(57)【要約】  本発明は、インターフェロン（ＩＦＮ）分子に結合された１つ以上の腫瘍関連抗原（「ＴＡＡ抗体」）に対する抗体（以降「ＴＡＡ抗体−ＩＦＮ融合分子」）を含む非天然融合分子を、治療上有効な低い投与量で単剤療法として又はと免疫療法と併用して、個人に投与することを含む個人における（がんなどの）増殖性疾患を治療する方法に関し、この併用療法はエフェクター細胞による殺作用の増加をもたらす。本発明の方法は、特に再発増殖性疾患、耐性増殖性疾患、又は難治性増殖性疾患の治療に効果的である。【選択図】図６
2018516950.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
個人における増殖性疾患を治療する方法であって、前記個人にａ）治療有効量の単離非天然腫瘍関連抗原抗体−インターフェロン（「ＴＡＡ抗体−ＩＦＮ」）融合分子及びｂ）免疫療法を施すことを含む方法。
【請求項２】
前記免疫療法が、共刺激分子又は共抑制分子（免疫チェックポイント）に対するアゴニスト抗体、アンタゴニスト抗体、又は遮断抗体を用いる治療；二重特異性Ｔ細胞誘導抗体（ＢｉＴＥ（登録商標））を用いる治療；生物学的応答調節物質の投与を含む治療；治療ワクチンを用いる治療；樹状細胞ワクチンを用いる治療；腫瘍抗原ペプチドワクチンを用いる治療；キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）−Ｔ細胞を用いる治療；ＣＡＲ−ＮＫ細胞を用いる治療；腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）を用いる治療；養子移入された抗腫瘍性Ｔ細胞を用いる治療；ＴＡＬＬ−１０４細胞を用いる治療；及びＴｏｌｌ様受容体（ＴＬＲ）アゴニストなどの免疫賦活剤を用いる治療からなる群より選択される請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記免疫療法が、共刺激分子又は共抑制分子（免疫チェックポイント）に対するアゴニスト抗体、アンタゴニスト抗体、又は遮断抗体を用いる治療；キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）−Ｔ細胞を用いる治療；ＣＡＲ−ＮＫ細胞を用いる治療；及び二重特異性Ｔ細胞誘導抗体（ＢｉＴＥ（登録商標））を用いる治療からなる群より選択される請求項２に記載の方法。
【請求項４】
前記融合分子が、完全ヒト抗体、ヒト化抗体、キメラ抗体、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、組換え抗体、抗体結合性抗体フラグメント、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆａｂ２、Ｆａｂ’２、ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＥ、ｓｃＦｖ、ｄｓＦｖ、ｄＡｂ、ナノボディ、ユニボディ、及び二特異性抗体からなる群より選択されるＴＡＡ抗体を含む請求項１〜３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５】
前記ＴＡＡ抗体が、キメラ抗体、ヒト化モノクローナル抗体、及び完全ヒトモノクローナル抗体からなる群より選択される請求項４に記載の方法。
【請求項６】
前記ＴＡＡ抗体が、完全ヒト抗ＨＥＲ２／ｎｅｕ抗体、完全ヒト抗ＣＤ２０抗体、完全ヒト抗ＣＤ１３８抗体、完全ヒト抗ＧＲＰ９４（エンドプラスミン）抗体、完全ヒト抗ＣＤ３３抗体、及び完全ヒト抗ＣＤ７０抗体からなる群より選択される完全ヒトモノクローナル抗体である請求項５に記載の方法。
【請求項７】
前記融合分子が、インターフェロン（ＩＦＮ）−α分子、ＩＦＮ−α変異体分子、ＩＦＮ−β−１ａ分子、ＩＦＮ−β−１ｂ分子、及びＩＦＮ−β変異体分子からなる群より選択される１型インターフェロン分子を含む請求項１〜６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８】
前記ＩＦＮ−α分子が、配列番号１のアミノ酸配列をもつヒトＩＦＮ−α２ｂ分子である請求項７に記載の方法。
【請求項９】
前記ＩＦＮ−α変異体分子が、配列番号２のアミノ酸配列をもつヒトＩＦＮ−α２ｂ変異体分子である請求項７に記載の方法。
【請求項１０】
前記ＩＦＮ−α分子が、配列番号３のアミノ酸配列をもつヒトＩＦＮ−α１４分子である請求項７に記載の方法。
【請求項１１】
前記ＩＦＮ−β分子が、配列番号４のアミノ酸配列をもつヒトＩＦＮ−β−１ａ分子及び配列番号５のアミノ酸配列をもつヒトＩＦＮ−β−１ｂ分子からなる群より選択される請求項７に記載の方法。
【請求項１２】
前記増殖性疾患が、がんである請求項１〜１１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１３】
前記がんが、Ｂ細胞リンパ腫；肺がん（小細胞肺がん及び非小細胞肺がん）；気管支がん；結腸直腸がん；前立腺がん；乳がん；膵臓がん；胃がん；卵巣がん；膀胱がん；脳又は中枢神経系がん；末梢神経系がん；食道がん；子宮頸がん；黒色腫；子宮又は子宮内膜がん；口腔又は咽頭のがん；肝がん；腎臓がん；胆道がん；小腸又は虫垂がん；唾液腺がん；甲状腺がん；副腎がん；骨肉腫；軟骨肉腫；脂肪肉腫；精巣がん；並びに悪性線維性組織球腫；皮膚がん；頭及び首がん；リンパ腫；肉腫；多発性骨髄腫；並びに白血病からなる群より選択される請求項１２に記載の方法。
【請求項１４】
前記がんが、乳がん、卵巣がん、及び非小細胞肺がん（ＮＳＣＬＣ）からなる群より選択され、前記免疫療法が、共刺激分子又は共抑制分子（免疫チェックポイント）に対するアゴニスト抗体、アンタゴニスト抗体、又は遮断抗体を用いる治療；キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）−Ｔ細胞を用いる治療；ＣＡＲ−ＮＫ細胞を用いる治療；及び二重特異性Ｔ細胞誘導抗体（ＢｉＴＥ（登録商標））を用いる治療からなる群より選択され、前記ＴＡＡ抗体−ＩＦＮ融合分子が抗ＨＥＲ２／ｎｅｕ−ＩＦＮ−α融合分子である請求項１２に記載の方法。
【請求項１５】
前記がんが、Ｂ細胞性非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）及びＢ細胞性慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）からなる群より選択され、前記免疫療法が、共刺激分子又は共抑制分子（免疫チェックポイント）に対するアゴニスト抗体、アンタゴニスト抗体、又は遮断抗体を用いる治療；キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）−Ｔ細胞を用いる治療；ＣＡＲ−ＮＫ細胞を用いる治療；及び二重特異性Ｔ細胞誘導抗体（ＢｉＴＥ（登録商標））を用いる治療からなる群より選択され、前記ＴＡＡ抗体−ＩＦＮ融合分子が抗ＣＤ２０−ＩＦＮ−α融合分子である請求項１２に記載の方法。
【請求項１６】
前記がんが、多発性骨髄腫、乳がん、及び膀胱がんからなる群より選択され、前記免疫療法が、共刺激分子又は共抑制分子（免疫チェックポイント）に対するアゴニスト抗体、アンタゴニスト抗体、又は遮断抗体を用いる治療；キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）−Ｔ細胞を用いる治療；ＣＡＲ−ＮＫ細胞を用いる治療；及び二重特異性Ｔ細胞誘導抗体（ＢｉＴＥ（登録商標））を用いる治療からなる群より選択され、前記ＴＡＡ抗体−ＩＦＮ融合分子が抗ＣＤ１３８−ＩＦＮ−α融合分子である請求項１２に記載の方法。
【請求項１７】
前記がんが、ＮＳＣＬＣ、急性脊髄性白血病（ＡＭＬ）、多発性骨髄腫、黒色腫、及び膵がんからなる群より選択され、前記免疫療法が、共刺激分子又は共抑制分子（免疫チェックポイント）に対するアゴニスト抗体、アンタゴニスト抗体、又は遮断抗体を用いる治療；キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）−Ｔ細胞を用いる治療；ＣＡＲ−ＮＫ細胞を用いる治療；及び二重特異性Ｔ細胞誘導抗体（ＢｉＴＥ（登録商標））を用いる治療からなる群より選択され、前記ＴＡＡ抗体−ＩＦＮ融合分子が抗ＧＲＰ９４抗体−ＩＦＮ−α融合分子である請求項１２に記載の方法。
【請求項１８】
前記がんが、ＡＭＬ、慢性脊髄性白血病（ＣＭＬ）、及び多発性骨髄腫からなる群より選択され、前記免疫療法が、共刺激分子又は共抑制分子（免疫チェックポイント）に対するアゴニスト抗体、アンタゴニスト抗体、又は遮断抗体を用いる治療；キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）−Ｔ細胞を用いる治療；ＣＡＲ−ＮＫ細胞を用いる治療；及び二重特異性Ｔ細胞誘導抗体（ＢｉＴＥ（登録商標））を用いる治療からなる群より選択され、前記ＴＡＡ抗体−ＩＦＮ融合分子が抗ＣＤ３３−ＩＦＮ−α融合分子である請求項１２に記載の方法。
【請求項１９】
前記がんが、腎細胞癌（ＲＣＣ）、ワルデンストレームマクログロブリン血症、多発性骨髄腫、及びＮＨＬからなる群より選択され、前記免疫療法が、共刺激分子又は共抑制分子（免疫チェックポイント）に対するアゴニスト抗体、アンタゴニスト抗体、又は遮断抗体を用いる治療；キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）−Ｔ細胞を用いる治療；ＣＡＲ−ＮＫ細胞を用いる治療；及び二重特異性Ｔ細胞誘導抗体（ＢｉＴＥ（登録商標））を用いる治療からなる群より選択され、前記ＴＡＡ抗体−ＩＦＮ融合分子が抗ＣＤ７０−ＩＦＮ−α融合分子である請求項１２に記載の方法。
【請求項２０】
前記ＴＡＡ抗体−ＩＦＮ融合分子が、０．０００１ｍｇ／ｋｇ以下、０．０００３ｍｇ／ｋｇ以下、０．００１ｍｇ／ｋｇ以下、０．００３ｍｇ／ｋｇ以下、０．０１ｍｇ／ｋｇ以下、０．０３ｍｇ／ｋｇ以下、０．１ｍｇ／ｋｇ以下、０．２ｍｇ／ｋｇ以下、０．３ｍｇ／ｋｇ以下、０．４ｍｇ／ｋｇ以下、０．５ｍｇ／ｋｇ以下、０．６ｍｇ／ｋｇ以下、０．７ｍｇ／ｋｇ以下、０．８ｍｇ／ｋｇ以下、及び０．９ｍｇ／ｋｇ以下からなる群より選択される週間投与量で個人に投与される請求項１〜１９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２１】
前記併用治療法が、前記ＴＡＡ抗体−ＩＦＮ融合分子と免疫療法を同時に投与することを含む請求項１〜２０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２２】
前記ＴＡＡ抗体−ＩＦＮ融合分子と免疫療法との前記投与が並行する請求項１〜２０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２３】
前記ＴＡＡ抗体−ＩＦＮ融合分子と免疫療法との前記投与が並行しない請求項１〜２０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２４】
個人における増殖性疾患を治療する方法であって、前記個人に単離非天然ＴＡＡ抗体−ＩＦＮ融合分子を投与することを含み、前記ＴＡＡ抗体−ＩＦＮ融合分子が、前記個人に、約０．０００１〜約０．０００３ｍｇ／ｋｇ、約０．０００３〜約０．００１ｍｇ／ｋｇ、約０．００１〜約０．００３ｍｇ／ｋｇ、約０．００３〜約０．０１ｍｇ／ｋｇ、約０．０１〜約０．０３ｍｇ／ｋｇ、約０．０３〜約０．１ｍｇ／ｋｇ、約０．１〜約０．３ｍｇ／ｋｇ、約０．３〜約０．４ｍｇ／ｋｇ、約０．４〜約０．５ｍｇ／ｋｇ、約０．５〜約０．６ｍｇ／ｋｇ、約０．６〜約０．７ｍｇ／ｋｇ、約０．７〜約０．８ｍｇ／ｋｇ、及び約０．８〜約０．９ｍｇ／ｋｇからなる群より選択される週間投与量で投与される方法。
【請求項２５】
前記ＴＡＡ抗体−ＩＦＮ融合分子が、前記個人に約０．００３〜約０．０１ｍｇ／ｋｇの週間投与量で投与される請求項２４に記載の方法。
【請求項２６】
前記ＴＡＡ抗体−ＩＦＮ融合分子が、前記個人に約０．０１〜約０．０３ｍｇ／ｋｇの週間投与量で投与される請求項２４に記載の方法。
【請求項２７】
前記ＴＡＡ抗体−ＩＦＮ融合分子が、前記個人に約０．０３〜約０．１ｍｇ／ｋｇの週間投与量で投与される請求項２４に記載の方法。
【請求項２８】
前記増殖性疾患が、乳がん、卵巣がん、及び非小細胞肺がん（ＮＳＣＬＣ）からなる群より選択されるがんであり、前記ＴＡＡ抗体−ＩＦＮ融合分子が抗ＨＥＲ２／ｎｅｕ−ＩＦＮ−α融合分子である請求項２４〜２７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２９】
前記増殖性疾患が、Ｂ細胞性非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）及びＢ細胞性慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）からなる群より選択されるがんであり、前記ＴＡＡ抗体−ＩＦＮ融合分子が抗ＣＤ２０−ＩＦＮ−α融合分子である請求項２４〜２７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３０】
前記増殖性疾患が、多発性骨髄腫、乳がん、及び膀胱がんからなる群より選択されるがんであり、前記ＴＡＡ抗体−ＩＦＮ融合分子が抗ＣＤ１３８−ＩＦＮ−α融合分子である請求項２４〜２７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３１】
前記増殖性疾患が、ＮＳＣＬＣ、急性脊髄性白血病（ＡＭＬ）、多発性骨髄腫、黒色腫、及び膵がんからなる群より選択されるがんであり、前記ＴＡＡ抗体−ＩＦＮ融合分子が抗ＧＲＰ９４−ＩＦＮ−α融合分子である請求項２４〜２７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３２】
前記増殖性疾患が、ＡＭＬ、慢性脊髄性白血病（ＣＭＬ）、及び多発性骨髄腫からなる群より選択されるがんであり、前記ＴＡＡ抗体−ＩＦＮ融合分子が抗ＣＤ３３−ＩＦＮ−α融合分子である請求項２４〜２７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３３】
前記増殖性疾患が、腎細胞癌（ＲＣＣ）、ワルデンストレームマクログロブリン血症、多発性骨髄腫、及びＮＨＬからなる群より選択されるがんであり、前記ＴＡＡ抗体−ＩＦＮ融合分子が抗ＣＤ７０−ＩＦＮ−α融合分子である請求項２４〜２７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３４】
前記個人が再発がんを患う請求項１〜３３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３５】
前記個人が耐性がん又は難治性がんを患う請求項１〜３３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３６】
化学療法、低分子キナーゼ阻害剤標的療法、手術、放射線療法、及び幹細胞移植からなる群より選択される１つ以上の追加療法をさらに含む請求項１〜３５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３７】
前記融合分子が、前記腫瘍関連抗原抗体に直接結合するインターフェロン分子を含む請求項１〜３６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３８】
前記融合分子が、ペプチドリンカーを介して前記ＴＡＡ  Ａｂに結合するＩＦＮ分子を含み、前記ペプチドリンカーが２０個未満のアミノ酸の長さである請求項１〜３６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３９】
前記ペプチドリンカーが、配列番号１８及び配列番号１９からなる群より選択される配列をもつ請求項３８に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連特許出願
本出願は、２０１５年６月１２日に出願された米国仮出願第６２／１７５，０２４号、２０１５年６月１２日に出願された米国仮出願第６２／１７５，０４４号、２０１５年１１月２０日に出願された米国仮出願第６２／２５７，８５２号、及び２０１６年４月１２日に出願された米国仮出願第６２／３２１，７２４号に基づく優先権を主張し、該仮出願は各々、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
【０００２】
がんは、体の他の部分に転移又は浸潤する可能性を伴う異常な細胞増殖が関与する疾患群である。すなわち、分離した腫瘍マスを形成し、嚢胞または液性領域を含まない異常な増殖は、固形腫瘍と定義される。固形腫瘍は、良性の場合もあり（がんではない）、悪性の場合もある（がん）。相異なる種類の固形腫瘍は、それを形成する細胞の種類に対して命名される。固形腫瘍の例は、肉腫、上皮性悪性腫瘍、及びリンパ腫である。２つの血液細胞系統、骨髄系リンパ系のどちらかに由来するがんは、血液悪性腫瘍と定義される。そのような悪性腫瘍は血液がんまたは液性腫瘍とも呼ばれる。液性腫瘍としては、例えば、多発性骨髄腫、急性白血病（例えば、１１ｑ２３陽性急性白血病、急性リンパ性白血病、急性骨髄球性白血病、急性骨髄性白血病及び骨髄芽球性白血病、前骨髄球性白血病、骨髄単球性白血病、並びに赤白血病）、慢性白血病（例えば、慢性骨髄球性（果粒球性）白血病、慢性骨髄性白血病、及び慢性リンパ性白血病）、真性多血症、リンパ腫、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫（緩慢性及び高悪性度型）、ワルデンストレームマクログロブリン血症、Ｈ鎖病、骨髄異形成症候群、有毛細胞白血病、並びに骨髄異形成症が挙げられる。
【０００３】
インターフェロン（ＩＦＮ）は、ウイルスに応答して細胞によって自然に産生される可溶性タンパク質である。ＩＦＮ−αは、そのウイルス複製を阻害する能力が最初に報告されたが、抗増殖効果、アポトーシスの誘導（Ｒｏｄｒｉｇｕｅｚ−Ｖｉｌｌａｎｕｅｖａ  Ｊ  ａｎｄ  ＴＪ  ＭｃＤｏｎｎｅｌｌ，Ｉｎｔ  Ｊ  Ｃａｎｃｅｒ，６１：１１０，１９９５）、及び腫瘍細胞におけるがん抑制遺伝子、Ｐ５３の誘導（Ｔａｋａｏｋａ  Ａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，４２４：５１６，２００３）を呈する複数の特性を有する。よって、ＩＦＮ−αは、さまざまながんの治療に使用された最初の組換えタンパク質であった。しかし、アポトーシス促進剤に対する腫瘍細胞耐性を媒介する多くの細胞機構を克服する点において、単剤としてのＩＦＮ−αはほとんど効果がない。そして残念なことに、がんを治療するためのＩＦＮ−αの使用は、その短い半減期及び関連する全身毒性によって限定されてきた（Ｗｅｉｓｓ  Ｋ，Ｓｅｍｉｎ  Ｏｎｃｏｌ，２５：９，１９９８；Ｊｏｎｅｓ  ＧＪ  ａｎｄ  Ｉｔｒｉ  ＬＭ，Ｃａｎｃｅｒ，５７：１７０９，２００６）。これらの限定を考慮に入れると、全身毒性を引き起こさない悪性疾患の部位で有効なＩＦＮ−α濃度を達成することは困難である。
【０００４】
がん免疫療法は、免疫系を利用してがんを攻撃するがん治療に与えられる名称である。全身免疫療法は、全身を治療するのに用いられる免疫療法を指し、体の１箇所の「局所的な」部分を治療するのに用いられる局所免疫療法と比べて広く使用され、特にがんが転移した場合に使用される。がん細胞は病原菌と比べて免疫原性が低いにもかかわらず、免疫系が腫瘍細胞を認識して、除去できることは明らかであり、がん免疫療法は、悪性腫瘍を治療するための免疫系の非常に優れた能力および特異性を利用することを試みる。残念なことに、腫瘍は、免疫応答が出現して機能するのを妨害し、例えば、定着腫瘍内に存在する抑制的な環境は効果的な免疫応答を阻害する。免疫療法の目的は、最終的に、免疫系の抗腫瘍覚醒を再確立して、腫瘍および腫瘍−微環境免疫抑制を阻害することである。よって、免疫療法の難しい課題は、局所腫瘍環境をうまくコントロールして、炎症誘発性環境を助長し、樹状細胞活性化を促進し、効果的且つ安全に抗腫瘍反応を増強する戦略を開発するように細胞免疫学及び分子免疫学の進歩を利用することである。
【０００５】
がん免疫療法は復興を享受しており、ここ２〜３年、急速に進歩しているこの分野から、がんを治療する新しい方法がいくつか生み出された。数多くのがん免疫療法戦略が広範な研究及び臨床評価の焦点であり、例えば、限定されないが、特異的な腫瘍抗原に対する枯渇抗体を用いる治療；抗体−薬物複合体を用いる治療；ＣＴＬＡ−４、ＰＤ−１、ＯＸ−４０、ＣＤ１３７、ＧＩＴＲ、ＬＡＧ３、ＴＩＭ−３、及びＶＩＳＴＡなどの共刺激分子又は共抑制分子（免疫チェックポイント）に対するアゴニスト抗体、アンタゴニスト抗体、又は遮断抗体を用いる治療；ブリナツモマブなどの二重特異性Ｔ細胞誘導抗体（ＢｉＴＥ（登録商標））を用いる治療；ＩＬ−２、ＩＬ−１２、ＩＬ−１５、ＩＬ−２１、ＧＭ−ＣＳＦ、ＩＦＮ−α、ＩＦＮ−β、及びＩＦＮ−γなどの生物学的応答調節物質の投与を含む治療；シプロイセル−Ｔなどの治療ワクチンを用いる治療；樹状細胞ワクチンもしくは腫瘍抗原ペプチドワクチンを用いる治療；キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）−Ｔ細胞を用いる治療；ＣＡＲ−ＮＫ細胞を用いる治療；腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）を用いる治療；（生体外で増殖させた及び／又はＴＣＲトランスジェニックの）養子移入された抗腫瘍性Ｔ細胞を用いる治療；ＴＡＬＬ−１０４細胞を用いる治療；並びにＴｏｌｌ様受容体（ＴＬＲ）アゴニストＣｐＧ及びイミキモドなどの免疫賦活剤を用いる治療などが含まれる。
【０００６】
特異的な腫瘍抗原に対する枯渇抗体の活用に重点をおいた免疫療法が研究され、多くの成功を収めてきた（例えば、Ｂｌａｔｔｍａｎ  ａｎｄ  Ｇｒｅｅｎｂｅｒｇ，Ｓｃｉｅｎｃｅ，３０５：２００，２００４；Ａｄａｍｓ  ａｎｄ  Ｗｅｉｎｅｒ，Ｎａｔ  Ｂｉｏｔｅｃｈ，２３：１１４７，２００５による総説を参照されたい）。そのような腫瘍抗原特異的な枯渇抗体の数例として、ＨＥＲＣＥＰＴＩＮ（登録商標）（抗Ｈｅｒ２／ｎｅｕ  ｍＡｂ）（Ｂａｓｅｌｇａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｏｎｃｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌ  １４：７３７，１９９６；Ｂａｓｅｌｇａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ，５８：２８２５，１９９８；  Ｓｈａｋ，Ｓｅｍｉｎ．Ｏｎｃｏｌｏｇｙ，２６  （Ｓｕｐｐｌ１２）：７１，１９９９；Ｖｏｇａｌ  ｅｔ  ａｌ．Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｏｎｃｏｌｏｇｙ，２０：７１９，２００２）；及びＲＩＴＵＸＡＮ（登録商標）（抗ＣＤ２０ｍＡｂ）（Ｃｏｌｏｍｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ，９７：１０１，２００１）がある。残念なことに、それらの抗体は明らかに腫瘍学治療において成功してきたが単剤療法としては、通常、奏効するのは個人のわずか約３０％であり、反応が部分的である。そのうえ、これらの抗体が入っているレジメンでの治療後に、多くの個人はやがて不応になったり、再発したりする。
【０００７】
共刺激分子又は共抑制分子（免疫チェックポイント）に対するアゴニスト抗体、アンタゴニスト抗体、又は遮断抗体を用いる治療、広範な研究及び臨床評価の領域である。正常な生理的状態の下では、免疫チェックポイントは自己寛容（すなわち、自己免疫の阻止）の維持に非常に重要であり、免疫系が病原性感染に反応しているときには、組織を損傷から保護する。また腫瘍が、免疫耐性の主要な機構として、特に腫瘍抗原に特異的であるＴ細胞に対して、ある特定の免疫チェックポイント経路を組み入れることが現在明らかにされている（Ｐａｒｄｏｌｌ  ＤＭ．，Ｎａｔ  Ｒｅｖ  Ｃａｎｃｅｒ，１２：２５２‐６４，２０１２）。したがって、例えば、ＣＴＬＡ−４（イピリムマブ）、ＰＤ−１（ニボルマブ；ペンブロリズマブ；ピディリズマブ）、及びＰＤ−Ｌ１（ＢＭＳ−９３６５５９；ＭＰＬＤ３２８０Ａ；ＭＥＤＩ４７３６；ＭＳＢ００１０７１８Ｃ）（例えば、Ｐｈｉｌｉｐｓ  ａｎｄ  Ａｔｋｉｎｓ，Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，２７（１）；３９−４６，Ｏｃｔ  ２０１４を参照されたい）、並びにＯＸ−４０、ＣＤ１３７、ＧＩＴＲ、ＬＡＧ３、ＴＩＭ−３、及びＶＩＳＴＡ（例えば、Ｓｈａｒｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｈｉｎ  Ｊ  Ｃａｎｃｅｒ．，３３（９）：４３４−４４４，Ｓｅｐ  ２０１４；Ｈｏｄｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎ  Ｅｎｇｌ  Ｊ  Ｍｅｄ，２０１０；Ｔｏｐａｌｉａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎ  Ｅｎｇｌ  Ｊ  Ｍｅｄ，３６６：２４４３‐５４を参照されたい）を含む免疫チェックポイント分子に対する抗体を利用する治療は、がんなどの増殖性疾患をもつ患者、特に、難治性がん及び／又は再発がんの患者を治療するための新たな代替免疫療法として評価されつつある。
【０００８】
キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）Ｔ細胞療法を用いる治療は、患者自身のＴ細胞が研究室で単離され、特定の抗原又はタンパク質を認識するように合成受容体で標的転換され、患者に再注入される免疫療法である。ＣＡＲは、（１）抗原結合領域、典型的には抗体に由来する、（２）ＣＡＲをＴ細胞につなぎとめる膜貫通領域、および（３）１つ以上の細胞内Ｔ細胞シグナル伝達ドメインを最低限含む合成分子である。ＣＡＲは、ヒト白血球型抗原（ＨＬＡ）に依存せずに抗原に特異的なＴ細胞を標的転換し、Ｔ細胞寛容に関連する問題を克服する（Ｋａｌｏｓ  Ｍ  ａｎｄ  Ｊｕｎｅ  ＣＨ，Ｉｍｍｕｎｉｔｙ，３９（１）：４９−６０，２０１３）。ここ５年にわたって、少なくとも１５件のＣＡＲ−Ｔ細胞療法の治験が報告されてきている。ＣＡＲ−Ｔ細胞療法を囲んでいる興奮の新たな波は、ペンシルベニア大学の研究者らがＣＤ１９に対するＣＡＲ−Ｔ細胞の単回投与後に寛解が長期にわたって続いた難治性慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）の３名の患者に関する報告を論文発表した２０１１年８月に始まった（Ｐｏｒｔｅｒ  ＤＬ，ｅｔ  ａｌ．，Ｎ  Ｅｎｇｌ  Ｊ  Ｍｅｄ．，３６５（８）：７２５−７３３，２０１１）。
【０００９】
ドナーＴ細胞とは対照的に、ナチュラルキラー細胞（ＮＫ）細胞は、移植片対宿主病（ＧｖＨＤ）を誘発するリスクなしに抗がん効果を媒介することが知られている。したがって、現在、アロ反応性ＮＫ細胞も、がんの細胞療法のための適切で且つ強力なエフェクター細胞として非常に大きな関心の的である。いくつかのヒトＮＫ細胞株が確立され、例えば、ＮＫ−９２、ＨＡＮＫ−１、ＫＨＹＧ−１、ＮＫ−ＹＳ、ＮＫＧ、ＹＴ、ＹＴＳ、ＮＫＬ、及びＮＫ３．３があり（Ｋｏｒｎｂｌｕｔｈ，Ｊ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３４，７２８−７３５，１９８５；Ｃｈｅｎｇ，Ｍ．ｅｔ  ａｌ．，Ｆｒｏｎｔ．Ｍｅｄ．６：５６，２０１２）、さまざまなＣＡＲ発現ＮＫ細胞（ＣＡＲ−ＮＫ）が生み出されてきた。ＣＡＲ発現ＮＫ細胞（ＣＡＲ−ＮＫ）を用いる免疫療法は、研究及び臨床評価の盛んな領域である（例えば、Ｇｌｉｅｎｋｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｆｒｏｎｔ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ，６（２１）：１−７，Ｆｅｂ  ２０１５を参照されたい）。
【００１０】
二重特異性Ｔ細胞誘導分子（ＢｉＴＥ（登録商標））は、病原性標的細胞に対する細胞傷害性Ｔ細胞をポリクローナル活性化し、且つ標的転換するための二重特異性単鎖抗体の類からなる。ＢｉＴＥ（登録商標）は、がん細胞の表面標的抗原に対してとＴ細胞のＣＤ３に対しての二重の特異性がある。ＢｉＴＥ（登録商標）は、Ｔ細胞受容体特異性、共刺激、又はペプチド抗原提示に依存することなく、どのタイプの細胞傷害性Ｔ細胞もがん細胞に結合させることができる。他のいずれの種類の二重特異性抗体構築物に対して未だ報告されていない特性の独自のセット、具体的には、Ｔ細胞共刺激を必要としない低いＴ細胞数における標的細胞に対する並はずれた効力及び有効性（Ｂａｅｕｅｒｌｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ，６９（１２）：４９４１−４，２００９）。これまでＢｉＴＥ抗体は、ＣＤ１９、ＥｐＣＡＭ、Ｈｅｒ２／ｎｅｕ、ＥＧＦＲ、ＣＤ６６ｅ（又はＣＥＡ、ＣＥＡＣＡＭ５）、ＣＤ３３、ＥｐｈＡ２、及びＭＣＳＰ（又はＨＭＷ−ＭＡＡ）を含む１０個を超える異なる標的抗原（同上）に対して構築されている。ブリナツモマブ（Ｎａｇｏｒｓｅｎ，Ｄ．ｅｔ  ａｌ．，Ｌｅｕｋｅｍｉａ  ＆  Ｌｙｍｐｈｏｍａ  ５０（６）：８８６−８９１，２００９）及びソリトマブ（Ａｍａｎｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ  ３２（５）：４５２−４６４，２００９）などのＢｉＴＥ（登録商標）抗体を用いる治療は臨床的に評価されているところである。
【００１１】
これらいくつかの免疫療法が劇的な利益をもたらし、且つ大いに有望であることが示されたにもかかわらず、これら療法は重症副作用の可能性に対する懸念及び多くの腫瘍が標的抗原を欠き、そのため治療から逃れることになるという事実によって依然として限定的なままである。したがって、がんなどの増殖性疾患をもつ患者、及び特に、難治性がん及び／又は再発がんの患者を治療するための新しく、且つ改良された免疫療法が喫緊に必要である。
【発明の概要】
【００１２】
１つの態様では、本発明は、個人にａ）腫瘍関連抗原抗体−インターフェロン（「ＴＡＡ抗体−ＩＦＮ」）融合分子及びｂ）免疫療法を施すことを含む個人における増殖性疾患（がんなど）を治療するために設計された併用療法に関し、該併用療法は、エフェクター細胞による殺腫瘍細胞作用の増加をもたらし、すなわち、併用して施行された場合、ＴＡＡ抗体−ＩＦＮ融合分子と免疫療法との間に相乗効果が存在する。
【００１３】
さまざまな実施形態では、免疫療法は、ＣＴＬＡ−４、ＰＤ−１、ＯＸ−４０、ＣＤ１３７、ＧＩＴＲ、ＬＡＧ３、ＴＩＭ−３、及びＶＩＳＴＡなどの共刺激分子又は共抑制分子（免疫チェックポイント）に対するアゴニスト抗体、アンタゴニスト抗体、又は遮断抗体を用いる治療；ブリナツモマブなどの二重特異性Ｔ細胞誘導抗体（ＢｉＴＥ（登録商標））を用いる治療；ＩＬ−２、ＩＬ−１２、ＩＬ−１５、ＩＬ−２１、ＧＭ−ＣＳＦ、並びにＩＦＮ−α、ＩＦＮ−β、及びＩＦＮ−γなどの生物学的応答調節物質の投与を含む治療；シプロイセル−Ｔなどの治療ワクチンを用いる治療；樹状細胞ワクチンもしくは腫瘍抗原ペプチドワクチンを用いる治療；キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）−Ｔ細胞を用いる治療；ＣＡＲ−ＮＫ細胞を用いる治療；腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）を用いる治療；（生体外で増殖させた及び／又はＴＣＲトランスジェニックの）養子移入された抗腫瘍性Ｔ細胞を用いる治療；ＴＡＬＬ−１０４細胞を用いる治療；並びにＴｏｌｌ様受容体（ＴＬＲ）アゴニストＣｐＧ及びイミキモドなどの免疫賦活剤を用いる治療からなる群より選択される。さまざまな実施形態では、免疫療法は、共刺激分子又は共抑制分子に対するアゴニスト抗体、アンタゴニスト抗体、又は遮断抗体を用いる治療；キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）−Ｔ細胞を用いる治療；ＣＡＲ−ＮＫ細胞を用いる治療；及び二重特異性Ｔ細胞誘導抗体（ＢｉＴＥ（登録商標））を用いる治療からなる群より選択される。さまざまな実施形態では、免疫療法は、共刺激分子又は共抑制分子に対するアゴニスト抗体、アンタゴニスト抗体、又は遮断抗体を用いる治療である。さまざまな実施形態では、免疫療法はキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）−Ｔ細胞を用いる治療である。さまざまな実施形態では、免疫療法はＣＡＲ−ＮＫ細胞を用いる治療である。さまざまな実施形態では、免疫療法は二重特異性Ｔ細胞誘導抗体（ＢｉＴＥ（登録商標））を用いる治療である。
【００１４】
さまざまな実施形態では、融合分子は、完全ヒト抗体、ヒト化抗体、キメラ抗体、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、組換え抗体、抗体結合性抗体フラグメント、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆａｂ２、Ｆａｂ’２、ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＥ、ｓｃＦｖ、ｄｓＦｖ、ｄＡｂ、ナノボディ、ユニボディ、及び二特異性抗体からなる群より選択されるＴＡＡ抗体を含む。さまざまな実施形態では、抗体はキメラ抗体である。さまざまな実施形態では、抗体はヒト化モノクローナル抗体である。さまざまな実施形態では、抗体は完全ヒトモノクローナル抗体である。さまざまな実施形態では、ＴＡＡ抗体は、完全ヒト抗ＨＥＲ２／ｎｅｕ抗体、完全ヒト抗ＣＤ２０抗体、完全ヒト抗ＣＤ１３８抗体、完全ヒト抗ＧＲＰ９４（エンドプラスミン）抗体、完全ヒト抗ＣＤ３３抗体、及び完全ヒト抗ＣＤ７０抗体からなる群より選択される完全ヒト抗体である。
【００１５】
さまざまな実施形態では、融合分子は１型インターフェロン分子を含む。さまざまな実施形態では、融合分子は１型インターフェロン変異体分子を含む。さまざまな実施形態では、融合分子はインターフェロン−アルファ（ＩＦＮ−α）分子を含む。さまざまな実施形態では、融合分子は配列番号１のアミノ酸配列をもつヒトＩＦＮ−α２ｂ分子を含む。さまざまな実施形態では、融合分子は配列番号２のアミノ酸配列をもつＩＦＮ−α２ｂ変異体分子を含む。さまざまな実施形態では、融合分子は配列番号３のアミノ酸配列をもつヒトＩＦＮ−α１４分子を含む。さまざまな実施形態では、融合分子はインターフェロン−ベータ（ＩＦＮ−β）分子を含む。さまざまな実施形態では、融合分子は配列番号４のアミノ酸配列をもつヒトＩＦＮ−β−１ａ分子を含む。さまざまな実施形態では、融合分子は配列番号５のアミノ酸配列をもつヒトＩＦＮ−β−１ｂ分子を含む。
