(57)【要約】本発明は、ラミニンアルファ−４鎖に結合するヒトＭＣＡＭの能力を阻害する抗ＭＣＡＭ抗体、及び巨細胞動脈炎、リウマチ性多発筋痛症（ＰＭＲ）又は高安動脈炎の処置又は予防において使用するための、それを組み込む医薬組成物及び医薬製剤、このような抗体を発生させる方法、及び神経炎症疾患、自己免疫性疾患、又はがんの処置のための医薬品の製造におけるそれらの使用を提供する。【選択図】図１
2018530540.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
抗体であって、
（ａ）  配列番号：１６１（ただし位置３２（Ｋａｂａｔナンバリング）がＮ、Ｓ、又はＱであることができ、位置３３（Ｋａｂａｔナンバリング）がＧ又はＡであることができる）の３つのＫａｂａｔ  ＣＤＲを含む成熟重鎖可変領域であって、位置１（Ｋａｂａｔナンバリング）がＥによって占められる、成熟重鎖可変領域；及び
（ｂ）  配列番号：１２３の３つのＫａｂａｔ  ＣＤＲを含む成熟軽鎖可変領域
を含む、巨細胞動脈炎、リウマチ性多発筋痛症（ＰＭＲ）又は高安動脈炎の処置又は予防において使用するための、抗体。
【請求項２】
巨細胞動脈炎の処置又は予防において使用するための、請求項１に記載の抗体。
【請求項３】
ＰＭＲの処置又は予防において使用するための、請求項１に記載の抗体。
【請求項４】
高安動脈炎の処置又は予防において使用するための、請求項１に記載の抗体。
【請求項５】
前記成熟重鎖可変領域が配列番号：１６１と少なくとも９０％同一であり、前記成熟軽鎖可変領域が配列番号：１２３と少なくとも９０％同一である、請求項１に記載の使用のための請求項１に記載の抗体。
【請求項６】
前記成熟重鎖可変領域が配列番号：１６１と少なくとも９５％同一であり、前記成熟軽鎖可変領域が配列番号：１２３と少なくとも９５％同一である、請求項１に記載の使用のための請求項１に記載の抗体。
【請求項７】
前記成熟重鎖可変領域が配列番号：１６１と少なくとも９８％同一であり、前記成熟軽鎖可変領域が配列番号：１２３と少なくとも９５％同一である、請求項１に記載の使用のための請求項１に記載の抗体。
【請求項８】
前記成熟重鎖可変領域が配列番号：１６１と少なくとも９９％同一であり、前記成熟軽鎖可変領域が配列番号：１２３と少なくとも９５％同一である、請求項１に記載の使用のための請求項１に記載の抗体。
【請求項９】
前記成熟重鎖可変領域が配列番号：１５７、配列番号：１５８、配列番号：１５９、配列番号：１６０、又は配列番号：１６１のアミノ酸配列を有し、前記成熟軽鎖可変領域が配列番号：１２３と少なくとも９５％同一である、請求項１に記載の使用のための請求項１に記載の抗体。
【請求項１０】
前記成熟重鎖可変領域が配列番号：１６１と少なくとも９５％同一であり、前記成熟軽鎖可変領域が配列番号：１２３と少なくとも９８％同一である、請求項１に記載の使用のための請求項１に記載の抗体。
【請求項１１】
前記成熟重鎖可変領域が配列番号：１６１と少なくとも９５％同一であり、前記成熟軽鎖可変領域が配列番号：１２３と少なくとも９９％同一である、請求項１に記載の使用のための請求項１に記載の抗体。
【請求項１２】
前記成熟重鎖可変領域が配列番号：１６１と少なくとも９５％同一であり、前記成熟軽鎖可変領域が配列番号：１２１、配列番号：１２２、又は配列番号：１２３のアミノ酸配列を有する、請求項１に記載の使用のための請求項１に記載の抗体。
【請求項１３】
前記成熟重鎖可変領域が配列番号：１６１と少なくとも９８％同一であり、前記成熟軽鎖可変領域が配列番号：１２３と少なくとも９８％同一である、請求項１に記載の使用のための請求項１に記載の抗体。
【請求項１４】
前記成熟重鎖可変領域が配列番号：１６１と少なくとも９９％同一であり、前記成熟軽鎖可変領域が配列番号：１２３と少なくとも９９％同一である、請求項１に記載の使用のための請求項１に記載の抗体。
【請求項１５】
前記成熟重鎖可変領域が配列番号：１５７、配列番号：１５８、配列番号：１５９、配列番号：１６０、又は配列番号：１６１のアミノ酸配列を有し、前記成熟軽鎖可変領域が配列番号：１２１、配列番号：１２２、又は配列番号：１２３のアミノ酸配列を有する、請求項１に記載の使用のための請求項１に記載の抗体。
【請求項１６】
前記成熟重鎖可変領域が配列番号：１６１のアミノ酸配列を有し、前記成熟軽鎖可変領域が配列番号：１２３のアミノ酸配列を有する、請求項１に記載の使用のための請求項１に記載の抗体。
【請求項１７】
前記成熟重鎖可変領域が配列番号：１６１のアミノ酸配列を有し、前記成熟軽鎖可変領域が配列番号：１２３のアミノ酸配列を有し、前記抗体が、配列番号：１７１のアミノ酸配列を有する重鎖定常領域及び配列番号：１６８のアミノ酸配列を有する軽鎖定常領域を含む、請求項１に記載の使用のための請求項１に記載の抗体。
【請求項１８】
前記成熟重鎖可変領域が配列番号：１６１のアミノ酸配列を有し、前記成熟軽鎖可変領域が配列番号：１２３のアミノ酸配列を有し、前記抗体が、配列番号：１７２のアミノ酸配列を有する重鎖定常領域及び配列番号：１６８のアミノ酸配列を有する軽鎖定常領域を含む、請求項１に記載の使用のための請求項１に記載の抗体。
【請求項１９】
ヒト化抗体である、請求項１に記載の使用のための請求項１−１８のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項２０】
巨細胞動脈炎、リウマチ性多発筋痛症（ＰＭＲ）又は高安動脈炎の処置又は予防において使用するための、アミノ酸残基１４１を含むエピトープで、ヒトＭＣＡＭ（配列番号：１１）に結合する、単離された抗体。
【請求項２１】
巨細胞動脈炎の処置又は予防において使用するための、請求項２０に記載の抗体。
【請求項２２】
ＰＭＲの処置又は予防において使用するための、請求項２０に記載の抗体。
【請求項２３】
高安動脈炎の処置又は予防において使用するための、請求項２０に記載の抗体。
【請求項２４】
前記エピトープがアミノ酸残基１４５を含む、請求項２０に記載の使用のための請求項２０−２３のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項２５】
前記エピトープが、アミノ酸残基１４１を含むヒトＭＣＡＭの少なくとも５の連続アミノ酸残基を含む、請求項２０に記載の使用のための請求項２０−２４のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項２６】
前記抗体が、モノクローナル抗体２１２０．４．１９又はモノクローナル抗体２１２０．４．１９に実質的に由来するＣＤＲを含む抗体ではない、請求項２０に記載の使用のための請求項２０−２５のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項２７】
前記抗体がモノクローナルである、請求項２０に記載の使用のための請求項２０−２６のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項２８】
前記抗体が、キメラ、ヒト化、ベニア化、又はヒトである、請求項２０に記載の使用のための請求項２７に記載の抗体。
【請求項２９】
抗原結合フラグメントである、請求項２１に記載の使用のための請求項１−２８のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項３０】
巨細胞動脈炎、リウマチ性多発筋痛症（ＰＭＲ）又は高安動脈炎の処置又は予防において使用するための、請求項１−２９のいずれか一項に記載の抗体を含む、医薬組成物。
【請求項３１】
医薬製剤であって、
（ａ）  以下の（ｉ）及び（ｉｉ）を含む抗体
（ｉ）  配列番号：１６１（ただし位置３２（Ｋａｂａｔナンバリング）がＮ、Ｓ、又はＱであることができ、位置３３（Ｋａｂａｔナンバリング）がＧ又はＡであることができる）の３つのＫａｂａｔ  ＣＤＲを含む成熟重鎖可変領域；及び
（ｉｉ）  配列番号：１２３の３つのＫａｂａｔ  ＣＤＲを含む成熟軽鎖可変領域；
（ｂ）  約１０ｍＭ〜約３０ｍＭの範囲内の濃度で存在するヒスチジンバッファー；
（ｃ）  以下の（ｉ）及び（ｉｉ）から選択される、１又は複数の糖及びポリオール（「糖／ポリオール」）
（ｉ）  約２００ｍＭ〜約２６０ｍＭの範囲内の濃度で存在するスクロース；及び
（ｉｉ）  約２００ｍＭ〜約２６０ｍＭの範囲内の濃度で存在するトレハロース；
及び
（ｄ）  約０．００５質量％〜約０．０５質量％の範囲内の濃度で存在するポリソルベート２０；
を含み、
前記医薬製剤が、約５．５〜約７の範囲内のｐＨによって特徴付けられる、巨細胞動脈炎、リウマチ性多発筋痛症（ＰＭＲ）又は高安動脈炎の処置又は予防において使用するための、
医薬製剤。
【請求項３２】
巨細胞動脈炎の処置又は予防において使用するための、請求項３１に記載の医薬製剤。
【請求項３３】
ＰＭＲの処置又は予防において使用するための、請求項３１に記載の医薬製剤。
【請求項３４】
高安動脈炎の処置又は予防において使用するための、請求項３１に記載の医薬製剤。
【請求項３５】
前記成熟重鎖可変領域が配列番号：１６１と少なくとも９０％同一であり、前記成熟軽鎖可変領域が配列番号：１２３と少なくとも９０％同一である、請求項３１に記載の使用のための請求項３１−３４のいずれか一項に記載の医薬製剤。
【請求項３６】
前記成熟重鎖可変領域の位置１（Ｋａｂａｔナンバリング）がＥによって占められる、請求項３１に記載の使用のための請求項３１−３５のいずれか一項に記載の医薬製剤。
【請求項３７】
前記成熟重鎖可変領域が配列番号：１５７、配列番号：１５８、配列番号：１５９、配列番号：１６０、又は配列番号：１６１のアミノ酸配列を有し、前記成熟軽鎖可変領域が配列番号：１２１、配列番号：１２２、又は配列番号：１２３のアミノ酸配列を有する、請求項３１に記載の使用のための請求項３１−３６のいずれか一項に記載の医薬製剤。
【請求項３８】
前記成熟重鎖可変領域が配列番号：１６１のアミノ酸配列を有し、前記成熟軽鎖可変領域が配列番号：１２３のアミノ酸配列を有する、請求項３１に記載の使用のための請求項３１−３７のいずれか一項に記載の医薬製剤。
【請求項３９】
前記成熟重鎖可変領域が配列番号：１６１のアミノ酸配列を有し、前記成熟軽鎖可変領域が配列番号：１２３のアミノ酸配列を有し、前記抗体が、配列番号：１７１のアミノ酸配列を有する重鎖定常領域及び配列番号：１６８のアミノ酸配列を有する軽鎖定常領域を含む、請求項３１に記載の使用のための請求項３１−３８のいずれか一項に記載の医薬製剤。
【請求項４０】
前記成熟重鎖可変領域が配列番号：１６１のアミノ酸配列を有し、前記成熟軽鎖可変領域が配列番号：１２３のアミノ酸配列を有し、前記抗体が、配列番号：１７２のアミノ酸配列を有する重鎖定常領域及び配列番号：１６８のアミノ酸配列を有する軽鎖定常領域を含む、請求項３１に記載の使用のための請求項３１−３８のいずれか一項に記載の医薬製剤。
【請求項４１】
医薬製剤であって、
（ａ）  請求項２０−２９のいずれか一項に記載の単離された抗ＭＣＡＭ抗体；
（ｂ）  約１０ｍＭ〜約３０ｍＭの範囲内の濃度で存在するヒスチジンバッファー；
（ｃ）  以下の（ｉ）及び（ｉｉ）から選択される、１又は複数の糖及びポリオール（「糖／ポリオール」）
（ｉ）  約２００ｍＭ〜約２６０ｍＭの範囲内の濃度で存在するスクロース；及び
（ｉｉ）  約２００ｍＭ〜約２６０ｍＭの範囲内の濃度で存在するトレハロース；
及び
（ｄ）  約０．００５質量％〜約０．０５質量％の範囲内の濃度で存在するポリソルベート２０；
を含み、
前記医薬製剤が、約５．５〜約７の範囲内のｐＨによって特徴付けられる、巨細胞動脈炎、リウマチ性多発筋痛症（ＰＭＲ）又は高安動脈炎の処置又は予防において使用するための、
医薬製剤。
【請求項４２】
前記単離された抗ＭＣＡＭ抗体が、アミノ酸残基１４１を含むエピトープで、ヒトＭＣＡＭ（配列番号：１１）に結合する、請求項４１に記載の使用のための請求項４１に記載の医薬製剤。
【請求項４３】
前記抗体又は前記単離された抗ＭＣＡＭ抗体が、約４０ｍｇ／ｍＬの濃度で存在する、請求項４１に記載の使用のための請求項３１−４２のいずれか一項に記載の医薬製剤。
【請求項４４】
前記ヒスチジンバッファーが、約２０ｍＭの濃度で存在する、請求項４１に記載の使用のための請求項３１−４２のいずれか一項に記載の医薬製剤。
【請求項４５】
前記糖／ポリオールが、約２２０ｍＭの濃度で存在するスクロースである、請求項４１に記載の使用のための請求項３１−４４のいずれか一項に記載の医薬製剤。
【請求項４６】
前記ｐＨが約６．０である、請求項４１に記載の使用のための請求項３１−４５のいずれか一項に記載の医薬製剤。
【請求項４７】
約２９５ｍＯｓｍ／ｋｇのオスモル濃度によって特徴付けられる、請求項４１に記載の使用のための請求項３１−６のいずれか一項に記載の医薬製剤。
【請求項４８】
前記糖／ポリオールが、約２２０ｍＭの濃度で存在するトレハロースである、請求項４１に記載の使用のための請求項３１−４７のいずれか一項に記載の医薬製剤。
【請求項４９】
前記ｐＨが約６．５である、請求項４１に記載の使用のための請求項３１−４８のいずれか一項に記載の医薬製剤。
【請求項５０】
約２８７ｍＯｓｍ／ｋｇのオスモル濃度によって特徴付けられる、請求項４１に記載の使用のための請求項３１−４９のいずれか一項に記載の医薬製剤。
【請求項５１】
約５％未満の前記抗体又は前記単離された抗ＭＣＡＭ抗体が、前記製剤中に凝集体として存在する、請求項４１に記載の使用のための請求項３１−５０のいずれか一項に記載の医薬製剤。
【請求項５２】
増量剤をさらに含む、請求項４１に記載の使用のための請求項３１−５１のいずれか一項に記載の医薬製剤。
【請求項５３】
滅菌である、請求項４１に記載の使用のための請求項３１−５２のいずれか一項に記載の医薬製剤。
【請求項５４】
凍結及び解凍時に安定性である、請求項４１に記載の使用のための請求項３１−５３のいずれか一項に記載の医薬製剤。
【請求項５５】
３８−４２℃で少なくとも３０日間の保存後及び／又は３８−４２℃で少なくとも３ヶ月の保存後に、少なくとも６５％のタンパク質が、疎水性相互作用クロマトグラフィーで単一のピークとして現れる、請求項４１に記載の使用のための請求項３１−５４のいずれか一項に記載の医薬製剤。
【請求項５６】
３８−４２℃で少なくとも３０日間の保存後及び／又は３８−４２℃で少なくとも３ヶ月の保存後に、高性能サイズ排除クロマトグラフィーで５質量％以下の凝集タンパク質を有する、請求項４１に記載の使用のための請求項３１−５５のいずれか一項に記載の医薬製剤。
【請求項５７】
凍結乾燥製剤であって、
（ａ）  請求項１５−２１、２３−２７、７５、又は７６のいずれか一項に記載の抗体又は単離された抗ＭＣＡＭ抗体；
（ｂ）  ヒスチジンバッファー；
（ｃ）  スクロース又はトレハロース；及び
（ｄ）  ポリソルベート２０
を含み、
巨細胞動脈炎、リウマチ性多発筋痛症（ＰＭＲ）又は高安動脈炎の処置又は予防において使用するための、
凍結乾燥製剤。
【請求項５８】
巨細胞動脈炎の処置又は予防において使用するための、請求項５７に記載の抗体。
【請求項５９】
ＰＭＲの処置又は予防において使用するための、請求項５７に記載の抗体。
【請求項６０】
高安動脈炎の処置又は予防において使用するための、請求項５７に記載の抗体。
【請求項６１】
水を添加すると、約５．５〜約６．５のｐＨを有する、巨細胞動脈炎、リウマチ性多発筋痛症（ＰＭＲ）又は高安動脈炎の処置又は予防において使用するための製剤に再構成する、請求項５６に記載の使用のための請求項５７−６０のいずれか一項に記載の凍結乾燥製剤。
【請求項６２】
約１０ｍｇ〜約４０ｍｇの前記抗体又は前記単離された抗ＭＣＡＭ抗体を含む、請求項５６に記載の使用のための請求項５７−６１のいずれか一項に記載の凍結乾燥製剤。
【請求項６３】
前記製剤が、再構成されたときに、約２０ｍＭの量で存在するヒスチジンバッファーを含む、請求項５６に記載の使用のための請求項５７−６２のいずれか一項に記載の凍結乾燥製剤。
【請求項６４】
前記製剤が、再構成されたときに、約２２０ｍＭの量で存在するスクロースを含む、請求項５６に記載の使用のための請求項５７−６３のいずれか一項に記載の凍結乾燥製剤。
【請求項６５】
前記製剤が、再構成されたときに、約６．０のｐＨを有する、請求項５６に記載の使用のための請求項５７−６４のいずれか一項に記載の凍結乾燥製剤。
【請求項６６】
前記製剤が、再構成されたときに、約２２０ｍＭの量で存在するトレハロースを含む、請求項５６に記載の使用のための請求項５７−６５のいずれか一項に記載の凍結乾燥製剤。
【請求項６７】
前記製剤が、再構成されたときに、約６．５のｐＨを有する、請求項５６に記載の使用のための請求項５７−６６のいずれか一項に記載の凍結乾燥製剤。
【請求項６８】
前記ポリソルベート２０が、約０．０１質量％〜約０．０５質量％の前記範囲内の量で存在する、請求項５６に記載の使用のための請求項５７−６７のいずれか一項に記載の凍結乾燥製剤。
【請求項６９】
請求項５６に記載の使用のための請求項５７−６８のいずれか一項に記載の凍結乾燥製剤であって、
水を添加することによって、
（ａ）  約４０ｍｇ／ｍＬの濃度で存在する、前記抗体又は前記単離された抗ＭＣＡＭ抗体；
（ｂ）  約２０ｍＭの濃度で存在するヒスチジンバッファー；
（ｃ）  約２２０ｍＭの濃度で存在するスクロース；
（ｄ）  約０．０２％の濃度で存在するポリソルベート２０；及び
（ｅ）  約６．０のｐＨ
を含む水溶液に再構成可能である、凍結乾燥製剤。
【請求項７０】
請求項５６に記載の使用のための請求項６７−６０のいずれか一項に記載の凍結乾燥製剤であって、
（ａ）  ２００ｍｇの前記抗体又は前記単離された抗ＭＣＡＭ抗体；
（ｂ）  １５．５ｍｇのヒスチジン
（ｃ）  ３７６ｍｇのスクロース；
（ｄ）  １ｍｇのポリソルベート２０；及び
（ｅ）  約６．０のｐＨ
を含む、凍結乾燥製剤。
【請求項７１】
請求項５６に記載の使用のための請求項５７−７０のいずれか一項に記載の凍結乾燥製剤であって、
水を添加することによって、
（ａ）  約４０ｍｇ／ｍＬの濃度で存在する、前記抗体又は前記単離された抗ＭＣＡＭ抗体；
（ｂ）  約２０ｍＭの濃度で存在するヒスチジンバッファー；
（ｃ）  約２２０ｍＭの濃度で存在するトレハロース；
（ｄ）  約０．０２％の濃度で存在するポリソルベート２０；及び
（ｅ）  約６．５のｐＨ
を含む水溶液に再構成可能である、凍結乾燥製剤。
【請求項７２】
請求項４４に記載の使用のための請求項５６に記載の使用のための請求項５７−７１のいずれか一項に記載の凍結乾燥製剤であって、
（ａ）  ２００ｍｇの前記抗体又は前記単離された抗ＭＣＡＭ抗体；
（ｂ）  １５．５ｍｇのヒスチジン
（ｃ）  ４１６ｍｇのトレハロース二水和物；
（ｄ）  １ｍｇのポリソルベート２０；及び
（ｅ）  約６．５のｐＨ
を含む、凍結乾燥製剤。
【請求項７３】
巨細胞動脈炎、リウマチ性多発筋痛症（ＰＭＲ）又は高安動脈炎の処置又は予防のための医薬品の製造における、請求項１−２９のいずれか一項に記載の抗体の使用。
【請求項７４】
巨細胞動脈炎の処置又は予防において使用するための、請求項７２に記載の抗体。
【請求項７５】
ＰＭＲの処置又は予防において使用するための、請求項７２に記載の抗体。
【請求項７６】
高安動脈炎の処置又は予防において使用するための、請求項７２に記載の抗体。
【請求項７７】
巨細胞動脈炎、リウマチ性多発筋痛症（ＰＭＲ）又は高安動脈炎の処置又は予防のための方法であって、前記方法が、有効量の請求項１−７６のいずれか一項に記載の前記抗体又は前記単離された抗ＭＣＡＭ抗体を、それを必要とする哺乳動物被験体に投与するステップを含む、方法。
【請求項７８】
ＭＣＡＭ発現細胞がＴＨ１７細胞である、請求項７７に記載の方法。
【請求項７９】
前記哺乳動物被験体がヒトである、請求項１−７８のいずれか一項に記載の方法又は使用。
【請求項８０】
抗ＭＣＡＭモノクローナル抗体を結合するためのエピトープを含む単離ペプチドであって、前記ペプチドが、アミノ酸残基１４１を含むヒトＭＣＡＭ（配列番号：１１）の５−５０の連続アミノ酸残基を含む、巨細胞動脈炎、リウマチ性多発筋痛症（ＰＭＲ）又は高安動脈炎の処置又は予防において使用するためのものである、単離ペプチド。
【請求項８１】
前記ペプチドがキャリアポリペプチドに連結される、請求項９０に記載の使用のための請求項８０に記載の単離ペプチド。
【請求項８２】
前記ペプチドがアジュバントと組み合わせられる、請求項８０に記載の使用のための請求項８０又は請求項８１に記載の単離ペプチド。
【請求項８３】
巨細胞動脈炎、リウマチ性多発筋痛症（ＰＭＲ）又は高安動脈炎の処置又は予防において使用するための、ヒト化２１０７抗体。
【請求項８４】
前記抗体が、配列番号：１７８又は１７９の成熟重鎖可変領域を含む、請求項８３に記載の使用のための請求項８３に記載のヒト化２１０７抗体。
【請求項８５】
前記抗体が、配列番号：９８の成熟軽鎖可変領域をさらに含む、請求項８３に記載の使用のための請求項８３又は８４に記載のヒト化２１０７抗体。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願の相互参照
本出願は、米国仮出願第６２／２１９，５９９号（２０１５年９月１６出願）（その開示は参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）の３５  ＵＳＣ  １１９（ｅ）に基づく利益を主張する。米国仮出願第６１／９５２，１１６号（２０１４年３月１２日出願）、米国仮出願第６１／９５２，８３３号（２０１４年３月１３日出願）、米国仮出願第６２／０２３，７２４号（２０１４年７月１１日出願）、及び米国仮出願第６２／０６８，４１９号（２０１４年１０月２４日出願）及び米国第１４／６５６，５９６号（２０１５年３月１２日出願）は、関連する発明特定事項を開示し、それぞれ、全ての目的のためにその全体が本明細書に組み込まれる。
【０００２】
配列表、表、又はコンピュータプログラム表の参照
「巨細胞動脈炎、リウマチ性多発筋痛症又は高安動脈炎の処置又は予防のための抗ＭＣＡＭ抗体の使用」の、ファイル481119_SEQLST.txt（２０１６年９月１５日作成）に記載された配列表は、１５８キロバイトである。このファイルに含まれる情報は、参照により本明細書に組み込まれる。
【背景技術】
【０００３】
背景
ＴＨ１７細胞（Ｔヘルパー１７細胞）と呼ばれるＣＤ４＋  Ｔ細胞のサブセットは、多数の自己免疫性疾患の病因、特に、Ｔ細胞のＣＮＳ浸潤を伴う神経炎症状態、例えば多発性硬化症及び動物モデル、実験的自己免疫性脳脊髄炎（ＥＡＥ）の病因に関与している。ＴＨ１７細胞は、ＩＬ−１７及びＩＬ−２２を含む多数の選択サイトカインを分泌することが報告されている。ＴＨ１７細胞は、組織の特異的動員及び浸潤を受けることが報告されている。ＭＣＡＭは、ＴＨ１７細胞上に発現され、リガンドとしてのラミニンアルファ−４に結合することが報告されている。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００４】
請求項に係る発明の概要
本発明は、巨細胞動脈炎、リウマチ性多発筋痛症（ＰＭＲ）又は高安動脈炎の処置又は予防において使用するための、以下及び本明細書を通して説明される、抗体、組成物、製剤などを提供する。方法又はスイススタイルの対応する請求項もまた提供される。
【０００５】
抗体、及び当該使用のための製剤、及び方法は、以下のように説明される。いくつかの抗体は、配列番号：１６１（ただし位置３２（Ｋａｂａｔナンバリング）がＮ、Ｓ、又はＱであることができ、位置３３（Ｋａｂａｔナンバリング）がＧ又はＡであることができる）の３つのＫａｂａｔ  ＣＤＲを含む成熟重鎖可変領域であって、位置１（Ｋａｂａｔナンバリング）がＥによって占められる成熟重鎖可変領域、及び配列番号：１２３の３つのＫａｂａｔ  ＣＤＲを含む成熟軽鎖可変領域を含む。いくつかの抗体において、成熟重鎖可変領域が配列番号：１６１と少なくとも９０％同一であり、成熟軽鎖可変領域が配列番号：１２３と少なくとも９０％同一である。いくつかのこのような抗体はヒト化抗体である。このような抗体のうちのいくつかにおいて、成熟重鎖可変領域が配列番号：１６１と少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％同一であり、成熟軽鎖可変領域が配列番号：１２３と少なくとも９８％又は９９％同一である。このような抗体のうちのいくつかにおいて、成熟重鎖可変領域が配列番号：１６１と少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％同一であり、成熟軽鎖可変領域が配列番号：１２３と少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％同一である。いくつかのこのような抗体において、成熟重鎖可変領域が配列番号：１５７、配列番号：１５８、配列番号：１５９、配列番号：１６０、又は配列番号：１６１のアミノ酸配列を有し、成熟軽鎖可変領域が配列番号：１２３と少なくとも９５％同一である。いくつかのこのような抗体において、成熟重鎖可変領域が配列番号：１６１と少なくとも９５％同一であり、成熟軽鎖可変領域が配列番号：１２１、配列番号：１２２、又は配列番号：１２３のアミノ酸配列を有する。いくつかのこのような抗体において、成熟重鎖可変領域が配列番号：１５７、配列番号：１５８、配列番号：１５９、配列番号：１６０、又は配列番号：１６１のアミノ酸配列を有し、成熟軽鎖可変領域が配列番号：１２１、配列番号：１２２、又は配列番号：１２３のアミノ酸配列を有する。いくつかのこのような抗体において、成熟重鎖可変領域が配列番号：１６１のアミノ酸配列を有し、成熟軽鎖可変領域が配列番号：１２３のアミノ酸配列を有する。いくつかのこのような抗体において、重鎖定常領域が配列番号：１７１又は１７２のアミノ酸配列を有し、及び／又は軽鎖定常領域が配列番号：１６８のアミノ酸配列を有する。
