(57)【要約】  下記の構造式（Ｉ）（式中、Ｒ１２、Ｒ１３はＨ、Ｃ１〜Ｃ６アルキル基、Ｃ２〜Ｃ６アルケニル基、Ｃ２〜Ｃ６アルキニル基、Ｃ３〜Ｃ８シクロアルキル基、Ｃ６〜Ｃ１０アリール基、４〜１５員ヘテロ環基、及び５〜１５員へテロアリール基からなる群から選ばれ、Ｒ１４はＲ’、ＯＲ’、ＳＲ’、及びＮ（Ｒ’）２からなる群から選ばれ、Ｒ’は、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ６アルキル基、Ｃ２〜Ｃ６アルケニル基、Ｃ２〜Ｃ６アルキニル基、Ｃ３〜Ｃ８シクロアルキル基、Ｃ６〜Ｃ１０アリール基、４〜１５員ヘテロ環基、５〜１５員へテロアリール基、ヒドロキシルＣ１〜Ｃ６アルキル基、カルボキシルＣ１〜Ｃ６アルキル基、Ｃ１〜Ｃ６アルキルアミド基及びリン酸基からなる群から選ばれる。）で表されるスニチニブプロドラッグは、より良い薬物動態及び薬力学特性、より良い安全性、並びにより低い毒性を有する。[化１]2018508495.tif 000025
2018508495.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記の式（１）：
【化１】
2018508495.tif 000024
［式中、
Ｒ１２、Ｒ１３は、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ６アルキル基、Ｃ２〜Ｃ６アルケニル基、Ｃ２〜Ｃ６アルキニル基、Ｃ３〜Ｃ８シクロアルキル基、Ｃ６〜Ｃ１０アリール基、４〜１５員ヘテロ環基及び５〜１５員へテロアリール基からなる群から選ばれ、
Ｒ１４は、Ｒ’、ＯＲ’、ＳＲ’及びＮ（Ｒ’）２からなる群から選ばれ、
Ｒ’は、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ６アルキル基、Ｃ２〜Ｃ６アルケニル基、Ｃ２〜Ｃ６アルキニル基、Ｃ３〜Ｃ８シクロアルキル基、Ｃ６〜Ｃ１０アリール基、４〜１５員ヘテロ環基、５〜１５員へテロアリール基、ヒドロキシルＣ１〜Ｃ６アルキル基、カルボキシルＣ１〜Ｃ６アルキル基、Ｃ１〜Ｃ６アルキルアミド基及びリン酸基からなる群から選ばれる。］
で表される化合物又はその薬学的に許容される塩。
【請求項２】
Ｒ１２、Ｒ１３はいずれもＨであり、
Ｒ１４はＮ，Ｎ−ジメチルアミノメチル基、ｔ−ブチル基、フェニル基、ｐ−フルオロフェニル基、ビフェニル基、ジメチルアミン基、シクロプロピル基、メチル基、エチル基、プロピル基、イソプロピル基、ブチル基、イソブチル基、シクロブチル基、ペンチル基、イソペンチル基、ネオペンチル基、シクロペンチル基、１−メチルシクロブチル基、Ｎ−メチルアミン基、Ｎ−エチルアミン基、Ｎ，Ｎ−メチルエチルアミン基、ｎ−ヘキシル基、シクロヘキシル基、メチルチオ基、エチルチオ基、プロピルチオ基、イソプロピルチオ基、シクロプロピルチオ基、ブチルチオ基、イソブチルチオ基、シクロブチルチオ基、メトキシ基、エトキシ基、プロホキシ基、イソプロホキシ基、ブトキシ基、シクロブトキシ基、ペンチルケアミン基、ペンチルチオ基、ペンチルオキシ基、イソペンチルケアミン基、ネオペンチルケアミン基、ｔ−ブチルアミン基、シクロペンチルアミン基、シクロペンチルチオ基、シクロペンチルオキシ基、シクロヘキシルアミン基、シクロヘキシルチオ基、シクロへキシルオキシ基、ｐ−メトキシフェニル基、ｐ−クロロフェニル基、及びｏ−フルオロフェニル基からなる群から選ばれる、請求項１に記載の化合物又はその薬学的に許容される塩。
【請求項３】
Ｒ１２、Ｒ１３はいずれもＨであり、Ｒ１４はｔ−ブチル基、フェニル基又はｔ−ブトキシ基である、請求項１に記載の化合物又はその薬学的に許容される塩。
【請求項４】
Ｎ−［２−（ジエチルアミノ）エチル］−５−［（５−フルオロ−２−オキソ−１−（Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノ）メチルカルボキシメチル−２，３−インドリン−３−イルメチレン）］−２，４−ジメチル−１Ｈ−ピロール−３−カルボキサミド（化合物Ａ）、
Ｎ−［２−（ジエチルアミノ）エチル］−５−［（５−フルオロ−２−オキソ−１−（ｔ−ブチルカルボキシメチル）−２，３−インドリン−３−イルメチレン）］−２，４−ジメチル−１Ｈ−ピロール−３−カルボキサミド（化合物１）、
Ｎ−［２−（ジエチルアミノ）エチル］−５−［（５−フルオロ−２−オキソ−１−（フェニルカルボキシメチル）−２，３−インドリン−３−イルメチレン）］−２，４−ジメチル−１Ｈ−ピロール−３−カルボキサミド（化合物２）、
Ｎ−［２−（ジエチルアミノ）エチル］−５−［（５−フルオロ−２−オキソ−１−（１−メチルシクロブチルカルボキシメチル）−２，３−インドリン−３−イルメチレン）］−２，４−ジメチル−１Ｈ−ピロール−３−カルボキサミド（化合物３）、
Ｎ−［２−（ジエチルアミノ）エチル］−５−［（５−フルオロ−２−オキソ−１−（Ｎ−メチルアミノカルボキシメチル）−２，３−インドリン−３−イルメチレン）］−２，４−ジメチル−１Ｈ−ピロール−３−カルボキサミド（化合物４）、
Ｎ−［２−（ジエチルアミノ）エチル］−５−［（５−フルオロ−２−オキソ−１−（Ｎ−エチルアミノカルボキシメチル）−２，３−インドリン−３−イルメチレン）］−２，４−ジメチル−１Ｈ−ピロール−３−カルボキサミド（化合物５）、
Ｎ−［２−（ジエチルアミノ）エチル］−５−［（５−フルオロ−２−オキソ−１−（Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノカルボキシメチル）−２，３−インドリン−３−イルメチレン）］−２，４−ジメチル−１Ｈ−ピロール−３−カルボキサミド（化合物６）、
Ｎ−［２−（ジエチルアミノ）エチル］−５−［（５−フルオロ−２−オキソ−１−（ｔ−ブトキシカルボキシメチル）−２，３−インドリン−３−イルメチレン）］−２，４−ジメチル−１Ｈ−ピロール−３−カルボキサミド（化合物７）、
Ｎ−［２−（ジエチルアミノ）エチル］−５−［（５−フルオロ−２−オキソ−１−（エトキシカルボキシメチル）−２，３−インドリン−３−イルメチレン）］−２，４−ジメチル−１Ｈ−ピロール−３−カルボキサミド（化合物８）、
Ｎ−［２−（ジエチルアミノ）エチル］−５−［（５−フルオロ−２−オキソ−１−（シクロヘキシルカルボキシメチル）−２，３−インドリン−３−イルメチレン）］−２，４−ジメチル−１Ｈ−ピロール−３−カルボキサミド（化合物９）、
Ｎ−［２−（ジエチルアミノ）エチル］−５−［（５−フルオロ−２−オキソ−１−（メチルカルボキシメチル）−２，３−インドリン−３−イルメチレン）］−２，４−ジメチル−１Ｈ−ピロール−３−カルボキサミド（化合物１０）、
Ｎ−［２−（ジエチルアミノ）エチル］−５−［（５−フルオロ−２−オキソ−１−（シクロプロピルカルボキシメチル）−２，３−インドリン−３−イルメチレン）］−２，４−ジメチル−１Ｈ−ピロール−３−カルボキサミド（化合物１１）、
Ｎ−［２−（ジエチルアミノ）エチル］−５−［（５−フルオロ−２−オキソ−１−（イソプロピルカルボキシメチル）−２，３−インドリン−３−イルメチレン）］−２，４−ジメチル−１Ｈ−ピロール−３−カルボキサミド（化合物１２）、及び
Ｎ−［２−（ジエチルアミノ）エチル］−５−［（５−フルオロ−２−オキソ−１−（ｐ−メトキシフェニルカルボキシメチル）−２，３−インドリン−３−イルメチレン）］−２，４−ジメチル−１Ｈ−ピロール−３−カルボキサミド（化合物１３）、
からなる群から選ばれるいずれか１つである化合物又はその薬学的に許容される塩。
【請求項５】
有効量の請求項１〜４のいずれか１項に記載の化合物又はその薬学的に許容される塩と、薬学的に許容される担体とを含む、医薬組成物。
【請求項６】
癌治療薬を製造するための、請求項１〜４のいずれか１項に記載の化合物又はその薬学的に許容される塩の使用。
【請求項７】
前記癌は、転移性腎細胞癌、消化管間質腫瘍、又は肝癌である、請求項６に記載の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
［関連出願の相互参照］
本出願は、Ａｓｃｅｎｔａ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ Ｉｎｃ．によって２０１５年１月２８日に出願された発明の名称を「スニチニブプロドラッグ」とする中国特許出願第２０１５１００４５０９９．１号の優先権利益を主張し、そのすべての内容が参考として本明細書に援用される。
【０００２】
本発明は、スニチニブのプロドラッグ化合物、そのプロドラッグ化合物のいずれかを含む医薬組成物に関し、かつ、これらの化合物の使用に関する。
【背景技術】
【０００３】
スニチニブ（Ｓｕｎｉｔｉｎｉｂ）は、転移性腎細胞癌（ＭＲＣＣ）及び消化管間質腫瘍（ＧＩＳＴ）の治療薬としてＦＤＡによって承認されたマルチターゲットキナーゼ阻害剤である。市販のスニチニブは、一般的に下記の式で表されるリンゴ酸スニチニブがある。
【０００４】
【化１】
2018508495.tif 000003
【０００５】
スニチニブは、血管内皮増殖因子受容体（ＶＥＧＦＲｓ）、血小板由来増殖因子受容体、幹細胞因子受容体（ｃ−Ｋｉｔ）、ＦＭＳ−様チロシンキナーゼ−３、及びグリア細胞株由来神経栄養因子受容体（ＲＥＴ）を阻害するマルチキナーゼ阻害剤である。マルチターゲットキナーゼ阻害剤は、細胞及び腫瘍微小環境に対して同時に多重個別シグナル経路（multiple individual signal pathways）又はクロスシグナル経路（crossed signal pathways）を阻害できるため、腫瘍の増殖及び生存を駆動する複雑な多形病変（polymorphic lesion）に対して抑制作用を有し、単一のターゲッティング剤と比べて、複雑な機構を有する癌、特に固形腫瘍に顕著な影響を与える可能性が高い。