【００１６】
さまざまな実施形態では、融合分子は腫瘍関連抗原抗体に直接結合するインターフェロン分子を含む。
【００１７】
さまざまな実施形態では、融合分子は、ペプチドリンカーを介してＴＡＡ抗体に結合するＩＦＮ分子を含む。さまざまな実施形態では、ペプチドリンカーは、長さが２０個未満のアミノ酸である。さまざまな実施形態では、ペプチドリンカーはＧ／Ｓに富むリンカーである。さまざまな実施形態では、ペプチドリンカーはアルファヘリックスリンカーである。さまざまな実施形態では、ペプチドリンカーは配列番号１８に記載の配列をもつ。さまざまな実施形態では、ペプチドリンカーは配列番号１９に記載の配列をもつ。
【００１８】
さまざまな実施形態では、融合分子は遺伝子組換えで発現された融合分子である。
【００１９】
さまざまな実施形態では、増殖性疾患は、Ｂ細胞リンパ腫；肺がん（小細胞肺がん及び非小細胞肺がん）；気管支がん；結腸直腸がん；前立腺がん；乳がん；膵臓がん；胃がん；卵巣がん；膀胱がん；脳又は中枢神経系がん；末梢神経系がん；食道がん；子宮頸がん；黒色腫；子宮又は子宮内膜がん；口腔又は咽頭のがん；肝がん；腎臓がん；胆道がん；小腸又は虫垂がん；唾液腺がん；甲状腺がん；副腎がん；骨肉腫；軟骨肉腫；脂肪肉腫；精巣がん；並びに悪性線維性組織球腫；皮膚がん；頭及び首がん；リンパ腫；肉腫；多発性骨髄腫；並びに白血病からなる群より選択されるがんである。
【００２０】
さまざまな実施形態では、個人は、以前は抗がん療法を用いた治療に反応したが、治療の中止時に再発を経験する（以降「再発がん」）。さまざまな実施形態では、個人は耐性がん又は難治性がんを患う。
【００２１】
さまざまな実施形態では、ａ）抗ＨＥＲ２／ｎｅｕ−ＩＦＮ−α融合分子を含む医薬組成物の有効量及びｂ）免疫療法を個人に施行することを含む、乳がん、卵巣がん、及び非小細胞肺がん（ＮＳＣＬＣ）からなる群より選択されるがんを治療する併用治療法が提供され、その併用療法はエフェクター細胞による殺作用の増加をもたらす。さまざまな実施形態では、免疫療法は、共刺激分子又は共抑制分子に対するアゴニスト抗体、アンタゴニスト抗体、又は遮断抗体を用いる治療である。さまざまな実施形態では、免疫療法はキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）−Ｔ細胞を用いる治療である。さまざまな実施形態では、免疫療法はＣＡＲ−ＮＫ細胞を用いる治療である。さまざまな実施形態では、免疫療法は二重特異性Ｔ細胞誘導抗体（ＢｉＴＥ（登録商標））を用いる治療である。さまざまな実施形態では、がんはＨＥＲ２／ｎｅｕを発現する。さまざまな実施形態では、がんはＨＥＲ２／ｎｅｕ発現がんの腫瘍微小環境内の非ＨＥＲ２／ｎｅｕ発現がんである。さまざまな実施形態では、免疫療法は、ＨＥＲ２／ｎｅｕと異なるＴＡＡを標的にすることになる。
【００２２】
さまざまな実施形態では、ａ）抗ＣＤ２０抗体−ＩＦＮ−α融合分子を含む医薬組成物の有効量及びｂ）免疫療法を個人に施行することを含む、Ｂ細胞性非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）及びＢ細胞性慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）からなる群より選択されるがんを治療する併用治療法が提供され；、その併用療法はエフェクター細胞による殺作用の増加をもたらす。さまざまな実施形態では、免疫療法は、共刺激分子又は共抑制分子に対するアゴニスト抗体、アンタゴニスト抗体、又は遮断抗体を用いる治療である。さまざまな実施形態では、免疫療法はキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）−Ｔ細胞を用いる治療である。さまざまな実施形態では、免疫療法はＣＡＲ−ＮＫ細胞を用いる治療である。さまざまな実施形態では、免疫療法は二重特異性Ｔ細胞誘導抗体（ＢｉＴＥ（登録商標））を用いる治療である。さまざまな実施形態では、がんはＣＤ２０を発現する。さまざまな実施形態では、がんはＣＤ２０発現がんの腫瘍微小環境内の非ＣＤ２０発現がんである。さまざまな実施形態では、免疫療法は、ＣＤ２０と異なるＴＡＡを標的にすることになる。
【００２３】
さまざまな実施形態では、抗ＣＤ１３８抗体−ＩＦＮ−α融合分子を含む医薬組成物の有効量及びｂ）免疫療法を個人に施行することを含む、多発性骨髄腫、乳がん、及び膀胱がんからなる群より選択されるがんを治療する併用治療法が提供され、その併用療法はエフェクター細胞による殺作用の増加をもたらす。さまざまな実施形態では、免疫療法は、共刺激分子又は共抑制分子に対するアゴニスト抗体、アンタゴニスト抗体、又は遮断抗体を用いる治療である。さまざまな実施形態では、免疫療法はキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）−Ｔ細胞を用いる治療である。さまざまな実施形態では、免疫療法はＣＡＲ−ＮＫ細胞を用いる治療である。さまざまな実施形態では、免疫療法は二重特異性Ｔ細胞誘導抗体（ＢｉＴＥ（登録商標））を用いる治療である。さまざまな実施形態では、がんはＣＤ１３８を発現する。さまざまな実施形態では、がんはＣＤ１３８発現がんの腫瘍微小環境内の非ＣＤ１３８発現がんである。さまざまな実施形態では、免疫療法は、ＣＤ１３８と異なるＴＡＡを標的にすることになる。
【００２４】
さまざまな実施形態では、抗ＧＲＰ９４（エンドプラスミン）抗体−ＩＦＮ−α融合分子を含む医薬組成物の有効量及びｂ）免疫療法を個人に施行することを含む、ＮＳＣＬＣ、急性脊髄性白血病（ＡＭＬ）、多発性骨髄腫、黒色腫、及び膵がんからなる群より選択されるがんを治療する併用治療法が提供され、その併用療法はエフェクター細胞による殺作用の増加をもたらす。さまざまな実施形態では、免疫療法は、共刺激分子又は共抑制分子に対するアゴニスト抗体、アンタゴニスト抗体、又は遮断抗体を用いる治療である。さまざまな実施形態では、免疫療法はキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）−Ｔ細胞を用いる治療である。さまざまな実施形態では、免疫療法はＣＡＲ−ＮＫ細胞を用いる治療である。さまざまな実施形態では、免疫療法は二重特異性Ｔ細胞誘導抗体（ＢｉＴＥ（登録商標））を用いる治療である。さまざまな実施形態では、がんはＧＲＰ９４を発現する。さまざまな実施形態では、がんはＧＲＰ９４発現がんの腫瘍微小環境内の非ＧＲＰ９４発現がんである。さまざまな実施形態では、免疫療法は、ＧＲＰ９４と異なるＴＡＡを標的にすることになる。
【００２５】
さまざまな実施形態では、抗ＣＤ３３抗体−ＩＦＮ−α融合分子を含む医薬組成物の有効量及びｂ）免疫療法を個人に施行することを含む、ＡＭＬ、慢性脊髄性白血病（ＣＭＬ）、及び多発性骨髄腫からなる群より選択されるがんを治療する併用治療法が提供され、その併用療法はエフェクター細胞による殺作用の増加をもたらす。さまざまな実施形態では、免疫療法は、共刺激分子又は共抑制分子に対するアゴニスト抗体、アンタゴニスト抗体、又は遮断抗体を用いる治療である。さまざまな実施形態では、免疫療法はキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）−Ｔ細胞を用いる治療である。さまざまな実施形態では、免疫療法はＣＡＲ−ＮＫ細胞を用いる治療である。さまざまな実施形態では、免疫療法は二重特異性Ｔ細胞誘導抗体（ＢｉＴＥ（登録商標））を用いる治療である。さまざまな実施形態では、がんはＣＤ３３を発現する。さまざまな実施形態では、がんはＣＤ３３発現がんの腫瘍微小環境内の非ＣＤ３３発現がんである。さまざまな実施形態では、免疫療法は、ＣＤ３３と異なるＴＡＡを標的にすることになる。
【００２６】
さまざまな実施形態では、抗ＣＤ７０抗体−ＩＦＮ−α融合分子を含む医薬組成物の有効量及びｂ）免疫療法を個人に施行することを含む、腎細胞癌（ＲＣＣ）、ワルデンストレームマクログロブリン血症、多発性骨髄腫、及びＮＨＬからなる群より選択されるがんを治療する併用治療法が提供され、その併用療法はエフェクター細胞による殺作用の増加をもたらす。さまざまな実施形態では、免疫療法は、共刺激分子又は共抑制分子に対するアゴニスト抗体、アンタゴニスト抗体、又は遮断抗体を用いる治療である。さまざまな実施形態では、免疫療法はキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）−Ｔ細胞を用いる治療である。さまざまな実施形態では、免疫療法はＣＡＲ−ＮＫ細胞を用いる治療である。さまざまな実施形態では、免疫療法は二重特異性Ｔ細胞誘導抗体（ＢｉＴＥ（登録商標））を用いる治療である。さまざまな実施形態では、がんはＣＤ７０を発現する。さまざまな実施形態では、がんはＣＤ７０発現がんの腫瘍微小環境内の非ＣＤ７０発現がんである。さまざまな実施形態では、免疫療法は、ＣＤ７０と異なるＴＡＡを標的にすることになる。
【００２７】
さまざまな実施形態では、併用治療法は、ＴＡＡ抗体−ＩＦＮ融合分子及び免疫療法を同時に、同じ医薬組成物または別個の医薬組成物で施行することを含む。代替的に、ＴＡＡ抗体−ＩＦＮ融合分子及び免疫療法は、順次連続して施行される。すなわち、ＴＡＡ抗体−ＩＦＮ融合分子は免疫療法の前後いずれかに投与される。
【００２８】
さまざまな実施形態では、ＴＡＡ抗体−ＩＦＮ融合分子及び免疫療法の投与は並行し、すなわち、ＴＡＡ抗体−ＩＦＮ融合分子及び免疫療法の施行期間は互いに重なる。
【００２９】
さまざまな実施形態では、ＴＡＡ抗体−ＩＦＮ融合分子及び免疫療法の投与は並行しない。例えば、いくつかの実施形態では、ＴＡＡ抗体−ＩＦＮ融合分子の投与は、免疫療法が施行される前に中止される。いくつかの実施形態では、ＴＡＡ抗体−ＩＦＮ融合分子の施行は、ＴＡＡ抗体−ＩＦＮ融合分子が投与される前に中止される。
【００３０】
さまざまな実施形態では、本方法は、化学療法、低分子キナーゼ阻害剤標的療法、手術、放射線療法、及び幹細胞移植からなる群より選択される１つ以上の追加療法含んでもよい。
【００３１】
別の態様では、本発明は、非天然ＴＡＡ抗体−ＩＦＮ融合分子を個人に投与することを含む個人における増殖性疾患を治療する方法に関し、ＴＡＡ抗体−ＩＦＮ融合分子は、以下の範囲のいずれかに含まれる投与量（例えば、週間投与量）で個人に投与される。約０．０００１〜約０．０００３ｍｇ／ｋｇ、約０．０００３〜約０．００１ｍｇ／ｋｇ、約０．００１〜約０．００３ｍｇ／ｋｇ、約０．００３〜約０．０１ｍｇ／ｋｇ、約０．０１〜約０．０３ｍｇ／ｋｇ、約０．０３〜約０．１ｍｇ／ｋｇ、約０．１〜約０．３ｍｇ／ｋｇ、約０．３〜約０．４ｍｇ／ｋｇ、約０．４〜約０．５ｍｇ／ｋｇ、約０．５〜約０．６ｍｇ／ｋｇ、約０．６〜約０．７ｍｇ／ｋｇ、約０．７〜約０．８ｍｇ／ｋｇ、及び約０．８〜約０．９ｍｇ／ｋｇ。さまざまな実施形態では、ＴＡＡ抗体−ＩＦＮ融合分子は、約０．０００１ｍｇ／ｋｇ、約０．０００３ｍｇ／ｋｇ、約０．００１ｍｇ／ｋｇ、約０．００３ｍｇ／ｋｇ、約０．０１ｍｇ／ｋｇ、約０．０３ｍｇ／ｋｇ、約０．１ｍｇ／ｋｇ、約０．２ｍｇ／ｋｇ、約０．３ｍｇ／ｋｇ、約０．４ｍｇ／ｋｇ、約０．５ｍｇ／ｋｇ、約０．６ｍｇ／ｋｇ、約０．７ｍｇ／ｋｇ、約０．８ｍｇ／ｋｇ、及び約０．９ｍｇ／ｋｇからなる群より選択される週間投与量で個人に投与される。さまざまな実施形態では、ＴＡＡ抗体−ＩＦＮ融合分子は、およそ、０．０００１ｍｇ／ｋｇ、０．０００３ｍｇ／ｋｇ、０．００１ｍｇ／ｋｇ、０．００３ｍｇ／ｋｇ、０．０１ｍｇ／ｋｇ、０．０３ｍｇ／ｋｇ、０．１ｍｇ／ｋｇ、０．２ｍｇ／ｋｇ、０．３ｍｇ／ｋｇ、０．４ｍｇ／ｋｇ、０．５ｍｇ／ｋｇ、０．６ｍｇ／ｋｇ、０．７ｍｇ／ｋｇ、０．８ｍｇ／ｋｇ、及び０．９ｍｇ／ｋｇのいずれかを超えない投与量（例えば、週間投与量）で個人に投与される。さまざまな実施形態では、がんは本発明の抗ＴＡＡ抗体−ＩＦＮ−α融合分子のＴＡＡを発現する。さまざまな実施形態では、がんはＴＡＡ発現がんの腫瘍微小環境内の非ＴＡＡ発現がんである。
【００３２】
さまざまな実施形態では、増殖性疾患は、乳がん、卵巣がん、及び非小細胞肺がん（ＮＳＣＬＣ）からなる群より選択されるがんであり、抗ＨＥＲ２／ｎｅｕ−ＩＦＮ−α融合分子を含む医薬組成物の有効量を個人に投与することを含み、抗ＨＥＲ２／ｎｅｕ−ＩＦＮ−α融合分子は、約０．０００１〜約０．０００３ｍｇ／ｋｇ、約０．０００３〜約０．００１ｍｇ／ｋｇ、約０．００１〜約０．００３ｍｇ／ｋｇ、約０．００３〜約０．０１ｍｇ／ｋｇ、約０．０１〜約０．０３ｍｇ／ｋｇ、約０．０３〜約０．１ｍｇ／ｋｇ、約０．１〜約０．３ｍｇ／ｋｇ、約０．３〜約０．４ｍｇ／ｋｇ、約０．４〜約０．５ｍｇ／ｋｇ、約０．５〜約０．６ｍｇ／ｋｇ、約０．６〜約０．７ｍｇ／ｋｇ、約０．７〜約０．８ｍｇ／ｋｇ、及び約０．８〜約０．９ｍｇ／ｋｇからなる群より選択される週間投与量で個人に投与される。さまざまな実施形態では、がんはＨＥＲ２／ｎｅｕを発現する。さまざまな実施形態では、がんはＨＥＲ２／ｎｅｕ発現がんの腫瘍微小環境内の非ＨＥＲ２／ｎｅｕ発現がんである。
【００３３】
さまざまな実施形態では、増殖性疾患は、Ｂ細胞性非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）及びＢ細胞性慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）からなる群より選択されるがんであり、抗ＣＤ２０抗体−ＩＦＮ−α融合分子を含む医薬組成物の有効量を個人に投与することを含み、抗ＣＤ２０−ＩＦＮ−α融合分子は、約０．０００１〜約０．０００３ｍｇ／ｋｇ、約０．０００３〜約０．００１ｍｇ／ｋｇ、約０．００１〜約０．００３ｍｇ／ｋｇ、約０．００３〜約０．０１ｍｇ／ｋｇ、約０．０１〜約０．０３ｍｇ／ｋｇ、約０．０３〜約０．１ｍｇ／ｋｇ、約０．１〜約０．３ｍｇ／ｋｇ、約０．３〜約０．４ｍｇ／ｋｇ、約０．４〜約０．５ｍｇ／ｋｇ、約０．５〜約０．６ｍｇ／ｋｇ、約０．６〜約０．７ｍｇ／ｋｇ、約０．７〜約０．８ｍｇ／ｋｇ、及び約０．８〜約０．９ｍｇ／ｋｇからなる群より選択される週間投与量で個人に投与される。さまざまな実施形態では、がんはＣＤ２０を発現する。さまざまな実施形態では、がんはＣＤ２０発現がんの腫瘍微小環境内の非ＣＤ２０発現がんである。
【００３４】
さまざまな実施形態では、増殖性疾患は、多発性骨髄腫、乳がん、及び膀胱がんからなる群より選択されるがんであり、抗ＣＤ１３８抗体−ＩＦＮ−α融合分子を含む医薬組成物の有効量を個人に投与することを含み、抗ＣＤ１３８−ＩＦＮ−α融合分子は、約０．０００１〜約０．０００３ｍｇ／ｋｇ、約０．０００３〜約０．００１ｍｇ／ｋｇ、約０．００１〜約０．００３ｍｇ／ｋｇ、約０．００３〜約０．０１ｍｇ／ｋｇ、約０．０１〜約０．０３ｍｇ／ｋｇ、約０．０３〜約０．１ｍｇ／ｋｇ、約０．１〜約０．３ｍｇ／ｋｇ、約０．３〜約０．４ｍｇ／ｋｇ、約０．４〜約０．５ｍｇ／ｋｇ、約０．５〜約０．６ｍｇ／ｋｇ、約０．６〜約０．７ｍｇ／ｋｇ、約０．７〜約０．８ｍｇ／ｋｇ、及び約０．８〜約０．９ｍｇ／ｋｇからなる群より選択される週間投与量で個人に投与される。さまざまな実施形態では、がんはＣＤ１３８を発現する。さまざまな実施形態では、がんはＣＤ１３８発現がんの腫瘍微小環境内の非ＣＤ１３８発現がんである。
【００３５】
さまざまな実施形態では、増殖性疾患は、ＮＳＣＬＣ、急性脊髄性白血病（ＡＭＬ）、多発性骨髄腫、黒色腫、及び膵がんからなる群より選択されるがんであり、抗ＧＲＰ９４（エンドプラスミン）抗体−ＩＦＮ−α融合分子を含む医薬組成物の有効量を個人に投与することを含み、抗ＧＲＰ９４−ＩＦＮ−α融合分子は、約０．０００１〜約０．０００３ｍｇ／ｋｇ、約０．０００３〜約０．００１ｍｇ／ｋｇ、約０．００１〜約０．００３ｍｇ／ｋｇ、約０．００３〜約０．０１ｍｇ／ｋｇ、約０．０１〜約０．０３ｍｇ／ｋｇ、約０．０３〜約０．１ｍｇ／ｋｇ、約０．１〜約０．３ｍｇ／ｋｇ、約０．３〜約０．４ｍｇ／ｋｇ、約０．４〜約０．５ｍｇ／ｋｇ、約０．５〜約０．６ｍｇ／ｋｇ、約０．６〜約０．７ｍｇ／ｋｇ、約０．７〜約０．８ｍｇ／ｋｇ、及び約０．８〜約０．９ｍｇ／ｋｇからなる群より選択される週間投与量で個人に投与される。さまざまな実施形態では、がんはＧＲＰ９４を発現する。さまざまな実施形態では、がんはＧＲＰ９４発現がんの腫瘍微小環境内の非ＧＲＰ９４発現がんである。
【００３６】
さまざまな実施形態では、増殖性疾患は、ＡＭＬ、慢性脊髄性白血病（ＣＭＬ）、及び多発性骨髄腫からなる群より選択されるがんであり、ａ）抗ＣＤ３３抗体−ＩＦＮ−α融合分子を含む医薬組成物の有効量を個人に投与することを含み、抗ＣＤ３３−ＩＦＮ−α融合分子は、約０．０００１〜約０．０００３ｍｇ／ｋｇ、約０．０００３〜約０．００１ｍｇ／ｋｇ、約０．００１〜約０．００３ｍｇ／ｋｇ、約０．００３〜約０．０１ｍｇ／ｋｇ、約０．０１〜約０．０３ｍｇ／ｋｇ、約０．０３〜約０．１ｍｇ／ｋｇ、約０．１〜約０．３ｍｇ／ｋｇ、約０．３〜約０．４ｍｇ／ｋｇ、約０．４〜約０．５ｍｇ／ｋｇ、約０．５〜約０．６ｍｇ／ｋｇ、約０．６〜約０．７ｍｇ／ｋｇ、約０．７〜約０．８ｍｇ／ｋｇ、及び約０．８〜約０．９ｍｇ／ｋｇからなる群より選択される週間投与量で個人に投与される。さまざまな実施形態では、がんはＣＤ３３を発現する。さまざまな実施形態では、がんはＣＤ３３発現がんの腫瘍微小環境内の非ＣＤ３３発現がんである。
【００３７】
さまざまな実施形態では、増殖性疾患は、腎細胞癌（ＲＣＣ）、ワルデンストレームマクログロブリン血症、多発性骨髄腫、及びＮＨＬからなる群より選択されるがんであり、ａ）抗ＣＤ７０抗体−ＩＦＮ−α融合分子を含む医薬組成物の有効量を個人に投与することを含み、抗ＣＤ７０−ＩＦＮ−α融合分子は、約０．０００１〜約０．０００３ｍｇ／ｋｇ、約０．０００３〜約０．００１ｍｇ／ｋｇ、約０．００１〜約０．００３ｍｇ／ｋｇ、約０．００３〜約０．０１ｍｇ／ｋｇ、約０．０１〜約０．０３ｍｇ／ｋｇ、約０．０３〜約０．１ｍｇ／ｋｇ、約０．１〜約０．３ｍｇ／ｋｇ、約０．３〜約０．４ｍｇ／ｋｇ、約０．４〜約０．５ｍｇ／ｋｇ、約０．５〜約０．６ｍｇ／ｋｇ、約０．６〜約０．７ｍｇ／ｋｇ、約０．７〜約０．８ｍｇ／ｋｇ、及び約０．８〜約０．９ｍｇ／ｋｇからなる群より選択される週間投与量で個人に投与される。さまざまな実施形態では、がんはＣＤ７０を発現する。さまざまな実施形態では、がんはＣＤ７０発現がんの腫瘍微小環境内の非ＣＤ７０発現がんである。
【００３８】
別の態様では、本発明は、薬理学的に許容可能な賦形剤又は担体中にＴＡＡ抗体−ＩＦＮ融合分子及び第２の抗がん剤を活性成分として含む医薬組成物を提供する。さまざまな実施形態では、医薬組成物は、皮下注射、腹腔内注射、筋肉内注射、胸骨内注射、静脈内注射、動脈内注射、クモ膜下腔内注射、心室内注射、尿道内注射、頭蓋内注射、滑液嚢内注射からなる群より選択される経路又は注入を介した投与用に製剤される。
【００３９】
他の態様では、本開示は、本開示の融合分子をコードするポリヌクレオチド；本開示の融合分子をコードするポリヌクレオチドを含むベクター；随意に、ベクターで形質転換される宿主細胞によって認識される動作可能に連結調節配列；本開示の融合分子をコードするポリヌクレオチドを含むベクターを含む宿主細菌；ポリヌクレオチドが発現するように本開示の融合分子をコードするポリヌクレオチドを含むベクターを含む宿主細菌を培養すること及び宿主細胞培養培地から融合分子を回収することを含む、本開示の融合分子を作る方法を提供する。
【図面の簡単な説明】
【００４０】
【図１】図１は、例示的なＴＡＡ抗体−ＩＦＮ融合分子の模式図である。
【図２】図２は、ダウディ（ＡＴＣＣ  ＣＣＬ−２１３）及びラモス（ＡＴＣＣ  ＣＲＬ−１５９６）ＮＨＬ細胞株を用いた、ＩＧＮ００２非融合ｍＡｂと比較したＩＧＮ００２のＡＤＣＣ及びＣＤＣ活性を示す。ＡＤＣＣ実験については、ダウディＮＨＬ腫瘍細胞を示されている濃度のＩＧＮ００２融合タンパク質又はＩＧＮ００２ｍＡｂとともに１５分間インキュベーションし、次いでエフェクター対標的細胞比（Ｅ：Ｔ比）が５０：１となるように腫瘍細胞をエフェクター細胞として、正常ヒト末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を加えた。プレートを３７℃にて５％ＣＯ２雰囲気中で一晩１６時間インキュベーションした。インキュベーション後、製造業者の取扱説明書に従って標準的な乳酸脱水素酵素（ＬＤＨ）アッセイ（ロシュ・ダイアグノスティックス社）を使用して％標的細胞溶解を決定した。プリズムソフトウェアを用いた非線形回帰分析によって用量反応曲線を作成した。ＣＤＣ実験については、ラモスＮＨＬ腫瘍細胞を示されている濃度のＩＧＮ００２融合タンパク質又はＩＧＮ００２ｍＡｂとともに氷上で１５分間インキュベーションし、次いで、市場ヒト補体血清（キデル社）を最終濃度が１０％となるように各チューブに加えた。試料を３７℃にて５％ＣＯ２雰囲気中で３時間インキュベーションし、次いで、製造業者の取扱説明書（ロシュ・ダイアグノスティックス社）に従って、生存性をヨウ化プロピジウム（ＰＩ）フローサイトメトリーで評価した。プリズムソフトウェアを用いた非線形回帰分析によって用量反応曲線を作成した。ＩＧＮ００２は非融合抗体と比較して優れたＡＤＣＣ及びＣＤＣ活性を示すことが明らかとなった。
【図３】図３は、非標的設定及び標的設定で非融合ＩＦＮ−α２ｂと比較したＩＧＮ００４のＳＴＡＴ１リン酸化及び増殖阻害活性を示す。非標的ＳＴＡＴ１リン酸化実験については、ダウディＮＨＬ腫瘍細胞（ＧＲＰ９４陰性）を示されている濃度のＩＧＮ００４又はＩＦＮ−α２ｂとともに１５分間インキュベーションし、次いで細胞を固定し、透過処理して、ＰＥ標識抗−ＳＴＡＴ１（ｐＹ７０１）又はＰＥ標識アイソタイプ対照で細胞内染色した。標的増殖阻害実験については、ＧＲＰ９４陽性ＮＣＩ−Ｈ１２９９  ＮＳＣＬＣ腫瘍細胞（ＡＴＣＣ  ＣＲＬ−５８０３）を示されている濃度のＩＧＮ００４融合タンパク質またはＩＦＮ−α２ｂで３７℃にて５％ＣＯ２雰囲気中で９６時間処理した。インキュベーション後、標準的なＭＴＳアッセイ（プロメガＣｅｌｌ  Ｔｉｔｅｒ９６；プロメガ社、マディソン、ウィスコンシン州）を行って細胞増殖を評価した。プリズムソフトウェアを用いた非線形回帰分析によって用量反応曲線を作成した。
【図４】図４は、Ｕ２６６ヒト多発性骨髄腫異種移植腫瘍モデルにおけるＩＧＮ００４の生体内抗腫瘍有効性を示す。１１日間定着させた皮下Ｕ２６６ヒト多発性骨髄腫異種移植腫瘍をもつＮＯＧ免疫不全マウスの８頭の群を、溶媒（リン酸緩衝食塩水）又は５、１、若しくは０．２ｍｇ／ｋｇのＩＧＮ００４静脈内に週に２回、４週間治療した。カリパスを用いて腫瘍を２方向で測り、腫瘍体積を０．５×（Ｌ×Ｗ２）として算出した。動物を生存について追跡し、腫瘍が２０００ｍｍ３に達したとき犠牲にした。平均腫瘍体積（ｍｍ３）を腫瘍チャレンジ後の日数に対してプロットした。
【図５】図５は、Ａ５４９ヒトＮＳＣＬＣ腫瘍細胞株（ＡＴＣＣ  ＣＣＬ−１８５）を用いてＩＧＮ００４の存在下又は非存在下において評価したヒトＣＤ８＋ＮＫＴ細胞様ＴＡＬＬ−１０４エフェクター細胞株（ＡＴＣＣ  ＣＲＬ−１１３８６）の殺腫瘍細胞活性を示す。ＩＧＮ００４処理は、Ａ５４９腫瘍細胞の生存率（１５．８２％）の微減をもたらした。ＴＡＬＬ−１０４エフェクター細胞は、ＩＧＮ００４の非存在下で強力な殺作用を示した（６９．２％）。しかし、ＩＧＮ００４及びＴＡＬＬ−１０４細胞の組み合わせは、Ａ５４９腫瘍細胞を完全になくすことに至った（１００％死滅）。この効果は、いずれの薬剤単独をあわせたものより強力であった（８５．０２％対１００％）。
【図６】図６は、異なるヒトＮＳＣＬＣ腫瘍細胞株（ＮＣＩ−Ｈ１９７５；ＡＴＣＣ  ＣＲＬ−５９０８）を用いてＩＧＮ００４の存在下又は非存在下において２つの異なるＥ：Ｔ比で評価したＴＡＬＬ−１０４エフェクター細胞の殺腫瘍細胞活性を示す。ＩＧＮ００４処理は、Ａ５４９腫瘍細胞の生存率（５．７％及び１０．６％）の微減をもたらした。ＴＡＬＬ−１０４エフェクター細胞は、ＩＧＮ００４の非存在下においてＥ：Ｔ比が５：１及び３．３：１の両方で有意な殺作用を示した（それぞれ、５８．６％及び５５．７％）。しかし、５０ｐＭのＩＧＮ００４及びＴＡＬＬ−１０４細胞の組み合わせは、両方のＥ：Ｔ比で、よりいっそう効果的なＮＣＩ−Ｈ１９７５腫瘍細胞標的に対する殺作用につながった（それぞれ、９３．８％及び９３．２％）。
【図７】図７は、ＮＣＩ−Ｈ１９７５ＮＳＣＬＣ腫瘍細胞を用いてＩＧＮ００４の存在下で評価されたＴＡＬＬ−１０４腫瘍細胞に対する殺作用の効力を示す。ＴＡＬＬ−１０４エフェクター細胞は、ＩＧＮ００４併用治療の非存在下で１７％のＮＣＩ−Ｈ１９７５腫瘍細胞を死滅させた。０．２５〜２５ｐＭの濃度でＴＡＬＬ−１０４細胞と併用したＩＧＮ００４での処理は、ＴＡＬＬ−１０４治療単独と比較して、殺腫瘍細胞作用の増加をもたらした。
【図８】図８は、Ａ５４９  ＮＳＣＬＣ腫瘍細胞で、１０ｐＭ  ＩＧＮ００４の存在下又は非存在下においてさまざまなＥ：Ｔ比で評価した下降調節したＴＡＬＬ−１０４エフェクター細胞の殺腫瘍細胞活性を示す。１０ｐＭのＩＧＮ００４単独では腫瘍細胞への効果がなかった。３：１のＥ：Ｔ比では、ＴＡＬＬ−１０４細胞は薬剤の非存在下で約４０％のＡ５４９腫瘍細胞を死滅させ、より低いＥ：Ｔ比では、エフェクター細胞は腫瘍細胞を死滅させるのに無効であった。薬剤なしではＴＡＬＬ−１０４が腫瘍細胞への効果がなかった０．７５：１のＥ：Ｔでも、１０ｐＭのＩＧＮ００４の存在下ではＴＡＬＬ−１０４細胞は強い殺腫瘍細胞作用を示した。
【図９】図９は、ＩＧＮ００４融合タンパク質又はＩＧＮ００４非融合ｍＡｂの存在下又は非存在下で評価したＴＡＬＬ−１０４エフェクター細胞の殺腫瘍細胞活性を示す。１０ｐＭのＩＧＮ００４非融合ｍＡｂ単独では腫瘍細胞への効果がなく、１０ｐＭのＩＧＮ００４はほんのわずかな効果のみ（＜１０％）であった。すべてのＥ：Ｔ比においてＴＡＬＬ−１０４細胞は薬剤の非存在下で低いレベルの殺腫瘍細胞作用を示した。１０ｐＭのＩＧＮ００４ｍＡｂの存在下では、ＴＡＬＬ−１０４細胞は薬剤なしのＴＡＬＬ−１０４細胞と同等の割合で死滅させた。しかし、１０ｐＭのＩＧＮ００４を用いると、薬物なしと比較して、ＴＡＬＬ−１０４細胞による殺腫瘍細胞作用の有意な増加があった（７０〜８０％対１０〜２０％死滅）。
【図１０】図１０は、ＩＧＮ００４、対照ＴＡＡ抗体−ＩＦＮ−α融合分子又はＩＧＮ００４非融合ｍＡｂ＋非融合ＩＦＮ−αの組み合わせの存在下又は非存在下で評価したＴＡＬＬ−１０４エフェクター細胞の殺腫瘍細胞活性を示す。１０ｐＭの対照ＴＡＡ抗体−ＩＦＮ−α融合分子単独では腫瘍細胞への効果がなかった。１０ｐＭのＩＧＮ００４も、ＩＧＮ００４非融合ｍＡｂと非融合ＩＦＮ−α２ｂの組み合わせもわずかな効果のみ（＜１０％）であった。両方のＥ：Ｔ比で、ＴＡＬＬ−１０４細胞は薬剤の非存在下において低いレベルの殺腫瘍細胞作用を示した（＜１０％）。１０ｐＭの対照ＴＡＡ抗体−ＩＦＮ−α融合分子の存在下では、ＴＡＬＬ−１０４細胞は薬剤なしのＴＡＬＬ−１０４細胞と同等の割合で死滅させた。１０ｐＭのＩＧＮ００４ｍＡｂ＋非融合ＩＦＮ−α２ｂの組み合わせを用いると、ＡＬＬ−１０４エフェクター細胞は、より多くのＡ５４９腫瘍細胞を死滅させた（１：１及び１．５：１のＥ：Ｔでそれぞれ、１４％及び２５％の殺作用の増加）。しかし、１０ｐＭのＩＧＮ００４を用いると、薬物なしと比較して、ＴＡＬＬ−１０４細胞による殺腫瘍細胞作用のよりいっそう大きな増加があった（１：１及び１．５：１のＥ：Ｔでそれぞれ、３４％及び４２％の殺作用の増加）。
【図１１】図１１は、ＯＶＣＡＲ−３卵巣がん細胞株（ＡＴＣＣ  ＨＴＢ−１６１）を用いてＩＧＮ００４又は対照ＴＡＡ抗体−ＩＦＮ−α融合分子の存在下又は非存在下において２つのＥ：Ｔ比で評価したＮＫエフェクター細胞株ＮＫ−９２（ＡＴＣＣ  ＣＲＬ−２４０７）の殺腫瘍細胞活性を示す。１０ｐＭのいずれの治療タンパク質も、エフェクター細胞の非存在下で、腫瘍細胞への効果がなかった。ＮＫ−９２エフェクター細胞は薬剤の非存在下で、１．５：１のＥ：Ｔ比では強い殺腫瘍細胞作用（４９％死滅）を示し、０．５：１ではあまり大きくない殺作用（１９％死滅）を示した。１０ｐＭの対照ＴＡＡ抗体−ＩＦＮα融合の存在下では、ＮＫ−９２細胞は、薬剤なしのエフェクター細胞と同等の割合で死滅させた。１０ｐＭのＩＧＮ００４を用いると、薬剤なしと比較して、ＮＫ−９２細胞による殺腫瘍細胞作用の有意な増加があった（１．５：１及び０．５：１でそれぞれ、４５％及び２９％の殺作用の増加）。
【図１２】図１２は、ＩＧＮ００４又は非融合ＩＦＮ−α２ｂの存在下又は非存在下において２つのＥ：Ｔ比でＮＣＩ−Ｈ１９７５ＮＳＣＬＣ腫瘍細胞を用いて評価したＮＫ−９２エフェクター細胞の殺腫瘍細胞活性を示す。いずれの治療タンパク質での処理も、エフェクター細胞の非存在下で腫瘍細胞への効果がなかった。ＮＫ−９２エフェクター細胞は薬剤の非存在下では、殺腫瘍細胞作用が皆無かそれに近かった。１００ｐＭの非融合ＩＦＮ−αの存在下では、ＮＫ−９２細胞は、薬剤の非存在下でのＮＫ−９２細胞と比べて多くの腫瘍細胞を死滅させた。１０ｐＭのＩＧＮ００４を用いると、薬剤なし及びＩＦＮ−α２ｂ（１：１及び０．３：１でそれぞれ、５０％及び５１％の殺作用の増加）と比較して、ＮＫ−９２細胞による殺腫瘍細胞作用の有意な増加があった（１：１及び０．３：１でそれぞれ、８５％及び６２％の殺作用の増加）。
【発明を実施するための形態】
【００４１】
本開示は、抗体の標的抗原に対する特異性とＩＦＮ分子の強力な細胞傷害性作用とを兼ね備えた融合分子は、現在のがん免疫療法及び／又はＩＦＮに基づいた療法の有効性及び安全性プロファイルを著しく向上するであろうという発明者らの洞察に基づく。これは、非融合ＩＦＮと比較してＴＡＡ抗体−ＩＦＮ融合分子の使用には以下の大きな利点があるという発明者らの理解に部分的に基づいている。１）ＩＦＮの強力な細胞傷害性効果（誘発アポトーシス及びプログラム細胞死）が（非融合ＩＦＮと比較して）融合分子によって標的腫瘍細胞に集中し、腫瘍細胞上に発現するＩＦＮ−αＲとの結合が、腫瘍細胞をなくす役目を果たすことになる；２）ＴＡＡ抗体の標的抗原に対する特異性は非標的細胞をｓｐａｒし、ＩＦＮの全身毒性を減らすことになる；３）腫瘍微小環境内の樹状細胞（ＤＣ）上のＩＦＮ−αの局所的な作用が、ＤＣ上の腫瘍の抑制作用のいくつかを無効にするのを助け、ＤＣによるＴ細胞への腫瘍抗原のより効率的なクロスプレゼンテーションを導く可能性がありうる；４）ＩＦＮ−αはＴ細胞上で直接的に作用することになり、例えば、ＣＤ８＋ＣＴＬ機能を増強し、融合タンパク質の治療効果を向上する導く可能性がありうるＤＣクロスプレゼンテーションの増加によってＣＤ８＋ＣＴＬプライミングを向上する；５）融合分子が、リンパ器官（例えば、流入領域リンパ節、脾臓、骨髄）の免疫細胞を刺激又は活性化することになる；６）融合分子が、抗体−ＴＡＡ及び／又はＩＦＮ−ＩＦＮαＲ相互作用を介してそれらに直接結合することによって、腫瘍微小環境に存在する免疫細胞（例えば、Ｔ細胞、ナチュラルキラー細胞、抗原提示細胞、食細胞）を刺激又は活性化することになる；７）腫瘍細胞を効率的に死滅させることを可能にすることになるＣＤ８＋ＣＴＬ機能の直接的な活性化；８）腫瘍細胞上に発現する共阻害免疫チェックポイントタンパク質又は腫瘍細胞と結合する共阻害免疫チェックポイントタンパク質の上方調節を誘発すること；９）腫瘍細胞上に発現するＭＨＣクラスＩ又は腫瘍細胞と結合するＭＨＣクラスＩの上方調節を誘発し、Ｔ細胞に対するより良好な抗原提示を導くこと；並びに１０）免疫回避の他の機構、例えば、Ｔ細胞／Ｂ細胞上のある種特定の免疫チェックポイントタンパク質によって媒介される主要な阻害経路を直接無効にすること。
【００４２】
本明細書に記載のように、発明者らは、１）ＴＡＡ抗体−ＩＦＮ融合分子は、免疫療法と併せて使用して、エフェクター細胞による殺腫瘍細胞作用の増加をもたらす治療プロトコールを設計することができること（すなわち、共投与された場合にＴＡＡ抗体−ＩＦＮ融合分子と免疫療法との間に相乗効果がある）；並びに２）本明細書に記載のＴＡＡ抗体−ＩＦＮ融合分子及び方法を使用して、驚くべき低い投与量で、再発がん、耐性がん、又は難治性がんを含むがんを効果的に治療することができることを見出した。具体的には、本明細書に記載のＴＡＡ抗体−ＩＦＮ融合分子及び方法は、ＩＦＮの複数の性質を活用するのに最適であると思われ、以下を示す。１）ＴＡＡ発現腫瘍細胞を効果的に死滅させること及び２）ＴＡＡを発現する腫瘍細胞に隣接又は非常に近接する非ＴＡＡ発現腫瘍細胞（以降「バイスタンダー腫瘍細胞」とも呼ばれる）（すなわち、腫瘍微小環境にある非ＴＡＡ発現腫瘍細胞）を死滅させる能力。非融合ＩＦＮと比べて融合ＩＦＮはＩＦＮ受容体に対するアフィニティーが非常に低く、よって非融合ＩＦＮと比較して、非ＴＡＡ発現腫瘍細胞上のＩＦＮ受容体を刺激する効力が非常に低いことを考えれば、観察された非ＴＡＡ発現腫瘍細胞のこれらの「バイスタンダー効果」は驚くべきことである。そして重要なことには、明らかなバイスタンダー効果は腫瘍微小環境内の非ＴＡＡ発現腫瘍細胞でのみ、又は腫瘍微小環境の免疫細胞がＴＡＡ発現腫瘍細胞を攻撃するようにデザインされたいずれかのタイプの免疫療法によって刺激された場合にのみ観察される。したがって、本発明のＴＡＡ抗体−ＩＦＮ融合分子及び方法は、増殖性疾患の患者及び特に、再発増殖性疾患、耐性増殖性疾患、又は難治性増殖性疾患の患者を治療するための有望で新しい効果的な療法を示す。
【００４３】
本明細書において別段の規定がない限り、本明細書との関連で使用される科学用語及び技術用語は当業者に一般的に理解されている意味を有するものとする。さらに、前後関係から別段求められない限り、単数の用語は複数を含むものとし、複数の用語は単数を含むものとする。一般に、本明細書に記載の細胞及び組織培養、分子生物学、免疫学、微生物学、遺伝学、並びにタンパク質及び核酸化学及びハイブリダイゼーションに関連して使用される術語体系並びにそれらの技術は、当該技術分野において一般に使用され、周知であるものである。別段の指示がない限り、本発明の方法及び技術は一般に、当該技術分野において周知である従来の方法に従い、本明細書を通して引用及び考察されているさまざまな一般的な参考文献及びより詳しい参考文献に記載のように行われる。例えば、参照により本願明細書に組み込まれる、Ｇｒｅｅｎ  ａｎｄ  Ｓａｍｂｒｏｏｋ，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ、第４版、コールドスプリングハーバー研究所出版局、コールドスプリングハーバー、ニューヨーク州（２０１２年）を参照されたい。酵素反応及び精製技術は製造業者の仕様書に従って当該技術分野において一般的に達成されるように行われるは、又は本明細書に記載のように行われる。本明細書に記載の分析化学、合成有機化学、並びに医薬品及び製薬化学に関連して使用される術語体系並びにそれらの実験手順及び技術は、当該技術分野において一般に使用され、周知であるものである。標準的な技術が、化学合成、化学分析、医薬品調製、製剤、及び送達、及び患者の治療に使用される。
【００４４】
定義
