(57)【要約】  １００ｎｍ未満の平均粒子直径を有する超微細脂質構造体（ＵＳＬＳ）は、脂質及びパッセンジャー化合物を含有するハイドロ有機溶剤を希釈することによる単一工程プロセスを用いて作製される。これらの粒子は、パッセンジャー分子を隔離することができ、単一プロセス工程で自己形成化してＵＳＬＳにすることができる。ＵＳＬＳは、例えば、農業、化粧品、製薬及び食品、及び飲料産業に応用されている。【選択図】図１【特許請求の範囲】
【請求項１】
超微細脂質構造体（ＵＳＬＳ）を作製する方法であって、
（ａ）約０．１％〜約２０％の水と約８０％〜約９９．９％の１種以上の水混和性有機溶媒とを含むハイドロ有機溶剤混合物と；
（ｂ）約５０ｍｇ／ｍｌ〜約２５０ｍｇ／ｍｌの１種以上の脂質化合物と；
（ｃ）１つ以上のパッセンジャー化合物と；
を含有する光学的に透明な保存溶液を、水による約１：５〜約１：２００の希釈比で希釈する単一工程を含む方法。
【請求項２】
前記光学的に透明な保存溶液は、1つ以上の糖をさらに含む、請求項1に記載の方法。
【請求項３】
前記ＵＳＬＳを脱水することをさらに含む、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
前記ＵＳＬＳを再水和することをさらに含む、請求項３に記載の方法。
【請求項５】
前記ハイドロ有機溶剤混合物は、約１０％の水を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項６】
前記水混和性有機溶媒は、エタノール、プロパノール、ブタノール、イソプロパノール、クロロホルム、アセトン、塩化メチレン及びプロピルグリコールからなる群から選択される、請求項１に記載の方法。
【請求項７】
前記水混和性有機溶媒は、エタノールである、請求項６に記載の方法。
【請求項８】
前記光学的に透明な保存溶液は、約２０ｍｇ／ｍｌの脂質化合物を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項９】
前記１つ以上の脂質化合物は、リン脂質のアシル鎖として、リノレン酸及びリノール酸を含む植物源由来の混合リン脂質である、請求項１に記載の方法。
【請求項１０】
前記１つ以上の脂質化合物は、大豆リン脂質を含む、請求項９に記載の方法。
【請求項１１】
前記１つ以上のパッセンジャー化合物は、親水性、親油性、両親媒性、あるいは親水性、親油性又は両親媒性化合物の１つ以上の組み合わせである、請求項１に記載の方法。
【請求項１２】
前記パッセンジャー化合物は、薬剤を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項１３】
前記パッセンジャー化合物は、栄養物質を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項１４】
前記パッセンジャー化合物は、食品成分を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項１５】
前記希釈比は、約１：１０から約１：１００である、請求項１に記載の方法。
【請求項１６】
前記方法は、前記パッセンジャー化合物の少なくとも８０％の隔離率を有する、請求項１に記載の方法。
【請求項１７】
前記光学的に透明な保存溶液は、（ａ）、（ｂ）及び（ｃ）の各成分を一緒に混合して製造されることを特徴とする請求項１に記載の方法。
【請求項１８】
請求項１に記載の方法によって製造された超微細脂質構造体（ＵＳＬＳ）。
【請求項１９】
請求項４に記載の方法によって製造された超微細脂質構造体（ＵＳＬＳ）。
【請求項２０】
平均直径が１００ｎｍ以下である、請求項１８に記載の超微細脂質構造体。
【請求項２１】
味覚マスキングである、請求項１８に記載の超微細脂質構造体。
【請求項２２】
保存安定性がある、請求項１８に記載の超微細脂質構造体。
【請求項２３】
超微細脂質構造体（ＵＳＬＳ）を生成するための光学的に透明な保存溶液であって、
（ａ）約０．１％〜約２０％の水と約８０％〜約９９．９％の１種以上の水混和性有機溶媒とを含むハイドロ有機溶媒混合物と；
（ｂ）約５０ｍｇ／ｍｌ〜約２５０ｍｇ／ｍｌの１種以上の脂質化合物と；
（ｃ）１つ以上のパッセンジャー化合物と、
を含有し、
前記光学的に透明な保存溶液は、その全体に加えられた（ａ）、（ｂ）及び（ｃ）の各成分を一緒に混合することによって生成され、
水による約１：５〜約１：２００の比での前記保存溶液の希釈は、請求項１８のＵＳＬＳを生成する光学的に透明な保存溶液。
【請求項２４】
貯蔵安定性である、請求項２３に記載の光学的に透明な保存溶液。
【請求項２５】
請求項１８に記載のＵＳＬＳを含む食品。
【請求項２６】
チョコレートである、請求項２５に記載の食品。
【請求項２７】
請求項１８に記載のＵＳＬＳを含む医薬品。
【請求項２８】
同じパッセンジャー化合物を有するがＵＳＬＳがない製品と比較して、１つ以上のパッセンジャー化合物の吸収及び生体内分布を変化させる、請求項２７に記載の医薬品。
【請求項２９】
経口投与、経粘膜投与又は鼻腔内投与のために製剤化される、請求項２７に記載の医薬品。
【請求項３０】
液体口内洗浄剤、ゲル、チューインガム、又は溶解性ストリップである、請求項１８に記載のＵＳＬＳを含む口腔ケア製品。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本出願は、２０１５年４月１３日に出願された米国仮出願第６２／１４６，４６５号の利益を主張するものであり、その全内容は、米国特許法第１１９条の下で本明細書に完全に記載されている。
【０００２】
本発明は、一回のプロセス工程において、パッセンジャー分子の隔離に有用な超微細脂質構造体（ＵＳＬＳ；平均、直径１００ｎｍ未満）の効率的な製造方法に関する。
【背景技術】
【０００３】
非常に小さい脂質粒子、小胞及び他の構造体そのものは、当技術分野で公知である。種々の用途における送達のために物質を封入又は隔離するために使用される、これらの構造体は、リポソームであり、通常、水性又は半水性中心を囲む脂質単層又は二重層を含み、その構造体中に隔離のために化合物を溶解又は懸濁させることができる。これらのタイプの構造体は、他の点では水性溶媒に溶解しない化合物を可溶化し、医薬品、食品及び飲料に含めるための化合物を便利にパッケージし、不快な味を隠し、製品中の成分の分離を生じさせ、隔離された内容物の遅延放出又は延長放出を達成するために有用である。
【０００４】
