(57)【要約】  本発明は、ヒト内在性レトロウイルスからの免疫調節性および免疫抑制性ペプチドの使用に関する。詳細には、本発明は、免疫抑制のための、および炎症の軽減のための、免疫抑制ペプチドの使用に関する。
2018533974.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
配列ＬＳＩＬＬＮＥＥ（配列番号２６）と少なくとも６２．５％、より好ましくは７５％、より好ましくは８７．５％、より好ましくは少なくとも１００％の配列同一性を有するペプチド配列を含むポリペプチド。
【請求項２】
配列ＬＳＩＬＬＮＥＥ（配列番号２６）と少なくとも６２．５％、より好ましくは７５％、より好ましくは８７．５％、より好ましくは少なくとも１００％の配列同一性を有するペプチド配列を含む、１３０アミノ酸の最大長を有するポリペプチド。
【請求項３】
ＬＱＮＲＲＧＬＧＬＳＩＬＬＮＥＥＣ（配列番号１）、ＬＱＮＲＲＧＬＧＬＳＩＬＬＮＥＥＣＧＰＧＰＧＰ（配列番号１９）、ＧＬＳＩＬＬＮＥＥＣ（配列番号２５）、ＬＱＮＲＲＧＬＧＬＳＩＬＬＮＥＥＣＥＥＧＰＧＰＧＰ（配列番号２７）、ＬＱＮＲＲＧＬＤＬＳＩＬＬＮＥＥＣＧＰＧＰＧＰ（配列番号２８）、ＧＬＳＩＬＬＮＥＥＣＧＰＧＰＧＰ（配列番号２９）およびＬＱＮＲＲＧＬＬＱＮＲＲＧＬＧＬＳＩＬＬＮＥＥ（配列番号３０）の中から選択される配列と少なくとも７０％、好ましくは少なくとも７６％、より好ましくは少なくとも８２％、好ましくは少なくとも８８％、より好ましくは少なくとも９４％、好ましくは１００％の配列同一性を有する１つまたは複数のペプチド配列を含む、請求項１または２に記載のポリペプチド。
【請求項４】
配列番号１〜２５および２７〜４１の配列の中から選択される配列と少なくとも７６％、より好ましくは少なくとも８２％、好ましくは少なくとも８８％、より好ましくは少なくとも９４％、好ましくは１００％の配列同一性を有するペプチド配列を含む、前記請求項のいずれかに記載のポリペプチド。
【請求項５】
ＬＳＩＬＬＮＥＥ（配列番号２６）、ＬＱＮＲＲＧＬＧＬＳＩＬＬＮＥＥＣ（配列番号１）、ＬＱＮＲＲＧＬＧＬＳＩＬＬＮＥＥＣＧＰＧＰＧＰ（配列番号１９）、ＧＬＳＩＬＬＮＥＥＣ（配列番号２５）、ＬＱＮＲＲＧＬＧＬＳＩＬＬＮＥＥＣＥＥＧＰＧＰＧＰ（配列番号２７）、ＬＱＮＲＲＧＬＤＬＳＩＬＬＮＥＥＣＧＰＧＰＧＰ（配列番号２８）、ＧＬＳＩＬＬＮＥＥＣＧＰＧＰＧＰ（配列番号２９）およびＬＱＮＲＲＧＬＬＱＮＲＲＧＬＧＬＳＩＬＬＮＥＥ（配列番号３０）の中から選択される配列と少なくとも７６％、より好ましくは少なくとも８２％、好ましくは少なくとも８８％、より好ましくは少なくとも９４％、好ましくは１００％の配列同一性を有するポリペプチドの中から選択される、請求項１または２に記載のポリペプチド。
【請求項６】
ＬＳＩＬＬＮＥＥ（配列番号２６）、ＬＱＮＲＲＧＬＧＬＳＩＬＬＮＥＥＣ（配列番号１）、ＬＱＮＲＲＧＬＧＬＳＩＬＬＮＥＥＣＧＰＧＰＧＰ（配列番号１９）、ＧＬＳＩＬＬＮＥＥＣ（配列番号２５）、ＬＱＮＲＲＧＬＧＬＳＩＬＬＮＥＥＣＥＥＧＰＧＰＧＰ（配列番号２７）、ＬＱＮＲＲＧＬＤＬＳＩＬＬＮＥＥＣＧＰＧＰＧＰ（配列番号２８）、ＧＬＳＩＬＬＮＥＥＣＧＰＧＰＧＰ（配列番号２９）およびＬＱＮＲＲＧＬＬＱＮＲＲＧＬＧＬＳＩＬＬＮＥＥ（配列番号３０）の中から選択される、請求項１または２に記載のポリペプチド。
【請求項７】
２５０未満のアミノ酸、好ましくは２００未満のアミノ酸、より好ましくは１７５未満のアミノ酸、好ましくは１５０未満のアミノ酸、より好ましくは１２５未満のアミノ酸、好ましくは１００未満のアミノ酸、より好ましくは７５未満のアミノ酸、好ましくは６０未満のアミノ酸、より好ましくは５０未満のアミノ酸、好ましくは４０未満のアミノ酸、より好ましくは３５未満のアミノ酸、好ましくは３０未満のアミノ酸、より好ましくは２５未満のアミノ酸、好ましくは２０未満のアミノ酸、より好ましくは１９未満のアミノ酸、好ましくは１８未満のアミノ酸、より好ましくは１７未満のアミノ酸、好ましくは１６未満のアミノ酸、より好ましくは１５未満のアミノ酸、好ましくは１４未満のアミノ酸、より好ましくは１３未満のアミノ酸、好ましくは１２未満のアミノ酸、より好ましくは１１未満のアミノ酸、好ましくは１０未満のアミノ酸、より好ましくは９未満のアミノ酸、好ましくは８未満のアミノ酸、より好ましくは７未満のアミノ酸、好ましくは６未満のアミノ酸を含む、前記請求項のいずれかに記載のポリペプチドを含むポリペプチド実体。
【請求項８】
少なくとも５、より好ましくは少なくとも６、好ましくは少なくとも７、より好ましくは少なくとも８、好ましくは少なくとも９、より好ましくは少なくとも１０、好ましくは少なくとも１１、より好ましくは少なくとも１２、好ましくは少なくとも１３、より好ましくは少なくとも１４、好ましくは少なくとも１５、より好ましくは少なくとも１６、好ましくは少なくとも１７、より好ましくは少なくとも１８、好ましくは少なくとも１９、より好ましくは少なくとも２０、好ましくは少なくとも２５、より好ましくは少なくとも３０、好ましくは少なくとも３５、より好ましくは少なくとも４０、好ましくは少なくとも５０、より好ましくは少なくとも６０、好ましくは少なくとも７５、より好ましくは少なくとも１００、好ましくは少なくとも１２５、より好ましくは少なくとも１５０、好ましくは少なくとも１７５、より好ましくは少なくとも２００、好ましくは少なくとも２５０のアミノ酸を含む、前記請求項のいずれかに記載のポリペプチドを含むポリペプチド実体。
【請求項９】
１７アミノ酸長を有するポリペプチドであって、最初の７つのアミノ酸の配列が配列番号４２〜１０４３の配列の中から選択される配列の最初の７つのアミノ酸の配列と同一であり、少なくとも１０のアミノ酸がＧＬＳＩＬＬＮＥＥＣ（配列番号２５）である、ポリペプチド。
【請求項１０】
配列番号１〜配列番号１０４３の中から選択される配列またはその断片に結合している配列ＬＳＩＬＬＮＥＥ（配列番号２６）と少なくとも６２．５％、より好ましくは７５％、より好ましくは８７．５％、より好ましくは少なくとも１００％の配列同一性を有する配列を含む、請求項１または２に記載のポリペプチド。
【請求項１１】
１、２、３または４つの点突然変異を含む、請求項９または１０に記載のポリペプチド。
【請求項１２】
グリコシル化される、前記請求項のいずれかに記載のポリペプチド。
【請求項１３】
アシル化される、前記請求項のいずれかに記載のポリペプチド。
【請求項１４】
単量体である、前記請求項のいずれかに記載のポリペプチド。
【請求項１５】
二量体化、三量体化または多量体化されている、前記請求項のいずれかに記載のポリペプチド。
【請求項１６】
２５０未満のアミノ酸、好ましくは２００未満のアミノ酸、より好ましくは１７５未満のアミノ酸、好ましくは１５０未満のアミノ酸、より好ましくは１２５未満のアミノ酸、好ましくは１００未満のアミノ酸、より好ましくは７５未満のアミノ酸、好ましくは６０未満のアミノ酸、より好ましくは５０未満のアミノ酸、好ましくは４０未満のアミノ酸、より好ましくは３５未満のアミノ酸、好ましくは３０未満のアミノ酸、より好ましくは２５未満のアミノ酸、好ましくは２０未満のアミノ酸、より好ましくは１９未満のアミノ酸、好ましくは１８未満のアミノ酸、より好ましくは１７未満のアミノ酸、好ましくは１６未満のアミノ酸、より好ましくは１５未満のアミノ酸、好ましくは１４未満のアミノ酸、より好ましくは１３未満のアミノ酸、好ましくは１２未満のアミノ酸、より好ましくは１１未満のアミノ酸、好ましくは１０未満のアミノ酸、より好ましくは９未満のアミノ酸、好ましくは８未満のアミノ酸、より好ましくは７未満のアミノ酸、好ましくは６未満のアミノ酸を含む、前記請求項のいずれかに記載のポリペプチドを含むタンパク質。
【請求項１７】
少なくとも５、より好ましくは少なくとも６、好ましくは少なくとも７、より好ましくは少なくとも８、好ましくは少なくとも９、より好ましくは少なくとも１０、好ましくは少なくとも１１、より好ましくは少なくとも１２、好ましくは少なくとも１３、より好ましくは少なくとも１４、好ましくは少なくとも１５、より好ましくは少なくとも１６、好ましくは少なくとも１７、より好ましくは少なくとも１８、好ましくは少なくとも１９、より好ましくは少なくとも２０、好ましくは少なくとも２５、より好ましくは少なくとも３０、好ましくは少なくとも３５、より好ましくは少なくとも４０、好ましくは少なくとも５０、より好ましくは少なくとも６０、好ましくは少なくとも７５、より好ましくは少なくとも１００、好ましくは少なくとも１２５、より好ましくは少なくとも１５０、好ましくは少なくとも１７５、より好ましくは少なくとも２００、好ましくは少なくとも２５０のアミノ酸を含む、前記請求項のいずれかに記載のタンパク質もしくはポリペプチド、または前記請求項のいずれかに記載のポリペプチドを含むタンパク質。
【請求項１８】
融合活性がない、請求項１〜１５のいずれかに記載のポリペプチドを含むタンパク質。
【請求項１９】
哺乳動物細胞系または動物モデルにおけるＩＬ−６発現を阻害する、前記請求項のいずれかに記載のポリペプチドまたはタンパク質。
【請求項２０】
前記請求項のいずれかに記載のポリペプチドまたはタンパク質をコードする、単離された核酸。
【請求項２１】
請求項２０に記載の核酸および該核酸の発現に必要なエレメントを含む発現ベクター。
【請求項２２】
真核生物または原核生物またはウイルス発現ベクターである、請求項２１に記載の発現ベクター。
【請求項２３】
酵母、大腸菌およびバキュロウイルスからなる群の中から選択される、請求項２１または２２に記載の発現ベクター。
【請求項２４】
配列ＬＳＩＬＬＮＥＥ（配列番号２６）と少なくとも６２．５％、より好ましくは７５％、より好ましくは８７．５％、より好ましくは少なくとも１００％の配列同一性を有するペプチド配列を含むポリペプチドを含み、少なくとも１つの希釈剤、担体、結合剤、溶媒または賦形剤をさらに含む医薬組成物。
【請求項２５】
ＬＱＮＲＲＧＬＧＬＳＩＬＬＮＥＥＣ（配列番号１）、ＬＱＮＲＲＧＬＧＬＳＩＬＬＮＥＥＣＧＰＧＰＧＰ（配列番号１９）、ＧＬＳＩＬＬＮＥＥＣ（配列番号２５）、ＬＱＮＲＲＧＬＧＬＳＩＬＬＮＥＥＣＥＥＧＰＧＰＧＰ（配列番号２７）、ＬＱＮＲＲＧＬＤＬＳＩＬＬＮＥＥＣＧＰＧＰＧＰ（配列番号２８）、ＧＬＳＩＬＬＮＥＥＣＧＰＧＰＧＰ（配列番号２９）およびＬＱＮＲＲＧＬＬＱＮＲＲＧＬＧＬＳＩＬＬＮＥＥ（配列番号３０）の中から選択される配列と少なくとも７０％、好ましくは少なくとも７６％、より好ましくは少なくとも８２％、好ましくは少なくとも８８％、より好ましくは少なくとも９４％、好ましくは１００％の配列同一性を有する１つまたは複数のペプチド配列を含む、請求項２４に記載のポリペプチドを含み、少なくとも１つの希釈剤、担体、結合剤、溶媒または賦形剤をさらに含む医薬組成物。
【請求項２６】
配列番号１〜４１）の配列の中から選択される配列と少なくとも７６％、より好ましくは少なくとも８２％、好ましくは少なくとも８８％、より好ましくは少なくとも９４％、好ましくは１００％の配列同一性を有するペプチド配列を含む、請求項２４または２５に記載のポリペプチドを含み、少なくとも１つの希釈剤、担体、結合剤、溶媒または賦形剤をさらに含む医薬組成物。
【請求項２７】
ＬＳＩＬＬＮＥＥ（配列番号２６）、ＬＱＮＲＲＧＬＧＬＳＩＬＬＮＥＥＣ（配列番号１）、ＬＱＮＲＲＧＬＧＬＳＩＬＬＮＥＥＣＧＰＧＰＧＰ（配列番号１９）、ＧＬＳＩＬＬＮＥＥＣ（配列番号２５）、ＬＱＮＲＲＧＬＧＬＳＩＬＬＮＥＥＣＥＥＧＰＧＰＧＰ（配列番号２７）、ＬＱＮＲＲＧＬＤＬＳＩＬＬＮＥＥＣＧＰＧＰＧＰ（配列番号２８）、ＧＬＳＩＬＬＮＥＥＣＧＰＧＰＧＰ（配列番号２９）およびＬＱＮＲＲＧＬＬＱＮＲＲＧＬＧＬＳＩＬＬＮＥＥ（配列番号３０）の中から選択される配列と少なくとも７６％、より好ましくは少なくとも８２％、好ましくは少なくとも８８％、より好ましくは少なくとも９４％、好ましくは１００％の配列同一性を有するポリペプチドの中から選択されるポリペプチドを含み、少なくとも１つの希釈剤、担体、結合剤、溶媒または賦形剤をさらに含む、請求項２４に記載の医薬組成物。
【請求項２８】
ＬＳＩＬＬＮＥＥ（配列番号２６）、ＬＱＮＲＲＧＬＧＬＳＩＬＬＮＥＥＣ（配列番号１）、ＬＱＮＲＲＧＬＧＬＳＩＬＬＮＥＥＣＧＰＧＰＧＰ（配列番号１９）、ＧＬＳＩＬＬＮＥＥＣ（配列番号２５）、ＬＱＮＲＲＧＬＧＬＳＩＬＬＮＥＥＣＥＥＧＰＧＰＧＰ（配列番号２７）、ＬＱＮＲＲＧＬＤＬＳＩＬＬＮＥＥＣＧＰＧＰＧＰ（配列番号２８）、ＧＬＳＩＬＬＮＥＥＣＧＰＧＰＧＰ（配列番号２９）およびＬＱＮＲＲＧＬＬＱＮＲＲＧＬＧＬＳＩＬＬＮＥＥ（配列番号３０）の中から選択される、請求項２４に記載のポリペプチドを含み、少なくとも１つの希釈剤、担体、結合剤、溶媒または賦形剤をさらに含む医薬組成物。
【請求項２９】
前記請求項のいずれかに記載の少なくとも１つのポリペプチド、タンパク質、核酸、発現ベクター、組換え細胞または医薬組成物の医学的使用。
【請求項３０】
免疫抑制または免疫調節のための、前記請求項のいずれかに記載の少なくとも１つのポリペプチド、タンパク質、核酸、発現ベクター、組換え細胞または医薬組成物の使用。
【請求項３１】
疾患の外科手術、予防、治療、診断方法、処置および／または改善における使用のための、前記請求項のいずれかに記載のポリペプチド、タンパク質、核酸、発現ベクター、組換え細胞または医薬組成物。
【請求項３２】
自己免疫疾患の処置、改善または予防のための、前記請求項のいずれかに記載のポリペプチド、タンパク質、核酸、発現ベクター、組換え細胞または医薬組成物。
【請求項３３】
自己免疫疾患が、ＳＬＥ（全身性エリテマトーデス）、または関節炎、例えば関節リウマチ、脊椎関節炎、または多発性硬化症（ＭＳ）である、請求項３２に記載のポリペプチド、タンパク質、核酸、発現ベクター、組換え細胞または医薬組成物。
【請求項３４】
炎症症状、または急性もしくは慢性炎症などの炎症に関連する障害の処置、改善または予防のための、前記請求項のいずれかに記載のポリペプチド、タンパク質、核酸、発現ベクター、組換え細胞または医薬組成物。
【請求項３５】
医薬としての使用のための、前記請求項のいずれかに記載のポリペプチド、タンパク質、核酸、発現ベクター、組換え細胞または医薬組成物。
【請求項３６】
敗血症の予防または処置を含む、前記請求項のいずれかに記載の使用のためのポリペプチド、タンパク質、核酸、発現ベクター、組換え細胞または医薬組成物。
【請求項３７】
脊椎関節炎の予防または処置を含む、前記請求項のいずれかに記載の使用のためのポリペプチド、タンパク質、核酸、発現ベクター、組換え細胞または医薬組成物。
【請求項３８】
喘息および／またはアレルギーの予防または処置を含む、前記請求項のいずれかに記載の使用のためのポリペプチド、タンパク質、核酸、発現ベクター、組換え細胞または医薬組成物。
【請求項３９】
アジュバントとして、例えばワクチンにおいて使用するための、前記請求項のいずれかに記載のポリペプチド、タンパク質、核酸、発現ベクター、組換え細胞または医薬組成物。
【請求項４０】
前記請求項のいずれかに記載の少なくとも１つのポリペプチド、タンパク質、核酸、発現ベクター、組換え細胞または医薬組成物の予防または治療有効量を１回または複数回または数回の投与によりそれを必要とする対象に投与することにより、自己免疫疾患および／または炎症症状を予防的にまたは治療的に処置する方法。
【請求項４１】
注射、吸入、局所、経皮、経口、経鼻、膣または肛門デリバリーの中から選択される投与経路による症状または疾患の予防または処置のための、前記請求項のいずれかに記載のポリペプチド、タンパク質、核酸、発現ベクター、組換え細胞または医薬組成物の使用。
【請求項４２】
注射の方式が、静脈内（ＩＶ）、腹腔内（ＩＰ）、皮下（ＳＣ）および（筋肉内）ＩＭの中から選択される、請求項４１に記載の使用。
【請求項４３】
炎症などの障害の患部への直接注射による疾患の処置のための、請求項４２に記載の使用。
【請求項４４】
関節炎の処置のための、前記請求項のいずれかに記載のポリペプチド、タンパク質、核酸、発現ベクター、組換え細胞または医薬組成物の使用であって、前記組成物が炎症部位に直接注射される、使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ヒト内在性レトロウイルスに関連するタンパク質およびそのようなタンパク質に由来するペプチドならび治療への応用のためのそれらの使用に関する。詳細には、本発明は、ヒト内在性レトロウイルスに関する免疫調節活性および免疫抑制ドメイン（ＩＳＤ）、ならびに免疫調節のためのおよび炎症の軽減のためのそれらの使用に関する。さらに、本発明は、自己免疫疾患および炎症性腸疾患の処置のための多機能薬物のクラスに関する。加えて、本発明は、内在性レトロウイルスに由来する免疫調節性タンパク質およびペプチド（タンパク質およびペプチドを本明細書では以降、一般にポリペプチドと呼ぶ）を含む医薬組成物に関する。
【０００２】
加えて、本発明は、そのようなポリペプチドとカップリングしている材料、表面および／または粒子に関する。本発明は、さらに、前記タンパク質、ペプチドおよび医薬組成物を生成する方法、ならびにそれらの利用に関する。
【背景技術】
【０００３】
レトロウイルスは、ＲＮＡゲノムを含有することを特徴とするウイルス群であり、感染すると該ＲＮＡゲノムがＤＮＡコピーに逆転写され、その後、それが宿主細胞に組み込まれる。この結果として、そのような感染細胞のすべての子孫は、ウイルスゲノムを含有することになる（プロウイルスと呼ばれる）。すべてのレトロウイルスは、以下の３つの遺伝子／コード配列を含む：ｇａｇ、これは、ウイルスの構造タンパク質を含有する；ｐｏｌ、これは、逆転写酵素をはじめとする酵素を含有する；および最後に、ｎｅｖ、これは、宿主細胞へのウイルス侵入、および多くのレトロウイルスにより明示される免疫抑制活性に主に関与する、ウイルス表面糖タンパク質をコードする。本発明は、ｅｎｖ遺伝子、およびそのタンパク質産物であるＥＮＶタンパク質、その誘導体、これに由来するペプチド、ならびにこれらの化合物または実体（ｅｎｔｉｔｉｅｓ）のいずれかの使用に、主に関する。
【０００４】
ヒト内在性レトロウイルス（ＨＥＲＶ）は、ヒトのゲノム内に恒久的に固定されている古代レトロウイルス組込み物である。ＨＥＲＶエレメントの大部分は、蓄積された非常に多くの突然変異および欠失を有するが、ＨＥＲＶの大部分のウイルス成分に関して機能性タンパク質の存在が実証されており、そのような機能性タンパク質にはウイルスプロテアーゼおよびエンベロープ表面タンパク質が含まれる（Schmitt, Reichrath, Roesch, Meese, & Mayer, 2013；Tonjes et al., 1996; Willer et al., 1997）。一部の機能性ＨＥＲＶエンベロープオープンリーディングフレーム（ＯＲＦ）を維持するようにおよびそれらの発現を特定の組織に限定するように進化により明らかに加えられる選択圧は、ＨＥＲＶ由来のタンパク質が有意な生理的可能性を示すように発達した可能性があることを示唆する。例えば、ＨＥＲＶ由来のエンベロープ糖タンパク質は、胎盤組織において豊富に発現され（Boyd, Bax, Bax, Bloxam, & Weiss, 1993）、その下にある細胞栄養芽層細胞層を融合することにより合胞体栄養細胞分化に関与することが提唱されている（Venables, Brookes, Griffiths, Weiss, & Boyd, 1995）。
【０００５】
レトロウイルス感染症は、一般に、有意な免疫抑制を引き起こし得る。特に、一部のヒト内在性レトロウイルスは免疫抑制活性を示し、例えば、免疫正常マウスに移植された腫瘍細胞の免疫依存性排除を、エンベロープ発現ベクターによるこれらの腫瘍細胞への形質導入後、弱めることができる（Mangeney & Heidmann, 1998）。
【０００６】
ＨＥＲＶ−Ｈファミリーは、ヒト内在性レトロウイルスの中で最も存在量の多い群の１つであり、一倍体ゲノム当りのエレメント数は、おおよそ１０００である。ＨＥＲＶ−Ｈプロウイルスの大部分は、それらの有意なオープンリーディングフレーム活性を失わせる欠失および／または突然変異を含む。しかし、小サブセットは実質的に無傷であり、完全長ｇａｇ、ｐｏｌおよびｅｎｖドメインを有する。おおよそ１００のＨＥＲＶ−Ｈ由来エンベロープ遺伝子の中で、ＨＥＲＶ−Ｈ  Ｅｎｖ５９（本明細書では移行「Ｅｎｖ５９」と呼ぶ）を含む３つのみが、免疫抑制ドメイン（本明細書では以降ＩＳＵドメインまたは単にＩＳＤとも呼ぶ）を包含する大きいタンパク質をコードする能力を有する。ＩＳＤまたはＩＳＵ配列に関する以前の知識は、主として、外在性マウスガンマレトロウイルスに由来する。この場合、ＩＳＵ配列は、エンベロープタンパク質のＣ末端付近に位置する。
【０００７】
免疫抑制ドメインはウイルス糖タンパク質の小セグメントを構成し、レトロウイルスによる免疫抑制の主要メディエーターである。レトロウイルスエンベロープタンパク質が有意な免疫抑制活性を有することは周知である。ガンマレトロウイルスの場合、この活性は、いくつかの種のレトロウイルス（ネズミ、ネコおよびヒトレトロウイルスを含み、ヒトレトロウイルスにはヒトＴ細胞白血病ウイルスが含まれる）間で保存されるレトロウイルス膜貫通（ＴＭ）タンパク質内の明確に定義された構造（いわゆるＩＳＤ）にある。
【０００８】
自己免疫および自己免疫疾患
自己免疫は、生物の、それ自体の健常細胞および組織に対する、免疫応答システムである。低レベルの自己免疫は身体維持（ｂｏｄｙ  ｍａｉｎｔａｎｅａｎｃｅ）に役立つが、高レベルの自己免疫は疾患の原因になり得る。そのような異常免疫応答の結果として生じるあらゆる疾患が自己免疫疾患と呼ばれる。自己免疫疾患には、多種多様な異なる作用がある。しかし、以下の３つの特徴的な病理学的作用のうちの１つの発生により、疾患は自己免疫疾患と定義される：組織の損傷もしくは破壊、臓器成長変化または臓器機能変化。
【０００９】
自己免疫によって引き起こされる疾病は８０種より多くあり、西欧諸国人口のおおよそ２〜５％が自己免疫疾患の患者である。したがって、前記集団の実質的少数派がこれらの疾患に罹患しており、これらの疾患は多くの場合、慢性、消耗性、および致死性である。女性は、男性より多く罹患するように見受けられ、自己免疫疾患は、米国の６５歳以下の全年齢群における女性間の主な死亡原因の１つと推定される。環境事象が、身体の組織を損傷させ得る放射線またはある一定の薬物への曝露などの、自己免疫疾患の一部の原因を誘発することもある。感染が、一部の自己免疫疾患、例えば、抗ヒストン抗体の産生増加を引き起こす特発性障害のより軽度の型と考えられるループスの誘因になることもある。
【００１０】
自己免疫疾患の処置は、典型的には、免疫応答を減少させる免疫抑制剤治療を含む。新規処置は、サイトカイン遮断（サイトカインシグナル伝達経路の治療的阻害）、エフェクターＴ細胞およびＢ細胞の除去（例えば、抗ＣＤ２０療法は、煽動するＢ細胞の除去に有効であり得る）ならびに静脈内免疫グロブリンを含み、前記静脈内免疫グロブリンは、一部の抗体媒介自己免疫疾患の処置にも役立っている。
【００１１】
多数の自己免疫疾患が認知されている。ゲノムワイド関連スキャンにより、自己免疫疾患の根底にある病態生理への新たな洞察を得ることができるようになった。一例として、この技術によって、自己免疫疾患間での顕著な遺伝子共有度が同定されている。
【００１２】
関節炎
関節炎は、１つまたは複数の関節の炎症を伴う関節障害の１形態である。
【００１３】
１００を超える異なる形態の関節炎がある。最もよく見られる形態である変形性関節症（変性関節疾患）は、関節の外傷、関節の炎症、または加齢の結果である。他の関節炎形態は、関節リウマチ、乾癬性関節炎、および関連自己免疫疾患である。敗血症性関節炎は、関節感染によって引き起こされる。
【００１４】
関節炎の共通因子は、関節痛である。疼痛は多くの場合持続性であり、罹患している関節に局在し得る。関節炎からの疼痛は、関節周囲で起こる炎症、疾患からの関節の損傷、日常的な関節の摩耗および裂傷、こわばった、痛みがある関節に対する強引な運動によって引き起こされる筋挫傷、ならびに疲労に起因する。
【００１５】
関節リウマチ
関節リウマチ（ＲＡ）は、主として関節を冒す長期間持続性の自己免疫疾患である。ＲＡは、熱をもった、腫脹した、および痛みがある関節を概してもたらす。疼痛およびこわばりは、休息後に悪化することが多い。最も一般的には、手首および手が冒され、典型的に、身体の両側の同じ関節が冒される。身体の他の部分もこの疾患に冒されることがある。これは、低赤血球数、肺周囲の炎症、および心臓周囲の炎症をもたらすことがある。発熱および活力低下が存在することもある。多くの場合、症状は、数週間から数ヶ月かけて徐々に出てくる。
【００１６】
関節リウマチの原因は明らかでないが、遺伝的因子と環境因子の組合せに関わると考えられている。根底にある機序は、関節を攻撃する身体の免疫系に関わる。これが、関節包の炎症および肥厚をもたらす。それは、下にある骨および軟骨も冒す。診断は、主として、人物の身体的兆候および症状に基づいて下されるが、Ｘ線および臨床検査により同様の症状を有する他の疾患の診断または除外が裏付けられることもある。同様に症状が見つかることがある他の疾患としては、とりわけ、全身性エリテマトーデス、乾癬性関節炎および線維筋痛症が挙げられる。
【００１７】
処置の目標は、疼痛および炎症を減少させること、ならびに人の機能全般を向上させることである。これは、休息と運動のバランスを取ること、副木および固定具の使用、または補助器具の使用により補うことができる。症状に効くように鎮痛薬、ステロイド、およびＮＳＡＩＤが使用されることが多い。疾患修飾性抗リウマチ薬（ＤＮＡＲＤ）と呼ばれる医薬群が、疾患の進行の緩徐化を試みるために使用されることもある。それらには、医薬ヒドロキシクロロキンおよびメトトレキサートが含まれる。生物学的ＤＭＡＲＤは、疾患が他の処置に応答しない場合に使用され得る。しかし、それらは、より高い有害事象率を有し得る。関節を修復するための、置換するための、または癒着させるための外科手術は、ある一定の状況では役立ち得る。大部分の代替医療処置は、証拠によって裏付けられていない。
【００１８】
先進国では成人の０．５〜１％がＲＡ患者であり、１００，０００人当り５〜５０人が毎年新たにこの症状を発症する。発症は、中年期が最も高頻度であり、女性は男性の２．５倍、罹患頻度が高い。２０１３年には、その結果としての死亡が、１９９０年における２８，０００件から増加して３８，０００件になった。関節リウマチという用語は、水が溜まっている、炎症している関節についてのギリシャ語に基づく。
【００１９】
関節リウマチにおける（またあるいは他の炎症性関節炎における）炎症性滑膜炎は、炎症誘発性サイトカイン（ｐｒｏ−ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ  ｃｙｔｏｋｉｎｅｓ）の過剰生産に伴う、または自然の抗炎症機序の不備からの、サイトカインネットワークの不均衡の結果であるように見える。ＲＡの場合、いくつかのサイトカイン、例えば、インターロイキン（ＩＬ）−１、ＩＬ−６、ＩＬ−８、ＩＬ−１２、ＩＬ−１７、腫瘍壊死因子−α（ＴＮＦ−α）、インターフェロン−γ（ＩＦＮ−γ）および顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ）が、関節の炎症および破壊のほぼすべての態様に関与する。
【００２０】
インターロイキン６（ＩＬ−６）は、関節リウマチ（ＲＡ）の病態生理において極めて重要な役割を果す。ＩＬ−６は、ＲＡ患者の滑液および血清において豊富に見出され、そのレベルは、疾患活動性および関節破壊と相関する。ＩＬ−６は、好中球遊走、破骨細胞成熟および血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）刺激パンヌス増殖を刺激することにより、滑膜炎および関節破壊を促進し得る。ＩＬ−６はまた、急性期反応［Ｃ反応性タンパク質（ＣＲＰ）を含む］、ヘプシジン（ｈｅｃｉｐｉｄｉｎ）産生による貧血、視床下部・下垂体・副腎（ＨＰＡ）軸（ｈｙｐｏｔｈａｌａｍｉｃ−ｐｉｔｕｉｔａｒｙ−ａｄｒｅｎａｌ  （ＨＰＡ）  ａｘｉｓ）による疲労、および破骨細胞に対するその作用からの骨粗鬆症の誘発を含む、ＲＡの全身症状発現の多くを媒介し得る。加えて、ＩＬ−６は、Ｂ細胞成熟およびＴＨ−１７分化による自己免疫過程の誘導および維持の一因になり得る。上記のすべてにより、ＩＬ−６遮断は、ＲＡ処置の望ましい治療選択肢である。動物実験成功後、ヒト化抗インターロイキン−６受容体（抗ＩＬ−６Ｒ）モノクローナル抗体であるトシリズマブ（ＴＣＺ）は治験に入り、ＲＡに関するいくつかの大規模第ＩＩＩ相治験において、疾患活動性の迅速かつ持続的改善、Ｘ線写真の関節損傷の低減および身体機能の向上があり、有効な処置であることが証明されている（Srirangan & Choy, 2010）。
【００２１】
全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）
全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）は、Ｂ細胞活性亢進、Ｔ細胞異常活性化、ならびにアポトーシス細胞および免疫複合体の排除の欠如を特徴とする、全身自己免疫の慢性炎症性疾患である。病因は、まだはっきりとは分からないが、ＳＬＥの際の無数の自然および適応免疫系異常がこの疾患の主要原因として確認されている。
【００２２】
