(57)【要約】  本発明は、ＡＳＣＴ１および／またはＡＳＣＴ２および／またはＸＰＲ１の発現レベルを測定することを含む、膵臓癌を診断するための方法に関する。本発明はさらに、医用イメージング用のプローブとして使用され得る、少なくとも１つの造影剤にカップリングされたＲＢＤリガンドに関する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
患者における膵臓癌細胞のインビボ検出に使用するための、ＡＳＣＴ１、ＡＳＣＴ２および／またはＸＰＲ１から選択される細胞表面栄養受容体の発現を検出するための手段。
【請求項２】
膵臓癌の診断または監視のための、請求項１に記載の使用のための手段。
【請求項３】
好ましくは医用イメージングによる、好ましくは磁気共鳴画像法（ＭＲＩ）、Ｘ線に基づくイメージング技術、例えばコンピュータ断層撮影（ＣＴ）、Ｘ線検査、ポジトロン断層撮影（ＰＥＴ）、単一光子放射断層撮影（ＳＰＥＣＴ）、超音波内視鏡検査（ＥＵＳ）、磁気共鳴胆管膵管造影、蛍光定量、蛍光透視法、蛍光および近赤外（ＮＩＲ）蛍光イメージングによる、膵臓癌の診断または監視のための請求項１または２に記載の使用のための手段。
【請求項４】
ＨＥＲＶ−Ｗ．ＲＢＤ、ＲＤ１１４．ＲＢＤ、ＢａＥＶ．ＲＢＤ、ＳＮＶ．ＲＢＤ、ＳＲＶ．ＲＢＤ、ＭＰＭＶ．ＲＢＤ、Ｘｅｎｏ．ＲＢＤ、これらの変異体および断片を含む群から選択されるＲＢＤリガンドである、請求項１〜３の何れか１項に記載の使用のための手段。
【請求項５】
前記ＲＢＤリガンドが少なくとも１つの造影剤とカップリングされ、前記造影剤が好ましくは放射性標識物質または蛍光物質から選択される、請求項４に記載の使用のためのＲＢＤリガンド。
【請求項６】
少なくとも１つの造影剤とカップリングされた受容体結合ドメイン（ＲＢＤ）リガンドであって、ＨＥＲＶ−Ｗ．ＲＢＤ、ＲＤ１１４．ＲＢＤ、ＢａＥＶ．ＲＢＤ、ＳＮＶ．ＲＢＤ、ＳＲＶ．ＲＢＤ、ＭＰＭＶ．ＲＢＤ、Ｘｅｎｏ．ＲＢＤ、これらの変異体および断片の群から選択される、受容体結合ドメイン（ＲＢＤ）リガンド。
【請求項７】
医用イメージング用のプローブとして使用するための、請求項６に記載のＲＢＤリガンド。
【請求項８】
ＡＳＣＴ１、ＡＳＣＴ２および／またはＸＰＲ１から選択される少なくとも１つの細胞表面栄養輸送体の発現レベルを測定することを含む、膵臓癌細胞を検出するためのインビトロ法。
【請求項９】
測定された発現レベルを参照発現レベルと比較することをさらに含む、請求項８に記載のインビトロ法。
【請求項１０】
対象において膵臓癌を診断または監視するための、請求項８または９に記載のインビトロ法。
【請求項１１】
前記発現レベルがタンパク質レベルで評価され、好ましくは少なくとも１つの細胞表面栄養輸送体の発現レベルの測定が、より好ましくは細胞表面栄養輸送体へのリガンドの結合を検出および／または定量することによる、細胞表面上での前記少なくとも１つの細胞表面栄養輸送体の検出および定量に対応し、好ましくは前記リガンドが、抗体であるか、またはエンベロープウイルスの糖タンパク質の可溶性部分由来の受容体結合ドメイン（ＲＢＤ）の一部または全体を含む受容体結合ドメインリガンド（ＲＢＤ）である、請求項８〜１０の何れか１項に記載のインビトロ法。
【請求項１２】
前記ＲＢＤリガンドが、ＨＥＲＶ−Ｗ．ＲＢＤ、ＲＤ１１４．ＲＢＤ、ＢａＥＶ．ＲＢＤ、ＳＮＶ．ＲＢＤ、ＳＲＶ．ＲＢＤ、ＭＰＭＶ．ＲＢＤまたはＸｅｎｏ．ＲＢＤ、これらの変異体または断片である、請求項１１に記載のインビトロ法。
【請求項１３】
少なくとも１つの請求項４〜５の何れか１項に記載の使用のためのＲＢＤリガンドまたは少なくとも１つの請求項６〜７の何れか１項に記載のＲＢＤリガンドと、薬学的に許容可能な賦形剤と、を含む診断組成物。
【請求項１４】
少なくとも１つの請求項４〜５の何れか１項に記載のＲＢＤリガンドまたは少なくとも１つの請求項６〜７の何れか１項に記載のＲＢＤリガンドまたは請求項１３に記載の診断組成物を含む、膵臓癌の診断のためのキット。
【請求項１５】
ＨＥＲＶ−Ｗ．ＲＢＤ、ＲＤ１１４．ＲＢＤ、ＢａＥＶ．ＲＢＤ、ＳＮＶ．ＲＢＤ、ＳＲＶ．ＲＢＤ、ＭＰＭＶ．ＲＢＤ、Ｘｅｎｏ．ＲＢＤ、これらの変異体および断片を含む群から選択される少なくとも１つのＲＢＤリガンドと、薬学的に許容可能な賦形剤と、を含む、膵臓癌の処置に使用するための医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、膵臓癌の管理の分野に関し、特に膵臓癌を診断および処置するための方法に関する。特に、本発明は、膵臓腫瘍の処置および診断のための、特に医用イメージング用のプローブとして使用するための、受容体結合ドメイン（ＲＢＤ）リガンドに関する。
【背景技術】
【０００２】
膵臓癌は、西欧諸国で癌関連死の第四位の原因である。膵臓癌は、胃の後ろの腺器官である膵臓の細胞が制御不能に複製し始め、塊を形成するときに生じる。これらの癌細胞は、身体の他の部分に浸潤する能力を有する。多くのタイプの膵臓癌がある。膵臓癌は極度に侵襲性が高く、診断時に腫瘍が根治治療可能であるほど十分に局所的である患者は２０％未満である。
【０００３】
一般に癌は、いくつかの技術、とりわけ医用イメージング技術、例えばコンピュータ断層撮影（ＣＴスキャン）および超音波内視鏡検査（ＥＵＳ）などを使用して診断することができる。磁気共鳴画像法（ＭＲＩ）および陽電子放射断層撮影（ＰＥＴ）も使用してもよく、一部の症例では磁気共鳴胆管膵管造影が有用であり得る。しかし、このような技術は、特異的なバイオマーカーの発見を必要とする。最も有名な癌のバイオマーカーのうち１つはＧＬＵＴ１である。このように、グルコース輸送および解糖活性の上昇は大部分の癌細胞の特徴であるため、ＰＥＴイメージングのために、放射活性グルコース同族体、１８Ｆ−フルオロ−２−デオキシグルコース（ＦＤＧ）を使用することはよく知られている。しかし、膵臓癌などの一部の癌は、ＧＬＵＴ１の過剰発現を信頼可能に示さない。
【０００４】
現在のところ、膵臓癌または膵臓癌腫瘍由来の細胞株の特異的なバイオマーカー（および特に代謝性バイオマーカー）は見出されていない。したがって、膵臓癌の初期ステージ直後から治療ストラテジーを定義できるようにするためには、膵臓癌の正確かつ確定的な検出を可能にするこのようなバイオマーカーを発見する必要に迫られている。
【０００５】
本出願人は、驚くべきことに、特異なＲＢＤリガンドが膵臓腫瘍細胞株を特異的に認識することを発見した。さらに、本出願人らは、哺乳動物において医用イメージングを使用して、ＲＢＤリガンドが全てのモデル膵臓腫瘍細胞をインビボで特異的に認識し得ることを発見した。
【発明の概要】
【０００６】
本発明は、患者における膵臓癌細胞のインビボ検出に使用するための、ＡＳＣＴ１、ＡＳＣＴ２および／またはＸＰＲ１から選択される細胞表面栄養受容体の発現を検出するための手段に関する。
【０００７】
一実施形態において、前記手段は、膵臓癌の診断または監視のためのものである。
【０００８】
別の実施形態において、前記手段は、好ましくは医用イメージングによる、好ましくは磁気共鳴画像法（ＭＲＩ）、Ｘ線に基づくイメージング技術、例えばコンピュータ断層撮影（ＣＴ）、Ｘ線検査、ポジトロン断層撮影（ＰＥＴ）、単一光子放射断層撮影（ＳＰＥＣＴ）、超音波内視鏡検査（ＥＵＳ）、磁気共鳴胆管膵管造影、蛍光定量、蛍光透視法、蛍光および近赤外（ＮＩＲ）蛍光イメージングによる、膵臓癌の診断または監視のためのものである。
【０００９】
別の実施形態において、前記手段は、ＨＥＲＶ−Ｗ．ＲＢＤ、ＲＤ１１４．ＲＢＤ、ＢａＥＶ．ＲＢＤ、ＳＮＶ．ＲＢＤ、ＳＲＶ．ＲＢＤ、ＭＰＭＶ．ＲＢＤ、Ｘｅｎｏ．ＲＢＤ、これらの変異体および断片を含む群から選択されるＲＢＤリガンドである。好ましくは、前記手段は、ＨＥＲＶ−Ｗ．ＲＢＤ、ＲＤ１１４．ＲＢＤ、Ｘｅｎｏ．ＲＢＤ、これらの変異体および断片を含む群から選択されるＲＢＤリガンドである。
【００１０】
別の実施形態において、前記ＲＢＤリガンドは少なくとも１つの造影剤とカップリングされ、前記造影剤は、好ましくは放射性標識物質または蛍光物質から選択される。
【００１１】
本発明は、少なくとも１つの造影剤とカップリングされた受容体結合ドメイン（ＲＢＤ）リガンドにも関し、前記ＲＢＤは、ＨＥＲＶ−Ｗ．ＲＢＤ、ＲＤ１１４．ＲＢＤ、ＢａＥＶ．ＲＢＤ、ＳＮＶ．ＲＢＤ、ＳＲＶ．ＲＢＤ、ＭＰＭＶ．ＲＢＤ、Ｘｅｎｏ．ＲＢＤ、これらの変異体および断片の群から、好ましくはＨＥＲＶ−Ｗ．ＲＢＤ、ＲＤ１１４．ＲＢＤ、Ｘｅｎｏ．ＲＢＤ、これらの変異体および断片の群から選択される。
【００１２】
一実施形態において、前記ＲＢＤリガンドは、医用イメージング用のプローブとして使用するためのものである。
【００１３】
本発明は、膵臓癌細胞を検出するためのインビトロ法にも関し、前記方法は、ＡＳＣＴ１、ＡＳＣＴ２および／またはＸＰＲ１から選択される少なくとも１つの細胞表面栄養輸送体の発現レベルを測定することを含む。
【００１４】
別の実施形態において、前記インビトロ法は、測定された発現レベルを参照発現レベルと比較することをさらに含む。
【００１５】
別の実施形態において、前記インビトロ法は、対象において膵臓癌を診断または監視するためのものである。
【００１６】
別の実施形態において、前記発現レベルは、タンパク質レベルで評価され、好ましくは少なくとも１つの細胞表面栄養輸送体の発現レベルの測定は、より好ましくは細胞表面栄養輸送体に対するリガンドの結合を検出および／または定量することによる、細胞表面上での前記少なくとも１つの細胞表面栄養輸送体の検出および定量に対応し、好ましくは前記のリガンドは、抗体であるか、またはエンベロープウイルスの糖タンパク質の可溶性部分由来の受容体結合ドメイン（ＲＢＤ）の一部または全体を含む受容体結合ドメインリガンド（ＲＢＤ）である。
【００１７】
別の実施形態において、前記ＲＢＤリガンドは、ＨＥＲＶ−Ｗ．ＲＢＤ、ＲＤ１１４．ＲＢＤ、ＢａＥＶ．ＲＢＤ、ＳＮＶ．ＲＢＤ、ＳＲＶ．ＲＢＤ、ＭＰＭＶ．ＲＢＤまたはＸｅｎｏ．ＲＢＤ、これらの変異体または断片である。好ましくは、前記ＲＢＤリガンドは、ＨＥＲＶ−Ｗ．ＲＢＤ、ＲＤ１１４．ＲＢＤおよびＸｅｎｏ．ＲＢＤ、これらの変異体および断片から選択される。
【００１８】
本発明は、本明細書中で上に記載の使用のための少なくとも１つのＲＢＤリガンドまたは本明細書中で上に記載の少なくとも１つのＲＢＤリガンドと、薬学的に許容可能な賦形剤と、を含む診断組成物にも関する。
【００１９】
本発明は、本明細書中で上に記載の少なくとも１つのＲＢＤリガンドまたは本明細書中で上に記載の少なくとも１つのＲＢＤリガンドまたは本明細書中で上に記載のような診断組成物を含む、膵臓癌の診断のためのキットにも関する。
【００２０】
本発明は、ＨＥＲＶ−Ｗ．ＲＢＤ、ＲＤ１１４．ＲＢＤ、ＢａＥＶ．ＲＢＤ、ＳＮＶ．ＲＢＤ、ＳＲＶ．ＲＢＤ、ＭＰＭＶ．ＲＢＤ、Ｘｅｎｏ．ＲＢＤ、これらの変異体および断片を含む群から選択される少なくとも１つのＲＢＤリガンドと、薬学的に許容可能な賦形剤と、を含む、膵臓癌の処置に使用するための医薬組成物にも関する。好ましくは、前記ＲＢＤリガンドは、ＨＥＲＶ−Ｗ．ＲＢＤ、ＲＤ１１４．ＲＢＤおよびＸｅｎｏ．ＲＢＤ、これらの変異体および断片から選択される。
【００２１】
定義
本発明において、次の用語は次の意味を有する：
「診断組成物」という用語は、診断および特にインビボ診断を行うために、対象に投与される組成物を指す。本発明において、診断組成物は、膵臓癌細胞を、好ましくは対象の体内で検出するためである。
【００２２】
「有効量」という用語は、リガンド、好ましくは、標的に対して著しい負のまたは有害な副作用を引き起こすことのない、細胞表面受容体、好ましくは細胞表面栄養輸送体に対する結合を目的とするＲＢＤリガンドのレベルまたは量を指す。
【００２３】
「治療有効量」という用語は、標的に対して著しい負のまたは有害な副作用を引き起こすことなく、（１）膵臓癌の発症を遅延させるかもしくは予防する；（２）膵臓癌の１つまたは複数の症状の進行、増悪または悪化を遅延させるかもしくは停止させる；（３）膵臓癌の症状の改善をもたらす；（４）膵臓癌の重症度もしくは発生率を低下させる；または（５）膵臓癌を治癒することを目的とする物質のレベルまたは量を意味する。治療有効量は、予防または防止行為のために、膵臓癌の発症前に投与され得る。あるいはまたはさらに、治療有効量は、治療行為のために膵臓癌発症後に投与され得る。
【００２４】
「処置」という用語は、治療的処置および予防的または防止手段の両方を指し；その目的は、膵臓癌を予防するかまたは進行を遅らせる（軽減する）ことである。処置を必要とする者としては、既に膵臓癌を有する者ならびに膵臓癌を有する傾向がある者または膵臓癌を予防すべきである者が挙げられる。抗癌剤の治療量を投与された後、対象が、次のうち１つまたは複数の存在下または非存在下で観察可能および／または測定可能な減少を示す場合、対象または哺乳動物は、疾患に対する「処置」が成功している：病原性細胞数の減少；病原性である総細胞のパーセンテージの低下；および／または特定の疾患もしくは状態と関連する症状の１つまたは複数のある程度の緩和；罹患率および死亡率の低下、ならびにクオリティーオブライフ問題の改善。処置の成功および疾患の改善を評価するための上記パラメータは、医師にとってよく知られる通常の手順により容易に測定可能である。
【００２５】
「同一性」という用語は、２つ以上のポリペプチド配列または２つ以上のＤＮＡ配列の間の関係に使用する場合、一連の２つ以上のアミノ酸残基または２つ以上のヌクレオチドの一致数によりそれぞれ決定した場合の、ポリペプチドまたはＤＮＡ配列間の（それぞれの）配列関連性の度合いを指す。「同一性」は、特定の数学モデルまたはコンピュータプログラム（すなわち「アルゴリズム」）により処理されるギャップアライメント（あれば）により２つ以上の配列のより小さいものの間の、同一である一致のパーセンテージを測定する。関連ポリペプチドまたはＤＮＡ配列の同一性は既知の方法によって容易に計算され得る。このような方法としては、Ｃｏｍｐｕｔａｔｉｏｎａｌ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｌｅｓｋ，Ａ．Ｍ．，ｅｄ．，Ｏｘｆｏｒｄ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，１９８８；Ｂｉｏｃｏｍｐｕｔｉｎｇ：Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ  ａｎｄ  Ｇｅｎｏｍｅ  Ｐｒｏｊｅｃｔｓ，Ｓｍｉｔｈ，Ｄ．Ｗ．，ｅｄ．，Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，１９９３；Ｃｏｍｐｕｔｅｒ  Ａｎａｌｙｓｉｓ  ｏｆ  Ｓｅｑｕｅｎｂｃｅ  Ｄａｔａ，Ｐａｒｔ  １，Ｇｒｉｆｆｉｎ，Ａ．Ｍ．およびＧｒｉｆｆｉｎ，Ｈ．Ｇ．，ｅｄｓ．，Ｈｕｍａｎａ  Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ  Ｊｅｒｓｅｙ，１９９４；Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  Ａｎａｌｙｓｉｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，ｖｏｎ  Ｈｅｉｎｊｅ，Ｇ．，Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，１９８７；Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  Ａｎａｌｙｓｉｓ  Ｐｒｉｍｅｒ，Ｇｒｉｂｓｋｏｖ，Ｍ．およびＤｅｖｅｒｅｕｘ，Ｊ．，ｅｄｓ．，Ｍ．Ｓｔｏｃｋｔｏｎ  Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，１９９１；およびＣａｒｉｌｌｏら、ＳＩＡＭ  Ｊ．Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｍａｔｈ．４８，１０７３（１９８８）に記載のものが挙げられるが限定されない。同一性を決定するための好ましい方法は、試験配列間で最大の一致を与えるように設計される。同一性を決定する方法は、公開されているコンピュータプログラムに記載されている。２つの配列間の同一性を決定するための好ましいコンピュータプログラム法としては、ＧＡＰ（Ｄｅｖｅｒｅｕｘら、Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄ．Ｒｅｓ．＼２，３８７（１９８４）；Ｇｅｎｅｔｉｃｓ  Ｃｏｍｐｕｔｅｒ  Ｇｒｏｕｐ，Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  ｏｆ  Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ，Ｍａｄｉｓｏｎ，Ｗｉｓ．）、ＢＬＡＳＴＰ、ＢＬＡＳＴＮ、ＴＢＬＡＳＴＮおよびＦＡＳＴＡ（Ａｌｔｓｃｈｕｌら、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２１５，４０３−４１０（１９９０））を含むＧＣＧプログラムパッケージが挙げられる。ＢＬＡＳＴＸプログラムは、Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｃｅｎｔｅｒ  ｆｏｒ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ（ＮＣＢＩ）および他のソース（ＢＬＡＳＴ  Ｍａｎｕａｌ，Ａｌｔｓｃｈｕｌら、ＮＣＢ／ＮＬＭ／ＮＩＨ  Ｂｅｔｈｅｓｄａ，Ｍｄ．２０８９４；Ａｌｔｓｃｈｕｌら、上出）から公開されている。同一性を決定するために、周知のＳｍｉｔｈ  Ｗａｔｅｒｍａｎアルゴリズムもまた使用することができる。
