(57)【要約】本明細書では、それを必要とする患者において視覚を増加させるための、および眼の血管障害を処置するための組成物および方法が開示される。本発明の組成物は、ＡｃｔＲＩＩアンタゴニストを含む。眼の障害、特に虚血および／または微小血管不全に関連する眼の障害を処置するのに有効な療法への未だ満たされていない高い必要性がある。したがって、本発明の開示の目的は、それを必要とする患者において視覚を改善するための手段、および眼の血管障害を処置する手段を提供することである。【特許請求の範囲】
【請求項１】
患者において眼の血管障害を処置または予防するための方法であって、有効量のＡｃｔＲＩＩアンタゴニストをそれを必要とする患者に投与することを含む、方法。
【請求項２】
前記患者の眼の視野を改善する、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
眼の血管障害を有する患者において視覚を改善するための方法であって、有効量のＡｃｔＲＩＩアンタゴニストをそれを必要とする患者に投与することを含む、方法。
【請求項４】
視力を増加させる、請求項２または３に記載の方法。
【請求項５】
視野を増加させる、請求項２から４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６】
前記眼の血管障害が、虚血に関連する、請求項１から５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７】
前記眼の血管障害が、微小血管不全に関連する、請求項１から６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８】
前記眼の血管障害が、網膜症に関連する、請求項１から７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９】
前記眼の血管障害が、視神経症に関連する、請求項１から８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０】
前記眼の血管障害が、黄斑変性症（例えば、加齢性黄斑変性症、若年性黄斑変性症、滲出型黄斑変性症、萎縮型黄斑変性症、シュタルガルト病、およびベスト病）、網膜静脈閉塞症（例えば、網膜中心静脈閉塞症、半側網膜静脈閉塞症、網膜静脈分枝閉塞症、および虚血性網膜静脈閉塞症）、網膜動脈閉塞症（例えば、網膜中心動脈閉塞症、半側網膜動脈閉塞症、網膜動脈分枝閉塞症、および虚血性網膜動脈閉塞症）、糖尿病性網膜症、虚血性視神経症［例えば、前部虚血性視神経症（動脈炎性および非動脈炎性）および後部虚血性視神経症］、黄斑部毛細血管拡張症（Ｉ型またはＩＩ型）、網膜虚血（例えば、急性網膜虚血または慢性網膜虚血）、眼虚血性症候群、網膜血管炎、および未熟児網膜症の１つまたは複数から選択される、請求項１から９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１１】
前記患者が、貧血を有する、請求項１から１０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１２】
前記患者が、骨髄異形成症候群を有する、請求項１から１０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１３】
前記患者が、鉄芽球性貧血を有する、請求項１１または１２に記載の方法。
【請求項１４】
前記患者が、サラセミアを有する、請求項１１に記載の方法。
【請求項１５】
前記患者が、β−サラセミアを有する、請求項１４に記載の方法。
【請求項１６】
前記患者が、中間型サラセミアを有する、請求項１４に記載の方法。
【請求項１７】
患者において眼の障害の重症度を処置する、予防する、または低減する方法であって、有効量のＡｃｔＲＩＩアンタゴニストをそれを必要とする患者に投与することを含む、方法。
【請求項１８】
前記患者が、眼の血管障害を有する、請求項１７に記載の方法。
【請求項１９】
前記眼の障害が、黄斑変性症（例えば、加齢性黄斑変性症、若年性黄斑変性症、滲出型黄斑変性症、萎縮型黄斑変性症、シュタルガルト病、新生血管加齢性黄斑変性症、およびベスト病）、網膜静脈閉塞症（例えば、網膜中心静脈閉塞症、半側網膜静脈閉塞症、網膜静脈分枝閉塞症、および虚血性網膜静脈閉塞症）、網膜動脈閉塞症（例えば、網膜中心動脈閉塞症、半側網膜動脈閉塞症、網膜動脈分枝閉塞症、および虚血性網膜動脈閉塞症）、黄斑浮腫（例えば、網膜静脈閉塞症後の黄斑浮腫および糖尿病黄斑浮腫）、糖尿病性網膜症（例えば、糖尿病性網膜症、および糖尿病黄斑浮腫を有する患者における糖尿病性網膜症）、虚血性視神経症［例えば、前部虚血性視神経症（動脈炎性および非動脈炎性）および後部虚血性視神経症］、黄斑部毛細血管拡張症（Ｉ型またはＩＩ型）、網膜虚血（例えば、急性網膜虚血または慢性網膜虚血）、眼虚血性症候群、網膜血管炎、および未熟児網膜症からなる群から選択される、請求項１７または１８に記載の方法。
【請求項２０】
前記眼の障害が、黄斑変性症である、請求項１７から１９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２１】
前記眼の障害が、加齢性黄斑変性症（ＡＭＤ）である、請求項２０に記載の方法。
【請求項２２】
前記患者が、加齢性眼疾患研究（ＡＲＥＤＳ）に基づき少なくともカテゴリー２のＡＭＤを有する、請求項２１に記載の方法。
【請求項２３】
前記患者が、ＡＲＥＤＳに基づきカテゴリー４のＡＭＤを有する、請求項２２に記載の方法。
【請求項２４】
前記ＡＭＤが、新生血管（滲出型）ＡＭＤである、請求項２１または２３に記載の方法。
【請求項２５】
前記ＡＭＤが、非新生血管（乾燥）ＡＭＤである、請求項２１または２３に記載の方法。
【請求項２６】
ＡＲＥＤＳに基づきＡＭＤにおける少なくとも１段階の改善をもたらす、請求項２２から２５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２７】
ＡＲＥＤＳに基づきＡＭＤにおける少なくとも２段階の改善をもたらす、請求項２１および２３から２５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２８】
前記患者が、Ｂｅｃｋｍａｎの黄斑調査分類委員会に関するイニシアティブ（ＢＩＭＲＣＣ）分類に基づき少なくとも初期ＡＭＤを有する、請求項２１に記載の方法。
【請求項２９】
前記患者が、（ＢＩＭＲＣＣ）分類に基づき後期ＡＭＤを有する、請求項２８に記載の方法。
【請求項３０】
前記ＡＭＤが、新生血管（滲出型）ＡＭＤである、請求項２９に記載の方法。
【請求項３１】
前記ＡＭＤが、非新生血管（乾燥）ＡＭＤである、請求項２９に記載の方法。
【請求項３２】
（ＢＩＭＲＣＣ）分類に基づきＡＭＤにおける少なくとも１段階の改善をもたらす、請求項２１および２８から３１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３３】
（ＢＩＭＲＣＣ）分類に基づきＡＭＤにおける少なくとも２段階の改善をもたらす、請求項２１および２９から３２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３４】
前記眼の障害が、黄斑浮腫である、請求項１７から１９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３５】
前記患者が、網膜静脈閉塞症（ＲＶＯ）後の黄斑浮腫を有する、請求項３４に記載の方法。
【請求項３６】
前記ＲＶＯが、分枝ＲＶＯである、請求項３５に記載の方法。
【請求項３７】
前記ＲＶＯが、中心ＲＶＯである、請求項３５に記載の方法。
【請求項３８】
患者が、分枝および中心ＲＶＯの両方を有する、請求項３５に記載の方法。
【請求項３９】
前記ＲＶＯが、半中心ＲＶＯである、請求項３５に記載の方法。
【請求項４０】
前記黄斑浮腫が、糖尿病黄斑浮腫である、請求項３５に記載の方法。
【請求項４１】
前記眼の障害が、網膜症である、請求項１７から１９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４２】
前記網膜症が、糖尿病性網膜症である、請求項４１に記載の方法。
【請求項４３】
前記患者が、糖尿病黄斑浮腫を有する、請求項４１または４２に記載の方法。
【請求項４４】
前記患者が、糖尿病性網膜症の早期処置研究（ＥＴＤＲＳ）分類に基づき少なくとも軽度非増殖性糖尿病性網膜症（ＮＰＤＲ）を有する、請求項４２または４３に記載の方法。
【請求項４５】
前記患者が、ＥＴＤＲＳ分類に基づき、軽度、中程度、重度、または極めて重度のＮＰＤＲを有する、請求項４２から４４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４６】
ＥＴＤＲＳ分類に基づき糖尿病性網膜症において少なくとも１段階の改善をもたらす、請求項４２から４５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４７】
ＥＴＤＲＳ分類に基づき糖尿病性網膜症において少なくとも２段階の改善をもたらす、請求項４６に記載の方法。
【請求項４８】
前記患者が、ＥＴＤＲＳの糖尿病性網膜症重症度スケール（ＥＴＤＲＳ−ＤＲＳＳ）分類に基づき少なくとも軽度非増殖性糖尿病性網膜症（ＮＰＤＲ）を有する、請求項４２または４３に記載の方法。
【請求項４９】
前記患者が、前記ＥＴＤＲＳ−ＤＲＳＳ分類に基づき中程度から重度のＮＰＤＲを有する、請求項４８に記載の方法。
【請求項５０】
ＥＴＤＲＳ−ＤＲＳＳ分類に基づき糖尿病性網膜症において少なくとも１段階の改善をもたらす、請求項４８または４９に記載の方法。
【請求項５１】
ＥＴＤＲＳ−ＤＲＳＳ分類に基づき糖尿病性網膜症において少なくとも２段階の改善をもたらす、請求項４９または５０に記載の方法。
【請求項５２】
前記患者が、ＲＶＯを有する、請求項１７から１９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５３】
前記ＲＶＯが、分枝ＲＶＯである、請求項５２に記載の方法。
【請求項５４】
前記ＲＶＯが、中心ＲＶＯである、請求項５２に記載の方法。
【請求項５５】
前記患者が、分枝および中心ＲＶＯの両方を有する、請求項５２に記載の方法。
【請求項５６】
前記患者が、半中心ＲＶＯを有する、請求項５２に記載の方法。
【請求項５７】
前記患者が、網膜静脈閉塞症（ＲＶＯ）後の黄斑浮腫を有する、請求項５２から５６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５８】
視力を維持する、請求項１から５７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５９】
ベースライン（処置の開始前の視力）と比較して視力を維持する、請求項５８に記載の方法。
【請求項６０】
ベースラインと比較した場合、少なくとも３０日間視力を維持する、請求項５８または５９に記載の方法。
【請求項６１】
前記患者の視覚損失が、１５文字未満である、請求項５８から６０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６２】
前記患者の視覚損失が、ベースライン（処置の開始前の視力）と比較して１５文字未満である、請求項６１に記載の方法。
【請求項６３】
視力を改善する、請求項１から５７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６４】
ベースライン（処置の開始前の視力）と比較して視力を改善する、請求項６３に記載の方法。
【請求項６５】
ベースラインと比較した場合、少なくとも３０日間視力を改善する、請求項６３または６４に記載の方法。
【請求項６６】
前記患者の視力が、少なくとも１５文字増加する、請求項６３から６５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６７】
前記患者の視力が、ベースライン（処置の開始前の視力）と比較して少なくとも１５文字増加する、請求項６６に記載の方法。
【請求項６８】
網膜の厚さを低減する、請求項１から６７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６９】
前記患者が、これまでにＶＥＧＦ阻害剤で処置されている、請求項１から６８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７０】
前記患者が、ＶＥＧＦ阻害剤での処置に不応性または不寛容である、請求項１から６９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７１】
前記ＶＥＧＦ阻害剤が、アフリベルセプトである、請求項６９または７０に記載の方法。
【請求項７２】
前記ＶＥＧＦ阻害剤が、ラニビズマブである、請求項６９または７０に記載の方法。
【請求項７３】
前記ＶＥＧＦ阻害剤が、ベバシズマブである、請求項６９または７０に記載の方法。
【請求項７４】
前記患者が、これまでにペガプタニブで処置されている、請求項６９または７０に記載の方法。
【請求項７５】
前記患者が、ペガプタニブでの処置に不応性または不寛容である、請求項７４に記載の方法。
【請求項７６】
前記患者が、これまでにフルオシノロンアセトニドで処置されている、請求項１から７５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７７】
前記患者が、フルオシノロンアセトニドでの処置に不応性または不寛容である、請求項７６に記載の方法。
【請求項７８】
前記患者が、眼または眼周囲の感染を有さない、請求項１から７７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７９】
前記患者が、緑内障を有さない、請求項１から７８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８０】
前記患者が、活動性の眼内炎症を有さない、請求項１から７９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８１】
前記患者が、鎌状赤血球症を有さない、請求項１から８０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８２】
前記患者が、鎌状赤血球症の合併症としての周辺部網膜虚血を有さない、請求項８１に記載の方法。
【請求項８３】
前記患者が、鎌状赤血球症の合併症としての増殖性鎌状赤血球網膜症を有さない、請求項８１に記載の方法。
【請求項８４】
前記患者が、鎌状赤血球症の合併症としての硝子体出血を有さない、請求項８１に記載の方法。
【請求項８５】
前記ＡｃｔＲＩＩアンタゴニストが、ＡｃｔＲＩＩポリペプチドである、請求項１から８４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８６】
前記ＡｃｔＲＩＩポリペプチドが、
ａ）配列番号１０のアミノ酸配列を含むか、または配列番号１０のアミノ酸配列と、少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一であるアミノ酸配列を含むポリペプチド；
ｂ）配列番号１１のアミノ酸配列を含むか、または配列番号１１のアミノ酸配列と、少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一であるアミノ酸配列を含むポリペプチド；
ｃ）配列番号９のアミノ酸３０〜１１０と同一であるアミノ酸配列を含むか、または配列番号９のアミノ酸３０〜１１０の配列と、少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一であるアミノ酸配列を含むポリペプチド；
ｄ）配列番号１のアミノ酸２９〜１０９と同一であるアミノ酸配列を含むか、または配列番号１のアミノ酸２９〜１０９の配列と、少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一であるアミノ酸配列を含むポリペプチド；
ｅ）配列番号１のアミノ酸２５〜１３１と同一であるアミノ酸配列を含むか、または配列番号１のアミノ酸２５〜１３１の配列と、少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一であるアミノ酸配列を含むポリペプチド；
ｆ）配列番号２のアミノ酸配列を含むか、または配列番号２のアミノ酸配列と、少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一であるアミノ酸配列を含むポリペプチド；
ｇ）配列番号３のアミノ酸配列を含むか、または配列番号３のアミノ酸配列と、少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一であるアミノ酸配列を含むポリペプチド；
ｈ）配列番号５のアミノ酸配列を含むか、または配列番号５のアミノ酸配列と、少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一であるアミノ酸配列を含むポリペプチド；
ｉ）配列番号６のアミノ酸配列を含むか、または配列番号６のアミノ酸配列と、少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一であるアミノ酸配列を含むポリペプチド；
ｊ）配列番号４５のアミノ酸配列を含むか、または配列番号４５のアミノ酸配列と、少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一であるアミノ酸配列を含むポリペプチド；
ｋ）配列番号４８のアミノ酸配列を含むか、または配列番号４８のアミノ酸配列と、少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一であるアミノ酸配列を含むポリペプチド；
ｌ）配列番号４９のアミノ酸配列を含むか、または配列番号４９のアミノ酸配列と、少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一であるアミノ酸配列を含むポリペプチド；および
ｍ）配列番号６５のアミノ酸配列を含むか、または配列番号６５のアミノ酸配列と、少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一であるアミノ酸配列を含むポリペプチド；
からなる群から選択される、請求項８５に記載の方法。
【請求項８７】
前記ポリペプチドが、配列番号１に照らして７９位に酸性アミノ酸を含む、請求項８６に記載の方法。
【請求項８８】
前記ポリペプチドが、配列番号１に照らして７９位にＤまたはＥを含む、請求項８７に記載の方法。
【請求項８９】
前記ポリペプチドが、ＡｃｔＲＩＩポリペプチドドメインに加えて、免疫グロブリンのＦｃドメインを含む融合タンパク質である、請求項８６から８８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９０】
前記免疫グロブリンのＦｃドメインが、ＩｇＧ１のＦｃドメインである、請求項８９に記載の方法。
【請求項９１】
前記免疫グロブリンのＦｃドメインが、配列番号１４〜１８のいずれか１つと少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一であるアミノ酸配列を含む、請求項８９に記載の方法。
【請求項９２】
前記融合タンパク質が、前記ＡｃｔＲＩＩドメインと前記免疫グロブリンのＦｃドメインとの間に位置するリンカードメインをさらに含む、請求項８９から９１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９３】
前記リンカードメインが、ＧＧＧ（配列番号１９）、ＧＧＧＧ（配列番号２０）、ＴＧＧＧＧ（配列番号２１）、ＳＧＧＧＧ（配列番号２２）、ＴＧＧＧ（配列番号２３）、ＳＧＧＧ（配列番号２４）、およびＧＧＧＧＳ（配列番号２５）からなる群から選択される、請求項９２に記載の方法。
【請求項９４】
前記ポリペプチドが、
ａ）配列番号３２のアミノ酸配列を含むか、または配列番号３２のアミノ酸配列と、少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一であるアミノ酸配列を含むポリペプチド；
ｂ）配列番号３６のアミノ酸配列を含むか、または配列番号３６のアミノ酸配列と、少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一であるアミノ酸配列を含むポリペプチド；
ｃ）配列番号３９のアミノ酸配列を含むか、または配列番号３９のアミノ酸配列と、少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一であるアミノ酸配列を含むポリペプチド；
ｄ）配列番号４０のアミノ酸配列を含むか、または配列番号４０のアミノ酸配列と、少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一であるアミノ酸配列を含むポリペプチド；
ｅ）配列番号４１のアミノ酸配列を含むか、または配列番号４１のアミノ酸配列と、少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一であるアミノ酸配列を含むポリペプチド；
ｆ）配列番号４４のアミノ酸配列を含むか、または配列番号４４のアミノ酸配列と、少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一であるアミノ酸配列を含むポリペプチド；
ｇ）配列番号４６のアミノ酸配列を含むか、または配列番号４６のアミノ酸配列と、少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一であるアミノ酸配列を含むポリペプチド；
ｈ）配列番号５０のアミノ酸配列を含むか、または配列番号５０のアミノ酸配列と、少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一であるアミノ酸配列を含むポリペプチド；
ｉ）配列番号６１のアミノ酸配列を含むか、または配列番号６１のアミノ酸配列と、少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一であるアミノ酸配列を含むポリペプチド；
ｊ）配列番号６４のアミノ酸配列を含むか、または配列番号６４のアミノ酸配列と、少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一であるアミノ酸配列を含むポリペプチド；
ｋ）配列番号７８のアミノ酸配列を含むか、または配列番号７８のアミノ酸配列と、少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一であるアミノ酸配列を含むポリペプチド；および
ｌ）配列番号５０のアミノ酸配列を含むか、または配列番号７９のアミノ酸配列と、少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一であるアミノ酸配列を含むポリペプチド；
からなる群から選択されるポリペプチドを含むＡｃｔＲＩＩ−Ｆｃ融合タンパク質である、請求項８９に記載の方法。
【請求項９５】
前記ポリペプチドが、配列番号１に照らして７９位に酸性アミノ酸を含む、請求項９４に記載の方法。
【請求項９６】
前記ポリペプチドが、配列番号１に照らして７９位にＤまたはＥを含む、請求項９５に記載の方法。
【請求項９７】
前記ポリペプチドが、グリコシル化アミノ酸、ＰＥＧ化アミノ酸、ファルネシル化アミノ酸、アセチル化アミノ酸、ビオチン化アミノ酸、および脂質部分に結合体化したアミノ酸から選択される、１つまたは複数のアミノ酸修飾を含む、請求項８５から９６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９８】
前記ポリペプチドが、グリコシル化されており、かつ哺乳動物グリコシル化パターンを有する、請求項９７に記載の方法。
【請求項９９】
前記ポリペプチドが、グリコシル化されており、かつチャイニーズハムスター卵巣細胞株から得ることができるグリコシル化パターンを有する、請求項９８に記載の方法。
【請求項１００】
前記ポリペプチドが、ＧＤＦ１１に結合する、請求項８５から９９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０１】
前記ポリペプチドが、ＧＤＦ８に結合する、請求項８５から１００のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０２】
前記ポリペプチドが、アクチビンに結合する、請求項８５から１０１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０３】
前記ポリペプチドが、アクチビンＡに結合する、請求項１０２に記載の方法。
【請求項１０４】
前記ポリペプチドが、アクチビンＢに結合する、請求項１０２または１０３に記載の方法。
【請求項１０５】
前記ＡｃｔＲＩＩアンタゴニストが、抗ＧＤＦ１１または抗ＧＤＦ８抗体である、請求項１から８４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０６】
前記ＡｃｔＲＩＩアンタゴニストが、抗アクチビン抗体である、請求項１から８４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０７】
前記ＡｃｔＲＩＩアンタゴニストが、少なくともＧＤＦ１１に結合する多特異性抗体である、請求項１から８４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０８】
前記多特異性抗体が、ＧＤＦ８および／またはアクチビンにさらに結合する、請求項１０７に記載の方法。
【請求項１０９】
前記多特異性抗体が、アクチビンＡ、アクチビンＢ、アクチビンＣ、アクチビンＥ、またはＢＭＰ６の１つまたは複数にさらに結合する、請求項１０７または１０８に記載の方法。
【請求項１１０】
前記抗体が、二特異性抗体である、請求項１０５から１０９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１１１】
前記二特異性抗体が、ＧＤＦ１１およびＧＤＦ８に結合する、請求項１１０に記載の方法。
【請求項１１２】
前記抗体が、キメラ抗体、ヒト化抗体、またはヒト抗体である、請求項１０５から１１１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１１３】
前記ＡｃｔＲＩＩアンタゴニストを、眼の障害の重症度を処置、予防または低減するための１つまたは複数の追加の活性作用因子または支持療法と組み合わせて投与することをさらに含む、請求項１から１１２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１１４】
前記１つまたは複数の支持療法が、外科手術、レーザー療法（例えば、光凝固）、抗血管新生療法［例えば、ＶＥＧＦ阻害剤、例えばベバシズマブ（Ａｖａｓｔｉｎ（登録商標））など、ラニビズマブ（Ｌｕｃｅｎｔｉｓ（登録商標））、およびアフリベルセプト（Ｅｙｌｅａ（登録商標））］、Ｃａ２＋阻害剤（例えば、フルナリジンおよびニフェジピン）、寒冷療法、高圧酸素療法、Ｎａ＋チャネルブロッカー（例えば、トピラメート）、ｉＧｌｕＲアンタゴニスト（例えば、ＭＫ−８０１、デキストロメトルファン、エリプロディル、およびフルピルチン）、抗酸化剤（例えば、ジメチルチオ尿素、ビタミンＥ、アルファ−リポ酸、スーパーオキシドジスムターゼ、カタラーゼ、デスフェリオキサミン、マンニトール、アロプリノール、ドベシル酸カルシウム、フルピルチン、トリメタジジン、およびＥＧＢ−７６１）、抗炎症剤、毛様体ジアテルミー、毛様体冷凍術、眼濾過手術、排水弁の埋め込み、抗血小板療法（例えば、アスピリン、チクロピジン、およびクロピドグレル）、抗凝血剤療法（例えば、ワルファリンおよびヘパリン）、ステロイド、全身または局所のコルチコステロイド（例えば、プレドニゾン、トリアムシノロン（Ｔｒｉｅｓｅｎｃｅ（登録商標））およびフルオシノロンアセトニド（Ｉｌｕｖｉｅｎ））、およびデキサメタゾン（Ｏｚｕｒｄｅｘ（登録商標））、ステロイド減量の免疫抑制剤（例えば、サイクロスポリン、アザチオプリン、シクロホスファミド、ミコフェノール酸塩、モフェチル、インフリキシマブおよびエタネルセプト）、栄養補助食品（例えば、ビタミンＣ、ビタミンＥ、ルテイン、ゼアキサンチン、亜鉛、葉酸、ビタミンＢ６、ビタミンＢ１２、およびゼアキサンチン）、硝子体切除、強膜バックル手術、および気体網膜復位術からなる群から選択される、請求項１１３に記載の方法。
【請求項１１５】
前記１つまたは複数の追加の活性作用因子が、血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）阻害剤である、請求項１１３に記載の方法。
【請求項１１６】
前記ＶＥＧＦ阻害剤が、ＶＥＧＦ−Ａ阻害剤である、請求項１１５に記載の方法。
【請求項１１７】
前記１つまたは複数の追加の活性作用因子が、胎盤増殖因子（ＰＩＧＦ）阻害剤である、請求項１１３に記載の方法。
【請求項１１８】
前記１つまたは複数の追加の活性作用因子が、ＶＥＧＦおよびＰＩＧＦを阻害する、請求項１１３に記載の方法。
【請求項１１９】
前記１つまたは複数の追加の活性作用因子が、アフリベルセプトである、請求項１１５から１１８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１２０】
前記１つまたは複数の追加の活性作用因子が、ラニビズマブである、請求項１１５に記載の方法。
【請求項１２１】
前記１つまたは複数の追加の活性作用因子が、ベバシズマブである、請求項１１５に記載の方法。
【請求項１２２】
前記ＡｃｔＲＩＩアンタゴニストが、非経口投与によって投与される、請求項１から１２１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１２３】
前記ＡｃｔＲＩＩアンタゴニストが、皮下投与によって投与される、請求項１から１２１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１２４】
前記ＡｃｔＲＩＩアンタゴニストが、眼への投与によって投与される、請求項１から１２１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１２５】
前記ＡｃｔＲＩＩアンタゴニストが、硝子体内投与によって投与される、請求項１から１２１のいずれか一項に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願への相互参照
本出願は、２０１５年１１月２３日に出願された米国仮出願番号第６２／２５８，９３４号からの優先権の利益を主張している。前述の出願の明細書は、その全体が参考として本明細書に援用される。
【背景技術】
【０００２】
発明の背景
最も代謝的に活性な組織の１つとして、眼の構造的および機能的な完全性は、血液からの規則的な酸素の供給および栄養素に依存する［Ｓｕｋ−Ｙｅｅら（２０１２年）Ｏｘｉｄａｔｉｖｅ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ  ａｎｄ  Ｃｅｌｌｕｌａｒ  Ｌｏｎｇｅｖｉｔｙ  ２０１２年：１〜１０頁］。この高い代謝上の要求を満たすために、眼は、視力の維持にとって重要な眼の構成要素に酸素および栄養素を供給する数種の構造的および機能的に別個の血管床を含有する［Ｋｉｅｌ  Ｊ．Ｗ．（２０１０年）Ｔｈｅ  Ｏｃｕｌａｒ  Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ．  Ｓａｎ  Ｒａｆａｅｌ  （ＣＡ）  Ｍｏｒｇａｎ  ＆  Ｃｌａｙｐｏｏｌ  Ｌｉｆｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、第２章、Ａｎａｔｏｍｙ］。血管床は、それぞれ網膜の内側および外側の部分に供給を行う網膜および脈絡膜血管系、ならびに角膜の外縁に位置する角膜縁血管系を含む。視力障害および失明の主な原因は、なかでも、眼の血管の正常な構造および／または機能を損なう傷害および疾患、特に、虚血および血管合併症、例えば新血管形成、血管の漏出、および血管の閉塞などに関連するものが挙げられる［Ｋａｕｒら（２００８年）Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌｏｇｙ  ２巻（４号）：８７９〜９９９頁］。そのような傷害および疾患はしばしば、眼内で低酸素症および／または酸化的ストレスの増加（例えば、活性酸素種レベルの増加）を引き起こし、それにより特に網膜および眼の神経が損傷を受ける可能性がある。したがって、多くの虚血性および微小血管不全障害において、視覚損失は、網膜の損傷、視神経の損傷、および硝子体出血（血管外漏出、または眼の硝子体液中およびその周辺の領域への血液や流体の漏出）の１つまたは複数に起因する。
【０００３】
例えば、糖尿病性網膜症は、網膜血管系に影響を及ぼす最も一般的な疾患の１つであり、これは、１型糖尿病または２型糖尿病患者の両方に現れる可能性がある［Ｓｈｉｎら（２０１４年）Ｊ  Ｏｐｔｈａｌｍｉｃ  Ｖｉｓ  Ｒｅｓ．９巻（３号）：３６２〜３７３頁］。最初は、糖尿病性網膜症は一般的に無症状であるか、または軽度の視力問題を引き起こす程度である。しかしながら、未処置のままにすると、糖尿病性網膜症が、最終的に失明を引き起こす可能性がある。非増殖性網膜症として分類される疾患の早期段階では、網膜の血管に毛細血管瘤が発生する。疾患が進行するにつれて、より多くの血管が損傷を受けたりまたは閉塞したりするようになり、その結果として虚血が生じ、低減した酸素および栄養素の循環を補おうとして新生血管の成長（新血管形成）が促進される。疾患のこの段階は、増殖性網膜症と呼ばれる。新生血管は、網膜および眼の内部を満たす透明な硝子体ゲルの表面に沿って生じる。これらの新生血管は、薄くもろい壁を有し、流体（全血および／またはそれらの一部の成分）を漏出させたり破裂したりする傾向がある。そのような漏出により、網膜の層内および硝子体液中に血液および／または流体がたまり、視界の曇りを引き起こす。また、血液および／または流体は、鋭い直線的な視覚に関与する眼の一部である網膜の黄斑に漏出する可能性がある。黄斑が膨潤すると、患者の中央の視界が歪むようになる。この状態は黄斑浮腫と称され、未処置のままにすると、糖尿病患者において黄斑変性症を引き起こす可能性がある。
【０００４】
また虚血および微小血管の病理は、他の多くの眼の障害にも関連し、そのような障害としては、例えば、黄斑変性症（例えば、加齢性黄斑変性症、若年性黄斑変性症、滲出型黄斑変性症、シュタルガルト病、およびベスト病）、網膜静脈閉塞症（例えば、網膜中心静脈閉塞症、半側網膜静脈閉塞症、網膜静脈分枝閉塞症、および虚血性網膜静脈閉塞症）、網膜動脈閉塞症（例えば、網膜中心動脈閉塞症、半側網膜動脈閉塞症、網膜動脈分枝閉塞症、および虚血性網膜動脈閉塞症）、虚血性視神経症［例えば、前部虚血性視神経症（動脈炎性および非動脈炎性）および後部虚血性視神経症］、黄斑部毛細血管拡張症（Ｉ型またはＩＩ型）、網膜虚血（例えば、急性網膜虚血または慢性網膜虚血）、眼虚血性症候群、網膜血管炎、および未熟児網膜症が挙げられる。
【０００５】
眼の血管障害のためのほとんどの利用可能な処置は、血管および神経の損傷を緩和することに向けられており、そのような処置としては、例えば、レーザー光凝固療法、低線量の放射線、および外科手術（例えば、新生血管膜の除去および硝子体切除）が挙げられる。残念なことに、これらの療法の多くは、限定的な効果または短時間の効果しかない。例えば、新生血管膜は、初期はレーザー療法に応答するが、高い再発率を示し、レーザー処置中の損傷による視覚損失のリスクもある。同様に、低線量の放射線療法を受けている患者において、新血管形成（ｎｅｏｖａｃｕｏｌｉｚａｔｉｏｎ）の高い再発率が生じる。新生血管膜の外科的除去および硝子体切除は、網膜剥離を引き起こす可能性があり、処置後に白内障の発症を伴うことが多い［Ｂｅｎｓｏｎら（１９８８年）Ｏｐｈｔｈａｌｍｉｃ  Ｓｕｒｇｅｒｙ  １９巻（２０号）：８２６〜８２４頁］。近年、加齢性黄斑変性症で使用するための種々のＶＥＧＦアンタゴニストが承認されており、他の眼の徴候に関して治験が継続中である。しかしながら、ＶＥＧＦアンタゴニスト療法も、種々の有害な合併症を伴うものであった［Ｆａｌａｖａｒｊａｎｉら（２０１３年）Ｅｙｅ  ２７巻：７８７〜７９４頁］。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００６】
【非特許文献１】Ｓｕｋ−Ｙｅｅら（２０１２年）Ｏｘｉｄａｔｉｖｅ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ  ａｎｄ  Ｃｅｌｌｕｌａｒ  Ｌｏｎｇｅｖｉｔｙ  ２０１２年：１〜１０頁
【非特許文献２】Ｋｉｅｌ  Ｊ．Ｗ．（２０１０年）Ｔｈｅ  Ｏｃｕｌａｒ  Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ．  Ｓａｎ  Ｒａｆａｅｌ  （ＣＡ）  Ｍｏｒｇａｎ  ＆  Ｃｌａｙｐｏｏｌ  Ｌｉｆｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、第２章、Ａｎａｔｏｍｙ
【非特許文献３】Ｋａｕｒら（２００８年）Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌｏｇｙ  ２巻（４号）：８７９〜９９９頁］
【非特許文献４】Ｓｈｉｎら（２０１４年）Ｊ  Ｏｐｔｈａｌｍｉｃ  Ｖｉｓ  Ｒｅｓ．９巻（３号）：３６２〜３７３頁
【非特許文献５】Ｆａｌａｖａｒｊａｎｉら（２０１３年）Ｅｙｅ  ２７巻：７８７〜７９４頁
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００７】
したがって、眼の障害、特に虚血および／または微小血管不全に関連する眼の障害を処置するのに有効な療法への未だ満たされていない高い必要性がある。したがって、本発明の開示の目的は、それを必要とする患者において視覚を改善するための方法、および眼の血管障害を処置する方法を提供することである。
【０００８】
発明の要旨
本明細書に記載される通り、ＡｃｔＲＩＩアンタゴニスト（阻害剤）は、目の（眼）障害を処置するのに使用できることが発見された。特に、ＡｃｔＲＩＩポリペプチドでの処置は、血管性の眼損傷に関連する疾患を有する患者において視覚を改善することが観察された。したがって、ある特定の態様では、本発明の開示は、１つまたは複数のＡｃｔＲＩＩアンタゴニスト、例えば、ＡｃｔＲＩＩポリペプチド（ＡｃｔＲＩＩＡおよびＡｃｔＲＩＩＢポリペプチド、加えてそれらの改変体、例えばＧＤＦトラップなど）などをそれを必要とする患者に投与することによって、眼の障害、特定の眼の血管障害を処置または予防するための方法に関する。本明細書に記載されるＡｃｔＲＩＩポリペプチド、加えてそれらの改変体は、ＴＧＦ−βスーパーファミリーの種々のリガンド［例えば、ＧＤＦ１１、ＧＤＦ８、アクチビン（アクチビンＡ、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、アクチビンＣ、アクチビンＥ）、ＢＭＰ６、ＧＤＦ３、ＢＭＰ１０、および／またはＢＭＰ９］に結合する。したがって、ＡｃｔＲＩＩポリペプチド、特に可溶性ポリペプチドは、ＡｃｔＲＩＩ−リガンド相互作用（例えば、細胞膜で起こる天然に存在するリガンド−受容体相互作用）を阻害するのに使用することができ、したがってＡｃｔＲＩＩ媒介Ｓｍａｄ（例えば、Ｓｍａｄ１、２、３、５および８）シグナル伝達を阻害するのに使用することができる。したがって、特定の作用機序に束縛されることは望まないが、本明細書に記載されるＡｃｔＲＩＩポリペプチドのアンタゴニスト特性を模擬する他のＡｃｔＲＩＩ阻害剤またはＡｃｔＲＩＩ阻害剤の組み合わせが、インビボにおける類似の生物学的作用、例えば、眼の障害、特に眼の血管障害を有する患者において視覚を改善する能力などを有することが予想される。そのようなアンタゴニスト模倣剤（例えば、少なくとも１つのＡｃｔＲＩＩリガンドおよび／またはＡｃｔＲＩＩ受容体を阻害する１つまたは複数の改変体ＡｃｔＲＩＩポリペプチド、少なくとも１つのＡｃｔＲＩＩリガンドおよび／またはＡｃｔＲＩＩ受容体を阻害する１つまたは複数の抗体、少なくとも１つのＡｃｔＲＩＩリガンドおよび／またはＡｃｔＲＩＩ受容体を阻害する１つまたは複数の核酸、少なくとも１つのＡｃｔＲＩＩリガンドおよび／またはＡｃｔＲＩＩ受容体を阻害する１つまたは複数の小分子、加えてそれらの組み合わせ）は、本明細書において集合的に「ＡｃｔＲＩＩアンタゴニスト」または「ＡｃｔＲＩＩ阻害剤」と称される。
【０００９】
したがって、ある特定の態様では、本開示は、眼の障害（例えば、眼の血管障害）を処置または予防するための方法、特に、障害の１つまたは複数の合併症を処置または予防するための方法であって、有効量のＡｃｔＲＩＩアンタゴニスト（阻害剤）またはＡｃｔＲＩＩアンタゴニストの組み合わせをそれを必要とする対象（患者）に投与することを含む、方法を提供する。例えば、本開示は、眼の障害、特に眼の血管障害を有する患者において視覚を改善するための方法であって、有効量のＡｃｔＲＩＩアンタゴニストまたはＡｃｔＲＩＩアンタゴニストの組み合わせを投与することを含む、方法を提供する。一部の実施形態では、そのような方法は、患者において視覚を増加させる。他の実施形態では、このような方法は、患者において視野を増加させる。さらに他の実施形態では、このような方法は、患者において視覚および視野を増加させる。一部の実施形態では、ＡｃｔＲＩＩアンタゴニストまたはＡｃｔＲＩＩアンタゴニストの組み合わせは、眼の障害、特に虚血に関連する眼の血管障害を処置または予防するのに使用することができる。一部の実施形態では、ＡｃｔＲＩＩアンタゴニストまたはＡｃｔＲＩＩアンタゴニストの組み合わせは、眼の障害、特に微小血管不全に関連する眼の血管障害を処置または予防するのに使用することができる。一部の実施形態では、ＡｃｔＲＩＩアンタゴニストまたはＡｃｔＲＩＩアンタゴニストの組み合わせは、眼の障害、特に網膜症に関連する眼の血管障害を処置または予防するのに使用することができる。一部の実施形態では、ＡｃｔＲＩＩアンタゴニストまたはＡｃｔＲＩＩアンタゴニストの組み合わせは、眼の障害、特に視神経症に関連する眼の血管障害を処置または予防するのに使用することができる。したがって、ある特定の態様では、ＡｃｔＲＩＩアンタゴニストまたはＡｃｔＲＩＩアンタゴニストの組み合わせは、１つまたは複数の眼の障害、特に、黄斑変性症（例えば、加齢性黄斑変性症、若年性黄斑変性症、滲出型黄斑変性症、萎縮型黄斑変性症、シュタルガルト病、およびベスト病）、網膜静脈閉塞症（例えば、網膜中心静脈閉塞症、半側網膜静脈閉塞症、網膜静脈分枝閉塞症、および虚血性網膜静脈閉塞症）、網膜動脈閉塞症（例えば、網膜中心動脈閉塞症、半側網膜動脈閉塞症、網膜動脈分枝閉塞症、網膜静脈閉塞症後の黄斑浮腫、および虚血性網膜動脈閉塞症）、糖尿病性網膜症、糖尿病黄斑浮腫、虚血性視神経症［例えば、前部虚血性視神経症（動脈炎性および非動脈炎性）および後部虚血性視神経症］、黄斑部毛細血管拡張症（Ｉ型またはＩＩ型）、網膜虚血（例えば、急性網膜虚血または慢性網膜虚血）、眼虚血性症候群、網膜血管炎、および未熟児網膜症からなる群から選択される眼の血管障害を処置または予防するのに使用することができる。一部の実施形態では、眼の障害、特に眼の血管障害の処置または予防が必要な患者は、貧血を有する。例えば、眼の障害、特に眼の血管障害の処置または予防が必要な患者は、鉄芽球性貧血を有していてもよい。一部の実施形態では、眼の障害、特に眼の血管障害の処置または予防が必要な患者は、骨髄異形成症候群を有する。一部の実施形態では、眼の障害、特に眼の血管障害の処置または予防が必要な患者は、異常ヘモグロビン症を有する。例えば、眼の障害、特に眼の血管障害の処置または予防が必要な患者は、サラセミア障害、これらに限定されないが、β−サラセミアまたは中間型サラセミアなどを有していてもよい。一部の実施形態では、眼の障害、特に眼の血管障害の処置または予防が必要な患者は、鎌状赤血球症を有さない。一部の実施形態では、眼の障害、特に眼の血管障害の処置または予防が必要な患者は、鎌状赤血球症の合併症としての周辺部網膜虚血を有さない。一部の実施形態では、眼の障害、特に眼の血管障害の処置または予防が必要な患者は、鎌状赤血球症の合併症としての増殖性鎌状赤血球網膜症を有さない。一部の実施形態では、眼の障害、特に眼の血管障害の処置または予防が必要な患者は、鎌状赤血球症の合併症としての硝子体出血を有さない。同様に、本開示は、本明細書に記載される眼の血管障害を処置または予防することにおいて使用するための、ＡｃｔＲＩＩアンタゴニスト（阻害剤）またはＡｃｔＲＩＩアンタゴニストの組み合わせを含む組成物および医薬を提供する。
【００１０】
ある特定の形態では、本開示は、患者において眼の障害を処置する方法であって、有効量のＡｃｔＲＩＩアンタゴニストをそれを必要とする患者に投与することを含む、方法に関する。一部の実施形態では、本開示は、患者において眼の障害を予防する方法であって、有効量のＡｃｔＲＩＩアンタゴニストをそれを必要とする患者に投与することを含む、方法に関する。一部の実施形態では、本開示は、患者において眼の障害の重症度を低減する方法であって、有効量のＡｃｔＲＩＩアンタゴニストをそれを必要とする患者に投与することを含む、方法に関する。一部の実施形態では、眼の障害は、眼の血管障害である。一部の実施形態では、眼の障害は、黄斑変性症（例えば、加齢性黄斑変性症、若年性黄斑変性症、滲出型黄斑変性症、萎縮型黄斑変性症、シュタルガルト病、新生血管加齢性黄斑変性症、およびベスト病）、網膜静脈閉塞症（例えば、網膜中心静脈閉塞症、半側網膜静脈閉塞症、網膜静脈分枝閉塞症、および虚血性網膜静脈閉塞症）、  網膜動脈閉塞症（例えば、網膜中心動脈閉塞症、半側網膜動脈閉塞症、網膜動脈分枝閉塞症、および虚血性網膜動脈閉塞症）、  黄斑浮腫（例えば、網膜静脈閉塞症後の黄斑浮腫および糖尿病黄斑浮腫）、糖尿病性網膜症（例えば、糖尿病性網膜症、および糖尿病黄斑浮腫を有する患者における糖尿病性網膜症）、虚血性視神経症［例えば、前部虚血性視神経症（動脈炎性および非動脈炎性）および後部虚血性視神経症］、黄斑部毛細血管拡張症（Ｉ型またはＩＩ型）、網膜虚血（例えば、急性網膜虚血または慢性網膜虚血）、眼虚血性症候群、網膜血管炎、および未熟児網膜症からなる群から選択される。一部の実施形態では、本方法は、視力を維持する。一部の実施形態では、本方法は、ベースラインと比較して視力（処置の開始前の患者における視力）を維持する。一部の実施形態では、本方法は、ベースラインと比較した場合、少なくとも３０、４５、６０、９０、１００、１２０、１４０、１６０、１８０、２００、２５０、３００、もしくは３６０日間、またはそれより多くの日数、視力を維持する。一部の実施形態では、本方法は、ベースラインと比較した場合、少なくとも１６０日間視力を維持する。一部の実施形態では、本方法は、ベースラインと比較した場合、少なくとも３６０日間視力を維持する。一部の実施形態では、患者の視覚損失は、３０、２９、２８、２７、２６、２５、２４、２３、２２、２１、２０、１９、１８、１７、１６、１５、１４、１３、１２、１１、１０、９、８、７、６、５、４、３、２、または１文字未満である。一部の実施形態では、患者の視覚損失は、１５文字未満である。一部の実施形態では、患者の視覚損失は、ベースライン（処置の開始前の患者における視力）と比較して、３０、２９、２８、２７、２６、２５、２４、２３、２２、２１、２０、１９、１８、１７、１６、１５、１４、１３、１２、１１、１０、９、８、７、６、５、４、３、２、または１文字未満である。一部の実施形態では、患者の視覚損失は、ベースライン（処置の開始前の患者における視力）と比較して１５文字未満である。一部の実施形態では、本方法は、視力を改善する。一部の実施形態では、本方法は、ベースラインと比較した場��、少なくとも３０、４５、６０、９０、１００、１２０、１４０、１６０、１８０、２００、２５０、３００、もしくは３６０日間、またはそれより多くの日数、視力を改善する。一部の実施形態では、本方法は、ベースラインと比較した場合、少なくとも１６０日間視力を改善する。一部の実施形態では、本方法は、ベースラインと比較した場合、少なくとも３６０日間視力を改善する。一部の実施形態では、本方法は、視力を改善し、患者の視力は、少なくとも５０、４０、３０、２９、２８、２７、２６、２５、２４、２３、２２、２１、２０、１９、１８、１７、１６、１５、１４、１３、１２、１１、１０、９、８、７、６、５、４、３、２、または１文字増加する。一部の実施形態では、本方法は、視力を改善し、患者の視力は、ベースライン（処置の開始前の患者における視力）と比較して、少なくとも５０、４０、３０、２９、２８、２７、２６、２５、２４、２３、２２、２１、２０、１９、１８、１７、１６、１５、１４、１３、１２、１１、１０、９、８、７、６、５、４、３、２、または１文字増加する。一部の実施形態では、本方法は、視力を改善し、患者の視力は、少なくとも１５文字増加する。一部の実施形態では、本方法は、視力を改善し、患者の視力は、ベースライン（処置の開始前の患者における視力）と比較して少なくとも１５文字増加する。一部の実施形態では、本方法は、網膜の厚さを低減する。一部の実施形態では、患者は、これまでにＶＥＧＦ阻害剤で処置されている。一部の実施形態では、患者は、ＶＥＧＦ阻害剤での処置に不応性または不寛容である。一部の実施形態では、ＶＥＧＦ阻害剤は、アフリベルセプトである。一部の実施形態では、ＶＥＧＦ阻害剤は、ラニビズマブである。一部の実施形態では、ＶＥＧＦ阻害剤は、ベバシズマブである。一部の実施形態では、患者は、これまでにペガプタニブで処置されている。一部の実施形態では、患者は、ペガプタニブでの処置に不応性または不寛容である。一部の実施形態では、患者は、これまでにフルオシノロンアセトニドで処置されている。一部の実施形態では、患者は、フルオシノロンアセトニドでの処置に不応性または不寛容である。一部の実施形態では、患者は、眼または眼周囲の感染を有さない。一部の実施形態では、患者は、緑内障を有さない。一部の実施形態では、患者は、活動性の眼内炎症を有さない。一部の実施形態では、患者は、鎌状赤血球症を有さない。一部の実施形態では、患者は、鎌状赤血球症の合併症としての周辺部網膜虚血を有さない。一部の実施形態では、患者は、鎌状赤血球症の合併症としての増殖性鎌状赤血球網膜症を有さない。一部の実施形態では、患者は、鎌状赤血球症の合併症としての硝子体出血を有さない。一部の実施形態では、本方法は、ＡｃｔＲＩＩアンタゴニストを、眼の障害の重症度を処置、予防または低減するための１つまたは複数の追加の活性作用因子または支持療法と組み合わせて投与することをさらに含む。一部の実施形態では、１つまたは複数の支持療法は、外科手術、レーザー療法（例えば、光凝固）、抗血管新生療法［例えば、ＶＥＧＦ阻害剤、例えばベバシズマブ（Ａｖａｓｔｉｎ（登録商標））など、ラニビズマブ（Ｌｕｃｅｎｔｉｓ（登録商��））、およびアフリベルセプト（Ｅｙｌｅａ（登録商標））］、Ｃａ２＋阻害剤（例えば、フルナリジンおよびニフェジピン）、寒冷療法、高圧酸素療法、Ｎａ＋チャネルブロッカー（例えば、トピラメート）、ｉＧｌｕＲアンタゴニスト（例えば、ＭＫ−８０１、デキストロメトルファン、エリプロディル、およびフルピルチン）、抗酸化剤（例えば、ジメチルチオ尿素、ビタミンＥ、アルファ−リポ酸、スーパーオキシドジスムターゼ、カタラーゼ、  デスフェリオキサミン、マンニトール、アロプリノール、ドベシル酸カルシウム、フルピルチン、トリメタジジン、およびＥＧＢ−７６１）、抗炎症剤、毛様体ジアテルミー、毛様体冷凍術、眼濾過手術、排水弁の埋め込み、  抗血小板療法（例えば、アスピリン、チクロピジン、およびクロピドグレル）、抗凝血剤療法（例えば、ワルファリンおよびヘパリン）、ステロイド、全身または局所のコルチコステロイド（例えば、プレドニゾン、トリアムシノロン（Ｔｒｉｅｓｅｎｃｅ（登録商標））およびフルオシノロンアセトニド（Ｉｌｕｖｉｅｎ））、およびデキサメタゾン（Ｏｚｕｒｄｅｘ（登録商標））、ステロイド減量の免疫抑制剤（例えば、サイクロスポリン、アザチオプリン、シクロホスファミド、ミコフェノール酸塩、モフェチル、インフリキシマブおよびエタネルセプト）、栄養補助食品（例えば、ビタミンＣ、ビタミンＥ、ルテイン、ゼアキサンチン、亜鉛、葉酸、ビタミンＢ６、ビタミンＢ１２、およびゼアキサンチン）、硝子体切除、強膜バックル手術、および気体網膜復位術からなる群から選択される。一部の実施形態では、１つまたは複数の追加の活性作用因子は、血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）阻害剤である。一部の実施形態では、ＶＥＧＦ阻害剤は、ＶＥＧＦ−Ａ阻害剤である。一部の実施形態では、１つまたは複数の追加の活性作用因子は、胎盤増殖因子（ＰＩＧＦ）阻害剤である。一部の実施形態では、１つまたは複数の追加の活性作用因子は、ＶＥＧＦおよびＰＩＧＦを阻害する。一部の実施形態では、１つまたは複数の追加の活性作用因子は、アフリベルセプトである。一部の実施形態では、１つまたは複数の追加の活性作用因子は、ラニビズマブである。一部の実施形態では、１つまたは複数の追加の活性作用因子は、ベバシズマブである。一部の実施形態では、ＡｃｔＲＩＩアンタゴニストは、非経口投与によって投与される。一部の実施形態では、ＡｃｔＲＩＩアンタゴニストは、皮下投与によって投与される。一部の実施形態では、ＡｃｔＲＩＩアンタゴニストは、眼への投与によって投与される。一部の実施形態では、ＡｃｔＲＩＩアンタゴニストは、硝子体内投与によって投与される。
【００１１】
ある特定の態様では、本開示は、患者において黄斑変性症を処置する方法であって、有効量のＡｃｔＲＩＩアンタゴニストをそれを必要とする患者に投与することを含む、方法に関する。一部の実施形態では、本開示は、患者において黄斑変性症を予防する方法であって、有効量のＡｃｔＲＩＩアンタゴニストをそれを必要とする患者に投与することを含む、方法に関する。一部の実施形態では、本開示は、患者において黄斑変性症の重症度を低減する方法であって、有効量のＡｃｔＲＩＩアンタゴニストをそれを必要とする患者に投与することを含む、方法に関する。一部の実施形態では、黄斑変性症は、加齢性黄斑変性症（ＡＭＤ）である。一部の実施形態では、患者は、加齢性眼疾患研究（Ａｇｅ−Ｒｅｌａｔｅｄ  Ｅｙｅ  Ｄｉｓｅａｓｅ  Ｓｔｕｄｙ；ＡＲＥＤＳ）に基づきカテゴリー２のＡＭＤを有する。一部の実施形態では、患者は、加齢性眼疾患研究（ＡＲＥＤＳ）に基づきカテゴリー３のＡＭＤを有する。一部の実施形態では、患者は、加齢性眼疾患研究（ＡＲＥＤＳ）に基づきカテゴリー４のＡＭＤを有する。一部の実施形態では、ＡＭＤは、新生血管（滲出型）ＡＭＤである。一部の実施形態では、ＡＭＤは、非新生血管（乾燥）ＡＭＤである。一部の実施形態では、本方法は、ＡＲＥＤＳに基づきＡＭＤにおける少なくとも１段階の改善をもたらす（例えば、ＡＲＥＤＳに基づきカテゴリー４からカテゴリー３にＡＭＤを改善するか、ＡＲＥＤＳに基づきカテゴリー３からカテゴリー２にＡＭＤを改善するか、またはＡＲＥＤＳに基づきカテゴリー２からカテゴリー１にＡＭＤを改善する）。一部の実施形態では、本方法は、ＡＲＥＤＳに基づきＡＭＤにおける少なくとも２段階の改善をもたらす（例えば、ＡＲＥＤＳに基づきカテゴリー４からカテゴリー２にＡＭＤを改善するか、またはＡＲＥＤＳに基づきカテゴリー３からカテゴリー１にＡＭＤを改善する）。一部の実施形態では、患者は、Ｂｅｃｋｍａｎの黄斑調査分類委員会に関するイニシアティブ（Ｂｅｃｋｍａｎ  Ｉｎｉｔｉａｔｉｖｅ  ｆｏｒ  Ｍａｃｕｌａｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｃｌａｓｓｉｆｉｃａｔｉｏｎ  Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ；ＢＩＭＲＣＣ）分類に基づき少なくとも初期のＡＭＤを有する。例えば、Ｆｒｅｄｅｒｉｃｋ  Ｌ．  Ｆｅｒｒｉｓ  ＩＩＩら（２０１３年）Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ａｃａｄｅｍｙ  ｏｆ  Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌｏｇｙ．  １２０巻（４号）：８４４〜８５１頁を参照されたい。一部の実施形態では、患者は、ＢＩＭＲＣＣ分類に基づき中期ＡＭＤを有する。一部の実施形態では、患者は、ＢＩＭＲＣＣ分類に基づき後期ＡＭＤを有する。一部の実施形態では、本方法は、（ＢＩＭＲＣＣ）分類に基づきＡＭＤにおける少なくとも１段階の改善をもたらす（例えば、ＢＩＭＲＣＣに基づき後期ＡＭＤから中期ＡＭＤに改善するか、またはＢＩＭＲＣＣに基づき中期ＡＭＤから初期ＡＭＤに改善する）。一部の実施形態では、本方法は、（ＢＩＭＲＣＣ）分類に基づきＡＭＤにおける少なくとも２段階の改善をもたらす（例えば、ＢＩＭＲＣＣに基づき後期ＡＭＤから初期ＡＭＤに改善する）。一部の実施形態では、本方法は、視力を維持する。一部の実施形態では、本方法は、ベースラインと比較して視力（処置の開���前の患者における視力）を維持する。一部の実施形態では、本方法は、ベースラインと比較した場合、少なくとも３０、４５、６０、９０、１００、１２０、１４０、１６０、１８０、２００、２５０、３００、もしくは３６０日間、またはそれより多くの日数、視力を維持する。一部の実施形態では、本方法は、ベースラインと比較した場合、少なくとも１６０日間視力を維持する。一部の実施形態では、本方法は、ベースラインと比較した場合、少なくとも３６０日間視力を維持する。一部の実施形態では、患者の視覚損失は、３０、２９、２８、２７、２６、２５、２４、２３、２２、２１、２０、１９、１８、１７、１６、１５、１４、１３、１２、１１、１０、９、８、７、６、５、４、３、２、または１文字未満である。一部の実施形態では、患者の視覚損失は、１５文字未満である。一部の実施形態では、患者の視覚損失は、ベースライン（処置の開始前の患者における視力）と比較して、３０、２９、２８、２７、２６、２５、２４、２３、２２、２１、２０、１９、１８、１７、１６、１５、１４、１３、１２、１１、１０、９、８、７、６、５、４、３、２、または１文字未満である。一部の実施形態では、患者の視覚損失は、ベースライン（処置の開始前の患者における視力）と比較して１５文字未満である。一部の実施形態では、本方法は、視力を改善する。一部の実施形態では、本方法は、ベースラインと比較した場合、少なくとも３０、４５、６０、９０、１００、１２０、１４０、１６０、１８０、２００、２５０、３００、もしくは３６０日間、またはそれより多くの日数、視力を改善する。一部の実施形態では、本方法は、ベースラインと比較した場合、少なくとも１６０日間視力を改善する。一部の実施形態では、本方法は、ベースラインと比較した場合、少なくとも３６０日間視力を改善する。一部の実施形態では、本方法は、視力を改善し、患者の視力は、少なくとも５０、４０、３０、２９、２８、２７、２６、２５、２４、２３、２２、２１、２０、１９、１８、１７、１６、１５、１４、１３、１２、１１、１０、９、８、７、６、５、４、３、２、または１文字増加する。一部の実施形態では、本方法は、視力を改善し、患者の視力は、ベースライン（処置の開始前の患者における視力）と比較して、少なくとも５０、４０、３０、２９、２８、２７、２６、２５、２４、２３、２２、２１、２０、１９、１８、１７、１６、１５、１４、１３、１２、１１、１０、９、８、７、６、５、４、３、２、または１文字増加する。一部の実施形態では、本方法は、視力を改善し、患者の視力は、少なくとも１５文字増加する。一部の実施形態では、本方法は、視力を改善し、患者の視力は、ベースライン（処置の開始前の患者における視力）と比較して少なくとも１５文字増加する。一部の実施形態では、本方法は、網膜の厚さを低減する。一部の実施形態では、患者は、これまでにＶＥＧＦ阻害剤で処置されている。一部の実施形態では、患者は、ＶＥＧＦ阻害剤での処置に不応性または不寛容である。一部の実施形態では、ＶＥＧＦ阻害剤は、アフリベルセプトである。一部の実施形態では、ＶＥＧＦ阻害剤は、ラニビズマブである。一部の実施形態では、ＶＥＧＦ阻害剤は、ベ���シズマブである。一部の実施形態では、患者は、これまでにペガプタニブで処置されている。一部の実施形態では、患者は、ペガプタニブでの処置に不応性または不寛容である。一部の実施形態では、患者は、これまでにフルオシノロンアセトニドで処置されている。一部の実施形態では、患者は、フルオシノロンアセトニドでの処置に不応性または不寛容である。一部の実施形態では、患者は、眼または眼周囲の感染を有さない。一部の実施形態では、患者は、緑内障を有さない。一部の実施形態では、患者は、活動性の眼内炎症を有さない。一部の実施形態では、患者は、鎌状赤血球症を有さない。一部の実施形態では、患者は、鎌状赤血球症の合併症としての周辺部網膜虚血を有さない。一部の実施形態では、患者は、鎌状赤血球症の合併症としての増殖性鎌状赤血球網膜症を有さない。一部の実施形態では、患者は、鎌状赤血球症の合併症としての硝子体出血を有さない。一部の実施形態では、本方法は、ＡｃｔＲＩＩアンタゴニストを、眼の障害の重症度を処置、予防または低減するための１つまたは複数の追加の活性作用因子または支持療法と組み合わせて投与することをさらに含む。一部の実施形態では、１つまたは複数の支持療法は、外科手術、レーザー療法（例えば、光凝固）、抗血管新生療法［例えば、ＶＥＧＦ阻害剤、例えばベバシズマブ（Ａｖａｓｔｉｎ（登録商標））など、ラニビズマブ（Ｌｕｃｅｎｔｉｓ（登録商標））、およびアフリベルセプト（Ｅｙｌｅａ（登録商標））］、Ｃａ２＋阻害剤（例えば、フルナリジンおよびニフェジピン）、寒冷療法、高圧酸素療法、Ｎａ＋チャネルブロッカー（例えば、トピラメート）、ｉＧｌｕＲアンタゴニスト（例えば、ＭＫ−８０１、デキストロメトルファン、エリプロディル、およびフルピルチン）、抗酸化剤（例えば、ジメチルチオ尿素、ビタミンＥ、アルファ−リポ酸、スーパーオキシドジスムターゼ、カタラーゼ、  デスフェリオキサミン、マンニトール、アロプリノール、ドベシル酸カルシウム、フルピルチン、トリメタジジン、およびＥＧＢ−７６１）、抗炎症剤、毛様体ジアテルミー、毛様体冷凍術、眼濾過手術、排水弁の埋め込み、  抗血小板療法（例えば、アスピリン、チクロピジン、およびクロピドグレル）、抗凝血剤療法（例えば、ワルファリンおよびヘパリン）、ステロイド、全身または局所のコルチコステロイド（例えば、プレドニゾン、トリアムシノロン（Ｔｒｉｅｓｅｎｃｅ（登録商標））およびフルオシノロンアセトニド（Ｉｌｕｖｉｅｎ））、およびデキサメタゾン（Ｏｚｕｒｄｅｘ（登録商標））、ステロイド減量の免疫抑制剤（例えば、サイクロスポリン、アザチオプリン、シクロホスファミド、ミコフェノール酸塩、モフェチル、インフリキシマブおよびエタネルセプト）、栄養補助食品（例えば、ビタミンＣ、ビタミンＥ、ルテイン、ゼアキサンチン、亜鉛、葉酸、ビタミンＢ６、ビタミンＢ１２、およびゼアキサンチン）、硝子体切除、強膜バックル手術、および気体網膜復位術からなる群から選択される。一部の実施形態では、１つまたは複数の追加の活性作用因子は、血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）阻害剤である。一部の実施形態では、ＶＥＧＦ阻害剤は、ＶＥＧＦ−Ａ阻害剤である。一部の実施形態では、１つまたは複数の追加の活性作用因子は、胎盤増殖因子（ＰＩＧＦ）阻害剤である。一部の実施形態では、１つまたは複数の追加の活性作用因子は、ＶＥＧＦおよびＰＩＧＦを阻害する。一部の実施形態では、１つまたは複数の追加の活性作用因子は、アフリベルセプトである。一部の実施形態では、１つまたは複数の追加の活性作用因子は、ラニビズマブである。一部の実施形態では、１つまたは複数の追加の活性作用因子は、ベバシズマブである。一部の実施形態では、ＡｃｔＲＩＩアンタゴニストは、非経口投与によって投与される。一部の実施形態では、ＡｃｔＲＩＩアンタゴニストは、皮下投与によって投与される。一部の実施形態では、ＡｃｔＲＩＩアンタゴニストは、眼への投与によって投与される。一部の実施形態では、ＡｃｔＲＩＩアンタゴニストは、硝子体内投与によって投与される。
【００１２】
ある特定の形態では、本開示は、患者において黄斑浮腫を処置する方法であって、有効量のＡｃｔＲＩＩアンタゴニストをそれを必要とする患者に投与することを含む、方法に関する。一部の実施形態では、本開示は、患者において黄斑浮腫を予防する方法であって、有効量のＡｃｔＲＩＩアンタゴニストをそれを必要とする患者に投与することを含む、方法に関する。一部の実施形態では、本開示は、患者において黄斑浮腫の重症度を低減する方法であって、有効量のＡｃｔＲＩＩアンタゴニストをそれを必要とする患者に投与することを含む、方法に関する。一部の実施形態では、患者は、網膜静脈閉塞症（ＲＶＯ）後の黄斑浮腫を有する。一部の実施形態では、ＲＶＯは、分枝ＲＶＯである。一部の実施形態では、ＲＶＯは、中心ＲＶＯである。一部の実施形態では、患者は、分枝および中心ＲＶＯの両方を有する。一部の実施形態では、ＲＶＯは、半中心ＲＶＯである。一部の実施形態では、黄斑浮腫は、糖尿病黄斑浮腫である。一部の実施形態では、本方法は、視力を維持する。一部の実施形態では、本方法は、ベースラインと比較して視力（処置の開始前の患者における視力）を維持する。一部の実施形態では、本方法は、ベースラインと比較した場合、少なくとも３０、４５、６０、９０、１００、１２０、１４０、１６０、１８０、２００、２５０、３００、もしくは３６０日間、またはそれより多くの日数、視力を維持する。一部の実施形態では、本方法は、ベースラインと比較した場合、少なくとも１６０日間視力を維持する。一部の実施形態では、本方法は、ベースラインと比較した場合、少なくとも３６０日間視力を維持する。一部の実施形態では、患者の視覚損失は、３０、２９、２８、２７、２６、２５、２４、２３、２２、２１、２０、１９、１８、１７、１６、１５、１４、１３、１２、１１、１０、９、８、７、６、５、４、３、２、または１文字未満である。一部の実施形態では、患者の視覚損失は、１５文字未満である。一部の実施形態では、患者の視覚損失は、ベースライン（処置の開始前の患者における視力）と比較して、３０、２９、２８、２７、２６、２５、２４、２３、２２、２１、２０、１９、１８、１７、１６、１５、１４、１３、１２、１１、１０、９、８、７、６、５、４、３、２、または１文字未満である。一部の実施形態では、患者の視覚損失は、ベースライン（処置の開始前の患者における視力）と比較して１５文字未満である。一部の実施形態では、本方法は、視力を改善する。一部の実施形態では、本方法は、ベースラインと比較した場合、少なくとも３０、４５、６０、９０、１００、１２０、１４０、１６０、１８０、２００、２５０、３００、もしくは３６０日間、またはそれより多くの日数、視力を改善する。一部の実施形態では、本方法は、ベースラインと比較した場合、少なくとも１６０日間視力を改善する。一部の実施形態では、本方法は、ベースラインと比較した場合、少なくとも３６０日間視力を改善する。一部の実施形態では、本方法は、視力を改善し、患者の視力は、少なくとも５０、４０、３０、２９、２８、２７、２６、２５、２４、２３、２２、２１、２０、１９、１８、１７、１６、１５、１４、１３、１２、１１、１０、９、８、７、６、５、４、３、２、または１文字増加する。一部の実施形態では、本方法は、視力を改善し、患者の視力は、ベースライン（処置の開始前の患者における視力）と比較して、少なくとも５０、４０、３０、２９、２８、２７、２６、２５、２４、２３、２２、２１、２０、１９、１８、１７、１６、１５、１４、１３、１２、１１、１０、９、８、７、６、５、４、３、２、または１文字増加する。一部の実施形態では、本方法は、視力を改善し、患者の視力は、少なくとも１５文字増加する。一部の実施形態では、本方法は、視力を改善し、患者の視力は、ベースライン（処置の開始前の患者における視力）と比較して少なくとも１５文字増加する。一部の実施形態では、本方法は、網膜の厚さを低減する。一部の実施形態では、患者は、これまでにＶＥＧＦ阻害剤で処置されている。一部の実施形態では、患者は、ＶＥＧＦ阻害剤での処置に不応性または不寛容である。一部の実施形態では、ＶＥＧＦ阻害剤は、アフリベルセプトである。一部の実施形態では、ＶＥＧＦ阻害剤は、ラニビズマブである。一部の実施形態では、ＶＥＧＦ阻害剤は、ベバシズマブである。一部の実施形態では、患者は、これまでにペガプタニブで処置されている。一部の実施形態では、患者は、ペガプタニブでの処置に不応性または不寛容である。一部の実施形態では、患者は、これまでにフルオシノロンアセトニドで処置されている。一部の実施形態では、患者は、フルオシノロンアセトニドでの処置に不応性または不寛容である。一部の実施形態では、患者は、眼または眼周囲の感染を有さない。一部の実施形態では、患者は、緑内障を有さない。一部の実施形態では、患者は、活動性の眼内炎症を有さない。一部の実施形態では、患者は、鎌状赤血球症を有さない。一部の実施形態では、患者は、鎌状赤血球症の合併症としての周辺部網膜虚血を有さない。一部の実施形態では、患者は、鎌状赤血球症の合併症としての増殖性鎌状赤血球網膜症を有さない。一部の実施形態では、患者は、鎌状赤血球症の合併症としての硝子体出血を有さない。一部の実施形態では、本方法は、ＡｃｔＲＩＩアンタゴニストを、眼の障害の重症度を処置、予防または低減するための１つまたは複数の追加の活性作用因子または支持療法と組み合わせて投与することをさらに含む。一部の実施形態では、１つまたは複数の支持療法は、外科手術、レーザー療法（例えば、光凝固）、抗血管新生療法［例えば、ＶＥＧＦ阻害剤、例えばベバシズマブ（Ａｖａｓｔｉｎ（登録商標））など、ラニビズマブ（Ｌｕｃｅｎｔｉｓ（登録商標））、およびアフリベルセプト（Ｅｙｌｅａ（登録商標））］、Ｃａ２＋阻害剤（例えば、フルナリジンおよびニフェジピン）、寒冷療法、高圧酸素療法、Ｎａ＋チャネルブロッカー（例えば、トピラメート）、ｉＧｌｕＲアンタゴニスト（例えば、ＭＫ−８０１、デキストロメトルファン、エリプロディル、およびフルピルチン）、抗酸化剤（例えば、ジメチルチオ尿素、ビタミンＥ、アルファ−リポ酸、スーパーオキシドジスムターゼ、カタラーゼ、  デスフェリオキサミン、マンニトール、アロプリノール、ドベシル酸カルシウム、フルピルチン、トリメタジジン、およびＥＧＢ−７６１）、抗炎症剤、毛様体ジアテ���ミー、毛様体冷凍術、眼濾過手術、排水弁の埋め込み、  抗血小板療法（例えば、アスピリン、チクロピジン、およびクロピドグレル）、抗凝血剤療法（例えば、ワルファリンおよびヘパリン）、ステロイド、全身または局所のコルチコステロイド（例えば、プレドニゾン、トリアムシノロン（Ｔｒｉｅｓｅｎｃｅ（登録商標））およびフルオシノロンアセトニド（Ｉｌｕｖｉｅｎ））、およびデキサメタゾン（Ｏｚｕｒｄｅｘ（登録商標））、ステロイド減量の免疫抑制剤（例えば、サイクロスポリン、アザチオプリン、シクロホスファミド、ミコフェノール酸塩、モフェチル、インフリキシマブおよびエタネルセプト）、栄養補助食品（例えば、ビタミンＣ、ビタミンＥ、ルテイン、ゼアキサンチン、亜鉛、葉酸、ビタミンＢ６、ビタミンＢ１２、およびゼアキサンチン）、硝子体切除、強膜バックル手術、および気体網膜復位術からなる群から選択される。一部の実施形態では、１つまたは複数の追加の活性作用因子は、血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）阻害剤である。一部の実施形態では、ＶＥＧＦ阻害剤は、ＶＥＧＦ−Ａ阻害剤である。一部の実施形態では、１つまたは複数の追加の活性作用因子は、胎盤増殖因子（ＰＩＧＦ）阻害剤である。一部の実施形態では、１つまたは複数の追加の活性作用因子は、ＶＥＧＦおよびＰＩＧＦを阻害する。一部の実施形態では、１つまたは複数の追加の活性作用因子は、アフリベルセプトである。一部の実施形態では、１つまたは複数の追加の活性作用因子は、ラニビズマブである。一部の実施形態では、１つまたは複数の追加の活性作用因子は、ベバシズマブである。一部の実施形態では、ＡｃｔＲＩＩアンタゴニストは、非経口投与によって投与される。一部の実施形態では、ＡｃｔＲＩＩアンタゴニストは、皮下投与によって投与される。一部の実施形態では、ＡｃｔＲＩＩアンタゴニストは、眼への投与によって投与される。一部の実施形態では、ＡｃｔＲＩＩアンタゴニストは、硝子体内投与によって投与される。
【００１３】
ある特定の態様では、本開示は、患者においてＲＶＯを処置する方法であって、有効量のＡｃｔＲＩＩアンタゴニストをそれを必要とする患者に投与することを含む、方法に関する。一部の実施形態では、本開示は、患者においてＲＶＯを予防する方法であって、有効量のＡｃｔＲＩＩアンタゴニストをそれを必要とする患者に投与することを含む、方法に関する。一部の実施形態では、本開示は、患者においてＲＶＯの重症度を低減する方法であって、有効量のＡｃｔＲＩＩアンタゴニストをそれを必要とする患者に投与することを含む、方法に関する。一部の実施形態では、ＲＶＯは、分枝ＲＶＯである。一部の実施形態では、ＲＶＯは、中心ＲＶＯである。一部の実施形態では、患者は、分枝および中心ＲＶＯの両方を有する。一部の実施形態では、患者は、半中心ＲＶＯを有する。一部の実施形態では、患者は、網膜静脈閉塞症（ＲＶＯ）後の黄斑浮腫を有する。一部の実施形態では、本方法は、視力を維持する。一部の実施形態では、本方法は、ベースラインと比較して視力（処置の開始前の患者における視力）を維持する。一部の実施形態では、本方法は、ベースラインと比較した場合、少なくとも３０、４５、６０、９０、１００、１２０、１４０、１６０、１８０、２００、２５０、３００、もしくは３６０日間、またはそれより多くの日数、視力を維持する。一部の実施形態では、本方法は、ベースラインと比較した場合、少なくとも１６０日間視力を維持する。一部の実施形態では、本方法は、ベースラインと比較した場合、少なくとも３６０日間視力を維持する。一部の実施形態では、患者の視覚損失は、３０、２９、２８、２７、２６、２５、２４、２３、２２、２１、２０、１９、１８、１７、１６、１５、１４、１３、１２、１１、１０、９、８、７、６、５、４、３、２、または１文字未満である。一部の実施形態では、患者の視覚損失は、１５文字未満である。一部の実施形態では、患者の視覚損失は、ベースライン（処置の開始前の患者における視力）と比較して、３０、２９、２８、２７、２６、２５、２４、２３、２２、２１、２０、１９、１８、１７、１６、１５、１４、１３、１２、１１、１０、９、８、７、６、５、４、３、２、または１文字未満である。一部の実施形態では、患者の視覚損失は、ベースライン（処置の開始前の患者における視力）と比較して１５文字未満である。一部の実施形態では、本方法は、視力を改善する。一部の実施形態では、本方法は、ベースラインと比較した場合、少なくとも３０、４５、６０、９０、１００、１２０、１４０、１６０、１８０、２００、２５０、３００、もしくは３６０日間、またはそれより多くの日数、視力を改善する。一部の実施形態では、本方法は、ベースラインと比較した場合、少なくとも１６０日間視力を改善する。一部の実施形態では、本方法は、ベースラインと比較した場合、少なくとも３６０日間視力を改善する。一部の実施形態では、本方法は、視力を改善し、患者の視力は、少なくとも５０、４０、３０、２９、２８、２７、２６、２５、２４、２３、２２、２１、２０、１９、１８、１７、１６、１５、１４、１３、１２、１１、１０、９、８、７、６、５、４、３、２、または１文字増加する。一部の実施形態では、本方法は、視力を改善し、患者の視力は、ベースライン（処置の開始前の患者における視力）と比較して、少なくとも５０、４０、３０、２９、２８、２７、２６、２５、２４、２３、２２、２１、２０、１９、１８、１７、１６、１５、１４、１３、１２、１１、１０、９、８、７、６、５、４、３、２、または１文字増加する。一部の実施形態では、本方法は、視力を改善し、患者の視力は、少なくとも１５文字増加する。一部の実施形態では、本方法は、視力を改善し、患者の視力は、ベースライン（処置の開始前の患者における視力）と比較して少なくとも１５文字増加する。一部の実施形態では、本方法は、網膜の厚さを低減する。一部の実施形態では、患者は、これまでにＶＥＧＦ阻害剤で処置されている。一部の実施形態では、患者は、ＶＥＧＦ阻害剤での処置に不応性または不寛容である。一部の実施形態では、ＶＥＧＦ阻害剤は、アフリベルセプトである。一部の実施形態では、ＶＥＧＦ阻害剤は、ラニビズマブである。一部の実施形態では、ＶＥＧＦ阻害剤は、ベバシズマブである。一部の実施形態では、患者は、これまでにペガプタニブで処置されている。一部の実施形態では、患者は、ペガプタニブでの処置に不応性または不寛容である。一部の実施形態では、患者は、これまでにフルオシノロンアセトニドで処置されている。一部の実施形態では、患者は、フルオシノロンアセトニドでの処置に不応性または不寛容である。一部の実施形態では、患者は、眼または眼周囲の感染を有さない。一部の実施形態では、患者は、緑内障を有さない。一部の実施形態では、患者は、活動性の眼内炎症を有さない。一部の実施形態では、患者は、鎌状赤血球症を有さない。一部の実施形態では、患者は、鎌状赤血球症の合併症としての周辺部網膜虚血を有さない。一部の実施形態では、患者は、鎌状赤血球症の合併症としての増殖性鎌状赤血球網膜症を有さない。一部の実施形態では、患者は、鎌状赤血球症の合併症としての硝子体出血を有さない。一部の実施形態では、本方法は、ＡｃｔＲＩＩアンタゴニストを、眼の障害の重症度を処置、予防または低減するための１つまたは複数の追加の活性作用因子または支持療法と組み合わせて投与することをさらに含む。一部の実施形態では、１つまたは複数の支持療法は、外科手術、レーザー療法（例えば、光凝固）、抗血管新生療法［例えば、ＶＥＧＦ阻害剤、例えばベバシズマブ（Ａｖａｓｔｉｎ（登録商標））など、ラニビズマブ（Ｌｕｃｅｎｔｉｓ（登録商標））、およびアフリベルセプト（Ｅｙｌｅａ（登録商標））］、Ｃａ２＋阻害剤（例えば、フルナリジンおよびニフェジピン）、寒冷療法、高圧酸素療法、Ｎａ＋チャネルブロッカー（例えば、トピラメート）、ｉＧｌｕＲアンタゴニスト（例えば、ＭＫ−８０１、デキストロメトルファン、エリプロディル、およびフルピルチン）、抗酸化剤（例えば、ジメチルチオ尿素、ビタミンＥ、アルファ−リポ酸、スーパーオキシドジスムターゼ、カタラーゼ、  デスフェリオキサミン、マンニトール、アロプリノール、ドベシル酸カルシウム、フルピルチン、トリメタジジン、およびＥＧＢ−７６１）、抗炎症剤、毛様体ジアテルミー、毛様体冷凍術、眼濾過手術、排水弁の埋め込み、  抗血小��療法（例えば、アスピリン、チクロピジン、およびクロピドグレル）、抗凝血剤療法（例えば、ワルファリンおよびヘパリン）、ステロイド、全身または局所のコルチコステロイド（例えば、プレドニゾン、トリアムシノロン（Ｔｒｉｅｓｅｎｃｅ（登録商標））およびフルオシノロンアセトニド（Ｉｌｕｖｉｅｎ））、およびデキサメタゾン（Ｏｚｕｒｄｅｘ（登録商標））、ステロイド減量の免疫抑制剤（例えば、サイクロスポリン、アザチオプリン、シクロホスファミド、ミコフェノール酸塩、モフェチル、インフリキシマブおよびエタネルセプト）、栄養補助食品（例えば、ビタミンＣ、ビタミンＥ、ルテイン、ゼアキサンチン、亜鉛、葉酸、ビタミンＢ６、ビタミンＢ１２、およびゼアキサンチン）、硝子体切除、強膜バックル手術、および気体網膜復位術からなる群から選択される。一部の実施形態では、１つまたは複数の追加の活性作用因子は、血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）阻害剤である。一部の実施形態では、ＶＥＧＦ阻害剤は、ＶＥＧＦ−Ａ阻害剤である。一部の実施形態では、１つまたは複数の追加の活性作用因子は、胎盤増殖因子（ＰＩＧＦ）阻害剤である。一部の実施形態では、１つまたは複数の追加の活性作用因子は、ＶＥＧＦおよびＰＩＧＦを阻害する。一部の実施形態では、１つまたは複数の追加の活性作用因子は、アフリベルセプトである。一部の実施形態では、１つまたは複数の追加の活性作用因子は、ラニビズマブである。一部の実施形態では、１つまたは複数の追加の活性作用因子は、ベバシズマブである。一部の実施形態では、ＡｃｔＲＩＩアンタゴニストは、非経口投与によって投与される。一部の実施形態では、ＡｃｔＲＩＩアンタゴニストは、皮下投与によって投与される。一部の実施形態では、ＡｃｔＲＩＩアンタゴニストは、眼への投与によって投与される。一部の実施形態では、ＡｃｔＲＩＩアンタゴニストは、硝子体内投与によって投与される。
