(57)【要約】  本発明は、ＨＥＲ２／ｎｅｕに特異的に結合する第１の分子と、免疫チェックポイントに関与する細胞表面受容体（又はそのリガンド）に特異的に結合する第２の分子とを含む、医薬組成物に関する。本発明は特に、上記第２の分子がＰＤ−１に結合する実施形態に関する。本発明はまた、癌及び他の疾患を治療するための、このような医薬組成物の使用にも関する。【選択図】図８
2018516966.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
癌を治療する方法であって、
前記方法を必要とする被験者に：
（ａ）配列番号４のアミノ酸配列を有する軽鎖可変ドメインと、配列番号９、配列番号１１及び配列番号１３からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する重鎖とを備える、変異型キメラ４Ｄ５抗体；並びに
（ｂ）免疫チェックポイントを調節する細胞表面受容体又はそのリガンドに特異的に結合する、分子
を投与するステップを含む、方法。
【請求項２】
免疫チェックポイントを調節する細胞表面受容体又はそのリガンドに特異的に結合する前記分子は、抗ＰＤ−１抗体又はその抗原結合断片である、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記抗ＰＤ−１抗体又は抗原結合断片は：
（ａ）ニボルマブ、ペンブロリズマブ、ピディリズマブ、抗体ＥＨ１２．２Ｈ７、抗体ｈＰＤ−１  ｍＡｂ  ２、抗体ｈＰＤ−１  ｍＡｂ  ７、抗体ｈＰＤ−１  ｍＡｂ  ９、抗体ｈＰＤ−１  ｍＡｂ  １５、若しくは表１から選択される抗ＰＤ−１抗体とのＰＤ−１結合に関して競合する；又は
（ｂ）ニボルマブ、ペンブロリズマブ、ピディリズマブ、抗体ＥＨ１２．２Ｈ７、抗体ｈＰＤ−１  ｍＡｂ  ２、抗体ｈＰＤ−１  ｍＡｂ  ７、抗体ｈＰＤ−１  ｍＡｂ  ９、抗体ｈＰＤ−１  ｍＡｂ  １５、若しくは表１から選択される抗ＰＤ−１抗体の、３つの重鎖ＣＤＲ及び３つの軽鎖ＣＤＲを有する；又は
（ｃ）ニボルマブ、ペンブロリズマブ、ピディリズマブ、抗体ＥＨ１２．２Ｈ７、抗体ｈＰＤ−１  ｍＡｂ  ２、抗体ｈＰＤ−１  ｍＡｂ  ７、抗体ｈＰＤ−１  ｍＡｂ  ９、抗体ｈＰＤ−１  ｍＡｂ  １５、若しくは表１から選択される抗ＰＤ−１抗体の、重鎖可変ドメイン及び軽鎖可変ドメインを有する、請求項２に記載の方法。
【請求項４】
前記抗ＰＤ−１抗体又はその抗原結合断片は、Ｆｃ領域を備える、請求項２又は３に記載の方法。
【請求項５】
前記抗ＰＤ−１抗体又はその抗原結合断片は、前記Ｆｃ領域にＡＤＣＣ活性を低減する少なくとも１つの修飾を有する、変異型Ｆｃ領域を備える、請求項４に記載の方法。
【請求項６】
前記抗ＰＤ−１抗体は、ニボルマブ、ペンブロリズマブ、ピディリズマブ、抗体ＥＨ１２．２Ｈ７、抗体ｈＰＤ−１  ｍＡｂ  ２、抗体ｈＰＤ−１  ｍＡｂ  ７、抗体ｈＰＤ−１  ｍＡｂ  ９、抗体ｈＰＤ−１  ｍＡｂ  １５、又は表１から選択される抗ＰＤ−１抗体の抗原結合断片である、請求項２〜５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項７】
前記変異型キメラ４Ｄ５抗体は、３週間毎におよそ６〜１８ｍｇ／ｋｇの投薬量で投与され、前記抗ＰＤ−１抗体は、３週間毎におよそ２００ｍｇの固定投薬量で投与される、請求項２〜６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項８】
前記変異型キメラ４Ｄ５抗体は、３週間毎におよそ６〜１８ｍｇ／ｋｇの投薬量で投与され、前記抗ＰＤ−１抗体は、３週間毎におよそ１〜１０ｍｇ／ｋｇの投薬量で投与される、請求項２〜６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項９】
前記変異型キメラ４Ｄ５抗体は、３週間毎におよそ６ｍｇ／ｋｇ、１０ｍｇ／ｋｇ、１５ｍｇ／ｋｇ及び１８ｍｇ／ｋｇから選択される投薬量で投与される、請求項７又は８に記載の方法。
【請求項１０】
前記抗ＰＤ−１抗体は、３週間毎におよそ１ｍｇ／ｋｇ、２ｍｇ／ｋｇ、３ｍｇ／ｋｇ及び１０ｍｇ／ｋｇから選択される投薬量で投与される、請求項８又は９に記載の方法。
【請求項１１】
前記変異型キメラ４Ｄ５抗体、及び免疫チェックポイントを調節する細胞表面受容体又はそのリガンドに特異的に結合する前記分子は、単一の医薬組成物中で、前記被験者に同時に投与される、請求項１〜１０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１２】
前記変異型キメラ４Ｄ５抗体、及び免疫チェックポイントを調節する細胞表面受容体又はそのリガンドに特異的に結合する前記分子は、別個の医薬組成物中で、前記被験者に同時に投与され、
前記別個の組成物は２４時間の期間内に投与される、請求項１〜１０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１３】
前記変異型キメラ４Ｄ５抗体、及び免疫チェックポイントを調節する細胞表面受容体又はそのリガンドに特異的に結合する前記分子は、別個の医薬組成物中で、前記被験者に順次投与され、
２番目に投与される前記組成物は、最初に投与される前記組成物の投与の少なくとも２４時間以上後に投与される、請求項１〜１０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１４】
前記癌は、ＨＥＲ２／ｎｅｕを発現する癌である、請求項１〜１３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１５】
前記癌は、ＨＥＲ２／ｎｅｕを発現する、乳癌、胃癌、前立腺癌、子宮癌、卵巣癌、結腸癌、子宮内膜癌、副腎癌、非小細胞肺癌、頭頸部癌、喉頭癌、肝臓癌、腎臓癌、神経膠芽腫、又は膵臓癌である、請求項１３に記載の方法。
【請求項１６】
前記治療は、第３の治療剤を投与するステップを更に含み、
前記第３の治療剤は、抗新生物剤、化学療法剤及び細胞傷害剤からなる群から選択される、請求項１〜１５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１７】
前記第３の治療剤は、前記変異型キメラ４Ｄ５抗体及び／又は免疫チェックポイントを調節する細胞表面受容体又はそのリガンドに特異的に結合する前記分子と同時に投与される、請求項１６に記載の方法。
【請求項１８】
前記第３の治療剤は、前記変異型キメラ４Ｄ５抗体及び／又は免疫チェックポイントを調節する細胞表面受容体又はそのリガンドに特異的に結合する前記分子とは別個に投与される、請求項１６に記載の方法。
【請求項１９】
前記変異型キメラ４Ｄ５抗体はマルゲツキシマブである、請求項１〜１８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２０】
前記抗ＰＤ−１抗体はペンブロリズマブである、請求項２〜１９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２１】
前記抗ＰＤ−１抗体はニボルマブである、請求項２〜１９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２２】
前記抗ＰＤ−１抗体はピディリズマブである、請求項２〜１９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２３】
前記抗ＰＤ−１抗体はＥＨ１２．２Ｈ７である、請求項２〜１９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２４】
前記抗ＰＤ−１抗体はｈＰＤ−１  ｍＡｂ  ２である、請求項２〜１９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２５】
前記抗ＰＤ−１抗体はｈＰＤ−１  ｍＡｂ  ７である、請求項２〜１９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２６】
前記抗ＰＤ−１抗体はｈＰＤ−１  ｍＡｂ  ９である、請求項２〜１９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２７】
前記抗ＰＤ−１抗体はｈＰＤ−１  ｍＡｂ  １５である、請求項２〜１９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２８】
前記抗ＰＤ−１抗体は、表１から選択される、請求項２〜１９のいずれか１項に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願の相互参照
米国仮特許出願第６２／１７５，０３９号（２０１５年６月１２日出願；係属中）、第６２／２１１，１０９号（２０１５年８月２８日出願；係属中）、及び第６２／２４２，６４０号（２０１５年１０月１６日出願；係属中）に対する優先権を主張するものであり、これらの出願は、参照によりその全体が本出願に援用される。
【０００２】
配列表の参照
本出願は、連邦規則法典第３７巻第１．８２１節以下による１つ又は複数の配列表を含み、これらの配列表は、コンピュータ可読媒体（ファイル名：１３０１＿０１２０ＰＣＴ＿ＳＴ２５．ｔｘｔ、２０１６年５月２３日作成、サイズ：８２，２８９バイト）において開示されており、上記ファイルは参照によりその全体が本出願に援用される。
【０００３】
本発明は、ＨＥＲ２／ｎｅｕに特異的に結合する第１の分子と、免疫チェックポイントに関与する細胞表面受容体（又はそのリガンド）に特異的に結合する第２の分子とを含む、医薬組成物に関する。本発明は特に、上記第２の分子がＰＤ−１に結合する実施形態に関する。本発明はまた、癌及び他の疾患を治療するための、このような医薬組成物の使用にも関する。
【背景技術】
【０００４】
Ｉ．ＨＥＲ２／ｎｅｕ及びＨＥＲ２／ｎｅｕ受容体
細胞成長及び分化プロセスは、チロシンキナーゼ等の特異的受容体を通してその作用を及ぼす成長因子に関与する。チロシンキナーゼ受容体へのリガンドの結合は、細胞増殖及び分化につながる一連のイベントをトリガする（非特許文献１、２）。チロシンキナーゼ受容体は、配列の類似性及び別個の特徴に基づいて、複数のグループに分類できる。１つのこのようなファミリーは、ＥｒｂＢ、即ち上皮性成長因子受容体ファミリーであり、これは、ＨＥＲ−１（ｅｒｂＢ−１又はＥＧＦＲとしても公知）、ＨＥＲ２／ｎｅｕ（ＨＥＲ−２、ｅｒｂＢ−２、ｃ−ｎｅｕ又はｐ１８５としても公知）、ＨＥＲ−３（ｅｒｂＢ−３としても公知）及びＨＥＲ−４（ｅｒｂＢ−４としても公知）として知られる、複数の受容体を含む（例えば、非特許文献１、３、４、５、６、７、８、９参照）。
【０００５】
ＥｒｂＢ受容体は、正常な成長プロセス及びヒト腫瘍形成の両方における、細胞増殖、分化、運動性及びアポトーシスを調節する信号の伝播において重要な役割を果たす（非特許文献１０）。例えばｅｒｂＢ受容体の活性化は、下流のＭＡＰＫ−Ｅｒｋ１／２及びホスホイノシチド−３−キナーゼ（ＰＩ3Ｋ）／ＡＫＴ成長及び生存経路に結合され、これを刺激する。癌におけるこれらの経路の脱制御は、疾患の進行及び治療に対する抵抗性に関連していた（非特許文献１１、１２、１３、１４、１５）。ＰＩ3Ｋ／ＡＫＴの活性化は、細胞生存、及び増強された腫瘍攻撃性を促進し、ＡＫＴ２は、ＨＥＲ２／ｎｅｕ過剰発現型乳癌において活性化されて過剰発現することが報告されている（非特許文献１６、１７、１８）。
【０００６】
受容体のＥｒｂＢファミリーによるシグナリングは、ホモ又はヘテロ受容体の二量体化、複数の細胞質末端の相互チロシンリン酸化、及び細胞内シグナル伝達経路の活性化をトリガする、リガンド結合によって開始される（非特許文献１９）。ＥｒｂＢ受容体に結合してこれを活性化するリガンドの可用性は、特異的タンパク質の細胞表面外部ドメイン脱落を触媒する亜鉛依存性メタロプロテアーゼのＡＤＡＭ（ａ ｄｉｓｉｎｔｅｇｒｉｎ  ａｎｄ  ｍｅｔａｌｌｏｐｒｏｔｅａｓｅ）ファミリー等の様々なメタロプロテアーゼによって仲介される（非特許文献２０、２１、２２参照）。具体的には、ＡＤＡＭファミリーは、ＡＰＰ及びＮｏｔｃｈといった、ＥｒｂＢ受容体を活性化する役割を果たすリガンドを切断することが示されている（非特許文献２３）。
【０００７】
ＨＥＲ２／ｎｅｕは、ＥｒｂＢファミリーの重要なメンバーである。化学処置済みラットの神経芽腫からのＥＲＢＢ２形質転換遺伝子の産物として元々同定されていたのは、１８５ｋＤａ受容体タンパク質である。ＨＥＲ２／ｎｅｕは、複数のヒト癌腫及び哺乳類成長におけるその役割により、幅広く調査されている（非特許文献２４、２５、２６）。ヒトＨｅｒ２／ｎｅｕ遺伝子及びＨＥＲ２／ｎｅｕタンパク質は非特許文献３、２７に記載されており、配列は受託番号Ｘ０３３６３としてＧｅｎＢａｎｋで入手可能である。ＨＥＲ２／ｎｅｕは、４つのドメイン：リガンドが結合する細胞外ドメイン；親油性膜貫通ドメイン；保存された細胞内チロシンキナーゼドメイン；及びリン酸化可能な複数のチロシン残基を有するカルボキシ末端シグナリングドメインを備える（非特許文献２８）。ＨＥＲ２／ｎｅｕ細胞外ドメイン（ＥＣＤ）の配列は非特許文献２９に記載されており、Ｐｒｏｔｅｉｎ  ＤａｔａＢａｎｋ  Ｒｅｃｏｒｄ  １Ｓ７８（２００４）において入手可能である。
【０００８】
ＨＥＲ２／ｎｅｕは成長因子受容体として機能し、多くの場合、乳癌、卵巣癌又は肺癌の癌細胞によって発現される。ＨＥＲ２／ｎｅｕは、ヒト乳癌及び卵巣癌の２５〜３０％において過剰に発現し、その過剰発現は、影響を受けた患者における攻撃的な臨床的進行及び不良予後に関連する（非特許文献３０、１０）。ＨＥＲ２／ｎｅｕの過剰発現はまた、胃、子宮内膜、唾液腺、肺、腎臓、結腸、甲状腺、膵臓及び膀胱の癌腫を含む他の癌腫の癌細胞においても観察されている（例えば非特許文献３１、３２、３３参照）。
【０００９】
ＨＥＲ２／ｎｅｕの活性化は、乳癌患者のホルモン療法に対する臨床的応答の低減に相関している（非特許文献３４、３５）。実際、ＨＥＲ２／ｎｅｕ発現は、抗エストロゲン抵抗性を伝達するために十分である（非特許文献３６）。ＨＥＲ２／ｎｅｕ及びＨＥＲ−３は、前立腺癌患者のホルモン抵抗の発現に関与すると思われる。前立腺癌患者のおよそ１／３は、精巣及び副腎アンドロゲンの作用を中断させることを目的とするホルモン療法治療を受ける。乳癌と同様、抵抗は不可避である。最新のデータは、ＨＥＲ２／ｎｅｕ及びＨＥＲ−３から発せられるシグナルが「ホルモン抵抗性（ｈｏｒｍｏｎｅ−ｒｅｆｒａｃｔｏｒｙ）」状態を誘発することを示唆している（非特許文献３７）。
【００１０】
ＨＥＲ２／ｎｅｕの複数の切断及びスプライシングされたバージョンが公知である。例えば、一部の消化管癌腫細胞の核周囲細胞質中に存在する切断ＥＣＤは、イントロン中においてポリアデニル化シグナルを用いて生成される代替転写物によって産生される（非特許文献２７、３８）。ＨＥＲ２／ｎｅｕのＥＣＤはまた、培養物中の乳癌細胞からタンパク質分解的に流出でき、これは一部の癌患者の血清中に見られ、転移性乳癌及び全体的な不良予後の血清マーカーとなり得る（非特許文献３９、４０、３８、４１）。一部のＨＥＲ２／ｎｅｕ過剰発現癌細胞では、公知のメタロプロテアーゼ活性化因子、４−アミノフェニル水銀アセテート（ＡＰＭＡ）が、ＡＤＡＭ１０及びＡＤＡＭ１５といったメタロプロテアーゼを活性化して、ＨＥＲ２／ｎｅｕ受容体を２つの部分、即ち：ｐ９５として公知である、切断された膜仲介型受容体；及びｐ１０５又はＥＣＤ１０５として公知である可溶性ＥＣＤに切断する（例えば非特許文献４２、特許文献１参照）。ＥＣＤの喪失により、ｐ９５受容体は、成長及び生存シグナルを癌細胞に送達できる、恒常的に活性のチロシンキナーゼとなる（例えば特許文献２参照）。
【００１１】
ＨＥＲ２／ｎｅｕ過剰発現乳癌細胞において、ＨＥＲ２／ｎｅｕに特異的な抗体を化学療法剤（例えばシスプラチン、ドキソルビシン、タキソール）と組み合わせて用いた治療は、化学療法単独での治療より高い細胞傷害応答を誘発することが、研究によって示されている（非特許文献４３、４４、４５）。ＨＥＲ２／ｎｅｕ抗体が化学療法剤に対する応答を増強し得る可能な機序は、ＨＥＲ２／ｎｅｕタンパク質発現の変調によるもの、又はＤＮＡ修復に干渉することによるものである（非特許文献４６、４７、４８、４９、５０、５１）。
【００１２】
ＨＥＲ−１又はＨＥＲ２／ｎｅｕを標的とする多数のモノクローナル抗体及び小分子チロシンキナーゼ阻害剤が開発されている。例えば、マウス抗体「４Ｄ５」として公知のマウスモノクローナル抗体は、膜貫通領域の極めて近傍に位置するＨＥＲ２／ｎｅｕの富システインＩＩドメイン中の細胞外エピトープ（アミノ酸５２９〜６２７）を認識する。マウス４Ｄ５及びヒト化４Ｄ５を用いた乳癌細胞の治療は、受容体リン酸化アッセイによって測定されるＨＥＲ２／ｎｅｕ−ＨＥＲ−３複合体のＮＤＦ／ヘレグリン活性化を部分的にブロックする（非特許文献５２、５３、５４、５５、５６、５７）。しかしながら、ヒトへのマウス４Ｄ５の投与は、患者がヒト抗マウス抗体（ＨＡＭＡ）応答を迅速に発現し、マウス４Ｄ５のヒト化形態が発現するため、臨床的に失敗であった。ヒト化４Ｄ５抗体の配列及び結晶構造は、特許文献３、非特許文献５２、５８に記載されている。
【００１３】
「トラスツズマブ」（Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ，  Ｉｎｃ．がＨｅｒｃｅｐｔｉｎ（登録商標）として販売）として公知のマウス４Ｄ５抗体のヒト化形態が開発されており、乳癌を含む、ＨＥＲ２／ｎｅｕの過剰発現又は遺伝子増幅を伴う癌の治療のために認可されている（非特許文献５９）。トラスツズマブは、ＥＣＤ及びｐ９５部分へのＨＥＲ２／ｎｅｕのインビトロでのＡＰＭＡ仲介型切断を阻害し、また、ＨＥＲ２／ｎｅｕ流出の可能な阻害を含む異なる複数の機序によってインビトロで作用すると考えられている（非特許文献６０、６１、６２）。しかしながらトラスツズマブ療法は、心毒性、及び一部の患者におけるヒト抗ヒト化抗体（ＨＡＨＡ）応答の発現といった、様々な欠点を有する。
【００１４】
癌療法に使用するための、抗ＨＥＲ２／ｎｅｕ抗体の新規の改良された形態、例えば親和性又は特異性の増大、ＨＡＭＡ又はＨＡＨＡ応答の可能性の低減、エフェクタ機能の増強等が見られる操作済みキメラ４Ｄ５抗体が、本明細書において提供され、またこれは特許文献４に記載されている。このような操作済み４Ｄ５抗体は、低ＨＥＲ２／ｎｅｕ発現因子を含むＨＥＲ２／ｎｅｕ陽性腫瘍に対して増強されたＡＤＣＣ活性を呈し、これは前臨床試験における上記エフェクタ細胞に関するＦｃγＲ変異型とは独立していることが示されている（非特許文献６３）。更に、第Ｉ相試験は、このような抗体が、以前にＨＥＲ−２／ｎｅｕ療法に失敗した乳癌及び胃食道癌の患者、並びにトラスツズマブが有効でないと考えられるＨＥＲ２／ｎｅｕ発現型腫瘍の患者において、有望な活性で十分な耐容性を有することを示している（非特許文献６４）。よってこのような改善された抗ＨＥＲ２／ｎｅｕ抗体は、腫瘍が低レベルのＨＥＲ２／ｎｅｕを発現する患者、又は他のＨＥＲ２／ｎｅｕ療法に失敗した患者のための、新規の治療選択肢を開拓する。
【００１５】
ＩＩ．細胞仲介性免疫応答
ヒト及び他の哺乳類の免疫系は、感染及び疾患に対して保護を提供する役割を果たす。このような保護は、体液性免疫応答及び細胞仲介性免疫応答の両方によって提供される。体液性免疫応答により、異物標的（抗原）を認識して中和できる抗体及び他の生体分子の産生が得られる。対照的に、細胞仲介性免疫応答は、Ｔ細胞によるマクロファージ、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞及び抗原特異性細胞毒性Ｔリンパ球の活性化、並びに抗原の認識に応じた様々なサイトカインの放出を伴う（非特許文献６５）。
【００１６】
抗原に対して免疫応答を最適に仲介するＴ細胞の能力は、２つの別個のシグナリング相互作用を必要とする（非特許文献６６、６７）。まず、抗原提示細胞（抗原−Ｐｒｅｓｅｎｔｉｎｇ  Ｃｅｌｌ：ＡＰＣ）の表面上に存在する抗原を、抗原特異性ナイーブＣＤ４+Ｔ細胞に対して提示する必要がある。このような提示により、提示された抗原に対して特異的となる免疫応答を開始するようにＴ細胞に指示するＴ細胞受容体（Ｔ−Ｃｅｌｌ  Ｒｅｃｅｐｔｏｒ：ＴＣＲ）を介して、シグナルが送達される。次に、ＡＰＣと別個のＴ細胞表面分子との間の相互作用によって仲介される一連の共刺激及び阻害シグナルが、まずＴ細胞の活性化及び増殖を、最終的にはＴ細胞の阻害をトリガする。従って、第１のシグナルは免疫応答に対して特異性を付与し、第２のシグナルは、上記応答の性質、強さ及び持続時間を決定する役割を果たす。
【００１７】
免疫系は、共刺激及び共阻害リガンド及び受容体によって厳密に制御される。これらの分子は、Ｔ細胞活性化のための第２のシグナルを提供し、また自己に対する免疫を制限しながら感染に対する免疫応答を最大化するための、ポジティブ及びネガティブシグナルの平衡ネットワークを提供する（非特許文献６８、６９）。自己寛容を維持し、免疫応答の期間及び振幅を変調するために重要な阻害経路を、まとめて免疫チェックポイントと呼ぶ。特に重要なのは、抗原提示細胞のＢ７．１（ＣＤ８０）及びＢ７．２（ＣＤ８６）リガンドと、ＣＤ４+Ｔリンパ球のＣＤ２８及びＣＴＬＡ−４受容体との間の結合である（非特許文献７０、６５、７１）。ＣＤ２８に対するＢ７．１又はＢ７．２の結合は、Ｔ細胞活性化を刺激し、ＣＴＬＡ−４に対するＢ７．１又はＢ７．２の結合は、上記活性化を阻害する（非特許文献６５、７１、７２）。ＣＤ２８は、Ｔ細胞の表面上に恒常的に発現し（非特許文献７３）、その一方でＣＴＬＡ−４の発現は、Ｔ細胞活性化に続いて急速に上方制御される（非特許文献７４）。ＣＴＬＡ−４は高親和性受容体である（非特許文献７０）ため、結合はまず（ＣＤ２８による）Ｔ細胞増殖を開始させ、その後（ＣＴＬＡ−４の初期発現によって）Ｔ細胞増殖を阻害し、これにより、増殖がもはや必要ない場合にその効果を減衰させる。
【００１８】
ＣＤ２８受容体のリガンドに対する更なる調査により、関連するＢ７分子のセット（「Ｂ７スーパファミリー（Ｂ７  Ｓｕｐｅｒｆａｍｉｌｙ）」の識別及び特性決定が得られた（非特許文献７０、７２、７５、７６、６７、７７、７８、７９）。現在、上記ファミリーの複数のメンバーが公知である：Ｂ７．１（ＣＤ８０）、Ｂ７．２（ＣＤ８６）、誘導性共刺激因子リガンド（ＩＣＯＳ−Ｌ）、プログラム死−１リガンド（ＰＤ−Ｌ１；Ｂ７−Ｈ１）、プログラム死−２リガンド（ＰＤ−Ｌ２；Ｂ７−ＤＣ）、Ｂ７−Ｈ３、Ｂ７−Ｈ４及びＢ７−Ｈ６（非特許文献７５、８０）。
【００１９】
ＩＩＩ．ＰＤ−１
プログラム死−１（「ＰＤ−１」）は、免疫応答を幅広く下方制御するＴ細胞制御因子の拡張ＣＤ２８／ＣＴＬＡ４ファミリーの、およそ３１ｋＤのＩ型膜タンパク質メンバーである（非特許文献８１、特許文献５〜１３）。
【００２０】
ＰＤ−１は、活性化されたＴ細胞、Ｂ細胞及び単球上で（非特許文献８２、８３）、並びにナチュラルキラー（ＮＫ）Ｔ細胞中において低レベルで（非特許文献８４、８５）、発現する。
【００２１】
ＰＤ−１の細胞外領域は、ＣＴＬＡ−４の同等のドメインに対して２３％の同一性を有する単一免疫グロブリン（Ｉｇ）Ｖドメインで構成される（非特許文献８５）。細胞外ＩｇＶドメインには、膜透過性領域及び細胞内テールが続く。細胞内テールは、免疫受容体チロシン系阻害モチーフ及び免疫受容体チロシン系スイッチモチーフ内に位置する２つのリン酸化部位を含有し、これは、ＰＤ−１がＴＣＲシグナルを下方制御することを示唆している（非特許文献８１、８６）。
【００２２】
ＰＤ−１は、Ｂ７−Ｈ１及びＢ７−ＤＣへの結合によって、免疫系の阻害を仲介する（非特許文献７７、特許文献１４〜２１）。
【００２３】
Ｂ７−Ｈ１及びＢ７−ＤＣは、心臓、胎盤、筋肉、胎児の肝臓、脾臓、リンパ節及び胸腺、並びにマウスの肝臓、肺、腎臓、膵臓の島細胞及び小腸といった、ヒト及びマウス組織の表面上で広く発現する（非特許文献８５）。ヒトでは、Ｂ７−Ｈ１タンパク質発現は、ヒト内皮細胞（非特許文献８７、８８、８９）、心筋（非特許文献９０）、合胞体栄養細胞（非特許文献９１）において見られた。上記分子はまた、いくつかの組織の常在性マクロファージによって、インターフェロン（ＩＦＮ）−γ又は腫瘍壊死因子（ｔｕｍｏｒ  ｎｅｃｒｏｓｉｓ  ｆａｃｔｏｒ：ＴＮＦ）−αによって活性化されたマクロファージによって（非特許文献９２）、及び腫瘍内において（非特許文献９３）も発現される。
【００２４】
Ｂ７−Ｈ１とＰＤ−１との間の相互作用は、Ｔ及びＢ細胞に対する重大な下方共刺激シグナル（非特許文献８５）、並びに細胞死誘導因子としての機能（非特許文献８１、９４）を提供することが分かっている。より具体的には、低濃度のＰＤ−１受容体とＢ７−Ｈ１リガンドとの間の相互作用は、抗原特異性ＣＤ８+Ｔ細胞の増殖を強く阻害する阻害シグナルの伝達をもたらすことが分かっており；高濃度では、ＰＤ−１との相互作用はＴ細胞増殖を阻害しないものの、複数のサイトカインの産生を明らかに低減させる（非特許文献７０）。休止ＣＤ４及びＣＤ８  Ｔ細胞並びに既に活性化されたＣＤ４及びＣＤ８  Ｔ細胞の両方、更には臍帯血由来のナイーブＴ細胞による、Ｔ細胞増殖及びサイトカイン産生は、可溶性Ｂ７−Ｈ１−Ｆｃ融合タンパク質によって阻害されることが分かっている（非特許文献９５、９２、９６、７０）。
【００２５】
Ｔ細胞活性化及び増殖におけるＢ７−Ｈ１及びＰＤ−１の役割は、これらの生体分子が、炎症及び癌の治療のための治療標的として機能し得ることを示唆している。従って、感染及び腫瘍の治療並びに適応免疫応答の上方調節のための抗ＰＤ−１抗体の使用が提案されている（特許文献２２、２３、２４、６、２５、２６、２７、２８、２９、３０を参照）。ＰＤ−１に特異的に結合できる抗体は、非特許文献８２及び９７によって報告されている（特許文献３１〜４０、２９、４１〜４３、３０、４４〜４８も参照）。
【００２６】
ＩＶ．ＨＥＲ２／ｎｅｕ発現型癌
ＨＥＲ２／ｎｅｕの増幅又は過剰発現は、乳癌のおよそ２５〜３０％で発生する（非特許文献９８、９９）。過剰発現は、卵巣、胃、及び子宮癌の攻撃的な形態でも発生することが公知である（例えば非特許文献３３、１００、１０１参照）。上述のように、ＨＥＲ２／ｎｅｕの過剰発現は、疾患の再発の増加及び不良予後に強く関連する。しかしながらＨＥＲ２／ｎｅｕは、トラスツズマブ及びマルゲツキシマブといった、受容体の細胞外ドメインを標的とするモノクローナル抗体、並びにラパチニブといった、ＨＥＲ２標的特異性作用剤の細胞内ドメイン内においてチロシンキナーゼ（ＴＫ）活性をブロックできる小分子アデノシン三リン酸（ＡＴＰ）競合因子を含む、抗ＨＥＲ２／ｎｅｕ薬剤のための重要な標的でもある（非特許文献１０２、１０３、１０４）。
【００２７】
ＨＥＲ２／ｎｅｕを過剰発現する癌の有効な標的化により、無増悪生存（ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｏｎ−ｆｒｅｅ  ｓｕｒｖｉｖａｌ：ＰＦＳ）及び全生存（ｏｖｅｒａｌｌ  ｓｕｒｖｉｖａｌ：ＯＳ）率が改善されているが、ＨＥＲ２／ｎｅｕ発現型転移性乳癌は、不治の疾患であり続けている。実際、多くの乳癌患者が、トラスツズマブ及びラパチニブといったＨＥＲ２／ｎｅｕ標的作用剤での治療後に再発しており、これは新規の又は獲得された耐性の存在を示している（非特許文献１０１、１０５、１０６）。更に、低ＨＥＲ２／ｎｅｕ発現もまた、不良予後に関連し得る（非特許文献１０７）。しかしながら、いずれのＨＥＲ２／ｎｅｕ標的治療療法も、低レベルのＨＥＲ２／ｎｅｕを発現する癌の患者に対して認可されていない。これらの知見は、ＨＥＲ２／ｎｅｕを発現する癌のための改善された療法を開発する重要性を強調するものである。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００２８】
【特許文献１】米国公開特許第２００４／０２４７６０２号
【特許文献２】米国特許第６，５４１，２１４号
【特許文献３】米国特許第６，０５４，２９７号
【特許文献４】国際公開第２００９／１２３８９４号
【特許文献５】米国特許出願公開第２００７／０２０２１００号
【特許文献６】米国特許出願公開第２００８／０３１１１１７号
【特許文献７】米国特許出願公開第２００９／００１１０６６７号
【特許文献８】米国公開特許第６，８０８，７１０号
【特許文献９】米国公開特許第７，１０１，５５０号
【特許文献１０】米国公開特許第７，４８８，８０２号
【特許文献１１】米国公開特許第７，６３５，７５７号
【特許文献１２】米国公開特許第７，７２２，８６８号
【特許文献１３】国際公開第０１／１４５５７号
【特許文献１４】米国公開特許第６，８０３，１９２号
【特許文献１５】米国公開特許第７，７９４，７１０号
【特許文献１６】米国特許出願公開第２００５／００５９０５１号
【特許文献１７】米国特許出願公開第２００９／００５５９４４号
【特許文献１８】米国特許出願公開第２００９／０２７４６６６号
【特許文献１９】米国特許出願公開第２００９／０３１３６８７号
【特許文献２０】国際公開第０１／３９７２２号
【特許文献２１】国際公開第０２／０８６０８３号
【特許文献２２】米国特許出願公開第２０１０／００４０６１４号
【特許文献２３】米国特許出願公開第２０１０／００２８３３０号
【特許文献２４】米国特許出願公開第２００４／０２４１７４５号
【特許文献２５】米国特許出願公開第２００９／０２１７４０１号
【特許文献２６】米国公開特許第７，５２１，０５１号
【特許文献２７】米国公開特許第７，５６３，８６９号
【特許文献２８】米国公開特許第７，５９５，０４８号
【特許文献２９】国際公開第２００４／０５６８７５号
【特許文献３０】国際公開第２００８／０８３１７４号
【特許文献３１】米国公開特許第８，００８，４４９号
【特許文献３２】米国公開特許第８，５５２，１５４号
【特許文献３３】米国公開特許第２００７／０１６６２８１号
【特許文献３４】米国公開特許第２０１２／０１１４６４８号
【特許文献３５】米国公開特許第２０１２／０１１４６４９号
【特許文献３６】米国公開特許第２０１３／００１７１９９号
【特許文献３７】米国公開特許第２０１３／０２３０５１４号
【特許文献３８】米国公開特許第２０１４／００４４７３８号
【特許文献３９】国際公開第２００３／０９９１９６号
【特許文献４０】国際公開第２００４／００４７７１号
【特許文献４１】国際公開第２００４／０７２２８６号
【特許文献４２】国際公開第２００６／１２１１６８号
【特許文献４３】国際公開第２００７／００５８７４号
【特許文献４４】国際公開第２００９／０１４７０８号
【特許文献４５】国際公開第２００９／０７３５３３号
【特許文献４６】国際公開第２０１２／１３５４０８号
【特許文献４７】国際公開第２０１２／１４５５４９号
【特許文献４８】国際公開第２０１３／０１４６６８号
【非特許文献】
【００２９】
【非特許文献１】Carpenter, G. et al. (1979) “Epidermal Growth Factor,” Annu Rev Biochem. 48:193-216
【非特許文献２】Sachs et al. (1987) “Cell Differentiation And Bypassing Of Genetic Defects In The Suppression Of Malignancy,” Cancer Res. 47:1981-1986
【非特許文献３】Semba, K. et al. (1985) “A v-erbB-Related Protooncogene, c-erbB-2, Is Distinct From The c-erbB-1/Epidermal Growth Factor-Receptor Gene And Is Amplified In A Human Salivary Gland Adenocarcinoma,” Proc. Natl. Acad. Sci. (U.S.A.) 82:6497-6501
【非特許文献４】Coussens, L. et al. (1985) “Tyrosine Kinase Receptor With Extensive Homology To EGF Receptor Shares Chromosomal Location With neu Oncogene,” Science 230:1132-1139
【非特許文献５】Bargmann, C.I. et al. (1986) “Multiple Independent Activations Of The Neu Oncogene By A Point Mutation Altering The Transmembrane Domain Of p185,” Cell 45:649-657
【非特許文献６】Kraus, M.H. et al. (1989) “Isolation And Characterization Of ERBB3, A Third Member Of The ERBB/Epidermal Growth Factor Receptor Family: Evidence For Overexpression In A Subset Of Human Mammary Tumors,” Proc. Natl. Acad. Sci. (U.S.A.) 86:9193-9197
【非特許文献７】Carraway, K.L. et al. (1994) “The erbB3 Gene Product Is A Receptor For Heregulin,” J. Biol. Chem. 269:14303-14306
【非特許文献８】Plowman, G.D. et al. (1993) “Heregulin Induces Tyrosine Phosphorylation Of HER4/p180erbB4,” Nature 366: 473-475
【非特許文献９】Tzahar, E. et al. (1994) “ErbB-3 and ErbB-4 Function As The Respective Low And High Affinity Receptors Of All neu Differentiation Factor/Heregulin Isoforms,” Biol. Chem. 269: 25226-25233
【非特許文献１０】Slamon, D.J. et al. (1989) “Studies Of The HER-2/neu Proto-Oncogene In Human Breast And Ovarian Cancer,” Science 244:707-712
【非特許文献１１】Fukazawa, T. et al. (1996) “Tyrosine Phosphorylation Of Cbl Upon Epidermal Growth Factor (EGF) Stimulation And Its Association With EGF Receptor And Downstream Signaling Proteins,” J. Biol. Chem. 271:14554-14559
【非特許文献１２】Tzahar, E. et al. (1996) “A Hierarchical Network Of Interreceptor Interactions Determines Signal Transduction By neu Differentiation Factor/Neuregulin And Epidermal Growth Factor,” Mol. Cell. Biol. 16:5276-5287
【非特許文献１３】Lange, C.A. et al. (1998) “Convergence Of Progesterone And Epidermal Growth Factor Signaling In Breast Cancer. Potentiation Of Mitogen-Activated Protein Kinase Pathways,” J. Biol. Chem. 273:31308-31316
【非特許文献１４】Olayioye, M.A. et al. (1998) “ErbB-1 And ErbB-2 Acquire Distinct Signaling Properties Dependent Upon Their Dimerization Partner,” Mol. Cell. Biol. 18:5042-5051
【非特許文献１５】Hackel, P.O. et al. (1999) “Epidermal Growth Factor Receptors: Critical Mediators Of Multiple Receptor Pathways,” Curr. Opin. Cell Biol. 11:184-189
【非特許文献１６】Shak, S. (1999) “Overview Of The Trastuzumab (Herceptin) anti-HER2 Monoclonal Antibody Clinical Program In HER2-Overexpressing Metastatic Breast Cancer,” Semin. Oncol. Suppl 12:71-77
【非特許文献１７】Huang, S.M. et al. (2000) “Modulation Of Radiation Response After Epidermal Growth Factor Receptor Blockade In Squamous Cell Carcinomas: Inhibition Of Damage Repair, Cell Cycle Kinetics, And Tumor Angiogenesis,” Clinical Cancer Res. 7:2166-2174
【非特許文献１８】Bacus, S.S. et al. (2002) “AKT2 Is Frequently Upregulated In HER-2/neu-Positive Breast Cancers And May Contribute To Tumor Aggressiveness By Enhancing Cell Survival,” Oncogene 21:3532-3540
【非特許文献１９】Citri, A. et al. (2003) “The Deaf And The Dumb: The Biology Of ErbB-2 And ErbB-3,” Exp. Cell Res. 284:54-65
【非特許文献２０】Chang, C. and Werb, Z. (2001) “The Many Faces Of Metalloproteases: Cell Growth, Invasion, Angiogenesis And Metastasis,” Trends in Cell Biology 11:S37-S43
【非特許文献２１】Moss, M.L. et al. (2002) “Shedding Of Membrane Proteins By ADAM Family Proteases,” Essays in Biochemistry 38:141-153
【非特許文献２２】Seals, D.F. et al. (2003) “The ADAMs Family Of Metalloproteases: Multidomain Proteins With Multiple Functions,” Genes and Development 17:7-30
【非特許文献２３】Blobel, C.P. (2005) “ADAMs: Key Components In EGFR Signalling And Development,” Nat. Rev. Mol. Cell. Biol. 6:32-43
【非特許文献２４】Hynes, N.E. et al. (1994) “The Biology Of erbB-2/neu/HER-2 And Its Role In Cancer,” Biochim. et Biophys. Acta 1198:165-184
【非特許文献２５】Dougall, W.C. et al. (1994) “The neu-Oncogene: Signal Transduction Pathways, Transformation Mechanisms And Evolving Therapies,” Oncogene 9:2109-2123
【非特許文献２６】Lee, K.F. et al. (1995) “Requirement For Neuregulin Receptor erbB2 In Neural And Cardiac Development,” Nature 378:394-398
【非特許文献２７】Yamamoto, T. et al. (1986) “Similarity Of Protein Encoded By The Human c-erb-B-2 Gene To Epidermal Growth Factor Receptor,” Nature 319:230-234
【非特許文献２８】Plowman, G.D. et al. (1993) “Ligand-Specific Activation Of HER4/p180erbB4, A Fourth Member Of The Epidermal Growth Factor Receptor Family,” Proc. Natl. Acad. Sci. (U.S.A.) 90:1746-1750
【非特許文献２９】Franklin, M.C. et al. (2004) “Insights Into ErbB Signaling From The Structure Of The ErbB2-Pertuzumab Complex,” Cancer Cell. 5(4):317-328
【非特許文献３０】Slamon, D.J. et al. (1987) “Human Breast Cancer: Correlation Of Relapse And Survival With Amplification Of The HER-2/neu Oncogene,” Science 235:177-182
【非特許文献３１】King, C.R. et al. (1985) “Amplification Of A Novel v-erbB-Related Gene In A Human Mammary Carcinoma,” Science 229:974
【非特許文献３２】McCann, A. et al. (1990) “c-erbB-2 Oncoprotein Expression In Primary Human Tumors,” Cancer 65:88-92
【非特許文献３３】Yonemura, Y. et al. (1991) “Evaluation Of Immunoreactivity For erbB-2 Protein As A Marker Of Poor Short Term Prognosis In Gastric Cancer” Cancer Research 51:1034
【非特許文献３４】Wright, C. et. al. (1989) “Expression Of c-erbB-2 Oncoprotein: A Prognostic Indicator In Human Breast Cancer,” Cancer Res. 49:2087-2090