【０００６】
しかしながら、スニチニブは、臨床試験においてその他多くの癌（肝癌を含む）に対して効果を発揮できず、その失効の主要因が治療関連毒性である。例えば、スニチニブは、腎癌患者の５０％に対して顕著な毒性を有する。
【発明の概要】
【０００７】
いくつかの実施形態において、本発明は、下記の式（Ｉ）：
【０００８】
【化２】
2018508495.tif 000004
［式中、
Ｒ１２、Ｒ１３は、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ６アルキル基、Ｃ２〜Ｃ６アルケニル基、Ｃ２〜Ｃ６アルキニル基、Ｃ３〜Ｃ８シクロアルキル基、Ｃ６〜Ｃ１０アリール基、４〜１５員ヘテロ環基、及び５〜１５員へテロアリール基からなる群から選ばれ、
Ｒ１４は、Ｒ’、ＯＲ’、ＳＲ’、及びＮ（Ｒ’）２から選ばれ、
Ｒ’は、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ６アルキル基、Ｃ２〜Ｃ６アルケニル基、Ｃ２〜Ｃ６アルキニル基、Ｃ３〜Ｃ８シクロアルキル基、Ｃ６〜Ｃ１０アリール基、４〜１５員ヘテロ環基、５〜１５員へテロアリール基、ヒドロキシルＣ１〜Ｃ６アルキル基、カルボキシルＣ１〜Ｃ６アルキル基、Ｃ１〜Ｃ６アルキルアミド基及びリン酸基からなる群から選ばれる。］
で表される構造を有するスニチニブプロドラッグを提供する。
【０００９】
いくつかの実施形態において、Ｒ１２、Ｒ１３はＨであり、Ｒ１４はＮ，Ｎ−ジメチルアミノメチル基、ｔ−ブチル基、フェニル基、ｐ−フルオロフェニル基、ビフェニル基、ジメチルアミン基、シクロプロピル基、メチル基、エチル基、プロピル基、イソプロピル基、ブチル基、イソブチル基、シクロブチル基、ペンチル基、イソペンチル基、ネオペンチル基、シクロペンチル基、１−メチルシクロブチル基、Ｎ−メチルアミノ基、Ｎ−エチルアミノ基、Ｎ，Ｎ−メチルエチルアミン基、ｎ−ヘキシル基、シクロヘキシル基、メチルチオ基、エチルチオ基、プロピルチオ基、イソプロピルチオ基、シクロプロピルチオ基、ブチルチオ基、イソブチルチオ基、シクロブチルチオ基、メトキシ基、エトキシ基、プロホキシ基、イソプロホキシ基、ブトキシ基、シクロブトキシ基、ペンチルケアミン基、ペンチルチオ基、ペンチルオキシ基、イソペンチルケアミン基、ネオペンチルケアミン基、ｔ−ブチルアミン基、シクロペンチルアミン基、シクロペンチルチオ基、シクロペンチルオキシ基、シクロヘキシルアミン基、シクロヘキシルチオ基、シクロへキシルオキシ基、ｐ−メトキシフェニル基、ｐ−クロロフェニル基、及びｏ−フルオロフェニル基からなる群から選ばれる。
【００１０】
化合物は、薬学的に許容される塩に調製可能であり、又は薬学的に許容される塩である。所望の薬学的に許容される塩は、モノ、ビス、トリス、テトラキス塩などを含むが、これらに限定されない。薬学的に許容される塩は、それらの使用量及び使用濃度で非毒性である。その生理効果の発揮を阻止しなければ、化合物の物性を変更することにより、このような塩は薬理学的使用に便利なものに製造され得る。物性の有用な変更は、経粘膜投与のための融点の低下、及びより高濃度で薬物を投与するための溶解度の増加を含む。
【００１１】
いくつかの実施形態において、本発明は、式（Ｉ）の化合物の薬学的に許容される塩を提供する。式（Ｉ）の化合物とともに塩を形成可能な酸は、塩酸、硫酸などの無機酸と、酢酸、トリフルオロ酢酸、クエン酸、マレイン酸、シュウ酸、コハク酸、安息香酸、酒石酸、フマル酸、マンデル酸、アスコルビン酸、又はリンゴ酸などの有機酸と、アラニン、アスパラギン酸、リジンなどのアミノ酸と、メタンスルホン酸、ｐ−トルエンスルホン酸などのスルホン酸とを含むが、これらに限定されない。
【００１２】
いくつかの実施形態において、本発明は、式（Ｉ）の化合物又はその塩と、薬学的に許容される担体とを含む医薬組成物を提供する。
【００１３】
いくつかの実施形態において、本発明は、癌治療薬を製造するための、式（Ｉ）の化合物又はその塩の使用を提供する。一実施形態において、上記癌は、転移性腎細胞癌、消化管間質腫瘍、又は肝癌である。一実施形態において、上記化合物は、Ｎ−［２−（ジエチルアミノ）エチル］−５−［（５−フルオロ−２−オキソ−１−（Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノ）メチルカルボキシメチル−２，３−インドリン−３−イルメチレン）］−２，４−ジメチル−１Ｈ−ピロール−３−カルボキサミド（化合物Ａ）、Ｎ−［２−（ジエチルアミノ）エチル］−５−［（５−フルオロ−２−オキソ−１−（ｔ−ブチルカルボキシメチル）−２，３−インドリン−３−イルメチレン）］−２，４−ジメチル−１Ｈ−ピロール−３−カルボキサミド（化合物１）、又はＮ−［２−（ジエチルアミノ）エチル］−５−［（５−フルオロ−２−オキソ−１−（フェニルカルボキシメチル）−２，３−インドリン−３−イルメチレン）］−２，４−ジメチル−１Ｈ−ピロール−３−カルボキサミド（化合物２）、Ｎ−［２−（ジエチルアミノ）エチル］−５−［（５−フルオロ−２−オキソ−１−（１−メチルシクロブチルカルボキシメチル）−２，３−インドリン−３−イルメチレン）］−２，４−ジメチル−１Ｈ−ピロール−３−カルボキサミド（化合物３）、Ｎ−［２−（ジエチルアミノ）エチル］−５−［（５−フルオロ−２−オキソ−１−（Ｎ−メチルアミノカルボキシメチル）−２，３−インドリン−３−イルメチレン）］−２，４−ジメチル−１Ｈ−ピロール−３−カルボキサミド（化合物４）、Ｎ−［２−（ジエチルアミノ）エチル］−５−［（５−フルオロ−２−オキソ−１−（Ｎ−エチルアミノカルボキシメチル）−２，３−インドリン−３−イルメチレン）］−２，４−ジメチル−１Ｈ−ピロール−３−カルボキサミド（化合物５）、Ｎ−［２−（ジエチルアミノ）エチル］−５−［（５−フルオロ−２−オキソ−１−（Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノカルボキシメチル）−２，３−インドリン−３−イルメチレン）］−２，４−ジメチル−１Ｈ−ピロール−３−カルボキサミド（化合物６）、Ｎ−［２−（ジエチルアミノ）エチル］−５−［（５−フルオロ−２−オキソ−１−（ｔ−ブトキシカルボキシメチル）−２，３−インドリン−３−イルメチレン）］−２，４−ジメチル−１Ｈ−ピロール−３−カルボキサミド（化合物７）、Ｎ−［２−（ジエチルアミノ）エチル］−５−［（５−フルオロ−２−オキソ−１−（エトキシカルボキシメチル）−２，３−インドリン−３−イルメチレン）］−２，４−ジメチル−１Ｈ−ピロール−３−カルボキサミド（化合物８）、Ｎ−［２−（ジエチルアミノ）エチル］−５−［（５−フルオロ−２−オキソ−１−（シクロヘキシルカルボキシメチル）−２，３−インドリン−３−イルメチレン）］−２，４−ジメチル−１Ｈ−ピロール−３−カルボキサミド（化合物９）、Ｎ−［２−（ジエチルアミノ）エチル］−５−［（５−フルオロ−２−オキソ−１−（メチルカルボキシメチル）−２，３−インドリン−３−イルメチレン）］−２，４−ジメチル−１Ｈ−ピロール−３−カルボキサミド（化合物１０）、Ｎ−［２−（ジエチルアミノ）エチル］−５−［（５−フルオロ−２−オキソ−１−（シクロプロピルカルボキシメチル）−２，３−インドリン−３−イルメチレン）］−２，４−ジメチル−１Ｈ−ピロール−３−カルボキサミド（化合物１１）、Ｎ−［２−（ジエチルアミノ）エチル］−５−［（５−フルオロ−２−オキソ−１−（イソプロピルカルボキシメチル）−２，３−インドリン−３−イルメチレン）］−２，４−ジメチル−１Ｈ−ピロール−３−カルボキサミド（化合物１２）、又はＮ−［２−（ジエチルアミノ）エチル］−５−［（５−フルオロ−２−オキソ−１−（ｐ−メトキシフェニルカルボキシメチル）−２，３−インドリン−３−イルメチレン）］−２，４−ジメチル−１Ｈ−ピロール−３−カルボキサミド（化合物１３）である。
【００１４】
いくつかの実施形態において、本発明は、有効量の本発明のいずれかの化合物又はその塩若しくは医薬組成物をその必要のある患者に投与することを含む癌の治療方法を提供する。いくつかの実施形態において、上記癌は、転移性腎細胞癌、消化管間質腫瘍、又は肝癌である。
【００１５】
いくつかの実施形態において、本発明は、有効量の本発明のいずれかの化合物又はその塩若しくは医薬組成物を腫瘍細胞と接触させることを含む腫瘍細胞の成長を抑制する方法を提供する。いくつかの実施形態において、上記腫瘍細胞は、転移性腎細胞癌細胞、消化管間質腫瘍細胞、又は肝癌細胞である。
【００１６】
いくつかの実施形態において、本発明は、癌治療薬を製造するための、本発明のいずれかの化合物又はその塩の使用を提供する。いくつかの実施形態において、上記癌は転移性腎細胞癌、消化管間質腫瘍、又は肝癌である。
【００１７】
いくつかの実施形態において、本発明は、有効量の本発明のいずれかの化合物又はその塩若しくは医薬組成物をその必要のある患者に投与することを含むスニチニブの毒性を低減する方法を提供する。いくつかの実施形態において、上記癌は転移性腎細胞癌、消化管間質腫瘍、又は肝癌である。
【００１８】
本明細書において、用語「治療上有効」及び「有効量」とは、上記物質及び物質の量は、疾患又は病状の１つ以上の症状の予防、軽減又は改善、及び／又は治療対象の生存の延長に有効であることを示す。
【００１９】
投与しようとする各化合物の有効量は、標準手順で確定され得る。考えられる要因は、例えば上記化合物のＩＣ５０、上記化合物の生物学的半減期、対象の年齢、大きさ及び体重、並びに対象に関する病状などがある。これらの要因及び他の要因の重要性は、当業者にとって周知であった。一般的に、用量は、治療対象の約０．０１ｍｇ／ｋｇ〜５０ｍｇ／ｋｇの間、好ましくは０．ｌｍｇ／ｋｇ〜２０ｍｇ／ｋｇの間にあり、複数用量が採用され得る。