ＩＬ−６とループスの進行との関連性がＳＬＥのいくつかのマウスモデルについて発表されている。加えて、いくつかの研究からのデータは、ＩＬ−６が、Ｂ細胞活性亢進およびヒトＳＬＥの免疫病理において重要な役割を果すこと、ならびに組織損傷の媒介に直接関与し得ることを示唆している。すべての研究ではないが一部の研究において、ループス患者には疾患活動性または抗ＤＮＡ（抗核抗体）レベルと相関する血清ＩＬ−６レベル上昇があった（Peterson, Robertson, & Emlen, 1996）。ＳＬＥの発病におけるＩＬ−６の重要な役割を裏付ける最も説得力がある証拠が、ＮＺＢ／ＷＦ１マウスにおけるＩＬ−６受容体遮断の有益効果およびＩＬ−６の憎悪作用によって示された（Mihara, Takagi, Takeda, & Ohsugi, 1998）。
【００２３】
炎症性腸疾患
炎症性腸疾患（ＩＢＤ）は、結腸および小腸の一連の炎症症状である。クローン病および潰瘍性大腸炎は、炎症性腸疾患の主要な型である。クローン病は、小腸および大腸を冒すばかりでなく、口、食道、胃および肛門も冒すことがあるが、潰瘍性大腸炎は、主として結腸および直腸を冒すことに留意することが重要である。
【００２４】
サイトカインは、腸免疫系の調節において中心的役割を果す。サイトカインは、リンパ球（特に、Ｔｈ１およびＴｈ２表現型のＴ細胞）、単球、腸マクロファージ、顆粒球、上皮細胞、内皮細胞ならびに線維芽細胞によって産生される。サイトカインは、炎症誘発機能［インターロイキン−１（ＩＬ−１）、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）、ＩＬ−６、ＩＬ−８、ＩＬ−１２］または抗炎症機能［インターロイキン−１受容体アンタゴニスト（ＩＬ−１ｒａ）、ＩＬ−４、ＩＬ−１０、ＩＬ−１１、トランスフォーミング増殖因子ベータ（ＴＧＦベータ）］を有する。多くの炎症誘発性および抗炎症性サイトカインの粘膜および全身濃度は、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）の際に上昇する。炎症誘発性サイトカインと抗炎症性サイトカインとの不均衡が、クローン病、潰瘍性大腸炎、憩質炎、および炎症性大腸炎（ａｎｄｉｎｆｅｃｔｉｏｕｓ  ｃｏｌｉｔｉｓ）の患者の炎症した粘膜におけるＩＬ−１／ＩＬ−１ｒａ比について見出された。さらに、炎症誘発性サイトカインの阻害および抗炎症性サイトカインの補充（ｕｐｐｌｅｍｅｎｔａｔｉｏｎｓ）は、動物モデル、例えば、デキストラン硫酸大腸炎（ＤＳＳ）モデル、トリニトロベンゼン硫酸（ＴＮＢＳ）モデル、またはＩＬ−１０ノックアウトマウスの遺伝子改変モデルにおいて炎症を軽減した。これらの発見に基づき、サイトカイン処置の理論的根拠が定義された。ＴＮＦアルファに対する中和モノクローナル抗体（ｃＡ２）または抗炎症性サイトカインＩＬ−１０を使用する最初の治験は、有望な結果を示した。しかし、多くの疑問に答えなければならず、サイトカインをＩＢＤの標準治療と見なすことができるのはその後である（Rogler & Andus, 1998）。
【００２５】
潰瘍性大腸炎およびクローン病は、ＧＩ管の慢性炎症性障害である。これらの障害は、通常、臨床的および病理学的基準に基づいて区別することができるが、自然な経過および治療への応答の点で類似性がある。
【００２６】
炎症誘発性サイトカインＩＬ−６が、ＩＢＤの主な特徴である無制御の腸炎症過程に極めて重要な役割を果すという証拠は、増え続けている。腸マクロファージおよびＣＤ４＋Ｔ細胞によるＩＬ−６およびその可溶性受容体（ｓＩＬ−６Ｒ）の産生増加がある。ＣＤ４＋Ｔ細胞の膜上でｇｐ１３０と相互作用（トランスシグナル伝達）するＩＬ−６−ｓＩＬ−６Ｒ複合体の形成増加は、ＳＴＡＴ３の発現および核移行増加につながり、これに起因してＢｃｌ−ｘｌなどの抗アポトーシス遺伝子が誘導される。これは、固有層Ｔ細胞のアポトーシスに対する抵抗性増強につながる。その後のＴ細胞発現は、慢性腸炎症の永続化の一因となる。ＩＬ−６依存性炎症カスケードの主な病因的役割に関するこの理解は、この疾患の処置の新たな治療戦略の開発につながり得る。
【００２７】
敗血症
敗血症は、感染により誘発される全身炎症症状（全身性炎症反応症候群またはＳＩＲＳと呼ばれる）を特徴とする、死に至る可能性がある医学的症状である。身体は、微生物に対する免疫系によるこの炎症反応を血液、尿、肺、皮膚または他の組織において発現し得る。敗血症（ｓｅｐｓｉｓ）の一般用語は、血液中毒であり、これは敗血症（ｓｅｐｔｉｃａｅｍｉａ）を記述するためにも使用される。重症敗血症は、全身性炎症反応、感染、および臓器機能不全の存在である。
【００２８】
重症敗血症は、集中治療室において静脈内輸液および抗生物質で通常は処置される。補液が血圧を維持するのに十分でなかった場合、特定の昇圧薬が使用され得る。人工呼吸器および透析が、それぞれ肺および腎臓の機能を支援するために必要とされることもある。治療を誘導するために、中心静脈カテーテルおよび動脈カテーテルが留置されることもあり、他の血行動態変数［例えば、心拍出量、混合静脈血酸素飽和度、または１回拍出量（ｓｔｒｏｋｅ  ｖｏｌｕｍｅ）変化］の測定が用いられることもある。敗血症患者には深部静脈血栓症、ストレス潰瘍および褥瘡の予防対策が必要であるが、他の条件によりこれが予防される場合はその限りでない。一部の患者は、インスリンでの（ストレス性高血糖を対象とする）血糖値の厳格な管理による恩恵を受けることもあるだろう。コルチコステロイド（低用量または別様）の使用は、議論の余地がある。活性型ドロトレコギンアルファ（組換えプロテインＣ）は役立つことが見出されず、最近販売が中止された。
【００２９】
誘発する感染症に関係する症状に加えて、敗血症は、全身の至る所に存在する急性炎症の存在を特徴とし、したがって、発熱および白血球数増加（白血球増多症）または低い白血球数（白血球減少症）および平均より低い体温、ならびに嘔吐を伴うことが多い。敗血症の最新の概念は、感染に対する宿主の免疫応答が、血液動態の帰結および臓器の損傷をもたらす、敗血症の殆どの症状の原因であるというものである。この宿主応答は、全身性炎症反応症候群（ＳＩＲＳ）と名付けられ、心拍数上昇（９０より上の毎分拍動数）、高い呼吸数（２０より上の毎分呼吸数または３２未満の血中二酸化炭素分圧）、異常な白血球数［１２，０００超、４，０００未満、または桿状核球（ｂａｎｄ  ｆｏｒｍ）１０％超］、および体温上昇または低下、すなわち、３６℃（９６．８°Ｆ）より低いまたは３８℃（１００．４°Ｆ）より高い体温を特徴とする。
【００３０】
この免疫学的応答は、急性期タンパク質の広範な活性化を引き起こし、これは補体系および凝固経路に影響を与え、次いでそれらが脈管構造の損傷はもちろん臓器の損傷も引き起こす。次いで、様々な神経内分泌対抗制御系も活性化され、その結果、問題が複雑になることが多い。即座にかつ積極的に処置したとしても、これは多臓器機能不全症候群、そして最終的に死に進行し得る。
【００３１】
炎症誘発性サイトカインは、敗血症により引き起こされる合併症の主な原因である。
【００３２】
１つの研究では、重症患者の（ｏｆｃｒｉｔｉｃａｌｌｙ  ｉｌｌ  ｐａｔｉｅｎｔｓ）レジスチン、活性ＰＡＩ−１、ＭＣＰ−１、ＩＬ−１アルファ、ＩＬ−６、ＩＬ−８、ＩＬ−１０、およびＴＮＦ−アルファの血漿レベルは、６０名の健常供血者と比較して有意に高かった。このことから、これらのサイトカインは免疫抑制ペプチドによるダウンレギュレーションの標的となっている（Hillenbrand et al., 2010）。
【００３３】
第２の研究では、前向き観察研究が、重症敗血症の重症患者の大多数における３つの主要炎症誘発性サイトカインとしての腫瘍壊死因子アルファ（ＴＮＦ−α）、インターロイキン（ＩＬ）−１βおよびＩＬ−６の予測的役割を決定するために使用された。
【００３４】
３つの測定されたサイトカインの中で、ＴＮＦ−αおよびＩＬ−６の一連のレベルは、生存者と非生存者の間で有意差を示すことが見出された。ＩＬ−６には、この研究期間中、アウトカムおよびスコア化システムと良好な相関関係があった。この研究の結果は、ＩＬ−６が、重症敗血症患者の死亡率予測および臨床評価に有用なサイトカインであることを示唆している（Hamishehkar et al., 2010）。
【００３５】
自己免疫疾患には、以下のものも含まれる：急性散在性脳脊髄炎（ＡＤＥＭ）、アジソン病、無ガンマグロブリン血症、円形脱毛症、筋萎縮性側索硬化症、ＡＮＣＡ血管炎、強直性脊椎炎、抗リン脂質抗体症候群（Ａｎｔｉｐｈｏｓｐｈｏｌｉｐｉｄ  ｓｙｎｄｒｏｍｅ）、抗シンセターゼ抗体症候群（Ａｎｔｉｓｙｎｔｈｅｔａｓｅ  ｓｙｎｄｒｏｍｅ）、動脈硬化症、アトピー性アレルギー、アトピー性皮膚炎、自己免疫性再生不良性貧血、自己免疫性心筋症、自己免疫性腸疾患、自己免疫性溶血性貧血、自己免疫性肝炎、自己免疫性内耳疾患、自己免疫性リンパ増殖症候群、自己免疫性末梢神経障害、自己免疫性膵炎、自己免疫性多分泌症候群、自己免疫性プロゲステロン皮膚炎、自己免疫性血小板減少性紫斑病、自己免疫性蕁麻疹、自己免疫性ぶどう膜炎、バロ病／バロ同心円硬化症、ベーチェット病、ベルジェ病、ビッカースタッフ脳炎、ブラウ症候群、水疱性類天疱瘡、がん、キャッスルマン病、セリアック病、シャガス病、慢性炎症性脱髄性多発神経炎、慢性再発性多発性骨髄炎、慢性閉塞性肺疾患、チャーグ・ストラウス症候群、瘢痕性類天疱瘡、コーガン症候群、寒冷凝集素症、補体成分２欠損症、接触皮膚炎、頭部動脈炎、ＣＲＥＳＴ症候群、クローン病、クッシング症候群、皮膚白血球破壊性血管炎（Ｃｕｔａｎｅｏｕｓ  ｌｅｕｋｏｃｙｔｏｃｌａｓｔｉｃａｎｇｉｉｔｉｓ）、デゴス病、ダーカム病、疱疹状皮膚炎、皮膚筋炎、１型糖尿病、汎発性皮膚全身性強皮症、ドレスラー症候群、薬物誘発性ループス、円板エリテマトーデス、湿疹、子宮内膜症、腱付着物炎関連関節炎、好酸球性筋膜炎、好酸球性胃腸炎、後天性表皮水疱症、結節性紅斑、胎児赤芽球症、本態性混合型クリオグロブリン血症、エバンス症候群、進行性骨化性線維異形成症（Ｆｉｂｒｏｄｙｓｐｌａｓｉａｏｓｓｉｆｉｃａｎｓｐｒｏｇｒｅｓｓｉｖａ）、線維化性肺胞炎（Ｆｉｂｒｏｓｉｎｇａｌｖｅｏｌｉｔｉｓ）、胃炎、胃腸類天疱瘡、糸球体腎炎、グッドパスチャー症候群、グレーブス病、ギラン・バレー症候群（ＧＢＳ）、橋本脳症、橋本甲状腺炎、ヘノッホ・シェーンライン紫斑病、妊娠性疱疹、肝炎、化膿性汗腺炎、ヒューズ・ストーヴィン症候群、低ガンマグロブリン血症、特発性炎症細胞脱髄疾患、特発性肺線維症、特発性血小板減少性紫斑病、ＩｇＡ腎症、封入体筋炎、慢性炎症性脱髄性多発神経炎、間質性膀胱炎、若年性特発性関節炎、川崎病、ランバート・イートン筋無力症候群、白血球破壊性血管炎（Ｌｅｕｋｏｃｙｔｏｃｌａｓｔｉｃ  ｖａｓｃｕｌｉｔｉｓ）、扁平苔癬、硬化性苔癬、線状ＩｇＡ病（ＬＡＤ）、ルー・ゲーリック病、ルポイド肝炎、エリテマトーデス、マジード症候群、メニエール病、顕微鏡的多発血管炎、ミラー・フィッシャー症候群、混合型結合組織病、モルフェア、ムッハ・ハーベルマン病、多発性硬化症、重症筋無力症、筋炎、ナルコレプシー、視神経脊髄炎（Ｎｅｕｒｏｍｙｅｌｉｔｉｓｏｐｔｉｃａ）、神経性筋強直症、非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）、眼瘢痕性類天疱瘡（Ｏｃｃｕｌａｒｃｉｃａｔｒｉｃｉａｌ  ｐｅｍｐｈｉｇｏｉｄ）、眼球クローヌス・ミオクローヌス症候群、オード甲状腺炎（Ｏｒｄ’ｓ  ｔｈｙｒｏｉｄｉｔｉｓ）、回帰性リウマチ、ＰＡＮＤＡＳ［小児自己免疫性溶連菌関連神性経精神障害（ｐｅｄｉａｔｒｉｃ  ａｕｔｏｉｍｍｕｎｅ  ｎｅｕｒｏｐｓｙｃｈｉａｔｒｉｃ  ｄｉｓｏｒｄｅｒｓ  ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  ｗｉｔｈ  ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ）］、腫瘍随伴性小脳変性症、発作性夜間ヘモグロビン尿症（ＰＮＨ）、パリー・ロンベルク症候群、パーソネージ・ターナー症候群、周辺部ぶどう膜炎、尋常性天疱瘡、悪性貧血、静脈周囲性脳脊髄炎、ＰＯＥＭＳ症候群、結節性多発動脈炎（Ｐｏｌｙａｒｔｅｒｉｔｉｓｎｏｄｏｓａ）、リウマチ性多発筋痛症、多発性筋炎、原発性胆汁性肝硬変、原発性硬化性胆管炎、進行性炎症性ニューロパチー、乾癬、乾癬性関節炎、壊疽性膿皮症、赤芽球ろう、ラスムッセン脳炎、レイノー現象、再発性多発軟骨炎、ライター症候群、下肢静止不能症候群、後腹膜線維症、関節リウマチ、リウマチ熱、サルコイドーシス、統合失調症、シュミット症候群、シュニッツラー症候群、強膜炎、強皮症、血清病、シェーグレン症候群、脊椎関節症、スチル病、全身硬直症候群、亜急性細菌性心内膜炎（ＳＢＥ）、スザック症候群、スイート症候群、シデナム舞踏病、交感神経性眼炎、全身性エリテマトーデス、高安動脈炎、側頭動脈炎、血小板減少症、トロサ・ハント症候群、横断性脊髄炎、潰瘍性大腸炎、未分化結合組織病、未分化脊椎関節症、じん麻疹様血管炎、血管炎、白斑、およびウェゲナー肉芽腫症。
【図面の簡単な説明】
【００３６】
【図１】原文に記載なし。
【発明を実施するための形態】
【００３７】
本発明の発明者らは、ＩＬ−６およびＴＮＦ−αなどの炎症誘発性サイトカインを本発明のペプチドおよびタンパク質により抑制または活性化することができることを証明することができた。本発明のペプチドおよびタンパク質は、自己免疫疾患に関連する症状の予防もしくは処置のための活性成分、または免疫療法のための、例えば、ワクチンアジュバントとして使用されるときの活性成分を提供することができる。
【００３８】
ある態様によれば、本発明は、配列ＬＳＩＬＬＮＥＥ（配列番号２６）と少なくとも６２％、より好ましくは少なくとも７５％、好ましくは少なくとも８７％、より好ましくは１００％の配列同一性を有する配列からなるかまたはそれを含むポリペプチドに関する。
【００３９】
別の態様によれば、本発明は、配列ＬＳＩＬＬＮＥＥ（配列番号２６）と少なくとも７０％の配列同一性または相同性を有するペプチド配列を含むポリペプチド、ならびにその誘導体、その断片、その複合体；単量体、二量体、三量体、多量体、らせん構造および球状構造の形態の、その任意の三次構造；ならびに架橋体；ならびに物理化学的形態および特性ならびにバイオアベイラビリティを増加させるような、その任意の化学修飾体に関する。
【００４０】
本発明のポリペプチドは、例えば、単一ペプチド鎖、凝集体、複合体および／もしくはナノ粒子の形態であってもよく、またそれらの一部であってもよい。
【００４１】
ある態様によれば、本発明は、本発明によるポリペプチドを含むタンパク質に関する。
【００４２】
ある態様によれば、本発明は、本発明によるポリペプチドまたはタンパク質をコードする、単離された核酸に関する。
【００４３】
ある態様によれば、本発明は、本発明の核酸および該核酸の発現に必要なエレメントを含む発現ベクターに関する。
【００４４】
ある態様によれば、本発明は、本発明による核酸および／または本発明による発現ベクターを含む組換え細胞に関する。
【００４５】
ある態様によれば、本発明は、本発明による少なくとも１つのポリペプチド、タンパク質、核酸、発現ベクターまたは組換え細胞を含み、少なくとも１つの希釈剤、担体、結合剤、溶媒または賦形剤をさらに含む医薬組成物に関する。
【００４６】
ある態様によれば、本発明は、医薬組成物の調製のための方法であって、
ａ．本発明による１つまたは複数のポリペプチド、タンパク質、核酸、発現ベクターまたは組換え細胞を用意し、所望により、前記１つまたは複数のポリペプチドを架橋させる工程；
ｂ．所望により、希釈剤、担体、結合剤、溶媒または賦形剤を用意する工程；
ｃ．物質を用意する工程；
ｄ．用意した１つまたは複数のペプチドを、所望による工程ｂ．の任意の担体および工程ｄ．の物質と混合して、医薬組成物を得る工程
を含む方法に関する。
【００４７】
ある態様によれば、本発明は、本発明に従って得ることができる医薬組成物に関する。
【００４８】
ある態様によれば、本発明は、本発明によるポリペプチド、タンパク質、核酸、発現ベクター、組換え細胞または医薬組成物を含む、生体材料に関する。
【００４９】
ある態様によれば、本発明は、本発明による少なくとも１つのポリペプチド、タンパク質、核酸、発現ベクター、組換え細胞、医薬組成物または生体材料の医学的使用に関する。
【００５０】
ある態様によれば、本発明は、抗炎症薬または免疫抑制もしくは免疫調節用の医薬の製造のための、本発明によるポリペプチド、タンパク質、核酸、発現ベクター、組換え細胞、医薬組成物またはインプラントの使用に関する。
【００５１】
ある態様によれば、本発明は、本発明による少なくとも１つのポリペプチド、タンパク質、核酸、発現ベクター、組換え細胞または医薬組成物の予防または治療有効量を１回または複数回または数回の投与によりそれを必要とする対象に投与することにより、自己免疫疾患および／または炎症症状を予防的にまたは治療的に処置する方法に関する。
【００５２】
ある態様によれば、本発明は、本発明による少なくとも１つのポリペプチド、タンパク質、核酸、発現ベクター、組換え細胞または医薬組成物の予防または治療有効量を１回または複数回または数回の投与によりそれを必要とする対象に投与することにより、がんまたは他の疾患を処置するための免疫療法の方法に関する。
【００５３】
ある態様によれば、本発明は、本発明による少なくとも１つのポリペプチド、タンパク質、核酸、発現ベクター、組換え細胞または医薬組成物の予防または治療有効量を１回または複数回または数回の投与によりそれを必要とする対象に投与することによって前記ワクチンまたは免疫原の免疫原性を増加させるために併用するための、ワクチンまたは他の免疫原と併用するためのアジュバントに関する。
【００５４】
ある態様によれば、本発明は、活性成分を含む医薬組成物であって、前記活性成分が、配列ＬＳＩＬＬＮＥＥ（配列番号２６）と少なくとも７０％の配列同一性もしくは相同性を有するペプチド配列、またはその誘導体、その断片；ならびにそれが由来したＨＥＲＶ−Ｈ  Ｅｎｖ５９タンパク質、それらの誘導体、それらの断片、それらの複合体；単量体、二量体、三量体、多量体、らせん構造および球状構造の形態の、それらの任意の三次構造；架橋体；ならびに化合物の物理的および／または化学的形態、特性ならびにバイオアベイラビリティを増加させるそれらの任意の化学修飾体を含む、医薬組成物に関する。
【００５５】
ある態様によれば、本発明は、活性成分がペプチド配列を含み、および／またはその化学的誘導体であり、および／または単量体もしくは二量体としてのものを含む、より大きなポリペプチドもしくはタンパク質の一部であるか、または全体としてもしくは部分的に、球状もしくはらせん構造などの三次構造の一部であり、前記三次構造が、らせん構造、ベータシート、三重らせん構造を、いずれも全体的にもしくは部分的に含む、単量体、二量体、三量体、多量体を含むものである、医薬組成物に関する。
【００５６】
ある態様によれば、本発明は、活性成分またはペプチドが、凝集体、複合体またはナノ粒子の一部である、医薬組成物に関する。
【００５７】
ある態様によれば、本発明は、注射、局所、経皮または経口適用のための医薬組成物に関する。
【００５８】
ある態様によれば、本発明は、がんまたは他の疾患の免疫療法処置のための医薬組成物に関する。
【００５９】
ある態様によれば、本発明は、ワクチン接種における使用のための医薬組成物に関する。
【００６０】
ある態様によれば、本発明は、自己免疫疾患の処置または予防のための医薬組成物に関する。
【００６１】
ある態様によれば、本発明は、炎症症状の処置または予防のための医薬組成物に関する。
【００６２】
ある態様によれば、本発明は、自己免疫疾患の処置または予防のための医薬組成物でああって、前記自己免疫疾患がＳＬＥ、または関節リウマチを含む関節炎である、医薬組成物に関する。
【００６３】
ある態様によれば、本発明は、ＧＬＳＩＬＬＮＥＥＣ（配列番号２５）、ＬＱＮＲＲＧＬＧＬＳＩＬＬＮＥＥＣＥＥＧＰＧＰＧＰ（配列番号２７）、ＬＱＮＲＲＧＬＤＬＳＩＬＬＮＥＥＣＧＰＧＰＧＰ（配列番号２８）、ＧＬＳＩＬＬＮＥＥＣＧＰＧＰＧＰ（配列番号２９）およびＬＱＮＲＲＧＬＬＱＮＲＲＧＬＧＬＳＩＬＬＮＥＥ（配列番号３０）からなる群の中から選択されるペプチド配列および／またはその誘導体を含む、医薬組成物に関する。
【００６４】
ある態様によれば、本発明は、ＧＬＳＩＬＬＮＥＥＣ（配列番号２５）、ＬＱＮＲＲＧＬＧＬＳＩＬＬＮＥＥＣＥＥＧＰＧＰＧＰ（配列番号２７）、ＬＱＮＲＲＧＬＤＬＳＩＬＬＮＥＥＣＧＰＧＰＧＰ（配列番号２８）、ＧＬＳＩＬＬＮＥＥＣＧＰＧＰＧＰ（配列番号２９）およびＬＱＮＲＲＧＬＬＱＮＲＲＧＬＧＬＳＩＬＬＮＥＥ（配列番号３０）の中から選択されるペプチド配列を含む、上記のポリペプチドに関する。
【００６５】
ある態様によれば、本発明は、配列番号１〜配列番号１０４３の中から選択される配列またはその断片に結合している配列ＬＳＩＬＬＮＥＥ（配列番号２６）を含有するポリペプチドに関する。前記結合は、両方のペプチド断片における任意の化学的部分間のＮ末端、Ｃ末端ペプチド結合または任意の他の化学的共有および／もしくは非共有結合であり得る。
【００６６】
ある態様によれば、本発明は、配列ＬＳＩＬＬＮＥＥ（配列番号２６）と少なくとも７０％の配列同一性または相同性を有するペプチドをコードする核酸配列を含む発現ベクターに関する。
【００６７】
ある態様によれば、本発明は、本発明のペプチドのいずれかをコードする核酸配列を含む発現ベクターに関する。
【００６８】
ある態様によれば、本発明は、微生物に基づく発現系、例えば、レトロウイルス、アデノウイルス、ポックスウイルス、麻疹ウイルス、またはサルモネラ菌、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）または酵母に基づくベクターを用いる、上記の発現ベクターに関する。
【００６９】
ある態様によれば、本発明は、本発明の任意の発現ベクターを含む医薬組成物に関する。
【００７０】
ある態様によれば、本発明は、本発明の医薬組成物の予防または治療有効量を１つまたは複数の投与経路によりそれを必要とする対象に投与する、自己免疫疾患および／または炎症症状を予防的にまたは治療的に処置する方法に関する。
【００７１】
ある態様によれば、本発明は、本発明のポリペプチドを含有する生体材料、例えば、表面、粒子、メッシュ、デバイス、チューブなどに関する。ポリペプチドは、生体材料に化学的に結合していることもあり、またはそれと、例えばその内部で、物理的に会合していることもある。
【００７２】
さらに別の態様では、本発明は、ＨＥＲＶ−Ｈ  ＤＮＡの発現レベルを測定することによるＳＬＥの診断に関する。発現レベルは、平均コピー数によって、または平均ＲＮＡによって表されることがある。
【００７３】
さらに別の態様では、本発明は、ＥＮＶ−５９ＤＮＡおよび／またはＲＮＡの発現レベルを測定することによるＳＬＥの診断に関する。
【００７４】
さらに別の態様では、本発明は、ＲＮＡに全体的にまたは部分的に転写され、ある症状を有する人において前記症状を有さない人物と比較して低い転写レベルまたは高い転写レベルのどちらかを有するヒト内在性レトロウイルスの、前記症状の処置または診断のための使用に関する。
【００７５】
さらに別の態様では、本発明は、ＲＮＡに全体的にまたは部分的に転写され、自己免疫症状を有する人物において前記症状を有さない人物と比較して低い転写レベルまたは高い転写レベルのどちらかを有するヒト内在性レトロウイルスの、前記自己免疫症状の処置または診断のための使用に関する。
【００７６】
さらに別の態様では、本発明は、ＲＮＡに全体的にまたは部分的に転写され、ある症状を有する人物において前記症状を有さない人物と比較して低い転写レベルまたは高い転写レベルのどちらかを有する、ヒトＨＥＲＶ−Ｈの、前記症状または疾患の診断のための処置のための（ｆｏｒ  ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｆｏｒ  ｄｉａｇｎｏｓｉｓ）使用に関する。
【００７７】
さらに別の態様では、本発明は、前記症状または疾患の診断のための、ＨＥＲＶ−Ｈ５９由来ＤＮＡ、ＲＮＡまたはタンパク質の使用に関する。ＥＮＶ５９ペプチド配列を配列番号１０４４として提供し、ＥＮＶ５９ＤＮＡ配列を配列番号１０４５として提供し、ＨＥＲＶ−Ｈ５９完全プロウイルス配列を配列番号１０４６として提供する。
【００７８】
ある態様によれば、本発明は、配列ＬＳＩＬＬＮＥＥ（配列番号２６）と少なくとも６２．５％、より好ましくは７５％、より好ましくは８７．５％、より好ましくは少なくとも１００％の配列同一性を有するペプチド配列を含むポリペプチドに関する。
【００７９】
ある態様によれば、本発明は、ＬＱＮＲＲＧＬＧＬＳＩＬＬＮＥＥＣ（配列番号１）、ＧＬＳＩＬＬＮＥＥＣ（配列番号２５）、ＬＱＮＲＲＧＬＧＬＳＩＬＬＮＥＥＣＥＥＧＰＧＰＧＰ（配列番号２７）、ＬＱＮＲＲＧＬＤＬＳＩＬＬＮＥＥＣＧＰＧＰＧＰ（配列番号２８）、ＧＬＳＩＬＬＮＥＥＣＧＰＧＰＧＰ（配列番号２９）およびＬＱＮＲＲＧＬＬＱＮＲＲＧＬＧＬＳＩＬＬＮＥＥ（配列番号３０）の中から選択される配列と少なくとも７０％、好ましくは少なくとも７６％、より好ましくは少なくとも８２％、好ましくは少なくとも８８％、より好ましくは少なくとも９４％、好ましくは１００％の配列同一性を有する１つまたは複数のペプチド配列を含む、上記のポリペプチドに関する。
【００８０】
ある態様によれば、本発明は、配列番号１〜４１の中から選択される配列と少なくとも７６％、より好ましくは少なくとも８２％、好ましくは少なくとも８８％、より好ましくは少なくとも９４％、好ましくは１００％の配列同一性を有するペプチド配列を含む、上記いずれかのポリペプチドに関する。
【００８１】
ある態様によれば、本発明は、ＬＳＩＬＬＮＥＥ（配列番号２６）、ＬＱＮＲＲＧＬＧＬＳＩＬＬＮＥＥＣ（配列番号１）、ＧＬＳＩＬＬＮＥＥＣ（配列番号２５）、ＬＱＮＲＲＧＬＧＬＳＩＬＬＮＥＥＣＥＥＧＰＧＰＧＰ（配列番号２７）、ＬＱＮＲＲＧＬＤＬＳＩＬＬＮＥＥＣＧＰＧＰＧＰ（配列番号２８）、ＧＬＳＩＬＬＮＥＥＣＧＰＧＰＧＰ（配列番号２９）およびＬＱＮＲＲＧＬＬＱＮＲＲＧＬＧＬＳＩＬＬＮＥＥ（配列番号３０）の中から選択される配列と少なくとも７６％、より好ましくは少なくとも８２％、好ましくは少なくとも８８％、より好ましくは少なくとも９４％、好ましくは１００％の配列同一性を有するポリペプチドの中から選択される、上記のポリペプチドに関する。
【００８２】
ある態様によれば、本発明は、ＬＳＩＬＬＮＥＥ（配列番号２６）、ＬＱＮＲＲＧＬＧＬＳＩＬＬＮＥＥＣ（配列番号１）、ＧＬＳＩＬＬＮＥＥＣ（配列番号２５）、ＬＱＮＲＲＧＬＧＬＳＩＬＬＮＥＥＣＥＥＧＰＧＰＧＰ（配列番号２７）、ＬＱＮＲＲＧＬＤＬＳＩＬＬＮＥＥＣＧＰＧＰＧＰ（配列番号２８）、ＧＬＳＩＬＬＮＥＥＣＧＰＧＰＧＰ（配列番号２９）およびＬＱＮＲＲＧＬＬＱＮＲＲＧＬＧＬＳＩＬＬＮＥＥ（配列番号３０）の中から選択される、請求項１に記載のポリペプチドに関する。
【００８３】
ある態様によれば、本発明は、上記いずれかのポリペプチドを含むポリペプチド実体であって、２５０未満のアミノ酸（ａｍｉｎｏａｃｉｄｓ）、好ましくは２００未満のアミノ酸、より好ましくは１７５未満のアミノ酸、好ましくは１５０未満のアミノ酸、より好ましくは１２５未満のアミノ酸、好ましくは１００未満のアミノ酸、より好ましくは７５未満のアミノ酸、好ましくは６０未満のアミノ酸、より好ましくは５０未満のアミノ酸、好ましくは４０未満のアミノ酸、より好ましくは３５未満のアミノ酸、好ましくは３０未満のアミノ酸、より好ましくは２５未満のアミノ酸、好ましくは２０未満のアミノ酸、より好ましくは１９未満のアミノ酸、好ましくは１８未満のアミノ酸、より好ましくは１７未満のアミノ酸、好ましくは１６未満のアミノ酸、より好ましくは１５未満のアミノ酸、好ましくは１４未満のアミノ酸、より好ましくは１３未満のアミノ酸、好ましくは１２未満のアミノ酸、より好ましくは１１未満のアミノ酸、好ましくは１０未満のアミノ酸、より好ましくは９未満のアミノ酸、好ましくは８未満のアミノ酸、より好ましくは７未満のアミノ酸、好ましくは６未満のアミノ酸を含むポリペプチド実体に関する。
【００８４】
ある態様によれば、本発明は、上記いずれかのポリペプチドを含むポリペプチド実体であって、少なくとも５、より好ましくは少なくとも６、好ましくは少なくとも７、より好ましくは少なくとも８、好ましくは少なくとも９、より好ましくは少なくとも１０、好ましくは少なくとも１１、より好ましくは少なくとも１２、好ましくは少なくとも１３、より好ましくは少なくとも１４、好ましくは少なくとも１５、より好ましくは少なくとも１６、好ましくは少なくとも１７、より好ましくは少なくとも１８、好ましくは少なくとも１９、より好ましくは少なくとも２０、好ましくは少なくとも２５、より好ましくは少なくとも３０、好ましくは少なくとも３５、より好ましくは少なくとも４０、好ましくは少なくとも５０、より好ましくは少なくとも６０、好ましくは少なくとも７５、より好ましくは少なくとも１００、好ましくは少なくとも１２５、より好ましくは少なくとも１５０、好ましくは少なくとも１７５、より好ましくは少なくとも２００、好ましくは少なくとも２５０のアミノ酸を含むポリペプチド実体に関する。
【００８５】
ある態様によれば、本発明は、１７アミノ酸の長さを有するポリペプチドであって、最初の７つのアミノ酸の配列が、配列番号２６〜１０２７の配列の中から選択される配列の最初の７つのアミノ酸の配列と同一であり、少なくとも１０のアミノ酸が、ＧＬＳＩＬＬＮＥＥＣ（配列番号２５）である、ポリペプチドに関する。
【００８６】
ある態様によれば、本発明は、１、２、３または４つの点突然変異を含む、上記のポリペプチドに関する。
【００８７】
ある態様によれば、本発明は、グリコシル化される、上記いずれかのポリペプチドに関する。
【００８８】
ある態様によれば、本発明は、アシル化される、上記いずれかのポリペプチドに関する。
【００８９】
ある態様によれば、本発明は、単量体である、上記いずれかのポリペプチドに関する。
【００９０】
ある態様によれば、本発明は、二量体化または三量体化されている、上記いずれかのポリペプチドに関する。