【００２６】
本明細書中で使用される場合、「薬学的に許容可能な賦形剤」という用語は、動物、好ましくはヒトに投与したときに、有害な反応、アレルギー反応または他の望ましくない反応を生じない賦形剤を指す。これには、ありとあらゆる溶媒、分散媒、コーティング、抗菌および抗真菌剤、等張および吸収遅延剤などが含まれる。ヒトに投与する場合、この調製物は、規制事務局、例えばＦＤＡ  ＯｆｆｉｃｅまたはＥＭＡなどにより要求される無菌性、発熱性、一般的安全性および純度標準に適合すべきである。
【００２７】
「対象」という用語は、哺乳動物、好ましくはヒトを指す。一実施形態において、対象は、医療ケアを受けることを待っているかまたは受けているか、または医療処置の対象であった／である／となろう、または疾患の発症について監視されている、「患者」、すなわち温血動物、より好ましくはヒトであり得る。
【００２８】
「ＸＰＲ１」は、後生動物によって、特にヒトによって発現されるリン酸排出輸送体を指し、異種指向性マウス白血病ウイルス（ＭＬＶ）、多指向性ＭＬＶおよび異種指向性マウス白血病ウイルス関連ウイルス（ＸＭＲＶ）によって受容体として使用される（Ｇｉｏｖａｎｎｉｎｉら、Ｃｅｌｌ  Ｒｅｐｏｒｔｓ  ３，１８６６−１８７３，２０１３）。一実施形態において、ＸＰＲ１は、配列番号２２（受託番号ＢＣ０４１１４２．１）によりコードされるヒトＸＰＲ１（受託番号ＡＡＨ４１１４２、配列番号２１）である。一実施形態において、ＸＰＲ１は、配列番号２１と少なくとも７０％の配列同一性、好ましくは配列番号２１と少なくとも７５、８０、８５、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９％またはそれを超える配列同一性を呈するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる。一実施形態において、ＸＰＲ１は、配列番号２２と少なくとも７０％の配列同一性、好ましくは配列番号２２と少なくとも７５、８０、８５、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９％またはそれを超える配列同一性を呈するヌクレオチド配列によりコードされる。一実施形態において、ＸＰＲ１は、配列番号２１の断片、好ましくは少なくとも約１００アミノ酸の断片、より好ましくは少なくとも約１５０、２００、２５０、３００、３５０、４００、４５０、５００、５５０または６００アミノ酸の断片を含むかまたはそれからなる。
【００２９】
「ＡＳＣＴ１」は、グルタミン酸および中性アミノ酸輸送体を指す。ＡＳＣＴ１は、ヒト内在性レトロウイルスＷ（ＨＥＲＶ−Ｗ）、ＲＤ１１４ネコガンマレトロウイルス、ヒヒ内在性ウイルス（ＢａＥＶ）、脾臓壊死ウイルス（ＳＮＶ）、サルレトロウイルス（ＳＲＶ）およびマソン・ファイザーサルウイルス（ＭＰＭＶ）の受容体として使用される。一実施形態において、ＡＳＣＴ１は、配列番号２０（受託番号ＨＵＭＡＳＣＴ１Ａ）によりコードされるヒトＡＳＣＴ１（受託番号ＡＡＨ２６２１６．１、配列番号１９）である。一実施形態において、ＡＳＣＴ１は、配列番号１９と少なくとも７０％の配列同一性、好ましくは配列番号１９と少なくとも７５、８０、８５、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９％またはそれを超える配列同一性を呈するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる。一実施形態において、ＡＳＣＴ１は、配列番号２０と少なくとも７０％の配列同一性、好ましくは配列番号２０と少なくとも７５、８０、８５、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９％またはそれを超える配列同一性を呈するヌクレオチド配列によりコードされる。一実施形態において、ＡＳＣＴ１は、配列番号１９の断片、好ましくは少なくとも約１００アミノ酸、より好ましくは少なくとも約１５０、２００、２５０、３００、３５０、４００、４５０、５００アミノ酸の断片を含むかまたはそれからなる。
【００３０】
「ＡＳＣＴ２」は、グルタミンおよび他の中性アミノ酸輸送体を指す。ＡＳＣＴ２は、ヒト内在性レトロウイルスＷ（ＨＥＲＶ−Ｗ）、ＲＤ１１４ネコガンマレトロウイルス、ヒヒ内在性ウイルス（ＢａＥＶ）、脾臓壊死ウイルス（ＳＮＶ）、サルレトロウイルス（ＳＲＶ）およびマソン・ファイザーサルウイルス（ＭＰＭＶ）の受容体として使用される。一実施形態において、ＡＳＣＴ２は、配列番号３４（受託番号ＧＱ９１９０５８）によりコードされるヒトＡＳＣＴ２（受託番号Ｑ１５７５８．２、配列番号３３）である。一実施形態において、ＡＳＣＴ２は、配列番号３３と少なくとも７０％の配列同一性、好ましくは配列番号３３と少なくとも７５、８０、８５、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９％またはそれを超える配列同一性を呈するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる。一実施形態において、ＡＳＣＴ２は、配列番号３３の断片、好ましくは少なくとも約１００アミノ酸、より好ましくは少なくとも約１５０、２００、２５０、３００、３５０、４００、４５０、５００アミノ酸の断片を含むかまたはそれからなる。一実施形態において、ＡＳＣＴ２は、配列番号３４と少なくとも７０％の配列同一性、好ましくは配列番号３４と少なくとも７５、８０、８５、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９％またはそれを超える配列同一性を呈するヌクレオチド配列によりコードされる。
【００３１】
数値の前の「約」は、その数値のプラスマイナス１０％を意味する。
【図面の簡単な説明】
【００３２】
【図１】図１は、ＭｉａＰａｃａ２、Ｐａｎｃ１ｗｔ、ＢｘＰＣ３およびＣＦＰＡＣ細胞株とのＨ２．ＲＢＤ．ＧＦＰのインキュベーション後のフローサイトメトリー分析を示す一連のグラフである。
【図２】図２は、ＭｉａＰａｃａ２、Ｐａｎｃ１ｗｔ、ＢｘＰＣ３およびＣＦＰＡＣ細胞株とのＸｅｎｏ．ＲＢＤ．ＲＦＣのインキュベーション後のフローサイトメトリー分析を示す一連のグラフである。
【図３】図３は、ＭｉａＰａｃａ２、Ｐａｎｃ１ｗｔ、ＢｘＰＣ３およびＣＦＰＡＣ細胞株とのＨＥＲＶ−Ｗ．ＲＢＤ．ＭＦＣのインキュベーション後のフローサイトメトリー分析を示す一連のグラフである。
【図４】図４は、Ｉ−１２５．ＨＥＲＶ−Ｗ．ＲＢＤ．ＭＦＣによる、種々の膵臓腫瘍細胞株のインビボでの認識を示すグラフである。
【図５】図５は、Ｉ−１２５．Ｘｅｎｏ．ＲＢＤ．ＲＦＣによる、種々の膵臓腫瘍細胞株のインビボでの認識を示すグラフである。
【図６】図６は、Ｉ−１２５．Ｈ２．ＲＢＤ．ＧＦＰによる、種々の膵臓腫瘍細胞株のインビボでの認識を示すグラフである。
【図７】図７は、Ｉ−１２５．ＨＥＲＶ−Ｗ．ＲＢＤ．ＭＦＣによる、ヒト膵臓腫瘍が異種移植されたマウスまたは異種移植なしのマウス（対照）のインビボでの認識を示す一連の画像である。
【図８】図８は、Ｉ−１２５．Ｘｅｎｏ．ＲＢＤ．ＲＦＣによる、ヒト膵臓腫瘍が異種移植されたマウスまたは異種移植なしのマウス（対照）のインビボでの認識を示す一連の画像である。
【図９】図９は、Ｉ−１２５．Ｈ２．ＲＢＤ．ＧＦＰによる、ヒト膵臓腫瘍が異種移植されたマウスまたは異種移植なしのマウス（対照）のインビボでの認識を示す一連の画像である。
【発明を実施するための形態】
【００３３】
詳細な説明
本発明は、膵臓癌細胞を検出するための方法に関し、前記方法は、前記細胞において少なくとも１つの細胞表面受容体、好ましくは少なくとも１つの細胞表面栄養輸送体、の発現レベルを決定または測定することを含み、前記少なくとも１つの細胞表面栄養輸送体は、ＡＳＣＴ１および／またはＡＳＣＴ２および／またはＸＰＲ１を含むかまたはそれに存する。
【００３４】
一実施形態において、前記方法は、測定された発現レベルを参照発現レベルと比較することをさらに含む。
【００３５】
一実施形態において、本発明の方法は、ＡＳＣＴ１の発現を測定することを含む。別の実施形態において、本発明の方法は、ＡＳＣＴ２の発現を測定することを含む。別の実施形態において、本発明の方法は、ＡＳＣＴ１およびＡＳＣＴ２の発現を測定することを含む。別の実施形態において、本発明の方法は、ＸＰＲ１の発現を測定することを含む。別の実施形態において、本発明の方法は、ＸＰＲ１およびＡＳＣＴ１、またはＸＰＲ１およびＡＳＣＴ２の発現を測定することを含む。別の実施形態において、本発明の方法は、ＸＰＲ１、ＡＳＣＴ１およびＡＳＣＴ２の発現を測定することを含む。
【００３６】
したがって、一実施形態において、本発明は、対象において膵臓癌を診断するための方法であって、前記対象において膵臓癌細胞を検出することを含む方法に関する。
【００３７】
一実施形態において、本発明の方法は、インビトロまたはエクスビボの方法であり、すなわち本発明の方法は、細胞試料、例えば（それぞれ）細胞株または対象から以前に回収された細胞試料などについて行われる。
【００３８】
別の実施形態において、本発明の方法はインビボの方法であり、すなわち本発明の方法は、例えば医用イメージングなどによって、膵臓癌細胞を対象の体内で直接検出するためである。
【００３９】
本明細書中で使用される場合、「細胞表面栄養輸送体」という用語は、細胞の形質膜に係留された栄養輸送体を指す。哺乳動物細胞は、細胞表面上で「栄養輸送体」を介して必要な栄養を取り込み、異化産物および他の構成要素を排出する。栄養および代謝産物または異化産物は、例えば、炭水化物、アミノ酸、無機リン酸、ヌクレオシド、脂質、ビタミン、ヘム、イオンなどである。栄養輸送体は、機能の受動的または能動的機序に基づいて分類され得る。受動的（または促進）輸送体は、それらの電気化学的勾配が低い方へと膜を超えて溶質を拡散させる。能動的輸送体は、例えばＡＴＰ合成または加水分解など、多様なエネルギーカップリング機序を利用して、膜を超えて溶質勾配を生じさせる。一実施形態において、細胞表面栄養輸送体は、ＳＬＣシリーズに属し、ＳＬＣは溶質連結担体または溶質担体を表す。
【００４０】
細胞表面栄養輸送体の例としては、グルコースの輸送体、例えば、グルコース取り込み輸送体（例えばＧＬＵＴ１など）；無機リン酸の輸送体、例えば無機リン酸取り込み輸送体（例えばＰｉＴ１またはＰｉＴ２など）または無機リン酸排出輸送体（例えばＸＰＲ１など）；アミノ酸の輸送体、例えば中性アミノ酸の輸送体（例えば中性アミノ酸取り込み輸送体など（例えばＡＳＣＴ１またはＡＳＣＴ２など））または陽イオン性アミノ酸の輸送体（例えばＣＡＴ１など）；ヘムの輸送体（例えばＦＬＶＣＲ１など）；イノシトールの輸送体、例えばミオ−イノシトールの輸送体（例えばＳＭＩＴ１など）など；およびリボフラビンの輸送体、例えばリボフラビンの取り込み輸送体（例えばＲＦＴ１、ＲＦＴ３、ＰＡＲ１またはＰＡＲ２など）などが挙げられるが限定されない。
【００４１】
一実施形態において、細胞表面栄養輸送体は、中性アミノ酸の輸送体、例えば中性アミノ酸取り込み輸送体（例えばＡＳＣＴ１および／またはＡＳＣＴ２など）または無機リン酸の輸送体、例えば無機リン酸排出輸送体（例えばＸＰＲ１など）などである。
【００４２】
本明細書中で使用される場合、「発現」という用語は、あるいは、細胞表面受容体、好ましくは細胞表面栄養輸送体の転写（すなわちＲＮＡの発現）または細胞表面受容体、好ましくは細胞表面栄養輸送体の翻訳（すなわちタンパク質の発現）または細胞表面での細胞表面受容体、好ましくは細胞表面栄養輸送体の存在を指し得る。
【００４３】
発現レベルを決定するための方法は、当業者にとって周知であり、細胞のトランスクリプトーム（発現が受容体の転写に関する実施形態では、好ましくは細胞表面栄養輸送体）またはプロテオーム（発現が受容体の翻訳に関する実施形態では、好ましくは細胞表面栄養輸送体）を決定することが挙げられるが限定されない。
【００４４】
本発明の一実施形態において、細胞表面受容体、好ましくは細胞表面栄養輸送体の発現はＲＮＡレベルで評価する。
【００４５】
輸送体の転写レベルを評価するための方法は先行技術において周知である。このような方法の例としては、ＲＴ−ＰＣＲ、ＲＴ−ｑＰＣＲ、ノーザンブロット、ハイブリダイゼーション技術、例えばマイクロアレイの使用および、ＲＴ−ＰＣＲにより得られるアンプリコンのハイブリダイゼーション、例えば次世代ＤＮＡ配列決定（ＮＧＳ）またはＲＮＡ−ｓｅｑ（「全トランスクリプトームショットガン配列決定」としても知られる。）などの配列決定を含むが限定されないそれらの組み合わせが挙げられるが限定されない。
【００４６】
ＸＰＲ１の発現を評価するために使用され得るＰＣＲまたはｑＰＣＲプライマーの例としては、次の一組のプライマー：フォワードプライマー：５’−ＡＧＡＧＣＴＴＧＧＧＡＧＡＣＡＡＡＧＣＡ−３’（配列番号２３）−リバースプライマー：５’−ＧＴＧＧＡＣＡＣＡＡＣＡＴＴＣＧＣＡＡＣ−３’（配列番号２４）が挙げられるが限定されない。
【００４７】
ＡＳＣＴ２の発現を評価するために使用され得るＰＣＲまたはｑＰＣＲプライマーの例としては、次の一組のプライマー：フォワードプライマー：５’−ＡＴＣＧＴＧＧＡＧＡＴＧＧＡＧＧＡ−３’（配列番号２５）−リバースプライマー：５’−ＡＡＧＡＧＧＴＣＣＣＡＡＡＧＧＣＡＧ−３’（配列番号２６）が挙げられるが限定されない。
【００４８】
本発明の一実施形態において、細胞表面受容体、好ましくは細胞表面栄養輸送体の発現はタンパク質レベルで評価される。
【００４９】
試料中のタンパク質レベルを決定するためのインビトロ法は当技術分野で周知である。このような方法の例としては、免疫組織化学、Ｍｕｌｔｉｐｌｅｘ法（Ｌｕｍｉｎｅｘ）、ウエスタンブロット、酵素結合免疫吸着測定法（ＥＬＩＳＡ）、サンドイッチＥＬＩＳＡ、蛍光結合免疫吸着測定法（ＦＬＩＳＡ）、酵素免疫測定法（ＥＩＡ）、放射免疫測定法（ＲＩＡ）、フローサイトメトリー（ＦＡＣＳ）などが挙げられるが限定されない。
【００５０】
タンパク質レベルを決定するためのインビボ法が当技術分野で周知である。このような方法の例としては、コンピュータ断層撮影（ＣＴスキャン）、超音波内視鏡検査（ＥＵＳ）、磁気共鳴画像法（ＭＲＩ）、ポジトロン断層撮影（ＰＥＴ）、単一光子放射断層撮影（ＳＰＥＣＴ）、磁気共鳴胆管膵管造影、蛍光定量、蛍光および近赤外（ＮＩＲ）蛍光イメージングが挙げられるが限定されない。
【００５１】