【００２０】
本発明の化合物は、さらに、同一の疾患を治療する他の治療剤と併用され得る。このような併用は、これらの化合物と１つ以上の他の治療剤とを異なる時間で投与すること、又はこれらの化合物と１つ以上の他の治療剤とを同時に投与することを含む。いくつかの実施形態において、本発明に係る１つ以上の化合物又は併用した他の治療剤の用量を変更することができ、例えば、当業者が周知した方法で単独使用の化合物又は治療剤に対して用量を低減することができる。
【００２１】
併用は、他の治療法、薬物、医療処置などと一緒に使用することを含み、ここで、他の療法又は処置は、本発明の化合物と異なる時間（例えば、短期間（１、２、３、４〜２４時間のような数時間）又は長期間（例えば、１〜２日、２〜４日、４〜７日、１〜４週）、又は本発明の化合物と同様の時間で適用できることが理解されよう。また、併用は、１回又は低頻度で適用される治療法又は医療処置（例えば、手術）と一緒に使用し、本発明の化合物とともに当該他の療法又は医療処置の前又は後の短期間又は長期間内で適用することを含む。いくつかの実施形態において、本発明は、同一又は異なる投与経路によって本発明の化合物と１つ以上の他の薬物治療剤とを送達するために用いられる。いかなる投与経路の併用は、２つの化合物が化学的に結合し且つ投与時にそれぞれの治療活性を維持する製剤を含むいかなる製剤の形で、本発明の化合物と１つ以上の他の薬物治療剤とを同一の投与経路によって一緒に送達することを含む。１つの態様において、当該他の薬物療法は、本発明の１つ以上の化合物と共投与され得る。共投与による併用は、合剤（co-formulation）若しくは化学的に結合した化合物の製剤を投与すること、又は短期間内で（例えば、１時間内、２時間内、３時間内、２４時間内まで）単一製剤の形で２つ以上の化合物を同一又は異なる経路によって投与することを含む。単一製剤の共投与は、例えば同一の吸入装置、同一のシリンジのような１つの装置によって送達する共投与、又は互いに対して短期間内で異なる装置による投与を含む。同一の投与経路によって送達される本発明の化合物と１つ以上の他の薬物療法との合剤は、異なる化合物を１つの製剤に組み合わせたり、化合物をそれぞれの生物活性が維持されながら化学的に結合させたりすることを含む１つの装置によって投与可能にするように材料を一緒に製造することを含む。このような化学的に結合する化合物は、２つの活性成分を分ける、インビボで基本的に維持可能又は分解可能な接続体を含んでもよい。
【００２２】
いくつかの実施形態において、本発明に係る化合物は、
Ｎ−［２−（ジエチルアミノ）エチル］−５−［（５−フルオロ−２−オキソ−１−（Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノ）メチルカルボキシメチル−２，３−インドリン−３−イルメチレン）］−２，４−ジメチル−１Ｈ−ピロール−３−カルボキサミド（化合物Ａ）、
Ｎ−［２−（ジエチルアミノ）エチル］−５−［（５−フルオロ−２−オキソ−１−（ｔ−ブチルカルボキシメチル）−２，３−インドリン−３−イルメチレン）］−２，４−ジメチル−１Ｈ−ピロール−３−カルボキサミド（化合物１）、
Ｎ−［２−（ジエチルアミノ）エチル］−５−［（５−フルオロ−２−オキソ−１−（フェニルカルボキシメチル）−２，３−インドリン−３−イルメチレン）］−２，４−ジメチル−１Ｈ−ピロール−３−カルボキサミド（化合物２）、
Ｎ−［２−（ジエチルアミノ）エチル］−５−［（５−フルオロ−２−オキソ−１−（１−メチルシクロブチルカルボキシメチル）−２，３−インドリン−３−イルメチレン）］−２，４−ジメチル−１Ｈ−ピロール−３−カルボキサミド（化合物３）、
Ｎ−［２−（ジエチルアミノ）エチル］−５−［（５−フルオロ−２−オキソ−１−（Ｎ−メチルアミノカルボキシメチル）−２，３−インドリン−３−イルメチレン）］−２，４−ジメチル−１Ｈ−ピロール−３−カルボキサミド（化合物４）、
Ｎ−［２−（ジエチルアミノ）エチル］−５−［（５−フルオロ−２−オキソ−１−（Ｎ−エチルアミノカルボキシメチル）−２，３−インドリン−３−イルメチレン）］−２，４−ジメチル−１Ｈ−ピロール−３−カルボキサミド（化合物５）、
Ｎ−［２−（ジエチルアミノ）エチル］−５−［（５−フルオロ−２−オキソ−１−（Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノカルボキシメチル）−２，３−インドリン−３−イルメチレン）］−２，４−ジメチル−１Ｈ−ピロール−３−カルボキサミド（化合物６）、
Ｎ−［２−（ジエチルアミノ）エチル］−５−［（５−フルオロ−２−オキソ−１−（ｔ−ブトキシカルボキシメチル）−２，３−インドリン−３−イルメチレン）］−２，４−ジメチル−１Ｈ−ピロール−３−カルボキサミド（化合物７）、
Ｎ−［２−（ジエチルアミノ）エチル］−５−［（５−フルオロ−２−オキソ−１−（エトキシカルボキシメチル）−２，３−インドリン−３−イルメチレン）］−２，４−ジメチル−１Ｈ−ピロール−３−カルボキサミド（化合物８）、
Ｎ−［２−（ジエチルアミノ）エチル］−５−［（５−フルオロ−２−オキソ−１−（シクロヘキシルカルボキシメチル）−２，３−インドリン−３−イルメチレン）］−２，４−ジメチル−１Ｈ−ピロール−３−カルボキサミド（化合物９）、
Ｎ−［２−（ジエチルアミノ）エチル］−５−［（５−フルオロ−２−オキソ−１−（メチルカルボキシメチル）−２，３−インドリン−３−イルメチレン）］−２，４−ジメチル−１Ｈ−ピロール−３−カルボキサミド（化合物１０）、
Ｎ−［２−（ジエチルアミノ）エチル］−５−［（５−フルオロ−２−オキソ−１−（シクロプロピルカルボキシメチル）−２，３−インドリン−３−イルメチレン）］−２，４−ジメチル−１Ｈ−ピロール−３−カルボキサミド（化合物１１）、
Ｎ−［２−（ジエチルアミノ）エチル］−５−［（５−フルオロ−２−オキソ−１−（イソプロピルカルボキシメチル）−２，３−インドリン−３−イルメチレン）］−２，４−ジメチル−１Ｈ−ピロール−３−カルボキサミド（化合物１２）、及び
Ｎ−［２−（ジエチルアミノ）エチル］−５−［（５−フルオロ−２−オキソ−１−（ｐ−メトキシフェニルカルボキシメチル）−２，３−インドリン−３−イルメチレン）］−２，４−ジメチル−１Ｈ−ピロール−３−カルボキサミド（化合物１３）からなる群から選ばれる。
【００２３】
＜医薬組成物＞
本発明は、式（Ｉ）で示された構造を有する化合物又はその薬学的に許容される塩を含有する医薬組成物をさらに提供する。上記医薬組成物に含有する式（Ｉ）で示された構造を有する化合物の組成物における重量比は、０．１〜９９．９％であり、薬学的に許容される担体の組成物における重量比は、０．１〜９９．９％である。医薬組成物は、医薬用途に適合する製剤の形で存在する。医薬製剤は、錠剤、カプセル剤、粒剤、ペレット剤、散剤、ペースト剤、懸濁剤、注射剤、粉末注射剤、坐剤、クリーム剤、滴剤、又はパッチ剤である。ここで、上記錠剤は、糖衣錠剤、フィルムコーティング錠剤、腸溶性コーティング錠剤、又は徐放性錠剤であってもよく、上記カプセル剤は、ハードカプセル剤、ソフトカプセル剤、徐放性カプセル剤であってもよく、上記粉末注射剤は、冷凍乾燥粉末注射剤であってもよい。
【００２４】
本発明の医薬組成物は、製剤として、各製剤に含有する本発明の化合物の有効量が０．１ｍｇ〜１０００ｍｇである。上記各製剤とは、各製剤単位、例えば、各錠、各カプセルを指し、ほかに、１回の投与量を指すこともできる。例えば、１回あたり１００ｍｇの投与量を指すこともできる。
【００２５】
本発明の医薬組成物は、粉剤、錠剤、分散性粉剤、カプセル剤、オブラート剤、坐剤、及び軟膏剤のような固形又は半固形医薬製剤に調製される場合、固体担体を使用することができる。使用可能な固体担体は、好ましくは希釈剤、調味剤、可溶化剤、潤滑剤、懸濁剤、結合剤、膨化剤などから選ばれる１つ以上であり、内包物質であってもよい。粉末製剤では、担体に５〜７０％の微粒化活性成分を含有する。適切な固体担体は、炭酸マグネシウム、ステアリン酸マグネシウム、タルク、ショ糖、ラクトース、ペクチン、デキストリン、デンプン、ゼラチン、メチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウム、低沸点ワックス（low boiling wax）、カカオ脂などを含む。錠剤、粉剤、オブラート剤、及びカプセル剤などは、投与しやすいため、最も有利な経口固形剤を代表する。
【００２６】
本発明の液剤は、溶液、懸濁液、及び乳液を含む。例えば、非経口投与の注射製剤は、等張性、ｐＨなどを生体の生理条件に適するように調整した水又は水・プロピレングリコール溶液の形であってもよい。また、液剤は、ポリグリコール溶液、水溶液の形に調製され得る。経口水溶液は、活性成分を水に溶解させた後、適量の着色剤、調味剤、安定剤、及び増粘剤を添加することにより調製され得る。経口に適する水懸濁液は、微粒化した活性成分を天然及び合成ガム、メチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウムなどの粘着物質、及びその他既知の懸濁剤に分散させることによって調製され得る。
【００２７】
投与及び用量の均一を容易にするために、上記医薬製剤を用量単位形態に調製することは特に有利である。製剤の用量単位形態とは、各単位に所望の治療効果を発揮可能な計算所定量の活性成分を含有し、単一用量として適する物理的に分離可能な単位を指す。このような用量単位形態は、例えば、錠剤、カプセル剤、チューブ若しくはバイアルに封入した粉剤、又はチューブ若しくはバイアルに封入した軟膏、ゲル若しくはクリーム剤のようなパッケージ形態であってもよい。