【非特許文献３５】Kurokawa, H. et al. (2001) “Inhibition Of erbB Receptor (HER) Tyrosine Kinases As A Strategy To Abrogate Antiestrogen Resistance In Human Breast Cancer,” Clin. Cancer Res. 7:4436s-42s, 4411s-4412s
【非特許文献３６】Benz, C.C. et al. (1993) “Estrogen-Dependent, Tamoxifen-Resistant Tumorigenic Growth Of MCF-7 Cells Transfected With HER2/neu,” Breast Cancer Res. Treat. 24:85-95
【非特許文献３７】Mellinghoff, I.K. et al. (2004) “HER2/neu Kinase-Dependent Modulation Of Androgen Receptor Function Through Effects On DNA Binding And Stability,” Cancer Cell 6:517-527
【非特許文献３８】Scott, G.K. et al. (1993) “A Truncated Intracellular HER2/neu Receptor Produced By Alternative RNA Processing Affects Growth Of Human Carcinoma Cells,” Mol. Cell. Biol. 13:2247-2257
【非特許文献３９】Petch, L.A. et al. (1990) “A Truncated, Secreted Form Of The Epidermal Growth Factor Receptor Is Encoded By An Alternatively Spliced Transcript In Normal Rat Tissue,” Mol. Cell. Biol. 10:2973-2982
【非特許文献４０】Leitzel, K. et al. (1992) “Elevated Soluble c-erbB-2 Antigen Levels In The Serum And Effusions Of A Proportion Of Breast Cancer Patients,” J. Clin. Oncol. 10:1436-1443
【非特許文献４１】Lee, H. et al. (1998) “Isolation And Characterization Of Four Alternate c-erbB3 Transcripts Expressed In Ovarian Carcinoma-Derived Cell Lines And Normal Human Tissues,” Oncogene 16:3243-3252
【非特許文献４２】Molina, M.A. et al. (2001) “Trastuzumab (Herceptin), A Humanized anti-Her2 Receptor Monoclonal Antibody, Inhibits Basal And Activated Her2 Ectodomain Cleavage In Breast Cancer Cells,” Cancer Res. 61:4744-4749
【非特許文献４３】Hancock, M.C. et al. (1991) “A Monoclonal Antibody Against The c-erbB-2 Protein Enhances The Cytotoxicity Of Cis-Diamminedichloroplatinum Against Human Breast And Ovarian Tumor Cell Lines,” Cancer Res. 51:4575-4580
【非特許文献４４】Arteaga, C.L. et al. (1994) “p185c-erbB-2 Signal Enhances Cisplatin-Induced Cytotoxicity In Human Breast Carcinoma Cells: Association Between An Oncogenic Receptor Tyrosine Kinase And Drug-Induced DNA Repair,” Cancer 54:3758-3765
【非特許文献４５】Pietras, R.J. et al. (1994) “Antibody to HER-2/neu receptor Blocks DNA Repair After Cisplatin In Human Breast And Ovarian Cancer Cells,” Oncogene 9:1829-1838
【非特許文献４６】Stancovski, I. et al. (1991) “Mechanistic Aspects Of The Opposing Effects Of Monoclonal Antibodies To The ERBB2 Receptor On Tumor Growth,” Proc. Natl. Acad. Sci. (U.S.A.) 88:8691-8695
【非特許文献４７】Bacus, S.S. et al. (1992) “A Ligand For The erbB-2 Oncogene Product (gp30) Induces Differentiation Of Human Breast Cancer Cells,” Cell Growth & Diff. 3:401-411
【非特許文献４８】Bacus, S.S. et al. (1993) “Neu Differentiation Factor (Heregulin) Induces Expression Of Intercellular Adhesion Molecule 1: Implications For Mammary Tumors,” Cancer Res. 53:5251-5261
【非特許文献４９】Klapper, L.N. et al. (1997) “A Subclass Of Tumor-Inhibitory Monoclonal Antibodies To ErbB-2/HER2 Blocks Crosstalk With Growth Factor Receptors,” Oncogene 14:2099-2109
【非特許文献５０】Klapper, L.N. et al. (2000) “Tumor-Inhibitory Antibodies To HER-2/ErbB-2 May Act By Recruiting c-Cbl And Enhancing Ubiquitination Of HER-2,” Cancer Res. 60:3384-3388
【非特許文献５１】Arteaga, C.L. et al. (2001) “The Epidermal Growth Factor Receptor: From Mutant Oncogene In Nonhuman Cancers To Therapeutic Target In Human Neoplasia,” J Clinical Oncology 19(18s):32s-40s
【非特許文献５２】Carter, P. et al. (1992) “Humanization Of An anti-p185HER2 Antibody For Human Cancer Therapy,” Proc. Natl. Acad. Sci. (U.S.A.) 89:4285-4289
【非特許文献５３】Sliwkowski, M.X. et al. (1999) “Nonclinical Studies Addressing The Mechanism Of Action Of Trastuzumab (Herceptin),” Sem. in Oncol. 26:60-70
【非特許文献５４】Ye, D. et al. (1999) “Augmentation Of A Humanized anti-HER2 mAb 4D5 Induced Growth Inhibition By A Human-Mouse Chimeric anti-EGF Receptor mAb C225,” Oncogene 18:731-738
【非特許文献５５】Vogel, C.L. et al. (2001) “First-Line Herceptin Monotherapy In Metastatic Breast Cancer,” Oncology 61(suppl 2):37-42
【非特許文献５６】Vogel, C.L et al. (2002) “Efficacy And Safety Of Trastuzumab As A Single Agent In First-Line Treatment Of HER2-Overexpressing Metastatic Breast Cancer,” J. Clin. Oncol. 20(3):719-726
【非特許文献５７】Fujimoto-Ouchi, K. et al. (2002) “Antitumor Activity Of Combinations Of anti-HER-2 Antibody Trastuzumab And Oral Fluoropyrimidines Capecitabine/5'-Dfurd In Human Breast Cancer Models,” Cancer Chemother. Pharmacol. 49:211-216
【非特許文献５８】Eigenbrot, C. et al. (1993) “X-ray Structures Of The Antigen-Binding Domains From Three Variants Of Humanized anti-p185HER2 Antibody 4D5 And Comparison With Molecular Modeling,” J. Mol. Biol. 229:969-995
【非特許文献５９】Cobleigh, M.A. et al. (1999) “Multinational Study Of The Efficacy And Safety Of Humanized anti-HER2 Monoclonal Antibody In Women Who Have HER2-Overexpressing Metastatic Breast Cancer That Has Progressed After Chemotherapy For Metastatic Disease,” J. Clin. Oncol. 17:2639-2648
【非特許文献６０】Pegram, M.D. et al. (1998) “Phase II Study Of Receptor-Enhanced Chemosensitivity Using Recombinant Humanized anti-p185HER2/neu Monoclonal Antibody Plus Cisplatin In Patients With HER2/neu-Overexpressing Metastatic Breast Cancer Refractory To Chemotherapy Treatment,” J. Clin. Oncology 16(8):2659-2671
【非特許文献６１】Baselga, J. et al. (2001) “Mechanism Of Action Of Trastuzumab And Scientific Update,” Seminars in Oncology 28(5)(suppl. 16):4-11
【非特許文献６２】Baselga, J. et al. (2001) “Mechanism Of Action Of anti-HER2 Monoclonal Antibodies,” Ann. Oncol. 12 (suppl. 1):S35-S41)
【非特許文献６３】Nordstrom, J.L. et al. (2011) “Anti-tumor Activity And Toxicokinetics Analysis Of MGAH22, An anti-HER2 Monoclonal Antibody With Enhanced Fcγ Receptor Binding Properties,” Breast Cancer Research 13(6):R123
【非特許文献６４】Burris, H.A.. (2013) “Phase I Study Of margetuximab (MGAH22), An FC-Modified Chimeric Monoclonal Antibody (MAb), in Patients (pts) With Advanced Solid Tumors Expressing The HER2 Oncoprotein,” J. Clin. Oncol. Suppl: abstr. 3004
【非特許文献６５】Dong, C. et al. (2003) “Immune Regulation by Novel Costimulatory Molecules,” Immunolog. Res. 28(1):39-48
【非特許文献６６】Viglietta, V. et al. (2007) “Modulating Co-Stimulation,” Neurotherapeutics 4:666-675
【非特許文献６７】Korman, A.J. et al. (2007) “Checkpoint Blockade in Cancer Immunotherapy,” Adv. Immunol. 90:297-339
【非特許文献６８】Wang, L. et al. (2011) “VISTA, A Novel Mouse Ig Superfamily Ligand That Negatively Regulates T-Cell Responses,” J. Exp. Med. 10.1084/jem.20100619:1-16
【非特許文献６９】Lepenies, B. et al. (2008) “The Role Of Negative Costimulators During Parasitic Infections,” Endocrine, Metabolic & Immune Disorders - Drug Targets 8:279-288
【非特許文献７０】Sharpe, A.H. et al. (2002) “The B7-CD28 Superfamily,” Nature Rev. Immunol. 2:116-126
【非特許文献７１】Lindley, P.S. et al. (2009) “The Clinical Utility Of Inhibiting CD28-Mediated Costimulation,” Immunol. Rev. 229:307-321
【非特許文献７２】Greenwald, R.J. et al. (2005) “The B7 Family Revisited,” Ann. Rev. Immunol. 23:515-548
【非特許文献７３】Gross, J., et al. (1992) “Identification and Distribution Of The Costimulatory Receptor CD28 In The Mouse,” J. Immunol. 149:380-388
【非特許文献７４】Linsley, P. et al. (1996) “Intracellular Trafficking Of CTLA4 and Focal Localization Towards Sites Of TCR Engagement,” Immunity 4:535-543
【非特許文献７５】Collins, M. et al. (2005) “The B7 Family Of Immune-Regulatory Ligands,” Genome Biol. 6:223.1-223.7
【非特許文献７６】Loke, P. et al. (2004) “Emerging Mechanisms Of Immune Regulation: The Extended B7 Family And Regulatory T-Cells.” Arthritis Res. Ther. 6:208-214
【非特許文献７７】Flies, D.B. et al. (2007) “The New B7s: Playing a Pivotal Role in Tumor Immunity,” J. Immunother. 30(3):251-260
【非特許文献７８】Agarwal, A. et al. (2008) “The Role Of Positive Costimulatory Molecules In Transplantation And Tolerance,” Curr. Opin. Organ Transplant. 13:366-372
【非特許文献７９】Wang, S. et al. (2004) “Co-Signaling Molecules Of The B7-CD28 Family In Positive And Negative Regulation Of T Lymphocyte Responses,” Microbes Infect. 6:759-766
【非特許文献８０】Flajnik, M.F. et al. (2012) “Evolution Of The B7 Family: Co-Evolution Of B7H6 And Nkp30, Identification Of A New B7 Family Member, B7H7, And Of B7's Historical Relationship With The MHC,” Immunogenetics 64(8):571-90
【非特許文献８１】Ishida, Y. et al. (1992) “Induced Expression Of PD-1, A Novel Member Of The Immunoglobulin Gene Superfamily, Upon Programmed Cell Death,” EMBO J. 11:3887-3895
【非特許文献８２】Agata, Y. et al. (1996) “Expression Of The PD-1 Antigen On The Surface Of Stimulated Mouse T And B Lymphocytes,” Int. Immunol. 8(5):765-772
【非特許文献８３】Yamazaki, T. et al. (2002) “Expression Of Programmed Death 1 Ligands By Murine T-Cells And APC,” J. Immunol. 169:5538-5545
【非特許文献８４】Nishimura, H. et al. (2000) “Facilitation Of Beta Selection And Modification Of Positive Selection In The Thymus Of PD-1-Deficient Mice,” J. Exp. Med. 191:891-898
【非特許文献８５】Martin-Orozco, N. et al. (2007) “Inhibitory Costimulation And Anti-Tumor Immunity,” Semin. Cancer Biol. 17(4):288-298
【非特許文献８６】Blank, C. et al. (2006) “Contribution Of The PD-L1/PD-1 Pathway To T-Cell Exhaustion: An Update On Implications For Chronic Infections And Tumor Evasion Cancer,” Immunol. Immunother. 56(5):739-745
【非特許文献８７】Chen, Y. et al. (2005) “Expression of B7-H1 in Inflammatory Renal Tubular Epithelial Cells,” Nephron. Exp. Nephrol. 102:e81-e92
【非特許文献８８】de Haij, S. et al. (2005) “Renal Tubular Epithelial Cells Modulate T-Cell Responses Via ICOS-L And B7-H1” Kidney Int. 68:2091-2102
【非特許文献８９】Mazanet, M.M. et al. (2002) “B7-H1 Is Expressed By Human Endothelial Cells And Suppresses T-Cell Cytokine Synthesis,” J. Immunol. 169:3581-3588
【非特許文献９０】Brown, J.A. et al. (2003) “Blockade Of Programmed Death-1 Ligands On Dendritic Cells Enhances T-Cell Activation And Cytokine Production,” J. Immunol. 170:1257-1266
【非特許文献９１】Petroff, M.G. et al. (2002) “B7 Family Molecules: Novel Immunomodulators At The Maternal-Fetal Interface,” Placenta 23:S95-S101
【非特許文献９２】Latchman, Y. et al. (2001) “PD-L2 Is A Second Ligand For PD-1 And Inhibits T-Cell Activation,” Nat. Immunol 2:261-268
【非特許文献９３】Dong, H. (2003) “B7-H1 Pathway And Its Role In The Evasion Of Tumor Immunity,” J. Mol. Med. 81:281-287
【非特許文献９４】Subudhi, S.K. et al. (2005) “The Balance Of Immune Responses: Costimulation Verse Coinhibition,” J. Molec. Med. 83:193-202
【非特許文献９５】Freeman, G.J. et al. (2000) “Engagement Of The PD-1 Immunoinhibitory Receptor By A Novel B7 Family Member Leads To Negative Regulation Of Lymphocyte Activation,” J. Exp. Med. 192:1-9
【非特許文献９６】Carter, L. et al. (2002) “PD-1:PD-L Inhibitory Pathway Affects Both CD4(+) and CD8(+) T-cells And Is Overcome By IL-2,” Eur. J. Immunol. 32(3):634-643
【非特許文献９７】Berger, R. et al. (2008) “Phase I Safety And Pharmacokinetic Study Of CT-011, A Humanized Antibody Interacting With PD-1, In Patients With Advanced Hematologic Malignancies,” Clin. Cancer Res. 14(10):3044-3051
【非特許文献９８】Mitri, Z. et al. (2012). "The HER2 Receptor in Breast Cancer: Pathophysiology, Clinical Use, and New Advances in Therapy," Chemother Res Pract 2012:742193
【非特許文献９９】Burstein, H.J. (2005) "The Distinctive Nature of HER2-Positive Breast Cancers," N. Engl. J. Med. 353 (16): 1652-4
【非特許文献１００】Lanitis, E. (2012) “Primary Human Ovarian Epithelial Cancer Cells Broadly Express HER2 At Immunologically-Detectable Levels,” PloS One 7(11):e49829
【非特許文献１０１】Tan, M. et al. (2007). "Molecular Mechanisms Of erbB2-Mediated Breast Cancer Chemoresistance," Adv. Exp. Med. Biol. 608: 119-29
【非特許文献１０２】Gandhi, M.D. et al. (2014) “Targeted Treatment Of Head And Neck Squamous-Cell Carcinoma: Potential Of Lapatinib,” Onco. Targets Ther. 7:245-251
【非特許文献１０３】Opdam, F.L. et al. (2012) “Lapatinib For Advanced Or Metastatic Breast Cancer,” Oncologist 17(4):536-542
【非特許文献１０４】Liao, J. et al. (2010) “Lapatinib: New Opportunities For Management Of Breast Cancer,” Breast Cancer (Dove Med Press) 2:79-91
【非特許文献１０５】Singh et al. (2014) “HER2-Positive Advanced Breast Cancer: Optimizing Patient Outcomes And Opportunities For Drug Development,” British Journal of Cancer 111:1888-1898
【非特許文献１０６】Formisano, L. et al. (2014) “Epidermal Growth Factor-Receptor Activation Modulates Src-Dependent Resistance To Lapatinib In Breast Cancer Models,” Breast Cancer Research 16:R45
【非特許文献１０７】Gilcrease M.Z. et al. (2009) “Even Low-Level HER2 Expression May Be Associated With Worse Outcome In Node-Positive Breast Cancer,” Am J Surg Pathol. 2009 33(5):759-67
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００３０】
よって、過去の進歩にもかかわらず、ＨＥＲ２／ｎｅｕを発現する癌、特に転移性乳癌、及び低レベルのＨＥＲ２／ｎｅｕを発現する癌を治療するための、改善された組成物及び方法に対する需要が存在し続けている。本発明はこのような組成物、並びにＨＥＲ２／ｎｅｕ陽性乳癌及びＨＥＲ２／ｎｅｕを発現する他の癌の治療における上記組成物の使用方法を対象とする。
【課題を解決するための手段】
【００３１】
本発明は、ＨＥＲ２／ｎｅｕに特異的に結合する第１の分子と、免疫チェックポイントに関与する細胞表面受容体（又はそのリガンド）に特異的に結合する第２の分子とを含む、医薬組成物に関する。本発明は特に、上記第２の分子がＰＤ−１に結合する実施形態に関する。本発明はまた、癌及び他の疾患を治療するための、このような医薬組成物の使用にも関する。
【００３２】
詳細には、本発明は、それを必要とする被験者に、ＨＥＲ２／ｎｅｕに特異的に結合する抗体と、免疫チェックポイントを調節する細胞表面受容体又はそのリガンドに特異的に結合する分子とを投与するステップを含む、癌を治療する方法を提供する。
【００３３】
本発明は特に、ＨＥＲ２／ｎｅｕに特異的に結合する上記抗体が、配列番号４のアミノ酸配列を有する軽鎖可変ドメインと、配列番号９、配列番号１１及び配列番号１３からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する重鎖可変ドメインとを備える、「変異型キメラ４Ｄ５抗体」である、このような方法の実施形態に関する。
【００３４】
本発明は特に、免疫チェックポイントを調節する細胞表面受容体又はそのリガンドに特異的に結合する上記分子が、抗ＰＤ−１抗体又はその抗原結合断片である、このような方法の実施形態に関する。
【００３５】
本発明は更に、上記抗ＰＤ−１抗体又は抗原結合断片が：
（ａ）ニボルマブ、ペンブロリズマブ、ピディリズマブ、抗体ＥＨ１２．２Ｈ７、抗体ｈＰＤ−１  ｍＡｂ  ２、抗体ｈＰＤ−１  ｍＡｂ  ７、抗体ｈＰＤ−１  ｍＡｂ  ９、抗体ｈＰＤ−１  ｍＡｂ  １５、若しくは表１から選択される別の抗ＰＤ−１抗体とのＰＤ−１結合に関して競合する；又は
（ｂ）ニボルマブ、ペンブロリズマブ、ピディリズマブ、抗体ＥＨ１２．２Ｈ７、抗体ｈＰＤ−１  ｍＡｂ  ２、抗体ｈＰＤ−１  ｍＡｂ  ７、抗体ｈＰＤ−１  ｍＡｂ  ９、抗体ｈＰＤ−１  ｍＡｂ  １５、若しくは表１から選択される別の抗ＰＤ−１抗体の、３つの重鎖ＣＤＲ及び３つの軽鎖ＣＤＲを有する；又は
（ｃ）ニボルマブ、ペンブロリズマブ、ピディリズマブ、抗体ＥＨ１２．２Ｈ７、抗体ｈＰＤ−１  ｍＡｂ  ２、抗体ｈＰＤ−１  ｍＡｂ  ７、抗体ｈＰＤ−１  ｍＡｂ  ９、抗体ｈＰＤ−１  ｍＡｂ  １５、若しくは表１から選択される別の抗ＰＤ−１抗体の、重鎖可変ドメイン及び軽鎖可変ドメインを有する、このような方法の実施形態に関する。
【００３６】
本発明は更に、上記抗ＰＤ−１抗体又はその抗原結合断片がＦｃ領域を備える、このような方法の実施形態に関する。本発明は更に、上記Ｆｃ領域が、ＦｃγＲＩＩＩａに対する変異型Ｆｃ領域（ＣＤ１６Ａ）の親和性を低減する及び／又はＡＤＣＣ活性を低減する、１つ又は複数のアミノ酸修飾を含む、このような方法の実施形態に関する。本発明は更に、上記修飾が：Ｌ２３４Ａ；Ｌ２３５Ａ；又はＬ２３４Ａ及びＬ２３５Ａの置換を含む、このような方法の実施形態に関する。
【００３７】
本発明は更に、上記抗ＰＤ−１抗体が、ニボルマブ、ペンブロリズマブ、ピディリズマブ、抗体ＥＨ１２．２Ｈ７、抗体ｈＰＤ−１  ｍＡｂ  ２、抗体ｈＰＤ−１  ｍＡｂ  ７、抗体ｈＰＤ−１  ｍＡｂ  ９、抗体ｈＰＤ−１  ｍＡｂ  １５、又は表１から選択される別の抗ＰＤ−１抗体である、このような方法の実施形態に関する。本発明は更に、上記抗ＰＤ−１抗体の上記抗原結合断片が、ニボルマブ、ペンブロリズマブ、ピディリズマブ、抗体ＥＨ１２．２Ｈ７、抗体ｈＰＤ−１  ｍＡｂ  ２、抗体ｈＰＤ−１  ｍＡｂ  ７、抗体ｈＰＤ−１  ｍＡｂ  ９、抗体ｈＰＤ−１  ｍＡｂ  １５、又は表１から選択される別の抗ＰＤ−１抗体の抗原結合断片である、このような方法の実施形態に関する。
【００３８】
本発明は更に、ＨＥＲ２／ｎｅｕに特異的に結合する上記抗体（特に変異型キメラ４Ｄ５抗体）が、３週間毎におよそ６〜１８ｍｇ／ｋｇ体重の投薬量で投与され、また免疫チェックポイントを調節する細胞表面受容体又はそのリガンドに特異的に結合する上記分子（特に抗ＰＤ−１抗体）が、３週間毎におよそ２００ｍｇの固定投薬量で投与される、このような方法の実施形態に関する。本発明はまた、ＨＥＲ２／ｎｅｕに特異的に結合する上記抗体（特に変異型キメラ４Ｄ５抗体）が、３週間毎におよそ６〜１８ｍｇ／ｋｇ体重の投薬量で投与され、また免疫チェックポイントを調節する細胞表面受容体又はそのリガンドに特異的に結合する上記分子（特に抗ＰＤ−１抗体）が、３週間毎におよそ１〜１０ｍｇ／ｋｇ体重の投薬量で投与される、このような方法の実施形態に関する。本発明は更に、ＨＥＲ２／ｎｅｕに特異的に結合する上記抗体（特に変異型キメラ４Ｄ５抗体）が、３週間毎におよそ６ｍｇ／ｋｇ体重、およそ１０ｍｇ／ｋｇ体重、およそ１５ｍｇ／ｋｇ体重又はおよそ１８ｍｇ／ｋｇ体重の投薬量で投与される、このような方法の実施形態に関する。本発明は更に、免疫チェックポイントを調節する細胞表面受容体又はそのリガンドに特異的に結合する上記分子（特に抗ＰＤ−１抗体）が、３週間毎におよそ１ｍｇ／ｋｇ体重、およそ２ｍｇ／ｋｇ体重、およそ３ｍｇ／ｋｇ体重又はおよそ１０ｍｇ／ｋｇ体重の投薬量で投与される、このような方法の実施形態に関する。
【００３９】
本発明は更に、ＨＥＲ２／ｎｅｕに特異的に結合する上記抗体（特に変異型キメラ４Ｄ５抗体）、及び免疫チェックポイントを調節する細胞表面受容体又はそのリガンドに特異的に結合する上記分子（特に抗ＰＤ−１抗体）が、単一の医薬組成物中で、上記被験者に同時に投与される、このような方法の実施形態に関する。
【００４０】
本発明は更に、ＨＥＲ２／ｎｅｕに特異的に結合する上記抗体（特に変異型キメラ４Ｄ５抗体）、及び免疫チェックポイントを調節する細胞表面受容体又はそのリガンドに特異的に結合する上記分子（特に抗ＰＤ−１抗体）が、別個の組成物中で、両方の上記組成物が２４時間の期間内に投与されるように同時に投与される、このような方法の実施形態に関する。
【００４１】
本発明は更に、ＨＥＲ２／ｎｅｕに特異的に結合する上記抗体（特に変異型キメラ４Ｄ５抗体）、及び免疫チェックポイントを調節する細胞表面受容体又はそのリガンドに特異的に結合する上記分子（特に抗ＰＤ−１抗体）が、別個の医薬組成物中で、上記被験者に順次投与され、特に、２番目に投与される上記組成物は、最初に投与される上記組成物の投与の少なくとも２４時間以上後に投与される、このような方法の実施形態に関する。
【００４２】
本発明は特に、上記癌がＨＥＲ２／ｎｅｕ発現型癌である、このような方法の実施形態に関する。本発明は更に、上記癌が、乳癌、胃癌、前立腺癌、子宮癌、卵巣癌、結腸癌、子宮内膜癌、副腎癌、非小細胞肺癌、頭頸部癌、喉頭癌、肝臓癌、腎臓癌、神経膠芽腫、又は膵臓癌である、このような方法の実施形態に関する。
【００４３】
本発明は更に、第３の治療剤を投与するステップを更に含み、特に上記第３の治療剤が、抗新生物剤、化学療法剤又は細胞傷害剤である、このような方法の実施形態に関する。
【００４４】
本発明は更に、上記第３の治療剤が、ＨＥＲ２／ｎｅｕに特異的に結合する上記抗体（特に変異型キメラ４Ｄ５抗体）及び／若しくは免疫チェックポイントを調節する細胞表面受容体若しくはそのリガンドに特異的に結合する上記分子（特に抗ＰＤ−１抗体）と同時に、又はこれらとは別個に、投与される、このような方法の実施形態に関する。
【００４５】
本発明は更に、ＨＥＲ２／ｎｅｕに特異的に結合する上記抗体がマルゲツキシマブであり、免疫チェックポイントを調節する細胞表面受容体又はそのリガンドに特異的に結合する上記分子が、抗ＰＤ−１抗体ペンブロリズマブである、このような方法の実施形態に関する。
【００４６】
本発明は更に、ＨＥＲ２／ｎｅｕに特異的に結合する上記抗体がマルゲツキシマブであり、免疫チェックポイントを調節する細胞表面受容体又はそのリガンドに特異的に結合する上記分子が、抗ＰＤ−１抗体ニボルマブである、このような方法の実施形態に関する。
【００４７】
本発明は更に、ＨＥＲ２／ｎｅｕに特異的に結合する上記抗体がマルゲツキシマブであり、免疫チェックポイントを調節する細胞表面受容体又はそのリガンドに特異的に結合する上記分子が、抗ＰＤ−１抗体ピディリズマブである、このような方法の実施形態に関する。
【００４８】
本発明は更に、ＨＥＲ２／ｎｅｕに特異的に結合する上記抗体がマルゲツキシマブであり、免疫チェックポイントを調節する細胞表面受容体又はそのリガンドに特異的に結合する上記分子が、抗ＰＤ−１抗体ＥＨ１２．２Ｈ７である、このような方法の実施形態に関する。
【００４９】
本発明は更に、ＨＥＲ２／ｎｅｕに特異的に結合する上記抗体がマルゲツキシマブであり、免疫チェックポイントを調節する細胞表面受容体又はそのリガンドに特異的に結合する上記分子が、抗ＰＤ−１抗体ｈＰＤ−１  ｍＡｂ  ２である、このような方法の実施形態に関する。
【００５０】
本発明は更に、ＨＥＲ２／ｎｅｕに特異的に結合する上記抗体がマルゲツキシマブであり、免疫チェックポイントを調節する細胞表面受容体又はそのリガンドに特異的に結合する上記分子が、抗ＰＤ−１抗体ｈＰＤ−１  ｍＡｂ  ７である、このような方法の実施形態に関する。
【００５１】
本発明は更に、ＨＥＲ２／ｎｅｕに特異的に結合する上記抗体がマルゲツキシマブであり、免疫チェックポイントを調節する細胞表面受容体又はそのリガンドに特異的に結合する上記分子が、抗ＰＤ−１抗体ｈＰＤ−１  ｍＡｂ  ９である、このような方法の実施形態に関する。
【００５２】
本発明は更に、ＨＥＲ２／ｎｅｕに特異的に結合する上記抗体がマルゲツキシマブであり、免疫チェックポイントを調節する細胞表面受容体又はそのリガンドに特異的に結合する上記分子が、抗ＰＤ−１抗体ｈＰＤ−１  ｍＡｂ  １５である、このような方法の実施形態に関する。
【００５３】
本発明は更に、ＨＥＲ２／ｎｅｕに特異的に結合する上記抗体がマルゲツキシマブであり、免疫チェックポイントを調節する細胞表面受容体又はそのリガンドに特異的に結合する上記分子が、表１から選択される抗ＰＤ−１抗体である、このような方法の実施形態に関する。
【００５４】
本発明の更なる利点及び特徴は、本発明の好ましい実施形態を例示する以下の「発明を実施するための形態」、図面及び実施例から明らかになるであろう。
【図面の簡単な説明】
【００５５】
【図１】図１は、「キメラ４Ｄ５抗体」の軽鎖可変ドメイン（配列番号４）と、「マウス４Ｄ５抗体」の軽鎖可変ドメイン（配列番号３）及び「ヒト化４Ｄ５抗体」の軽鎖可変ドメイン（配列番号５）との配列を比較する、配列アラインメントである。
【図２】図２は、野生型（「ＷＴ」）Ｆｃ領域を有する「キメラ４Ｄ５抗体」の重鎖（配列番号７）、第１の変異型Ｆｃ領域を有する「変異型キメラ４Ｄ５抗体ＭＴ１」の重鎖（「ＭＴ１」）（配列番号９）、第２の変異型Ｆｃ領域を有する「変異型キメラ４Ｄ５抗体ＭＴ２」の重鎖（「ＭＴ２」）（配列番号１１）、及び第３の変異型Ｆｃ領域を有する「変異型キメラ４Ｄ５抗体ＭＴ３」の重鎖（「ＭＴ３」）（配列番号１３）の配列間の比較を示す。これらのＣＤＲの残基は、このような残基の下側に示された黒色のバーで示されている。
【図３】図３（パネルＡ〜Ｃ）は、野生型Ｆｃ（「ｃｈ４Ｄ５−野生型Ｆｃ」）（パネルＡ）、４Ｄ５（パネルＢ）及びトラスツズマブ（パネルＣ）結合を有するキメラ４Ｄ５抗体のＢＩＡＣｏｒｅ（登録商標）分析を示す。
【図４】図４（パネルＡ−Ｄ）は、ＣＤ１６−１５８Ｆ＋（パネルＡ及びＣ）又はＣＤ１６−１５８Ｖ＋（パネルＢ及びＤ）ＳＫＢＲ３細胞のインビトロでの増殖に対する、ｃｈ４Ｄ５−Ａｇ（パネルＡ及びＢ）並びにＣｈ４Ｄ−ＦｃＭＴ１（パネルＢ及びＤ）の効果を示す。
【図５】図５は、非トランスジェニックマウスにおける本発明の様々な抗体の増強された抗腫瘍活性を示す。
【図６】図６は、ｈＣＤ１６Ａトランスジェニックマウスにおける本発明の様々な抗体の増強された抗腫瘍活性を示す。
【図７】図７（パネルＡ〜Ｂ）は、非トランスジェニックマウスにおける本発明の様々な抗体による細胞成長阻害における、ｍＦｃＲＩＶ及びｈＣＤ１６Ａの役割を示す。
【図８】図８は、ｈＣＤ１６Ａトランスジェニックマウスにおける本発明の様々な抗体の増強された抗腫瘍活性を示す。
【図９】図９（パネルＡ〜Ｍ）は、ＨＥＲ２／ｎｅｕに関する、様々な癌細胞株からの細胞の、代表的な免疫組織化学染色を示す。パネルＡ〜Ｌは、異なる複数の細胞株、即ちパネルＡ：ＭＤＡ−ＭＢ−４３５；パネルＢ：ＭＤＡ−ＭＢ−２３１；パネルＣ：Ａ５４９；パネルＤ：ＯＶＣＡＲ−８；パネルＥ：ＭＣＦ−７；パネルＦ：ＢＴ−２０；パネルＧ：ＨＴ−２９；パネルＨ：ＺＲ７５−１；パネルＩ：ＪＩＭＴ−１；パネルＪ：ＭＤＡ−ＭＢ−４５３；パネルＫ：ＢＴ−４７４；パネルＬ：ＳＫＢＲ−３；及びパネルＭ：ｍＳＫＯＶ−３を示す。
【図１０】図１０（パネルＡ〜Ｂ）は、ＨＥＲ２／ｎｅｕ発現レベルが極めて低いか又はゼロである（ダコスコア＝０）癌細胞株（パネルＡではＭＤＡ−ＭＢ−４３５；パネルＢではＭＤＡ−ＭＢ−２３１）においてＡＤＣＣを仲介する、本発明のキメラ４Ｄ５抗体変異型の能力を試験するために実施された、ＡＤＣＣアッセイの結果を示す。
【図１１】図１１（パネルＡ〜Ｅ）は、ＨＥＲ２／ｎｅｕ発現レベルが低い（ダコスコア＝１＋）癌細胞株（パネルＡではＡ５４９；パネルＢではＯＶＣＡＲ−８；パネルＣではＭＣＦ−７；パネルＤではＢＴ−２０；パネルＥではＨＴ−２９）においてＡＤＣＣを仲介する、本発明の変異型キメラ４Ｄ５抗体の能力を試験するために実施された、ＡＤＣＣアッセイの結果を示す。
【図１２】図１２（パネルＡ〜Ｂ）は、ＨＥＲ２／ｎｅｕ発現レベルが中程度である（ダコスコア＝２＋）癌細胞株（パネルＡではＺＲ７５−１；パネルＢではＪＩＭＴ−１）においてＡＤＣＣを仲介する、本発明の変異型キメラ４Ｄ５抗体の能力を試験するために実施された、ＡＤＣＣアッセイの結果を示す。
【図１３】図１３（パネルＡ−Ｃ）は、ＨＥＲ２／ｎｅｕ発現レベルが高い（ダコスコア＝３＋）癌細胞株（パネルＡではＭＤＡ−ＭＢ−４５３；パネルＢではＢＴ−４７４；パネルＣではＳＫＢＲ−３；パネルＤではｍＳＫＯＶ−３）においてＡＤＣＣを仲介する、本発明の変異型キメラ４Ｄ５抗体の能力を試験するために実施された、ＡＤＣＣアッセイの結果を示す。
【図１４】図１４は、抗ＰＤ−１抗体の、Ｔ細胞の増殖を増強する能力を評価するためのプロトコルの図である。
【図１５】図１５は、アロＭＬＲアッセイの開始時におけるＰＤ−１  ｍＡｂ  １（５Ｃ４；ＢＭＳ−９３６５５８；Ｂｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ  Ｓｑｕｉｂｂ、ニボルマブ）、ＰＤ−１  ｍＡｂ  ２（ＭＫ−３４７５；Ｍｅｒｃｋ、ペンブロリズマブ（以前はランブロリズマブ）及びＰＤ−１  ｍＡｂ  ３（ＥＨ１２．２Ｈ７；Ｄａｎａ  Ｆａｒｂｅｒ）の添加が、ＩｇＧ１アイソタイプ対照抗体に比べて強いＴ細胞増殖応答を誘起したことを示す。また、ＰＤ−１  ｍＡｂ  ４（ＣＴ−０１１；ＣｕｒｅＴｅｃｈ、ピディリズマブ）、抗ＣＴＬＡ  ｍＡｂ及びＬＡＧ−３  ｍＡｂを用いて上記増殖応答が得られることも示されている。レスポンダ（ｒｅｓｐｏｎｄｅｒ：Ｒ）細胞はｐａｎ  Ｔ細胞であり；スティミュレータ（ｓｔｉｍｕｌａｔｏｒ：Ｓ）細胞は成熟樹状細胞（ｍＤＣ）である。