【０００６】
いくつかの抗ＭＣＡＭ抗体が、アミノ酸残基１４１を含むエピトープで、ヒトＭＣＡＭ（配列番号：１１）に結合する。いくつかの抗体において、エピトープがアミノ酸残基１４５を含む。いくつかの抗体において、エピトープが、アミノ酸残基１４１を含むヒトＭＣＡＭの少なくとも５の連続アミノ酸残基を含む。いくつかのこのような抗体において、抗体は、以下の（ａ）〜（ｉ）からなる群より選択される抗体ではない：
（ａ）  配列番号：１８に対応する成熟重鎖可変領域及び配列番号：１３に対応する成熟軽鎖可変領域を有するクローン１５；
（ｂ）  配列番号：７に対応する成熟重鎖可変領域及び配列番号：２に対応する成熟軽鎖可変領域を有するクローン１７；
（ｃ）  配列番号：３５に対応する成熟重鎖可変領域及び配列番号：３０に対応する成熟軽鎖可変領域を有する１１７４．１．３；
（ｄ）  配列番号：４５に対応する成熟重鎖可変領域及び配列番号：４０に対応する成熟軽鎖可変領域を有する１４１４．１．２；
（ｅ）  配列番号：５５に対応する成熟重鎖可変領域及び配列番号：５０に対応する成熟軽鎖可変領域を有する１４１５．１．１；
（ｆ）  配列番号：６５に対応する成熟重鎖可変領域及び配列番号：６０に対応する成熟軽鎖可変領域を有する１７４９．１．３；
（ｇ）  配列番号：７７に対応する成熟重鎖可変領域及び配列番号：７０に対応する成熟軽鎖可変領域を有する２１２０．４．１９；
（ｈ）  配列番号：８９に対応する成熟重鎖可変領域及び配列番号：８４に対応する成熟軽鎖可変領域を有する２１０７．４．１０：及び
（ｉ）  モノクローナル抗体１１７４．１．３、１４１４．１．２、１４１５．１．１、１７４９．１．３、２１２０．４．１９、及び２１０７．４．１０に実質的に由来するＣＤＲを含む抗体。
いくつかのこのような抗体において、抗体がモノクローナルである。いくつかのこのような抗体において、抗体が、キメラ、ヒト化、ベニア化、又はヒトである。
いくつかのこのような抗体において、抗体は、以下の（ａ）〜（ｉ）からなる群より選択される抗体ではない：
（ａ）  配列番号：１８に対応する成熟重鎖可変領域及び配列番号：１３に対応する成熟軽鎖可変領域を有するクローン１５；
（ｂ）  配列番号：７に対応する成熟重鎖可変領域及び配列番号：２に対応する成熟軽鎖可変領域を有するクローン１７；
（ｃ）  配列番号：３５に対応する成熟重鎖可変領域及び配列番号：３０に対応する成熟軽鎖可変領域を有する１１７４．１．３；
（ｄ）  配列番号：４５に対応する成熟重鎖可変領域及び配列番号：４０に対応する成熟軽鎖可変領域を有する１４１４．１．２；
（ｅ）  配列番号：５５に対応する成熟重鎖可変領域及び配列番号：５０に対応する成熟軽鎖可変領域を有する１４１５．１．１；
（ｆ）  配列番号：６５に対応する成熟重鎖可変領域及び配列番号：６０に対応する成熟軽鎖可変領域を有する１７４９．１．３；
（ｇ）  配列番号：７７に対応する成熟重鎖可変領域及び配列番号：７０、７１、又は７２に対応する成熟軽鎖可変領域を有する２１２０．４．１９；
（ｈ）  配列番号：８９に対応する成熟重鎖可変領域及び配列番号：８２又は８４に対応する成熟軽鎖可変領域を有する２１０７．４．１０：及び
（ｉ）  モノクローナル抗体１１７４．１．３、１４１４．１．２、１４１５．１．１、１７４９．１．３、２１２０．４．１９、及び２１０７．４．１０に実質的に由来するＣＤＲを含む抗体。
いくつかのこのような抗体において、抗体がモノクローナルである。いくつかのこのような抗体において、抗体が、キメラ、ヒト化、ベニア化、又はヒトである。
【０００７】
上述の抗体のうち任意のものを含む医薬組成物もまた提供される。
【０００８】
いくつかの医薬製剤は、（ａ）約１ｍｇ／ｍＬ〜約１００ｍｇ／ｍＬの範囲内の濃度で存在する本明細書に記載される任意の抗体；（ｂ）約１０ｍＭ〜約３０ｍＭの範囲内の濃度で存在する、ヒスチジンバッファーなどのバッファー；（ｃ）約２００ｍＭ〜約２６０ｍＭの範囲内の濃度で存在する、スクロース又はトレハロースなどの糖及び／又はポリオール；及び（ｄ）約０．００５質量％〜約０．０５質量％の範囲内の濃度で存在する、ポリソルベート２０などの界面活性剤を含み、この製剤は、約５．５〜約７の範囲内のｐＨによって特徴付けられる。
【０００９】
例示的な医薬製剤は、（ａ）約４０ｍｇ／ｍＬの濃度で存在する、本明細書に記載される任意の抗体；（ｂ）約２０ｍＭの濃度で存在するヒスチジンバッファー；（ｃ）約２２０ｍＭの濃度で存在するスクロース；（ｄ）約０．０２％の濃度で存在するポリソルベート２０；及び（ｅ）約６．０のｐＨを含む。
【００１０】
別の例示的な医薬製剤は、（ａ）約４０ｍｇ／ｍＬの濃度で存在する、本明細書に記載される任意の抗体；（ｂ）約２０ｍＭの濃度で存在するヒスチジンバッファー；（ｃ）約２２０ｍＭの濃度で存在するトレハロース；（ｄ）約０．０２％の濃度で存在するポリソルベート２０；及び（ｅ）約６．５のｐＨを含む。
【００１１】
いくつかの製剤は、増量剤をさらに含み、滅菌であり、及び／又は凍結及び解凍時に安定性である。いくつかの製剤において、３８−４２℃で少なくとも３０日間の保存後及び／又は３８−４２℃で少なくとも３ヶ月の保存後に、少なくとも６５％の抗体が、疎水性相互作用クロマトグラフィーで単一のピークとして現れる。いくつかの製剤において、３８−４２℃で少なくとも３０日間の保存後及び／又は３８−４２℃で少なくとも３ヶ月の保存後に、高性能サイズ排除クロマトグラフィーで５質量％以下の凝集タンパク質が存在する。
【００１２】
抗体製剤は、凍結乾燥製剤の形態であることができる。例えば、代表的な凍結乾燥製剤は、（ａ）本明細書に記載される任意の抗体；（ｂ）ヒスチジンバッファー；（ｃ）スクロース又はトレハロース；及び（ｄ）ポリソルベート２０を含むことができる。凍結乾燥製剤は、約１０ｍｇ〜約４０ｍｇの抗体及び約０．００５質量％〜約０．０５質量％の範囲内の濃度のポリソルベート２０を含むことができる。再構成の後、凍結乾燥製剤は、約１０ｍＭ〜約３０ｍＭのヒスチジンバッファー及び約２００ｍＭ〜約２６０ｍＭのスクロース又はトレハロースを含むことができる。再構成の後、凍結乾燥製剤は、約６〜約７のｐＨ、例えばｐＨ６．０又は６．５などを有する水溶液を生じる。
【００１３】
再構成の後、例示的な凍結乾燥製剤は、（ａ）約４０ｍｇ／ｍＬの濃度で存在する、本明細書に記載される任意の抗体；（ｂ）約２０ｍＭの濃度で存在するヒスチジンバッファー；（ｃ）約２２０ｍＭの濃度で存在するスクロース；（ｄ）約０．２ｇ／Ｌの濃度で存在するポリソルベート２０；及び（ｅ）約６．０のｐＨを含むことができる。このような凍結乾燥製剤は、約２００ｍｇの抗体、約１５．５ｍｇのヒスチジン、約３７６ｍｇのスクロース、及び約１ｍｇのポリソルベート２０を含むことができる。
【００１４】
再構成の後、別の例示的な凍結乾燥製剤は、（ａ）約４０ｍｇ／ｍＬの濃度で存在する、本明細書に記載される任意の抗体；（ｂ）約２０ｍＭの濃度で存在するヒスチジンバッファー；（ｃ）約２２０ｍＭの濃度で存在するトレハロース二水和物；（ｄ）約０．２ｇ／Ｌの濃度で存在するポリソルベート２０；及び（ｅ）約６．５のｐＨを含むことができる。このような凍結乾燥製剤は、約２００ｍｇの抗体、約１５．５ｍｇのヒスチジン、約４１６ｍｇのトレハロース二水和物、及び約１ｍｇのポリソルベート２０を含むことができる。
【００１５】
本発明は、抗ＭＣＡＭモノクローナル抗体を結合するためのエピトープを含む単離ペプチドであって、ペプチドが、アミノ酸残基１４１を含むヒトＭＣＡＭ（配列番号：１１）の５−５０の連続アミノ酸残基を含む、単離ペプチドをさらに提供する。これらのペプチドのいくつかにおいて、ペプチドがキャリアポリペプチドに連結される。これらのペプチドのいくつかにおいて、ペプチドが、アジュバントと組み合わせられる、巨細胞動脈炎、リウマチ性多発筋痛症（ＰＭＲ）又は高安動脈炎の処置又は予防において使用するためのものである。
【００１６】
本発明は、巨細胞動脈炎、リウマチ性多発筋痛症（ＰＭＲ）又は高安動脈炎の処置又は予防において使用するためのヒト化２１０７抗体をさらに提供する。任意選択的に、抗体が、配列番号：１７８又は１７９の成熟重鎖可変領域を含む。任意選択的に、抗体が、配列番号：９８の成熟軽鎖可変領域をさらに含む。
【図面の簡単な説明】
【００１７】
【図１】図１は、重要クローンの同定を示す。平均２１２０．４．１９結合値が、その平均表面発現値の関数としてプロットされている（グレーの菱形）。＜３０％モノクローナル抗体反応性の閾値、及び＞５０％マウス血清結合の閾値を適用して、抗体結合についてネガティブであったが表面発現についてポジティブであったクローン（黒の菱形）を同定した。
【００１８】
【図２】図２Ａ−Ｃ。図２Ａは、リボンダイヤグラムによって表されるヒトＭＣＡＭの相同性モデルである。図２Ｂは、ヒトＭＣＡＭの位置１４１（Ｉ１４１）及び位置１４５（Ｐ１４５）にある、関心の対象となる残基を含む、ヒトＢＣＡＭ、ヒトＭＣＡＭ、及びマウスＭＣＡＭ配列の部分的なアラインメントを示す。図２Ｃは、ヒトＭＣＡＭのＩ１４１及びＰ１４５残基の位置及び暴露を示すリボンダイヤグラムを示す。
【００１９】
【図３】図３Ａ及びＢ。図３Ａは、以下についての可変重鎖の配列のアラインメントを示す：ラット２１２０．４．１９抗ＭＣＡＭ抗体（２１２０．４．１９．６＿ＶＨ＿ｔｏｐｏ＿ｐｒｏ；配列番号：１１４）；２１２０ＶＨ１ヒト化抗ＭＣＡＭ抗体（ｈ２１２０ＶＨ１；配列番号：１１５）；２１２０ＶＨ２ヒト化抗ＭＣＡＭ抗体（ｈ２１２０ＶＨ２；配列番号：１１６）；２１２０ＶＨ３ヒト化抗ＭＣＡＭ抗体（ｈ２１２０ＶＨ３；配列番号：１１７）；２１２０ＶＨ４ヒト化抗ＭＣＡＭ抗体（ｈ２１２０ＶＨ４；配列番号：１１８）；２１２０ＶＨ５ヒト化抗ＭＣＡＭ抗体（ｈ２１２０ＶＨ５；配列番号：１１９）；及びフレームワークドナーとして使用される重鎖ヒト可変ＡＦ０６２１３３  ＩＧＨＶ２−２６＊０１配列（ＡＦ０６２１３３＿ＶＨ；配列番号：１０８）。Ｋａｂａｔナンバリングが使用され、ラット２１２０．４．１９．６抗体から可変重鎖可変ＡＦ０６２１３３  ＩＧＨＶ２−２６＊０１フレームワークに移植された超可変領域（ＨＶＲ）が囲まれている。（ｉ）ＣＤＲ−Ｈ１における囲まれたＮ／Ｄ残基の突然変異、例えば、Ｎ３２Ｓ（ＶＨ３）；Ｎ３２Ｑ（ＶＨ４）；又はＧ３３Ａ（ＶＨ５）と組み合わせられたＳ３０Ｔ、Ｉ３７Ｖ、Ｌ４８Ｉ及びＫ７１Ｒ突然変異は、Ｎ脱アミド化変異体を提供する。ヒト化抗体配列中の太字のアミノ酸残基は、ラット抗体配列中の対応する残基とは異なる。ＣＤＲ接触又はＣＤＲ構造に影響を及ぼし得る基準及び界面のアミノ酸残基の位置が、アスタリスクによって示される。Ｎ−脱アミノ化部位又はＮ−グリコシル化部位の存在に起因して突然変異が集中した残基は、括弧付きのボックス内に示される。
【００２０】
図３Ｂは、以下についての可変軽鎖の配列のアラインメントを示す：ラット２１２０．４．１９．６抗ＭＣＡＭ抗体（２１２０．４．１９．６＿ＶＬ＿ｔｏｐｏ＿ｐｒｏ；配列番号：１２０）；２１２０ＶＬ１ヒト化抗ＭＣＡＭ抗体（ｈ２１２０ＶＬ１配列番号：１２１）；２１２０ＶＬ２ヒト化抗ＭＣＡＭ抗体（ｈ２１２０ＶＬ２配列番号：１２２）；２１２０ＶＬ３ヒト化抗ＭＣＡＭ抗体（ｈ２１２０ＶＬ３配列番号：１２３）；及びフレームワークドナーとして使用される軽鎖ヒト可変Ｘ８４３４３  ＩＧＫＶ２−２６＊０１配列（Ｘ８４３４３＿ＶＬ配列番号：１２４）。Ｋａｂａｔナンバリングが使用され、ラット２１２０．４．１９．６抗体から可変軽鎖可変Ｘ８４３４３  ＩＧＫＶ２−２６＊０１フレームワークに移植された超可変領域（ＨＶＲ）が囲まれている。ヒト化抗体配列中の太字のアミノ酸残基は、ラット抗体配列中の対応する残基とは異なる。ＣＤＲ接触又はＣＤＲ構造に影響を及ぼし得る基準及び界面のアミノ酸残基の位置が、アスタリスクによって示される。
【００２１】
【図４】図４Ａは、以下についての成熟重鎖可変領域の配列のアラインメントを示す：ラット２１２０．４．１９抗ＭＣＡＭ抗体（２１２０．４．１９．６＿ＶＨ＿ｔｏｐｏ＿ｐｒｏ；配列番号：１１４）；２１２０ＶＨ１．Ｑ１Ｅヒト化抗ＭＣＡＭ抗体（ｈ２１２０ＶＨ１．Ｑ１Ｅ；配列番号：１５７）；２１２０ＶＨ２．Ｑ１Ｅヒト化抗ＭＣＡＭ抗体（ｈ２１２０ＶＨ２．Ｑ１Ｅ；配列番号：１５８）；２１２０ＶＨ３．Ｑ１Ｅヒト化抗ＭＣＡＭ抗体（ｈ２１２０ＶＨ３．Ｑ１Ｅ；配列番号：１５９）；２１２０ＶＨ４．Ｑ１Ｅヒト化抗ＭＣＡＭ抗体（ｈ２１２０ＶＨ４．Ｑ１Ｅ；配列番号：１６０）；２１２０ＶＨ５．Ｑ１Ｅヒト化抗ＭＣＡＭ抗体（ｈ２１２０ＶＨ５．Ｑ１Ｅ；配列番号：１６１）；及びフレームワークドナーとして使用される重鎖ヒト可変ＡＦ０６２１３３  ＩＧＨＶ２−２６＊０１配列（ＡＦ０６２１３３＿ＶＨ；配列番号：１０８）。Ｋａｂａｔナンバリングが使用され、ラット２１２０．４．１９．６抗体から可変重鎖可変ＡＦ０６２１３３  ＩＧＨＶ２−２６＊０１フレームワークに移植された超可変領域（ＨＶＲ）が囲まれている。位置Ｑ１Ｅ置換はボックスによって囲まれている。
【００２２】
図４Ｂは、以下についての可変軽鎖の配列のアラインメントを示す：ラット２１２０．４．１９．６抗ＭＣＡＭ抗体（２１２０．４．１９．６＿ＶＬ＿ｔｏｐｏ＿ｐｒｏ；配列番号：１２０）；２１２０ＶＬ１ヒト化抗ＭＣＡＭ抗体（ｈ２１２０ＶＬ１；配列番号：１２１）；２１２０ＶＬ２ヒト化抗ＭＣＡＭ抗体（ｈ２１２０ＶＬ２；配列番号：１２２）；２１２０ＶＬ３ヒト化抗ＭＣＡＭ抗体（ｈ２１２０ＶＬ３；配列番号：１２３）；及びフレームワークドナーとして使用される軽鎖ヒト可変Ｘ８４３４３  ＩＧＫＶ２−２６＊０１配列（Ｘ８４３４３＿ＶＬ配列番号：１２４）。Ｋａｂａｔナンバリングが使用され、ラット２１２０．４．１９．６抗体から可変軽鎖可変Ｘ８４３４３  ＩＧＫＶ２−２６＊０１フレームワークに移植された超可変領域（ＨＶＲ）が囲まれている。
【発明を実施するための形態】
【００２３】
配列の短い説明
配列番号：１は、抗体クローン１７の成熟軽鎖可変領域をコードする核酸配列である。
【００２４】
配列番号：２は、抗体クローン１７の成熟軽鎖可変領域のアミノ酸配列である。
【００２５】
配列番号：３は、抗体クローン１７のＣＤＲＬ１のアミノ酸配列である。
【００２６】
配列番号：４は、抗体クローン１７のＣＤＲＬ２のアミノ酸配列である。
【００２７】
配列番号：５は、抗体クローン１７のＣＤＲＬ３のアミノ酸配列である。
【００２８】
配列番号：６は、抗体クローン１７の成熟重鎖可変領域をコードする核酸配列である。
【００２９】
配列番号：７は、抗体クローン１７の成熟重鎖可変領域のアミノ酸配列である。
【００３０】
配列番号：８は、抗体クローン１７のＣＤＲＨ１のアミノ酸配列である。
【００３１】
配列番号：９は、抗体クローン１７のＣＤＲＨ２のアミノ酸配列である。
【００３２】
配列番号：１０は、抗体クローン１７のＣＤＲＨ３のアミノ酸配列である。
【００３３】
配列番号：１１は、ヒトＭＣＡＭ受託番号ＣＡＡ４８３３２のアミノ酸配列である。
【００３４】
配列番号：１２は、抗体クローン１５の成熟軽鎖可変領域をコードする核酸配列である。
【００３５】
配列番号：１３は、抗体クローン１５の成熟軽鎖可変領域のアミノ酸配列である。
【００３６】
配列番号：１４は、抗体クローン１５のＣＤＲＬ１のアミノ酸配列である。
【００３７】
配列番号：１５は、抗体クローン１５のＣＤＲＬ２のアミノ酸配列である。
【００３８】
配列番号：１６は、抗体クローン１５のＣＤＲＬ３のアミノ酸配列である。
【００３９】
配列番号：１７は、抗体クローン１５の成熟重鎖可変領域をコードする核酸配列である。
【００４０】
配列番号：１８は、抗体クローン１５の成熟重鎖可変領域のアミノ酸配列である。
【００４１】
配列番号：１９は、抗体クローン１５のＣＤＲＨ１のアミノ酸配列である。
【００４２】
配列番号：２０は、抗体クローン１５のＣＤＲＨ２のアミノ酸配列である。
【００４３】
配列番号：２１は、抗体クローン１５のＣＤＲＨ３のアミノ酸配列である。
【００４４】
配列番号：２２は、ヒトＭＣＡＭドメイン１（残基１９−１２９）のアミノ酸配列である。
【００４５】
配列番号：２３は、ヒトＭＣＡＭドメイン２（残基１３９−２４２）のアミノ酸配列である。
【００４６】
配列番号：２４は、ヒトＭＣＡＭドメイン３（残基２４４−３２１）のアミノ酸配列である。
【００４７】
配列番号：２５は、ヒトＭＣＡＭドメイン４（残基３５５−４２４）のアミノ酸配列である。
【００４８】
配列番号：２６は、ヒトＭＣＡＭドメイン５（残基４３０−５１０）のアミノ酸配列である。
【００４９】
配列番号：２７は、ヒトラミニン４１１のα４−鎖アイソフォーム（受託番号ＮＰ００１０９８６７６）のアミノ酸配列である。
【００５０】
配列番号：２８は、ヒトラミニン４１１のα４−鎖アイソフォーム（受託番号ＣＡＡ４８３３２）のアミノ酸配列である。
【００５１】
配列番号：２９は、抗体１１７４．１．３の成熟軽鎖可変領域をコードする核酸配列である。
【００５２】
配列番号：３０は、抗体１１７４．１．３の成熟軽鎖可変領域のアミノ酸配列である。
【００５３】
配列番号：３１は、抗体１１７４．１．３のＣＤＲＬ１のアミノ酸配列である。
【００５４】
配列番号：３２は、抗体１１７４．１．３のＣＤＲＬ２のアミノ酸配列である。
【００５５】
配列番号：３３は、抗体１１７４．１．３のＣＤＲＬ３のアミノ酸配列である。
【００５６】
配列番号：３４は、抗体１１７４．１．３の成熟重鎖可変領域をコードする核酸配列である。
【００５７】
配列番号：３５は、抗体１１７４．１．３の成熟重鎖可変領域のアミノ酸配列である。
【００５８】
配列番号：３６は、抗体１１７４．１．３のＣＤＲＨ１のアミノ酸配列である。
【００５９】
配列番号：３７は、抗体１１７４．１．３のＣＤＲＨ２のアミノ酸配列である。
【００６０】
配列番号：３８は、抗体１１７４．１．３のＣＤＲＨ３のアミノ酸配列である。
【００６１】
配列番号：３９は、抗体１４１４．１．２の成熟軽鎖可変領域をコードする核酸配列である。
【００６２】
配列番号：４０は、抗体１４１４．１．２の成熟軽鎖可変領域のアミノ酸配列である。
【００６３】
配列番号：４１は、抗体１４１４．１．２のＣＤＲＬ１のアミノ酸配列である。
【００６４】
配列番号：４２は、抗体１４１４．１．２のＣＤＲＬ２のアミノ酸配列である。
【００６５】
配列番号：４３は、抗体１４１４．１．２のＣＤＲＬ３のアミノ酸配列である。
【００６６】
配列番号：４４は、抗体１４１４．１．２の成熟重鎖可変領域をコードする核酸配列である。
【００６７】
配列番号：４５は、抗体１４１４．１．２の成熟重鎖可変領域のアミノ酸配列である。
【００６８】
配列番号：４６は、抗体１４１４．１．２のＣＤＲＨ１のアミノ酸配列である。
【００６９】
配列番号：４７は、抗体１４１４．１．２のＣＤＲＨ２のアミノ酸配列である。
【００７０】
配列番号：４８は、抗体１４１４．１．２のＣＤＲＨ３のアミノ酸配列である。
【００７１】
配列番号：４９は、抗体１４１５．１．１の成熟軽鎖可変領域をコードする核酸配列である。
【００７２】
配列番号：５０は、抗体１４１５．１．１の成熟軽鎖可変領域のアミノ酸配列である。
【００７３】
配列番号：５１は、抗体１４１５．１．１のＣＤＲＬ１のアミノ酸配列である。
【００７４】
配列番号：５２は、抗体１４１５．１．１のＣＤＲＬ２のアミノ酸配列である。
【００７５】
配列番号：５３は、抗体１４１５．１．１のＣＤＲＬ３のアミノ酸配列である。
【００７６】
配列番号：５４は、抗体１４１５．１．１の成熟重鎖可変領域をコードする核酸配列である。
【００７７】
配列番号：５５は、抗体１４１５．１．１の成熟重鎖可変領域のアミノ酸配列である。
【００７８】
配列番号：５６は、抗体１４１５．１．１のＣＤＲＨ１のアミノ酸配列である。
【００７９】
配列番号：５７は、抗体１４１５．１．１のＣＤＲＨ２のアミノ酸配列である。
【００８０】
配列番号：５８は、抗体１４１５．１．１のＣＤＲＨ３のアミノ酸配列である。
【００８１】
配列番号：５９は、抗体１７４９．１．３の成熟軽鎖可変領域をコードする核酸配列である。
【００８２】
配列番号：６０は、抗体１７４９．１．３の成熟軽鎖可変領域のアミノ酸配列である。
【００８３】
配列番号：６１は、抗体１７４９．１．３のＣＤＲＬ１のアミノ酸配列である。
【００８４】
配列番号：６２は、抗体１７４９．１．３のＣＤＲＬ２のアミノ酸配列である。
【００８５】
配列番号：６３は、抗体１７４９．１．３のＣＤＲＬ３のアミノ酸配列である。
【００８６】
配列番号：６４は、抗体１７４９．１．３の成熟重鎖可変領域をコードする核酸配列である。
【００８７】
配列番号：６５は、抗体１７４９．１．３の成熟重鎖可変領域のアミノ酸配列である。
【００８８】
配列番号：６６は、抗体１７４９．１．３のＣＤＲＨ１のアミノ酸配列である。
【００８９】
配列番号：６７は、抗体１７４９．１．３のＣＤＲＨ２のアミノ酸配列である。
【００９０】
配列番号：６８は、抗体１７４９．１．３のＣＤＲＨ３のアミノ酸配列である。
【００９１】
配列番号：６９は、抗体２１２０．４．１９の成熟軽鎖可変領域をコードする核酸配列である。
【００９２】
配列番号：７０は、配列番号：６９に記載される抗体２１２０．４．１９の成熟軽鎖可変領域のアミノ酸配列である。
【００９３】
配列番号：７１は、抗体２１２０．４．１９の成熟軽鎖可変領域のアミノ酸配列である。
【００９４】
配列番号：７２は、抗体２１２０．４．１９の成熟軽鎖可変領域のアミノ酸配列である。
【００９５】
配列番号：７３は、抗体２１２０．４．１９のＣＤＲＬ１のアミノ酸配列である。
【００９６】
配列番号：７４は、抗体２１２０．４．１９のＣＤＲＬ２のアミノ酸配列である。
【００９７】
配列番号：７５は、抗体２１２０．４．１９のＣＤＲＬ３のアミノ酸配列である。
【００９８】
配列番号：７６は、抗体２１２０．４．１９の成熟重鎖可変領域をコードする核酸配列である。
【００９９】
配列番号：７７は、抗体２１２０．４．１９の成熟重鎖可変領域のアミノ酸配列である。
【０１００】
配列番号：７８は、抗体２１２０．４．１９のＣＤＲＨ１のアミノ酸配列である。
【０１０１】
配列番号：７９は、抗体２１２０．４．１９のＣＤＲＨ２のアミノ酸配列である。
【０１０２】
配列番号：８０は、抗体２１２０．４．１９のＣＤＲＨ３のアミノ酸配列である。
【０１０３】
配列番号：８１は、抗体２１０７．４．１０の成熟軽鎖可変領域をコードする核酸配列である。
【０１０４】
配列番号：８２は、配列番号：８１に記載される抗体２１０７．４．１０の成熟軽鎖可変領域のアミノ酸配列である。
【０１０５】
配列番号：８３は、抗体２１０７．４．１０の成熟軽鎖可変領域をコードする核酸配列である。
【０１０６】
配列番号：８４は、配列番号：８３に記載される抗体２１０７．４．１０の成熟軽鎖可変領域のアミノ酸配列である。
【０１０７】
配列番号：８５は、抗体２１０７．４．１０のＣＤＲＬ１のアミノ酸配列である。
【０１０８】
配列番号：８６は、抗体２１０７．４．１０のＣＤＲＬ２のアミノ酸配列である。
【０１０９】
配列番号：８７は、抗体２１０７．４．１０のＣＤＲＬ３のアミノ酸配列である。
【０１１０】
配列番号：８８は、抗体２１０７．４．１０の成熟重鎖可変領域をコードする核酸配列である。
【０１１１】
配列番号：８９は、抗体２１０７．４．１０の成熟重鎖可変領域のアミノ酸配列である。
【０１１２】
配列番号：９０は、抗体２１０７．４．１０のＣＤＲＨ１のアミノ酸配列である。
【０１１３】
配列番号：９１は、抗体２１０７．４．１０のＣＤＲＨ２のアミノ酸配列である。
【０１１４】
配列番号：９２は、抗体２１０７．４．１０のＣＤＲＨ３のアミノ酸配列である。
【０１１５】
配列番号：９３は、抗体１７４９．１．３の成熟重鎖可変領域のアミノ酸配列である。
【０１１６】
配列番号：９４は、ヒト化抗体１７４９バージョン１の成熟重鎖可変領域（ＶＨ１）のアミノ酸配列である。
【０１１７】
配列番号：９５は、ヒト化抗体１７４９バージョン２の成熟重鎖可変領域（ＶＨ２）のアミノ酸配列である。
【０１１８】
配列番号：９６は、重鎖可変フレームワークドナーＵ９６２８２＿ＶＨのアミノ酸配列である。
【０１１９】
配列番号：９７は、抗体１７４９．１．３の成熟軽鎖可変領域のアミノ酸配列である。
【０１２０】
配列番号：９８は、ヒト化抗体１７４９バージョン１の成熟軽鎖可変領域（ＶＬ１）のアミノ酸配列である。
【０１２１】
配列番号：９９は、ヒト化抗体１７４９バージョン２の成熟軽鎖可変領域（ＶＬ２）のアミノ酸配列である。
【０１２２】
配列番号：１００は、軽鎖可変フレームワークドナーＸ０２９９０＿ＶＬのアミノ酸配列である。
【０１２３】
配列番号：１０１は、抗体２１０７．４．１０．１８の成熟重鎖可変領域のアミノ酸配列である。
【０１２４】
配列番号：１０２は、ヒト化抗体２１０７バージョン１の成熟重鎖可変領域（ＶＨ１）のアミノ酸配列である。
【０１２５】
