(57)【要約】  ペットフード製品の脂肪酸の味及び／又はおいしさを高めるのに用いることができる、ＧＰＲ１２０脂肪酸受容体の活性を調節、増加、及び／又は、増強する少なくとも１つの化合物を含むフレーバ組成物が、本明細書に記載される。該化合物を特定する方法もまた本明細書に開示される。
2018506263.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記構造を含む式ＩＩの化合物を含む、フレーバ組成物であって、
【化１】
2018506263.tif 000011
式中、
Ｘは、（Ｃ）Ｒ１Ｒ２、Ｏ、Ｓ、Ｃ（Ｏ）、又は化学結合であり；
Ｘ１は、（Ｃ）Ｒ１Ｒ２、Ｏ、Ｓ、又はＮ（Ｒ１）であり；
Ｙは、ＣＯＯＨ、ＳＯ３Ｈ、−ＯＰ（Ｏ）（ＯＨ）２、又はテトラゾールであり；
Ｗは、ハロゲン、ＣＯＯＨ、ＣＯＯＭｅ、ＣＮ、Ｎ（Ｒ１）（Ｒ２）、ＣＨＯ、ＣＯＮＲ１Ｒ２、アリール、ＯＨ、Ｈ、−Ｓ−アリール、−Ｏ−アリール、−Ｎ−アリール、ＣＦ３、ＯＣＨ３、ＣＨ３、ＮＯ２、又はＯＥｔであり；
Ｚ１及びＺ２は、ハロゲン、ＣＯＯＨ、ＣＯＯＭｅ、ＣＮ、Ｎ（Ｒ１）（Ｒ２）、ＣＨＯ、ＣＯＮＲ１Ｒ２、アリール、ＯＨ、Ｈ、−Ｓ−アリール、−Ｏ−アリール、−Ｎ−アリール、ＣＦ３、ＯＣＨ３、ＣＨ３、ＮＯ２、及びＯＥｔから各々独立して選択され；
Ｒ１及びＲ２は、Ｈ及び分岐又は非分岐のＣ１〜Ｃ６低級アルキルから各々独立して選択され；
ｎ１は、０〜４であり；
ｎ２は、０〜２であり；
ｎ３は、０〜４である、
フレーバ組成物。
【請求項２】
前記化合物が、３−（４−（（４−フルオロ−４’−メチルビフェニル−２−イル）メトキシ）フェニル）プロパン酸、及び４−［［（３−フェノキシフェニル）メチル］アミノ］ベンゼンプロパン酸からなる群より選択されることを特徴とする、請求項１に記載のフレーバ組成物。
【請求項３】
下記構造を含む式ＩＩＩの化合物を含む、フレーバ組成物であって、
【化２】
2018506263.tif 000012
式中、
Ｘは、（Ｃ）Ｒ１Ｒ２、Ｏ、Ｓ、Ｃ（Ｏ）、又は化学結合であり；
Ｘ１は、（Ｃ）Ｒ１Ｒ２、Ｏ、Ｓ、又はＮ（Ｒ１）であり；
Ｙは、ＣＯＯＨ、ＳＯ３Ｈ、−ＯＰ（Ｏ）（ＯＨ）２、又はテトラゾールであり；
Ｗは、ハロゲン、ＣＯＯＨ、ＣＯＯＭｅ、ＣＮ、Ｎ（Ｒ１）（Ｒ２）、ＣＨＯ、ＣＯＮＲ１Ｒ２、アリール、ＯＨ、Ｈ、−Ｓ−アリール、−Ｏ−アリール、−Ｎ−アリール、ＣＦ３、ＯＣＨ３、ＣＨ３、ＮＯ２、又はＯＥｔであり；
Ｒは、ＣＨ３、又は（Ｒ４）（Ｒ５）Ｘ２であり；
Ｒ１及びＲ２は、Ｈ及び分岐又は非分岐のＣ１〜Ｃ６低級アルキルから各々独立して選択され；
Ｒ４及びＲ５は、Ｈ、アリール、及び分岐又は非分岐の低級アルキル（Ｃ１〜Ｃ１０）から各々独立して選択され；
ｎ１は、０〜４であり；
ｎ２は、０〜２であり；
ｎ３は、１〜１２、又は分岐又は非分岐のＣ２〜Ｃ２０であり；
Ｘ２は、Ｃ又はＮである、
フレーバ組成物。
【請求項４】
前記化合物が、４−［４−（ヘプチルオキシ）フェニル］−４−オキソブタン酸であることを特徴とする、請求項３に記載のフレーバ組成物。
【請求項５】
（５Ｚ，８Ｚ，１１Ｚ，１４Ｚ）−イコサ−５，８，１１，１４−テトラエン酸（アラキドン酸としても知られる）；
（５Ｚ，８Ｚ）−イコサ−５，８−ジエン酸；
（１１Ｚ）−オクタデカ−１１−エン酸（ｃｉｓ−バクセン酸としても知られる）；
（９Ｅ）−ヘキサデカ−９−エン酸（パルミテライジン酸としても知られる）；
トリデカ−１２−エン酸（１２−トリデセン酸としても知られる）；
Ｓ−ファルネシルチオ酢酸；
（１０Ｚ）−ペンタデカ−１０−エン酸（（１０Ｚ）−１０−ペンタデセン酸としても知られる）；
１０（Ｅ），１２（Ｚ）−共役リノール酸（（１０Ｚ，１２Ｚ）−１０，１２−オクタデカジエン酸としても知られる）；
（１０Ｚ，１３Ｚ）−ノナデカ−１０，１３−ジエン酸；
（９Ｚ，１１Ｅ）−オクタデカ−９，１１−ジエン酸；
ｃｉｓ−７−ヘキサデセン酸；
ドデカン酸（ラウリン酸としても知られる）；
（９Ｚ）−テトラデカ−９−エン酸（ミリストレイン酸としても知られる）；
（１１Ｚ，１４Ｚ，１７Ｚ）−イコサ−１１，１４，１７−トリエン酸（ジホモ−α−リノレン酸（２０：３（ｎ−３））としても知られる）；
（６Ｚ，９Ｚ，１２Ｚ）−オクタデカ−６，９，１２−トリエン酸（γ−リノレン酸としても知られる）；
（１１Ｚ，１４Ｚ）−イコサ−１１，１４−ジエン酸（ジホモリノール酸（２０：２（ｎ−６））としても知られる）；
（９Ｚ）−ヘキサデカ−９−エン酸（パルミトレート、（Ｚ）−パルミトレイン酸としても知られる）；
１２−メトキシドデカン酸；
（８Ｚ，１１Ｚ，１４Ｚ）−イコサ−８，１１，１４−トリエン酸；
（９Ｚ，１２Ｚ）−オクタデカ−９，１２−ジエン酸（リノール酸としても知られる）；
（１０Ｚ）−ヘプタデカ−１０−エン酸；
ピノレン酸；
（９Ｚ，１２Ｚ，１５Ｚ）−オクタデカ−９，１２，１５−トリエン酸（α−リノレン酸としても知られる）；
トリデカン酸（トリデシル酸としても知られる）；
テトラデカン酸（ミリスチン酸としても知られる）；
（９Ｚ）−オクタデカ−９−エン酸（オレイン酸としても知られる）；
（５Ｚ，８Ｚ，１１Ｚ，１４Ｚ，１７Ｚ）−イコサ−５，８，１１，１４，１７−ペンタエン酸（エイコサペンタエン酸としても知られる）；
（１０Ｅ）−ペンタデカ−１０−エン酸；
（９Ｅ）−テトラデカ−９−エン酸（ミリストレートとしても知られる）；
（６Ｚ，９Ｚ，１２Ｚ，１５Ｚ）−オクタデカ−６，９，１２，１５−テトラエン酸；
（５Ｚ，８Ｚ，１１Ｚ）−イコサ−５，８，１１−トリエン酸（ミード酸としても知られる）；及び
リン酸二水素ドデシル
からなる群より選択される化合物を含む、フレーバ組成物。
【請求項６】
構造Ｒ−Ｘを有する化合物を含むフレーバ組成物であって、式中、
Ｘは、カルボキシル基であるか、又は、ホスフェート、ボロン酸、ホスホエステル、ホスホジエステル、ホスフィン酸、スルホンアミド、マロン酸、２−スルホ酢酸、スルホン酸、ヒドロキサム酸、テトラゾール、ヒドロキシ尿素、ホスホラミド、及びＣ（Ｏ）ＯＣＨ２ＣＨ（ＯＨ）ＯＰ（Ｏ）（ＯＲ１）（ＯＲ２）［式中、Ｒ１及びＲ２は、Ｈ、低級アルキル（Ｃ１〜Ｃ６）、及びＰｈから各々独立して選択される］からなる群より選択されるカルボキシレートの生物学的等価置換であり；
Ｒは、約Ｃ２〜約Ｃ４０の炭素長を有する置換又は非置換の炭化水素鎖である、
フレーバ組成物。
【請求項７】
