(57)【要約】  【解決手段】  自己抗体疾患または障害を治療する組成物および方法が開示される。  【選択図】      図１
2018526346.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
それを必要とする被験者の自己免疫疾患または障害を治療、阻害、および／または予防する方法であって、少なくとも１つの抗ＩＤＯ２アプタマーおよび／または抗ＩＤＯ２抗体またはそのフラグメントを前記被験者に投与する工程を有する方法。
【請求項２】
請求項１記載の方法において、前記方法は少なくとも１つの抗ＩＤＯ２抗体またはそのフラグメントを前記被験者に投与する工程を有する方法。
【請求項３】
請求項１記載の方法において、前記自己免疫疾患または障害は抗体分泌により維持される癌である方法。
【請求項４】
請求項１記載の方法において、前記自己免疫疾患または障害は抗体性腫瘍随伴症候群である方法。
【請求項５】
請求項１記載の方法において、前記自己免疫疾患または障害は抗体性炎症疾患である方法。
【請求項６】
請求項１記載の方法において、少なくとも１つの抗ＩＤＯ２アプタマーおよび／または抗ＩＤＯ２抗体またはそのフラグメントと、少なくとも１つの薬学的に許容される担体とを有する組成物を投与する工程を有する方法。
【請求項７】
請求項１記載の方法において、前記抗ＩＤＯ２アプタマーおよび／または抗ＩＤＯ２抗体は配列ＩＤ番号：１に免疫学的に特異的である方法。
【請求項８】
請求項１記載の方法において、前記抗ＩＤＯ２アプタマーおよび／または抗ＩＤＯ２抗体はヒトＩＤＯ２のアミノ酸３３１−３５１に免疫学的に特異的である方法。
【請求項９】
請求項１記載の方法において、前記抗ＩＤＯ２アプタマーおよび／または抗ＩＤＯ２抗体は配列ＩＤ番号：２に免疫学的に特異的である方法。
【請求項１０】
請求項１記載の方法において、前記抗ＩＤＯ２アプタマーおよび／または抗ＩＤＯ２抗体は配列ＩＤ番号：５に免疫学的に特異的である方法。
【請求項１１】
請求項１記載の方法において、前記方法は、さらに、少なくとも１つの抗炎症薬を投与する工程を有する方法。
【請求項１２】
請求項１記載の方法において、前記自己免疫疾患は関節リウマチである方法。
【請求項１３】
請求項３記載の方法において、前記方法は、さらに、少なくとも１つの化学療法剤を投与する工程を有する方法。
【請求項１４】
被験者の自己抗体産生を抑制する方法であって、少なくとも１つの抗ＩＤＯ２アプタマーおよび／または抗ＩＤＯ２抗体またはそのフラグメントを前記被験者に投与する工程を有する方法。
【請求項１５】
請求項１４記載の方法において、前記抗ＩＤＯ２アプタマーおよび／または抗ＩＤＯ２抗体は配列ＩＤ番号：１に免疫学的に特異的である方法。
【請求項１６】
請求項１４記載の方法において、前記抗ＩＤＯ２アプタマーおよび／または抗ＩＤＯ２抗体はヒトＩＤＯ２のアミノ酸３３１−３５１に免疫学的に特異的である方法。
【請求項１７】
請求項１４記載の方法において、前記抗ＩＤＯ２アプタマーおよび／または抗ＩＤＯ２抗体は配列ＩＤ番号：２に免疫学的に特異的である方法。
【請求項１８】
請求項１４記載の方法において、前記抗ＩＤＯ２アプタマーおよび／または抗ＩＤＯ２抗体は配列ＩＤ番号：５に免疫学的に特異的である方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本出願書類は、３５Ｕ．Ｓ．Ｃ．§１１９（ｅ）のもと、２０１５年７月２８日に提出された米国仮特許出願第６２／１９７，９００号の優先権を請求するものである。前述の出願書類は、この参照により本明細書に組み込まれる。
【０００２】
本発明は免疫療法の分野に関する。具体的には、本発明は抗ＩＤＯ２分子の投与により疾患および障害を治療する新規組成物および方法を提供する。
【背景技術】
【０００３】
自己免疫の病原性因子は、依然として、自己免疫疾患に罹患した患者の罹患率および死亡率を低下させることを目的とした研究の重要な焦点である。炎症を軽減または作り変え、自己抗体またはＢ細胞集団を消耗させる治療戦略が探索され、臨床的成功は様々であった（Ｔｏｗｎｓｅｎｄ  ｅｔ  ａｌ．，Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｒｅｖ．（２０１０）２３７：２６４−２８３；Ｈａｒｖｅｙ  ｅｔ  ａｌ．，ＢｉｏＤｒｕｇｓ（２０１３）２７：８５−９５；Ｂｕｃｈ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｎｎ．Ｒｈｅｕｍ．Ｄｉｓ．（２０１１）７０：９０９−９２０）。しかし、自己免疫反応を誘発する根底にあるメカニズムを標的とした新しい戦略は、まだ早急に必要である。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００４】
本発明の１つの観点に従い、それを必要とする被験者の自己抗体関連疾患または障害（例えば、自己免疫疾患）を阻害、治療、および／または予防する方法を提供する。本発明は、被験者における自己抗体産生を抑制する方法も含む。前記方法は、ＩＤＯ２に免疫学的に特異的な、少なくとも１つのアプタマーおよび／または抗体または抗体フラグメントの投与を有する。特定の実施形態では、前記方法がＩＤＯ２に対して免疫学的に特異的な、少なくとも１つのアプタマーおよび／または抗体または抗体フラグメント、および少なくとも１つの薬学的に許容される担体を有する組成物の投与を有する。特定の実施形態では、前記方法がさらに、少なくとも１種類の他の治療薬の投与、またはＩＤＯ２に対して免疫学的に特異的な、少なくとも１つの抗体または抗体フラグメントを同時におよび／または連続的に用い、自己免疫疾患を治療、阻害、または予防する方法を有する。
【０００５】
少なくとも１種類の抗ＩＤＯ２抗体（またはそのフラグメント）および／または抗ＩＤＯ２アプタマーと、少なくとも１種類の薬学的に許容される担体とを有する組成物も提供される。前記方法は、さらに、少なくとも１種類の他の治療薬を有してもよい。
【図面の簡単な説明】
【０００６】
【図１】図１は、対照マウスの抗体または抗ＩＤＯ２抗体処理したマウスの自己抗体分泌細胞数のグラフを示す。グラフは、ｎ＝１３匹の対照Ｉｇ処理マウスおよびｎ＝１１匹の抗ＩＤＯ２  Ｉｇ処理マウスの平均±ＳＥＭを示す。
【図２】図２は、対照マウスの抗体または抗ＩＤＯ２抗体処理したマウスの足関節の厚さ平均のグラフを示す。グラフは、ｎ＝１３匹の対照Ｉｇ処理マウスおよびｎ＝１１匹の抗ＩＤＯ２  Ｉｇ処理マウスの平均±ＳＥＭを示す。
【図３】図３は、対照マウスの抗体または抗ＩＤＯ２抗体処理した野生型（ＫＲＮ．ｇ７）またはＩＤＯ２ノックアウトＫＲＮ．ｇ７（ＩＤＯ２  ｋｏ）マウスの自己抗体分泌細胞数のグラフを示す。グラフは、１回の処理あたりｎ＝６匹のＫＲＮ．ｇ７マウスおよびｎ＝８匹のＩＤＯ２ノックアウトＫＲＮ．ｇ７マウスの平均±ＳＥＭを示す。
【図４】図４は、対照マウスの抗体または抗ＩＤＯ２抗体処理した野生型（ＫＲＮ．ｇ７）またはＩＤＯ２ノックアウトＫＲＮ．ｇ７（ＩＤＯ２  ｋｏ）マウスの足関節の厚さ平均のグラフを示す。グラフは、１回の処理あたりｎ＝６匹のＫＲＮ．ｇ７マウスおよびｎ＝８匹のＩＤＯ２ノックアウトＫＲＮ．ｇ７マウスの平均±ＳＥＭを示す。
【図５】図５は、生後２１日（関節炎前）または生後２８日（関節炎後）における、対照マウス抗体または抗ＩＤＯ２抗体処理した野生型（ＫＲＮ．ｇ７）またはＩＤＯ２ノックアウトＫＲＮ．ｇ７（ＩＤＯ２  ｋｏ）マウスの自己抗体分泌細胞数のグラフを示す。生後６週間で、関節流入領域リンパ節を採取し、Ｅｎｚｙｍｅ−ｌｉｎｋｅｄ  ｉｍｍｕｎｏｓｐｏｔ（ＥＬＩＳｐｏｔ）アッセイにより自己抗体分泌細胞（ＡＳＣｓ）数を分析した。グラフは、ｎ＝１５匹の対照Ｉｇ処理マウス、ｎ＝１１匹の関節炎前抗ＩＤＯ２  Ｉｇ処理マウス、およびｎ＝９匹の関節炎後抗ＩＤＯ２  Ｉｇ処理マウスの平均±ＳＥＭを示す。
【図６】図６は、生後２１日（関節炎前）または生後２８日（関節炎後）における、対照マウスの抗体または抗ＩＤＯ２抗体処理し、関節炎の発症を追跡した野生型（ＫＲＮ．ｇ７）またはＩＤＯ２ノックアウトＫＲＮ．ｇ７（ＩＤＯ２  ｋｏ）マウスの足関節の厚さ平均のグラフを示す。グラフは、ｎ＝９匹の対照Ｉｇ処理マウス、ｎ＝５匹の関節炎前抗ＩＤＯ２  Ｉｇ処理マウス、およびｎ＝９匹の関節炎後抗ＩＤＯ２  Ｉｇ処理マウスの平均±ＳＥＭを示す。
【発明を実施するための形態】
【０００７】
本明細書では、酵素インドールアミン２，３−ジオキシゲナーゼ２（ＩＤＯ２）は抗体産生の促進に関与することが証明される。特に、ＩＤＯ２は関節リウマチ（ＲＡ）の前臨床モデルにおいて自己抗体産生を促進することが証明される。ＲＡマウスモデルへの抗ＩＤＯ２抗体の投与はＩＤＯ２機能を遮断し、疾患を軽減した。実際、抗ＩＤＯ２抗体処理は自己抗体レベルを低下させ、対照抗体を投与したマウスと比較して関節炎の発症を遅らせ全体的重症度を低下させる上で効果的であった。前記抗体の特異性は、ＩＤＯ２が遺伝的に欠失したマウスでは反応がないことで確認された。
【０００８】
抗ＩＤＯ２抗体を使用し、自己抗体産生を抑制し、および／または自己免疫疾患の一般的特徴である、患者自身の組織または細胞に対する抗体（１種類または多種類）（すなわち、自己抗体）の蓄積により引き起こされる、または増悪する疾患または障害を治療することができる。そのような疾患は、抗体を分泌する自己反応性免疫Ｂ細胞の発達が介在する。Ｂ細胞を撲滅し、その作用を鈍化させるアプローチが開発されたが、本発明の抗ＩＤＯ２抗体アプローチを使用することで、自己反応性Ｂ細胞による抗体分泌を制限する独特の方法が提供される。自己免疫性抗体の産生を鈍化することにより、本発明の方法は、開発及び利用することができる疾患特異的アプローチにとって代わることはない。例えば、自己免疫反応により誘導された炎症反応を軽減する治療薬は抗ＩＤＯ２抗体薬と同時投与し、疾患に対して協力的、さらには相乗的作用を提供することができる。したがって、抗ＩＤＯ２抗体治療法はその単純性および汎用性のみならず、その独特のメカニズムおよび他の治療アプローチと併用できる点で重大な利点を提供する。
【０００９】