【００１４】
ある特定の態様では、本開示は、患者において網膜症を処置する方法であって、有効量のＡｃｔＲＩＩアンタゴニストをそれを必要とする患者に投与することを含む、方法に関する。一部の実施形態では、本開示は、患者において網膜症を予防する方法であって、有効量のＡｃｔＲＩＩアンタゴニストをそれを必要とする患者に投与することを含む、方法に関する。一部の実施形態では、本開示は、患者において網膜症の重症度を低減する方法であって、有効量のＡｃｔＲＩＩアンタゴニストをそれを必要とする患者に投与することを含む、方法に関する。一部の実施形態では、網膜症は、糖尿病性網膜症である。一部の実施形態では、患者は、糖尿病黄斑浮腫を有する。一部の実施形態では、患者は、糖尿病性網膜症の早期処置研究（Ｅａｒｌｙ  Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  Ｄｉａｂｅｔｉｃ  Ｒｅｔｉｎｏｐａｔｈｙ  Ｓｔｕｄｙ；ＥＴＤＲＳ）分類に基づき、少なくとも軽度非増殖性糖尿病性網膜症（ＮＰＤＲ）を有する。一部の実施形態では、患者は、ＥＴＤＲＳ分類に基づき中程度のＮＰＤＲを有する。一部の実施形態では、患者は、ＥＴＤＲＳ分類に基づき重度のＮＰＤＲを有する。一部の実施形態では、患者は、ＥＴＤＲＳ分類に基づき極めて重度のＮＰＤＲを有する。一部の実施形態では、患者は、ＥＴＤＲＳ分類に基づき早期増殖性糖尿病性網膜症（ＰＤＲ）を有する。一部の実施形態では、患者は、ＥＴＤＲＳ分類に基づき高リスクＰＤＲを有する。一部の実施形態では、患者は、ＥＴＤＲＳ分類に基づき進行したＰＤＲを有する。一部の実施形態では、患者は、ＥＴＤＲＳ分類に基づき臨床的に有意な黄斑変性症を有する進行したＰＤＲを有する。一部の実施形態では、本方法は、ＥＴＤＲＳ分類に基づき、糖尿病性網膜症において少なくとも１段階の改善（例えば、臨床的に有意な黄斑変性症を有する進行したＰＤＲから有意な黄斑変性症がない進行したＰＤＲへの改善、進行したＰＤＲから高リスクＰＤＲへの改善、高リスクＰＤＲから早期ＰＤＲへの改善、早期ＰＤＲから極めて重度のＮＰＤＲへの改善、極めて重度のＮＰＤＲから重度のＮＰＤＲへの改善、重度のＮＰＤＲから中程度のＮＰＤＲへの改善、または中程度のＮＰＤＲから軽度ＮＰＤＲへの改善）をもたらす。一部の実施形態では、本方法は、ＥＴＤＲＳ分類に基づき、糖尿病性網膜症において少なくとも２段階の改善（例えば、臨床的に有意な黄斑変性症を有する進行したＰＤＲから高リスクＰＤＲへの改善、進行したＰＤＲから早期ＰＤＲへの改善、高リスクＰＤＲから極めて重度のＮＰＤＲへの改善、早期ＰＤＲから重度のＮＰＤＲへの改善、極めて重度のＮＰＤＲから中程度のＮＰＤＲへの改善、重度のＮＰＤＲから軽度ＮＰＤＲへの改善、または中程度のＮＰＤＲから明らかな網膜症がない状態への改善）をもたらす。一部の実施形態では、患者は、ＥＴＤＲＳの糖尿病性網膜症重症度スケール（ＥＴＤＲＳ  Ｄｉａｂｅｔｉｃ  Ｒｅｔｉｎｏｐａｔｈｙ  Ｓｅｖｅｒｉｔｙ  Ｓｃａｌｅ；ＥＴＤＲＳ−ＤＲＳＳ）分類に基づき、少なくとも軽度ＮＰＤＲを有する。一部の実施形態では、患者は、ＥＴＤＲＳ−ＤＲＳＳ分類に基づき中程度のＮＰＤＲを有する。一部の実施形態では、患者は、ＥＴＤＲＳ−ＤＲＳＳ分類に基づき重度のＮ��ＤＲを有する。一部の実施形態では、患者は、ＥＴＤＲＳ−ＤＲＳＳ分類に基づきＰＤＲを有する。一部の実施形態では、患者は、ＥＴＤＲＳ−ＤＲＳＳ分類に基づき糖尿病黄斑浮腫を有さないＰＤＲを有する。一部の実施形態では、患者は、ＥＴＤＲＳ−ＤＲＳＳ分類に基づき糖尿病黄斑浮腫を有するＰＤＲを有する。一部の実施形態では、本方法は、ＥＴＤＲＳ−ＤＲＳＳ分類に基づき、糖尿病性網膜症において少なくとも１段階の改善（例えば、糖尿病黄斑浮腫を有するＰＤＲから糖尿病黄斑浮腫がないＰＤＲへの改善、糖尿病黄斑浮腫がないＰＤＲからＰＤＲへの改善、ＰＤＲから重度のＮＰＤＲへの改善、重度のＮＰＤＲから中程度のＮＰＤＲへの改善、中程度のＮＰＤＲから軽度ＮＰＤＲへの改善、または軽度のＮＰＤＲから明らかな網膜症がない状態への改善）をもたらす。一部の実施形態では、本方法は、ＥＴＤＲＳ−ＤＲＳＳ分類に基づき、糖尿病性網膜症において少なくとも２段階の改善（例えば、糖尿病黄斑浮腫を有するＰＤＲからＰＤＲへの改善、糖尿病黄斑浮腫がないＰＤＲから重度のＮＰＤＲへの改善、ＰＤＲから中程度のＮＰＤＲへの改善、重度のＮＰＤＲから軽度ＮＰＤＲへの改善、中程度のＮＰＤＲから明らかな網膜症がない状態への改善、または軽度のＮＰＤＲから明らかな網膜症がない状態への改善）をもたらす。一部の実施形態では、本方法は、視力を維持する。一部の実施形態では、本方法は、ベースラインと比較して視力（処置の開始前の患者における視力）を維持する。一部の実施形態では、本方法は、ベースラインと比較した場合、少なくとも３０、４５、６０、９０、１００、１２０、１４０、１６０、１８０、２００、２５０、３００、もしくは３６０日間、またはそれより多くの日数、視力を維持する。一部の実施形態では、本方法は、ベースラインと比較した場合、少なくとも１６０日間視力を維持する。一部の実施形態では、本方法は、ベースラインと比較した場合、少なくとも３６０日間視力を維持する。一部の実施形態では、患者の視覚損失は、３０、２９、２８、２７、２６、２５、２４、２３、２２、２１、２０、１９、１８、１７、１６、１５、１４、１３、１２、１１、１０、９、８、７、６、５、４、３、２、または１文字未満である。一部の実施形態では、患者の視覚損失は、１５文字未満である。一部の実施形態では、患者の視覚損失は、ベースライン（処置の開始前の患者における視力）と比較して、３０、２９、２８、２７、２６、２５、２４、２３、２２、２１、２０、１９、１８、１７、１６、１５、１４、１３、１２、１１、１０、９、８、７、６、５、４、３、２、または１文字未満である。一部の実施形態では、患者の視覚損失は、ベースライン（処置の開始前の患者における視力）と比較して１５文字未満である。一部の実施形態では、本方法は、視力を改善する。一部の実施形態では、本方法は、ベースラインと比較した場合、少なくとも３０、４５、６０、９０、１００、１２０、１４０、１６０、１８０、２００、２５０、３００、もしくは３６０日間、またはそれより多くの日数、視力を改善する。一部の実施形態では、本方法は、ベースラインと比較した場合、少なくとも１６０日間視力を改善する。一部の実施形態で��、本方法は、ベースラインと比較した場合、少なくとも３６０日間視力を改善する。一部の実施形態では、本方法は、視力を改善し、患者の視力は、少なくとも５０、４０、３０、２９、２８、２７、２６、２５、２４、２３、２２、２１、２０、１９、１８、１７、１６、１５、１４、１３、１２、１１、１０、９、８、７、６、５、４、３、２、または１文字増加する。一部の実施形態では、本方法は、視力を改善し、患者の視力は、ベースライン（処置の開始前の患者における視力）と比較して、少なくとも５０、４０、３０、２９、２８、２７、２６、２５、２４、２３、２２、２１、２０、１９、１８、１７、１６、１５、１４、１３、１２、１１、１０、９、８、７、６、５、４、３、２、または１文字増加する。一部の実施形態では、本方法は、視力を改善し、患者の視力は、少なくとも１５文字増加する。一部の実施形態では、本方法は、視力を改善し、患者の視力は、ベースライン（処置の開始前の患者における視力）と比較して少なくとも１５文字増加する。一部の実施形態では、本方法は、網膜の厚さを低減する。一部の実施形態では、患者は、これまでにＶＥＧＦ阻害剤で処置されている。一部の実施形態では、患者は、ＶＥＧＦ阻害剤での処置に不応性または不寛容である。一部の実施形態では、ＶＥＧＦ阻害剤は、アフリベルセプトである。一部の実施形態では、ＶＥＧＦ阻害剤は、ラニビズマブである。一部の実施形態では、ＶＥＧＦ阻害剤は、ベバシズマブである。一部の実施形態では、患者は、これまでにペガプタニブで処置されている。一部の実施形態では、患者は、ペガプタニブでの処置に不応性または不寛容である。一部の実施形態では、患者は、これまでにフルオシノロンアセトニドで処置されている。一部の実施形態では、患者は、フルオシノロンアセトニドでの処置に不応性または不寛容である。一部の実施形態では、患者は、眼または眼周囲の感染を有さない。一部の実施形態では、患者は、緑内障を有さない。一部の実施形態では、患者は、活動性の眼内炎症を有さない。一部の実施形態では、患者は、鎌状赤血球症を有さない。一部の実施形態では、患者は、鎌状赤血球症の合併症としての周辺部網膜虚血を有さない。一部の実施形態では、患者は、鎌状赤血球症の合併症としての増殖性鎌状赤血球網膜症を有さない。一部の実施形態では、患者は、鎌状赤血球症の合併症としての硝子体出血を有さない。一部の実施形態では、本方法は、ＡｃｔＲＩＩアンタゴニストを、眼の障害の重症度を処置、予防または低減するための１つまたは複数の追加の活性作用因子または支持療法と組み合わせて投与することをさらに含む。一部の実施形態では、１つまたは複数の支持療法は、外科手術、レーザー療法（例えば、光凝固）、抗血管新生療法［例えば、ＶＥＧＦ阻害剤、例えばベバシズマブ（Ａｖａｓｔｉｎ（登録商標））など、ラニビズマブ（Ｌｕｃｅｎｔｉｓ（登録商標））、およびアフリベルセプト（Ｅｙｌｅａ（登録商標））］、Ｃａ２＋阻害剤（例えば、フルナリジンおよびニフェジピン）、寒冷療法、高圧酸素療法、Ｎａ＋チャネルブロッカー（例えば、トピラメート）、ｉＧｌｕＲアンタゴニスト（例えば、ＭＫ−８０１、デキストロメトルファン、エリプロデ��ル、およびフルピルチン）、抗酸化剤（例えば、ジメチルチオ尿素、ビタミンＥ、アルファ−リポ酸、スーパーオキシドジスムターゼ、カタラーゼ、  デスフェリオキサミン、マンニトール、アロプリノール、ドベシル酸カルシウム、フルピルチン、トリメタジジン、およびＥＧＢ−７６１）、抗炎症剤、毛様体ジアテルミー、毛様体冷凍術、眼濾過手術、排水弁の埋め込み、  抗血小板療法（例えば、アスピリン、チクロピジン、およびクロピドグレル）、抗凝血剤療法（例えば、ワルファリンおよびヘパリン）、ステロイド、全身または局所のコルチコステロイド（例えば、プレドニゾン、トリアムシノロン（Ｔｒｉｅｓｅｎｃｅ（登録商標））およびフルオシノロンアセトニド（Ｉｌｕｖｉｅｎ））、およびデキサメタゾン（Ｏｚｕｒｄｅｘ（登録商標））、ステロイド減量の免疫抑制剤（例えば、サイクロスポリン、アザチオプリン、シクロホスファミド、ミコフェノール酸塩、モフェチル、インフリキシマブおよびエタネルセプト）、栄養補助食品（例えば、ビタミンＣ、ビタミンＥ、ルテイン、ゼアキサンチン、亜鉛、葉酸、ビタミンＢ６、ビタミンＢ１２、およびゼアキサンチン）、硝子体切除、強膜バックル手術、および気体網膜復位術からなる群から選択される。一部の実施形態では、１つまたは複数の追加の活性作用因子は、血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）阻害剤である。一部の実施形態では、ＶＥＧＦ阻害剤は、ＶＥＧＦ−Ａ阻害剤である。一部の実施形態では、１つまたは複数の追加の活性作用因子は、胎盤増殖因子（ＰＩＧＦ）阻害剤である。一部の実施形態では、１つまたは複数の追加の活性作用因子は、ＶＥＧＦおよびＰＩＧＦを阻害する。一部の実施形態では、１つまたは複数の追加の活性作用因子は、アフリベルセプトである。一部の実施形態では、１つまたは複数の追加の活性作用因子は、ラニビズマブである。一部の実施形態では、１つまたは複数の追加の活性作用因子は、ベバシズマブである。一部の実施形態では、ＡｃｔＲＩＩアンタゴニストは、非経口投与によって投与される。一部の実施形態では、ＡｃｔＲＩＩアンタゴニストは、皮下投与によって投与される。一部の実施形態では、ＡｃｔＲＩＩアンタゴニストは、眼への投与によって投与される。一部の実施形態では、ＡｃｔＲＩＩアンタゴニストは、硝子体内投与によって投与される。
【００１５】
本開示のＡｃｔＲＩＩアンタゴニストとしては、例えば、ＡｃｔＲＩＩ受容体（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡおよび／またはＡｃｔＲＩＩＢ受容体）シグナル伝達経路を阻害できる作用因子（例えば、例えばＳｍａｄ１、２、３、５、および／または８などの細胞内媒介物質を介したシグナル伝達の活性化）；１つまたは複数のＡｃｔＲＩＩリガンド［例えば、ＧＤＦ１１、ＧＤＦ８、アクチビン（アクチビンＡ、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、アクチビンＣ、アクチビンＥ）、ＢＭＰ６、ＧＤＦ３、ＢＭＰ１０、および／またはＢＭＰ９］の、例えばＡｃｔＲＩＩ受容体への結合および／またはその活性化を阻害できる作用因子；ＡｃｔＲＩＩリガンドおよび／またはＡｃｔＲＩＩ受容体の発現（例えば、転写、翻訳、細胞分泌、またはそれらの組み合わせ）を阻害する作用因子；およびＡｃｔＲＩＩシグナル伝達経路の１つまたは複数の細胞内媒介物質（例えば、Ｓｍａｄ１、２、３、５、および／または８）を阻害できる作用因子が挙げられる。このような作用因子としては、例えば、ＡｃｔＲＩＩ（ＡｃｔＲＩＩＡまたはＡｃｔＲＩＩＢ）ポリペプチドまたはＡｃｔＲＩＩポリペプチドの組み合わせ、加えてそれらの改変体（例えば、ＧＤＦトラップポリペプチド）；１つまたは複数のＡｃｔＲＩＩリガンドおよび／またはＡｃｔＲＩＩ受容体に結合する抗体または抗体の組み合わせ；１つまたは複数のＡｃｔＲＩＩリガンドおよび／またはＡｃｔＲＩＩ受容体の発現を阻害するＲＮＡまたはＲＮＡの組み合わせ；１つまたは複数のＡｃｔＲＩＩリガンドおよび／またはＡｃｔＲＩＩ受容体の発現を阻害する小分子または小分子の組み合わせ、加えてそれらの組み合わせが挙げられる。
【００１６】
ある特定の態様では、本明細書に記載される方法および使用に従って使用される好ましいＡｃｔＲＩＩアンタゴニストまたはアンタゴニストの組み合わせは、少なくともＧＤＦ１１媒介シグナル伝達（例えば、Ｓｍａｄ２／３シグナル伝達）を阻害する作用因子である。リガンド媒介シグナル伝達への作用は、例えば細胞ベースのアッセイ、例えば本明細書に記載されるものなどを使用して決定することができる。したがって、本開示のＡｃｔＲＩＩ阻害剤または阻害剤の組み合わせは、少なくともＧＤＦ１１に結合することができる。リガンドの結合活性は、例えば結合親和性アッセイ、例えば本明細書に記載されるものなどを使用して決定することができる。一部の実施形態では、本開示のＡｃｔＲＩＩ阻害剤または阻害剤の組み合わせは、少なくともＧＤＦ１１に、少なくとも１×１０−７Ｍ（例えば、少なくとも１×１０−８Ｍ、少なくとも１×１０−９Ｍ、少なくとも１×１０−１０Ｍ、少なくとも１×１０−１１Ｍ、または少なくとも１×１０−１２Ｍ）のＫＤで結合する。
【００１７】
他の態様では、本明細書に記載される方法および使用に従って使用される好ましいＡｃｔＲＩＩアンタゴニストまたはアンタゴニストの組み合わせは、少なくともＧＤＦ８媒介シグナル伝達（例えば、Ｓｍａｄ２／３シグナル伝達）を阻害する作用因子である。したがって、本開示のＡｃｔＲＩＩ阻害剤または阻害剤の組み合わせは、少なくともＧＤＦ８に結合することができる。一部の実施形態では、本開示のＡｃｔＲＩＩ阻害剤または阻害剤の組み合わせは、少なくともＧＤＦ８に、少なくとも１×１０−７Ｍ（例えば、少なくとも１×１０−８Ｍ、少なくとも１×１０−９Ｍ、少なくとも１×１０−１０Ｍ、少なくとも１×１０−１１Ｍ、または少なくとも１×１０−１２Ｍ）のＫＤで結合する。
【００１８】
それでもなお他の態様では、本明細書に記載される方法および使用に従って使用される好ましいＡｃｔＲＩＩアンタゴニストまたはアンタゴニストの組み合わせは、少なくともアクチビン媒介シグナル伝達（例えば、Ｓｍａｄ２／３シグナル伝達）を阻害する作用因子である。したがって、本開示のＡｃｔＲＩＩ阻害剤または阻害剤の組み合わせは、少なくともアクチビン（例えば、アクチビンＡ、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、アクチビンＣ、および／またはアクチビンＥ）に結合することができる。一部の実施形態では、本開示のＡｃｔＲＩＩ阻害剤または阻害剤の組み合わせは、少なくともアクチビンＡ、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、アクチビンＣ、および／またはアクチビンＥに、少なくとも１×１０−７Ｍ（例えば、少なくとも１×１０−８Ｍ、少なくとも１×１０−９Ｍ、少なくとも１×１０−１０Ｍ、少なくとも１×１０−１１Ｍ、または少なくとも１×１０−１２Ｍ）のＫＤで結合する。一部の実施形態では、本開示のＡｃｔＲＩＩ阻害剤または阻害剤の組み合わせは、少なくともアクチビンＢに、少なくとも１×１０−７Ｍ（例えば、少なくとも１×１０−８Ｍ、少なくとも１×１０−９Ｍ、少なくとも１×１０−１０Ｍ、少なくとも１×１０−１１Ｍ、または少なくとも１×１０−１２Ｍ）のＫＤで結合する。一部の実施形態では、本開示のＡｃｔＲＩＩ阻害剤または阻害剤の組み合わせは、アクチビンＡに実質的に結合しないか（例えば、アクチビンＡに１×１０−７Ｍより高いＫＤで結合するか、または比較的中度の結合、例えば、約１×１０−８Ｍまたは約１×１０−９Ｍを示す）、および／またはアクチビンＡ活性を阻害する。一部の実施形態では、本開示のＡｃｔＲＩＩ阻害剤または阻害剤の組み合わせは、少なくともアクチビンＢに結合するが（例えば、少なくとも１×１０−７Ｍ、少なくとも１×１０−８Ｍ、少なくとも１×１０−９Ｍ、少なくとも１×１０−１０Ｍ、少なくとも１×１０−１１Ｍ、または少なくとも１×１０−１２ＭのＫＤで結合する）、アクチビンＡに実質的に結合しないか（例えば、アクチビンＡに１×１０−７Ｍより高いＫＤで結合するか、または比較的中度の結合、例えば、約１×１０−８Ｍまたは約１×１０−９Ｍを示す）および／またはアクチビンＡ活性を阻害する。
【００１９】
さらなる他の態様では、本明細書に記載される方法および使用に従って使用される好ましいＡｃｔＲＩＩアンタゴニストまたはアンタゴニストの組み合わせは、少なくともＢＭＰ６媒介シグナル伝達（例えば、Ｓｍａｄ２／３シグナル伝達）を阻害する作用因子である。したがって、本開示のＡｃｔＲＩＩ阻害剤または阻害剤の組み合わせは、少なくともＢＭＰ６に結合することができる。一部の実施形態では、本開示のＡｃｔＲＩＩ阻害剤または阻害剤の組み合わせは、少なくともＢＭＰ６に、少なくとも１×１０−７Ｍ（例えば、少なくとも１×１０−８Ｍ、少なくとも１×１０−９Ｍ、少なくとも１×１０−１０Ｍ、少なくとも１×１０−１１Ｍ、または少なくとも１×１０−１２Ｍ）のＫＤで結合する。代替として、他の態様では、本開示のＡｃｔＲＩＩ阻害剤または阻害剤の組み合わせは、ＢＭＰ６に実質的に結合しないか（例えば、ＢＭＰ６に１×１０−７Ｍより高いＫＤで結合するか、または比較的中度の結合、例えば、約１×１０−８Ｍまたは約１×１０−９Ｍを示す）、および／またはＢＭＰ６活性を阻害する。
【００２０】
さらなる他の態様では、本明細書に記載される方法および使用に従って使用される好ましいＡｃｔＲＩＩアンタゴニストまたはアンタゴニストの組み合わせは、少なくともＧＤＦ３媒介シグナル伝達（例えば、Ｓｍａｄ２／３シグナル伝達）を阻害する作用因子である。したがって、本開示のＡｃｔＲＩＩ阻害剤または阻害剤の組み合わせは、少なくともＧＤＦ３に結合することができる。一部の実施形態では、本開示のＡｃｔＲＩＩ阻害剤または阻害剤の組み合わせは、少なくともＧＤＦ３に、少なくとも１×１０−７Ｍ（例えば、少なくとも１×１０−８Ｍ、少なくとも１×１０−９Ｍ、少なくとも１×１０−１０Ｍ、少なくとも１×１０−１１Ｍ、または少なくとも１×１０−１２Ｍ）のＫＤで結合する。代替として、他の態様では、本開示のＡｃｔＲＩＩ阻害剤または阻害剤の組み合わせは、ＧＤＦ３に実質的に結合しないか（例えば、ＧＤＦ３に１×１０−７Ｍより高いＫＤで結合するか、または比較的中度の結合、例えば、約１×１０−８Ｍまたは約１×１０−９Ｍを示す）、および／またはＧＤＦ３活性を阻害する。
【００２１】
それでもなお他の態様では、本明細書に記載される方法および使用に従って使用される好ましいＡｃｔＲＩＩアンタゴニストまたはアンタゴニストの組み合わせは、少なくともＢＭＰ９媒介シグナル伝達（例えば、Ｓｍａｄ２／３シグナル伝達）を阻害する作用因子である。したがって、本開示のＡｃｔＲＩＩ阻害剤または阻害剤の組み合わせは、少なくともＢＭＰ９に結合することができる。一部の実施形態では、本開示のＡｃｔＲＩＩ阻害剤または阻害剤の組み合わせは、少なくともＢＭＰ９に、少なくとも１×１０−７Ｍ（例えば、少なくとも１×１０−８Ｍ、少なくとも１×１０−９Ｍ、少なくとも１×１０−１０Ｍ、少なくとも１×１０−１１Ｍ、または少なくとも１×１０−１２Ｍ）のＫＤで結合する。代替として、他の態様では、本開示のＡｃｔＲＩＩ阻害剤または阻害剤の組み合わせは、ＢＭＰ９に実質的に結合しないか（例えば、ＢＭＰ９に１×１０−７Ｍより高いＫＤで結合するか、または比較的中度の結合、例えば、約１×１０−８Ｍまたは約１×１０−９Ｍを示す）、および／またはＢＭＰ９活性を阻害する。
【００２２】
さらなる他の態様では、本明細書に記載される方法および使用に従って使用される好ましいＡｃｔＲＩＩアンタゴニストまたはアンタゴニストの組み合わせは、少なくともＢＭＰ１０媒介シグナル伝達（例えば、Ｓｍａｄ２／３シグナル伝達）を阻害する作用因子である。したがって、本開示のＡｃｔＲＩＩ阻害剤または阻害剤の組み合わせは、少なくともＢＭＰ１０に結合することができる。一部の実施形態では、本開示のＡｃｔＲＩＩ阻害剤または阻害剤の組み合わせは、少なくともＢＭＰ１０に、少なくとも１×１０−７Ｍ（例えば、少なくとも１×１０−８Ｍ、少なくとも１×１０−９Ｍ、少なくとも１×１０−１０Ｍ、少なくとも１×１０−１１Ｍ、または少なくとも１×１０−１２Ｍ）のＫＤで結合する。代替として、他の態様では、本開示のＡｃｔＲＩＩ阻害剤または阻害剤の組み合わせは、ＢＭＰ１０に実質的に結合しないか（例えば、ＢＭＰ１０に１×１０−７Ｍより高いＫＤで結合するか、または比較的中度の結合、例えば、約１×１０−８Ｍまたは約１×１０−９Ｍを示す）、および／またはＢＭＰ１０活性を阻害する。
【００２３】
さらなる態様では、本明細書に記載される方法および使用に従って使用される好ましいＡｃｔＲＩＩアンタゴニストまたはアンタゴニストの組み合わせは、少なくともＧＤＦ１１媒介およびＧＤＦ８媒介シグナル伝達（例えば、Ｓｍａｄ２／３シグナル伝達）を阻害する作用因子である。したがって、本開示のＡｃｔＲＩＩ阻害剤または阻害剤の組み合わせは、少なくともＧＤＦ１１およびＧＤＦ８に結合することができる。一部の実施形態では、本開示のＡｃｔＲＩＩ阻害剤は、少なくともＧＤＦ１１に、少なくとも１×１０−７Ｍ（例えば、少なくとも１×１０−８Ｍ、少なくとも１×１０−９Ｍ、少なくとも１×１０−１０Ｍ、少なくとも１×１０−１１Ｍ、または少なくとも１×１０−１２Ｍ）のＫＤで結合し、ＧＤＦ８に、少なくとも１×１０−７Ｍ（例えば、少なくとも１×１０−８Ｍ、少なくとも１×１０−９Ｍ、少なくとも１×１０−１０Ｍ、少なくとも１×１０−１１Ｍ、または少なくとも１×１０−１２Ｍ）のＫＤで結合する。一部の実施形態では、ＧＤＦ１１およびＧＤＦ８に結合する本開示のＡｃｔＲＩＩ阻害剤または阻害剤の組み合わせは、アクチビンＡに実質的に結合しない（例えば、アクチビンＡに１×１０−７Ｍより高いＫＤで結合するか、または比較的中度の結合、例えば、約１×１０−８Ｍまたは約１×１０−９Ｍを示す）。一部の実施形態では、ＧＤＦ１１およびＧＤＦ８に結合する本開示のＡｃｔＲＩＩ阻害剤または阻害剤の組み合わせは、ＢＭＰ９に実質的に結合しない（例えば、ＢＭＰ９に１×１０−７Ｍより高いＫＤで結合するか、または比較的中度の結合、例えば、約１×１０−８Ｍまたは約１×１０−９Ｍを示す）。一部の実施形態では、ＧＤＦ１１およびＧＤＦ８に結合する本開示のＡｃｔＲＩＩ阻害剤または阻害剤の組み合わせは、ＢＭＰ１０に実質的に結合しない（例えば、ＢＭＰ１０に１×１０−７Ｍより高いＫＤで結合するか、または比較的中度の結合、例えば、約１×１０−８Ｍまたは約１×１０−９Ｍを示す）。一部の実施形態では、ＧＤＦ１１およびＧＤＦ８に結合する本開示のＡｃｔＲＩＩ阻害剤または阻害剤の組み合わせは、ＢＭＰ９またはＢＭＰ１０に実質的に結合しない（例えば、ＢＭＰ９およびＢＭＰ１０に１×１０−７Ｍより高いＫＤで結合するか、または比較的中度の結合、例えば、約１×１０−８Ｍまたは約１×１０−９Ｍを示す）。一部の実施形態では、ＧＤＦ１１およびＧＤＦ８に結合する本開示のＡｃｔＲＩＩ阻害剤または阻害剤の組み合わせは、アクチビンＡ、ＢＭＰ９、またはＢＭＰ１０に実質的に結合しない（例えば、アクチビンＡ、ＢＭＰ９およびＢＭＰ１０に１×１０−７Ｍより高いＫＤで結合するか、または比較的中度の結合、例えば、約１×１０−８Ｍまたは約１×１０−９Ｍを示す）。
【００２４】
他のさらなる態様では、ＧＤＦ１１媒介および／またはＧＤＦ８媒介シグナル伝達（例えば、Ｓｍａｄ２／３シグナル伝達）を阻害するアンタゴニストまたはアンタゴニストの組み合わせは、アクチビン媒介シグナル伝達をさらに阻害することができる。したがって、本開示のＧＤＦ１１および／またはＧＤＦ８に結合するＡｃｔＲＩＩ阻害剤または阻害剤の組み合わせは、少なくともアクチビン（例えば、アクチビンＡ、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、アクチビンＣ、および／またはアクチビンＥ）にさらに結合することができる。一部の実施形態では、本開示のＧＤＦ１１および／またはＧＤＦ８に結合するＡｃｔＲＩＩ阻害剤または阻害剤の組み合わせは、少なくともアクチビン（例えば、アクチビンＡ、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、アクチビンＣ、および／またはアクチビンＥ）に、少なくとも１×１０−７Ｍ（例えば、少なくとも１×１０−８Ｍ、少なくとも１×１０−９Ｍ、少なくとも１×１０−１０Ｍ、少なくとも１×１０−１１Ｍ、または少なくとも１×１０−１２Ｍ）のＫＤで、さらに結合することができる。一部の実施形態では、本開示のＧＤＦ１１および／またはＧＤＦ８に結合するＡｃｔＲＩＩ阻害剤または阻害剤の組み合わせは、少なくともアクチビンＢにさらに結合することができる（例えば、少なくとも１×１０−７Ｍ、少なくとも１×１０−８Ｍ、少なくとも１×１０−９Ｍ、少なくとも１×１０−１０Ｍ、少なくとも１×１０−１１Ｍ、または少なくとも１×１０−１２ＭのＫＤで結合する）。一部の実施形態では、本開示のＧＤＦ１１および／またはＧＤＦ８に結合するＡｃｔＲＩＩ阻害剤または阻害剤の組み合わせは、アクチビンＡに実質的に結合しない（例えば、アクチビンＡに１×１０−７Ｍより高いＫＤで結合するか、または比較的中度の結合、例えば、約１×１０−８Ｍまたは約１×１０−９Ｍを示す）。一部の実施形態では、本開示のＧＤＦ１１および／またはＧＤＦ８に結合するＡｃｔＲＩＩ阻害剤または阻害剤の組み合わせは、少なくともアクチビンＢにさらに結合することができるが（例えば、少なくとも１×１０−７Ｍ、少なくとも１×１０−８Ｍ、少なくとも１×１０−９Ｍ、少なくとも１×１０−１０Ｍ、少なくとも１×１０−１１Ｍ、または少なくとも１×１０−１２ＭのＫＤで結合する）、アクチビンＡに実質的に結合しない（例えば、アクチビンＡに１×１０−７Ｍより高いＫＤで結合するか、または比較的中度の結合、例えば、約１×１０−８Ｍまたは約１×１０−９Ｍを示す）。一部の実施形態では、本開示のＧＤＦ１１および／またはＧＤＦ８に結合するＡｃｔＲＩＩ阻害剤または阻害剤の組み合わせは、ＢＭＰ９に実質的に結合しない（例えば、ＢＭＰ９に１×１０−７Ｍより高いＫＤで結合するか、または比較的中度の結合、例えば、約１×１０−８Ｍまたは約１×１０−９Ｍを示す）。一部の実施形態では、本開示のＧＤＦ１１および／またはＧＤＦ８に結合するＡｃｔＲＩＩ阻害剤または阻害剤の組み合わせは、ＢＭＰ１０に実質的に結合しない（例えば、ＢＭＰ１０に１×１０−７Ｍより高いＫＤで結合するか、または比較的中度の結合、例えば、約１×１０−８Ｍまたは約１×１０−９Ｍを示す）。一部の実施形態では、本開示のＧＤＦ１１および／またはＧＤＦ８に結合するＡｃｔＲＩＩ阻害剤または阻害剤の組み合わせは、ＢＭＰ９またはＢＭＰ１０に実質的に結合しない（例えば、ＢＭＰ９およびＢＭＰ１０に１×１０−７Ｍより高いＫＤで結合するか、または比較的中度の結合、例えば、約１×１０−８Ｍまたは約１×１０−９Ｍを示す）。一部の実施形態では、本開示のＧＤＦ１１および／またはＧＤＦ８に結合するＡｃｔＲＩＩ阻害剤または阻害剤の組み合わせは、アクチビンＡ、ＢＭＰ９、またはＢＭＰ１０に実質的に結合しない（例えば、アクチビンＡ、ＢＭＰ９およびＢＭＰ１０に１×１０−７Ｍより高いＫＤで結合するか、または比較的中度の結合、例えば、約１×１０−８Ｍまたは約１×１０−９Ｍを示す）。
【００２５】
他のさらなる態様では、ＧＤＦ１１、ＧＤＦ８、および／またはアクチビン（例えば、アクチビンＡ、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、アクチビンＣ、および／またはアクチビンＥ）媒介シグナル伝達（例えば、Ｓｍａｄ２／３シグナル伝達）を阻害するアンタゴニストまたはアンタゴニストの組み合わせは、ＢＭＰ６媒介シグナル伝達をさらに阻害することができる。したがって、ＧＤＦ１１、ＧＤＦ８、および／またはアクチビンに結合する本開示のＡｃｔＲＩＩ阻害剤または阻害剤の組み合わせは、少なくともＢＭＰ６にさらに結合することができる。一部の実施形態では、ＧＤＦ１１、ＧＤＦ８、および／またはアクチビンに結合する本開示のＡｃｔＲＩＩ阻害剤または阻害剤の組み合わせは、少なくともＢＭＰ６に、少なくとも１×１０−７Ｍ（例えば、少なくとも１×１０−８Ｍ、少なくとも１×１０−９Ｍ、少なくとも１×１０−１０Ｍ、少なくとも１×１０−１１Ｍ、または少なくとも１×１０−１２Ｍ）のＫＤで、さらに結合することができる。一部の実施形態では、ＧＤＦ１１、ＧＤＦ８、アクチビンＢ、および／またはＢＭＰ６に結合する本開示のＡｃｔＲＩＩ阻害剤または阻害剤の組み合わせは、アクチビンＡに実質的に結合しない（例えば、アクチビンＡに１×１０−７Ｍより高いＫＤで結合するか、または比較的中度の結合、例えば、約１×１０−８Ｍまたは約１×１０−９Ｍを示す）。一部の実施形態では、ＧＤＦ１１、ＧＤＦ８、アクチビン、および／またはＢＭＰ６に結合する本開示のＡｃｔＲＩＩ阻害剤または阻害剤の組み合わせは、ＢＭＰ９に実質的に結合しない（例えば、ＢＭＰ９に１×１０−７Ｍより高いＫＤで結合するか、または比較的中度の結合、例えば、約１×１０−８Ｍまたは約１×１０−９Ｍを示す）。一部の実施形態では、ＧＤＦ１１、ＧＤＦ８、アクチビン、および／またはＢＭＰ６に結合する本開示のＡｃｔＲＩＩ阻害剤または阻害剤の組み合わせは、ＢＭＰ１０に実質的に結合しない（例えば、ＢＭＰ１０に１×１０−７Ｍより高いＫＤで結合するか、または比較的中度の結合、例えば、約１×１０−８Ｍまたは約１×１０−９Ｍを示す）。一部の実施形態では、ＧＤＦ１１、ＧＤＦ８、アクチビン、および／またはＢＭＰ６に結合する本開示のＡｃｔＲＩＩ阻害剤または阻害剤の組み合わせは、ＢＭＰ９またはＢＭＰ１０に実質的に結合しない（例えば、ＢＭＰ９およびＢＭＰ１０に１×１０−７Ｍより高いＫＤで結合するか、または比較的中度の結合、例えば、約１×１０−８Ｍまたは約１×１０−９Ｍを示す）。一部の実施形態では、ＧＤＦ１１、ＧＤＦ８、アクチビンＢ、および／またはＢＭＰ６に結合する本開示のＡｃｔＲＩＩ阻害剤または阻害剤の組み合わせは、アクチビンＡ、ＢＭＰ９、またはＢＭＰ１０に実質的に結合しない（例えば、アクチビンＡ、ＢＭＰ９、およびＢＭＰ１０に１×１０−７Ｍより高いＫＤで結合するか、または比較的中度の結合、例えば、約１×１０−８Ｍまたは約１×１０−９Ｍを示す）。
【００２６】
よりさらなる態様では、ＧＤＦ１１、ＧＤＦ８、アクチビン（例えば、アクチビンＡ、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、アクチビンＣ、および／またはアクチビンＥ）および／またはＢＭＰ６媒介シグナル伝達（例えば、Ｓｍａｄ２／３シグナル伝達）を阻害するアンタゴニストまたはアンタゴニストの組み合わせは、ＧＤＦ３媒介シグナル伝達をさらに阻害することができる。したがって、ＧＤＦ１１、ＧＤＦ８、アクチビンおよび／またはＢＭＰ６に結合する本開示のＡｃｔＲＩＩ阻害剤または阻害剤の組み合わせは、少なくともＧＤＦ３にさらに結合することができる。一部の実施形態では、ＧＤＦ１１、ＧＤＦ８、アクチビン、および／またはＢＭＰ６に結合する本開示のＡｃｔＲＩＩ阻害剤または阻害剤の組み合わせは、少なくともＧＤＦ３にさらに、少なくとも１×１０−７Ｍ（例えば、少なくとも１×１０−８Ｍ、少なくとも１×１０−９Ｍ、少なくとも１×１０−１０Ｍ、少なくとも１×１０−１１Ｍ、または少なくとも１×１０−１２Ｍ）のＫＤで結合することができる。一部の実施形態では、ＧＤＦ１１、ＧＤＦ８、アクチビンＢ、および／またはＢＭＰ６に結合する本開示のＡｃｔＲＩＩ阻害剤または阻害剤の組み合わせは、アクチビンＡに実質的に結合しない（例えば、１×１０−７Ｍより高いＫＤでのアクチビンＡへの結合、または比較的中度の結合、例えば、約１×１０−８Ｍまたは約１×１０−９Ｍを示す）。一部の実施形態では、ＧＤＦ１１、ＧＤＦ８、アクチビン、および／またはＢＭＰ６に結合する本開示のＡｃｔＲＩＩ阻害剤または阻害剤の組み合わせは、ＢＭＰ９に実質的に結合しない（例えば、１×１０−７Ｍより高いＫＤでのＢＭＰ９への結合、または比較的中度の結合、例えば、約１×１０−８Ｍまたは約１×１０−９Ｍを示す）。一部の実施形態では、ＧＤＦ１１、ＧＤＦ８、アクチビン、および／またはＢＭＰ６に結合する本開示のＡｃｔＲＩＩ阻害剤または阻害剤の組み合わせは、ＢＭＰ１０に実質的に結合しない（例えば、１×１０−７Ｍより高いＫＤでのＢＭＰ９への結合、または比較的中度の結合、例えば、約１×１０−８Ｍまたは約１×１０−９Ｍを示す）。一部の実施形態では、ＧＤＦ１１、ＧＤＦ８、アクチビン、および／またはＢＭＰ６に結合する本開示のＡｃｔＲＩＩ阻害剤または阻害剤の組み合わせは、ＢＭＰ９またはＢＭＰ１０に実質的に結合しない（例えば、１×１０−７Ｍより高いＫＤでのＢＭＰ９およびＢＭＰ１０への結合、または比較的中度の結合、例えば、約１×１０−８Ｍまたは約１×１０−９Ｍを示す）。一部の実施形態では、ＧＤＦ１１、ＧＤＦ８、アクチビンＢ、および／またはＢＭＰ６に結合する本開示のＡｃｔＲＩＩ阻害剤または阻害剤の組み合わせは、アクチビンＡ、ＢＭＰ９、またはＢＭＰ１０に実質的に結合しない（例えば、１×１０−７Ｍより高いＫＤでのアクチビンＡ、ＢＭＰ９、およびＢＭＰ１０への結合、または比較的中度の結合、例えば、約１×１０−８Ｍまたは約１×１０−９Ｍを示す）。
【００２７】
よりさらなる態様では、ＧＤＦ１１、ＧＤＦ８、アクチビン（例えば、アクチビンＡ、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、アクチビンＣ、および／またはアクチビンＥ）、ＢＭＰ６、および／またはＧＤＦ３媒介シグナル伝達（例えば、Ｓｍａｄ２／３シグナル伝達）を阻害するアンタゴニストまたはアンタゴニストの組み合わせは、ＢＭＰ１０媒介シグナル伝達をさらに阻害することができる。したがって、ＧＤＦ１１、ＧＤＦ８、アクチビン、ＢＭＰ６、および／またはＧＤＦ３に結合する本開示のＡｃｔＲＩＩ阻害剤または阻害剤の組み合わせは、少なくともＢＭＰ１０にさらに結合することができる。一部の実施形態では、ＧＤＦ１１、ＧＤＦ８、アクチビン、ＢＭＰ６、および／またはＧＤＦ３に結合する本開示のＡｃｔＲＩＩ阻害剤または阻害剤の組み合わせは、少なくともＢＭＰ１０に、少なくとも１×１０−７Ｍ（例えば、少なくとも１×１０−８Ｍ、少なくとも１×１０−９Ｍ、少なくとも１×１０−１０Ｍ、少なくとも１×１０−１１Ｍ、または少なくとも１×１０−１２Ｍ）のＫＤで、さらに結合することができる。一部の実施形態では、ＧＤＦ１１、ＧＤＦ８、アクチビンＢ、ＢＭＰ６、ＧＤＦ３および／またはＢＭＰ１０に結合する本開示のＡｃｔＲＩＩ阻害剤または阻害剤の組み合わせは、アクチビンＡに実質的に結合しない（例えば、１×１０−７Ｍより高いＫＤでのアクチビンＡへの結合、または比較的中度の結合、例えば、約１×１０−８Ｍまたは約１×１０−９Ｍを示す）。一部の実施形態では、ＧＤＦ１１、ＧＤＦ８、アクチビンＢ、ＢＭＰ６、ＧＤＦ３および／またはＢＭＰ１０に結合する本開示のＡｃｔＲＩＩ阻害剤または阻害剤の組み合わせは、ＢＭＰ９に実質的に結合しない（例えば、１×１０−７Ｍより高いＫＤでのＢＭＰ９への結合、または比較的中度の結合、例えば、約１×１０−８Ｍまたは約１×１０−９Ｍを示す）。一部の実施形態では、ＧＤＦ１１、ＧＤＦ８、アクチビンＢ、ＢＭＰ６、ＧＤＦ３および／またはＢＭＰ１０に結合する本開示のＡｃｔＲＩＩ阻害剤または阻害剤の組み合わせは、アクチビンＡまたはＢＭＰ９に実質的に結合しない（例えば、１×１０−７Ｍより高いＫＤでのアクチビンＡおよびＢＭＰ９への結合、または比較的中度の結合、例えば、約１×１０−８Ｍまたは約１×１０−９Ｍを示す）。
【００２８】
他の態様では、ＧＤＦ１１、ＧＤＦ８、アクチビン（例えば、アクチビンＡ、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、アクチビンＣ、および／またはアクチビンＥ）、ＢＭＰ６、ＧＤＦ３および／またはＢＭＰ１０媒介シグナル伝達（例えば、Ｓｍａｄ２／３シグナル伝達）を阻害するアンタゴニストまたはアンタゴニストの組み合わせは、ＢＭＰ９媒介シグナル伝達をさらに阻害することができる。したがって、ＧＤＦ１１、ＧＤＦ８、アクチビン、ＢＭＰ６、ＧＤＦ３および／またはＢＭＰ１０に結合する本開示のＡｃｔＲＩＩ阻害剤または阻害剤の組み合わせは、少なくともＢＭＰ９にさらに結合することができる。一部の実施形態では、ＧＤＦ１１、ＧＤＦ８、アクチビン、ＢＭＰ６、ＧＤＦ３および／またはＢＭＰ１０に結合する本開示のＡｃｔＲＩＩ阻害剤または阻害剤の組み合わせは、少なくともＢＭＰ９に、少なくとも１×１０−７Ｍ（例えば、少なくとも１×１０−８Ｍ、少なくとも１×１０−９Ｍ、少なくとも１×１０−１０Ｍ、少なくとも１×１０−１１Ｍ、または少なくとも１×１０−１２Ｍ）のＫＤで、さらに結合することができる。一部の実施形態では、ＧＤＦ１１、ＧＤＦ８、アクチビン、ＢＭＰ６、ＧＤＦ３、ＢＭＰ１０、および／またはＢＭＰ９に結合する本開示のＡｃｔＲＩＩ阻害剤または阻害剤の組み合わせは、アクチビンＡに実質的に結合しない（例えば、１×１０−７Ｍより高いＫＤでのアクチビンＡへの結合、または比較的中度の結合、例えば、約１×１０−８Ｍまたは約１×１０−９Ｍを示す）。
【００２９】
ある特定の態様では、本発明の開示は、眼の血管障害を処置または予防するための方法および組成物であって、有効量のＡｃｔＲＩＩポリペプチドをそれを必要とする患者に投与することを含む、方法および組成物に関する。用語「ＡｃｔＲＩＩポリペプチド」は、集合的に、天然に存在するＡｃｔＲＩＩＡおよびＡｃｔＲＩＩＢポリペプチド、加えてそれらの短縮型および改変体、例えば本明細書に記載されるものなど（例えば、ＧＤＦトラップポリペプチド）を指す。好ましくはＡｃｔＲＩＩポリペプチドは、ＡｃｔＲＩＩポリペプチドまたはそれらの修飾された（改変体）形態のリガンド結合ドメインを含むか、これらから本質的になるか、またはこれらからなる。例えば、一部の実施形態では、ＡｃｔＲＩＩＡポリペプチドは、ＡｃｔＲＩＩＡポリペプチドのＡｃｔＲＩＩＡリガンド結合ドメイン、例えばＡｃｔＲＩＩＡ細胞外ドメインの一部分を含むか、これらから本質的になるか、またはこれらからなる。同様に、ＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドは、ＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドのＡｃｔＲＩＩＢリガンド結合ドメイン、例えばＡｃｔＲＩＩＢ細胞外ドメインの一部分を含んでいてもよく、これらから本質的になっていてもよく、またはこれらからなっていてもよい。好ましくは、本明細書に記載される方法および使用に従って使用されるＡｃｔＲＩＩポリペプチドは、可溶性ポリペプチドである。
【００３０】
ある特定の態様では、本発明の開示は、眼の血管障害を処置または予防するための方法および組成物であって、有効量のＡｃｔＲＩＩＡポリペプチドをそれを必要とする患者に投与することを含む、方法および組成物に関する。例えば、一部の実施形態では、本開示のＡｃｔＲＩＩＡポリペプチドは、配列番号９のアミノ酸３０〜１１０の配列と、少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一であるアミノ酸配列を含むか、これらから本質的になるか、またはこれらからなる。他の実施形態では、ＡｃｔＲＩＩＡポリペプチドは、配列番号９のアミノ酸配列と、少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一であるアミノ酸配列を含んでいてもよく、これらから本質的になっていてもよく、またはこれらからなっていてもよい。他の実施形態では、ＡｃｔＲＩＩＡポリペプチドは、配列番号１０のアミノ酸配列と、少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一であるアミノ酸配列を含んでいてもよく、これらから本質的になっていてもよく、またはこれらからなっていてもよい。さらなる他の実施形態では、ＡｃｔＲＩＩＡポリペプチドは、配列番号１１のアミノ酸配列と、少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一であるアミノ酸配列を含んでいてもよく、これらから本質的になっていてもよく、またはこれらからなっていてもよい。さらなる他の実施形態では、ＡｃｔＲＩＩＡポリペプチドは、配列番号３２のアミノ酸配列と、少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一であるアミノ酸配列を含んでいてもよく、これらから本質的になっていてもよく、またはこれらからなっていてもよい。なおさらなる他の実施形態では、ＡｃｔＲＩＩＡポリペプチドは、配列番号３６のアミノ酸配列と、少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一であるアミノ酸配列を含んでいてもよく、これらから本質的になっていてもよく、またはこれらからなっていてもよい。なおさらなる他の実施形態では、ＡｃｔＲＩＩＡポリペプチドは、配列番号３９のアミノ酸配列と、少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一であるアミノ酸配列を含んでいてもよく、これらから本質的になっていてもよく、またはこれらからなっていてもよい。
【００３１】
他の態様では、本発明の開示は、眼の血管障害を処置または予防するための方法および組成物であって、有効量のＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドをそれを必要とする患者に投与することを含む、方法および組成物に関する。例えば、一部の実施形態では、本開示のＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドは、配列番号１のアミノ酸２９〜１０９の配列と、少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一であるアミノ酸配列を含むか、これらから本質的になるか、またはこれらからなる。一部の実施形態では、ＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドは、配列番号１のアミノ酸２９〜１０９の配列と、少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一であるアミノ酸配列を含んでいてもよく、これらから本質的になっていてもよく、またはこれらからなっていてもよく、ＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドは、配列番号１に照らして７９位に酸性アミノ酸［天然に存在する（ＥまたはＤ）または人工酸性アミノ酸］を含む。他の実施形態では、ＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドは、配列番号１のアミノ酸２５〜１３１の配列と、少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一であるアミノ酸配列を含んでいてもよく、これらから本質的になっていてもよく、またはこれらからなっていてもよい。一部の実施形態では、ＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドは、配列番号１のアミノ酸２５〜１３１の配列と、少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一であるアミノ酸配列を含んでいてもよく、これらから本質的になっていてもよく、またはこれらからなっていてもよく、ＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドは、配列番号１に照らして７９位に酸性アミノ酸を含む。他の実施形態では、ＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドは、配列番号１のアミノ酸配列と、少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一であるアミノ酸配列を含んでいてもよく、これらから本質的になっていてもよく、またはこれらからなっていてもよい。一部の実施形態では、ＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドは、配列番号１のアミノ酸配列と、少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一であるアミノ酸配列を含んでいてもよく、これらから本質的になっていてもよく、またはこれらからなっていてもよく、ＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドは、配列番号１に照らして７９位に酸性アミノ酸を含む。さらなる他の実施形態では、ＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドは、配列番号２のアミノ酸配列と、少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一であるアミノ酸配列を含んでいてもよく、これらから本質的になっていてもよく、またはこれらからなっていてもよい。他の実施形態では、ＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドは、配列番号２のアミノ酸配列と、少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一であるアミノ酸配列を含んでいてもよく、これらから本質的になっていてもよく、またはこれらからなっていてもよく、ＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドは、配列番号１に照らして７９位に酸性アミノ酸を含む。それでもなお他の実施形態では、ＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドは、配列番号３のアミノ酸配列と、少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一であるアミノ酸配列を含んでいてもよく、これらから本質的になっていてもよく、またはこれらからなっていてもよい。他では、ＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドは、配列番号３のアミノ酸配列と、少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一であるアミノ酸配列を含んでいてもよく、これらから本質的になっていてもよく、またはこれらからなっていてもよく、ＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドは、配列番号１に照らして７９位に酸性アミノ酸を含む。他の実施形態では、ＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドは、配列番号４のアミノ酸配列と、少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一であるアミノ酸配列を含んでいてもよく、これらから本質的になっていてもよく、またはこれらからなっていてもよい。一部の実施形態では、ＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドは、配列番号４のアミノ酸配列と、少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一であるアミノ酸配列を含んでいてもよく、これらから本質的になっていてもよく、またはこれらからなっていてもよく、ＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドは、配列番号４に照らして７９位に酸性アミノ酸を含む。他の実施形態では、ＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドは、配列番号５のアミノ酸配列と、少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一であるアミノ酸配列を含んでいてもよく、これらから本質的になっていてもよく、またはこれらからなっていてもよい。一部の実施形態では、ＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドは、配列番号５のアミノ酸配列と、少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一であるアミノ酸配列を含んでいてもよく、これらから本質的になっていてもよく、またはこれらからなっていてもよく、ＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドは、配列番号４に照らして７９位に酸性アミノ酸を含む。他の実施形態では、ＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドは、配列番号６のアミノ酸配列と、少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一であるアミノ酸配列を含んでいてもよく、これらから本質的になっていてもよく、またはこれらからなっていてもよい。一部の実施形態では、ＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドは、配列番号６のアミノ酸配列と、少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一であるアミノ酸配列を含んでいてもよく、これらから本質的になっていてもよく、またはこれらからなっていてもよく、ＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドは、配列番号４に照らして７９位に酸性アミノ酸を含む。なおさらなる他の実施形態では、ＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドは、配列番号４４のアミノ酸配列と、少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一であるアミノ酸配列を含んでいてもよく、これらから本質的になっていてもよく、またはこれらからなっていてもよい。一部の実施形態では、ＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドは、配列番号４４のアミノ酸配列と、少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一であるアミノ酸配列を含んでいてもよく、これらから本質的になっていてもよく、またはこれらからなっていてもよく、ＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドは、配列番号１に照らして７９位に酸性アミノ酸を含む。なおさらなる他の実施形態では、ＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドは、配列番号４５のアミノ酸配列と、少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一であるアミノ酸配列を含んでいてもよく、これらから本質的になっていてもよく、またはこれらからなっていてもよい。一部の実施形態では、ＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドは、配列番号４５のアミノ酸配列と、少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一であるアミノ酸配列を含んでいてもよく、これらから本質的になっていてもよく、またはこれらからなっていてもよく、ＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドは、配列番号１に照らして７９位に酸性アミノ酸を含む。なおさらなる他の実施形態では、ＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドは、配列番号４６のアミノ酸配列と、少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一であるアミノ酸配列を含んでいてもよく、これらから本質的になっていてもよく、またはこれらからなっていてもよい。一部の実施形態では、ＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドは、配列番号４６のアミノ酸配列と、少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一であるアミノ酸配列を含んでいてもよく、これらから本質的になっていてもよく、またはこれらからなっていてもよく、ＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドは、配列番号１に照らして７９位に酸性アミノ酸を含む。なおさらなる他の実施形態では、ＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドは、配列番号４８のアミノ酸配列と、少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一であるアミノ酸配列を含んでいてもよく、これらから本質的になっていてもよく、またはこれらからなっていてもよい。一部の実施形態では、ＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドは、配列番号４８のアミノ酸配列と、少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一であるアミノ酸配列を含んでいてもよく、これらから本質的になっていてもよく、またはこれらからなっていてもよく、ＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドは、配列番号１に照らして７９位に酸性アミノ酸を含む。他では、ＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドは、配列番号４９のアミノ酸配列と、少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一であるアミノ酸配列を含んでいてもよく、これらから本質的になっていてもよく、またはこれらからなっていてもよい。一部の実施形態では、ＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドは、配列番号４９のアミノ酸配列と、少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一であるアミノ酸配列を含んでいてもよく、これらから本質的になっていてもよく、またはこれらからなっていてもよく、ＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドは、配列番号１に照らして７９位に酸性アミノ酸を含む。なおさらなる他の実施形態では、ＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドは、配列番号５０のアミノ酸配列と、少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一であるアミノ酸配列を含んでいてもよく、これらから本質的になっていてもよく、またはこれらからなっていてもよい。一部の実施形態では、ＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドは、配列番号５０のアミノ酸配列と、
少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一であるアミノ酸配列を含んでいてもよく、これらから本質的になっていてもよく、またはこれらからなっていてもよく、ＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドは、配列番号１に照らして７９位に酸性アミノ酸を含む。なおさらなる他の実施形態では、ＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドは、配列番号７９のアミノ酸配列と、少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一であるアミノ酸配列を含んでいてもよく、これらから本質的になっていてもよく、またはこれらからなっていてもよい。他では、ＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドは、配列番号７９のアミノ酸配列と、少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一であるアミノ酸配列を含んでいてもよく、これらから本質的になっていてもよく、またはこれらからなっていてもよく、ＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドは、配列番号１に照らして７９位に酸性アミノ酸を含む。なおさらなる他の実施形態では、ＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドは、配列番号６１のアミノ酸配列と、少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一であるアミノ酸配列を含んでいてもよく、これらから本質的になっていてもよく、またはこれらからなっていてもよい。他では、ＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドは、配列番号６１のアミノ酸配列と、少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一であるアミノ酸配列を含んでいてもよく、これらから本質的になっていてもよく、またはこれらからなっていてもよく、ＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドは、配列番号１に照らして７９位に酸性アミノ酸を含む。なおさらなる他の実施形態では、ＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドは、配列番号６４のアミノ酸配列と、少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一であるアミノ酸配列を含んでいてもよく、これらから本質的になっていてもよく、またはこれらからなっていてもよい。他では、ＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドは、配列番号６４のアミノ酸配列と、少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一であるアミノ酸配列を含んでいてもよく、これらから本質的になっていてもよく、またはこれらからなっていてもよく、ＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドは、配列番号１に照らして７９位に酸性アミノ酸を含む。なおさらなる他の実施形態では、ＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドは、配列番号６５のアミノ酸配列と、少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一であるアミノ酸配列を含んでいてもよく、これらから本質的になっていてもよく、またはこれらからなっていてもよい。他では、ＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドは、配列番号６５のアミノ酸配列と、少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一であるアミノ酸配列を含んでいてもよく、これらから本質的になっていてもよく、またはこれらからなっていてもよく、ＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドは、配列番号１に照らして７９位に酸性アミノ酸を含む。なおさらなる他の実施形態では、ＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドは、配列番号４０のアミノ酸配列と、少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一であるアミノ酸配列を含んでいてもよく、これらから本質的になっていてもよく、またはこれらからなっていてもよい。一部の実施形態では、ＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドは、配列番号４０のアミノ酸配列と、少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一であるアミノ酸配列を含んでいてもよく、これらから本質的になっていてもよく、またはこれらからなっていてもよく、ＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドは、配列番号１に照らして７９位に酸性アミノ酸を含む。なおさらなる他の実施形態では、ＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドは、配列番号４１のアミノ酸配列と、少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一であるアミノ酸配列を含んでいてもよく、これらから本質的になっていてもよく、またはこれらからなっていてもよい。一部の実施形態では、ＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドは、配列番号４１のアミノ酸配列と、少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一であるアミノ酸配列を含んでいてもよく、これらから本質的になっていてもよく、またはこれらからなっていてもよく、ＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドは、配列番号１に照らして７９位に酸性アミノ酸を含む。なおさらなる他の実施形態では、ＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドは、配列番号７８のアミノ酸配列と、少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一であるアミノ酸配列を含んでいてもよく、これらから本質的になっていてもよく、またはこれらからなっていてもよい。一部の実施形態では、ＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドは、配列番号７８のアミノ酸配列と、少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一であるアミノ酸配列を含んでいてもよく、これらから本質的になっていてもよく、またはこれらからなっていてもよく、ＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドは、配列番号１に照らして７９位に酸性アミノ酸を含む。ある特定の実施形態では、本明細書に記載される方法および使用に従って使用されるＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドは、配列番号１のＬ７９に対応する位置における酸性アミノ酸を含まない。
【００３２】
他の態様では、本発明の開示は、眼の血管障害を処置または予防するための方法および組成物であって、有効量のＧＤＦトラップポリペプチド（ＧＤＦトラップ）をそれを必要とする患者に投与することを含む、方法および組成物に関する。一部の実施形態では、
ＧＤＦトラップは、そのアクチビンＡへの結合についてのＫｄの、ＧＤＦ１１および／またはＧＤＦ８への結合についてのＫｄに対する比が、野生型リガンド結合性ドメインの場合の比と比べて、少なくとも２倍、５倍、１０倍、２０倍、５０倍、１００倍、なおまたは１０００倍である変更させたＡｃｔＲＩＩリガンド結合性ドメインを含むか、本質的にそれからなるか、それからなる。任意選択で、変更させたリガンド結合性ドメインを含むＧＤＦトラップは、アクチビンＡの阻害についてのＩＣ５０の、ＧＤＦ１１および／またはＧＤＦ８の阻害についてのＩＣ５０に対する比が、野生型ＡｃｔＲＩＩリガンド結合性ドメインの場合と比べて、少なくとも２倍、５倍、１０倍、２０倍、２５倍、５０倍、１００倍、なおまたは１０００倍である。任意選択で、変更させたリガンド結合性ドメインを含むＧＤＦトラップは、ＧＤＦ１１および／またはＧＤＦ８を、アクチビンＡの阻害についてのＩＣ５０の、多くとも、２分の１、５分の１、１０分の１、２０分の１、５０分の１、なおまたは１００分の１であるＩＣ５０で阻害する。これらのＧＤＦトラップは、免疫グロブリンＦｃドメイン（野生型または変異体）を含む融合タンパク質であり得る。ある特定の場合には、対象の可溶性ＧＤＦトラップは、ＧＤＦ８および／またはＧＤＦ１１媒介性細胞内シグナル伝達（例えば、Ｓｍａｄ２／３シグナル伝達）のアンタゴニスト（阻害剤）である。
【００３３】
一部の実施形態では、本開示は、変更させたリガンド結合性（例えば、ＧＤＦ１１結合性）ドメインを含む可溶性ＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドであるＧＤＦトラップを提供する。リガンド結合性ドメインを変更させたＧＤＦトラップは、例えば、ヒトＡｃｔＲＩＩＢのＥ３７、Ｅ３９、Ｒ４０、Ｋ５５、Ｒ５６、Ｙ６０、Ａ６４、Ｋ７４、Ｗ７８、Ｌ７９、Ｄ８０、Ｆ８２、およびＦ１０１（番号付けは、配列番号１に照らした番号付けである）などのアミノ酸残基において、１つまたは複数の変異を含み得る。任意選択で、変更させたリガンド結合性ドメインは、ＧＤＦ８／ＧＤＦ１１などのリガンドに対する選択性を、ＡｃｔＲＩＩＢ受容体の野生型リガンド結合性ドメインと比べて増大させている場合がある。例示すると、本明細書では、これらの変異：Ｋ７４Ｙ、Ｋ７４Ｆ、Ｋ７４Ｉ、Ｌ７９Ｄ、Ｌ７９Ｅ、およびＤ８０Ｉが、変更させたリガンド結合性ドメインの、ＧＤＦ１１に対する選択性を、アクチビンに対する場合を上回って増大させる（したがって、おそらく、ＧＤＦ８に対する選択性も増大させる）ことが実証される。以下の変異：Ｄ５４Ａ、Ｋ５５Ａ、Ｌ７９Ａ、およびＦ８２Ａは、逆の作用を及ぼし、アクチビンへの結合の、ＧＤＦ１１への結合に対する比を増大させる。全体的な（ＧＤＦ１１およびアクチビンへの）結合活性は、「テール」領域の組入れにより増大する場合もあり、おそらく、構造化されていないリンカー領域により増大する場合もあり、また、Ｋ７４Ａ変異の使用により増大する場合もある。リガンド結合アフィニティーの全体的な減少を引き起こした他の変異は、Ｒ４０Ａ、Ｅ３７Ａ、Ｒ５６Ａ、Ｗ７８Ａ、Ｄ８０Ｋ、Ｄ８０Ｒ、Ｄ８０Ａ、Ｄ８０Ｇ、Ｄ８０Ｆ、Ｄ８０Ｍ、およびＤ８０Ｎを含む。変異は、所望の効果を達成するように組み合わせることができる。例えば、ＧＤＦ１１への結合の、アクチビンへの結合に対する比に影響を及ぼす変異の多くは、リガンドへの結合に対して、全体的な負の作用を及ぼし、したがって、これらを、リガンドへの結合を一般に増大させる変異と組み合わせることができ、これにより、リガンドへの選択性を有する、改善された結合性タンパク質をもたらす。例示的な実施形態では、ＧＤＦトラップは、任意選択で、追加のアミノ酸の置換、付加、または欠失と組み合わせた、Ｌ７９Ｄ変異またはＬ７９Ｅ変異を含むＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドである。
【００３４】
本明細書に記載される通り、ＡｃｔＲＩＩポリペプチドおよびそれらの改変体（ＧＤＦトラップ）は、ホモ多量体、例えば、ホモ二量体、ホモ三量体、ホモ四量体、ホモ五量体、およびより高次のホモ多量体複合体であり得る。ある特定の好ましい実施形態では、ＡｃｔＲＩＩポリペプチドおよびそれらの改変体は、ホモ二量体である。ある特定の実施形態では、本明細書に記載されるＡｃｔＲＩＩポリペプチド二量体は、第１のＡｃｔＲＩＩポリペプチドが、第２のＡｃｔＲＩＩポリペプチドに共有結合または非共有結合したものを含み、第１のポリペプチドは、ＡｃｔＲＩＩドメインおよび相互作用対（例えば、免疫グロブリンの定常ドメイン）の第１のメンバー（または第２のメンバー）のアミノ酸配列を含み、第２のポリペプチドは、ＡｃｔＲＩＩポリペプチドおよび相互作用対の第２のメンバー（または第１のメンバー）のアミノ酸配列を含む。
【００３５】
ある特定の態様では、ＡｃｔＲＩＩポリペプチドは、それらの改変体（例えば、ＧＤＦトラップ）を含め、融合タンパク質であってもよい。例えば、一部の実施形態では、ＡｃｔＲＩＩポリペプチドは、ＡｃｔＲＩＩポリペプチドドメインおよび１つまたは複数の異種（非ＡｃｔＲＩＩ）ポリペプチドドメインを含む融合タンパク質であってもよい。一部の実施形態では、ＡｃｔＲＩＩポリペプチドは、１つのドメインとして、ＡｃｔＲＩＩポリペプチド（例えば、ＡｃｔＲＩＩ受容体またはそれらの改変体のリガンド結合ドメイン）由来のアミノ酸配列を有し、所望の特性、例えば改善された薬物動態、より簡単な精製、特定の組織への標的化などを提供する１つまたは複数の異種ドメインを有する融合タンパク質であってもよい。例えば、融合タンパク質のドメインは、インビボにおける安定性、インビボ半減期、取込み／投与、組織局在化もしくは分布、タンパク質複合体の形成、融合タンパク質の多量体化、および／または精製の１つまたは複数を増強し得る。任意選択で、融合タンパク質のＡｃｔＲＩＩポリペプチドドメインは、１つまたは複数の異種ポリペプチドドメインに直接接続（融合）されているか、またはＡｃｔＲＩＩポリペプチドのアミノ酸配列と１つまたは複数の異種ドメインのアミノ酸配列との間に、介在配列、例えばリンカーなどが配置されていてもよい。ある特定の実施形態では、ＡｃｔＲＩＩ融合タンパク質は、比較的構造化されていないリンカーであって、異種ドメインと、ＡｃｔＲＩＩドメインとの間に位置するリンカーを含む。この構造化されていないリンカーは、ＡｃｔＲＩＩＡまたはＡｃｔＲＩＩＢの細胞外ドメインのＣ末端（「テール」）における、約１５アミノ酸の構造化されていない領域に対応してもよく、３と、１５、２０、３０、５０、またはこれを超えるアミノ酸との間の人工配列であって、比較的二次構造を含まない人工配列でもよい。リンカーは、グリシン残基およびプロリン残基に富む場合がある。リンカーの例としては、これらに限定されないが、配列ＴＧＧＧ（配列番号２３）、ＳＧＧＧ（配列番号２４）、ＴＧＧＧＧ（配列番号２１）、ＳＧＧＧＧ（配列番号２２）、ＧＧＧＧＳ（配列番号２５）、ＧＧＧＧ（配列番号２０）、およびＧＧＧ（配列番号１９）が挙げられる。一部の実施形態では、ＡｃｔＲＩＩ融合タンパク質は、免疫グロブリンの定常ドメイン、例えば免疫グロブリンのＦｃ部分などを含み得る。例えば、ＩｇＧ（ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４）、ＩｇＡ（ＩｇＡ１またはＩｇＡ２）、ＩｇＥ、またはＩｇＭ免疫グロブリンのＦｃドメイン由来のアミノ酸配列。例えば、免疫グロブリンドメインのＦｃ部分は、配列番号１４〜１８のいずれか１つと少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％同一であるアミノ酸配列を含んでいてもよく、これらから本質的になっていてもよく、またはこれらからなっていてもよい。このような免疫グロブリンドメインは、変更されたＦｃ活性を付与する、例えば、１つまたは複数のＦｃエフェクター機能を低下させる１つまたは複数のアミノ酸修飾（例えば、欠失、付加、および／または置換）を含み得る。一部の実施形態において、ＡｃｔＲＩＩ融合タンパク質は、式Ａ−Ｂ−Ｃに示されるアミノ酸配列を含む。例えば、Ｂ部分は、本明細書に記載される通りのＮおよびＣ末端が短縮されたＡｃｔＲＩＩポリペプチドである。ＡおよびＣ部分は、独立に、０、１、または１を超えるアミノ酸であってもよく、ＡおよびＣ部分の両方は、Ｂにとって異種である。Ａおよび／またはＣ部分は、リンカー配列を介してＢ部分に付加され得る。ある特定の実施形態では、ＡｃｔＲＩＩ融合タンパク質は、リーダー配列を含む。リーダー配列は、天然のＡｃｔＲＩＩリーダー配列（例えば、天然のＡｃｔＲＩＩＡリーダー配列またはＡｃｔＲＩＩＢリーダー配列）であってもよく、異種リーダー配列であってもよい。ある特定の実施形態では、リーダー配列は、組織プラスミノーゲンアクチベーター（ＴＰＡ）リーダー配列である。
【００３６】
ＡｃｔＲＩＩポリペプチドは、それらの改変体（例えば、ＧＤＦトラップ）を含め、エピトープタグ、ＦＬＡＧタグ、ポリヒスチジン配列、およびＧＳＴ融合などの精製部分配列を含み得る。任意選択で、ＡｃｔＲＩＩポリペプチドは、グリコシル化アミノ酸、ＰＥＧ化アミノ酸、ファルネシル化アミノ酸、アセチル化アミノ酸、ビオチン化アミノ酸、脂質部分に結合体化したアミノ酸、および有機誘導体化剤に結合体化したアミノ酸から選択される、１つまたは複数の修飾アミノ酸残基を含む。ＡｃｔＲＩＩポリペプチドは、少なくとも１つのＮ−連結糖を含んでいてもよく、２つ、３つまたはそれより多くのＮ−連結糖を含んでいてもよい。このようなポリペプチドはまた、Ｏ−連結糖を含んでいてもよい。一般に、ＡｃｔＲＩＩアンタゴニストポリペプチドは、患者における望ましくない免疫応答の可能性を低減するために好適にはポリペプチドの天然グリコシル化を媒介する哺乳動物細胞株内で発現させることが好ましい。ＡｃｔＲＩＩポリペプチドは、操作された昆虫または酵母細胞、および哺乳動物細胞、例えばＣＯＳ細胞、ＣＨＯ細胞、ＨＥＫ細胞およびＮＳＯ細胞などの、患者の使用にとって好適な方式でタンパク質をグリコシル化する種々の細胞株で産生させることができる。一部の実施形態では、ＡｃｔＲＩＩポリペプチドは、グリコシル化されており、チャイニーズハムスター卵巣細胞株から得ることができるグリコシル化パターンを有する。一部の実施形態では、本開示のＡｃｔＲＩＩポリペプチドは、哺乳動物（例えば、マウスまたはヒト）において少なくとも４、６、１２、２４、３６、４８、または７２時間の血清中半減期を呈示する。任意選択で、ＡｃｔＲＩＩポリペプチドは、哺乳動物（例えば、マウスまたはヒト）において少なくとも６、８、１０、１２、１４、２０、２５、または３０日の血清中半減期を呈示していてもよい。