【発明を実施するための形態】
【００５６】
本発明は、ＨＥＲ２／ｎｅｕに特異的に結合する第１の分子と、免疫チェックポイントに関与する細胞表面受容体（又はそのリガンド）に特異的に結合する第２の分子とを含む、医薬組成物に関する。本発明は特に、上記第２の分子がＰＤ−１に結合する実施形態に関する。本発明はまた、癌及び他の疾患を治療するための、このような医薬組成物の使用にも関する。
【００５７】
特に本発明は：
（Ｉ）ＨＥＲ２／ｎｅｕ過剰発現型細胞のための選択的細胞傷害剤として有用となるよう、ＨＥＲ２／ｎｅｕに特異的に結合する、第１の抗体（例えば、公知の４Ｄ５抗体と比較してグリコシル化が低下し、エフェクタ機能が変化した、ＨＥＲ２／ｎｅｕに対する変異型キメラ４Ｄ５抗体）；及び
（ＩＩ）ＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１結合に拮抗するか又はこれをブロックすることにより、Ｔ細胞へのネガティブなシグナルの送達を防止することによって、Ｔ細胞応答を維持するために有用となるよう、ＰＤ−１に特異的に結合する、第２の抗体
を含む、医薬組成物を提供する。
【００５８】
本発明はまた、癌等の疾患の診断、予後及び治療においてこのような組成物を使用する方法を提供する。
【００５９】
いずれの特定の理論に束縛されるものではないが、強力に標的化された抗ＨＥＲ２／ｎｅｕ抗体を抗ＰＤ−１抗体と組み合わせる本発明の方法及び組成物は：癌細胞上のＨＥＲ２／ｎｅｕに結合し、これにより、ＨＥＲ２／ｎｅｕ−ＨＥＲ−３複合体のＮＤＦ／ヘレグリン活性化を低減／ブロックし、及び／又はＨＥＲ２／ｎｅｕ陽性腫瘍に対するＡＤＣＣ活性を増強することによって、腫瘍を直接標的化でき；また、例えば消耗した寛容性腫瘍浸潤リンパ球の表面に存在する細胞表面ＰＤ−１分子に結合し、これによって、このような細胞表面分子の、その受容体リガンドに結合する能力を弱め、またこれによって免疫系の活性化を促進することにより、内因性抗腫瘍免疫応答を直接増強できる。これらの属性により、このような治療及び組成物は、癌の治療において有用性を得る。
【００６０】
これより、図面及び以下の実施例と併せて本発明の原理の説明に役立つ、本発明の現時点での好ましい実施形態に関して、詳細に言及する。これらの実施形態は、当業者が本発明を実施できるようにするために十分に詳細に説明され、また、他の実施形態を利用してもよいこと、並びに本発明の精神及び範囲から逸脱することなく、構造的、生物学的及び化学的変更を行ってよいことを理解されたい。そうでないものとして定義されていない限り、本明細書中で使用される全ての技術用語及び科学用語は、本発明が属する分野の当業者が共通して理解する意味と同一の意味を有する。
【００６１】
本発明の実践は、そうでないことが示されていない限り、当該技術の範囲内の分子生物学（組み換え技術を含む）、微生物学、細胞生物学、生化学及び免疫学の従来技術を採用する。このような技術は：Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Fourth Edition (Sambrook et al. Eds., 2012) Cold Spring Harbor Press, Cold Spring Harbor, NY; Current Protocols in Molecular Biology (Ausubel, F.M. et al., Eds., 1987) Greene Pub. Associates, New York, NY; Oligonucleotide Synthesis: Methods and Applications (Methods in Molecular Biology), Immunobiology 7 (Janeway, C.A. et al. 2007) Garland Science, London, UK; Monoclonal Antibodies: A Practical Approach (Shepherd, P. et al. Eds., 2000) Oxford University Press, USA, New York NY; Using Antibodies: A Laboratory Manual (Harlow, E. et al. Eds., 1998) Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY; and DeVita, Hellman, and Rosenberg's Cancer: Principles & Practice of Oncology, Eighth Edition, DeVita, V. et al. Eds. 2008, Lippincott Williams & Wilkins, Philadelphia, PA.等の文献に十分に説明されている。抗体の操作については、米国仮特許出願第６０／７８１，５６４号；米国仮特許出願第６０／９４５，５２３号；米国仮特許出願第６１／０１５，１０６号；及び米国仮特許出願第６１／０１９，０５１において；並びに米国公開特許第２００４０１８５０４５号；米国公開特許第２００４０１９７３４７号；米国公開特許第２００４０１９７８６６号；米国公開特許第２００５００３７０００号；米国公開特許第２００５００６４５１４号；米国公開特許第２００５０２１５７６７号；米国公開特許第２００６０１３４７０９号；米国公開特許第２００６０１７７４３９号；米国公開特許第２００７０００４９０９号；米国公開特許第２００７００３６７９９号；米国公開特許第２００７００３７２１６号；米国公開特許第２００７００７７２４６号；米国公開特許第２００７０２４４３０３号；米国公開特許第２００８００４４４２９号；米国公開特許第２００８００５０３７１号；米国公開特許第１１／８６９，４１０号；米国公開特許第１１／９５２，５６８号；米国特許第７，１１２，４３９号；国際公開第０４／０６３３５１号；国際公開第０６／０８８４９４号；国際公開第０７／０２４２４９号；国際公開第０６／１１３６６５号；国際公開第０７／０２１８４１号；国際公開第０７／１０６７０７号；及び国際公開第２００８／１４０６０３号において議論されている。
【００６２】
Ｖ．定義
本発明は、ＨＥＲ２／ｎｅｕに特異的に結合する第１の分子と、免疫チェックポイントに関与する細胞表面受容体（又はそのリガンド）に特異的に結合する第２の分子とを含む、医薬組成物に関する。本発明は特に、上記第２の分子がＰＤ−１に結合する実施形態に関する。
【００６３】
本明細書中で使用される場合、用語「ＡＤＣＣ」は、抗体依存性細胞傷害性、即ち、ＦｃγＲを発現する非特異的細胞傷害性細胞（例えばナチュラルキラー（ＮＫ）細胞及びマクロファージ等の単球細胞）が、標的細胞上に結合した抗体を認識し、その後上記標的細胞の溶解を引き起こす、インビトロでの細胞仲介型応答を指す。
【００６４】
本明細書において使用される場合、用語「抗体（ａｎｔｉｂｏｄｙ）」は、特定のドメイン又は部分又は形態（「エピトープ（ｅｐｉｔｏｐｅ）」）がこのような分子上に存在することにより、ポリペプチド又はタンパク質若しくは非タンパク質分子に特異的に結合できる、免疫グロブリン分子を指す。エピトープ含有分子は免疫原性活性を有してよく、これにより上記エピトープ含有分子は、動物の体内で抗体産生応答を誘発し、このような分子は「抗原（ａｎｔｉｇｅｎ）」と呼ばれる。エピトープ含有分子は必ずしも免疫原性でなくてよい。
【００６５】
本明細書において使用される場合、用語「抗体（ａｎｔｉｂｏｄｙ）」は：モノクローナル抗体；多重特異性抗体；ヒト抗体；ヒト化抗体；合成抗体；キメラ抗体；ポリクローナル抗体；ラクダ化抗体；単鎖Ｆｖｓ（ｓｃＦｖ）；単鎖抗体；免疫学的に活性の抗体断片（例えば：Ｆａｂ断片；Ｆａｂ’断片；Ｆ（ａｂ’）2断片；Ｆｖ断片；ＶL及び／若しくはＶHドメインを含有する断片、又はある抗原等に特異的に結合するＶＬドメインの相補性決定領域（ＣＤＲ）（即ちＣＤＲL１、ＣＤＲL２及び／若しくはＣＤＲL３）若しくはＶＨドメインの相補性決定領域（ＣＤＲ）（即ちＣＤＲH１、ＣＤＲH２及び／若しくはＣＤＲH３）の相補性決定領域（ＣＤＲ）のうちの１つ、２つ若しくは３つを含有する断片等といったエピトープに結合できる、抗体断片）；二重官能性又は多重官能性抗体；ジスルフィド結合二重特異性Ｆｖｓ（ｓｄＦｖ）；細胞内抗体；及び以上のうちのいずれの、エピトープ結合断片を包含する。特に用語「抗体」は、免疫グロブリン分子、及び免疫グロブリン分子の免疫学的に活性の断片、即ち抗原結合部位を含有する分子を包含することを意図したものである。免疫グロブリン分子は、いずれのタイプ（例えば、ＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＡ及びＩｇＹ）、クラス（例えば、ＩｇＧ1、ＩｇＧ2、ＩｇＧ3、ＩｇＧ4、ＩｇＡ1及びＩｇＡ2）又はサブクラスのものとすることができる（例えば米国公開特許第２００４０１８５０４５号；米国公開特許第２００５００３７０００号；米国公開特許第２００５００６４５１４号；米国公開特許第２００５０２１５７６７号；米国公開特許第２００７０００４９０９号；米国公開特許第２００７００３６７９９号；米国公開特許第２００７００７７２４６号；及び米国公開特許第２００７０２４４３０３号参照）。この数十年、抗体の治療的潜在能力に対する関心が再び高まっており、抗体は、生命工学由来の薬剤の筆頭となるクラスの１つとなっている（Chan, C.E. et al. (2009) “The Use Of Antibodies In The Treatment Of Infectious Diseases,” Singapore Med. J. 50(7):663-666）。２００を超える抗体系薬剤が使用認可済み、又は開発中である。
【００６６】
用語「キメラ抗体（ｃｈｉｍｅｒｉｃ  ａｎｔｉｇｅｎ）」は、これらが所望の生物活性を示す限りにおいて、重鎖及び／又は軽鎖の一部分がある種（例えばマウス）由来のある抗体又は抗体クラス若しくはサブクラスと同一又は相同でありながら、残りの部分が別の種（例えばヒト）の抗体又は抗体クラス若しくはサブクラスと同一又は均質である、抗体を指す。本明細書における関心対象のキメラ抗体は、非ヒト霊長類（例えば旧世界ザル、類人猿等）由来の可変ドメイン抗原結合配列及びヒト定常領域配列を備えた「霊長類化（ｐｒｉｍａｔｉｚｅｄ）」抗体を含む。
【００６７】
本明細書において使用される場合、用語「モノクローナル抗体（ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  ａｎｔｉｂｏｄｙ）」は、略均質な抗体の集団のうちの１つの抗体を表し、即ち上記集団を構成する個々の抗体は、微量存在し得る自然発生的突然変異を有する抗体の可能性を除いて同一である。また本明細書において使用される場合、用語「ポリクローナル抗体（ｐｏｌｙｃｌｏｎａｌ  ａｎｔｉｂｏｄｙ）は、不均質な抗体の集団から得られる抗体を指す。用語「モノクローナル（ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ）」は、抗体の略均質な集団であるという抗体の特性を示し、いずれの特定の方法によって（例えば、ハイブリドーマ、ファージ選択、組み換え発現、遺伝子導入動物等によって）抗体を産生することを要求するものとして解釈してはならない。この用語は、免疫グロブリン全体、及び「抗体」の定義において上述した断片等を含む。モノクローナル抗体の作製方法は当該技術分野において公知である。採用してよい１つの方法は、Kohler, G. et al. (1975) “Continuous Cultures Of Fused Cells Secreting Antibody Of Predefined Specificity,” Nature 256:495-497の方法又はその修正例である。典型的には、モノクローナル抗体はマウス、ラット又はウサギにおいて発現する。上記抗体は、動物を、所望のエピトープを含有する免疫原性量の細胞、細胞抽出物又はタンパク製剤で免疫化することによって産生される。免疫原は、一次細胞、培養された細胞株、癌細胞、タンパク質、ペプチド、核酸又は組織とすることができるが、これらに限定されない。免疫化に使用してよい細胞は、これらを免疫原として使用するよりもある期間（例えば少なくとも２４時間）だけ前に、培養してよい。細胞は単独で、又はＲｉｂｉ等の非変性アジュバントと組み合わせて、免疫原として使用してよい（例えばJennings, V.M. (1995) “Review of Selected Adjuvants Used in Antibody Production,” ILAR J. 37(3):119-125参照）。一般に細胞は、免疫原として使用される際、完全な状態、及び好ましくは生存できる状態に維持しなければならない。完全な細胞は、破裂した細胞よりも、免疫性を与えられた動物が抗原をより良好に検出できるようにすることができる。変性又は強いアジュバント、例えばフロイントアジュバントの使用は、細胞を破裂させる場合があり、従って推奨されない。免疫原は、２週間に１回若しくは１週間に１回等、周期的な間隔で複数回投与してよく、又は動物中（例えば組織組み換え中）に生存能力を維持できるように投与してよい。あるいは、所望の病原性エピトープに対する特異性を有する既存のモノクローナル抗体及び他の同等の抗体は、当該技術分野で公知のいずれの手段によって、組み換え配列及び産生できる。一実施形態では、このような抗体を配列し、続いてポリヌクレオチド配列を発現又は繁殖のためのベクターにクローン化する。関心対象の抗体をエンコードする配列は、宿主細胞中のベクター中に保持され、続いて上記宿主細胞を、将来使用するために膨張させて冷凍できる。このような抗体のポリヌクレオチド配列は、本発明の単一特異性又は多重特異性（例えば二重特異性、三重特異性及び四重特異性）分子、並びに親和性が最適化された抗体、キメラ抗体、ヒト化抗体及び／又はイヌ化抗体を生成することによって、抗体の親和性又は他の特徴を改善するため��、遺伝子操作のために使用してよい。
【００６８】
用語「ヒト化抗体（ｈｕｍａｎｉｚｅｄ  ａｎｔｉｂｏｄｙ）」は、キメラ分子であって、一般に組み換え技術を用いて調製され、非ヒト種からの免疫グロブリンの抗原結合部位と、残りの、ヒト免疫グロブリンの構造及び／又は配列に基づく分子の免疫グロブリン構造とを有する、キメラ分子を指す。抗原結合部位は、定常ドメインに融合した完全な可変ドメイン、又は可変ドメイン内の適切なフレームワーク領域上に移植されたＣＤＲのみを備えてよい。抗原結合部位は野生型であってよく、又は１つ若しくは複数のアミノ酸置換によって修飾されてよい。これにより、ヒト個体の免疫原としての不変領域が削減されるが、外来の可変領域に対する免疫応答の可能性は残る（LoBuglio, A.F. et al. (1989) “Mouse/Human Chimeric Monoclonal Antibody In Man: Kinetics And Immune Response,” Proc. Natl. Acad. Sci. (U.S.A.) 86:4220-4224）。別のアプローチは、ヒト由来不変領域を提供することだけでなく、可変領域を修飾して、ヒト型に可能な限り近くなるように再成形することに焦点を当てている。重鎖及び軽鎖両方の可変領域は、問題となる抗原に応答して変化して結合能力を決定する、４つのフレームワーク領域（ＦＲ）が隣接する３つのＣＤＲを内包することが知られており、上記フレームワーク領域は、ある所与の種において相対的に保存され、またＣＤＲのための足場を提供するものと推定される。ある特定の抗原に対して非ヒト抗体を調製する際、非ヒト抗体由来のＣＤＲを、修飾されるヒト抗体内に存在するＦＲに移植することによって、可変領域を「再成形」又は「ヒト化」できる。様々な抗体に対するこのアプローチの適用は：Sato, K. et al. (1993) “Reshaping A Human Antibody To Inhibit The Interleukin 6-Dependent Tumor Cell Growth,” Cancer Res 53:851-856. Riechmann, L. et al. (1988) “Reshaping Human Antibodies for Therapy,” Nature 332:323-327; Verhoeyen, M. et al. (1988) “Reshaping Human Antibodies: Grafting An Antilysozyme Activity,” Science 239:1534-1536; Kettleborough, C. A. et al. (1991) “Humanization Of A Mouse Monoclonal Antibody By CDR-Grafting: The Importance Of Framework Residues On Loop Conformation,” Protein Engineering 4:773-3783; Maeda, H. et al. (1991) “Construction Of Reshaped Human Antibodies With HIV-Neutralizing Activity,” Human Antibodies Hybridoma 2:124-134; Gorman, S. D. et al. (1991) “Reshaping A Therapeutic CD4 Antibody,” Proc. Natl. Acad. Sci. (U.S.A.) 88:4181-4185; Tempest, P.R. et al. (1991) “Reshaping A Human Monoclonal Antibody To Inhibit Human Respiratory Syncytial Virus Infection in vivo,” Bio/Technology 9:266-271; Co, M. S. et al. (1991) “Humanized Antibodies For Antiviral Therapy,” Proc. Natl. Acad. Sci. (U.S.A.) 88:2869-2873; Carter, P. et al. (1992) “Humanization Of An Anti-p185her2 Antibody For Human Cancer Therapy,” Proc. Natl. Acad. Sci. (U.S.A.) 89:4285-4289; 及びCo, M.S. et al. (1992) “Chimeric And Humanized Antibodies With Specificity For The CD33 Antigen,” J. Immunol. 148:1149-1154によって報告されている。いくつかの実施形態では、ヒト化抗体は全てのＣＤＲ配列を保存する（例えば、マウス抗体からの６つのＣＤＲ全てを含有するヒト化マウス抗体）。他の実施形態では、ヒト化抗体は、オリジナルの抗体に対してその１つ又は複数のアミノ酸配列が改変された１つ又は複数のＣＤＲ（１つ、２つ、３つ、４つ、５つ又は６つ）を有し、これらは、オリジナルの抗体からの１つ又は複数のＣＤＲ「に由来する（ｄｅｒｉｖｅｄ  ｆｒｏｍ）」（即ち、このようなＣＤＲに由来する、このよう���ＣＤＲのアミノ酸配列の知識に由来する、等）１つ又は複数のＣＤＲとも呼ばれる。抗体の可変ドメインをエンコードするポリヌクレオチド配列は、上記誘導体を生成するため及び上記抗体の親和性又は他の特徴を改善するための遺伝子操作のために使用できる。抗体をヒト化する際の一般原理は、抗体の抗原結合部位の塩基配列を保持しながら、抗体の非ヒト残部をヒト抗体配列と交換するステップを伴う。モノクローナル抗体をヒト化するためには、４つの一般的なステップが存在する。上記ステップは以下の通りである：（１）開始抗体の軽鎖及び重鎖可変ドメインのヌクレオチド及び予測されるアミノ酸配列を決定するステップ；（２）ヒト化抗体又はイヌ化抗体を設計するステップ、即ちヒト化又はイヌ化プロセス中に使用する抗体フレームワーク領域を決定するステップ；（３）実際のヒト化又はイヌ化法／技術；並びに（４）ヒト化抗体のトランスフェクション及び発現。例えば米国特許第４，８１６，５６７号；米国特許第５，８０７，７１５号；米国特許第５，８６６，６９２号；及び米国特許第６，３３１，４１５号を参照。
【００６９】
天然抗体（ＩｇＧ抗体等）は、２つの重鎖と複合体化した２つの軽鎖からなる。各軽鎖は、可変ドメイン（ＶＬ）及び定常ドメイン（ＣＬ）を含有する。各重鎖は、可変ドメイン（ＶＨ）、３つの定常ドメイン（ＣＨ１、ＣＨ２及びＣＨ３）、並びにＣＨ１ドメインとＣＨ２ドメインとの間に位置する「ヒンジ（Ｈｉｎｇｅ）」ドメイン（「Ｈ」）を含有する。従って、自然に発生する免疫グロブリン（例えばＩｇＧ）の基本構造単位は、通常は約１５０，０００Ｄａの糖タンパク質として発現される、軽鎖及び２つの重鎖を有する三量体である。各鎖のアミノ末端（「Ｎ末端（Ｎ−ｔｅｒｍｉｎａｌ）」）部分は、抗原認識に主要な役割を果たす約１００〜１１０個の可変ドメインを含む。各鎖のカルボキシ末端（「Ｃ末端（Ｃ−ｔｅｒｍｉｎａｌ）」）部分は定常領域を画定し、軽鎖は単一の定常ドメインを有し、重鎖は通常３つの定常ドメイン及び１つのヒンジドメインを有する。従って、ＩｇＧ分子の軽鎖の構造はｎ−ＶＬ−ＣＬ−ｃであり、ＩｇＧ重鎖の構造はｎ−ＶＨ−ＣＨ１−Ｈ−ＣＨ２−ＣＨ３−ｃである（ここでｎ及びｃはそれぞれ、ポリペプチドのＮ末端及びＣ末端を表す）。ある抗体の、抗原のエピトープに結合する能力は、抗体のＶＬ及びＶＨドメインの存在並びにそのアミノ酸配列左右される。抗体軽鎖と抗体重鎖との相互作用、特にそのＶＬドメインとＶＨドメインとの相互作用は、天然抗体の２つの抗原結合部位のうちの１つを形成する。天然抗体は、１つのエピトープ種のみに結合できる（即ち天然抗体は単一特異性である）が、当該種の複数の複製に結合できる（即ち２価性又は多価性を示す）。ＩｇＧ分子の可変ドメインは、エピトープと接触した残基を含有する複数の相補性決定領域（ＣＤＲ）、及びフレームワークセグメント（ＦＲ）と呼ばれる非ＣＤＲセグメントからなり、上記フレームワークセグメントは、一般にＣＤＲループの構造を維持してＣＤＲの位置を決定することにより、このような接触を可能とする（ただし特定のフレームワーク残基も抗原に接触し得る）。従って、ＶL及びＶＨドメインは、構造ｎ−ＦＲ１−ＣＤＲ１−ＦＲ２−ＣＤＲ２−ＦＲ３−ＣＤＲ３−ＦＲ４−ｃを有する。抗体軽鎖の第１、第２及び第３のＣＤＲである（又は第１、第２及び第３のＣＤＲとして機能し得る）ポリペプチドは、本明細書ではそれぞれＣＤＲL１ドメイン、ＣＤＲL２ドメイン及びＣＤＲL３ドメインと呼ばれる。同様に、抗体重鎖の第１、第２及び第３のＣＤＲである（又は第１、第２及び第３のＣＤＲとして機能し得る）ポリペプチドは、本明細書ではそれぞれＣＤＲH１ドメイン、ＣＤＲH２ドメイン、及びＣＤＲH３ドメインと呼ばれる。よって、ＣＤＲL１ドメイン、ＣＤＲL２ドメイン、ＣＤＲL３ドメイン、ＣＤＲH１ドメイン、ＣＤＲH２ドメイン、及びＣＤＲH３ドメインという用語は、あるタンパク質に組み込まれた場合に、当該タンパク質が、軽鎖及び重鎖若しくはダイアボディ若しくは単鎖結合分子（例えばｓｃＦｖ、ＢｉＴｅ等）を有する抗体であるか、又は別のタイプのタンパク質であるかにかかわらず、当該タンパク質を、特定のエピトープに結合できるようにする、ポリペプチドを対象としている。従って本明細書において使用される場合、用語「抗原結合ドメ��ン（ａｎｔｉｇｅｎ  ｂｉｎｄｉｎｇ  ｄｏｍａｉｎ）」は、抗原結合分子の、このような分子がある抗原のエピトープに特異的に結合する能力の原因となる部分を指す。抗原結合断片は、このような抗体のＣＤＲドメインのうちの１個、２個、３個、４個、５個又は６個全てを含有でき、またこのようなエピトープに特異的に結合できる一方で、上記抗体とは異なる、このようなエピトープに対する免疫特異性、親和性又は選択性を呈してよい。しかしながら好ましくは、抗原結合断片は、このような抗体のＣＤＲドメインのうちの６個全てを含有する。抗体の抗原結合断片は、単一のポリペプチド鎖であってよく（例えばｓｃＦｖ）、又はそれぞれアミノ末端及びカルボキシル末端を有する２つ以上のポリペプチド鎖を備えてよい（例えばダイアボディ、Ｆａｂ断片、Ｆａｂ2断片等）。
【００７０】
本明細書中で使用される場合、用語「ダイアボディ（ｄｉａｂｏｄｙ）」は、それぞれが少なくとも１つのＶL及び１つのＶHドメイン又はその断片を備える２つ以上のポリペプチド鎖又はタンパク質の複合体を指し、両方のドメインは単一のポリペプチド鎖内に含まれるものの、これらが会合してエピトープ結合部位を形成できるようにするには短すぎる介在リンカーで隔てられており、従って、１つのダイアボディを形成するには少なくとも２つのポリペプチド鎖又はタンパク質が必要となる。特定の実施形態では、「ダイアボディ分子（ｄｉａｂｏｄｙ  ｍｏｌｅｃｕｌｅ）」は、ある抗体の「Ｆｃ」又は「ヒンジＦｃ領域」を備える分子を含む。上記複合体中の上記ポリペプチド鎖は、同一であっても異なっていてもよく、例えば上記ダイアボディ分子は、ホモ多量体又はヘテロ多量体であってよい。特定の態様では、「ダイアボディ分子」は、ＶL及びＶHドメインの両方を含有する上記ポリペプチド鎖の二量体又は四量体（例えばホモ二量体ダイアボディ分子、ヘテロ二量体ダイアボディ分子等）を含む。多量体タンパク質を含む個々のポリペプチド鎖は、鎖間ジスルフィド結合によって、上記多量体の少なくとも１つの他のペプチドと共有結合してよい。
【００７１】
本明細書中で使用される場合、用語「癌（ｃａｎｃｅｒ）」は、細胞（この細胞を「癌細胞（ｃａｎｃｅｒ  ｃｅｌｌ）」と呼ぶ）の異常な制御されない成長に起因する新生物又は腫瘍の存在を特徴とする疾患を指す。本明細書中で使用される場合、用語「癌」は明示的に、白血病及びリンパ腫を含む。いくつかの実施形態では、用語「癌」は、局在状態のままの良性腫瘍の存在を特徴とする疾患を指す。しかしながら好ましい実施形態では、用語「癌」は、隣接する体内構造に侵入した悪性腫瘍の存在を特徴とする疾患を指す。このような腫瘍は更に、離れた部位に拡散する能力を有し得る。いくつかの実施形態では、癌は、特定のがん抗原を発現する癌細胞に関連する。いくつかの態様では、本明細書中で使用される場合、用語「癌」は、ＨＥＲ２／ｎｅｕを発現する癌を具体的に指す。従って本明細書中で使用される場合、用語「ＨＥＲ２／ｎｅｕ発現型癌（ＨＥＲ２／ｎｅｕ−ｅｘｐｒｅｓｓｉｎｇ  ｃａｎｃｅｒ）」は、検出可能なレベルのＨＥＲ２／ｎｅｕを発現する癌細胞の存在を特徴とする癌を指す。このようなＨＥＲ２／ｎｅｕ発現型癌の癌細胞は、高レベルのＨＥＲ２／ｎｅｕを発現してもよく、又は低レベルのＨＥＲ２／ｎｅｕを発現してもよい。本明細書中で使用される場合、「高レベルのＨＥＲ２／ｎｅｕ（ｈｉｇｈ  ｌｅｖｅｌ  ｏｆ  ＨＥＲ２／ｎｅｕ）」は、ＨＥＲＣＥＰＴＥＳＴ（登録商標）（Ｄａｋｏ  Ｃｙｔｏｍａｔｉｏｎ  Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ  Ｉｎｃ．、カルフォルニア州カーピンテリア）分類を用いた場合に２＋以上のスコアを示す癌細胞の存在、又は被験者若しくは患者が、例えば蛍光インシチュハイブリダイゼーション（ＦＩＳＨ）によって過剰発現ＨＥＲ２／ｎｅｕとして同定された癌細胞を有することを特徴とする、癌を指す。本明細書中で使用される場合、「低レベルのＨＥＲ２／ｎｅｕ（ｌｏｗ  ｌｅｖｅｌ  ｏｆ  ＨＥＲ２／ｎｅｕ）」は、ＨＥＲＣＥＰＴＥＳＴ（登録商標）（Ｄａｋｏ  Ｃｙｔｏｍａｔｉｏｎ  Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ  Ｉｎｃ．、カルフォルニア州カーピンテリア）分類を用いた場合に２＋未満（例えば１＋）のスコアを示す癌細胞を特徴とする癌を指す。腫瘍の癌細胞によるＨＥＲ２発現のレベルを決定するために、様々な診断／予後アッセイが利用可能である。一態様では、ＨＥＲ２過剰発現は、免疫組織化学（ＩＨＣ）によって、例えばＨＥＲＣＥＰＴＥＳＴ（登録商標）（Ｄａｋｏ）を用いて、分析できる。従って、腫瘍生検からのパラフィン包埋組織切片をＩＨＣアッセイに供し、ＨＥＲ２タンパク質染色強度基準に適応させることができる。あるいは、又は更に、ＩＮＦＯＲＭ（商標）（Ｖｅｎｔａｎａ（アリゾナ州）が販売）又はＰＡＴＨＶＩＳＩＯＮ（商標）（Ｖｙｓｉｓ（イリノイ州））等のＦＩＳＨアッセイを、ホルマリン固定パラフィン包埋腫瘍組織に対して実行して、上記腫瘍におけるＨＥＲ２過剰発現の程度を（これが存在する場合に）決定できる。
【００７２】
本明細書中で使用される場合、用語「障害（ｄｉｓｏｒｄｅｒ）」及び「疾患（ｄｉｓｅａｓｅ）」は、被験者の状態を指して相互交換可能なものとして使用される。特に用語「自己免疫疾患（ａｕｔｏｉｍｍｕｎｅ  ｄｉｓｅａｓｅ）」は、用語「自己免疫障害（ａｕｔｏｉｍｍｕｎｅ  ｄｉｓｏｒｄｅｒ）と相互交換可能なものとして使用されて、被験者自身の細胞、組織及び／又は器官に対する被験者の免疫応答によって引き起こされた細胞、組織及び／又は器官の傷害を特徴とする、被験者の状態を指す。用語「炎症性疾患（ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ  ｄｉｓｅａｓｅ）」は、用語「炎症性傷害（ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ  ｄｉｓｏｒｄｅｒ）」と相互交換可能なものとして使用されて、炎症、好ましくは慢性炎症を特徴とする被験者の状態を指す。自己免疫障害は、炎症と関連していてもいなくてもよい。更に炎症は、自己免疫障害によって引き起こされたものであってもなくてもよい。よって、特定の障害は、自己免疫障害及び炎症性障害の両方を特徴としてよく、その一方で他の障害は、免疫障害のみ、又は炎症性障害のみであることを特徴としてよい。癌は「増殖性障害（ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｖｅ  ｄｉｓｏｒｄｅｒ）」（即ちある程度の異常な細胞増殖と関連する障害）の一例である。
【００７３】
本明細書において使用される場合、医薬組成物の「有効量（ｅｆｆｅｃｔｉｖｅ  ａｍｏｕｎｔ）」は、（例えば乳癌、胃癌若しくは前立腺癌といった癌の文脈における）腫瘍のサイズの縮小、癌細胞の成長の遅滞、転移の発現の遅延、疾患によって発生する症状の低減、疾患に罹患した人々のＱＯＬの向上、疾患を治療するために必要な他の薬物の用量の低減、標的化及び／若しくは細胞内在化等による別の薬物の効果の増強、疾患の進行の遅延、並びに／又は個体の生存期間の延長といった臨床的結果を含むがこれらに限定されない、有益な又は望ましい結果を得るために十分な量である。有効量は、１回又は複数回の投与で投与できる。本発明の目的に関して、薬剤、化合物又は医薬組成物の有効量は、直接的又は間接的に、癌細胞の増殖を低減する（若しくは癌細胞を破壊する）ため、又は癌細胞の腫瘍の発現若しくは成長を低減する及び／若しくは遅延させるために十分な量である。いくつかの実施形態では、薬剤、化合物又は医薬組成物の有効量は、別の薬剤、化合物又は医薬組成物と併用して達成してもしなくてもよい。従って「有効量」は、１つ又は複数の化学療法剤の投与の文脈で考えることができ、また１つ又は複数の他の作用剤との併用によって望ましい結果が達成され得る又は達成される場合、ある単一の作用剤は有効量で提供されていると考えてよい。個々の必要量は異なるが、各成分の有効量の最適な範囲の決定は当該技術分野の範囲内である。典型的な投薬量に関しては以下で議論する。
【００７４】
用語「エフェクタ活性（ｅｆｆｅｃｔｏｒ  ａｃｔｉｖｉｔｙ）」は、抗体Ｆｃ領域とＦｃ受容体又はリガンドとの相互作用に寄与できる生物学的活性を指す。１つの抗体は、１つ又は複数のエフェクタ機能を有してよい。抗体エフェクタ機能の非限定的な例としては、ＡＤＣＣ、Ｃ１ｑ結合、補体存性細胞傷害（ＣＤＣ）、細胞表面受容体（例えば、Ｂ細胞受容体；ＢＣＲ）の下方制御、オプソニン化、オプソニン化貪食作用、細胞結合、及びロゼット形成が挙げられる。エフェクタ機能は、抗原結合後に作用するもの、及び抗原結合と独立して作用するものの両方を含む。
【００７５】
本明細書中で使用される場合、用語「エフェクタ細胞（ｅｆｆｅｃｔｏｒ  ｃｅｌｌ）」は、１つ又は複数のＦｃ受容体を発現し、かつ１つ又は複数のエフェクタ機能を仲介する、免疫系の細胞を指す。エフェクタ細胞としては、限定するものではないが、単球、マクロファージ、好中球、樹状細胞、好酸球、肥満細胞、血小板、Ｂ細胞、大型顆粒リンパ球、ランゲルハンス細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞が挙げられ、ヒト、マウス、ラット、ウサギ及びサルを含むがこれらに限定されないいずれの有機体由来のものであってよい。
【００７６】
本明細書において、用語「Ｆｃ受容体」又は「ＦｃＲ」は、抗体のＦｃ領域に結合する受容体を記述するために使用される。例示的なＦｃＲは、天然配列ヒトＦｃＲである。ＦｃＲは、ＩｇＧ抗体（γ受容体、「ＦｃγＲ」）に結合し、かつＦｃγＲＩ（ＣＤ６４）、ＦｃγＲＩＩ（ＣＤ３２）、ＦｃγＲＩＩＩ（ＣＤ１６）、及びＦｃγＲＩＶサブクラスの受容体（これらの受容体の対立変異型及び選択的にスプライシングされた形態を含む）を含むものであってよく、例えば少なくとも２つの公知のＦｃγＲＩＩ受容体、ＦｃγＲＩＩＡ及びＦｃγＲＩＩＢが存在する。用語「ＦｃＲ」はまた、胎児への母体ＩｇＧの移動を担う新生児受容体ＦｃＲｎも含む。
【００７７】
用語「グリコシル化部位（ｇｌｙｃｏｓｙｌａｔｉｏｎ  ｓｉｔｅ）」は、哺乳類細胞によってオリゴ糖（即ち一体に結合した２つ以上の単糖を含有する炭化水素）の付着のための箇所として認識される１つ又は複数のアミノ酸残基を指す。オリゴ糖等の炭化水素が付着するアミノ酸残基は通常、アスパラギン（Ｎ結合）、セリン（Ｏ結合）及びトレオニン（Ｏ結合）残基である。Ｎ結合グリコシル化は、アスパラギン残基の側鎖へのオリゴ糖部分の付着を指す。Ｏ結合グリコシル化は、例えばセリン又はトレオニンといったヒドロキシアミノ酸へのオリゴ糖部分の付着を指す。本発明の分子は、Ｎ結合及びＯ結合グリコシル化部位を含む、１つ又は複数のグリコシル化部位を備えてよい。当該技術分野において公知のＮ結合又はＯ結合グリコシル化のためのいずれのグリコシル化部位を、本発明に従って使用してよい。付着のための特定の部位は通常、「グリコシル化部位配列（ｇｌｙｃｏｓｙｌａｔｉｏｎ  ｓｉｔｅ  ｓｅｑｕｅｎｃｅ）」と呼ばれるアミノ酸の特徴的な配列を有する。Ｎ結合グリコシル化のためのグリコシル化部位配列は：Ｎ−Ｘ−Ｓ又はＮ−Ｘ−Ｔであり、ここでＮはアスパラギンを示し、Ｘはプロリン以外の慣用のアミノ酸のうちのいずれとすることができ、Ｓはセリンを示し、Ｔはトレオニンを示す。天然ヒトＩｇＧのＦｃ領域は、２９７位のアスパラギン（Ａｓｎ２９７）において、各ＣＨ２ドメインに１つずつ、２つのＮ結合グリコシル化部位を有する。グリコシル化部位は、本発明が関与する技術分野において公知の方法を用いて、本発明の分子に導入してよい（例えばIN VITRO MUTAGENESIS, RECOMBINANT DNA: A SHORT COURSE, J. D. Watson, et al. W.H. Freeman and Company, New York, 1983, chapter 8, pp. 106-116（その全体は参照によって本出願に援用される）を参照のこと）。グリコシル化部位を本発明の分子に導入するための例示的な方法は：分子のアミノ酸配列を修飾するか若しくは突然変異させて、所望のＮ−Ｘ−Ｓ又はＮ−Ｘ−Ｔ配列を得るステップを含んでよい。同様に、既存のグリコシル化部位のアミノ酸配列を修飾して又は突然変異させて、例えば既存のＮ−Ｘ−Ｓ又はＮ−Ｘ−Ｔ配列を変化させることにより、グリコシル化部位を除去してよい。
【００７８】
本明細書中で使用される場合、用語「ヒト抗マウス抗体（「ＨＡＭＡ」）応答（Ｈｕｍａｎ  Ａｎｔｉ−Ｍｏｕｓｅ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ（“ＨＡＭＡ”）ｒｅｓｐｏｎｓｅ）」は、ヒト免疫系がマウス抗体を外来分子として識別し、これに対する炎症応答を開始した場合に発生する、有害な炎症応答を指す。ＨＡＭＡ応答は、毒性のショック又は死を引き起こし得る。キメラ及びヒト化抗体は、投与される抗体の非ヒト部分を減少させることにより、ＨＡＭＡ応答の可能性を低減するが、このような抗体に対するヒト抗ヒト抗体応答（「ＨＡＨＡ応答」）免疫応答の可能性は依然として存在する。
【００７９】
本明細書中で使用される場合、用語「異種（ｈｅｔｅｒｏｌｏｇｏｕｓ）」核酸は、宿主細胞に導入されるＤＮＡ、ＲＮＡ等を指す。上記核酸は、ゲノムＤＮＡ、ｍＲＮＡ、ｃＤＮＡ、合成ＤＮＡ、及びこれらの融合体又は組み合わせを含む、多様なソースのうちのいずれに由来してよい。上記核酸は、宿主若しくはレシピエント細胞と同一の細胞若しくは細胞タイプに由来するポリヌクレオチド、又は異なる細胞タイプに由来する、例えば哺乳類若しくは植物に由来するポリヌクレオチドを含んでよく、また任意に、例えば抗生物質耐性遺伝子、耐熱性遺伝子等のマーカー又は選択的遺伝子を含んでよい。
【００８０】
本明細書中で使用される場合、用語「免疫調節剤（ｉｍｍｕｎｏｍｏｄｕｌａｔｏｒｙ  ａｇｅｎｔ）」及びその変化形は、宿主の免疫系を変調する作用剤を指す。特定の実施形態では、免疫調節剤は免疫抑制剤である。他の特定の実施形態では、免疫調節剤は免疫刺激剤である。免疫調節剤としては、限定するものではないが、小分子、ペプチド、ポリペプチド、融合タンパク質、抗体、無機分子、模倣剤及び有機分子が挙げられる。
【００８１】
本明細書中で使用される場合、ある分子（例えば抗体）が別の分子のある領域と「特異的に（ｓｐｅｃｉｆｉｃａｌｌｙ）」結合すると表現されるのは、この分子の代替的な領域又は代替的な分子に対して、より頻繁に、より迅速に、より長期間、及び／又は当該領域に対するより高い親和性で、反応又は会合する場合である。例えば、ＨＥＲ２／ｎｅｕエピトープに特異的に結合する抗体は、このようなＨＥＲ２／ｎｅｕエピトープに、他のＨＥＲ２／ｎｅｕエピトープ又は非ＨＥＲ２／ｎｅｕエピトープに結合するよりも、より高い親和性、結合活性で、より迅速に、及び／又はより長期間、結合する、抗体である。同様に、ＰＤ−１のエピトープに特異的に結合する抗体は、このようなエピトープに、他のＰＤ−１エピトープ又は非ＰＤ−１エピトープに結合するよりも、より高い親和性、結合活性で、より迅速に、及び／又はより長期間、結合する。この定義を読めば、例えば第１の標的に特異的に結合する抗体（又は部分若しくはエピトープ）が、第２の標的に特異的に又は優先的に結合する場合があり、又はしない場合もあることが理解される。従って「特異的（ｓｐｅｃｉｆｉｃ）」結合は、必ずしも排他的結合である必要はない（ただしこれを含み得る）。一般に、文脈によってそうでないことが明らかに示されていない限り、「結合（ｂｉｎｄｉｎｇ）」に関する言及は、「特異的結合（ｓｐｅｃｉｆｉｃ  ｂｉｎｄｉｎｇ）」を意味する。ある抗原のエピトープに特異的に結合する抗体の能力は、例えばイムノアッセイによって決定できる。
【００８２】
本明細書中で使用される場合、用語「核酸分子」は、ＤＮＡ分子（例えばｃＤＮＡ又はゲノムＤＮＡ）、ＲＮＡ分子（例えばｍＲＮＡ）、ＤＮＡ及びＲＮＡ分子の組み合わせ又はハイブリッドＤＮＡ／ＲＮＡ分子、並びにＤＮＡ又はＲＮＡ分子の類似体を含む。このような類似体は例えば、イノシン又はトリチル化塩基を含むがこれらを用いて生成される。このような類似体はまた、ＤＮＡ又はＲＮＡ分子であって、ヌクレアーゼ耐性又は細胞膜を通過する能力の増大といった上記分子に有益な属性を与える修飾された骨格を備える、ＤＮＡ又はＲＮＡ分子も含むことができる。上記核酸又はヌクレオチド配列は、単鎖、二重鎖とすることができ、単鎖部分及び二重鎖部分の両方を含有してよく、また三重鎖部分を含有してよいが、好ましくは二重鎖ＤＮＡである。
【００８３】
本明細書中で使用される場合、用語「実質的な配列同一性（ｓｕｂｓｔａｎｔｉａｌ  ｓｅｑｕｅｎｃｅ  ｉｄｅｎｔｉｔｙ）」は、比較を行い、最大の一致に関してアラインメントを行った場合に、少なくとも約８０％のアミノ酸残基同一性、好ましくは少なくとも約９０％又は少なくとも約９５％の同一性を有する、２つ以上の配列又は下位配列（例えばドメイン）を指す。２つの同様の配列（例えば抗体可変ドメイン）間の配列同一性は、T.F. & Waterman, M.S. (1981) “Comparison Of Biosequences,” Adv. Appl. Math. 2:482［局所相同性アルゴリズム］；Needleman, S.B. & Wunsch, C.D. (1970) “A General Method Applicable To The Search For Similarities In The Amino Acid Sequence Of Two Proteins,” J. Mol. Biol. 48:443［相同性アラインメントアルゴリズム］；Pearson, W.R. & Lipman, D.J. (1988) “Improved Tools For Biological Sequence Comparison,” Proc. Natl. Acad. Sci. (U.S.A.) 85:2444［類似性に関する探索法］；又はAltschul, S.F. et al., (1990) “Basic Local Alignment Search Tool,” J. Mol. Biol. 215:403-10［ＢＬＡＳＴアルゴリズム］のもの等のアルゴリズムによって測定できる。上述のアルゴリズムのうちのいずれを使用する場合、（ウインドウの長さ、ギャップペナルティ等に関して）デフォルトのパラメータを使用する。第１のアミノ酸配列は、配列同一性の程度が、少なくとも約７０％同一である、好ましくは少なくとも約８０％、又は少なくとも約９０％、又は更に少なくとも約９５％同一である場合に、第２のアミノ酸配列と「実質的に同様（ｓｕｂｓｔａｎｔｉａｌｌｙ  ｓｉｍｉｌａｒ）」であると表現される。ある核酸配列は：（１）配列同一性の程度が、少なくとも約７０％同一である、好ましくは少なくとも約８０％、若しくは少なくとも約９０％、若しくは更に少なくとも約９５％同一である；又は（２）当該核酸配列を含む核酸分子が、第２の配列を含む核酸分子がエンコードするポリペプチドと少なくとも約７０％同一である、好ましくは少なくとも約８０％、若しくは少なくとも約９０％、若しくは更に少なくとも約９５％同一であるポリペプチドをエンコードする場合に、第２の配列と「実質的に同様」であると表現される。実質的に同一（ｓｕｂｓｔａｎｔｉａｌｌｙ  ｉｄｅｎｔｉｃａｌ）である配列もまた、実質的に同様である。
【００８４】
抗体に言及する際、各ドメインに対するアミノ酸の割り当ては、Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. (National Institutes of Health, Bethesda, MD., (1991)（「Kabatら」）に従い、上記文献は参照によりその全体が明示的に本出願に援用される。本明細書全体を通して、「Kabatに従った（ａｃｃｏｒｄｉｎｇ  ｔｏ  Kabat）」ＩｇＧ重鎖中の定常残基の番号付与は、Kabatらに記載されているようなヒトＩｇＧ１  ＥＵ抗体の番号付与を指す。