本発明の別の有益な特徴は、本明細書に示されるｉｎ  ｖｉｖｏ実験で認められるとおり、低毒性または副作用が少ないと予想されることである。特に、ＩＤＯ２が遺伝的に欠失したマウスは正常であり、抗原刺激またはＩｇＧ記憶の形成に対するＢ細胞の反応性が欠如しているなど、明らかな免疫不全症がなく、これは明白に試験されている。したがって、抗ＩＤＯ２抗体技術は自己免疫抗体の産生において異常Ｂ細胞機能を遅らせるが、標準的な抗体負荷後の正常Ｂ細胞機能を混乱させることは示されなかった。
【００１０】
特定のケースでは、抗ＩＤＯ２抗体の適用は、疾患治療が標的を絞ったものではないという側面にもかかわらず、容認性がある他の抗体療法と同等であると考えられる。例には、これに限定されるものではないが、抗体療法の抗ＴＮＦα（インフリキシマブ、アダリムマブ、エタネルセプト）、抗ＣＤ２０（リツキシマブ）、および抗ＢＬｙＳ（ベリムマブ）が含まれ、すべて炎症を鈍化させるか、またはＢ細胞またはＢ細胞機能を根絶する。これらの治療に対する容認性が低い患者では、抗ＩＤＯ２抗体は別の治療オプションを提供する。
【００１１】
本発明は、自己免疫疾患を抑制、予防、および／または治療する組成物および方法を提供する。前記方法は被験者に少なくとも１種類の抗ＩＤＯ２抗体（および／または抗ＩＤＯ２アプタマー（以下参照））を投与する工程を有する。本発明の方法は、さらに、治療される疾患に対する少なくとも１種類の他の治療薬の投与を有する。例えば、前記抗ＩＤＯ２抗体またはアプタマーは、抗炎症薬および／または免疫抑制剤と同時投与してもよい。被験者に投与される薬物は、少なくとも１種類の薬学的に許容される基剤を有する組成物に含まれてもよい。１種類以上の薬物が投与される場合（例えば、抗ＩＤＯ２抗体またはアプタマーと追加治療薬など）、前記薬物は（前後に）連続しておよび／または同時に（併用）投与してもよい。前記薬物は同じ組成物または別の組成物で投与してもよい。
【００１２】
本明細書に用いるとおり、「自己免疫疾患」の用語は、被験者に自己免疫反応（自己抗原に対する免疫反応）があることを指す。自己免疫疾患には、適応免疫系が自己抗原に反応し、細胞および組織の損傷を媒介するなど、自己寛容の破綻により引き起こされる疾患を含む。特定の実施形態では、自己免疫疾患が、少なくとも一部は体液性免疫反応の結果であるとして特徴付けられる。特定の実施形態では、自己免疫疾患がＴ細胞依存性である（例えば、Ｔ細胞が自己抗体の産生を行うＢ細胞を助けるまたはクロストークを行う）。自己免疫疾患の例には、これに限定されるものではないが、急性散在性脳脊髄炎（ＡＤＥＭ）、急性壊死性出血性白質脳炎、アジソン病、無ガンマグロブリン血症、アレルギー性喘息、アレルギー性鼻炎、円形脱毛症、アミロイドーシス、強直性脊椎炎、抗体関連型移植拒絶、抗ＧＢＭ／抗ＴＢＭ腎炎、抗リン脂質症候群（ＡＰＳ）、自己免疫性血管浮腫、自己免疫性再生不良性貧血、自己免疫性自律神経異常症、自己免疫性肝炎、自己免疫性高脂血症、自己免疫性免疫不全、自己免疫性内耳障害（ＡＩＥＤ）、自己免疫性心筋炎、自己免疫性膵炎、自己免疫性網膜症、自己免疫性血小板減少性紫斑病（ＡＴＰ）、自己免疫性甲状腺疾患、自己免疫性蕁麻疹、軸索および神経ニューロパシー、Ｂａｌｏ病、ベーチェット病、水疱性類天疱瘡、心筋症、キャッスルマン病、セリアック病、シャーガス病、慢性疲労症候群、慢性炎症性脱髄性多発神経根筋障害（ＣＩＤＰ）、慢性再発性多発性骨髄炎（ＣＲＭＯ）、チャーグ・ストラウス症候群、瘢痕性類天疱瘡／良性粘膜類天疱瘡、クローン病、コーガン症候群、寒冷凝集素症、先天性心ブロック、コクサッキー心筋炎、ＣＲＥＳＴ病、本態性混合型クリオグロブリン血症、脱髄性ニューロパシー、疱疹状皮膚炎、皮膚筋炎、ドゥヴィック病（視神経脊髄炎）、円板状ループス、ドレスラー症候群、子宮内膜症、好酸球性筋膜炎、結節性紅斑、実験的アレルギー性脳脊髄炎、エバンズ症候群、筋線維痛、線維化性肺胞炎、巨細胞動脈炎（側頭動脈炎）、糸球体腎炎、グッドパスチャー症候群、多発性血管炎を伴う肉芽腫症（ＧＰＡ）、グレーブス病、ギラン・バレー症候群、橋本脳症、橋本甲状腺炎、溶血性貧血、ヘノッホ・シェンライン紫斑病、妊娠ヘルペス、低ガンマグロブリン症、高ガンマグロブリン血症、特発性血小板減少性紫斑病（ＩＴＰ）、ＩｇＡ腎症、ＩｇＧ４関連硬化性疾患、免疫調節性脂肪肉腫、封入体筋炎、炎症性腸疾患、インスリン依存性糖尿病（１型）、間質性膀胱炎、若年性関節炎、若年性糖尿病、川崎症候群、ランバート・イートン症候群、白血球破砕性血管炎、扁平苔癬、硬化性苔癬、木質性結膜炎、リニアＩｇＡ病（ＬＡＤ）、ループス（ＳＬＥ）、ライム病、メニエール病、顕微鏡的多発性血管炎、混合性結合組織病（ＭＣＴＤ）、モノクローナル高γグロブリン血症、重症度不明（ＭＧＵＳ）、モーレン潰瘍、ムーシャ・ハーベルマン病、多発性硬化症、重症筋無力症、筋炎、ナルコレプシー、視神経脊髄炎（デビック病）、好中球減少症、眼瘢痕性類天疱瘡、視神経炎、回帰性リウマチ、ＰＡＮＤＡＳ（小児自己免疫性溶連菌感染関連性神経精神障害）、腫瘍随伴性小脳変性症、腫瘍随伴性神経学的症候群、発作性���間ヘモグロビン尿症（ＰＮＨ）、Ｐａｒｒｙ  Ｒｏｍｂｅｒｇ症候群、Ｐａｒｓｏｎｎａｇｅ−Ｔｕｒｎｅｒ症候群、扁平部炎（周辺部ブドウ膜炎）、天疱瘡（尋常性天疱瘡）、末梢性ニューロパシー、静脈周囲脳脊髄炎、悪性貧血、ＰＯＥＭＳ症候群、結節性多発動脈炎、多腺性自己免疫性症候群１、２、および３型、リウマチ性多発筋痛、多発性筋炎、心筋梗塞後症候群、心膜切除術後症候群、プロゲステロン皮膚炎、原発性胆汁性肝硬変、原発性硬化性胆管炎、乾癬、乾癬性関節炎、特発性肺線維症、壊疽性膿皮症、真性赤血球無形成症、レイノー現象、反射性交感神経性ジストロフィー、ライター症候群、再発性多発性軟骨炎、下肢静止不能症候群、後腹膜線維化症、リウマチ熱、関節リウマチ、サルコイドーシス、シュミット症候群、強膜炎、強皮症、シェーグレン症候群、精子および睾丸自己免疫性、スティッフパーソン症候群、亜急性細菌性心内膜炎（ＳＢＥ）、スザック症候群、交感性眼炎、高安動脈炎、側頭動脈炎／巨細胞性動脈炎、血小板減少性紫斑病（ＴＴＰ）、トローザ・ハント症候群、横断性脊髄炎、潰瘍性大腸炎、未分化結合組織疾患（ＵＣＴＤ）、ブドウ膜炎、血管炎、小水疱水疱性皮膚病、白斑、ワルデンシュトレーム型マクログロブリン血症（ＷＭ）、およびヴェゲナー肉芽腫症（多発性血管炎を伴う肉芽腫症（ＧＰＡ））を含む。特定の実施形態では、前記自己免疫疾患が関節リウマチ、１型糖尿病、全身性エリテマトーデス、重症筋無力症、多発性硬化症、強皮症、アジソン病、水疱性類天疱瘡、尋常性天疱瘡、ギラン・バレー症候群、シェーグレン症候群、皮膚筋炎、血栓性血小板減少性紫斑病、モノクローナル高γグロブリン血症、重症度不明、ワルデンストローム・マクログロブリン血症、慢性炎症性脱髄性多発根ニューロパチー、橋本脳症、橋本甲状腺炎、グレーブス病、ヴェゲナー肉芽腫症、および抗体関連型移植拒絶から成る群から選択される。特定の実施形態では、前記自己免疫疾患が関節リウマチである。自己免疫疾患が関節リウマチである場合、本発明の方法は、さらに、少なくとも１種類の他の関節治療（抗炎症療法（例えば、メトトレキサート）、Ｂ細胞除去療法、および／またはＩＤＯ経路の小分子阻害薬（例えば、１−メチル−トリプトファン）など）を有してもよい。
【００１３】
本発明は、抗体分泌により維持される癌（例えば、血腫（例えば、多発性骨髄腫）または固形腫瘍（例えば、抗体分泌が支持的炎症過程に寄与する場合）（例えば、扁平上皮癌（ＳＣＣ）（Ａｆｆａｒａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ  Ｃｅｌｌ（２０１４）２５（６）：８０９−８２１）を抑制、予防、および／または治療する組成物および方法を提供する。前記方法は、少なくとも１種類の抗ＩＤＯ２抗体を被験者に投与する工程を有する。本発明の方法は、さらに、治療される癌に対する少なくとも１種類の他の治療薬の投与を有する。例えば、前記方法は、さらに、少なくとも１種類の化学療法薬の投与および／または抗癌治療（例えば、放射線療法および／または癌細胞または腫瘍を除去する手術（例えば、切除）を有する。被験者に投与される薬物は、少なくとも１種類の薬学的に許容される基剤を有する組成物に含まれてもよい。１種類以上の薬物が投与される場合（例えば、抗ＩＤＯ２抗体と追加化学療法薬など）、前記薬物は（前後に）連続しておよび／または同時に（併用）投与してもよい。前記薬物は同じ組成物または別の組成物で投与してもよい。
【００１４】
本発明は、抗体関連型腫瘍随伴症候群を抑制、予防、および／または治療する組成物および方法を提供する。腫瘍随伴症候群は癌と関連するが、直接の浸潤、転移、または治療の結果により生じるものではない障害である。前記方法は、少なくとも１種類の抗ＩＤＯ２抗体を被験者に投与する工程を有する。抗体関連型腫瘍随伴症候群の例には、これに限定されるものではないが、（例えば、乳癌の）スティッフパーソン症候群、（例えば、乳癌の）皮膚筋炎、（例えば、乳癌の）眼球クローヌス・ミオクローヌス、（例えば、肺癌の）末梢脳脊髄炎、および（例えば、肺癌の）網膜症を含む。本発明の方法は、さらに、治療される腫瘍随伴症候群または癌に対する少なくとも１種類の他の治療薬の投与を有する。例えば、前記方法は、さらに、少なくとも１種類の他の治療薬の投与を有する。被験者に投与される薬物は、少なくとも１種類の薬学的に許容される基剤を有する組成物に含まれてもよい。１種類以上の薬物が投与される場合（例えば、抗ＩＤＯ２抗体と追加治療薬など）、前記薬物は（前後に）連続しておよび／または同時に（併用）投与してもよい。前記薬物は同じ組成物または別の組成物で投与してもよい。
【００１５】
本発明は、抗体関連型炎症性疾患を抑制、予防、および／または治療する組成物および方法を提供する。前記方法は、少なくとも１種類の抗ＩＤＯ２抗体を被験者に投与する工程を有する。抗体関連型炎症性疾患の例は、これに限定されるものではないが、アレルギー反応、セリアック病、クローン病、炎症性腸疾患、関節リウマチ、全身性エリテマトーデス、重症筋無力症、強皮症、１型糖尿病、モノクローナル高γグロブリン血症、重症度不明（ＭＧＵＳ）、シェーグレン症候群、ワルデンストレームマクログロブリン血症、および橋本甲状腺炎を含む。本発明の方法は、さらに、治療される炎症性疾患に対する少なくとも１種類の他の治療薬の投与を有する。例えば、前記方法は、さらに、少なくとも１種類の他の抗炎症薬の投与を有する。被験者に投与される薬物は、少なくとも１種類の薬学的に許容される基剤を有する組成物に含まれてもよい。１種類以上の薬物が投与される場合（例えば、抗ＩＤＯ２抗体と追加治療薬など）、前記薬物は（前後に）連続しておよび／または同時に（併用）投与してもよい。前記薬物は同じ組成物または別の組成物で投与してもよい。
