(57)【要約】本発明は一般的に、抗ＩＬ−２３Ａ抗体を使用して、呼吸器疾患、例えば喘息を処置するための方法に関する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
抗ＩＬ−２３Ａ抗体を患者に投与する工程を含む、重症の持続性喘息を処置するための方法。
【請求項２】
前記患者が副腎皮質ステロイドに応答性ではない、請求項１記載の方法。
【請求項３】
前記抗ＩＬ−２３Ａ抗体が、抗体Ａ、抗体Ｂ、抗体Ｃ、又は抗体Ｄである、請求項１又は２のいずれか一項記載の方法。
【請求項４】
前記抗ＩＬ−２３Ａ抗体が、皮下投与によって前記患者に投与される、請求項１〜３のいずれか一項記載の方法。
【請求項５】
前記喘息が、好中球性喘息、好酸球性喘息、混合型好中球性及び好酸球性喘息、又は顆粒球の関与が乏しい喘息である、請求項１〜４のいずれか一項記載の方法。
【請求項６】
前記抗ＩＬ−２３Ａ抗体が、配列番号１８のアミノ酸配列を含む軽鎖と、配列番号１９のアミノ酸配列を含む重鎖とを含む、請求項１〜５のいずれか一項記載の方法。
【請求項７】
前記抗ＩＬ−２３Ａ抗体が、配列番号１８のアミノ酸配列を含む軽鎖と、配列番号２０のアミノ酸配列を含む重鎖とを含む、請求項１〜５のいずれか一項記載の方法。
【請求項８】
前記抗ＩＬ−２３Ａ抗体が、配列番号２１のアミノ酸配列を含む軽鎖と、配列番号１９のアミノ酸配列を含む重鎖とを含む、請求項１〜５のいずれか一項記載の方法。
【請求項９】
前記抗ＩＬ−２３Ａ抗体が、配列番号２１のアミノ酸配列を含む軽鎖と、配列番号２０のアミノ酸配列を含む重鎖とを含む、請求項１〜５のいずれか一項記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
発明の技術分野
本発明は一般的に、抗ＩＬ−２３Ａ抗体を使用して、呼吸器疾患、例えば喘息を処置する方法に関する。
【０００２】
発明の背景
喘息は気道の慢性炎症性疾患であり、これは粘液産生増加、咳、及び気道閉塞の兆候としての呼吸困難と喘鳴のような様々な症状によって特徴付けられる。症状は、上気道及びおそらく下気道の炎症誘発性過敏症によって引き起こされる。地球上の約３億人の人々がこの疾患を患っている。その中で推定５〜１０％が、喘息に関連した医療の利用及び医療費の大半に至らせる重症の喘息を有する。
【０００３】
重症の喘息は重大な医療経済学の問題であるが、診療における効果的な処置の利用可能性は依然として限定されている。しかしながら、単一の容態ではなく、数多くの起こり得る表現型（そのいくつかは、より重症な疾患状態との関連を示し得る）から構成されている喘息の多様性がますます現実となっている。これに関して、クラスター分析などの偏らない統計分析の近年における採用は、成人及び小児の両方の個体群における重症の喘息クラスターの存在を実証した。これらの臨床的表現型は、エンドタイプの分類につながる特定の病態生理学的関連性を示し得る。このように喘息の多様な性質がますます解明されることに伴い、個々の疾患の根底にある性質に依存して幅広い範囲の処置に対する応答も存在することが現実となっている。
【０００４】
喘息の病態生理は不均一であり、そして遺伝子的、エピジェネティック的、環境的な原因、並びに、未知の原因によって引き起こされる。特徴は、アレルギー誘引物質、ウイルス感染、及びさらには細菌コロニー形成に対して応答して活性化される、好酸球、Ｔ細胞サブセット、肥満細胞、好塩基球、及び好中球のような様々な細胞型の関与である。
【０００５】
免疫系の誘引物質及び反応の複雑さに因り、喘息は単に１つの表現型としては捉えることはできない。現在、科学的並びに臨床的努力が、これらの細胞型の一定しない寄与を反映し得る、様々なサブタイプの疾患の同定に向けられている。
【０００６】
例えば、１つの表現型は、ＩｇＥによって媒介されるアレルゲンに対する生体反応の感作である、アトピーを伴う１２歳以下の小児にすでに早期に発症する疾患によって示される。ここで、血液及び気管支肺胞洗浄液（ＢＡＬＦ）及び／又は痰中の好酸球増加並びに２型ヘルパーＴ細胞（Ｔｈ２）及び２型自然リンパ球（ＩＬＣ２）応答が起こり、そして上昇したレベルのサイトカインＩＬ４、ＩＬ５及びＩＬ１３並びにエオタキシンによって同定され得る。他の可能性ある表現型は、Ｔｈ２ではない表現型として捉えられ、後期に発症する、すなわち、成人期の４０代初期から中期に発症する疾患を有し得る（Wenzel S 2012 Clin Exp Allergy. 42:650-8）。喫煙による喘息はこのグループに見られ、そして気道における好中球数増加によって特徴付けられる。
【０００７】
Ｔｈ２ではない及び／又は好酸球性ではない喘息は、炎症プロセスのマーカーとしての１セットの異なるサイトカインを含み得る。ＩＬ１７Ａ及びＦのようなサイトカインが、特定のセットの免疫細胞、すなわちとりわけ、１７型ヘルパーＴ細胞（Ｔｈ１７細胞）、３型自然リンパ球（ＩＬＣ３）、γδ−Ｔ、ＮＫ細胞によって遊離されることが示された。Ｔｈ１７細胞の発生のための許容的な環境は、例えばｔｏｌｌ様受容体（ＴＬＲ）などの様々なパターン認識受容体の活性化と一緒にＴ細胞の活性化によって確立される。いくつかの場合では、高濃度の抗原が、Ｔｈ１７細胞の発生の開始を誘引するのに必要とされる（Lezzi G et al., 2009 Proc Natl Acad Sci U S A. 106:876-81）。高濃度の抗原の下では、持続的な炎症源を提供するＴｈ１７表現型に向けてＴ細胞の分化を駆動することができる、サイトカイン（すなわちＩＬ１β、ＩＬ６、ＴＧＦβ）が遊離される。皮膚のような様々な組織では、サイトカインＩＬ−２３は、Ｔｈ１７表現型を増殖及び維持するのに重要であるようである。Ｔｈ１７細胞は特に、ＩＬ１７Ａ及びＦ、ＩＬ２２のようなサイトカインを遊離し、次いでこれは上皮細胞によるＩＬ８の遊離を誘導し、これは好中球を肺に誘引する物質である。
【０００８】
軽症から中等症の喘息は、吸入ステロイド、長時間及び短時間作用型βアゴニスト、モンテルカスト及びテオフィリンのような抗炎症剤を用いて処置される。より重症の個体群には、経口ステロイドが加えられるが、全ての喘息表現型を管理するには十分ではない。それ故、より重症型の喘息、例えば多数の特定の細胞亜個体群を示す及び／又はステロイド抵抗性である表現型の処置のための医薬が必要とされる。
【０００９】
発明の要約
本発明は上記のニーズに対処し、そして抗ＩＬ−２３Ａ抗体を患者に投与する工程を含む喘息、特に重症の持続性喘息を処置する方法を提供する。
【００１０】
１つの態様では、本発明の方法は、好中球性喘息を処置するためのものである。１つの態様では、本発明の方法は、好酸球性喘息を処置するためのものである。１つの態様では、本発明の方法は、混合型好中球性及び好酸球性喘息を処置するためのものである。１つの態様では、本発明の方法は、顆粒球の関与が乏しい喘息を処置するためのものである。１つの態様では、喘息は喀痰によって分類される。
【００１１】
１つの態様では、上記の１つの方法における患者は、副腎皮質ステロイドに応答性ではない。
【００１２】
１つの態様では、上記の１つの方法において、処置は、患者、例えば重症持続性喘息患者、例えば０．７５のハザード比（ＨＲ）を有する患者における年間増悪率の低減によって評価される。１つの態様では、上記の１つの方法において、処置は、症状の改善、例えば、喘息コントロールに関する質問票（ＡＣＱ）の０．５単位：２０％の減少を示す患者の比率の相対的改善によって評価される。１つの態様では、上記の１つの方法において、処置は、トラフ１秒間努力呼気肺活量（ＦＥＶ１）の改善、例えば１２５ml超、現在の長期管理薬による療法の減少、健康関連ＱＯＬ（例えば喘息ＱＯＬ質問票（ＡＱＬＱ））の改善、又は症状のスコアの改善／レスキュー薬の使用によって評価される。
【００１３】
１つの態様では、上記の１つの方法において、喘息は、Ｔｈ１７細胞、又はＩＬ−２３に対して応答性である細胞によって媒介される。１つの態様では、上記の１つの方法において、喘息はＴｈ２細胞によって媒介される。１つの態様では、上記の１つの方法において、喘息はＴｈ２／Ｔｈ１７二重陽性細胞、又はＴｈ２応答性サイトカイン及びＩＬ−２３に対して応答性である細胞によって媒介される。
【００１４】
さらなる態様では、本発明は、喘息、特に重症の喘息、例えば重症の持続性喘息を有する患者に抗ＩＬ−２３Ａ抗体を投与する工程を含む、喘息増悪の治療法又は予防法を提供する。
【００１５】
本発明の１つの態様では、患者は、頻繁な増悪を経験する患者であり、さらなる実施態様では、本発明は、喘息、特に重症の喘息、例えば重症の持続性喘息を有する患者に抗ＩＬ−２３Ａ抗体を投与する工程を含む、頻繁な増悪を経験する患者における増悪を改善するための方法を提供する。
【００１６】
さらなる態様では、本発明は、重症の持続性喘息を有する患者に抗ＩＬ−２３Ａ抗体を投与する工程を含む、重症の喘息症状の処置法又は管理法を提供する。
【００１７】
さらなる態様では、本発明は、重症の持続性喘息を有する患者に抗ＩＬ−２３Ａ抗体を投与する工程を含む、喘息増悪の治療法又は予防法、及び重症の喘息症状の処置法又は管理法を提供する。
【００１８】
さらなる態様では、本発明は、重症の持続性喘息を有する患者に抗ＩＬ−２３Ａ抗体を投与する工程を含む、喘息増悪率を低減させるための方法を提供する。
【００１９】
１つの態様では、上記の１つの方法において、喘息は好中球性喘息である。１つの態様では、上記の１つの方法において、喘息は好酸球性喘息である。１つの態様では、上記の１つの方法において、喘息は混合型好中球性及び好酸球性喘息である。１つの態様では、上記の１つの方法において、喘息は顆粒球の関与が乏しい喘息である。１つの態様では、喘息の種類は、喀痰、血球数、又は血液バイオマーカー（これは好酸球及び／又は様々なサイトカイン又は他のタンパク質であり得る）によって分類又は表現型分類される。
【００２０】
１つの態様では、上記の１つの方法において、患者は吸入副腎皮質ステロイドで適切に管理されていない。１つの態様では、上記の１つの方法において、患者は、吸入副腎皮質ステロイド及び第二の長期管理薬で適切に管理されていない。１つの態様では、上記の１つの方法において、患者は１２歳以上である。１つの態様では、上記の１つの方法において、患者は、吸入副腎皮質ステロイド及び第二の長期管理薬で適切に管理されていない１２歳以上である。
【００２１】
１つの態様では、上記の１つの方法において、治療、予防、管理、又は低減は、患者、例えば重症の持続性喘息患者、例えば０．７５のハザード比（ＨＲ）を有する患者における年間増悪率の低減によって評価される。１つの態様では、上記の１つの方法において、治療、予防、管理、又は低減は、症状の改善、例えば、喘息コントロールに関する質問票（ＡＣＱ）の０．５単位：２０％の減少を示す患者の比率の相対的改善によって評価される。１つの態様では、上記の１つの方法において、治療、予防、管理、又は低減は、トラフＦＥＶ１の改善（例えば１２５ml超）、現在の長期管理薬による療法の減少、健康関連ＱＯＬ（例えば喘息ＱＯＬ質問票（ＡＱＬＱ））の改善、又は症状のスコアの改善／レスキュー薬の使用によって評価される。
【００２２】
１つの態様では、上記の１つの方法において、抗ＩＬ−２３Ａ抗体は抗体Ａ、抗体Ｂ、抗体Ｃ、又は抗体Ｄである。
【００２３】
１つの態様では、上記の１つの方法において、抗ＩＬ−２３Ａ抗体は、皮下投与によって前記患者に投与される。
【００２４】
１つの態様では、本発明は、本明細書に記載の方法に使用するための、例えば喘息、特に例えば本明細書に記載のような重症の持続性喘息の処置に使用するための、抗ＩＬ−２３Ａ抗体を提供する。
【００２５】
１つの態様では、本発明は、喘息、特に例えば本明細書に記載のような重症の持続性喘息の処置用の医薬品の調製のための抗ＩＬ−２３Ａ抗体の使用を提供する。
【００２６】
１つの実施態様では、上記のいずれか１つの方法又は使用において、抗ＩＬ−２３Ａ抗体は以下に開示されている。
【００２７】
１つの実施態様では、抗ＩＬ−２３Ａ抗体は、配列番号１のアミノ酸配列（ＣＤＲ１−Ｌ）；配列番号２のアミノ酸配列（ＣＤＲ２−Ｌ）；及び配列番号３のアミノ酸配列（ＣＤＲ３−Ｌ）を含む軽鎖の可変領域；並びに、配列番号４、７、８、又は９のアミノ酸配列（ＣＤＲ１−Ｈ）；配列番号５のアミノ酸配列（ＣＤＲ２−Ｈ）；及び配列番号６のアミノ酸配列（ＣＤＲ３−Ｈ）を含む重鎖の可変領域を含む。
【００２８】
１つの実施態様では、抗ＩＬ−２３Ａ抗体は、配列番号１のアミノ酸配列（ＣＤＲ１−Ｌ）；配列番号２のアミノ酸配列（ＣＤＲ２−Ｌ）；及び配列番号３のアミノ酸配列（ＣＤＲ３−Ｌ）を含む軽鎖の可変領域；並びに、配列番号４のアミノ酸配列（ＣＤＲ１−Ｈ）；配列番号５のアミノ酸配列（ＣＤＲ２−Ｈ）；及び配列番号６のアミノ酸配列（ＣＤＲ３−Ｈ）を含む重鎖の可変領域を含む。
【００２９】
１つの実施態様では、抗ＩＬ−２３Ａ抗体は、配列番号１のアミノ酸配列（ＣＤＲ１−Ｌ）；配列番号２のアミノ酸配列（ＣＤＲ２−Ｌ）；及び配列番号３のアミノ酸配列（ＣＤＲ３−Ｌ）を含む軽鎖の可変領域；並びに、配列番号７のアミノ酸配列（ＣＤＲ１−Ｈ）；配列番号５のアミノ酸配列（ＣＤＲ２−Ｈ）；及び配列番号６のアミノ酸配列（ＣＤＲ３−Ｈ）を含む重鎖の可変領域を含む。
【００３０】
１つの実施態様では、抗ＩＬ−２３Ａ抗体は、配列番号１のアミノ酸配列（ＣＤＲ１−Ｌ）；配列番号２のアミノ酸配列（ＣＤＲ２−Ｌ）；及び配列番号３のアミノ酸配列（ＣＤＲ３−Ｌ）を含む軽鎖の可変領域；並びに、配列番号８のアミノ酸配列（ＣＤＲ１−Ｈ）；配列番号５のアミノ酸配列（ＣＤＲ２−Ｈ）；及び配列番号６のアミノ酸配列（ＣＤＲ３−Ｈ）を含む重鎖の可変領域を含む。
【００３１】