前記炭化水素鎖が、０〜８つの二重結合を含むことを特徴とする、請求項６に記載のフレーバ組成物。
【請求項８】
１つ以上の二重結合が、水素、メチル、又はＣ１〜Ｃ１２アルキルで置換されていてもよいことを特徴とする、請求項７に記載のフレーバ組成物。
【請求項９】
前記炭化水素鎖中の炭素の１つ以上が、酸素、硫黄、窒素、ケトン、スルホン、スルホキシド、アミド、尿素、又はスルホンアミドで置換されていることを特徴とする、請求項６に記載のフレーバ組成物。
【請求項１０】
Ｒが、Ｈ、ＣＨ３、Ｃ１〜Ｃ２０、ＣＯＯＨ、ＳＯ３Ｈ、ＣＨＯ、Ｃ（Ｏ）Ｒ１、Ｃ＝ＣＲ１Ｒ２、Ｃ＝ＮＯＨ、ＯＰ（Ｏ）（ＯＲ１）（ＯＲ２）、ＯＲ１、ＳＲ１、ＣＮ、ＣＯＯＲ１、ＣＯＮＲ１Ｒ２、ＮＯ２、ＮＨＯＨ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、及びＮＲ１Ｒ２［式中、Ｒ１及びＲ２は、Ｈ及び分岐又は非分岐のＣ１〜Ｃ６アルキルから各々独立して選択される］のうちの１つ以上で置換された置換炭化水素鎖であることを特徴とする、請求項６に記載のフレーバ組成物。
【請求項１１】
下記構造を含む式Ｉの化合物を含むフレーバ組成物であって、
【化３】
2018506263.tif 000013
式中、
Ｒは、約Ｃ１〜約Ｃ４０の炭素長を有する置換又は非置換の炭化水素鎖であり、
前記炭化水素鎖が置換される場合、該炭化水素鎖は、Ｈ、ＣＨ３、Ｃ１〜Ｃ２０、ＣＯＯＨ、ＳＯ３Ｈ、ＣＨＯ、Ｃ（Ｏ）Ｒ１、Ｃ＝ＣＲ１Ｒ２、Ｃ＝ＮＯＨ、ＯＰ（Ｏ）（ＯＲ１）（ＯＲ２）、ＯＲ１、ＳＲ１、ＣＮ、ＣＯＯＲ１、ＣＯＮＲ１Ｒ２、ＮＯ２、ＮＨＯＨ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、及びＮＲ１Ｒ２［式中、Ｒ１及びＲ２は、Ｈ及び分岐又は非分岐のＣ１〜Ｃ６アルキルから各々独立して選択される］のうちの１つ以上で置換される、
フレーバ組成物。
【請求項１２】
前記フレーバ組成物が、味覚テスターのパネルによって決定して、前記食品の脂肪酸の味の増加に有効な量で存在することを特徴とする、請求項１〜１１のいずれか一項に記載のフレーバ組成物を含む食品。
【請求項１３】
前記フレーバ組成物が、味覚テスターのパネルによって決定して、前記食品のおいしさの増加に有効な量で存在することを特徴とする、請求項１〜１１のいずれか一項に記載のフレーバ組成物を含む食品。
【請求項１４】
前記フレーバ組成物が、前記食品中に、約１０ｐＭ〜約１Ｍ、約０．０１ｐｐｍ〜１，０００ｐｐｍ、又は約０．０１％ｗ／ｗ〜約１０％ｗ／ｗの濃度で存在することを特徴とする、請求項１２又は１３に記載の食品。
【請求項１５】
前記食品が、ペットフード製品を含むことを特徴とする、請求項１２〜１４のいずれか一項に記載の食品。
【請求項１６】
前記ペットフード製品が、ネコ用ペットフード製品又はイヌ用ペットフード製品であることを特徴とする、請求項１５に記載の食品。
【請求項１７】
前記ペットフード製品がウエットペットフード製品であることを特徴とする、請求項１６に記載の食品。
【請求項１８】
前記ペットフード製品が、ドライペットフード製品であることを特徴とする、請求項１６に記載の食品。
【請求項１９】
食品を、請求項１〜１１のいずれか一項に記載のフレーバ組成物と混和する工程を含み、前記フレーバ組成物が、味覚テスターのパネルによって決定して、前記食品の脂肪酸の味の増加に有効な量で存在する、食品中の脂肪酸の味覚強度を増加する方法。
【請求項２０】
前記フレーバ組成物が、前記混和物中に、約１０ｐＭ〜約１Ｍ、約０．０１ｐｐｍ〜１，０００ｐｐｍ、又は約０．０１％ｗ／ｗ〜約１０％ｗ／ｗの濃度で存在することを特徴とする、請求項１９に記載の方法。
【請求項２１】
組成物を、配列番号：１のアミノ酸配列を含むネコ脂肪酸受容体と接触させる工程を含む、ネコ脂肪酸受容体の活性を調節する方法であって、
前記組成物が、
ヘリックス２のＰＨＥ８８、ＶＡＬ９５、ＶＡＬ９８及びＡＲＧ９９；
ヘリックス３のＰＨＥ１１５、ＭＥＴ１１８、ＳＥＲ１１９、ＧＬＹ１２２、ＳＥＲ１２３；
ヘリックス５のＴＲＰ２０７、ＰＨＥ２１１、ＶＡＬ２１２、ＡＳＮ２１５；
ヘリックス６のＴＲＰ２７７、ＩＬＥ２８０、ＩＬＥ２８１、ＩＬＥ２８４；及び
ヘリックス７のＴＲＰ２９９、ＰＨＥ３０３、ＰＨＥ３０４、ＶＡＬ３０７、ＴＨＲ３１０、ＰＨＥ３１１；
並びにそれらの組合せからなる群より選択される、前記ネコ脂肪酸受容体の相互作用部位における１つ以上のアミノ酸と相互作用することを特徴とする、方法。
【請求項２２】
前記相互作用が、部位特異的突然変異導入、ｘ線結晶構造解析、ｘ線分光法、核磁気共鳴（ＮＭＲ）、架橋評価、質量分析、電気泳動、置換分析、及びそれらの組合せによって決定されることを特徴とする、請求項２１に記載の方法。
【請求項２３】
前記相互作用が、インシリコで決定されることを特徴とする、請求項２１に記載の方法。
【請求項２４】
ネコ脂肪酸受容体の活性を調節する組成物を特定する方法であって、
（ａ）試験薬を、配列番号：１のアミノ酸配列を含むネコ脂肪酸受容体と接触させる工程、
（ｂ）前記試験薬と、ヘリックス２のＰＨＥ８８、ＶＡＬ９５、ＶＡＬ９８及びＡＲＧ９９；ヘリックス３のＰＨＥ１１５、ＭＥＴ１１８、ＳＥＲ１１９、ＧＬＹ１２２、ＳＥＲ１２３；ヘリックス５のＴＲＰ２０７、ＰＨＥ２１１、ＶＡＬ２１２、ＡＳＮ２１５；ヘリックス６のＴＲＰ２７７、ＩＬＥ２８０、ＩＬＥ２８１、ＩＬＥ２８４；及びヘリックス７のＴＲＰ２９９、ＰＨＥ３０３、ＰＨＥ３０４、ＶＡＬ３０７、ＴＨＲ３１０、ＰＨＥ３１１；並びにそれらの組合せからなる群より選択される、前記ネコ脂肪酸受容体の相互作用部位における１つ以上のアミノ酸との相互作用を検出する工程、及び
（ｃ）前記アミノ酸の１つ以上と相互作用する試験薬を前記組成物として選択する工程
を含む、方法。
【請求項２５】
工程（ａ）の後に、前記脂肪酸受容体の前記活性を特定する工程をさらに含む、請求項２４に記載の方法。
【請求項２６】
脂肪酸受容体リガンドを前記脂肪酸受容体に接触させる工程をさらに含む、請求項２４又は２５に記載の方法。
【請求項２７】
工程（ｃ）が、前記組成物として、前記脂肪酸受容体の前記活性を増加させる試験薬を選択する工程をさらに含むことを特徴とする、請求項２５又は２６に記載の方法。
【請求項２８】
ネコ脂肪酸受容体の活性を調節する組成物を特定する方法であって、
（ａ）ネコ脂肪酸受容体アゴニストをネコ脂肪酸受容体と接触させ、前記ネコ脂肪酸受容体の前記活性を特定する工程、