【００１６】
本明細書で上述のとおり、本発明の方法（および組成物）は、被験者に対してＩＤＯ２（インドールアミン２，３−ジオキシゲナーゼ２、抗ＩＤＯ２抗体）に免疫学的に特異的な少なくとも１種類の抗体または抗体フラグメントを投与する工程を有する。特定の実施形態では、前記抗ＩＤＯ２抗体がヒトＩＤＯ２に免疫学的に特異的である。特定の実施形態では、ＩＤＯ１を除き、抗ＩＤＯ２抗体がヒトＩＤＯ２に免疫学的に特異的である。ヒトＩＤＯ２およびそのイソ型／変異型のアミノ酸およびヌクレオチド配列は、ＧｅｎＢａｎｋ遺伝子ＩＤ番号：１６９３５５およびＧｅｎＢａｎｋ受入番号ＮＭ＿１９４２９４．２およびＮＰ＿９１９２７０．２で提供される。ヒトＩＤＯ２の典型的なアミノ酸配列（例えば、４２０アミノ酸）は、
１  ＭＬＨＦＨＹＹＤＴＳ  ＮＫＩＭＥＰＨＲＰＮ  ＶＫＴＡＶＰＬＳＬＥ  ＳＹＨＩＳＥＥＹＧＦ  ＬＬＰＤＳＬＫＥＬＰ
５１  ＤＨＹＲＰＷＭＥＩＡ  ＮＫＬＰＱＬＩＤＡＨ  ＱＬＱＡＨＶＤＫＭＰ  ＬＬＳＣＱＦＬＫＧＨ  ＲＥＱＲＬＡＨＬＶＬ
１０１  ＳＦＬＴＭＧＹＶＷＱ  ＥＧＥＡＱＰＡＥＶＬ  ＰＲＮＬＡＬＰＦＶＥ  ＶＳＲＮＬＧＬＰＰＩ  ＬＶＨＳＤＬＶＬＴＮ
１５１  ＷＴＫＫＤＰＤＧＦＬ  ＥＩＧＮＬＥＴＩＩＳ  ＦＰＧＧＥＳＬＨＧＦ  ＩＬＶＴＡＬＶＥＫＥ  ＡＶＰＧＩＫＡＬＶＱ
２０１  ＡＴＮＡＩＬＱＰＮＱ  ＥＡＬＬＱＡＬＱＲＬ  ＲＬＳＩＱＤＩＴＫＴ  ＬＧＱＭＨＤＹＶＤＰ  ＤＩＦＹＡＧＩＲＩＦ
２５１  ＬＳＧＷＫＤＮＰＡＭ  ＰＡＧＬＭＹＥＧＶＳ  ＱＥＰＬＫＹＳＧＧＳ  ＡＡＱＳＴＶＬＨＡＦ  ＤＥＦＬＧＩＲＨＳＫ
３０１  ＥＳＧＤＦＬＹＲＭＲ  ＤＹＭＰＰＳＨＫＡＦ  ＩＥＤＩＨＳＡＰＳＬ  ＲＤＹＩＬＳＳＧＱＤ  ＨＬＬＴＡＹＮＱＣＶ
３５１  ＱＡＬＡＥＬＲＳＹＨ  ＩＴＭＶＴＫＹＬＩＴ  ＡＡＡＫＡＫＨＧＫＰ  ＮＨＬＰＧＰＰＱＡＬ  ＫＤＲＧＴＧＧＴＡＶ
４０１  ＭＳＦＬＫＳＶＲＤＫ  ＴＬＥＳＩＬＨＰＲＧ（配列ＩＤ番号：１）である。
特定の実施形態では、ＩＤＯ２のアミノ酸配列が、配列ＩＤ番号：１と少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９７％、９９％、または１００％の相同性または同一性を有する。
【００１７】
特定の実施形態では、前記抗ＩＤＯ２抗体が、マウスＩＤＯ２エピトープＲＤＹＩＬＡＳＧＰＧＤＣＬＭＡＹＮＱＣＶＥ（配列ＩＤ番号：２）を認識するか、または免疫学的に特異的である。実施例で使用される抗ＩＤＯ２抗体は、このエピトープを認識する。特定の実施形態では、軽鎖（リーダー配列、可変領域、Ｊ）のアミノ酸配列は、
１  ＭＳＶＬＴＱＶＬＡＬ  ＬＬＬＷＬＴＧＡＲＣ  ＤＩＱＭＴＱＳＰＡＳ  ＬＳＡＳＶＧＥＴＶＴ  ＩＴＣＲＡＳＥＮＩＨ
５１  ＮＹＬＡＷＹＱＱＫＱ  ＧＫＳＰＱＬＬＶＹＮ  ＰＫＮＬＡＤＧＶＰＳ  ＲＦＳＧＳＧＳＧＴＱ  ＹＳＬＮＩＮＳＬＱＰ
１０１  ＥＤＦＧＴＹＹＣＱＨ  ＦＷＮＴＰＰＴＦＧＧ  ＧＴＲＬＥＩＫＲ（配列ＩＤ番号：３）である。
特定の実施形態では、重鎖（リーダー配列、可変領域、Ｄ、Ｊ）のアミノ酸配列は、
１  ＭＳＳＰＱＴＬＮＴＬ  ＴＬＴＭＧＷＳＷＩＦ  ＬＦＬＬＳＧＴＡＧＶ  ＬＳＥＶＱＬＱＱＳＧ  ＰＥＬＶＫＰＧＡＳＶ
５１  ＱＩＳＣＫＴＳＧＹＴ  ＦＴＥＹＴＭＨＷＶＫ  ＱＳＨＧＫＳＬＥＷＬ  ＧＩＩＨＰＤＮＧＩＴ  ＲＹＮＱＫＦＫＡＫＡ
１０１  ＴＬＴＥＤＫＳＳＲＴ  ＡＹＭＥＬＲＳＬＴＳ  ＥＤＳＡＶＹＹＣＡＲ  ＲＹＹＧＮＦＤＹＡＬ  ＤＹＷＧＱＧＴＳＶＴ
１５１  ＶＳＳ（配列ＩＤ番号：４）である。
本発明の抗体および抗体フラグメントは、上述の抗ＩＤＯ２モノクローナル抗体から少なくとも１つのドメインを有してもよい。例えば、前記抗体または抗体フラグメントは、上述の抗ＩＤＯ２モノクローナル抗体の少なくとも１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、または６つすべてのＣＤＲドメインを有してもよい。特定の実施形態では、前記抗体または抗体フラグメントが前記ＣＤＲ３ドメインの少なくとも一方または両方を有する。特定の実施形態では、前記抗体または抗体フラグメントのドメインが、抗ＩＤＯ２モノクローナル抗体に存在するドメインまたは配列ＩＤ番号３および／または４と少なくとも９０％、９５％、９７％、９９％、または１００％の相同性を有するか、または同一性を有する。
【００１８】
特定の実施形態では、前記抗ＩＤＯ２抗体が、ヒトＩＤＯ２のアミノ酸３３１−３５１（ＲＤＹＩＬＳＳＧＱＤＨＬＬＴＡＹＮＱＣＶＱ；配列ＩＤ番号：５）を認識するか、または免疫学的に特異的である。
【００１９】
本発明の抗体は、天然であるか、合成であるか、または修飾したものであってもよい（例えば、組み換え技術により作られた抗体、キメラ抗体、二重特異性抗体、ヒト化抗体、ラクダ科抗体など）。前記抗体は、少なくとも１種類の精製タグを有してもよい。特定の実施形態では、前記抗体が抗体フラグメントである。抗体フラグメントには、これに限定されるものではないが、単一ドメイン（Ｄａｂ、例えば、単鎖可変軽鎖または重鎖ドメイン）、Ｆａｂ、Ｆａｂ'、Ｆ（ａｂ'）２、およびＦ（ｖ）を含む免疫グロブリンフラグメント；およびこれに限定されるものではないが、ｓｃＦｖ、ｓｃＦｖ２、ｓｃＦｖ−Ｆｃ、ｍｉｎｉｂｏｄｙ、ｄｉａｂｏｄｙ、ｔｒｉａｂｏｄｙ、およびｔｅｔｒａｂｏｄｙを含むこれらの免疫グロブリンフラグメントの（例えばリンカーを介した）融合体を含む。前記抗体は、少なくとも１種類の抗体または抗体フラグメントを有するタンパク質（例えば、融合タンパク質）としてもよい。本発明の特定の実施形態では、前記抗体がＦｃ領域を有する。本発明の特定の実施形態では、前記抗体がモノクローナル抗体を有する。
【００２０】
特に、ＩＤＯ２は、細胞表面タンパク質、リガンド、または受容体ではなく、細胞内タンパク質である。したがって、前記抗ＩＤＯ２抗体は前記Ｆｃ受容体から細胞に入ることができる。この進入メカニズムでは、前記Ｆｃ受容体を発現した細胞のみが抗ＩＤＯ２抗体に感受性を持つため、毒性または副作用が軽減される。したがって、本発明の特定の実施形態では、前記抗ＩＤＯ２抗体フラグメントがＦｃ領域を有する。特定の実施形態では、特に前記抗体フラグメントがＦｃ領域を含まない場合、前記抗体またはそのフラグメントが細胞貫通ペプチドと結合または連結する。
【００２１】
また本発明は、免疫グロブリンを模倣した合成タンパク質も含む。例には、これに限定されるものではないが、Ａｆｆｉｂｏｄｙ（商標）分子（Ａｆｆｉｂｏｄｙ、Ｂｒｏｍｍａ、Ｓｗｅｄｅｎ）、ｄａｒｐｉｎｓ（設計されたアンキリン反復タンパク質、Ｋａｗｅ  ｅｔ  ａｌ．（２００６）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２８１：４０２５２−４０２６３）、およびｐｅｐｔａｂｏｄｉｅｓ（Ｔｅｒｓｋｉｋｈ  ｅｔ  ａｌ．（１９９７）ＰＮＡＳ  ９４：１６６３−１６６８）を含む。
【００２２】
本発明の抗体は、さらに修飾されていてもよい。例えば、前記抗体はヒト化してもよい。特定の実施形態では、前記ハイブリッド抗体（またはその一部）が抗体または抗体フラグメント定数の骨格に挿入される。例えば、本発明の抗体の前記可変軽鎖ドメインおよび／または可変重鎖ドメインを別の抗体構成に挿入してもよい。組み換え技術により抗体を生成する方法は、当該分野で周知である。実際、特定の抗体および抗体フラグメント構成には市販のベクターが利用できる。
【００２３】
本発明の抗体は、他の成分と結合／連結していてもよい。例えば、前記抗体は、少なくとも１種類の検出剤、画像化剤、造影剤、または治療用化合物（例えば、上記参照）と操作により結合してもよい（例えば、選択的にリンカーを介した共有結合）。本発明の抗体は、少なくとも１種類の精製タグ（例えば、Ｈｉｓタグ）を有してもよい。
【００２４】
本発明の抗体分子は、当該分野で既知の様々な方法により調製可能である。ポリクローナルおよびモノクローナル抗体は、Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ａｕｓｕｂｅｌ  ｅｔ  ａｌ．ｅｄｓ．に説明されたとおり調整可能である。抗体は化学的架橋、ハイブリッドハイブリドーマ技術、および細菌または酵母細胞などの宿主細胞に発現された組み換え抗体フラグメントの発現により調整可能である。本発明の１つの実施形態では、前記抗体分子が、宿主細胞で組み換え抗体または抗体フラグメントを発現することにより生成される。前記抗体をコードした核酸分子は、発現ベクターに挿入されるか、宿主細胞に導入されてもよい。次に、得られた抗体分子を単離し、発現系から精製する。前記抗体は、選択的に精製タグを有し、これにより前記抗体を精製することができる。
【００２５】
本発明の抗体分子の純度は、当業者に既知の標準的方法により評価することができ、これに限定されるものではないが、ＥＬＩＳＡ、免疫組織化学検査、イオン交換クロマトグラフィー、アフィニティークロマトグラフィー、固定化金属イオンアフィニティークロマトグラフィー（ＩＭＡＣ）、サイズ交換クロマトグラフィー、ポリアクリルアミドゲル電気泳動（ＰＡＧＥ）、ウェスタンブロッティング、表面プラスモン共鳴および質量分析を含む。
【００２６】