「腫瘍関連抗原」（ＴＡＡ）という用語は、例えば、がん細胞によって選択的に発現されるか、又は大部分の正常細胞と比べてがん細胞において過剰発現されるかする細胞表面抗原を指す。本明細書において、「ＴＡＡバリアント」及び「ＴＡＡ変異体」という用語は、別のＴＡＡ配列と比べて、１つ以上のアミノ酸残基がそのアミノ酸配列に挿入、削除、及び／又は置換されているアミノ酸配列を含むＴＡＡを指す。さまざまな実施形態では、挿入、削除、又は置換されるアミノ酸残基の数は、例えば、少なくとも１個、少なくとも２個、少なくとも３個、少なくとも４個、少なくとも５個、少なくとも１０個、少なくとも２５個、少なくとも５０個、少なくとも７５個、少なくとも１００個、少なくとも１２５個、少なくとも１５０個、少なくとも１７５個、少なくとも２００個、少なくとも２２５個、少なくとも２５０個、少なくとも２７５個、少なくとも３００個、少なくとも３５０個、少なくとも４００個、少なくとも４５０個、又は少なくとも５００個のアミノ酸の長さであることができる。
【００４５】
本明細書で使用される場合、「腫瘍微小環境」という用語は、周囲の血管、免疫細胞、線維芽細胞、骨髄由来炎症細胞、リンパ球、シグナル伝達分子、及び細胞外マトリックス（ＥＣＭ）を含む、腫瘍が存在する細胞環境を指す。腫瘍微小環境の構成要素は、腫瘍細胞の増殖、例えば、その進行及び転移する能力を変えることができる。また、腫瘍微小環境は腫瘍放出細胞外シグナルによる影響を受け、腫瘍血管新生を促進し、且つ末梢性免疫寛容を誘発する可能性がある。
【００４６】
本明細書で使用される場合、「増殖性疾患」は腫瘍疾患（良性又はがん性を含む）及び／又はいずれの転移を含む。増殖性疾患としては、過形成、線維症（特に、肺線維症、それだけでなく腎線維症などの他のタイプの線維症）、新脈管形成、乾癬、アテローム性動脈硬化症、及び狭窄又は血管形成術後の再狭窄などの血管内平滑筋増殖などの過剰増殖状態が挙げられうる。いくつかの実施形態では、増殖性疾患はがんである。いくつかの実施形態では、増殖性疾患は非がん性疾患である。いくつかの実施形態では、増殖性疾患は良性腫瘍又は悪性腫瘍である。
【００４７】
本明細書で使用される場合、「治療）」は、有益又は所望の臨床的結果を得る方法である。本発明の目的のために、有益又は所望の臨床的結果としては、１つ以上の症状の緩和、疾患の範囲の縮小、疾患の拡散、例えば、転移、例えば、肺又はリンパ節への転移）の予防又は遅延、疾患の再発の予防又は遅延、疾患の進行を遅らせる又は遅くすること、病的状態の改善、及び（部分寛解又は完全寛解いずれにしても）寛解のいずれか１つ以上が挙げられるが、これらに限定されない。また、増殖性疾患の病理学的結果の減少も「治療」に包含される。本発明の方法は、治療のこれらの態様のいずれか１つ以上を企図する。
【００４８】
本明細書で使用される場合、「免疫療法」という用語は、限定されないが、特異的な腫瘍抗原に対する枯渇抗体を用いる治療；抗体−薬物複合体を用いる治療；ＣＴＬＡ−４、ＰＤ−１、ＯＸ−４０、ＣＤ１３７、ＧＩＴＲ、ＬＡＧ３、ＴＩＭ−３、及びＶＩＳＴＡなどの共刺激分子又は共抑制分子（免疫チェックポイント）に対するアゴニスト抗体、アンタゴニスト抗体、又は遮断抗体を用いる治療；ブリナツモマブなどの二重特異性Ｔ細胞誘導抗体（ＢｉＴＥ（登録商標））を用いる治療：ＩＬ−２、ＩＬ−１２、ＩＬ−１５、ＩＬ−２１、ＧＭ−ＣＳＦ、ＩＦＮ−α、ＩＦＮ−β、及びＩＦＮ−γなどの生物学的応答調節物質の投与を含む治療；シプロイセル−Ｔなどの治療ワクチンを用いる治療；樹状細胞ワクチンもしくは腫瘍抗原ペプチドワクチンを用いる治療；キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）−Ｔ細胞を用いる治療；ＣＡＲ−ＮＫ細胞を用いる治療；腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）を用いる治療；（生体外で増殖させた及び／又はＴＣＲトランスジェニックの）養子移入された抗腫瘍性Ｔ細胞を用いる治療；ＴＡＬＬ−１０４細胞を用いる治療；並びにＴｏｌｌ様受容体（ＴＬＲ）アゴニストＣｐＧ及びイミキモドなどの免疫賦活剤を用いる治療を含むがん治療を指す。
【００４９】
「Ｔ細胞機能を増強すること」とは、再生、保持、又は増幅された生体機能を有するようにエフェクター又はメモリーＴ細胞を誘発したり、かかる生体機能をそれらの細胞にもたせたり、かかる生体機能を有するようにそれらの細胞を刺激したりすることを意味する。Ｔ細胞機能を増強することとしては、例えば、治療介入前のそのレベルと比べた、ＣＤ８＋エフェクターＴ細胞からのγ−インターフェロン分泌の増加、ＣＤ４＋メモリー及び／又はエフェクターＴ細胞からのγ−インターフェロン分泌の増加、ＣＤ４＋エフェクター及び／又はメモリーＴ細胞の増殖の増加、ＣＤ８＋エフェクターＴ細胞の増殖の増加、抗原応答性（例えば、クリアランス）の増加が挙げられる。この増強を測定する方法は当業者に公知である。
【００５０】
本明細書において使用される場合、「有効量」又は「治療有効量」という用語は、特定の障害、病態、又は疾患を治療する、例えば、その１つ以上の症状を改善する、軽減する、且つ／又は遅延させるのに十分な化合物又は組成物の量を指す。ＮＨＬ及び他のがん又は他の望まれない細胞増殖に関して、有効量は、（ｉ）がん細胞の数を減らす；（ｉｉ）腫瘍サイズを小さくする；（ｉｉｉ）末梢臓器へのがん細胞浸潤をある程度阻害する、妨害する、遅延させる、好ましくは止める；（ｉｖ）腫瘍転移を阻害する（すなわち、ある程度、遅延させる、好ましくは止める）；（ｖ）腫瘍増殖を阻害する；（ｖｉ）腫瘍の発生及び／若しくは再発を予防する若しくは遅らせる；並びに／又は（ｖｉｉ）がんに関連する１つ以上の症状をある程度和らげるのに十分な量を含む。有効量は１回以上の投与で施すことができる。
【００５１】
「補助設定」は、個人が増殖性疾患、特にがんの病歴をもち、一般に（必ずしもそうとは限らないが）、限定されないが、手術（外科的切除など）、放射線療法、及び化学療法を含む治療に反応したことがある臨床設定を指す。しかし、増殖性疾患（がんなど）の個人の病歴に起因して、これらの個人は疾患発症の恐れがあると見なされる。「補助設定」における治療又は投与は後続の治療様式を指す。リスクの度合い（すなわち、補助設定にいる個人が「高いリスク」又は「低いリスク」とみなされる場合）は、いくつかの因子、たいていは最初に治療されたときの疾患の程度に依存する。
【００５２】
本発明の融合分子及び１つ以上の他の治療薬剤について言及して「共投与」、「共投与して」、及び「と併用して」という用語が本明細書で使用される場合、以下を意味することが意図され、且つ実際に参照及び包含される。治療を必要とする個人への本発明の融合分子及び治療薬剤のそのような組み合わせの同時投与、この場合、そのような構成成分は前記構成成分を前記個人に実質的に同時に放出する単回剤形で一緒にして製剤される；治療を必要とする個人への本発明の融合分子及び治療薬剤のそのような組み合わせの実質的に同時の投与、この場合、そのような構成成分は前記個人によって実質的に同時に摂取される別個の剤形に互いに別々に製剤され、前記構成成分は前記個人に実質的に同時に放出される；治療を必要とする個人への本発明の融合分子及び治療薬剤のそのような組み合わせの連続投与、この場合、そのような構成成分は、前記個人によって投与間の時間間隔を大きくあけて連続した時間で摂取される別個の剤形に、互いに別々に製剤され、前記構成成分は前記個人に実質的に時を異にして放出される；並びに治療を必要とする個人への本発明の融合分子及び治療薬剤のそのような組み合わせの連続投与、この場合、そのような構成成分は共に、制御された形で前記構成成分を放出する単回剤形に製剤される  それらは、並行して、連続的に、且つ／又はオーバーラップして、同時に且つ／又は時を異にして前記個人に放出され、各部分は同じ経路又は異なる経路で投与されうる。
【００５３】
「治療用タンパク質」という用語は、１つ以上の治療活性及び／又は生物学的活性をもつタンパク質、ポリペプチド、抗体、ペプチド、又はその断片若しくはバリアントを指す。本発明によって包含される治療用タンパク質としては、タンパク質、ポリペプチド、ペプチド、抗体、及び生物製剤が挙げられるが、これらに限定されない（ペプチド、タンパク質、及びポリペプチドという用語は本明細書において互換可能に使用される）。「治療用タンパク質」という用語が本発明の融合分子を包含することが具体的に企図される。
【００５４】
「患者」、「個人」、及び「対象」という用語は、互換可能に用いてよく、哺乳類、好ましくは、ヒト又は非ヒト霊長類、それだけでなく飼育哺乳類（例えば、イヌ又はネコ）、実験哺乳類（例えば、マウス、ラット、ウサギ、ハムスター、モルモット）、及び農業哺乳類（例えば、ウマ、ウシ、ブタ、ヒツジ）を指す。さまざまな実施形態では、患者は、病院、精神科療養施設において、外来患者として、又は他の臨床状況で医師又は他の医療従事者のケアを受けているヒト（例えば、成人男性、成人女性、青年男性、青年女性、男児、女児）であることができる。さまざまな実施形態では、患者は、免疫不全患者又は免疫系が低下している患者であることもあり、例えば、限定されないが、原発性免疫不全、ＡＩＤＳをもつ患者；ある種の免疫抑制剤を服用しているがん患者及び移植患者；及び免疫系を侵す遺伝性疾患（例えば、先天性無ガンマグロブリン血症、先天性ＩｇＡ欠損症）を患う者でありうる。さまざまな実施形態では、患者は、免疫原性のがん、例えば、限定されないが、膀胱がん、肺がん、黒色腫、及び変異をもつ率が高いことが報告されている他のがん（Ｌａｗｒｅｎｃｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，４９９（７４５７）：２１４−２１８，２０１３）を患う。
【００５５】
「医薬組成物」はヒトにおける医薬用途に適した組成物を指す。医薬組成物は、薬理学的に有効な量の活性薬剤及び薬理学的に許容可能な担体を含んでなる。「薬理学的に有効な量」は、意図する薬理学的結果を生じさせるのに有効な薬剤の量を指す。「薬理学的に許容可能な担体」は、リン酸緩衝生理食塩溶液、デキストロースの５％水溶液、及びエマルション、例えば油／水又は水／油エマルションなどの標準的な医薬担体、溶媒、バッファー、及び賦形剤、並びにさまざまな種類の湿潤剤及び／又は補助剤のいずれかを指す。適切な医薬担体及び製剤は、レミントンの薬学、第２１版、２００５年、Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏ、Ｅａｓｔｏｎに記載されている。「薬理学的に許容可能な塩」は、医薬用途のための化合物に製剤できる塩であり、例えば、金属塩（ナトリウム、カリウム、マグネシウム、カルシウムなど）及びアンモニア又は有機アミン塩である。
【００５６】
「投与すること」又は「投与されるようにする」という句は、問題の薬剤／化合物の患者への投与を管理及び／又は許可する、医療従事者（例えば、医師）又は患者の医療ケアを管理する者によってとられる行為を指す。投与されるようにすることは、診断及び／又は適切な治療レジメンの決定、及び／又は特定の薬剤／化合物を患者に対して処方することを含みうる。そのような処方することとしては、例えば、処方箋を書くこと、診療録に注釈を付けることなどを挙げることができる。投与が本明細書で記載される場合、「投与されるようにすること」も企図される。
【００５７】
「耐性がん又は難治性がん」は、例えば、化学療法、手術、放射線療法、幹細胞移植、及び免疫療法を含む過去の抗がん治療に反応しない腫瘍細胞又はがんを指す。腫瘍細胞は治療開始時に抵抗性若しくは難治性でありうるか、又は、腫瘍細胞は治療中に抵抗性若しくは難治性になることもある。難治性腫瘍細胞としては、治療開始時に反応しないか、又は初期には短い期間治療に反応するが、反応しなくなる腫瘍が挙げられる。難治性腫瘍細胞としては、抗がん療法での治療に反応するが、それに続く療法に反応しない腫瘍も挙げられる。本発明の目的のために、難治性腫瘍細胞は、抗がん療法での治療によって抑制されるように思われるが、治療が中止された後、５年までに、時には１０年までに、又はそれ以降に再発する腫瘍も包含する。抗がん治療は、化学療法剤単独、放射線単独、標的療法単独、手術単独、又はそれらの組み合わせを採用することができる。説明を容易にし、且つ限定しないために、難治性腫瘍細胞は耐性腫瘍と互換可能であることが理解されるであろう。
【００５８】
本出願では、別段の記述がない限り、単数形の使用は複数形を含む。本出願では、別段の記述がない限り、「又は」の使用は、「及び／又は」を意味する。さらに、「含むこと」という用語及び「含む」及び「含まれた」などの他の形の使用は限定的ではない。また、「要素」又は「構成成分」などの用語は、別段の具体的な記述がない限り、１つのユニットを含んでなる要素及び構成成分と、１つより多くのサブユニットを含んでなる要素及び構成成分との両方を包含する。
【００５９】
本明細書における値又はパラメーターの「約」への参照は、その値又はパラメーターそれ自体を対象とするばらつきを含む（且つ記載する）。例えば、「約Ｘ」に言及する記載は「Ｘ」の記載を含む。
【００６０】
本明細書及び添付の請求項において使用する場合、単数形「１の（ａ）」、「又は（ｏｒ）」、及び「その（ｔｈｅ）」は、文脈から明らかにそうでないことが示されない限り、複数の指示対象物を含む。本明細書に記載の本発明の態様及び変形は、態様及び変形「からなる」及び／又は「から本質的になる」を含むことが理解される。
インターフェロン及びインターフェロン変異体
【００６１】
本開示の融合分子では、ＴＡＡ抗体、又は抗原結合断片重鎖若しくは軽鎖のＮ末端又はＣ末端のいずれかが、いくつかの企図されるインターフェロンまたはインターフェロン変異体の１つを用いて遺伝子組換えで構築されることになる。インターフェロンには、Ｉ型インターフェロン（例えば、ＩＦＮ−α、ＩＦＮ−β）及びＩＩ型インターフェロン（例えば、ＩＦＮ−γ）が含まれる。本明細書において、「インターフェロン」という用語は、指す。完全長インターフェロン又はインターフェロン断片（トランケートされたインターフェロン）又は完全長野生型インターフェロンの生体活性を実質的に保持する（例えば、完全長野生型インターフェロンの生体活性の少なくとも５０％、例えば、少なくともおよそ６０％、７０％、８０％、９０％、又はそれ以上のいずれかを保持する）インターフェロン変異体、例えば、当該技術分野において教示されるいずれのバイオ後続品、バイオ後続品、後続生物製剤、若しくは後続タンパク質の形のインターフェロンを指す（本明細書ではトランケートされたインターフェロン及びインターフェロン変異体をあわせて「改変インターフェロン」と呼ぶ）。インターフェロンは本質的にいずれの哺乳類の種に由来することができる。さまざまな実施形態では、インターフェロンは、ヒト、ウマ、ウシ、齧歯類、ブタ、ウサギ、ネコ、イヌ、ネズミ、ヤギ、ヒツジ、非ヒト霊長類などからなる群より選択される種に由来する。さまざまなそのようなインターフェロンは広く文献に記載されており、当業者に周知である（例えば、Ｐｅｓｔｋａ，Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｒｅｖｉｅｗｓ，２０２（１）：８−３２，２００４を参照されたい）。ＦＤＡ承認インターフェロンとしては、例えば、ＲＯＦＥＲＯＮ（登録商標）−Ａ（ロシュ社）、ＩＮＴＲＯＮ（登録商標）Ａ（シェリング社）、ＩＦＮＥＲＧＥＮ（登録商標）（インターミューン社）、ＡＶＯＮＥＸ（登録商標）（バイオジェン社）、ＢＥＴＡＳＥＲＯＮ（登録商標）（カイロン社）、並びにＲＥＢＩＦ（登録商標）（ＥＭＤセローノ社及びファイザー社）が挙げられる。
【００６２】
さまざまな実施形態では、ＴＡＡ抗体−ＩＦＮ融合分子は、同じアミノ酸配列をもつが抗体に結合していない野生型インターフェロンの内因性活性の、例えば、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも１００％を保有するインターフェロン又は改変インターフェロンを含む。
【００６３】
さまざまな実施形態では、ＴＡＡ抗体−ＩＦＮ融合分子は、同じアミノ酸配列をもつが抗体に結合していない野生型インターフェロンの内因性活性の、例えば、１０％未満、２０％未満、３０％未満、４０％未満、５０％未満、５５％未満、６０％未満、６５％未満、７０％未満、７５％未満、８０％未満、８５％未満、９０％未満、９５％未満、９６％未満、９７％未満、９８％未満、９９％未満、１００％未満を保有するインターフェロン又は改変インターフェロンを含むことになる。
【００６４】
さまざまな実施形態では、ＴＡＡ抗体−ＩＦＮ融合分子は、同じアミノ酸配列をもつが抗体に結合していない野生型インターフェロンの内因性活性の、例えば、５倍超、１０倍超、１５倍超、２０倍超、２５倍超、３０倍超、３５倍超、４０倍超、５０倍超、６０倍超、７０倍超、８０倍超、９０倍超、１００倍超、１２５倍超、１５０倍超、１７５倍超、２００倍超、２５０倍超、３００倍超、４００倍超、５００倍超、７５０倍超、及び１０００倍超を保有するインターフェロン又は改変インターフェロンを含むことになる。
【００６５】
インターフェロン活性は、例えば、当該技術分野において記載されているさまざまな抗ウイルスアッセイ及び抗増殖性アッセイ（例えば、米国特許第８，５６３，６９２号、米国特許公開第２０１３０２３０５１７号、米国特許公開２０１１０１５８９０５号、ＰＣＴ国際公開第２０１４／０２８５０２号、及びＰＣＴ国際公開第２０１３／０５９８８５号を参照されたい）並びに下記の実施例の項に記載のアッセイを用いて評価することができる。
【００６６】
さまざまな実施形態では、同じアミノ酸配列をもつが抗体に結合していないインターフェロンと比較して、ＴＡＡ抗体−ＩＦＮ融合分子は、少なくとも１０倍、少なくとも１００倍、少なくとも１０００倍、少なくとも１０，０００倍、又は少なくとも１００，０００倍の、抗体が結合するＴＡＡを発現しない細胞に比べたＴＡＡ発現細胞に対する選択性示すことになる。
【００６７】
本発明のさまざまな実施形態では、インターフェロンは、１つ以上のアミノ酸置換、挿入、及び／又は削除を含むインターフェロン変異体である。そのような変異体インターフェロン分子を同定する手段は当業者にとって慣用的なものである。１つの例示的な方法では、トランケートされた及び／又は変異させたＩＦＮ−αのライブラリーが作られ、ＩＦＮ−α活性についてスクリーニングされる。ポリペプチドバリアントのライブラリーを作製する方法は当業者に周知である。よって、例えば、エラーを起こしやすいＰＣＲが用いられて、変異体及び／又はトランケートされたＩＦＮ−αのライブラリーを作り出すことができる（例えば、米国特許第６，３６５，４０８号を参照されたい）。次いで、結果として得られるライブラリーの構成物は、当業者に公知の標準的な方法に従ってスクリーニングすることができる。よって、例えば、ＩＦＮ−α活性は、特定の試験ウイルスに対する抗ウイルス性活性を測定することによってアッセイすることができる。ＩＦＮ−α活性についてアッセイするためのキットは市販されている（例えば、Ｎｅｕｔｅｋｂｉｏ社、アイルランドによるＩＬＩＴＥ（商標）アルファベータキットを参照されたい）。
【００６８】
本発明のさまざまな実施形態では、インターフェロン変異体は、１つ以上のアミノ酸置換、挿入、及び／又は削除を含む。そのような改変インターフェロン分子を同定する手段は当業者にとって慣用的なものである。１つの例示的な方法では、トランケートされた及び／又は変異させたＩＦＮ−αのライブラリーが作られ、ＩＦＮ−α活性についてスクリーニングされる。ポリペプチドバリアントのライブラリーを作製する方法は当業者に周知である。よって、例えば、エラーを起こしやすいＰＣＲが用いられて、変異体及び／又はトランケートされたＩＦＮ−αのライブラリーを作り出すことができる（例えば、米国特許第６，３６５，４０８号を参照されたい）。次いで、結果として得られるライブラリーの構成物は、当業者に公知の標準的な方法に従ってスクリーニングすることができる。よって、例えば、ＩＦＮ−α活性は、特定の試験ウイルスに対する抗ウイルス性活性を測定することによってアッセイすることができる。ＩＦＮ−α活性についてアッセイするためのキットは市販されている（例えば、Ｎｅｕｔｅｋｂｉｏ社、アイルランドによるＩＬＩＴＥ（商標）アルファベータキットを参照されたい）。
【００６９】
化学修飾インターフェロンの使用も企図される。例えば、あるいくつかの実施形態では、インターフェロンは化学修飾されて血中半減期を長くする。よって、例えば、（２−スルホ−９−フルオレニルメトキシカルボニル）７−インターフェロン−α２は時間依存性自然加水分解を経て、活性インターフェロンを生じさせる（Ｓｈｅｃｈｔｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．，ＵＳＡ，９８（３）：１２１２−１２１７，２００１）。他の修飾としては、例えば、限定されないが、ＰＥＧ、保護基などの付加を含むＮ末端修飾が挙げられる（例えば、米国特許第５，８２４，７８４号を参照されたい）。
【００７０】
さまざまな実施形態では、インターフェロンは、配列番号１として下記に提供される野生型ＩＦＮ−α２ｂ配列（以降「ＩＦＮ−α２ｂ」と呼ばれる）と、例えば、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の実際の相同性を共有するアミノ酸配列を含む。
2018516950.tif 000003
【００７１】
さまざまな実施形態では、変異させたＩＦＮ−αの使用が企図される。本明細書での使用に企図される単一点変異は、限定されないが、単一点変異は結合親和力を変えうるが、ＩＦＮ−αの活性を完全に上げることはなく、したがって、よりいっそう高い濃度でも抗増殖性を保持するという仮定の下に、論文報告されているＮＭＲ構造に関する情報に基づいてＩＦＮ−α及びＩＦＮ−αＲ１の結合親和力に重要であると考えられる一連の主に単一点変異体を含む（下表１を参照されたい）。これは潜在的にインターフェロン−アルファ変異体に融合する抗体を含む融合分子の治療指数を上げることになる。本明細書に記載され、表１に示されるように、単一変異は、配列番号１として提供される野生型ＩＦＮ−α２ｂの配列内の特定のアミノ酸位置で特定のアミノ酸置換によって同定されることになる。例えば、５７番目のアミノ酸における完全長野生型のヒスチジンを置換したチロシンを含んでなる変異は、Ｈ５７Ｙとして同定される。
2018516950.tif 000004
【００７２】
いくつかの実施形態では、変異体インターフェロンは、配列番号１として下記に提供される野生型ＩＦＮ−α２ｂの活性の少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも１×、少なくとも１．５×、少なくとも２×、少なくとも２．５×、又は少なくとも３×をもつ。いくつかの実施形態では、変異体インターフェロンは、配列番号１として下記に提供される野生型ＩＦＮ−α２ｂの活性の約７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、又は９５％のいずれか未満の活性をもつ。さまざまな実施形態では、インターフェロンはＩＦＮ−α２ｂ変異体分子であり、配列番号１の１４９番目のアミノ酸残基のアルギニンはアラニンで置換され（Ｒ１４９Ａ）、配列番号１の１６２番目のアミノ酸残基のアルギニンはアラニンで置換されている（Ｒ１６２Ａ）。このＩＦＮ−α２ｂ変異体分子は以降「ＩＦＮ−α２ｂ−Ｍ８」と呼ばれる。ＩＦＮ−α２ｂ−Ｍ８のアミノ酸配列は配列番号２として下記に提供される。
2018516950.tif 000005
【００７３】
使用のために企図されるさらなるインターフェロン変異体としては、例えば、ＰＣＴ国際公開第２０１３／０５９８８５号（Ｗｉｌｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．）、及び米国特許第８，２５８，２６３号（Ｍｏｒｒｉｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ）に記載のものが挙げられ、その中で提供されるインターフェロン変異体及び配列のために、それらの文献は各々、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。さまざまな実施形態では、インターフェロンは、配列番号１に記載のアミノ酸配列をもち、Ｌ１５Ａ、Ａ１９Ｗ、Ｒ２２Ａ、Ｒ２３Ａ、Ｓ２５Ａ、Ｌ２６Ａ、Ｆ２７Ａ、Ｌ３０Ａ、Ｌ３０Ｖ、Ｋ３１Ａ、Ｄ３２Ａ、Ｒ３３Ｋ、Ｒ３３Ａ、Ｒ３３Ｑ、Ｈ３４Ａ、Ｄ３５Ｅ、Ｑ４０Ａ、Ｈ５７Ａ、Ｈ５７Ｓ、Ｈ５７Ｙ、Ｅ５８Ａ、Ｅ５８Ｎ、Ｅ５８Ｓ、Ｑ６１Ａ、Ｑ６１Ｓ、Ｄ１１４Ｒ、Ｌ１１７Ａ、Ｒ１２０Ａ、Ｒ１２５Ａ、Ｒ１２５Ｅ、Ｋ１３１Ａ、Ｅ１３２Ａ、Ｋ１３３Ａ、Ｋ１３４Ａ、Ｒ１４４Ａ、Ｒ１４４Ｄ、Ｒ１４４Ｅ、Ｒ１４４Ｇ、Ｒ１４４Ｈ、Ｒ１４４Ｉ、Ｒ１４４Ｋ、Ｒ１４４Ｌ、Ｒ１４４Ｎ、Ｒ１４４Ｑ、Ｒ１４４Ｓ、Ｒ１４４Ｔ、Ｒ１４４Ｖ、Ｒ１４４Ｙ、Ａ１４５Ｄ、Ａ１４５Ｅ、Ａ１４５Ｇ、Ａ１４５Ｈ、Ａ１４５Ｉ、Ａ１４５Ｋ、Ａ１４５Ｌ、Ａ１４５Ｍ、Ａ１４５Ｎ、Ａ１４５Ｑ、Ａ１４５Ｒ、Ａ１４５Ｓ、Ａ１４５Ｔ、Ａ１４５Ｖ、Ａ１４５Ｙ、Ｍ１４８Ａ、Ｒ１４９Ａ、Ｓ１５２Ａ、Ｌ１５３Ａ、Ｎ１５６Ａ、Ｒ１６２Ａ、又はＥ１６５Ｄから選択される１つ以上の単一点変異を含んでなるＩＦＮ−α２ｂ変異体分子である。
【００７４】
さまざまな実施形態では、インターフェロンは、配列番号３として下記に提供される野生型ＩＦＮ−α１４配列（以降「ＩＦＮ−α１４」と呼ばれる）と、例えば、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の実際の相同性を共有するアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、インターフェロンは、配列番号３として下記に提供されるＩＦＮ−α１４の活性の少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも１×、少なくとも１．５×、少なくとも２×、少なくとも２．５×、又は少なくとも３×をもつ。いくつかの実施形態では、インターフェロンは、配列番号３として下記に提供されるＩＦＮ−α１４の活性の約７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、又は９５％のいずれか未満の活性をもつ。
2018516950.tif 000006
【００７５】
さまざまな実施形態では、インターフェロンは、ＩＦＮ−α５（ＮＰ＿００２１６０．１）、ＩＦＮ−α６（ＮＰ＿０６６２８２．１）、ＩＦＮ−α７（ＮＰ＿０６６４０１．１）、ＩＦＮ−α８（ＮＰ＿００２１６１．２）、ＩＦＮ−α１０（ＮＰ＿００２１６２．１）、ＩＦＮ−α１６（ＮＰ＿００２１６４．１）、ＩＦＮ−α１７（ＮＰ＿０６７０９１．１）、及びＩＦＮ−α２１（ＮＰ＿００２１６６．２）からなる群より選択される野生型ＩＦＮ−α配列と、例えば、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の実際の相同性を共有するアミノ酸配列を含む。
【００７６】
さまざまな実施形態では、インターフェロンは、配列番号４として下記に提供される野生型ＩＦＮ−β−１ａ配列と、例えば、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の実際の相同性を共有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、変異体インターフェロンは、配列番号４として下記に提供される野生型ＩＦＮ−β−１ａの活性の少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも１×、少なくとも１．５×、少なくとも２×、少なくとも２．５×、又は少なくとも３×をもつ。いくつかの実施形態では、変異体インターフェロンは、配列番号４として下記に提供される野生型ＩＦＮ−β−１ａの活性の約７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、又は９５％のいずれか未満の活性をもつ。
2018516950.tif 000007
【００７７】
さまざまな実施形態では、インターフェロンは、配列番号５として下記に提供される野生型ＩＦＮ−β−１ｂ配列と、例えば、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の実際の相同性を共有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、変異体インターフェロンは、配列番号５として下記に提供される野生型ＩＦＮ−β−１ｂの活性の少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも１×、少なくとも１．５×、少なくとも２×、少なくとも２．５×、又は少なくとも３×をもつ。いくつかの実施形態では、変異体インターフェロンは、配列番号５として下記に提供される野生型ＩＦＮ−β−１ｂの活性の約７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、又は９５％のいずれか未満の活性をもつ。
2018516950.tif 000008
【００７８】
さまざまな実施形態では、変異させたＩＦＮ−βの使用が企図される。ＩＦＮ−β−１ａの１７番目のアミノ酸において天然のシステインを置換したセリンを含む変異が入ったＩＦＮ−βも、有効性を示すことが明らかにされている（Ｈａｗｋｉｎｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．，４５：５９１４−５９２０，１９８５）。あるいくつかのＣ末端がトランケートされたＩＦＮ−β−１ａは、増加した活性をもつことが示されている（例えば、米国特許公開第２００９／００２５１０６号Ａ１を参照されたい）。したがって、ある実施形態では、本明細書に記載の融合分子に使用されるインターフェロンは、米国特許公開第２００９／００２５１０６号Ａ１においてＩＦＮ−Δ１、ＩＦＮ−Δ２、ＩＦＮ−Δ３、ＩＦＮ−Δ４、ＩＦＮ−Δ５、ＩＦＮ−Δ６、ＩＦＮ−Δ７、ＩＦＮ−Δ８、ＩＦＮ−Δ９、ＩＦＮ−Δ１０として記載されるＣ末端がトランケートされたＩＦＮ−βを含む。その中で提供されるインターフェロン変異体及び配列のために、この参考文献は参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
【００７９】
腫瘍関連抗原抗体
本発明の方法は、少なくとも１つのインターフェロン又はインターフェロン変異体分子に結合された少なくとも１つの腫瘍関連抗原抗体又はその抗原結合断片を含む、単離された非天然の遺伝子改変ＴＡＡ抗体−ＩＦＮ融合分子を利用する。
【００８０】
幅広い種類の腫瘍関連抗原及び腫瘍マーカーが文献に記載され、当業者に周知である。本発明の方法に使用されるＴＡＡ抗体−ＩＦＮ融合分子は、当該技術分野において記載されているいずれかのＴＡＡのバイオ後続品、バイオ後続品、後続生物製剤、又は後続タンパク質型を含む、当該技術分野において記載されている腫瘍関連抗原のいずれかに特異的な抗体又は抗体結合性抗体フラグメントを含みうる。ＴＡＡは、当業者が免疫応答を誘発したいと望む、いずれのペプチド、ポリペプチド、タンパク質、核酸、脂質、炭水化物、又は小さい有機分子、又はそれらのいずれの組み合わせであることができる。
【００８１】
さまざまな実施形態では、使用に企図されるＴＡＡは、限定されないが、表２に提供されるものを含む。各関連参考文献は、参照腫瘍マーカーを同定するために、参照により本願明細書に組み込まれる。
表２
例示的腫瘍マーカー
2018516950.tif 000009
2018516950.tif 000010
2018516950.tif 000011
【００８２】
さまざまな実施形態では、使用に企図されるＴＡＡは、限定されないが、表３に提供されるものを含む。
2018516950.tif 000012
2018516950.tif 000013
2018516950.tif 000014
【００８３】
本明細書に記載のＴＡＡに結合する抗体を作製する方法は当業者に公知である。例えば、標的抗原ポリペプチドに特異的に結合するモノクローナル抗体を作製する方法は、検出可能な免疫応答を刺激するのに有効な標的抗原ポリペプチドを含んでなる免疫原性組成物の量をマウスに投与すること、マウスから抗体産生細胞（例えば、脾臓由来の細胞）を得ること及び抗体産生細胞を骨髄腫細胞と融合させて抗体産生ハイブリドーマを得ること、並びに抗体産生ハイブリドーマをテストして標的抗原ポリペプチドに特異的に結合するモノクローナル抗体を産生するハイブリドーマを同定することを含みうる。いったんハイブリドーマが得られたら、ハイブリドーマは細胞培養、随意に、ハイブリドーマ由来細胞が標的抗原ポリペプチドに特異的に結合するモノクローナル抗体を産生する培養条件で増やすことができる。モノクローナル抗体は細胞培養物から精製されうる。さまざまな相異なる技術が、特に、望ましい抗体を同定する抗原／抗体相互作用をテストするために利用可能である。
【００８４】
必須の特異性の抗体を作製又は単離する他の適切な方法が使用することができ、例えば、ライブラリーから組換え抗体を選択する方法又はヒト抗体の全レパートリーを作ることができるトランスジェニック動物（例えば、マウス）の免疫に依る方法が挙げられる。例えば、Ｊａｋｏｂｏｖｉｔｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．（Ｕ．Ｓ．Ａ．），９０：２５５１−２５５５，１９９３；Ｊａｋｏｂｏｖｉｔｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，３６２：２５５−２５８，１９９３；Ｌｏｎｂｅｒｇ  ｅｔ  ａｌ．、米国特許第５，５４５，８０６号；及びＳｕｒａｎｉ  ｅｔ  ａｌ．、米国特許第５，５４５，８０７号を参照されたい。
【００８５】
抗体は多くの方法で改変することができる。抗体は、単鎖抗体（例えば、小モジュラー免疫医薬又はＳＭＩＰ（商標））、Ｆａｂ、及びＦ（ａｂ’）２断片などとして作ることができる。抗体は、ヒト化、キメラ化、脱免疫化されることも、または完全ヒト型であることもできる。多数の出版物が多くのタイプの抗体及びそのような抗体を改変する方法を記述している。例えば、米国特許第６，３５５，２４５号；第６，１８０，３７０号；第５，６９３，７６２号；第６，４０７，２１３号；第６，５４８，６４０号；第５，５６５，３３２号；第５，２２５，５３９号；第６，１０３，８８９号；及び第５，２６０，２０３号を参照されたい。
【００８６】