配列番号：１０３は、ヒト化抗体２１０７バージョン２の成熟重鎖可変領域（ＶＨ２）のアミノ酸配列である。
【０１２６】
配列番号：１０４は、ヒト化抗体２１０７バージョン３の成熟重鎖可変領域（ＶＨ３）のアミノ酸配列である。
【０１２７】
配列番号：１０５は、ヒト化抗体２１０７バージョン４Ａの成熟重鎖可変領域（ＶＨ４Ａ）のアミノ酸配列である。
【０１２８】
配列番号：１０６は、ヒト化抗体２１０７バージョン５Ａの成熟重鎖可変領域（ＶＨ５Ａ）のアミノ酸配列である。
【０１２９】
配列番号：１０７は、ヒト化抗体２１０７バージョン６の成熟重鎖可変領域（ＶＨ６）のアミノ酸配列である。
【０１３０】
配列番号：１０８は、重鎖可変フレームワークドナーＡＦ０６２１３３＿ＶＨのアミノ酸配列である。
【０１３１】
配列番号：１０９は、抗体２１０７．４．１０．１８の成熟軽鎖可変領域のアミノ酸配列である。
【０１３２】
配列番号：１１０は、ヒト化抗体２１０７バージョン１の成熟軽鎖可変領域（ＶＬ１）のアミノ酸配列である。
【０１３３】
配列番号：１１１は、ヒト化抗体２１０７バージョン２の成熟軽鎖可変領域（ＶＬ２）のアミノ酸配列である。
【０１３４】
配列番号：１１２は、ヒト化抗体２１０７バージョン３の成熟軽鎖可変領域（ＶＬ３）のアミノ酸配列である。
【０１３５】
配列番号：１１３は、軽鎖可変フレームワークドナーＵ８６８０３のアミノ酸配列である。
【０１３６】
配列番号：１１４は、抗体２１２０．４．１９．６の成熟重鎖可変領域のアミノ酸配列である。
【０１３７】
配列番号：１１５は、ヒト化抗体２１２０バージョン１の成熟重鎖可変領域（ＶＨ１）のアミノ酸配列である。
【０１３８】
配列番号：１１６は、ヒト化抗体２１２０バージョン２の成熟重鎖可変領域（ＶＨ２）のアミノ酸配列である。
【０１３９】
配列番号：１１７は、ヒト化抗体２１２０バージョン３の成熟重鎖可変領域（ＶＨ３）のアミノ酸配列である。
【０１４０】
配列番号：１１８は、ヒト化抗体２１２０バージョン４の成熟重鎖可変領域（ＶＨ４）のアミノ酸配列である。
【０１４１】
配列番号：１１９は、ヒト化抗体２１２０バージョン５の成熟重鎖可変領域（ＶＨ５）のアミノ酸配列である。
【０１４２】
配列番号：１２０は、抗体２１２０．４．１９．６の成熟軽鎖可変領域のアミノ酸配列である。
【０１４３】
配列番号：１２１は、ヒト化抗体２１２０バージョン１の成熟軽鎖可変領域（ＶＬ１）のアミノ酸配列である。
【０１４４】
配列番号：１２２は、ヒト化抗体２１２０バージョン２の成熟軽鎖可変領域（ＶＬ２）のアミノ酸配列である。
【０１４５】
配列番号：１２３は、ヒト化抗体２１２０バージョン３の成熟軽鎖可変領域（ＶＬ３）のアミノ酸配列である。
【０１４６】
配列番号：１２４は、軽鎖可変フレームワークドナーＸ８４３４３＿ＶＬのアミノ酸配列である。
【０１４７】
配列番号：１２５は、ヒト化重鎖フレームワーク領域のアミノ酸配列である。
【０１４８】
配列番号：１２６は、ヒト化重鎖フレームワーク領域のアミノ酸配列である。
【０１４９】
配列番号：１２７は、ヒト化重鎖フレームワーク領域のアミノ酸配列である。
【０１５０】
配列番号：１２８は、ヒト化重鎖／軽鎖フレームワーク領域のアミノ酸配列である。
【０１５１】
配列番号：１２９は、ヒト化軽鎖フレームワーク領域のアミノ酸配列である。
【０１５２】
配列番号：１３０は、ヒト化軽鎖フレームワーク領域のアミノ酸配列である。
【０１５３】
配列番号：１３１は、ヒト化軽鎖フレームワーク領域のアミノ酸配列である。
【０１５４】
配列番号：１３２は、ヒト化軽鎖フレームワーク領域のアミノ酸配列である。
【０１５５】
配列番号：１３３は、ヒト化重鎖フレームワーク領域のアミノ酸配列である。
【０１５６】
配列番号：１３４は、ヒト化重鎖フレームワーク領域のアミノ酸配列である。
【０１５７】
配列番号：１３５は、ヒト化重鎖フレームワーク領域のアミノ酸配列である。
【０１５８】
配列番号：１３６は、ヒト化重鎖フレームワーク領域のアミノ酸配列である。
【０１５９】
配列番号：１３７は、ヒト化重鎖フレームワーク領域のアミノ酸配列である。
【０１６０】
配列番号：１３８は、ヒト化重鎖フレームワーク領域のアミノ酸配列である。
【０１６１】
配列番号：１３９は、ヒト化抗体２１２０バージョン３のＣＤＲＨ１（ＶＨ３）のアミノ酸配列である。
【０１６２】
配列番号：１４０は、ヒト化抗体２１２０バージョン４のＣＤＲＨ１（ＶＨ４）のアミノ酸配列である。
【０１６３】
配列番号：１４１は、ヒト化抗体２１２０バージョン５のＣＤＲＨ１（ＶＨ５）のアミノ酸配列である。
【０１６４】
配列番号：１４２は、ヒト化軽鎖フレームワーク領域のアミノ酸配列である。
【０１６５】
配列番号：１４３は、ヒト化軽鎖フレームワーク領域のアミノ酸配列である。
【０１６６】
配列番号：１４４は、ヒト化軽鎖フレームワーク領域のアミノ酸配列である。
【０１６７】
配列番号：１４５は、ヒト化軽鎖フレームワーク領域のアミノ酸配列である。
【０１６８】
配列番号：１４６は、ヒト化軽鎖フレームワーク領域のアミノ酸配列である。
【０１６９】
配列番号：１４７は、ヒト化軽鎖フレームワーク領域のアミノ酸配列である。
【０１７０】
配列番号：１４８は、ヒト化軽鎖フレームワーク領域のアミノ酸配列である。
【０１７１】
配列番号：１４９は、ヒト化軽鎖フレームワーク領域のアミノ酸配列である。
【０１７２】
配列番号：１５０は、ヒト化軽鎖フレームワーク領域のアミノ酸配列である。
【０１７３】
配列番号：１５１は、ヒト化抗体２１０７バージョン１のＣＤＲＨ１（ＶＨ１）のアミノ酸配列である。
【０１７４】
配列番号：１５２は、ヒト化抗体２１０７バージョン４のＣＤＲＨ１（ＶＨ４）のアミノ酸配列である。
【０１７５】
配列番号：１５３は、ヒト化抗体２１２０バージョン１−５のＣＤＲＨ３（ＶＨ１−ＶＨ５）のアミノ酸配列である。
【０１７６】
配列番号：１５４は、ヒト化軽鎖フレームワーク領域のアミノ酸配列である。
【０１７７】
配列番号：１５５は、ヒト化重鎖フレームワーク領域のアミノ酸配列である。
【０１７８】
配列番号：１５６は、位置１（Ｋａｂａｔナンバリング）がＥによって占められる、抗体２１２０．４．１９．Ｑ１Ｅの成熟重鎖可変領域のアミノ酸配列である。
【０１７９】
配列番号：１５７は、位置１（Ｋａｂａｔナンバリング）がＥによって占められる、ヒト化抗体２１２０バージョン１  Ｑ１Ｅの成熟重鎖可変領域（ＶＨ１．Ｑ１Ｅ）のアミノ酸配列である。
【０１８０】
配列番号：１５８は、位置１（Ｋａｂａｔナンバリング）がＥによって占められる、ヒト化抗体２１２０バージョン２  Ｑ１Ｅの成熟重鎖可変領域（ＶＨ２．Ｑ１Ｅ）のアミノ酸配列である。
【０１８１】
配列番号：１５９は、位置１（Ｋａｂａｔナンバリング）がＥによって占められる、ヒト化抗体２１２０バージョン３  Ｑ１Ｅの成熟重鎖可変領域（ＶＨ３．Ｑ１Ｅ）のアミノ酸配列である。
【０１８２】
配列番号：１６０は、位置１（Ｋａｂａｔナンバリング）がＥによって占められる、ヒト化抗体２１２０バージョン４  Ｑ１Ｅの成熟重鎖可変領域（ＶＨ４．Ｑ１Ｅ）のアミノ酸配列である。
【０１８３】
配列番号：１６１は、位置１（Ｋａｂａｔナンバリング）がＥによって占められる、ヒト化抗体２１２０バージョン５  Ｑ１Ｅの成熟重鎖可変領域（ＶＨ５．Ｑ１Ｅ）のアミノ酸配列である。
【０１８４】
配列番号：１６２は、成熟重鎖又は成熟軽鎖可変領域に融合させることができる例示的なシグナルペプチドをコードする核酸配列である。
【０１８５】
配列番号：１６３は、配列番号：１６２の核酸配列によってコードされる例示的なシグナルペプチドのアミノ酸配列である。
【０１８６】
配列番号：１６４は、成熟重鎖又は成熟軽鎖可変領域に融合させることができる例示的なシグナルペプチドをコードする核酸配列である。
【０１８７】
配列番号：１６５は、配列番号：１６４の核酸配列によってコードされる例示的なシグナルペプチドのアミノ酸配列である。
【０１８８】
配列番号：１６６は、成熟重鎖又は成熟軽鎖可変領域に融合させることができる例示的なシグナルペプチドをコードする核酸配列である。
【０１８９】
配列番号：１６７は、配列番号：１６６の核酸配列によってコードされる例示的なシグナルペプチドのアミノ酸配列である。
【０１９０】
配列番号：１６８は、Ｎ末端にアルギニンを有するヒト化２１２０軽鎖定常領域のアミノ酸配列である。
【０１９１】
配列番号：１６９は、Ｎ末端にアルギニンを有しないヒト化２１２０軽鎖定常領域のアミノ酸配列である。
【０１９２】
配列番号：１７０は、ヒト化２１２０重鎖定常領域のアミノ酸配列である。
【０１９３】
配列番号：１７１は、ＢＩＰバージョン重鎖Ｇ１ｍ３アロタイプ定常領域のアミノ酸配列である。
【０１９４】
配列番号：１７２は、ＢＩＰバージョン重鎖Ｇ１ｍ３アロタイプ定常領域のアミノ酸配列である。
【０１９５】
配列番号：１７３は、ヒト化抗体２１２０バージョン３の成熟軽鎖領域（ＶＬ３＋軽鎖定常領域）のアミノ酸配列である。
【０１９６】
配列番号：１７４は、ヒト化抗体２１２０バージョン５の成熟重鎖領域（ＶＨ５＋ＢＩＰバージョン重鎖Ｇ１ｍ３アロタイプ定常領域）のアミノ酸配列である。
【０１９７】
配列番号：１７５は、ヒト化抗体２１２０バージョン５の成熟重鎖領域（ＶＨ５＋ＢＩＰバージョン重鎖Ｇ１ｍ３アロタイプ定常領域）のアミノ酸配列である。
【０１９８】
配列番号：１７６は、ヒト化抗体２１２０バージョン５  Ｑ１Ｅの成熟重鎖領域（ＶＨ５．Ｑ１Ｅ＋ＢＩＰバージョン重鎖Ｇ１ｍ３アロタイプ定常領域）のアミノ酸配列である。配列番号：１７７は、ヒト化抗体２１２０バージョン５  Ｑ１Ｅの成熟重鎖領域（ＶＨ５．Ｑ１Ｅ＋ＢＩＰバージョン重鎖Ｇ１ｍ３アロタイプ定常領域）のアミノ酸配列である。
【０１９９】
配列番号：１７８は、ヒト化抗体２１０７バージョン４Ｂの成熟重鎖可変領域（ＶＨ４Ｂ）のアミノ酸配列である。
【０２００】
配列番号：１７９は、ヒト化抗体２１０７バージョン５Ｂの成熟重鎖可変領域（ＶＨ５Ｂ）のアミノ酸配列である。
【０２０１】
定義
モノクローナル抗体は典型的には、単離された形態で提供される。これは、抗体が典型的には、その産生又は精製から生じるタンパク質及び他の巨大分子から少なくとも５０％ｗ／ｗ純粋であることを意味するが、モノクローナル抗体が、その使用を容易にすることが意図される過剰の医薬的に許容されるキャリア又は他のビヒクルと組み合わせられる可能性を除外するものではない。時折、モノクローナル抗体は、産生又は精製由来のタンパク質及び他の巨大分子から少なくとも６０％、７０％、８０％、９０％、９５又は９９％ｗ／ｗ純粋である。
【０２０２】
モノクローナル抗体のその標的抗原への特異的結合は、少なくとも１０６、１０７、１０８、１０９、又は１０１０Ｍ−１の親和性を意味する。特異的結合は、大きさが検出可能に高く、少なくとも１つの無関係の標的に対して生じる非特異的結合と区別できる。特異的結合は、特定の官能基間の結合の形成又は特定の空間的嵌合（例えば、ロック及びキータイプ）の結果であり得る一方で、非特異的結合は通常、ファン・デル・ワールス力の結果である。しかしながら、特異的結合は、モノクローナル抗体が唯一の標的に結合することを必ずしも意味するものではない。
【０２０３】
基本的な抗体構造単位は、サブユニットのテトラマーである。各テトラマーは、同一の２対のポリペプチド鎖を含み、各対は、１つの「軽」鎖（約２５ｋＤａ）及び１つの「重」鎖（約５０−７０ｋＤａ）を有する。各鎖のアミノ末端部分は、抗原認識に主として関与している約１００〜１１０又はそれ以上のアミノ酸の可変領域を含む。この可変領域は最初に、切断可能なシグナルペプチドに連結して発現される。シグナルペプチドを有しない可変領域は、時折、成熟可変領域と呼ばれる。したがって、例えば、軽鎖成熟可変領域は、軽鎖シグナルペプチドを有しない軽鎖可変領域を意味する。各鎖のカルボキシ末端部分は、エフェクター機能に主として関与している定常領域を定める。
【０２０４】
軽鎖は、カッパ又はラムダのいずれかに分類される。重鎖は、ガンマ、ミュー、アルファ、デルタ、又はイプシロンとして分類され、それぞれＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＤ及びＩｇＥとして、抗体のアイソタイプを定める。軽鎖及び重鎖内で、可変領域及び定常領域は、約１２以上のアミノ酸の「Ｊ」領域によって接合されており、重鎖はまた、約１０以上のアミノ酸の「Ｄ」領域を含む。（参照によりその全体が全ての目的のために組み込まれる、Ｆｕｎｄａｍｅｎｔａｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（Ｐａｕｌ，  Ｗ．，  ｅｄ．，  ２ｎｄ  ｅｄ．  Ｒａｖｅｎ  Ｐｒｅｓｓ，  Ｎ．Ｙ．，  １９８９，  Ｃｈ．  ７）を一般的に参照されたい。）
【０２０５】
各軽鎖／重鎖対の成熟可変領域は、抗体結合部位を形成する。したがって、インタクトな抗体は２つの結合部位を有する。二機能性又は二重特異性抗体を除き、この２つの結合部位は同じである。鎖は全て、３つの超可変領域（相補性決定領域又はＣＤＲとも呼ばれる）によって接合された、比較的保存されたフレームワーク領域（ＦＲ）の同じ一般的構造を示す。各対の２つの鎖由来のＣＤＲは、フレームワーク領域によって整列され、特異的なエピトープへの結合を可能にする。Ｎ末端からＣ末端まで、軽鎖及び重鎖の両方は、ドメインＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３及びＦＲ４を含む。各ドメインへのアミノ酸の割当は、Ｋａｂａｔ，  Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ  （Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ，  Ｂｅｔｈｅｓｄａ，  ＭＤ，  １９８７  ａｎｄ  １９９１）、又はＣｈｏｔｈｉａ  ＆  Ｌｅｓｋ，  Ｊ．  Ｍｏｌ．  Ｂｉｏｌ．  １９６：９０１−９１７  （１９８７）；Ｃｈｏｔｈｉａ  ｅｔ  ａｌ．  ，  Ｎａｔｕｒｅ  ３４２：８７８−８８３  （１９８９）の定義に従う。Ｋａｂａｔはまた、幅広く使用されるナンバリング規則（Ｋａｂａｔナンバリング）を提供し、ここで、異なる重鎖間又は異なる軽鎖間で対応する残基は、同じ番号に割り当てられる（例えば、Ｈ８３は、成熟重鎖可変領域中のＫａｂａｔナンバリングによる位置８３を意味し；同様に位置Ｌ３６は、成熟軽鎖可変領域中のＫａｂａｔナンバリングによる位置３６を意味する）。他に明示的に記載されていない限り、Ｋａｂａｔナンバリングは、抗体の可変領域中の位置を参照する際に、いたるところで使用される。
【０２０６】
用語「抗体」は、インタクトな抗体及びその抗原結合フラグメントを含む。典型的には、フラグメントは、別個の重鎖、軽鎖、Ｆａｂ、Ｆａｂ'、Ｆ（ａｂ'）２、Ｆ（ａｂ）ｃ、ダイアボディ、Ｄａｂｓ、ナノボディ、及びＦｖを含む標的への特異的結合について、それらが由来したインタクトな抗体と競合する。フラグメントは、組換えＤＮＡ技術によって、又はインタクトな免疫グロブリンの酵素的又は化学的分離によって産生することができる。
【０２０７】
用語「抗体」はまた、二重特異性抗体、及び／又はキメラ抗体、及び／又はヒト化抗体を含む。二重特異性又は二機能性抗体は、２つの異なる重鎖／軽鎖対及び２つの異なる結合部位を有する人工ハイブリッド抗体である（例えば、Ｓｏｎｇｓｉｖｉｌａｉ  ａｎｄ  Ｌａｃｈｍａｎｎ，  Ｃｌｉｎ．  Ｅｘｐ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．，  ７９：３１５−３２１  （１９９０）；Ｋｏｓｔｅｌｎｙ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  １４８：１５４７−５３  （１９９２）を参照されたい）。いくつかの二重特異性抗体において、この２つの異なる重鎖／軽鎖対は、ヒト化重鎖／軽鎖対及び異なるエピトープに特異的な重鎖／軽鎖対を含み得る。
【０２０８】
いくつかの二重特異性抗体において、１つの重鎖軽鎖対は、以下にさらに開示されるようなヒト化抗体であり、この重鎖軽鎖対は、血液脳関門に発現されたレセプター、例えば、インシュリンレセプター、インシュリン様成長因子（ＩＧＦ）レセプター、レプチンレセプター、又はリポタンパク質レセプター、又はトランスフェリンレセプターなどに結合する抗体に由来する（Ｆｒｉｄｅｎ  ｅｔ  ａｌ．  ，  ＰＮＡＳ  ８８：４７７１−４７７５，  １９９１；Ｆｒｉｄｅｎ  ｅｔ  ａｌ．  ，  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２５９：３７３−３７７，  １９９３）。このような二重特異性抗体は、レセプター介在性トランスサイトーシスによって、血液脳関門を横切って移動させることができる。二重特異性抗体の脳取り込みは、二重特異性抗体を操作して、血液脳関門レセプターに対するその親和性を低減することによって、さらに強化することができる。レセプターに対する親和性の低下は、脳におけるより幅広い分布をもたらした（例えば、Ａｔｗａｌ．  ｅｔ  ａｌ．    Ｓｃｉ．  Ｔｒａｎｓ．  Ｍｅｄ．  ３，  ８４ｒａ４３，  ２０１１；Ｙｕ  ｅｔ  ａｌ．    Ｓｃｉ．  Ｔｒａｎｓ．  Ｍｅｄ．  ３，  ８４ｒａ４４，  ２０１１を参照されたい）。
【０２０９】
例示的な二重特異性抗体はまた、（１）二重可変ドメイン抗体（ＤＶＤ−Ｉｇ）（ここで、各軽鎖及び重鎖が、短いペプチド結合を介してタンデムに２つの可変ドメインを含む）（Ｗｕ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ  ｏｆ  ａ  Ｄｕａｌ  Ｖａｒｉａｂｌｅ  Ｄｏｍａｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎ（ＤＶＤ−Ｉｇ（商標））Ｍｏｌｅｃｕｌｅ、Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，  Ｓｐｒｉｎｇｅｒ  Ｂｅｒｌｉｎ  Ｈｅｉｄｅｌｂｅｒｇ  （２０１０）において）；（２）Ｔａｎｄａｂ（これは、標的抗原のそれぞれに対し２つの結合部位を有する四価の二重特異性抗体をもたらす、２つの一本鎖ダイアボディの融合体である）；（３）フレキシボディ（ｆｌｅｘｉｂｏｄｙ）（これは、多価分子をもたらす、ｓｃＦｖｓとダイアボディの組み合わせである）；（４）プロテインキナーゼＡの「二量体化及びドッキングドメイン」に基づく、いわゆる「ドックアンドロック」分子（これは、Ｆａｂｓに適用された場合、異なるＦａｂフラグメントに連結された２つの同一のＦａｂフラグメントから成る三価の二重特異的結合タンパク質を産生することができる）；（５）例えば、ヒトＦｃ−領域の両末端に融合された２つのｓｃＦｖｓを含む、いわゆるＳｃｏｒｐｉｏｎ分子、であることができる。二重特異性抗体を調製するのに有用なプラットフォームの例は、ＢｉＴＥ（Ｍｉｃｒｏｍｅｔ）、ＤＡＲＴ（ＭａｃｒｏＧｅｎｉｃｓ）、Ｆｃａｂ及びＭａｂ２（Ｆ−ｓｔａｒ）、Ｆｃ−操作ＩｇＧｌ（Ｘｅｎｃｏｒ）又はＤｕｏＢｏｄｙ（Ｆａｂアーム交換に基づく、Ｇｅｎｍａｂ）を含むが、これらに限定されない。
【０２１０】
用語「エピトープ」は、抗体が結合する抗原上の部位を指す。エピトープは、連続アミノ酸、又は１又は複数のタンパク質の３次折り畳みによって並置された非連続アミノ酸から形成されることができる。連続アミノ酸から形成されたエピトープは、典型的には、変性溶媒に暴露しても保持されるが、３次折り畳みによって形成されたエピトープは、典型的には、変性溶媒で処置すると失われる。エピトープは、典型的には、少なくとも３の、及び通常はそれ以上の、少なくとも５又は８−１０のアミノ酸を、独特の空間的コンフォメーションで含む。エピトープの空間的コンフォメーションを決定する方法は、例えば、Ｘ線結晶学及び２次元核磁気共鳴を含む。例えば、Ｅｐｉｔｏｐｅ  Ｍａｐｐｉｎｇ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ，  ｉｎ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，  Ｖｏｌ．  ６６，  Ｇｌｅｎｎ  Ｅ．  Ｍｏｒｒｉｓ，  Ｅｄ．  （１９９６）を参照されたい。
【０２１１】
「アンタゴニスト」抗体又は他の結合剤は、それが結合する抗原の生物学的活性を阻害するものである。このような抗体は、抗原の生物学的活性を実質的に又は完全に阻害し得る。
【０２１２】
ＭＣＡＭに関して、用語「生物学的活性」及び「生物学的に活性のある」は、そのリガンド（ラミニンα４鎖、例えば、ラミニン４１１のα４鎖）に特異的に結合するその能力及び／又はＭＣＡＭ発現細胞、例えば、ＴＨ１７細胞の、ＣＮＳへの浸潤を促進するその能力を指す。
【０２１３】
「阻害する」は、薬剤が、少なくとも１つの標的、例えばＭＣＡＭの生物学的活性を減少させることを意味する。このような阻害剤は、少なくとも約、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９５％又は少なくとも１００％だけ、少なくとも１つの標的の活性を阻害する。
【０２１４】
「被験体」は、予防的又は治療的処置のいずれかを受けるヒト又は他の哺乳動物被験体を含む。
【０２１５】
アミノ酸置換を保存的又は非保存的として分類する目的のために、アミノ酸は、以下のようにグループ分けされる：グループＩ（疎水性側鎖）：ｍｅｔ、ａｌａ、ｖａｌ、ｌｅｕ、ｉｌｅ；グループＩＩ（中性親水性側鎖）：ｃｙｓ、ｓｅｒ、ｔｈｒ；グループＩＩＩ（酸性側鎖）：ａｓｐ、ｇｌｕ；グループＩＶ（塩基性側鎖）：ａｓｎ、ｇｌｎ、ｈｉｓ、ｌｙｓ、ａｒｇ；グループＶ（鎖配向に影響を与える残基）：ｇｌｙ、ｐｒｏ；及びグループＶＩ（芳香族側鎖）：ｔｒｐ、ｔｙｒ、ｐｈｅ。保存的置換は、同じクラスのアミノ酸間の置換を含む。非保存的置換は、これらのクラスのうちの１つのメンバーの、別のクラスのメンバーへの交換を構成する。
【０２１６】
パーセンテージ配列同一性は、Ｋａｂａｔナンバリング規則によって最大限に整列された抗体配列を用いて決定される。整列の後、被験体抗体領域（例えば、重鎖又は軽鎖の全体の成熟可変領域）が、参照抗体の同じ領域と比較されている場合、被験体抗体領域と参照抗体領域との間のパーセンテージ配列同一性は、被験体抗体領域及び参照抗体領域の両方において同じアミノ酸によって占められる位置の数を、２つの領域の整列された位置の総数で割ったもの（ギャップはカウントしない）に、１００を乗じてパーセンテージに変換したものである。
【０２１７】
値の範囲の指定は、範囲内の又は範囲を定める全ての整数、及び範囲内の整数によって定められる全ての部分範囲を含む。
【０２１８】
文脈から他に明らかでない限り、用語「約」は、記載されている値の測定の標準誤差（ＳＥＭ）内の値を包含する。
【０２１９】
統計的有意性は、ｐ≦０．０５であることを意味する。
【０２２０】
詳細な説明
Ｉ．  概要
ＭＣＡＭがラミニン４１１のラミニンα４鎖に結合するのを阻害する有用な特性を備える抗体が、ＷＯ／２０１２／１７００７１及びＰＣＴ／ＵＳ２０１３／０５８７７３に開示される。ＵＳ  １４／６５６，５９６は、中でも、（ａ）２１２０．４．１９抗体の新規のヒト化形態を提供し、（ｂ）この抗体が結合するエピトープをマッピングし、（ｃ）同じエピトープに結合する抗体を提供し、（ｄ）開示される抗体の新規の製剤を提供する。本出願は、巨細胞動脈炎、リウマチ性多発筋痛症（ＰＭＲ）又は高安動脈炎の処置又は予防のための、１４／６５６．５９６の抗体及び製剤の使用を開示する。
【０２２１】
用語「２１２０．４．１９」、「ｍ２１２０」、「マウス２１２０」抗体は、配列番号：１１４に対応する成熟可変重鎖及び配列番号：１２０に対応する成熟可変軽鎖を有する、げっ歯類由来のモノクローナル抗体クローンを指す。「ヒト化２１２０」又は「ｈｕ２１２０」は、２１２０．４．１９クローンのヒト化変異体を指す。
【０２２２】
ＩＩ．  標的分子
天然ヒト野生型ＭＣＡＭ（メラノーマ細胞接着分子、ＣＤ１４６及びＭＵＣ１８としても知られる）は、以下のアミノ酸配列を有する、６４６アミノ酸のタンパク質である。
ＭＧＬＰＲＬＶＣＡＦＬＬＡＡＣＣＣＣＰＲＶＡＧＶＰＧＥＡＥＱＰＡＰＥＬＶＥＶＥＶＧＳＴＡＬＬＫＣＧＬＳＱＳＱＧＮＬＳＨＶＤＷＦＳＶＨＫＥＫＲＴＬＩＦＲＶＲＱＧＱＧＱＳＥＰＧＥＹＥＱＲＬＳＬＱＤＲＧＡＴＬＡＬＴＱＶＴＰＱＤＥＲＩＦＬＣＱＧＫＲＰＲＳＱＥＹＲＩＱＬＲＶＹＫＡＰＥＥＰＮＩＱＶＮＰＬＧＩＰＶＮＳＫＥＰＥＥＶＡＴＣＶＧＲＮＧＹＰＩＰＱＶＩＷＹＫＮＧＲＰＬＫＥＥＫＮＲＶＨＩＱＳＳＱＴＶＥＳＳＧＬＹＴＬＱＳＩＬＫＡＱＬＶＫＥＤＫＤＡＱＦＹＣＥＬＮＹＲＬＰＳＧＮＨＭＫＥＳＲＥＶＴＶＰＶＦＹＰＴＥＫＶＷＬＥＶＥＰＶＧＭＬＫＥＧＤＲＶＥＩＲＣＬＡＤＧＮＰＰＰＨＦＳＩＳＫＱＮＰＳＴＲＥＡＥＥＥＴＴＮＤＮＧＶＬＶＬＥＰＡＲＫＥＨＳＧＲＹＥＣＱＡＷＮＬＤＴＭＩＳＬＬＳＥＰＱＥＬＬＶＮＹＶＳＤＶＲＶＳＰＡＡＰＥＲＱＥＧＳＳＬＴＬＴＣＥＡＥＳＳＱＤＬＥＦＱＷＬＲＥＥＴＤＱＶＬＥＲＧＰＶＬＱＬＨＤＬＫＲＥＡＧＧＧＹＲＣＶＡＳＶＰＳＩＰＧＬＮＲＴＱＬＶＫＬＡＩＦＧＰＰＷＭＡＦＫＥＲＫＶＷＶＫＥＮＭＶＬＮＬＳＣＥＡＳＧＨＰＲＰＴＩＳＷＮＶＮＧＴＡＳＥＱＤＱＤＰＱＲＶＬＳＴＬＮＶＬＶＴＰＥＬＬＥＴＧＶＥＣＴＡＳＮＤＬＧＫＮＴＳＩＬＦＬＥＬＶＮＬＴＴＬＴＰＤＳＮＴＴＴＧＬＳＴＳＴＡＳＰＨＴＲＡＮＳＴＳＴＥＲＫＬＰＥＰＥＳＲＧＶＶＩＶＡＶＩＶＣＩＬＶＬＡＶＬＧＡＶＬＹＦＬＹＫＫＧＫＬＰＣＲＲＳＧＫＱＥＩＴＬＰＰＳＲＫＴＥＬＶＶＥＶＫＳＤＫＬＰＥＥＭＧＬＬＱＧＳＳＧＤＫＲＡＰＧＤＱＧＥＫＹＩＤＬＲＨ（配列番号：１１）