【００２８】
用量単位形態に含有する活性成分の量は変更可能であるが、一般的に、選択された活性成分の効力によって、１〜８００ｍｇの範囲に調整され得る。
【００２９】
本発明の式（Ｉ）で示された構造を有する活性化合物は、抗腫瘍薬として用いられる場合、投与量が患者の要求、治療しようとする病状の重症度、選択された化合物などによって変更され得る。
【００３０】
当業者は、常法により、ある状況に適する好ましい用量を確定することができる。一般的に、治療時に初期投与量が活性成分の最適用量より低いが、その後、投与量が最適治療効果を達するまで徐々に増加する。治療のために、１日総投与量は、１回で投与されてもよく、複数回で投与されてもよい。
【図面の簡単な説明】
【００３１】
【図１】図１は、スニチニブ及び化合物Ａを静脈投与したマウスの薬物動態学研究を示す図である。
【図２】図２は、スニチニブ及び化合物１、２を静脈投与したマウスの薬物濃度-時間曲線であり、ここで（ａ）心臓、（ｂ）肝臓、（ｃ）脾臓、（ｄ）肺、（ｅ）腎臓、（ｆ）血漿を示した。
【図３】図３は、スニチニブ及び化合物１、２を胃内投与したマウスの薬物濃度-時間曲線であり、ここで（ａ）心臓、（ｂ）血漿を示した。
【図４】図４は、スニチニブ及び化合物１、２によるｐＳＴＡＴ３の脱リン酸化作用の比較図である。
【図５】図５は、スニチニブ及び化合物１、２による異なる細胞系の細胞毒性試験を示す図であり、ここで（ａ）Ａ５４９、（ｂ）ＮＣＩ−Ｈ４６０、（ｃ）７８６−Ｏ、（ｄ）Ｃａｋｉ−１、（ｅ）ＨＴ−２９、（ｆ）ＭＣＦ−７を示した。
【図６】図６は、化合物２及ぶスニチニブを経口投与したマウスの急性毒性試験を示す図であり、ここで（ａ）２８ｍｇ／ｋｇ、（ｂ）７０ｍｇ／ｋｇ、（ｃ）１７５ｍｇ／ｋｇ、（ｄ）５０ｍｇ／ｋｇ、（ｅ）１００ｍｇ／ｋｇ、（ｆ）２００ｍｇ／ｋｇを示した。
【図７】図７は、マウスに癌細胞を異種移植してから化合物１、２及びスニチニブを皮下注射した後の平均腫瘍サイズの比較図であり、ここで（ａ）１．５ｍｇ／ｋｇ、（ｂ）７．５ｍｇ／ｋｇ、（ｃ）３０ｍｇ／ｋｇを示した。
【図８】図８は、マウスに癌細胞を異種移植してから化合物１、２及びスニチニブを経口投与した後の平均腫瘍サイズの比較図であり、ここで（ａ）５ｍｇ／ｋｇ、（ｂ）１５ｍｇ／ｋｇ、（ｃ）４５ｍｇ／ｋｇを示した。
【図９】図９は、化合物１又は化合物２による細胞形態及び生存率への影響を示す図であり、ここで（ａ）スニチニブ、化合物１及び化合物２による細胞形態への影響、（ｂ）スニチニブ、化合物１及び化合物２を異なる濃度で７８６−Ｏ細胞又はＡ５４９細胞と８時間共培養した後の細胞生存率への影響、（ｃ）スニチニブ、化合物Ａ、化合物１及び化合物２を異なる濃度でＡ５４９細胞と８時間共培養した後の細胞生存率への影響、（ｄ）スニチニブ、化合物１及び化合物２を異なる濃度でＨＵＶＥＣ細胞と８時間共培養した後の細胞生存率への影響を示した。
【図１０】図１０は、スニチニブ及び化合物２による肝要な生化学的指標への影響を示す図であり、ここで（ａ）スニチニブによるアスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ（ＡＳＴ）、アラニンアミノトランスフェラーゼ（ＡＬＴ）及びコリンエステラーゼ（ＣＨＥ）の顕著な増加、（ｂ）スニチニブによる血中尿酸及び血中尿素窒素レベルの向上と血糖の低下、（ｃ）スニチニブ及び化合物２による乳酸脱水素酵素（ＬＤＨ）、クレアチンキナーゼ（ＣＫ）、クレアチンキナーゼ−ＭＢ（ＣＫＭＢ）指標への影響を示した。
【図１１】図１１は、Ａ５４９ヒト非小細胞肺癌の細胞系を本発明の化合物で短期（８ｈ）処理した後のその生存率への影響を示す図であり、ここで（ａ）〜（ｈ）はそれぞれ化合物６〜１３を表す。
【図１２】図１２は、Ａ５４９ヒト非小細胞肺癌の細胞系を本発明の化合物で短期（８ｈ）処理してから化合物を取り除き、２４時間回復した後のその生存率への影響を示す図であり、ここで（ａ）〜（ｈ）はそれぞれ化合物６〜１３を表す。
【図１３】図１３は、Ａ５４９ヒト非小細胞肺癌の細胞系を本発明の化合物で長期（７２ｈ）処理した後のその生存率への影響を示す図であり、ここで（ａ）〜（ｈ）はそれぞれ化合物６〜１３を表す。
【発明を実施するための形態】
【００３２】
プロドラッグとは、化学構造的に改良された後にインビボで不活性又は低活性であるが、インビボで酵素処理又は非酵素処理により原薬を放出して薬理作用を発揮する化合物を指す。
【００３３】
一般的に、プロドラッグは、薬物の生物学的利用能及び安定性の向上、毒性や副作用の減少、薬物の長期間効果の促進、不快臭の隠蔽などを目的として、薬物に「親油性」、「親水性」、「能動輸送」及び「ダブルドラッグ」を与えることにより製造される。最も成功したプロドラッグ、例えばホスアンプレナビルは、「親水性」のアンプレナビルのフォスフェイト前駆体であり、現在、ＡＩＤＳの治療に広く使用されている。
【００３４】
本発明者らは、スニチニブに基づいて、スニチニブに一層優れた特性を持たせるために、スニチニブの構造を改良し、関連のプロドラッグ設計原理を利用することにより、スニチニブのプロドラッグを多く設計した。意外にも、本発明の化合物は、肝臓における濃度がスニチニブよりはるかに多く、肝癌に対してより高い殺傷力を有すると同時に、全身毒性、特に心臓毒性を低減し、副作用を軽減できることを発見した。
【００３５】
スニチニブを親化合物としてプロドラッグを製造できるが、置換基の選定及びその効果の予測が困難であった。プロドラッグに用いられる置換基は数多いが、その中から適切かつ適用可能な置換基の選択が困難であることがよく知られている。
【００３６】
本発明は、下記の式（Ｉ）：
【００３７】
【化３】
2018508495.tif 000005
［式中、
Ｒ１２、Ｒ１３は、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ６アルキル基、Ｃ２〜Ｃ６アルケニル基、Ｃ２〜Ｃ６アルキニル基、Ｃ３〜Ｃ８シクロアルキル基、Ｃ６〜Ｃ１０アリール基、４〜１５員ヘテロ環基、及び５〜１５員へテロアリール基からなる群から選ばれ、
Ｒ１４は、Ｒ’、ＯＲ’、ＳＲ’、及びＮ（Ｒ’）２からなる群から選ばれ、
Ｒ’は、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ６アルキル基、Ｃ２〜Ｃ６アルケニル基、Ｃ２〜Ｃ６アルキニル基、Ｃ３〜Ｃ８シクロアルキル基、Ｃ６〜Ｃ１０アリール基、４〜１５員ヘテロ環基、５〜１５員へテロアリール基、ヒドロキシルＣ１〜Ｃ６アルキル基、カルボキシルＣ１〜Ｃ６アルキル基、Ｃ１〜Ｃ６アルキルアミド基及びリン酸基からなる群から選ばれる。］
で表される構造を有するスニチニブプロドラッグを提供する。
【００３８】
いくつかの実施形態において、Ｒ１２、Ｒ１３はＨであり、Ｒ１４はＮ，Ｎ−ジメチルアミノメチル基、ｔ−ブチル基、フェニル基、ｐ−フルオロフェニル基、ビフェニル基、ジメチルアミン基、シクロプロピル基、メチル基、エチル基、プロピル基、イソプロピル基、ブチル基、イソブチル基、シクロブチル基、ペンチル基、イソペンチル基、ネオペンチル基、シクロペンチル基、１−メチルシクロブチル基、Ｎ−メチルアミン基、Ｎ−エチルアミン基、Ｎ，Ｎ−メチルエチルアミン基、ｎ−ヘキシル基、シクロヘキシル基、メチルチオ基、エチルチオ基、プロピルチオ基、イソプロピルチオ基、シクロプロピルチオ基、ブチルチオ基、イソブチルチオ基、シクロブチルチオ基、メトキシ基、エトキシ基、プロホキシ基、イソプロホキシ基、ブトキシ基、シクロブトキシ基、ペンチルケアミン基、ペンチルチオ基、ペンチルオキシ基、イソペンチルケアミン基、ネオペンチルケアミン基、ｔ−ブチルアミン基、シクロペンチルアミン基、シクロペンチルチオ基、シクロペンチルオキシ基、シクロヘキシルアミン基、シクロヘキシルチオ基、シクロへキシルオキシ基、ｐ−メトキシフェニル基、ｐ−クロロフェニル基、及びｏ−フルオロフェニル基から選ばれる。
【００３９】
いくつかの実施形態において、Ｒ１２、Ｒ１３はＨであり、Ｒ１４はｔ−ブチル、フェニル基又はｔ−ブトキシ基である。
【００４０】
（実施例１）
Ｎ−［２−（ジエチルアミノ）エチル］−５−［（５−フルオロ−２−オキソ−１−ヒドロキシメチル−２，３−インドリン−３−イルメチレン）］−２，４−ジメチル−１Ｈ−ピロール−３−カルボキサミド（化合物Ｘ）及びその製造方法
【００４１】
【化４】
2018508495.tif 000006
０℃で、スニチニブ（１．２５ｍｍｏｌ、０．５ｇ）が溶解したジメチルカルボキサミド（１４ｍｌ）溶液にホルムアルデヒド（３０％、４０５ｍｇ、５ｍｍｏｌ）及びトリエチルアミン（５０６ｍｇ、５ｍｍｏｌ）を加え、得られた混合物を一晩撹拌した。得られた反応混合物をさらに０℃まで冷却し、混合物に水を添加しながら撹拌した後、黄色固体沈殿を形成した。得られた沈殿をろ過、洗浄し、空気中で数日乾燥した後、４００ｍｇの生成物（化合物Ｘ）を得た（収率７５％）。
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6): 13.56 (s, 1H), 7.84 (d, 1H, J=9.2 Hz), 7.77 (s, 1H), 7.49 (t, 1H, J=5.2 Hz), 7.15〜7.00 (m, 2H), 6.35 (s, 1H), 5.24 (s, 2H), 3.31〜3.26 (m, 2H), 2.56〜2.52 (m, 6H), 2.49〜2.44 (m, 6H), 0.98 (t, 6H, J=7.2 Hz).