【００８５】
用語「マウス４Ｄ５抗体（Ｍｕｒｉｎｅ  ４Ｄ５  Ａｎｔｉｂｏｄｙ）」は、米国特許第５，６７７，１７１号にＡＴＣＣ  ＣＲＬ  １０４６３として開示されているマウスＩｇＧ１抗体を指す。マウス４Ｄ５抗体はＨｅｒ２／ｎｅｕに結合し、また配列番号３のアミノ酸配列を有する軽鎖可変ドメイン、及び配列番号４７のアミノ酸配列を有する重鎖可変ドメインを有する。用語「ヒト化４Ｄ５抗体（Ｈｕｍａｎｉｚｅｄ  ４Ｄ５  Ａｎｔｉｂｏｄｙ）」は、Carter, P. et al. (1992) (“Humanization Of An Anti-P185her2 Antibody For Human Cancer Therapy,” Proc. Natl. Acad. Sci. (U.S.A.) 89:4285-4289)に開示されているＩｇＧ抗体を指す。ヒト化４Ｄ５抗体は、Ｈｅｒ２／ｎｅｕに結合できることが報告されており、また配列番号５のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域、及び配列番号４８のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域を有する。
【００８６】
マウス４Ｄ５抗体の軽鎖可変ドメインのアミノ酸配列は、（配列番号３）（ＣＤＲL残基には下線が付されている）：
DIVMTQSHKF MSTSVGDRVS ITCKASQDVN TAVAWYQQKP GHSPKLLIYS
ASFRYTGVPD RFTGNRSGTD FTFTISSVQA EDLAVYYCQQ HYTTPPTFGG
GTKLEIK
である。
【００８７】
マウス４Ｄ５抗体の重鎖可変ドメインのアミノ酸配列は、（配列番号４７）（ＣＤＲH残基には下線が付されている）：
QVQLQQSGPE LVKPGASLKL SCTASGFNIK DTYIHWVKQR PEQGLEWIGR
IYPTNGYTRY DPKFQDKATI TADTSSNTAY LQVSRLTSED TAVYYCSRWG
GDGFYAMDYW GQGASVTVSS
である。
【００８８】
ヒト化４Ｄ５抗体の軽鎖可変ドメインのアミノ酸配列は、（配列番号５）（ＣＤＲL残基には下線が付されている）：
DIQMTQSPSS LSASVGDRVT ITCRASQDVN TAVAWYQQKP GKAPKLLIYS
ASFLESGVPS RFSGSRSGTD FTLTISSLQP EDFATYYCQQ HYTTPPTFGQ
GTKVEIK
である。
【００８９】
ヒト化４Ｄ５抗体の重鎖可変ドメインのアミノ酸配列は、（配列番号４８）（ＣＤＲH残基には下線が付されている）：
EVQLVESGGG LVQPGGSLRL SCAASGFNIK DTYIHWVRQA PGKGLEWVAR
IYPTNGYTRY ADSVKGRFTI SADTSKNTAY LQMNSLRAED TAVYYCSRWG
GDGFYAMDVW GQGTLVTVSS
である。
【００９０】
用語「キメラ４Ｄ５抗体（Ｃｈｉｍｅｒｉｃ  ４Ｄ５  Ａｎｔｉｂｏｄｙ）」は、ヒトＨｅｒ２／ｎｅｕに結合し、また配列番号２のアミノ酸配列を有する軽鎖、及び野生型Ｆｃ領域を有する重鎖を有する、ＩｇＧ抗体を指し、キメラ４Ｄ５抗体の重鎖のアミノ酸配列は、配列番号７で示される。「変異型キメラ４Ｄ５抗体（Ｖａｒｉａｎｔ  Ｃｈｉｍｅｒｉｃ  ４Ｄ５  Ａｎｔｉｂｏｄｙ）」は、Ｈｅｒ２／ｎｅｕに結合し、またその１つ又は複数のアミノ酸配列がキメラ４Ｄ５抗体のものとは異なる軽鎖及び／又は重鎖を有する、ＩｇＧ抗体（例えば、配列番号２のアミノ酸配列を有する軽鎖、及び配列番号９、配列番号１１又は配列番号１３のアミノ酸配列を有する重鎖を含む、ＩｇＧ抗体）である。
【００９１】
ＶＩ．結合分子
Ａ．ＨＥＲ２／ｎｅｕに特異的に結合する分子
本発明に包含されるＨＥＲ２／ｎｅｕに特異的に結合する分子は、ヒトＨＥＲ２／ｎｅｕの連続又は不連続（例えば配座）エピトープに特異的に結合できる抗ＨＥＲ２／ｎｅｕ抗体を含む。本発明の方法において使用されるＨＥＲ２／ｎｅｕ抗体は好ましくは、１つ又は複数の非ヒト種、特にマウス、ロバ、イヌ及び霊長類種（特にカニクイザル）のＨＥＲ２／ｎｅｕ分子に結合する能力も示す。
【００９２】
ＨＥＲ２／ｎｅｕに対する抗体を以下に提供する。更なる所望の抗体は、このような抗体のポリペプチド鎖をエンコードする核酸分子を突然変異させた後、ＨＥＲ２／ｎｅｕに特異的に結合する能力を示す発現した抗体を、ＨＥＲ２／ｎｅｕ若しくはその断片を用いて誘発される新規の抗体分泌ハイブリドーマを単離することによって、又は他の手段によって、スクリーニングすることにより、作製できる。ヒトＨＥＲ／２配列は非特許文献２７に記載されており、また上記配列は、受託番号Ｘ０３３６３としてＧｅｎＢａｎｋで入手可能である。
【００９３】
本発明は特に、キメラ４Ｄ５抗体の変異型、より詳細には、ＨＥＲ２／ｎｅｕ、好ましくはヒトＨＥＲ２／ｎｅｕに特異的に結合し、かつ軽鎖の可変ドメイン中のグリコシル化部位の除去により、マウス４Ｄ５抗体に対してグリコシル化が低減した、このようなキメラ４Ｄ５抗体の変異型を包含する。特に本発明の好ましいキメラ抗体は、マウス４Ｄ５抗体の軽鎖の可変ドメイン中にグリコシル化部位を有さず、マウス４Ｄ５抗体の軽鎖中には、６５、６６及び６７位にＮ−Ｒ−Ｓ配列を含む。好ましくは、上記抗体は、ＨＥＲ２／ｎｅｕに対する結合親和性が増強され、より好ましくは、本発明の変異型キメラ４Ｄ５抗体は、マウス４Ｄ５抗体と比較して、増強されたエフェクタ機能、又は増強されたＨＥＲ２／ｎｅｕに対する結合親和性及び増強されたエフェクタ機能の両方を有する。
【００９４】
ある好ましい実施形態では、キメラ４Ｄ５抗体の好ましい変異型は、配列番号２のアミノ酸配列を有する又は含む軽鎖（キメラ４Ｄ５軽鎖）を含む。
【００９５】
キメラ４Ｄ５抗体軽鎖のアミノ酸配列（配列番号２）（ＣＤＲL残基には下線が付されている）：
DIVMTQSHKF MSTSVGDRVS ITCKASQDVN TAVAWYQQKP GHSPKLLIYS
ASFRYTGVPD RFTGSRSGTD FTFTISSVQA EDLAVYYCQQ HYTTPPTFGG
GTKVEIKRTV AAPSVFIFPP SDEQLKSGTA SVVCLLNNFY PREAKVQWKV
DNALQSGNSQ ESVTEQDSKD STYSLSSTLT LSKADYEKHK VYACEVTHQG
LSSPVTKSFN RGEC
【００９６】
好ましい変異型キメラ４Ｄ５抗体の軽鎖をエンコードする例示的な核酸分子は、配列番号１：
gacatcgtga tgacccagtc ccacaagttc atgtccacct ctgtgggcga
tagggtcagc atcacctgca aggccagcca ggatgtgaat actgctgtag
cctggtatca gcagaaacca ggacattctc ccaaactgct gatttactcc
gcatccttcc ggtacactgg agtccctgat cgcttcactg gcagcagatc
tgggacagat ttcactttca ccatcagcag tgtgcaggct gaagacctgg
cagtttatta ctgtcagcaa cattatacta cacctcccac cttcggaggg
ggtaccaagg tggagatcaa acgtacggtg gctgcaccat ctgtcttcat
cttcccgcca tctgatgagc agttgaaatc tggaactgcc tctgttgtgt
gcctgctgaa taacttctat cccagagagg ccaaagtaca gtggaaggtg
gataacgccc tccaatcggg taactcccag gagagtgtca cagagcagga
cagcaaggac agcacctaca gcctcagcag caccctgacg ctgagcaaag
cagactacga gaaacacaaa gtctacgcct gcgaagtcac ccatcagggc
ctgagctcgc ccgtcacaaa gagcttcaac aggggagagt gttag
である。
【００９７】
このような軽鎖アミノ酸配列を有する抗体は、ＶL領域の６５位の修飾、従ってマウス４Ｄ５抗体に見られるＮ結合グリコシル化の欠如を有する。（図１参照；図１は、Ｎ６５Ｓ修飾を有するキメラ４Ｄ５抗体（配列番号４）、並びにマウス（配列番号３）及びヒト化（配列番号５）４Ｄ５抗体のＶL領域アミノ酸配列間の例示的な比較を示す）。別の好ましい実施形態では、本発明の変異型キメラ４Ｄ５抗体は、配列番号４のＶL領域アミノ酸配列を有する。
【００９８】
キメラ４Ｄ５  ＶL領域のアミノ酸配列（配列番号４）（ＣＤＲL残基には下線が付されている）：
DIVMTQSHKF MSTSVGDRVS ITCKASQDVN TAVAWYQQKP GHSPKLLIYS
ASFRYTGVPD RFTGSRSGTD FTFTISSVQA EDLAVYYCQQ HYTTPPTFGG
GTKVEIK
【００９９】
キメラ４Ｄ５抗体は、野生型Ｆｃ領域（配列番号７）を有する重鎖（「キメラ４Ｄ５重鎖」）を含み、これは配列番号６の核酸配列によってエンコードできる。これらの配列を以下に提示する。
【０１００】
野生型Ｆｃ領域を有するキメラ４Ｄ５重鎖のアミノ酸配列（配列番号７）（ＣＤＲH残基には下線が付されている）：
QVQLQQSGPE LVKPGASLKL SCTASGFNIK DTYIHWVKQR PEQGLEWIGR
IYPTNGYTRY DPKFQDKATI TADTSSNTAY LQVSRLTSED TAVYYCSRWG
GDGFYAMDYW GQGASVTVSS ASTKGPSVFP LAPSSKSTSG GTAALGCLVK
DYFPEPVTVS WNSGALTSGV HTFPAVLQSS GLYSLSSVVT VPSSSLGTQT
YICNVNHKPS NTKVDKRVEP KSCDKTHTCP PCPAPELLGG PSVFLFPPKP
KDTLMISRTP EVTCVVVDVS HEDPEVKFNW YVDGVEVHNA KTKPREEQYN
STYRVVSVLT VLHQDWLNGK EYKCKVSNKA LPAPIEKTIS KAKGQPREPQ
VYTLPPSRDE LTKNQVSLTC LVKGFYPSDI AVEWESNGQP ENNYKTTPPV
LDSDGSFFLY SKLTVDKSRW QQGNVFSCSV MHEALHNHYT QKSLSLSPGK
【０１０１】
野生型Ｆｃ領域を有するキメラ４Ｄ５重鎖をエンコードする例示的な核酸分子（配列番号６）：
caggttcagc tgcagcagtc tggccctgag ctggtgaagc caggggcctc
actcaagttg tcctgtacag cttctggctt caacatcaaa gacacctata
tccactgggt gaaacagagg cctgaacagg gcctggaatg gattggaagg
atttatccta ccaatggcta tactagatat gacccaaagt tccaggacaa
ggccactatc acagcagaca catcctccaa cacagcctac ctgcaagtca
gccgcctgac atctgaggac actgccgtct attactgctc ccggtgggga
ggggacggct tctatgctat ggactactgg ggtcagggag cctccgtgac
cgtgagctcc gcctccacca agggcccatc ggtcttcccc ctggcaccct
cctccaagag cacctctggg ggcacagcgg ccctgggctg cctggtcaag
gactacttcc ccgaaccggt gacggtgtcg tggaactcag gcgccctgac
cagcggcgtg cacaccttcc cggctgtcct acagtcctca ggactctact
ccctcagcag cgtggtgacc gtgccctcca gcagcttggg cacccagacc
tacatctgca acgtgaatca caagcccagc aacaccaagg tggacaagag
agttgagccc aaatcttgtg acaaaactca cacatgccca ccgtgcccag
cacctgaact cctgggggga ccgtcagtct tcctcttccc cccaaaaccc
aaggacaccc tcatgatctc ccggacccct gaggtcacat gcgtggtggt
ggacgtgagc cacgaagacc ctgaggtcaa gttcaactgg tacgtggacg
gcgtggaggt gcataatgcc aagacaaagc cgcgggagga gcagtacaac
agcacgtacc gtgtggtcag cgtcctcacc gtcctgcacc aggactggct
gaatggcaag gagtacaagt gcaaggtctc caacaaagcc ctcccagccc
ccatcgagaa aaccatctcc aaagccaaag ggcagccccg agaaccacag
gtgtacaccc tgcccccatc ccgggatgag ctgaccaaga accaggtcag
cctgacctgc ctggtcaaag gcttctatcc cagcgacatc gccgtggagt
gggagagcaa tgggcagccg gagaacaact acaagaccac gcctcccgtg
ctggactccg acggctcctt cttcctctac agcaagctca ccgtggacaa
gagcaggtgg cagcagggga acgtcttctc atgctccgtg atgcatgagg
ctctgcacaa ccactacacg cagaagagcc tctccctgtc tccgggtaaa
tga
【０１０２】
他の実施形態では、本発明は、変異型Ｆｃ領域、より好ましくは「ＦｃＭＴ１」、「ＦｃＭＴ２」又は「ＦｃＭＴ３」変異型Ｆｃ領域を含む、変異型キメラ４Ｄ５抗体を採用することを考える。これらの配列を以下に提示する。
【０１０３】
ＦｃＭＴ１変異型Ｆｃ領域を有する変異型キメラ４Ｄ５抗体の重鎖のアミノ酸配列（配列番号９）（ＣＤＲH残基には下線が付されている）：
QVQLQQSGPE LVKPGASLKL SCTASGFNIK DTYIHWVKQR PEQGLEWIGR
IYPTNGYTRY DPKFQDKATI TADTSSNTAY LQVSRLTSED TAVYYCSRWG
GDGFYAMDYW GQGASVTVSS ASTKGPSVFP LAPSSKSTSG GTAALGCLVK
DYFPEPVTVS WNSGALTSGV HTFPAVLQSS GLYSLSSVVT VPSSSLGTQT
YICNVNHKPS NTKVDKRVEP KSCDKTHTCP PCPAPELLGG PSVFLLPPKP
KDTLMISRTP EVTCVVVDVS HEDPEVKFNW YVDGVEVHNA KTKPPEEQYN
STLRVVSILT VLHQDWLNGK EYKCKVSNKA LPAPIEKTIS KAKGQPREPQ
VYTLPPSRDE LTKNQVSLTC LVKGFYPSDI AVEWESNGQP ENNYKTTPLV
LDSDGSFFLY SKLTVDKSRW QQGNVFSCSV MHEALHNHYT QKSLSLSPGK
【０１０４】
ＦｃＭＴ１変異型Ｆｃ領域を有する変異型キメラ４Ｄ５抗体の重鎖をエンコードする例示的な核酸分子（配列番号８）：
caggttcagc tgcagcagtc tggccctgag ctggtgaagc caggggcctc
actcaagttg tcctgtacag cttctggctt caacatcaaa gacacctata
tccactgggt gaaacagagg cctgaacagg gcctggaatg gattggaagg
atttatccta ccaatggcta tactagatat gacccaaagt tccaggacaa
ggccactatc acagcagaca catcctccaa cacagcctac ctgcaagtca
gccgcctgac atctgaggac actgccgtct attactgctc ccggtgggga
ggggacggct tctatgctat ggactactgg ggtcagggag cctccgtgac
cgtgagctcc gcctccacca agggcccatc ggtcttcccc ctggcaccct
cctccaagag cacctctggg ggcacagcgg ccctgggctg cctggtcaag
gactacttcc ccgaaccggt gacggtgtcg tggaactcag gcgccctgac
cagcggcgtg cacaccttcc cggctgtcct acagtcctca ggactctact
ccctcagcag cgtggtgacc gtgccctcca gcagcttggg cacccagacc
tacatctgca acgtgaatca caagcccagc aacaccaagg tggacaagag
agttgagccc aaatcttgtg acaaaactca cacatgccca ccgtgcccag
cacctgaact cctgggggga ccgtcagtct tcctcttacc cccaaaaccc
aaggacaccc tcatgatctc ccggacccct gaggtcacat gcgtggtggt
ggacgtgagc cacgaagacc ctgaggtcaa gttcaactgg tacgtggacg
gcgtggaggt gcataatgcc aagacaaagc cgccggagga gcagtacaac
agcacgctcc gtgtggtcag catcctcacc gtcctgcacc aggactggct
gaatggcaag gagtacaagt gcaaggtctc caacaaagcc ctcccagccc
ccatcgagaa aaccatctcc aaagccaaag ggcagccccg agaaccacag
gtgtacaccc tgcccccatc ccgggatgag ctgaccaaga accaggtcag
cctgacctgc ctggtcaaag gcttctatcc cagcgacatc gccgtggagt
gggagagcaa tgggcagccg gagaacaact acaagaccac gcctctcgtg
ctggactccg acggctcctt cttcctctac agcaagctca ccgtggacaa
gagcaggtgg cagcagggga acgtcttctc atgctccgtg atgcatgagg
ctctgcacaa ccactacacg cagaagagcc tctccctgtc tccgggtaaa
tga
【０１０５】
ＦｃＭＴ２変異型Ｆｃ領域を有する変異型キメラ４Ｄ５抗体の重鎖のアミノ酸配列（配列番号１１）（ＣＤＲH残基には下線が付されている）：
QVQLQQSGPE LVKPGASLKL SCTASGFNIK DTYIHWVKQR PEQGLEWIGR
IYPTNGYTRY DPKFQDKATI TADTSSNTAY LQVSRLTSED TAVYYCSRWG
GDGFYAMDYW GQGASVTVSS ASTKGPSVFP LAPSSKSTSG GTAALGCLVK
DYFPEPVTVS WNSGALTSGV HTFPAVLQSS GLYSLSSVVT VPSSSLGTQT
YICNVNHKPS NTKVDKRVEP KSCDKTHTCP PCPAPELVGG PSVFLLPPKP
KDTLMISRTP EVTCVVVDVS HEDPEVKFNW YVDGVEVHNA KTKPPEEQYN
STLRVVSVLT VLHQDWLNGK EYKCKVSNKA LPAPIEKTIS KAKGQPREPQ
VYTLPPSRDE LTKNQVSLTC LVKGFYPSDI AVEWESNGQP ENNYKTTPLV
LDSDGSFFLY SKLTVDKSRW QQGNVFSCSV MHEALHNHYT QKSLSLSPGK
【０１０６】
ＦｃＭＴ２変異型Ｆｃ領域を有する変異型キメラ４Ｄ５抗体の重鎖をエンコードする例示的な核酸分子（配列番号１０）：
caggttcagc tgcagcagtc tggccctgag ctggtgaagc caggggcctc
actcaagttg tcctgtacag cttctggctt caacatcaaa gacacctata
tccactgggt gaaacagagg cctgaacagg gcctggaatg gattggaagg
atttatccta ccaatggcta tactagatat gacccaaagt tccaggacaa
ggccactatc acagcagaca catcctccaa cacagcctac ctgcaagtca
gccgcctgac atctgaggac actgccgtct attactgctc ccggtgggga
ggggacggct tctatgctat ggactactgg ggtcagggag cctccgtgac
cgtgagctcc gcctccacca agggcccatc ggtcttcccc ctggcaccct
cctccaagag cacctctggg ggcacagcgg ccctgggctg cctggtcaag
gactacttcc ccgaaccggt gacggtgtcg tggaactcag gcgccctgac
cagcggcgtg cacaccttcc cggctgtcct acagtcctca ggactctact
ccctcagcag cgtggtgacc gtgccctcca gcagcttggg cacccagacc
tacatctgca acgtgaatca caagcccagc aacaccaagg tggacaagag
agttgagccc aaatcttgtg acaaaactca cacatgccca ccgtgcccag
cacctgaact cgtgggggga ccgtcagtct tcctcttacc cccaaaaccc
aaggacaccc tcatgatctc ccggacccct gaggtcacat gcgtggtggt
ggacgtgagc cacgaagacc ctgaggtcaa gttcaactgg tacgtggacg
gcgtggaggt gcataatgcc aagacaaagc cgccggagga gcagtacaac
agcacgctcc gtgtggtcag cgtcctcacc gtcctgcacc aggactggct
gaatggcaag gagtacaagt gcaaggtctc caacaaagcc ctcccagccc
ccatcgagaa aaccatctcc aaagccaaag ggcagccccg agaaccacag
gtgtacaccc tgcccccatc ccgggatgag ctgaccaaga accaggtcag
cctgacctgc ctggtcaaag gcttctatcc cagcgacatc gccgtggagt
gggagagcaa tgggcagccg gagaacaact acaagaccac gcctctcgtg
ctggactccg acggctcctt cttcctctac agcaagctca ccgtggacaa
gagcaggtgg cagcagggga acgtcttctc atgctccgtg atgcatgagg
ctctgcacaa ccactacacg cagaagagcc tctccctgtc tccgggtaaa
tga
【０１０７】
ＦｃＭＴ３変異型Ｆｃ領域を有する変異型キメラ４Ｄ５抗体の重鎖のアミノ酸配列（配列番号１３）（ＣＤＲH残基には下線が付されている）：
QVQLQQSGPE LVKPGASLKL SCTASGFNIK DTYIHWVKQR PEQGLEWIGR
IYPTNGYTRY DPKFQDKATI TADTSSNTAY LQVSRLTSED TAVYYCSRWG
GDGFYAMDYW GQGASVTVSS ASTKGPSVFP LAPSSKSTSG GTAALGCLVK
DYFPEPVTVS WNSGALTSGV HTFPAVLQSS GLYSLSSVVT VPSSSLGTQT
YICNVNHKPS NTKVDKRVEP KSCDKTHTCP PCPAPELLGG PSVFLLPPKP
KDTLMISRTP EVTCVVVDVS HEDPEVKFNW YVDGVEVHNA KTKPPEEQYN
STLRVVSVLT VLHQDWLNGK EYKCKVSNKA LPAPIEKTIS KAKGQPREPQ
VYTLPPSRDE LTKNQVSLTC LVKGFYPSDI AVEWESNGQP ENNYKTTPPV
LDSDGSFFLY SKLTVDKSRW QQGNVFSCSV MHEALHNHYT QKSLSLSPGK
【０１０８】
ＦｃＭＴ３変異型Ｆｃ領域を有する変異型キメラ４Ｄ５抗体の重鎖をエンコードする例示的な核酸分子（配列番号１２）：
caggttcagc tgcagcagtc tggccctgag ctggtgaagc caggggcctc
actcaagttg tcctgtacag cttctggctt caacatcaaa gacacctata
tccactgggt gaaacagagg cctgaacagg gcctggaatg gattggaagg
atttatccta ccaatggcta tactagatat gacccaaagt tccaggacaa
ggccactatc acagcagaca catcctccaa cacagcctac ctgcaagtca
gccgcctgac atctgaggac actgccgtct attactgctc ccggtgggga
ggggacggct tctatgctat ggactactgg ggtcagggag cctccgtgac
cgtgagctcc gcctccacca agggcccatc ggtcttcccc ctggcaccct
cctccaagag cacctctggg ggcacagcgg ccctgggctg cctggtcaag
gactacttcc ccgaaccggt gacggtgtcg tggaactcag gcgccctgac
cagcggcgtg cacaccttcc cggctgtcct acagtcctca ggactctact
ccctcagcag cgtggtgacc gtgccctcca gcagcttggg cacccagacc
tacatctgca acgtgaatca caagcccagc aacaccaagg tggacaagag
agttgagccc aaatcttgtg acaaaactca cacatgccca ccgtgcccag
cacctgaact cctgggggga ccgtcagtct tcctcttacc cccaaaaccc
aaggacaccc tcatgatctc ccggacccct gaggtcacat gcgtggtggt
ggacgtgagc cacgaagacc ctgaggtcaa gttcaactgg tacgtggacg
gcgtggaggt gcataatgcc aagacaaagc cgccggagga gcagtacaac
agcacgctcc gtgtggtcag cgtcctcacc gtcctgcacc aggactggct
gaatggcaag gagtacaagt gcaaggtctc caacaaagcc ctcccagccc
ccatcgagaa aaccatctcc aaagccaaag ggcagccccg agaaccacag
gtgtacaccc tgcccccatc ccgggatgag ctgaccaaga accaggtcag
cctgacctgc ctggtcaaag gcttctatcc cagcgacatc gccgtggagt
gggagagcaa tgggcagccg gagaacaact acaagaccac gcctcccgtg
ctggactccg acggctcctt cttcctctac agcaagctca ccgtggacaa
gagcaggtgg cagcagggga acgtcttctc atgctccgtg atgcatgagg
ctctgcacaa ccactacacg cagaagagcc tctccctgtc tccgggtaaa
tga
【０１０９】
一実施形態では、本発明は、Ｆｃ領域に修飾を有し、かつ配列番号８の核酸配列によってエンコードされる、又は配列番号９のアミノ酸配列を含む、又は配列番号１０の核酸配列によってエンコードされる、又は配列番号１１のアミノ酸配列を含む、又は配列番号１２の核酸配列によってエンコードされる、又は配列番号１３のアミノ酸配列を含む、変異型キメラ４Ｄ５抗体の使用を対象とする。
【０１１０】
一実施形態では、本発明は、ＶＬドメインにＮ６５Ｓ修飾を有する免疫グロブリン軽鎖、及び修飾されたＦｃ領域を有する免疫グロブリン重鎖を含む、抗ＨＥＲ２／ｎｅｕ抗体の使用を対象とする。好ましくは、このような抗ＨＥＲ２／ｎｅｕ抗体は、配列番号２のアミノ酸配列を有する軽鎖、並びに配列番号７、配列番号９、配列番号１１及び配列番号１３からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する重鎖を含む、キメラ４Ｄ５抗体又は変異型キメラ４Ｄ５抗体である。いくつかの実施形態では、本発明の抗ＨＥＲ２／ｎｅｕ抗体は更に、いくつかの実施形態では少なくとも配列番号４を含む軽鎖可変ドメインに融合した軽鎖定常ドメインを含む。他の実施形態では、上記抗体は修飾されているか、断片であるか、又は修飾された断片である。
【０１１１】
活性化低親和性Ｆｃ受容体への結合を増強し、かつ低親和性阻害因子受容体ＣＤ３２Ｂ（ＦｃγＲＩＩｂ）への結合を変化させない、又は最小限しか増大させないように、本発明の様々な実施形態に従ってキメラ４Ｄ５抗体を構成した。上記抗体は、以下の野生型及びＦｃ最適化抗体を含む：
・ｃｈ４Ｄ５−野生型Ｆｃ：これは、配列番号２のアミノ酸配列の軽鎖、及び配列番号７のアミノ酸配列の重鎖を有する。ｃｈ４Ｄ５−野生型Ｆｃは、軽鎖にＮ６５Ｓ置換を有し、これは脱グルコシル化軽鎖をもたらす。
・ｃｈ４Ｄ５−ＦｃＭＴ１：これは、配列番号２のアミノ酸配列の軽鎖、及び配列番号９のアミノ酸配列の重鎖を有する。ｃｈ４Ｄ５−ＦｃＭＴ１は、軽鎖にＮ６５Ｓ置換を有し、これは脱グルコシル化軽鎖をもたらし、また重鎖にＦ２４３Ｌ、Ｒ２９２Ｐ、Ｙ３００Ｌ、Ｖ３０５Ｉ及びＰ３９６Ｌ置換を有する（全てKabatに従って番号付与されている）。ｃｈ４Ｄ５−ＦｃＭＴ１は、ヒトＣＤ１６Ａ（ＦｃγＲＩＩＩ−Ａ）への結合が１０倍増大し、ＣＤ１６−１５８Pheへの結合は、ＣＤ１６−１５８Valへの結合よりも、これに比例して増強されている。
・ｃｈ４Ｄ５−ＦｃＭＴ２（「マルゲツキシマブ」ＣＡＳ登録番号：１３５０６２４−７５−７）：これは、配列番号２のアミノ酸配列の軽鎖、及び配列番号１１のアミノ酸配列の重鎖を有する。マルゲツキシマブは、軽鎖にＮ６５Ｓ置換を有し、これは脱グルコシル化軽鎖をもたらし、また重鎖にＬ２３５Ｖ、Ｆ２４３Ｌ、Ｒ２９２Ｐ、Ｙ３００Ｌ及びＰ３９６Ｌ置換を有する（全てKabatに従って番号付与されている）。この抗体は、ｃｈ４Ｄ５−ＦｃＭＴ１抗体を更に精製したものであり、同様のＣＤ１６Ａ結合特性を有するが、ＣＤ３２Ｂ（ＦｃγＲＩＩＢ）への結合がより好ましく低下している。
・ｃｈ４Ｄ５−ＦｃＭＴ３：これは、配列番号２のアミノ酸配列の軽鎖、及び配列番号１３のアミノ酸配列の重鎖を有する。ｃｈ４Ｄ５−ＦｃＭＴ３、軽鎖にＮ６５Ｓ置換を有し、これは脱グルコシル化軽鎖をもたらし、また重鎖にＦ２４３Ｌ、Ｒ２９２Ｐ及びＹ３００Ｌ置換を有する（全てKabatに従って番号付与されている）。この抗体は、ｃｈ４Ｄ５−ＦｃＭＴ１抗体を更に精製したものであり、同様のＣＤ１６Ａ結合特性を有するが、ＣＤ３２Ｂ（ＦｃγＲＩＩＢ）への結合がより好ましく低下している。
・ｃｈ４Ｄ５−Ｎ２９７Ｑ（本明細書では「ｃｈ４Ｄ５−Ａｇ」とも呼ばれる）：これは、配列番号２のアミノ酸配列の軽鎖、及びＮ２９７Ｑ置換を有する重鎖を有する（Kabatに従って番号付与されている）。
【０１１２】
ｃｈ４Ｄ５−野生型Ｆｃ、並びにＦｃ最適化変異型ｃｈ４Ｄ５−ＦｃＭＴ１、ｃｈ４Ｄ５−ＦｃＭＴ２及びｃｈ４Ｄ５−ＦｃＭＴ３の重鎖配列の比較を、図２に示す。ＣＤＲは、関連する残基の下側の黒色のバーで示されている。
【０１１３】
Ｂ．ＰＤ−１に特異的に結合する分子
本発明に包含されるＰＤ−１に特異的に結合する分子は、ヒトＰＤ−１の連続又は不連続（例えば配座）部分（エピトープ）に特異的に結合できる抗ＰＤ−１抗体を含む。本発明の方法において使用されるＰＤ−１抗体は好ましくは、１つ又は複数の非ヒト種、特にマウス、ロバ、イヌ及び霊長類種のＰＤ−１分子に結合する能力も示す。
ＰＤ−１に特異的な抗体は公知である（例えば、米国特許出願第６２／１９８，８６７号；米国特許第５，９５２，１３６号；米国特許第７，４８８，８０２号；米国特許第７，５２１，０５１号；米国特許第８，００８，４４９号；米国特許第８，０８８，９０５号；米国特許第８，３５４，５０９号；米国特許第８，５５２，１５４号；米国特許第８，７７９，１０５号；米国特許第８，９００，５８７号；米国特許第９，０８４，７７６号；国際公開第２００４／０５６８７５号；国際公開第２００６／１２１１６８号；国際公開第２００８／１５６７１２号；国際公開第２０１２／１３５４０８号；国際公開第２０１２／１４５４９３号；国際公開第２０１３／０１４６６８号；国際公開第２０１４／１７９６６４号；国際公開第２０１４／１９４３０２号；及び国際公開第２０１５／１１２８００号を参照）。更なる所望の抗体は、ＰＤ−１又はそのペプチド断片を用いて誘発される抗体分泌ハイブリドーマを単離することによって作製できる。（２０個のアミノ酸残基シグナル配列（下線が付されている）及び２６８個のアミノ酸残基成熟タンパク質を含む）ヒトＰＤ−１は、アミノ酸配列（配列番号１４）：
MQIPQAPWPV VWAVLQLGWR PGWFLDSPDR PWNPPTFSPA LLVVTEGDNA
TFTCSFSNTS ESFVLNWYRM SPSNQTDKLA AFPEDRSQPG QDCRFRVTQL
PNGRDFHMSV VRARRNDSGT YLCGAISLAP KAQIKESLRA ELRVTERRAE
VPTAHPSPSP RPAGQFQTLV VGVVGGLLGS LVLLVWVLAV ICSRAARGTI
GARRTGQPLK EDPSAVPVFS VDYGELDFQW REKTPEPPVP CVPEQTEYAT
IVFPSGMGTS SPARRGSADG PRSAQPLRPE DGHCSWPL
を有する。
【０１１４】
好ましい抗ＰＤ−１抗体は：抗ヒトＰＤ−１モノクローナル抗体「ＰＤ−１  ｍＡｂ  １」（ニボルマブ、ＣＡＳ登録番号：９４６４１４−９４−４、５Ｃ４、ＢＭＳ−９３６５５８、ＯＮＯ−４５３８、ＭＤＸ−１１０６としても公知、Ｂｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ  ＳｑｕｉｂｂがＯＰＤＩＶＯ（登録商標）として市販）；「ＰＤ−１  ｍＡｂ  ２」（ペンブロリズマブ（以前はランブロリズマブとして公知）、ＣＡＳ登録番号：１３７４８５３−９１−４、ＭＫ−３４７５、ＳＣＨ−９００４７５としても公知、ＭｅｒｃｋがＫＥＹＴＲＵＤＡ（登録商標）として市販）；「ＰＤ−１  ｍＡｂ  ３」（ＥＨ１２．２Ｈ７；Ｄａｎａ  Ｆａｒｂｅｒ）；「ＰＤ−１  ｍＡｂ  ４」（ピディリズマブ、ＣＡＳ登録番号：１０３６７３０−４２−３、ＣＴ−０１１としても公知、ＣｕｒｅＴｅｃｈ，）；又は表１で提供される抗ＰＤ−１抗体のうちのいずれの、ＶL及び／又はＶHドメインを有し、より好ましくは、このような抗ＰＤ−１モノクローナル抗体のＶL領域のＣＤＲのうちの１つ、２つ若しくは３つ全て及び／又はＶHドメインのＣＤＲのうちの１つ、２つ若しくは３つ全てを有する。本発明の方法及び組成物において有用な独特の結合特性を有する更なる抗ＰＤ−１抗体は、最近同定された（米国特許出願第６２／１９８，８６７号参照）。特に好ましいのは、抗ＰＤ−１抗体「ＰＤ−１  ｍＡｂ  ５」（ｈＰＤ−１  ｍＡｂ  ２、ＭａｃｒｏＧｅｎｉｃｓ）；「ＰＤ−１  ｍＡｂ  ６」（ｈＰＤ−１  ｍＡｂ  ７、ＭａｃｒｏＧｅｎｉｃｓ）；「ＰＤ−１  ｍＡｂ  ７」（ｈＰＤ−１  ｍＡｂ  ９、ＭａｃｒｏＧｅｎｉｃｓ）；「ＰＤ−１  ｍＡｂ  ８」（ｈＰＤ−１  ｍＡｂ  １５、ＭａｃｒｏＧｅｎｉｃｓ）のヒト化ＶＨ及び／又はＶＬドメインを有し、より好ましくはこのような抗ＰＤ−１モノクローナル抗体のＶL領域のＣＤＲのうちの１つ、２つ若しくは３つ全て及び／又はＶHドメインのＣＤＲのうちの１つ、２つ若しくは３つ全てを有する、ＰＤ−１結合分子である。このような好ましい抗ＰＤ−１抗体は、変異型Ｆｃ領域を有する抗体、二重特異性（又は多重特異性）抗体、キメラ又はヒト化抗体、ＢｉＴｅ、ダイアボディ等を含む。
【０１１５】
ＰＤ−１  ｍＡｂ  １の重鎖可変ドメインのアミノ酸配列（配列番号１５）（ＣＤＲH残基には下線が付されている）：
QVQLVESGGG VVQPGRSLRL DCKASGITFS NSGMHWVRQA PGKGLEWVAV
IWYDGSKRYY ADSVKGRFTI SRDNSKNTLF LQMNSLRAED TAVYYCATND
DYWGQGTLVT VSS
【０１１６】
ＰＤ−１  ｍＡｂ  １のＣＤＲH１（配列番号１６）  NSGMH
【０１１７】
ＰＤ−１  ｍＡｂ  １のＣＤＲH２（配列番号１７）  VIWYDGSKRYYADSVKG
【０１１８】
ＰＤ−１  ｍＡｂ  １のＣＤＲH３（配列番号１８）  NDDY
【０１１９】
ＰＤ−１  ｍＡｂ  １の軽鎖可変ドメインのアミノ酸配列（配列番号１９）（ＣＤＲL残基には下線が付されている）：
EIVLTQSPAT LSLSPGERAT LSCRASQSVS SYLAWYQQKP GQAPRLLIYD
ASNRATGIPA RFSGSGSGTD FTLTISSLEP EDFAVYYCQQ SSNWPRTFGQ
GTKVEIK
【０１２０】
ＰＤ−１  ｍＡｂ  １のＣＤＲL１（配列番号２０）  RASQSVSSYLA
【０１２１】
ＰＤ−１  ｍＡｂ  １のＣＤＲL２（配列番号２１）  DASNRAT
【０１２２】
ＰＤ−１  ｍＡｂ  １のＣＤＲL３（配列番号２２）  QQSSNWPRT
【０１２３】
ＰＤ−１  ｍＡｂ  ２の重鎖可変ドメインのアミノ酸配列（配列番号２３）（ＣＤＲH残基には下線が付されている）：
QVQLVQSGVE VKKPGASVKV SCKASGYTFT NYYMYWVRQA PGQGLEWMGG
INPSNGGTNF NEKFKNRVTL TTDSSTTTAY MELKSLQFDD TAVYYCARRD
YRFDMGFDYW GQGTTVTVSS
【０１２４】
ＰＤ−１  ｍＡｂ  ２のＣＤＲH１（配列番号２４）  NYYMY
【０１２５】
ＰＤ−１  ｍＡｂ  ２のＣＤＲH２（配列番号２５）  GINPSNGGTNFNEKFKN
【０１２６】
ＰＤ−１  ｍＡｂ  ２のＣＤＲH３（配列番号２６）  RDYRFDMGFDY
【０１２７】
ＰＤ−１  ｍＡｂ  ２の軽鎖可変ドメインのアミノ酸配列（配列番号２７）（ＣＤＲL残基には下線が付されている）：
EIVLTQSPAT LSLSPGERAT LSCRASKGVS TSGYSYLHWY QQKPGQAPRL
LIYLASYLES GVPARFSGSG SGTDFTLTIS SLEPEDFAVY YCQHSRDLPL
TFGGGTKVEIK
【０１２８】
ＰＤ−１  ｍＡｂ  ２のＣＤＲL１（配列番号２８）  RASKGVSTSGYSYLH
【０１２９】
ＰＤ−１  ｍＡｂ  ２のＣＤＲL２（配列番号２９）  LASYLES
【０１３０】
ＰＤ−１  ｍＡｂ  ２のＣＤＲL３（配列番号３０）  QHSRDLPLT
【０１３１】
ＰＤ−１  ｍＡｂ  ３の重鎖可変ドメインのアミノ酸配列（配列番号３１）（ＣＤＲH残基には下線が付されている）：
QVQLQQSGAE LAKPGASVQM SCKASGYSFT SSWIHWVKQR PGQGLEWIGY
IYPSTGFTEY NQKFKDKATL TADKSSSTAY MQLSSLTSED SAVYYCARWR
DSSGYHAMDY WGQGTSVTVSS
【０１３２】
ＰＤ−１  ｍＡｂ  ３のＣＤＲH１（配列番号３２）  SSWIH
【０１３３】
ＰＤ−１  ｍＡｂ  ３のＣＤＲH２（配列番号３３）  YIYPSTGFTEYNQKFKD
【０１３４】
ＰＤ−１  ｍＡｂ  ３のＣＤＲH３（配列番号３４）  RWRDSSGYHAMDY
【０１３５】
ＰＤ−１  ｍＡｂ  ３の軽可変ドメインのアミノ酸配列（配列番号３５）（ＣＤＲL残基には下線が付されている）：
DIVLTQSPAS LTVSLGQRAT ISCRASQSVS TSGYSYMHWY QQKPGQPPKL
LIKFGSNLES GIPARFSGSG SGTDFTLNIH PVEEEDTATY YCQHSWEIPY
TFGGGTKLEI K
【０１３６】
ＰＤ−１  ｍＡｂ  ３のＣＤＲL１（配列番号３６）  RASQSVSTSGYSYMH
【０１３７】
ＰＤ−１  ｍＡｂ  ３のＣＤＲL２（配列番号３７）  FGSNLES
【０１３８】
ＰＤ−１  ｍＡｂ  ３のＣＤＲL３（配列番号３８）  QHSWEIPYT
【０１３９】
ＰＤ−１  ｍＡｂ  ４の重鎖可変ドメインのアミノ酸配列（配列番号３９）（ＣＤＲH残基には下線が付されている）：
QVQLVQSGSE LKKPGASVKI SCKASGYTFT NYGMNWVRQA PGQGLQWMGW
INTDSGESTY AEEFKGRFVF SLDTSVNTAY LQITSLTAED TGMYFCVRVG
YDALDYWGQG TLVTVSS
【０１４０】
ＰＤ−１  ｍＡｂ  ４のＣＤＲH１（配列番号４０）  NYGMN
【０１４１】
ＰＤ−１  ｍＡｂ  ４のＣＤＲH２（配列番号４１）  WINTDSGESTYAEEFKG
【０１４２】
ＰＤ−１  ｍＡｂ  ４のＣＤＲH３（配列番号４２）  VGYDALDY
【０１４３】
ＰＤ−１  ｍＡｂ  ４の軽鎖可変ドメインのアミノ酸配列（配列番号４３）（ＣＤＲL残基には下線が付されている）：
EIVLTQSPSS LSASVGDRVT ITCSARSSVS YMHWFQQKPG KAPKLWIYRT
SNLASGVPSR FSGSGSGTSY CLTINSLQPE DFATYYCQQR SSFPLTFGGG
TKLEIK
【０１４４】
ＰＤ−１  ｍＡｂ  ４のＣＤＲL１（配列番号４４）  SARSSVSYMH
【０１４５】
ＰＤ−１  ｍＡｂ  ４のＣＤＲL２（配列番号４５）  RTSNLAS