【０２２３】
（ＧｅｎＢａｎｋデータベース、受託番号ＡＡＡ２０９２２．１（ＣＡＡ４８３３２））。ＭＣＡＭは、細胞接着、及び血管組織の細胞間接合部での内皮単層の結着に関与する、免疫グロブリンスーパーファミリーに属する細胞表面糖タンパク質である。これはまた、メラノーマ及び前立腺がんを含む、固形腫瘍などの多くのがんの腫瘍進行を促進する。これは、ホモタイプ／ホモフィリックに相互作用することが知られており、他のリガンドにも結合し得る。ヒトＭＣＡＭは、配列番号：２２−２６として示される、５つの免疫グロブリンドメイン（１：アミノ酸残基１９−１２９；２：アミノ酸残基１３９−２４２；３：アミノ酸残基２４４−３２１；４：アミノ酸残基３３５−４２４；及び５：アミノ酸残基４３０−５１０）を含む。
【０２２４】
文脈から他に明らかでない限り、ＭＣＡＭ又はそのフラグメントへの参照は、上記の天然ヒト野生型アミノ酸配列、及びそのヒト対立遺伝子変異体を含む。
【０２２５】
ラミニンα４は、ラミニン分子に見出されるポリペプチド鎖のうちの１つを指す。ラミニン分子は、大部分の細胞及び器官のタンパク質ネットワーク基盤である、（基底膜の）基底層で発現される。ラミニンは、原形質膜分子を介して細胞膜に結合し、細胞付着に寄与することが知られている。ラミニンα４鎖は典型的には、ラミニンβ−鎖、及びラミニンγ−鎖と複合体を形成する。ラミニンα４鎖は、ラミニン４１１（ラミニン８又はα４β１γ１）；ラミニン４２１（ラミニン９又はα４β２γ１）、及びラミニン４２３（ラミニン１４又はα４β２γ３）を含む多数のラミニン分子において見出される。ヒトラミニンα４−鎖の２つの主なアイソフォーム：ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＮＰ００１０９８６７６及びＮＰ００１０９８６７７（それぞれ配列番号：２７及び２８）が存在する。「ラミニン４１１」は、３つのポリペプチドサブユニット又は鎖：α４−鎖、β１−鎖、及びγ１−鎖で構成される三量体ポリペプチド複合体を指す。
【０２２６】
ＭＣＡＭに対するアンタゴニストは、抗体、ＩｇＧ定常領域へのレセプター又はリガンドの融合タンパク質、他の生物学的結合分子、及び小分子を含む。抗体は、モノクローナル又はポリクローナルであり得る。抗体は、マウス又はラットなどの非ヒト、非ヒト霊長類、又はヒトであり得る。抗体は、キメラ、ベニア化、ヒト化、霊長類化などであり得る。
【０２２７】
ＭＣＡＭアンタゴニストは、ＭＣＡＭの、（ｉ）そのリガンド：ラミニンα４鎖、例えば、ラミニン４１１のα４鎖、に特異的に結合する能力；及び／又は（ｉｉ）ＭＣＡＭ発現細胞、例えば、ＴＨ１７細胞が、被験体の組織に浸潤又は遊走するのを促進する能力を、完全に又は部分的に阻害するアンタゴニストを指す。ＭＣＡＭアンタゴニストは、ＭＣＡＭに又はそのリガンドであるラミニンアルファ４に結合する、抗体又は他のアンタゴニストを含む。
【０２２８】
ＩＩＩ．  抗体
＜Ａ．  抗体２１２０．４．１９及びそのキメラ、ベニア化、及びヒト化形態＞
ヒト化抗体は、非ヒト「ドナー」抗体（すなわち、２１２０．４．１９）由来のＣＤＲがヒト「アクセプター」抗体配列に移植されている、遺伝子操作された抗体である（例えば、Ｑｕｅｅｎ，  ＵＳ  ５，５３０，１０１及び５，５８５，０８９；Ｗｉｎｔｅｒ，  ＵＳ  ５，２２５，５３９、Ｃａｒｔｅｒ，  ＵＳ  ６，４０７，２１３、Ａｄａｉｒ，  ＵＳ  ５，８５９，２０５  ６，８８１，５５７、Ｆｏｏｔｅ，  ＵＳ  ６，８８１，５５７を参照されたい）。アクセプター抗体配列は、例えば、成熟ヒト抗体配列、このような配列の複合物、ヒト抗体配列のコンセンサス配列、又は生殖系領域配列であり得る。ヒトアクセプター抗体配列は、任意選択的に、ヒトアクセプター配列可変領域フレームワークとドナー抗体鎖の対応する可変領域フレームワークとの間の高度の配列同一性（例えば、６５−８５％同一性）を提供するように、多くの既知のヒト抗体配列の中から選択することができる。したがって、ヒト化抗体は、ドナー抗体に完全に又は実質的に由来するいくつかの又は全てのＣＤＲ、及びヒト抗体配列に完全に又は実質的に由来する可変領域フレームワーク配列及び定常領域（存在する場合）を有する抗体である。同様にヒト化重鎖は、ドナー抗体重鎖に完全に又は実質的に由来する、少なくとも１つの、２つの、及び通常は３つ全てのＣＤＲ、及びヒト重鎖可変領域フレームワーク及び定常領域配列に実質的に由来する、重鎖可変領域フレームワーク配列及び重鎖定常領域（存在する場合）を有する。同様にヒト化軽鎖は、ドナー抗体軽鎖に完全に又は実質的に由来する、少なくとも１つの、２つの、及び通常は３つ全てのＣＤＲ、及びヒト軽鎖可変領域フレームワーク及び定常領域配列に実質的に由来する、軽鎖可変領域フレームワーク配列及び軽鎖定常領域（存在する場合）を有する。ナノボディ及びｄＡｂｓ以外に、ヒト化抗体は、ヒト化重鎖及びヒト化軽鎖を含む。ＣＤＲＨ１が２つまでの置換を有することができ、ＣＨＤＲＨ２が位置Ｈ６０−６５に置換を有することができることを除いては、対応する残基（Ｋａｂａｔにより定められる）の少なくとも８５％、９０％、９５％又は１００％が、それぞれのＣＤＲ間で同一である場合、ヒト化抗体中のＣＤＲは、非ヒト抗体中の対応するＣＤＲに実質的に由来する。Ｋａｂａｔにより定められる対応する残基の少なくとも８５％、９０％、９５％又は１００％が同一である場合、抗体鎖の可変領域フレームワーク配列又は抗体鎖の定常領域は、それぞれ、ヒト可変領域フレームワーク配列又はヒト定常領域に実質的に由来する。
【０２２９】
ヒト化抗体は、しばしば、マウス抗体由来の６つ全てのＣＤＲ（好ましくはＫａｂａｔにより定められる）を組み込むが、それらは、マウス抗体由来の全てのＣＤＲ未満（例えば、少なくとも３、４、又は５つのＣＤＲ）で作製することもできる（例えば、Ｐａｓｃａｌｉｓ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  １６９：３０７６，  ２００２；Ｖａｊｄｏｓ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，  ３２０：  ４１５−４２８，  ２００２；Ｉｗａｈａｓｈｉ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｍｏｌ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  ３６：１０７９−１０９１，  １９９９；Ｔａｍｕｒａ  ｅｔ  ａｌ，  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，  １６４：１４３２−１４４１，  ２０００）。
【０２３０】
いくつかの抗体において、ＣＤＲの一部のみ、すなわちＳＤＲと呼ばれる、結合に必要とされるＣＤＲ残基のサブセットが、ヒト化抗体において結合を保持するために必要である。抗原に接触せずＳＤＲにないＣＤＲ残基は、Ｃｈｏｔｈｉａ超可変ループ（Ｃｈｏｔｈｉａ，  Ｊ．  Ｍｏｌ．  Ｂｉｏｌ．  １９６：９０１，  １９８７）の外側に位置するＫａｂａｔ  ＣＤＲの領域から、分子モデリングによって及び／又は経験的に、又はＧｏｎｚａｌｅｓ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｍｏｌ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  ４１：  ８６３，  ２００４に説明されるように、従来の研究に基づいて、同定することができる（例えばＣＤＲ  Ｈ２の残基Ｈ６０−Ｈ６５はしばしば必要とされない）。このようなヒト化抗体において、１又は複数のドナーＣＤＲ残基が存在しない位置又はドナーＣＤＲ全体が省略されている位置で、その位置を占めるアミノ酸は、アクセプター抗体配列中の対応する位置（Ｋａｂａｔナンバリングによる）を占めるアミノ酸であることができる。含むべきＣＤＲ中のドナーアミノ酸に対するアクセプターのこのような置換の数は、競合する検討事項のバランスを反映する。このような置換は、ヒト化抗体中のマウスアミノ酸の数を減少させ、その結果として潜在的な免疫原性を減少させる上で、潜在的に有利である。しかしながら、置換はまた、親和性の変化を引き起こす可能性もあり、親和性の顕著な減少が好ましくは回避される。ＣＤＲ内の置換の位置及び置換するアミノ酸もまた、経験的に選択することができる。
【０２３１】
ＭＣＡＭに対する２１２０．４．１９ラット抗体がＰＣＴ／ＵＳ２０１３／０５８７７３に開示された。そしてこれは、本明細書で配列番号：６９−８０によって定められる。２１２０．４．１９抗体のキメラ、ベニア化、及びヒト化形態もまた、ＰＣＴ／ＵＳ２０１３／０５８７７３出願に開示された。開示されるヒト化形態は、本明細書で配列番号：１１５−１１９、１２１−１２３、１３９−１４１、及び１５３として定められる。これらの配列番号によって表される、ヒト化重鎖及びヒト化軽鎖の任意の順列を含む、開示される形態は、医薬組成物及び製剤などの本発明のいくつかの態様において使用することができる。
【０２３２】
本出願は、２１２０．４．１９抗体の追加のヒト化形態を提供し、ここで、グルタミンが、重鎖可変領域の位置１（Ｋａｂａｔナンバリング）で、グルタミン酸に置換されている（すなわちＱ１Ｅ）。重鎖可変領域中のＱ１Ｅ置換は、保存的置換であり、これは、抗体の結合特性に実質的な効果を生じるとは予想されないが、抗体安定性を向上させる可能性がある。
【０２３３】
文脈から他に明らかでない限り、以下の説明は、ＰＣＴ／ＵＳ２０１３／０５８７７３に開示されるヒト化抗体及び本明細書中に開示されるＱ１Ｅ変異体を含む。
【０２３４】
本開示は、配列番号：７８のＫａｂａｔ  ＣＤＲ１：GFSLTSNGVS；配列番号：７９のＫａｂａｔ  ＣＤＲ２：AISSGGTTYYNSAFKS；及び配列番号：８０のＫａｂａｔ  ＣＤＲ３：RYGYGWYFDFを含む重鎖可変領域を含む抗体を提供する。いくつかの抗体は、配列番号：７３のＫａｂａｔ  ＣＤＲ１：KASQNIYNSLA；配列番号：７４のＫａｂａｔ  ＣＤＲ２：NANSLQT；及び配列番号：７５のＫａｂａｔ  ＣＤＲ３：QQFYSGYTを含む軽鎖可変領域を含む。いくつかのこのような抗体は、配列番号：７８のＫａｂａｔ  ＣＤＲ１にＮ３２Ｓ置換又はＮ３２Ｑ置換を含み、またいくつかは、配列番号：７８のＫａｂａｔ  ＣＤＲ１にＧ３３Ａ置換を含む。これらの置換は、抗体の親和性及び効力の増加を含む特性の向上を提供することが見出されている。
【０２３５】
本開示はまた、成熟重鎖可変領域が配列番号：１６１と少なくとも９０％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％同一性を有し、成熟軽鎖可変領域が配列番号：１２３と少なくとも９０％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％配列同一性を有する抗ＭＣＡＭ抗体を提供する。いくつかのこのような抗体は、ドナー２１２０．４．１９抗体のＣＤＲ領域と完全に又は実質的に同一の、３つの重鎖及び３つの軽鎖ＣＤＲを含む。同一ではない場合、ＣＤＲは好ましくは、前の段落などの本明細書で定められるタイプ及び位置に置換を有する。ＣＤＲ領域は、任意の従来の定義（例えば、Ｃｈｏｔｈｉａ）によって定めることができるが、好ましくはＫａｂａｔにより定められる。
【０２３６】
上記に説明される抗体のいずれかは、ヒト化抗体であり得る。いくつかのヒト化抗体は、配列番号：１６１の３つのＫａｂａｔ  ＣＤＲ（これは、配列番号：１５６のＣＤＲと同じである）を含む成熟重鎖可変領域（ただし位置３２（Ｋａｂａｔナンバリング）はＮ、Ｓ、又はＱであることができ、位置３３（Ｋａｂａｔナンバリング）はＧ又はＡであることができる）、及び配列番号：１２３の３つのＫａｂａｔ  ＣＤＲ（これは、配列番号：１２０のＣＤＲと同じである）を含む成熟軽鎖可変領域を含み、好ましくはここで、成熟重鎖可変領域が配列番号：１６１と少なくとも９０％同一である、及び好ましくはここで、成熟軽鎖可変領域が配列番号：１２３と少なくとも９０％同一である。任意のこのような抗体は、Ｋａｂａｔナンバリングによる位置Ｈ１に、Ｑ又はＥのいずれかを有することができる（すなわち、Ｑ１Ｅ置換）。
【０２３７】
成熟重鎖可変領域にＱ１Ｅ置換を有する、本明細書で提供される抗体は、配列番号：１５６（すなわち、２１２０．４．１９．Ｑ１Ｅ）、配列番号：１５７、配列番号：１５８、配列番号：１５９、配列番号：１６０、又は配列番号：１６１のアミノ酸配列を有する成熟重鎖可変領域を含む抗体を含む。いくつかのこのような抗体は、配列番号：１２０、配列番号：１２１、配列番号：１２２、又は配列番号：１２３に指定されるアミノ酸配列を有する成熟軽鎖可変領域を含む。成熟重鎖及び軽鎖可変領域は、任意の可能な順列で組み合わせることができる。例示的な組み合わせは、配列番号：１６１のアミノ酸配列を有する成熟重鎖可変領域、及び配列番号：１２３に指定されるアミノ酸配列を有する成熟軽鎖可変領域を含む抗体である。ＰＣＴ／ＵＳ２０１３／０５８７７３において説明されているような、Ｑ１Ｅ置換のないこれらの抗体の形態もまた、医薬組成物及び製剤などの本発明のいくつかの態様において使用することができる。
【０２３８】
本開示は、重鎖成熟可変領域が、配列番号：１５６（すなわち、２１２０．４．１９．Ｑ１Ｅ）、配列番号：１５７、配列番号：１５８、配列番号：１５９、配列番号：１６０、又は配列番号：１６１のいずれかのアミノ酸配列と、少なくとも９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％配列同一性を有し、軽鎖が、配列番号：１２０、配列番号：１２１、配列番号：１２２、又は配列番号：１２３のいずれかと、少なくとも９０％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％配列同一性を有する、抗体をさらに提供する。このような抗体は好ましくはヒト化である。任意のこのような抗体は、Ｋａｂａｔナンバリングによる位置Ｈ１に、Ｑ又はＥのいずれかを有することができる（すなわち、Ｑ１Ｅ置換）。
【０２３９】
開示される配列番号の変異体は、典型的には、小さい数（例えば、軽鎖又は重鎖いずれかの成熟可変領域フレームワークにおいて、又はそれらの両方において、典型的には１、２、３、５又は１０以下）の置換、欠失又は挿入によって、成熟重鎖及び軽鎖可変領域配列と異なる。いかなる変化も、好ましくは保存的置換である。
【０２４０】
本開示はまた、巨細胞動脈炎、リウマチ性多発筋痛症又は高安動脈炎の処置又は予防において使用するための２１０７のヒト化形態を提供する。このような抗体は、本明細書に記載される２１０７の重鎖可変領域及び軽鎖可変領域のいずれかを含み得る。重鎖可変領域は例えば、配列番号：１７８又は１７９の配列を有するものであり得る。軽鎖可変領域は例えば、配列番号：９８又は配列番号：９９の配列を有するものであり得る。
【０２４１】
＜Ｂ．  定常領域の選択＞
キメラ、ベニア化又はヒト化抗体の重鎖可変領域及び軽鎖可変領域は、ヒト定常領域の少なくとも一部分に連結することができる。定常領域の選択は、部分的に、抗体依存性細胞媒介性細胞傷害、抗体依存性細胞食作用及び／又は補体依存性細胞傷害が望ましいかどうかに依存する。例えば、ヒトアイソタイプＩｇＧ１及びＩｇＧ３は、補体依存性細胞傷害を有し、ヒトアイソタイプＩｇＧ２及びＩｇＧ４は有さない。ヒトＩｇＧ１及びＩｇＧ３はまた、ヒトＩｇＧ２及びＩｇＧ４よりも強い細胞媒介性エフェクター機能を誘導する。軽鎖定常領域はラムダ又はカッパであり得る。
【０２４２】
軽鎖及び／又は重鎖のアミノ又はカルボキシ末端の１つ又はいくつかのアミノ酸、例えば重鎖のＣ末端リジンなどは、分子の一部又は全てにおいて、欠損していて又は誘導体化されてよい。定常領域において置換を行って、補体媒介性細胞傷害又はＡＤＣＣなどのエフェクター機能を低減又は増加させること（例えば、Ｗｉｎｔｅｒ  ｅｔ  ａｌ．  ，  米国特許第５，６２４，８２１号；Ｔｓｏ  ｅｔ  ａｌ．  ，  米国特許第５，８３４，５９７号；及びＬａｚａｒ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ  １０３：４００５，  ２００６を参照されたい）、又はヒトにおいて半減期を延長すること（例えば、Ｈｉｎｔｏｎ  ｅｔ  ａｌ．  ，  Ｊ．  Ｂｉｏｌ．  Ｃｈｅｍ．  ２７９：６２１３，  ２００４を参照されたい）ができる。例示的な置換は、抗体の半減期を増加させるために、位置２５０のＧｌｎ及び／又は位置４２８のＬｅｕを含む（定常領域について、この段落においてＥＵナンバリングが使用される）。位置２３４、２３５、２３６及び／又は２３７のいずれか又は全てでの置換は、Ｆｃγレセプター、特にＦｃγＲＩレセプターに対する親和性を低減する（例えば、ＵＳ  ６，６２４，８２１を参照されたい）。ヒトＩｇＧ１の位置２３４、２３５、及び２３７でのアラニン置換を、エフェクター機能を低減するために使用することができる。いくつかの抗体は、エフェクター機能を低減するために、ヒトＩｇＧ１の位置２３４、２３５及び２３７にアラニン置換を有する。任意選択的に、ヒトＩｇＧ２中の位置２３４、２３６及び／又は２３７はアラニンで置換され、位置２３５はグルタミンで置換される（例えば、ＵＳ  ５，６２４，８２１を参照されたい）。いくつかの抗体において、ヒトＩｇＧ１のＥＵナンバリングによる、位置２４１、２６４、２６５、２７０、２９６、２９７、３２２、３２９、及び３３１のうち１又は複数での突然変異が使用される。いくつかの抗体において、ヒトＩｇＧ１のＥＵナンバリングによる、位置３１８、３２０、及び３２２のうち１又は複数での突然変異が使用される。いくつかの抗体において、位置２３４及び／又は２３５がアラニンで置換され、及び／又は位置３２９がグリシンで置換される。いくつかの抗体において、配列番号：１７２でのように、位置２３４及び２３５がアラニンで置換される。いくつかの抗体において、アイソタイプはヒトＩｇＧ２又はＩｇＧ４である。例示的なヒト軽鎖カッパ定常領域は、配列番号：１６８のアミノ酸配列を有する。配列番号：１６８のＮ末端アルギニンは省略することができ、この場合軽鎖カッパ定常領域は配列番号：１６９のアミノ酸配列を有する。例示的なヒトＩｇＧ１重鎖定常領域は配列番号：１７０のアミノ酸配列を有する（Ｃ末端リジン有り又は無し）。抗体は、２つの軽鎖及び２つの重鎖を含むテトラマーとして、別個の重鎖、軽鎖として、Ｆａｂ、Ｆａｂ'、Ｆ（ａｂ'）２、及びＦｖとして、又は重鎖及び軽鎖成熟可変ドメインがスペーサを介して連結されている一本鎖抗体として、発現させることができる。
【０２４３】
ヒト定常領域は、異なる個体間でアロタイプ変異及びイソアロタイプ変異を示す、すなわち、定常領域は、異なる個体において、１又は複数の多型位置で異なる可能性がある。イソアロタイプは、イソアロタイプを認識する血清が１又は複数の他のアイソタイプの非多型領域に結合する点で、アロタイプと異なる。したがって、例えば、別の重鎖定常領域はＩｇＧ１  Ｇ１ｍ３アロタイプであり、配列番号：１７１のアミノ酸配列を有する。別の重鎖定常領域は、それがＣ末端リジンを欠くことを除いて、配列番号：１７１のアミノ酸配列を有する。別の重鎖定常領域は、配列番号：１７２のアミノ酸配列を有する。さらに別の重鎖定常領域は、それがＣ末端リジンを欠くことを除いて、配列番号：１７２のアミノ酸配列を有する。
【０２４４】
本開示は、上記の定常領域のうち任意のものをコードする核酸をさらに提供する。任意選択的に、このような核酸はシグナルペプチドをさらにコードし、定常領域に連結されたシグナルペプチドで発現されることができる。
【０２４５】
＜Ｃ．  組換え抗体の発現＞
抗体は、組換え発現によって産生することができる。抗体をコードする核酸は、所望の細胞タイプ（例えば、ＣＨＯ又はＳｐ２／０）における発現のために、コドン最適化することができる。組換え核酸構築物は、典型的には、天然に関連する又は異種プロモーター領域を含む、抗体鎖のコード配列に作動可能に連結された発現制御配列を含む。発現制御配列は、真核宿主細胞を形質転換又は遺伝子導入することができるベクター中の真核プロモーターシステムであることができる。ベクターが適切な宿主に組み込まれると、宿主は、ヌクレオチド配列の高レベル発現、及び交差反応する抗体の回収及び精製に適切な条件下で維持される。抗体鎖をコードするこの１又は複数のベクターはまた、抗体鎖をコードする核酸のコピー数の増幅を可能にするために、ジヒドロ葉酸レダクターゼなどの選択可能な遺伝子を含むことができる。
【０２４６】
Ｅ．  ｃｏｌｉは、抗体、特に抗体フラグメントの発現に特に有用な原核宿主である。酵母などの微生物もまた発現に有用である。サッカロマイセスは酵母宿主の一例であり、所望の発現制御配列、複製起点、終止配列などを有する適切なベクターを備える。典型的なプロモーターは、３−ホスホグリセレートキナーゼ及び他の解糖酵素を含む。誘導性酵母プロモーターは、とりわけ、アルコールデヒドロゲナーゼ、イソチトクロームＣ、及びマルトースとガラクトースの利用に関与している酵素由来のプロモーターを含む。哺乳動物細胞は、免疫グロブリン又はそれらのフラグメントをコードするヌクレオチドセグメントを発現するために使用することができる。Ｗｉｎｎａｃｋｅｒ，  Ｆｒｏｍ  Ｇｅｎｅｓ  ｔｏ  Ｃｌｏｎｅｓ，  （ＶＣＨ  Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ，  ＮＹ，  １９８７）を参照されたい。インタクトな異種タンパク質を分泌することができる多数の適切な宿主細胞株が、本分野において開発されており、ＣＨＯ細胞株、様々なＣＯＳ細胞株、ＨｅＬａ細胞、ＨＥＫ２９３細胞、Ｌ細胞、及びＳｐ２／０及びＮＳ０を含む非抗体産生骨髄腫を含む。非ヒト細胞を使用することが有利であり得る。これらの細胞の発現ベクターは、複製起点、プロモーター、エンハンサーなどの発現制御配列（Ｑｕｅｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  Ｒｅｖ．  ８９：４９  （１９８６））、及びリボソーム結合部位、ＲＮＡスプライス部位、ポリアデニル化部位、及び転写ターミネーター配列などの必要なプロセシング情報部位を含むことができる。適切な発現制御配列は、内在性遺伝子、サイトメガロウイルス、ＳＶ４０、アデノウイルス、ウシパピローマウイルスなどに由来するプロモーターである。Ｃｏ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  １４８：１１４９  （１９９２）を参照されたい。
【０２４７】
抗体重鎖及び軽鎖をコードするベクターを細胞培養物に導入することにより、細胞プールを、無血清培地における成長生産性及び産生物の質についてスクリーニングすることができる。次いで、トップ産生細胞プールをＦＡＣＳ系の単細胞クローニングに供し、モノクローナル株を発生させることができる。１日あたり１細胞あたり５０ｐｇ又は１００ｐｇを超える特異的生産性（これは、７．５ｇ／Ｌ培養物より大きい産生物力価に対応する）が有利であり得る。単細胞クローンから産生された抗体は、濁度、ろ過特性、ＰＡＧＥ、ＩＥＦ、ＵＶスキャン、ＨＰ−ＳＥＣ、炭水化物−オリゴ糖マッピング、質量分析法、及び結合アッセイ、例えばＥＬＩＳＡ又はＢｉａｃｏｒｅなど、について試験することもできる。次いで、選択されたクローンを複数のバイアル中にバンク化し、後続の使用のために凍結保存することができる。
【０２４８】
発現されると、抗体は、タンパク質Ａ捕捉、カラムクロマトグラフィー（例えば、疎水性相互作用又はイオン交換）、ウイルス不活化のための低ｐＨなどを含む、本技術分野の標準的な手順にしたがって、精製することができる（Ｓｃｏｐｅｓ，  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ  （Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ，  ＮＹ，  １９８２）を一般的に参照されたい）。
【０２４９】
抗体の商業的産生のための方法論は、コドン最適化、プロモーター、転写要素、及びターミネーターの選択、無血清単細胞クローニング、細胞バンク化、コピー数の増幅のための選択マーカーの使用、ＣＨＯターミネーター、無血清単細胞クローニング、タンパク質力価の向上を含む（例えば、ＵＳ  ５，７８６，４６４、ＵＳ  ５，８８８，８０９、ＵＳ  ６，０６３，５９８、ＵＳ  ６，１１４，１４８、ＵＳ  ７，５６９，３３９、ＷＯ２００４／０５０８８４、ＷＯ２００５／０１９４４２、ＷＯ２００８／０１２１４２、ＷＯ２００８／０１２１４２、ＷＯ２００８／１０７３８８、及びＷＯ２００９／０２７４７１を参照されたい）。
【０２５０】
＜Ｄ．  核酸＞