本発明の一実施形態において、細胞表面受容体、好ましくは細胞表面栄養輸送体の発現レベルを決定することは、具体的に、細胞表面上に存在する前記受容体、好ましくは細胞表面栄養輸送体、の検出および定量に対応する。
【００５２】
細胞表面上のタンパク質の存在を分析するための方法は当業者にとって周知であり、ＦＡＣＳ分析、免疫組織化学、細胞の分画化に付随したウエスタンブロット、酵素結合免疫吸着測定法（ＥＬＩＳＡ）、サンドイッチＥＬＩＳＡ、蛍光結合免疫吸着測定法（ＦＬＩＳＡ）、酵素免疫アッセイ（ＥＩＡ）、放射免疫測定法（ＲＩＡ）、画像分析、例えばハイコンテンツ分析、コンピュータ断層撮影（ＣＴスキャン）、超音波内視鏡検査（ＥＵＳ）、磁気共鳴画像法（ＭＲＩ）、ポジトロン断層撮影（ＰＥＴ）、単一光子放射断層撮影（ＳＰＥＣＴ）、磁気共鳴胆管膵管造影、蛍光定量、蛍光および近赤外（ＮＩＲ）蛍光イメージングなどが挙げられるが限定されない。
【００５３】
一実施形態において、少なくとも１つの細胞表面受容体、好ましくは少なくとも１つの細胞表面栄養輸送体の発現レベルを決定することは、細胞表面受容体、好ましくは細胞表面栄養輸送体に対するリガンドの結合を検出および／または定量することに対応する。
【００５４】
本明細書中で使用される場合、「リガンド」という用語は、細胞表面受容体、好ましくは細胞表面栄養輸送体と複合体を形成する何らかの物質を指す。典型的なリガンドとしては、ポリペプチドおよびタンパク質が挙げられるが限定されない。本明細書中で使用される場合、ポリペプチドは、ペプチド結合により一緒に連結されるアミノ酸の直鎖状ポリマー（好ましくは少なくとも５０アミノ酸）を指す。タンパク質は、具体的には、１つまたは複数のポリペプチド、および場合によっては非ポリペプチド補因子、から形成される機能的実体を指す。
【００５５】
好ましくは、前記リガンドは受容体結合ドメインリガンドであり、本発明の方法は、前記受容体結合ドメインリガンドと細胞表面受容体、好ましくは細胞表面栄養輸送体との間で形成される複合体を検出および／または定量することを含む。別の実施形態において、前記リガンドは、前記細胞表面受容体に特異的な抗体であり、本発明の方法は、前記抗体と前記細胞表面受容体との間で形成される複合体を検出および／または定量することを含む。
【００５６】
「リガンド、例えば受容体結合ドメインリガンドの、細胞表面受容体、好ましくは細胞表面栄養輸送体に対する結合を検出および／または定量すること」という表現は、細胞表面受容体、好ましくは細胞表面栄養輸送体が存在する場合、受容体、好ましくは細胞表面栄養輸送体とリガンドとの間で複合体が形成されることを意味する。
【００５７】
一実施形態において、リガンドが、限定されないが例えば抗体定常断片（Ｆｃ）または蛍光化合物（例えばシアニン色素、Ａｌｅｘａ色素、量子色素など）などの検出可能な分子と共有カップリングされている場合、その複合体を検出することができる。リガンドが当業者にとって周知の様々な手段でタグ付けされている場合も複合体を検出することができる。限定されないが、例えば、本発明で使用されるタグは、ヘマグルチニンタグ、ポリアルギニンタグ、ポリヒスチジンタグ、Ｍｙｃタグ、Ｓｔｒｅｐタグ、Ｓ−Ｔａｇ、ＨＡＴタグ、３ｘＦｌａｇタグ、カルモジュリン結合ペプチドタグ、ＳＢＰタグ、キチン結合ドメインタグ、ＧＳＴタグ、マルトース結合タンパク質タグ、蛍光タンパク質タグ、Ｔ７タグ、Ｖ５タグおよびＸｐｒｅｓｓタグを含むかまたはそれらからなる群から選択されるタグであり得る。したがってリガンドの使用によって、一方で使用されるリガンドに依存して細胞表面受容体、好ましくは細胞表面栄養輸送体の同定および検出が可能になり、他方では、形成される複合体の定量が可能になる。一実施形態において、結合の検出または定量は、フローサイトメトリー、免疫蛍光または画像分析、例えばハイコンテントアナリシスにより行われる。
【００５８】
別の実施形態において、リガンドが例えば、以下に限定されないが少なくとも１つの造影剤と共有カップリングされている場合、その複合体を検出することができる。一実施形態において、結合の検出または定量は、医用イメージング技術により行われる。
【００５９】
本明細書中で使用される場合、「造影剤」という用語は、磁気共鳴画像法（ＭＲＩ）、Ｘ線に基づくイメージング技術、例えばコンピュータ断層撮影（ＣＴ）、Ｘ線検査、超音波内視鏡検査（ＥＵＳ）、ポジトロン断層撮影（ＰＥＴ）、単一光子放射断層撮影（ＳＰＥＣＴ）、磁気共鳴胆管膵管造影、蛍光透視法、蛍光定量、蛍光および近赤外（ＮＩＲ）蛍光イメージングを含むが限定されない医用イメージング技術において身体内部構造の可視性を改善するために使用される物質を指す。
【００６０】
一実施形態において、リガンドは、少なくとも１つの造影剤とカップリングされ、前記造影剤は放射性標識物質または蛍光物質であり得る。
【００６１】
一実施形態において、本発明の放射性標識物質は、非金属放射性同位体、非金属または金属性色素、常磁性金属または放射活性金属を含む群から選択される。
【００６２】
非金属放射性同位体の例としては、Ｉ−１２５、Ｉ−１２３、Ｉ−１３１、Ｃ−１１、Ｆ−１８、Ｂｒ−７５、Ｂｒ−７６、Ｂｒ−７７、Ｂｒ−８０およびＡｔ−２１１が挙げられるが、これらに限定されない。非金属放射性同位体は、リガンドの何れかの末端、アミノ酸側鎖の官能基に共有結合的にコンジュゲートされてもよく、例えばフッ素、臭素もしくはヨウ素を有するアミノ酸フェニルアラニンもしくはチロシンにおけるさらなる置換基として、またはさらなる置換基カルボキシもしくはメチルとして、またはリガンドにおける何らかの通常の炭素原子のＩ−１２５への置換として、直鎖状安定化ペプチドの一部となり得る。好ましくは、リガンドはＩ−１２５とカップリングされる。これらの放射性同位体は、陽電子放射断層撮影（ＰＥＴ）プローブとしてまたは単一光子放射型コンピュータ断層撮影（ＳＰＥＣＴ）プローブとしてリガンドにおいて有用である。
【００６３】
非金属または金属性の色素の例としては、有機分子、例えば市販のＡｌｅｘａ蛍光色素、フルオレセイン、ローダミンまたはＣｙ５．５、遷移金属の錯体、例えばＥｕ３＋、Ｔｂ３＋のキレート、または可視範囲もしくは近赤外領域の光を吸着および／または放射するナノ粒子（量子ドット）、が挙げられるが、これらに限定されない。有機色素およびキレート系は、キレート剤に関して上で記載のようにリガンドにカップリングされる。量子ドットとのリガンドのコンジュゲーションは、当業者にとって公知の手順により行われる。色素を保有するこれらのリガンドは、光学的イメージングプローブとして有用である。
【００６４】
常磁性金属の例としては、Ｇｄ、Ｆｅ、Ｍｎが挙げられるが、これらに限定されない。金属はリガンドに結合される。これらのリガンドは磁気共鳴画像法（ＭＲＩ）プローブとして有用である。
【００６５】
放射活性金属の例としては、Ｔｃ−９９ｍ、Ｇａ−６７、Ｇａ−６８、Ｌｕ−１７７、Ｃｕ−６４およびＺｒ−８９、Ｒｅ−１８６／１８８、Ｂｉ−２１３、Ｙ−９０、Ｃｕ−６７、Ｌｕ−１７７、Ｔｂ−１６１、Ｔｃ−９９ｍおよびＩｎ−１１１が挙げられるが、これらに限定されない。放射活性金属（および上述の常磁性金属）は、上で記載したキレート剤により本発明のリガンドに結合されるか、直接またはスペーサーを介してリガンドに連結される。
【００６６】
蛍光物質の例としては、ＧＦＰ、ｍＰｌｕｍｇ、ｍＣｈｅｒｒｙｇ、ｔｄＴｏｍａｔｏｇ、ｍＳｔｒａｗｂｅｒｒｙｇ、Ｊ−Ｒｅｄ、ＤＳ−Ｒｅｄ  ｍｏｎｏｍｅｒｈ、ｍＯｒａｎｇｅｇ、ｍＫＯ、ｍＣｉｔｒｉｎｅｉ、Ｖｅｎｕｓ、ＹＰｅｔｇ、ＥＹＦＰ、Ｅｍｅｒａｌｄｇ、ＥＧＦＰ、ＣｙＰｅｔ、ｍＣＦＰｍ、Ｃｅｒｕｌｅａｎｇ、Ｔ−Ｓａｐｐｈｉｒｅｇ、インドシアニングリーン、ＺＷ８００−１、Ｃｙ５．５およびＩＲＤｙｅ８００ＣＷが挙げられるが限定されない。
【００６７】
一実施形態において、造影剤はＩ−１２５である。
【００６８】
本発明のある態様において、リガンドはＲＢＤリガンドであり、前記ＲＢＤリガンドは、細胞表面受容体と相互作用するエンベロープウイルスの糖タンパク質の可溶性部分由来の受容体結合ドメイン（ＲＢＤ）の一部または全体を含む。このような受容体の例としては、栄養輸送体、内在性タンパク質、ＧＰＩアンカータンパク質、多糖類、ヘテロもしくはプロテオグリカンまたは細胞外マトリクスの何らかの他の構成要素、ウイルス受容体であることが示される全ての例が挙げられるが限定されない。一実施形態において、リガンドは可溶性であり、すなわちこれは膜貫通ドメインを含まず、したがって膜に係留されない。
【００６９】
「エンベロープウイルスの糖タンパク質の可溶性部分由来」という表現は、リガンドが、ウイルスのエンベロープ中に含有される糖タンパク質の断片または一部であり、例えばクローニングにより得られ得ることを意味する。
【００７０】
「糖タンパク質」という用語は、エンベロープ糖タンパク質、コート糖タンパク質または融合糖タンパク質を意味するものとして理解すべきものであり、「糖タンパク質」という用語は、ポリペプチド側鎖に共有結合されるオリゴ糖鎖を含有するタンパク質を指す。
【００７１】
「細胞表面受容体と相互作用する」という表現は、糖タンパク質が、細胞表面上に存在する受容体を認識する傾向があることを意味する。一実施形態において、したがって、細胞表面受容体、好ましくは細胞表面栄養輸送体と相互作用するリガンドは、前記細胞表面受容体と複合体を形成し、複合体は、本明細書中で上に記載のような方法によって検出され得る。
【００７２】
ＲＢＤは、特にウイルスのエンベロープの糖タンパク質において見出され得る。
【００７３】
一実施形態において、受容体結合ドメインリガンドは、ＲＢＤ全体またはＲＢＤの断片もしくは一部を含有する。
【００７４】
一実施形態において、本発明のＲＢＤリガンドはグリコシル化される。別の実施形態において、本発明のＲＢＤリガンドはグリコシル化されない。
【００７５】
一実施形態において、本発明のリガンドは、ウイルスの糖タンパク質エンベロープのＳＵドメインまたはＳＵドメインの断片、例えばＲＢＤを含む。別の実施形態において、本発明のリガンドは、ウイルスの糖タンパク質エンベロープのＴＭドメインを含まない。したがって、本発明の一実施形態において、本発明のリガンドは、可溶性ペプチド、例えば可溶性ＲＢＤである。本明細書中で使用される場合、「可溶性ペプチド」という用語は、例えば膜貫通またはＧＰＩアンカードメインによって膜内に係留されないペプチドを指す。
【００７６】
一実施形態において、前記ウイルスは、例えば、（ｉ）ガンマレトロウイルス、例えばマウス（ＭＬＶ）、ネコ（ＦｅＬＶ、ＲＤ１１４）、鳥類（脾臓壊死ウイルス（ＳＮＶ）またはサルヒヒ内在性ウイルス（ＢａＥＶ）、サル肉腫ウイルス（ＳＳＶ）、ＳＳＶ関連ウイルス（ＳＳａＶ）または、例えばサルレトロウイルス（ＳＲＶ）およびマソン・ファイザーサルウイルス（ＭＰＭＶ）などのガンマレトロウイルスのエンベロープに関連する（糖）タンパク質エンベロープを有することが知られるベータレトロウイルス；および（ｉｉ）デルタレトロウイルス、例えば、霊長類Ｔ細胞白血病ウイルス（例えばヒトＴ細胞白血病ウイルス（ＨＴＬＶ）およびサルＴ細胞白血病ウイルス（ＳＴＬＶ））およびウシ白血病ウイルス（ＢＬＶ）、などのレトロウイルスを含む群から選択される。
【００７７】
ガンマおよびデルタレトロウイルスは、成熟レトロウイルスビリオンに存在するＥｎｖ糖タンパク質をコードする。Ｅｎｖタンパク質は、プロペプチドの形態で合成され、これがフリンペプチダーゼによりゴルジ装置において切断されて、その結果、２つのポリペプチド：膜貫通（ＴＭ）および細胞表面（ＳＵ）構成要素が生じる。ＳＵドメインは、２つの主要なサブドメイン：ＴＭドメインとの相互作用のドメインと、さらに宿主細胞膜受容体と相互作用する傾向があるＲＢＤと、を含有する。
【００７８】
本発明の一実施形態において、ＲＢＤリガンドは、ヒト内在性レトロウイルスＷの糖タンパク質から単離され、本明細書中でＨＥＲＶ−Ｗ．ＲＢＤと呼ぶ。一実施形態において、受容体結合ドメインリガンドは、ＨＥＲＶ−Ｗ．ＲＢＤの一部または全体を含み、ＡＳＣＴ１および／またはＡＳＣＴ２栄養輸送体に結合する。
【００７９】
一実施形態において、前記ＨＥＲＶ−Ｗ．ＲＢＤは、配列番号１のアミノ酸配列、その変異体または断片を含むかまたはそれからなる。
【００８０】
一実施形態において、前記断片は、配列番号１のアミノ酸２１〜１８９を含むかまたはそれからなる。
【００８１】
一実施形態において、前記断片は、配列番号１のアミノ酸１〜１２２、１２３、１２４、１２５、１２６、１２７、１２８、１２９、１３０、１３１、１３２、１３３、１３４、１３５、１３６、１３７、１３８、１３９、１４０、１４１、１４２、１４３、１４４、１４５、１４６、１４７、１４８、１４９、１５０、１５１、１５２、１５３、１５４、１５５、１５６、１５７、１５８、１５９、１６０、１６１、１６２、１６３、１６４、１６５、１６６、１６７、１６８、１６９、１７０、１７１、１７２、１７３、１７４、１７５、１７６、１７７、１７８、１７９、１８０、１８１、１８２、１８３、１８４、１８５、１８６、１８７または１８８を含むかまたはそれからなる。
【００８２】
別の実施形態において、前記断片は、配列番号１のアミノ酸２１〜１２２、１２３、１２４、１２５、１２６、１２７、１２８、１２９、１３０、１３１、１３２、１３３、１３４、１３５、１３６、１３７、１３８、１３９、１４０、１４１、１４２、１４３、１４４、１４５、１４６、１４７、１４８、１４９、１５０、１５１、１５２、１５３、１５４、１５５、１５６、１５７、１５８、１５９、１６０、１６１、１６２、１６３、１６４、１６５、１６６、１６７、１６８、１６９、１７０、１７１、１７２、１７３、１７４、１７５、１７６、１７７、１７８、１７９、１８０、１８１、１８２、１８３、１８４、１８５、１８６、１８７または１８８を含むかまたはそれからなる。
【００８３】
一実施形態において、前記ＨＥＲＶ−Ｗ．ＲＢＤは、配列番号４６のアミノ酸配列、この変異体または断片を含むかまたはそれかなる。
【００８４】
一実施形態において、前記断片は、配列番号４６のアミノ酸２１〜１８９を含むかまたはそれからなる。
【００８５】
一実施形態において、前記断片は、配列番号４６のアミノ酸１〜１２２、１２３、１２４、１２５、１２６、１２７、１２８、１２９、１３０、１３１、１３２、１３３、１３４、１３５、１３６、１３７、１３８、１３９、１４０、１４１、１４２、１４３、１４４、１４５、１４６、１４７、１４８、１４９、１５０、１５１、１５２、１５３、１５４、１５５、１５６、１５７、１５８、１５９、１６０、１６１、１６２、１６３、１６４、１６５、１６６、１６７、１６８、１６９、１７０、１７１、１７２、１７３、１７４、１７５、１７６、１７７、１７８、１７９、１８０、１８１、１８２、１８３、１８４、１８５、１８６、１８７または１８８を含むかまたはそれからなる。
【００８６】
別の実施形態において、前記断片は、配列番号４６のアミノ酸２１〜１２２、１２３、１２４、１２５、１２６、１２７、１２８、１２９、１３０、１３１、１３２、１３３、１３４、１３５、１３６、１３７、１３８、１３９、１４０、１４１、１４２、１４３、１４４、１４５、１４６、１４７、１４８、１４９、１５０、１５１、１５２、１５３、１５４、１５５、１５６、１５７、１５８、１５９、１６０、１６１、１６２、１６３、１６４、１６５、１６６、１６７、１６８、１６９、１７０、１７１、１７２、１７３、１７４、１７５、１７６、１７７、１７８、１７９、１８０、１８１、１８２、１８３、１８４、１８５、１８６、１８７または１８８を含むかまたはそれからなる。
【００８７】
別の実施形態において、前記断片は、配列番号３のＤＮＡ配列によりコードされる配列番号２を含むかまたはそれからなる。
【００８８】
別の実施形態において、前記断片は、配列番号２のアミノ酸２１〜１２１を含むかまたはそれからなる。
【００８９】
一実施形態において、前記ＨＥＲＶ−Ｗ．ＲＢＤは、配列番号３８のアミノ酸配列、この変異体または断片を含むかまたはそれからなる。
【００９０】
一実施形態において、前記断片は、配列番号３８のアミノ酸２２〜１８１を含むかまたはそれからなる。
【００９１】