【０１４６】
ＰＤ−１  ｍＡｂ  ４のＣＤＲL３（配列番号４６）  QQRSSFPLT
【０１４７】
ＰＤ−１  ｍＡｂ  ５の重鎖可変ドメインのアミノ酸配列（配列番号５３）（ＣＤＲH残基には下線が付されている）：
EVQLVESGGG LVQPGGSLRL SCAASGFVFS SFGMHWVRQA PGKGLEWVAY 
ISSGSMSISY ADTVKGRFTI SRDNAKNTLY LQMNSLRTED TALYYCASLS 
DYFDYWGQGT TVTVSS
【０１４８】
ＰＤ−１  ｍＡｂ  ５のＣＤＲH１（配列番号５４）  SFGMH
【０１４９】
ＰＤ−１  ｍＡｂ  ５のＣＤＲH２（配列番号５５）  YISSGSMSISYADTVKG
【０１５０】
ＰＤ−１  ｍＡｂ  ５のＣＤＲH３（配列番号５６）  LSDYFDY
【０１５１】
ＰＤ−１  ｍＡｂ  ５の軽鎖可変ドメインのアミノ酸配列（配列番号５７）（ＣＤＲL残基には下線が付されている）：
DVVMTQSPLS LPVTLGQPAS ISCRSSQSLV HSTGNTYLHW YLQKPGQSPQ 
LLIYRVSNRF SGVPDRFSGS GSGTDFTLKI SRVEAEDVGV YYCSQTTHVP 
WTFGQGTKLE IK
【０１５２】
ＰＤ−１  ｍＡｂ  ５のＣＤＲL１（配列番号５８）  RSSQSLVHSTGNTYLH
【０１５３】
ＰＤ−１  ｍＡｂ  ５のＣＤＲL２（配列番号５９）  RVSNRFS
【０１５４】
ＰＤ−１  ｍＡｂ  ５のＣＤＲL３（配列番号６０）  SQTTHVPWT
【０１５５】
ＰＤ−１  ｍＡｂ  ６の重鎖可変ドメインのアミノ酸配列（配列番号６１）（ＣＤＲH残基には下線が付されている）：
QVQLVQSGAE VKKPGASVKV SCKASGYSFT SYWMNWVRQA PGQGLEWXGV 
IHPSDSETWL DQKFKDRVTI TVDKSTSTAY MELSSLRSED TAVYYCAREH 
YGTSPFAYWG QGTLVTVSS 
ここでXはI又はAである。
【０１５６】
ＰＤ−１  ｍＡｂ  ６のＣＤＲH１（配列番号６２）  SYWMN
【０１５７】
ＰＤ−１  ｍＡｂ  ６のＣＤＲH２（配列番号６３）  VIHPSDSETWLDQKFKD
【０１５８】
ＰＤ−１  ｍＡｂ  ６のＣＤＲH３（配列番号６４）  EHYGTSPFAY
【０１５９】
ＰＤ−１  ｍＡｂ  ６の軽鎖可変ドメインのアミノ酸配列（配列番号６５）（ＣＤＲL残基には下線が付されている）：
EIVLTQSPAT  LSLSPGERAT LSCRAX1ESVD NYGMSFMNWF QQKPGQPPKL 
LIHAASNX2GS GVPSRFSGSG SGTDFTLTIS  SLEPEDFAVY FCQQSKEVPY 
TFGGGTKVEI  K
ここでＸ1はＮ若しくはＳであり、かつＸ2はＱ若しくはＲであるか；又はＸ1はＮであり、Ｘ2はＱであるか；又はＸ1はＳであり、Ｘ2はＱであるか；又はＸ1はＳであり、Ｘ2はＲである。
【０１６０】
ＰＤ−１  ｍＡｂ  ６のＣＤＲL１（配列番号６６）  RAX1ESVDNYGMSFMN
ここでＸ１は上述の通りである。
【０１６１】
ＰＤ−１  ｍＡｂ  ６のＣＤＲL２（配列番号６７）  AASNX2GS
ここでＸ2は上述の通りである。
【０１６２】
ＰＤ−１  ｍＡｂ  ６のＣＤＲL３（配列番号６８）  QQSKEVPYT
【０１６３】
特定の実施形態では、ＰＤ−１  ｍＡｂ  ６は：
（ａ）配列番号６１、ただしＸはＩである；及び配列番号６５、ただしＸ1はＮであり、Ｘ2はＱである；又は
（ｂ）配列番号６１、ただしＸはＩである；及び配列番号６５、ただしＸ1はＳであり、Ｘ2はＱである
を含む。
【０１６４】
ＰＤ−１  ｍＡｂ  ７の重鎖可変ドメインのアミノ酸配列（配列番号６９）（ＣＤＲH残基には下線が付されている）：
EVQLVESGGG LX1RPGGSLKL SCAASGFTFS SYLVX2WVRQA PGKGLEWX3AT 
ISGGGGNTYY SDSVKGRFTI  SRDNAKNSLY LQMNSX4RAED TATYYCARYG 
FDGAWFAYWG QGTLVTVSS
ここでＸ1はＶ若しくはＡであり、Ｘ2はＳ若しくはＧであり、Ｘ3はＶ若しくはＴであり、Ｘ4はＬ若しくはＡであるか；Ｘ1はＶであり、Ｘ2はＳであり、Ｘ3はＶであり、Ｘ4はＬであるか；又はＸ1はＡであり、Ｘ2はＧであり、Ｘ3はＴであり、Ｘ4はＡである。
【０１６５】
ＰＤ−１  ｍＡｂ  ７のＣＤＲH１（配列番号７０）  SYLVX2
ここでＸ２は上述の通りである。
【０１６６】
ＰＤ−１  ｍＡｂ  ７のＣＤＲH２（配列番号７１）  TISGGGGNTYYSDSVKG
【０１６７】
ＰＤ−１  ｍＡｂ  ７のＣＤＲH３（配列番号７２）  YGFDGAWFAY
【０１６８】
ＰＤ−１  ｍＡｂ  ７の軽鎖可変ドメインのアミノ酸配列（配列番号７３）（ＣＤＲL残基には下線が付されている）：
DIQMTQSPSS LSASVGDRVT ITCRASENIY X1YLAWYQQKP GKAPKLLIYX2 
AKTLAAGVPS RFSGSGSGTD FTLTISSLQP EDFATYYCQH  HYAVPWTFGQ 
GTKLEIK
ここでＸ1はＮ若しくはＳであり、Ｘ2はＮ若しくはＤであるか；Ｘ1はＳであり、Ｘ2はＮであるか；又はＸ1はＮであり、Ｘ2はＤである。
【０１６９】
ＰＤ−１  ｍＡｂ  ７のＣＤＲL１（配列番号７４）  RASENIYX1YLA
ここでＸ１は上述の通りである。
【０１７０】
ＰＤ−１  ｍＡｂ  ７のＣＤＲL２（配列番号７５）  X2AKTLAA
ここでＸ２は上述の通りである。
【０１７１】
ＰＤ−１  ｍＡｂ  ７のＣＤＲL３（配列番号７６）  QHHYAVPWT
【０１７２】
特定の実施形態では、ＰＤ−１  ｍＡｂ  ７は：
（ａ）配列番号６９、ただしＸ1はＶであり、Ｘ2はＳであり、Ｘ3はＶであり、Ｘ4はＬである；及び配列番号７３、ただしＸ1はＳであり、Ｘ2はＮである；又は
（ｂ）配列番号６９、ただしＸ1はＡであり、Ｘ2はＧであり、Ｘ3はＴであり、Ｘ4はＡである；及び配列番号７３、ただしＸ1はＮであり、Ｘ2はＤである
を含む。
【０１７３】
ＰＤ−１  ｍＡｂ  ８の重鎖可変ドメインのアミノ酸配列（配列番号７７）（ＣＤＲH残基には下線が付されている）：
EVQLVESGGG LVRPGGSLRL SCAASGFTFS SYLISWVRQA PGKGLEWVAA 
ISGGGADTYY ADSVKGRFTI SRDNAKNSLY LQMNSLRAED TATYYCARRG 
TYAMDYWGQG TLVTVSS
【０１７４】
ＰＤ−１  ｍＡｂ  ８のＣＤＲH１（配列番号７８）  SYLIS
【０１７５】
ＰＤ−１  ｍＡｂ  ８のＣＤＲH２（配列番号７９）  AISGGGADTYYADSVKG
【０１７６】
ＰＤ−１  ｍＡｂ  ８のＣＤＲH３（配列番号８０）  RGTYAMDY
【０１７７】
ＰＤ−１  ｍＡｂ  ８の軽鎖可変ドメインのアミノ酸配列（配列番号８１）（ＣＤＲL残基には下線が付されている）：
DIQMTQSPSS LSASVGDRVT ITCRASENIY NYLAWYQQKP GKAPKLLIYD 
AKTLAAGVPS RFSGSGSGTD FTLTISSLQP EDFATYYCQH HYAVPWTFGQ 
GTKLEIK
【０１７８】
ＰＤ−１  ｍＡｂ  ８のＣＤＲL１（配列番号８２）  RASENIYNYLA
【０１７９】
ＰＤ−１  ｍＡｂ  ８のＣＤＲL２（配列番号８３）  DAKTLAA
【０１８０】
ＰＤ−１  ｍＡｂ  ８のＣＤＲL３（配列番号８４）  QHHYAVPWT
【０１８１】
【表１】
2018516966.tif 000003
【０１８２】
特定の実施形態では、本発明の方法及び組成物において有用なＰＤ−１抗体は、上述の抗体（例えばＰＤ−１  ｍＡｂ  １、ＰＤ−１  ｍＡｂ  ２、ＰＤ−１  ｍＡｂ  ３、ＰＤ−１  ｍＡｂ  ４、ＰＤ−１  ｍＡｂ  ５、ＰＤ−１  ｍＡｂ  ６、ＰＤ−１  ｍＡｂ  ７、ＰＤ−１  ｍＡｂ  ８、又は表１の抗ＰＤ−１抗体のうちのいずれ）のうちのいずれのＶＬ及びＶＨドメイン、κＣＬドメイン、並びに任意にＣ末端リシン残基を有しないＩｇＧ４  Ｆｃドメインを備える。このような抗体は好ましくは、ＩｇＧ４  ＣＨ１ドメイン及びヒンジを備え、より好ましくは、Ｓ２２８Ｐ置換（番号付与はKabatにおいてと同様にＥＵインデックスに従ったものである）を含む安定化ＩｇＧ４ヒンジを備える。
【０１８３】
κＣＬドメインのアミノ酸配列（配列番号８６）は：
RTVAAPSVFI FPPSDEQLKS GTASVVCLLN NFYPREAKVQ WKVDNALQSG 
NSQESVTEQD SKDSTYSLSS TLTLSKADYE KHKVYACEVT HQGLSSPVTK 
SFNRGEC
である。
【０１８４】
ＩｇＧ４  ＣＨ１ドメイン及び安定化ヒンジのアミノ酸配列（配列番号８７）は：
ASTKGPSVFP LAPCSRSTSE STAALGCLVK DYFPEPVTVS WNSGALTSGV 
HTFPAVLQSS GLYSLSSVVT VPSSSLGTKT YTCNVDHKPS NTKVDKRVES 
KYGPPCPPCP 
である。
【０１８５】
ＩｇＧ４  ＣＨ２−ＣＨ３ドメインのアミノ酸配列（配列番号５２）を以下に提示する。
【０１８６】
「ＰＤ−１  ｍＡｂ  ６−ＩＳＱ」と呼称される例示的な抗ＰＤ−１抗体は：ＰＤ−１  ｍＡｂ  ６のＶＬドメイン（配列番号６５）（ただしＸ1はＳであり、Ｘ2はＱである）と、κＣＬ（配列番号８６）とを有する軽鎖；及びＰＤ−１  ｍＡｂ  ６のＶＨドメイン（配列番号６１）（ただしＸ1はＩである）と、ＩｇＧ４  ＣＨ１ドメインと、安定化ＩｇＧ  ４ヒンジ（配列番号８７）と、ＩｇＧ４  ＣＨ２−ＣＨ３ドメイン（配列番号５２）とを有する重鎖を含む。
【０１８７】
ＰＤ−１  ｍＡｂ  ６−ＩＳＱの完全な軽鎖のアミノ酸配列（配列番号８７）を以下に示す（ＣＤＲL残基には下線が付されている）：
EIVLTQSPAT LSLSPGERAT LSCRASESVD NYGMSFMNWF QQKPGQPPKL 
LIHAASNQGS GVPSRFSGSG SGTDFTLTIS SLEPEDFAVY FCQQSKEVPY
TFGGGTKVEI KRTVAAPSVF IFPPSDEQLK SGTASVVCLL NNFYPREAKV 
QWKVDNALQS GNSQESVTEQ DSKDSTYSLS STLTLSKADY EKHKVYACEV 
THQGLSSPVT KSFNRGEC
【０１８８】
ＰＤ−１  ｍＡｂ  ６−ＩＳＱの完全な重鎖のアミノ酸配列（配列番号８８）を以下に示す（ＣＤＲH残基には下線が付されている）：
QVQLVQSGAE VKKPGASVKV SCKASGYSFT SYWMNWVRQA PGQGLEWIGV 
IHPSDSETWL DQKFKDRVTI TVDKSTSTAY MELSSLRSED TAVYYCAREH
YGTSPFAYWG QGTLVTVSSA STKGPSVFPL APCSRSTSES TAALGCLVKD 
YFPEPVTVSW NSGALTSGVH TFPAVLQSSG LYSLSSVVTV PSSSLGTKTY 
TCNVDHKPSN TKVDKRVESK YGPPCPPCPA PEFLGGPSVF LFPPKPKDTL 
MISRTPEVTC VVVDVSQEDP EVQFNWYVDG VEVHNAKTKP REEQFNSTYR 
VVSVLTVLHQ DWLNGKEYKC KVSNKGLPSS IEKTISKAKG QPREPQVYTL 
PPSQEEMTKN QVSLTCLVKG FYPSDIAVEW ESNGQPENNY KTTPPVLDSD 
GSFFLYSRLT VDKSRWQEGN VFSCSVMHEA LHNHYTQKSL SLSLG
【０１８９】
別の例示的な抗ＰＤ−１抗体は、ＰＤ−１  ｍＡｂ  １（ニボルマブ）であり、これは：ＶＬドメイン（配列番号１９）とκＣＬドメイン（例えば配列番号８６参照）とを有する軽鎖；並びにＶＨドメイン（配列番号１５）、ＩｇＧ４  ＣＨ１ドメイン及び安定化ヒンジ（例えば配列番号８７参照）と、ＩｇＧ４  ＣＨ２−ＣＨ３ドメイン（例えば配列番号５４参照）とを有する重鎖を含む、ヒト抗体である。
【０１９０】
別の例示的な抗ＰＤ−１抗体は、ＰＤ−１  ｍＡｂ  ２（ペンブロリズマブ）であり、これは：ＶＬドメイン（配列番号２７）とκＣＬドメイン（例えば配列番号８６参照）とを有する軽鎖；並びにＶＨドメイン（配列番号２３）と、ＩｇＧ４  ＣＨ１及び安定化ＩｇＧ４ヒンジ（例えば配列番号８７参照）と、ＩｇＧ４  ＣＨ２−ＣＨ３ドメイン（例えば配列番号５２参照）とを有する重鎖を含む、ヒト化抗体である。
【０１９１】
Ｃ．抗体変異型
抗体変異型を調製できるとも考えられる。上記変異型は、そのアミノ酸配列内の所望の位置に、天然アミノ酸配列に対する配列修飾（例えば置換、欠失及び／又は追加）を有してよい。当業者であれば、アミノ酸の変化により、例えばグリコシル化部位の数若しくは位置の変更、又は膜アンカー特性の変更といった、抗体の転写後プロセスが変化し得ることを理解するだろう。ある好ましい実施形態では、上記抗体及び変異型は、Ｆｃ領域変異型である。
【０１９２】
変異型は、天然抗体に比べて同一の又は変化した活性を有し得る。例えば、上記変異型は同一の活性を有するものの、例えば米国特許第５，７３９，２７７号に記載されているように、例えば上記抗体をアルブミン又はサルベージ受容体結合エピトープとコンジュゲートすることによって、より安定するよう、又はより長いインビボ半減期を有するような様式で修飾されることが望ましい場合がある。あるいは例えば、抗体が、抗原に対する結合親和性を増大させるものの、天然抗体と同一のエフェクタ機能を有することが望ましい場合があり、又は抗体が、抗原に対する同一の結合親和性を有するものの、エフェクタ機能が低下することが望ましい場合がある。活性は例えば、ＥＬＩＳＡアッセイ、表面プラズモン共鳴アッセイ、放射標識タンパク質結合アッセイ（ＲＩＡ）、又は免疫沈降アッセイといったインビトロアッセイを用いて試験できる。
【０１９３】
機能又は免疫学的アイデンティティの大幅な修飾は：（ａ）修飾の領域内のポリペプチド骨格の構造を、例えばシート若しくは螺旋構造として；（ｂ）標的部位における上記分子の電荷若しくは疎水性を；又は（ｃ）側鎖のかさを、維持することに対して、機能が大幅に異なる修飾を選択することによって達成できる。例えばCunningham and Wells (1989) Science 244:1081−1085に記載されているように、走査アミノ酸分析を採用して、連続する配列に沿った１つ又は複数のアミノ酸を同定することもできる。走査アミノ酸のうち、アラニン、グリシン、セリン及びシステインといった比較的小型の中性アミノ酸が好ましい。この群の中で、アラニンは典型的に好ましい走査アミノ酸である。というのは、これは最も一般的なアミノ酸であり、露出していない部分及び露出している部分の両方に頻繁に見られ、またこれは、β炭素を超えた側鎖を排除し、変異型の主要な鎖構造を変化させにくいためである。アラニン置換が充分な量の変異型をもたらさない場合、異性体アミノ酸を使用できる。更に、抗体又はポリペプチドの適切な構成の維持に関与しないいずれのシステイン残基を、一般にはセリンで置換することによって、上記分子の酸化安定性を改善し、異常な架橋を防止できる。しかしながら特定の状況、特に上記抗体がＦｖ断片等の抗体断片である状況において、１つ又は複数のシステイン結合を上記抗体又はポリペプチドに追加することによって、その安定性を改善できる。
【０１９４】
ＣＤＲ残基の単一のアミノ酸改変が、機能的結合の損失につながり得るという事実（Rudikoff, S. etc. (1982) "Single Amino Acid Substitution Altering Antigen-Binding Specificity," Proc. Natl. Acad. Sci. (USA) 79(6): 1979-1983）は、代替的な機能性ＣＤＲ配列を組織的に識別するための手段を提供する。上述のような変異型ＣＤＲを得るための１つの好ましい方法では、上記ＣＤＲをエンコードするポリヌクレオチドを（例えばランダム突然変異誘発によって、又は部位指向性の方法（例えば突然変異した座をエンコードするプライマによるポリメラーゼ鎖仲介型増幅）によって）突然変異誘発して、置換されたアミノ酸残基を有するＣＤＲを産生する。オリジナルの（機能性）ＣＤＲ配列中の関連する残基の同一性を、置換された（非機能性）変異型ＣＤＲ配列の同一性と比較することによって、当該置換に関するＢＬＯＳＵＭ６２．ｉｉｊ置換スコアを識別できる。ＢＬＯＳＵＭシステムは、信頼できる整列のために配列のデータベースを分析することによって生成されたアミノ酸置換のマトリクスを提供する（Eddy, S.R. (2004) "Where Did The BLOSUM62 Alignment Score Matrix Come From?," Nature Biotech. 22(8): 1035-1036; Henikoff, J.G. (1992) "Amino acid substitution matrices from protein blocks," Proc. Natl. Acad. Sci. (USA) 89: 10915-10919; Karlin, S. et al. (1990) "Methods For Assessing The Statistical Significance Of Molecular Sequence Features By Using General Scoring Schemes," Proc. Natl. Acad. Sci. (USA) 87:2264-2268; Altschul, S.F. (1991) "Amino Acid Substitution Matrices From An Information Theoretic Perspective," J. Mol. Biol. 219, 555-565）。現在、最も進化したＢＬＯＳＵＭデータベースは、ＢＬＯＳＵＭ６２データベース（ＢＬＯＳＵＭ６２．ｉｉｊ）である。以下の表２は、ＢＬＯＳＵＭ６２．ｉｉｊ置換スコアを示す（スコアが高いほど置換が保存的であり、従って置換が機能に影響を与えにくい）。例えば、結果として得られるＣＤＲを含む抗原結合性断片がＲＯＲ１に結合できない場合、ＢＬＯＳＵＭ６２．ｉｉｊ置換スコアは、十分に保存的でないと考えられ、より高い置換スコアを有する新たな置換候補が選択及び産生される。従って例えば、オリジナルの残基がグルタミン酸（Ｅ）であり、非機能性置換残基がヒスチジン（Ｈ）であった場合、ＢＬＯＳＵＭ６２．ｉｉｊ置換スコアは０となり、（アスパラギン酸、アスパラギン、グルタミン又はリシン等への）より保存的な変化が好ましい。
【０１９５】
【表２】
2018516966.tif 000004
【０１９６】
従って本発明は、改善されたＣＤＲを同定するための、誘導又はランダム突然変異誘発の使用を考えるものである。
【０１９７】
Ｄ．Ｆｃ領域変異型
従来の免疫機能では、抗体−抗原複合体と免疫系の細胞との相互作用は、ＡＤＣＣ、肥満細胞脱顆粒及び食作用等のエフェクタ機能から、リンパ球増殖及び抗体分泌を制御するもの等の免疫調節性信号にまで及ぶ、広範な応答をもたらす。これらの相互作用は全て、抗体又は免疫複合体のＦｃ領域の、造血細胞上の特殊化された細胞表面受容体への結合によって開始される。抗体及び免疫複合体によってトリガされる細胞応答の多様性は、３つのＦｃ受容体：ＦｃγＲＩ（ＣＤ６４）、ＦｃγＲＩＩ（ＣＤ３２）及びＦｃγＲＩＩＩ（ＣＤ１６）の構造不均質性によって得られる。ＦｃγＲＩ（ＣＤ６４）、ＦｃγＲＩＩＡ（ＣＤ３２Ａ）及びＦｃγＲＩＩＩ（ＣＤ１６）は活性化（即ち免疫系増強）受容体であり；ＦｃγＲＩＩＢ（ＣＤ３２Ｂ）は阻害性（即ち免疫系減衰）受容体。
【０１９８】
上記ＩｇＧ１  Ｆｃ領域のアミノ酸配列を以下に示す（配列番号４９として；Kabatに従った番号付与）：
231      240          250          260          270          280
APELLGGPSV   FLFPPKPKDT   LMISRTPEVT   CVVVDVSHED   PEVKFNWYVD
290          300          310          320          330
GVEVHNAKTK   PREEQYNSTY   RVVSVLTVLH   QDWLNGKEYK   CKVSNKALPA
340          350          360          370          380
PIEKTISKAK   GQPREPQVYT   LPPSREEMTK   NQVSLTCLVK   GFYPSDIAVE
390          400          410          420          430
WESNGQPENN   YKTTPPVLDS   DGSFFLYSKL   TVDKSRWQQG   NVFSCSVMHE
440       447
ALHNHYTQKS   LSLSPGX
これはKabatによるＥＵインデックスに従って番号付与されており、Ｘはリシン（Ｋ）であるか、又は不在である。
【０１９９】
例示的なヒトＩｇＧ２のＣＨ２−ＣＨ３ドメインのアミノ酸配列は、（配列番号５０）：
231      240          250          260          270          280
APPVA-GPSV   FLFPPKPKDT   LMISRTPEVT   CVVVDVSHED   PEVQFNWYVD 
290          300          310          320          330
GVEVHNAKTK   PREEQFNSTF   RVVSVLTVVH   QDWLNGKEYK   CKVSNKGLPA 
340          350          360          370          380
PIEKTISKTK   GQPREPQVYT   LPPSREEMTK   NQVSLTCLVK   GFYPSDISVE 
390          400          410          420          430
WESNGQPENN   YKTTPPMLDS   DGSFFLYSKL   TVDKSRWQQG   NVFSCSVMHE 
440       447
ALHNHYTQKS   LSLSPGX
であり、これはKabatによるＥＵインデックスに従って番号付与されており、Ｘはリシン（Ｋ）であるか、又は不在である。
【０２００】
例示的なヒトＩｇＧ３のＣＨ２−ＣＨ３ドメインのアミノ酸配列は、（配列番号５１）：
231      240          250          260          270          280
APELLGGPSV   FLFPPKPKDT   LMISRTPEVT   CVVVDVSHED   PEVQFKWYVD 
290          300          310          320          330
GVEVHNAKTK   PREEQYNSTF   RVVSVLTVLH   QDWLNGKEYK   CKVSNKALPA   
340          350          360          370          380
PIEKTISKTK   GQPREPQVYT   LPPSREEMTK   NQVSLTCLVK   GFYPSDIAVE   
390          400          410          420          430
WESSGQPENN   YNTTPPMLDS   DGSFFLYSKL   TVDKSRWQQG   NIFSCSVMHE   
440       447
ALHNRFTQKS   LSLSPGX
であり、これはKabatによるＥＵインデックスに従って番号付与されており、Ｘはリシン（Ｋ）であるか、又は不在である。
【０２０１】
例示的なヒトＩｇＧ４のＣＨ２−ＣＨ３ドメインのアミノ酸配列は、（配列番号５２）：
231      240          250          260          270          280
APEFLGGPSV   FLFPPKPKDT   LMISRTPEVT   CVVVDVSQED   PEVQFNWYVD 
290          300          310          320          330
GVEVHNAKTK   PREEQFNSTY   RVVSVLTVLH   QDWLNGKEYK   CKVSNKGLPS 
340          350          360          370          380
SIEKTISKAK   GQPREPQVYT   LPPSQEEMTK   NQVSLTCLVK   GFYPSDIAVE 
390          400          410          420          430
WESNGQPENN   YKTTPPVLDS   DGSFFLYSRL   TVDKSRWQEG   NVFSCSVMHE 
440       447
ALHNHYTQKS   LSLSLGX
であり、これはKabatによるＥＵインデックスに従って番号付与されており、Ｘはリシン（Ｋ）であるか、又は不在である。
【０２０２】
多型は、抗体定常領域内の多数の異なる位置（例えばKabatに記載されているようなＥＵインデックスによる番号付与で２７０位、２７２位、３１２位、３１５位、３５６位及び３５８位を含むがこれらに限定されないＦｃ位置）において観察されており、従ってここで提示される配列と従来技術の配列との間にはわずかな差異が存在し得る。ヒト免疫グロブリンの多型形態は、十分に特性決定されている。現在、１８個のＧｍアロタイプが公知である：Ｇ１ｍ（１，２，３，１７）又はＧ１ｍ（ａ，ｘ，ｆ，ｚ）、Ｇ２ｍ（２３）又はＧ２ｍ（ｎ）、Ｇ３ｍ（５，６，１０，１１，１３，１４，１５，１６，２１，２４，２６，２７，２８）又はＧ３ｍ（ｂ１，ｃ３，ｂ３，ｂ０，ｂ３，ｂ４，ｓ，ｔ，ｇ１，ｃ５，ｕ，ｖ，ｇ５）（(Lefranc, G. et al., in The Human IgG Subclasses: Molecular Analysis Of Structure, Function And Regulation, (Shakib, F. (ed.) 1990, pp. 43-78, Pergamon, Oxford, ; Lefranc, G. et al., (1979) “Gm, Am And Km Immunoglobulin Allotypes Of Two Populations In Tunisia,” Hum. Genet. 50:199-211）。特に、本発明の抗体が、いずれの免疫グロブリン遺伝子のいずれのアロタイプ、アイソアロタイプ又はハプロタイプを組み込むことができ、本明細書中で提示される配列のアロタイプ、アイソアロタイプ又はハプロタイプに限定されないと考えられる。更に、発現系によっては、ＣＨ３ドメインのＣ末端アミノ酸残基（上述の配列番号４９~５２において太字で記載され、下線を付されている）は、翻訳後に除去できる。従ってＣＨ３ドメインのＣ末端残基（上では太字で記載され、下線を付されている）は、本発明の方法で使用される抗体中の、任意のアミノ酸残基である。
【０２０３】
Ｆｃ領域の修飾は通常、表現型の変化、例えば血清半減期の変化、安定性の変化、細胞酵素に対する感受性の変化又はエフェクタ機能の変化につながる。本発明の抗体をエフェクタ機能に関して修飾して、例えば癌の治療における抗体の有効性を増強することが望ましい場合がある。例えば、作用機序が、標的抗原を担持する細胞の殺滅ではなく遮断又は拮抗作用を伴う抗体の場合といった、特定の場合においては、エフェクタ機能の低減又は削減が望ましい。エフェクタ機能の上昇は、ＦｃγＲが低いレベルで発現する腫瘍及び外来細胞、例えばＦｃγＲＩＩＢのレベルが低い腫瘍特異性Ｂ細胞（例えば非ホジキンリンパ腫、ＣＬＬ及びバーキットリンパ腫）といった、望ましくない細胞を対象とする場合に一般に望ましい。上記実施形態では、エフェクタ機能活性が与えられた又は増強された本発明の分子は、エフェクタ機能活性の効率の増強が望ましい疾患、障害又は感染の治療及び／又は予防のために有用である。
【０２０４】
特定の実施形態では、本発明の分子は、Ｆｃ領域のアミノ酸に対する１つ又は複数の修飾を含み、これは上記Ｆｃドメイン領域、従って本発明の分子の、１つ又は複数のＦｃγＲ受容体に対する親和性及び結合活性を低下させる。他の実施形態では、本発明の分子は、上記Ｆｃ領域、従って本発明の分子の、１つ又は複数のＦｃγＲ受容体に対する親和性及び結合活性を上昇させる、Ｆｃ領域のアミノ酸に対する１つ又は複数の修飾を含む。他の実施形態では、上記分子は変異型Ｆｃ領域を含み、ここで上記変異型は、Ｆｃ領域を含まない、又は野生型Ｆｃ領域を含む分子に対して、ＡＤＣＣ活性の上昇、及び／又はＦｃγＲＩＩＡへの結合の増大を与える、又は仲介する。代替実施形態では、上記分子は変異型Ｆｃ領域を含み、ここで上記変異型は、Ｆｃ領域を含まない、又は野生型Ｆｃ領域を含む分子に対して、ＡＤＣＣ活性（若しくは他のエフェクタ機能）の低下、及び／又はＦｃγＲＩＩＢへの結合の増大を与える、又は仲介する。
【０２０５】
いくつかの実施形態では、本発明は、変異型Ｆｃ領域を含む分子を包含し、上記変異型Ｆｃ領域は、野生型Ｆｃ領域を含む同等の分子と比べて、いずれのＦｃγＲに対する検出可能な結合を示さない。他の実施形態では、本発明は、変異型Ｆｃ領域を含む分子を包含し、上記変異型Ｆｃ領域は、単一のＦｃγＲ、好ましくはＦｃγＲＩＩＡ、ＦｃγＲＩＩＢ、又はＦｃγＲＩＩＩＡのうちの１つにしか結合しない。
【０２０６】
本発明の分子は、活性化及び／又は阻害性Ｆｃγ受容体に対する親和性が変化し得る。一実施形態では、上記抗体又は分子は、野生型Ｆｃ領域を有する同等の分子と比べて、ＦｃγＲＩＩＢに対する親和性が上昇し、かつＦｃγＲＩＩＩＡ及び／又はＦｃγＲＩＩＡに対する親和性が低下した、変異型Ｆｃ領域を含む。別の実施形態では、本発明の分子は、野生型Ｆｃ領域を有する同等の分子と比べて、ＦｃγＲＩＩＢに対する親和性が低下し、かつＦｃγＲＩＩＩＡ及び／又はＦｃγＲＩＩＡに対する親和性が上昇した、変異型Ｆｃ領域を含む。更に別の実施形態では、本発明の分子は、野生型Ｆｃ領域を有する同等の分子と比べて、ＦｃγＲＩＩＢに対する親和性が低下し、かつＦｃγＲＩＩＩＡ及び／又はＦｃγＲＩＩＡに対する親和性が低下した、変異型Ｆｃ領域を含む。また更に別の実施形態では、本発明の分子は、野生型Ｆｃ領域を有する同等の分子と比べて、ＦｃγＲＩＩＢに対する親和性が変化せず、かつＦｃγＲＩＩＩＡ及び／又はＦｃγＲＩＩＡに対する親和性が低下（又は上昇）した、変異型Ｆｃ領域を含む。
【０２０７】
特定の実施形態では、本発明は、免疫グロブリンが増強されたエフェクタ機能、例えばＡＤＣＣを有するように、ＦｃγＲＩＩＩＡ及び／又はＦｃγＲＩＩＡに対する親和性が変化した変異型Ｆｃ領域を含む、免疫グロブリンを包含する。エフェクタ細胞機能の非限定的な例としては、ＡＤＣＣ、抗体依存性細胞食作用（ＡＤＣＰ）、食作用、オプソニン作用、オプソニン食作用、細胞結合、ロゼット形成、Ｃ１ｑ結合、及びＣＤＣが挙げられる。
【０２０８】
特に好ましい実施形態では、本発明は、変異型Ｆｃ領域を含むキメラ抗ＨＥＲ２／ｎｅｕ抗体を包含し、上記変異型は、当業者に公知でありかつ本明細書で例示されている方法を用いて測定される、増大したＡＤＣＣ活性及び／又は増大したＦｃγＲＩＩＩＡ（ＣＤ１６Ａ）への結合をもたらす、又は有する。本発明の方法に従って使用されるＡＤＣＣアッセイは、ＮＫ依存性又はマクロファージ依存性であってよい。
【０２０９】
特に好ましい実施形態では、本発明は、変異型Ｆｃ領域を含む、ＰＤ−１に特異的に結合する分子を包含し、上記変異型は、当業者に公知である、本明細書で例示されている方法を用いて測定した場合に、低下したＡＤＣＣ活性及び／又はＦｃγＲＩＩＩＡ（ＣＤ１６Ａ）に対する低下した結合を与える又は有する。本発明の方法に従って使用されるＡＤＣＣアッセイは、ＮＫ依存性又はマクロファージ依存性であってよい。更なる好ましい実施形態では、本発明は変異型Ｆｃ領域を含む、ＰＤ−１に特異的に結合する分子を包含し、上記変異型は、当業者に公知である、本明細書で例示されている方法を用いて測定した場合に、低下したＣＤＣ活性及び／又はＣ１ｑに対する低下した結合を与える又は有する。
【０２１０】
ある好ましい実施形態では、親和性又はエフェクタ機能の変化は、野生型Ｆｃ領域を含む同等の分子に対して少なくとも２倍、好ましくは少なくとも４倍、少なくとも５倍、少なくとも６倍、少なくとも７倍、少なくとも８倍、少なくとも９倍、少なくとも１０倍、少なくとも５０倍、又は少なくとも１００倍である。本発明の他の実施形態では、変異型Ｆｃ領域は、野生型Ｆｃ領域を含む分子に対して少なくとも６５％、好ましくは少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも１００％、少なくとも１２５％、少なくとも１５０％、少なくとも１７５％、少なくとも２００％、少なくとも２２５％、又は少なくとも２５０％高い親和性で、１つ又は複数のＦｃＲに特異的に結合する。このような測定は、インビボ又はインビトロアッセイとすることができ、好ましい実施形態では、ＥＬＩＳＡ又は表面プラズモン共鳴アッセイ等のインビトロアッセイである。
【０２１１】
様々な実施形態において、上記分子は、変異型Ｆｃ領域を含み、上記変異型は、ＦｃγＲ受容体の少なくとも１つの活性を刺激するか、又はＦｃγＲ受容体の少なくとも１つの活性に拮抗する。好ましい実施形態では、上記分子は、ＦｃγＲＩＩＢの１つ又は複数の活性、例えば、Ｂ細胞受容体−仲介型シグナリング、Ｂ細胞の活性化、Ｂ細胞増殖、抗体産生、Ｂ細胞の細胞内カルシウム流入、細胞周期進行、ＦｃεＲＩシグナリングのＦｃγＲＩＩＢ−仲介型阻害、ＦｃγＲＩＩＢのリン酸化、ＳＨＩＰ動員、ＳＨＩＰリン酸化及びＳｈｃとの連結、又はＦｃγＲＩＩＢシグナル伝達経路中の１つ若しくは複数の下流分子の活性（例えばＭＡＰキナーゼ、ＪＮＫ、ｐ３８若しくはＡｋｔ）を刺激する（又はこれに拮抗する）変異体を含む。別の実施形態では、上記分子は、ＦｃεＲＩの１つ又は複数の活性、例えば肥満細胞活性化、カルシウム可動化、脱顆粒、サイトカイン産生又はセロトニン放出を刺激する（又はこれに拮抗する）変異体を含む。
【０２１２】
特定の実施形態では、上記分子は、２つ以上のＩｇＧアイソタイプ（例えばＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３及びＩｇＧ４）からのドメイン又は領域を備えるＦｃ領域を含む。上記様々なＩｇＧアイソタイプは、例えばFlesch, B.K. and Neppert, J. (1999) "Functions Of The Fc Receptors For Immunoglobulin G " J. Clin. Lab. Anal. 14: 141-156; Chappel, M.S. et al. (1993) "Identification Of A Secondary Fc Gamma RI Binding Site Within A Genetically Engineered Human IgG Antibody J. Biol. Chem. 33:25124-25131; Chappel, M.S. et al. (1991) "Identification Of The Fc Gamma Receptor Class I Binding Site In Human IgG Through The Use Of Recombinant IgGl/IgG2 Hybrid And Point-Mutated Antibodies " Proc. Natl. Acad. Sci. (U.S.A.) 88:9036-9040; Briiggemann, M. et al. (1987) "Comparison Of The Effector Functions Of Human Immunoglobulins Using A Matched Set Of Chimeric Antibodies " J. Exp. Med 166: 1351-1361に記載されているような、そのヒンジ及び／又はＦｃ領域のアミノ酸配列の違いにより、血清半減期、補体結合、ＦｃγＲ結合親和性及びエフェクタ機能活性（例えばＡＤＣＣ、ＣＤＣ等）を含む様々な物理的及び機能的特性を呈する。このタイプの変異型Ｆｃ領域を、単独で、又はアミノ酸修飾と組み合わせて使用して、Ｆｃ仲介型エフェクタ機能及び／又は結合活性に影響を及ぼすことができる。組み合わせにおいて、アミノ酸修飾及びＩｇＧヒンジ／Ｆｃ領域は、同様の機能性（例えばＦｃγＲＩＩＡに対する親和性の上昇）を示すことができ、また相加的に、又はより好ましくは相乗的に作用して、野生型Ｆｃ領域を含む本発明の分子と比べて、本発明の分子のエフェクタ機能性を修飾できる。他の実施形態では、アミノ酸修飾及びＩｇＧ  Ｆｃ領域は反対の機能性（例えばそれぞれＦｃγＲＩＩＡに対する親和性の上昇及び低下）を示すことができ、また、同一のアイソタイプの、Ｆｃ領域を含まない又は野生型Ｆｃ領域を含む本発明の分子と比べて、本発明の分子の特異的機能性を選択的に調節又は低下させるよう作用できる。
【０２１３】
好ましい具体的実施形態では、上記分子は、変異型Ｆｃ領域を含み、上記変異型Ｆｃ領域は、野生型Ｆｃ領域に対する少なくとも１つのアミノ酸修飾を含み、これにより、上記変異体Ｆｃ領域が、Sondermann, P. et al. (2000) "The 3.2-A Crystal Structure Of The Human IgGI Fc Fragment-Fc GammaRIII Complex, " dAmz 406:267-273に開示されているもののようなＦｃ−ＦｃＲ相互作用の結晶学的及び構造的分析に基づいて、ＦｃγＲと直接接触する位置において置換を有しない場合に、上記分子のＦｃＲに対する親和性が変化する。ＦｃγＲと直接接触するＦｃ領域の位置の例は、アミノ酸残基２３４−２３９（ヒンジ領域）、アミノ酸残基２６５−２６９（Ｂ／Ｃループ）、アミノ酸残基２９７−２９９（Ｃ’／Ｅループ）及びアミノ酸残基３２７−３３２（Ｆ／Ｇループ）である。いくつかの実施形態では、本発明の分子は、構造的及び結晶学的分析に基づいてＦｃγＲと直接接触しない、例えばＦｃ−ＦｃγＲ結合部位内にない、少なくとも１つの残基の修飾を含む、変異型Ｆｃ領域を含む。
【０２１４】
変異型Ｆｃ領域は当該技術分野において公知であり、例えばＮＫ依存性又はマクロファージ依存性アッセイにおいて機能的にアッセイされるような、Ｆｃ領域（又はその一部）を含む本発明の分子が呈するエフェクタ機能を付与又は改変するために、いずれの公知のＦｃ変異体を本発明において使用してよい。例えば、変化したエフェクタ機能として識別されるＦｃ領域変異体は、抗体操作技術の分野において開示されており、上記分野において開示されているいずれの好適な変異体を、本発明の分子において使用してよい。
【０２１５】
特定の実施形態では、上記分子は、１つ又は複数の領域において１つ又は複数のアミノ酸修飾を有する変異型Ｆｃ領域を含み、上記１つ又は複数の修飾は、変異型Ｆｃ領域の、阻害型ＦｃγＲ（ＦｃγＲＩＩＢ等）に対する親和性に対する活性化ＦｃγＲ（ＦｃγＲＩＩＡ又はＦｃγＲＩＩＩＡ等）に対する親和性の比率を、（野生型Ｆｃ領域に対して）変化させる：
【数１】
2018516966.tif 000005
【０２１６】
あるＦｃ変異体の親和性の比率が１を超える場合、本発明の方法は、例えば癌又は感染症といった、ＦｃγＲが仲介するエフェクタ細胞機能（例えばＡＤＣＣ）の効率の増強が望まれる疾患、障害、若しくは感染の治療的若しくは予防的処置、又はその症状の寛解を提供するにあたって特定の用途を有する。あるＦｃ変異体の親和性の比率が１未満である場合、本発明の方法は、例えば自己免疫障害又は炎症性障害といった、ＦｃγＲが仲介するエフェクタ細胞機能の効率の低下が望まれる疾患、若しくは障害の治療的若しくは予防的処置、又はその症状の寛解を提供するにあたって特定の用途を有する。表３は、例示的な単一、二重、三重、四重及び五重突然変異を、その親和性の比率が１を超えるか１未満であるかによって列挙しており、これらの突然変異に関する更なる情報は、抗体操作技術の分野において見ることができる。
【０２１７】
【表３】
2018516966.tif 000006
【０２１８】
ある具体的な実施形態では、変異型Ｆｃ領域において、２３５、２４０、２４１、２４３、２４４、２４７、２６２、２６３、２６９、２９８、３２８、又は３３０位のうちのいずれにおけるいずれのアミノ酸修飾（例えば置換）、及び好ましくは以下の残基：Ａ２４０、Ｉ２４０、Ｌ２４１、Ｌ２４３、Ｈ２４４、Ｎ２９８、Ｉ３２８又はＶ３３０のうちの１つ又は複数。異なる具体的な実施形態では、変異型Ｆｃ領域において、２６８、２６９、２７０、２７２、２７６、２７８、２８３、２８５、２８６、２８９、２９２、２９３、３０１、３０３、３０５、３０７、３０９、３３１、３３３、３３４、３３５、３３７、３３８、３４０、３６０、３７３、３７６、４１６、４１９、４３０、４３４、４３５、４３７、４３８又は４３９位のうちのいずれにおけるいずれのアミノ酸修飾（例えば置換）、好ましくは以下の残基：Ｈ２８０、Ｑ２８０、Ｙ２８０、Ｇ２９０、Ｓ２９０、Ｔ２９０、Ｙ２９０、Ｎ２９４、Ｋ２９５、Ｐ２９６、Ｄ２９８、Ｎ２９８、Ｐ２９８、Ｖ２９８、Ｉ３００又はＬ３００。
【０２１９】
ある好ましい実施形態では、変化した親和性でＦｃγＲに結合する変異型Ｆｃ領域において、２５５、２５６、２５８、２６７、２６８、２６９、２７０、２７２、２７６、２７８、２８０、２８３、２８５、２８６、２８９、２９０、２９２、２９３、２９４、２９５、２９６、２９８、３００、３０１、３０３、３０５、３０７、３０９、３１２、３２０、３２２、３２６、３２９、３３０、３３２、３３１、３３３、３３４、３３５、３３７、３３８、３３９、３４０、３５９、３６０、３７３、３７６、４１６、４１９、４３０、４３４、４３５、４３７、４３８又は４３９位のうちのいずれにおけるいずれのアミノ酸修飾（例えば置換）。好ましくは、上記変異型Ｆｃ領域は、以下の残基のうちのいずれか１つを有する：Ａ２５６、Ｎ２６８、Ｑ２７２、Ｄ２８６、Ｑ２８６、Ｓ２８６、Ａ２９０、Ｓ２９０、Ａ２９８、Ｍ３０１、Ａ３１２、Ｅ３２０、Ｍ３２０、Ｑ３２０、Ｒ３２０、Ｅ３２２、Ａ３２６、Ｄ３２６、Ｅ３２６、Ｎ３２６、Ｓ３２６、Ｋ３３０、Ｔ３３９、Ａ３３３、Ａ３３４、Ｅ３３４、Ｈ３３４、Ｌ３３４、Ｍ３３４、Ｑ３３４、Ｖ３３４、Ｋ３３５、Ｑ３３５、Ａ３５９、Ａ３６０又はＡ４３０。
【０２２０】