【００４２】
（実施例２）
Ｎ−［２−（ジエチルアミノ）エチル］−５−［（５−フルオロ−２−オキソ−１−（Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノ）メチルカルボキシメチル−２，３−インドリン−３−イルメチレン）］−２，４−ジメチル−１Ｈ−ピロール−３−カルボキサミド（化合物Ａ）及びその製造方法
【００４３】
【化５】
2018508495.tif 000007
【００４４】
実施例１で製造した化合物Ｘ（４３７ｍｇ、１．０２ｍｍｏｌ）を５ｍＬ無水ＤＭＦ及び２ｍＬピリジン（Ｐｙ）に溶解し、得られた混合物にＮ，Ｎ−ジメチルアミノピリジン（１２ｍｇ、０．１ｍｍｏｌ）、Ｎ，Ｎ−ジメチルグリシン（２０６ｍｇ、ｍｍｏｌ）及びＥＤＣ（３８４ｍｇ、２ｍｍｏｌ）を加えた。得られた混合物を室温で２時間撹拌した後、溶媒を減圧留去した。得られた生成物をＤＣＭで抽出し、塩水で洗浄した後、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、シリカゲルカラムクロマトグラフィーによりＤＣＭ／ＭｅｏＨ（ＤＣＭに０．１％Ｅｔ３Ｎが添加された）で精製した。画分を収集して真空乾燥した後、５０ｍｇ橙色固体の化合物Ａを得た（収率１０％）。
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6): 13.25 (s, 1H), 7.86 (dd, 1H, J=7.2, 2 Hz), 7.81 (s, 1H), 7.50 (t, 1H, J=4.4 Hz), 7.19(dd, 1H, J=7.2, 3.2Hz), 7.05 (td, 1H, J=7.2, 2Hz), 5.93 (s, 2H), 3.31〜3.27 (m, 4H), 3.19(s, 2H); 2.56~2.44 (m, 10H), 2.21(s, 6H), 0.98 (t, 6H, J=7.2 Hz)。
【００４５】
（実施例３）
Ｎ−［２−（ジエチルアミノ）エチル］−５−［（５−フルオロ−２−オキソ−１−（ｔ−ブチルカルボキシメチル）−２，３−インドリン−３−イルメチレン）］−２，４−ジメチル−１Ｈ−ピロール−３−カルボキサミド（化合物１）及びその製造方法
【００４６】
実施例１で製造した化合物Ｘ（１．６５ｇ、３．８６ｍｍｏｌ、１ｅｑ．）が溶解したピリジン（５０ｍＬ）溶液に、ネオペンタン酸無水物（２．８７ｇ、１５．４２ｍｍｏｌ、４ｅｑ．）及びＤＭＡＰ（５０ｍｇ）を加え、得られた混合物を室温で一晩撹拌した。その後、混合物を濃縮、乾燥した後、乾燥した残留物に飽和ＮａＨＣＯ３溶液（２０ｍＬ）を加えて、さらにＥｔＯＡｃ（２ｘ２０ｍＬ）で抽出した。有機相を合わせて乾燥（無水硫酸ナトリウム）、ろ過、濃縮し、シリカゲルカラムクロマトグラフィーによりＤＣＭ：メタノール＝１０：１で溶出した後、黄色固体である化合物１を得た（１ｇ、収率５１％、１Ｈ  ＮＭＲ、ＨＰＬＣで確認、バッチ＃：ＭＣ０９１７９−０５６−１５Ｓ）。
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6)δ13.26 (brs, 1H), 8.87 (dd, J1=9.6 Hz, J2=2.4 Hz, 1 H), 7.81 (s, 1H), 7.54-7.52 (m, 1H), 7.17-7.05 (m, 2H), 5.90 (s, 2H), 3.32-3.27 (m, 4H), 2.58-2.45 (m, 10H), 1.11 (s, 9H), 0.98 (t, J=7.2 Hz, 6H); HPLC純度: 96.27% (254 nm)。
【００４７】
（実施例４）
Ｎ−［２−（ジエチルアミノ）エチル］−５−［（５−フルオロ−２−オキソ−１−（フェニルカルボキシメチル）−２，３−インドリン−３−イルメチレン）］−２，４−ジメチル−１Ｈ−ピロール−３−カルボキサミド（化合物２）及びその製造方法
【００４８】
実施例１で製造した化合物Ｘ（１．６５ｇ、３．８６ｍｍｏｌ、１ｅｑ．）が溶解したピリジン（５０ｍＬ）溶液に、（ＰｈＣＯ）２Ｏ溶液（１．７ｇ、７．７ｍｍｏｌ、２ｅｑ．）及びＤＭＡＰ（５０ｍｇ）を加え、得られた混合物を室温で一晩撹拌した。その後、混合物を濃縮、乾燥した後、乾燥した残留物に飽和ＮａＨＣＯ３溶液（２０ｍＬ）を加えて、さらにＥｔＯＡｃ（２ｘ２０ｍＬ）で抽出した。有機相を合わせて乾燥（無水硫酸ナトリウム）、ろ過、濃縮し、シリカゲルカラムクロマトグラフィーによりＤＣＭ：メタノール＝１０：１で溶出した後、黄色固体である化合物２を得た（１．２ｇ、収率５８％、１Ｈ  ＮＭＲ、ＨＰＬＣで確認、バッチ＃：ＭＣ０９１７９−０５５−１１Ｓ）。
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6)δ13.28 (brs, 1H), 7.95-7.84 (m, 4 H), 7.67 (t, J=7.2 Hz, 1H), 7.54-7.50 (m, 3H), 7.34-7.31 (m, 1H), 7.10-7.05 (m, 1H), 6.18 (s, 2H), 3.32-3.27 (m, 4H), 2.57-2.45 (m, 10H), 0.98 (t, J=7.2 Hz, 6H); HPLC 純度: 96.86% (254 nm)。
【００４９】
（実施例５）
Ｎ−［２−（ジエチルアミノ）エチル］−５−［（５−フルオロ−２−オキソ−１−（Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノカルボキシメチル）−２，３−インドリン−３−イルメチレン）］−２，４−ジメチル−１Ｈ−ピロール−３−カルボキサミド（化合物６）及びその製造方法
【００５０】
【化６】
2018508495.tif 000008
【００５１】
実施例１で製造した化合物Ｘ（１５０ｍｇ、０．３５ｍｍｏｌ）が溶解した無水ＤＭＦ（２ｍＬ）溶液に、ＣＤＩ（６２．４ｍｇ、０．３８５ｍｍｏｌ、１．１ｅｑ）を加え、得られた混合物を室温で３０分間撹拌した。その後、混合物にトリエチルアミン（５６．７ｍｇ、０．５６ｍｍｏｌ）及び塩酸ジメチルアミン（４５．６７ｍｇ、０．５６ｍｍｏｌ）を加えて反応を行った。反応物を室温で１時間撹拌した後、得られた混合物に５ｍｌ水を加え、ＣＨ２Ｃｌ２（３Ｘ２ｍＬ）で抽出した。有機相を合わせて乾燥（無水硫酸ナトリウム）、ろ過、濃縮し、ＴＬＣ法によりＤＣＭ：ＭｅＯＨ＝１０：１で溶出して精製した後、黄色固体である化合物６を得た（２０ｍｇ、収率４５％、Ｌｏｔ＃：ＭＣ１０１８８−２０−６、１Ｈ  ＮＭＲ及びＭＳで確認、ＨＰＬＣ：９８％、２５４ｎｍ）。
1H NMR (400 MHz, CDCl3): 13.37 (1H, s), 11.58 (1H, br s), 7.92 (s, 1H), 7.36 (s, 1H), 7.14~7.18 (m, 2H), 6.88-6.93 (m, 1H), 5.91 (s, 2H), 3.97-3.91 (m, 2H), 3.25~3.31 (m, 2H), 3.15-3.20 (m, 2H), 2.99-2.30 (m, 6H), 2.64 (s, 3H), 2.57 (s, 3H), 1.57-1.59 (br s, 4H), 1.42-1.45 (m, 6H)。
【００５２】
（実施例６）
Ｎ−［２−（ジエチルアミノ）エチル］−５−［（５−フルオロ−２−オキソ−１−（ｔ−ブトキシカルボキシメチル）−２，３−インドリン−３−イルメチレン）］−２，４−ジメチル−１Ｈ−ピロール−３−カルボキサミド（化合物７）及びその製造方法
【００５３】
【化７】
2018508495.tif 000009
【００５４】
実施例１で製造した化合物Ｘ（１００ｍｇ、０．２６ｍｍｏｌ）が溶解した無水Ｐｙ（３ｍＬ）溶液に、ＤＭＡＰ（３．１６ｍｇ、０．０２６ｍｍｏｌ、０．１ｅｑ．）及びＳＭ３（１７３ｍｇ、１．０４ｍｍｏｌ）を加え、得られた混合物を室温で１６時間撹拌した。その後、混合物を濃縮、乾燥した後、乾燥した残留物に飽和ＮａＨＣＯ３溶液を加え、さらにＥＡで抽出した。有機相を合わせて乾燥、ろ過、濃縮し、シリカゲルカラムクロマトグラフィーによりＤＣＭ：ＭｅＯＨ＝１０：１で溶出して精製した後、黄色固体である化合物７を得た（８０ｍｇ、収率５８．４％、Ｌｏｔ＃：ＭＣ１０１８８−００４−６、１Ｈ  ＮＭＲ及びＭＳで確認、ＨＰＬＣ：９５．６％，２５４ｎｍ）。
1H NMR (400 MHz, CDCl3-d6): δ ppm 13.31 (bs, 1H), 7.38 (s, 1H), 7.21-7.19 (m, 1H), 7.09-7.06 (m, 1H), 6.94-6.88 (m, 1H), 6.47 (bs, 1H), 5.88 (s, 2H), 3.49-3.48 (m, 2H), 2.67 (m, 2H), 2.60-2.57(m, 7H), 2.51-2.39 (m, 3H), 1.11 (s, 9H), 1.04(t, J=7 Hz, 6H)。
【００５５】
（実施例７）
Ｎ−［２−（ジエチルアミノ）エチル］−５−［（５−フルオロ−２−オキソ−１−（エトキシカルボキシメチル）−２，３−インドリン−３−イルメチレン）］−２，４−ジメチル−１Ｈ−ピロール−３−カルボキサミド（化合物８）及びその製造方法
【００５６】
【化８】
2018508495.tif 000010
【００５７】
実施例１で製造した化合物Ｘ（１００ｍｇ、０．２６ｍｍｏｌ）が溶解した無水Ｐｙ（３ｍＬ）溶液に、ＤＭＡＰ（３．１６ｍｇ、０．０２６ｍｍｏｌ、０．１ｅｑ．）及びＳＭ２（１６９ｍｇ、１．０４ｍｍｏｌ）を加え、得られた混合物を室温で１６時間撹拌した。その後、混合物を濃縮、乾燥した後、乾燥した残留物に飽和ＮａＨＣＯ３溶液を加え、さらにＥＡで抽出した。有機相を合わせて乾燥、ろ過、濃縮し、シリカゲルカラムクロマトグラフィーによりＤＣＭ：ＭｅＯＨ＝１０：１で溶出して精製した後、黄色固体である化合物８を得た（７０ｍｇ、収率５３．８％、Ｌｏｔ＃：ＭＣ１０１８８−００２−６、１Ｈ  ＮＭＲ及びＭＳで確認、ＨＰＬＣ：９８．７％、２５４ｎｍ）。
1H NMR(400 MHz, CDCl3-d6): δ ppm 13.29 (bs, 1H), 7.38 (s, 1H),7.22-7.19 (m, 1H), 7.09-7.06 (m, 1H), 6.94-6.91 (m, 1H), 6.47 (bs, 1H), 5.94 (s, 2H), 4.26-4.21 (m, 2H), 3.51-3.47 (m, 2H), 2.67-2.63(m, 2H), 2.60-2.57 (m, 7H), 2.55-2.51 (m, 3H), 1.30(t, J=7  Hz, 3H), 1.4(t, J=7 Hz, 6H)。
【００５８】
（実施例８）
Ｎ−［２−（ジエチルアミノ）エチル］−５−［（５−フルオロ−２−オキソ−１−（シクロヘキシルカルボキシメチル）−２，３−インドリン−３−イルメチレン）］−２，４−ジメチル−１Ｈ−ピロール−３−カルボキサミド（化合物９）及びその製造方法
【００５９】
【化９】
2018508495.tif 000011
【００６０】
