＬ−２分泌を少なくとも約４０％阻害する。別の実施形態において、本明細書で提供する抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＬ−２分泌を少なくとも約４５％阻害する。他の実施形態において、本明細書で提供する抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＬ−２分泌を少なくとも約５０％阻害する。いくつかの実施形態において、本明細書で提供する抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＬ−２分泌を少なくとも約５５％阻害する。別の実施形態において、本明細書で提供する抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＬ−２分泌を少なくとも約６０％阻害する。一実施形態において、本明細書で提供する抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＬ−２分泌を少なくとも約６５％阻害する。一実施形態において、本明細書で提供する抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＬ−２分泌を少なくとも約７０％阻害する。別の実施形態において、本明細書で提供する抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＬ−２分泌を少なくとも約７５％阻害する。いくつかの実施形態において、本明細書で提供する抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＬ−２分泌を少なくとも約８０％阻害する。他の実施形態において、本明細書で提供する抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＬ−２分泌を少なくとも約８５％阻害する。別の実施形態において、本明細書で提供する抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＬ−２分泌を少なくとも約９０％阻害する。一実施形態において、本明細書で提供する抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＬ−２分泌を少なくとも約９５％阻害する。いくつかの実施形態において、本明細書で提供する抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＬ−２分泌を少なくとも約９８％阻害する。別の実施形態において、本明細書で提供する抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＬ−２分泌を少なくとも約９９％阻害する。具体的な実施形態において、本明細書で提供する抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＬ−２分泌を少なくとも約２５％または３５％、任意により約７５％まで阻害する。いくつかの実施形態において、ＩＬ−２分泌の阻害は本明細書に記載の方法によって評価される。他の実施形態において、ＩＬ−２分泌の阻害は、当業者にとって公知の方法（例えば、ＭｅｓｏＳｃａｌｅ（商標）Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ（ＭＳＤ）マルチプレックスアッセイ）によって評価される。具体的な実施形態において、ＩＬ−２分泌は、抗ＰＤ−１抗体の不存在下でのＩＬ−２分泌と比較して阻害される。他の実施形態において、ＩＬ−２分泌は、非関連抗体（例えば、ＰＤ−１に特異的に結合しない抗体）の存在下でのＩＬ−２分泌と比較して阻害される。
【０２９７】
ある実施形態において、本明細書で提供する抗ＰＤ−１抗体（例えば、抗体ＰＤ１ＡＢ−１、ＰＤ１ＡＢ−２、ＰＤ１ＡＢ−３、ＰＤ１ＡＢ−４、ＰＤ１ＡＢ−５、もしくはＰＤ１ＡＢ−６の任意の１つもしくはその抗原結合断片、または抗体ＰＤ１ＡＢ−１、ＰＤ１ＡＢ−２、ＰＤ１ＡＢ−３、ＰＤ１ＡＢ−４、ＰＤ１ＡＢ−５、もしくはＰＤ１ＡＢ−６の任意の１つのＣＤＲを含む抗体）は、ＩＬ−２分泌を阻害する。一実施形態において、本明細書で提供する抗ＰＤ−１抗体は、最大でも約５０ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−２分泌を阻害する。他の実施形態において、本明細書で提供する抗ＰＤ−１抗体は、最大でも約４０ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−２分泌を阻害する。別の実施形態において、本明細書で提供する抗ＰＤ−１抗体は、最大でも約３０ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−２分泌を阻害する。いくつかの実施形態において、本明細書で提供する抗ＰＤ−１抗体は、最大でも約２０ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−２分泌を阻害する。一実施形態において、本明細書で提供する抗ＰＤ−１抗体は、最大でも約１０ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−２分泌を阻害する。別の実施形態において、本明細書で提供する抗ＰＤ−１抗体は、最大でも約５ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−２分泌を阻害する。一実施形態において、本明細書で提供する抗ＰＤ−１抗体は、最大でも約１ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−２分泌を阻害する。いくつかの実施形態において、本明細書で提供する抗ＰＤ−１抗体は、最大でも約０．７５ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−２分泌を阻害する。別の実施形態において、本明細書で提供する抗ＰＤ−１抗体は、最大でも約０．５ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−２分泌を阻害する。他の実施形態において、本明細書で提供する抗ＰＤ−１抗体は、最大でも約０．１ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−２分泌を阻害する。一実施形態において、本明細書で提供する抗ＰＤ−１抗体は、最大でも約０．０５ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−２分泌を阻害する。別の実施形態において、本明細書で提供する抗ＰＤ−１抗体は、最大でも約０．０１ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−２分泌を阻害する。いくつかの実施形態において、本明細書で提供する抗ＰＤ−１抗体は、最大でも約０．００５ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−２分泌を阻害する。一実施形態において、本明細書で提供する抗ＰＤ−１抗体は、最大でも約０．００１ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−２分泌を阻害する。別の実施形態において、本明細書で提供する抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約５０ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−２分泌を阻害する。他の実施形態において、本明細書で提供する抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約４０ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−２分泌を阻害する。いくつかの実施形態において、本明細書で提供する抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約３０ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−２分泌を阻害する。別の実施形態において、本明細書で提供する抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約２０ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−２分泌を阻害する。一実施形態において、本明細書で提供する抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約１０ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−２分泌を阻害する。一実施形態において、本明細書で提供する抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約５ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−２分泌を阻害する。別の実施形態において、本明細書で提供する抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約１ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−２分泌を阻害する。いくつかの実施形態において、本明細書で提供する抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約０．７５ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−２分泌を阻害する。他の実施形態において、本明細書で提供する抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約０．５ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−２分泌を阻害する。別の実施形態において、本明細書で提供する抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約０．１ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−２分泌を阻害する。一実施形態において、本明細書で提供する抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約０．０５ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−２分泌を阻害する。いくつかの実施形態において、本明細書で提供する抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約０．０１ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−２分泌を阻害する。別の実施形態において、本明細書で提供する抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約０．００５ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−２分泌を阻害する。一実施形態において、本明細書で提供する抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約０．００１ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−２分泌を阻害する。具体的な実施形態において、ＥＣ５０は本明細書に記載の方法によって評価される。他の実施形態において、ＥＣ５０は当業者にとって公知の他の方法（例えば、ＭＳＤマルチプレックスアッセイ）によって評価される。具体的な実施形態において、ＥＣ５０はＭＳＤマルチプレックスアッセイによって評価される。
【０２９８】
具体的な実施形態において、本明細書で提供する抗体（例えば、抗体ＰＤ１ＡＢ−１、ＰＤ１ＡＢ−２、ＰＤ１ＡＢ−３、ＰＤ１ＡＢ−４、ＰＤ１ＡＢ−５、もしくはＰＤ１ＡＢ−６の任意の１つもしくはその抗原結合断片、または抗体ＰＤ１ＡＢ−１、ＰＤ１ＡＢ−２、ＰＤ１ＡＢ−３、ＰＤ１ＡＢ−４、ＰＤ１ＡＢ−５、もしくはＰＤ１ＡＢ−６の任意の１つのＣＤＲを含む抗体）は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＬ−１７分泌（例えば、細胞、例えばＴ細胞から）を阻害する。他の実施形態において、本明細書で提供する抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＬ−１７分泌を少なくとも約５％阻害する。別の実施形態において、本明細書で提供する抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＬ−１７分泌を少なくとも約１０％阻害する。いくつかの実施形態において、本明細書で提供する抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＬ−１７分泌を少なくとも約１５％阻害する。一実施形態において、本明細書で提供する抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＬ−１７分泌を少なくとも約２０％阻害する。別の実施形態において、本明細書で提供する抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＬ−１７分泌を少なくとも約２５％阻害する。一実施形態において、本明細書で提供する抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＬ−１７分泌を少なくとも約３０％阻害する。いくつかの実施形態において、本明細書で提供する抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＬ−１７分泌を少なくとも約３５％阻害する。別の実施形態において、本明細書で提供する抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＬ−１７分泌を少なくとも約４０％阻害する。他の実施形態において、本明細書で提供する抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＬ−１７分泌を少なくとも約４５％阻害する。一実施形態において、本明細書で提供する抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＬ−１７分泌を少なくとも約５０％阻害する。別の実施形態において、本明細書で提供する抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＬ−１７分泌を少なくとも約５５％阻害する。いくつかの実施形態において、本明細書で提供する抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＬ−１７分泌を少なくとも約６０％阻害する。一実施形態において、本明細書で提供する抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＬ−１７分泌を少なくとも約６５％阻害する。別の実施形態において、本明細書で提供する抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＬ−１７分泌を少なくとも約７０％阻害する。他の実施形態において、本明細書で提供する抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＬ−１７分泌を少なくとも約７５％阻害する。いくつかの実施形態において、本明細書で提供する抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＬ−１７分泌を少なくとも約８０％阻害する。別の実施形態において、本明細書で提供する抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＬ−１７分泌を少なくとも約８５％阻害する。一実施形態において、本明細書で提供する抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＬ−１７分泌を少なくとも約９０％阻害する。一実施形態において、本明細書で提供する抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＬ−１７分泌を少なくとも約９５％阻害する。別の実施形態において、本明細書で提供する抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＬ−１７分泌を少なくとも約９８％阻害する。いくつかの実施形態において、本明細書で提供する抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＬ−１７分泌を少なくとも約９９％阻害する。具体的な実施形態において、本明細書で提供する抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＬ−１７分泌を少なくとも約２５％または３５％、任意により約７５％まで阻害する。いくつかの実施形態において、ＩＬ−１７分泌の阻害は本明細書に記載の方法によって評価される。他の実施形態において、ＩＬ−１７分泌の阻害は、当業者にとって公知の方法（例えば、ＭＳＤマルチプレックスアッセイ）によって評価される。具体的な実施形態において、ＩＬ−１７分泌は、抗ＰＤ−１抗体の不存在下でのＩＬ−１７分泌と比較して阻害される。他の実施形態において、ＩＬ−１７分泌は、非関連抗体（例えば、ＰＤ−１に特異的に結合しない抗体）の存在下でのＩＬ−１７分泌と比較して阻害される。
【０２９９】
ある実施形態において、本明細書で提供する抗ＰＤ−１抗体（例えば、抗体ＰＤ１ＡＢ−１、ＰＤ１ＡＢ−２、ＰＤ１ＡＢ−３、ＰＤ１ＡＢ−４、ＰＤ１ＡＢ−５、もしくはＰＤ１ＡＢ−６の任意の１つもしくはその抗原結合断片、または抗体ＰＤ１ＡＢ−１、ＰＤ１ＡＢ−２、ＰＤ１ＡＢ−３、ＰＤ１ＡＢ−４、ＰＤ１ＡＢ−５、もしくはＰＤ１ＡＢ−６の任意の１つのＣＤＲを含む抗体）は、ＩＬ−１７分泌を阻害する。他の実施形態において、本明細書で提供する抗ＰＤ−１抗体は、最大でも約５０ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−１７分泌を阻害する。別の実施形態において、本明細書で提供する抗ＰＤ−１抗体は、最大でも約４０ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−１７分泌を阻害する。一実施形態において、本明細書で提供する抗ＰＤ−１抗体は、最大でも約３０ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−１７分泌を阻害する。いくつかの実施形態において、本明細書で提供する抗ＰＤ−１抗体は、最大でも約２０ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−１７分泌を阻害する。別の実施形態において、本明細書で提供する抗ＰＤ−１抗体は、最大でも約１０ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−１７分泌を阻害する。一実施形態において、本明細書で提供する抗ＰＤ−１抗体は、最大でも約５ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−１７分泌を阻害する。他の実施形態において、本明細書で提供する抗ＰＤ−１抗体は、最大でも約１ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−１７分泌を阻害する。別の実施形態において、本明細書で提供する抗ＰＤ−１抗体は、最大でも約０．７５ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−１７分泌を阻害する。いくつかの実施形態において、本明細書で提供する抗ＰＤ−１抗体は、最大でも約０．５ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−１７分泌を阻害する。一実施形態において、本明細書で提供する抗ＰＤ−１抗体は、最大でも約０．１ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−１７分泌を阻害する。別の実施形態において、本明細書で提供する抗ＰＤ−１抗体は、最大でも約０．０５ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−１７分泌を阻害する。一実施形態において、本明細書で提供する抗ＰＤ−１抗体は、最大でも約０．０１ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−１７分泌を阻害する。いくつかの実施形態において、本明細書で提供する抗ＰＤ−１抗体は、最大でも約０．００５ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−１７分泌を阻害する。別の実施形態において、本明細書で提供する抗ＰＤ−１抗体は、最大でも約０．００１ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−１７分泌を阻害する。他の実施形態において、本明細書で提供する抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約５０ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−１７分泌を阻害する。一実施形態において、本明細書で提供する抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約４０ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−１７分泌を阻害する。別の実施形態において、本明細書で提供する抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約３０ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−１７分泌を阻害する。いくつかの実施形態において、本明細書で提供する抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約２０ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−１７分泌を阻害する。一実施形態において、本明細書で提供する抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約１０ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−１７分泌を阻害する。別の実施形態において、本明細書で提供する抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約５ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−１７分泌を阻害する。他の実施形態において、本明細書で提供する抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約１ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−１７分泌を阻害する。いくつかの実施形態において、本明細書で提供する抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約０．７５ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−１７分泌を阻害する。別の実施形態において、本明細書で提供する抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約０．５ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−１７分泌を阻害する。一実施形態において、本明細書で提供する抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約０．１ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−１７分泌を阻害する。一実施形態において、本明細書で提供する抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約０．０５ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−１７分泌を阻害する。別の実施形態において、本明細書で提供する抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約０．０１ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−１７分泌を阻害する。いくつかの実施形態において、本明細書で提供する抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約０．００５ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−１７分泌を阻害する。他の実施形態において、本明細書で提供する抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約０．００１ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−１７分泌を阻害する。具体的な実施形態において、ＥＣ５０は本明細書に記載の方法によって評価される。他の実施形態において、ＥＣ５０は当業者にとって公知の他の方法（例えば、ＭＳＤマルチプレックスアッセイ）によって評価される。具体的な実施形態において、ＥＣ５０はＭＳＤマルチプレックスアッセイによって評価される。
【０３００】
具体的な実施形態において、本明細書で提供する抗体（例えば、抗体ＰＤ１ＡＢ−１、ＰＤ１ＡＢ−２、ＰＤ１ＡＢ−３、ＰＤ１ＡＢ−４、ＰＤ１ＡＢ−５、もしくはＰＤ１ＡＢ−６の任意の１つもしくはその抗原結合断片、または抗体ＰＤ１ＡＢ−１、ＰＤ１ＡＢ−２、ＰＤ１ＡＢ−３、ＰＤ１ＡＢ−４、ＰＤ１ＡＢ−５、もしくはＰＤ１ＡＢ−６の任意の１つのＣＤＲを含む抗体）は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＦＮ−γ分泌（例えば、細胞、例えばＴ細胞から）を阻害する。別の実施形態において、本明細書で提供する抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＦＮ−γ分泌を少なくとも約５％阻害する。一実施形態において、本明細書で提供する抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＦＮ−γ分泌を少なくとも約１０％阻害する。いくつかの実施形態において、本明細書で提供する抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＦＮ−γ分泌を少なくとも約１５％阻害する。別の実施形態において、本明細書で提供する抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＦＮ−γ分泌を少なくとも約２０％阻害する。一実施形態において、本明細書で提供する抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＦＮ−γ分泌を少なくとも約２５％阻害する。他の実施形態において、本明細書で提供する抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＦＮ−γ分泌を少なくとも約３０％阻害する。別の実施形態において、本明細書で提供する抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＦＮ−γ分泌を少なくとも約３５％阻害する。いくつかの実施形態において、本明細書で提供する抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＦＮ−γ分泌を少なくとも約４０％阻害する。一実施形態において、本明細書で提供する抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＦＮ−γ分泌を少なくとも約４５％阻害する。別の実施形態において、本明細書で提供する抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＦＮ−γ分泌を少なくとも約５０％阻害する。一実施形態において、本明細書で提供する抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＦＮ−γ分泌を少なくとも約５５％阻害する。いくつかの実施形態において、本明細書で提供する抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＦＮ−γ分泌を少なくとも約６０％阻害する。別の実施形態において、本明細書で提供する抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＦＮ−γ分泌を少なくとも約６５％阻害する。他の実施形態において、本明細書で提供する抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＦＮ−γ分泌を少なくとも約７０％阻害する。一実施形態において、本明細書で提供する抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＦＮ−γ分泌を少なくとも約７５％阻害する。別の実施形態において、本明細書で提供する抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＦＮ−γ分泌を少なくとも約８０％阻害する。いくつかの実施形態において、本明細書で提供する抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＦＮ−γ分泌を少なくとも約８５％阻害する。一実施形態において、本明細書で提供する抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＦＮ−γ分泌を少なくとも約９０％阻害する。別の実施形態において、本明細書で提供する抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＦＮ−γ分泌を少なくとも約９５％阻害する。他の実施形態において、本明細書で提供する抗体は、ＰＤ−��に特異的に結合し、ＩＦＮ−γ分泌を少なくとも約９８％阻害する。いくつかの実施形態において、本明細書で提供する抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＦＮ−γ分泌を少なくとも約９９％阻害する。具体的な実施形態において、本明細書で提供する抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＦＮ−γ分泌を少なくとも約２５％または３５％、任意により約７５％まで阻害する。いくつかの実施形態において、ＩＦＮ−γ分泌の阻害は本明細書に記載の方法によって評価される。他の実施形態において、ＩＦＮ−γ分泌の阻害は、当業者にとって公知の方法（例えば、ＭＳＤマルチプレックスアッセイ）によって評価される。具体的な実施形態において、ＩＦＮ−γ分泌は、抗ＰＤ−１抗体の不存在下でのＩＦＮ−γ分泌と比較して阻害される。他の実施形態において、ＩＦＮ−γ分泌は、非関連抗体（例えば、ＰＤ−１に特異的に結合しない抗体）の存在下でのＩＦＮ−γ分泌と比較して阻害される。
【０３０１】
ある実施形態において、本明細書で提供する抗ＰＤ−１抗体（例えば、抗体ＰＤ１ＡＢ−１、ＰＤ１ＡＢ−２、ＰＤ１ＡＢ−３、ＰＤ１ＡＢ−４、ＰＤ１ＡＢ−５、もしくはＰＤ１ＡＢ−６の任意の１つもしくはその抗原結合断片、または抗体ＰＤ１ＡＢ−１、ＰＤ１ＡＢ−２、ＰＤ１ＡＢ−３、ＰＤ１ＡＢ−４、ＰＤ１ＡＢ−５、もしくはＰＤ１ＡＢ−６の任意の１つのＣＤＲを含む抗体）は、ＩＦＮ−γ分泌を阻害する。別の実施形態において、本明細書で提供する抗ＰＤ−１抗体は、最大でも約５０ｎＭのＥＣ５０でＩＦＮ−γ分泌を阻害する。一実施形態において、本明細書で提供する抗ＰＤ−１抗体は、最大でも約４０ｎＭのＥＣ５０でＩＦＮ−γ分泌を阻害する。一実施形態において、本明細書で提供する抗ＰＤ−１抗体は、最大でも約３０ｎＭのＥＣ５０でＩＦＮ−γ分泌を阻害する。別の実施形態において、本明細書で提供する抗ＰＤ−１抗体は、最大でも約２０ｎＭのＥＣ５０でＩＦＮ−γ分泌を阻害する。いくつかの実施形態において、本明細書で提供する抗ＰＤ−１抗体は、最大でも約１０ｎＭのＥＣ５０でＩＦＮ−γ分泌を阻害する。他の実施形態において、本明細書で提供する抗ＰＤ−１抗体は、最大でも約５ｎＭのＥＣ５０でＩＦＮ−γ分泌を阻害する。別の実施形態において、本明細書で提供する抗ＰＤ−１抗体は、最大でも約１ｎＭのＥＣ５０でＩＦＮ−γ分泌を阻害する。一実施形態において、本明細書で提供する抗ＰＤ−１抗体は、最大でも約０．７５ｎＭのＥＣ５０でＩＦＮ−γ分泌を阻害する。いくつかの実施形態において、本明細書で提供する抗ＰＤ−１抗体は、最大でも約０．５ｎＭのＥＣ５０でＩＦＮ−γ分泌を阻害する。別の実施形態において、本明細書で提供する抗ＰＤ−１抗体は、最大でも約０．１ｎＭのＥＣ５０でＩＦＮ−γ分泌を阻害する。一実施形態において、本明細書で提供する抗ＰＤ−１抗体は、最大でも約０．０５ｎＭのＥＣ５０でＩＦＮ−γ分泌を阻害する。他の実施形態において、本明細書で提供する抗ＰＤ−１抗体は、最大でも約０．０１ｎＭのＥＣ５０でＩＦＮ−γ分泌を阻害する。別の実施形態において、本明細書で提供する抗ＰＤ−１抗体は、最大でも約０．００５ｎＭのＥＣ５０でＩＦＮ−γ分泌を阻害する。いくつかの実施形態において、本明細書で提供する抗ＰＤ−１抗体は、最大でも約０．００１ｎＭのＥＣ５０でＩＦＮ−γ分泌を阻害する。一実施形態において、本明細書で提供する抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約５０ｎＭのＥＣ５０でＩＦＮ−γ分泌を阻害する。別の実施形態において、本明細書で提供する抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約４０ｎＭのＥＣ５０でＩＦＮ−γ分泌を阻害する。一実施形態において、本明細書で提供する抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約３０ｎＭのＥＣ５０でＩＦＮ−γ分泌を阻害する。いくつかの実施形態において、本明細書で提供する抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約２０ｎＭのＥＣ５０でＩＦＮ−γ分泌を阻害する。別の実施形態において、本明細書で提供する抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約１０ｎＭのＥＣ５０でＩＦＮ−γ分泌を阻害する。他の実施形態において、本明細書で提供する抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約５ｎＭのＥＣ５０でＩＦＮ−γ分泌を阻害する。一実施形態において、本明細書で提供する抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約１ｎＭのＥＣ５０でＩＦＮ−γ分泌を阻害する。別の実施形態において、本明細書で提供する抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約０．７５ｎＭのＥＣ５０でＩＦＮ−γ分泌を阻害する。いくつかの実施形態において、本明細書で提供する抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約０．５ｎＭのＥＣ５０でＩＦＮ−γ分泌を阻害する。一実施形態において、本明細書で提供する抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約０．１ｎＭのＥＣ５０でＩＦＮ−γ分泌を阻害する。別の実施形態において、本明細書で提供する抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約０．０５ｎＭのＥＣ５０でＩＦＮ−γ分泌を阻害する。他の実施形態において、本明細書で提供する抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約０．０１ｎＭのＥＣ５０でＩＦＮ−γ分泌を阻害する。いくつかの実施形態において、本明細書で提供する抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約０．００５ｎＭのＥＣ５０でＩＦＮ−γ分泌を阻害する。別の実施形態において、本明細書で提供する抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約０．００１ｎＭのＥＣ５０でＩＦＮ−γ分泌を阻害する。具体的な実施形態において、ＥＣ５０は本明細書に記載の方法によって評価される。他の実施形態において、ＥＣ５０は当業者にとって公知の他の方法（例えば、ＭＳＤマルチプレックスアッセイ）によって評価される。具体的な実施形態において、ＥＣ５０はＭＳＤマルチプレックスアッセイによって評価される。
【０３０２】
具体的な実施形態において、本明細書で提供する抗体（例えば、抗体ＰＤ１ＡＢ−１、ＰＤ１ＡＢ−２、ＰＤ１ＡＢ−３、ＰＤ１ＡＢ−４、ＰＤ１ＡＢ−５、もしくはＰＤ１ＡＢ−６の任意の１つもしくはその抗原結合断片、または抗体ＰＤ１ＡＢ−１、ＰＤ１ＡＢ−２、ＰＤ１ＡＢ−３、ＰＤ１ＡＢ−４、ＰＤ１ＡＢ−５、もしくはＰＤ１ＡＢ−６の任意の１つのＣＤＲを含む抗体）は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＬ−１分泌（例えば、細胞、例えばＴ細胞から）を阻害する。一実施形態において、本明細書で提供する抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＬ−１分泌を少なくとも約５％阻害する。いくつかの実施形態において、本明細書で提供する抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＬ−１分泌を少なくとも約１０％阻害する。別の実施形態において、本明細書で提供する抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＬ−１分泌を少なくとも約１５％阻害する。他の実施形態において、本明細書で提供する抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＬ−１分泌を少なくとも約２０％阻害する。一実施形態において、本明細書で提供する抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＬ−１分泌を少なくとも約２５％阻害する。別の実施形態において、本明細書で提供する抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＬ−１分泌を少なくとも約３０％阻害する。いくつかの実施形態において、本明細書で提供する抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＬ−１分泌を少なくとも約３５％阻害する。一実施形態において、本明細書で提供する抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＬ−１分泌を少なくとも約４０％阻害する。別の実施形態において、本明細書で提供する抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＬ−１分泌を少なくとも約４５％阻害する。他の実施形態において、本明細書で提供する抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＬ−１分泌を少なくとも約５０％阻害する。いくつかの実施形態において、本明細書で提供する抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＬ−１分泌を少なくとも約５５％阻害する。別の実施形態において、本明細書で提供する抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＬ−１分泌を少なくとも約６０％阻害する。一実施形態において、本明細書で提供する抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＬ−１分泌を少なくとも約６５％阻害する。一実施形態において、本明細書で提供する抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＬ−１分泌を少なくとも約７０％阻害する。別の実施形態において、本明細書で提供する抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＬ−１分泌を少なくとも約７５％阻害する。いくつかの実施形態において、本明細書で提供する抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＬ−１分泌を少なくとも約８０％阻害する。他の実施形態において、本明細書で提供する抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＬ−１分泌を少なくとも約８５％阻害する。別の実施形態において、本明細書で提供する抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＬ−１分泌を少なくとも約９０％阻害する。一実施形態において、本明細書で提供する抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＬ−１分泌を少なくとも約９５％阻害する。いくつかの実施形態において、本明細書で提供する抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＬ−１分泌を少なくとも約９８％阻害する。別の実施形態において、本明細書で提供する抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＬ−１分泌を少なくとも約９９％阻害する。具体的な実施形態において、本明細書で提供する抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＬ−１分泌を少なくとも約２５％または３５％、任意により約７５％まで阻害する。いくつかの実施形態において、ＩＬ−１分泌の阻害は本明細書に記載の方法によって評価される。他の実施形態において、ＩＬ−１分泌の阻害は、当業者にとって公知の方法（例えば、ＭＳＤマルチプレックスアッセイ）によって評価される。具体的な実施形態において、ＩＬ−１分泌は、抗ＰＤ−１抗体の不存在下でのＩＬ−１分泌と比較して阻害される。他の実施形態において、ＩＬ−１分泌は、非関連抗体（例えば、ＰＤ−１に特異的に結合しない抗体）の存在下でのＩＬ−１分泌と比較して阻害される。
【０３０３】
ある実施形態において、本明細書で提供する抗ＰＤ−１抗体（例えば、抗体ＰＤ１ＡＢ−１、ＰＤ１ＡＢ−２、ＰＤ１ＡＢ−３、ＰＤ１ＡＢ−４、ＰＤ１ＡＢ−５、もしくはＰＤ１ＡＢ−６の任意の１つもしくはその抗原結合断片、または抗体ＰＤ１ＡＢ−１、ＰＤ１ＡＢ−２、ＰＤ１ＡＢ−３、ＰＤ１ＡＢ−４、ＰＤ１ＡＢ−５、もしくはＰＤ１ＡＢ−６の任意の１つのＣＤＲを含む抗体）は、ＩＬ−１分泌を阻害する。一実施形態において、本明細書で提供する抗ＰＤ−１抗体は、最大でも約５０ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−１分泌を阻害する。他の実施形態において、本明細書で提供する抗ＰＤ−１抗体は、最大でも約４０ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−１分泌を阻害する。別の実施形態において、本明細書で提供する抗ＰＤ−１抗体は、最大でも約３０ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−１分泌を阻害する。いくつかの実施形態において、本明細書で提供する抗ＰＤ−１抗体は、最大でも約２０ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−１分泌を阻害する。一実施形態において、本明細書で提供する抗ＰＤ−１抗体は、最大でも約１０ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−１分泌を阻害する。別の実施形態において、本明細書で提供する抗ＰＤ−１抗体は、最大でも約５ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−１分泌を阻害する。一実施形態において、本明細書で提供する抗ＰＤ−１抗体は、最大でも約１ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−１分泌を阻害する。いくつかの実施形態において、本明細書で提供する抗ＰＤ−１抗体は、最大でも約０．７５ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−１分泌を阻害する。別の実施形態において、本明細書で提供する抗ＰＤ−１抗体は、最大でも約０．５ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−１分泌を阻害する。他の実施形態において、本明細書で提供する抗ＰＤ−１抗体は、最大でも約０．１ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−１分泌を阻害する。一実施形態において、本明細書で提供する抗ＰＤ−１抗体は、最大でも約０．０５ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−１分泌を阻害する。別の実施形態において、本明細書で提供する抗ＰＤ−１抗体は、最大でも約０．０１ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−１分泌を阻害する。いくつかの実施形態において、本明細書で提供する抗ＰＤ−１抗体は、最大でも約０．００５ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−１分泌を阻害する。一実施形態において、本明細書で提供する抗ＰＤ−１抗体は、最大でも約０．００１ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−１分泌を阻害する。別の実施形態において、本明細書で提供する抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約５０ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−１分泌を阻害する。他の実施形態において、本明細書で提供する抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約４０ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−１分泌を阻害する。いくつかの実施形態において、本明細書で提供する抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約３０ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−１分泌を阻害する。別の実施形態において、本明細書で提供する抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約２０ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−１分泌を阻害する。一実施形態において、本明細書で提供する抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約１０ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−１分泌を阻害する。一実施形態において、本明細書で提供する抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約５ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−１分泌を阻害する。別の実施形態において、本明細書で提供する抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約１ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−１分泌を阻害する。いくつかの実施形態において、本明細書で提供する抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約０．７５ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−１分泌を阻害する。他の実施形態において、本明細書で提供する抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約０．５ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−１分泌を阻害する。別の実施形態において、本明細書で提供する抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約０．１ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−１分泌を阻害する。一実施形態において、本明細書で提供する抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約０．０５ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−１分泌を阻害する。いくつかの実施形態において、本明細書で提供する抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約０．０１ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−１分泌を阻害する。別の実施形態において、本明細書で提供する抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約０．００５ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−１分泌を阻害する。一実施形態において、本明細書で提供する抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約０．００１ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−１分泌を阻害する。具体的な実施形態において、ＥＣ５０は本明細書に記載の方法によって評価される。他の実施形態において、ＥＣ５０は当業者にとって公知の他の方法（例えば、ＭＳＤマルチプレックスアッセイ）によって評価される。具体的な実施形態において、ＥＣ５０はＭＳＤマルチプレックスアッセイによって評価される。