（ｂ）試験薬を前記ネコ脂肪酸受容体と接触させ、前記ネコ脂肪酸受容体の前記活性を特定する工程、及び
（ｃ）（ｂ）の活性が（ａ）の活性より大きい場合に、前記試験薬を前記組成物として選択する工程
を含む、方法。
【請求項２９】
前記ネコ脂肪酸受容体が、配列番号：１のアミノ酸配列を含むことを特徴とする、請求項２８に記載の方法。
【請求項３０】
前記脂肪酸受容体が細胞によって発現され、前記試験薬を前記細胞と接触させることを特徴とする、請求項２４〜２９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３１】
前記細胞が、カルシウム結合型発光タンパク質を発現することを特徴とする、請求項３０に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【関連出願の相互参照】
【０００１】
本出願は、その全体がここに参照することによって本願に援用される、２０１４年１２月１０日出願の米国仮特許出願第６２／０９０，１３８号の優先権を主張する。
【技術分野】
【０００２】
本明細書に開示される主題は、脂肪酸受容体と相互作用する少なくとも１つの化合物を含む、化合物及びフレーバ組成物に関する。フレーバ組成物は、ペットフード製品のおいしさ、味及び／又はフレーバを高める又は改変するために用いられうる。フレーバ組成物は、化合物の組合せを含んでよく、さまざまな供給系フォーマットにおいてペットフード製品に添加することができる。
【背景技術】
【０００３】
食用組成物の味覚プロファイルには、甘味、塩味、苦味、酸味、旨味及びコク味などの基本的味覚が含まれる。味覚プロファイルはまた、遊離脂肪酸の味を含むものとしても説明されている。これらの味を引き出す化合物は、しばしば、味物質（tastants）と称される。味物質は、口腔及び咽喉内の味覚受容体によって感知され、それが信号を脳に伝え、そこに味物質及び結果的に得られる味覚プロファイルが登録されると推定されている。味覚受容体は、特定の脂肪酸の検出に関与する７つの膜貫通ドメイン、及び、信号変換に関与するＧ−タンパク質に関連する細胞内部分を含む、Ｇ−タンパク質連結型細胞表面受容体であると予想される、ＧＰＲ１２０（ＧＰＲ１２９、Ｏ３ＦＡＲ１、ＰＧＲ４、ＦＦＡＲ４としても知られる）味覚受容体を含む。ＧＰＲ１２０は、遊離型の、オレイン酸及びリノール酸などの長鎖脂肪酸に媒体（medium）を結合すると考えられる。ＧＰＲ１２０受容体の２つのアイソフォーム（スプライス変異体）、ＧＰＲ１２０Ｌ及びＧＰＲ１２０Ｓが、ヒトの結腸内分泌細胞に存在すると予想されている。長いアイソフォームは、味の知覚においては機能的に信号伝達しないことが示唆されている。
【０００４】
ＧＰＲ１２０は、さまざまな哺乳動物組織において発現されており、不飽和長鎖脂肪酸の既知の受容体である。ＧＰＲ１２０は、腸管分泌型細胞株ＳＴＣ−１からのコレシストキニン（ＣＣＫ）分泌の刺激に関与することが知られており、また、ＧＰＲ１２０がグルカゴン様ペプチド（ＧＬＰ１）の分泌に対し刺激効果を有することが報告されている。ストレス調節及びインスリン感受性にＧＰＲ１２０が関与する可能性、並びに、その抗炎症作用及び抗肥満作用の可能性が調査されている（例えば、非特許文献１；２００７年１１月２９日公開の特許文献１；２００８年６月１８日公開の特許文献２；及び、２００６年８月９日公開の特許文献３を参照）が、ＧＰＲ１２０が、ペットフード、特にキャットフード及びドッグフードのおいしさの調節に関与することについては示唆されていない。
【０００５】
ペットフード製造業者らは、長年にわたり、高い栄養価を有するペットフード製品を提供したいと望んでいる。加えて、及び、特にキャットフード及びドッグフードに関して、ペットフード製造業者らは、ペットが食物から十分な栄養上の利益を享受できるように、高度のおいしさを望んでいる。飼育動物、特にネコは、食物嗜好性において気まぐれなことで悪名高く、しばしば、ある時期にわたり受け入れられていたペットフード製品を食べるのを拒んだり、あるいは、ペットフード製品を最小量より多く食べることを拒んだりする。その結果、ペットの飼い主は、ペットを健康かつ満足した状態に維持するために、ペットフードの種類と銘柄を頻繁に変更する。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００６】
【特許文献１】国際公開第２００７／１３４６１３号
【特許文献２】欧州特許出願公開第１９３２９２０号明細書
【特許文献３】欧州特許出願公開第１６８８１３８号明細書
【非特許文献】
【０００７】
【非特許文献１】Cartoni et al., J Neurosci. 2010 Jun 23; 30(25): 8376-82;Celine et al., PLoS One. 2011; 6(8): e24014
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
味及びフレーバの技術は最近、進歩しているが、ペットフード製品の味、食感及び／又はフレーバプロファイルを増強又は改変することによってペットフード製品のおいしさを増強又は改変することができる化合物が必要とされている。増強又は改変は、望ましい特質の強度を増加させること、ペットフード製品中に存在しない又は何らかの形で失われた望ましい特質を取り戻すこと、若しくは、望ましくない特質の強度を低下させることでありうる。特に、ペットフード製品中の味物質の強度を増加させることが望ましい。したがって、肥満を制御する又は脂肪酸の摂取を制御する試みとは別の、ペットフード製品のおいしさ及び味を増強するための組成物が当技術分野において必要とされている。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
本明細書に開示される主題は、フレーバ組成物、並びに、さまざまなペットフード製品にわたってこのような組成物を製造及び改質するための方法を対象とする。特に、本開示は、脂肪酸受容体ＧＰＲ１２０の活性を増強、増加、及び／又は調節する、１つ以上の化合物を含む組成物を対象とする。
【００１０】
本開示のある特定の実施形態では、フレーバ組成物は、
（５Ｚ，８Ｚ，１１Ｚ，１４Ｚ）−イコサ−５，８，１１，１４−テトラエン酸（アラキドン酸としても知られる）；
（５Ｚ，８Ｚ）−イコサ−５，８−ジエン酸；