少なくとも１種類の抗ＩＤＯ２抗体を有する組成物も本発明に含まれる。特定の実施形態では、前記組成物は、少なくとも１つの抗ＩＤＯ２抗体または抗体フラグメントおよび少なくとも１つの薬学的に許容される担体を有する。前記組成物は、さらに、治療される疾患または障害を阻害、治療、および／または予防する、少なくとも１種類の他の治療用化合物を有してもよい（例えば、上記参照）。代わりに、少なくとも１種類の他の治療用化合物は、少なくとも１種類の薬学的に許容される担体とは別の組成物に含まれてもよい。また本発明は、少なくとも１種類の抗ＩＤＯ２抗体または抗体フラグメントを有する第１の組成物、および治療される疾患または障害を阻害、治療、および／または予防する、少なくとも１種類の他の治療用化合物を有する第２の組成物を有するキットを含む。前記第１および第２の組成物は、さらに、少なくとも１種類の薬学的に許容される担体を有する。
【００２７】
上記に説明したとおり、本発明の組成物は、自己抗体関連疾患または障害の治療に有用である。前記組成物の治療有効量は、前記被験者に投与されてもよい。用量、方法、および投与時間は、本明細書に提供された教示を考え、当業者が容易に決定することができる。
【００２８】
本明細書で説明された抗体は、薬学的製剤として患者に投与される。本明細書で使用する「患者」の用語は、ヒトまたは動物被験者を指す。これらの抗体は、指示された疾患または障害の治療を目的とした医師のガイドラインのもと、治療に利用してもよい。
【００２９】
本発明の抗体分子を有する薬学的製剤は、水、緩衝食塩水、エタノール、ポリオール（例えば、グリセロール、プロピレングリコール、液体ポリエチレングリコールなど）、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）、オイル、界面活性剤、懸濁剤、またはその適切な混合物など、許容できる媒体（例えば、薬学的に許容される担体）を投与するため、都合よく製剤化してもよい。選択した媒体中の薬物濃度は変化する可能性があり、前記媒体は前記薬学的製剤の望みの投与経路により選択することができる。従来の媒体または薬物が投与される薬物と適合しない場合を除き、前記薬学的製剤での使用は検討される。
【００３０】
特定患者への投与に適した本発明の抗体の用量および投与方法は、前記抗体が投与される患者の年齢、性別、体重、全身の医学的状態、および特定の状態およびその重症度を考慮し、医師が決定することができる。前記医師は、前記抗体の投与経路、前記抗体と併用される薬学的担体、および前記抗体の生物学的活性を検討してもよい。
【００３１】
適切な薬学的製剤の選択は、選択された投与方法によって決まる。例えば、本発明の抗体は、望みの組織またはその周辺領域に直接注射することにより投与してもよい。この場合、薬学的製剤は、標的組織と適合する媒体に分散された抗体分子を有する。
【００３２】
また、抗体は非経口的に、血流への静注、または皮下、筋肉内、または腹腔内注射により投与してもよい。非経口注射用の薬学的製剤は当該分野で既知である。非経口注射が前記抗体の投与方法として選択される場合、確実に十分な量の分子が標的細胞に到達し、生物学的作用を発揮するような手順をとる必要がある。前記抗体の親油性、または送達される薬学的製剤は、前記分子が標的部位に到達することができるように、増量する必要がある。さらに、十分な数の分子が前記標的細胞に到達するように、前記抗体は細胞を標的とする担体で送達する必要がある。分子の親油性を上昇させる方法は当該分野で既知である。これに限定されるものではないが、Ｆａｂフラグメント、Ｄａｂ、ｓｃＦｖ、またはｄｉａｂｏｄｙを含む小分子の形態の前記抗体を投与する場合、これに限定されるものではないが、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）またはアルブミン結合抗体またはペプチドなどの第２の（担体）分子に結合し、血中での保持時間を延長してもよい。
【００３３】
薬学的担体との密接な混合物に活性成分として本発明の化合物を含む薬学的組成物は、従来の薬学的配合技術により調整可能である。前記担体は、例えば、静脈内、経口、または非経口など、投与に望ましい製剤形態により、様々な形態をとることができる。経口投与剤形での前記抗体の調製では、例えば、（例えば、懸濁液、エリキシル剤、および液剤などの）経口液体製剤の場合は水、グリコール、オイル、アルコール、香料、保存料、着色料など；または（例えば、粉末、カプセル、および錠剤などの）経口固体製剤の場合はデンプン、糖、希釈剤、造粒剤、潤滑剤、結合剤、崩壊剤などの担体など、有用な薬学的媒体をすべて利用することができる。投与が簡便であるため、錠剤およびカプセルは症例で固体薬学的担体が明らかに利用される、最も有利な経口投与担体である。望ましい場合、錠剤は標準的な技術により糖コーティングまたは腸溶性コーティングとすることができる。非経口投与では、前記担体は、通常、例えば溶解を助けるため、または保存の目的で、他の成分を介して滅菌水を有する。注射可能な懸濁液を調整することもでき、この場合、適切な液体担体、懸濁剤などを利用することができる。
【００３４】
本発明の薬学的製剤は、投与を簡便にし、用量を均一とするため、投与量単位で製剤化することができる。本明細書で用いる投与量の単位形態は、治療を受ける患者に適した薬学的製剤の物理学的な離散単位を指す。各投与量は、選択された薬学的担体と関連した望みの作用を生じるために計算された量の活性成分を含む必要がある。適切な投与量単位を決定する方法は、当業者に周知である。
【００３５】
投与量単位は患者の体重に比例して増減してもよい。特定の病的状態を軽減するために適した濃度は、当該分野で周知の投与量濃度曲線の計算から決定することができる。
【００３６】
本発明によれば、抗ＩＤＯ２抗体分子の投与に適した投与量単位は、動物モデルにおける抗体分子の毒性評価により決定することができる。様々な濃度の抗体薬学的製剤を前記疾患または障害のマウスモデルに投与することができ、最少および最大投与量は前記結果および治療結果としての副作用に基づき決定することができる。適切な投与量単位は、他の標準的薬物と併用した前記抗体分子投与の有効性を評価することでも決定可能である。抗ＩＤＯ２抗体分子の投与量単位は、個々にまたは他の治療との併用で決定することができる。
【００３７】
前記抗ＩＤＯ２抗体を有する薬学的製剤は、前記病的症状が軽減または改善するまで、適切な間隔、例えば、少なくとも１日２回以上で投与することができ、この後前記投与量を維持用量まで減量することができる。特定の症例において適切な間隔は、通常、患者の状態に依存する。
【００３８】
本発明の方法はさらに、本発明の組成物を投与後、前記被験者の疾患または障害をモニタリングし、前記方法の有効性をモニタリングする工程を有する。
【００３９】
前記用途は本明細書で上述の抗ＩＤＯ２抗体の使用について説明しているが、本発明は抗ＩＤＯ２アプタマー、特に抗ＩＤＯ２核酸アプタマーの使用も含む。すなわち、本発明の方法および組成物中の前記抗ＩＤＯ２抗体は、抗ＩＤＯ２アプタマーと置換または併用することができる。特定の実施形態では、前記抗ＩＤＯ２アプタマーがヒトＩＤＯ２（ＲＤＹＩＬＳＳＧＱＤＨＬＬＴＡＹＮＱＣＶＱ；配列ＩＤ番号：５）のアミノ酸３３１−３５１を認識するか、特異的に結合する。
【００４０】
本明細書で使用するとおり、「アプタマー」の用語は特異的標的分子に結合する分子（例えば、オリゴヌクレオチドまたはペプチド）を指す。特定の実施形態では、前記アプタマーが、ワトソン・クリック塩基対以外の相互作用によりタンパク質などの標的に特異的に結合する核酸である。特定の実施形態では、サンプル中の他の分子が全般的に排除されるまで、前記アプタマーが１もしくはそれ以上の標的（例えば、タンパク質またはタンパク質複合体）に特異的に結合する。前記アプタマーは、ＲＮＡ、ＤＮＡ、修飾核酸、またはその混合物などの核酸としてもよい。前記アプタマーは線形または円形の核酸としてもよく、一本鎖または二本鎖としてもよい。前記アプタマーは、少なくとも５、少なくとも１０、少なくとも１５、少なくとも２０、少なくとも２５、少なくとも３０、少なくとも３５、少なくとも４０、またはそれ以上のヌクレオチド長であるオリゴヌクレオチドを有してもよい。アプタマーは、最長４０、最長６０、最長８０、最長１００、最長１５０、最長２００、またはそれ以上のヌクレオチド長である配列を有してもよい。アプタマーは、約５〜約１５０ヌクレオチド長、約１０〜約１００ヌクレオチド長、または約２０〜約７５ヌクレオチド長としてもよい。アプタマーは核酸分子（例えば、オリゴヌクレオチド）であるが、ペプチドアプタマーなど、核酸アプタマーの代わりにアプタマー同等物を使用することもできる。核酸アプタマーは自然に発生する可能性がある。ただし、ほとんどの核酸アプタマーは、試験管内選択法（Ｓｙｓｔｅｍａｔｉｃ  Ｅｖｏｌｕｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｌｉｇａｎｄｓ  ｂｙ  Ｅｘｐｏｎｅｎｔｉａｌ  ｅｎｒｉｃｈｍｅｎｔ：ＳＥＬＥＸ）およびＣｅｌｌ  ＳＥＬＥＸと呼ばれる細胞版の選択法を用いた多様なコンビナトリアルライブラリーに由来する（Ｓｕｎｄａｒａｍ  ｅｔ  ａｌ．（２０１３）Ｅｕｒ．Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｓｃｉ．，４８：２５９−７１；Ｂｕｒｎｅｔｔ  ｅｔ  ａｌ．（２０１２）Ｃｈｅｍ  Ｂｉｏｌ．，１９：６０−７１；Ｍａｇａｌｈａｅｓ  ｅｔ  ａｌ．（２０１２）Ｍｏｌ．Ｔｈｅｒ．，２０：６１６−２４；Ｓｈｉｇｄａｒ  ｅｔ  ａｌ．（２０１１）Ｃａｎｃｅｒ  Ｓｃｉ．，１０２：９９１−８；Ｔｈｉｅｌ  ｅｔ  ａｌ．（２０１２）Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．，４０：６３１９−３７）。
【００４１】