【００９１】
ある態様によれば、本発明は、上記いずれかのポリペプチドを含むタンパク質であって、２５０未満のアミノ酸、好ましくは２００未満のアミノ酸、より好ましくは１７５未満のアミノ酸、好ましくは１５０未満のアミノ酸、より好ましくは１２５未満のアミノ酸、好ましくは１００未満のアミノ酸、より好ましくは７５未満のアミノ酸、好ましくは６０未満のアミノ酸、より好ましくは５０未満のアミノ酸、好ましくは４０未満のアミノ酸、より好ましくは３５未満のアミノ酸、好ましくは３０未満のアミノ酸、より好ましくは２５未満のアミノ酸、好ましくは２０未満のアミノ酸、より好ましくは１９未満のアミノ酸、好ましくは１８未満のアミノ酸、より好ましくは１７未満のアミノ酸、好ましくは１６未満のアミノ酸、より好ましくは１５未満のアミノ酸、好ましくは１４未満のアミノ酸、より好ましくは１３未満のアミノ酸、好ましくは１２未満のアミノ酸、より好ましくは１１未満のアミノ酸、好ましくは１０未満のアミノ酸、より好ましくは９未満のアミノ酸、好ましくは８未満のアミノ酸、より好ましくは７未満のアミノ酸、好ましくは６未満のアミノ酸を含むタンパク質に関する。
【００９２】
ある態様によれば、本発明は、上記いずれかのタンパク質もしくはポリペプチド、または上記いずれかのポリペプチドを含むタンパク質に関し、前記タンパク質またはポリペプチドは、少なくとも５、より好ましくは少なくとも６、好ましくは少なくとも７、より好ましくは少なくとも８、好ましくは少なくとも９、より好ましくは少なくとも１０、好ましくは少なくとも１１、より好ましくは少なくとも１２、好ましくは少なくとも１３、より好ましくは少なくとも１４、好ましくは少なくとも１５、より好ましくは少なくとも１６、好ましくは少なくとも１７、より好ましくは少なくとも１８、好ましくは少なくとも１９、より好ましくは少なくとも２０、好ましくは少なくとも２５、より好ましくは少なくとも３０、好ましくは少なくとも３５、より好ましくは少なくとも４０、好ましくは少なくとも５０、より好ましくは少なくとも６０、好ましくは少なくとも７５、より好ましくは少なくとも１００、好ましくは少なくとも１２５、より好ましくは少なくとも１５０、好ましくは少なくとも１７５、より好ましくは少なくとも２００、好ましくは少なくとも２５０のアミノ酸を含む。
【００９３】
ある態様によれば、本発明は上記いずれかのポリペプチドを含むタンパク質であって、融合活性（ｆｕｓｉｏｎ  ａｃｔｉｖｅ）がないタンパク質に関する。
【００９４】
ある態様によれば、本発明は、哺乳動物細胞系または動物モデルにおけるＩＬ−６発現を阻害する、上記いずれかのポリペプチドまたはタンパク質に関する。
【００９５】
ある態様によれば、本発明は、前記請求項のいずれかに記載のポリペプチドまたはタンパク質をコードする、単離された核酸に関する。
【００９６】
ある態様によれば、本発明は、上記の核酸および該核酸の発現に必要なエレメントを含む発現ベクターに関する。
【００９７】
ある態様によれば、本発明は、真核生物または原核生物またはウイルス発現ベクターである、上記の発現ベクターに関する。
【００９８】
ある態様によれば、本発明は、酵母、大腸菌（ｅ−ｃｏｌｉ）およびバキュロからなる群の中から選択される、上記発現ベクターに関する。
【００９９】
ある態様によれば、本発明は、前記請求項のいずれかに記載の少なくとも１つのポリペプチド、タンパク質、核酸または発現ベクターを含み、少なくとも１つの希釈剤、担体、結合剤、溶媒または賦形剤をさらに含む医薬組成物に関する。
【０１００】
ある態様によれば、本発明は、前記少なくとも１つのポリペプチド、タンパク質、核酸、発現ベクターまたは組換え細胞が、前記医薬品の活性成分または唯一の活性成分である、請求項のいずれかに記載の医薬組成物に関する。
【０１０１】
ある態様によれば、本発明は、医薬組成物の調製のための方法であって、
ａ．前記請求項のいずれかに記載の１つまたは複数のポリペプチド、タンパク質、核酸、発現ベクターまたは組換え細胞を用意し、所望により、前記１つまたは複数のポリペプチドを架橋させる工程；
ｂ．所望により、希釈剤、担体、結合剤、溶媒または賦形剤を用意する工程；
ｃ．物質を用意する工程；
ｄ．用意した１つまたは複数のペプチドを、所望による工程ｂ．の任意の担体および工程ｄ．の物質と混合して、医薬組成物を得る工程
を含む方法に関する。
【０１０２】
ある態様によれば、本発明は、工程ｃ．の前記物質が、クリーム、ローション、軟膏（ｏｉｎｔｍｅｎｔ）、ゲル、香膏（ｂａｌｍ）、半固形軟膏（ｓａｌｖｅ）、油、フォームおよびシャンプーからなる群から選択される、上記の方法に関する。
【０１０３】
ある態様によれば、本発明は、上記のようにして得ることができる医薬組成物に関する。
【０１０４】
ある態様によれば、本発明は、クリーム、ローション、懸濁性ローション（ｓｈａｋｅ  ｌｏａｔｉｏｎ）、軟膏、ゲル、香膏、半固形軟膏、油、フォーム、シャンプー、スプレー剤、エアロゾル、経皮パッチおよび絆創膏からなる群の中から選択される、上記いずれかの医薬組成物に関する。
【０１０５】
ある態様によれば、本発明は、前記請求項のいずれかに記載の少なくとも１つのポリペプチド、タンパク質、核酸、発現ベクター、組換え細胞または医薬組成物の医学的使用に関する。
【０１０６】
ある態様によれば、本発明は、免疫抑制または免疫調節のための、前記請求項のいずれかに記載の少なくとも１つのポリペプチド、タンパク質、核酸、発現ベクター、組換え細胞または医薬組成物の使用に関する。
【０１０７】
ある態様によれば、本発明は、疾患の外科手術、予防、治療、診断方法、処置および／または改善における使用のための、前記請求項のいずれかに記載のポリペプチド、タンパク質、核酸、発現ベクター、組換え細胞または医薬組成物に関する。
【０１０８】
ある態様によれば、本発明は、自己免疫疾患の処置、改善または予防のための、前記請求項のいずれかに記載のポリペプチド、タンパク質、核酸、発現ベクター、組換え細胞または医薬組成物に関する。
【０１０９】
ある態様によれば、本発明は、自己免疫疾患が、ＳＬＥ（全身性エリテマトーデス）、または関節炎、例えば関節リウマチ、脊椎関節炎、または多発性硬化症（ＭＳ）である、上記のポリペプチド、タンパク質、核酸、発現ベクター、組換え細胞または医薬組成物に関する。
【０１１０】
ある態様によれば、本発明は、炎症症状、または急性もしくは慢性炎症などの炎症に関連する障害の処置、改善または予防のための、前記請求項のいずれかに記載のポリペプチド、タンパク質、核酸、発現ベクター、組換え細胞または医薬組成物に関する。
【０１１１】
ある態様によれば、本発明は、医薬としての使用のための、前記請求項のいずれかに記載のポリペプチド、タンパク質、核酸、発現ベクター、組換え細胞または医薬組成物に関する。
【０１１２】
ある態様によれば、本発明は、敗血症の予防または処置を含む、前記請求項のいずれかに記載の使用のためのポリペプチド、タンパク質、核酸、発現ベクター、組換え細胞または医薬組成物に関する。
【０１１３】
ある態様によれば、本発明は、脊椎関節炎の予防または処置を含む、前記請求項のいずれかに記載の使用のためのポリペプチド、タンパク質、核酸、発現ベクター、組換え細胞または医薬組成物に関する。
【０１１４】
ある態様によれば、本発明は、喘息および／またはアレルギーの予防または処置を含む、前記請求項のいずれかに記載の使用のためのポリペプチド、タンパク質、核酸、発現ベクター、組換え細胞または医薬組成物に関する。
【０１１５】
ある態様によれば、本発明は、例えばワクチン中のアジュバントに入れて用いるための、前記請求項のいずれかに記載のポリペプチド、タンパク質、核酸、発現ベクター、組換え細胞または医薬組成物に関する。
【０１１６】
ある態様によれば、本発明は、前記請求項のいずれかに記載の少なくとも１つのポリペプチド、タンパク質、核酸、発現ベクター、組換え細胞または医薬組成物の予防または治療有効量を１回または複数回または数回の投与によりそれを必要とする対象に投与することにより、自己免疫疾患および／または炎症症状を予防的にまたは治療的に処置する方法に関する。
【０１１７】
ある態様によれば、本発明は、注射、吸入、局所、経皮、経口、経鼻、膣または肛門デリバリーの中から選択される投与経路による症状または疾患の予防または処置のための、前記請求項のいずれかに記載のポリペプチド、タンパク質、核酸、発現ベクター、組換え細胞または医薬組成物の使用に関する。
【０１１８】
ある態様によれば、本発明は、注射の方式が、静脈内（ＩＶ）、腹腔内（ＩＰ）、皮下（ＳＣ）および（筋肉内）ＩＭの中から選択される、上記の使用に関する。
【０１１９】
ある態様によれば、本発明は、炎症などの障害の患部への直接注射による疾患の処置のための、上記の使用に関する。
【０１２０】
ある態様によれば、本発明は、関節炎の処置のための、前記請求項のいずれかに記載のポリペプチド、タンパク質、核酸、発現ベクター、組換え細胞または医薬組成物の使用であって、組成物が炎症部位に直接注射される、使用に関する。
【０１２１】
本発明は、とりわけ、自己免疫疾患へのＨＥＲＶ遺伝子の関与および自己免疫疾患における免疫学的応答に対するそれらの影響の研究結果である。ＳＬＥ患者において、ＨＥＲＶ−Ｈ  Ｅｎｖ５９  ｍＲＮＡの発現がＩＬ−６およびＴＬＲ７発現のレベルと負に相関すること（それぞれ、ｐ＝０．００６５、ｐ＝０．０２）を見出した。ＨＥＲＶ−Ｈ  Ｅｎｖ５９は、機能性膜糖タンパク質をコードし、レンチウイルスベクター系とともに感染性シュードタイプビリオンを作ることを実証した。さらに、公知のＩＳＤと比較して特有の配列またはＩＳＤ様配列（ａ  ｕｎｉｑｕｅ  ｓｅｑｕｅｎｃｅ  ｃｏｍｐａｒｅｄ  ｔｏ  ｋｎｏｗｎ  ＩＳＤｓ  ｏｇ  ＩＳＤ  ｌｉｋｅ  ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ）を有する、ＥＮＶ−５９におけるＩＳＤを同定した。
【０１２２】
このＥＮＶ−５９ＩＳＤは、ヒトに特有であるようである（１つの点突然変異を有する類似のＩＳＤがチンパンジーにおいても見出され、他の霊長類にも存在する可能性があるが）。
【０１２３】
Ｅｎｖ５９ＩＳＵドメインに由来するペプチド、ＧＬＳＩＬＬＮＥＥＣ（配列番号２５）は、インビトロ（ｉｎ  ｖｉｔｒｏ）、エクスビボ（ｅｘ  ｖｉｖｏ）およびインビボ（ｉｎ  ｖｉｖｏ）両方において有意な免疫制御活性を有する。驚くべきことに、ウイルス由来免疫抑制ペプチドは、他にも作用はあるが、ＩＬ−６の産生を阻害し、これは、ＳＬＥ患者におけるＩＬ−６発現レベルとＥＮＶ５９発現レベル間に見られる負の相関を確証する。これは、さらに、内在性エンベロープタンパク質が、ヒト免疫系において極めて重要な役割を果すことに適応したものであり、自己免疫疾患を抑制する上で有利な機能を有することを示唆する。
【０１２４】
インビボで、ＩＳＤペプチドは、妥当性が確認されており、かつ認知されている２つの動物モデル、すなわち、坂口（Ｓａｋａｇｕｃｈｉ）マウスモデルおよびコラーゲン誘発関節炎−マウスモデル、つまりＣＩＡ−マウスモデルにおいて誘発された関節炎の症状を強く軽減することができる。これは、ＩＳＤペプチドがヒトにおいて抗関節リウマチ（ａｎｔｉ−Ｒｈｕｅｍａｔｏｉｄ−Ａｒｔｈｒｔｉｔｉｓ）活性を有する可能性を強く示唆する。
【０１２５】
ある実施形態によれば、本発明は、ペプチド配列ＬＳＩＬＬＮＥＥ（配列番号２６）、またはその誘導体、その断片、ならびにそれが由来したＨＥＲＶ−Ｈ  Ｅｎｖ５９タンパク質、それらの誘導体、それらの断片；それらの複合体；単量体、二量体、三量体、多量体、ヘリックス構造および球状構造の形態の、それらの任意の三次構造；架橋体；ならびに本発明の化合物の、または各々別々にもしくは任意の組合せで本発明のポリペプチドもしくはペプチドの物理的および／または化学的形態、特性ならびにバイオアベイラビリティを増加させる、それらの任意の化学修飾体に関する。加えて、本発明は、上記ペプチドおよびタンパク質のそれを必要とする患者への適用に適した任意の医薬製剤にも関する。
【０１２６】
ある実施形態によれば、本発明は、配列ＬＳＩＬＬＮＥＥ（配列番号２６）と少なくとも６２％、より好ましくは少なくとも７５％、より好ましくは少なくとも８７％、より好ましくは１００％の配列同一性を有する配列からなるかまたはそれを含むポリペプチドに関する。
【０１２７】
ある実施形態によれば、本発明のポリペプチドは、グリコシル化されている。
【０１２８】
ある実施形態によれば、本発明のポリペプチドは、アシル化されている。
【０１２９】
ある実施形態によれば、本発明のポリペプチドは、二量体化または三量体化されている。
【０１３０】
ポリペプチドは、配列から、例えば、１、２または３つの点欠失、点挿入および／または点突然変異によって得ることができる。点突然変異は、単一のアミノ酸の変化についてここでは用いられ、点挿入は、単一のアミノ酸の挿入であり、点欠失は、単一のアミノ酸の除去である。
【０１３１】
本発明は、配列ＬＳＩＬＬＮＥＥ（配列番号２６）と少なくとも７０％の配列同一性または相同性を有するペプチド配列を含むポリペプチド、ならびにその誘導体、その断片、その複合体；単量体、二量体、三量体、多量体、らせん構造および球状構造の形態の、その任意の三次構造；ならびに架橋体；ならびに物理化学的形態および特性ならびにバイオアベイラビリティを増加させるような、その任意の化学修飾体にも関する。
【０１３２】
本発明のポリペプチドは、例えば、単一ペプチド鎖、凝集体、複合体および／もしくはナノ粒子の形態であってもよく、またはそれらの一部であってもよい。
【０１３３】
ある実施形態によれば、本発明は、配列番号１〜配列番号１０４３の中から選択される配列またはその断片に結合している配列ＬＳＩＬＬＮＥＥ（配列番号２６）を含むポリペプチドに関する。
【０１３４】
前記結合は、両方のペプチド断片における任意の化学的部分間のＮ末端、Ｃ末端ペプチド結合または任意の他の化学的共有および／もしくは非共有結合であり得る。
【０１３５】
ある実施形態によれば、ポリペプチドは、ＧＬＳＩＬＬＮＥＥＣ（配列番号２５）、ＬＱＮＲＲＧＬＧＬＳＩＬＬＮＥＥＣＥＥＧＰＧＰＧＰ（配列番号２７）、ＬＱＮＲＲＧＬＤＬＳＩＬＬＮＥＥＣＧＰＧＰＧＰ（配列番号２８）、ＧＬＳＩＬＬＮＥＥＣＧＰＧＰＧＰ（配列番号２９）およびＬＱＮＲＲＧＬＬＱＮＲＲＧＬＧＬＳＩＬＬＮＥＥ（配列番号３０）の中から選択されるペプチド配列を含むかまたはからなる。
【０１３６】
ある実施形態によれば、ポリペプチドは、配列：ＬＱＮＲＲＧＬＧＬＳＩＬＬＮＥＥＣ（配列番号１）と少なくとも７０％の配列同一性を有する配列を含むかまたはからなる。
【０１３７】
ある実施形態によれば、ポリペプチドは、配列番号１と少なくとも７６％、より好ましくは少なくとも８２％、好ましくは少なくとも８８％、より好ましくは少なくとも９４％、好ましくは１００％の配列同一性を有する配列を含むかまたはからなる。
【０１３８】
ある実施形態によれば、ポリペプチドは、配列番号１〜４１の中から選択される配列と少なくとも７６％、より好ましくは少なくとも８２％、好ましくは少なくとも８８％、より好ましくは少なくとも９４％、好ましくは１００％の配列同一性を有する配列を含むかまたはからなる。
【０１３９】
ある実施形態によれば、ポリペプチドは、２５０未満のアミノ酸、好ましくは２００未満のアミノ酸、より好ましくは１７５未満のアミノ酸、好ましくは１５０未満のアミノ酸、より好ましくは１２５未満のアミノ酸、好ましくは１００未満のアミノ酸、より好ましくは７５未満のアミノ酸、好ましくは６０未満のアミノ酸、より好ましくは５０未満のアミノ酸、好ましくは４０未満のアミノ酸、より好ましくは３５未満のアミノ酸、好ましくは３０未満のアミノ酸、より好ましくは２５未満のアミノ酸、好ましくは２０未満のアミノ酸、より好ましくは１９未満のアミノ酸、好ましくは１８未満のアミノ酸、より好ましくは１７未満のアミノ酸、好ましくは１６未満のアミノ酸、より好ましくは１５未満のアミノ酸、好ましくは１４未満のアミノ酸、より好ましくは１３未満のアミノ酸、好ましくは１２未満のアミノ酸、より好ましくは１１未満のアミノ酸、好ましくは１０未満のアミノ酸、より好ましくは９未満のアミノ酸、好ましくは８未満のアミノ酸、より好ましくは７未満のアミノ酸、好ましくは６未満のアミノ酸を含む。
【０１４０】
ある実施形態によれば、ポリペプチドは、少なくとも５、より好ましくは少なくとも６、好ましくは少なくとも７、より好ましくは少なくとも８、好ましくは少なくとも９、より好ましくは少なくとも１０、好ましくは少なくとも１１、より好ましくは少なくとも１２、好ましくは少なくとも１３、より好ましくは少なくとも１４、好ましくは少なくとも１５、より好ましくは少なくとも１６、好ましくは少なくとも１７、より好ましくは少なくとも１８、好ましくは少なくとも１９、より好ましくは少なくとも２０、好ましくは少なくとも２５、より好ましくは少なくとも３０、好ましくは少なくとも３５、より好ましくは少なくとも４０、好ましくは少なくとも５０、より好ましくは少なくとも６０、好ましくは少なくとも７５、より好ましくは少なくとも１００、好ましくは少なくとも１２５、より好ましくは少なくとも１５０、好ましくは少なくとも１７５、より好ましくは少なくとも２００、好ましくは少なくとも２５０のアミノ酸を含む。
【０１４１】
ある実施形態によれば、ポリペプチドは１７アミノ酸の長さを有し、最初の７つのアミノ酸の配列が配列番号４２〜１０４３の配列の中から選択される配列の最初の７つのアミノ酸の配列と同一であり、少なくとも１０のアミノ酸がＧＬＳＩＬＬＮＥＥＣ（配列番号２５）である。
【０１４２】
ある実施形態によれば、ポリペプチドは、１、２、３または４つの点突然変異を有する。
【０１４３】
ある実施形態によれば、ポリペプチドは、免疫抑制ドメインであるか、または免疫抑制ドメインとして作用する。そのようなポリペプチドは、免疫抑制ペプチドと呼ばれることもある。ある実施形態によれば、免疫抑制ドメインは、本発明によるポリペプチドから少なくとも１つの点突然変異、欠失または挿入によって得ることができる。ある実施形態によれば、点突然変異、欠失または挿入の総数は、１、２、３および４の中から選択される。ある実施形態によれば、点突然変異、欠失または挿入の総数は、４より多い。ある実施形態によれば、ポリペプチドは、単量体ペプチドである。ある実施形態によれば、ポリペプチドは、少なくとも１つのさらなる免疫抑制ペプチドと架橋されており、および／またはタンパク質に連結されており、前記タンパク質は、少なくとも１つのさらなる免疫抑制ドメインに連結されている。ある実施形態によれば、ポリペプチドは、二量体を形成するように少なくとも１つのさらなる免疫抑制ペプチドに連結されている。ある実施形態によれば、二量体は、同種のものであり、ジスルフィド結合によりＮ末端とＮ末端、Ｃ末端とＣ末端および／またはタンデムリピートが架橋されている少なくとも２つの免疫抑制ペプチドを含む。ある実施形態によれば、ポリペプチドは、同種二量体または異種二量体を形成するように少なくとも１つのさらなる免疫抑制ペプチドに連結されている。ある実施形態によれば、ポリペプチドは、多量体または重合体を形成するように少なくとも２つのさらなる免疫抑制ペプチドに連結されている。ある実施形態によれば、ポリペプチドは、１つまたは複数の修飾を含む。ある実施形態によれば、修飾は、化学的誘導体化、Ｌ−アミノ酸置換、Ｄ−アミノ酸置換、合成アミノ酸置換、脱アミノ化および脱カルボキシル化からなる群から選択される。ある実施形態によれば、ポリペプチドは、前記少なくとも１つの修飾を含まないペプチドまたはタンパク質と比較して増加したタンパク質分解抵抗性を有する。
【０１４４】
特定の実施形態では、免疫抑制ペプチドの活性成分の長さは、３５アミノ酸、または３４、または３３、または３２、または３１、または３０、または２９、または２８、または２７、または２６、または２５、または２４、または２３、または２２、または２１、または２０、または１９、または１８、または１７、または１６、または１５、または１４、または１３、または１２、または１１、または１０、または９、または８、または、または７、または６、または５、または４、または３アミノ酸長である。したがって、本発明の免疫抑制ペプチドは、あらゆる公知ＩＳＤに対応する長さおよびアミノ酸配列を有する。本発明の免疫抑制ペプチドの特別な特徴は、該ポリペプチドがそれらのＮ末端またはＣ末端のどちらかに追加のシステイン（ＣｙｓまたはＣ）残基を含有し得ることである。特定の実施形態において、システイン残基は、ペプチドのＣ末端に位置する。このシステイン残基の存在および機能は、主として、２つ以上のポリペプチドを互いに架橋させるためのものであり、この架橋は、本明細書において以下で説明するように、ジスルフィド結合によることが好ましい。しかし、追加のシステインの機能は、架橋以外の機能であってもよい。したがって、本発明の免疫抑制ペプチドは、配列番号１〜１０４３のいずれかに対応するアミノ酸配列を有することができ、前記免疫抑制ペプチドは、該ペプチドのＮ末端またはＣ末端のどちらかに追加のシステイン［ＣｙｓまたはＣ（Ｃｙｓ  ｏｇ  Ｃ）］残基をさらに含有する。
【０１４５】
ある実施形態によれば、さらなるアミノ酸または分子を免疫抑制ペプチドに付加または連結させて、該免疫抑制ペプチド（ｉｍｍｕｓｕｐｐｒｅｓｓｉｖｅ  ｐｅｐｔｉｄｅ）の溶解性を向上させることができる。
【０１４６】
ある実施形態によれば、本発明は、本発明によるポリペプチドを含むタンパク質に関する。
【０１４７】
ある実施形態によれば、タンパク質は、エンベロープタンパク質である。
【０１４８】
ある実施形態によれば、タンパク質は、機能性膜糖タンパク質でない。
【０１４９】
ある実施形態によれば、タンパク質は、融合活性がない。「融合活性がない」という表現は、タンパク質が２つの生体膜の融合を媒介することができないことを意味する。
【０１５０】
ある実施形態によれば、タンパク質は、膜と結合あるいは連結していない。
【０１５１】
ある実施形態によれば、タンパク質は、膜内在性タンパク質でない。
【０１５２】
ある実施形態によれば、本発明によるポリペプチドまたはタンパク質は、哺乳動物細胞系または動物モデルにおけるＩＬ−６発現を阻害する。
【０１５３】
ある実施形態によれば、本発明によるポリペプチドまたはタンパク質は、哺乳動物細胞系または動物モデルにおけるＩＬ−６発現を誘導する。
【０１５４】
ある実施形態によれば、本発明は、本発明によるポリペプチドまたはタンパク質をコードする、単離された核酸に関する。
【０１５５】
ある実施形態によれば、本発明は、本発明の核酸および該核酸の発現に必要なエレメントを含む発現ベクターに関する。
【０１５６】
ある実施形態によれば、本発明は、真核生物または原核生物またはウイルス発現ベクターである、発現ベクターに関する。
【０１５７】
ある実施形態によれば、本発明は、配列ＬＳＩＬＬＮＥＥ（配列番号２６）と少なくとも６２％の配列同一性または相同性を有するペプチドをコードする（ｅｎｃｏｄｉｎｇ  ｆｏｒ）核酸配列を含む発現ベクターに関する。
【０１５８】
ある実施形態によれば、本発明は、本発明によるポリペプチドまたはタンパク質をコードする核酸配列を含む発現ベクターに関する。
【０１５９】
発現ベクターは、微生物、例えば、レトロウイルス、アデノウイルス、ポックスウイルス、麻疹ウイルス、サルモネラ菌に基づくベクター、大腸菌（Ｅ  ｃｏｌｉ）ベクター、酵母に基づき得る。
【０１６０】
ある実施形態によれば、本発明は、本発明による核酸および／または本発明による発現ベクターを含む組換え細胞に関する。
【０１６１】
ある実施形態によれば、本発明は、本発明による少なくとも１つのポリペプチド、タンパク質、核酸、発現ベクターまたは組換え細胞を含み、少なくとも１つの希釈剤、担体、結合剤、溶媒または賦形剤をさらに含む医薬組成物に関する。
【０１６２】
投与形態、製剤および投与計画
本発明の化合物を含む薬学的に有用な組成物は、公知の方法に従って、例えば、薬学的に許容される担体および／またはさらなる活性化合物の混合により、製剤化することができる。そのような担体および製剤化方法の例は、Remington's Pharmaceutical Sciencesにおいて見出すことができる。有効な投与に適した薬学的に許容される組成物を形成するために、そのような組成物は、本発明の化合物の有効量を含有することになる。そのような組成物は、本発明の１つより多くの化合物を含有することもある。
【０１６３】
本発明の医薬組成物または化合物は、治療有効量で個体に投与される。有効量は、個体の状態、体重、性別および年齢などの様々な因子によって変わり得る。他の因子としては、投与の方式が挙げられる。一般に、組成物は、約１μｇ〜約１００ｍｇ、特に、約１０μｇ〜約１０ｍｇの範囲の投薬量で投与されることになる。
【０１６４】
医薬組成物は、様々な経路により、具体的には、例えば、皮下経路により、局所経路により、経口経路により、粘膜経路により、静脈内経路により、非経口的に、および筋肉内経路により、個体に投与することができる。
【０１６５】
そのような製剤は、一般に安全であり、毒性副作用を有さず、有効な経路により投与することができ、安定しており、医薬担体と適合性である。
【０１６６】
本発明の医薬製剤および化合物は、カプセル剤、懸濁液、エリキシル剤または溶液などの剤形で使用することができる。
【０１６７】
本発明の医薬製剤および化合物を単回投与で投与してもよく、または複数回投与で投与してもよい。
【０１６８】
本発明の組成物または塩を未加工の化学物質として投与することは可能であるが、それらを医薬製剤の形態で提供するほうが好ましい。したがって、本発明は、本発明の実体またはその薬学的に許容される塩およびそれらのための薬学的に許容される担体を含む、医療用途の医薬製剤をさらに提供する。
【０１６９】
本組成物の薬学的に許容される塩もまた、それらを調製することができる場合、本発明によって包含されることを意図したものである。
【０１７０】
ある実施形態によれば、本発明は、前記少なくとも１つのポリペプチド、タンパク質、核酸、発現ベクターまたは組換え細胞が前記医薬品の活性成分または唯一の活性成分である医薬組成物に関する。
【０１７１】
本発明の医薬組成物は、活性成分としてペプチド配列および／またはその化学的誘導体を含むことがあり、前記配列またはその誘導体は、例えば単量体、二量体として、より大きいポリペプチドもしくはタンパク質の一部であることもあり、または全体として、もしくは部分的に、球状もしくはらせん構造などの三次構造の一部をであることもあり、前記三次構造は、単量体、二量体、三量体、多量体としてのものを含み、らせん構造、ベータシート、三重らせん構造を、いずれも全体的にまたは部分的に含むものである。
【０１７２】
本発明の医薬組成物は、凝集体、複合体またはナノ粒子の一部であるペプチドを、活性成分として含むこともある。
【０１７３】
ある実施形態によれば、本発明は、医薬組成物の調製のための方法であって、
ａ．本発明による１つまたは複数のポリペプチド、タンパク質、核酸、発現ベクターまたは組換え細胞を用意し、所望により、前記１つまたは複数のポリペプチドを架橋させる工程；
ｂ．所望により、希釈剤、担体、結合剤、溶媒または賦形剤を用意する工程；
ｃ．物質を用意する工程；
ｄ．用意した１つまたは複数のペプチドを、所望による工程ｂ．の任意の担体および工程ｄ．の物質と混合して、医薬組成物を得る工程
を含む方法に関する。
【０１７４】
ある実施形態によれば、本発明は、工程ｃ．の前記物質が、クリーム、ローション、軟膏、ゲル、香膏、半固形軟膏、油、フォームおよびシャンプーからなる群から選択される方法に関する。
【０１７５】
ある実施形態によれば、本発明は、本発明の方法に従って得ることができる医薬組成物に関する。
【０１７６】
ある実施形態によれば、本発明は、クリーム、ローション、懸濁性ローション、軟膏、ゲル、香膏、半固形軟膏、油、フォーム、シャンプー、スプレー剤、エアロゾル、経皮パッチおよび絆創膏からなる群の中から選択される医薬組成物に関する。
【０１７７】
ある実施形態によれば、本発明は、本発明によるポリペプチド、タンパク質、核酸、発現ベクター、組換え細胞または医薬組成物を含む、生体材料に関する。
【０１７８】
ある実施形態によれば、本発明は、表面、粒子、メッシュ、デバイス、チューブまたはインプラントの中から選択される生体材料に関する。
【０１７９】
ポリペプチドは、生体材料に化学的に結合していることもあり、またはそれと、例えばその内部で、物理的に会合していることもある。
【０１８０】
ある実施形態によれば、本発明は、本発明による少なくとも１つのポリペプチド、タンパク質、核酸、発現ベクター、組換え細胞、医薬組成物または生体材料の医学的使用に関する。
【０１８１】
ある実施形態によれば、本発明は、免疫抑制または免疫調節のための、本発明による少なくとも１つのポリペプチド、タンパク質、核酸、発現ベクター、組換え細胞、医薬組成物またはインプラントの使用に関する。
【０１８２】
ある実施形態によれば、本発明は、疾患の外科手術、予防、治療、診断方法、処置および／または改善における使用のための、本発明によるポリペプチド、タンパク質、核酸、発現ベクター、組換え細胞、医薬組成物またはインプラントに関する。
【０１８３】
ある実施形態によれば、本発明は、自己免疫疾患の処置、改善または予防のための、本発明によるポリペプチド、タンパク質、核酸、発現ベクター、組換え細胞、医薬組成物またはインプラントに関する。
【０１８４】
ある実施形態によれば、本発明は、自己免疫疾患が、ＳＬＥ（全身性エリテマトーデス）、または関節炎、例えば関節リウマチである、ポリペプチド、タンパク質、核酸、発現ベクター、組換え細胞、医薬組成物またはインプラントに関する。
【０１８５】
ある実施形態によれば、本発明は、炎症症状、または急性もしくは慢性炎症などの炎症に関連する障害の処置、改善または予防のための、本発明によるポリペプチド、タンパク質、核酸、発現ベクター、組換え細胞、医薬組成物またはインプラントに関する。