１つの実施態様では、抗ＩＬ−２３Ａ抗体は、配列番号１のアミノ酸配列（ＣＤＲ１−Ｌ）；配列番号２のアミノ酸配列（ＣＤＲ２−Ｌ）；及び配列番号３のアミノ酸配列（ＣＤＲ３−Ｌ）を含む軽鎖の可変領域；並びに、配列番号９のアミノ酸配列（ＣＤＲ１−Ｈ）；配列番号５のアミノ酸配列（ＣＤＲ２−Ｈ）；及び配列番号６のアミノ酸配列（ＣＤＲ３−Ｈ）を含む重鎖の可変領域を含む。
【００３２】
１つの実施態様では、抗ＩＬ−２３Ａ抗体は、配列番号１０、１１、１２、又は１３のいずれか１つのアミノ酸配列を含む軽鎖の可変領域；及び、配列番号１４、１５、１６、又は１７のいずれか１つのアミノ酸配列を含む重鎖の可変領域を含む。
【００３３】
１つの実施態様では、抗ＩＬ−２３Ａ抗体は、配列番号１１のアミノ酸配列を含む軽鎖の可変領域と、配列番号１４のアミノ酸配列を含む重鎖の可変領域とを含む。
【００３４】
１つの実施態様では、抗ＩＬ−２３Ａ抗体は、配列番号１１のアミノ酸配列を含む軽鎖の可変領域と、配列番号１５のアミノ酸配列を含む重鎖の可変領域とを含む。
【００３５】
１つの実施態様では、抗ＩＬ−２３Ａ抗体は、配列番号１０のアミノ酸配列を含む軽鎖の可変領域と、配列番号１４のアミノ酸配列を含む重鎖の可変領域とを含む。
【００３６】
１つの実施態様では、ＩＬ−２３Ａ抗体は、配列番号１０のアミノ酸配列を含む軽鎖の可変領域と、配列番号１５のアミノ酸配列を含む重鎖の可変領域とを含む。
【００３７】
１つの実施態様では、抗ＩＬ−２３Ａ抗体は、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＭ、ＩｇＡ、又はＩｇＥの重鎖定常領域に連結された配列番号１４又は１５のアミノ酸配列を含む。１つの実施態様では、抗ＩＬ−２３Ａ抗体は、ヒトＩｇＧ１重鎖定常領域に連結された配列番号１４又は１５のアミノ酸配列を含む。１つの実施態様では、抗ＩＬ−２３Ａ抗体は、ヒトκ又はλ軽鎖定常領域に連結された配列番号１０又は１１のアミノ酸配列を含む。
【００３８】
１つの実施態様では、抗ＩＬ−２３Ａ抗体は、ヒトＩｇＧ１重鎖定常領域に連結された配列番号１４又は１５のアミノ酸配列；及びヒトκ軽鎖定常領域に連結された配列番号１０又は１１のアミノ酸配列を含む。
【００３９】
１つの実施態様では、抗ＩＬ−２３Ａ抗体は、配列番号１０、１１、１２及び１３のいずれか１つからなる群より選択されたアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域と、配列番号１４、１５、１６及び１７のいずれか１つからなる群より選択されたアミノ酸配列を含む重鎖可変領域とを含む、ヒト化モノクローナル抗体である。
【００４０】
１つの実施態様では、抗ＩＬ−２３Ａ抗体は、配列番号１１のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域と、配列番号１４のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域とを含む、ヒト化モノクローナル抗体である。
【００４１】
１つの実施態様では、抗ＩＬ−２３Ａ抗体は、配列番号１１のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域と、配列番号１５のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域とを含む、ヒト化モノクローナル抗体である。
【００４２】
１つの実施態様では、抗ＩＬ−２３Ａ抗体は、配列番号１０のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域と、配列番号１４のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域とを含む、ヒト化モノクローナル抗体である。
【００４３】
１つの実施態様では、抗ＩＬ−２３Ａ抗体は、配列番号１０のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域と、配列番号１５のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域とを含む、ヒト化モノクローナル抗体である。
【００４４】
１つの実施態様では、抗ＩＬ−２３Ａ抗体は、配列番号１８又は２１のアミノ酸配列を含む軽鎖と、配列番号１９又は２０のアミノ酸配列を含む重鎖とを含む。
【００４５】
１つの実施態様では、抗ＩＬ−２３Ａ抗体は、配列番号１８のアミノ酸配列を含む軽鎖と、配列番号１９のアミノ酸配列を含む重鎖とを含む。
【００４６】
１つの実施態様では、抗ＩＬ−２３Ａ抗体は、配列番号１８のアミノ酸配列を含む軽鎖と、配列番号２０のアミノ酸配列を含む重鎖とを含む。
【００４７】
１つの実施態様では、抗ＩＬ−２３Ａ抗体は、配列番号２１のアミノ酸配列を含む軽鎖と、配列番号１９のアミノ酸配列を含む重鎖とを含む。
【００４８】
１つの実施態様では、抗ＩＬ−２３Ａ抗体は、配列番号２１のアミノ酸配列を含む軽鎖と、配列番号２０のアミノ酸配列を含む重鎖とを含む。
【００４９】
１つの実施態様では、抗ＩＬ−２３Ａ抗体は、抗体Ａ、抗体Ｂ、抗体Ｃ、又は抗体Ｄである。
【００５０】
１つの実施態様では、抗ＩＬ−２３Ａ抗体は、国際公開公報第２００７／００５９５５号、国際公開公報第２００７／０２４８４６号、国際公開公報第２００７／０２７７１４号、国際公開公報第２００７／０７６５２４号、国際公開公報第２００８／１０３４３２号、又は国際公開公報第２０１２／０６１４４８号に開示されている通りである。
【図面の簡単な説明】
【００５１】
【図１】ラット精密カット肺切片をＩＬ−２３を用いて処置した後のＩＬ８（ＣＩＮＣ１）の遊離（中央値、四分位範囲及び５〜９５％信頼区間）。
【図２】ラット精密カット肺切片をＩＬ−２３を用いて処置した後のＩＬ２２の遊離（中央値、四分位範囲及び５〜９５％信頼区間）。
【図３】ＩＬ２３によって刺激されたラット精密カット肺切片（ＰＣＬＳ）からのＩＬ２２の遊離。データは散乱ドットプロットとして示され、そして平均値±標準偏差が示されている。レプリケートはｎ＝５〜６匹のラットを起源とする。平均値は、ノンパラメトリッククラスカル・ワリス検定、次いでダンポスト検定によって比較した。
【図４Ａ】ＩＬ２３（Ａ）又はＩＬ１７（Ｂ）によって刺激されたヒトＰＣＬＳからのＩＬ２２の遊離。データは散乱ドットプロットとして示され、そして平均値±標準偏差が示されている。レプリケートはｎ＝３のヒトドナーを起源とする。各ドナーのバッチを二回行ない、サイトカイン分析の前に上清をプールした。平均値を一元配置分散分析、次いでダネット多重比較検定によって比較した；＊、対照に対してｐ＜０．０５。
【図４Ｂ】ＩＬ２３（Ａ）又はＩＬ１７（Ｂ）によって刺激されたヒトＰＣＬＳからのＩＬ２２の遊離。データは散乱ドットプロットとして示され、そして平均値±標準偏差が示されている。レプリケートはｎ＝３のヒトドナーを起源とする。各ドナーのバッチを二回行ない、サイトカイン分析の前に上清をプールした。平均値を一元配置分散分析、次いでダネット多重比較検定によって比較した；＊、対照に対してｐ＜０．０５。
【００５２】
詳細な説明
ＩＬ−２３のｐ１９サブユニット（本明細書では「ＩＬ−２３Ａ」、「ＩＬ−２３ｐ１９」及び「ｐ１９サブユニット」とも称される）は、２１アミノ酸リーダー配列を含有している１８９アミノ酸ポリペプチドである（Oppmann et al. Immunity 13:715 (2000), 配列番号２２）。該分子の生物学的活性は、ＩＬ−１２ｐ４０サブユニットと対を形成してＩＬ−２３を形成した場合にのみ検出される。ＩＬ−２３は主に、活性化された樹状細胞（ＤＣ）及び貪食細胞によって発現されている。
【００５３】
配列番号２２：
【化１】
2018512422.tif 000002
【００５４】
ＩＬ−２３の受容体は、ＩＬ−２３Ｒと呼ばれる独特なサブユニットと対を形成したＩＬ−１２受容体のＩＬ−１２Ｒβ１サブユニットから構成されることが判明した（Parham et al. J. Immunol. 168:5699 (2002)）。該受容体の発現は主に、記憶Ｔ細胞（例えばＴｈ１７細胞）及びＮＫ細胞上に検出される。したがって、このサイトカイン：受容体の対の発現は、免疫細胞の特定の個体群に限定されているようである。ＩＬ−２３は、Ｔｈ１７細胞の生成及び維持に決定的に関与していることが判明した（Kikly et al. Curr. Opin. Immunol. 18:670 (2006), Kastelein et al. Ann. Rev. Immunol. 25:221 (2007)）。これらの細胞は、ＩＬ−１７Ａ、ＩＬ−１７Ｆ、ＩＬ−２２、及び他の炎症誘発性サイトカイン、例えばＩＬ−６及びＴＮＦ−αを産生する。近年、ＩＬ２３Ｒは、実験的な自己免疫脳脊髄炎においてＧＭ−ＣＳＦを分泌するＴｈ１７細胞の特定の病原性サブセットを特徴付けることが明らかとなり、このことは、Ｔｈ１７細胞の特定のサブセットが疾患を引き起こす可能性があることを示す。以下に記載されているように、これらのＴｈ１７細胞の役割に関する動物モデル研究は、慢性炎症及び自己免疫における駆動力としてのその重要性を示す。
【００５５】
より最近になって、Ｔｈ１７細胞、及びまたＴｈ２細胞及びＴｈ２／Ｔｈ１７二重陽性細胞の役割、並びに、これらの種類の細胞によって発現されている又は制御されているサイトカインの役割が喘息において調べられた（すなわちＩＬ１７Ａ、ＩＬ１７Ｆ）。しかしながら、これらのサイトカインの１つ、特にＩＬ−２３を標的化することにより、例えば増悪の低減による、重症の喘息患者に対する治療利点が得られるかどうかは依然として不明である。
【００５６】
本発明は、抗ＩＬ−２３Ａ抗体を患者に投与する工程を含む、喘息、特に重症の持続性喘息を処置するための方法を提供する。１つの態様では、本発明の方法は、好中球性喘息を患っている患者、すなわち、好中球性喘息患者とも呼ばれる、喀痰中に上昇したレベルの好中球を有する患者の処置のためである。したがって、１つの態様では、本発明の方法において、患者は、好中球性喘息患者である。別の態様では、本発明の方法は、好酸球性喘息を患っている患者、すなわち、好酸球性喘息患者とも呼ばれる、喀痰中に上昇したレベルの好酸球を有する患者の処置のためである。したがって、１つの態様では、本発明の方法において、患者は好酸球性喘息患者である。別の態様では、本発明の方法は、混合型喘息を患っている患者、すなわち、喀痰中に上昇したレベルの好中球及び好酸球を有する患者の処置のためである。したがって、１つの態様では、本発明の方法において、患者は混合型喘息患者である。別の態様では、本発明の方法は、顆粒球の関与が乏しい喘息を患っている患者、すなわち、喀痰中に正常又は正常未満のレベルの顆粒球を有する患者の処置のためである。したがって、１つの態様では、本発明の方法において、患者は、顆粒球の関与が乏しい喘息患者である。
【００５７】
１つの態様では、重症の持続性喘息は、ＧＩＮＡガイドライン（喘息管理に関する国際指針）の以前の分類に、例えば２０１２年及び２０１４年の分類に言及されているが、喘息患者の組み入れ基準及び除外基準は、喘息の管理に関する一番新しいＧＩＮＡガイドライン（ＧＩＮＡ２０１５）に従って定義されている。これらは、２０１５年のガイドライン（ＧＩＮＡ２０１５）により工程４又は５の処置処方計画を必要とする患者である。
【００５８】
１つの態様では、重症の持続性喘息患者はまた、中用量又は高用量のＩＣＳに加えて、少なくとも１つの長期管理薬（例えばＬＡＢＡ、ＬＴＲＡ、テオフィリン）も服用している。
【００５９】
１つの態様では、喘息の種類は、喀痰、血球数、又は血液バイオマーカー（これは、好酸球及び／又は様々なサイトカイン又は他のタンパク質又は遺伝子発現であり得る）によって分類される。
【００６０】
さらなる態様では、本発明の方法において、患者は、Ｔｈ１７細胞又はＩＬ−２３に対して応答性である細胞によって媒介される、喘息、特に重症の持続性喘息について処置される。さらなる態様では、本発明の方法において、患者は、Ｔｈ２細胞によって媒介される、喘息、特に重症の持続性喘息について処置される。さらなる態様では、本発明の方法において、患者は、Ｔｈ２／Ｔｈ１７二重陽性細胞又はＴｈ２応答性サイトカイン及びＩＬ−２３に対して応答性である細胞によって媒介される、喘息、特に重症の持続性喘息について処置される。
【００６１】
さらなる態様では、本発明は、抗ＩＬ−２３Ａ抗体を重症の持続性喘息患者に投与する工程を含む、喘息増悪の治療法又は予防法を提供する。
【００６２】
さらなる態様では、本発明は、抗ＩＬ−２３Ａ抗体を重症の持続性喘息患者に投与する工程を含む、重症の喘息症状の処置法又は管理法を提供する。
【００６３】
さらなる態様では、本発明は、抗ＩＬ−２３Ａ抗体を重症の持続性喘息患者に投与する工程を含む、喘息増悪の治療法又は予防法、及び重症の喘息症状の処置法又は管理法を提供する。
【００６４】
さらなる態様では、本発明は、抗ＩＬ−２３Ａ抗体を重症の持続性喘息患者に投与する工程を含む、喘息増悪率を低減させるための方法を提供する。
【００６５】
さらなる態様では、本発明は、喘息症状を低減させるに十分な時間をかけた計画及び用量の抗ＩＬ−２３Ａ抗体を成人患者に皮下投与する工程を含む、重症の持続性喘息を処置するための方法を提供する。
【００６６】
さらなる態様では、本発明は、４週間毎に１回、９０mgの用量の抗ＩＬ−２３Ａ抗体を成人患者に皮下投与する工程を含む、重症の持続性喘息を処置するための方法を提供し、これにより喘息の症状は低減する。
【００６７】
さらなる態様では、本発明は、４週間毎に１回、９０mgの用量の、抗体Ａ、抗体Ｂ、抗体Ｃ、又は抗体Ｄからなる群より選択された抗ＩＬ−２３Ａ抗体を成人患者に皮下投与する工程を含む、重症の持続性喘息を処置するための方法を提供し、これにより喘息の症状は低減する。