特定の実施形態では、前記抗ＩＤＯ２アプタマーが、望みの細胞タイプに対するアプタマーを標的とし、および／または前記アプタマー（例えば、細胞貫通分子）の細胞取込みを促進する化合物（例えば、抗体、ペプチド、タンパク質、核酸分子、小分子など）に（例えば、直接またはリンカーを介して）結合する。前記標的分子は５'末端、３'末端、または両端または内部ヌクレオチドに操作により結合することができる。特定の実施形態では、前記標的分子および／または細胞貫通分子が前記５'末端および／または３'末端に結合する。特定の実施形態では、前記アプタマーが標的分子および細胞貫通分子に結合する。前記アプタマーは、望みの細胞タイプの表面化合物またはタンパク質（例えば、受容体）を標的としてもよい（例えば、前記表面化合物またはタンパク質は、標的とされる細胞タイプの表面で選択的または排他的に発現されてもよい）。本明細書で使用するとおり、「細胞貫通物質」または「細胞貫通分子」の用語は、細胞外腔から細胞内への化合物の移動を媒介する化合物または官能基を指す。例えば、前記細胞貫通分子は細胞貫通アプタマー（例えば、Ｃ１またはＯｔｔｅｒ（例えば、Ｂｕｒｋｅ，Ｄ．Ｈ．（２０１２）Ｍｏｌ．Ｔｈｅｒ．，２０：２５１−２５３を参照））、細胞貫通ペプチド（例えば、Ｔａｔペプチド、Ｐｅｎｅｔｒａｔｉｎ、短い両親媒性ペプチド（例えば、Ｐｅｐ−およびＭＰＧ−ファミリー由来のもの）、オリゴアルギニン、オリゴリジン）、または非極性蛍光群（例えば、Ｃｙ３またはＣｙ５などのシアニン）であってもよい。
【００４２】
特定の実施形態では、前記抗ＩＤＯ２アプタマーは、ミセル、リポソーム、ナノ粒子、またはポリマー組成物などの送達媒体内に含めてもよい。特定の実施形態では、前記アプタマーはデンドリマー（例えば、ポリ（アミドアミン）（ＰＡＭＡＭ）デンドリマーまたはポリプロピレンイミン（ＰＰＩ）デンドリマーなどの陽イオンデンドリマー）と複合体を形成する（例えば、含まれるまたは封入される）。
【００４３】
定義
以下の定義は、本発明の理解を促すために提供される。
【００４４】
単数形の「ａ」、「ａｎ」、および「ｔｈｅ」は、内容が明らかにそうでないことを示していない限り、複数の言及も含む。
【００４５】
化合物または薬学的組成物の「治療有効量」は、特定の障害または疾患の症状を予防、阻害、治療、または軽減するために有効な量を指す。本明細書における眼疾患の治療は、前記眼疾患、その症状、またはその疾病素質を治癒、軽減、および／または予防することを指す。
【００４６】
「薬学的に許容される」は、連邦または州政府の規制当局により承認されているか、米国薬局方、または他の一般的に認識されている、動物、特にヒトに使用される薬局方に掲載されていることを示す。
【００４７】
「担体」は、例えば、本発明の活性物質が投与される希釈剤、アジュバント、賦形剤、補助剤、または溶媒を指す。薬学的に許容される担体は、水、および石油、ピーナッツ油、大豆油、鉱油、ゴマ油など、動物、植物、または合成由来のものを含むオイルなどの滅菌液体とすることができる。水または水性滅菌溶液および水性デキストロースおよびグリセロール溶液は、好ましくは担体、特に注射用溶液として利用される。適切な薬学的担体は、例えば、Ｅ．Ｗ．Ｍａｒｔｉｎの「Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ'ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ」に説明されている。
【００４８】
「抗体」または「抗体分子」は、特異的抗原に結合する抗体およびそのフラグメントを含む免疫グロブリンである。本明細書に用いるとおり、抗体または抗体分子は未処理の免疫グロブリン分子、免疫グロブリン分子の免疫学的に活性な部分、および免疫グロブリン分子の免疫学的に活性な部分を融合したものを意図する。
【００４９】
本明細書に用いるとおり、「免疫学的に特異的な」の用語は、１もしくはそれ以上のタンパク質のエピトープまたは対象化合物に結合するが、抗原性生物学的分子の混合物を含むサンプルにおいて、実質的に他の分子を認識し、結合することのない、タンパク質／ポリペプチド、特に抗体を指す。
【００５０】
本明細書に用いるとおり、「予防する」の用語は、状態を発生するリスクがあり、被験者が前記状態を発生する可能性が低下する、被験者の予防的治療を指す。
【００５１】
本明細書に用いる「治療する」の用語は、患者の状態の改善（例えば、１もしくはそれ以上の症状）、前記状態の進行遅延など、疾患に苦しむ患者に利益を与えるすべてのタイプの治療を指す。
【００５２】
本明細書に用いるとおり、「宿主」、「被験者」、および「患者」の用語は、ヒトなどの哺乳類を含む動物を指す。
【００５３】
本明細書に用いるとおり、「免疫抑制剤（ｉｍｍｕｎｏｓｕｐｐｒｅｓｓａｎｔおよびｉｍｍｕｎｏｓｕｐｐｒｅｓｓｉｖｅ  ａｇｅｎｔ）」の用語は、免疫反応またはそれと関連する症状を抑制する化合物または組成物を含む。免疫抑制剤には、これに限定されるものではないが、プリン類似体（例えば、アザチオプリン）、メトトレキセート、シクロスポリン（例えば、シクロスポリンＡ）、シクロフォスファミド、レフルノミド、ミコフェノール酸塩（ミコフェノール酸モフェチル）、ステロイド（例えば、グルココルチコイド、コルチコステロイド）、メチルプレドニゾン、プレドニゾン、非ステロイド性抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）、クロロキン、ヒドロキシクロロキン、クロラムブシル、ＣＤ２０拮抗薬（例えば、リツキシマブ、オクレリズマブ、ベルツズマブ、またはオファツムマブ）、アバタセプト、ＴＮＦ拮抗薬（例えば、インフリキシマブ、アダリムマブ、エタネルセプト）、マクロライド（例えば、ピメクロリムス、タクロリムス（ＦＫ５０６）、およびシロリムス（ラパマイシン））、デヒドロエピアンドロステロン、レナリドミド、ＣＤ４０拮抗薬（例えば、抗ＣＤ４０Ｌ抗体）、アベチムスナトリウム、ＢＬｙｓ拮抗薬（例えば、抗ＢＬｙＳ（例えば、ベリムマブ）、ダクチノマイシン、ブシラミン、ペニシラミン、レフルノミド、メルカプトプリン、ピリミジン類似体（例えば、シトシンアラビノシド）、ミゾリビン、アルキル化剤（例えば、ナイトロジェンマスタード、フェニルアラニンマスタード、ブスルファン、およびシクロフォスファミド）、葉酸拮抗薬（例えば、アミノプテリンおよびメトトレキサート）、抗生物質（例えば、ラパマイシン、アクチンマイシンＤ、マイトマイシンＣ、プラマイシン、およびクロラムフェニコール）、ヒトＩｇＧ、抗リンパ球グロブリン（ＡＬＧ）、抗体（例えば、抗ＣＤ３抗体（ＯＫＴ３）、抗ＣＤ４抗体（ＯＫＴ４）、抗ＣＤ５抗体、抗ＣＤ７抗体、抗ＩＬ−２受容体（例えば、ダクリズマブおよびバシリキシマブ）、抗α／βＴＣＲ抗体、抗ＩＣＡＭ−１抗体、ムロモナブ−ＣＤ３、抗ＩＬ−１２抗体、アレムツズマブ、および免疫毒素抗体）、およびその誘導体および類似体を含む。
【００５４】
本明細書に用いるとおり、「抗炎症薬」は炎症性疾患またはそれに伴う症状の治療に用いられる化合物を指す。抗炎症薬には、これに限定されるものではないが、非ステロイド性抗炎症薬（ＮＳＡＩＤｓ、例えば、アスピリン、イブプロフェン、ナプロキセン、メチルサリチル酸、ジフルニサル、インドメタシン、スリンダク、ジクロフェナク、ケトプロフェン、ケトロラク、カルプロフェン、フェノプロフェン、メフェナム酸、ピロキシカム、メロキシカム、メトトレキサート、セレコキシブ、バルデコキシブ、パレコキシブ、エトリコキシブ、およびニメスリド）、コルチコステロイド（例えば、プレドニゾン、ベタメサゾン、ブデソニド、コルチゾン、デキサメサゾン、ヒドロコルチゾン、メチルプレドニゾロン、プレドニゾロン、トリアムシノロン、およびフルチカゾン）、ラパマイシン、アセトアミノフェン、グルココルチコイド、ステロイド、β拮抗薬、抗コリン剤、メチルキサンチン、金注射（例えば、アウロチオマレイン酸ナトリウム）、スルファサラジン、およびダプソンを含む。
【００５５】
「細胞貫通ペプチド」は、別のペプチド、タンパク質、または核酸をｉｎ  ｖｉｔｒｏおよび／またはｉｎ  ｖｉｖｏで細胞内に伝達する、すなわち、細胞の分子取込みを促進するペプチドを指す。細胞貫通ペプチドの例には、これに限定されるものではないが、Ｔａｔペプチド、ｐｅｎｅｔｒａｔｉｎ、ｔｒａｎｓｐｏｒｔａｎなどを含む。
【００５６】
以下の例は、本発明の様々な実施形態を説明するために提供される。実施例はいかなる方法でも本発明を制限する意図はない。
【００５７】
［実施例］
滑膜関節性関節の炎症および最終的には軟骨と骨の分解で特徴付けられる消耗性疾患である関節リウマチ（ＲＡ）は、自己免疫疾患である。他の免疫疾患同様、知識の増加により治療管理の選択肢が改善したが、ＲＡは依然として、疾患をより特異的に標的とすることができる治療が必要である（Ｂｕｃｈ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｎｎ．Ｒｈｅｕｍ．Ｄｉｓ．（２０１１）７０：９０９−９２０；Ｈｅｌｍｉｃｋ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  Ｒｈｅｕｍ．（２００８）５８：１５−２５；Ｕｐｃｈｕｒｃｈ  ｅｔ  ａｌ．，Ｒｈｅｕｍａｔｏｌｏｇｙ（Ｏｘｆｏｒｄ）５１（Ｓｕｐｐｌ  ６）：ｖｉ２８−ｖｉ３６）。自己免疫障害患者の血清及び尿中トリプトファンレベルの低下とトリプトファン異化生成物の増加に関する長年にわたる根拠は、自己免疫におけるトリプトファン異化酵素の関与を示している（Ｂｅｅｔｈａｍ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｓｏｃ．Ｅｘｐ．Ｂｉｏｌ．Ｍｅｄ．（１９６４）１１７：７５６−７５９；Ｌａｂａｄａｒｉｏｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｒｈｅｕｍａｔｏｌ．Ｒｅｈａｂｉｌ．（１９７８）１７：２２７−２３２；Ｍａｎｄｅｌ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｒｃｈ．Ｄｅｒｍａｔｏｌ．（１９９６）９４：３５８−３６０；Ｓｐｉｅｒａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．（１９６９）４８：８５６−８５９；Ｗｉｄｎｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｄｖ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．Ｂｉｏｌ．（１９９９）４６７：５７１−５７７；Ｗｉｄｎｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｉｍｍｕｎｏｂｉｏｌ．，（２０００）２０１：６２１−６３０）。実際、ＩＤＯ調節不全は、自己免疫障害であるＲＡ及び全身性エリテマトーデスでは疾患活動性と直接関連していた（Ｆｕｒｕｚａｗａ−Ｃａｒｂａｌｌｅｄａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｅｕｒ．Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．（２０１１）４１：１０３７−１０４６；Ｐｅｒｔｏｖａａｒａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｌｉｎ．Ｅｘｐ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．（２００７）１５０：２７４−２７８）。