一実施形態において、前記断片は、配列番号３８のアミノ酸１〜１３０、１３１、１３２、１３３、１３４、１３５、１３６、１３７、１３８、１３９、１４０、１４１、１４２、１４３、１４４、１４５、１４６、１４７、１４８、１４９、１５０、１５１、１５２、１５３、１５４、１５５、１５６、１５７、１５８、１５９、１６０、１６１、１６２、１６３、１６４、１６５、１６６、１６７、１６８、１６９、１７０、１７１、１７２、１７３、１７４、１７５、１７６、１７７、１７８、１７９または１８０を含むかまたはそれからなる。
【００９２】
一実施形態において、前記断片は、配列番号３８のアミノ酸２２〜１３０、１３１、１３２、１３３、１３４、１３５、１３６、１３７、１３８、１３９、１４０、１４１、１４２、１４３、１４４、１４５、１４６、１４７、１４８、１４９、１５０、１５１、１５２、１５３、１５４、１５５、１５６、１５７、１５８、１５９、１６０、１６１、１６２、１６３、１６４、１６５、１６６、１６７、１６８、１６９、１７０、１７１、１７２、１７３、１７４、１７５、１７６、１７７、１７８、１７９または１８０を含むかまたはそれからなる。
【００９３】
本発明の一実施形態において、ＲＢＤリガンドは、異種指向性マウス白血病ウイルスの糖タンパク質から単離され、本明細書中でＸｅｎｏ．ＲＢＤと呼ぶ。一実施形態において、受容体結合ドメインリガンドは、Ｘｅｎｏ．ＲＢＤの一部または全体を含み、ＸＰＲ１栄養輸送体に結合する。
【００９４】
一実施形態において、前記Ｘｅｎｏ．ＲＢＤは、配列番号４のアミノ酸配列、またはその断片を含むかまたはそれからなる。
【００９５】
一実施形態において、前記断片は、配列番号４のアミノ酸３６〜３１６を含むかまたはそれからなる。
【００９６】
一実施形態において、前記断片は、配列番号４のアミノ酸１〜２９７、２９８、２９９、３００、３０１、３０２、３０３、３０４、３０５、３０６、３０７、３０８、３０９、３１０、３１１、３１２、３１３、３１４または３１５を含むかまたはそれからなる。
【００９７】
別の実施形態において、前記断片は、配列番号４のアミノ酸３４〜２９７、２９８、２９９、３００、３０１、３０２、３０３、３０４、３０５、３０６、３０７、３０８、３０９、３１０、３１１、３１２、３１３、３１４または３１５を含むかまたはそれからなる。
【００９８】
別の実施形態において、前記断片は、配列番号４のアミノ酸３６〜２９７、２９８、２９９、３００、３０１、３０２、３０３、３０４、３０５、３０６、３０７、３０８、３０９、３１０、３１１、３１２、３１３、３１４または３１５を含むかまたはそれからなる。
【００９９】
別の実施形態において、前記断片は、配列番号５を含むかまたはそれからなる。
【０１００】
別の実施形態において、前記断片は、配列番号５のアミノ酸３４〜２９６を含むかまたはそれからなる。
【０１０１】
別の実施形態において、前記断片は、配列番号５のアミノ酸３６〜２９６を含むかまたはそれからなる。
【０１０２】
別の実施形態において、前記断片は、配列番号６のＤＮＡ配列によりコードされる配列番号４７を含むかまたはそれからなる。
【０１０３】
別の実施形態において、前記断片は、配列番号４７のアミノ酸３１〜２９３を含むかまたはそれからなる。
【０１０４】
別の実施形態において、前記断片は、配列番号４８を含むかまたはそれからなる。
【０１０５】
別の実施形態において、前記断片は、配列番号４８のアミノ酸３１〜２３８を含むかまたはそれからなる。
【０１０６】
一実施形態において、ＲＢＤリガンドは、ネコ内在性ウイルスの糖タンパク質から単離され、本明細書中でＲＤ１１４．ＲＢＤと呼ばれる。一実施形態において、受容体結合ドメインリガンドはＲＤ１１４．ＲＢＤの一部または全体を含み、ＡＳＣＴ１および／またはＡＳＣＴ２栄養輸送体に結合する。
【０１０７】
一実施形態において、このＲＤ１１４．ＲＢＤは、配列番号２８のアミノ酸配列、またはその断片を含むかまたはそれからなる。
【０１０８】
一実施形態において、前記断片は、配列番号２８のアミノ酸１９〜２３９を含むかまたはそれからなる。
【０１０９】
一実施形態において、前記断片は、配列番号２８のアミノ酸１〜２２３、２２４、２２５、２２６、２２７、２２８、２２９、２３０、２３１、２３２、２３３、２３４、２３５、２３６、２３７または２３８を含むかまたはそれからなる。
【０１１０】
別の実施形態において、前記断片は、配列番号２８のアミノ酸１９〜２２３、２２４、２２５、２２６、２２７、２２８、２２９、２３０、２３１、２３２、２３３、２３４、２３５、２３６、２３７または２３８を含むかまたはそれからなる。
【０１１１】
別の実施形態において、前記断片は、配列番号２９を含むかまたはそれからなる。
【０１１２】
別の実施形態において、前記断片は、配列番号２９のアミノ酸１９〜２２２を含むかまたはそれからなる。
【０１１３】
一実施形態において、前記断片は、配列番号３０のＤＮＡ配列によりコードされる配列番号４９を含むかまたはそれからなる。
【０１１４】
別の実施形態において、前記断片は、配列番号４９のアミノ酸１９〜２２３を含むかまたはそれからなる。
【０１１５】
一実施形態において、前記ＲＤ１１４．ＲＢＤは、配列番号３５のアミノ酸配列、またはその断片を含むかまたはそれからなる。
【０１１６】
一実施形態において、前記断片は、配列番号３５のアミノ酸２２〜３３１を含むかまたはそれからなる。
【０１１７】
別の実施形態において、前記断片は、配列番号３５のアミノ酸１〜２８１、２８２、２８３、２８４、２８５、２８６、２８７、２８８、２８９、２９０、２９１、２９２、２９３、２９４、２９５、２９６、２９７、２９８、２９９、３００、３０１、３０２、３０３、３０４、３０５、３０６、３０７、３０８、３０９、３１０、３１１、３１２、３１３、３１４、３１５、３１６、３１７、３１８、３１９、３２０、３２１、３２２、３２３、３２４、３２５、３２６、３２７、３２８、３２９、３３０を含むかまたはそれからなる。
【０１１８】
別の実施形態において、前記断片は、配列番号３５のアミノ酸２２〜２８１、２８２、２８３、２８４、２８５、２８６、２８７、２８８、２８９、２９０、２９１、２９２、２９３、２９４、２９５、２９６、２９７、２９８、２９９、３００、３０１、３０２、３０３、３０４、３０５、３０６、３０７、３０８、３０９、３１０、３１１、３１２、３１３、３１４、３１５、３１６、３１７、３１８、３１９、３２０、３２１、３２２、３２３、３２４、３２５、３２６、３２７、３２８、３２９、３３０を含むかまたはそれからなる。
【０１１９】
別の実施形態において、前記断片は、配列番号３６のＤＮＡ配列によりコードされる配列番号３５またはその断片を含むかまたはそれからなる。好ましくは、配列番号３６の前記断片は配列番号５０である。
【０１２０】
別の実施形態において、前記断片は、配列番号３５のアミノ酸１９〜２２２を含むかまたはそれからなる。
【０１２１】
一実施形態において、前記ＲＤ１１４．ＲＢＤは、配列番号３７のアミノ酸配列、またはその断片を含むかまたはそれからなる。
【０１２２】
一実施形態において、前記断片は、配列番号３７のアミノ酸１〜２２２を含むかまたはそれからなる。
【０１２３】
一実施形態において、前記断片は、配列番号３７のアミノ酸１〜１７１、１７２、１７３、１７４、１７５、１７６、１７７、１７８、１７９、１８０、１８１、１８２、１８３、１８４、１８５、１８６、１８７、１８８、１８９、１９０、１９１、１９２、１９３、１９４、１９５、１９６、１９７、１９８、１９９、２００、２０１、２０２、２０３、２０４、２０５、２０６、２０７、２０８、２０９、２１０、２１１、２１２、２１３、２１４、２１５、２１６、２１７、２１８、２１９、２２０、２２１を含むかまたはそれからなる。
【０１２４】
一実施形態において、前記断片は、配列番号３７のアミノ酸１９〜１７１、１７２、１７３、１７４、１７５、１７６、１７７、１７８、１７９、１８０、１８１、１８２、１８３、１８４、１８５、１８６、１８７、１８８、１８９、１９０、１９１、１９２、１９３、１９４、１９５、１９６、１９７、１９８、１９９、２００、２０１、２０２、２０３、２０４、２０５、２０６、２０７、２０８、２０９、２１０、２１１、２１２、２１３、２１４、２１５、２１６、２１７、２１８、２１９、２２０、２２１を含むかまたはそれからなる。
【０１２５】
一実施形態において、ＲＢＤリガンドは、ヒヒ内在性ウイルスの糖タンパク質から単離され、本明細書中でＢａＥＶ．ＲＢＤと呼ばれる。一実施形態において、受容体結合ドメインリガンドは、ＢａＥＶ．ＲＢＤの一部または全体を含み、ＡＳＣＴ１および／またはＡＳＣＴ２栄養輸送体に結合する。
【０１２６】
一実施形態において、前記ＢａＥＶ．ＲＢＤは、配列番号３９のアミノ酸配列、またはこれらの断片を含むかまたはそれからなる。
【０１２７】
一実施形態において、前記断片は、配列番号３９のアミノ酸１９〜５６３を含むかまたはそれからなる。
【０１２８】
一実施形態において、前記断片は、配列番号３９のアミノ酸１〜５１３、５１４、５１５、５１６、５１７、５１８、５１９、５２０、５２１、５２２、５２３、５２４、５２５、５２６、５２７、５２８、５２９、５３０、５３１、５３２、５３３、５３４、５３５、５３６、５３７、５３８、５３９、５４０、５４１、５４２、５４３、５４４、５４５、５４６、５４７、５４８、５４９、５５０、５５１、５５２、５５３、５５４、５５５、５５６、５５７、５５８、５５９、５６０、５６１、５６２を含むかまたはそれからなる。
【０１２９】
一実施形態において、前記断片は、配列番号３９のアミノ酸１９〜５１３、５１４、５１５、５１６、５１７、５１８、５１９、５２０、５２１、５２２、５２３、５２４、５２５、５２６、５２７、５２８、５２９、５３０、５３１、５３２、５３３、５３４、５３５、５３６、５３７、５３８、５３９、５４０、５４１、５４２、５４３、５４４、５４５、５４６、５４７、５４８、５４９、５５０、５５１、５５２、５５３、５５４、５５５、５５６、５５７、５５８、５５９、５６０、５６１、５６２を含むかまたはそれからなる。
【０１３０】
一実施形態において、ＲＢＤリガンドは、脾臓壊死ウイルスの糖タンパク質から単離され、本明細書中でＳＮＶ．ＲＢＤと呼ぶ。一実施形態において、受容体結合ドメインリガンドは、ＳＮＶ．ＲＢＤの一部または全体を含み、ＡＳＣＴ１および／またはＡＳＣＴ２栄養輸送体に結合する。
【０１３１】
一実施形態において、前記ＳＮＶ．ＲＢＤは、配列番号４２のアミノ酸配列、またはその断片を含むかまたはそれからなる。
【０１３２】
一実施形態において、前記断片は、配列番号４２のアミノ酸１〜２０１、２０２、２０３、２０４、２０５、２０６、２０７、２０８、２０９、２１０、２１１、２１２、２１３、２１４、２１５、２１６、２１７、２１８、２１９、２２０、２２１、２２２、２２３、２２４、２２５、２２６、２２７、２２８、２２９、２３０、２３１、２３２、２３３、２３４、２３５、２３６、２３７、２３８、２３９、２４０、２４１、２４２、２４３、２４４、２４５、２４６、２４７、２４８、２４９、２５０、２５１、２５２、２５３、２５４、２５５、２５６、２５７を含むかまたはそれからなる。
【０１３３】
別の実施形態において、前記ＳＮＶ．ＲＢＤは、配列番号４３のアミノ酸配列、またはその断片を含むかまたはそれからなる。
【０１３４】
別の実施形態において、前記断片は、配列番号４３のアミノ酸３７〜５６７を含むかまたはそれからなる。
【０１３５】
別の実施形態において、前記断片は、配列番号４３のアミノ酸１〜５１３、５１４、５１５、５１６、５１７、５１８、５１９、５２０、５２１、５２２、５２３、５２４、５２５、５２６、５２７、５２８、５２９、５３０、５３１、５３２、５３３、５３４、５３５、５３６、５３７、５３８、５３９、５４０、５４１、５４２、５４３、５４４、５４５、５４６、５４７、５４８、５４９、５５０、５５１、５５２、５５３、５５４、５５５、５５６、５５７、５５８、５５９、５６０、５６１、５６２、５６３、５６４、５６５、５６６を含むかまたはそれからなる。
【０１３６】
別の実施形態において、前記断片は、配列番号４３のアミノ酸３７〜５１３、５１４、５１５、５１６、５１７、５１８、５１９、５２０、５２１、５２２、５２３、５２４、５２５、５２６、５２７、５２８、５２９、５３０、５３１、５３２、５３３、５３４、５３５、５３６、５３７、５３８、５３９、５４０、５４１、５４２、５４３、５４４、５４５、５４６、５４７、５４８、５４９、５５０、５５１、５５２、５５３、５５４、５５５、５５６、５５７、５５８、５５９、５６０、５６１、５６２、５６３、５６４、５６５、５６６を含むかまたはそれからなる。
【０１３７】
一実施形態において、ＲＢＤリガンドは、サルレトロウイルスの糖タンパク質から単離され、本明細書中でＳＲＶ．ＲＢＤと呼ぶ。一実施形態において、受容体結合ドメインリガンドは、ＳＲＶ．ＲＢＤの一部または全体を含み、ＡＳＣＴ１および／またはＡＳＣＴ２栄養輸送体に結合する。
【０１３８】
一実施形態において、前記ＳＲＶ．ＲＢＤは、配列番号４０のアミノ酸配列、またはその断片を含むかまたはそれからなる。
【０１３９】
別の実施形態において、前記断片は、配列番号４０のアミノ酸２３〜２５１を含むかまたはそれからなる。
【０１４０】
一実施形態において、前記断片は、配列番号４０のアミノ酸１〜２０１、２０２、２０３、２０４、２０５、２０６、２０７、２０８、２０９、２１０、２１１、２１２、２１３、２１４、２１５、２１６、２１７、２１８、２１９、２２０、２２１、２２２、２２３、２２４、２２５、２２６、２２７、２２８、２２９、２３０、２３１、２３２、２３３、２３４、２３５、２３６、２３７、２３８、２３９、２４０、２４１、２４２、２４３、２４４、２４５、２４６、２４７、２４８、２４９、２５０を含むかまたはそれからなる。
【０１４１】
別の実施形態において、前記断片は、配列番号４０のアミノ酸２３〜２０１、２０２、２０３、２０４、２０５、２０６、２０７、２０８、２０９、２１０、２１１、２１２、２１３、２１４、２１５、２１６、２１７、２１８、２１９、２２０、２２１、２２２、２２３、２２４、２２５、２２６、２２７、２２８、２２９、２３０、２３１、２３２、２３３、２３４、２３５、２３６、２３７、２３８、２３９、２４０、２４１、２４２、２４３、２４４、２４５、２４６、２４７、２４８、２４９、２５０を含むかまたはそれからなる。
【０１４２】
別の実施形態において、前記断片は、配列番号４１のＤＮＡ配列、またはその断片によりコードされる。
【０１４３】
一実施形態において、ＲＢＤリガンドは、マソン・ファイザーサルウイルスの糖タンパク質から単離され、本明細書中でＭＰＭＶ．ＲＢＤと呼ぶ。一実施形態において、受容体結合ドメインリガンドは、ＭＰＭＶ．ＲＢＤの一部または全体を含み、ＡＳＣＴ１および／またはＡＳＣＴ２栄養輸送体に結合する。
【０１４４】
一実施形態において、前記ＭＰＭＶ．ＲＢＤは、配列番号４４のアミノ酸配列、またはその断片を含むかまたはそれからなる。
【０１４５】
別の実施形態において、これらの断片は、配列番号４４のアミノ酸２３〜２５０を含むかまたはそれからなる。
【０１４６】
一実施形態において、前記断片は、配列番号４４のアミノ酸１〜２０１、２０２、２０３、２０４、２０５、２０６、２０７、２０８、２０９、２１０、２１１、２１２、２１３、２１４、２１５、２１６、２１７、２１８、２１９、２２０、２２１、２２２、２２３、２２４、２２５、２２６、２２７、２２８、２２９、２３０、２３１、２３２、２３３、２３４、２３５、２３６、２３７、２３８、２３９、２４０、２４１、２４２、２４３、２４４、２４５、２４６、２４７、２４８、２４９を含むかまたはそれからなる。
【０１４７】
別の実施形態において、前記断片は、配列番号４４のアミノ酸２３〜２０１、２０２、２０３、２０４、２０５、２０６、２０７、２０８、２０９、２１０、２１１、２１２、２１３、２１４、２１５、２１６、２１７、２１８、２１９、２２０、２２１、２２２、２２３、２２４、２２５、２２６、２２７、２２８、２２９、２３０、２３１、２３２、２３３、２３４、２３５、２３６、２３７、２３８、２３９、２４０、２４１、２４２、２４３、２４４、２４５、２４６、２４７、２４８、２４９を含むかまたはそれからなる。
【０１４８】
別の実施形態において、前記断片は、配列番号４５のＤＮＡ配列、またはその断片によりコードされる。