以前は、小さなサイズ、すなわち約２００ｎｍ未満の充填された脂質構造体が、マルチ工程プロセスを用いて製造されてきた。１つの方法は、二層形成脂質を有機溶剤に溶解し、乾燥させ、溶解したパッセンジャー化合物を含む水溶液を加えて薄膜を形成し、次いでリポソームを生成することを含んでいた。しかしながら、このプロセスは、一般に、最も有利な用途には大きすぎる構造体をもたらす。
【０００５】
第２の方法は溶媒希釈を含む。脂質、例えば大豆リン脂質を、エタノール中に溶解する。次に、水を加え、次にエタノールを加える。次いで、この物質を、意図されるパッセンジャー化合物を含む水性環境中に置き、約４００〜５００ｎｍのリポソームを生成する。より小さい構造体は、例えば米国特許第５，８７９，７０３号、第５，９２２，３５０号、第８，５４５，８７４号、第８，５４５，８７５号及び第８，５９７，６７８号に記載された方法に従って製造されている。これらの方法は、溶媒を添加して多段階に希釈し、次いで、脂質構造体を形成するために、隔離のためのパッセンジャー化合物の溶液を添加することによってある種の前駆体溶液を生成することを含む。
【０００６】
したがって、脂質小胞を生成して充填する以前の方法は、複数のステップを含み、不均一な結果を生じる。したがって、貯蔵安定性があり、消費者にとって魅力的である、充填された非常に小さい脂質構造体を生産するための効率的な方法の必要性が当該分野において存在する。好ましくは、そのような粒子は、直径が１００ｎｍ未満である。
【０００７】
したがって、本明細書に記載される本発明は、超微細脂質構造体を作製する方法及びその構造体、その構造体を作成するための溶液、及びその構造体を含む製品を含む。
【発明の概要】
【０００８】
本発明の実施形態は、約１：５〜約１：２００の希釈比の水と、（ａ）約０．１％〜約２０％の水及び約８０％〜約９９．９％の１種以上の水溶性有機溶剤を含有するハイドロ溶剤混合物；（ｂ）約５０ｍｇ／ｍｌ〜約２５０ｍｇ／ｍｌの１種以上の脂質化合物；（ｃ）１つ以上のパッセンジャー化合物；とを含む保存溶液を希釈する単一工程を含む超微細脂質構造体ＵＳＬＳを作製する方法を含む。特定の実施形態では、この保存溶液は、１つ以上の糖をさらに含む。本発明の方法は、特定の実施形態において、ＵＳＬＳの脱水及び／又はＵＳＬＳの再水和をさらに含む。
【０００９】
好ましい実施形態では、ヒドロ有機溶剤混合物は、約１０％の水を含む。さらなる好ましい態様において、水溶性有機溶剤は、エタノール、プロパノール、ブタノール、イソプロパノール、クロロホルム、アセトン、塩化メチレン及びプロピルグリコールからなる群から選択され、最も好ましくはエタノールである。
【００１０】
本発明の特定の好ましい実施形態では、保存溶液は、約２０ｍｇ／ｍｌの脂質化合物を含有する。好ましくは、１種以上の脂質化合物は、リン脂質のアシル鎖としてリノレン酸及びリノール酸を含む植物源に由来する混合リン脂質である。最も好ましくは、１種以上の脂質化合物は、大豆リン脂質を含む。
【００１１】
特定の好ましい実施形態では、１種以上のパッセンジャー化合物は、親水性、親油性、両親媒性、あるいは、親水性、親油性又は両親媒性化合物の１つ以上の組み合わせである。パッセンジャー化合物は、医薬品、栄養物質、及び／又は食品成分を含むことができる。
【００１２】
本発明の好ましい実施形態では、希釈比は、約１：１０から約１：１００である。本発明の他の好ましい態様において、本方法は、パッセンジャー化合物の少なくとも８０％の隔離率を有する。
【００１３】
本発明は、また、特定の実施形態において、本明細書に記載の方法のいずれかによって製造される超微細脂質構造体（ＵＳＬＳ）を含む。好ましくは、これらのＵＳＬＳは、１００ｎｍ以下の平均直径を有する。ＵＳＬＳは、好ましくは貯蔵安定性があり、選択的に味覚マスキング（ｔａｓｔｅ−ｍａｓｋｉｎｇ）である。
【００１４】
本発明の実施形態は、また、超微細脂質構造体（ＵＳＬＳ）を生成するための光学的に透明な保存溶液を含む。保存溶液は、（ａ）約０．１％〜約２０％の水及び約８０％〜約９９．９％の水を含有する１種以上の水溶性有機溶剤を含むハイドロ有機溶剤；（ｂ）約５０ｍｇ／ｍｌ〜約２５０ｍｇ／ｍｌの１種以上の脂質化合物；及び（ｃ）約１：５〜約１：２００の比の水による保存溶液の希釈が、本明細書に記載のＵＳＬＳを産生する、１種以上のパッセンジャー化合物を含む。この保存溶液は、好ましくは貯蔵安定性がある。
【００１５】
追加の実施形態には、ＵＳＬＳを含む製品、但し、ＵＳＬＳから成る食品に限定されず、選択的にチョコレート、ＵＳＬＳから成る医薬品を含む。これは、必要に応じて、１種以上のパッセンジャー化合物の吸収及び生体内分布を、同じパッセンジャー化合物を運ぶ製品と比較して変更する。但し、同じパッセンジャー化合物であるが、ＵＳＬＳがなく、経口投与、経粘膜投与又は鼻腔内投与用に製剤化することができる。他の実施形態では、製品は、ＵＳＬＳから成る口腔ケア製品であり、これは、液体マウスすすぎ剤、ゲル、チューインガム、又は溶解可能なストリップ（ｄｉｓｓｏｌｖａｂｌｅ  ｓｔｒｉｐ）であり得る。
【図面の簡単な説明】
【００１６】
以下、添付図面に示した特定の実施形態を参照して本発明のより具体的な説明を記載する。これらの図面は、本発明の代表的な実施形態しか示していないので、発明の範囲を限定すると見なしてはならないと理解した上で、以下詳細な説明及び添付図面を参照し、本発明の実施例について更に具体的かつ詳細に説明する。
【００１７】
【図１】図１は、ＵＳＬＳのサイズ及びサイズ分布を示す、実施例１で調製された乳剤の動的光散乱結果のグラフである。
【図２】図２は、ＵＳＬＳのサイズ及びサイズ分布を示す、実施例２で調製された乳剤の動的光散乱結果を示すグラフである。
【図３】図３は、ＵＳＬＳのサイズ及びサイズ分布を示す、実施例３で調製された乳剤の動的光散乱結果を示すグラフである。
【図４】図４は、ラットにＥＧＣＧ（曲線Ｂ）又はＥＧＣＧを含むＵＳＬＳ（実施例３、曲線Ａ）を経口胃管栄養法（実施例９を参照）により投与したときのＥＧＣＧの血漿濃度を示すグラフである。
【発明を実施するための形態】
【００１８】
本明細書において、本発明は、その特定の実施形態を参照して記載されている。しかしながら、本発明の広範な精神及び範囲から逸脱することなく、様々な修正及び変更がなされ得ることは明らかであろう。したがって、明細書及び図面は、限定的ではなく例示的なものとみなされるべきである。本明細書に記載されるような超微細脂質粒子の製造方法は、隔離された材料を含む１００ｎｍ未満の狭いサイズ範囲を有する粒子を一工程で製造する単純化された方法である。いくつかの実施形態では、このプロセスは、ＵＳＬＳの主要集団に加えて、約１〜５ｎｍの極めて小さな粒子の集団を含む最終生成物を生成する。