実施例１で製造した化合物Ｘ（１００ｍｇ、０．２６ｍｍｏｌ）が溶解した無水Ｐｙ（３ｍＬ）溶液に、ＤＭＡＰ（３．１６ｍｇ、０．０２６ｍｍｏｌ、０．１ｅｑ．）及びＳＭ４（２４８ｍｇ、１．０４ｍｍｏｌ）を加え、得られた混合物を室温で１６時間撹拌した。その後、混合物を濃縮、乾燥した後、乾燥した残留物に飽和ＮａＨＣＯ３溶液を加え、さらにＥＡで抽出した。有機相を合わせて乾燥、ろ過、濃縮し、シリカゲルカラムクロマトグラフィーによりＤＣＭ：ＭｅＯＨ＝１０：１で溶出して精製した後、黄色固体である化合物９を得た（６０ｍｇ、収率４３％、Ｌｏｔ＃：ＭＣ１０１８８−００６−６、１Ｈ  ＮＭＲ及びＭＳで確認、ＨＰＬＣ：９９％、２５４ｎｍ）。
1H NMR(400 MHz, CDCl3-d6): δ ppm 13.41 (bs, 1H), 7.39 (s, 1H), 7.22-7.18 (m, 1H), 7.04-7.01 (m, 1H), 6.93-6.89 (m, 1H), 6.47 (bs, 1H), 5.92 (s, 2H), 3.49-3.48 (m, 2H), 2.67-2.61 (m, 2H), 2.57-2.52(m, 7H), 2.47-2.45 (m, 3H), 2.36-2.35(m, 1H),1.89-1.85(m, 2 H), 1.67-1.62(m, 2 H), 1.43-1.40( m, 3 H), 1.26-1.20(m, 3H), 1.04(m, 6H)。
【００６１】
（実施例９）
Ｎ−［２−（ジエチルアミノ）エチル］−５−［（５−フルオロ−２−オキソ−１−（メチルカルボキシメチル）−２，３−インドリン−３−イルメチレン）］−２，４−ジメチル−１Ｈ−ピロール−３−カルボキサミド（化合物１０）及びその製造方法
【００６２】
【化１０】
2018508495.tif 000012
【００６３】
実施例１で製造した化合物Ｘ（１００ｍｇ、０．２６ｍｍｏｌ）が溶解した無水Ｐｙ（３ｍＬ）溶液に、ＤＭＡＰ（３．１６ｍｇ、０．０２６ｍｍｏｌ、０．１ｅｑ．）及びＳＭ１（１０６ｍｇ、１．０４ｍｍｏｌ）を加え、得られた混合物を室温で１６時間撹拌した。その後、混合物を濃縮、乾燥した後、乾燥した残留物に飽和ＮａＨＣＯ３溶液を加え、さらにＥＡで抽出した。有機相を合わせて乾燥、ろ過、濃縮し、シリカゲルカラムクロマトグラフィーによりＤＣＭ：ＭｅＯＨ＝１０：１で溶出して精製した後、黄色固体である化合物１０を得た（６０ｍｇ、収率４９％、Ｌｏｔ＃：ＭＣ１０１８８−００５−６、１Ｈ  ＮＭＲ及びＭＳで確認、ＨＰＬＣ：９６．５％、２５４ｎｍ）。
1H NMR(400 MHz, CDCl3-d6): δ ppm 13.32 (bs, 1H), 7.39 (s, 1H),7.21-7.19 (m, 1H), 7.07-7.05 (m, 1H), 6.94-6.89 (m, 1H), 6.60 (bs, 1H), 5.91 (s, 2H), 3.53-3.52 (m, 2H), 2.71-2.67 (m, 2H), 2.63-2.52(m, 7H), 2.45-2.44 (m, 3H), 2.09 (s, 3H), 1.07(s, 6H)。
【００６４】
（実施例１０）
Ｎ−［２−（ジエチルアミノ）エチル］−５−［（５−フルオロ−２−オキソ−１−（シクロプロピルカルボキシメチル）−２，３−インドリン−３−イルメチレン）］−２，４−ジメチル−１Ｈ−ピロール−３−カルボキサミド（化合物１１）及びその製造方法
【００６５】
【化１１】
2018508495.tif 000013
【００６６】
実施例１で製造した化合物Ｘ（２００ｍｇ、０．４６７ｍｍｏｌ）が溶解したピリジン（５ｍＬ）溶液に、ＤＭＡＰ（５ｍｇ）を加えた後、氷浴で化合物ＲＩ／ピリジン（２８８ｍｇ、１．８７ｍｍｏｌ、４．０ｅｑ．）を加えた。得られた混合物を室温で一晩撹拌した。混合物を濃縮した後、シリカゲルカラムクロマトグラフィーによりＤＣＭ：ＭｅＯＨ＝５０：１で溶出して精製した後、黄色固体である化合物１１を得た（１３８ｍｇ、収率６０％、Ｌｏｔ＃：ＭＣ０９１６３−０３４−Ｐ１、１Ｈ  ＮＭＲ及びＭＳで確認、ＨＰＬＣ：９９％、２５４ｎｍ）。
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6): 13.26 (s, 1H), 7.88 (dd, 1H, J=11.6 Hz), 7.82 (s, 1H), 7.52 (t, 1H, J=10.8 Hz), 7.22~7.16 (m, 1H), 7.10~7.02 (m, 1H), 5.91 (s, 2H), 3.35~3.28 (m, 2H), 2.57~2.53 (m, 4H), 2.52~2.51 (m, 8H), 1.69~1.62 (m, 1H), 0.99 (t, 6H, J=14 Hz), 0.95~0.85 (m, 4H)。
【００６７】
（実施例１１）
Ｎ−［２−（ジエチルアミノ）エチル］−５−［（５−フルオロ−２−オキソ−１−（イソプロピルカルボキシメチル）−２，３−インドリン−３−イルメチレン）］−２，４−ジメチル−１Ｈ−ピロール−３−カルボキサミド（化合物１２）及びその製造方法
【００６８】
【化１２】
2018508495.tif 000014
【００６９】
実施例１で製造した化合物Ｘ（２００ｍｇ、０．４７ｍｍｏｌ）が溶解したピリジン（５ｍＬ）溶液に、ＤＭＡＰ（５ｍｇ）を加えた後、氷浴で化合物ＲＪ／ピリジン（２９５ｍｇ、１．８７ｍｍｏｌ、４．０ｅｑ．）を加えた。得られた混合物を室温で一晩撹拌した。混合物を濃縮した後、シリカゲルカラムクロマトグラフィーによりＤＣＭ：ＭｅＯＨ＝５０：１で溶出して精製した後、黄色固体である化合物１２を得た（１３５ｍｇ、収率５８％、Ｌｏｔ＃：ＭＣ０９１６３−０４０−Ｐ、１Ｈ  ＮＭＲ及びＭＳで確認、ＨＰＬＣ：９９％、２５４ｎｍ）。
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6): 13.26 (s, 1H), 7.88 (dd, 1H, J=8.4 Hz), 7.81 (s, 1H), 7.54~7.52 (m, 1H), 7.19~7.15 (m, 1H), 7.05 (t, 1H,J=17.6 Hz), 5.89 (s, 2H), 2.58~2.56 (m, 8H), 2.48~2.44 (m, 6H), 1.06 (d, 7H, J=6.8 Hz), 1.0~0.97 (m, 6H)。
【００７０】
（実施例１２）
Ｎ−［２−（ジエチルアミノ）エチル］−５−［（５−フルオロ−２−オキソ−１−（ｐ−メトキシフェニルカルボキシメチル）−２，３−インドリン−３−イルメチレン）］−２，４−ジメチル−１Ｈ−ピロール−３−カルボキサミド（化合物１３）及びその製造方法
【００７１】
【化１３】
2018508495.tif 000015
【００７２】
実施例１で製造した化合物Ｘ（２００ｍｇ、０．４７ｍｍｏｌ）が溶解したピリジン（５ｍＬ）溶液に、ＤＭＡＰ（５ｍｇ）を加えた後、氷浴で化合物ＲＬ／ピリジン（５３４ｍｇ、１．８７ｍｍｏｌ、４．０ｅｑ．）を加えた。得られた混合物を室温で一晩撹拌した。混合物を濃縮した後、シリカゲルカラムクロマトグラフィーによりＤＣＭ：ＭｅＯＨ＝５０：１で溶出して精製した後、黄色固体である化合物１３を得た（１２０ｍｇ、収率４５％、Ｌｏｔ＃：ＭＣ０９１６３−０４１−Ｐ１、１Ｈ  ＮＭＲ及びＭＳで確認、ＨＰＬＣ：９８．９％、２５４ｎｍ）。
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6): 13.29 (s, 1H), 7.89 (d, 3H, J=8.8 Hz), 7.83 (s, 1H), 7.55 (s, 1H), 7.33~7.29 (m, 1H), 7.09~7.02 (m, 3H), 6.13 (s, 2H), 3.83 (s, 3H), 3.0~2.5 (m, 7H), 2.49~2.45 (m, 7H), 0.84 (s, 6H)。
【００７３】
（実施例１３）
化合物Ａの薬物動態試験及び安定性研究
【００７４】
＜薬物動態＞
スニチニブ及び化合物Ａをそれぞれリンゴ酸に溶解させ、得られた溶液をｐＨ＝７程度に調整した。対照群マウス（ｎ＝６）に５．１４ｍｇ／ｋｇのリンゴ酸スニチニブを尾静脈注射し、サンプルＡ群マウス（ｎ＝６）に１３ｍｇ／ｋｇの化合物Ａを尾静脈注射した。薬物の尾静脈注射から０．０８３時間、０．２５時間、０．５時間、１時間、３時間、８時間後、各群マウスを眼球摘出により採血し、かつ頸椎脱臼により屠殺した。生理食塩水で全組織を灌流し、肝・腎組織を取り出して生理食塩水で表面を洗浄した後、濾紙で乾燥させた。得られた血漿サンプルを遠心分離した後、上澄みを取った。血漿サンプルを−２０℃の温度で冷凍保存した。血漿サンプル５０μＬ及び内部標準物質（クロザピン）ワーキング溶液５０μＬをメタノール３００μＬと渦流混合させ、遠心分離した。その後、上層である有機相１５０μＬを取り出して水１５０μＬと渦流混合させ、遠心分離した後、上澄み１０μＬをサンプリングして分析した。組織サンプルを秤量し、１０倍重量の純水を加え、均一に混合した（組織サンプルが１０倍希釈したので、組織の濃度は組織サンプルの測定結果の１０倍になる。心濃度の希釈倍数は５倍である。）。均一に混合したホモジネート１００μＬと、内部標準物質（クロザピン）ワーキング溶液５０μＬと、メタノール３００μＬとを渦流混合させ、遠心分離した。その後、上層である有機相１５０μＬを取り出して水１５０μＬと渦流混合させ、遠心分離した後、上澄み１０μＬをサンプリングして分析した。
【００７５】
＜結果処理及び分析方法＞
相対摂取率（ＲＥ）＝（ＡＵＣｉ）サンプル／（ＡＵＣｉ）対照
ＡＵＣｉ（area under the curve）は、濃度−時間曲線により求めた第ｉ個の器官又は組織の曲線下面積である。ＲＥ＞１の場合には、医薬製剤が当該器官又は組織において標的指向性を有し、ＲＥが大きいほど標的効果が高くなることを示す。ＲＥ≦１の場合には、標的指向性を有しないことを示す。
相対総合ターゲティング効率（relative overall targeting efficiency、ＲＴＥ）
ＡＵＣとは、ある組織の濃度−時間曲線下面積を指す。相対総合ターゲティング効率（ＲＴＥ）とは、実験群における体内の薬物総量に対して組織内の薬物量が占める比率が、対照群における当該比率に対して増加した倍数を指す。ＲＴＥが正の値である場合、実験群では薬物が当該組織に対して標的指向性を増強する効果があり、正の値が大きいほど標的指向性を増強した倍数が大きくなることを示すが、ＲＴＥが負の値である場合はその逆であり、ＲＴＥが０である場合は当該組織に影響を与えないことを示す。
【００７６】
実験結果は、図１及び下記の表１、２に示された。
【表１】
2018508495.tif 000016
【００７７】
【表２】
2018508495.tif 000017
【００７８】
薬物動態パラメータは、Ｗｉｎｎｏｎｌｉｎソフトウェアにより計算する。マウスの薬物動態試験に複数の動物が使用されるため、濃度−時間曲線の平均値を算出した後、ソフトウェアに入力してパラメータを計算する。
【００７９】