【０１４９】
本明細書中で使用される場合、「アミノ酸」は、当技術分野で周知のような、その完全な名称、それらの三文字コードまたはそれらの一文字コードにより表される。ペプチド中のアミノ酸残基は、次のように省略される：フェニルアラニンはＰｈｅまたはＦ；ロイシンはＬｅｕまたはＬ；イソロイシンはＩｌｅまたはＩ；メチオニンはＭｅｔまたはＭ；バリンはＶａｌまたはＶ；セリンはＳｅｒまたはＳ；プロリンはＰｒｏまたはＰ；スレオニンはＴｈｒまたはＴ；アラニンはＡｌａまたはＡ；チロシンはＴｙｒまたはＹ；ヒスチジンはＨｉｓまたはＨ；グルタミンはＧｌｎまたはＱ；アスパラギンはＡｓｎまたはＮ；リジンはＬｙｓまたはＫ；アスパラギン酸はＡｓｐまたはＤ；グルタミン酸はＧｌｕまたはＥ；システインはＣｙｓまたはＣ；トリプトファンはＴｒｐまたはＷ；アルギニンはＡｒｇまたはＲ；およびグリシンはＧｌｙまたはＧである。
【０１５０】
本明細書中で使用される場合、「アミノ酸」という用語は、天然および合成アミノ酸の両方ならびにＤおよびＬアミノ酸の両方を含む。「標準アミノ酸」または「天然アミノ酸」は、天然のペプチドで一般に見られる２０個の標準的なＬ−アミノ酸の何れかを意味する。「非標準アミノ酸残基」は、合成により調製されるかまたは天然起源由来であるかにかかわらず、標準アミノ酸以外の何らかのアミノ酸を意味する。例えば、合成を促進するために、トリプトファンをナフチルアラニンで置換し得る。置換され得る他の合成アミノ酸としては、Ｌ−ヒドロキシプロピル、Ｌ−３，４−ジヒドロキシフェニルアラニル、アルファ−アミノ酸、例えばＬ−アルファ−ヒドロキシリシルおよびＤ−アルファ−メチルアラニル、Ｌ−アルファ−メチルアラニル、ベータ−アミノ酸およびイソキノリルが挙げられるが限定されない。
【０１５１】
本明細書中で使用される場合、「アミノ酸」は、塩、アミノ酸誘導体（アミドなど）および置換を含むが限定されない化学的に修飾されるアミノ酸も包含する。本発明のポリペプチド内、特にカルボキシまたはアミノ末端に含有されるアミノ酸は、メチル化、アミド化、アセチル化またはそれらの活性に悪影響を与えることなくポリペプチドの循環中半減期を変化させ得る他の化学基との置換によって修飾され得る。さらに、本発明のポリペプチド中にジスルフィド結合が存在してもよくまたは存在しなくてもよい。
【０１５２】
本発明のＲＢＤリガンドは、天然に標準的アミノ酸または非標準的アミノ酸を含み得る。ポリペプチド模倣物は、次の修飾を有するポリペプチドを含む：ｉ）１つまたは複数のペプチジル−Ｃ（Ｏ）ＮＲ−連結（結合）が、−ＣＨ２−カルバメート連結（−ＣＨ２ＯＣ（Ｏ）ＮＲ−）、ホスホネート連結、−ＣＨ２−スルホンアミド（−ＣＨ２−Ｓ（Ｏ）２ＮＲ−）連結、尿素（−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ−）連結、−ＣＨ２−二級アミン連結などの非ペプチジル結合によって、またはアルキル化ペプチジル連結（−Ｃ（Ｏ）ＮＲ−）（式中、ＲはＣ１−Ｃ４アルキルである。）によって置換されているポリペプチド；ｉｉ）Ｎ末端が−ＮＲＲ１基、−ＮＲＣ（Ｏ）Ｒ基、−ＮＲＣ（Ｏ）ＯＲ基、−ＮＲＳ（Ｏ）２Ｒ基、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨＲ基に（式中、ＲおよびＲ１は水素またはＣ１−Ｃ４アルキルであり、ただしＲおよびＲ１は両者とも水素ではない。）誘導体化されているポリペプチド；ｉｉｉ）Ｃ末端が、−Ｃ（Ｏ）Ｒ２（式中、Ｒ２は、Ｃ１−Ｃ４アルコキシおよび−ＮＲ３Ｒ４からなる群から選択され、Ｒ３およびＲ４は、独立に水素およびＣ１−Ｃ４アルキルからなる群から選択される）に誘導体化されているポリペプチド。
【０１５３】
好ましい実施形態によれば、受容体結合ドメインリガンドは、配列番号１、２、４、５、２８、２９、３５、３７、３８、３９、４０、４２、４３および４４の配列、これらの断片および変異体を含む群から選択され、より好ましくは配列番号２、５、２９、３５、３７、３８、３９、４０、４２、４３および４４の配列、これらの断片および変異体を含む群から選択される。別の実施形態によれば、受容体結合ドメインリガンドは、配列番号３、６、３０、３６、４１および４５の配列、これらの変異体および断片を含む群から選択されるＤＮＡ配列によりコードされる。
【０１５４】
一実施形態において、ＲＢＤリガンドは、配列番号１、２、４、５、２８、２９、３５、３７、３８、３９、４０、４２、４３および４４の配列のうち１つと少なくとも７０％の配列同一性、好ましくは配列番号１、２、４、５、２８、２９、３５、３７、３８、３９、４０、４２、４３および４４の配列のうち１つと、少なくとも約７５、８０、８５、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９％またはそれを超える配列同一性を呈する配列を含むかまたはそれからなる。
【０１５５】
別の実施形態において、ＲＢＤリガンドは、配列番号３、６、３０、３６、４１および４５の配列のうち１つと少なくとも７０％の配列同一性、好ましくは配列番号３、６、３０、３６、４１および４５の配列のうち１つと少なくとも約７５、８０、８５、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９％またはそれを超える配列同一性を呈するＤＮＡ配列によってコードされる。
【０１５６】
一実施形態において、ＲＢＤリガンドは、配列番号１、２、４、５、２８、２９、３５、３７、３８、３９、４０、４２、４３および４４の配列を有するポリペプチドの１つの変異体である。
【０１５７】
本明細書中で使用される用語としてのポリペプチド「変異体」は、一般的には本明細書中で具体的に開示されるポリペプチドと、１つまたは複数の置換、欠失、付加および／または挿入が異なるポリペプチドである。このような変異体は、天然起源であり得るか、または、例えば上記ポリペプチド配列の１つまたは複数を修飾すること、および本明細書中に記載のポリペプチドの１つまたは複数の生物活性を評価すること、および／または当技術分野で周知の多くの技術のうち何れかを使用することによって、合成により作製され得る。ポリペプチドの構造に修飾を行ってもよく、それでもなお所望の特徴を有する変異体または誘導体ポリペプチドをコードする機能分子を得ることができる。
【０１５８】
同等であるかまたは改善すらされた本発明のリガンドの変異体またはその一部を作製するためにポリペプチドのアミノ酸配列を変更することが望ましい場合、当業者は一般的には、コードするＤＮＡ配列のコドンの１つまたは複数を変化させる。例えば、ある特定のアミノ酸は、細胞表面受容体、好ましくは細胞表面栄養輸送体に結合するその能力が認識可能に失われることなく、タンパク質構造において他のアミノ酸により置換され得る。タンパク質の生物機能活性を定義するのは、タンパク質の結合能および性質であることから、タンパク質配列、および当然ではあるがその基礎となるＤＮＡコード配列においてある特定のアミノ酸配列置換を行うことができ、それでもなお類似の特性があるタンパク質を得ることができる。したがって、それらの生物学的有用性または活性を認識可能に喪失することなく、ペプチド配列または前記ペプチドをコードする対応するＤＮＡ配列において様々な変化がなされ得ることが企図される。多くの例において、ポリペプチド変異体は１つまたは複数の保存的置換を含有する。「保存的置換」は、ペプチド化学の当業者が、ポリペプチドの二次構造およびハイドロパシー性が実質的に変化しないと予想するように、アミノ酸が類似の特性を有する別のアミノ酸により置換されている置換である。したがって上記で概説されるように、アミノ酸置換は一般に、アミノ酸側鎖置換基の相対的類似性、例えばそれらの疎水性、親水性、電荷、サイズなどに基づく。様々な前述の特徴を考慮にする代表的な置換は当業者にとって周知であり、アルギニンおよびリジン；グルタミン酸塩およびアスパラギン酸塩；セリンおよびスレオニン；グルタミンおよびアスパラギン；およびバリン、ロイシンおよびイソロイシンが挙げられる。アミノ酸置換は、残基の極性、電荷、溶解度、疎水性、親水性および／または両親媒性の類似性に基づいてさらになされ得る。例えば、負荷電アミノ酸としてはアスパラギン酸およびグルタミン酸が挙げられ；正荷電アミノ酸としては、ヒスチジン、リジンおよびアルギニンが挙げられ；類似の親水性値を有する非荷電極性ヘッドグループがあるアミノ酸としては、ロイシン、イソロイシンおよびバリン；グリシンおよびアラニン；アスパラギンおよびグルタミン；およびセリン、スレオニン、フェニルアラニンおよびチロシンが挙げられる。保存的変化を表し得るアミノ酸の他の基としては、（１）ａｌａ、ｐｒｏ、ｇｌｙ、ｇｌｕ、ａｓｐ、ｇｌｎ、ａｓｎ、ｓｅｒ、ｔｈｒ；（２）ｃｙｓ、ｓｅｒ、ｔｙｒ、ｔｈｒ；（３）ｖａｌ、ｉｌｅ、ｌｅｕ、ｍｅｔ、ａｌａ、ｐｈｅ；（４）ｌｙｓ、ａｒｇ、ｈｉｓ；および（５）ｐｈｅ、ｔｙｒ、ｔｒｐ、ｈｉｓが挙げられる。
【０１５９】
本明細書中で使用される場合、「保存的アミノ酸置換」という用語は、次の５つのグループのうち１つの中でのアミノ酸交換としてさらに定義され得る：
Ｉ．小さい脂肪族、非極性または僅かに極性がある残基：Ａｌａ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｐｒｏ、Ｇｌｙ；
ＩＩ．極性、負荷電残基およびそれらのアミド：Ａｓｐ、Ａｓｎ、Ｇｌｕ、Ｇｌｎ；
ＩＩＩ．極性、正荷電残基：Ｈｉｓ、Ａｒｇ、Ｌｙｓ；
ＩＶ．大きい、脂肪族、非極性残基：Ｍｅｔ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｖａｌ、Ｃｙｓ；
Ｖ．大きい、芳香族残基：Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ。
【０１６０】
変異体は、またはあるいは非保存的変化も含有し得る。好ましい実施形態において、変異体ポリペプチドは、１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０個のアミノ酸の置換、欠失または付加により、ネイティブ配列とは異なる。変異体は、（またはあるいは）例えば、ポリペプチドの免疫原性、二次構造およびハイドロパシー性に対する影響が最小限であるアミノ酸の欠失または付加によっても修飾され得る。
【０１６１】
一実施形態において、配列番号１、２、４、５、２８、２９、３５、３７、３８、３９、４０、４２、４３および４４の変異体は、それぞれ配列番号１、２、４、５、２８、２９、３５、３７、３８、３９、４０、４２、４３および４４のうち１つと少なくとも同等の親和性で、細胞表面受容体、好ましくは細胞表面栄養輸送体に結合可能である。
【０１６２】
一実施形態において、配列番号１、２、４、５、２８、２９、３５、３７、３８、３９、４０、４２、４３および４４の変異体は、それぞれ配列番号１、２、４、５、２８、２９、３５、３７、３８、３９、４０、４２、４３および４４の配列と比較した場合、例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０個の保存的アミノ酸置換などの保存的アミノ酸置換を含む。
【０１６３】
別の実施形態において、配列番号１、２、４、５、２８、２９、３５、３７、３８、３９、４０、４２、４３および４４の変異体は、それぞれ配列番号１、２、４、５、２８、２９、３５、３７、３８、３９、４０、４２、４３および４４の配列からの１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０個のアミノ酸が、存在しないか、または何らかのアミノ酸により置換されている、または１、２、３、４、５、６、７、８、９もしくは１０個のアミノ酸（連続または不連続の何れか）が付加されているポリペプチドである。
【０１６４】
本発明の一実施形態において、本明細書中で上に記載のようなＲＢＤリガンドは、当技術分野で周知の手段により、例えば１つまたは複数の官能基、例えばリン酸、酢酸、脂質または炭水化物基の付加により、および／または１つまたは複数の保護基の付加により、修飾される。
【０１６５】
例えば、ＲＢＤリガンドは、１つまたは複数の官能基、例えばリン酸塩、酢酸塩または様々な脂質および炭水化物の付加により修飾され得る。本発明のＲＢＤリガンドは、ポリペプチド誘導体としても存在し得る。「ポリペプチド誘導体」という用語は、アミノ基（−−ＮＨ−−）、より具体的にはペプチド結合を有する化合物を指す。ポリペプチドは、置換アミドとしてみなされ得る。アミド基のように、ペプチド結合は高度の共鳴安定化を示す。ペプチド結合中のＣ−−Ｎ単結合は、一般的には約４０パーセントの二重結合の特徴を有し、およびＣ＝Ｏ二重結合、約４０パーセントの単結合の特徴を有する。「保護基」は、非保護官能基を伴う望ましくない反応（タンパク質分解など）を妨げる基である。アミノ保護基の具体例としては、ホルミル；トリフルオロアセチル；ベンジルオキシカルボニル；置換ベンジルオキシカルボニル、例えば（オルト−またはパラ−）クロロベンジルオキシカルボニルおよび（オルト−またはパラ−）ブロモベンジルオキシカルボニル；および脂肪族オキシカルボニル、例えばｔ−ブトキシカルボニルおよびｔ−アミルオキシカルボニルが挙げられる。アミノ酸のカルボキシル基は、エステル基への変換を通じて保護され得る。エステル基としては、ベンジルエステル、置換ベンジルエステル、例えばメトキシベンジルエステルなど；アルキルエステル、例えばシクロへキシルエステル、シクロヘプチルエステルまたはｔ−ブチルエステルなどが挙げられる。グアニジノ部分は、保護基を必要としない場合でも、ニトロ；またはアリールスルホニル、例えばトシル、メトキシベンゼンスルホニルまたはメシチレンスルホニルなどにより保護され得る。イミダゾールの保護基としては、トシル、ベンジルおよびジニトロフェニルが挙げられる。トリプトファンのインドール基は、ホルミルにより保護してもよく、または保護しなくてもよい。
【０１６６】
ＲＢＤリガンドの修飾は、特にインビボでのそれらの寿命を改善することを目的とする。あるタイプの修飾は、ＲＢＤリガンドのＮまたはＣ末端へのポリエチレングリコール（ＰＥＧ）の付加である。ＰＥＧは、水溶性が高い、溶液中での移動性が高い、および免疫原性が低いことなど、ポリペプチドにとって理想的な担体となる多くの特性を有することが当業者により知られている。この修飾は、ポリペプチドをエキソペプチダーゼからも保護し、したがってインビボでのそれらの全体的な安定性を向上させる。
【０１６７】
エンドペプチダーゼまたはエキソペプチダーゼによるポリペプチドの分解を防ぐために使用される他の修飾としては、アセチル化またはグリコシル化などのＮ末端修飾、アミド化などのＣ末端修飾およびポリペプチド内の特定の部位での非天然アミノ酸（β−アミノおよびα−トリフルオロメチルアミノ酸）の使用が挙げられる。
【０１６８】
ポリペプチド分子サイズを増大させるための別の代替法は、ヒト免疫グロブリンのＦｃドメイン（例えば、ＩｇＡ、ＩｇＭおよびＩｇＧを含む。）に対するポリペプチドの遺伝子融合またはアルブミンに対するポリペプチドの融合である。
【０１６９】
一実施形態において、ＲＢＤリガンドは、検出タグ、例えばＦｃ断片またはＧＦＰなどに融合されるＲＢＤの一部または全体を含む融合タンパク質である。Ｆｃ断片の例としては、ウサギＦｃ断片（配列番号１０によりコードされる、配列番号９のアミノ酸配列）、マウスＦｃ断片（配列番号１２によりコードされる、配列番号１１のアミノ酸配列）および（配列番号２７によりコードされる）ｈｕＩｇＧ２  ＦｃなどのヒトＦｃ断片が挙げられるが限定されない。
【０１７０】
一実施形態において、前記融合タンパク質は、ＲＢＤの一部または全体と検出タグとの間にスペーサーを含む。一実施形態において、前記スペーサーは、アミノ酸配列ＧＳを含むかまたはそれからなる。一実施形態において、前記スペーサーは、ＢａｍＨＩ制限部位に対応するＤＮＡ配列ＧＧＡＴＣＣによりコードされる。
【０１７１】
一実施形態において、受容体結合ドメインリガンドは、マウスＦｃ断片に融合されるＨＥＲＶ−Ｗ．ＲＢＤ（例えば、配列番号７のＤＮＡ配列によりコードされる配列番号５１など）、マウスＦｃ断片に融合されるＲＤ１１４．ＲＢＤ（例えば、配列番号５４；または配列番号３１のＤＮＡ配列によりコードされる配列番号５５など）およびウサギＦｃ断片に融合されるＸｅｎｏ．ＲＢＤ（例えば、配列番号５２；または配列番号８のＤＮＡ配列によりコードされる配列番号５３など）を含む群から選択される。