【００６８】
さらなる態様では、本発明は、４週間毎に１回、９０mgの用量の、抗ＩＬ−２３Ａ抗体である抗体Ａを成人患者に皮下投与する工程を含む、重症の持続性喘息を処置するための方法を提供し、これにより喘息の症状は低減する。
【００６９】
１つの態様では、本明細書に記載の方法において、治療、予防、管理、又は低減は、例えば０．７５のハザード比（ＨＲ）を有する前記患者における年間増悪率の減少によって測定される。
【００７０】
１つの態様では、本明細書に記載の方法において、治療、予防、管理、又は低減は、喘息コントロールに関する質問票（ＡＣＱ）の０．５単位：２０％の減少を示す患者の比率の相対的改善によって測定される。
【００７１】
１つの態様では、本明細書に記載の方法において、治療、予防、管理、又は低減は、トラフＦＥＶ１の改善（例えば１２５ml超）、健康関連ＱＯＬ（例えば喘息ＱＯＬ質問票（ＡＱＬＱ））の改善、又は症状のスコアの改善／レスキュー薬の使用によって測定される。
【００７２】
さらなる態様では、本発明の方法において、患者は、吸入副腎皮質ステロイドで適切に管理されていない。さらなる態様では、患者は吸入副腎皮質ステロイド及び第二の長期管理薬で適切に管理されていない。さらなる態様では、患者は１２歳以上である。
【００７３】
１つの態様では、本発明は、本明細書に記載の方法、特に、喘息の処置、特に例えば本明細書に記載のような重症の持続性喘息の処置に使用するための、抗ＩＬ−２３Ａ抗体を提供する。
【００７４】
１つの態様では、本発明は、喘息、特に例えば本明細書に記載のような重症の持続性喘息の処置用の医薬品の調製のための抗ＩＬ−２３Ａ抗体の使用を提供する。
【００７５】
１つの実施態様では、上記のいずれか１つの方法における抗ＩＬ−２３Ａ抗体は本明細書に開示されている。
【００７６】
１つの態様では、上記のいずれか１つの方法において、抗ＩＬ−２３Ａ抗体を含む医薬組成物が患者に投与される。１つの態様では、抗ＩＬ−２３Ａ抗体、例えば抗体Ａ、抗体Ｂ、抗体Ｃ、又は抗体Ｄを含む実施例３に開示された製剤２が患者に投与される。１つの態様では、抗ＩＬ−２３Ａ抗体、例えば抗体Ａ、抗体Ｂ、抗体Ｃ、又は抗体Ｄを含む実施例３に開示された製剤３が患者に投与される。
【００７７】
１つの態様では、抗ＩＬ−２３Ａ抗体は、ヒト化抗体である。１つの態様では、抗ＩＬ−２３Ａ抗体はモノクローナル抗体である。１つの態様では、抗ＩＬ−２３Ａ抗体は完全長抗体である。１つの態様では、抗ＩＬ−２３Ａ抗体はヒト化モノクローナル抗体、例えば完全長のヒト化モノクローナル抗体である。
【００７８】
本明細書に記載の抗体は、特定の「ＩＬ−２３Ａ抗原エピトープ」又は「ＩＬ−２３Ａエピトープ」を認識する。本明細書において使用するこれらの用語は、抗ＩＬ−２３Ａ抗体と免疫反応することができ、そして、例えば、配列番号１１／１４、１１／１５、１０／１４、又は１０／１５の軽鎖／重鎖配列の組合せを有するいずれかの抗体によって認識されるＩＬ−２３Ａ抗原決定基を含む、分子（例えばペプチド）又は分子のフラグメントを指す。
【００７９】
抗体又は免疫グロブリンの一般構造は、当業者には周知である。これらの分子は、２本の同一な軽鎖（Ｌ）と２本の同一な重鎖（Ｈ）から構成される典型的には約１５０，０００ダルトンのヘテロ四量体糖タンパク質であり、これは典型的には完全長抗体と呼ばれる。各々の軽鎖は、１本のジスルフィド結合によって重鎖に共有結合で連結されてヘテロ二量体を形成し、ヘテロ二量体の２本の同一な重鎖の間でのジスルフィド共有結合を通してヘテロ四量体分子が形成される。軽鎖と重鎖は互いに１本のジスルフィド結合によって連結されているが、２本の重鎖間のジスルフィド結合の数は、免疫グロブリンのアイソタイプによって異なる。各々の重鎖及び軽鎖はまた、規則的に配置された鎖内ジスルフィド橋を有する。各々の重鎖は、アミノ末端に可変ドメイン（ＶＨ）、続いて３つ又は４つの定常ドメイン（ＣＨ１、ＣＨ２、ＣＨ３及びＣＨ４）、並びに、ＣＨ１とＣＨ２間のヒンジ領域を有する。各々の軽鎖は、アミノ末端可変ドメイン（ＶＬ）及びカルボキシ末端定常ドメイン（ＣＬ）という２つのドメインを有する。ＶＬドメインは、非共有結合的にＶＨドメインと会合し、一方、ＣＬドメインは一般的にＣＨ１ドメインにジスルフィド結合を介して共有結合で連結されている。特定のアミノ酸残基が、軽鎖可変ドメインと重鎖可変ドメインとの間の界面を形成すると考えられている（Chothia et al., 1985, J. Mol. Biol. 186:651-663）。可変ドメインはまた、本明細書において可変領域とも称される。
【００８０】
可変ドメイン内の特定のドメインが、様々な抗体間で大幅に異なり、すなわち「超可変的」である。これらの超可変ドメインは、その特異的な抗原決定基に対する各々の特定の抗体の結合及び特異性に直接関与している残基を含有している。軽鎖可変ドメインと重鎖可変ドメインの両方における超可変性は、相補性決定領域（ＣＤＲ）又は超可変ループ（ＨＶＬ）として知られる３つのセグメントに集中している。ＣＤＲは、Kabat et al., 1991, In: Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, Md.の配列比較によって規定され、一方、ＨＶＬ（本明細書においてＣＤＲとも称される）は、Chothia and Lesk, 1987, J. Mol. Biol. 196: 901-917に記載のような可変ドメインの３次元構造に従って構造的に規定される。これらの２つの方法では、ＣＤＲの同定は僅かに異なる。Kabatによって定義されているように、ＣＤＲ−Ｌ１は、軽鎖可変ドメイン内のおよそ２４〜３４残基に位置し、ＣＤＲ−Ｌ２はおよそ５０〜５６残基に位置し、ＣＤＲ−Ｌ３はおよそ８９〜９７残基に位置し；ＣＤＲ−Ｈ１は、重鎖可変ドメイン内のおよそ３１〜３５残基に位置し、ＣＤＲ−Ｈ２はおよそ５０〜６５残基に位置し、ＣＤＲ−Ｈ３はおよそ９５〜１０２残基に位置する。特定のＣＤＲを包含する正確な残基の番号は、ＣＤＲの配列及びサイズに依存して変化するだろう。当業者は、抗体の可変領域のアミノ酸配列が与えられれば、どの残基が特定のＣＤＲを含むか慣用的に決定することができる。それ故、重鎖及び軽鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、ＣＤＲ３は、所与の抗体に特異的な独特かつ機能的な特性を規定する。
【００８１】
重鎖及び軽鎖の各々の中にある３つのＣＤＲは、フレームワーク領域（ＦＲ）によって隔てられ、このフレームワーク領域はより可変性が低い傾向がある配列を含有している。重鎖及び軽鎖の可変ドメインのアミノ末端からカルボキシ末端にかけて、ＦＲ及びＣＤＲは、ＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、及びＦＲ４の順に整列している。ＦＲの主にβ−シートの立体配置により、各々の鎖内のＣＤＲが互いに及び他の鎖のＣＤＲと近接する。結果として生じたコンフォメーションは抗原結合部位に寄与するが（Kabat et al., 1991, NIH Publ. No. 91-3242, Vol. I, pages 647-669を参照）、全てのＣＤＲ残基が必ずしも抗原との結合に直接関与しているわけではない。
【００８２】
ＦＲ残基及びＩｇ定常ドメインは、抗原との結合に直接関与していないが、抗原との結合に寄与する、及び／又は、抗体エフェクター機能を媒介する。いくつかのＦＲ残基は少なくとも３つの方法で抗原との結合に対して有意な効果を及ぼすと考えられている：エピトープに非共有結合的に直接結合することによって、１つ以上のＣＤＲ残基と相互作用することによって、及び重鎖と軽鎖との間の界面に影響を及ぼすことによって。定常ドメインは、抗原との結合に直接関与していないが、様々なＩｇエフェクター機能を媒介し、例えば抗体依存性細胞傷害作用（ＡＤＣＣ）、補体依存性細胞傷害作用（ＣＤＣ）及び抗体依存性細胞貪食（ＡＤＣＰ）における抗体の関与を媒介する。
【００８３】
脊椎動物の免疫グロブリンの軽鎖は、定常ドメインのアミノ酸配列に基づいて、カッパ（κ）及びラムダ（λ）という２つの明確に異なるクラスの中の１つに割り当てられる。これに対して、哺乳動物の免疫グロブリンの重鎖は、定常ドメインの配列に従って、５つの主要なクラスの中の１つに割り当てられる：ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、及びＩｇＭ。ＩｇＧ及びＩｇＡはさらにサブクラス（アイソタイプ）に分類される、例えばＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１、及びＩｇＡ２。様々なクラスの免疫グロブリンに対応する重鎖定常ドメインは、α、δ、ε、γ、及びμとそれぞれ呼ばれる。天然免疫グロブリンのクラスのサブユニット構造及び３次元立体配置は周知である。
【００８４】
「抗体」、「抗ＩＬ−２３Ａ抗体」、「抗ＩＬ−２３ｐ１９抗体」、「ヒト化抗ＩＬ−２３Ａ抗体」、「ヒト化抗ＩＬ−２３ｐ１９抗体」、「ヒト化抗ＩＬ−２３Ａエピトープ抗体」、「ヒト化抗ＩＬ−２３１９エピトープ抗体」、「変異ヒト化抗ＩＬ−２３Ａエピトープ抗体」及び「変異ヒト化抗ＩＬ−２３ｐ１９エピトープ抗体」という用語は具体的に、所望の生物学的活性、例えばＩＬ−２３Ａとの結合を示すモノクローナル抗体（完全長のモノクローナル抗体を含む）、ポリクローナル抗体、及び抗体フラグメント、例えば可変ドメイン、及び抗体の他の部分を包含する。「モノクローナル抗体」（ｍＡｂ）という用語は、非常に特異的であり、単一の抗原決定基、すなわち「エピトープ」に対して指向される、抗体を指す。それ故、「モノクローナル」という修飾語は、同一のエピトープに対して指向される抗体を示し、任意の特定の方法による抗体の産生が必要とされると捉えられるものではない。モノクローナル抗体は、例えばハイブリドーマ法（Kohler et al., 1975, Nature 256:495）又は当技術分野において公知である組換えＤＮＡ法（例えば米国特許第４，８１６，５６７号を参照）、又はClackson et al., 1991, Nature 352: 624-628、及びMarks et al., 1991, J. Mol. Biol. 222: 581-597に記載の技術を使用してファージ抗体ライブラリーを使用して組換え産生されたモノクローナル抗体の単離法をはじめとする、当技術分野において公知である任意の技術又は方法によって作製され得ることが理解されるべきである。
【００８５】
「単量体」という用語は、均一な形態の抗体を指す。例えば、完全長の抗体では、単量体は、２本の同一な重鎖と２本の同一な軽鎖とを有する単量体の抗体を意味する。
【００８６】
キメラ抗体は、ある種（例えば非ヒト哺乳動物、例えばマウス）に由来する抗体の重鎖及び軽鎖の可変領域と、別の種（例えばヒト）に由来する抗体の重鎖及び軽鎖の定常領域とからなり、そしてこれは、第一の種（例えばマウス）に由来する抗体の可変領域をコードしているＤＮＡ配列を、第二の種（例えばヒト）に由来する抗体の定常領域のＤＮＡ配列に連結させ、連結させた配列を含有している発現ベクターを用いて宿主を形質転換して、それがキメラ抗体を産生することを可能とすることによって得ることができる。あるいは、キメラ抗体はまた、重鎖及び／又は軽鎖の１つ以上の領域若しくはドメインが、別の免疫グロブリンクラス若しくはアイソタイプ由来の、又は共通配列若しくは生殖系列配列由来のモノクローナル抗体内の対応する配列と同一であるか、相同であるか、又はその変異体であるものであり得る。キメラ抗体は、このような抗体のフラグメントを含んでいてもよい。ただし、該抗体フラグメントは、その親抗体の所望の生物学的活性、例えば同じエピトープへの結合を示す（例えば、米国特許第４，８１６，５６７号；及びMorrison et al., 1984, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 81: 6851-6855を参照）。
【００８７】
「抗体フラグメント」、「抗ＩＬ−２３Ａ抗体フラグメント」、「抗ＩＬ−２３Ａエピトープ抗体フラグメント」、「ヒト化抗ＩＬ−２３Ａ抗体フラグメント」、「ヒト化抗ＩＬ−２３Ａエピトープ抗体フラグメント」、「変異ヒト化抗ＩＬ−２３Ａエピトープ抗体フラグメント」という用語は、完全長の抗ＩＬ−２３Ａ抗体の一部を指し、可変領域又は機能的能力、例えば特異的なＩＬ−２３Ａのエピトープへの結合は保持されている。抗体フラグメントの例としては、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｄ、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、及びｓｃＦｖ−Ｆｃフラグメントが挙げられる。
【００８８】
完全長の抗体を、パパイン又はペプシンなどの酵素で処理することにより、有用な抗体フラグメントを作製することができる。パパインによる消化を使用することにより、「Ｆａｂ」フラグメントと呼ばれる２つの同一な抗原結合性の抗体フラグメント（各々は１つの抗原結合部位を有する）と残りの「Ｆｃ」フラグメントを生成する。Ｆａｂフラグメントはまた、軽鎖の定常ドメイン及び重鎖のＣＨ１ドメインも含有している。ペプシンによる処理により、２つの抗原結合部位を有するＦ（ａｂ’）２フラグメントが生じ、これは依然として抗原と架橋することができる。
【００８９】
Ｆａｂ’フラグメントは、ＣＨ１ドメインのＣ末端における抗体ヒンジ領域由来の１つ以上のシステインを含む、追加の残基の存在によってＦａｂフラグメントとは異なる。Ｆ（ａｂ’）２抗体フラグメントは、ヒンジ領域内のシステイン残基によって連結されたＦａｂ’フラグメントの対である。抗体フラグメントの他の化学的結合も公知である。