【００５８】
ＩＤＯは胎児組織の母性寛容に必要であるという予想外の発見以来、ＩＤＯは免疫調節作用を有することが知られてきた（Ｍｕｎｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ（１９９８）２８１：１１９１−１１９３）。それ以来、ＩＤＯは様々な疾患で免疫調節と関連付けられてきたが（Ｅｌｏｖａｉｎｉｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｓｙｃｈｏｓｏｍ．Ｍｅｄ．（２０１２）７４：６７５−６８１；Ｏｘｅｎｋｒｕｇ，Ｇ．Ｆ．，Ｉｓｒ．Ｊ．Ｐｓｙｃｈｉａｔｒｙ  Ｒｅｌａｔ．Ｓｃｉ．（２０１０）４７：５６−６３；Ｘｉａｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｍ．Ｊ．Ｒｅｓｐｉｒ．Ｃｒｉｔ．Ｃａｒｅ  Ｍｅｄ．（２０１３）１８８：４８２−４９１）、その機能は腫瘍免疫回避の重要媒介物質として最も確立されている（Ｍｕｌｌｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔ．Ｒｅｖ．Ｃａｎｃｅｒ（２００６）６：６１３−６２５；Ｐｒｅｎｄｅｒｇａｓｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｕｒｒ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．（２０１１）１８：２２５７−２２６２）。このような背景において、ＩＤＯは免疫抑制性と考えられる。しかし、自己免疫との関連では、ＩＤＯの機能はあまり明白ではない。数件の研究において、トリニトロベンゼンスルホン酸誘導性大腸炎、コラーゲン誘導性関節炎、及び実験的自己免疫脳脊髄炎などの自己免疫誘導モデルで免疫抑制作用を有することが証明された（Ｇｕｒｔｎｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ（２００３）１２５：１７６２−１７７３；Ｓａｋｕｒａｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｎｅｕｒｏｉｍｍｕｎｏｌ．（２００２）１２９：１８６−１９６；Ｓｚａｎｔｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  Ｒｅｓ．Ｔｈｅｒ．（２００７）９：Ｒ５０）。ＲＡのＫＲＮトランスジェニック（Ｔｇ）［ＫＲＮ（Ｃ５７ＢＬ／６  ｘ  ＮＯＤ）Ｆ１（Ｋ／ＢｘＮ）およびＫＲＮ．ｇ７］マウスモデル（Ｓｃｏｔｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．（２００９）１８２：７５０９−７５１７）、また炎症性気道疾患（Ｘｕ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．（２００８）１０５：６６９０−６６９５）、アレルギー（ｖｏｎＢｕｂｎｏｆｆ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｌｌｅｒｇｙ（２０１２）６７：７１８−７２５）、および接触過敏症（Ｍｅｔｚ  ｅｔ  ａｌ．，Ｉｎｔ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．（２０１４）２６：３５７−６７）モデルなどの他のモデルは、ＩＤＯが免疫反応に肯定的役割を果たすという根拠を提供した。自己免疫疾患患者におけるトリプトファン分解の増加と疾患活動との関連性を考えると、これらのモデルはヒトの炎症性自己免疫疾患とより関連性がある（Ｆｕｒｕｚａｗａ−Ｃａｒｂａｌｌｅｄａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｅｕｒ．Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．（２０１１）４１：１０３７−１０４６；Ｐｅｒｔｏｖａａｒａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｌｉｎ．Ｅｘｐ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．（２００７）１５０：２７４−２７８）。異なる自己免疫および炎症モデルでみられた対照的な結果は、疾患誘導プロセスにおける機構的な違いを反映していると考えられる。
【００５９】
ＫＲＮモデルは、自己抗体の産生により誘導された関節炎症の急速で対称的な発症により特徴付けられる、炎症性自己免疫疾患の自然発生マウスモデルである（Ｋｏｕｓｋｏｆｆ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｅｌｌ（１９９６）８７：８１１−８２２；Ｋｏｒｇａｎｏｗ  ｅｔ  ａｌ．，Ｉｍｍｕｎｉｔｙ（１９９９）１０：４５１−４６１）。このモデルでは、遺伝的背景が存在する場合にＩ−Ａｇ７  ＭＨＣクラスＩＩ分子を発現し、関節特異的自己免疫疾患が発症するＲＣＴ導入遺伝子ＫＲＮを使用する。このモデルでは、自己反応性ＴおよびＢ細胞の両方が自己抗原として糖分解酵素グルコース−６−リン酸イソメラーゼ（ＧＰＩ）を認識し、疾患の重症度は血清中の抗ＧＰＩ  Ｉｇ力価の上昇と関連する（Ｋｏｒｇａｎｏｗ  ｅｔ  ａｌ．，Ｉｍｍｕｎｉｔｙ（１９９９）１０：４５１−４６１；Ｍａｔｓｕｍｏｔｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ（１９９９）２８６：１７３２−１７３５；Ｍａｎｄｉｋ−Ｎａｙａｋ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．（２００２）９９：１４３６８−１４３７３）。Ｋ／ＢｘＮモデルはヒトＲＡと共通の特徴を多く有し、この特徴には関節の病理学的変化、細胞浸潤物、炎症性サイトカイン、および自己抗体産生などがある（Ｋｏｕｓｋｏｆｆ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｅｌｌ（１９９６）８７：８１１−８２２；Ｋｏｒｇａｎｏｗ  ｅｔ  ａｌ．，Ｉｍｍｕｎｉｔｙ（１９９９）１０：４５１−４６１）。しかし、すべての動物モデルと同様、ある程度の違いが認められる。特に、Ｋ／ＢｘＮマウスで産生された自己抗体の特異性は、ヒトＲＡ患者の大部分に存在する自己抗体であるリウマチ因子またはシトルリン化タンパク質ではなく、ＧＰＩに対するものである（Ｍｅｗａｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｍｅｄ．Ｐｈａｒｍａｃｏｔｈｅｒ．（２００６）６０：６４８０−６５５）。ヒトＲＡとして、ＫＲＮマウスの関節炎はトリプトファン異化代謝の亢進と関連し、疾患プロセスにおけるＩＤＯ経路を意味する（Ｓｃｏｔｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．（２００９）１８２：７５０９−７５１７）。
【００６０】
ＲＡのＫＲＮ−Ｔｇマウスモデルで自己抗体反応の低下と関節炎の経過減弱を証明した研究を含むＩＤＯおよび自己免疫に関するこれまでの大半の研究において（Ｓｃｏｔｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．（２００９）１８２：７５０９−７５１７；Ｐｉｇｏｔｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  Ｒｈｅｕｍ．（２０１２）６４：２１６９−２１７８）、化合物Ｄ／Ｌ−１−メチル−トリプトファン（１ＭＴ）をＩＤＯの阻害に使用した。広く検討されているが、ＩＤＯ阻害剤である１ＭＴ、特にＤ−１ＭＴ立体異性体は、酵素自体を直接阻害するよりも、ＩＤＯ経路を阻害する可能性がある（Ｍｅｔｚ  ｅｔ  ａｌ．，ＯｎｃｏＩｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（２０１２）１：１４６０−１４６８）。ＩＤＯ経路は複雑であり、免疫調節の機構的基盤は確立され始めたばかりである（Ｐｒｅｎｄｅｒｇａｓｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｕｒｒ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．（２０１１）１８：２２５７−２２６２）。２つの密接に関連したＩＤＯ遺伝子であるＩＤＯ１およびＩＤＯ２は、１ＭＴの様々な立体異性体により阻害されると考えられ（Ｍｅｔｚ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．（２００７）６７：７０８２−７０８７）、免疫調節に様々な役割を果たしている可能性がある。
【００６１】