本開示はさらに、上述の重鎖及び軽鎖のうち任意のものをコードする核酸を提供する。典型的には、核酸はまた、成熟重鎖及び軽鎖に融合されたシグナルペプチド（例えば、配列番号：１６２、１６４、及び１６６によってコードされ得る、配列番号：１６３、１６５、及び１６７のアミノ酸配列を有するシグナルペプチド）をコードする。核酸上のコード配列は、コード配列、例えば、プロモーター、エンハンサー、リボソーム結合部位、転写終止シグナルなどの発現を保証するように、調節配列と作動可能に連結することができる。重鎖及び軽鎖をコードする核酸は、単離された形態で存在することができ、又は１又は複数のベクターにクローニングされることができる。核酸は、例えば、重複オリゴヌクレオチドの固相合成又はＰＣＲによって合成することができる。重鎖及び軽鎖をコードする核酸は、１つの連続核酸として、例えば、発現ベクター内で接合されることができ、又は別々であることができる、例えば、それ自身の発現ベクターにそれぞれクローニングされることができる。
【０２５１】
＜Ｅ．  抗体結合のためのＭＣＡＭエピトープの特徴付け及びそれに結合する抗体の産生＞
１．  抗体結合のためのＭＣＡＭエピトープ
本開示は、ヒトＭＣＡＭタンパク質内の特異的なエピトープに結合するモノクローナル抗体を提供し、そのいくつかは、２１２０．４．１９（ｍ２１２０）に指定される抗体と同じ又は重複するエピトープに結合する。
【０２５２】
ＭＣＡＭ（配列番号：１１）の残基３９、６２、１３３、１４１、１５９、２１２、２２０、２２１、２２３、２２７、２３８、２４１、及び／又は３９２での突然変異は、ｍ２１２０の特異的結合を妨害する（例えば、実施例で説明されるように、ポジティブコントロールの野生型ＭＣＡＭと比較して、変異体ＭＣＡＭに＜３０％結合）。ｍ２１２０の特異的結合の最大の効果（減少）を有するものとして、残基１４５、１６７、１７５、２０６、２０７、２１６、及び２２５での突然変異が同定された。比較的少数の残基が結合に影響を及ぼし、残基が、典型的な直鎖エピトープ（例えば、３−２０連続アミノ酸）よりも幅広く離間しているため、これらの結果は、ｍ２１２０がコンフォメーションエピトープに結合し得ること、又は代替的に、結合に影響を及ぼす残基のうち１又は複数が、抗体と直接接触することなくアロステリックに、コンフォメーションエピトープに結合し得ることを示すものである。
【０２５３】
ＭＣＡＭの残基３９、６２、１３３、１４１、１４５、１５９、１６７、１７５、２０６、２０７、２１２、２１６、２２０、２２１、２２３、２２５、２２７、２３８、２４１、及び３９２のうち１又は複数を含むエピトープに結合する抗体、及び特に、残基１４１及び１４５のうち１又は複数を含むエピトープに結合する抗体は、ｍ２１２０と有用な阻害特性を共有する可能性が高い。したがって、ＭＣＡＭの残基１４１及び１４５のうち１又は複数、及び特に、残基１４１の変異誘発によってその特異的結合が阻害される抗体は、ｍ２１２０と類似の特性を共有する可能性が高い。いくつかのこのような抗体は、ＭＣＡＭの残基１４１及び／又は１４５を含む又はそれらから成るエピトープに結合する。このエピトープは、直鎖、例えば前記特定のアミノ酸（１４１及び１４５）のうち１つ又は両方を含むエピトープ（例えば、２−５、３−５、３−１０、３−１５、３−２０、５−１０、５−１５、５−２０、５−３０、５−４０、５−５０、５−６０、又は５−７０の連続アミノ酸）などであることができ、又は前記特定のアミノ酸のうち１つ又は両方を含む又はそれらから成るコンフォメーションであることができる。
【０２５４】
２．  特異的ＭＣＡＭエピトープに結合する抗体の発生
【０２５５】
いくつかの抗体は、ｍ２１２０抗体と同じ又は重複するエピトープに結合する。ヒトＭＣＡＭに対する他の非ヒトモノクローナル抗体、例えば、マウス、モルモット、霊長類、ウサギ又はラットのモノクローナル抗体の産生は、例えば、所望のエピトープ（「免疫原」）を含む、ヒトＭＣＡＭ又はペプチドフラグメント又はヒトＭＣＡＭを提示する細胞株又はそのヒトＭＣＡＭ  ｃＤＮＡ（レトロウイルスによってコード化する遺伝子銃で免疫化する）で、動物を免疫化し、結果として得られる抗体を、ＭＣＡＭへの結合について、任意選択的にｍ２１２０と競合させて、スクリーニングすることによって、達成することができる（参照により全ての目的のために組み込まれる、Ｈａｒｌｏｗ  ＆  Ｌａｎｅ，  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，  Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ  （ＣＳＨＰ  ＮＹ，  １９８８）を参照されたい）。任意選択的に、免疫原はキャリア分子にコンジュゲートされる。任意選択的に、免疫原はアジュバントとともに投与される。以下に説明されるようにいくつかのタイプのアジュバントを使用することができる。実験動物の免疫化のために、完全フロイントアジュバントに不完全アジュバントが続くことが好ましい。ポリクローナル抗体を作製するために、ウサギ又はモルモットが典型的には使用される。モノクローナル抗体を作製するために、マウスが典型的には使用される。抗体は、ＭＣＡＭ内の所望のエピトープへの特異的結合についてスクリーニングされる。
【０２５６】
本開示は、上記に説明されるエピトープに対する抗体を作製するために使用される、ＭＣＡＭのペプチドフラグメントを提供する。このようなペプチドの例は、長さが２−５、３−５、３−１０、３−１５、３−２０、５−１０、５−１５、５−２０、５−３０、５−４０、５−５０、５−６０、又は５−７０の連続アミノ酸であり、ＭＣＡＭのアミノ酸残基１４１及び１４５のうち少なくとも１つを含む、ペプチドを含む。これらのペプチドのいくつかにおいて、ペプチドは、アミノ酸残基１４１及び１４５の両方を含む。
【０２５７】
免疫原は、キャリア分子、典型的にはキャリアポリペプチドにコンジュゲートされ、したがってキャリアにコンジュゲートされたフラグメントに対する免疫応答を誘発するのを助け得る。単一の薬剤を単一のキャリアに連結することができ、薬剤の複数のコピーをキャリアの複数のコピーに連結することができ（これらは次に相互に連結される）、薬剤の複数のコピーをキャリアの単一のコピーに連結することができ、又は薬剤の単一のコピーをキャリアの複数のコピー、又は異なるキャリアに連結することができる。適切なキャリアは、血清アルブミン、キーホールリンペットヘモシアニン、免疫グロブリン分子、サイログロブリン、オボアルブミン、破傷風トキソイド、又は他の病原性細菌、例えばジフテリア（例えば、ＣＲＭ１９７）、Ｅ．  ｃｏｌｉ、コレラ、又はＨ．  ｐｙｌｏｒｉ由来のトキソイド、又は弱毒化毒素誘導体を含む。
【０２５８】
免疫原は、しばしば、医薬的に許容されるアジュバントとともに投与される。アジュバントは、ペプチドが単独で使用された場合と比べて、誘導された抗体の力価及び／又は誘導された抗体の結合親和性を増加させる。免疫応答を誘発するために、様々なアジュバントを、ＭＣＡＭの免疫原性フラグメントと組み合わせて使用することができる。好ましいアジュバントは、応答の定性的形態に影響を及ぼす免疫原のコンフォメーション変化を引き起こすことなく、免疫原に対する内因性応答を増大させる。例示的なアジュバントは、水酸化アルミニウム及びリン酸アルミニウム、３−脱−Ｏ−アシル化モノホスホリルリピドＡ（ＭＰＬ（商標））（ＧＢ  ２２２０２１１  （ＲＩＢＩ  ＩｍｍｕｎｏＣｈｅｍ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｉｎｃ．，  Ｈａｍｉｌｔｏｎ，  Ｍｏｎｔａｎａ，  現在Ｃｏｒｉｘａの一部）を参照されたい）を含む。Ｓｔｉｍｕｌｏｎ（商標）ＱＳ−２１は、南アメリカに見られるＱｕｉｌｌａｊａ  Ｓａｐｏｎａｒｉａ  Ｍｏｌｉｎａの樹皮から単離されたトリテルペン配糖体又はサポニンである（Ｋｅｎｓｉｌ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｖａｃｃｉｎｅ  Ｄｅｓｉｇｎ中：  Ｔｈｅ  Ｓｕｂｕｎｉｔ  ａｎｄ  Ａｄｊｕｖａｎｔ  Ａｐｐｒｏａｃｈ  （ｅｄｓ．  Ｐｏｗｅｌｌ  ＆  Ｎｅｗｍａｎ，  Ｐｌｅｎｕｍ  Ｐｒｅｓｓ，  ＮＹ，  １９９５）；  ＵＳ  ５，０５７，５４０）、（Ａｑｕｉｌａ  ＢｉｏＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，  Ｆｒａｍｉｎｇｈａｍ，  ＭＡ；  現在Ａｎｔｉｇｅｎｉｃｓ，  Ｉｎｃ．，  Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，  ＮＹ）を参照されたい）。他のアジュバントは水中油型エマルジョン（スクアレン又はピーナッツ油など）であり、任意選択的に、免疫賦活剤、例えばモノホスホリルリピドＡ（Ｓｔｏｕｔｅ  ｅｔ  ａｌ．  ，  Ｎ．  Ｅｎｇｌ．  Ｊ．  Ｍｅｄ．  ３３６，  ８６−９１  （１９９７）を参照されたい）など、プルロニックポリマー、及び死滅させたマイコバクテリアと組み合わせられる。別のアジュバントはＣｐＧである（ＷＯ  ９８／４０１００）。アジュバントは、活性のある薬剤とともに治療用組成物の成分として投与することができ、又は治療用薬剤の投与とは別々に、その前に、同時に、又はその後に投与することができる。
【０２５９】
３．  抗体のタイプ
抗体は、モノクローナル又はポリクローナルであることができる。抗体は、非ヒト、例えばマウス又はラット、非ヒト霊長類であることができ、又はヒトであることができる。抗体は、キメラ、ベニア化、ヒト化、霊長類化などであることができる。
【０２６０】
モノクローナル抗体は、上述の方法及びＱｕｅｅｎ，  ＵＳ  ５，５３０，１０１及び５，５８５，０８９；Ｗｉｎｔｅｒ，  ＵＳ  ５，２２５，５３９、Ｃａｒｔｅｒ，  ＵＳ  ６，４０７，２１３、Ａｄａｉｒ，  ＵＳ  ５，８５９，２０５  ６，８８１，５５７、Ｆｏｏｔｅ，  ＵＳ  ６，８８１，５５７に説明される方法を使用してヒト化される。アクセプター抗体配列は、例えば、成熟ヒト抗体可変領域配列、このような配列の複合物、ヒト抗体可変領域配列のコンセンサス配列（例えば、Ｋａｂａｔ，  １９９１，  上記の軽鎖及び重鎖可変領域コンセンサス配列）、又は生殖系可変領域配列であることができる。したがって、ヒト化抗体は、ドナー抗体に完全に又は実質的に由来するいくつかの又は全てのＣＤＲ、及びヒト抗体配列に完全に又は実質的に由来する可変領域フレームワーク配列及び定常領域（存在する場合）を有する抗体である。同様にヒト化重鎖は、ドナー抗体重鎖に完全に又は実質的に由来する、少なくとも１つの、２つの、及び通常は３つ全てのＣＤＲ、及びヒト重鎖可変領域フレームワーク及び定常領域配列に実質的に由来する、重鎖可変領域フレームワーク配列及び重鎖定常領域（存在する場合）を有する。同様にヒト化軽鎖は、ドナー抗体軽鎖に完全に又は実質的に由来する、少なくとも１つの、２つの、及び通常は３つ全てのＣＤＲ、及びヒト軽鎖可変領域フレームワーク及び定常領域配列に実質的に由来する、軽鎖可変領域フレームワーク配列及び軽鎖定常領域（存在する場合）を有する。ナノボディ及びｄＡｂｓ以外に、ヒト化抗体は、ヒト化重鎖及びヒト化軽鎖を含む。対応する残基（Ｋａｂａｔにより定められる）の少なくとも８５％、９０％、９５％又は１００％が、それぞれのＣＤＲ間で同一である場合、ヒト化抗体中のＣＤＲは、非ヒト抗体中の対応するＣＤＲに実質的に由来する。Ｋａｂａｔにより定められる対応する残基の少なくとも８５、９０、９５又は１００％が同一である場合、抗体鎖の可変領域フレームワーク配列又は抗体鎖の定常領域は、それぞれ、ヒト可変領域フレームワーク配列又はヒト定常領域に実質的に由来する。
【０２６１】
ヒト化抗体は、しばしば、マウス抗体由来の６つ全てのＣＤＲ（好ましくはＫａｂａｔにより定められる）を組み込むが、それらは、マウス抗体由来の全てのＣＤＲ未満（例えば、少なくとも３、４、又は５つのＣＤＲ）で作製することもできる（例えば、Ｐａｓｃａｌｉｓ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  １６９：３０７６，  ２００２；Ｖａｊｄｏｓ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，  ３２０：  ４１５−４２８，  ２００２；Ｉｗａｈａｓｈｉ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｍｏｌ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  ３６：１０７９−１０９１，  １９９９；Ｔａｍｕｒａ  ｅｔ  ａｌ，  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，  １６４：１４３２−１４４１，  ２０００）。
【０２６２】
いくつかの抗体において、ＣＤＲの一部のみ、すなわちＳＤＲと呼ばれる、結合に必要とされるＣＤＲ残基のサブセットが、ヒト化抗体において結合を保持するために必要である。抗原に接触せずＳＤＲにないＣＤＲ残基は、Ｃｈｏｔｈｉａ超可変ループ（Ｃｈｏｔｈｉａ，  Ｊ．  Ｍｏｌ．  Ｂｉｏｌ．  １９６：９０１，  １９８７）の外側に位置するＫａｂａｔ  ＣＤＲの領域から、分子モデリングによって及び／又は経験的に、又はＧｏｎｚａｌｅｓ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｍｏｌ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  ４１：  ８６３，  ２００４に説明されるように、従来の研究に基づいて、同定することができる（例えばＣＤＲ  Ｈ２の残基Ｈ６０−Ｈ６５はしばしば必要とされない）。このようなヒト化抗体において、１又は複数のドナーＣＤＲ残基が存在しない位置又はドナーＣＤＲ全体が省略されている位置で、その位置を占めるアミノ酸は、アクセプター抗体配列中の対応する位置（Ｋａｂａｔナンバリングによる）を占めるアミノ酸であることができる。含むべきＣＤＲ中のドナーアミノ酸に対するアクセプターのこのような置換の数は、競合する検討事項のバランスを反映する。このような置換は、ヒト化抗体中のマウスアミノ酸の数を減少させ、その結果として潜在的な免疫原性を減少させる上で、潜在的に有利である。しかしながら、置換はまた、親和性の変化を引き起こす可能性もあり、親和性の顕著な減少が好ましくは回避される。ＣＤＲ内の置換の位置及び置換するアミノ酸もまた、経験的に選択することができる。
【０２６３】
ヒトアクセプター抗体配列は、任意選択的に、ヒトアクセプター配列可変領域フレームワークとドナー抗体鎖の対応する可変領域フレームワークとの間の高度の配列同一性（例えば、６５−８５％同一性）を提供するように、多くの既知のヒト抗体配列の中から選択することができる。
【０２６４】
ヒト可変領域フレームワーク残基に由来するある特定のアミノ酸を、ＣＤＲコンフォメーション及び／又は抗原への結合に対するそれらの影響の可能性に基づいて、置換のために選択することができる。このような影響の可能性の調査は、モデリング、特定の位置のアミノ酸の特性の検討、又は特定のアミノ酸の置換又は変異誘発の効果の経験的見解によるものである。
【０２６５】
例えば、マウス可変領域フレームワーク残基と選択されたヒト可変領域フレームワーク残基との間でアミノ酸が異なる場合、
（１）  アミノ酸が抗原に直接的に非共有結合する、
（２）  アミノ酸がＣＤＲ領域に隣接する、
（３）  アミノ酸が他のやり方でＣＤＲ領域と相互作用する（例えば、ＣＤＲ領域の約６Å以内にある）
ことが合理的に予想される場合に、ヒトフレームワークアミノ酸を、マウス抗体由来の等価なフレームワークアミノ酸によって置換することができる。
【０２６６】
置換のための他の候補は、その位置のヒト免疫グロブリンにとっては珍しいアクセプターヒトフレームワークアミノ酸である。これらのアミノ酸は、マウスドナー抗体の等価な位置に由来する、又はより典型的なヒト免疫グロブリンの等価な位置に由来するアミノ酸で、置換することができる。置換のための他の候補は、その位置のヒト免疫グロブリンにとっては珍しいアクセプターヒトフレームワークアミノ酸である。
【０２６７】
本開示は、上述のＭＣＡＭエピトープに特異的に結合する非ヒト抗体のキメラ形態及びベニア化形態をさらに提供する。
【０２６８】
キメラ抗体は、非ヒト抗体（例えば、マウス）の軽鎖及び重鎖の成熟可変領域がヒト軽鎖及び重鎖定常領域と組み合わせられている抗体である。このような抗体は、実質的に又は完全に、マウス抗体の結合特異性を保持しており、約３分の２がヒト配列である。
【０２６９】
ベニア化抗体は、非ヒト抗体のＣＤＲのうちいくつか及び通常全て、及び非ヒト可変領域フレームワーク残基のうちいくつかを保持しているが、Ｂ又はＴ細胞エピトープ、例えば暴露残基に寄与し得る他の可変領域フレームワーク残基を、ヒト抗体配列の対応する位置に由来する残基で置き換えている、ヒト化抗体の１タイプである（Ｐａｄｌａｎ，  Ｍｏｌ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  ２８：４８９，  １９９１）。結果として得られるのは、ＣＤＲが完全に又は実質的に非ヒト抗体に由来し、非ヒト抗体の可変領域フレームワークが、置換によってよりヒト様に作られている抗体である。
【０２７０】
ＭＣＡＭに対するヒト抗体は、以下に説明される様々な技術によって提供される。いくつかのヒト抗体は、特定のマウス抗体、例えば、実施例において説明されるマウスモノクローナル抗体のうちの１つなどと同じエピトープ特異性を有するように、競合結合実験によって、上記Ｗｉｎｔｅｒのファージディスプレイ法によって、又は他のやり方で選択される。ヒト抗体はまた、標的抗原としてＭＣＡＭのフラグメントのみを使用することによって、及び／又はＭＣＡＭの欠失変異体のコレクションに対する抗体をスクリーニングすることによって、特定のエピトープ特異性についてスクリーニングすることができる。
【０２７１】
ヒト抗体を産生するための方法は、Ｏｅｓｔｂｅｒｇ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｈｙｂｒｉｄｏｍａ  ２：３６１−３６７  （１９８３）；Ｏｅｓｔｂｅｒｇの米国特許第４，６３４，６６４号；及びＥｎｇｌｅｍａｎらの米国特許第４，６３４，６６６号のトリオーマ法、ヒト免疫グロブリン遺伝子を含むトランスジェニックマウスの使用（例えば、ＬｏｎｂｅｒｇらのＷＯ９３／１２２２７  （１９９３）；ＵＳ  ５，８７７，３９７、ＵＳ  ５，８７４，２９９、ＵＳ  ５，８１４，３１８、ＵＳ  ５，７８９，６５０、ＵＳ  ５，７７０，４２９、ＵＳ  ５，６６１，０１６、ＵＳ  ５，６３３，４２５、ＵＳ  ５，６２５，１２６、ＵＳ  ５，５６９，８２５、ＵＳ  ５，５４５，８０６、Ｎａｔｕｒｅ  １４８，  １５４７−１５５３  （１９９４）、Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  １４，  ８２６  （１９９６）、ＫｕｃｈｅｒｌａｐａｔｉのＷＯ  ９１／１０７４１  （１９９１）を参照されたい）、及びファージディスプレイ法（例えば、ＤｏｗｅｒらのＷＯ  ９１／１７２７１及びＭｃＣａｆｆｅｒｔｙらのＷＯ  ９２／０１０４７、ＵＳ  ５，８７７，２１８、ＵＳ  ５，８７１，９０７、ＵＳ  ５，８５８，６５７、ＵＳ  ５，８３７，２４２、ＵＳ  ５，７３３，７４３及びＵＳ  ５，５６５，３３２を参照されたい）を含む。
【０２７２】
キメラ、ヒト化（ベニア化を含む）及びヒト抗体は、典型的には、上述のように組換え発現によって産生される。
【０２７３】
本開示は、非抗体結合分子をさらに提供する。非抗体結合分子は、例えば、アンチカリンを含み、これは、リポカリンスキャフォールド、すなわちリガンド結合部位を形成する４つの超可変ループを支持する剛性ベータバレルによって特徴付けられるタンパク質構造に基づく。新規の結合特異性は、機能性提示及び誘導選択と組み合わせた、ループ領域における標的化ランダム変異誘発によって操作される（Ｓｋｅｒｒａ  （２００８）  ＦＥＢＳ  Ｊ．  ２７５：  ２６７７−２６８３）。他の適切なスキャフォールドは、例えば、ヒトフィブロネクチンＩＩＩの１０番目の細胞外ドメインに基づく、アドネクチン、又はモノボディ（Ｋｏｉｄｅ  ａｎｄ  Ｋｏｉｄｅ  （２００７）  Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｍｏｌ．  Ｂｉｏｌ．  ３５２：  ９５−１０９）；ブドウ球菌タンパク質ＡのＺドメインに基づく、アフィボディ（Ｎｙｇｒｅｎ  ｅｔ  ａｌ．  （２００８）  ＦＥＢＳ  Ｊ．  ２７５：  ２６６８−２６７６）；アンキリン反復タンパク質に基づく、ＤＡＲＰｉｎ（Ｓｔｕｍｐｐ  ｅｔ  ａｌ．  （２００８）  Ｄｒｕｇ．  Ｄｉｓｃｏｖ．  Ｔｏｄａｙ  １３：  ６９５−７０１）；ヒトＦｙｎプロテインキナーゼのＳＨ３ドメインに基づく、フィノマー（Ｇｒａｂｕｌｏｖｓｋｉ  ｅｔ  ａｌ．    （２００７）  Ｊ．  Ｂｉｏｌ．  Ｃｈｅｍ．  ２８２：  ３１９６−３２０４）；スルホロブス・アシドカルダリウス由来のＳａｃ７ｄに基づく、アフィチン（Ｋｒｅｈｅｎｂｒｉｎｋ  ｅｔ  ａｌ．  （２００８）  Ｊ．  Ｍｏｌ．  Ｂｉｏｌ．  ３８３：  １０５８−１０６８）；ヒトｙ−Ｂ−クリスタリンに基づく、アフィリン（Ｅｂｅｒｓｂａｃｈ  ｅｔ  ａｌ．  （２００７）  Ｊ．  Ｍｏｌ．  Ｂｉｏｌ．  ３７２：  １７２−１８５）；膜レセプタータンパク質のＡドメインに基づく、アビマー（Ｓｉｌｖｅｒｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．  （２００５）  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．  ２３：  １５５６−１５６１）；システインリッチなノッチンペプチド（Ｋｏｌｍａｒ  （２００８）  ＦＥＢＳ  Ｊ．  ２７５：  ２６８４−２６９０）；及び遺伝子操作されたＫｕｎｉｔｚ型阻害剤（Ｎｉｘｏｎ  ａｎｄ  Ｗｏｏｄ  （２００６）  Ｃｕｒｒ．  Ｏｐｉｎ．  Ｄｒｕｇ．  Ｄｉｓｃｏｖ．  Ｄｅｖ．  ９：  ２６１−２６８）を含み得る。レビューについては、Ｇｅｂａｕｅｒ  ａｎｄ  Ｓｋｅｒｒａ  （２００９）  Ｃｕｒｒ．  Ｏｐｉｎ．  Ｃｈｅｍ．  Ｂｉｏｌ．  １３：  ２４５−２５５を参照されたい。
【０２７４】
これらの抗体のいくつかにおいて、抗体は、ＷＯ／２０１２／１７００７１及びＰＣＴ／ＵＳ２０１３／０５８７７３において説明される抗体、特に、ＷＯ／２０１２／１７００７１のクローン１５（配列番号：１２−２１によって定められる）及びクローン１７（配列番号：１−１０によって定められる）に指定される抗体、及びＰＣＴ／ＵＳ２０１３／０５８７７３において説明される、１１７４．１．３、１４１４．１．２、１４１５．１．１、及び１７４９．１．３に指定されるマウス抗ヒトＭＣＡＭモノクローナルクローン、及び２１２０．４．１９及び２１０７．４．１０に指定されるラット抗ヒトＭＣＡＭモノクローナル抗体クローンに、完全に又は実質的に由来するＣＤＲ（Ｋａｂａｔ、Ｃｈｏｔｈｉａ又はそれらの複合により定められる）を含む抗体のいずれか１つではない。
【０２７５】
４．  活性について抗体をスクリーニングする方法
本明細書に記載されるＭＣＡＭ抗体の阻害活性は、同じ又は実質的に類似のエピトープ（例えば、ｍ２１２０）に結合する抗体での競合結合アッセイ、及びそのリガンドである、ラミニン４１１のラミニンα４鎖に結合するＭＣＡＭのブロッキングを含む、様々な方法によって、アッセイすることができる。
【０２７６】
例えば、ＭＣＡＭとラミニン４１１のラミニンα４鎖との間の相互作用を阻害するＭＣＡＭ抗体の活性は、以下のようにスクリーニングすることができる。ＭＣＡＭ発現細胞は、（ａ）ラミニンα４鎖、例えば、ラミニン４１１のα４鎖を含む組換えポリペプチドとともに、候補抗体の存在下又は非存在下でインキュベートされ；（ｂ）細胞へのラミニンα４の結合のレベルを、例えば蛍光顕微鏡法又はフローサイトメトリーによってモニタリングし；（ｃ）候補抗体の非存在下よりも、存在下で、ラミニンα４結合のレベルが低い場合に、前記候補抗体をＭＣＡＭ／ラミニンα４相互作用の阻害剤として同定する。代替のスクリーニングプロトコルは、ラミニンα４鎖を発現する細胞の集団の使用を含む。この集団を、候補抗体の存在下及び非存在下で、ＭＣＡＭとともにインキュベートして、細胞集団へのＭＣＡＭの結合をモニタリングすることができる。候補抗体の非存在下よりも、存在下で、細胞集団へのＭＣＡＭの結合が低い場合、候補抗体はＭＣＡＭアンタゴニストである。
【０２７７】
モニタリングの他の方法は、蛍光活性化セルソーティング（ＦＡＣＳ）及び酵素結合免疫吸着測定法（ＥＬＩＳＡ）を含む。
【０２７８】
ＭＣＡＭの、そのリガンド、例えば、ラミニンα４鎖への結合を阻害する能力に基づいて同定されたＭＣＡＭアンタゴニストは、ＭＣＡＭ発現細胞の浸潤によって特徴付けられる炎症性状態の処置のための候補である。
【０２７９】
＜Ｆ．  コンジュゲート抗体＞