【０１８６】
ある実施形態によれば、本発明は、医薬としての使用のための、本発明によるポリペプチド、タンパク質、核酸、発現ベクター、組換え細胞、医薬組成物またはインプラントに関する。
【０１８７】
ある実施形態によれば、本発明は、対象がヒトまたは動物である、本発明による使用のためのポリペプチド、タンパク質、核酸、発現ベクター、組換え細胞、医薬組成物またはインプラントに関する。
【０１８８】
ある実施形態によれば、本発明は、臓器に対する使用のための、本発明によるポリペプチド、タンパク質、核酸、発現ベクター、組換え細胞、医薬組成物またはインプラントに関する。
【０１８９】
ある実施形態によれば、本発明は、移植患者の準備または処置のための、本発明によるポリペプチド、タンパク質、核酸、発現ベクター、組換え細胞、医薬組成物またはインプラントに関する。
【０１９０】
ある実施形態によれば、本発明は、以下から選択される症状の予防または処置を含む本発明による使用のためのポリペプチド、タンパク質、核酸、発現ベクター、組換え細胞、医薬組成物またはインプラントに関する：急性散在性脳脊髄炎（ＡＤＥＭ）、アジソン病、無ガンマグロブリン血症、円形脱毛症、筋萎縮性側索硬化症、強直性脊椎炎、抗リン脂質抗体症候群、抗シンセターゼ抗体症候群、アトピー性アレルギー、アトピー性皮膚炎、自己免疫性再生不良性貧血、自己免疫性心筋症、自己免疫性腸疾患、自己免疫性溶血性貧血、自己免疫性肝炎、自己免疫性内耳疾患、自己免疫性リンパ増殖症候群、自己免疫性末梢神経障害、自己免疫性膵炎、自己免疫性多分泌症候群、自己免疫性プロゲステロン皮膚炎、自己免疫性血小板減少性紫斑病、自己免疫性蕁麻疹、自己免疫性ぶどう膜炎、バロ病／バロ同心円硬化症、ベーチェット病、ベルジェ病、ビッカースタッフ脳炎、ブラウ症候群、水疱性類天疱瘡、がん、キャッスルマン病、セリアック病、シャガス病、慢性炎症性脱髄性多発神経炎、慢性再発性多発性骨髄炎、慢性閉塞性肺疾患、チャーグ・ストラウス症候群、瘢痕性類天疱瘡、コーガン症候群、寒冷凝集素症、補体成分２欠損症、接触皮膚炎、頭部動脈炎、ＣＲＥＳＴ症候群、クローン病、クッシング症候群、皮膚白血球破壊性血管炎、デゴス病、ダーカム病、疱疹状皮膚炎、皮膚筋炎、１型糖尿病、汎発性皮膚全身性強皮症、ドレスラー症候群、薬物誘発性ループス、円板エリテマトーデス、湿疹、子宮内膜症、腱付着物炎関連関節炎、好酸球性筋膜炎、好酸球性胃腸炎、後天性表皮水疱症、結節性紅斑、胎児赤芽球症、本態性混合型クリオグロブリン血症、エバンス症候群、進行性骨化性線維異形成症、線維化性肺胞炎、胃炎、胃腸類天疱瘡、糸球体腎炎、グッドパスチャー症候群、グレーブス病、ギラン・バレー症候群（ＧＢＳ）、橋本脳症、橋本甲状腺炎、ヘノッホ・シェーンライン紫斑病、妊娠性疱疹、肝炎、化膿性汗腺炎、ヒューズ・ストーヴィン症候群、低ガンマグロブリン血症、特発性炎症細胞脱髄疾患、特発性肺線維症、特発性血小板減少性紫斑病、ＩｇＡ腎症、封入体筋炎、慢性炎症性脱髄性多発神経炎、間質性膀胱炎、若年性特発性関節炎、川崎病、ランバート・イートン筋無力症候群、白血球破壊性血管炎、扁平苔癬、硬化性苔癬、線状ＩｇＡ病（ＬＡＤ）、ルー・ゲーリック病、ルポイド肝炎、エリテマトーデス、マジード症候群、メニエール病、顕微鏡的多発血管炎、ミラー・フィッシャー症候群、混合型結合組織病、モルフェア、ムッハ・ハーベルマン病、多発性硬化症、重症筋無力症、筋炎、ナルコレプシー、視神経脊髄炎、神経性筋強直症、非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）、眼瘢痕性類天疱瘡、眼球クローヌス・ミオクローヌス症候群、オード甲状腺炎、回帰性リウマチ、ＰＡＮＤＡＳ（小児自己免疫性溶連菌関連神性経精神障害）、腫瘍随伴性小脳変性症、発作性夜間ヘモグロビン尿症（ＰＮＨ）、パリー・ロンベルク症候群、パーソネージ・ターナー症候群、周辺部ぶどう膜炎、尋常性天疱瘡、悪性貧血、静脈周囲性脳脊髄炎、ＰＯＥＭＳ症候群、結節性多発動脈炎、リウマチ性多発筋痛症、多発性筋炎、原発性胆汁性肝硬変、原発性硬化性胆管炎、進行性炎症性ニューロパチー、乾癬、乾癬性関節炎、壊疽性膿皮症、赤芽球ろう、ラスムッセン脳炎、レイノー現象、再発性多発軟骨炎、ライター症候群、下肢静止不能症候群、後腹膜線維症、関節リウマチ、リウマチ熱、サルコイドーシス、統合失調症、シュミット症候群、シュニッツラー症候群、強膜炎、強皮症、血清病、シェーグレン症候群、脊椎関節症、スチル病、全身硬直症候群、亜急性細菌性心内膜炎（ＳＢＥ）、スザック症候群、スイート症候群、シデナム舞踏病、交感神経性眼炎、全身性エリテマトーデス、高安動脈炎、側頭動脈炎、血小板減少症、トロサ・ハント症候群、横断性脊髄炎、潰瘍性大腸炎、未分化結合組織病、未分化脊椎関節症、じん麻疹様血管炎、血管炎、白斑、およびウェゲナー肉芽腫症。
【０１９１】
ある実施形態によれば、本発明は、尋常性ざ瘡、アレルギー、アレルギー性鼻炎、喘息、アテローム動脈硬化症、自己免疫疾患、セリアック病、慢性前立腺炎、糸球体腎炎、過敏症、炎症性腸疾患、骨盤内炎症性疾患、再灌流傷害、関節リウマチ、サルコイドーシス、移植拒絶、血管炎、間質性膀胱炎、がん、うつ病、白血球増多症、および白血球欠損症の中から選択される障害の処置または予防のための、本発明による使用のためのポリペプチド、タンパク質、核酸、発現ベクター、組換え細胞、医薬組成物またはインプラントに関する。
【０１９２】
ある実施形態によれば、敗血症の予防または処置を含む本発明による使用のためのポリペプチド、タンパク質、核酸、発現ベクター、組換え細胞、医薬組成物またはインプラントに関する。
【０１９３】
ある実施形態によれば、本発明は、脊椎関節炎の予防または処置を含む本発明による使用のためのポリペプチド、タンパク質、核酸、発現ベクター、組換え細胞、医薬組成物またはインプラントに関する。
【０１９４】
ある実施形態によれば、本発明は、喘息および／またはアレルギーの予防または処置を含む本発明による使用のためのポリペプチド、タンパク質、核酸、発現ベクター、組換え細胞、医薬組成物またはインプラントに関する。
【０１９５】
ある実施形態によれば、本発明は、がんの予防または処置を含む本発明による使用のためのポリペプチド、タンパク質、核酸、発現ベクター、組換え細胞、医薬組成物またはインプラントに関する。
【０１９６】
ある実施形態によれば、ワクチンの免疫原性またはワクチンに使用されるものを含む任意の抗原の免疫原性を増強することを含む本発明による使用のためのポリペプチド、タンパク質、核酸、発現ベクター、組換え細胞、医薬組成物またはインプラントに関する。
【０１９７】
ある実施形態によれば、本発明は、自己免疫疾患に関連する症状の予防または処置または改善方法における使用のための、免疫抑制ドメインであるかまたは免疫抑制ドメインとして作用するポリペプチドであって、前記免疫抑制ドメインを発現する遺伝子配列が、前記自己免疫疾患に罹患している患者群において健常対照群と比較して発現増加または減少を示す、ポリペプチドに関する。ある実施形態によれば、本発明は、前記免疫抑制ドメインが、内在性レトロウイルス、好ましくは、ヒト内在性レトロウイルスからのものである、ポリペプチドに関する。ある実施形態によれば、本発明は、前記免疫抑制ドメインが、配列番号：番号１〜１０４３（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：ＮＯ：１−１０４３）の配列の中から選択される、ポリペプチドに関する。
【０１９８】
ある実施形態によれば、本発明は、自己免疫疾患のまたは該自己免疫疾患と関連する少なくとも１つの症状の予防または処置または改善のための、配列番号：番号１〜１０４３の配列の中から選択されるポリペプチドの使用に関する。
【０１９９】
ある実施形態によれば、本発明は、抗炎症薬または免疫抑制もしくは免疫調節用の医薬の製造のための、本発明によるポリペプチド、タンパク質、核酸、発現ベクター、組換え細胞、医薬組成物またはインプラントの使用に関する。
【０２００】
ある実施形態によれば、本発明は、移植患者の準備または処置用の医薬の製造のための、本発明によるポリペプチド、タンパク質、核酸、発現ベクター、組換え細胞、医薬組成物またはインプラントの使用に関する。
【０２０１】
ある実施形態によれば、本発明は、自己免疫または炎症性疾患の予防または処置用の医薬の製造のための、本発明によるポリペプチド、タンパク質、核酸、発現ベクター、組換え細胞、医薬組成物またはインプラントの使用に関する。
【０２０２】
ある実施形態によれば、本発明は、以下から選択される症状の予防または処置用の医薬の製造のための、本発明によるポリペプチド、タンパク質、核酸、発現ベクター、組換え細胞、医薬組成物またはインプラントの使用に関する：急性散在性脳脊髄炎（ＡＤＥＭ）、アジソン病、無ガンマグロブリン血症、円形脱毛症、筋萎縮性側索硬化症、ＡＮＣＡ血管炎、強直性脊椎炎、抗リン脂質抗体症候群、抗シンセターゼ抗体症候群、動脈硬化症、アトピー性アレルギー、アトピー性皮膚炎、自己免疫性再生不良性貧血、自己免疫性心筋症、自己免疫性腸疾患、自己免疫性溶血性貧血、自己免疫性肝炎、自己免疫性内耳疾患、自己免疫性リンパ増殖症候群、自己免疫性末梢神経障害、自己免疫性膵炎、自己免疫性多分泌症候群、自己免疫性プロゲステロン皮膚炎、自己免疫性血小板減少性紫斑病、自己免疫性蕁麻疹、自己免疫性ぶどう膜炎、バロ病／バロ同心円硬化症、ベーチェット病、ベルジェ病、ビッカースタッフ脳炎、ブラウ症候群、水疱性類天疱瘡、がん、キャッスルマン病、セリアック病、シャガス病、慢性炎症性脱髄性多発神経炎、慢性再発性多発性骨髄炎、慢性閉塞性肺疾患、チャーグ・ストラウス症候群、瘢痕性類天疱瘡、コーガン症候群、寒冷凝集素症、補体成分２欠損症、接触皮膚炎、頭部動脈炎、ＣＲＥＳＴ症候群、クローン病、クッシング症候群、皮膚白血球破壊性血管炎、デゴス病、ダーカム病、疱疹状皮膚炎、皮膚筋炎、１型糖尿病、汎発性皮膚全身性強皮症、ドレスラー症候群、薬物誘発性ループス、円板エリテマトーデス、湿疹、子宮内膜症、腱付着物炎関連関節炎、好酸球性筋膜炎、好酸球性胃腸炎、後天性表皮水疱症、結節性紅斑、胎児赤芽球症、本態性混合型クリオグロブリン血症、エバンス症候群、進行性骨化性線維異形成症、線維化性肺胞炎、胃炎、胃腸類天疱瘡、糸球体腎炎、グッドパスチャー症候群、グレーブス病、ギラン・バレー症候群（ＧＢＳ）、橋本脳症、橋本甲状腺炎、ヘノッホ・シェーンライン紫斑病、妊娠性疱疹、肝炎、化膿性汗腺炎、ヒューズ・ストーヴィン症候群、低ガンマグロブリン血症、特発性炎症細胞脱髄疾患、特発性肺線維症、特発性血小板減少性紫斑病、ＩｇＡ腎症、封入体筋炎、慢性炎症性脱髄性多発神経炎、間質性膀胱炎、若年性特発性関節炎、川崎病、ランバート・イートン筋無力症候群、白血球破壊性血管炎、扁平苔癬、硬化性苔癬、線状ＩｇＡ病（ＬＡＤ）、ルー・ゲーリック病、ルポイド肝炎、エリテマトーデス、マジード症候群、メニエール病、顕微鏡的多発血管炎、ミラー・フィッシャー症候群、混合型結合組織病、モルフェア、ムッハ・ハーベルマン病、多発性硬化症、重症筋無力症、筋炎、ナルコレプシー、視神経脊髄炎、神経性筋強直症、非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）、眼瘢痕性類天疱瘡、眼球クローヌス・ミオクローヌス症候群、オード甲状腺炎、回帰性リウマチ、ＰＡＮＤＡＳ（小児自己免疫性溶連菌関連神性経精神障害）、腫瘍随伴性小脳変性症、発作性夜間ヘモグロビン尿症（ＰＮＨ）、パリー・ロンベルク症候群、パーソネージ・ターナー症候群、周辺部ぶどう膜炎、尋常性天疱瘡、悪性貧血、静脈周囲性脳脊髄炎、ＰＯＥＭＳ症候群、結節性多発動脈炎、リウマチ性多発筋痛症、多発性筋炎、原発性胆汁性肝硬変、原発性硬化性胆管炎、進行性炎症性ニューロパチー、乾癬、乾癬性関節炎、壊疽性膿皮症、赤芽球ろう、ラスムッセン脳炎、レイノー現象、再発性多発軟骨炎、ライター症候群、下肢静止不能症候群、後腹膜線維症、関節リウマチ、リウマチ熱、サルコイドーシス、統合失調症、シュミット症候群、シュニッツラー症候群、強膜炎、強皮症、血清病、シェーグレン症候群、脊椎関節症、スチル病、全身硬直症候群、亜急性細菌性心内膜炎（ＳＢＥ）、スザック症候群、スイート症候群、シデナム舞踏病、交感神経性眼炎、全身性エリテマトーデス、高安動脈炎、側頭動脈炎、血小板減少症、トロサ・ハント症候群、横断性脊髄炎、潰瘍性大腸炎、未分化結合組織病、未分化脊椎関節症、じん麻疹様血管炎、血管炎、白斑、およびウェゲナー肉芽腫症。
【０２０３】
ある実施形態によれば、本発明は、急性または慢性炎症などの、炎症または炎症に関連する症状の、予防または処置用の医薬の製造のための、本発明によるポリペプチド、タンパク質、核酸、発現ベクター、組換え細胞、医薬組成物またはインプラントの使用に関する。
【０２０４】
ある実施形態によれば、本発明は、尋常性ざ瘡、アレルギー、アレルギー性鼻炎、喘息、アテローム動脈硬化症、自己免疫疾患、セリアック病、慢性前立腺炎、糸球体腎炎、過敏症、炎症性腸疾患、骨盤内炎症性疾患、再灌流傷害、関節リウマチ、サルコイドーシス、移植拒絶、血管炎、間質性膀胱炎、がん、うつ病、白血球増多症、および白血球欠損症の中から選択される症状の予防または処置用の医薬の製造のための、本発明によるポリペプチド、タンパク質、核酸、発現ベクター、組換え細胞、医薬組成物またはインプラントの使用に関する。
【０２０５】
ある実施形態によれば、本発明は、敗血症、関節リウマチ、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）および脊椎関節炎の中からの少なくとも症状選択（ａｔ  ｌｅａｓｔ  ｃｏｎｄｉｔｉｏｎ  ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ）の予防または処置用の医薬の製造のための、本発明によるポリペプチド、タンパク質、核酸、発現ベクター、組換え細胞、医薬組成物またはインプラントの使用に関する。
【０２０６】
ある実施形態によれば、本発明は、喘息および／またはアレルギーの予防または処置用の医薬の製造のための、本発明によるポリペプチド、タンパク質、核酸、発現ベクター、組換え細胞、医薬組成物またはインプラントの使用に関する。
【０２０７】
ある実施形態によれば、本発明は、アジュバントの製造のための、本発明によるポリペプチド、タンパク質、核酸、発現ベクター、組換え細胞、医薬組成物またはインプラントの使用に関する。
【０２０８】
ある実施形態によれば、本発明は、ナノ粒子および／または生体材料のコーティングのための、本発明によるポリペプチド、タンパク質、核酸、発現ベクター、組換え細胞または医薬組成物の使用に関する。
【０２０９】
生体材料は、生物系と相互作用する任意の物質、表面、粒子または構築物である。生体材料は、自然に由来することもあり、または金属成分、セラミック、ポリマーまたは複合材料を利用する様々な化学的アプローチを使用して研究室で合成されることもある。一部の生体材料は、天然に存在する化合物の主として有機性のマトリックス内の無機結晶体からなる。
【０２１０】
生体材料は、医療用途に使用されるおよび／または適していることが多く、それ故、天然の機能を果す、増大させる、またはそれに取って代わる生体構造または医用デバイスの全部または一部を構成する。そのような機能は、心臓弁に使用されているような穏やかなものであることもあり、またはヒドロキシアパタイト被覆股関節インプラントなどの、より相互作用性の高い機能性を備えている生物活性のものであることもある。生体材料は、歯科用途、外科手術、およびドラッグデリバリー、例えば、ナノ粒子の形態でのドラッグデリバリーにも日々使用されている。医薬品を含浸させた構築物を体内に留置することができ、これにより、長期間にわたっての薬物の持続放出が可能になる。生体材料は、移植材料として使用される自家移植片、同種移植片または異種移植片であることもある。
【０２１１】
生体材料は、例えば、関節置換、骨プレート、骨セメント、人工靱帯および腱、歯固定用の歯科インプラント、人工血管、心臓弁、皮膚修復デバイス（人工組織）、人工内耳置換、コンタクトレンズ、乳房インプラントに使用される。
【０２１２】
ある実施形態によれば、本発明は、少なくとも１つのナノ粒子または生体材料への免疫応答の少なくとも部分的抑制のための、本発明によるポリペプチド、タンパク質、核酸、発現ベクター、組換え細胞または医薬組成物の使用に関する。
【０２１３】
ある実施形態によれば、本発明は、患者におけるナノ粒子および／または生体材料および／または医療デバイスおよび／またはインプラントのインビボ半減期を増加させるための、本発明によるポリペプチド、タンパク質、核酸、発現ベクター、組換え細胞または医薬組成物の使用に関する。
【０２１４】
ある実施形態によれば、本発明は、疾患の診断のための内在性レトロウイルスの使用に関する。
【０２１５】
ある実施形態によれば、本発明は、発現レベルまたはコピー数が、ある症状を有する対象において該症状がない対象と比較して異なる内在性レトロウイルスの、疾患の診断のための使用に関する。
【０２１６】
ある実施形態によれば、本発明は、発現レベルまたはコピー数が、自己免疫症状を有する対象において該症状がない対象と比較して異なる内在性レトロウイルスの、疾患の診断のための使用に関する。
【０２１７】
ある実施形態によれば、本発明は、疾患の診断のための、ＨＥＲＶ−Ｈ５９に関連する一塩基多型の使用に関する。
【０２１８】
ある実施形態によれば、本発明は、ＳＬＥの診断のためのＨＥＲＶ−Ｈ５９の使用に関する。
【０２１９】
ある実施形態によれば、本発明は、本発明による少なくとも１つのポリペプチド、タンパク質、核酸、発現ベクター、組換え細胞または医薬組成物の予防または治療有効量を１回または複数回または数回の投与によりそれを必要とする対象に投与することにより、自己免疫疾患および／または炎症症状を予防的にまたは治療的に処置する方法に関する。
【０２２０】
ある実施形態によれば、本発明は、自己免疫疾患に関連する症状の予防または処置または改善の方法であって、
ａ．前記自己免疫疾患に罹患している患者群における少なくとも１つの内在性レトロウイルスの発現またはコピー数を測定すること；
ｂ．前記発現を、健常対照群における前記少なくとも１つの内在性レトロウイルスの発現と比較すること；
ｃ．前記患者群中で異なる発現を有する少なくとも１つの内在性レトロウイルスを同定すること；
ｄ．所望により、前記少なくとも１つの内在性レトロウイルスにおける少なくとも１つの免疫抑制ドメインを同定すること；
ｅ．少なくとも１つの免疫抑制ドメイン、好ましくは、前記少なくとも１つの免疫抑制ドメインを含有するタンパク質および／または前記内在性レトロウイルスにより発現されたタンパク質に含有されている前記少なくとも１つの免疫抑制ドメインの投与により、前記症状に罹患している少なくとも１名の患者を処置すること
を含む方法に関する。
【０２２１】
ある実施形態によれば、本発明は、自己免疫疾患に関連する症状の予防または処置または改善の方法であって、
ｆ．前記自己免疫疾患に罹患している患者群における少なくとも１つの免疫抑制ドメインを含む少なくとも１つのタンパク質またはポリペプチドの濃度を測定すること；
ｇ．前記濃度を健常対照群における濃度と比較すること；
ｈ．前記患者群中で異なる発現を有する少なくとも１つの免疫抑制ドメインを同定すること；
ｉ．前記少なくとも１つの免疫抑制ドメイン、および／または前記少なくとも１つの免疫抑制ドメインを含むタンパク質の投与により、前記症状に罹患している少なくとも１名の患者を処置すること
を含む方法に関する。
【０２２２】
ある実施形態によれば、本発明は、前記異なる発現が発現増加および減少の中から選択される方法に関する。
【０２２３】
ある実施形態によれば、本発明は、前記内在性レトロウイルスがヒト内在性レトロウイルスである方法に関する。
【０２２４】
ある実施形態によれば、本発明は、前記ヒト内在性レトロウイルスがＨＥＲＶ−ＨサブファミリーまたはＨＥＲＶ−Ｋサブファミリーに属する方法に関する。
【０２２５】
ある実施形態によれば、本発明は、前記内在性レトロウイルスが、タンパク質をコードすることができる少なくとも１つのオープンリーディングフレームを含有する方法に関する。
【０２２６】
ある実施形態によれば、本発明は、前記少なくとも１つのオープンリーディングフレームが、少なくとも５０、好ましくは少なくとも１００、より好ましくは少なくとも１５０、好ましくは少なくとも２００、より好ましくは少なくとも２５０、好ましくは少なくとも３００、より好ましくは少なくとも３５０、好ましくは少なくとも４００ヌクレオチドの長さを有する方法に関する。
【０２２７】
ある実施形態によれば、本発明は、注射、吸入、局所、経皮、経口、経鼻、膣または肛門デリバリーの中から選択される投与経路による症状または疾患の予防または処置のための、本発明によるポリペプチド、タンパク質、核酸、発現ベクター、組換え細胞または医薬組成物の使用に関する。
【０２２８】
ある実施形態によれば、本発明は、注射の方式が静脈内（ＩＶ）、腹腔内（ＩＰ）、皮下（ＳＣ）および（筋肉内）ＩＭの中から選択される、使用に関する。
【０２２９】
ある実施形態によれば、本発明は、炎症などの障害の患部への直接注射による疾患の処置のための、使用に関する。
【０２３０】
ある実施形態によれば、本発明は、皮膚疾患、乾癬、関節炎、喘息、敗血症、炎症性腸疾患、関節リウマチ、ＳＬＥ、および脊椎関節炎の中から選択される症状の処置のための、本発明によるポリペプチド、タンパク質、核酸、発現ベクター、組換え細胞または医薬組成物の使用に関する。
【０２３１】
ある実施形態によれば、本発明は、関節炎の処置のための、本発明によるポリペプチド、タンパク質、核酸、発現ベクター、組換え細胞または医薬組成物の使用であって、組成物が炎症部位に直接注射される、使用に関する。
【０２３２】
ある実施形態によれば、本発明は、本発明によるポリペプチド、タンパク質、核酸、発現ベクター、組換え細胞または医薬組成物の使用であって、好ましくは組成物が経口送達される、胃腸過敏性疾患、食物アレルギー疾患、食物不耐性疾患および炎症性腸疾患の中から選択される症状の処置のための使用に関する。
【０２３３】
ある実施形態によれば、本発明は、関節炎の処置のための、本発明によるポリペプチド、タンパク質、核酸、発現ベクター、組換え細胞または医薬組成物の使用であって、組成物が吸入により送達される、使用に関する。
【０２３４】
本発明のある実施形態によれば、本発明の実体（ポリペプチド、タンパク質、核酸、発現ベクター、組換え細胞、医薬組成物および／またはインプラント）を使用して、炎症ならびに／または炎症性および自己免疫疾患の作用を低減または改善することができる。
【０２３５】
本発明の実体は、例えば、リンパ球、単球、または免疫系の他の細胞上または内のタンパク質に結合することによりそれらの免疫調節活性を発揮することができる。そのようなタンパク質または受容体は、これらに限定されないが、Ｔｏｌｌ様受容体（ＴＬＲ）、Ｇタンパク質共役型受容体（ＧＰＣＲ）、抗体、接着分子、輸送体（アミノ酸、無機イオン、有機イオンもしくは糖輸送体、膜貫通ポンプ、輸送体タンパク質、エスコートタンパク質、酸輸送タンパク質、陽イオン輸送タンパク質、または陰イオン輸送タンパク質を含むがこれらに限定されない）、ナトリウムチャネル、カリウムチャネル、カルシウムチャネル、リン酸チャネルを含むがこれらに限定されないイオンチャネルなどのチャネルタンパク質、ならびに任意の他の陽イオンまたは陰イオン輸送体を含む、いずれのタンパク質ファミリーに属していてもよい。特に、リンパ球および単球の活性化に関与するカルシウムおよびカルシウム活性化カリウムチャネルは、ＩＳＤペプチドの標的になり得る。
【０２３６】
本発明の実体はまた、細胞膜に変化を導入すること、例えば、膜の曲率を変化させることによってそれらの免疫調節活性を発揮することができ、または膜を透過性にして、もしくは不安定化して代謝物もしくは他の分子およびイオンを通過させることによって、細胞内のそのような分子の生物学的相対濃度を乱れさせること、もしくは膜を横断するそのような分子の勾配を遮断することができ、これは、細胞の正常な機能にとって重要であり得る。他の機序が存在することもある。
【０２３７】
坂口マウスモデルおよびコラーゲン誘発関節炎−マウスモデル、つまりＣＩＡ−マウスモデルであるモデル［ヒトにおけるＩＳＤペプチドの抗関節リウマチ（ａｎｔｉ−ＲｈｕｅｍａｔｏｉｄＡｒｔｈｒｉｔｉｓ）活性を予測する］ならびに本発明のペプチド、タンパク質および医薬製剤のインビボ検証：
ＳＫＧマウスは、Ｔ細胞介在慢性自己免疫性関節炎を自然発症する。これは、Ｔ細胞における重要なシグナル伝達分子である７０ｋＤａのζ会合タンパク質（ＺＡＰ−７０）のＳｒｃホモログ２（ＳＨ２）ドメインをコードする遺伝子の突然変異に起因する（Sakaguchi et al., Nature 2003）。この突然変異は、胸腺におけるＴ細胞の正および負の選択を害し、その結果、関節炎誘発性Ｔ細胞が胸腺で産生されることになる。臨床的には、関節腫脹が指の小関節で始まり、手首および足首をはじめとするより大きい関節に対称性に進行する。組織学的には、腫脹した関節は、隣接する軟骨および軟骨下骨に侵食および浸潤するパンヌスの形成を伴う、重度滑膜炎を示す。ＳＫＧマウスは、追加の関節外病変、例えば、間質性肺炎、血管炎、およびＲＡにおけるリウマドイド結節とよく似ている皮下類壊死性結節を発症する。血清学的には、それらは、ＩＩ型コラーゲンに特異的な高力価のＲＦおよび自己抗体を発生させる。さらに、ＣＤ４＋Ｔ細胞は、ＢＡＬＢ／ｃ遺伝的バックグラウンドを有するＳＫＧマウスにおける関節炎を、Ｔ細胞欠損ＢＡＬＢ／ｃヌードまたはＴ細胞／Ｂ細胞欠損ＳＣＩＤマウスに養子移入することができ、これは、前記疾患がＴ細胞介在自己免疫疾患であることを示す。原因遺伝子に加えて、ＭＨＣ遺伝子の多型も、環境条件に依存してＳＫＧ関節炎の発生の一因となる。したがって、マウスにおけるこの自然発症自己免疫性関節炎は、関節および関節外病変の臨床的および組織学的特徴について、血清学的特徴について、ならびに関節炎の惹起におけるＣＤ４＋Ｔ細胞の重要な役割について、ヒトＲＡと似ている（Sakaguchi et al Nature 2003）。
【０２３８】
サイトカインは、ＳＫＧマウスにおける自然発症ＣＤ４＋Ｔ細胞介在慢性自己免疫性関節炎において重要な役割を果す。畑（Ｈａｔａ）らによって行われた研究（J Clin Invest 2004）は、ＩＬ−６の遺伝的欠損が、血中リウマトイド因子の持続性に関係なく、ＳＫＧマウスにおける関節炎の発症を完全に抑制したことを示す。ＩＬ−１またはＴＮＦ−αのどちらかの欠損が関節炎の発症を遅らせ、その発生率および重症度を実質的に低下させた。その一方で、ＩＬ−１０欠損は疾患を悪化させたが、ＩＬ−４欠損あるいはＩＦＮ−γ欠損は疾患の経過を変えなかった。関節炎ＳＫＧマウスの滑液は、大量のＩＬ−６、ＴＮＦ−αおよびＩＬ−１を、罹患した関節におけるこれらのサイトカイン遺伝子の活性転写に従って含有した。注目すべきことに、免疫組織化学的検査により、滑膜細胞の別個のサブセットが炎症した滑膜において異なるサイトカインを産生し、表在性の滑膜表層細胞が主としてＩＬ−１およびＴＮＦ−αを産生するのに対して、散在性の滑膜下細胞がＩＬ−６を産生することが明らかになった。したがって、ＩＬ−６、ＩＬ−１、ＴＮＦ−αおよびＩＬ−１０は、ＳＫＧ関節炎の発症において別個の役割を果す。これらの結果は、各サイトカインのみならず、別個のサイトカインを分泌する各細胞集団も標的とすることが、関節リウマチの有効な処置であり得ることも示す（Hata et al. j.Clin Invest 2004）。
【０２３９】
本発明のある実施形態によれば、本発明の実体は、関節炎の坂口（ＳＫＧ）マウスモデルにおいて炎症、特に関節の炎症の発症を抑制することができる。本発明によれば、本発明の実体は、そのような動物における関節炎スコアを低下させることができ、マンナン注射による炎症の誘発時のスコアが低下され、該スコアの少なくとも５％、例えば、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、例えば、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、例えば、少なくとも４０％、少なくとも４５％、例えば、少なくとも５０％、少なくとも５５％、例えば、少なくとも６０％、少なくとも６５％、例えば、少なくとも７０％、少なくとも７５％、例えば、少なくとも８０％、少なくとも８５％低下がある。
【０２４０】
本発明の実体は、ＳＫＧマウスモデルによれば全身性炎症に罹患している動物における免疫応答を抑制することができる。本発明によれば、本発明の実体は、マンナンを追加投与した坂口マウスにおいてＩＬ−６レベルを低下させることができ、マンナンを追加投与したマウスにおいてＩＬ−６レベルが低下され、該ＩＬ−６レベルの少なくとも５％、例えば、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、例えば、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、例えば、少なくとも４０％、少なくとも４５％、例えば、少なくとも５０％、少なくとも５５％、例えば、少なくとも６０％、少なくとも６５％、例えば、少なくとも７０％、少なくとも７５％、例えば、少なくとも８０％、少なくとも８５％低下がある。
【０２４１】
コラーゲン誘発関節炎（ＣＩＡ）マウスモデルは、関節リウマチの最もよく研究されている自己免疫疾患モデルである。自己免疫性関節炎は、このモデルでは、完全フロイントアジュバントとＩＩ型コラーゲン（ＣＩＩ）のエマルジョンでの免疫付与により誘発される。
【０２４２】