４−［４−（ヘプチルオキシ）フェニル］−４−オキソブタン酸；
（１１Ｚ）−オクタデカ−１１−エン酸（ｃｉｓ−バクセン酸としても知られる）；
（９Ｅ）−ヘキサデカ−９−エン酸（パルミテライジン酸としても知られる）；
トリデカ−１２−エン酸（１２−トリデセン酸としても知られる）；
Ｓ−ファルネシルチオ酢酸；
（１０Ｚ）−ペンタデカ−１０−エン酸（（１０Ｚ）−１０−ペンタデセン酸としても知られる）；
１０（Ｅ），１２（Ｚ）−共役リノール酸（（１０Ｚ，１２Ｚ）−１０，１２−オクタデカジエン酸としても知られる）；
（１０Ｚ，１３Ｚ）−ノナデカ−１０，１３−ジエン酸；
（９Ｚ，１１Ｅ）−オクタデカ−９，１１−ジエン酸；
ｃｉｓ−７−ヘキサデセン酸；
ドデカン酸（ラウリン酸としても知られる）；
（９Ｚ）−テトラデカ−９−エン酸（ミリストレイン酸としても知られる）；
（１１Ｚ，１４Ｚ，１７Ｚ）−イコサ−１１，１４，１７−トリエン酸（ジホモ−α−リノレン酸（２０：３（ｎ−３））としても知られる）；
（６Ｚ，９Ｚ，１２Ｚ）−オクタデカ−６，９，１２−トリエン酸（γ−リノレン酸としても知られる）；
（１１Ｚ，１４Ｚ）−イコサ−１１，１４−ジエン酸（ジホモリノール酸（２０：２（ｎ−６））としても知られる）；
（９Ｚ）−ヘキサデカ−９−エン酸（パルミトレート、（Ｚ）−パルミトレイン酸としても知られる）；
１２−メトキシドデカン酸；
（８Ｚ，１１Ｚ，１４Ｚ）−イコサ−８，１１，１４−トリエン酸；
（９Ｚ，１２Ｚ）−オクタデカ−９，１２−ジエン酸（リノール酸としても知られる）；
（１０Ｚ）−ヘプタデカ−１０−エン酸；
ピノレン酸；
（９Ｚ，１２Ｚ，１５Ｚ）−オクタデカ−９，１２，１５−トリエン酸（α−リノレン酸としても知られる）；
トリデカン酸（トリデシル酸としても知られる）；
テトラデカン酸（ミリスチン酸としても知られる）；
（９Ｚ）−オクタデカ−９−エン酸（オレイン酸としても知られる）；
ＧＷ  ９５０８（４−［［（３−フェノキシフェニル）メチル］アミノ］ベンゼンプロパン酸としても知られる）；
（５Ｚ，８Ｚ，１１Ｚ，１４Ｚ，１７Ｚ）−イコサ−５，８，１１，１４，１７−ペンタエン酸（エイコサペンタエン酸としても知られる）；
３−（４−（（４−フルオロ−４’−メチルビフェニル−２−イル）メトキシ）フェニル）プロパン酸（ＴＵＧ  ８９１及び４−［（４−フルオロ−４’−メチル［１，１’−ビフェニル］−２−イル）メトキシ］−ベンゼンプロパン酸としても知られる）；
（１０Ｅ）−ペンタデカ−１０−エン酸；
（９Ｅ）−テトラデカ−９−エン酸（ミリストレートとしても知られる）；
（６Ｚ，９Ｚ，１２Ｚ，１５Ｚ）−オクタデカ−６，９，１２，１５−テトラエン酸；
（５Ｚ，８Ｚ，１１Ｚ）−イコサ−５，８，１１−トリエン酸（ミード酸としても知られる）；及び
リン酸二水素ドデシル
からなる群より選択される１つ以上の化合物を含む。
【００１１】
本開示のある特定の実施形態では、フレーバ組成物は、下記構造を含む式Ｉの化合物：
【００１２】
【化１】
2018506263.tif 000003
【００１３】
を含み、式中、Ｒは、置換又は非置換の炭化水素鎖である。
【００１４】
本開示のある特定の実施形態では、フレーバ組成物は、下記構造を含む式ＩＩの化合物：
【００１５】
【化２】
2018506263.tif 000004
【００１６】
を含み、式中、Ｘ、Ｘ１、Ｙ、Ｗ、Ｚ１、Ｚ２、ｎ１、ｎ２、及びｎ３は、本明細書に記載される通りである。
【００１７】
本開示のある特定の実施形態では、フレーバ組成物は、下記構造を含む式ＩＩＩの化合物：
【００１８】
【化３】
2018506263.tif 000005
【００１９】
を含み、式中、Ｘ、Ｘ１、Ｙ、Ｗ、Ｒ、ｎ１、ｎ２、及びｎ３は、本明細書に記載される通りである。
【００２０】
本開示のある特定の実施形態では、フレーバ組成物は、構造Ｒ−Ｘを有する化合物を含み、式中、Ｘは、カルボキシル基又は、カルボキシレートの生物学的等価置換であり、Ｒは、置換又は非置換の炭化水素鎖である。
【００２１】
本開示はまた、本明細書に記載の化合物の塩及び立体異性体も提供する。
【００２２】
ある特定の実施形態では、フレーバ組成物は、少なくとも１つ、２つ、３つ、４つ、５つ又はそれ以上の第１のアミノ酸、及び／又は、少なくとも１つ、２つ、３つ、４つ、５つ又はそれ以上の第２のアミノ酸をさらに含む。第１のアミノ酸の非限定的な例としては、トリプトファン、フェニルアラニン、ヒスチジン、グリシン、システイン、アラニン、チロシン、セリン、メチオニン、アスパラギン及びロイシンが挙げられる。第２のアミノ酸の非限定的な例としては、トレオニン、イソロイシン、プロリン、グルタミン酸、アスパラギン酸、ヒドロキシプロリン、アルギニン、シスチン、グルタミン、リシン、バリン、オルニチン（orthinine）、グルタミン酸ナトリウム（ＭＳＧ）及びタウリンが挙げられる。
【００２３】
ある特定の実施形態では、フレーバ組成物は、少なくとも１つの標準ヌクレオチドをさらに含みうる。標準ヌクレオチドの非限定的な例としては、グアノシン一リン酸（ＧＭＰ）、アデノシン一リン酸（ＡＭＰ）、シチジン一リン酸（ＣＭＰ）、イノシン一リン酸（ＩＭＰ）、ウリジン一リン酸（ＵＭＰ）、チミジン一リン酸（ＴＭＰ）及びキサントシン一リン酸（ＸＭＰ）が挙げられる。ある特定の実施形態では、フレーバ組成物は、本明細書に記載される少なくとも１つのヌクレオチド誘導体をさらに含みうる。
【００２４】
ある特定の実施形態では、フレーバ組成物は、本明細書に記載される少なくとも１つの膜貫通化合物をさらに含みうる。
【００２５】
ある特定の実施形態では、本開示は、化合物を含むフレーバ組成物を含む、ペットフード製品を提供し、該フレーバ組成物は、味覚テスターのパネルによって決定して、食品の脂肪酸の味を増加させるのに有効な量で存在する。
【００２６】
ある特定の実施形態では、本開示は、化合物を含むフレーバ組成物を含む、ペットフード製品を提供し、該フレーバ組成物は、ペットフード製品の約０．００１質量％〜約１０質量％（％ｗ／ｗ）、又は約０．０１〜約１％ｗ／ｗの濃度で存在する。ある特定の実施形態では、ペットフード製品は、ネコ用ペットフード製品である。
【００２７】
ある特定の実施形態では、本開示は、化合物を含むフレーバ組成物を含む、ペットフード製品を提供する。ある特定の実施形態では、フレーバ組成物は、ペットフード製品の約０．０１ｐｐｍ〜約１，０００ｐｐｍの濃度で存在する。代替的に又は加えて、化合物は、ペットフード製品中に約１０ｐＭ〜約１Ｍの濃度で存在しうる。