【０３０４】
具体的な実施形態において、本明細書で提供する抗体（例えば、抗体ＰＤ１ＡＢ−１、ＰＤ１ＡＢ−２、ＰＤ１ＡＢ−３、ＰＤ１ＡＢ−４、ＰＤ１ＡＢ−５、もしくはＰＤ１ＡＢ−６の任意の１つもしくはその抗原結合断片、または抗体ＰＤ１ＡＢ−１、ＰＤ１ＡＢ−２、ＰＤ１ＡＢ−３、ＰＤ１ＡＢ−４、ＰＤ１ＡＢ−５、もしくはＰＤ１ＡＢ−６の任意の１つのＣＤＲを含む抗体）は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＬ−６分泌（例えば、細胞、例えばＴ細胞から）を阻害する。一実施形態において、本明細書で提供する抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＬ−６分泌を少なくとも約５％阻害する。いくつかの実施形態において、本明細書で提供する抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＬ−６分泌を少なくとも約１０％阻害する。別の実施形態において、本明細書で提供する抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＬ−６分泌を少なくとも約１５％阻害する。他の実施形態において、本明細書で提供する抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＬ−６分泌を少なくとも約２０％阻害する。一実施形態において、本明細書で提供する抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＬ−６分泌を少なくとも約２５％阻害する。別の実施形態において、本明細書で提供する抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＬ−６分泌を少なくとも約３０％阻害する。いくつかの実施形態において、本明細書で提供する抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＬ−６分泌を少なくとも約３５％阻害する。一実施形態において、本明細書で提供する抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＬ−６分泌を少なくとも約４０％阻害する。別の実施形態において、本明細書で提供する抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＬ−６分泌を少なくとも約４５％阻害する。他の実施形態において、本明細書で提供する抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＬ−６分泌を少なくとも約５０％阻害する。いくつかの実施形態において、本明細書で提供する抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＬ−６分泌を少なくとも約５５％阻害する。別の実施形態において、本明細書で提供する抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＬ−６分泌を少なくとも約６０％阻害する。一実施形態において、本明細書で提供する抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＬ−６分泌を少なくとも約６５％阻害する。一実施形態において、本明細書で提供する抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＬ−６分泌を少なくとも約７０％阻害する。別の実施形態において、本明細書で提供する抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＬ−６分泌を少なくとも約７５％阻害する。いくつかの実施形態において、本明細書で提供する抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＬ−６分泌を少なくとも約８０％阻害する。他の実施形態において、本明細書で提供する抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＬ−６分泌を少なくとも約８５％阻害する。別の実施形態において、本明細書で提供する抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＬ−６分泌を少なくとも約９０％阻害する。一実施形態において、本明細書で提供する抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＬ−６分泌を少なくとも約９５％阻害する。いくつかの実施形態において、本明細書で提供する抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＬ−６分泌を少なくとも約９８％阻害する。別の実施形態において、本明細書で提供する抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＬ−６分泌を少なくとも約９９％阻害する。具体的な実施形態において、本明細書で提供する抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＬ−６分泌を少なくとも約２５％または３５％、任意により約７５％まで阻害する。いくつかの実施形態において、ＩＬ−６分泌の阻害は本明細書に記載の方法によって評価される。他の実施形態において、ＩＬ−６分泌の阻害は、当業者にとって公知の方法（例えば、ＭＳＤマルチプレックスアッセイ）によって評価される。具体的な実施形態において、ＩＬ−６分泌は、抗ＰＤ−１抗体の不存在下でのＩＬ−６分泌と比較して阻害される。他の実施形態において、ＩＬ−６分泌は、非関連抗体（例えば、ＰＤ−１に特異的に結合しない抗体）の存在下でのＩＬ−６分泌と比較して阻害される。
【０３０５】
ある実施形態において、本明細書で提供する抗ＰＤ−１抗体（例えば、抗体ＰＤ１ＡＢ−１、ＰＤ１ＡＢ−２、ＰＤ１ＡＢ−３、ＰＤ１ＡＢ−４、ＰＤ１ＡＢ−５、もしくはＰＤ１ＡＢ−６の任意の１つもしくはその抗原結合断片、または抗体ＰＤ１ＡＢ−１、ＰＤ１ＡＢ−２、ＰＤ１ＡＢ−３、ＰＤ１ＡＢ−４、ＰＤ１ＡＢ−５、もしくはＰＤ１ＡＢ−６の任意の１つのＣＤＲを含む抗体）は、ＩＬ−６分泌を阻害する。一実施形態において、本明細書で提供する抗ＰＤ−１抗体は、最大でも約５０ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−６分泌を阻害する。他の実施形態において、本明細書で提供する抗ＰＤ−１抗体は、最大でも約４０ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−６分泌を阻害する。別の実施形態において、本明細書で提供する抗ＰＤ−１抗体は、最大でも約３０ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−６分泌を阻害する。いくつかの実施形態において、本明細書で提供する抗ＰＤ−１抗体は、最大でも約２０ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−６分泌を阻害する。一実施形態において、本明細書で提供する抗ＰＤ−１抗体は、最大でも約１０ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−６分泌を阻害する。別の実施形態において、本明細書で提供する抗ＰＤ−１抗体は、最大でも約５ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−６分泌を阻害する。一実施形態において、本明細書で提供する抗ＰＤ−１抗体は、最大でも約１ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−６分泌を阻害する。いくつかの実施形態において、本明細書で提供する抗ＰＤ−１抗体は、最大でも約０．７５ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−６分泌を阻害する。別の実施形態において、本明細書で提供する抗ＰＤ−１抗体は、最大でも約０．５ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−６分泌を阻害する。他の実施形態において、本明細書で提供する抗ＰＤ−１抗体は、最大でも約０．１ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−６分泌を阻害する。一実施形態において、本明細書で提供する抗ＰＤ−１抗体は、最大でも約０．０５ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−６分泌を阻害する。別の実施形態において、本明細書で提供する抗ＰＤ−１抗体は、最大でも約０．０１ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−６分泌を阻害する。いくつかの実施形態において、本明細書で提供する抗ＰＤ−１抗体は、最大でも約０．００５ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−６分泌を阻害する。一実施形態において、本明細書で提供する抗ＰＤ−１抗体は、最大でも約０．００１ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−６分泌を阻害する。別の実施形態において、本明細書で提供する抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約５０ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−６分泌を阻害する。他の実施形態において、本明細書で提供する抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約４０ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−６分泌を阻害する。いくつかの実施形態において、本明細書で提供する抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約３０ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−６分泌を阻害する。別の実施形態において、本明細書で提供する抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約２０ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−６分泌を阻害する。一実施形態において、本明細書で提供する抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約１０ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−６分泌を阻害する。一実施形態において、本明細書で提供する抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約５ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−６分泌を阻害する。別の実施形態において、本明細書で提供する抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約１ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−６分泌を阻害する。いくつかの実施形態において、本明細書で提供する抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約０．７５ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−６分泌を阻害する。他の実施形態において、本明細書で提供する抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約０．５ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−６分泌を阻害する。別の実施形態において、本明細書で提供する抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約０．１ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−６分泌を阻害する。一実施形態において、本明細書で提供する抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約０．０５ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−６分泌を阻害する。いくつかの実施形態において、本明細書で提供する抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約０．０１ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−６分泌を阻害する。別の実施形態において、本明細書で提供する抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約０．００５ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−６分泌を阻害する。一実施形態において、本明細書で提供する抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約０．００１ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−６分泌を阻害する。具体的な実施形態において、ＥＣ５０は本明細書に記載の方法によって評価される。他の実施形態において、ＥＣ５０は当業者にとって公知の他の方法（例えば、ＭＳＤマルチプレックスアッセイ）によって評価される。具体的な実施形態において、ＥＣ５０はＭＳＤマルチプレックスアッセイによって評価される。
【０３０６】
具体的な実施形態において、本明細書で提供する抗体（例えば、抗体ＰＤ１ＡＢ−１、ＰＤ１ＡＢ−２、ＰＤ１ＡＢ−３、ＰＤ１ＡＢ−４、ＰＤ１ＡＢ−５、もしくはＰＤ１ＡＢ−６の任意の１つもしくはその抗原結合断片、または抗体ＰＤ１ＡＢ−１、ＰＤ１ＡＢ−２、ＰＤ１ＡＢ−３、ＰＤ１ＡＢ−４、ＰＤ１ＡＢ−５、もしくはＰＤ１ＡＢ−６の任意の１つのＣＤＲを含む抗体）は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＬ−１２分泌（例えば、細胞、例えばＴ細胞から）を阻害する。一実施形態において、本明細書で提供する抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＬ−１２分泌を少なくとも約５％阻害する。いくつかの実施形態において、本明細書で提供する抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＬ−１２分泌を少なくとも約１０％阻害する。別の実施形態において、本明細書で提供する抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＬ−１２分泌を少なくとも約１５％阻害する。他の実施形態において、本明細書で提供する抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＬ−１２分泌を少なくとも約２０％阻害する。一実施形態において、本明細書で提供する抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＬ−１２分泌を少なくとも約２５％阻害する。別の実施形態において、本明細書で提供する抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＬ−１２分泌を少なくとも約３０％阻害する。いくつかの実施形態において、本明細書で提供する抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＬ−１２分泌を少なくとも約３５％阻害する。一実施形態において、本明細書で提供する抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＬ−１２分泌を少なくとも約４０％阻害する。別の実施形態において、本明細書で提供する抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＬ−１２分泌を少なくとも約４５％阻害する。他の実施形態において、本明細書で提供する抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＬ−１２分泌を少なくとも約５０％阻害する。いくつかの実施形態において、本明細書で提供する抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＬ−１２分泌を少なくとも約５５％阻害する。別の実施形態において、本明細書で提供する抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＬ−１２分泌を少なくとも約６０％阻害する。一実施形態において、本明細書で提供する抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＬ−１２分泌を少なくとも約６５％阻害する。一実施形態において、本明細書で提供する抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＬ−１２分泌を少なくとも約７０％阻害する。別の実施形態において、本明細書で提供する抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＬ−１２分泌を少なくとも約７５％阻害する。いくつかの実施形態において、本明細書で提供する抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＬ−１２分泌を少なくとも約８０％阻害する。他の実施形態において、本明細書で提供する抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＬ−１２分泌を少なくとも約８５％阻害する。別の実施形態において、本明細書で提供する抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＬ−１２分泌を少なくとも約９０％阻害する。一実施形態において、本明細書で提供する抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＬ−１２分泌を少なくとも約９５％阻害する。いくつかの実施形態において、本明細書で提供する抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＬ−１２分泌を少なくとも約９８％阻害する。別の実施形態において、本明細書で提供する抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＬ−１２分泌を少なくとも約９９％阻害する。具体的な実施形態において、本明細書で提供する抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＬ−１２分泌を少なくとも約２５％または３５％、任意により約７５％まで阻害する。いくつかの実施形態において、ＩＬ−１２分泌の阻害は本明細書に記載の方法によって評価される。他の実施形態において、ＩＬ−１２分泌の阻害は、当業者にとって公知の方法（例えば、ＭＳＤマルチプレックスアッセイ）によって評価される。具体的な実施形態において、ＩＬ−１２分泌は、抗ＰＤ−１抗体の不存在下でのＩＬ−１２分泌と比較して阻害される。他の実施形態において、ＩＬ−１２分泌は、非関連抗体（例えば、ＰＤ−１に特異的に結合しない抗体）の存在下でのＩＬ−１２分泌と比較して阻害される。
【０３０７】
ある実施形態において、本明細書で提供する抗ＰＤ−１抗体（例えば、抗体ＰＤ１ＡＢ−１、ＰＤ１ＡＢ−２、ＰＤ１ＡＢ−３、ＰＤ１ＡＢ−４、ＰＤ１ＡＢ−５、もしくはＰＤ１ＡＢ−６の任意の１つもしくはその抗原結合断片、または抗体ＰＤ１ＡＢ−１、ＰＤ１ＡＢ−２、ＰＤ１ＡＢ−３、ＰＤ１ＡＢ−４、ＰＤ１ＡＢ−５、もしくはＰＤ１ＡＢ−６の任意の１つのＣＤＲを含む抗体）は、ＩＬ−１２分泌を阻害する。一実施形態において、本明細書で提供する抗ＰＤ−１抗体は、最大でも約５０ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−１２分泌を阻害する。他の実施形態において、本明細書で提供する抗ＰＤ−１抗体は、最大でも約４０ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−１２分泌を阻害する。別の実施形態において、本明細書で提供する抗ＰＤ−１抗体は、最大でも約３０ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−１２分泌を阻害する。いくつかの実施形態において、本明細書で提供する抗ＰＤ−１抗体は、最大でも約２０ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−１２分泌を阻害する。一実施形態において、本明細書で提供する抗ＰＤ−１抗体は、最大でも約１０ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−１２分泌を阻害する。別の実施形態において、本明細書で提供する抗ＰＤ−１抗体は、最大でも約５ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−１２分泌を阻害する。一実施形態において、本明細書で提供する抗ＰＤ−１抗体は、最大でも約１ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−１２分泌を阻害する。いくつかの実施形態において、本明細書で提供する抗ＰＤ−１抗体は、最大でも約０．７５ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−１２分泌を阻害する。別の実施形態において、本明細書で提供する抗ＰＤ−１抗体は、最大でも約０．５ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−１２分泌を阻害する。他の実施形態において、本明細書で提供する抗ＰＤ−１抗体は、最大でも約０．１ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−１２分泌を阻害する。一実施形態において、本明細書で提供する抗ＰＤ−１抗体は、最大でも約０．０５ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−１２分泌を阻害する。別の実施形態において、本明細書で提供する抗ＰＤ−１抗体は、最大でも約０．０１ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−１２分泌を阻害する。いくつかの実施形態において、本明細書で提供する抗ＰＤ−１抗体は、最大でも約０．００５ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−１２分泌を阻害する。一実施形態において、本明細書で提供する抗ＰＤ−１抗体は、最大でも約０．００１ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−１２分泌を阻害する。別の実施形態において、本明細書で提供する抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約５０ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−１２分泌を阻害する。他の実施形態において、本明細書で提供する抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約４０ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−１２分泌を阻害する。いくつかの実施形態において、本明細書で提供する抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約３０ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−１２分泌を阻害する。別の実施形態において、本明細書で提供する抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約２０ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−１２分泌を阻害する。一実施形態において、本明細書で提供する抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約１０ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−１２分泌を阻害する。一実施形態において、本明細書で提供する抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約５ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−１２分泌を阻害する。別の実施形態において、本明細書で提供する抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約１ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−１２分泌を阻害する。いくつかの実施形態において、本明細書で提供する抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約０．７５ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−１２分泌を阻害する。他の実施形態において、本明細書で提供する抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約０．５ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−１２分泌を阻害する。別の実施形態において、本明細書で提供する抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約０．１ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−１２分泌を阻害する。一実施形態において、本明細書で提供する抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約０．０５ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−１２分泌を阻害する。いくつかの実施形態において、本明細書で提供する抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約０．０１ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−１２分泌を阻害する。別の実施形態において、本明細書で提供する抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約０．００５ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−１２分泌を阻害する。一実施形態において、本明細書で提供する抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約０．００１ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−１２分泌を阻害する。具体的な実施形態において、ＥＣ５０は本明細書に記載の方法によって評価される。他の実施形態において、ＥＣ５０は当業者にとって公知の他の方法（例えば、ＭＳＤマルチプレックスアッセイ）によって評価される。具体的な実施形態において、ＥＣ５０はＭＳＤマルチプレックスアッセイによって評価される。
【０３０８】
具体的な実施形態において、本明細書で提供する抗体（例えば、抗体ＰＤ１ＡＢ−１、ＰＤ１ＡＢ−２、ＰＤ１ＡＢ−３、ＰＤ１ＡＢ−４、ＰＤ１ＡＢ−５、もしくはＰＤ１ＡＢ−６の任意の１つもしくはその抗原結合断片、または抗体ＰＤ１ＡＢ−１、ＰＤ１ＡＢ−２、ＰＤ１ＡＢ−３、ＰＤ１ＡＢ−４、ＰＤ１ＡＢ−５、もしくはＰＤ１ＡＢ−６の任意の１つのＣＤＲを含む抗体）は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＬ−２２分泌（例えば、細胞、例えばＴ細胞から）を阻害する。一実施形態において、本明細書で提供する抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＬ−２２分泌を少なくとも約５％阻害する。いくつかの実施形態において、本明細書で提供する抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＬ−２２分泌を少なくとも約１０％阻害する。別の実施形態において、本明細書で提供する抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＬ−２２分泌を少なくとも約１５％阻害する。他の実施形態において、本明細書で提供する抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＬ−２２分泌を少なくとも約２０％阻害する。一実施形態において、本明細書で提供する抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＬ−２２分泌を少なくとも約２５％阻害する。別の実施形態において、本明細書で提供する抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＬ−２２分泌を少なくとも約３０％阻害する。いくつかの実施形態において、本明細書で提供する抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＬ−２２分泌を少なくとも約３５％阻害する。一実施形態において、本明細書で提供する抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＬ−２２分泌を少なくとも約４０％阻害する。別の実施形態において、本明細書で提供する抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＬ−２２分泌を少なくとも約４５％阻害する。他の実施形態において、本明細書で提供する抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＬ−２２分泌を少なくとも約５０％阻害する。いくつかの実施形態において、本明細書で提供する抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＬ−２２分泌を少なくとも約５５％阻害する。別の実施形態において、本明細書で提供する抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＬ−２２分泌を少なくとも約６０％阻害する。一実施形態において、本明細書で提供する抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＬ−２２分泌を少なくとも約６５％阻害する。一実施形態において、本明細書で提供する抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＬ−２２分泌を少なくとも約７０％阻害する。別の実施形態において、本明細書で提供する抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＬ−２２分泌を少なくとも約７５％阻害する。いくつかの実施形態において、本明細書で提供する抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＬ−２２分泌を少なくとも約８０％阻害する。他の実施形態において、本明細書で提供する抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＬ−２２分泌を少なくとも約８５％阻害する。別の実施形態において、本明細書で提供する抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＬ−２２分泌を少なくとも約９０％阻害する。一実施形態において、本明細書で提供する抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＬ−２２分泌を少なくとも約９５％阻害する。いくつかの実施形態において、本明細書で提供する抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＬ−２２分泌を少なくとも約９８％阻害する。別の実施形態において、本明細書で提供する抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＬ−２２分泌を少なくとも約９９％阻害する。具体的な実施形態において、本明細書で提供する抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＬ−２２分泌を少なくとも約２５％または３５％、任意により約７５％まで阻害する。いくつかの実施形態において、ＩＬ−２２分泌の阻害は本明細書に記載の方法によって評価される。他の実施形態において、ＩＬ−２２分泌の阻害は、当業者にとって公知の方法（例えば、ＭＳＤマルチプレックスアッセイ）によって評価される。具体的な実施形態において、ＩＬ−２２分泌は、抗ＰＤ−１抗体の不存在下でのＩＬ−２２分泌と比較して阻害される。他の実施形態において、ＩＬ−２２分泌は、非関連抗体（例えば、ＰＤ−１に特異的に結合しない抗体）の存在下でのＩＬ−２２分泌と比較して阻害される。
【０３０９】
ある実施形態において、本明細書で提供する抗ＰＤ−１抗体（例えば、抗体ＰＤ１ＡＢ−１、ＰＤ１ＡＢ−２、ＰＤ１ＡＢ−３、ＰＤ１ＡＢ−４、ＰＤ１ＡＢ−５、もしくはＰＤ１ＡＢ−６の任意の１つもしくはその抗原結合断片、または抗体ＰＤ１ＡＢ−１、ＰＤ１ＡＢ−２、ＰＤ１ＡＢ−３、ＰＤ１ＡＢ−４、ＰＤ１ＡＢ−５、もしくはＰＤ１ＡＢ−６の任意の１つのＣＤＲを含む抗体）は、ＩＬ−２２分泌を阻害する。一実施形態において、本明細書で提供する抗ＰＤ−１抗体は、最大でも約５０ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−２２分泌を阻害する。他の実施形態において、本明細書で提供する抗ＰＤ−１抗体は、最大でも約４０ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−２２分泌を阻害する。別の実施形態において、本明細書で提供する抗ＰＤ−１抗体は、最大でも約３０ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−２２分泌を阻害する。いくつかの実施形態において、本明細書で提供する抗ＰＤ−１抗体は、最大でも約２０ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−２２分泌を阻害する。一実施形態において、本明細書で提供する抗ＰＤ−１抗体は、最大でも約１０ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−２２分泌を阻害する。別の実施形態において、本明細書で提供する抗ＰＤ−１抗体は、最大でも約５ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−２２分泌を阻害する。一実施形態において、本明細書で提供する抗ＰＤ−１抗体は、最大でも約１ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−２２分泌を阻害する。いくつかの実施形態において、本明細書で提供する抗ＰＤ−１抗体は、最大でも約０．７５ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−２２分泌を阻害する。別の実施形態において、本明細書で提供する抗ＰＤ−１抗体は、最大でも約０．５ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−２２分泌を阻害する。他の実施形態において、本明細書で提供する抗ＰＤ−１抗体は、最大でも約０．１ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−２２分泌を阻害する。一実施形態において、本明細書で提供する抗ＰＤ−１抗体は、最大でも約０．０５ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−２２分泌を阻害する。別の実施形態において、本明細書で提供する抗ＰＤ−１抗体は、最大でも約０．０１ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−２２分泌を阻害する。いくつかの実施形態において、本明細書で提供する抗ＰＤ−１抗体は、最大でも約０．００５ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−２２分泌を阻害する。一実施形態において、本明細書で提供する抗ＰＤ−１抗体は、最大でも約０．００１ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−２２分泌を阻害する。別の実施形態において、本明細書で提供する抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約５０ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−２２分泌を阻害する。他の実施形態において、本明細書で提供する抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約４０ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−２２分泌を阻害する。いくつかの実施形態において、本明細書で提供する抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約３０ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−２２分泌を阻害する。別の実施形態において、本明細書で提供する抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約２０ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−２２分泌を阻害する。一実施形態において、本明細書で提供する抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約１０ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−２２分泌を阻害する。一実施形態において、本明細書で提供する抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約５ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−２２分泌を阻害する。別の実施形態において、本明細書で提供する抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約１ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−２２分泌を阻害する。いくつかの実施形態において、本明細書で提供する抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約０．７５ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−２２分泌を阻害する。他の実施形態において、本明細書で提供する抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約０．５ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−２２分泌を阻害する。別の実施形態において、本明細書で提供する抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約０．１ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−２２分泌を阻害する。一実施形態において、本明細書で提供する抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約０．０５ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−２２分泌を阻害する。いくつかの実施形態において、本明細書で提供する抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約０．０１ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−２２分泌を阻害する。別の実施形態において、本明細書で提供する抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約０．００５ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−２２分泌を阻害する。一実施形態において、本明細書で提供する抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約０．００１ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−２２分泌を阻害する。具体的な実施形態において、ＥＣ５０は本明細書に記載の方法によって評価される。他の実施形態において、ＥＣ５０は当業者にとって公知の他の方法（例えば、ＭＳＤマルチプレックスアッセイ）によって評価される。具体的な実施形態において、ＥＣ５０はＭＳＤマルチプレックスアッセイによって評価される。
【０３１０】