【００１９】
本明細書で使用される以下の用語は、以下の定義を有する。指定されていない場合、本明細書で使用される用語は、関連技術の当業者による通常の使用においてそれらに起因する意味を有する。
【００２０】
本明細書で使用される用語「脂質」は、アルコール又は有機溶剤に一般に溶解するが純粋な水には溶解しないワックス、脂肪及び油などの天然又は合成物質のいずれかである。脂質には、脂肪酸、中性脂肪、ワックス、ステロイド、ならびにリン脂質及び糖脂質などの化合物脂質が含まれるが、これらに限定されない。例えば、モノ−、ジ−及びトリ−グリセリド、コレステロールなども含まれる。このような化合物の組合せ及び混合物は、脂質の定義に含まれる。好ましくは、親油性又は両親媒性であり、水性環境において小胞構造体（単層又は二層）又は膜を形成することができる分子のいずれかが、この用語に含まれる。リン脂質、極性脂質、ステロール、ステロールエステル、中性脂質、脂肪酸、又は任意の他のこのような物質、又は物質の混合物を使用することができ、本発明のために考慮される。好ましい本発明の実施形態で使用される「脂質」は、好ましくは大豆リン脂質のようなリン脂質であり得る。
【００２１】
本明細書で使用される「医薬品」という用語は、ヒト医学又は獣医学における疾患又は損傷の治療に使用するための任意の医薬的、栄養補助的又は生物学的化合物を指し、広く包括的である。例には、薬物、防腐剤、鎮痛剤、抗菌剤、又は任意の医薬品などが含まれるが、これらに限定されない。
【００２２】
本明細書で使用される用語「栄養物質」は、ビタミン、ミネラル、塩、植物抽出物などの多量栄養素及び微量栄養素を含む、栄養価を有する任意の化合物を指す。
【００２３】
本発明の文脈において本明細書で使用される用語「粒子」、「構造体」、「リポソーム」及び「小胞」は同義語であり、以下に記載される方法によって産生される超微細脂質構造体（ＵＳＬＳ）を指す。ＵＳＬＳは、脂質、例えば親油性又は両親媒性パッセンジャー分子を伴うか、又は伴わないリン脂質からなり、水性又は半水性液体を隔離することができる閉鎖脂質構造体であって、溶解したパッセンジャー化合物又は物質も包含することができる。
【００２４】
本明細書で使用される「パッセンジャー」又は「隔離された」化合物、分子又は物質は、以下に説明するように、構造体の水性コア又は脂質層のいずれかのＵＳＬＳ内に包含されるか、これらのＵＳＬＳを製造するための保存溶液に溶解される、化合物又は化合物群のいずれかである。
【００２５】
本明細書で使用される「貯蔵安定性（shelf stable）」という用語は、生成物が少なくとも１年間、好ましくは少なくとも２年間、化合物を隔離することができることを意味する。この用語は、相対的であり、少なくともある程度、製品中のパッセンジャー分子の安定性に依存する。
【００２６】
本明細書で使用される用語「超微細脂質構造体（ＵＳＬＳ）」は、平均直径が１００ｎｍ以下の、二重層又は非二重層脂質包囲構造体、及び水性コアを有する脂質小胞を指す。
【００２７】
本発明の実施形態による粒子は、溶解された脂質の水アルコール溶液がパッセンジャー化合物の水溶液に添加される単純なワンステップ法を用いて製造される。狭いサイズ範囲を有する直径２００ｎｍ以下、直径１５０ｎｍ以下、又は直径１００ｎｍ以下の構造体を、水性パッセンジャー材料の１００％に近い封入で形成することができる。
【００２８】
本発明によるＵＳＬＳは、平均直径が約１５０ｎｍ未満、好ましくは平均直径が約１００ｎｍ未満の脂質構造体である。これらの構造体は、内部の水性又は半水性コアを有する、完成した粒子のサイズに応じて、非二重層又は二重層であり得る外側脂質層を有する。４０ｎｍ未満では、構造体は主に非二重層である。好ましくは、構造体は、中心水性コア、脂質層構造体、又はその両方に１つ以上のパッセンジャー化合物を含む。これらの構造体は、構造体の外側脂質層を形成する脂質材料と、一旦形成された構造体中に隔離されるパッセンジャー分子とを含有する保存ハイドロ有機溶剤と水を混合することによって、単一の希釈プロセス工程で製造される。
【００２９】
約８０％〜約９５％の隔離率は、本発明の実施形態による方法を使用して達成することができる。好ましくは、パッセンジャー化合物は、少なくとも８０％、最も好ましくは少なくとも９０％の率で隔離される。
【００３０】
水有機溶剤中の脂質物質及びパッセンジャー化合物を含有するストック混合物（stock mixture）は、室温で安定な光学的に透明な溶液である。この溶液は、後で使用するために何時までも、又は最長２年間保管することができる。
【００３１】
ＵＳＬＳは、二重層又は非二重層の脂質層で囲むことができる。最終的なＵＳＬＳ製品中の脂質の構造体は、ＵＳＬＳ保存溶液を形成するために使用される脂質及び他の成分の選択に依存する。例えば、ＵＳＬＳは、最終形成された構造体中に、それらを形成するために使用されるハイドロ有機保存溶液の一部を保持する。したがって、有機溶剤の選択は、ＵＳＬＳの最終構造体に有意に影響を及ぼし、二重層であるか非二重層であるかを決定するのに役立つ。より小さい分子量の有機溶剤及びより極性の高いものは、脂質、ハイドロ有機溶剤及び隔離されたパッセンジャー分子を含む閉じた超微細二重層構造体の形成に有利である。より負に帯電した表面を有する構造体が所望される場合、追加のリン脂質種、例えばホスファチジン酸を添加することができ；より正に帯電した表面を生成するために、ホスファチジルセリンなどの追加のリン脂質種を添加することができる。
【００３２】
本発明に従って製造されたＵＳＬＳ製品は、場合によっては、製品が指紋の形態として認識され得る、約１％〜２％の非常に小さな（１ｎｍ〜５ｎｍ）粒子の集団も含む。これらの粒子は非二重層であり、その非常に小さいサイズのためミセルではない可能性がある。理論に縛られることを望むものではないが、これらの粒子は、水及びエタノールによって水溶性頭部に結合したリン脂質の小さな集合体であってもよい。
【００３３】
脂質
本発明での使用に好ましい脂質には、リン脂質、例えばリン脂質のアシル鎖の構成成分としてリノレン酸及びリノール酸を含むホスファチジルコリンを主に含む混合天然リン脂質が含まれる。これらは、当該分野で公知の大豆、菜種、ヒマワリ、家禽の卵黄、魚の卵及び牛乳中に見出され、これらのソースから周知の方法に従って精製することができる。
【００３４】