【００２８】
本開示はさらに、ペットフード製品のおいしさを増加させる方法も提供する。ある特定の実施形態では、本方法は、ペットフード製品をフレーバ組成物と混和する工程を含む。ある特定の実施形態では、フレーバ組成物は、混和物の約０．００１質量％〜約１０質量％の濃度で存在する。
【００２９】
本開示のある特定の実施形態では、ペットフード製品のおいしさを増加させる方法は、ペットフード製品をフレーバ組成物と混和する工程を含む。ある特定の実施形態では、フレーバ組成物は、混和物の約０．０１ｐｐｍ〜約１，０００ｐｐｍの濃度で存在する。代替的に又は加えて、少なくとも１つの化合物は、混和物中に約１０ｐＭ〜約１Ｍの濃度で存在する。
【００３０】
本開示のある特定の実施形態では、フレーバ組成物は、ペットフード製品のおいしさを増加させるのに有効な量でペットフード製品と混和される。
【００３１】
本明細書に開示される主題はまた、組成物を、例えば配列番号：１のアミノ酸配列を含むネコ脂肪酸受容体などの脂肪酸受容体と接触させる工程を含む、脂肪酸受容体の活性を調節する方法も提供し、該組成物は、ヘリックス２のＰＨＥ８８、ＶＡＬ９５、ＶＡＬ９８及びＡＲＧ９９；ヘリックス３のＰＨＥ１１５、ＭＥＴ１１８、ＳＥＲ１１９、ＧＬＹ１２２、ＳＥＲ１２３；ヘリックス５のＴＲＰ２０７、ＰＨＥ２１１、ＶＡＬ２１２、ＡＳＮ２１５；ヘリックス６のＴＲＰ２７７、ＩＬＥ２８０、ＩＬＥ２８１、ＩＬＥ２８４；及びヘリックス７のＴＲＰ２９９、ＰＨＥ３０３、ＰＨＥ３０４、ＶＡＬ３０７、ＴＨＲ３１０、ＰＨＥ３１１；並びにそれらの組合せからなる群より選択される脂肪酸受容体の相互作用部位における１つ以上のアミノ酸と相互作用する。
【００３２】
本明細書に開示される主題はまた、試験薬を脂肪酸受容体と接触させる工程、及び、試験薬と、本明細書に記載される脂肪酸受容体の相互作用部位における１つ以上のアミノ酸との相互作用を検出する工程を含む、脂肪酸受容体の活性を調節する組成物を特定する方法も提供する。
【００３３】
前述の説明は、以下の詳細な説明がより良く理解される目的で、本願の特徴及び技術的利点を幅広く説明してきた。本願の追加的な特徴及び利点は、以下に記載され、本願の特許請求の範囲の主題を形成する。開示される概念及び特定の実施形態が、本願と同一の目的を成し遂げるために他の構造を改変又は設計するための基礎として容易に利用されうることは、当業者に認識されよう。このような同等の構成が添付の特許請求の範囲に記載される本願の精神及び範囲から逸脱しないこともまた、当業者に認識されよう。本願の特性であると考えられる新規の特徴は、その機構及び動作方法の両方に関して、さらなる目的及び利点とともに、以下の説明からより良く理解されよう。
【図面の簡単な説明】
【００３４】
【図１−１】実施例１に記載される化合物の３つの異なる用量についてのインビトロにおけるｆＧＰＲ１２０受容体活性レベル
【図１−２】実施例１に記載される化合物の３つの異なる用量についてのインビトロにおけるｆＧＰＲ１２０受容体活性レベル
【図１−３】実施例１に記載される化合物の３つの異なる用量についてのインビトロにおけるｆＧＰＲ１２０受容体活性レベル
【図１−４】実施例１に記載される化合物の３つの異なる用量についてのインビトロにおけるｆＧＰＲ１２０受容体活性レベル
【図１−５】実施例１に記載される化合物の３つの異なる用量についてのインビトロにおけるｆＧＰＲ１２０受容体活性レベル
【図１−６】実施例１に記載される化合物の３つの異なる用量についてのインビトロにおけるｆＧＰＲ１２０受容体活性レベル
【図１−７】実施例１に記載される化合物の３つの異なる用量についてのインビトロにおけるｆＧＰＲ１２０受容体活性レベル
【図１−８】実施例１に記載される化合物の３つの異なる用量についてのインビトロにおけるｆＧＰＲ１２０受容体活性レベル
【図１−９】実施例１に記載される化合物の３つの異なる用量についてのインビトロにおけるｆＧＰＲ１２０受容体活性レベル
【図１−１０】実施例１に記載される化合物の３つの異なる用量についてのインビトロにおけるｆＧＰＲ１２０受容体活性レベル
【図１−１１】実施例１に記載される化合物の３つの異なる用量についてのインビトロにおけるｆＧＰＲ１２０受容体活性レベル
【図１−１２】実施例１に記載される化合物の３つの異なる用量についてのインビトロにおけるｆＧＰＲ１２０受容体活性レベル
【図１−１３】実施例１に記載される化合物の３つの異なる用量についてのインビトロにおけるｆＧＰＲ１２０受容体活性レベル
【図１−１４】実施例１に記載される化合物の３つの異なる用量についてのインビトロにおけるｆＧＰＲ１２０受容体活性レベル
【図１−１５】実施例１に記載される化合物の３つの異なる用量についてのインビトロにおけるｆＧＰＲ１２０受容体活性レベル
【図１−１６】実施例１に記載される化合物の３つの異なる用量についてのインビトロにおけるｆＧＰＲ１２０受容体活性レベル
【図１−１７】実施例１に記載される化合物の３つの異なる用量についてのインビトロにおけるｆＧＰＲ１２０受容体活性レベル
【図１−１８】実施例１に記載される化合物の３つの異なる用量についてのインビトロにおけるｆＧＰＲ１２０受容体活性レベル
【図１−１９】実施例１に記載される化合物の３つの異なる用量についてのインビトロにおけるｆＧＰＲ１２０受容体活性レベル
【図１−２０】実施例１に記載される化合物の３つの異なる用量についてのインビトロにおけるｆＧＰＲ１２０受容体活性レベル
【図１−２１】実施例１に記載される化合物の３つの異なる用量についてのインビトロにおけるｆＧＰＲ１２０受容体活性レベル
【図１−２２】実施例１に記載される化合物の３つの異なる用量についてのインビトロにおけるｆＧＰＲ１２０受容体活性レベル
【図１−２３】実施例１に記載される化合物の３つの異なる用量についてのインビトロにおけるｆＧＰＲ１２０受容体活性レベル
【図１−２４】実施例１に記載される化合物の３つの異なる用量についてのインビトロにおけるｆＧＰＲ１２０受容体活性レベル
【図１−２５】実施例１に記載される化合物の３つの異なる用量についてのインビトロにおけるｆＧＰＲ１２０受容体活性レベル
【図１−２６】実施例１に記載される化合物の３つの異なる用量についてのインビトロにおけるｆＧＰＲ１２０受容体活性レベル
【図１−２７】実施例１に記載される化合物の３つの異なる用量についてのインビトロにおけるｆＧＰＲ１２０受容体活性レベル