【０１７２】
一実施形態において、本発明の受容体結合リガンドは、少なくとも１つの造影剤とカップリングされる。造影剤の非限定例は本明細書中、上記で列挙する。一実施形態において、本発明の受容体結合リガンドはＩ−１２５とカップリングされる。
【０１７３】
本明細書中に記載のＲＢＤリガンドは、当技術分野で周知であるように、化学合成または酵素合成により合成的に作製され得る。あるいは、本発明のポリペプチドをコードするヌクレオチド配列をタンパク質発現ベクターに導入し、適切な宿主生物（例えば細菌、昆虫細胞など）において産生させ、次いで精製し得る。一実施形態において、受容体結合ドメインリガンドは、例えば、例えば大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）、酵母、バキュロウイルス−昆虫細胞またはＨＥＫもしくはＣＨＯ発現系などの哺乳動物細胞などの当技術分野で公知の何らかの産生系を用いることなどのクローニング法によって得られる。
【０１７４】
ポリペプチドを精製または同定するかまたは精製する目的のために、さらなるポリペプチド（「タグ」）を付加し得る。タンパク質タグによって、例えば、ポリペプチドを高親和性でマトリクスに吸着させ、次いで、任意の顕著な程度に複合体を溶出させることなく、適切な緩衝液でストリンジェントにそのマトリクスを洗浄し、その後、吸着タンパク質を選択的に溶出させることが可能になる。当業者にとって公知のタンパク質タグの例は、（Ｈｉｓ）６タグ、Ｍｙｃタグ、ＦＬＡＧタグ、ヘマグルチニンタグ、グルタチオントランスフェラーゼ（ＧＳＴ）タグ、親和性キチン結合タグまたはマルトース結合タンパク質（ＭＢＰ）タグを有するインテインである。これらのタンパク質タグは、Ｎ末端、Ｃ末端および／または内部に存在し得る。
【０１７５】
一実施形態において、ＲＢＤリガンドの配列は、前記ＲＢＤリガンドの分泌を可能にするペプチドシグナル配列にＮ末端で融合される。ペプチドシグナル配列の例としては、ヒトＩＬ−２ペプチドシグナル（配列番号１３）、ヒトアルブミンペプチドシグナル（配列番号１４）、ヒトキモトリプシノーゲンペプチドシグナル（配列番号１５）、ヒトトリプシノーゲン−２ペプチドシグナル（配列番号１６）、ガウシアルシフェラーゼペプチドシグナル（配列番号１７）およびマウスＩｇＭペプチドシグナル（配列番号１８）が挙げられるが限定されない。
【０１７６】
一実施形態において、本発明の方法は、ＡＳＣＴ１、ＡＳＣＴ２またはＡＳＣＴ１とＡＳＣＴ２に対するＨＥＲＶ−Ｗ．ＲＢＤの結合を測定することを含む。
【０１７７】
一実施形態において、本発明の方法は、ＡＳＣＴ１、ＡＳＣＴ２またはＡＳＣＴ１とＡＳＣＴ２に対するＲＤ１１４．ＲＢＤの結合を測定することを含む。
【０１７８】
一実施形態において、本発明の方法は、ＡＳＣＴ１、ＡＳＣＴ２またはＡＳＣＴ１とＡＳＣＴ２に対するＢａＥＶ．ＲＢＤの結合を測定することを含む。
【０１７９】
一実施形態において、本発明の方法は、ＡＳＣＴ１、ＡＳＣＴ２またはＡＳＣＴ１とＡＳＣＴ２に対するＳＮＶ．ＲＢＤの結合を測定することを含む。
【０１８０】
一実施形態において、本発明の方法は、ＡＳＣＴ１、ＡＳＣＴ２またはＡＳＣＴ１とＡＳＣＴ２に対するＳＲＶ．ＲＢＤの結合を測定することを含む。
【０１８１】
一実施形態において、本発明の方法は、ＡＳＣＴ１、ＡＳＣＴ２またはＡＳＣＴ１とＡＳＣＴ２に対するＭＰＭＶ．ＲＢＤの結合を測定することを含む。
【０１８２】
別の実施形態において、本発明の方法は、ＸＰＲ１に対するＸｅｎｏ．ＲＢＤの結合を測定することを含む。
【０１８３】
別の実施形態において、本発明の方法は、ヒトＴ−リンパ好性ウイルス（ＨＴＬＶ）１、ＨＴＬＶ２、もしくはＨＴＬＶ４由来、またはサルＴ−リンパ好性ウイルス（ＳＴＬＶ）１、ＳＴＬＶ２、もしくはＳＴＬＶ３由来のＲＢＤとＧＬＵＴ１との結合を測定することに存しない。
【０１８４】
本発明は、さらに、膵臓癌細胞を検出するための方法であって、前記細胞上での少なくとも１つのＲＢＤリガンドの結合を決定または測定することを含み、前記ＲＢＤリガンドが、ＨＥＲＶ−Ｗ．ＲＢＤ、ＲＤ１１４．ＲＢＤ、ＢａＥＶ．ＲＢＤ、ＳＮＶ．ＲＢＤ、ＳＲＶ．ＲＢＤ、ＭＰＭＶ．ＲＢＤ、Ｘｅｎｏ．ＲＢＤ、これらの変異体および断片を含む群から選択される方法に関する。
【０１８５】
一実施形態において、本発明の方法は、少なくとも１つのＲＢＤリガンドの結合を参照値と比較することを含む。
【０１８６】
本発明の別の目的は、少なくとも１つの造影剤とカップリングされたＲＢＤリガンドである。好ましくは、前記ＲＢＤリガンドは、（本明細書中で上に記載のような）少なくとも１つの造影剤とカップリングされた、（本明細書中で上に記載のような）ＨＥＲＶ−Ｗ  ＲＢＤ、ＲＤ１１４．ＲＢＤ、ＢａＥＶ．ＲＢＤ、ＳＮＶ．ＲＢＤ、ＳＲＶ．ＲＢＤ、ＭＰＭＶ．ＲＢＤ、Ｘｅｎｏ．ＲＢＤ、これらの変異体または断片、より好ましくはＨＥＲＶ−Ｗ．ＲＢＤ、ＲＤ１１４．ＲＢＤまたはＸｅｎｏ．ＲＢＤ、これらの変異体および断片である。一実施形態において、少なくとも１つの造影剤は放射性標識物質である。一実施形態において、少なくとも１つの造影剤はＩ−１２５である。
【０１８７】
一実施形態において、少なくとも１つの造影剤とカップリングされた少なくとも１つのＲＢＤリガンドは、医用イメージング用のプローブとして使用され得る。一実施形態において、放射性標識物質とカップリングされた少なくとも１つのＲＢＤリガンドは、医用イメージング用のプローブとして使用され得る。一実施形態において、Ｉ−１２５とカップリングされた少なくとも１つのＲＢＤリガンドは、医用イメージング用のプローブとして使用され得る。
【０１８８】
少なくとも１つの造影剤をＲＢＤリガンドにカップリングさせるための方法は、当技術分野の水準において周知である。例えば、少なくとも１つの造影剤は共有または非共有結合され得る。
【０１８９】
例えば、ポリペプチドをＩ−１２５にカップリングさせるための技術は、当技術分野の水準において周知である。このような方法の例は次のとおりである：還元型で存在するヨウ素（ＮａＩ）がチロシンのフェノール基またはヒスチジン残基の側鎖と反応する。これらの基を酸化剤（ヨードゲン）で予め酸化する。次いでペプチド調製物（１ｍｃｉ＝３７ＭＢｑに対して１００μｇ）をヨードゲン溶液に添加し、４℃で１０分間インキュベートする。標識ごとに、例えばアジ化ナトリウムを含むＰＢＳ  ２００μＬを含む停止溶液を用いて反応を停止させる。並行して、マウス血清をＰＤ１０カラムに添加する。次いで反応溶液をＰＤ１０カラム上に添加し、ヨウ素とカップリングしたペプチドを回収する。
【０１９０】
本発明の一実施形態において、少なくとも１つの本発明の造影剤とカップリングされたＲＢＤリガンドは、トレーサーとして使用するためのものである。「トレーサー」という用語は、本明細書中で使用される場合、術前、術中、および術後に癌の位置、癌の進行および構造に対する洞察を提供する認識物質を指す。
【０１９１】
したがって、本願はさらに、必要とする対象において膵臓癌細胞を追跡するためのインビボ法であって、
ａ．少なくとも１つの造影剤とカップリングされた、ＨＥＲＶ−Ｗ．ＲＢＤ、ＲＤ１１４．ＲＢＤ、ＢａＥＶ．ＲＢＤ、ＳＮＶ．ＲＢＤ、ＳＲＶ．ＲＢＤ、ＭＰＭＶ．ＲＢＤ、Ｘｅｎｏ．ＲＢＤ（好ましくはＨＥＲＶ−Ｗ．ＲＢＤ、ＲＤ１１４．ＲＢＤおよびＸｅｎｏ．ＲＢＤ）、これらの変異体および断片から選択される少なくとも１つのＲＢＤリガンドの有効量を対象に投与することと；
ｂ．医用イメージング技術を用いて膵臓癌細胞に結合する前記少なくとも１つのＲＢＤリガンドを検出することと、
を含むインビボ法に関する。
【０１９２】
一実施形態において、本方法は、術前、術中および術後に使用するためのものである。別の実施形態において、本方法は蛍光ナビゲーション手術で使用するためのものである。
【０１９３】
一実施形態において、膵臓癌細胞に結合する前記少なくとも１つのＲＢＤリガンドの検出は、少なくとも１つの造影剤とカップリングされた少なくとも１つのＲＢＤリガンドの対象への投与から４時間、６時間、１２時間、１８時間、２４時間、３６時間、４８時間または９６時間後に行われる。当業者は、使用される造影剤に応じて、正しい読み取りを決定する。
【０１９４】
使用され得る具体的な医用イメージング技術の方法の例は、当業者に周知であり、例えばコンピュータ断層撮影（ＣＡＴ）、磁気共鳴分光法（ＭＲＳ）、磁気共鳴画像法（ＭＲＩ）、ポジトロン断層撮影（ＰＥＴ）または単一光子放射型コンピュータ断層撮影（ＳＰＥＣＴ）が挙げられ、これらはＢｏｏｎｓｔｒａら、２０１４に記載されている。
【０１９５】
一実施形態において、ＲＢＤリガンドは、本明細書中に記載のような放射性標識物質または蛍光物質とカップリングされる。好ましくは、標的化のための放射性標識物質または蛍光物質としては、Ｉ−１２５、Ｉ−１３１、Ｆ−１８（すなわち１８−Ｆ−フルオロ−２−デオキシ−Ｄ−グルコース、１８−Ｆ−フルオロ−１７−エストラジオール）、１１−Ｃ−アセテート、９９ｍＴｃ、Ｏ−１５、Ｎ−１３、Ｂｒ−７６、Ｉｎ−１１１、Ｃｕ−６４、Ｇａ−６８、Ｚｒ−８９、ＺＷ８００−１、Ｃｙ５．５、ＩＲＤｙｅ８００ＣＷが挙げられるが限定されない。
【０１９６】
本明細書中で使用される場合、「参照」という用語は、測定された発現レベルに関して、比較のための基準として使用され得る何らかの適切な参照発現レベルを広く包含する。一実施形態において、参照は、アルゴリズム、ならびに／または統計学および階層的分類の他の方法を使用して構築される。別の態様において、保存された発現レベルを提供するために、参照発現レベルをデータベースに保存し、保存された発現レベルを使用して、発現レベルの差異を決定する。データベースは、例えばコンピュータまたはサーバー上に保存され得る。
【０１９７】
一実施形態において、参照発現レベルは、指標値であるか、または膵臓癌細胞の存在に対する１つまたは複数のリスク予測アルゴリズムもしくは計算された指標から導出する。参照発現レベルは、類似の年齢範囲の対象集団、同じまたは類似の民族の対象集団を含むがこれらに限定されない集団試験から導出された数または値に関連し得る。
【０１９８】
本発明の一実施形態において、参照発現レベルは、膵臓癌と診断された患者の集団で測定された発現レベルである。一実施形態において、測定された発現レベルと参照発現レベルとの間で等価であること（すなわち差異がないこと）または参照発現レベルを上回る測定発現レベルは、膵臓癌細胞の存在を示し得る。
【０１９９】
本発明の一実施形態において、参照発現レベルは、実質的に健康な対象集団において、すなわち膵臓癌と診断されていない対象集団において測定される発現レベルである。一実施形態において、測定された発現レベルが参照発現レベルを上回ることは、膵臓癌細胞の存在を示し得る。
【０２００】
本発明において、２つの数値、特に２つの発現レベルは、第１の数値が第２の数値より高い（例えば第１の数値が第２の数値よりも約２０％高い、好ましくは第２の数値よりも約３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０％またはそれを超えて高いなど）、または第２の数値よりも低い（例えば第２の数値が、第２の数値よりも約２０％低い、好ましくは第２の数値よりも約３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０％またはそれを超えて低いなど）の場合、異なるとみなされる。
【０２０１】
一実施形態において、参照値は、同じ対象において以前（例えば膵臓癌を処置するための処置を受ける前など）に決定された個別化された参照値である。
【０２０２】
「膵臓癌」という用語は、本明細書中で使用される場合、膵臓細胞の異常な増殖を指す。特に、膵臓癌細胞は、栄養細胞輸送体ＡＳＣＴ１および／またはＡＳＣＴ２および／またはＸＰＲ１を発現、好ましくは過剰発現する。
【０２０３】
一実施形態において、膵臓癌細胞はＧＬＵＴ１を過剰発現しない。
【０２０４】
膵臓癌は、２つの一般的なグループに分類され得る。症例の圧倒的多数（約９９％）は、外分泌グループとして知られる消化酵素を産生する膵臓の部分で起こる。これらの癌のごく一部は、膵臓のホルモン産生組織で生じ、したがって内分泌グループとして知られる。
【０２０５】
外分泌グループの膵臓癌の例としては、腺癌、腺房細胞癌、嚢胞腺癌、膵芽腫、腺扁平上皮癌、印環細胞癌、肝様癌、膠様癌、未分化癌および破骨細胞様巨細胞を伴う未分化癌、膵充実性偽乳頭状腫瘍および膵臓粘液性嚢胞新生物が挙げられるがこれらに限定されない。
【０２０６】
神経内分泌グループの膵臓癌の例としては、膵臓神経内分泌腫瘍、悪性膵臓神経内分泌腫瘍、良性膵臓神経内分泌腫瘍、インスリノーマおよびガストリノーマが挙げられるがこれらに限定されない。
【０２０７】
本願は、膵臓癌の診断のための方法であって、以下の段階：
ａ．ＨＥＲＶ−Ｗ．ＲＢＤ、ＲＤ１１４．ＲＢＤ、ＢａＥＶ．ＲＢＤ、ＳＮＶ．ＲＢＤ、ＳＲＶ．ＲＢＤ、ＭＰＭＶ．ＲＢＤ、Ｘｅｎｏ．ＲＢＤ、これらの変異体および断片（好ましくはＨＥＲＶ−Ｗ．ＲＢＤ、ＲＤ１１４．ＲＢＤおよびＸｅｎｏ．ＲＢＤ、これらの変異体および断片）から選択される少なくとも１つのＲＢＤリガンドの有効量を組織、器官または細胞と接触させることと；
ｂ．前記組織または器官または細胞における、少なくとも１つの細胞表面受容体、好ましくは少なくとも１つの細胞表面栄養輸送体に対する少なくとも１つのＲＢＤリガンドの結合を検出および／または定量することと、
を含む方法に関する。
【０２０８】
一実施形態において、膵臓癌の診断のための方法は、次の段階：
ａ．ＨＥＲＶ−Ｗ．ＲＢＤ、ＲＤ１１４．ＲＢＤ、ＢａＥＶ．ＲＢＤ、ＳＮＶ．ＲＢＤ、ＳＲＶ．ＲＢＤ、ＭＰＭＶ．ＲＢＤおよびＸｅｎｏ．ＲＢＤから選択される少なくとも１つのＲＢＤリガンドの有効量を組織、器官または細胞と接触させることと；
ｂ．前記組織または器官または細胞におけるＡＳＣＴ１、ＡＳＣＴ２およびＸＰＲ１からなる群から選択される少なくとも１つの細胞表面受容体に対する少なくとも１つのＲＢＤリガンドの結合を検出および／または定量することと、
を含む。
【０２０９】
一実施形態において、本発明の診断方法はインビボ診断法である。好ましくは、前記診断法は医用イメージングに基づく。
【０２１０】
一実施形態において、少なくとも１つのＲＢＤリガンドは、本明細書中で上に記載のような少なくとも１つの造影剤に融合されたＲＢＤリガンドである。一実施形態において、少なくとも１つのＲＢＤリガンドは、少なくとも１つの放射性標識物質に融合されたＲＢＤリガンドである。一実施形態において、少なくとも１つの放射性標識物質はＩ−１２５である。
【０２１１】
一実施形態において、本発明の方法は、対象において膵臓癌を監視するためである。「監視する」という用語は、本明細書中で使用される場合、例えば抗癌療法の前、最中および後などの時間の関数としての対象の体内の膵臓癌細胞の量の決定を指す。
【０２１２】
「抗癌療法」という用語は、本明細書中で使用される場合、化学療法、放射線、外科手術、免疫療法および抗癌剤として当業者にとって公知の薬物を指す。
【０２１３】
一実施形態において、本発明の監視方法は、２つの発現レベル、例えば処置前に測定した（ＡＳＣＴ１および／またはＡＳＣＴ２および／またはＸＰＲ１の）発現レベルと、処置後に測定した（ＡＳＣＴ１および／またはＡＳＣＴ２および／またはＸＰＲ１の）発現レベルとを比較することを含む。
【０２１４】
一実施形態において、処置後のＡＳＣＴ１および／またはＡＳＣＴ２および／またはＸＰＲ１の発現レベルの低下は、その処置の有効性を示す。
【０２１５】
一実施形態において、処置前に測定したレベルと同等であるかまたはそれを上回る、処置後のＡＳＣＴ１および／またはＡＳＣＴ２および／またはＸＰＲ１の発現レベルは、その処置の有効性がないことを示す。
【０２１６】
本願は、対象において膵臓癌を監視するための方法であって、