【００３７】
ある特定の態様では、本開示は、本発明の開示の１つまたは複数のＡｃｔＲＩＩアンタゴニストおよび薬学的に許容されるキャリアを含む医薬調製物を提供する。また医薬調製物は、１つまたは複数の追加の活性作用因子、例えば本明細書に記載されるものなどの眼の血管障害を処置するのに使用される化合物を含んでいてもよい。本開示の医薬調製物は、実質的に発熱物質非含有であることが好ましい。ある特定の実施形態では、本開示は、パッケージングされた医薬品であって、本明細書に記載される医薬調製物を含み、１つまたは複数の眼の血管障害［例えば、加齢性黄斑変性症、若年性黄斑変性症、滲出型黄斑変性症、萎縮型黄斑変性症、シュタルガルト病、およびベスト病）、網膜静脈閉塞症（例えば、網膜中心静脈閉塞症、半側網膜静脈閉塞症、網膜静脈分枝閉塞症、および虚血性網膜静脈閉塞症）、網膜動脈閉塞症（例えば、網膜中心動脈閉塞症、半側網膜動脈閉塞症、網膜動脈分枝閉塞症、および虚血性網膜動脈閉塞症）、糖尿病性網膜症、虚血性視神経症［例えば、前部虚血性視神経症（動脈炎性および非動脈炎性）および後部虚血性視神経症］、黄斑部毛細血管拡張症（Ｉ型またはＩＩ型）、網膜虚血（例えば、急性網膜虚血または慢性網膜虚血）の処置または予防の増進の１つまたは複数での使用に関するラベルが付された、医薬品を提供する。
【００３８】
ある特定の態様では、本発明の開示は、患者における眼の血管障害の処置または予防であって、少なくとも１つのＡｃｔＲＩＩアンタゴニストをそれを必要とする患者に投与し、さらに、例えば、外科手術、レーザー療法（例えば、光凝固）、抗血管新生療法［例えば、ＶＥＧＦ阻害剤、例えばベバシズマブ（Ａｖａｓｔｉｎ（登録商標））など、ラニビズマブ（Ｌｕｃｅｎｔｉｓ（登録商標））、およびアフリベルセプト（Ｅｙｌｅａ（登録商標））］、Ｃａ２＋阻害剤（例えば、フルナリジンおよびニフェジピン）、寒冷療法、高圧酸素療法、Ｎａ＋チャネルブロッカー（例えば、トピラメート）、ｉＧｌｕＲアンタゴニスト（例えば、ＭＫ−８０１、デキストロメトルファン、エリプロディル、およびフルピルチン）、抗酸化剤（例えば、ジメチルチオ尿素、ビタミンＥ、アルファ−リポ酸、スーパーオキシドジスムターゼ、カタラーゼ、  デスフェリオキサミン、マンニトール、アロプリノール、ドベシル酸カルシウム、フルピルチン、トリメタジジン、およびＥＧＢ−７６１）、抗炎症剤、毛様体ジアテルミー、毛様体冷凍術、眼濾過手術、排水弁の埋め込み、抗血小板療法（例えば、アスピリン、チクロピジン、およびクロピドグレル）、抗凝血剤療法（例えば、ワルファリンおよびヘパリン）、ステロイド、全身または局所のコルチコステロイド（例えば、プレドニゾン、トリアムシノロン（Ｔｒｉｅｓｅｎｃｅ（登録商標））およびデキサメタゾン（Ｏｚｕｒｄｅｘ（登録商標））、ステロイド減量の免疫抑制剤（例えば、サイクロスポリン、アザチオプリン、シクロホスファミド、ミコフェノール酸塩、モフェチル、インフリキシマブおよびエタネルセプト）、栄養補助食品（例えば、ビタミンＣ、ビタミンＥ、ルテイン、ゼアキサンチン、亜鉛、葉酸、ビタミンＢ６、ビタミンＢ１２、およびゼアキサンチン）、硝子体切除、強膜バックル手術、および気体網膜復位術などの障害を処置するための少なくとも１つの追加の療法とを施すことを含む、患者における眼の血管障害の処置または予防に関する。
【００３９】
ある特定の態様では、本発明の開示は、ＡｃｔＲＩＩ活性に拮抗する（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡおよび／またはＡｃｔＲＩＩＢシグナル伝達、例えば、Ｓｍａｄ１、２、３、５、および８シグナル伝達の阻害）抗体または抗体の組み合わせに関する。特に、本開示は、眼の血管障害を処置または予防するための方法であって、有効量の抗体ＡｃｔＲＩＩアンタゴニストまたは抗体ＡｃｔＲＩＩアンタゴニストの組み合わせ（例えば、ＡｃｔＲＩＩリガンド結合抗体、ＡｃｔＲＩＩ抗体など）をそれを必要とする対象に投与することを含む、方法を提供する。例えば、ある特定の実施形態では、本開示の好ましいＡｃｔＲＩＩアンタゴニストは、少なくともＧＤＦ１１に結合する抗体または抗体の組み合わせである。他の実施形態では、本開示の好ましいＡｃｔＲＩＩアンタゴニストは、少なくともＧＤＦ８に結合する抗体または抗体の組み合わせである。他の実施形態では、本開示の好ましいＡｃｔＲＩＩアンタゴニストは、少なくともアクチビン（例えば、アクチビンＡ、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、アクチビンＣ、および／またはアクチビンＥ）に結合する抗体または抗体の組み合わせである。さらなる実施形態では、本開示の好ましいＡｃｔＲＩＩアンタゴニストは、少なくともアクチビンＡおよびアクチビンＢに結合する抗体または抗体の組み合わせである。さらなる実施形態では、本開示の好ましいＡｃｔＲＩＩアンタゴニストは、少なくともアクチビンＡ、アクチビンＢ、アクチビンＡＢに結合する抗体または抗体の組み合わせである。さらなる他の実施形態では、本開示の好ましいＡｃｔＲＩＩアンタゴニストは、特に二特異性抗体などの多特異性抗体の文脈において、少なくともＧＤＦ１１およびＧＤＦ８に結合する抗体または抗体の組み合わせである。任意選択で、ＧＤＦ１１および／またはＧＤＦ８に結合する本開示の抗体または抗体の組み合わせは、アクチビン（アクチビンＡ、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、アクチビンＣ、アクチビンＥ）、ＢＭＰ６、またはＢＭＰ１０の１つまたは複数にさらに結合する。一部の実施形態では、ＧＤＦ１１および／またはＧＤＦ８に結合する本開示の抗体または抗体の組み合わせは、少なくともアクチビンＢにさらに結合する。一部の実施形態では、本開示の抗体または抗体の組み合わせは、アクチビンＡに結合するか、またはそれに実質的に結合しない（例えば、アクチビンＡに１×１０−７Ｍより大きいＫＤで結合するか、または比較的中度の結合、例えば、約１×１０−８Ｍまたは約１×１０−９Ｍを示す）。一部の実施形態では、本開示の抗体または抗体の組み合わせは、ＢＭＰ１０に結合しないか、またはそれに実質的に結合しない（例えば、ＢＭＰ１０に１×１０−７Ｍより大きいＫＤで結合するか、または比較的中度の結合、例えば、約１×１０−８Ｍまたは約１×１０−９Ｍを示す）。
【００４０】
ある特定の場合において、眼の血管障害を処置または予防するために、本開示のＡｃｔＲＩＩアンタゴニストまたはアンタゴニストの組み合わせを投与する場合、ＡｃｔＲＩＩアンタゴニストの投与時における赤血球に対する効果をモニタリングするか、または赤血球に対する所望されない作用を低減するために、ＡｃｔＲＩＩアンタゴニストの投薬を決定もしくは調整することが望ましいと考えられる。例えば、赤血球レベル、ヘモグロビンレベル、またはヘマトクリットレベルの上昇は、血圧の望ましくない上昇を引き起こし得る。
【００４１】
特許または特許出願書類は、カラーで作成された少なくとも１つの図を含む。カラー図を含む本特許または特許出願公開の複製は、申請および手数料の支払いにより特許庁から提供される。
【図面の簡単な説明】
【００４２】
【図１】図１は、複数のＡｃｔＲＩＩＢおよびＡｃｔＲＩＩＡの結晶構造の合成解析に基づき、ボックスで指し示されるリガンドに直接接触することが本明細書で推定される残基を伴う、ヒトＡｃｔＲＩＩＡの細胞外ドメイン（配列番号５１）およびヒトＡｃｔＲＩＩＢの細胞外ドメイン（配列番号２）のアラインメントを示す。
【００４３】
【図２】図２は、種々の脊椎動物ＡｃｔＲＩＩＢタンパク質およびヒトＡｃｔＲＩＩＡ（配列番号５２〜５８）の多重配列アライメントならびにアライメント由来のコンセンサスＡｃｔＲＩＩ配列（配列番号５９）を示す。
【００４４】
【図３】図３は、ＣＨＯ細胞内で発現させたＡｃｔＲＩＩＡ−ｈＦｃの精製を示す。タンパク質は、サイジングカラム（上パネル）およびクーマシー染色したＳＤＳ−ＰＡＧＥ（下パネル）（左レーン：分子量標準物質；右レーン：ＡｃｔＲＩＩＡ−ｈＦｃ）により視覚化される通り、単一の、十分に明確なピークとして精製される。
【００４５】
【図４】図４は、Ｂｉａｃｏｒｅ（商標）アッセイにより測定される、ＡｃｔＲＩＩＡ−ｈＦｃの、アクチビン（上パネル）およびＧＤＦ−１（下パネル）への結合を示す。
【００４６】
【図５】図５は、ＧＤＦトラップであるＡｃｔＲＩＩＢ（Ｌ７９Ｄ  ２０〜１３４）−ｈＦｃ（配列番号４６）の全長アミノ酸配列であって、ＴＰＡリーダー配列（二重下線を付す）、ＡｃｔＲＩＩＢ細胞外ドメイン（配列番号１内の残基２０〜１３４；一重下線を付す）、およびｈＦｃドメインを含む全長アミノ酸配列を示す。シーケンシングにより、成熟融合タンパク質内のＮ末端残基であると明らかにされたグリシンと同様に、天然配列内の７９位において置換されたアスパラギン酸にも二重下線を付し、強調する。
【００４７】
【図６−１】図６Ａおよび６Ｂは、ＡｃｔＲＩＩＢ（Ｌ７９Ｄ  ２０〜１３４）−ｈＦｃをコードするヌクレオチド配列を示す。配列番号４７は、センス鎖に対応し、配列番号６０は、アンチセンス鎖に対応する。ＴＰＡリーダー（ヌクレオチド１〜６６）に二重下線を付し、ＡｃｔＲＩＩＢ細胞外ドメイン（ヌクレオチド７６〜４２０）に一重下線を付す。
【図６−２】図６Ａおよび６Ｂは、ＡｃｔＲＩＩＢ（Ｌ７９Ｄ  ２０〜１３４）−ｈＦｃをコードするヌクレオチド配列を示す。配列番号４７は、センス鎖に対応し、配列番号６０は、アンチセンス鎖に対応する。ＴＰＡリーダー（ヌクレオチド１〜６６）に二重下線を付し、ＡｃｔＲＩＩＢ細胞外ドメイン（ヌクレオチド７６〜４２０）に一重下線を付す。
【００４８】
【図７】図７は、短縮型ＧＤＦトラップであるＡｃｔＲＩＩＢ（Ｌ７９Ｄ  ２５〜１３１）−ｈＦｃ（配列番号６１）の全長アミノ酸配列であって、ＴＰＡリーダー（二重下線を付す）、短縮型ＡｃｔＲＩＩＢ細胞外ドメイン（配列番号１内の残基２５〜１３１；一重下線を付す）、およびｈＦｃドメインを含む全長アミノ酸配列を示す。シーケンシングにより、成熟融合タンパク質内のＮ末端残基であると明らかにされたグルタミン酸と同様に、天然配列内の７９位において置換されたアスパラギン酸にも二重下線を付し、強調する。
【００４９】
【図８−１】図８Ａおよび８Ｂは、ＡｃｔＲＩＩＢ（Ｌ７９Ｄ  ２５〜１３１）−ｈＦｃをコードするヌクレオチド配列を示す。配列番号６２は、センス鎖に対応し、配列番号６３は、アンチセンス鎖に対応する。ＴＰＡリーダー（ヌクレオチド１〜６６）に二重下線を付し、短縮型ＡｃｔＲＩＩＢ細胞外ドメイン（ヌクレオチド７６〜３９６）に一重下線を付す。また、ＡｃｔＲＩＩＢ細胞外ドメイン（配列番号１内の残基２５〜１３１）のアミノ酸配列も示す。
【図８−２】図８Ａおよび８Ｂは、ＡｃｔＲＩＩＢ（Ｌ７９Ｄ  ２５〜１３１）−ｈＦｃをコードするヌクレオチド配列を示す。配列番号６２は、センス鎖に対応し、配列番号６３は、アンチセンス鎖に対応する。ＴＰＡリーダー（ヌクレオチド１〜６６）に二重下線を付し、短縮型ＡｃｔＲＩＩＢ細胞外ドメイン（ヌクレオチド７６〜３９６）に一重下線を付す。また、ＡｃｔＲＩＩＢ細胞外ドメイン（配列番号１内の残基２５〜１３１）のアミノ酸配列も示す。
【００５０】
【図９】図９は、リーダーを伴わない短縮型ＧＤＦトラップであるＡｃｔＲＩＩＢ（Ｌ７９Ｄ  ２５〜１３１）−ｈＦｃのアミノ酸配列（配列番号６４）を示す。短縮型ＡｃｔＲＩＩＢ細胞外ドメイン（配列番号１内の残基２５〜１３１）に下線を付す。シーケンシングにより、成熟融合タンパク質内のＮ末端残基であると明らかにされたグルタミン酸と同様に、天然配列内の７９位において置換されたアスパラギン酸にも二重下線を付し、強調する。
【００５１】
【図１０】図１０は、リーダー、ｈＦｃドメイン、およびリンカーを伴わない短縮型ＧＤＦトラップであるＡｃｔＲＩＩＢ（Ｌ７９Ｄ  ２５〜１３１）のアミノ酸配列（配列番号６５）を示す。シーケンシングにより、成熟融合タンパク質内のＮ末端残基であると明らかにされたグルタミン酸と同様に、天然配列内の７９位において置換されたアスパラギン酸にも下線を付し、強調する。
【００５２】
【図１１−１】図１１Ａおよび１１Ｂは、ＡｃｔＲＩＩＢ（Ｌ７９Ｄ  ２５〜１３１）−ｈＦｃをコードする代替的なヌクレオチド配列を示す。配列番号６６は、センス鎖に対応し、配列番号６７は、アンチセンス鎖に対応する。ＴＰＡリーダー（ヌクレオチド１〜６６）に二重下線を付し、短縮型ＡｃｔＲＩＩＢ細胞外ドメイン（ヌクレオチド７６〜３９６）に下線を付し、細胞外ドメインの野生型ヌクレオチド配列内の置換に二重下線を付し、強調する（図８の配列番号６２と比較する）。また、ＡｃｔＲＩＩＢ細胞外ドメイン（配列番号１内の残基２５〜１３１）のアミノ酸配列も示す。
【図１１−２】図１１Ａおよび１１Ｂは、ＡｃｔＲＩＩＢ（Ｌ７９Ｄ  ２５〜１３１）−ｈＦｃをコードする代替的なヌクレオチド配列を示す。配列番号６６は、センス鎖に対応し、配列番号６７は、アンチセンス鎖に対応する。ＴＰＡリーダー（ヌクレオチド１〜６６）に二重下線を付し、短縮型ＡｃｔＲＩＩＢ細胞外ドメイン（ヌクレオチド７６〜３９６）に下線を付し、細胞外ドメインの野生型ヌクレオチド配列内の置換に二重下線を付し、強調する（図８の配列番号６２と比較する）。また、ＡｃｔＲＩＩＢ細胞外ドメイン（配列番号１内の残基２５〜１３１）のアミノ酸配列も示す。
【００５３】
【図１２】図１２は、図１１に示される代替的なヌクレオチド配列（配列番号６６）のヌクレオチド７６〜３９６（配列番号６８）を示す。図１１に表示した同じヌクレオチド置換に、本図でもまた下線を付し、強調する。配列番号６８は、Ｌ７９Ｄ置換を有する短縮型ＡｃｔＲＩＩＢ細胞外ドメイン（配列番号１内の残基２５〜１３１に対応する）、例えば、ＡｃｔＲＩＩＢ（Ｌ７９Ｄ  ２５〜１３１）だけをコードする。
【００５４】
【図１３】図１３は、ＧＤＦトラップがＭＤＳのマウスモデルにおける複数の段階の疾患重症度で無効赤血球生成を軽減でき、貧血を改善できることを示す。（Ａ）１週間に２回、８週間、終了時およそ６カ月齢（初期段階）でビヒクル（Ｔｒｉｓ緩衝生理食塩水、ＴＢＳ、ｎ＝５）を用いて処置した野生型（Ｗｔ）マウス、ＴＢＳを用いて処置したＭＤＳマウス（ｎ＝５）およびＡｃｔＲＩＩＢ（Ｌ７９Ｄ  ２５−１３１）−ｍＦｃを用いて処置したＭＤＳマウス（１０ｍｇ／ｋｇ、ｎ＝６）におけるＲＢＣ数およびヘモグロビン濃度（上）ならびに骨髄中の造血前駆体の形態学的一覧（下）。ＴＢＳ処置ＭＤＳマウスに対して、＊Ｐ＜０．０５、＊＊Ｐ＜０．０１；野生型マウスに対して、＃＃＃Ｐ＜０．００１。（Ｂ）７週間、終了時およそ１２カ月齢（後期段階）でＡｃｔＲＩＩＢ（Ｌ７９Ｄ  ２５−１３１）−ｍＦｃ（１０ｍｇ／ｋｇ、１週間に２回、ｎ＝５）またはＴＢＳ（ｎ＝４）を用いて処置したＭＤＳマウスにおけるパネルＡと同じエンドポイント。ＴＢＳ処置ＭＤＳマウスに対して、＊Ｐ＜０．０５。データは、平均±ＳＥＭである。
【００５５】
【図１４】図１４は、種々の脊椎動物ＡｃｔＲＩＩＡタンパク質およびヒトＡｃｔＲＩＩＡの多重配列アライメント（配列番号６９〜７６）を示す。
【００５６】
【図１５】図１５は、Ｃｌｕｓｔａｌ  ２．１を使用してヒトＩｇＧアイソタイプからのＦｃドメインの多重配列アライメントを示す。ヒンジ領域は点線下線で示されている。
【００５７】
【図１６】図１６は、ＡｃｔＲＩＩＢ（２５−１３１）−ｈＦｃ（配列番号７９）についての全長の、プロセシングされていないアミノ酸配列を示す。ＴＰＡリーダー（残基１〜２２）および二重短縮型ＡｃｔＲＩＩＢ細胞外ドメイン（残基２４〜１３１、配列番号１の天然配列に基づく番号付けを使用）それぞれに下線を付す。強調されているのは、配列番号１に対して２５位である、シーケンシングにより成熟融合タンパク質のＮ末端アミノ酸であると明らかにされたグルタミン酸である。
【００５８】
【図１７−１】図１７Ａおよび１７Ｂは、ＡｃｔＲＩＩＢ（２５−１３１）−ｈＦｃをコードするヌクレオチド配列を示す（コード鎖は上に示され、配列番号８０、相補体は下に示されている、３’−５’、配列番号８１）。ＴＰＡリーダー（ヌクレオチド１〜６６）およびＡｃｔＲＩＩＢ細胞外ドメイン（ヌクレオチド７３〜３９６）をコードする配列に下線を付す。ＡｃｔＲＩＩＢ（２５−１３１）についての対応するアミノ酸配列も示されている。
【図１７−２】図１７Ａおよび１７Ｂは、ＡｃｔＲＩＩＢ（２５−１３１）−ｈＦｃをコードするヌクレオチド配列を示す（コード鎖は上に示され、配列番号８０、相補体は下に示されている、３’−５’、配列番号８１）。ＴＰＡリーダー（ヌクレオチド１〜６６）およびＡｃｔＲＩＩＢ細胞外ドメイン（ヌクレオチド７３〜３９６）をコードする配列に下線を付す。ＡｃｔＲＩＩＢ（２５−１３１）についての対応するアミノ酸配列も示されている。
【００５９】
【図１８−１】図１８は、ＡｃｔＲＩＩＢ（２５−１３１）−ｈＦｃをコードする代替ヌクレオチド配列を示す（コード鎖は上に示され、配列番号８２、相補体は下に示されている、３’−５’、配列番号８３）。この配列は、最初の形質転換体においてタンパク質のより多い発現レベルを付与し、細胞株発達をさらに急速なプロセスにする。ＴＰＡリーダー（ヌクレオチド１〜６６）およびＡｃｔＲＩＩＢ細胞外ドメイン（ヌクレオチド７３〜３９６）をコードする配列に下線を付し、ＥＣＤの野生型ヌクレオチド配列中の置換（図１７を参照されたい）を強調する。ＡｃｔＲＩＩＢ（２５−１３１）に対応するアミノ酸配列も示す。
【図１８−２】図１８は、ＡｃｔＲＩＩＢ（２５−１３１）−ｈＦｃをコードする代替ヌクレオチド配列を示す（コード鎖は上に示され、配列番号８２、相補体は下に示されている、３’−５’、配列番号８３）。この配列は、最初の形質転換体においてタンパク質のより多い発現レベルを付与し、細胞株発達をさらに急速なプロセスにする。ＴＰＡリーダー（ヌクレオチド１〜６６）およびＡｃｔＲＩＩＢ細胞外ドメイン（ヌクレオチド７３〜３９６）をコードする配列に下線を付し、ＥＣＤの野生型ヌクレオチド配列中の置換（図１７を参照されたい）を強調する。ＡｃｔＲＩＩＢ（２５−１３１）に対応するアミノ酸配列も示す。
【発明を実施するための形態】
【００６０】
（発明の詳細な説明）
（１．概要）
トランスフォーミング増殖因子−β（ＴＧＦ−β）スーパーファミリーは、共通の配列エレメントと構造モチーフを共有する、種々の増殖因子を含む。これらのタンパク質は、脊椎動物および無脊椎動物の両方における広範な種々の細胞型に対して生物学的作用を発揮することが公知である。このスーパーファミリーのメンバーは、胚発生の間に、パターン形成および組織の特異化において重要な機能を果たし、そして、脂質生成、筋発生、軟骨形成、心臓発生、造血、神経発生および上皮細胞分化を含む種々の分化プロセスに影響を及ぼし得る。ＴＧＦ−βファミリーのメンバーの活性を操作することによって、しばしば、生物において顕著な生理学的変化を引き起こすことが可能である。例えば、ウシのＰｉｅｄｍｏｎｔｅｓｅおよびＢｅｌｇｉａｎ  Ｂｌｕｅ品種は、ＧＤＦ８（ミオスタチンとも呼ばれる）遺伝子に機能喪失変異を有しており、筋肉量の顕著な増加を引き起こしている［例えば、Ｇｒｏｂｅｔら（１９９７年）、Ｎａｔ  Ｇｅｎｅｔ．、１７巻（１号）：７１〜４頁を参照されたい］。さらに、ヒトでは、ＧＤＦ８の不活性な対立遺伝子は、筋肉量の増加、および、報告によれば、例外的な強度と関連している［例えば、Ｓｃｈｕｅｌｋｅら（２００４年）、Ｎ  Ｅｎｇｌ  Ｊ  Ｍｅｄ、３５０巻：２６８２〜８頁を参照されたい］。
【００６１】
ＴＧＦ−βシグナルは、Ｉ型およびＩＩ型のセリン／スレオニンキナーゼ受容体の異種複合体（ｈｅｔｅｒｏｍｅｒｉｃ  ｃｏｍｐｌｅｘ）によって媒介され、これらは、リガンド刺激の際に、下流のＳＭＡＤタンパク質（例えば、ＳＭＡＤタンパク質１、２、３、５、および８）をリン酸化および活性化する［例えば、Ｍａｓｓａｇｕｅ、２０００年、Ｎａｔ．Ｒｅｖ．Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ．１巻：１６９〜１７８頁を参照のこと］。これらのＩ型およびＩＩ型受容体は、システインリッチな領域を持つリガンド結合細胞外ドメイン、膜貫通ドメイン、および、予測セリン／スレオニン特異性を持つ細胞質ドメインから構成される膜貫通タンパク質である。Ｉ型受容体は、シグナル伝達に必須である。ＩＩ型受容体は、リガンド結合およびＩ型受容体の活性化に必要とされる。Ｉ型およびＩＩ型のアクチビン受容体は、リガンド結合後に安定な複合体を形成し、ＩＩ型受容体によるＩ型受容体のリン酸化をもたらす。
【００６２】
２つの関連するＩＩ型受容体（ＡｃｔＲＩＩ）である、ＡｃｔＲＩＩＡおよびＡｃｔＲＩＩＢがアクチビンについてのＩＩ型受容体として同定されている［例えば、ＭａｔｈｅｗｓおよびＶａｌｅ（１９９１年）、Ｃｅｌｌ、６５巻：９７３〜９８２頁；ならびにＡｔｔｉｓａｎｏら（１９９２年）、Ｃｅｌｌ、６８巻：９７〜１０８頁を参照されたい］。ＡｃｔＲＩＩＡおよびＡｃｔＲＩＩＢは、アクチビンに加えて、例えば、ＢＭＰ６、ＢＭＰ７、Ｎｏｄａｌ、ＧＤＦ８、およびＧＤＦ１１を含む他のいくつかのＴＧＦ−βファミリータンパク質とも生化学的に相互作用し得る［例えば、Ｙａｍａｓｈｉｔａら（１９９５年）、Ｊ．  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ．、１３０巻：２１７〜２２６頁；ＬｅｅおよびＭｃＰｈｅｒｒｏｎ（２００１年）、Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．ＵＳＡ、９８巻：９３０６〜９３１１頁；ＹｅｏおよびＷｈｉｔｍａｎ（２００１年）、Ｍｏｌ．  Ｃｅｌｌ、７巻：９４９〜９５７頁；ならびにＯｈら（２００２年）、Ｇｅｎｅｓ
Ｄｅｖ．、１６巻：２７４９〜５４頁を参照されたい］。ＡＬＫ４は、アクチビン、特に、アクチビンＡに対する主たるＩ型受容体であり、ＡＬＫ７は、同様に他のアクチビン、特に、アクチビンＢに対する受容体として機能し得る。ある特定の実施形態では、本開示は、本明細書で開示される１つまたは複数の阻害剤作用因子、特に、アクチビンＡ、アクチビンＢ、アクチビンＣ、アクチビンＥ、ＢＭＰ９、ＢＭＰ１０、ＢＭＰ６、ＧＤＦ３、ＧＤＦ１１および／またはＧＤＦ８のうちの１つまたは複数に拮抗し得る阻害剤作用因子で、ＡｃｔＲＩＩ受容体のリガンド（ＡｃｔＲＩＩリガンドとも呼ばれる）に拮抗することに関する。
【００６３】
アクチビンとは、ＴＧＦベータスーパーファミリーに属する、二量体ポリペプチドの増殖因子である。２つの近縁のβサブユニットのホモ／ヘテロ二量体（それぞれ、βＡβＡ、βＢβＢ、およびβＡβＢ）である、３つの主要なアクチビン形態（Ａ、Ｂ、およびＡＢ）が存在する。ヒトゲノムはまた、主に肝臓内で発現する、アクチビンＣおよびアクチビンＥもコードし、βＣまたはβＥを含有するヘテロ二量体形態もまた公知である。
【００６４】
ＴＧＦ−βスーパーファミリーにおいて、アクチビンは、卵巣および胎盤の細胞におけるホルモン生成を刺激し得、神経細胞の生存を支援し得、細胞周期の進行に対して細胞型に依存して正もしくは負に影響を及ぼし得、そして、少なくとも両生類の胚において中胚葉分化を誘導し得る、独特かつ多機能の作用因子である［ＤｅＰａｏｌｏら（１９９１年）、Ｐｒｏｃ  Ｓｏｃ  Ｅｐ  Ｂｉｏｌ  Ｍｅｄ．１９８巻：５００〜５１２頁；Ｄｙｓｏｎら（１９９７年）、Ｃｕｒｒ  Ｂｉｏｌ．７巻：８１〜８４頁；およびＷｏｏｄｒｕｆｆ（１９９８年）、Ｂｉｏｃｈｅｍ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．５５巻：９５３〜９６３頁］。さらに、刺激されたヒト単球性白血病細胞から単離された赤血球分化作用因子（ＥＤＦ）は、アクチビンＡと同一であることが分かった［Ｍｕｒａｔａら（１９８８年）、ＰＮＡＳ、８５巻：２４３４頁］。アクチビンＡは、骨髄における赤血球生成を促進することが示唆されている。いくつかの組織では、アクチビンのシグナル伝達は、その関連するヘテロ二量体であるインヒビンによって拮抗される。例えば、下垂体からの卵胞刺激ホルモン（ＦＳＨ）の放出の間に、アクチビンは、ＦＳＨの分泌および合成を促進するが、インヒビンは、ＦＳＨの分泌および合成を抑制する。アクチビンの生活性を調節し得、そして／または、アクチビンに結合し得る他のタンパク質としては、フォリスタチン（ＦＳ）、フォリスタチン関連タンパク質（ＦＳＲＰ、ＦＬＲＧまたはＦＳＴＬ３としても公知）およびα２−マクログロブリンが挙げられる。
【００６５】
本明細書で記載される通り、「アクチビンＡ」に結合する作用因子は、単離βＡサブユニットの文脈であれ、二量体の複合体（例えば、βＡβＡホモ二量体またはβＡβＢヘテロ二量体）としてであれ、βＡサブユニットに特異的に結合する作用因子である。ヘテロ二量体の複合体（例えば、βＡβＢヘテロ二量体）の場合、「アクチビンＡ」に結合する作用因子は、βＡサブユニット内に存在するエピトープには特異的であるが、複合体のβＡ以外のサブユニット（例えば、複合体のβＢサブユニット）内に存在するエピトープには結合しない。同様に、「アクチビンＡ」に拮抗する（これを阻害する）本明細書で開示される作用因子は、単離βＡサブユニットの文脈であれ、二量体の複合体（例えば、βＡβＡホモ二量体またはβＡβＢヘテロ二量体）としてあれ、βＡサブユニットにより媒介される１つまたは複数の活性を阻害する作用因子である。βＡβＢヘテロ二量体の場合、「アクチビンＡ」を阻害する作用因子は、βＡサブユニットの１つまたは複数の活性を特異的に阻害するが、複合体のβＡ以外のサブユニット（例えば、複合体のβＢサブユニット）の活性は阻害しない作用因子である。この原則はまた、「アクチビンＢ」、「アクチビンＣ」、および「アクチビンＥ」に結合し、かつ／またはこれらを阻害する作用因子にも当てはまる。「アクチビンＡＢ」に拮抗する本明細書で開示される作用因子は、βＡサブユニットにより媒介される１つまたは複数の活性と、βＢサブユニットにより媒介される１つまたは複数の活性とを阻害する作用因子である。
【００６６】
増殖および分化因子８（ＧＤＦ８）は、ミオスタチンとしても公知である。ＧＤＦ８は、骨格筋量の負の調節因子である。ＧＤＦ８は、発生中および成体中の骨格筋において高度に発現する。遺伝子導入マウスにおけるＧＤＦ８欠失変異は、骨格筋の顕著な肥大および過形成を特徴とする［ＭｃＰｈｅｒｒｏｎら、Ｎａｔｕｒｅ（１９９７年）、３８７巻：８３〜９０頁］。骨格筋量の同様の増加は、ウシ［例えば、Ａｓｈｍｏｒｅら（１９７４年）、Ｇｒｏｗｔｈ、３８巻：５０１〜５０７頁；ＳｗａｔｌａｎｄおよびＫｉｅｆｆｅｒ（１９９４年）、Ｊ．  Ａｎｉｍ．  Ｓｃｉ．、３８巻：７５２〜７５７頁；ＭｃＰｈｅｒｒｏｎおよびＬｅｅ（１９９７年）、Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ、９４巻：１２４５７〜１２４６１頁；ならびにＫａｍｂａｄｕｒら（１９９７年）、Ｇｅｎｏｍｅ  Ｒｅｓ．、７巻：９１０〜９１５頁を参照されたい］および、驚くべきことに、ヒト［例えば、Ｓｃｈｕｅｌｋｅら（２００４年）、Ｎ  Ｅｎｇｌ  Ｊ  Ｍｅｄ、３５０巻：２６８２〜８頁を参照されたい］におけるＧＤＦ８の天然に存在する変異において明らかである。研究は、ヒトにおけるＨＩＶ感染に関連する筋肉消耗には、ＧＤＦ８タンパク質の発現の増加が随伴することも示している［例えば、Ｇｏｎｚａｌｅｚ−Ｃａｄａｖｉｄら（１９９８年）、ＰＮＡＳ、９５巻：１４９３８〜４３頁を参照されたい］。加えて、ＧＤＦ８は、筋肉特異的酵素（例えば、クレアチンキナーゼ）の生成を調節することが可能であり、筋芽細胞の増殖を調節し得る［例えば、国際特許出願公開第ＷＯ００／４３７８１号を参照されたい］。ＧＤＦ８プロペプチドは、成熟ＧＤＦ８ドメイン二量体に非共有結合的に結合し、その生物活性を不活性化することができる［例えば、Ｍｉｙａｚｏｎｏら（１９８８年）、Ｊ．  Ｂｉｏｌ．  Ｃｈｅｍ．、２６３巻：６４０７〜６４１５頁；Ｗａｋｅｆｉｅｌｄら（１９８８年）、Ｊ．  Ｂｉｏｌ．  Ｃｈｅｍ．、２６３巻：７６４６〜７６５４頁；およびＢｒｏｗｎら（１９９０年）、Ｇｒｏｗｔｈ  Ｆａｃｔｏｒｓ、３巻：３５〜４３頁を参照されたい］。ＧＤＦ８または構造的に関連するタンパク質に結合し、それらの生物活性を阻害する他のタンパク質として、フォリスタチン、および、潜在的に、フォリスタチン関連タンパク質が挙げられる［例えば、Ｇａｍｅｒら（１９９９年）、Ｄｅｖ．  Ｂｉｏｌ．、２０８巻：２２２〜２３２頁を参照されたい］。
【００６７】
ＢＭＰ１１としても公知の増殖および分化因子１１（ＧＤＦ１１）は、分泌タンパク質である［ＭｃＰｈｅｒｒｏｎら（１９９９年）、Ｎａｔ．  Ｇｅｎｅｔ．、２２巻：２６０〜２６４頁］。ＧＤＦ１１は、マウス発生時に尾芽、肢芽、上顎弓および下顎弓、ならびに後根神経節において発現する［例えば、Ｎａｋａｓｈｉｍａら（１９９９年）、Ｍｅｃｈ．  Ｄｅｖ．、８０巻：１８５〜１８９頁を参照されたい］。ＧＤＦ１１は、中胚葉組織および神経組織の両方のパターン形成において、固有の役割を果たす［例えば、Ｇａｍｅｒら（１９９９年）、Ｄｅｖ  Ｂｉｏｌ．、２０８巻：２２２〜３２頁を参照されたい］。ＧＤＦ１１は、発生中のニワトリの肢における軟骨形成および筋発生の負の調節因子であることが示された［例えば、Ｇａｍｅｒら（２００１年）、Ｄｅｖ  Ｂｉｏｌ．、２２９巻：４０７〜２０頁を参照されたい］。筋内のＧＤＦ１１の発現はまた、ＧＤＦ８と同様の方式での筋肉の増殖の調節におけるその役割も示唆する。加えて、脳内のＧＤＦ１１の発現は、ＧＤＦ１１はまた、神経系の機能に関連する活性を有し得ることを示唆する。興味深いことに、ＧＤＦ１１は、嗅上皮における神経発生を阻害することも見出された［例えば、Ｗｕら（２００３年）、Ｎｅｕｒｏｎ、３７巻：１９７〜２０７頁を参照されたい］。
【００６８】
ＡｃｔＲＩＩポリペプチド（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡおよびＡｃｔＲＩＩＢポリペプチド、加えてそれらの改変体、例えばＧＤＦトラップなど）は、インビボでの赤血球レベルを増加させるのに使用できることが実証された（例えば、ＷＯ２００８／０４６４３７およびＷＯ２０１０／０１９２６１を参照されたい）。本明細書に記載のある特定の例では、ＧＤＦトラップポリペプチドは、（非改変）ＡｃｔＲＩＩポリペプチドの対応する試料と比較して、固有の生体特性を特徴とすることが示される。このＧＤＦトラップは部分的に、アクチビンＡに対する結合アフィニティーの実質的な喪失を特徴とし、したがって、アクチビンＡ活性に拮抗する能力の有意な減殺を特徴とするが、ＧＤＦ１１に対する結合および阻害の野生型に近いレベルを保持する。ＧＤＦトラップは、赤血球レベルを増加させることにおいて、対応する非改変ＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドと比較してより有効であり、貧血についての種々のモデルにおいて有益な効果を有する。したがってデータは、ＡｃｔＲＩＩポリペプチドの観察された生物活性は、赤血球レベルに関して、アクチビンＡ阻害に依存しないことを指し示す。しかし、アクチビンＡへの結合を保持する非改変ＡｃｔＲＩＩポリペプチドもやはり、インビボにおいて赤血球を増大させる能力を実証することに注目されたい。さらに、より適度の赤血球レベルの上昇が望ましく、かつ／またはある程度のレベルのオフターゲット活性も許容可能である（なおまたは望ましい）一部の適用では、アクチビンＡの阻害を保持するＡｃｔＲＩＩポリペプチドが、アクチビンＡに対する結合アフィニティーが減殺されたＧＤＦトラップと比較して、より強く望ましいと考えられる。注目すべきことに、造血は、エリスロポイエチン、Ｇ−ＣＳＦ、および鉄のホメオスタシスを含む種々の因子によって調節される複雑なプロセスである。用語「赤血球レベルを増加させる」および「赤血球形成を促進する」は、ヘマトクリット、赤血球数、およびヘモグロビン測定値のような臨床的に観察可能な測定基準（ｍｅｔｒｉｃｓ）を指し、そのような変化が起こる機構に関しては中立であることが意図される。
【００６９】
本明細書に記載される通り、ＡｃｔＲＩＩアンタゴニスト（阻害剤）は、ＭＤＳ患者において、ヘモグロビンレベルを増加させ、輸血負荷を低減するのに使用できることが決定された。したがって、これらのデータは、ＡｃｔＲＩＩ阻害剤は、任意選択で１つまたは複数の支持療法と組み合わせて、それを必要とする対象において、骨髄異形成症候群を処置すること、鉄芽球性貧血を処置すること、さらに、鉄芽球性貧血または骨髄異形成症候群の１つまたは複数の合併症（例えば、貧血、血液、輸血必要状態、鉄過剰負荷、好中球減少症、脾腫、および急性骨髄性白血病への進行）を処置または予防すること、任意選択で、輪状鉄芽球および／または骨髄細胞におけるＳＦ３Ｂ１遺伝子の１つまたは複数の変異を有する患者の亜集団においてそれらを処置または予防することに使用できることを指し示す。
【００７０】
驚くべきことに、ＡｃｔＲＩＩアンタゴニストはまた、ＭＤＳ患者において視覚を改善することも観察された。したがって、貧血の処置への陽性効果に加えて、ＡｃｔＲＩＩ阻害剤は、ＭＤＳ患者において視覚の増加（例えば、視力および／または視野の増加）をもたらす可能性がある。さらに、ＭＤＳ関連の視覚損失に関する報告された機構を考慮すれば［Ｈａｎら（２０１５年）Ｊ  Ｇｌａｕｃｏｍａ（印刷前の電子出版）；Ｂｒｏｕｚａｓら（２００９年）Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌｏｇｙ  ３巻：１３３〜１３７頁］、データは、ＡｃｔＲＩＩ阻害剤はまた、他のタイプの眼（目の）障害、特に虚血および血管不全に関連する障害の処置に対しても陽性効果も有する可能性があることを示唆する。
【００７１】
したがって、本発明の開示の方法は、一部、それを必要とする対象において眼の血管障害を処置または予防するための、眼の血管障害を有する患者において視野を改善するための（例えば、視力および／または視野を増加させるための）、および／または眼の血管障害の１つまたは複数の合併症を処置もしくは予防するための、１つまたは複数のＡｃｔＲＩＩアンタゴニスト（阻害剤）の、任意選択で１つまたは複数の支持療法と組み合わせた使用に関する。
【００７２】
本明細書中で使用される用語は、一般に、本開示の文脈の範囲内で、かつ、各々の用語が使用される特定の文脈において、当該分野におけるその通常の意味を有する。本開示の組成物および方法、ならびに、これらの作製方法および使用方法の記載において、専門家にさらなる案内を提供するために、特定の用語が以下または本明細書中の他の場所で論じられている。用語の任意の使用の範囲および意味は、それらが使用される特定の文脈から明らかである。
【００７３】
「相同」は、そのあらゆる文法的な形態および語の綴りのバリエーションにおいて「共通する進化的起源」を有する２つのタンパク質間の関係を指し、同じ生物種のスーパーファミリーからのタンパク質ならびに異なる生物種からの相同タンパク質を含む。このようなタンパク質（およびこれをコードする核酸）は、％同一性の観点であれ、特定の残基もしくはモチーフおよび保存された位置の存在によるものであれ、その配列類似性によって反映されるように、配列の相同性を有する。
用語「配列類似性」は、そのあらゆる文法的な形態において、共通する進化の起源を共有している場合も共有していない場合もある、核酸もしくはアミノ酸配列間の同一性もしくは対応性の程度をいう。
しかし、一般的な用法およびこの出願において、用語「相同」は、「高度に」のような副詞で修飾されるとき、配列の類似性を指す場合があり、そして、共通する進化の起源に関連していてもしていなくてもよい。
【００７４】
参照ポリペプチド（またはヌクレオチド）配列に照らした「配列同一性パーセント（％）」とは、配列を決定し、必要な場合、最大の配列同一性パーセントを達成するようにギャップを導入した後における、保存的置換は配列同一性の一部と考えない場合の、候補配列内のアミノ酸残基（または核酸）の百分率であって、参照ポリペプチド（ヌクレオチド）配列内のアミノ酸残基（または核酸）と同一であるアミノ酸残基（または核酸）の百分率と定義される。アミノ酸配列同一性パーセントを決定することを目的とするアラインメントは、当該分野の技術の範囲内にある種々の方式で、例えば、ＢＬＡＳＴソフトウェア、ＢＬＡＳＴ−２ソフトウェア、ＡＬＩＧＮソフトウェア、またはＭｅｇａｌｉｇｎ（ＤＮＡＳＴＡＲ）ソフトウェアなど、一般に利用可能なコンピュータソフトウェアを使用して達成することができる。当業者は、配列を決定するのに適切なパラメータであって、比較される配列の全長にわたり最大のアラインメントを達成するのに必要とされる、任意のアルゴリズムを含むパラメータを決定することができる。しかし、本明細書の目的では、アミノ酸（核酸）配列同一性％値は、配列比較コンピュータプログラムである、ＡＬＩＧＮ−２を使用して生成する。ＡＬＩＧＮ−２配列比較コンピュータプログラムは、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ，Ｉｎｃ．により作成され、ソースコードは、使用説明書と共に、米国著作権局、Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ  Ｄ．Ｃ．、２０５５９に提出され、ここで、米国著作権登録第ＴＸＵ５１００８７号として登録されている。ＡＬＩＧＮ−２プログラムは、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ，Ｉｎｃ．、Ｓｏｕｔｈ  Ｓａｎ  Ｆｒａｎｃｉｓｃｏ、Ｃａｌｉｆ．から一般に利用可能であるが、ソースコードからコンパイルすることもできる。ＡＬＩＧＮ−２プログラムは、デジタルＵＮＩＸ（登録商標）  Ｖ４．０Ｄを含む、ＵＮＩＸ（登録商標）オペレーティングシステム上の使用のためにコンパイルされるべきである。全ての配列比較パラメータは、ＡＬＩＧＮ−２プログラムにより設定され、変化しない。
【００７５】
「アゴナイズする」は、全てのその文法上の形態において、タンパク質および／または遺伝子を活性化するプロセス（例えば、そのタンパク質の遺伝子発現を活性化または増幅することによって、または不活性なタンパク質が活性状態になるように誘導することによって）、またはタンパク質および／または遺伝子の活性を増加させるプロセスを指す。
【００７６】
「拮抗する」は、全てのその文法上の形態において、タンパク質および／または遺伝子を阻害するプロセス（例えば、そのタンパク質の遺伝子発現を阻害するかまたは低下させることによって、または活性タンパク質が不活性状態になるように誘導することによって）、またはタンパク質および／または遺伝子の活性を低下させるプロセスを指す。
【００７７】
本明細書で使用される場合、別段の指定がない限り、「Ｘに実質的に結合しない」とは、作用因子が、約１０−７より大きい、約１０−６より大きい、約１０−５より大きい、約１０−４より大きい、またはそれより大きいＫＤを有すること（例えば、「Ｘ」に関するＫＤを決定するのに使用されるアッセイでは検出不可能な結合、または「Ｘ」に関して比較的中度の結合、例えば、約１×１０−８Ｍまたは約１×１０−９Ｍを示すこと）を意味することが意図される。
【００７８】
用語「約」および「およそ」は、本明細書および特許請求の範囲にわたり数値と関連して使用される場合、当業者にとって一般的な許容できる正確さの隔たりを意味する。一般に、このような正確さの隔たりは±１０％である。代替的に、生物系において特に、用語「約」および「およそ」は、所与の値の１ケタ以内、好ましくは５倍以内、より好ましくは２倍以内の値を意味し得る。
【００７９】
本明細書で開示された数値範囲は、範囲を定義する数を含む。
【００８０】
用語「１つの（ａ）」および「１つの（ａｎ）」は、その用語が使用される文脈が明らかにそうではないことを指示しない限り、複数形の指示対象を含む。用語「１つの（ａ）」（または「１つの（ａｎ）」）、加えて用語「１つまたは複数の」、および「少なくとも１つの」は、本明細書において同義的に使用することができる。さらに、「および／または」は、本明細書において使用される場合、２つまたはそれより多くの特定された特徴または構成要素のそれぞれが他方を含むまたは含まないことの具体的な開示として解釈されるものとする。したがって、用語「および／または」は、本明細書において例えば「Ａおよび／またはＢ」などの成句で使用される場合、「ＡおよびＢ」、「ＡまたはＢ」、「Ａ」（単独）、および「Ｂ」（単独）を含むことが意図される。同様に、用語「および／または」は、例えば「Ａ、Ｂ、および／またはＣ」などの成句で使用される場合、以下の態様：Ａ、Ｂ、およびＣ；Ａ、Ｂ、またはＣ；ＡまたはＣ；ＡまたはＢ；ＢまたはＣ；ＡおよびＣ；ＡおよびＢ；ＢおよびＣ；Ａ（単独）；Ｂ（単独）；ならびにＣ（単独）のそれぞれを包含することが意図される。
【００８１】
本明細書にわたり、文言「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅ）」または「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ）」もしくは「含むこと（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」などの派生語は、述べられている整数または整数の群を含むことを暗に意味するが、他のいずれの整数または整数の群も排除されないことが理解される。
【００８２】
２．ＡｃｔＲＩＩアンタゴニスト
本明細書で示されたデータは、ＡｃｔＲＩＩアンタゴニスト（阻害剤）（例えば、ＡｃｔＲＩＩ媒介Ｓｍａｄ１、２、３、５、および８シグナル伝達の阻害剤）は、眼の血管障害を処置するのに使用できることを実証する。特に、ＡｃｔＲＩＩアンタゴニストは、ＭＤＳ患者において視覚を増加させることに有効であることが示された。ＭＤＳ患者における視覚損失は、虚血および／または血管不全が媒介する血管性の問題との関連が示されてきた［Ｈａｎら（２０１５年）Ｊ  Ｇｌａｕｃｏｍａ（印刷前の電子出版）；Ｂｒｏｕｚａｓら（２００９年）Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌｏｇｙ  ３巻：１３３〜１３７頁］。したがって、本発明の開示は、それを必要とする患者において、眼の血管障害［例えば、黄斑変性症（例えば、加齢性黄斑変性症、若年性黄斑変性症、滲出型黄斑変性症、萎縮型黄斑変性症、シュタルガルト病、およびベスト病）、網膜静脈閉塞症（例えば、網膜中心静脈閉塞症、半側網膜静脈閉塞症、網膜静脈分枝閉塞症、網膜静脈閉塞症後の黄斑浮腫、および虚血性網膜静脈閉塞症）、網膜動脈閉塞症（例えば、網膜中心動脈閉塞症、半側網膜動脈閉塞症、網膜動脈分枝閉塞症、および虚血性網膜動脈閉塞症）、糖尿病性網膜症、糖尿病黄斑浮腫、虚血性視神経症［例えば、前部虚血性視神経症（動脈炎性および非動脈炎性）および後部虚血性視神経症］、黄斑部毛細血管拡張症（Ｉ型またはＩＩ型）、網膜虚血（例えば、急性網膜虚血または慢性網膜虚血）、眼虚血性症候群、網膜血管炎、および未熟児網膜症を処置または予防するための；それを必要とする眼の血管障害を有する患者において視覚（例えば、視力および／または視野）を増加させるための；および／または眼の血管障害の１つまたは複数の合併症を処置または予防するための、単独で、または１つまたは複数の追加の支持療法と組み合わせて使用することができる種々のＡｃｔＲＩＩアンタゴニストを部分的に提供する。
【００８３】
ある特定の態様では、本明細書で開示された方法に従って使用されるＡｃｔＲＩＩアンタゴニストは、それらの短縮型および改変体を含むＡｃｔＲＩＩポリペプチド（ＡｃｔＲＩＩＡまたはＡｃｔＲＩＩＢポリペプチド）である。一部の実施形態では、本明細書で開示された方法に従って使用される好ましいＡｃｔＲＩＩアンタゴニストは、ＧＤＦ１１および／またはＧＤＦ８への強から中程度の結合アフィニティーを保持するが、対応する非改変体ＡｃｔＲＩＩポリペプチドと比較して１つまたは複数のＡｃｔＲＩＩリガンド（例えば、アクチビンＡ）への結合が低減された改変体ＡｃｔＲＩＩポリペプチドである。このような改変体ＡｃｔＲＩＩポリペプチドは、一般に、本明細書では「ＧＤＦトラップ」または「ＧＤＦトラップポリペプチド」と称される。
【００８４】
可溶性ＡｃｔＲＩＩポリペプチドおよびそれらの改変体（例えば、ＧＤＦトラップ）は、ＡｃｔＲＩＩリガンドの阻害以外の機構を介して、視覚または眼の血管障害の他の合併症に影響を及ぼす可能性があるが［例えば、ＧＤＦ１１、ＧＤＦ８、アクチビン、ＢＭＰ６、ＧＤＦ３、ＢＭＰ１０、および／またはＢＭＰ９の１つまたは複数の阻害は、おそらくＴＧＦ−ベータスーパーファミリーの他のメンバーも含む広範な追加の作用因子の活性を阻害する作用因子の傾向の指標であることが可能であり、このような集合的な阻害は、例えば視覚に所望の効果をもたらす可能性がある］、他のタイプのＡｃｔＲＩＩリガンドおよび受容体の阻害剤または阻害剤の組み合わせが、開示の方法に従って有用であることが予想され、このような他のタイプの阻害剤としては、例えば、抗ＧＤＦ１１抗体；抗ＧＤＦ８抗体；抗ＡｃｔＲＩＩＡ抗体；抗ＡｃｔＲＩＩＢ抗体；抗ＡｃｔＲＩＩＡ／ＩＩＢ抗体；抗アクチビン抗体；抗ＢＭＰ６抗体；抗ＧＤＦ３抗体；抗ＢＭＰ１０抗体；抗ＢＭＰ９抗体；ＧＤＦ１１、ＧＤＦ８、ＡｃｔＲＩＩＡ、ＡｃｔＲＩＩＢ、アクチビン、ＢＭＰ６、ＧＤＦ３、ＢＭＰ１０、およびＢＭＰ９の１つまたは複数の発現（例えば、転写、翻訳、細胞からの分泌、またはそれらの組み合わせ）を阻害する核酸；ならびにＧＤＦ１１、ＧＤＦ８、ＡｃｔＲＩＩＡ、ＡｃｔＲＩＩＢ、アクチビン、ＢＭＰ６、ＧＤＦ３、ＢＭＰ１０、およびＢＭＰ９の１つまたは複数の低分子阻害剤などが挙げられる。
【００８５】
Ａ．ＡｃｔＲＩＩポリペプチド
ある特定の態様では、本発明の開示は、ＡｃｔＲＩＩポリペプチドに関する。特に、本開示は、それを必要とする患者において、眼の障害、特に眼の血管障害［例えば、黄斑変性症（例えば、加齢性黄斑変性症、若年性黄斑変性症、滲出型黄斑変性症、萎縮型黄斑変性症、シュタルガルト病、およびベスト病）、網膜静脈閉塞症（例えば、網膜中心静脈閉塞症、半側網膜静脈閉塞症、網膜静脈分枝閉塞症、網膜静脈閉塞症後の黄斑浮腫、および虚血性網膜静脈閉塞症）、網膜動脈閉塞症（例えば、網膜中心動脈閉塞症、半側網膜動脈閉塞症、網膜動脈分枝閉塞症、および虚血性網膜動脈閉塞症）、糖尿病性網膜症、糖尿病黄斑浮腫、虚血性視神経症［例えば、前部虚血性視神経症（動脈炎性および非動脈炎性）および後部虚血性視神経症］、黄斑部毛細血管拡張症（Ｉ型またはＩＩ型）、網膜虚血（例えば、急性網膜虚血または慢性網膜虚血）、眼虚血性症候群、網膜血管炎、および未熟児網膜症］を処置または予防するための、それを必要とする眼の血管障害を有する患者において視覚を改善するための（増加させるための）（例えば、視力を増加させる、および／または視野を増加させるための）、および／または眼の血管障害の１つまたは複数の合併症を処置または予防するための、単独で、または１つまたは複数の追加の活性作用因子または支持療法と組み合わせて、ＡｃｔＲＩＩポリペプチドを使用する方法を提供する。本明細書で使用される用語「ＡｃｔＲＩＩ」とは、ＩＩ型アクチビン受容体のファミリーを指す。このファミリーは、アクチビン受容体ＩＩＡ型（ＡｃｔＲＩＩＡ）およびアクチビン受容体ＩＩＢ型（ＡｃｔＲＩＩＢ）を含む。
【００８６】
本明細書で使用する場合、用語「ＡｃｔＲＩＩＢ」とは、任意の種に由来するアクチビン受容体ＩＩＢ型（ＡｃｔＲＩＩＢ）タンパク質のファミリーと、変異誘発または他の改変によるこのようなＡｃｔＲＩＩＢタンパク質に由来する改変体とを指す。本明細書におけるＡｃｔＲＩＩＢに対する言及は、現在同定されている形態のうちの任意の１つに対する言及であるものと理解される。ＡｃｔＲＩＩＢファミリーのメンバーは、一般に、システインリッチな領域を含むリガンド結合細胞外ドメイン、膜貫通ドメインおよび予測セリン／スレオニンキナーゼ活性を持つ細胞質ドメインから構成される、膜貫通タンパク質である。
【００８７】
用語「ＡｃｔＲＩＩＢポリペプチド」は、ＡｃｔＲＩＩＢファミリーメンバーの任意の天然に存在するポリペプチド、ならびに、有用な活性を保持するその任意の改変体（変異体、フラグメント、融合物およびペプチド模倣形態を含む）を含むポリペプチドを包含する。このような改変体ＡｃｔＲＩＩＡポリペプチドの例は、本開示を通して提供されるほか、参照によりその全体において本明細書に組み込まれる、国際特許出願公開第ＷＯ２００６／０１２６２７号においても提供されている。本明細書で記載される、全てのＡｃｔＲＩＩＢ関連ポリペプチドのアミノ酸の番号付けは、そうでないことが具体的に指示されない限りにおいて、下記で提供される、ヒトＡｃｔＲＩＩＢ前駆体のタンパク質配列（配列番号１）の番号付けに基づく。
ヒトＡｃｔＲＩＩＢ前駆体タンパク質配列は、以下の通りである。
【化１】
2018534335.tif 000002
【００８８】
シグナルペプチドは、一重下線で指し示し、細胞外ドメインは、太字フォントで指し示し、潜在的な、内因性Ｎ−連結グリコシル化部位は、二重下線で指し示す。
【００８９】
プロセシング後の細胞外ＡｃｔＲＩＩＢポリペプチド配列は、以下の通りである。
【化２】
2018534335.tif 000003
【００９０】
一部の実施形態では、タンパク質は、Ｎ末端における「ＳＧＲ・・・」配列により生成することができる。細胞外ドメインのＣ末端「テール」は、一重下線で指し示す。「テール」を欠失させた配列（Δ１５配列）は、以下の通りである。
【化３】
2018534335.tif 000004
【００９１】
配列番号１の６４位においてアラニン（Ａ６４）を有するＡｃｔＲＩＩＢの形態についてはまた、文献［Ｈｉｌｄｅｎら（１９９４年）、Ｂｌｏｏｄ、８３巻（８号）：２１６３〜２１７０頁］においても報告されている。本出願人らは、Ａ６４置換を有するＡｃｔＲＩＩＢの細胞外ドメインを含むＡｃｔＲＩＩＢ−Ｆｃ融合タンパク質は、アクチビンおよびＧＤＦ１１に対するアフィニティーが比較的低いことを確認した。これに対し、６４位においてアルギニン（Ｒ６４）を有する、同じＡｃｔＲＩＩＢ−Ｆｃ融合タンパク質は、アクチビンおよびＧＤＦ１１に対するアフィニティーが、低ｎＭ〜高ｐＭの範囲である。したがって、Ｒ６４を有する配列を、本開示におけるヒトＡｃｔＲＩＩＢのための「野生型」参照配列として使用する。
６４位にアラニンを有するＡｃｔＲＩＩＢの形態は、以下の通りである。
【化４】
2018534335.tif 000005
【００９２】
シグナルペプチドは、一重下線で指し示し、細胞外ドメインは、太字フォントで指し示す。
代替Ａ６４形態のプロセシング後の細胞外ＡｃｔＲＩＩＢポリペプチド配列は、以下の通りである。
【化５】
2018534335.tif 000006
【００９３】
一部の実施形態では、タンパク質は、Ｎ末端における「ＳＧＲ・・・」配列により生成することができる。細胞外ドメインのＣ末端「テール」は、一重下線で指し示す。「テール」を欠失させた配列（Δ１５配列）は、以下の通りである。
【化６】
2018534335.tif 000007
【００９４】
ヒトＡｃｔＲＩＩＢ前駆体タンパク質をコードする核酸配列であって、ＡｃｔＲＩＩＢ前駆体のアミノ酸１〜５１３をコードする、Ｇｅｎｂａｎｋ参照配列ＮＭ＿００１１０６．３のヌクレオチド２５〜１５６０からなる核酸配列を、下記（配列番号７）に示す。示される配列は、６４位においてアルギニンを提示するが、代わりに、アラニンを提示するように改変することができる。シグナル配列に下線を付す。
【化７】
2018534335.tif 000008
【化８】
2018534335.tif 000009
【００９５】
プロセシング後のヒト細胞外ＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドをコードする核酸配列は、以下（配列番号８）の通りである。
【化９】
2018534335.tif 000010
【００９６】
示される配列は、６４位においてアルギニンを提示するが、代わりに、アラニンを提示するように改変することができる。
【００９７】
ヒトＡｃｔＲＩＩＢ細胞外ドメインおよびヒトＡｃｔＲＩＩＡ細胞外ドメインのアミノ酸配列のアラインメントを、図１に例示する。このアラインメントは、両方の受容体内のアミノ酸残基であって、ＡｃｔＲＩＩリガンドに直接接触すると考えられるアミノ酸残基を指し示す。例えば、複合的なＡｃｔＲＩＩ構造から、ＡｃｔＲＩＩＢ−リガンド結合ポケットは、残基Ｙ３１、Ｎ３３、Ｎ３５、Ｌ３８〜Ｔ４１、Ｅ４７、Ｅ５０、Ｑ５３〜Ｋ５５、Ｌ５７、Ｈ５８、Ｙ６０、Ｓ６２、Ｋ７４、Ｗ７８〜Ｎ８３、Ｙ８５、Ｒ８７、Ａ９２、およびＥ９４〜Ｆ１０１によって部分的に定義されることが指し示された。これらの位置において、保存的変異が許容されることが予想される。
【００９８】
加えて、ＡｃｔＲＩＩＢは、一般に、脊椎動物のなかでよく保存されており、完全に保存された細胞外ドメインの大きいストレッチを有する。例えば、図２は、種々のＡｃｔＲＩＩＢオーソログと比較したヒトＡｃｔＲＩＩＢ細胞外ドメインの多重配列アラインメントを描示する。ＡｃｔＲＩＩＢに結合するリガンドの多くも高度に保存されている。したがって、これらのアラインメントから、通常のＡｃｔＲＩＩＢ−リガンド結合活性に重要なリガンド結合ドメイン内の主要なアミノ酸位置を予想することが可能であるほか、通常のＡｃｔＲＩＩＢ−リガンド結合活性を顕著に変更させずに、置換に対して許容性を有する可能性が高いアミノ酸位置を予想することも可能である。したがって、ここで開示された方法に従って有用な活性ヒトＡｃｔＲＩＩＢ改変体ポリペプチドは、別の脊椎動物のＡｃｔＲＩＩＢの配列からの対応する位置における１つまたは複数のアミノ酸を含み得、または、ヒトまたは他の脊椎動物の配列中の残基に類似している残基を含み得る。
【００９９】
限定することを意味しないが、以下の実施例は、活性なＡｃｔＲＩＩＢ改変体を定義するためのこのアプローチを例示する。ヒト細胞外ドメイン（配列番号２）におけるＬ４６は、アフリカツメガエルＡｃｔＲＩＩＢ（配列番号５７）におけるバリンであり、したがってこの位置は変更され得、任意選択で、Ｖ、ＩまたはＦなどの別の疎水性残基、またはＡなどの非極性残基に変更され得る。ヒト細胞外ドメインにおけるＥ５２は、アフリカツメガエルではＫであり、これは、この部位は、Ｅ、Ｄ、Ｋ、Ｒ、Ｈ、Ｓ、Ｔ、Ｐ、Ｇ、ＹおよびおそらくＡなどの極性残基を含めた多種多様の変化が許容され得ることを示す。ヒト細胞外ドメインにおけるＴ９３は、アフリカツメガエルではＫであり、これは、この位置において幅広い構造的なバリエーションが許容されることを示しており、Ｓ、Ｋ、Ｒ、Ｅ、Ｄ、Ｈ、Ｇ、Ｐ、ＧおよびＹなどの極性残基が好ましい。ヒト細胞外ドメインにおけるＦ１０８は、アフリカツメガエルではＹであり、したがって、Ｙまたは他の疎水性基、例えばＩ、ＶまたはＬが許容されるはずである。ヒト細胞外ドメインにおけるＥ１１１は、アフリカツメガエルではＫであり、これは、この位置において、Ｄ、Ｒ、ＫおよびＨ、ならびにＱおよびＮを含めた荷電残基が許容されるはずであることを示す。ヒト細胞外ドメインにおけるＲ１１２は、アフリカツメガエルではＫであり、これは、この位置において、ＲおよびＨを含めた塩基性残基が許容されることを示す。ヒト細胞外ドメインにおける１１９位のＡは比較的不完全に保存されており、げっ歯類ではＰ（配列番号５２および５４）およびアフリカツメガエルではＶとして出現し、したがってこの位置では本質的にいかなるアミノ酸も許容されるはずである。
【０１００】
さらに当該分野では、ＡｃｔＲＩＩタンパク質は、構造的／機能的な特徴に関して、特にリガンド結合に関して特徴付けられている［Ａｔｔｉｓａｎｏら（１９９２年）Ｃｅｌｌ  ６８巻（１号）：９７〜１０８頁；Ｇｒｅｅｎｗａｌｄら（１９９９年）Ｎａｔｕｒｅ  Ｓｔｒｕｃｔｕｒａｌ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  ６巻（１号）：１８〜２２頁；Ａｌｌｅｎｄｏｒｐｈら（２００６年）ＰＮＡＳ  １０３巻（２０号）：７６４３〜７６４８頁；Ｔｈｏｍｐｓｏｎら（２００３年）Ｔｈｅ  ＥＭＢＯ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ２２巻（７号）：１５５５〜１５６６頁；および米国特許第７，７０９，６０５号、同第７，６１２，０４１号、および同第７，８４２，６６３号］。本明細書に記載の教示に加えて、これらの参考文献は、１つまたは複数の所望の活性（例えば、リガンド結合活性）を保持するＡｃｔＲＩＩ改変体をどのように生成するかに関する詳細な指針を提供する。
【０１０１】
例えば、スリーフィンガー毒素のフォールドとして公知の構造的なモチーフを定義することが、Ｉ型およびＩＩ型受容体によるリガンド結合にとって重要であり、各モノマー受容体の細胞外ドメイン内の様々な位置に配置されている保存されたシステイン残基によって形成される［Ｇｒｅｅｎｗａｌｄら（１９９９年）Ｎａｔ  Ｓｔｒｕｃｔ  Ｂｉｏｌ  ６巻：１８〜２２頁；およびＨｉｎｃｋ（２０１２年）ＦＥＢＳ  Ｌｅｔｔ  ５８６巻：１８６０〜１８７０頁］。したがって、ヒトＡｃｔＲＩＩＢのコアリガンド結合ドメインは、これらの保存されたシステインの最も外側を境界と定めた場合、配列番号１（ＡｃｔＲＩＩＢ前駆体）の２９〜１０９位に対応する。これらのシステインによって境界を定められたコア配列の端にある構造的にあまり秩序立っていないアミノ酸は、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、または３７残基短縮されていてもよく、それにより必ずしもリガンド結合は変更されない。Ｎ末端および／またはＣ末端における短縮の例示的なＡｃｔＲＩＩＢ細胞外ドメインとしては、配列番号２、３、５、および６が挙げられる。
【０１０２】
Ａｔｔｉｓａｎｏらは、ＡｃｔＲＩＩＢの細胞外ドメインのＣ末端におけるプロリンノットの欠失が、アクチビンに対する受容体のアフィニティーを低減したことを示した。本発明の配列番号１のアミノ酸２０〜１１９を含有するＡｃｔＲＩＩＢ−Ｆｃ融合タンパク質「ＡｃｔＲＩＩＢ（２０〜１１９）−Ｆｃ」は、プロリンノット領域および完全な膜近傍ドメインを含むＡｃｔＲＩＩＢ（２０〜１３４）−Ｆｃに比べて、ＧＤＦ１１およびアクチビンへの結合を低減した（例えば、米国特許第７，８４２，６６３号を参照されたい）。しかしながら、ＡｃｔＲＩＩＢ（２０〜１２９）−Ｆｃタンパク質は、プロリンノット領域が崩壊されていたとしても、野生型に類似した、ただし多少低減された活性を保持する。したがって、アミノ酸１３４、１３３、１３２、１３１、１３０および１２９（配列番号１に照らして）で終わるＡｃｔＲＩＩＢ細胞外ドメインは全て、活性であると予想されるが、１３４または１３３で終わる構築物が最も高い活性を有し得る。同様に、残基１２９〜１３４（配列番号１に照らして）のいずれかにおける変異は、リガンド結合アフィニティーが大幅に変更されるとは予想されない。この裏付けとして、Ｐ１２９およびＰ１３０の変異（配列番号１に照らして）によって、リガンド結合は実質的に低下しないことが当該分野において公知である。したがって、本発明の開示のＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドは、アミノ酸１０９（最後のシステイン）もの早期に終わる場合もあるが、１０９および１１９で終わるかまたはその間（例えば、１０９、１１０、１１１、１１２、１１３、１１４、１１５、１１６、１１７、１１８、または１１９）で終わる形態は、低減したリガンド結合を有すると予想される。アミノ酸１１９（本発明の配列番号１に照らして）は不完全に保存されているので、たやすく変更または短縮される。１２８またはそれ以降（配列番号１に照らして）で終わるＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドは、リガンド結合活性を保持すると予想される。配列番号１に照らして、１１９および１２７で終わるかまたはその間（例えば、１１９、１２０、１２１、１２２、１２３、１２４、１２５、１２６、または１２７）で終わるＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドは、中間の結合能力を有すると予想される。これらの形態のいずれも、臨床上または実験の設定に応じて使用するのに望ましい可能性がある。
【０１０３】
ＡｃｔＲＩＩＢのＮ末端では、アミノ酸２９またはその手前（配列番号１に照らして）で始まるタンパク質が、リガンド結合活性を保持することが予想される。アミノ酸２９は、最初のシステインを表す。２４位におけるアラニンからアスパラギンへの変異（配列番号１に照らして）は、リガンド結合に実質的に影響を及ぼさずに、Ｎ−連結グリコシル化配列を導入する［米国特許第７，８４２，６６３号］。これにより、シグナル切断ペプチドとシステイン架橋領域との間の領域であって、アミノ酸２０〜２９に対応する領域内の変異は、良好に許容されることが確認される。特に、２０、２１、２２、２３、および２４位（配列番号１に照らして）から始まるＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドは、一般的なリガンド結合活性を保持し、２５、２６、２７、２８、および２９位（配列番号１に照らして）から始まるＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドも、リガンド結合活性を保持すると予想される。例えば米国特許第７，８４２，６６３号において、驚くべきことに、２２、２３、２４、または２５位から始まるＡｃｔＲＩＩＢ構築物が最も高い活性を有すると予想されることが実証された。
【０１０４】
総合すると、ＡｃｔＲＩＩＢの活性部分（例えば、リガンド結合部分）の一般式は、配列番号１のアミノ酸２９〜１０９を含む。したがって、ＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドは、例えば、ＡｃｔＲＩＩＢの一部分であって、配列番号１のアミノ酸２０〜２９のいずれか１つに対応する残基で始まり（例えば、アミノ酸２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、または２９のいずれか１つで始まり）、配列番号１のいずれか１つのアミノ酸１０９〜１３４に対応する位置で終わる（例えば、アミノ酸１０９、１１０、１１１、１１２、１１３、１１４、１１５、１１６、１１７、１１８、１１９、１２０、１２１、１２２、１２３、１２４、１２５、１２６、１２７、１２８、１２９、１３０、１３１、１３２、１３３、または１３４のいずれか１つで終わる）一部分と、少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一であるアミノ酸配列を含んでいてもよいし、これらから本質的になっていてもよいし、またはこれらからなっていてもよい。他の例としては、配列番号１の、２０〜２９位（例えば、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、または２９位のいずれか１つ）または２１〜２９位（例えば、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、または２９位のいずれか１つ）で始まり、１１９〜１３４位（例えば、１１９、１２０、１２１、１２２、１２３、１２４、１２５、１２６、１２７、１２８、１２９、１３０、１３１、１３２、１３３、または１３４位のいずれか１つ）、１１９〜１３３位（例えば、１１９、１２０、１２１、１２２、１２３、１２４、１２５、１２６、１２７、１２８、１２９、１３０、１３１、１３２、または１３３位のいずれか１つ）、１２９〜１３４位（例えば、１２９、１３０、１３１、１３２、１３３、または１３４位のいずれか１つ）、または１２９〜１３３位（例えば、１２９、１３０、１３１、１３２、または１３３位のいずれか１つ）で終わるポリペプチドが挙げられる。他の例としては、配列番号１の、２０〜２４位（例えば、２０、２１、２２、２３、または２４位のいずれか１つ）、２１〜２４位（例えば、２１、２２、２３、または２４位のいずれか１つ）、または２２〜２５位（例えば、２２、２２、２３、または２５位のいずれか１つ）で始まり、１０９〜１３４位（例えば、１０９、１１０、１１１、１１２、１１３、１１４、１１５、１１６、１１７、１１８、１１９、１２０、１２１、１２２、１２３、１２４、１２５、１２６、１２７、１２８、１２９、１３０、１３１、１３２、１３３、または１３４位のいずれか１つ）、１１９〜１３４位（例えば、１１９、１２０、１２１、１２２、１２３、１２４、１２５、１２６、１２７、１２８、１２９、１３０、１３１、１３２、１３３、または１３４位のいずれか１つ）または１２９〜１３４位（例えば、１２９、１３０、１３１、１３２、１３３、または１３４位のいずれか１つ）で終わる構築物が挙げられる。これらの範囲内の改変体も企図され、特に、配列番号１の対応する部分と、少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の同一性を有する改変体も企図される。
【０１０５】
本明細書に記載されるバリエーションは、種々の方法で組み合わせられ得る。一部の実施形態では、ＡｃｔＲＩＩＢ改変体は、リガンド結合ポケット内に、１、２、５、６、７、８、９、１０または１５以下の保存的アミノ酸変化を含み、リガンド結合ポケット内の４０、５３、５５、７４、７９および／または８２位に、０、１つまたは複数の非保存的変更を含む。可変性が特に良好に許容され得る結合ポケットの外側の部位は、細胞外ドメインのアミノおよびカルボキシ末端（上述のように）、ならびに４２〜４６位および６５〜７３位（配列番号１に照らして）を包含する。６５位におけるアスパラギンからアラニンへの変更（Ｎ６５Ａ）は、Ａ６４バックグラウンドにおけるリガンド結合を実際に改善し、したがってＲ６４バックグラウンドにおいてリガンド結合に対する好ましくない影響を有さないと予想される［米国特許第７，８４２，６６３号］。この変化により、Ａ６４バックグラウンドにおけるＮ６５のグリコシル化が排除される可能性があり、したがって、この領域における著しい変化が許容される可能性があることが実証されている。Ｒ６４Ａ変化は許容性が乏しいが、Ｒ６４Ｋは良好に許容される、したがって、Ｈなどの別の塩基性残基は、６４位において許容され得る［米国特許第７，８４２，６６３号］。さらに、本技術に記載される変異誘発プログラムの結果は、保存が多くの場合有益であるアミノ酸位がＡｃｔＲＩＩＢにあることを示す。配列番号１に照らして、これらとしては、８０位（酸性または疎水性アミノ酸）、７８位（疎水性、そして特にトリプトファン）、３７位（酸性、そして特にアスパラギン酸またはグルタミン酸）、５６位（塩基性アミノ酸）、６０位（疎水性アミノ酸、特にフェニルアラニンまたはチロシン）が挙げられる。したがって、本開示はＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドに保存され得るアミノ酸のフレームワークを提供する。保存が望ましいと考えられる他の位置は以下の通りである：５２位（酸性アミノ酸）、５５位（塩基性アミノ酸）、８１位（酸性）、９８位（極性または荷電、特にＥ、Ｄ、ＲまたはＫ）、全て配列番号１に照らして。
【０１０６】
ＡｃｔＲＩＩＢ細胞外ドメインへのさらなるＮ−連結グリコシル化部位（Ｎ−Ｘ−Ｓ／Ｔ）の付加は、良好に許容されることがこれまでに実証された（例えば、米国特許第７，８４２，６６３号を参照されたい）。したがって、Ｎ−Ｘ−Ｓ／Ｔ配列は、一般に、本発明の開示のＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドにおいて図１において定義されるリガンド結合ポケットの外側の位置に導入され得る。非内因性Ｎ−Ｘ−Ｓ／Ｔ配列の導入に特に好適な部位としては、アミノ酸２０〜２９、２０〜２４、２２〜２５、１０９〜１３４、１２０〜１３４または１２９〜１３４（配列番号１に照らして）が挙げられる。またＮ−Ｘ−Ｓ／Ｔ配列は、ＡｃｔＲＩＩＢ配列とＦｃドメインまたは他の融合成分との間のリンカーにも導入され得る。このような部位は、以前から存在しているＳまたはＴに対して正しい位置にＮを導入することによって、または以前から存在しているＮに対応する位置にＳまたはＴを導入することによって、最小の労力で導入され得る。したがって、Ｎ−連結グリコシル化部位を生じる望ましい変更は、Ａ２４Ｎ、Ｒ６４Ｎ、Ｓ６７Ｎ（可能であればＮ６５Ａの変更と組み合わせる）、Ｅ１０５Ｎ、Ｒ１１２Ｎ、Ｇ１２０Ｎ、Ｅ１２３Ｎ、Ｐ１２９Ｎ、Ａ１３２Ｎ、Ｒ１１２ＳおよびＲ１１２Ｔ（配列番号１に照らして）である。グリコシル化されることが予測されるＳはどれも、グリコシル化によってもたらされる保護のために、免疫原性部位を生じることなくＴに変更され得る。同様に、グリコシル化されることが予測されるＴはどれも、Ｓに変更され得る。したがって、Ｓ６７ＴおよびＳ４４Ｔ（配列番号１に照らして）の変更が企図される。同様に、Ａ２４Ｎ改変体では、Ｓ２６Ｔの変更が使用され得る。したがって、本発明の開示のＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドは、上記の、１つまたは複数の追加の非内因性Ｎ−連結グリコシル化コンセンサス配列を有する改変体であり得る。
【０１０７】
ある特定の実施形態では、本開示は、少なくとも１つのＡｃｔＲＩＩＢポリペプチド、それらのフラグメント、機能的な改変体、および改変形態などを含むＡｃｔＲＩＩ阻害剤に関する。好ましくは、本開示に従って使用するためのＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドは、可溶性である（例えば、ＡｃｔＲＩＩＢの細胞外ドメイン）。一部の実施形態では、本開示に従って使用するためのＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドは、１つまたは複数のＴＧＦ−ベータスーパーファミリーのリガンド［例えば、ＧＤＦ１１、ＧＤＦ８、アクチビン（アクチビンＡ、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、アクチビンＣ、アクチビンＥ）、ＢＭＰ６、ＧＤＦ３、ＢＭＰ１０、および／またはＢＭＰ９］の活性（例えば、Ｓｍａｄ１、２、３、５、または８シグナル伝達の誘導）を阻害する（それに拮抗する）。一部の実施形態では、本開示に従って使用するためのＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドは、１つまたは複数のＴＧＦ−ベータスーパーファミリーのリガンド［例えば、ＧＤＦ１１、ＧＤＦ８、アクチビン（アクチビンＡ、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、アクチビンＣ、アクチビンＥ）、ＢＭＰ６、ＧＤＦ３、ＢＭＰ１０、および／またはＢＭＰ９］に結合する。一部の実施形態では、本開示のＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドは、ＡｃｔＲＩＩＢの一部分であって、配列番号１のアミノ酸２０〜２９に対応する残基で始まり（例えば、アミノ酸２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、または２９のいずれか１つで始まり）、配列番号１のアミノ酸１０９〜１３４に対応する位置で終わる（例えば、アミノ酸１０９、１１０、１１１、１１２、１１３、１１４、１１５、１１６、１１７、１１８、１１９、１２０、１２１、１２２、１２３、１２４、１２５、１２６、１２７、１２８、１２９、１３０、１３１、１３２、１３３、または１３４のいずれか１つで終わる）一部分と、少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一であるアミノ酸配列を含むか、これらから本質的になるか、またはこれらからなる。一部の実施形態では、本開示のＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドは、配列番号１のアミノ酸２９〜１０９に、少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一であるアミノ酸配列を含むか、これらからなるか、またはこれらから本質的になる。一部の実施形態では、本開示のＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドは、配列番号１のアミノ酸２９〜１０９に、少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一であるアミノ酸配列を含むか、これらからなるか、またはこれらから本質的になり、配列番号１のＬ７９に対応する位置は、酸性アミノ酸（天然に存在する酸性アミノ酸ＤおよびＥ、または人工酸性アミノ酸）である。ある特定の好ましい実施形態では、本開示のＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドは、配列番号１のアミノ酸２５〜１３１に、少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一であるアミノ酸配列を含むか、これらからなるか、またはこれらから本質的になる。ある特定の好ましい実施形態では、本開示のＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドは、配列番号１のアミノ酸２５〜１３１に、少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一であるアミノ酸配列を含むか、これらからなるか、またはこれらから本質的になり、配列番号１のＬ７９に対応する位置は、酸性アミノ酸である。一部の実施形態では、開示のＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドは、配列番号１、２、３、４、５、６、４０、４１、４４、４５、４６、４８、４９、５０、６１、６４、６５、７８、および７９のいずれか１つのアミノ酸配列と、少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一であるアミノ酸配列を含むか、これらからなるか、またはこれらから本質的になる。一部の実施形態では、開示のＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドは、配列番号１、２、３、４、５、６、４０、４１、４４、４５、４６、４８、４９、５０、６１、６４、６５、７８、および７９のいずれか１つのアミノ酸配列と、少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一であるアミノ酸配列を含むか、これらからなるか、またはこれらから本質的になり、配列番号１のＬ７９に対応する位置は、酸性アミノ酸である。一部の実施形態では、本開示のＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドは、少なくとも１つのＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドからなるか、またはこれらから本質的になり、配列番号１のＬ７９に対応する位置は、酸性アミノ酸ではない（すなわち、天然に存在する酸アミノ酸ＤもしくはＥ、または人工酸性アミノ酸残基ではない）。
【０１０８】
ある特定の実施形態では、本発明の開示は、ＡｃｔＲＩＩＡポリペプチドに関する。本明細書で使用される場合、用語「ＡｃｔＲＩＩＡ」は、任意の種に由来するＩＩＡ型アクチビン受容体（ＡｃｔＲＩＩＡ）タンパク質のファミリーと、変異誘発または他の改変によるこのようなＡｃｔＲＩＩＡタンパク質に由来する改変体とを指す。本明細書におけるＡｃｔＲＩＩＡに対する言及は、現在識別されている形態のいずれか１つに対する言及であるものと理解される。ＡｃｔＲＩＩＡファミリーのメンバーは一般に、システインリッチな領域を含むリガンド結合細胞外ドメイン、膜貫通ドメイン、および予測されるセリン／スレオニンキナーゼ活性を有する細胞質内ドメインから構成される膜貫通タンパク質である。
【０１０９】
用語「ＡｃｔＲＩＩＡポリペプチド」は、ＡｃｔＲＩＩＡファミリーメンバーの任意の天然に存在するポリペプチドのほか、有用な活性を保持する任意のその改変体（変異体、フラグメント、融合、およびペプチド模倣物形態を含む）も含むポリペプチドを含む。このような改変体ＡｃｔＲＩＩＡポリペプチドの例は、本発明の開示を通して提供されるほか、参照によりその全体において本明細書に組み込まれる国際特許出願公報第ＷＯ２００６／０１２６２７号においても提供されている。本明細書に記載される全てのＡｃｔＲＩＩＡ関連ポリペプチドのアミノ酸の番号付けは、そうでないことが具体的に指示されない限りにおいて、下記で提供されるヒトＡｃｔＲＩＩＡ前駆体タンパク質配列（配列番号９）の番号付けに基づく。
正規のヒトＡｃｔＲＩＩＡ前駆体タンパク質配列は、以下の通りである。
【化１０】
2018534335.tif 000011
【０１１０】
シグナルペプチドは、一重下線で指し示し、細胞外ドメインは、太字フォントで指し示され、可能性のある、内因性Ｎ−連結グリコシル化部位は、二重下線で指し示す。
【０１１１】
プロセシング後の細胞外ヒトＡｃｔＲＩＩＡポリペプチド配列は、以下の通りである。
【化１１】
2018534335.tif 000012
【０１１２】
細胞外ドメインのＣ末端「テール」は、一重下線で指し示す。「テール」が欠失した配列（Δ１５配列）は、以下の通りである。
【化１２】
2018534335.tif 000013
【０１１３】
ヒトＡｃｔＲＩＩＡ前駆体タンパク質をコードする核酸配列を以下に示し（配列番号１２）、次に示すようにヌクレオチド１５９〜１７００はＧｅｎｂａｎｋ参照配列ＮＭ＿００１６１６．４由来である。シグナル配列に下線を付す。
【化１３】
2018534335.tif 000014
【化１４】
2018534335.tif 000015
【０１１４】
プロセシング後の可溶性（細胞外）ヒトＡｃｔＲＩＩＡポリペプチドをコードする核酸配列は、以下の通りである。
【化１５】
2018534335.tif 000016