【図１−２８】実施例１に記載される化合物の３つの異なる用量についてのインビトロにおけるｆＧＰＲ１２０受容体活性レベル
【図１−２９】実施例１に記載される化合物の３つの異なる用量についてのインビトロにおけるｆＧＰＲ１２０受容体活性レベル
【図１−３０】実施例１に記載される化合物の３つの異なる用量についてのインビトロにおけるｆＧＰＲ１２０受容体活性レベル
【図１−３１】実施例１に記載される化合物の３つの異なる用量についてのインビトロにおけるｆＧＰＲ１２０受容体活性レベル
【図１−３２】実施例１に記載される化合物の３つの異なる用量についてのインビトロにおけるｆＧＰＲ１２０受容体活性レベル
【図１−３３】実施例１に記載される化合物の３つの異なる用量についてのインビトロにおけるｆＧＰＲ１２０受容体活性レベル
【図１−３４】実施例１に記載される化合物の３つの異なる用量についてのインビトロにおけるｆＧＰＲ１２０受容体活性レベル
【図２−１】実施例１に記載される化合物のｆＧＰＲ１２０のインビトロ活性化についての用量反応曲線
【図２−２】実施例１に記載される化合物のｆＧＰＲ１２０のインビトロ活性化についての用量反応曲線
【図２−３】実施例１に記載される化合物のｆＧＰＲ１２０のインビトロ活性化についての用量反応曲線
【図２−４】実施例１に記載される化合物のｆＧＰＲ１２０のインビトロ活性化についての用量反応曲線
【図２−５】実施例１に記載される化合物のｆＧＰＲ１２０のインビトロ活性化についての用量反応曲線
【図２−６】実施例１に記載される化合物のｆＧＰＲ１２０のインビトロ活性化についての用量反応曲線
【図２−７】実施例１に記載される化合物のｆＧＰＲ１２０のインビトロ活性化についての用量反応曲線
【図２−８】実施例１に記載される化合物のｆＧＰＲ１２０のインビトロ活性化についての用量反応曲線
【図２−９】実施例１に記載される化合物のｆＧＰＲ１２０のインビトロ活性化についての用量反応曲線
【図２−１０】実施例１に記載される化合物のｆＧＰＲ１２０のインビトロ活性化についての用量反応曲線
【図２−１１】実施例１に記載される化合物のｆＧＰＲ１２０のインビトロ活性化についての用量反応曲線
【図２−１２】実施例１に記載される化合物のｆＧＰＲ１２０のインビトロ活性化についての用量反応曲線
【図２−１３】実施例１に記載される化合物のｆＧＰＲ１２０のインビトロ活性化についての用量反応曲線
【図２−１４】実施例１に記載される化合物のｆＧＰＲ１２０のインビトロ活性化についての用量反応曲線
【図２−１５】実施例１に記載される化合物のｆＧＰＲ１２０のインビトロ活性化についての用量反応曲線
【図２−１６】実施例１に記載される化合物のｆＧＰＲ１２０のインビトロ活性化についての用量反応曲線
【図２−１７】実施例１に記載される化合物のｆＧＰＲ１２０のインビトロ活性化についての用量反応曲線
【図２−１８】実施例１に記載される化合物のｆＧＰＲ１２０のインビトロ活性化についての用量反応曲線
【図２−１９】実施例１に記載される化合物のｆＧＰＲ１２０のインビトロ活性化についての用量反応曲線
【図２−２０】実施例１に記載される化合物のｆＧＰＲ１２０のインビトロ活性化についての用量反応曲線
【図２−２１】実施例１に記載される化合物のｆＧＰＲ１２０のインビトロ活性化についての用量反応曲線
【図２−２２】実施例１に記載される化合物のｆＧＰＲ１２０のインビトロ活性化についての用量反応曲線
【図２−２３】実施例１に記載される化合物のｆＧＰＲ１２０のインビトロ活性化についての用量反応曲線
【図２−２４】実施例１に記載される化合物のｆＧＰＲ１２０のインビトロ活性化についての用量反応曲線
【図２−２５】実施例１に記載される化合物のｆＧＰＲ１２０のインビトロ活性化についての用量反応曲線
【図２−２６】実施例１に記載される化合物のｆＧＰＲ１２０のインビトロ活性化についての用量反応曲線
【図２−２７】実施例１に記載される化合物のｆＧＰＲ１２０のインビトロ活性化についての用量反応曲線
【図２−２８】実施例１に記載される化合物のｆＧＰＲ１２０のインビトロ活性化についての用量反応曲線
【図２−２９】実施例１に記載される化合物のｆＧＰＲ１２０のインビトロ活性化についての用量反応曲線
【図２−３０】実施例１に記載される化合物のｆＧＰＲ１２０のインビトロ活性化についての用量反応曲線
【図２−３１】実施例１に記載される化合物のｆＧＰＲ１２０のインビトロ活性化についての用量反応曲線
【図２−３２】実施例１に記載される化合物のｆＧＰＲ１２０のインビトロ活性化についての用量反応曲線
【図２−３３】実施例１に記載される化合物のｆＧＰＲ１２０のインビトロ活性化についての用量反応曲線
【図２−３４】実施例１に記載される化合物のｆＧＰＲ１２０のインビトロ活性化についての用量反応曲線
【図３−１】ｆＧＰＲ１２０活性を増加させる、実施例１並びに図１及び２に記載される化合物の化学構造。各化合物における炭素原子の数は「Ｌ」と記された欄に示され、各化合物における二重結合の数は「Ｓ」と記された欄に示されている。
【図３−２】ｆＧＰＲ１２０活性を増加させる、実施例１並びに図１及び２に記載される化合物の化学構造。各化合物における炭素原子の数は「Ｌ」と記された欄に示され、各化合物における二重結合の数は「Ｓ」と記された欄に示されている。
【図３−３】ｆＧＰＲ１２０活性を増加させる、実施例１並びに図１及び２に記載される化合物の化学構造。各化合物における炭素原子の数は「Ｌ」と記された欄に示され、各化合物における二重結合の数は「Ｓ」と記された欄に示されている。
【図３−４】ｆＧＰＲ１２０活性を増加させる、実施例１並びに図１及び２に記載される化合物の化学構造。各化合物における炭素原子の数は「Ｌ」と記された欄に示され、各化合物における二重結合の数は「Ｓ」と記された欄に示されている。
【図３−５】ｆＧＰＲ１２０活性を増加させる、実施例１並びに図１及び２に記載される化合物の化学構造。各化合物における炭素原子の数は「Ｌ」と記された欄に示され、各化合物における二重結合の数は「Ｓ」と記された欄に示されている。
【図３−６】ｆＧＰＲ１２０活性を増加させる、実施例１並びに図１及び２に記載される化合物の化学構造。各化合物における炭素原子の数は「Ｌ」と記された欄に示され、各化合物における二重結合の数は「Ｓ」と記された欄に示されている。
【図３−７】ｆＧＰＲ１２０活性を増加させる、実施例１並びに図１及び２に記載される化合物の化学構造。各化合物における炭素原子の数は「Ｌ」と記された欄に示され、各化合物における二重結合の数は「Ｓ」と記された欄に示されている。