キメラ抗体は、当技術分野において公知である組換えＤＮＡ技術によって作製することができる。例えば、マウス（又は他の種）モノクローナル抗体分子のＦｃ定常領域をコードする遺伝子は制限酵素で消化分解されてマウスＦｃをコードする領域が除去され、ヒトＦｃ定常領域をコードする遺伝子の相当部分が置換される（Ｒｏｂｉｎｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．、国際特許公開ＰＣＴ／ＵＳ８６／０２２６９；Ａｋｉｒａ，ｅｔ  ａｌ．、欧州特許出願第１８４，１８７号；Ｔａｎｉｇｕｃｈｉ，  Ｍ．、欧州特許出願第１７１，４９６号；Ｍｏｒｒｉｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．、欧州特許出願第１７３，４９４号；Ｎｅｕｂｅｒｇｅｒ  ｅｔ  ａｌ．、国際出願ＷＯ８６／０１５３３；Ｃａｂｉｌｌｙ  ｅｔ  ａｌ．  米国特許第４，８１６，５６７号；Ｃａｂｉｌｌｙ  ｅｔ  ａｌ．、欧州特許出願第１２５，０２３号；Ｂｅｔｔｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２４０：１０４１−１０４３，１９８８；Ｌｉｕ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．（Ｕ．Ｓ．Ａ．），８４：３４３９−３４４３，１９８７；Ｌｉｕ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１３９：３５２１−３５２６，１９８７；Ｓｕｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．（Ｕ．Ｓ．Ａ．），８４：２１４−２１８，１９８７；Ｎｉｓｈｉｍｕｒａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃ．Ｒｅｓ．，４７：９９９−１００５，１９８７；Ｗｏｏｄ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，３１４：４４６−４４９，１９８５；ａｎｄ  Ｓｈａｗ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｎａｔｌ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｎｓｔ．，８０：１５５３−１５５９，１９８８）を参照されたい）。
【００８７】
抗体をヒト化する方法は当該技術分野において記述されている。いくつかの実施形態では、ヒト化抗体は、非ヒトＣＤＲに加えて、非ヒトである供給源から導入される１つ以上のアミノ酸残基をもつ。ヒト化は、ヒト抗体の対応配列を超過変領域配列に置換することによって、本質的にＷｉｎｔｅｒら方法に従って行うことができる（Ｊｏｎｅｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，３２１：５２２−５２５，１９８６；Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，３３２：３２３−３２７，１９８８；Ｖｅｒｈｏｅｙｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２３９：１５３４−１５３６，１９８８）。したがって、そのような「ヒト化」抗体はキメラ抗体であり（米国特許第４，８１６，５６７号）、実質的に完全ではないヒト可変領域は、ノンヒト種由来の相当する配列によって置換される。実際のところ、ヒト化抗体は典型的には、いくつかの超過変領域残基及び場合によりいくつかのフレームワーク領域残基が齧歯類抗体の類似部位によって置換されているヒト抗体である。
【００８８】
Ｑｕｅｅｎらによる米国特許第５，６９３，７６１号は、抗体をヒト化するためのＷｉｎｔｅｒらの改良を開示し、アビディティーが失われるのは、立体的又は他の化学的不適合に起因して、マウス抗体に見られる結合可能コンフォメーションへのＣＤＲの折り畳みを妨害するヒト化フレームワークの構造的モチーフの問題のためであるという前提に基づいていている。この問題に対処するために、Ｑｕｅｅｎはヒト化されるマウス抗体のフレームワーク配列に直鎖ペプチド配列において非常に相同性のあるヒトフレームワーク配列を用いることを教示する。したがって、Ｑｕｅｅｎの方法は、種間でフレームワーク配列を比較することに重点をおいている。典型的には、入手可能なすべてのヒト可変領域配列が特定のマウス配列と比較され、対応するフレームワーク残基間の同一性割合が計算される。最も高い割合をもつヒト可変領域が選択されて、ヒト化プロジェクト用のフレームワーク配列を提供する。またＱｕｅｅｎは、ヒト化フレームワークにおいて、結合可能コンフォメーションのＣＤＲをもつのに肝要なマウスフレームワークからある特定のアミノ酸残基を保持することが重要であることも教示する。潜在的な重要性は分子モデルから評価される。保持のための候補残基は、典型的には直鎖配列中でＣＤＲに隣接するもの又は物理的にいずれのＣＤＲ残基６オングストローム以内に隣接するものである。
【００８９】
他のアプローチでは、特定のフレームワークアミノ酸残基の重要性は、いったん、アビディティーの低いヒト化構築物が得られると、１９８８年にＲｉｅｃｈｍａｎｎらによって記述されたように、単一残基のマウス配列への転換及び抗原結合のアッセイをすることによって実験的に決定される。フレームワーク配列中の重要なアミノ酸を同定する別のアプローチの例は、Ｃａｒｔｅｒらによる米国特許第５，８２１，３３７号及びＡｄａｉｒらによる米国特許第５，８５９，２０５号によって開示されている。これらの参考文献は、ヒト化抗体において、アビディティーを保つために対応するマウスアミノ酸での置換を必要としうる、フレームワーク中の具体的なＫａｂａｔ残基位置を開示する。
【００９０】
抗体をヒト化する別のアプローチは、「フレームワークシャッフリング（ｆｒａｍｅｗｏｒｋ  ｓｈｕｆｆｌｉｎｇ）」と呼ばれ、個々のヒト生殖細胞系フレームワークのコレクションにインフレームで融合されたノンヒトＣＤＲ可変領域を用いてコンビナトリアルライブラリーを作製することに依拠する（Ｄａｌｌ’Ａｃｑｕａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ，３６：４３，２００５）。次いで、ライブラリーはスクリーニングされて、良好な結合を保持するヒト化抗体をコードするクローンが同定される。
【００９１】
ヒト化抗体の作製に使用される軽鎖と重鎖双方のヒト可変領域の選択は、抗原性を減じるために非常に重要である。いわゆる「ベストフィット（ｂｅｓｔ−ｆｉｔ）」法に従って、齧歯類抗体の可変領域の配列が既知のヒト可変領域配列のライブラリー全体に対してスクリーニングされる。次いで、齧歯類の配列に最も近いヒト配列がヒト化抗体のためのヒトフレームワーク領域（フレームワーク領域）として受け入れられる（Ｓｉｍｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１５１：２２９６，１９９３；Ｃｈｏｔｈｉａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，１９６：９０１，１９８７）。別の方法は、軽鎖又は重鎖可変領域の特定のサブグループのすべてのヒト抗体のコンセンサス配列に由来する特定のフレームワーク領域を使用する。同一のフレームワークがいくつかの異なるヒト化抗体に使用されうる（Ｃａｒｔｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．（Ｕ．Ｓ．Ａ．），８９：４２８５，１９９２；Ｐｒｅｓｔａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１５１：２６２３，１９９３）。
【００９２】
ヒト可変領域に置換するノンヒト残基の選択は、さまざまな因子によって影響を受ける可能性がある。これらの因子としては、例えば、特定の位置におけるまれなアミノ酸、ＣＤＲ又は抗原のいずれかとの相互作用の可能性、及び軽鎖と重鎖可変領域との接続部分間において接続部分が関与する可能性が挙げられる。（例えば、米国特許第５，６９３，７６１号、同第６，６３２，９２７号、及び同第６，６３９，０５５号を参照されたい）。これらの因子を解析する１つの方法は、非ヒト及びヒト化配列の３次元モデルを使用することによる。３次元免疫グロブリンモデルは一般に入手可能であり、当業者によく知られている。選ばれた候補免疫グロブリン配列の推定三次元立体配座構造を図解及び表示するコンピュータープログラムが利用可能である。これらの表示を調べることにより、分析候補免疫グロブリン配列の機能における残基の可能性のある役割の分析、例えば、候補免疫グロブリンのその抗原に対する結合能に影響する残基の分析が可能になる。このようにして、所望の抗体の特徴、例えば、標的抗原に対するアフィニティーの増加などを達成するために、ノンヒト残基は選択され、ヒト可変領域残基と置換することができる。
【００９３】
完全ヒト抗体を作る方法は当該技術分野において記述されている。例として、ＴＡＡ抗体又はその抗原結合断片を作製する方法は、ヒト抗体のライブラリーをファージ上に合成するステップ、ライブラリーをＴＡＡ又はその抗体結合部分でスクリーニングするステップ、ＴＡＡと結合するファージを単離するステップ、及びファージから抗体を得るステップを含む。別の例として、ファージディスプレイ技術で用いる抗体のライブラリーを調製するための１つの方法は、ヒト免疫グロブリン座位を含む非ヒト動物をＴＡＡ又はその抗原性部分で免疫して免疫応答を作り出すステップ、免疫した動物から抗体産生細胞を抽出するステップ、抽出した細胞から本開示の抗体の重鎖及び軽鎖をコードするＲＮＡを単離するステップ、ＲＮＡを逆転写してｃＤＮＡを作製するステップ、プライマーを用いてｃＤＮＡを増幅するステップ、及び抗体がファージ上に発現するようにｃＤＮＡをファージディスプレイベクターに挿入するステップを含む。本開示の組換え抗ＴＡＡ抗体はこのようにして得られうる。
【００９４】
先と同様に、例として、本開示の組換えヒト抗ＴＡＡ抗体は、コンビナトリアル抗体ライブラリーをスクリーニングすることによって単離することもできる。好ましくは、ライブラリーは、Ｂ細胞から単離されたｍＲＮＡから調製されたヒトＶＬ及びＶＨ  ｃＤＮＡを用いて作られたｓｃＦｖファージディスプレイライブラリーである。そのようなライブラリーを調製し、スクリーニングする方法は、当技術分野において公知である。ファージディスプレイライブラリーを作るためのキットは市販されている（例えば、ファルマシアＲｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ  Ｐｈａｇｅ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｓｙｓｔｅｍ、カタログ番号２７−９４００−０１；及びストラタジーンＳｕｒｆＺＡＰ（商標）ファージディスプレイキット、カタログ番号２４０６１２）。さらに、抗体ディスプレイライブラリーの作製及びスクリーニングに使用できる他の方法及び試薬も存在する（例えば、米国特許第５，２２３，４０９号；ＰＣＴ国際公開第９２／１８６１９号、国際公開第９１／１７２７１号、国際公開第９２／２０７９１号、国際公開第９２／１５６７９号、国際公開第９３／０１２８８号、国際公開第９２／０１０４７号、国際公開第９２／０９６９０号；Ｆｕｃｈｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，９：１３７０−１３７２（１９９１）；Ｈａｙ  ｅｔ  ａｌ．，Ｈｕｍ．Ａｎｔｉｂｏｄ．Ｈｙｂｒｉｄｏｍａｓ，３：８１−８５，１９９２；Ｈｕｓｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２４６：１２７５−１２８１，１９８９；ＭｃＣａｆｆｅｒｔｙ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，３４８：５５２−５５４，１９９０；Ｇｒｉｆｆｉｔｈｓ  ｅｔ  ａｌ．，ＥＭＢＯ  Ｊ．，１２：７２５−７３４，１９９３；Ｈａｗｋｉｎｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，２２６：８８９−８９６，１９９２；Ｃｌａｃｋｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，３５２：６２４−６２８，１９９１；Ｇｒａｍ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．（Ｕ．Ｓ．Ａ．），８９：３５７６−３５８０，１９９２；Ｇａｒｒａｄ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，９：１３７３−１３７７，１９９１；Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎｕｃ．Ａｃｉｄ  Ｒｅｓ．，１９：４１３３−４１３７，１９９１；ａｎｄ  Ｂａｒｂａｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．（Ｕ．Ｓ．Ａ．），８８：７９７８−７９８２，１９９１）を参照されたい）。すべての文献は参照により本願明細書に組み込まれる。
【００９５】
また、ヒト抗体は、いくつか又はすべてのヒト免疫グロブリン重鎖及び軽鎖座位をそのゲノム内に含む非ヒト、トランスジェニック動物、例えば、ＸｅｎｏＭｏｕｓｅ（商標）動物（Ａｂｇｅｎｉｘ，Ｉｎｃ．／Ａｍｇｅｎ，Ｉｎｃ．、フリーモント、カリフォルニア州）をヒトＩｇＥ抗原で免疫することによっても作製される。ＸｅｎｏＭｏｕｓｅ（商標）マウスは、ヒト免疫グロブリン重鎖及び軽鎖座位の大きい断片を含み、マウス抗体産生を欠く、改変されたマウス系統である。例えば、Ｇｒｅｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ，７：１３−２１，１９９４並びに米国特許第５，９１６，７７１号、同第５，９３９，５９８号、同第５，９８５，６１５号、同第５，９９８，２０９号、同第６，０７５，１８１号、同第６，０９１，００１号、同第６，１１４，５９８号、同第６，１３０，３６４号、同第６，１６２，９６３号、及び同第６，１５０，５８４号を参照されたい。ＸｅｎｏＭｏｕｓｅ（商標）マウスは、完全ヒト抗体の成人様ヒトレパートリーを生じ、抗原特異的なヒト抗体を作る。いくつかの実施形態では、ＸｅｎｏＭｏｕｓｅ（商標）マウスは、細菌人工染色体（ＹＡＣ）のヒト重鎖座位及びカッパ軽鎖座位のメガベースのサイズの生殖系配置断片を導入することを通して、約８０％のヒト抗体Ｖ遺伝子レパートリーを含む。その他の実施形態では、ＸｅｎｏＭｏｕｓｅ（商標）マウスは、ほぼすべてのヒトラムダ軽鎖座位をさらに含む。Ｍｅｎｄｅｚ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ，１５：１４６−１５６，１９９７；Ｇｒｅｅｎ  ａｎｄ  Ｊａｋｏｂｏｖｉｔｓ，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．，１８８：４８３−４９５，１９９８；及び国際公開第９８／２４８９３号を参照されたい。
【００９６】
さまざまな実施形態では、本開示の融合分子は、ポリクローナル抗体、モノクローナル抗体、組換え抗体、二特異性抗体、キメラ化抗体若しくはキメラ抗体又はその抗原結合断片、ヒト化抗体又はその抗原結合断片、完全ヒト抗体又はその抗原結合断片、ＣＤＲ移植抗体又はその抗原結合断片、一本鎖抗体、Ｆｖ、Ｆｄ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、又はＦ（ａｂ’）２、及び合成又は半合成抗体からなる群より選択される抗体又はその抗原結合断片を利用する。
【００９７】
さまざまな実施形態では、本開示の融合分子は、例えば、少なくとも約１×１０−３Ｍ、少なくとも約１×１０−４Ｍ、少なくとも約１×１０−５Ｍ、少なくとも約１×１０−６Ｍ、少なくとも約１×１０−７Ｍ、少なくとも約１×１０−８Ｍ、少なくとも約１×１０−９Ｍ、少なくとも約１×１０−１０Ｍ、少なくとも約１×１０−１１Ｍ、又は少なくとも約１×１０−１２Ｍの解離定数（ＫＤ）でＴＡＡと結合する抗体又は抗原結合断片を利用する。さまざまな実施形態では、本開示の融合分子は、例えば、少なくとも約１×１０−３Ｍ〜少なくとも約１×１０−４Ｍ、少なくとも約１×１０−４Ｍ〜少なくとも約１×１０−５Ｍ、少なくとも約１×１０−５Ｍ〜少なくとも約１×１０−６Ｍ、少なくとも約１×１０−６Ｍ〜少なくとも約１×１０−７Ｍ、少なくとも約１×１０−７Ｍ〜少なくとも約１×１０−８Ｍ、少なくとも約１×１０−８Ｍ〜少なくとも約１×１０−９Ｍ、少なくとも約１×１０−９Ｍ〜少なくとも約１×１０−１０Ｍ、少なくとも約１×１０−１０Ｍ〜少なくとも約１×１０−１１Ｍ、又は少なくとも約１×１０−１１Ｍ〜少なくとも約１×１０−１２Ｍの範囲にある解離定数（ＫＤ）でＴＡＡにと結合する抗体又は抗原結合断片を利用する。
【００９８】
さまざまな実施形態では、本開示の融合分子は、本明細書において提供されている参考文献及び配列表に記載の重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含んでなる参照抗体とＴＡＡ上の同じエヒトープへの結合を相互に競合する抗体又は抗原結合断片を利用する。
【００９９】
抗ＨＥＲ２抗体  ｅｒｇＢ２遺伝子は、より一般的には（ＨＥＲ２／ｎｅｕ）として知られており、膜貫通型受容体をコードするがん遺伝子である。トラスツズマブ（例えば、ＨＥＲＣＥＰＴＩＮ（登録商標））；Ｆｏｒｎｉｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｏｎｃｏｌｏｇｙ（Ｈｕｎｔｉｎｇｔ）１３：６４７−５８（１９９９））、ＴＡＢ−２５０（Ｒｏｓｅｎｂｌｕｍ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｌｉｎ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．５：８６５−７４（１９９９））、ＢＡＣＨ−２５０（同上）、ＴＡ１（Ｍａｉｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．５１：５３６１−９（１９９１））、並びに米国特許第５，７７２，９９７号；同第５，７７０，１９５号（ｍＡｂ  ４Ｄ５；ＡＴＣＣ  ＣＲＬ  １０４６３）；及び米国特許第５，６７７，１７１号に記載のｍＡｂを含むいくつかの抗体がＨＥＲ２／ｎｅｕに対して開発されてきた。該文献は各々、そのような抗体及び抗原結合断片を提供するために、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。さまざまな実施形態では、抗体は、配列番号６に記載のアミノ酸配列をもつ重鎖を含んでなる抗ＨＥＲ２／ｎｅｕ抗体である。
2018516950.tif 000015
【０１００】
さまざまな実施形態では、抗ＨＥＲ２／ｎｅｕ抗体の重鎖は、配列番号６の配列と、例えば、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は少なくとも約９９％の実際の相同性を共有するアミノ酸配列をもつ。さまざまな実施形態では、抗ＨＥＲ２／ｎｅｕ抗体の重鎖は、配列番号６のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３配列を含む。
【０１０１】
さまざまな実施形態では、抗体は、配列番号７に記載のアミノ酸配列をもつ軽鎖を含む抗ＨＥＲ２／ｎｅｕ抗体である。
2018516950.tif 000016
【０１０２】
さまざまな実施形態では、抗ＨＥＲ２／ｎｅｕ抗体の軽鎖は、配列番号７の配列と、例えば、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は少なくとも約９９％の実際の相同性を共有するアミノ酸配列をもつ。さまざまな実施形態では、抗ＨＥＲ２／ｎｅｕ抗体の軽鎖は、配列番号７のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３配列を含む。
【０１０３】
さまざまな実施形態では、抗ＨＥＲ２／ｎｅｕ抗体は、配列番号６のアミノ酸配列をもつ重鎖及び配列番号７のアミノ酸配列をもつ軽鎖をもつ抗体と同じエヒトープと特異的に結合する。さまざまな実施形態では、抗ＨＥＲ２／ｎｅｕ抗体は、配列番号６のアミノ酸配列をもつ重鎖及び配列番号７のアミノ酸配列をもつ軽鎖をもつ抗体と、ＨＥＲ２／ｎｅｕ抗原への結合を競合する。
【０１０４】
抗ＣＤ２０抗体  ＦＤＡ承認抗ＣＤ２０抗体、リツキシマブ（ＩＤＥＣ  Ｃ２Ｂ８；ＲＩＴＵＸＡＮ；ＡＴＣＣ番号ＨＢ  １１３８８）はヒトを治療するのに使用されてきている。イブリツモマブは、リツキシマブに対応するマウスの抗体である（Ｗｉｓｅｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｌｉｎ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．５：３２８１ｓ−６ｓ（１９９９））。他の報告されている抗ＣＤ２０抗体としては、抗ヒトＣＤ２０ｍＡｂ  １Ｆ５（Ｓｈａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ  １６２：６５８９−９５（１９９９））、一本鎖Ｆｖ抗ＣＤ２０マウスｍＡｂ  １Ｈ４（Ｈａｉｓｍａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ  ９２：１８４−９０（１９９８））、及び抗Ｂ１抗体（Ｌｉｕ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｏｎｃｏｌ．１６：３２８−７０（１９９８））が挙げられる。該文献は各々、そのような抗体及び抗原結合断片を提供するために、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。さまざまな実施形態では、抗体は、配列番号８に記載のアミノ酸配列をもつ重鎖を含むキメラ抗ＣＤ２０抗体である。
2018516950.tif 000017
【０１０５】
さまざまな実施形態では、抗ＣＤ２０抗体の重鎖は、配列番号８の配列と、例えば、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は少なくとも約９９％の実際の相同性を共有するアミノ酸配列をもつ。さまざまな実施形態では、抗ＣＤ２０抗体の重鎖は、配列番号８のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３配列を含む。
【０１０６】
さまざまな実施形態では、抗体は、配列番号９に記載のアミノ酸配列をもつ軽鎖を含む抗ＣＤ２０抗体である。
2018516950.tif 000018
【０１０７】
さまざまな実施形態では、抗ＣＤ２０抗体の軽鎖は、配列番号９の配列と、例えば、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は少なくとも約９９％の実際の相同性を共有するアミノ酸配列をもつ。さまざまな実施形態では、抗ＣＤ２０抗体の軽鎖は、配列番号９のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３配列を含む。
【０１０８】
さまざまな実施形態では、抗ＣＤ２０抗体は、配列番号８のアミノ酸配列をもつ重鎖及び配列番号９のアミノ酸配列をもつ軽鎖をもつ抗体と同じエヒトープと特異的に結合する。さまざまな実施形態では、抗ＣＤ２０抗体は、配列番号８のアミノ酸配列をもつ重鎖及び配列番号９のアミノ酸配列をもつ軽鎖をもつ抗体と、ＣＤ２０抗原への結合を競合する。
【０１０９】
抗ＣＤ１３８抗体  マウス抗ＣＤ１３８抗体及びキメラ抗ＣＤ１３８抗体は、例えば、米国特許出願公開第２００７０１８３９７１号（Ｇｏｌｄｍａｋｈｅｒ）及び同第２００９０２３２８１０号（Ｋｒａｕｓ  ｅｔ  ａｌ）に記載されている。該文献は各々、そのような抗体及び抗原結合断片を提供するため、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。さまざまな実施形態では、抗体は、配列番号１０に記載のアミノ酸配列をもつ重鎖を含む抗ＣＤ１３８抗体である。
2018516950.tif 000019
【０１１０】
さまざまな実施形態では、抗ＣＤ１３８抗体の重鎖は、配列番号１０の配列と、例えば、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は少なくとも約９９％の実際の相同性を共有するアミノ酸配列をもつ。さまざまな実施形態では、抗ＣＤ１３８抗体の重鎖は、配列番号１０のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３配列を含む。
【０１１１】
さまざまな実施形態では、抗体は、配列番号１１に記載のアミノ酸配列をもつ軽鎖を含む抗ＣＤ１３８抗体である。
2018516950.tif 000020
【０１１２】
さまざまな実施形態では、抗ＣＤ１３８抗体の軽鎖は、配列番号１１の配列と、例えば、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は少なくとも約９９％の実際の相同性を共有するアミノ酸配列をもつ。さまざまな実施形態では、抗ＣＤ１３８抗体の軽鎖は、配列番号１１のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３配列を含む。
【０１１３】
さまざまな実施形態では、抗ＣＤ１３８抗体は、配列番号１０のアミノ酸配列をもつ重鎖及び配列番号１１のアミノ酸配列をもつ軽鎖をもつ抗体と同じエヒトープと特異的に結合する。さまざまな実施形態では、抗ＣＤ１３８抗体は、配列番号１０のアミノ酸配列をもつ重鎖及び配列番号１１のアミノ酸配列をもつ軽鎖をもつ抗体と、ＣＤ１３８抗原への結合を競合する。
【０１１４】
抗ＧＲＰ９４（エンドプラスミン）抗体  エンドプラスミン（ＧＲＰ９４）に特異的に結合する完全ヒト抗体を含む単離モノクローナル抗体及びエンドプラスミンを発現する腫瘍の検出における使用、該抗体を用いる治療方法、及び該抗体を含む免疫複合体が、米国特許第８，４９７，３５４号（Ｆｅｒｒｏｎｅ  ｅｔ  ａｌ．）及び米国出願第２００４０００１７８９号（Ｙｏｕｎｇ  ｅｔ  ａｌ）に記載されている。該文献は各々、そのような抗体及び抗原結合断片を提供するために、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。さまざまな実施形態では、抗体は、配列番号１２に記載のアミノ酸配列をもつ重鎖を含むＧＲＰ９４抗体である。
2018516950.tif 000021
【０１１５】
さまざまな実施形態では、ＧＲＰ９４抗体の重鎖は、配列番号１２の配列と、例えば、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は少なくとも約９９％の実際の相同性を共有するアミノ酸配列をもつ。さまざまな実施形態では、抗ＧＲＰ９４抗体の重鎖は、配列番号１２のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３配列を含む。
【０１１６】
さまざまな実施形態では、抗体は、配列番号１３に記載のアミノ酸配列をもつ軽鎖を含むＧＲＰ９４抗体である。
2018516950.tif 000022
【０１１７】
さまざまな実施形態では、ＧＲＰ９４抗体の軽鎖は、配列番号１３の配列と、例えば、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は少なくとも約９９％の実際の相同性を共有するアミノ酸配列をもつ。さまざまな実施形態では、抗ＧＲＰ９４抗体の軽鎖は、配列番号１３のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３配列を含む。
【０１１８】
さまざまな実施形態では、抗ＧＲＰ９４抗体は、配列番号１２のアミノ酸配列をもつ重鎖及び配列番号１３のアミノ酸配列をもつ軽鎖をもつ抗体と同じエヒトープと特異的に結合する。さまざまな実施形態では、抗ＧＲＰ９４抗体は、配列番号１２のアミノ酸配列をもつ重鎖及び配列番号１３のアミノ酸配列をもつ軽鎖をもつ抗体と、ＧＲＰ９４抗原への結合を競合する。
【０１１９】
抗ＣＤ３３抗体  ＣＤ３３は、初期骨髄系前駆細胞及び骨髄性白血病（例えば、急性骨髄性白血病、ＡＭＬ）細胞に発現するが、幹細胞には発現しない糖タンパク質である。ＩｇＧ１モノクローナル抗体をマウス（Ｍ１９５）で作製し、抗体依存性細胞傷害性をもつと報告されていたヒト化型（ＨｕＭ１９５）でも作製した（Ｋｏｓｓｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｌｉｎ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．５：２７４８−５５（１９９９））。抗腫瘍抗生物質カリチアマイシンに連結した、ヒト化抗ＣＤ３３抗体からなる抗ＣＤ３３免疫複合体（ＣＭＡ−６７６）が何名かのＡＭＬ患者において悪性造血の選択的除去を示したことが報告されている（Ｓｉｅｖｅｒｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ  ９３：３６７８−８４（１９９９））。該文献は各々、そのような抗体及び抗原結合断片を提供するために、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。さまざまな実施形態では、抗体は、配列番号１４に記載のアミノ酸配列をもつ重鎖を含む抗ＣＤ３３抗体である。
2018516950.tif 000023
【０１２０】
さまざまな実施形態では、抗ＣＤ３３抗体の重鎖は、配列番号１４の配列と、例えば、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は少なくとも約９９％の実際の相同性を共有するアミノ酸配列をもつ。さまざまな実施形態では、抗ＣＤ３３抗体の重鎖は、配列番号１４のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３配列を含む。
【０１２１】
さまざまな実施形態では、抗体は、配列番号１５に記載のアミノ酸配列をもつ軽鎖を含む抗ＣＤ３３抗体である。
2018516950.tif 000024
【０１２２】
さまざまな実施形態では、抗ＣＤ３３抗体の軽鎖は、配列番号１５の配列と、例えば、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は少なくとも約９９％の実際の相同性を共有するアミノ酸配列をもつ。さまざまな実施形態では、抗ＣＤ３３抗体の軽鎖は、配列番号１５のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３配列を含む。
【０１２３】
さまざまな実施形態では、抗ＣＤ３３抗体は、配列番号１４のアミノ酸配列をもつ重鎖及び配列番号１５のアミノ酸配列をもつ軽鎖をもつ抗体と同じエヒトープと特異的に結合する。さまざまな実施形態では、抗ＣＤ３３抗体は、配列番号１４のアミノ酸配列をもつ重鎖及び配列番号１５のアミノ酸配列をもつ軽鎖をもつ抗体と、ＣＤ３３抗原への結合を競合する。
【０１２４】
抗ＣＤ７０（ＣＤ２７Ｌ）抗体  ＣＤ７０に結合する抗体は、例えば、米国特許第７，４９１，３９０号（Ｌａｗ  ｅｔ  ａｌ）及び米国特許第８，１２４，７３８号（Ｔｅｒｒｅｔ  ｅｔ  ａｌ）に記載されている。該文献は各々、そのような抗体及び抗原結合断片を提供するために、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。さまざまな実施形態では、抗体は、配列番号１６に記載のアミノ酸配列をもつ重鎖可変領域を含む抗ＣＤ７０抗体である。
2018516950.tif 000025
【０１２５】
さまざまな実施形態では、抗ＣＤ７０抗体の重鎖可変領域は、配列番号１６の配列と、例えば、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は少なくとも約９９％の実際の相同性を共有するアミノ酸配列をもつ。さまざまな実施形態では、抗ＣＤ７０抗体の重鎖は、配列番号１６のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３配列を含む。
【０１２６】
さまざまな実施形態では、抗体は、配列番号１７に記載のアミノ酸配列をもつ軽鎖可変領域を含む抗ＣＤ７０抗体である。
2018516950.tif 000026
【０１２７】
さまざまな実施形態では、抗ＣＤ７０抗体の軽鎖可変領域は、配列番号１７の配列と、例えば、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は少なくとも約９９％の実際の相同性を共有するアミノ酸配列をもつ。さまざまな実施形態では、抗ＣＤ７０抗体の軽鎖は、配列番号１７のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３配列を含む。
【０１２８】
さまざまな実施形態では、抗ＣＤ７０抗体は、配列番号１６のアミノ酸配列をもつ重鎖可変領域及び配列番号１７のアミノ酸配列をもつ軽鎖可変領域をもつ抗体と同じエヒトープと特異的に結合する。さまざまな実施形態では、抗ＣＤ７０抗体は、配列番号１６のアミノ酸配列をもつ重鎖及び配列番号１７のアミノ酸配列をもつ軽鎖をもつ抗体と、ＣＤ７０抗原への結合を競合する。
【０１２９】
融合分子
一般的に言えば、ＴＡＡ抗体−ＩＦＮ融合分子のＴＡＡ抗体分子及びインターフェロン分子は、いずれの順番でもつなげて一体にすることができる。よって、例えば、インターフェロン分子は、抗体のアミノ末端又はカルボキシ末端のいずれにも結合することができる。代替的に、抗体は、インターフェロン分子のアミノ末端又はカルボキシ末端のいずれにも結合することができる。さまざまな実施形態では、抗体及びインターフェロン分子は、それらの間に入るペプチドリンカー配列なく互いに直接連結され、組換えＤＮＡ方法を用いて合成される。「連結された」によって、第２の配列が第１の配列によって標的細胞に輸送できるように第１及び第２の配列が結び付けられること、すなわち、これらのタンパク質をコードするＤＮＡ分子の遺伝子発現を通して抗体がそのポリペプチド主鎖を介してＩＦＮ−α分子に連結される融合分子、直接合成されるタンパク質、及び予め形成された配列が架橋剤によって結び付けられる結合タンパク質を我々は意味する。
【０１３０】
さまざまな実施形態では、抗体部分はインターフェロン分子に化学的に結合される。分子を化学的に結合する手段は当業者に周知である。２つの分子を結合する手順は、薬剤の化学構造によって異なる。典型的にポリペプチドは、他のペプチド又はリンカー上の適切な官能基との反応に利用可能なさまざまな官能基、例えば、カルボン酸（ＣＯＯＨ）基又は遊離アミン（−ＮＨ２）基を含んで分子を連結する。代替的に、抗体及び／又はインターフェロンは、誘導体化されてさらなる反応性官能基に曝露又は付着することができる。誘導体化は、ピアス・ケミカル・カンパニー、ロックフォード、イリノイ州から入手可能なものなどの多くのリンカー分子のいずれかの連結を含むことができる。抗体上の基と反応する１つの官能基及びインターフェロン上で反応する別の基をもつ二官能性リンカーを所望の複合体を形成するために使用することができる。代替的に、誘導体化は抗体部分の化学的処理を伴うことができる。例えば、抗体または抗体断片などのポリペプチド上の遊離スルフヒトリル基を作る手順は公知である（米国特許第４，６５９，８３９号を参照されたい）。