本発明のいくつかの実施形態では、リン脂質の市販製剤を選択することが好都合である。約７５〜９７％の混合大豆リン脂質を含む調製物を使用することができる。７５％〜８０％の混合大豆リン脂質を含有する市販の調製物（残りの百分率は大豆油である）、又は９５％〜９７％の混合大豆リン脂質を含有する市販の調製物（残りの百分率は大豆油である）が入手可能であり、本発明で使用することができる。これらの特徴を有する適切な市販の調製物は、Ａｌｃｏｌｅｃ  Ｓ（登録商標）、Ａｌｃｏｌｅｃ  Ｘ−ｔｒａ  Ａ（登録商標）及びＡｌｃｏｌｅｃ  ＬＫＥ（登録商標）の商品名で販売されている。
【００３５】
ハイドロ有機溶剤（保存溶液）中の脂質層形成脂質又は脂質混合物の濃度は変化するが、選択されたハイドロ有機溶剤中の脂質又は脂質混合物の溶解度の限界を超えることはできない。隔離されるパッセンジャー分子の濃度も変動することができるが、ハイドロ有機溶剤中の脂質物質とのパッセンジャー分子の同時溶解性、又は（個々のパッセンジャー分子の物理的及び化学的特性に基づく）ＵＳＬＳにおける隔離能力を超えてはならない。
【００３６】
好ましくは、脂質は、約５０ｍｇ／ｍｌ〜約２５０ｍｇ／ｍｌ、好ましくは約１００ｍｇ／ｍｌ〜約２００ｍｇ／ｍｌの濃度範囲のハイドロ有機溶剤系（下記参照）に溶解され、最も好ましくは約１５０ｍｇ／ｍｌである。例示的な濃度としては、約５０ｍｇ／ｍｌ、約１００ｍｇ／ｍｌ、約１５０ｍｇ／ｍｌ、約２００ｍｇ／ｍｌ及び約２５０ｍｇ／ｍｌが挙げられるが、これらに限定されない。
【００３７】
有機溶剤
適切な有機溶媒は、一般に、脂質及び意図されるパッセンジャー化合物の両方が十分に可溶性であるハイドロ有機溶剤混合物を生成するものである。一般に、最も好ましい溶剤は、水と低分子量の有機溶剤との混合物である。エタノール、プロパノール、ブタノール、イソプロパノール、クロロホルム、アセトン、塩化メチレン又はプロピルグリコールなどの低分子量有機溶剤、又はそれらの混合物が適している。さらに、溶剤は、ＵＳＬＳの特定の意図された用途に適切であり、水と十分に混合可能でなければならない。ＵＳＬＳを例えば静脈内混入のような生体内で使用する場合、その使用において溶剤は十分に非毒性でなければならず、一般に生体適合性でなければならず、血液などの生物学的液体と容易に混合可能でなければならない。したがって、このタイプの使用にはエタノール（試薬グレード）が最も好ましい。好ましくは、全ての溶剤は試薬グレードである。
【００３８】
水
本発明による方法で使用される水は、任意の供給源からの飲料水であることができるが、好ましくは、蒸留水又は脱イオン水などの精製水である。滅菌水を使用することができる。
【００３９】
ハイドロ有機溶剤
ＵＳＬＳは、脂質のハイドロ有機溶剤と隔離されるパッセンジャー化合物を作製することによって調製される。適切なハイドロ有機溶剤系は、約０．１〜約２０％の水（ｖ／ｖ）、約０．５〜約１５％の水（ｖ／ｖ）、約１〜約１０％の水（ｖ／ｖ）、最も好ましくは約５〜約１０％の水（ｖ／ｖ）を含む。例示的な量の水は、約１％水（ｖ／ｖ）、約５％水（ｖ／ｖ）、約１２％水（ｖ／ｖ）及び約１５％水（ｖ／ｖ）を含むが、これに限定されず、最も好ましくは約１０％（ｖ／ｖ）の水を含む。残りの溶剤（１００％を構成する）は、エタノールなどの１つ以上の有機溶剤である。最も好ましい溶剤系は、１０％の水及び９０％の試薬級エタノールである。本発明の方法に従って使用される水は、好ましくは精製、蒸留又は脱イオン水であり、滅菌水であることができる。
【００４０】
パッセンジャー化合物
本発明の構造体における隔離に適した材料には、最終的な超微細脂質構造体を形成するために使用されるハイドロ有機溶剤に溶解又は懸濁できる任意の材料が含まれる。したがって、ＵＳＬＳ中の隔離のためのパッセンジャー化合物は、内部（水性）コア中又は外部脂質殻の不可欠な成分としてＵＳＬＳにおいて物理的に隔離され得る任意の物質であり得、親油性、親水性又は両親媒性であり得る。
【００４１】
そのような物質には、医薬品、医薬品化合物、栄養素又は栄養素化合物、化粧品などが含まれる。味、香り、栄養素、ビタミン、ミネラル、塩、抗菌剤、抗炎症剤、抗寄生虫剤、染料、放射性標識、放射性不透明化合物、蛍光化合物、免疫調節化合物、ペプチド、タンパク質、糖タンパク質、リポタンパク質、ホルモン、神経伝達物質、殺腫瘍剤、成長因子、毒素、鎮痛剤、麻酔薬、単糖類及び多糖類のようなパッセンジャー分子、及び麻薬は、使用することができる物質のクラスの非包括的例である。ハイドロ有機溶剤系に可溶性であれば、親油性、親水性及び両親媒性物質、又は物質の組み合わせを使用することができる。
【００４２】
医薬品、栄養補助食品、又は栄養分野において、本発明は、そうでなければ不快な味を有するか、又はＵＳＬＳの内容物の遅延又は長期放出を達成するために使用され得る成分の味をマスクするために有利に使用される。あるいは、ＵＳＬＳは、例えば、医薬品又は食品に添加するために、味付けされるように設計された成分を隔離するために使用され得る。ＵＳＬＳは、例えば、胃をバイパスして腸内の内容物を放出するために、又は貯蔵中に互いに反応し得る製品の成分を分離するために、内容物の遅延放出を生成するために使用され得る。
【００４３】
経口送達用の任意の医薬化合物は、本発明の実施形態と共に使用することができる。例えば、抗生物質（例えば、アミノグリコシド、ベータラクタム、及びマクロライド）、麻酔薬（例えば、リドカイン）、ステロイド（例えば、エストロゲン、プロゲステロン、スチルベストロール、テストステロン及びエストラジオール）、抗真菌剤（例えば、グリセオフルヴィン）、抗原性物質（例えば、ワクチン、アレルギー処置）、タンパク質、免疫調節物質、モノクローナル抗体及びその断片などの化合物は、使用のために企図される。そのような物質には、有機化学物質、塩、ペプチド、タンパク質、炭水化物、糖などが含まれる。
【００４４】
ビタミンＡ、ビタミンＢ、ビタミンＣ、ビタミンＤ、ビタミンＥ、ビタミンＫ、又はそれらビタミンの任意の組み合わせなどの脂溶性及び水溶性ビタミンを含むビタミンもまた、本発明の構造体における隔離のために考えられる。ナトリウム、カリウム、マグネシウム、鉄などのような塩及びミネラルも本発明で使用することができる。
【００４５】
日焼け止め、毛染め、着色料、香料、及び臭気物質などのような化粧品産業において有用な材料もまた考えられる。
【００４６】
食品及び飲料産業では、カフェイン、香味料（例えば、ペパーミント油）、着色料、塩、炭水化物、ビタミン、タンパク質、植物抽出物（植物栄養補助食品を含む）などの材料が使用されることが考えられる。このような物質は、味マスキング、口当たりの改善、酸化からの保護、及び例えば製品の他の成分との反応からの保護のために隔離することができる。
【００４７】