【００９０】
「Ｆｖ」フラグメントは、緊密に非共有結合的に会合した１つの重鎖可変ドメインと１つの軽鎖可変ドメインとの二量体からなる、完全な抗原認識結合部位を含有している。この立体配置では、各々の可変ドメインの３つのＣＤＲは相互作用して、ＶＨ−ＶＬ二量体の表面上の抗原結合部位を規定する。要するに、６つのＣＤＲが、抗体に対して抗原結合特異性を付与する。
【００９１】
「一本鎖Ｆｖ」すなわち「ｓｃＦｖ」抗体フラグメントは、抗体のＶＨドメインとＶＬドメインとを含む一本鎖Ｆｖ変異体であり、ここでのドメインは、１本のポリペプチド鎖内に存在している。一本鎖Ｆｖは、抗原を認識し結合することができる。ｓｃＦｖポリペプチドはまた場合により、ＶＨドメインとＶＬドメインの間に位置するポリペプチドリンカーを含有していてもよく、これによりｓｃＦｖと抗原との結合のために望ましい３次元構造の形成が促進される（例えば、Pluckthun, 1994, In The Pharmacology of monoclonal Antibodies, Vol. 113, Rosenburg and Moore eds., Springer-Verlag, New York, pp. 269-315を参照）。
【００９２】
「ヒト化抗体」又は「ヒト化抗体フラグメント」は、予め決定された抗原に結合することができ、そしてヒト免疫グロブリンのアミノ酸配列を実質的に有する１つ以上のＦＲと、非ヒト免疫グロブリンのアミノ酸配列を実質的に有する１つ以上のＣＤＲとを含む、免疫グロブリンアミノ酸配列変異体又はそのフラグメントを含む、特殊な種類のキメラ抗体である。「インポート」配列としばしば称されるこの非ヒトアミノ酸配列は、典型的には、「インポート」抗体ドメイン、特に可変ドメインから採用される。一般的には、ヒト化抗体は、ヒト重鎖可変ドメイン又は軽鎖可変ドメインのＦＲ間に挿入された、非ヒト抗体の少なくともＣＤＲ又はＨＶＬを含む。本発明は、マウスモノクローナル抗体に由来するＣＤＲ、又は、ヒト生殖系列配列の重鎖可変ドメイン及び軽鎖可変ドメインのＦＲ間に挿入された表１及び２に示されるヒト化ＣＤＲを含有している、特定のヒト化抗ＩＬ−２３Ａ抗体を記載する。特定のマウスＦＲ残基が、ヒト化抗体の機能にとって重要である場合があり、それ故、特定のヒト生殖系列配列の重鎖及び軽鎖の可変ドメイン残基が、対応するマウス配列の残基と同じになるように改変されることが理解されるだろう。
【００９３】
別の態様では、ヒト化抗ＩＬ−２３Ａ抗体は、少なくとも１つ、典型的には２つの可変ドメイン（例えば、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆａｂｃ、及びＦｖフラグメントに含有されているような）の実質的に全部を含み、ここではＣＤＲの全部又は実質的に全部が、非ヒト免疫グロブリンのＣＤＲに相当し、具体的に本明細書において、ＣＤＲの全部が、本明細書の以下の表１及び２に詳述されているようなマウス配列又はヒト化配列であり、ＦＲの全部又は実質的に全部が、ヒト免疫グロブリン共通配列又は生殖系列配列のＦＲである。別の態様では、ヒト化抗ＩＬ−２３Ａ抗体はまた、免疫グロブリンＦｃ領域の少なくとも一部、典型的にはヒト免疫グロブリンのそれを含む。通常、抗体は、両方の軽鎖、並びに重鎖の少なくとも可変ドメインを含有するだろう。抗体はまた、適宜、重鎖のＣＨ１領域、ヒンジ領域、ＣＨ２領域、ＣＨ３領域、及び／又はＣＨ４領域の１つ以上を含み得る。
【００９４】
ヒト化抗ＩＬ−２３Ａ抗体は、ＩｇＭ、ＩｇＧ、ＩｇＤ、ＩｇＡ、及びＩｇＥを含むあらゆるクラスの免疫グロブリン、並びに、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１、及びＩｇＡ２を含むあらゆるアイソタイプから選択され得る。例えば、定常ドメインは、補体に結合する定常ドメインであってもよく、この場合ヒト化抗体は、細胞傷害活性を示すことが望まれ、アイソタイプは典型的にはＩｇＧ１である。このような細胞傷害活性が望ましくない場合には、定常ドメインは別のアイソタイプ、例えばＩｇＧ２であってもよい。代替的なヒト化抗ＩＬ−２３Ａ抗体は、１つを超える免疫グロブリンのクラス又はアイソタイプに由来する配列を含み得、所望のエフェクター機能を最適化するために特定の定常ドメインを選択することは、当技術分野の技能範囲内である。具体的な実施態様では、本発明は、ＩｇＧ１抗体、より特定するとエフェクター機能がノックアウトされているＩｇＧ１抗体である抗体を提供する。
【００９５】
ヒト化抗ＩＬ−２３Ａ抗体のＦＲ及びＣＤＲ又はＨＶＬは、親配列に対して正確に対応している必要はない。例えば、インポートＣＤＲ若しくはＨＶＬ、又は共通配列若しくは生殖系列配列のＦＲ配列における１つ以上の残基を、置換、挿入、又は欠失によって改変（例えば突然変異誘発）させてもよく、これにより生じたアミノ酸残基は、いずれかの親配列の対応する位置の元来の残基とはもはや同一ではないが、該抗体はそれにも関わらずＩＬ−２３Ａに結合する機能を保持している。このような改変は典型的には大規模ではなく、保存的改変であろう。通常、ヒト化抗体残基の少なくとも７５％、より頻繁には少なくとも９０％、最も頻繁には９５％超、又は９８％超、又は９９％超が、親共通配列又は生殖系列配列のＦＲ配列及びインポートＣＤＲ配列の残基に相当するだろう。
【００９６】
重鎖可変領域と軽鎖可変領域との間の界面（「ＶＬ−ＶＨ界面」）に影響を及ぼす免疫グロブリン残基は、２つの鎖の互いの近接性又は配向に影響を及ぼす残基である。鎖間相互作用に関与する可能性のある特定の残基としては、ＶＬ残基３４、３６、３８、４４、４６、８７、８９、９１、９６及び９８、並びにＶＨ残基３５、３７、３９、４５、４７、９１、９３、９５、１００、及び１０３が挙げられる（Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest (National Institutes of Health, Bethesda, Md., 1987)に示される番号付けシステムを利用）。米国特許第６，４０７，２１３号はまた、ＶＬ残基４３及び８５、並びにＶＨ残基４３及び６０などの残基も、この相互作用に関与している可能性があると考察している。これらの残基は、ヒトＩｇＧについてのみ示されているが、それらは種間で適用可能である。鎖間相互作用に関与することが合理的に考えて予想される重要な抗体残基が、共通配列の置換のために選択される。
【００９７】
「共通配列」及び「共通抗体」という用語は、任意の特定のクラス、アイソタイプ、又はサブユニット構造の全ての免疫グロブリン、例えばヒト免疫グロブリン可変ドメインにおける各々の位置において最も高い頻度で存在するアミノ酸残基を含む、アミノ酸配列を指す。共通配列は、特定の種の又は多くの種の免疫グロブリンに基づき得る。「共通」配列、構造、又は抗体は、特定の実施態様に記載されているような共通ヒト配列を包含すると理解され、任意の特定のクラス、アイソタイプ、又はサブユニット構造の全てのヒト免疫グロブリンにおける各々の位置において最も高い頻度で存在するアミノ酸残基を含む、アミノ酸配列を指す。したがって、共通配列は、１つ以上の公知の免疫グロブリンに存在するアミノ酸を各々の位置において有するアミノ酸配列を含有するが、任意の単一の免疫グロブリンの完全アミノ酸配列を正確に複製していなくてもよい。可変領域の共通配列は、どの天然に生成された抗体又は免疫グロブリン（Kabat et al., 1991, Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, Md.）及びその変異体からも得られない。重鎖及び軽鎖の共通配列のＦＲ、及びその変異体は、ヒト化抗ＩＬ−２３ｐ１９抗体の調製のための有用な配列を提供する。例えば、米国特許第６，０３７，４５４号及び第６，０５４，２９７号を参照されたい。
【００９８】
ヒト生殖系列配列は、ヒト個体群に天然に見られる。そうした生殖系列遺伝子の組合せは、抗体の多様性を生じる。抗体の軽鎖についての生殖系列抗体配列は、保存されたヒト生殖系列κ又はλｖ−遺伝子及びｊ−遺伝子に由来する。同様に、重鎖配列は、生殖系列ｖ−、ｄ−及びｊ−遺伝子に由来する（LeFranc, M-P, and LeFranc, G, “The Immunoglobulin Facts Book” Academic Press, 2001）。
【００９９】
本明細書において使用する「変異体」、「抗ＩＬ−２３Ａ変異体」、「ヒト化抗ＩＬ−２３Ａ変異体」、又は「変異ヒト化抗ＩＬ−２３Ａ」は各々、表１に示されているような配列のいずれかに由来する少なくとも１つの軽鎖可変マウスＣＤＲ、又は、表２に示されているようなマウスモノクローナル抗体に由来する１つの重鎖マウスＣＤＲ配列を有する、ヒト化抗ＩＬ−２３Ａ抗体を指す。変異体としては、一方又は両方の軽鎖又は重鎖の可変ドメインに１つ以上のアミノ酸変化を有する変異体が挙げられ、ただし、アミノ酸変化は、ＩＬ−２３Ａへの抗体の結合を実質的に損なわない。本明細書において生成された例示的な抗体としては、抗体Ａ、抗体Ｂ、抗体Ｃ、及び抗体Ｄとして称されるものが挙げられ、その様々な軽鎖及び重鎖が配列番号１８及び２１、並びに配列番号１９及び２０にそれぞれ示されている。
【０１００】
「単離された」抗体は、その天然環境の成分から同定及び分離及び／又は回収されたものである。抗体の天然環境の混入成分は、抗体の診断用途又は治療用途に干渉する可能性のある材料であり、これは酵素、ホルモン、又は他のタンパク質性若しくは非タンパク質性溶質であり得る。１つの態様では、該抗体は、抗体の重量に対して少なくとも９５％超まで単離されて精製されるだろう。
【０１０１】
単離された抗体としては、それが産生された組換え細胞内のインサイツでの抗体が挙げられる。なぜなら、抗体の天然環境の少なくとも１つの成分さえ存在しないであろうからである。しかしながら、通常、単離された抗体は、組換え細胞性材料が除去されるような少なくとも１回の精製工程によって調製されるだろう。
【０１０２】
「抗体の性能」という用語は、抗体による抗原の認識又は抗体のインビボでの効力に寄与する因子を指す。抗体のアミノ酸配列の変化は、折り畳みなどの抗体の特性に影響を及ぼし得、抗原に抗体が結合する初期速度（ｋａ）、抗原からの抗体の解離定数（ｋｄ）、抗原に対する抗体の親和性定数（Ｋｄ）、抗体のコンフォメーション、タンパク質の安定性、及び抗体の半減期などの、物理的因子に影響を及ぼし得る。
【０１０３】
本明細書において使用する「エピトープでタグ化された」という用語は、「エピトープタグ」に融合させた抗ＩＬ−２３Ａ抗体を指す。「エピトープタグ」は、抗体産生のためのエピトープを提供するに十分な数のアミノ酸を有するポリペプチドであるが、それが、抗ＩＬ−２３Ａ抗体の所望の活性に干渉しないように設計されている。エピトープタグは通常、十分に独特であるので、エピトープタグに対して生じた抗体は、実質的に他のエピトープと交差反応しない。適切なタグポリペプチドは一般的に、少なくとも６個のアミノ酸残基を含有し、通常、約８〜５０個のアミノ酸残基、又は約９〜３０個の残基を含有している。エピトープタグ及び該エピトープに結合する抗体の例としては、ｆｌｕ ＨＡタグポリペプチド及びその抗体である１２ＣＡ５（Field et al., 1988 Mol. Cell. Biol. 8: 2159-2165）；ｃ−ｍｙｃタグ及びその８Ｆ９、３Ｃ７、６Ｅ１０、Ｇ４、Ｂ７及び９Ｅ１０抗体（Evan et al., 1985, Mol. Cell. Biol. 5(12):3610-3616）；及び単純ヘルペスウイルス糖タンパク質Ｄ（ｇＤ）タグ及びその抗体（Paborsky et al. 1990, Protein Engineering 3(6): 547-553）が挙げられる。特定の実施態様では、エピトープタグは、「サルベージ受容体に結合するエピトープ」である。本明細書において使用する「サルベージ受容体に結合するエピトープ」という用語は、ＩｇＧ分子のインビボでの血清中半減期を延長させることに関与する、ＩｇＧ分子（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、又はＩｇＧ４）のＦｃ領域のエピトープを指す。
【０１０４】
診断上並びに治療上のモニタリングのために、本発明の抗体をまた、標識に、すなわち標識のみに又は標識と追加の第二の薬剤（プロドラッグ、化学療法剤など）のいずれかにコンジュゲートさせてもよい。他の第二の薬剤から識別されるような標識は、検出可能な化合物又は組成物である物質を指し、それを、本発明の抗体に直接又は間接的にコンジュゲートさせ得る。標識はそれ自体検出可能であっても（例えば放射性同位体標識又は蛍光標識）、又は、酵素標識の場合、検出可能な基質化合物又は組成物の化学的変化を触媒してもよい。標識された抗ＩＬ−２３Ａ抗体を調製し、インビトロ及びインビボでの診断を含む様々な適用に使用することができる。
【０１０５】
本発明の様々な態様において、抗体の１つ以上のドメインは組換え発現されるだろう。このような組換え発現は、１つ以上の制御配列、すなわち、特定の宿主生物における作動可能に連結されたコード配列の発現に必要とされるポリヌクレオチド配列を使用し得る。原核細胞において使用するのに適した制御配列としては、例えば、プロモーター、オペレーター、及びリボソーム結合部位の配列が挙げられる。真核細胞の制御配列としては、プロモーター、ポリアデニル化シグナル、及びエンハンサーが挙げられるがこれらに限定されない。これらの制御配列は、原核宿主細胞及び真核宿主細胞における抗ＩＬ−２３Ａ抗体の発現及び産生のために使用され得る。
【０１０６】