【図４Ａ】化合物３−（４−（（４−フルオロ−４’−メチルビフェニル−２−イル）メトキシ）フェニル）プロパン酸（ＴＵＧ８９１としても知られる）のｆＧＰＲ１２０への結合のインシリコモデリング。図４Ａは、結合性化合物の構造を示す。
【図４Ｂ】化合物３−（４−（（４−フルオロ−４’−メチルビフェニル−２−イル）メトキシ）フェニル）プロパン酸（ＴＵＧ８９１としても知られる）のｆＧＰＲ１２０への結合のインシリコモデリング。図４Ｂは、ｆＧＰＲ１２０に結合する化合物のモデルを示す。
【図４Ｃ】化合物３−（４−（（４−フルオロ−４’−メチルビフェニル−２−イル）メトキシ）フェニル）プロパン酸（ＴＵＧ８９１としても知られる）のｆＧＰＲ１２０への結合のインシリコモデリング。図４Ｃは、結合性化合物と相互作用する推定上のｆＧＰＲ１２０アミノ酸残基を示す。
【図５Ａ】化合物４−［４−（ヘプチルオキシ）フェニル］−４−オキソブタン酸のｆＧＰＲ１２０への結合のインシリコモデリング。図５Ａは、結合性化合物の構造を示す。
【図５Ｂ】化合物４−［４−（ヘプチルオキシ）フェニル］−４−オキソブタン酸のｆＧＰＲ１２０への結合のインシリコモデリング。図５Ｂは、ｆＧＰＲ１２０に結合する化合物のモデルを示す。
【図５Ｃ】化合物４−［４−（ヘプチルオキシ）フェニル］−４−オキソブタン酸のｆＧＰＲ１２０への結合のインシリコモデリング。図５Ｃは、結合性化合物と相互作用する推定上のｆＧＰＲ１２０アミノ酸残基を示す。
【図６Ａ】化合物エイコサペンタエン酸のｆＧＰＲ１２０への結合のインシリコモデリング。図６Ａは結合性化合物の構造を示す。
【図６Ｂ】化合物エイコサペンタエン酸のｆＧＰＲ１２０への結合のインシリコモデリング。図６ＢはｆＧＰＲ１２０に結合する化合物のモデルである。
【図６Ｃ】化合物エイコサペンタエン酸のｆＧＰＲ１２０への結合のインシリコモデリング。図６Ｃは、結合性化合物と相互作用する推定上のｆＧＰＲ１２０アミノ酸残基を示す。
【図７】受容体に化合物が結合するときのｆＧＰＲ１２０のＡｒｇ９９の位置を示す、エイコサペンタエン酸、３−（４−（（４−フルオロ−４’−メチルビフェニル−２−イル）メトキシ）フェニル）プロパン酸、及び４−［４−（ヘプチルオキシ）フェニル］−４−オキソブタン酸のオーバーレイ
【図８Ａ】塩橋がオレイン酸のカルボキシル基とｆＧＰＲ１２０のＡｒｇ９９との間に形成される、化合物オレイン酸のｆＧＰＲ１２０への結合のインシリコモデリング。図８Ａは、結合性化合物の構造を示す。
【図８Ｂ】塩橋がオレイン酸のカルボキシル基とｆＧＰＲ１２０のＡｒｇ９９との間に形成される、化合物オレイン酸のｆＧＰＲ１２０への結合のインシリコモデリング。図８Ｂは、結合性化合物と相互作用する推定上のｆＧＰＲ１２０アミノ酸残基が示されている、ｆＧＰＲ１２０に結合する化合物のモデルを示す。
【図９Ａ】塩橋がリノール酸のカルボキシル基とｆＧＰＲ１２０のＡｒｇ９９との間に形成される、化合物リノール酸のｆＧＰＲ１２０への結合のインシリコモデリング。図９Ａは、結合性化合物の構造を示す。
【図９Ｂ】塩橋がリノール酸のカルボキシル基とｆＧＰＲ１２０のＡｒｇ９９との間に形成される、化合物リノール酸のｆＧＰＲ１２０への結合のインシリコモデリング。図９Ｂは、ｆＧＰＲ１２０に結合する化合物のモデルを示す。
【図９Ｃ】塩橋がリノール酸のカルボキシル基とｆＧＰＲ１２０のＡｒｇ９９との間に形成される、化合物リノール酸のｆＧＰＲ１２０への結合のインシリコモデリング。図９Ｃは、結合性化合物と相互作用する推定上のｆＧＰＲ１２０アミノ酸残基を示す。
【図１０】配列番号：１として特定されるｆＧＰＲ１２０受容体のアミノ酸配列
【図１１Ａ】アゴニストモードにおけるリガンドによるｆＧＰＲ１２０の活性化についてのインビトロ細胞アッセイで決定された、リン酸二水素ドデシルについての用量反応曲線
【図１１Ｂ】ＰＡＭモードにおけるリガンドによるｆＧＰＲ１２０の活性化についてのインビトロ細胞アッセイで決定された、リン酸二水素ドデシルについての用量反応曲線
【図１２Ａ】実施例３に記載される、ｆＧＰＲ１２０の活性化についてのインビトロ細胞アッセイにおける、対照α−リノレン酸についての用量反応曲線
【図１２Ｂ】実施例３に記載される、ｆＧＰＲ１２０の活性化についてのインビトロ細胞アッセイにおける、ＡＴＰについての用量反応曲線
【発明を実施するための形態】
【００３５】
今日まで、さまざまなネコ用ペットフード製品のおいしさを増加及び／又は増強可能なフレーバ改質剤が、依然として必要とされている。本願は、少なくとも１つの化合物を含むフレーバ組成物に関する。フレーバ組成物は、おいしさを増加させるために使用することができ、及び／又は、栄養的に完全なペットフードなどのさまざまなペットフード製品の味を増強又は改変することができる。フレーバ組成物はさらに、アミノ酸、ヌクレオチド、及びフラノン（各々の全体がここに参照することによって本明細書に取り込まれる、２０１３年１０月３１日出願の国際出願第ＰＣＴ／ＥＰ２０１３／０７２７８８号、２０１３年１０月３１日出願の同第ＰＣＴ／ＥＰ２０１３／０７２７８９号、２０１３年１０月３１日出願の同第ＰＣＴ／ＥＰ２０１３／０７２７９０号、及び２０１３年１０月３１日出願の同第ＰＣＴ／ＥＰ２０１３／０７２７９４号の各明細書に記載される）、ヌクレオチド誘導体（その全体がここに参照することによって本明細書に取り込まれる、２０１５年１２月１０日出願の国際出願第ＰＣＴ／ＵＳ１５／６５０４６号明細書に記載される）、及び／又は、膜貫通化合物（その全体がここに参照することによって本明細書に取り込まれる、２０１５年１２月１０日出願の国際出願第ＰＣＴ／ＵＳ１５／６５０３６号明細書に記載される）を含む、化合物の組合せを含んでよく、さまざまな供給系フォーマットにおけるペットフード製品に添加することができる。
【００３６】
１．定義
本明細書に用いられる用語は、本発明の文脈において、及び各用語が用いられる特定の文脈において、概して、当技術分野における通常の意味を有する。ある特定の用語は、以下に、又は本明細書の他の部分に記載されており、本発明の組成物及び方法、並びにそれらの製造及び使用方法を説明する追加的なガイダンスを実施者に提供する。
【００３７】