具体的な実施形態において、本明細書で提供する抗体（例えば、抗体ＰＤ１ＡＢ−１、ＰＤ１ＡＢ−２、ＰＤ１ＡＢ−３、ＰＤ１ＡＢ−４、ＰＤ１ＡＢ−５、もしくはＰＤ１ＡＢ−６の任意の１つもしくはその抗原結合断片、または抗体ＰＤ１ＡＢ−１、ＰＤ１ＡＢ−２、ＰＤ１ＡＢ−３、ＰＤ１ＡＢ−４、ＰＤ１ＡＢ−５、もしくはＰＤ１ＡＢ−６の任意の１つのＣＤＲを含む抗体）は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＬ−２３分泌（例えば、細胞、例えばＴ細胞から）を阻害する。一実施形態において、本明細書で提供する抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＬ−２３分泌を少なくとも約５％阻害する。いくつかの実施形態において、本明細書で提供する抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＬ−２３分泌を少なくとも約１０％阻害する。別の実施形態において、本明細書で提供する抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＬ−２３分泌を少なくとも約１５％阻害する。他の実施形態において、本明細書で提供する抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＬ−２３分泌を少なくとも約２０％阻害する。一実施形態において、本明細書で提供する抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＬ−２３分泌を少なくとも約２５％阻害する。別の実施形態において、本明細書で提供する抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＬ−２３分泌を少なくとも約３０％阻害する。いくつかの実施形態において、本明細書で提供する抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＬ−２３分泌を少なくとも約３５％阻害する。一実施形態において、本明細書で提供する抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＬ−２３分泌を少なくとも約４０％阻害する。別の実施形態において、本明細書で提供する抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＬ−２３分泌を少なくとも約４５％阻害する。他の実施形態において、本明細書で提供する抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＬ−２３分泌を少なくとも約５０％阻害する。いくつかの実施形態において、本明細書で提供する抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＬ−２３分泌を少なくとも約５５％阻害する。別の実施形態において、本明細書で提供する抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＬ−２３分泌を少なくとも約６０％阻害する。一実施形態において、本明細書で提供する抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＬ−２３分泌を少なくとも約６５％阻害する。一実施形態において、本明細書で提供する抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＬ−２３分泌を少なくとも約７０％阻害する。別の実施形態において、本明細書で提供する抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＬ−２３分泌を少なくとも約７５％阻害する。いくつかの実施形態において、本明細書で提供する抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＬ−２３分泌を少なくとも約８０％阻害する。他の実施形態において、本明細書で提供する抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＬ−２３分泌を少なくとも約８５％阻害する。別の実施形態において、本明細書で提供する抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＬ−２３分泌を少なくとも約９０％阻害する。一実施形態において、本明細書で提供する抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＬ−２３分泌を少なくとも約９５％阻害する。いくつかの実施形態において、本明細書で提供する抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＬ−２３分泌を少なくとも約９８％阻害する。別の実施形態において、本明細書で提供する抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＬ−２３分泌を少なくとも約９９％阻害する。具体的な実施形態において、本明細書で提供する抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＬ−２３分泌を少なくとも約２５％または３５％、任意により約７５％まで阻害する。いくつかの実施形態において、ＩＬ−２３分泌の阻害は本明細書に記載の方法によって評価される。他の実施形態において、ＩＬ−２３分泌の阻害は、当業者にとって公知の方法（例えば、ＭＳＤマルチプレックスアッセイ）によって評価される。具体的な実施形態において、ＩＬ−２３分泌は、抗ＰＤ−１抗体の不存在下でのＩＬ−２３分泌と比較して阻害される。他の実施形態において、ＩＬ−２３分泌は、非関連抗体（例えば、ＰＤ−１に特異的に結合しない抗体）の存在下でのＩＬ−２３分泌と比較して阻害される。
【０３１１】
ある実施形態において、本明細書で提供する抗ＰＤ−１抗体（例えば、抗体ＰＤ１ＡＢ−１、ＰＤ１ＡＢ−２、ＰＤ１ＡＢ−３、ＰＤ１ＡＢ−４、ＰＤ１ＡＢ−５、もしくはＰＤ１ＡＢ−６の任意の１つもしくはその抗原結合断片、または抗体ＰＤ１ＡＢ−１、ＰＤ１ＡＢ−２、ＰＤ１ＡＢ−３、ＰＤ１ＡＢ−４、ＰＤ１ＡＢ−５、もしくはＰＤ１ＡＢ−６の任意の１つのＣＤＲを含む抗体）は、ＩＬ−２３分泌を阻害する。一実施形態において、本明細書で提供する抗ＰＤ−１抗体は、最大でも約５０ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−２３分泌を阻害する。他の実施形態において、本明細書で提供する抗ＰＤ−１抗体は、最大でも約４０ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−２３分泌を阻害する。別の実施形態において、本明細書で提供する抗ＰＤ−１抗体は、最大でも約３０ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−２３分泌を阻害する。いくつかの実施形態において、本明細書で提供する抗ＰＤ−１抗体は、最大でも約２０ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−２３分泌を阻害する。一実施形態において、本明細書で提供する抗ＰＤ−１抗体は、最大でも約１０ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−２３分泌を阻害する。別の実施形態において、本明細書で提供する抗ＰＤ−１抗体は、最大でも約５ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−２３分泌を阻害する。一実施形態において、本明細書で提供する抗ＰＤ−１抗体は、最大でも約１ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−２３分泌を阻害する。いくつかの実施形態において、本明細書で提供する抗ＰＤ−１抗体は、最大でも約０．７５ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−２３分泌を阻害する。別の実施形態において、本明細書で提供する抗ＰＤ−１抗体は、最大でも約０．５ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−２３分泌を阻害する。他の実施形態において、本明細書で提供する抗ＰＤ−１抗体は、最大でも約０．１ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−２３分泌を阻害する。一実施形態において、本明細書で提供する抗ＰＤ−１抗体は、最大でも約０．０５ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−２３分泌を阻害する。別の実施形態において、本明細書で提供する抗ＰＤ−１抗体は、最大でも約０．０１ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−２３分泌を阻害する。いくつかの実施形態において、本明細書で提供する抗ＰＤ−１抗体は、最大でも約０．００５ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−２３分泌を阻害する。一実施形態において、本明細書で提供する抗ＰＤ−１抗体は、最大でも約０．００１ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−２３分泌を阻害する。別の実施形態において、本明細書で提供する抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約５０ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−２３分泌を阻害する。他の実施形態において、本明細書で提供する抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約４０ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−２３分泌を阻害する。いくつかの実施形態において、本明細書で提供する抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約３０ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−２３分泌を阻害する。別の実施形態において、本明細書で提供する抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約２０ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−２３分泌を阻害する。一実施形態において、本明細書で提供する抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約１０ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−２３分泌を阻害する。一実施形態において、本明細書で提供する抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約５ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−２３分泌を阻害する。別の実施形態において、本明細書で提供する抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約１ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−２３分泌を阻害する。いくつかの実施形態において、本明細書で提供する抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約０．７５ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−２３分泌を阻害する。他の実施形態において、本明細書で提供する抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約０．５ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−２３分泌を阻害する。別の実施形態において、本明細書で提供する抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約０．１ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−２３分泌を阻害する。一実施形態において、本明細書で提供する抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約０．０５ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−２３分泌を阻害する。いくつかの実施形態において、本明細書で提供する抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約０．０１ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−２３分泌を阻害する。別の実施形態において、本明細書で提供する抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約０．００５ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−２３分泌を阻害する。一実施形態において、本明細書で提供する抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約０．００１ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−２３分泌を阻害する。具体的な実施形態において、ＥＣ５０は本明細書に記載の方法によって評価される。他の実施形態において、ＥＣ５０は当業者にとって公知の他の方法（例えば、ＭＳＤマルチプレックスアッセイ）によって評価される。具体的な実施形態において、ＥＣ５０はＭＳＤマルチプレックスアッセイによって評価される。
【０３１２】
具体的な実施形態において、本明細書で提供する抗体（例えば、抗体ＰＤ１ＡＢ−１、ＰＤ１ＡＢ−２、ＰＤ１ＡＢ−３、ＰＤ１ＡＢ−４、ＰＤ１ＡＢ−５、もしくはＰＤ１ＡＢ−６の任意の１つもしくはその抗原結合断片、または抗体ＰＤ１ＡＢ−１、ＰＤ１ＡＢ−２、ＰＤ１ＡＢ−３、ＰＤ１ＡＢ−４、ＰＤ１ＡＢ−５、もしくはＰＤ１ＡＢ−６の任意の１つのＣＤＲを含む抗体）は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＧＭ−ＣＳＦ分泌（例えば、細胞、例えばＴ細胞から）を阻害する。一実施形態において、本明細書で提供する抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＧＭ−ＣＳＦ分泌を少なくとも約５％阻害する。いくつかの実施形態において、本明細書で提供する抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＧＭ−ＣＳＦ分泌を少なくとも約１０％阻害する。別の実施形態において、本明細書で提供する抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＧＭ−ＣＳＦ分泌を少なくとも約１５％阻害する。他の実施形態において、本明細書で提供する抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＧＭ−ＣＳＦ分泌を少なくとも約２０％阻害する。一実施形態において、本明細書で提供する抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＧＭ−ＣＳＦ分泌を少なくとも約２５％阻害する。別の実施形態において、本明細書で提供する抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＧＭ−ＣＳＦ分泌を少なくとも約３０％阻害する。いくつかの実施形態において、本明細書で提供する抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＧＭ−ＣＳＦ分泌を少なくとも約３５％阻害する。一実施形態において、本明細書で提供する抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＧＭ−ＣＳＦ分泌を少なくとも約４０％阻害する。別の実施形態において、本明細書で提供する抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＧＭ−ＣＳＦ分泌を少なくとも約４５％阻害する。他の実施形態において、本明細書で提供する抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＧＭ−ＣＳＦ分泌を少なくとも約５０％阻害する。いくつかの実施形態において、本明細書で提供する抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＧＭ−ＣＳＦ分泌を少なくとも約５５％阻害する。別の実施形態において、本明細書で提供する抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＧＭ−ＣＳＦ分泌を少なくとも約６０％阻害する。一実施形態において、本明細書で提供する抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＧＭ−ＣＳＦ分泌を少なくとも約６５％阻害する。一実施形態において、本明細書で提供する抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＧＭ−ＣＳＦ分泌を少なくとも約７０％阻害する。別の実施形態において、本明細書で提供する抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＧＭ−ＣＳＦ分泌を少なくとも約７５％阻害する。いくつかの実施形態において、本明細書で提供する抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＧＭ−ＣＳＦ分泌を少なくとも約８０％阻害する。他の実施形態において、本明細書で提供する抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＧＭ−ＣＳＦ分泌を少なくとも約８５％阻害する。別の実施形態において、本明細書で提供する抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＧＭ−ＣＳＦ分泌を少なくとも約９０％阻害する。一実施形態において、本明細書で提供する抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＧＭ−ＣＳＦ分泌を少なくとも約９５％阻害する。いくつかの実施形態において、本明細書で提供する抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＧＭ−ＣＳＦ分泌を少なくとも約９８％阻害する。別の実施形態において、本明細書で提供する抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＧＭ−ＣＳＦ分泌を少なくとも約９９％阻害する。具体的な実施形態において、本明細書で提供する抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＧＭ−ＣＳＦ分泌を少なくとも約２５％または３５％、任意により約７５％まで阻害する。いくつかの実施形態において、ＧＭ−ＣＳＦ分泌の阻害は本明細書に記載の方法によって評価される。他の実施形態において、ＧＭ−ＣＳＦ分泌の阻害は、当業者にとって公知の方法（例えば、ＭＳＤマルチプレックスアッセイ）によって評価される。具体的な実施形態において、ＧＭ−ＣＳＦ分泌は、抗ＰＤ−１抗体の不存在下でのＧＭ−ＣＳＦ分泌と比較して阻害される。他の実施形態において、ＧＭ−ＣＳＦ分泌は、非関連抗体（例えば、ＰＤ−１に特異的に結合しない抗体）の存在下でのＧＭ−ＣＳＦ分泌と比較して阻害される。
【０３１３】
ある実施形態において、本明細書で提供する抗ＰＤ−１抗体（例えば、抗体ＰＤ１ＡＢ−１、ＰＤ１ＡＢ−２、ＰＤ１ＡＢ−３、ＰＤ１ＡＢ−４、ＰＤ１ＡＢ−５、もしくはＰＤ１ＡＢ−６の任意の１つもしくはその抗原結合断片、または抗体ＰＤ１ＡＢ−１、ＰＤ１ＡＢ−２、ＰＤ１ＡＢ−３、ＰＤ１ＡＢ−４、ＰＤ１ＡＢ−５、もしくはＰＤ１ＡＢ−６の任意の１つのＣＤＲを含む抗体）は、ＧＭ−ＣＳＦ分泌を阻害する。一実施形態において、本明細書で提供する抗ＰＤ−１抗体は、最大でも約５０ｎＭのＥＣ５０でＧＭ−ＣＳＦ分泌を阻害する。他の実施形態において、本明細書で提供する抗ＰＤ−１抗体は、最大でも約４０ｎＭのＥＣ５０でＧＭ−ＣＳＦ分泌を阻害する。別の実施形態において、本明細書で提供する抗ＰＤ−１抗体は、最大でも約３０ｎＭのＥＣ５０でＧＭ−ＣＳＦ分泌を阻害する。いくつかの実施形態において、本明細書で提供する抗ＰＤ−１抗体は、最大でも約２０ｎＭのＥＣ５０でＧＭ−ＣＳＦ分泌を阻害する。一実施形態において、本明細書で提供する抗ＰＤ−１抗体は、最大でも約１０ｎＭのＥＣ５０でＧＭ−ＣＳＦ分泌を阻害する。別の実施形態において、本明細書で提供する抗ＰＤ−１抗体は、最大でも約５ｎＭのＥＣ５０でＧＭ−ＣＳＦ分泌を阻害する。一実施形態において、本明細書で提供する抗ＰＤ−１抗体は、最大でも約１ｎＭのＥＣ５０でＧＭ−ＣＳＦ分泌を阻害する。いくつかの実施形態において、本明細書で提供する抗ＰＤ−１抗体は、最大でも約０．７５ｎＭのＥＣ５０でＧＭ−ＣＳＦ分泌を阻害する。別の実施形態において、本明細書で提供する抗ＰＤ−１抗体は、最大でも約０．５ｎＭのＥＣ５０でＧＭ−ＣＳＦ分泌を阻害する。他の実施形態において、本明細書で提供する抗ＰＤ−１抗体は、最大でも約０．１ｎＭのＥＣ５０でＧＭ−ＣＳＦ分泌を阻害する。一実施形態において、本明細書で提供する抗ＰＤ−１抗体は、最大でも約０．０５ｎＭのＥＣ５０でＧＭ−ＣＳＦ分泌を阻害する。別の実施形態において、本明細書で提供する抗ＰＤ−１抗体は、最大でも約０．０１ｎＭのＥＣ５０でＧＭ−ＣＳＦ分泌を阻害する。いくつかの実施形態において、本明細書で提供する抗ＰＤ−１抗体は、最大でも約０．００５ｎＭのＥＣ５０でＧＭ−ＣＳＦ分泌を阻害する。一実施形態において、本明細書で提供する抗ＰＤ−１抗体は、最大でも約０．００１ｎＭのＥＣ５０でＧＭ−ＣＳＦ分泌を阻害する。別の実施形態において、本明細書で提供する抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約５０ｎＭのＥＣ５０でＧＭ−ＣＳＦ分泌を阻害する。他の実施形態において、本明細書で提供する抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約４０ｎＭのＥＣ５０でＧＭ−ＣＳＦ分泌を阻害する。いくつかの実施形態において、本明細書で提供する抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約３０ｎＭのＥＣ５０でＧＭ−ＣＳＦ分泌を阻害する。別の実施形態において、本明細書で提供する抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約２０ｎＭのＥＣ５０でＧＭ−ＣＳＦ分泌を阻害する。一実施形態において、本明細書で提供する抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約１０ｎＭのＥＣ５０でＧＭ−ＣＳＦ分泌を阻害する。一実施形態において、本明細書で提供する抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約５ｎＭのＥＣ５０でＧＭ−ＣＳＦ分泌を阻害する。別の実施形態において、本明細書で提供する抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約１ｎＭのＥＣ５０でＧＭ−ＣＳＦ分泌を阻害する。いくつかの実施形態において、本明細書で提供する抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約０．７５ｎＭのＥＣ５０でＧＭ−ＣＳＦ分泌を阻害する。他の実施形態において、本明細書で提供する抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約０．５ｎＭのＥＣ５０でＧＭ−ＣＳＦ分泌を阻害する。別の実施形態において、本明細書で提供する抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約０．１ｎＭのＥＣ５０でＧＭ−ＣＳＦ分泌を阻害する。一実施形態において、本明細書で提供する抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約０．０５ｎＭのＥＣ５０でＧＭ−ＣＳＦ分泌を阻害する。いくつかの実施形態において、本明細書で提供する抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約０．０１ｎＭのＥＣ５０でＧＭ−ＣＳＦ分泌を阻害する。別の実施形態において、本明細書で提供する抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約０．００５ｎＭのＥＣ５０でＧＭ−ＣＳＦ分泌を阻害する。一実施形態において、本明細書で提供する抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約０．００１ｎＭのＥＣ５０でＧＭ−ＣＳＦ分泌を阻害する。具体的な実施形態において、ＥＣ５０は本明細書に記載の方法によって評価される。他の実施形態において、ＥＣ５０は当業者にとって公知の他の方法（例えば、ＭＳＤマルチプレックスアッセイ）によって評価される。具体的な実施形態において、ＥＣ５０はＭＳＤマルチプレックスアッセイによって評価される。
【０３１４】
具体的な実施形態において、本明細書で提供する抗体（例えば、抗体ＰＤ１ＡＢ−１、ＰＤ１ＡＢ−２、ＰＤ１ＡＢ−３、ＰＤ１ＡＢ−４、ＰＤ１ＡＢ−５、もしくはＰＤ１ＡＢ−６の任意の１つもしくはその抗原結合断片、または抗体ＰＤ１ＡＢ−１、ＰＤ１ＡＢ−２、ＰＤ１ＡＢ−３、ＰＤ１ＡＢ−４、ＰＤ１ＡＢ−５、もしくはＰＤ１ＡＢ−６の任意の１つのＣＤＲを含む抗体）は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＴＮＦ−α分泌（例えば、細胞、例えばＴ細胞から）を阻害する。一実施形態において、本明細書で提供する抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＴＮＦ−α分泌を少なくとも約５％阻害する。いくつかの実施形態において、本明細書で提供する抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＴＮＦ−α分泌を少なくとも約１０％阻害する。別の実施形態において、本明細書で提供する抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＴＮＦ−α分泌を少なくとも約１５％阻害する。他の実施形態において、本明細書で提供する抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＴＮＦ−α分泌を少なくとも約２０％阻害する。一実施形態において、本明細書で提供する抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＴＮＦ−α分泌を少なくとも約２５％阻害する。別の実施形態において、本明細書で提供する抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＴＮＦ−α分泌を少なくとも約３０％阻害する。いくつかの実施形態において、本明細書で提供する抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＴＮＦ−α分泌を少なくとも約３５％阻害する。一実施形態において、本明細書で提供する抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＴＮＦ−α分泌を少なくとも約４０％阻害する。別の実施形態において、本明細書で提供する抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＴＮＦ−α分泌を少なくとも約４５％阻害する。他の実施形態において、本明細書で提供する抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＴＮＦ−α分泌を少なくとも約５０％阻害する。いくつかの実施形態において、本明細書で提供する抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＴＮＦ−α分泌を少なくとも約５５％阻害する。別の実施形態において、本明細書で提供する抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＴＮＦ−α分泌を少なくとも約６０％阻害する。一実施形態において、本明細書で提供する抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＴＮＦ−α分泌を少なくとも約６５％阻害する。一実施形態において、本明細書で提供する抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＴＮＦ−α分泌を少なくとも約７０％阻害する。別の実施形態において、本明細書で提供する抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＴＮＦ−α分泌を少なくとも約７５％阻害する。いくつかの実施形態において、本明細書で提供する抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＴＮＦ−α分泌を少なくとも約８０％阻害する。他の実施形態において、本明細書で提供する抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＴＮＦ−α分泌を少なくとも約８５％阻害する。別の実施形態において、本明細書で提供する抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＴＮＦ−α分泌を少なくとも約９０％阻害する。一実施形態において、本明細書で提供する抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＴＮＦ−α分泌を少なくとも約９５％阻害する。いくつかの実施形態において、本明細書で提供する抗体は、��Ｄ−１に特異的に結合し、ＴＮＦ−α分泌を少なくとも約９８％阻害する。別の実施形態において、本明細書で提供する抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＴＮＦ−α分泌を少なくとも約９９％阻害する。具体的な実施形態において、本明細書で提供する抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＴＮＦ−α分泌を少なくとも約２５％または３５％、任意により約７５％まで阻害する。いくつかの実施形態において、ＴＮＦ−α分泌の阻害は本明細書に記載の方法によって評価される。他の実施形態において、ＴＮＦ−α分泌の阻害は、当業者にとって公知の方法（例えば、ＭＳＤマルチプレックスアッセイ）によって評価される。具体的な実施形態において、ＴＮＦ−α分泌は、抗ＰＤ−１抗体の不存在下でのＴＮＦ−α分泌と比較して阻害される。他の実施形態において、ＴＮＦ−α分泌は、非関連抗体（例えば、ＰＤ−１に特異的に結合しない抗体）の存在下でのＴＮＦ−α分泌と比較して阻害される。
【０３１５】
ある実施形態において、本明細書で提供する抗ＰＤ−１抗体（例えば、抗体ＰＤ１ＡＢ−１、ＰＤ１ＡＢ−２、ＰＤ１ＡＢ−３、ＰＤ１ＡＢ−４、ＰＤ１ＡＢ−５、もしくはＰＤ１ＡＢ−６の任意の１つもしくはその抗原結合断片、または抗体ＰＤ１ＡＢ−１、ＰＤ１ＡＢ−２、ＰＤ１ＡＢ−３、ＰＤ１ＡＢ−４、ＰＤ１ＡＢ−５、もしくはＰＤ１ＡＢ−６の任意の１つのＣＤＲを含む抗体）は、ＴＮＦ−α分泌を阻害する。一実施形態において、本明細書で提供する抗ＰＤ−１抗体は、最大でも約５０ｎＭのＥＣ５０でＴＮＦ−α分泌を阻害する。他の実施形態において、本明細書で提供する抗ＰＤ−１抗体は、最大でも約４０ｎＭのＥＣ５０でＴＮＦ−α分泌を阻害する。別の実施形態において、本明細書で提供する抗ＰＤ−１抗体は、最大でも約３０ｎＭのＥＣ５０でＴＮＦ−α分泌を阻害する。いくつかの実施形態において、本明細書で提供する抗ＰＤ−１抗体は、最大でも約２０ｎＭのＥＣ５０でＴＮＦ−α分泌を阻害する。一実施形態において、本明細書で提供する抗ＰＤ−１抗体は、最大でも約１０ｎＭのＥＣ５０でＴＮＦ−α分泌を阻害する。別の実施形態において、本明細書で提供する抗ＰＤ−１抗体は、最大でも約５ｎＭのＥＣ５０でＴＮＦ−α分泌を阻害する。一実施形態において、本明細書で提供する抗ＰＤ−１抗体は、最大でも約１ｎＭのＥＣ５０でＴＮＦ−α分泌を阻害する。いくつかの実施形態において、本明細書で提供する抗ＰＤ−１抗体は、最大でも約０．７５ｎＭのＥＣ５０でＴＮＦ−α分泌を阻害する。別の実施形態において、本明細書で提供する抗ＰＤ−１抗体は、最大でも約０．５ｎＭのＥＣ５０でＴＮＦ−α分泌を阻害する。他の実施形態において、本明細書で提供する抗ＰＤ−１抗体は、最大でも約０．１ｎＭのＥＣ５０でＴＮＦ−α分泌を阻害する。一実施形態において、本明細書で提供する抗ＰＤ−１抗体は、最大でも約０．０５ｎＭのＥＣ５０でＴＮＦ−α分泌を阻害する。別の実施形態において、本明細書で提供する抗ＰＤ−１抗体は、最大でも約０．０１ｎＭのＥＣ５０でＴＮＦ−α分泌を阻害する。いくつかの実施形態において、本明細書で提供する抗ＰＤ−１抗体は、最大でも約０．００５ｎＭのＥＣ５０でＴＮＦ−α分泌を阻害する。一実施形態において、本明細書で提供する抗ＰＤ−１抗体は、最大でも約０．００１ｎＭのＥＣ５０でＴＮＦ−α分泌を阻害する。別の実施形態において、本明細書で提供する抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約５０ｎＭのＥＣ５０でＴＮＦ−α分泌を阻害する。他の実施形態において、本明細書で提供する抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約４０ｎＭのＥＣ５０でＴＮＦ−α分泌を阻害する。いくつかの実施形態において、本明細書で提供する抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約３０ｎＭのＥＣ５０でＴＮＦ−α分泌を阻害する。別の実施形態において、本明細書で提供する抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約２０ｎＭのＥＣ５０でＴＮＦ−α分泌を阻害する。一実施形態において、本明細書で提供する抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約１０ｎＭのＥＣ５０でＴＮＦ−α分泌を阻害する。一実施形態において、本明細書で提供する抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約５ｎＭのＥＣ５０でＴＮＦ−α分泌を阻害する。別の実施形態において、本明細書で提供する抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約１ｎＭのＥＣ５０でＴＮＦ−α分泌を阻害する。いくつかの実施形態において、本明細書で提供する抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約０．７５ｎＭのＥＣ５０でＴＮＦ−α分泌を阻害する。他の実施形態において、本明細書で提供する抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約０．５ｎＭのＥＣ５０でＴＮＦ−α分泌を阻害する。別の実施形態において、本明細書で提供する抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約０．１ｎＭのＥＣ５０でＴＮＦ−α分泌を阻害する。一実施形態において、本明細書で提供する抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約０．０５ｎＭのＥＣ５０でＴＮＦ−α分泌を阻害する。いくつかの実施形態において、本明細書で提供する抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約０．０１ｎＭのＥＣ５０でＴＮＦ−α分泌を阻害する。別の実施形態において、本明細書で提供する抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約０．００５ｎＭのＥＣ５０でＴＮＦ−α分泌を阻害する。一実施形態において、本明細書で提供する抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約０．００１ｎＭのＥＣ５０でＴＮＦ−α分泌を阻害する。具体的な実施形態において、ＥＣ５０は本明細書に記載の方法によって評価される。他の実施形態において、ＥＣ５０は当業者にとって公知の他の方法（例えば、ＭＳＤマルチプレックスアッセイ）によって評価される。具体的な実施形態において、ＥＣ５０はＭＳＤマルチプレックスアッセイによって評価される。
【０３１６】
具体的な実施形態において、本明細書で提供する抗体（例えば、抗体ＰＤ１ＡＢ−１、ＰＤ１ＡＢ−２、ＰＤ１ＡＢ−３、ＰＤ１ＡＢ−４、ＰＤ１ＡＢ−５、もしくはＰＤ１ＡＢ−６の任意の１つもしくはその抗原結合断片、または抗体ＰＤ１ＡＢ−１、ＰＤ１ＡＢ−２、ＰＤ１ＡＢ−３、ＰＤ１ＡＢ−４、ＰＤ１ＡＢ−５、もしくはＰＤ１ＡＢ−６の任意の１つのＣＤＲを含む抗体）は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＰＤ−１発現（例えば、細胞、例えばＴ細胞における）を下方調節する。一実施形態において、本明細書で提供する抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＰＤ−１発現を少なくとも約５％下方調節する。一実施形態において、本明細書で提供する抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＰＤ−１発現を少なくとも約１０％下方調節する。別の実施形態において、本明細書で提供する抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＰＤ−１発現を少なくとも約１５％下方調節する。いくつかの実施形態において、本明細書で提供する抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＰＤ−１発現を少なくとも約２０％下方調節する。他の実施形態において、本明細書で提供する抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＰＤ−１発現を少なくとも約２５％下方調節する。別の実施形態において、本明細書で提供する抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＰＤ−１発現を少なくとも約３０％下方調節する。一実施形態において、本明細書で提供する抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＰＤ−１発現を少なくとも約３５％下方調節する。いくつかの実施形態において、本明細書で提供する抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＰＤ−１発現を少なくとも約４０％下方調節する。別の実施形態において、本明細書で提供する抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＰＤ−１発現を少なくとも約４５％下方調節する。一実施形態において、本明細書で提供する抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＰＤ−１発現を少なくとも約５０％下方調節する。他の実施形態において、本明細書で提供する抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＰＤ−１発現を少なくとも約５５％下方調節する。別の実施形態において、本明細書で提供する抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＰＤ−１発現を少なくとも約６０％下方調節する。いくつかの実施形態において、本明細書で提供する抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＰＤ−１発現を少なくとも約６５％下方調節する。一実施形態において、本明細書で提供する抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＰＤ−１発現を少なくとも約７０％下方調節する。別の実施形態において、本明細書で提供する抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＰＤ−１発現を少なくとも約７５％下方調節する。一実施形態において、本明細書で提供する抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＰＤ−１発現を少なくとも約８０％下方調節する。いくつかの実施形態において、本明細書で提供する抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＰＤ−１発現を少なくとも約８５％下方調節する。別の実施形態において、本明細書で提供する抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＰＤ−１発現を少なくとも約９０％下方調節する。他の実施形態において、本明細書で提供する抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＰＤ−１発現を少なくとも約９５％下方調節する。一実施形態において、本明細書で提供する抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＰＤ−１発現を少なくとも約９８％下方調節する。別の実施形態において、本明細書で提供する抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＰＤ−１発現を少なくとも約９９％下方調節する。具体的な実施形態において、本明細書で提供する抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＰＤ−１発現を少なくとも約２５％または３５％、任意により約７５％まで下方調節する。いくつかの実施形態において、ＰＤ−１発現の下方調節は本明細書に記載の方法によって評価される。他の実施形態において、ＰＤ−１発現の下方調節は、当業者にとって公知の方法（例えば、フローサイトメトリー、ウエスタンブロッティング、ノーザンブロッティング、またはＲＴ−ＰＣＲ）によって評価される。具体的な実施形態において、ＰＤ−１発現の下方調節はフローサイトメトリーによって評価される。別の実施形態において、ＰＤ−１発現の下方調節はウエスタンブロッティングによって評価される。さらに別の実施形態において、ＰＤ−１発現の下方調節はノーザンブロッティングによって評価される。さらに別の実施形態において、ＰＤ−１発現の下方調節はＲＴ−ＰＣＲによって評価される。具体的な実施形態において、ＰＤ−１発現は、抗ＰＤ−１抗体の不存在下でのＰＤ−１発現下方調節と比較して下方調節される。他の実施形態において、ＰＤ−１発現は、非関連抗体（例えば、ＰＤ−１に特異的に結合しない抗体）の存在下でのＰＤ−１発現下方調節と比較して下方調節される。
【０３１７】
ある実施形態において、本明細書で提供する抗ＰＤ−１抗体（例えば、抗体ＰＤ１ＡＢ−１、ＰＤ１ＡＢ−２、ＰＤ１ＡＢ−３、ＰＤ１ＡＢ−４、ＰＤ１ＡＢ−５、もしくはＰＤ１ＡＢ−６の任意の１つもしくはその抗原結合断片、または抗体ＰＤ１ＡＢ−１、ＰＤ１ＡＢ−２、ＰＤ１ＡＢ−３、ＰＤ１ＡＢ−４、ＰＤ１ＡＢ−５、もしくはＰＤ１ＡＢ−６の任意の１つのＣＤＲを含む抗体）は、ＰＤ−１発現を下方調節する。一実施形態において、本明細書で提供する抗ＰＤ−１抗体は、最大でも約５０ｎＭのＥＣ５０でＰＤ−１発現を下方調節する。他の実施形態において、本明細書で提供する抗ＰＤ−１抗体は、最大でも約４０ｎＭのＥＣ５０でＰＤ−１発現を下方調節する。別の実施形態において、本明細書で提供する抗ＰＤ−１抗体は、最大でも約３０ｎＭのＥＣ５０でＰＤ−１発現を下方調節する。いくつかの実施形態において、本明細書で提供する抗ＰＤ−１抗体は、最大でも約２０ｎＭのＥＣ５０でＰＤ−１発現を下方調節する。一実施形態において、本明細書で提供する抗ＰＤ−１抗体は、最大でも約１０ｎＭのＥＣ５０でＰＤ−１発現を下方調節する。別の実施形態において、本明細書で提供する抗ＰＤ−１抗体は、最大でも約５ｎＭのＥＣ５０でＰＤ−１発現を下方調節する。一実施形態において、本明細書で提供する抗ＰＤ−１抗体は、最大でも約１ｎＭのＥＣ５０でＰＤ−１発現を下方調節する。いくつかの実施形態において、本明細書で提供する抗ＰＤ−１抗体は、最大でも約０．７５ｎＭのＥＣ５０でＰＤ−１発現を下方調節する。別の実施形態において、本明細書で提供する抗ＰＤ−１抗体は、最大でも約０．５ｎＭのＥＣ５０でＰＤ−１発現を下方調節する。他の実施形態において、本明細書で提供する抗ＰＤ−１抗体は、最大でも約０．１ｎＭのＥＣ５０でＰＤ−１発現を下方調節する。一実施形態において、本明細書で提供する抗ＰＤ−１抗体は、最大でも約０．０５ｎＭのＥＣ５０でＰＤ−１発現を下方調節する。別の実施形態において、本明細書で提供する抗ＰＤ−１抗体は、最大でも約０．０１ｎＭのＥＣ５０でＰＤ−１発現を下方調節する。いくつかの実施形態において、本明細書で提供する抗ＰＤ−１抗体は、最大でも約０．００５ｎＭのＥＣ５０でＰＤ−１発現を下方調節する。一実施形態において、本明細書で提供する抗ＰＤ−１抗体は、最大でも約０．００１ｎＭのＥＣ５０でＰＤ−１発現を下方調節する。別の実施形態において、本明細書で提供する抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約５０ｎＭのＥＣ５０でＰＤ−１発現を下方調節する。他の実施形態において、本明細書で提供する抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約４０ｎＭのＥＣ５０でＰＤ−１発現を下方調節する。いくつかの実施形態において、本明細書で提供する抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約３０ｎＭのＥＣ５０でＰＤ−１発現を下方調節する。別の実施形態において、本明細書で提供する抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約２０ｎＭのＥＣ５０でＰＤ−１発現を下方調節する。一実施形態において、本明細書で提供する抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約１０ｎＭのＥＣ５０でＰＤ−１発現を下方調節する。一実施形態において、本明細書で提供する抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約５ｎＭのＥＣ５０でＰＤ−１発現を下方調節する。別の実施形態において、本明細書で提供する抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約１ｎＭのＥＣ５０でＰＤ−１発現を下方調節する。いくつかの実施形態において、本明細書で提供する抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約０．７５ｎＭのＥＣ５０でＰＤ−１発現を下方調節する。他の実施形態において、本明細書で提供する抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約０．５ｎＭのＥＣ５０でＰＤ−１発現を下方調節する。別の実施形態において、本明細書で提供する抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約０．１ｎＭのＥＣ５０でＰＤ−１発現を下方調節する。一実施形態において、本明細書で提供する抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約０．０５ｎＭのＥＣ５０でＰＤ−１発現を下方調節する。いくつかの実施形態において、本明細書で提供する抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約０．０１ｎＭのＥＣ５０でＰＤ−１発現を下方調節する。別の実施形態において、本明細書で提供する抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約０．００５ｎＭのＥＣ５０でＰＤ−１発現を下方調節する。一実施形態において、本明細書で提供する抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約０．００１ｎＭのＥＣ５０でＰＤ−１発現を下方調節する。具体的な実施形態において、ＥＣ５０は本明細書に記載の方法によって評価される。他の実施形態において、ＥＣ５０は、当業者にとって公知の他の方法（例えば、フローサイトメトリー、ウエスタンブロッティング、ノーザンブロッティング、またはＲＴ−ＰＣＲ）によって評価される。具体的な実施形態において、ＥＣ５０はフローサイトメトリーによって評価される。別の実施形態において、ＥＣ５０はウエスタンブロッティングによって評価される。さらに別の実施形態において、ＥＣ５０はノーザンブロッティングによって評価される。さらに別の実施形態において、ＥＣ５０はＲＴ−ＰＣＲによって評価される。
【０３１８】
ある実施形態において、Ｔ細胞の表面上のＰＤ−１発現の下方調節は、早ければ抗体またはその抗原結合断片との接触の４時間後にでも生じる。別の実施形態において、下方調節は早ければ接触の６時間後にでも生じる。さらに別の実施形態において、下方調節は早ければ接触の８時間後にでも生じる。さらに別の実施形態において、下方調節は早ければ接触の１０時間後にでも生じる。一実施形態において、下方調節は早ければ接触の１２時間後にでも生じる。別の実施形態において、下方調節は早ければ接触の１４時間後にでも生じる。さらに別の実施形態において、下方調節は早ければ接触の１６時間後にでも生じる。さらに別の実施形態において、下方調節は早ければ接触の１８時間後にでも生じる。一実施形態において、下方調節は早ければ接触の２０時間後にでも生じる。別の実施形態において、下方調節は早ければ接触の２２時間後にでも生じる。さらに別の実施形態において、下方調節は早ければ接触の２４時間後にでも生じる。いくつかの実施形態において、接触は抗体とのものである。他の実施形態において、接触はその抗原結合断片とのものである。