核酸配列は、それが別の核酸配列と機能的関係に配置されている場合に「作動可能に連結」されている。例えば、核酸プレ配列又は分泌リーダーは、それがポリペプチドの分泌に関与するプレタンパク質として発現されるならば、ポリペプチドをコードしている核酸に作動可能に連結されており；プロモーター又はエンハンサーは、それが配列の転写に影響を及ぼすならば、コード配列に作動可能に連結されており；又は、リボソーム結合部位は、それが翻訳を促進するように位置しているならば、コード配列に作動可能に連結されている。一般的に、「作動可能に連結される」は、連結されているＤＮＡ配列が連続的であり、分泌リーダーの場合には、連続的かつリーディングフレーム内にあることを意味する。しかしながら、エンハンサーは、場合により近接している。連結は、好都合な制限酵素部位におけるライゲーションによって達成され得る。このような部位が存在しない場合には、合成オリゴヌクレオチドアダプター又はリンカーを使用していてもよい。
【０１０７】
本明細書において使用する「細胞」、「細胞株」及び「細胞培養液」という表現は同義語として使用され、全てのこのような名称はその子孫を含む。したがって、「形質転換体」及び「形質転換細胞」は、初代の対象細胞、及び継代数に関係なくそれから得られた培養液を含む。
【０１０８】
処置の目的のための「哺乳動物」という用語は、ヒト、飼い慣らされた動物及び家畜、並びに動物園用、スポーツ用、又はペット用の動物、例えばイヌ、ウマ、ネコ、ウシなどをはじめとする哺乳動物として分類される任意の動物を指す。好ましくは、哺乳動物はヒトである。
【０１０９】
本明細書において使用する「障害」は、本明細書に記載された抗ＩＬ−２３Ａ抗体を用いての処置から恩恵を受けるであろう任意の容態である。これは、慢性及び急性の障害又は疾患、例えば、問題となっている障害に哺乳動物を罹りやすくさせる病状を含む。
【０１１０】
本明細書において使用する「ＩＬ−２３に関連した障害」又は「ＩＬ−２３に関連した疾患」という用語は、ＩＬ−２３の活性が疾患の原因となり、典型的にはＩＬ−２３が異常に発現されている、容態を指す。ＩＬ−２３に関連した障害は、免疫系の疾患及び障害、例えば、自己免疫障害及び炎症疾患を含む。このような容態としては、乾癬、炎症性腸疾患、例えば潰瘍性大腸炎又はクローン病、及び脊椎関節炎、例えば強直性脊椎炎、Ｘ線所見が認められない軸性脊椎関節炎、末梢性脊椎関節炎、又は乾癬性関節炎が挙げられる。
【０１１１】
「静脈内入」という用語は、約１５分間を超える時間をかけての、一般的には約３０〜９０分間かけての、動物又はヒト患者の静脈への薬剤の導入を指す。
【０１１２】
「静脈内ボーラス」又は「静脈内プッシュ」という用語は、生体が約１５分間以内、一般的には５分間以内に薬物を受けるような、動物又はヒトの静脈への薬物の投与を指す。
【０１１３】
「皮下投与」という用語は、動物又はヒト患者の皮膚下への、好ましくは皮膚と根底にある組織との間のポケット内への、薬物貯蔵所からの比較的緩徐で持続的な送達による、薬剤の導入を指す。皮膚をつまむか、又は皮膚を引き上げて根底にある組織から引き離すことにより、ポケットが作られ得る。
【０１１４】
「皮下注入」という用語は、３０分以内、又は９０分以内を含むがそれに限定されない時間をかけての、動物又はヒト患者の皮膚下への、好ましくは皮膚と根底にある組織との間のポケット内への、薬物貯蔵所からの比較的緩徐で持続的な送達による、薬物の導入を指す。場合により、注入は、動物又はヒト患者の皮膚下に埋め込まれた薬物送達ポンプの皮下埋め込みによって行なわれ得、ここでポンプは、予め決定された時間かけて、例えば３０分間、９０分間、又は処置計画の長さにおよぶ時間をかけて、予め決定された量の薬物を送達する。
【０１１５】
「皮下ボーラス」という用語は、動物又はヒト患者の皮膚下への薬物の投与を指し、ここでボーラス薬物送達は、約１５分以内であり；別の態様では、５分以内であり、さらに別の態様では、６０秒以内である。またさらなる別の態様では、投与は、皮膚と根底にある組織との間のポケット内であり、ここでポケットは、皮膚をつまむか又は皮膚を引き上げて根底の組織から引き離すことによって作られ得る。
【０１１６】
「治療有効量」という用語は、処置される障害の１つ以上の症状を緩和又は寛解する活性物質の量を指すために使用される。別の態様では、治療有効量は、疾患の進行を緩徐化させる上で効果的であることが示された標的の血清中濃度を指す。効力は、処置しようとする容態に依存して、慣用的な方法で測定され得る。
【０１１７】
本明細書において使用する「処置」及び「療法」などという用語は、１つ以上の症状の軽減又は緩和、疾患若しくは障害の後退、緩徐化、又は休止を含むがこれらに限定されない、あらゆる臨床的に望ましいか又は有益な効果をもたらす、疾患又は障害についての治療的措置並びに予防的又は抑制的措置を含むことを意味する。したがって、例えば、処置という用語は、疾患又は障害の症状の発症前又は発症後の薬剤の投与を含み、これにより、疾患又は障害の１つ以上の兆候が予防又は除去される。別の例として、この用語は、疾患の臨床徴候後に薬剤を投与することにより、疾患の症状と戦うことを含む。さらに、発症後及び臨床症状が発生した後の薬剤の投与は（ここでは、処置により疾患の寛解がもたらされるか否かに関係なく、投与が、疾患又は障害の臨床パラメーター、例えば組織損傷度、又は転移の量若しくは程度に影響を及ぼす）、本明細書において使用する「処置」又は「療法」を含む。さらに、単独での又は別の治療剤と組み合わせた本発明の組成物が、抗ＩＬ−２３Ａ抗体組成物を使用しない場合の症状と比較して、処置される障害の少なくとも１つの症状を軽減又は寛解する限り、結果は、障害の全ての症状が軽減されるか否かに関係なく、根底にある障害の効果的な処置であると判断されるべきである。
【０１１８】
「添付文書」という用語は、適応症、使用法、投与法、禁忌、及び／又はこのような治療用製品の使用に関する警告に関する情報を含有している、治療用製品の商業包装に慣例上含まれる説明書を指すために使用される。
【０１１９】
抗体
本発明の状況において使用された選択された抗体のＣＤＲを表１及び２に示す。本発明の状況において使用された選択された抗体の可変領域を表３及び４に示す。
【０１２０】
【表１】
2018512422.tif 000003
【０１２１】
【表２】
2018512422.tif 000004
【０１２２】
【表３】
2018512422.tif 000005
【０１２３】
【表４】
2018512422.tif 000006
【０１２４】
マウス抗体６Ｂ８から得られたヒト化軽鎖可変領域及び重鎖可変領域の選択された組合せにより、抗体Ａ、Ｂ、Ｃ及びＤが得られた：
抗体Ａ：ＩｇΚ−６６を有する６Ｂ８−ＩｇＧ１ＫＯ−２（重鎖可変領域６Ｂ８ＣＶＨ−０２及び軽鎖可変領域６Ｂ８ＣＶＫ−６６）；
抗体Ｂ；ＩｇΚ−６６を有する６Ｂ８−ＩｇＧ１ＫＯ−５（重鎖可変領域６Ｂ８ＣＶＨ−０５及び軽鎖可変領域６Ｂ８ＣＶＫ−６６）；
抗体Ｃ：ＩｇΚ−６５を有する６Ｂ８−ＩｇＧ１ＫＯ−２（重鎖可変領域６Ｂ８ＣＶＨ−０２及び軽鎖可変領域６Ｂ８ＣＶＫ−６５）；
抗体Ｄ：ＩｇΚ−６５を有する６Ｂ８−ＩｇＧ１ＫＯ−５（重鎖可変領域６Ｂ８ＣＶＨ−０５及び軽鎖可変領域６Ｂ８ＣＶＫ−６５）。
【０１２５】
抗体Ａ、Ｂ、Ｃ及びＤは、表５に示される重鎖及び軽鎖の配列を有する。
【０１２６】
【表５】
2018512422.tif 000007
2018512422.tif 000008
【０１２７】
上記の表５における抗体Ａ、Ｂ、Ｃ及びＤの軽鎖及び重鎖の可変領域に下線が付されている。
【０１２８】
１つの実施態様では、抗ＩＬ−２３Ａ抗体は、配列番号１８の軽鎖配列及び配列番号１９の重鎖配列を含む。１つの実施態様では、抗ＩＬ−２３Ａ抗体は配列番号１８の軽鎖配列及び配列番号２０の重鎖配列を含む。１つの実施態様では、抗ＩＬ−２３Ａ抗体は配列番号２１の軽鎖配列及び配列番号１９の重鎖配列を含む。１つの実施態様では、抗ＩＬ−２３Ａ抗体は配列番号２１の軽鎖配列及び配列番号２０の重鎖配列を含む。
【０１２９】
１つの実施態様では、抗ＩＬ−２３Ａ抗体は、配列番号１８の軽鎖配列及び配列番号１９の重鎖配列からなる。１つの実施態様では、抗ＩＬ−２３Ａ抗体は、配列番号１８の軽鎖配列及び配列番号２０の重鎖配列からなる。１つの実施態様では、抗ＩＬ−２３Ａ抗体は、配列番号２１の軽鎖配列及び配列番号１９の重鎖配列からなる。１つの実施態様では、抗ＩＬ−２３Ａ抗体は、配列番号２１の軽鎖配列及び配列番号２０の重鎖配列からなる。
【０１３０】
さらなる実施態様では、抗ＩＬ−２３Ａ抗体は、配列番号２２のアミノ酸残基１０８〜１２６及びアミノ酸残基１３７〜１５１からなる、エピトープにおいてヒトＩＬ−２３Ａに結合する。
【０１３１】
さらなる実施態様では、抗ＩＬ−２３Ａ抗体は、本発明の抗体、例えば本明細書に記載された抗体Ａ、抗体Ｂ、抗体Ｃ、又は抗体Ｄと競合的に、ヒトＩＬ−２３Ａに結合する。ＩＬ−２３Ａに対する抗体の競合的結合能は、当技術分野において公知である競合的結合アッセイを使用して測定することができる。
【０１３２】
いくつかの実施態様では、抗ＩＬ−２３Ａ抗体は、配列番号１０、１１、１２又は１３に示されるアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域配列を含む。いくつかの実施態様では、抗ＩＬ−２３Ａ抗体は、配列番号１４、１５、１６又は１７に示されるアミノ酸配列を有する重鎖可変領域配列を含む（上記の表３及び４参照）。これらの抗体のＣＤＲ配列を表１及び２に示す。例えば、抗ＩＬ−２３Ａ抗体は、配列番号１１／１４、１１／１５、１０／１４又は１０／１５の軽鎖可変領域と重鎖可変領域の組合せを有するモノクローナル抗体である。このような可変領域を、ヒト定常領域と組み合わせてもよい。
【０１３３】
ポリヌクレオチド、ベクター、宿主細胞、及び組換え法
他の実施態様は、抗ＩＬ−２３Ａ抗体をコードしている配列を含む単離されたポリヌクレオチド、ベクター、及び該ポリヌクレオチドを含む宿主細胞、並びに、ヒト化抗体の産生のための組換え技術を包含する。単離されたポリヌクレオチドは、例えば、完全長のモノクローナル抗体、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、及びＦｖフラグメントをはじめとする、任意の所望の形態の抗ＩＬ−２３Ａ抗体をコードすることができる。
【０１３４】
抗ＩＬ−２３Ａ抗体をコードしている配列を含むポリヌクレオチド（群）を、当技術分野において公知であるような１つ以上の調節配列又は制御配列に融合させることができ、またこれを当技術分野において公知であるような適切な発現ベクター又は宿主細胞に含有させることができる。重鎖可変ドメイン又は軽鎖可変ドメインをコードしている各ポリヌクレオチド分子を、独立して、ヒト定常ドメインなどの定常ドメインをコードしているポリヌクレオチド配列に融合させることができ、これによりインタクトな抗体の生成が可能となる。あるいは、ポリヌクレオチド又はその一部を互いに融合させることができ、これにより、一本鎖抗体の生成のための鋳型がもたらされる。
【０１３５】
組換え産生のために、抗体をコードしているポリヌクレオチドを、クローニング用（ＤＮＡの増幅）又は発現用の複製可能なベクターに挿入する。組換え抗体を発現させるための多くの適切なベクターが入手可能である。ベクター成分は一般的に、以下の１つ以上を含むがこれらに限定されない：シグナル配列、複製起点、１つ以上のマーカー遺伝子、エンハンサー配列、プロモーター、及び転写終結配列。
【０１３６】
抗ＩＬ−２３Ａ抗体はまた融合ポリペプチドとして生成されてもよく、ここでは該抗体は、シグナル配列などの異種ポリペプチド、又は成熟タンパク質若しくはポリペプチドのアミノ末端に特異的な切断部位を有する他のポリペプチドと融合している。選択された異種シグナル配列は典型的には、宿主細胞によって認識されプロセシング（すなわちシグナルペプチダーゼによって切断）されるものである。抗ＩＬ−２３Ａ抗体シグナル配列を認識しプロセシングしない原核宿主細胞では、シグナル配列を、原核生物のシグナル配列によって置換してもよい。シグナル配列は、例えば、アルカリホスファターゼ、ペニシリナーゼ、リポタンパク質、熱安定性エンテロトキシンＩＩリーダーなどであり得る。酵母での分泌のために、天然シグナル配列を、例えば、酵母インベルターゼα因子（サッカロマイセス（Saccharomyces）及びクルイベロマイセス（Kluyveromyces）α因子リーダーを含む）、酸性ホスファターゼ、Ｃ．アルビカンス（C. albicans）・グルコアミラーゼ、又は国際公開公報第９０／１３６４６号に記載のシグナルから得られたリーダー配列で置換してもよい。哺乳動物細胞では、哺乳動物シグナル配列、並びにウイルス分泌リーダー、例えば単純ヘルペスｇＤシグナルを使用してもよい。このような前駆領域についてのＤＮＡを、抗ＩＬ−２３Ａ抗体をコードしているＤＮＡにリーディングフレーム内でライゲートする。
【０１３７】
発現ベクター及びクローニングベクターは、１つ以上の選択された宿主細胞においてベクターが複製することを可能とする核酸配列を含有している。一般的には、クローニングベクター内におけるこの配列は、ベクターが宿主染色体ＤＮＡとは独立して複製することを可能とするものであり、これは複製起点又は自律複製配列を含む。様々な細菌、酵母、及びウイルスについてのこのような配列は周知である。プラスミドｐＢＲ３２２由来の複製起点は大半のグラム陰性細菌にとって適切であり、２−ν.プラスミド起点は酵母に適切であり、様々なウイルス起点（ＳＶ４０、ポリオーマ、アデノウイルス、ＶＳＶ、及びＢＰＶ）は哺乳動物細胞におけるクローニングベクターにとって有用である。一般的に、複製起点の成分は、哺乳動物発現ベクターには必要とされない（ＳＶ４０起点が典型的には使用され得る。なぜなら、それは初期プロモーターを含有しているからである）。