異なる実施形態では、低下した親和性で（そのＦｃ領域を介して）ＦｃγＲに結合する変異型Ｆｃ領域において、２５２、２５４、２６５、２６８、２６９、２７０、２７８、２８９、２９２、２９３、２９４、２９５、２９６、２９８、３００、３０１、３０３、３２２、３２４、３２７、３２９、３３３、３３５、３３８、３４０、３７３、３７６、３８２、３８８、３８９、４１４、４１６、４１９、４３４、４３５、４３７、４３８、又は４３９位のうちのいずれにおけるいずれのアミノ酸修飾（例えば置換）。
【０２２１】
異なる実施形態では、増強された親和性で（そのＦｃ領域を介して）ＦｃγＲに結合する変異型Ｆｃ領域において、２８０、２８３、２８５、２８６、２９０、２９４、２９５、２９８、３００、３０１、３０５、３０７、３０９、３１２、３１５、３３１、３３３、３３４、３３７、３４０、３６０、３７８、３９８、又は４３０位のうちのいずれにおけるいずれのアミノ酸修飾（例えば置換）。異なる実施形態では、増強された親和性でＦｃγＲＩＩＡに結合する変異型Ｆｃ領域において、以下の残基のうちのいずれか１つ：Ａ２５５、Ａ２５６、Ａ２５８、Ａ２６７、Ａ２６８、Ｎ２６８、Ａ２７２、Ｑ２７２、Ａ２７６、Ａ２８０、Ａ２８３、Ａ２８５、Ａ２８６、Ｄ２８６、Ｑ２８６、Ｓ２８６、Ａ２９０、Ｓ２９０、Ｍ３０１、Ｅ３２０、Ｍ３２０、Ｑ３２０、Ｒ３２０、Ｅ３２２、Ａ３２６、Ｄ３２６、Ｅ３２６、Ｓ３２６、Ｋ３３０、Ａ３３１、Ｑ３３５、Ａ３３７又はＡ４３０。
【０２２２】
好ましい変異体は、２２８、２３０、２３１、２３２、２３３、２３４、２３５、２３９、２４０、２４１、２４３、２４４、２４５、２４７、２６２、２６３、２６４、２６５、２６６、２７１、２７３、２７５、２８１、２８４、２９１、２９６、２９７、２９８、２９９、３０２、３０４、３０５、３１３、３２３、３２５、３２６、３２８、３３０又は３３２位のうちのいずれにおける１つ又は複数の修飾を含む。
【０２２３】
特に好ましい変異体は、群Ａ〜ＡＩから選択された１つ又は複数の修飾を含む：
【０２２４】
【表４】
2018516966.tif 000007
【０２２５】
更に特に好ましい変異体は、群１〜１０５から選択された１つ又は複数の修飾を含む：
【０２２６】
【表５】
2018516966.tif 000008
2018516966.tif 000009
【０２２７】
一実施形態では、ＨＥＲ２／ｎｅｕに特異的に結合する分子（例えば抗ＨＥＲ２／ｎｅｕ抗体）、及び／又はＰＤ−１に特異的に結合する分子（例えば抗ＰＤ−１抗体）は、Ｆｃ領域に少なくとも１つの修飾を有する変異型Ｆｃ領域を含む。一実施形態では、ＨＥＲ２／ｎｅｕに特異的に結合する分子（例えば抗ＨＥＲ２／ｎｅｕ抗体）は、野生型Ｆｃ領域を含む同一の抗体に対して、ＦｃγＲＩＩＡへの結合を増強する、及び／又はＡＤＣＣ活性を増強する少なくとも１つの修飾を有する、変異型Ｆｃ領域を含む。特定の実施形態では、上記変異型Ｆｃドメインは、Ｌ２３５Ｖ、Ｆ２４３Ｌ、Ｒ２９２Ｐ、Ｙ３００Ｌ、Ｖ３０５Ｉ、及びＰ３９６Ｌからなる群から選択される少なくとも１つの置換を含み、ここで上記番号付与は、Kabatにおいてと同様のＥＵインデックスの番号付与である。
【０２２８】
ある具体的実施形態では、変異型Ｆｃ領域は以下を含む：
（Ａ）Ｆ２４３Ｌ、Ｒ２９２Ｐ、Ｙ３００Ｌ、Ｖ３０５Ｉ、及びＰ３９６Ｌからなる群から選択される、少なくとも１つの置換；
（Ｂ）（１）Ｆ２４３Ｌ及びＰ３９６Ｌ；
（２）Ｆ２４３Ｌ及びＲ２９２Ｐ；並びに
（３）Ｒ２９２Ｐ及びＶ３０５Ｉ；
からなる群から選択される、少なくとも２つの置換；
（Ｃ）（１）Ｆ２４３Ｌ、Ｒ２９２Ｐ及びＹ３００Ｌ；
（２）Ｆ２４３Ｌ、Ｒ２９２Ｐ及びＶ３０５Ｉ；
（３）Ｆ２４３Ｌ、Ｒ２９２Ｐ及びＰ３９６Ｌ；並びに
（４）Ｒ２９２Ｐ、Ｖ３０５Ｉ及びＰ３９６Ｌ；
からなる群から選択される、少なくとも３つの置換；
（Ｄ）（１）Ｆ２４３Ｌ、Ｒ２９２Ｐ、Ｙ３００Ｌ及びＰ３９６Ｌ；並びに
（２）Ｆ２４３Ｌ、Ｒ２９２Ｐ、Ｖ３０５Ｉ及びＰ３９６Ｌ；
からなる群から選択される、少なくとも４つの置換；又は
（Ｅ）（１）Ｆ２４３Ｌ、Ｒ２９２Ｐ、Ｙ３００Ｌ、Ｖ３０５Ｉ及びＰ３９６Ｌ；並びに
（２）Ｌ２３５Ｖ、Ｆ２４３Ｌ、Ｒ２９２Ｐ、Ｙ３００Ｌ及びＰ３９６Ｌ
からなる群から選択される、少なくとも５つの置換。
【０２２９】
別の具体的実施形態では、変異型Ｆｃ領域は、以下の置換を含む：
（Ａ）Ｆ２４３Ｌ、Ｒ２９２Ｐ、及びＹ３００Ｌ；
（Ｂ）Ｌ２３５Ｖ、Ｆ２４３Ｌ、Ｒ２９２Ｐ、Ｙ３００Ｌ、及びＰ３９６Ｌ；又は
（Ｃ）Ｆ２４３Ｌ、Ｒ２９２Ｐ、Ｙ３００Ｌ、Ｖ３０５Ｉ、及びＰ３９６Ｌ。
【０２３０】
一実施形態では、ＰＤ−１に特異的に結合する分子（例えば抗ＰＤ−１抗体）は、野生型Ｆｃ領域を含む同一の抗体に対して、ＦｃγＲＩＩＩＡ（ＣＤ１６Ａ）への結合を増強する、及び／又はＡＤＣＣ活性を増強する少なくとも１つの修飾を有する、変異型Ｆｃ領域を含む。特定の実施形態では、上記変異型Ｆｃ領域は、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｄ２６５Ａ、Ｎ２９７Ｑ及びＮ２９７Ｇからなる群から選択される少なくとも１つの置換を含み、ここで上記番号付与は、Kabatにおいてと同様のＥＵインデックスの番号付与である。ある具体的な実施形態では、上記変異型Ｆｃ領域は、Ｌ２３４Ａ及びＬ２３５Ａの置換を含む。
【０２３１】
あるいは、（野生型ＩｇＧ１  Ｆｃ領域（配列番号１）が示す結合に対して）、ＦｃγＲＩＩＩＡ（ＣＤ１６Ａ）への結合が本質的に低下した（若しくは結合しない）及び／又はエフェクタ機能が低下した、Ｆｃ領域を利用する。ある具体的な実施形態では、ＨＥＲ２／ｎｅｕに特異的に結合する分子（例えば抗ＨＥＲ２／ｎｅｕ抗体）、及び／又はＰＤ−１に特異的に結合する分子（例えば抗ＰＤ−１抗体）は、ＩｇＧ２  Ｆｃ領域（配列番号５０）又はＩｇＧ４  Ｆｃ領域（配列番号５２）を含み、任意にＣ末端アミノ酸残基を有しない。ＩｇＧ４  Ｆｃ領域を利用する場合、本発明はまた、鎖交換の発生を低減するために、Kabatに記載されているようにＥＵインデックスによって番号付与されたＳ２２８Ｐ等の安定化突然変異の導入も包含する（Lu et al., (2008) “The Effect Of A Point Mutation On The Stability Of Igg4 As Monitored By Analytical Ultracentrifugation,” J. Pharmaceutical Sciences 97:960-969）。当該技術分野において公知である他の安定化突然変異を、ＩｇＧ４  Ｆｃ領域に導入してよい（Peters, P et al., (2012) “Engineering an Improved IgG4 Molecule with Reduced Disulfide Bond Heterogeneity and Increased Fab Domain Thermal Stability,” J. Biol. Chem. 287:24525-24533；国際公開第2008/145142号）。ある具体的な実施形態ではＰＤ−１に特異的に結合する分子（例えば抗ＰＤ−１抗体）は、ＩｇＧ４  Ｆｃ領域及びＳ２２８Ｐ突然変異を含む。
【０２３２】
他の実施形態では、本発明は：Jefferis, B.J. et al. (2002) “Interaction Sites On Human IgG-Fc For FcgammaR: Current Models,” Immunol. Lett. 82:57-65; Presta, L.G. et al. (2002) “Engineering Therapeutic Antibodies For Improved Function,” Biochem. Soc. Trans. 30:487-90; Idusogie, E.E. et al. (2001) “Engineered Antibodies With Increased Activity To Recruit Complement,” J. Immunol. 166:2571-75; Shields, R.L. et al. (2001) “High Resolution Mapping Of The Binding Site On Human IgG1 For Fc Gamma RI, Fc Gamma RII, Fc Gamma RIII, And FcRn And Design Of IgG1 Variants With Improved Binding To The Fc gamma R,” J. Biol. Chem. 276:6591-6604; Idusogie, E.E. et al. (2000) “Mapping Of The C1q Binding Site On Rituxan, A Chimeric Antibody With A Human IgG Fc,” J. Immunol. 164:4178-84; Reddy, M.P. et al. (2000) “Elimination Of Fc Receptor-Dependent Effector Functions Of A Modified IgG4 Monoclonal Antibody To Human CD4,” J. Immunol. 164:1925-1933; Xu, D. et al. (2000) “In Vitro Characterization of Five Humanized OKT3 Effector Function Variant Antibodies,” Cell. Immunol. 200:16-26; Armour, K.L. et al. (1999) “Recombinant human IgG Molecules Lacking Fcgamma Receptor I Binding And Monocyte Triggering Activities,” Eur. J. Immunol. 29:2613-24; Jefferis, R. et al. (1996) “Modulation Of Fc(Gamma)R And Human Complement Activation By IgG3-Core Oligosaccharide Interactions,” Immunol. Lett. 54:101-04; Lund, J. et al. (1996) “Multiple Interactions Of IgG With Its Core Oligosaccharide Can Modulate Recognition By Complement And Human Fc Gamma Receptor I And Influence The Synthesis Of Its Oligosaccharide Chains,” J. Immunol. 157:4963-4969; Hutchins et al. (1995) “Improved Biodistribution, Tumor Targeting, And Reduced Immunogenicity In Mice With A Gamma 4 Variant Of Campath-1H,” Proc. Natl. Acad. Sci. (U.S.A.) 92:11980-84; Jefferis, R. et al. (1995) “Recognition Sites On Human IgG For Fc Gamma Receptors: The Role Of Glycosylation,” Immunol. Lett. 44:111-17; Lund, J. et al. (1995) “Oligosaccharide-Protein Interactions In IgG Can Modulate Recognition By Fc Gamma Receptors,” FASEB J. 9:115-19; Alegre, M.L. et al. (1994) “A Non-Activating "Humanized" Anti-CD3 Monoclonal Antibody Retains Immunosuppressive Properties In Vivo,” Transplantation 57:1537-1543; Lund et al. (1992) “Multiple Binding Sites On The CH2 Domain Of IgG For Mouse Fc Gamma R11,” Mol. Immunol. 29:53-59; Lund et al. (1991) “Human Fc Gamma RI And Fc Gamma RII Interact With Distinct But Overlapping Sites On Human IgG,” J. Immunol. 147:2657-2662; Duncan, A.R. et al. (1988) “Localization Of The Binding Site For The Human High-Affinity Fc Receptor On IgG,” Nature 332:563-564；米国特許第５，６２４，８２１号；５，８８５，５７３号；６，１９４，５５１号；７，２７６，５８６号；７，３１７，０９１号；国際公開第００／４２０７２号及び国際公開９９／５８５７２号に開示されているもの等の、当該技術分野において公知のいずれのＦｃ変異体の使用を包含する。いくつかの実施形態では、本発明の分子は更に、１つ又は複数のグリコシル化部位を含み、これにより、１つ又は複数の炭水化物部分が上記分子に共有結合する。好ましくは、１つ若しくは複数のグリコシル化部位及び／又はＦｃ領域の１つ若しくは複数の修飾を有する本発明の分子は、未修飾抗体に比べて増強された抗体媒介性エフェクタ機能、例えば増強されたＡＤＣＣ活性を与える、又は有する。いくつかの実施形態では、本発明は更に、２４１、２４３、２４４、２４５、２４５、２４９、２５６、２５８、２６０、２６２、２６４、２６５、２９６、２９９、及び３０１位のアミノ酸を含むがこれらに限定されない、Ｆｃ領域の炭水化物部分と直接的又は間接的に相互作用することが知られているアミノ酸の１つ又は複数の修飾を含む分子を含む。Ｆｃ領域の炭水化物部分と直接的又は間接的に相互作用するアミノ酸は、当該技術分野において公知であり、例えばJefferis, R. et al. (1995) “Recognition Sites On Human IgG For Fc Gamma Receptors: The Role Of Glycosylation,” Immunol. Lett. 44:111-17を参照されたい。
【０２３３】
別の実施形態では、本発明は、好ましくは当該分子の機能性、例えば標的分子又はＦｃγＲへの結合活性を変化させることなく、１つ又は複数のグリコシル化部位を、当該分子の１つ又は複数の部位に導入することによって修飾された、分子を包含する。グリコシル化部位は、本発明の分子の可変及び／又は定常領域に導入してよい。
【０２３４】
いくつかの実施形態では、本発明は、グリコシル化部位を追加又は欠失することによって、本発明の分子の炭水化物含量を改変する方法を包含する。抗体（及び抗体ドメイン、例えばＦｃ領域を含む分子）の炭水化物含量を改変する方法は、当該技術分野において公知であり、本発明に包含される。例えば米国特許第６，２１８，１４９号；欧州特許第０３５９０９６Ｂ１号；米国特許出願第２００２／００２８４８６号；国際公開第０３／０３５８３５号；米国公開特許第２００３／０１１５６１４号；米国特許第６，２１８，１４９号；米国特許第６，４７２，５１１号（これらの全体は参照によって本出願に援用される）を参照されたい。他の実施形態では、本発明は、当該分子の１つ又は複数の内因性炭水化物部分を欠失することによって、本発明の分子の炭水化物含量を改変する方法を包含する。ある具体的実施形態では、本発明は、２９７位に隣接する位置を修飾することによって、抗体のＦｃ領域のグリコシル化部位をシフトするステップを包含する。ある具体的実施形態では、本発明は２９６位を修飾することによって、２９７位ではなく２９６位をグリコシル化するステップを包含する。
【０２３５】
エフェクタ機能は、抗体操作技術の分野で説明されている技法によって、又は他の手段によって、就職できる。例えば、Ｆｃ領域に１つ又は複数のシステイン残基を導入することによって、この領域における鎖間ジスルフィド結合を可能とし、その結果として吸収能力が改善され得る、並びに／又は補体仲介型細胞殺滅及びＡＤＣＣが増大し得るホモ二量体抗体を生成することにより、修飾できる。Caron, P.C. et al. (1992) "Engineered Humanized Dimeric Forms Of IgG Are More Effective Antibodies J. Exp. Med. 176: 1191-1195; Shopes, B. (1992) "A Genetically Engineered Human IgG Mutant With Enhanced Cytolytic Activity," J. Immunol. 148(9):2918-2922を参照されたい。抗腫瘍活性が増強されたホモ二量体抗体はまた、Wolff, E.A. et al. (1993) "Monoclonal Antibody Homodimers: Enhanced Antitumor Activity In Nude Mice," Cancer Research 53:2560-2565に記載されているようなヘテロ二機能性クロスリンカーを用いて調製できる。あるいは、二重Ｆｃドメインを有し、それによって補体溶解及びＡＤＣＣ能力が増強され得る抗体を加工できる（Stevenson, G.T. et al. (1989) "A Chimeric Antibody With Dual Fc Regions (bisFabFc) Prepared By Manipulations At The IgG Hinge " Anti-Cancer Drug Design 3:219-230）。
【０２３６】
Ｅ．ポリペプチドコンジュゲート
本発明の分子を、異種ポリペプチド又はその一部と組み換え的に融合するか又は化学的にコンジュゲート（共有結合及び非共有結合コンジュゲートの両方を含む）して、融合タンパク質を形成してよい。好ましくは、本発明の分子（特に抗体）は、異種ポリペプチドの少なくとも１０、少なくとも１５、少なくとも２０、少なくとも２５、少なくとも３０、少なくとも４０、少なくとも５０、少なくとも６０、少なくとも７０、少なくとも８０、少なくとも９０、又は少なくとも１００個のアミノ酸と融合して、所望の融合タンパク質を生成する。この融合は必ずしも直接でなくてよいが、リンカー配列を通して発生してよい。上記分子（例えば抗体及びポリペプチド）は、治療剤とコンジュゲートして、所与の成体応答を修正する、上記治療剤の血清半減期に影響を及ぼす（例えばこれを増大させる）、又は上記治療剤を特定の細胞のサブセットに標的化することができる。上記分子はまた、マーカー配列（例えばヘキサヒスチジンペプチド又は「フラグ（ｆｌａｇ）」タグ）と融合して、精製を促進することもできる。このような治療用部分を抗体とコンジュゲートする技法は公知であり、例えばHellstrom et al., “Antibodies For Drug Delivery”, in Controlled Drug Delivery (2nd ed., Robinson et al. (eds.), 1987, pp. 623-53, Marcel Dekker, Inc.)を参照されたい。
【０２３７】
追加の融合タンパク質を、遺伝子シャッフリング、モチーフシャッフリング、エクソンシャッフリング、及び／又はコドンシャッフリング（まとめて「ＤＮＡシャッフリング（ＤＮＡ  ｓｈｕｆｆｌｉｎｇ）」と呼ばれる）の技法によって生成できる。ＤＮＡシャッフリングは、本発明の分子（例えば親和性が高く分解速度が低い抗体）の活性を変化させるために採用してよい。本発明の分子又はこれがエンコードする核酸は更に、エラープローンＰＣＲによるランダムな突然変異誘発、ランダムなヌクレオチド挿入、又は他の方法を、組み換え前に受けることによって、更に変化させることができる。本発明の分子をエンコードするポリヌクレオチドの１つ又は複数の部分は、１つ又は複数の異種分子の１つ又は複数の成分、モチーフ、セクション、部分、ドメイン、断片等と組み換えてよい。
【０２３８】
Ｆ．ダイアボディ及びＤＡＲＴ（登録商標）ダイアボディ
ダイアボディ及び二重親和性再標的化試薬（特にＤＡＲＴ（登録商標）ダイアボディ（ＭａｃｒｏＧｅｎｉｃｓ，  Ｉｎｃ．））もまた、本発明によって提供される。従って本発明は更に、少なくとも２つの共有結合したポリペプチド鎖を含むダイアボディ（特にＤＡＲＴ（登録商標）ダイアボディ）分子を包含し、上記ポリペプチド鎖は、少なくとも２つのエピトープ結合部位を形成し、上記エピトープ結合部位のうちの一方はＨＥＲ２／ｎｅｕに特異的に結合し、もう一方は、免疫チェックポイントを調節する細胞表面受容体（又はそのリガンド）に結合する。好ましくは、このようなダイアボディは、ＨＥＲ２／ｎｅｕ及びＰＤ−１に結合することになる。特に、本発明の抗ＨＥＲ２／ｎｅｕ抗体及び抗ＰＤ−１抗体からの抗原結合ドメインを含むダイアボディ及びＤＡＲＴが包含される。
【０２３９】
ホモ二量体ダイアボディ及び安定した共有結合ヘテロ二量体非単一特異性ダイアボディの設計及び構成は、例えば米国公開特許第２０１３−０２９５１２１号；米国公開特許第２０１０−０１７４０５３号；及び米国公開特許第２００９−００６０９１０号；欧州公開特許第２７１４０７９号；欧州公開特許第２６０１２１６号；欧州公開特許第２３７６１０９号；欧州公開特許第２１５８２２１号；及び国際公開第２０１２／１６２０６８号；国際公開第２０１２／０１８６８７号；国際公開第２０１０／０８０５３８号；国際公開第２００８／１５７３７９号；国際公開第２００６／１１３６６５号；並びにSloan, D.D. et al. (2015) “Targeting HIV Reservoir in Infected CD4 T Cells by Dual-Affinity Re-targeting Molecules (DARTs) that Bind HIV Envelope and Recruit Cytotoxic T Cells,” PLoS Pathog. 11(11):e1005233. doi: 10.1371/journal.ppat.1005233; Al Hussaini, M. et al. (2015) “Targeting CD123 In AML Using A T-Cell Directed Dual-Affinity Re-Targeting (DART(R)) Platform,” Blood 127(1):122-131; Chichili, G.R. et al. (2015) “A CD3xCD123 Bispecific DART For Redirecting Host T Cells To Myelogenous Leukemia: Preclinical Activity And Safety In Nonhuman Primates,” Sci. Transl. Med. 7(289):289ra82; Moore, P.A. et al. (2011) “Application Of Dual Affinity Retargeting Molecules To Achieve Optimal Redirected T-Cell Killing Of B-Cell Lymphoma,” Blood 117(17):4542-4551; Veri, M.C. et al. (2010) “Therapeutic Control Of B Cell Activation Via Recruitment Of Fcgamma Receptor IIb (CD32B) Inhibitory Function With A Novel Bispecific Antibody Scaffold,” Arthritis Rheum. 62(7):1933-1943; Johnson, S. et al. (2010) “Effector Cell Recruitment With Novel Fv-Based Dual-Affinity Re-Targeting Protein Leads To Potent Tumor Cytolysis And in vivo B-Cell Depletion,” J. Mol. Biol. 399(3):436-449; Marvin, J.S. et al. (2005) “Recombinant Approaches To IgG-Like Bispecific Antibodies,” Acta Pharmacol. Sin. 26:649-658; Olafsen, T. et al. (2004) “Covalent Disulfide-Linked Anti-CEA Diabody Allows Site-Specific Conjugation And Radiolabeling For Tumor Targeting Applications,” Prot. Engr. Des. Sel. 17:21-27; Holliger, P. et al. (1993) “’Diabodies’: Small Bivalent And Bispecific Antibody Fragments,” Proc. Natl. Acad. Sci. (U.S.A.) 90:6444-6448に記載されている。ダイアボディ分子の各ポリペプチド鎖は、同一の又は異なる抗体からのＶL領域及びＶH領域を含み、これらは、これらのドメインが自己集合に制約がかかるように、共有結合する。上記ポリペプチド鎖のうちの２つの相互作用は、２つのＶL−ＶHペアを生成し、これは２つのエピトープ結合部位、即ち２価分子を形成する。上記ドメインは、ペプチドリンカーによって隔てられていてよく、上記ポリペプチド鎖を、各鎖に少なくとも１つのシステイン残基を含むように操作してよく、これにより、鎖間ジスルフィド結合を形成して、上記ダイアボディを安定化できる。
【０２４０】
好ましい実施形態では、上記ダイアボディの第１のポリペプチド鎖は：
（ｉ）ＨＥＲ２／ｎｅｕのエピトープに対して特異的な、第１の免疫グロブリンの軽鎖可変ドメイン（ＶＬ１）の結合領域を含むドメイン（Ａ）；
（ｉｉ）ＰＤ−１のエピトープに対して特異的な、第２の免疫グロブリンの重鎖可変ドメイン（ＶＨ２）の結合領域を含むドメイン（Ｂ）；及び
（ｉｉｉ）任意に、ドメイン（Ｃ）
を含む。このようなダイアボディの第２のポリペプチド鎖は：
（ｉ）上述のようなＰＤ−１のエピトープに対して特異的な、第２の免疫グロブリンの軽鎖可変ドメイン（ＶＬ２）の結合領域を含むドメイン（Ｄ）；
（ｉｉ）上述のようなＨＥＲ２／ｎｅｕのエピトープに対して特異的な、第１の免疫グロブリンの重鎖可変ドメイン（ＶＨ１）の結合領域を含むドメイン（Ｅ）；及び
（ｉｉｉ）任意に、ドメイン（Ｆ）
を含む。
【０２４１】
ダイアボディドメイン（Ａ）及び（Ｂ）は、互いに連結してエピトープ結合部位を形成しない。同様に、ダイアボディドメイン（Ｄ）及び（Ｅ）は、互いに連結してエピトープ結合部位を形成しない。その代わりに、ダイアボディドメイン（Ａ）及び（Ｅ）が連結して、ＨＥＲ２／ｎｅｕエピトープに結合する結合部位を形成し、ダイアボディドメイン（Ｂ）及び（Ｄ）が連結して、ＰＤ−１エピトープに結合する結合部位を形成する。
【０２４２】
第１及び第２のポリペプチド鎖の可変ドメインは互いに反転してよく、これにより、ダイアボディの第１のポリペプチド鎖は：
（ｉ）ＰＤ−１のエピトープに対して特異的な、第２の免疫グロブリンの軽鎖可変ドメイン（ＶＬ２）の結合領域を含むドメイン（Ａ）；
（ｉｉ）ＨＥＲ２／ｎｅｕのエピトープに対して特異的な、第１の免疫グロブリンの重鎖可変ドメイン（ＶＨ１）の結合領域を含むドメイン（Ｂ）；及び
（ｉｉｉ）任意に、ドメイン（Ｃ）；
を含み、またこのようなダイアボディの第２のポリペプチド鎖は：
（ｉ）ＨＥＲ２／ｎｅｕのエピトープに対して特異的な、第１の免疫グロブリンの軽鎖可変ドメイン（ＶＬ１）の結合領域を含むドメイン（Ｄ）；
（ｉｉ）ＰＤ−１のエピトープに対して特異的な、第２の免疫グロブリンの重鎖可変ドメイン（ＶＨ２）の結合領域を含むドメイン（Ｅ）；及び
（ｉｉｉ）任意に、ドメイン（Ｆ）。
を含む。
【０２４３】
この反転構成では、ダイアボディドメイン（Ａ）及び（Ｅ）が連結して、ＰＤ−１エピトープに結合する結合部位を形成し、ダイアボディドメイン（Ｂ）及び（Ｄ）が連結して、ＨＥＲ２／ｎｅｕエピトープに結合する結合部位を形成する。
【０２４４】
ドメイン（Ｃ）及び（Ｆ）が存在する場合、これらは互いに共有結合している。ドメイン（Ｃ）及び（Ｆ）は、第１及び第２のポリペプチド鎖の相互作用を促進する、ヘテロ二量体促進ドメインを含んでよい。ダイアボディの産生において有用なヘテロ二量体化ドメインは例えば、国際公開第２０１２／１６２０６８号；国際公開第２０１２／０１８６８７号；国際公開第２０１０／０８０５３８号；国際公開第２００８／１５７３７９号；及び国際公開第２００６／１１３６６５号に記載されており、これらの文献はそれぞれ参照により本出願に援用される。ドメイン（Ｃ）及び（Ｆ）は、Ｆｃドメイン又はその一部分（例えばＣＨ２ドメイン若しくはＣＨ３ドメイン）であってよい。Ｆｃドメイン又はその一部分は、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＧ、ＩｇＥ及びＩｇＭを含むがこれらに限定されない、いずれの免疫グロブリンアイソタイプ又はアロタイプに由来するものであってよい。好ましい実施形態では、Ｆｃドメイン（又はその一部分）は、ＩｇＧに由来する。特定の実施形態では、ＩｇＧアイソタイプはＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３若しくはＩｇＧ４又はそのアロタイプである。一実施形態では、ダイアボディ分子はＦｃドメインを含み、このＦｃドメインは、いずれの免疫グロブリンアイソタイプから独立して選択されたＣＨ２ドメイン及びＣＨ３ドメインを含む（即ち、ＩｇＧに由来するＣＨ２ドメイン及びＩｇＥに由来するＣＨ３ドメイン、又はＩｇＧ１に由来するＣＨ２ドメイン及びＩｇＧ２に由来するＣＨ３ドメイン等を含むＦｃドメイン）。上記Ｆｃドメインは、本発明のダイアボディ分子を含むポリペプチド鎖に、上記ポリペプチド鎖の他のドメイン又は部分に対していずれの位置において組み込むことができる（例えば上記Ｆｃドメイン又はその一部分は、鎖のポリペプチドのＶＬ及びＶＨドメインに対するＣ末端であってよく、又はＶＬ及びＶＨドメイン両方に対するＮ末端であってよく、又は一方のドメインに対するＮ末端及び他方のドメインに対するＣ末端（即ちポリペプチド鎖の２つのドメインの間）等であってよい）。
【０２４５】
ダイアボディ分子のポリペプチド鎖のＦｃドメインは、優先的に二量体化し、これは免疫グロブリン様特性、例えばＦｃ−ＦｃγＲ相互作用を呈するダイアボディ分子の形成につながる。ダイアボディを構成するＦｃドメインは、例えばそれぞれがＶＨドメイン、ＶＬドメイン及びＦｃドメインを含む２つのポリペプチド鎖からなる、二量体であってよい。上記ポリペプチド鎖の二量体化により、非修飾２価抗体の構造とは異なっているにも関わらず、Ｆｃドメインを含む２価ダイアボディが得られる。このようなダイアボディ分子は、野生型免疫グロブリンに対して変化した表現型、例えば変化した血清半減期、結合特性等を呈することになる。他の実施形態では、Ｆｃドメインを構成するダイアボディ分子は四量体であってよい。このような四量体は、２つの「比較的重い」ポリペプチド鎖、即ちＶＬ、ＶＨ及びＦｃドメインを含むポリペプチド鎖と、２つの「比較的軽い」ポリペプチド鎖、即ちＶＬ及びＶＨを含むポリペプチド鎖とを含む。上記比較的軽い鎖及び比較的重い鎖は、相互作用して単量体を形成し、上記単量体は、それ自体の、ペアになっていないドメインを介して相互作用して、Ｉｇ様分子を形成する。このようなＩｇ様ダイアボディは４価である。
【０２４６】
上述のような四重特異性ダイアボディ分子の形成は、４つの異なるポリペプチド鎖の相互作用を必要とする。このような相互作用は潜在的に発生し得る鎖の誤ったペアリングの様々な変形例により、単一細胞組み換え産生系内で効率的に達成するのが困難である。誤ったペアリングの蓋然性を低減する１つの解決策は、「ノブ・イントゥ・ホール」タイプの突然変異を所望のポリペプチド鎖ペアに組み込むことである。このような突然変異は、ホモ二量体化を抑えてヘテロ二量体化を促進する。例えばＦｃ−Ｆｃ間相互作用に関して、ＣＨ２又はＣＨ３ドメインにアミノ酸置換（好ましくは「ノブ（ｋｎｏｂ）」を形成する嵩高な側鎖基、例えばトリプトファンを含むアミノ酸による置換）を導入して、立体障害により、同様に突然変異させたドメインとの相互作用を防止し、上記変化させたドメインを、相補的な又は適応した突然変異（例えばグリシンによる置換）を施されたドメイン、即ち「ホール（ｈｏｌｅ）」とペアにすることができる。このような一連の変化は、上記ダイアボディ分子を構成するポリペプチドのいずれのペアに施すことができ、また更に、上記ペアのポリペプチド鎖のいずれの部分に施すことができる。ホモ二量体化を抑えてヘテロ二量体化を促進するためのタンパク質加工の方法は、特に免疫グロブリン様分子の加工に関して当該技術分野で公知であり、本明細書に包含される（例えばRidgway et al. (1996) “‘Knobs-Into-Holes’ Engineering Of Antibody CH3 Domains For Heavy Chain Heterodimerization,” Protein Engr. 9:617-621; Atwell et al. (1997) “Stable Heterodimers From Remodeling The Domain Interface Of A Homodimer Using A Phage Display Library,” J. Mol. Biol. 270: 26-35;及びXie et al. (2005) “A New Format Of Bispecific Antibody: Highly Efficient Heterodimerization, Expression And Tumor Cell Lysis,” J. Immunol. Methods 296:95-101を参照（これらはそれぞれ参照によりその全体が本明細書に援用される））。
【０２４７】
本発明はまた、変異型Ｆｃドメイン又は変異型ヒンジＦｃドメイン（又はその一部分）を含むダイアボディ分子も包含し、上記変異型Ｆｃドメインは、同等の野生型Ｆｃドメイン又はヒンジＦｃドメイン（又はその一部分）に対する少なくとも１つのアミノ酸修飾（例えば置換、挿入、欠失）を含む。変異型Ｆｃ又は変異型ヒンジＦｃドメイン（又はその一部分）を含む分子（例えば抗体）は通常、野生型Ｆｃドメイン又はヒンジＦｃドメイン又はその一部分を含む分子に対して変化した表現型を有する。この変異型表現型は、変化した血清半減期、変化した安定性、細胞酵素に対する変化した感受性、又はＮＫ依存性若しくはマクロファージ依存性アッセイで測定されるような変化したエフェクタ機能として表現され得る。変化したエフェクタ機能として表されるＦｃドメイン修飾については、既に開示している。
【０２４８】
本発明はまた、ヒンジドメインを含む分子も包含する。このヒンジドメインは、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＧ、ＩｇＥ及びＩｇＭを含むいずれの免疫グロブリンアイソタイプ又はアロタイプに由来するものであってよい。好ましい実施形態では、ヒンジドメインはＩｇＧに由来し、上記ＩｇＧアイソタイプは、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３若しくはＩｇＧ４又はこれらのアロタイプである。Ｆｃドメインと共にダイアボディ分子を構成するポリペプチド鎖に上記ヒンジドメインを組み込むことによって、上記ダイアボディ分子がヒンジＦｃドメインを含むようにしてよい。特定の実施形態では、上記ヒンジドメイン及びＦｃドメインは、当該技術分野において公知の、本明細書において例示されているいずれの免疫グロブリンアイソタイプから独立して選択される。他の実施形態では、上記ヒンジドメイン及びＦｃドメインは、ポリペプチド鎖の少なくとも１つの他のドメイン、例えばＶＬドメインによって分離される。ヒンジドメイン、又は任意にヒンジＦｃドメインを、本発明のポリペプチド鎖に、上記ポリペプチド鎖の他のドメイン又は部分に対していずれの位置において組み込んでよい。特定の実施形態では、本発明のポリペプチド鎖はヒンジドメインを含み、上記ヒンジドメインはポリペプチド鎖のＣ末端にあり、上記ポリペプチド鎖はＦｃドメインを含まない。更に他の実施形態では、本発明のポリペプチド鎖はヒンジＦｃドメインを含み、上記ヒンジＦｃドメインはポリペプチド鎖のＣ末端にある。更なる実施形態では、本発明のポリペプチド鎖はヒンジＦｃドメインを含み、上記ヒンジＦｃドメインはポリペプチド鎖のＮ末端にある。
【０２４９】
特定の作用機序によって束縛されることを意図するものではないが、本発明のダイアボディ分子は、当該技術分野において公知の治療用抗体に対して増強された治療有効性を示し、これは部分的には、ダイアボディの、特定の抗原を発現する標的細胞に特異的に結合する能力によるものであり、例えば上記ダイアボディの、ダイアボディ−エピトープ相互作用の改善された結合活性によって標的細胞上により長く留まることができる能力によるものである。従って本発明のダイアボディは、標的細胞集団中で標的抗原が低レベルで発現される部分集団における、癌等の疾患又は障害の治療、予防又は管理において特定の有用性を有する。
【０２５０】
上記ダイアボディ分子は、デノボタンパク質合成、及び結合タンパク質をエンコードする核酸の組み換え発現を含む、様々な方法を用いて産生できる。所望の核酸配列は、組み換え方法（例えば所望のポリヌクレオチドの、早期に調製された変異型のＰＣＲ突然変異誘発）によって、又は固相ＤＮＡ合成によって産生できる。好ましくは、組み換え発現方法を使用する。遺伝子コードの縮重により、多様な核酸配列がそれぞれ免疫グロブリンアミノ酸配列をエンコードし、本発明は、本明細書中二記載の結合タンパク質をエンコードする全ての核酸を含む。
【０２５１】
Ｇ．抗体の産生
本発明の好ましい実施形態の抗体は、多様な方法のうちのいずれで産生又は取得できる。例えばこのような抗体は、血漿から、合成によって、組み換えによって、又は遺伝子導入によって、細胞（例えばハイブリドーマ培養物）を介して等の方法で得ることができる。合成タンパク質の産生は例えば、Dawson, P.E. et al. (2000) “Synthesis Of Native Proteins By Chemical Ligation,” Annu. Rev Biochem. 69:923-960; Wilken, J. et al. (1998) “Chemical Protein Synthesis,” Curr. Opin. Biotechnol. 9(4):412-426; and Kochendoerfer, G.G. et al. (1999) “Chemical Protein Synthesis,”Curr. Opin. Chem. Biol. 3(6):665-671に記載されている。
【０２５２】
抗体は、まず宿主動物から作製された抗体を単離し、遺伝子配列を取得し、上記遺伝子配列を使用して宿主細胞（例えばＣＨＯ細胞）内で抗体を組み換え発現させることによって作製できる。関心対象のポリヌクレオチドを含有するベクターは：電気穿孔；塩化カルシウム、塩化ルビジウム、リン酸カルシウム、ＤＥＡＥ−デキストラン又は他の物質を使用したトランスフェクション；微粒子銃；リポフェクション；及び感染（例えばベクターがワクシニアウイルス等の感染性因子である場合）を含む多数の適切な手段のうちのいずれによって、宿主細胞に導入できる。ベクター又はポリヌクレオチドの導入の選択は、宿主細胞の特徴に左右される場合が多い。
【０２５３】
関心対象の抗体、ポリペプチド、又はタンパク質をエンコードする遺伝子を単離する目的で、異種ＤＮＡを過剰発現できるいずれの宿主細胞を使用できる。好適な哺乳類宿主細胞の非限定的な例としては、ＣＯＳ、ＨｅＬａ及びＣＨＯ細胞が挙げられるが、これらに限定されない。好ましくは、宿主細胞は、対応する関心対象の内因性抗体又はタンパク質（これらが宿主細胞中に存在する場合）より５倍高い、より好ましくは１０倍高い、更に好ましくは２０倍高いレベルのｃＤＮＡを発現する。ＨＥＲ２／ｎｅｕ又はＰＤ−１への特異的結合に関する宿主細胞のスクリーニングは好ましくは、イムノアッセイ又はＦＡＣＳによって実行される。細胞（例えばハイブリドーマ）培養物による抗体の産生は、例えばLaffly, E. et al. (2005) “Monoclonal And Recombinant Antibodies, 30 Years After...,” Hum. Antibodies. 14(1-2):33-55; Aldington, S. et al. (2007) “Scale-Up Of Monoclonal Antibody Purification Processes,” J. Chromatogr. B Analyt. Technol. Biomed. Life Sci. 848(1):64-78; S.S. Farid (2006) J. Chromatogr. B Analyt. Technol. Biomed. Life Sci. 848(1):8-18; Birch, J.R. et al. (2006) “Antibody Production,” Adv. Drug Deliv. Rev. 58(5-6):671-685; Even, M.S. et al. (2006) “Serum-Free Hybridoma Culture: Ethical, Scientific And Safety Considerations,” Trends Biotechnol. 24(3):105-108; Graumann, K. et al. (2006) “Manufacturing Of Recombinant Therapeutic Proteins In Microbial Systems,” Biotechnol. J. 1(2):164-86；米国特許第７，１１２，４３９号；並びに米国公開特許第２００７００３７２１６号及び米国公開特許第２００４０１９７８６６号に記載されている。
【０２５４】
採用できる別の方法は、植物（例えばタバコ）又はトランスジェニックミルク中で抗体配列を発現させることである。植物又はミルク中で抗体を組み換え発現させるための好適な方法は、開示されている（例えばPeeters, K. et al. (2001) "Production Of Antibodies And Antibody Fragments In Plants," Vaccine 19:2756; Lonberg, N. et al. (1995) "Human Antibodies From Transgenic Mice," Int. Rev. Immunol 13:65-93; and Pollock et a/.(1999) "Transgenic Milk As A Method For The Production Of Recombinant Antibodies," J. Immunol Methods 231 : 147-157を参照）。