ａ．ＨＥＲＶ−Ｗ．ＲＢＤ、ＲＤ１１４．ＲＢＤ、ＢａＥＶ．ＲＢＤ、ＳＮＶ．ＲＢＤ、ＳＲＶ．ＲＢＤ、ＭＰＭＶ．ＲＢＤおよびＸｅｎｏ．ＲＢＤ、これらの変異体および断片から選択され；好ましくはＨＥＲＶ−Ｗ．ＲＢＤ、ＲＤ１１４．ＲＢＤおよびＸｅｎｏ．ＲＢＤ、これらの変異体および断片から選択され、より好ましくは少なくとも１つの造影剤とカップリングされた少なくとも１つのＲＢＤリガンドの有効量を前記対象の組織、器官または細胞に接触させる段階と；
ｂ．好ましくは医用イメージングによって、前記組織または器官または細胞において、少なくとも１つの細胞表面受容体、好ましくは少なくとも１つの細胞表面栄養輸送体に対する少なくとも１つのＲＢＤリガンドの結合を検出および／または定量する段階と；
ｃ．対象を抗癌療法で処置する段階と；
ｄ．好ましくは少なくとも１つの造影剤とカップリングされた少なくとも１つのＲＢＤリガンドの有効量を前記対象の組織、器官または細胞と接触させる段階と；
ｅ．前記組織または器官または細胞における少なくとも１つの細胞表面受容体、好ましくは少なくとも１つの細胞表面栄養輸送体に対する少なくとも１つのＲＢＤリガンドの結合を検出および／または定量する段階と、
を含む方法にも関する。
【０２１７】
一実施形態において、対象において膵臓癌を監視するための方法は、
ａ．ＨＥＲＶ−Ｗ．ＲＢＤ、ＲＤ１１４．ＲＢＤ、ＢａＥＶ．ＲＢＤ、ＳＮＶ．ＲＢＤ、ＳＲＶ．ＲＢＤ、ＭＰＭＶ．ＲＢＤおよびＸｅｎｏ．ＲＢＤ、これらの変異体および断片から選択され、好ましくはＨＥＲＶ−Ｗ．ＲＢＤ、ＲＤ１１４．ＲＢＤおよびＸｅｎｏ．ＲＢＤ、これらの変異体および断片から選択され、より好ましくは少なくとも１つの造影剤とカップリングされた少なくとも１つのＲＢＤリガンドの有効量を前記対象の組織、器官または細胞と接触させる段階と；
ｂ．好ましくは医用イメージングによって、前記組織または器官または細胞におけるＡＳＣＴ１、ＡＳＣＴ２およびＸＰＲ１からなる群から選択される少なくとも１つの細胞表面受容体に対する少なくとも１つのＲＢＤリガンドの結合を検出および／または定量する段階と；
ｃ．抗癌療法で対象を処置する段階と；
ｄ．好ましくは少なくとも１つの造影剤とカップリングされた少なくとも１つのＲＢＤリガンドの有効量を前記対象の組織、器官または細胞と接触させる段階と；
ｅ．前記組織または器官または細胞におけるＡＳＣＴ１；ＡＳＣＴ２およびＸＰＲ１からなる群から選択される少なくとも１つの細胞表面受容体に対する少なくとも１つのＲＢＤリガンドの結合を検出および／または定量する段階と、
を含む。
【０２１８】
一実施形態において、本発明の方法はさらに、段階ｅ）で測定した結合を段階ｂ）で測定した結合と比較し、それにより対象において膵臓癌を監視する段階を含む。
【０２１９】
一実施形態において、抗癌療法後に組織、器官または細胞において、少なくとも１つの受容体、好ましくは少なくとも１つの細胞表面栄養細胞輸送体、好ましくはＡＳＣＴ１、ＡＳＣＴ２およびＸＰＲ１からなる群から選択される少なくとも１つの細胞表面栄養細胞輸送体の検出がないことは、寛解を示す。
【０２２０】
本願はさらに、本明細書中で上に記載のような、少なくとも１つの造影剤とカップリングされた、好ましくは少なくとも１つの放射性標識物質とカップリングされた、好ましくはＩ−１２５とカップリングされた少なくとも１つのＲＢＤリガンドを含む組成物に関する。
【０２２１】
本願はさらに、本明細書中で上に記載のような、少なくとも１つの造影剤とカップリングされた、好ましくは少なくとも１つの放射性標識物質とカップリングされた、好ましくはＩ−１２５とカップリングされた少なくとも１つのＲＢＤリガンドと、少なくとも１つの薬学的に許容可能な賦形剤と、を含むか、それからなるか、または本質的にそれからなる医薬組成物に関する。
【０２２２】
本願はさらに、本明細書中で上に記載のような、少なくとも１つの造影剤とカップリングされた、好ましくは少なくとも１つの放射性標識物質とカップリングされた、好ましくはＩ−１２５とカップリングされた少なくとも１つのＲＢＤリガンドを含むか、それからなるか、または本質的にそれからなる薬剤に関する。
【０２２３】
本明細書中で使用される場合、医薬組成物または薬剤に関して、「本質的に〜からなる」という用語は、本発明の少なくとも１つのＲＢＤリガンドが前記医薬組成物または薬剤における唯一の治療剤または生物学的活性を有する薬剤であることを意味する。
【０２２４】
本願は、本明細書中で上に記載のような、少なくとも１つの造影剤とカップリングされた、好ましくは少なくとも１つの放射性標識物質とカップリングされた、好ましくはＩ−１２５とカップリングされた少なくとも１つのＲＢＤリガンドと、少なくとも１つの薬学的に許容可能な賦形剤とを含むか、それからなるか、または本質的にそれからなる診断組成物にも関する。
【０２２５】
一実施形態において、本発明の診断組成物は、本明細書中で上に記載のような本発明の方法に従い、膵臓癌を診断するかまたは膵臓癌を監視するためのものである。
【０２２６】
薬学的に許容可能な賦形剤としては、水、食塩水、リンゲル液、デキストロース溶液およびエタノール溶液、グルコース、スクロース、デキストラン、マンノース、マンニトール、ソルビトール、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、リン酸塩、酢酸塩、ゼラチン、コラーゲン、Ｃａｒｂｏｐｏｌ（登録商標）、植物油などが挙げられる。さらに適切な保存剤、安定化剤、抗酸化剤、抗菌剤および緩衝剤、例えばＢＨＡ、ＢＨＴ、クエン酸、アスコルビン酸、テトラサイクリンなども含まれ得る。
【０２２７】
本発明の組成物において使用され得る薬学的に許容可能な賦形剤の他の例としては、イオン交換体、アルミナ、ステアリン酸アルミニウム、レシチン、血清タンパク質、例えばヒト血清アルブミンなど、緩衝物質、例えばリン酸塩、グリシン、ソルビン酸、ソルビン酸カリウム、飽和植物性脂肪酸の部分グリセリド混合物、水、塩または電解質、例えばプロタミン硫酸塩、リン酸水素二ナトリウム、リン酸水素カリウム、塩化ナトリウム、亜鉛塩、コロイド状シリカ、三ケイ酸マグネシウム、ポリビニルピロリドン、セルロース骨格の物質、ポリエチレングリコール、カルボキシメチルセルロースナトリウム、ポリアクリレート、ワックス、ポリエチレン−ポリオキシプロピレン−ブロックポリマー、ポリエチレングリコールおよび羊毛脂が挙げられるがこれらに限定されない。
【０２２８】
さらに、薬学的に許容可能な賦形剤は、一部の賦形剤、例えば界面活性剤（例えばヒドロキシプロピルセルロース）など；適切な担体、例えば、例えば水、エタノール、ポリオール（例えばグリセロール、プロピレングリコールおよび液体ポリエチレングリコールなど）を含有する溶媒および分散媒、適切なそれらの混合物および植物油、例えばピーナツ油およびゴマ油など；等張剤、例えば糖または塩化ナトリウムなど；コーティング剤、例えばレシチンなど；吸収を遅延させる薬剤、例えばモノステアリン酸アルミニウムおよびゼラチンなど；保存剤、例えば塩化ベンザルコニウム、ベンゼトニウム塩化物、クロロブタノール、チメロサールなど；緩衝剤、例えば、ホウ酸、重炭酸ナトリウムおよびカリウム、ホウ酸ナトリウムおよびカリウム、炭酸ナトリウムおよびカリウム、酢酸ナトリウム、重リン酸ナトリウムなど；等張化剤、例えば、デキストロース、塩化カリウム、プロピレングリコール、塩化ナトリウムなど；抗酸化剤および安定化剤、例えば亜硫酸水素ナトリウム、メタ重亜硫酸ナトリウム、チオ亜硫酸ナトリウム、チオ尿素など；非イオン性湿潤剤または清澄剤、例えばポリソルベート８０、ポリソルベート２０、ポロキサマー２８２およびチロキサポールなど；粘度調整剤、例えばデキストラン４０、デキストラン７０、ゼラチン、グリセリン、ヒドロキシエチルセルロース、ヒドロキシメチルプロピルセルロース、ラノリン、メチルセルロース、ペトロラタム、ポリエチレングリコール、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、カルボキシメチルセルロースなどを含み得る。
【０２２９】
本願は、膵臓癌を処置するためまたは膵臓癌の処置で使用するための本発明の医薬組成物にも関する。
【０２３０】
本願は、膵臓癌を処置するためまたは膵臓癌の処置で使用するための本発明の薬剤にも関する。
【０２３１】
本願は、膵臓癌を処置するための方法であって、本発明のＲＢＤリガンドの治療的有効量を対象に投与することを含む方法にも関する。一実施形態において、前記ＲＢＤリガンドは、ＨＥＲＶ−Ｗ．ＲＢＤ、ＲＤ１１４．ＲＢＤ、ＢａＥＶ．ＲＢＤ、ＳＮＶ．ＲＢＤ、ＳＲＶ．ＲＢＤ、ＭＰＭＶ．ＲＢＤ、Ｘｅｎｏ．ＲＢＤ、これらの変異体および断片からなる群から選択され；好ましくは前記ＲＢＤリガンドは、ＨＥＲＶ−Ｗ．ＲＢＤ、ＲＤ１１４．ＲＢＤおよびＸｅｎｏ．ＲＢＤ、これらの変異体および断片から選択される。
【０２３２】
本願は、膵臓癌細胞を標的とするための方法であって、ＨＥＲＶ−Ｗ．ＲＢＤ、ＲＤ１１４．ＲＢＤ、ＢａＥＶ．ＲＢＤ、ＳＮＶ．ＲＢＤ、ＳＲＶ．ＲＢＤ、ＭＰＭＶ．ＲＢＤ、Ｘｅｎｏ．ＲＢＤ、これらの変異体および断片からなる群から選択される；好ましくはＨＥＲＶ−Ｗ．ＲＢＤ、ＲＤ１１４．ＲＢＤおよびＸｅｎｏ．ＲＢＤ、これらの変異体および断片から選択されるＲＢＤリガンドを対象に投与することを含む方法にも関する。このような方法は、例えば膵臓癌細胞に対して治療剤を標的化するために使用され得る。
【０２３３】
一実施形態において、少なくとも１つの造影剤とカップリングされた、好ましくは少なくとも１つの放射性標識物質とカップリングされた、好ましくはＩ−１２５とカップリングされた前記ＲＢＤリガンドはカプセル封入される。少なくとも１つの造影剤とカップリングされたＲＢＤリガンドのカプセル封入は、分解を回避し得る。カプセル封入技術は当技術分野の水準において周知である。
【０２３４】
カプセルの例としては、リン脂質、ポリマー、リポソームおよび量子ドットが挙げられるがこれらに限定されない。
【０２３５】
一実施形態において、ＲＢＤリガンドは、対象の体内で膵臓癌細胞に具体的に投与される治療剤とともにカプセル封入される。
【０２３６】
一実施形態において、ＲＢＤリガンド、少なくとも１つの造影剤とカップリングされたＲＢＤリガンドまたは本発明の診断組成物または本発明の医薬組成物または本発明の薬剤は、当業者により決定され、個別に各対象に適応させた用量で投与されるべきものである。
【０２３７】
本発明の一実施形態において、ＲＢＤリガンド、少なくとも１つの造影剤とカップリングされたＲＢＤリガンドまたは本発明の診断組成物または本発明の医薬組成物または本発明の薬剤は、有効量で投与されるべきものである。
【０２３８】
ＲＢＤリガンド、少なくとも１つの造影剤とカップリングされたＲＢＤリガンドまたは本発明の診断組成物の使用は、健全な医学的判断の範囲内で主治医により決定されるものと理解される。何れかの特定の患者に対する具体的な有効量は、使用される具体的な組成物、対象の年齢、体重、全身健康状態、性別および食餌；投与時間、投与経路および医薬の技術分野で周知の同様の要因を含む様々な要因に依存する。
【０２３９】
一実施形態において、ＲＢＤリガンド、少なくとも１つの造影剤とカップリングされたＲＢＤリガンド、または本発明の診断組成物、医薬組成物もしくは薬剤は、注射によって、経口、局所、鼻腔、頬側、直腸、膣、気管内に、内視鏡によって、経粘膜的にまたは経皮的投与によって、投与されるべきものである。
【０２４０】
一実施形態において、ＲＢＤリガンド、少なくとも１つの造影剤とカップリングされたＲＢＤリガンド、または本発明の診断組成物、医薬組成物もしくは薬剤は、注射によって投与され、好ましくは全身的に注射されるべきものである。全身への注射に適合される処方物の例としては、液体溶液または懸濁液、注射前に液体で溶解または懸濁するのに適切な固体剤形が挙げられるが限定されない。全身への注射の例としては、静脈内、皮下、筋肉内、皮内、硝子体内および腹腔内注射または点滴が挙げられるが限定されない。別の実施形態において、注射される場合、本発明の、組成物、医薬組成物または薬剤は無菌である。滅菌医薬組成物を得るための方法としては、ＧＭＰ合成（ＧＭＰは「生産管理および品質管理に関する基準」を表す。）が挙げられるが限定されない。
【０２４１】
一実施形態において、ＲＢＤリガンド、少なくとも１つの造影剤とカップリングされたＲＢＤリガンド、または本発明の診断組成物、医薬組成物もしくは薬剤は、経口投与されるべきものである。経口投与に適合される処方物の例としては、固体、液体およびゲルが挙げられるが限定されない。経口投与に適合する固体の例としては、丸剤、錠剤、カプセル、軟ゼラチンカプセル、硬ゼラチンカプセル、カプレット、圧縮錠剤、カシェー、オブラート、糖衣丸剤、糖衣錠または分散／または分解錠剤、粉末、経口投与前に液体で溶解または懸濁するのに適切な固体剤形および発泡錠が挙げられるが限定されない。経口投与に適合する液体の例としては、溶液、懸濁液、飲用液、エリクシル、密封薬瓶、頓服、水薬、シロップ剤および濃縮溶液が挙げられるが限定されない。
【０２４２】
別の実施形態において、ＲＢＤリガンド、少なくとも１つの造影剤とカップリングされたＲＢＤリガンド、または本発明の診断組成物、医薬組成物もしくは薬剤は、局所投与されるべきものである。局所投与に適合する処方物の例としては、スティック、ワックス、クリーム、ローション、軟膏、バーム、ジェル、マスク、リーブオン洗浄剤および／または類似物が挙げられるが限定されない。
【０２４３】
標的器官に応じて、当業者は、標的器官にＲＢＤリガンドを導入するために必要な技術を決定し得る。
【０２４４】
一実施形態において、ＲＢＤリガンド、少なくとも１つの造影剤とカップリングされたＲＢＤリガンド、または本発明の診断組成物、医薬組成物もしくは薬剤は、持続放出形態で投与されるべきものである。別の実施形態において、ＲＢＤリガンド、少なくとも１つの造影剤とカップリングされたＲＢＤリガンド、または本発明の診断組成物は、薬剤の放出を制御する送達系を含む。
【０２４５】
「標的器官」とは、本明細書中で使用される場合、癌により影響を受けるかまたは影響を受けることが疑われる膵臓を指し得る。
【０２４６】
一実施形態において、本発明の医薬組成物または薬剤の治療有効量は、少なくとも１日１回、１日２回または少なくとも１日３回投与される。
【０２４７】
別の実施形態において、本発明の医薬組成物または薬剤の治療有効量は、２、３、４、５または６日ごとに投与される。
【０２４８】
別の実施形態において、本発明の医薬組成物または薬剤の治療有効量は、毎週、週２回、２週間ごとまたは月に１回投与される。
【０２４９】
別の実施形態において、治療有効量の、ＲＢＤリガンド、少なくとも１つの造影剤とカップリングされたＲＢＤリガンド、または本発明の診断組成物または本発明の医薬組成物または本発明の薬剤は、少なくとも２；３；４；５；または６カ月にわたり毎月投与される。
【０２５０】
別の実施形態において、ＲＢＤリガンド、少なくとも１つの造影剤とカップリングされたＲＢＤリガンド、または本発明の診断組成物または本発明の医薬組成物または本発明の薬剤の治療有効量の範囲は約１μｇ〜５ｇである。
【０２５１】
別の実施形態において、ＲＢＤリガンド、少なくとも１つの造影剤とカップリングされたＲＢＤリガンド、または本発明の診断組成物または本発明の医薬組成物または本発明の薬剤の治療有効量は、約０．１μｇ／ｋｇ〜１ｇ／ｋｇの範囲で投与されるべきものである。
【０２５２】
別の実施形態において、本明細書中で上に記載のような、ＲＢＤリガンド、少なくとも１つの造影剤とカップリングされたＲＢＤリガンド、または本発明の診断組成物または本発明の医薬組成物または本発明の薬剤は、膵臓癌に対する別の治療と組み合わせて投与されるべきものである。
【０２５３】
抗膵臓癌剤の例には、化学療法、放射線、外科手術、タンパク質キナーゼ阻害剤、微小管阻害剤、代謝拮抗剤、腫瘍ワクチンまたは免疫賦活抗体が含まれるがこれらに限定されない。
【０２５４】
本発明の一実施形態において、膵臓癌の処置を必要とする対象において膵臓癌を処置するための方法は、ＲＢＤリガンド、少なくとも１つの造影剤とカップリングされたＲＢＤリガンド、または本発明の診断組成物または本発明の医薬組成物または本発明の薬剤を、別の抗腫瘍剤または癌処置の前に、これと同時におよび／またはこれらの後に対象に投与することを含む。