【０１１５】
ＡｃｔＲＩＩＡは、脊椎動物の間で良好に保存されており、完全に保存された細胞外ドメインの大きなストレッチを持つ。例えば、図１４は、種々のＡｃｔＲＩＩＡオーソログと比較したヒトＡｃｔＲＩＩＡ細胞外ドメインの多重配列アラインメントを描示する。ＡｃｔＲＩＩＡに結合するリガンドの多くも高度に保存されている。したがって、これらのアラインメントからは、通常のＡｃｔＲＩＩＡ−リガンド結合活性に重要なリガンド結合ドメイン内の鍵となるアミノ酸位置を予測することが可能であるほか、通常のＡｃｔＲＩＩＡ−リガンド結合活性を顕著に変更させずに、置換に対して許容性を有する可能性が高いアミノ酸位置を予測することも可能である。したがって、ここで開示された方法に従って有用な活性なヒトＡｃｔＲＩＩＡ改変体ポリペプチドは、別の脊椎動物ＡｃｔＲＩＩＡ由来の配列からの対応する位置に１つまたは複数のアミノ酸を含んでいてもよいし、またはヒトまたは他の脊椎動物配列中の残基に類似した残基を含んでいてもよい。
【０１１６】
制限することを意味しないが、以下の実施例は、活性なＡｃｔＲＩＩＡ改変体を定義するために、このアプローチを例示する。ヒト細胞外ドメインにおけるＦ１３は、Ｏｖｉｓ  ａｒｉｅｓ（配列番号７０）、Ｇａｌｌｕｓ  ｇａｌｌｕｓ（配列番号７３）、Ｂｏｓ  ｔａｕｒｕｓ（配列番号７４）、Ｔｙｔｏ  ａｌｂａ（配列番号７５）、およびＭｙｏｔｉｓ  ｄａｖｉｄｉｉ（配列番号７６）のＡｃｔＲＩＩＡにおいてＹであり、これは、この位置において、Ｆ、Ｗ、およびＹなどの芳香族残基が許容されることを指し示す。ヒト細胞外ドメインにおけるＱ２４は、Ｂｏｓ  ｔａｕｒｕｓのＡｃｔＲＩＩＡにおいてＲであり、これは、この位置において、Ｄ、Ｒ、Ｋ、Ｈ、およびＥなどの荷電残基が許容されることを指し示す。ヒト細胞外ドメインにおけるＳ９５は、Ｇａｌｌｕｓ  ｇａｌｌｕｓおよびＴｙｔｏ  ａｌｂａのＡｃｔＲＩＩＡにおいてＦであり、これは、この部位は、Ｅ、Ｄ、Ｋ、Ｒ、Ｈ、Ｓ、Ｔ、Ｐ、Ｇ、Ｙなどの極性残基、およびおそらくＬ、Ｉ、またはＦなどの疎水性残基を含む多種多様の変化が許容され得ることを指し示す。ヒト細胞外ドメインにおけるＥ５２は、Ｏｖｉｓ  ａｒｉｅｓのＡｃｔＲＩＩＡにおいてＤであり、これは、この位置において、ＤおよびＥなどの酸性残基が許容されることを指し示す。ヒト細胞外ドメインにおけるＰ２９は、比較的十分に保存されておらず、Ｏｖｉｓ  ａｒｉｅｓのＡｃｔＲＩＩＡではＳおよびＭｙｏｔｉｓ  ｄａｖｉｄｉｉのＡｃｔＲＩＩＡではＬとして出現し、したがって、この位置において、本質的に全てのアミノ酸が許容されるはずである。
【０１１７】
さらに、上記で論じられたように、ＡｃｔＲＩＩタンパク質は、当該分野では構造的／機能的な特徴に関して、特にリガンド結合に関して特徴付けられている［Ａｔｔｉｓａｎｏら（１９９２年）Ｃｅｌｌ  ６８巻（１号）：９７〜１０８頁；Ｇｒｅｅｎｗａｌｄら（１９９９年）Ｎａｔｕｒｅ  Ｓｔｒｕｃｔｕｒａｌ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  ６巻（１号）：１８〜２２頁；Ａｌｌｅｎｄｏｒｐｈら（２００６年）ＰＮＡＳ  １０３巻（２０号：７６４３〜７６４８頁；Ｔｈｏｍｐｓｏｎら（２００３年）Ｔｈｅ  ＥＭＢＯ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ２２巻（７号）：１５５５〜１５６６頁；加えて米国特許第７，７０９，６０５号、同第７，６１２，０４１号、および同第７，８４２，６６３号］。これらの参考文献は、本明細書における教示に加えて、１つまたは複数の所望の活性（例えば、リガンド結合活性）を保持するＡｃｔＲＩＩ改変体をどのように生成するのかに関する詳細な指針を提供する。
【０１１８】
例えば、スリーフィンガー毒素のフォールドとして公知の構造的なモチーフを定義することは、Ｉ型およびＩＩ型受容体によるリガンド結合にとって重要であり、各モノマー受容体の細胞外ドメイン内の様々な位置に配置された保存されたシステイン残基によって形成される［Ｇｒｅｅｎｗａｌｄら（１９９９年）Ｎａｔ  Ｓｔｒｕｃｔ  Ｂｉｏｌ  ６巻：１８〜２２頁；およびＨｉｎｃｋ（２０１２年）ＦＥＢＳ  Ｌｅｔｔ  ５８６巻：１８６０〜１８７０頁］。したがって、ヒトＡｃｔＲＩＩＡのコアリガンド結合ドメインは、これらの保存されたシステインの最も外側を境界と定めた場合、配列番号９（ＡｃｔＲＩＩＡ前駆体）の３０〜１１０位に対応する。したがって、これらのシステインによって境界を定められたコア配列の端にある構造的にあまり秩序立っていないアミノ酸は、Ｎ末端において、約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、または２９残基、Ｃ末端において、約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、または２５残基短縮されていてもよく、それにより必ずしもリガンド結合は変更されない。例示的なＡｃｔＲＩＩＡ細胞外ドメインの短縮型としては、配列番号１０および１１が挙げられる。
【０１１９】
したがって、ＡｃｔＲＩＩＡの活性部分（例えば、リガンド結合）の一般式は、配列番号９のアミノ酸３０〜１１０を含むか、これらから本質的になるか、またはこれらからなるポリペプチドである。したがって、ＡｃｔＲＩＩＡポリペプチドは、例えば、ＡｃｔＲＩＩＡの一部分であって、配列番号９のアミノ酸２１〜３０のいずれか１つに対応する残基で始まり（例えば、アミノ酸２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、または３０のいずれか１つで始まり）、配列番号９のいずれか１つのアミノ酸１１０〜１３５に対応する位置で終わる（例えば、アミノ酸１１０、１１１、１１２、１１３、１１４、１１５、１１６、１１７、１１８、１１９、１２０、１２１、１２２、１２３、１２４、１２５、１２６、１２７、１２８、１２９、１３０、１３１、１３２、１３３、または１３５のいずれか１つで終わる）一部分と、少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一であるアミノ酸配列を含んでいてもよいし、これらから本質的になっていてもよいし、またはこれらからなっていてもよい。他の例としては、配列番号９の、２１〜３０から選択される位置で始まり（例えば、アミノ酸２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、または３０のいずれか１つで始まり）、２２〜３０から選択される位置で始まり（例えば、アミノ酸２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、または３０のいずれか１つで始まり）、２３〜３０から選択される位置で始まり（例えば、アミノ酸２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、または３０のいずれか１つで始まり）、２４〜３０から選択される位置で始まり（例えば、アミノ酸２４、２５、２６、２７、２８、２９、または３０のいずれか１つで始まり）、配列番号９の、１１１〜１３５から選択される位置で終わり（例えば、アミノ酸１１１、１１２、１１３、１１４、１１５、１１６、１１７、１１８、１１９、１２０、１２１、１２２、１２３、１２４、１２５、１２６、１２７、１２８、１２９、１３０、１３１、１３２、１３３、１３４または１３５のいずれか１つで終わり）、１１２〜１３５から選択される位置で終わり（例えば、アミノ酸１１２、１１３、１１４、１１５、１１６、１１７、１１８、１１９、１２０、１２１、１２２、１２３、１２４、１２５、１２６、１２７、１２８、１２９、１３０、１３１、１３２、１３３、１３４または１３５のいずれか１つで終わり）、１１３〜１３５から選択される位置で終わり（例えば、アミノ酸１１３、１１４、１１５、１１６、１１７、１１８、１１９、１２０、１２１、１２２、１２３、１２４、１２５、１２６、１２７、１２８、１２９、１３０、１３１、１３２、１３３、１３４または１３５のいずれか１つで終わり）、１２０〜１３５から選択される位置で終わり（例えば、アミノ酸１２０、１２１、１２２、１２３、１２４、１２５、１２６、１２７、１２８、１２９、１３０、１３１、１３２、１３３、１３４または１３５のいずれか１つで終わり）、１３０〜１３５から選択される位置で終わり（例えば、アミノ酸１３０、１３１、１３２、１３３、１３４または１３５のいずれか１つで終わり）、１１１〜１３４から選択される位置で終わり（例えば、アミノ酸１１０、１１１、１１２、１１３、１１４、１１５、１１６、１１７、１１８、１１９、１２０、１２１、１２２、１２３、１２４、１２５、１２６、１２７、１２８、１２９、１３０、１３１、１３２、１３３、または１３４のいずれか１つで終わり）、１１１〜１３３から選択される位置で終わり（例えば、アミノ酸１１０、１１１、１１２、１１３、１１４、１１５、１１６、１１７、１１８、１１９、１２０、１２１、１２２、１２３、１２４、１２５、１２６、１２７、１２８、１２９、１３０、１３１、１３２、または１３３のいずれか１つで終わり）、１１１〜１３２から選択される位置で終わり（例えば、アミノ酸１１０、１１１、１１２、１１３、１１４、１１５、１１６、１１７、１１８、１１９、１２０、１２１、１２２、１２３、１２４、１２５、１２６、１２７、１２８、１２９、１３０、１３１、または１３２のいずれか１つで終わり）、または１１１〜１３１から選択される位置で終わる（例えば、アミノ酸１１０、１１１、１１２、１１３、１１４、１１５、１１６、１１７、１１８、１１９、１２０、１２１、１２２、１２３、１２４、１２５、１２６、１２７、１２８、１２９、１３０、または１３１のいずれか１つで終わる）構築物が挙げられる。したがって、本発明の開示のＡｃｔＲＩＩＡは、配列番号９のアミノ酸３０〜１１０と、少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一であるポリペプチドを含んでいてもよく、これらから本質的になっていてもよく、またはこれらからなっていてもよい。任意選択で、本発明の開示のＡｃｔＲＩＩＡポリペプチドは、配列番号９のアミノ酸３０〜１１０と、少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一であり、リガンド結合ポケット内に１、２、５、１０または１５個以下の保存的アミノ酸変化を含み、リガンド結合ポケット内の４０、５３、５５、７４、７９および／または８２位に配列番号９に照らして０、１つまたは複数の非保存的変更を含むポリペプチドを含む。
【０１２０】
ある特定の実施形態では、本開示は、少なくとも１つのＡｃｔＲＩＩＡポリペプチド、それらのフラグメント、機能的な改変体、および改変形態などを含むＡｃｔＲＩＩ阻害剤に関する。好ましくは、本開示に従って使用するためのＡｃｔＲＩＩＡポリペプチドは、可溶性である（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡの細胞外ドメイン）。一部の実施形態では、本開示に従って使用するためのＡｃｔＲＩＩＡポリペプチドは、１つまたは複数のＴＧＦ−ベータスーパーファミリーのリガンド［例えば、ＧＤＦ１１、ＧＤＦ８、アクチビン（アクチビンＡ、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、アクチビンＣ、アクチビンＥ）、ＢＭＰ６、ＧＤＦ３、ＢＭＰ１０、および／またはＢＭＰ９］の活性（例えば、Ｓｍａｄ１、２、３、５、または８シグナル伝達の誘導）を阻害する（それに拮抗する）。一部の実施形態では、本開示に従って使用するためのＡｃｔＲＩＩＡポリペプチドは、１つまたは複数のＴＧＦ−ベータスーパーファミリーのリガンド［例えば、ＧＤＦ１１、ＧＤＦ８、アクチビン（アクチビンＡ、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、アクチビンＣ、アクチビンＥ）、ＢＭＰ６、ＧＤＦ３、ＢＭＰ１０、および／またはＢＭＰ９］に結合する。一部の実施形態では、本開示のＡｃｔＲＩＩＡポリペプチドは、ＡｃｔＲＩＩＡの一部分であって、配列番号９のアミノ酸２１〜３０に対応する残基で始まり（例えば、アミノ酸２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、または３０のいずれか１つで始まり）、配列番号９のいずれか１つのアミノ酸１１０〜１３５に対応する位置で終わる（例えば、アミノ酸１１０、１１１、１１２、１１３、１１４、１１５、１１６、１１７、１１８、１１９、１２０、１２１、１２２、１２３、１２４、１２５、１２６、１２７、１２８、１２９、１３０、１３１、１３２、１３３、または１３５のいずれか１つで終わる）一部分と、少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一であるアミノ酸配列を含むか、これらから本質的になるか、またはこれらからなる。一部の実施形態では、本開示のＡｃｔＲＩＩＡポリペプチドは、配列番号９のアミノ酸３０〜１１０と、少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一であるアミノ酸配列を含むか、これらからなるか、またはこれらから本質的になる。ある特定の実施形態では、本開示のＡｃｔＲＩＩＡポリペプチドは、配列番号９のアミノ酸２１〜１３５と、少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一であるアミノ酸配列を含むか、これらからなるか、またはこれらから本質的になる。一部の実施形態では、開示のＡｃｔＲＩＩＡポリペプチドは、配列番号９、１０、１１、３２、３６、および３９のいずれか１つのアミノ酸配列と、少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一であるアミノ酸配列を含むか、これらからなるか、またはこれらから本質的になる。
【０１２１】
ある特定の態様では、本発明の開示は、ＧＤＦトラップポリペプチド（「ＧＤＦトラップ」とも称される）に関する。一部の実施形態では、本発明の開示のＧＤＦトラップは、改変体ＡｃｔＲＩＩポリペプチドが対応する野生型ＡｃｔＲＩＩポリペプチドに比べて１つまたは複数の変更されたリガンド結合活性を有するように、ＡｃｔＲＩＩポリペプチド（例えば、「野生型」または非改変ＡｃｔＲＩＩポリペプチド）の細胞外ドメイン（リガンド結合ドメインとも称される）中に１つまたは複数の変異（例えば、アミノ酸付加、欠失、置換、およびそれらの組み合わせ）を含む改変体ＡｃｔＲＩＩポリペプチド（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡおよびＡｃｔＲＩＩＢポリペプチド）である。好ましい実施形態では、本発明の開示のＧＤＦトラップポリペプチドは、対応する野生型ＡｃｔＲＩＩポリペプチドと類似した少なくとも１つの活性を保持する。例えば、好ましいＧＤＦトラップは、ＧＤＦ１１および／またはＧＤＦ８に結合して、その機能を阻害する（例えばそれに拮抗する）。一部の実施形態では、本発明の開示のＧＤＦトラップは、ＴＧＦ−ベータスーパーファミリーのリガンドの１つまたは複数にさらに結合し、それを阻害する。したがって、本発明の開示は、１つまたは複数のＡｃｔＲＩＩリガンドに対する変更された結合特異性を有するＧＤＦトラップポリペプチドを提供する。
【０１２２】
例示すれば、１つまたは複数のＡｃｔＲＩＩ結合リガンド、例えばアクチビン（アクチビンＡ、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、アクチビンＣ、および／またはアクチビンＥ）、特にアクチビンＡと比べて、ＧＤＦ１１および／またはＧＤＦ８への変更されたリガンド結合ドメインの選択性を増加させる１つまたは複数の変異を選択してもよい。任意選択で、変更されたリガンド結合ドメインは、アクチビン結合に関するＫｄとＧＤＦ１１および／またはＧＤＦ８結合に関するＫｄとの比率が、野生型リガンド結合ドメインの比率に対して、少なくとも２倍、５倍、１０倍、２０倍、５０倍、１００倍であり、または１０００倍もの大きさである。任意選択で、変更されたリガンド結合ドメインは、アクチビン阻害に関するＩＣ５０とＧＤＦ１１および／またはＧＤＦ８阻害に関するＩＣ５０との比率が、野生型リガンド結合ドメインに対して、少なくとも２倍、５倍、１０倍、２０倍、５０倍、１００倍であり、または１０００倍もの大きさである。任意選択で、変更されたリガンド結合ドメインは、アクチビン阻害に関するＩＣ５０の、少なくとも２分の１、５分の１、１０分の１、２０分の１、５０分の１、１００分の１またはさらには１０００分の１もの低さでＧＤＦ１１および／またはＧＤＦ８を阻害する。
【０１２３】
ある特定の好ましい実施形態では、本発明の開示のＧＤＦトラップは、ＧＤＦ１１および／またはＧＤＦ８（ミオスタチンとしても公知である）に優先的に結合するように設計される。任意選択で、ＧＤＦ１１および／またはＧＤＦ８結合トラップは、アクチビンＢにさらに結合することができる。任意選択で、ＧＤＦ１１および／またはＧＤＦ８結合トラップは、ＢＭＰ６にさらに結合することができる。任意選択で、ＧＤＦ１１および／またはＧＤＦ８結合トラップは、ＢＭＰ１０にさらに結合することができる。任意選択で、ＧＤＦ１１および／またはＧＤＦ８結合トラップは、アクチビンＢおよびＢＭＰ６にさらに結合することができる。ある特定の実施形態では、本発明の開示のＧＤＦトラップは、例えば、野生型ＡｃｔＲＩＩポリペプチドと比較して、アクチビン（例えば、アクチビンＡ、アクチビンＡ／Ｂ、アクチビンＢ、アクチビンＣ、アクチビンＥ）への結合アフィニティーが低減されている。ある特定の好ましい実施形態では、本発明の開示のＧＤＦトラップポリペプチドは、アクチビンＡへの結合アフィニティーが低減されている。
【０１２４】
ＡｃｔＲＩＩＢタンパク質のアミノ酸残基（例えば、Ｅ３９、Ｋ５５、Ｙ６０、Ｋ７４、Ｗ７８、Ｌ７９、Ｄ８０、およびＦ１０１）は、ＡｃｔＲＩＩＢリガンド結合ポケット中であり、例えばアクチビンＡ、ＧＤＦ１１、およびＧＤＦ８を含めたそのリガンドへの結合の媒介を助ける。したがって本発明の開示は、それらのアミノ酸残基において１つまたは複数の変異を含むＡｃｔＲＩＩＢ受容体の変更されたリガンド結合ドメイン（例えばＧＤＦ８／ＧＤＦ１１結合ドメイン）を含むＧＤＦトラップポリペプチドを提供する。
【０１２５】
具体例として、ＡｃｔＲＩＩＢのリガンド結合ドメインの正に荷電したアミノ酸残基であるＡｓｐ（Ｄ８０）を、異なるアミノ酸残基に変異させて、アクチビンではなく、ＧＤＦ８に優先的に結合するＧＤＦトラップポリペプチドを生成することができる。好ましくは、Ｄ８０残基を、配列番号１に照らして、非荷電アミノ酸残基、負荷電アミノ酸残基、および疎水性アミノ酸残基からなる群から選択されるアミノ酸残基に変化させる。さらなる具体例として、配列番号１の疎水性残基であるＬ７９を変更させて、アクチビン−ＧＤＦ１１／ＧＤＦ８結合特性の変更を付与することができる。例えば、Ｌ７９Ｐ置換は、ＧＤＦ１１への結合を、アクチビンへの結合より大幅に低減する。これに対し、Ｌ７９の、酸性アミノ酸による置き換え［アスパラギン酸またはグルタミン酸；Ｌ７９Ｄ置換またはＬ７９Ｅ置換］は、ＧＤＦ１１への結合アフィニティーを保持しながら、アクチビンＡへの結合アフィニティーを大幅に低減する。例示的な実施形態では、本明細書に記載される方法は、任意選択で、１つまたは複数の追加のアミノ酸の置換、付加、または欠失と組み合わせた、配列番号１の７９位に対応する位置に酸性アミノ酸（例えば、ＤまたはＥ）を含む改変体ＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドである、ＧＤＦトラップポリペプチドを利用する。
【０１２６】
一部の実施形態では、本開示は、治療有効性または安定性（例えば、貯蔵寿命およびインビボでのタンパク質分解に対する抵抗性）を増強することなどの目的のために、ＡｃｔＲＩＩポリペプチドの構造を改変することにより機能的改変体を作製することを企図する。改変体は、アミノ酸の置換、欠失、付加またはそれらの組み合わせによっても生成することができる。例えば、ロイシンのイソロイシンもしくはバリンでの単発的な置換、アスパラギン酸のグルタミン酸での単発的な置換、スレオニンのセリンでの単発的な置換、または、あるアミノ酸の、構造的に関連したアミノ酸での同様の置換（例えば、保存的変異）は、結果として生じる分子の生物学的活性に対して大きな影響を及ぼさないと予想するのは理にかなっている。保存的置換は、その側鎖が関連しているアミノ酸のファミリー内で行われる置換である。本開示のポリペプチドのアミノ酸配列における変化が機能的な相同体をもたらすかどうかは、野生型ポリペプチドに類似した様式で細胞内の応答を生成するか、または例えば、ＢＭＰ２、ＢＭＰ２／７、ＢＭＰ３、ＢＭＰ４、ＢＭＰ４／７、ＢＭＰ５、ＢＭＰ６、ＢＭＰ７、ＢＭＰ８ａ、ＢＭＰ８ｂ、ＢＭＰ９、ＢＭＰ１０、ＧＤＦ３、ＧＤＦ５、ＧＤＦ６／ＢＭＰ１３、ＧＤＦ７、ＧＤＦ８、ＧＤＦ９ｂ／ＢＭＰ１５、ＧＤＦ１１／ＢＭＰ１１、ＧＤＦ１５／ＭＩＣ１、ＴＧＦ−β１、ＴＧＦ−β２、ＴＧＦ−β３、アクチビンＡ、アクチビンＢ、アクチビンＣ、アクチビンＥ、アクチビンＡＢ、アクチビンＡＣ、ｎｏｄａｌ、グリア細胞由来神経栄養因子（ＧＤＮＦ）、ニュールツリン、アルテミン、パーセフィン、ＭＩＳ、およびＬｅｆｔｙなど、１つまたは複数のＴＧＦ−ベータリガンドに結合する、改変体ポリペプチドの能力を評価することによってたやすく決定することができる。
【０１２７】
ある特定の実施形態では、本開示は、ポリペプチドのグリコシル化を変更させるような、ＡｃｔＲＩＩポリペプチドの特異的変異を企図する。このような変異は、１または複数のグリコシル化部位（例えば、Ｏ−連結もしくはＮ−連結のグリコシル化部位）を導入もしくは排除するように選択され得る。アスパラギン連結グリコシル化認識部位は、一般に、トリペプチド配列、アスパラギン−Ｘ−スレオニンまたはアスパラギン−Ｘ−セリン（ここで、「Ｘ」は任意のアミノ酸である）を含み、この配列は、適切な細胞のグリコシル化酵素によって特異的に認識される。変化はまた、（Ｏ−連結グリコシル化部位については）ポリペプチドの配列への、１または複数のセリンもしくはスレオニン残基の付加、または、１または複数のセリンもしくはスレオニン残基による置換によってなされ得る。グリコシル化認識部位の第１位もしくは第３位のアミノ酸の一方もしくは両方における種々のアミノ酸置換もしくは欠失（および／または、第２位におけるアミノ酸の欠失）は、改変されたトリペプチド配列において非グリコシル化をもたらす。ポリペプチドにおける糖質部分の数を増加させる別の手段は、ポリペプチドへのグリコシドの化学的もしくは酵素的なカップリングによるものである。使用されるカップリング様式に依存して、糖は、（ａ）アルギニンおよびヒスチジン；（ｂ）遊離カルボキシル基；（ｃ）遊離スルフヒドリル基（例えば、システインのもの）；（ｄ）遊離ヒドロキシル基（例えば、セリン、スレオニンまたはヒドロキシプロリンのもの）；（ｅ）芳香族残基（例えば、フェニルアラニン、チロシンまたはトリプトファンのもの）；または（ｆ）グルタミンのアミド基に付加され得る。ポリペプチド上に存在する１または複数の糖質部分の除去は、化学的および／または酵素的に達成され得る。化学的な脱グリコシル化は、例えば、化合物トリフルオロメタンスルホン酸または等価な化合物へのポリペプチドの曝露を含み得る。この処理は、アミノ酸配列をインタクトなままにしつつ、連結糖（Ｎ−アセチルグルコサミンまたはＮ−アセチルガラクトサミン）を除くほとんどもしくは全ての糖の切断を生じる。ポリペプチドにおける、炭水化物部分の酵素的切断は、Ｔｈｏｔａｋｕｒａら［Ｍｅｔｈ．  Ｅｎｚｙｍｏｌ．（１９８７年）、１３８巻：３５０頁］により記載されているように、様々なエンドグリコシダーゼおよびエキソグリコシダーゼの使用により達成することができる。ポリペプチドの配列は、適切なように、使用される発現系のタイプに応じて調節され得る。というのも、哺乳動物、酵母、昆虫および植物の細胞は全て、ペプチドのアミノ酸配列によって影響され得る異なるグリコシル化パターンを導入し得る。一般に、ヒトにおいて使用するための本開示のポリペプチドは、適切なグリコシル化を提供する哺乳動物細胞株（例えば、ＨＥＫ２９３細胞株またはＣＨＯ細胞株）において発現され得るが、他の哺乳動物発現細胞株も同様に有用であることと期待される。
【０１２８】
本発明の開示はさらに、変異体、特にＡｃｔＲＩＩポリペプチドのコンビナトリアル変異体のセットのほか、短縮型変異体を生成する方法も企図する。コンビナトリアル変異体のプールは、機能的に活性な（例えば、ＴＧＦ−ベータスーパーファミリーのリガンドに結合する）ＡｃｔＲＩＩ配列を識別するために特に有用である。このようなコンビナトリアルライブラリーをスクリーニングする目的は、例えば、薬物動態の変更またはリガンドへの結合の変更など、特性を変更させたポリペプチド改変体を生成することであり得る。種々のスクリーニングアッセイが以下に提供され、そして、このようなアッセイは、改変体を評価するために使用され得る。例えば、ＡｃｔＲＩＩ改変体は、１つまたは複数のＴＧＦ−ベータスーパーファミリーのリガンド（例えば、ＢＭＰ２、ＢＭＰ２／７、ＢＭＰ３、ＢＭＰ４、ＢＭＰ４／７、ＢＭＰ５、ＢＭＰ６、ＢＭＰ７、ＢＭＰ８ａ、ＢＭＰ８ｂ、ＢＭＰ９、ＢＭＰ１０、ＧＤＦ３、ＧＤＦ５、ＧＤＦ６／ＢＭＰ１３、ＧＤＦ７、ＧＤＦ８、ＧＤＦ９ｂ／ＢＭＰ１５、ＧＤＦ１１／ＢＭＰ１１、ＧＤＦ１５／ＭＩＣ１、ＴＧＦ−β１、ＴＧＦ−β２、ＴＧＦ−β３、アクチビンＡ、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、アクチビンＡＣ、ｎｏｄａｌ、グリア細胞由来神経栄養因子（ＧＤＮＦ）、ニュールツリン、アルテミン、パーセフィン、ＭＩＳ、およびＬｅｆｔｙ）に結合する能力、ＴＧＦ−ベータスーパーファミリー受容体へのＴＧＦ−ベータスーパーファミリーのリガンドの結合を防止する能力、および／またはＴＧＦ−ベータスーパーファミリーのリガンドによって引き起こされるシグナル伝達に干渉する能力についてスクリーニングされ得る。
【０１２９】
ＡｃｔＲＩＩポリペプチドの活性はまた、細胞ベースのアッセイまたはインビボアッセイでも試験することができる。例えば、視力に関与する遺伝子の発現に対するＡｃｔＲＩＩポリペプチドの作用が、評価され得る。これは、必要な場合、１つまたは複数の組換えＡｃｔＲＩＩリガンドタンパク質（例えば、ＢＭＰ２、ＢＭＰ２／７、ＢＭＰ３、ＢＭＰ４、ＢＭＰ４／７、ＢＭＰ５、ＢＭＰ６、ＢＭＰ７、ＢＭＰ８ａ、ＢＭＰ８ｂ、ＢＭＰ９、ＢＭＰ１０、ＧＤＦ３、ＧＤＦ５、ＧＤＦ６／ＢＭＰ１３、ＧＤＦ７、ＧＤＦ８、ＧＤＦ９ｂ／ＢＭＰ１５、ＧＤＦ１１／ＢＭＰ１１、ＧＤＦ１５／ＭＩＣ１、ＴＧＦ−β１、ＴＧＦ−β２、ＴＧＦ−β３、アクチビンＡ、アクチビンＢ、アクチビンＣ、アクチビンＥ、アクチビンＡＢ、アクチビンＡＣ、ｎｏｄａｌ、グリア細胞由来神経栄養因子（ＧＤＮＦ）、ニュールツリン、アルテミン、パーセフィン、ＭＩＳ、およびＬｅｆｔｙ）の存在下で行われ得、そして、ＡｃｔＲＩＩポリペプチド、そして任意選択でＡｃｔＲＩＩリガンドが生成するように細胞がトランスフェクトされ得る。同様に、ＡｃｔＲＩＩポリペプチドは、マウスまたは他の動物に投与され得、そして、視力が、当該分野で認識された方法を用いて評価され得る。同様に、ＡｃｔＲＩＩポリペプチドまたはその改変体の活性は、血液細胞の前駆細胞中で、これらの細胞の成長に対する何らかの効果に関して、例えば本明細書に記載されるアッセイや当該分野において常識的なアッセイによって試験することができる。このような細胞株では、下流のシグナル伝達への作用をモニタリングために、ＳＭＡＤ応答性レポーター遺伝子を使用することができる。
【０１３０】
コンビナトリアル由来の改変体であって、参照ＡｃｔＲＩＩポリペプチドと比べて選択的、または一般的に効力を増大させたリガンドトラップを生成することができる。このような改変体は、組換えＤＮＡ構築物から発現されたとき、遺伝子治療のプロトコルにおいて使用され得る。同様に、変異誘発は、対応する非改変ＡｃｔＲＩＩポリペプチドとは劇的に異なる細胞内半減期を有する改変体を生じ得る。例えば、変更されたタンパク質は、タンパク質分解、または、非改変ポリペプチドの崩壊もしくは他の方法で不活性化をもたらす他の細胞プロセスに対してより安定性であるかもしくは安定性が低いかのいずれかにされ得る。このような改変体およびこれをコードする遺伝子は、そのポリペプチドの半減期を調節することによってポリペプチド複合体レベルを変更するのに利用され得る。例えば、短い半減期は、より一過性の生物学的作用を生じ得、そして、誘導性の発現系の一部である場合、細胞内での組換えポリペプチド複合体レベルのより厳しい制御を可能にし得る。Ｆｃ融合タンパク質では、変異は、ＡｃｔＲＩＩポリペプチドの半減期を変更するために、リンカー（存在する場合）および／またはＦｃ部分において作製され得る。
【０１３１】
コンビナトリアルライブラリーは、各々が潜在的なＡｃｔＲＩＩ配列の少なくとも一部を含むポリペプチドのライブラリーをコードする遺伝子の縮重ライブラリーによって生成することができる。例えば、潜在的なＡｃｔＲＩＩをコードするヌクレオチド配列の縮重セットが、個々のポリペプチドとして、または代替的に、大型の融合タンパク質のセット（例えば、ファージディスプレイのための）として発現可能であるように、合成オリゴヌクレオチドの混合物を、遺伝子配列に酵素的にライゲーションすることができる。
【０１３２】
潜在的な相同体のライブラリーを縮重オリゴヌクレオチド配列から生成し得る、多くの方式が存在する。縮重遺伝子配列の化学合成は、自動式ＤＮＡ合成器で実行することができ、次いで、合成遺伝子は、発現に適切なベクターにライゲーションすることができる。縮重オリゴヌクレオチドの合成は、当該分野で周知である。［Ｎａｒａｎｇ，  ＳＡ（１９８３年）、Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ、３９巻：３頁；Ｉｔａｋｕｒａら（１９８１年）、Ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ  ＤＮＡ、Ｐｒｏｃ．  ３ｒｄ  Ｃｌｅｖｅｌａｎｄ  Ｓｙｍｐｏｓ．  Ｍａｃｒｏｍｏｌｅｃｕｌｅｓ、ＡＧ  Ｗａｌｔｏｎ編、Ａｍｓｔｅｒｄａｍ、Ｅｌｓｅｖｉｅｒ、２７３〜２８９頁；Ｉｔａｋｕｒａら（１９８４年）、Ａｎｎｕ．  Ｒｅｖ．  Ｂｉｏｃｈｅｍ．、５３巻：３２３頁；Ｉｔａｋｕｒａら（１９８４年）、Ｓｃｉｅｎｃｅ、１９８巻：１０５６頁およびＩｋｅら（１９８３年）、Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄ  Ｒｅｓ．、１１巻：４７７頁］。このような技法は、他のタンパク質の指向進化で利用されている。［Ｓｃｏｔｔら、（１９９０年）、Ｓｃｉｅｎｃｅ、２４９巻：３８６〜３９０頁；Ｒｏｂｅｒｔｓら（１９９２年）、ＰＮＡＳ  ＵＳＡ、８９巻：２４２９〜２４３３頁；Ｄｅｖｌｉｎら（１９９０年）、Ｓｃｉｅｎｃｅ、２４９巻：４０４〜４０６頁；Ｃｗｉｒｌａら、（１９９０年）、ＰＮＡＳ  ＵＳＡ、８７巻：６３７８〜６３８２頁のほか、米国特許第５，２２３，４０９号、同第５，１９８，３４６号、および同第５，０９６，８１５号］。
【０１３３】
代替的に、変異誘発の他の形態も、コンビナトリアルライブラリーを生成するのに活用することができる。例えば、本開示のＡｃｔＲＩＩポリペプチドは、例えば、アラニン走査変異誘発［Ｒｕｆら（１９９４年）、Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、３３巻：１５６５〜１５７２頁；Ｗａｎｇら（１９９４年）、Ｊ．  Ｂｉｏｌ．  Ｃｈｅｍ．、２６９巻：３０９５〜３０９９頁；Ｂａｌｉｎｔら（１９９３年）、Ｇｅｎｅ、１３７巻：１０９〜１１８頁；Ｇｒｏｄｂｅｒｇら（１９９３年）、Ｅｕｒ．  Ｊ．  Ｂｉｏｃｈｅｍ．、２１８巻：５９７〜６０１頁；Ｎａｇａｓｈｉｍａら（１９９３年）、Ｊ．  Ｂｉｏｌ．  Ｃｈｅｍ．、２６８巻：２８８８〜２８９２頁；Ｌｏｗｍａｎら（１９９１年）、Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、３０巻：１０８３２〜１０８３８頁；およびＣｕｎｎｉｎｇｈａｍら（１９８９年）、Ｓｃｉｅｎｃｅ、２４４巻：１０８１〜１０８５頁］を使用して、リンカー走査変異誘発［Ｇｕｓｔｉｎら（１９９３年）、Ｖｉｒｏｌｏｇｙ、１９３巻：６５３〜６６０頁；およびＢｒｏｗｎら（１９９２年）、Ｍｏｌ．  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ．、１２巻：２６４４〜２６５２頁；ＭｃＫｎｉｇｈｔら（１９８２年）、Ｓｃｉｅｎｃｅ、２３２巻：３１６頁］によって、飽和変異誘発［Ｍｅｙｅｒｓら、（１９８６年）、Ｓｃｉｅｎｃｅ、２３２巻：６１３頁］によって、ＰＣＲ変異誘発［Ｌｅｕｎｇら（１９８９年）、Ｍｅｔｈｏｄ  Ｃｅｌｌ  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ、１巻：１１〜１９頁］によって、または化学的変異誘発［Ｍｉｌｌｅｒら（１９９２年）、Ａ  Ｓｈｏｒｔ  Ｃｏｕｒｓｅ  ｉｎ  Ｂａｃｔｅｒｉａｌ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ、ＣＳＨＬ  Ｐｒｅｓｓ、Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ、ＮＹ；およびＧｒｅｅｎｅｒら（１９９４年）、Ｓｔｒａｔｅｇｉｅｓ  ｉｎ  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ、７巻：３２〜３４頁］を含むランダム変異誘発によって、スクリーニングすることにより、ライブラリーから生成および単離することができる。特に、コンビナトリアルの状況におけるリンカー走査変異誘発は、ＡｃｔＲＩＩポリペプチドの短縮型（生体活性）形態を同定するための魅力的な方法である。
【０１３４】
当該分野では、広範にわたる技法であって、点変異および短縮により作製されるコンビナトリアルライブラリーの遺伝子産物をスクリーニングするための技法、および、このために、ある特定の特性を有する遺伝子産物についてｃＤＮＡライブラリーをスクリーニングするための技法が公知である。このような技法は一般に、ＡｃｔＲＩＩポリペプチドのコンビナトリアル変異誘発により生成される遺伝子ライブラリーの迅速なスクリーニングに適合可能である。大規模な遺伝子ライブラリーをスクリーニングするために最も広く使用される技法は典型的に、遺伝子ライブラリーを複製可能な発現ベクターにクローニングする工程と、適切な細胞を結果として得られるベクターのライブラリーで形質転換する工程と、所望の活性の検出により、その産物が検出された遺伝子をコードするベクターの比較的容易な単離を促進する条件下で、コンビナトリアル遺伝子を発現させる工程とを含む。好ましいアッセイは、ＴＧＦ−ベータリガンド（例えば、ＢＭＰ２、ＢＭＰ２／７、ＢＭＰ３、ＢＭＰ４、ＢＭＰ４／７、ＢＭＰ５、ＢＭＰ６、ＢＭＰ７、ＢＭＰ８ａ、ＢＭＰ８ｂ、ＢＭＰ９、ＢＭＰ１０、ＧＤＦ３、ＧＤＦ５、ＧＤＦ６／ＢＭＰ１３、ＧＤＦ７、ＧＤＦ８、ＧＤＦ９ｂ／ＢＭＰ１５、ＧＤＦ１１／ＢＭＰ１１、ＧＤＦ１５／ＭＩＣ１、ＴＧＦ−β１、ＴＧＦ−β２、ＴＧＦ−β３、アクチビンＡ、アクチビンＢ、アクチビンＣ、アクチビンＥ、アクチビンＡＢ、アクチビンＡＣ、ｎｏｄａｌ、グリア細胞由来神経栄養因子（ＧＤＮＦ）、ニュールツリン、アルテミン、パーセフィン、ＭＩＳ、およびＬｅｆｔｙ）についての結合アッセイおよび／またはＴＧＦ−ベータリガンドに媒介される細胞シグナル伝達アッセイを含む。
【０１３５】
当業者により認識される通り、本明細書で記載される変異、改変体または改変の大半は、核酸レベルで作製することもできる、または、場合によって、翻訳後修飾または化学合成により作製することもできる。このような技法は、当該分野で周知であり、それらの一部については、本明細書で記載される。本発明の開示は、部分的に、本明細書に記載される本発明の範囲内の他の改変体ＡｃｔＲＩＩポリペプチドを生成したり使用したりするための指標として使用することができる、ＡｃｔＲＩＩポリペプチドの機能的に活性な部分（フラグメント）および改変体を識別する。
【０１３６】
ある特定の実施形態では、本発明の開示のＡｃｔＲＩＩポリペプチドの機能的に活性なフラグメントは、ＡｃｔＲＩＩポリペプチドをコードする核酸（例えば、配列番号７、８、１２、１３、３７、４２、４７、６０、６２、６３、６６、６７、６８、８０、８１、８２、および８３）の対応するフラグメントから組換えにより生成されたポリペプチドをスクリーニングすることにより得ることができる。加えて、フラグメントは、従来のメリフィールド固相ｆ−Ｍｏｃまたはｔ−Ｂｏｃ化学など、当該分野において公知の技法を使用して化学合成することができる。フラグメントを生成し（組換えにより、または化学合成により）、試験して、ＡｃｔＲＩＩ受容体および／または１つまたは複数のリガンド（例えば、ＢＭＰ２、ＢＭＰ２／７、ＢＭＰ３、ＢＭＰ４、ＢＭＰ４／７、ＢＭＰ５、ＢＭＰ６、ＢＭＰ７、ＢＭＰ８ａ、ＢＭＰ８ｂ、ＢＭＰ９、ＢＭＰ１０、ＧＤＦ３、ＧＤＦ５、ＧＤＦ６／ＢＭＰ１３、ＧＤＦ７、ＧＤＦ８、ＧＤＦ９ｂ／ＢＭＰ１５、ＧＤＦ１１／ＢＭＰ１１、ＧＤＦ１５／ＭＩＣ１、ＴＧＦ−β１、ＴＧＦ−β２、ＴＧＦ−β３、アクチビンＡ、アクチビンＢ、アクチビンＣ、アクチビンＥ、アクチビンＡＢ、アクチビンＡＣ、ｎｏｄａｌ、グリア細胞由来神経栄養因子（ＧＤＮＦ）、ニュールツリン、アルテミン、パーセフィン、ＭＩＳ、およびＬｅｆｔｙ）のアンタゴニスト（阻害剤）として機能することができるペプチジルフラグメントを識別することができる。
【０１３７】
ある特定の実施形態では、本開示のＡｃｔＲＩＩポリペプチドまたはＧＤＦトラップポリペプチドはさらに、ＡｃｔＲＩＩ（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡまたはＡｃｔＲＩＩＢポリペプチド）内に天然に存在する任意の翻訳後修飾に加えて翻訳後修飾を含み得る。このような修飾としては、アセチル化、カルボキシル化、グリコシル化、リン酸化、脂質化およびアシル化が挙げられるがこれらに限定されない。結果として、ＡｃｔＲＩＩポリペプチドは、ポリエチレングリコール、脂質、多糖類もしくは単糖類およびホスフェイトのような非アミノ酸成分を含み得る。このような非アミノ酸成分の、リガンドトラップポリペプチドの機能に対する影響は、他のＡｃｔＲＩＩ改変体について本明細書中に記載されるようにして試験され得る。本開示のポリペプチドの新生形態を切断することによってポリペプチドが細胞内で生成される場合、翻訳後プロセシングもまた、このタンパク質の正確な折り畳みおよび／または機能にとって重要となり得る。様々な細胞（例えば、ＣＨＯ、ＨｅＬａ、ＭＤＣＫ、２９３、ＷＩ３８、ＮＩＨ−３Ｔ３またはＨＥＫ２９３）が、このような翻訳後の活性のための特定の細胞機構および特徴的なメカニズムを有し、そして、ＡｃｔＲＩＩポリペプチドの正確な修飾およびプロセシングを保証するように選択され得る。
【０１３８】
ある特定の態様では、本開示のＡｃｔＲＩＩポリペプチドは、少なくともＡｃｔＲＩＩポリペプチド（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡまたはＡｃｔＲＩＩＢポリペプチド）の部分（ドメイン）と、１つまたは複数の異種部分（ドメイン）とを有する融合タンパク質を含む。このような融合ドメインの周知の例としては、ポリヒスチジン、Ｇｌｕ−Ｇｌｕ、グルタチオンＳトランスフェラーゼ（ＧＳＴ）、チオレドキシン、プロテインＡ、プロテインＧ、免疫グロブリン重鎖定常領域（Ｆｃ）、マルトース結合タンパク質（ＭＢＰ）、またはヒト血清アルブミンが挙げられるがこれらに限定されない。融合ドメインは、所望される特性を与えるように選択され得る。例えば、いくつかの融合ドメインが、アフィニティクロマトグラフィーによる融合タンパク質の単離に特に有用である。アフィニティ精製の目的では、グルタチオン−、アミラーゼ−、およびニッケル−もしくはコバルト−結合化樹脂のような、アフィニティクロマトグラフィーのための適切なマトリクスが使用される。このようなマトリクスの多くは、Ｐｈａｒｍａｃｉａ  ＧＳＴ精製システムおよび（ＨＩＳ６）融合パートナーと共に有用なＱＩＡｅｘｐｒｅｓｓＴＭシステム（Ｑｉａｇｅｎ）のような「キット」の形態で利用可能である。別の例としては、融合ドメインは、ＡｃｔＲＩＩポリペプチドの検出を容易にするように選択され得る。このような検出ドメインの例としては、種々の蛍光タンパク質（例えば、ＧＦＰ）、ならびに、「エピトープタグ」（これは、特定の抗体に利用可能な、通常は短いペプチド配列である）が挙げられる。特定のモノクローナル抗体に容易に利用可能な周知のエピトープタグとしては、ＦＬＡＧ、インフルエンザウイルスヘマグルチニン（ＨＡ）およびｃ−ｍｙｃタグが挙げられる。いくつかの場合、融合ドメインは、関連のプロテアーゼが融合タンパク質を部分的に消化し、それによって、そこから組換えタンパク質を解放することを可能にする、第Ｘａ因子またはトロンビンのようなプロテアーゼ切断部位を有する。解放されたタンパク質は、次いで、その後のクロマトグラフィーによる分離によって、融合ドメインから単離され得る。選択され得る融合ドメインの他のタイプとしては、多量体化（例えば、二量体化、四量体化）ドメインおよび機能性ドメイン（追加の生物学的機能を付与するもの）、例えば免疫グロブリンからの定常ドメイン（例えば、Ｆｃドメイン）などが挙げられる。
【０１３９】
ある特定の態様では、本発明の開示のＡｃｔＲＩＩポリペプチドは、ポリペプチドを「安定化すること」が可能な１つまたは複数の改変を含有する。「安定化すること」とは、それが、破壊の低減によるものであるか、腎臓によるクリアランスの減少によるものであるか、または作用因子の他の薬物動態作用によるものであるかとは無関係に、インビトロ半減期、血清中半減期を増加させる任意のものを意味する。例えば、このような修飾は、ポリペプチドの貯蔵寿命を増強させるか、ポリペプチドの循環半減期を増強させる、かつ／または、ポリペプチドのタンパク質分解を減少させる。このような安定化修飾としては、融合タンパク質（例えば、ＡｃｔＲＩＩポリペプチドドメインと安定化ドメインとを含む融合タンパク質が挙げられる）、グリコシル化部位の修飾（例えば、本開示のポリペプチドへのグリコシル化部位の付加が挙げられる）、および糖質部分の修飾（例えば、本開示のポリペプチドからの炭水化物部分の除去が挙げられる）が挙げられるがこれらに限定されない。本明細書中で使用される場合、用語「安定化ドメイン」は、融合タンパク質の場合のように融合ドメイン（例えば、免疫グロブリンＦｃドメイン）を指すだけでなく、炭水化物部分のような非タンパク質性修飾、または、ポリエチレングリコールのような非タンパク質性部分も含む。ある特定の好ましい実施形態では、ＡｃｔＲＩＩポリペプチドは、ポリペプチドを安定化させる異種ドメイン（「安定剤」ドメイン）、好ましくはインビボにおけるポリペプチドの安定性を増加させる異種ドメインと融合されている。免疫グロブリンの定常ドメイン（例えば、Ｆｃドメイン）との融合は、多様なタンパク質に所望の薬物動態特性を付与することが公知である。同様に、ヒト血清アルブミンへの融合は、所望の特性を付与することができる。
【０１４０】
以下に、ヒトＩｇＧ１のＦｃ部分（Ｇ１Ｆｃ）に使用できる天然アミノ酸配列の例を示す（配列番号１４）。点線の下線は、ヒンジ領域を指し示し、実線の下線は、天然に存在する改変体を有する位置を指し示す。本開示は、部分的に、配列番号１４と、７０％、７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含むか、これらから本質的になるか、またはこれらからなるポリペプチドを提供する。Ｇ１Ｆｃ中の天然に存在する改変体は、配列番号１４で使用される番号付けシステム（Ｕｎｉｐｒｏｔ  Ｐ０１８５７を参照）に従ってＥ１３４ＤおよびＭ１３６Ｌを含み得ると予想される。
【化１６】
2018534335.tif 000017
【０１４１】
任意選択で、ＩｇＧ１Ｆｃドメインは、Ａｓｐ−２６５、リシン３２２、およびＡｓｎ−４３４のような残基における１つまたは複数の変異を有する。特定の場合には、これらの変異のうち１つまたは複数（例えば、Ａｓｐ−２６５変異）を有する変異型ＩｇＧ１Ｆｃドメインは、野生型Ｆｃドメインに対する、Ｆｃγ受容体への結合能の低下を有する。他の場合には、これらの変異のうち１つまたは複数（例えば、Ａｓｎ−４３４変異）を有する変異型Ｆｃドメインは、野生型ＩｇＧ１Ｆｃドメインに対する、ＭＨＣクラスＩ関連のＦｃ受容体（ＦｃＲＮ）への結合能の増加を有する。
【０１４２】
以下に、ヒトＩｇＧ２（Ｇ２Ｆｃ）のＦｃ部分に使用できる天然アミノ酸配列の例を示す（配列番号１５）。点線の下線は、ヒンジ領域を指し示し、二重下線は、配列においてデータベースの矛盾がある位置（ＵｎｉＰｒｏｔ  Ｐ０１８５９に従う）を指し示す。本開示は、部分的に、配列番号１５と、７０％、７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含むか、これらから本質的になるか、またはこれらからなるポリペプチドを提供する。
【化１７】
2018534335.tif 000018
【０１４３】
以下に、ヒトＩｇＧ３（Ｇ３Ｆｃ）のＦｃ部分に使用できるアミノ酸配列の２つの例を示す。Ｇ３Ｆｃ中のヒンジ領域は、他のＦｃ鎖中のものの最大４倍であってもよく、類似の１７残基のセグメントに続き、３つの同一である１５残基のセグメントを含有する。以下に示す第１のＧ３Ｆｃ配列（配列番号１６）は、単一の１５残基のセグメントからなる短いヒンジ領域を含有し、それに対して第２のＧ３Ｆｃ配列（配列番号１７）は、全長ヒンジ領域を含有する。それぞれの場合において、点線の下線は、ヒンジ領域を指し示し、実線の下線は、ＵｎｉＰｒｏｔ  Ｐ０１８５９に従って天然に存在する改変体を有する位置を指し示す。本開示は、部分的に、配列番号１６および１７と、７０％、７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含むか、これらから本質的になるか、またはこれらからなるポリペプチドを提供する。
【化１８】
2018534335.tif 000019
【０１４４】
Ｇ３Ｆｃ中の天然に存在する改変体（例えば、Ｕｎｉｐｒｏｔ  Ｐ０１８６０を参照）は、配列番号１６で使用される番号付けシステムに変換した場合、Ｅ６８Ｑ、Ｐ７６Ｌ、Ｅ７９Ｑ、Ｙ８１Ｆ、Ｄ９７Ｎ、Ｎ１００Ｄ、Ｔ１２４Ａ、Ｓ１６９Ｎ、Ｓ１６９ｄｅｌ、Ｆ２２１Ｙを含み、本発明の開示は、これらのバリエーションのうち１つまたは複数を含有するＧ３Ｆｃドメインを含む融合タンパク質を提供する。加えて、ヒト免疫グロブリンＩｇＧ３遺伝子（ＩＧＨＧ３）は、異なるヒンジ長さを特徴とする構造的多型を示す［Ｕｎｉｐｒｏｔ  Ｐ０１８５９を参照］。具体的には、改変体ＷＩＳは、Ｖ領域のほとんどおよびＣＨ１領域の全てが欠失している。これは、ヒンジ領域中に通常存在する１１個に加えて、７位に余分な鎖間のジスルフィド結合を有する。改変体ＺＵＣは、Ｖ領域のほとんど、ＣＨ１領域の全て、およびヒンジの一部を欠如している。改変体ＯＭＭは、対立遺伝子型または別のガンマ鎖サブクラスを表す場合がある。本発明の開示は、これらの改変体のうち１つまたは複数を含有するＧ３Ｆｃドメインを含む追加の融合タンパク質を提供する。
【０１４５】
以下に、ヒトＩｇＧ４（Ｇ４Ｆｃ）のＦｃ部分に使用できる天然アミノ酸配列の例を示す（配列番号１８）。点線の下線は、ヒンジ領域を指し示す。本開示は、一部、配列番号１８と、７０％、７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含むか、これらから本質的になるか、またはこれらからなるポリペプチドを提供する。
【化１９】
2018534335.tif 000020
【０１４６】
Ｆｃドメインにおける種々の操作された変異が、本明細書ではＧ１Ｆｃ配列（配列番号１４）に関して示されており、Ｇ２Ｆｃ、Ｇ３Ｆｃ、およびＧ４Ｆｃにおける類似の変異は、図１５におけるそれらのＧ１Ｆｃとのアラインメントから誘導することができる。不均一なヒンジ長さのために、アイソタイプアラインメント（図１５）に基づく類似のＦｃ位置は、配列番号１４、１５、１６、１７、および１８において異なるアミノ酸の数を有する。また、ヒンジ、ＣＨ２、およびＣＨ３領域からなる免疫グロブリン配列中の所与のアミノ酸位置（例えば、配列番号１４、１５、１６、１７、および１８）は、Ｕｎｉｐｒｏｔデータベースに記載の通り、番号付けがＩｇＧ１重鎖定常ドメイン（ＣＨ１、ヒンジ、ＣＨ２、およびＣＨ３領域からなる）全体を包含する場合の同位置とは異なる番号で識別されることも認められ得る。例えば、ヒトＧ１Ｆｃ配列（配列番号１４）、ヒトＩｇＧ１重鎖定常ドメイン（Ｕｎｉｐｒｏｔ  Ｐ０１８５７）、およびヒトＩｇＧ１重鎖中の選択されたＣＨ３の位置間の対応は、以下の通りである。
【表Ａ】
2018534335.tif 000021
【０１４７】
融合タンパク質（例えば、免疫グロブリンＦｃ融合タンパク質）の異なるエレメントが、所望の機能性に符合する任意の形態で配列され得ることが理解される。例えば、ＡｃｔＲＩＩポリペプチドドメインを、異種ドメインに対してＣ末端に設置することもでき、または代替的に、異種ドメインは、ＡｃｔＲＩＩポリペプチドドメインに対してＣ末端に設置することもできる。ＡｃｔＲＩＩポリペプチドドメインと異種ドメインとは、融合タンパク質内で隣接する必要はなく、追加のドメインまたはアミノ酸配列を、いずれかのドメインに対してＣ末端またはＮ末端に含めることもでき、またはドメイン間に含めることもできる。
【０１４８】
例えば、ＡｃｔＲＩＩ受容体融合タンパク質は、式Ａ−Ｂ−Ｃに示されるアミノ酸配列を含み得る。Ｂ部分は、ＡｃｔＲＩＩポリペプチドドメインに対応する。Ａ部分およびＣ部分は、独立に、０、１、または１を超えるアミノ酸であることが可能であり、Ａ部分およびＣ部分のいずれも、存在する場合、Ｂに対して異種である。Ａ部分および／またはＣ部分は、リンカー配列を介してＢ部分に付加され得る。リンカーは、グリシンリッチであってもよく（例えば、２〜１０、２〜５、２〜４、２〜３個のグリシン残基）、またはグリシンおよびプロリン残基がリッチであってもよく、例えば、スレオニン／セリンおよびグリシンの単一の配列、またはスレオニン／セリンおよび／もしくはグリシンの反復配列、例えば、ＧＧＧ（配列番号１９）、ＧＧＧＧ（配列番号２０）、ＴＧＧＧＧ（配列番号２１）、ＳＧＧＧＧ（配列番号２２）、ＴＧＧＧ（配列番号２３）、ＳＧＧＧ（配列番号２４）、またはＧＧＧＧＳ（配列番号２５）のシングレットまたはリピートを含有し得る。ある特定の実施形態では、ＡｃｔＲＩＩ融合タンパク質は、式Ａ−Ｂ−Ｃに示されるアミノ酸配列を含み、式中Ａは、リーダー（シグナル）配列であり、Ｂは、ＡｃｔＲＩＩポリペプチドドメインからなり、Ｃは、インビボにおける安定性、インビボにおける半減期、取込み／投与、組織局在化もしくは分布、タンパク質複合体の形成、および／または精製の１つまたは複数を増強するポリペプチド部分である。ある特定の実施形態では、ＡｃｔＲＩＩ融合タンパク質は、式Ａ−Ｂ−Ｃに示されるアミノ酸配列を含み、式中Ａは、ＴＰＡリーダー配列であり、Ｂは、ＡｃｔＲＩＩ受容体ポリペプチドドメインからなり、Ｃは、免疫グロブリンのＦｃドメインである。好ましい融合タンパク質は、配列番号３２、３６、３９、４０、４１、４４、４６、５０、６１、６４、７８、および７９のいずれか１つに示されるアミノ酸配列を含む。
【０１４９】
好ましい実施形態では、本明細書で記載される方法に従い使用されるＡｃｔＲＩＩポリペプチドは、単離ポリペプチドである。本明細書で使用する場合、単離タンパク質または単離ポリペプチドとは、その天然環境の成分から分離されたタンパク質またはポリペプチドである。一部の実施形態では、本開示のポリペプチドを、例えば、電気泳動（例えば、ＳＤＳ−ＰＡＧＥ、等電点電気泳動（ＩＥＦ）、キャピラリー電気泳動）、またはクロマトグラフィー（例えば、イオン交換ＨＰＬＣまたは逆相ＨＰＬＣ）により決定した場合に、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％より高い純度まで精製する。当該分野では、抗体純度を評価するための方法が周知である［例えば、Ｆｌａｔｍａｎら、（２００７年）、Ｊ．  Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒ．、Ｂ８４８巻：７９〜８７頁を参照されたい］。一部の実施形態では、本明細書に記載される方法に従って使用されるＡｃｔＲＩＩポリペプチドは、組換えポリペプチドである。
【０１５０】
ある特定の実施形態では、本開示のＡｃｔＲＩＩポリペプチドは、当該分野で公知の様々な技法により生成することができる。例えば、本開示のポリペプチドは、Ｂｏｄａｎｓｋｙ，  Ｍ．、Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ  ｏｆ  Ｐｅｐｔｉｄｅ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ、Ｓｐｒｉｎｇｅｒ  Ｖｅｒｌａｇ、Ｂｅｒｌｉｎ（１９９３年）；およびＧｒａｎｔ  Ｇ．  Ａ．（編）、Ｓｙｎｔｈｅｔｉｃ  Ｐｅｐｔｉｄｅｓ：  Ａ  Ｕｓｅｒ’ｓ  Ｇｕｉｄｅ、Ｗ．  Ｈ．  Ｆｒｅｅｍａｎ  ａｎｄ  Ｃｏｍｐａｎｙ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ（１９９２年）において記載されているものなどの標準的なタンパク質化学技術を使用して合成することができる。加えて、自動式ペプチド合成器も、市販されている（例えば、Ａｄｖａｎｃｅｄ  ＣｈｅｍＴｅｃｈ  ３９６型；Ｍｉｌｌｉｇｅｎ／Ｂｉｏｓｅａｒｃｈ９６００）。代替的に、それらのフラグメントまたは改変体を含む、本開示のポリペプチドは、当該分野で周知の、種々の発現系［例えば、Ｅ．ｃｏｌｉ、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞、ＣＯＳ細胞、バキュロウイルス］を使用して、組換えにより生成することもできる。さらなる実施形態では、本開示の改変ポリペプチドまたは非改変ポリペプチドは、例えば、プロテアーゼ、例えば、トリプシン、サーモリシン、キモトリプシン、ペプシン、またはＰＡＣＥ（ｐａｉｒｅｄ  ｂａｓｉｃ  ａｍｉｎｏ  ａｃｉｄ  ｃｏｎｖｅｒｔｉｎｇ  ｅｎｚｙｍｅ）の使用を介する、組換えにより生成された全長ＡｃｔＲＩＩポリペプチドの消化により生成することができる。（市販のソフトウェア、例えば、ＭａｃＶｅｃｔｏｒ、Ｏｍｅｇａ、ＰＣＧｅｎｅ、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｓｉｍｕｌａｔｉｏｎ，Ｉｎｃ．を使用する）コンピュータ解析を使用して、タンパク質分解性切断部位を同定することができる。代替的に、このようなポリペプチドは、化学的切断（例えば、臭化シアン、ヒドロキシルアミンなど）を使用して、組換えにより生成された全長ＡｃｔＲＩＩポリペプチドから生成することができる。
【０１５１】
本明細書に記載されるＡｃｔＲＩＩポリペプチド（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡまたはＡｃｔＲＩＩＢポリペプチド、加えてそれらの改変体、例えばＧＤＦトラップなど）のいずれかを、１つまたは複数の追加のＡｃｔＲＩＩアンタゴニストと組み合わせて、所望の効果を達成する（例えば、それを必要とする患者において眼の血管障害を処置または予防する、それを必要とする眼の血管障害を有する患者において視覚を増加させる、および／または眼の血管障害の１つまたは複数の合併症を処置または予防する）ことができる。例えば、ＡｃｔＲＩＩポリペプチドは、ｉ）１つまたは複数の追加のＡｃｔＲＩＩポリペプチド、ｉｉ）１つまたは複数のＡｃｔＲＩＩアンタゴニスト抗体；ｉｉｉ）１つまたは複数の低分子ＡｃｔＲＩＩアンタゴニスト；ｉｖ）１つまたは複数のポリヌクレオチドＡｃｔＲＩＩアンタゴニスト；ｖ）１つまたは複数のフォリスタチンポリペプチド；および／またはｖｉ）１つまたは複数のＦＬＲＧポリペプチドと組み合わせて使用することができる。
Ｂ．ＡｃｔＲＩＩポリペプチドをコードする核酸
【０１５２】
Ｂ．ＡｃｔＲＩＩポリペプチドおよびＧＤＦトラップをコードする核酸
ある特定の実施形態では、本開示は、ＡｃｔＲＩＩポリペプチド（そのフラグメント、機能的改変体（例えば、ＧＤＦトラップ）、および融合タンパク質を含む）をコードする、単離核酸および／または組換え核酸を提供する。例えば、配列番号１２は、天然に存在するヒトＡｃｔＲＩＩＡ前駆体のポリペプチドをコードするが、配列番号１３は、ＡｃｔＲＩＩＡのプロセシング後の細胞外ドメインをコードする。さらに、配列番号７は、天然に存在するヒトＡｃｔＲＩＩＢ前駆体ポリペプチド（上記のＲ６４改変体）をコードするが、配列番号８は、ＡｃｔＲＩＩＢのプロセシング後の細胞外ドメイン（上記のＲ６４改変体）をコードする。対象核酸は、一本鎖でもよく、二本鎖でもよい。このような核酸は、ＤＮＡ分子でもよく、ＲＮＡ分子でもよい。これらの核酸は、例えば、本明細書に記載のＡｃｔＲＩＩベースのリガンドトラップポリペプチドを作製するための方法において使用することができる。
【０１５３】
本明細書で使用する場合、単離核酸とは、その天然環境の成分から分離された核酸分子を指す。単離核酸は、その核酸分子を通常含有するが、その核酸分子が染色体外またはその天然の染色体位置と異なる染色体位置に存在する細胞内に含有される核酸分子を含む。
【０１５４】
ある特定の実施形態では、本開示のＡｃｔＲＩＩポリペプチドをコードする核酸は、配列番号７、８、１２、１３、３７、４２、４７、６０、６２、６３、６６、６７、６８、８０、８１、８２、および８３のいずれか１つの改変体である核酸を含むことが理解される。改変体ヌクレオチド配列は、対立遺伝子改変体を含む、１つまたは複数のヌクレオチドの置換、付加、または欠失により異なる配列、、したがって、配列番号７、８、１２、１３、３７、４２、４７、６０、６２、６３、６６、６７、６８、８０、８１、８２、および８３のいずれか１つに表示されるヌクレオチド配列とは異なるコード配列を含み得る。
【０１５５】
ある特定の実施形態では、本開示のＡｃｔＲＩＩポリペプチドは、配列番号７、８、１２、１３、３７、４２、４７、６０、６２、６３、６６、６７、６８、８０、８１、８２、および８３のいずれか１つと、少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％  ９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一である、単離されたおよび／または組換え核酸配列によってコードされる。当業者は、配列番号７、８、１２、１３、３７、４２、４７、６０、６２、６３、６６、６７、６８、８０、８１、８２、および８３、ならびにこれらの改変体に相補的な配列と、少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％  ９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一である核酸配列もまた、本発明の開示の範囲内にあることを理解する。さらなる実施形態では、本開示の核酸配列は、単離核酸配列であっても、組換え核酸配列であっても、および／または異種ヌクレオチド配列と融合させてもよく、またはＤＮＡライブラリー内の核酸配列であってもよい。
【０１５６】
他の実施形態では、本開示の核酸はまた、配列番号７、８、１２、１３、３７、４２、４７、６０、６２、６３、６６、６７、６８、８０、８１、８２および８３に指定されるヌクレオチド配列、配列番号７、８、１２、１３、３７、４２、４７、６０、６２、６３、６６、６７、６８、８０、８１、８２および８３の相補配列、またはこれらのフラグメントに対して高度にストリンジェントな条件下でハイブリダイズするヌクレオチド配列も含む。上述のように、当業者は、ＤＮＡのハイブリダイゼーションを促進する適切なストリンジェンシー条件が変更され得ることを容易に理解する。当業者は、ＤＮＡのハイブリダイゼーションを促進する適切なストリンジェンシー条件が変更され得ることを容易に理解する。例えば、約４５℃における６．０×塩化ナトリウム／クエン酸ナトリウム（ＳＳＣ）でのハイブリダイゼーションの後に、５０℃における２．０×ＳＳＣの洗浄を行い得る。例えば、洗浄工程における塩濃度は、５０℃における約２．０×ＳＳＣの低ストリンジェンシーから、５０℃における約０．２×ＳＳＣの高ストリンジェンシーまで選択され得る。さらに、洗浄工程における温度は、室温（約２２℃）の低ストリンジェンシー条件から、約６５℃の高ストリンジェンシー条件まで上昇され得る。温度と塩の両方が変更されても、温度または塩濃度が一定に保たれ、他の変数が変更されてもよい。一実施形態では、本開示は、室温における６×ＳＳＣとその後の室温で２×ＳＳＣでの洗浄の低ストリンジェンシー条件下でハイブリダイズする核酸を提供する。
【０１５７】
遺伝子コードにおける縮重に起因して配列番号７、８、１２、１３、３７、４２、４７、６０、６２、６３、６６、６７、６８、８０、８１、８２および８３に示される核酸と異なる単離された核酸もまた、本開示の範囲内である。例えば、多数のアミノ酸が１より多いトリプレットによって示される。同じアミノ酸を特定するコドンまたは同義語（例えば、ＣＡＵおよびＣＡＣはヒスチジンに対する同義語である）は、タンパク質のアミノ酸配列に影響を及ぼさない「サイレント」変異を生じ得る。しかしながら、哺乳動物細胞の中には、本主題のタンパク質のアミノ酸配列に変化をもたらすＤＮＡ配列の多型が存在することが予想される。当業者は、天然の対立遺伝子改変に起因して、所与の種の個体間に、特定のタンパク質をコードする核酸の１または複数のヌクレオチド（約３〜５％までのヌクレオチド）におけるこれらの改変が存在し得ることを理解する。任意およびあらゆるこのようなヌクレオチドの改変と、結果として生じるアミノ酸の多型とは、本開示の範囲内である。
【０１５８】
特定の実施形態では、本開示の組換え核酸は、発現構築物において１または複数の調節性ヌクレオチド配列に作動可能に連結され得る。調節性のヌクレオチド配列は、一般に、発現のために使用される宿主細胞に対して適切なものである。多数のタイプの適切な発現ベクターおよび適切な調節性配列が当該分野で公知であり、種々の宿主細胞において使用することができる。代表的には、上記１または複数の調節性ヌクレオチド配列としては、プロモーター配列、リーダー配列もしくはシグナル配列、リボソーム結合部位、転写開始配列および転写終結配列、翻訳開始配列および翻訳終結配列、ならびに、エンハンサー配列もしくはアクチベーター配列が挙げられ得るがこれらに限定されない。当該分野で公知の構成的もしくは誘導性のプロモーターが、本開示によって企図される。プロモーターは、天然に存在するプロモーター、または、１つより多くのプロモーターの要素を組み合わせたハイブリッドプロモーターのいずれかであり得る。発現構築物は、プラスミドのようにエピソーム上で細胞中に存在し得るか、または、発現構築物は、染色体中に挿入され得る。一部の実施形態では、発現ベクターは、形質転換された宿主細胞の選択を可能にするために、選択可能なマーカー遺伝子を含む。選択可能なマーカー遺伝子は、当該分野で周知であり、そして、使用される宿主細胞により変化し得る。
【０１５９】
特定の態様では、本明細書に記載の本主題の核酸は、ＡｃｔＲＩＩポリペプチドをコードし、そして、少なくとも１つの調節性配列に作動可能に連結されたヌクレオチド配列を含む発現ベクターにおいて提供される。調節性配列は当該分野で認識され、そして、ＡｃｔＲＩＩポリペプチドの発現を誘導するように選択される。したがって、用語、調節性配列は、プロモーター、エンハンサーおよび他の発現制御エレメントを含む。例示的な調節性配列は、Ｇｏｅｄｄｅｌ；Ｇｅｎｅ  Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ：Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ、Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ、Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ、ＣＡ（１９９０年）に記載される。例えば、作動可能に連結されたときにＤＮＡ配列の発現を制御する広範な種々の発現制御配列のいずれかが、ＡｃｔＲＩＩポリペプチドをコードするＤＮＡ配列を発現させるためにこれらのベクターにおいて使用され得る。このような有用な発現制御配列としては、例えば、ＳＶ４０の初期および後期プロモーター、ｔｅｔプロモーター、アデノウイルスもしくはサイトメガロウイルスの前初期プロモーター、ＲＳＶプロモーター、ｌａｃシステム、ｔｒｐシステム、ＴＡＣもしくはＴＲＣシステム、Ｔ７  ＲＮＡポリメラーゼによってその発現が誘導されるＴ７プロモーター、ファージλの主要なオペレーターおよびプロモーター領域、ｆｄコートタンパク質の制御領域、３−ホスホグリセリン酸キナーゼもしくは他の糖分解酵素のプロモーター、酸性ホスファターゼのプロモーター（例えば、Ｐｈｏ５）、酵母α−接合因子（ｍａｔｉｎｇ  ｆａｃｔｏｒ）のプロモーター、バキュロウイルス系の多角体プロモーター、ならびに、原核生物もしくは真核生物の細胞、または、そのウイルスの遺伝子の発現を制御することが公知である他の配列、ならびにこれらの種々の組み合わせが挙げられる。発現ベクターの設計は、形質転換される宿主細胞の選択および／または発現されることが所望されるタンパク質のタイプのような要因に依存し得ることが理解されるべきである。さらに、ベクターのコピー数、コピー数を制御する能力およびベクターによってコードされる任意の他のタンパク質（例えば、抗生物質マーカー）の発現もまた考慮されるべきである。
【０１６０】
本開示の組換え核酸は、クローニングされた遺伝子またはその一部を、原核生物細胞、真核生物細胞（酵母、鳥類、昆虫または哺乳動物）のいずれか、または両方において発現させるために適切なベクター中に連結することによって生成され得る。組換えＡｃｔＲＩＩポリペプチドの生成のための発現ビヒクルとしては、プラスミドおよび他のベクターが挙げられる。例えば、適切なベクターとしては、以下のタイプのプラスミドが挙げられる：原核生物細胞（例えば、Ｅ．ｃｏｌｉ）における発現のための、ｐＢＲ３２２由来のプラスミド、ｐＥＭＢＬ由来のプラスミド、ｐＥＸ由来のプラスミド、ｐＢＴａｃ由来のプラスミドおよびｐＵＣ由来のプラスミド。
【０１６１】
いくつかの哺乳動物発現ベクターは、細菌中でのベクターの増殖を促進するための原核生物の配列と、真核生物細胞において発現される１または複数の真核生物の転写単位との両方を含む。ｐｃＤＮＡＩ／ａｍｐ、ｐｃＤＮＡＩ／ｎｅｏ、ｐＲｃ／ＣＭＶ、ｐＳＶ２ｇｐｔ、ｐＳＶ２ｎｅｏ、ｐＳＶ２−ｄｈｆｒ、ｐＴｋ２、ｐＲＳＶｎｅｏ、ｐＭＳＧ、ｐＳＶＴ７、ｐｋｏ−ｎｅｏおよびｐＨｙｇ由来のベクターは、真核生物細胞のトランスフェクションに適切な哺乳動物発現ベクターの例である。これらのベクターのいくつかは、原核生物細胞および真核生物細胞の両方における複製および薬物耐性選択を容易にするために、細菌プラスミド（例えば、ｐＢＲ３２２）からの配列を用いて改変される。あるいは、ウシパピローマウイルス（ＢＰＶ−１）またはエプスタイン−バーウイルス（ｐＨＥＢｏ、ｐＲＥＰ由来およびｐ２０５）のようなウイルスの誘導体が、真核生物細胞におけるタンパク質の一過的な発現のために使用され得る。他のウイルス（レトロウイルスを含む）発現系の例は、遺伝子治療送達系の説明において以下に見出され得る。プラスミドの調製および宿主生物の形質転換において用いられる種々の方法は、当該分野で周知である。原核生物細胞および真核生物細胞の両方についての他の適切な発現系、ならびに、一般的な組換え手順、例えば、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ  Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ、３ｒｄ  Ｅｄ．、Ｓａｍｂｒｏｏｋ、ＦｒｉｔｓｃｈおよびＭａｎｉａｔｉｓ編（Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ、２００１年）。いくつかの場合において、バキュロウイルス発現系を用いて組換えポリペプチドを発現させることが望ましくあり得る。このようなバキュロウイルス発現系の例としては、ｐＶＬ由来のベクター（例えば、ｐＶＬ１３９２、ｐＶＬ１３９３およびｐＶＬ９４１）、ｐＡｃＵＷ由来のベクター（例えば、ｐＡｃＵＷｌ）およびｐＢｌｕｅＢａｃ由来のベクター（例えば、β−ｇａｌを含むｐＢｌｕｅＢａｃ  ＩＩＩ）が挙げられる。
【０１６２】
好ましい実施形態では、ベクターは、ＣＨＯ細胞における本主題のＡｃｔＲＩＩポリペプチドの生成のために設計される（例えば、Ｐｃｍｖ−Ｓｃｒｉｐｔベクター（Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ，Ｌａ  Ｊｏｌｌａ，Ｃａｌｉｆ．）、ｐｃＤＮＡ４ベクター（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，Ｃａｒｌｓｂａｄ，Ｃａｌｉｆ．）およびｐＣＩ−ｎｅｏベクター（Ｐｒｏｍｅｇａ，Ｍａｄｉｓｏｎ，Ｗｉｓｃ））。明らかであるように、本主題の遺伝子構築物は、例えば、タンパク質（融合タンパク質または改変体タンパク質を含む）を生成するため、精製のために、培養物において増殖させた細胞において本主題のＡｃｔＲＩＩポリペプチドの発現を引き起こすために使用され得る。
【０１６３】
本開示はまた、１または複数の本主題のＡｃｔＲＩＩポリペプチドのコード配列を含む組換え遺伝子をトランスフェクトされた宿主細胞に関する。宿主細胞は、任意の原核生物細胞または真核生物細胞であり得る。例えば、本開示のＡｃｔＲＩＩポリペプチドは、Ｅ．ｃｏｌｉのような細菌細胞、昆虫細胞（例えば、バキュロウイルス発現系を用いる）、酵母細胞または哺乳動物細胞［例えば、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞株］において発現され得る。他の適切な宿主細胞は、当業者に公知である。
【０１６４】
したがって、本開示はさらに、本主題のＡｃｔＲＩＩポリペプチドを生成する方法に関する。例えば、ＡｃｔＲＩＩポリペプチドをコードする発現ベクターでトランスフェクトされた宿主細胞は、ＡｃｔＲＩＩポリペプチドの発現を起こすことが可能な適切な条件下で培養され得る。ポリペプチドは、ポリペプチドを含む細胞および培地の混合物から分泌および単離され得る。あるいは、ＡｃｔＲＩＩポリペプチドは、細胞質または膜画分に保持され得、そして、細胞が回収、溶解され、そして、タンパク質が単離される。細胞培養物は、宿主細胞、培地および他の副産物を含む。細胞培養に適切な培地は、当該分野で周知である。本主題のポリペプチドは、タンパク質を精製するための当該分野で公知の技法であって、イオン交換クロマトグラフィー、ゲル濾過クロマトグラフィー、限外濾過、電気泳動、ＡｃｔＲＩＩポリペプチドの特定のエピトープに特異的な抗体による免疫アフィニティー精製、およびＡｃｔＲＩＩポリペプチドに融合させたドメインに結合する作用因子によるアフィニティー精製（例えば、プロテインＡカラムを使用して、ＡｃｔＲＩＩ−Ｆｃ融合タンパク質を精製することができる）を含む技法を使用して、細胞培養培地、宿主細胞、またはこれらの両方から単離することができる。一部の実施形態では、ＡｃｔＲＩＩポリペプチドは、その精製を容易とするドメインを含有する融合タンパク質である。
【０１６５】
一部の実施形態では、精製は、一連のカラムクロマトグラフィー工程であって、例えば、以下：プロテインＡクロマトグラフィー、Ｑセファロースクロマトグラフィー、フェニルセファロースクロマトグラフィー、サイズ除外クロマトグラフィー、およびカチオン交換クロマトグラフィーのうちの３つまたはこれより多く、任意の順序で含む工程により達成する。精製は、ウイルス濾過および緩衝液交換により完了し得る。ＡｃｔＲＩＩタンパク質は、サイズ除外クロマトグラフィーにより決定した場合に、＞９０％、＞９５％、＞９６％、＞９８％、または＞９９％の純度まで精製することができ、ＳＤＳ  ＰＡＧＥにより決定した場合に、＞９０％、＞９５％、＞９６％、＞９８％、または＞９９％の純度まで精製することができる。純度の標的レベルは、哺乳動物系、特に、非ヒト霊長動物、齧歯動物（マウス）、およびヒトにおいて、望ましい結果を達成するのに十分なレベルであるべきである。
【０１６６】
別の実施形態では、精製用リーダー配列（例えば、組換えＡｃｔＲＩＩポリペプチドの所望の部分のＮ末端に位置するポリ−（Ｈｉｓ）／エンテロキナーゼ切断部位の配列）をコードする融合遺伝子は、Ｎｉ２＋金属樹脂を用いる親和性クロマトグラフィーによる、発現された融合タンパク質の精製を可能にし得る。その後、精製用リーダー配列は、引き続いて、エンテロキナーゼでの処理によって除去され、精製ＡｃｔＲＩＩポリペプチドを提供し得る。例えば、Ｈｏｃｈｕｌｉら、（１９８７年）Ｊ．Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ  ４１１巻：１７７頁；およびＪａｎｋｎｅｃｈｔら、（１９９１年）ＰＮＡＳ  ＵＳＡ  ８８巻：８９７２頁を参照のこと）。
【０１６７】
融合遺伝子を作製するための技術は周知である。本質的には、異なるポリペプチド配列をコードする種々のＤＮＡフラグメントの接合は、ライゲーションのための平滑末端もしくは突出（ｓｔａｇｇｅｒｅｄ）末端、適切な末端を提供するための制限酵素消化、必要に応じた粘着末端のフィルイン（ｆｉｌｌｉｎｇ−ｉｎ）、所望されない接合を回避するためのアルカリ性ホスファターゼ処理、および酵素によるライゲーション、を用いる従来の技術に従って行われる。別の実施形態では、融合遺伝子は、自動ＤＮＡ合成装置を含む従来の技術によって合成され得る。あるいは、遺伝子フラグメントのＰＣＲ増幅は、２つの連続した遺伝子フラグメント間の相補的なオーバーハング（ｏｖｅｒｈａｎｇ）を生じるアンカープライマーを用いて行われ得、これらのフラグメントは、その後、キメラ遺伝子配列を生じるようにアニーリングされ得る。例えば、Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ、Ａｕｓｕｂｅｌら編、Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ：１９９２年を参照のこと。
【０１６８】
Ｃ．抗体アンタゴニスト
他の態様では、本発明の開示は、ＡｃｔＲＩＩ活性に拮抗する（例えば、Ｓｍａｄ１、２、３、５、および８を介したＡｃｔＲＩＩシグナル伝達の阻害）抗体または抗体の組み合わせに関する。このような抗体は、１つまたは複数のＴＧＦ−βリガンド（例えば、ＢＭＰ２、ＢＭＰ２／７、ＢＭＰ３、ＢＭＰ４、ＢＭＰ４／７、ＢＭＰ５、ＢＭＰ６、ＢＭＰ７、ＢＭＰ８ａ、ＢＭＰ８ｂ、ＢＭＰ９、ＢＭＰ１０、ＧＤＦ３、ＧＤＦ５、ＧＤＦ６／ＢＭＰ１３、ＧＤＦ７、ＧＤＦ８、ＧＤＦ９ｂ／ＢＭＰ１５、ＧＤＦ１１／ＢＭＰ１１、ＧＤＦ１５／ＭＩＣ１、ＴＧＦ−β１、ＴＧＦ−β２、ＴＧＦ−β３、アクチビンＡ、アクチビンＢ、アクチビンＣ、アクチビンＥ、アクチビンＡＢ、アクチビンＡＣ、ｎｏｄａｌ、グリア細胞由来神経栄養因子（ＧＤＮＦ）、ニュールツリン、アルテミン、パーセフィン、ＭＩＳ、およびＬｅｆｔｙ）または１つまたは複数のＩ型および／またはＩＩ型受容体（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡ、ＡｃｔＲＩＩＢ、ＡＬＫ４、ＡＬＫ５）に結合することができる。特に、本開示は、それを必要とする患者において、眼の血管障害［例えば、黄斑変性症（例えば、加齢性黄斑変性症、若年性黄斑変性症、滲出型黄斑変性症、萎縮型黄斑変性症、シュタルガルト病、およびベスト病）、網膜静脈閉塞症（例えば、網膜中心静脈閉塞症、半側網膜静脈閉塞症、網膜静脈分枝閉塞症、網膜静脈閉塞症後の黄斑浮腫、および虚血性網膜静脈閉塞症）、網膜動脈閉塞症（例えば、網膜中心動脈閉塞症、半側網膜動脈閉塞症、網膜動脈分枝閉塞症、および虚血性網膜動脈閉塞症）、糖尿病性網膜症、糖尿病黄斑浮腫、虚血性視神経症［例えば、前部虚血性視神経症（動脈炎性および非動脈炎性）および後部虚血性視神経症］、黄斑部毛細血管拡張症（Ｉ型またはＩＩ型）、網膜虚血（例えば、急性網膜虚血または慢性網膜虚血）、眼虚血性症候群、網膜血管炎、および未熟児網膜症］を処置または予防するために；それを必要とする眼の血管障害を有する患者において視覚を増加させる（視力および／または視野を増加させる）ために；および／または眼の血管障害の１つまたは複数の合併症を処置または予防するために、抗体ＡｃｔＲＩＩアンタゴニストまたは抗体ＡｃｔＲＩＩアンタゴニストの組み合わせを、単独で、または１つまたは複数の追加の支持療法と組み合わせて使用する方法を提供する。
【０１６９】