ＭＣＡＭに特異的に結合するコンジュゲート抗体は、破壊のためのがん又は腫瘍細胞の標的化に、又は自己免疫性疾患又は神経炎症疾患に関与する細胞の標的化に、有用である可能性がある。このような抗体はまた、ＭＣＡＭの発現によって少なくとも部分的に媒介される任意の疾患の標的化にも有用である可能性がある。例えば、このような抗体は、他の治療用薬剤、他のタンパク質、他の抗体、及び／又は検出可能な標識とコンジュゲートすることができる。ＷＯ  ０３／０５７８３８；ＵＳ  ８，４５５，６２２を参照されたい。このような治療用薬剤は、患者の望ましくない状態又は疾患、例えば、自己免疫性疾患、神経炎症疾患、又はがんなどを、処置し、それらと闘い、改善し、防止し、又は向上するために使用することができる、任意の薬剤である可能性がある。治療用薬剤は、細胞傷害性薬剤、細胞増殖抑制剤、放射線治療剤、免疫調節剤、又は抗体の活性を促進又は強化する任意の生物学的に活性のある薬剤を含む可能性がある。細胞傷害性薬剤は、細胞に対し毒性のある任意の薬剤である可能性がある。細胞増殖抑制剤は、細胞増殖を阻害する任意の薬剤である可能性がある。免疫調節剤は、免疫応答の進行又は維持を刺激又は阻害する任意の薬剤である可能性がある。放射線治療剤は、放射線を放出する任意の分子又は化合物である可能性がある。このような治療用薬剤が本明細書に記載される抗体などのＭＣＡＭ特異的抗体に結合されると、結合した治療用薬剤は、他の細胞を超える、ＭＣＡＭ発現細胞（例えば、ＴＨ１７−発現細胞などの免疫細胞、又は悪性メラノサイトなどのがん細胞）に対する特異的親和性を有するだろう。その結果として、コンジュゲート抗体の投与は、ＭＣＡＭ発現細胞を直接標的とし、他の周囲の細胞及び組織に対する効果は最小限である。このことは、特に、単独で投与するには毒性が強い治療用薬剤に有用である可能性がある。加えて、より少量の治療用薬剤を使用することができる。
【０２８０】
抗体は、免疫毒素として作用するように改変することができる。例えば、米国特許第５，１９４，５９４号を参照されたい。例えば、植物に由来する細胞毒素であるリシンは、二機能性試薬（抗体についてはＳ−アセチルメルカプトコハク酸無水物及びリシンについてはスクシンイミジル３−（２−ピリジルジチオ）プロピオネート）を使用することにより、抗体に結合させることができる。Ｐｉｅｔｅｒｓｚ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．  ４８（１６）：４４６９−４４７６  （１９９８）を参照されたい。この結合は、リシンのＢ鎖結合活性の喪失をもたらし、リシンのＡ鎖の潜在的な毒性も、抗体の活性も損なわれない。同様に、リボソームアセンブリの阻害剤であるサポリンを、化学的に挿入されたスルフヒドリル基の間のジスルフィド結合を介して、抗体に結合させることができる。Ｐｏｌｉｔｏ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｌｅｕｋｅｍｉａ  １８：１２１５−１２２２  （２００４）を参照されたい。
【０２８１】
例えば、イットリウム９０（９０Ｙ）、インジウム１１１（１１１Ｉｎ）、１３１Ｉ、９９ｍＴｃ、放射性銀−１１１、放射性銀−１９９、及びビスマス２１３などの放射性同位元素もまた、抗体に連結することができる。放射性同位元素の抗体への連結は、従来の二機能キレートで実施してよい。放射性銀−１１及び放射性銀−１９９連結には、硫黄系リンカーを使用してよい。Ｈａｚｒａ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｐｈｙｓ．  ２４−２５：１−７  （１９９４）を参照されたい。銀放射性同位元素の連結は、アスコルビン酸による免疫グロブリンの還元を含んでよい。１１１Ｉｎ及び９０Ｙなどの放射性同位元素には、イブリツモマブ・チウキセタンを使用することができ、これは、このような同位元素と反応して、１１１Ｉｎ−イブリツモマブ・チウキセタン及び９０Ｙ−イブリツモマブ・チウキセタンを、それぞれ形成することとなる。Ｗｉｔｚｉｇ，  Ｃａｎｃｅｒ  Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ．  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．，  ４８  Ｓｕｐｐｌ  １：Ｓ９１−Ｓ９５  （２００１）を参照されたい。
【０２８２】
他の治療用薬剤もまた抗体に連結してよい。治療用薬剤は通常、細胞傷害性又は細胞増殖抑制性である。例えば、毒性のある化学療法薬、例えばマイタンシン、ゲルダナマイシン、チューブリン阻害剤、例えばオーリスタチン、又は副溝結合剤、例えばカリチアマイシンと、抗体をコンジュゲートすることができる。他の代表的な治療用薬剤は、自己免疫性疾患、神経炎症疾患、又はがんの、又は自己免疫性疾患、神経炎症疾患、又はがんの症候の、処置、管理、又は改善に有用であることが知られている薬剤を含む。このような治療用薬剤の例は、本明細書の他の場所に開示される。
【０２８３】
抗体はまた、他のタンパク質と結合させることができる。例えば、抗体はフィノマーと結合させることができる。フィノマーは、ヒトＦｙｎ  ＳＨ３ドメインに由来する小さい結合タンパク質（例えば、７ｋＤａ）である。それらは、安定性且つ可溶性であることができ、またそれらは、システイン残基及びジスルフィド結合を欠くことができる。フィノマーを操作して、抗体と同じ親和性及び特異性で標的分子に結合させることができる。それらは、抗体に基づく多重特異性融合タンパク質を作製するのに適切である。例えば、フィノマーを抗体のＮ末端及び／又はＣ末端と融合させて、異なる構造を有する二重特異性及び三重特異性のＦｙｎｏｍＡｂｓを作製することができる。フィノマーは、最適な特性を有するフィノマーの効率的選択を可能にする、ＦＡＣＳ、Ｂｉａｃｏｒｅ、及び細胞系アッセイを使用するスクリーニング技術を介し、フィノマーライブラリーを使用して選択することができる。フィノマーの例は、Ｇｒａｂｕｌｏｖｓｋｉ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｊ．  Ｂｉｏｌ．  Ｃｈｅｍ．  ２８２：３１９６−３２０４  （２００７）；Ｂｅｒｔｓｃｈｉｎｇｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｎｇ．  Ｄｅｓ．  Ｓｅｌ．  ２０：５７−６８  （２００７）；Ｓｃｈｌａｔｔｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，  ＭＡｂｓ．  ４：４９７−５０８  （２０１１）；Ｂａｎｎｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，  Ａｃｔａ．  Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒ．  Ｄ．  Ｂｉｏｌ．  Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒ．  ６９（Ｐｔ６）：１１２４−１１３７  （２０１３）；及びＢｒａｃｋ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｍｏｌ．  Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｈｅｒ．  １３：２０３０−２０３９  （２０１４）に開示される。
【０２８４】
本明細書中に開示される抗体はまた、１又は複数の他の抗体に結合又はコンジュゲートさせ（て、例えば、抗体ヘテロコンジュゲートを形成す）ることができる。このような他の抗体は、ＭＣＡＭ内の異なるエピトープに結合することができ、又は異なる標的抗原に結合することができる。
【０２８５】
抗体はまた、検出可能な標識と結合させることができる。このような抗体を、例えば、自己免疫性疾患、神経炎症疾患、又はがんの診断のために、自己免疫性疾患、神経炎症疾患、又はがんの進行のモニタリングのために、及び／又は処置の有効性の評価のために、使用することができる。このような抗体は、自己免疫性疾患、神経炎症疾患、又はがんを有する又はこれらに罹りやすい被験体において、又はこのような被験体から得られた適切な生物学的サンプルにおいて、このような決定を実施するために有用である可能性がある。抗体に結合又は連結され得る代表的な検出可能な標識は、様々な酵素、例えばホースラディッシュペルオキシダーゼ、アルカリホスファターゼ、ベータ−ガラクトシダーゼ、又はアセチルコリンエステラーゼなど；補欠分子族、例えばストレプトアビジン／ビオチン及びアビジン／ビオチンなど；蛍光材料、例えばウンベリフェロン、フルオレセイン、フルオレセインイソチオシアナート、ローダミン、ジクロロトリアジニルアミンフルオレセイン、ダンシルクロリド又はフィコエリトリンなど；発光材料、例えばルミノールなど；生物発光材料、例えばルシフェラーゼ、ルシフェリン、及びエクオリンなど；放射性材料、例えば放射性銀−１１１、放射性銀−１９９、ビスマス２１３、ヨウ素（１３１Ｉ、１２５Ｉ、１２３Ｉ、１２１Ｉ）、炭素（１４Ｃ）、硫黄（５Ｓ）、トリチウム（３Ｈ）、インジウム（１１５Ｉｎ、１１３Ｉｎ、１１２Ｉｎ、１１１Ｉｎ）、テクネチウム（９９Ｔｃ）、タリウム（２０１Ｔｉ）、ガリウム（６８Ｇａ、６７Ｇａ）、パラジウム（１０３Ｐｄ）、モリブデン（９９Ｍｏ）、キセノン（１３３Ｘｅ）、フッ素（１８Ｆ）、１５３Ｓｍ、１７７Ｌｕ、１５９Ｇｄ、１４９Ｐｍ、１４０Ｌａ、１７５Ｙｂ、１６６Ｈｏ、９０Ｙ、４７Ｓｃ、１８６Ｒｅ、１８８Ｒｅ、１４２Ｐｒ、１０５Ｒｈ、９７Ｒｕ、６８Ｇｅ、５７Ｃｏ、６５Ｚｎ、８５Ｓｒ、３２Ｐ、１５３Ｇｄ、１６９Ｙｂ、５１Ｃｒ、５４Ｍｎ、７５Ｓｅ、１１３Ｓｎ、及び１１７スズなど；様々なポジトロン放出断層撮影を使用するポジトロン放出金属；非放射性の常磁性金属イオン；及び特定の放射性同位元素に放射標識又はコンジュゲートされる分子、を含む。
【０２８６】
治療用薬剤、他のタンパク質、他の抗体、及び／又は検出可能な標識は、本分野において公知の技術を使用して、直接的に又は間接的に、中間物（例えば、リンカー）を介して、マウス、キメラ、ベニア化、又はヒト化抗体に、結合又はコンジュゲートさせてよい。例えば、Ａｒｎｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，  "Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  Ｆｏｒ  Ｉｍｍｕｎｏｔａｒｇｅｔｉｎｇ  Ｏｆ  Ｄｒｕｇｓ  Ｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｈｅｒａｐｙ，"  ｉｎ  Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  Ａｎｄ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｈｅｒａｐｙ，  Ｒｅｉｓｆｅｌｄ  ｅｔ  ａｌ．  （ｅｄｓ．），  ｐｐ．  ２４３−５６  （Ａｌａｎ  Ｒ．  Ｌｉｓｓ，  Ｉｎｃ．  １９８５）；Ｈｅｌｌｓｔｒｏｍ  ｅｔ  ａｌ．，  "Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  Ｆｏｒ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ，"  ｉｎ  Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  （２ｎｄ  Ｅｄ．），  Ｒｏｂｉｎｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．  （ｅｄｓ．），  ｐｐ．  ６２３−５３  （Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ，  Ｉｎｃ．  １９８７）；Ｔｈｏｒｐｅ，  "Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｃａｒｒｉｅｒｓ  Ｏｆ  Ｃｙｔｏｔｏｘｉｃ  Ａｇｅｎｔｓ  Ｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｈｅｒａｐｙ：  Ａ  Ｒｅｖｉｅｗ，"  ｉｎ  Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ８４：  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ａｎｄ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ，  Ｐｉｎｃｈｅｒａ  ｅｔ  ａｌ．  （ｅｄｓ．），  ｐｐ．  ４７５−５０６  （１９８５）；"Ａｎａｌｙｓｉｓ，  Ｒｅｓｕｌｔｓ，  Ａｎｄ  Ｆｕｔｕｒｅ  Ｐｒｏｓｐｅｃｔｉｖｅ  Ｏｆ  Ｔｈｅ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  Ｕｓｅ  Ｏｆ  Ｒａｄｉｏｌａｂｅｌｅｄ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｈｅｒａｐｙ，"  ｉｎ  Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  Ｆｏｒ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ  Ａｎｄ  Ｔｈｅｒａｐｙ，  Ｂａｌｄｗｉｎ  ｅｔ  ａｌ．  （ｅｄｓ．），  ｐｐ．  ３０３−１６  （Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ  １９８５）；及びＴｈｏｒｐｅ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  Ｒｅｖ．，  ６２：１１９−５８  （１９８２）を参照されたい。適切なリンカーは、例えば、切断可能な及び切断不能なリンカーを含む。酸性又は還元条件下で、又は特定のプロテアーゼへの暴露下で、薬物を放出する、異なるリンカーを採用することができる。同様に、酸性又は還元条件下で、特定のプロテアーゼへの暴露下で、又は他の定められた条件下で、結合した治療用薬剤、タンパク質、抗体、及び／又は検出可能な標識を放出する、異なるリンカーを採用することができる。
【０２８７】
ＩＶ．  処置の方法
本明細書中に開示される抗体又は他のアンタゴニストは、罹患している（例えば、ＤＳＭ−ＩＶ−ＴＲ又はＤＳＭ−Ｖのもののような、本技術分野で認識されている判定基準を満たす）又は本明細書中に開示される疾患の一般的集団と比べてリスクの高い被験体の処置又は予防のために使用することができる。リスクが高いことは、疾患に関連する１又は複数の遺伝的又は生化学的マーカーの存在、又は疾患と一致するが確定的な診断を可能にするには不十分な１又は複数の症候の存在から、評価することができる。本方法によって処置可能ないくつかの特定の例示的な疾患は、巨細胞動脈炎、リウマチ性多発筋痛症（ＰＭＲ）及び高安動脈炎を含む。これらの疾患は、血管壁へのＴＨ１７及びＴＨ１細胞の浸潤によって特徴付けられる。ＭＣＡＭを発現する細胞が血管の周りに局在することが見出されている。本方法の実施は機序の理解に依存するものではないが、いくつかの方法において、抗体又は他のアンタゴニストが、Ｔ細胞（例えば、ＴＨ１７細胞）上に発現されるＭＣＡＭと、血管壁を形成する内皮細胞の表面上に発現されるラミニンα４鎖、例えば、ラミニン４１１のα４鎖との間の相互作用を阻害することによって、少なくとも部分的に機能すると考えられる。抗体−薬物コンジュゲートは、典型的には標的化細胞内への取り込みの後に、連結された薬剤の細胞傷害性又は細胞増殖抑制性効果を含む追加の作用機序を有することができる。抗体−薬物コンジュゲートはまた、マクロファージ毒性を誘導し得る。
【０２８８】
巨細胞動脈炎（ＧＣＡ又は側頭動脈炎又は頭部動脈炎又はホートン病）は、最も一般的には頭部の大動脈及び中動脈、大部分は外頸動脈の支流を含む、血管の炎症性疾患である。最も重篤な合併症は、内頸動脈の支流である眼動脈の閉塞である。これにより、速やかに処置されなければ不可逆的な虚血及び失明を引き起こす可能性のある、医療的緊急事態が発生する可能性がある。ＧＣＡは従来、グルココルチコイドで処置されており、グルココルチコイドは、現在の炎症の症候を低減し、閉塞を防止するが、血管壁の病理には効果がなく、その結果、回復後に被験体は再発する。
【０２８９】
ＧＧＡは、５０歳以降に発症し、診断の平均年齢は７２歳である。約１９０，０００の被験体が、この疾患に罹患している。この疾患はしばしば、鎮痛剤耐性頭痛（６０−９０％）及び視力低下（１２−４０％）として現れる。症候は、グルココルチコイドに対し劇的な初期応答を示す。
【０２９０】
ＧＣＡは、臨床像、患者の特性、炎症の血液検査マーカー、及び最も特徴的には、最も一般的には内部弾性膜に近接する血管壁の生検における、巨大多核細胞の存在から診断される。
【０２９１】
ＧＣＡは、血管壁へのＴＨ１７及びＴＨ１細胞の浸潤によって引き起こされる。組織病理学的病変部が動脈の全ての層において観察され、Ｔ細胞、マクロファージ及び多核巨細胞を含む多型細胞浸潤、断片化された内弾性板及び内膜過形成を伴う分節性及び限局性汎動脈炎に至る。ＴＨ１７細胞は巨細胞の前駆体である（Ｓａｍｓｏｎ  Ｃｌｉｎ  Ｅｘｐ  Ｒｈｅｕｍａｔｏｌ．  ２０１３  Ｊａｎ−Ｆｅｂ；３１（１  Ｓｕｐｐｌ  ７５）：Ｓ６５−７３．  Ｅｐｕｂ  ２０１３  Ａｐｒ  １９．）。それ故に、本開示の抗体は、他の機序のなかでも、血管壁へのＴＨ１７又はＴＨ１細胞の遊走又はＴＨ１７細胞の巨細胞への変換を阻害することによって、ＧＣＡを阻害することができる。抗体を試験するために、ＧＣＡのための動物モデルが利用可能である。この動物モデルは、ヒト側頭動脈標本をＳＣＩＤマウスの皮下に導入することによって形成される（Ｄｅｎｇ  ｅｔ  ａｌ．  ，  Ｃｉｒｃ．  Ｒｅｓ．  １０４，  ４８８−４９５  （２００９））。脈管構造における平滑筋細胞の遊走及び増殖に対する潜在的な薬物の効果を分析するために、細胞モデルもまた利用可能である。このモデルは、Ｍａｔｒｉｇｅｌ（商標）マトリクス上の平滑筋細胞を使用する。
【０２９２】
ＰＭＲと略記されるリウマチ性多発筋痛症は、ＧＣＡに関連する状態である。ＧＣＡにおいて、被験体は、疼痛又はこわばりを有し、これらは通常は首、肩、上腕及び臀部で起こるが、全身にわたって起こり得る。疼痛は非常に突然起こる可能性があり、又はある期間にわたって徐々に起こる可能性がある。これは、側頭動脈炎などの血管の炎症性状態によって引き起こされ得る。ＥＳＲ亢進及びＣ−反応性タンパク質は、ＰＭＲの特性であり、低投与量のコルチコステロイド（これは、ＰＭＲの従来の処置である）に対し迅速に応答する。
【０２９３】
ＰＭＲは、ＧＣＡと同時に又は別々に発生する可能性がある。ＰＭＲ患者のおよそ１５％が巨細胞動脈炎（ＧＣＡ）を発症し、ＧＣＡ患者の４０−５０％がＰＭＲと関連している。大部分の炎症は、滑膜及び滑液包のレベルにあり、ＭＲＩ研究は、関節周囲の炎症並びに肩帯及び腰帯の両方に関連する滑液包における滑液包炎を明らかにしている。全身性マクロファージ及びＴ細胞活性化は、ＧＣＡ及びＰＭＲの両方の特性である。患者はしばしば、ＧＣＡ及びＰＭＲの両方において全身炎症性反応に関与している可能性が高い、ＩＬ−６レベルの亢進を有する。循環するＩＬ−６のレベルの減少は、臨床症候の寛解と相関する。ＧＣＡと同様に、発症年齢は５０歳以上で、平均は７２歳である。
【０２９４】
高安動脈炎は、ＧＣＡに関連する稀なタイプの脈管炎である。これは、大血管肉芽腫性脈管炎の一形態であり、重度の内膜線維腫及び血管狭窄を伴い、しばしばアジア系の若年又は中年女性に影響を及ぼす。これは主に、大動脈（心臓を出る主血管）及びその支流、並びに肺動脈に影響を及ぼす。メスは、オスよりも、約８−９倍影響を受けやすい。この疾患を有する者は、しばしば、１５〜３０歳のときに症候に気が付く。高安動脈炎はまた、腕又は胸の疼痛及び高血圧につながり、また最終的には心不全又は脳卒中につながる可能性がある。処置の目標は、動脈の炎症を軽減し、潜在的な合併症を防止することである。高安動脈炎の徴候及び症候は、使用による腕又は脚の脱力感又は疼痛（跛行）、立ちくらみ又は目まい、失神、頭痛、記憶障害、思考困難、息切れ、視覚障害、高血圧、腕間の血圧の差、見つけるのが難しい又は不在の手首の脈拍；過少赤血球（貧血症）、胸痛、腹痛を含む。この状態は、大動脈及びその主要な派生支流の分節性及び斑点状肉芽腫性炎症によって特徴付けられる。この炎症は、動脈狭窄、血栓症、及び動脈瘤につながる。慢性脈管炎に起因する、血管の不規則な線維症もまた存在し、時折、重度の内膜線維腫（血管の内部部分の線維症）に至る。炎症、肉芽腫、及び線維症に起因する著しい狭窄はしばしば、磁気的共鳴血管造影（ＭＲＡ）、コンピュータ断層撮影血管造影（ＣＴＡ）、又は動脈血管造影（ＤＳＡ）などの動脈研究において見られる。処置は、コルチコステロイド、メトトレキセート、アザチオプリン、アダリムマブ、エタネルセプト、インフリキシマブ及びトシリズマブを含む。
【０２９５】
抗体又は他のアンタゴニストは、有効なレジメンで投与される。有効なレジメンは、処置されるべき疾患（例えば、巨細胞動脈炎、リウマチ性多発筋痛症（ＰＭＲ）又は高安動脈炎）の少なくとも１つの徴候又は症候の、発症を遅延させ、重症度を低減し、さらなる悪化を阻害し、及び／又は改善する、用量、投与経路及び投与頻度を意味する。患者が既に障害を患っている場合、このレジメンは、治療的に有効なレジメンと呼ぶことができる。患者が、一般的集団と比べて障害のリスクが高いが、まだ症候を経験していない場合、このレジメンは、予防的に有効なレジメンと呼ぶことができる。いくつかの例において、治療的又は予防的有効性は、これまでの対照又は同じ患者における過去の経験と比べて、個々の患者において観察することができる。他の例において、治療的又は予防的有効性は、処置されていない患者の対照集団と比べて、処置されている患者の集団における前臨床又は臨床試験において、立証することができる。
【０２９６】
抗体の例示的な用量は、０．１−２０、又は０．５−５ｍｇ／ｋｇ体重（例えば、０．５、１、２、３、４又は５ｍｇ／ｋｇ）又は固定用量として１０−１５００ｍｇである。この用量は、他の要因のなかでも、患者の状態及び前処置（存在する場合）に対する応答、処置が予防的であるか治療的であるか、及び障害が急性であるか慢性であるかに依存する。
【０２９７】
投与は、非経口、静脈内、経口、皮下、動脈内、頭蓋内、髄腔内、腹腔内、局所、鼻腔内又は筋肉内が可能である。いくつかの抗体について、及びいくつかの状況下では、静脈内又は皮下投与による全身循環への投与が好ましい。静脈内投与は、例えば、ある期間、例えば３０−９０分にわたる注入によって行うことができる。
【０２９８】
投与頻度は、他の要因の中でも、循環中の抗体の半減期、患者の状態及び投与経路に依存する。頻度は、患者の状態の変化又は処置されている障害の進行に応じて、毎日、毎週、毎月、四半期毎、又は不規則な間隔が可能である。静脈内投与の例示的な頻度は、継続的な処置の原因について、毎週〜四半期毎であるが、同じような頻度の投薬も可能である。皮下投与について、例示的な投薬頻度は毎日〜毎月であるが、同じような頻度の投薬も可能である。
【０２９９】
投与される用量の数は、障害が急性であるか慢性であるか、及び処置に対する障害の応答に依存する。急性障害又は慢性障害の急性憎悪には、１〜１０回の投与がしばしば十分である。任意選択的に分割された形態の、単一の大量瞬時投与が、急性障害又は慢性障害の急性憎悪に十分である場合もある。急性障害又は急性憎悪の再発のために、処置を反復することができる。慢性障害には、抗体は、少なくとも１、５又は１０年、又は患者の寿命の間、規則的な間隔で、例えば、毎週、隔週、毎月、四半期毎、６ヶ月毎に、投与することができる。
【０３００】
本明細書中に開示される抗体又は他のアンタゴニストでの処置は、処置されている障害に対して有効な他の処置と組み合わせることができる。組み合わせ処置は、別々に投与するために製剤化することができる。
【０３０１】
Ｖ．  製剤
非経口投与のための医薬組成物は、好ましくは、滅菌で実質的に等張であり、ＧＭＰ条件下で製造される。医薬組成物は、単位剤形（すなわち、単回投与のための用量）で提供することができる。医薬組成物は、１又は複数の生理的に及び医薬的に許容されるキャリア、希釈剤、添加剤又は助剤を使用して製剤化することができる。製剤は、選択された投与経路に依存する。注射のためには、抗体は、（注射の部位での不快感を低減するために、）水溶液中で、好ましくは、ハンクス溶液、リンガー溶液、又は生理食塩水又は酢酸バッファーなどの生理的に適合性のバッファー中で、製剤化することができる。この溶液は、懸濁剤、安定化剤及び／又は分散剤などの製剤化剤を含有することができる。代替的に、抗体は、使用前に、適切なビヒクル、例えば、滅菌パイロジェンフリー水で構成するための凍結乾燥形態であることができる。
【０３０２】