【０２５５】
一実施形態において、対象は膵臓癌に罹患しており、好ましくは膵臓癌と診断されている。別の実施形態において、本発明の対象は、膵臓癌を発症するリスクがある。リスク因子の例としては、膵臓癌の家族歴、遺伝学的要因、喫煙、肥満、糖尿病およびアルコールが挙げられるが限定されない。
【０２５６】
別の実施形態において、本発明の対象は膵臓癌後の寛解段階にある。
【０２５７】
本発明の別の目的は、少なくとも１つの細胞表面受容体、好ましくは少なくとも１つの細胞表面栄養輸送体、好ましくはＡＳＣＴ１、ＡＳＣＴ２およびＸＰＲ１からなる群から選択される少なくとも１つの細胞表面栄養輸送体の発現レベルを測定するための手段を含む、本発明の方法を実行するためのキットである。
【０２５８】
一実施形態において、少なくとも１つの細胞表面栄養輸送体の発現レベルはＲＮＡレベルで評価され、本発明のキットは、全ＲＮＡ抽出のための手段、全ＲＮＡの逆転写のための手段および少なくとも１つの細胞表面栄養輸送体、好ましくはＡＳＣＴ１、ＡＳＣＴ２および／またはＸＰＲ１のＲＮＡの発現を定量するための手段を含み得る。一実施形態において、少なくとも１つの細胞表面栄養輸送体、好ましくはＡＳＣＴ１、ＡＳＣＴ２および／またはＸＰＲ１のＲＮＡの発現を定量するための手段は、前記細胞表面栄養輸送体、好ましくはＡＳＣＴ１、ＡＳＣＴ２および／またはＸＰＲ１に特異的なＰＣＲまたはｑＰＣＲプライマーである。ＰＣＴまたはｑＰＣＲプライマーの例は、本明細書中で上に記載されている。一実施形態において、本キットは、定量的ＰＣＲを行うための試薬（例えば、緩衝液、酵素など）も含む。一実施形態において、本発明のキットは、ＲＮＡレベルで少なくとも１つの標準化遺伝子の発現レベルを検出するための手段も含み得る。
【０２５９】
別の実施形態において、少なくとも１つの細胞表面栄養輸送体の発現レベルは、タンパク質レベルで評価され、本発明のキットは、ＡＳＣＴ１、ＡＳＣＴ２および／またはＸＰＲ１から選択される少なくとも１つの細胞表面栄養輸送体を検出するための手段を含み得る。一実施形態において、少なくとも１つの細胞表面栄養輸送体を検出するための前記手段は、ＡＳＣＴ１、ＡＳＣＴ２および／またはＸＰＲ１から選択される少なくとも１つの細胞表面栄養輸送体の特異的な抗体である。別の実施形態において、少なくとも１つの細胞表面栄養輸送体を検出するための前記手段は、本発明で定義されるような、および少なくとも１つの細胞表面栄養輸送体の特異的なＲＢＤである。一実施形態において、本発明のキットは、少なくとも１つの標準化タンパク質またはタンパク質発現の監視を可能にするタンパク質の発現レベルを検出するための手段も含み得る。タンパク質発現の監視を可能にするタンパク質の例としては、ＭＨＣクラスＩおよびＣＤ３２６（ヒト上皮抗原（ＨＥＡ）、上皮細胞接着分子（ＥｐＣＡＭ）または上皮特異的抗原（ＥＳＡ）としても知られる）が挙げられるが限定されない。
【０２６０】
一実施形態において、本発明のキットは、本明細書中で上に記載のような少なくとも１つの造影剤とカップリングされた少なくとも１つのＲＢＤリガンドを含む。一実施形態において、前記ＲＢＤリガンドは、ＨＥＲＶ−Ｗ．ＲＢＤ、ＲＤ１１４．ＲＢＤ、ＢａＥＶ．ＲＢＤ、ＳＮＶ．ＲＢＤ、ＳＲＶ．ＲＢＤ、ＭＰＭＶ．ＲＢＤまたはＸｅｎｏ．ＲＢＤ、これらの変異体および断片から、好ましくはＨＥＲＶ−Ｗ．ＲＢＤ、ＲＤ１１４．ＲＢＤおよびＸｅｎｏ．ＲＢＤ、これらの変異体および断片から選択される。
【０２６１】
「キット」とは、細胞栄養輸送体の発現を特異的に検出するための少なくとも１つの試薬（例えば少なくとも１つの造影剤とカップリングされるＲＢＤリガンドなど）を含む何らかの製品（例えばパッケージまたは容器）であるものとする。本キットは、本発明の方法を行うための単位として販売促進されるか、流通されるかまたは販売され得る。さらに、あらゆるまたは全てのキット試薬は、それらを外部環境から保護する容器内、例えば密封無菌容器内などで提供され得る。本キットは、その使用のためのキットおよび方法を記載する添付文書を含有し得る。
【０２６２】
本願は、膵臓癌のインビトロまたはインビボ診断のための方法であって、
ａ．ＨＥＲＶ−Ｗ．ＲＢＤ、ＲＤ１１４  ＲＢＤ、ＢａＥＶ．ＲＢＤ、ＳＮＶ．ＲＢＤ、ＳＲＶ．ＲＢＤ、ＭＰＭＶ．ＲＢＤまたはＸｅｎｏ．ＲＢＤ、これらの変異体および断片から、好ましくはＨＥＲＶ−Ｗ．ＲＢＤ、ＲＤ１１４．ＲＢＤおよびＸｅｎｏ．ＲＢＤ、これらの変異体および断片から選択される少なくとも１つのＲＢＤリガンドの有効量を対象に投与することと；
ｂ．前記対象内で少なくとも１つのＲＢＤリガンドを検出することと、
を含む方法にも関する。
【０２６３】
本発明の一実施形態において、ＲＢＤリガンドは、少なくとも１つの造影剤とカップリングされるか、好ましくは少なくとも１つの放射性標識物質とカップリングされるか、好ましくはＩ−１２５とカップリングされ、医用イメージングによるインビボ診断のために使用され得る。
【０２６４】
本願は、膵臓癌を処置するための方法であって、
ａ．本発明の方法に従い対象において膵臓癌を診断することと；
ｂ．段階（ａ）で膵臓癌と診断された対象に抗癌療法の治療有効量を投与することと、
を含む方法にも関する。
【０２６５】
したがって、一実施形態において、本発明の膵臓癌を処置するための方法は、
ａ．
ｉ．少なくとも１つの造影剤とカップリングされた、ＨＥＲＶ−Ｗ．ＲＢＤ、ＲＤ１１４  ＲＢＤ、ＢａＥＶ．ＲＢＤ、ＳＮＶ．ＲＢＤ、ＳＲＶ．ＲＢＤ、ＭＰＭＶ．ＲＢＤまたはＸｅｎｏ．ＲＢＤ、これらの変異体および断片から、好ましくはＨＥＲＶ−Ｗ．ＲＢＤ、ＲＤ１１４．ＲＢＤおよびＸｅｎｏ．ＲＢＤ、これらの変異体および断片から選択されるＲＢＤリガンドの有効量を対象に投与することと；
ｉｉ．医用イメージングを使用してＲＢＤリガンドを検出することと、
を含む、対象において膵臓癌細胞の存在を決定することと、
ｂ．抗癌療法の治療的有効量を段階（ａ）で膵臓癌と診断された対象に投与することと、
を含む。
【０２６６】
本願は、少なくとも１つの膵臓癌細胞を検出するためのインビボ法であって、
ａ．膵臓癌細胞を含有することが疑われる身体、組織または細胞に、少なくとも１つの造影剤とカップリングされたＨＥＲＶ−Ｗ．ＲＢＤ、ＲＤ１１４  ＲＢＤ、ＢａＥＶ．ＲＢＤ、ＳＮＶ．ＲＢＤ、ＳＲＶ．ＲＢＤ、ＭＰＭＶ．ＲＢＤまたはＸｅｎｏ．ＲＢＤ、これらの変異体および断片から、好ましくはＨＥＲＶ−Ｗ．ＲＢＤ、ＲＤ１１４．ＲＢＤおよびＸｅｎｏ．ＲＢＤ、これらの変異体および断片から選択される少なくとも１つのＲＢＤリガンドまたは本発明の診断組成物を投与することと；
ｂ．医用イメージング技術を使用して、細胞表面受容体、好ましくは膵臓癌細胞上で発現される細胞表面栄養輸送体、好ましくはＡＳＣＴ１、ＡＳＣＴ２およびＸＰＲ１からなる群から選択される細胞表面栄養輸送体に結合する少なくとも１つのＲＢＤリガンドの結合を検出することと、
を含むインビボ法にも関する。
【０２６７】
一実施形態において、本発明の方法はさらに、段階（ｂ）で測定された結合を参照結合と比較することを含む。
【０２６８】
本願は、対象における膵臓腫瘍または膵臓癌細胞の磁気共鳴画像を増強するためのインビボ法であって：
ａ．少なくとも１つの造影剤とカップリングされたＨＥＲＶ−Ｗ．ＲＢＤ、ＲＤ１１４．ＲＢＤ、ＢａＥＶ．ＲＢＤ、ＳＮＶ．ＲＢＤ、ＳＲＶ．ＲＢＤ、ＭＰＭＶ．ＲＢＤおよびＸｅｎｏ．ＲＢＤ、これらの変異体および断片から、好ましくはＨＥＲＶ−Ｗ．ＲＢＤ、ＲＤ１１４．ＲＢＤおよびＸｅｎｏ．ＲＢＤ、これらの変異体および断片から選択される少なくとも１つのＲＢＤリガンドの有効量または本発明の診断組成物を対象に投与することと；
ｂ．医用イメージング技術を使用して膵臓癌細胞に結合する前記少なくとも１つのＲＢＤリガンドを検出することと、
を含むインビボ法にも関する。
【０２６９】
本願は、必要とする対象においてＡＳＣＴ１、ＡＳＣＴ２および／またはＸＰＲ１から選択される細胞表面栄養輸送体を阻害するための方法であって、少なくとも１つのＲＢＤリガンドの治療有効量が前記対象に投与される方法にも関する。一実施形態において、ＡＳＣＴ１、ＡＳＣＴ２および／またはＸＰＲ１から選択される細胞表面栄養輸送体を阻害するための前記方法は、それにより対象において膵臓癌を処置する。
【０２７０】
実施例
本発明を次の実施例によりさらに説明する。
【０２７１】
実施例１
材料および方法
１０％ウシ胎仔血清（ＦＢＳ）を補給したＤＭＥＭ中でＭｉａＰａｃａ２およびＰａｎｃ１ｗｔ細胞を生育させ、１０％ウシ胎仔血清（ＦＢＳ）を補給したＲＰＭＩ中でＢｘＰＣ３およびＣａｐａｎ１細胞を生育させ、１０％ウシ胎仔血清（ＦＢＳ）を補給したＩＭＤＭ中でＣＦＰＡＣ細胞を生育させた。全て、５％ＣＯ２−９５％大気雰囲気中で３７℃にてインキュベートした。
【０２７２】
１×１０６個／１０ｃｍプレートの濃度で細胞を２日間培養し、次いで上清を廃棄し、プレートを５ｍＬのＰＢＳですすぎ、トリプシン処理した。次に、１００μＬのＰＢＡ（ＰＢＳ＋２％ＦＣＳ）中で細胞を再懸濁した。次に、細胞１×１０５個／ポイントの濃度で細胞を播種した。
【０２７３】
この時点において、４℃で作業を行った。１２００ｒｐｍで３分間、細胞を遠心分離し、ＲＢＤリガンドを含む１００μＬの溶液中で再懸濁した（表１）。３７℃で３０分間ＲＢＤリガンドを細胞とともにインキュベートする（一部のＲＢＤはインビトロで４℃を下回る低温でも機能し得る。）。次いで細胞を遠心分離し、ＰＢＡですすぎ、次いでフローサイトメトリー分析のために１００μＬ抗マウスＡ６４７または抗ウサギＡ６４７（ＰＢＡ中１／５００）中で再懸濁した。
【０２７４】
【表１】
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【０２７５】
結果
発明者らは、本発明のＲＢＤリガンドがインビトロで膵臓細胞株を特異的に認識する能力を試験した。図２および図３で示されるように、Ｘｅｎｏ．ＲＢＤおよびＨＥＲＶ−Ｗ．ＲＢＤは、膵臓細胞株ＭｉａＰａｃａ２、Ｐａｎｃ１ｗｔ、ＢｘＰＣ３およびＣＦＰＡＣを効率的に検出する。本発明のＲＢＤリガンドは、Ｃａｐａｎ１細胞株（データは示さない）も特異的に認識する。これとは逆に、Ｈ２．ＲＢＤではインビトロでこれらの細胞株を検出できない（図１）。
【０２７６】
実施例２
材料および方法
ＲＢＤリガンドの放射性標識
Ｉ−１２５はＰｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒから入手し、ＲＢＤリガンドは、以前に記載のように（Ｓａｎｔｏｒｏら、２００９．Ｊ．Ｎｕｃｌ．Ｍｅｄ．５０：２０３３−２０４１）、ＩＯＤＯ−ＧＥＮ（Ｐｉｅｒｃｅ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏ．）法を使用して、ＳＰＥＣＴイメージングのために３７０ＭＢｑ／ｍｇの比活性で放射性標識した。インビボ試験のために使用される標識リガンドは、Ｉ−１２５（１０μＣｉ／μｇ）を有する、ＨＥＲＶ−Ｗ．ＲＢＤ．ＭＦＣ（配列番号７）；Ｘｅｎｏ．ＲＢＤ．ＲＦＣ（配列番号８）；およびＨ２．ＲＢＤ．ＧＦＰ（配列番号３２）である。
【０２７７】
動物
フランス政府の指針および実験動物試験に対するＩｎｓｔｉｔｕｔ  Ｎａｔｉｏｎａｌ  ｄｅ  ｌａ  Ｓａｎｔｅ  ｅｔ  ｄｅ  ｌａ  Ｒｅｃｈｅｒｃｈｅ  Ｍｅｄｉｃａｌｅの基準（ａｇｒｅｅｍｅｎｔ  Ｄ３４−１７２−２７）に従って、全ての動物実験を行った。
【０２７８】
Ｃｈａｒｌｅｓ  Ｒｉｖｅｒ／Ｈａｒｌａｎ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓからマウス（５週齢無胸腺ＦｏｘＮ１マウス）を得て、実験での使用前に１週間順化させた。これらを２２℃および５５％湿度、１２時間明暗サイクルで収容した。餌および水を自由摂取させた。イメージングの前日にマウスにルゴール液を強制摂取させ、全実験期間にわたり、安定ヨウ素を飲用水に添加した。
・群１（マウス６匹）：左側：ＣＦＰＡＣ（細胞５×１０６個を注射）／右側：ＨＰＡＣ（細胞５×１０６個を注射）；
・群２（マウス６匹）：左側：ＣＦＰＡＣ（細胞５×１０６個を注射）；
・群３（マウス６匹）：対照群。
ＲＢＤを５０μｇ／マウスで静脈内注射する（注射した放射活性＝５００μＣｉ／マウス）。
【０２７９】
データ獲得時、マウスを麻酔ガスイソフルラン２．５％下に置いた。
【０２８０】
ＳＰＥＣＴ−ＣＴイメージング
１８ＭＢｑ放射性標識Ｉ−１２５．ＲＢＤの尾静脈注射後、様々な時間で全身ＳＰＥＣＴ／ＣＴ画像を獲得した。２％イソフルランでマウスに麻酔をかけ、４−ヘッド・マルチプレックス・マルチピンホールＮａｎｏＳＰＥＣＴカメラ（Ｂｉｏｓｃａｎ  Ｉｎｃ．，Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ，ＵＳＡ）を有するベッドに置いた。
【０２８１】
エネルギーウィンドウの中心を±２０％の幅で２８ｋｅＶに置き、各投影に関して３００００カウントの２４の投影を得るために獲得時間を定めた。専用ソフトウェアＩｎｖｉｖｏｓｃｏｐｅ（登録商標）（Ｂｉｏｓｃａｎ，Ｉｎｃ．，Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ，ＵＳＡ）およびＭｅｄｉｓｏ  ＩｎｔｅｒＶｉｅｗＸＰ（登録商標）（Ｍｅｄｉｓｏ，Ｂｕｄａｐｅｓｔ  Ｈｕｎｇａｒｙ）を使用して、画像および最大値投影像（ＭＩＰ）を再構築した。ＳＰＥＣＴデータと解剖学的に同時登録するために、同時ｍｉｃｒｏＣＴ全身画像を行った。ＳＰＥＣＴおよびＣＴからの再構築データを可視化し、Ｉｎｖｉｖｏｓｃｏｐｅ（登録商標）を使用して同時登録した。
【０２８２】
ＮａｎｏＳＰＥＣＴ−ＣＴ（Ｍｅｄｉｓｏ）での獲得：
移植５週間後、ＳＰＥＣＴ−ＣＴイメージングを実施した；
・Ｉ−１２５．Ｈ２．ＲＢＤ．ＧＦＰの注射から４時間後、２４時間後、４８時間後、７２時間後；
・Ｉ−１２５．時間ＥＲＶ−Ｗ．ＲＢＤ．ＭＦＣおよびＩ−１２５．Ｘｅｎｏ．ＲＢＤ．ＲＦＣの注射から２４時間後、４８時間後、７２時間後、９６時間後。
【０２８３】
ＶｉｖｏＱｕａｎｔソフトウェアで画像分析を行い、カウント／ｍｍ３で測定した。
【０２８４】
結果
均一な腫瘍を有する動物を選択した；しかし腫瘍細胞タイプに応じて、腫瘍は同じ速度で成長せず、したがって、イメージング時に各動物群間で、および腫瘍細胞タイプ間で、同じ体積にはならない。
【０２８５】
画像分析における腫瘍体積の差異を打開するために、測定値を、測定された放射活性／腫瘍組織の単位体積に対応させ、カウント／腫瘍体積ｍｍ３として表す。したがって、腫瘍の異なる体積により誘導されるバイアスを有することなく、様々な腫瘍細胞タイプに従ってＲＢＤに関連する放射活性の比較が可能である。
【０２８６】
対照動物の測定値は、動物の全身における放射活性／単位体積（カウント／ｍｍ３）に対応する。全ての動物において分析に考慮されない領域は、自然の排泄ゆえに膀胱（これは動物により経時的に変動し得る）および注射部位であるので尾部（残留物が持続し得る）である。ノイズバックグラウンドは、放射線源とは無関係に考慮され得る自然および周囲の放射活性検出器である。ノイズバックグラウンドの範囲で測定される値は有意ではない。
【０２８７】
図４〜５および７〜８は、それぞれＩ−１２５．ＨＥＲＶ−Ｗ．ＲＢＤ．ＭＦＣおよびＩ−１２５．Ｘｅｎｏ．ＲＢＤ．ＲＦＣによる、異なる種類の膵臓腫瘍細胞のインビボでの認識を示す。これとは逆に、図６および９により示されるように、Ｉ−１２５．Ｈ２．ＲＢＤ．ＧＦＰでは、インビボで膵臓癌細胞を効率的に認識できない。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【手続補正書】
【提出日】平成30年6月7日(2018.6.7)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】配列表
【補正方法】追加
【補正の内容】
【配列表】
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【国際調査報告】
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