薬物動態パラメータにおける２つの投与群のクリアランスから見ると、化合物Ａ（ｓａｍｐｌｅ  Ａ）投与群のクリアランスは、心臓、肝臓、脾臓、肺、腎臓においてそれぞれスニチニブ（Ｓ, Ｓｕｎｉｔｉｎｉｂ）投与群の７倍、３倍、５倍、５倍、４倍、４倍であることが分かった。つまり、各臓器におけるクリアランスが顕著に増大したが、肝における増大倍数が最も小い。これは、化合物Ａ（ｓａｍｐｌｅ  Ａ）による特別な代謝産物がＣＰＹ代謝酵素の誘導、又は他のクリアランス経路への影響により、スニチニブのクリアランスを増大させ、化合物Ａ（ｓａｍｐｌｅ  Ａ）投与群のスニチニブ暴露値（exposure value）の低下をもたらすためと考えられる。
【００８０】
一方、化合物Ａ（ｓａｍｐｌｅ  Ａ）は、血液に入ってから器官に到達するまでの過程においてスニチニブに代謝可能なプロドラッグであり、化合物Ａの特別な構造によりそのターゲティング分布（targeting distribution）に影響を与える可能性があるので、代謝速度が上昇しても、肝における化合物Ａの分布比率が依然として増加している。
【００８１】
また、ＲＴＥから見ると、腎のＲＴＥが０に近いが、血漿とその他の臓器のＲＴＥがいずれも１未満である一方、肝臓のＲＴＥ（０．４８）が０よりかなり高いことが分かった。このことから、化合物Ａ（ｓａｍｐｌｅ  Ａ）投与群のスニチニブ分布について、肝臓における分布比率が増加したが、その他の臓器における分布比率が低下し、すなわち、化合物Ａ（ｓａｍｐｌｅ  Ａ）は肝臓におけるスニチニブの分布を促進できることを示した。
【００８２】
以上に説明したように、化合物Ａは、各臓器及び組織におけるスニチニブの絶対暴露量（absolute exposure）を増加できないが、肝臓におけるスニチニブの分布比率を増加させ、標的指向性を向上させ、他の器官における分布を低下することができる。化合物Ａ（ｓａｍｐｌｅ  Ａ）もその他の代謝物も毒性を有しない場合、化合物Ａ（ｓａｍｐｌｅ  Ａ）は、スニチニブに対して、その他の非標的器官におけるスニチニブの毒性を低下することができる。
【００８３】
（実施例１４）
化合物１、化合物２及びスニチニブの比較実験
【００８４】
＜薬物動態＞
スニチニブ、化合物１及び化合物２をそれぞれリンゴ酸に溶解させ、得られた溶液をｐＨ＝７程度に調整した。対照群マウス（ｎ＝３６）に５．１４ｍｇ／ｋｇのリンゴ酸スニチニブを尾静脈注射し、サンプル１群マウス（ｎ＝３６）に５．１３ｍｇ／ｋｇの化合物１を尾静脈注射し、サンプル２群マウス（ｎ＝３６）に５．３２ｍｇ／ｋｇの化合物２を尾静脈注射した。各群の３６匹マウスを６グループに分け、それぞれ、薬物の尾静脈注射から０．０８３時間、０．２５時間、０．５時間、１時間、３時間、８時間後、各マウスを眼球摘出により採血し、かつ頸椎脱臼により屠殺した。生理食塩水で全組織を灌流し、肝・腎組織を取り出して生理食塩水で表面を洗浄した後、濾紙で乾燥させた。得られた血漿サンプルを遠心分離した後、上澄みを取った。血漿サンプルを−２０℃の温度で冷凍保存した。血漿サンプルの処理方法は以下の通りである。血漿サンプル５０μＬ及び内部標準物質（クロザピン）ワーキング溶液５０μＬをメタノール３００μＬと渦流混合させ、遠心分離した。その後、上層である有機相１５０μＬを取り出して水１５０μＬと渦流混合させ、遠心分離した後、上澄み１０μＬをサンプリングして分析した。組織サンプルの処理方法は以下の通りである。組織サンプルを秤量し、１０倍重量の純水を加え、均一に混合した（組織サンプルが１０倍希釈したので、組織の濃度は組織サンプルの測定結果の１０倍になる。心濃度の希釈倍数は５倍である。）。均一に混合したホモジネート１００μＬと、内部標準物質（クロザピン）ワーキング溶液５０μＬと、メタノール３００μＬとを渦流混合させ、遠心分離した。その後、上層である有機相１５０μＬを取り出して水１５０μＬと渦流混合させ、遠心分離した後、上澄み１０μＬをサンプリングして分析した。
【００８５】
実験結果は、図２及び下記の表３〜５に示された。
【表３】
2018508495.tif 000018
【００８６】
【表４】
2018508495.tif 000019
【００８７】
血漿の濃度−時間曲線により計算した薬物動態パラメータから見ると、スニチニブ対照物が最も長い半減期（１．２４時間）を有し、化合物１と化合物２が同じ程度の半減期（１時間以内）を有し、すなわち化合物１、２によるスニチニブのクリアランスが比較的速いことが分かった。Ｃｍａｘから見ると、化合物１、２は、ＣｍａｘがいずれもスニチニブのＣｍａｘより高く、すなわちスニチニブ対照群の約５倍であるが、ＡＵＣがスニチニブと大差ないので、化合物１、２の濃度−時間曲線がスニチニブより急勾配となっていることが分かった。また、見かけの分布容積は、３５０〜５００ｍＬの範囲にあるので、組織における分布が明らかに広いことが分かった。
【００８８】
【表５】
2018508495.tif 000020
【００８９】
相対摂取率（ＲＥ）の分析から、図２に示すように、血漿がＲＥ＞１、すなわち、当該投与濃度下で血漿における相対摂取率が向上したが、他の臓器における相対摂取率が低下したことが分かった。
【００９０】
相対総合ターゲティング効率（ＲＴＥ）の分析から、図２に示すように、化合物１は肝、脾における分布比率が向上したが、化合物２は脾及び肺における分布比率が向上し、心、腎における分布比率が低下し、血漿における分布比率が大幅に向上したことが分かった。
【００９１】
化合物の処理において、脾以外の器官ではプロドラッグが検出されなかった。以前の実験により、化合物１、２は、メタノール保存液において安定（安定性測定時間：７日）であるが、バイオマスと共存する場合に分解されやすいことが証明された。これは、処理過程中又は体内でプロドラッグがスニチニブ又は他の構造に代謝されたためと考えられる。
【００９２】
＜薬物動態研究＞
スニチニブが患者に経口投与される薬であるため、スニチニブと化合物１、２の経口投与剤について薬物動態研究を行った。スニチニブ、化合物１及び化合物２をそれぞれリンゴ酸に溶解させ、得られた溶液をｐＨ＝７程度に調整した。リンゴ酸スニチニブを純水で溶解させた。２０ｍｇ／ｋｇの投与量で対照群マウス（ｎ＝２４）にリンゴ酸スニチニブを、１９．２４８ｍｇ／ｋｇの投与量でサンプル１群マウス（ｎ＝２４）に化合物１を、２０ｍｇ／ｋｇの投与量でサンプル２群マウス（ｎ＝２４）に化合物２を胃内投与した。動物実験として、各群の２４匹マウスを８グループに分け、それぞれ、胃内投与から０．２５時間、０．５時間、１時間、１．５時間、２時間、４時間、６時間、１０時間後、各マウスを眼球摘出により採血し、かつ頸椎脱臼により屠殺した。生理食塩水で全組織を灌流し、肝・腎組織を取り出して生理食塩水で表面を洗浄した後、濾紙で乾燥させた。得られた血漿サンプルを遠心分離した後、上澄みを取った。血漿サンプルを−２０℃の温度で冷凍保存した。
【００９３】
実験結果は、図３及び下記の表６、７に示された。
【表６】
2018508495.tif 000021
【００９４】
【表７】
2018508495.tif 000022
【００９５】
胃内投与の実験結果では動物によって大きな差異があるが、静脈投与の場合は動物によって差異が小さくなった。これは、胃腸吸収による差異が大きいためと考えられる。化合物１、２では、スニチニブ対照群と比べて、ＡＵＣが約３．５倍増加しただけでなく、Ｃｍａｘも対照群よりはるかに高い。このことから、改良した化合物１、２は、スニチニブの吸収度を向上させることが分かった。また、計算した絶対生物学的利用能から見ると、化合物１、２は約５０％の高い生物学的利用能を有するが、スニチニブ投与群は１５％の低い生物学的利用能を有することが分かった。見かけの分布容積から見ると、スニチニブ対照群はより高い見かけの分布容積を有し、胃内投与後のより高い組織蓄積性を示したが、化合物１、２は心臓における蓄積割合は低下したことが分かった。
【００９６】
（実施例１５）
化合物１、化合物２及びスニチニブの薬力学及び毒性学の比較実験
【００９７】
＜細胞系及び培養方法＞
Ａ５４９ヒト非小細胞肺癌細胞系、ＮＣＩ−Ｈ４６０ヒト非小細胞肺癌細胞株、７８６−Ｏヒト腎細胞癌細胞系、Ｃａｋｉ−１ヒト腎細胞癌細胞系、ＨＴ−２９ヒト結腸癌細胞系、ＭＤＡ−ＭＢ−２３１ヒト乳癌細胞系、ＭＣＦ−７ヒト乳癌細胞系は、Chinese Academy of Science Shanghai Branchから購入された。ＰＬＣ／ＰＲＦ−５のヒト肝癌細胞株及びＨｅｐａ１−６マウス肝癌細胞株は、Institute of Biochemistry and Cell Biology（ＳＩＢＣＢ）から得られた。細胞系Ａ５４９、Ｃａｋｉ−１、ＨＴ−２９、ＭＤＡ−ＭＢ−２３１、ＭＣＦ−７、ＰＬＣ／ＰＲＦ−５及びＨｅｐａ１−６は、ＤＭＥＭ培地（Gibco, Life Technologies、中国）で培養され、細胞系ＮＣＩ−Ｈ４６０、７８６−Ｏは、ＲＰＭＩ−１６４０培地（Gibco, Life Technologies、中国）で培養された。１０％ＨＩウシ胎児血清はGibco, Life Technologies, 米国から得られ、１％ペニシリン／ストレプトマイシンはHyclone社から得られた。
【００９８】
９６ウエルプレートの各穴に、約２０００個の細胞が培養された完全培地５０μｌを入れ、３７℃で（５％ＣＯ２）一晩培養した。０．０２〜１０μＭの範囲にある異なる濃度の薬物を０．１％ＤＭＳＯに溶解させた後、各穴に入れた。７２時間培養した後、各穴にＣＣＫ８試薬（Dojindo社）１０μＬを入れた。さらに３７℃で４時間培養した後、ＴＥＣＡＮマイクロプレートリーダにより４５０ｎｍでＯＤ値を測定した。
【００９９】
＜化合物の処理＞
インビトロ測定では、化合物を濃度１０ｍＭのＤＭＳＯに溶解させ、−２０℃で保存した。一方、インビボ測定では、化合物をＤＭＳＯとツイン８０（ＤＭＳＯ：ツイン８０＝１：１）に溶解させた後、ＰＢＳ（ｐＨ７．４）で中和した。ＤＭＳＯ及びツイン８０（Ｔｗｅｅｎ−８０）の最終濃度は、５％に希釈された。
【０１００】
＜ＭＥＫ、ＥＲＫ及びＳＴＡＴ３リン酸化への影響＞
スニチニブは、ＲＴＫ阻害剤であり、ＲＡＳ／ＲＡＦ／ＭＡＰＫなどの様々なシグナル経路を阻害可能である。そのため、ＭＥＫ、ＥＲＫ及びＳＴＡＴ３を含む主要な下流タンパク（downstream protein）について分析を行った。ｐＳＴＡＴ３、スニチニブ及びプロドラッグ化合物２について、１０μＭの濃度でＡ５４９細胞系（図４）に対する強い阻害作用を示した。これらの結果から、プロドラッグ化合物とスニチニブとは、同一の抗腫瘍メカニズムを有することを示した。
研究結果によれば、スニチニブ及び３種類のプロドラッグ（化合物１、２及び化合物Ａ）は、いずれもインビトロで強い殺腫瘍細胞効果を示した。スニチニブのＩＣ５０と化合物１、２のＩＣ５０とは、様々な細胞系において類似している（図５ａ〜ｆ）。これらの結果により、スニチニブ及び化合物１、２は、いずれも強い細胞毒性を有することが証明された。
【０１０１】
しかしながら、スニチニブと異なり、化合物１、２で処理された細胞は、培養中で細胞の形態変化がより速いことが観察された。化合物１、２とともに４時間培養された癌細胞は円形に変形して応力による影響を受けやすいが、スニチニブで処理された細胞は細長形かつ正常細胞と同様な形態で付着を維持することができる（図９ａ）。化合物１、２とともに８時間培養された細胞は、大量の細胞死が観察されたが、スニチニブで８時間処理した後で細胞生存率への影響が見られなかった（図９ｂ）。このことから、化合物１、２はスニチニブよりも快速かつ不可逆的に癌細胞を殺傷し得ることを示した。また、化合物Ａは、化合物１、２に類似して、快速な殺癌細胞活性を持つことが見られた（図９ｃ）。スニチニブはインビボで腫瘍血管内皮細胞を主要な標的とするため、ヒト臍帯静脈内皮細胞（ＨＵＶＥＣ）を用いて化合物１、２の細胞毒性を測定した。７８６−Ｏ及びＡ５４９細胞の観察結果に類似して、化合物１、２で８時間処理した後、５０％未満のＨＵＶＥＣの生存が見られた（図９ｄ）。