【０１３１】
放射性核種金属キレート、毒素、及び薬物を含むさまざまな化合物を抗体などのタンパク質に連結するための多くの手順及びリンカー分子が公知である。例えば、欧州特許出願第１８８，２５６号；米国特許第４，６７１，９５８号、同第４，６５９，８３９号、同第４，４１４，１４８号、同第４，６９９，７８４号；同第４，６８０，３３８号；同第４，５６９，７８９号；及び同第４，５８９，０７１号；並びにＢｏｒｌｉｎｇｈａｕｓｅｔ  ａｌ．（１９８７）Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．４７：４０７１−４０７５参照されたい。特に、さまざまな免疫毒素の作製は当該技術分野内で周知であり、例えば、「Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ−Ｔｏｘｉｎ  Ｃｏｎｊｕｇａｔｅｓ：Ａｉｍｉｎｇ  ｔｈｅ  Ｍａｇｉｃ  Ｂｕｌｌｅｔ」Ｔｈｏｒｐｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ｉｎ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，１６８〜１９０頁（１９８２）；Ｗａｌｄｍａｎｎ（１９９１）Ｓｃｉｅｎｃｅ，２５２：１６５７；米国特許第４，５４５，９８５号、及び同第４，８９４，４４３号などに見出すことができる。
【０１３２】
本明細書において、「リンカー」という用語は、ペプチド結合で連結される１つ以上のアミノ酸残基を含んでなるポリペプチドを示すのに使用され、本開示のＴＡＡ抗体とインターフェロン分子を連結するのに使用される。一般にリンカーは、タンパク質に連結する、又は最小限のある程度の距離若しくは他の空間的関係を保つ以外の特定の生物学的活性をもたない。しかし、さまざまな実施形態では、リンカーの構成アミノ酸は、折り畳み、正味の荷電、又は疎水性などの分子のいくつかの特性に影響を及ぼすように選択することができる。さまざまな実施形態では、リンカーは抗体ともインターフェロとも共有結合を形成できる。適切なリンカーは当業者に周知であり、例としては、直鎖または分岐鎖炭素リンカー、複素環炭素リンカー、又はペプチドリンカーが挙げられるが、これらに限定されないが。ある実施形態では、リンカーは、抗体及び／又はインターフェロンの構成アミノ酸をそれらの側基を通して（例えば、システインへのジスルフィド結合を通して）結合することができる。特定の好ましい実施形態では、リンカーは、抗体及び／又はインターフェロンの末端アミノ酸のアルファ炭素アミノ及び／又はカルボキシル基に結合する。そのようなリンカーポリペプチドは当該技術分野において周知である（例えば、Ｈｏｌｌｉｇｅｒ，Ｐ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．（Ｕ．Ｓ．Ａ．），９０：６４４４，１９９３；Ｐｏｌｊａｋ，Ｒ．Ｊ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ，２：１１２１，１９９４を参照されたい）。使用のために企図されるリンカー長は、アミノ酸が約５個から２００個までさまざまであることができる。
【０１３３】
さまざまな実施形態では、リンカーはα−ヘリックスリンカーである。さまざまな実施形態では、リンカーはＧ／Ｓ含有量が豊富である（例えば、リンカー中のアミノ酸の少なくとも約６０％、７０％、８０％、９０％、又はそれより多くがＧ又はＳである）。さまざまな実施形態では、リンカーはＧ／Ｃ含有量が豊富であり、長さがおよそ２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１５個、２０個、２５個、又は３０個のアミノ酸のいずれかより短い。さまざまな実施形態では、リンカーはα−ヘリックスリンカーであり、長さがおよそ７個、８個、９個、１０個、１５個、２０個、２５個、又は３０個のアミノ酸のいずれかより短い。さまざまな実施形態では、リンカーは、長さが１〜２０個のアミノ酸のタンパク質分解耐性リンカーでありうる（例えば、米国特許第８，２５８，２６３号（Ｍｏｒｒｉｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．）を参照されたく、該特許は、その中に提供されるタンパク質分解耐性リンカー及び配列のため、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）。さまざまな実施形態では、リンカーは下記表４に記載のタンパク質分解耐性リンカーである。
2018516950.tif 000027
【０１３４】
さまざまな実施形態では、リンカーはＳＧＧＧＧＳ（配列番号１８）を含んでなる。さまざまな実施形態では、リンカーはＡＥＡＡＡＫＥＡＡＡＫＡＧＳ（配列番号１９）を含んでなる。
【０１３５】
さまざまな実施形態では、融合分子は遺伝子組換えで発現された融合分子であり、本明細書に記載され、図１に示されているようにペプチドリンカーを介して抗体に結合されるインターフェロン分子を含むことになる。さまざまな実施形態では、本発明のＴＡＡ抗体−ＩＦＮ融合分子の調製は一般に、次のように説明することができる。ＴＡＡ抗体の重鎖はカルボキシ末端にて、ペプチドリンカーを用いてインターフェロン又はその変異体とともに遺伝子組換え的に改変される。融合タンパク質含有ベクターが正しいヌクレオチド配列をもつことを確認した後、そのベクターは、軽鎖を含有するベクターと一緒に、例えば、ＣＨＯ細胞にトランスフェクションされる。トランスフェクタントは、ＥＬＩＳＡによって完全融合分子の産生についてスクリーニングされる。最も高いシグナルを与えるクローンを増殖させ、サブクローニングした後にローラーボトルで培養される。条件培地が集められて濃縮され、単一プロテインＡアフィニティークロマトグラフィーステップまたは適切な代替クロマトグラフィー法を用いて目的のタンパク質が精製される。最終生成物は所望のバッファーに所望の濃度で配合される（タンパク質濃度はＵＶ吸収によって決定される）。最終生成物の純度は、還元条件下及び非還元条件下の両方でのＳＤＳ−ＰＡＧＥによって決定される。ウェスタンブロット分析を使用して分子の予想されたサイズを確認する。
【０１３６】
さまざまな実施形態では、本開示の融合分子は、表５に記載の抗体、ペプチドリンカー、とインターフェロン分子との組み合わせを含むことになる。
2018516950.tif 000028
2018516950.tif 000029
【０１３７】
医薬組成物
別の態様では、本開示は、本明細書に記載の融合分子及び第２の抗がん剤を１つ以上の薬理学的に許容可能な賦形剤とともに含んでなる医薬組成物を提供する。本明細書に記載の医薬組成物及び使用方法は、下記に詳述されるように、他の活性薬剤との併用（共投与）の実施形態も包含する。本明細書において提供される融合分子は、医薬製剤の当業者ならば容易にわかるさまざまな方法によって製剤することができる。そのような方法は、例えば、レミントンの薬学、第１９版（Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏｍｐａｎｙ，１９９５）に見出される。医薬組成物は一般に、無菌で実質的に等張な、米国食品医薬品局のＧＭＰ規則すべてに完全に準拠して製剤される。
【０１３８】
一般に、本発明の融合分子は、１つ以上の薬理学的に許容可能な賦形剤又は担体と併せて製剤として投与されるのに適している。そのような薬理学的に許容可能な賦形剤及び担体は周知であり、当業者に理解されており、且つ広範に記述されている（例えば、レミントンの薬学、第１８版、Ａ．Ｒ．Ｇｅｎｎａｒｏ，ｅｄ．，Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏｍｐａｎｙ，１９９０を参照されたい）。薬理学的に許容可能な担体は、例えば、組成物のｐＨ、浸透圧、粘性、透明度、色、等張性、臭気、無菌性、安定性、溶解又は放出の速度、吸着又は浸透を改変、維持、又は保持するために含まれうる。そのような医薬組成物は、ポリペプチドの物理状態、安定性、生体内放出の速度、及び生体内クリアランスの速度に影響しうる。適切な薬理学的に許容可能な担体としては、アミノ酸（グリシン、グルタミン、アスパラギン、アルギニン、若しくはリジンなど）；抗微生物剤；抗酸化物質（アスコルビン酸、亜硫酸ナトリウム、若しくは亜硫酸水素ナトリウムなど）；バッファー（ホウ酸バッファー、重炭酸バッファー、トリス−ＨＣｌバッファー、クエン酸バッファー、リン酸バッファー、他の有機酸バッファーなど）；増量剤（マンニトール若しくはグリシンなど）、キレート剤（エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）など）；錯化剤（カフェイン、ポリビニルピロリドン、ベータ−サイクロデキストリン、若しくはヒトロキシプロピル−ベータ−サイクロデキストリンなど）；充填剤；単糖類；二糖類及び他の炭水化物（グルコース、マンノース、若しくはデキストリン）；タンパク質（血清アルブミン、ゼラチン、若しくは免疫グロブリン）；着色剤；矯味矯臭剤及び希釈剤；乳化剤；親水性ポリマー（ポリビニルピロリドンなど）；低分子量ポリペプチド；塩形成対イオン（ナトリウムなど）；保存剤（塩化ベンザルコニウム、安息香酸、サリチル酸、チメロサール、フェネチルアルコール、メチルパラベン、プロピルパラベン、クロルヘキシジン、ソルビン酸、若しくは過酸化水素など）；溶媒（グリセリン、プロピレングリコール、若しくはポリエチレングリコールなど）；糖アルコール（マンニトール若しくはソルビトールなど）；懸濁剤；界面活性剤又は湿潤剤（プルロニック、ＰＥＧ、ソルビタンエステル、ポリソルベート２０、ポリソルベート８０などのポリソルベート、トリトン、トロメタミン、レシチン、コレステロール、チロキサポール）；安定強化剤（スクロース若しくはソルビトール）；張度増強剤（ハロゲン化アルカリ金属（好ましくは、塩化ナトリウム若しくは塩化カリウム、マンニトール、ソルビトール）；送達溶媒；希釈剤；賦形剤、並びに／又は医薬補助剤が挙げられるが、これらに限定されない。
【０１３９】
医薬組成物における主要な溶媒又は担体は、その性質が水性であっても、非水性であってもよい。例えば、適切な溶媒又は担体は、非経口投与用組成物によくみられる他の材料を用いて補充されることがある注射用水、生理食塩水溶液、又は人工脳脊髄液である。中性緩衝生理食塩水又は血清アルブミンと混合した生理食塩水はさらなる例示的な溶媒である。他の例示的な医薬組成物としては、約ｐＨ７．０〜８．５のトリスバッファー又は約ｐＨ４．０〜５．５の酢酸緩衝液が挙げられ、それらはソルビトール又はその適切な代替物をさらに含みうる。本開示の１つの実施形態では、組成物は、所望の純度をもつ選ばれた組成物を随意の製剤化剤（レミントンの薬学、上記）と混合することによって、凍結乾燥ケーキ又は水溶液の形態に保存用に調製されうる。さらに、治療用組成物は、スクロースなどの適切な賦形剤を用いて凍結乾燥物として製剤されうる。最適な医薬組成物は、例えば、投与の経路、送達フォーマット、及び所望の投与量に応じて当業者によって決定されることになる。
【０１４０】
典型的には、本発明の医薬組成物は非経口投与に適する。本明細書で使用される場合、医薬組成物の「非経口投与」は、患者の組織を物理的に破ること及びその組織の破れたところを通した医薬組成物の投与を特徴とするいずれの投与の経路も含み、よって一般的に、血流、筋肉、又は内臓への直接投与となる。よって、非経口投与には、限定されないが、組成物を注射すること、外科的切開を通して組成物を適用すること、組織貫通非外科的創傷を通して組成物を適用することなどによる医薬組成物の投与が含まれる。さまざまな実施形態では、医薬組成物は、例えば、皮下注射、腹腔内注射、筋肉内注射、胸骨内注射、静脈内注射、動脈内注射、髄腔内注射、心室内注射、尿道内注射、頭蓋内注射、滑液嚢内注射から選択される経路を介するか又は注入を介する非経口投与用に製剤される。
【０１４１】
非経口投与が企図される場合、治療用医薬組成物は、薬理学的に許容可能な溶媒中の所望の融合分子を含む、発熱物質を含有しない非経口的に許容可能な水溶液の形態で存在しうる。非経口注射に特に適した溶媒は、適切に保存される無菌、等張溶液としてポリペプチドが製剤される滅菌蒸留水である。さまざまな実施形態では、注射投与に適した医薬製剤は、水溶液、好ましくは、ハンクス溶液、リンゲル液、又は緩衝生理食塩水などの生理的に適合可能なバッファー中に配合されうる。水性注射懸濁液は、カルボキシメチルセルロースナトリウム、ソルビトール、又はデキストランなどの懸濁液の粘性を増加させる物質を含みうる。くわえて、活性化合物の懸濁液は適切な油性注射懸濁液として調製されうる。随意に、懸濁液は、適切な安定剤又は化合物の溶解度を増加させ、高濃縮溶液の調製を可能にする物質も含んでもよい。注射製剤は、アンプルなどの単位剤形又は保存剤を含む複数回投与容器で、調製、パッケージ、又は販売されうる。他の有用な非経口投与可能な製剤としては、活性成分を微結晶形態又はリポソーム調製物中に含むものが挙げられる。非経口投与用製剤は、即時放出及び／又は調節された放出であるように製剤されうる。放出調節製剤としては、遅延放出、持続放出、パルス放出、制御放出、ターゲット放出、及びプログラム放出が挙げられる。
【０１４２】
当該技術分野において許容されるペプチド、タンパク質、抗体、及び免疫複合体を製剤及び投与するいずれの方法も、本発明の融合分子を投与するために適切に採用されうる。
【０１４３】
投薬
投薬レジメンは、最適な所望の反応（例えば、治療反応）をもたらすように調節される。例えば、単回ボーラス投与が施行されてもよく、いくつかに分けられた投与量が時間をかけて投与されてもよく、又は投与量は治療状況の緊急事態に適応するように比例的に減らしたり、増やしたりしてもよい。非経口組成物を単位剤形に投与のしやすさし、且つ投与量を均一にするために製剤することは、特に有利である。本明細書において、「単位剤形」という用語は、治療対象に単位投与量として適した物理的に個別のユニットを指す。各ユニットは、所望の治療効果を生むように計算された所定量の活性化合物を必要な医薬担体とともに含む。
【０１４４】
本開示の方法に採用される融合分子の正確な投与量は、投与の経路並びに疾患及び障害の重篤度に依存することになり、施術者の判断及び各対象の状況に応じて決められるべきである。なお、投与量値が、単回又は投与複数回投与を含みうること、特定の対象いずれに対しても、特有の投薬レジメンが、個々の必要性及び組成物の投与を施行又は管理する者の専門家としての判断に応じて時間とともに調節されるべきであること、本明細書に記載の投与量範囲は例示に過ぎず、特許請求される組成物の範囲又は実施を限定することを意図しないことに留意すべきである。さらに、本開示の組成物を用いる投薬レジメンは、疾患の種類、対象の年齢、体重、性別、病状、病気の重症度、投与の経路、及び用いる特定の抗体を含むさまざまな因子に基づきうる。よって、投薬レジメンは大きく変わる可能性があるが、標準的な方法を用いて慣習的に決定することができる。例えば、投与量は、毒性作用などの臨床効果及び／又は臨床検査値を含みうる、薬物動態に関するパラメーター又は薬力学に関するパラメーターに基づいて調節されうる。よって、本開示は、当業者によって決定されるような対象内投与量漸増を包含する。適切な投与量及びレジメンを決定することは、関連する技術分野において周知であり、本明細書において開示される教示をいったん提供された当業者ならば包含されることを理解するであろう。
【０１４５】
ヒト対象への投与については、本発明の融合分子の総月間投与量は、当然投与方法に依存して、患者あたり０．００２〜５００ｍｇ、患者あたり０．００２〜４００ｍｇ、患者あたり０．００２〜３００ｍｇ、患者あたり０．００２〜２００ｍｇ、患者あたり０．００２〜１００ｍｇ、患者あたり０．００２〜５０ｍｇ、患者あたり０．００６〜５００ｍｇ、患者あたり０．００６〜４００ｍｇ、患者あたり０．００６〜３００ｍｇ、患者あたり０．００６〜２００ｍｇ、患者あたり０．００６〜１００ｍｇ、患者あたり０．００６〜５０ｍｇ、患者あたり０．０２〜５００ｍｇ、患者あたり０．０２〜４００ｍｇ、患者あたり０．０２〜３００ｍｇ、患者あたり０．０２〜２００ｍｇ、患者あたり０．０２〜１００ｍｇ、患者あたり０．０２〜５０ｍｇ、患者あたり０．０６〜５００ｍｇ、患者あたり０．０６〜４００ｍｇ、患者あたり０．０６〜３００ｍｇ、患者あたり０．０６〜２００ｍｇ、患者あたり０．０６〜１００ｍｇ、患者あたり０．０６〜５０ｍｇ、患者あたり０．２〜５００ｍｇ、患者あたり０．２〜４００ｍｇ、患者あたり０．２〜３００ｍｇ、患者あたり０．２〜２００ｍｇ、患者あたり０．２〜１００ｍｇ、患者あたり０．２〜５０ｍｇ、患者あたり０．６〜５００ｍｇ、患者あたり０．６〜４００ｍｇ、患者あたり０．６〜３００ｍｇ、患者あたり０．６〜２００ｍｇ、患者あたり０．６〜１００ｍｇ、又は患者あたり０．６〜５０ｍｇ、患者あたり２〜５００ｍｇ、患者あたり２〜４００ｍｇ、患者あたり２〜３００ｍｇ、患者あたり２〜２００ｍｇ、患者あたり２〜１００ｍｇ、患者あたり２〜５０ｍｇ、患者あたり６〜５００ｍｇ、患者あたり６〜４００ｍｇ、患者あたり６〜３００ｍｇ、患者あたり６〜２００ｍｇ、患者あたり６〜１００ｍｇ、又は患者あたり６〜５０ｍｇの範囲であることができる。総月間投与量は、単回又は分割投与で投与することができ、医師の裁量で、本明細書に与えられる典型的な範囲から外れることができる。
【０１４６】
本発明の融合分子の治療有効量に関する例となる非限定的な週間投与量範囲は、約０．０００１〜約０．９ｍｇ／ｋｇ、約０．０００１〜約０．８ｍｇ／ｋｇ、約０．０００１〜約０．７ｍｇ／ｋｇ、約０．０００１〜約０．６ｍｇ／ｋｇ、約０．０００１〜約０．５ｍｇ／ｋｇ、約０．０００１〜約０．４ｍｇ／ｋｇ、約０．０００１〜約０．３ｍｇ／ｋｇ、約０．０００１〜約０．２ｍｇ／ｋｇ、約０．０００１〜約０．１ｍｇ／ｋｇ、約０．０００３〜約０．９ｍｇ／ｋｇ、約０．０００３〜約０．８ｍｇ／ｋｇ、約０．０００３〜約０．７ｍｇ／ｋｇ、約０．０００３〜約０．６ｍｇ／ｋｇ、約０．０００３〜約０．５ｍｇ／ｋｇ、約０．０００３〜約０．４ｍｇ／ｋｇ、約０．０００３〜約０．３ｍｇ／ｋｇ、約０．０００３〜約０．２ｍｇ／ｋｇ、約０．０００３〜約０．１ｍｇ／ｋｇ、約０．００１〜約０．９ｍｇ／ｋｇ、約０．００１〜約０．８ｍｇ／ｋｇ、約０．００１〜約０．７ｍｇ／ｋｇ、約０．００１〜約０．６ｍｇ／ｋｇ、約０．００１〜約０．５ｍｇ／ｋｇ、約０．００１〜約０．４ｍｇ／ｋｇ、約０．００１〜約０．３ｍｇ／ｋｇ、約０．００１〜約０．２ｍｇ／ｋｇ、約０．０００１〜約０．１ｍｇ／ｋｇ、約０．００３〜約０．９ｍｇ／ｋｇ、約０．００３〜約０．８ｍｇ／ｋｇ、約０．００３〜約０．７ｍｇ／ｋｇ、約０．００３〜約０．６ｍｇ／ｋｇ、約０．００３〜約０．５ｍｇ／ｋｇ、約０．００３〜約０．４ｍｇ／ｋｇ、約０．００３〜約０．３ｍｇ／ｋｇ、約０．００３〜約０．２ｍｇ／ｋｇ、約０．００３〜約０．１ｍｇ／ｋｇ、約０．０１〜約０．９ｍｇ／ｋｇ、約０．０１〜約０．８ｍｇ／ｋｇ、約０．０１〜約０．７ｍｇ／ｋｇ、約０．０１〜約０．６ｍｇ／ｋｇ、約０．０１〜約０．５ｍｇ／ｋｇ、約０．０１〜約０．４ｍｇ／ｋｇ、約０．０１〜約０．３ｍｇ／ｋｇ、約０．０１〜約０．２ｍｇ／ｋｇ、約０．０１〜約０．１ｍｇ／ｋｇ、約０．０３〜約０．９ｍｇ／ｋｇ、約０．０３〜約０．８ｍｇ／ｋｇ、約０．０３〜約０．７ｍｇ／ｋｇ、約０．０３〜約０．６ｍｇ／ｋｇ、約０．０３〜約０．５ｍｇ／ｋｇ、約０．０３〜約０．４ｍｇ／ｋｇ、約０．０３〜約０．３ｍｇ／ｋｇ、約０．０３〜約０．２ｍｇ／ｋｇ、約０．０３〜約０．１ｍｇ／ｋｇ、約０．１〜約０．９ｍｇ／ｋｇ、約０．１〜約０．８ｍｇ／ｋｇ、約０．１〜約０．７ｍｇ／ｋｇ、約０．１〜約０．６ｍｇ／ｋｇ、約０．１〜約０．５ｍｇ／ｋｇ、約０．１〜約０．４ｍｇ／ｋｇ、約０．１〜約０．３ｍｇ／ｋｇ、約０．１〜約０．２ｍｇ／ｋｇ、約０．１〜約０．１ｍｇ／ｋｇ、約０．３〜約０．９ｍｇ／ｋｇ、約０．３〜約０．８ｍｇ／ｋｇ、約０．３〜約０．７ｍｇ／ｋｇ、約０．３〜約０．６ｍｇ／ｋｇ、約０．３〜約０．５ｍｇ／ｋｇ、約０．３〜約０．４ｍｇ／ｋｇ、約０．３〜約０．３ｍｇ／ｋｇ、約０．３〜約０．２ｍｇ／ｋｇ、約０．３〜約０．１ｍｇ／ｋｇであることができる。
【０１４７】
さまざまな実施形態では、ＴＡＡ抗体−ＩＦＮ融合分子は、０．０００１ｍｇ／ｋｇ以下、０．０００３ｍｇ／ｋｇ以下、０．００１ｍｇ／ｋｇ以下、０．００３ｍｇ／ｋｇ以下、０．０１ｍｇ／ｋｇ以下、０．０３ｍｇ／ｋｇ以下、０．１ｍｇ／ｋｇ以下、０．２ｍｇ／ｋｇ以下、０．３ｍｇ／ｋｇ以下、０．４ｍｇ／ｋｇ以下、０．５ｍｇ／ｋｇ以下、０．６ｍｇ／ｋｇ以下、０．７ｍｇ／ｋｇ以下、０．８ｍｇ／ｋｇ以下、及び０．９ｍｇ／ｋｇ以下からなる群より選択される週間投与量で患者に投与される。
【０１４８】
さまざまな実施形態では、本発明の治療有効量の融合分子の週間投与量は０．０００１ｍｇ／ｋｇ体重であることになる。さまざまな実施形態では、本発明の治療有効量の融合分子の週間投与量は０．０００３ｍｇ／ｋｇ体重であることになる。さまざまな実施形態では、本発明の治療有効量の融合分子の週間投与量は０．００１ｍｇ／ｋｇ体重であることになる。さまざまな実施形態では、本発明の治療有効量の融合分子の週間投与量は０．００３ｍｇ／ｋｇ体重であることになる。さまざまな実施形態では、本発明の治療有効量の融合分子の週間投与量は０．０１ｍｇ／ｋｇ体重であることになる。さまざまな実施形態では、本発明の治療有効量の融合分子の週間投与量は０．０３ｍｇ／ｋｇ体重であることになる。さまざまな実施形態では、本発明の治療有効量の融合分子の週間投与量は０．１ｍｇ／ｋｇ体重であることになる。さまざまな実施形態では、本発明の治療有効量の融合分子の週間投与量は０．３ｍｇ／ｋｇ体重であることになる。さまざまな実施形態では、融合分子は、静脈内（ＩＶ）注入を介して８回の週１回投与を最高で３サイクル投与されることになる。
【０１４９】
さまざまな実施形態では、医薬組成物の単回又は複数回投与は、患者に必要とされ、忍容される投与量及び頻度に依存して施行される。いずれにしても、組成物は、患者を効果的に治療するのに十分な、本明細書において開示されている少なくとも１つの融合分子の量をもたらすべきである。投与は１回で施行することができるが、治療結果が達成されるか、又は副作用が治療の中止を必要とするかのいずれかまで定期的に適用されうる。
【０１５０】
融合分子医薬組成物の投与の投与頻度は、療法及び治療中の特定の疾患の性質に依存する。患者は、所望の治療結果が達成されるまで、毎週又は毎月などの一定の間隔で治療することができる。例示的な投与頻度としては、中断なしに週１回；週１回、隔週；２週間に１回；３週間に１回；中断なしに週１回２週間、中断なしに週２回２週間、中断なしに週２回３週間、中断なしに週２回４週間、中断なしに週２回５週間、中断なしに週２回６週間、中断なしに週２回７週間、中断なしに週２回８週間、月１回；２か月に１回；３か月に１回；４か月に１回；５か月に１回；又は６か月に１回、又は年１回が挙げられるが、これらに限定されない。
【０１５１】
ＴＡＡ抗体−ＩＦＮ融合分子治療の使用法
１つの態様では、本発明は、個人に治療有効量のＴＡＡ抗体−ＩＦＮ融合分子を投与することを含む、個人における増殖性疾患（がんなど）を治療する方法に関する。重要なことには、本明細書に記載のＴＡＡ抗体−ＩＦＮ融合分子及び方法は、再発がん、耐性がん、又は難治性がんを含むがんを、驚くべき低い投与量で効果的に治療するのに使用することができる。
【０１５２】
さまざまな実施形態では、本発明の方法は、あるいくつかの細胞増殖性疾患を治療するのに有用である。そのような疾患としては、以下が挙げられるが、それらに限定されない。（ａ）限定されないが、浸潤性乳管癌、浸潤性小葉癌、乳管癌、非浸潤性小葉癌、及び転移性乳がんを含む乳房の増殖性疾患；（ｂ）限定されないが、さまざまなＴ細胞及びＢ細胞リンパ腫、非ホジキンリンパ腫、皮膚Ｔ細胞性リンパ腫、ホジキン病、並びに中枢神経系のリンパ腫を含むリンパ球細胞の増殖性疾患；（ｃ）多発性骨髄腫、慢性好中球性白血病、慢性好酸球性白血病／好酸球増加症候群、慢性特発性骨髄線維症、真性多血症、本態性血小板血症、慢性骨髄単球性白血病、非定型慢性骨髄性白血病、若年性骨髄単球性白血病、環状鉄芽球を伴う不応性貧血及び環状鉄芽球を伴わない不応性貧血、多血球系異形成を伴う不応性血球減少症（骨髄異形成症候群）、過剰芽細胞を伴う不応性貧血（骨髄異形成症候群）、５ｑ−症候群、ｔ（９；１２）（ｑ２２；ｐ１２）を有する骨髄異形成症候群、及び骨髄性白血病（例えば、フィラデルフィア染色体陽性（ｔ（９；２２）（ｑｑ３４；ｑ１１））；（ｄ）限定されないが、基底細胞がん、扁平上皮がん、悪性黒色腫、及びカポジ肉腫を含む皮膚の増殖性疾患；（ｅ）限定されないが、急性脊髄性白血病、急性リンパ性白血病、慢性リンパ性白血病、慢性骨髄性白血病、及び有毛細胞白血病を含む白血病；（ｆ）限定されないが、肛門、結腸、大腸、食道、胆嚢、胃（ｓｔｏｍａｃｈ）（胃（ｇａｓｔｒｉｃ））、膵がん、膵がん−膵島細胞、直腸、小腸、及び唾液腺がんを含む消化管の増殖性疾患；（ｇ）限定されないが、肝細胞がん、胆管がん、混合型肝細胞胆管癌、原発性肝がん、及び転移性肝がんを含む肝臓の増殖性疾患；（ｈ）限定されないが、前立腺がん、精巣がん、及び陰茎がんを含む男性生殖器の増殖性疾患；（ｉ）限定されないが、子宮がん（子宮内膜）、子宮頸、卵巣、膣、外陰がん、子宮肉腫、及び卵巣胚細胞腫瘍を含む女性生殖器の増殖性疾患；（ｊ）限定されないが、小細胞及び非小細胞肺癌、気管支腺腫、胸膜肺芽腫、並びに悪性中皮腫を含む呼吸器の増殖性疾患；（ｋ）限定されないが、脳幹及び視床下部神経膠腫、小脳及び大脳星細胞腫、髄芽腫、上衣腫瘍、乏突起膠腫、髄膜腫、並びに神経外胚葉及び松果体腫瘍を含む脳の増殖性疾患；（ｌ）限定されないが、眼球内黒色腫、網膜芽腫、及び横紋筋肉腫を含む眼の増殖性疾患；（ｍ）限定されないが、喉頭、下咽頭、鼻咽腔、咽頭口腔部がん、並びに口唇及び口腔がん、扁平上皮性頸部がん、転移性副鼻腔がんを含む頭頸部の増殖性疾患；（ｎ）限定されないが、甲状腺がん、胸腺腫、悪性胸腺腫、甲状腺髄様がん、乳頭様甲状腺癌、多発性内分泌腫瘍症２型Ａ（ＭＥＮ２Ａ）、褐色細胞腫、副甲状腺腫、多発性内分泌腫瘍症２型Ｂ（ＭＥＮ２Ｂ）、家族性甲状腺髄様癌（ＦＭＴＣ）、及びカルチノイドを含む甲状腺がんの増殖性疾患；（ｏ）限定されないが、膀胱がんを含む尿路の増殖性疾患；（ｐ）限定されないが、軟組織の肉腫、骨肉腫、悪性線維性組織球腫、リンパ肉腫、及び横紋筋肉腫を含む肉腫；（ｑ）限定されないが、腎細胞癌、腎明細胞癌、及び腎細胞癌を含む腎臓の増殖性疾患；（ｒ）前駆Ｂリンパ芽球性白血病／リンパ腫（前駆Ｂ細胞急性リンパ性白血病）、Ｂ細胞性慢性リンパ性白血病／小リンパ球性リンパ腫、Ｂ細胞前リンパ球性白血病、リンパ形質細胞性リンパ腫、脾辺縁帯Ｂ細胞リンパ腫、有毛細胞白血病、形質細胞性骨髄腫／形質細胞腫、ＭＡＬＴ型節外性濾胞辺縁帯Ｂ細胞リンパ腫、節性辺縁帯Ｂ細胞リンパ腫、濾胞性リンパ腫、マントル細胞リンパ腫、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、縦隔大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、原発性滲出性リンパ腫、及びバーキットリンパ腫／バーキット細胞白血病；（ｓ）前駆Ｔリンパ芽球性リンパ腫／白血病（前駆Ｔ細胞急性リンパ性白血病）、Ｔ細胞前リンパ球性白血病、Ｔ細胞顆粒リンパ球性白血病、アグレッシブＮＫ細胞白血病、成人Ｔ細胞リンパ腫／白血病（ＨＴＬＶ−１）、節外性ＮＫ／Ｔ細胞リンパ腫、鼻型、腸管症型Ｔ細胞リンパ腫、肝脾ガンマ・デルタＴ細胞リンパ腫、皮下脂肪織炎様Ｔ細胞リンパ腫、菌状息肉症／セザリー症候群、未分化大細胞型リンパ腫、Ｔ／ヌル細胞、原発性皮膚型、末梢性Ｔ細胞リンパ腫、他の点は特徴不明（ｎｏｔ  ｏｔｈｅｒｗｉｓｅ  ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚｅｄ）、血管免疫芽球性Ｔ細胞リンパ腫、未分化大細胞型リンパ腫、Ｔ／ヌル細胞、及び原発性全身型；（ｔ）結節性リンパ球優位型ホジキンリンパ腫、結節性硬化型ホジキンリンパ腫（グレード１及び２）、リンパ球豊富型古典的ホジキンリンパ腫、混合細胞型ホジキンリンパ腫、及びリンパ球減少型ホジキンリンパ腫；並びに（ｕ）ｔ（８；２１）（ｑ２２；ｑ２２）を有するＡＭＬ、ＡＭＬ１（ＣＢＦ−アルファ）／ＥＴＯ、急性前骨髄球性白血病（ｔ（１５；１７）（ｑ２２；ｑ１１−１２）及びバリアント、ＰＭＬ／ＲＡＲ−アルファを有するＡＭＬ）、異常骨髄好酸球（ｉｎｖ（１６）（ｐ１３ｑ２２）又はｔ（１６；１６）（ｐ１３；ｑ１１）、ＣＢＦｂ／ＭＹＨ１１．ｔｉｍｅｓ．）を有するＡＭＬ、及び１１ｑ２３（ＭＬＬ）異常を有するＡＭＬ、最未分化型ＡＭＬ、未分化型ＡＭＬ、分化型ＡＭＬ、急性骨髄単球性白血病、急性単球性白血病、急性赤白血病、急性巨核芽球性白血病、急性好塩基球性白血病、並びに骨髄線維症を伴う急性汎骨髄症。
【０１５３】
さまざまな実施形態では、増殖性疾患は、Ｂ細胞リンパ腫；肺がん（小細胞肺がん及び非小細胞肺がん）；気管支がん；結腸直腸がん；前立腺がん；乳がん；膵臓がん；胃がん；卵巣がん；膀胱がん；脳又は中枢神経系がん；末梢神経系がん；食道がん；子宮頸がん；黒色腫；子宮又は子宮内膜がん；口腔又は咽頭のがん；肝がん；腎臓がん；胆道がん；小腸又は虫垂がん；唾液腺がん；甲状腺がん；副腎がん；骨肉腫；軟骨肉腫；脂肪肉腫；精巣がん；並びに悪性線維性組織球腫；皮膚がん；頭及び首がん；リンパ腫；肉腫；多発性骨髄腫；並びに白血病からなる群より選択されるがんである。
【０１５４】
さまざまな実施形態では、個人に有効量の抗ＴＡＡ抗体−ＩＦＮ−α融合分子を含んでなる医薬組成物を投与することを含んでなる個人におけるがんを治療する方法が提供され、抗−ＴＡＡ−ＩＦＮ−α融合分子は、０．０００１ｍｇ／ｋｇ、０．０００３ｍｇ／ｋｇ、０．００１ｍｇ／ｋｇ、０．００３ｍｇ／ｋｇ、０．０１ｍｇ／ｋｇ、０．０３ｍｇ／ｋｇ、０．１ｍｇ／ｋｇ、０．２ｍｇ／ｋｇ、０．３ｍｇ／ｋｇ、０．４ｍｇ／ｋｇ、０．５ｍｇ／ｋｇ、０．６ｍｇ／ｋｇ、０．７ｍｇ／ｋｇ、０．８ｍｇ／ｋｇ、及び０．９ｍｇ／ｋｇからなる群より選択される週間投与量で個人に投与される。さまざまな実施形態では、抗−ＴＡＡ−ＩＦＮ−α融合分子は、以下の範囲のいずれかに含まれる投与量（例えば、週間投与量）で個人に投与される。約０．０００１〜約０．０００３ｍｇ／ｋｇ、約０．０００３〜約０．００１ｍｇ／ｋｇ、約０．００１〜約０．００３ｍｇ／ｋｇ、約０．００３〜約０．０１ｍｇ／ｋｇ、約０．０１〜約０．０３ｍｇ／ｋｇ、約０．０３〜約０．１ｍｇ／ｋｇ、約０．１〜約０．３ｍｇ／ｋｇ、約０．３〜約０．４ｍｇ／ｋｇ、約０．４〜約０．５ｍｇ／ｋｇ、約０．５〜約０．６ｍｇ／ｋｇ、約０．６〜約０．７ｍｇ／ｋｇ、約０．７〜約０．８ｍｇ／ｋｇ、及び約０．８〜約０．９ｍｇ／ｋｇ。さまざまな実施形態では、抗−ＴＡＡ−ＩＦＮ−α融合分子は、およそ、０．０００１ｍｇ／ｋｇ、０．０００３ｍｇ／ｋｇ、０．００１ｍｇ／ｋｇ、０．００３ｍｇ／ｋｇ、０．０１ｍｇ／ｋｇ、０．０３ｍｇ／ｋｇ、０．１ｍｇ／ｋｇ、０．２ｍｇ／ｋｇ、０．３ｍｇ／ｋｇ、０．４ｍｇ／ｋｇ、０．５ｍｇ／ｋｇ、０．６ｍｇ／ｋｇ、０．７ｍｇ／ｋｇ、０．８ｍｇ／ｋｇ、及び０．９ｍｇ／ｋｇのいずれかを超えない投与量（例えば、週間投与量）で個人に投与される。さまざまな実施形態では、がんは、本発明の抗ＴＡＡ抗体−ＩＦＮ−α融合分子のＴＡＡを発現する。さまざまな実施形態では、がんは、ＴＡＡ発現がんの腫瘍微小環境内の非ＴＡＡ発現がんである。
【０１５５】
さまざまな実施形態では、抗ＴＡＡ抗体−ＩＦＮ−α融合分子を含む医薬組成の有効量を個人に投与することを含む個人におけるがんを治療する方法が提供され、ＴＡＡ抗体−ＩＦＮ−α融合分子は、約０．００３〜約０．０１ｍｇ／ｋｇの週間投与量で個人に投与される。
【０１５６】
さまざまな実施形態では、抗ＴＡＡ抗体−ＩＦＮ−α融合分子を含む医薬組成の有効量を個人に投与することを含む個人におけるがんを治療する方法が提供され、ＴＡＡ抗体−ＩＦＮ−α融合分子は、約０．０１〜約０．０３ｍｇ／ｋｇの週間投与量で個人に投与される。
【０１５７】
さまざまな実施形態では、抗ＴＡＡ抗体−ＩＦＮ−α融合分子を含む医薬組成の有効量を個人に投与することを含む個人におけるがんを治療する方法が提供され、ＴＡＡ抗体−ＩＦＮ−α融合分子は、約０．０３〜約０．１ｍｇ／ｋｇの週間投与量で個人に投与される。
【０１５８】
さまざまな実施形態では、抗ＨＥＲ２／ｎｅｕ−ＩＦＮ−α融合分子を含む医薬組成物の有効量を個人に投与することを含む個人におけるがんを治療する方法が提供され、抗ＨＥＲ２／ｎｅｕ−ＩＦＮ−α融合分子は、０．０００１ｍｇ／ｋｇ、０．０００３ｍｇ／ｋｇ、０．００１ｍｇ／ｋｇ、０．００３ｍｇ／ｋｇ、０．０１ｍｇ／ｋｇ、０．０３ｍｇ／ｋｇ、０．１ｍｇ／ｋｇ、０．２ｍｇ／ｋｇ、０．３ｍｇ／ｋｇ、０．４ｍｇ／ｋｇ、０．５ｍｇ／ｋｇ、０．６ｍｇ／ｋｇ、０．７ｍｇ／ｋｇ、０．８ｍｇ／ｋｇ、及び０．９ｍｇ／ｋｇからなる群より選択される週間投与量で個人に投与される。さまざまな実施形態では、抗ＨＥＲ２／ｎｅｕ−ＩＦＮ−α融合分子は、以下の範囲のいずれかに含まれる投与量（例えば、週間投与量）で個人に投与される。約０．０００１〜約０．０００３ｍｇ／ｋｇ、約０．０００３〜約０．００１ｍｇ／ｋｇ、約０．００１〜約０．００３ｍｇ／ｋｇ、約０．００３〜約０．０１ｍｇ／ｋｇ、約０．０１〜約０．０３ｍｇ／ｋｇ、約０．０３〜約０．１ｍｇ／ｋｇ、約０．１〜約０．３ｍｇ／ｋｇ、約０．３〜約０．４ｍｇ／ｋｇ、約０．４〜約０．５ｍｇ／ｋｇ、約０．５〜約０．６ｍｇ／ｋｇ、約０．６〜約０．７ｍｇ／ｋｇ、約０．７〜約０．８ｍｇ／ｋｇ、及び約０．８〜約０．９ｍｇ／ｋｇ。さまざまな実施形態では、抗ＨＥＲ２／ｎｅｕ−ＩＦＮ−α融合分子は、およそ、０．０００１ｍｇ／ｋｇ、０．０００３ｍｇ／ｋｇ、０．００１ｍｇ／ｋｇ、０．００３ｍｇ／ｋｇ、０．０１ｍｇ／ｋｇ、０．０３ｍｇ／ｋｇ、０．１ｍｇ／ｋｇ、０．２ｍｇ／ｋｇ、０．３ｍｇ／ｋｇ、０．４ｍｇ／ｋｇ、０．５ｍｇ／ｋｇ、０．６ｍｇ／ｋｇ、０．７ｍｇ／ｋｇ、０．８ｍｇ／ｋｇ、及び０．９ｍｇ／ｋｇのいずれかを超えない投与量（例えば、週間投与量）で個人に投与される。さまざまな実施形態では、がんはＨＥＲ２／ｎｅｕを発現する。さまざまな実施形態では、がんはＨＥＲ２／ｎｅｕ発現がんの腫瘍微小環境内の非ＨＥＲ２／ｎｅｕ発現がんである。
【０１５９】
さまざまな実施形態では、抗ＨＥＲ２／ｎｅｕ抗体−ＩＦＮ−α融合分子を含む医薬組成物の有効量を個人に投与することを含む、個人における、乳がん、卵巣がん、及び非小細胞肺がん（ＮＳＣＬＣ）からなる群より選択されるがんを治療する方法が提供され、抗ＨＥＲ２／ｎｅｕ抗体−ＩＦＮ融合−α分子は約０．００３〜約０．０１ｍｇ／ｋｇの週間投与量で個人に投与される。