このモデルはいくつかの病理学的特徴をＲＡと共有し、ＩＩ型コラーゲン（ＣＩＩ）は、ＲＡの標的組織である軟骨における主要タンパク質である。加えて、軟骨タンパク質に基づく抗原定義モデルのＣＩＡマウスモデルは、免疫付与と疾患症状発現との期間が最短である。ＣＩＡモデルは、疾患発症および進行における個々の細胞型の役割を含む、自己免疫の潜在的発病機序を同定するために、ならびに新たな治療法の設計および試験のために、広範に使用されてきた。近年、ＣＩＡモデルは、マクロファージおよびＴ細胞により産生されるサイトカインであって、ＲＡの発病における主要炎症メディエーターであるサイトカインである腫瘍壊死因子−αを標的とするものなどの、生物学に基づく新たな治療法の試験および開発に役立っている。
【０２４３】
ＣＩＡは、マウスの遺伝的に感受性の高い系統において、完全フロイントアジュバント（ＣＦＡ）に乳化されたＣＩＩでの免疫付与により誘発される。その後の発病は、滑膜過形成、単核細胞浸潤、軟骨分解をはじめとするいくつかの病理学的特徴をＲＡと共有し、ＲＡ同様、感受性が特異的ＭＨＣクラスＩＩ遺伝子の発現に関連づけられる。このモデルとＲＡとの最も顕著な差は、リウマトイド因子がＣＩＡには存在せず、ＣＩＡには性バイアスが殆どまたは全くないこと、および多少の再発性ＣＩＡマウスモデルが記載されているが一般にはこの実験的疾患が一相性であることである。ＣＩＩに対するＴ細胞およびＢ細胞免疫の存在がＲＡに関して報告されているが、これが、この疾患に関連する発病の原因因子であるのか、または結果であるのかは不明である。ＣＩＡモデルの元々の「ゴールド・スタンダード」は、ＤＢＡ／１（Ｈ−２ｑ）マウス系統であった。しかし、近年、ＲＡに対する感受性に関連するＨＬＡ−ＤＲ１またはＤＲ４クラスＩＩ遺伝子のトランスジェニック発現がレシピエントマウス系統においてＣＩＡに対する感受性を付与するいくつかのＨＬＡ−ＤＲマウスモデルが確立された。これらのデータは、ＲＡに対する感受性に関連するＤＲ分子がＣＩＩへの免疫応答に少なくとも関与することを示す。
【０２４４】
ＣＩＡの免疫病原性は、ＣＩＩへのＴ細胞特異的応答とＢ細胞特異的応答の両方に関わる。ＣＩＡを媒介するＣＩＩの免疫優性Ｔ細胞決定基が、この実験的疾患に対する感受性に関連するクラスＩＩ分子の大部分について同定されており、少数は、クラスＩＩ分子およびＴ細胞受容体とのそれらの相互作用について詳細に研究されている。同様に、ＣＩＩへの抗体応答の標的になるＢ細胞決定基も同定されており、ＲＡ患者からの抗体がＣＩＡからのものと同じＣＩＩ分子領域を標的とするという証拠が多少ある。病原性Ｂ細胞決定基の同定は、病原性抗体が三重らせん未変性ＣＩＩと結合することができなければならないという必要条件のせいでより困難になることが判明した。Ｔ細胞が主要発病機序である、実験的自己免疫性脳脊髄炎（ＥＡＥ）などの他の自己免疫モデルとは異なり、ＣＩＡの発病は、軟骨と結合し、補体結合能力があるＣＩＩ特異的抗体によって大部分が媒介される。まとめると、これらのデータは、研究者が、このモデルにおける広範な発病機序を研究すること、ならびに新規治療法を設計および試験することを可能にした（Brand, Latham, & Rosloniec, 2007）。
【０２４５】
ＴＮＦ−αはＣＩＡにおいて重要な役割を果す。研究により、コラーゲン関節炎（ｃｏｌｌａｇｅｎａｒｔｈｒｉｔｉｓ）の抑制はＴＮＦαに対する中和抗体でも、可溶性ＴＮＦ受容体でも実現されることが証明された。興味深いことに、ＴＮＦαは、関節炎の発症時に極めて重要であるが後期にはさほど有力でないようであることが見出された。実際、ＴＮＦ受容体ノックアウトマウスにおける研究により、関節炎の発生率および重症度はそのようなマウスにおけるほうが低いが、一旦関節が罹患してしまうと一見ＴＮＦ依存的にびらん性損傷への完全な進行が認められることが実証された。
【０２４６】
同様に、ＣＩＡにおいて、ＩＬ−１ａとＩＬ−１βの両方に対する中和抗体のセットでの処置は、既存の関節炎において依然として非常に有効であり、炎症と軟骨破壊の進行の両方を低減させることが証明された。別々のＩＬ−１アイソフォームに対する抗体に関する研究により、ＩＬ−１βのほうが重要であることが明らかになった。これは、ＩＣＥ（ＩＬ−１β変換酵素）阻害剤のこのモデルにおける明白な有効性、およびＩＣＥ欠損マウスにおけるＣＩＡ低減の観察と一致している。同様に、炎症した膝関節へのレトロウイルス遺伝子移入によるＩＬ−１ｒａの局所的過剰発現は、その部位に対して有効であった。関節炎の動物モデルにおける別々の標的としてのＴＮＦαおよびＩＬ−１βの同定と一致して、ＴＮＦブロッカーとＩＬ−１ブロッカーの両方での併用療法は最適な保護をもたらすことが、説得力をもって実証されている。
【０２４７】
ＩＬ−６もＣＩＡの発症において重要な役割を果し、ＩＬ−６−／−マウスは、ＩＩ型コラーゲンへの抗体応答低減、ならびに膝関節における炎症細胞および組織損傷の非存在を伴って、ＣＩＡから完全に保護される。ＣＩＩへの特異的免疫応答の抑制とＴｈ２サイトカインプロファイルにシフトする傾向（ａ  ｔｅｎｄｅｎｃｙ  ｔｏ  ａ  ｓｈｉｆｔ）の両方が、ＩＬ−６−／−マウスにおけるＣＩＡの減弱にある程度寄与し得る（Sasai et al., 1999）。
【０２４８】
本発明のさらなる実施形態によれば、本発明の実体は、関節炎のコラーゲン誘発関節炎（ＣＩＡ）マウスモデルにおいて炎症、特に関節の炎症の発症を抑制することができる。
【０２４９】
本発明のある実施形態によれば、本発明の免疫抑制ポリペプチドは、そのような動物における関節炎スコアを低下させることができ、コラーゲン注射による炎症の誘発からのスコアが低下され、該スコアの少なくとも５％、例えば、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、例えば、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、例えば、少なくとも４０％、少なくとも４５％、例えば、少なくとも５０％、少なくとも５５％、例えば、少なくとも６０％、少なくとも６５％、例えば、少なくとも７０％、少なくとも７５％、例えば、少なくとも８０％、少なくとも８５％低下がある。
【０２５０】
タンパク質およびペプチド
本発明の一実施形態において、ポリペプチドは単量体のものである。本発明の別の実施形態において、ポリペプチドは二量体のものである。本発明の別の実施形態において、ポリペプチドは三量体のものである。本発明のさらに別の実施形態において、ポリペプチドは多量体のものである。したがって、本発明によれば、ポリペプチドは、単量体のもの、同種二量体のもの、異種二量体のもの、同種三量体のもの、異種三量体のもの、同種多量体のものおよび／または異種多量体のものであり得る。特定の好ましい実施形態において、本発明のポリペプチドは、同種二量体のものである。
【０２５１】
加えて、本発明は、二量体、三量体および／または多量体ポリペプチドの組合せを含み得る。一実施形態において、本発明は、同種二量体ペプチドを他の同種二量体ペプチドと組み合わせて含む。別の実施形態において、本発明は、同種二量体ペプチドを異種二量体ペプチドと組み合わせて含む。ペプチドの以下の組合せも本発明の範囲内である：同種二量体ペプチドと同種三量体のもの、同種二量体のものと異種三量体のもの、異種二量体のものと同種三量体のもの、異種二量体のものと異種三量体のもの、同種二量体のものと同種多量体のもの、異種二量体のものと同種多量体のもの、同種二量体のものと異種多量体のもの、異種二量体のものと異種多量体のもの、同種三量体のものと同種多量体のもの、同種三量体のものと異種多量体のもの、異種三量体のものと同種多量体のもの、および異種三量体のものと異種多量体免疫抑制ペプチド。
【０２５２】
本発明のある一定の実施形態によれば、ポリペプチドは、同種二量体、例えば、配列番号１〜１０４３の中から選択されるペプチドのうちの２つによって形成される同種二量体である。
【０２５３】
一実施形態において、単量体ペプチドは、それらのペプチドのＮ末端とＮ末端またはＣ末端とＣ末端を架橋させることにより、架橋されて二量体になる。好ましい実施形態において、ペプチドは、それらのペプチドのＣ末端とＣ末端を架橋させるジスルフィド結合により、架橋される。
【０２５４】
ある実施形態において、本発明のポリペプチドは、担体タンパク質として作用することができる少なくとも１つのタンパク質に連結される。多量体は、担体タンパク質もしくは他の分子に連結させることにより、および／またはいくつかのペプチドを前記担体タンパク質に連結させることにより形成することができる。
【０２５５】
一実施形態において、単量体ペプチドは、１つより多くのペプチドとカップリングさせることができるタンパク質（例えば、担体タンパク質）または任意の他の分子に化学的に連結される。カップリングは共有結合によることもあり、またはより弱い結合、例えば、水素結合もしくはファンデルワールス結合によることもある。ペプチドは、そのＮ末端、Ｃ末端、またはペプチド配列内のどこでカップリングされていてもよい。ペプチドの架橋について本明細書に記載の任意の方法を使用して、ペプチドをタンパク質または担体分子とカップリングさせて、前記ペプチドのいくつかのコピーを含有する分子を得ることができる。
【０２５６】
本発明のポリペプチドは、種々の長さのものであり得る。しかし、免疫抑制ペプチドの活性成分が、約１００アミノ酸、例えば約９０アミノ酸、例えば約８０アミノ酸、例えば約７０アミノ酸、例えば約６０アミノ酸、例えば約５０アミノ酸、例えば約４０アミノ酸、例えば約３５アミノ酸の最大長を有することは理解される。
【０２５７】
ある実施形態によれば、ポリペプチド、または該ポリペプチドの配列は、より大きいペプチドまたは分子の一部を構成し、その生物学的特性をなお保持することができる。ある実施形態によれば、さらなるアミノ酸または分子を免疫抑制ペプチドに付加させて、該免疫抑制ペプチドの溶解性および／またはバイオアベイラビリティ特性を向上させることができる。
【０２５８】
さらに、本発明は、１つまたは複数のアミノ酸残基が修飾されているポリペプチドであって、前記１つまたは複数の修飾が、インビボまたはインビトロでの化学的誘導体化、例えば、これらに限定されないが、アセチル化またはカルボキシル化、グリコシル化、例えば、グリコシル化に影響を与える酵素、例えば、哺乳動物グリコシル化酵素もしくは脱グリコシル化酵素へのポリペプチドの曝露の結果として生じるグリコシル化、リン酸化、例えば、リン酸化されたアミノ酸残基、例えば、ホスホチロシン、ホスホセリンおよびホスホトレオニンをもたらすアミノ酸残基の修飾からなる群から好ましくは選択される、ポリペプチドも包含する。本発明によるポリペプチドは、天然に存在するＬ−アミノ酸、Ｄ−アミノ酸および天然に存在しない合成アミノ酸からなる群から独立して選択される１つまたは複数のアミノ酸を含むことができる。本発明のポリペプチドの１つまたは複数のアミノ酸残基は、好ましくは、タンパク質分解に対する抵抗性および安定性を向上させるように、または溶解特性を最適化するように、またはポリペプチドを治療剤としてより適したものにするように修飾される。本発明は、ポリペプチドのＮおよび／もしくはＣ末端を望ましくない分解から保護するために、ならびに／または前記末端を安定化するために、ブロッキング基が導入されている、本発明のポリペプチドにも関する。そのようなブロッキング基は、これらに限定されないが、分岐または非分岐アルキル基およびアシル基、例えば、ホルミル基およびアセチル基、その上それらの置換形態、例えばアセトアミドメチルも含む群から選択することができる。本発明は、以下のものにも関する：１つまたは複数のブロッキング基が、ペプチドのＮ末端にカップリングされているかまたはＮ末端アミノ酸残基の代わりに使用されている、アミノ酸のデスアミノ類似体を含むＮ末端ブロッキング基から選択される、本発明のポリペプチド。１つまたは複数のブロッキング基が、Ｃ末端のカルボキシル基が組み込まれているかまたは組み込まれていないＣ末端ブロッキング基、例えば、エステル、ケトンおよびアミド、ならびに脱カルボキシル化アミノ酸類似体から選択される、しかしこれらに限定されない、本発明によるポリペプチド。１つまたは複数のブロッキング基が、エステルまたはケトン形成性アルキル基（ｅｓｔｅｒ  ｏｒ  ｋｅｔｏｎｅｆｏｒｍｉｎｇ  ａｌｋｙｌ  ｇｒｏｕｐｓ）、例えば、低級（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル基、例えばメチル、エチルおよびプロピル、ならびにアミド形成性アミノ基、例えば、第１級アミン（−ＮＨ２）、ならびにモノおよびジアルキルアミノ基、例えばメチルアミノ、エチルアミノ、ジメチルアミノ、ジエチルアミノ、メチルエチルアミノなどを含む、Ｃ末端ブロッキング基から選択される、本発明によるポリペプチド。Ｎ末端の遊離アミノ基および前記末端の遊離カルボキシル基を一緒にポリペプチドから除去して、該ポリペプチドの生物活性に有意な影響を与えることなくそのデスアミノおよび脱カルボキシル化形態を形成することができる、本発明によるポリペプチド。望ましい特性は、例えば、化学的保護により、すなわち、本発明のタンパク質およびペプチドを保護化学基と反応させることに���り実現することができ、または天然に存在しないアミノ酸、例えば、Ｄ−アミノ酸の組込みにより、本発明のタンパク質およびペプチドの半減期を延長するという結果をもって実現することができる。
【０２５９】
ある実施形態によれば、本発明は、内在性レトロウイルス由来の遺伝子または遺伝子セグメントに関する。内在性レトロウイルスは、古代レトロウイルス組込みの遺物であり、他のレトロウイルスとの配列相同性のため当業者には容易に同定することができる。
【０２６０】
ある実施形態によれば、本発明は、ＲＮＡに転写される内在性レトロウイルス由来の遺伝子または遺伝子セグメントに関する。
【０２６１】
ある実施形態によれば、本発明は、その転写レベルが、疾患または症状に関与する他の遺伝子の転写レベルと相関がある、ＲＮＡに転写される内在性レトロウイルス由来の遺伝子または遺伝子セグメントに関する。
【０２６２】
ある実施形態によれば、本発明は、その転写レベルが、自己免疫疾患に関与する他の遺伝子の転写レベルと相関がある、ＲＮＡに転写される内在性レトロウイルス由来の遺伝子または遺伝子セグメントに関する。
【０２６３】
ある実施形態によれば、本発明は、その転写レベルが、ある症状を有する対象においてそのような症状を有さない対象と比較して異なる、ＲＮＡに転写される内在性レトロウイルス由来の遺伝子または遺伝子セグメントに関する。そのような症状は、自己免疫疾患または先天性疾患などの、疾患であり得る。
【０２６４】
ある実施形態によれば、本発明は、その転写レベルが、自己免疫症状を有する対象においてそのような症状を有さない対象と比較して異なる、ＲＮＡに転写される内在性レトロウイルス由来の遺伝子または遺伝子セグメントに関する。そのような症状としては、ＳＬＥ、関節リウマチ、ＩＢＤなどが挙げられる。
【０２６５】
ある実施形態によれば、本発明は、異なる個体において異なるコピー数を有する、内在性レトロウイルス由来の遺伝子または遺伝子セグメントに関する。
【０２６６】
ある実施形態によれば、本発明は、ある疾患または症状を有する個体において前記疾患または症状を有さない個体と比較して異なるコピー数を有する、内在性レトロウイルス由来の遺伝子または遺伝子セグメントに関する。
【０２６７】
ある実施形態によれば、本発明は、自己免疫を有する個体において自己免疫症状を有さない個体と比較して異なるコピー数を有する、内在性レトロウイルス由来の遺伝子または遺伝子セグメントに関する。
【０２６８】
ある実施形態によれば、本発明は、自己免疫または先天性疾患を有する個体において自己免疫症状または先天性疾患を有さない個体と比較して異なるコピー数を有する、内在性レトロウイルス由来の遺伝子または遺伝子セグメントに関する。
【０２６９】
ある実施形態によれば、本発明は、ＳＬＥ、関節リウマチ、ＩＢＤなどのような症状を有する個体においてそのような症状を有さない個体と比較して異なるコピー数を有する、内在性レトロウイルス由来の遺伝子または遺伝子セグメントに関する。
【０２７０】
ある実施形態によれば、本発明は、異なる個体において一塩基多型（ＳＮＰ）を含有する、内在性レトロウイルス由来の遺伝子または遺伝子セグメントに関する。
【０２７１】
ある実施形態によれば、本発明は、ある疾患または症状を有さない個体と比較して前記疾患または症状の発生率と相関する一塩基多型（ＳＮＰ）を有する、内在性レトロウイルス由来の遺伝子または遺伝子セグメントに関する。
【０２７２】
ある実施形態によれば、本発明は、自己免疫症状を有さない個体と比較して自己免疫の発生率と相関するＳＮＰを有する、内在性レトロウイルス由来の遺伝子または遺伝子セグメントに関する。
【０２７３】
ある実施形態によれば、本発明は、自己免疫または先天性疾患を有する個体において自己免疫症状または先天性疾患を有さない個体と比較して高いまたは低い頻度で発生するＳＮＰを有する、内在性レトロウイルス由来の遺伝子または遺伝子セグメントに関する。
【０２７４】
ある実施形態によれば、本発明は、ＳＬＥ、関節リウマチ、ＩＢＤなどのような症状を有さない個体と比較してそのような症状の発生率と相関するＳＮＰを有する、内在性レトロウイルス由来の遺伝子または遺伝子セグメントに関する。
【０２７５】
ある実施形態によれば、本発明は、１つまたは複数の免疫抑制ペプチドの組成物に関する。免疫抑制ポリペプチドは、動物において免疫応答を抑制することができるポリペプチドであり、前記動物には、人間および他の動物、例えば、飼育もしくは畜産動物（ネコ、イヌ、ウシ、ヒツジ、ウマ、ブタなど）または試験種、例えばマウス、ラット、ウサギなどが含まれる。
【０２７６】
本発明の一実施形態において、免疫抑制ポリペプチドは、Ｔリンパ球増殖の少なくとも５％阻害、Ｔリンパ球増殖の少なくとも１０％、少なくとも２０％、例えば少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、例えば少なくとも６０％、例えば少なくとも７０％阻害が可能である。特定の実施形態において、本発明の免疫抑制ペプチドは、Ｔリンパ球増殖の少なくとも７５％阻害、Ｔリンパ球増殖の少なくとも８０％、例えば少なくとも８５％、少なくとも９０％、例えば少なくとも９５％、少なくとも９７％、例えば少なくとも９９％、少なくとも１００％阻害が可能である。
【０２７７】
本発明の別の実施形態によれば、免疫抑制ポリペプチドは、本明細書において以下で説明するような、刺激性接触皮膚炎モデルであるＴＰＡモデルによれば、全身性の皮膚の炎症に罹患している動物において免疫応答を抑制することができる。本発明によれば、本発明の免疫抑制ポリペプチドは、１３−酢酸１２−ミリスチン酸ホルボール（ＴＰＡ）を追加投与したマウスにおいて耳の肥厚を低減させることができ、ＴＰＡの追加投与後の耳の肥厚が低減され、耳の肥厚の少なくとも５％、例えば、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、例えば少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、例えば少なくとも４０％、少なくとも４５％、例えば少なくとも５０％、少なくとも５５％、例えば少なくとも６０％、少なくとも６５％、例えば少なくとも７０％、少なくとも７５％、例えば少なくとも８０％、少なくとも８５％低減がある。
【０２７８】
本発明の医薬組成物において使用するための薬学的に許容される酸付加塩の例としては、例えば、塩酸、臭化水素酸、リン酸、メタリン酸、硝酸および硫酸などの無機酸、ならびに酒石酸、酢酸、クエン酸、リンゴ酸、乳酸、フマル酸、安息香酸、グリコール酸、グルコン酸、コハク酸、ｐ−トルエンスルホン酸およびアリールスルホン酸などの有機酸が挙げられる。
【０２７９】
いくつかの定義
タンパク質およびペプチド
「ペプチド」および「ポリペプチド」という用語は、ペプチド結合によってカップリングされている少なくとも３つのアミノ酸残基を含有する任意の分子を指す。「ポリペプチド」という用語は、ここでは、該ポリペプチドの特定の長さに必ずしも限定されずに、ペプチドおよび／またはタンパク質について使用される。
【０２８０】
「タンパク質」という用語は、ポリペプチドと同義で使用され、いずれの特定の長さにもサイズにも限定されない。ポリペプチドおよびタンパク質は、断片もしくは複合体の形態であってもよく、あるいは任意の一次、二次、三次または四次構造、例えば、これらに限定されないが、単量体、二量体、三量体、四量体もしくは多量体、アルファらせん、ベータシートまたは任意の他のらせん構造および／もしくは球状構造を有してもよい。ポリペプチドおよびタンパク質は、架橋または任意の化学修飾を含有してもよい。
【０２８１】
ポリペプチドおよびタンパク質は、修飾されていてもよい。非限定的な例として、本発明のポリペプチドは、グリコシル化、アシル化および／または二量体化もしくは三量体化されている必要はないが、グリコシル化、アシル化および／または二量体化もしくは三量体化されていてもよい。
【０２８２】
ポリペプチドおよびタンパク質は、天然に存在するＬ−アミノ酸、Ｄ−アミノ酸および天然に存在しない合成アミノ酸からなる群から独立して選択される１つまたは複数のアミノ酸を含むことができる。
【０２８３】
「架橋因子（ｃｒｏｓｓ−ｌｉｎｋｅｒ）」または「架橋部分」という表現は、本明細書において以下でさらに詳細に説明するような１つまたは複数のポリペプチドと１つのポリペプチドを架橋させるために使用される外部架橋剤（ｃｒｏｓｓ−ｌｉｎｋｉｎｇ  ａｇｅｎｔ）により付与される連結部分を指す。
【０２８４】
「担体」という用語は、ポリペプチドの数を増加させるために、ポリペプチドの活性もしくは免疫抑制効果を増加させるために、分子に安定性を付与するために、ペプチドの生物活性を増加させるために、またはその血清半減期を増加させるために、またはその免疫原性を低下させるために、ポリペプチドに結合される化合物を指す。「担体」は、タンパク質担体であってもよく、または非タンパク質担体であってもよい。非タンパク質担体の非限定的な例としては、リポソーム、ミセル、高分子ナノ粒子およびジアミノエタンが挙げられる。リポソームは、グルコサミノグリカンヒアルロナン（ＨＡ）および／またはＰＥＧを含み得る。一実施形態では、担体は、イムノリポソームである。他の担体としては、プロタミン、または多糖類、例えば、アミノデキストランもしくはキトサンが挙げられる。タンパク質担体の非限定的な例としては、キーホールリンペットヘモシアニン、血清タンパク質、例えば、トランスフェリン、ウシ血清アルブミン、ヒト血清アルブミン、クジラミオグロビン、オボアルブミン、免疫グロブリン、リゾチーム、炭酸脱水酵素、またはホルモン、例えばインスリンが挙げられる。本発明の他の実施形態において、担体は、本明細書において以下で説明するような薬学的に許容される担体であってもよい。本発明の免疫調節性ペプチドは、本明細書において以下でさらに説明するような架橋手段により担体にカップリングさせることができる。
【０２８５】
「タンパク質修飾」、「タンパク質安定性」および「ペプチド安定性」という用語は、タンパク質およびペプチドの状態、特に、前記タンパク質および／またはペプチドが、分解、フィブリル化および凝集に対してより抵抗性であり、ならびに／あるいは加水分解および／もしくはタンパク質分解に向かう特性が増加したまたは有効保存期間が改善された状態を記述するために使用される。特に、タンパク質分解安定性は、プロテアーゼとしても公知であるタンパク質分解酵素、すなわち、タンパク質またはペプチドのアミド／ペプチド結合の加水分解を触媒する酵素の作用に対する抵抗性を指す。さらに、本発明は、１つまたは複数のアミノ酸残基が修飾されているポリペプチドであって、前記１つまたは複数の修飾が、インビボまたはインビトロでの化学的誘導体化、例えば、これらに限定されないが、アセチル化またはカルボキシル化、グリコシル化、例えば、グリコシル化に影響を与える酵素、例えば、哺乳動物グリコシル化もしくは脱グリコシル化酵素へのポリペプチドの曝露の結果として生じるグリコシル化、リン酸化、例えば、リン酸化されたアミノ酸残基、例えば、ホスホチロシン、ホスホセリンおよびホスホトレオニンをもたらすアミノ酸残基の修飾からなる群から好ましくは選択される、ポリペプチドも包含する。本発明によるポリペプチドは、天然に存在するＬ−アミノ酸、天然に存在するＤ−アミノ酸および天然に存在しない合成アミノ酸からなる群から独立して選択される１つまたは複数のアミノ酸を含むことができる。本発明のポリペプチドの１つまたは複数のアミノ酸残基は、好ましくは、タンパク質分解に対する抵抗性および安定性を向上させるように、または溶解特性を最適化するように、またはポリペプチドを治療剤としてより適したものにするように修飾される。本発明は、ポリペプチドのＮおよび／もしくはＣ末端を望ましくない分解から保護するために、ならびに／または前記末端を安定化するために、ブロッキング基が導入されている、本発明のポリペプチドにも関する。そのようなブロッキング基は、これらに限定されないが、分岐または非分岐アルキル基およびアシル基、例えば、ホルミル基およびアセチル基、その上、それらの置換形態、例えばアセトアミドメチルも含む群から選択することができる。本発明は、以下のものにも関する：１つまたは複数のブロッキング基が、ペプチドのＮ末端にカップリングされているかまたはＮ末端アミノ酸残基の代わりに使用されている、アミノ酸のデスアミノ類似体を含むＮ末端ブロッキング基から選択される、本発明のポリペプチド。１つまたは複数のブロッキング基が、Ｃ末端のカルボキシル基が組み込まれているかまたは組み込まれていないＣ末端ブロッキング基、例えば、エステル、ケトンおよびアミド、ならびに脱カルボキシル化アミノ酸類似体から選択される、しかしこれらに限定されない、本発明によるポリペプチド。１つまたは複数のブロッキング基が、エステルまたはケトン形成性アルキル基、例えば、低級（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル基、例えばメチル、エチルおよびプロピル、ならびにアミド形成性アミノ基、例えば、第１級アミン（−ＮＨ２）、ならびにモノおよびジアルキルアミノ基、例えばメチルアミノ、エチルアミノ、ジメチルアミノ、ジエチルアミノ、メチルエチルアミノなどを含む、Ｃ末端ブロッキング基から選択される、本発明によるポリペプチド。Ｎ末端の遊離アミノ基および前記末端の遊離カルボキシル基を一緒にポリペプチドから除去して、該ポリペプチドの生物活性に有意な影響を与えることなくそのデスアミノおよび脱カルボキシル化形態を形成することができる、本発明によるポリペプチド。特性の増加は、例えば、化学的保護により、すなわち、本発明のタンパク質およびペプチドを保護化学基と反応させることにより実現することができ、または天然に存在しないアミノ酸、例えば、Ｄ−アミノ酸の組込みにより、本発明のタンパク質およびペプチドの半減期を延長するという結果をもって実現することができる。
【０２８６】
一塩基多型（ＳＮＰ）：
単純塩基多型としても公知の一塩基多型（ＳＮＰ、スニップと発音される；複数形スニップス）は、ゲノム（または他の共有配列）内の一塩基−Ａ、Ｔ、ＣまたはＧ−が生物学的種のメンバー間または対の染色体間で異なる、集団内に共通して存在する（例えば１％）ＤＮＡ配列変異である。例えば、異なる個体からの２つの配列決定されたＤＮＡ断片、ＡＡＧＣＣＴＡ対ＡＡＧＣＴＴＡは、一塩基の差を有する。この場合、２つの対立遺伝子があると言う。ほぼすべての共通ＳＮＰは、対立遺伝子を２つしか有さない。ＳＮＰのゲノム分布は、均一ではない。ＳＮＰは、非コード領域においてコード領域より高頻度に出現し、または一般には、自然選択が作用しており、最も好適な遺伝的適応を構成するＳＮＰの対立遺伝子を「固定している」（他の変異体を排除している）場合に出現する。遺伝子組換えおよび突然変異率などの他の因子もＳＮＰ密度を左右し得る。
【０２８７】
ＳＮＰ密度は、マイクロサテライトの存在により予測することができる：特にＡＴマイクロサテライトは、ＳＮＰ密度の強力な予測因子であり、長い（ＡＴ）（ｎ）繰り返し配列が、有意に低下したＳＮＰ密度の領域および低いＧＣ含量の領域において見出される傾向がある。
【０２８８】
集団内で、ＳＮＰは、マイナー対立遺伝子頻度−特定の集団内で観察される遺伝子座での最低対立遺伝子頻度−を指定することができる。これは、単に、一塩基多型についての２つの対立遺伝子頻度のうちの小さいほうの頻度である。ヒト集団間には変異があるため、ある地理群または民族群ではよく見られるＳＮＰ対立遺伝子が別の群ではかなり稀であることもある。
【０２８９】
個体間の（特に、ゲノムの非コード部分における）これらの遺伝子変異は、化学捜査に使用されるＤＮＡフィンガープリント法に活用されることもある。また、これらの遺伝的変異は疾患に対する我々の感受性の差の根底にある。病気の重症度、および我々の身体の処置への応答の仕方もまた、遺伝子変異の現れである。例えば、ＡＰＯＥ（アポリポタンパク質Ｅ）遺伝子の一塩基突然変異は、より高いアルツハイマー病リスクに関連している。
【０２９０】
相同性および同一性
「相同性」という用語は、２つ以上のポリヌクレオチド配列間または２つ以上のポリペプチド配列間の配列類似性または、同義で、配列同一性を指す。
【０２９１】
「パーセント同一性」および「％同一性」という句は、ポリペプチド配列に適用される場合、標準アルゴリズムを使用してアラインメントされた少なくとも２つのポリペプチド配列間の残基一致パーセンテージを指す。ポリペプチド配列アラインメント方法は周知である。一部のアラインメントの方法は、保存的アミノ酸置換を考慮に入れる。上記でより詳細に説明した、そのような保存的置換は、置換部位における変化および疎水性を一般に保存し、したがってポリペプチドの構造（およびしたがって機能）を保存する。