【０２５５】
例えばヒト化、最適化、単鎖等の抗体の誘導体を作製するための好適な方法は、当該技術分野において公知である。例えばその抗原に対する親和性が増大した抗体の誘導体は、ファージディスプレイ法によって産生できる。親和性成熟とも呼ばれるこの技術は、突然変異誘発、又は同種抗原を用いたＣＤＲウォーキング及び再選択を採用して、初期又は親抗体と比較した場合に抗原に対して高い親和性で結合する抗体を同定する（例えばGlaser, S.M. et al. (1992) “Antibody Engineering By Codon-Based Mutagenesis In A Filamentous Phage Vector System,” J. Immunology 149:3903; Wu, H. et al. (1998) “Stepwise in vitro Affinity Maturation Of Vitaxin, An AlphaV Beta3-mAb,” Proc. Natl. Acad. Sci. (U.S.A.) 95:6037-6042; Yelton, D.E. et al. (1995) “Affinity Maturation Of The BR96 Anti-Carcinoma Antibody By Codon-Based Mutagenesis,” J. Immunology 155:1994-2004; Schier, R et al. (1996) “Isolation Of Picomolar Affinity anti-c-erbB-2 Single-Chain Fv By Molecular Evolution Of The Complementarity Determining Regions In The Center Of The Antibody Binding Site,” J. Mol. Bio. 263:551-567を参照）。
【０２５６】
内因性免疫グロブリン重鎖及び軽鎖遺伝子を発現できないものの、ヒト重鎖及び軽鎖遺伝子を発現できる、トランスジェニックマウスを用いて、完全な（ｆｕｌｌｙ）ヒト抗体（完全な（ｃｏｍｐｌｅｔｅｌｙ）ヒト抗体とも呼ばれる）を産生できる。ヒト抗体を産生するためのこの技術の概観は、例えばLonberg, N. et al. (1995) “Human Antibodies From Transgenic Mice,” Int. Rev. Immunol. 13:65-93；及び米国特許第５，６３３，４２５号に記載されている。完全なヒト抗体はまた、ファージディスプレイライブラリ（Hoogenboom, H.R. et al. (1991) “By-Passing Immunisation. Human Antibodies From Synthetic Repertoires Of Germline VH Gene Segments Rearranged In Vitro,” J. Mol. Biol. 227:381 and Marks, J.D. et al. (1991) “By-Passing Immunization. Human Antibodies From V-Gene Libraries Displayed On Phage,” J. Mol. Biol. 222:581に記載）又は「誘導選択（guided selection）」（例えばJespers, L.S. et al. (1994) “Guiding The Selection Of Human Antibodies From Phage Display Repertoires To A Single Epitope Of An Antigen,” Biotechnology 12:899-903に記載）を含む、当該技術分野において公知の他の技法を用いて産生できる。より望ましい（例えば完全なヒト抗体）又はよりロバストな免疫応答を生成するために設計されたトランスジェニック動物も、ヒト化又はヒト抗体の生成に使用してよい。このような技術の例は、Ｘｅｎｏｍｏｕｓｅ（商標）（Ａｂｇｅｎｉｘ，  Ｉｎｃ．、カリフォルニア州フレモント）、並びにＨｕＭＡｂ−Ｍｏｕｓｅ（登録商標）及びＴＣ  Ｍｏｕｓｅ（商標）（共にＭｅｄａｒｅｘ，  Ｉｎｃ．、ニュージャージー州プリンストン）である。
【０２５７】
本発明は、本明細書に記載の抗体（即ち抗ＨＥＲ２／ｎｅｕ抗体及び抗ＰＤ−１抗体）に対する修飾（このような分子の特性に有意な影響を及ぼさない、機能的に同等の抗体及び融合ポリペプチド、並びに活性が増強した又は低下した変異型を含む）を含む。ポリペプチドの修飾は、当該技術分野において慣用的に実践されており、本明細書で詳細に説明する必要はない。修飾されたポリペプチドの例としては、アミノ酸残基の保存的置換を有するポリペプチド、機能的活性を大きく劣化するように変化させない１つ若しくは複数の欠失若しくは追加、又は化学的類似体の使用が挙げられる。互いを保存的に置換できるアミノ酸残基としては：グリシン／アラニン；セリン／トレオニン；バリン／イソロイシン／ロイシン；アスパラギン／グルタミン；アスパラギン酸／グルタミン酸；リジン／アルギニン；及びフェニルアラニン／チロシンが挙げられるが、これらに限定されない。これらのポリペプチドとしては、グリコシル化及び非グリコシル化ポリペプチド、並びに例えば異なる複数の糖によるグリコシル化、アセチル化及びリン酸化といった、その他の変換後修飾を有するポリペプチドも挙げられる。好ましくは、アミノ酸置換は保存的であり、即ち置換されたアミノ酸は、オリジナルのアミノ酸と同様の化学的特性を有する。このような保存的置換は当該技術分野において公知であり、その例は上述されている。アミノ酸修飾は、１つ又は複数のアミノ酸を変化させるか又は修飾することから、可変領域等の領域の完全な再設計にまで及んでよい。可変領域の変化は、結合親和性及び／又は特異性を変化させる。他の修飾方法としては、酵素的手段、酸化的置換及びキレート化を含むがこれらに限定されない、当該技術分野において公知の連結技術の使用が挙げられる。修飾は例えば、イムノアッセイのための標識の付与、例えばラジオイムノアッセイのための放射性部分の付与等のために使用できる。修飾されたポリペプチドは、当該技術分野において確立された手順を用いて作製され、また当該技術分野において公知の標準的なアッセイを用いてスクリーニングできる。
【０２５８】
Ｈ．結合分子の特性決定
抗体等の結合分子は、多様な方法で特性決定してよい。特に抗体を、抗原、例えばＨＥＲ２／ｎｅｕ、ＰＤ−１に特異的に結合する能力に関して、又はＦｃ−ＦｃγＲ相互作用、即ちＦｃγＲに対するＦｃ領域（若しくはその一部分）の特異的結合を呈する能力のために、上記分子がＦｃ領域（若しくはその一部分）を含む場所に関して、アッセイしてよい。
【０２５９】
特異的結合、交差反応性及びＦｃ−ＦｃγＲ相互作用を分析するために使用できるイムノアッセイとしては、限定するものではないが、ウエスタンブロット、放射線イムノアッセイＥＬＩＳＡ（酵素結合免疫溶媒アッセイ）、「サンドイッチ」イムノアッセイ、免疫沈降アッセイ、沈降反応、ゲル拡散沈降素反応、免疫クロマトグラフィアッセイ、免疫拡散アッセイ、凝集アッセイ、補体固定アッセイ、免疫放射線測定アッセイ、蛍光イムノアッセイ、及びタンパク質Ａイムノアッセイ等の技法を用いた競合性及び非競合性アッセイ系が挙げられる（例えばCurrent Protocols in Molecular Biology (Ausubel、F.M. et al.、Eds.、1987) Greene Pub. Associates、New York、NYを参照）。
【０２６０】
標的抗原に対する結合親和性は典型的には、ＢＩＡｃｏｒｅ競合性アッセイ、飽和アッセイ、又はＥＬＩＳＡ若しくはＲＩＡといったイムノアッセイ等の、標準的な抗体−抗原アッセイによって測定又は決定される。当業者に公知の技法のうちのいずれを用いた蛍光活性化細胞分類（Ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ  ａｃｔｉｖａｔｅｄ  ｃｅｌｌ  ｓｏｒｔｉｎｇ：ＦＡＣＳ）を、本発明の分子を特性決定するための免疫学又は機能ベースのアッセイのために使用してよい。表面プラズモン共鳴ベースのアッセイを用いて、抗原結合ドメイン又はＦｃ−ＦｃγＲ結合の動力学的パラメータを特性決定してよい。
【０２６１】
Ｆｃ領域（若しくはその一部分）を含む、及び／又はＦｃγＲに対して特異的なエピトープ結合ドメインを含む分子の、ＦｃγＲへの結合の特性決定は、抗体操作技術の分野において説明されている方法に従って実施してよい。エフェクタ細胞の機能に関するアッセイは公知であり、例えばPerussia, B. et al. (2000) “Assays for antibody-dependent cell-mediated cytotoxicity (ADCC) And Reverse ADCC (Redirected Cytotoxicity) In Human Natural Killer Cells,” Methods Mol. Biol. 121:179-192; Lehmann, A.K. et al. (2000) “Phagocytosis: Measurement By Flow Cytometry,” J. Immunol. Methods 243(1-2):229-242; Baggiolini, M. et al. (1998) “Cellular Models For The Detection And Evaluation Of Drugs That Modulate Human Phagocyte Activity,” Experientia 44(10):841-848; Brown, E.J. (1994) “In Vitro Assays Of Phagocytic Function Of Human Peripheral Blood Leukocytes: Receptor Modulation And Signal Transduction,” Methods Cell Biol. 45:147-164;及びMunn, D.H. et al. (1990) “Phagocytosis Of Tumor Cells By Human Monocytes Cultured In Recombinant Macrophage Colony-Stimulating Factor,” J. Exp. Med. 172:231-237に記載されている。
【０２６２】
ＶＩＩ．治療の方法
ＨＥＲ２／ｎｅｕ特異的に結合する分子、及び免疫チェックポイントの調節に関与する細胞表面受容体（特にＰＤ−１）（又はそのリガンド）に特異的に結合する分子を、癌又は他の疾患を有する個体において、治療目的で使用してよい。一実施形態では、このような結合特異性を有する１つ又は複数の分子は、同時に投与される。本明細書中で使用される場合、このような「同時（ｃｏｎｃｕｒｒｅｎｔ）」投与は、以下を指すことを意図している：
（Ａ）ＨＥＲ２／ｎｅｕに特異的に結合する分子、及び免疫チェックポイントの調節に関与する細胞表面受容体（特にＰＤ−１）（若しくはそのリガンド）に特異的に結合する分子の両方を含有する、単一の医薬組成物の投与。このような分子は、同一の分子（例えばダイアボディ）であってよく、若しくは別個（例えば抗ＨＥＲ２／ｎｅｕ抗体若しくはその抗原結合断片、及び抗ＰＤ−１−抗体若しくはその抗原結合断片）であってよい；又は
（Ｂ）２つ以上の医薬組成物の個別投与であって、上記医薬組成物のうちの１つの組成物は、ＨＥＲ２／ｎｅｕに特異的に結合する分子を含有し、上記医薬組成物のうちの別の１つの組成物は、免疫チェックポイントの調節に関与する細胞表面受容体（特にＰＤ−１）（若しくはそのリガンド）に特異的に結合する分子を含有し、上記組成物は２４時間の期間内に投与される、個別投与。
【０２６３】
第２の実施形態では、２つの別個の分子が採用され、これらの分子は「順次」投与される（例えば抗ＨＥＲ２／ｎｅｕ抗体を投与した後で抗ＰＤ−１抗体が提供されるか、又はその逆）。このような順次投与では、最も好ましくは、第２の投与される組成物は、第１の投与される組成物の投与後、少なくとも２４時間以上後に投与される。
【０２６４】
ある療法を提供すること、即ち「治療、治療すること（ｔｒｅａｔｉｎｇ）」は、：症状の緩和、寛解、減少；又は傷害、病理若しくは状態を患者にとってより許容可能なものとすること；変性若しくは衰弱の速度の低下；変性の最終地点における衰弱の緩和；又は患者の身体的若しくは精神的健康の改善といった、いずれの主観的又は客観的パラメータを含む、傷害、病理又は状態の治療又は改善の成功のいずれの指標を示す。症状の治療又は改善は、身体的試験、神経精神医学的試験、及び／又は精神医学的評価の結果を含む、主観的又は客観的パラメータに基づくものであってよい。
【０２６５】
好ましい治療の被験者は、疾患及び他の病理学的状態となった、動物、最も好ましくはヒト又は他の霊長類等の哺乳類、及びイヌ、ネコ等の飼育動物を含む。「患者（ｐａｔｉｅｎｔ）」は、被験者、好ましくは哺乳類（ヒトを含む）を指す。
【０２６６】
一実施形態では、ＨＥＲ２／ｎｅｕを発現する様々な組織の癌細胞、並びに特に乳癌、膠芽腫、子宮頸癌、転移性結腸直腸癌、胃癌、肝細胞癌、白血病、肺癌、転移性黒色腫、血管新生性膵臓癌及び転移性前立腺癌といった癌細胞を対象とする免疫療法のために、モノクローナル抗ＨＥＲ２／ｎｅｕ抗体及びモノクローナル抗ＰＤ−１抗体を使用できる。このような免疫療法は例えば、癌細胞における細胞分裂の低減、転移の発現（例えば発生及び拡散）の遅延、並びに／又は癌細胞に対する免疫系の活性の促進を含む。
【０２６７】
上記分子は、生理学的（例えばインビボ）条件において結合を促進する濃度で投与されることが理解される。上記分子（例えば抗体又はダイアボディ）は、個体自身の免疫応答を増強する又は指向する追加の作用剤、例えばＡＤＣＣを強化する作用剤等と共に投与してよい。
【０２６８】
更に別の実施形態では、このような分子（例えば抗体又はダイアボディ）のうちの１つ又は複数は：放射性分子；毒素（例えばカリケアマイシン）；化学療法剤分子；化学療法剤化合物を含み、これらの化合物を、上記抗体が認識する抗原を含有する癌細胞に対して標的化することによって、癌細胞又は罹患細胞を除去するために、このような治療を必要とする個体に投与されるリポソーム又は他の小胞と、複合化又は連結させてよい。いずれの特定の理論に限定されるものではないが、上記抗体（例えば抗ＨＥＲ２／ｎｅｕ抗体）は、ＨＥＲ２／ｎｅｕを表面に担持する細胞によって内在化され、これにより上記細胞に複合化された部分を送達して治療的効果を誘起し、また、免疫チェックポイントの調節に関わる細胞表面受容体（又はそのリガンド）（特にＰＤ−１）に特異的に結合する分子が、免疫系の活性化を促進する。
【０２６９】
更に別の実施形態では、このような分子（例えば抗体又はダイアボディ）は、転移の発現の遅延、抑制又は防止のための、腫瘍の外科的除去時の補助療法として使用できる。上記分子は、腫瘍のサイズを低減することによって手術を可能とする若しくは簡略化するため、手術中に組織をなるべく保護するため、及び／又は結果として発生するいずれの外面的破壊を低減するために、手術前に投与することもできる。
【０２７０】
本発明の抗ＨＥＲ２／ｎｅｕ抗体は、ＦｃγＲが仲介するエフェクタ細胞機能（例えばＡＤＣＣ）が望まれる疾患又は障害（例えば癌）の治療及び／又は予防に特に有用である。例えば本発明の抗ＨＥＲ２／ｎｅｕ抗体は、免疫エフェクタ細胞（例えばＮＫ細胞）上の細胞表面抗原及びＦｃγＲに結合してよく、上記細胞に対するエフェクタ機能（例えばＡＤＣＣ、ＣＤＣ、食作用、オプソニン化等）を刺激する。いくつかの実施形態では、本発明の抗ＨＥＲ２／ｎｅｕ抗体は、癌の治療に特に好適である。標準的なモノクローナル抗体療法の有効性は、被験者のＦｃγＲの多形性に依存する。Cartron, G. et al. (2002) “Therapeutic Activity Of Humanized Anti-CD20 Monoclonal Antibody And Polymorphism In IgG Fc Receptor FcgammaRIIIa Gene,” Blood 99:754-758; Weng, W.K. et al. (2003) “Two Immunoglobulin G Fragment C Receptor Polymorphisms Independently Predict Response To Rituximab In Patients With Follicular Lymphoma,” J Clin Oncol. 21(21):3940-3947。これらの受容体は、上記エフェクタ細胞の表面で発現し、ＡＤＣＣを仲介する。高親和性対立遺伝子は、ＡＤＣＣを仲介するエフェクタ細胞の能力を改善する。特に本発明の抗ＨＥＲ２／ｎｅｕ抗体は、エフェクタ細胞上のＦｃγＲに対する親和性が（野生型Ｆｃ領域に対して）増強された変異型Ｆｃ領域を含み、従って、患者のＦｃγＲの多形性にかかわらず、患者に対してより良好な免疫療法試薬を提供する。
【０２７１】
ＶＩＩＩ．治療可能な障害
本発明の様々な実施形態によって治療できる例示的な障害としては、限定するものではないが、増殖性の障害、特に癌（より特定すると、ＨＥＲ２／ｎｅｕ発現型癌）が挙げられる。様々な実施形態において、本発明は、ＨＥＲ２／ｎｅｕに特異的に結合する分子、及び免疫チェックポイントの調節に関与する細胞表面受容体（特にＰＤ−１）（又はそのリガンド）に特異的に結合する分子を、被験者に治療的有効量で投与するステップを含む、被験者の疾患又は障害の治療、予防又は管理のための方法及び組成物を包含する。例えば、本発明の分子は、原発腫瘍及び癌細胞の転移の、予防、阻害、成長の低減又は退行のために特に有用である。特定の作用機序によって束縛されることを意図するものではないが、本発明の分子は、癌細胞に対するエフェクタ機能を仲介でき、癌細胞に対する免疫系の活性化を促進でき、癌細胞上の細胞表面抗原及び／又は受容体を架橋させることができ、アポトーシス、又は負の成長調節シグナリング、又はこれらの組み合わせを増強でき、これにより腫瘍の除去及び／又は腫瘍の縮小を得ることができる。
【０２７２】
ＦｃγＲＩＩＢに対する親和性が低下し、かつＦｃγＲＩＩＩＡ及び／又はＦｃγＲＩＩＡに対する親和性が増大した抗体により、ＦｃγＲ結合時の活性化応答を増強でき、従って癌の治療及び／又は予防に関する治療有効性を増強できる。本明細書の方法によって治療できる癌の非限定的な例としては、急性骨髄性リンパ腫、副腎癌、腺癌、基底細胞癌、膀胱癌、骨癌、骨及び結合組織肉腫、脳腫瘍、乳癌、気管支癌、子宮頸癌、絨毛癌、慢性リンパ球性白血病、慢性骨髄性白血病、結腸癌、結腸直腸癌、子宮内膜癌、食道癌、眼癌、卵管癌、胆嚢癌、胃腸癌、神経膠腫、毛状細胞白血病、肝細胞癌、ホジキン病、肝内胆管癌、関節癌、カポジ肉腫、腎臓癌、喉頭癌、肝臓癌、白血病、肺癌、リンパ芽球性白血病、リンパ腫、悪性中皮腫、髄膜腫、黒色腫、中皮腫、中耳癌、多発性骨髄腫、骨髄腫、粘液肉腫、鼻腔癌、鼻咽頭癌、神経芽細胞腫、非ホジキンリンパ腫、非小細胞肺癌、鼻癌、口腔癌、卵巣癌、膵臓癌、陰茎癌、腹膜癌、咽頭癌、下垂体癌、前立腺癌、直腸癌、腎臓癌、唾液腺癌、皮膚癌、軟部肉腫、扁平上皮癌、胃癌、精巣癌、甲状腺癌、尿癌、子宮癌、膣癌、小胞癌、外陰部癌並びにウィルムス腫瘍が挙げられる。
【０２７３】
いくつかの実施形態では、上記癌は、リンパ腫、白血病、骨髄腫、リンパ性悪性腫瘍、脾臓癌及びリンパ節の癌といった、造血性癌又は血液関連癌である。ある好ましい実施形態では、上記癌は：（例えばバーキットリンパ腫、びまん性大細胞リンパ腫、濾胞性リンパ腫、ホジキンリンパ腫、マントル細胞リンパ腫、辺縁帯リンパ腫、粘膜関連リンパ系組織Ｂ細胞リンパ腫、非ホジキンリンパ腫、小リンパ球性リンパ腫及びＴ細胞リンパ腫といったＢ細胞リンパ腫を含む）高、中又は低悪性度リンパ腫、並びに（Ｂ細胞白血病（ＣＤ５＋Ｂリンパ球）、慢性骨髄性白血病、急性リンパ芽球性白血病等のリンパ性白血病、骨髄異形成、急性骨髄性白血病等の骨髄性白血病、及び二次性白血病といった慢性リンパ球性白血病を含む）白血病といった、Ｂ細胞関連癌；形質細胞悪性腫瘍等の多発性骨髄腫；並びに他の血液学的及び／又はＢ細胞若しくはＴ細胞関連癌である。他の例示的な癌は、好塩基球、好酸球、好中球及び単球、樹状細胞、血小板、赤血球、並びにナチュラルキラー細胞といった多形核白血球を含む、更なる造血細胞の癌である。
【０２７４】
いくつかの実施形態では、上記癌は、ＨＥＲ２／ｎｅｕを発現する癌である。いくつかの実施形態では、上記癌は、ＨＥＲ２／ｎｅｕを発現する、乳癌、胃癌、前立腺癌、子宮癌、卵巣癌、結腸癌、子宮内膜癌、副腎癌、非小細胞肺癌、頭頸部癌、喉頭癌、肝臓癌、腎臓癌、グリア芽細胞腫又は膵臓癌である。
【０２７５】
ＩＸ．医薬組成物
医薬組成物の「活性成分（ａｃｔｉｖｅ  ｉｎｇｒｅｄｉｅｎｔ）」としての投与のために、本発明の分子（例えば抗体又はダイアボディ）の様々な処方を用いてよい。いくつかの実施形態では、このような分子はそのまま投与してよい。本発明の組成物は、１つ又は複数の薬理学的活性作用剤に加えて、薬理学的に効果的な物質の投与を促進する、又は作用部位への送達のために薬学的に使用できる調剤への活性化合物の加工を促進する、当該技術分野において公知の、比較的不活性の物質である賦形剤及び助剤を含む、薬学的に許容可能な好適なキャリアを含有してよい。例えば賦形剤は、形状若しくは濃度を与えることができ、又は希釈剤として作用できる。好適な賦形剤としては、安定化剤、湿潤及び乳化剤、モル浸透圧濃度を変化させるための塩、カプセル化剤、緩衝液及び皮膚浸透エンハンサが挙げられるが、これらに限定されない。上記組成物は、いくつかの非限定的な選択肢を挙げると、例えば錠剤、丸薬、粉体、ロゼンジ、個包装剤、オブラート薬包、エリキシル剤、懸濁液、エマルジョン、溶液、シロップ、（固体としての又は液体媒体中の）エアロゾル、例えば最大１０重量％の活性化合物を含有する軟膏、軟質及び硬質ゼラチンカプセル、坐薬、滅菌注射用溶液、並びに滅菌包装済み粉体といった、いずれの好適な形態とすることができる。このような組成物は、いずれの公知の方法によって、例えば活性成分を１つ若しくは複数の担体又は１つ若しくは複数の賦形剤と、滅菌条件下で混合することによって、調製してよい。
【０２７６】
非経口投与のための好適な処方は、水溶性形態、例えば水溶性塩である活性化合物の水溶液を含む。更に、油性注射懸濁液のために適切な、活性化合物の懸濁液も投与してよい。好適な親油性溶媒又は担体は、脂肪油、例えばゴマ油、又は合成脂肪酸エステル、例えばオレイン酸エチル若しくはトリグリセリドを含む。水性注射懸濁液は、懸濁液の粘度を上昇させる物質を含有してよく、また例えばカルボキシメチルセルロースナトリウム及び／又はデキストランを含んでよい。任意に、上記懸濁液は安定化剤も含有してよい。細胞内への送達のために作用剤をカプセル化するために、リポソームも使用できる。
【０２７７】
本発明による全身投与のための薬学的処方は、経腸、非経口又は局所投与のために処方してよい。実際には、これら３つのタイプの処方全てを同時に使用して、活性成分の全身投与を達成してよい。非経口及び経口薬剤送達のための賦形剤及び処方は、Remington: The Science And Practice Of Pharmacy, 21st Edition, Lippincott Williams & Wilkins Publishing (2005)に記載されている。経口投与のための好適な処方は、硬質若しくは軟質ゼラチンカプセル、丸薬、コーティング錠剤を含む錠剤、エリキシル、懸濁液、シロップ又は吸入剤及びこれらの徐放形態を含む。一般にこれらの作用剤は、（例えば腹腔内、静脈内、皮下、筋肉内等の）注射による投与のために処方されるが、他の投与形態（例えば経口、粘膜等）も使用できる。従って本発明の分子（例えば抗ＨＥＲ２／ｎｅｕ抗体、抗ＰＤ−１抗体）は好ましくは、生理食塩水、リンゲル液、デキストロース溶液等の、薬学的に許容可能な担体と組み合わされる。
【０２７８】
上記医薬組成物はまた、当該技術分野において公知の処置によって、患者への投与後に、その活性成分の迅速な放出、徐放、又は遅延放出を提供できるように処方することもできる。本発明の組成物の物理的及び化学的特徴は、投与の態様、及び治療対象の特定の疾患又は障害に応じて、当該技術に従って修正又は最適化してよい。上記組成物は、単位剤形で、密閉コンテナとして、又は使用説明書及び／若しくは複数の単位剤形を含んでよいキットの一部として提供してよい。
【０２７９】
特定の実施形態では、例えば抗体又は融合タンパク質を発現できるリポソーム、微粒子マイクロカプセル、組み換え細胞内へのカプセル化；受容体仲介性エンドサイトーシス（例えばWu G.Y. and Wu C.H. (1987) “Receptor-Mediated In Vitro Gene Transformation By A Soluble DNA Carrier System,” J. Biol. Chem. 262:4429-4432を参照）；レトロウイルス又は他のベクターの一部としての核酸の構築等によって、上記治療剤を組成物に組み込むことができる。別の特定の実施形態では、気密性コンテナ内の滅菌凍結乾燥粉末又は無水濃縮物として供給され、例えば水又は食塩水を用いて、被験体への投与に適切な濃度へと再構成できる。
【０２８０】
好ましくは、上記治療剤は、少なくとも５ｍｇ、より好ましくは少なくとも１０ｍｇ、少なくとも１５ｍｇ、少なくとも２５ｍｇ、少なくとも３５ｍｇ、少なくとも４５ｍｇ、少なくとも５０ｍｇ又は少なくとも７５ｍｇの単位剤形で、気密性コンテナ内の乾燥滅菌凍結乾燥粉末として供給される。凍結乾燥された粉末は、その元々のコンテナ内において２℃〜８℃で保管するべきであり、またこの分子は、再構成後１２時間以内、好ましくは６時間以内、５時間以内、３時間以内又は１時間以内に非経口投与するべきである。ある代替実施形態では、上記治療剤は、上記治療剤の量及び濃度を示す気密性コンテナ内に、液体形態で供給される。好ましくは、上記液体形態は、上記分子の少なくとも１ｍｇ／ｍｌ、より好ましくは少なくとも２．５ｍｇ／ｍｌ、少なくとも５ｍｇ／ｍｌ、少なくとも８ｍｇ／ｍｌ、少なくとも１０ｍｇ／ｍｌ、少なくとも１５ｍｇ／ｍｌ、少なくとも２５ｍｇ／ｍｌ、少なくとも５０ｍｇ／ｍｌ、少なくとも１００ｍｇ／ｍｌ、少なくとも１５０ｍｇ／ｍｌ、少なくとも２００ｍｇ／ｍｌで、気密性コンテナ内で供給される。
【０２８１】
２つ以上の治療剤を投与する場合、作用剤は、同一処方にまとめて処方してよく、又は別個の組成物へと処方してよい。従っていくつかの実施形態では、ＨＥＲ２／ｎｅｕに特異的に結合する分子、及び免疫チェックポイントの調節に関与する細胞表面受容体（特にＰＤ−１）（又はそのリガンド）に特異的に結合する分子は、同一の医薬組成物中にまとめて処方される。代替実施形態では、これらの分子は別個の医薬組成物中に処方される。
【０２８２】
Ｘ．キット
上記組成物は、キットに含まれていてよい。このキットは、非限定的な態様において、治療剤を含む医薬組成物、投与のための説明書、及び／又は他の構成要素を含むことができる。好ましい実施形態では、上記キットは、投与の準備ができた状態の組成物を含むことができる。上記キットのコンテナは、ある構成要素を入れることができる、瓶、ディスペンサ、梱包、コンパートメント又は他のタイプのコンテナを含むことができる。上記コンテナは、その表面上に印を含むことができる。上記印は例えば、単語、句、頭字語、写真又はシンボルとすることができる。上記コンテナは、所定量の構成要素（例えば本発明の組成物）を分注できる。上記組成物は、スプレー、エアロゾル、又は液体形態若しくは半固体形態で分注できる。上記コンテナは、スプレー、ポンプ、又は圧搾機構を有することができる。特定の態様では、上記キットは、本発明の組成物を投与するためのシリンジを含むことができる。
【０２８３】
キット内に２つ以上の構成要素が存在する場合、これらはまとめて梱包されていてよく、又は上記キットは一般に、上記追加の構成要素を別個に入れることができる第２の、第３の、又は更なる追加のコンテナを内包することになる。本発明のキットはまた、市販のために厳重に封止された状態で上記構成要素を格納するコンテナを含むことができる。このようなコンテナは、所望の瓶、ディスペンサ又は梱包がその中に保持される、射出成形又は吹込成形されたプラスティックコンテナを含んでよい。キットは、キットの構成要素を使用するための、及びキットに含まれていない他のいずれの組成物、化合物、作用剤、活性成分又は物品の使用のための、説明書も含むことができる。説明書は、実装可能なバリエーションを含んでよい。説明書は、例えば製品又は組成物を適用、使用及び保守するための説明を含むことができる。
【０２８４】
ＸＩ．投与及び投薬量
本発明の組成物のために、多様な投与経路が利用可能である。選択される特定の態様は、当然のことながら：選択される特定の治療剤；この投与が疾患の予防、診断又は治療のいずれのためのものであるか；治療対象である医学的障害の重篤度；及び治療有効性のために必要な投薬量に左右される。本発明の方法は、医学的に許容可能であり、かつ臨床的に許容できない悪影響を引き起こすことなく、効果的なレベルの活性化合物を生成する、いずれの投与態様を用いて実施してよく、このような投与態様としては、限定するものではないが、経口投与、頬内投与、舌下投与、吸入投与、粘膜投与、直腸投与、鼻腔内投与、局所投与、点眼投与、眼球周囲投与、眼球内投与、経皮投与、皮下投与、動脈内投与、静脈内投与、筋内投与、非経口投与、又は点滴投与法が挙げられる。ある特定の実施形態では、本発明の医薬組成物を、治療が必要な領域に局所的に投与することが望ましい場合があり、これは例えば、限定するものではないが、局所的注入によって、注射によって又はインプラントを用いて達成してよく、上記インプラントは、シラスティック膜等の膜又は繊維を含む、多孔性、非多孔性又はゼラチン質材料である。好ましくは、本発明の分子を投与する際、上記分子を吸収しない材料を使用するよう注意する必要がある。
【０２８５】
本明細書中で使用される場合、用語「治療有効量（ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃａｌｌｙ  ｅｆｆｅｃｔｉｖｅ  ａｍｏｕｎｔ）」は、有意な患者の利益、即ち慢性状態の治癒若しくは改善、症状の軽減、このような状態の治癒速度の増大、又は治療対象の若しくはその周囲の組織における物質のレベルの検出可能な変化を示すために十分な、医薬組成物又は方法の各活性構成要素の合計量を意味する。単独で投与される個々の活性成分に対してこの用語が適用される場合、この用語は、上記成分のみを指す。組み合わせに対して適用される場合、この用語は、治療的効果をもたらす複数の活性成分の合計量を指し、これらの活性成分が組み合わせて投与されるか、順次投与されるか、又は同時に投与されるかにはかかわらない。
【０２８６】
本発明の処方に採用される正確な用量は、投与経路及び状態の重篤度に左右され、専門家の判断及び各患者の状況に従って決定しなければならず、標準的な臨床技術によって決定できる。効果的な用量（即ち、障害に関連する１つ又は複数の症状の治療、予防又は寛解に効果的となるために十分な用量）は、インビトロ又は動物モデル試験系から得られる用量−応答曲線から外挿法によって推定できる。従って、特定の投薬レジメン、即ち用量、タイミング及び繰り返し数は、特定の個体及びその個体の治療歴、並びに投与経路に左右される。本発明の分子の投与の投薬量及び頻度は、例えば脂質付加等によって上記分子の摂取及び／又は組織浸透を増強することにより、低減又は変化させてよい。
【０２８７】
ある好ましい実施形態では、本発明の治療剤は、連続的な注入又は休止期間が長くない頻繁な投与による、規則的投薬レジメンで投与される。このような規則的投与は、休止期間がない一定の間隔での投薬を伴うことができる。典型的には、治療剤、特に細胞傷害剤は、比較的低用量で使用される。このような投薬レジメンは、長期間に亘って比較的低用量で毎日投与するものを包含し、これは、有毒な副作用を最小化でき、また休止期間を排除できる。特定の実施形態では、上記治療剤は、約２４時間から約２日、約１週間、約２週間、約３週間、約１か月、約２か月、約３か月、約４か月、約５か月、約６か月までの範囲の、長期間の低用量又は連続注入によって送達される。このような投薬レジメンのスケジュール決定は、腫瘍専門医が最適化できる。
【０２８８】
好ましくは、本発明の分子は、１回又は複数回の用量を含む治療レジメンを用いて投与され、この治療レジメンは、２日、３日、４日、５日、６日又は７日に亘って投与される。特定の実施形態では、治療レジメンは、有効量のこのような分子の用量を断続的に投与する（例えば、予上記分子の用量を、所定の週の１日目、２日目、３日目及び４日目に投与し、その週の他の日には投与しない）ことを含む。特に、同一週の５日目、６日目及び７日目におけるこのような分子の投与も包含される。典型的には、１、２、３、４、５つ又はそれを超える治療のコースが存在する。各コースは、同一のレジメン又は異なるレジメンであってよい。
【０２８９】
別の実施形態では、投与される用量は、上記分子の１日の予防的又は治療的有効量に到達するまで、１つ又は複数のレジメンの最初の１／４、最初の半分又は最初の２／３若しくは３／４に亘って（例えば４コース治療の第１、第２又は第３のレジメンに亘って）漸増する。
【０２９０】
患者に投与されるこのような分子の投薬量は、単一作用剤療法としての使用に関して計算してよい。あるいは上記分子は、他の治療組成物と組み合わせて使用してよく、患者に投与される投薬量は、上記分子を単一作用剤療法として使用する場合より低くなる。患者に投与されるこのような分子（又はこのような分子の組み合わせ）の投薬量は典型的には、少なくとも約１．０ｍｇ／ｋｇ体重、少なくとも約３ｍｇ／ｋｇ体重、少なくとも約５ｍｇ／ｋｇ体重、少なくとも約１０ｍｇ／ｋｇ体重、又は少なくとも約２０ｍｇ／ｋｇ体重である。本発明が包含する抗体に関して、患者に投与される投薬量は典型的には、１．０ｍｇ／ｋｇ〜１００ｍｇ／ｋｇ（患者の体重）である。好ましくは、患者に投与される投薬量は、１．０ｍｇ／ｋｇ体重〜２０ｍｇ／ｋｇ体重、１．０ｍｇ／ｋｇ体重〜１０ｍｇ／ｋｇ体重、１．０ｍｇ／ｋｇ体重〜５ｍｇ／ｋｇ体重、２．０ｍｇ／ｋｇ体重〜２０ｍｇ／ｋｇ体重、又は５ｍｇ／ｋｇ体重〜２０ｍｇ／ｋｇ（患者の体重）である。一実施形態では、患者に投与される投薬量は、６ｍｇ／ｋｇ体重〜１８ｍｇ／ｋｇ体重である。別の実施形態では、患者に投与される投薬量は、６ｍｇ／ｋｇ体重、１０ｍｇ／ｋｇ体重、１５ｍｇ／ｋｇ体重又は１８ｍｇ／ｋｇ体重である。ベースラインにある患者の体重に基づいて、計算した用量を投与する。ベースライン又は確立された平坦域体重からの体重の有意な（≧１０％）変化がある場合、用量の再計算を促す必要がある。
【０２９１】
あるいは、体重にかかわらず、固定投薬量のこのような分子（又はこのような分子の組み合わせ）を患者に投与する。本発明が包含する抗体に関して、患者に投与される固定投薬量は典型的には、５０ｍｇ〜５００ｍｇである。好ましくは、患者に投与される固定投薬量は、５０ｍｇ〜３００ｍｇ、１００ｍｇ〜３００ｍｇ又は１００ｍｇ〜２００ｍｇである。一実施形態では、患者に投与される固定投薬量は、２００ｍｇである。
【０２９２】
半減期等の経験的考慮事項は一般に、投薬量の決定に寄与する。ヒト化抗体又は完全ヒト抗体等のヒト免疫系に適合する抗体を用いて、抗体の半減期を延長し、抗体が宿主の免疫系に攻撃されるのを防止できる。投与の頻度は、治療過程全体に亘って決定及び調整してよく、癌細胞の数の減少、癌細胞の減少の維持、癌細胞の増殖の低下、又は転移の発現の遅延に基づく。あるいは、抗ＨＥＲ２／ｎｅｕ抗体の持続連続放出処方も適切であり得る。持続放出を達成するための様々な処方及びデバイスは、当該技術分野において公知である。
【０２９３】
ＸＩＩ．併用療法
本発明は更に、ＨＥＲ２／ｎｅｕに特異的に結合する分子と、免疫チェックポイントの調節に関与する細胞表面受容体（特にＰＤ−１）（又はそのリガンド）に特異的に結合する分子とを、現行の標準的な及び実験的な化学療法、ホルモン療法、生物学的療法、免疫療法、放射線療法又は手術を含むがこれらに限定されない、癌、自己免疫疾患、炎症又は感染性疾患の治療又は予防のための当業者に公知の他の療法との更なる組み合わせで、投与することを包含する。いくつかの実施形態では、本発明の分子（例えば本発明の抗ＨＥＲ２／ｎｅｕ及び抗ＰＤ−１抗体）は、治療有効量又は予防有効量の、癌、特にＨＥＲ２／ｎｅｕ発現型癌の治療及び／又は予防のための当業者に公知の１つ又は複数の治療剤との組み合わせで投与される。
【０２９４】
本明細書中で使用される場合、用語「組み合わせ、併用（ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ）」は、２つ以上の治療剤の使用を指す。用語「組み合わせ、併用」の使用は、複数の治療剤が障害を有する被験者に投与される順序を制限するものではなく、またこれらの作用剤が全く同一の時点に投与されることを意味するものではなく、本発明の抗体又はポリペプチドが他の作用剤と共に作用することによって、これらを他の方法で投与した場合よりも多大な利益を提供できるように、本発明の抗体又はポリペプチド及び上記他の作用剤を、ある順序で、ある時間間隔内に、哺乳類に投与することを意味するものである。例えば各治療剤（例えば化学療法、放射線療法、ホルモン療法又は生物学的療法）は、同時に、又は異なる時点においていずれの順序で順次、投与できるものの、同時に投与しない場合には、上記治療剤は、所望の治療的又は予防的効果を提供できるよう、時間的に十分に近接して投与するべきである。各治療剤は、いずれの適切な形態で、またいずれの好適な経路で、例えば１つを経口経路、そして１つを非経口経路で、別個に投与できる。
【０２９５】
様々な実施形態では、第１の治療剤は、障害を有する被験者への第２の（又は後続の）治療剤の投与の、前（例えば、５分前、１５分前、３０分前、４５分前、１時間前、２時間前、４時間前、６時間前、１２時間前、２４時間前、４８時間前、７２時間前、９６時間前、１週間前、２週間前、３週間前、４週間前、５週間前、６週間前、８週間前若しくは１２週間前）、同時、又は後（例えば、５分後、１５分後、３０分後、４５分後、１時間後、２時間後、４時間後、６時間後、１２時間後、２４時間後、４８時間後、７２時間後、９６時間後、１週間後、２週間後、３週間後、４週間後、５週間後、６週間後、８週間後若しくは１２週間後）に、投与できる。好ましい実施形態では、２つ以上の作用剤を、患者の同一の訪問時に、又は１２時間以下の間隔で、２４時間以下の間隔で、若しくは４８時間以内の間隔で、投与する。
【０２９６】
上述のように、本発明に従って、それぞ必要とするレシピエントである被験者に、ＨＥＲ２／ｎｅｕに特異的に結合する分子と、免疫チェックポイントを調節する細胞表面受容体又はそのリガンドに特異的に結合する分子との組み合わせを提供するために、様々な投薬及び投与経路を採用してよいが、このような治療における使用のために、特定の組み合わせ、投薬及び投与経路が特に好ましい。本発明の変異型キメラ４Ｄ５抗体（例えばマルゲツキシマブ）を、本発明の抗ＰＤ−１抗体（例えばペンブロリズマブ）と組み合わせて、上述のような投薬及び投与経路で使用することが、特に好ましい。
【０２９７】
ある用量の変異型キメラ４Ｄ５抗体と、ある用量の抗ＰＤ−１抗体の投薬との組み合わせを、１回又は複数回投与してよく（このような組み合わせ治療レジメンの各投与を、本明細書では「サイクル（ｃｙｃｌｅ）」と呼ぶ）、各投与は、患者の体重１ｋｇあたり６〜１８ｍｇ、好ましくは６ｍｇ、１０ｍｇ、１５ｍｇ又は１８ｍｇの変異型キメラ４Ｄ５抗体と、患者の体重１ｋｇあたり１〜１０ｍｇ、好ましくは１ｍｇ、２ｍｇ、３ｍｇ若しくは１０ｍｇの抗ＰＤ−１抗体、又は２００ｍｇの固定用量の抗ＰＤ−１抗体との投与を含む。最も好ましくは、サイクルは、３週間（±３日）毎に、疾患又は管理できない毒性の寛解が観察されるまで行われる。
【０２９８】
特に好ましい実施形態では、変異型キメラ４Ｄ５抗体（例えば、マルゲツキシマブ）及び抗ＰＤ−１抗体（例えば、ペンブロリズマブ）は、少なくとも１か月以上、少なくとも３か月以上、又は少なくとも６か月以上、又は少なくとも１２か月以上の期間に亘って、約３週間（±３日）毎に、ＩＶ点滴によって被験者に投与される。少なくとも６か月以上、又は少なくとも１２か月以上、又は疾患若しくは管理できない毒性の寛解が観察されるまでの治療期間が特に好ましい。このようなＩＶ投与では、変異型キメラ４Ｄ５抗体及び抗ＰＤ−１抗体は、共に、又は順次投与してよい。特に好ましい実施形態では、変異型キメラ４Ｄ５抗体及び抗ＰＤ−１抗体は、２４時間以内の間隔でＩＶ点滴によって被験者に順次投与される。このような順次投与では、変異型キメラ４Ｄ５抗体は、抗ＰＤ−１抗体の投与の前又は後に投与してよい。
【０２９９】
変異型キメラ４Ｄ５抗体及び抗ＰＤ−１抗体の組み合わせの複数の用量を被験者に提供することが特に好ましい。従って治療レジメンは、１サイクル、少なくとも２サイクル以上、少なくとも３サイクル以上、少なくとも４サイクル以上、少なくとも５サイクル以上、又は少なくとも６サイクル以上を含んでよい。このようなサクルそれぞれにおける各抗体の投薬量は、１回前に投与された投薬量と同一であってよく、又は異なっていてよい。よって例えば、療法は、「第１の（ｆｉｒｓｔ）」（又は「多い」）用量の変異型キメラ４Ｄ５抗体と、それに続く、比較的少ない「第２の（ｓｅｃｏｎｄ）」用量の変異型キメラ４Ｄ５抗体との投与を含んでよい。
【０３００】
いくつかの実施形態では、変異型キメラ４Ｄ５抗体は、およそ６、１０、１５又は１８ｍｇ／ｋｇの第１の用量で投与され、それに続いて第２の比較的少ない用量で投与され、この第２の用量は、第１の用量の投与後約３週間（±３日）である。例えば、変異型キメラ４Ｄ５抗体の上記第１の用量がおよそ１８ｍｇ／ｋｇ体重である場合、上記第２の用量は、体重未満（例えばおよそ３ｍｇ／ｋｇ体重、およそ６ｍｇ／ｋｇ体重、およそ８ｍｇ／ｋｇ体重、およそ１０ｍｇ／ｋｇ体重又はおよそ１５ｍｇ／ｋｇ体重）である。いくつかの実施形態では、追加の後続の用量の変異型キメラ４Ｄ５抗体が投与され、この後続の用量は、第２の用量又は１つ前の後続の用量の投与後約３週間（±３日）で投与される。いくつかの実施形態では、上記後続の用量は、上記第２の比較的少ない用量と同一の濃度で投与される。好ましい実施形態では、同一用量の変異型キメラ４Ｄ５抗体を、治療の全過程に亘って投与する。
【０３０１】
上記抗体をＩＶプッシュ又はボーラスとして投与するのではなく、このような投与をＩＶ点滴によって行うことが好ましい。従って上記抗体は好ましくは、好適な希釈剤、例えば０．９％塩化ナトリウムを内包する点滴バッグ内へと希釈される。急性輸液反応又はアレルギー反応が発生し得るため、このような急性輸液反応の予防のための事前薬物処理が推奨され、また抗体投与中にアナフィラキシーに関する警戒を怠ってはならない。ＩＶ点滴を、３０分〜２４時間の期間に亘って被験者に投与するのが特に好ましい。特定の実施形態では、被験者が有害な急性輸液反応の兆候又は症状を示さない場合、ＩＶ点滴は好ましくは、３０〜１８０分若しくは３０〜１２０分若しくは３０〜９０分の期間に亘って、又は６０分の期間に亘って、又はそれ未満の期間に亘って、送達される。