免疫系の調節では、ＩＤＯの役割について相反する根拠が存在する。癌においては、ＩＤＯは免疫抑制性と考えられ、調節性Ｔ細胞集団の発現及びＴ細胞活性化の抑制が可能であるが（Ｍｕｌｌｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．（２００８）１０５：１７０７３−１７０７８；Ｙａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ（２００７）８３：１６４３−１６４７）、最近の研究はより複雑な免疫調節の役割があることを示唆している（Ｐｒｅｎｄｅｒｇａｓｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｕｒｒ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．（２０１１）１８：２２５７−２２６２）。免疫抑制の亢進はこの背景では有益であると予想されるため、ＩＤＯは自己免疫においてアップレギュレートされるという所見は矛盾しており、ＩＤＯの活性化と疾患との関連性についての現在の理解は不完全であることを示している。ＩＤＯ１が免疫調節に大きくかかわっていると考えられる癌とは異なり（Ｓｍｉｔｈ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ  Ｄｉｓｃｏｖ．（２０１２）２：７２２−７３５）、他のデータは、自己免疫に照らした免疫系調節における第２の関連酵素ＩＤＯ２を直接関連付けている（Ｍｅｒｌｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．（２０１４）１９２：２０８２−２０９０）。
【００６２】
ＩＤＯ２は構造的にはＩＤＯ１と関連するが、その機能はあまり確立されていない。ＩＤＯ２はトリプトファンをキヌレニンに異化するが、その際の効率はＩＤＯ１と比べてかなり抑制される（Ｍｅｔｚ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．（２００７）６７：７０８２−７０８７；Ｙｕａｓａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｅｖｏｌ．（２００７）６５：７０５−７１４；Ｍｅｉｎｉｎｇｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｉｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ａｃｔａ（２０１１）１８１４：１９４７−１９５４）。ＩＤＯ２はＩＤＯ１よりも発現される組織の範囲が狭く、肝臓、腎臓、および精巣上体、また免疫組織のＡＰＣ（例えば、樹状細胞）に限定されている（Ｍｅｔｚ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．（２００７）６７：７０８２−７０８７；Ｆｕｋｕｎａｇａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｈｉｓｔｏｃｈｅｍ．Ｃｙｔｏｃｈｅｍ．（２０１２）６０：８５４−８６０）。ＩＤＯ２が免疫系に影響するメカニズムはさらに不明瞭である。ＩＤＯ経路は、おそらくはトリプトファンの枯渇およびＧＣＮ２および哺乳類ラパマイシン標的タンパク質に影響する十分なシグナルを介して、間接的に免疫系を調節する可能性があるが（Ｍｅｔｚ  ｅｔ  ａｌ，ＯｎｃｏＩｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（２０１２）１：１４６０−１４６８）、これらのシグナルに対するＩＤＯ１とＩＤＯ２の相対的寄与は不明である。
【００６３】
自己免疫反応におけるＩＤＯ経路の役割を評価したほとんどの先行研究では、小分子阻害剤のＤ／Ｌ−１ＭＴを使用し、得られた結果は矛盾していた。１ＭＴによりＩＤＯを遮断すると、コラーゲン誘導性関節炎の関節炎（Ｓｚａｎｔｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  Ｒｅｓ．Ｔｈｅｒ．（２００７）９：Ｒ５０；  Ｃｒｉａｄｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  Ｒｈｅｕｍ．（２００９）６０：１３４２−１３５１）および実験的自己免疫性脳脊髄炎（Ｓａｋｕｒａｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｎｅｕｒｏｉｍｍｕｎｏｌ．（２００２）１２９：１８６−１９６）が増悪するが、Ｋ／ＢｘＮおよびＫＲＮ．ｇ７関節炎、また炎症性気道疾患モデルの疾患は軽減する（Ｓｃｏｔｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．（２００９）１８２：７５０９−７５１７；Ｘｕ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．（２００８）１０５：６６９０−６６９５）。なぜ１ＭＴが一部のモデルで自己免疫を軽減するが、他のモデルでは増悪するのかは分かっていない。１ＭＴはＩＤＯ１およびＩＤＯ２をいずれも阻害する可能性があるため、考えられる説明の１つは、様々な疾患モデルにおけるＩＤＯ１およびＩＤＯ２の寄与が様々であるためというものである。各１ＭＴ異性体のＩＤＯ１とＩＤＯ２に対する特異性についても議論の余地があり、Ｌ−１ＭＴがＩＤＯ１を阻害し、Ｄ−１ＭＴがＩＤＯ２を阻害すると示している報告もあれば（Ｍｅｔｚ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．（２００７）６７：７０８２−７０８７）、その正反対であることを示している報告もある（Ｙｕａｓａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｏｍｐ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．Ｂ  Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．（２０１０）１５７：１０−１５）。１ＭＴのＬ異性体は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏにおいてＩＤＯのより直接的な酵素阻害剤であるようにみえるが、ｉｎ  ｖｉｖｏにおいて腫瘍の進行に生理的影響を与えるのは、ＩＤＯに間接的に影響するＤ−１ＭＴである（Ｍｅｔｚ  ｅｔ  ａｌ，ＯｎｃｏＩｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（２０１２）１：１４６０−１４６８）（Ｈｏｕ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．（２００７）６７：７９２−８０１）。
【００６４】
ＩＤＯ２は自己抗体の発生を促すように特異的に作用すると思われるが、一般にはＡｂ反応の誘導にあまり重要な役割は果たしていない。最近、ＲＡのＮ−Ｔｇ前臨床モデルにおいて、自己免疫性関節炎の確立および発症にＩＤＯ２が特異的な病原性機能を有していることが示された（Ｍｅｒｌｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．（２０１４）１９２：２０８２−２０９０）。ＩＤＯ２欠失マウスのＢ細胞は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏおよびｉｎ  ｖｉｖｏにおいてモデルＡｇｓに正常なＡｂ反応を示す。したがって、ＩＤＯ２のメカニズムは自己抗体の直接産生ではないと考えられ、むしろＴ細胞がＢ細胞を司令（ヘルプ）し、この自己抗体産生を促すものと考えられる。この考えを支持し、ＩＤＯ２  ｋｏ  ＫＲＮ．ｇ７マウスはＴ細胞の司令が全体的に減少しており、Ｔｈ１、Ｔｈ２、およびＴｈ１７細胞コンパートメントは減少し、ＴｈサイトカインＩＬ−４、ＩＬ−６、およびＩＬ−２１レベルは低くなっている。これらのサイトカインはＴｆｈ細胞の分化と機能誘導により、Ｂ細胞のＡｂ反応誘導に重要であることが示された（Ｃｒｏｔｔｙ，Ｓ．，Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．（２０１１）２９：６２１−６６３）。ＩＤＯ２  ｋｏ  ＫＲＮ．ｇ７マウスにおいてＴｆｈ細胞レベルの低下傾向が認められたが、これは統計学的に有意ではなかった。ＩＬ−２１はＴｆｈ細胞との関連性に加え、Ｔｈ１７細胞でも産生され、Ｋ／ＢｘＮモデルの関節炎発症に重要である（Ｊａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．（２００９）１８２：４６４９−４６５６）。ＩＤＯ２  ｋｏ  ＫＲＮ．ｇ７マウスではＴｈ１７細胞分化の制御因子であるＩＬ−６が減少しているため、この状況では特にＴｈ１７コンパートメントが興味深いが、ＩＬ−１７自体に大きな変化はない。ただし、このモデルでのＴｈ１７細胞の役割は、解明が困難であった。これらのマウスの腸にセグメント化された糸状菌があるとＴｈ１７産生が誘導され、これが関節炎の発症に必要であることが示された（Ｗｕ  ｅｔ  ａｌ．，Ｉｍｍｕｎｉｔｙ（２０１０）３２：８１５−８２７）。しかし、養子免疫伝達研究では、Ｔｈ１７細胞の関節炎発症率に対する寄与に矛盾する結果が得られた。Ｔｈ１７極性化ＫＲＮ  Ｔ細胞の養子免疫伝達はレシピエントマウスに強度の関節炎を誘導し、ＩＬ−１７Ａの中和はこのモデルにおける関節炎の発症を遅らせることが証明された（Ｈｉｃｋｍａｎ−Ｂｒｅｃｋｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ａｕｔｏｉｍｍｕｎ．（２０１１）３６：６５−７５）。対照的に、Ｔｈ１７発症を誘導する転写因子ＲＯＲｇｔの発現を不活性化したマウスから移行したＴ細胞により、関節炎の発症は通常通りに進むことも分かった（Ｂｌｏｃｋ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．（２０１３）１９１：２９４８−２９５５）。ＩＤＯ２  ｋｏ  ＫＲＮ．ｇ７マウスにおける分化Ｔ細胞集団およびサイトカインの全体的な減少は、ＩＤＯ２が特異的Ｔ細胞亜集団に作用するよりも、Ｔ細胞司令の全体的な質を調節することで、関節炎および自己抗体産生に介在することを示している。
【００６５】