パッセンジャー化合物は、ハイドロ有機保存溶液中の溶液中にあり、脂質成分の存在下で溶媒混合物に可溶な任意の濃度で存在することができる。したがって、当業者は、所望の最終生成物に応じて、使用される濃度を決定することができる。本発明での使用に適した範囲は、例えば約０．１ｍｇ／ｍｌ〜約１０ｍｇ／ｍｌ、又は約１０ｍｇ／ｍｌ〜約１００ｍｇ／ｍｌ、又は約１００ｍｇ／ｍｌ〜約３００ｍｇ／ｍｌ、又はハイドロ有機溶剤系における物質の最大溶解度までである。有機溶剤の量は、必要に応じて、溶解性を高めるために操作することもできる。
【００４８】
その他のコンポーネント
必要に応じて、例えば、トレハロース、スクロース、マルトース及びフルクトースなどの糖が挙げられるが、これらに限定されない糖を含む、光学的に透明な保存溶液に追加の成分を添加することができる。１つの好ましい実施形態では、特に後の段階で最終生成物を脱水することが望ましい場合には、糖が溶液に添加される。さらに、ＵＳＬＳを製造した後、それらが含有される溶液をこれらの糖を含むように変更してもよく、又は製品に外的糖のみが必要な場合には糖をＵＳＬＳに添加してもよい。
【００４９】
製法
本明細書に記載される保存溶液は、水と約１：５〜約１：１００の比で１段階で希釈される（すなわち、１部の溶液対約４部の水、１部の溶液対約９９部の水）。希釈のための例示的な比としては、１：５、１：１０、１：２５、１：５０、１：７５及び１：１００が挙げられるが、これらに限定されない。好ましい希釈率は、１：１０（１部の溶液対９部の水）である。この希釈工程において、ＵＳＬＳ（最終生成物）が形成される。
【００５０】
これらの条件下で、完成したＵＳＬＳは、１００ｎｍ未満（一般に５０ｎｍ〜９０ｎｍの間）の平均粒径（ＤＬＳ技術によって測定）を有するタイトなサイズ分布を一貫して示す。製品は、また、最終製品におけるパッセンジャー分子の味の排除によって示されるように、パッセンジャー分子の非常に高い隔離率（１００％カプセル化に近い、又は８０％以上、又は９０％以上のカプセル化）を有する。さらに、保存溶液製剤（希釈前）及び希釈後の完成ＵＳＬＳ調製物は、光学的に透明であり、室温で貯蔵安定性がある。ＵＳＬＳ製品は、また、１〜５ｎｍの粒子の小さな集団（約１％〜２％）の存在を示すことができる。
【００５１】
ＵＳＬＳは、以前に利用可能な方法によって調製された同じパッセンジャー分子の標準的な市販製剤と比較されている。標準試験（粒子サイズ分析及びヒト試験ボランティアでパッセンジャー分子の味覚を効果的にマスクする調製能力）を用いて、本発明の実施形態によって調製されたＵＳＬＳは、関心のある分子を首尾よく隔離したことが見出された。例を参照されたい。
【００５２】
最終生成物中のＵＳＬＳは、脂質構造体（ＵＳＬＳ）の存在、サイズ及びサイズ分布を決定するために、動的光散乱法（ＤＬＳ）によって評価することができる。当業者は、懸濁液中の粒子の計数又は測定に利用可能な分析のためのそのような技術及び商業的に入手可能な機器を認識している。例えば、Ｗｙａｔｔ  ＤｙｎａＰｒｏ（商標登録）を使用することができる。例を参照されたい。
【００５３】
本発明のＵＳＬＳは、図１、図２及び図３の光散乱データによって示されるように、最小の均一性を示す。理論に縛られることを望まないが、個々の小胞のサイズは、パッセンジャー分子、使用される両親媒性物質、及び、脂質及びパッセンジャー分子を溶解するために使用されるハイドロ有機溶剤中の水の量に依存すると考えられる。水の量を増加させることは、ＵＳＬＳ集団のサイズを増加させるために使用され得る。親脂性パッセンジャー分子の濃度を増加させると、非二重層形成化合物を用いて作製される場合、ＵＳＬＳ粒子集団のサイズが増大する。荷電した水溶性化合物の濃度を増加させることは、ＵＳＬＳ集団のサイズを減少させる。両親媒性パッセンジャー分子の濃度を増加させることは、ＵＳＬＳ集団のサイズを増加させる。
【００５４】
本発明のいくつかの実施形態では、ＵＳＬＳは貯蔵のために脱水され、再水和することができる。ＵＳＬＳ製品は、好ましくは、減圧下、製剤の凍結乾燥又は凍結なしで脱水される。好ましくは、当該技術分野で知られているように、減圧下又は部分真空下で、標準凍結乾燥装置又は同等の装置を用いて製品を脱水する。場合により、材料及びその周囲の媒体は、脱水前に液体窒素中で凍結することができる。あるいは、事前凍結させずに、単に減圧下に置くことによって、リポソームを脱水することもできる。事前凍結を伴わない脱水は、事前凍結を伴う脱水よりも長い時間を要するが、全体的なプロセスは、凍結工程を経ることなくより穏やかであり、ゆえに、一般にリポソームに対する損傷が少なくなり、それに対応してリポソームの内部含有量が減少する。例えば、室温での、及び１ｍｍ水銀柱程度の圧力を発生させることができる真空ポンプによって提供される減圧での事前凍結を伴わない脱水は、約２４時間から３６時間を要し、一方、同条件下での事前凍結を伴う脱水は、約１２時間から２４時間を要する。さらに、凍結保護糖の存在下での完成ＵＳＬＳ製剤の噴霧乾燥は、後で再水和に適した脱水製剤ＵＳＬＳを提供することができる。
【００５５】
脂質構造体が内部含有量のかなりの部分を失うことなく脱水プロセスをより良好に残存するように、１つ以上の保護糖をＵＳＬＳと相互作用させることができ、システムの水分が除去されてもそれらを損なわれないようにすることができる。トレハロース、マルトース、スクロース、グルコース、ラクトース、及びデキストランなどの糖を含む、様々な糖を使用することができる。一般に、二糖類の糖は、単糖類の糖よりも良好に作用することが見出されており、二糖類のトレハロース及びスクロースが最も有効である。他のより複雑な糖も使用することができる。例えば、ストレプトマイシン及びジヒドロストレプトマイシンを含むアミノグリコシドは、脱水中にリポソームを保護することが見出されている。本発明の特定の好ましい実施形態では、リポソームは、１つ以上の糖がリポソーム膜の内面及び外面の両方に存在する状態で脱水される。他の好ましい実施形態では、糖はトレハロース、マルトース、ラクトース、スクロース、グルコース及びデキストランからなる群から選択され、性能の観点から最も好ましい糖はトレハロース及びスクロースである。
【００５６】
１つ以上の糖は、好ましくは、脱水されるＵＳＬＳの内部媒体又は外部媒体の一部として含まれる。最も好ましくは、糖は、脂質層の内面及び外面の両方と相互作用することができるように、内部媒体及び外部媒体の両方に含まれる。内部媒体中への封入は、リポソームが封入する溶質に１つの糖又は複数の糖を添加することによって達成される。ほとんどの場合、この溶質は最終リポソームのための入浴媒体も形成するので、溶質中に糖を含有させることにより、それらを外部媒体の一部にする。当然、元の溶質以外の外部媒体が使用される場合、新しい外部媒体は、１つ以上の保護糖も含むべきである。