ある特定の態様では、本開示の好ましい抗体ＡｃｔＲＩＩアンタゴニストは、少なくともＧＤＦ１１に結合し、かつ／またはその活性を阻害する抗体または抗体の組み合わせである。他の態様では、本開示の好ましい抗体ＡｃｔＲＩＩアンタゴニストは、少なくともＧＤＦ８に結合し、かつ／またはその活性を阻害する抗体または抗体の組み合わせである。他の態様では、本開示の好ましい抗体ＡｃｔＲＩＩアンタゴニストは、少なくともＧＤＦ３に結合し、かつ／またはその活性を阻害する抗体または抗体の組み合わせである。さらなる他の態様では、本開示の好ましい抗体ＡｃｔＲＩＩアンタゴニストは、少なくともＢＭＰ６に結合し、かつ／またはその活性を阻害する抗体または抗体の組み合わせである。それでもなお他の態様では、本開示の好ましい抗体ＡｃｔＲＩＩアンタゴニストは、少なくともＢＭＰ９に結合し、かつ／またはその活性を阻害する抗体または抗体の組み合わせである。代替的態様では、本開示の好ましい抗体ＡｃｔＲＩＩアンタゴニストは、ＢＭＰ９に結合せず、かつ／またはその活性を阻害しない抗体または抗体の組み合わせである。さらになお他の態様では、本開示の好ましい抗体ＡｃｔＲＩＩアンタゴニストは、少なくともＢＭＰ１０に結合し、かつ／またはその活性を阻害する抗体または抗体の組み合わせである。代替的態様では、本開示の好ましい抗体ＡｃｔＲＩＩアンタゴニストは、ＢＭＰ１０に結合せず、かつ／またはその活性を阻害しない抗体または抗体の組み合わせである。さらなる態様では、本開示の好ましい抗体ＡｃｔＲＩＩアンタゴニストは、少なくともアクチビン（例えば、アクチビンＡ、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、アクチビンＣ、およびアクチビンＤ）に結合し、かつ／またはその活性を阻害する抗体または抗体の組み合わせである。一部の実施形態では、本開示の好ましい抗体ＡｃｔＲＩＩアンタゴニストは、少なくともアクチビンＢに結合し、かつ／またはその活性を阻害する抗体または抗体の組み合わせである。一部の実施形態では、本開示の好ましい抗体ＡｃｔＲＩＩアンタゴニストは、少なくともアクチビンＡおよびアクチビンＢに結合し、かつ／またはその活性を阻害する抗体または抗体の組み合わせである。代替的に、一部の実施形態では、本開示の好ましい抗体ＡｃｔＲＩＩアンタゴニストは、少なくともアクチビンＢに結合し、かつ／またはその活性を阻害するが、アクチビンＡに結合せず、かつ／またはそれを阻害しない抗体または抗体の組み合わせである。よりさらなる態様では、本開示の好ましい抗体ＡｃｔＲＩＩアンタゴニストは、ＢＭＰ９、ＢＭＰ１０、およびアクチビンＡの１つまたは複数に結合せず、かつ／またはその活性を阻害しない抗体または抗体の組み合わせである。
【０１７０】
一部の実施形態では、本開示の好ましい抗体ＡｃｔＲＩＩアンタゴニストは、特に、ＧＤＦ１１およびＧＤＦ８の両方に対する結合アフィニティーを有する多特異性抗体の場合において、または１つまたは複数の抗ＧＤＦ１１抗体および１つまたは複数の抗ＧＤＦ８抗体の組み合わせの文脈において、少なくともＧＤＦ１１およびＧＤＦ８に結合し、かつ／またはその活性を阻害する抗体または抗体の組み合わせである。一部の実施形態では、ＧＤＦ１１および／またはＧＤＦ８に結合し、かつ／またはその活性を阻害する本開示の抗体または抗体の組み合わせは、アクチビン（例えば、アクチビンＡ、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、アクチビンＣ、および／またはアクチビンＥ）にさらに結合し、かつ／またはその活性を阻害する。一部の実施形態では、ＧＤＦ１１および／またはＧＤＦ８に結合し、かつ／またはその活性を阻害する本開示の抗体または抗体の組み合わせは、アクチビンＢにさらに結合し、かつ／またはその活性を阻害する。一部の実施形態では、ＧＤＦ１１および／またはＧＤＦ８に結合し、かつ／またはその活性を阻害する本開示の抗体または抗体の組み合わせは、アクチビンＡに結合せず、かつ／もしくはその活性を阻害しないか、またはそれに実質的に結合せず、かつ／もしくはその活性を阻害しない（例えば、アクチビンＡに関して１×１０−７より大きいＫＤを有する抗体）。一部の実施形態では、ＧＤＦ１１、ＧＤＦ８、および／またはアクチビンに結合し、かつ／またはその活性を阻害する本開示の抗体または抗体の組み合わせは、ＢＭＰ６にさらに結合し、かつ／またはその活性を阻害する。一部の実施形態では、ＧＤＦ１１、ＧＤＦ８、アクチビン、および／またはＢＭＰ６に結合し、かつ／またはその活性を阻害する本開示の抗体または抗体の組み合わせは、ＧＤＦ３にさらに結合し、かつ／またはその活性を阻害する。一部の実施形態では、ＧＤＦ１１、ＧＤＦ８、アクチビン、ＢＭＰ６、および／またはＧＤＦ３に結合し、かつ／またはその活性を阻害する本開示の抗体または抗体の組み合わせは、ＢＭＰ１０にさらに結合し、かつ／またはその活性を阻害する。一部の実施形態では、ＧＤＦ１１、ＧＤＦ８、アクチビン、ＢＭＰ６、ＧＤＦ３、および／またはＢＭＰ１０に結合し、かつ／またはその活性を阻害する本開示の抗体または抗体の組み合わせは、ＢＭＰ９にさらに結合し、かつ／またはその活性を阻害する。一部の実施形態では、ＧＤＦ１１、ＧＤＦ８、アクチビン、ＢＭＰ６、および／またはＧＤＦ３に結合し、かつ／またはその活性を阻害する本開示の抗体または抗体の組み合わせは、ＢＭＰ９に結合せず、かつ／またはそれを阻害しない（例えば、ＢＭＰ９に関して１×１０−７より大きいＫＤを有する抗体）。一部の実施形態では、ＧＤＦ１１、ＧＤＦ８、アクチビン、ＢＭＰ６、および／またはＧＤＦ３に結合し、かつ／またはその活性を阻害する本開示の抗体または抗体の組み合わせは、ＢＭＰ１０に結合せず、かつ／またはそれを阻害しない（例えば、ＢＭＰ１０に関して１×１０−７より大きいＫＤを有する抗体）。一部の実施形態では、ＧＤＦ１１、ＧＤＦ８、アクチビン、ＢＭＰ６、および／またはＧＤＦ３に結合し、かつ／またはその活性を阻害する本開示の抗体または抗体の組み合わせは、ＢＭＰ９またはＢＭＰ１０に結合せず、かつ／またはそれを阻害しない（例えば、ＢＭＰ９およびＢＭＰ１０に関して１×１０−７より大きいＫＤを有する抗体）。一部の実施形態では、ＧＤＦ１１、ＧＤＦ８、アクチビンＢ、ＢＭＰ６、および／またはＧＤＦ３に結合し、かつ／またはその活性を阻害する本開示の抗体または抗体の組み合わせは、ＢＭＰ９に結合せず、かつ／またはそれを阻害しない（例えば、ＢＭＰ９に関して１×１０−７より大きいＫＤを有する抗体）。一部の実施形態では、ＧＤＦ１１、ＧＤＦ８、アクチビンＢ、ＢＭＰ６、および／またはＧＤＦ３に結合し、かつ／またはその活性を阻害する本開示の抗体または抗体の組み合わせは、ＢＭＰ１０に結合せず、かつ／またはそれを阻害しない（例えば、ＢＭＰ１０に関して１×１０−７より大きいＫＤを有する抗体）。一部の実施形態では、ＧＤＦ１１、ＧＤＦ８、アクチビンＢ、ＢＭＰ６、および／またはＧＤＦ３に結合し、かつ／またはその活性を阻害する本開示の抗体または抗体の組み合わせは、ＢＭＰ９またはＢＭＰ１０に結合せず、かつ／またはそれを阻害しない（例えば、ＢＭＰ９およびＢＭＰ１０に関して１×１０−７より大きいＫＤを有する抗体）。一部の実施形態では、ＧＤＦ１１、ＧＤＦ８、アクチビンＢ、ＢＭＰ６、および／またはＧＤＦ３に結合し、かつ／またはその活性を阻害する本開示の抗体または抗体の組み合わせは、アクチビンＡに結合せず、かつ／またはそれを阻害しない（例えば、アクチビンＡに関して１×１０−７より大きいＫＤを有する抗体）。一部の実施形態では、ＧＤＦ１１、ＧＤＦ８、アクチビンＢ、ＢＭＰ６、および／またはＧＤＦ３に結合し、かつ／またはその活性を阻害する本開示の抗体または抗体の組み合わせは、アクチビンＡまたはＢＭＰ１０に結合せず、かつ／またはそれを阻害しない（例えば、アクチビンＡおよびＢＭＰ１０に関して１×１０−７より大きいＫＤを有する抗体）。一部の実施形態では、ＧＤＦ１１、ＧＤＦ８、アクチビンＢ、ＢＭＰ６、および／またはＧＤＦ３に結合し、かつ／またはその活性を阻害する本開示の抗体または抗体の組み合わせは、アクチビンＡまたはＢＭＰ９に結合せず、かつ／またはそれを阻害しない（例えば、アクチビンＡおよびＢＭＰ９に関して１×１０−７より大きいＫＤを有する抗体）。一部の実施形態では、ＧＤＦ１１、ＧＤＦ８、アクチビンＢ、ＢＭＰ６、および／またはＧＤＦ３に結合し、かつ／またはその活性を阻害する本開示の抗体または抗体の組み合わせは、アクチビンＡ、ＢＭＰ９、またはＢＭＰ１０に結合せず、かつ／またはそれを阻害しない（例えば、アクチビンＡ、ＢＭＰ９、およびＢＭＰ１０に関して１×１０−７より大きいＫＤを有する抗体）。
【０１７１】
別の態様では、本開示のＡｃｔＲＩＩアンタゴニストは、ＡｃｔＲＩＩ受容体（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡ受容体および／またはＡｃｔＲＩＩＢ受容体）に結合し、かつ／またはその活性を阻害する抗体または抗体の組み合わせである。一部の実施形態では、本開示の抗ＡｃｔＲＩＩ受容体抗体または抗体の組み合わせは、ＡｃｔＲＩＩ受容体に結合し、少なくともＧＤＦ１１によるＡｃｔＲＩＩ受容体への結合および／またはその活性化を防止する。一部の実施形態では、本開示の抗ＡｃｔＲＩＩ受容体抗体または抗体の組み合わせは、ＡｃｔＲＩＩ受容体に結合し、少なくともＧＤＦ８によるＡｃｔＲＩＩ受容体への結合および／またはその活性化を防止する。一部の実施形態では、本開示の抗ＡｃｔＲＩＩ受容体抗体または抗体の組み合わせは、ＡｃｔＲＩＩ受容体に結合し、少なくともＧＤＦ３によるＡｃｔＲＩＩ受容体への結合および／またはその活性化を防止する。一部の実施形態では、本開示の抗ＡｃｔＲＩＩ受容体抗体または抗体の組み合わせは、ＡｃｔＲＩＩ受容体に結合し、少なくともＢＭＰ６によるＡｃｔＲＩＩ受容体への結合および／またはその活性化を防止する。一部の実施形態では、本開示の抗ＡｃｔＲＩＩ受容体抗体または抗体の組み合わせは、ＡｃｔＲＩＩ受容体に結合し、少なくともＢＭＰ１０によるＡｃｔＲＩＩ受容体への結合および／またはその活性化を防止する。代替の実施形態では、本開示の抗ＡｃｔＲＩＩ受容体抗体または抗体の組み合わせは、ＢＭＰ１０によるＡｃｔＲＩＩ受容体への結合および／またはその活性化を防止しない。一部の実施形態では、本開示の抗ＡｃｔＲＩＩ受容体抗体または抗体の組み合わせは、ＡｃｔＲＩＩ受容体に結合し、少なくともＢＭＰ９によるＡｃｔＲＩＩ受容体への結合および／またはその活性化を防止する。代替の実施形態では、本開示の抗ＡｃｔＲＩＩ受容体抗体または抗体の組み合わせは、ＢＭＰ９によるＡｃｔＲＩＩ受容体への結合および／またはその活性化を防止しない。一部の実施形態では、本開示の抗ＡｃｔＲＩＩ受容体抗体または抗体の組み合わせは、ＡｃｔＲＩＩ受容体に結合し、少なくともアクチビン（例えば、アクチビンＡ、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、アクチビンＣ、およびアクチビンＥ）によるＡｃｔＲＩＩ受容体への結合および／またはその活性化を防止する。一部の実施形態では、本開示の抗ＡｃｔＲＩＩ受容体抗体または抗体の組み合わせは、ＡｃｔＲＩＩ受容体に結合し、少なくともアクチビンＢによるＡｃｔＲＩＩ受容体への結合および／またはその活性化を防止する。一部の実施形態では、本開示の抗ＡｃｔＲＩＩ受容体抗体または抗体の組み合わせは、アクチビンＡによるＡｃｔＲＩＩ受容体への結合および／またはその活性化を防止しない。一部の実施形態では、本開示の抗ＡｃｔＲＩＩ受容体抗体または抗体の組み合わせは、ＡｃｔＲＩＩ受容体に結合し、少なくともアクチビンＢによるＡｃｔＲＩＩ受容体への結合および／またはその活性化を防止するが、アクチビンＡによるＡｃｔＲＩＩ受容体への結合および／またはその活性化を防止しない。
【０１７２】
抗体という用語は、本明細書では、最も広い意味で使用され、それらが、所望の抗原結合活性を呈示する限りにおいて、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、多特異性抗体（例えば、二特異性抗体）、および抗体フラグメントを含むがこれらに限定されない、種々の抗体構造を包摂する。抗体フラグメントとは、インタクトな抗体以外の分子であって、インタクトな抗体が結合する抗原に結合するインタクトな抗体の一部を含む分子を指す。抗体フラグメントの例は、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆａｂ’−ＳＨ、Ｆ（ａｂ’）２；ダイアボディー（ｄｉａｂｏｄｙ）；直鎖状抗体；単鎖抗体分子（例えば、ｓｃＦｖ）；および抗体フラグメントから形成される多特異性抗体を含むがこれらに限定されない。例えば、Ｈｕｄｓｏｎら（２００３年）、Ｎａｔ．  Ｍｅｄ．、９巻：１２９〜１３４頁；Ｐｌｕｅｃｋｔｈｕｎ、Ｔｈｅ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ  ｏｆ  Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ、１１３巻、ＲｏｓｅｎｂｕｒｇおよびＭｏｏｒｅ編（Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ）、２６９〜３１５頁（１９９４年）；ＷＯ９３／１６１８５；ならびに米国特許第５，５７１，８９４号；同第５，５８７，４５８号；および同第５，８６９，０４６号を参照されたい。本明細書で開示される抗体は、ポリクローナル抗体でもよく、モノクローナル抗体でもよい。ある特定の実施形態では、本開示の抗体は、それらに付加させた、検出可能な標識を含む（例えば、標識は、放
射性同位元素、蛍光化合物、酵素、または酵素補因子であり得る）。好ましい実施形態では、本開示の抗体は、単離された抗体である。
【０１７３】
ダイアボディーは、二価または二特異性であり得る、２つの抗原結合性部位を有する抗体フラグメントである。例えば、ＥＰ４０４，０９７；ＷＯ１９９３／０１１６１；Ｈｕｄｓｏｎら（２００３年）、Ｎａｔ．  Ｍｅｄ．、９巻：１２９〜１３４頁；およびＨｏｌｌｉｎｇｅｒら（１９９３年）、Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ、９０巻：６４４４〜６４４８頁を参照されたい。トリアボディー（ｔｒｉａｂｏｄｙ）およびテトラボディー（ｔｅｔｒａｂｏｄｙ）もまた、Ｈｕｄｓｏｎら（２００３年）、Ｎａｔ．  Ｍｅｄ．、９巻：１２９〜１３４頁において記載されている。
【０１７４】
単一ドメイン抗体とは、抗体の重鎖可変ドメインの全部もしくは一部、または抗体の軽鎖可変ドメインの全部もしくは一部を含む抗体フラグメントである。ある特定の実施形態では、単一ドメイン抗体は、ヒト単一ドメイン抗体である。例えば、米国特許第６，２４８，５１６号を参照されたい。
【０１７５】
抗体フラグメントは、本明細書で記載されるように、インタクトな抗体のタンパク質分解性消化のほか、組換え宿主細胞（例えば、Ｅ．ｃｏｌｉまたはファージ）による生成を含むがこれらに限定されない種々の技法により作製することができる。
【０１７６】
本明細書の抗体は、任意のクラスの抗体であり得る。抗体のクラスとは、その重鎖により保有される定常ドメインまたは定常領域の種類を指す。抗体の５つの主要なクラス：ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、およびＩｇＭが存在し、これらのいくつかは、サブクラス（アイソタイプ）、例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１、およびＩｇＡ２にさらに分けることができる。免疫グロブリンの異なるクラスに対応する重鎖定常ドメインは、アルファ、デルタ、イプシロン、ガンマ、およびミューと呼ばれる。
【０１７７】
一般に、本明細書で開示される方法における使用のための抗体は、その標的抗原に、好ましくは、大きな結合アフィニティーで特異的に結合する。アフィニティーは、ＫＤ値として表すことができ、内因性結合アフィニティー（例えば、アビディティー効果を最小化して）を反映する。典型的に、結合アフィニティーは、無細胞状況の場合であれ、細胞会合状況の場合であれ、インビトロにおいて測定する。本明細書で開示されるアッセイを含む、当該分野で公知の多数のアッセイであって、例えば、表面プラズモン共鳴（Ｂｉａｃｏｒｅ（商標）アッセイ）、放射性標識抗原結合アッセイ（ＲＩＡ）、およびＥＬＩＳＡを含むアッセイのいずれかを使用して、結合アフィニティーの測定値を得ることができる。。一部の実施形態では、本開示の抗体は、それらの標的抗原（例えば、ＧＤＦ１１、ＧＤＦ８、ＡｃｔＲＩＩＡ、ＡｃｔＲＩＩＢなど）に、少なくとも１×１０−７もしくはこれよりも強力に、１×１０−８もしくはこれよりも強力に、１×１０−９もしくはこれよりも強力に、１×１０−１０もしくはこれよりも強力に、１×１０−１１もしくはこれよりも強力に、１×１０−１２もしくはこれよりも強力に、１×１０−１３もしくはこれよりも強力に、または１×１０−１４もしくはこれよりも強力なＫＤで結合する。
【０１７８】
ある特定の実施形態では、ＫＤは、以下のアッセイにより記載されるように、関心のある抗体のＦａｂバージョンおよびその標的抗原で実施されるＲＩＡにより測定される。Ｆａｂの抗原に対する溶液結合アフィニティーは、Ｆａｂを、滴定系列の非標識抗原の存在下において、最低濃度の放射性標識された抗原（例えば、１２５Ｉで標識された）と平衡化し、次いで、結合した抗原を、抗Ｆａｂ抗体でコーティングしたプレートで捕捉することにより測定する［例えば、Ｃｈｅｎら（１９９９年）、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．、２９３巻：８６５〜８８１頁を参照されたい］。アッセイ条件を確立するために、マルチウェルプレート（例えば、Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ製のＭＩＣＲＯＴＩＴＥＲ（
登録商標））を、捕捉用抗Ｆａｂ抗体（例えば、Ｃａｐｐｅｌ  Ｌａｂｓ製）でコーティングし（例えば、一晩にわたり）、その後、好ましくは、室温（例えば、およそ２３℃）において、ウシ血清アルブミンでブロッキングする。非吸着型プレートでは、放射性標識された抗原を、関心のあるＦａｂの系列希釈液と混合する［例えば、Ｐｒｅｓｔａら、（１９９７年）、Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．、５７巻：４５９３〜４５９９頁における抗ＶＥＧＦ抗体である、Ｆａｂ−１２の評価と符合する］。次いで、関心のあるＦａｂを、好ましくは、一晩にわたりインキュベートするが、平衡に到達することを確保するように、インキュベーションは、長時間（例えば、約６５時間）にわたり継続することもできる。その後、混合物を、好ましくは、室温で約１時間にわたるインキュベーションのために、捕捉プレートに移す。次いで、溶液を除去し、プレートを、好ましくは、ポリソルベート２０とＰＢＳとの混合物で、複数回洗浄する。プレートを乾燥させたら、シンチレーション剤（例えば、Ｐａｃｋａｒｄ製のＭＩＣＲＯＳＣＩＮＴ（登録商標））を添加し、ガンマカウンター（例えば、Ｐａｃｋａｒｄ製のＴＯＰＣＯＵＮＴ（登録商標））上で、プレートをカウントする。
【０１７９】
別の実施形態によれば、ＫＤは、例えば、抗原ＣＭ５チップを約１０応答単位（ＲＵ）で固定化させた、ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）２０００またはＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）３０００（Ｂｉａｃｏｒｅ，Ｉｎｃ．、Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ、Ｎ．Ｊ．）を使用する、表面プラズモン共鳴アッセイを使用して測定する。略述すると、供給元の指示書に従い、カルボキシメチル化デキストランバイオセンサーチップ（ＣＭ５、Ｂｉａｃｏｒｅ，Ｉｎｃ．）を、Ｎ−エチル−Ｎ’−（３−ジメチルアミノプロピル）−カルボジイミドヒドロクロリド（ＥＤＣ）およびＮ−ヒドロキシスクシンイミド（ＮＨＳ）で活性化させる。例えば、抗原は、１０ｍＭの酢酸ナトリウム、ｐＨ４．８で、５μｇ／ｍｌ（約０．２μＭ）まで希釈してから、５μｌ／分の流量で注入して、およそ１０応答単位（ＲＵ）のタンパク質のカップリングを達成することができる。抗原を注入した後、１Ｍのエタノールアミンを注入して、未反応基をブロッキングする。反応速度の測定のため、Ｆａｂの２倍系列希釈液（０．７８ｎＭ〜５００ｎＭ）を、０．０５％のポリソルベート２０（ＴＷＥＥＮ−２０（登録商標））界面活性剤を含むＰＢＳ（ＰＢＳＴ）に、およそ２５μｌ／分の流量で注入する。会合速度（ｋｏｎ）および解離速度（ｋｏｆｆ）は、例えば、単純な一対一ラングミュア結合モデル（ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ  Ｓｏｆｔｗａｒｅバージョン３．２）を使用して、会合センサーグラムおよび解離センサーグラムのフィッティングを同時に行うことにより計算する。平衡解離定数（ＫＤ）は、ｋｏｆｆ／ｋｏｎ比として計算する［例えば、Ｃｈｅｎら、（１９９９年）、Ｊ．  Ｍｏｌ．  Ｂｉｏｌ．、２９３巻：８６５〜８８１頁を参照されたい］。オン速度が、例えば、上記の表面プラズモン共鳴アッセイで１０６Ｍ−１ｓ−１を超える場合、オン速度は、徐々に増大する濃度の抗原の存在下におけるＰＢＳ中、２０ｎＭの抗抗原抗体（Ｆａｂ形態）の蛍光発光強度（例えば、励起＝２９５ｎｍ；発光＝３４０ｎｍ、１６ｎｍのバンドパス）であって、攪拌型キュベットを有するストップフロー装備型分光光度計（Ａｖｉｖ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ）、または８０００シリーズのＳＬＭ−ＡＭＩＮＣＯ（登録商標）分光光度計（ＴｈｅｒｍｏＳｐｅｃｔｒｏｎｉｃ）などの分光計により測定した場合の、蛍光発光強度の増加または減少を測定する蛍光消光法を使用することにより決定することができる。
【０１８０】
本明細書で使用される抗ＧＤＦ１１抗体とは一般に、抗体が、ＧＤＦ１１を標的化するときの診断剤および／または治療剤として有用であるように、十分なアフィニティーでＧＤＦ１１に結合することが可能である抗体を指す。ある特定の実施形態では、抗ＧＤＦ１１抗体の、ＧＤＦ１１以外の非関連タンパク質への結合の程度は、例えば、ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）により測定される、抗体のＧＤＦ１１への結合の約１０％、９％、８％、７％、６％、５％、４％、３％、２％未満、または１％未満である。ある特定の実施形態では、抗ＧＤＦ１１抗体は、異なる種に由来するＧＤＦ１１の間で保存的な、ＧＤＦ
１１のエピトープに結合する。ある特定の好ましい実施形態では、本開示の抗ＧＤＦ１１抗体は、ＧＤＦ１１活性を阻害し得るアンタゴニスト抗体である。例えば、本開示の抗ＧＤＦ１１抗体は、ＧＤＦ１１が、同族受容体（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡ受容体またはＡｃｔＲＩＩＢ受容体）に結合することを阻害することが可能であり、かつ／またはＡｃｔＲＩＩ受容体によるＳｍａｄシグナル伝達など、ＧＤＦ１１に媒介される、同族受容体のシグナル伝達（活性化）を阻害し得る。一部の実施形態では、本発明の開示の抗ＧＤＦ１１抗体は、特に多特異性抗体の場合において、アクチビンＡに実質的に結合せず、かつ／またはその活性を実質的に阻害しない（例えば、アクチビンＡに１×１０−７Ｍより大きいＫＤで結合するか、または比較的中度の結合、例えば、約１×１０−８Ｍまたは約１×１０−９Ｍを示す）。注目すべきことに、ＧＤＦ１１は、ＧＤＦ８と高い配列相同性を有することから、ＧＤＦ１１に結合し、かつ／またはそれを阻害する抗体は、場合によって、ＧＤＦ８に結合し、かつ／またはそれを阻害する可能性もある。
【０１８１】
本明細書で使用される抗ＧＤＦ８抗体とは一般に、抗体が、ＧＤＦ８を標的化するときの診断剤および／または治療剤として有用であるように、十分なアフィニティーでＧＤＦ８に結合することが可能である抗体を指す。ある特定の実施形態では、ＧＤＦ８以外の非関連タンパク質への抗ＧＤＦ８抗体の結合の程度は、例えばラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）により測定される、抗体のＧＤＦ８への結合の約１０％、９％、８％、７％、６％、５％、４％、３％、２％未満、または１％未満である。ある特定の実施形態では、抗ＧＤＦ８抗体は、異なる種に由来するＧＤＦ８の間で保存的な、ＧＤＦ８のエピトープに結合する。ある特定の好ましい実施形態では、本発明の開示の抗ＧＤＦ８抗体は、ＧＤＦ８活性を阻害し得るアンタゴニスト抗体である。例えば、本開示の抗ＧＤＦ８抗体は、ＧＤＦ８が、同族受容体（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡ受容体またはＡｃｔＲＩＩＢ受容体）に結合することを阻害することが可能であり、かつ／またはＡｃｔＲＩＩ受容体によるＳｍａｄシグナル伝達など、同族受容体のＧＤＦ８に媒介されるシグナル伝達（活性化）を阻害することが可能である。一部の実施形態では、本発明の開示の抗ＧＤＦ８抗体は、特に多特異性抗体の場合において、アクチビンＡに実質的に結合せず、かつ／またはその活性を実質的に阻害しない（例えば、アクチビンＡに１×１０−７Ｍより大きいＫＤで結合するか、または比較的中度の結合、例えば、約１×１０−８Ｍまたは約１×１０−９Ｍを示す）。ＧＤＦ８は、ＧＤＦ１１との配列相同性が大きく、したがって、ＧＤＦ８に結合し、かつ／またはこれを阻害する抗体はまた、場合によって、ＧＤＦ１１にも結合し、かつ／またはこれも阻害し得ることに注目されたい。
【０１８２】
本明細書で使用される抗アクチビン抗体とは一般に、抗体が、アクチビンを標的化するときの診断剤および／または治療剤として有用であるように、十分なアフィニティーでアクチビン（例えば、アクチビンＡ、アクチビンＢ、アクチビンＣ、アクチビンＡＢ、および／またはアクチビンＥの１つまたは複数）に結合することが可能である抗体を指す。ある特定の実施形態では、抗アクチビン抗体の、アクチビン以外の非関連タンパク質への結合の程度は、例えばラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）により測定される、抗体のアクチビンへの結合の約１０％、９％、８％、７％、６％、５％、４％、３％、２％未満、または１％未満である。ある特定の実施形態では、抗アクチビン抗体は、異なる種に由来するアクチビンの間で保存的な、アクチビンのエピトープに結合する。ある特定の好ましい実施形態では、本発明の開示の抗アクチビン抗体は、アクチビン活性を阻害し得るアンタゴニスト抗体である。例えば、本開示の抗アクチビン抗体は、アクチビンが、同族受容体（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡ受容体またはＡｃｔＲＩＩＢ受容体）に結合することを阻害することが可能であり、かつ／またはＡｃｔＲＩＩ受容体によるＳｍａｄシグナル伝達など、同族受容体のアクチビンに媒介されるシグナル伝達（活性化）を阻害することが可能である。一部の実施形態では、本発明の開示の抗アクチビン抗体は、アクチビンＢに結合し、かつ／またはその活性を阻害する。一部の実施形態では、本発明の開示の抗アクチビン抗体は、アクチビンＡおよびアクチビンＢに結合し、かつ／またはその活性を阻害する。一部の実施形態では、本発明の開示の抗アクチビン抗体は、特に多特異性抗体の場合において、アクチビンＡに実質的に結合せず、かつ／またはその活性を実質的に阻害しない（例えば、アクチビンＡに１×１０−７Ｍより大きいＫＤで結合するか、または比較的中度の結合、例えば、約１×１０−８Ｍまたは約１×１０−９Ｍを示す）。
【０１８３】
本明細書で使用される抗ＢＭＰ６抗体とは一般に、抗体が、ＢＭＰ６を標的化するときの診断剤および／または治療剤として有用であるように、十分なアフィニティーでＢＭＰ６に結合することが可能である抗体を指す。ある特定の実施形態では、ＢＭＰ６以外の非関連タンパク質への抗ＢＭＰ６抗体の結合の程度は、例えばラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）により測定される、抗体のＢＭＰ６への結合の約１０％、９％、８％、７％、６％、５％、４％、３％、２％未満、または１％未満である。ある特定の実施形態では、抗ＢＭＰ６抗体は、異なる種に由来するＢＭＰ６の間で保存的な、ＢＭＰ６のエピトープに結合する。ある特定の好ましい実施形態では、本発明の開示の抗ＢＭＰ６抗体は、ＢＭＰ６活性を阻害し得るアンタゴニスト抗体である。例えば、本開示の抗ＢＭＰ６抗体は、ＢＭＰ６が、同族受容体（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡ受容体またはＡｃｔＲＩＩＢ受容体）に結合することを阻害することが可能であり、かつ／またはＡｃｔＲＩＩ受容体によるＳｍａｄシグナル伝達など、同族受容体のＢＭＰ６に媒介されるシグナル伝達（活性化）を阻害することが可能である。一部の実施形態では、本発明の開示の抗ＢＭＰ６抗体は、特に多特異性抗体の場合において、アクチビンＡに実質的に結合せず、かつ／またはその活性を実質的に阻害しない（例えば、アクチビンＡに１×１０−７Ｍより大きいＫＤで結合するか、または比較的中度の結合、例えば、約１×１０−８Ｍまたは約１×１０−９Ｍを示す）。
【０１８４】
本明細書で使用される抗ＧＤＦ３抗体とは一般に、抗体が、ＧＤＦ３を標的化するときの診断剤および／または治療剤として有用であるように、十分なアフィニティーでＧＤＦ３に結合することが可能である抗体を指す。ある特定の実施形態では、ＧＤＦ３以外の非関連タンパク質への抗ＧＤＦ３抗体の結合の程度は、例えばラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）により測定される、抗体のＧＤＦ３への結合の約１０％、９％、８％、７％、６％、５％、４％、３％、２％未満、または１％未満である。ある特定の実施形態では、抗ＧＤＦ３抗体は、異なる種に由来するＧＤＦ３の間で保存的な、ＧＤＦ３のエピトープに結合する。ある特定の好ましい実施形態では、本発明の開示の抗ＧＤＦ３抗体は、ＧＤＦ３活性を阻害し得るアンタゴニスト抗体である。例えば、本開示の抗ＧＤＦ３抗体は、ＧＤＦ３が、同族受容体（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡ受容体またはＡｃｔＲＩＩＢ受容体）に結合することを阻害することが可能であり、かつ／またはＡｃｔＲＩＩ受容体によるＳｍａｄシグナル伝達など、同族受容体のＧＤＦ３に媒介されるシグナル伝達（活性化）を阻害することが可能である。一部の実施形態では、本発明の開示の抗ＧＤＦ３抗体は、特に多特異性抗体の場合において、アクチビンＡに実質的に結合せず、かつ／またはその活性を実質的に阻害しない（例えば、アクチビンＡに１×１０−７Ｍより大きいＫＤで結合するか、または比較的中度の結合、例えば、約１×１０−８Ｍまたは約１×１０−９Ｍを示す）。
【０１８５】
本明細書で使用される抗ＢＭＰ１０抗体とは一般に、抗体が、ＢＭＰ１０を標的化するときの診断剤および／または治療剤として有用であるように、十分なアフィニティーでＢＭＰ１０に結合することが可能である抗体を指す。ある特定の実施形態では、ＢＭＰ１０以外の非関連タンパク質への抗ＢＭＰ１０抗体の結合の程度は、例えばラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）により測定される、抗体のＢＭＰ１０への結合の約１０％、９％、８％、７％、６％、５％、４％、３％、２％未満、または１％未満である。ある特定の実施形態では、抗ＢＭＰ１０抗体は、異なる種に由来するＢＭＰ１０の間で保存的な、ＢＭＰ１０のエピトープに結合する。ある特定の好ましい実施形態では、本発明の開示の抗ＢＭＰ１０抗体は、ＢＭＰ１０活性を阻害し得るアンタゴニスト抗体である。例えば、本開示の抗ＢＭＰ１０抗体は、ＢＭＰ１０が、同族受容体（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡ受容体またはＡｃｔＲＩＩＢ受容体）に結合することを阻害することが可能であり、かつ／またはＡｃｔＲＩＩ受容体によるＳｍａｄシグナル伝達など、同族受容体のＢＭＰ１０に媒介されるシグナル伝達（活性化）を阻害することが可能である。一部の実施形態では、本発明の開示の抗ＢＭＰ１０抗体は、特に多特異性抗体の場合において、アクチビンＡに実質的に結合せず、かつ／またはその活性を実質的に阻害しない（例えば、アクチビンＡに１×１０−７Ｍより大きいＫＤで結合するか、または比較的中度の結合、例えば、約１×１０−８Ｍまたは約１×１０−９Ｍを示す）。
【０１８６】
本明細書で使用される抗ＢＭＰ９抗体とは一般に、抗体が、ＢＭＰ９を標的化するときの診断剤および／または治療剤として有用であるように、十分なアフィニティーでＢＭＰ９に結合することが可能である抗体を指す。ある特定の実施形態では、ＢＭＰ９以外の非関連タンパク質への抗ＢＭＰ９抗体の結合の程度は、例えばラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）により測定される、抗体のＢＭＰ９への結合の約１０％、９％、８％、７％、６％、５％、４％、３％、２％未満、または１％未満である。ある特定の実施形態では、抗ＢＭＰ９抗体は、異なる種に由来するＢＭＰ９の間で保存的な、ＢＭＰ９のエピトープに結合する。ある特定の好ましい実施形態では、本発明の開示の抗ＢＭＰ９抗体は、ＢＭＰ９活性を阻害し得るアンタゴニスト抗体である。例えば、本開示の抗ＢＭＰ９抗体は、ＢＭＰ９が、同族受容体（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡ受容体またはＡｃｔＲＩＩＢ受容体）に結合することを阻害することが可能であり、かつ／またはＡｃｔＲＩＩ受容体によるＳｍａｄシグナル伝達など、同族受容体のＢＭＰ９に媒介されるシグナル伝達（活性化）を阻害することが可能である。一部の実施形態では、本発明の開示の抗ＢＭＰ９抗体は、特に多特異性抗体の場合において、アクチビンＡに実質的に結合せず、かつ／またはその活性を実質的に阻害しない（例えば、アクチビンＡに１×１０−７Ｍより大きいＫＤで結合するか、または比較的中度の結合、例えば、約１×１０−８Ｍまたは約１×１０−９Ｍを示す）。
【０１８７】
抗ＡｃｔＲＩＩ抗体は、抗体が、ＡｃｔＲＩＩを標的化するときの診断剤および／または治療剤として有用であるように、十分なアフィニティーでＡｃｔＲＩＩ（ＡｃｔＲＩＩＡおよび／またはＡｃｔＲＩＩＢ）に結合することが可能である抗体を指す。ある特定の実施形態では、ＡｃｔＲＩＩ以外の非関連タンパク質への抗ＡｃｔＲＩＩ抗体の結合の程度は、例えばラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）により測定される、抗体のＡｃｔＲＩＩへの結合の約１０％、９％、８％、７％、６％、５％、４％、３％、２％未満、または１％未満である。ある特定の実施形態では、抗ＡｃｔＲＩＩ抗体は、異なる種に由来するＡｃｔＲＩＩの間で保存的な、ＡｃｔＲＩＩのエピトープに結合する。好ましい実施形態では、本発明の開示の抗ＡｃｔＲＩＩ抗体は、ＡｃｔＲＩＩ活性を阻害し得るアンタゴニスト抗体である。例えば、本発明の開示の抗ＡｃｔＲＩＩ抗体は、アクチビンＡ、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、アクチビンＣ、アクチビンＥ、ＧＤＦ１１、ＧＤＦ８、アクチビンＡ、ＢＭＰ６、およびＢＭＰ７から選択される１つまたは複数のＡｃｔＲＩＩリガンドが、ＡｃｔＲＩＩ受容体に結合することを阻害することが可能であり、かつ／またはこれらのリガンドの１つが、ＡｃｔＲＩＩシグナル伝達（例えば、Ｓｍａｄ１、２、３、５、および８シグナル伝達）を活性化することを阻害することが可能である。一部の実施形態では、本発明の開示の抗ＡｃｔＲＩＩ抗体は、ＧＤＦ１１が、ＡｃｔＲＩＩ受容体に結合することを阻害し、かつ／またはＧＤＦ１１が、ＡｃｔＲＩＩシグナル伝達を活性化することを阻害する。一部の実施形態では、本発明の開示の抗ＡｃｔＲＩＩ抗体は、ＧＤＦ８が、ＡｃｔＲＩＩ受容体に結合することを阻害し、かつ／またはＧＤＦ８が、ＡｃｔＲＩＩシグナル伝達を活性化することを阻害する。一部の実施形態では、本発明の開示の抗ＡｃｔＲＩＩ抗体は、ＧＤＦ８およびＧＤＦ１１のＡｃｔＲＩＩ受容体への結合を阻害する、および／またはＧＤＦ８およびＧＤＦ１１のＡｃｔＲＩＩシグナル伝達の活性化を阻害する。一部の実施形態では、ＧＤＦ１１および／またはＧＤＦ８のＡｃｔＲＩＩ受容体への結合および／またはその活性化を阻害する、本開示の抗ＡｃｔＲＩＩ抗体は、アクチビン（例えば、アクチビンＡ、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、アクチビンＣ、アクチビンＥ）のＡｃｔＲＩＩ受容体への結合および／またはその活性化をさらに阻害する。一部の実施形態では、ＧＤＦ１１および／またはＧＤＦ８のＡｃｔＲＩＩ受容体への結合および／またはその活性化を阻害する、本開示の抗ＡｃｔＲＩＩ抗体は、ＢＭＰ６が、ＡｃｔＲＩＩ受容体に結合し、かつ／またはそれを活性化させることをさらに阻害する。一部の実施形態では、ＧＤＦ１１および／またはＧＤＦ８のＡｃｔＲＩＩ受容体への結合および／またはその活性化を阻害する、本開示の抗ＡｃｔＲＩＩ抗体は、ＢＭＰ１０が、ＡｃｔＲＩＩ受容体に結合し、かつ／またはそれを活性化させることをさらに阻害する。一部の実施形態では、ＧＤＦ１１および／またはＧＤＦ８のＡｃｔＲＩＩ受容体への結合および／またはその活性化を阻害する、本開示の抗ＡｃｔＲＩＩ抗体は、ＢＭＰ６およびＢＭＰ１０が、ＡｃｔＲＩＩ受容体に結合し、かつ／またはそれを活性化させることをさらに阻害する。一部の実施形態では、ＧＤＦ１１および／またはＧＤＦ８のＡｃｔＲＩＩ受容体への結合および／またはその活性化を阻害する、本開示の抗ＡｃｔＲＩＩ抗体は、アクチビン（例えば、アクチビンＢ）およびＢＭＰ６が、ＡｃｔＲＩＩ受容体に結合し、かつ／またはそれを活性化させることをさらに阻害する。一部の実施形態では、ＧＤＦ１１および／またはＧＤＦ８のＡｃｔＲＩＩ受容体への結合および／またはその活性化を阻害する、本開示の抗ＡｃｔＲＩＩ抗体は、アクチビン（例えば、アクチビンＢ）およびＢＭＰ１０が、ＡｃｔＲＩＩ受容体に結合し、かつ／またはそれを活性化させることをさらに阻害する。一部の実施形態では、ＧＤＦ１１および／またはＧＤＦ８のＡｃｔＲＩＩ受容体への結合および／またはその活性化を阻害する、本開示の抗ＡｃｔＲＩＩ抗体は、アクチビン（例えば、アクチビンＢ）、ＢＭＰ６、およびＢＭＰ１０が、ＡｃｔＲＩＩ受容体に結合し、かつ／またはそれを活性化させることをさらに阻害する。一部の実施形態では、本発明の開示の抗ＡｃｔＲＩＩＡ抗体は、アクチビンＡが、ＡｃｔＲＩＩ受容体に結合することを実質的に阻害せず、かつ／またはＡｃｔＲＩＩシグナル伝達の、アクチビンＡに媒介される活性化を実質的に阻害しない。
【０１８８】
当該分野では、ヒトＡｃｔＲＩＩ受容体およびリガンド（例えば、ＧＤＦ１１、アクチビンＡ、アクチビンＢ、アクチビンＣ、アクチビンＥ、ＧＤＦ８、ＢＭＰ６、ＢＭＰ１０、ＡｃｔＲＩＩＢ、およびＡｃｔＲＩＩＡ）の核酸配列およびアミノ酸配列が周知であり、したがって、本開示に従う使用のための抗体アンタゴニストは、当該分野における知見および本明細書で提供される教示に基づき、当業者が日常的に作製することができる。
【０１８９】
ある特定の実施形態では、本明細書で提供される抗体は、キメラ抗体である。キメラ抗体とは、重鎖および／または軽鎖の一部が特定の供給源または種に由来する一方、重鎖および／または軽鎖の残余は異なる供給源または種に由来する抗体を指す。ある特定のキメラ抗体は、例えば、米国特許第４，８１６，５６７号；およびＭｏｒｒｉｓｏｎら、（１９８４年）、Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ、８１巻：６８５１〜６８５５頁に記載されている。一部の実施形態では、キメラ抗体は、非ヒト可変領域（例えば、マウス、ラット、ハムスター、ウサギ、またはサルなどの非ヒト霊長動物に由来する可変領域）と、ヒト定常領域とを含む。一部の実施形態では、キメラ抗体は、クラスまたはサブクラスを、親抗体のクラスまたはサブクラスから変化させた「クラススイッチ」抗体である。一般に、キメラ抗体は、その抗原結合フラグメントを含む。
【０１９０】
ある特定の実施形態では、本明細書で提供されるキメラ抗体は、ヒト化抗体である。ヒト化抗体とは、非ヒト超可変領域（ＨＶＲ）に由来するアミノ酸残基と、ヒトフレームワーク領域（ＦＲ）に由来するアミノ酸残基とを含むキメラ抗体を指す。ある特定の実施形態では、ヒト化抗体は、少なくとも１つの可変ドメインであり、典型的には２つの可変ドメインであって、ＨＶＲ（例えば、ＣＤＲ）の全てまたは実質的に全てが非ヒト抗体のＨＶＲ（例えば、ＣＤＲ）に対応し、ＦＲの全てまたは実質的に全てがヒト抗体のＦＲに対応する、可変ドメインの実質的に全てを含む。ヒト化抗体は任意選択で、ヒト抗体に由来する抗体定常領域の少なくとも一部を含み得る。抗体、例えば、非ヒト抗体の「ヒト化形態」とは、ヒト化を経た抗体を指す。
【０１９１】
ヒト化抗体およびそれらを作製する方法は、例えば、ＡｌｍａｇｒｏおよびＦｒａｎｓｓｏｎ（２００８年）、Ｆｒｏｎｔ．  Ｂｉｏｓｃｉ．、１３巻：１６１９〜１６３３頁において総説されており、例えば、Ｒｉｅｃｈｍａｎｎら、（１９８８年）、Ｎａｔｕｒｅ、３３２巻：３２３〜３２９頁；Ｑｕｅｅｎら（１９８９年）、Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔ’ｌ  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ、８６巻：１００２９〜１００３３頁；米国特許第５，８２１，３３７号；同第７，５２７，７９１号；同第６，９８２，３２１号；および同第７，０８７，４０９号；Ｋａｓｈｍｉｒｉら、（２００５年）、Ｍｅｔｈｏｄｓ、３６巻：２５〜３４頁［ＳＤＲ（ａ−ＣＤＲ）グラフティングについて記載する］；Ｐａｄｌａｎ、Ｍｏｌ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．、（１９９１年）、２８巻：４８９〜４９８頁（「リサーフェシング」について記載する）；Ｄａｌｌ’Ａｃｑｕａら（２００５年）、Ｍｅｔｈｏｄｓ、３６巻：４３〜６０頁（「ＦＲシャフリング」について記載する）；Ｏｓｂｏｕｒｎら（２００５年）、Ｍｅｔｈｏｄｓ、３６巻：６１〜６８頁；ならびにＫｌｉｍｋａら、Ｂｒ．  Ｊ．  Ｃａｎｃｅｒ（２０００年）、８３巻：２５２〜２６０頁（ＦＲシャフリングへの「誘導選択」アプローチについて記載する）においてさらに記載されている。
【０１９２】
ヒト化のために使用され得るヒトフレームワーク領域は、「ベストフィット」法を使用して選択されるフレームワーク領域［例えば、Ｓｉｍｓら（１９９３年）、Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．、１５１巻：２２９６頁を参照されたい］；軽鎖可変領域または重鎖可変領域の特定の亜集団による、ヒト抗体のコンセンサス配列に由来するフレームワーク領域［例えば、Ｃａｒｔｅｒら（１９９２年）、Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．
ＵＳＡ、８９巻：４２８５頁；およびＰｒｅｓｔａら（１９９３年）、Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．、１５１巻：２６２３頁を参照されたい］；ヒト成熟（体細胞変異させた）フレームワーク領域またはヒト生殖細胞系列フレームワーク領域［例えば、ＡｌｍａｇｒｏおよびＦｒａｎｓｓｏｎ（２００８年）、Ｆｒｏｎｔ．  Ｂｉｏｓｃｉ．、１３巻：１６１９〜１６３３頁を参照されたい］；およびＦＲライブラリーのスクリーニングに由来するフレームワーク領域［例えば、Ｂａｃａら、（１９９７年）、Ｊ．  Ｂｉｏｌ．  Ｃｈｅｍ．、２７２巻：１０６７８〜１０６８４頁；およびＲｏｓｏｋら、（１９９６年）、Ｊ．  Ｂｉｏｌ．  Ｃｈｅｍ．、２７１巻：２２６１１〜２２６１８頁を参照されたい］を含むがこれらに限定されない。
【０１９３】
ある特定の実施形態では、本明細書で提供される抗体は、ヒト抗体である。ヒト抗体は、当該分野で公知の種々の技法を使用して生成することができる。ヒト抗体は一般に、ｖａｎ  Ｄｉｊｋおよびｖａｎ  ｄｅ  Ｗｉｎｋｅｌ（２００１年）、Ｃｕｒｒ．  Ｏｐｉｎ．  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．、５巻：３６８〜７４頁；ならびにＬｏｎｂｅｒｇ（２００８年）、Ｃｕｒｒ．  Ｏｐｉｎ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．、２０巻：４５０〜４５９頁において記載されている。
【０１９４】
ヒト抗体は、免疫原（例えば、ＧＤＦ１１ポリペプチド、ＧＤＦ８ポリペプチド、ＡｃｔＲＩＩＡポリペプチド、またはＡｃｔＲＩＩＢポリペプチド）を、抗原性攻撃に応答して、インタクトなヒト抗体またはヒト可変領域を有するインタクトな抗体を生成するように改変されたトランスジェニック動物に投与することにより調製することができる。このような動物は典型的に、内因性免疫グロブリン遺伝子座を置きかえるか、または染色体外に存在するかもしくは動物の染色体にランダムに組み込まれた、ヒト免疫グロブリン遺伝子座の全部または一部を含有する。このようなトランスジェニック動物では、内因性免疫グロブリン遺伝子座は一般に、不活性化されている。トランスジェニック動物からヒト抗体を得るための方法の総説については、例えば、Ｌｏｎｂｅｒｇ（２００５年）、Ｎａｔ．  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．、２３巻：１１１７〜１１２５頁；米国特許第６，０７５，１８１号および同第６，１５０，５８４号（ＸＥＮＯＭＯＵＳＥ（商標）技術について記載）；米国特許第５，７７０，４２９号（ＨｕＭａｂ（登録商標）技術について記載）；米国特許第７，０４１，８７０号（Ｋ−Ｍ  ＭＯＵＳＥ（登録商標）技術について記載）；ならびに米国特許出願公開第２００７／００６１９００号（ＶｅｌｏｃｉＭｏｕｓｅ（登録商標）技術について記載）を参照されたい。このような動物により生成されるインタクトな抗体に由来するヒト可変領域は、例えば、異なるヒト定常領域と組み合わせることによりさらに改変することができる。
【０１９５】
本明細書で提供されるヒト抗体はまた、ハイブリドーマベースの方法により作製することもできる。ヒトモノクローナル抗体を生成するためのヒト骨髄腫細胞株およびマウス−ヒトヘテロ骨髄腫細胞株は記載されている［例えば、Ｋｏｚｂｏｒ、Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．、（１９８４年）、１３３巻：３００１頁；Ｂｒｏｄｅｕｒら（１９８７年）、Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ  Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ  ａｎｄ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ、５１〜６３頁、Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ，  Ｉｎｃ．、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ；およびＢｏｅｒｎｅｒら（１９９１年）、Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．、１４７巻：８６頁を参照されたい］。ヒトＢ細胞ハイブリドーマ技術を介して生成されるヒト抗体はまた、Ｌｉら、（２００６年）、Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ、１０３巻：３５５７〜３５６２頁において記載されている。追加の方法は、例えば、米国特許第７，１８９，８２６号（ハイブリドーマ細胞株からのヒトモノクローナルＩｇＭ抗体の生成について記載）およびＮｉ、Ｘｉａｎｄａｉ  Ｍｉａｎｙｉｘｕｅ（２００６年）、２６巻（４号）：２６５〜２６８頁（２００６年）（ヒト−ヒトハイブリドーマについて記載）において記載されている方法を含む。ヒトハイブリドーマ技術（トリオーマ技術）はまた、ＶｏｌｌｍｅｒｓおよびＢｒａｎｄｌｅｉｎ（２００５年）、Ｈｉｓｔｏｌ．  Ｈｉｓｔｏｐａｔｈｏｌ．、２０巻（３号）：９２７〜９３７頁；ならびにＶｏｌｌｍｅｒｓおよびＢｒａｎｄｌｅｉｎ（２００５年）、Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｆｉｎｄ  Ｅｘｐ．  Ｃｌｉｎ．  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．、２７巻（３号）：１８５〜９１頁において記載されている。
【０１９６】
本明細書で提供されるヒト抗体はまた、ヒト由来のファージディスプレイライブラリーより選択されるＦｖクローン可変ドメイン配列を単離することによっても生成することができる。次いで、このような可変ドメイン配列を、所望のヒト定常ドメインと組み合わせることができる。ヒト抗体を抗体ライブラリーより選択するための技法については、本明細書で記載される。
【０１９７】
例えば、本開示の抗体は、１つまたは複数の所望の活性を有する抗体のためのコンビナトリアルライブラリーをスクリーニングすることにより単離することができる。当該分野では、ファージディスプレイライブラリーを生成し、このようなライブラリーを、所望の結合特徴を保有する抗体についてスクリーニングするための、様々な方法が公知である。このような方法は、例えば、Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍら（２００１年）、Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ、１７８巻：１〜３７頁、Ｏ’Ｂｒｉｅｎら編、Ｈｕｍａｎ  Ｐｒｅｓｓ、Ｔｏｔｏｗａ、Ｎ．Ｊ．において総説されており、例えば、ＭｃＣａｆｆｅｒｔｙら（１９９１年）、Ｎａｔｕｒｅ、３４８巻：５５２〜５５４頁；Ｃｌａｃｋｓｏｎら、（１９９１年）、Ｎａｔｕｒｅ、３５２巻：６２４〜６２８頁；Ｍａｒｋｓら（１９９２年）、Ｊ．  Ｍｏｌ．  Ｂｉｏｌ．、２２２巻：５８１〜５９７頁；ＭａｒｋｓおよびＢｒａｄｂｕｒｙ（２００３年）、Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ、２４８巻：１６１〜１７５頁、Ｌｏ編、Ｈｕｍａｎ  Ｐｒｅｓｓ、Ｔｏｔｏｗａ、Ｎ．Ｊ．；Ｓｉｄｈｕら（２００４年）、Ｊ．  Ｍｏｌ．  Ｂｉｏｌ．、３３８巻（２号）：２９９〜３１０頁；Ｌｅｅら（２００４年）、Ｊ．  Ｍｏｌ．  Ｂｉｏｌ．、３４０巻（５号）：１０７３〜１０９３頁；Ｆｅｌｌｏｕｓｅ（２００４年）、Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ、１０１巻（３４号）：１２４６７〜１２４７２頁；ならびにＬｅｅら（２００４年）、Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  Ｍｅｔｈｏｄｓ、２８４巻（１〜２号）：１１９〜１３２頁においてさらに記載されている。
【０１９８】
ある特定のファージディスプレイ法では、Ｗｉｎｔｅｒら（１９９４年）、Ａｎｎ．  Ｒｅｖ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．、１２巻：４３３〜４５５頁において記載されているように、ＶＨ遺伝子およびＶＬ遺伝子のレパートリーを、ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）により個別にクローニングし、ファージライブラリー内でランダムに組み換え、次いで、抗原結合ファージについてスクリーニングすることができる。ファージは典型的に、抗体フラグメントを、単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）フラグメントまたはＦａｂフラグメントとして呈示する。免疫化された供給源に由来するライブラリーは、ハイブリドーマを構築する必要なく、免疫原（例えば、ＧＤＦ１１、アクチビンＢ、ＡｃｔＲＩＩＡ、またはＡｃｔＲＩＩＢ）に対する高アフィニティー抗体をもたらす。代替的に、ナイーブレパートリーは、Ｇｒｉｆｆｉｔｈｓら（１９９３年）、ＥＭＢＯ  Ｊ、１２巻：７２５〜７３４頁により記載されているように、いかなる免疫化もなく、広範にわたる非自己抗原を指向する抗体の単一の供給源をもたらし、また、広範にわたる自己抗原を指向する抗体の単一の供給源ももたらすように、クローニングすることができる（例えば、ヒトから）。最後に、ナイーブライブラリーはまた、ＨｏｏｇｅｎｂｏｏｍおよびＷｉｎｔｅｒ（１９９２年）、Ｊ．  Ｍｏｌ．  Ｂｉｏｌ．、２２７巻：３８１〜３８８頁により記載されているように、再配列されていないＶ遺伝子セグメントを、幹細胞からクローニングし、高度に可変的なＣＤＲ３領域をコードし、インビトロにおける再配列を達成する、ランダム配列を含有するＰＣＲプライマーを使用することを介して、合成により作製することもできる。ヒト抗体ファージライブラリーについて記載する特許公開は、例えば、米国特許第５，７５０，３７３号；ならびに米国特許公開第２００５／００７９５７４号、同第２００５／０１１９４５５号、同第２００５／０２６６０００号、同第２００７／０１１７１２６号、同第２００７／０１６０５９８号、同第２００７／０２３７７６４号、同第２００７／０２９２９３６号、および同第２００９／０００２３６０号を含む。
【０１９９】
ある特定の実施形態では、本明細書で提供される抗体は、多特異性抗体、例えば、二特異性抗体である。多特異性抗体（典型的に、モノクローナル抗体）は、１つまたは複数の（例えば、２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、またはこれを超える）抗原上の、少なくとも２つの（例えば、２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、またはこれを超える）異なるエピトープに対する結合特異性を有する。
【０２００】
ある特定の実施形態では、本開示の多特異性抗体は、２つまたはこれを超える結合特異性を含み、結合特異性の少なくとも１つは、ＧＤＦ１１エピトープに対する結合特異性であり、任意選択で、１つまたは複数の追加の結合特異性は、異なるＡｃｔＲＩＩリガンド（例えば、ＧＤＦ８、アクチビン、ＢＭＰ６、および／またはＢＭＰ１０）上および／またはＡｃｔＲＩＩ受容体（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡ受容体および／またはＡｃｔＲＩＩＢ受容体）上のエピトープに対する結合特異性である。ある特定の実施形態では、多特異性抗体は、ＧＤＦ１１の２つまたはこれを超える異なるエピトープに結合し得る。好ましくは、部分的に、ＧＤＦ１１エピトープに対する結合アフィニティーを有する、本開示の多特異性抗体を使用して、ＧＤＦ１１活性（例えば、ＡｃｔＲＩＩ受容体に結合し、かつ／またはこれらを活性化させる能力）を阻害することができ、任意選択で、１つまたは複数の異なるＡｃｔＲＩＩリガンド（例えば、ＧＤＦ８、アクチビン、ＢＭＰ６、および／またはＢＭＰ１０）および／またはＡｃｔＲＩＩ受容体（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡ受容体またはＡｃｔＲＩＩＢ受容体）の活性を阻害することができる。ある特定の好ましい実施形態では、ＧＤＦ１１に結合し、かつ／またはこれを阻害する、本開示の多特異性抗体は、少なくともＧＤＦ８にさらに結合し、かつ／またはこれをさらに阻害する。任意選択で、ＧＤＦ１１に結合し、かつ／またはこれを阻害する、本開示の多特異性抗体は、アクチビンＡに実質的に結合せず、かつ／またはこれを実質的に阻害しない。
【０２０１】
ある特定の実施形態では、本開示の多特異性抗体は、２つまたはこれを超える結合特異性を含み、結合特異性の少なくとも１つは、ＧＤＦ８エピトープに対する結合特異性であり、任意選択で、１つまたは複数の追加の結合特異性は、異なるＡｃｔＲＩＩリガンド（例えば、ＧＤＦ１１、アクチビン、ＢＭＰ６、ＢＭＰ１０、ＢＭＰ９および／またはＧＤＦ３）上および／またはＡｃｔＲＩＩ受容体（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡ受容体および／またはＡｃｔＲＩＩＢ受容体）上のエピトープに対する結合特異性である。ある特定の実施形態では、多特異性抗体は、ＧＤＦ８の２つまたはこれを超える異なるエピトープに結合し得る。好ましくは、部分的に、ＧＤＦ８エピトープに対する結合アフィニティーを有する、本開示の多特異性抗体を使用して、ＧＤＦ８活性（例えば、ＡｃｔＲＩＩ受容体に結合し、かつ／またはこれらを活性化させる能力）を阻害することができ、任意選択で、１つまたは複数の異なるＡｃｔＲＩＩリガンド（例えば、ＧＤＦ１１、アクチビン、ＢＭＰ６、ＢＭＰ１０、ＢＭＰ９および／またＧＤＦ３）および／またはＡｃｔＲＩＩ受容体（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡ受容体またはＡｃｔＲＩＩＢ受容体）の活性を阻害することができる。ある特定の好ましい実施形態では、ＧＤＦ８に結合し、かつ／またはこれを阻害する、本開示の多特異性抗体は、少なくともＧＤＦ１１にさらに結合し、かつ／またはこれをさらに阻害する。任意選択で、ＧＤＦ８に結合し、かつ／またはこれを阻害する、本開示の多特異性抗体は、少なくともアクチビン（例えば、アクチビンＡ、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、アクチビンＣ、およびアクチビンＥ）にさらに結合し、かつ／またはこれを阻害する。一部の実施形態では、ＧＤＦ８に結合し、かつ／またはこれを阻害する、本開示の多特異性抗体は、少なくともアクチビンＢにさらに結合し、かつ／またはこれを阻害する。一部の実施形態では、ＧＤＦ８に結合し、かつ／またはこれを阻害する、本開示の多特異性抗体は、アクチビンＡに実質的に結合せず、かつ／またはこれを実質的に阻害しない。任意選択で、ＧＤＦ８に結合し、かつ／またはこれを阻害する、本開示の多特異性抗体は、少なくともＢＭＰ６にさらに結合し、かつ／またはこれを阻害する。任意選択で、ＧＤＦ８に結合し、かつ／またはこれを阻害する、本開示の多特異性抗体は、少なくともＢＭＰ９にさらに結合し、かつ／またはこれを阻害する。一部の実施形態では、ＧＤＦ８に結合し、かつ／またはこれを阻害する、本開示の多特異性抗体は、ＢＭＰ９に実質的に結合せず、かつ／またはこれを実質的に阻害しない。任意選択で、ＧＤＦ８に結合し、かつ／またはこれを阻害する、本開示の多特異性抗体は、少なくともＢＭＰ１０にさらに結合し、かつ／またはこれを阻害する。一部の実施形態では、ＧＤＦ８に結合し、かつ／またはこれを阻害する、本開示の多特異性抗体は、ＢＭＰ１０に実質的に結合せず、かつ／またはこれを実質的に阻害しない。任意選択で、ＧＤＦ８に結合し、かつ／またはこれを阻害する、本開示の多特異性抗体は、少なくともＧＤＦ３にさらに結合し、かつ／またはこれを阻害する。
【０２０２】
ある特定の実施形態では、本開示の多特異性抗体は、２またはこれを超える結合特異性を含み、結合特異性の少なくとも１つは、ＧＤＦ１１エピトープに対する結合特異性であり、任意選択で、１つまたは複数の追加の結合特異性は、異なるＡｃｔＲＩＩリガンド（例えば、ＧＤＦ８、アクチビン、ＢＭＰ６、ＢＭＰ１０、ＢＭＰ９、および／またはＧＤＦ３）上および／またはＡｃｔＲＩＩ受容体（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡおよび／またはＡｃｔＲＩＩＢ受容体）上のエピトープに対する結合特異性である。ある特定の実施形態では、多特異性抗体は、ＧＤＦ１１の２またはこれを超える異なるエピトープに結合することができる。好ましくは、部分的に、ＧＤＦ１１エピトープに対する結合アフィニティーを有する、本開示の多特異性抗体を使用して、ＧＤＦ１１活性（例えば、ＡｃｔＲＩＩ受容体に結合し、かつ／またはこれらを活性化させる能力）を阻害することができ、任意選択で、１つまたは複数の異なるＡｃｔＲＩＩリガンド（例えば、ＧＤＦ８、アクチビン、ＢＭＰ６、ＢＭＰ１０、ＢＭＰ９、および／またはＧＤＦ３）および／またはＡｃｔＲＩＩ受容体（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡ受容体またはＡｃｔＲＩＩＢ受容体）の活性を阻害することができる。ある特定の好ましい実施形態では、ＧＤＦ１１に結合し、かつ／またはこれを阻害する、本発明の開示の多特異性抗体は、少なくともＧＤＦ８にさらに結合し、かつ／またはこれを阻害する。任意選択で、ＧＤＦ１１に結合し、かつ／またはこれを阻害する、本開示の多特異性抗体は、少なくともアクチビン（例えば、アクチビンＡ、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、アクチビンＣ、およびアクチビンＥ）にさらに結合し、かつ／またはこれを阻害する。一部の実施形態では、ＧＤＦ１１に結合し、かつ／またはこれを阻害する、本開示の多特異性抗体は、少なくともアクチビンＢにさらに結合し、かつ／またはこれを阻害する。一部の実施形態では、ＧＤＦ１１に結合し、かつ／またはこれを阻害する、本開示の多特異性抗体は、アクチビンＡに実質的に結合せず、かつ／またはこれを実質的に阻害しない。任意選択で、ＧＤＦ１１に結合し、かつ／またはこれを阻害する、本開示の多特異性抗体は、少なくともＢＭＰ６にさらに結合し、かつ／またはこれを阻害する。任意選択で、ＧＤＦ１１に結合し、かつ／またはこれを阻害する、本開示の多特異性抗体は、少なくともＢＭＰ９にさらに結合し、かつ／またはこれを阻害する。一部の実施形態では、ＧＤＦ１１に結合し、かつ／またはこれを阻害する、本開示の多特異性抗体は、ＢＭＰ９に実質的に結合せず、かつ／またはこれを実質的に阻害しない。任意選択で、ＧＤＦ１１に結合し、かつ／またはこれを阻害する、本開示の多特異性抗体は、少なくともＢＭＰ１０にさらに結合し、かつ／またはこれを阻害する。一部の実施形態では、ＧＤＦ１１に結合し、かつ／またはこれを阻害する、本開示の多特異性抗体は、ＢＭＰ１０に実質的に結合せず、かつ／またはこれを実質的に阻害しない。任意選択で、ＧＤＦ１１に結合し、かつ／またはこれを阻害する、本開示の多特異性抗体は、少なくともＧＤＦ３にさらに結合し、かつ／またはこれを阻害する。
【０２０３】
ある特定の実施形態では、本発明の開示の多特異性抗体は、２またはこれを超える結合特異性を含み、結合特異性の少なくとも１つは、アクチビンに対する結合特異性であり、任意選択で、１つまたは複数の追加の結合特異性は、異なるＡｃｔＲＩＩリガンド（例えば、ＧＤＦ１１、ＧＤＦ８、ＢＭＰ６、ＢＭＰ１０、ＢＭＰ９、および／またはＧＤＦ３）上および／またはＡｃｔＲＩＩ受容体（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡおよび／またはＡｃｔＲＩＩＢ受容体）上のエピトープに対する結合特異性である。ある特定の実施形態では、多特異性抗体は、アクチビンの２またはこれを超える異なるエピトープに結合することができ、または異なるタイプのアクチビン上の２またはこれを超える異なるエピトープに結合することができる（例えば、アクチビンＡエピトープに結合し、かつアクチビンＢエピトープに結合する）。好ましくは、部分的に、アクチビンエピトープに対する結合アフィニティーを有する、本開示の多特異性抗体を使用して、アクチビン活性（例えば、ＡｃｔＲＩＩ受容体に結合し、かつ／またはこれらを活性化させる能力）を阻害することができ、任意選択で、１つまたは複数の異なるＡｃｔＲＩＩリガンド（例えば、ＧＤＦ１１、ＧＤＦ８、ＢＭＰ６、ＢＭＰ１０、ＢＭＰ９、および／またはＧＤＦ３）および／またはＡｃｔＲＩＩ受容体（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡ受容体またはＡｃｔＲＩＩＢ受容体）の活性を阻害することができる。ある特定の好ましい実施形態では、アクチビンに結合し、かつ／またはこれを阻害する、本発明の開示の多特異性抗体は、少なくともＧＤＦ１１にさらに結合し、かつ／またはこれを阻害する。任意選択で、アクチビンに結合し、かつ／またはこれを阻害する、本開示の多特異性抗体は、少なくともＧＤＦ８にさらに結合し、かつ／またはこれを阻害する。一部の実施形態では、アクチビンＢに結合し、かつ／またはこれを阻害する、本開示の多特異性抗体。一部の実施形態では、アクチビンＢに結合し、かつ／またはこれを阻害する、本開示の多特異性抗体は、アクチビンＡに実質的に結合せず、かつ／またはこれを実質的に阻害しない。任意選択で、アクチビンに結合し、かつ／またはこれを阻害する、本開示の多特異性抗体は、少なくともＢＭＰ６にさらに結合し、かつ／またはこれを阻害する。任意選択で、アクチビンに結合し、かつ／またはこれを阻害する、本開示の多特異性抗体は、少なくともＢＭＰ９にさらに結合し、かつ／またはこれを阻害する。一部の実施形態では、アクチビンに結合し、かつ／またはこれを阻害する、本開示の多特異性抗体は、ＢＭＰ９に実質的に結合せず、かつ／またはこれを実質的に阻害しない。任意選択で、アクチビンに結合し、かつ／またはこれを阻害する、本開示の多特異性抗体は、少なくともＢＭＰ１０にさらに結合し、かつ／またはこれを阻害する。一部の実施形態では、アクチビンに結合し、かつ／またはこれを阻害する、本開示の多特異性抗体は、ＢＭＰ１０に実質的に結合せず、かつ／またはこれを実質的に阻害しない。任意選択で、アクチビンに結合し、かつ／またはこれを阻害する、本開示の多特異性抗体は、少なくともＧＤＦ３にさらに結合し、かつ／またはこれを阻害する。
【０２０４】
本明細書にはまた、３つまたはこれを超える、機能的な抗原結合性部位を有する操作抗体であって、「オクトパス抗体」を含む操作抗体も含まれる（例えば、ＵＳ２００６／００２５５７６Ａ１を参照されたい）。
【０２０５】
ある特定の実施形態では、本明細書で開示される抗体は、モノクローナル抗体である。モノクローナル抗体とは、実質的に均一な抗体の集団から得られた抗体を指す、すなわち、集団を構成する個々の抗体は、可能な改変体抗体、例えば、天然に存在する変異を含有する、またはモノクローナル抗体調製物の生成時に発生する改変体抗体（このような改変体は、一般に少量で存在する）を除き同一であり、かつ／または同じエピトープに結合する。典型的に、異なるエピトープを指向する異なる抗体を含むポリクローナル抗体調製物とは対照的に、モノクローナル抗体調製物の各モノクローナル抗体は、抗原上の単一のエピトープを指向する。したがって、修飾語「モノクローナル」とは、実質的に均一な抗体集団から得られる抗体の性質を指し示し、任意の特定の方法により抗体の生成を必要とするとはみなさないものとする。例えば、本方法に従って使用されるモノクローナル抗体は、ハイブリドーマ法、組換えＤＮＡ法、ファージディスプレイ法、およびヒト免疫グロブリン遺伝子座の全部または一部を含有するトランスジェニック動物を活用する方法、本明細書で記載されるモノクローナル抗体を作製するためのこのような方法および他の例示的な方法を含むがこれらに限定されない様々な技法により作製することができる。
【０２０６】
例えば、標準的なプロトコルを介して、ＧＤＦ１１に由来する免疫原を使用することにより、抗タンパク質／抗ペプチド抗血清または抗タンパク質／抗ペプチドモノクローナル抗体を作製することができる［例えば、Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：  Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ（１９８８年）、ＨａｒｌｏｗおよびＬａｎｅ編、Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｐｒｅｓｓを参照されたい］。マウス、ハムスター、またはウサギなどの哺乳動物は、ＧＤＦ１１ポリペプチドの免疫原性形態、抗体応答を誘発することが可能である抗原性フラグメント、または融合タンパク質で免疫化することができる。タンパク質またはペプチドに免疫原性を付与するための技法は、キャリアへの結合体化または当該分野で周知の他の技法を含む。ＧＤＦ１１ポリペプチドの免疫原性部分は、アジュバントの存在下で投与することができる。免疫化の進行は、血漿中または血清中の抗体力価の検出によりモニタリングすることができる。免疫原を抗原とする標準的なＥＬＩＳＡまたは他のイムノアッセイを使用して、抗体生成レベルおよび／または結合アフィニティーレベルを評価することができる。
【０２０７】
ＧＤＦ１１の抗原性調製物で動物を免疫化した後、抗血清を得ることができ、所望の場合、ポリクローナル抗体を血清から単離することができる。モノクローナル抗体を生成するために、抗体生成細胞（リンパ球）を、免疫化動物から採取し、標準的な体細胞融合手順により、骨髄腫細胞など、不死化細胞と融合させて、ハイブリドーマ細胞をもたらすことができる。このような技法は、当該分野で周知であり、例えば、ハイブリドーマ技法［例えば、ＫｏｈｌｅｒおよびＭｉｌｓｔｅｉｎ（１９７５年）、Ｎａｔｕｒｅ、２５６巻：４９５〜４９７頁を参照されたい］、ヒトＢ細胞ハイブリドーマ技法［例えば、Ｋｏｚｂａｒら（１９８３年）、Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  Ｔｏｄａｙ、４巻：７２頁を参照されたい］、およびヒトモノクローナル抗体を生成するＥＢＶハイブリドーマ技法［Ｃｏｌｅら（１９８５年）、Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ａｎｄ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｈｅｒａｐｙ、Ａｌａｎ  Ｒ．  Ｌｉｓｓ，  Ｉｎｃ．、７７〜９６頁］が挙げられる。ハイブリドーマ細胞は、ＧＤＦ１１ポリペプチドと特異的に反応性である抗体、およびこのようなハイブリドーマ細胞を含む培養物から単離されたモノクローナル抗体の生成について、免疫化学的にスクリーニングすることができる。
【０２０８】
ある特定の実施形態では、１つまたは複数のアミノ酸改変を、本明細書で提供される抗体のＦｃ領域に導入し、これにより、Ｆｃ領域改変体を生成することができる。Ｆｃ領域改変体は、１つまたは複数のアミノ酸位置において、アミノ酸改変（例えば、置換、欠失、および／または付加）を含む、ヒトＦｃ領域配列（例えば、ヒトＩｇＧ１、ヒトＩｇＧ２、ヒトＩｇＧ３、またはヒトＩｇＧ４のＦｃ領域）を含み得る。
【０２０９】
例えば、本開示は、一部のエフェクター機能を保有するが、全てのエフェクター機能は保有しない抗体の改変体であって、これにより、インビボにおける抗体の半減期は重要であるが、ある特定のエフェクター機能［例えば、補体依存性細胞傷害作用（ＣＤＣ）および抗体依存性細胞傷害作用（ＡＤＣＣ）］は、不要または有害である適用に望ましい候補となる抗体の改変体を企図する。インビトロおよび／またはインビボにおける細胞傷害作用アッセイを実行して、ＣＤＣ活性および／またはＡＤＣＣ活性の低減／枯渇を確認することができる。例えば、Ｆｃ受容体（ＦｃＲ）結合アッセイを実行して、抗体が、ＦｃγＲ結合を欠く（よって、ＡＤＣＣ活性を欠く可能性が高い）が、ＦｃＲｎへの結合能は保持することを確保することができる。ＡＤＣＣを媒介するための主要な細胞であるＮＫ細胞がＦｃγＲＩＩＩだけを発現するのに対し、単球はＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩ、およびＦｃγＲＩＩＩを発現する。造血細胞におけるＦｃＲの発現は、例えば、ＲａｖｅｔｃｈおよびＫｉｎｅｔ（１９９１年）、Ａｎｎｕ．  Ｒｅｖ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．、９巻：４５７〜４９２頁にまとめられている。関心のある分子のＡＤＣＣ活性を評価するインビトロアッセイの非限定的な例は、米国特許第５，５００，３６２号；Ｈｅｌｌｓｔｒｏｍ，
Ｉ．ら（１９８６年）、Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔ’ｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ、８３巻：７０５９〜７０６３頁；Ｈｅｌｌｓｔｒｏｍ，  Ｉら（１９８５年）、Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔ’ｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ、８２巻：１４９９〜１５０２頁；米国特許第５，８２１，３３７号；およびＢｒｕｇｇｅｍａｎｎ，  Ｍ．ら（１９８７年）、Ｊ．  Ｅｘｐ．  Ｍｅｄ．、１６６巻：１３５１〜１３６１頁において記載されている。代替的に、非放射性アッセイ法を利用することができる（例えば、フローサイトメトリーのためのＡＣＴＩ（商標）非放射性細胞傷害作用アッセイ；ＣｅｌｌＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｉｎｃ．、Ｍｏｕｎｔａｉｎ  Ｖｉｅｗ、Ｃａｌｉｆ．；およびＣｙｔｏＴｏｘ  ９６（登録商標）非放射性細胞傷害作用アッセイ、Ｐｒｏｍｅｇａ、Ｍａｄｉｓｏｎ、Ｗｉｓ．）。このようなアッセイに有用なエフェクター細胞として、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）およびナチュラルキラー（ＮＫ）細胞が挙げられる。代替的に、または加えて、関心のある分子のＡＤＣＣ活性は、インビボにおいて、例えば、Ｃｌｙｎｅｓら（１９９８年）、Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔ’ｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ、９５巻：６５２〜６５６頁において開示されている動物モデルなどの動物モデルにおいて評価することができる。また、Ｃ１ｑ結合アッセイを実行して、抗体がＣ１ｑに結合できず、よって、ＣＤＣ活性を欠くことを確認することもできる［例えば、ＷＯ２００６／０２９８７９およびＷＯ２００５／１００４０２における、Ｃ１ｑ結合ＥＬＩＳＡおよびＣ３ｃ結合ＥＬＩＳＡを参照されたい］。補体の活性化を評価するために、ＣＤＣアッセイを実施することができる［例えば、Ｇａｚｚａｎｏ−Ｓａｎｔｏｒｏら（１９９６年）、Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  Ｍｅｔｈｏｄｓ、２０２巻：１６３頁；Ｃｒａｇｇ，  Ｍ．  Ｓ．ら（２００３年）、Ｂｌｏｏｄ、１０１巻：１０４５〜１０５２頁；ならびにＣｒａｇｇ，  Ｍ．  Ｓ．およびＭ．  Ｊ．  Ｇｌｅｎｎｉｅ（２００４年）、Ｂｌｏｏｄ、１０３巻：２７３８〜２７４３頁を参照されたい］。当該分野で公知の方法を使用して、ＦｃＲｎへの結合およびインビボにおけるクリアランス／半減期の決定もまた、実施することができる［例えば、Ｐｅｔｋｏｖａ，  Ｓ．  Ｂ．ら（２００６年）、Ｉｎｔ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．、１８巻（１２号）：１７５９〜１７６９頁を参照されたい］。
【０２１０】
エフェクター機能を低減した本開示の抗体は、Ｆｃ領域残基２３８、２６５、２６９、２７０、２９７、３２７、および３２９のうちの１つまたは複数を置換した抗体を含む（米国特許第６，７３７，０５６号）。このようなＦｃ変異体は、アミノ酸２６５位、２６９位、２７０位、２９７位、および３２７位のうちの２つまたはこれより多くにおいて置換を有するＦｃ変異体であって、残基２６５および２９７のアラニンへの置換を有する、いわゆる「ＤＡＮＡ」Ｆｃ変異体を含むＦｃ変異体を含む（米国特許第７，３３２，５８１号）。
【０２１１】
ある特定の実施形態では、システイン操作抗体、例えば、抗体の１つまたは複数の残基をシステイン残基で置換した「チオＭＡｂ」を創出することが望ましいと考えられる。特定の実施形態では、残基の置換を、抗体の接近可能な部位に施す。システインでこれらの残基を置換することにより、反応性のチオール基が抗体の接近可能な部位に配置され、抗体を、薬物部分またはリンカー−薬物部分など、他の部分に結合体化させて、本明細書でさらに記載されるような、免疫結合体を創出するのに使用することができる。ある特定の実施形態では、以下の残基：軽鎖のＶ２０５（Ｋａｂａｔ番号付け）；重鎖のＡ１１８（ＥＵ番号付け）；および重鎖Ｆｃ領域のＳ４００（ＥＵ番号付け）のうちの任意の１つまたは複数を、システインで置換することができる。システイン操作抗体は、例えば、米国特許第７，５２１，５４１号において記載されているように生成することができる。
【０２１２】
加えて、望ましい抗体を同定するための抗体をスクリーニングするのに使用される技法は、得られる抗体の特性に影響を及ぼし得る。例えば、抗体を、溶液中の抗原の結合に使用する場合、溶液中での結合について試験することが望ましいと考えられる。抗体と抗原との相互作用を試験して、特に望ましい抗体を同定するために、様々な異なる技法が利用可能である。このような技法として、ＥＬＩＳＡ、表面プラズモン共鳴結合アッセイ（例えば、Ｂｉａｃｏｒｅ結合アッセイ、Ｂｉａｃｏｒｅ  ＡＢ、Ｕｐｐｓａｌａ、Ｓｗｅｄｅｎ）、サンドイッチアッセイ（例えば、ＩＧＥＮ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ，Ｉｎｃ．、Ｇａｉｔｈｅｒｓｂｕｒｇ、Ｍａｒｙｌａｎｄの常磁性ビーズシステム）、ウェスタンブロット、免疫沈降アッセイ、および免疫組織化学が挙げられる。
【０２１３】
ある特定の実施形態では、本明細書で提供される抗体および／または結合ポリペプチドのアミノ酸配列改変体が企図される。例えば、抗体および／または結合ポリペプチドの結合アフィニティーおよび／または他の生体特性を改善することが望ましい場合がある。抗体および／または結合ポリペプチドのアミノ酸配列改変体は、抗体および／または結合ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列に適切な改変を導入することにより調製することもでき、ペプチド合成により調製することもできる。このような改変は、例えば、抗体および／または結合性ポリペプチドのアミノ酸配列内の残基からの欠失、および／またはこれらへの挿入、および／またはこれらの置換を含む。欠失、挿入、および置換の任意の組み合わせは、最終的な構築物が、所望の特徴、例えば、標的への結合（ＧＤＦ１１、ＧＤＦ８、ＡｃｔＲＩＩＡ、および／またはＡｃｔＲＩＩＢへの結合）を保有するという条件で、最終的な構築物に到達するように施すことができる。
【０２１４】