【０３１９】
いくつかの実施形態において、Ｔ細胞の表面上のＰＤ−１発現の下方調節はサイトカイン阻害に先行する。一実施形態において、Ｔ細胞の表面上のＰＤ−１発現の下方調節は、早ければ抗体またはその抗原結合断片との接触の４時間後にでも生じ、サイトカイン阻害に先行する。別の実施形態において、下方調節は、早ければ抗体またはその抗原結合断片との接触の６時間後にでも生じ、サイトカイン阻害に先行する。さらに別の実施形態において、下方調節は、早ければ抗体またはその抗原結合断片との接触の８時間後にでも生じ、サイトカイン阻害に先行する。さらに別の実施形態において、下方調節は、早ければ抗体またはその抗原結合断片との接触の１０時間後にでも生じ、サイトカイン阻害に先行する。一実施形態において、下方調節は、早ければ抗体またはその抗原結合断片との接触の１２時間後にでも生じ、サイトカイン阻害に先行する。別の実施形態において、下方調節は、早ければ抗体またはその抗原結合断片との接触の１４時間後にでも生じ、サイトカイン阻害に先行する。さらに別の実施形態において、下方調節は、早ければ抗体またはその抗原結合断片との接触の１６時間後にでも生じ、サイトカイン阻害に先行する。さらに別の実施形態において、下方調節は、早ければ抗体またはその抗原結合断片との接触の１８時間後にでも生じ、サイトカイン阻害に先行する。一実施形態において、下方調節は、早ければ抗体またはその抗原結合断片との接触の２０時間後にでも生じ、サイトカイン阻害に先行する。別の実施形態において、下方調節は、早ければ抗体またはその抗原結合断片との接触の２２時間後にでも生じ、サイトカイン阻害に先行する。さらに別の実施形態において、下方調節は、早ければ抗体またはその抗原結合断片との接触の２４時間後にでも生じ、サイトカイン阻害に先行する。
【０３２０】
他の実施形態において、Ｔ細胞の表面上のＰＤ−１発現の下方調節はサイトカイン阻害と同時に生じる。一実施形態において、Ｔ細胞の表面上のＰＤ−１発現の下方調節は、早ければ抗体またはその抗原結合断片との接触の４時間後にでも生じ、サイトカイン阻害と同時に生じる。別の実施形態において、下方調節は、早ければ抗体またはその抗原結合断片との接触の６時間後にでも生じ、サイトカイン阻害と同時に生じる。さらに別の実施形態において、下方調節は、早ければ抗体またはその抗原結合断片との接触の８時間後にでも生じ、サイトカイン阻害と同時に生じる。さらに別の実施形態において、下方調節は、早ければ抗体またはその抗原結合断片との接触の１０時間後にでも生じ、サイトカイン阻害と同時に生じる。一実施形態において、下方調節は、早ければ抗体またはその抗原結合断片との接触の１２時間後にでも生じ、サイトカイン阻害と同時に生じる。別の実施形態において、下方調節は、早ければ抗体またはその抗原結合断片との接触の１４時間後にでも生じ、サイトカイン阻害と同時に生じる。さらに別の実施形態において、下方調節は、早ければ抗体またはその抗原結合断片との接触の１６時間後にでも生じ、サイトカイン阻害と同時に生じる。さらに別の実施形態において、下方調節は、早ければ抗体またはその抗原結合断片との接触の１８時間後にでも生じ、サイトカイン阻害と同時に生じる。一実施形態において、下方調節は、早ければ抗体またはその抗原結合断片との接触の２０時間後にでも生じ、サイトカイン阻害と同時に生じる。別の実施形態において、下方調節は、早ければ抗体またはその抗原結合断片との接触の２２時間後にでも生じ、サイトカイン阻害と同時に生じる。さらに別の実施形態において、下方調節は、早ければ抗体またはその抗原結合断片との接触の２４時間後にでも生じ、サイトカイン阻害と同時に生じる。
【０３２１】
さらに他の実施形態において、Ｔ細胞の表面上のＰＤ−１発現の下方調節はサイトカイン阻害の後である。一実施形態において、Ｔ細胞の表面上のＰＤ−１発現の下方調節は、早ければ抗体またはその抗原結合断片との接触の４時間後にでも生じ、サイトカイン阻害の後である。別の実施形態において、下方調節は、早ければ抗体またはその抗原結合断片との接触の６時間後にでも生じ、サイトカイン阻害の後である。さらに別の実施形態において、下方調節は、早ければ抗体またはその抗原結合断片との接触の８時間後にでも生じ、サイトカイン阻害の後である。さらに別の実施形態において、下方調節は、早ければ抗体またはその抗原結合断片との接触の１０時間後にでも生じ、サイトカイン阻害の後である。一実施形態において、下方調節は、早ければ抗体またはその抗原結合断片との接触の１２時間後にでも生じ、サイトカイン阻害の後である。別の実施形態において、下方調節は、早ければ抗体またはその抗原結合断片との接触の１４時間後にでも生じ、サイトカイン阻害の後である。さらに別の実施形態において、下方調節は、早ければ抗体またはその抗原結合断片との接触の１６時間後にでも生じ、サイトカイン阻害の後である。さらに別の実施形態において、下方調節は、早ければ抗体またはその抗原結合断片との接触の１８時間後にでも生じ、サイトカイン阻害の後である。一実施形態において、下方調節は、早ければ抗体またはその抗原結合断片との接触の２０時間後にでも生じ、サイトカイン阻害の後である。別の実施形態において、下方調節は、早ければ抗体またはその抗原結合断片との接触の２２時間後にでも生じ、サイトカイン阻害の後である。さらに別の実施形態において、下方調節は、早ければ抗体またはその抗原結合断片との接触の２４時間後にでも生じ、サイトカイン阻害の後である。
【０３２２】
４．３．１．１ポリクローナル抗体
本開示の抗体はポリクローナル抗体を含み得る。ポリクローナル抗体の調製方法は、当業者に既知である。ポリクローナル抗体は、哺乳類において、例えば、免疫付与剤及び必要に応じてアジュバントの１回以上の注入によって産生され得る。典型的には、免疫付与剤及び／またはアジュバントは、複数の皮下または腹腔内注入によって哺乳類に注入される。免疫付与剤は、ＰＤ−１ポリペプチドまたはその融合タンパク質を含み得る。免疫付与される哺乳類において免疫原性であることが知られているタンパク質に免疫付与剤を結合させること、またはそのタンパク質及び１つ以上のアジュバントで哺乳類に免疫付与することが有用であり得る。そのような免疫原性タンパク質の例としては、キーホールリンペットヘモシアニン、血清アルブミン、ウシサイログロブリン、及び大豆トリプシン阻害剤が挙げられるが、それらに限定されない。用いられ得るアジュバントの例としては、Ｒｉｂｉ、ＣｐＧ、Ｐｏｌｙ  １Ｃ、フロイント完全アジュバント、及びＭＰＬ−ＴＤＭアジュバント（モノホスホリル脂質Ａ、合成トレハロースジコリノミコレート）が挙げられる。免疫付与プロトコールは、過度な実験なしに当業者によって選択され得る。その後、哺乳類から採血し、血清をＰＤ−１抗体力価に関してアッセイすることができる。所望であれば、抗体力価が増加するかまたはプラトーになるまで哺乳類を追加免疫することができる。追加または代替として、下記のような融合及びハイブリドーマからのモノクローナル抗体の調製のために、免疫化動物からリンパ球を得てもよい。
【０３２３】
４．３．１．２モノクローナル抗体
本開示の抗体は代替としてモノクローナル抗体であり得る。モノクローナル抗体は、Ｋｏｈｌｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，１９７５，Ｎａｔｕｒｅ  ２５６：４９５−９７に初めて記載されたハイブリドーマ法を用いて作製され得るか、または組換えＤＮＡ法（例えば、米国特許第４，８１６，５６７号を参照）によって作製され得る。
【０３２４】
ハイブリドーマ法では、マウスまたは他の適切な宿主動物、例えばハムスターなどが、上述のように免疫化されて、免疫化に使用されるタンパク質に特異的に結合する抗体を産生するか、または産生することのできるリンパ球が誘発される。代替として、リンパ球は、インビトロで免疫化され得る。免疫化の後、リンパ球が単離され、次いでポリエチレングリコールなどの好適な融合剤を使用して骨髄腫細胞株と融合されて、ハイブリドーマ細胞が形成される（Ｇｏｄｉｎｇ，Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ５９−１０３（１９８６））。
【０３２５】
このように調製されたハイブリドーマ細胞は、好適な培養培地に播種され増殖するが、ある実施形態において、培養培地は、非融合の親骨髄腫細胞（融合パートナーとも称される）の増殖または生存を阻害する１つ以上の物質を含有する。例えば、親骨髄腫細胞が酵素ヒポキサンチングアニンホスホリボシルトランスフェラーゼ（ＨＧＰＲＴまたはＨＰＲＴ）を欠く場合、ハイブリドーマの選択培養培地は、典型的には、ヒポキサンチン、アミノプテリン、及びチミジンを含むことになり（ＨＡＴ培地）、これらは、ＨＧＰＲＴ欠損細胞の増殖を防止する。
【０３２６】
例示的な融合パートナー骨髄腫細胞は、効率的に融合し、選択された抗体産生細胞による抗体の安定した高レベルの産生を支持し、かつ非融合の親細胞に対して選択する選択培地に対して感受性を示すものである。例示的な骨髄腫細胞株は、ＳＰ−２及び誘導体、例えば、Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（Ｍａｎａｓｓａｓ，ＶＡ）から入手可能なＸ６３−Ａｇ８−６５３細胞、ならびにＳａｌｋ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ  Ｃｅｌｌ  Ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ  Ｃｅｎｔｅｒ（Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）から入手可能なＭＯＰＣ−２１及びＭＰＣ−１１マウス腫瘍に由来するものなどのマウス骨髄腫株である。ヒト骨髄腫及びマウス−ヒトヘテロ骨髄腫細胞株も、ヒトモノクローナル抗体の産生に関して記載されている（Ｋｏｚｂｏｒ，１９８４，Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３３：３００１−０５；及びＢｒｏｄｅｕｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ  Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ  ａｎｄ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ  ５１−６３（１９８７））。
【０３２７】
ハイブリドーマ細胞が成長する培養培地は、抗原に対して指向されたモノクローナル抗体の産生に関してアッセイされる。ハイブリドーマ細胞によって産生されたモノクローナル抗体の結合特異性は、免疫沈降によって、またはインビトロ結合アッセイ、例えばＲＩＡもしくはＥＬＩＳＡなどによって判定される。モノクローナル抗体の結合アフィニティーは、例えば、Ｍｕｎｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９８０，Ａｎａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．１０７：２２０−３９に記載のスキャッチャード解析によって判定することができる。
【０３２８】
所望の特異性、アフィニティー、及び／または活性の抗体を産生するハイブリドーマ細胞が特定されたら、クローンを、限界希釈法によってサブクローニングし、標準的方法によって成長させることができる（Ｇｏｄｉｎｇ（上記））。この目的に好適な培養培地には、例えば、ＤＭＥＭまたはＲＰＭＩ−１６４０培地が含まれる。加えて、ハイブリドーマ細胞は、例えば、マウスにこの細胞をｉ．ｐ．注入することによって、動物中で腹水腫瘍としてインビボで成長させられ得る。
【０３２９】
サブクローンにより分泌されるモノクローナル抗体は、例えば、アフィニティークロマトグラフィー（例えば、プロテインＡもしくはプロテインＧ−セファロースを使用する）またはイオン交換クロマトグラフィー、ヒドロキシルアパタイトクロマトグラフィー、ゲル電気泳動、透析などの従来の抗体精製法によって、培養培地、腹水、または血清から好適に分離される。
【０３３０】
モノクローナル抗体をコードするＤＮＡは、従来の手順を使用して（例えば、マウス抗体の重鎖及び軽鎖をコードする遺伝子に特異的に結合することができるオリゴヌクレオチドプローブを使用することにより）容易に単離及び配列決定される。ハイブリドーマ細胞は、そのようなＤＮＡの供給源として機能することができる。単離されたら、ＤＮＡは発現ベクター内に入れられ得るが、これは次いで、宿主細胞、例えばＥ．ｃｏｌｉ細胞、サルＣＯＳ細胞、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞、またはさもなければ抗体タンパク質を産生しない骨髄腫などに形質移入されて、組換え宿主細胞内でモノクローナル抗体の合成体が得られる。抗体をコードするＤＮＡの細菌における組換え発現に関する総説論文としては、Ｓｋｅｒｒａ  ｅｔ  ａｌ．，１９９３，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎｉｏｎ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．５：２５６−６２及びＰｌｕｃｋｔｈｕｎ，１９９２，Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｒｅｖｓ．１３０：１５１  ８８が挙げられる。
【０３３１】
いくつかの実施形態において、ＰＤ−１エピトープに結合する抗体は、（１）本明細書に記載のＶＨ及び／またはＶＬドメインの任意の１つをコードするヌクレオチド配列の相補鎖に、ストリンジェントな条件（例えば、約４５℃での６Ｘ塩化ナトリウム／クエン酸ナトリウム（ＳＳＣ）中のフィルター結合ＤＮＡへのハイブリダイゼーションとこれに続く約５０〜６５℃の０．２Ｘ  ＳＳＣ／０．１％  ＳＤＳ中での１回以上の洗浄）の下で、高度にストリンジェントな条件（例えば、約４５℃での６Ｘ  ＳＳＣ中のフィルター結合核酸へのハイブリダイゼーションとこれに続く約６８℃の０．１Ｘ  ＳＳＣ／０．２％  ＳＤＳ中での１回以上の洗浄）の下で、または当業者にとって公知の他のストリンジェントなハイブリダイゼーション条件の下でハイブリダイズするヌクレオチド配列によってコードされるＶＨドメインのアミノ酸配列及び／またはＶＬドメインのアミノ酸配列を含む。例えば、Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  Ｖｏｌ．Ｉ，６．３．１−６．３．６  ａｎｄ  ２．１０．３（Ａｕｓｕｂｅｌ  ｅｔ  ａｌ．ｅｄｓ．，１９８９）を参照。
【０３３２】
いくつかの実施形態において、ＰＤ−１エピトープに結合する抗体は、表１〜２に示したＶＨ  ＣＤＲ及び／またはＶＬ  ＣＤＲの任意の１つをコードするヌクレオチド配列の相補鎖に、ストリンジェントな条件（例えば、約４５℃での６Ｘ  ＳＳＣ中のフィルター結合ＤＮＡへのハイブリダイゼーションとこれに続く約５０〜６５℃の０．２Ｘ  ＳＳＣ／０．１％  ＳＤＳ中での１回以上の洗浄）の下で、高度にストリンジェントな条件（例えば、約４５℃での６Ｘ  ＳＳＣ中のフィルター結合核酸へのハイブリダイゼーションとこれに続く約６８℃の０．１Ｘ  ＳＳＣ／０．２％  ＳＤＳ中での１回以上の洗浄）の下で、または当業者にとって公知の他のストリンジェントなハイブリダイゼーション条件の下でハイブリダイズするヌクレオチド配列によってコードされるＶＨ  ＣＤＲのアミノ酸配列及び／またはＶＬ  ＣＤＲのアミノ酸配列を含む（例えば、Ａｕｓｕｂｅｌら（上記）を参照）。
【０３３３】
さらなる実施形態において、モノクローナル抗体または抗体断片は、例えば、Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｐｈａｇｅ  Ｄｉｓｐｌａｙ：Ｍｅｔｈｏｄｓ  ａｎｄ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ（Ｏ’Ｂｒｉｅｎ  ａｎｄ  Ａｉｔｋｅｎ  ｅｄｓ．，２００２）に記載されている技術を用いて生成された抗体ファージライブラリーから単離することができる。原則として、合成抗体クローンは、ファージコートタンパク質に融合した抗体可変領域（Ｆｖ）の様々な断片を提示するファージを含有するファージライブラリーをスクリーニングすることによって選別される。そのようなファージライブラリーは所望の抗原に対してスクリーニングされる。所望の抗原に結合することのできるＦｖ断片を発現するクローンが抗原に吸着し、これにより、ライブラリー中の非結合クローンから分離される。その後、結合クローンは抗原から溶出され、さらなる抗原吸着／溶出サイクルによってさらに富化することができる。
【０３３４】
可変ドメインは、例えば、Ｗｉｎｔｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，１９９４，Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１２：４３３  ５５に記載されているように、ＶＨ及びＶＬが短い柔軟なペプチドを介して共有結合している一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）断片、またはそれぞれ定常ドメインに融合し、非共有結合的に相互作用するＦａｂ断片のいずれかとして、ファージ上に機能的に掲示することができる。
【０３３５】
ＶＨ及びＶＬ遺伝子のレパートリーをＰＣＲによって別々にクローニングしてファージライブラリー中でランダムに組換えることができ、その後、そこからＷｉｎｔｅｒら（上記）に記載されているように抗原結合クローンを探索することができる。免疫化した供給源からのライブラリーによって、ハイブリドーマを構築する必要なしに、免疫原に対する高アフィニティー抗体が得られる。あるいは、Ｇｒｉｆｆｉｔｈｓ  ｅｔ  ａｌ．，１９９３，ＥＭＢＯ  Ｊ  １２：７２５−３４に記載されているように、ナイーブレパートリーをクローニングして、いかなる免疫化も伴うことなく、広範な非自己抗原及び自己抗原に対する単一源のヒト抗体を得ることができる。最後に、ナイーブライブラリーは、例えば、Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍ  ａｎｄ  Ｗｉｎｔｅｒ，１９９２，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２７：３８１−８８に記載されているように、幹細胞由来の未再構成Ｖ遺伝子セグメントをクローニングし、ランダム配列を含有するＰＣＲプライマーを使用して高度に可変性のＣＤＲ３領域をコードし、インビトロでの再構成を達成することによって、合成的に作製することもできる。
【０３３６】
ライブラリーのスクリーニングは当該技術分野において公知の様々な技術によって達成することができる。例えば、ＰＤ−１（例えば、ＰＤ−１ポリペプチド、断片、またはエピトープ）を用いて吸着プレートのウェルをコーティングすることができるか、吸着プレートに付着させた、もしくは細胞ソーティングに用いられる宿主細胞上で発現させることができるか、ストレプトアビジン被覆ビーズでの捕捉のためにビオチンと結合させることができるか、またはディスプレイライブラリーをパニングする任意の他の方法において用いることができる。解離カイネティクスが遅い（例えば、良好な結合アフィニティー）抗体の選別は、Ｂａｓｓ  ｅｔ  ａｌ．，１９９０，Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ８：３０９−１４及びＷＯ  ９２／０９６９０に記載されているような長い洗浄及び一価ファージディスプレイの使用によって、ならびにＭａｒｋｓ  ｅｔ  ａｌ．，１９９２，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．１０：７７９−８３に記載されているような低コーティング密度の抗原の使用によって促進することができる。
【０３３７】
抗ＰＤ−１抗体は、好適な抗原スクリーニング手順を設計して目的のファージクローンを選別し、その後、目的のファージクローン由来のＶＨ及び／またはＶＬ配列（例えば、Ｆｖ配列）、またはＶＨ及びＶＬ配列からの様々なＣＤＲ配列、ならびにＫａｂａｔら（上記）に記載の好適な定常領域（例えば、Ｆｃ）配列を用いて、全長抗ＰＤ−１抗体クローンを構築することによって得ることができる。
【０３３８】
別の実施形態において、抗ＰＤ−１抗体は、Ｂｏｗｅｒｓ  ｅｔ  ａｌ．，２０１１，Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ．１０８：２０４５５−６０に記載されているような方法、例えば、ＳＨＭ−ＸＨＬ（商標）プラットフォーム（ＡｎａｐｔｙｓＢｉｏ，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）を用いることによって生成される。簡潔に述べると、このアプローチでは、ＩｇＧの完全ヒトライブラリーが出発ライブラリーとして哺乳類細胞株（例えば、ＨＥＫ２９３）中で構築される。標的ペプチドまたはエピトープに結合する免疫グロブリンを提示する哺乳類細胞を選別し（例えば、ＦＡＣＳソーティングによって）、その後、活性化誘導シチジンデアミナーゼ（ＡＩＤ）誘発性体細胞超変異をインビトロで再現して最初に選別した抗体プールの多様性を拡張する。哺乳類細胞表面ディスプレイをインビトロ体細胞超変異と組み合わせることによる複数回のアフィニティー成熟の後、高アフィニティー高特異性抗ＰＤ−１抗体が生成される。抗体ライブラリー及び／または抗体アフィニティー成熟を得るために用いることのできるさらなる方法は、例えば、米国特許第８，６８５，８９７号及び８，６０３，９３０号、ならびに米国特許出願公開第２０１４／０１７０７０５号、２０１４／００９４３９２号、２０１２／００２８３０１号、２０１１／０１８３８５５号、及び２００９／００７５３７８号に開示されており、それぞれ参照により本明細書に援用する。
【０３３９】
４．３．１．３抗体断片
本開示は、ＰＤ−１に結合する抗体及び抗体断片を提供する。ある特定の状況では、全抗体ではなく抗体断片を使用する利点がある。より小さなサイズの断片は、迅速なクリアランスを可能とし、細胞、組織、または臓器への到達の改善につながり得る。ある抗体断片の総説については、Ｈｕｄｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，２００３，Ｎａｔｕｒｅ  Ｍｅｄ．９：１２９−３４を参照。
【０３４０】
抗体断片を産生するための様々な技法が開発されている。従来、これらの断片は、インタクト抗体のタンパク質分解消化により得られていた（例えば、Ｍｏｒｉｍｏｔｏ  ｅｔ  ａｌ．，１９９２，Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｍｅｔｈｏｄｓ  ２４：１０７−１７；及びＢｒｅｎｎａｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９８５，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２２９：８１−８３を参照）。しかし、これらの断片は、現在、組換え宿主細胞により直接産生され得る。Ｆａｂ、Ｆｖ、及びｓｃＦｖ抗体断片はすべて、Ｅ．ｃｏｌｉまたは酵母細胞で発現されて分泌され得るため、これらの断片の容易な大量産生が可能になる。抗体断片は、上述の抗体ファージライブラリーから単離することができる。あるいは、Ｆａｂ’−ＳＨ断片をＥ．ｃｏｌｉから直接回収し、化学的にカップリングして、Ｆ（ａｂ’）２断片を形成することができる（Ｃａｒｔｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，１９９２，Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  １０：１６３−６７）。別のアプローチによると、Ｆ（ａｂ’）２断片は、組換え宿主細胞培養から直接単離することができる。サルベージ受容体結合エピトープ残基を含むインビボ半減期が増加したＦａｂ及びＦ（ａｂ’）２断片が、米国特許第５，８６９，０４６号に記載されている。抗体断片を産生するための他の技法が、当業者に明らかであろう。ある実施形態において、抗体は一本鎖Ｆｖ断片（ｓｃＦｖ）である（例えば、ＷＯ  ９３／１６１８５；米国特許第５，５７１，８９４号及び５，５８７，４５８号を参照）。Ｆｖ及びｓｃＦｖは、定常領域を欠くインタクトな結合部位を有するので、インビボでの使用中の非特異的結合の低減に好適であり得る。ｓｃＦｖのアミノまたはカルボキシ末端のいずれかにおけるエフェクタータンパク質の融合をもたらすようにｓｃＦｖ融合タンパク質が構築され得る（例えば、Ｂｏｒｒｅｂａｅｃｋ  ｅｄ．（上記）を参照）。抗体断片は、例えば、上で引用した参考文献に記載されるような「直線状抗体」でもあり得る。そのような直線状抗体は、単一特異性または多重特異性、例えば二重特異性などであり得る。
【０３４１】
より小さな抗体由来結合構造は、単一可変ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）とも称される個々の可変ドメイン（Ｖドメイン）である。ある種の生物、ラクダ科及び軟骨魚類は、免疫系の一部としてＦｃ相当ドメイン構造上に載った高アフィニティー単一Ｖ様ドメインを有する。（Ｗｏｏｌｖｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９９９，Ｉｍｍｕｎｏｇｅｎｅｔｉｃｓ  ５０：９８−１０１；及びＳｔｒｅｌｔｓｏｖ  ｅｔ  ａｌ．，２００４，Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ．１０１：１２４４４−４９）。Ｖ様ドメイン（ラクダ科ではＶｈＨと呼ばれ、サメではＶ−ＮＡＲと呼ばれる）は典型的に長い表面ループを提示しており、標的抗原の空隙の貫通を可能とする。それらはまた、疎水性表面パッチを覆うことによって単離ＶＨドメインを安定化させる。
【０３４２】
これらのＶｈＨ及びＶ−ＮＡＲドメインはｓｄＡｂを設計するために用いられている。ヒトＶドメインバリアントは、ファージライブラリーからの選別及び安定な高結合性ＶＬ及びＶＨ由来ドメインが得られた他のアプローチを用いて設計されている。
【０３４３】
本明細書で提供する抗体としては、免疫グロブリン分子及び免疫グロブリン分子の免疫活性部分、例えば、ＰＤ−１エピトープに結合する抗原結合部位を含有する分子が挙げられるが、これらに限定されない。本明細書で提供する免疫グロブリン分子は、免疫グロブリン分子の任意のクラス（例えば、ＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、及びＩｇＡ）、または任意のサブクラス（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１、及びＩｇＡ２）のものとすることができる。
【０３４４】
抗体のバリアント及び誘導体としては、ＰＤ−１エピトープに結合する能力を保持する抗体機能的断片が挙げられる。例示的な機能的断片としては、Ｆａｂ断片（例えば、抗原結合ドメインを含有し、ジスルフィド結合によって架橋された軽鎖及び重鎖の一部を含む抗体断片）；Ｆａｂ’（例えば、Ｆａｂ及びヒンジ領域を通る重鎖の追加の部分を含む単一抗原結合ドメインを含有する抗体断片）；Ｆ（ａｂ’）２（例えば、重鎖のヒンジ領域において鎖間ジスルフィド結合によって連結した２つのＦａｂ’分子；Ｆａｂ’分子は同じまたは異なるエピトープを対象とし得る）；二重特異性Ｆａｂ（例えば、２つの抗原結合ドメインを有し、それぞれが異なるエピトープを対象とし得るＦａｂ分子）；ｓｃＦｖとしても知られる可変領域を含む一本鎖（例えば、１０〜２５アミノ酸の鎖によって互いに連結した抗体の単一の軽鎖及び重鎖の可変性抗原結合決定領域）；ジスルフィド連結Ｆｖ、またはｄｓＦｖ（例えば、ジスルフィド結合によって互いに連結した抗体の単一の軽鎖及び重鎖の可変性抗原結合決定領域）；ラクダ化ＶＨ（例えば、ＶＨ界面におけるいくつかのアミノ酸が自然発生ラクダ抗体の重鎖に見られるものである、抗体の単一の重鎖の可変性抗原結合決定領域）；二重特異性ｓｃＦｖ（例えば、２つの抗原結合ドメインを有し、それぞれが異なるエピトープを対象とし得るｓｃＦｖまたはｄｓＦｖ分子）；ダイアボディ（例えば、第１のｓｃＦｖのＶＨドメインが第２のｓｃＦｖのＶＬドメインと会合し、第１のｓｃＦｖのＶＬドメインが第２のｓｃＦｖのＶＨドメインと会合して形成される二量体化ｓｃＦｖ；ダイアボディの２つの抗原結合領域は同じまたは異なるエピトープを対象とし得る）；ならびにトリアボディ（例えば、ダイアボディと類似した様式で形成されるが、３つの抗原結合ドメインが単一の複合体中に生成される三量体化ｓｃＦｖ；３つの抗原結合ドメインは同じまたは異なるエピトープを対象とし得る）が挙げられる。
【０３４５】
４．３．１．４ヒト化抗体
いくつかの実施形態において、本明細書で提供する抗体は、ヒト及び／またはカニクイザルＰＤ−１をはじめとするＰＤ−１に結合するヒト化抗体とすることができる。例えば、本開示のヒト化抗体は表１〜２に示した１つ以上のＣＤＲを含み得る。非ヒト抗体をヒト化する様々な方法が当技術分野において公知である。例えば、ヒト化抗体は、ヒトではない起源から導入された１つ以上のアミノ酸残基を有することができる。これらの非ヒトアミノ酸残基は、多くの場合、典型的には「移入」可変ドメインから得られる「移入」残基と称される。ヒト化は、例えば、Ｊｏｎｅｓ  ｅｔ  ａｌ．，１９８６，Ｎａｔｕｒｅ  ３２１：５２２−２５；Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９８８，Ｎａｔｕｒｅ  ３３２：３２３−２７；及びＶｅｒｈｏｅｙｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９８８，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２３９：１５３４−３６の方法に従って、超可変領域配列でヒト抗体の対応する配列を置換することによって実施され得る。
【０３４６】
場合によっては、ヒト化抗体は、親非ヒト抗体（例えば、げっ歯類）の６つのＣＤＲのアミノ酸配列をヒト抗体フレームワーク上に移植するＣＤＲグラフティングによって構築される。例えば、Ｐａｄｌａｎらは、ＣＤＲ中の残基の約３分の１のみが実際に抗原と接触することを確認し、これらを「特異性決定残基」またはＳＤＲと称した（Ｐａｄｌａｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９９５，ＦＡＳＥＢ  Ｊ．９：１３３−３９）。ＳＤＲグラフティングの技術において、ＳＤＲ残基のみがヒト抗体フレームワーク上に移植される（例えば、Ｋａｓｈｍｉｒｉ  ｅｔ  ａｌ．，２００５，Ｍｅｔｈｏｄｓ  ３６：２５−３４を参照）。
【０３４７】
ヒト化抗体を作製するのに使用されるヒト可変ドメインの選択は、軽ドメイン及び重ドメインの両方とも、抗原性を低減するのに重要であり得る。例えば、いわゆる「ベストフィット」法によると、非ヒト抗体（例えばげっ歯類）の可変ドメインの配列が、既知のヒト可変ドメイン配列の全ライブラリーに対してスクリーニングされる。げっ歯類のものに最も近いヒト配列が、ヒト化抗体のためのヒトフレームワーク領域（ＦＲ）として選択され得る（Ｓｉｍｓ  ｅｔ  ａｌ．，１９９３，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５１：２２９６−３０８；及びＣｈｏｔｈｉａ  ｅｔ  ａｌ．，１９８７，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１−１７）。別の方法は、軽鎖または重鎖の特定のサブグループのヒト抗体すべてのコンセンサス配列に由来する特定のフレームワークを使用する。同じフレームワークが、いくつかの異なるヒト化抗体に使用され得る（Ｃａｒｔｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，１９９２，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８９：４２８５−８９；及びＰｒｅｓｔａ  ｅｔ  ａｌ．，１９９３，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５１：２６２３−３２）。場合によっては、フレームワークは、最も豊富なヒトサブクラスであるＶＬ６サブグループＩ（ＶＬ６Ｉ）及びＶＨサブグループＩＩＩ（ＶＨＩＩＩ）のコンセンサス配列に由来する。別の方法においては、ヒト生殖細胞系遺伝子がフレームワーク領域の供給源として用いられる。
【０３４８】
超ヒト化と呼ばれるＣＤＲの比較に基づいた代替的なパラダイムにおいては、ＦＲ相同性は無関係である。この方法は、非ヒト配列と機能的ヒト生殖細胞系遺伝子レパートリーとの比較からなる。その後、マウス配列と同じまたは密接に関係したカノニカル構造をコードする遺伝子が選択される。次に、非ヒト抗体とカノニカル構造を共有する遺伝子の中で、ＣＤＲ中の相同性が最も高いものがＦＲドナーとして選択される。最後に、非ヒトＣＤＲがこれらのＦＲ上に移植される（例えば、Ｔａｎ  ｅｔ  ａｌ．，２００２，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６９：１１１９−２５を参照）。
【０３４９】
一般に、抗原に対するアフィニティー及び他の好ましい生物学的特性を保持させて抗体をヒト化することがさらに望ましい。この目標を達成するためには、ある方法によると、ヒト化抗体は、親配列及びヒト化配列の三次元モデルを使用した、親配列及び様々な概念上のヒト化産物の分析プロセスによって調製される。三次元免疫グロブリンモデルは一般的に、利用可能であり、当業者にはよく知られている。選択された候補免疫グロブリン配列の推定される三次元高次構造を例示及び表示するコンピュータプログラムが利用可能である。これらとしては、例えば、ＷＡＭ  （Ｗｈｉｔｅｌｅｇｇ  ａｎｄ  Ｒｅｅｓ，２０００，Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｎｇ．１３：８１９−２４）、Ｍｏｄｅｌｌｅｒ（Ｓａｌｉ  ａｎｄ  Ｂｌｕｎｄｅｌｌ，１９９３，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２３４：７７９−８１５）、及びＳｗｉｓｓ  ＰＤＢ  Ｖｉｅｗｅｒ（Ｇｕｅｘ  ａｎｄ  Ｐｅｉｔｓｃｈ，１９９７，Ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ  １８：２７１４−２３）が挙げられる。これらの表示の精査は、候補免疫グロブリン配列の機能における残基の可能性の高い役割の分析、例えば、候補免疫グロブリンがその抗原に結合する能力に影響する残基の分析を可能にする。このように、標的抗原（複数可）に対するアフィニティーの増加などの所望の抗体特徴が達成されるように、ＦＲ残基をレシピエント及び移入配列から選択して組み合わせることができる。概して、超可変領域残基は、抗原結合への影響に直接的に、かつ最も実質的に関与している。
【０３５０】
抗体ヒト化のための別の方法は、ヒトストリング含有量（ＨＳＣ）と称される抗体ヒト性の尺度に基づく。この方法では、マウス配列をヒト生殖細胞系遺伝子のレパートリーと比較し、その差異をＨＳＣとしてスコア化する。次に、全体的な同一性尺度を使用するのではなく、そのＨＳＣを最大化することによって標的配列をヒト化して、複数の多様なヒト化バリアントを生成する（Ｌａｚａｒ  ｅｔ  ａｌ．，２００７，Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．４４：１９８６−９８）。
【０３５１】
上記の方法に加えて、ヒト化抗体を生成及び選別するために実験的方法が用いられ得る。こうした方法としては、ヒト化バリアントの大規模ライブラリーの生成及び富化技術または高スループットスクリーニング技術を用いた最良のクローンの選別に基づくものが挙げられる。抗体バリアントは、ファージ、リボソーム、及び酵母ディスプレイライブラリーから、ならびに細菌コロニースクリーニングによって単離され得る（例えば、Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍ，２００５，Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２３：１１０５−１６；Ｄｕｆｎｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，２００６，Ｔｒｅｎｄｓ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２４：５２３−２９；Ｆｅｌｄｈａｕｓ  ｅｔ  ａｌ．，２００３，Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２１：１６３−７０；及びＳｃｈｌａｐｓｃｈｙ  ｅｔ  ａｌ．，２００４，Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｎｇ．Ｄｅｓ．Ｓｅｌ．１７：８４７−６０を参照）。
【０３５２】
ＦＲライブラリーアプローチでは、一群の残基バリアントをＦＲ中の特定の位置に導入し、その後、移植ＣＤＲを最も良好に支持するＦＲを選択するためにライブラリーをスクリーニングする。置換される残基としては、ＣＤＲ構造に寄与する可能性があるとして同定された「バーニヤ」残基（例えば、Ｆｏｏｔｅ  ａｎｄ  Ｗｉｎｔｅｒ，１９９２，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２４：４８７−９９を参照）の、またはＢａｃａ  ｅｔ  ａｌ．（１９９７，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７２：１０６７８−８４）によって同定された、より限定された一連の標的残基からのいくつかまたはすべてが挙げられ得る。
【０３５３】
ＦＲシャッフリングでは、選択された残基バリアントのコンビナトリアルライブラリーを作製する代わりに、ＦＲ全体を非ヒトＣＤＲと組み合わせる（例えば、Ｄａｌｌ’Ａｃｑｕａ  ｅｔ  ａｌ．，２００５，Ｍｅｔｈｏｄｓ  ３６：４３−６０を参照）。ライブラリーは、最初にＶＬをヒト化し、その後にＶＨをヒト化する２段階プロセスにおいて、結合に関してスクリーニングされ得る。あるいは、１段階ＦＲシャッフリングプロセスが用いられ得る。そのようなプロセスは、結果的に得られる抗体が発現の強化、アフィニティーの増加、及び熱安定性をはじめとする生化学的及び物理化学的特性の向上を示すので、２段階スクリーニングよりも効率的であることが明らかにされている（例えば、Ｄａｍｓｃｈｒｏｄｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，２００７，Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．４４：３０４９−６０を参照）。
【０３５４】
「ヒューマニアリング」法は、必須最小限特異性決定基（ＭＳＤ）の実験的な同定に基づき、ヒトＦＲのライブラリーへの非ヒト断片の逐次的置換及び結合の評価に基づく。これは、非ヒトＶＨ及びＶＬ鎖のＣＤＲ３の領域から開始し、ＶＨ及びＶＬの両方のＣＤＲ１及びＣＤＲ２を含む非ヒト抗体の他の領域をヒトＦＲへと漸進的に置き換える。この方法は典型的には、エピトープ保持、及び異なるヒトＶセグメントＣＤＲを有する複数のサブクラスからの抗体の同定をもたらす。ヒューマニアリングは、ヒト生殖細胞系遺伝子抗体と９１〜９６％相同な抗体の単離を可能にする（例えば、Ａｌｆｅｎｉｔｏ，Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ  Ｈｅａｌｔｈｔｅｃｈ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ’ｓ  Ｔｈｉｒｄ  Ａｎｎｕａｌ  ＰＥＧＳ，Ｔｈｅ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ  Ｓｕｍｍｉｔ，２００７を参照）。
【０３５５】
「ヒトエンジニアリング」法は、ヒトにおける免疫原性が減少しているが、それでもなお元の非ヒト抗体の望ましい結合特性を保持する改変抗体を生成するように、抗体のアミノ酸配列に特定の変化をもたらすことによって、非ヒト抗体または抗体断片、例えばマウスまたはキメラ抗体または抗体断片などを改変させることを伴う。一般に、この技術は、非ヒト（例えばマウス）抗体のアミノ酸残基を「低リスク」、「中リスク」、または「高リスク」残基に分類することを伴う。分類は、特定の置換を行うことの予測される利益（例えば、ヒトにおける免疫原性について）を、得られる抗体のフォールディングにその置換が影響を及ぼすリスクに対して評価する全体的なリスク／リワード計算を用いて実施する。非ヒト（例えばマウス）抗体配列の所与の位置（例えば低または中リスク）で置換される特定のヒトアミノ酸残基は、非ヒト抗体の可変領域からのアミノ酸配列を特異的またはコンセンサスヒト抗体配列の対応する領域とアラインメントすることによって選択することができる。非ヒト配列中の低または中リスク位置のアミノ酸残基で、アラインメントによるヒト抗体配列中の対応する残基を置換することができる。ヒトエンジニアリングタンパク質を作製するための技術は、Ｓｔｕｄｎｉｃｋａ  ｅｔ  ａｌ．，１９９４，Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ  ７：８０５−１４；米国特許第５，７６６，８８６号；５，７７０，１９６号；５，８２１，１２３号；及び５，８６９，６１９号；ならびにＰＣＴ公開ＷＯ  ９３／１１７９４号でより詳細に記載されている。
【０３５６】
４．３．１．５ヒト抗体
ヒト抗ＰＤ−１抗体は、ヒト由来ファージディスプレイライブラリーから選択されたＦｖクローン可変ドメイン配列（複数可）を、既知のヒト定常ドメイン配列（複数可）と組み合わせることによって構築することができる。あるいは、本開示のヒトモノクローナル抗ＰＤ−１抗体をハイブリドーマ法によって作製することができる。ヒトモノクローナル抗体の産生のためのヒト骨髄腫及びマウス−ヒトヘテロ骨髄腫細胞株は、例えば、Ｋｏｚｂｏｒ，１９８４，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３３：３００１−０５；Ｂｒｏｄｅｕｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ  Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ  ａｎｄ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ  ５１−６３（１９８７）；及びＢｏｅｒｎｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，１９９１，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４７：８６−９５に記載されている。
【０３５７】
免疫化すると内因性免疫グロブリン産生の不在下でヒト抗体の完全レパートリーを産生することのできる遺伝子導入動物（例えば、マウス）を作製することも可能である。ヒト抗体レパートリーを発現する遺伝子導入マウスは、多種多様な潜在的薬物標的に対する高アフィニティーヒト配列モノクローナル抗体を生成するために用いられている（例えば、Ｊａｋｏｂｏｖｉｔｓ，Ａ．，１９９５，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．６（５）：５６１−６６；Ｂｒｕｇｇｅｍａｎｎ  ａｎｄ  Ｔａｕｓｓｉｎｇ，１９９７，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．８（４）：４５５−５８；米国特許第６，０７５，１８１号及び６，１５０，５８４号；ならびにＬｏｎｂｅｒｇ  ｅｔ  ａｌ．，２００５，ＮａｔｕｒｅＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２３：１１１７−２５を参照）。
【０３５８】
あるいは、ヒト抗体は、標的抗原に対する抗体を産生するヒトＢリンパ球の不死化によって調製され得る（例えば、そのようなＢリンパ球は、個体から回収され得るか、またはインビトロで免疫化されたものであり得る）（例えば、Ｃｏｌｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ａｎｄ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｈｅｒａｐｙ  （１９８５）；Ｂｏｅｒｎｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，１９９１，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４７（１）：８６−９５；及び米国特許第５，７５０，３７３号を参照）。
【０３５９】
遺伝子シャッフリングを用いて、非ヒト、例えば、げっ歯類の抗体からヒト抗体を得ることができ、この場合、ヒト抗体は、出発非ヒト抗体と類似したアフィニティー及び特異性を有する。「エピトープインプリンティング」または「誘導選択」とも呼ばれるこの方法によれば、本明細書に記載するようなファージディスプレイ技術によって得られた非ヒト抗体断片の重鎖可変領域または軽鎖可変領域のいずれかが、ヒトＶドメイン遺伝子のレパートリーと置き換えられ、非ヒト鎖／ヒト鎖ｓｃＦｖまたはＦａｂキメラの集団が作製される。抗原での選択の結果、非ヒト鎖／ヒト鎖キメラｓｃＦｖまたはＦａｂが単離されるが、ここで、ヒト鎖は、一次ファージディスプレイクローン中の対応する非ヒト鎖の除去時に破壊された抗原結合部位を回復する（例えば、エピトープがヒト鎖パートナーの選択を誘導する（刷り込む））。残りの非ヒト鎖を置き換えるためにプロセスを繰り返すと、ヒト抗体が得られる（例えば、ＰＣＴ  ＷＯ  ９３／０６２１３；及びＯｓｂｏｕｒｎ  ｅｔ  ａｌ．，２００５，Ｍｅｔｈｏｄｓ  ３６：６１−６８を参照）。ＣＤＲグラフティングによる非ヒト抗体の従来のヒト化とは異なり、この技術では、非ヒト起源のＦＲ残基もＣＤＲ残基も有しない、完全ヒト抗体が得られる。細胞表面抗原に対するマウス抗体をヒト化するための誘導選択の例としては、卵巣癌細胞上に存在する葉酸結合タンパク質（例えば、Ｆｉｇｉｎｉ  ｅｔ  ａｌ．，１９９８，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．５８：９９１−９６を参照）、及び肝細胞癌上で高度に発現されるＣＤ１４７（例えば、Ｂａｏ  ｅｔ  ａｌ．，２００５，Ｃａｎｃｅｒ  Ｂｉｏｌ．Ｔｈｅｒ．４：１３７４−８０を参照）が挙げられる。
【０３６０】
誘導選択アプローチの潜在的な欠点は、他方の抗体鎖を不変に保ちながらの一方の抗体鎖のシャッフリングが、エピトープのずれをもたらす恐れがあることである。非ヒト抗体によって認識されるエピトープを維持するために、ＣＤＲ保持を適用することができる（例えば、Ｋｌｉｍｋａ  ｅｔ  ａｌ．，２０００，Ｂｒ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ．８３：２５２−６０；及びＢｅｉｂｏｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，２０００，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２９６：８３３−４９を参照）。この方法では、一般に非ヒトＶＨ  ＣＤＲ３が保持されるが、これは、このＣＤＲが抗原結合部位の中心にあり、抗原認識のための抗体の最も重要な領域であり得るためである。しかし、場合によっては、非ヒト抗体のＶＨ  ＣＤＲ３及びＶＬ  ＣＤＲ３、ならびにＶＨ  ＣＤＲ２、ＶＬ  ＣＤＲ２、及びＶＬ  ＣＤＲ１が保持されることもある。
【０３６１】
４．３．１．６二重特異性抗体