【００５７】
使用される糖の量は、使用される糖の種類及び保護されるべきリポソームの特性に依存する。当業者は、様々な糖の種類及び濃度を試験して、どの組み合わせが特定のリポソーム調製に最も適しているかを決定することができる。例示的な方法については、参照により本明細書に組み込まれる米国特許第５，９２２，３５０号を参照されたい。一般に、最高レベルの保護を達成するためには、１００ｍＭ以上の糖濃度が必要であることが判明している。膜リン脂質のモル数に関して、１００ｍＭ程度のミリモルレベルは、リン脂質１モル当たり約５モルの糖に相当する。
【００５８】
事前凍結されていない脱水の場合、脱水されるリポソームが複数の脂質層を有するタイプのものであり、脱水が、製剤中に十分な水が残っている終点まで行われる場合、膜の実質的な部分は、再水和時に完全性を保持するので、１つ以上の保護糖の使用を省略することができる。製剤が脱水工程の終わりに、脱水前の製剤中に存在する最初の水の少なくとも約２％、最も好ましくは約２％〜約５％を含むことが好ましい。
【００５９】
リポソームが脱水されると、それらを使用するまで長期間保存することができる。保存のための適切な温度は、リポソームの構成及び封入物質の温度感受性に依存する。例えば、当該技術分野において周知であるように、様々な薬物製剤は熱不安定であり、したがって、そのような薬物を含む脱水されたリポソームは、薬物がその効力を失わないように冷蔵条件下で保存されるべきである。また、そのような薬物の場合、脱水プロセスは、好ましくは、室温ではなく、低温で実施される。
【００６０】
脱水されたＵＳＬＳが使用される場合、脱水されたＵＳＬＳに水溶液、例えば蒸留水を添加して再水和させることによって再水和が達成される。リポソームは、溶液の穏やかな旋回によって、水溶液中に再懸濁することができる。再水和は、室温で、又はリポソーム及びその内部内容物の組成に適した他の温度で行うことができる。脱水及び再水和のための適切な方法については、米国特許第５，９２２，３５０号を参照されたい。
【００６１】
用途
本発明のＵＳＬＳは、液体、固体及び蒸気を含む、様々な食品、化粧品及び医薬品に使用することができる。製品は、局所投与、経口摂取、静脈注射又は他の注射経路、吸入又は他の投与方法及び使用のために使用できる、ゲル、ローション、クリーム、エマルジョン、懸濁液、凍結乾燥製品、噴霧乾燥製品、粉末及び溶剤などの形態で有用であると考えられる。製品は、固体又は液体の食品、及び、摂取又は投与のための補助組成物に組み込むことができる。あるいは、ＵＳＬＳは、使用前にユーザによって追加される別個の容器内に医薬品又は食品を提供することができる。
【００６２】
本発明によるＵＳＬＳを有利に使用することができる特定の製品としては、以下が挙げられるが、これらに限定されない：
１．例えば、飲料、チョコレート及び他の菓子、チューインガム、加工食品などの食品及び食料製品。
２．例えば、消毒スプレー、固体経口投与剤形、液体経口投与剤形、直腸又は膣座薬、鼻スプレー、吸入又はネブライザー製品、経皮パッチ、経粘膜投与剤形、希釈用の静脈内投与形、直接注射用の静脈内形、皮下及び筋肉内デポー形、及びヒト又は獣医学における使用のための薬品、医薬品及び応急処置製品。
３．例えば、水分補給製品、エネルギー飲料、ビタミン、ハーブ、ホメオパシー化合物などのサプリメント。
４．例えば、うがい薬、口内洗浄剤、ゲル、石鹸、チューインガム、溶解性ストリップ、喉スプレー、点眼剤、スキンケア製品、クリーム、ローションなどの口腔ケア製品を含むパーソナルケア製品。
５．例えば、植物及び動物の疾病の治療のための、及び、成長促進又は保護化合物の送達のための、液体、乾燥又は固体製剤を含む農産物。
【００６３】
特に、本発明によるＵＳＬＳは、味覚マスキングが望ましい場合、例えば、有効成分がコンプライアンスを低下させる不快な風味を有する場合の経口投与剤形において使用することができる。特定の好ましい例は、マリファナ成分（例えば、テトラヒドロカンナビノール、マリファナ抽出物、油など）を含有するチョコレート又は焼き菓子であり、マリファナ成分がＵＳＬＳ中に隔離されている。あるいは、味覚マスキングが望まれる栄養補助食品を含む植物抽出物を、本発明に従って隔離することができる。さらなる好ましい実施形態は、殺腫瘍剤、又は他の癌化学療法剤、又はＵＳＬＳで隔離された薬剤の組み合わせの製剤である。
【００６４】
食品及び飲料産業における製品のもう一つの用途は、マスクされるよりも、むしろ味わられるＵＳＬＳ内に物質を取り込むことにある。ペパーミント油及び他の油のような香味料は、ＵＳＬＳに組み込むことができ、ＵＳＬＳをベース製品に添加して、そのフレーバーを改変又は追加することができる。これは、例えば、製品の１つのベースフレーバー及びいくつかの異なるＵＳＬＳ隔離フレーバー、又は任意にベース製品に添加することができるビタミン濃縮ＵＳＬＳ製品を製造することを製造者に対して可能にすることにより、製造者及び消費者に選択肢を与えることができる。味見されることが意図されている物質は、脂質構造体の外部と緩やかに関連付けることができ、マスクされることが意図された物質は、小胞の内部に隔離することができる。
【００６５】
医薬品又は栄養製品では、ＵＳＬＳは、胃のより低いｐＨに耐え、腸から引き継ぐために生き残ることができるので、内容物の遅延放出を達成するために使用することができる。さらに、ＵＳＬＳは、経口投与後に血液脳関門を通過することができ、したがって、化合物を神経組織に投与するために使用することができる。さらに、ＵＳＬＳは、パッセンジャー分子を循環系に送達するために経粘膜投与に使用することができる。
【００６６】
結果の要約
以下の実施例は、一貫した結果及び狭いサイズ範囲で、平均直径１００ｎｍ未満のＵＳＬＳを形成する、１つのプロセス工程で、パッセンジャー分子を封鎖する非常に小さい脂質小胞を生成することができることを示す。
【００６７】
実施例
本発明は、記載される特定のプロセス、組成物、又は方法論に限定されず、これらは変更されてもよい。したがって、以下の実施例は、本発明を説明するためのものであり、限定的ではなく例示的なものである。
【００６８】
実施例１：ハイドロ有機溶剤中のリン脂質の溶解混合物からのＵＳＬＳ製造