【０２９２】
「パーセント同一性」は、例えば特定の配列番号によって定義されるような、被定義ポリペプチド配列全体の長さにわたって測定されることもあり、またはより短い長さにわたって、例えば、より大きい被定義ポリペプチド配列から取った断片、例えば、連続する少なくとも６、少なくとも８、少なくとも１０、少なくとも１５、少なくとも２０、少なくとも３０、少なくとも４０、少なくとも５０、少なくとも７０または少なくとも１５０残基の断片の長さにわたって測定されることもある。このような長さは例示的なものに過ぎず、当然のことながら、本明細書において表、図または配列表に示されている配列により支持される任意の断片長が、パーセンテージ同一性が測定され得る長さを記載するために使用され得る。
【０２９３】
他の用語
アジュバントは、抗原に対する免疫応答を増強する、および／またはそれを所望の免疫応答に向けて調節する、成分である。アジュバントは、特定のワクチン抗原と併用されたときに抗原特異的免疫応答を加速、延長または強化するように作用する任意の物質と定義される。
【０２９４】
免疫療法という用語は、免疫応答を誘導、強化または抑制することによる疾患の処置を指す。免疫応答を惹起または増幅するように設計された免疫療法は、活性化免疫療法として分類され、その一方で低減または抑制する免疫療法は、抑制免疫療法として分類される。
【０２９５】
「免疫抑制ポリペプチド」という用語は、免疫抑制活性を示すことができるポリペプチドについて使用される。「本発明の免疫抑制ポリペプチド」という用語は、免疫抑制活性を示すことができる、本発明のポリペプチドについて使用される。
【０２９６】
「免疫調節」という用語は、免疫系の変化について、またはその機能を活性化もしくは抑制する薬剤による免疫応答の変化について本明細書では使用される。「免疫調節」という用語は、部分的にもしくは完全に抑制される、または誘発もしくは誘導もしくは強化される、免疫応答の過程を指すこともある。これは、免疫付与または免疫調節薬の投与を含み得る。
【０２９７】
「免疫調節性ペプチド」という用語は、免疫調節活性を示すことができるポリペプチドについて使用される。「本発明の免疫調節性ポリペプチド」という用語は、免疫調節活性を示すことができる、本発明のポリペプチドについて使用される。
【０２９８】
同様に、本明細書で使用される「増殖調節」は、細胞増殖が部分的にもしくは完全に抑制されるまたは細胞増殖が誘導もしくは増進もしくは促進される過程（ｔｈｅ  ｐｒｏｃｅｓｓ  ｏｆ  ｗｅｒｅ  ｔｈｅ  ｃｅｌｌ  ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ  ｉｓ  ｅｉｔｈｅｒ  ｓｕｐｐｒｅｓｓｅｄ，  ｐａｒｔｌｙ  ｏｒ  ｃｏｍｐｌｅｔｅｌｙ，  ｏｒ  ｗｈｅｒｅ  ｃｅｌｌ  ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ  ｉｓ  ｉｎｄｕｃｅｄ  ｏｒ  ｅｎｈａｎｃｅｄ  ｏｒ  ｐｒｏｍｏｔｅｄ）を指す。
【０２９９】
「物質」という用語は、本明細書のどこで使用される場合も、本発明のポリペプチドを含むのに適した物質の任意の形態を含む。
【０３００】
そのような物質の非限定的な例は、クリーム、ローション、懸濁性ローション、軟膏、ゲル、香膏、半固形軟膏、油、フォーム、シャンプー、スプレー剤、エアロゾル、ならびに経皮パッチおよび絆創膏である。
【０３０１】
「処置」という用語は、本明細書のどこで使用される場合も、本明細書に記載の臨床症状を終わらせること、予防すること、改善すること、および／またはそのような臨床症状に対する感受性を低下させることを目的とする、任意のタイプの治療を含む。好ましい実施形態において、処置という用語は、予防的処置、すなわち、本明細書で定義の臨床症状、障害または症状の感受性を低下させるための治療に関する。
【０３０２】
したがって、本明細書で使用される「処置」、「処置すること」などは、ヒトを含む哺乳動物における病的症状または障害の任意の処置を包含する、所望の薬理学的および／または生理的効果を得ることを指す。前記効果は、障害もしくはその症状を完全にもしくは部分的に防ぐ点で予防的であることもあり、ならびに／または障害をおよび／もしくは該障害に起因する有害作用を部分的にもしくは完全に治癒させる点で治療的であることもある。すなわち、「処置」は、（１）対象における障害の発生または再発を防ぐこと、（２）障害を抑制すること、例えば、その発症を抑止すること、（３）例えば、喪失した、欠損している、もしくは不完全な機能を回復させるかもしくは修復すること、または効率の悪い過程を刺激することにより、宿主がもはや障害またはその症状に苦しまないように、障害または少なくともそれに関連する症状を停止させるまたは終わらせること、例えば、障害またはその症状を退行させること、あるいは（４）障害またはそれに関連する症状を緩和、軽減または改善することを含み、緩和することは、炎症、疼痛および／または免疫不全などのパラメータの規模の低下を少なくとも指すために広い意味で使用される。
【０３０３】
本明細書で使用される「動物」という用語は、ヒト、飼育もしくは畜産動物（ネコ、イヌ、ウシ、ヒツジ、ウマ、ブタなど）または試験種、例えばマウス、ラット、ウサギなどを含むように定義され得る。したがって、動物は、ウシ、ウマ、ブタ、ヒト、ヒツジ、ヤギまたはシカ科起源の動物も含み得る。
【０３０４】
「内在性レトロウイルスに由来する」という表現は、ドメインが、内在性レトロウイルスの免疫抑制ドメインと実質的に同一であり、突然変異、挿入または欠失があってもよいことを意味する。
【０３０５】
引用するすべての参考文献は、参照により本明細書に組み入れられている。
【０３０６】
添付の図および実施例は、本発明を限定するためではなく説明するために提供するものである。本発明の態様、実施形態、項目および請求項を組み合わせてもよく、またそれらを背景技術および引用参考文献に記載の特徴と組み合わせてもよいことは、当業者には明らかであろう。
【実施例１】
【０３０７】
ＨＥＲＶ−Ｅｎｖ５９はＳＬＥ患者において健常個体と比較して過剰発現される
ここで、本発明者らは、４５名の健常個体からのおよび全身性エリテマトーデス（ここではＳＬＥ）を有する４５名の患者からのＰＢＭＣ（末梢血単核細胞）におけるＨＥＲＶ−Ｅｎｖ５９遺伝子発現のリアルタイムＲＴ−ＰＣＲによる調査に関するデータを提示する。データをＲＰＬ１３ａまたはＲＰＬ３７Ａハウスキーピング遺伝子に対して正規化した。静脈血試料をＣＰＴ（商標）チューブ（ＢＤ  Ｖａｃｕｔａｉｎｅｒｓ（登録商標）、ＢＤ  Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ、ＮＪ  ＵＳＡ）に採取し、１時間以内に処理した。チューブ／血液試料を室温で水平ローターにおいて最低３０分間、１８００ｇ（相対遠心力）で遠心分離した。遠心分離後、単核細胞層を回収し、１５ｍｌサイズのコニカルチューブに移した。２洗浄工程の後、細胞ペレットを後続のＲＮＡ抽出のために望ましい培地に再懸濁させた。ＲＮｅａｓｙ（登録商標）Ｐｌｕｓミニキット（Ｑｉａｇｅｎ、ＤＫ）をその製造業者の手順書に従って使用して末梢血試料からＲＮＡを単離した。単離されたＲＮＡ試料の量および完全性を、Ａ２６０／Ａ２８０、Ａ２６０／Ａ２３０吸光度比、および２８Ｓ／１８Ｓ  ｒＲＮＡ比を決定することにより制御した。ＰＢＭＣから精製した２００ｎｇの全ＲＮＡを、ｉＳｃｒｉｐｔ（商標）ｃＤＮＡ合成キット（Ｂｉｏ−Ｒａｄ、ＣＡ  ＵＳＡ）をその製造業者の説明書に従って使用するｃＤＮＡ合成に使用した。Ｌｉｇｈｔ  Ｃｙｃｌｅｒ  ４８０サイクラー（Ｒｏｃｈｅ  Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ、ＤＫ）を使用してリアルタイムＱ−ＰＣＲ分析を行った。２μｌのｃＤＮＡ（合計２０μｌの反応容量からのもの）を２０μｌ反応に使用した。リアルタイムＱ−ＰＣＲ反応は、１０μｌのサイバーグリーン２ｘマスターミックス（Ｒｏｃｈｅ  Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ、ＤＫ）、２μｌのフォワードプライマ−（５ｐｍｏｌ／μｌ）、２μｌのリバースプライマー（５ｐｍｏｌ／μｌ）および４μｌの水を含有した。９５℃で１０分間の初期変性後、ＰＣＲ増幅を４５サイクル行った。各転写物の交差ポイント（ＣＰ）を測定し、Ｌｉｇｈｔ  Ｃｙｃｌｅｒ  ４８０ソフトウェアにおいて一定蛍光レベルで定義した。試験遺伝子のｍＲＮＡレベルをＲＰＬ１３ａ値に対して正規化し、ＰＥ  Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｓｔｅｍｓ（Ｐｅｒｋｉｎｓ  Ｅｌｍｅｒ、Ｆｏｓｔｅｒ  Ｃｉｔｙ、ＣＡ  ＵＳＡ）により提供されたΔＣＴモデルを使用して相対定量を決定した。
【０３０８】
特異的増幅産物（プライマーセット：Ｅｎｖ３フォワードセット１およびＥｎｖ３リバースセット１、ＩＳＤ５９フォワードおよびＩＳＤ５９リバース、ＥｎｖＨ３フォワードおよびＥｎｖＨ３リバース）が、すべてのＳＬＥ試料において、および健常対照において観察された。相対ＨＥＲＶ−Ｅｎｖ５９  ｍＲＮＡ発現レベルは、健常対照よりＳＬＥの患者のほうが有意に高かった（Ｐ＜０．００１）図１。バーは、中央値およびＳＤを示す。Ｐ値は、試料間の統計的差異（＜０．０５）を示す。Ｐ値は、ノンパラメトリックなマン・ホイットニーＵ検定を使用して計算した。さらに、ＨＥＲＶ−Ｅｎｖ５９  ｍＲＮＡ発現レベルの有意なばらつきが、ＳＬＥ患者から採取したＰＢＭＣ試料において観察された。差異は、逆転写の質によるものではなかった。ＲＮＡ  ＲＰＬ１３ａまたはＲＰＬ３７Ａ発現レベルの分析により、全ｃＤＮＡ量が試験したすべての試料にわたって同一であることが確証されたからである。
【０３０９】
結果を図１に提示する。
【実施例２】
【０３１０】
ＳＬＥ患者におけるＩＬ−６および／またはＴＬＲ−７  ｍＲＮＡ発現レベルとＨＥＲＶ−Ｅｎｖ５９発現レベルの間の相関
ここで、本発明者らは、ＳＬＥ患者におけるＩＬ−６および／またはＴＬＲ７  ｍＲＮＡ発現レベルとＨＥＲＶ−Ｅｎｖ５９発現レベルの間の相関の調査に関するデータを提示する。Ｅｎｖ５９発現レベルの研究に使用した試料集団の中で、本発明者らは、ＳＬＥ患者からのＰＢＭＣにおけるＩＬ−６  ｍＲＮＡ発現レベルをリアルタイムＲＴ−ＰＣＲにより検査した（アッセイに関する詳細については実施例１を参照されたい）。加えて、本発明者らは、ＳＬＥ患者からのＰＢＭＣにおけるＴＬＲ−７  ｍＲＮＡ発現レベルを評定した。データをハウスキーピング遺伝子ＲＰＬ１３ａ  ｍＲＮＡ発現レベルに対して正規化した。本発明者らは、次に、ＨＥＲＶ−Ｅｎｖ５９  ｍＲＮＡとＩＬ−６  ｍＲＮＡまたはＴＬＲ−７  ｍＲＮＡ（これらの両方が特徴的調節を示した）の発現間のスピアマン相関分析を行った。図２ａおよび２ｂは、ＩＬ−６またはＴＬＲ−７遺伝子発現に対してプロットした、ＳＬＥ患者から採取したＰＢＭＣにおける、リアルタイムＲＴ−ＰＣＲにより評価したＥＨＲＶ−Ｅｎｖ５９遺伝子発現レベルを示す。統計解析は、ＳＬＥ群においてＨＥＲＶ−Ｅｎｖ５９のｍＲＮＡ発現とＩＬ−６のｍＲＮＡ発現の間（Ｐ＝０．００６５、ｒ＝‐０．５４００）またはＴＬＲ−７との間（ｐ＝０．０２、ｒ＝‐０．３８）の有意な負の相関を明示した。したがって、この相関分析は、ＨＥＲＶ−Ｅｎｖ５９がＳＬＥ患者においてより低いＩＬ−６またはＴＬＲ−７レベルに関連づけられることを示唆する。
【０３１１】
結果を図２ａおよび２ｂに提示する。
【実施例３】
【０３１２】
ＨＥＲＶ−Ｈ３／Ｅｎｖ−５９遺伝子座からの機能性エンベロープタンパク質の特性解析
ここで、本発明者らは、ＨＥＲＶ−Ｅｎｖ５９遺伝子座からの機能性エンベロープ（ｅｎｅｖｅｌｏｐｅ）タンパク質の特性解析に関するデータを提示する。ＨＥＲＶ−Ｅｎｖ５９の構造構成を以前に確認し、レトロウイルスエンベロープの疎水性プロファイルならびに他の特徴、すなわち、Ｍ２メチオニンの下流に位置する推定的シグナルペプチド、ＣＷＬＣモチーフ、ＳＵサブユニットとＴＭサブユニットの接合部のフューリン切断部位、それに続く疎水性融合ペプチドおよび疎水性膜貫通ドメインを開示した。このタンパク質の発現および活性をさらに研究するために、コードＨＥＲＶ−Ｅｎｖ５９  ｃＤＮＡを、ヒトサイトメガロウイルス（ＣＭＶ）プロモーターにより駆動される発現ベクターにクローニングした。インシリコ（ｉｎ  ｓｉｌｉｃｏ）法により同定された推定的シグナルペプチドの後のタンパク質のＮ末端にＨＡタグを付加させた。ＰＵＣ５７Ｅｎｖ５９プラスミドは、Ｇｅｎｓｃｒｉｐｔ（ＮＪ、ＵＳＡ）が合成Ｅｎｖ５９インサートをＰＵＣ５７プラスミドのＥｃｏＲＶ部位にクローニングして構築したものであった。市販の抗体が無かったため、遺伝子をＣ末端ＨＡタグに融合させた。発現研究のために、ＥｃｏＲＩおよびＮｏｔＩ（ＥｃｏＲＩａｎｄ  ＮｏｔＩ）制限部位を使用してＥｎｖ５９を８６７ｐ−ＩＲＥＳ−ｐｕｒｏベクターに挿入して、最終ｐＥｎｖ５９ＩＲＥＳｐｕｒｏ構築物を得た。配列の正確さをシークエンシングにより検証した。
【０３１３】
一過性にトランスフェクトしたＨＥＫ２９３またはＮＩＨ３Ｔ３細胞において、ウエスタンブロットで、ＨＡタグに対するモノクローナル抗体を使用し、Ｌｉｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ  ＬＴＸ（登録商標）またはＬｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ  ２０００（登録商標）試薬（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を使用して、ＨＥＲＶ−Ｅｎｖ５９遺伝子の発現を確認した（図３ａ）。トランスフェクションの４８時間後、細胞を溶解し、ウエスタンブロッティング用に処理した。プロテアーゼ阻害剤カクテル（Ｒｏｃｈｅ  Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ、ＤＫ）を含有するＮＰ−４０溶解バッファー（１０ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＨＣＬ  ｐＨ７．４、１３７ｍＭＮａＣｌ、１０％ｖ／ｖグリセロール、１％ｖ／ｖ  Ｎｏｎｉｄｅｔ  Ｐ−４０）での溶解後、全細胞抽出物を調製した。細胞片を１０．００ｘｇで２５分間、４℃での遠心分離により除去し、タンパク質濃度をＢＣＡアッセイ（Ｐｉｅｒｃｅ、ＶＷＲ／Ｂｉｅ＆Ｂｅｒｎｔｓｅｎ、ＤＫ）により決定した。等量のタンパク質（２０μｇ／試料）をＳＤＳ−ポリアクリルアミドゲル電気泳動により分離し、ニトロセルロース膜に転写し、特異的抗体とともにインキュベートし、その後、ＨＲＰ標識二次抗体とともにインキュベートした。有標の試薬（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ、ＤＫ）を使用する増強化学発光により免疫ブロットを現像した。
【０３１４】
明らかにわかるように、約６２ｋＤａの分子量に対応するバンドのみが、ＨＥＲＶ−Ｅｎｖ５９発現ベクターをトランスフェクトしたＨＥＫ２９３およびＮＩＨ３Ｔ３細胞において検出され、ＨＥＲＶ−Ｅｎｖ５９遺伝子が、完全長タンパク質をコードする能力を有し、ｅｘ  ｖｉｖｏで発現され得ることを実証した。
【０３１５】
エンベロープタンパク質の正確な表面発現を判定するために、本発明者らは、一過性にトランスフェクトしたＨＥＫ２９３細胞において、蛍光標識抗ＨＡ抗体を使用して免疫蛍光共焦点顕微鏡観察を行った。ｐＥｎｖ５９ＩＲＥＳｐｕｒｏおよびｐｃＤＮＡ−ｅＧＦＰ構築物をトランスフェクトしたＨＥＫ２９３細胞におけるＨＥＲＶ−Ｈ  Ｅｎｖ５９表面発現を免疫蛍光により可視化するために、本発明者らは、ホルムアルデヒドで固定した、透過処理していない細胞を、マウス抗ＨＡタグ抗体で染色し、その後、蛍光標識抗マウス抗体であるＡｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ５６８ｎｍで染色した。すべての実験において、ＨＥＲＶ−Ｈ  Ｅｎｖ５９検出は、トランスフェクションのおおよそ３６〜４８時間後、ガラスカバースリップ上で増殖させた細胞を用いて行った。ＤＡＰＩ（４’，６−ジアミジノ−２−フェニルインドール）を使用して細胞核を染色した。無関係の発現ベクターをトランスフェクトした細胞に関してはシグナルが検出されなかった。観察は、Ｚｅｉｓｓ  ＬＳＭ５１０レーザー走査共焦点顕微鏡下で行った。
【０３１６】
透過処理していない細胞の染色は、ＨＥＲＶ−Ｅｎｖ５９タンパク質を細胞表面で検出できることを示し、レトロウイルスエンベロープタンパク質と一致するタンパク質の正確な細胞内輸送を確認した（図３ｂ）。
【０３１７】
図３ａは、ＨＥＲＶ−Ｈ  Ｅｎｖ５９ＨＡタグトランスフェクト細胞におけるＨＡタグエンベロープ糖タンパク質の検出を示す（ｄｅｐｉｔｓｄｅｔｅｃｔｉｏｎ）。
【０３１８】
ヒトＨＥＫ２９３またはマウスＮＩＨ３Ｔ３細胞に、ＨＥＲＶ−Ｈ  Ｅｎｖ５９ＨＡタグｃＤＮＡまたは対照プラスミドｐｃＤＮＡ３．１ｅＧＦＰのどちらかを発現するプラスミドをトランスフェクトしたか、またはトランスフェクトせずに（ｕｎｔｒｎｓｆｅｃｔｅｄ）培養培地中に放置した。４８時間後、Ｅｎｖ５９トランスフェクト細胞、ｐｃＤＮＡ３．１ｅＧＦＰトランスフェクト細胞、および非トランスフェクト細胞を溶解し、次いで（ｔｈｅｉｎ）、ＨＡタグまたはチューブリンに対する抗体（Ａｂ）でのウエスタンブロッティング用に処理した（ｐｒｏｃｅｅｄ）。
【０３１９】
図３ｂは、ＨＥＲＶ−Ｅｎｖ５９タンパク質の発現を示す（Ｆｉｇｕｒｅ  ３ｂｄｅｐｉｃｔｓｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｏｆ  ｔｈｅ  ＨＥＲＶ−Ｅｎｖ５９  ｐｒｏｔｅｉｎ）。ＨＥＲＶ−Ｈ  Ｅｎｖ５９タンパク質を細胞表面で検出することができ、機能性Ｅｎｖについて予想した局在と一致する結果であった。
【０３２０】
完全コードＨＥＲＶ−Ｈ  Ｅｎｖ５９遺伝子の発現ベクター（赤色）および対照ｐｃＤＮＡ３．１ｅＧＦＰベクター（緑色）を一過性にトランスフェクトしたヒトＨＥＫ２９３細胞の免疫蛍光分析からの共焦点顕微鏡像。検出は、トランスフェクションのおおよそ３６時間後、ガラスカバースリップ上で増殖させた、固定され透過性処理していないＨＥＫ２９３細胞を用いて行った。マウス抗ＨＡタグ抗体を使用してＨＥＲＶ−Ｈ  Ｅｎｖ５９を検出した（赤色）。細胞核をＤＡＰＩで染色した。
【実施例４】
【０３２１】
ＨＥＲＶ−Ｅｎｖ５９は機能性エンベロープタンパク質をコードする
ここで、本発明者らは、ＨＥＲＶ−Ｅｎｖ５９をコードするタンパク質の機能的特性の調査に関するデータを提示する。本発明者らは、このエンベロープタンパク質が、レンチウイルスコア粒子を用いるこのタンパク質のシュードタイピングにより、依然として融合活性であるかどうかを調査した。ｅＧＦＰタンパク質をコードするウイルス移入ベクターを含む３つのプラスミドベクター系を使用して、シュードタイプレンチウイルス／ＨＥＲＶ−Ｅｎｖ５９粒子を形成した。コトランスフェクトしたとき、これら３つのプラスミドはレンチウイルス粒子を産生し、表面タンパク質をコードする第４のプラスミドをトランスフェクション混合物に含めれば、レンチウイルス粒子を表面タンパク質で装飾することができる。レンチウイルスパッケージング用のプラスミドは、Ｊａｃｏｂ  Ｇｉｅｈｍ  Ｍｉｋｋｅｌｓｅｎ教授により快く提供されたものであった。ｐＭＤ．２Ｇによりコードされた水疱性口内炎ウイルスＧタンパク質（ＶＳＶ−Ｇ）、またはｐＥｎｖ５９ＩＲＥＳｐｕｒｏ、または対照ｐｃＤＮＡ３．１を用いてシュードタイプ化したレンチウイルスベクターを、ｐＣＣＬ／ＰＧＫ−ｅＧＦＰ．ｐＭＤＬｇ／ｐ−ＲＲＥ．ｐＲＳＶ−ＲＥＶを含有する４つのプラスミド発現レンチウイルス系を使用して生成した。本発明者らの系では、複製可能なウイルスの組換えおよび産生のリスクをさらに低下させるために、Ｒｅｖ遺伝子をｐＲＳＶ−ＲＥＶプラスミドに挿入した。標準リン酸カルシウム媒介法を使用する２９３Ｔ細胞への一過性トランスフェクションによりウイルスを産生した。６ウェルプレート１つ当りに使用したＤＮＡの総量は、レンチウイルスベクタープラスミド４μｇであり、１．５９μｇのｐＣＬＬ／ＰＧＫ−ｅＧＦＰ、１．５９μｇのｐＭＤＩｇ／ｐ−ＲＲＥ、０．３７μｇのｐＲＳＶ−Ｒｅｖおよび０．４６μｇのｐＭＤＭ．２Ｇ／ｐＥｎｖ５９ＩＲＥＳｐｕｒｏ／ｐｃＤＮＡ３．１であった。トランスフェクションの４８時間後、ベクターを含有する培地を回収し、５００ｘｇで５分間回転させ、０．４５μ孔径フィルター（Ｃｏｒｎｉｎｇ、ＮＹ  ＵＳＡ）により濾過し、そのまま標的細胞の形質導入に使用した。ＨＥＫ２９３細胞を６ウェルプレートに１ウェルにつき細胞５×１０５個で播種し、その翌日にポリブレン（８μｇ／ｍｌ）の存在下、濃縮ウイルスストックの系列希釈物を用いて感染させることにより、レンチウイルス力価を判定した。１２時間インキュベーション後、培養培地を交換し、細胞をさらなる時間、インキュベートした。蛍光顕微鏡法を用いて、ＥＧＦＰを発現する細胞を同定した（図４）。図４で明らかなように、ＶＳＶ−ｇシュードタイプ粒子はすべての細胞型を感染させ、これは、このアッセイがすべての細胞型において感染を検出することができることを示すが、未装飾の裸の粒子は感染性でなかった。最も興味深いこととして、ＥＮＶ５９シュードタイプ粒子は、ＨＥＫ２９３細胞のみに感染することができる。ヒトＨＥＫ２９３細胞に対する力価は、３５００〜５０００ＣＦＵ／ｍｌ範囲の範囲であり、これは極めて有意である。これは、ＥＮＶ５９が出芽ウイルスに組込まれ、活性融合可能エンベロープタンパク質を構成することを示唆する。さらに、この��ンベロープタンパク質は、ＨＥＫ２９３細胞上でのみ見出される受容体であって、マウスＮＩＨ３Ｔ３上でもＨｅＬａ細胞上でも見出されない受容体を使用するようである。
【０３２２】
ＨＥＲＶ−Ｈ  Ｅｎｖ５９エンベロープの感染アッセイ。感染性ＨＥＲＶ−Ｈ  Ｅｎｖ５９ハイブリッドウイルス粒子の形成。ｐＭＤ．２Ｇによりコードされた水疱性口内炎ウイルスＧタンパク質（ＶＳＶ−Ｇ）、またはｐＥｎｖ５９ＩＲＥＳｐｕｒｏ、または対照ｐｃＤＮＡ３．１を用いてシュードタイプ化した（ｐｓｅｕｄｏｔｙｐｅｄｗｉｔ）レンチウイルスベクターを、４つのプラスミド発現レンチウイルス系を使用して生成した。シュードタイプビリオン（Ｐｓｅｕｄｏｔｙｐｅｄｖｉｒｏｎｓ）を感染力についてアッセイし、標的細胞は、ヒトＨＥＫ２９３細胞であった。ウイルス力価は、２回の独立した実験からの平均である。
【実施例５】
【０３２３】
ＳＬＥおよび他の自己免疫疾患の発病に影響を与える、ＨＥＲＶ−Ｅｎｖ５９レトロウイルスペプチドにより導入される免疫調節機能。
ＬＰＳ放出の結果としての炎症性ショックは、依然として、深刻な臨床的懸念事項である。ヒトの場合、ＬＰＳに対する炎症反応は、単球およびマクロファージからのサイトカインおよび他の細胞メディエーターの放出をもたらし、これが発熱、ショック、臓器不全および死亡の原因になり得る。プロＬＰＳおよび抗ＬＰＳ（ｐｒｏ−ａｎｄ  ａｎｔｉ−  ＬＰＳ）は、単球の組織化で始まる自然免疫におけるサイトカイン産生の強力なプロトタイプインデューサーとして広く使用されている。リポ多糖（ＬＰＳ）のような、病原体関連分子パターン（ＰＡＭＰ）は、グラム陰性菌による感染に起因する様々な宿主応答の阻害において極めて重要な役割を果す。そのような作用は、全身性炎症反応、例えば、血流へのサイトカインタンパク質の分泌をもたらす炎症誘発性および抗炎症性サイトカインのアップレギュレーションにつながる。
【０３２４】
ここで、本発明者らは、ＥＮＶ５９ペプチドでの細胞の前処置が、ＩＬ−６などの炎症誘発性サイトカインを含むサイトカインの放出の減少をもたらすことを示すデータを提示する。したがって、敗血症または他の炎症症状を発症するリスクがある患者のＥＮＶ５９ペプチドでの処置は、炎症誘発性サイトカインの産生を減少させるように、およびこれによってショック、臓器不全および死亡を生じさせるリスクを低下させるように、有益に作用することができるだろう。ここで、本発明者らは、ヒト急性単球性白血病細胞株ＴＨＰ−１における、ならびに健常ドナーまたはＳＬＥ患者から採取したＰＢＭＣにおける、ＩＬ−６の発現レベルに対するＥｎｖ５９ＩＳＤの調節機能を検査した。ＴＨＰ−１細胞およびＰＢＭＣを、１０％ＦＢＳと１００Ｕ／ｍｌのペニシリンと１００μｇ／ｍｌのストレプトマイシンと２ｍＭのＬ−グルタミンとを補充したＲＰＭＩ１６４０中、３７℃で、５％ＣＯ２インキュベーターにおいて維持した。ＴＨＰ−１細胞がリポ多糖（ＬＰＳ）処置に応答してＩＬ−６  ｍＲＮＡおよびタンパク質を誘導することは公知である。ＴＨＰ−１細胞を未処置で放置するか、または最適な用量およびインキュベーション時間を見出すための以前の分析に基づいて、０ｕＭ、３０μＭもしくは６０μＭのＥｎｖ−５９ＩＳＤとともにインキュベートし、１μｇ／μｌのＬＰＳで４時間刺激した。図５ａおよび５ｂは、刺激物質誘導ＩＬ−６  ｍＲＮＡタンパク質発現に関するリアルタイムＲＴ−ＰＣＦ（アッセイに関する詳細については実施例１を参照されたい）およびＥＬＩＳＡ分析の結果の代表である。
【０３２５】
ＩＬ−６ＥＬＩＳＡ分析については、ペプチドで処置したＴＨＰ−１細胞またはＰＢＭＣ（図５ｃおよびｄ）からの上清を、ヒトＩＬ−６ＥＬＩＳＡ  Ｍａｘ（商標）Ｄｅｌｕｘｅ  Ｓｅｔ（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ、＃４３０５０５）を用いてアッセイした。ＥＬＩＳＡアッセイは、製造業者の手順書に従って、以下のように行った。各インキュベーション工程の後、密封し、プレートを振盪させなかった捕捉抗体との一晩のインキュベーションを除き、回転テーブルを用いて１５０〜２００ｒｐｍで振盪させた。ＥＬＩＳＡ実行の前日、１×コーティングバッファー（ｄｄＨ２Ｏで希釈した５×コーティングバッファー）で１：２００希釈した捕捉抗体で９６ウェルアッセイプレートを覆った。１００μＬのこの捕捉抗体溶液をすべてのウェルに添加し、密封し、一晩（１６〜１８時間）４℃でインキュベートした。翌日、使用前にそのセットからのすべての試薬を室温（ＲＴ）にした。プレートを１ウェルにつき最低３００μＬの洗浄バッファー（１×ＰＢＳ、０．０５％Ｔｗｅｅｎ２０）で４回洗浄した。後続の洗浄の際には残留バッファーを吸収紙でのプレートの吸い取りにより除去した。次に、２００μＬの１×アッセイ希釈液Ａ（ＰＢＳ  ｐＨ＝７．４で希釈した５×アッセイ希釈液Ａ）を１時間にわたって添加して、非特異的結合をブロックした。プレートをブロッキングしている間に、すべての試料および標準物質（プレートごとに必須）を調製した。標準物質および試料を３回ずつ実行した。１ｍＬの最良の標準物質２５０ｐｇ／ｍＬを、ＩＬ−６ストック溶液から１×アッセイ希釈液Ａ（１×ＡＤ）で調製した。２５０ｐｇ／ｍＬの最良の標準物質の６種の２倍系列希釈を行い、ヒトＩＬ−６標準濃度：２５０ｐｇ／ｍＬを用いて、それぞれ、１２５ｐｇ／ｍＬ、６２．５ｐｇ／ｍＬ、３１．２ｐｇ／ｍＬ、１５．６ｐｇ／ｍＬ、７．８ｐｇ／ｍＬおよび３．９ｐｇ／ｍＬにした。１×ＡＤは、ゼロ標準物質（０ｐｇ／ｍＬ）として役立つ。プレートをブロッキングした後、洗浄を行い、１００μＬの標準物質および試料を３回ずつアッセイし、２時間、室温でインキュベートした。試料を希釈せず、ＴＨＰ−１またはＰＢＭＣ細胞からの全上清をアッセイした。洗浄後、１００μＬの検出抗体を各ウェルに適用し、１×ＡＤで１：２００希釈し、１時間インキュベートした。プレートを洗浄し、その後、１×ＡＤで１：１０００希釈した、１ウェルにつき１００μＬのアビジン−ＨＲＰ溶液とともに３０分インキュベートした。最終洗浄を５回、洗浄と洗浄の間に少なくとも３０秒の間隔をとって行って、バックグラウンドを減少させた。次に、１００μＬの混合したばかりのＴＭＢ基質溶液（１プレートにつき１０ｍＬ、２つの基質各々から５ｍＬをセットに供給した）を適用し、暗所で１５分間放置した。陽性ウェルが青色に変わるシグナル飽和を防止するために観察する必要がある。暗所でのインキュベーション後、１ウェルにつき１００μＬの２Ｎ  Ｈ２ＳＯ４を用いて反応を停止させた。陽性ウェルは黄色に変わった。３０分以内に４５０ｎｍおよび５７０ｎｍ（バックグラウンド）で吸光度を読み取った。データをＭｉｃｒｏｓｏｆｔ  Ｅｘｃｅｌ  ２０１０プログラムで分析した。
【０３２６】
結果を図５Ａ〜Ｄに提示する。
【０３２７】
図５Ａおよび５Ｂ。ＬＰＳ刺激ＴＨＰ−１細胞におけるＩＬ−６  ｍＲＮＡおよびＩＬ−６タンパク質の発現に対するＥｎｖ５９（ＩＳＵ）ペプチドの阻害効果。ＴＨＰ−１細胞を完全増殖培地、または３０μＭ  Ｅｎｖ５９ペプチド、６０μＭ  Ｅｎｖ５９ペプチド、３０μＭ対照ペプチド、６０μＭ対照ペプチドのいずれかとともにインキュベートし、同時に１μｇ／ｍｌのＬＰＳで４時間刺激した。インキュベーション後、試料をＲＮＡ抽出用に処理し（ｐｒｏｃｅｅｄ  ｆｏｒ  ＲＮＡ  ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ）、上清をＥＬＩＳＡ実験に使用した。実験を５回繰り返した。５つの典型的な結果のうちの１つを図５Ａおよび５Ｂに示す。インキュベーション時間およびペプチド濃度を経時的な用量応答曲線実験（Wasaporn 2010）で最適化した。
【０３２８】