【０１３８】
発現ベクター及びクローニングベクターは、発現の同定を容易にする選択マーカーをコードする遺伝子を含有していてもよい。典型的な選択マーカー遺伝子は、抗生物質又は他の毒素に対する耐性を付与するタンパク質、例えばアンピシリン、ネオマイシン、メトトレキサート、又はテトラサイクリンをコードするか、又は代替的には補完的な栄養要求性欠乏症であるか、又は他の代替選択肢では、複合培地に存在しない特定の栄養分を供給し、例えば桿菌のためのＤ−アラニンラセミ化酵素をコードしている遺伝子である。
【０１３９】
選択スキームの一例は、宿主細胞の増殖を停止する薬物を利用する。異種遺伝子を用いて成功裡に形質転換された細胞は、薬物耐性を付与するタンパク質を産生し、よって選択計画を生き延びる。このような優性選択の例は、薬物のネオマイシン、ミコフェノール酸、及びハイグロマイシンを使用する。哺乳動物細胞のための一般的な選択マーカーは、抗ＩＬ−２３Ａ抗体をコードしている核酸を取り入れる能力のある細胞の同定を可能とするもの、例えばＤＨＦＲ（ジヒドロ葉酸レダクターゼ）、チミジンキナーゼ、メタロチオネイン−Ｉ及び−ＩＩ（例えば霊長類のメタロチオネイン遺伝子）、アデノシンデアミナーゼ、オルニチンデカルボキシラーゼなどである。ＤＨＦＲ選択遺伝子を用いて形質転換された細胞をまず、ＤＨＦＲの競合的アンタゴニストであるメトトレキサート（Ｍｔｘ）を含有する培養培地中で全ての形質転換体を培養することによって同定する。野生型ＤＨＦＲを使用する場合の適切な宿主細胞は、ＤＨＦＲ活性の欠損したチャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞株（例えばＤＧ４４）である。
【０１４０】
あるいは、抗ＩＬ−２３Ａ抗体、野生型ＤＨＦＲタンパク質、及び別の選択マーカー、例えばアミノグリコシド３’−ホスホトランスフェラーゼ（ＡＰＨ）をコードしているＤＮＡ配列を用いて形質転換された又は同時形質転換された宿主細胞（特に、内因性ＤＨＦＲを含有する野生型宿主）を、選択マーカーのための選択物質、例えばアミノグリコシド抗生物質、例えばカナマイシン、ネオマイシン、又はＧ４１８を含有している培地中での細胞増殖によって選択することができる。例えば、米国特許第４，９６５，１９９号を参照されたい。
【０１４１】
組換え産生を、宿主細胞としての酵母細胞において行なう場合、酵母プラスミドＹＲｐ７に存在するＴＲＰ１遺伝子（Stinchcomb et al., 1979, Nature 282: 39）を、選択マーカーとして使用することができる。ＴＲＰ１遺伝子は、トリプトファン中で増殖する能力を欠失している酵母の突然変異株、例えばＡＴＣＣ番号４４０７６又はＰＥＰ４−１のための選択マーカーを提供する（Jones, 1977, Genetics 85:12）。よって、酵母宿主細胞ゲノム内のｔｒｐ１病変の存在は、トリプトファンの非存在下での増殖によって、形質転換を検出するために有効な環境を提供する。同様に、Ｌｅｕ２ｐ欠損酵母株、例えばＡＴＣＣ２０，６２２及び３８，６２６は、ＬＥＵ２遺伝子を有する公知のプラスミドによって補完される。
【０１４２】
さらに、１．６μmの環状プラスミドｐＫＤ１に由来するベクターを、クルイベロマイセス（Kluyveromyces）酵母の形質転換のために使用することができる。あるいは、組換え仔ウシキモシンの大規模産生のための発現系がＫ．ラクティス（K. lactis）において報告された（Van den Berg, 1990, Bio/Technology 8:135）。クリベロマイセスの工業生産株による成熟組換えヒト血清アルブミンの分泌のための安定な多コピー発現ベクターも開示されている（Fleer et al., 1991, Bio/Technology 9:968-975）。
【０１４３】
発現ベクター及びクローニングベクターは通常、宿主生物によって認識されかつ抗ＩＬ−２３ｐ１９抗体又はそのポリペプチド鎖をコードしている核酸分子に作動可能に連結されている、プロモーターを含有している。原核生物宿主と共に使用するのに適したプロモーターとしては、ｐｈｏＡプロモーター、β−ラクタマーゼ及びラクトースプロモーター系、アルカリホスファターゼ、トリプトファン（ｔｒｐ）プロモーター系、及びハイブリッドプロモーター、例えばｔａｃプロモーターが挙げられる。他の公知の細菌プロモーターも適している。細菌系に使用するためのプロモーターはまた、抗ＩＬ−２３Ａ抗体をコードしているＤＮＡに作動可能に連結されたシャイン・ダルガーノ（Ｓ．Ｄ．）配列も含有しているだろう。
【０１４４】
多くの真核生物プロモーター配列が公知である。実質的に全ての真核生物遺伝子が、転写が開始される部位から約２５〜３０塩基上流に位置するＡＴリッチ領域を有する。多くの遺伝子の転写開始から７０〜８０塩基上流に見られる別の配列はＣＮＣＡＡＴ領域であり、そこではＮはどのようなヌクレオチドでもよい。大半の真核生物遺伝子の３’末端には、コード配列の３’末端へのポリＡテイルの付加のためのシグナルである可能性があるＡＡＴＡＡＡ配列がある。これらの全ての配列は、真核生物発現ベクターに適切に挿入される。
【０１４５】
酵母宿主と共に使用するのに適したプロモーター配列の例としては、３−ホスホグリセリン酸キナーゼ又は他の解糖酵素、例えばエノラーゼ、グリセルアルデヒド−３−リン酸デヒドロゲナーゼ、ヘキソキナーゼ、ピルビン酸デカルボキシラーゼ、ホスホフルクトキナーゼ、グルコース−６−リン酸イソメラーゼ、３−ホスホグリセリン酸ムターゼ、ピルビン酸キナーゼ、トリオースリン酸イソメラーゼ、ホスホグルコースイソメラーゼ、及びグルコキナーゼのプロモーターが挙げられる。
【０１４６】
誘導性プロモーターは、増殖条件によって制御される転写というさらなる利点を有する。これらは、アルコールデヒドロゲナーゼ２、イソシトクロムＣ、酸性ホスファターゼ、窒素代謝に関連した誘導酵素、メタロチオネイン、グリセルアルデヒド−３−リン酸デヒドロゲナーゼ、及びマルトース及びガラクトースの利用に関与する酵素についての酵母プロモーター領域を含む。酵母における発現に使用するのに適したベクター及びプロモーターはさらに、欧州特許第７３，６５７号に記載されている。酵母エンハンサーはまた、有利には酵母プロモーターと共に使用される。
【０１４７】
哺乳動物宿主細胞内のベクターからの抗ＩＬ−２３Ａ抗体の転写は、例えば、ポリオーマウイルス、鶏頭ウイルス、アデノウイルス（例えばアデノウイルス２型）、ウシパピローマウイルス、サル肉腫ウイルス、サイトメガロウイルス、レトロウイルス、Ｂ型肝炎ウイルス、及びサルウイルス４０（ＳＶ４０）などのウイルスのゲノムから得られたプロモーターによって、異種哺乳動物プロモーター、例えばアクチンプロモーター又は免疫グロブリンプロモーターから、又は熱ショックプロモーターから制御される。ただし、このようなプロモーターは宿主細胞系と適合性である。
【０１４８】
ＳＶ４０ウイルスの初期及び後期プロモーターは簡便には、ＳＶ４０ウイルス複製起点も含有するＳＶ４０制限酵素フラグメントとして得られる。ヒトサイトメガロウイルスの最初期プロモーターは簡便には、ＨｉｎｄＩＩＩ Ｅ制限酵素フラグメントとして得られる。ベクターとしてウシパピローマウイルスを使用して哺乳動物宿主においてＤＮＡを発現させるための系は、米国特許第４，４１９，４４６号に開示されている。この系の改変が、米国特許第４，６０１，９７８号に記載されている。また、単純ヘルペスウイルス由来のチミジンキナーゼプロモーターの制御下にあるマウス細胞内のヒトｐ−インターフェロンｃＤＮＡの発現を開示している、Reyes et al., 1982, Nature 297:598-601も参照されたい。あるいは、ラウス肉腫ウイルス末端反復配列をプロモーターとして使用してもよい。
【０１４９】
組換え発現ベクターに使用され得る別の有用な配列は、高等な真核生物による抗ＩＬ−２３Ａ抗体をコードしているＤＮＡの転写を増加させるために使用される、エンハンサー配列である。哺乳動物遺伝子（例えばグロビン、エラスターゼ、アルブミン、α−フェトプロテイン、及びインスリン）に由来する多くのエンハンサー配列が現在公知である。しかしながら、典型的には、真核細胞ウイルスに由来するエンハンサーが使用される。例としては、複製起点の後期側上のＳＶ４０エンハンサー（ｂｐ１００〜２７０）、サイトメガロウイルス初期プロモーターエンハンサー、複製起点の後期側上のポリオーマエンハンサー、及びアデノウイルスエンハンサーが挙げられる。また、真核生物プロモーターの活性化のためのエンハンサー配列の記載についてYaniv, 1982, Nature 297:17-18を参照されたい。エンハンサーは、抗ＩＬ−２３Ａ抗体をコードする配列の５’位又は３’位でベクターにスプライシングされ得るが、好ましくはプロモーターに対して５’の部位に位置する。
【０１５０】
真核宿主細胞（酵母、真菌、昆虫、植物、動物、ヒト、又は他の多細胞生物由来の有核細胞）に使用される発現ベクターはまた、転写終結のために必要とされる及びｍＲＮＡの安定化のために必要とされる配列も含有していてもよい。このような配列は、一般的に、真核生物又はウイルスのＤＮＡ又はｃＤＮＡの５’及び場合により３’非翻訳領域から入手できる。これらの領域は、抗ＩＬ−２３Ａ抗体をコードしているｍＲＮＡの非翻訳部分内にポリアデニル化フラグメントとして転写されるヌクレオチドセグメントを含有している。１つの有用な転写終結成分は、ウシ成長ホルモンポリアデニル化領域である。国際公開公報第９４／１１０２６号及びそこに開示されている発現ベクターを参照されたい。いくつかの実施態様では、ヒト化抗ＩＬ−２３ｐ１９抗体は、ＣＨＥＦ系を使用して発現させ得る（例えば、米国特許第５，８８８，８０９号を参照されたい；その開示は参照により本明細書に組み入れられる）。
【０１５１】
本明細書においてベクター内のＤＮＡをクローニング又は発現させるのに適した宿主細胞は、上記の原核細胞、酵母細胞、又はより高等な真核細胞である。この目的のために適した原核細胞としては、真正細菌、例えばグラム陰性菌又はグラム陽性菌、例えば腸内細菌科、例えば大腸菌類、例えば大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）、エンテロバクター菌、エルウィニア菌、クレブシエラ菌、プロテウス菌、サルモネラ菌、例えばサルモネラ・チフィリウム（Salmonella typhimurium）、セラチア菌、例えばセラチア・マルセセンス（Serratia marcescans）、及び赤痢菌、並びに、桿菌、例えば枯草菌及びバチルス・リケニフォルミス（B. licheniformis）（例えば１９８９年４月１２日に公開されたＤＤ２６６，７１０号に開示されたＢ．リケニフォルミス４１Ｐ）、シュードモナス菌、例えば緑膿菌、及びストレプトマイセス菌が挙げられる。１つの好ましいＥ．ｃｏｌｉクローニング宿主はＥ．ｃｏｌｉ２９４（ＡＴＣＣ ３１，４４６）であるが、Ｅ．ｃｏｌｉ Ｂ、Ｅ．ｃｏｌｉ Ｘ１７７６（ＡＴＣＣ ３１，５３７）及びＥ．ｃｏｌｉ Ｗ３１１０（ＡＴＣＣ ２７，３２５）などの他の株も適している。これらの例は、制限するものではなくむしろ例である。
【０１５２】
原核生物の他に、糸状菌又は酵母などの真核微生物も、抗ＩＬ−２３Ａ抗体をコードしているベクターに適したクローニング用宿主又は発現用宿主である。サッカロマイセス・セレビシエ（Saccharomyces cerevisiae）又は一般的なパン酵母が、より下等な真核宿主微生物の中で最も一般的に使用されている。しかしながら、多くの他の属、種、及び株が一般的に入手可能であり、かつ本明細書において有用であり、例えば分裂酵母（Schizosaccharomyces pombe）；クリベロマイセス（Kluyveromyces）宿主、例えばＫ．ラクティス（K. lactis）、Ｋ．フラジリス（K. fragilis）（ＡＴＣＣ １２，４２４）、Ｋ．ブルガリクス（K. bulgaricus）（ＡＴＣＣ １６，０４５）、Ｋ．ウィッカーラミ（K. wickeramii）（ＡＴＣＣ ２４，１７８）、Ｋ．ワルティイ（K. waltii）（ＡＴＣＣ ５６，５００）、Ｋ．ドロソフィラルム（K. drosophilarum）（ＡＴＣＣ ３６，９０６）、Ｋ．サーモトレランス（K. thermotolerans）、及びＫ．マルキシアヌス（K. marxianus）；ヤロウィア属（yarrowia）（欧州特許第４０２，２２６号）；ピキア・パストリス（Pichia pastors）（欧州特許第１８３，０７０号）；カンジダ；トリコデルマ・レーシア（Trichoderma reesia）（欧州特許第２４４，２３４号）；アカパンカビ（Neurospora crassa）；シュワンニオマイセス（Schwanniomyces）、例えばシュワンニオマイセス・オシデンタリス（Schwanniomyces occidentalis）；及び糸状菌、例えばニュースポラ（Neurospora）、アオカビ類（Penicillium）、トリポクラディウム（Tolypocladium）、及びアスペルギルス（Aspergillus）宿主、例えばＡ．ニデュランス（A. nidulans）及びクロコウジカビ（A. niger）である。
【０１５３】
グリコシル化抗ＩＬ−２３Ａ抗体の発現に適した宿主細胞は、多細胞生物から得られる。無脊椎動物細胞の例としては、植物細胞及び昆虫細胞、例えば数多くのバキュロウイルス株及び変異株、並びにヨトウガ（Spodoptera frugiperda）（イモムシ）、ネッタイシマカ（Aedes aegypti）（蚊）、ヒトスジシマカ（Aedes albopictus）（蚊）、キイロショウジョウバエ（ショウジョウバエ）、及びボムビークス・モリー（Bombyx mori）（カイコ）などの宿主からの対応する許容される昆虫宿主細胞が挙げられる。例えばアウトグラファ・カリフォルニカ（Autographa californica）ＮＰＶのＬ−１変異体及びボムビークス・モリー（Bombyx mori）ＮＰＶのＢｍ−５株などの、トランスフェクション用の様々なウイルス株が公共的に入手可能であり、このようなウイルスを、特にヨトウガ細胞のトランスフェクションのために使用し得る。