Ｔ細胞司令の減少を考え、ｗｔおよびＩＤＯ２  ｋｏ  Ｔ細胞の影響を直接試験するため、Ｔ細胞欠失宿主へのＴ細胞の相互養子免疫伝達を行った。ここでは、関節炎および自己抗体産生に影響するのは、Ｔ細胞自体のＩＤＯ２ではなく、宿主マウスのＩＤＯ２欠失であることが確認される。したがって、ＩＤＯ２は宿主マウスのＡＰＣに作用し、Ｂ細胞およびＴ細胞の活性化にいずれも影響する可能性がある。特に、寛容原性環境を維持するために必要なエフェクターおよび制御性Ｔ細胞集団のバランスをコントロールするＩＤＯ発現樹状細胞の能力において、ＩＤＯ１は明らかに樹状細胞の機能に重要であるが（Ｈａｒｄｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｉｎｖｅｓｔ．（２０１２）４１：７３８−７６４）、樹状細胞およびＢ細胞などの他のＡＰＣにおけるＩＤＯ２の役割は大部分が分かっていない。Ｂ細胞とＴｈ細胞とのクロストークは、Ｂ細胞のＡｂ産生効率の高いＴ細胞司令を行うために必要である。このクロストークには、ＰＤ−１、ＩＣＯＳ、およびＩＬ−２１とそれぞれのリガンドを含め、細胞表面分子と可溶性因子の両方が関与する（Ｎｕｔｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．（２０１１）１２：４７２−４７７）。ＩＤＯ２は、自己反応性Ｂ細胞におけるこれらのシグナル１種類以上の誘導に関与している可能性がある。このメカニズムの裏付けとして、ＩＤＯ２  ｋｏ  ＫＲＮ．ｇ７マウスのＣＤ４  Ｔ細胞は低レベルのＩＬ−２１を発現する。別の可能性は、レシピエントマウスのＩＤＯ２欠失が、分化Ｔｈ細胞集団の活性化だけではなく、生存にも影響しているということである。いずれのシナリオでも、ＩＤＯ２がないと、Ｔ細胞の司令およびその後の抗体産生が減少し、自己免疫反応は低下する。
【００６６】
本明細書で説明されているとおり、ＩＤＯ２欠失マウスの実験では、養子移植実験により、Ｂ細胞におけるＤＯ２発現が確実な関節炎発症支援に必要かつ十分であることが示された。Ｂ細胞のＩＤＯ２機能は、同種のＡｇ特異的相互作用では偶発的なもので、関節炎発症に免疫調節作用を示した。確立された接触過敏症モデルでも同様の要件が確認され、このモデルでは確実に炎症反応を起こすため、ＩＤＯ２発現Ｂ細胞が必要である。力学的検討では、ＩＤＯ２欠失Ｂ細胞に共刺激マーカーＣＤ４０をアップレギュレートする能力はないことが示され、これは、ＩＤＯ２がＴ−Ｂ細胞の界面に作用し、自己抗体産生を促すために必要なＴ細胞司令の作用強度を調節することを示している。全体として、この所見から、Ｂ細胞によるＩＤＯ２発現は、自己反応性Ｔ細胞とＢ細胞間のクロストークを支援することで、自己免疫反応を調節することが明らかとなった。
【００６７】
まとめると、Ｂ細胞性自己免疫疾患を誘発するＩＤＯ２の病原性役割の直接的根拠が提供された。ＲＡのＫＲＮ前臨床モデルを利用し、ＩＤＯ２がＣＤ４＋Ｔｈ細胞の活性化、病原性自己抗体の産生、およびその後の関節炎の発症に必要であることが示された。ＩＤＯ２  ｋｏマウスはｉｎ  ｖｉｔｒｏおよびｉｎ  ｖｉｖｏにおいてモデルＡｇｓに対する生産的Ａｂ反応を増加させることができるため、ＩＤＯ２は自己反応性反応を特異的に制御するが、正常なＢ細胞反応は制御しないようにみえる。相反的な養子免疫伝達研究では、Ｔ細胞外因性の細胞タイプ、最も可能性が高いものとしてはＡＰＣにおいて、自己抗体産生および関節炎がＩＤＯ発現を介して行われることが確認された。同時に、このデータは、ＩＤＯ２はその自己抗体産生における役割により自己免疫に寄与することを証明しており、ＩＤＯ２がＲＡに対する興味深い新規治療ターゲットであることを意味している。
【００６８】
材料と方法
マウス
Ｃ５７ＢＬ／６バックグラウンドとしたＫＲＮ  ＴＣＲ  ＴｇおよびＩＤＯ２欠失（ＩＤＯ２  ｋｏ）マウスが報告されている（Ｋｏｕｓｋｏｆｆ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｅｌｌ（１９９６）８７：８１１−８２２；Ｍｅｔｚ  ｅｔ  ａｌ．，Ｉｎｔ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．（２０１４）２６：３５７−６７）。関節炎マウスは、Ｉ−Ａｇ７  ＭＨＣクラスＩＩ分子（ＫＲＮ．ｇ７）を発現したＫＲＮ  Ｔｇ  Ｃ５７ＢＬ／６マウスの繁殖により作成した。このプロセスを繰り返し、ＩＤＯ２を欠失した関節炎マウス（ＩＤＯ２  ｋｏ  ＫＲＮ．ｇ７）を作成した。ＫＲＮ．ｇ７マウスは、オリジナルのＫ／ＢｘＮマウスと同様の動態で関節炎を発症する（Ｓｃｏｔｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．（２００９）１８２：７５０９−７５１７）。すべてのマウスはＬａｎｋｅｎａｕ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ  ｆｏｒ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｒｅｓｅａｒｃｈの動物施設で特殊な病原体のない条件下、繁殖および飼育した。研究は、実験動物管理評価・認定協会（Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ  ｆｏｒ  Ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ  ａｎｄ  Ａｃｃｒｅｄｉｔａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ａｎｉｍａｌ  Ｃａｒｅ）ガイドラインに従って実施し、Ｌａｎｋｅｎａｕ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ  ｆｏｒ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｒｅｓｅａｒｃｈの動物実験委員会（Ｉｎｓｔｉｔｕｔｉｏｎａｌ  Ａｎｉｍａｌ  Ｃａｒｅ  ａｎｄ  Ｕｓｅ  Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ）により承認された。
【００６９】
関節炎の発症率
マウスの後足関節２箇所を離乳（生後３週間）から測定した。Ｆｏｗｌｅｒ  Ｍｅｔｒｉｃ  Ｐｏｃｋｅｔ  Ｔｈｉｃｋｎｅｓｓ  Ｇａｕｇｅを用い、足蹠の上、足関節の軸方向に足関節の厚さを測定した。足関節の厚さは、０．０５ｍｍ単位で四捨五入した。
【００７０】
Ｅｎｚｙｍｅ−ｌｉｎｋｅｄ  ｉｍｍｕｎｏｓｐｏｔ（ＥＬＩＳｐｏｔ）アッセイ
６週齢マウスの関節流入領域リンパ節（ｄＬＮｓ）（腋窩、上腕、および膝窩ＬＮｓ）の細胞を１ウェルあたり４ｘ１０５細胞で播種し、ＧＰＩ−ｈｉｓ（１０  ｍｇ／ｍｌ）でコーティングしたＭｕｌｔｉＳｃｒｅｅｎ（登録商標）−ＨＡ混合セルロースエステル膜プレート（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）で１：４に連続希釈した。細胞は３７℃で４時間、Ａｇでコーティングしたプレートにインキュベートした。播種細胞から分泌されたＩｇをアルカリフォスファターゼ結合ヤギ抗マウス全Ｉｇ二次抗体（Ｓｏｕｔｈｅｒｎ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  Ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ）により検出し、ＮＢＴ／ＢＣＩＰ基質（ＮＢＴ／５−ブロモ−４−クロロ−３−インドリルリン酸、Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ）により可視化した。
【００７１】
結果
Ｋ／ＢｘＮマウスに生後２１日で０．５ｍｇの対照マウスＩｇまたは抗ＩＤＯ２  Ｉｇを腹腔内注射した。生後６週間で、関節流入領域リンパ節を採取し、ｅｎｚｙｍｅ−ｌｉｎｋｅｄ  ｉｍｍｕｎｏｓｐｏｔ（ＥＬＩＳｐｏｔ）アッセイにより自己抗体分泌細胞（ＡＳＣｓ）数を分析した。図１は、抗ＩＤＯ２抗体が自己抗体産生を抑制することを示している。
【００７２】
抗ＩＤＯ２抗体が関節炎を抑制する効果を測定するため、Ｋ／ＢｘＮマウスに生後２１日で０．５ｍｇの対照マウスＩｇまたは抗ＩＤＯ２  Ｉｇを注射した。足関節の厚さを測定することで、前記マウスの関節炎発症を追跡した。図２に見られるとおり、抗ＩＤＯ２抗体は関節の炎症を抑制し、関節炎の発症を遅らせ、その重症度を低下させる。
【００７３】
前記抗ＩＤＯ２抗体の特異性は、ＩＤＯ２が遺伝的に欠失したマウスでは反応がないことで確認された。簡潔に述べると、ＫＲＮ．ｇ７またはＩＤＯ２ノックアウト（ｋｏ）ＫＲＮ．ｇ７マウスに生後２１日で０．５ｍｇの対照マウスＩｇまたは抗ＩＤＯ２  Ｉｇを注射した。生後６週間で、関節流入領域リンパ節を採取し、ＥＬＩＳｐｏｔアッセイにより自己抗体分泌細胞（ＡＳＣｓ）数を分析した。図３に見られるとおり、抗ＩＤＯ２抗体の投与では、ＩＤＯ２ノックアウトマウスの自己抗体レベルを変化させることができなかった。さらに、ＫＲＮ．ｇ７またはＩＤＯ２  ｋｏ  ＫＲＮ．ｇ７マウスに生後２１日で０．５ｍｇの対照マウスＩｇまたは抗ＩＤＯ２  Ｉｇを注射し、関節炎の発症を追跡した。図４に見られるとおり、抗ＩＤＯ２抗体の投与では、ＩＤＯ２ノックアウトマウスの炎症または関節炎の進行を変化させることができなかった。
【００７４】
関節炎発症後に投与した場合、抗ＩＤＯ２抗体が自己抗体産生を抑制する効果も示された。図５に示されるとおり、関節炎発症前後に投与した場合、抗ＩＤＯ２抗体は自己抗体産生を抑制する。さらに、関節炎発症前後に投与した場合、抗ＩＤＯ２抗体の投与は関節の炎症を抑制した（図６）。
【００７５】
本発明が関与する本技術の状態をより詳細に説明するため、前述の明細書に数件の出版物および特許文書が引用されている。これらの各引用の開示は、この参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
【００７６】
本発明の特定の好適な実施形態が説明され、具体的に上記に例示されているが、本発明はそのような実施形態に限定されるものではないことは意図されるものである。以下の請求項に示されるとおり、本発明の範囲および精神から離れずに、様々な変形形態が可能である。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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