【０１０２】
＜急性毒性試験：最大耐性量（ＭＴＤ）の測定＞
本試験は、平均重量が１７ｇ以上で、４〜５週齢の雌性ＢＡＬＢ／ｃマウスを用いた。薬物を３つの投与量（２８ｍｇ／ｋｇ、７０ｍｇ／ｋｇ、１７５ｍｇ／ｋｇ）で動物に１日１回経口投与することを１４日間持続した。各マウスの体重及び条件を記録した。
【０１０３】
試験結果（図６ａ〜ｃ）によれば、２８ｍｇ／ｋｇ及び７０ｍｇ／ｋｇの濃度では、スニチニブ及び３種類の化合物による動物の体重への影響が少なく、かつすべてのマウスが正常と認められた。しかしながら、投与量が１７５ｍｇ／ｋｇまで増加された場合、スニチニブでは強い毒性を示し、マウスの平均重量を１７．６％減少させたが、化合物２投与群では、マウスの重量が平均で６．０％増加した。また、スニチニブの１７５ｍｇ／ｋｇ投与群では、試験の全過程においてマウスの行動が極めて弱いが、化合物２の１７５ｍｇ／ｋｇ投与群では、マウスの行動が陰性対照群に類似した。そのため、急性毒性試験から、マウスは化合物２に対してより良い生存性を持つことを示した。
【０１０４】
さらなる急性毒性試験では、スニチニブ及び３種類の化合物を３つの投与量（５０ｍｇ／ｋｇ、１００ｍｇ／ｋｇ、２００ｍｇ／ｋｇ）で動物に１日１回経口投与した。試験結果によれば、５０ｍｇ／ｋｇの濃度では、スニチニブ及び３種類の化合物による動物の体重への影響が少なく、かつすべてのマウスが正常と認められ、１００ｍｇ／ｋｇの濃度では、化合物２による動物の体重への影響が少なく、かつすべてのマウスが正常と認められ、１００ｍｇ／ｋｇの濃度では、スニチニブによる動物の体重への影響がはじめて見られたが、マウス体重の変化がなかった一方、投与量が２００ｍｇ／ｋｇまで増加された場合、スニチニブでは強い毒性を示し、平均重量を約２０％減少させたが、化合物２投与群では、重量が平均で６．０％増加したことが明らかになった（図６ｄ〜ｆ）。また、スニチニブの２００ｍｇ／ｋｇ投与群では、試験の全過程においてマウスの行動が極めて弱いが、化合物２の２００ｍｇ／ｋｇ投与群では、マウスの行動が陰性対照群に類似した。そのため、急性毒性試験から、マウスは化合物２に対してより良い生存性を持つことをさらに示した。
【０１０５】
その毒性をさらに検討するために、薬物で１４日間処理した後、血液サンプルを採取して肝要な生化学的指標を分析した。２００ｍｇ／ｋｇのスニチニブで処理されたマウスでは、アスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ（ＡＳＴ）、アラニンアミノトランスフェラーゼ（ＡＬＴ）及びコリンエステラーゼ（ＣＨＥ）の顕著な向上（図１０ａ）から、肝臓、心臓、腎臓又はその他の組織における毒性の存在可能性が明らかになり、尿酸及び血中尿素窒素レベルの向上及び血糖の低下（図１０ｂ）から、腎臓毒性の存在可能性が明らかになり、乳酸脱水素酵素（ＬＤＨ）、クレアチンキナーゼ（ＣＫ）、クレアチンキナーゼ−ＭＢ（ＣＫＭＢ）の顕著な向上（図１０ｃ）から、心臓又は他の器官における毒性の存在可能性が明らかになった。それに対して、２００ｍｇ／ｋｇの化合物２で処理されたマウスでは、ＡＳＴ及びＡＬＴを除いて、以上の指標がいずれも正常範囲にあった（図１０ｃ）。これらのデータは、化合物２の毒性、特に心臓、肝臓又は腎臓毒性がスニチニブよりも小さいという結論をさらに証明した。
【０１０６】
＜マウス異種移植モデルに対する薬効試験＞
まず、５×１０６癌細胞をマウスの右脇皮下に注射した。平均腫瘍サイズが一定のサイズ（７５〜１５０ｍｍ３）に到達するときに、１．５ｍｇ／ｋｇ、７．５ｍｇ／ｋｇ、３０ｍｇ／ｋｇの用量で薬物を腹腔内に１日１回注射することを２週間持続した。隔日に腫瘍のサイズを測定した。測定結果により、図７に示すように、化合物２はスニチニブよりも優れた治療効果を有するが、化合物１より効果が弱いことが明らかになった。
【０１０７】
その後、５×１０６癌細胞を各マウスの右脇皮下に注射して、経口投与実験を行った。平均腫瘍サイズが一定のサイズ（７５〜１５０ｍｍ３）に到達するときに、５ｍｇ／ｋｇ、１５ｍｇ／ｋｇ、４５ｍｇ／ｋｇの用量で薬物を１日１回経口投与することを２週間持続した。隔日に腫瘍のサイズを測定した。測定結果により、図８に示すように、同様に化合物２がスニチニブよりも優れた治療効果を有することが明らかになった。
【０１０８】
（実施例１６）
他の化合物の殺腫瘍細胞効果
【０１０９】
＜化合物の８時間（短期間）殺細胞効果＞
細胞系及び培養方法は以下の通りである。Ａ５４９ヒト非小細胞肺癌細胞系をＤＭＥＭ培地（Gibco、Life Technologies社、中国）、１０％  ＨＩウシ胎児血清（Gibco社、Life Technologies社、米国）及び１％ペニシリン／ストレプトマイシン（Hyclone社）で培養した。
【０１１０】
９６ウエルプレートの各穴に、約２０００個の細胞が培養された完全培地５０μｌを入れ、３７℃で（５％ＣＯ２）一晩培養した。２．５μＭ、５μＭ及び１０μＭ濃度の薬物を０．１％ＤＭＳＯに溶解させた後、各穴に入れた。８時間培養した後、各穴にＣＣＫ８試薬（Dojindo社）１０μＬを入れた。さらに３７℃で４時間培養した後、ＴＥＣＡＮマイクロプレートリーダにより４５０ｎｍでＯＤ値を測定した。
【０１１１】
化合物の処理は以下の通りである。インビトロ測定において、化合物を１０ｍＭのＤＭＳＯに直接溶解し、−２０℃で保存した。
【０１１２】
測定結果によれば、図１１ａ〜ｈに示すように、これらの化合物の短期間処理による細胞生存率への顕著な影響が見られないことを示した。
【０１１３】
＜化合物の８時間処理、２４時間回復後の殺細胞効果＞
【０１１４】
細胞系及び培養方法は以下の通りである。Ａ５４９ヒト非小細胞肺癌細胞系をＤＭＥＭ培地（Gibco、Life Technologies社、中国）、１０％  ＨＩウシ胎児血清（Gibco社、Life Technologies社、米国）及び１％ペニシリン／ストレプトマイシン（Hyclone社）で培養した。
【０１１５】
９６ウエルプレートの各穴に、約２０００個の細胞が培養された完全培地５０μｌを入れ、３７℃で（５％ＣＯ２）一晩培養した。２．５μＭ、５μＭ及び１０μＭ濃度の薬物を０．１％ＤＭＳＯに溶解させた後、各穴に入れた。８時間培養した後、化合物が存在しない完全培地１００μｌに置き換えた後、２４時間培養した。その後、各穴にＣＣＫ８試薬（Dojindo社）１０μＬを入れた。さらに３７℃で４時間培養した後、ＴＥＣＡＮマイクロプレートリーダにより４５０ｎｍでＯＤ値を測定した。
【０１１６】
化合物の処理は以下の通りである。インビトロ測定において、化合物を１０ｍＭのＤＭＳＯに直接溶解し、−２０℃で保存した。
【０１１７】
測定結果によれば、図１２ａ〜ｈに示すように、これらの化合物で同じ時間（８時間）処理してから２４時間後、細胞生存率への濃度依存的な影響ははじめて見られることを示した。これは、化合物が細胞に侵入する速度が低いので、遅延した活性を示すためと考えられる。
【０１１８】
＜化合物の７２時間（長期間）殺細胞効果＞
細胞系及び培養方法は以下の通りである。Ａ５４９ヒト非小細胞肺癌細胞系をＤＭＥＭ培地（Gibco、Life Technologies社、中国）、１０％  ＨＩウシ胎児血清（Gibco社、Life Technologies社、米国）及び１％ペニシリン／ストレプトマイシン（Hyclone社）で培養した。
【０１１９】
９６ウエルプレートの各穴に、約２０００個の細胞が培養された完全培地５０μｌを入れ、３７℃で（５％ＣＯ２）一晩培養した。０．０２〜１０μＭの範囲にある異なる濃度の薬物を０．１％ＤＭＳＯに溶解させた後、各穴に入れた。２時間培養した後、各穴にＣＣＫ８試薬（Dojindo社）１０μＬを入れた。さらに３７℃で４時間培養した後、ＴＥＣＡＮマイクロプレートリーダにより４５０ｎｍでＯＤ値を測定した。
【０１２０】
化合物の製造は以下の通りである。インビトロ測定において、化合物を１０ｍＭのＤＭＳＯに直接溶解し、−２０℃で保存した。
【０１２１】
測定結果によれば、表８及び図１２ａ〜ｈに示すように、これらの化合物はいずれも濃度依存的な優れた腫瘍抑制活性を有することを示した。
【０１２２】
【表８】
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【０１２３】
以上の実験結果により、下記の（１）〜（３）が見られた。
（１）本発明に係るスニチニブプロドラッグは、より良い薬物動態及び薬力学を有する。具体的に、マウスに対する静脈注射後の薬物動態研究によれば、化合物１、２は、スニチニブと比べて、Ｃｍａｘがはるかに大きいが、ＡＵＣが大差ないことが明らかになった。マウスに対する胃内投与後の薬物動態研究によると、化合物１、２は、スニチニブと比べて、Ｃｍａｘ及びＡＵＣがはるかに大きいことが明らかになった。
（２）本発明に係るスニチニブプロドラッグは、より良い安全性を有する。具体的に、化合物２は、スニチニブと比べて肝臓において比較的高い分布比率を示した。一方、化合物２は、スニチニブと比べて他の器官、特に心臓において比較的低い分布比率を示した。３種類のプロドラッグ化合物が心臓において比較的低い薬物濃度を有することで、本発明に係るスニチニブプロドラッグは、全身毒性、特に心臓毒性を効果的に低減可能であり、より良い安全性、持続した薬物濃度を有することが証明された。
（３）本発明に係るスニチニブプロドラッグはより良い治療効果を有する。具体的に、マウス異種移植モデルによる研究によれば、スニチニブプロドラッグは、スニチニブより良い治療効果を有する。本発明に係るスニチニブプロドラッグは、スニチニブと比べて肝臓において比較的高い分布を示すが、心臓において比較的低い分布を示し、かつより良い腫瘍治療効果を有する。
そのため、本発明に係るスニチニブプロドラッグは、癌治療においてより良い薬効を有するとともにより低い毒性・副作用を有するので、臨床試験でスニチニブが使用不能な肝癌に適用でき、有効性及び低毒性を兼備した抗腫瘍剤の開発のためのリード化合物として有用である。
【０１２４】
本明細書で援用したすべての特許文献び非特許文献は、当業者の技術レベルを示すものであり、各文献が個々に記された場合と同程度に、そのすべての表及び図を含む開示内容の全体を参照として本明細書中に援用されて取り込まれる。
【０１２５】
また、マーカッシュグループ又はその他の代替グループの形で本発明の特徴又は態様を説明するときに、同様に当該マーカッシュグループ又はその他の代替グループにおける如何なる単一のメンバ若しくはサブグループのメンバの形で本発明を説明することは当業者にとって明らかであろう。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【国際調査報告】
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