二重特異性抗体は、少なくとも２つの異なる抗原に対する結合特異性を有するモノクローナル抗体である。ある実施形態において、二重特異性抗体はヒト抗体またはヒト化抗体である。ある実施形態において、結合特異性のうちの一方はＰＤ−１に対するものであり、他方は任意の他の抗原に対するものである。いくつかの実施形態において、結合特異性のうちの一方はＰＤ−１に対するものであり、他方はＰＤ−１を発現する細胞上で発現される別の表面抗原に対するものである。ある実施形態において、二重特異性抗体はＰＤ−１の２つの異なるエピトープに結合し得る。二重特異性抗体は全長抗体または抗体断片（例えば、Ｆ（ａｂ’）２二重特異性抗体）として調製することができる。
【０３６２】
二重特異性抗体の作製方法は当該技術分野において公知であり、例えば、２つの免疫グロブリン重鎖−軽鎖ペアの共発現によるものなどであり、ここで２つの重鎖は異なる特異性を有する（例えば、Ｍｉｌｓｔｅｉｎ  ａｎｄ  Ｃｕｅｌｌｏ，１９８３，Ｎａｔｕｒｅ  ３０５：５３７−４０を参照）。二重特異性抗体の生成のさらなる詳細については、例えば、Ｂｉｓｐｅｃｉｆｉｃ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ（Ｋｏｎｔｅｒｍａｎｎ  ｅｄ．，２０１１）を参照。
【０３６３】
４．３．１．７多価抗体
多価抗体は、抗体が結合する抗原を発現する細胞によって二価抗体よりも速く内部移行（及び／または異化）され得る。本開示の抗体は、３つ以上の抗原結合部位を有する（ＩｇＭクラス以外の）多価抗体（例えば、四価抗体）とすることができ、抗体のポリペプチド鎖をコードする核酸の組換え発現によって容易に産生させることができる。多価抗体は、二量体化ドメイン及び３つ以上の抗原結合部位を含むことができる。ある実施形態において、二量体化ドメインはＦｃ領域またはヒンジ領域を含む（またはそれらからなる）。この場合、抗体は、Ｆｃ領域及びＦｃ領域のアミノ末端側の３つ以上の抗原結合部位を含むことになるであろう。ある実施形態において、多価抗体は３つ〜約８つの抗原結合部位を含む（またはそれらからなる）。そのような一実施形態において、多価抗体は４つの抗原結合部位を含む（またはそれらからなる）。多価抗体は少なくとも１つのポリペプチド鎖（例えば、２つのポリペプチド鎖）を含み、ポリペプチド鎖（複数可）は２つ以上の可変ドメインを含む。例えば、ポリペプチド鎖（複数可）はＶＤ１−（Ｘ１）ｎ−ＶＤ２−（Ｘ２）ｎ−Ｆｃを含み得るが、ここで、ＶＤ１は第１可変ドメインであり、ＶＤ２は第２可変ドメインであり、ＦｃはＦｃ領域の１つのポリペプチド鎖であり、Ｘ１及びＸ２はアミノ酸またはポリペプチドを表し、ｎは０または１である。例えば、ポリペプチド鎖（複数可）は以下を含み得る：ＶＨ−ＣＨ１−フレキシブルリンカー−ＶＨ−ＣＨ１−Ｆｃ領域鎖；またはＶＨ−ＣＨ１−ＶＨ−ＣＨ１−Ｆｃ領域鎖。本明細書の多価抗体は少なくとも２つ（例えば４つ）の軽鎖可変ドメインポリペプチドをさらに含み得る。本明細書の多価抗体は、例えば約２〜約８つの軽鎖可変ドメインポリペプチドを含み得る。ここで企図する軽鎖可変ドメインポリペプチドは、軽鎖可変ドメインを含み、任意により、ＣＬドメインをさらに含む。
【０３６４】
４．３．１．８Ｆｃエンジニアリング
Ｆｃエンジニアリングによって本明細書で提供する抗ＰＤ−１抗体を改変することが望ましい場合がある。ある実施形態において、抗体のＦｃ領域への改変は抗体のエフェクター機能の減少または除去をもたらす。ある実施形態において、エフェクター機能はＡＤＣＣ、ＡＤＣＰ、及び／またはＣＤＣである。いくつかの実施形態において、エフェクター機能はＡＤＣＣである。他の実施形態において、エフェクター機能はＡＤＣＰである。他の実施形態において、エフェクター機能はＣＤＣである。一実施形態において、エフェクター機能はＡＤＣＣ及びＡＤＣＰである。一実施形態において、エフェクター機能はＡＤＣＣ及びＣＤＣである。一実施形態において、エフェクター機能はＡＤＣＰ及びＣＤＣである。一実施形態において、エフェクター機能はＡＤＣＣ、ＡＤＣＰ及びＣＤＣである。これは、１つ以上のアミノ酸置換を抗体のＦｃ領域内に導入することによって達成され得る。例えば、２３３〜２３６位でＩｇＧ２残基を、ならびに３２７、３３０、及び３３１位でＩｇＧ４残基を用いたヒトＩｇＧ１中への置換がＡＤＣＣ及びＣＤＣを大幅に減少させることが明らかにされた（例えば、Ａｒｍｏｕｒ  ｅｔ  ａｌ．，１９９９，Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２９（８）：２６１３−２４；及びＳｈｉｅｌｄｓ  ｅｔ  ａｌ．，２００１，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７６（９）：６５９１−６０４を参照）。他のＦｃバリアントは本明細書の他の箇所で提供する。
【０３６５】
抗体の血清半減期を延長させるために、例えば、米国特許第５，７３９，２７７号に記載されているように抗体（特に抗体断片）中にサルベージ受容体結合エピトープが組み込まれ得る。用語「サルベージ受容体結合エピトープ」は、ＩｇＧ分子のインビボ血清半減期の延長を担うＩｇＧ分子（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４）のＦｃ領域のエピトープのことをいう。
【０３６６】
４．３．１．９代替的な結合作用物質
本開示は、本明細書に開示の抗ＰＤ−１抗体と同じエピトープに特異的に結合する非免疫グロブリン性結合作用物質を包含する。いくつかの実施形態において、非免疫グロブリン性結合作用物質は、競合結合アッセイにおいて本開示の抗ＰＤ−１抗体に取って代わるか、またはそれによって置き換えられる作用物質として同定される。こうした代替的な結合作用物質としては、例えば、当技術分野において公知の任意の組換えタンパク質スキャフォールドが挙げられ得る。そのようなスキャフォールドは表１〜２に示した１つ以上のＣＤＲを含み得る。そのようなスキャフォールドとしては、例えば、リガンド結合部位を形成する４つの超可変ループを支持する強固なβ−バレルによって特徴づけられるタンパク質構造のリポカリンスキャフォールドを基にしたアンチカリンが挙げられる。機能的提示及び誘導選択と組み合わせた、ループ領域における標的ランダム変異誘発によって、新規な結合特異性が設計され得る（例えば、Ｓｋｅｒｒａ，２００８，ＦＥＢＳ  Ｊ．２７５：２６７７−８３を参照）。他の好適なスキャフォールドとしては、例えば、ヒトフィブロネクチンＩＩＩの１０番目の細胞外ドメインを基にしたアドネクチン、またはモノボディ（例えば、Ｋｏｉｄｅ  ａｎｄ  Ｋｏｉｄｅ，２００７，Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．３５２：９５−１０９を参照）；ブドウ球菌プロテインＡのＺドメインを基にしたアフィボディ（例えば、Ｎｙｇｒｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，２００８，ＦＥＢＳ  Ｊ．２７５：２６６８−７６を参照）；アンキリンリピートタンパク質を基にしたＤＡＲＰｉｎ（例えば、Ｓｔｕｍｐｐ  ｅｔ  ａｌ．，２００８，Ｄｒｕｇ．Ｄｉｓｃｏｖ．Ｔｏｄａｙ  １３：６９５−７０１を参照）；ヒトＦｙｎタンパク質キナーゼのＳＨ３ドメインを基にしたフィノマー（例えば、Ｇｒａｂｕｌｏｖｓｋｉ  ｅｔ  ａｌ．，２００７，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２８２：３１９６−２０４を参照）；Ｓｕｌｆｏｌｏｂｕｓ  ａｃｉｄｏｌａｒｉｕｓ由来のＳａｃ７ｄを基にしたアフィチン（例えば、Ｋｒｅｈｅｎｂｒｉｎｋ  ｅｔ  ａｌ．，２００８，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．３８３：１０５８  ６８を参照）；ヒトｙ−Ｂ−クリスタリンを基にしたアフィリン（例えば、Ｅｂｅｒｓｂａｃｈ  ｅｔ  ａｌ．，２００７，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．３７２：１７２−８５を参照）；膜受容体タンパク質のＡドメインを基にしたアビマー（例えば、Ｓｉｌｖｅｒｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．，２００５，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２３：１５５６−６１を参照）；システインリッチノッチンペプチド（例えば、Ｋｏｌｍａｒ，２００８，ＦＥＢＳ  Ｊ．２７５：２６８４−９０を参照）；及び組換えクニッツ型阻害剤（例えば、Ｎｉｘｏｎ  ａｎｄ  Ｗｏｏｄ，２００６，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｄｒｕｇ．Ｄｉｓｃｏｖ．Ｄｅｖ．９：２６１−６８を参照）が挙げられ得る。総説については、例えば、Ｇｅｂａｕｅｒ  ａｎｄ  Ｓｋｅｒｒａ，２００９，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｃｈｅｍ．Ｂｉｏｌ．１３：２４５−５５を参照。
【０３６７】
４．３．２抗体バリアント
いくつかの実施形態において、ＰＤ−１に結合する抗体または本明細書に記載の抗体のアミノ酸配列改変（複数可）を企図する。例えば、結合アフィニティー、及び／または限定はしないが、特異性、熱安定性、発現レベル、エフェクター機能、グリコシル化、低い免疫原性、もしくは溶解性をはじめとする抗体の他の生物学的特性を改善することが望ましい場合がある。したがって、本明細書で提供する抗ＰＤ−１抗体に加えて、抗ＰＤ−１抗体バリアントを調製することができると企図する。例えば、抗ＰＤ−１抗体バリアントは、コーディングＤＮＡ中に適切なヌクレオチド変化を導入することによって、及び／または所望の抗体もしくはポリペプチドの合成によって調製することができる。当業者であれば、アミノ酸変化が、グリコシル化部位の数もしくは位置の変化または膜アンカリング特性の変更などのように、抗ＰＤ−１抗体の翻訳後プロセスを変更し得ることを認識している。
【０３６８】
いくつかの実施形態において、本明細書で提供する抗体は、例えば抗体への任意のタイプの分子の共有結合によって、化学修飾される。抗体誘導体としては、例えば、グリコシル化、アセチル化、ペグ化、リン酸化、アミド化、公知の保護／ブロック基による誘導体化、化学的切断、タンパク質分解切断、細胞リガンドまたは他のタンパク質への連結などの増加または減少によって化学修飾された抗体が挙げられ得る。加えて、抗体は１つ以上の非古典的アミノ酸を含有し得る。
【０３６９】
変異は、天然配列抗体またはポリペプチドと比較してアミノ酸配列に変化をもたらす抗体またはポリペプチドをコードする１つ以上のコドンの置換、欠失、または挿入であり得る。アミノ酸置換は、例えばセリンでのロイシンの置き換えのように、あるアミノ酸を類似の構造的及び／または化学的特性を有する別のアミノ酸で置き換える、例えば、保存的アミノ酸置換の結果とすることができる。挿入または欠失は任意により約１〜５アミノ酸の範囲であり得る。ある実施形態において、置換、欠失、または挿入は、元の分子に対して２５個未満のアミノ酸置換、２０個未満のアミノ酸置換、１５個未満のアミノ酸置換、１０個未満のアミノ酸置換、５個未満のアミノ酸置換、４個未満のアミノ酸置換、３個未満のアミノ酸置換、または２個未満のアミノ酸置換を含む。具体的な実施形態において、置換は、１つ以上の予測される非必須アミノ酸残基において行われる保存的アミノ酸置換である。許容される変異は、配列中のアミノ酸の挿入、欠失、または置換を系統的に行い、その結果生じるバリアントを全長または成熟天然配列によって示される活性に関して試験することによって決定され得る。
【０３７０】
アミノ酸配列挿入としては、１個の残基から１００個以上の残基を含有するポリペプチドの範囲の長さである、アミノ末端及び／またはカルボキシル末端融合、ならびに単一のまたは複数のアミノ酸残基の配列内挿入が挙げられる。末端挿入の例としては、Ｎ末端メチオニル残基を有する抗体が挙げられる。抗体分子の他の挿入型バリアントとしては、抗体の血清半減期を増加させる酵素（例えば、抗体指向性酵素プロドラッグ療法用）またはポリペプチドに対する抗体のＮ末端またはＣ末端への融合が挙げられる。
【０３７１】
抗体の生物学的特性の実質的な改変は、（ａ）置換領域におけるポリペプチド骨格の構造、例えば、シートもしくは螺旋コンフォメーション、（ｂ）標的部位における分子の荷電もしくは疎水性、または（ｃ）側鎖の大きさの維持に対する影響が著しく異なる置換を選択することにより達成される。あるいは、特性を維持するように、または著しく変化させないように、保存的（例えば類似の特性及び／または側鎖を有するアミノ酸基のうちでの）置換が行われ得る。アミノ酸は、その側鎖の特性の類似性に従ってグループ分けされ得る（例えば、Ｌｅｈｎｉｎｇｅｒ，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ７３−７５（２ｄ  ｅｄ．１９７５）を参照）：（１）非極性：Ａｌａ（Ａ）、Ｖａｌ（Ｖ）、Ｌｅｕ（Ｌ）、Ｉｌｅ（Ｉ）、Ｐｒｏ（Ｐ）、Ｐｈｅ（Ｆ）、Ｔｒｐ（Ｗ）、Ｍｅｔ（Ｍ）；（２）非荷電極性：Ｇｌｙ（Ｇ）、Ｓｅｒ（Ｓ）、Ｔｈｒ（Ｔ）、Ｃｙｓ（Ｃ）、Ｔｙｒ（Ｙ）、Ａｓｎ（Ｎ）、Ｇｌｎ（Ｑ）；（３）酸性：Ａｓｐ（Ｄ）、Ｇｌｕ（Ｅ）；及び（４）塩基性：Ｌｙｓ（Ｋ）、Ａｒｇ（Ｒ）、Ｈｉｓ（Ｈ）。
【０３７２】
あるいは、自然発生残基は、共通の側鎖特性に基づいてグループに分類され得る：（１）疎水性：ノルロイシン、Ｍｅｔ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ；（２）中性親水性：Ｃｙｓ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ；（３）酸性：Ａｓｐ、Ｇｌｕ；（４）塩基性：Ｈｉｓ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ；（５）鎖の配向に影響を与える残基：Ｇｌｙ、Ｐｒｏ；（６）芳香族：Ｔｒｐ、Ｔｙｒ、Ｐｈｅ。
【０３７３】
非保存的置換は、これらのクラスのうちの１つのメンバーを別のクラスと交換することを伴う。そのような置換された残基は、保存的置換部位にも、または残りの（非保存的）部位にも導入され得る。したがって、一実施形態において、ＰＤ−１エピトープに結合する抗体またはその断片は、本明細書で提供するマウスモノクローナル抗体のアミノ酸配列と少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含む。一実施形態において、ＰＤ−１エピトープに結合する抗体またはその断片は、表１〜６に示したアミノ酸配列と少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含む。さらに別の実施形態において、ＰＤ−１エピトープに結合する抗体またはその断片は、表２に示したＶＨ  ＣＤＲアミノ酸配列及び／または表１に示したＶＬ  ＣＤＲアミノ酸配列と少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９９％同一であるＶＨ  ＣＤＲ及び／またはＶＬ  ＣＤＲアミノ酸配列を含む。変異は、オリゴヌクレオチド媒介（部位特異的）変異誘発、アラニンスキャニング及びＰＣＲ変異誘発などの当該技術分野において公知の方法を用いて行うことができる。部位特異的変異誘発（例えば、Ｃａｒｔｅｒ，１９８６，Ｂｉｏｃｈｅｍ  Ｊ．２３７：１−７；及びＺｏｌｌｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，１９８２，Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．１０：６４８７−５００を参照）、カセット変異誘発（例えば、Ｗｅｌｌｓ  ｅｔ  ａｌ．，１９８５，Ｇｅｎｅ  ３４：３１５−２３を参照）、または他の公知の技術をクローニングしたＤＮＡで実施して、抗ＰＤ−１抗体バリアントＤＮＡを生成することができる。
【０３７４】
分子の酸化安定性を向上させて異常な架橋を防止するために、抗ＰＤ−１抗体の適切なコンフォメーションの維持に関与していない任意のシステイン残基も、例えば、アラニンまたはセリンなどの別のアミノ酸で置換され得る。逆に、その安定性を向上させるために（例えば、抗体がＦｖ断片などの抗体断片である場合）、システイン結合（複数可）が抗ＰＤ−１抗体に付加され得る。
【０３７５】
いくつかの実施形態において、本開示の抗ＰＤ−１抗体分子は「脱免疫化」抗体である。「脱免疫化」抗ＰＤ−１抗体は、それぞれの元の非脱免疫化抗体と比較して、そのアミノ酸配列中に抗体の免疫原性の低下をもたらす１つ以上の改変を有する、ヒト化またはキメラ抗ＰＤ−１抗体に由来する抗体である。そのような抗体変異体を生成するための手順の１つは、抗体分子のＴ細胞エピトープの同定及び除去を伴う。最初の段階において、抗体分子の免疫原性は、いくつかの方法によって、例えば、当該技術分野において公知の、Ｔ細胞エピトープのインビトロでの決定またはそのようなエピトープのインシリコ予測によって決定することができる。Ｔ細胞エピトープ機能のために決定的な残基が同定されたら、免疫原性を除去し、抗体活性を保持するために変異させることできる。総説については、例えば、Ｊｏｎｅｓ  ｅｔ  ａｌ．，２００９，Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  ５２５：４０５−２３を参照。
【０３７６】
４．３．２．１インビトロアフィニティー成熟
いくつかの実施形態において、親抗体と比較してアフィニティー、安定性、または発現レベルなどの特性が向上した抗体バリアントは、インビトロアフィニティー成熟によって調製され得る。天然原型と同様に、インビトロアフィニティー成熟は変異及び選別の原理に基づく。抗体のライブラリーは、生物（例えば、ファージ、細菌、酵母、もしくは哺乳類細胞）の表面上、またはそれらのコーディングｍＲＮＡもしくはＤＮＡとの会合（例えば、共有結合的または非共有結合的に）のいずれかで、Ｆａｂ、ｓｃＦｖ、またはＶドメイン断片として提示される。提示された抗体のアフィニティー選別により、抗体をコードする遺伝情報を保有する生物または複合体の単離が可能になる。一般に、ファージディスプレイなどのディスプレイ方法を用いた２回または３回の変異及び選別の結果、低いｎＭの範囲のアフィニティーを有する抗体断片が得られる。アフィニティー成熟抗体は、標的抗原に対してｎＭ、さらにはｐＭのアフィニティーを有することができる。
【０３７７】
ファージディスプレイは抗体の提示及び選別のための広く普及している方法である。抗体は、バクテリオファージコートタンパク質との融合体としてＦｄまたはＭ１３バクテリオファージの表面上に提示される。選別は、ファージディスプレイ抗体をそれらの標的と結合させるための抗原に対する曝露を伴い、このプロセスは「パニング」と呼ばれる。抗原と結合したファージを回収し、これを用いて細菌に感染させ、さらなる回数の選別のためのファージを産生させる。総説については、例えば、Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍ，２００２，Ｍｅｔｈｏｄｓ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１７８：１−３７；及びＢｒａｄｂｕｒｙ  ａｎｄ  Ｍａｒｋｓ，２００４，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ  ２９０：２９−４９を参照。
【０３７８】
酵母ディスプレイシステム（例えば、Ｂｏｄｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，１９９７，Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．１５：５５３−５７；及びＣｈａｏ  ｅｔ  ａｌ．，２００６，Ｎａｔ．Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  １：７５５−６８を参照）において、抗体は、重鎖及び軽鎖がフレキシブルリンカーによって連結された一本鎖可変融合体（ｓｃＦｖ）として提示され得る。ｓｃＦｖは、Ａｇａ１ｐとのジスルフィド結合を介して酵母細胞壁に結合している酵母アグルチニンタンパク質Ａｇａ２ｐの接着サブユニットに融合する。Ａｇａ２ｐを介したタンパク質の提示は、細胞表面からタンパク質を突出させ、酵母細胞壁上の他の分子との相互作用の可能性を最小限にする。ライブラリーをスクリーニングしてアフィニティーまたは安定性が向上した抗体を選別するために、磁気分離及びフローサイトメトリーが用いられる。目的の可溶性抗原への結合は、ビオチン化抗原での酵母の標識、及び蛍光団に結合したストレプトアビジンなどの二次試薬によって判定される。抗体の表面発現の変動は、ｓｃＦｖに隣接するヘマグルチニンまたはｃ−Ｍｙｃエピトープタグのいずれかの免疫蛍光標識によって測定することができる。発現は提示されるタンパク質の安定性と相関することが分かっており、そのため、抗体は安定性及びアフィニティーの向上で選別することができる（例えば、Ｓｈｕｓｔａ  ｅｔ  ａｌ．，１９９９，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２９２：９４９−５６を参照）。酵母ディスプレイのさらなる利点は、提示されたタンパク質が真核酵母細胞の小胞体内でフォールディングされ、小胞体シャペロン及び品質管理機構を活用することである。成熟が完了したら、酵母の表面に提示されたままで抗体アフィニティーを都合よく「タイトレーション」することができ、各クローンの発現及び精製の必要性はなくなる。酵母表面ディスプレイの理論的限界は、他のディスプレイ法よりも機能的なライブラリーのサイズが小さくなる可能性があることであるが；最近のアプローチでは、酵母細胞の交配系を用いてサイズが１０１４と推定されるコンビナトリアル多様性が生み出されている（例えば、米国特許出願公開第２００３／０１８６３７４号；及びＢｌａｉｓｅ  ｅｔ  ａｌ．，２００４，Ｇｅｎｅ  ３４２：２１１−１８を参照）。
【０３７９】
リボソームディスプレイにおいて、無細胞系における選別のために抗体−リボソーム−ｍＲＮＡ（ＡＲＭ）複合体が生成される。抗体の特定のライブラリーをコードするＤＮＡライブラリーを、終止コドンを欠くスペーサー配列と遺伝的に融合させる。このスペーサー配列は、翻訳された場合にペプチジルｔＲＮＡと依然として結合したままであり、リボソームトンネルを占有し、そのため、目的のタンパク質がリボソームから突出してフォールディングすることを可能とする。結果として生じるｍＲＮＡ、リボソーム、及びタンパク質の複合体は、表面結合リガンドと結合することができ、リガンドでのアフィニティー捕捉による抗体及びそのコーディングｍＲＮＡの同時単離が可能になる。続いて、リボソーム結合ｍＲＮＡをｃＤＮＡへと逆転写し、続いて、変異誘発して次回の選別に用いることができる（例えば、Ｆｕｋｕｄａ  ｅｔ  ａｌ．，２００６，Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．３４：ｅ１２７を参照）。ｍＲＮＡディスプレイにおいて、ピューロマイシンをアダプター分子として用いて抗体とｍＲＮＡとの間の共有結合が確立される（Ｗｉｌｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，２００１，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９８：３７５０−５５）。
【０３８０】
これらの方法は完全にインビトロで行われるので、他の選別技術に勝る２つの主な利点がある。第１に、ライブラリーの多様性は、細菌細胞の形質転換効率によってではなく、試験管内に存在するリボソーム及び異なるｍＲＮＡ分子の数のみによって制限される。第２に、各回の選別の後に、例えば、非プルーフリーディングポリメラーゼによって容易にランダム変異を導入することができ、いかなる多様化段階の後にもライブラリーを形質転換してはならないからである。
【０３８１】
哺乳類細胞ディスプレイシステム（例えば、Ｂｏｗｅｒｓ  ｅｔ  ａｌ．，２０１１，Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ．１０８：２０４５５−６０を参照）において、予め再構成されたＤ（Ｊ）領域に接合した生殖細胞系配列Ｖ遺伝子セグメントに基づいて、ＩｇＧの完全ヒトライブラリーが構築される。重鎖及び軽鎖の全長Ｖ領域をヒト重鎖及び軽鎖定常領域と結合させ、哺乳類細胞株（例えばＨＥＫ２９３）中に形質移入する。形質移入したライブラリーを増殖させ、ストレプトアビジン（ＳＡ）結合磁気ビーズに対して複数回のネガティブセレクションを行い、その後、ビオチン化標的タンパク質、ペプチド断片、またはエピトープでコーティングしたＳＡ結合磁気ビーズに対してポジティブセレクションを１回行う。ポジティブセレクションされた細胞を増殖させ、その後、数回のＦＡＣＳによってソーティングして、標的タンパク質、ペプチド断片、またはエピトープに特異的に結合する抗体を提示する単細胞クローンを単離する。これらの単細胞クローンからの重鎖及び軽鎖ペアはさらなる成熟のためにＡＩＤで再形質移入する。ＡＩＤ誘発性体細胞超変異と組み合わせた複数回の哺乳類細胞ディスプレイにより、高特異性高アフィニティー抗体が生成される。
【０３８２】
多様性は、標的を定めて、またはランダム導入によって、抗体ライブラリーのＣＤＲまたはＶ遺伝子全体に導入することができる。前者のアプローチとしては、高レベルもしくは低レベルの変異誘発によって抗体のＣＤＲのすべてを逐次的な標的化、または体細胞超変異の孤立したホットスポット（例えば、Ｈｏ  ｅｔ  ａｌ．，２００５，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２８０：６０７−１７を参照）、もしくは実験に基づいて、もしくは構造上の理由からアフィニティーに影響を及ぼすと疑われる残基の標的化が挙げられる。具体的な実施形態において、体細胞超変異は、例えば、ＳＨＭ−ＸＥＬ（商標）プラットフォーム（ＡｎａｐｔｙｓＢｉｏ，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）を用いて、ＡＩＤ誘発性体細胞超変異によって実施される。ランダム変異は、Ｅ．  ｃｏｌｉミューテーター株、ＤＮＡポリメラーゼによる誤りがちな複製（例えば、Ｈａｗｋｉｎｓ  ｅｔ  ａｌ．，１９９２，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２６：８８９−９６を参照）、またはＲＮＡレプリカーゼを用いて、Ｖ遺伝子全体にわたって導入することができる。多様性は、ＤＮＡシャフリングまたは類似の技術による天然で多様性の領域の置換によっても導入され得る（例えば、Ｌｕ  ｅｔ  ａｌ．，２００３，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７８：４３４９６−５０７；米国特許第５，５６５，３３２号及び６，９８９，２５０号を参照）。代替的な技術では、フレームワーク領域残基に伸びる超可変ループを標的とするか（例えば、Ｂｏｎｄ  ｅｔ  ａｌ．，２００５，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．３４８：６９９−７０９を参照）、ＣＤＲ中のループ欠失及び挿入を採用するか、またはハイブリダイゼーションベースの多様化を用いる（例えば、米国特許出願公開第２００４／０００５７０９号を参照）。ＣＤＲにおける多様性を生じさせるさらなる方法が、例えば、米国特許第７，９８５，８４０号に開示されている。抗体ライブラリー及び／または抗体アフィニティー成熟を得るために用いることのできるさらなる方法は、例えば、米国特許第８，６８５，８９７号及び８，６０３，９３０号、ならびに米国特許出願公開第２０１４／０１７０７０５号、２０１４／００９４３９２号、２０１２／００２８３０１号、２０１１／０１８３８５５号、及び２００９／００７５３７８号に開示されており、それぞれ参照により本明細書に援用する。
【０３８３】
ライブラリーのスクリーニングは当該技術分野において公知の様々な技術によって達成することができる。例えば、ＰＤ−１を、固体支持体、カラム、ピン、またはセルロース／ポリ（フッ化ビニリデン）膜／他のフィルター上に固定化することができるか、吸着プレートに付着させた、もしくは細胞ソーティングに用いられる宿主細胞上で発現させることができるか、もしくはストレプトアビジン被覆ビーズでの捕捉のためにビオチンと結合させることができるか、またはディスプレイライブラリーをパニングする任意の他の方法において用いることができる。
【０３８４】
インビトロアフィニティー成熟法の総説については、例えば、Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍ，２００５，Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ２３：１１０５−１６；Ｑｕｉｒｏｚ  ａｎｄ  Ｓｉｎｃｌａｉｒ，２０１０，Ｒｅｖｉｓｔａ  Ｉｎｇｅｎｅｒｉａ  Ｂｉｏｍｅｄｉａ  ４：３９  ５１；及びこれらの中の参考文献を参照。
【０３８５】
４．３．２．２抗ＰＤ−１抗体の修飾
抗ＰＤ−１抗体の共有結合性修飾が本開示の範囲内に含まれる。共有結合性修飾としては、抗ＰＤ−１抗体の標的アミノ酸残基を、抗ＰＤ−１抗体の選択された側鎖またはＮもしくはＣ末端残基と反応することのできる有機誘導体化剤と反応させることが挙げられる。他の修飾としては、グルタミニル及びアスパラギニル残基の、それぞれ対応するグルタミル及びアスパルチル残基への脱アミド化、プロリン及びリシンのヒドロキシル化、セリルまたはスレオニル残基のヒドロキシル基のリン酸化、リシン、アルギニン及びヒスチジン側鎖のα−アミノ基のメチル化（例えば、Ｃｒｅｉｇｈｔｏｎ，Ｐｒｏｔｅｉｎｓ：Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ  ａｎｄ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ  ７９−８６（１９８３）を参照）、Ｎ末端アミンのアセチル化、ならびにいずれかのＣ末端カルボキシル基のアミド化が挙げられる。
【０３８６】
本開示の範囲内に含まれる抗ＰＤ−１抗体の他の種類の共有結合性修飾としては、抗体またはポリペプチドの天然グリコシル化パターンを変更すること（例えば、Ｂｅｃｋ  ｅｔ  ａｌ．，２００８，Ｃｕｒｒ．Ｐｈａｒｍ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．９：４８２−５０１；及びＷａｌｓｈ，２０１０，Ｄｒｕｇ  Ｄｉｓｃｏｖ．Ｔｏｄａｙ  １５：７７３−８０を参照）、ならびに例えば、米国特許第４，６４０，８３５号；４，４９６，６８９号；４，３０１，１４４号；４，６７０，４１７号；４，７９１，１９２号；または４，１７９，３３７号に記載されているように抗体を様々な非タンパク質性ポリマー、例えば、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、ポリプロピレングリコール、またはポリオキシアルキレンの１つに連結させることが挙げられる。
【０３８７】
本開示の抗ＰＤ−１抗体は、別の異種ポリペプチドまたはアミノ酸配列、例えばエピトープタグ（例えば、Ｔｅｒｐｅ，２００３，Ａｐｐｌ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．６０：５２３−３３を参照）またはＩｇＧ分子のＦｃ領域（例えば、Ａｒｕｆｆｏ，Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｆｕｓｉｏｎ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ２２１−４２（Ｃｈａｍｏｗ  ａｎｄ  Ａｓｈｋｅｎａｚｉ  ｅｄｓ．，１９９９）を参照）と融合した抗ＰＤ−１抗体を含むキメラ分子を形成するためにも修飾され得る。
【０３８８】
本明細書では、ＰＤ−１抗原に結合する本明細書で提供する抗体及び異種ポリペプチドを含む融合タンパク質も提供する。いくつかの実施形態において、抗体が融合される異種ポリペプチドは、細胞表面発現ＰＤ−１を有する細胞へ抗体を標的化するために有用である。
【０３８９】
本明細書ではＰＤ−１抗原に結合する抗体のパネルも提供する。具体的な実施形態において、抗体のパネルは、異なる会合速度、異なる解離速度、ＰＤ−１抗原に対する異なるアフィニティー、及び／またはＰＤ−１抗原に対する異なる特異性を有する。いくつかの実施形態において、パネルは、約１０、約２５、約５０、約７５、約１００、約１２５、約１５０、約１７５、約２００、約２５０、約３００、約３５０、約４００、約４５０、約５００、約５５０、約６００、約６５０、約７００、約７５０、約８００、約８５０、約９００、約９５０、もしくは約１０００個またはこれより多くの抗体を含むかまたはそれからなる。抗体のパネルは、例えば、ＥＬＩＳＡなどのアッセイのために、９６ウェルまたは３８４ウェルプレート中で用いることができる。
【０３９０】
４．３．３抗ＰＤ−１抗体の調製
抗ＰＤ−１抗体は、抗ＰＤ−１抗体をコードする核酸を含むベクターで形質転換または形質移入した細胞を培養することによって産生され得る。本開示の抗体のポリペプチドコンポーネントをコードするポリヌクレオチド配列は、標準的な組換え技術を用いて得ることができる。所望のポリヌクレオチド配列は、ハイブリドーマ細胞などの抗体産生細胞から単離及び配列決定され得る。代替的に、ポリヌクレオチドは、ヌクレオチド合成機またはＰＣＲ技法を用いて合成され得る。ポリペプチドをコードする配列が得られたら、宿主細胞内で異種ポリヌクレオチドを複製及び発現することができる組換えベクター中に挿入される。当該技術分野において入手可能であり公知である多くのベクターを本開示の目的に用いることができる。適切なベクターの選択は、ベクターに挿入される核酸の大きさ及びベクターで形質転換される特定の宿主細胞に主に依存する。本開示の抗体を発現させるのに適した宿主細胞としては、グラム陰性またはグラム陽性生物をはじめとする古細菌及び真正細菌などの原核生物、糸状菌または酵母などの真核微生物、昆虫細胞などの無脊椎動物細胞または植物細胞、ならびに哺乳類宿主細胞株などの脊椎動物細胞が挙げられる。宿主細胞を上記の発現ベクターによって形質転換させて、プロモーターを誘導するために、形質転換体を選別するために、または所望の配列をコードする遺伝子を増幅するために適宜改変された従来の栄養培地中で培養する。宿主細胞によって産生された抗体は、当該技術分野において公知の標準的なタンパク質精製法を用いて精製される。
【０３９１】
ベクター構築、発現、及び精製を含めた抗体産生方法は、Ｐｌｕｃｋｔｈｕｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ：Ｐｒｏｄｕｃｉｎｇ  ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ｉｎ  Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ：Ｆｒｏｍ  ＰＣＲ  ｔｏ  ｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎ  ２０３−５２（ＭｃＣａｆｆｅｒｔｙ  ｅｔ  ａｌ．ｅｄｓ．，１９９６）；Ｋｗｏｎｇ  ａｎｄ  Ｒａｄｅｒ，Ｅ．ｃｏｌｉ  Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ａｎｄ  Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｆａｂ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｆｒａｇｍｅｎｔｓ，ｉｎ  Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｓｃｉｅｎｃｅ（２００９）；Ｔａｃｈｉｂａｎａ  ａｎｄ  Ｔａｋｅｋｏｓｈｉ，Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ  ｏｆ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｆａｂ  Ｆｒａｇｍｅｎｔｓ  ｉｎ  Ｅｓｃｈｅｒｉｓｃｈｉａ  ｃｏｌｉ，ｉｎ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ａｎｄ  Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ（Ａｌ−Ｒｕｂｅａｉ  ｅｄ．，２０１１）；及びＴｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ｆｒｏｍ  Ｂｅｎｃｈ  ｔｏ  Ｃｌｉｎｉｃ（Ａｎ  ｅｄ．，２００９）にさらに記載されている。
【０３９２】
当然、抗ＰＤ−１抗体の調製のために、当該技術分野において公知の代替的方法が用いられ得ることを企図する。例えば、適切なアミノ酸配列またはその部分は、固相法を用いた直接ペプチド合成によって生成され得る（例えば、Ｓｔｅｗａｒｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｏｌｉｄ−Ｐｈａｓｅ  Ｐｅｐｔｉｄｅ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ（１９６９）；及びＭｅｒｒｉｆｉｅｌｄ，１９６３，Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．８５：２１４９−５４を参照）。インビトロタンパク質合成は、手作業の技術を用いて、または自動化によって実施され得る。抗ＰＤ−１抗体の様々な部分が、別々に化学合成され、化学的または酵素的な方法を用いて結合させて、所望の抗ＰＤ−１抗体が生成され得る。あるいは、抗体は、例えば、米国特許第５，５４５，８０７号及び５，８２７，６９０号に開示されているように、抗体を発現するように組換えられた遺伝子導入動物の細胞、または体液、例えば乳などから精製され得る。
【０３９３】
４．３．４イムノコンジュゲート
本開示は、合成リンカーによって１つ以上の非抗体作用物質に共有結合した本開示の抗ＰＤ−１抗体のいずれか１つを含むコンジュゲートも提供する。
【０３９４】
いくつかの実施形態において、本明細書で提供する抗体は、例えば、診断または検出可能な分子に結合または組換え融合している。結合または組換え融合した抗体は、例えば、ＰＤ−１媒介疾患の発症、発生、進行及び／または重症度を監視または予後予測するのに有用であり得る。
【０３９５】
そのような診断及び検出は、例えば、限定はしないが、様々な酵素、例えば限定はしないがホースラディッシュパーオキシダーゼ、アルカリホスファターゼ、β−ガラクトシダーゼ、またはアセチルコリンエステラーゼなど；補欠分子族、例えば限定はしないがストレプトアビジン／ビオチンまたはアビジン／ビオチンなど；蛍光材料、例えば限定はしないがウンベリフェロン、フルオレセイン、フルオレセインイソチオシネート（ｉｓｏｔｈｉｏｃｙｎａｔｅ）、ローダミン、ジクロロトリアジニルアミンフルオレセイン、塩化ダンシル、またはフィコエリスリンなど；発光材料、例えば限定はしないがルミノールなど；生物発光材料、例えば限定はしないがルシフェラーゼ、ルシフェリン、またはエクオリンなど；化学発光材料、例えば限定はしないがアクリジニウム系化合物またはＨＡＬＯＴＡＧなど；放射性材料、例えば限定はしないがヨウ素（１３１Ｉ、１２５Ｉ、１２３Ｉ、及び１２１Ｉ）、炭素（１４Ｃ）、硫黄（３５Ｓ）、トリチウム（３Ｈ）、インジウム（１１５Ｉｎ、１１３Ｉｎ、１１２Ｉｎ、及び１１１Ｉｎ）、テクネチウム（９９Ｔｃ）、タリウム（２０１Ｔｉ）、ガリウム（６８Ｇａ及び６７Ｇａ）、パラジウム（１０３Ｐｄ）、モリブデン（９９Ｍｏ）、キセノン（１３３Ｘｅ）、フッ素（１８Ｆ）、１５３Ｓｍ、１７７Ｌｕ、１５９Ｇｄ、１４９Ｐｍ、１４０Ｌａ、１７５Ｙｂ、１６６Ｈｏ、９０Ｙ、４７Ｓｃ、１８６Ｒｅ、１８８Ｒｅ、１４２Ｐｒ、１０５Ｒｈ、９７Ｒｕ、６８Ｇｅ、５７Ｃｏ、６５Ｚｎ、８５Ｓｒ、３２Ｐ、１５３Ｇｄ、１６９Ｙｂ、５１Ｃｒ、５４Ｍｎ、７５Ｓｅ、１１３Ｓｎ、または１１７Ｓｎなど；様々な陽電子放出断層撮影を用いる陽電子放出金属；ならびに非放射性常磁性金属イオンをはじめとする、検出可能な物質に抗体をカップリングすることによって達成することができる。
【０３９６】
本明細書では、異種タンパク質もしくはポリペプチドに（またはその断片、例えば、約１０、約２０、約３０、約４０、約５０、約６０、約７０、約８０、約９０、または約１００アミノ酸のポリペプチドに）組換え融合または化学的に結合（共有結合性もしくは非共有結合性コンジュゲーション）して融合タンパク質を生成している抗体、ならびにその使用も提供する。特に、本明細書では、本明細書で提供する抗体の抗原結合断片（例えば、Ｆａｂ断片、Ｆｃ断片、Ｆｖ断片、Ｆ（ａｂ）２断片、ＶＨドメイン、ＶＨ  ＣＤＲ、ＶＬドメイン、またはＶＬ  ＣＤＲ）及び異種タンパク質、ポリペプチド、またはペプチドを含む融合タンパク質を提供する。一実施形態において、抗体が融合している異種タンパク質、ポリペプチド、またはペプチドは、特定の細胞型、例えば、ＰＤ−１を発現する細胞などへ抗体を標的化するのに有用である。例えば、特定の細胞型によって発現された細胞表面受容体に結合する抗体が、本明細書で提供する改変抗体に融合または結合され得る。
【０３９７】
さらに、本明細書で提供する抗体は、精製を容易にするためにマーカーまたは「タグ」配列、例えばペプチドなどと融合することができる。具体的な実施形態において、マーカーまたはタグアミノ酸配列は、ヘキサヒスチジンペプチド、例えば、中でも、ｐＱＥベクター（例えば、ＱＩＡＧＥＮ，Ｉｎｃ．を参照）で提供されるタグなどであり、これらの多くが市販されている。例えば、Ｇｅｎｔｚ  ｅｔ  ａｌ．，１９８９，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８６：８２１−２４に記載されているように、ヘキサヒスチジンは融合タンパク質の好都合な精製をもたらす。精製に有用な他のペプチドタグとしては、インフルエンザヘマグルチニンタンパク質に由来するエピトープに対応するヘマグルチニン（「ＨＡ」）タグ（Ｗｉｌｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９８４，Ｃｅｌｌ  ３７：７６７−７８）、及び「ＦＬＡＧ」タグが挙げられるがこれらに限定されない。
【０３９８】
抗体に部分（ポリペプチドを含む）を融合または結合させる方法は公知である（例えば、Ａｒｎｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ｆｏｒ  Ｉｍｍｕｎｏｔａｒｇｅｔｉｎｇ  ｏｆ  Ｄｒｕｇｓ  ｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｈｅｒａｐｙ，ｉｎ  Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ａｎｄ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｈｅｒａｐｙ  ２４３−５６（Ｒｅｉｓｆｅｌｄ  ｅｔ  ａｌ．ｅｄｓ．，１９８５）；Ｈｅｌｌｓｔｒｏｍ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ｆｏｒ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ，ｉｎ  Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  ６２３−５３（Ｒｏｂｉｎｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．ｅｄｓ．，２ｄ  ｅｄ．１９８７）；Ｔｈｏｒｐｅ，Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｃａｒｒｉｅｒｓ  ｏｆ  Ｃｙｔｏｔｏｘｉｃ  Ａｇｅｎｔｓ  ｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｈｅｒａｐｙ：Ａ  Ｒｅｖｉｅｗ，ｉｎ  Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  ａｎｄ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ  ４７５−５０６（Ｐｉｎｃｈｅｒａ  ｅｔ  ａｌ．ｅｄｓ．，１９８５）；Ａｎａｌｙｓｉｓ，Ｒｅｓｕｌｔｓ，ａｎｄ  Ｆｕｔｕｒｅ  Ｐｒｏｓｐｅｃｔｉｖｅ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  Ｕｓｅ  ｏｆ  Ｒａｄｉｏｌａｂｅｌｅｄ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ  ｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｈｅｒａｐｙ，ｉｎ  Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ｆｏｒ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｔｈｅｒａｐｙ  ３０３−１６（Ｂａｌｄｗｉｎ  ｅｔ  ａｌ．ｅｄｓ．，１９８５）；Ｔｈｏｒｐｅ  ｅｔ  ａｌ．，１９８２，Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｒｅｖ．６２：１１９−５８；米国特許第５，３３６，６０３号；５，６２２，９２９号；５，３５９，０４６号；５，３４９，０５３号；５，４４７，８５１号；５，７２３，１２５号；５，７８３，１８１号；５，９０８，６２６号；５，８４４，０９５号；及び５，１１２，９４６号；ＥＰ  ３０７，４３４；ＥＰ  ３６７，１６６；ＥＰ  ３９４，８２７；ＰＣＴ公開ＷＯ  ９１／０６５７０、ＷＯ  ９６／０４３８８、ＷＯ  ９６／２２０２４、ＷＯ  ９７／３４６３１、及びＷＯ  ９９／０４８１３；  Ａｓｈｋｅｎａｚｉ  ｅｔ  ａｌ．，１９９１，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８８：１０５３５−３９；Ｔｒａｕｎｅｃｋｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，１９８８，Ｎａｔｕｒｅ，３３１：８４−８６；Ｚｈｅｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，１９９５，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５４：５５９０−６００；ならびにＶｉｌ  ｅｔ  ａｌ．，１９９２，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８９：１１３３７−４１を参照）。
【０３９９】
融合タンパク質は、例えば、遺伝子シャッフリング、モチーフシャッフリング、エキソンシャッフリング、及び／またはコドンシャッフリング（「ＤＮＡシャフリング」と総称される）の技術によって生成され得る。例えば、より高い親和性及びより低い解離速度を有する抗体をはじめとする、本明細書で提供する抗ＰＤ−１抗体の活性を変更するために、ＤＮＡシャフリングが用いられ得る（例えば、米国特許第５，６０５，７９３号；５，８１１，２３８号；５，８３０，７２１号；５，８３４，２５２号；及び５，８３７，４５８号；Ｐａｔｔｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９９７，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎｉｏｎ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．８：７２４−３３；Ｈａｒａｙａｍａ，１９９８，Ｔｒｅｎｄｓ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．１６（２）：７６−８２；Ｈａｎｓｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９９９，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２８７：２６５−７６；ならびにＬｏｒｅｎｚｏ  ａｎｄ  Ｂｌａｓｃｏ，１９９８，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ  ２４（２）：３０８−１３を参照）。抗体、またはコードされた抗体は、組換え前に誤りがちなＰＣＲ、ランダムヌクレオチド挿入、または他の方法によるランダム変異誘発を行うことによって改変され得る。本明細書で提供する抗体をコードするポリヌクレオチドは、１つ以上の異種分子の１つ以上のコンポーネント、モチーフ、セクション、部分、ドメイン、断片などで組換えられ得る。