【０１５４】
綿、コーン、ジャガイモ、大豆、ペチュニア、トマト、及びタバコの植物細胞培養液もまた宿主として使用することができる。
【０１５５】
別の態様では、抗ＩＬ−２３Ａの発現は、脊椎動物細胞内で行なわれる。培養液（組織培養液）中の脊椎動物細胞の増殖は慣用的な手順となっており、技術は広く利用可能である。有用な哺乳動物宿主細胞株の例は、ＳＶ４０によって形質転換されたサル腎臓ＣＶ１株（ＣＯＳ−７、ＡＴＣＣ ＣＲＬ １６５１）、ヒト胚腎臓株（懸濁培養液中での増殖のためにサブクローニングされた２９３又は２９３細胞）、（Graham et al., 1977, J. Gen Virol. 36: 59）、ベビーハムスター腎臓細胞（ＢＨＫ、ＡＴＣＣ ＣＣＬ１０）、チャイニーズハムスター卵巣細胞／−ＤＨＦＲ１（ＣＨＯ、Urlaub et al., 1980, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 77: 4216；例えばＤＧ４４）、マウスセルトリ細胞（ＴＭ４、Mather, 1980, Biol. Reprod. 23:243-251）、サル腎臓細胞（ＣＶ１ ＡＴＣＣ ＣＣＬ ７０）、アフリカミドリザル腎臓細胞（ＶＥＲＯ−７６、ＡＴＣＣ ＣＲＬ−１５８７）、ヒト子宮頸癌細胞（ＨＥＬＡ、ＡＴＣＣ ＣＣＬ ２）、イヌ腎臓細胞（ＭＤＣＫ、ＡＴＣＣ ＣＣＬ ３４）、バッファローラット肝臓細胞（ＢＲＬ ３Ａ、ＡＴＣＣ ＣＲＬ １４４２)、ヒト肺細胞（Ｗ１３８、ＡＴＣＣ ＣＣＬ ７５）、ヒト肝臓細胞（ＨｅｐＧ２、ＨＢ８０６５）、マウス乳腺腫瘍（ＭＭＴ ０６０５６２、ＡＴＣＣ ＣＣＬ ５１）、ＴＲ１細胞（Mather et al., 1982, Annals N.Y. Acad. Sci. 383: 44-68）、ＭＲＣ５細胞、ＦＳ４細胞、及びヒト肝細胞腫株（ＨｅｐＧ２）である。
【０１５６】
宿主細胞を、抗ＩＬ−２３Ａ抗体産生のための上記の発現ベクター又はクローニングベクターを用いて形質転換し、そして、プロモーターを誘導するために、形質転換体を選択するために、又は所望の配列をコードしている遺伝子を増幅させるために適宜改変された慣用的な栄養培地中で培養する。
【０１５７】
本明細書に記載の抗ＩＬ−２３Ａ抗体を産生するために使用された宿主細胞は、様々な培地中で培養され得る。市販の培地、例えばＨａｍのＦ１０（Sigma-Aldrich Co.、セントルイス、ミズーリ州）、最小必須培地（（ＭＥＭ）、（Sigma-Aldrich Co.）、ＲＰＭＩ−１６４０（Sigma-Aldrich Co.）、及びダルベッコ改変イーグル培地（（ＤＭＥＭ）、Sigma-Aldrich Co.）が、宿主細胞を培養するのに適している。さらに、Ham et al., 1979, Meth. Enz. 58: 44, Barnes et al., 1980, Anal. Biochem. 102: 255、米国特許第４，７６７，７０４号、米国特許第４，６５７，８６６号、米国特許第４，９２７，７６２号、米国特許第４，５６０，６５５号、米国特許第５，１２２，４６９号、国際公開公報第９０／１０３４３０号、及び国際公開公報第８７／００１９５号の１つ以上に記載された培地のいずれかを、宿主細胞のための培養培地として使用し得る。これらの培地のいずれかに、必要であれば、ホルモン及び／又は他の成長因子（例えばインスリン、トランスフェリン、又は上皮成長因子）、塩（例えば塩化ナトリウム、カルシウム、マグネシウム、及びリン酸塩）、緩衝液（例えばＨＥＰＥＳ）、ヌクレオチド（例えばアデノシン及びチミジン）、抗生物質（例えばゲンタマイシン）、微量元素（マイクロモルの範囲の最終濃度で通常存在する無機化合物として定義される）、及びブドウ糖又は等価なエネルギー源を補充し得る。他の補助物質も、当業者には公知であろう適切な濃度で含まれていてもよい。培養条件、例えば温度、ｐＨなどは、発現のために選択された宿主細胞と共に以前に使用されたものであり、当業者には明らかであろう。
【０１５８】
組換え技術を使用する場合、抗体は、細胞内の細胞膜周辺腔で産生されても、又は培地中に直接分泌されてもよい。抗体が細胞内で産生される場合、第一工程として細胞を破壊してタンパク質を放出させ得る。宿主細胞又は溶解したフラグメントのいずれかの粒子状破片物を、例えば、遠心分離又は限外ろ過によって除去することができる。Carter et al., 1992, Bio/Technology 10:163-167は、Ｅ．ｃｏｌｉの細胞膜周辺腔に分泌された抗体を単離するための手順を記載している。
【０１５９】
簡潔に言えば、細胞ペーストを、酢酸ナトリウム（ｐＨ３．５）、ＥＤＴＡ、及びフェニルメチルスルホニルフルオライド（ＰＭＳＦ）の存在下で約３０分間かけて解凍する。細胞破片物を、遠心分離によって除去することができる。抗体が培地に分泌される場合、このような発現系からの上清を、一般的にまず、市販のタンパク質濃縮フィルター、例えばアミコン又はミリポアペリコン限外ろ過装置を使用して濃縮する。ＰＭＳＦなどのプロテアーゼ阻害剤を、前記の工程のいずれかに含めることにより、タンパク質の分解を抑制することができ、そして抗生物質を含めることにより外来性の混入物の増殖を防ぐことができる。様々な方法を使用して、宿主細胞から抗体を単離することができる。
【０１６０】
細胞から調製された抗体組成物を、例えば、ヒドロキシアパタイトクロマトグラフィー、ゲル電気泳動、透析、及びアフィニティクロマトグラフィーを使用して精製することができ、アフィニティクロマトグラフィーが典型的な精製技術である。アフィニティリガンドとしてのプロテインＡの適切性は、抗体に存在するあらゆる免疫グロブリンＦｃドメインの種及びアイソタイプに依存する。プロテインＡを使用して、ヒトγ１、γ２、又はγ４重鎖に基づいた抗体を精製することができる（例えば、Lindmark et al., 1983 J. Immunol. Meth. 62:1-13参照）。プロテインＧは、全てのマウスアイソタイプ及びヒトγ３に推奨される（例えば、Guss et al., 1986 EMBO J. 5:1567-1575参照）。アフィニティリガンドが付着するマトリックスは、アガロースであることが最も多いが、他のマトリックスも利用可能である。力学的に安定なマトリックス、例えば制御された細孔ガラス又はポリ（スチレンジビニル）ベンゼンは、アガロースを用いて達成され得るより迅速な流速及びより短い処理時間を可能とする。抗体がＣＨ３ドメインを含む場合、Bakerbond ABX（商標）樹脂（J. T. Baker、フィリップスバーグ、ニュージャージー州）が精製のために有用である。タンパク質精製のための他の技術、例えばイオン交換カラム上での分画、エタノールによる沈降、逆相ＨＰＬＣ、シリカクロマトグラフィー、陰イオン又は陽イオン交換樹脂上でのヘパリンセファロース（商標）クロマトグラフィー（例えばポリアスパラギン酸カラム）、クロマトフォーカッシング、ＳＤＳ−ＰＡＧＥ、及び硫酸アンモニウム沈降法もまた、回収しようとする抗体に依存して利用可能である。
【０１６１】
任意の予備精製工程（群）の後に、関心対象の抗体と混入物とを含む混合物を、典型的には低塩濃度（例えば約０〜０．２５Ｍの塩）で行なわれる、ｐＨ約２．５〜４．５の溶出緩衝液を使用した、低いｐＨでの疎水性相互作用クロマトグラフィーにかけ得る。
【０１６２】
治療用途
別の実施態様では、本明細書において開示された抗ＩＬ−２３Ａ抗体は、本明細書に記載されているようなＩＬ−２３ｐ１９の発現に関連した様々な障害の処置に有用である。１つの態様では、ＩＬ−２３に関連した障害を処置するための方法は、治療有効量の抗ＩＬ−２３Ａ抗体をそれを必要とする被験者に投与する工程を含む。
【０１６３】
抗ＩＬ−２３Ａ抗体は、非経口、皮下、腹腔内、肺内、及び鼻腔内、並びに局所的な免疫抑制処置を所望の場合には病巣内投与（灌流するか、又はさもなくば移植前に移植片を抗体と接触させることを含む）をはじめとする任意の適切な手段によって投与される。抗ＩＬ−２３Ａ抗体又は薬剤は、例えば、注入として又はボーラスとして投与され得る。非経口注入は、筋肉内、静脈内、動脈内、腹腔内、又は皮下投与を含む。さらに、抗ＩＬ−２３Ａ抗体は適切には、特に漸減している投与量の抗体を用いてのパルス注入によって投与される。１つの態様では、投薬は、一部には投与が短時間であるか又は慢性であるかに依存して、注射によって、最も好ましくは静脈内又は皮下注射によって行なわれる。１つの態様では、抗ＩＬ−２３抗体の投薬は、皮下注射によって行なわれる。
【０１６４】
疾患の予防又は治療のために、抗体の適切な投与量は、上記に定義されているような処置しようとする疾患の種類、疾患の重度及び経緯、該抗体が予防目的で投与されるか又は治療目的で投与されるか、以前の療法、患者の臨床履歴、並びに該抗体に対する応答、並びに担当医師の慎重さなどの様々な要因に依存するだろう。該抗体は、一度に又は一連の処置をかけて患者に適切に投与される。
【０１６５】
「抑制」という用語は、「寛解」及び「軽減」と同じ内容で本明細書において使用され、疾患の１つ以上の特徴の減少を意味する。
【０１６６】
前記抗体は、良い医療行為にかなっている様式で製剤化され、秤量され、投与されるだろう。この文脈において考えられる因子としては、処置される具体的な障害、処置される具体的な哺乳動物、個々の患者の臨床容態、障害の原因、薬剤の送達部位、投与法、投与計画、及び医療従事者には公知である他の因子が挙げられる。投与しようとする抗体の「治療有効量」はこのような配慮によって左右されるだろう。
【０１６７】
前記抗体は、問題の障害を予防又は治療するために現在使用されている薬剤の１つ以上と共に場合により製剤化され得る。このような他の薬剤の有効量は、製剤中に存在する抗ＩＬ−２３Ａ抗体の量、障害又は処置の種類、及び上記に考察された他の因子に依存する。
【０１６８】
１つの態様では、抗ＩＬ−２３Ａ抗体は、ＩＬ−２３の異常な発現によって、例えば免疫細胞（例えばリンパ球又は樹状細胞）の不適切な活性化によって特徴付けられる障害を治療又は予防するのに有用である。このような異常なＩＬ−２３の発現は、例えば、上昇したＩＬ−２３タンパク質レベルに起因する可能性がある。
【０１６９】
１つの態様では、本発明の脈絡において、疾患は喘息、特に重症の持続性喘息である。臨床試験における重症の持続性喘息の処置の有効性は頻繁に、処置期間中の最初の喘息の悪化までの時間（例えば日数）によって計測される。有効性の他の評価は、例えば、処置期間中の年間喘息悪化率、処置期間中の年間重症喘息増悪率、特定の時点における例えば２４週目における週１回のＡＣＱ５（喘息コントロールに関する質問票）スコア、特定の時点における例えば２４週目における基線からの院内でのトラフＦＥＶ１の変化、特定の時点における例えば２４週目における基線からの院内での気管支拡張薬投与後のＦＥＶ１の変化、又は処置期間中の最初の重症喘息増悪までの時間である。１つの態様では、上記のいずれか１つを使用して、重症の持続性喘息の処置における抗ＩＬ−２３Ａ抗体、例えば抗体Ａ、抗体Ｂ、抗体Ｃ、又は抗体Ｄの有効性を評価する。
【０１７０】
医薬組成物及びその投与
抗ＩＬ−２３Ａ抗体を含む組成物を、免疫学的障害を有する又は有するリスクがある被験者に投与することができる。本明細書において使用する「被験者」という用語は、抗ＩＬ−２３Ａ抗体を投与することのできる任意の哺乳動物患者、例えば、ヒト及び非ヒト哺乳動物、例えば霊長類、げっ歯類、並びにイヌを意味する。本明細書に記載の方法を使用した処置に特に意図される被験者としては、ヒトが挙げられる。該抗体を、単独で又は他の組成物と組み合わせてのいずれかで、呼吸器障害の予防又は治療において投与することができる。
【０１７１】
このような医薬組成物に使用するための抗ＩＬ−２３Ａ抗体の例は本明細書に記載され、例えば抗体Ａ、抗体Ｂ、抗体Ｃ、又は抗体Ｄである。
【０１７２】
様々な送達システムが知られており、これを使用して抗ＩＬ−２３Ａ抗体を投与することができる。導入法としては、皮内、筋肉内、腹腔内、静脈内、皮下、鼻腔内、硬膜外、及び経口経路が挙げられるがこれらに限定されない。抗ＩＬ−２３Ａ抗体は、例えば、注入、ボーラス、又は注射によって投与されてもよく、そして、他の生物学的に活性な薬剤、例えば化学療法剤と一緒に投与されてもよい。投与は全身性であっても局所性であってもよい。１つの実施態様では、投与は、皮下注射による。このような注射用の製剤は、隔週毎に１回投与され得る例えばプレフィルドシリンジに調製され得る。
【０１７３】
具体的な実施態様では、抗ＩＬ−２３Ａ抗体は、注射によって、カテーテルを用いて、坐剤を用いて、又は埋込剤を用いて投与され、該埋込剤は、多孔性材料、非多孔性材料、又はゲル性材料（サイラスティック膜などの膜を含む）、又は繊維である。典型的には、該組成物を投与する場合に、抗ＩＬ−２３Ａ抗体又は薬剤が吸収しない材料が使用される。
【０１７４】