【０１６０】
さまざまな実施形態では、抗ＨＥＲ２／ｎｅｕ抗体−ＩＦＮ−α融合分子を含む医薬組成物の有効量を個人に投与することを含む、個人における、乳がん、卵巣がん、及び非小細胞肺がん（ＮＳＣＬＣ）からなる群より選択されるがんを治療する方法が提供され、抗ＨＥＲ２／ｎｅｕ抗体−ＩＦＮ−α融合分子は約０．０１〜約０．０３ｍｇ／ｋｇの週間投与量で個人に投与される。
【０１６１】
さまざまな実施形態では、抗ＨＥＲ２／ｎｅｕ抗体−ＩＦＮ−α融合分子を含む医薬組成物の有効量を個人に投与することを含む、個人における、乳がん、卵巣がん、及び非小細胞肺がん（ＮＳＣＬＣ）からなる群より選択されるがんを治療する方法が提供され、抗ＨＥＲ２／ｎｅｕ抗体−ＩＦＮ−α融合分子は約０．０３〜約０．１ｍｇ／ｋｇの週間投与量で個人に投与される。
【０１６２】
さまざまな実施形態では、抗ＣＤ２０−ＩＦＮ−α融合分子を含む医薬組成物の有効量を個人に投与することを含む個人におけるがんを治療する方法が提供され、抗ＣＤ２０−ＩＦＮ−α融合分子は、０．０００１ｍｇ／ｋｇ、０．０００３ｍｇ／ｋｇ、０．００１ｍｇ／ｋｇ、０．００３ｍｇ／ｋｇ、０．０１ｍｇ／ｋｇ、０．０３ｍｇ／ｋｇ、０．１ｍｇ／ｋｇ、０．２ｍｇ／ｋｇ、０．３ｍｇ／ｋｇ、０．４ｍｇ／ｋｇ、０．５ｍｇ／ｋｇ、０．６ｍｇ／ｋｇ、０．７ｍｇ／ｋｇ、０．８ｍｇ／ｋｇ、及び０．９ｍｇ／ｋｇからなる群より選択される週間投与量で個人に投与される。さまざまな実施形態では、抗ＣＤ２０−ＩＦＮ−α融合分子は、以下の範囲のいずれかに含まれる投与量（例えば、週間投与量）で個人に投与される。約０．０００１〜約０．０００３ｍｇ／ｋｇ、約０．０００３〜約０．００１ｍｇ／ｋｇ、約０．００１〜約０．００３ｍｇ／ｋｇ、約０．００３〜約０．０１ｍｇ／ｋｇ、約０．０１〜約０．０３ｍｇ／ｋｇ、約０．０３〜約０．１ｍｇ／ｋｇ、約０．１〜約０．３ｍｇ／ｋｇ、約０．３〜約０．４ｍｇ／ｋｇ、約０．４〜約０．５ｍｇ／ｋｇ、約０．５〜約０．６ｍｇ／ｋｇ、約０．６〜約０．７ｍｇ／ｋｇ、約０．７〜約０．８ｍｇ／ｋｇ、及び約０．８〜約０．９ｍｇ／ｋｇ。さまざまな実施形態では、抗ＣＤ２０−ＩＦＮ−α融合分子は、およそ、０．０００１ｍｇ／ｋｇ、０．０００３ｍｇ／ｋｇ、０．００１ｍｇ／ｋｇ、０．００３ｍｇ／ｋｇ、０．０１ｍｇ／ｋｇ、０．０３ｍｇ／ｋｇ、０．１ｍｇ／ｋｇ、０．２ｍｇ／ｋｇ、０．３ｍｇ／ｋｇ、０．４ｍｇ／ｋｇ、０．５ｍｇ／ｋｇ、０．６ｍｇ／ｋｇ、０．７ｍｇ／ｋｇ、０．８ｍｇ／ｋｇ、及び０．９ｍｇ／ｋｇのいずれかを超えない投与量（例えば、週間投与量）で個人に投与される。さまざまな実施形態では、がんはＣＤ２０を発現する。さまざまな実施形態では、がんはＣＤ２０発現がんの腫瘍微小環境内の非ＣＤ２０発現がんである。
【０１６３】
さまざまな実施形態では、抗ＣＤ２０抗体−ＩＦＮ−α融合分子を含む医薬組成物の有効量を個人に投与することを含む、個人における、Ｂ細胞性非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）及びＢ細胞性慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）からなる群より選択されるがんを治療する方法が提供され、抗ＣＤ２０抗体−ＩＦＮ−α融合分子は約０．００３〜約０．０１ｍｇ／ｋｇの週間投与量で個人に投与される。
【０１６４】
さまざまな実施形態では、抗ＣＤ２０抗体−ＩＦＮ−α融合分子を含む医薬組成物の有効量を個人に投与することを含む、個人における、Ｂ細胞性非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）及びＢ細胞性慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）からなる群より選択されるがんを治療する方法が提供され、抗ＣＤ２０抗体−ＩＦＮ−α融合分子は約０．０１〜約０．０３ｍｇ／ｋｇの週間投与量で個人に投与される。
【０１６５】
さまざまな実施形態では、抗ＣＤ２０抗体−ＩＦＮ−α融合分子を含む医薬組成物の有効量を個人に投与することを含む、個人における、Ｂ細胞性非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）及びＢ細胞性慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）からなる群より選択されるがんを治療する方法が提供され、抗ＣＤ２０抗体−ＩＦＮ−α融合分子は約０．０３〜約０．１ｍｇ／ｋｇの週間投与量で個人に投与される。
【０１６６】
さまざまな実施形態では、抗ＣＤ１３８−ＩＦＮ−α融合分子を含む医薬組成物の有効量を個人に投与することを含む個人におけるがんを治療する方法が提供され、抗ＣＤ１３８−ＩＦＮ−α融合分子は、０．０００１ｍｇ／ｋｇ、０．０００３ｍｇ／ｋｇ、０．００１ｍｇ／ｋｇ、０．００３ｍｇ／ｋｇ、０．０１ｍｇ／ｋｇ、０．０３ｍｇ／ｋｇ、０．１ｍｇ／ｋｇ、０．２ｍｇ／ｋｇ、０．３ｍｇ／ｋｇ、０．４ｍｇ／ｋｇ、０．５ｍｇ／ｋｇ、０．６ｍｇ／ｋｇ、０．７ｍｇ／ｋｇ、０．８ｍｇ／ｋｇ、及び０．９ｍｇ／ｋｇからなる群より選択される週間投与量で個人に投与される。さまざまな実施形態では、抗ＣＤ１３８−ＩＦＮ−α融合分子は、以下の範囲のいずれかに含まれる投与量（例えば、週間投与量）で個人に投与される。約０．０００１〜約０．０００３ｍｇ／ｋｇ、約０．０００３〜約０．００１ｍｇ／ｋｇ、約０．００１〜約０．００３ｍｇ／ｋｇ、約０．００３〜約０．０１ｍｇ／ｋｇ、約０．０１〜約０．０３ｍｇ／ｋｇ、約０．０３〜約０．１ｍｇ／ｋｇ、約０．１〜約０．３ｍｇ／ｋｇ、約０．３〜約０．４ｍｇ／ｋｇ、約０．４〜約０．５ｍｇ／ｋｇ、約０．５〜約０．６ｍｇ／ｋｇ、約０．６〜約０．７ｍｇ／ｋｇ、約０．７〜約０．８ｍｇ／ｋｇ、及び約０．８〜約０．９ｍｇ／ｋｇ。さまざまな実施形態では、抗ＣＤ１３８−ＩＦＮ−α融合分子は、およそ、０．０００１ｍｇ／ｋｇ、０．０００３ｍｇ／ｋｇ、０．００１ｍｇ／ｋｇ、０．００３ｍｇ／ｋｇ、０．０１ｍｇ／ｋｇ、０．０３ｍｇ／ｋｇ、０．１ｍｇ／ｋｇ、０．２ｍｇ／ｋｇ、０．３ｍｇ／ｋｇ、０．４ｍｇ／ｋｇ、０．５ｍｇ／ｋｇ、０．６ｍｇ／ｋｇ、０．７ｍｇ／ｋｇ、０．８ｍｇ／ｋｇ、及び０．９ｍｇ／ｋｇのいずれかを超えない投与量（例えば、週間投与量）で個人に投与される。さまざまな実施形態では、がんはＣＤ１３８を発現する。さまざまな実施形態では、がんはＣＤ１３８発現がんの腫瘍微小環境内の非ＣＤ１３８発現がんである。
【０１６７】
さまざまな実施形態では、抗ＣＤ１３８抗体−ＩＦＮ−α融合分子を含む医薬組成物の有効量を個人に投与することを含む、個人における、多発性骨髄腫、乳がん、及び膀胱がんからなる群より選択されるがんを治療する方法が提供され、抗ＣＤ１３８抗体−ＩＦＮ−α融合分子は約０．００３〜約０．０１ｍｇ／ｋｇの週間投与量で個人に投与される。
【０１６８】
さまざまな実施形態では、抗ＣＤ１３８抗体−ＩＦＮ−α融合分子を含む医薬組成物の有効量を個人に投与することを含む、個人における、多発性骨髄腫、乳がん、及び膀胱がんからなる群より選択されるがんを治療する方法が提供され、抗ＣＤ１３８抗体−ＩＦＮ−α融合分子は約０．０１〜約０．０３ｍｇ／ｋｇの週間投与量で個人に投与される。
【０１６９】
さまざまな実施形態では、抗ＣＤ１３８抗体−ＩＦＮ−α融合分子を含む医薬組成物の有効量を個人に投与することを含む、個人における、多発性骨髄腫、乳がん、及び膀胱がんからなる群より選択されるがんを治療する方法が提供され、抗ＣＤ１３８抗体−ＩＦＮ−α融合分子は約０．０３〜約０．１ｍｇ／ｋｇの週間投与量で個人に投与される。
【０１７０】
さまざまな実施形態では、抗ＧＲＰ９４−ＩＦＮ−α融合分子を含む医薬組成物の有効量を個人に投与することを含む個人におけるがんを治療する方法が提供され、抗ＧＲＰ９４−ＩＦＮ−α融合分子は、０．０００１ｍｇ／ｋｇ、０．０００３ｍｇ／ｋｇ、０．００１ｍｇ／ｋｇ、０．００３ｍｇ／ｋｇ、０．０１ｍｇ／ｋｇ、０．０３ｍｇ／ｋｇ、０．１ｍｇ／ｋｇ、０．２ｍｇ／ｋｇ、０．３ｍｇ／ｋｇ、０．４ｍｇ／ｋｇ、０．５ｍｇ／ｋｇ、０．６ｍｇ／ｋｇ、０．７ｍｇ／ｋｇ、０．８ｍｇ／ｋｇ、及び０．９ｍｇ／ｋｇからなる群より選択される週間投与量で個人に投与される。さまざまな実施形態では、抗ＧＲＰ９４−ＩＦＮ−α融合分子は、以下の範囲のいずれかに含まれる投与量（例えば、週間投与量）で個人に投与される。約０．０００１〜約０．０００３ｍｇ／ｋｇ、約０．０００３〜約０．００１ｍｇ／ｋｇ、約０．００１〜約０．００３ｍｇ／ｋｇ、約０．００３〜約０．０１ｍｇ／ｋｇ、約０．０１〜約０．０３ｍｇ／ｋｇ、約０．０３〜約０．１ｍｇ／ｋｇ、約０．１〜約０．３ｍｇ／ｋｇ、約０．３〜約０．４ｍｇ／ｋｇ、約０．４〜約０．５ｍｇ／ｋｇ、約０．５〜約０．６ｍｇ／ｋｇ、約０．６〜約０．７ｍｇ／ｋｇ、約０．７〜約０．８ｍｇ／ｋｇ、及び約０．８〜約０．９ｍｇ／ｋｇ。さまざまな実施形態では、抗ＧＲＰ９４−ＩＦＮ−α融合分子は、およそ、０．０００１ｍｇ／ｋｇ、０．０００３ｍｇ／ｋｇ、０．００１ｍｇ／ｋｇ、０．００３ｍｇ／ｋｇ、０．０１ｍｇ／ｋｇ、０．０３ｍｇ／ｋｇ、０．１ｍｇ／ｋｇ、０．２ｍｇ／ｋｇ、０．３ｍｇ／ｋｇ、０．４ｍｇ／ｋｇ、０．５ｍｇ／ｋｇ、０．６ｍｇ／ｋｇ、０．７ｍｇ／ｋｇ、０．８ｍｇ／ｋｇ、及び０．９ｍｇ／ｋｇのいずれかを超えない投与量（例えば、週間投与量）で個人に投与される。さまざまな実施形態では、がんはＧＲＰ９４を発現する。さまざまな実施形態では、がんはＧＲＰ９４発現がんの腫瘍微小環境内の非ＧＲＰ９４発現がんである。
【０１７１】
さまざまな実施形態では、抗ＧＲＰ９４抗体−ＩＦＮ−α融合分子を含む医薬組成物の有効量を個人に投与することを含む、個人における、ＮＳＣＬＣ、急性脊髄性白血病（ＡＭＬ）、多発性骨髄腫、黒色腫、及び膵がんからなる群より選択されるがんを治療する方法が提供され、抗ＧＲＰ９４抗体−ＩＦＮ−α融合分子は約０．００３〜約０．０１ｍｇ／ｋｇの週間投与量で個人に投与される。
【０１７２】
さまざまな実施形態では、抗ＧＲＰ９４抗体−ＩＦＮ−α融合分子を含む医薬組成物の有効量を個人に投与することを含む、個人における、ＮＳＣＬＣ、急性脊髄性白血病（ＡＭＬ）、多発性骨髄腫、黒色腫、及び膵がんからなる群より選択されるがんを治療する方法が提供され、抗ＧＲＰ９４抗体−ＩＦＮ−α融合分子は約０．０１〜約０．０３ｍｇ／ｋｇの週間投与量で個人に投与される。
【０１７３】
さまざまな実施形態では、抗ＧＲＰ９４抗体−ＩＦＮ−α融合分子を含む医薬組成物の有効量を個人に投与することを含む、個人における、ＮＳＣＬＣ、急性脊髄性白血病（ＡＭＬ）、多発性骨髄腫、黒色腫、及び膵がんからなる群より選択されるがんを治療する方法が提供され、抗ＧＲＰ９４抗体−ＩＦＮ−α融合分子は約０．０３〜約０．１ｍｇ／ｋｇの週間投与量で個人に投与される。
【０１７４】
さまざまな実施形態では、抗ＣＤ３３−ＩＦＮ−α融合分子を含む医薬組成物の有効量を個人に投与することを含む個人におけるがんを治療する方法が提供され、抗ＣＤ３３−ＩＦＮ−α融合分子は、０．０００１ｍｇ／ｋｇ、０．０００３ｍｇ／ｋｇ、０．００１ｍｇ／ｋｇ、０．００３ｍｇ／ｋｇ、０．０１ｍｇ／ｋｇ、０．０３ｍｇ／ｋｇ、０．１ｍｇ／ｋｇ、０．２ｍｇ／ｋｇ、０．３ｍｇ／ｋｇ、０．４ｍｇ／ｋｇ、０．５ｍｇ／ｋｇ、０．６ｍｇ／ｋｇ、０．７ｍｇ／ｋｇ、０．８ｍｇ／ｋｇ、及び０．９ｍｇ／ｋｇからなる群より選択される週間投与量で個人に投与される。さまざまな実施形態では、抗ＣＤ３３−ＩＦＮ−α融合分子は、以下の範囲のいずれかに含まれる投与量（例えば、週間投与量）で個人に投与される。約０．０００１〜約０．０００３ｍｇ／ｋｇ、約０．０００３〜約０．００１ｍｇ／ｋｇ、約０．００１〜約０．００３ｍｇ／ｋｇ、約０．００３〜約０．０１ｍｇ／ｋｇ、約０．０１〜約０．０３ｍｇ／ｋｇ、約０．０３〜約０．１ｍｇ／ｋｇ、約０．１〜約０．３ｍｇ／ｋｇ、約０．３〜約０．４ｍｇ／ｋｇ、約０．４〜約０．５ｍｇ／ｋｇ、約０．５〜約０．６ｍｇ／ｋｇ、約０．６〜約０．７ｍｇ／ｋｇ、約０．７〜約０．８ｍｇ／ｋｇ、及び約０．８〜約０．９ｍｇ／ｋｇ。さまざまな実施形態では、抗ＣＤ３３−ＩＦＮ−α融合分子は、およそ、０．０００１ｍｇ／ｋｇ、０．０００３ｍｇ／ｋｇ、０．００１ｍｇ／ｋｇ、０．００３ｍｇ／ｋｇ、０．０１ｍｇ／ｋｇ、０．０３ｍｇ／ｋｇ、０．１ｍｇ／ｋｇ、０．２ｍｇ／ｋｇ、０．３ｍｇ／ｋｇ、０．４ｍｇ／ｋｇ、０．５ｍｇ／ｋｇ、０．６ｍｇ／ｋｇ、０．７ｍｇ／ｋｇ、０．８ｍｇ／ｋｇ、及び０．９ｍｇ／ｋｇのいずれかを超えない投与量（例えば、週間投与量）で個人に投与される。さまざまな実施形態では、がんはＣＤ３３を発現する。さまざまな実施形態では、がんはＣＤ３３発現がんの腫瘍微小環境内の非ＣＤ３３発現がんである。
【０１７５】
さまざまな実施形態では、抗ＣＤ３３抗体−ＩＦＮ−α融合分子を含む医薬組成物の有効量を個人に投与することを含む、個人における、ＡＭＬ、慢性脊髄性白血病（ＣＭＬ）、及び多発性骨髄腫からなる群より選択されるがんを治療する方法が提供され、抗ＣＤ３３抗体−ＩＦＮ−α融合分子は約０．００３〜約０．０１ｍｇ／ｋｇの週間投与量で個人に投与される。
【０１７６】
さまざまな実施形態では、抗ＣＤ３３抗体−ＩＦＮ−α融合分子を含む医薬組成物の有効量を個人に投与することを含む、個人における、ＡＭＬ、慢性脊髄性白血病（ＣＭＬ）、及び多発性骨髄腫からなる群より選択されるがんを治療する方法が提供され、抗ＣＤ３３抗体−ＩＦＮ−α融合分子は約０．０１〜約０．０３ｍｇ／ｋｇの週間投与量で個人に投与される。
【０１７７】
さまざまな実施形態では、抗ＣＤ３３抗体−ＩＦＮ−α融合分子を含む医薬組成物の有効量を個人に投与することを含む、個人における、ＡＭＬ、慢性脊髄性白血病（ＣＭＬ）、及び多発性骨髄腫からなる群より選択されるがんを治療する方法が提供され、抗ＣＤ３３抗体−ＩＦＮ−α融合分子は約０．０３〜約０．１ｍｇ／ｋｇの週間投与量で個人に投与される。
【０１７８】
さまざまな実施形態では、抗ＣＤ７０−ＩＦＮ−α融合分子を含む医薬組成物の有効量を個人に投与することを含む個人におけるがんを治療する方法が提供され、抗ＣＤ７０−ＩＦＮ−α融合分子は、０．０００１ｍｇ／ｋｇ、０．０００３ｍｇ／ｋｇ、０．００１ｍｇ／ｋｇ、０．００３ｍｇ／ｋｇ、０．０１ｍｇ／ｋｇ、０．０３ｍｇ／ｋｇ、０．１ｍｇ／ｋｇ、０．２ｍｇ／ｋｇ、０．３ｍｇ／ｋｇ、０．４ｍｇ／ｋｇ、０．５ｍｇ／ｋｇ、０．６ｍｇ／ｋｇ、０．７ｍｇ／ｋｇ、０．８ｍｇ／ｋｇ、及び０．９ｍｇ／ｋｇからなる群より選択される週間投与量で個人に投与される。さまざまな実施形態では、抗ＣＤ７０−ＩＦＮ−α融合分子は、以下の範囲のいずれかに含まれる投与量（例えば、週間投与量）で個人に投与される。約０．０００１〜約０．０００３ｍｇ／ｋｇ、約０．０００３〜約０．００１ｍｇ／ｋｇ、約０．００１〜約０．００３ｍｇ／ｋｇ、約０．００３〜約０．０１ｍｇ／ｋｇ、約０．０１〜約０．０３ｍｇ／ｋｇ、約０．０３〜約０．１ｍｇ／ｋｇ、約０．１〜約０．３ｍｇ／ｋｇ、約０．３〜約０．４ｍｇ／ｋｇ、約０．４〜約０．５ｍｇ／ｋｇ、約０．５〜約０．６ｍｇ／ｋｇ、約０．６〜約０．７ｍｇ／ｋｇ、約０．７〜約０．８ｍｇ／ｋｇ、及び約０．８〜約０．９ｍｇ／ｋｇ。さまざまな実施形態では、抗ＣＤ７０−ＩＦＮ−α融合分子は、およそ、０．０００１ｍｇ／ｋｇ、０．０００３ｍｇ／ｋｇ、０．００１ｍｇ／ｋｇ、０．００３ｍｇ／ｋｇ、０．０１ｍｇ／ｋｇ、０．０３ｍｇ／ｋｇ、０．１ｍｇ／ｋｇ、０．２ｍｇ／ｋｇ、０．３ｍｇ／ｋｇ、０．４ｍｇ／ｋｇ、０．５ｍｇ／ｋｇ、０．６ｍｇ／ｋｇ、０．７ｍｇ／ｋｇ、０．８ｍｇ／ｋｇ、及び０．９ｍｇ／ｋｇのいずれかを超えない投与量（例えば、週間投与量）で個人に投与される。さまざまな実施形態では、がんはＣＤ７０を発現する。さまざまな実施形態では、がんはＣＤ７０発現がんの腫瘍微小環境内の非ＣＤ７０発現がんである。
【０１７９】
さまざまな実施形態では、抗ＣＤ７０抗体−ＩＦＮ−α融合分子を含む医薬組成物の有効量を個人に投与することを含む、個人における、腎細胞癌（ＲＣＣ）、ワルデンストレームマクログロブリン血症、多発性骨髄腫、及びＮＨＬからなる群より選択されるがんを治療する方法が提供され、抗ＣＤ７０抗体−ＩＦＮ−α融合分子は約０．００３〜約０．０１ｍｇ／ｋｇの週間投与量で個人に投与される。
【０１８０】
さまざまな実施形態では、抗ＣＤ７０抗体−ＩＦＮ−α融合分子を含む医薬組成物の有効量を個人に投与することを含む、個人における、腎細胞癌（ＲＣＣ）、ワルデンストレームマクログロブリン血症、多発性骨髄腫、及びＮＨＬからなる群より選択されるがんを治療する方法が提供され、抗ＣＤ７０抗体−ＩＦＮ−α融合分子は約０．０１〜約０．０３ｍｇ／ｋｇの週間投与量で個人に投与される。
【０１８１】
さまざまな実施形態では、抗ＣＤ７０抗体−ＩＦＮ−α融合分子を含む医薬組成物の有効量を個人に投与することを含む、個人における、腎細胞癌（ＲＣＣ）、ワルデンストレームマクログロブリン血症、多発性骨髄腫、及びＮＨＬからなる群より選択されるがんを治療する方法が提供され、抗ＣＤ７０抗体−ＩＦＮ−α融合分子は約０．０３〜約０．１ｍｇ／ｋｇの週間投与量で個人に投与される。
【０１８２】
さまざまな実施形態では、個人は以前に抗がん療法での治療に反応したが、治療の中止時に再発を経験した（以降「再発がん」）。
【０１８３】
さまざまな実施形態では、個人は耐性がん又は難治性がんをもつ。さまざまな実施形態では、がんは免疫療法治療に不応である。さまざまな実施形態では、がんは化学療法剤での治療に不応である。さまざまな実施形態では、がんはＴＡＡ抗体での標的治療に不応である。さまざまな実施形態では、がんは、ＴＡＡ抗体を含む免疫複合体、抗体−薬物複合体（ＡＤＣ）、又は融合分子及び細胞傷害性薬剤での標的治療に不応である。さまざまな実施形態では、がんは低分子キナーゼ阻害剤での標的治療に不応である。さまざまな実施形態では、がんは、例えば、免疫療法、化学療法剤での治療、ＴＡＡ抗体での治療、ＴＡＡ抗体を含む免疫複合体、ＡＤＣ、又は融合分子及び細胞傷害性薬剤での標的治療、低分子キナーゼ阻害剤での標的治療、手術による治療、幹細胞移植を用いる治療、並びに放射線を使用する治療を含む併用療法に不応である。
【０１８４】
さまざまな実施形態では、本明細書に記載の方法は、増殖性疾患の治療または予防に向けた他の従来の抗がん治療アプローチと併用して用いられうる。そのようなアプローチとしては、化学療法、低分子キナーゼ阻害剤標的療法、手術、放射線療法、及び幹細胞移植が挙げられるが、これらに限定されない。例えば、そのような方法は、予防的がん防止、手術後のがん再発及び転移の予防、及び他の従来のがん治療の補助として使用することができる。本開示は、従来のがん療法（例えば、化学療法、放射線療法、光線療法、免疫療法、及び手術）の効果が本明細書に記載の融合分子の使用を通して増強できることを認める。
【０１８５】
多様な従来の化合物が、抗腫瘍活性をもつことが示されている。これらの化合物は、固形腫瘍を小さくし、転移及びさらなる増殖を防ぎ、又は白血病又は骨髄悪性腫瘍の悪性Ｔ細胞の数を減少させるために化学療法における医薬品として使用されてきた。化学療法はさまざまな種類の悪性腫瘍の治療に有効であるが、多くの抗腫瘍化合物は望ましくない副作用を誘発する。２つ以上の異なる治療が併用される場合、治療が相乗的に効き、各治療の投与量の減量が可能になることによって、高い投与量で各化合物によってもたらされる有害な副作用を減らしうることが示されている。他の例では、治療に不応の悪性腫瘍が２つ以上の異なる治療の併用療法に反応する場合がある。
【０１８６】
本明細書において開示されるＴＡＡ抗体−ＩＦＮ融合分子が、別の従来の抗腫瘍剤と併用して同時に又は順次連続的に投与される場合、そのような融合分子は、抗腫瘍剤の治療効果を増強しうるか、又はそのような抗腫瘍剤に対する細胞耐性を克服しうる。これは抗腫瘍剤の投与量の減量を可能にすることよって望ましくない副作用を減らしたり、耐性Ｔ細胞における抗腫瘍剤の効果を回復させたりする。さまざまな実施形態では、化学療法剤などの第２の抗がん剤が患者に投与されることになる。代表的な化学療法剤のリストは、限定されないが、ダウノルビシン、ダクチノマイシン、ドキソルビシン、ブレオマイシン、マイトマイシン、ナイトロジェンマスタード、クロランブシル、メルファラン、シクロホスファミド、６−メルカプトプリン、６−チオグアニン、ベンダムスチン、シタラビン（ＣＡ）、５−フルオロウラシル（５−ＦＵ）、フロクスウリジン（５−ＦＵｄＲ）、メトトレキサート（ＭＴＸ）、コルヒチン、ビンクリスチン、ビンブラスチン、エトポシド、テニポシド、シスプラチン、カルボプラチン、オキサリプラチン、ペントスタチン、クラドリビン、シタラビン、ゲムシタビン、プララトレキサート、ミトキサントロン、ジエチルスチルベストロール（ＤＥＳ）、フルダラビン、イホスファミド、ヒトロキシ尿素タキサン（パクリタキセル及びドセタキセルなど）、及び／又はアントラサイクリン抗生物質、及び限定されないが、ＤＡ−ＥＰＯＣＨ、ＣＨＯＰ、ＣＶＰ、又はＦＯＬＦＯＸなどの薬剤の組み合わせを含む。さまざまな実施形態では、そのような化学療法剤の投与量としては、およそ、１０ｍｇ／ｍ２、２０ｍｇ／ｍ２、３０ｍｇ／ｍ２、４０ｍｇ／ｍ２、５０ｍｇ／ｍ２、６０ｍｇ／ｍ２、７５ｍｇ／ｍ２、８０ｍｇ／ｍ２、９０ｍｇ／ｍ２、１００ｍｇ／ｍ２、１２０ｍｇ／ｍ２、１５０ｍｇ／ｍ２、１７５ｍｇ／ｍ２、２００ｍｇ／ｍ２、２１０ｍｇ／ｍ２、２２０ｍｇ／ｍ２、２３０ｍｇ／ｍ２、２４０ｍｇ／ｍ２、２５０ｍｇ／ｍ２、２６０ｍｇ／ｍ２、及び３００ｍｇ／ｍ２のいずれかが挙げられるが、これらに限定されない。
【０１８７】
免疫療法
数多くのがん免疫療法戦略が広範な研究及び臨床評価の焦点であり、例えば、限定されないが、特異的な腫瘍抗原に対する枯渇抗体を用いる治療（例えば、Ｂｌａｔｔｍａｎ  ａｎｄ  Ｇｒｅｅｎｂｅｒｇ，Ｓｃｉｅｎｃｅ，３０５：２００，２００４；Ａｄａｍｓ  ａｎｄ  Ｗｅｉｎｅｒ，Ｎａｔ  Ｂｉｏｔｅｃｈ，２３：１１４７，２００５；Ｖｏｇａｌ  ｅｔ  ａｌ．Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｏｎｃｏｌｏｇｙ，２０：７１９，２００２；Ｃｏｌｏｍｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ，９７：１０１，２００１による総説を参照されたい）；抗体−薬物複合体を用いる治療（例えば、Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ．Ｂｏｏｋ  １０４５．Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ（ＮＹ），Ｈｕｍａｎａ  Ｐｒｅｓｓ，２０１３；Ｎａｔｕｒｅ  Ｒｅｖｉｅｗｓ  Ｄｒｕｇ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ  １２，２５９−２６０，Ａｐｒｉｌ  ２０１３中のＤｕｃｒｙ，Ｌａｕｒｅｎｔ（Ｅｄ．）Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｄｒｕｇ  Ｃｏｎｊｕｇａｔｅｓを参照されたい）；ＣＴＬＡ−４（イピリムマブ）、ＰＤ−１（ニボルマブ；ペンブロリズマブ；ピディリズマブ）、及びＰＤ−Ｌ１（ＢＭＳ−９３６５５９；ＭＰＬＤ３２８０Ａ；ＭＥＤＩ４７３６；ＭＳＢ００１０７１８Ｃ）（例えば、Ｐｈｉｌｉｐｓ  ａｎｄ  Ａｔｋｉｎｓ，Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，２７（１）；３９−４６，Ｏｃｔ  ２０１４を参照されたい）、ＯＸ−４０、ＣＤ１３７、ＧＩＴＲ、ＬＡＧ３、ＴＩＭ−３、及びＶＩＳＴＡ（例えば、Ｓｈａｒｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｈｉｎ  Ｊ  Ｃａｎｃｅｒ．，３３（９）：４３４−４４４，Ｓｅｐ  ２０１４；Ｈｏｄｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎ  Ｅｎｇｌ  Ｊ  Ｍｅｄ，２０１０；Ｔｏｐａｌｉａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎ  Ｅｎｇｌ  Ｊ  Ｍｅｄ，３６６：２４４３‐５４，２０１２を参照されたい）などの共刺激分子又は共抑制分子（免疫チェックポイント）に対するアゴニスト抗体、アンタゴニスト抗体、又は遮断抗体を用いる治療；ブリナツモマブなどの二重特異性Ｔ細胞誘導抗体（ＢｉＴＥ（登録商標））を用いる治療（例えば、米国特許第９，２６０，５２２号；米国特許出願第２０１４０３０２０３７号を参照されたい）；ＩＬ−２、ＩＬ−１２、ＩＬ−１５、ＩＬ−２１、ＧＭ−ＣＳＦ、ＩＦＮ−α、ＩＦＮ−β、及びＩＦＮ−γなどの生物学的応答調節物質の投与を含む治療（例えば、Ｓｕｔｌｕ  Ｔ  ｅｔ  ａｌ．，，Ｊｏｕｒｎ  ｏｆ  Ｉｎｔｅｒｎａｌ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，２６６（２）：１５４−１８１，２００９；Ｊｏｓｈｉ  Ｓ  ＰＮＡＳ  ＵＳＡ，１０６（２９）：１２０９７−１２１０２，２００９；Ｌｉ  Ｙ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎａｌ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，  ７：１１，２００９を参照されたい）；シプロイセル−Ｔなどの治療ワクチンを用いる治療（例えば、Ｋａｎｔｏｆｆ  ＰＷ  Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌａｎｄ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，３６３（５）：４１１−４２２，２０１０；Ｓｃｈｌｏｍ  Ｊ．，Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ，１０４（８）：５９９−６１３，２０１２を参照されたい）；樹状細胞ワクチンもしくは腫瘍抗原ペプチドワクチンを用いる治療；キメラ抗原受容体��ＣＡＲ）−Ｔ細胞を用いる治療（例えば、Ｒｏｓｅｎｂｅｒｇ  ＳＡ  Ｎａｔｕｒｅ  Ｒｅｖｉｅｗｓ  Ｃａｎｃｅｒ，８（４）：２９９−３０８，２００８；  Ｐｏｒｔｅｒ  ＤＬ  ｅｔ  ａｌ，Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌａｎｄ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，３６５（８）：７２５−７３３，２０１１；Ｇｒｕｐｐ  ＳＡ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌａｎｄ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，３６８（１６）：１５０９−１５１，２０１３；米国特許第９，１０２，７６１号；米国特許第９，１０１，５８４号を参照されたい）；ＣＡＲ−ＮＫ細胞を用いる治療（例えば、Ｇｌｉｅｎｋｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｆｒｏｎｔ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ，６（２１）：１−７，Ｆｅｂ  ２０１５を参照されたい）；腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）を用いる治療（例えば、Ｗｕ  ｅｔ  ａｌ，Ｃａｎｃｅｒ  Ｊ．，１８（２）：１６０−１７５，２０１２を参照されたい）；（生体外で増殖させた及び／又はＴＣＲトランスジェニックの）養子移入された抗腫瘍性Ｔ細胞を用いる治療（例えば、Ｗｒｚｅｓｉｎｓｋｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ，３３（１）：１−７，２０１０を参照されたい）；ＴＡＬＬ−１０４細胞を用いる治療；並びにＴｏｌｌ様受容体（ＴＬＲ）アゴニストＣｐＧ及びイミキモドなどの免疫賦活剤を用いる治療（例えば、Ｋｒｉｅｇ，Ｏｎｃｏｇｅｎｅ，２７：１６１−１６７，２００８；Ｌｕ，Ｆｒｏｎｔ  Ｉｍｍｕｎｏｌ，５（８３）：１−４，Ｍａｒｃｈ  ２０１４を参照されたい）が含まれる。
【０１８８】
併用療法の使用方法
別の態様では、本発明は、個人にａ）治療有効量のＴＡＡ抗体−ＩＦＮ融合分子及びｂ）免疫療法を施すことを含む個人における増殖性疾患（がんなど）を治療するために設計された併用療法に関し、該併用療法は、エフェクター細胞による殺腫瘍細胞作用の増加をもたらし、すなわち、併用して施行された場合、ＴＡＡ抗体−ＩＦＮ融合分子と免疫療法との間に相乗効果が存在する。
【０１８９】
さまざまな実施形態では、増殖性疾患は、Ｂ細胞リンパ腫；肺がん（小細胞肺がん及び非小細胞肺がん）；気管支がん；結腸直腸がん；前立腺がん；乳がん；膵臓がん；胃がん；卵巣がん；膀胱がん；脳又は中枢神経系がん；末梢神経系がん；食道がん；子宮頸がん；黒色腫；子宮又は子宮内膜がん；口腔又は咽頭のがん；肝がん；腎臓がん；胆道がん；小腸又は虫垂がん；唾液腺がん；甲状腺がん；副腎がん；骨肉腫；軟骨肉腫；脂肪肉腫；精巣がん；並びに悪性線維性組織球腫；皮膚がん；頭及び首がん；リンパ腫；肉腫；多発性骨髄腫；並びに白血病からなる群より選択されるがんである。
【０１９０】
さまざまな実施形態では、ａ）有効量の抗−ＴＡＡ−ＩＦＮ−α融合分子及びｂ）免疫療法を個人に施すことを含む、個人における増殖性疾患を治療する併用治療法が提供され、併用療法はエフェクター細胞による殺作用の増加をもたらす。さまざまな実施形態では、免疫療法は、共刺激分子又は共抑制分子に対するアゴニスト抗体、アンタゴニスト抗体、又は遮断抗体を用いる治療である。さまざまな実施形態では、免疫療法はキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）−Ｔ細胞を用いる治療である。さまざまな実施形態では、免疫療法はＣＡＲ−ＮＫ細胞を用いる治療である。さまざまな実施形態では、免疫療法は二重特異性Ｔ細胞誘導抗体（ＢｉＴＥ（登録商標））を用いる治療である。さまざまな実施形態では、抗ＴＡＡ−ＩＦＮ−α融合分子は、約０．０００１〜約０．０００３ｍｇ／ｋｇ、約０．０００３〜約０．００１ｍｇ／ｋｇ、約０．００１〜約０．００３ｍｇ／ｋｇ、約０．００３〜約０．０１ｍｇ／ｋｇ、約０．０１〜約０．０３ｍｇ／ｋｇ、約０．０３〜約０．１ｍｇ／ｋｇ、約０．１〜約０．３ｍｇ／ｋｇ、約０．３〜約０．４ｍｇ／ｋｇ、約０．４〜約０．５ｍｇ／ｋｇ、約０．５〜約０．６ｍｇ／ｋｇ、約０．６〜約０．７ｍｇ／ｋｇ、約０．７〜約０．８ｍｇ／ｋｇ、及び約０．８〜約０．９ｍｇ／ｋｇからなる群より選択される週間投与量で個人に投与される。さまざまな実施形態では、がんは、本発明の抗ＴＡＡ抗体−ＩＦＮ−α融合分子のＴＡＡを発現する。さまざまな実施形態では、がんは、ＴＡＡ発現がんの腫瘍微小環境内の非ＴＡＡ発現がんである。さまざまな実施形態では、免疫療法は、ＴＡＡ抗体−ＩＦＮ融合分子によって標的にされるＴＡＡと異なるＴＡＡを標的にすることになる。
【０１９１】
さまざまな実施形態では、ａ）抗ＨＥＲ２／ｎｅｕ−ＩＦＮ−α融合分子を含む医薬組成物の有効量及びｂ）共刺激分子又は共抑制分子（免疫チェックポイント）に対するアゴニスト抗体、アンタゴニスト抗体、又は遮断抗体を用いる免疫療法を個人に施行することを含む、個人におけるがんを治療する併用治療法が提供される。さまざまな実施形態では、がんは、乳がん、卵巣がん、及び非小細胞肺がん（ＮＳＣＬＣ）からなる群より選択され、抗ＨＥＲ２／ｎｅｕ−ＩＦＮ−α融合分子は、約０．０００１〜約０．０００３ｍｇ／ｋｇ、約０．０００３〜約０．００１ｍｇ／ｋｇ、約０．００１〜約０．００３ｍｇ／ｋｇ、約０．００３〜約０．０１ｍｇ／ｋｇ、約０．０１〜約０．０３ｍｇ／ｋｇ、約０．０３〜約０．１ｍｇ／ｋｇ、及び約０．１〜約０．３ｍｇ／ｋｇからなる群より選択される週間投与量で個人に投与される。さまざまな実施形態では、がんはＨＥＲ２／ｎｅｕを発現する。さまざまな実施形態では、がんはＨＥＲ２／ｎｅｕ発現がんの腫瘍微小環境内の非ＨＥＲ２／ｎｅｕ発現がんである。
【０１９２】
さまざまな実施形態では、ａ）抗ＨＥＲ２／ｎｅｕ−ＩＦＮ−α融合分子を含む医薬組成物の有効量及びｂ）キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）−Ｔ細胞を用いる免疫療法を個人に施行することを含む、個人におけるがんを治療する併用治療法が提供される。さまざまな実施形態では、がんは、乳がん、卵巣がん、及び非小細胞肺がん（ＮＳＣＬＣ）からなる群より選択され、抗ＨＥＲ２／ｎｅｕ−ＩＦＮ−α融合分子は、約０．０００１〜約０．０００３ｍｇ／ｋｇ、約０．０００３〜約０．００１ｍｇ／ｋｇ、約０．００１〜約０．００３ｍｇ／ｋｇ、約０．００３〜約０．０１ｍｇ／ｋｇ、約０．０１〜約０．０３ｍｇ／ｋｇ、約０．０３〜約０．１ｍｇ／ｋｇ、及び約０．１〜約０．３ｍｇ／ｋｇからなる群より選択される週間投与量で個人に投与される。さまざまな実施形態では、がんはＨＥＲ２／ｎｅｕを発現する。さまざまな実施形態では、がんはＨＥＲ２／ｎｅｕ発現がんの腫瘍微小環境内の非ＨＥＲ２／ｎｅｕ発現がんである。さまざまな実施形態では、ＣＡＲ−Ｔ免疫療法は、ＨＥＲ２／ｎｅｕと異なるＴＡＡを標的にすることになる。
【０１９３】
さまざまな実施形態では、ａ）抗ＨＥＲ２／ｎｅｕ−ＩＦＮ−α融合分子を含む医薬組成物の有効量及びｂ）ＣＡＲ−ＮＫ細胞を用いる治療を用いる免疫療法を個人に施行することを含む、個人におけるがんを治療する併用治療法が提供される。さまざまな実施形態では、がんは、乳がん、卵巣がん、及び非小細胞肺がん（ＮＳＣＬＣ）からなる群より選択され、抗ＨＥＲ２／ｎｅｕ−ＩＦＮ−α融合分子は、約０．０００１〜約０．０００３ｍｇ／ｋｇ、約０．０００３〜約０．００１ｍｇ／ｋｇ、約０．００１〜約０．００３ｍｇ／ｋｇ、約０．００３〜約０．０１ｍｇ／ｋｇ、約０．０１〜約０．０３ｍｇ／ｋｇ、約０．０３〜約０．１ｍｇ／ｋｇ、及び約０．１〜約０．３ｍｇ／ｋｇからなる群より選択される週間投与量で個人に投与される。さまざまな実施形態では、がんはＨＥＲ２／ｎｅｕを発現する。さまざまな実施形態では、がんはＨＥＲ２／ｎｅｕ発現がんの腫瘍微小環境内の非ＨＥＲ２／ｎｅｕ発現がんである。さまざまな実施形態では、ＣＡＲ−ＮＫ免疫療法は、ＨＥＲ２／ｎｅｕと異なるＴＡＡを標的にすることになる。
【０１９４】
さまざまな実施形態では、ａ）抗ＨＥＲ２／ｎｅｕ−ＩＦＮ−α融合分子を含む医薬組成物の有効量及びｂ）二重特異性Ｔ細胞誘導抗体（ＢｉＴＥ（登録商標））を用いる免疫療法を個人に施行することを含む、個人におけるがんを治療する併用治療法が提供される。さまざまな実施形態では、がんは、乳がん、卵巣がん、及び非小細胞肺がん（ＮＳＣＬＣ）からなる群より選択され、抗ＨＥＲ２／ｎｅｕ−ＩＦＮ−α融合分子は、約０．０００１〜約０．０００３ｍｇ／ｋｇ、約０．０００３〜約０．００１ｍｇ／ｋｇ、約０．００１〜約０．００３ｍｇ／ｋｇ、約０．００３〜約０．０１ｍｇ／ｋｇ、約０．０１〜約０．０３ｍｇ／ｋｇ、約０．０３〜約０．１ｍｇ／ｋｇ、及び約０．１〜約０．３ｍｇ／ｋｇからなる群より選択される週間投与量で個人に投与される。さまざまな実施形態では、がんはＨＥＲ２／ｎｅｕを発現する。さまざまな実施形態では、がんはＨＥＲ２／ｎｅｕ発現がんの腫瘍微小環境内の非ＨＥＲ２／ｎｅｕ発現がんである。さまざまな実施形態では、ＢｉＴＥ（登録商標）免疫療法は、ＨＥＲ２／ｎｅｕと異なるＴＡＡを標的にすることになる。