変更（例えば、置換）をＨＶＲ内に施して、例えば、抗体のアフィニティーを改善することができる。このような変更は、ＨＶＲの「ホットスポット」、すなわち、体細胞成熟プロセスにおいて高頻度で変異を経るコドンによりコードされる残基（例えば、Ｃｈｏｗｄｈｕｒｙ（２００８年）、Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｍｏｌ．  Ｂｉｏｌ．、２０７巻：１７９〜１９６頁（２００８年）を参照されたい）、および／またはＳＤＲ（ａ−ＣＤＲ）に施すことができ、結果として得られる改変体ＶＨまたは改変体ＶＬを結合アフィニティーについて調べる。当該分野では、二次ライブラリーを構築し、ここから再選択することによるアフィニティー成熟が記載されている［例えば、Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍら、Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ、１７８巻：１〜３７頁、Ｏ’Ｂｒｉｅｎら編、Ｈｕｍａｎ  Ｐｒｅｓｓ、Ｔｏｔｏｗａ、Ｎ．Ｊ．（２００１年）を参照されたい］。アフィニティー成熟の一部の実施形態では、様々な方法（例えば、エラープローンＰＣＲ、鎖シャフリング、またはオリゴヌクレオチド指向変異誘発）のいずれかにより、成熟のために選択された可変遺伝子に多様性を導入する。次いで、二次ライブラリーを創出する。次いで、ライブラリーをスクリーニングして、所望のアフィニティーを有する任意の抗体改変体を同定する。多様性を導入する別の方法は、いくつかのＨＶＲ残基（例えば、一度に４〜６残基）をランダム化する、ＨＶＲ指向アプローチを伴う。抗原の結合に関与するＨＶＲ残基は、例えばアラニン走査変異誘発またはモデル化を使用して、特異的に同定することができる。特にＣＤＲ−Ｈ３およびＣＤＲ−Ｌ３は、しばしば標的化される。
【０２１５】
ある特定の実施形態では、このような変更が、抗原に結合する抗体の能力を実質的に低減しない限りにおいて、１つまたは複数のＨＶＲ内に置換、挿入、または欠失を施すことができる。例えば、結合アフィニティーを実質的に低減しない保存的変更（例えば、本明細書で提供される保存的置換）を、ＨＶＲ内に施すことができる。このような変更は、ＨＶＲ「ホットスポット」またはＳＤＲの外部であり得る。上記で提供した改変体ＶＨ配列およびＶＬ配列のある特定の実施形態では、各ＨＶＲは、不変であるか、または１つ、２つ、もしくは３つ以下のアミノ酸置換を含有する。
【０２１６】
変異誘発のために標的化され得る抗体および／または結合性ポリペプチドの残基または領域の同定に有用な方法は、ＣｕｎｎｉｎｇｈａｍおよびＷｅｌｌｓ（１９８９年）、Ｓｃｉｅｎｃｅ、２４４巻：１０８１〜１０８５頁により記載されているように、「アラニン走査変異誘発」と呼ばれている。この方法では、残基または標的残基の群（例えば、ａｒｇ、ａｓｐ、ｈｉｓ、ｌｙｓ、およびｇｌｕなどの荷電残基）を同定し、中性であるかまたは負に荷電したアミノ酸（例えば、アラニンまたはポリアラニン）で置きかえて、抗体または結合性ポリペプチドの、抗原との相互作用が影響を受けるのかどうかを決定する。初期の置換に対して機能的な感受性を顕示するアミノ酸位置に、さらなる置換を導入することもできる。代替的に、または加えて、抗原−抗体複合体の結晶構造を使用して、抗体と抗原との間の接点を同定することができる。このような接触残基および近傍の残基は、置換の標的化してもよく、置換の候補として消失させてもよい。改変体をスクリーニングして、それらが所望の特性を含有するかどうかを決定することができる。
【０２１７】
アミノ酸配列の挿入は、１残基〜１００またはこれより多くの残基を含有するポリペプチドの範囲の長さのアミノ末端融合物および／またはカルボキシル末端融合物のほか、単一または複数のアミノ酸残基の内部配列挿入も含む。末端挿入の例として、Ｎ末端メチオニル残基を有する抗体が挙げられる。抗体分子の他の挿入改変体として、抗体のＮ末端もしくはＣ末端の、酵素（例えば、ＡＤＥＰＴのための）、または抗体の血清中半減期を延長するポリペプチドへの融合物が挙げられる。
【０２１８】
ある特定の実施形態では、本明細書で提供される抗体および／または結合性ポリペプチドを、当該分野で公知であり、たやすく利用可能である、追加の非タンパク質性部分を含有するようにさらに修飾することができる。抗体および／または結合性ポリペプチドの誘導体化に適する部分は、水溶性ポリマーを含むがこれらに限定されない。水溶性ポリマーの非限定的な例として、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、エチレングリコール／プロピレングリコールのコポリマー、カルボキシメチルセルロース、デキストラン、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、ポリ−１，３−ジオキソラン、ポリ−１，３，６−トリオキサン、エチレン／無水マレイン酸コポリマー、ポリアミノ酸（ホモポリマーまたはランダムコポリマー）、およびデキストラン、またはポリ（ｎ−ビニルピロリドン）ポリエチレングリコール、ポリプロピレン（ｐｒｏｐｒｏｐｙｌｅｎｅ）グリコールホモポリマー、ポリプロピレン（ｐｒｏｌｙｐｒｏｐｙｌｅｎｅ）オキシド／エチレンオキシドコポリマー、ポリオキシエチル化ポリオール（例えば、グリセロール）、ポリビニルアルコール、ならびにこれらの混合物が挙げられるがこれらに限定されない。ポリエチレングリコールプロピオンアルデヒドは、水中のその安定性のために、製造において有利であり得る。ポリマーは、任意の分子量であることが可能であり、分枝状でもよく、非分枝状でもよい。抗体および／または結合ポリペプチドに付加させるポリマーの数は、変化させることができ、１つより多くのポリマーを付加させる場合、それらは、同じ分子でもよく、異なる分子でもよい。一般に、誘導体化に使用されるポリマーの数および／または種類は、抗体の誘導体および／または結合ポリペプチドの誘導体が規定の条件下での治療に使用されようと、改善する抗体および／または結合ポリペプチドの特定の特性または機能を含むがこれらに限定されない検討事項に基づき決定することができる。
【０２１９】
本明細書で開示されたＡｃｔＲＩＩアンタゴニスト抗体（例えば、抗アクチビンＡ抗体、抗アクチビンＢ抗体、抗アクチビンＣ抗体、抗アクチビンＥ抗体、抗ＧＤＦ１１抗体、抗ＧＤＦ８抗体、抗ＢＭＰ６抗体、抗ＢＭＰ１０抗体、抗ＡｃｔＲＩＩＡ抗体、抗ＧＤＦ３抗体、および／または抗ＡｃｔＲＩＩＢ抗体）のいずれかは、１つまたは複数の追加のＡｃｔＲＩＩアンタゴニスト作用因子と組み合わせて、所望の効果を達成する［それを必要とする患者において眼の血管障害を処置または予防する；それを必要とする眼の血管障害を有する患者において視覚を増加させる（例えば、視力および／または視野を増加させる）；および／または眼の血管障害の１つまたは複数の合併症を処置または予防する］ことができる。例えば、ＡｃｔＲＩＩアンタゴニスト抗体は、ｉ）１つまたは複数の追加のＡｃｔＲＩＩアンタゴニスト抗体、ｉｉ）１つまたは複数のＡｃｔＲＩＩポリペプチド；ｉｉｉ）１つまたは複数の低分子ＡｃｔＲＩＩアンタゴニスト；ｉｖ）１つまたは複数のポリヌクレオチドＡｃｔＲＩＩアンタゴニスト；ｖ）１つまたは複数のフォリスタチンポリペプチド；および／またはｖｉ）１つまたは複数のＦＬＲＧポリペプチドと組み合わせて使用することができる。
【０２２０】
Ｄ．低分子アンタゴニスト
別の態様では、本発明の開示は、ＡｃｔＲＩＩ活性に拮抗する（例えば、Ｓｍａｄ１、２、３、５、および８を介したＡｃｔＲＩＩシグナル伝達の阻害）低分子または低分子の組み合わせに関する。特に、本開示は、それを必要とする患者において、眼の血管障害［例えば、黄斑変性症（例えば、加齢性黄斑変性症、若年性黄斑変性症、滲出型黄斑変性症、萎縮型黄斑変性症、シュタルガルト病、およびベスト病）、網膜静脈閉塞症（例えば、網膜中心静脈閉塞症、半側網膜静脈閉塞症、網膜静脈分枝閉塞症、網膜静脈閉塞症後の黄斑浮腫、および虚血性網膜静脈閉塞症）、網膜動脈閉塞症（例えば、網膜中心動脈閉塞症、半側網膜動脈閉塞症、網膜動脈分枝閉塞症、および虚血性網膜動脈閉塞症）、糖尿病性網膜症、糖尿病黄斑浮腫、虚血性視神経症［例えば、前部虚血性視神経症（動脈炎性および非動脈炎性）および後部虚血性視神経症］、黄斑部毛細血管拡張症（Ｉ型またはＩＩ型）、網膜虚血（例えば、急性網膜虚血または慢性網膜虚血）、眼虚血性症候群、網膜血管炎、および未熟児網膜症］を処置または予防するために；それを必要とする眼の血管障害を有する患者において視覚を増加させる（例えば、視力を増加させる、および／または視野を増加させる）ために；および／または眼の血管障害の１つまたは複数の合併症を処置または予防するために、ＡｃｔＲＩＩの、低分子アンタゴニスト（阻害剤）または低分子アンタゴニストの組み合わせを、単独で、または１つまたは複数の追加の支持療法と組み合わせて使用する方法を提供する。
【０２２１】
一部の実施形態では、本発明の開示の好ましいＡｃｔＲＩＩアンタゴニストは、少なくともＧＤＦ１１活性を阻害する低分子アンタゴニストまたは低分子アンタゴニストの組み合わせである。一部の実施形態では、本発明の開示の好ましいＡｃｔＲＩＩアンタゴニストは、少なくともＧＤＦ８活性を阻害する低分子アンタゴニストまたは低分子アンタゴニストの組み合わせである。一部の実施形態では、本発明の開示の好ましいＡｃｔＲＩＩアンタゴニストは、少なくともＧＤＦ３活性を阻害する低分子アンタゴニストまたは低分子アンタゴニストの組み合わせである。一部の実施形態では、本発明の開示の好ましいＡｃｔＲＩＩアンタゴニストは、少なくともＢＭＰ６活性を阻害する低分子アンタゴニストまたは低分子アンタゴニストの組み合わせである。一部の実施形態では、本発明の開示の好ましいＡｃｔＲＩＩアンタゴニストは、少なくともＢＭＰ９活性を阻害する低分子アンタゴニストまたは低分子アンタゴニストの組み合わせである。代替的に、他の実施形態では、本発明の開示の好ましい低分子ＡｃｔＲＩＩアンタゴニストは、ＢＭＰ９活性を阻害しない。一部の実施形態では、本発明の開示の好ましいＡｃｔＲＩＩアンタゴニストは、少なくともＢＭＰ１０活性を阻害する低分子アンタゴニストまたは低分子アンタゴニストの組み合わせである。代替的に、他の実施形態では、本発明の開示の好ましい低分子ＡｃｔＲＩＩアンタゴニストは、ＢＭＰ１０活性を阻害しない。一部の実施形態では、本発明の開示の好ましいＡｃｔＲＩＩアンタゴニストは、少なくともアクチビン（例えば、アクチビンＡ、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、アクチビンＣ、およびアクチビンＥ）活性を阻害する低分子アンタゴニストまたは低分子アンタゴニストの組み合わせである。一部の実施形態では、本発明の開示の好ましいＡｃｔＲＩＩアンタゴニストは、少なくともアクチビン（例えば、アクチビンＡ、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、アクチビンＣ、およびアクチビンＥ）活性を阻害する低分子アンタゴニストまたは低分子アンタゴニストの組み合わせである。一部の実施形態では、本発明の開示の好ましいＡｃｔＲＩＩアンタゴニストは、少なくともアクチビンＢ活性を阻害する低分子アンタゴニストまたは低分子アンタゴニストの組み合わせである。一部の実施形態では、本発明の好ましい低分子ＡｃｔＲＩＩアンタゴニストは、アクチビンＢ活性を阻害しない。
【０２２２】
一部の実施形態では、本発明の開示の好ましいＡｃｔＲＩＩアンタゴニストは、少なくともＧＤＦ１１およびＧＤＦ８活性を阻害する低分子アンタゴニストまたは低分子アンタゴニストの組み合わせである。一部の実施形態では、ＧＤＦ１１および／またはＧＤＦ８活性を阻害する、本発明の開示の低分子アンタゴニストまたは低分子アンタゴニストの組み合わせは、アクチビン（例えば、アクチビンＡ、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、アクチビンＣ、アクチビンＥ）をさらに阻害する。一部の実施形態では、ＧＤＦ１１、ＧＤＦ８、および／またはアクチビン活性を阻害する、本発明の開示の低分子アンタゴニストまたは低分子アンタゴニストの組み合わせは、ＢＭＰ６をさらに阻害する。一部の実施形態では、ＧＤＦ１１、ＧＤＦ８、アクチビン、および／またはＢＭＰ６活性を阻害する、本発明の開示の低分子アンタゴニストまたは低分子アンタゴニストの組み合わせは、ＧＤＦ３をさらに阻害する。一部の実施形態では、ＧＤＦ１１、ＧＤＦ８、アクチビン、ＢＭＰ６、および／またはＧＤＦ３活性を阻害する、本発明の開示の低分子アンタゴニストまたは低分子アンタゴニストの組み合わせは、ＢＭＰ１０をさらに阻害する。一部の実施形態では、ＧＤＦ１１、ＧＤＦ８、アクチビン、ＢＭＰ６、ＧＤＦ３、および／またはＢＭＰ１０活性を阻害する、本発明の開示の低分子アンタゴニストまたは低分子アンタゴニストの組み合わせは、ＢＭＰ９をさらに阻害する。一部の実施形態では、ＧＤＦ１１、ＧＤＦ８、アクチビン、ＢＭＰ６、ＧＤＦ３、ＢＭＰ９、および／またはＢＭＰ１０活性を阻害する、本発明の開示の低分子アンタゴニストまたは低分子アンタゴニストの組み合わせは、アクチビンＡを阻害しない。
【０２２３】
一部の実施形態では、本発明の開示の低分子アンタゴニストまたは低分子アンタゴニストの組み合わせは、ＡｃｔＲＩＩ受容体（例えばＡｃｔＲＩＩ媒介Ｓｍａｄ１、２、３、５、および８シグナル伝達）を阻害する。例えば、一部の実施形態では、本開示の低分子アンタゴニストまたは低分子アンタゴニストの組み合わせは、ＧＤＦ１１が、ＡｃｔＲＩＩ受容体（ＡｃｔＲＩＩＡおよび／またはＡｃｔＲＩＩＢ）に結合し、かつ／またはこれを活性化することを阻害する。一部の実施形態では、本開示の低分子アンタゴニストまたは低分子アンタゴニストの組み合わせは、ＧＤＦ８が、ＡｃｔＲＩＩ受容体に結合し、かつ／またはこれを活性化することを阻害する。一部の実施形態では、本開示の低分子アンタゴニストまたは低分子アンタゴニストの組み合わせは、ＧＤＦ１１およびＧＤＦ８が、ＡｃｔＲＩＩ受容体に結合し、かつ／またはこれを活性化することを阻害する。一部の実施形態では、ＧＤＦ１１および／またはＧＤＦ８のＡｃｔＲＩＩ受容体への結合および／またはその活性化を阻害する低分子アンタゴニストまたは低分子アンタゴニストの組み合わせは、アクチビン（例えば、アクチビンＡ、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、アクチビンＣ、および／またはアクチビンＥ）が、ＡｃｔＲＩＩ受容体に結合し、かつ／またはこれを活性化することをさらに阻害する。一部の実施形態では、ＧＤＦ１１および／またはＧＤＦ８のＡｃｔＲＩＩ受容体への結合および／またはその活性化を阻害する低分子アンタゴニストまたは低分子アンタゴニストの組み合わせは、ＢＭＰ６が、ＡｃｔＲＩＩ受容体に結合し、かつ／またはこれを活性化することをさらに阻害する。一部の実施形態では、ＧＤＦ１１および／またはＧＤＦ８のＡｃｔＲＩＩ受容体への結合および／またはその活性化を阻害する低分子アンタゴニストまたは低分子アンタゴニストの組み合わせは、ＢＭＰ１０が、ＡｃｔＲＩＩ受容体に結合し、かつ／またはこれを活性化することをさらに阻害する。一部の実施形態では、ＧＤＦ１１および／またはＧＤＦ８のＡｃｔＲＩＩ受容体への結合および／またはその活性化を阻害する低分子アンタゴニストまたは低分子アンタゴニストの組み合わせは、ＢＭＰ６およびＢＭＰ１０が、ＡｃｔＲＩＩ受容体に結合し、かつ／またはこれを活性化することをさらに阻害する。一部の実施形態では、ＧＤＦ１１および／またはＧＤＦ８のＡｃｔＲＩＩ受容体への結合および／またはその活性化を阻害する低分子アンタゴニストまたは低分子アンタゴニストの組み合わせは、アクチビン（例えば、アクチビンＢ）およびＢＭＰ６が、ＡｃｔＲＩＩ受容体に結合し、かつ／またはこれを活性化することをさらに阻害する。一部の実施形態では、ＧＤＦ１１および／またはＧＤＦ８のＡｃｔＲＩＩ受容体への結合および／またはその活性化を阻害する低分子アンタゴニストまたは低分子アンタゴニストの組み合わせは、アクチビン（例えば、アクチビンＢ）およびＢＭＰ１０が、ＡｃｔＲＩＩ受容体に結合し、かつ／またはこれを活性化することをさらに阻害する。一部の実施形態では、ＧＤＦ１１および／またはＧＤＦ８のＡｃｔＲＩＩ受容体への結合および／またはその活性化を阻害する低分子アンタゴニストまたは低分子アンタゴニストの組み合わせは、アクチビン（例えば、アクチビンＢ）、ＢＭＰ６、およびＢＭＰ１０が、ＡｃｔＲＩＩ受容体に結合し、かつ／またはこれを活性化することをさらに阻害する。一部の実施形態では、ＧＤＦ１１および／またはＧＤＦ８のＡｃｔＲＩＩ受容体への結合および／またはその活性化を阻害する低分子アンタゴニストまたは低分子アンタゴニストの組み合わせは、アクチビンＡが、ＡｃｔＲＩＩ受容体に結合し、かつ／またはこれを活性化することを阻害しない。
【０２２４】
低分子ＡｃｔＲＩＩアンタゴニストは、直接的または間接的な阻害剤であり得る。例えば、間接的な低分子ＡｃｔＲＩＩアンタゴニストまたは低分子ＡｃｔＲＩＩアンタゴニストの組み合わせは、ＧＤＦ１１、ＧＤＦ８、アクチビン（例えば、アクチビンＡ、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、アクチビンＣ、アクチビンＥ）、ＢＭＰ６、ＧＤＦ３、ＢＭＰ１０、ＡｃｔＲＩＩＡおよび／またはＡｃｔＲＩＩＢの少なくとも１つまたはそれより多くの発現（例えば、転写、翻訳、細胞分泌、またはそれらの組み合わせ）を阻害し得る。代替的に、直接的な低分子ＡｃｔＲＩＩアンタゴニストまたは低分子ＡｃｔＲＩＩアンタゴニストの組み合わせは、例えば、１つまたは複数のリガンド［例えば、ＧＤＦ１１、ＧＤＦ８，ＧＤＦ３、アクチビン（例えば、アクチビンＡ、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、アクチビンＣ、アクチビンＥ）、ＢＭＰ６、および／またはＢＭＰ１０］、受容体（ＡｃｔＲＩＩＡおよび／またはＡｃｔＲＩＩＢ）、またはＡｃｔＲＩＩ−リガンドシグナル伝達経路のシグナル伝達成分（例えば、Ｓｍａｄ１、２、３、５、および８の１つまたは複数）に直接的に結合し得る。１つまたは複数の間接的な低分子ＡｃｔＲＩＩアンタゴニスト、および１つまたは複数の直接的な低分子ＡｃｔＲＩＩアンタゴニストの組み合わせは、本明細書で開示された方法に従って使用することができる。
【０２２５】
本開示の結合有機低分子アンタゴニストは、公知の方法を使用して、同定し、化学合成することができる（例えば、ＰＣＴ公開第ＷＯ００／００８２３号および同第ＷＯ００／３９５８５号を参照されたい）。一般に、本開示の低分子アンタゴニストは、通常約２０００ダルトン未満のサイズであり、代替的に、約１５００、７５０、５００、２５０、または２００ダルトン未満のサイズであり、ここで、このような有機低分子は、本明細書で記載されるポリペプチド（例えば、ＧＤＦ１１、ＧＤＦ８、ＡｃｔＲＩＩＡおよびＡｃｔＲＩＩＢ）に、好ましくは、特異的に結合することが可能である。このような低分子アンタゴニストは、不要な実験を行わず、周知の技法を使用して同定することができる。これに関して、当該分野では、ポリペプチド標的に特異的に結合することが可能な分子について、有機低分子ライブラリーをスクリーニングするための技法が周知であることに留意されたい（例えば、国際特許公開第ＷＯ００／００８２３号および同第ＷＯ００／３９５８５号を参照されたい）。
【０２２６】
本開示の結合有機低分子は、例えば、アルデヒド、ケトン、オキシム、ヒドラゾン、セミカルバゾン、カルバジド、一級アミン、二級アミン、三級アミン、Ｎ置換ヒドラジン、ヒドラジド、アルコール、エーテル、チオール、チオエーテル、ジスルフィド、カルボン酸、エステル、アミド、尿素、カルバメート、カーボネート、ケタール、チオケタール、アセタール、チオアセタール、アリールハロゲン化物、アリールスルホネート、アルキルハロゲン化物、アルキルスルホネート、芳香族化合物、複素環化合物、アニリン、アルケン、アルキン、ジオール、アミノアルコール、オキサゾリジン、オキサゾリン、チアゾリジン、チアゾリン、エナミン、スルホンアミド、エポキシド、アジリジン、イソシアネート、スルホニル塩化物、ジアゾ化合物、および酸塩化物であり得る。
【０２２７】
本明細書で開示された低分子ＡｃｔＲＩＩアンタゴニスト（例えば、ＧＤＦ１１、ＧＤＦ８、ＧＤＦ３、アクチビンＡ、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、アクチビンＣ、アクチビンＥ、ＢＭＰ６、ＢＭＰ１０、ＡｃｔＲＩＩＡ、および／またはＡｃｔＲＩＩＢの１つまたは複数の低分子アンタゴニスト）のいずれかを、１つまたは複数の追加のＡｃｔＲＩＩアンタゴニスト作用因子と組み合わせて、所望の効果を達成する［例えば、それを必要とする患者において眼の血管障害を処置または予防する；それを必要とする眼の血管障害を有する患者において視覚を増加させる（例えば、視力を増加させる、および／または視野を増加させる）；および／または眼の血管障害の１つまたは複数の合併症を処置または予防する］ことができる。例えば、低分子ＡｃｔＲＩＩアンタゴニストは、ｉ）１つまたは複数の追加の低分子ＡｃｔＲＩＩアンタゴニスト、ｉｉ）本明細書で開示された１つまたは複数のＡｃｔＲＩＩアンタゴニスト抗体；ｉｉｉ）１つまたは複数のＡｃｔＲＩＩポリペプチド；ｉｖ）１つまたは複数のポリヌクレオチドＡｃｔＲＩＩアンタゴニスト；ｖ）１つまたは複数のフォリスタチンポリペプチド；および／またはｖｉ）１つまたは複数のＦＬＲＧポリペプチドと組み合わせて使用することができる。
【０２２８】
Ｅ．アンタゴニストポリヌクレオチド
別の態様では、本発明の開示は、ＡｃｔＲＩＩ活性に拮抗する（例えば、Ｓｍａｄ１、２、３、５、および８を介したＡｃｔＲＩＩシグナル伝達の阻害）ポリヌクレオチドまたはポリヌクレオチドの組み合わせに関する。特に、本開示は、それを必要とする患者において、眼の血管障害［例えば、黄斑変性症（例えば、加齢性黄斑変性症、若年性黄斑変性症、滲出型黄斑変性症、萎縮型黄斑変性症、シュタルガルト病、およびベスト病）、網膜静脈閉塞症（例えば、網膜中心静脈閉塞症、半側網膜静脈閉塞症、網膜静脈分枝閉塞症、網膜静脈閉塞症後の黄斑浮腫、および虚血性網膜静脈閉塞症）、網膜動脈閉塞症（例えば、網膜中心動脈閉塞症、半側網膜動脈閉塞症、網膜動脈分枝閉塞症、および虚血性網膜動脈閉塞症）、糖尿病性網膜症、糖尿病黄斑浮腫、虚血性視神経症［例えば、前部虚血性視神経症（動脈炎性および非動脈炎性）および後部虚血性視神経症］、黄斑部毛細血管拡張症（Ｉ型またはＩＩ型）、網膜虚血（例えば、急性網膜虚血または慢性網膜虚血）、眼虚血性症候群、網膜血管炎、および未熟児網膜症］を処置または予防するために、それを必要とする眼の血管障害を有する患者において視覚を増加させる（例えば、視力および／または視野を増加させる）ために、および／または眼の血管障害の１つまたは複数の合併症を処置または予防するために、ポリヌクレオチドＡｃｔＲＩＩアンタゴニストまたはポリヌクレオチドＡｃｔＲＩＩアンタゴニストの組み合わせを、単独で、または１つまたは複数の追加の支持療法と組み合わせて使用する方法を提供する。
【０２２９】
一部の実施形態では、本発明の開示のポリヌクレオチドＡｃｔＲＩＩアンタゴニストまたはポリヌクレオチドＡｃｔＲＩＩアンタゴニストの組み合わせを使用して、ＧＤＦ１１の活性および／または発現（例えば、転写、翻訳、分泌、またはそれらの組み合わせ）を阻害することができる。一部の実施形態では、本発明の開示のポリヌクレオチドＡｃｔＲＩＩアンタゴニストまたはポリヌクレオチドＡｃｔＲＩＩアンタゴニストの組み合わせを使用して、ＧＤＦ８の活性および／または発現を阻害することができる。一部の実施形態では、本発明の開示のポリヌクレオチドＡｃｔＲＩＩアンタゴニストまたはポリヌクレオチドＡｃｔＲＩＩアンタゴニストの組み合わせを使用して、ＧＤＦ３の活性および／または発現を阻害することができる。一部の実施形態では、本発明の開示のポリヌクレオチドＡｃｔＲＩＩアンタゴニストまたはポリヌクレオチドＡｃｔＲＩＩアンタゴニストの組み合わせを使用して、ＢＭＰ６の活性および／または発現を阻害することができる。一部の実施形態では、本発明の開示のポリヌクレオチドＡｃｔＲＩＩアンタゴニストまたはポリヌクレオチドＡｃｔＲＩＩアンタゴニストの組み合わせを使用して、ＢＭＰ９の活性および／または発現を阻害することができる。代替的に、他の実施形態では、本発明の開示のポリヌクレオチドＡｃｔＲＩＩアンタゴニストまたはポリヌクレオチドＡｃｔＲＩＩアンタゴニストの組み合わせは、ＢＭＰ９の活性および／または発現を阻害しない。一部の実施形態では、本発明の開示のポリヌクレオチドＡｃｔＲＩＩアンタゴニストまたはポリヌクレオチドＡｃｔＲＩＩアンタゴニストの組み合わせを使用して、ＢＭＰ１０の活性および／または発現を阻害することができる。代替的に、他の実施形態では、本発明の開示のポリヌクレオチドＡｃｔＲＩＩアンタゴニストまたはポリヌクレオチドＡｃｔＲＩＩアンタゴニストの組み合わせは、ＢＭＰ１０の活性および／または発現を阻害しない。一部の実施形態では、本発明の開示のポリヌクレオチドＡｃｔＲＩＩアンタゴニストまたはポリヌクレオチドＡｃｔＲＩＩアンタゴニストの組み合わせを使用して、アクチビン（例えば、アクチビンＡ、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、アクチビンＣ、およびアクチビンＥ）の活性および／または発現を阻害することができる。一部の実施形態では、本発明の開示のポリヌクレオチドＡｃｔＲＩＩアンタゴニストまたはポリヌクレオチドＡｃｔＲＩＩアンタゴニストの組み合わせを使用して、アクチビンＢの活性および／または発現を阻害することができる。一部の実施形態では、本発明の開示のポリヌクレオチドＡｃｔＲＩＩアンタゴニストまたはポリヌクレオチドＡｃｔＲＩＩアンタゴニストの組み合わせは、アクチビンＡの活性および／または発現を阻害しない。一部の実施形態では、本発明の開示のポリヌクレオチドＡｃｔＲＩＩアンタゴニストまたはポリヌクレオチドＡｃｔＲＩＩアンタゴニストの組み合わせは、アクチビンＢの活性および／または発現を阻害するのに使用することができるが、アクチビンＡの活性および／または発現を阻害しない。
【０２３０】
一部の実施形態では、本発明の開示のポリヌクレオチドＡｃｔＲＩＩアンタゴニストまたはポリヌクレオチドＡｃｔＲＩＩアンタゴニストの組み合わせを使用して、ＧＤＦ１１およびＧＤＦ８の活性および／または発現を阻害することができる。一部の実施形態では、ＧＤＦ１１および／またはＧＤＦ８の活性および／または発現を阻害する、ポリヌクレオチドＡｃｔＲＩＩアンタゴニストまたはポリヌクレオチドＡｃｔＲＩＩアンタゴニストの組み合わせは、アクチビン（例えば、アクチビンＡ、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、アクチビンＣ、および／またはアクチビンＥ）の活性および／または発現をさらに阻害する。一部の実施形態では、ＧＤＦ１１、ＧＤＦ８、および／またはアクチビンの活性および／または発現を阻害するポリヌクレオチドＡｃｔＲＩＩアンタゴニストまたはポリヌクレオチドＡｃｔＲＩＩアンタゴニストの組み合わせは、ＢＭＰ６の活性および／または発現をさらに阻害する。一部の実施形態では、ＧＤＦ１１、ＧＤＦ８、アクチビン、および／またはＢＭＰ６の活性および／または発現を阻害するポリヌクレオチドＡｃｔＲＩＩアンタゴニストまたはポリヌクレオチドＡｃｔＲＩＩアンタゴニストの組み合わせは、ＧＤＦ３の活性および／または発現をさらに阻害する。一部の実施形態では、ＧＤＦ１１、ＧＤＦ８、アクチビン、ＢＭＰ６、および／またはＧＤＦ３の活性および／または発現を阻害するポリヌクレオチドＡｃｔＲＩＩアンタゴニストまたはポリヌクレオチドＡｃｔＲＩＩアンタゴニストの組み合わせは、ＢＭＰ１０の活性および／または発現をさらに阻害する。一部の実施形態では、ＧＤＦ１１、ＧＤＦ８、アクチビン、ＢＭＰ６、ＧＤＦ３、および／またはＢＭＰ１０の活性および／または発現を阻害するポリヌクレオチドＡｃｔＲＩＩアンタゴニストまたはポリヌクレオチドＡｃｔＲＩＩアンタゴニストの組み合わせは、ＢＭＰ９の活性および／または発現をさらに阻害する。一部の実施形態では、ＧＤＦ１１、ＧＤＦ８、アクチビンＢ、ＢＭＰ６、ＧＤＦ３、ＢＭＰ９、および／またはＢＭＰ１０の活性および／または発現を阻害するポリヌクレオチドＡｃｔＲＩＩアンタゴニストまたはポリヌクレオチドＡｃｔＲＩＩアンタゴニストの組み合わせは、アクチビンＡの活性および／または発現を阻害しない。一部の実施形態では、ＧＤＦ１１、ＧＤＦ８、アクチビンＢ、ＢＭＰ６、ＧＤＦ３、および／またはＢＭＰ１０の活性および／または発現を阻害するポリヌクレオチドＡｃｔＲＩＩアンタゴニストまたはポリヌクレオチドＡｃｔＲＩＩアンタゴニストの組み合わせは、アクチビンＡまたはＢＭＰ９の活性および／または発現を阻害しない。一部の実施形態では、ＧＤＦ１１、ＧＤＦ８、アクチビンＢ、ＢＭＰ６、および／またはＧＤＦ３の活性および／または発現を阻害するポリヌクレオチドＡｃｔＲＩＩアンタゴニストまたはポリヌクレオチドＡｃｔＲＩＩアンタゴニストの組み合わせは、アクチビンＡ、ＢＭＰ９、またはＢＭＰ１０の活性および／または発現を阻害しない。
【０２３１】
一部の実施形態では、本開示のポリヌクレオチドアンタゴニストまたはポリヌクレオチドアンタゴニストの組み合わせは、ＡｃｔＲＩＩ（ＡｃｔＲＩＩＡおよび／またはＡｃｔＲＩＩＢ）の活性および／または発現（例えば、転写、翻訳、分泌、またはそれらの組み合わせ）を阻害する。一部の実施形態では、ＡｃｔＲＩＩの活性および／または発現を阻害する、本開示のポリヌクレオチドアンタゴニストまたはポリヌクレオチドアンタゴニストの組み合わせは、リガンド（例えば、アクチビンＡ、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、アクチビンＣ、アクチビンＥ、ＢＭＰ６、ＢＭＰ９、ＧＤＦ１１、ＧＤＦ８、およびＢＭＰ１０）の１つまたは複数の活性およびまたは発現をさらに阻害することができる。一部の実施形態では、ＡｃｔＲＩＩの活性および／または発現を阻害する、本開示のポリヌクレオチドアンタゴニストまたはポリヌクレオチドアンタゴニストの組み合わせは、アクチビンＡの活性およびまたは発現を阻害しない。
【０２３２】
本開示のポリヌクレオチドアンタゴニストは、アンチセンス核酸、ＲＮＡｉ分子［例えば、低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）、低分子ヘアピンＲＮＡ（ｓｈＲＮＡ）、マイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）］、アプタマーおよび／またはリボザイムであり得る。当該分野では、ヒトＧＤＦ１１、ＧＤＦ８、アクチビンＡ、アクチビンＢ、アクチビンＣ、アクチビンＥ、ＢＭＰ６、ＢＭＰ１０、ＡｃｔＲＩＩＡおよびＡｃｔＲＩＩＢの核酸配列およびアミノ酸配列が公知であり、したがって、本開示の方法に従う使用のためのポリヌクレオチドアンタゴニストは、当該分野における知見および本明細書で提供される教示に基づき、当業者が慣習的に作製することができる。
【０２３３】
例えば、アンチセンス技術は、アンチセンスＤＮＡもしくはアンチセンスＲＮＡ、または三重螺旋形成を介して、遺伝子発現を制御するのに使用することができる。アンチセンス法は、例えば、Ｏｋａｎｏ（１９９１年）、Ｊ．  Ｎｅｕｒｏｃｈｅｍ．、５６巻：５６０頁；Ｏｌｉｇｏｄｅｏｘｙｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ  ａｓ  Ａｎｔｉｓｅｎｓｅ  Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ  ｏｆ  Ｇｅｎｅ  Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ、ＣＲＣ  Ｐｒｅｓｓ、Ｂｏｃａ  Ｒａｔｏｎ、Ｆｌａ．（１９８８年）において論じられている。三重螺旋形成は、例えば、Ｃｏｏｎｅｙら（１９８８年）、Ｓｃｉｅｎｃｅ、２４１巻：４５６頁；およびＤｅｒｖａｎら、（１９９１年）、Ｓｃｉｅｎｃｅ、２５１巻：１３００頁において論じられている。方法は、ポリヌクレオチドの、相補性ＤＮＡまたはＲＮＡへの結合に基づく。一部の実施形態では、アンチセンス核酸は、望ましい遺伝子のＲＮＡ転写物の少なくとも一部に相補的な一本鎖ＲＮＡ配列または一本鎖ＤＮＡ配列を含む。しかし、絶対的な相補性は、好ましいが、必要ではない。
【０２３４】
本明細書で言及される「ＲＮＡの少なくとも一部に相補的な」配列とは、ＲＮＡとハイブリダイズし、安定的な二重鎖を形成することが可能であるのに十分な相補性を有する配列を意味し、したがって、本明細書で開示される遺伝子の二本鎖アンチセンス核酸の場合、二重鎖ＤＮＡの一本鎖を試験してもよく、三重鎖形成をアッセイしてもよい。ハイブリダイズする能力は、アンチセンス核酸の相補性の程度および長さの両方に依存する。一般に、ハイブリダイズさせる核酸が大型であるほど、それが含有し得るＲＮＡとの塩基のミスマッチも多くなるが、なおも安定的な二重鎖（または、場合に応じて、三重鎖）を形成する。当業者は、ハイブリダイズした複合体の融点を決定する標準的な手順の使用により、ミスマッチの許容可能な程度を確認することができる。
【０２３５】
メッセージの５’末端、例えば、ＡＵＧ開始コドンまでの５’側非翻訳配列であって、ＡＵＧ開始コドンを含む５’側非翻訳配列に相補的なポリヌクレオチドは、翻訳を阻害するのに最も効率的に働くはずである。しかし、ｍＲＮＡの３’側非翻訳配列に対する配列相補性もまた、ｍＲＮＡの翻訳を阻害するのに効果的であることが示されている［例えば、Ｗａｇｎｅｒ，  Ｒ．、（１９９４年）、Ｎａｔｕｒｅ、３７２巻：３３３〜３３５頁を参照されたい］。したがって、本開示の遺伝子の非コード領域である、５’側または３’側の非翻訳領域に相補的なオリゴヌクレオチドは、内因性ｍＲＮＡの翻訳を阻害するアンチセンスアプローチにおいて使用し得る。ｍＲＮＡの５’側非翻訳領域に相補的なポリヌクレオチドは、ＡＵＧ開始コドンの相補体を含むべきである。ｍＲＮＡコード領域に相補的なアンチセンスポリヌクレオチドは、翻訳のそれほど効率的な阻害剤ではないが、本開示の方法に従い使用し得る。本開示のｍＲＮＡの５’側非翻訳領域、３’側非翻訳領域、またはコード領域のいずれにハイブリダイズするようにデザインされている場合でも、アンチセンス核酸は、少なくとも６ヌクレオチドの長さであるべきであり、好ましくは、６〜約５０ヌクレオチドの範囲の長さのオリゴヌクレオチドである。具体的な態様では、オリゴヌクレオチドは、少なくとも１０ヌクレオチド、少なくとも１７ヌクレオチド、少なくとも２５ヌクレオチド、または少なくとも５０ヌクレオチドである。
【０２３６】
一実施形態では、本開示のアンチセンス核酸は、外因性配列からの転写により、細胞内で生成される。例えば、ベクターまたはその一部は、転写され、本開示の遺伝子のアンチセンス核酸（ＲＮＡ）を生成する。このようなベクターは、所望のアンチセンス核酸をコードする配列を含有する。このようなベクターは、所望のアンチセンスＲＮＡを生成するように転写され得る限りにおいて、エピソームにとどまってもよく、染色体に組み込まれてもよい。このようなベクターは、当該分野で標準的な組換えＤＮＡ法により構築することができる。ベクターは、プラスミドベクターでもよく、ウイルスベクターでもよく、または当該分野で公知の他のベクターであって、脊椎動物細胞内の複製および発現のために使用されるベクターでもよい。本開示の所望の遺伝子またはこれらのフラグメントをコードする配列の発現は、脊椎動物細胞内、好ましくは、ヒト細胞内で作用することが当該分野で公知の任意のプロモーターによるものであり得る。このようなプロモーターは、誘導性であっても、恒常的であってもよい。このようなプロモーターとして、ＳＶ４０初期プロモーター領域［例えば、ＢｅｎｏｉｓｔおよびＣｈａｍｂｏｎ（１９８１年）、Ｎａｔｕｒｅ、２９巻：３０４〜３１０頁を参照されたい］、ラウス肉腫ウイルスの３’側長末端リピート内に含有されるプロモーター［例えば、Ｙａｍａｍｏｔｏら（１９８０年）、Ｃｅｌｌ、２２巻：７８７〜７９７頁を参照されたい］、ヘルペスチミジンプロモーター［例えば、Ｗａｇｎｅｒら（１９８１年）、Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  Ｕ．Ｓ．Ａ．、７８巻：１４４１〜１４４５頁を参照されたい］、およびメタロチオネイン遺伝子の調節配列［例えば、Ｂｒｉｎｓｔｅｒら（１９８２年）、Ｎａｔｕｒｅ、２９６巻：３９〜４２頁を参照されたい］が挙げられるがこれらに限定されない。
【０２３７】
一部の実施形態では、ポリヌクレオチドアンタゴニストは、１つまたは複数の遺伝子の発現を標的化する干渉ＲＮＡまたはＲＮＡｉ分子である。ＲＮＡｉとは、標的化されるｍＲＮＡの発現に干渉するＲＮＡの発現を指す。具体的には、ＲＮＡｉは、ｓｉＲＮＡ（低分子干渉ＲＮＡ）を介する特異的ｍＲＮＡとの相互作用により、標的化される遺伝子をサイレンシングする。次いで、ｄｓＲＮＡ複合体が、細胞による分解の標的化される。ｓｉＲＮＡ分子は、１０〜５０ヌクレオチドの長さの二本鎖ＲＮＡ二重鎖であり、十分に相補的な標的遺伝子（例えば、遺伝子に少なくとも８０％の同一性）の発現に干渉する。一部の実施形態では、ｓｉＲＮＡ分子は、標的遺伝子のヌクレオチド配列に少なくとも８５、９０、９５、９６、９７、９８、９９、または１００％同一であるヌクレオチド配列を含む。
【０２３８】
追加のＲＮＡｉ分子として、短鎖ヘアピンＲＮＡ（ｓｈＲＮＡ）が挙げられ、また、短鎖干渉ヘアピンおよびマイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）が挙げられる。ｓｈＲＮＡ分子は、ループにより接続された、標的遺伝子に由来するセンス配列とアンチセンス配列とを含有する。ｓｈＲＮＡは、核から細胞質に輸送され、ｍＲＮＡと共に分解される。Ｐｏｌ  ＩＩＩプロモーターまたはＵ６プロモーターを使用して、ＲＮＡｉのためのＲＮＡを発現させることができる。Ｐａｄｄｉｓｏｎら［Ｇｅｎｅｓ  ＆  Ｄｅｖ．（２００２年）、１６巻：９４８〜９５８頁、２００２年］は、ＲＮＡｉを実行する手段としてヘアピンに折り畳まれた低分子ＲＮＡ分子を使用している。したがって、このような短鎖ヘアピンＲＮＡ（ｓｈＲＮＡ）分子はまた、本明細書で記載される方法においても有利に使用される。機能的なｓｈＲＮＡのステムおよびループの長さは、サイレンシング活性に影響を及ぼさずに変化し、ステム長は、約２５〜約３０ｎｔのいずれかの範囲であることが可能であり、ループサイズは、４〜約２５ｎｔの間の範囲であり得る。いかなる特定の理論に束縛されることも望まないが、これらのｓｈＲＮＡは、ＤＩＣＥＲ  ＲＮａｓｅの二本鎖ＲＮＡ（ｄｓＲＮＡ）産物に相似し、いずれにせよ、特異的遺伝子の発現を阻害するための同じ能力を有すると考えられる。ｓｈＲＮＡは、レンチウイルスベクターから発現させることができる。ｍｉＲＮＡは、約１０〜７０ヌクレオチドの長さの一本鎖ＲＮＡであり、「ステムループ」構造を特徴とするｐｒｅ−ｍｉＲＮＡとして最初に転写され、その後、ＲＩＳＣを介するさらなるプロセシングの後で、成熟ｍｉＲＮＡにプロセシングされる。
【０２３９】
ｓｉＲＮＡを含むがこれに限定せず、ＲＮＡｉを媒介する分子は、インビトロで、化学合成（Ｈｏｈｊｏｈ、ＦＥＢＳ  Ｌｅｔｔ、５２１巻：１９５〜１９９頁、２００２年）、ｄｓＲＮＡの加水分解（Ｙａｎｇら、Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ、９９巻：９９４２〜９９４７頁、２００２年）、Ｔ７  ＲＮＡポリメラーゼによるインビトロ転写（Ｄｏｎｚｅｅｔら、Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ、３０巻：ｅ４６頁、２００２年；Ｙｕら、Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ、９９巻：６０４７〜６０５２頁、２００２年）、およびＥ．ｃｏｌｉ  ＲＮアーゼＩＩＩなどのヌクレアーゼを使用する二本鎖ＲＮＡの加水分解（Ｙａｎｇら、Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ、９９巻：９９４２〜９９４７頁、２００２年）によって生成することができる。
【０２４０】
別の態様に従うと、本開示は、デコイＤＮＡ、二本鎖ＤＮＡ、一本鎖ＤＮＡ、複合体化ＤＮＡ、封入型ＤＮＡ、ウイルスＤＮＡ、プラスミドＤＮＡ、ネイキッドＲＮＡ、封入型ＲＮＡ、ウイルスＲＮＡ、二本鎖ＲＮＡ、ＲＮＡ干渉をもたらすことが可能な分子、またはこれらの組み合わせを含むがこれらに限定されないポリヌクレオチドアンタゴニストを提供する。
【０２４１】
一部の実施形態では、本開示のポリヌクレオチドアンタゴニストは、アプタマーである。アプタマーは、二本鎖ＤＮＡ分子および一本鎖ＲＮＡ分子を含む核酸分子であって、ＧＤＦ１１、ＧＤＦ８、アクチビンＡ、アクチビンＢ、アクチビンＣ、アクチビンＥ、ＢＭＰ６、ＢＭＰ７、Ｎｏｄａｌ、ＡｃｔＲＩＩＡおよびＡｃｔＲＩＩＢのポリペプチドなど、標的分子に特異的に結合する三次構造に結合し、これを形成する核酸分子である。当該分野では、アプタマーの生成および治療的使用が、十分に確立されている。例えば、米国特許第５，４７５，０９６号を参照されたい。アプタマーについての追加の情報は、米国特許出願公開第２００６０１４８７４８号において見出すことができる。核酸アプタマーは、当該分野で公知の方法を使用して、例えば、ＳＥＬＥＸ（Ｓｙｓｔｅｍａｔｉｃ  Ｅｖｏｌｕｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｌｉｇａｎｄｓ  ｂｙ  Ｅｘｐｏｎｅｎｔｉａｌ  Ｅｎｒｉｃｈｍｅｎｔ）プロセスを介して選択される。ＳＥＬＥＸは、例えば、米国特許第５，４７５，０９６号、同第５，５８０，７３７号、同第５，５６７，５８８号、同第５，７０７，７９６号、同第５，７６３，１７７号、同第６，０１１，５７７号、および同第６，６９９，８４３号において記載されているように、標的分子に高度に特異的に結合する核酸分子のインビトロ進化法である。アプタマーを同定する別のスクリーニング法は、米国特許第５，２７０，１６３号において記載されている。ＳＥＬＥＸプロセスは、単量体であれ、多量体であれ、他の核酸分子およびポリペプチドを含め、事実上任意の化合物に対してリガンドとして作用する（特異的結合対を形成する）ヌクレオチド単量体内で利用可能な二次元構造および三次元構造ならびに化学的多様性を形成する核酸の能力に基づく。任意のサイズまたは組成の分子が、標的として機能し得る。ＳＥＬＥＸ法は、候補オリゴヌクレオチドの混合物からの選択、ならびに結合、区分、および増幅の段階的反復を伴い、同じ一般的な選択スキームを使用して、所望の結合アフィニティーおよび選択性を達成する。ランダム化された配列のセグメントを含み得る核酸の混合物から始めて、ＳＥＬＥＸ法は、混合物を結合に好適な条件下で標的と接触させる工程と；非結合核酸を標的分子に特異的に結合した核酸から区分する工程と；核酸−標的複合体を解離させる工程と；核酸−標的複合体から解離させた核酸を増幅して、リガンド濃縮された核酸混合物をもたらす工程とを含む。結合させる工程と、区分する工程と、解離させる工程と、増幅する工程を、所望の回数のサイクルにわたり繰り返して、標的分子に対する高度に特異的な高アフィニティーの核酸リガンドをもたらす。
【０２４２】
典型的に、このような結合分子は、動物に別個に投与される［例えば、Ｏ’Ｃｏｎｎｏｒ（１９９１年）、Ｊ．  Ｎｅｕｒｏｃｈｅｍ．、５６巻：５６０頁を参照されたい］が、このような結合分子はまた、宿主細胞により取り込まれたポリヌクレオチドからインビボで発現させることもでき、インビボで発現させることができる［例えば、Ｏｌｉｇｏｄｅｏｘｙｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ  ａｓ  Ａｎｔｉｓｅｎｓｅ  Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ  ｏｆ  Ｇｅｎｅ  Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ、ＣＲＣ  Ｐｒｅｓｓ、Ｂｏｃａ  Ｒａｔｏｎ、Ｆｌａ．（１９８８年）を参照されたい］。
【０２４３】
本明細書で開示されたポリヌクレオチドＡｃｔＲＩＩアンタゴニスト（例えば、ＧＤＦ１１、ＧＤＦ８、ＧＤＦ３、アクチビンＡ、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、アクチビンＣ、アクチビンＥ、ＢＭＰ６、ＢＭＰ１０、ＡｃｔＲＩＩＡ、および／またはＡｃｔＲＩＩＢの１つまたは複数のポリヌクレオチドアンタゴニスト）のいずれかは、１つまたは複数の追加のＡｃｔＲＩＩアンタゴニストと組み合わせて、所望の効果を達成することができる［例えば、それを必要とする患者において眼の血管障害を処置または予防する；それを必要とする眼の血管障害を有する患者において視覚を増加させる（例えば、視力および／または視野を増加させる）、および／または眼の血管障害の１つまたは複数の合併症を処置または予防する］ことができる。例えば、本明細書で開示されたポリヌクレオチドＡｃｔＲＩＩアンタゴニストは、ｉ）１つまたは複数の追加のポリヌクレオチドＡｃｔＲＩＩアンタゴニスト、ｉｉ）１つまたは複数のＡｃｔＲＩＩポリペプチド；ｉｉｉ）１つまたは複数のＡｃｔＲＩＩアンタゴニスト抗体；ｉｖ）１つまたは複数の低分子ＡｃｔＲＩＩアンタゴニスト；ｖ）１つまたは複数のフォリスタチンポリペプチド；および／またはｖｉ）１つまたは複数のＦＬＲＧポリペプチドと組み合わせて使用することができる。
【０２４４】
Ｆ．フォリスタチンおよびＦＬＲＧアンタゴニスト
他の態様では、本明細書で開示された方法に従って使用するためのＡｃｔＲＩＩアンタゴニスト（阻害剤）は、フォリスタチンまたはＦＬＲＧポリペプチドであり、これらを、単独で、または１つまたは複数の追加の支持療法と組み合わせて、それを必要とする患者において、眼の血管障害（例えば、黄斑変性症（例えば、加齢性黄斑変性症、若年性黄斑変性症、滲出型黄斑変性症、萎縮型黄斑変性症、シュタルガルト病、およびベスト病）、網膜静脈閉塞症（例えば、網膜中心静脈閉塞症、半側網膜静脈閉塞症、網膜静脈分枝閉塞症、網膜静脈閉塞症後の黄斑浮腫、および虚血性網膜静脈閉塞症）、網膜動脈閉塞症（例えば、網膜中心動脈閉塞症、半側網膜動脈閉塞症、網膜動脈分枝閉塞症、および虚血性網膜動脈閉塞症）、糖尿病性網膜症、糖尿病黄斑浮腫、虚血性視神経症［例えば、前部虚血性視神経症（動脈炎性および非動脈炎性）および後部虚血性視神経症］、黄斑部毛細血管拡張症（Ｉ型またはＩＩ型）、網膜虚血（例えば、急性網膜虚血または慢性網膜虚血）、眼虚血性症候群、網膜血管炎、および未熟児網膜症）を処置または予防するために；それを必要とする眼の血管障害を有する患者において視覚を増加させる（例えば、視力および／または視野を増加させる）ために、および／または眼の血管障害の１つまたは複数の合併症を処置または予防するために使用してもよい。
【０２４５】
用語「フォリスタチンポリペプチド」は、フォリスタチンの任意の天然に存在するポリペプチドのほか、有用な活性を保持するその任意の改変体（変異体、フラグメント、融合物、およびペプチド模倣物形態を含む）も含むポリペプチドを含み、フォリスタチンの任意の機能的な単量体または多量体もさらに含む。ある特定の好ましい実施形態では、本開示のフォリスタチンポリペプチドは、アクチビン、特に、アクチビンＡに結合し、かつ／またはこれらの活性を阻害する。アクチビンへの結合特性を保持する、フォリスタチンポリペプチドの改変体は、フォリスタチンとアクチビンとの相互作用に関するかつての研究に基づき同定することができる。例えば、ＷＯ２００８／０３０３６７は、アクチビンへの結合に重要であることが示されている、特異的なフォリスタチンドメイン（「ＦＳＤ」）について開示している。下記の配列番号２８〜３０に示される通り、フォリスタチンのＮ末端ドメイン（「ＦＳＮＤ」；配列番号２８）、ＦＳＤ２（配列番号３０）は、フォリスタチン内の例示的なドメインであって、アクチビンへの結合に重要なドメインを表し、程度は劣るが、ＦＳＤ１（配列番号２９）も、フォリスタチン内の例示的なドメインであって、アクチビンへの結合に重要なドメインを表す。加えて、上記では、ＡｃｔＲＩＩポリペプチドの文脈において、ポリペプチドのライブラリーを作製し、これについて調べるための方法についても記載したが、このような方法はまた、フォリスタチンの改変体を作製し、これらについて調べることにも関する。フォリスタチンポリペプチドは、任意の公知のフォリスタチン配列に由来するポリペプチドであって、フォリスタチンポリペプチドの配列に少なくとも約８０％同一である配列を有し、任意選択で、少なくとも８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはこれを超える同一性を有するポリペプチドを含む。フォリスタチンポリペプチドの例は、成熟フォリスタチンポリペプチド、または、例えば、ＷＯ２００５／０２５６０１において記載されている、ヒトフォリスタチン前駆体ポリペプチド（配列番号２６）の短いアイソフォームもしくは他の改変体を含む。
【０２４６】
ヒトフォリスタチン前駆体ポリペプチドのアイソフォームであるＦＳＴ３４４は、以下の通りである。
【化２０】
2018534335.tif 000022
【０２４７】
シグナルペプチドに下線を付す；上記ではまた、このフォリスタチンアイソフォームを、下記に示される短いフォリスタチンアイソフォームであるＦＳＴ３１７から弁別する、Ｃ末端伸長部分を表す最後の２７残基にも下線を付している。
【０２４８】
ヒトフォリスタチン前駆体ポリペプチドのアイソフォームであるＦＳＴ３１７は、以下の通りである。
【化２１】
2018534335.tif 000023
シグナルペプチドに下線を付す。
【０２４９】
フォリスタチンＮ末端ドメイン（ＦＳＮＤ）配列は、以下の通りである。
【化２２】
2018534335.tif 000024
ＦＳＤ１およびＦＳＤ２配列は、以下の通りである。
【化２３】
2018534335.tif 000025
【０２５０】
他の態様では、本明細書で開示される方法に従う使用のための作用因子は、フォリスタチン関連タンパク質３（ＦＳＴＬ３）としてもまた公知の、フォリスタチン様関連遺伝子（ＦＬＲＧ）である。用語「ＦＬＲＧポリペプチド」は、ＦＬＲＧの任意の天然に存在するポリペプチドのほか、有用な活性を保持するその任意の改変体（変異体、フラグメント、融合物、およびペプチド模倣物形態を含む）も含むポリペプチドを含む。ある特定の好ましい実施形態では、本開示のＦＬＲＧポリペプチドは、アクチビン、特に、アクチビンＡに結合し、かつ／またはこれらの活性を阻害する。アクチビンへの結合特性を保持するＦＬＲＧポリペプチドの改変体は、ＦＬＲＧとアクチビンとの相互作用についてアッセイする日常的方法を使用して同定することができる（例えば、ＵＳ６，５３７，９６６を参照されたい）。加えて、上記では、ＡｃｔＲＩＩポリペプチドの文脈において、ポリペプチドのライブラリーを作製し、これについて調べるための方法についても記載したが、このような方法はまた、ＦＬＲＧの改変体を作製し、これらについて調べることにも関する。ＦＬＲＧポリペプチドは、任意の公知のＦＬＲＧ配列に由来するポリペプチドであって、ＦＬＲＧポリペプチドの配列に少なくとも約８０％同一である配列を有し、任意選択で、少なくとも８５％、９０％、９５％、９７％、９９％、またはこれを超える同一性を有するポリペプチドを含む。
【０２５１】
ヒトＦＬＲＧ前駆体（フォリスタチン関連タンパク質３前駆体）ポリペプチドは、以下の通りである。
【化２４】
2018534335.tif 000026
【０２５２】
シグナルペプチドに下線を付す。
【０２５３】
ある特定の実施形態では、フォリスタチンポリペプチドおよびＦＬＲＧポリペプチドの機能的な改変体または改変形態は、フォリスタチンポリペプチドまたはＦＬＲＧポリペプチドの少なくとも一部を有する融合タンパク質と、例えば、ポリペプチドの単離、検出、安定化、または多量体化を容易とするドメインなど、１つまたは複数の融合ドメインとを含む。適切な融合ドメインについては、ＡｃｔＲＩＩポリペプチドに関して、上記で詳細に論じられている。一部の実施形態では、本開示のアンタゴニスト作用因子は、Ｆｃドメインに融合させたフォリスタチンポリペプチドのアクチビン結合性部分を含む融合タンパク質である。別の実施形態では、本開示のアンタゴニスト作用因子は、Ｆｃドメインに融合させたＦＬＲＧポリペプチドのアクチビン結合性部分を含む融合タンパク質である。
【０２５４】
本明細書で開示されたフォリスタチンポリペプチドのいずれかを、１つまたは複数の本開示の追加のＡｃｔＲＩＩアンタゴニスト作用因子と組み合わせて、所望の効果を達成する（例えば、それを必要とする患者において眼の血管障害を処置または予防する、それを必要とする眼の血管障害を有する患者において視覚を増加させる、および／または眼の血管障害の１つまたは複数の合併症を処置または予防する）ことができる。例えば、フォリスタチンポリペプチドは、ｉ）１つまたは複数の追加のフォリスタチンポリペプチド、ｉｉ）本明細書で開示された１つまたは複数のＡｃｔＲＩＩポリペプチド、ｉｉｉ）１つまたは複数のＡｃｔＲＩＩアンタゴニスト抗体；ｉｖ）１つまたは複数の低分子ＡｃｔＲＩＩアンタゴニスト；ｖ）１つまたは複数のポリヌクレオチドＡｃｔＲＩＩアンタゴニスト；および／またはｖｉ）１つまたは複数のＦＬＲＧポリペプチドと組み合わせて使用することができる。
【０２５５】
同様に、本明細書で開示されたＦＬＲＧポリペプチドのいずれかを、１つまたは複数の本開示の追加のＡｃｔＲＩＩアンタゴニスト作用因子と組み合わせて、所望の効果を達成する（例えば、それを必要とする患者において眼の血管障害を処置または予防する、それを必要とする眼の血管障害を有する患者において視覚を増加させる、および／または眼の血管障害の１つまたは複数の合併症を処置または予防する）ことができる。例えば、ＦＬＲＧポリペプチドは、ｉ）１つまたは複数の追加のＦＬＲＧポリペプチド、ｉｉ）本明細書で開示された１つまたは複数のＡｃｔＲＩＩポリペプチド、ｉｉｉ）１つまたは複数のＡｃｔＲＩＩアンタゴニスト抗体；ｉｖ）１つまたは複数の低分子ＡｃｔＲＩＩアンタゴニスト；ｖ）１つまたは複数のポリヌクレオチドＡｃｔＲＩＩアンタゴニスト；および／またはｖｉ）１つまたは複数のフォリスタチンポリペプチドと組み合わせて使用することができる。
３．スクリーニングアッセイ
【０２５６】
ある特定の態様では、本開示は、ＡｃｔＲＩＩポリペプチドのアゴニストまたはアンタゴニストである化合物（作用因子）を識別するための主題のＡｃｔＲＩＩポリペプチド（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡおよびＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドならびにその改変体）の使用に関する。このスクリーニングを通じて識別される化合物は、例えば動物モデルにおいて視力を改善するそれらの能力を評価するために検査できる。
【０２５７】
ＡｃｔＲＩＩシグナル伝達（例えば、Ｓｍａｄ１、２、３、５、および８を介するＡｃｔＲＩＩシグナル伝達）を標的化することによって視覚を改善する（例えば、視力および／または視野を増加させる）ための治療剤についてスクリーニングする多数のアプローチがある。特定の実施形態では、選択された細胞株においてＡｃｔＲＩＩ媒介性の作用を混乱させる作用因子を同定するために、化合物のハイスループットスクリーニングが行われ得る。特定の実施形態では、アッセイは、ＡｃｔＲＩＩポリペプチドの、その結合パートナー、例えばＡｃｔＲＩＩリガンドなど（例えば、アクチビンＡ、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、アクチビンＣ、ＧＤＦ８、ＧＤＦ１１またはＢＭＰ１０）への結合を特異的に阻害または減少させる化合物をスクリーニングおよび同定するために行われ得る。あるいは、アッセイは、ＡｃｔＲＩＩポリペプチドの、その結合パートナー、例えばＡｃｔＲＩＩリガンドなどへの結合を増強しない化合物を同定するために使用され得る。さらなる実施形態では、化合物は、ＡｃｔＲＩＩポリペプチドと相互作用するその能力によって同定され得る。
【０２５８】
種々のアッセイ形式が十分であり、そして、本開示を考慮すれば、本明細書中に明示的に記載されない形式は、本明細書中に記載されていないにもかかわらず、当業者によって理解される。本明細書中に記載されるように、本発明の試験化合物（作用因子）は、任意の組み合わせ化学の方法によって作製され得る。あるいは、本主題の化合物は、インビボまたはインビトロで合成された天然に存在する生体分子であり得る。組織増殖の調節因子として作用するその能力について試験される化合物（作用因子）は、例えば、細菌、酵母、植物または他の生物によって生成されても（例えば、天然の生成物）、化学的に生成されても（例えば、ペプチド模倣物を含む低分子）、組換えにより生成されてもよい。本発明によって企図される試験化合物としては、非ペプチジル有機分子、ペプチド、ポリペプチド、ペプチド模倣物、糖、ホルモンおよび核酸分子が挙げられる。ある特定の実施形態では、試験作用因子は、約２０００ダルトン未満の分子量を持つ小さな有機分子である。
【０２５９】
本開示の試験化合物は、単一の別個の実体として提供され得るか、または、組み合わせ化学によって作製されたような、より複雑度の高いライブラリーにおいて提供され得る。これらのライブラリーは、例えば、アルコール、ハロゲン化アルキル、アミン、アミド、エステル、アルデヒド、エーテルおよび有機化合物の他の分類を含み得る。試験システムに対する試験化合物の提示は、特に、最初のスクリーニング段階において、単離された形態または化合物の混合物としてのいずれかであり得る。任意選択で、化合物は、任意選択で他の化合物で誘導体化され得、そして、化合物の単離を容易にする誘導体化基を有し得る。誘導体化基の非限定的な例としては、ビオチン、フルオレセイン、ジゴキシゲニン、緑色蛍光タンパク質、同位体、ポリヒスチジン、磁気ビーズ、グルタチオンＳトランスフェラーゼ（ＧＳＴ）、光活性化クロスリンカー、またはこれらの任意の組み合わせが挙げられる。
【０２６０】
化合物および天然抽出物のライブラリーを試験する多くの薬物スクリーニングプログラムにおいて、所与の期間に調査される化合物の数を最大にするためには、ハイスループットアッセイが望ましい。精製もしくは半精製（ｓｅｍｉ−ｐｕｒｉｆｉｅｄ）されたタンパク質で誘導され得るような、無細胞のシステムにおいて行われるアッセイは、試験化合物によって媒介される分子標的における変更の迅速な発生と比較的容易な検出とを可能にするように作られ得るという点で、しばしば、「一次」スクリーニングとして好ましい。さらに、試験化合物の細胞毒性またはバイオアベイラビリティの作用は、一般に、インビトロのシステムでは無視され得るが、その代わりに、このアッセイは主として、ＡｃｔＲＩＩポリペプチドとその結合パートナー（例えば、ＡｃｔＲＩＩリガンド）との間の結合親和性の変更において明らかになり得るような、分子標的に対する薬物の作用に焦点を当てている。
【０２６１】
単なる例示として、本開示の例示的なスクリーニングアッセイでは、関心のある化合物は、アッセイの意図に応じて適宜、通常ＡｃｔＲＩＩＢリガンドに結合し得る単離および精製されたＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドと接触させられる。その後、化合物とＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドとの混合物は、ＡｃｔＲＩＩＢリガンド（例えば、ＧＤＦ１１）を含む組成物に加えられる。ＡｃｔＲＩＩＢ／ＡｃｔＲＩＩＢリガンド複合体の検出および定量は、ＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドとその結合タンパク質との間の複合体の形成の阻害（または助長）における化合物の効力を決定するための手段を提供する。化合物の効力は、種々の濃度の試験化合物を用いて得られたデータから用量応答曲線を生成することによって評価され得る。さらに、比較のためのベースラインを提供するためのコントロールアッセイもまた行われ得る。例えば、コントロールアッセイでは、単離および精製されたＡｃｔＲＩＩＢリガンドは、ＡｃｔＲＩＩＢポリペプチドを含む組成物に加えられ、そして、ＡｃｔＲＩＩＢ／ＡｃｔＲＩＩＢリガンド複合体の形成は、試験化合物の非存在下で定量される。一般に、反応物が混合され得る順序は変化し得、そして、同時に混合され得ることが理解される。さらに、適切な無細胞アッセイ系を与えるように、精製したタンパク質の代わりに、細胞の抽出物および溶解物が使用され得る。
【０２６２】
ＡｃｔＲＩＩポリペプチドとその結合タンパク質との間の複合体の形成は、種々の技術によって検出され得る。例えば、複合体の形成の調節は、例えば、検出可能に標識されたタンパク質、例えば、放射標識（例えば、３２Ｐ、３５Ｓ、１４Ｃまたは３Ｈ）、蛍光標識（例えば、ＦＩＴＣ）、または、酵素標識されたＡｃｔＲＩＩポリペプチドおよび／またはその結合タンパク質を用いて、イムノアッセイによって、あるいは、クロマトグラフィーによる検出によって定量され得る。
【０２６３】
特定の実施形態では、本開示は、直接的または間接的のいずれかで、ＡｃｔＲＩＩポリペプチドとその結合タンパク質との間の相互作用の程度を測定する、蛍光偏光アッセイおよび蛍光共鳴エネルギー遷移（ＦＲＥＴ）アッセイの使用を企図する。さらに、光導波管（ｗａｖｅｇｕｉｄｅ）（例えば、ＰＣＴ公開ＷＯ９６／２６４３２および米国特許第５，６７７，１９６号を参照のこと）、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）、表面電荷センサ、および表面力センサに基づくもののような、他の検出様式が、本開示の多くの実施形態と適合性がある。
【０２６４】
さらに、本開示は、ＡｃｔＲＩＩポリペプチドとその結合パートナーとの間の相互作用を妨害または助長する作用因子を同定するための、「ツーハイブリッドアッセイ」としても公知である相互作用トラップアッセイの使用を企図する。例えば、米国特許第５，２８３，３１７号；Ｚｅｒｖｏｓら（１９９３年）Ｃｅｌｌ  ７２巻：２２３〜２３２頁；Ｍａｄｕｒａら（１９９３年）Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ  ２６８巻：１２０４６〜１２０５４頁；Ｂａｒｔｅｌら（１９９３年）Ｂｉｏｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ  １４巻：９２０〜９２４頁；およびＩｗａｂｕｃｈｉら（１９９３年）Ｏｎｃｏｇｅｎｅ  ８巻：１６９３〜１６９６頁を参照のこと。特定の実施形態では、本開示は、ＡｃｔＲＩＩポリペプチドまたはＧＤＦトラップとその結合タンパク質との間の相互作用を解離させる化合物（例えば、低分子またはペプチド）を同定するための、逆ツーハイブリッドシステムの使用を企図する［例えば、ＶｉｄａｌおよびＬｅｇｒａｉｎ（１９９９年）Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ  ２７巻：９１９〜２９頁；ＶｉｄａｌおよびＬｅｇｒａｉｎ（１９９９年）Ｔｒｅｎｄｓ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ  １７巻：３７４〜８１頁；ならびに米国特許第５，５２５，４９０号；同第５，９５５，２８０号；および同第５，９６５，３６８号を参照のこと］。
【０２６５】
特定の実施形態では、本主題の化合物は、ＡｃｔＲＩＩポリペプチドと相互作用するその能力によって同定される。化合物と、ＡｃｔＲＩＩポリペプチドとの間の相互作用は、共有結合性であっても非共有結合性であってもよい。例えば、このような相互作用は、光架橋、放射性標識リガンド結合、およびアフィニティクロマトグラフィーを含むインビトロの生化学的な方法を用いて、タンパク質レベルで同定され得る［例えば、Ｊａｋｏｂｙ  ＷＢら（１９７４年）、Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ  ４６巻：１頁を参照のこと］。特定の場合には、化合物は、ＡｃｔＲＩＩポリペプチドに結合する化合物を検出するためのアッセイのような、機構ベースのアッセイにおいてスクリーニングされ得る。これは、固相もしくは流体相の結合事象を含み得る。あるいは、ＡｃｔＲＩＩポリペプチドをコードする遺伝子は、レポーターシステム（例えば、β−ガラクトシダーゼ、ルシフェラーゼまたは緑色蛍光タンパク質）と共に細胞中にトランスフェクトされ、そして、好ましくは、ハイスループットスクリーニングによって、ライブラリーに対して、または、ライブラリーの個々のメンバーを用いてスクリーニングされ得る。他の機構ベースの結合アッセイ（例えば、自由エネルギーの変化を検出する結合アッセイ）が使用され得る。結合アッセイは、ウェル、ビーズもしくはチップに固定されているか、または、固定された抗体によって捕捉されている標的を用いて行われ得るか、あるいは、キャピラリー電気泳動によって分離され得る。結合した化合物は通常、比色エンドポイントあるいは蛍光または表面プラズモン共鳴を用いて検出され得る。
４．例示的治療用使用
【０２６６】
本明細書で記載される通り、本出願人らは、ＡｃｔＲＩＩアンタゴニスト（阻害剤）がＭＤＳ患者において視覚の改善に驚くべき効果を有することを発見した。さらに、ＭＤＳ関連視覚損失について報告された機構［Ｈａｎら、（２０１５年）Ｊ  Ｇｌａｕｃｏｍａ（印刷前の電子出版）、［Ｂｒｏｕｚａｓら、（２００９年）Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌｏｇｙ  ３巻：１３３〜１３７頁］の観点から、本開示のデータは、ＡｃｔＲＩＩ阻害剤も他の種類の眼（視覚）の障害、特に例えば、虚血および／または血管不全と関連するものを含む血管性眼障害を処置または予防することに正の効果を有し得ることを示唆している。
【０２６７】
眼の構造的および機能的な完全性は、規則的な酸素および栄養素の供給に依存する。代謝的に最も活性な組織の１つとして、網膜は、身体における他の組織より急速に酸素を消費する［Ｃｏｈｅｎら、（１９６５年）Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｒｅｔｉｎａ．  Ｏｒｌａｎｄｏ、Ｆｌａ：  Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ  Ｉｎｃ；３６〜５０頁、Ａｎｄｅｒｓｏｎら、（１９６４年）Ａｒｃｈ  Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ  ７２巻：７９２〜７９５頁およびＡｍｅｓ  Ａ．、（１９９２年）Ｃａｎ  Ｊ  Ｐｈｙｓｉｏｌ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．  ７０巻（補遺）：Ｓ１５８〜６４頁］。二重循環システムの存在は、網膜の酸素化を独特にしている［Ｏｓｂｏｒｎｅら、（２００４年）Ｐｒｏｇ  Ｒｅｔｉｎ  Ｅｙｅ  Ｒｅｓ．  ２３巻：９１〜１４７頁］。光受容体および外網状層の大部分は、栄養物を脈毛細管から間接的に施される一方で、内側の網膜層は、網膜の中心動脈の分枝部によって形成された表在性および深部のキャピラリー神経叢によって供給される。網膜の内層は、低酸素攻撃に最も高い感受性を示すことが公知であり［Ｊａｎａｋｙら、（２００７年）Ｄｏｃ  Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ．  １１４巻：４５〜５１頁］、一方で外側の網膜は、低酸素ストレスにより抵抗性である［Ｔｉｎｊｕｓｔら、（２００２年）Ａｖｉａｔ  Ｓｐａｃｅ  Ｅｎｖｉｒｏｎ  Ｍｅｄ．  ７３巻：１１８９〜９４頁］。
【０２６８】
解糖、血管新生、血管拡張および赤血球生成などの多数の全身性および細胞性の応答は、生物が低酸素に応答できるようにする［Ｈａｒｒｉｓら、（２００２年）Ｎａｔ  Ｒｅｖ  Ｃａｎｃｅｒ．  ２巻：３８〜４７頁］。多くの組織は、低酸素虚血状態下で、典型的には発症の数分間以内に誘導され、損傷を限定するために非常に重要である防御機構を誘導できる［Ｋｉｔａｇａｗａら、（１９９０年）Ｂｒａｉｎ  Ｒｅｓ．  ５２８巻：２１〜４頁］。しかし長期間の低酸素状態の際に、これらの防御機構は低酸素虚血発作の数時間以内に一般に減殺／喪失され、細胞死および組織損傷をもたらす［Ｐｒａｓｓら、（２００３年）Ｓｔｒｏｋｅ．  ３４巻：１９８１〜６頁］。転写アクチベーター低酸素誘導因子１α（ＨＩＦ−１α）は、細胞性Ｏ２ホメオスタシスのマスター調節因子である［Ｉｙｅｒら、（１９９８年）Ｇｅｎｅｓ  Ｄｅｖ．  １２巻：１４９〜６２頁］。低酸素症は、多くの組織においてＨＩＦ−１αならびに血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）および一酸化窒素合成酵素（ＮＯＳ）などのその標的遺伝子を誘導することが公知である。興味深いことに、長期間の低酸素症の際などのこれらの因子の過剰生成は、低酸素虚血条件での細胞死に関与していた。加えて、長期間の低酸素症の際に生じるグルタミン酸および炎症性サイトカインの細胞外蓄積の増強は、細胞および組織を損傷する場合がある。ＨＩＦ−１α、ＶＥＧＦおよびＮＯＳの種々のアイソフォームの発現の増加は、低酸素傷害後に網膜において報告された［Ｋａｕｒら、（２００６年）Ｉｎｖｅｓｔ  Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ  Ｖｉｓ  Ｓｃｉ．  ４７巻：１１２６〜４１頁、およびＴｅｚｅｌら、（２００４年）Ｃｕｒｒ  Ｏｐｉｎ  Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ．  １５巻：８０〜４頁］。
【０２６９】
網膜神経節細胞（ＲＧＣ）は、急性、一過性および軽度の全身性低酸素ストレスに特に感受性である［Ｋｅｒｇｏａｔら、（２００６年）Ｉｎｖｅｓｔ  Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ  Ｖｉｓ  Ｓｃｉ．  ４７巻：５４２３〜７頁］。ＲＧＣの喪失は、緑内障および糖尿病などの多くの眼の状態において生じ（Ｓｕｃｈｅｒら、（１９９７年）Ｖｉｓｉｏｎ  Ｒｅｓ．  ３７巻：３４８３〜９３頁、Ａｂｕ−Ｅｌ−Ａｓｒａｒら、（２００４年）Ｉｎｖｅｓｔ  Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ  Ｖｉｓ  Ｓｃｉ．  ４５巻：２７６０〜６頁］、低酸素症は、そのような喪失に関与している［Ｗａｘら、（２００２年）Ｍｏｌ  Ｎｅｕｒｏｂｉｏｌ．  ２６巻：４５〜５５頁、Ｔｅｚｅｌら、（２００４年）．  Ｃｕｒｒ  Ｏｐｉｎ  Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ．  １５巻：８０〜４頁およびＣｈｅｎら、（２００７年）Ｓｔｅｍ  Ｃｅｌｌｓ．  ２５巻：２２９１〜３０１頁］。酸素および基質の欠乏によって生じる網膜低酸素虚血から生じる神経変性は、遊離酸素ラジカルの蓄積［Ｂｌｏｃｋら、（１９９７年）Ｅｘｐ  Ｅｙｅ  Ｒｅｓ．  ６４巻：５５９〜６４頁、Ｍｕｌｌｅｒら、（１９９７年）Ｅｘｐ  Ｅｙｅ  Ｒｅｓ．  ６４巻：６３７〜４３頁およびＳｚａｂｏら、（１９９７年）Ｃｌｉｎ  Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．  ４巻：２４０〜５頁］、グルタミン酸興奮毒性［Ｋｕｒｏｉｗａ  Ｔら、（１９８５年）Ａｃｔａ  Ｎｅｕｒｏｐａｔｈｏｌ  （Ｂｅｒｌ）６８巻：１２２〜９頁、Ｏｓｂｏｒｎｅら、（２００４年）Ｐｒｏｇ  Ｒｅｔｉｎ  Ｅｙｅ  Ｒｅｓ．  ２３巻：９１〜１４７頁およびＫａｕｒら、（２００６年）Ｉｎｖｅｓｔ  Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ  Ｖｉｓ  Ｓｃｉ．  ４７巻：１１２６〜４１頁］、炎症、および血液網膜関門の破壊［Ｋｕｒｏｉｗａら、（１９８５年）Ａｃｔａ  Ｎｅｕｒｏｐａｔｈｏｌ  （Ｂｅｒｌ）６８巻：１２２〜９頁およびＫａｕｒら、（２００７年）Ｊ  Ｐａｔｈｏｌ．  ２１２巻：４２９〜３９頁］によって部分的に媒介される。
【０２７０】
低酸素虚血は、細胞外間隙（血管原性浮腫）または細胞内間隙（細胞傷害性浮腫）での流体貯留と関連する網膜血管損傷ももたらす［Ｍａｒｍｏｒら、（１９９９年）Ｄｏｃ  Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ．  ９７巻：２３９〜４９頁］。内側の網膜における細胞外間隙は、しっかりと詰まった細胞要素間の狭い割れ目からなる。内側の網膜中の損傷された毛細血管から漏出した流体は、細胞外間隙に貯留し、網膜の細胞要素を置き換え、神経連絡の正常な解剖学的形態を破壊し、黄斑浮腫を生じる［Ｈａｍａｎｎら、（２００５年）Ａｃｔａ  Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ  Ｓｃａｎｄ．  ８３巻：５２３〜５頁］。黄斑浮腫は、網膜虚血をさらに増悪し、酸化ストレスおよび炎症の増加を促進する可能性がある（Ｇｕｅｘ−Ｃｒｏｓｉｅｒ  Ｙ．、（１９９９年）Ｄｏｃ  Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ．  ９７巻：２９７〜３０９頁、ｖａｎ  Ｄａｍ  ＰＳ．、（２００２年）Ｄｉａｂｅｔｅｓ  Ｍｅｔａｂ  Ｒｅｓ  Ｒｅｖ．  １８巻：１７６〜８４頁およびＭｉｙａｋｅら、（２００２年）Ｓｕｒｖ  Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ．  ４７巻：Ｓ２０３〜８頁）。流体貯留を生じる血液網膜関門（ＢＲＢ）の透過性の増加は、圧迫による網膜の神経変性に寄与すると報告された［Ａｎｔｃｌｉｆｆら、（１９９９年）Ｓｅｍｉｎ  Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ．  １４巻：２２３〜３２頁、Ｍａｒｕｍｏ  Ｔら、（１９９９年）Ｊ  Ｖａｓｃ  Ｒｅｓ．  ３６巻：５１０〜１５頁およびＲｅｉｃｈｅｎｂａｃｈら、（２００７年）Ｇｒａｅｆｅｓ  Ａｒｃｈ  Ｃｌｉｎ  Ｅｘｐ  Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ．  ２４５巻：６２７〜３６頁）。最初は防御的であるが、低酸素虚血発作の際のＶＥＧＦ、一酸化窒素（ＮＯ）およびアクアポリン−４の過剰なおよび／または慢性産生は、内側の網膜におけるＢＲＢの新血管形成および機能障害を生じる可能性があり、網膜の組織への血清漏出および網膜浮腫を生じる。血管透過性の増加に加えて、眼低酸素症は、内皮細胞死、血管の白血球プラギングおよび毛細血管瘤にも関連する［Ｌｉｎｓｅｎｍｅｉｅｒら、（１９９８年）Ｉｎｖｅｓｔ  Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ  Ｖｉｓ  Ｓｃｉ．  ３９巻：１６４７〜５７頁］。
【０２７１】
低酸素虚血は、例えば、網膜動脈／静脈閉塞症または血栓症、眼虚血性症候群、虚血性視神経症および網膜虚血を含む種々の眼の状態において生じる。低酸素虚血は、緑内障の発症にも関連し［Ｆｌａｍｍｅｒ  Ｊ．、（１９９４年）‘Ｓｕｒｖ  Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ．  ３８巻（補遺）：Ｓ３〜６頁、Ｃｈｕｎｇら、（１９９９年）Ｓｕｒｖ  Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ．  ４３巻（補遺１号）：Ｓ４３〜５０頁およびＴｅｚｅｌら、（２００４年）Ｃｕｒｒ  Ｏｐｉｎ  Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ．  １５巻：８０〜４頁］、網膜および視神経乳頭新血管形成を含む糖尿病性眼疾患の視力を脅かす合併症の多くの根底にあると考えられており［Ｌｉｎｓｅｎｍｅｉｅｒら、（１９９８年）Ｉｎｖｅｓｔ  Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ  Ｖｉｓ  Ｓｃｉ．  ３９巻：１６４７〜５７頁］、加齢性黄斑変性症において役割を果たしている可能性がある［Ｔｓｏら、（１９８２年）Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌｏｇｙ．  ８９巻：９０２〜１５頁、Ｙａｎｏｆｆら、（１９８４年）Ｓｕｒｖ  Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ．  ２８巻（補遺）：５０５〜１１頁およびＢｒｅｓｓｌｅｒら、（２００１年）Ｓｃｈａｃｈａｔ  ＡＰ編、Ｒｅｔｉｎａ．  Ｓｔ．  Ｌｏｕｉｓ、ＭＯ：  Ｍｏｓｂｙ］。眼低酸素症の全身的原因として、心血管系作用、慢性閉塞性気道疾患、動脈性／静脈性閉塞性状態、［Ｂｒｏｗｎら、（１９８８年）Ｉｎｔ  Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ．  １１巻：２３９〜５１頁］高安動脈炎［Ｓｈｅｌｈａｍｅｒら、（１９８５年）Ａｎｎ  Ｉｎｔｅｒｎ  Ｍｅｄ．  １０３巻：１２１〜６頁］、過粘稠度症候群［Ａｓｈｔｏｎら、（１９６３年）Ｊ  Ｐａｔｈｏｌ  Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ．  ８６巻：４５３〜６１頁］および外傷（例えば、手術または偶発的損傷）［Ｐｕｒｔｓｃｈｅｒ’ｓ  ｒｅｔｉｎｏｐａｔｈｙ；Ｂｕｃｋｌｅｙら、（１９９６年）Ｐｏｓｔｇｒａｄ  Ｍｅｄ  Ｊ．  ７２巻：４０９〜１２頁］が挙げられる。上記の状態と関連する低酸素症は、視力障害および失明の一般的な原因である［Ｏｓｂｏｒｎｅら、（２００４年）Ｐｒｏｇ  Ｒｅｔｉｎ  Ｅｙｅ  Ｒｅｓ．  ２３巻：９１〜１４７頁］。