他の実施態様では、抗ＩＬ−２３Ａ抗体は、徐放性システムで送達される。１つの実施態様では、ポンプが使用され得る（例えばLanger, 1990, Science 249:1527-1533; Sefton, 1989, CRC Crit. Ref. Biomed. Eng. 14:201; Buchwald et al., 1980, Surgery 88:507; Saudek et al., 1989, N. Engl. J. Med. 321:574参照）。別の実施態様では、ポリマー材料が使用され得る。（例えば、Medical Applications of Controlled Release (Langer and Wise eds., CRC Press, Boca Raton, Fla., 1974); Controlled Drug Bioavailability, Drug Product Design and Performance (Smolen and Ball eds., Wiley, New York, 1984); Ranger and Peppas, 1983, Macromol. Sci. Rev. Macromol. Chem. 23:61. See also Levy et al., 1985, Science 228:190; During et al., 1989, Ann. Neurol. 25:351; Howard et al., 1989, J. Neurosurg. 71:105参照）。他の徐放性システムも、例えば上記のLangerにおいて考察されている。
【０１７５】
抗ＩＬ−２３ｐ１９抗体は典型的には、治療有効量の抗体と１つ以上の薬学的に適合性の成分とを含む医薬組成物として投与される。
【０１７６】
典型的な実施態様では、医薬組成物は、ヒトへの静脈内投与又は皮下投与に適合した医薬組成物として、慣用的な手順に従って製剤化される。典型的には、注射による投与用の組成物は、無菌等張水性緩衝液中の溶液である。必要であれば、該医薬はまた、可溶化剤及び局所麻酔剤、例えばリグノカインを含むことにより、注射部位における疼痛を和らげることができる。一般的には、成分は、別々に又は単位投与剤形内に一緒に混合されてのいずれかで、例えば凍結乾燥粉末又は水分非含有の濃縮物として、活性物質の量を示したアンプル又はサッシェなどの密閉容器で供給される。該医薬を注入によって投与しようとする場合、それを、無菌の医薬等級の水又は食塩水を含有している注入瓶を用いて施薬することができる。該医薬を注射によって投与する場合、成分を投与前に混合することができるように、注射用滅菌水又は食塩水のアンプルを提供し得る。
【０１７７】
さらに、医薬組成物は、（ａ）凍結乾燥形の抗ＩＬ−２３Ａ抗体を含有している容器と、（ｂ）注射用の薬学的に許容される希釈剤（例えば滅菌水）を含有している第二の容器とを含む、医薬キットとして提供され得る。薬学的に許容される希釈剤は、凍結乾燥させた抗ＩＬ−２３Ａ抗体の復元又は希釈のために使用され得る。このような容器（群）に場合により付随されるのは、医薬品又は生物学的製剤の製造、使用又は販売を規制する政府当局によって定められた形式の通知であり得、この通知は、ヒトへの投与のための製造、使用又は販売の当局による承認を反映する。
【０１７８】
１つの態様では、９０mgの抗ＩＬ−２３Ａ抗体、例えば抗体Ａ、抗体Ｂ、抗体Ｃ、又は抗体Ｄが患者に、例えば４週間毎に１回投与される。抗ＩＬ−２３Ａ抗体は、例えば、０週目、４週目、８週目、１２週目、１６週目、２０週目、及びその後は４週間隔で患者に投与される。１つの態様では、投与は皮下注射による。
【０１７９】
本発明の脈絡において使用される医薬組成物の例は、以下の本明細書の実施例３に開示されている。
【０１８０】
本発明は、以下の実施例にさらに記載されており、この実施例は本発明の範囲を制限するものではない。
【０１８１】
実施例
実施例１ａ：薬理学的試験
ＩＬ−２３受容体活性化の下流シグナルを研究するために、ラット精密カット肺切片を使用した。
【０１８２】
肺を雄ウィスターラット（２５０〜４００ｇ）から採取し、そして制御された条件下に保持した（２２℃、湿度５５％、１２時間の昼／夜リズム）。肺切片を得るために、ラットを、６０mg/kgのペントバルビタールナトリウム（ナルコレン、メリアルGmbH社、ドイツ）の腹腔内注射によって麻酔した。動物の失血及び死滅後、肺を、培地中１．５％低融点アガロース（シグマアルドリッチ社）を用いてインサイツで充填し、そして氷を用いて１０分間覆うことによりアガロースの冷却及び固化を可能とした。肺を胸腔から取り出し、そして肺葉を分離した。円柱（直径：８mm）をコアリングツールで穴を開けて取り出し、そしてクルームディーク・ティッシュスライサー（Alabama Research and Development、マンフォード、米国）を用いて切断して２５０μmの水平方向の薄片とした。肺切片を、細胞培養条件下、３７℃、５％ＣＯ２、及び９５％の湿度で培地中でインキュベートした。インキュベーションに使用される培地は、ＭＥＭ（最小必須培地、ライフテクノロジーズ社）を含有し、以下の成分（業者、最終濃度）が補充された。グルコース（ビーブラウン社、１７mM）、ＮａＨＣＯ３（シグマ社、２６mM）、Ｈｅｐｅｓ（ギブコ社、２５mM）、ピルビン酸ナトリウム（ギブコ社、１mM）、グルタマックス（ギブコ社、２mM）、ペニシリン−ストレプトマイシン（シグマ社、１％ｖ/ｖ）。
【０１８３】
ＩＬ−２３を用いて刺激を行なった。サイトカインの遊離をＲ＆Ｄシステムズ社製のＥＬＩＳＡを用いて測定した。
【０１８４】
ＩＬ−２３（１０又は１００nM）を薄片に加えた。薄片を３７℃、５％ＣＯ２、及び９５％湿度でインキュベートし、指定された時点において１rpmで回転させた。インキュベーション後（以下に示された時点）、培養上清を回収し、そしてＥＬＩＳＡを実施するまで−８０℃で保存した。１つのデータ点あたり６つの切片を使用した。基線においてこれらの組織切片はｍＲＮＡレベルで好中球マーカーを発現しないか又はＴｈ１７細胞の典型的なマーカーを発現しない。
【０１８５】
図１は、ラット精密カット肺切片をＩＬ−２３を用いて処置することにより、刺激開始から２時間後に好中球の誘引物質であるＣｘｃｌ１（ＣＩＮＣ１）の急速な遊離が引き起こされることを示す。
【０１８６】
図２は、ラット精密カット肺切片をＩＬ−２３を用いて処置することにより、刺激開始から４８時間後にＩＬ２２の遊離が引き起こされることを示す。
【０１８７】
実施例１ｂ：薬理学的試験
精密カット肺切片（ＰＣＬＳ）を、以下に簡潔に記載されているように成体雄ウィスターラットから調製した。ラットを水及び食物に自由に近づける隔離され換気されたケージ内で従来の条件下で飼育した。
【０１８８】
ラット肺又はヒト肺胞を、それぞれ、気管及び肺葉気管支を介して、ウィリアム最小必須培地（ＭＥＭ）に溶解した１．５％低融点アガロースを用いて充填し、そしてゲル化のために氷上で冷却した。組織を円形状（直径８mm）に穴を開けて取り出し、そしてクルームディーク・ティッシュスライサーを用いて切断してＰＣＬＳとした。ＰＣＬＳを収集し、そして標準的な細胞培養条件（ＭＥＭ、３７℃、５％ＣＯ２）下に保持した。培地を調製後最初の４時間の間は３０分毎に、及び次に翌日に交換した。チャレンジのためにＰＣＬＳを４８穴プレート（１つのＰＣＬＳ／５００μL）に移した。チャレンジは、２４若しくは４８時間のＩＬ２３（１００ng/mL又は３００ng/mL）を含んでいたか、又は未処置のまま放置された（対照）。ヒトＰＣＬＳでは、ＩＬ１７（１００ng/mL又は３００ng/mL）をさらに試験した。
【０１８９】
ＩＬ２２の測定
ＰＣＬＳ処置に由来する上清中のサイトカインＩＬ２２を測定した。ラットではＥＬＩＳＡ（Ｒ＆Ｄ、Ｍ２２００）を製造業者の説明書に従って実施した。ヒトＩＬ２２を高感度シングレックスアッセイによって決定した。
【０１９０】
統計：
データ分析を、グラフパッドプリズム６を使用して実施した。分散の品質をバートレット検定によって確認した。分散が均等であれば、グループの平均値を、分散分析によって、次いで、ダネット多重比較検定によって比較した。分散が不均等であれば、グループの平均値をクラスカルワリス検定、次いでダンポスト検定によって比較することにより、多重比較について修正した。ｐ値が０．０５より小さければ、グループは有意差があると判断された。
【０１９１】
結果
ＩＬ２３シグナル伝達に関与する肺バイオマーカーを選抜するために、ＰＣＬＳをＩＬ２３を用いてチャレンジし、そして遊離されたサイトカイン（ＴＮＦα、ＩＬ１β、ＩＬ６、ＩＬ８、ＩＬ１３、ＩＬ１７、ＩＬ２１、及びＩＬ２２）を定量した。ラットＰＣＬＳでは、ＩＬ２２のみが濃度依存的及び時間依存的に再現性をもって誘導された（図３）。
【０１９２】
ＩＬ２３でチャレンジされたヒトＰＣＬＳからの上清を、ＩＬ１７Ａ／Ｆ、ＩＬ２２及びβ２−デフェンシンタンパク質の遊離について分析した。ここでも、ＩＬ２２のみがＩＬ２３による処置から２４時間後に有意に生じた（図４Ａ）。対照的に、ＩＬ１７はＩＬ２２を誘導しなかった（図４Ｂ）。
【０１９３】
実施例２：臨床試験
無作為化二重盲検プラセボ対照平行群間試験において重症の持続性喘息患者に抗体Ａを皮下投与することにより、２４週間にわたるアドオン療法としてのその安全性及び有効性を評価した。９０mgの抗体Ａを、４週間毎に１回、０、４、８、１２、１６及び２０週目に投与する。
【０１９４】
試験への組み入れ基準は、以下である：
１．気管支拡張薬投与前に院内で測定されたＦＥＶ１は、予測される正常値の４０％及び８５％である（ＦＥＶ１＝１秒間努力呼気肺活量）。
２．１年間の喘息歴と医師によって診断され、４００μgのサルブタモールの投与後にＦＥＶ１が１２％戻ることができそして少なくとも２００mLの絶対的な変化を有する。
３．少なくとも中用量の吸入副腎皮質ステロイド及び少なくとも１つの他の喘息長期管理薬を少なくとも１年間服用していなければならない。
４．過去１２カ月の間に２回以上の重症の喘息増悪歴の記録を有していなければならない。
【０１９５】
抗体Ａの有効性は、以下の１つ以上の評価項目によって評価され、これは公知の方法を使用して決定される。
【０１９６】
主要評価項目は、最高の標準治療で活性薬物を用いて処置された患者対プラセボを用いて処置された患者においての、計画された２４週間の処置中の最初の喘息悪化までの時間である。
【０１９７】
追加の評価項目は以下である：
−計画された２４週間の処置期間中の年間喘息悪化率。
−２４週目における基線からの院内でのトラフＦＥＶ１の変化。
−計画された２４週間の処置期間中の年間重症喘息増悪率。
−２４週目における基線からの気管支拡張薬投与後の院内でのＦＥＶ１の変化。
−計画された２４週間の処置期間中の最初の重症喘息増悪までの時間。
−２４週目における週１回の喘息コントロールに関する質問票のスコア。
【０１９８】
実施例３：医薬組成物
本発明の抗体に適した製剤の例を以下に示す。以下の製剤に使用される抗体は、例えば、抗体Ａ、抗体Ｂ、抗体Ｃ、又は抗体Ｄである。
【０１９９】
【表６】
2018512422.tif 000009
【０２００】
製剤１のｐＨは典型的にはｐＨ６．０〜７．０の範囲内であり、例えばｐＨ６．５である。この製剤は、静脈内投与に特に適している。
【０２０１】
使用される賦形剤の分子量（g/molでの分子量）：コハク酸二ナトリウム六水和物＝２７０．１４g/mol；コハク酸＝１１８．０９g/mol；塩化ナトリウム＝５８．４４g/mol。
【０２０２】
製剤の浸透圧は、Osmomat 030（Gonotec GmbH、ベルリン、ドイツ）を使用して決定したところ３００＋／−３０mOsmol/kgである。製剤の２０℃における密度は、DMA 4500（Anton Paar GmbH、オストフィルダーン・シャルンハウゼン、ドイツ）の測定装置を使用して決定したところ約１．００８９g/cm３である。
【０２０３】
【表７】
2018512422.tif 000010
【０２０４】
製剤２のｐＨは、典型的にはｐＨ５．５〜６．５の範囲内であり、例えばｐＨ５．５〜６．１であり、例えばｐＨは５．８である。この製剤は、皮下投与に特に適している。
【０２０５】
使用される賦形剤の分子量（g/molでの分子量）：
分子量：コハク酸（Ｃ４Ｈ６Ｏ４）＝１１８．０９g/mol
分子量：コハク酸二ナトリウム六水和物（Ｃ４Ｏ４Ｎａ２Ｈ４×６Ｈ２Ｏ）＝２７０．１４g/mol
分子量：ソルビトール＝１８２．１７g/mol
分子量：ポリソルベート２０＝１２２７．７２g/mol。
【０２０６】
製剤の浸透圧は、Osmomat 030（Gonotec GmbH、ベルリン、ドイツ）を使用して決定したところ３００＋／−３０mOsmol/kgである。製剤の２０℃における密度は、DMA 4500（Anton Paar GmbH、オストフィルダーン・シャルンハウゼン、ドイツ）の測定装置を使用して決定したところ約１．０４０g/cm３である。
【０２０７】
【表８】
2018512422.tif 000011
【０２０８】
製剤３のｐＨは、典型的にはｐＨ５．５〜６．５の範囲内であり、例えば５．５〜６．１であり、例えばｐＨは５．８である。この製剤は、皮下投与に特に適している。
【０２０９】
使用される賦形剤の分子量（g/molでの分子量）：
分子量：ソルビトール＝１８２．１７g/mol
分子量：ポリソルベート２０＝１２２７．７２g/mol。
【０２１０】
製剤の浸透圧は、Osmomat 030（Gonotec GmbH、ベルリン、ドイツ）を使用して決定したところ３００＋／−３０mOsmol/kgである。
【図１】
2018512422.tif 000012
【図２】
2018512422.tif 000013
【図３】
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【図４Ａ】
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【図４Ｂ】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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