【０１９５】
さまざまな実施形態では、ａ）抗ＣＤ２０−ＩＦＮ−α融合分子を含む医薬組成物の有効量及びｂ）共刺激分子又は共抑制分子（免疫チェックポイント）に対するアゴニスト抗体、アンタゴニスト抗体、又は遮断抗体を用いる免疫療法を個人に施行することを含む、個人におけるがんを治療する併用治療法が提供される。さまざまな実施形態では、がんは、Ｂ細胞性非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）及びＢ細胞性慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）からなる群より選択され、抗ＣＤ２０−ＩＦＮ−α融合分子は、約０．０００１〜約０．０００３ｍｇ／ｋｇ、約０．０００３〜約０．００１ｍｇ／ｋｇ、約０．００１〜約０．００３ｍｇ／ｋｇ、約０．００３〜約０．０１ｍｇ／ｋｇ、約０．０１〜約０．０３ｍｇ／ｋｇ、約０．０３〜約０．１ｍｇ／ｋｇ、及び約０．１〜約０．３ｍｇ／ｋｇからなる群より選択される週間投与量で個人に投与される。さまざまな実施形態では、がんはＣＤ２０を発現する。さまざまな実施形態では、がんはＣＤ２０発現がんの腫瘍微小環境内の非ＣＤ２０発現がんである。
【０１９６】
さまざまな実施形態では、ａ）抗ＣＤ２０−ＩＦＮ−α融合分子を含む医薬組成物の有効量及びｂ）キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）−Ｔ細胞を用いる免疫療法を個人に施行することを含む、個人におけるがんを治療する併用治療法が提供される。さまざまな実施形態では、がんは、Ｂ細胞性非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）及びＢ細胞性慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）からなる群より選択され、抗ＣＤ２０−ＩＦＮ−α融合分子は、約０．０００１〜約０．０００３ｍｇ／ｋｇ、約０．０００３〜約０．００１ｍｇ／ｋｇ、約０．００１〜約０．００３ｍｇ／ｋｇ、約０．００３〜約０．０１ｍｇ／ｋｇ、約０．０１〜約０．０３ｍｇ／ｋｇ、約０．０３〜約０．１ｍｇ／ｋｇ、及び約０．１〜約０．３ｍｇ／ｋｇからなる群より選択される週間投与量で個人に投与される。さまざまな実施形態では、がんはＣＤ２０を発現する。さまざまな実施形態では、がんはＣＤ２０発現がんの腫瘍微小環境内の非ＣＤ２０発現がんである。さまざまな実施形態では、ＣＡＲ−Ｔ免疫療法は、ＣＤ２０と異なるＴＡＡを標的にすることになる。
【０１９７】
さまざまな実施形態では、ａ）抗ＣＤ２０−ＩＦＮ−α融合分子を含む医薬組成物の有効量及びｂ）ＣＡＲ−ＮＫ細胞を用いる治療を用いる免疫療法を個人に施行することを含む、個人におけるがんを治療する併用治療法が提供される。さまざまな実施形態では、がんは、Ｂ細胞性非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）及びＢ細胞性慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）からなる群より選択され、抗ＣＤ２０−ＩＦＮ−α融合分子は、約０．０００１〜約０．０００３ｍｇ／ｋｇ、約０．０００３〜約０．００１ｍｇ／ｋｇ、約０．００１〜約０．００３ｍｇ／ｋｇ、約０．００３〜約０．０１ｍｇ／ｋｇ、約０．０１〜約０．０３ｍｇ／ｋｇ、約０．０３〜約０．１ｍｇ／ｋｇ、及び約０．１〜約０．３ｍｇ／ｋｇからなる群より選択される週間投与量で個人に投与される。さまざまな実施形態では、がんはＣＤ２０を発現する。さまざまな実施形態では、がんはＣＤ２０発現がんの腫瘍微小環境内の非ＣＤ２０発現がんである。さまざまな実施形態では、ＣＡＲ−ＮＫ免疫療法は、ＣＤ２０と異なるＴＡＡを標的にすることになる。
【０１９８】
さまざまな実施形態では、ａ）抗ＣＤ２０−ＩＦＮ−α融合分子を含む医薬組成物の有効量及びｂ）二重特異性Ｔ細胞誘導抗体（ＢｉＴＥ（登録商標））を用いる免疫療法を個人に施行することを含む、個人におけるがんを治療する併用治療法が提供される。さまざまな実施形態では、がんは、Ｂ細胞性非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）及びＢ細胞性慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）からなる群より選択され、抗ＣＤ２０−ＩＦＮ−α融合分子は、約０．０００１〜約０．０００３ｍｇ／ｋｇ、約０．０００３〜約０．００１ｍｇ／ｋｇ、約０．００１〜約０．００３ｍｇ／ｋｇ、約０．００３〜約０．０１ｍｇ／ｋｇ、約０．０１〜約０．０３ｍｇ／ｋｇ、約０．０３〜約０．１ｍｇ／ｋｇ、及び約０．１〜約０．３ｍｇ／ｋｇからなる群より選択される週間投与量で個人に投与される。さまざまな実施形態では、がんはＣＤ２０を発現する。さまざまな実施形態では、がんはＣＤ２０発現がんの腫瘍微小環境内の非ＣＤ２０発現がんである。さまざまな実施形態では、ＢｉＴＥ（登録商標）免疫療法は、ＣＤ２０と異なるＴＡＡを標的にすることになる。
【０１９９】
さまざまな実施形態では、ａ）抗ＣＤ１３８−ＩＦＮ−α融合分子を含む医薬組成物の有効量及びｂ）共刺激分子又は共抑制分子（免疫チェックポイント）に対するアゴニスト抗体、アンタゴニスト抗体、又は遮断抗体を用いる免疫療法を個人に施行することを含む、個人におけるがんを治療する併用治療法が提供される。さまざまな実施形態では、がんは、多発性骨髄腫、乳がん、及び膀胱がんからなる群より選択され、抗ＣＤ１３８−ＩＦＮ−α融合分子は、約０．０００１〜約０．０００３ｍｇ／ｋｇ、約０．０００３〜約０．００１ｍｇ／ｋｇ、約０．００１〜約０．００３ｍｇ／ｋｇ、約０．００３〜約０．０１ｍｇ／ｋｇ、約０．０１〜約０．０３ｍｇ／ｋｇ、約０．０３〜約０．１ｍｇ／ｋｇ、及び約０．１〜約０．３ｍｇ／ｋｇからなる群より選択される週間投与量で個人に投与される。さまざまな実施形態では、がんはＣＤ１３８を発現する。さまざまな実施形態では、がんはＣＤ１３８発現がんの腫瘍微小環境内の非ＣＤ１３８発現がんである。
【０２００】
さまざまな実施形態では、ａ）抗ＣＤ１３８−ＩＦＮ−α融合分子を含む医薬組成物の有効量及びｂ）キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）−Ｔ細胞を用いる免疫療法を個人に施行することを含む、個人におけるがんを治療する併用治療法が提供される。さまざまな実施形態では、がんは、多発性骨髄腫、乳がん、及び膀胱がんからなる群より選択され、抗ＣＤ１３８−ＩＦＮ−α融合分子は、約０．０００１〜約０．０００３ｍｇ／ｋｇ、約０．０００３〜約０．００１ｍｇ／ｋｇ、約０．００１〜約０．００３ｍｇ／ｋｇ、約０．００３〜約０．０１ｍｇ／ｋｇ、約０．０１〜約０．０３ｍｇ／ｋｇ、約０．０３〜約０．１ｍｇ／ｋｇ、及び約０．１〜約０．３ｍｇ／ｋｇからなる群より選択される週間投与量で個人に投与される。さまざまな実施形態では、がんはＣＤ１３８を発現する。さまざまな実施形態では、がんはＣＤ１３８発現がんの腫瘍微小環境内の非ＣＤ１３８発現がんである。さまざまな実施形態では、ＣＡＲ−Ｔ免疫療法は、ＣＤ１３８と異なるＴＡＡを標的にすることになる。
【０２０１】
さまざまな実施形態では、ａ）抗ＣＤ１３８−ＩＦＮ−α融合分子を含む医薬組成物の有効量及びｂ）ＣＡＲ−ＮＫ細胞を用いる治療を用いる免疫療法を個人に施行することを含む、個人におけるがんを治療する併用治療法が提供される。さまざまな実施形態では、がんは、多発性骨髄腫、乳がん、及び膀胱がんからなる群より選択され、抗ＣＤ１３８−ＩＦＮ−α融合分子は、約０．０００１〜約０．０００３ｍｇ／ｋｇ、約０．０００３〜約０．００１ｍｇ／ｋｇ、約０．００１〜約０．００３ｍｇ／ｋｇ、約０．００３〜約０．０１ｍｇ／ｋｇ、約０．０１〜約０．０３ｍｇ／ｋｇ、約０．０３〜約０．１ｍｇ／ｋｇ、及び約０．１〜約０．３ｍｇ／ｋｇからなる群より選択される週間投与量で個人に投与される。さまざまな実施形態では、がんはＣＤ１３８を発現する。さまざまな実施形態では、がんはＣＤ１３８発現がんの腫瘍微小環境内の非ＣＤ１３８発現がんである。さまざまな実施形態では、ＣＡＲ−ＮＫ免疫療法は、ＣＤ１３８と異なるＴＡＡを標的にすることになる。
【０２０２】
さまざまな実施形態では、ａ）抗ＣＤ１３８−ＩＦＮ−α融合分子を含む医薬組成物の有効量及びｂ）二重特異性Ｔ細胞誘導抗体（ＢｉＴＥ（登録商標））を用いる免疫療法を個人に施行することを含む、個人におけるがんを治療する併用治療法が提供される。さまざまな実施形態では、がんは、多発性骨髄腫、乳がん、及び膀胱がんからなる群より選択され、抗ＣＤ１３８−ＩＦＮ−α融合分子は、約０．０００１〜約０．０００３ｍｇ／ｋｇ、約０．０００３〜約０．００１ｍｇ／ｋｇ、約０．００１〜約０．００３ｍｇ／ｋｇ、約０．００３〜約０．０１ｍｇ／ｋｇ、約０．０１〜約０．０３ｍｇ／ｋｇ、約０．０３〜約０．１ｍｇ／ｋｇ、及び約０．１〜約０．３ｍｇ／ｋｇからなる群より選択される週間投与量で個人に投与される。さまざまな実施形態では、がんはＣＤ１３８を発現する。さまざまな実施形態では、がんはＣＤ１３８発現がんの腫瘍微小環境内の非ＣＤ１３８発現がんである。さまざまな実施形態では、ＢｉＴＥ（登録商標）免疫療法は、ＣＤ１３８と異なるＴＡＡを標的にすることになる。
【０２０３】
さまざまな実施形態では、ａ）抗ＧＲＰ９４−ＩＦＮ−α融合分子を含む医薬組成物の有効量及びｂ）共刺激分子又は共抑制分子（免疫チェックポイント）に対するアゴニスト抗体、アンタゴニスト抗体、又は遮断抗体を用いる免疫療法を個人に施行することを含む、個人におけるがんを治療する併用治療法が提供される。さまざまな実施形態では、がんは、ＮＳＣＬＣ、急性脊髄性白血病（ＡＭＬ）、多発性骨髄腫、黒色腫、及び膵がんからなる群より選択され、抗ＧＲＰ９４−ＩＦＮ−α融合分子は、約０．０００１〜約０．０００３ｍｇ／ｋｇ、約０．０００３〜約０．００１ｍｇ／ｋｇ、約０．００１〜約０．００３ｍｇ／ｋｇ、約０．００３〜約０．０１ｍｇ／ｋｇ、約０．０１〜約０．０３ｍｇ／ｋｇ、約０．０３〜約０．１ｍｇ／ｋｇ、及び約０．１〜約０．３ｍｇ／ｋｇからなる群より選択される週間投与量で個人に投与される。さまざまな実施形態では、がんはＧＲＰ９４を発現する。さまざまな実施形態では、がんはＧＲＰ９４発現がんの腫瘍微小環境内の非ＧＲＰ９４発現がんである。
【０２０４】
さまざまな実施形態では、ａ）抗ＧＲＰ９４−ＩＦＮ−α融合分子を含む医薬組成物の有効量及びｂ）キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）−Ｔ細胞を用いる免疫療法を個人に施行することを含む、個人におけるがんを治療する併用治療法が提供される。さまざまな実施形態では、がんは、ＮＳＣＬＣ、急性脊髄性白血病（ＡＭＬ）、多発性骨髄腫、黒色腫、及び膵がんからなる群より選択され、抗ＧＲＰ９４−ＩＦＮ−α融合分子は、約０．０００１〜約０．０００３ｍｇ／ｋｇ、約０．０００３〜約０．００１ｍｇ／ｋｇ、約０．００１〜約０．００３ｍｇ／ｋｇ、約０．００３〜約０．０１ｍｇ／ｋｇ、約０．０１〜約０．０３ｍｇ／ｋｇ、約０．０３〜約０．１ｍｇ／ｋｇ、及び約０．１〜約０．３ｍｇ／ｋｇからなる群より選択される週間投与量で個人に投与される。さまざまな実施形態では、がんはＧＲＰ９４を発現する。さまざまな実施形態では、がんはＧＲＰ９４発現がんの腫瘍微小環境内の非ＧＲＰ９４発現がんである。さまざまな実施形態では、ＣＡＲ−Ｔ免疫療法は、ＧＲＰ９４と異なるＴＡＡを標的にすることになる。
【０２０５】
さまざまな実施形態では、ａ）抗ＧＲＰ９４−ＩＦＮ−α融合分子を含む医薬組成物の有効量及びｂ）ＣＡＲ−ＮＫ細胞を用いる治療を用いる免疫療法を個人に施行することを含む、個人におけるがんを治療する併用治療法が提供される。さまざまな実施形態では、がんは、ＮＳＣＬＣ、急性脊髄性白血病（ＡＭＬ）、多発性骨髄腫、黒色腫、及び膵がんからなる群より選択され、抗ＧＲＰ９４−ＩＦＮ−α融合分子は、約０．０００１〜約０．０００３ｍｇ／ｋｇ、約０．０００３〜約０．００１ｍｇ／ｋｇ、約０．００１〜約０．００３ｍｇ／ｋｇ、約０．００３〜約０．０１ｍｇ／ｋｇ、約０．０１〜約０．０３ｍｇ／ｋｇ、約０．０３〜約０．１ｍｇ／ｋｇ、及び約０．１〜約０．３ｍｇ／ｋｇからなる群より選択される週間投与量で個人に投与される。さまざまな実施形態では、がんはＧＲＰ９４を発現する。さまざまな実施形態では、がんはＧＲＰ９４発現がんの腫瘍微小環境内の非ＧＲＰ９４発現がんである。さまざまな実施形態では、ＣＡＲ−ＮＫ免疫療法は、ＧＲＰ９４と異なるＴＡＡを標的にすることになる。
【０２０６】
さまざまな実施形態では、ａ）抗ＧＲＰ９４−ＩＦＮ−α融合分子を含む医薬組成物の有効量及びｂ）二重特異性Ｔ細胞誘導抗体（ＢｉＴＥ（登録商標））を用いる免疫療法を個人に施行することを含む、個人におけるがんを治療する併用治療法が提供される。さまざまな実施形態では、がんは、ＮＳＣＬＣ、急性脊髄性白血病（ＡＭＬ）、多発性骨髄腫、黒色腫、及び膵がんからなる群より選択され、抗ＧＲＰ９４−ＩＦＮ−α融合分子は、約０．０００１〜約０．０００３ｍｇ／ｋｇ、約０．０００３〜約０．００１ｍｇ／ｋｇ、約０．００１〜約０．００３ｍｇ／ｋｇ、約０．００３〜約０．０１ｍｇ／ｋｇ、約０．０１〜約０．０３ｍｇ／ｋｇ、約０．０３〜約０．１ｍｇ／ｋｇ、及び約０．１〜約０．３ｍｇ／ｋｇからなる群より選択される週間投与量で個人に投与される。さまざまな実施形態では、がんはＧＲＰ９４を発現する。さまざまな実施形態では、がんはＧＲＰ９４発現がんの腫瘍微小環境内の非ＧＲＰ９４発現がんである。さまざまな実施形態では、ＢｉＴＥ（登録商標）免疫療法は、ＧＲＰ９４と異なるＴＡＡを標的にすることになる。
【０２０７】
さまざまな実施形態では、ａ）抗ＣＤ３３−ＩＦＮ−α融合分子を含む医薬組成物の有効量及びｂ）共刺激分子又は共抑制分子に対するアゴニスト抗体、アンタゴニスト抗体、又は遮断抗体（免疫チェックポイント）を用いる免疫療法を個人に施行することを含む、個人におけるがんを治療する併用治療法が提供される。さまざまな実施形態では、がんは、ＡＭＬ、慢性脊髄性白血病（ＣＭＬ）、及び多発性骨髄腫からなる群より選択され、抗ＣＤ３３−ＩＦＮ−α融合分子は、約０．０００１〜約０．０００３ｍｇ／ｋｇ、約０．０００３〜約０．００１ｍｇ／ｋｇ、約０．００１〜約０．００３ｍｇ／ｋｇ、約０．００３〜約０．０１ｍｇ／ｋｇ、約０．０１〜約０．０３ｍｇ／ｋｇ、約０．０３〜約０．１ｍｇ／ｋｇ、及び約０．１〜約０．３ｍｇ／ｋｇからなる群より選択される週間投与量で個人に投与される。さまざまな実施形態では、がんはＣＤ３３を発現する。さまざまな実施形態では、がんはＣＤ３３発現がんの腫瘍微小環境内の非ＣＤ３３発現がんである。
【０２０８】
さまざまな実施形態では、ａ）抗ＣＤ３３−ＩＦＮ−α融合分子を含む医薬組成物の有効量及びｂ）キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）−Ｔ細胞を用いる免疫療法を個人に施行することを含む、個人におけるがんを治療する併用治療法が提供される。さまざまな実施形態では、がんは、ＡＭＬ、慢性脊髄性白血病（ＣＭＬ）、及び多発性骨髄腫からなる群より選択され、抗ＣＤ３３−ＩＦＮ−α融合分子は、約０．０００１〜約０．０００３ｍｇ／ｋｇ、約０．０００３〜約０．００１ｍｇ／ｋｇ、約０．００１〜約０．００３ｍｇ／ｋｇ、約０．００３〜約０．０１ｍｇ／ｋｇ、約０．０１〜約０．０３ｍｇ／ｋｇ、約０．０３〜約０．１ｍｇ／ｋｇ、及び約０．１〜約０．３ｍｇ／ｋｇからなる群より選択される週間投与量で個人に投与される。さまざまな実施形態では、がんはＣＤ３３を発現する。さまざまな実施形態では、がんはＣＤ３３発現がんの腫瘍微小環境内の非ＣＤ３３発現がんである。さまざまな実施形態では、ＣＡＲ−Ｔ免疫療法は、ＣＤ３３と異なるＴＡＡを標的にすることになる。
【０２０９】
さまざまな実施形態では、ａ）抗ＣＤ３３−ＩＦＮ−α融合分子を含む医薬組成物の有効量及びｂ）ＣＡＲ−ＮＫ細胞を用いる治療を用いる免疫療法を個人に施行することを含む、個人におけるがんを治療する併用治療法が提供される。さまざまな実施形態では、がんは、ＡＭＬ、慢性脊髄性白血病（ＣＭＬ）、及び多発性骨髄腫からなる群より選択され、抗ＣＤ３３−ＩＦＮ−α融合分子は、約０．０００１〜約０．０００３ｍｇ／ｋｇ、約０．０００３〜約０．００１ｍｇ／ｋｇ、約０．００１〜約０．００３ｍｇ／ｋｇ、約０．００３〜約０．０１ｍｇ／ｋｇ、約０．０１〜約０．０３ｍｇ／ｋｇ、約０．０３〜約０．１ｍｇ／ｋｇ、及び約０．１〜約０．３ｍｇ／ｋｇからなる群より選択される週間投与量で個人に投与される。さまざまな実施形態では、がんはＣＤ３３を発現する。さまざまな実施形態では、がんはＣＤ３３発現がんの腫瘍微小環境内の非ＣＤ３３発現がんである。さまざまな実施形態では、ＣＡＲ−ＮＫ免疫療法は、ＣＤ３３と異なるＴＡＡを標的にすることになる。
【０２１０】
さまざまな実施形態では、ａ）抗ＣＤ３３−ＩＦＮ−α融合分子を含む医薬組成物の有効量及びｂ）二重特異性Ｔ細胞誘導抗体（ＢｉＴＥ（登録商標））を用いる免疫療法を個人に施行することを含む、個人におけるがんを治療する併用治療法が提供される。さまざまな実施形態では、がんは、ＡＭＬ、慢性脊髄性白血病（ＣＭＬ）、及び多発性骨髄腫からなる群より選択され、抗ＣＤ３３−ＩＦＮ−α融合分子は、約０．０００１〜約０．０００３ｍｇ／ｋｇ、約０．０００３〜約０．００１ｍｇ／ｋｇ、約０．００１〜約０．００３ｍｇ／ｋｇ、約０．００３〜約０．０１ｍｇ／ｋｇ、約０．０１〜約０．０３ｍｇ／ｋｇ、約０．０３〜約０．１ｍｇ／ｋｇ、及び約０．１〜約０．３ｍｇ／ｋｇからなる群より選択される週間投与量で個人に投与される。さまざまな実施形態では、がんはＣＤ３３を発現する。さまざまな実施形態では、がんはＣＤ３３発現がんの腫瘍微小環境内の非ＣＤ３３発現がんである。さまざまな実施形態では、ＢｉＴＥ（登録商標）免疫療法は、ＣＤ３３と異なるＴＡＡを標的にすることになる。
【０２１１】
さまざまな実施形態では、ａ）抗ＣＤ７０−ＩＦＮ−α融合分子を含む医薬組成物の有効量及びｂ）共刺激分子又は共抑制分子（免疫チェックポイント）に対するアゴニスト抗体、アンタゴニスト抗体、又は遮断抗体を用いる免疫療法を個人に施行することを含む、個人におけるがんを治療する併用治療法が提供され、併用療法はエフェクター細胞による殺作用の増加をもたらす。さまざまな実施形態では、がんは、腎細胞癌（ＲＣＣ）、ワルデンストレームマクログロブリン血症、多発性骨髄腫、及びＮＨＬからなる群より選択され、抗ＣＤ７０−ＩＦＮ−α融合分子は、約０．０００１〜約０．０００３ｍｇ／ｋｇ、約０．０００３〜約０．００１ｍｇ／ｋｇ、約０．００１〜約０．００３ｍｇ／ｋｇ、約０．００３〜約０．０１ｍｇ／ｋｇ、約０．０１〜約０．０３ｍｇ／ｋｇ、約０．０３〜約０．１ｍｇ／ｋｇ、及び約０．１〜約０．３ｍｇ／ｋｇからなる群より選択される週間投与量で個人に投与される。さまざまな実施形態では、がんはＣＤ７０を発現する。さまざまな実施形態では、がんはＣＤ７０発現がんの腫瘍微小環境内の非ＣＤ７０発現がんである。
【０２１２】
さまざまな実施形態では、ａ）抗ＣＤ７０−ＩＦＮ−α融合分子を含む医薬組成物の有効量及びｂ）キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）−Ｔ細胞を用いる免疫療法を個人に施行することを含む、個人におけるがんを治療する併用治療法が提供される。さまざまな実施形態では、がんは、腎細胞癌（ＲＣＣ）、ワルデンストレームマクログロブリン血症、多発性骨髄腫、及びＮＨＬからなる群より選択され、抗ＣＤ７０−ＩＦＮ−α融合分子は、約０．０００１〜約０．０００３ｍｇ／ｋｇ、約０．０００３〜約０．００１ｍｇ／ｋｇ、約０．００１〜約０．００３ｍｇ／ｋｇ、約０．００３〜約０．０１ｍｇ／ｋｇ、約０．０１〜約０．０３ｍｇ／ｋｇ、約０．０３〜約０．１ｍｇ／ｋｇ、及び約０．１〜約０．３ｍｇ／ｋｇからなる群より選択される週間投与量で個人に投与される。さまざまな実施形態では、がんはＣＤ７０を発現する。さまざまな実施形態では、がんはＣＤ７０発現がんの腫瘍微小環境内の非ＣＤ７０発現がんである。さまざまな実施形態では、ＣＡＲ−Ｔ免疫療法は、ＣＤ７０と異なるＴＡＡを標的にすることになる。
【０２１３】
さまざまな実施形態では、ａ）抗ＣＤ７０−ＩＦＮ−α融合分子を含む医薬組成物の有効量及びｂ）ＣＡＲ−ＮＫ細胞を用いる治療を用いる免疫療法を個人に施行することを含む、個人におけるがんを治療する併用治療法が提供される。さまざまな実施形態では、がんは、腎細胞癌（ＲＣＣ）、ワルデンストレームマクログロブリン血症、多発性骨髄腫、及びＮＨＬからなる群より選択され、抗ＣＤ７０−ＩＦＮ−α融合分子は、約０．０００１〜約０．０００３ｍｇ／ｋｇ、約０．０００３〜約０．００１ｍｇ／ｋｇ、約０．００１〜約０．００３ｍｇ／ｋｇ、約０．００３〜約０．０１ｍｇ／ｋｇ、約０．０１〜約０．０３ｍｇ／ｋｇ、約０．０３〜約０．１ｍｇ／ｋｇ、及び約０．１〜約０．３ｍｇ／ｋｇからなる群より選択される週間投与量で個人に投与される。さまざまな実施形態では、がんはＣＤ７０を発現する。さまざまな実施形態では、がんはＣＤ７０発現がんの腫瘍微小環境内の非ＣＤ７０発現がんである。さまざまな実施形態では、ＣＡＲ−ＮＫ免疫療法は、ＣＤ７０と異なるＴＡＡを標的にすることになる。
【０２１４】
さまざまな実施形態では、ａ）抗ＣＤ７０−ＩＦＮ−α融合分子を含む医薬組成物の有効量及びｂ）二重特異性Ｔ細胞誘導抗体（ＢｉＴＥ（登録商標））を用いる免疫療法を個人に施行することを含む、個人におけるがんを治療する併用治療法が提供される。さまざまな実施形態では、がんは、腎細胞癌（ＲＣＣ）、ワルデンストレームマクログロブリン血症、多発性骨髄腫、及びＮＨＬからなる群より選択され、抗ＣＤ７０−ＩＦＮ−α融合分子は、約０．０００１〜約０．０００３ｍｇ／ｋｇ、約０．０００３〜約０．００１ｍｇ／ｋｇ、約０．００１〜約０．００３ｍｇ／ｋｇ、約０．００３〜約０．０１ｍｇ／ｋｇ、約０．０１〜約０．０３ｍｇ／ｋｇ、約０．０３〜約０．１ｍｇ／ｋｇ、及び約０．１〜約０．３ｍｇ／ｋｇからなる群より選択される週間投与量で個人に投与される。さまざまな実施形態では、がんはＣＤ７０を発現する。さまざまな実施形態では、がんはＣＤ７０発現がんの腫瘍微小環境内の非ＣＤ７０発現がんである。さまざまな実施形態では、ＢｉＴＥ（登録商標）免疫療法はＴＡＡ  ｔｈａｔ  ＣＤ７０を標的にすることになる。
【０２１５】
さまざまな実施形態では、併用治療法は、ＴＡＡ抗体−ＩＦＮ融合分子及び免疫療法を同時に、同じ医薬組成物または別個の医薬組成物で施行することを含む。代替的に、ＴＡＡ抗体−ＩＦＮ融合分子及び免疫療法は、順次連続して施行される。すなわち、ＴＡＡ抗体−ＩＦＮ融合分子は免疫療法の前後いずれかに投与される。
【０２１６】
さまざまな実施形態では、ＴＡＡ抗体−ＩＦＮ融合分子及び免疫療法の投与は並行し、すなわち、ＴＡＡ抗体−ＩＦＮ融合分子及び免疫療法の施行期間は互いに重なる。
【０２１７】
さまざまな実施形態では、ＴＡＡ抗体−ＩＦＮ融合分子及び免疫療法の施行は並行しない。例えば、さまざまな実施形態では、ＴＡＡ抗体−ＩＦＮ融合分子は免疫療法の施行前に投与される。さまざまな実施形態では、ＴＡＡ抗体−ＩＦＮ融合分子は、免疫療法の施行の、約１時間前、約２時間前、約３時間前、約４時間前、約５時間前、約６時間前、約７時間前、約８時間前、約９時間前、約１０時間前、約１１時間前、約１２時間前、約１３時間前、約１４時間前、約１５時間前、約１６時間前、約１７時間前、約１８時間前、約１９時間前、約２０時間前、約２１時間前、約２２時間前、約２３時間前、約１日前、約２日前、約３日前、約４日前、約５日前、約６日前、及び約１週前からなる群より選択される時点に投与される。
【０２１８】
さまざまな実施形態では、ＴＡＡ抗体−ＩＦＮ融合分子の投与前に施行される。さまざまな実施形態では、免疫療法は、ＴＡＡ抗体−ＩＦＮ融合分子の投与の、約１時間前、約２時間前、約３時間前、約４時間前、約５時間前、約６時間前、約７時間前、約８時間前、約９時間前、約１０時間前、約１１時間前、約１２時間前、約１３時間前、約１４時間前、約１５時間前、約１６時間前、約１７時間前、約１８時間前、約１９時間前、約２０時間前、約２１時間前、約２２時間前、約２３時間前、約１日前、約２日前、約３日前、約４日前、約５日前、約６日前、及び約１週間前からなる群より選択される時点に施行される。
【０２１９】
さまざまな実施形態では、ＴＡＡ抗体−ＩＦＮ融合分子の投与は、免疫療法が施行される前に中止される。いくつかの実施形態では、免疫療法の施行は、ＴＡＡ抗体−ＩＦＮ融合分子が投与される前に中止される。
【０２２０】
これらのさまざまな併用療法は「相乗効果」をもたらしうる。すなわち、活性成分を一緒に用いたとき達成される効果が、化合物を別々に使用することによって生じる効果の和よりも大きい。
【０２２１】
核酸分子及び融合分子発現
本出願はさらに、本明細書に記載の遺伝子組換え改変融合分子をコードするヌクレオチド配列を含む核酸分子を提供する。遺伝子コードの縮重に起因して、さまざまな核酸配列が各融合分子アミノ酸配列をコードする。本出願はさらに、ストリンジェントなハイブリダイゼーション条件下、又は例えば、本明細書において定義されているようなストリンジェンシーがより低いハイブリダイゼーション条件下で融合分子をコードする核酸分子にハイブリダイズする核酸分子を提供する。ストリンジェントなハイブリダイゼーション条件としては、６×ＳＳＣ中約４５℃でフィルター結合ＤＮＡへのハイブリダイゼーション後、０．２×ＳＳＣ／０．１％ＳＤＳ中約５０〜６５℃で１回以上の洗浄、６×ＳＳＣ中約４５℃でフィルター結合ＤＮＡへのハイブリダイゼーション後、０．１×ＳＳＣ／０．２％ＳＤＳ中約６０℃で１回以上の洗浄などの高ストリンジェントな条件、又は当業者に公知の他のいずれのストリンジェントなハイブリダイゼーション条件（例えば、Ａｕｓｕｂｅｌ，Ｆ．Ｍ．ｅｔ  ａｌ．，ｅｄｓ．１９８９  Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，ｖｏｌ．１，Ｇｒｅｅｎ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ，Ｉｎｃ．ａｎｄ  Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．，ＮＹ  ａｔ  ｐａｇｅｓ  ６．３．１  ｔｏ  ６．３．６  ａｎｄ  ２．１０．３を参照されたい）が挙げられるが、それらに限定されない。
【０２２２】
当該技術分野において公知のいずれの方法によっても、核酸分子は入手でき、核酸分子のヌクレオチド配列は決定することができる。例えば、融合分子のヌクレオチド配列が既知である場合、（例えば、Ｋｕｔｍｅｉｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，ＢｉｏＴｅｃｈｎｉｑｕｅｓ  １７：２４２，１９９４に記載のように）融合分子をコードする核酸分子は化学的に合成したオリゴヌクレオチドから組み立てられうる。手短に、抗体をコードする配列の部分を含むオーバーラップするオリゴヌクレオチドの合成、それらのオリゴヌクレオチドのアニーリング及びライゲーション、次いでライゲーションしたオリゴヌクレオチドのＰＣＲによる増幅を含む。１つの実施形態では、使用されるコドンはヒト又はマウスに典型的なものを含む（例えば、Ｎａｋａｍｕｒａ，Ｙ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．２８：２９２，２０００を参照されたい）。
【０２２３】
融合分子をコードする核酸分子は、適切な供給源に由来する核酸からも生成されうる。例えば、特定の抗体をコードする核酸を含むクローンは入手できないが、抗体分子の配列は既知である場合、免疫グロブリンをコードする核酸は、化学的に合成してもよく、又は配列の３’末端及び５’末端にハイブリダイズ可能な合成プライマーを用いてＰＣＲ増幅することによって、若しくは同定すべき特定の遺伝子配列、例えば、ｃＤＮＡクローンに特異的なオリゴヌクレオチドプローブを用いて抗体をコードするｃＤＮＡライブラリーからクローニングすることによって、適切なソース（例えば、抗体ｃＤＮＡライブラリー、若しくは抗体を発現するために選ばれたハイブリドーマ細胞などの抗体を発現するいずれの組織若しくは細胞から精製されたｃＤＮＡライブラリー又は該組織若しくは該細胞から単離された核酸、好ましくは、ポリＡ＋ＲＮＡ）から得てもよい。ＰＣＲによって作られた増幅核酸は次に、当該技術分野において周知であるいずれかの方法によって複製可能なクローニングベクターにクローニングされうる。
【０２２４】
本開示の１つの実施形態では、適切な抗体フレームワークをコードする核酸配列は、（随意に例えば、原核生物又は真核生物用の、例えば、発現ベクター）適切なベクターにクローニング及びライゲーションされる。くわえて、適切なインターフェロン分子をコードする核酸配列は随意に、ベクターの発現は抗体−インターフェロン分子融合分子を生み出すように、同じベクターに適切な向き及び適切な位置にクローニングされる。いくつかの随意の実施形態は、発現後修飾、例えば、抗体サブユニットのアセンブリなども必要とする。上記（及び類似）の操作のため手法及び技術は当業者に周知である。関連する使用説明は、例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ−−Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ（第２版）、１〜３巻、コールドスプリングハーバー研究所、コールドスプリングハーバー、ニューヨーク州、１９８９年及びＣｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｆ．Ｍ．Ａｕｓｕｂｅｌ  ｅｔ  ａｌ．，ｅｄｓ．，Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ，Ｇｒｅｅｎｅ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ，Ｉｎｃ．とＪｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．との合弁事業（１９９９年まで増補）に見出される。
【０２２５】
本開示は、本開示の融合分子を発現する宿主細菌も対象とする。複製及び融合タンパク質の組換え発現のサポートに適した宿主細胞は当該技術分野において周知である。そのような細胞は特定の発現ベクターで適宜トランスフェクション又は形質導入されうる。大量のベクター含有細胞が大型発酵槽に播種するために培養されて充分量の臨床用途のためのタンパク質を得ることができる。そのような細胞としては、大腸菌などの原核微生物；チャイニーズハムスター卵巣細胞（ＣＨＯ）、ＮＳＯ、ＨＥＫ２９３；酵母；昆虫細胞；ハイブリドーマ；ヒト細胞株などのさまざまな真核細胞；並びにトランスジェニック動物及びトランスジェニック植物などが挙げられうる。これらの系で外来遺伝子を発現するための標準的な技術は、当該技術分野において公知である。典型的には、組換えタンパク質遺伝子は、各宿主に適した発現制御配列に動作可能に連結される。大腸菌については、この発現制御配列は、Ｔ７、ｔｒｐ、又はラムダプロモーターなどのプロモーター、リボソーム結合部位、及び好ましくは、転写終結シグナルを含む。真核細胞については、制御配列は、プロモーター並びに好ましくは、免疫グロブリン遺伝子、ＳＶ４０、サイトメガロウイルスなどに由来するエンハンサー及びポリアデニル化配列を含むことになり、スプライスドナー配列及びスプライスアクセプター配列を含みうる。
【０２２６】
抗体−ＩＦＮ融合分子を遺伝子組換えで発現するには、宿主細胞は、抗体の免疫グロブリン軽鎖及び／又は重鎖並びに結合インターフェロンをコードするＤＮＡ断片をもつ１つ以上の組換え発現ベクターで、形質転換、形質導入、感染などされ、その結果、軽鎖及び／又は重鎖は宿主細胞で発現される。重鎖及び軽鎖は、１つのベクター内で動作可能に連結される相異なるプロモーターから独立して発現されてもよく、又は代替的に、重鎖及び軽鎖は、重鎖を発現する１つのベクター及び軽鎖を発現する１つのベクターの２つのベクター内で動作可能に連結される異なるプロモーターから独立して発現されてもよい。随意に、重鎖及び軽鎖は異なる宿主細菌で発現されてもよい。
【０２２７】
くわえて、組換え発現ベクターは、宿主細胞からの抗体軽鎖及び／又は重鎖の分泌を容易にするシグナルペプチドをコードすることができる。抗体軽鎖及び／又は重鎖遺伝子は、シグナルペプチドが抗体鎖遺伝子のアミノ末端にインフレームで動作可能に連結されるようにベクターにクローニングする。シグナルペプチドは、免疫グロブリンシグナルペプチド又は異種シグナルペプチドであることができる。好ましくは、組換え抗体は宿主細菌が培養され、抗体が回収又は精製できる培地に分泌される。
【０２２８】
ＨＣＶＲをコードするＤＮＡは、ＨＣＶＲをコードするＤＮＡを、重鎖定常領域をコードする別のＤＮＡ分子に動作可能に連結することによって完全長重鎖遺伝子に変換することができる。ヒト重鎖定常領域遺伝子及び他の哺乳類の重鎖定常領域遺伝子の配列は当技術分野において公知である。これらの領域を包含するＤＮＡ断片は、例えば、標準的なＰＣＲ増幅によって得ることができる。Ｋａｂａｔ（上記を参照）に記載のように、重鎖定常領域は、いずれのタイプ（例えば、ＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、若しくはＩｇＤ）、クラス（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、及びＩｇＧ４）又はサブクラス定常領域、及びそのいずれのアロタイプバリアントであることができる。
【０２２９】
ＬＣＶＲ領域をコードする単離ＤＮＡは、ＬＣＶＲをコードするＤＮＡを、軽鎖定常領域をコードする別のＤＮＡ分子に動作可能に連結することによって完全長軽鎖遺伝子（及びＦａｂ軽鎖遺伝子）に変換されうる。ヒト軽鎖定常部遺伝子及び他の哺乳類軽鎖定常部遺伝子の配列は当技術分野において公知である。これらの領域を包含するＤＮＡ断片は標準的なＰＣＲ増幅によって得ることができる。軽鎖定常領域は、カッパ又はラムダ定常領域であることができる。
【０２３０】