本開示は、本明細書に記載される抗体又は他のアンタゴニスト、バッファー、１又は複数の糖及び／又はポリオール、及び界面活性剤を含み、約５．５〜約７の範囲のｐＨを有する製剤を提供する。製剤は、保存のために、液体形態で又は凍結乾燥形態で調製することができる。凍結乾燥形態で保存される場合、製剤は、液体（例えば、滅菌水）で、本明細書に記載される濃度及び特性に再構成することができる。凍結乾燥組成物が、特定の成分濃度及びｐＨの製剤を生じるために、水を添加することによって再構成可能であると言われる場合、凍結乾燥製剤が、単純に水を添加することによって（すなわち、追加の量の成分を供給することなく、又はｐＨを変えるために酸又は塩基を添加することなく）そのように再構成されることができることが意味される。凍結乾燥製剤が凍結乾燥前（ｐｒｅｌｙｏｐｈｉｌｉｚａｔｉｏｎ）の製剤と同じ体積に再構成される場合、凍結乾燥前の液体製剤の濃度及び特性は、以下に説明されるものに従うこともできる。体積が異なる場合、製剤の濃度は比例的に調整されるはずである。例えば、再構成体積が凍結乾燥前体積の半分である場合、凍結乾燥前製剤中の成分の濃度は、再構成製剤中の濃度の半分になるはずである。
【０３０３】
任意選択的に、抗体は、以下に説明されるように製剤中に再懸濁され、凍結乾燥前の保存のために一時的に凍結され、凍結乾燥され、水で凍結乾燥前と同じ濃度に再構成される。このような製剤は、好ましくは、凍結、凍結乾燥、保存、及び再構成、並びに非経口投与に適切な状態を通してずっと、抗体を安定化すべきである。例示的なワークフローにおいて、精製された抗体を、約４０ｍｇ／ｍＬで製剤中に再懸濁し、バッグ中に−４０℃で凍結して保存する。バッグを室温３時間で解凍し、内容物をプールする。この製剤を、０．２マイクロメートル滅菌フィルターを通して滅菌ろ過する。バイアルに５．４ｍＬの製剤を充填し、凍結乾燥する。凍結乾燥されたバイアルを２−８℃で保存する。滅菌水（例えば、製剤に応じておよそ５．０〜５．４ｍＬの滅菌水）を添加することによって、凍結乾燥されたバイアルを再構成する。次いで、５ｍＬの再構成された製品を、患者へ静脈内注入するために、２０−１００ｍＬの生理食塩水、乳酸リンゲル液、又は５％デキストロース溶液などを含有するＩＶバッグのポートに添加する。
【０３０４】
いくつかの製剤は増量剤を含み、これは、糖／ポリオール成分と同じであってもなくてもよい。典型的には、製剤は、例えば、０．２μｍ又は０．２２μｍフィルターを使用する滅菌ろ過によって達成されるような滅菌である。製剤はまた、凍結及び解凍時に、以下でさらに定められるように、低いレベル〜検出不能なレベルの断片化及び／又は凝集によって、一般的に安定性である。さらに他の製剤は、凍結乾燥されたケーキの再構成の後、少なくとも３ヶ月間、約４０℃で安定性である。いくつかの製剤において、約５％未満の抗体が、製剤中に凝集体として存在する。
【０３０５】
いくつかの製剤において、抗体は、約５ｍｇ／ｍＬ〜約１００ｇ／ｍＬの範囲内の濃度で存在する。いくつかの製剤において、抗体は、約５ｍｇ／ｍＬ〜約５０ｇ／ｍＬの範囲内の濃度で存在する。いくつかの製剤において、抗体は、約２５ｍｇ／ｍＬ〜約５０ｇ／ｍＬの範囲内の濃度で存在する。例えば、抗体は、約３５−４５ｍｇ／ｍＬ又は約４０ｍｇ／ｍＬの濃度で存在してよい。抗体は、約５０ｍｇ／バイアル〜約５００ｍｇ／バイアル、又はそれ以上の滅菌液体剤形で存在してよい。抗体は、約４０ｍｇ／バイアル〜約５００ｍｇ／バイアルの凍結乾燥剤形で存在してよい。例えば、抗体は、約２５０−３５０ｍｇ／バイアル又は約２００ｍｇ／バイアルの滅菌液体又は凍結乾燥剤形で存在してよい。
【０３０６】
製剤は、本明細書に記載される抗体のうちいずれかを含むことができる。いくつかの製剤において、製剤化された抗体は、（ｉ）配列番号：１６１（ただし位置３２（Ｋａｂａｔナンバリング）がＮ、Ｓ、又はＱであることができ、位置３３（Ｋａｂａｔナンバリング）がＧ又はＡであることができる）の３つのＫａｂａｔ  ＣＤＲを含む成熟重鎖可変領域であって、成熟重鎖可変領域が配列番号：１６１と少なくとも９０％同一である、成熟重鎖可変領域、及び（ｉｉ）配列番号：１２３の３つのＫａｂａｔ  ＣＤＲを含み、配列番号：１２３と少なくとも９０％同一である、成熟軽鎖可変領域を含む、抗体である。このような製剤において、成熟重鎖可変領域の位置１（Ｋａｂａｔナンバリング）は、Ｅによって占められることができる。いくつかの製剤において、成熟重鎖可変領域が配列番号：１５７、配列番号：１５８、配列番号：１５９、配列番号：１６０、又は配列番号：１６１のアミノ酸配列を有し、成熟軽鎖可変領域が配列番号：１２１、配列番号：１２２、又は配列番号：１２３のアミノ酸配列を有する。例えば、いくつかの製剤において、成熟重鎖可変領域が配列番号：１６１のアミノ酸配列を有し、成熟軽鎖可変領域が配列番号：１２３のアミノ酸配列を有する。
【０３０７】
他の製剤において、製剤化された抗体は、本明細書に記載される単離された抗ＭＣＡＭ抗体である。このような製剤において、単離された抗ＭＣＡＭ抗体が、アミノ酸残基１４１を含むエピトープで、ヒトＭＣＡＭ（配列番号：１１）に結合する。
【０３０８】
抗体に適切なｐＨを達成するために、開示される製剤において、例えば、ヒスチジンバッファー、コハク酸バッファー、及びクエン酸バッファーなどのバッファーが使用される。いくつかの製剤は、約５．５〜約７の範囲内のｐＨ、例えば、５．５、５．６、５．７、５．８、５．９、６．０、６．１、６．２、６．３、６．４、６．５、６．６、６．７、６．８、６．９、又は７．０のｐＨを有する。いくつかの製剤は、約５．５〜約６．５のｐＨを有する。いくつかの製剤は約６．０のｐＨを有し、他の製剤は約６．５のｐＨを有する。いくつかの製剤において、ヒスチジンバッファーは、約１０ｍＭ〜約３０ｍＭの範囲内の濃度で、例えば、約１５−２５ｍＭ又は約２０ｍＭの濃度で存在する。
【０３０９】
製剤に適切な糖及び／又はポリオールは、トレハロース及びスクロース、又はそれらの組み合わせを含む。糖／ポリオールは、増量剤、凍結保護剤、及び／又は等張化剤としての役割を果たす。例えば、いくつかの製剤は、約２００ｍＭ〜約２６０ｍＭの範囲内の濃度で存在するトレハロース、又は約２００ｍＭ〜約２６０ｍＭの範囲内の濃度で存在するスクロースを含む。いくつかの製剤は、約２２０ｍＭの濃度で存在するトレハロースを含む。他の製剤は、約２２０ｍＭの濃度で存在するスクロースを含む。いくつかのこのような製剤は、約２５０−４００、３００−４００、又は３００−３５０ｍＯｓｍ／ｋｇの範囲の、例えば、２８７又は２９５ｍＯｓｍ／ｋｇなどのオスモル濃度によって特徴付けられる。
【０３１０】
製剤は、表面への抗体の凝集及び吸収を低減するために、界面活性剤を含有することができる。適切な界面活性剤は、約０．００５質量％〜約０．０５質量％の範囲内の濃度で存在するポリソルベート２０を含む。ポリソルベート２０は、それがなければ抗体の製剤中で起こるであろう凝集又は濁度の激増を防ぐ。ポリソルベート２０は、約０．０１％〜約０．０５％の範囲内の濃度で存在してよい。例えば、濃度は、０．００５％、０．０１％、０．０１５％、０．０２％、０．０２５％、０．０３％、０．０３５％、０．０４％、０．０４５％、又は０．０５％であることができる。代替的に、いくつかの製剤において、ポリソルベート２０は、約０．０５ｇ／Ｌ、０．１ｇ／Ｌ、０．１５ｇ／Ｌ、０．２ｇ／Ｌ、０．２５ｇ／Ｌ、０．３ｇ／Ｌ、０．３５ｇ／Ｌ、０．４ｇ／Ｌ、０．４５ｇ／Ｌ、又は０．５ｇ／Ｌの範囲内の濃度で存在する。いくつかの製剤は、０．２ｇ／Ｌの濃度のポリソルベート２０を含む。
【０３１１】
例示的な製剤（液体、凍結乾燥前、又は凍結乾燥後に再構成された）は、約５．５〜約７の範囲内のｐＨによって特徴付けられ、（ａ）約１０ｍｇ／ｍＬ〜約５０ｍｇ／ｍＬの範囲内の濃度の本明細書に記載される抗体；（ｂ）約１０ｍＭ〜約３０ｍＭの範囲内の濃度で存在するヒスチジンバッファー；（ｃ）約２００ｍＭ〜約２６０ｍＭの範囲内の濃度で存在するトレハロース、及び約２００ｍＭ〜約２６０ｍＭの範囲内の濃度で存在するスクロースから選択される、１又は複数の糖及びポリオール（「糖／ポリオール」）；及び（ｄ）約０．００５質量％〜約０．０５質量％の範囲内の濃度で存在するポリソルベート２０を含む。一つの例において、製剤は、（ａ）本明細書に記載される任意の抗体；（ｂ）約２０ｍＭの濃度のヒスチジンバッファー；（ｃ）約２２０ｍＭの濃度のスクロース；（ｄ）約０．０２％の濃度のポリソルベート２０；及び約６．０のｐＨを含むことができる。別の例において、製剤は、（ａ）本明細書に記載される任意の抗体；（ｂ）約２０ｍＭの濃度のヒスチジンバッファー；（ｃ）約２２０ｍＭの濃度のトレハロース；（ｄ）約０．０２％の濃度のポリソルベート２０；及び約６．５のｐＨを含むことができる。
【０３１２】
いくつかの凍結乾燥製剤は、（ａ）本明細書に記載される抗体；（ｂ）ヒスチジンバッファー；（ｃ）トレハロース又はスクロース；及び（ｄ）ポリソルベート２０を含む。凍結乾燥製剤は、約２００ｍｇの抗体を含むことができる。いくつかの凍結乾燥製剤は、滅菌水で再構成することができる。いくつかの凍結乾燥製剤は、１００−３００又は１５０−２５０ｍｇの抗体、１０−２０又は１４−１６ｍｇのヒスチジン、３００−４５０又は３５０−４００ｍｇのスクロース、及び０．５−１．５ｍｇ又は０．７５−１．２５ｍｇのポリソルベート２０を含む。他の凍結乾燥製剤は、１００−３００又は１５０−２５０ｍｇの抗体、１０−２０又は１４−１６ｍｇのヒスチジン、３６０−５００又は４００−４５０ｍｇのトレハロース無水物、及び０．５−１．５ｍｇ又は０．７５−１．２５ｍｇのポリソルベート２０を含む。
【０３１３】
例示的な凍結乾燥製剤は、２００ｍｇの抗体、１５．５ｍｇのヒスチジン、３７６ｍｇのスクロース、及び１ｍｇのポリソルベート２０を含む。別の例示的な凍結乾燥製剤は、２００ｍｇの抗体、１５．５ｍｇのヒスチジン、４１６ｍｇのトレハロース二水和物、及び１ｍｇのポリソルベート２０を含む。いくつかのこのような製剤は、約５ｍＬの体積に再構成することができる。他の凍結乾燥製剤は、この段落に開示されている任意のものと同じ成分を、同じ割合で、しかし異なる量で含む（例えば、４００ｍｇの抗体、３１ｍｇのヒスチジン、７５２ｍｇのスクロース、及び２ｍｇのポリソルベート２０）。
【０３１４】
凍結乾燥製剤は、約３０−５０又は３５−４５ｍｇ／ｍＬ、例えば約４０ｍｇ／ｍＬの抗体濃度；（ｂ）約１０−３０又は１５−２５ｍＭ、例えば約２０ｍＭの濃度で存在するヒスチジンバッファー；（ｃ）約１６０−３３０又は２００−２６０ｍＭ、例えば約２２０ｍＭの濃度で存在するスクロース又はトレハロース；（ｄ）約０．１−０．３又は０．１５−０．２５ｇ／Ｌ、例えば約０．２ｇ／Ｌの濃度で存在するポリソルベート２０；及び（ｅ）約５．５−６．５、例えば約６．０（スクロースが存在する場合）又は６．５（トレハロースが存在する場合）のｐＨに、再構成することができる。
【０３１５】
液体又は再構成された凍結乾燥製剤は、好ましくは実質的に等張であり、これは、約２５０−３５０ｍＯｓｍ／ｋｇ水のオスモル濃度を意味する。いくつかの製剤は、２７０−３００ｍＯｓｍ／ｋｇのオスモル濃度を有する。いくつかの製剤は、約２８７又は約２９５ｍＯｓｍ／ｋｇのオスモル濃度を有する。液体又は再構成された凍結乾燥製剤は、高張（＞３５０ｍＯｓｍ／ｋｇ水）又は低張（＜２５０ｍＯｓｍ／ｋｇ水）であることもできる。
【０３１６】
説明される製剤のうち任意のものは、本明細書で成分であると説明されたもの以外の、医薬添加剤、キャリアなどなしで、作製することができる。このような製剤は、記載された成分から成るものとして説明することができ、又は製剤の特性に影響を及ぼさない、取るに足りないほどの量の他の成分が存在する場合は、記載された成分から本質的に成るものとして説明することができる。製剤は、好ましくは、ヒトに投与するための薬物の調製のための、ＦＤＡによって承認された又は承認可能な優良製造規範（ＧＭＰ）下で作製される。
【０３１７】
本開示は、３８℃−４２℃で、少なくとも約３０日間、少なくとも約３ヶ月、又はそれ以上の期間、（例えば、高性能サイズ排除クロマトグラフィー（ＨＰＳＥＣ）によって評価される）安定性を有する抗体製剤を包含する。このような製剤はまた、２０℃−２４℃で少なくとも約１年間の安定性、及び／又は２℃−４℃で少なくとも約３年間の安定性を有し得る。凍結乾燥製剤の安定性は、凍結乾燥された状態での保存について評価される。製剤は、時間及び温度のこれらの特定の組み合わせのうち１又は複数でインキュベーションした後に、それが低い〜検出不能な断片化及び／又は低い〜検出不能な凝集の以下の定義を満たす場合に、安定性であるとみなされる。より具体的には、開示される製剤は、低いレベル〜検出不能なレベルの抗体凝集及び／又は断片化、又は断片化及び／又は凝集の低い又は検出不能な初期レベルからの増加（例えば、約５％未満の凝集）を示す。低いレベル〜検出不能なレベルの断片化を有する製剤は、総タンパク質の少なくとも約６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９８％、又は９９％を、分解されていない抗体を表す、例えば、疎水性相互作用クロマトグラフィーにより決定される単一のピークに、又は還元キャピラリーゲル電気泳動（ｒＣＧＥ）による２つのピーク（それぞれが、抗体重鎖及び抗体軽鎖のそれぞれに対応する）に含有し、それぞれ総タンパク質の５％超、４％超、３％超、２％超、１％超、又は０．５％超を有する他の単一のピークを含有しない。低いレベル〜検出不能なレベルの凝集を有する製剤は、高性能サイズ排除クロマトグラフィー（ＨＰＳＥＣ）によって測定される、タンパク質質量の約１５％以下、約１０％以下、約５％以下、約４％以下、約３％以下、約２％以下、約１％以下、又は約０．５％以下の凝集を含有する。例えば、いくつかの製剤において、約５％未満の抗体が凝集体として存在する。安定性製剤はまた、例えば、ＥＬＩＳＡ及び／又は追加の機能性アッセイによって測定可能な結合親和性（すなわち、初期の測定可能な値の少なくとも約５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９８％、又は９９％）を有する生物学的活性の損失をほとんど又は全く示さない。
【０３１８】
ＶＩ．  キット
本開示はさらに、本明細書中に開示されるＭＣＡＭ抗体又は他のアンタゴニスト及び使用説明書などの関連資材（例えば、パッケージ挿入物）を含むキット（例えば、容器）を提供する。使用説明書は、例えば、ＭＣＡＭアンタゴニスト及び任意選択的に１又は複数の追加の薬剤の投与のための説明書を含み得る。ＭＣＡＭアンタゴニストの容器は、ユニットドーズ、バルクパッケージ（例えば、マルチドーズパッケージ）、又はサブユニットドーズであってよい。
【０３１９】
パッケージ挿入物は、このような治療用製品の使用に関する適用、使用法、用量、投与、禁忌及び／又は警告に関する情報を含む、治療用製品の市販パッケージに慣例上含まれる説明書を指す。
【０３２０】
キットはまた、注射用静菌水（ＢＷＦＩ）、リン酸緩衝食塩水、リンガー溶液及びデキストロース溶液などの、医薬的に許容されるバッファーを含む第２の容器を含むことができる。それはまた、他のバッファー、希釈剤、フィルター、針、及びシリンジを含む、商業的観点及びユーザの観点から望ましい他の材料を含むことができる。
【０３２１】
上記又は下記に引用される全ての特許出願、ウェブサイト、他の刊行物、受託番号などは、それぞれの個々の項目が、参照によりそれらの全体が全ての目的のために組み込まれることが具体的に且つ個々に示されたのと同じ程度に、参照によりそれらの全体が全ての目的のために組み込まれる。ある配列の異なるバージョンが、異なる時点で、ある１つの受託番号に関連している場合は、本出願の有効な出願日での受託番号に関連するバージョンが意図される。有効な出願日は、該当する場合に受託番号を参照する、実際の出願日又は優先権出願の出願日のうち、早い方を意味する。同様に、刊行物、ウェブサイトなどの異なるバージョンが異なる時点で公開される場合は、特に指示のない限り、本出願の有効な出願日時点で最も最近公開されたバージョンが意図される。本発明の任意の特徴、ステップ、要素、実施形態、又は態様は、他に具体的に指示のない限り、任意の他のものと組み合わせて使用することができる。明確にすること及び理解することを目的として、解説及び例示によって若干詳細に、本発明を説明してきたが、添付の特許請求の範囲内である特定の変更及び改変を実施することができることは明らかであろう。
【実施例】
【０３２２】
材料及び方法
抗体の発生／特徴付け
マウスＭＣＡＭに結合することのできる抗体を発生させるために、マウスＭＣＡＭの細胞外ドメインをヒトＩｇＧに融合させることによってＭＣＡＭ−Ｆｃを発生させ、標準的な技術を使用してＣＨＯ細胞で産生させた。Ｌｏｕ／Ｍラットを、ＣＦＡ中の１００μｇのＭＣＡＭ−Ｆｃタンパク質（１：１体積）で免疫化した。ラットを、不完全フロイントアジュバント（ＩＦＡ）中のＭＣＡＭ−Ｆｃタンパク質（１：１体積）で、２週間間隔で２回追加免疫した。標準的なプロトコルを使用して、免疫化されたラットからハイブリドーマを発生させ、Ｃｌｏｎｅｐｉｘによってクローンを選択した。ＣＨＯ細胞を完全長マウスＭＣＡＭ遺伝子で遺伝子導入し、ネオマイシン及び標準的な技術を使用して、安定な発現について選択した。親のＣＨＯ細胞（ＭＣＡＭネガティブ）を、標準的な技術を使用してカルボキシフルオレセインスクシンイミジルエステル（ＣＦＳＥ）で蛍光標識し、非標識ＭＣＡＭ遺伝子導入ＣＨＯ細胞と１：１の比で混合した。ハイブリドーマ上清をこの細胞混合物とともに３０分間インキュベートし、潜在的なＭＣＡＭ特異的抗体の結合を、蛍光標識された抗ラット二次抗体（Ｊａｃｋｓｏｎ  Ｉｍｍｕｎｏ）を用い、フローサイトメトリーによって検出した。
【０３２３】
ラミニンα４発現細胞株ＷＭ２６６４を添加する前に、ＭＣＡＭ特異的抗体についてポジティブにスクリーニングされたハイブリドーマの上清を、蛍光標識されたマウスＭＣＡＭ−Ｆｃタンパク質（５μｇ／ｍＬ）とともに３０分間プレインキュベートし、ＭＣＡＭ−Ｆｃタンパク質のこの細胞株への結合の中和をフローサイトメトリーによって決定した。
【０３２４】
ヒトＭＣＡＭに結合することのできるラット抗体を発生させるために、ヒトＭＣＡＭの細胞外ドメインをヒトＩｇＧと融合させることによってｈＭＣＡＭ−Ｆｃを発生させ、標準的な技術を使用してＣＨＯ細胞で産生させた。Ｌｏｕ／Ｍラットを、ＣＦＡ中の２５０μｇのｈＭＣＡＭ−Ｆｃタンパク質（１：１体積）で免疫化した。ラットを、不完全フロイントアジュバント（ＩＦＡ）中のｈＭＣＡＭ−Ｆｃタンパク質（１：１体積）で、２週間間隔で２回追加免疫した。標準的なプロトコルを使用して、免疫化されたラットからハイブリドーマを発生させ、Ｃｌｏｎｅｐｉｘによってクローンを選択した。ＣＨＯ細胞を、完全長ヒトＭＣＡＭ遺伝子で遺伝子導入し、ネオマイシン及び標準的な技術を使用して、安定な発現について選択した。親のＣＨＯ細胞（ＭＣＡＭネガティブ）を、標準的な技術を使用してカルボキシフルオレセインスクシンイミジルエステル（ＣＦＳＥ）で蛍光標識し、非標識ヒトＭＣＡＭ遺伝子導入ＣＨＯ細胞と１：１の比で混合した。ハイブリドーマ上清をこの細胞混合物とともに３０分間インキュベートし、潜在的なヒトＭＣＡＭ特異的抗体の結合を、蛍光標識された抗ラット二次抗体（Ｊａｃｋｓｏｎ  Ｉｍｍｕｎｏ）を用い、フローサイトメトリーによって検出した。
【０３２５】
ヒトＭＣＡＭに結合することのできるマウス抗体を発生させるために、ヒトＭＣＡＭの細胞外ドメインをヒトＩｇＧと融合させることによってｈＭＣＡＭ−Ｆｃを発生させ、標準的な技術を使用してＣＨＯ細胞で産生させた。Ｂａｌｂ／ｃマウスを、ＣＦＡ中の５０μｇのｈＭＣＡＭ−Ｆｃタンパク質（１：１体積）で免疫化した。マウスを、不完全フロイントアジュバント（ＩＦＡ）中のｈＭＣＡＭ−Ｆｃタンパク質（１：１体積）で、２週間間隔で２回追加免疫した。標準的なプロトコルを使用して、免疫化されたマウスからハイブリドーマを発生させ、Ｃｌｏｎｅｐｉｘによってクローンを選択した。ＣＨＯ細胞を、完全長ヒトＭＣＡＭ遺伝子で遺伝子導入し、ネオマイシン及び標準的な技術を使用して、安定な発現について選択した。親のＣＨＯ細胞（ＭＣＡＭネガティブ）を、標準的な技術を使用してカルボキシフルオレセインスクシンイミジルエステル（ＣＦＳＥ）で蛍光標識し、非標識ヒトＭＣＡＭ遺伝子導入ＣＨＯ細胞と１：１の比で混合した。ハイブリドーマ上清をこの細胞混合物とともに３０分間インキュベートし、潜在的なヒトＭＣＡＭ特異的抗体の結合を、蛍光標識された抗マウス二次抗体（Ｊａｃｋｓｏｎ  Ｉｍｍｕｎｏ）を用い、フローサイトメトリーによって検出した。
【０３２６】
ラミニンα４発現細胞株ＷＭ２６６４を添加する前に、ヒトＭＣＡＭ特異的抗体についてポジティブにスクリーニングされたハイブリドーマの上清を、蛍光標識されたｈＭＣＡＭ−Ｆｃタンパク質（５μｇ／ｍＬ）とともに３０分間プレインキュベートし、ｈＭＣＡＭ−Ｆｃタンパク質のこの細胞株への結合の中和をフローサイトメトリーによって決定した。
【０３２７】
核酸及びタンパク質操作
【０３２８】
ＣＤＲを決定するために、ＲＮＡｑｕｏｕｓ−４ＰＣＲキット（Ａｍｂｉｏｎ）を使用してハイブリドーマ細胞から全ＲＮＡを単離し、ｃＤＮＡ合成に使用した。得られたｄｓｃＤＮＡの５'末端にライゲーションされたｃＤＮＡアダプタで、Ｍａｒａｔｈｏｎ  ｃＤＮＡ増幅（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ）から改変した方法を使用して、第１及び第２鎖ｃＤＮＡを合成した。重鎖及び軽鎖の両方についての特異的抗体アイソタイプ定常領域配列に基づいて特異的リバースプライマーを設計し、Ｐｆｕ  Ｕｌｔｒａ  ＤＮＡポリメラーゼ（Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ）を使用するＶＬフラグメント及びＶＨフラグメントの両方のＰＣＲ増幅において、アダプタプライマーとともに使用した。増幅されたＰＣＲ産物をｐＣＲ−Ｂｌｕｎｔ−ＴＯＰＯ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）にクローニングし、ヌクレオチド配列を決定した。同定されたクローンの配列を、ＶＬ配列及びＶＨ配列内のパーセント同一性について比較した。
【０３２９】
上清中のＩＬ−１７濃度を決定するために、市販のキット（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ）を使用してＥＬＩＳＡを実施した。
【０３３０】
例１．  抗ＭＣＡＭモノクローナル抗体の発生
ヒトＭＣＡＭタンパク質に対するマウス及びラットモノクローナル抗体を、上記の材料及び方法において説明したように発生させた。ヒトＭＣＡＭで遺伝子導入された細胞に結合するモノクローナル抗体の能力を評価することによって、モノクローナル抗体とヒトＭＣＡＭとの間の特異的結合を確認した。このために、遺伝子導入されていない細胞をカルボキシフルオレセインスクシンイミジルエステル（ＣＦＳＥ）で標識し、非標識ヒトＭＣＡＭ遺伝子導入細胞と混合した。それ故に、遺伝子導入されていない細胞を分化させることができる。
【０３３１】
これらの技術を使用して、８２３の独立したマウス融合クローンを単離し、ヒトＭＣＡＭに結合することのできる抗体を発現することを示した。加えて、１５２の独立したラット融合クローンを単離し、ヒトＭＣＡＭに結合することのできる抗体を発現することを示した。
【０３３２】
次に、抗ヒトＭＣＡＭモノクローナル抗体を使用して、ヒトＭＣＡＭのそのリガンドへの結合をブロックするそれらの能力を試験した。ヒトＭＣＡＭ−Ｆｃタンパク質（５μｇ／ｍＬ）を、アイソタイプ対照抗体、又は１０μｇ／ｍＬの試験モノクローナル抗体とともに、ＰＢＳ中で３０分間プレインキュベートした。この混合物を健康な脊髄組織切片に添加し、それに続いて、上記の材料及び方法において説明したように蛍光顕微鏡法によって特徴付けた。さらに、親のＣＨＯ細胞（ＣＨＯＫ１）又はヒトＭＣＡＭ遺伝子で遺伝子導入されたＣＨＯ細胞を、ＣＨＯ培地（ＤＭＥＭ）、組換えラミニン４１１（１０μｇ／ｍｌ）、又は組換えラミニン５１１（すなわち、ラミニン１０（α５β１γ１））（１０μｇ／ｍｌ）とともに、３７℃で４５分間プレインキュベートした。細胞を洗浄し、ラミニン５１１ではなくラミニン４１１の、ＭＣＡＭへの特異的結合を、ｐａｎ−ラミニン抗体を用いてフローサイトメトリーによって検出した。ラミニンインキュベーションの前の、ヒトＭＣＡＭ遺伝子導入ＣＨＯ細胞の抗ＭＣＡＭ抗体（２０μｇ／ｍｌ）とのプレインキュベーションは、ヒトＭＣＡＭのラミニン４１１への結合を消失させた。
【０３３３】
この技術を使用して、上述の、８２３の独立したマウス融合クローンのうち８７及び１５２の独立したラット融合クローンのうち２６が、ヒトＭＣＡＭタンパク質とそのリガンドであるラミニンのα−４鎖との間の相互作用をブロックすることができた抗体を発現したことが示された。
【０３３４】
例２．  抗ＭＣＡＭモノクローナル抗体のさらなる特徴付け
（ｉ）ヒトＭＣＡＭに結合することができ、且つ（ｉｉ）ヒトＭＣＡＭとラミニンのα−４鎖との間の相互作用をブロックすることができるとして、上記例１において説明される、８７の独立したマウス融合クローン及び２６の独立したラット融合クローンを、以下のようにさらに特徴付けた。最初に、ラミニンのα−４鎖へのヒトＭＣＡＭの結合をブロックするモノクローナル抗体の能力についてのＩＣ５０定量を、以下のように決定した。ヒトＭＣＡＭを発現するＣＨＯ細胞を、（様々な濃度の）抗ヒトＭＣＡＭ抗体とともに、３０分間、４セ氏温度でインキュベートした。次いで、未結合の抗体を洗い流し、細胞を、２０ｕｇ／ｍｌの組換えヒトラミニン４１１とともに、４５分間、３７セ氏温度でインキュベートした。次いで、未結合のラミニンを洗い流し、蛍光標識された抗ラミニン抗体で、細胞の表面に結合したラミニンを検出した。洗浄後、フローサイトメトリーによって、表面に結合したラミニンの量を検出し、平均蛍光強度に基づいてＩＣ５０を計算した。