図５Ｃおよび５Ｄ。ＰＭＡ／イオノマイシン刺激ヒトＰＢＭＣにおけるＩＬ−６タンパク質およびＩＮＦ−ガンマタンパク質に対するＥｎｖ５９（ＩＳＵ）ペプチドの阻害効果。健常ドナーまたはＳＬＥ患者から採取したヒトＰＢＭＣを、完全増殖培地、または３０μＭ  Ｅｎｖ５９−Ｈ６ペプチド、６０μＭ  Ｅｎｖ５９−Ｈ６ペプチド、３０μＭ  Ｅｎｖ５９−ＧＰ３ペプチド、６０μＭ  Ｅｎｖ５９−ＧＰ３ペプチド、３０μＭ対照ペプチド、６０μＭ対照ペプチドのいずれかとともにインキュベートし、同時に５０ｎｇ／ｍｌのＰＭＡおよび１μｇ／ｍｌのイオノマイシンで４時間刺激した。インキュベーション後、上清を回収し、ＥＬＩＳＡ実験に使用した。実験を５回行った。５つの典型的な結果のうちの１つを図５Ｃおよび５Ｄに示す。インキュベーション時間およびペプチド濃度を経時的な用量応答曲線実験で最適化した。
【０３２９】
Ｅｎｖ５９ＩＳＤは、ＬＰＳ刺激ＴＨＰ−１細胞におけるＩＬ−６のｍＲＮＡおよびタンパク質の発現を強く抑制した。対照ペプチドは、ＩＬ−６  ｍＲＮＡ発現レベルに対しても、ＩＬ−６タンパク質発現レベルに対しても抑制効果を示さなかった。ＩＬ−６タンパク質の発現は、培地のみとインキュベートしたＴＨＰ−１細胞において最小であった（図５Ｂ）。ｍＲＮＡ最適化に使用したハウスキーピング遺伝子ＲＰＬ１３ａのレベルは、ペプチドおよび／またはＬＰＳ処置による影響を受けなかった。ＩＬ−６は、ＳＬＥに関与すると考えられるため、細胞株においてＩＬ−６を阻害するＥｎｖ５９ＩＳＤの能力は、非常に有意であり、ＳＬＥの低減は自己免疫疾患の新規処置戦略の構成要素となると予想される。５０ｎｇ／ｍｌのＰＭＡに加えて１μｇ／ｍｌのイオノマイシンでＰＢＭＣを刺激した。この刺激は、ヒトＰＢＭＣにおけるＩＬ−６タンパク質誘導について最も一貫した結果を与える（データを示さない）ので選択した。リアルタイムＲＴ−ＰＣＲ定量は、ＰＢＭＣから得ることができる精製ＲＮＡの濃度が低いため、行わなかった。結果を図５Ｃに示す。ＩＬ−６レベルは、Ｅｎｖ−５９ＩＳＤペプチドのいずれかとともにインキュベートしたＰＢＭＣにおけるほうが有意に低かった。対照ペプチドは、ＩＬ−６タンパク質の合成に影響を与えなかった。ＩＬ−６タンパク質のレベルは、培地のみとインキュベートしたＰＢＭＣでは検出下限より下であった。最後の一連の実験において、本発明者らは、Ｅｎｖ５９ＩＳＤが他の炎症性サイトカイン、例えば、インターフェロンガンマ（ＩＦＮ−ガンマ）の産生に影響を与えるかを確かめることに関心があった。ＩＦＮ−ガンマの過剰産生は、全身性エリテマトーデスの発病に関係づけられており、ＩＮＦ−ガンマ受容体の欠乏は、疾患の過程を完全に無効にする。合成Ｅｎｖ５９ＩＳＤペプチドは、ＰＭＡ／イオノマイシン刺激ヒトＰＢＭＣによるＩＮＦ−ガンマの産生を、異なるレベルでだが、阻害する（図５Ｄ）。これらの研究において、エフェクター分子の阻害は、トリパンブルー色素排除により評定して、ＰＢＭＣへのペプチドの非特異的毒性の単に二次的なものではなかった。
【実施例６】
【０３３０】
ＳＧ＃１〜ＳＧ＃１７（ＩＤ１０３１〜ＩＤ１０４７）により誘導される免疫調節機能。
ペプチドＳＧ＃１〜ＳＧ＃１７（ＩＤ１０３１〜ＩＤ１０４７）での細胞の前処置は、ＩＬ−６、ＴＮＦ−アルファ、ＩＬ−１０およびＩＬ−８などの炎症誘発性サイトカインを含む、サイトカインの放出に影響を与える。
【０３３１】
ここで、本発明者らは、ヒト急性単球性白血病細胞株ＴＨＰ−１におけるＩＬ−６、ＴＮＦ−アルファ、ＩＬ−１０およびＩＬ−８の発現レベルに対するペプチド、ペプチドＳＧ＃１〜ＳＧ＃１７（ここではＩＤ１０３１〜ＩＤ１０４７）の調節機能を検査した。ＴＨＰ−１細胞を、１０％ＦＢＳと１００Ｕ／ｍｌのペニシリンと１００μｇ／ｍｌのストレプトマイシンと２ｍＭのＬグルタミンとを補充したＲＰＭＩ１６４０中、３７℃で、５％ＣＯ２インキュベーターにおいて維持した。ＴＨＰ−１細胞がリポ多糖（ＬＰＳ）処置に応答してＩＬ−６、ＴＮＦ−アルファ、ＩＬ−１０およびＩＬ−８  ｍＲＮＡおよびタンパク質を誘導することは公知である。ＴＨＰ−１細胞を未処置で放置するか、または最適な用量およびインキュベーション時間を見出すための以前の分析に基づいて、０ｕＭ、７．５μＭ、１５μＭ、３０μＭ、６０μＭまたは１００μＭのペプチドの各々、ペプチドＳＧ＃１〜ＳＧ＃１７（ここではＩＤ１０３１〜ＩＤ１０４７）の各々とともにインキュベートし、１μｇ／μｌのＬＰＳで６時間刺激した。
【０３３２】
表１：ヒト急性単球性白血病細胞株ＴＨＰ−１におけるＩＬ−６の発現レベルに対するペプチド、ペプチドＳＧ＃１〜ＳＧ＃１７（ここではＩＤ１０３１〜ＩＤ１０４７）の調節機能。（−）阻害は、ＬＰＳ処置試料のみ（１００％での任意セット）と比較したときの阻害パーセンテージ（％）を示す。したがって、１００μＭでのＳＧ＃１７についての（−）９８．９３８７５は、ＬＰＳのみで処置した細胞と比較してペプチドＳＧ＃１７（ＩＤ１０４７）での処置によりＩＬ−６分泌の９８．９３８７５パーセンテージ（％）が阻害された（または０．１％未満のＩＬ−６が分泌された）ことを示す。したがって、１００μＭでのＳＧ＃１３についての（＋）３６．９８２８パーセンテージ（％）は、分泌されたサイトカインのレベルが、ＬＰＳのみで処置した試料（１００％）より３６．９８２８パーセンテージ（％）高かった、または１３６．９８２８５％であったことを示す。
【０３３３】
【表１】
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【０３３４】
図６（Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ）：ＴＮＦ−アルファタンパク質分泌の発現レベルに対する、ＳＧ＃２、ＳＧ＃３、ＳＧ＃１５、ＳＧ＃１５（ＩＤ１０３２、ＩＤ１０３３、ＩＤ１０３５およびＩＤ１０４５）により誘導される免疫調節機能。
【０３３５】
図７（Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ）：ＩＬ−１０の発現レベルに対する、ＳＧ＃２、ＳＧ＃３、ＳＧ＃１５、ＳＧ＃１５（ＩＤ１０３２、ＩＤ１０３３、ＩＤ１０３５およびＩＤ１０４５）により誘導される免疫調節機能。
【０３３６】
図８（Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ）：ＩＬ−８の発現レベルに対する、ＳＧ＃２、ＳＧ＃３、ＳＧ＃１５、ＳＧ＃１５（ＩＤ１０３２、ＩＤ１０３３、ＩＤ１０３５およびＩＤ１０４５）により誘導される免疫調節機能。
【０３３７】
ＩＬ−６、ＴＮＦ−アルファ、ＩＬ−１０およびＩＬ−８ＥＬＩＳＡ定量の手順
ＥＬＩＳＡアッセイは、製造業者の手順書に従って、以下のように行った。各インキュベーション工程の後、密封し、プレートを振盪させなかった捕捉抗体との一晩のインキュベーションを除き、回転テーブルを用いて１５０〜２００ｒｐｍで振盪させた。ＥＬＩＳＡ実行の前日、１×コーティングバッファー（ｄｄＨ２Ｏで希釈した５×コーティングバッファー）で１：２００希釈した捕捉抗体で９６ウェルアッセイプレートを覆った。１００μＬのこの捕捉抗体溶液をすべてのウェルに添加し、密封し、一晩（１６〜１８時間）４℃でインキュベートした。翌日、使用前にそのセットからのすべての試薬を室温（ＲＴ）にした。プレートを１ウェルにつき最低３００μＬの洗浄バッファー（１×ＰＢＳ、０．０５％Ｔｗｅｅｎ２０）で４回洗浄した。後続の洗浄の際には残留バッファーを吸収紙でのプレートの吸い取りにより除去した。次に、２００μＬの１×アッセイ希釈液Ａ（ＰＢＳ  ｐＨ＝７．４で希釈した５×アッセイ希釈液Ａ）を１時間にわたって添加して、非特異的結合をブロックした。プレートをブロッキングしている間に、すべての試料および標準物質（プレートごとに必須）を調製した。標準物質および試料を３回ずつ実行した。最良の標準濃度（２５０ｐｇ／ｍＬまたはＩＬ−１０定量のために３００ｐｇ／ｍＬ）のもの１ｍＬを適切なＩＬ−６、ＴＮＦ−アルファ、ＩＬ−１０またはＩＬ−８ストック溶液から１×アッセイ希釈液Ａ（１×ＡＤ）で調製した。２５０ｐｇ／ｍＬ（またはＩＬ−１０定量のために３００ｐｇ／ｍＬ）の最良の標準物質の６種の２倍系列希釈を行い、ヒトＩＬ−６、ＴＮＦ−アルファまたはＩＬ−８標準濃度：２５０ｐｇ／ｍＬ、１２５ｐｇ／ｍＬ、６２．５ｐｇ／ｍＬ、３１．２ｐｇ／ｍＬ、１５．６ｐｇ／ｍＬ、７．８ｐｇ／ｍＬおよび３．９ｐｇ／ｍＬをそれぞれ用い、ならびにＩＬ−１０標準濃度：３００ｐｇ／ｍＬ、１５０ｐｇ／ｍＬ、７５ｐｇ／ｍＬ、３７．５ｐｇ／ｍＬ、１８．７５ｐｇ／ｍＬ、９．３７５ｐｇ／ｍＬおよび４．６８７５ｐｇ／ｍＬをそれぞれ用いた。１×ＡＤは、ゼロ標準物質（０ｐｇ／ｍＬ）として役立つ。プレートをブロッキングした後、洗浄を行い、１００μＬの標準物質および試料を３回ずつアッセイし、２時間、室温でインキュベートした。試料を希釈せず、ＴＨＰ−１またはＰＢＭＣ細胞からの全上清をアッセイした。洗浄後、１００μＬの検出抗体を各ウェルに適用し、１×ＡＤで１：２００希釈し、１時間インキュベートした。プレートを洗浄し、その後、１×ＡＤで１：１０００希釈した、１ウェルにつき１００μＬのアビジン−ＨＲＰ溶液とともに３０分インキュベートした。最終洗浄を５回、洗浄と洗浄の間に少なくとも３０秒の間隔を取って行って、バックグラウンドを減少させた。次に、１００μＬの混合したばかりのＴＭＢ基質溶液（１プレートにつき１０ｍＬ、２つの基質各々から５ｍＬをセットに供給した）を適用し、暗所で１５分間放置した。陽性ウェルが青色に変わるシグナル飽和を防止するために観察する必要がある。暗所でのインキュベーション後、１ウェルにつき１００μＬの２Ｎ  Ｈ２ＳＯ４を用いて反応を停止させた。陽性ウェルは黄色に変わった。３０分以内に４５０ｎｍおよび５７０ｎｍ（バックグ��ウンド）で吸光度を測定した。データをＭｉｃｒｏｓｏｆｔ  Ｅｘｃｅｌ  ２０１０プログラムで分析した。Ｍｉｃｒｏｓｏｆｔ  Ｅｘｃｅｌｌ  ２０１０プログラムを使用して統計解析を行った。
【実施例７】
【０３３８】
坂口マウスモデル（自然発症ＣＤ４＋Ｔ細胞介在性慢性自己免疫性関節炎）における関節炎スコアおよびＳＡＡ−３発現に対するペプチドの効果。
ここで、本発明者らは、ＨＥＲＶ−Ｅｎｖ５９ペプチドのインビボ効果の調査に関するデータを提示する。疾患発症に対するＥｎｖ５９ＩＳＵペプチドの効果をスクランブルペプチドまたは食塩水処置対照群と比較した。９０μｇ／ｍｌの濃度のマンナン２２０μｌの陰茎内注射により、関節炎を誘発した。示した濃度のＥｎｖ−５９ペプチド、スクランブルペプチド対照またはＮａＣＬ食塩水対照の皮下注射により動物を毎日処置した。関節腫脹を視診によりモニターし、以下のようにスコアを付けた：０、関節腫脹なし；０．１、指関節の腫脹；０．５、手首または足首の軽度腫脹；１．０、手首または足首の重度腫脹。図９Ａでは、すべての指、手首および足首のスコアをマウスごとに合計した。
【０３３９】
図９Ａ
ＳＫＧマウスにおける関節炎の発症。縦のバーは、全マウス群（各群動物５匹）の平均＋ＳＤを表す。関節炎スコアは、Ｅｎｖ３ペプチド処置マウスとＮａＣｌ対照処置マウスの間で有意な差がある。ペプチドまたは対照食塩水ＮａＣｌを日（−１、処置１日前）で開始して週に５回皮下投与した。
【０３４０】
マウス血清アミロイドＡ−３ＥＬＩＳＡ
急性期血清アミロイドＡタンパク質（Ａ−ＳＡＡ）は、炎症の急性期に分泌される。ＣＲＰと同様、急性期ＳＡＡレベルは、炎症刺激後数時間以内に増加し、増加の規模がＣＲＰのものより大きいこともある。ＳＡＡ３遺伝子は、炎症誘発性サイトカインＩＬ−６により制御される。ＥＬＩＳＡアッセイの質は、２つの参照ＱＣ試料（キットに含まれており、期待範囲が分かっているもの）を含めることにより検証されている。ＥＬＩＳＡをその製造業者の手順書（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）に従って使用して、血漿試料をＳＡＡ３の存在について２回ずつ分析した。動物から瀉血し、屠殺した時点（試験の２８日目）と同時点で採取した血漿中のＳＡＡ３の濃度を決定した（図９Ｂ）。処置群間で中央値の差が検出された。ＳＡＡ３レベルは、食塩水ＮａＣＬで処置したＳＫＧマウスにおいて、ＨＥＲＶ−Ｅｎｖ５９由来ペプチドで処置した動物と比較して上昇した。次に、本発明者らは、循環ＳＡＡ３レベルと関節炎スコアの相関を処置群に関係なく検査した。線形回帰を使用して、ＳＡＡ３血漿濃度と関節炎スコア間に正の相関があった（図９）。しかし、この関係は曲線を成しており、片対数（ｌｏｇ−Ｘ、線形−Ｙ）モデル（Ｒ２＝０．７３）に最もよく適合した。これは、循環ＳＡＡ３のｌｏｇ増加が、関節炎スコアの単位変化に対応することを示唆する。
【０３４１】
結果を図９ｂおよび９Ｃに提示する。
【実施例８】
【０３４２】
リアルタイムＲＴ−ＰＣＲ分析に使用したプライマーのリスト（表２）
【０３４３】
【表２】
2018533974.tif 000004
【実施例９】
【０３４４】
コラーゲン誘発関節炎モデル（ＣＩＡモデル）における関節炎スコアに対するペプチドの効果。
ＣＩＡモデルは、骨および軟骨に対する抗体を発生させるためのウシコラーゲンでの免疫付与に基づく抗関節炎活性の評価のための「標準」動物モデルである。
【０３４５】
ここで、本発明者らは、ＨＥＲＶ−Ｅｎｖ５９ペプチドのインビボ効果の調査に関するデータを提示する。目的は、コラーゲン誘発関節炎のマウスモデルにおいて抗関節炎投薬パラダイムを決定することであった。この研究は、雌ＤＢＡ／１Ｊマウスで行った。疾患発症に対するＥｎｖ５９ＩＳＵペプチドの効果をメトトレキサートＭＴＸ（陽性対照）または食塩水処置対照群と比較した。
【０３４６】
手順の概要：
０日目：マウスを計量し、以下の表（表３）におけるように首の項部に皮下注射した：
【０３４７】
【表３】
2018533974.tif 000005
【０３４８】
１時間後、マウスの尾の基部に５０μｌのコラーゲン／ＣＦＡエマルジョンを皮下注射した。
【０３４９】
その後４１日の間、毎週月、水および金曜日に関節炎の兆候について以下のようにマウスにスコアを付けた：
・足ごとにスコアを与える
・０＝関節炎の目に見える影響なし
・１＝１本の指の浮腫および／または紅斑
・２＝２本の指の浮腫および／または紅斑
・３＝２本より多くの指の浮腫および／または紅斑
・４＝足および指全体の重度関節炎
【０３５０】
関節炎指数（ＡＩ）を個々の足スコアの加算により計算した。
【０３５１】
４２日目にマウスを計量し、関節炎の兆候についてスコアを付けた。
【０３５２】
表４および図１０は、ＡＩに基づく疾患発症平均値に対する処置の効果を示す。
【０３５３】
表５は、最終的な個々の足スコア平均値に対する処置の効果を示す。
【０３５４】
【表４】
2018533974.tif 000006
【０３５５】
【表５】
2018533974.tif 000007
【０３５６】
結果の概要：４μ／マウスのＨＥＲＶ−Ｅｎｖ５９ペプチドでの予防的連日皮下注射は、疾患の７０％発生率および疾患重症度の７０％低下をもたらした。
【０３５７】
結論：疾患誘発（ｄｉｓｅａｓｅ  ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ）の１時間前に開始した、４μｇ／マウスの試験化合物での１日１回の皮下注射は、疾患に関して７０％の発生率しかもたらさず、これは、この研究の終了時の疾患重症度の有意な７０％低下を伴うものであった。
【実施例１０】
【０３５８】
赤血球に関する溶血アッセイ。
薬物誘発性溶血は、重度毒性になりやすいが比較的稀である。それは、２つの機序（ｍｅｃｈａｎｓｉｓｍｓ）によって起こる：
中毒性溶血  −  薬物、その代謝物、または製剤中の賦形剤の直接毒性。
【０３５９】
アレルギー性溶血  −  以前に薬物に感作された患者において免疫反応により引き起こされる毒性。
【０３６０】
正常個体の大多数は、十分に高い溶血薬濃度で中毒性溶血を経験し得るが、大部分の薬物について、溶血の遺伝的素因がある個体にはより低い用量で中毒性溶血が引き起こされる。ＵＳ  ＦＤＡは、注射剤用の賦形剤について、ＩＶ投与が指示される濃度でインビトロ溶血研究を行って溶血の可能性に関して試験するべきであると提言している。溶血アッセイでは、ヒト赤血球および試験材料を、細胞外、初期エンドソームおよび後期エンド・リソソーム環境を模倣する被定義ｐＨのバッファー中で、コインキュベートする。無傷の赤血球をペレット化するための遠心分離工程後、培地に放出されたヘモグロビンの量を分光光度法（最高ダイナミックレンジのために４０５ｎｍ）で測定する。次いで、パーセント赤血球分布を、界面活性剤で溶解した陽性対照試料を基準にして定量する。このモデル系では、赤血球膜は、エンド・リソソーム小胞を封入する脂質二重層膜の代替物として役立つ。望ましい結果は、生理的ｐＨ（７．４）で無視できる溶血、およびおおよそｐＨ５〜６．８のエンド・リソソームｐＨ範囲での確固たる溶血である。
【０３６１】
ここで、本発明者らは、ニワトリからの赤血球を使用する、Ｅｎｖ５９ペプチド濃度の関数としての溶血の調査に関するデータを提示する。３７℃で１時間のインキュベーション時間後のＥｎｖ３ペプチドの溶血活性を図６に示す。ニワトリ赤血球（ＲＢＣ）のパーセンテージ溶解についてのペプチドの濃度反応曲線を示す。陽性対照として、エボラウイルスの糖タンパク質からのペプチドを含め、ここでそれをＥｂｏ  Ｚとして与える。１００％溶血の対照は、ＮＰ−４０界面活性剤で処置した赤血球の試料であった。ペプチド濃度をμＭとして報告する。
【０３６２】
結果を図１１に提示する。
【実施例１１】
【０３６３】
ペプチドＳＧ＃１〜ＳＧ＃１７（ＩＤ１０３１〜ＩＤ１０４７）についての毒性プロファイル
ここで、本発明者らは、２つのヒト細胞株ＴＨＰ−１またはＨＴ−１０８０細胞に対するペプチドＳＧ＃１〜ＳＧ＃１７（ＩＤ１０３１〜ＩＤ１０４７）の細胞毒性効果を検査した。
【０３６４】
ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｂｌｕｅ（登録商標）細胞生存率アッセイは、マルチウォールプレート（ｍｕｌｔｉｗａｌｌ  ｐｌａｔｅ）内に存在する生存細胞の数を推定するための均一な蛍光測定法を提供する。このアッセイは、細胞の代謝能力を測定するために細胞生存率の指示薬である指示色素レサズリンを使用する。生存細胞は、高蛍光性であるレゾルフィンにレサズリンを還元する能力を保持する。
【０３６５】
ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｂｌｕｅ（登録商標）試薬は、高純度レサズリンを含有する緩衝溶液である。レサズリンは、色が濃青色であり、内在蛍光を殆ど有さない。しかし、レサズリンは、レゾルフィンに還元されると、ピンク色になり、高蛍光性（５７９ＥＸ／５８４ＥＭ）になる。
【０３６６】
手順例：
１．培養培地中の細胞が入っている９６ウェルアッセイプレートを準備する。ＨＴ−１０８０については、実験の１日目に１ウェルにつき細胞１．６×１０４個を播種する。１ウェルにつき１００μｌの完全培養培地（ＤＭＥＭ）に細胞を播種する。
【０３６７】
２．２日目に、培地を穏やかに除去し、５０μｌの完全ＤＭＥＭ培地を添加し、適切なウェルにペプチドおよび媒体対照を、各ウェルにおける最終容量が１００μｌになるように添加する。必要に応じて完全ＤＭＥＭを補充する。
【０３６８】
３．望ましい試験曝露期間、約２０時間、細胞を培養する。
【０３６９】
４．３日目に、３７℃インキュベーターからアッセイプレートを取り出し、２０μｌ／ウェルのＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｂｌｕｅ（登録商標）試薬を添加する。
【０３７０】
５．１０秒間震盪させる。
【０３７１】
６．標準細胞培養条件を使用して４時間インキュベートする。
【０３７２】
７．１０秒間プレートを振盪させ、５６０／５９０ｎｍで蛍光を記録する。
【０３７３】
結果：
ペプチドＳＧ＃１〜ＳＧ＃１７（ＩＤ１０３１〜ＩＤ１０４７）についての毒性プロファイル。すべてのペプチドを投薬量漸増（１０ｎｍ、３０ｎＭ、１００ｎＭ、１μＭ、１０μＭ、３０μＭ、１００μＭおよび３００μＭ）で試験した。１μＭのＩＣ５０を有する細胞毒性細胞透過性ペプチドを陽性対照として同じ投薬量漸増で含めた。
【０３７４】
被験ペプチドＳＧ＃１〜ＳＧ＃１７（ＩＤ１０３１〜ＩＤ１０４７）のいずれも、投薬量漸増（１０ｎｍ、３０ｎＭ、１００ｎＭ、１μＭ、１０μＭ、３０μＭ、１００μＭおよび３００μＭ）でＴＨＰ−１細胞に対してもＨＴ−１０８０細胞に対しても毒性効果の兆候を示さない。図１２は、ＳＧ＃１６（ＩＤ１０４６）についての代表グラフである。
【０３７５】
【表６】
2018533974.tif 000008
【０３７６】
ペプチドＳＧ＃１〜ＳＧ＃１７（ＩＤ１０３１〜ＩＤ１０４７）のいずれも、投薬量漸増（１０ｎｍ、３０ｎＭ、１００ｎＭ、１μＭ、１０μＭ、３０μＭ、１００μＭおよび３００μＭ）でＴＨＰ−１細胞に対してもＨＴ−１０８０細胞に対しても毒性効果の兆候を示さないので、ＥＣ５０を計算しない。
【実施例１２】
【０３７７】
コラーゲン誘発関節炎モデル（ＣＩＡモデル）における関節炎スコアに対するペプチドの効果、研究番号２。
ＣＩＡモデルは、実施例９において説明したように、骨および軟骨に対する抗体を発生させるためのウシコラーゲンでの免疫付与に基づく抗関節炎活性の評価のための「標準」動物モデルである。
【０３７８】
ここで、本発明者らは、ＨＥＲＶ−Ｅｎｖ５９、ＳＧ＃２、およびＳＧ＃５、およびＳＧ＃１５ペプチドのインビボ効果の調査に関するデータを提示する。目的は、コラーゲン誘発関節炎のマウスモデルにおいて抗関節炎投薬パラダイムを決定することであった。この研究は、雌ＤＢＡ／１Ｊマウスで行った。疾患発症に対するＥｎｖ５９ＩＳＵペプチド、ＳＧ＃２、ＳＧ＃５またはＳＧ＃１５ペプチドの効果をメトトレキサートＭＴＸ（陽性対照）または食塩水処置対照群と比較する。
【０３７９】
手順の概要：
０日目：マウスを計量し、以下の表（表６）におけるように首の項部に皮下注射した：
【０３８０】
【表７】
2018533974.tif 000009
【０３８１】
１時間後、マウスの尾の基部に５０μｌのコラーゲン／ＣＦＡエマルジョンを皮下注射した。
【０３８２】
その後４１日の間、毎週月、水および金曜日に関節炎の兆候について以下のようにマウスにスコアを付けた：
・足ごとにスコアを与える
・０＝関節炎の目に見える影響なし
・１＝１本の指の浮腫および／または紅斑
・２＝２本の指の浮腫および／または紅斑
・３＝２本より多くの指の浮腫および／または紅斑
・４＝足および指全体の重度関節炎
【０３８３】
関節炎指数（ＡＩ）を個々の足スコアの加算により計算した。
【０３８４】
４２日目にマウスを計量し、関節炎の兆候についてスコアを付けた。
【０３８５】
表７および図１３は、ＡＩに基づく疾患発症平均値に対する処置の効果を示す。
【０３８６】
表８は、最終的な個々の足スコア平均値に対する処置の効果を示す。
【０３８７】
表７
疾患発症（ＡＩ）平均値（Ａｖａｒａｇｅ）に対する処置の効果：
疾患発症（ＡＩ）平均値に対する処置の効果：
【０３８８】
【表８】
2018533974.tif 000010
【０３８９】
表８  最終的な個々の足スコアの平均値に対する処置の効果：
【０３９０】
【表９】
2018533974.tif 000011
【０３９１】
結果の概要および結論：
ＳＧ＃２ペプチドでの予防的処置の効果（群３）：
疾患誘発の１時間前に開始した、４μｇ／マウスのＳＧ＃２ペプチドでの１日１回の皮下注射は、３０％の疾患発生率しかもたらさず、これは、この研究の終了時の疾患重症度の有意な９０％低下を伴うものであった。この処置計画は、マウス体重減少に対して効果がなかった。
【０３９２】
ＳＧ＃５ペプチドでの予防的処置の効果（群４）：
疾患誘発の１時間前に開始した、４μｇ／マウスのＳＧ＃５ペプチドでの１日１回の皮下注射は、８０％の疾患発生率をもたらし、これは、この研究の終了時の疾患重症度の有意な７０％低下を伴うものであった。この処置計画は、マウス体重減少に対して効果がなかった。
【０３９３】
ＳＧ＃１５ペプチドでの予防的処置の効果（群５）：
疾患誘発の１時間前に開始した、４μｇ／マウスのＳＧ＃１５ペプチドでの１日１回の皮下注射は、３０％の疾患発生率しかもたらさず、これは、この研究の終了時の疾患重症度の有意な９７％低下を伴うものであった。この処置計画は、マウス体重減少に対して効果がなかった。
【０３９４】
ＨＥＲＶ−Ｅｎｖ５９ペプチドでの予防的処置の効果（群６）：
疾患誘発の１時間前に開始した、４μｇ／マウスの試験化合物４での１日１回の皮下注射は、８０％の疾患発生率をもたらし、これは、この研究の終了時の疾患重症度の有意な６７％低下を伴うものであった。この処置計画は、マウス体重減少に対して効果がなかった。
【０３９５】
【表１０】
2018533974.tif 000012
【表１１】
2018533974.tif 000013
【０３９６】
ＳＧ＃１６は、ペプチドＫＧＬＳＩＬＬＮＥＥにおけるリシン残基のαおよびεアミノ基にＣ末端がカップリングされている２つのＬＱＮＲＲＧＬペプチドを有する、分岐ペプチド構造を有する。そのような構造を描写する１つの方法は、以下の通りである：（ＬＱＮＲＲＧＬ）２（＞Ｋ）ＧＬＳＩＬＬＮＥＥ
【０３９７】
ＳＧ＃１０は、配列ＬＱＮＲＲＧＬＧＬＳＩＬＬＮＥＥＣＧＰＧＰＧＰを有し、この配列は、ＳＧ＃１７と同一であるが、そのＣ末端にカップリングされている追加のＮＨ２基を有する。
【０３９８】
アミノ酸の１文字および３文字記号を以下の表１に提供する。
【０３９９】
【表１２】
2018533974.tif 000014
【表１３】
2018533974.tif 000015
【０４００】
項目
（項目１）
配列ＬＳＩＬＬＮＥＥ（配列番号２６）と少なくとも６２％、より好ましくは少なくとも７５％、より好ましくは少なくとも８７％、より好ましくは１００％の配列同一性を有する配列からなるかまたはそれを含むポリペプチド。
【０４０１】
（項目２）
配列番号１〜配列番号１０４３の中から選択される配列またはその断片に結合している配列ＬＳＩＬＬＮＥＥ（配列番号２６）を含む、項目１に記載のポリペプチド。
【０４０２】
（項目３）
ＧＬＳＩＬＬＮＥＥＣ（配列番号２５）、ＬＱＮＲＲＧＬＧＬＳＩＬＬＮＥＥＣＥＥＧＰＧＰＧＰ（配列番号２７）、ＬＱＮＲＲＧＬＤＬＳＩＬＬＮＥＥＣＧＰＧＰＧＰ（配列番号２８）、ＧＬＳＩＬＬＮＥＥＣＧＰＧＰＧＰ（配列番号２９）およびＬＱＮＲＲＧＬＬＱＮＲＲＧＬＧＬＳＩＬＬＮＥＥ（配列番号３０）の中から選択されるペプチド配列を含むかまたはからなる、前記項目のいずれかに記載のポリペプチド。
【０４０３】
（項目４）
配列：ＬＱＮＲＲＧＬＧＬＳＩＬＬＮＥＥＣ（配列番号１）と少なくとも７０％の配列同一性を有する配列からなるかまたはそれを含む、前記項目のいずれかに記載のポリペプチド。
【０４０４】
（項目５）
配列番号１と少なくとも７６％、より好ましくは少なくとも８２％、好ましくは少なくとも８８％、より好ましくは少なくとも９４％、好ましくは１００％の配列同一性を有する配列からなるかまたはそれを含む、前記項目のいずれかに記載のポリペプチド。
【０４０５】
（項目６）
配列番号１〜２５の配列の中から選択される配列と少なくとも７６％、より好ましくは少なくとも８２％、好ましくは少なくとも８８％、より好ましくは少なくとも９４％、好ましくは１００％の配列同一性を有する配列からなるかまたはそれを含む、前記項目のいずれかに記載のポリペプチド。
【０４０６】
（項目７）
２５０未満のアミノ酸、好ましくは２００未満のアミノ酸、より好ましくは１７５未満のアミノ酸、好ましくは１５０未満のアミノ酸、より好ましくは１２５未満のアミノ酸、好ましくは１００未満のアミノ酸、より好ましくは７５未満のアミノ酸、好ましくは６０未満のアミノ酸、より好ましくは５０未満のアミノ酸、好ましくは４０未満のアミノ酸、より好ましくは３５未満のアミノ酸、好ましくは３０未満のアミノ酸、より好ましくは２５未満のアミノ酸、好ましくは２０未満のアミノ酸、より好ましくは１９未満のアミノ酸、好ましくは１８未満のアミノ酸、より好ましくは１７未満のアミノ酸、好ましくは１６未満のアミノ酸、より好ましくは１５未満のアミノ酸、好ましくは１４未満のアミノ酸、より好ましくは１３未満のアミノ酸、好ましくは１２未満のアミノ酸、より好ましくは１１未満のアミノ酸、好ましくは１０未満のアミノ酸、より好ましくは９未満のアミノ酸、好ましくは８未満のアミノ酸、より好ましくは７未満のアミノ酸、好ましくは６未満のアミノ酸を含む、前記項目のいずれかに記載のポリペプチド。
【０４０７】
（項目８）
少なくとも５、より好ましくは少なくとも６、好ましくは少なくとも７、より好ましくは少なくとも８、好ましくは少なくとも９、より好ましくは少なくとも１０、好ましくは少なくとも１１、より好ましくは少なくとも１２、好ましくは少なくとも１３、より好ましくは少なくとも１４、好ましくは少なくとも１５、より好ましくは少なくとも１６、好ましくは少なくとも１７、より好ましくは少なくとも１８、好ましくは少なくとも１９、より好ましくは少なくとも２０、好ましくは少なくとも２５、より好ましくは少なくとも３０、好ましくは少なくとも３５、より好ましくは少なくとも４０、好ましくは少なくとも５０、より好ましくは少なくとも６０、好ましくは少なくとも７５、より好ましくは少なくとも１００、好ましくは少なくとも１２５、より好ましくは少なくとも１５０、好ましくは少なくとも１７５、より好ましくは少なくとも２００、好ましくは少なくとも２５０のアミノ酸を含む、前記項目のいずれかに記載のポリペプチド。
【０４０８】
（項目９）
１７アミノ酸の長さを有するポリペプチドであって、最初の７つのアミノ酸の配列が配列番号２６〜１０４３の配列の中から選択される配列の最初の７つのアミノ酸の配列と同一であり、少なくとも１０のアミノ酸がＧＬＳＩＬＬＮＥＥＣ（配列番号２５）である、ポリペプチド。
【０４０９】
（項目１０）
１、２、３または４つの点突然変異を含む、項目８に記載のポリペプチド。
【０４１０】
（項目１１）
免疫抑制ドメインであるか、または免疫抑制ドメインとして作用する、前記項目のいずれかに記載のポリペプチド。
【０４１１】