【０３０２】
従って、好ましい癌の治療方法が提供され、この方法は、それを必要とする被験者に、およそ６〜１８ｍｇ／ｋｇ体重の投薬量の変異型キメラ４Ｄ５抗体、及びおよそ２００ｍｇの固定投薬量の抗ＰＤ−１抗体を投与するステップを含み、各上記抗体は、３週間（±３日）毎に投与される。一実施形態では、上記変異型キメラ４Ｄ５抗体は、およそ６、１０、１５又は１８ｍｇ／ｋｇ体重の投薬量で投与される。更なる実施形態では、変異型キメラ４Ｄ５抗体は、およそ６ｍｇ／ｋｇ体重の投薬量で投与され、抗ＰＤ−１抗体は、２００ｍｇの固定投薬量で投与される。更なる実施形態では、変異型キメラ４Ｄ５抗体は、およそ１０ｍｇ／ｋｇ体重の投薬量で投与され、抗ＰＤ−１抗体は、２００ｍｇの固定投薬量で投与される。更なる実施形態では、変異型キメラ４Ｄ５抗体は、およそ１５ｍｇ／ｋｇ体重の投薬量で投与され、抗ＰＤ−１抗体は、２００ｍｇの固定投薬量で投与される。更なる実施形態では、変異型キメラ４Ｄ５抗体は、およそ１８ｍｇ／ｋｇ体重の投薬量で投与され、抗ＰＤ−１抗体は、およそ２００ｍｇの固定投薬量で投与される。上述の実施形態のうちのいずれにおいて、変異型キメラ４Ｄ５抗体及び抗ＰＤ−１抗体は、２４時間の期間内にＩＶ点滴で投与される。上述の実施形態のうちのいずれにおいて、上記癌は、ＨＥＲ２／ｎｅｕ発現型癌である。上述の実施形態のうちのいずれにおいて、変異型キメラ４Ｄ５抗体はマルゲツキシマブであり、抗ＰＤ−１抗体はペンブロリズマブである。上述の実施形態のうちのいずれにおいて、変異型キメラ４Ｄ５抗体はマルゲツキシマブであり、抗ＰＤ−１抗体はニボルマブである。上述の実施形態のうちのいずれにおいて、変異型キメラ４Ｄ５抗体はマルゲツキシマブであり抗ＰＤ−１抗体はピディリズマブである。上述の実施形態のうちのいずれにおいて、変異型キメラ４Ｄ５抗体はマルゲツキシマブであり、抗ＰＤ−１抗体はＥＨ１２．２Ｈ７である。上述の実施形態のうちのいずれにおいて、変異型キメラ４Ｄ５抗体はマルゲツキシマブであり、抗ＰＤ−１抗体はｈＰＤ−１  ｍＡｂ  ２である。上述の実施形態のうちのいずれにおいて、変異型キメラ４Ｄ５抗体はマルゲツキシマブであり、抗ＰＤ−１抗体はｈＰＤ−１  ｍＡｂ  ７である。上述の実施形態のうちのいずれにおいて、変異型キメラ４Ｄ５抗体はマルゲツキシマブであり、抗ＰＤ−１抗体はｈＰＤ−１  ｍＡｂ  ９である。上述の実施形態のうちのいずれにおいて、変異型キメラ４Ｄ５抗体はマルゲツキシマブであり、抗ＰＤ−１抗体はｈＰＤ−１  ｍＡｂ  １５である。上述の実施形態のうちのいずれにおいて、変異型キメラ４Ｄ５抗体はマルゲツキシマブであり、抗ＰＤ−１抗体は、表１で提供された抗体から選択される。
【０３０３】
従って、好ましい癌の治療方法が提供され、この方法は、それを必要とする被験者に、およそ６〜１８ｍｇ／ｋｇ体重の投薬量の変異型キメラ４Ｄ５抗体、及びおよそ１〜１０ｍｇ／ｋｇの投薬量の抗ＰＤ−１抗体を投与するステップを含み、各上記抗体は、３週間（±３日）毎に投与される。一実施形態では、上記変異型キメラ４Ｄ５抗体は、およそ６、１０、１５又は１８ｍｇ／ｋｇ体重の投薬量で投与される。更なる実施形態では、抗ＰＤ−１抗体は、およそ１、２、３又は１０ｍｇ／ｋｇ体重の投薬量で投与される。更なる実施形態では、変異型キメラ４Ｄ５抗体は、およそ６ｍｇ／ｋｇ体重の投薬量で投与され、抗ＰＤ−１抗体は、およそ１ｍｇ／ｋｇの投薬量で投与される。更なる実施形態では、変異型キメラ４Ｄ５抗体は、およそ６ｍｇ／ｋｇ体重の投薬量で投与され、抗ＰＤ−１抗体は、２ｍｇ／ｋｇの投薬量で投与される。更なる実施形態では、変異型キメラ４Ｄ５抗体は、およそ６ｍｇ／ｋｇ体重の投薬量で投与され、抗ＰＤ−１抗体は、およそ１０ｍｇ／ｋｇ体重の投薬量で投与される。更なる実施形態では、変異型キメラ４Ｄ５抗体は、およそ１０ｍｇ／ｋｇ体重の投薬量で投与され、抗ＰＤ−１抗体は、およそ１ｍｇ／ｋｇ体重の投薬量で投与される。更なる実施形態では、変異型キメラ４Ｄ５抗体は、およそ１０ｍｇ／ｋｇ体重の投薬量で投与され、抗ＰＤ−１抗体は、およそ２ｍｇ／ｋｇ体重の投薬量で投与される。更なる実施形態では、変異型キメラ４Ｄ５抗体は、およそ１０ｍｇ／ｋｇ体重の投薬量で投与され、抗ＰＤ−１抗体は、およそ１０ｍｇ／ｋｇ体重の投薬量で投与される。更なる実施形態では、変異型キメラ４Ｄ５抗体は、およそ１５ｍｇ／ｋｇ体重の投薬量で投与され、抗ＰＤ−１抗体は、１ｍｇ／ｋｇの投薬量で投与される。更なる実施形態では、変異型キメラ４Ｄ５抗体は、およそ１６ｍｇ／ｋｇ体重の投薬量で投与され、抗ＰＤ−１抗体は、２ｍｇ／ｋｇの投薬量で投与される。更なる実施形態では、変異型キメラ４Ｄ５抗体は、およそ１５ｍｇ／ｋｇ体重の投薬量で投与され、抗ＰＤ−１抗体は、およそ１０ｍｇ／ｋｇ体重の投薬量で投与される。上述の実施形態のうちのいずれにおいて、変異型キメラ４Ｄ５抗体及び抗ＰＤ−１抗体は、２４時間の期間内にＩＶ点滴で投与される。上述の実施形態のうちのいずれにおいて、上記癌は、ＨＥＲ２／ｎｅｕ発現型癌である。上述の実施形態のうちのいずれにおいて、変異型キメラ４Ｄ５抗体はマルゲツキシマブであり、抗ＰＤ−１抗体はペンブロリズマブである。上述の実施形態のうちのいずれにおいて、変異型キメラ４Ｄ５抗体はマルゲツキシマブであり、抗ＰＤ−１抗体はニボルマブである。上述の実施形態のうちのいずれにおいて、変異型キメラ４Ｄ５抗体はマルゲツキシマブであり抗ＰＤ−１抗体はピディリズマブである。上述の実施形態のうちのいずれにおいて、変異型キメラ４Ｄ５抗体はマルゲツキシマブであり、抗ＰＤ−１抗体はＥＨ１２．２Ｈ７である。上述の実施形態のうちのいずれにおいて、変異型キメラ４Ｄ５抗体はマルゲツキシマブであり、抗ＰＤ−１抗体はｈＰＤ−１  ｍＡｂ  ２である。上述の実施形態のうちのいずれにおいて、変異型キメラ４Ｄ５抗体はマルゲツキシマブであり、抗ＰＤ−１抗体はｈＰＤ−１  ｍＡｂ  ７である。上述の実施形態のうちのいずれにおいて、変異型キメラ４Ｄ５抗体はマルゲツキシマブであり、抗ＰＤ−１抗体はｈＰＤ−１  ｍＡｂ  ９である。上述の実施形態のうちのいずれにおいて、変異型キメラ４Ｄ５抗体はマルゲツキシマブであり、抗ＰＤ−１抗体はｈＰＤ−１  ｍＡｂ  １５である。上述の実施形態のうちのいずれにおいて、変異型キメラ４Ｄ５抗体はマルゲツキシマブであり、抗ＰＤ−１抗体は、表１で提供された抗体から選択される。
【０３０４】
特定の実施形態では、上記治療剤は、被験者に周期的に投与される。このような周期的療法は、ある期間に亘る第１の作用剤の投与、これに続くある期間に亘る第２の作用剤及び／又は第３の作用剤の投与、及びこの順次投与の繰り返しを伴う。周期的療法は、上記療法の１つ若しくは複数に対する耐性の発達を低減でき、上記療法のうちの１つの副作用を回避若しくは低減でき、及び／又は治療の有効性を改善できる。例示的サイクルは、１週間に約１回、１０日毎に約１回、２週間毎に約１回、及び３週間毎に約１回である。各サイクルは、少なくとも１週間の休止期間、少なくとも２週間の休止期間、少なくとも３週間の休止期間を含むことができる。投与されるサイクルの数は、約１〜約１２サイクル、より典型的には約２〜約１０サイクル、より典型的には約２〜約８サイクルである。
【０３０５】
細胞増殖性障害の治療に関するある実施形態では、本発明の分子（例えば抗ＨＥＲ２／ｎｅｕ抗体、抗ＰＤ−１抗体）は、限定するものではないが、アルキル化剤（例えばメクロレタミン若しくはシスプラチン）、血管新生阻害剤、アントラサイクリン（例えばダウノルビシン／ダウノマイシン若しくはドキソルビシン）、抗生剤（例えばダクチノマイシン、ブレオマイシン若しくはアントラマイシン）、抗体（例えば、ベバシズマブ（Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ，  Ｉｎｃ．がＡＶＡＳＴＩＮ（登録商標）として販売）等の抗ＶＥＧＦ抗体、パニツムマブ（Ａｍｇｅｎ，  Ｉｎｃ．がＶＥＣＴＩＢＩＸ（商標）として販売）等の抗ＥＧＦＲ抗体、若しくはナタリズマブ（Ｂｉｏｇｅｎ  Ｉｄｅｃ  ａｎｄ  Ｅｌａｎ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，  Ｉｎｃ．がＴＹＳＡＢＲＩ（登録商標）として販売）等の抗インテグリン抗体）、代謝拮抗剤（例えばメトトレキサート若しくは５−フルオロウラシル）、有糸分裂阻害剤（例えばビンクリスチン若しくはパクリタキセル）、細胞傷害剤（例えば細胞分裂阻害剤若しくは殺細胞剤）、ホルモン療法剤（例えば選択的エストロゲン受容体調節剤（例えばタモキシフェン若しくはラロキシフェン）、アロマターゼ阻害剤、ルテイン化ホルモン放出性ホルモン類似体、プロゲステロン作用剤、副腎皮質ステロイド、エストロゲン、アンドロゲン、抗エストロゲン剤、アンドロゲン受容体ブロック剤、５αレダクターゼ阻害剤、副腎ホルモン生成阻害剤等）、マトリックスメタロプロテアーゼ阻害剤、放射性元素（例えばαエミッタ、γエミッタ等）、又は他のいずれの化学療法剤といった、別の治療剤と、コンジュゲートするか、又は更に組み合わせて投与する。
【０３０６】
好適な血管新生阻害剤の非限定的な例としては：ＡＢＴ−６２７；アンジオスタチン（プラスミノーゲン断片）；アンジオザイム；抗血管新生アンチトロンビンＩＩＩ；Ｂａｙ  １２−９５６６；ベネフィン；ベバシズマブ；ＢＭＳ−２７５２９１；ビスホスホネート；軟骨由来阻害剤（ＣＤＩ）；ＣＡＩ；ＣＤ５９補体断片；ＣＥＰ−７０５５；Ｃｏｌ  ３；コンブレタスタチンＡ−４；エンドスタチン（コラーゲンＸＶＩＩＩ断片）；ファルネシルトランスフェラーゼ阻害剤（ＦＴＩ）；フィブロネクチン断片；ｇｒｏ−ｂｅｔａ；ハロフジノン；ヘパリナーゼ；ヘパリンヘキササッカライド断片；ＨＭＶ８３３；ヒト絨毛性ゴナドトロピン（ｈＣＧ）；ＩＭ−８６２；インターフェロンα／β／γ；インターフェロン誘導性タンパク質（ＩＰ−１０）；インターロイキン−１２；クリングル５（プラスミノーゲン断片）；マリマスタット；メタロプロテイナーゼ阻害剤（ＴＩＭＰ）；２−メトキシエストラジオール；ＭＭＩ  ２７０（ＣＧＳ  ２７０２３Ａ）；ＭｏＡｂ  ＩＭＣ−１Ｃ１１；ネオバスタット；ＮＭ−３；パンゼム；ＰＩ−８８；胎盤リボヌクレアーゼ阻害剤；プラスミノーゲン活性化因子阻害剤；血小板因子ｒ−４（ＰＦ４）；プリノマスタット；プロラクチン１６ｋＤａ断片；プロリフェリン関連タンパク質（ＰＲＰ）；ＰＴＫ  ７８７／ＺＫ  ２２２５９４；レチノイド；ソリマスタット；スクアラミン；ＳＳ３３０４；ＳＵ５４１６；ＳＵ６６６８；ＳＵ１１２４８；テトラヒドロコルチゾール−Ｓ；テトラチオモリブデート；サリドマイド；トロンボスポンジン−１（ＴＳＰ−１）；ＴＮＰ−４７０；トランスフォーミング成長因子β（ＴＧＦ−β）；バスクロスタチン；バソスタチン（カルレティキュリン断片）；ＺＤ６１２６；及びＺＤ６４７４が挙げられる。
【０３０７】
細胞増殖性障害の治療のための追加の抗体の非限定的な例としては、１７−１Ａ、αｖβ３、ＡＦＰ、ＣＤ３、ＣＤ１８、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ３３、ＣＤ４４、ＣＤ５２、ＣＥＡ、ＣＴＬＡ−４、ＤＮＡ関連タンパク質、ＥＧＦ受容体、Ｅｐ−ＣＡＭ、ＧＤ２−ガングリオシド、ｇｐ  ＩＩＩｂ／ＩＩＩａ、ｇｐ７２、ＨＬＡ−ＤＲ  １０β、ＨＬＡ−ＤＲ抗原、ＩｇＥ、ガングリオシドＧＤ３、ＭＵＣ−１、ｎｕＣ２４２、ＰＥＭ抗原、ＳＫ−１抗原、腫瘍抗原ＣＡ１２５、腫瘍抗原ＭＵＣ１、ＶＥＧＦ、及びＶＥＧＦ−受容体に対する抗体が挙げられる。
【実施例】
【０３０８】
ここまで本発明を概説してきたが、以下の実施例を参照することにより、本発明は更に容易に理解されるだろう。これらの実施例は例示として提供されており、そうでないことが明記されていない限り本発明を制限することを意図したものではない。
【０３０９】
実施例１
ＢＩＡＣｏｒｅ親和性決定
溶出され精製された抗体の結合の動力学的パラメータを、ＢＩＡｃｏｒｅアッセイ（ＢＩＡｃｏｒｅ（登録商標）機器１０００、ＢＩＡｃｏｒｅ  Ｉｎｃ．，ニュージャージー州ピスカータウェイ）及び関連ソフトウェアを用いて分析した。ＨＥＲ−２は、（ＮＨＳ／ＥＤＣの混合物によるカルボキシメチル基の修飾による）アミン連結化学作用により、センサチップ表面の４つのフローセルのうちの１つ（フローセル２）上に不動化され、これにより、約１０００応答単位（ｒｅｓｐｏｎｓｅ  ｕｎｉｔ：ＲＵ）の受容体が上記表面上に不動化される。これに続き、未反応の活性エステルを、１ＭのＥｔ−ＮＨ２の注入によって「終端させ（ｃａｐｐｅｄ  ｏｆｆ）」た。好適な表面が調製された後、ｃｈ４Ｄ５−ＦｃＷＴ（野生型Ｆｃ）、ｃｈ４Ｄ５及びトラスツズマブ（対照）を、１８０秒に亘り、７０ｍＬ／分の流量で、上記表面に亘って、６．２５〜２００ｎＭの濃度で注入した。
【０３１０】
全てのデータセットの回収後、得られた結合曲線を全体的にフィッティングし、ＢＩＡｃｏｒｅ，  Ｉｎｃ．から入手可能なＢＩＡｅｖａｌｕａｔｉｏｎ  Ｓｏｆｔｗａｒｅ  Ｈａｎｄｂｏｏｋに記載されているように、製造元が供給するコンピュータアルゴリズムを用いて、速度定数及び見かけの平衡結合定数を算出した。図３は、ＳＰＲ分析の結果のグラフであり、算出された定数は図４に提示される。
【０３１１】
【表６】
2018516966.tif 000010
【０３１２】
実施例２
アポトーシス
様々な細胞株を、ｃｈ４Ｄ５及びｃｈ４Ｄ５−ＦｃＭＴ１と共に一晩インキュベートした。アポトーシスを、ＦＡＣＳ分析によってアッセイし、その結果を表５に示す。
【０３１３】
【表７】
2018516966.tif 000011
【０３１４】
実施例３
増殖
ＤＮＡへの［3Ｈ］チミジン（［3Ｈ］ＴｄＲ）組み込みを、ＳＫＢＲ３細胞増殖の生化学的指標として用いて、本発明の様々なキメラ４Ｄ５抗体の効果を比較した。ｃｈ４Ｄ５−Ａｇ、ｃｈ４Ｄ５及びＣｈ４Ｄ−ＦｃＭＴ１の、ＣＤ１６−１５８Ｆ＋及びＣＤ１６−１５８Ｖ＋細胞に対する影響を研究し、対照と比較した。結果を図４に示す。
【０３１５】
実施例４
マウス（乳癌モデル）における抗腫瘍活性
様々な抗体の抗腫瘍活性を、非トランスジェニック及びトランスジェニック（ｈＣＤ１６Ａ）マウスを用いて、乳癌モデルで研究した。５０体のＢａｌｂ／ｃ  ＲＡＧ２−／−非トランスジェニックマウスに、ＪＭＴ−１乳癌細胞を、０日目に皮下（ｓ．ｃ．）注射した。マウスを１０体ずつの５つのグループに分け、ｃｈ４Ｄ５  Ｎ２９７Ｑ、ｃｈ４Ｄ５−野生型Ｆｃ、ｃｈ４Ｄ５−ＦｃＭＴ１、ｃｈ４Ｄ５−ＦｃＭＴ２、又はＰＢＳ（陰性対照）を用いて８週間に亘って腹腔内（ＩＰ）治療した。キャリパーを用いて腫瘍の発達を１週間に２回監視し、腫瘍の重量を、以下の式：腫瘍重量＝（長さ×幅2）／２によって推定した。結果を図５に示す。２３体のＢａｌｂ／ｃ  ＲＡＧ２−／−ｍＣＤ１６−／−ｈＣＤ１６Ａ＋トランスジェニックマウスに、ＪＭＴ−１乳癌細胞を、０日目にｓ．ｃ．注射した。マウスを３つのグループに分け、ｃｈ４Ｄ５−野生型Ｆｃ（ｎ＝８）、ｃｈ４Ｄ５−ＦｃＭＴ１（ｎ＝８）、又はＰＢＳ（陰性対照；ｎ＝７）を用いて８週間に亘って腹腔内（ＩＰ）治療した。キャリパーを用いて腫瘍の発達を１週間に２回監視し、腫瘍の重量を、以下の式：腫瘍重量＝（長さ×幅2）／２によって推定した。結果を図６に示す。
【０３１６】
実施例５
マウス（卵巣癌モデル）における抗腫瘍活性
様々な抗体の抗腫瘍活性を、非トランスジェニック及びトランスジェニック（ｈＣＤ１６Ａ）マウスを用いて、卵巣癌モデルで研究した。ＭａｃｒｏＧｅｎｉｃｓ繁殖コロニーからの２２体のＲ３−／−Ｎ／Ｎ非トランスジェニックマウスに、ＳＫＯＶ−３卵巣癌細胞を、０日目にｓ．ｃ．注射した。マウスを４つのグループに分け、ｃｈ４Ｄ５  Ｎ２９７Ｑ（ｎ＝５）、ｃｈ４Ｄ５−野生型Ｆｃ（ｎ＝６）、ｃｈ４Ｄ５−ＦｃＭＴ１（ｎ＝６）、又はＰＢＳ（陰性対照；ｎ＝５）を用いて８週間に亘って腹腔内（ＩＰ）治療した。キャリパーを用いて腫瘍の発達を１週間に２回監視し、腫瘍の重量を、以下の式：腫瘍重量＝（長さ×幅2）／２によって推定した。このような治療の、生存に対する影響を、図７、パネルＡに示す。ＭａｃｒｏＧｅｎｉｃｓ繁殖コロニーからの３２体のＲ３−／−Ｎ／Ｎ  ｈＣＤ１６Ａ＋トランスジェニックマウスに、ＳＫＯＶ−３卵巣癌細胞を、０日目にｓ．ｃ．注射した。マウスを４つのグループに分け、ｃｈ４Ｄ５−Ｎ２９７Ｑ（ｎ＝８）、ｃｈ４Ｄ５−野生型Ｆｃ（ｎ＝８）、ｃｈ４Ｄ５−ＦｃＭＴ１（ｎ＝８）、又はＰＢＳ（陰性対照；ｎ＝８）を用いて８週間に亘って腹腔内（ＩＰ）治療した。キャリパーを用いて腫瘍の発達を１週間に２回監視し、腫瘍の重量を、以下の式：腫瘍重量＝（長さ×幅2）／２によって推定した。このような治療の、生存に対する影響を、図７、パネルＢに示す。ＭａｃｒｏＧｅｎｉｃｓ繁殖コロニーからの９６体のｍＣＤ１６−／−ｈｕＣＤ１６Ａ  ＦｏｘＮ１−／−（ｎｕ／ｎｕ）トランスジェニックマウスに、ＳＫＯＶ−３卵巣癌細胞を、０日目にｓ．ｃ．注射した。マウスを１６体ずつの６つのグループに分け、ｃｈ４Ｄ５−ＦｃＭＴ３、ｃｈ４Ｄ５−ＦｃＭＴ１、ｃｈ４Ｄ５−ＦｃＭＴ４、ｃｈ４Ｄ５、ｃｈ４Ｄ５Ａｇ又はＰＢＳ（陰性対照）を用いて８週間に亘って腹腔内（ＩＰ）治療した。キャリパーを用いて腫瘍の発達を１週間に２回監視し、腫瘍の重量を、以下の式：腫瘍重量＝（長さ×幅2）／２によって推定した。このような治療の、生存に対する影響を、図８に示す。
【０３１７】
実施例６
様々な癌細胞株におけるＡＤＣＣアッセイ
図９は、ＨＥＲ２／ｎｅｕに関する、様々な癌細胞株の代表的な免疫組織化学染色を示す。細胞株を、ＤＡＫＯ  ＨｅｒｃｅｐｔＴｅｓｔ（商標）（ＤａｋｏＣｙｔｏｍａｔｉｏｎ、デンマーク、グロストループ）として販売されているＨＥＲ２／ｎｅｕ試験キットで特定されるような、そのＨＥＲ２／ｎｅｕ染色強度に従って、ランク付けした：ＨＥＲ２／ｎｅｕ染色なし（ダコスコア０）；弱いＨＥＲ２／ｎｅｕ染色（ダコスコア１＋）；中程度のＨＥＲ２／ｎｅｕ染色（ダコスコア２＋）；及び強いＨＥＲ２／ｎｅｕ染色（ダコスコア３＋）。パネルＡ〜Ｍは、表６に示すような様々な細胞株を示す。
【０３１８】
【表８】
2018516966.tif 000012
【０３１９】
ｃｈ４Ｄ５−ＦｃＭＴ１、ｃｈ４Ｄ５−ＦｃＭＴ２、ｃｈ４Ｄ５−ＦｃＭＴ３、ｃｈ４Ｄ５−ＦｃＷＴ（野生型Ｆｃ）、ｃｈ４Ｄ５  Ｎ２９７Ｑ及びトラスツズマブ（対照として）を含む、Ｆｃ変異型ドメインを有するｃｈ４Ｄ５抗体を含むいくつかのｃｈ４Ｄ５抗体を、癌細胞株においてＡＤＣＣを仲介する能力に関して試験した。確実なアッセイからのデータ（ＳＲ≦２０％ＭＲ、ＡＩＣＣ≦５０％ＭＲ）を表７で報告するが、ここでＥＣ50推定値は、モデルが最大溶解＞２０％に適合している場合のみ確実なものであると見做した。ＥＣ50と最大溶解パラメータとの比較は、Ｆｃ最適化抗体に関して得られた最良のフィット値が、Ｆｃ野生型ｃｈ４Ｄ５抗体に関して得られたものと統計的に異なっているかどうかを、二乗和Ｆ検定によって問うことによって実施した。データを、図１０〜１３に示すＳ字状の用量−応答モデルにもフィットさせた。
【０３２０】
【表９】
2018516966.tif 000013
2018516966.tif 000014
【０３２１】
実施例７  T細胞増殖時の共刺激又はチェックポイント標的に対するモノクローナル抗体の活性
アロ−ＭＬＲアッセイにおいて、Ｔ細胞を、ＨＬＡミスマッチ（Latchman, Y.E. et al. (2004) “PD-L1-Deficient Mice Show That PD-L1 On T-Cells, Antigen-Presenting Cells, And Host Tissues Negatively Regulates T-Cells.” Proc. Natl. Acad. Sci. (U.S.A.) 101(29):10691-10696; Wang, W. et al. (2008) “PD-L1/PD-1 Signal Deficiency Promotes Allogeneic Immune Responses And Accelerates Heart Allograft Rejection,” Transplantation 86(6):836-44）又は分裂促進／薬理学的刺激に応答して増殖するよう誘導する。共刺激分子を標的とするアゴニスト抗体は、Ｔ細胞シグナリングの再強化、及びＴ細胞エフェクタ機能を促進する転写因子の安定化によって、増殖応答を誘導することが知られている（Melero, I. et al. (2013) “Agonist Antibodies to TNFR Molecules That Costimulate T and NK Cells,” Clin. Cancer Res. 19(5):1044-1053）。同様に、Ｔ細胞応答を下方調節する重要なチェックポイント分子（チェックポイント阻害因子）を標的とするアンタゴニスト抗体は、Ｔ細胞シグナリング及びエフェクタ機能の維持、並びにそれによる抗腫瘍免疫の改善によって、増殖応答を誘導できる（Capece, D. et al. (2012) “Targeting Costimulatory Molecules to Improve Antitumor Immunity,” J. Biomed. Biotech. 2012:926321）。同種抗原に応答しての増殖における、共刺激又はチェックポイント標的に対するモノクローナル抗体の影響は、以下の３Ｈ−チミジンの取り込みによる続く短期混合リンパ球（アロ−ＭＬＲ）反応において容易に測定できる。チェックポイント阻害剤に対して抗体が増殖を増強する能力を扱うために、抗ＰＤ−１又は抗ＬＡＧ−３  ｍＡｂを産生し、精製し、アロ−ＭＬＲアッセイの開始時に、２０、１０、５、２．５及び１．２５μｇ／ｍｌの量で外因的に添加した（図１４）。５〜６日目の終わりに、９６ウェルプレートに３Ｈ−チミジンを送り込み、１８時間培養して増殖を測定した。ヒトＰＤ−１、ＬＡＧ−３及びＣＴＬＡ−４に対するいくつかのベンチマーク抗体を、アロ抗原刺激に応答してのＴ細胞増殖を増強する能力において評価した。図１５に示すように、アロＭＬＲアッセイの開始時におけるＰＤ−１  ｍＡｂ  １（５Ｃ４；ＢＭＳ−９３６５５８）、ＰＤ−１  ｍＡｂ  ２（ＭＫ−３４７５；Ｍｅｒｃｋ、ランブロリズマブ）及びＰＤ−１  ｍＡｂ  ３（ＥＨ１２．２Ｈ７；Ｄａｎａ  Ｆａｒｂｅｒ）の添加は、ＩｇＧ１アイソタイプ対照抗体、又はレスポンダ及びスティミュレータを含有する対照ウェルに比べて強いＴ細胞増殖応答を誘起した。照射した刺激細胞のみを含有するウェルは、増殖を示さなかった。用量依存性増殖応答が観察されたものの、ＰＤ−１  ｍＡｂ  ４（ＣＴ−０１１；ＣｕｒｅＴｅｃｈ、ＢＡＴ−１）は、ＰＤ−１  ｍＡｂ  １（５Ｃ４；ＢＭＳ−９３６５５８）、ＰＤ−１  ｍＡｂ  ２（ＭＫ−３４７５；Ｍｅｒｃｋ、ランブロリズマブ）又はＰＤ−１  ｍＡｂ  ３（ＥＨ１２．２Ｈ７；Ｄａｎａ  Ｆａｒｂｅｒ）に比べて最小の増殖を示した。ＬＡＧ−３  ｍＡｂ  １（２５Ｆ７；ＢＭＳ−９８６０１６、Ｍｅｄａｒｅｘ／ＢＭＳ）についてもわずかな用量依存性増殖応答が観察され、これを同様にＹｅｒｖｏｙ（登録商標）イピリムマブ、抗ＣＴＬＡ−４  ｍＡｂ（Ｂｒｉｓｔｏｌ  Ｍｙｅｒｓ−Ｓｑｕｉｂ）と比較した。
【０３２２】
実施例８  マルゲツキシマブ及びペンブロリズマブの用量段階的増加研究
用量段階的増加研究を実施して、およそ２００ｍｇの固定用量のペンブロリズマブと組み合わせ投与される、用量が段階的に増加するマルゲツキシマブの、最大耐用量（ＭＴＤ）又は（ＭＴＤが画定されない場合は）最大投与用量（ＭＡＤ）を決定する。その後にコホート拡大段階を続けて、上記用量段階的増加研究で確立したマルゲツキシマブとの組み合わせの安全性及び初期有効性を更に画定した。マルゲツキシマブ及びペンブロリズマブの両方を、３週間毎に投与する。これら両方の作用剤を同日中に投与し、ペンブロリズマブをまず投与した後、マルゲツキシマブを投与した。療法の各サイクルは３週間と画定され、マルゲツキシマブ及びペンブロリズマブを１日目に与える。腫瘍の評価を、研究中に、好ましくは治療のサイクルが２回終了するたびに（即ち６週間毎［サイクル２、４、６等の終了時］に）実施してよい。
【０３２３】
コホート患者において、２００ｍｇのペンブロリズマブと組み合わせた２つの順次段階的に増加する用量、即ちおよそ１０ｍｇ／ｋｇ体重及びおよそ１５ｍｇ／ｋｇ体重のマルゲツキシマブを評価してよい。ＭＴＤが第１の用量コホートにおいて過剰であることが決定された場合、２００ｍｇのペンブロリズマブと組み合わせたより低い用量（例えば６ｍｇ／ｋｇ）のマルゲツキシマブを評価するための、用量を段階的に減少させたコホートを利用してよい。より高い用量（例えば１８ｍｇ／ｋｇ）のマルゲツキシマブを、研究の段階的増加部分中に調査してよい。
【０３２４】
コホート拡大段階のために、複数の患者が登録され、上記患者は、２００ｍｇのペンブロリズマブと組み合わせた上記研究の用量段階的増加段階から確立されたＭＴＤ（又はＭＡＤ）のマルゲツキシマブを受容することになる。
【０３２５】
本明細書において言及されている全ての公刊物及び特許は、個々の公刊物又は特許出願それぞれの全体が参照により本明細書に援用されていることが具体的かつ独立に指示されている場合と同程度に、参照により本明細書に援用されている。本発明をその具体的実施形態に関して説明したが、更なる修正形態が可能であり、本出願は、本発明が属する分野の公知の方法又は慣例の範囲内であるような、及びこれまでに挙げた必須の特徴に適用できるような、本開示からの逸脱を含む、本発明の原理に概ね従う本発明のいずれの変形、使用又は改変を包含することを意図していることを理解されたい。
【配列表フリーテキスト】
【０３２６】
配列表の数字見出し＜２２３＞の記載は以下のとおりである。
配列番号１：好ましい変異型キメラ４Ｄ５抗体の軽鎖をエンコードするポリヌクレオチド
配列番号２：好ましい変異型キメラ４Ｄ５抗体の軽鎖
配列番号３：マウス４Ｄ５抗体の軽鎖可変ドメイン
配列番号４：キメラ４Ｄ５VL領域
配列番号５：ヒト化４Ｄ５抗体の軽鎖可変ドメイン
配列番号６：野生型Ｆｃ領域を有するキメラ４Ｄ５重鎖をエンコードするポリヌクレオチド
配列番号７：野生型Ｆｃ領域を有するキメラ４Ｄ５重鎖
配列番号８：ＦｃＭＴ１変異型Ｆｃ領域を有する変異型キメラ４Ｄ５抗体の重鎖をエンコードするポリヌクレオチド
配列番号９：ＦｃＭＴ１変異型Ｆｃ領域を有する変異型キメラ４Ｄ５抗体の重鎖
配列番号１０：ＦｃＭＴ２変異型Ｆｃ領域を有する変異型キメラ４Ｄ５抗体の重鎖をエンコードするポリヌクレオチド
配列番号１１：ＦｃＭＴ２変異型Ｆｃ領域を有する変異型キメラ４Ｄ５抗体の重鎖
配列番号１２：ＦｃＭＴ３変異型Ｆｃ領域を有する変異型キメラ４Ｄ５抗体をエンコードするポリヌクレオチド
配列番号１３：ＦｃＭＴ３変異型Ｆｃ領域を有する変異型キメラ４Ｄ５抗体の重鎖
配列番号１４：ヒトＰＤ−１
配列番号１５：ＰＤ−１  ｍＡｂ  １の重鎖可変ドメイン
配列番号１６：ＰＤ−１  ｍＡｂ  １のＣＤＲＨ１
配列番号１７：ＰＤ−１  ｍＡｂ  １のＣＤＲＨ２
配列番号１８：ＰＤ−１  ｍＡｂ  １のＣＤＲＨ３
配列番号１９：ＰＤ−１  ｍＡｂ  １の軽鎖可変ドメイン
配列番号２０：ＰＤ−１  ｍＡｂ  １のＣＤＲＬ１
配列番号２１：ＰＤ−１  ｍＡｂ  １のＣＤＲＬ２
配列番号２２：ＰＤ−１  ｍＡｂ  １のＣＤＲＬ３
配列番号２３：ＰＤ−１  ｍＡｂ  ２の重鎖可変ドメイン
配列番号２４：ＰＤ−１  ｍＡｂ  ２の重鎖可変ドメインのＣＤＲ１
配列番号２５：ＰＤ−１  ｍＡｂ  ２の重鎖可変ドメインのＣＤＲ２
配列番号２６：ＰＤ−１  ｍＡｂ  ２の重鎖可変ドメインのＣＤＲ３
配列番号２７：ＰＤ−１  ｍＡｂ  ２の軽鎖可変ドメイン
配列番号２８：ＰＤ−１  ｍＡｂ  ２の軽鎖可変ドメインのＣＤＲ１
配列番号２９：ＰＤ−１  ｍＡｂ  ２の軽鎖可変ドメインのＣＤＲ２
配列番号３０：ＰＤ−１  ｍＡｂ  ２の軽鎖可変ドメインのＣＤＲ３
配列番号３１：ＰＤ−１  ｍＡｂ  ３の重鎖可変ドメイン
配列番号３２：ＰＤ−１  ｍＡｂ  ３の重鎖可変ドメインのＣＤＲ１
配列番号３３：ＰＤ−１  ｍＡｂ  ３の重鎖可変ドメインのＣＤＲ２
配列番号３４：ＰＤ−１  ｍＡｂ  ３の重鎖可変ドメインのＣＤＲ３
配列番号３５：ＰＤ−１  ｍＡｂ  ３の軽鎖可変ドメイン
配列番号３６：ＰＤ−１  ｍＡｂ  ３の軽鎖可変ドメインのＣＤＲ１
配列番号３７：ＰＤ−１  ｍＡｂ  ３の軽鎖可変ドメインのＣＤＲ２
配列番号３８：ＰＤ−１  ｍＡｂ  ３の軽鎖可変ドメインのＣＤＲ３
配列番号３９：ＰＤ−１  ｍＡｂ  ４の重鎖可変ドメイン
配列番号４０：ＰＤ−１  ｍＡｂ  ４の重鎖可変ドメインのＣＤＲ１
配列番号４１：ＰＤ−１  ｍＡｂ  ４の重鎖可変ドメインのＣＤＲ２
配列番号４２：ＰＤ−１  ｍＡｂ  ４の重鎖可変ドメインのＣＤＲ３
配列番号４３：ＰＤ−１  ｍＡｂ  ４の軽鎖可変ドメイン
配列番号４４：ＰＤ−１  ｍＡｂ  ４の軽鎖可変ドメインのＣＤＲ１
配列番号４５：ＰＤ−１  ｍＡｂ  ４の軽鎖可変ドメインのＣＤＲ２
配列番号４６：ＰＤ−１  ｍＡｂ  ４の軽鎖可変ドメインのＣＤＲ３
配列番号４７：マウス４Ｄ５抗体の重鎖可変ドメイン
配列番号４８：ヒト化４Ｄ５抗体の重鎖可変ドメイン
配列番号４９：ＩｇＧ１  Ｆｃ領域；Ｘはリジン（Ｋ）又は不在である
配列番号５０：例示的なヒトＩｇＧ２のＣＨ２−ＣＨ３ドメイン；Ｘはリジン（Ｋ）又は不在である
配列番号５１：例示的なヒトＩｇＧ３のＣＨ２−ＣＨ３ドメイン；Ｘはリジン（Ｋ）又は不在である
配列番号５２：例示的なヒトＩｇＧ４のＣＨ２−ＣＨ３ドメイン；Ｘはリジン（Ｋ）又は不在である
配列番号５３：ＰＤ−１  ｍＡｂ  ５の重鎖可変ドメイン
配列番号５４：ＰＤ−１  ｍＡｂ  ５の重鎖可変ドメインのＣＤＲ１
配列番号５５：ＰＤ−１  ｍＡｂ  ５の重鎖可変ドメインのＣＤＲ２
配列番号５６：ＰＤ−１  ｍＡｂ  ５の重鎖可変ドメインのＣＤＲ３
配列番号５７：ＰＤ−１  ｍＡｂ  ５の軽鎖可変ドメイン
配列番号５８：ＰＤ−１  ｍＡｂ  ５の軽鎖可変ドメインのＣＤＲ１
配列番号５９：ＰＤ−１  ｍＡｂ  ５の軽鎖可変ドメインのＣＤＲ２
配列番号６０：ＰＤ−１  ｍＡｂ  ５の軽鎖可変ドメインのＣＤＲ３
配列番号６１：ＰＤ−１  ｍＡｂ  ６の重鎖可変ドメイン
配列番号６２：ＰＤ−１  ｍＡｂ  ６の重鎖可変ドメインのＣＤＲ１
配列番号６３：ＰＤ−１  ｍＡｂ  ６の重鎖可変ドメインのＣＤＲ２
配列番号６４：ＰＤ−１  ｍＡｂ  ６の重鎖可変ドメインのＣＤＲ３
配列番号６５：ＰＤ−１  ｍＡｂ  ６の軽鎖可変ドメイン；Ｘ１はＮ若しくはＳであり、かつＸ２はＱ若しくはＲであるか；又はＸ１はＮであり、Ｘ２はＱであるか；又はＸ１はＳであり、Ｘ２はＱであるか；又はＸ１はＳであり、Ｘ２はＲである
配列番号６６：ＰＤ−１  ｍＡｂ  ６の軽鎖可変ドメインのＣＤＲ１；Ｘ１はＮ若しくはＳであり、かつＸ２はＱ若しくはＲであるか；又はＸ１はＮであり、Ｘ２はＱであるか；又はＸ１はＳであり、Ｘ２はＱであるか；又はＸ１はＳであり、Ｘ２はＲである
配列番号６７：ＰＤ−１  ｍＡｂ  ６の軽鎖可変ドメインのＣＤＲ２；Ｘ１はＮ若しくはＳであり、かつＸ２はＱ若しくはＲであるか；又はＸ１はＮであり、Ｘ２はＱであるか；又はＸ１はＳであり、Ｘ２はＱであるか；又はＸ１はＳであり、Ｘ２はＲである
配列番号６８：ＰＤ−１  ｍＡｂ  ６の軽鎖可変ドメインのＣＤＲ３；Ｘ１はＮ若しくはＳであり、かつＸ２はＱ若しくはＲであるか；又はＸ１はＮであり、Ｘ２はＱであるか；又はＸ１はＳであり、Ｘ２はＱであるか；又はＸ１はＳであり、Ｘ２はＲである
配列番号６９：ＰＤ−１  ｍＡｂ  ７の重鎖可変ドメイン；Ｘ１はＶ若しくはＡであり、Ｘ２はＳ若しくはＧであり、Ｘ３はＶ若しくはＴであり、Ｘ４はＬ若しくはＡであるか；Ｘ１はＶであり、Ｘ２はＳであり、Ｘ３はＶであり、Ｘ４はＬであるか；又はＸ１はＡであり、Ｘ２はＧであり、Ｘ３はＴであり、Ｘ４はＡである
配列番号７０：ＰＤ−１  ｍＡｂ  ７の重鎖可変ドメインのＣＤＲ１；Ｘ１はＶ若しくはＡであり、Ｘ２はＳ若しくはＧであり、Ｘ３はＶ若しくはＴであり、Ｘ４はＬ若しくはＡであるか；Ｘ１はＶであり、Ｘ２はＳであり、Ｘ３はＶであり、Ｘ４はＬであるか；又はＸ１はＡであり、Ｘ２はＧであり、Ｘ３はＴであり、Ｘ４はＡである
配列番号７１：ＰＤ−１  ｍＡｂ  ７の重鎖可変ドメインのＣＤＲ２；Ｘ１はＶ若しくはＡであり、Ｘ２はＳ若しくはＧであり、Ｘ３はＶ若しくはＴであり、Ｘ４はＬ若しくはＡであるか；Ｘ１はＶであり、Ｘ２はＳであり、Ｘ３はＶであり、Ｘ４はＬであるか；又はＸ１はＡであり、Ｘ２はＧであり、Ｘ３はＴであり、Ｘ４はＡである
配列番号７２：ＰＤ−１  ｍＡｂ  ７の重鎖可変ドメインのＣＤＲ３；Ｘ１はＶ若しくはＡであり、Ｘ２はＳ若しくはＧであり、Ｘ３はＶ若しくはＴであり、Ｘ４はＬ若しくはＡであるか；Ｘ１はＶであり、Ｘ２はＳであり、Ｘ３はＶであり、Ｘ４はＬであるか；又はＸ１はＡであり、Ｘ２はＧであり、Ｘ３はＴであり、Ｘ４はＡである
配列番号７３：ＰＤ−１  ｍＡｂ  ７の軽鎖可変ドメイン；Ｘ１はＮ若しくはＳであり、Ｘ２はＮ若しくはＤであるか；Ｘ１はＳであり、Ｘ２はＮであるか；又はＸ１はＮであり、Ｘ２はＤである
配列番号７４：ＰＤ−１  ｍＡｂ  ７のＣＤＲＬ１；Ｘ１はＮ若しくはＳであり、Ｘ２はＮ若しくはＤであるか；Ｘ１はＳであり、Ｘ２はＮであるか；又はＸ１はＮであり、Ｘ２はＤである
配列番号７５：ＰＤ−１  ｍＡｂ  ７のＣＤＲＬ２；Ｘ１はＮ若しくはＳであり、Ｘ２はＮ若しくはＤであるか；Ｘ１はＳであり、Ｘ２はＮであるか；又はＸ１はＮであり、Ｘ２はＤである
配列番号７６：ＰＤ−１  ｍＡｂ  ７のＣＤＲＬ３
配列番号７７：ＰＤ−１  ｍＡｂ  ８の重鎖可変ドメイン
配列番号７８：ＰＤ−１  ｍＡｂ  ８のＣＤＲＨ１
配列番号７９：ＰＤ−１  ｍＡｂ  ８のＣＤＲＨ２
配列番号８０：ＰＤ−１  ｍＡｂ  ８のＣＤＲＨ３
配列番号８１：ＰＤ−１  ｍＡｂ  ８の軽鎖可変ドメイン
配列番号８２：ＰＤ−１  ｍＡｂ  ８のＣＤＲＬ１
配列番号８３：ＰＤ−１  ｍＡｂ  ８のＣＤＲＬ２
配列番号８４：ＰＤ−１  ｍＡｂ  ８のＣＤＲＬ３
配列番号８５：κＣＬドメイン
配列番号８６：ＩｇＧ４  ＣＨ１ドメイン及び安定化ヒンジ
配列番号８７：ＰＤ−１  ｍＡｂ  ６−ＩＳＱの完全な重鎖
【図１】
2018516966.tif 000015
【図２】
2018516966.tif 000016
【図３】
2018516966.tif 000017
【図４】
2018516966.tif 000018
【図５】
2018516966.tif 000019
【図６】
2018516966.tif 000020
【図７】
2018516966.tif 000021
【図８】
2018516966.tif 000022
【図９】
2018516966.tif 000023
【図１０】
2018516966.tif 000024
【図１１】
2018516966.tif 000025
【図１２】
2018516966.tif 000026
【図１３】
2018516966.tif 000027
【図１４】
2018516966.tif 000028
【図１５】
2018516966.tif 000029
【配列表】
2018516966000001.app
【手続補正書】
【提出日】平成30年4月3日(2018.4.3)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０３２６
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０３２６】
配列表の数字見出し＜２２３＞の記載は以下のとおりである。
配列番号１：好ましい変異型キメラ４Ｄ５抗体の軽鎖をエンコードするポリヌクレオチド
配列番号２：好ましい変異型キメラ４Ｄ５抗体の軽鎖
配列番号３：マウス４Ｄ５抗体の軽鎖可変ドメイン
配列番号４：キメラ４Ｄ５VL領域
配列番号５：ヒト化４Ｄ５抗体の軽鎖可変ドメイン
配列番号６：野生型Ｆｃ領域を有するキメラ４Ｄ５重鎖をエンコードするポリヌクレオチド
配列番号７：野生型Ｆｃ領域を有するキメラ４Ｄ５重鎖
配列番号８：ＦｃＭＴ１変異型Ｆｃ領域を有する変異型キメラ４Ｄ５抗体の重鎖をエンコードするポリヌクレオチド
配列番号９：ＦｃＭＴ１変異型Ｆｃ領域を有する変異型キメラ４Ｄ５抗体の重鎖
配列番号１０：ＦｃＭＴ２変異型Ｆｃ領域を有する変異型キメラ４Ｄ５抗体の重鎖をエンコードするポリヌクレオチド
配列番号１１：ＦｃＭＴ２変異型Ｆｃ領域を有する変異型キメラ４Ｄ５抗体の重鎖
配列番号１２：ＦｃＭＴ３変異型Ｆｃ領域を有する変異型キメラ４Ｄ５抗体をエンコードするポリヌクレオチド
配列番号１３：ＦｃＭＴ３変異型Ｆｃ領域を有する変異型キメラ４Ｄ５抗体の重鎖
配列番号１４：ヒトＰＤ−１
配列番号１５：ＰＤ−１  ｍＡｂ  １の重鎖可変ドメイン
配列番号１６：ＰＤ−１  ｍＡｂ  １のＣＤＲＨ１
配列番号１７：ＰＤ−１  ｍＡｂ  １のＣＤＲＨ２
配列番号１８：ＰＤ−１  ｍＡｂ  １のＣＤＲＨ３
配列番号１９：ＰＤ−１  ｍＡｂ  １の軽鎖可変ドメイン
配列番号２０：ＰＤ−１  ｍＡｂ  １のＣＤＲＬ１
配列番号２１：ＰＤ−１  ｍＡｂ  １のＣＤＲＬ２
配列番号２２：ＰＤ−１  ｍＡｂ  １のＣＤＲＬ３
配列番号２３：ＰＤ−１  ｍＡｂ  ２の重鎖可変ドメイン
配列番号２４：ＰＤ−１  ｍＡｂ  ２の重鎖可変ドメインのＣＤＲ１
配列番号２５：ＰＤ−１  ｍＡｂ  ２の重鎖可変ドメインのＣＤＲ２
配列番号２６：ＰＤ−１  ｍＡｂ  ２の重鎖可変ドメインのＣＤＲ３
配列番号２７：ＰＤ−１  ｍＡｂ  ２の軽鎖可変ドメイン
配列番号２８：ＰＤ−１  ｍＡｂ  ２の軽鎖可変ドメインのＣＤＲ１
配列番号２９：ＰＤ−１  ｍＡｂ  ２の軽鎖可変ドメインのＣＤＲ２
配列番号３０：ＰＤ−１  ｍＡｂ  ２の軽鎖可変ドメインのＣＤＲ３
配列番号３１：ＰＤ−１  ｍＡｂ  ３の重鎖可変ドメイン
配列番号３２：ＰＤ−１  ｍＡｂ  ３の重鎖可変ドメインのＣＤＲ１
配列番号３３：ＰＤ−１  ｍＡｂ  ３の重鎖可変ドメインのＣＤＲ２
配列番号３４：ＰＤ−１  ｍＡｂ  ３の重鎖可変ドメインのＣＤＲ３
配列番号３５：ＰＤ−１  ｍＡｂ  ３の軽鎖可変ドメイン
配列番号３６：ＰＤ−１  ｍＡｂ  ３の軽鎖可変ドメインのＣＤＲ１
配列番号３７：ＰＤ−１  ｍＡｂ  ３の軽鎖可変ドメインのＣＤＲ２
配列番号３８：ＰＤ−１  ｍＡｂ  ３の軽鎖可変ドメインのＣＤＲ３
配列番号３９：ＰＤ−１  ｍＡｂ  ４の重鎖可変ドメイン
配列番号４０：ＰＤ−１  ｍＡｂ  ４の重鎖可変ドメインのＣＤＲ１
配列番号４１：ＰＤ−１  ｍＡｂ  ４の重鎖可変ドメインのＣＤＲ２
配列番号４２：ＰＤ−１  ｍＡｂ  ４の重鎖可変ドメインのＣＤＲ３
配列番号４３：ＰＤ−１  ｍＡｂ  ４の軽鎖可変ドメイン
配列番号４４：ＰＤ−１  ｍＡｂ  ４の軽鎖可変ドメインのＣＤＲ１
配列番号４５：ＰＤ−１  ｍＡｂ  ４の軽鎖可変ドメインのＣＤＲ２
配列番号４６：ＰＤ−１  ｍＡｂ  ４の軽鎖可変ドメインのＣＤＲ３
配列番号４７：マウス４Ｄ５抗体の重鎖可変ドメイン
配列番号４８：ヒト化４Ｄ５抗体の重鎖可変ドメイン
配列番号４９：ＩｇＧ１  Ｆｃ領域；Ｘはリジン（Ｋ）又は不在である
配列番号５０：例示的なヒトＩｇＧ２のＣＨ２−ＣＨ３ドメイン；Ｘはリジン（Ｋ）又は不在である
配列番号５１：例示的なヒトＩｇＧ３のＣＨ２−ＣＨ３ドメイン；Ｘはリジン（Ｋ）又は不在である
配列番号５２：例示的なヒトＩｇＧ４のＣＨ２−ＣＨ３ドメイン；Ｘはリジン（Ｋ）又は不在である
配列番号５３：ＰＤ−１  ｍＡｂ  ５の重鎖可変ドメイン
配列番号５４：ＰＤ−１  ｍＡｂ  ５の重鎖可変ドメインのＣＤＲ１
配列番号５５：ＰＤ−１  ｍＡｂ  ５の重鎖可変ドメインのＣＤＲ２
配列番号５６：ＰＤ−１  ｍＡｂ  ５の重鎖可変ドメインのＣＤＲ３
配列番号５７：ＰＤ−１  ｍＡｂ  ５の軽鎖可変ドメイン
配列番号５８：ＰＤ−１  ｍＡｂ  ５の軽鎖可変ドメインのＣＤＲ１
配列番号５９：ＰＤ−１  ｍＡｂ  ５の軽鎖可変ドメインのＣＤＲ２
配列番号６０：ＰＤ−１  ｍＡｂ  ５の軽鎖可変ドメインのＣＤＲ３
配列番号６１：ＰＤ−１  ｍＡｂ  ６の重鎖可変ドメイン；Ｘａａはイソロイシン（Ｉ）又はアラニン（Ａ）である
配列番号６２：ＰＤ−１  ｍＡｂ  ６の重鎖可変ドメインのＣＤＲ１
配列番号６３：ＰＤ−１  ｍＡｂ  ６の重鎖可変ドメインのＣＤＲ２
配列番号６４：ＰＤ−１  ｍＡｂ  ６の重鎖可変ドメインのＣＤＲ３
配列番号６５：ＰＤ−１  ｍＡｂ  ６の軽鎖可変ドメイン；２６位のＸａａはアスパラギン（Ｎ）又はセリン（Ｓ）であり；５８位のＸａａはグルタミン（Ｑ）又はアルギニン（Ｒ）である
配列番号６６：ＰＤ−１  ｍＡｂ  ６の軽鎖可変ドメインのＣＤＲ１；Ｘａａはアスパラギン（Ｎ）又はセリン（Ｓ）である
配列番号６７：ＰＤ−１  ｍＡｂ  ６の軽鎖可変ドメインのＣＤＲ２；Ｘａａはグルタミン（Ｑ）又はアルギニン（Ｒ）である
配列番号６８：ＰＤ−１  ｍＡｂ  ６の軽鎖可変ドメインのＣＤＲ３
配列番号６９：ＰＤ−１  ｍＡｂ  ７の重鎖可変ドメイン；Ｘ１はＶ若しくはＡであり、Ｘ２はＳ若しくはＧであり、Ｘ３はＶ若しくはＴであり、Ｘ４はＬ若しくはＡであるか；Ｘ１はＶであり、Ｘ２はＳであり、Ｘ３はＶであり、Ｘ４はＬであるか；又はＸ１はＡであり、Ｘ２はＧであり、Ｘ３はＴであり、Ｘ４はＡである
配列番号７０：ＰＤ−１  ｍＡｂ  ７の重鎖可変ドメインのＣＤＲ１；Ｘａａはセリン（Ｓ）又はグリシン（Ｇ）である
配列番号７１：ＰＤ−１  ｍＡｂ  ７の重鎖可変ドメインのＣＤＲ２
配列番号７２：ＰＤ−１  ｍＡｂ  ７の重鎖可変ドメインのＣＤＲ３
配列番号７３：ＰＤ−１  ｍＡｂ  ７の軽鎖可変ドメイン；Ｘ１はＮ若しくはＳであり、Ｘ２はＮ若しくはＤであるか；Ｘ１はＳであり、Ｘ２はＮであるか；又はＸ１はＮであり、Ｘ２はＤである
配列番号７４：ＰＤ−１  ｍＡｂ  ７のＣＤＲＬ１；Ｘａａはアスパラギン（Ｎ）又はセリン（Ｓ）である
配列番号７５：ＰＤ−１  ｍＡｂ  ７のＣＤＲＬ２；Ｘａａはアスパラギン（Ｎ）又はアスパラギン酸（Ｄ）である
配列番号７６：ＰＤ−１  ｍＡｂ  ７のＣＤＲＬ３
配列番号７７：ＰＤ−１  ｍＡｂ  ８の重鎖可変ドメイン
配列番号７８：ＰＤ−１  ｍＡｂ  ８のＣＤＲＨ１
配列番号７９：ＰＤ−１  ｍＡｂ  ８のＣＤＲＨ２
配列番号８０：ＰＤ−１  ｍＡｂ  ８のＣＤＲＨ３
配列番号８１：ＰＤ−１  ｍＡｂ  ８の軽鎖可変ドメイン
配列番号８２：ＰＤ−１  ｍＡｂ  ８のＣＤＲＬ１
配列番号８３：ＰＤ−１  ｍＡｂ  ８のＣＤＲＬ２
配列番号８４：ＰＤ−１  ｍＡｂ  ８のＣＤＲＬ３
配列番号８５：κＣＬドメイン
配列番号８６：ＩｇＧ４  ＣＨ１ドメイン及び安定化ヒンジ
配列番号８７：ＰＤ−１  ｍＡｂ  ６−ＩＳＱの完全な重鎖
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】配列表
【補正方法】変更
【補正の内容】
【配列表】
2018516966000001.app
【国際調査報告】
2018516966.tif 000030
2018516966.tif 000031
2018516966.tif 000032