ホスファチジルコリン及びリゾホスファチジルコリン（混合物中の総リン脂質の重量パーセントで約３％ｗ／ｗのリゾホスファチジルコリン）を含む天然大豆リン脂質（１８８ｍｇ）の混合物を、９０％のエタノールと１０％の蒸留水（ｖ／ｖ）とからなるハイドロ有機溶剤の１０ｍｌに溶解した。得られた製剤は光学的に透明であった。
【００６９】
Ｗｙａｔｔ  ＤｙｎａＰｒｏ（登録商標）分析装置を用いて動的光散乱分析（ＤＬＳ）を行ったところ、生成物は直径２ｎｍを超える粒子を有しないことが判明した。極めて小さな粒子の集団が、約１ｎｍの平均粒径（ＤＬＳ分析装置の検出限界）で観察された。得られた製剤は室温で安定であり、蒸留水で１：７５（ｖ／ｖ）に希釈すると、平均直径が１００ｎｍ未満（平均直径８２．６ｎｍ）のＵＳＬＳ粒子の均一な集団が生成された。図１を参照されたい。光散乱データは４１．３ｎｍの半径を示した。希釈した製剤もまた光学的に透明であり、室温で安定であった。
【００７０】
実施例２：ハイドロ有機溶剤中に同時可溶化されたパッセンジャー分子及びリン脂質を含むＵＳＬＳ
ホスファチジルコリン及びリゾホスファチジルコリン（混合物中の総リン脂質の重量パーセントで約３％ｗ／ｗのリゾホスファチジルコリン）を含む天然大豆リン脂質（１８８ｍｇ）の混合物を、９０％のエタノールと１０％の蒸留水（ｖ／ｖ）とからなるハイドロ有機溶剤に溶解した。次いで、エピガロカテキンガレート（ＥＧＣＧ；１，５００ｍｇ）をリン脂質、エタノール及び水からなるこの製剤に溶解した。得られた製剤は光学的に透明であり、ルビー色の赤色であり、室温で安定であった。
【００７１】
Ｗｙａｔｔ  ＤｙｎａＰｒｏ（登録商標）分析装置を用いて動的光散乱分析（ＤＬＳ）を行った場合、ＥＧＣＧを含むこの製剤は、室温で安定であり、直径２ｎｍを超える粒子を含まないことが判明した。極めて小さな粒子の集団が、約１ｎｍの平均粒径（ＤＬＳ分析装置の検出限界）で観察された。この脂質製剤を蒸留水で１：７５（ｖ／ｖ）に希釈すると、１００ｎｍ未満の平均直径（平均直径８１．４ｎｍ）を有するＵＳＬＳ粒子の均一な集団が得られた。図２を参照されたい。光散乱データは、４０．７ｎｍの半径を示した。この生成物も光学的に透明であり、室温で安定であった。
【００７２】
さらに、製品がヒトボランティアの舌に置かれたとき、ＥＧＣＧの通常の苦味がマスクされた。この試験は以下のように行った。完成したＵＳＬＳ製剤（０．１ｍｌ〜１０ｍｌ）のアリコートをヒト試験ボランティアの舌の上に置き、口腔内で揺り動かしながら６０秒間口腔内に保持した。試験被験者は、ＵＳＬＳを用いないパッセンジャー分子の同一の製剤と比較して、隔離されたパッセンジャー分子の味をマスキングする有効性についての観察を報告した。
【００７３】
実施例３：水可溶性リン脂質のその後の添加によるハイドロ有機溶剤中の予備可溶化されたパッセンジャー分子
エピガロカテキンガレート（ＥＧＣＧ；１，５００ｍｇ）を９０％のエタノール及び１０％の蒸留水（ｖ／ｖ）からなる１０ｍｌのハイドロ有機溶剤に溶解した。ホスファチジルコリンとリゾホスファチジルコリン（混合物中の総リン脂質の重量パーセントで約３％ｗ／ｗのリゾホスファチジルコリン）とを含む天然大豆リン脂質（１８８ｍｇ）の混合物を、ＥＧＣＧ、エタノール及び水からなるこの製剤に溶解した。得られた脂質調製物は、光学的に透明であり、ルビー色の赤色であり、室温で安定であった。
【００７４】
Ｗｙａｔｔ  ＤｙｎａＰｒｏ（登録商標）分析装置を用いて動的光散乱分析（ＤＬＳ）を行った場合、ＥＧＣＧを含むこの製剤は、直径２ｎｍを超える粒子を示さなかった。極めて小さな粒子の集団が、約１ｎｍの平均粒径（ＤＬＳ分析装置の検出限界）で観察された。この脂質製剤を蒸留水で１：７５（ｖ／ｖ）に希釈すると、１００ｎｍ未満の平均直径（平均直径８９．７ｎｍ）を有するＵＳＬＳ粒子の均一な集団が得られた。図３を参照されたい。光散乱データは、４４．９ｎｍの半径を示した。ＵＳＬＳの最終的な製剤は、光学的に透明であり、室温で安定であった。生成物を実施例２に記載したようにヒトボランティアの舌に置いたとき、ＥＧＣＧの通常の苦味はマスクされた。
【００７５】
実施例４：グルコン酸マグネシウムを含むＵＳＬＳ
ホスファチジルコリン及びリゾホスファチジルコリン（混合物中の総リン脂質の重量パーセントで約３％ｗ／ｗのリゾホスファチジルコリン）を含む天然大豆リン脂質（１８８ｍｇ）の混合物を、９０％のエタノール及び１０％の蒸留水（ｖ／ｖ）からなるハイドロ有機溶剤に溶解した。グルコン酸マグネシウム（５．２ｇ）を蒸留水１５０ｍｌに溶解した。リン酸大豆を含むハイドロ有機溶剤を、このグルコン酸マグネシウム溶液に直接添加した。得られた製剤は、光学的に透明で、室温で安定であった。
【００７６】
Ｗｙａｔｔ  ＤｙｎａＰｒｏ（登録商標）分析装置を用いて動的光散乱分析（ＤＬＳ）を行った場合、グルコン酸マグネシウムを含有するこの調製物は、直径２ｎｍを超える粒子を有していなかった。極めて小さな粒子の集団が、約１ｎｍの平均粒径（ＤＬＳ分析装置の検出限界）で観察された。製剤は、室温で安定であった。蒸留水で１：７５（ｖ  ／  ｖ）に希釈した場合、溶剤は、平均直径が１００ｎｍ未満（平均直径６３ｎｍ）のＵＳＬＳ粒子の均一な集団を生じた。超微粒子製剤は、光学的に透明であり、室温で安定であった。生成物を実施例２に記載したようなヒトボランティアの舌に置いたとき、グルコン酸マグネシウムのフレーバーはマスクされた。
【００７７】
実施例５：塩化マグネシウム含有ＵＳＬＰの製剤
ホスファチジルコリン及びリゾホスファチジルコリン（混合物中の総リン脂質の重量パーセントで約３％ｗ／ｗのリゾホスファチジルコリン）を含む天然大豆リン脂質（１８８ｍｇ）の混合物を、９０％のエタノール及び１０％の蒸留水（ｖ／ｖ）からなるハイドロ有機溶剤に溶解した。塩化マグネシウム（５．２ｇ）を蒸留水１５０ｍｌに溶解した。大豆リン脂質を含むハイドロ有機溶剤を、この塩化マグネシウム溶液に直接加えた。得られた調製物は、光学的に透明で、室温で安定であった。
【００７８】
Ｗｙａｔｔ  ＤｙｎａＰｒｏ（登録商標）分析装置を用いて動的光散乱分析（ＤＬＳ）を行った場合、塩化マグネシウムを含むこの製剤は、直径２ｎｍを超える粒子を有していなかった。極めて小さな粒子の集団が、約１ｎｍの平均粒径（ＤＬＳ分析装置の検出限界）で観察された。製剤は、室温で安定であった。蒸留水で１：７５（ｖ  ／  ｖ）に希釈した場合、溶液は１００ｎｍ未満の平均直径（平均直径７６ｎｍ）を有するＵＳＬＳの均一な集団を生じた。得られた最終調製物は、光学的に透明であり、室温で安定であった。実施例２に記載したようなヒトボランティアの舌の上に置いた場合、塩化マグネシウムの味はマスクされた。
【００７９】