（項目１２）
前記ドメインが、項目１〜９のいずれかに記載のポリペプチドから少なくとも１つの点突然変異、欠失または挿入によって得ることができる、項目１１に記載のポリペプチド。
【０４１２】
（項目１３）
点突然変異、欠失または挿入の総数が、１、２、３および４の中から選択される、項目１１に記載のポリペプチド。
【０４１３】
（項目１４）
点突然変異、欠失または挿入の総数が、４より多い、項目１１に記載のポリペプチド。
【０４１４】
（項目１５）
単量体ペプチドである、項目１１〜１４のいずれかに記載のポリペプチド。
【０４１５】
（項目１６）
少なくとも１つのさらなる免疫抑制ペプチドと架橋されており、および／またはタンパク質に連結されており、前記タンパク質が、前記請求項のいずれかに記載の少なくとも１つのさらなる免疫抑制ドメインに連結されている、項目１１〜１５のいずれかに記載のポリペプチド。
【０４１６】
（項目１７）
少なくとも１つのさらなる免疫抑制ペプチドに二量体を形成するように連結されている、項目１１〜１６のいずれかに記載のポリペプチド。
【０４１７】
（項目１８）
前記二量体が同種のものであり、ジスルフィド結合によりＮ末端とＮ末端、Ｃ末端とＣ末端および／またはタンデムリピートが架橋されている、項目１１〜１６のいずれかに記載の少なくとも２つの免疫抑制ペプチドを含む、項目１７に記載のポリペプチド。
【０４１８】
（項目１９）
少なくとも１つのさらなる免疫抑制ペプチドに同種二量体または異種二量体を形成するように連結されている、項目１７または１８に記載のポリペプチド。
【０４１９】
（項目２０）
少なくとも２つのさらなる免疫抑制ペプチドに多量体または重合体を形成するように連結されている、項目１１〜１９のいずれかに記載のポリペプチド。
【０４２０】
（項目２１）
１つまたは複数の修飾を含む、項目１１〜２０のいずれかに記載のポリペプチド。
【０４２１】
（項目２２）
前記修飾が、化学的誘導体化、Ｌ−アミノ酸置換、Ｄ−アミノ酸置換、合成アミノ酸置換、脱アミノ化および脱カルボキシル化からなる群から選択される、項目２１に記載のポリペプチド。
【０４２２】
（項目２３）
前記ペプチドまたはタンパク質は、少なくとも１つの修飾を含まないペプチドまたはタンパク質と比較して増加したタンパク質分解抵抗性を有する、項目２１または２２に記載のポリペプチド。
【０４２３】
（項目２４）
前記項目のいずれかに記載のポリペプチドを含むタンパク質。
【０４２４】
（項目２５）
エンベロープタンパク質である、項目２４の記載のタンパク質。
【０４２５】
（項目２６）
項目１〜１４のいずれかに記載のポリペプチドを含むタンパク質であって、機能成膜糖タンパク質でないタンパク質。
【０４２６】
（項目２７）
融合活性がない、項目１〜１４のいずれかに記載のポリペプチドを含むタンパク質。
【０４２７】
（項目２８）
膜に結合または連結されていない、項目１〜１４のいずれかに記載のポリペプチドを含むタンパク質。
【０４２８】
（項目２９）
哺乳動物細胞系または動物モデルにおけるＩＬ−６発現を阻害する、前記項目のいずれかに記載のポリペプチドまたはタンパク質。
【０４２９】
（項目３０）
前記項目のいずれかに記載のポリペプチドまたはタンパク質をコードする、単離された核酸。
【０４３０】
（項目３１）
項目３０に記載の核酸および該核酸の発現に必要なエレメントを含む発現ベクター。
【０４３１】
（項目３２）
真核生物または原核生物またはウイルス発現ベクターである、項目３１に記載の発現ベクター。
【０４３２】
（項目３３）
配列ＬＳＩＬＬＮＥＥ（配列番号２６）と少なくとも６２％の配列同一性または相同性を有するペプチドをコードする核酸配列を含む発現ベクター。
【０４３３】
（項目３４）
項目１〜２９のいずれかに記載のポリペプチドまたはタンパク質をコードする核酸配列を含む発現ベクター。
【０４３４】
（項目３５）
項目１８に記載の核酸、および／または項目３１〜３４のいずれかに記載の発現ベクターを含む組換え細胞。
【０４３５】
（項目３６）
前記項目のいずれかに記載の少なくとも１つのポリペプチド、タンパク質、核酸、発現ベクターまたは組換え細胞を含み、少なくとも１つの希釈剤、担体、結合剤、溶媒または賦形剤をさらに含む医薬組成物。
【０４３６】
（項目３７）
前記少なくとも１つのポリペプチド、タンパク質、核酸、発現ベクターまたは組換え細胞が、前記医薬品の活性成分または唯一の活性成分である、項目３６に記載の医薬組成物。
【０４３７】
（項目３８）
医薬組成物の調製のための方法であって、
ａ．前記項目のいずれかに記載の１つまたは複数のポリペプチド、タンパク質、核酸、発現ベクターまたは組換え細胞を用意し、所望により、前記１つまたは複数のポリペプチドを架橋させる工程；
ｂ．所望により、希釈剤、担体、結合剤、溶媒または賦形剤を用意する工程；
ｃ．物質を用意する工程；
ｄ．用意した１つまたは複数のペプチドを、所望による工程ｂ．の任意の担体および工程ｄ．の物質と混合して、医薬組成物を得る工程
を含む方法。
【０４３８】
（項目３９）
工程ｃ．の前記物質が、クリーム、ローション、軟膏、ゲル、香膏、半固形軟膏、油、フォームおよびシャンプーからなる群から選択される、項目３８に記載の方法。
【０４３９】
（項目４０）
項目３８または３９に従って得ることができる医薬組成物。
【０４４０】
（項目４１）
クリーム、ローション、懸濁性ローション、軟膏、ゲル、香膏、半固形軟膏、油、フォーム、シャンプー、スプレー剤、エアロゾル、経皮パッチおよび絆創膏からなる群の中から選択される、項目３６、３７または４０のいずれかに記載の医薬組成物。
【０４４１】
（項目４２）
前記項目のいずれかに記載のポリペプチド、タンパク質、核酸、発現ベクター、組換え細胞または医薬組成物を含む生体材料。
【０４４２】
（項目４３）
表面、粒子、メッシュ、デバイス、チューブまたはインプラントの中から選択される、項目４２に記載の生体材料。
【０４４３】
（項目４４）
前記項目のいずれかに記載の少なくとも１つのポリペプチド、タンパク質、核酸、発現ベクター、組換え細胞、医薬組成物または生体材料の医学的使用。
【０４４４】
（項目４５）
免疫抑制または免疫調節のための、前記項目のいずれかに記載の少なくとも１つのポリペプチド、タンパク質、核酸、発現ベクター、組換え細胞、医薬組成物またはインプラントの使用。
【０４４５】
（項目４６）
疾患の外科手術、予防、治療、診断方法、処置および／または改善における使用のための、前記項目のいずれかに記載のポリペプチド、タンパク質、核酸、発現ベクター、組換え細胞、医薬組成物またはインプラント。
【０４４６】
（項目４７）
自己免疫疾患の処置、改善または予防のための、前記項目のいずれかに記載のポリペプチド、タンパク質、核酸、発現ベクター、組換え細胞、医薬組成物またはインプラント。
【０４４７】
（項目４８）
自己免疫疾患が、ＳＬＥ（全身性エリテマトーデス）、または関節炎、例えば関節リウマチである、項目４７に記載のポリペプチド、タンパク質、核酸、発現ベクター、組換え細胞、医薬組成物またはインプラント。
【０４４８】
（項目４９）
炎症症状、または急性もしくは慢性炎症などの炎症に関連する障害の処置、改善または予防のための、前記項目のいずれかに記載のポリペプチド、タンパク質、核酸、発現ベクター、組換え細胞、医薬組成物またはインプラント。
【０４４９】
（項目５０）
医薬としての使用のための、前記項目のいずれかに記載のポリペプチド、タンパク質、核酸、発現ベクター、組換え細胞、医薬組成物またはインプラント。
【０４５０】
（項目５１）
対象がヒトまたは動物である、前記項目のいずれかに記載の使用のためのポリペプチド、タンパク質、核酸、発現ベクター、組換え細胞、医薬組成物またはインプラント。
【０４５１】
（項目５２）
臓器に対する使用のための、前記項目のいずれかに記載のポリペプチド、タンパク質、核酸、発現ベクター、組換え細胞、医薬組成物またはインプラント。
【０４５２】
（項目５３）
移植患者の準備または処置のための、前記項目のいずれかに記載のポリペプチド、タンパク質、核酸、発現ベクター、組換え細胞、医薬組成物またはインプラント。
【０４５３】
（項目５４）
急性散在性脳脊髄炎（ＡＤＥＭ）、アジソン病、無ガンマグロブリン血症、円形脱毛症、筋萎縮性側索硬化症、強直性脊椎炎、抗リン脂質抗体症候群、抗シンセターゼ抗体症候群、アトピー性アレルギー、アトピー性皮膚炎、自己免疫性再生不良性貧血、自己免疫性心筋症、自己免疫性腸疾患、自己免疫性溶血性貧血、自己免疫性肝炎、自己免疫性内耳疾患、自己免疫性リンパ増殖症候群、自己免疫性末梢神経障害、自己免疫性膵炎、自己免疫性多分泌症候群、自己免疫性プロゲステロン皮膚炎、自己免疫性血小板減少性紫斑病、自己免疫性蕁麻疹、自己免疫性ぶどう膜炎、バロ病／バロ同心円硬化症、ベーチェット病、ベルジェ病、ビッカースタッフ脳炎、ブラウ症候群、水疱性類天疱瘡、がん、キャッスルマン病、セリアック病、シャガス病、慢性炎症性脱髄性多発神経炎、慢性再発性多発性骨髄炎、慢性閉塞性肺疾患、チャーグ・ストラウス症候群、瘢痕性類天疱瘡、コーガン症候群、寒冷凝集素症、補体成分２欠損症、接触皮膚炎、頭部動脈炎、ＣＲＥＳＴ症候群、クローン病、クッシング症候群、皮膚白血球破壊性血管炎、デゴス病、ダーカム病、疱疹状皮膚炎、皮膚筋炎、１型糖尿病、汎発性皮膚全身性強皮症、ドレスラー症候群、薬物誘発性ループス、円板エリテマトーデス、湿疹、子宮内膜症、腱付着物炎関連関節炎、好酸球性筋膜炎、好酸球性胃腸炎、後天性表皮水疱症、結節性紅斑、胎児赤芽球症、本態性混合型クリオグロブリン血症、エバンス症候群、進行性骨化性線維異形成症、線維化性肺胞炎、胃炎、胃腸類天疱瘡、糸球体腎炎、グッドパスチャー症候群、グレーブス病、ギラン・バレー症候群（ＧＢＳ）、橋本脳症、橋本甲状腺炎、ヘノッホ・シェーンライン紫斑病、妊娠性疱疹、肝炎、化膿性汗腺炎、ヒューズ・ストーヴィン症候群、低ガンマグロブリン血症、特発性炎症細胞脱髄疾患、特発性肺線維症、特発性血小板減少性紫斑病、ＩｇＡ腎症、封入体筋炎、慢性炎症性脱髄性多発神経炎、間質性膀胱炎、若年性特発性関節炎、川崎病、ランバート・イートン筋無力症候群、白血球破壊性血管炎、扁平苔癬、硬化性苔癬、線状ＩｇＡ病（ＬＡＤ）、ルー・ゲーリック病、ルポイド肝炎、エリテマトーデス、マジード症候群、メニエール病、顕微鏡的多発血管炎、ミラー・フィッシャー症候群、混合型結合組織病、モルフェア、ムッハ・ハーベルマン病、多発性硬化症、重症筋無力症、筋炎、ナルコレプシー、視神経脊髄炎、神経性筋強直症、非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）、眼瘢痕性類天疱瘡、眼球クローヌス・ミオクローヌス症候群、オード甲状腺炎、回帰性リウマチ、ＰＡＮＤＡＳ（小児自己免疫性溶連菌関連神性経精神障害）、腫瘍随伴性小脳変性症、発作性夜間ヘモグロビン尿症（ＰＮＨ）、パリー・ロンベルク症候群、パーソネージ・ターナー症候群、周辺部ぶどう膜炎、尋常性天疱瘡、悪性貧血、静脈周囲性脳脊髄炎、ＰＯＥＭＳ症候群、結節性多発動脈炎、リウマチ性多発筋痛症、多発性筋炎、原発性胆汁性肝硬変、原発性硬化性胆管炎、進行性炎症性ニューロパチー、乾癬、乾癬性関節炎、壊疽性膿皮症、赤芽球ろう、ラスムッセン脳炎、レイノー現象、再発性多発軟骨炎、ライター症候群、下肢静止不能症候群、後腹膜線維症、関節リウマチ、リウマチ熱、サルコイドーシス、統合失調症、シュミット症候群、シュニッツラー症候群、強膜炎、強皮症、血清病、シェーグレン症候群、脊椎関節症、スチル病、全身硬直症候群、亜急性細菌性心内膜炎（ＳＢＥ）、スザック症候群、スイート症候群、シデナム舞踏病、交感神経性眼炎、全身性エリテマトーデス、高安動脈炎、側頭動脈炎、血小板減少症、トロサ・ハント症候群、横断性脊髄炎、潰瘍性大腸炎、未分化結合組織病、未分化脊椎関節症、じん麻疹様血管炎、血管炎、白斑、およびウェゲナー肉芽腫症の中から選択される症状の予防または処置を含む、前記項目のいずれかに記載の使用のためのポリペプチド、タンパク質、核酸、発現ベクター、組換え細胞、医薬組成物またはインプラント。
【０４５４】
（項目５５）
尋常性ざ瘡、アレルギー、アレルギー性鼻炎、喘息、アテローム動脈硬化症、自己免疫疾患、セリアック病、慢性前立腺炎、糸球体腎炎、過敏症、炎症性腸疾患、骨盤内炎症性疾患、再灌流傷害、関節リウマチ、サルコイドーシス、移植拒絶、血管炎、間質性膀胱炎、がん、うつ病、白血球増多症、および白血球欠損症の中から選択される障害の処置または予防のための、前記項目のいずれかに記載の使用のためのポリペプチド、タンパク質、核酸、発現ベクター、組換え細胞、医薬組成物またはインプラント。
【０４５５】
（項目５６）
敗血症の予防または処置を含む、前記項目のいずれかに記載の使用のためのポリペプチド、タンパク質、核酸、発現ベクター、組換え細胞、医薬組成物またはインプラント。
【０４５６】
（項目５７）
脊椎関節炎の予防または処置を含む、前記項目のいずれかに記載の使用のためのポリペプチド、タンパク質、核酸、発現ベクター、組換え細胞、医薬組成物またはインプラント。
【０４５７】
（項目５８）
喘息および／またはアレルギーの予防または処置を含む、前記項目のいずれかに記載の使用のためのポリペプチド、タンパク質、核酸、発現ベクター、組換え細胞、医薬組成物またはインプラント。
【０４５８】
（項目５９）
自己免疫疾患に関連する症状の予防または処置または改善方法における使用のためのポリペプチドであって、前記免疫抑制ドメインを発現する遺伝子配列が、前記自己免疫疾患に罹患している患者群において健常対照群と比較して発現増加または減少を示す、項目１１〜２３のいずれかに記載のポリペプチド。
【０４５９】
（項目６０）
前記免疫抑制ドメインが、内在性レトロウイルス、好ましくは、ヒト内在性レトロウイルスからのものである、項目５９に記載のポリペプチド。
【０４６０】
（項目６１）
前記免疫抑制ドメインが、配列番号：番号１〜１０４３の配列の中から選択される、項目５９または６０に記載のポリペプチド。
【０４６１】
（項目６２）
自己免疫疾患または該自己免疫疾患と関連する少なくとも１つの症状の予防または処置または改善のための、配列番号：番号１〜１０４３の中から選択されるポリペプチドの使用。
【０４６２】
（項目６３）
抗炎症薬または免疫抑制もしくは免疫調節用の医薬の製造のための、前記項目のいずれかに記載のポリペプチド、タンパク質、核酸、発現ベクター、組換え細胞、医薬組成物またはインプラントの使用。
【０４６３】
（項目６４）
移植患者の準備または処置用の医薬の製造のための、前記項目のいずれかに記載のポリペプチド、タンパク質、核酸、発現ベクター、組換え細胞、医薬組成物またはインプラントの使用。
【０４６４】
（項目６５）
自己免疫または炎症性疾患の予防または処置用の医薬の製造のための、前記項目のいずれかに記載のポリペプチド、タンパク質、核酸、発現ベクター、組換え細胞、医薬組成物またはインプラントの使用。
【０４６５】
（項目６６）
急性散在性脳脊髄炎（ＡＤＥＭ）、アジソン病、無ガンマグロブリン血症、円形脱毛症、筋萎縮性側索硬化症、ＡＮＣＡ血管炎、強直性脊椎炎、抗リン脂質抗体症候群、抗シンセターゼ抗体症候群、動脈硬化症、アトピー性アレルギー、アトピー性皮膚炎、自己免疫性再生不良性貧血、自己免疫性心筋症、自己免疫性腸疾患、自己免疫性溶血性貧血、自己免疫性肝炎、自己免疫性内耳疾患、自己免疫性リンパ増殖症候群、自己免疫性末梢神経障害、自己免疫性膵炎、自己免疫性多分泌症候群、自己免疫性プロゲステロン皮膚炎、自己免疫性血小板減少性紫斑病、自己免疫性蕁麻疹、自己免疫性ぶどう膜炎、バロ病／バロ同心円硬化症、ベーチェット病、ベルジェ病、ビッカースタッフ脳炎、ブラウ症候群、水疱性類天疱瘡、がん、キャッスルマン病、セリアック病、シャガス病、慢性炎症性脱髄性多発神経炎、慢性再発性多発性骨髄炎、慢性閉塞性肺疾患、チャーグ・ストラウス症候群、瘢痕性類天疱瘡、コーガン症候群、寒冷凝集素症、補体成分２欠損症、接触皮膚炎、頭部動脈炎、ＣＲＥＳＴ症候群、クローン病、クッシング症候群、皮膚白血球破壊性血管炎、デゴス病、ダーカム病、疱疹状皮膚炎、皮膚筋炎、１型糖尿病、汎発性皮膚全身性強皮症、ドレスラー症候群、薬物誘発性ループス、円板エリテマトーデス、湿疹、子宮内膜症、腱付着物炎関連関節炎、好酸球性筋膜炎、好酸球性胃腸炎、後天性表皮水疱症、結節性紅斑、胎児赤芽球症、本態性混合型クリオグロブリン血症、エバンス症候群、進行性骨化性線維異形成症、線維化性肺胞炎、胃炎、胃腸類天疱瘡、糸球体腎炎、グッドパスチャー症候群、グレーブス病、ギラン・バレー症候群（ＧＢＳ）、橋本脳症、橋本甲状腺炎、ヘノッホ・シェーンライン紫斑病、妊娠性疱疹、肝炎、化膿性汗腺炎、ヒューズ・ストーヴィン症候群、低ガンマグロブリン血症、特発性炎症細胞脱髄疾患、特発性肺線維症、特発性血小板減少性紫斑病、ＩｇＡ腎症、封入体筋炎、慢性炎症性脱髄性多発神経炎、間質性膀胱炎、若年性特発性関節炎、川崎病、ランバート・イートン筋無力症候群、白血球破壊性血管炎、扁平苔癬、硬化性苔癬、線状ＩｇＡ病（ＬＡＤ）、ルー・ゲーリック病、ルポイド肝炎、エリテマトーデス、マジード症候群、メニエール病、顕微鏡的多発血管炎、ミラー・フィッシャー症候群、混合型結合組織病、モルフェア、ムッハ・ハーベルマン病、多発性硬化症、重症筋無力症、筋炎、ナルコレプシー、視神経脊髄炎、神経性筋強直症、非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）、眼瘢痕性類天疱瘡、眼球クローヌス・ミオクローヌス症候群、オード甲状腺炎、回帰性リウマチ、ＰＡＮＤＡＳ（小児自己免疫性溶連菌関連神性経精神障害）、腫瘍随伴性小脳変性症、発作性夜間ヘモグロビン尿症（ＰＮＨ）、パリー・ロンベルク症候群、パーソネージ・ターナー症候群、周辺部ぶどう膜炎、尋常性天疱瘡、悪性貧血、静脈周囲性脳脊髄炎、ＰＯＥＭＳ症候群、結節性多発動脈炎、リウマチ性多発筋痛症、多発性筋炎、原発性胆汁性肝硬変、原発性硬化性胆管炎、進行性炎症性ニューロパチー、乾癬、乾癬性関節炎、壊疽性膿皮症、赤芽球ろう、ラスムッセン脳炎、レイノー現象、再発性多発軟骨炎、ライター症候群、下肢静止不能症候群、後腹膜線維症、関節リウマチ、リウマチ熱、サルコイドーシス、統合失調症、シュミット症候群、シュニッツラー症候群、強膜炎、強皮症、血清病、シェーグレン症候群、脊椎関節症、スチル病、全身硬直症候群、亜急性細菌性心内膜炎（ＳＢＥ）、スザック症候群、スイート症候群、シデナム舞踏病、交感神経性眼炎、全身性エリテマトーデス、高安動脈炎、側頭動脈炎、血小板減少症、トロサ・ハント症候群、横断性脊髄炎、潰瘍性大腸炎、未分化結合組織病、未分化脊椎関節症、じん麻疹様血管炎、血管炎、白斑、およびウェゲナー肉芽腫症の中から選択される症状の予防または処置用の医薬の製造のための、前記項目のいずれかに記載のポリペプチド、タンパク質、核酸、発現ベクター、組換え細胞、医薬組成物またはインプラントの使用。
【０４６６】
（項目６７）
急性もしくは慢性炎症などの、炎症または炎症に関連する症状の予防または処置用の医薬の製造のための、前記項目のいずれかに記載のポリペプチド、タンパク質、核酸、発現ベクター、組換え細胞、医薬組成物またはインプラントの使用。
【０４６７】
（項目６８）
尋常性ざ瘡、アレルギー、アレルギー性鼻炎、喘息、アテローム動脈硬化症、自己免疫疾患、セリアック病、慢性前立腺炎、糸球体腎炎、過敏症、炎症性腸疾患、骨盤内炎症性疾患、再灌流傷害、関節リウマチ、サルコイドーシス、移植拒絶、血管炎、間質性膀胱炎、がん、うつ病、白血球増多症、および白血球欠損症の中から選択される症状の予防または処置用の医薬の製造のための、項目６７に記載のポリペプチド、タンパク質、核酸、発現ベクター、組換え細胞、医薬組成物またはインプラントの使用。
【０４６８】
（項目６９）
敗血症、関節リウマチ、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）および脊椎関節炎の中からの少なくとも症状選択の予防または処置用の医薬の製造のための、前記項目のいずれかに記載のポリペプチド、タンパク質、核酸、発現ベクター、組換え細胞、医薬組成物またはインプラントの使用。
【０４６９】
（項目７０）
喘息および／またはアレルギーの予防または処置用の医薬の製造のための、前記項目のいずれかに記載のポリペプチド、タンパク質、核酸、発現ベクター、組換え細胞、医薬組成物またはインプラントの使用。
【０４７０】
（項目７１）
ナノ粒子および／または生体材料のコーティングのための、前記項目のいずれかに記載のポリペプチド、タンパク質、核酸、発現ベクター、組換え細胞または医薬組成物の使用。
【０４７１】
（項目７２）
少なくとも１つのナノ粒子または生体材料への免疫応答の少なくとも部分的抑制のための、前記項目のいずれかに記載のポリペプチド、タンパク質、核酸、発現ベクター、組換え細胞または医薬組成物の使用。
【０４７２】
（項目７３）
患者におけるナノ粒子および／または生体材料および／または医療デバイスおよび／またはインプラントのインビボ半減期を増加させるための、前記項目のいずれかに記載のポリペプチド、タンパク質、核酸、発現ベクター、組換え細胞または医薬組成物の使用。
【０４７３】
（項目７４）
疾患の診断のための内在性レトロウイルスの使用。
【０４７４】
（項目７５）
発現レベルまたはコピー数が、ある症状を有する対象において該症状がない対象と比較して異なる内在性レトロウイルスの、疾患の診断のための使用。
【０４７５】
（項目７６）
発現レベルまたはコピー数が自己免疫症状を有する対象において該症状がない対象と比較して異なる内在性レトロウイルスの、疾患の診断のための使用。
【０４７６】
（項目７７）
疾患の診断のための、ＨＥＲＶ−Ｈ５９に関連する一塩基多型の使用。
【０４７７】
（項目７８）
ＳＬＥの診断のための、ＨＥＲＶ−Ｈ５９の使用。
【０４７８】
（項目７９）
前記項目のいずれかに記載の少なくとも１つのポリペプチド、タンパク質、核酸、発現ベクター、組換え細胞または医薬組成物の予防または治療有効量を１回または複数回または数回の投与によりそれを必要とする対象に投与することにより、自己免疫疾患および／または炎症症状を予防的にまたは治療的に処置する方法。
【０４７９】
（項目８０）
自己免疫疾患に関連する症状の予防または処置または改善の方法であって、
ａ．前記自己免疫疾患に罹患している患者群における少なくとも１つの内在性レトロウイルスの発現またはコピー数を測定すること；
ｂ．前記発現を、健常対照群における前記少なくとも１つの内在性レトロウイルスの発現と比較すること；
ｃ．前記患者群中で異なる発現を有する少なくとも１つの内在性レトロウイルスを同定すること；
ｄ．所望により、前記少なくとも１つの内在性レトロウイルスにおける少なくとも１つの免疫抑制ドメインを同定すること；
ｅ．少なくとも１つの免疫抑制ドメイン、好ましくは、前記少なくとも１つの免疫抑制ドメインを含有するタンパク質および／または前記内在性レトロウイルスにより発現されたタンパク質に含有されている少なくとも１つの免疫抑制ドメインの投与により、前記症状に罹患している少なくとも１名の患者を処置すること
を含む方法。
【０４８０】
（項目８１）
自己免疫疾患に関連する症状の予防または処置または改善の方法であって、
ｆ．前記自己免疫疾患に罹患している患者群における少なくとも１つの免疫抑制ドメインを含む少なくとも１つのタンパク質またはポリペプチドの濃度を測定すること；
ｇ．前記濃度を健常対照群における濃度と比較すること；
ｈ．前記患者群中で異なる発現を有する少なくとも１つの免疫抑制ドメインを同定すること；
ｉ．前記少なくとも１つの免疫抑制ドメイン、および／または前記少なくとも１つの免疫抑制ドメインを含むタンパク質の投与により、前記症状に罹患している少なくとも１名の患者を処置すること
を含む方法。
【０４８１】
（項目８２）
前記異なる発現が、発現増加および減少の中から選択される、項目８０または８１に記載の方法。
【０４８２】
（項目８３）
前記内在性レトロウイルスがヒト内在性レトロウイルスである、項目８０〜８２のいずれかに記載の方法。
【０４８３】
（項目８４）
前記ヒト内在性レトロウイルスがＨＥＲＶ−ＨサブファミリーまたはＨＥＲＶ−Ｋサブファミリーに属する、項目８３に記載の方法。
【０４８４】
（項目８５）
前記内在性レトロウイルスが、タンパク質をコードすることができる少なくとも１つのオープンリーディングフレームを含有する、項目８０〜８４のいずれかに記載の方法。
【０４８５】
（項目８６）
前記少なくとも１つのオープンリーディングフレームが、少なくとも５０、好ましくは少なくとも１００、より好ましくは少なくとも１５０、好ましくは少なくとも２００、より好ましくは少なくとも２５０、好ましくは少なくとも３００、より好ましくは少なくとも３５０、好ましくは少なくとも４００ヌクレオチドの長さを有する、項目８５に記載の方法。
【０４８６】
（項目８７）
注射、吸入、局所、経皮、経口、経鼻、膣または肛門デリバリーの中から選択される投与経路による症状または疾患の予防または処置のための、前記項目のいずれかに記載のポリペプチド、タンパク質、核酸、発現ベクター、組換え細胞または医薬組成物の使用。
【０４８７】
（項目８８）
注射の方式が、静脈内（ＩＶ）、腹腔内（ＩＰ）、皮下（ＳＣ）および（筋肉内）ＩＭの中から選択される、項目８７に記載の使用。
【０４８８】
（項目８９）
炎症などの障害の患部への直接注射による疾患の処置のための、項目８８に記載の使用。
【０４８９】
（項目９０）
皮膚疾患、乾癬、関節炎、喘息、敗血症、炎症性腸疾患、関節リウマチ、ＳＬＥ、および脊椎関節炎の中から選択される症状の処置のための、前記項目のいずれかに記載のポリペプチド、タンパク質、核酸、発現ベクター、組換え細胞または医薬組成物の使用。
【０４９０】
（項目９１）
関節炎の処置のための、前記項目のいずれかに記載のポリペプチド、タンパク質、核酸、発現ベクター、組換え細胞または医薬組成物の使用であって、前記組成物が炎症部位に直接注射される、使用。
【０４９１】
（項目９２）
前記項目のいずれかに記載のポリペプチド、タンパク質、核酸、発現ベクター、組換え細胞または医薬組成物の使用であって、好ましくは前記組成物が経口送達される、胃腸過敏性疾患、食物アレルギー疾患、食物不耐性疾患および炎症性腸疾患の中から選択される症状の処置のための使用。
【０４９２】
（項目９３）
前記項目のいずれかに記載のポリペプチド、タンパク質、核酸、発現ベクター、組換え細胞または医薬組成物の使用であって、前記組成物が吸入により送達される喘息の処置のための使用。
【０４９３】
参考文献
【表１４】
2018533974.tif 000016
【表１５】
2018533974.tif 000017
【図１】
2018533974.tif 000018
【図２ａ】
2018533974.tif 000019
【図２ｂ】
2018533974.tif 000020
【図３ａ】
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【図３ｂ】
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【図４】
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【図５Ａ】
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【図５Ｂ】
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【図５Ｃ】
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【図５Ｄ】
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【図６Ａ】
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【図６Ｂ】
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【図６Ｃ】
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【図６Ｄ】
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【図７Ａ】
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【図７Ｂ】
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【図７Ｃ】
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【図７Ｄ】
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【図８Ａ】
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【図８Ｂ】
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【図８Ｃ】
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【図８Ｄ】
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【図９ａ】
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【図９ｂ】
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【図９ｃ】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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