【０２７２】
したがって、ある特定の態様では、本開示は、ＡｃｔＲＩＩアンタゴニスト（阻害剤）またはＡｃｔＲＩＩアンタゴニストの組み合わせの治療有効量を患者に投与することによって、それを必要とする患者（対象）（具体的にはげっ歯類、ネコ、イヌ、霊長類およびヒトなどの哺乳動物）において眼の血管障害（疾患）を処置または予防するための方法および組成物を提供する。一部の実施形態では、本開示は、虚血と関連する眼の血管障害を処置または予防するためにＡｃｔＲＩＩアンタゴニストまたはＡｃｔＲＩＩアンタゴニストの組み合わせを使用するための方法を提供する。一部の実施形態では、本開示は、虚血性眼疾患を処置または予防するためにＡｃｔＲＩＩアンタゴニストまたはＡｃｔＲＩＩアンタゴニストの組み合わせを使用するための方法を提供する。一部の実施形態では、本開示は、微小血管系不全と関連する眼の血管障害を処置または予防するためにＡｃｔＲＩＩアンタゴニストまたはＡｃｔＲＩＩアンタゴニストの組み合わせを使用するための方法を提供する。一部の実施形態では、本開示は、眼の微小血管系不全疾患を処置または予防するためにＡｃｔＲＩＩアンタゴニストまたはＡｃｔＲＩＩアンタゴニストの組み合わせを使用するための方法を提供する。一部の実施形態では、本開示は、網膜症と関連する眼の血管障害を処置または予防するためにＡｃｔＲＩＩアンタゴニストまたはＡｃｔＲＩＩアンタゴニストの組み合わせを使用するための方法を提供する。一部の実施形態では、本開示は、視神経症と関連する眼の血管障害を処置または予防するためにＡｃｔＲＩＩアンタゴニストまたはＡｃｔＲＩＩアンタゴニストの組み合わせを使用するための方法を提供する。一部の実施形態では、本開示は、虚血性網膜症を処置または予防するためにＡｃｔＲＩＩアンタゴニストまたはＡｃｔＲＩＩアンタゴニストの組み合わせを使用するための方法を提供する。一部の実施形態では、本開示は、虚血性視神経症を処置または予防するためにＡｃｔＲＩＩアンタゴニストまたはＡｃｔＲＩＩアンタゴニストの組み合わせを使用するための方法を提供する。一部の実施形態では、本開示は、微小血管系不全と関連する網膜症を処置または予防するためにＡｃｔＲＩＩアンタゴニストまたはＡｃｔＲＩＩアンタゴニストの組み合わせを使用するための方法を提供する。一部の実施形態では、本開示は、微小血管系不全と関連する視神経症を処置または予防するためにＡｃｔＲＩＩアンタゴニストまたはＡｃｔＲＩＩアンタゴニストの組み合わせを使用するための方法を提供する。具体的には、本開示は：黄斑変性症（例えば、加齢性黄斑変性症、若年性黄斑変性症、滲出型黄斑変性症、萎縮型黄斑変性症、シュタルガルト病、およびベスト病）、網膜静脈閉塞症（例えば、網膜中心静脈閉塞症、半側網膜静脈閉塞症、網膜静脈分枝閉塞症、および虚血性網膜静脈閉塞症）、  網膜動脈閉塞症（例えば、網膜中心動脈閉塞症、半側網膜動脈閉塞症、網膜動脈分枝閉塞症、および虚血性網膜動脈閉塞症）、糖尿病性網膜症、虚血性視神経症［例えば、前部虚血性視神経症（動脈炎性および非動脈炎性）および後部虚血性視神経症］、黄斑部毛細血管拡張症（Ｉ型またはＩＩ型）、網膜虚血（例えば、急性網膜虚血ま���は慢性網膜虚血）、眼虚血性症候群、網膜血管炎、および未熟児網膜症から選択される１つまたは複数の疾患を処置または予防するためにＡｃｔＲＩＩアンタゴニストまたはＡｃｔＲＩＩアンタゴニストの組み合わせを使用するための方法を提供する。一部の実施形態では、眼疾患を処置するための本明細書で開示される方法および組成物は、患者の眼に視力の改善をもたらす。一部の実施形態では、眼疾患を処置するための本明細書で開示される方法および組成物は、患者の眼に視力の増加をもたらす。一部の実施形態では、眼疾患を処置するための本明細書で開示される方法および組成物は、患者の眼に視野の増加をもたらす。任意選択で、眼の血管障害を処置または予防するための本開示の方法は、ＡｃｔＲＩＩアンタゴニストまたはＡｃｔＲＩＩアンタゴニストの組み合わせの投与に加えて障害を処置または予防するための１つまたは複数の支持療法の投与をさらに含む場合がある［例えば、外科手術、レーザー療法（例えば、光凝固）、抗血管新生療法［例えば、ＶＥＧＦ阻害剤、例えばベバシズマブ（Ａｖａｓｔｉｎ（登録商標））など、ラニビズマブ（Ｌｕｃｅｎｔｉｓ（登録商標））、およびアフリベルセプト（Ｅｙｌｅａ（登録商標））］、Ｃａ２＋阻害剤（例えば、フルナリジンおよびニフェジピン）、寒冷療法、高圧酸素療法、Ｎａ＋チャネルブロッカー（例えば、トピラメート）、ｉＧｌｕＲアンタゴニスト（例えば、ＭＫ−８０１、デキストロメトルファン、エリプロディル、およびフルピルチン）、抗酸化剤（例えば、ジメチルチオ尿素、ビタミンＥ、アルファ−リポ酸、スーパーオキシドジスムターゼ、カタラーゼ、  デスフェリオキサミン、マンニトール、アロプリノール、ドベシル酸カルシウム、フルピルチン、トリメタジジン、およびＥＧＢ−７６１）、抗炎症剤、毛様体ジアテルミー、毛様体冷凍術、眼濾過手術、排水弁の埋め込み、抗血小板療法（例えば、アスピリン、チクロピジンおよびクロピドグレル）、抗凝固療法（例えば、ワルファリンおよびヘパリン）、ステロイド、全身または局所のコルチコステロイド（例えば、プレドニゾン、トリアムシノロン（Ｔｒｉｅｓｅｎｃｅ（登録商標））およびデキサメタゾン（Ｏｚｕｒｄｅｘ（登録商標））、ステロイド減量の免疫抑制剤（例えば、サイクロスポリン、アザチオプリン、シクロホスファミド、ミコフェノール酸塩、モフェチル、インフリキシマブおよびエタネルセプト）、栄養補助食品（例えば、ビタミンＣ、ビタミンＥ、ルテイン、ゼアキサンチン、亜鉛、葉酸、ビタミンＢ６、ビタミンＢ１２、およびゼアキサンチン）、硝子体切除、強膜バックル手術、および気体網膜復位術］．
【０２７３】
ある特定の態様では、本開示は：貧血、骨髄異形成症候群、鉄芽球性貧血、異常ヘモグロビン症、サラセミアおよび鎌状赤血球症の１つまたは複数を有する患者において眼の血管障害を、ＡｃｔＲＩＩアンタゴニストまたはＡｃｔＲＩＩアンタゴニストの組み合わせの治療有効量を患者に投与することによって処置または予防するための方法および組成物を提供する。一部の実施形態では、本開示は：貧血、骨髄異形成症候群、鉄芽球性貧血、異常ヘモグロビン症、サラセミアおよび鎌状赤血球症の１つまたは複数を有する患者において眼の虚血と関連する眼の血管障害を処置または予防するためにＡｃｔＲＩＩアンタゴニストまたはＡｃｔＲＩＩアンタゴニストの組み合わせを使用するための方法を提供する。一部の実施形態では、本開示は：貧血、骨髄異形成症候群、鉄芽球性貧血、異常ヘモグロビン症、サラセミアおよび鎌状赤血球症の１つまたは複数を有する患者において虚血性眼疾患を処置または予防するためにＡｃｔＲＩＩアンタゴニストまたはＡｃｔＲＩＩアンタゴニストの組み合わせを使用するための方法を提供する。一部の実施形態では、本開示は：貧血、骨髄異形成症候群、鉄芽球性貧血、異常ヘモグロビン症、サラセミアおよび鎌状赤血球症の１つまたは複数を有する患者において微小血管系不全と関連する眼の血管障害を処置または予防するためにＡｃｔＲＩＩアンタゴニストまたはＡｃｔＲＩＩアンタゴニストの組み合わせを使用するための方法を提供する。一部の実施形態では、本開示は：貧血、骨髄異形成症候群、鉄芽球性貧血、異常ヘモグロビン症、サラセミアおよび鎌状赤血球症の１つまたは複数を有する患者において眼の微小血管系不全疾患を処置または予防するためにＡｃｔＲＩＩアンタゴニストまたはＡｃｔＲＩＩアンタゴニストの組み合わせを使用するための方法を提供する。一部の実施形態では、本開示は：貧血、骨髄異形成症候群、鉄芽球性貧血、異常ヘモグロビン症、サラセミアおよび鎌状赤血球症の１つまたは複数を有する患者において網膜症と関連する眼の血管障害を処置または予防するためにＡｃｔＲＩＩアンタゴニストまたはＡｃｔＲＩＩアンタゴニストの組み合わせを使用するための方法を提供する。一部の実施形態では、本開示は：貧血、骨髄異形成症候群、鉄芽球性貧血、異常ヘモグロビン症、サラセミアおよび鎌状赤血球症の１つまたは複数を有する患者において視神経症と関連する眼の血管障害を処置または予防するためにＡｃｔＲＩＩアンタゴニストまたはＡｃｔＲＩＩアンタゴニストの組み合わせを使用するための方法を提供する。一部の実施形態では、本開示は：貧血、骨髄異形成症候群、鉄芽球性貧血、異常ヘモグロビン症、サラセミアおよび鎌状赤血球症の１つまたは複数を有する患者において虚血性網膜症を処置または予防するためにＡｃｔＲＩＩアンタゴニストまたはＡｃｔＲＩＩアンタゴニストの組み合わせを使用するための方法を提供する。一部の実施形態では、本開示は：貧血、骨髄異形成症候群、鉄芽球性貧血、異常ヘモグロビン症、サラセミアおよび鎌状赤血球症の１つまたは複数を有する患者において虚血性視神経症を処置または予防するためにＡｃｔＲＩＩアンタゴニストまたはＡｃｔＲＩＩアンタゴニストの組み合わせを使用するための方法を提供する。一部の実施形態では、本開示は：貧血、骨髄異形成症候群、鉄芽球性貧血、異常ヘモグロビン症、サラセミアおよび鎌状赤血球症の１つまたは複数を有する患者において微小血管系不全と関連する網膜症を処置または予防するためにＡｃｔＲＩＩアンタゴニストまたはＡｃｔＲＩＩアンタゴニストの組み合わせを使用するための方法を提供する。一部の実施形態では、本開示は：貧血、骨髄異形成症候群、鉄芽球性貧血、異常ヘモグロビン症、サラセミアおよび鎌状赤血球症の１つまたは複数を有する患者において微小血管系不全と関連する視神経症を処置または予防するためにＡｃｔＲＩＩアンタゴニストまたはＡｃｔＲＩＩアンタゴニストの組み合わせを使用するための方法を提供する。一部の実施形態では：貧血、骨髄異形成症候群、鉄芽球性貧血、異常ヘモグロビン症、サラセミアおよび鎌状赤血球症の１つまたは複数を有する患者において眼疾患を処置するための本明細書で開示される方法および組成物は、患者の眼に視力の改善をもたらす。一部の実施形態では：貧血、骨髄異形成症候群、鉄芽球性貧血、異常ヘモグロビン症、サラセミアおよび鎌状赤血球症の１つまたは複数を有する患者において眼の血管障害を処置するための本明細書で開示される方法および組成物は、患者の眼に視力の増加をもたらす。一部の実施形態では：貧血、骨髄異形成症候群、鉄芽球性貧血、異常ヘモグロビン症、サラセミアおよび鎌状赤血球症の１つまたは複数を有する患者において眼の血管障害を処置するための本明細書で開示される方法および組成物は、患者の眼に視野の増加をもたらす。任意選択で：貧血、骨髄異形成症候群、鉄芽球性貧血、異常ヘモグロビン症、サラセミアおよび鎌状赤血球症の１つまたは複数を有する患者において眼疾患を処置または予防するための本開示の方法は、ＡｃｔＲＩＩアンタゴニストまたはＡｃｔＲＩＩアンタゴニストの組み合わせの投与に加えて眼の血管障害を処置または予防するための１つまたは複数の支持療法の投与をさらに含むことができる。
【０２７４】
ある特定の態様では、本開示は、ＡｃｔＲＩＩアンタゴニストまたはＡｃｔＲＩＩアンタゴニストの組み合わせの治療有効量を患者に投与することによって、骨髄異形成症候群を有する患者（対象）（具体的には、げっ歯類、ネコ、イヌ、霊長類およびヒトなどの哺乳動物）において眼の血管障害を処置または予防するための方法および組成物を提供する。一部の実施形態では、本開示は、骨髄異形成症候群を有する患者において眼の虚血と関連する眼の血管障害を処置または予防するためにＡｃｔＲＩＩアンタゴニストまたはＡｃｔＲＩＩアンタゴニストの組み合わせを使用するための方法を提供する。一部の実施形態では、本開示は、骨髄異形成症候群を有する患者において虚血性眼疾患を処置または予防するためにＡｃｔＲＩＩアンタゴニストまたはＡｃｔＲＩＩアンタゴニストの組み合わせを使用するための方法を提供する。一部の実施形態では、本開示は、骨髄異形成症候群を有する患者において微小血管系不全と関連する眼の血管障害を処置または予防するためにＡｃｔＲＩＩアンタゴニストまたはＡｃｔＲＩＩアンタゴニストの組み合わせを使用するための方法を提供する。一部の実施形態では、本開示は、骨髄異形成症候群を有する患者において眼の微小血管系不全疾患を処置または予防するためにＡｃｔＲＩＩアンタゴニストまたはＡｃｔＲＩＩアンタゴニストの組み合わせを使用するための方法を提供する。一部の実施形態では、本開示は、骨髄異形成症候群を有する患者において網膜症と関連する眼の血管障害を処置または予防するためにＡｃｔＲＩＩアンタゴニストまたはＡｃｔＲＩＩアンタゴニストの組み合わせを使用するための方法を提供する。一部の実施形態では、本開示は、骨髄異形成症候群を有する患者において視神経症と関連する眼の血管障害を処置または予防するためにＡｃｔＲＩＩアンタゴニストまたはＡｃｔＲＩＩアンタゴニストの組み合わせを使用するための方法を提供する。一部の実施形態では、本開示は、骨髄異形成症候群を有する患者において虚血性網膜症を処置または予防するためにＡｃｔＲＩＩアンタゴニストまたはＡｃｔＲＩＩアンタゴニストの組み合わせを使用するための方法を提供する。一部の実施形態では、本開示は、骨髄異形成症候群を有する患者において虚血性視神経症を処置または予防するためにＡｃｔＲＩＩアンタゴニストまたはＡｃｔＲＩＩアンタゴニストの組み合わせを使用するための方法を提供する。一部の実施形態では、本開示は、骨髄異形成症候群を有する患者において微小血管系不全と関連する網膜症を処置または予防するためにＡｃｔＲＩＩアンタゴニストまたはＡｃｔＲＩＩアンタゴニストの組み合わせを使用するための方法を提供する。一部の実施形態では、本開示は、骨髄異形成症候群を有する患者において微小血管系不全と関連する視神経症を処置または予防するためにＡｃｔＲＩＩアンタゴニストまたはＡｃｔＲＩＩアンタゴニストの組み合わせを使用するための方法を提供する。一部の実施形態では、骨髄異形成症候群を有する患者において眼の血管障害を処置するための本明細書で開示される方法および組成物は、患者の眼に視力の改善をもたらす。一部の実施形態では、骨髄異形成症候群を有する患者において眼の血管障害を処置するための本明細書で開示される方法および組成物は、患者の眼に視力の増加をもたらす。一部の実施形態では、骨髄異形成症候群を有する患者において眼の血管障害を処置するための本明細書で開示される方法および組成物は、患者の眼に視野の増加をもたらす。任意選択で、骨髄異形成症候群を有する患者において眼の血管障害を処置または予防するための本開示の方法は、ＡｃｔＲＩＩアンタゴニストまたはＡｃｔＲＩＩアンタゴニストの組み合わせの投与に加えて眼の疾患を処置または予防するための１つまたは複数の支持療法の投与をさらに含むことができる。
【０２７５】
ある特定の態様では、本開示は、ＡｃｔＲＩＩアンタゴニストまたはＡｃｔＲＩＩアンタゴニストの組み合わせの治療有効量を患者に投与することによって、それを必要とする患者において視覚を改善する（例えば、視力およびまたは視野を増加させる）ための方法および組成物を提供する。一部の実施形態では、本開示は、眼の血管障害を有する患者において視覚を改善する（例えば、視力およびまたは視野を増加させる）ためにＡｃｔＲＩＩアンタゴニストまたはＡｃｔＲＩＩアンタゴニストの組み合わせを使用するための方法を提供する。一部の実施形態では、本開示は、虚血性眼疾患と関連する眼の血管障害を有する患者において視覚を改善する（例えば、視力およびまたは視野を増加させる）ためにＡｃｔＲＩＩアンタゴニストまたはＡｃｔＲＩＩアンタゴニストの組み合わせを使用するための方法を提供する。一部の実施形態では、本開示は、微小血管系不全と関連する眼の血管障害を有する患者において視覚を改善する（例えば、視力およびまたは視野を増加させる）ためにＡｃｔＲＩＩアンタゴニストまたはＡｃｔＲＩＩアンタゴニストの組み合わせを使用するための方法を提供する。一部の実施形態では、本開示は、眼の微小血管系不全疾患を有する患者において視覚を改善する（例えば、視力およびまたは視野を増加させる）ためにＡｃｔＲＩＩアンタゴニストまたはＡｃｔＲＩＩアンタゴニストの組み合わせを使用するための方法を提供する。一部の実施形態では、本開示は、網膜症と関連する眼の血管障害を有する患者において視覚を改善する（例えば、視力およびまたは視野を増加させる）ためにＡｃｔＲＩＩアンタゴニストまたはＡｃｔＲＩＩアンタゴニストの組み合わせを使用するための方法を提供する。一部の実施形態では、本開示は、視神経症と関連する眼の血管障害を有する患者において視覚を改善する（例えば、視力およびまたは視野を増加させる）ためにＡｃｔＲＩＩアンタゴニストまたはＡｃｔＲＩＩアンタゴニストの組み合わせを使用するための方法を提供する。一部の実施形態では、本開示は、虚血性網膜症を有する患者において視覚を改善する（例えば、視力およびまたは視野を増加させる）ためにＡｃｔＲＩＩアンタゴニストまたはＡｃｔＲＩＩアンタゴニストの組み合わせを使用するための方法を提供する。一部の実施形態では、本開示は、虚血性視神経症を有する患者において視覚を改善する（例えば、視力およびまたは視野を増加させる）ためにＡｃｔＲＩＩアンタゴニストまたはＡｃｔＲＩＩアンタゴニストの組み合わせを使用するための方法を提供する。一部の実施形態では、本開示は、微小血管系不全と関連する網膜症を有する患者において視覚を改善する（例えば、視力およびまたは視野を増加させる）ためにＡｃｔＲＩＩアンタゴニストまたはＡｃｔＲＩＩアンタゴニストの組み合わせを使用するための方法を提供する。一部の実施形態では、本開示は、微小血管系不全と関連する視神経症を有する患者において視覚を改善する（例えば、視力およびまたは視野を増加させる）ためにＡｃｔＲＩＩアンタゴニストまたはＡｃｔＲＩＩアンタゴニストの組み合わせを使用するための方法を提供する。具体的には、本開示は：黄斑変性症（例えば、加齢性黄斑変性症、若年性黄斑変性症、滲出型黄斑変性症、萎縮型黄斑変性症、シュタルガルト病、およびベスト病）、網膜静脈閉塞症（例えば、網膜中心静脈閉塞症、半側網膜静脈閉塞症、網膜静脈分枝閉塞症、および虚血性網膜静脈閉塞症）、  網膜動脈閉塞症（例えば、網膜中心動脈閉塞症、半側網膜動脈閉塞症、網膜動脈分枝閉塞症、および虚血性網膜動脈閉塞症）、糖尿病性網膜症、虚血性視神経症［例えば、前部虚血性視神経症（動脈炎性および非動脈炎性）および後部虚血性視神経症］、黄斑部毛細血管拡張症（Ｉ型またはＩＩ型）、網膜虚血（例えば、急性網膜虚血または慢性網膜虚血）、眼虚血性症候群、網膜血管炎、および未熟児網膜症から選択される１つまたは複数の疾患を有する患者において視覚を改善する（例えば、視力およびまたは視野を増加させる）ためにＡｃｔＲＩＩアンタゴニストまたはＡｃｔＲＩＩアンタゴニストの組み合わせを使用するための方法を提供する。一部の実施形態では、本開示は、貧血を有する患者において視覚を改善する（例えば、視力およびまたは視野を増加させる）ためにＡｃｔＲＩＩアンタゴニストまたはＡｃｔＲＩＩアンタゴニストの組み合わせを使用するための方法を提供する。一部の実施形態では、本開示は、骨髄異形成症候群を有する患者において視覚を改善する（例えば、視力およびまたは視野を増加させる）ためにＡｃｔＲＩＩアンタゴニストまたはＡｃｔＲＩＩアンタゴニストの組み合わせを使用するための方法を提供する。一部の実施形態では、本開示は、鉄芽球性貧血を有する患者において視覚を改善する（例えば、視力およびまたは視野を増加させる）ためにＡｃｔＲＩＩアンタゴニストまたはＡｃｔＲＩＩアンタゴニストの組み合わせを使用するための方法を提供する。一部の実施形態では、本開示は、異常ヘモグロビン症を有する患者において視覚を改善する（例えば、視力およびまたは視野を増加させる）ためにＡｃｔＲＩＩアンタゴニストまたはＡｃｔＲＩＩアンタゴニストの組み合わせを使用するための方法を提供する。一部の実施形態では、本開示は、サラセミアを有する患者において視覚を改善する（例えば、視力およびまたは視野を増加させる）ためにＡｃｔＲＩＩアンタゴニストまたはＡｃｔＲＩＩアンタゴニストの組み合わせを使用するための方法を提供する。一部の実施形態では、本開示は、鎌状赤血球症を有する患者において視覚を改善する（例えば、視力およびまたは視野を増加させる）ためにＡｃｔＲＩＩアンタゴニストまたはＡｃｔＲＩＩアンタゴニストの組み合わせを使用するための方法を提供する。任意選択で、眼疾患を有する患者において視覚を改善する（例えば、視力およびまたは視野を増加させる）ための本開示の方法は、ＡｃｔＲＩＩアンタゴニストまたはＡｃｔＲＩＩアンタゴニストの組み合わせの投与に加えて眼疾患を処置または予防するための１つまたは複数の支持療法の投与をさらに含むことができる。
【０２７６】
本明細書中で使用される場合、障害または状態を「予防する」治療薬は、統計的試料において、無処置の対照試料に対して、処置試料における障害もしくは状態の出現を低下させるか、あるいは、無処置の対照試料に対して、障害もしくは状態の１または複数の症状の発症を遅延させるか、または、重篤度を低下させるような化合物を指す。
【０２７７】
用語「処置する」は、本明細書中で使用される場合、一度確立された状態の改善もしくは除去を含む。いずれの場合にも、予防または処置は、医師または他の医療提供者によって提供される診断、および、治療剤の投与の意図される結果において認識され得る。
【０２７８】
一般に、本開示で記載されている疾患または状態の処置または予防は、１つまたは複数のＡｃｔＲＩＩアンタゴニスト（例えば、ＡｃｔＲＩＩＡおよび／またはＡｃｔＲＩＩＢアンタゴニスト）を、「有効量」で投与することにより達成する。作用因子の有効量とは、必要な投与量で、かつ、必要な期間にわたり、所望の治療結果または予防結果を達成するのに効果的な量を指す。本開示の作用因子の「治療有効量」は、個体の疾患状態、年齢、性別、および体重、ならびに個体において所望の応答を誘発する作用因子の能力などの要因に従い変化し得る。「予防有効量」とは、必要な投与量で、かつ、必要な期間にわたり、所望の予防結果を達成するのに効果的な量を指す。
【０２７９】
眼損傷は、骨髄異形成症候群の合併症／徴候である［Ｈａｎら、（２０１５年）Ｊ  Ｇｌａｕｃｏｍａ（印刷前の電子出版）、［Ｂｒｏｕｚａｓら、（２００９年）Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌｏｇｙ  ３巻：１３３〜１３７頁］。本出願人らは、ＡｃｔＲＩＩ阻害剤を用いる処置がＭＤＳ患者における視覚の改善に驚くべき効果を有することを発見した。ＭＤＳ患者における視覚損失に関する機構についての洞察は、ＡｃｔＲＩＩ阻害剤療法が眼の他の血管障害、特に虚血および／または微小血管系不全と関連するものの処置においても有用である可能性があることを示唆している。例えばＭＤＳに加えて、他の血液学的障害は、例えば、異常ヘモグロビン症疾患（例えば、鎌状赤血球症およびサラセミア）を含む眼の損傷と関連していた［ｄｅ  Ｍｅｌｏ  Ｍ．Ｂ．、（２０１４年）Ｒｅｖ  Ｈｅｍａｔｏｌ  Ｈｅｍｏｔｅｒ  ３６巻（５号）：３１９〜３２１頁およびＡｋｓｏｙら、（２０１３年）Ｓｅｍｉｎａｒｓ  ｉｎ  Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌｏｇｙ  ２８巻（１号）：２２〜２６頁］。
【０２８０】
したがって、ある特定の態様では、本開示は、１つまたは複数のＡｃｔＲＩＩアンタゴニスト（例えば、ＧＤＦ−ＡｃｔＲＩＩアンタゴニスト、ＡｃｔＲＩＩＡポリペプチド、ＡｃｔＲＩＩＢポリペプチド、ＧＤＦトラップなど）を投与することによって、血液学的障害を有する患者において視覚（例えば、視力および／または視野）を改善するための方法および組成物を提供する。一部の実施形態では、ＡｃｔＲＩＩアンタゴニストまたはＡｃｔＲＩＩアンタゴニストの組み合わせは、貧血を有する患者において視覚を改善する（例えば、視力および／または視野を改善する）ために使用できる。一部の実施形態では、ＡｃｔＲＩＩアンタゴニストまたはＡｃｔＲＩＩアンタゴニストの組み合わせは、ＭＤＳを有する患者において視覚を改善する（例えば、視力および／または視野を改善する）ために使用できる。一部の実施形態では、ＡｃｔＲＩＩアンタゴニストまたはＡｃｔＲＩＩアンタゴニストの組み合わせは、異常ヘモグロビン症を有する患者において視覚を改善する（例えば、視力および／または視野を改善する）ために使用できる。一部の実施形態では、ＡｃｔＲＩＩアンタゴニストまたはＡｃｔＲＩＩアンタゴニストの組み合わせは、サラセミアを有する患者において視覚を改善する（例えば、視力および／または視野を改善する）ために使用できる。一部の実施形態では、ＡｃｔＲＩＩアンタゴニストまたはＡｃｔＲＩＩアンタゴニストの組み合わせは、鎌状赤血球症を有する患者において視覚を改善する（例えば、視力および／または視野を改善する）ために使用できる。一部の実施形態では、ＡｃｔＲＩＩアンタゴニストまたはＡｃｔＲＩＩアンタゴニストの組み合わせは、鉄芽球性貧血を有する患者において視覚を改善する（例えば、視力および／または視野を改善する）ために使用できる。任意選択で、血液学的障害（例えば、骨髄異形成症候群、鉄芽球性貧血、サラセミア、鎌状赤血球症、貧血、異常ヘモグロビン症または鉄芽球性貧血）を有し、視力の改善（視力および／または視野の改善）を必要とする患者は、ＡｃｔＲＩＩアンタゴニストまたはＡｃｔＲＩＩアンタゴニストの組み合わせに加えて血液学的障害を処置するための１つまたは複数の支持療法を用いて処置される場合がある。
【０２８１】
網膜虚血は、一般的な疾患であり、比較的効果がない処置のために依然として、先進工業国における視力障害および失明の一般的原因のままである［Ｏｓｂｏｒｎｅら、（２００４年）Ｐｒｏｇｒｅｓｓ  ｉｎ  Ｒｅｔｉｎａｌ  ａｎｄ  Ｅｙｅ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ２３巻：９１〜１４７頁］。虚血とは、細胞のエネルギー要求に応じられない、組織への不適当な（必ずしも完全な欠如ではない）血流を含む病理学的状況を指す。一般に、虚血とは、組織の３つの要求：酸素、代謝基質および老廃物の除去を欠乏させる。３つの要求の欠如は、最初にホメオスタシス反応を低下させ、時間と共に組織に傷害を誘導する。十分長期間抑制されると、組織は死滅する（梗塞）。細胞レベルでは、虚血性網膜傷害は、神経の脱分極、カルシウム流入ならびにエネルギー不全およびグルタミン酸刺激の増加によって始まる酸化ストレスを含む自己強化型破壊カスケードからなる。最終的には虚血性損傷は、例えば、光受容体、神経節細胞およびアマクリン細胞を含む網膜中の細胞の喪失をもたらす可能性がある。
【０２８２】
網膜虚血は、例えば、脳卒中、眼傷害および糖尿病を含む様々な状態によって引き起こされる可能性がある。網膜中心静脈が閉塞したまたは眼から解離した場合にも一般に生じる。網膜がその酸素供給を喪失すると、身体は、例えば血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）を含む種々の血管修飾作用因子を産生することによって補おうと試みる。残念ながらこれは、網膜の表面での異常な血管の増殖を生じる場合があり、失明をもたらす。実際、虚血は、網膜静脈閉塞症、糖尿病、鎌状赤血球性網膜症および未熟児網膜症を有する患者において網膜新血管形成の原因となり、その全てが最終的には網膜血管出血および／または網膜剥離を生じる可能性があることが示唆されている［Ｏｓｂｏｒｎｅら、（２００４年）Ｐｒｏｇｒｅｓｓ  ｉｎ  Ｒｅｔｉｎａｌ  ａｎｄ  Ｅｙｅ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ２３巻：９１〜１４７頁］。
【０２８３】
網膜虚血は、慢性または急性疾患として顕在化する場合がある。一般に網膜虚血は、最初は一方の眼に局在するが、経時的にしばしば両眼を冒すように進行する。多くの場合、網膜虚血を有する患者は、視神経乳頭腫脹を伴う視力および視野の無痛性の低下を示す。この状態を有する患者の年齢範囲は、幅広く、虚血の原因にある程度依存する。しかし一部の患者は、全く急激な視覚損失を経験する。視覚損失の程度は、重度である場合があり、または患者は、しばしば視野の一部での影もしくはベールと記載されるかすみ目の曖昧な感覚だけを認める場合がある。視覚損失は変化し、視野および視力に重度の機能障害を生じる場合がある。発症すると、視力の低下は、いくらかの回復が初期段階では適切な処置を用いて可能であるが、通常永久的である。
【０２８４】
網膜虚血を処置するために利用可能な種々の眼のおよび全身性の処置があり、多くは限定的な効力および／または潜在的に有害な副作用を伴う。これらの処置として、例えば：手術、レーザー療法（例えば、光凝固）、抗凝固剤（例えば、アスピリンおよびＰＡＦ阻害剤）、抗血管新生療法（例えば、ＶＥＧＦ阻害剤）、Ｃａ２＋阻害剤（例えば、フルナリジンおよびニフェジピン）、寒冷療法、高圧酸素療法、Ｎａ＋チャネルブロッカー（例えば、トピラマート）、ｉＧｌｕＲアンタゴニスト（例えば、ＭＫ−８０１、デキストロメトルファン、エリプロディルおよびフルピルチン）、抗酸化物質（例えば、ジメチルチオ尿素、ビタミンＥ、アルファ（ａｌｐｈ）リポ酸、スーパーオキシドジスムターゼ、カタラーゼ、デスフェリオキサミン、マンニトール、アロプリノール、ドベシル酸カルシウム、フルピルチン、トリメタジジンおよびＥＧＢ−７６１）および抗炎症剤が挙げられる。
【０２８５】
ある特定の態様では、本開示は、１つまたは複数のＡｃｔＲＩＩアンタゴニスト［例えば、ＡｃｔＲＩＩポリペプチドまたはその改変体（例えば、ＧＤＦトラップ）］を投与することによって、それを必要とする患者において網膜虚血を処置または予防するための方法および組成物を提供する。一部の実施形態では、ＡｃｔＲＩＩアンタゴニストまたはＡｃｔＲＩＩアンタゴニストの組み合わせは：急性網膜虚血および慢性網膜虚血の１つまたは複数を処置または予防するために使用できる。一部の実施形態では、ＡｃｔＲＩＩアンタゴニストまたはＡｃｔＲＩＩアンタゴニストの組み合わせは：白内障、角膜浮腫、低眼圧、眼圧の上昇、前房炎、新生血管緑内障および虹彩新血管形成、網膜動脈の狭窄、網膜静脈の拡張、網膜出血、綿花状白斑、サクランボ赤色斑、視神経新血管形成、網膜新血管形成、虚血性眼痛ならびに一過性黒内障から選択される網膜虚血の１つまたは複数の合併症を処置または予防するために使用できる。一部の実施形態では、ＡｃｔＲＩＩアンタゴニストまたはＡｃｔＲＩＩアンタゴニストの組み合わせは、網膜虚血を有する患者において視覚を改善する（例えば、視力および／または視野を改善する）ために使用できる。任意選択で、網膜虚血を患う患者は、ＡｃｔＲＩＩアンタゴニストまたはＡｃｔＲＩＩアンタゴニストの組み合わせに加えて網膜虚血を処置するための１つまたは複数の支持療法［例えば、手術、レーザー療法（例えば、光凝固）、眼内圧を低下させる局所薬物療法、毛様体ジアテルミー、毛様体冷凍術、硝子体内ステロイド、眼濾過手術、新生血管緑内障を処置するための緑内障排水弁の埋め込み、抗血小板療法（例えば、アスピリン、チクロピジンおよびクロピドグレル）、抗凝固療法（例えば、ワルファリンおよびヘパリン）ならびに全身性ステロイド療法、抗血管新生療法（例えば、ＶＥＧＦ阻害剤）、Ｃａ２＋阻害剤（例えば、フルナリジンおよびニフェジピン）、寒冷療法、高圧酸素療法、Ｎａ＋チャネルブロッカー（例えば、トピラマート）、ｉＧｌｕＲアンタゴニスト（例えば、ＭＫ−８０１、デキストロメトルファン、エリプロディルおよびフルピルチン）、抗酸化物質（例えば、ジメチルチオ尿素、ビタミンＥ、アルファリポ酸、スーパーオキシドジスムターゼ、カタラーゼ、デスフェリオキサミン、マンニトール、アロプリノール、ドベシル酸カルシウム、フルピルチン、トリメタジジンおよびＥＧＢ−７６１）ならびに抗炎症剤］を用いて処置できる。
【０２８６】
眼虚血性症候群（ＯＩＳ）は、徐々にまたは突然の視力の低下が慢性血管不全から生じる稀な疾患である［Ｂｒｏｗｎら、（１９９４年）Ｏｃｕｌａｒ  ｉｓｃｈｅｍｉｃ  ｓｙｎｄｒｏｍｅ．  Ｒｅｔｉｎａ．  第２版、Ｍｏｓｂｙ．  １５１５〜２７頁およびＣｈｅｎら、（２００７年）Ｃｏｍｐｒ  Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ  Ｕｐｄａｔｅ．  ８巻（１号）：１７〜２８頁］。ＯＩＳの最も一般的な病因は、内頸動脈の重度の一側性もしくは両側性動脈硬化性疾患または総頸動脈の分岐での顕著な狭窄である。ＯＩＳは、巨細胞性動脈炎によっても生じる可能性がある。血管灌流の減少が組織低酸素症および眼の虚血の増加を生じ、それが典型的には新血管形成をもたらすことが想定される。疾患は、糖尿病、高脂血症および高血圧症などの心血管疾患についての他の危険因子を有する患者において最も頻繁に見出される。一般的な前部の病態として、白内障、角膜浮腫、低眼圧、眼圧の上昇、前房炎、新生血管緑内障および虹彩新血管形成が挙げられる。後部の徴候として、網膜動脈の狭窄、拡張型だが非蛇行性の網膜静脈、網膜出血、綿花状白斑、サクランボ赤色斑および視神経／網膜新血管形成が挙げられる。
【０２８７】
ＯＩＳの主な症状として、視覚損失、光誘発一過性視覚損失、一過性黒内障および虚血性眼痛が挙げられる［Ｍｉｚｅｎｅｒら、（１９９７年）Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌｏｇｙ．  １０４巻（５号）：８５９〜６４頁およびＣｈｅｎら、（２００７年）Ｃｏｍｐｒ  Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ  Ｕｐｄａｔｅ．  ８巻（１号）：１７〜２８頁］。視力の低下は、最も頻繁に直面する症状であり、７０〜９０％の患者に存在する。視覚損失は、典型的には数週間から数カ月の期間にわたって徐々に生じる一方で、急激にも生じる可能性がある。ＯＩＳを有する患者の約４０％は、虚血性疼痛の症状を示す。一般に疼痛は、眉全体の鈍痛として特徴的に記載され、それは数時間から数日で徐々に回復する。一過性黒内障は、約１０分間未満の期間続く完全なまたは部分的な単眼失明の一過性エピソードである。一過性黒内障の病歴は、ＯＩＳを有する患者の約９〜１５％において見出される。
【０２８８】
ＯＩＳを処置するために利用可能な種々の眼のおよび全身性の処置があり、多くは限定的な効力および／または潜在的に有害な副作用を伴う。眼の処置として、例えば：手術または虹彩、視神経もしくは網膜の新血管形成を処置するためのレーザー療法（例えば、汎網膜光凝固）；眼内圧を低下させる局所薬物療法、眼内圧を低下させる毛様体ジアテルミーおよび毛様体冷凍術；硝子体内ステロイド；ならびに眼濾過手術および新生血管緑内障を処置するための緑内障排水弁の埋め込みが挙げられる。全身処置として、例えば：抗血小板療法（例えば、アスピリン、チクロピジンおよびクロピドグレル）、抗凝固療法（例えば、ワルファリンおよびヘパリン）およびステロイドが挙げられる。
【０２８９】
ある特定の態様では、本開示は、１つまたは複数のＡｃｔＲＩＩアンタゴニスト［例えば、ＡｃｔＲＩＩポリペプチドまたはその改変体（例えば、ＧＤＦトラップ）］を投与することによって、それを必要とする患者において眼虚血性症候群を処置または予防するための方法および組成物を提供する。一部の実施形態では、ＡｃｔＲＩＩアンタゴニストまたはＡｃｔＲＩＩアンタゴニストの組み合わせは：白内障、角膜浮腫、低眼圧、眼圧の上昇、前房炎、新生血管緑内障および虹彩新血管形成、網膜動脈の狭窄、網膜静脈の拡張、網膜出血、綿花状白斑、サクランボ赤色斑、視神経新血管形成、網膜新血管形成、虚血性眼痛ならびに一過性黒内障から選択される眼虚血性症候群の１つまたは複数の合併症を処置または予防するために使用できる。一部の実施形態では、ＡｃｔＲＩＩアンタゴニストまたはＡｃｔＲＩＩアンタゴニストの組み合わせは、眼虚血性症候群を有する患者において視覚を改善する（例えば、視力および／または視野を改善する）ために使用できる。任意選択で、眼虚血性症候群を患う患者は、ＡｃｔＲＩＩアンタゴニストまたはＡｃｔＲＩＩアンタゴニストの組み合わせに加えて眼虚血性症候群を処置するための１つまたは複数の支持療法［例えば、汎網膜光凝固、眼内圧を低下させる局所薬物療法、毛様体ジアテルミー、毛様体冷凍術、硝子体内ステロイド、眼濾過手術、新生血管緑内障を処置するための緑内障排水弁の埋め込み、抗血小板療法（例えば、アスピリン、チクロピジンおよびクロピドグレル）、抗凝固療法（例えば、ワルファリンおよびヘパリン）および全身性ステロイド療法］を用いて処置できる。
【０２９０】
虚血性視神経症（ＩＯＮ）は、眼の視神経への血流の減少または中断による中心視、側視または両方の突然の喪失である。ＩＯＮの２つの主なカテゴリーがある：後部虚血性視神経症（ＰＩＯＮ）および前部虚血性視神経症（ＡＩＯＮ）。ＡＩＯＮは、一般に動脈炎性ＡＩＯＮ（ＡＡＩＯＮ）または非動脈炎性ＡＩＯＮ（ＮＡＩＯＮ）のいずれかとして分類される。
【０２９１】
ＰＩＯＮは、一般に虚血による視神経の眼球後部分への損傷を特徴とする。用語、後部にもかかわらず、この病態生理は、状態が視神経における損傷の位置と同程度に視覚損失の具体的な機構を記載することから、虚血性損傷が前側である場合に適用される場合がある。ＡＩＯＮは、それが素因となる状態および／または心血管系危険因子を有する患者において自然発症的におよび一側性に生じる事実によって識別される。典型的にはＰＩＯＮは、２つのカテゴリーの患者において生じる：ｉ）特に長時間にわたる、または顕著な失血を伴う眼以外の手術を受けた患者、およびｉｉ）事故または血管破裂からの顕著な出血を経験した患者。高血圧、糖尿病および喫煙歴を有する患者は、一般に彼らが血管自己調節が損なわれていることから、ＰＩＯＮに最も感受性である。
【０２９２】
ＡＡＩＯＮは、中型の血管の炎症性疾患であり、一般に高齢者に生じる、側頭動脈炎（巨細胞性動脈炎とも称される）から生じる。多くの場合ＡＡＩＯＮは、一方の眼における完全に近い視覚損失を生じる。未処置のままにすると、１〜２週間以内に第２の眼も視覚損失を被りやすい。対照的に、ＮＡＩＯＮは、少し若い群で頻繁に観察され、「小乳頭」または「危険性がある乳頭」としばしば称される種類の視神経乳頭を有する患者において、心血管系危険因子（例えば、糖尿病、高血圧症および高コレステロールレベル）の併発から生じる。
【０２９３】
ＩＯＮ損傷は元に戻せないと以前は信じられていた。しかし、近年の研究は、ＩＯＮの初期段階で大用量のコルチコステロイド（例えば、プレドニゾン）を用いて処置された患者において視力の改善を示した［Ｈａｙｒｅｈら、（２００８年）Ｇｒａｅｆｅ’ｓ  Ａｒｃｈｉｖｅ  ｆｏｒ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  Ｏｐｔｈａｌｍｏｌｏｇｙ  ２４６巻（７号）：１０２９〜１０４６頁］。
【０２９４】
ある特定の態様では、本開示は、１つまたは複数のＡｃｔＲＩＩアンタゴニスト［例えば、ＡｃｔＲＩＩポリペプチドまたはその改変体（例えば、ＧＤＦトラップ）］を投与することによって、それを必要とする患者において虚血性視神経症を処置または予防するための方法および組成物を提供する。一部の実施形態では、ＡｃｔＲＩＩアンタゴニストまたはＡｃｔＲＩＩアンタゴニストの組み合わせは：後部虚血性視神経症、前部虚血性視神経症、動脈炎性前部虚血性視神経症および非動脈炎性前部虚血性視神経症の１つまたは複数を処置または予防するために使用できる。一部の実施形態では、ＡｃｔＲＩＩアンタゴニストまたはＡｃｔＲＩＩアンタゴニストの組み合わせは：後部虚血性視神経症、前部虚血性視神経症、動脈炎性前部虚血性視神経症および非動脈炎性前部虚血性視神経症の１つまたは複数を有する患者において視覚を改善する（例えば、視力およびまたは視野を増加させる）ために使用できる。任意選択で、虚血性視神経症を患う患者は、ＡｃｔＲＩＩアンタゴニストまたはＡｃｔＲＩＩアンタゴニストの組み合わせに加えて虚血性視神経症を処置するための１つまたは複数の支持療法［例えば、コルチコステロイド（プレドニゾン）］を用いて処置できる。
【０２９５】
網膜血管炎は、網膜血管の炎症を特徴とする局所または全身性障害の孤立性の状態または合併症である場合がある［Ｗａｌｔｏｎら、（２００３年）Ｃｕｒｒｅｎｔ  ｏｐｉｎｉｏｎ  ｉｎ  ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌｏｇｙ．  １４巻（６号）：４１３〜４１９頁およびＡｌｉら、（２０１４年）Ｔｈｅ  Ｂｒｉｔｉｓｈ  ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌｏｇｙ．  ９８巻（６号）：７８５〜７８９頁］。網膜血管炎は、一般に、位置に基づいて分類される：大型血管炎、中型血管炎、小型血管炎、多様な血管の血管炎および単一の臓器の血管炎。網膜血管炎の古典的な特性は、血管壁周囲の鞘の存在である。血管周囲鞘形成は、罹患した血管周囲の炎症性細胞からなる滲出物の集積物である。これは、血管周囲の白色カフの出現を生じる。網膜炎のパッチは、網膜血管炎に付随する場合がある。これらは、アダマンチアデス−ベーチェット病および感染性ぶどう膜炎を有する個体において見られる。網膜炎は、一過性である場合があり、または網膜壊死を伴う場合がある。網膜内浸潤は、視力を脅かす可能性があり、網膜萎縮、孔、および剥離を生じる可能性がある。網膜血管炎は、表在性の網膜表面の散在性、フラッフィー、綿花様斑として顕在化する網膜神経線維束の微小梗塞を生じる可能性がある。網膜血管炎を伴う感染型のぶどう膜炎は、網膜層の壊死を伴う可能性がある。糖衣状分枝血管炎は、リンパ形質細胞性浸潤物での血管周囲腔の重度の浸潤を特徴とする網膜血管炎についての記述用語である。これは、樹木の霜で覆われた枝の所見をもたらす。炎症に続発する網膜の脈管構造の閉塞は、網膜の虚血および毛細血管非灌流領域の発症を生じる可能性がある。これらの患者は、新血管形成および眼内出血などの網膜の非灌流から生じる合併症を発症しやすい場合がある。これは、網膜の顕著な非灌流領域の発症を生じる可能性がある。生じる可能性がある種々の他の合併症として、ルベオーシス、牽引性網膜剥離、新生血管緑内障および再発性硝子体出血が挙げられる。
【０２９６】
非感染性網膜血管炎は、全身性または局所コルチコステロイド（例えば、プレドニゾンおよびトリアムシノロン）およびステロイド減量の免疫抑制剤（例えば、シクロスポリン、アザチオプリン、シクロホスファミド、ミコフェノレート、モフェチル、インフリキシマブおよびエタネルセプト）によって管理される。治療剤の局所送達は、硝子体内注射または眼周囲治療を介して行われる場合があるが、後者は重度の網膜血管炎の場合は十分に適切でない場合がある。免疫抑制薬の選択は、眼所見、病因学および全身性併存症に基づいて適合されるべきである。免疫抑制とは別に、手術、寒冷療法およびレーザー療法（例えば、汎網膜光凝固）などの種々の治療選択肢は、網膜血管炎を管理するために使用できる。
【０２９７】
ある特定の態様では、本開示は、１つまたは複数のＡｃｔＲＩＩアンタゴニスト［例えば、ＡｃｔＲＩＩポリペプチドまたはその改変体（例えば、ＧＤＦトラップ）］を投与することによって、それを必要とする患者において網膜血管炎を処置または予防するための方法および組成物を提供する。一部の実施形態では、ＡｃｔＲＩＩアンタゴニストまたはＡｃｔＲＩＩアンタゴニストの組み合わせは：大型血管炎、中型血管炎、小型血管炎、多様な血管の血管炎および単一の臓器の血管炎の１つまたは複数を処置または予防するために使用できる。一部の実施形態では、ＡｃｔＲＩＩアンタゴニストまたはＡｃｔＲＩＩアンタゴニストの組み合わせは：血管周囲鞘形成、網膜炎、網膜壊死、網膜内浸潤糖衣状分枝毛細管非灌流、新血管形成、眼内出血、ルベオーシス、網膜剥離、新生血管緑内障および再発性硝子体出血から選択される網膜血管炎の１つまたは複数の合併症を処置または予防するために使用できる。一部の実施形態では、ＡｃｔＲＩＩアンタゴニストまたはＡｃｔＲＩＩアンタゴニストの組み合わせは、網膜血管炎（例えば、大型血管炎、中型血管炎、小型血管炎、多様な血管の血管炎および単一の臓器の血管炎）を有する患者において視覚を改善する（例えば、視力を増加させるおよび／または視野を増加させる）ために使用できる。任意選択で、網膜血管炎を患う患者は、ＡｃｔＲＩＩアンタゴニストまたはＡｃｔＲＩＩアンタゴニストの組み合わせに加えて網膜血管炎を処置するための１つまたは複数の支持療法［例えば、コルチコステロイド（例えば、プレドニゾンおよびトリアムシノロン）およびステロイド減量の免疫抑制剤（例えば、シクロスポリン、アザチオプリン、シクロホスファミド、ミコフェノレート、モフェチル、インフリキシマブおよびエタネルセプト）］を用いて処置できる。
【０２９８】
黄斑変性症は、視覚の中心（黄斑）での視力の低下を生じ、一般に網膜への損傷によって引き起こされる［ｄｅ  Ｊｏｎｇ  ＰＴ、（２００６年）Ｎ  Ｅｎｇｌ  Ｊ  Ｍｅｄ  ２５５巻（１４号）：１４７４〜１４８５頁］。それは、失明および視力障害の主な原因であり、通常高齢者において生じ、世界でおよそ２〜５千万人を苦しめている。主に高齢者において顕在化することから、黄斑変性症は、しばしば加齢性黄斑変性症と称される。若年患者では黄斑変性症は、しばしば若年性黄斑変性症と称され、一般に基礎遺伝性障害（例えば、シュタルガルト病またはベスト病）の結果である［Ｄｒｙｊａら、（１９９８年）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２７９巻（５３５４号）：１１０７頁］。一般に黄斑変性症は、「乾燥」（非滲出性）または「滲出型」（滲出性）疾患のいずれかとして顕在化する。萎縮型黄斑変性症では、黄色沈着物（ドルーゼン）が黄斑、網膜色素上皮と基礎にある脈絡膜との間に蓄積する。大きなおよび／または多数のドルーゼン沈着は、黄斑下の色素細胞層を破壊し、光受容体（錐体および杆体）の損傷により視覚損失を引き起こす場合がある。一般に、滲出型黄斑変性症は、ブルッフ膜を通じた脈絡毛細管からの異常な血管増殖（脈絡膜新血管形成）から生じる。これらの新たな血管は、脆弱であり、黄斑下に血液およびタンパク質の漏出をもたらす。これらの血管からの出血および瘢痕は、光受容体を損傷させ、それにより視覚損失を促進する場合がある。
【０２９９】
残念なことに、萎縮型黄斑変性症のための処置は限定されている。しかし、大規模な科学的研究（加齢性眼疾患研究２）は、後期黄斑変性症を発症する高い危険性を有する人々では、亜鉛との組み合わせでビタミンＣ、ビタミンＥ、ルテインおよびゼアキサンチンの栄養補助食品を摂取することが疾患の先の段階への進行を少なくとも２５％低下させたことを示した［Ｃｈｅｗら、（２０１３年）Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌｏｇｙ  １２０巻（８号）：１６０４〜１６１１頁］。女性での別の大規模研究は、葉酸ならびにビタミンＢ６およびＢ１２を摂取することによる利益を示した［Ｃｈｒｉｓｔｅｎら、（２００９年）Ａｒｃｈ  Ｉｎｔｅｒｎ  Ｍｅｄ  １６９巻（４号）：３３５〜３４１頁］。他の研究は、ルテインおよびゼアキサンチンが萎縮型黄斑変性症を発症する危険性を低減できることを示した［Ｃｈｅｗら、（２０１３年）Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌｏｇｙ  １３１巻（７号）：８４３〜８５０頁］。
【０３００】
滲出型黄斑変性症のための最も一般的な治療は、例えば、ベバシズマブ、ラニビズマブおよびアフリベルセプトを含む１つまたは複数の血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）アンタゴニスト（阻害剤）の投与である。ベバシズマブ（Ａｖａｓｔｉｎ（登録商標））は、ヒト化、モノクローナルＶＥＧＦ−Ａ抗体である。同様にラニビズマブ（Ｌｕｃｅｎｔｉｓ（登録商標））は、モノクローナルＶＥＧＦ−Ａ抗体断片（Ｆａｂ）である。アフリベルセプト（Ｅｙｌｅａ（登録商標））は、ヒトＶＥＧＦ受容体１および２の細胞外ドメイン由来部分を含む免疫グロブリンＦｃ融合タンパク質である。ほとんどの場合は薬物療法を用いて処置されるが、手術またはレーザー療法も滲出型黄斑変性症を処置するために使用できる。レーザー療法では、光の集束ビームが網膜での異常な血管を破壊するために使用され、さらなる迷走性血管増殖および漏出を予防する。一部の場合では、滲出型黄斑変性症は、光線力学的治療を用いて処置される場合があり、それは光活性化薬（光増感剤）および低出力レーザーの組み合わせを使用する。光感受性薬は、患者に注射され、眼の後ろの異常な血管内を含む身体全体を巡る。低出力レーザーは、薬物を活性化するために異常な血管に直接標的化され、それにより望ましくない血管を特異的に損傷させる。
【０３０１】
ある特定の態様では、本開示は、１つまたは複数のＡｃｔＲＩＩアンタゴニスト［例えば、ＡｃｔＲＩＩポリペプチドまたはその改変体（例えば、ＧＤＦトラップ）］を投与することによって、それを必要とする患者において黄斑変性症を処置または予防するための方法および組成物を提供する。一部の実施形態では、ＡｃｔＲＩＩアンタゴニストまたはＡｃｔＲＩＩアンタゴニストの組み合わせは：加齢性黄斑変性症、若年性黄斑変性症、シュタルガルト病、ベスト病、萎縮型黄斑変性症および滲出型黄斑変性症の１つまたは複数を処置または予防するために使用できる。一部の実施形態では、ＡｃｔＲＩＩアンタゴニストまたはＡｃｔＲＩＩアンタゴニストの組み合わせは、例えばドルーゼ沈着／蓄積、黄斑浮腫および新血管形成を含む黄斑変性症の１つまたは複数の合併症を処置または予防するために使用できる。一部の実施形態では、ＡｃｔＲＩＩアンタゴニストまたはＡｃｔＲＩＩアンタゴニストの組み合わせは、黄斑変性症を有する患者において視覚を改善する（例えば、視力を増加させるおよび／または視野を増加させる）ために使用できる。任意選択で、黄斑変性症を患う患者は、ＡｃｔＲＩＩアンタゴニストまたはＡｃｔＲＩＩアンタゴニストの組み合わせに加えて黄斑変性症を処置するために、１つまたは複数の支持療法［例えば、ＶＥＧＦアンタゴニスト（例えば、ベバシズマブ、ラニビズマブおよびアフリベルセプト）、手術、レーザー療法、光線力学的治療および／または栄養補助食品（例えば、ビタミンＣ、ビタミンＥ、ルテイン、ゼアキサンチン、亜鉛、葉酸、ビタミンＢ６、ビタミンＢ１２およびゼアキサンチン）］を用いて処置できる。
【０３０２】
糖尿病性網膜症は、糖尿病の眼の所見であり、２種類に分類される：非増殖性糖尿病性網膜症（ＮＰＤＲ）および増殖性糖尿病性網膜症（ＰＤＲ）［Ｓｅｍｅｒａｒｏら、（２０１５年）Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｄｉａｂｅｔｅｓ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ２０１５年（５８２０６０）１〜１６頁、Ａｒｄｅｎら、（２０１１年）Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｄｉａｂｅｔｅｓ  Ｒｅｖｉｅｗｓ  ７巻：２９１〜３０４頁およびＥｓｈａｑら、（２０１４年）Ｒｅｄｏｘ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  ２巻：６６１〜６６６頁］。ＮＰＤＲは、一般に軽度の症状または症状がない疾患の初期段階である。ＮＰＤＲでは網膜中の血管は、弱められ、毛細血管瘤を生じる。これらの毛細血管瘤（ｍｉｃｒｏａｎｕｅｒｙｓｍｓ）は、網膜に流体を漏出する場合があり、黄斑浮腫をもたらす可能性がある。それにより、ＮＰＤＲ合併症は、毛細血管瘤、網膜出血、黄斑浮腫および黄斑虚血としてしばしば顕在化する。ＰＤＲは、疾患の最も進行した形態である。この段階では、循環の問題は網膜を酸素欠乏にし、硝子体に伸長する可能性がある網膜での新たな脆弱な血管の形成を促進する。この新血管形成は、視界を曇らせる可能性がある硝子体出血を生じる可能性がある。ＰＤＲの他の合併症として、瘢痕組織形成による網膜の剥離および緑内障の発症が挙げられる。一部の場合では眼内部の液圧の増加は、視神経損傷をもたらす。未処置のままにすると、糖尿病性網膜症は、重度の視覚損失および失明さえ生じる場合がある。
【０３０３】
糖尿病性網膜症の処置は、一般に黄斑浮腫および新血管形成などの合併症について患者をモニタリングし、その合併症を処置することによる視力の維持に向けられる。糖尿病性網膜症のそのような合併症は、例えばＶＥＧＦアンタゴニスト（例えば、ベバシズマブ、ラニビズマブおよびアフリベルセプト）および／またはコルチコステロイド（例えば、トリアムシノロンおよびデキサメタゾン）を投与することによって処置できる。一部の場合では、糖尿病性網膜症は、手術、レーザー療法（例えば、レーザー光凝固、格子状レーザー光凝固、汎網膜光凝固および光線力学的治療）および／または硝子体切除を用いて処置される。
【０３０４】
ある特定の態様では、本開示は、１つまたは複数のＡｃｔＲＩＩアンタゴニスト［例えば、ＡｃｔＲＩＩポリペプチドまたはその改変体（例えば、ＧＤＦトラップ）］を投与することによって、それを必要とする患者において糖尿病性網膜症を処置または予防するための方法および組成物を提供する。一部の実施形態では、ＡｃｔＲＩＩアンタゴニストまたはＡｃｔＲＩＩアンタゴニストの組み合わせは：非増殖性糖尿病性網膜症および増殖性糖尿病性網膜症の１つまたは複数を処置または予防するために使用できる。一部の実施形態では、ＡｃｔＲＩＩアンタゴニストまたはＡｃｔＲＩＩアンタゴニストの組み合わせは、例えば、毛細血管瘤、網膜出血、黄斑浮腫、黄斑虚血、新血管形成、緑内障、硝子体出血、視神経損傷および網膜剥離を含む糖尿病性網膜症の１つまたは複数の合併症を処置または予防するために使用できる。一部の実施形態では、ＡｃｔＲＩＩアンタゴニストまたはＡｃｔＲＩＩアンタゴニストの組み合わせは、糖尿病性網膜症を有する患者において視覚を改善する（例えば、視力を増加させるおよび／または視野を増加させる）ために使用できる。任意選択で、糖尿病性網膜症を患う患者は、ＡｃｔＲＩＩアンタゴニストまたはＡｃｔＲＩＩアンタゴニストの組み合わせに加えて、糖尿病性網膜症を処置するための１つまたは複数の支持療法［例えば、ＶＥＧＦアンタゴニスト（例えば、ベバシズマブ、ラニビズマブおよびアフリベルセプト）、コルチコステロイド（トリアムシノロンおよびデキサメタゾン）、手術、レーザー療法（例えば、レーザー光凝固、格子状レーザー光凝固、汎網膜光凝固および光線力学的治療）および／または硝子体切除］を用いて処置できる。
【０３０５】
網膜閉塞症は、網膜の一般的血管障害であり、世界的に最も一般的な視覚損失の原因の１つである［Ｋｌｅｉｎら、（２０００年）Ｔｒａｎ  Ａｍ  Ｏｐｔｈａｌｍｏｌ  Ｓｏｃ．  ９８巻：１３３〜１４１頁］。網膜閉塞症は、網膜動脈閉塞症（ＲＡＣ）としてまたは網膜静脈閉塞症（ＲＶＯ）として顕在化する場合がある。網膜閉塞症は、閉塞がどこに位置するかによって分類される。視神経のレベルでの中心静脈の閉塞は、網膜中心動脈／静脈閉塞症（ＣＲＡＯおよびＣＲＶＯ）と称される。網膜のおよそ半分を巻き込む第１上分枝または第１下分枝での閉塞は、半側網膜動脈／網膜閉塞症（ＨＲＡＯおよびＨＲＶＯ）と称される。網膜のさらに離れた分枝での閉塞は、分枝網膜動脈／網膜閉塞症（ＢＲＡＯおよびＢＲＶＯ）と称される。閉塞の位置は、病態形成、臨床症状および網膜閉塞症の管理に影響を及ぼす。網膜閉塞症は、観察される網膜毛細管虚血の量により、非虚血性および虚血性型にさらに細分される。
【０３０６】
一般に、網膜閉塞症は、血液を供給する（ＲＡＣ）または網膜から血液を排出する（ＲＶＯ）循環の一部の遮断である。遮断により、毛細血管において圧力が高まり、出血ならびに流体および血液の漏出をもたらす。これは、黄斑に浮腫を生じる可能性がある。黄斑虚血は、網膜に酸素を供給する、これらの毛細血管内でも発症する場合がある。酸素および栄養素利用能の低減は、新血管形成を促進し、新生血管緑内障、硝子体出血、網膜剥離を生じる場合がある。視覚の病的な状態および失明は、一般にこれらの因子の組み合わせから生じる。
【０３０７】
網膜閉塞症の処置は、一般に黄斑浮腫および新血管形成などの合併症について患者をモニタリングし、その合併症を処置することによる視力の維持に向けられる。そのような合併症は、ＶＥＧＦアンタゴニスト（例えば、ベバシズマブ、ラニビズマブおよびアフリベルセプト）および／または、例えば、トリアムシノロン（Ｔｒｉｅｓｅｎｃｅ（登録商標））およびデキサメタゾン（Ｏｚｕｒｄｅｘ（登録商標））を含むコルチコステロイドを用いて処置できる。一部の場合では、網膜閉塞症は、手術、またはある特定の種の光線力学的治療技術を含むレーザー療法を用いて処置される。難治性の場合では、硝子体切除が必要である可能性があり、硝子体の除去および生理食塩水溶液を用いた置換を含む。
【０３０８】
ある特定の態様では、本開示は、１つまたは複数のＡｃｔＲＩＩアンタゴニスト［例えば、ＡｃｔＲＩＩポリペプチドまたはその改変体（例えば、ＧＤＦトラップ）］を投与することによって、それを必要とする患者において網膜閉塞症を処置または予防するための方法および組成物を提供する。一部の実施形態では、ＡｃｔＲＩＩアンタゴニストまたはＡｃｔＲＩＩアンタゴニストの組み合わせは：網膜中心静脈閉塞症、半側網膜静脈閉塞症、分枝網膜静脈閉塞症、虚血性網膜静脈閉塞症、非虚血性網膜静脈閉塞症、網膜中心動脈閉塞症、半側網膜動脈閉塞症、分枝網膜動脈閉塞症、虚血性網膜動脈閉塞症および非虚血性網膜動脈閉塞症の１つまたは複数を処置または予防するために使用できる。一部の実施形態では、ＡｃｔＲＩＩアンタゴニストまたはＡｃｔＲＩＩアンタゴニストの組み合わせは、例えば、黄斑浮腫、黄斑虚血、新血管形成、緑内障（ｇｌａｕｃｏｃｍａ）および網膜剥離を含む網膜閉塞症の１つまたは複数の合併症を処置または予防するために使用できる。一部の実施形態では、ＡｃｔＲＩＩアンタゴニストまたはＡｃｔＲＩＩアンタゴニストの組み合わせは、網膜閉塞症を有する患者において視覚を改善する（例えば、視力を増加させるおよび／または視野を増加させる）ために使用できる。任意選択で、網膜閉塞症を患う患者は、ＡｃｔＲＩＩアンタゴニストまたはＡｃｔＲＩＩアンタゴニストの組み合わせに加えて網膜閉塞症を処置するための、１つまたは複数の支持療法［例えば、ＶＥＧＦアンタゴニスト（例えば、ベバシズマブ、ラニビズマブおよびアフリベルセプト）、コルチコステロイド（トリアムシノロンおよびデキサメタゾン）、手術、レーザー療法、光線力学的治療および硝子体切除］を用いて処置できる。
【０３０９】
黄斑部毛細血管拡張症は、黄斑の中心である中心窩周辺の損傷を特徴とし、２つの形態で顕在化する。２型黄斑部毛細血管拡張症は、疾患の最も一般的な形態であり、中心窩周辺の血管の漏出として顕在化する。この漏出は、黄斑浮腫および新血管形成をもたらす場合があり、部分的に、硝子体出血により中心視に影響を及ぼす。同様に瘢痕組織が黄斑および中心窩を覆って形成される場合があり、きめ細かい視力の低下をもたらす。２型黄斑部毛細血管拡張症は、両眼を冒すが、必ずしも同じ重症度を有さない。１型黄斑部毛細血管拡張症では、中心窩周辺の血管は、拡張されて黄斑浮腫および新血管形成を促進する可能性がある小さな動脈瘤を形成する。１型黄斑部毛細血管拡張症は、ほとんどの場合一方の眼に生じ、疾患の２型形態と区別される。
【０３１０】
黄斑部毛細血管拡張症の処置は、一般に黄斑浮腫および新血管形成などの合併症について患者をモニタリングし、その合併症を処置することによる視力の維持に向けられる。黄斑部毛細血管拡張症のそのような合併症は、ＶＥＧＦアンタゴニスト（例えば、ベバシズマブ、ラニビズマブおよびアフリベルセプト）を投与することによって処置できる。一部の場合、黄斑部毛細血管拡張症は、手術、レーザー療法（例えば、レーザー光凝固、格子状レーザー光凝固、汎網膜光凝固および光線力学的治療）および／または硝子体切除を用いて処置される。
【０３１１】
ある特定の態様では、本開示は、１つまたは複数のＡｃｔＲＩＩアンタゴニスト［例えば、ＡｃｔＲＩＩポリペプチドまたはその改変体（例えば、ＧＤＦトラップ）］を投与することによって、それを必要とする患者において黄斑部毛細血管拡張症を処置または予防するための方法および組成物を提供する。一部の実施形態では、ＡｃｔＲＩＩアンタゴニストまたはＡｃｔＲＩＩアンタゴニストの組み合わせは：２型黄斑部毛細血管拡張症および１型黄斑部毛細血管拡張症の１つまたは複数を処置または予防するために使用できる。一部の実施形態では、ＡｃｔＲＩＩアンタゴニストまたはＡｃｔＲＩＩアンタゴニストの組み合わせは、例えば、毛細血管瘤、黄斑浮腫、新血管形成および硝子体出血を含む黄斑部毛細血管拡張症の１つまたは複数の合併症を処置または予防するために使用できる。一部の実施形態では、ＡｃｔＲＩＩアンタゴニストまたはＡｃｔＲＩＩアンタゴニストの組み合わせは、黄斑部毛細血管拡張症を有する患者において視覚を改善する（例えば、視力を増加させるおよび／または視野を増加させる）ために使用できる。任意選択で、黄斑部毛細血管拡張症を患う患者は、ＡｃｔＲＩＩアンタゴニストまたはＡｃｔＲＩＩアンタゴニストの組み合わせに加えて網膜黄斑部毛細血管拡張症を処置するための、１つまたは複数の支持療法［例えば、ＶＥＧＦアンタゴニスト（例えば、ベバシズマブ、ラニビズマブおよびアフリベルセプト）、手術、レーザー療法（例えば、レーザー光凝固、格子状レーザー光凝固、汎網膜光凝固、および光線力学的治療）および硝子体切除］を用いて処置できる。
【０３１２】
未熟児網膜症（ＲＯＰ）は、テリー症候群または後水晶体線維増加症とも称される、網膜周辺の異常な血管増殖を有する未熟児において生じる眼疾患である［Ｐｈｅｌｐｓ  Ｄ．Ｌ．、（２００１年）ＮｅｏＲｅｖｉｅｗ  ２巻（７号）：１５３〜１６６頁］。網膜周辺の新血管形成は、黄斑浮腫および硝子体出血をもたらす場合があり、視力を損なう。一部の場合では、新血管形成は、網膜周辺に瘢痕組織形成をもたらし、網膜剥離を促進する可能性がある。ＲＯＰを有する患者は、特に重度の疾患を発症した者は、後年に近視（近眼）、弱視（ａｍｂｌｙｏｐｉａ）（弱視（ｌａｚｙ  ｅｙｅ））、斜視（ｓｔｒａｂｉｓｍｕｓ）（斜視（ｍｉｓａｌｉｇｎｅｄ  ｅｙｅｓ））、白内障および緑内障についてのより大きな危険性がある。
【０３１３】
ＲＯＰの処置は、一般に黄斑浮腫、網膜出血、新血管形成、硝子体出血および網膜剥離などの合併症について患者をモニタリングし、その合併症を処置することによる視力の維持に向けられる。ＲＯＰのそのような合併症は、ＶＥＧＦアンタゴニスト（例えば、ベバシズマブ、ラニビズマブおよびアフリベルセプト）を投与することによって処置できる。一部の場合では、ＲＯＰは、手術、レーザー療法（例えば、レーザー光凝固、格子状レーザー光凝固、汎網膜光凝固および光線力学的治療）および／または硝子体切除を用いて処置される。強膜バックル術および気体網膜復位術は、網膜剥離を修復するための一般的な眼科的手順である。近年、ベータブロッカー（例えば、プロプラノロール）は、ＲＯＰの進行を、詳細には網膜の血管新生を阻害し、それにより血液網膜関門機能障害を改善することによって、遅らせることが実証された［Ｒｉｓｔｏｒｉ  Ｃ．、（２００１年）Ｉｎｖｅｓｔ  Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ  Ｖｉｓ  Ｓｃｉ  ５２巻（１号）：１５５〜１７０頁］。
【０３１４】
ある特定の態様では、本開示は、１つまたは複数のＡｃｔＲＩＩアンタゴニスト［例えば、ＡｃｔＲＩＩポリペプチドまたはその改変体（例えば、ＧＤＦトラップ）］を投与することによって、それを必要とする患者において未熟児網膜症を処置または予防するための方法および組成物を提供する。一部の実施形態では、ＡｃｔＲＩＩアンタゴニストまたはＡｃｔＲＩＩアンタゴニストの組み合わせは、例えば、網膜出血、黄斑浮腫、新血管形成、硝子体出血および網膜剥離を含む未熟児網膜症の１つまたは複数の合併症を処置または予防するために使用できる。一部の実施形態では、ＡｃｔＲＩＩアンタゴニストまたはＡｃｔＲＩＩアンタゴニストの組み合わせは、未熟児網膜症を有する患者において視覚を改善する（例えば、視力を増加させるおよび／または視野を増加させる）ために使用できる。任意選択で、未熟児網膜症を患う患者は、ＡｃｔＲＩＩアンタゴニストまたはＡｃｔＲＩＩアンタゴニストの組み合わせに加えて未熟児網膜症を処置するための、１つまたは複数の支持療法［例えば、ＶＥＧＦアンタゴニスト（例えば、ベバシズマブ、ラニビズマブおよびアフリベルセプト）、ベータブロッカー（プロプラノロール）、手術、レーザー療法（例えば、レーザー光凝固、格子状レーザー光凝固、汎網膜光凝固および光線力学的治療）、硝子体切除、強膜バックル術、および／または気体網膜復位術］を用いて処置できる。
【０３１５】
本明細書で使用する場合、「〜と組み合わせて」または「併用投与」とは、追加的治療（例えば、第２、第３、第４など）が、体内でなおも効果的である（例えば、複数の化合物は、患者において同時に効果的であり、これは、これらの化合物の相乗効果を含み得る）ような、任意の投与形態を指す。有効性は、血中、血清中、または血漿中の作用因子の測定可能な濃度と相関しない場合もある。例えば、異なる治療用化合物は、同じ製剤において投与することもでき、別個の製剤において、同時または逐次的に投与することもでき、異なるスケジュールで投与することもできる。したがって、このような処置を施される個体は、異なる治療の組み合わせ効果から利益を得ることができる。本開示の１つまたは複数のＡｃｔＲＩＩアンタゴニスト（例えば、ＧＤＦ−ＡｃｔＲＩＩアンタゴニスト、ＡｃｔＲＩＩＡポリペプチド、ＡｃｔＲＩＩＢポリペプチド、ＧＤＦトラップ、抗体など）は、１つまたは複数の他の追加の作用因子または支持療法と同時に、これらの前に、またはこれらの後に投与され得る。一般に、各治療剤は、その特定の作用因子について決定された用量および／または時間スケジュールで投与される。レジメンにおいて利用する特定の組み合わせは、本開示のアンタゴニストの、治療および／または所望のその適合性を考慮に入れる。
【０３１６】
視力（ＶＡ）は、視力の鋭さまたは鮮明さであり、一部は眼内の網膜焦点のシャープさおよび脳の解釈能力の感受性に依存する。視力は、視覚処理系の空間分解能の尺度である。一部の実施形態では、ＶＡは、視力を検査される人に規定の距離からチャート上の字、典型的には数または文字を識別するように求めることによって検査される。一般に、チャート字は、白色背景に対して黒色シンボルとして表される。人の眼と検査チャートとの間の距離は、レンズが焦点を合わせようと試みる場合のほぼ無限大の十分な距離に設定される。一部の実施形態では、２０フィートまたは６メートル、光学的観点から本質的に無限大。
【０３１７】
ＶＡを測定するための非限定的な一手段は、ＥＳＶ−３０００  ＥＴＤＲＳ検査デバイス（ＵＳ５，０７８，４８６を参照されたい）、自己キャリブレート検査照明の使用である。ＥＳＶ−３０００デバイスは、ＬＥＤ光源技術を組み込んでいる。自己キャリブレーション電子回路は、ＬＥＤ光源を常にモニタリングし、検査輝度を８５ｃｄ／ｍ２または３ｃｄ／ｍ２にキャリブレートする。大型のＥＴＤＲＳ検査（２０／２００まで）が、４メートルで実施される臨床試験のために設計されたが、デバイスは非研究設定、例えば眼疾患モニタリングが行われる病院またはクリニックでも使用できる。一部の実施形態では、検査は、規格化された照明条件、例えば８５ｃｄ／ｍ２の明順応検査レベルで行われる。この光レベルは、Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ａｃａｄｅｍｙ  ｏｆ  ＳｃｉｅｎｃｅｓによっておよびＡｍｅｒｉｃａｎ  Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｓｔａｎｄａｒｄｓ  ＩｎｓｔｉｔｕｔｅによってＥＴＤＲＳおよびコントラスト感度視力検査のために推奨されている。視力のスコア化は、モニターによって選択された任意の様式によって達成できる。ベースライン評価を提供した後に、検査対象によって識別できる文字数の増加または減少は、処置の際の見る能力の増加または減少の測定値を提供する。ＶＡを測定する他の方法として、例えば、スネレン検査、Ｅチャート検査およびニア検査が挙げられる。
【０３１８】
一態様では、本開示は、本明細書に記載される眼の血管障害を有する対象において視力を増加させるための方法および組成物を提供する。一般に、これらの方法は、１つまたは複数のＡｃｔＲＩＩアンタゴニストの有効量をそれを必要とする患者に投与する工程を含む。一部の実施形態では、方法は、処置された眼によって認識可能な文字数を約１から約３０文字増加させるための手段を提供する。別の実施形態では、認識可能な文字数は、約５から約２５文字増加される。さらなる実施形態では、認識可能な文字数は、約５から約２０文字増加される。さらに別の実施形態では、認識可能な文字数は、約５から約１５文字増加される。なおさらなる実施形態では、認識可能な文字数は、約５から約１０文字増加される。さらに別の実施形態では、認識可能な文字数は、約１０から約２５文字増加される。さらになおさらなる実施形態では、認識可能な文字数は、約１５から約２５文字増加される。さらになお別の実施形態では、認識可能な文字数は、約２０から約２５文字増加される。
【０３１９】
一般に、視野は、患者が周辺的に見ることが可能である水平および垂直範囲全体の視野検査を通じて決定できる。この種類の検査は、患者はまっすぐ前の光源を凝視し、異なる濃さのランダム光が患者の視界の周辺部で点滅する自動化視野測定検査を用いて通常実施される。患者は、光を見ることができることを示すためにボタンまたは他の手段を押す。本明細書に記載の方法により使用できる視野検査として、例えば、アムスラーグリッド検査、対面検査、視野測定検査およびタンジェントスクリーン検査が挙げられる。
【０３２０】
一態様では、本開示は、本明細書に記載される眼の血管障害を有する対象において視野を増加させるための方法および組成物を提供する。一般にこれらの方法は、１つまたは複数のＡｃｔＲＩＩアンタゴニストの有効量をそれを必要とする患者に投与する工程を含む。一部の実施形態では、方法は、患者の視野を少なくとも１０％（例えば、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％）増加させるための手段を提供する。
【０３２１】
無効赤血球生成の最も一般的な原因は、サラセミア症候群、インタクトアルファおよびベータヘモグロビン鎖の産生の不均衡が赤芽球成熟の際のアポトーシスの増加を引き起こす遺伝子性異常ヘモグロビン症である（Ｓｃｈｒｉｅｒ、２００２年、Ｃｕｒｒ  Ｏｐｉｎ  Ｈｅｍａｔｏｌ  ９巻：１２３〜１２６頁）。サラセミアは、集合的に世界中で最も高頻度の遺伝性障害であり、疫学的パターンの変化を伴って米国および世界的の両方において公衆衛生問題の拡大に寄与すると予測されている（Ｖｉｃｈｉｎｓｋｙ、２００５年、Ａｎｎ  ＮＹ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  １０５４巻：１８〜２４頁）。サラセミア症候群は、それらの重症度に応じて名付けられている。それにより、α−サラセミアは、α−サラセミア軽症型（α−サラセミア形質としても公知；２カ所影響を受けたα−グロビン遺伝子）、ヘモグロビンＨ疾患（３カ所影響を受けたα−グロビン遺伝子）およびα−サラセミア重症型（胎児水腫としても公知；４カ所影響を受けたα−グロビン遺伝子）を含む。β−サラセミアは、β−サラセミア軽症型（β−サラセミア形質としても公知；１カ所影響を受けたβ−グロビン遺伝子）、β−サラセミア中間型（２カ所影響を受けたβ−グロビン遺伝子）、ヘモグロビンＥサラセミア（２カ所影響を受けたβ−グロビン遺伝子）およびβ−サラセミア重症型（クーリー貧血としても公知；β−グロビンタンパク質の完全な欠如をもたらす２カ所影響を受けたβ−グロビン遺伝子）を含む。複数の臓器に影響を及ぼすβ−サラセミアは、相当な罹患率および死亡率と関連し、現在生涯にわたるケアを必要としている。β−サラセミアを有する患者における平均余命は、鉄キレート化との組み合わせでの定期的な輸血の使用により近年増加しているが、輸血および鉄の過剰な消化管吸収の両方から生じる鉄過剰負荷は、心疾患、血栓症、性腺機能低下、甲状腺機能低下、糖尿病、骨粗鬆症および骨減少症などの重篤な合併症を引き起こす可能性がある（Ｒｕｎｄら、２００５年、Ｎ  Ｅｎｇｌ  Ｊ  Ｍｅｄ  ３５３巻：１１３５〜１１４６頁）。ＡｃｔＲＩＩアンタゴニストは、任意選択で１つまたは複数の追加的支持療法との組み合わせで、サラセミア症候群を処置するために使用できる。
【０３２２】
ＡｃｔＲＩＩアンタゴニストは、任意選択で１つまたは複数の追加的支持療法との組み合わせで、サラセミア症候群に加えて無効赤血球生成の障害を処置するために使用できる。そのような障害として、鉄芽球性（ｓｉｄｅｒｂｌａｓｔｉｃ）貧血（遺伝性または後天性）；赤血球異形成貧血（ＩおよびＩＩ型）；鎌状赤血球貧血；遺伝性球状赤血球症；ピルビン酸キナーゼ欠損；葉酸欠損（先天性疾患、摂取不足または要求量の増加による）、コバラミン欠損（先天性疾患、悪性貧血、吸収障害、膵臓不全または摂取不足による）、ある特定の薬物または原因不明（先天性赤血球異形成貧血、不応性巨赤芽球性貧血または赤白血病）などの状態によって生じる可能性がある巨赤芽球性貧血；骨髄線維症（骨髄化生）および骨髄癆を含む骨髄癆性貧血；先天性赤血球生成性ポルフィン症；ならびに鉛中毒が挙げられる。
【０３２３】
骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）とは、骨髄性血球生成の無効および急性骨髄性白血病への転換の危険性を特徴とする血液学的障害の多様な集合である。ＭＤＳ患者では、血液幹細胞が、健常な赤血球、白血球、または血小板に成熟しない。ＭＤＳ障害として、例えば、不応性貧血、単一血球系統の異形成を伴う不応性血球減少症（ＲＣＵＤ）、環状鉄芽球を伴う不応性貧血（ＲＡＲＳ）、顕著な血小板増加を伴う環状鉄芽球性不応性貧血（ＲＡＲＳ−Ｔ）、過剰な芽球を有する不応性貧血（ＲＡＥＢ−１）、変形した過剰な芽球を有する不応性貧血（ＲＡＥＢ−２）、多系列異形成を有する不応性血球減少症（ＲＣＭＤ）、分類不能ＭＤＳ（ＭＤＳ−Ｕ）、および孤発性５ｑ染色体異常と関連する骨髄異形成症候群［ｄｅｌ（５ｑ）を有するＭＤＳ］が挙げられる。
【０３２４】
ＭＤＳ患者は、赤血球レベルを高めるための、輸血および／または、血球生成性増殖因子（例えば、ＥＰＯなどのＥＳＡ）単独もしくはコロニー刺激因子［例えば、フィルグラスチムなどの顆粒球コロニー刺激因子（Ｇ−ＣＳＦ）の類似体またはサルグラモスチムなどの顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ−ＧＳＦ）の類似体］との組み合わせでの処置を最終的に必要とする。輸血の頻度は、疾患の程度および併存疾患の存在に依存する。慢性的輸血は、ヘモグロビンレベルを増加させることが公知であり、次に脳および抹消組織酸素化を改善し、それにより身体的活性および精神的敏捷性を改善する。しかし、多くのＭＤＳ患者は、このような治療の使用に起因する副作用を発症する。例えば、高頻度の赤血球輸血を施される患者は、鉄蓄積および有毒な活性酸素種の生成に由来する組織損傷および臓器損傷を有し得る。したがって、本開示の１つまたは複数のＡｃｔＲＩＩアンタゴニスト作用因子（例えば、ＧＤＦ−ＡｃｔＲＩＩアンタゴニスト、ＡｃｔＲＩＩＡポリペプチド、ＡｃｔＲＩＩＢポリペプチド、ＧＤＦトラップなど）は、任意選択で、ＥＰＯ受容体活性化因子と組み合わせて、ＭＤＳまたは鉄芽球性貧血を有する患者を処置するのに使用できる。ある特定の実施形態では、ＭＤＳまたは鉄芽球性貧血を患う患者は、本開示の１つまたは複数のＡｃｔＲＩＩアンタゴニスト作用因子（例えば、ＧＤＦ−ＡｃｔＲＩＩアンタゴニスト、ＡｃｔＲＩＩＡポリペプチド、ＡｃｔＲＩＩＢポリペプチド、ＧＤＦトラップなど）を、任意選択で、ＥＰＯ受容体活性化因子と組み合わせて使用して処置することができる。他の実施形態では、ＭＤＳまたは鉄芽球性貧血を患う患者は、本開示の１つまたは複数のＡｃｔＲＩＩアンタゴニスト作用因子の組み合わせ（例えば、ＧＤＦ−ＡｃｔＲＩＩアンタゴニスト、ＡｃｔＲＩＩＡポリペプチド、ＡｃｔＲＩＩＢポリペプチド、ＧＤＦトラップなど）ならびに、例えば、ＥＳＡ；フィルグラスチムを含むＧ−ＣＳＦ類似体；サルグラモスチムを含むＧＭ−ＣＳＦ類似体；レナリドミド；サリドマイド；ポマリドミド、アザシチジンおよびデシタビンを含む低メチル化剤；デフェロキサミンおよびデフェラシロクスを含む鉄キレート化剤；ロミプロスチムおよびエルトロンボパグを含むトロンボポエチン模倣物；単独またはイダルビシン、トポテカンもしくはフルダラビンとの組み合わせでのシタラビン（ａｒａ−Ｃ）を含む化学療法剤；抗胸腺細胞グロブリン、アレムツズマブおよびシクロスポリンを含む免疫抑制剤；ボリノスタット、バルプロ酸、フェニルブチレート、エンチノスタット、ＭＧＣＤ０１０３ならびに他のクラスＩ核ＨＤＡＣ阻害剤、クラスＩＩ非核ＨＤＡＣ阻害剤、汎ＨＤＡＣ阻害剤およびアイソフォーム特異的ＨＤＡＣ阻害剤を含むヒストン脱アセチル化酵素阻害剤（ＨＤＡＣ阻害剤）；ティピファニルブおよびロナファルニブを含むファルネシルトランスフェラーゼ阻害剤；エタネルセプトまたはインフリキシマブを含む腫瘍壊死因子−アルファ（ＴＮＦ−α）阻害剤；エザチオスタットを含むグルタチオン−Ｓ−トランスフェラーゼ（ＧＳＴ）Ｐ１−１の阻害剤；ならびにゲムツズマブオゾガマイシンを含むＣＤ３３の阻害剤を含む、ＭＤＳを処���するための１つまたは複数の追加的治療剤を使用して処置できる。
【０３２５】
本明細書で記載される通り、環状鉄芽球を呈する患者は、ＡｃｔＲＩＩアンタゴニストを用いる処置に特に適している可能性がある。鉄芽球性貧血は、先天性（遺伝性）および後天性型に大きく分類でき、表１に示す通りさらに細分できる。
【表１】
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【０３２６】