実施例６：乳酸マグネシウム含有ＵＳＬＳの製剤
ホスファチジルコリン及びリゾホスファチジルコリン（混合物中の総リン脂質の重量パーセントで約３％ｗ／ｗのリゾホスファチジルコリン）を含む天然大豆リン脂質（１８８ｍｇ）の混合物を、９０％のエタノール及び１０％の蒸留水（ｖ／ｖ）からなるハイドロ有機溶剤に溶解した。乳酸マグネシウム（５．２ｇ）を１５０ｍｌの蒸留水に溶解した。大豆リン脂質を含有するハイドロ有機溶剤を乳酸マグネシウムの溶液に直接加えた。得られた製剤は、光学的に透明で、室温で安定であった。
【００８０】
Ｗｙａｔｔ  ＤｙｎａＰｒｏ（登録商標）分析装置を用いて動的光散乱分析（ＤＬＳ）を行った場合、乳酸マグネシウムを含有するこの製剤は、直径２ｎｍを超える粒子を示さなかった。極めて小さな粒子の集団が、約１ｎｍの平均粒径（ＤＬＳ分析装置の検出限界）で観察された。得られた製剤は、室温で安定であった。蒸留水で１：７５（ｖ／ｖ）に希釈した場合、溶液は１００ｎｍ未満（平均直径７５ｎｍ）の平均直径を有するＵＳＬＳの均一な集団を生成した。得られた最終製剤は、光学的に透明であり、室温で安定であった。実施例２に記載したようにヒトボランティアの舌に置いたとき、乳酸マグネシウムの味はマスクされた。
【００８１】
実施例７：電解質濃縮物を含む超微粒子の製剤
ホスファチジルコリン及びリゾホスファチジルコリン（混合物中の総リン脂質の重量パーセントで約３％ｗ／ｗのリゾホスファチジルコリン）を含む天然大豆リン脂質（３，７５０ｍｇ）の混合物を、９０％のエタノール及び１０％の蒸留水（ｖ／ｖ）からなるハイドロ有機溶剤に溶解した。塩化ナトリウム（７３ｇ）、塩化カリウム（２６５ｇ）、クエン酸ナトリウム（５０．５ｇ）を４８００ｍｌの蒸留水に溶解した。大豆リン脂質を含有するハイドロ有機溶剤を、この電解質塩の溶液に直接添加した。得られた製剤は、光学的に透明で、室温で安定であった。
【００８２】
Ｗｙａｔｔ  ＤｙｎａＰｒｏ（登録商標）分析装置を用いて動的光散乱分析（ＤＬＳ）を行った場合、電解質塩を含むこの製剤は、直径２ｎｍを超える粒子を含まないことが分かった。  極めて小さな粒子の集団が、約１ｎｍの平均粒径（ＤＬＳ分析装置の検出限界）で観察された。得られた製剤は、室温で安定であった。蒸留水で１：７５（ｖ／ｖ）に希釈した場合、溶液は、１〜５ｎｍの直径サイズ範囲に存在する粒子の小さな集団とともに、平均直径が１００ｎｍ未満（平均直径５７ｎｍ）のＵＳＬＳの均一な集団を生成した。得られた最終製剤は、光学的に透明であり、室温で安定であった。実施例２に記載したようにヒトボランティアの舌に置いたとき、電解質塩の味はマスクされた。
【００８３】
実施例８：ビタミンＢ１２含有ＵＳＬＳの製剤
ホスファチジルコリン及びリゾホスファチジルコリン（混合物中の総リン脂質の重量パーセントで約３％ｗ／ｗのリゾホスファチジルコリン）を含む天然大豆リン脂質（１８８ｍｇ）の混合物を、９０％のエタノール及び１０％の蒸留水（ｖ／ｖ）からなるハイドロ有機溶剤に溶解した。ビタミンＢ１２（５００ｍｇ）を１５０ｍｌの蒸留水に溶解した。ビタミンＢ１２のこの溶液に、大豆リン脂質を含むハイドロ有機溶液を直接添加した。得られた製剤は、光学的に透明で、室温で安定であった。
【００８４】
Ｗｙａｔｔ  ＤｙｎａＰｒｏ（登録商標）分析装置を用いて動的光散乱分析（ＤＬＳ）を行った場合、ビタミンＢ１２を含むこの製剤は、直径２ｎｍを超える粒子を含まないことが判明した。極めて小さな粒子の集団が、約１ｎｍの平均粒径（ＤＬＳ分析装置の検出限界）で観察された。得られた調製物は、室温で安定であった。蒸留水で１：１０（ｖ／ｖ）に希釈すると、溶液は、１００ｎｍ未満の平均直径（平均直径７８ｎｍ）を有するＵＳＬＳの均一な集団を生成した。得られた最終製剤は、光学的に透明であり、室温で安定であった。実施例２に記載したようにヒトボランティアの舌に置いたとき、ビタミンＢ１２の味はマスクされた。
【００８５】
実施例９：経口投与後のＥＧＣＧ及びＵＳＬＳで隔離されたＥＧＣＧの薬物動態学的パラメータ
１０匹の２００ｇの雄ラットの群に、実施例３（２．１ｍｌ；１００ｍｇ／ｋｇ体重）のように調製したＵＳＬＳの形態で、又はＵＳＬＳを含まないＥＧＣＧの同一製剤として経口胃管栄養法によりＥＧＣＧを投与した。投与後、５分、１０分、３０分、６０分、１２０分、及び４８０分に血液試料を採取した。ＵＳＬＳ隔離されたＥＧＣＧ（曲線Ａ）及びＵＳＬＧなしのＥＧＣＧ（曲線Ｂ）について示された時点＋／−  ＳＥＭでのＥＧＣＧの平均濃度を示す図４を参照されたい。経口投与後５分以内に、ＵＳＬＳで隔離された化合物は、６００ｎｇ／ｍｌの血漿濃度を生じ、投与後１０分で６０５ｎｇ／ｍｌのピーク血漿濃度を生じた。ＵＳＬＳ中で隔離されずに投与されたＥＧＣＧは、投与後５分でわずか１５０ｎｇ／ｍｌのピーク血漿濃度を生じた。したがって、ＵＳＬＳ隔離された製品は、ＵＳＬＳなしのものよりも４倍高いピーク血漿濃度を示した。
【００８６】
血漿データから薬物動態パラメータＣｍａｘ（最大血清濃度）、Ｔｍａｘ（最大血清濃度に達する時間）、ＡＵＣ（曲線下面積）、及び相対的バイオアベイラビリティを決定し、以下の表１に示す。ＵＳＬＳを隔離しない投与と比較してＵＳＬＳで投与した場合に、ＥＧＣＧの吸収が有意に増強されたことが実証された。
【００８７】
【表１】
2018512442.tif 000002
【００８８】
参考文献
【００８９】
以下に記載された全ての刊行物及び本出願全体は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
１．ファウンテン（Fountain）の米国特許公開第２０１４−０２７１７８２号
２．ファウンテン（Fountain）の米国特許公開第２０１５−０３４２２２６号
３．ファウンテン（Fountain）の米国特許第４，５８８，５７８号
４．ファウンテン（Fountain）の米国特許第５，２６９，９７９号
５．ファウンテン（Fountain）の米国特許第５，８７９，７０３号
６．ヤノフ（Janoff）の米国特許第５，９２２，３５０号
７．ファウンテン（Fountain）の米国特許第８，５４５，８７４号
８．ファウンテン（Fountain）の米国特許第８，５４５，８７５号
９．ファウンテン（Fountain）の米国特許第８，５９７，６７８号
【図１】
2018512442.tif 000003
【図２】
2018512442.tif 000004
【図３】
2018512442.tif 000005
【図４】
2018512442.tif 000006
【国際調査報告】
2018512442.tif 000007