【０４００】
本明細書で提供する抗体は、例えば、米国特許第４，６７６，９８０号に記載されているように、抗体ヘテロコンジュゲートを形成するために第２の抗体に結合させることもできる。
【０４０１】
本明細書で提供するＰＤ−１抗原に結合する抗体は、固体支持体に付着させる場合もあり、これは、標的抗原のイムノアッセイまたは精製に特に有用である。そのような固体支持体としては、ガラス、セルロース、ポリアクリルアミド、ナイロン、ポリスチレン、ポリ塩化ビニル、またはポリプロピレンが挙げられるがこれらに限定されない。
【０４０２】
リンカーは、結合させた作用物質の細胞内での放出を容易にする「切断可能リンカー」であり得るが、切断不能リンカーも本明細書において企図する。本開示のコンジュゲートに用いるためのリンカーとしては、限定はしないが、酸不安定性リンカー（例えば、ヒドラゾンリンカー）、ジスルフィド含有リンカー、ペプチダーゼ感受性リンカー（例えば、アミノ酸、例えば、バリン及び／またはシトルリンを含むペプチドリンカー、例えば、シトルリン−バリンまたはフェニルアラニン−リシン）、光不安定性リンカー、ジメチルリンカー（例えば、Ｃｈａｒｉ  ｅｔ  ａｌ．，１９９２，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．５２：１２７−３１；及び米国特許第５，２０８，０２０号を参照）、チオエーテルリンカー、または多剤トランスポーター媒介性耐性を回避するように設計された親水性リンカー（例えば、Ｋｏｖｔｕｎ  ｅｔ  ａｌ．，２０１０，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．７０：２５２８−３７を参照）が挙げられる。
【０４０３】
抗体及び作用物質のコンジュゲートは、様々な二官能性タンパク質カップリング剤、例えば、ＢＭＰＳ、ＥＭＣＳ、ＧＭＢＳ、ＨＢＶＳ、ＬＣ−ＳＭＣＣ、ＭＢＳ、ＭＰＢＨ、ＳＢＡＰ、ＳＩＡ、ＳＩＡＢ、ＳＭＣＣ、ＳＭＰＢ、ＳＭＰＨ、スルホ−ＥＭＣＳ、スルホ−ＧＭＢＳ、スルホ−ＫＭＵＳ、スルホ−ＭＢＳ、スルホ−ＳＩＡＢ、スルホ−ＳＭＣＣ、スルホ−ＳＭＰＢ、及びＳＶＳＢ（スクシンイミジル−（４−ビニルスルホン）ベンゾエート））などを用いて作製され得る。本開示は、抗体及び作用物質のコンジュゲートが、当該技術分野において開示されている任意の好適な方法を用いて調製され得ることをさらに企図する（例えば、Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ  Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ（Ｈｅｒｍａｎｓｏｎ  ｅｄ．，２ｄ  ｅｄ．２００８）を参照）。
【０４０４】
従来の抗体及び作用物質のコンジュゲーション戦略は、Ｌｙｓ残基のε−アミノ基またはＣｙｓ残基のチオール基が関与するランダムコンジュゲーション化学に基づいており、結果として不均質なコンジュゲートが得られていた。最近開発された技術は抗体への部位特異的コンジュゲーションを可能にし、その結果、均質な担持及び抗原結合性または薬物動態が変化したコンジュゲート部分集団の回避がもたらされる。これらとしては、重鎖及び軽鎖上の位置における、反応性チオール基を付与し、かつ、免疫グロブリンのフォールディング及び会合を妨害しない、または抗原結合を変化させないシステイン置換を含む「チオマブ」の設計が挙げられる（例えば、Ｊｕｎｕｔｕｌａ  ｅｔ  ａｌ．，２００８，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈ．３３２：  ４１−５２；及びＪｕｎｕｔｕｌａ  ｅｔ  ａｌ．，２００８，Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２６：９２５−３２を参照）。別の方法では、終止コドンＵＧＡを終了からセレノシステイン挿入へと再コード化することによって、抗体配列中にセレノシステインを共翻訳的に挿入し、他の天然アミノ酸の存在下でセレノシステインの求核性セレノール基における部位特異的共有結合性コンジュゲーションを可能にさせる（例えば、Ｈｏｆｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，２００８，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  １０５：１２４５１−５６；及びＨｏｆｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，２００９，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ４８（５０）：１２０４７−５７を参照）。
【０４０５】
４．４抗体及び組成物の使用方法
本明細書では、（ａ）Ｔ細胞活性を減衰させる、及び／または（ｂ）対象におけるＰＤ−１発現を下方調節する方法を提供する。ある実施形態において、本明細書で提供する方法は対象の細胞におけるＰＤ−１発現を下方調節する。ある実施形態において、本明細書で提供する方法は対象におけるＴ細胞活性を減衰させる。Ｔ細胞活性の非限定例はサイトカインの分泌である。ある実施形態において、本明細書では、サイトカインの分泌を阻害する方法を提供する。ある実施形態において、サイトカインは、ＩＬ−１、ＩＬ−２、ＩＬ−６、ＩＬ−１２、ＩＬ−１７、ＩＬ−２２、ＩＬ−２３、ＧＭ−ＣＳＦ、ＩＦＮ−γ、及びＴＮＦ−αからなる群から選択される。いくつかの実施形態において、サイトカインは、ＩＬ−２、ＩＬ−１７、ＩＦＮ−γ、またはこれらの任意の組合せである。ある実施形態において、サイトカインはＩＬ−２である。他の実施形態において、サイトカインはＩＬ−１７である。さらに他の実施形態において、サイトカインはＩＦＮ−γである。ある実施形態において、サイトカインはＩＬ−２及びＩＬ−１７である。いくつかの実施形態において、サイトカインはＩＬ−２及びＩＦＮ−γである。さらに他の実施形態において、サイトカインはＩＬ−１７及びＩＦＮ−γである。さらに他の実施形態において、サイトカインはＩＬ−２、ＩＬ−１７、及びＩＦＮ−γである。ある実施形態において、サイトカインはＩＬ−１である。他の実施形態において、サイトカインはＩＬ−６である。さらに他の実施形態において、サイトカインはＩＬ−１２である。さらに他の実施形態において、サイトカインはＩＬ−２２である。ある実施形態において、サイトカインはＩＬ−２３である。いくつかの実施形態において、サイトカインはＧＭ−ＣＳＦである。他の実施形態において、サイトカインはＴＮＦ−αである。上述のサイトカインの２つ、３つまたはこれより多くの他の組合せも企図する。
【０４０６】
一実施形態において、本明細書では、ＩＬ−２の分泌を阻害する方法を提供する。いくつかの実施形態において、本明細書では、ＩＬ−１７の分泌を阻害する方法を提供する。さらに別の実施形態において、Ｔ細胞活性を減衰させる方法はＩＦＮ−γの分泌を阻害する方法である。
【０４０７】
一態様において、本明細書では、Ｔ細胞を有効量の本明細書で提供する抗体またはその抗原結合断片と接触させることを含むＴ細胞の活性の減衰方法を提供する。他の実施形態において、Ｔ細胞活性の最大減衰率は少なくとも約１０％である。別の実施形態において、Ｔ細胞活性の最大減衰率は少なくとも約２０％である。いくつかの実施形態において、Ｔ細胞活性の最大減衰率は少なくとも約３０％である。一実施形態において、Ｔ細胞活性の最大減衰率は少なくとも約４０％である。別の実施形態において、Ｔ細胞活性の最大減衰率は少なくとも約４５％である。他の実施形態において、Ｔ細胞活性の最大減衰率は少なくとも約５０％である。一実施形態において、Ｔ細胞活性の最大減衰率は少なくとも約５５％である。別の実施形態において、Ｔ細胞活性の最大減衰率は少なくとも約６０％である。いくつかの実施形態において、Ｔ細胞活性の最大減衰率は少なくとも約６５％である。他の実施形態において、Ｔ細胞活性の最大減衰率は少なくとも約７０％である。別の実施形態において、Ｔ細胞活性の最大減衰率は少なくとも約７５％である。一実施形態において、Ｔ細胞活性の最大減衰率は少なくとも約８０％である。他の実施形態において、Ｔ細胞活性の最大減衰率は少なくとも約８５％である。別の実施形態において、Ｔ細胞活性の最大減衰率は少なくとも約９０％である。一実施形態において、Ｔ細胞活性の最大減衰率は少なくとも約９５％である。いくつかの実施形態において、Ｔ細胞活性の最大減衰率は少なくとも約１００％である。
【０４０８】
いくつかの実施形態において、Ｔ細胞活性の減衰はサイトカインの産生の調節によって測定される。いくつかの実施形態において、Ｔ細胞活性の減衰はサイトカインの分泌の調節によって測定される。いくつかの実施形態において、Ｔ細胞活性の減衰はサイトカインの発現の調節によって測定される。いくつかの実施形態において、Ｔ細胞活性の減衰はサイトカインの産生の阻害によって測定される。いくつかの実施形態において、Ｔ細胞活性の減衰はサイトカインの分泌の阻害によって測定される。いくつかの実施形態において、Ｔ細胞活性の減衰はサイトカインの発現の阻害によって測定される。ある実施形態において、サイトカイン産生（例えば、サイトカインタンパク質産生）が調節される。ある実施形態において、サイトカイン分泌（例えば、サイトカインタンパク質分泌）が調節される。他の実施形態において、サイトカイン発現（例えば、サイトカイン遺伝子発現）が調節される。いくつかの実施形態において、調節はサイトカインの減少、阻害、または下方調節である。他の実施形態において、調節はサイトカインの増加または上方調節である。ある実施形態において、サイトカイン産生（例えば、サイトカインタンパク質産生）が阻害される。ある実施形態において、サイトカイン分泌（例えば、サイトカインタンパク質分泌）が阻害される。他の実施形態において、サイトカイン発現（例えば、サイトカイン遺伝子発現）が阻害される。ある実施形態において、細胞からのサイトカイン産生が調節される。ある実施形態において、細胞からのサイトカイン分泌が調節される。ある実施形態において、細胞からのサイトカイン発現が調節される。ある実施形態において、細胞からのサイトカイン産生が阻害される。ある実施形態において、細胞からのサイトカイン分泌が阻害される。ある実施形態において、細胞からのサイトカイン発現が阻害される。ある実施形態において、細胞はＴ細胞である。いくつかの実施形態において、細胞はＴ細胞でない。
【０４０９】
いくつかの実施形態において、サイトカインは、ＩＬ−２、ＩＬ−１７、ＩＦＮ−γ、またはこれらの任意の組合せからなる群から選択される。一実施形態において、サイトカインはＩＬ−２である。別の実施形態において、サイトカインはＩＬ−１７である。他の実施形態において、サイトカインはＩＦＮ−γである。いくつかの実施形態において、サイトカインはＩＬ−２及びＩＬ−１７である。いくつかの実施形態において、サイトカインはＩＬ−２及びＩＦＮ−γである。他の実施形態において、サイトカインはＩＬ−１７及びＩＦＮ−γである。ある実施形態において、サイトカインはＩＬ−２、ＩＬ−１７、及びＩＦＮ−γである。ある実施形態において、サイトカインは、ＩＬ−１、ＩＬ−２、ＩＬ−６、ＩＬ−１２、ＩＬ−１７、ＩＬ−２２、ＩＬ−２３、ＧＭ−ＣＳＦ、ＩＦＮ−γ、及びＴＮＦ−αからなる群から選択される。ある実施形態において、サイトカインはＩＬ−１である。他の実施形態において、サイトカインはＩＬ−６である。さらに他の実施形態において、サイトカインはＩＬ−１２である。さらに他の実施形態において、サイトカインはＩＬ−２２である。ある実施形態において、サイトカインはＩＬ−２３である。いくつかの実施形態において、サイトカインはＧＭ−ＣＳＦである。他の実施形態において、サイトカインはＴＮＦ−αである。上述のサイトカインの２つ、３つまたはこれより多くの他の組合せも企図する。
【０４１０】
いくつかの実施形態において、サイトカイン産生の阻害は、Ｔ細胞の表面上のＰＤ−１発現の下方調節と同時に生じる。いくつかの実施形態において、サイトカイン産生の阻害の前に、Ｔ細胞の表面上のＰＤ−１発現の下方調節が生じる。いくつかの実施形態において、サイトカイン産生の阻害は、Ｔ細胞の表面上のＰＤ−１発現の下方調節に先行する。一実施形態において、Ｔ細胞の表面上のＰＤ−１発現の下方調節は、早ければ抗体またはその抗原結合断片との接触の４時間後にでも生じる。
【０４１１】
一態様において、本明細書では、本明細書で提供するＰＤ−１に特異的に結合する抗体と細胞を接触させることを含む、細胞におけるＰＤ−１活性及び／または発現の調節方法を提供する。具体的な実施形態において、細胞はＴ細胞である。ある実施形態において、本明細書に記載の有効量の抗体またはその抗原結合断片と細胞を接触させる。一実施形態において、ＰＤ−１活性が調節される。別の実施形態において、ＰＤ−１発現が調節される。他の実施形態において、ＰＤ−１活性及びＰＤ−１発現が両方とも調節される。一実施形態において、ＰＤ−１シグナル伝達が活性化される。別の実施形態において、ＰＤ−１発現が阻害される。ある実施形態において、抗体はＰＤ−１アゴニストである。ある実施形態において、本明細書で提供する抗体はヒトＰＤ−１に特異的に結合し、少なくとも１つのＰＤ−１活性を活性化させる（例えば部分的に活性化させる）、または別様に調節する。具体的な実施形態において、少なくとも１つのＰＤ−１活性はサイトカイン産生の阻害である。ある実施形態において、ＰＤ−１に特異的に結合する抗体は、ヒトＰＤ−１のＥＣＤ、またはそのヒトＰＤ−１のＥＣＤのエピトープに結合する。ある実施形態において、抗体は、ＰＤ−Ｌ１結合部位とは異なるヒトＰＤ−１のＥＣＤのエピトープに特異的に結合する。ある実施形態において、抗体は、ＰＤ−Ｌ２結合部位とは異なるヒトＰＤ−１のＥＣＤのエピトープに特異的に結合する。ある実施形態において、抗体は、ＰＤ−Ｌ１及びＰＤ−Ｌ２結合部位の両方と異なるヒトＰＤ−１のＥＣＤのエピトープに特異的に結合する。ある実施形態において、ＰＤ−１へのＰＤ−Ｌ１の結合は抗体によって阻害されない。他の実施形態において、ＰＤ−１へのＰＤ−Ｌ２の結合は抗体によって阻害されない。具体的な実施形態において、ＰＤ−１へのＰＤ−Ｌ１の結合もＰＤ−１へのＰＤ−Ｌ２の結合も抗体によって阻害されない。
【０４１２】
別の態様において、本明細書では、本明細書で提供するＰＤ−１に特異的に結合する抗体と細胞を接触させることを含む、細胞におけるＰＤ−１発現の下方調節方法を提供する。具体的な実施形態において、細胞はＴ細胞である。ある実施形態において、本明細書に記載の有効量の抗体またはその抗原結合断片と細胞を接触させる。ある実施形態において、抗体は本明細書で提供するＰＤ−１アゴニストである。ある実施形態において、抗体は、ＰＤ−Ｌ１結合部位とは異なるヒトＰＤ−１のＥＣＤのエピトープに特異的に結合する。ある実施形態において、抗体は、ＰＤ−Ｌ２結合部位とは異なるヒトＰＤ−１のＥＣＤのエピトープに特異的に結合する。ある実施形態において、抗体は、ＰＤ−Ｌ１及びＰＤ−Ｌ２結合部位の両方と異なるヒトＰＤ−１のＥＣＤのエピトープに特異的に結合する。ある実施形態において、ＰＤ−１へのＰＤ−Ｌ１の結合は抗体によって阻害されない。他の実施形態において、ＰＤ−１へのＰＤ−Ｌ２の結合は抗体によって阻害されない。具体的な実施形態において、ＰＤ−１へのＰＤ−Ｌ１の結合もＰＤ−１へのＰＤ−Ｌ２の結合も抗体によって阻害されない。
【０４１３】
別の態様において、本明細書では、本明細書で提供するＰＤ−１に特異的に結合する抗体と細胞を接触させることを含む、Ｔ細胞活性の減衰及び細胞におけるＰＤ−１発現の下方調節の方法を提供する。具体的な実施形態において、細胞はＴ細胞である。ある実施形態において、本明細書に記載の有効量の抗体またはその抗原結合断片と細胞を接触させる。ある実施形態において、Ｔ細胞活性の減衰はサイトカイン産生の阻害である。ある実施形態において、抗体は、ＰＤ−Ｌ１結合部位とは異なるヒトＰＤ−１のＥＣＤのエピトープに特異的に結合する。ある実施形態において、抗体は、ＰＤ−Ｌ２結合部位とは異なるヒトＰＤ−１のＥＣＤのエピトープに特異的に結合する。ある実施形態において、抗体は、ＰＤ−Ｌ１及びＰＤ−Ｌ２結合部位の両方と異なるヒトＰＤ−１のＥＣＤのエピトープに特異的に結合する。ある実施形態において、ＰＤ−１へのＰＤ−Ｌ１の結合は抗体によって阻害されない。他の実施形態において、ＰＤ−１へのＰＤ−Ｌ２の結合は抗体によって阻害されない。具体的な実施形態において、ＰＤ−１へのＰＤ−Ｌ１の結合もＰＤ−１へのＰＤ−Ｌ２の結合も抗体によって阻害されない。
【０４１４】
ＰＤ−１活性は、当該技術分野において公知または記載されているものなどのＰＤ−１の任意の活性に関係し得る。ＰＤ−１活性及びＰＤ−１シグナル伝達は本明細書において同じ意味で用いられる。ある態様において、ＰＤ−１活性は、ＰＤ−１に結合するＰＤ−１リガンド（例えば、ＰＤ−Ｌ１）によって誘発される。ＰＤ−１の発現レベルは、本明細書に記載または当業者にとって公知の方法（例えば、ウエスタンブロッティング、ＥＬＩＳＡ、免疫組織化学、またはフローサイトメトリー）によって評価することができる。
【０４１５】
本明細書では、本明細書で提供するＰＤ−１（例えば、ヒトＰＤ−１のＥＣＤまたはヒトＰＤ−１のＥＣＤのエピトープ）に特異的に結合する抗体と細胞を接触させることを含む、細胞におけるサイトカイン産生の阻害方法も提供する。具体的な実施形態において、細胞はＴ細胞である。ある実施形態において、本明細書に記載の有効量の抗体またはその抗原結合断片と細胞を接触させる。いくつかの実施形態において、抗体はヒトＰＤ−１のＥＣＤに結合する。いくつかの実施形態において、抗体はヒトＰＤ−１のＥＣＤのエピトープに結合する。ある実施形態において、抗体は、ＰＤ−Ｌ１結合部位とは異なるヒトＰＤ−１のＥＣＤのエピトープに特異的に結合する。ある実施形態において、抗体は、ＰＤ−Ｌ２結合部位とは異なるヒトＰＤ−１のＥＣＤのエピトープに特異的に結合する。ある実施形態において、抗体は、ＰＤ−Ｌ１及びＰＤ−Ｌ２結合部位の両方と異なるヒトＰＤ−１のＥＣＤのエピトープに特異的に結合する。ある実施形態において、ＰＤ−１へのＰＤ−Ｌ１の結合は抗体によって阻害されない。他の実施形態において、ＰＤ−１へのＰＤ−Ｌ２の結合は抗体によって阻害されない。具体的な実施形態において、ＰＤ−１へのＰＤ−Ｌ１の結合もＰＤ−１へのＰＤ−Ｌ２の結合も抗体によって阻害されない。
【０４１６】
本明細書では、本明細書で提供するＰＤ−１（例えば、ヒトＰＤ−１のＥＣＤまたはヒトＰＤ−１のＥＣＤのエピトープ）に特異的に結合する抗体と細胞を接触させることを含む、細胞におけるＰＤ−１シグナル伝達の活性化方法も提供する。具体的な実施形態において、細胞はＴ細胞である。ある実施形態において、本明細書に記載の有効量の抗体またはその抗原結合断片と細胞を接触させる。いくつかの実施形態において、抗体はヒトＰＤ−１のＥＣＤに結合する。いくつかの実施形態において、抗体はヒトＰＤ−１のＥＣＤのエピトープに結合する。ある実施形態において、抗体は、ＰＤ−Ｌ１結合部位とは異なるヒトＰＤ−１のＥＣＤのエピトープに特異的に結合する。ある実施形態において、抗体は、ＰＤ−Ｌ２結合部位とは異なるヒトＰＤ−１のＥＣＤのエピトープに特異的に結合する。ある実施形態において、抗体は、ＰＤ−Ｌ１及びＰＤ−Ｌ２結合部位の両方と異なるヒトＰＤ−１のＥＣＤのエピトープに特異的に結合する。ある実施形態において、ＰＤ−１へのＰＤ−Ｌ１の結合は抗体によって阻害されない。他の実施形態において、ＰＤ−１へのＰＤ−Ｌ２の結合は抗体によって阻害されない。具体的な実施形態において、ＰＤ−１へのＰＤ−Ｌ１の結合もＰＤ−１へのＰＤ−Ｌ２の結合も抗体によって阻害されない。一実施形態において、ＰＤ−１シグナル伝達が部分的に活性化される。
【０４１７】
一態様において、本明細書では、本明細書で提供するＰＤ−１（例えば、ヒトＰＤ−１のＥＣＤまたはヒトＰＤ−１のＥＣＤのエピトープ）に特異的に結合する抗体と細胞を接触させることを含む、Ｔ細胞活性の減衰方法を提供する。具体的な実施形態において、細胞はＴ細胞である。ある実施形態において、本明細書に記載の有効量の抗体またはその抗原結合断片と細胞を接触させる。いくつかの実施形態において、抗体はヒトＰＤ−１のＥＣＤに結合する。いくつかの実施形態において、抗体はヒトＰＤ−１のＥＣＤのエピトープに結合する。ある実施形態において、抗体は、ＰＤ−Ｌ１結合部位とは異なるヒトＰＤ−１のＥＣＤのエピトープに特異的に結合する。ある実施形態において、抗体は、ＰＤ−Ｌ２結合部位とは異なるヒトＰＤ−１のＥＣＤのエピトープに特異的に結合する。ある実施形態において、抗体は、ＰＤ−Ｌ１及びＰＤ−Ｌ２結合部位の両方と異なるヒトＰＤ−１のＥＣＤのエピトープに特異的に結合する。ある実施形態において、ＰＤ−１へのＰＤ−Ｌ１の結合は抗体によって阻害されない。他の実施形態において、ＰＤ−１へのＰＤ−Ｌ２の結合は抗体によって阻害されない。具体的な実施形態において、ＰＤ−１へのＰＤ−Ｌ１の結合もＰＤ−１へのＰＤ−Ｌ２の結合も抗体によって阻害されない。いくつかの実施形態において、Ｔ細胞活性は少なくとも約１０％減衰する。いくつかの実施形態において、Ｔ細胞活性は少なくとも約１５％減衰する。いくつかの実施形態において、Ｔ細胞活性は少なくとも約２０％減衰する。いくつかの実施形態において、Ｔ細胞活性は少なくとも約２５％減衰する。いくつかの実施形態において、Ｔ細胞活性は少なくとも約３０％減衰する。いくつかの実施形態において、Ｔ細胞活性は少なくとも約３５％減衰する。いくつかの実施形態において、Ｔ細胞活性は少なくとも約４０％減衰する。いくつかの実施形態において、Ｔ細胞活性は少なくとも約４５％減衰する。いくつかの実施形態において、Ｔ細胞活性は少なくとも約５０％減衰する。いくつかの実施形態において、Ｔ細胞活性は少なくとも約５５％減衰する。いくつかの実施形態において、Ｔ細胞活性は少なくとも約６０％減衰する。いくつかの実施形態において、Ｔ細胞活性は少なくとも約６５％減衰する。いくつかの実施形態において、Ｔ細胞活性は少なくとも約７０％減衰する。いくつかの実施形態において、Ｔ細胞活性は少なくとも約７５％減衰する。いくつかの実施形態において、Ｔ細胞活性は少なくとも約８０％減衰する。いくつかの実施形態において、Ｔ細胞活性は少なくとも約８５％減衰する。いくつかの実施形態において、Ｔ細胞活性は少なくとも約９０％減衰する。いくつかの実施形態において、Ｔ細胞活性は少なくとも約９５％減衰する。いくつかの実施形態において、Ｔ細胞活性は少なくとも約９８％減衰する。いくつかの実施形態において、Ｔ細胞活性は少なくとも約９９％減衰する。いくつかの実施形態において、Ｔ細胞活性は少なくとも約１００％減衰する。ある実施形態において、Ｔ細胞活性は少なくとも約２５％〜約６５％減衰する。具体的な実施形態において、Ｔ細胞活性減衰は本明細書に記載の方法によって評価される。いくつかの実施形態において、Ｔ細胞活性減衰は当業者にとって公知の方法によって評価される。ある実施形態において、Ｔ細胞活性減衰は、抗ＰＤ−１抗体と接触させていない細胞におけるＴ細胞活性に対してである。ある実施形態において、Ｔ細胞活性減衰は、非関連抗体（例えば、ＰＤ−１に特異的に結合しない抗体）と接触させたＴ細胞活性に対してである。
【０４１８】
Ｔ細胞活性の非限定例はサイトカインの分泌である。ある実施形態において、サイトカインは、ＩＬ−１、ＩＬ−２、ＩＬ−６、ＩＬ−１２、ＩＬ−１７、ＩＬ−２２、ＩＬ−２３、ＧＭ−ＣＳＦ、ＩＦＮ−γ、及びＴＮＦ−αからなる群から選択される。いくつかの実施形態において、サイトカインは、ＩＬ−２、ＩＬ−１７、ＩＦＮ−γ、またはこれらの任意の組合せである。ある実施形態において、サイトカインはＩＬ−２である。他の実施形態において、サイトカインはＩＬ−１７である。さらに他の実施形態において、サイトカインはＩＦＮ−γである。ある実施形態において、サイトカインはＩＬ−２及びＩＬ−１７である。いくつかの実施形態において、サイトカインはＩＬ−２及びＩＦＮ−γである。さらに他の実施形態において、サイトカインはＩＬ−１７及びＩＦＮ−γである。さらに他の実施形態において、サイトカインはＩＬ−２、ＩＬ−１７、及びＩＦＮ−γである。ある実施形態において、サイトカインはＩＬ−１である。他の実施形態において、サイトカインはＩＬ−６である。さらに他の実施形態において、サイトカインはＩＬ−１２である。さらに他の実施形態において、サイトカインはＩＬ−２２である。ある実施形態において、サイトカインはＩＬ−２３である。いくつかの実施形態において、サイトカインはＧＭ−ＣＳＦである。他の実施形態において、サイトカインはＴＮＦ−αである。上述のサイトカインの２つ、３つまたはこれより多くの他の組合せも企図する。
【０４１９】
ある実施形態において、サイトカイン産生の阻害の結果としてサイトカイン分泌が阻害される。他の実施形態において、サイトカイン発現の阻害の結果としてサイトカイン分泌が阻害される。
【０４２０】
具体的な実施形態において、本明細書では、本明細書で提供するＰＤ−１（例えば、ヒトＰＤ−１のＥＣＤまたはヒトＰＤ−１のＥＣＤのエピトープ）に特異的に結合する抗体と細胞を接触させることを含む、細胞からのサイトカイン分泌を阻害する方法を提供する。具体的な実施形態において、細胞はＴ細胞である。ある実施形態において、本明細書に記載の有効量の抗体またはその抗原結合断片と細胞を接触させる。ある実施形態において、抗体は、抗体ＰＤ１ＡＢ−１、ＰＤ１ＡＢ−２、ＰＤ１ＡＢ−３、ＰＤ１ＡＢ−４、ＰＤ１ＡＢ−５、もしくはＰＤ１ＡＢ−６の任意の１つもしくはその抗原結合断片、または抗体ＰＤ１ＡＢ−１、ＰＤ１ＡＢ−２、ＰＤ１ＡＢ−３、ＰＤ１ＡＢ−４、ＰＤ１ＡＢ−５、もしくはＰＤ１ＡＢ−６の任意の１つのＣＤＲを含む抗体である。ある実施形態において、サイトカインは、ＩＬ−１、ＩＬ−２、ＩＬ−６、ＩＬ−１２、ＩＬ−１７、ＩＬ−２２、ＩＬ−２３、ＧＭ−ＣＳＦ、ＩＦＮ−γ、及びＴＮＦ−αからなる群から選択される。いくつかの実施形態において、サイトカインは、ＩＬ−２、ＩＬ−１７、ＩＦＮ−γ、またはこれらの任意の組合せである。ある実施形態において、サイトカインはＩＬ−２である。他の実施形態において、サイトカインはＩＬ−１７である。さらに他の実施形態において、サイトカインはＩＦＮ−γである。ある実施形態において、サイトカインはＩＬ−２及びＩＬ−１７である。いくつかの実施形態において、サイトカインはＩＬ−２及びＩＦＮ−γである。さらに他の実施形態において、サイトカインはＩＬ−１７及びＩＦＮ−γである。さらに他の実施形態において、サイトカインはＩＬ−２、ＩＬ−１７、及びＩＦＮ−γである。ある実施形態において、サイトカインはＩＬ−１である。他の実施形態において、サイトカインはＩＬ−６である。さらに他の実施形態において、サイトカインはＩＬ−１２である。さらに他の実施形態において、サイトカインはＩＬ−２２である。ある実施形態において、サイトカインはＩＬ−２３である。いくつかの実施形態において、サイトカインはＧＭ−ＣＳＦである。他の実施形態において、サイトカインはＴＮＦ−αである。上述のサイトカインの２つ、３つまたはこれより多くの他の組合せも企図する。
【０４２１】
いくつかの実施形態において、本明細書では、本明細書で提供するＰＤ−１（例えば、ヒトＰＤ−１のＥＣＤまたはヒトＰＤ−１のＥＣＤのエピトープ）に特異的に結合する抗体と細胞を接触させることを含む、細胞からのＩＬ−２分泌を阻害する方法を提供する。具体的な実施形態において、細胞はＴ細胞である。ある実施形態において、本明細書に記載の有効量の抗体またはその抗原結合断片と細胞を接触させる。ある実施形態において、抗体は、抗体ＰＤ１ＡＢ−１、ＰＤ１ＡＢ−２、ＰＤ１ＡＢ−３、ＰＤ１ＡＢ−４、ＰＤ１ＡＢ−５、もしくはＰＤ１ＡＢ−６の任意の１つもしくはその抗原結合断片、または抗体ＰＤ１ＡＢ−１、ＰＤ１ＡＢ−２、ＰＤ１ＡＢ−３、ＰＤ１ＡＢ−４、ＰＤ１ＡＢ−５、もしくはＰＤ１ＡＢ−６の任意の１つのＣＤＲを含む抗体である。
【０４２２】
一実施形態において、ＩＬ−２分泌は少なくとも約５％阻害される。いくつかの実施形態において、ＩＬ−２分泌は少なくとも約１０％阻害される。別の実施形態において、ＩＬ−２分泌は少なくとも約１５％阻害される。他の実施形態において、ＩＬ−２分泌は少なくとも約２０％阻害される。一実施形態において、ＩＬ−２分泌は少なくとも約２５％阻害される。別の実施形態において、ＩＬ−２分泌は少なくとも約３０％阻害される。いくつかの実施形態において、ＩＬ−２分泌は少なくとも約３５％阻害される。一実施形態において、ＩＬ−２分泌は少なくとも約４０％阻害される。別の実施形態において、ＩＬ−２分泌は少なくとも約４５％阻害される。他の実施形態において、ＩＬ−２分泌は少なくとも約５０％阻害される。いくつかの実施形態において、ＩＬ−２分泌は少なくとも約５５％阻害される。別の実施形態において、ＩＬ−２分泌は少なくとも約６０％阻害される。一実施形態において、ＩＬ−２分泌は少なくとも約６５％阻害される。一実施形態において、ＩＬ−２分泌は少なくとも約７０％阻害される。別の実施形態において、ＩＬ−２分泌は少なくとも約７５％阻害される。いくつかの実施形態において、ＩＬ−２分泌は少なくとも約８０％阻害される。他の実施形態において、ＩＬ−２分泌は少なくとも約８５％阻害される。別の実施形態において、ＩＬ−２分泌は少なくとも約９０％阻害される。一実施形態において、ＩＬ−２分泌は少なくとも約９５％阻害される。いくつかの実施形態において、ＩＬ−２分泌は少なくとも約９８％阻害される。別の実施形態において、ＩＬ−２分泌は少なくとも約９９％阻害される。具体的な実施形態において、ＩＬ−２分泌は少なくとも約２５％または３５％、任意により約７５％まで阻害される。いくつかの実施形態において、ＩＬ−２分泌の阻害は本明細書に記載の方法によって評価される。他の実施形態において、ＩＬ−２分泌の阻害は、当業者にとって公知の方法（例えば、ＭＳＤマルチプレックスアッセイ）によって評価される。具体的な実施形態において、ＩＬ−２分泌は、抗ＰＤ−１抗体と接触させていない細胞からのＩＬ−２分泌と比較して阻害される。他の実施形態において、ＩＬ−２分泌は、非関連抗体（例えば、ＰＤ−１に特異的に結合しない抗体）と接触させた細胞からのＩＬ−２分泌と比較して阻害される。
【０４２３】
ある実施形態において、ＩＬ−２分泌は最大でも約５０ｎＭのＥＣ５０で阻害される。他の実施形態において、ＩＬ−２分泌は最大でも約４０ｎＭのＥＣ５０で阻害される。別の実施形態において、ＩＬ−２分泌は最大でも約３０ｎＭのＥＣ５０で阻害される。いくつかの実施形態において、ＩＬ−２分泌は最大でも約２０ｎＭのＥＣ５０で阻害される。一実施形態において、ＩＬ−２分泌は最大でも約１０ｎＭのＥＣ５０で阻害される。別の実施形態において、ＩＬ−２分泌は最大でも約５ｎＭのＥＣ５０で阻害される。一実施形態において、ＩＬ−２分泌は最大でも約１ｎＭのＥＣ５０で阻害される。いくつかの実施形態において、ＩＬ−２分泌は最大でも約０．７５ｎＭのＥＣ５０で阻害される。別の実施形態において、ＩＬ−２分泌は最大でも約０．５ｎＭのＥＣ５０で阻害される。他の実施形態において、ＩＬ−２分泌は最大でも約０．１ｎＭのＥＣ５０で阻害される。一実施形態において、ＩＬ−２分泌は最大でも約０．０５ｎＭのＥＣ５０で阻害される。別の実施形態において、ＩＬ−２分泌は最大でも約０．０１ｎＭのＥＣ５０で阻害される。いくつかの実施形態において、ＩＬ−２分泌は最大でも約０．００５ｎＭのＥＣ５０で阻害される。一実施形態において、ＩＬ−２分泌は最大でも約０．００１ｎＭのＥＣ５０で阻害される。別の実施形態において、ＩＬ−２分泌は少なくとも約５０ｎＭのＥＣ５０で阻害される。他の実施形態において、ＩＬ−２分泌は少なくとも約４０ｎＭのＥＣ５０で阻害される。いくつかの実施形態において、ＩＬ−２分泌は少なくとも約３０ｎＭのＥＣ５０で阻害される。別の実施形態において、ＩＬ−２分泌は少なくとも約２０ｎＭのＥＣ５０で阻害される。一実施形態において、ＩＬ−２分泌は少なくとも約１０ｎＭのＥＣ５０で阻害される。一実施形態において、ＩＬ−２分泌は少なくとも約５ｎＭのＥＣ５０で阻害される。別の実施形態において、ＩＬ−２分泌は少なくとも約１ｎＭのＥＣ５０で阻害される。いくつかの実施形態において、ＩＬ−２分泌は少なくとも約０．７５ｎＭのＥＣ５０で阻害される。他の実施形態において、ＩＬ−２分泌は少なくとも約０．５ｎＭのＥＣ５０で阻害される。別の実施形態において、ＩＬ−２分泌は少なくとも約０．１ｎＭのＥＣ５０で阻害される。一実施形態において、ＩＬ−２分泌は少なくとも約０．０５ｎＭのＥＣ５０で阻害される。いくつかの実施形態において、ＩＬ−２分泌は少なくとも約０．０１ｎＭのＥＣ５０で阻害される。別の実施形態において、ＩＬ−２分泌は少なくとも約０．００５ｎＭのＥＣ５０で阻害される。一実施形態において、ＩＬ−２分泌は少なくとも約０．００１ｎＭのＥＣ５０で阻害される。いくつかの実施形態において、ＥＣ５０は本明細書に記載の方法によって評価される。他の実施形態において、ＥＣ５０は当業者にとって公知の方法（例えば、ＭＳＤマルチプレックスアッセイ）によって評価される。具体的な実施形態において、ＩＬ−２分泌は、抗ＰＤ−１抗体と接触させていない細胞からのＩＬ−２分泌と比較して阻害される。他の実施形態において、ＩＬ−２分泌は、非関連抗体（例えば、ＰＤ−１に特異的に結合しない抗体）と接触させた細胞からのＩＬ−２分泌と比較して阻害される。
【０４２４】
いくつかの実施形態において、本明細書では、本明細書で提供するＰＤ−１（例えば、ヒトＰＤ−１のＥＣＤまたはヒトＰＤ−１のＥＣＤのエピトープ）に特異的に結合する抗体と細胞を接触させることを含む、細胞からのＩＬ−１７分泌を阻害する方法を提供する。具体的な実施形態において、細胞はＴ細胞である。ある実施形態において、本明細書に記載の有効量の抗体またはその抗原結合断片と細胞を接触させる。ある実施形態において、抗体は、抗体ＰＤ１ＡＢ−１、ＰＤ１ＡＢ−２、ＰＤ１ＡＢ−３、ＰＤ１ＡＢ−４、ＰＤ１ＡＢ−５、もしくはＰＤ１ＡＢ−６の任意の１つもしくはその抗原結合断片、または抗体ＰＤ１ＡＢ−１、ＰＤ１ＡＢ−２、ＰＤ１ＡＢ−３、ＰＤ１ＡＢ−４、ＰＤ１ＡＢ−５、もしくはＰＤ１ＡＢ−６の任意の１つのＣＤＲを含む抗体である。
【０４２５】
一実施形態において、ＩＬ−１７分泌は少なくとも約５％阻害される。いくつかの実施形態において、ＩＬ−１７分泌は少なくとも約１０％阻害される。別の実施形態において、ＩＬ−１７分泌は少なくとも約１５％阻害される。他の実施形態において、ＩＬ−１７分泌は少なくとも約２０％阻害される。一実施形態において、ＩＬ−１７分泌は少なくとも約２５％阻害される。別の実施形態において、ＩＬ−１７分泌は少なくとも約３０％阻害される。いくつかの実施形態において、ＩＬ−１７分泌は少なくとも約３５％阻害される。一実施形態において、ＩＬ−１７分泌は少なくとも約４０％阻害される。別の実施形態において、ＩＬ−１７分泌は少なくとも約４５％阻害される。他の実施形態において、ＩＬ−１７分泌は少なくとも約５０％阻害される。いくつかの実施形態において、ＩＬ−１７分泌は少なくとも約５５％阻害される。別の実施形態において、ＩＬ−１７分泌は少なくとも約６０％阻害される。一実施形態において、ＩＬ−１７分泌は少なくとも約６５％阻害される。一実施形態において、ＩＬ−１７分泌は少なくとも約７０％阻害される。別の実施形態において、ＩＬ−１７分泌は少なくとも約７５％阻害される。いくつかの実施形態において、ＩＬ−１７分泌は少なくとも約８０％阻害される。他の実施形態において、ＩＬ−１７分泌は少なくとも約８５％阻害される。別の実施形態において、ＩＬ−１７分泌は少なくとも約９０％阻害される。一実施形態において、ＩＬ−１７分泌は少なくとも約９５％阻害される。いくつかの実施形態において、ＩＬ−１７分泌は少なくとも約９８％阻害される。別の実施形態において、ＩＬ−１７分泌は少なくとも約９９％阻害される。具体的な実施形態において、ＩＬ−１７分泌は少なくとも約２５％または３５％、任意により約７５％まで阻害される。いくつかの実施形態において、ＩＬ−１７分泌の阻害は本明細書に記載の方法によって評価される。他の実施形態において、ＩＬ−１７分泌の阻害は、当業者にとって公知の方法（例えば、ＭＳＤマルチプレックスアッセイ）によって評価される。具体的な実施形態において、ＩＬ−１７分泌は、抗ＰＤ−１抗体と接触させていない細胞からのＩＬ−１７分泌と比較して阻害される。他の実施形態において、ＩＬ−１７分泌は、非関連抗体（例えば、ＰＤ−１に特異的に結合しない抗体）と接触させた細胞におけるＩＬ−１７分泌と比較して阻害される。
【０４２６】
ある実施形態において、ＩＬ−１７分泌は最大でも約５０ｎＭのＥＣ５０で阻害される。他の実施形態において、ＩＬ−１７分泌は最大でも約４０ｎＭのＥＣ５０で阻害される。別の実施形態において、ＩＬ−１７分泌は最大でも約３０ｎＭのＥＣ５０で阻害される。いくつかの実施形態において、ＩＬ−１７分泌は最大でも約２０ｎＭのＥＣ５０で阻害される。一実施形態において、ＩＬ−１７分泌は最大でも約１０ｎＭのＥＣ５０で阻害される。別の実施形態において、ＩＬ−１７分泌は最大でも約５ｎＭのＥＣ５０で阻害される。一実施形態において、ＩＬ−１７分泌は最大でも約１ｎＭのＥＣ５０で阻害される。いくつかの実施形態において、ＩＬ−１７分泌は最大でも約０．７５ｎＭのＥＣ５０で阻害される。別の実施形態において、ＩＬ−１７分泌は最大でも約０．５ｎＭのＥＣ５０で阻害される。他の実施形態において、ＩＬ−１７分泌は最大でも約０．１ｎＭのＥＣ５０で阻害される。一実施形態において、ＩＬ−１７分泌は最大でも約０．０５ｎＭのＥＣ５０で阻害される。別の実施形態において、ＩＬ−１７分泌は最大でも約０．０１ｎＭのＥＣ５０で阻害される。いくつかの実施形態において、ＩＬ−１７分泌は最大でも約０．００５ｎＭのＥＣ５０で阻害される。一実施形態において、ＩＬ−１７分泌は最大でも約０．００１ｎＭのＥＣ５０で阻害される。別の実施形態において、ＩＬ−１７分泌は少なくとも約５０ｎＭのＥＣ５０で阻害される。他の実施形態において、ＩＬ−１７分泌は少なくとも約４０ｎＭのＥＣ５０で阻害される。いくつかの実施形態において、ＩＬ−１７分泌は少なくとも約３０ｎＭのＥＣ５０で阻害される。別の実施形態において、ＩＬ−１７分泌は少なくとも約２０ｎＭのＥＣ５０で阻害される。一実施形態において、ＩＬ−１７分泌は少なくとも約１０ｎＭのＥＣ５０で阻害される。一実施形態において、ＩＬ−１７分泌は少なくとも約５ｎＭのＥＣ５０で阻害される。別の実施形態において、ＩＬ−１７分泌は少なくとも約１ｎＭのＥＣ５０で阻害される。いくつかの実施形態において、ＩＬ−１７分泌は少なくとも約０．７５ｎＭのＥＣ５０で阻害される。他の実施形態において、ＩＬ−１７分泌は少なくとも約０．５ｎＭのＥＣ５０で阻害される。別の実施形態において、ＩＬ−１７分泌は少なくとも約０．１ｎＭのＥＣ５０で阻害される。一実施形態において、ＩＬ−１７分泌は少なくとも約０．０５ｎＭのＥＣ５０で阻害される。いくつかの実施形態において、ＩＬ−１７分泌は少なくとも約０．０１ｎＭのＥＣ５０で阻害される。別の実施形態において、ＩＬ−１７分泌は少なくとも約０．００５ｎＭのＥＣ５０で阻害される。一実施形態において、ＩＬ−１７分泌は少なくとも約０．００１ｎＭのＥＣ５０で阻害される。いくつかの実施形態において、ＥＣ５０は本明細書に記載の方法によって評価される。他の実施形態において、ＥＣ５０は当業者にとって公知の方法（例えば、ＭＳＤマルチプレックスアッセイ）によって評価される。具体的な実施形態において、ＩＬ−１７分泌は、抗ＰＤ−１抗体と接触させていない細胞からのＩＬ−１７分泌と比較して阻害される。他の実施形態において、ＩＬ−１７分泌は、非関連抗体（例えば、ＰＤ−１に特異的に結合しない抗体）と接触させた細胞からのＩＬ−１７分泌と比較して阻害される。
【０４２７】
いくつかの実施形態において、本明細書では、本明細書で提供するＰＤ−１（例えば、ヒトＰＤ−１のＥＣＤまたはヒトＰＤ−１のＥＣＤのエピトープ）に特異的に結合する抗体と細胞を接触させることを含む、細胞からのＩＦＮ−γ分泌を阻害する方法を提供する。具体的な実施形態において、細胞はＴ細胞である。ある実施形態において、本明細書に記載の有効量の抗体またはその抗原結合断片と細胞を接触させる。ある実施形態において、抗体は、抗体ＰＤ１ＡＢ−１、ＰＤ１ＡＢ−２、ＰＤ１ＡＢ−３、ＰＤ１ＡＢ−４、ＰＤ１ＡＢ−５、もしくはＰＤ１ＡＢ−６の任意の１つもしくはその抗原結合断片、または抗体ＰＤ１ＡＢ−１、ＰＤ１ＡＢ−２、ＰＤ１ＡＢ−３、ＰＤ１ＡＢ−４、ＰＤ１ＡＢ−５、もしくはＰＤ１ＡＢ−６の任意の１つのＣＤＲを含む抗体である。
【０４２８】
一実施形態において、ＩＦＮ−γ分泌は少なくとも約５％阻害される。いくつかの実施形態において、ＩＦＮ−γ分泌は少なくとも約１０％阻害される。別の実施形態において、ＩＦＮ−γ分泌は少なくとも約１５％阻害される。他の実施形態において、ＩＦＮ−γ分泌は少なくとも約２０％阻害される。一実施形態において、ＩＦＮ−γ分泌は少なくとも約２５％阻害される。別の実施形態において、ＩＦＮ−γ分泌は少なくとも約３０％阻害される。いくつかの実施形態において、ＩＦＮ−γ分泌は少なくとも約３５％阻害される。一実施形態において、ＩＦＮ−γ分泌は少なくとも約４０％阻害される。別の実施形態において、ＩＦＮ−γ分泌は少なくとも約４５％阻害される。他の実施形態において、ＩＦＮ−γ分泌は少なくとも約５０％阻害される。いくつかの実施形態において、ＩＦＮ−γ分泌は少なくとも約５５％阻害される。別の実施形態において、ＩＦＮ−γ分泌は少なくとも約６０％阻害される。一実施形態において、ＩＦＮ−γ分泌は少なくとも約６５％阻害される。一実施形態において、ＩＦＮ−γ分泌は少なくとも約７０％阻害される。別の実施形態において、ＩＦＮ−γ分泌は少なくとも約７５％阻害される。いくつかの実施形態において、ＩＦＮ−γ分泌は少なくとも約８０％阻害される。他の実施形態において、ＩＦＮ−γ分泌は少なくとも約８５％阻害される。別の実施形態において、ＩＦＮ−γ分泌は少なくとも約９０％阻害される。一実施形態において、ＩＦＮ−γ分泌は少なくとも約９５％阻害される。いくつかの実施形態において、ＩＦＮ−γ分泌は少なくとも約９８％阻害される。別の実施形態において、ＩＦＮ−γ分泌は少なくとも約９９％阻害される。具体的な実施形態において、ＩＦＮ−γ分泌は少なくとも約２５％または３５％、任意により約７５％まで阻害される。いくつかの実施形態において、ＩＦＮ−γ分泌の阻害は本明細書に記載の方法によって評価される。他の実施形態において、ＩＦＮ−γ分泌の阻害は、当業者にとって公知の方法（例えば、ＭＳＤマルチプレックスアッセイ）によって評価される。具体的な実施形態において、ＩＦＮ−γ分泌は、抗ＰＤ−１抗体と接触させていない細胞からのＩＦＮ−γ分泌と比較して阻害される。他の実施形態において、ＩＦＮ−γ分泌は、非関連抗体（例えば、ＰＤ−１に特異的に結合しない抗体）と接触させた細胞からのＩＦＮ−γ分泌と比較して阻害される。
【０４２９】
ある実施形態において、ＩＦＮ−γ分泌は最大でも約５０ｎＭのＥＣ５０で阻害される。他の実施形態において、ＩＦＮ−γ分泌は最大でも約４０ｎＭのＥＣ５０で阻害される。別の実施形態において、ＩＦＮ−γ分泌は最大でも約３０ｎＭのＥＣ５０で阻害される。いくつかの実施形態において、ＩＦＮ−γ分泌は最大でも約２０ｎＭのＥＣ５０で阻害される。一実施形態において、ＩＦＮ−γ分泌は最大でも約１０ｎＭのＥＣ５０で阻害される。別の実施形態において、ＩＦＮ−γ分泌は最大でも約５ｎＭのＥＣ５０で阻害される。一実施形態において、ＩＦＮ−γ分泌は最大でも約１ｎＭのＥＣ５０で阻害される。いくつかの実施形態において、ＩＦＮ−γ分泌は最大でも約０．７５ｎＭのＥＣ５０で阻害される。別の実施形態において、ＩＦＮ−γ分泌は最大でも約０．５ｎＭのＥＣ５０で阻害される。他の実施形態において、ＩＦＮ−γ分泌は最大でも約０．１ｎＭのＥＣ５０で阻害される。一実施形態において、ＩＦＮ−γ分泌は最大でも約０．０５ｎＭのＥＣ５０で阻害される。別の実施形態において、ＩＦＮ−γ分泌は最大でも約０．０１ｎＭのＥＣ５０で阻害される。いくつかの実施形態において、ＩＦＮ−γ分泌は最大でも約０．００５ｎＭのＥＣ５０で阻害される。一実施形態において、ＩＦＮ−γ分泌は最大でも約０．００１ｎＭのＥＣ５０で阻害される。別の実施形態において、ＩＦＮ−γ分泌は少なくとも約５０ｎＭのＥＣ５０で阻害される。他の実施形態において、ＩＦＮ−γ分泌は少なくとも約４０ｎＭのＥＣ５０で阻害される。いくつかの実施形態において、ＩＦＮ−γ分泌は少なくとも約３０ｎＭのＥＣ５０で阻害される。別の実施形態において、ＩＦＮ−γ分泌は少なくとも約２０ｎＭのＥＣ５０で阻害される。一実施形態において、ＩＦＮ−γ分泌は少なくとも約１０ｎＭのＥＣ５０で阻害される。一実施形態において、ＩＦＮ−γ分泌は少なくとも約５ｎＭのＥＣ５０で阻害される。別の実施形態において、ＩＦＮ−γ分泌は少なくとも約１ｎＭのＥＣ５０で阻害される。いくつかの実施形態において、ＩＦＮ−γ分泌は少なくとも約０．７５ｎＭのＥＣ５０で阻害される。他の実施形態において、ＩＦＮ−γ分泌は少なくとも約０．５ｎＭのＥＣ５０で阻害される。別の実施形態において、ＩＦＮ−γ分泌は少なくとも約０．１ｎＭのＥＣ５０で阻害される。一実施形態において、ＩＦＮ−γ分泌は少なくとも約０．０５ｎＭのＥＣ５０で阻害される。いくつかの実施形態において、ＩＦＮ−γ分泌は少なくとも約０．０１ｎＭのＥＣ５０で阻害される。別の実施形態において、ＩＦＮ−γ分泌は少なくとも約０．００５ｎＭのＥＣ５０で阻害される。一実施形態において、ＩＦＮ−γ分泌は少なくとも約０．００１ｎＭのＥＣ５０で阻害される。いくつかの実施形態において、ＥＣ５０は本明細書に記載の方法によって評価される。他の実施形態において、ＥＣ５０は当業者にとって公知の方法（例えば、ＭＳＤマルチプレックスアッセイ）によって評価される。具体的な実施形態において、ＩＦＮ−γ分泌は、抗ＰＤ−１抗体と接触させていない細胞からのＩＦＮ−γ分泌と比較して阻害される。他の実施形態において、ＩＦＮ−γ分泌は、非関連抗体（例えば、ＰＤ−１に特異的に結合しない抗体）と���触させた細胞からのＩＦＮ−γ分泌と比較して阻害される。
【０４３０】
いくつかの実施形態において、本明細書では、本明細書で提供するＰＤ−１（例えば、ヒトＰＤ−１のＥＣＤまたはヒトＰＤ−１のＥＣＤのエピトープ）に特異的に結合する抗体と細胞を接触させることを含む、細胞からのＩＬ−１分泌を阻害する方法を提供する。具体的な実施形態において、細胞はＴ細胞である。ある実施形態において、本明細書に記載の有効量の抗体またはその抗原結合断片と細胞を接触させる。ある実施形態において、抗体は、抗体ＰＤ１ＡＢ−１、ＰＤ１ＡＢ−２、ＰＤ１ＡＢ−３、ＰＤ１ＡＢ−４、ＰＤ１ＡＢ−５、もしくはＰＤ１ＡＢ−６の任意の１つもしくはその抗原結合断片、または抗体ＰＤ１ＡＢ−１、ＰＤ１ＡＢ−２、ＰＤ１ＡＢ−３、ＰＤ１ＡＢ−４、ＰＤ１ＡＢ−５、もしくはＰＤ１ＡＢ−６の任意の１つのＣＤＲを含む抗体である。
【０４３１】
一実施形態において、ＩＬ−１分泌は少なくとも約５％阻害される。いくつかの実施形態において、ＩＬ−１分泌は少なくとも約１０％阻害される。別の実施形態において、ＩＬ−１分泌は少なくとも約１５％阻害される。他の実施形態において、ＩＬ−１分泌は少なくとも約２０％阻害される。一実施形態において、ＩＬ−１分泌は少なくとも約２５％阻害される。別の実施形態において、ＩＬ−１分泌は少なくとも約３０％阻害される。いくつかの実施形態において、ＩＬ−１分泌は少なくとも約３５％阻害される。一実施形態において、ＩＬ−１分泌は少なくとも約４０％阻害される。別の実施形態において、ＩＬ−１分泌は少なくとも約４５％阻害される。他の実施形態において、ＩＬ−１分泌は少なくとも約５０％阻害される。いくつかの実施形態において、ＩＬ−１分泌は少なくとも約５５％阻害される。別の実施形態において、ＩＬ−１分泌は少なくとも約６０％阻害される。一実施形態において、ＩＬ−１分泌は少なくとも約６５％阻害される。一実施形態において、ＩＬ−１分泌は少なくとも約７０％阻害される。別の実施形態において、ＩＬ−１分泌は少なくとも約７５％阻害される。いくつかの実施形態において、ＩＬ−１分泌は少なくとも約８０％阻害される。他の実施形態において、ＩＬ−１分泌は少なくとも約８５％阻害される。別の実施形態において、ＩＬ−１分泌は少なくとも約９０％阻害される。一実施形態において、ＩＬ−１分泌は少なくとも約９５％阻害される。いくつかの実施形態において、ＩＬ−１分泌は少なくとも約９８％阻害される。別の実施形態において、ＩＬ−１分泌は少なくとも約９９％阻害される。具体的な実施形態において、ＩＬ−１分泌は少なくとも約２５％または３５％、任意により約７５％まで阻害される。いくつかの実施形態において、ＩＬ−１分泌の阻害は本明細書に記載の方法によって評価される。他の実施形態において、ＩＬ−１分泌の阻害は、当業者にとって公知の方法（例えば、ＭＳＤマルチプレックスアッセイ）によって評価される。具体的な実施形態において、ＩＬ−１分泌は、抗ＰＤ−１抗体と接触させていない細胞からのＩＬ−１分泌と比較して阻害される。他の実施形態において、ＩＬ−１分泌は、非関連抗体（例えば、ＰＤ−１に特異的に結合しない抗体）と接触させた細胞からのＩＬ−１分泌と比較して阻害される。