新規シーケンシング技術は、過去数年間でＭＤＳにおいて繰り返し変異する数十個の遺伝子の識別をもたらした。種類によって分類されたそのような遺伝子の２０１３年のリストを表３に示す。１つまたは複数のそのような変異は、ＭＤＳを有するほとんど全ての患者において見出すことができ、関与する遺伝子の性質を知ることは、どのようにＭＤＳが発症し、発達するかについての理解を改善したが、処置にはまだ効果を与えていない。ＭＤＳ患者試料に適用された全ゲノムシーケンシングは、ｍＲＮＡスプライシング（スプライソソーム）因子をコードするがん関連遺伝子の完全に新規のクラスを識別した。ＭＤＳにおいて識別された最初のそのような遺伝子はＳＦ３Ｂ１であり、ＲＡＲＳを有する患者において特に高頻度で変異されている［Ｐａｐａｅｍｍａｎｕｉｌら、（２０１１年）Ｎ  Ｅｎｇｌ  Ｊ  Ｍｅｄ  ３６５巻：１３８４〜１３９５頁］。変異遺伝子の他の主なカテゴリーは、エピジェネティック（ＤＮＡメチル化）調節因子、転写因子およびシグナル伝達分子である［Ｃａｚｚｏｌａら、（２０１３年）Ｂｌｏｏｄ  １２２巻：４０２１〜４０３４頁、Ｂｅｊａｒら、（２０１４年）Ｂｌｏｏｄ  １２４巻：２７９３〜２８０３頁］。これらの変異がＭＤＳ患者で同時に生じる程度は、遺伝子型によって異なると考えられる。例えば、ＭＤＳ患者のおよそ５０％は、変異体スプライシング因子をコードする今日までに識別された１０個の遺伝子のうちの１個を有するが、これらの変異体遺伝子は、同じ患者ではめったに同時に生じない［Ｂｅｊａｒら、（２０１４年）Ｂｌｏｏｄ  １２４巻：２７９３〜２８０３頁］。それによりこれらの変異体遺伝子は、同じ個体についてのほとんど重複しないマーカーである。変異体エピジェネティック調節因子をコードする遺伝子は、同じ患者において互いに、および変異体スプライシング因子遺伝子とさらに高頻度で同時に生じる。本明細書に開示の通り、表３に列挙するものなどの変異体遺伝子の発生差異は、ＭＤＳまたは鉄芽球性貧血を有するどの患者がＡｃｔＲＩＩアンタゴニストに治療的に応答性または非応答性のどちらの可能性があるかを予測する助けとなり得る遺伝子シグネチャーを提供する。
【表３】
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【０３２７】
表３に列挙される遺伝子のうち、スプライシング因子３Ｂ１（ＳＦ３Ｂ１）をコードする遺伝子は、ＭＤＳ、具体的にはＲＡＲＳ、ＲＡＲＳ−ＴおよびＲＣＭＤ−ＲＳサブタイプに、極めて重要であるとして、近年関連付けられている［Ｍａｌｃｏｖａｔｉら、（２０１１年）Ｂｌｏｏｄ  １１８巻：６２３９〜６２４６頁、Ｄｏｌａｔｓｈａｄら、（２０１４年）Ｌｅｕｋｅｍｉａ  ｄｏｉ：  １０．１０３８／ｌｅｕ．２０１４．３３１  印刷前の電子出版］。ＳＦ３Ｂ１中の体細胞変異は、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）および急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）を含む血液学的がんにおいてならびに乳がん、膵臓がん、胃がん、前立腺がんおよびぶどう膜メラノーマにおいても生じる［Ｍａｌｃｏｖａｔｉら、（２０１１年）Ｂｌｏｏｄ  １１８巻：６２３９〜６２４６頁、Ｗａｎｇら、（２０１１年）Ｎ  Ｅｎｇｌ  Ｊ  Ｍｅｄ  ３６５巻：２４９７〜２５０６頁、Ｔｈｅ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｇｅｎｏｍｅ  Ａｔｌａｓ  Ｎｅｔｗｏｒｋ（２０１２年）Ｎａｔｕｒｅ  ４９０巻：６１〜７０頁、Ｂｉａｎｋｉｎら、（２０１２年）Ｎａｔｕｒｅ  ４９１巻：３９９〜４０５頁、Ｃｈｅｓｎａｉｓら、（２０１２年）Ｏｎｃｏｔａｒｇｅｔ  ３巻：１２８４〜１２９３頁、Ｆｕｒｎｅｙら、（２０１３年）Ｃａｎｃｅｒ  Ｄｉｓｃｏｖ  ３巻：１１２２〜１１２９頁、Ｊｅら、（２０１３年）Ｉｎｔ  Ｊ  Ｃａｎｃｅｒ  １３３巻：２６０〜２６６頁］。ＳＦ３Ｂ１変異のスペクトルは、多くはタンパク質中の数個の位置にクラスター化され、臨床試料においてまたは高濃度のプラジエノリドに曝露された細胞株において識別されている［Ｗｅｂｂら、（２０１３年）Ｄｒｕｇ  Ｄｉｓｃｏｖ  Ｔｏｄａｙ  １８巻：４３〜４９頁］。ＭＤＳにおいて識別されるＳＦ３Ｂ１変異として、例えばＫ１８２Ｅ、Ｅ４９１Ｇ、Ｒ５９０Ｋ、Ｅ５９２Ｋ、Ｒ６２５Ｃ、Ｒ６２５Ｇ、Ｎ６２６Ｄ、Ｎ６２６Ｓ、Ｈ６６２Ｙ、Ｔ６６３Ａ、Ｋ６６６Ｍ、Ｋ６６６Ｑ、Ｋ６６６Ｒ、Ｑ６７０Ｅ、Ｇ６７６Ｄ、Ｖ７０１Ｉ、Ｉ７０４Ｎ、Ｉ７０４Ｖ、Ｇ７４０Ｒ、Ａ７４４Ｐ、Ｄ７８１ＧおよびＡ１１８８Ｖが挙げられる。がんにおいて識別されるＳＦ３Ｂ１変異として、例えばＮ６１９Ｋ、Ｎ６２６Ｈ、Ｎ６２６Ｙ、Ｒ６３０Ｓ、Ｉ７０４Ｔ、Ｇ７４０Ｅ、Ｋ７４１Ｎ、Ｇ７４２Ｄ、Ｄ８９４Ｇ、Ｑ９０３Ｒ、Ｒ１０４１ＨおよびＩ１２４１Ｔが挙げられる。最終的に、ＭＤＳおよびがんの両方において見出されるＳＦ３Ｂ１変異として、例えばＧ３４７Ｖ、Ｅ６２２Ｄ、Ｙ６２３Ｃ、Ｒ６２５Ｈ、Ｒ６２５Ｌ、Ｈ６６２Ｄ、Ｈ６６２Ｑ、Ｔ６６３Ｉ、Ｋ６６６Ｅ、Ｋ６６６Ｎ、Ｋ６６６Ｔ、Ｋ７００ＥおよびＶ７０１Ｆが挙げられる。
【０３２８】
本開示の一実施形態では、ＡｃｔＲＩＩアンタゴニストは、例えば環状鉄芽球を伴う不応性貧血（ＲＡＲＳ）、顕著な血小板増加を伴うＲＡＲＳ（ＲＡＲＳ−Ｔ）、または多系列異形成を有する不応性血球減少症（ＲＣＭＤ、環状鉄芽球が顕著である患者ではＲＣＭＤ−ＲＳとしても公知）において１％、２％、３％、４％、５％、６％、７％、８％、９％、１０％、１１％、１２％、１３％、１４％、１５％、１６％、１７％、１８％、１９％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％または９５％を超える赤血球前駆体が環状鉄芽球であるＭＤＳ患者または鉄芽球性貧血を有する患者を含む、患者における眼の血管障害を処置するために有用である。
【０３２９】
多数の遺伝子が古典的鎌状赤血球症（ＳＣＤ；鎌状赤血球症（ｄｒｅｐａｎｏｃｙｔｏｓｉｓ））に寄与する。第１に、鎌状赤血球症とは、β−グロビン遺伝子内の変異（コドン６における、グルタミン酸のバリンへの変異）により引き起こされる遺伝性障害である。例えば、Ｋａｓｓｉｍら、（２０１３年）Ａｎｎｕ  Ｒｅｖ  Ｍｅｄ、６４巻：４５１〜４６６頁を参照されたい。鎌状赤血球貧血とは、βＳ対立遺伝子内のホモ接合性変異（ＨｂＳＳ）を有する鎌状赤血球症の最も一般的な形態を指し、鎌状赤血球症を有する人々の６０〜７０％を冒している。β−グロビン遺伝子内の変異のために、脱酸素化状態に置かれると露出される疎水性モチーフを有する、異常なヘモグロビン分子が生成される［例えば、Ｅａｔｏｎら（１９９０年）、Ａｄｖ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｃｈｅｍ、４０巻：６３〜２７９頁；Ｓｔｅｉｎｂｅｒｇ，  ＭＨ（１９９９年）、Ｎ  Ｅｎｇｌ  Ｊ  Ｍｅｄ、３４０巻（１３号）：１０２１〜１０３０頁；およびＢａｌｌａｓら（１９９２年）、Ｂｌｏｏｄ、７９巻（８号）：２１５４〜６３頁を参照されたい］。露出されると、個別のヘモグロビン分子鎖は、重合化し、この結果として、赤血球膜への損傷および細胞内脱水をもたらす。膜の損傷は、エリスロサイト膜の外側リーフレット上のホスファチジルセリンの発現をもたらす、膜脂質の再分布により部分的に顕示される［例えば、（２００２年）、Ｂｌｏｏｄ、９９巻（５号）：１５６４〜１５７１頁を参照されたい］。外在化ホスファチジルセリンは、脈管（血管）閉塞に寄与する、マクロファージおよび活性化内皮細胞の両方への接着を促進する。したがって、低酸素状態では、赤血球のヘモグロビンは、長い結晶へと沈降し、これにより、伸長が引き起こされ、「鎌状」赤血球へと形態的に切り替わる。遺伝子型ならびに脱酸素化の広がりおよび程度の両方が、ヘモグロビン多量体化の重症度に寄与する。胎児性ヘモグロビンの存在は、病理学的ヘモグロビンポリマーの量を比例的に低減し、血管閉塞性クリーゼに対して保護的であることが実証されている。
【０３３０】
鎌状赤血球症を有する大部分の患者のための処置の中心は、支持的である。鎌状赤血球症を有する患者に対する現在の処置選択肢として、抗生物質、疼痛管理［例えば、１つまたは複数の麻薬、非ステロイド系抗炎症薬、および／またはコルチコステロイド）、静脈内輸液、輸血、手術、鉄キレート化療法（例えば、デフェロキサミン）およびヒドロキシウレア（例えばＤｒｏｘｉａ（登録商標））を用いる処置］が挙げられる。一部の実施形態では、本開示の１つまたは複数のＡｃｔＲＩＩアンタゴニスト作用因子（例えば、ＧＤＦ−ＡｃｔＲＩＩアンタゴニスト、ＡｃｔＲＩＩＡポリペプチド、ＡｃｔＲＩＩＢポリペプチド、ＧＤＦトラップなど）は、鎌状赤血球症を処置するための１つまたは複数の追加的作用因子ならびに／または支持療法（例えば、１つまたは複数の麻薬、非ステロイド系抗炎症薬、および／またはコルチコステロイドを用いる処置）、静脈内輸液、輸血、手術、鉄キレート化療法（例えば、デフェロキサミン）およびヒドロキシウレア）との組み合わせで、それを必要とする患者において鎌状赤血球症を処置するのに使用できる。
【０３３１】
ある特定の実施形態では、本開示は、本開示の１つまたは複数のＡｃｔＲＩＩアンタゴニスト［例えば、ＡｃｔＲＩＩＡポリペプチドおよびその改変体（例えばＧＤＦトラップ）］を用いて処置されているか、または処置される候補の患者を、その患者における１つまたは複数の血液学的パラメータを測定することによって管理するための方法を提供する。血液学的パラメータは、本開示のアンタゴニストを用いた処置の候補である患者に対する適切な投薬を評価するため、処置中に血液学的パラメータをモニタリングするため、本開示の１つまたは複数のアンタゴニストを用いた処置中に投薬量を調節するかどうかを評価するため、および／または本開示の１つまたは複数のアンタゴニストの適切な維持用量を評価するために使用され得る。１つまたは複数の血液学的パラメータが正常レベルの外側である場合、１つまたは複数のＡｃｔＲＩＩアンタゴニストを用いた投薬は減少、延期または終了され得る。
【０３３２】
本明細書中で提供される方法に従って測定され得る血液学的パラメータとしては、例えば、赤血球レベル、血圧、貯蔵鉄、および、当該分野で認識されている方法を使用する、赤血球レベルの増加と相関する体液中に見出される他の作用因子が挙げられる。そのようなパラメータは、患者からの血液試料を使用して決定され得る。赤血球レベル、ヘモグロビンレベル、および／またはヘマトクリットレベルの増加により、血圧の上昇が引き起こされ得る。
【０３３３】
一実施形態では、１つまたは複数のＡｃｔＲＩＩアンタゴニストを用いて処置される候補である患者において、１つまたは複数の血液学的パラメータが正常範囲の外側、または正常の高値側である場合、そのときは、血液学的パラメータが自然にまたは治療介入によってのいずれかで正常または許容されるレベルに戻るまで、１つまたは複数のアンタゴニストの投与の開始が延期され得る。例えば、候補の患者が高血圧または前高血圧である場合、そのときは、患者は、患者の血圧を低下させるために血圧降下剤を用いて処置され得る。個々の患者の状態に適した任意の血圧降下剤が使用され得、例えば、利尿薬、アドレナリンインヒビター（アルファ遮断薬およびベータ遮断薬を含む）、血管拡張薬、カルシウムチャネル遮断薬、アンジオテンシン変換酵素（ＡＣＥ）インヒビター、またはアンジオテンシンＩＩ受容体遮断薬が挙げられる。血圧は、食事および運動レジメンを使用して代替的に処置され得る。同様に、候補の患者が正常よりも低いか、または正常の低値側の貯蔵鉄を有する場合、そのときは、患者は、患者の貯蔵鉄が正常または許容されるレベルに戻るまで、適切な食事および／または鉄サプリメントのレジメンを用いて処置され得る。正常よりも高い赤血球レベルおよび／またはヘモグロビンレベルを有する患者に対して、そのときは、そのレベルが正常または許容されるレベルに戻るまで本開示の１つまたは複数のアンタゴニストの投与が延期され得る。
【０３３４】
特定の実施形態では、１つまたは複数のＡｃｔＲＩＩアンタゴニスト作用因子を用いて処置される候補である患者において、１つまたは複数の血液学的パラメータが正常範囲の外側、または正常の高値側である場合、そのときは、投与の開始が延期されないことがある。しかし、１つまたは複数のアンタゴニストの投薬量または投薬の頻度は、本開示の１つまたは複数のアンタゴニストが投与されると上昇する血液学的パラメータの許容されない増加リスクを低下させる量に設定され得る。あるいは、１つまたは複数のＡｃｔＲＩＩアンタゴニスト作用因子（例えば、ＧＤＦ−ＡｃｔＲＩＩアンタゴニスト、ＡｃｔＲＩＩＡポリペプチド、ＡｃｔＲＩＩＢポリペプチド、ＧＤＦトラップなど）と、望ましくないレベルの血液学的パラメータに対処する治療剤を組み合わせた治療レジメンが患者のために開発され得る。例えば、患者の血圧が上昇している場合、治療レジメンは、１つまたは複数のＡｃｔＲＩＩアンタゴニストおよび血圧降下剤の投与を含めて設計され得る。所望より低い貯蔵鉄を有する患者について、治療レジメンは、１つまたは複数のＡｃｔＲＩＩアンタゴニストおよび鉄の補給を含めて開発され得る。
【０３３５】
一実施形態では、１つまたは複数の血液学的パラメータについてのベースラインパラメータは、１つまたは複数のＡｃｔＲＩＩアンタゴニスト作用因子を用いて処置される候補である患者に対して確立され得、適切な投薬レジメンが、ベースライン値に基づいて患者に対して確立される。あるいは、患者の病歴に基づいて確立されたベースラインパラメータが、患者に対して適切なアンタゴニスト投薬レジメンを通知するために使用され得る。例えば、健康な患者が、規定の正常範囲を超える確立された血圧のベースライン数値を有する場合、本開示の１つまたは複数のアンタゴニストを用いた処置の前に、その患者の血圧を一般集団について正常だとみなされる範囲に至らせる必要がないことがあり得る。患者の、１つまたは複数のＡｃｔＲＩＩアンタゴニストを用いた処置前の１つまたは複数の血液学的パラメータのベースライン値は、本明細書に記載の１つまたは複数のアンタゴニストを用いた処置中の、血液学的パラメータの任意の変化をモニタリングするための関連性のある比較値としても使用され得る。
【０３３６】
特定の実施形態では、１つまたは複数の血液学的パラメータは、１つまたは複数のＡｃｔＲＩＩアンタゴニストを用いて処置されている患者において測定される。血液学的パラメータは、処置中の患者をモニタリングし、本開示の１つまたは複数のアンタゴニストを用いた投薬または別の治療剤を用いた追加の投薬の調節または終了を可能にするために使用され得る。例えば、１つまたは複数のＡｃｔＲＩＩアンタゴニストの投与によって血圧、赤血球レベル、またはヘモグロビンレベルが上昇したか、または貯蔵鉄が減少した場合、そのときは、本開示の１つまたは複数のアンタゴニストの用量は、１つまたは複数の血液学的パラメータに対する本開示の１つまたは複数のアンタゴニストの作用を減少させるために、その量または頻度が減少され得る。１つまたは複数のＡｃｔＲＩＩアンタゴニストの投与によって、患者にとって不都合な１つまたは複数の血液学的パラメータの変化が生じた場合、そのときは、本明細書に記載の１つまたは複数のアンタゴニストの投薬は、一時的に、血液学的パラメータが許容されるレベルに戻るまでか、または永久に、のいずれかで終了され得る。同様に、本明細書に記載の１つまたは複数のアンタゴニストの投与の用量または頻度を減らした後、１つまたは複数の血液学的パラメータが許容される範囲内に至らない場合、そのときは、投薬は終了され得る。本開示の１つまたは複数のアンタゴニストを用いた投薬を減らすかまたは終了する代わりに、またはそれに加えて、患者は、血液学的パラメータの望ましくないレベルに対処する追加の治療剤、例えば、血圧降下剤または鉄のサプリメントなどが投薬され得る。例えば、１つまたは複数のＡｃｔＲＩＩアンタゴニストを用いて処置されている患者の血圧が上昇している場合、そのときは、本開示の１つまたは複数のアンタゴニストを用いた投薬は同じレベルで継続され得、および処置レジメンに血圧降下剤が追加されるか、１つまたは複数のアンタゴニストを用いた投薬例えば、量および／または頻度について）、および処置レジメンに血液降下剤が追加されるか、または、１つまたは複数のアンタゴニストを用いた投薬は終了され得、および患者は血圧降下剤を用いて処置され得る。
【０３３７】
（６．薬学的組成物）
ある特定の態様では、本開示の１つまたは複数のＡｃｔＲＩＩアンタゴニストは、単独で投与することもでき、医薬製剤（治療用組成物または薬学的組成物とも称される）の成分として投与することもできる。医薬製剤とは、その中に含有される活性成分（例えば、本開示の作用因子）の生物活性が効果的であることを可能とするような形態にあり、製剤が投与される対象に対して許容不可能に毒性である、さらなる成分を含有しない調製物を指す。本主題の化合物は、ヒト医療または獣医療における使用のために好都合な任意の方式における投与のために製剤化され得る。例えば、本開示の１つまたは複数の作用因子は、薬学的に許容されるキャリアと共に製剤化することができる。薬学的に許容されるキャリアとは、医薬製剤中の、活性成分以外の成分であって、対象に対して一般に非毒性である成分を指す。薬学的に許容されるキャリアは、緩衝剤、賦形剤、安定化剤、および／または保存剤を含むがこれらに限定されない。一般に、本開示における使用のための医薬製剤は、対象に投与されるとき、発熱物質非含有であり、生理学的に許容される形態にある。本明細書に記載のもの以外の治療的に有用な作用因子であって、任意選択で、上記の製剤中に含まれ得る作用因子を、本開示の方法における主題の作用因子と組み合わせて投与することができる。
【０３３８】
典型的には、化合物は、例えば局所投与、眼内（例えば、硝子体内）注射によって、またはインプラントもしくはデバイスによって、を含んで眼に投与される。硝子体内注射は、例えば毛様体扁平部を通じて、縁より３ｍｍから４ｍｍ後方に注射されてよい。眼への投与のための医薬組成物は、例えば点眼剤、点眼薬、眼科用懸濁剤、眼科用乳剤、硝子体内注射、テノン嚢下注射、眼科用生体内分解性インプラントおよび非生体内分解性眼科用挿入物もしくはデポーを含む種々の方法で製剤化され得る。
【０３３９】
一部の実施形態では、化合物は、非経口投与される［例えば、静脈内（Ｉ．Ｖ．）注射、動脈内注射、骨内注射、筋内注射、髄腔内注射、皮下注射、または皮内注射により］。
【０３４０】
点眼または非経口投与に適する薬学的組成物は、本開示の１つまたは複数の作用因子を、１つまたは複数の薬学的に許容される無菌かつ等張の水性もしくは非水性の溶液、分散液、懸濁液、もしくはエマルジョン、または使用直前に無菌の溶液もしくは分散液へと再構成され得る無菌粉末と組み合わせて含み得る。溶液または分散液は、抗酸化物質、緩衝剤、静菌剤、懸濁剤、増粘剤、または製剤を意図されるレシピエントの血液と等張にする溶質を含有し得る。本開示の医薬製剤において利用され得る、適切な水性および非水性のキャリアの例は、水、エタノール、ポリオール（例えば、グリセロール、プロピレングリコール、ポリエチレングリコールなど）、植物油（例えば、オリーブ油）、注射可能な有機エステル（例えば、オレイン酸エチル）、およびこれらの適切な混合物を含む。適正な流動性は、例えば、コーティング材料（例えば、レシチン）の使用によって、分散剤の場合には必要とされる粒子径の維持によって、および、界面活性剤の使用によって維持することができる。
【０３４１】
一部の実施形態では、本開示の治療法は、インプラントもしくはデバイスから薬学的組成物を全身投与または局所投与する工程を包含する。さらに、薬学的組成物は、カプセル化され得、または、標的組織部位（例えば、骨髄または筋肉）へと送達するための形態で注射され得る。特定の実施形態では、本開示の組成物は、標的組織部位（例えば、骨髄または筋肉）に本開示の１つまたは複数の作用因子を送達し得、成長中の組織のための構造を提供し得、そして、最適には身体内へと再吸収され得るマトリクスを含み得る。例えば、マトリクスは、本開示の１つまたは複数の作用因子の遅速放出を提供し得る。このようなマトリクスは、他の移植医療用途に現在使用される材料から形成され得る。
【０３４２】
マトリクス材料の選択は、生体適合性、生分解性、機械的特性、見かけ上の様相および界面の特性のうちの１つまたは複数に基づいてもよい。本主題の組成物の特定の用途が、適切な製剤を画定する。組成物のための可能性のあるマトリクスは、生分解性でかつ化学的に画定された硫酸カルシウム、リン酸三カルシウム、ヒドロキシアパタイト、ポリ乳酸およびポリ無水物であり得る。他の可能性のある材料は、生分解性でかつ生物学的に十分に画定されたもの（例えば、骨または皮膚のコラーゲンが挙げられる）である。さらなるマトリクスは、純粋なタンパク質または細胞外マトリクスの成分から構成される。他の可能性のあるマトリクスは、非生分解性でかつ化学的に規定されたもの（例えば、焼結ヒドロキシアパタイト、バイオグラス、アルミン酸塩、または他のセラミクスが挙げられる）である。マトリクスは、上述のタイプの材料のいずれかの組み合わせ（例えば、ポリ乳酸およびヒドロキシアパタイト、または、コラーゲンおよびリン酸三カルシウム）を含み得る。バイオセラミクスは、組成物（例えば、カルシウム−アルミン酸−リン酸）中で変化され得、孔径、粒子径、粒子の形状および生分解性のうちの１つまたは複数を変更するように加工され得る。
【０３４３】
ある特定の実施形態では、本開示の薬学的組成物は、例えば、カプセル、カシェ、丸剤、錠剤、ロゼンジ（スクロースおよびアカシアまたはトラガントなどの矯味矯臭基材を使用する）、散剤、顆粒剤、水性もしくは非水性液体中の溶液もしくは懸濁液、水中油もしくは油中水の液体エマルジョン、またはエリキシルもしくはシロップ、または香錠（ゼラチンおよびグリセリン、またはスクロースおよびアカシアなどの不活性基材を使用する）、かつ／またはマウスウォッシュの形態で経口投与することもでき、各々が、所定量の、本開示の化合物と、任意選択で、１つまたは複数の他の活性成分とを含有する。本開示の化合物と、任意選択で、１つまたは複数の他の活性成分とはまた、ボーラス、舐剤、またはペーストとしても投与することができる。
【０３４４】
経口投与のための固体投薬形態（例えば、カプセル、錠剤、丸剤、糖衣錠、散剤および顆粒剤）において、本開示の１または複数の化合物は、１または複数の薬学的に受容可能なキャリア（例えば、クエン酸ナトリウム、リン酸二カルシウム、充填剤または増量剤（例えば、デンプン、ラクトース、スクロース、グルコース、マンニトールおよびケイ酸）、結合剤（例えば、カルボキシメチルセルロース、アルギン酸塩、ゼラチン、ポリビニルピロリドン、スクロースおよびアカシア）、湿潤剤（例えば、グリセロール）、崩壊剤（例えば、アガー−アガー、炭酸カルシウム、ポテトもしくはタピオカデンプン、アルギン酸、ケイ酸塩、および炭酸ナトリウム）、溶液抑制因子（ｓｏｌｕｔｉｏｎ  ｒｅｔａｒｄｉｎｇ  ａｇｅｎｔ）（例えば、パラフィン）、吸収加速剤（例えば、四級アンモニウム化合物）、加湿剤（例えば、セチルアルコールおよびモノステアリン酸グリセロール）、吸着剤（例えば、カオリンおよびベントナイトクレイ）、潤滑剤（例えば、滑石、ステアリン酸カルシウム、ステアリン酸マグネシウム、固体ポリエチレングリコール、ラウリル硫酸ナトリウム）、着色剤およびこれらの混合物を含む）と共に混合され得る。カプセル、錠剤、および丸剤の場合、医薬製剤（組成物）はまた、緩衝剤も含み得る。また、同様の種類の固形組成物も、例えば、ラクトースまたは乳糖のほか、高分子量ポリエチレングリコールを含む、１つまたは複数の賦形剤を使用して、軟充填ゼラチンカプセル中および硬充填ゼラチンカプセル中の充填剤として利用することができる。
【０３４５】
薬学的組成物の経口投与のための液体投薬形態としては、薬学的に受容可能なエマルジョン、マイクロエマルジョン、溶液、懸濁物、シロップおよびエリキシルが挙げられる。活性成分に加え、液体投薬形態は、当該分野で一般に用いられる不活性希釈剤（例えば、水または他の溶媒が挙げられる）、可溶化剤および／または乳化剤［例えば、エチルアルコール、イソプロピルアルコール、炭酸エチル、酢酸エチル、ベンジルアルコール、安息香酸ベンジル、プロピレングリコール、１，３−ブチレングリコール、油（例えば、綿実油、ピーナッツ油、トウモロコシ油、胚芽油、オリーブ油、ヒマシ油およびゴマ油）、グリセロール、テトラヒドロフリルアルコール、ポリエチレングリコール、ソルビタンの脂肪酸エステル、およびこれらの混合物］を含み得る。不活性な希釈剤に加え、経口用組成物はまた、例えば、加湿剤、乳化剤および懸濁剤、甘味剤、矯味矯臭剤、着色剤、芳香剤、保存剤およびこれらの組み合わせを含む佐剤を含み得る。
【０３４６】
懸濁液は、活性化合物に加えて、例えば、エトキシル化イソステアリルアルコール、ポリオキシエチレンソルビトール、ソルビタンエステル、微結晶性セルロース、アルミニウムメタヒドロキシド、ベントナイト、アガー−アガー、トラガント、およびこれらの組み合わせを含む懸濁剤を含有し得る。
【０３４７】
微生物の作用および／または増殖の防止は、例えば、パラベン、クロロブタノール、およびソルビン酸フェノールを含む、種々の抗細菌剤および抗真菌剤を組み入れることにより確保することができる。
【０３４８】
ある特定の実施形態では、例えば、糖、または塩化ナトリウムを含む等張化剤を組成物中に組み入れることも望ましいと考えられる。加えて、注射可能な医薬形態の吸収の遅延も、例えば、モノステアリン酸アルミニウムおよびゼラチンを含む、吸収を遅延させる作用因子を組み入れることにより、もたらすことができる。
【０３４９】
投薬レジメンは、本開示の１つまたは複数の作用因子の作用を修飾する種々の要因を考慮して主治医によって決定されることが理解される。種々の要因として、患者の赤血球数、ヘモグロビンレベル、所望の標的赤血球数、患者の年齢、患者の性別、および患者の食餌、赤血球レベルの低下に寄与し得る任意の疾患の重症度、投与時間、ならびに他の臨床的要因が挙げられるがこれらに限定されない。他の公知の活性の作用因子の、最終組成物への添加もまた、投与量に影響を及ぼし得る。進行は、赤血球レベル、ヘモグロビンレベル、網状赤血球レベル、および造血プロセスの他の指標のうちの１つまたは複数の定期的な評価によりモニタリングすることができる。
【０３５０】
特定の実施形態では、本開示はまた、本開示の１つまたは複数の作用因子のインビボ産生のための遺伝子治療を提供する。このような治療は、上に列挙したような障害のうち１つまたは複数を有する細胞または組織中に作用因子配列を導入することによってその治療作用を達成する。作用因子配列の送達は、例えば、キメラウイルスのような組換え発現ベクターまたはコロイド分散系を用いることによって達成され得る。本開示の１つまたは複数の作用因子配列の好ましい治療的送達は、標的化されたリポソームの使用である。
【０３５１】
本明細書中で教示されるような遺伝子治療に利用され得る種々のウイルスベクターとしては、アデノウイルス、ヘルペスウイルス、ワクシニア、または、ＲＮＡウイルス（例えば、レトロウイルス）が挙げられる。レトロウイルスベクターは、マウスもしくはトリのレトロウイルスの誘導体であり得る。単一の外来遺伝子が挿入され得るレトロウイルスベクターの例としては、以下が挙げられるがこれらに限定されない：モロニーマウス白血病ウイルス（ＭｏＭｕＬＶ）、ハーベーマウス肉腫ウイルス（ＨａＭｕＳＶ）、マウス乳腺癌ウイルス（ＭｕＭＴＶ）およびラウス肉腫ウイルス（ＲＳＶ）。多数のさらなるレトロウイルスベクターが多数の遺伝子を組み込み得る。これらのベクターは全て、形質導入された細胞が同定および生成され得るように、選択マーカーについての遺伝子を移送または組み込み得る。レトロウイルスベクターは、例えば、糖、糖脂質またはタンパク質を付着させることによって、標的特異的とされ得る。好ましい標的化は、抗体を用いて達成される。当業者は、本開示の１つまたは複数の作用因子を含むレトロウイルスベクターの標的特異的な送達を可能にするために、特定のポリヌクレオチド配列がレトロウイルスゲノム中に挿入され得るか、または、ウイルスエンベロープに付着され得ることを認識する。
【０３５２】
あるいは、組織培養細胞は、従来のリン酸カルシウムトランスフェクション法によって、レトロウイルスの構造遺伝子（ｇａｇ、ｐｏｌおよびｅｎｖ）をコードするプラスミドを用いて直接トランスフェクトされ得る。これらの細胞は、次いで、関心のある遺伝子を含むベクタープラスミドでトランスフェクトされる。得られた細胞は、培養培地中にレトロウイルスベクターを放出する。
【０３５３】
本開示の１つまたは複数の作用因子のための別の標的化送達システムは、コロイド分散系である。コロイド分散系としては、例えば、高分子複合体、ナノカプセル、ミクロスフェア、ビーズおよび脂質ベースの系（水中油エマルジョン、ミセル、混合型ミセルおよびリポソームを含む）が挙げられる。特定の実施形態において、本開示の好ましいコロイド系は、リポソームである。リポソームは、インビトロおよびインビボで送達ビヒクルとして有用な人工の膜小胞である。ＲＮＡ、ＤＮＡおよびインタクトなビリオンが、水性の内部に封入され得、そして、生物学的に活性な形態で細胞へと送達され得る［例えば、Ｆｒａｌｅｙら（１９８１年）、Ｔｒｅｎｄｓ  Ｂｉｏｃｈｅｍ．  Ｓｃｉ．、６巻：７７頁を参照のこと］。リポソームビヒクルを用いた効率的な遺伝子移入のための方法は当該分野で公知である［例えば、Ｍａｎｎｉｎｏら（１９８８年）、Ｂｉｏｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ、６巻：６８２頁、１９８８を参照のこと］。
【０３５４】
リポソームの組成は通常、リン脂質の組み合わせであり、ステロイド（例えば、コレステロール）を含み得る。リポソームの物理的特徴は、ｐＨ、イオン強度、および二価カチオンの存在に依存する。また、他のリン脂質または他の脂質であって、例えば、ホスファチジル化合物（例えば、ホスファチジルグリセロール、ホスファチジルコリン、ホスファチジルセリン、ホスファチジルエタノールアミン、スフィンゴ脂質、セレブロシドまたはガングリオシド）、卵ホスファチジルコリン、ジパルミトイルホスファチジルコリンおよびジステアロイルホスファチジルコリンを含むリン脂質または脂質も使用することができる。例えば、器官特異性、細胞特異性および細胞小器官特異性に基づいたリポソームの標的化もまた可能であり、当該分野で公知である。
【実施例】
【０３５５】
（実施例）
本発明は、ここで、一般的に記載されるが、単に特定の実施形態および本発明の実施形態を例示する目的のために含められ、本発明を限定することは意図されない以下の実施例を参照するとより容易に理解される。
【０３５６】
（実施例１）
ＡｃｔＲＩＩａ−Ｆｃ融合タンパク質
本出願人らは、間に最小限のリンカーを有する、ヒトＡｃｔＲＩＩａの細胞外ドメインを、ヒトＦｃドメインまたはマウスＦｃドメインに融合させた、可溶性ＡｃｔＲＩＩＡ融合タンパク質を構築した。構築物を、それぞれ、ＡｃｔＲＩＩＡ−ｈＦｃおよびＡｃｔＲＩＩＡ−ｍＦｃと呼ぶ。
ＣＨＯ細胞株から精製されたＡｃｔＲＩＩＡ−ｈＦｃを、下記（配列番号３２）に示す。
【０３５７】
【化２５】
2018534335.tif 000029
【０３５８】
ＡｃｔＲＩＩＡ−ｈＦｃおよびＡｃｔＲＩＩＡ−ｍＦｃタンパク質をＣＨＯ細胞株内で発現させた。３つの異なるリーダー配列：
（ｉ）ミツバチメリチン（ＨＢＭＬ）：ＭＫＦＬＶＮＶＡＬＶＦＭＶＶＹＩＳＹＩＹＡ（配列番号３３）
（ｉｉ）組織プラスミノーゲンアクチベーター（ＴＰＡ）：ＭＤＡＭＫＲＧＬＣＣＶＬＬＬＣＧＡＶＦＶＳＰ（配列番号３４）
（ｉｉｉ）天然：ＭＧＡＡＡＫＬＡＦＡＶＦＬＩＳＣＳＳＧＡ（配列番号３５）
について検討した。
【０３５９】
選択された形態は、ＴＰＡリーダーを使用し、以下のプロセシングされていないアミノ酸配列を有する：
【化２６】
2018534335.tif 000030
【０３６０】
このポリペプチドは、以下の核酸配列によりコードされる：
【化２７】
2018534335.tif 000031
【化２８】
2018534335.tif 000032
【０３６１】
ＡｃｔＲＩＩＡ−ｈＦｃおよびＡｃｔＲＩＩＡ−ｍＦｃはいずれも、組換え発現に目覚ましく適した。図３において示される通り、タンパク質は、タンパク質の、単一で十分に明確なピークとして精製した。Ｎ末端のシーケンシングにより、−ＩＬＧＲＳＥＴＱＥ（配列番号３８）の単一の配列を明らかにした。精製は、一連のカラムクロマトグラフィー工程であって、例えば、以下：プロテインＡクロマトグラフィー、Ｑセファロースクロマトグラフィー、フェニルセファロースクロマトグラフィー、サイズ除外クロマトグラフィー、およびカチオン交換クロマトグラフィーの３つまたはこれ超を、任意の順序で含む工程により達成することができた。精製は、ウイルス濾過および緩衝液交換により完了させることができた。ＡｃｔＲＩＩＡ−ｈＦｃタンパク質は、サイズ除外クロマトグラフィーにより決定されるように、＞９８％の純度まで精製し、ＳＤＳ  ＰＡＧＥにより決定されるように、＞９５％の純度まで精製した。
【０３６２】
ＡｃｔＲＩＩＡ−ｈＦｃおよびＡｃｔＲＩＩＡ−ｍＦｃは、リガンドに対する高アフィニティーを示した。ＧＤＦ−１１またはアクチビンＡは、標準的なアミンカップリング手順を使用して、Ｂｉａｃｏｒｅ（商標）ＣＭ５チップ上に固定化した。ＡｃｔＲＩＩＡ−ｈＦｃタンパク質およびＡｃｔＲＩＩＡ−ｍＦｃタンパク質を、システム上にロードし、結合を測定した。ＡｃｔＲＩＩＡ−ｈＦｃは、アクチビンに、５×１０−１２の解離定数（ＫＤ）で結合し、ＧＤＦ１１に、９．９６×１０−９のＫＤで結合した。図４を参照されたい。ＡｃｔＲＩＩＡ−ｍＦｃも同様に挙動した。
【０３６３】
ＡｃｔＲＩＩＡ−ｈＦｃは、薬物動態研究において極めて安定であった。ラットに、１ｍｇ／ｋｇ、３ｍｇ／ｋｇ、または１０ｍｇ／ｋｇのＡｃｔＲＩＩＡ−ｈＦｃタンパク質を投薬し、２４、４８、７２、１４４、および１６８時間で、タンパク質の血漿レベルを測定した。別個の研究では、ラットに、１ｍｇ／ｋｇ、１０ｍｇ／ｋｇ、または３０ｍｇ／ｋｇで投薬した。ラットでは、ＡｃｔＲＩＩＡ−ｈＦｃの血清半減期は、１１〜１４日間であり、薬物の循環レベルは、２週間後においても極めて高かった（１ｍｇ／ｋｇ、１０ｍｇ／ｋｇ、または３０ｍｇ／ｋｇの初回投与について、それぞれ、１１μｇ／ｍｌ、１１０μｇ／ｍｌ、または３０４μｇ／ｍｌ）。カニクイザルでは、血漿半減期は、実質的に１４日間を超え、薬物の循環レベルは、１ｍｇ／ｋｇ、１０ｍｇ／ｋｇ、または３０ｍｇ／ｋｇの初回投与について、それぞれ、２５μｇ／ｍｌ、３０４μｇ／ｍｌ、または１４４０μｇ／ｍｌであった。
【０３６４】
（実施例２）
ＡｃｔＲＩＩＡ−ｈＦｃタンパク質の特徴付け
ＡｃｔＲＩＩＡ−ｈＦｃ融合タンパク質は、安定的にトランスフェクトされたＣＨＯ−ＤＵＫＸ  Ｂ１１細胞内で、ｐＡＩＤ４ベクター（ＳＶ４０  ｏｒｉ／エンハンサー、ＣＭＶプロモーター）から、配列番号３の組織プラスミノーゲンリーダー配列を使用して発現させた。上記の実施例１で記載した通りに精製されたタンパク質は、配列番号３２の配列を有した。Ｆｃ部分は、配列番号３２において示される、ヒトＩｇＧ１のＦｃ配列である。タンパク質解析は、ＡｃｔＲＩＩＡ−ｈＦｃ融合タンパク質は、ジスルフィド結合によるホモ二量体として形成されることを明らかにする。
【０３６５】
ＣＨＯ細胞により発現させた材料の、アクチビンＢリガンドに対するアフィニティーは、ヒト２９３細胞内で発現させたＡｃｔＲＩＩａ−ｈＦｃ融合タンパク質について報告されているアフィニティー［ｄｅｌ  Ｒｅら（２００４年）、Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ．、２７９巻（５１
号）：５３１２６〜５３１３５頁を参照されたい］より大きい。加えて、ＴＰＡリーダー配列の使用は、他のリーダー配列より大きな生成をもたらし、天然のリーダーとともに発現させたＡｃｔＲＩＩＡ−Ｆｃと異なり、高純度のＮ末端配列をもたらした。天然のリーダー配列の使用は、ＡｃｔＲＩＩＡ−Ｆｃの２つの主要な分子種であって、各々が異なるＮ末端配列を有する分子種を結果としてもたらした。
（実施例３）
代替ＡｃｔＲＩＩＡ−Ｆｃタンパク質
【０３６６】
本明細書で記載される方法に従い使用され得る、様々なＡｃｔＲＩＩＡ改変体は、参照によりその全体において本明細書に組み込まれる、ＷＯ２００６／０１２６２７として公開されている国際特許出願（例えば、５５〜５８頁を参照されたい）において記載されている。代替的な構築物は、Ｃ末端テール（ＡｃｔＲＩＩＡの細胞外ドメインの最後の１５アミノ酸）を欠失させている場合がある。このような構築物の配列を下記（Ｆｃ部分に下線を付す）（配列番号３９）に提示する。
【化２９】
2018534335.tif 000033
（実施例４）
ＡｃｔＲＩＩＢ−Ｆｃ融合タンパク質の生成
【０３６７】
本出願人らは、間に最小限のリンカー（３つのグリシンアミノ酸）を有する、ヒトＡｃｔＲＩＩＢの細胞外ドメインを、ヒトＦｃドメインまたはマウスＦｃドメインに融合させた、可溶性ＡｃｔＲＩＩＢ融合タンパク質を構築した。構築物を、それぞれ、ＡｃｔＲＩＩＢ−ｈＦｃおよびＡｃｔＲＩＩＢ−ｍＦｃと呼ぶ。
【０３６８】
ＡｃｔＲＩＩＢ−ｈＦｃをＣＨＯ細胞株からの精製物として下記に示す（配列番号４０）：
【化３０】
2018534335.tif 000034
【０３６９】
ＡｃｔＲＩＩＢ−ｈＦｃおよびＡｃｔＲＩＩＢ−ｍＦｃタンパク質をＣＨＯ細胞株内で発現させた。３つの異なるリーダー配列：（ｉ）ミツバチメリチン（ＨＢＭＬ）、ｉｉ）組織プラスミノーゲンアクチベーター（ＴＰＡ）および（ｉｉｉ）天然：ＭＧＡＡＡＫＬＡＦＡＶＦＬＩＳＣＳＳＧＡ（配列番号７７）について検討した。
【０３７０】
選択された形態は、ＴＰＡリーダーを使用し、以下のプロセシングされていないアミノ酸配列（配列番号４１）を有する。
【化３１】
2018534335.tif 000035
【０３７１】
このポリペプチドは、以下の核酸配列（配列番号４２）によってコードされる。
【化３２】
2018534335.tif 000036
【化３３】
2018534335.tif 000037
【０３７２】
ＣＨＯ細胞により生成された材料の、Ｎ末端のシーケンシングにより、−ＧＲＧＥＡＥ（配列番号４３）の主要な配列を明らかにした。とりわけ、文献において報告されている他の構築物は、−ＳＧＲ・・・配列で始まる。
【０３７３】
精製は、一連のカラムクロマトグラフィー工程であって、例えば、以下：プロテインＡクロマトグラフィー、Ｑセファロースクロマトグラフィー、フェニルセファロースクロマトグラフィー、サイズ除外クロマトグラフィー、およびカチオン交換クロマトグラフィーの３つまたはこれ超を、任意の順序で含む工程により達成することができた。精製は、ウイルス濾過および緩衝液交換により完了させることができた。
【０３７４】
ＡｃｔＲＩＩＢ−Ｆｃ融合タンパク質はまた、ＨＥＫ２９３細胞内およびＣＯＳ細胞内でも発現された。全ての細胞株および妥当な培養条件に由来する材料は、インビボにおいて筋構築活性を有するタンパク質をもたらしたが、おそらく細胞株の選択および／または培養条件に関連する、効力の変動性も観察された。
【０３７５】
本出願人らは、ＡｃｔＲＩＩＢの細胞外ドメイン内に一連の変異を生成し、これらの変異体タンパク質を、細胞外ＡｃｔＲＩＩＢとＦｃドメインとの間の可溶性融合タンパク質として生成した。バックグラウンドのＡｃｔＲＩＩＢ−Ｆｃ融合物は、配列番号４０の配列を有する。
【０３７６】
Ｎ末端およびＣ末端の切断を含む種々の変異を、バックグラウンドのＡｃｔＲＩＩＢ−Ｆｃタンパク質に導入した。本明細書に提示したデータに基づくと、これらの構築物は、ＴＰＡリーダーとともに発現させる場合、Ｎ末端のセリンを欠くことが予想される。変異は、ＰＣＲ変異誘発により、ＡｃｔＲＩＩＢ細胞外ドメイン内に生成した。ＰＣＲの後、フラグメントを、Ｑｉａｇｅｎカラムを介して精製し、ＳｆｏＩおよびＡｇｅＩで消化し、ゲル精製した。ライゲーションすると、ヒトＩｇＧ１との融合物キメラを創出するように、これらのフラグメントを、発現ベクターであるｐＡＩＤ４（ＷＯ２００６／０１２６２７を参照されたい）にライゲーションした。Ｅ．ｃｏｌｉ  ＤＨ５アルファへと形質転換させたら、コロニーを採取し、ＤＮＡを単離した。マウス構築物（ｍＦｃ）のために、マウスＩｇＧ２ａで、ヒトＩｇＧ１を置換した。全ての変異体の配列を検証した。
【０３７７】
変異体の全ては、ＨＥＫ２９３Ｔ細胞内で、一過性のトランスフェクションにより生成した。まとめると、５００ｍｌのスピナー内で、ＨＥＫ２９３Ｔ細胞を、容量２５０ｍｌのＦｒｅｅｓｔｙｌｅ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）培地中に１ｍｌ当たりの細胞６×１０５個で設定し、一晩にわたり増殖させた。翌日、これらの細胞を、最終ＤＮＡ濃度を０．５ｕｇ／ｍｌとするＤＮＡ：ＰＥＩ（１：１）複合体で処理した。４時間後、２５０ｍｌの培地を添加し、細胞を、７日間にわたり増殖させた。細胞をスピンダウンすることにより馴化培地を採取し、濃縮した。
【０３７８】
変異体を、例えば、プロテインＡカラムを含む、様々な技法を使用して精製し、低ｐＨ（３．０）のグリシン緩衝液で溶出させた。中和の後、これらを、ＰＢＳに対して透析した。
【０３７９】
変異体はまた、同様な方法により、ＣＨＯ細胞内でも生成した。変異体を、参照により本明細書に組み込まれる、ＷＯ２００８／０９７５４１およびＷＯ２００６／０１２６２７において記載されている、結合アッセイおよび／またはバイオアッセイにおいて調べた。一部の場合には、アッセイを、精製タンパク質ではなく、馴化培地について実施した。ＡｃｔＲＩＩＢの追加のバリエーションについては、米国特許第７，８４２，６６３号において記載されている。
【０３８０】
本出願人らは、Ｎ末端およびＣ末端短縮（天然タンパク質配列番号１の残基２５〜１３１）を有し、Ｎ末端で天然ＡｃｔＲＩＩＢリーダーを置換するＴＰＡリーダー配列に、およびＣ末端で最小限のリンカー（３つのグリシン残基）を介してヒトＦｃドメインに融合された、ヒトＡｃｔＲＩＩＢ細胞外ドメインを含むＡｃｔＲＩＩＢ（２５−１３１）−ｈＦｃ融合タンパク質を生成した（図１６）。この融合タンパク質をコードするヌクレオチド配列を図１７Ａおよび１７Ｂに示す。本出願人らは、コドンを改変し、最初の形質転換体の発現レベルに実質的な改善を提供したＡｃｔＲＩＩＢ（２５−１３１）−ｈＦｃタンパク質をコードする改変体核酸を見出した（図１８）。
【０３８１】
成熟タンパク質は、以下のアミノ酸配列を有する（Ｎ末端はＮ末端シーケンシングによって確認した）（配列番号７８）。
【化３４】
2018534335.tif 000038
【化３５】
2018534335.tif 000039
【０３８２】
アミノ酸１〜１０７はＡｃｔＲＩＩＢに由来する。
【０３８３】
発現分子は、一連のカラムクロマトグラフィー工程であって、例えば、以下：プロテインＡクロマトグラフィー、Ｑセファロースクロマトグラフィー、フェニルセファロースクロマトグラフィー、サイズ除外クロマトグラフィー、およびカチオン交換クロマトグラフィーのうちの３つまたはこれより多くを、任意の順序で含む工程を使用して精製された。精製は、ウイルス濾過および緩衝液交換により完了し得る。
【０３８４】
ＡｃｔＲＩＩＢ（２５−１３１）−ｈＦｃおよびその全長対応物ＡｃｔＲＩＩＢ（２０−１３４）−ｈＦｃに対するいくつかのリガンドに対するアフィニティーを、インビトロにおいて、Ｂｉａｃｏｒｅ（商標）装置により評価し、結果を、下記の表にまとめる。Ｋｄ値は、複合体の会合および解離が極めて急速であり、ｋｏｎおよびｋｏｆｆの正確な決定が妨げられるために、定常状態アフィニティーの当てはめにより得た。ＡｃｔＲＩＩＢ（２５−１３１）−ｈＦｃは、アクチビンＡ、アクチビンＢおよびＧＤＦ１１に高アフィニティーで結合した。
ＡｃｔＲＩＩＢ−ｈＦｃ体のリガンドアフィニティー：
【表Ｂ】
2018534335.tif 000040
（実施例５）
ＧＤＦトラップの生成
【０３８５】
本出願人らは、以下のようにＧＤＦトラップを構築した。アクチビンＡへの結合を、ＧＤＦ１１および／またはミオスタチンと比べて大幅に低減した（配列番号１内の７９位における、ロイシンからアスパラギン酸への置換の帰結として）、改変ＡｃｔＲＩＩＢの細胞外ドメイン（Ｌ７９Ｄ置換を有する配列番号１のアミノ酸２０〜１３４）を有するポリペプチドを、間に最小限のリンカー（３つのグリシンアミノ酸）を有する、ヒトＦｃドメインまたはマウスＦｃドメインに融合させた。構築物を、それぞれ、ＡｃｔＲＩＩＢ（Ｌ７９Ｄ  ２０〜１３４）−ｈＦｃおよびＡｃｔＲＩＩＢ（Ｌ７９Ｄ  ２０〜１３４）−ｍＦｃと呼ぶ。７９位にアスパラギン酸ではなく、グルタミン酸を有する代替的形態についても、同様に実施した（Ｌ７９Ｅ）。下記の配列番号４４に照らした２２６位において、バリンではなく、アラニンを有する代替的形態もまた、生成し、調べる全ての点において、同等に実施した。７９位におけるアスパラギン酸（配列番号１に照らした；または配列番号４４に照らした６０位）は、下記で二重下線により指し示す。配列番号４４に照らした２２６位におけるバリンもまた、下記で二重下線により指し示す。
【０３８６】
ＧＤＦトラップＡｃｔＲＩＩＢ（Ｌ７９Ｄ  ２０−１３４）−ｈＦｃをＣＨＯ細胞株からの精製物として下記に示す（配列番号４４）。
【化３６】
2018534335.tif 000041
【０３８７】
ＧＤＦトラップのＡｃｔＲＩＩＢに由来する部分は、下記（配列番号４５）に示されるアミノ酸配列を有し、この部分は、単量体として使用することもでき、単量体、二量体またはより高次の複合体としての非Ｆｃ融合タンパク質として使用することもできるであろう。
【化３７】
2018534335.tif 000042
【０３８８】
ＧＤＦトラップタンパク質をＣＨＯ細胞株で発現させた。３つの異なるリーダー配列：
（ｉ）ミツバチメリチン（ＨＢＭＬ）、（ｉｉ）組織プラスミノーゲンアクチベーター（ＴＰＡ）、および（ｉｉｉ）天然について検討した。
【０３８９】
選択された形態は、ＴＰＡリーダーを使用し、以下のプロセシングされていないアミノ酸配列を有する。
【化３８】
2018534335.tif 000043
【化３９】
2018534335.tif 000044
【０３９０】
このポリペプチドは、以下の核酸配列（配列番号４７）によってコードされる。
【化４０】
2018534335.tif 000045
【０３９１】
精製は、一連のカラムクロマトグラフィー工程であって、例えば、以下：プロテインＡクロマトグラフィー、Ｑセファロースクロマトグラフィー、フェニルセファロースクロマトグラフィー、サイズ除外クロマトグラフィー、およびカチオン交換クロマトグラフィーの３つまたはこれ超を、任意の順序で含む工程により達成することができた。精製は、ウイルス濾過および緩衝液交換により完了させることができた。精製スキームの例では、細胞培養培地を、プロテインＡカラムに通し、１５０ｍＭのトリス／ＮａＣｌ（ｐＨ８．０）中で洗浄し、次いで、５０ｍＭのトリス／ＮａＣｌ（ｐＨ８．０）中で洗浄し、０．１Ｍのグリシン、ｐＨ３．０で溶出させる。低ｐＨの溶出物は、ウイルス除去工程として、室温で３０分間にわたり保持する。次いで、溶出物を中和させ、Ｑセファロースイオン交換カラムに通し、５０ｍＭのトリス、ｐＨ８．０、５０ｍＭのＮａＣｌ中で洗浄し、１５０ｍＭ〜３００ｍＭの間の濃度のＮａＣｌを伴う、５０ｍＭのトリス、ｐＨ８．０中で溶出させる。次いで、溶出物を、５０ｍＭのトリス、ｐＨ８．０、１．１Ｍの硫酸アンモニウムへと交換し、フェニルセファロースカラムに通し、洗浄し、１５０〜３００ｍＭの間で硫酸アンモニウムを伴う、５０ｍＭのトリス、ｐＨ８．０で溶出させる。使用のために、溶出物を透析し、濾過する。
【０３９２】
追加のＧＤＦトラップ（アクチビンＡへの結合の、ミオスタチンまたはＧＤＦ１１への結合と比べた比を低減するように改変されたＡｃｔＲＩＩＢ−Ｆｃ融合タンパク質）は、参照により本明細書に組み込まれる、ＷＯ２００８／０９７５４１およびＷＯ２００６／０１２６２７において記載されている。
【０３９３】
（実施例６）
ＧＤＦ−１１およびアクチビンに媒介されるシグナル伝達についてのバイオアッセイ
Ａ−２０４レポーター遺伝子アッセイを使用して、ＡｃｔＲＩＩＢ−Ｆｃタンパク質およびＧＤＦトラップの、ＧＤＦ−１１およびアクチビンＡによるシグナル伝達に対する効果を評価した。細胞株：ヒト横紋筋肉腫（筋肉に由来する）。レポーターベクター：ｐＧＬ３（ＣＡＧＡ）１２（Ｄｅｎｎｌｅｒら、１９９８年、ＥＭＢＯ、１７巻：３０９１〜３１００頁
において記載されている）。ＣＡＧＡ１２モチーフは、ＴＧＦベータ応答性遺伝子（例えば、ＰＡＩ−１遺伝子）内に存在するので、このベクターは、ＳＭＡＤ２およびＳＭＡＤ３を介してシグナル伝達する因子のために一般的に使用される。
【０３９４】
１日目：Ａ−２０４細胞を、４８ウェルプレートに分ける。
【０３９５】
２日目：Ａ−２０４細胞に、１０ｕｇのｐＧＬ３（ＣＡＧＡ）１２またはｐＧＬ３（ＣＡＧＡ）１２（１０ｕｇ）＋ｐＲＬＣＭＶ（１μｇ）およびＦｕｇｅｎｅをトランスフェクトする。
【０３９６】
３日目：因子（培地＋０．１％のＢＳＡ中に希釈された）を添加する。細胞に添加する前に、１時間にわたり、阻害剤を、因子と共に、あらかじめインキュベートする必要がある。６時間後、細胞を、ＰＢＳですすぎ、溶解させた。
【０３９７】
これに続いて、ルシフェラーゼアッセイを行う。いかなる阻害剤も存在しない下で、アクチビンＡは、レポーター遺伝子発現に対する１０倍の刺激およびＥＤ５０約２ｎｇ／ｍｌを示した。ＧＤＦ−１１：１６倍の刺激、ＥＤ５０：約１．５ｎｇ／ｍｌを示した。
【０３９８】
このアッセイでは、ＡｃｔＲＩＩＢ（２０〜１３４）は、アクチビンＡ、ＧＤＦ−８、およびＧＤＦ−１１の活性の強力な阻害剤である。下記で記載される、ＡｃｔＲＩＩＢ改変体もまた、このアッセイで調べた。
【０３９９】
（実施例７）
ＡｃｔＲＩＩＢ−Ｆｃ改変体の細胞ベースの活性
ＡｃｔＲＩＩＢ−Ｆｃタンパク質およびＧＤＦトラップの活性を、上記で記載した細胞ベースのアッセイで調べた。結果を、下記の表にまとめる。一部の改変体を、異なるＣ末端切断構築物で調べた。上記で論じた通り、５または１５アミノ酸の切断は、活性の低減を引き起こした。ＧＤＦトラップ（Ｌ７９Ｄ改変体およびＬ７９Ｅ改変体）は、ＧＤＦ−１１の野生型阻害をほとんど保持しながら、アクチビンＡ阻害の実質的な喪失を示した。
ＧＤＦ１１およびアクチビンＡへの可溶性ＡｃｔＲＩＩＢ−Ｆｃ結合：
【表Ｃ−１】
2018534335.tif 000046
【表Ｃ−２】
2018534335.tif 000047
【０４００】
いくつかの改変体は、ラットにおける血清半減期について評価されている。ＡｃｔＲＩＩＢ（２０〜１３４）−Ｆｃの血清半減期は、およそ７０時間である。ＡｃｔＲＩＩＢ（Ａ２４Ｎ  ２０〜１３４）−Ｆｃの血清半減期は、およそ１００〜１５０時間である。Ａ２４Ｎ改変体の、細胞ベースのアッセイ（上記）における活性は、野生型分子と同等である。より長い半減期と併せて、これは、時間をわたって、Ａ２４Ｎ改変体は、タンパク質単位当たりで、野生型分子より大きな効果をもたらすことを意味する。Ａ２４Ｎ改変体、および上記で調べた他の改変体のいずれかは、Ｌ７９Ｄ改変体またはＬ７９Ｅ改変体など、ＧＤＦトラップ分子と組み合わせることができる。
【０４０１】
（実施例８）
ＧＤＦ−１１およびアクチビンＡへの結合
ある特定のＡｃｔＲＩＩＢ−Ｆｃタンパク質およびＧＤＦトラップの、リガンドへの結合について、Ｂｉａｃｏｒｅ（商標）アッセイで調べた。
【０４０２】
ＡｃｔＲＩＩＢ−Ｆｃ改変体または野生型タンパク質を、抗ｈＦｃ抗体を使用するシステム上に捕捉した。リガンドを注入し、捕捉された受容体タンパク質上に流した。結果を、下記の表にまとめる。
【０４０３】
ＩＩＢ改変体のリガンド結合特異性
【表Ｄ−１】
2018534335.tif 000048
【表Ｄ−２】
2018534335.tif 000049
【０４０４】
無細胞アッセイにおいて得られたこれらのデータにより、細胞ベースのアッセイによるデータが確認され、Ａ２４Ｎ改変体は、ＡｃｔＲＩＩＢ（２０〜１３４）−ｈＦｃ分子のリガンド結合活性と同様なリガンド結合活性を保持し、Ｌ７９Ｄ分子またはＬ７９Ｅ分子は、ミオスタチンおよびＧＤＦ１１への結合を保持するが、アクチビンＡへの結合の顕著な減殺（定量化不可能な結合）を示すことが実証される。
【０４０５】
他の改変体も、ＷＯ２００６／０１２６２７（参照によりその全体において本明細書に組み込まれる）で報告される通りに生成され、調べられている。例えば、デバイスにカップリングさせたリガンドを使用し、カップリングさせたリガンド上に受容体を流す、５９〜６０頁を参照されたい。とりわけ、Ｋ７４Ｙ、Ｋ７４Ｆ、Ｋ７４Ｉ（および、おそらく、Ｋ７４Ｌなど、Ｋ７４における他の疎水性置換）およびＤ８０Ｉは、アクチビンＡ（ＡｃｔＡ）への結合の、ＧＤＦ１１への結合に対する比の、野生型Ｋ７４分子と比べた減少を引き起こす。これらの改変体に関するデータの表を、下記に再掲載する。
ＧＤＦ１１およびアクチビンＡへの可溶性ＡｃｔＲＩＩＢ−Ｆｃ改変体の結合（Ｂｉａｃｏｒｅ（商標）アッセイ）
【表Ｅ−１】
2018534335.tif 000050
【表Ｅ−２】
2018534335.tif 000051
（実施例９）
短縮型ＡｃｔＲＩＩＢ細胞外ドメインを有するＧＤＦトラップの生成
【０４０６】
ＡｃｔＲＩＩＢ（Ｌ７９Ｄ  ２０〜１３４）−ｈＦｃと呼ばれるＧＤＦトラップを、Ｎ末端における、ＴＰＡリーダーの、ロイシンからアスパラギン酸への置換（配列番号１内の残基７９における）を含有するＡｃｔＲＩＩＢ細胞外ドメイン（配列番号１内の残基２０〜１３４）への融合と、Ｃ末端における、ヒトＦｃドメインの、最小限のリンカー（３つのグリシン残基）による融合とにより生成した（図５）。この融合タンパク質に対応するヌクレオチド配列を、図６Ａおよび６Ｂに示す。
【０４０７】
ＡｃｔＲＩＩＢ（Ｌ７９Ｄ  ２５−１３１）−ｈＦｃと呼ばれる短縮型ＡｃｔＲＩＩＢ細胞外ドメインを有するＧＤＦトラップを、Ｎ末端における、ＴＰＡリーダーの、ロイシンからアスパラギン酸への置換（配列番号１内の残基７９における）を含有する短縮型細胞外ドメイン（配列番号１内の残基２５〜１３１）への融合と、Ｃ末端における、ヒトＦｃドメインの、最小限のリンカー（３つのグリシン残基）による融合とにより生成した（図７、配列番号６１）。ＡｃｔＲＩＩＢ（Ｌ７９Ｄ  ２５−１３１）−ｈＦｃ（配列番号６４）のプロセシング後の形態を図９に示す。この融合タンパク質をコードする１つのヌクレオチド配列を図８Ａおよび８Ｂ（配列番号６２）に示し、正確に同じ融合タンパク質をコードする代替ヌクレオチド配列を図１１Ａおよび１１Ｂ（配列番号６６）に示す。
【０４０８】
（実施例１０）
二重短縮型ＡｃｔＲＩＩＢ細胞外ドメインを有するＧＤＦトラップによる選択的リガンド結合
ＧＤＦトラップおよび他のＡｃｔＲＩＩＢ−ｈＦｃタンパク質の、いくつかのリガンドに対するアフィニティーを、インビトロにおいて、Ｂｉａｃｏｒｅ（商標）装置により評価した。結果を、下記の表にまとめる。Ｋｄ値は、複合体の会合および解離が極めて急速であり、ｋｏｎおよびｋｏｆｆの正確な決定が妨げられるために、定常状態アフィニティーの当てはめにより得た。
ＡｃｔＲＩＩＢ−ｈＦｃ改変体のリガンド選択性：
【表Ｆ】
2018534335.tif 000052
【０４０９】
短縮型細胞外ドメインを有するＧＤＦトラップである、ＡｃｔＲＩＩＢ（Ｌ７９Ｄ  ２５〜１３１）−ｈＦｃは、より長い改変体である、ＡｃｔＲＩＩＢ（Ｌ７９Ｄ  ２０〜１３４）−ｈＦｃにより示されるリガンドへの選択性に匹敵するかまたはこれを凌駕し、アクチビンＡへの結合の顕著な喪失、アクチビンＢへの結合の部分的喪失、およびＬ７９Ｄ置換を欠くＡｃｔＲＩＩＢ−ｈＦｃ対応物と比較してほぼ完全なＧＤＦ１１への結合の保持を伴った。短縮単独（Ｌ７９Ｄ置換を有さない）では、本実施例で示されるリガンド間の選択性を変更しなかった［ＡｃｔＲＩＩＢ（Ｌ７９  ２５〜１３１）−ｈＦｃを、ＡｃｔＲＩＩＢ（Ｌ７９  ２０〜１３４）−ｈＦｃと比較する］ことに注目されたい。ＡｃｔＲＩＩＢ（Ｌ７９Ｄ  ２５−１３１）−ｈＦｃもＳｍａｄ２／３シグナル伝達リガンドＧＤＦ８ならびにＳｍａｄ１／５／８リガンドＢＭＰ６およびＢＭＰ１０への強いから中程度の結合を保持している。
（実施例１１）
ＡｃｔＲＩＩＢ５由来ＧＤＦトラップ
【０４１０】
他の研究者らも、ＡｃｔＲＩＩＢの膜貫通ドメインを含むエクソン４が、異なるＣ末端配列により置きかえられた、ＡｃｔＲＩＩＢの代替的な可溶性形態（ＡｃｔＲＩＩＢ５と表記される）について報告している（例えば、ＷＯ２００７／０５３７７５を参照されたい）。
【０４１１】
リーダーを含まない天然ヒトＡｃｔＲＩＩＢ５の配列は以下の通りである。
【化４１】
2018534335.tif 000053
【０４１２】
記載される通りに、ロイシンからアスパラギン酸への置換、または他の酸性置換を、天然の７９位（下線を付す）に施して、以下の配列を有する、改変体ＡｃｔＲＩＩＢ５（Ｌ７９Ｄ）を構築することができる。
【化４２】
2018534335.tif 000054
【０４１３】
この改変体を、ＴＧＧＧリンカー（一重下線）により、ヒトＦｃ（二重下線）に接続して、以下の配列を有するヒトＡｃｔＲＩＩＢ５（Ｌ７９Ｄ）−ｈＦｃ融合タンパク質を生成することができる。
【化４３】
2018534335.tif 000055
【０４１４】
この構築物はＣＨＯ細胞において発現され得る。
（実施例１２）
ＭＤＳのマウスモデルにおける無効赤血球生成および貧血へのＧＤＦトラップの効果
【０４１５】
本出願人らは、不完全な前駆体成熟および無効性造血を特徴とする、ＭＤＳのＮＵＰ９８−ＨＯＸＤ１３マウスモデルにおいてＧＤＦトラップＡｃｔＲＩＩＢ（Ｌ７９Ｄ  ２５−１３１）−ｍＦｃの効果を調査した。このモデルでは、疾患重症度は年齢と共に増加し、最終的に大部分のマウスにおいて急性骨髄性白血病に進行し、それらはおよそ１４カ月の平均寿命を有する。およそ４カ月齢で始まって、これらのマウスは貧血、白血球減少症、無効赤血球生成、および正常細胞性から過形成性である骨髄を示す［Ｌｉｎら、（２００５年）Ｂｌｏｏｄ  １０６巻：２８７〜２９５頁］。慢性投与の効果をモニタリングするために、ＭＤＳマウスをＡｃｔＲＩＩＢ（Ｌ７９Ｄ  ２５−１３１）−ｍＦｃ（１０ｍｇ／ｋｇ、ｓ．ｃ．）またはビヒクルを用いて１週間に２回、４カ月齢で開始して、７カ月間続けて処置し、その間、全血球計算分析のために血液試料（５０μＬ）をベースライン時およびその後毎月回収した。予測される通り６カ月齢ＭＤＳマウスは、野生型マウスと比較して重度の貧血を発症し（図１３Ａ）、骨髄分析は、年齢適合ＦＶＢ野生型マウスと比べてＭＤＳマウスにおいて、無効赤血球生成の指標である赤血球前駆体数の増加（図１３Ａ）および低い骨髄性／赤血球（Ｍ／Ｅ）比を明らかにした［Ｓｕｒａｇａｎｉら、（２０１４年）Ｎａｔ  Ｍｅｄ  ２０巻：４０８〜４１４頁］。６カ月齢ＭＤＳマウスでは、ＡｃｔＲＩＩＢ（Ｌ７９Ｄ  ２５−１３１）−ｍＦｃを用いた処置は、ＲＢＣ数を（１６．９％）およびヘモグロビン濃度を（１２．５％）顕著に増加させ（図１３Ａ）、骨髄中の赤血球前駆体細胞数を低減し（図１３Ａ）、Ｍ／Ｅ比を野生型マウスのものに正常化させた［Ｓｕｒａｇａｎｉら、（２０１４年）Ｎａｔ  Ｍｅｄ  ２０巻：４０８〜４１４頁］。
【０４１６】
１２カ月齢のＭＤＳマウスでは、ＡｃｔＲＩＩＢ（Ｌ７９Ｄ  ２５−１３１）−ｍＦｃ処置は、ビヒクルと比較してＲＢＣ数を（１８．３％）およびヘモグロビンレベルを（１３．０％）顕著に増加させ（図１３Ｂ）、赤血球前駆体細胞数を低減し（図１３Ｂ）、Ｍ：Ｅ比を改善した［Ｓｕｒａｇａｎｉら、（２０１４年）Ｎａｔ  Ｍｅｄ  ２０巻：４０８〜４１４頁］。ＡｃｔＲＩＩＢ（Ｌ７９Ｄ  ２５−１３１）−ｍＦｃ処置は、骨髄性前駆体の絶対数に影響を及ぼさなかった。フローサイトメトリーは、ＡｃｔＲＩＩＢ（Ｌ７９Ｄ  ２５−１３１）−ｍＦｃ処置がＭＤＳマウスにおいて両方の年齢で赤芽球過形成を低減したことを確認した。ＡｃｔＲＩＩＢ（Ｌ７９Ｄ  ２５−１３１）−ｍＦｃを用いて７カ月間処置したＭＤＳマウスでの経時的分析は、研究期間中維持されたＲＢＣ数の上昇を示した［Ｓｕｒａｇａｎｉら、（２０１４年）Ｎａｔ  Ｍｅｄ  ２０巻：４０８〜４１４頁］。併せてこれらの結果は、ＧＤＦトラップを用いた処置が、ＭＤＳマウスにおいて疾患重症度にかかわらず貧血、赤芽球過形成および無効赤血球生成を改善することを示している。
（実施例１３）
ＧＤＦトラップに治療応答性のＭＤＳ患者における細胞学的および遺伝子シグネチャー
【０４１７】
改変アクチビン受容体ＩＩＢ型およびＩｇＧ  Ｆｃを含有する組換え融合タンパク質［ＡｃｔＲＩＩＢ（Ｌ７９Ｄ  ２５−１３１）−ｈＦｃ、ラスパテルセプトまたはＡＣＥ−５３６としても公知］は、骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）などの無効赤血球生成による貧血の処置のために開発されている。ＭＤＳを有する患者は、しばしばＥＰＯのレベルが上昇しており、赤血球生成刺激剤（ＥＳＡ）に非応答性または不応性である場合がある。ＭＤＳ患者は、ＧＤＦ１１の血清レベルが上昇しており［Ｓｕｒａｇａｎｉら、（２０１４年）Ｎａｔ  Ｍｅｄ  ２０巻：４０８〜４１４頁］、骨髄中のＳｍａｄ２／３シグナル伝達が増加している［Ｚｈｏｕら、（２００８年）Ｂｌｏｏｄ  １１２巻：３４３４〜３４４３頁］ことも示されている。ＡｃｔＲＩＩＢ（Ｌ７９Ｄ  ２５−１３１）−ｈＦｃは、ＧＤＦ１１を含むＴＧＦβスーパーファミリー中のリガンドに結合し、Ｓｍａｄ２／３シグナル伝達を阻害し、ＥＳＡとは異なる機構を介して後期赤血球分化を促進する。マウスバージョン、ＡｃｔＲＩＩＢ（Ｌ７９Ｄ  ２５−１３１）−ｍＦｃは、ＭＤＳのマウスモデルにおいてＳｍａｄ２シグナル伝達を低減し、ヘモグロビン（Ｈｂ）レベルを増加させ、骨髄赤芽球過形成を減少させた［Ｓｕｒａｇａｎｉら、（２０１４年）Ｎａｔ  Ｍｅｄ  ２０巻：４０８〜４１４頁］。健康なボランティアでの研究では、ＡｃｔＲＩＩＢ（Ｌ７９Ｄ  ２５−１３１）−ｈＦｃは、十分に許容され、Ｈｂレベルを増加させた［Ａｔｔｉｅら、（２０１４年）Ａｍ  Ｊ  Ｈｅｍａｔｏｌ  ８９巻：７６６〜７７０頁］。
【０４１８】
本出願人らは、高い輸血負荷（ＨＴＢ、ベースライン前８週間当たり≧４単位ＲＢＣとして定義される）または低い輸血負荷（ＬＴＢ、ベースライン前８週間当たり＜４単位ＲＢＣとして定義される）のいずれかを有する、低いまたはＩｎｔ−１リスクＭＤＳを有する患者における貧血へのＡｃｔＲＩＩＢ（Ｌ７９Ｄ  ２５−１３１）−ｈＦｃの効果を評価するために進行中の、第２相、多施設、非盲検、用量設定研究を実施している。研究結果は、赤血球応答（ＬＴＢ患者におけるＨｂの増加またはＨＴＢ患者における輸血負荷の低減のいずれか）、安全性、許容性、薬物動態および薬力学的バイオマーカーを含む。組み入れ基準は：低またはＩｎｔ−１リスクＭＤＳ、年齢≧１８歳、貧血（ＨＴＢ患者である、またはＬＴＢ患者ではベースラインＨｂ＜１０．０ｇ／ｄＬを有する、のいずれかとして定義される）、ＥＰＯ＞５００Ｕ／ＬまたはＥＳＡに非応答性／不応性、先行するアザシチジンまたはデシタビンがない、および現在ＥＳＡ、顆粒球コロニー刺激因子（Ｇ−ＣＳＦ）、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ）またはレナリドミド、サリドマイドもしくはポマリドミドを用いて処置されていないことを含む。用量漸増相では、ＡｃｔＲＩＩＢ（Ｌ７９Ｄ  ２５−１３１）−ｈＦｃは、皮下注射によって、３週間ごとに１回、７個の系列コホート（ｎ＝３〜６）において０．１２５、０．２５、０．５、０．７５、１．０、１．３３および１．７５ｍｇ／ｋｇの用量レベルで５回投薬まで投与され、３カ月の経過観察を伴った。
【０４１９】
データは、患者２６名（７名ＬＴＢ／１９名ＨＴＢ）について利用可能であった。年齢中央値は７１歳（範囲：２７〜８８歳）であり、５０％が女性であり、５４％が以前にＥＰＯ治療を受けたことがあり、１５％が以前にレナリドミドを受けたことがあった。ＷＨＯサブタイプによる患者の分類は以下の通り：１５％ＲＡＲＳ、４６％ＲＣＭＤ−ＲＳ、１５％ＲＣＭＤ、１５％ＲＡＥＢ−１（≧１５％環状鉄芽球を有する患者２名を含む）および８％ｄｅｌ（５ｑ）であった。ＬＴＢ患者（ｎ＝７）についての平均（ＳＤ）ベースラインＨｇｂは、９．１（０．４）ｇ／ｄＬであった。処置前８週間に輸血された平均（ＳＤ）単位ＲＢＣは、ＬＴＢ患者について０．９（１．１）単位であり、ＨＴＢ患者について６．３（２．４）単位であった。ＬＴＢ患者７名のうち２名は、ベースラインと比較して８週間で平均でＨｂ≧１．５ｇ／ｄＬの増加を有した。ＬＴＢ患者での平均最大Ｈｂ増加は、０．１２５（ｎ＝１）、０．２５（ｎ＝１）、０．７５（ｎ＝３）および１．７５（ｎ＝２）ｍｇ／ｋｇ用量群においてそれぞれ０．８、１．０、２．２および３．５ｇ／ｄＬであった。ＬＴＢ患者７名のうち６名が研究中に≧８週間のＲＢＣ輸血非依存（ＲＢＣ−ＴＩ）を達成した。０．７５ｍｇ／ｋｇから１．７５ｍｇ／ｋｇの範囲の用量レベルが活性用量であると見なされた。活性用量群中の患者５名のうち、４名（８０％）が≧２週間について≧１．５ｇ／ｄｌのＨｇｂ増加の事前に決められたエンドポイントを達成した。患者２名（４０％）は、ＬＴＢ患者において≧８週間についての≧１．５ｇ／ｄｌのＨｇｂ増加と定義されたＨＩ−Ｅ応答を達成した［国際的作業部会、Ｃｈｅｓｏｎら、（２０００年）Ｂｌｏｏｄ  ９６巻：３６７１〜３６７４頁、Ｃｈｅｓｏｎら、（２００６年）Ｂｌｏｏｄ  １０８巻：４１９〜４２５頁］。ＨＴＢ患者では、ＨＩ−Ｅ応答は、研究開始前８週間と比較して、８週間の間に輸血される赤血球の輸血負荷の少なくとも４単位の低減として定義されている。活性用量群では、ＨＴＢ患者１２名のうち５名（４２％）が処置前の８週間と比較して処置期間の際の８週間間隔の間に輸血される≧４ＲＢＣ単位の低減またはＲＢＣ単位での≧５０％低減の事前に決められたエンドポイントに合致し、同じ患者（１２名のうち５名、４２％）がＨＩ−Ｅ応答を達成し；活性用量群におけるＨＴＢ患者１２名のうち３名（２５％）が研究の際にＲＢＣ−ＴＩ≧８週間を達成した。試験薬投与後の好中球数における増加が一部の患者において観察された。最終的にＡｃｔＲＩＩＢ（Ｌ７９Ｄ  ２５−１３１）−ｈＦｃは、一般に十分に許容された。関連する重篤な有害事象は、今日までに報告されていない。因果関係にかかわらず最も頻繁な有害事象は：下痢（ｎ＝４、グレード１／２）、骨痛、疲労、筋痙攣、筋肉痛および上咽頭炎（各ｎ＝３、グレード１／２）であった。
【０４２０】
骨髄吸引液の評価は、環状鉄芽球の存在（≧１５％の赤血球前駆体が環状鉄芽球形態を示した場合に陽性と見なされる）と活性用量群（０．７５〜１．７５ｍｇ／ｋｇ）でのＡｃｔＲＩＩＢ（Ｌ７９Ｄ  ２５−１３１）−ｈＦｃへの応答性との間の関連を実証した。ＬＴＢおよびＨＴＢ患者両方についての全奏効率（ＨＩ−Ｅ基準を使用、上に記載）は、１７名のうち７名（４１％）であった。ベースライン時に環状鉄芽球について陽性であった患者のうち、患者１３名のうち７名（５４％）がＨＩ−Ｅ応答を達成し、注目すべきことにベースライン時に環状鉄芽球について陰性であった患者４名のうち誰も、ＨＩ−Ｅ応答を達成しなかった。
【０４２１】
患者由来の骨髄吸引液を、ＭＤＳに関連する変異（主に体細胞変異）を有することが公知である２１個の異なる遺伝子における変異の存在についても評価した。ゲノムＤＮＡを骨髄吸引液から単離し、２１個の遺伝子の選択したコード領域をポリメラーゼ連鎖反応によって増幅し、これらの領域のＤＮＡ配列を次世代シーケンシング（Ｍｙｅｌｏｉｄ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｒｏｆｉｌｅ  ２１−ｇｅｎｅ  ｐａｎｅｌ、Ｇｅｎｏｐｔｉｘ，Ｉｎｃ．、Ｃａｒｌｓｂａｄ、ＣＡ）を使用して決定した。この分析は、活性化シグナル伝達遺伝子（ＫＩＴ、ＪＡＫ２、ＮＲＡＳ、ＣＢＬおよびＭＰＬ）、転写因子（ＲＵＮＸ１、ＥＴＶ６）、エピジェネティック遺伝子（ＩＤＨ１、ＩＤＨ２、ＴＥＴ２、ＤＮＭＴ３Ａ、ＥＺＨ２、ＡＳＸＬ１およびＳＥＴＢＰ１）、ＲＮＡスプライシング遺伝子（ＳＦ３Ｂ１、Ｕ２ＡＦ１、ＺＲＳＦ２およびＳＲＳＦ２）および腫瘍抑制遺伝子／他（ＴＰ５３、ＮＰＭ１、ＰＨＦ６）を検討した。ＳＦ３Ｂ１の分析はエクソン１３〜１６を特異的に標的化した。評価したこれら２１個のＭＤＳ関連遺伝子において、ＳＦ３Ｂ１中の変異は、非応答性患者においてよりも応答性患者において骨髄細胞中でより頻繁に検出された。これらの患者において検出された個々のＳＦ３Ｂ１変異を下の表に示す。同じ変異が複数の患者において時に生じていた。
【表Ｇ】
2018534335.tif 000056
【０４２２】
活性用量群においてＳＦ３Ｂ１変異を有する患者では、全部で３名の患者が８週間より長い輸血非依存を達成して、９名のうち６名（６７％）がＨＩ−Ｅ応答を達成した。ＳＦ３Ｂ１変異を有さない患者では、８名のうち１名（１３％）だけがＨＩ−Ｅ応答を達成した。ＳＦ３Ｂ１中の変異は、環状鉄芽球を有するＭＤＳ患者ではしばしば観察され、無効赤血球生成と関連する。
【０４２３】
これらの結果は、≧１５％環状鉄芽球（および他の形態の鉄芽球性貧血を有する患者）、ならびに／またはＳＦ３Ｂ１中に少なくとも１つの変異を示すＭＤＳを有する患者が、＜１５％環状鉄芽球を有する、および／またはＳＦ３Ｂ１に変異を有さないＭＤＳ患者よりもＡｃｔＲＩＩＢ（Ｌ７９Ｄ  ２５−１３１）−ｈＦｃに治療的に応答する可能性が高いことを示している。これらのデータに基づいて、これらの患者サブグループの者の選択的処置は、ＡｃｔＲＩＩ阻害剤を用いる処置の利益／リスク比を大きく増加させることが期待される。
（実施例１４）
ＧＤＦトラップに治療的に応答性のＭＤＳ患者における視力の改善
【０４２４】
ＡｃｔＲＩＩＢ（Ｌ７９Ｄ  ２５−１３１）−ｈＦｃ処置は、視覚に驚くべき効果を有することも観察された。上に記載の第２相ＭＤＳ研究では、低い視覚を有する（例えば、ある特定の活動を実施するために矯正レンズを必要とする）男性患者は、ＡｃｔＲＩＩＢ（Ｌ７９Ｄ  ２５−１３１）−ｈＦｃ治療に応答性であることが示された。処置前に患者は、慢性貧血を患い、定期的な輸血を必要としていた。ＡｃｔＲＩＩＢ（Ｌ７９Ｄ  ２５−１３１）−ｈＦｃは、患者にヘモグロビンレベルの顕著で持続的な増加をもたらした。実際に患者は、研究中に≧８カ月の輸血非依存を達成した。加えて、視覚の顕著な改善が患者で観察された。実際、患者はある特定の活動を実施するために矯正レンズをもはや必要としなかった。したがってこれらのデータは、貧血を処置することへの正の効果に加えて、ＡｃｔＲＩＩ阻害剤がＭＤＳ患者で視覚を改善するために使用できることを示している。さらに、下に考察するＭＤＳ関連視覚損失について報告された機構の観点から、データは、ＡｃｔＲＩＩ阻害剤が他の種類の眼障害を処置することにも正の効果を有する可能性があることを示唆している。
【０４２５】
網膜神経線維層厚が、種々の血液学的障害、特に貧血に関連するものを有する患者において減少していることが報告されている［Ｈａｎら、（２０１５年）Ｊ  Ｇｌａｕｃｏｍａ（印刷前の電子出版）］。網膜神経線維におけるそのような変化は、視力の低減および眼における他の病理学的変化と関連している。研究は、これらの患者における網膜損傷が虚血性視神経症による可能性があることを示している。例えばＭＤＳ患者における視覚の損失は、ＮＡＩＯＮの徴候と関連していた［Ｂｒｏｕｚａｓら、（２００９年）Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌｏｇｙ  ３巻：１３３〜１３７頁］。そのようなＭＤＳ患者では、ＮＡＩＯＮの開始は、虚血および／または微小血管不全の機構を通じてであると考えられている。実際に、虚血低酸素を処置するための治療がＭＤＳ患者において視力を改善することが実証されている。したがって本出願のデータは、ＡｃｔＲＩＩアンタゴニストを他の関連する眼障害、特に虚血および微小血管不全に関連するものを処置するのに使用できることを示唆している。
（実施例１５）
レーザー誘発脈絡膜新血管形成後の病変サイズおよび漏出へのＡｃｔＲＩＩポリペプチドの効果
【０４２６】
レーザー誘発脈絡膜新血管形成のラットモデルでの病変サイズおよび漏出へのＡｃｔＲＩＩＡ−Ｆｃ（実施例１を参照されたい）、ＡｃｔＲＩＩＢ−Ｆｃ（実施例４を参照されたい）およびＡｃｔＲＩＩＢ（Ｌ７９Ｄ  ２５−１３１）−Ｆｃ（実施例９を参照されたい）の効果を評価する。
【０４２７】
研究１日目に、２０匹のＢｒｏｗｎ  Ｎｏｒｗａｙラット（６〜８週齢）に眼１個当たり３カ所の病変を生成する両側性レーザー処置を施す。動物を１％サイクロジル溶液で散大させ（ｄｉｌａｔｅｄ）、光から保護する。観察可能な散大に続いて動物を鎮静させる。鎮静させた動物の眼底を観察し、Ｍｉｃｒｏｎ  ＩＶ  ｓｍａｌｌ  ａｎｉｍａｌ  ｆｕｎｄｕｓｃｏｐｅ（Ｐｈｏｅｎｉｘ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ）を使用して記録する。レーザー処置を、Ｍｉｃｒｏｎ  ＩＶ  ｃｕｓｔｏｍ  ｌａｓｅｒ  ａｔｔａｃｈｍｅｎｔを通して連結する熱レーザーを使用して実施する。眼１個当たり合計３カ所の病変を右眼に波長５３２ｎｍを使用して作る。得られた眼底画像を記録し、レーザーがブルッフ膜を通じて気泡を良好に生成することを確認するために評価する。
【０４２８】
レーザー処置後にラットを４個の処置群のうちの１個に分ける：ａ）１、８および１５日目にビヒクル（ＰＢＳ）のｓ．ｃ．投与；ｂ）１、８および１５日目にＡｃｔＲＩＩＡ−Ｆｃ（１０ｍｇ／ｋｇ）のｓ．ｃ．投与；ｃ）１、８および１５日目にＡｃｔＲＩＩＢ−Ｆｃ（１０ｍｇ／ｋｇ）のｓ．ｃ．投与；ならびにｄ）１、８、および１５日目にＡｃｔＲＩＩＢ（Ｌ７９Ｄ  ２５−１３１）−Ｆｃ（１０ｍｇ／ｋｇ）のｓ．ｃ．投与。
【０４２９】
２２日目に、ラットをインビボフルオレセイン血管造影写真によって病変サイズおよび漏出の低減について評価する。動物を麻酔し、次いで、体重１グラム当たり１０％フルオレセインナトリウム１μｌのＩＰ注射を施す。次いで眼底画像を、Ｍｉｃｒｏｎ  ＩＩＩおよび４８８ｎｍの標的波長のための励起／バリアフィルターを使用して、８ビットＴＩＦＦファイルとして捕捉する。標準色眼底写真も各眼について捕捉する。全てのＴＩＦＦ画像をコンピューター制御画像分析ソフトウェア（例えば、ＩｍａｇｅＪ、ＮＩＨ、ＵＳＡ）を使用して定量する。次に病変の境界を個々にフリーハンドで描き、バックグラウンドシグナルを除くために得られた画像をｍｕｌｔｉ−Ｏｔｓｕ  ｔｈｒｅｓｈｏｌｄｉｎｇに供し、領域を画素で定量する。出血領域または２つの病変が重複している場所を分析から除外する。
（実施例１６）
ストレプトゾトシン誘発糖尿病モデルのラットモデルにおける病変サイズおよび漏出へのＡｃｔＲＩＩポリペプチドの効果
【０４３０】
ストレプトゾトシン（ＳＴＺ）誘発糖尿病のラットモデルにおける病変サイズおよび漏出へのＡｃｔＲＩＩＡ−Ｆｃ（実施例１を参照されたい）、ＡｃｔＲＩＩＢ−Ｆｃ（実施例４を参照されたい）およびＡｃｔＲＩＩＢ（Ｌ７９Ｄ  ２５−１３１）−Ｆｃ（実施例９を参照されたい）の効果を評価する。
【０４３１】
ＳＴＺは、全身投与後に膵島細胞の欠乏を生じる小分子である。島細胞死は、インスリン産生の減少および次いで数日以内に高血糖をもたらす血糖レベルの調節不全を生じる。このモデルは、糖尿病性網膜症および糖尿病黄斑浮腫の病態形成における炎症、血管病態およびシグナル伝達経路を研究するために使用されている。ＳＴＺを用いる糖尿病の誘導後８週間で、顕著で進行性の視力および対比感度の低下がある。ヒト臨床試験についての規制機関によって承認された主要エンドポイントが視力および対比感度の定量的測定を中心としていることから、これは糖尿病性視覚損失を予防するための治療剤の活性を検査するための優れたモデルである。
【０４３２】
研究１日目に、２０匹のＢｒｏｗｎ  Ｎｏｒｗａｙラット（８〜１２週齢）にＳＴＺ（１０ｍｍｏｌ／Ｌのクエン酸緩衝液、ｐＨ４．５中、体重１ｋｇ当たり５０ｍｇ）の単回腹腔内注射を与える。血清グルコースレベルをＳＴＺ注射の２日後およびその後１週間ごとに検討する。３５０ｍｇ／ｄｌを超える血糖レベルを有する動物だけを糖尿病ラットとして使用する。
【０４３３】
ＳＴＺ処置６〜８週間後、ラットを４個の処置群のうちの１個に分ける：ａ）１、８および１５日目にビヒクル（ＰＢＳ）のｓ．ｃ．投与；ｂ）１、８、および１５日目にＡｃｔＲＩＩＡ−Ｆｃ（１０ｍｇ／ｋｇ）のｓ．ｃ．投与；ｃ）１、８および１５日目にＡｃｔＲＩＩＢ−Ｆｃ（１０ｍｇ／ｋｇ）のｓ．ｃ．投与；ならびにｄ）１、８および１５日目にＡｃｔＲＩＩＢ（Ｌ７９Ｄ  ２５−１３１）−Ｆｃ（１０ｍｇ／ｋｇ）のｓ．ｃ．投与。
【０４３４】
治療開始後２２日目に、実施例１５において上に記載の通りインビボフルオレセイン血管造影写真によってラットを病変サイズおよび漏出の低減について評価する。
参照による援用
【０４３５】
（参考としての援用）
本明細書中で言及される全ての刊行物および特許は、各個々の刊行物または特許が、具体的かつ個別に参考として援用されると示されるかのように、その全体が本明細書に参考として援用される。
【０４３６】
本主題の特定の実施形態が考察されてきたが、上記明細書は、例示的であり、限定的なものではない。本明細書および以下の特許請求の範囲を精査すれば、多くの変更が当業者に明らかとなる。本発明の完全な範囲は、その等価物の完全な範囲と共に特許請求の範囲を、そして、このような変更と共に明細書を参照することによって決定されるべきである。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６−１】
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【図６−２】
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【図７】
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【図８−１】
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【図８−２】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１−１】
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【図１１−２】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７−１】
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【図１７−２】
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【図１８−１】
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【図１８−２】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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