【０３３５】
上記に説明されるアッセイを使用して、ヒトＭＣＡＭに結合し、細胞の表面上に発現されたヒトＭＣＡＭとその結合リガンドであるヒトラミニン４１１との間の相互作用をブロックする最大の能力を有するものとして、６つの独立した抗ヒトＭＣＡＭモノクローナル抗体クローンを同定した。これらの６つの抗ＭＣＡＭモノクローナル抗体クローンは、本明細書で、（ｉ）マウス抗ヒトＭＣＡＭモノクローナルクローン１１７４．１．３、１４１４．１．２、１４１５．１．１、及び１７４９．１．３、並びに（ｉｉ）ラット抗ヒトＭＣＡＭモノクローナル抗体クローン２１２０．４．１９及び２１０７．４．１０と呼ばれる。これらの抗体の重鎖及び軽鎖、並びにそれらの超可変領域のアミノ酸及び核酸配列は、配列番号：２９−９２に提供される。より具体的には、上記のアッセイにおいて、モノクローナル抗体クローン１１７４．１．３、１４１４．１．２、１４１５．１．１、１７４９．１．３、２１２０．４．１９、及び２１０７．４．１０のＩＣ５０が、それぞれ、０．４６９ｕｇ／ｍｌ、０．４３１ｕｇ／ｍｌ、０．３０７ｕｇ／ｍｌ、０．５４５ｕｇ／ｍｌ、０．８８８ｕｇ／ｍｌ、及び０．２９０ｕｇ／ｍｌであることを決定した。さらに、各モノクローナル抗体の特異的結合親和性を決定するために実施された実験は、それぞれが高い親和性でヒトＭＣＡＭタンパク質に結合することができたことを示した（データは示さず）。このように、これらの特異的モノクローナル抗体のそれぞれは、非常に、ヒトＭＣＡＭに結合することができ、且つ細胞発現ヒトＭＣＡＭとそのα−４ラミニン結合リガンドとの相互作用を阻害することができた。対照的に、２つの対照抗体である、非特異的ヒトＩｇＧ１抗体、及び従来より説明される、ＡＢＸ−ＭＡ１と呼ばれる完全ヒト抗ＭＣＡＭ抗体（例えば、Ｍｉｌｌｓ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．  ６２：５１０６  （２００２）、及び米国特許第６，９２４，３６０号、７，０６７，１３１号、及び７，０９０，８４４号を参照されたい）は、両方とも、ヒトＭＣＡＭとそのラミニン４１１対応物との間の結合相互作用をブロックすることができなかった。このように、上で同定された６つの特異的モノクローナル抗体は、（ｉ）高い親和性で生細胞の表面上のヒトＭＣＡＭに結合し、且つ（ｉｉ）細胞発現ヒトＭＣＡＭと、α−４ラミニンポリペプチド鎖を含むラミニンタンパク質との相互作用をブロックする、新規の能力を保有する。
【０３３６】
例３．  抗ＭＣＡＭモノクローナル抗体のドメイン結合分析
モノクローナル抗体クローン１１７４．１．３、１４１４．１．２、１４１５．１．１、１７４９．１．３、２１２０．４．１９、及び２１０７．４．１０によって認識され結合されるヒトＭＣＡＭタンパク質上の抗原エピトープの位置を決定するために、ＦｏｒｔｅＢｉｏ分析を採用した。以下のプロトコルを使用した：ＦｏｒｔｅＢｉｏ抗ヒトＩｇＧ  Ｆｃバイオセンサーを使用して、完全長ＭＣＡＭｈＦｃタンパク質を含む様々なＭＣＡＭｈＦｃドメインをバイオセンサー表面に固定化した。これらのドメイン又は完全長タンパク質への結合を検出するために、これらのセンサーを、ＭＣＡＭ特異的１１７４．１．３、１４１４．１．２、１４１５．１．１、１７４９．１．３、２１２０．４．１９、又は２１０７．４．１０抗体に浸漬した。これらのサンプルを黒色９６ウェルプレートにローディングした後、Ｏｃｔｅｔ  Ｒｅｄを以下のようにプログラムした：ベースライン＃１について６０秒間；様々なドメインのローディングについて１８０秒間；ベースライン＃２について６０秒間；抗体のドメインへの会合について１８０秒間；及び抗体のドメインからの解離について２４０秒間。
【０３３７】
＜使用した試薬及び備品＞
１．  最終濃度５ｕｇ／ｍｌのＭＣＡＭｈＦｃ
２．  ５ｕｇ／ｍｌの抗体クローン１１７４．１．３、１４１４．１．２、１４１５．１．１、１７４９．１．３、２１２０．４．１９、及び２１０７．４．１０クローン
３．  カイネティクス実験用のＦｏｒｔｅＢｉｏ抗ヒトＩｇＧ  Ｆｃ捕捉（ａｎｔｉ−ｈｕｍａｎ  ＩｇＧ  Ｆｃ  Ｃａｐｔｕｒｅ）（ＡＨＣ）バイオセンサー、ｃａｔ＃  １８−５０６０
４．  Ｇｒｅｉｎｅｒ  Ｂｉｏ−ｏｎｅのブロック９６ウェルプレート、ｃａｔ＃  ６５５２０９
５．  ＦｏｒｔｅＢｉｏ  Ｏｃｔｅｔ  Ｒｅｄの機械
６．  新鮮な組織培地、２０％ＦＣＳを含むＤＭＥＭを、希釈用バッファーとして使用した
【０３３８】
これらの分析の結果は以下のとおりである。
【０３３９】
モノクローナル抗体クローン１１７４．１．３、１４１４．１．２、１４１５．１．１、及び１７４９．１．３は全て、具体的にはヒトＭＣＡＭタンパク質のアミノ酸２４４−３２１（配列番号：２４）によって定められる、ヒトＭＣＡＭタンパク質のドメイン３に見られる抗原性エピトープに結合することが示された。これらのモノクローナル抗体は、ヒトＭＣＡＭドメイン１（すなわちアミノ酸１９−１２９、配列番号：２２）、ドメイン２（すなわちアミノ酸１３９−２４２、配列番号：２３）、又はドメイン１及びドメイン２の組み合わせ（すなわち、アミノ酸１９−２４２）に結合することができなかった。したがって、モノクローナル抗体クローン１１７４．１．３、１４１４．１．２、１４１５．１．１、及び１７４９．１．３は、ヒトＭＣＡＭタンパク質のドメイン３内に位置する新規の抗原性エピトープを定める。
【０３４０】
モノクローナル抗体クローン２１２０．４．１９、及び２１０７．４．１０はそれぞれ、ヒトＭＣＡＭドメイン１（すなわちアミノ酸１９−１２９、配列番号：２２）、及びドメイン２（すなわちアミノ酸１３９−２４２、配列番号：２３）の組み合わせによって定められる抗原性エピトープに結合することが示された。これらの２つのモノクローナル抗体のいずれも、ヒトＭＣＡＭドメイン１単独に結合しなかった。したがって、モノクローナル抗体クローン２１２０．４．１９及び２１０７．４．１０は、ヒトＭＣＡＭタンパク質ドメイン１及び２の両方の存在によって決定される新規の抗原性エピトープを定める。
【０３４１】
上記とは対照的に、従来より説明される完全ヒト抗ＭＣＡＭ抗体ＡＢＸ−ＭＡ１は、上述のものとは異なる抗原性エピトープ、すなわちヒトＭＣＡＭドメイン１内のみで完全に定められ包含される抗原性エピトープに結合する。
【０３４２】
これらの結果を考慮すると、モノクローナル抗体クローン１１７４．１．３、１４１４．１．２、１４１５．１．１、１７４９．１．３、２１２０．４．１９、及び２１０７．４．１０のそれぞれが、（ｉ）ヒトＭＣＡＭに結合することができ、且つ（ｉｉ）ヒトＭＣＡＭとα−４ラミニン含有タンパク質との間の相互作用をブロックすることができるが、一方でＡＢＸ−ＭＡ１抗体は、ヒトＭＣＡＭに結合することができるのみであり、ヒトＭＣＡＭとα−４ラミニン含有タンパク質との間の相互作用をブロックすることができないため、これらの結果は、ヒトＭＣＡＭドメイン２、ヒトＭＣＡＭドメイン３、及びそれらの組み合わせが、α−４ラミニン鎖との結合相互作用において役割を果たすことを実証する。このことを考慮すると、ヒトＭＣＡＭドメイン２、ヒトＭＣＡＭドメイン３、及び／又はそれらの組み合わせに結合する抗体が、ヒトＭＣＡＭとα−４ラミニンとの間の相互作用をブロックすることのできる薬剤としての用途を見出し、そしてこれにより、その相互作用から生じる本明細書に記載される様々な影響を阻害するための用途を見出すだろうということは明らかである。対照的に、ヒトＭＣＡＭドメイン１によってもっぱら定められる抗原性エピトープに結合する抗体（例えば、本明細書に記載されるＡＢＸ−ＭＡ１抗体など）は、ＭＣＡＭ／α−４ラミニン相互作用及びその様々な下流の生物学的影響をブロックするのに有用ではない。
【０３４３】
例４．  ショットガン変異誘発エピトープマッピング
抗ＭＣＡＭ抗体結合について関心の対象となる様々なアミノ酸残基を、ショットガン変異誘発及び高スループット細胞発現技術（これは、真核細胞内での変異された標的タンパク質の大きいライブラリーの発現及び分析を可能にする）を使用して、同定した。ヒトＭＣＡＭタンパク質中の全ての残基を、アラニン、又は他の特定の残基に個々に変異させて、機能の変化をアッセイした。タンパク質を標準的な哺乳動物細胞株内で発現させた。
【０３４４】
表１は、ショットガン変異誘発ライブラリーを発生させるために使用される試薬及び方法の概要を示す。
【表１】
2018530540.tif 000003
【０３４５】
完全長ヒトＭＣＡＭを首尾よくコドン最適化し、合成し、哺乳動物高発現ベクターにサブクローニングした。次いで、この親の構築物を配列確認し、免疫検出法によって哺乳動物細胞発現についての有効性を確認した。
【０３４６】
免疫蛍光法による、ＭＣＡＭに結合する２１２０．４．１９抗体及びマウス血清の検出を、高スループットショットガン変異誘発フォーマット用に首尾よく最適化した。各一次抗体の連続希釈液を、二次抗体の単一の希釈液で、３８４ウェルフォーマットで試験した。ヒトＭＣＡＭを発現する２９３Ｔ及びＢＨＫ細胞の検出について、抗体を試験した。完全な突然変異ライブラリーをスクリーニングするための最適なアッセイ条件を選択した。
【０３４７】
アラニンへ（アラニン残基はセリンへ置換される）又は特定の残基への単一の残基置換をそれぞれ有する、５４５のクローン（５２８／５３６アラニン変異体及び１７／１７部位特異的変異体）から成る、ＭＣＡＭ突然変異ライブラリーを作製し配列確認した。残基３５、６６、１６１、２６１、３４２、３８０、４１４、及び４３５はこのライブラリーにおいて表されていない。この突然変異ライブラリーを、マウス血清への結合について、免疫検出によってトリプリケートでスクリーニングした。これは、各変異体クローンについての細胞表面発現の有効性を確認する。
【０３４８】
マッピングに適切な条件を決定するために、複数ラウンドの最適化を実施した。以下の変数を評価した：複数のラミニン濃度及び抗ラミニン二次抗体濃度、非特異的結合を低減する様々なブロッキングバッファー、複数の細胞タイプ、及び複数の洗浄ステップ。
【０３４９】
突然変異ライブラリーを、２１２０．４．１９抗体への結合について、免疫検出によってトリプリケートでスクリーニングした。各変異体について反応性を定量化し、結合の喪失を示す点変異体を同定した。
【０３５０】
各変異体クローンについて、モノクローナル抗体及び血清反応性を定量化し、表面発現に影響を与えることなく結合の喪失を示す点変異体を同定した。各抗体についての重要残基を、モノクローナル抗体結合プロファイルと、各変異体クローンの血清結合プロファイルとの比較によって同定した。
【０３５１】
３８４ウェルフォーマットにおいて、野生型（ＷＴ）ＭＣＡＭ又はベクター単独のいずれかでＢＨＫ細胞を遺伝子導入し、続いて免疫検出を行った。各抗体の連続希釈液（４μｇ／ｍｌで開始）を、ＷＴ又はベクター単独に対する免疫反応性について試験した（表２）。各ポイントは、４回の反復の平均を表す。
【表２】
2018530540.tif 000004
【０３５２】
２１２０．４．１９及びＭｓ血清の免疫検出及びエピトープマッピングのための最適なスクリーニング条件を決定した。これらの条件を使用して、各抗体は、しっかりとしたシグナル、高いシグナル対バックグラウンド値、及び反復間の低い変動性を示した。これらのデータは、これらの条件が、高スループットエピトープマッピングの成功のために適切であることを示している。２１２０．４．１９について０．２５μｇ／ｍＬ、及びＭｓ血清の１：８００希釈の、最終スクリーニング濃度を使用した。Ｊａｃｋｓｏｎ  ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈの二次抗体を、２１２０．４．１９及び血清検出のために、１：４００で使用した。表３は、高スループット免疫検出用に最適化された実験パラメーターを示す。
【表３】
2018530540.tif 000005
【０３５３】
突然変異ライブラリーを、表面発現（マウス血清結合）及びモノクローナル抗体結合について、トリプリケートでアッセイした。各生データポイントからバックグラウンドを差し引き、野生型ＭＣＡＭ反応性値に対して正規化した。結果を図１に示す。２１２０．４．１９の平均モノクローナル抗体結合値が、その平均表面発現値の関数としてプロットされている（図１、グレーの菱形）。＜３０％のモノクローナル抗体反応性の閾値及び＞５０％のマウス血清結合の閾値を適用して、モノクローナル抗体結合についてネガティブであったが表面発現についてポジティブであったクローン（図１、黒の菱形）を同定した。
各クローンの、その全体の表面発現（平均血清反応性）と比較したときの平均モノクローナル抗体反応性を評価することにより、２１２０．４．１９の重要残基を同定した（表４）。抗体結合に関与する残基を、モノクローナル抗体結合についてネガティブであった（＜３０％ＷＴ）が表面発現についてポジティブであった（＞５０％ＷＴ）ものとして同定した。各重要残基について、平均反応性（及び標準偏差）を示す。
【表４】
2018530540.tif 000006
【０３５４】
ショットガン変異誘発マッピングによって同定された重要アミノ酸は、２１２０．４．１９抗体の結合部位を示唆する。このデータは、２１２０．４．１９が、第２のＩｇドメインに主として結合しながら、コンフォメーション的に複雑なエピトープに結合することを示している。
【０３５５】
重要残基は、第２の及び／又は第３のＩｇドメインのジスルフィド結合によってもたらされる構造的安定化に大きく依存するように見える。２１２０．４．１９への結合は、第２のＩｇドメインのジスルフィド結合したシステイン１６１及び２２３のうち１つ又は両方を含む、重要残基のクラスタによって支持される。
【０３５６】
例５．  抗体及びラミニン結合の確認的ＭＣＡＭエピトープマッピング
ヒトＭＣＡＭ上の２１２０．４．１９の結合部位を同定するために、Ｓｃｈｒｏｄｉｎｇｅｒ  Ｍａｅｓｔｒｏを使用することによって、ヒトＭＣＡＭ  Ｉｇ１及びＩｇ２の相同性モデルを、ヒトＢＣＡＭ  Ｉｇ１及びＩｇ２モデル上に構築した（図２Ａ）。構造情報及びショットガン変異誘発情報に基づく２０の点変異体を設計し発生させた。これらの変異体を哺乳動物細胞上に提示させ、ＦＡＣＳを使用して、２１２０．４．１９及びラミニンα−４のＭＣＡＭ変異体への結合を試験した。３つのＭＣＡＭ単一変異体、Ｉ１４１Ａ、Ｄ２１６Ａ及びＹ３１８Ａは、ラミニンα−４結合の完全な喪失を示した。Ｉ１４１Ａは、２１２０．４．１９結合の完全な喪失を示し、Ｐ１４５Ｖは、２１２０．４．１９結合の顕著な喪失を示した。
【０３５７】
データをさらに確認するために、Ｉ１４１Ａ、Ｐ１４５Ｖ、Ｄ２１６Ａ及びＹ３１８Ａをそれぞれ発現する安定性細胞株を発生させた。ＦｏｒｔｅＢｉｏアッセイを、上述の精製タンパク質で実施した。対照ＡＢＸ−ＭＡ１抗体は、野生型ＭＣＡＭ及びＭＣＡＭ変異体に結合した。２１２０．４．１９は、ＭＣＡＭ  Ｉ１４１Ａ変異体に対し顕著な結合を示さなかった。加えて、２１２０．４．１９は、それぞれＭＣＡＭＰ  １４５Ｖ及びＤ２１６Ａ変異体に対し大幅に低減された結合を示した。また、２１２０．４．１９のＭＣＡＭ変異体Ｐ１４５Ｖへの結合は、迅速なＫ  ｏｆｆを示した。
【０３５８】
例６．  ヒト化抗ＭＣＡＭ２１２０抗体の発生
様々なヒト化抗ＭＣＡＭ抗体を、以下のプロトコルにしたがって発生させた。第１に、ＪＮ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓの専有のアルゴリズムを使用して、可変領域の３次元分子モデルを構築した。第２に、分子モデルを使用して、ＣＤＲ構造の形成に重要な又は抗原への結合に必要なフレームワークアミノ酸残基を同定した。並行して、それぞれＶＨ及びＶＬアミノ酸配列と、高い相同性を有する、ｃＤＮＡ由来のヒトＶＨ及びＶＬアミノ酸配列を選択した。最後に、ＣＤＲ構造又は抗原結合に重要なフレームワークアミノ酸残基とともに、ＣＤＲ配列を、ＶＨ及びＶＬから、対応する選択されたヒトフレームワーク配列に移植した。
【０３５９】
図３は、様々な２１２０重鎖及び軽鎖配列のアラインメントを示す。残基ナンバリングは、Ｋａｂａｔナンバリングに従う。ＣＤＲ形成及び抗原結合に関与するフレームワーク（ＦＲ）アミノ酸残基への異なる突然変異を、抗体のバージョンに応じて同定した。
【０３６０】
図３Ａ（ＣＤＲ−Ｈ１中の（Ｓ３０Ｔ）、ＣＤＲ−Ｈ１とＣＤＲ−Ｈ２との間の（Ｉ３７Ｖ及びＬ４８Ｉ）、及びＣＤＲ−Ｈ２とＣＤＲ−Ｈ３との間の（Ｋ７１Ｒ）囲まれた残基が、ＣＤＲ接触に影響を及ぼし；ＣＤＲ−Ｈ２の後の追加の突然変異（Ｔ６８Ｓ）と組み合わせられたＳ３０Ｔ、Ｉ３７Ｖ、Ｌ４８Ｉ、及びＫ７１Ｒ突然変異が、ＣＤＲ接触に影響を及ぼす）；及び図３Ｂ（ＣＤＲ−Ｌ１とＣＤＲ−Ｌ２との間の（Ｌ４６Ｖ及びＹ４９Ｆ）及びＣＤＲ−Ｌ２とＣＤＲ−Ｌ３との間の（Ｖ５８Ｉ）囲まれた残基が、ＣＤＲ接触に影響を及ぼし；ＣＤＲ−Ｌ１とＣＤＲ−Ｌ２との間の（Ｌ４６Ｖ及びＹ４９Ｆ）囲まれた残基が、ＣＤＲ接触に影響を及ぼし；ＣＤＲ−Ｌ１の前の追加の突然変異（Ｔ２２Ｎ）と組み合わせられたＬ４６Ｖ、Ｙ４９Ｆ、及びＶ５８Ｉ突然変異が、抗体／抗原相互作用に影響を及ぼす）において、２１２０抗体の例示的な突然変異が示される。
【０３６１】
各鎖のいくつかのバージョンを設計した（標準対積極的（ａｇｇｒｅｓｓｉｖｅ）又は保存的（ｃｏｎｓｅｒｖａｔｉｖｅ））。Ｎ−脱アミド化モチーフ（ＮＧ）を含んだこれらの抗体について、アスパラギン又はグリシンへの突然変異を標準バージョンに導入した。様々なヒト化Ｖ領域を異種シグナル配列で合成し、ヒトＣＫ（ＶＬ）又はヒトＩｇＧ１（ＶＨ）を含む発現ベクターにクローニングした。
【０３６２】
ＦｒｅｅＳｔｙｌｅ（商標）ＭＡＸ遺伝子導入試薬（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を用いて、製造者のプロトコルに従って、重鎖及び軽鎖プラスミドを２９３Ｆ細胞に同時遺伝子導入した。発現した抗体を、タンパク質Ａ  ＰｈｙＴｉｐカラム（Ｐｈｙｎｅｘｕｓ）で精製し、ＯＤ２８０で定量化した。
【０３６３】
ヒト化抗体の見かけの親和性を、競合ＥＬＩＳＡにおいて、以下のプロトコルに従って、親のげっ歯類又はキメラ抗体と比較した。
【０３６４】
ＥＬＩＳＡプレートを組換えｈＭＣＡＭ−Ｈｉｓでコーティングし、非特異的結合を防止するためにカゼインバッファーでブロッキングした。ビオチン化されたげっ歯類又はキメラ抗体を、亜飽和の濃度で、３倍増加した濃度の非標識競合物（ヒト化抗体、げっ歯類、又はキメラ）の存在下又は非存在下で、添加した。洗浄して未結合の抗体を除去した後、ストレプトアビジンＨＲＰを添加して、ビオチン化された抗体を検出した。ＥＬＩＳＡをＴＭＢ基質で現像し、ＯＤ４５０を測定した。ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍ５ソフトウェアを使用して、非標識競合物のＩＣ５０を決定した。
【０３６５】
表５は、ヒト化配列の設計をまとめたものである。
【表５】
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【０３６６】
ＦｒｅｅＳｔｙｌｅ（商標）ＭＡＸ遺伝子導入試薬（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を用いて、製造者のプロトコルに従って、重鎖及び軽鎖プラスミドを２９３Ｆ細胞に同時遺伝子導入した。発現した抗体を、タンパク質Ａ  ＰｈｙＴｉｐカラム（Ｐｈｙｎｅｘｕｓ）で精製し、ＯＤ２８０で定量化した。
【０３６７】
ヒト化抗体の見かけの親和性を、競合ＥＬＩＳＡにおいて、以下のプロトコルに従って、親のげっ歯類又はキメラ抗体と比較した：ＥＬＩＳＡプレートを組換えｈＭＣＡＭ−Ｈｉｓでコーティングし、非特異的結合を防止するためにカゼインバッファーでブロッキングした。ビオチン化されたげっ歯類又はキメラ抗体を、亜飽和の濃度で、３倍増加した濃度の非標識競合物（ヒト化抗体、げっ歯類、又はキメラ）の存在下又は非存在下で、添加した。洗浄して未結合の抗体を除去した後、ストレプトアビジンＨＲＰを添加して、ビオチン化された抗体を検出した。ＥＬＩＳＡをＴＭＢ基質で現像し、ＯＤ４５０を測定した。ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍ５ソフトウェアを使用して、非標識競合物のＩＣ５０を決定した。
【０３６８】
ＦｏｒｔｅＢｉｏ  Ｏｃｔｅｔ  Ｒｅｄを使用して親和性を測定した。抗ヒトＦｃセンサーを使用してヒト化抗体を捕捉した。そして、いくつかの濃度のｈＭＣＡＭＨｉｓ分析物を使用し、１：１適合モデルを使用して親和性を決定した。
【０３６９】
抗体の効力を、ラミニン／ＦＡＣＳアッセイにおいて、以下のプロトコルに従って測定した：組換えラミニン４１１（Ｂｉｏｌａｍｉｎａｔｅ）を、様々な濃度のヒト化、げっ歯類、又はキメラ抗体の存在下又は非存在下で、ｈＭＣＡＭ発現ＣＨＯ細胞に添加した。３０−４５分間のインキュベーションに続いて、細胞を洗浄し、ＡＦ６５０にコンジュゲートした抗ラミニン（ＮｏｖｕｓＢｉｏ）を添加して、結合されたラミニンを検出した。細胞をフローサイトメーターに流し、ラミニン結合シグナルを測定した。
【０３７０】
表６は、遺伝子導入に使用された構築物を提供する。
【表６】
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【０３７１】
表７は、特異的遺伝子導入実験を説明する。
【表７】
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【０３７２】
表８は、遺伝子導入の第１ラウンドの、ＦｏｒｔｅＢｉｏ及び競合ＥＬＩＳＡによって測定された、げっ歯類親と比較したヒト化抗体の相対的親和性、並びに発現レベルを示す。
【表８】
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【０３７３】
表９は、遺伝子導入の第２ラウンドの、ＦｏｒｔｅＢｉｏ、競合ＥＬＩＳＡ、及び機能性ブロッキングデータ（ラミニン／ＦＡＣＳアッセイ）によって測定された、げっ歯類親と比較した親和性、並びに発現レベルを示す。
【表９】
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【０３７４】
全体として、このデータは、様々な２１２０ヒト化抗体は、ＦｏｒｔｅＢｉｏによって測定される親和性が＞５倍減少し、ＶＨ５ＶＬ３（Ｇ−Ａ  Ｎ−脱アミド化変異体ＶＨ／保存的ＶＬ）（これは、親和性及び効力が＜２倍減少した）を除きそのほとんどは、競合ＥＬＩＳＡ及びラミニンブロッキングアッセイによって測定される見かけの親和性及び効力が＞２−３倍減少することを実証している。
【０３７５】
ある特定の候補抗体を再発現させて、それらの親和性について、ＦｏｒｔｅＢｉｏ及びそれらのＩＣ５０によって試験した。結果を以下の表１０に示す。
【表１０】
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【０３７６】
＜例７．  ヒト化２１２０抗体の改変＞
【０３７７】
上述のＤＮＡ操作法を利用して、Ｌｉｕ  ｅｔ  ａｌ．  ＪＢＣ．  ２８６：１１２１１−７，  ２０１１に従い、２１２０．４．１９抗体成熟重鎖可変領域のラット及びヒト化バージョンの変異体を構築した。位置Ｈ１（Ｋａｂａｔナンバリング）でグルタミンからグルタミン酸への置換を有する、２１２０．４．１９、ｈ２１２０ＶＨ１、ｈ２１２０ＶＨ２、ｈ２１２０ＶＨ３、ｈ２１２０ＶＨ４、及びｈ２１２０ＶＨ５の変異体を構築した（図４Ａ）。これらの変異体は、２１２０．４．１９．Ｑ１Ｅ、ｈ２１２０ＶＨ１．Ｑ１Ｅ、ｈ２１２０ＶＨ２．Ｑ１Ｅ、ｈ２１２０ＶＨ３．Ｑ１Ｅ、ｈ２１２０ＶＨ４．Ｑ１Ｅ、及びｈ２１２０ＶＨ５．Ｑ１Ｅと呼ばれ、配列番号：１５６−１６１に示される。配列番号：１５７−１６１によって同定されるヒト化バージョンは、図４Ａのアラインメントに示される。様々なラット及びヒト化抗体は、改変された可変重鎖を使用して構築することができ、ｈ２１２０ＶＨ１．Ｑ１Ｅ＋ｈ２１２０ＶＬ１；ｈ２１２０ＶＨ１．Ｑ１Ｅ＋ｈ２１２０ＶＬ２；ｈ２１２０ＶＨ１．Ｑ１Ｅ＋ｈ２１２０ＶＬ３；ｈ２１２０ＶＨ２．Ｑ１Ｅ＋ｈ２１２０ＶＬ１；ｈ２１２０ＶＨ２．Ｑ１Ｅ＋ｈ２１２０ＶＬ２；ｈ２１２０ＶＨ２．Ｑ１Ｅ＋ｈ２１２０ＶＬ３；ｈ２１２０ＶＨ３．Ｑ１Ｅ＋ｈ２１２０ＶＬ１；ｈ２１２０ＶＨ３．Ｑ１Ｅ＋ｈ２１２０ＶＬ２；ｈ２１２０ＶＨ３．Ｑ１Ｅ＋ｈ２１２０ＶＬ３；ｈ２１２０ＶＨ４．Ｑ１Ｅ＋ｈ２１２０ＶＬ１；ｈ２１２０ＶＨ４．Ｑ１Ｅ＋ｈ２１２０ＶＬ２；ｈ２１２０ＶＨ４．Ｑ１Ｅ＋ｈ２１２０ＶＬ３；ｈ２１２０ＶＨ５．Ｑ１Ｅ＋ｈ２１２０ＶＬ１；ｈ２１２０ＶＨ５．Ｑ１Ｅ＋ｈ２１２０ＶＬ２；及びｈ２１２０ＶＨ５．Ｑ１Ｅ＋ｈ２１２０ＶＬ３が含まれる。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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