【０４３２】
ある実施形態において、ＩＬ−１分泌は最大でも約５０ｎＭのＥＣ５０で阻害される。他の実施形態において、ＩＬ−１分泌は最大でも約４０ｎＭのＥＣ５０で阻害される。別の実施形態において、ＩＬ−１分泌は最大でも約３０ｎＭのＥＣ５０で阻害される。いくつかの実施形態において、ＩＬ−１分泌は最大でも約２０ｎＭのＥＣ５０で阻害される。一実施形態において、ＩＬ−１分泌は最大でも約１０ｎＭのＥＣ５０で阻害される。別の実施形態において、ＩＬ−１分泌は最大でも約５ｎＭのＥＣ５０で阻害される。一実施形態において、ＩＬ−１分泌は最大でも約１ｎＭのＥＣ５０で阻害される。いくつかの実施形態において、ＩＬ−１分泌は最大でも約０．７５ｎＭのＥＣ５０で阻害される。別の実施形態において、ＩＬ−１分泌は最大でも約０．５ｎＭのＥＣ５０で阻害される。他の実施形態において、ＩＬ−１分泌は最大でも約０．１ｎＭのＥＣ５０で阻害される。一実施形態において、ＩＬ−１分泌は最大でも約０．０５ｎＭのＥＣ５０で阻害される。別の実施形態において、ＩＬ−１分泌は最大でも約０．０１ｎＭのＥＣ５０で阻害される。いくつかの実施形態において、ＩＬ−１分泌は最大でも約０．００５ｎＭのＥＣ５０で阻害される。一実施形態において、ＩＬ−１分泌は最大でも約０．００１ｎＭのＥＣ５０で阻害される。別の実施形態において、ＩＬ−１分泌は少なくとも約５０ｎＭのＥＣ５０で阻害される。他の実施形態において、ＩＬ−１分泌は少なくとも約４０ｎＭのＥＣ５０で阻害される。いくつかの実施形態において、ＩＬ−１分泌は少なくとも約３０ｎＭのＥＣ５０で阻害される。別の実施形態において、ＩＬ−１分泌は少なくとも約２０ｎＭのＥＣ５０で阻害される。一実施形態において、ＩＬ−１分泌は少なくとも約１０ｎＭのＥＣ５０で阻害される。一実施形態において、ＩＬ−１分泌は少なくとも約５ｎＭのＥＣ５０で阻害される。別の実施形態において、ＩＬ−１分泌は少なくとも約１ｎＭのＥＣ５０で阻害される。いくつかの実施形態において、ＩＬ−１分泌は少なくとも約０．７５ｎＭのＥＣ５０で阻害される。他の実施形態において、ＩＬ−１分泌は少なくとも約０．５ｎＭのＥＣ５０で阻害される。別の実施形態において、ＩＬ−１分泌は少なくとも約０．１ｎＭのＥＣ５０で阻害される。一実施形態において、ＩＬ−１分泌は少なくとも約０．０５ｎＭのＥＣ５０で阻害される。いくつかの実施形態において、ＩＬ−１分泌は少なくとも約０．０１ｎＭのＥＣ５０で阻害される。別の実施形態において、ＩＬ−１分泌は少なくとも約０．００５ｎＭのＥＣ５０で阻害される。一実施形態において、ＩＬ−１分泌は少なくとも約０．００１ｎＭのＥＣ５０で阻害される。いくつかの実施形態において、ＥＣ５０は本明細書に記載の方法によって評価される。他の実施形態において、ＥＣ５０は当業者にとって公知の方法（例えば、ＭＳＤマルチプレックスアッセイ）によって評価される。具体的な実施形態において、ＩＬ−１分泌は、抗ＰＤ−１抗体と接触させていない細胞からのＩＬ−１分泌と比較して阻害される。他の実施形態において、ＩＬ−１分泌は、非関連抗体（例えば、ＰＤ−１に特異的に結合しない抗体）と接触させた細胞からのＩＬ−１分泌と比較して阻害される。
【０４３３】
いくつかの実施形態において、本明細書では、本明細書で提供するＰＤ−１（例えば、ヒトＰＤ−１のＥＣＤまたはヒトＰＤ−１のＥＣＤのエピトープ）に特異的に結合する抗体と細胞を接触させることを含む、細胞からのＩＬ−６分泌を阻害する方法を提供する。具体的な実施形態において、細胞はＴ細胞である。ある実施形態において、本明細書に記載の有効量の抗体またはその抗原結合断片と細胞を接触させる。ある実施形態において、抗体は、抗体ＰＤ１ＡＢ−１、ＰＤ１ＡＢ−２、ＰＤ１ＡＢ−３、ＰＤ１ＡＢ−４、ＰＤ１ＡＢ−５、もしくはＰＤ１ＡＢ−６の任意の１つもしくはその抗原結合断片、または抗体ＰＤ１ＡＢ−１、ＰＤ１ＡＢ−２、ＰＤ１ＡＢ−３、ＰＤ１ＡＢ−４、ＰＤ１ＡＢ−５、もしくはＰＤ１ＡＢ−６の任意の１つのＣＤＲを含む抗体である。
【０４３４】
一実施形態において、ＩＬ−６分泌は少なくとも約５％阻害される。いくつかの実施形態において、ＩＬ−６分泌は少なくとも約１０％阻害される。別の実施形態において、ＩＬ−６分泌は少なくとも約１５％阻害される。他の実施形態において、ＩＬ−６分泌は少なくとも約２０％阻害される。一実施形態において、ＩＬ−６分泌は少なくとも約２５％阻害される。別の実施形態において、ＩＬ−６分泌は少なくとも約３０％阻害される。いくつかの実施形態において、ＩＬ−６分泌は少なくとも約３５％阻害される。一実施形態において、ＩＬ−６分泌は少なくとも約４０％阻害される。別の実施形態において、ＩＬ−６分泌は少なくとも約４５％阻害される。他の実施形態において、ＩＬ−６分泌は少なくとも約５０％阻害される。いくつかの実施形態において、ＩＬ−６分泌は少なくとも約５５％阻害される。別の実施形態において、ＩＬ−６分泌は少なくとも約６０％阻害される。一実施形態において、ＩＬ−６分泌は少なくとも約６５％阻害される。一実施形態において、ＩＬ−６分泌は少なくとも約７０％阻害される。別の実施形態において、ＩＬ−６分泌は少なくとも約７５％阻害される。いくつかの実施形態において、ＩＬ−６分泌は少なくとも約８０％阻害される。他の実施形態において、ＩＬ−６分泌は少なくとも約８５％阻害される。別の実施形態において、ＩＬ−６分泌は少なくとも約９０％阻害される。一実施形態において、ＩＬ−６分泌は少なくとも約９５％阻害される。いくつかの実施形態において、ＩＬ−６分泌は少なくとも約９８％阻害される。別の実施形態において、ＩＬ−６分泌は少なくとも約９９％阻害される。具体的な実施形態において、ＩＬ−６分泌は少なくとも約２５％または３５％、任意により約７５％まで阻害される。いくつかの実施形態において、ＩＬ−６分泌の阻害は本明細書に記載の方法によって評価される。他の実施形態において、ＩＬ−６分泌の阻害は、当業者にとって公知の方法（例えば、ＭｅｓｏＳｃａｌｅ（商標）Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ（ＭＳＤ）マルチプレックスアッセイ）によって評価される。具体的な実施形態において、ＩＬ−６分泌は、抗ＰＤ−１抗体と接触させていない細胞からのＩＬ−６分泌と比較して阻害される。他の実施形態において、ＩＬ−６分泌は、非関連抗体（例えば、ＰＤ−１に特異的に結合しない抗体）と接触させた細胞からのＩＬ−６分泌と比較して阻害される。
【０４３５】
ある実施形態において、ＩＬ−６分泌は最大でも約５０ｎＭのＥＣ５０で阻害される。他の実施形態において、ＩＬ−６分泌は最大でも約４０ｎＭのＥＣ５０で阻害される。別の実施形態において、ＩＬ−６分泌は最大でも約３０ｎＭのＥＣ５０で阻害される。いくつかの実施形態において、ＩＬ−６分泌は最大でも約２０ｎＭのＥＣ５０で阻害される。一実施形態において、ＩＬ−６分泌は最大でも約１０ｎＭのＥＣ５０で阻害される。別の実施形態において、ＩＬ−６分泌は最大でも約５ｎＭのＥＣ５０で阻害される。一実施形態において、ＩＬ−６分泌は最大でも約１ｎＭのＥＣ５０で阻害される。いくつかの実施形態において、ＩＬ−６分泌は最大でも約０．７５ｎＭのＥＣ５０で阻害される。別の実施形態において、ＩＬ−６分泌は最大でも約０．５ｎＭのＥＣ５０で阻害される。他の実施形態において、ＩＬ−６分泌は最大でも約０．１ｎＭのＥＣ５０で阻害される。一実施形態において、ＩＬ−６分泌は最大でも約０．０５ｎＭのＥＣ５０で阻害される。別の実施形態において、ＩＬ−６分泌は最大でも約０．０１ｎＭのＥＣ５０で阻害される。いくつかの実施形態において、ＩＬ−６分泌は最大でも約０．００５ｎＭのＥＣ５０で阻害される。一実施形態において、ＩＬ−６分泌は最大でも約０．００１ｎＭのＥＣ５０で阻害される。別の実施形態において、ＩＬ−６分泌は少なくとも約５０ｎＭのＥＣ５０で阻害される。他の実施形態において、ＩＬ−６分泌は少なくとも約４０ｎＭのＥＣ５０で阻害される。いくつかの実施形態において、ＩＬ−６分泌は少なくとも約３０ｎＭのＥＣ５０で阻害される。別の実施形態において、ＩＬ−６分泌は少なくとも約２０ｎＭのＥＣ５０で阻害される。一実施形態において、ＩＬ−６分泌は少なくとも約１０ｎＭのＥＣ５０で阻害される。一実施形態において、ＩＬ−６分泌は少なくとも約５ｎＭのＥＣ５０で阻害される。別の実施形態において、ＩＬ−６分泌は少なくとも約１ｎＭのＥＣ５０で阻害される。いくつかの実施形態において、ＩＬ−６分泌は少なくとも約０．７５ｎＭのＥＣ５０で阻害される。他の実施形態において、ＩＬ−６分泌は少なくとも約０．５ｎＭのＥＣ５０で阻害される。別の実施形態において、ＩＬ−６分泌は少なくとも約０．１ｎＭのＥＣ５０で阻害される。一実施形態において、ＩＬ−６分泌は少なくとも約０．０５ｎＭのＥＣ５０で阻害される。いくつかの実施形態において、ＩＬ−６分泌は少なくとも約０．０１ｎＭのＥＣ５０で阻害される。別の実施形態において、ＩＬ−６分泌は少なくとも約０．００５ｎＭのＥＣ５０で阻害される。一実施形態において、ＩＬ−６分泌は少なくとも約０．００１ｎＭのＥＣ５０で阻害される。いくつかの実施形態において、ＥＣ５０は本明細書に記載の方法によって評価される。他の実施形態において、ＥＣ５０は当業者にとって公知の方法（例えば、ＭＳＤマルチプレックスアッセイ）によって評価される。具体的な実施形態において、ＩＬ−６分泌は、抗ＰＤ−１抗体と接触させていない細胞からのＩＬ−６分泌と比較して阻害される。他の実施形態において、ＩＬ−６分泌は、非関連抗体（例えば、ＰＤ−１に特異的に結合しない抗体）と接触させた細胞からのＩＬ−６分泌と比較して阻害される。
【０４３６】
いくつかの実施形態において、本明細書では、本明細書で提供するＰＤ−１（例えば、ヒトＰＤ−１のＥＣＤまたはヒトＰＤ−１のＥＣＤのエピトープ）に特異的に結合する抗体と細胞を接触させることを含む、細胞からのＩＬ−１２分泌を阻害する方法を提供する。具体的な実施形態において、細胞はＴ細胞である。ある実施形態において、本明細書に記載の有効量の抗体またはその抗原結合断片と細胞を接触させる。ある実施形態において、抗体は、抗体ＰＤ１ＡＢ−１、ＰＤ１ＡＢ−２、ＰＤ１ＡＢ−３、ＰＤ１ＡＢ−４、ＰＤ１ＡＢ−５、もしくはＰＤ１ＡＢ−６の任意の１つもしくはその抗原結合断片、または抗体ＰＤ１ＡＢ−１、ＰＤ１ＡＢ−２、ＰＤ１ＡＢ−３、ＰＤ１ＡＢ−４、ＰＤ１ＡＢ−５、もしくはＰＤ１ＡＢ−６の任意の１つのＣＤＲを含む抗体である。
【０４３７】
一実施形態において、ＩＬ−１２分泌は少なくとも約５％阻害される。いくつかの実施形態において、ＩＬ−１２分泌は少なくとも約１０％阻害される。別の実施形態において、ＩＬ−１２分泌は少なくとも約１５％阻害される。他の実施形態において、ＩＬ−１２分泌は少なくとも約２０％阻害される。一実施形態において、ＩＬ−１２分泌は少なくとも約２５％阻害される。別の実施形態において、ＩＬ−１２分泌は少なくとも約３０％阻害される。いくつかの実施形態において、ＩＬ−１２分泌は少なくとも約３５％阻害される。一実施形態において、ＩＬ−１２分泌は少なくとも約４０％阻害される。別の実施形態において、ＩＬ−１２分泌は少なくとも約４５％阻害される。他の実施形態において、ＩＬ−１２分泌は少なくとも約５０％阻害される。いくつかの実施形態において、ＩＬ−１２分泌は少なくとも約５５％阻害される。別の実施形態において、ＩＬ−１２分泌は少なくとも約６０％阻害される。一実施形態において、ＩＬ−１２分泌は少なくとも約６５％阻害される。一実施形態において、ＩＬ−１２分泌は少なくとも約７０％阻害される。別の実施形態において、ＩＬ−１２分泌は少なくとも約７５％阻害される。いくつかの実施形態において、ＩＬ−１２分泌は少なくとも約８０％阻害される。他の実施形態において、ＩＬ−１２分泌は少なくとも約８５％阻害される。別の実施形態において、ＩＬ−１２分泌は少なくとも約９０％阻害される。一実施形態において、ＩＬ−１２分泌は少なくとも約９５％阻害される。いくつかの実施形態において、ＩＬ−１２分泌は少なくとも約９８％阻害される。別の実施形態において、ＩＬ−１２分泌は少なくとも約９９％阻害される。具体的な実施形態において、ＩＬ−１２分泌は少なくとも約２５％または３５％、任意により約７５％まで阻害される。いくつかの実施形態において、ＩＬ−１２分泌の阻害は本明細書に記載の方法によって評価される。他の実施形態において、ＩＬ−１２分泌の阻害は、当業者にとって公知の方法（例えば、ＭＳＤマルチプレックスアッセイ）によって評価される。具体的な実施形態において、ＩＬ−１２分泌は、抗ＰＤ−１抗体と接触させていない細胞からのＩＬ−１２分泌と比較して阻害される。他の実施形態において、ＩＬ−１２分泌は、非関連抗体（例えば、ＰＤ−１に特異的に結合しない抗体）と接触させた細胞におけるＩＬ−１２分泌と比較して阻害される。
【０４３８】
ある実施形態において、ＩＬ−１２分泌は最大でも約５０ｎＭのＥＣ５０で阻害される。他の実施形態において、ＩＬ−１２分泌は最大でも約４０ｎＭのＥＣ５０で阻害される。別の実施形態において、ＩＬ−１２分泌は最大でも約３０ｎＭのＥＣ５０で阻害される。いくつかの実施形態において、ＩＬ−１２分泌は最大でも約２０ｎＭのＥＣ５０で阻害される。一実施形態において、ＩＬ−１２分泌は最大でも約１０ｎＭのＥＣ５０で阻害される。別の実施形態において、ＩＬ−１２分泌は最大でも約５ｎＭのＥＣ５０で阻害される。一実施形態において、ＩＬ−１２分泌は最大でも約１ｎＭのＥＣ５０で阻害される。いくつかの実施形態において、ＩＬ−１２分泌は最大でも約０．７５ｎＭのＥＣ５０で阻害される。別の実施形態において、ＩＬ−１２分泌は最大でも約０．５ｎＭのＥＣ５０で阻害される。他の実施形態において、ＩＬ−１２分泌は最大でも約０．１ｎＭのＥＣ５０で阻害される。一実施形態において、ＩＬ−１２分泌は最大でも約０．０５ｎＭのＥＣ５０で阻害される。別の実施形態において、ＩＬ−１２分泌は最大でも約０．０１ｎＭのＥＣ５０で阻害される。いくつかの実施形態において、ＩＬ−１２分泌は最大でも約０．００５ｎＭのＥＣ５０で阻害される。一実施形態において、ＩＬ−１２分泌は最大でも約０．００１ｎＭのＥＣ５０で阻害される。別の実施形態において、ＩＬ−１２分泌は少なくとも約５０ｎＭのＥＣ５０で阻害される。他の実施形態において、ＩＬ−１２分泌は少なくとも約４０ｎＭのＥＣ５０で阻害される。いくつかの実施形態において、ＩＬ−１２分泌は少なくとも約３０ｎＭのＥＣ５０で阻害される。別の実施形態において、ＩＬ−１２分泌は少なくとも約２０ｎＭのＥＣ５０で阻害される。一実施形態において、ＩＬ−１２分泌は少なくとも約１０ｎＭのＥＣ５０で阻害される。一実施形態において、ＩＬ−１２分泌は少なくとも約５ｎＭのＥＣ５０で阻害される。別の実施形態において、ＩＬ−１２分泌は少なくとも約１ｎＭのＥＣ５０で阻害される。いくつかの実施形態において、ＩＬ−１２分泌は少なくとも約０．７５ｎＭのＥＣ５０で阻害される。他の実施形態において、ＩＬ−１２分泌は少なくとも約０．５ｎＭのＥＣ５０で阻害される。別の実施形態において、ＩＬ−１２分泌は少なくとも約０．１ｎＭのＥＣ５０で阻害される。一実施形態において、ＩＬ−１２分泌は少なくとも約０．０５ｎＭのＥＣ５０で阻害される。いくつかの実施形態において、ＩＬ−１２分泌は少なくとも約０．０１ｎＭのＥＣ５０で阻害される。別の実施形態において、ＩＬ−１２分泌は少なくとも約０．００５ｎＭのＥＣ５０で阻害される。一実施形態において、ＩＬ−１２分泌は少なくとも約０．００１ｎＭのＥＣ５０で阻害される。いくつかの実施形態において、ＥＣ５０は本明細書に記載の方法によって評価される。他の実施形態において、ＥＣ５０は当業者にとって公知の方法（例えば、ＭＳＤマルチプレックスアッセイ）によって評価される。具体的な実施形態において、ＩＬ−１２分泌は、抗ＰＤ−１抗体と接触させていない細胞からのＩＬ−１２分泌と比較して阻害される。他の実施形態において、ＩＬ−１２分泌は、非関連抗体（例えば、ＰＤ−１に特異的に結合しない抗体）と接触させた細胞におけるＩＬ−１２分泌と比較して阻害される。
【０４３９】
いくつかの実施形態において、本明細書では、本明細書で提供するＰＤ−１（例えば、ヒトＰＤ−１のＥＣＤまたはヒトＰＤ−１のＥＣＤのエピトープ）に特異的に結合する抗体と細胞を接触させることを含む、細胞からのＩＬ−２２分泌を阻害する方法を提供する。具体的な実施形態において、細胞はＴ細胞である。ある実施形態において、本明細書に記載の有効量の抗体またはその抗原結合断片と細胞を接触させる。ある実施形態において、抗体は、抗体ＰＤ１ＡＢ−１、ＰＤ１ＡＢ−２、ＰＤ１ＡＢ−３、ＰＤ１ＡＢ−４、ＰＤ１ＡＢ−５、もしくはＰＤ１ＡＢ−６の任意の１つもしくはその抗原結合断片、または抗体ＰＤ１ＡＢ−１、ＰＤ１ＡＢ−２、ＰＤ１ＡＢ−３、ＰＤ１ＡＢ−４、ＰＤ１ＡＢ−５、もしくはＰＤ１ＡＢ−６の任意の１つのＣＤＲを含む抗体である。
【０４４０】
一実施形態において、ＩＬ−２２分泌は少なくとも約５％阻害される。いくつかの実施形態において、ＩＬ−２２分泌は少なくとも約１０％阻害される。別の実施形態において、ＩＬ−２２分泌は少なくとも約１５％阻害される。他の実施形態において、ＩＬ−２２分泌は少なくとも約２０％阻害される。一実施形態において、ＩＬ−２２分泌は少なくとも約２５％阻害される。別の実施形態において、ＩＬ−２２分泌は少なくとも約３０％阻害される。いくつかの実施形態において、ＩＬ−２２分泌は少なくとも約３５％阻害される。一実施形態において、ＩＬ−２２分泌は少なくとも約４０％阻害される。別の実施形態において、ＩＬ−２２分泌は少なくとも約４５％阻害される。他の実施形態において、ＩＬ−２２分泌は少なくとも約５０％阻害される。いくつかの実施形態において、ＩＬ−２２分泌は少なくとも約５５％阻害される。別の実施形態において、ＩＬ−２２分泌は少なくとも約６０％阻害される。一実施形態において、ＩＬ−２２分泌は少なくとも約６５％阻害される。一実施形態において、ＩＬ−２２分泌は少なくとも約７０％阻害される。別の実施形態において、ＩＬ−２２分泌は少なくとも約７５％阻害される。いくつかの実施形態において、ＩＬ−２２分泌は少なくとも約８０％阻害される。他の実施形態において、ＩＬ−２２分泌は少なくとも約８５％阻害される。別の実施形態において、ＩＬ−２２分泌は少なくとも約９０％阻害される。一実施形態において、ＩＬ−２２分泌は少なくとも約９５％阻害される。いくつかの実施形態において、ＩＬ−２２分泌は少なくとも約９８％阻害される。別の実施形態において、ＩＬ−２２分泌は少なくとも約９９％阻害される。具体的な実施形態において、ＩＬ−２２分泌は少なくとも約２５％または３５％、任意により約７５％まで阻害される。いくつかの実施形態において、ＩＬ−２２分泌の阻害は本明細書に記載の方法によって評価される。他の実施形態において、ＩＬ−２２分泌の阻害は、当業者にとって公知の方法（例えば、ＭＳＤマルチプレックスアッセイ）によって評価される。具体的な実施形態において、ＩＬ−２２分泌は、抗ＰＤ−１抗体と接触させていない細胞からのＩＬ−２２分泌と比較して阻害される。他の実施形態において、ＩＬ−２２分泌は、非関連抗体（例えば、ＰＤ−１に特異的に結合しない抗体）と接触させた細胞からのＩＬ−２２分泌と比較して阻害される。
【０４４１】
ある実施形態において、ＩＬ−２２分泌は最大でも約５０ｎＭのＥＣ５０で阻害される。他の実施形態において、ＩＬ−２２分泌は最大でも約４０ｎＭのＥＣ５０で阻害される。別の実施形態において、ＩＬ−２２分泌は最大でも約３０ｎＭのＥＣ５０で阻害される。いくつかの実施形態において、ＩＬ−２２分泌は最大でも約２０ｎＭのＥＣ５０で阻害される。一実施形態において、ＩＬ−２２分泌は最大でも約１０ｎＭのＥＣ５０で阻害される。別の実施形態において、ＩＬ−２２分泌は最大でも約５ｎＭのＥＣ５０で阻害される。一実施形態において、ＩＬ−２２分泌は最大でも約１ｎＭのＥＣ５０で阻害される。いくつかの実施形態において、ＩＬ−２２分泌は最大でも約０．７５ｎＭのＥＣ５０で阻害される。別の実施形態において、ＩＬ−２２分泌は最大でも約０．５ｎＭのＥＣ５０で阻害される。他の実施形態において、ＩＬ−２２分泌は最大でも約０．１ｎＭのＥＣ５０で阻害される。一実施形態において、ＩＬ−２２分泌は最大でも約０．０５ｎＭのＥＣ５０で阻害される。別の実施形態において、ＩＬ−２２分泌は最大でも約０．０１ｎＭのＥＣ５０で阻害される。いくつかの実施形態において、ＩＬ−２２分泌は最大でも約０．００５ｎＭのＥＣ５０で阻害される。一実施形態において、ＩＬ−２２分泌は最大でも約０．００１ｎＭのＥＣ５０で阻害される。別の実施形態において、ＩＬ−２２分泌は少なくとも約５０ｎＭのＥＣ５０で阻害される。他の実施形態において、ＩＬ−２２分泌は少なくとも約４０ｎＭのＥＣ５０で阻害される。いくつかの実施形態において、ＩＬ−２２分泌は少なくとも約３０ｎＭのＥＣ５０で阻害される。別の実施形態において、ＩＬ−２２分泌は少なくとも約２０ｎＭのＥＣ５０で阻害される。一実施形態において、ＩＬ−２２分泌は少なくとも約１０ｎＭのＥＣ５０で阻害される。一実施形態において、ＩＬ−２２分泌は少なくとも約５ｎＭのＥＣ５０で阻害される。別の実施形態において、ＩＬ−２２分泌は少なくとも約１ｎＭのＥＣ５０で阻害される。いくつかの実施形態において、ＩＬ−２２分泌は少なくとも約０．７５ｎＭのＥＣ５０で阻害される。他の実施形態において、ＩＬ−２２分泌は少なくとも約０．５ｎＭのＥＣ５０で阻害される。別の実施形態において、ＩＬ−２２分泌は少なくとも約０．１ｎＭのＥＣ５０で阻害される。一実施形態において、ＩＬ−２２分泌は少なくとも約０．０５ｎＭのＥＣ５０で阻害される。いくつかの実施形態において、ＩＬ−２２分泌は少なくとも約０．０１ｎＭのＥＣ５０で阻害される。別の実施形態において、ＩＬ−２２分泌は少なくとも約０．００５ｎＭのＥＣ５０で阻害される。一実施形態において、ＩＬ−２２分泌は少なくとも約０．００１ｎＭのＥＣ５０で阻害される。いくつかの実施形態において、ＥＣ５０は本明細書に記載の方法によって評価される。他の実施形態において、ＥＣ５０は当業者にとって公知の方法（例えば、ＭＳＤマルチプレックスアッセイ）によって評価される。具体的な実施形態において、ＩＬ−２２分泌は、抗ＰＤ−１抗体と接触させていない細胞からのＩＬ−２２分泌と比較して阻害される。他の実施形態において、ＩＬ−２２分泌は、非関連抗体（例えば、ＰＤ−１に特異的に結合しない抗体）と接触させた細胞からのＩＬ−２２分泌と比較して阻害される。
【０４４２】
いくつかの実施形態において、本明細書では、本明細書で提供するＰＤ−１（例えば、ヒトＰＤ−１のＥＣＤまたはヒトＰＤ−１のＥＣＤのエピトープ）に特異的に結合する抗体と細胞を接触させることを含む、細胞からのＩＬ−２３分泌を阻害する方法を提供する。具体的な実施形態において、細胞はＴ細胞である。ある実施形態において、本明細書に記載の有効量の抗体またはその抗原結合断片と細胞を接触させる。ある実施形態において、抗体は、抗体ＰＤ１ＡＢ−１、ＰＤ１ＡＢ−２、ＰＤ１ＡＢ−３、ＰＤ１ＡＢ−４、ＰＤ１ＡＢ−５、もしくはＰＤ１ＡＢ−６の任意の１つもしくはその抗原結合断片、または抗体ＰＤ１ＡＢ−１、ＰＤ１ＡＢ−２、ＰＤ１ＡＢ−３、ＰＤ１ＡＢ−４、ＰＤ１ＡＢ−５、もしくはＰＤ１ＡＢ−６の任意の１つのＣＤＲを含む抗体である。
【０４４３】
一実施形態において、ＩＬ−２３分泌は少なくとも約５％阻害される。いくつかの実施形態において、ＩＬ−２３分泌は少なくとも約１０％阻害される。別の実施形態において、ＩＬ−２３分泌は少なくとも約１５％阻害される。他の実施形態において、ＩＬ−２３分泌は少なくとも約２０％阻害される。一実施形態において、ＩＬ−２３分泌は少なくとも約２５％阻害される。別の実施形態において、ＩＬ−２３分泌は少なくとも約３０％阻害される。いくつかの実施形態において、ＩＬ−２３分泌は少なくとも約３５％阻害される。一実施形態において、ＩＬ−２３分泌は少なくとも約４０％阻害される。別の実施形態において、ＩＬ−２３分泌は少なくとも約４５％阻害される。他の実施形態において、ＩＬ−２３分泌は少なくとも約５０％阻害される。いくつかの実施形態において、ＩＬ−２３分泌は少なくとも約５５％阻害される。別の実施形態において、ＩＬ−２３分泌は少なくとも約６０％阻害される。一実施形態において、ＩＬ−２３分泌は少なくとも約６５％阻害される。一実施形態において、ＩＬ−２３分泌は少なくとも約７０％阻害される。別の実施形態において、ＩＬ−２３分泌は少なくとも約７５％阻害される。いくつかの実施形態において、ＩＬ−２３分泌は少なくとも約８０％阻害される。他の実施形態において、ＩＬ−２３分泌は少なくとも約８５％阻害される。別の実施形態において、ＩＬ−２３分泌は少なくとも約９０％阻害される。一実施形態において、ＩＬ−２３分泌は少なくとも約９５％阻害される。いくつかの実施形態において、ＩＬ−２３分泌は少なくとも約９８％阻害される。別の実施形態において、ＩＬ−２３分泌は少なくとも約９９％阻害される。具体的な実施形態において、ＩＬ−２３分泌は少なくとも約２５％または３５％、任意により約７５％まで阻害される。いくつかの実施形態において、ＩＬ−２３分泌の阻害は本明細書に記載の方法によって評価される。他の実施形態において、ＩＬ−２３分泌の阻害は、当業者にとって公知の方法（例えば、ＭＳＤマルチプレックスアッセイ）によって評価される。具体的な実施形態において、ＩＬ−２３分泌は、抗ＰＤ−１抗体と接触させていない細胞からのＩＬ−２３分泌と比較して阻害される。他の実施形態において、ＩＬ−２３分泌は、非関連抗体（例えば、ＰＤ−１に特異的に結合しない抗体）と接触させた細胞からのＩＬ−２３分泌と比較して阻害される。
【０４４４】
ある実施形態において、ＩＬ−２３分泌は最大でも約５０ｎＭのＥＣ５０で阻害される。他の実施形態において、ＩＬ−２３分泌は最大でも約４０ｎＭのＥＣ５０で阻害される。別の実施形態において、ＩＬ−２３分泌は最大でも約３０ｎＭのＥＣ５０で阻害される。いくつかの実施形態において、ＩＬ−２３分泌は最大でも約２０ｎＭのＥＣ５０で阻害される。一実施形態において、ＩＬ−２３分泌は最大でも約１０ｎＭのＥＣ５０で阻害される。別の実施形態において、ＩＬ−２３分泌は最大でも約５ｎＭのＥＣ５０で阻害される。一実施形態において、ＩＬ−２３分泌は最大でも約１ｎＭのＥＣ５０で阻害される。いくつかの実施形態において、ＩＬ−２３分泌は最大でも約０．７５ｎＭのＥＣ５０で阻害される。別の実施形態において、ＩＬ−２３分泌は最大でも約０．５ｎＭのＥＣ５０で阻害される。他の実施形態において、ＩＬ−２３分泌は最大でも約０．１ｎＭのＥＣ５０で阻害される。一実施形態において、ＩＬ−２３分泌は最大でも約０．０５ｎＭのＥＣ５０で阻害される。別の実施形態において、ＩＬ−２３分泌は最大でも約０．０１ｎＭのＥＣ５０で阻害される。いくつかの実施形態において、ＩＬ−２３分泌は最大でも約０．００５ｎＭのＥＣ５０で阻害される。一実施形態において、ＩＬ−２３分泌は最大でも約０．００１ｎＭのＥＣ５０で阻害される。別の実施形態において、ＩＬ−２３分泌は少なくとも約５０ｎＭのＥＣ５０で阻害される。他の実施形態において、ＩＬ−２３分泌は少なくとも約４０ｎＭのＥＣ５０で阻害される。いくつかの実施形態において、ＩＬ−２３分泌は少なくとも約３０ｎＭのＥＣ５０で阻害される。別の実施形態において、ＩＬ−２３分泌は少なくとも約２０ｎＭのＥＣ５０で阻害される。一実施形態において、ＩＬ−２３分泌は少なくとも約１０ｎＭのＥＣ５０で阻害される。一実施形態において、ＩＬ−２３分泌は少なくとも約５ｎＭのＥＣ５０で阻害される。別の実施形態において、ＩＬ−２３分泌は少なくとも約１ｎＭのＥＣ５０で阻害される。いくつかの実施形態において、ＩＬ−２３分泌は少なくとも約０．７５ｎＭのＥＣ５０で阻害される。他の実施形態において、ＩＬ−２３分泌は少なくとも約０．５ｎＭのＥＣ５０で阻害される。別の実施形態において、ＩＬ−２３分泌は少なくとも約０．１ｎＭのＥＣ５０で阻害される。一実施形態において、ＩＬ−２３分泌は少なくとも約０．０５ｎＭのＥＣ５０で阻害される。いくつかの実施形態において、ＩＬ−２３分泌は少なくとも約０．０１ｎＭのＥＣ５０で阻害される。別の実施形態において、ＩＬ−２３分泌は少なくとも約０．００５ｎＭのＥＣ５０で阻害される。一実施形態において、ＩＬ−２３分泌は少なくとも約０．００１ｎＭのＥＣ５０で阻害される。いくつかの実施形態において、ＥＣ５０は本明細書に記載の方法によって評価される。他の実施形態において、ＥＣ５０は当業者にとって公知の方法（例えば、ＭＳＤマルチプレックスアッセイ）によって評価される。具体的な実施形態において、ＩＬ−２３分泌は、抗ＰＤ−１抗体と接触させていない細胞からのＩＬ−２３分泌と比較して阻害される。他の実施形態において、ＩＬ−２３分泌は、非関連抗体（例えば、ＰＤ−１に特異的に結合しない抗体）と接触させた細胞からのＩＬ−２３分泌と比較して阻害される。
【０４４５】
いくつかの実施形態において、本明細書では、本明細書で提供するＰＤ−１（例えば、ヒトＰＤ−１のＥＣＤまたはヒトＰＤ−１のＥＣＤのエピトープ）に特異的に結合する抗体と細胞を接触させることを含む、細胞からのＧＭ−ＣＳＦ分泌を阻害する方法を提供する。具体的な実施形態において、細胞はＴ細胞である。ある実施形態において、本明細書に記載の有効量の抗体またはその抗原結合断片と細胞を接触させる。ある実施形態において、抗体は、抗体ＰＤ１ＡＢ−１、ＰＤ１ＡＢ−２、ＰＤ１ＡＢ−３、ＰＤ１ＡＢ−４、ＰＤ１ＡＢ−５、もしくはＰＤ１ＡＢ−６の任意の１つもしくはその抗原結合断片、または抗体ＰＤ１ＡＢ−１、ＰＤ１ＡＢ−２、ＰＤ１ＡＢ−３、ＰＤ１ＡＢ−４、ＰＤ１ＡＢ−５、もしくはＰＤ１ＡＢ−６の任意の１つのＣＤＲを含む抗体である。
【０４４６】
一実施形態において、ＧＭ−ＣＳＦ分泌は少なくとも約５％阻害される。いくつかの実施形態において、ＧＭ−ＣＳＦ分泌は少なくとも約１０％阻害される。別の実施形態において、ＧＭ−ＣＳＦ分泌は少なくとも約１５％阻害される。他の実施形態において、ＧＭ−ＣＳＦ分泌は少なくとも約２０％阻害される。一実施形態において、ＧＭ−ＣＳＦ分泌は少なくとも約２５％阻害される。別の実施形態において、ＧＭ−ＣＳＦ分泌は少なくとも約３０％阻害される。いくつかの実施形態において、ＧＭ−ＣＳＦ分泌は少なくとも約３５％阻害される。一実施形態において、ＧＭ−ＣＳＦ分泌は少なくとも約４０％阻害される。別の実施形態において、ＧＭ−ＣＳＦ分泌は少なくとも約４５％阻害される。他の実施形態において、ＧＭ−ＣＳＦ分泌は少なくとも約５０％阻害される。いくつかの実施形態において、ＧＭ−ＣＳＦ分泌は少なくとも約５５％阻害される。別の実施形態において、ＧＭ−ＣＳＦ分泌は少なくとも約６０％阻害される。一実施形態において、ＧＭ−ＣＳＦ分泌は少なくとも約６５％阻害される。一実施形態において、ＧＭ−ＣＳＦ分泌は少なくとも約７０％阻害される。別の実施形態において、ＧＭ−ＣＳＦ分泌は少なくとも約７５％阻害される。いくつかの実施形態において、ＧＭ−ＣＳＦ分泌は少なくとも約８０％阻害される。他の実施形態において、ＧＭ−ＣＳＦ分泌は少なくとも約８５％阻害される。別の実施形態において、ＧＭ−ＣＳＦ分泌は少なくとも約９０％阻害される。一実施形態において、ＧＭ−ＣＳＦ分泌は少なくとも約９５％阻害される。いくつかの実施形態において、ＧＭ−ＣＳＦ分泌は少なくとも約９８％阻害される。別の実施形態において、ＧＭ−ＣＳＦ分泌は少なくとも約９９％阻害される。具体的な実施形態において、ＧＭ−ＣＳＦ分泌は少なくとも約２５％または３５％、任意により約７５％まで阻害される。いくつかの実施形態において、ＧＭ−ＣＳＦ分泌の阻害は本明細書に記載の方法によって評価される。他の実施形態において、ＧＭ−ＣＳＦ分泌の阻害は、当業者にとって公知の方法（例えば、ＭｅｓｏＳｃａｌｅ（商標）Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ（ＭＳＤ）マルチプレックスアッセイ）によって評価される。具体的な実施形態において、ＧＭ−ＣＳＦ分泌は、抗ＰＤ−１抗体と接触させていない細胞からのＧＭ−ＣＳＦ分泌と比較して阻害される。他の実施形態において、ＩＬ−２分泌は、非関連抗体（例えば、ＰＤ−１に特異的に結合しない抗体）と接触させた細胞からのＧＭ−ＣＳＦ分泌と比較して阻害される。
【０４４７】
ある実施形態において、ＧＭ−ＣＳＦ分泌は最大でも約５０ｎＭのＥＣ５０で阻害される。他の実施形態において、ＧＭ−ＣＳＦ分泌は最大でも約４０ｎＭのＥＣ５０で阻害される。別の実施形態において、ＧＭ−ＣＳＦ分泌は最大でも約３０ｎＭのＥＣ５０で阻害される。いくつかの実施形態において、ＧＭ−ＣＳＦ分泌は最大でも約２０ｎＭのＥＣ５０で阻害される。一実施形態において、ＧＭ−ＣＳＦ分泌は最大でも約１０ｎＭのＥＣ５０で阻害される。別の実施形態において、ＧＭ−ＣＳＦ分泌は最大でも約５ｎＭのＥＣ５０で阻害される。一実施形態において、ＧＭ−ＣＳＦ分泌は最大でも約１ｎＭのＥＣ５０で阻害される。いくつかの実施形態において、ＧＭ−ＣＳＦ分泌は最大でも約０．７５ｎＭのＥＣ５０で阻害される。別の実施形態において、ＧＭ−ＣＳＦ分泌は最大でも約０．５ｎＭのＥＣ５０で阻害される。他の実施形態において、ＧＭ−ＣＳＦ分泌は最大でも約０．１ｎＭのＥＣ５０で阻害される。一実施形態において、ＧＭ−ＣＳＦ分泌は最大でも約０．０５ｎＭのＥＣ５０で阻害される。別の実施形態において、ＧＭ−ＣＳＦ分泌は最大でも約０．０１ｎＭのＥＣ５０で阻害される。いくつかの実施形態において、ＧＭ−ＣＳＦ分泌は最大でも約０．００５ｎＭのＥＣ５０で阻害される。一実施形態において、ＧＭ−ＣＳＦ分泌は最大でも約０．００１ｎＭのＥＣ５０で阻害される。別の実施形態において、ＧＭ−ＣＳＦ分泌は少なくとも約５０ｎＭのＥＣ５０で阻害される。他の実施形態において、ＧＭ−ＣＳＦ分泌は少なくとも約４０ｎＭのＥＣ５０で阻害される。いくつかの実施形態において、ＧＭ−ＣＳＦ分泌は少なくとも約３０ｎＭのＥＣ５０で阻害される。別の実施形態において、ＧＭ−ＣＳＦ分泌は少なくとも約２０ｎＭのＥＣ５０で阻害される。一実施形態において、ＧＭ−ＣＳＦ分泌は少なくとも約１０ｎＭのＥＣ５０で阻害される。一実施形態において、ＧＭ−ＣＳＦ分泌は少なくとも約５ｎＭのＥＣ５０で阻害される。別の実施形態において、ＧＭ−ＣＳＦ分泌は少なくとも約１ｎＭのＥＣ５０で阻害される。いくつかの実施形態において、ＧＭ−ＣＳＦ分泌は少なくとも約０．７５ｎＭのＥＣ５０で阻害される。他の実施形態において、ＧＭ−ＣＳＦ分泌は少なくとも約０．５ｎＭのＥＣ５０で阻害される。別の実施形態において、ＧＭ−ＣＳＦ分泌は少なくとも約０．１ｎＭのＥＣ５０で阻害される。一実施形態において、ＧＭ−ＣＳＦ分泌は少なくとも約０．０５ｎＭのＥＣ５０で阻害される。いくつかの実施形態において、ＧＭ−ＣＳＦ分泌は少なくとも約０．０１ｎＭのＥＣ５０で阻害される。別の実施形態において、ＧＭ−ＣＳＦ分泌は少なくとも約０．００５ｎＭのＥＣ５０で阻害される。一実施形態において、ＧＭ−ＣＳＦ分泌は少なくとも約０．００１ｎＭのＥＣ５０で阻害される。いくつかの実施形態において、ＥＣ５０は本明細書に記載の方法によって評価される。他の実施形態において、ＥＣ５０は当業者にとって公知の方法（例えば、ＭＳＤマルチプレックスアッセイ）によって評価される。具体的な実施形態において、ＧＭ−ＣＳＦ分泌は、抗ＰＤ−１抗体と接触させていない細胞からのＧＭ−ＣＳＦ分泌と比較して阻害される。他の実施形態において、ＩＬ−２分泌は、非関連抗体（例えば、ＰＤ−１に特異的に結合しない抗体）と接触させた細胞からのＧＭ−ＣＳＦ分泌と比較して阻害される。
【０４４８】
いくつかの実施形態において、本明細書では、本明細書で提供するＰＤ−１（例えば、ヒトＰＤ−１のＥＣＤまたはヒトＰＤ−１のＥＣＤのエピトープ）に特異的に結合する抗体と細胞を接触させることを含む、細胞からのＴＮＦ−α分泌を阻害する方法を提供する。具体的な実施形態において、細胞はＴ細胞である。ある実施形態において、本明細書に記載の有効量の抗体またはその抗原結合断片と細胞を接触させる。ある実施形態において、抗体は、抗体ＰＤ１ＡＢ−１、ＰＤ１ＡＢ−２、ＰＤ１ＡＢ−３、ＰＤ１ＡＢ−４、ＰＤ１ＡＢ−５、もしくはＰＤ１ＡＢ−６の任意の１つもしくはその抗原結合断片、または抗体ＰＤ１ＡＢ−１、ＰＤ１ＡＢ−２、ＰＤ１ＡＢ−３、ＰＤ１ＡＢ−４、ＰＤ１ＡＢ−５、もしくはＰＤ１ＡＢ−６の任意の１つのＣＤＲを含む抗体である。
【０４４９】
一実施形態において、ＴＮＦ−α分泌は少なくとも約５％阻害される。いくつかの実施形態において、ＴＮＦ−α分泌は少なくとも約１０％阻害される。別の実施形態において、ＴＮＦ−α分泌は少なくとも約１５％阻害される。他の実施形態において、ＴＮＦ−α分泌は少なくとも約２０％阻害される。一実施形態において、ＴＮＦ−α分泌は少なくとも約２５％阻害される。別の実施形態において、ＴＮＦ−α分泌は少なくとも約３０％阻害される。いくつかの実施形態において、ＴＮＦ−α分泌は少なくとも約３５％阻害される。一実施形態において、ＴＮＦ−α分泌は少なくとも約４０％阻害される。別の実施形態において、ＴＮＦ−α分泌は少なくとも約４５％阻害される。他の実施形態において、ＴＮＦ−α分泌は少なくとも約５０％阻害される。いくつかの実施形態において、ＴＮＦ−α分泌は少なくとも約５５％阻害される。別の実施形態において、ＴＮＦ−α分泌は少なくとも約６０％阻害される。一実施形態において、ＴＮＦ−α分泌は少なくとも約６５％阻害される。一実施形態において、ＴＮＦ−α分泌は少なくとも約７０％阻害される。別の実施形態において、ＴＮＦ−α分泌は少なくとも約７５％阻害される。いくつかの実施形態において、ＴＮＦ−α分泌は少なくとも約８０％阻害される。他の実施形態において、ＴＮＦ−α分泌は少なくとも約８５％阻害される。別の実施形態において、ＴＮＦ−α分泌は少なくとも約９０％阻害される。一実施形態において、ＴＮＦ−α分泌は少なくとも約９５％阻害される。いくつかの実施形態において、ＴＮＦ−α分泌は少なくとも約９８％阻害される。別の実施形態において、ＴＮＦ−α分泌は少なくとも約９９％阻害される。具体的な実施形態において、ＴＮＦ−α分泌は少なくとも約２５％または３５％、任意により約７５％まで阻害される。いくつかの実施形態において、ＴＮＦ−α分泌の阻害は本明細書に記載の方法によって評価される。他の実施形態において、ＴＮＦ−α分泌の阻害は、当業者にとって公知の方法（例えば、ＭＳＤマルチプレックスアッセイ）によって評価される。具体的な実施形態において、ＴＮＦ−α分泌は、抗ＰＤ−１抗体と接触させていない細胞からのＴＮＦ−α分泌と比較して阻害される。他の実施形態において、ＴＮＦ−α分泌は、非関連抗体（例えば、ＰＤ−１に特異的に結合しない抗体）と接触させた細胞からのＴＮＦ−α分泌と比較して阻害される。
【０４５０】
ある実施形態において、ＴＮＦ−α分泌は最大でも約５０ｎＭのＥＣ５０で阻害される。他の実施形態において、ＴＮＦ−α分泌は最大でも約４０ｎＭのＥＣ５０で阻害される。別の実施形態において、ＴＮＦ−α分泌は最大でも約３０ｎＭのＥＣ５０で阻害される。いくつかの実施形態において、ＴＮＦ−α分泌は最大でも約２０ｎＭのＥＣ５０で阻害される。一実施形態において、ＴＮＦ−α分泌は最大でも約１０ｎＭのＥＣ５０で阻害される。別の実施形態において、ＴＮＦ−α分泌は最大でも約５ｎＭのＥＣ５０で阻害される。一実施形態において、ＴＮＦ−α分泌は最大でも約１ｎＭのＥＣ５０で阻害される。いくつかの実施形態において、ＴＮＦ−α分泌は最大でも約０．７５ｎＭのＥＣ５０で阻害される。別の実施形態において、ＴＮＦ−α分泌は最大でも約０．５ｎＭのＥＣ５０で阻害される。他の実施形態において、ＴＮＦ−α分泌は最大でも約０．１ｎＭのＥＣ５０で阻害される。一実施形態において、ＴＮＦ−α分泌は最大でも約０．０５ｎＭのＥＣ５０で阻害される。別の実施形態において、ＴＮＦ−α分泌は最大でも約０．０１ｎＭのＥＣ５０で阻害される。いくつかの実施形態において、ＴＮＦ−α分泌は最大でも約０．００５ｎＭのＥＣ５０で阻害される。一実施形態において、ＴＮＦ−α分泌は最大でも約０．００１ｎＭのＥＣ５０で阻害される。別の実施形態において、ＴＮＦ−α分泌は少なくとも約５０ｎＭのＥＣ５０で阻害される。他の実施形態において、ＴＮＦ−α分泌は少なくとも約４０ｎＭのＥＣ５０で阻害される。いくつかの実施形態において、ＴＮＦ−α分泌は少なくとも約３０ｎＭのＥＣ５０で阻害される。別の実施形態において、ＴＮＦ−α分泌は少なくとも約２０ｎＭのＥＣ５０で阻害される。一実施形態において、ＴＮＦ−α分泌は少なくとも約１０ｎＭのＥＣ５０で阻害される。一実施形態において、ＴＮＦ−α分泌は少なくとも約５ｎＭのＥＣ５０で阻害される。別の実施形態において、ＴＮＦ−α分泌は少なくとも約１ｎＭのＥＣ５０で阻害される。いくつかの実施形態において、ＴＮＦ−α分泌は少なくとも約０．７５ｎＭのＥＣ５０で阻害される。他の実施形態において、ＴＮＦ−α分泌は少なくとも約０．５ｎＭのＥＣ５０で阻害される。別の実施形態において、ＴＮＦ−α分泌は少なくとも約０．１ｎＭのＥＣ５０で阻害される。一実施形態において、ＴＮＦ−α分泌は少なくとも約０．０５ｎＭのＥＣ５０で阻害される。いくつかの実施形態において、ＴＮＦ−α分泌は少なくとも約０．０１ｎＭのＥＣ５０で阻害される。別の実施形態において、ＴＮＦ−α分泌は少なくとも約０．００５ｎＭのＥＣ５０で阻害される。一実施形態において、ＴＮＦ−α分泌は少なくとも約０．００１ｎＭのＥＣ５０で阻害される。いくつかの実施形態において、ＥＣ５０は本明細書に記載の方法によって評価される。他の実施形態において、ＥＣ５０は当業者にとって公知の方法（例えば、ＭＳＤマルチプレックスアッセイ）によって評価される。具体的な実施形態において、ＴＮＦ−α分泌は、抗ＰＤ−１抗体と接触させていない細胞からのＴＮＦ−α分泌と比較して阻害される。他の実施形態において、ＴＮＦ−α分泌は、非関連抗体（例えば、ＰＤ−１に特異的に結合しない抗体）と���触させた細胞からのＴＮＦ−α分泌と比較して阻害される。
【０４５１】
いくつかの実施形態において、本明細書では、本明細書で提供するＰＤ−１（例えば、ヒトＰＤ−１のＥＣＤまたはヒトＰＤ−１のＥＣＤのエピトープ）に特異的に結合する抗体と細胞を接触させることを含む、細胞におけるＰＤ−１発現を下方調節する方法を提供する。具体的な実施形態において、細胞はＴ細胞である。ある実施形態において、本明細書に記載の有効量の抗体またはその抗原結合断片と細胞を接触させる。ある実施形態において、抗体は、抗体ＰＤ１ＡＢ−１、ＰＤ１ＡＢ−２、ＰＤ１ＡＢ−３、ＰＤ１ＡＢ−４、ＰＤ１ＡＢ−５、もしくはＰＤ１ＡＢ−６の任意の１つもしくはその抗原結合断片、または抗体ＰＤ１ＡＢ−１、ＰＤ１ＡＢ−２、ＰＤ１ＡＢ−３、ＰＤ１ＡＢ−４、ＰＤ１ＡＢ−５、もしくはＰＤ１ＡＢ−６の任意の１つのＣＤＲを含む抗体である。
【０４５２】
一実施形態において、ＰＤ−１発現は少なくとも約５％下方調節される。一実施形態において、ＰＤ−１発現は少なくとも約１０％下方調節される。別の実施形態において、ＰＤ−１発現は少なくとも約１５％下方調節される。いくつかの実施形態において、ＰＤ−１発現は少なくとも約２０％下方調節される。他の実施形態において、ＰＤ−１発現は少なくとも約２５％下方調節される。別の実施形態において、ＰＤ−１発現は少なくとも約３０％下方調節される。一実施形態において、ＰＤ−１発現は少なくとも約３５％下方調節される。いくつかの実施形態において、ＰＤ−１発現は少なくとも約４０％下方調節される。別の実施形態において、ＰＤ−１発現は少なくとも約４５％下方調節される。一実施形態において、ＰＤ−１発現は少なくとも約５０％下方調節される。他の実施形態において、ＰＤ−１発現は少なくとも約５５％下方調節される。別の実施形態において、ＰＤ−１発現は少なくとも約６０％下方調節される。いくつかの実施形態において、ＰＤ−１発現は少なくとも約６５％下方調節される。一実施形態において、ＰＤ−１発現は少なくとも約７０％下方調節される。別の実施形態において、ＰＤ−１発現は少なくとも約７５％下方調節される。一実施形態において、ＰＤ−１発現は少なくとも約８０％下方調節される。いくつかの実施形態において、ＰＤ−１発現は少なくとも約８５％下方調節される。別の実施形態において、ＰＤ−１発現は少なくとも約９０％下方調節される。他の実施形態において、ＰＤ−１発現は少なくとも約９５％下方調節される。一実施形態において、ＰＤ−１発現は少なくとも約９８％下方調節される。別の実施形態において、ＰＤ−１発現は少なくとも約９９％下方調節される。具体的な実施形態において、本明細書で提供する抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＰＤ−１発現を少なくとも約２５％または３５％、任意により約７５％まで下方調節する。いくつかの実施形態において、ＰＤ−１発現の下方調節は本明細書に記載の方法によって評価される。他の実施形態において、ＰＤ−１発現の下方調節は、当業者にとって公知の方法（例えば、フローサイトメトリー、ウエスタンブロッティング、ノーザンブロッティング、またはＲＴ−ＰＣＲ）によって評価される。具体的な実施形態において、ＰＤ−１発現の下方調節はフローサイトメトリーによって評価される。別の実施形態において、ＰＤ−１発現の下方調節はウエスタンブロッティングによって評価される。さらに別の実施形態において、ＰＤ−１発現の下方調節はノーザンブロッティングによって評価される。さらに別の実施形態において、ＰＤ−１発現の下方調節はＲＴ−ＰＣＲによって評価される。具体的な実施形態において、ＰＤ−１発現は、抗ＰＤ−１抗体と接触させていない細胞におけるＰＤ−１発現と比較して下方調節される。他の実施形態において、ＰＤ−１発現は、非関連抗体（例えば、ＰＤ−１に特異的に結合しない抗体）と接触させた細胞におけるＰＤ−１発現と比較して下方調節される。
【０４５３】
一実施形態において、本明細書では、有効量の本明細書で提供する抗体またはその抗原結合断片とＴ細胞を接触させることを含む、Ｔ細胞の表面上のＰＤ−１発現を下方調節する方法を提供する。一実施形態において、抗体またはその抗原結合断片によるＰＤ−１発現の最大下方調節率は、少なくとも約１０％である。一実施形態において、抗体またはその抗原結合断片によるＰＤ−１発現の最大下方調節率は、少なくとも約２０％である。一実施形態において、抗体またはその抗原結合断片によるＰＤ−１発現の最大下方調節率は、少なくとも約３０％である。一実施形態において、抗体またはその抗原結合断片によるＰＤ−１発現の最大下方調節率は、少なくとも約４０％である。一実施形態において、抗体またはその抗原結合断片によるＰＤ−１発現の最大下方調節率は、少なくとも約４５％である。一実施形態において、抗体またはその抗原結合断片によるＰＤ−１発現の最大下方調節率は、少なくとも約５０％である。一実施形態において、抗体またはその抗原結合断片によるＰＤ−１発現の最大下方調節率は、少なくとも約５５％である。一実施形態において、抗体またはその抗原結合断片によるＰＤ−１発現の最大下方調節率は、少なくとも約６０％である。一実施形態において、抗体またはその抗原結合断片によるＰＤ−１発現の最大下方調節率は、少なくとも約６５％である。一実施形態において、抗体またはその抗原結合断片によるＰＤ−１発現の最大下方調節率は、少なくとも約７０％である。一実施形態において、抗体またはその抗原結合断片によるＰＤ−１発現の最大下方調節率は、少なくとも約７５％である。一実施形態において、抗体またはその抗原結合断片によるＰＤ−１発現の最大下方調節率は、少なくとも約８０％である。一実施形態において、抗体またはその抗原結合断片によるＰＤ−１発現の最大下方調節率は、少なくとも約８５％である。一実施形態において、抗体またはその抗原結合断片によるＰＤ−１発現の最大下方調節率は、少なくとも約９０％である。一実施形態において、抗体またはその抗原結合断片によるＰＤ−１発現の最大下方調節率は、少なくとも約９５％である。一実施形態において、抗体またはその抗原結合断片によるＰＤ−１発現の最大下方調節率は、少なくとも約１００％である。
【０４５４】
ある実施形態において、Ｔ細胞の表面上のＰＤ−１発現の下方調節は、早ければ抗体またはその抗原結合断片との接触の４時間後にでも生じる。他の実施形態において、Ｔ細胞の表面上のＰＤ−１発現の下方調節は、早ければ抗体またはその抗原結合断片との接触の４時間、６時間、８時間、１０時間、１２時間、１４時間、１６時間、１８時間、２０時間、または２２時間後にでも生じる。一実施形態において、下方調節は早ければ接触の４時間後にでも生じる。一実施形態において、下方調節は早ければ接触の６時間後にでも生じる。別の実施形態において、下方調節は早ければ接触の８時間後にでも生じる。他の実施形態において、下方調節は早ければ接触の１０時間後にでも生じる。いくつかの実施形態において、下方調節は早ければ接触の１２時間後にでも生じる。一実施形態において、下方調節は早ければ接触の１４時間後にでも生じる。別の実施形態において、下方調節は早ければ接触の１６時間後にでも生じる。いくつかの実施形態において、下方調節は早ければ接触の１８時間後にでも生じる。他の実施形態において、下方調節は早ければ接触の２０時間後にでも生じる。他の実施形態において、下方調節は早ければ接触の２２時間後にでも生じる。さらに他の実施形態において、Ｔ細胞の表面上のＰＤ−１発現の下方調節は、早ければ抗体またはその抗原結合断片との接触の２４時間後にでも生じる。