くわえて、本開示の組換え発現ベクターは追加の配列、例えば、宿主細菌内のベクターの複製を調節する配列（例えば、複製起点）及び１つ以上の選択可能マーカー遺伝子を有してもよい。選択可能マーカー遺伝子は、ベクターが導入された宿主細菌の選択を容易にする。例えば、典型的には、選択可能マーカー遺伝子は、ベクターが導入された宿主細菌に、Ｇ４１８、ハイグロマイシン、又はメトトレキサートなどの薬剤に対する耐性を付与する。好ましい選択可能マーカー遺伝子としては、ジヒドロ葉酸レダクターゼ（ｄｈｆｒ）遺伝子（メトトレキサート選択／増幅を伴うｄｈｆｒ欠損宿主細菌で用いる）、ｎｅｏ遺伝子（Ｇ４１８選択用）、及びＧＳ陰性細胞株（ＮＳＯなど）における選択／増幅のためのグルタミン合成酵素（ＧＳ）が挙げられる。
【０２３１】
軽鎖及び／又は重鎖を結合インターフェロンとともに発現するために、重鎖及び／又は軽鎖をコードする発現ベクターは、標準的な技術、例えば、エレクトロポーレーション、リン酸カルシウム沈殿、ＤＥＡＥ‐デキストラントランスフェクション、形質導入、感染などによって宿主細胞に導入される。理論的には原核生物宿主細菌又は真核生物宿主細菌のいずれでも本開示の抗体を発現することが可能であるが、真核細胞宿主細菌及び最も具体的には哺乳類宿主細菌がより典型的であり、その理由は  そのような細胞は適切に折り畳まれ、且つ免疫学的に活性のある抗体をアセンブリ及び分泌する可能性が高いからである。本開示の組換え抗体を発現するための哺乳類宿主細菌としては、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ細胞）［例えば、Ｋａｕｆｍａｎ  ａｎｄ  Ｓｈａｒｐ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１５９：６０１−２１，１９８２に記載されるようにＤＨＦＲ選択可能マーカーとともに使用される、Ｕｒｌａｕｂ  ａｎｄ  Ｃｈａｓｉｎ，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ７７：４２１６−２０，１９８０に記載されるようなｄｈｆｒ欠損ＣＨＯ細胞を含む］、ＮＳＯ骨髄腫細胞、ＣＯＳ細胞、及びＳＰ２／０細胞が挙げられる。抗体遺伝子をコードする組換え発現ベクターが、哺乳類宿主細菌に導入される場合、抗体は、宿主細菌での抗体の発現、又はより好ましくは、宿主細菌が当技術分野において公知である適切な条件下で培養される培養培地への抗体の分泌を可能にするのに十分な期間、宿主細菌を培養することによって産生される。抗体は、標準的な精製方法を用いて宿主細胞及び／又は培養培地から回収することができる。
【０２３２】
いったん発現すると、本開示の完全な抗体、個々の軽鎖及び重鎖、又は他の免疫グロブリン型は、硫酸アンモニウム沈殿、イオン交換、アフィニティー（例えば、プロテインＡ）、逆相、疎水相互作用カラムクロマトグラフィー、ハイドロキシアパタイトクロマトグラフィー、ゲル電気泳動などを含む当該技術分野で標準的な手順に従って精製することができる。治療用抗体の精製のための標準的な手順は、例えば、「Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｐｒｏｃｅｓｓ  Ｏｐｔｉｍｉｚａｔｉｏｎ」（ＢｉｏＰｒｏｃｅｓｓｉｎｇ  Ｊｏｕｒｎａｌ，Ｓｅｐｔｅｍｂｅｒ／Ｏｃｔｏｂｅｒ  ２００５）と題する論文で、Ｆｅｎｇ  Ｌ１，Ｊｏｅ  Ｘ．  Ｚｈｏｕ，Ｘｉａｏｍｉｎｇ  Ｙａｎｇ，Ｔｉｍ  Ｔｒｅｓｓｅｌ，ａｎｄ  Ｂｒｉａｎ  Ｌｅｅによって記述されている。くわえて、遺伝子組換えで発現された抗体調製物からウイルスを除去する標準的な技術も当該技術分野において公知である（例えば、Ｇｅｒｄ  Ｋｅｒｎ  ａｎｄ  Ｍａｎｉ  Ｋｒｉｓｈｎａｎ，”Ｖｉｒａｌ  Ｒｅｍｏｖａｌ  ｂｙ  Ｆｉｌｔｒａｔｉｏｎ：  Ｐｏｉｎｔｓ  ｔｏ  Ｃｏｎｓｉｄｅｒ”（Ｂｉｏｐｈａｒｍ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ，Ｏｃｔｏｂｅｒ  ２００６）を参照されたい）。治療用抗体の調製物からウイルスを除去するための濾過の効果は、濾過する溶液中のタンパク質及び／又は抗体の濃度に少なくとも部分的に依存することが知られている。本開示の抗体の精製プロセスは、１つ以上のクロマトグラフィー操作のメインストリームからウイルスを除去するための濾過ステップを含みうる。好ましくは、医薬品グレードナノフィルターを通して濾過してウイルスを除去する前に、本開示の抗体を含むクロマトグラフィーメインストリームは全タンパク質及び／又は総抗体濃度が約１ｇ／Ｌ〜約３ｇ／Ｌとなるように希釈又は濃縮される。よりいっそう好ましくは、ナノフィルターはＤＶ２０ナノフィルター（例えば、Ｐａｌｌ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ、イースト・ヒルズ、ニューヨーク州）である。医薬用途には、均一性が少なくとも約９０％、約９２％、約９４％、又は約９６％である実質的に純粋な免疫グロブリンが好ましく、約９８〜約９９％又はそれより大きい均一性が最も好ましい。無菌抗体は、部分的に又は所望のような均一性にまで精製されると、その後、本明細書において示されるように、治療的に使用されうる。
【０２３３】
前述の考察に鑑みて、本開示はさらに、核酸が発現するように、本開示の抗体をコードする核酸分子を含んでなる核酸分子又はベクターによって形質転換された宿主細胞、例えば、限定されないが、哺乳類細胞、植物細胞、細菌細胞、トランスジェニック動物細胞、又はトランスジェニック植物細胞を培養するステップ及び随意に、宿主細胞培養培地から抗体を回収するステップを含む過程によって得ることができる融合分子を対象とする。
【０２３４】
キット
ある実施形態では、本開示はがん治療及び／又は補助療法のキットをもたらす。典型的には、キットは本開示のＴＡＡ抗体−ＩＦＮ融合分子が入った容器を含む。ＴＡＡ抗体−ＩＦＮ融合分子は薬理学的に許容可能な賦形剤中に存在することができる。キットは随意に免疫療法がん剤を含んでもよい。
【０２３５】
くわえて、キットは随意に、がんを治療するためにＴＡＡ抗体−ＩＦＮ融合分子及び／又は免疫療法を使用する手段を開示する取扱説明資料を含むことができる。また、取扱説明資料は随意に、好ましい投与量、禁忌などを教示してもよい。
【０２３６】
またキットは、キットがそのために設計されている特定の用途を容易にする追加構成要素も含むことができる。よって、例えば、創傷を消毒する手段、痛みを軽減する手段、創傷被覆材を付ける手段などが追加で含まれる。
【０２３７】
取扱説明資料は典型的には書物又は印刷物をからなるが、そのようなものに限定されない。そのような取扱説明書を保存し、それをエンドユーザーに伝えることができるいずれの媒体も本開示によって企図される。そのような媒体としては、電子記憶媒体（例えば、磁気ディスク、テープ、カートリッジ、チップ）、光媒体（例えば、ＣＤ  ＲＯＭ）などが挙げられるが、これらに限定されない。そのような媒体は、そのような取扱説明資料を提供するインターネットサイトのアドレスが含まれうる。
【実施例】
【０２３８】
本発明をさらに詳細に記載するために以下の例を提供する。
【０２３９】
実施例１
本明細書に記載のように調製した組換え抗ＣＤ２０抗体−ｗｔＩＦＮ−α２ｂ融合分子（以降、「ＩＧＮ００２」と呼ぶ）が、インヒトロで数多くの細胞株に対して及びマウスで増大するヒト異種移植腫瘍の定着に対して優れた抗リンパ腫活性を示すことを本発明の発明者らは以前に報告した（Ｘｕａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ  １１５：２８６４−７１，２０１０；Ｔｉｍｍｅｒｍａｎ  Ｊ  ｅｔ  ａｌ，Ｂｌｏｏｄ  １２６（２３）：２７６２，２０１５）。具体的には、非臨床試験において、ＩＧＮ００２は選択的にＣＤ２０陽性細胞に結合し、融合パートナー各々単独と比べて、ＣＤ２０陽性ＮＨＬ細胞株に対するインヒトロでの強力な抗増殖活性（０．１〜２．１ｐＭのＥＣ５０値）を示した。またＩＧＮ００２は、ＮＨＬ細胞に対して、リツキシマブと比較して増強されたサイトカイン依存性細胞傷害性（ＣＤＣ）活性及び抗体依存性細胞介在性細胞傷害（ＡＤＣＣ）活性を示し、ＮＨＬ細胞株に対する強力なアポトーシス促進活性（１．９ｐＭ〜２．７ｎＭのＥＣ５０値）を示した（図２を参照されたい）。とりわけ、非融合ＩＦＮ−αと比較してＩＧＮ００２では抗ウイルス性活性が２７０倍低下し、モル同等レベルの非融合ＩＦＮαと比較して、全身性の有害事象（ＡＥ）の減衰に起因するＩＧＮ００２の高い治療指数の可能性が示唆された。
【０２４０】
３つの異なるヒトＮＨＬ細胞株を用いた免疫不全マウスにおける異種移植研究は、ＩＧＮ００２の抗腫瘍活性をリツキシマブ及び対照ｍＡｂ−ＩＦＮ−α融合分子と比較した。３つのＮＨＬ異種移植腫瘍株すべてに対して、ＩＧＮ００２は生存期間中央値及び全体的な生存率で測定して生体内での優れた抗腫瘍有効性を示した。ラージバーキットリンパ腫瘍に対して、リツキシマブと比べて２５倍低いモル投与量で投与された場合にＩＧＮ００２は同等の有効性を保持した。ダウディバーキットリンパ腫瘍に対して、ＩＧＮ００２で治療した動物の１００％が、完全な腫瘍退縮を経験し、試験の期間中生存したのに対して、等モル投与量レベルのリツキシマブを用いて治療した動物はわずか１２．５％しか生存しなかった（ｐ≦０．０００５）。ＯＣＩ−Ｌｙ１９  ＤＬＢＣＬ異種移植腫瘍をもつマウスのＩＧＮ００２治療は、リツキシマブ治療と比べて著しく長い生存をもたらした（それぞれ、９６．５日対５８日の生存期間中央値、ｐ＜０．０００１）。また、ＩＧＮ００２治療が、ＯＣＩ−Ｌｙ１９腫瘍の進行のより明らかな遅延を示し、且つ同じ投与量での非標的対照ｍＡｂ−ＩＦＮ−α融合分子の５９日と比較して、９６．５日の著しく長い生存期間中央値（ｐ＜０．０００１）を伴ったより優れた抗腫瘍活性を示したように、ＩＦＮ−αのＣＤ２０標的送達の重要性も示された。
【０２４１】
実施例２
この例では、本明細書に記載の方法を用いて、配列番号１２に記載のアミノ酸配列をもち、配列番号１３に記載のアミノ酸配列をもつ軽鎖をもつ抗ＧＲＰ９４抗体を含むＴＡＡ抗体−ＩＦＮ融合分子を次のように作製した。配列番号１に記載のアミノ酸配列をもつインターフェロン分子を抗ＧＲＰ９４抗体重鎖のＣ末端に配列番号１８のアミノ酸配列をもつリンカーを用いて連結した（この融合は以降「ＩＧＮ００４」と呼ぶ）。
【０２４２】
さまざまな固形腫瘍及び血液がん細胞株のＧＲＰ９４の発現をフローサイトメトリーで評価した。細胞を、１０６個の細胞あたり２μｇの抗ＧＲＰ９４抗体と氷上で１時間インキュベーションした。インキュベーション後、細胞を２回洗い、次いで結合したｍＡｂを抗ヒトＩｇＧ（Ｆｃ）−ＦＩＴＣ抗体で検出した。試料をベックマン・コールターＣｙｔｏｍｉｃｓ  ＦＣ５００又はＧａｌｉｏｓフローサイトメーター装置を用いたフローサイトメトリーで分析し、ＷｉｎＭＤＩソフトウェアを用いてデータを解析した。対照は、抗ＧＲＰ９４抗体とその後のＩｇＧ２ａ，κ−ＦＩＴＣアイソタイプ対照及び抗ヒトＩｇＧ（Ｆｃ特異的）−ＦＩＴＣ単独を含んだ。フローサイトメトリーの結果を表６に示す。抗ＧＲＰ９４抗体は、黒色腫、ＮＳＣＬＣ、ＡＭＬ、及びＭＭを含む、調べた腫瘍細胞株の大部分に結合した。
2018516950.tif 000030
【０２４３】
さまざまな原発性ヒト腫瘍及び（免疫不全マウス内で増殖させた）患者由来ヒト異種移植腫瘍のＧＲＰ９４の発現を、免疫組織化学（ＩＨＣ）を用いて評価した。ＩＨＣの結果を表７に示す。
2018516950.tif 000031
【０２４４】
この場合もやはり、抗ＧＲＰ９４抗体は、ＩＨＣで試験した原発固形腫瘍試料のほぼ１００％に結合した。
【０２４５】
実施例３
この例では、非標的設定及び標的設定でそれぞれ、ＩＧＮ００４のＳＴＡＴ１リン酸化及び増殖阻害活性を非融合ＩＦＮ−α２ｂと比較した。
【０２４６】
非標的ＳＴＡＴ１リン酸化実験に関して、ダウディＮＨＬ腫瘍細胞（ＧＲＰ９４陰性）を、示されている濃度のＩＧＮ００４又はＩＦＮ−α２ｂで１５分間インキュベーションし、次いで細胞を固定し、透過処理して、ＰＥ標識抗−ＳＴＡＴ１（ｐＹ７０１）又はＰＥ標識アイソタイプ対照で細胞内染色した。洗浄後、試料をフローサイトメトリーで解析した。プリズムソフトウェアを用いた非線形回帰分析によって用量反応曲線を作成した。標的増殖阻害実験に関して、ＧＲＰ９４陽性ＮＣＩ−Ｈ１２９９  ＮＳＣＬＣ腫瘍細胞（ＡＴＣＣ  ＣＲＬ−５８０３）を、示されている濃度のＩＧＮ０００４又はＩＦＮ−α２ｂで３７℃にて５％ＣＯ２雰囲気中で９６時間処理した。インキュベーション後、標準的なＭＴＳアッセイ（プロメガＣｅｌｌ  Ｔｉｔｅｒ９６；プロメガ、マディソン、ウィスコンシン州）を行って細胞増殖を評価した。プリズムソフトウェアを用いた非線形回帰分析によって用量反応曲線を作成した。
【０２４７】
図３に示されるように、ＩＧＮ００４関連ＩＦＮ活性は、抗原陰性細胞（ダウディ）で減少し、抗原陽性細胞（ＮＣＩ−Ｈ１２９９）で増強された。抗体標的抗原を発現しないダウディ細胞では、ＳＴＡＴ１リン酸化活性は、非融合ＩＦＮ−α２ｂ（ＥＣ５０（ＩＦＮ−α２ｂ）＝０．１５４ｎＭと比較して５４倍弱まり、ＥＣ５０（ＩＧＮ００４）＝８．３９ｎＭ）であった。抗体標的抗原を発現するＮＣＩ−Ｈ１２９９細胞では、増殖阻害活性は、非融合ＩＦＮ−α２ｂ（ＥＣ５０（ＩＦＮ−α２ｂ）＝３０．３ｐＭと比較して２７５倍増強され、ＥＣ５０（ＩＧＮ００４）＝０．１１ｐＭ）であった。
【０２４８】
実施例４
この例では、ＩＧＮ００４の生体内抗腫瘍活性を、Ｕ２６６腫瘍がＮＯＧ（ＮＯＤ／Ｓｈｉ−ｓｃｉｄ／ＩＬ−２Ｒγｎｕｌｌ）免疫不全マウスで増殖したヒト多発性骨髄腫の異種移植片モデル（Ｉｔｏ  ｅｔ  ａｌ，  Ｂｌｏｏｄ，１００（９）：３１７５−８２，２００２）において調べた。
【０２４９】
本試験では、８〜１１日定着皮下腫瘍をもつ動物の群（平均腫瘍体積＝１３８ｍｍ３）を、５ｍｇ／ｋｇ、１ｍｇ／ｋｇ、又は０．２ｍｇ／ｋｇのＩＧＮ００４を用いて静注で週に２回４週間治療した。溶媒（リン酸緩衝食塩水）での治療をネガティブコントロールとした。リン酸緩衝食塩水で治療した動物は生存期間中央値が３９．５日であり、０．２ｍｇ／ｋｇのＩＧＮ００４での治療は生存期間を有意に延ばさなかった（図４を参照されたい）。しかし、１ｍｇ／ｋｇのＩＧＮ００４での治療は生存期間を有意に向上し、それぞれ、生存期間中央値が４７日（ｐ＝０．０２  対リン酸緩衝食塩水）及び７３日（ｐ＝０．０００２  対リン酸緩衝食塩水）であった。５ｍｇ／ｋｇのＩＧＮ００４での動物の治療は、１００％のマウスにおいて定着腫瘍の完全な退縮をもたらした。これらのデータは、ＩＧＮ００４がヒト多発性骨髄腫異種移植腫瘍を効果的に治療できることを示す。
【０２５０】
実施例５
この例では、ＩＧＮ００４の生体内抗腫瘍活性を、免疫不全マウスで増殖する１５個の相異なるヒトＮＳＣＬＣ患者由来異種移植片（ＰＤＸ）腫瘍のパネルに対して評価した。
【０２５１】
平均腫瘍体積が１５０ｍｍ３の定着ＮＳＣＬＣ  ＰＤＸ腫瘍をもつ５頭のＢＡＬＢ／ｃヌード免疫不全マウスの群を、リン酸緩衝食塩水又は２ｍｇ／ｋｇのＩＧＮ００４のいずれかを用いて静注で実験の期間中週に２回治療した。腫瘍サイズを週に２回カリパスを用いて長短両方向測定し、腫瘍体積を、式：Ｖ＝０．５ａ×ｂ２を用いて計算した。式中、ａ及びｂはそれぞれ、腫瘍の長径及び短径である。エクセルソフトウェア（マイクロソフト社）を用いて各腫瘍モデルの各時点での平均腫瘍体積をプロットし、ＩＧＮ００４の有効性を、４つのカテゴリー、＋＋＋＝腫瘍退縮、＋＋＝不変、＋＝腫瘍増殖の減速する、及び−＝無反応に分けた。
【０２５２】
表８に示されるように、ＩＧＮ００４は、４つの腫瘍モデルにおける腫瘍退縮を含む生体内有効性を、１５個中１０個のＰＤＸ腫瘍（６６．７％）において示した。既知の遺伝子変異ともＮＳＣＬＣ腫瘍タイプ及び治療への反応とも相関がないようである。これらの結果は、ヒトがん患者においてＴＡＡ抗体−ＩＦＮ融合分子の作用機序に潜在的に関与しうる免疫細胞の非存在下でさえも、ＩＧＮ００４のようなＴＡＡ抗体−ＩＦＮ融合分子が、臨床的に関連するＮＳＣＬＣ  ＰＤＸ腫瘍に対して非常に効果的でありうることを示す。
2018516950.tif 000032
【０２５３】
実施例６
この例では、ヒトＣＤ８＋ＮＫＴ細胞様ＴＡＬＬ−１０４エフェクター細胞株（ＡＴＣＣ  ＣＲＬ−１１３８６）の殺腫瘍細胞活性を、ＩＧＮ００４の存在下又は非存在下でＡ５４９ヒトＮＳＣＬＣ腫瘍細胞株（ＡＴＣＣ  ＣＣＬ−１８５）を用いて評価した。
【０２５４】
３００Ｕ／ｍＬ  ＩＬ−２で培養中のＴＡＬＬ−１０４細胞を２回洗ってＩＬ−２を除去し、培養に戻して一晩行った。Ａ５４９腫瘍細胞を２４ウェルプレートに蒔き、３７℃にて５％ＣＯ２雰囲気中で一晩インキュベーションした。次の日、細胞を３ｎＭ  ＩＧＮ００４と４時間インキュベーションし、次いでウェルを洗って未結合タンパク質を除去した。ＩＬ−２の非存在下で一晩インキュベーションした後、ＴＡＬＬ−１０４エフェクター細胞をエフェクター：標的比（Ｅ：Ｔ）が５：１になるようにＡ５４９腫瘍細胞が入ったウェルに加えた。共培養を３７℃にて５％ＣＯ２雰囲気中で２４時間インキュベーションし、次いで非付着エフェクター細胞を洗い流した後に腫瘍細胞の生存率を標準的なＭＴＳアッセイで評価した。ウェルを２回洗い、次いで０．５ｍＬの４：１混合ＲＰＭＩ＋１０％ＦＢＳ及びプロメガＣｅｌｌ  Ｔｉｔｅｒ９６を加え、３７℃で１時間インキュベーションした。培地を９６ウェルプレートに移し、分光光度計を使用して４９０ｎｍでプレートを読んだ。データを、未処理腫瘍細胞を１００％細胞対照として、且つ３７℃で１時間インキュベーションした培地とＣｅｌｌ  Ｔｉｔｅｒの混合物を０％細胞対照としてグラフパッドプリズムにプロットした。対照として、Ａ５４９腫瘍細胞単独、Ａ５４９腫瘍細胞＋ＩＧＮ００４（エフェクター無し）、及びＡ５４９腫瘍細胞＋ＴＡＬＬ−１０４エフェクター細胞（ＩＧＮ００４無し）を含めた。プレートを４連の試料でセットアップした。
【０２５５】
図５に示されるように、ＩＧＮ００４治療は、Ａ５４９腫瘍細胞の生存率の小さな減少をもたらした（１５．８２％）。ＴＡＬＬ−１０４エフェクター細胞は、ＩＧＮ００４の非存在下で強い殺作用を示した（６９．２％）。しかし、ＩＧＮ００４とＴＡＬＬ−１０４細胞の併用は、Ａ５４９腫瘍細胞の完全になくすこと（１００％死滅）につながった。この効果はいずれの薬剤単独をあわせたものよりも強く（８５．０２％対１００％）、ＩＧＮ００４及びＴＡＬＬ−１０４はＡ５４９腫瘍細胞での相乗効果を有し、よりいっそう強い殺腫瘍細胞作用をもたらすことができるという結論に至った。
【０２５６】
実施例７
この例では、ＴＡＬＬ−１０４エフェクター細胞の殺腫瘍細胞活性を、異なるヒトＮＳＣＬＣ腫瘍細胞株（ＮＣＩ−Ｈ１９７５；ＡＴＣＣ  ＣＲＬ−５９０８）を用いてＩＧＮ００４の存在下又は非存在下において２つの異なるＥ：Ｔ比にて評価した。
【０２５７】
３００Ｕ／ｍＬ  ＩＬ−２で培養中のＴＡＬＬ−１０４細胞を２回洗ってＩＬ−２を除去し、培養に戻して一晩行った。ＮＣＩ−Ｈ１９７５腫瘍細胞を２４ウェルプレートに蒔き、３７℃にて５％ＣＯ２雰囲気中で一晩インキュベーションした。次の日、細胞を５０ｐＭ  ＩＧＮ００４と４時間インキュベーションし、次いでウェルを洗って未結合タンパク質を除去した。ＩＬ−２の非存在下で一晩インキュベーションした後、ＴＡＬＬ−１０４エフェクター細胞をＥ：Ｔ比が５：１又は３．３：１になるように腫瘍細胞が入ったウェルに加えた。共培養を３７℃にて５％ＣＯ２雰囲気中で４８時間インキュベーションし、腫瘍細胞の生存率を実施例１に前述したように評価した。対照として、ＮＣＩ−Ｈ１９７５腫瘍細胞単独、ＮＣＩ−Ｈ１９７５腫瘍細胞＋ＩＧＮ００４（エフェクター無し）、及びＮＣＩ−Ｈ１９７５腫瘍細胞＋ＴＡＬＬ−１０４エフェクター細胞（ＩＧＮ００４無し）を含めた。プレートを２連の試料でセットアップした。
【０２５８】
図６に示されるように、ＩＧＮ００４治療は、Ａ５４９腫瘍細胞の生存率の小さな減少をもたらした（５．７％及び１０．６％）。ＴＡＬＬ−１０４エフェクター細胞は、ＩＧＮ００４の非存在下においてＥ：Ｔ比が５：１と３．３：１の両方において有意な殺作用を示した（それぞれ、５８．６％及び５５．７％）。しかし、５０ｐＭのＩＧＮ００４及びＴＡＬＬ−１０４細胞の組み合わせは、両方のＥ：Ｔ比においてよりいっそう効果的なＮＣＩ−Ｈ１９７５腫瘍細胞標的に対する殺作用もたらした（それぞれ、９３．８％及び９３．２％）。この効果はいずれの薬剤単独をあわせたものよりも強く、ＩＧＮ００４及びＴＡＬＬ−１０４はＮＣＩ−Ｈ１９７５腫瘍細胞での相乗効果を有し、よりいっそうより強い殺腫瘍細胞作用をもたらすことができるという結論に至った。
【０２５９】
実施例８
この例では、ＩＧＮ００４によるＴＡＬＬ−１０４腫瘍細胞に対する殺作用の増強の効力をＮＣＩ−Ｈ１９７５ＮＳＣＬＣ腫瘍細胞を用いて評価した。
【０２６０】
腫瘍細胞を示されている濃度のＩＧＮ００４で３時間インキュベーションした後、ＮＣＩ−Ｈ１９７５腫瘍細胞を標的として、ＴＡＬＬ−１０４細胞をエフェクターとして用いて、実施例６及び７に記載のように共培養を２４ウェルプレートにセットアップした。未結合ＩＧＮ００４を洗い流した後に、Ｅ：Ｔ比が３．３：１になるようにエフェクター細胞を加えた。共培養のインキュベーション時間は３７℃で４８時間であった。
【０２６１】
図７に示されるように、ＴＡＬＬ−１０４エフェクター細胞はＩＧＮ００４併用治療の非存在下で１７％のＮＣＩ−Ｈ１９７５腫瘍細胞を死滅させた。ＴＡＬＬ−１０４細胞を０．２５〜２５ｐＭの濃度で併用したＩＧＮ００４での治療は、ＴＡＬＬ−１０４治療単独と比較して殺腫瘍細胞作用の増加をもたらした。この結果は、免疫細胞による殺作用の増強は非常に強力な効果であり、非常に低い薬剤の濃度で起こりうることを示す。
【０２６２】
実施例９
この例では、下降調節したＴＡＬＬ−１０４エフェクター細胞の殺腫瘍細胞活性を、Ａ５４９  ＮＳＣＬＣ腫瘍細胞で、１０ｐＭのＩＧＮ００４の存在下又は非存在下においてさまざまなＥ：Ｔ比で評価した。
【０２６３】
腫瘍細胞を１０ｐＭのＩＧＮ００４と３時間インキュベーションした後、Ａ５４９腫瘍細胞を標的として、ＴＡＬＬ−１０４細胞をエフェクターとして用いて、実施例６及び７に記載のように共培養を２４ウェルプレートにセットアップした。未結合ＩＧＮ００４を洗い流した後に、Ｅ：Ｔ比が３：１、１．５：１、又は０．７５：１になるようにエフェクター細胞を加えた。ＴＡＬＬ−１０４細胞を洗い、その活性化状態及び殺細胞活性を減じるためにアッセイをセットアップする２日前にＩＬ−２を培地から除去した。共培養のインキュベーション時間は３７℃で５日であった。
【０２６４】
図８に示されるように、１０ｐＭのＩＧＮ００４は単独では腫瘍細胞に効果がなかった。３：１のＥ：Ｔ比においてＴＡＬＬ−１０４細胞は薬剤の非存在下で約４０％のＡ５４９腫瘍細胞を死滅させたが、より低いＥ：Ｔ比ではエフェクター細胞は腫瘍細胞を死滅させるのに無効であった。薬剤なしではＴＡＬＬ−１０４が腫瘍細胞への効果がなかった０．７５：１のＥ：Ｔでも、１０ｐＭのＩＧＮ００４の存在下ではＴＡＬＬ−１０４細胞は強い殺腫瘍細胞作用を示した。これらの結果は、ＩＧＮ００４が、ＩＬ−２欠乏によって達成されたＴＡＬＬ−１０４エフェクター細胞による殺細胞活性の下方調節を覆すことができることを示す。
【０２６５】
実施例１０
この例では、ＴＡＬＬ−１０４エフェクター細胞の殺腫瘍細胞活性をＩＧＮ００４又はＩＧＮ００４非融合ｍＡｂの存在下又は非存在下で評価した。
【０２６６】
腫瘍細胞を１０ｐＭのＩＧＮ００４又はＩＧＮ００４非融合ｍＡｂのいずれかと３時間インキュベーションした後、Ａ５４９腫瘍細胞を標的として、ＴＡＬＬ−１０４細胞をエフェクターとして用いて、実施例６及び７に記載のように共培養を２４ウェルプレートにセットアップした。未結合タンパク質を洗い流した後に、Ｅ：Ｔ比が１．５：１、０．７５：１、又は０．３７５：１になるようにエフェクター細胞を加えた。ＴＡＬＬ−１０４細胞を洗い、アッセイをセットアップする２日前にＩＬ−２を培地から除去した。共培養のインキュベーション時間は３７℃で４日であった。
【０２６７】
図９に示されるように、１０ｐＭのＩＧＮ００４非融合ｍＡｂは単独では腫瘍細胞に対して効果がなく、１０ｐＭのＩＧＮ００４はほんのわずかな効果のみ（＜１０％）であった。すべてのＥ：Ｔ比においてＴＡＬＬ−１０４細胞は薬剤の非存在下で低いレベルの殺腫瘍細胞作用を示した。１０ｐＭのＩＧＮ００４ｍＡｂの存在下では、ＴＡＬＬ−１０４細胞は薬剤なしのＴＡＬＬ−１０４細胞と同等の割合で死滅させた。しかし、１０ｐＭのＩＧＮ００４を用いると、薬物なしと比較して、ＴＡＬＬ−１０４細胞による殺腫瘍細胞作用の有意な増加があった（７０〜８０％対１０〜２０％死滅）。これらの結果はＩＧＮ００４の抗体部分だけがＴＡＬＬ−１０４媒介殺腫瘍細胞作用への相乗効果の要因ではないことを示す。
【０２６８】
実施例１１
この例では、ＴＡＬＬ−１０４エフェクター細胞の殺腫瘍細胞活性を、ＩＧＮ００４、対照ＴＡＡ抗体−ＩＦＮ−α融合タンパク質、またはＩＧＮ００４非融合ｍＡｂ＋非融合ＩＦＮ−αの組み合わせの存在下又は非存在下で評価した。
【０２６９】
腫瘍細胞を１０ｐＭのＩＧＮ００４、対照抗体−ＩＦＮ−α融合タンパク質、又はＩＧＮ００４非融合ｍＡｂ＋非融合ＩＦＮ−α２ｂの組み合わせのいずれかと３時間インキュベーションした後、Ａ５４９腫瘍細胞を標的として、ＴＡＬＬ−１０４細胞をエフェクターとして用いて、実施例６及び７に記載のように共培養を２４ウェルプレートにセットアップした。次いで、治療タンパク質を洗い流さずに、Ｅ：Ｔ比が１：１または１．５：１になるようにエフェクター細胞を加えた。ＴＡＬＬ−１０４細胞を洗い、アッセイをセットアップする２日前にＩＬ−２を培地から除去した。共培養のインキュベーション時間は３７℃で５日であった。
【０２７０】
図１０に示されるように、１０ｐＭの対照抗体−ＩＦＮ−α２ｂ単独では腫瘍細胞に効果はなかった。１０ｐＭのＩＧＮ００４又はＩＧＮ００４非融合ｍＡｂと非融合ＩＦＮ−α２ｂ組み合わせはほんのわずかな効果のみ（＜１０％）であった。両方のＥ：Ｔ比においてＴＡＬＬ−１０４細胞は薬剤の非存在下で低いレベル（＜１０％）の殺腫瘍細胞作用を示した。１０ｐＭの対照抗体−ＩＦＮ−α融合の存在では、ＴＡＬＬ−１０４細胞は薬剤なしのＴＡＬＬ−１０４細胞と同等の割合で死滅させた。１０ｐＭのＩＧＮ００４ｍＡｂ＋非融合ＩＦＮ−α２ｂの組み合わせを用いると、ＴＡＬＬ−１０４エフェクター細胞は、より多くのＡ５４９腫瘍細胞を死滅させた（１：１及び１．５：１のＥ：Ｔにおいてそれぞれ、１４％及び２５％のｋｉｌｌｉｎｇの増加）。しかし、１０ｐＭのＩＧＮ００４を用いると、薬剤なしと比較して、ＴＡＬＬ−１０４細胞による殺腫瘍細胞作用のよりいっそう大きい増加があった（１：１及び１．５：１においてそれぞれ、３４％及び４２％の殺作用の増加）。これらの結果は、ＴＡＡ抗体−ＩＦＮ−α融合タンパク質は、腫瘍微小環境における免疫細胞の殺腫瘍細胞作用を増強する機能を発揮するために腫瘍細胞に結合しなければならないこと並びにＴＡＡ抗体及びＩＦＮは完全な効果を得るために一緒に融合しなければならないことを示す。したがって、免疫細胞機能の増強は、抗体標的抗原が発現する部位でのみ起こるはずである。
【０２７１】
実施例１２
この例では、ＮＫエフェクター細胞株ＮＫ−９２（ＡＴＣＣ  ＣＲＬ−２４０７）の殺腫瘍細胞活性を、ＩＧＮ００４又は対照ＴＡＡ抗体−ＩＦＮ−α融合タンパク質の存在下又は非存在下において２つのＥ：Ｔ比でＯＶＣＡＲ−３卵巣がん細胞株（ＡＴＣＣ  ＨＴＢ−１６１）を用いて評価した。
【０２７２】
ＮＫ−９２殺腫瘍細胞作用アッセイを、実施例６及び７に記載のＴＡＬＬ−１０４殺作用アッセイと同様に行った。腫瘍細胞を１０ｐＭのＩＧＮ００４又は対照ＴＡＡ抗体−ＩＦＮ−α融合タンパク質のいずれかと３時間インキュベーションした後、ＯＶＣＡＲ−３腫瘍細胞を標的として、ＮＫ−９２細胞をエフェクターとして用いて、共培養を２４ウェルプレートにセットアップした。次いで、治療タンパク質を洗い流さずに、Ｅ：Ｔ比が１．５：１または０．５：１になるようにエフェクター細胞を加えた。ＮＫ−９２細胞を洗い、アッセイをセットアップする１日前にＩＬ−２を培地から除去した。共培養のインキュベーション時間は３７℃で２日であった。
【０２７３】
図１１に示されるように、１０ｐＭのいずれの治療タンパク質も、エフェクター細胞の非存在下で腫瘍細胞への効果がなかった。ＮＫ−９２エフェクター細胞は薬剤の非存在下では、１．５：１のＥ：Ｔ比では強い殺腫瘍細胞作用（４９％死滅）を示し、０．５：１ではあまり大きくない殺作用（１９％死滅）を示した。１０ｐＭの対照ＴＡＡ抗体−ＩＦＮ−α融合分子の存在下では、ＮＫ−９２細胞は、薬剤なしのエフェクター細胞と同等の割合で死滅させた。１０ｐＭのＩＧＮ００４を用いると、薬剤なしと比較して、ＮＫ−９２細胞による殺腫瘍細胞作用の有意な増加があった（１．５：１及び０．５：１でそれぞれ、４５％及び２９％の殺作用の増加）。これらの結果は、ＩＧＮ００４が、ＮＫ細胞が媒介する殺腫瘍細胞作用を増強できること及びＴＡＡ抗体−ＩＦＮ融合タンパク質はこの機能を発揮するために腫瘍細胞に結合しなければならないことを示す。したがって、免疫細胞機能の増強は、抗体標的抗原が発現する部位でのみ起こるはずである。
【０２７４】
実施例１３
この例では、ＮＫ−９２エフェクター細胞の殺腫瘍細胞活性を、ＩＧＮ００４又は非融合ＩＦＮ−α２ｂの存在下又は非存在下において２つのＥ：Ｔ比でＮＣＩ−Ｈ１９７５ＮＳＣＬＣ腫瘍細胞を用いて評価した。
【０２７５】
ＮＫ−９２殺腫瘍細胞作用アッセイを実施例１２に記載のように行った。腫瘍細胞を１０ｐＭのＩＧＮ００４又は１００ｐＭの非融合ＩＦＮ−α２ｂと３時間インキュベーションした後、ＮＣＩ−Ｈ１９７５細胞を標的として、ＮＫ−９２細胞をエフェクターとして用いて、共培養を２４ウェルプレートにセットアップした。次いで、治療タンパク質を洗い流さずに、Ｅ：Ｔ比が１：１又は０．３：１になるようにエフェクター細胞を加えた。ＮＫ−９２細胞を洗い、アッセイをセットアップする１日前にＩＬ−２を培地から除去した。共培養のインキュベーション時間は３７℃で４日であった。
【０２７６】
図１２に示されるように、いずれの治療タンパク質での治療も、エフェクター細胞の非存在下で腫瘍細胞への効果がなかった。ＮＫ−９２エフェクター細胞は薬剤の非存在下では、殺腫瘍細胞作用が皆無かそれに近かった。１００ｐＭの非融合ＩＦＮ−α２ｂの存在下では、ＮＫ−９２細胞は、薬剤の非存在下でのＮＫ−９２細胞と比べて多くの腫瘍細胞を死滅させた。１０ｐＭのＩＧＮ００４を用いると、薬剤なし並びに非融合ＩＦＮ−α２ｂ（１：１及び０．３：１でそれぞれ、５０％及び５１％の殺作用の増加）と比較して、ＮＫ−９２細胞による殺腫瘍細胞作用の有意な増加があった（１：１及び０．３：１でそれぞれ、８５％及び６２％の殺作用の増加）。これらの結果は、ＩＧＮ００４が、ＮＫ細胞が媒介する殺腫瘍細胞作用を増強できること及びＴＡＡ抗体−ＩＦＮ融合タンパク質が、非融合ＩＦＮ−α２ｂと比べて良好にこの効果を媒介することを示し、ＴＡＡ抗体を介してＩＦＮを腫瘍細胞表面にターゲティングすることの重要性が明らかになった。
【０２７７】
実施例１４
この例では、ＧＲＰ９４陽性Ａ１８４７卵巣がん細胞を９６ウェルプレートに蒔き、３７℃で２０時間インキュベーションして付着させた。インキュベーション後、５０ｐＭのＩＧＮ００４又は５０ｐＭの対照ＴＡＡ抗体−ＩＦＮα融合分子で腫瘍細胞を４時間処理した。４時間後、抗メソテリンＣＡＲ−Ｔ細胞を２：１のエフェクター対標的比で加えた。共培養物をさらに７２時間インキュベーションし、細胞生存率をｘＣＥＬＬｉｇｅｎｃｅ  ＲＴＣＡシステム（ＡＣＥＡバイオサイエンス社）を用いてリアルタイムでモニターした。
【０２７８】
実験全体を通して、２：１の次善最適Ｅ：Ｔ比での抗メソテリンＣＡＲ−Ｔエフェクター細胞は、腫瘍細胞単独と比較して、Ａ１８４７腫瘍細胞生存率の減少をもたらした。対照ＴＡＡ抗体−ＩＦＮα融合分子の添加は腫瘍細胞標的のＣＡＲ−Ｔ殺作用を増強しなかった。対照的に、５０ｐＭのＩＧＮ００４はＣＡＲ−ＴのＡ１８４７腫瘍細胞に対する殺作用を時間とともに増強し、結果として、Ａ１８４７＋ＣＡＲ−Ｔと比較して細胞指数の減少をもたらした。
【０２７９】
配列表
付随の配列表に列挙されるアミノ酸配列は、３７  Ｃ．Ｆ．Ｒ．  １．８２２で規定される通りに、アミノ酸の標準的な３文字表記を用いて示される。
【０２８０】
配列番号１はヒト野生型ＩＦＮ−α２ｂ分子のアミノ酸配列である。
【０２８１】
配列番号２はＩＦＮ−α２ｂ変異体分子のアミノ酸配列である。
【０２８２】
配列番号３は野生型ＩＦＮ−α１４分子のアミノ酸配列である。
【０２８３】
配列番号４は野生型ＩＦＮ−β−１ａ分子のアミノ酸配列である。
【０２８４】
配列番号５は野生型ＩＦＮ−β−１ｂ分子のアミノ酸配列である。
【０２８５】
配列番号６は抗ＨＥＲ２／ｎｅｕ抗体の重鎖をコードするアミノ酸配列である。配列番号７は抗ＨＥＲ２／ｎｅｕ抗体の軽鎖をコードするアミノ酸配列である。
【０２８６】
配列番号８は抗ＣＤ２０抗体の重鎖をコードするアミノ酸配列である。配列番号９は抗ＣＤ２０抗体の軽鎖をコードするアミノ酸配列である。
【０２８７】
配列番号１０は抗ＣＤ１３８抗体の重鎖をコードするアミノ酸配列である。配列番号１１は抗ＣＤ１３８抗体の軽鎖をコードするアミノ酸配列である。
【０２８８】
配列番号１２は抗ＧＲＰ９４抗体の重鎖をコードするアミノ酸配列である。配列番号１３は抗ＧＲＰ９４抗体の軽鎖をコードするアミノ酸配列である。
【０２８９】
配列番号１４は抗ＣＤ３３抗体の重鎖をコードするアミノ酸配列である。配列番号１５は抗ＣＤ３３抗体の軽鎖をコードするアミノ酸配列である。
【０２９０】
配列番号１６は抗ＣＤ７０抗体の重鎖可変領域をコードするアミノ酸配列である。配列番号１７は抗ＣＤ７０抗体の軽鎖をコードするアミノ酸配列である。
【０２９１】
配列番号１８〜２８は、さまざまなペプチドリンカーのアミノ酸配列である。
配列表
2018516950.tif 000033
2018516950.tif 000034
2018516950.tif 000035
2018516950.tif 000036
【図１】
2018516950.tif 000037
【図２】
2018516950.tif 000038
【図３】
2018516950.tif 000039
【図４】
2018516950.tif 000040
【図５】
2018516950.tif 000041
【図６】
2018516950.tif 000042
【図７】
2018516950.tif 000043
【図８】
2018516950.tif 000044
【図９】
2018516950.tif 000045
【図１０】
2018516950.tif 000046
【図１１】
2018516950.tif 000047
【図１２】
2018516950.tif 000048
【手続補正書】
【提出日】平成30年2月1日(2018.2.1)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】配列表
【補正方法】追加
【補正の内容】
【配列表】
2018516950000001.app
【国際調査報告】
2018516950.tif 000049
2018516950.tif 000050
2018516950.tif 000051