【０４５５】
一実施形態において、Ｔ細胞の表面上のＰＤ−１発現の下方調節はサイトカイン阻害に先行する。別の実施形態において、Ｔ細胞の表面上のＰＤ−１発現の下方調節はサイトカイン阻害と同時に生じる。さらに別の実施形態において、Ｔ細胞の表面上のＰＤ−１発現の下方調節の前にサイトカイン阻害が生じる。ある実施形態において、サイトカインは、ＩＬ−２、ＩＬ−１７、ＩＦＮ−γ、またはこれらの任意の組合せである。一実施形態において、サイトカインはＩＬ−２である。別の実施形態において、サイトカインはＩＬ−１７である。他の実施形態において、サイトカインはＩＦＮ−γである。ある実施形態において、サイトカインは、ＩＬ−１、ＩＬ−２、ＩＬ−６、ＩＬ−１２、ＩＬ−１７、ＩＬ−２２、ＩＬ−２３、ＧＭ−ＣＳＦ、ＩＦＮ−γ、及びＴＮＦ−αからなる群から選択される。ある実施形態において、サイトカインはＩＬ−１である。他の実施形態において、サイトカインはＩＬ−６である。さらに他の実施形態において、サイトカインはＩＬ−１２である。さらに他の実施形態において、サイトカインはＩＬ−２２である。ある実施形態において、サイトカインはＩＬ−２３である。いくつかの実施形態において、サイトカインはＧＭ−ＣＳＦである。他の実施形態において、サイトカインはＴＮＦ−αである。上述のサイトカインの２つ、３つまたはこれより多くの他の組合せも企図する。
【０４５６】
他の態様において、本開示の抗ＰＤ−１抗体及びその断片は生体試料中のＰＤ−１の存在を検出するのに有用である。そのような抗ＰＤ−１抗体としては、ヒト及び／またはカニクイザルＰＤ−１に結合するが、ＰＤ−１シグナル伝達活性を誘発しないものが挙げられ得る。用語「検出」は、本明細書で用いる場合、定量的または定性的検出を包含する。ある実施形態において、生体試料は、体液、細胞、または組織を含む。
【０４５７】
４．５医薬組成物
一態様において、本開示は、少なくとも１つの本開示の抗ＰＤ−１抗体を含む医薬組成物をさらに提供する。いくつかの実施形態において、医薬組成物は、１）抗ＰＤ−１抗体、及び２）医薬品として許容可能な担体を含む。
【０４５８】
抗体を含む医薬組成物は、所望の純度を有する抗体を、任意選択の生理的に許容される担体、賦形剤、または安定剤（例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ，Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ（１８ｔｈ  ｅｄ．１９８０）を参照）と混合することによって、水溶液の形態または凍結乾燥もしくは他の乾燥形態で貯蔵用に調製される。
【０４５９】
本開示の抗体は、標的細胞／組織への送達に適した任意の形態で、例えば、マイクロカプセルまたはマクロエマルションとして（Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ（上記）；  Ｐａｒｋ  ｅｔ  ａｌ．，２００５，Ｍｏｌｅｃｕｌｅｓ  １０：１４６−６１；Ｍａｌｉｋ  ｅｔ  ａｌ．，２００７，Ｃｕｒｒ．Ｄｒｕｇ．Ｄｅｌｉｖ．４：１４１−５１）、持続放出性製剤として（Ｐｕｔｎｅｙ  ａｎｄ  Ｂｕｒｋｅ，１９９８，Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．１６：１５３−５７）、またはリポソーム中に（Ｍａｃｌｅａｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９９７，Ｉｎｔ．Ｊ．Ｏｎｃｏｌ．１１：３２５−３２；Ｋｏｎｔｅｒｍａｎｎ，２００６，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｍｏｌ．Ｔｈｅｒ．８：３９−４５）、製剤化され得る。
【０４６０】
本明細書で提供する抗体は、例えば、コアセルベーション技術または界面重合によって調製されたマイクロカプセル、例えば、それぞれ、ヒドロキシメチルセルロースもしくはゼラチンマイクロカプセル及びポリ−（メチルメタクリレート）マイクロカプセル中に、コロイド状薬物送達システム（例えば、リポソーム、アルブミンマイクロスフィア、マイクロエマルション、ナノ粒子、及びナノカプセル）中に、またはマクロエマルション中に閉じ込めることもできる。そのような技術は、例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ（上記）に開示されている。
【０４６１】
様々な組成物及び送達システムが公知であり、本明細書に記載のＰＤ−１に結合する抗体と共に用いることができ、限定はしないが、リポソーム、マイクロ粒子、マイクロカプセル中へのカプセル化、抗体を発現することのできる組換え細胞、受容体媒介エンドサイトーシス（例えば、Ｗｕ  ａｎｄ  Ｗｕ，１９８７，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６２：４４２９−３２を参照）、レトロウイルスまたは他のベクターの一部としての核酸の構築などが挙げられる。別の実施形態において、組成物は制御放出または持続放出システムとして提供することができる。一実施形態において、制御または持続放出を達成するためにポンプが用いられ得る（例えば、Ｌａｎｇｅｒ（上記）；Ｓｅｆｔｏｎ，１９８７，Ｃｒｉｔ．Ｒｅｆ．Ｂｉｏｍｅｄ．Ｅｎｇ．１４：２０１−４０；Ｂｕｃｈｗａｌｄ  ｅｔ  ａｌ．，１９８０，Ｓｕｒｇｅｒｙ  ８８：５０７  １６；及びＳａｕｄｅｋ  ｅｔ  ａｌ．，１９８９，Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３２１：５６９−７４を参照）。別の実施形態において、予防もしくは治療薬（例えば、本明細書に記載のＰＤ−１に結合する抗体）または本発明の組成物の制御または持続放出を達成するためにポリマー材料を用いることができる（例えば、Ｍｅｄｉｃａｌ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ  ｏｆ  Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  Ｒｅｌｅａｓｅ（Ｌａｎｇｅｒ  ａｎｄ  Ｗｉｓｅ  ｅｄｓ．，１９７４）；Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  Ｄｒｕｇ  Ｂｉｏａｖａｉｌａｂｉｌｉｔｙ，Ｄｒｕｇ  Ｐｒｏｄｕｃｔ  Ｄｅｓｉｇｎ  ａｎｄ  Ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ（Ｓｍｏｌｅｎ  ａｎｄ  Ｂａｌｌ  ｅｄｓ．，１９８４）；Ｒａｎｇｅｒ  ａｎｄ  Ｐｅｐｐａｓ，  １９８３，Ｊ．Ｍａｃｒｏｍｏｌ．Ｓｃｉ．Ｒｅｖ．Ｍａｃｒｏｍｏｌ．Ｃｈｅｍ．２３：６１−１２６；Ｌｅｖｙ  ｅｔ  ａｌ．，１９８５，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２２８：１９０−９２；Ｄｕｒｉｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，１９８９，Ａｎｎ．Ｎｅｕｒｏｌ．２５：３５１−５６；Ｈｏｗａｒｄ  ｅｔ  ａｌ．，１９８９，Ｊ．Ｎｅｕｒｏｓｕｒｇ．７１：１０５−１２；米国特許第５，６７９，３７７号；５，９１６，５９７号；５，９１２，０１５号；５，９８９，４６３；及び５，１２８，３２６号；ＰＣＴ公開第ＷＯ  ９９／１５１５４号及びＷＯ  ９９／２０２５３号を参照）。持続放出性製剤に用いられるポリマーの例としては、ポリ（２−ヒドロキシエチルメタクリレート）、ポリ（メチルメタクリレート）、ポリ（アクリル酸）、ポリ（エチレン−ｃｏ−ビニルアセテート）、ポリ（メタクリル酸）、ポリグリコリド（ＰＬＧ）、ポリ無水物、ポリ（Ｎ−ビニルピロリドン）、ポリ（ビニルアルコール）、ポリアクリルアミド、ポリ（エチレングリコール）、ポリラクチド（ＰＬＡ）、ポリ（ラクチド−ｃｏ−グリコリド）（ＰＬＧＡ）、及びポリオルトエステルが挙げられるが、これらに限定されない。一実施形態において、持続放出性製剤に用いられるポリマーは、不活性であり、浸出性不純物を含まず、貯蔵時に安定であり、無菌、かつ生分解性である。
【０４６２】
さらに別の実施形態において、制御または持続放出システムは、特定の標的組織、例えば、鼻道または肺の近くに配置することができるので、全身投与量の一部のみしか必要としない（例えば、Ｇｏｏｄｓｏｎ，Ｍｅｄｉｃａｌ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ  ｏｆ  Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  Ｒｅｌｅａｓｅ  Ｖｏｌ．２，１１５−３８（１９８４）を参照）。制御放出システムは、例えばＬａｎｇｅｒ，１９９０，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４９：１５２７−３３で説明されている。本明細書に記載のＰＤ−１に結合する抗体を１つ以上含む持続放出性製剤を製造するために、当業者にとって公知の任意の技術を用いることができる（例えば、米国特許第４，５２６，９３８号、ＰＣＴ公開第ＷＯ  ９１／０５５４８号及びＷＯ  ９６／２０６９８号、Ｎｉｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，１９９６，Ｒａｄｉｏｔｈｅｒａｐｙ  ＆  Ｏｎｃｏｌｏｇｙ  ３９：１７９−８９；Ｓｏｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，１９９５，ＰＤＡ  Ｊ．ｏｆ  Ｐｈａｒｍａ．Ｓｃｉ．  ＆  Ｔｅｃｈ．５０：３７２−９７；Ｃｌｅｅｋ  ｅｔ  ａｌ．，１９９７，Ｐｒｏ．Ｉｎｔ’ｌ．Ｓｙｍｐ．Ｃｏｎｔｒｏｌ．Ｒｅｌ．Ｂｉｏａｃｔ．Ｍａｔｅｒ．２４：８５３−５４；及びＬａｍ  ｅｔ  ａｌ．，１９９７，Ｐｒｏｃ．Ｉｎｔ’ｌ．Ｓｙｍｐ．Ｃｏｎｔｒｏｌ  Ｒｅｌ．Ｂｉｏａｃｔ．Ｍａｔｅｒ．２４：７５９−６０を参照）。
【０４６３】
４．６キット
本明細書では、好適なパッケージ材料中にパッケージ化された、本明細書で提供する抗体（例えば、抗ＰＤ−１抗体）またはその組成物（例えば、医薬組成物）を含むキットも提供する。キットは任意により、その中の構成要素の説明または構成要素のインビトロ、インビボ、またはエクスビボでの使用説明書をはじめとするラベルまたは添付文書を含む。
【０４６４】
用語「パッケージ材料」は、キットの構成要素を収容する物理的構造体のことをいう。パッケージ材料は構成要素を無菌に維持することができ、そのような目的に一般に用いられる材料（例えば、紙、段ボール、ガラス、プラスチック、ホイル、アンプル、バイアル、チューブなど）で作製することができる。
【０４６５】
本明細書で提供するキットはラベルまたは添付文書を含むことができる。ラベルまたは添付文書としては、別個の、または構成要素、キットもしくはパッケージ材料（例えば、箱）に貼り付けられた、もしくは例えば、キット構成要素が入ったアンプル、チューブ、もしくはバイアルに取り付けられた、「印刷物」、例えば、紙または厚紙が挙げられる。ラベルまたは添付文書としてはさらに、コンピュータ可読媒体、例えば、ディスク（例えば、ハードディスク、カード、記憶ディスク）、ＣＤまたはＤＶＤ−ＲＯＭ／ＲＡＭなどの光ディスクなど、ＤＶＤ、ＭＰ３、磁気テープ、または電気的記憶媒体、例えば、ＲＡＭ及びＲＯＭまたはこれらのハイブリッドなど、例えば、磁気／光記憶媒体、ＦＬＡＳＨ媒体、またはメモリ型カードなどを挙げることができる。ラベルまたは添付文書は、製造業者の情報、ロット番号、製造場所、及び日付を特定する情報を含むことができる。
【０４６６】
本明細書で提供するキットは追加で他の構成要素を含むことができる。キットの各構成要素を個々の容器内に封入することができ、様々な容器のすべてを単一パッケージ内に入れることができる。キットは冷蔵用に設計することもできる。キットはさらに、本明細書で提供する抗体、または本明細書で提供する抗体をコードする核酸を含有する細胞を含むように設計することができる。キット中の細胞は、使用直前まで適切な貯蔵条件の下で維持することができる。
【０４６７】
別途定義しない限り、本明細書で用いるすべての科学技術用語は、本発明が属する技術分野の当業者によって一般に理解されているものと同じ意味を有する。本発明の実施または試験には、本明細書に記載のものと類似または同等の方法及び材料を用いることができるが、好適な方法及び材料を本明細書に記載する。
【０４６８】
本明細書で引用するすべての出願、刊行物、特許ならびに他の参考文献、ＧｅｎＢａｎｋの引用及びＡＴＣＣの引用は、その全体を参照により援用する。矛盾が生じた場合には、定義をはじめとして、本明細書が優先される。
【０４６９】
本明細書で用いる場合、単数形「ａ」、「ａｎ」、及び「ｔｈｅ」は、文脈からそうでないことが明らかに分かる場合を除いて、複数形の指示対象を含む。したがって、例えば、「ａ  ｐｅｐｔｉｄｅ  ｓｅｑｕｅｎｃｅ（ペプチド配列）」への言及は複数のそのような配列を含み、他も同様である。
【０４７０】
本明細書で用いる場合、数値は多くの場合、本明細書全体を通して範囲形式で提示する。範囲形式の使用は単に便宜及び簡潔のためにすぎず、文脈からそうでないことが明らかに分かる場合を除いて、本発明の範囲の融通の利かない限定として解釈されるべきではない。したがって、範囲の使用は、文脈からそうでないことが明らかに分かる場合を除いて、すべての可能な部分範囲、その範囲内のすべての個々の数値、ならびにそのような範囲内の整数及び範囲内の値または整数の分数を含むすべての数値または数値範囲を明示的に含む。この構成は、範囲の幅にかかわらず、本特許文献中の文脈全体において適用される。したがって、例えば、９０〜１００％の範囲への言及は、９１〜９９％、９２〜９８％、９３〜９５％、９１〜９８％、９１〜９７％、９１〜９６％、９１〜９５％、９１〜９４％、９１〜９３％などを含む。９０〜１００％の範囲への言及は、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９５％、９７％など、及び９１．１％、９１．２％、９１．３％、９１．４％、９１．５％など、９２．１％、９２．２％、９２．３％、９２．４％、９２．５％など（以下同様）も含む。
【０４７１】
さらに、１〜３、３〜５、５〜１０、１０〜２０、２０〜３０、３０〜４０、４０〜５０、５０〜６０、６０〜７０、７０〜８０、８０〜９０、９０〜１００、１００〜１１０、１１０〜１２０、１２０〜１３０、１３０〜１４０、１４０〜１５０、１５０〜１６０、１６０〜１７０、１７０〜１８０、１８０〜１９０、１９０〜２００、２００〜２２５、２２５〜２５０の範囲への言及は、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０などを含む。さらなる例において、２５〜２５０、２５０〜５００、５００〜１，０００、１，０００〜２，５００、２，５００〜５，０００、５，０００〜２５，０００、２５，０００〜５０，０００の範囲への言及は、そのような値の中のまたはそれを包含する任意の数値または範囲、例えば、２５、２６、２７、２８、２９．．．２５０、２５１、２５２、２５３、２５４．．．５００、５０１、５０２、５０３、５０４．．．などを含む。
【０４７２】
本明細書でも用いるように、一連の範囲が本明細書全体を通して開示される。一連の範囲の使用は、別の範囲を与える上の範囲及び下の範囲の組合せを含む。この構成は、範囲の幅にかかわらず、本特許文献中の文脈全体において適用される。したがって、例えば、５〜１０、１０〜２０、２０〜３０、３０〜４０、４０〜５０、５０〜７５、７５〜１００、１００〜１５０などの一連の範囲への言及は、５〜２０、５〜３０、５〜４０、５〜５０、５〜７５、５〜１００、５〜１５０、及び１０〜３０、１０〜４０、１０〜５０、１０〜７５、１０〜１００、１０〜１５０、及び２０〜４０、２０〜５０、２０〜７５、２０〜１００、２０〜１５０などを含む。
【０４７３】
簡潔のために、特定の略号を本明細書で用いる。一例としては、アミノ酸残基を表す１文字略号である。アミノ酸ならびにその３文字及び１文字略号は以下の通りである。
【表１０】
2018533973.tif 000028
【０４７４】
本発明は概して、多数の実施形態を記述する肯定的な文言を用いて本明細書で開示される。本発明は具体的に、特定の内容、例えば、物質または材料、方法のステップ及び条件、プロトコール、手順、アッセイまたは分析などが完全にまたは部分的に除外されている実施形態も含む。したがって、本発明は概して、本発明が含まないものに関して本明細書で述べられないが、それでも本発明に明示的には含まれない態様が本明細書で開示される。
【０４７５】
本発明の多くの実施形態について記載した。それでも、本発明の精神及び範囲から逸脱することなく、様々な修正が行われ得ると理解されるであろう。したがって、以下の実施例は、特許請求の範囲に記載する発明の範囲の例示を意図するものであり、限定を意図するものではない。
【実施例】
【０４７６】
５．実施例
この節（すなわち、第５節）における実施例は、限定としてではなく例示として提供する。
【０４７７】
５．１実施例１：抗ＰＤ−１抗体の生成
５．１．１抗ＰＤ−１抗体の生成
最初に、ヒトＰＤ−１細胞外ドメイン（ＥＣＤ）抗原またはＣＨＯ−ｈＰＤ−１形質移入細胞を用いてマウス免疫化法によって、親ＰＤ−１−ＩｇＧ１  ｍＡｂを生成した。ハイブリドーマプールの最初の同定で、Ｂｉａｃｏｒｅ（登録商標）によって測定した可溶性抗原に対するＫＤが約６ｎＭの抗ヒトＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１非遮断及びＰＤ−Ｌ２非遮断抗体（データは図示せず）を産生する、ＰＤ１Ｓｕｂ１と命名したサブクローンを同定した。ＰＤ１Ｓｕｂ１ハイブリドーマからのマウスＶＨ及びＶＬ遺伝子を配列決定し、最も相同なヒトＶＨ及びＶＬフレームワーク遺伝子（それぞれＩｇＨ１−ｆ及びＶκ４−１）のヒトγ１及びκ定常領域中への、最も近くのＪ領域（それぞれＩｇＨ  Ｊ６及びＩｇκ  Ｊ２）を利用したヒトＣＤＲグラフティングに用いた。ヒト生殖細胞系ＨＧ１  ＶＨ及びＶＬ領域についてのみ、マウスＣＤＲ３セグメントをヒトＶＨ及びＶＬフレームワーク生殖細胞系遺伝子（それぞれＩｇＨ  １−ｆ及びＶκ  ４−１）中に入れた。
【０４７８】
Ｄｅｃｉｄｕｏｕｓ（商標）コンストラクト中のＣＤＲグラフティングまたは生殖細胞系ＨＧ１抗体のいずれかを安定ＡＩＤ（活性化誘導デアミナーゼ）と共に発現する安定ＨＥＫ−２９３ｃ１８細胞株を、ＳＨＭ−ＸＥＬ（商標）アフィニティー成熟プラットフォーム（ＡｎａｐｔｙｓＢｉｏ，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）での使用のために生成した。抗体可変ドメインにおける遺伝的多様性のインサイチュ生成によって、アフィニティーがより高い親抗体のバリアントを発現する細胞が得られた。単量体または二量体ｈＰＤ−１を用いたフローサイトメトリーによってこれらを単離した。複数回のアフィニティー精製及び選別で６コリドー及び４５クローンを得た。これらのクローンの、追加の「インシリコＳＨＭ」イベントを伴うサンガー及びディープシーケンシングの結果、ＶＨ及びＶＬ  ＣＤＲ中に富化変異を組み込む部位特異的変異誘発が数回行われた。アフィニティー結合性が最も高い１２のムテインを、ＰＤ−１への結合カイネティクスについて、及びＣＨＯ細胞の表面上に発現された全長ＰＤ−１への結合について、生化学的、生物物理学的にさらに特性評価した。精製抗体の機能特性評価を２つのアッセイにおいて実施した：細胞表面ＰＤ−１への結合についてのＰＤ−Ｌ１競合及び活性化ヒトＣＤ４＋  Ｔ細胞の再活性化からのＩＬ−２産生における阻害活性。
【０４７９】
これらの方法に基づいて、表９に示すように、抗ＰＤ−１抗体ＰＤ１ＡＢ−１、ＰＤ１ＡＢ−２、ＰＤ１ＡＢ−３、ＰＤ１ＡＢ−４、ＰＤ１ＡＢ−５、またはＰＤ１ＡＢ−６を生成した。
表９．抗ＰＤ−１抗体の特性評価
【表１１】
2018533973.tif 000029
【０４８０】
５．１．２ヒトＰＢＭＣまたはヒト全血におけるＣＤ４＋再活性化アッセイ
３７℃で４８時間のＰＨＡ活性化によって、白血球除去システム（ＬＲＳ）から単離したヒトＰＢＭＣでＰＤ−１発現を誘発した。ＣＤ４単離キット（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ  Ｂｉｏｔｅｃ，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）を用いてＰＢＭＣからＣＤ４＋  Ｔ細胞を精製し、抗ＣＤ３または抗ＣＤ３＋タイトレートした抗ＰＤ−１またはｈＩｇＧ１アイソタイプ対照抗体を固定化した９６ウェル上に再播種した。ＩＬ−２、ＩＦＮ−γ、及びＩＬ−１７サイトカイン判定のために、２４及び４８時間の時点で上清を収集した。表１０に示すように、６つの抗ＰＤ−１クローンはすべて、ＩＬ−２については２０〜３６ｎＭ、ＩＦＮ−γについては３４〜５８ｎＭ、及びＩＬ−１７については２７〜４１ｎＭの範囲の類似の阻害ＥＣ５０を示した。
表１０．ＰＢＭＣ再活性化アッセイにおける６つのリード抗体のＴ細胞減衰活性の比較
【表１２】
2018533973.tif 000030
【０４８１】
次に、特異的Ｔ細胞機能の阻害をヒト全血マトリックス中で評価した。新たに採取し、ヘパリン添加したヒト血液を、抗ＣＤ３または抗ＣＤ３＋タイトレートした抗ＰＤ−１またはｈＩｇＧ１アイソタイプ対照抗体のいずれかを固定化したウェル上に播種した。２４及び４８時間の時点で収集した血漿をＩＬ−２（２４時間）及びＩＦＮ−γ／ＩＬ−１７（４８時間）について測定した。表１１に示すように、３つの他の試験した抗体クローンと比較して、ＰＤ１ＡＢ−６は、特異的ＩＬ−２（ＥＣ５０  ４．０＋０．９ｎＭ、ｎ＝４）、ＩＦＮ−γ（ＥＣ５０  ４．１＋２．２ｎＭ、ｎ＝２）、及びＩＬ−１７（ＥＣ５０  ３．６＋１．２ｎＭ、ｎ＝３）阻害において効力の２〜３倍の増加を示した。
表１１．全血アッセイにおける４つのリード分子のＴ細胞減衰活性の比較
【表１３】
2018533973.tif 000031
【０４８２】
５．１．３細胞ベースのリガンド結合アッセイ
リガンド競合を評価するために、細胞結合アッセイを行い、同定した６つの抗体クローンを評価した。簡潔に述べると、１００ｎＭ〜１００ｐＭの半対数濃度の個々の抗体クローンを１０ｎＭのＤｙＬ６５０−ＰＤ−Ｌ１で予備混合し、その後、氷上でヒトＰＤ−１−ＣＨＯ細胞（２×１０５細胞）に４５分間加えた。その後、細胞を洗浄してから、ＢＤ  ＦＡＣＳＡｒｒａｙ（商標）でＤｙＬ６５０−ＰＤ−Ｌ１結合を分析し、アイソタイプ対照抗体に対する蛍光強度中央値を各濃度でプロットした。図１Ａ〜１Ｂに示すように、ＰＤ１ＡＢ−６は、親クローンＰＤ１ＡＢ−１を含めた他の５つのクローンと同様、１００ｎＭまででＤｙＬ６５０−ＰＤ−Ｌ１結合に対して有意な競合を示さなかった。対照的に、アンタゴニストのリガンド遮断ＰＤ−１抗体であるＭＤＸ  ４Ｈ１（ＡｎａｐｔｙｓＢｉｏ，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）は、標識化ＰＤ−Ｌ１結合を投与量依存的に遮断し、結合ＥＣ５０は約５〜１０ｎＭとなった。
【０４８３】
５．１．４エピトープマッピング
ＰＤ−１エピトープは、ヒトＰＤ−１細胞外ドメインと複合体化したＰＤ１ＡＢ−６  Ｆａｂの結晶構造を１．８Åの分解能まで解くことによって決定した。ＰＤ−１：ＰＤ１ＡＢ−６  Ｆａｂ相互作用部位は、ＰＤ−１：ＰＤ−Ｌ１相互作用部位に対してＰＤ−１の遠位側に生じており（図２）、ＰＤ−Ｌ１及びＰＤ１ＡＢ−６がＰＤ−１結合について競合しないという観察結果に合致する。ＰＤ１ＡＢ−６  Ｆａｂは残基１００〜１０５で構成されるＰＤ−１ループと形成される実質的な相互作用でＰＤ−１βシートに対して結合する（図３）。ＰＤ−１上のＲ１０４は、Ｆａｂ  ＣＤＲ  Ｈ１上の残基との複数の極性相互作用に関与する。隣接する残基Ｇ１０３もＦａｂと密接な極性相互作用をする。Ｒ１０４及びＧ１０３は両方ともマウスＰＤ−１においては変異しており（それぞれヒスチジン及びアルギニンに）、ＰＤ１ＡＢ−６がマウスＰＤ−１に結合しないことの構造的な根拠となる。ＰＤ−１と相互作用するＰＤ１ＡＢ−６  Ｆａｂ領域は、ＣＤＲ  Ｈ１、Ｈ２、Ｈ３、Ｌ１及びＬ２である。ＰＤ−１：ＰＤ１ＡＢ−６  Ｆａｂ相互作用の原子レベルの詳細を表１２に記載する。ＰＤ−１エピトープと相互作用するＨＣ及びＬＣ残基を記載する。略号は以下の通りである：ＨＢ−水素結合、ＨＹＤ−疎水性相互作用、ＩＯＮ−イオン相互作用。
表１２．ＰＤ１ＡＢ−６：ＰＤ−１相互作用の原子レベルの詳細
【表１４】
2018533973.tif 000032
【０４８４】
５．１．５  ＰＤ１ＡＢ−６のバリアントの生成
ＰＤ１ＡＢ−６  ＩｇＧ１抗体（ＰＤ１ＡＢ−６−ＩｇＧ１）及びＦｃ改変ＩｇＧ４ＰＥ抗体（ＰＤ１ＡＢ−６−４ＰＥ）を生成した。ＰＤ１ＡＢ−６−４ＰＥは有意に低いＦｃ媒介エフェクター機能を有するように設計した。ＣＨ領域のγ４は２つの非標準アミノ酸置換Ｓ２２８Ｐ及びＬ２３５Ｅ（ＥＵ番号付けシステム、Ｋａｂａｔ  ａｎｄ  Ｗｕ  １９９１）を含有する。ＩｇＧ４のヒンジにおいて一般的なアミノ酸タイプのセリン２２８を、ＩｇＧ４においてあまり一般的には観察されないアミノ酸タイプであり、ＩｇＧ１において高度に保存されているアミノ酸であるプロリンに変化させた。この変化は、ＩｇＧ４サブクラス抗体の産生において一般に観察される「半抗体」のレベルを有意に減少させた。Ｆｃγ受容体との重鎖相互作用に関与する決定的なアミノ酸の１つであるロイシン２３５をグルタミン酸に変化させた。Ｌ２３５Ｅ置換はＦｃγＲへのγ４鎖の相互作用を有意に減少させ、ＡＤＣＣ及びＰＤ−１発現正常細胞のＦｃ受容体媒介排泄をなくした。さらに、γ４重鎖による補体結合が元々ないことで、ＰＤ１ＡＢ−６−４ＰＥ分子はＣＤＣ機能を欠く。ＣＤＣの減少のためにＣ１ｑへの結合アフィニティーを最小限にするように２つの他のバリアントを生成した（図４）。ＰＤ１ＡＢ−６−Ｋ３を生成するために、ＰＤ１ＡＢ−６−ＩｇＧ１においてリシン３２２をアラニンで置換した。Ｋ３２２Ａ置換は、ヒトＩｇＧ１  Ｆｃを有するキメラ抗体であるリツキシマブ上のＣ１ｑ結合を抑制すると報告されている（Ｉｄｕｓｏｇｉｅ  ｅｔ  ａｌ．，２０００，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６４（８）：４１７８−８４）。Ｓ２２８Ｐ置換でＰＤ１ＡＢ−６−ＩｇＧ１のＦｃ主鎖をＩｇＧ４のＦｃ主鎖に変換することによって、ＰＤ１ＡＢ−６−４Ｐを生成した。ＩｇＧ４のヒンジにおいて一般的なアミノ酸タイプのセリン２２８を、ＩｇＧ４においてあまり一般的には観察されないアミノ酸タイプであり、ＩｇＧ１において高度に保存されているアミノ酸であるプロリンに変化させた。この変化は、ＩｇＧ４サブクラス抗体の産生においてしばしば観察される半抗体のレベルを有意に減少させる。ＩｇＧ４抗体は、ＡＤＣＣ及びＣＤＣ機能が減衰していることが報告されている（Ｏｖｅｒｄｉｊｋ  ｅｔ  ａｌ．，２０１２，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１８９（７）：３４３０−３８）。すべての変化はＣＨ領域において作製し、可変領域は変化させなかった。ＰＤ１ＡＢ−６−ＩｇＧ１の重鎖及び軽鎖のアミノ酸配列は、それぞれＬＣ＿ＰＤ１ＡＢ−６−ＩｇＧ１及びＨＣ＿ＰＤ１ＡＢ−６−ＩｇＧ１と標識する（図４）。２つの重鎖バリアントはＨＣ＿ＰＤ１ＡＢ−６−ＩｇＧ１−Ｋ３２２Ａ及びＨＣ＿ＰＤ１ＡＢ−６−ＩｇＧ４Ｐを含む。軽鎖ＬＣ＿ＰＤ１ＡＢ−６−ＩｇＧ１を３つの個々の重鎖と対合させて、それぞれＰＤ１ＡＢ−６−ＩｇＧ１、ＰＤ１ＡＢ−６−Ｋ３、及びＰＤ１ＡＢ−６−４Ｐを生成する。
【０４８５】
５．１．６細胞株開発及び一過性形質移入からの抗体製造
５．１．６．１重鎖及び軽鎖の分子クローニング
ＩｇＧ  ＬＣ発現ベクターｐＦＵＳＥ２ｓｓ−ＣＬＩｇ−ｈｋ及びＩｇＧ  ＨＣ発現ベクターｐＦＵＳＥｓｓ−ＣＨＩｇ−ｈＧ１をＩｎｖｉｖｏＧｅｎ（Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）から購入した。
【０４８６】
ＬＣ＿ＰＤ１ＡＢ−６−ＩｇＧ１をコードするアミノ酸配列（図４）を、哺乳類細胞におけるタンパク質発現のためにコドン最適化遺伝子配列に変換した。５’末端のＥｃｏＲＩ及び３’末端のＮｈｅＩの制限酵素部位を最適化遺伝子に加えた。ＥｃｏＲＩ及びＮｈｅＩ部位を有する最適化ＬＣ遺伝子を合成して挿入断片を生成した。ＩｇＧ  ＬＣ発現ベクターｐＦＵＳＥ２ｓｓ−ＣＬＩｇ−ｈｋをＥｃｏＲＩ及びＮｈｅＩで消化して、およそ３．５ｋｂのｐＦＵＳＥ２ｓｓ−ＣＬＩｇ−ｈｋ−ＥｃｏＲＩ／ＮｈｅＩ断片を生成した。挿入断片をｐＦＵＳＥ２ｓｓ−ＣＬＩｇ−ｈｋ−ＥｃｏＲＩ／ＮｈｅＩ断片に連結して、ｐＦＵＳＥ２ｓｓ−ＣＬＩｇ−ｈｋ−ＬＣ＿ＰＤ１ＡＢ−６−ＩｇＧ１であるｐＪＳ−１を得た。
【０４８７】
ＨＣ＿ＰＤ１ＡＢ−６−ＩｇＧ１、ＨＣ＿ＰＤ１ＡＢ−６−ＩｇＧ１−Ｋ３２２Ａ、またはＨＣ＿ＰＤ１ＡＢ−６−ＩｇＧ４Ｐをコードするアミノ酸配列（図４）を、哺乳類細胞におけるタンパク質発現のためにコドン最適化遺伝子配列に変換した。５’末端の制限酵素部位ＥｃｏＲＩ、３’末端の終止コドン（ｐＦＵＳＥｓｓ−ＣＨＩｇ−ｈＧ１におけるＨＣ配列の３’末端の後）からＨｐａＩまでの定常領域を加えた。ＥｃｏＲＩ及びＨｐａＩ部位を有する最適化遺伝子を合成して、ＨＣ＿ＰＤ１ＡＢ−６−ＩｇＧ１、ＨＣ＿ＰＤ１ＡＢ−６−ＩｇＧ１−Ｋ３２２Ａ、及びＨＣ＿ＰＤ１ＡＢ−６−ＩｇＧ４Ｐをそれぞれコードする遺伝子を含有する挿入断片を生成した。ＩｇＧ  ＨＣ発現ベクターｐＦＵＳＥｓｓ−ＣＨＩｇ−ｈＧ１をＥｃｏＲＩ及びＨｐａＩで消化して、およそ３．４ｋｂのｐＦＵＳＥｓｓ−ＣＨＩｇ−ｈＧ１−ＥｃｏＲＩ／ＨｐａＩ断片を生成した。挿入断片をｐＦＵＳＥｓｓ−ＣＨＩｇ−ｈＧ１−ＥｃｏＲＩ／ＨｐａＩ断片に連結して、それぞれｐＦＵＳＥｓｓ−ＣＨＩｇ−ｈＧ１−ＨＣ＿ＰＤ１ＡＢ−６−ＩｇＧ１、ｐＦＵＳＥｓｓ−ＣＨＩｇ−ｈＧ１−ＨＣ＿ＰＤ１ＡＢ−６−ＩｇＧ１−Ｋ３２２Ａ、及びｐＦＵＳＥｓｓ−ＣＨＩｇ−ｈＧ１−ＨＣ＿ＰＤ１ＡＢ−６−ＩｇＧ４ＰであるｐＪＳ−２、ｐＪＳ−３、及びｐＪＳ−１２を得た。
【０４８８】
５．１．６．２タンパク質産生
ＰＤ１ＡＢ−６−ＩｇＧ１、ＰＤ１ＡＢ−６−Ｋ３、及びＰＤ１ＡＢ−６−４Ｐの３つのバリアントをすべて、インビトロ及びインビボ効力検査のために振とうフラスコ中において実験室スケールで製造した。非ＧＬＰ毒性検査及び追加の特性評価のためのＰＤ１ＡＢ−６−４Ｐ及びＰＤ１ＡＢ−６−Ｋ３抗体を、５０Ｌバイオリアクター（５０Ｌ撹拌タンク及び５０Ｌウェーブバッグ）中で、Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ  （Ｃａｒｌｓｂａｄ，ＣＡ）からのＦｒｅｅＳｔｙｌｅ（商標）ＭＡＸ  ＣＨＯ発現系、及びＥｘｐｉ２９３（商標）発現系を用いて製造した。ＣＨＯ−Ｓ細胞の一過性形質移入のために、製造業者の標準的なプロトコールを用いて、ＦｒｅｅＳｔｙｌｅ（商標）ＭＡＸ  ＣＨＯ発現系を用いた。Ｅｘｐｉ２９３細胞の一過性形質移入のために、製造業者の標準的なプロトコールを用いて、Ｅｘｐｉ２９３（商標）発現系を用いた。形質移入時には、培養物１Ｌ当たり１ｍｇのＤＮＡ混合物に３：２の軽鎖対重鎖の比を用いた。３７℃で５０Ｌバイオリアクター中に０．５百万細胞／ｍＬで細胞を播種し、一晩成長させて１百万細胞／ｍＬにした。その後、製造業者の標準的なプロトコールを用いて細胞を形質移入した。形質移入後１日目に、１ｍＭの酪酸ナトリウム＋１％ｖ／ｖのフィード培地（イーストレート、ＣＨＯ  ＣＤ  ＥｆｆｉｃｉｅｎｔＦｅｅｄ（商標）Ａ、グルタマックス及びグルコース）をバイオリアクターに加え、温度を３２℃に下げた。５０Ｌ撹拌タンクに４０Ｌの細胞＋添加剤を播種し、５０Ｌウェーブバイオリアクターに２５Ｌの細胞＋添加剤を播種した。細胞生存率及び力価を毎日監視し、細胞生存率が５０％未満に下がった時にバッチを採取した。生存率分析にはＶｉ−Ｃｅｌｌ（商標）測定器を用い、力価分析には、標準曲線に精製抗体を用いて、抗ヒトＩｇＧセンサーを備えたＯｃｔｅｔ  ＲＥＤを用いた。ＧＥ  Ｌｉｆｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ深層濾過及び滅菌カラムを用いて細胞及び上清を採取したが、深層濾過にはＵＬＴＡ  Ｐｒｉｍｅ  ＧＦ  ５μｍカプセルを用い、続いて、ＵＬＴＡ  Ｐｕｒｅ  ＨＣ  ０．６／０．２μｍ滅菌カプセルを用いた。クロスフロー濾過を用いて、清澄化した上清を５〜８倍に濃縮し、ＧＥ  Ｌｉｆｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅからの５０ＫｄカットオフＫｖｉｃｋ（商標）Ｌａｂ  ＳＣＵをＴＦＦに用いた。採取時に各アイソタイプについて得られた力価及び最大細胞密度を表１３に示す。
表１３．流加式バイオリアクター（５０Ｌ）の生産性
【表１５】
2018533973.tif 000033
【０４８９】
５．１．６．３タンパク質精製
生成された材料の精製は、プロテインＡアフィニティークロマトグラフィー及び低ｐＨウイルス不活性化、その後のＩＥＸ相互作用（Ｃａｐｔｏ（商標）Ａｄｈｅｒｅ  ＆  Ｃａｐｔｏ（商標）ＳＰ  ＩｍｐＲｅｓ）クロマトグラフィーステップを含む一連の下流精製ステップによって行った。精製抗体を（１０ｍＭスクシネートｐＨ５．５、９％スクロース、０．０５％  ＰＳ２０）バッファーに対して交換したバッファーによってバルク製剤化し、０．２μｍフィルターに通して濾過し、分取した。
【０４９０】
プロテインＡアフィニティークロマトグラフィーは、生成物を捕捉し、プロセス関連不純物を除去するように設計されたＭａｂＳｅｌｅｃｔ  ＳｕＲｅ（商標）で行った。その後のウイルス不活性化ステップは酸性条件下（ｐＨ３．４±０．１で４５分間）で行い、続いて不活性化プールをｐＨ５．５±０．１に調節した。ウイルス不活性化の後、Ｃａｐｔｏ（商標）Ａｄｈｅｒｅを用いた中間精製ステップにフロースルーモードでアニオン交換体を用いて、不純物、例えば、凝集体、ＤＮＡ、宿主細胞タンパク質、及びエンドトキシンなどを除去した。生成物プールをｐＨ６．５±０．１に調節し、次のプロセスステップの前に導電率を２ｍＳ／ｃｍに減少させた。カチオン交換体Ｃａｐｔｏ（商標）ＳＰ  ＩｍｐＲｅｓを最終精製ステップとして用いて、生成物を１０ｍＳ／ｃｍで分離した。その後、抗体を原液（１０ｍＭスクシネート、９％スクロース、０．０５％  ＰＳ２０、ｐＨ５．５）中でバッファー交換し、２０ｍｇ／ｍＬに濃縮した。その後、生成物プールを０．２μｍフィルターに通して濾過し、分取した。
【０４９１】
５．１．７細胞ベースのＰＤ−１結合アッセイ
ヒトＰＤ−１及びカニクイザルＰＤ−１を発現するＣＨＯ細胞（図５Ａ〜５Ｂ）、ならびに初代ヒトＰＢＭＣ（図６）及びカニクイザルＰＢＭＣ（図７）でＰＤ１ＡＢ−６−ＩｇＧ１結合を評価した。
【０４９２】
ヒトＰＤ−１及びカニクイザルＰＤ−１を発現するＣＨＯ細胞を様々な濃度の非標識ＰＤ１ＡＢ−６−ＩｇＧ１抗体と共に３０分間４℃でインキュベートし、洗浄して、抗ヒトＩｇＧ  Ｆｃ（ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）で３０分間４℃にて染色した。ヒトＩｇＧ１  Ｆｃを陰性対照として用いた。ＰＤ１ＡＢ−６−ＩｇＧ１は、ＣＨＯ細胞上に発現されたヒトＰＤ−１にＥＣ５０＝０．４ｎＭで結合し、ＣＨＯ細胞上に発現されたカニクイザルＰＤ−１にＥＣ５０＝０．８ｎＭで結合する（図５Ａ〜５Ｂ）。
【０４９３】
ヒトＰＢＭＣを１μｇ／ｍＬのプレートに結合した抗ＣＤ３で３日間活性化させて、Ｔ細胞上のＰＤ−１発現を誘発した。細胞を様々な濃度の非標識ＰＤ１ＡＢ−６−ＩｇＧ１抗体と共に３０分間４℃でインキュベートし、洗浄して、抗ヒトＩｇＧ  Ｆｃ（ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）で３０分間４℃にて染色した。ヒトＩｇＧ１  Ｆｃを陰性対照として用いた。ＣＤ４＋  Ｔ細胞で幾何ＭＦＩを求めた。２人のヒト健康ドナーのうちの１人からのデータを図６に示す。
【０４９４】
カニクイザルＰＢＭＣを１μｇ／ｍＬの抗カニクイザルＣＤ３／ＣＤ２８で２日間活性化させて、Ｔ細胞上のＰＤ−１発現を誘発した。細胞を様々な濃度の非標識ＰＤ１ＡＢ−６−ＩｇＧ１抗体と共に３０分間４℃でインキュベートし、洗浄して、抗ヒトＩｇＧ  Ｆｃ（ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）で３０分間４℃にて染色した。ヒトＩｇＧ１  Ｆｃを陰性対照として用いた。ＣＤ４＋  Ｔ細胞で幾何ＭＦＩを求めた。２匹のカニクイザルドナーのうちの１匹からのデータを図７に示す。
【０４９５】
５．１．８  Ｆｃ受容体結合アッセイ
バリアント生成の目的、すなわち、ＦｃγＲ媒介エフェクター機能の減少を確認するために、ＰＤ１ＡＢ−６−Ｋ３及びＰＤ１ＡＢ−６−４ＰバリアントへのＦｃγＲ結合を２つの方法によって分析した。第１に、Ｃｉｓｂｉｏ  Ｔａｇ  ｌｉｔｅ（登録商標）検出を用いた置換ＦｃγＲアッセイで結合を試験した（図８Ａ〜８Ｄ）。テルビウム（Ｔｂ）ドナー色素で前標識した特定のＦｃγＲ（ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩＩａ、またはＦｃγＲＩＩｂ）を発現するように遺伝子操作したＨＥＫ２９３細胞を、参照対照またはＰＤ１ＡＢ−６−ＩｇＧ１、ＰＤ１ＡＢ−６−Ｋ３、及びＰＤ１ＡＢ−６−４Ｐ抗体と１００００ｎＭ〜０．１ｐＭの範囲の対数濃度にわたって混合した。その後、第２のヒトｈＩｇＧ−ｄ２（アクセプター）を加えて受容体結合について競合させた。Ｔｂ−ｄ２近接性によって生成される蛍光共鳴エネルギー移動（ＦＲＥＴ）シグナルの検出が測定され、これはＰＤ１ＡＢ−６バリアント結合ＦｃγＲに反比例する。図８Ａ〜８Ｄに示すように、ＰＤ１ＡＢ−６−Ｋ３バリアントは、ＡＤＣＣ活性を担うＮＫ細胞上の低アフィニティー受容体であるＦｃγＲＩＩＩａ（ＣＤ１６）への結合の減少を示した。ＦｃγＲＩ（顆粒球、樹状細胞（ＤＣ）、または単球上で発現される）への結合は親ＰＤ１ＡＢ−６−ＩｇＧ１分子と類似していた。
【０４９６】
第２に、ＦＡＣＳベースの結合アッセイにおいてＰＤ１ＡＢ−６−Ｋ３及びＰＤ１ＡＢ−６−４Ｐバリアントの両方を試験した（図９Ａ〜９Ｃ）。簡潔に述べると、ＦｃγＲＩ−ＣＨＯまたはＦｃγＲＩＩＩａＶ１５８−ＣＨＯ発現細胞株を剥離して洗浄した後、ＰＤ１ＡＢ−６−Ｋ３及びＰＤ１ＡＢ−６−４Ｐバリアントと異なる濃度にわたって１時間氷上で混合した。ＰＤ１ＡＢ−６バリアント結合細胞を標識化ＰＥ結合Ｆ（ａｂ’）２ヤギ抗ヒト二次抗体によってさらに１時間氷上で検出し、洗浄して、ＦＡＣＳによる分析の前に固定化し、各濃度について平均蛍光強度をプロットした。ＰＤ１ＡＢ−６−４Ｐバリアントは、ＦｃγＲＩ及びＦｃγＲＩＩＩａ株に対して有意により高い結合ＥＣ５０（それぞれ、＞１５×及び＞２１×）を返した（図９Ａ〜９Ｃ）。
【０４９７】
５．１．９インビトロＡＤＣＣアッセイ
健康ドナー由来のナチュラルキラー（ＮＫ）細胞及びＰＤ−１発現標的細胞が関与する共培養アッセイにおいて、ＰＤ１ＡＢ−６バリアントのＡＤＣＣを誘発する能力を評価した。ＰＤ１ＡＢ−６バリアントで前処理した標的細胞（ＮＣＩ−ＯＣＩ−Ｌｙ３）を活性化ＮＫ細胞と共に４時間共培養した。上清ＬＤＨ濃度を用いて特異的溶解を計算した。Ｐｒｉｓｍを用いてＥＣ５０（ｎＭ）を計算した。エラーバーは３回の実験を表す。データは４個体の健康ドナーの代表２つである。図１０Ａ〜１０Ｂに示すように、ＰＤ１ＡＢ−６−ＩｇＧ１のタイトレーションは投与量依存的なＡＤＣＣを誘発したが、ＰＤ１ＡＢ−６−Ｋ３はＡＤＣＣ活性の減少を示した。
【０４９８】
５．１．１０インビトロＣＤＣアッセイ
ＰＤ−１発現ＣＤ２０＋  ＮＣＩ−ＯＣＩ−Ｌｙ３細胞を用いて、ＰＤ１ＡＢ−６バリアントのＣＤＣを誘発する能力を評価した。５％ウサギ補体を補添した無血清培地中において、抗体で前処理した標的細胞（ＮＣＩ−ＯＣＩ−Ｌｙ３）を４時間培養した。ＦＡＣＳによって７−ＡＡＤ＋細胞で細胞溶解を測定した。データは３つの独立した実験の代表である：（ｉ）ＰＤ１ＡＢ−６−ＩｇＧ１及び抗ＣＤ２０  ＩｇＧ１のＣＤＣ活性；（ｉｉ）ＰＤ１ＡＢ−６−ＩｇＧ１及びＰＤ１ＡＢ−６−Ｋ３のＣＤＣ活性；（ｉｉｉ）ＰＤ１ＡＢ−６−４Ｐ及び市販のマウス抗ＰＤ−１  ＩｇＧ１抗体のＣＤＣ活性。図１１に示すように、ＰＤ１ＡＢ−６−Ｋ３は一貫してＣＤＣを誘発しなかった（ｎ＝３）。親ＰＤ１ＡＢ−６−ＩｇＧ１及びＰＤ１ＡＢ−６−４ＰもＣＤＣを誘発しなかった。これは、補体殺傷に対する標的細胞株の耐性によるものではなかったが、その理由は、抗ＣＤ２０  ＩｇＧ１が５％ウサギ補体の存在下においてＮＣＩ−ＯＣＩ−Ｌｙ３細胞に対する投与量依存的ＣＤＣを繰り返し誘発したためである。
【０４９９】
５．２実施例２：活性アッセイ
５．２．１ヒトＴ細胞活性化アッセイ
Ｔ細胞エフェクター機能の阻害についてのＰＤ１ＡＢ−６バリアントの機能評価を２つの方法によって行った。１つのアッセイにおいて、末梢血単核細胞を事前活性化してＰＤ−１を発現させ、可溶性ＰＤ１ＡＢ−６−Ｋ３の存在下において再刺激した（図１２）。健康ドナー由来の末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を分裂促進因子ＰＨＡで４８時間事前活性化してＰＤ−１発現を上方調節した。その後、最終濃度１００ｎＭ〜０．１ｎＭの範囲にわたって希釈したＰＤ１ＡＢ−６バリアントの存在下において、抗ＣＤ３結合Ｄｙｎａｂｅａｄｓ（登録商標）（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，  Ｃａｒｌｓｂａｄ，ＣＡ）を用いて、これらの細胞を再刺激した。刺激後２４時間の培養上清におけるＩＬ−２レベルを用いてＴ細胞活性化を測定した。図１２に示すように、ＰＤ１ＡＢ−６−Ｋ３及び２つの他のバリアントは、このアッセイにおいて強力なＴ細胞阻害活性を示し、ＥＣ５０は５〜２５ｎＭであった。
【０５００】
Ｔ細胞機能の阻害におけるＰＤ１ＡＢ−６−Ｋ３の直接エクスビボ測定のために第２のアッセイを用いた（図１３）。これは、抗ＣＤ３  ＋／−  ＰＤ１ＡＢ−６−Ｋ３で共コーティングした９６ウェルプレート中に新鮮なヒト全血を直接播種し、Ｔ細胞活性化の測定値としてＩＬ−１７及びＩＦＮ−γレベルを測定することによって行った。これらのアッセイにおいて、ＣＴＬＡ４Ｉｇ（Ｏｒｅｎｃｉａ（登録商標））を陽性対照として用い、ヒトＩｇＧ  Ｆｃ断片を陰性対照として用いた。図１３に示すように、全体として、ＰＤ１ＡＢ−６−Ｋ３はＰＤ１ＡＢ−６−４Ｐよりも効力が良好な傾向にあった。陰性対照ｈＩｇＧ  ＦｃはＥＣ５０＞１００ｎＭで活性を示さなかった。
【０５０１】
５．２．２カニクイザル交差反応性アッセイ
新たに単離したカニクイザルＰＢＭＣを用いて、リードＰＤ１ＡＢ−６−Ｋ３での機能的カニクイザル交差反応性の測定をヒト試料と同様に実施し、抗カニクイザルＣＤ３、ＣＤ２８、及び表示したＰＤ１ＡＢ−６バリアントで活性化した。これらのアッセイにおいて、ＣＴＬＡ４Ｉｇを陽性対照として用い、ｈＩｇＧ１  Ｆｃを陰性対照として用いた。４８時間後に、カニクイザルＩＬ−２  ＭＳＤアッセイを用いたサイトカイン測定のために培養上清を取り出した。表１４に示すように、これらのアッセイは、ＰＤ１ＡＢ−６−Ｋ３がカニクイザルＴ細胞サイトカイン分泌を陽性対照ＣＴＬＡ４Ｉｇと同等のレベルまで減衰し、活性がヒトアッセイにおいて見られたものと同等であることを実証した。
表１４．カニクイザルＰＢＭＣアッセイにおけるＰＤ１ＡＢ−６−Ｋ３活性
【表１６】
2018533973.tif 000034
【０５０２】
５．２．３作用のインビトロ機序
Ｔ細胞表面分子、例えば、ＣＤ３及びＣＤ４などに結合するいくつかの抗体は、シグナル伝達及びその後のそれらの分子の表面発現の下方調節をもたらす。ＰＤ１ＡＢ−６抗体はＰＤ−１を介してアゴニストシグナルをもたらすように設計されるので、インビトロでのＰＤ１ＡＢ−６処理の後のＰＤ−１発現を評価することに関心がもたれた。
【０５０３】
５．２．３．１  ＰＤ１ＡＢ−６処理の後のＰＤ−１発現の減少
異なるドナー由来のヒトＰＢＭＣを、様々な濃度の可溶性対照ＩｇＧ１またはＰＤ１ＡＢ−６−ＩｇＧ１を伴う１μｇ／ｍＬのプレートに結合した抗ＣＤ３＋０．２５μｇ／ｍＬのプレートに結合した抗ＣＤ２８で活性化した。４時間〜７２時間のインキュベーション後、細胞をＣＤ３、ＣＤ４５ＲＯ、及びＰＤ−１について染色してＴ細胞上のＰＤ−１発現を評価した。図１４Ａ〜１４Ｃは、４８時間のＰＤ１ＡＢ−６−ＩｇＧ１処理の後でヒトＣＤ３＋  Ｔ細胞上のＰＤ−１の発現が減少されたことを示す。ＰＤ−１発現の分析は、ＰＤ１ＡＢ−６−ＩｇＧ１処理がＴ細胞の表面上でのＰＤ−１発現の下方調節をもたらすことを示していた（図１４Ａ〜１４Ｂにおける１人のドナーからの代表的なヒストグラム、ならびに図１４Ｃにおける３人のドナー及び様々な濃度にわたる４８時間の時点での平均蛍光強度の分析）。ＰＤ−１下方調節はＰＤ１ＡＢ−６−ＩｇＧ１とのインキュベーションの４時間の時点で早くも見られた。表面ＰＤ−１発現の下方調節は、ＰＤ−１を介したＰＤ１ＡＢ−６誘発性シグナル伝達によるものと考えられ、Ｔ細胞受容体シグナル伝達で観察されるものに類似した機序によるものであった（Ｓａｎ  Ｊｏｓｅ  ｅｔ  ａｌ．，２０００，Ｉｍｍｕｎｉｔｙ  １２（２）：１６１−７０）。
【０５０４】
５．３実施例３：ＰＤ１ＡＢ−６バリアントの物理化学的特性評価
５．３．１  Ｂｉａｃｏｒｅ（登録商標）結合分析
Ｂｉａｃｏｒｅ（登録商標）Ｔ２００で捕捉法を用いてＰＤ１ＡＢ−６バリアント抗体をｈＰＤ１抗原への結合について分析した。Ｆｃ特異的抗ヒトＩｇＧをＦｃ２上に固定化し、Ｆｃ１は参照チャネルとしてブランクのままとした。精製ＰＤ１抗体を抗ヒトＩｇＧ上に捕捉させ、結合のカイネティクスを求めるために、１００ｎＭ〜２００ｐＭの２倍希釈系列を用いて、内部生成ｈＰＤ１抗原（ＰＤ１＿００２）を両チャネルに流した。用いたＰＤ−１は、封入体としてＥ．ｃｏｌｉ中で発現させてリフォールディングさせたヒトＰＤ−１の細胞外ドメイン（残基３２〜１６０）であった。３Ｍ塩化マグネシウムを用いて各抗原凝縮物の間の表面を再生した。ＰＤ１ＡＢ−６−ＩｇＧ１、ＰＤ１ＡＢ−６−４Ｐ、及びＰＤ１ＡＢ−６−Ｋ３についての結合カイネティクスならびにｋｏｎ、ｋｏｆｆ、及びＫＤの値の例を図１５Ａ〜１５Ｃに示す。３つのバリアントはすべて、ＰＤ−１抗原に対する会合及び解離の速度が類似しており、ＫＤ値は１９〜２２ｎＭで同等であった。
【０５０５】
６．配列表
本明細書は配列表のコンピュータ可読形式（ＣＲＦ）コピーと共に出願されている。２０１６年９月２２日に作成されたサイズが５０，８７０バイトの１０６２４−２９４−２２８＿ＳＥＱＬＩＳＴ．ｔｘｔという名称のＣＲＦは、配列表の紙のコピーと同一であり、その全内容を参照により本明細書に援用する。
【図１】
2018533973.tif 000035
【図２】
2018533973.tif 000036
【図３】
2018533973.tif 000037
【図４】
2018533973.tif 000038
【図５】
2018533973.tif 000039
【図６】
2018533973.tif 000040
【図７】
2018533973.tif 000041
【図８】
2018533973.tif 000042
【図９Ａ−９Ｃ】
2018533973.tif 000043
【図１０】
2018533973.tif 000044
【図１１】
2018533973.tif 000045
【図１２】
2018533973.tif 000046
【図１３】
2018533973.tif 000047
【図１４】
2018533973.tif 000048
【図１５Ａ】
2018533973.tif 000049
【図１５Ｂ】
2018533973.tif 000050
【図１５Ｃ】
2018533973.tif 000051
【手続補正書】
【提出日】平成30年6月13日(2018.6.13)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】配列表
【補正方法】追加
【補正の内容】
【配列表】
2018533973000001.app
【国際調査報告】
2018533973.tif 000052
2018533973.tif 000053
2018533973.tif 000054