本明細書で用いられる場合、特許請求の範囲及び／又は本明細書において用語「含む（comprising）」と併せて使用する場合の語句「ａ」又は「ａｎ」の使用は、「１つ」を意味しうるが、「１つ以上」、「少なくとも１つ」、及び「１つ又はそれ以上」の意味とも一致する。さらにまた、用語「有する」、「含有する」、「包含する」及び「備える」などは、互いに置き替え可能であり、当業者は、これらの用語が制約のない（open ended）用語であることを認識している。 
【００３８】
用語「約」又は「およそ」は、当業者によって決定される特定の値についての許容される誤差範囲内を意味し、これは、一部には、値の測定又は決定方法、すなわち、測定系の限界に応じて決まる。例えば、「約」は、当技術分野における１回の実施当たり、３以内又は３を超える標準偏差を意味しうる。あるいは、「約」は、所与の値の最大で２０％、好ましくは最大で１０％、さらに好ましくは最大で５％、及び、さらになお好ましくは最大で１％の範囲を意味しうる。あるいは、特に生物学的な系又はプロセスに関して、該用語は、ある値の１０倍以内（within an order of magnitude）、好ましくは５倍以内、さらに好ましくは２倍以内を意味しうる。
【００３９】
本明細書で用いられる場合、「味」とは、対象の味蕾における受容体細胞の活性化又は抑制によって引き起こされる感覚を指す。ある特定の実施形態では、味は、甘味、酸味、塩味、苦味、コク味及び旨味からなる群より選択されうる。ある特定の実施形態では、味は、「味物質」によって対象に引き起こされる。ある特定の実施形態では、味物質は、合成の味物質である。ある特定の実施形態では、味物質は天然源から調製される。
【００４０】
ある特定の実施形態では、「味」は、遊離脂肪酸の味を含みうる。例えば、その内容がここに参照することによって本明細書に取り込まれる、Cartoni et al., J. of Neuroscience, 30(25): 8376-8382(2010)を参照。ある特定の実施形態では、遊離脂肪酸の味は、例えば受容体ＧＰＲ１２０など、対象の味蕾における受容体細胞の活性化又は抑制によって引き起こされる感覚であり、脂肪の多い食物の食感及び嗅覚の知覚、例えば、粘性の、滑りやすい、油分の多い、口中を覆う又はクリーミーな食感を伴う食物とは別である。
【００４１】
本明細書で用いられる場合、「味覚プロファイル」とは、例えば、甘味、酸味、塩味、苦味、旨味、コク味及び遊離脂肪酸の味のうちの１つ以上など、味の組合せを指す。ある特定の実施形態では、味覚プロファイルは、同一又は異なる濃度で組成物中に存在する１つ以上の味物質によって生じる。ある特定の実施形態では、味覚プロファイルとは、例えば、対象によって又は当技術分野で知られている任意のアッセイによって検出される、甘味、酸味、塩味、苦味、旨味、コク味及び遊離脂肪酸の味など、味又は味の組合せの強度のことを指す。ある特定の実施形態では、味覚プロファイルにおける味物質の組合せを改質、変更又は変化させることによって、対象の感覚的経験を変化させることができる。
【００４２】
本明細書で用いられる場合、「フレーバ」とは、例えば、味（味覚）、匂い（嗅覚）、触感（触覚）及び温度（熱）刺激のうちの１つ以上など、１つ以上の感覚刺激を指す。ある特定の非限定的な実施形態では、フレーバに晒される対象の感覚的経験は、特定のフレーバについての特徴的経験として分類されうる。例えば、フレーバは、限定はしないが、花、柑橘系、ベリー系、ナッツ、キャラメル、チョコレート、ペッパー、スモーキー、チーズ、肉風味などのフレーバとして、対象によって特定されうる。本明細書で用いられる場合、フレーバ組成物は、液体、溶液、乾燥粉末、噴霧、ペースト、懸濁液及びそれらの任意の組合せから選択されうる。フレーバは、天然組成物、人工組成物、ネイチャーアイデンティカル、又はそれらの任意の組合せでありうる。
【００４３】
本明細書で置き換え可能に用いられる場合、「芳香」及び「匂い」とは、刺激に対する嗅覚応答のことを指す。例えば及び限定はしないが、芳香は、嗅覚系の匂い受容体によって知覚される芳香族物質によって生じうる。
【００４４】
本明細書で用いられる場合、「フレーバプロファイル」とは、例えば、甘味、酸味、苦味、塩味、旨味、コク味及び遊離脂肪酸の味などの味、及び／又は嗅覚、触覚及び／又は熱刺激などの感覚刺激の組合せのことを指す。ある特定の実施形態では、フレーバプロファイルは、対象の感覚的経験の一因となる１つ以上のフレーバを含む。ある特定の実施形態では、フレーバプロファイルにおける刺激の組合せの改変、変更又は変化は、対象の感覚的経験を変化させうる。
【００４５】
本明細書で用いられる場合、例えば「本願のフレーバ組成物又はそれらの組合せを食品と混和する」などの「混和」とは、フレーバ組成物又はフレーバ組成物の個々の成分が、完成した製品に混合又は添加される、若しくは、製品形成の間に製品の成分の幾つか又はすべてと混合されるプロセス、あるいは、これらの工程の幾つかの組合せを指す。混和するという文脈で用いられる場合、用語「製品」とは、製品又はその成分のことを指す。この混和する工程は、フレーバ組成物を製品に添加する、フレーバ組成物を製品に噴霧する、フレーバ組成物を製品上にコーティングする、製品をフレーバ組成物中に懸濁する、フレーバ組成物を製品上に塗布する、フレーバ組成物を製品に貼り付ける、製品をフレーバ組成物とともにカプセル封入する、フレーバ組成物を製品と混合する、各工程、及びそれらの任意の組合せから選択されるプロセスを含みうる。フレーバ組成物は、液体、エマルション、乾燥粉末、噴霧、ペースト、懸濁液及びそれらの任意の組合せでありうる。
【００４６】
ある特定の実施形態では、フレーバ組成物の化合物は、ペットフード製品中に存在する前駆体化合物から、例えば、殺菌、レトルト処理及び／又は押出成形などペットフード製品の加工の間に生成されうる。非限定的な例では、組成物は、ペットフード製品の加工の間に１つ以上のトリグリセリドから遊離した遊離脂肪酸でありうる。ある特定の実施形態では、遊離脂肪酸は、トリグリセリドの熱、酸、及び／又は酵素処理の間に生成されうる。ある特定の実施形態では、トリグリセリドは、ペットフードを生産するために加工される、肉（例えば、鶏肉、牛肉、豚肉、魚肉、及び／又は獣脂）及び／又は植物（例えば、植物油及びヒマワリ油などの油）の供給源中に存在する。
【００４７】
本明細書で用いられる場合、「ｐｐｍ」は、パーツ・パー・ミリオン（parts-par-million）を意味し、重量に関連するパラメータである。パート・パー・ミリオン（part-par-million）は、１グラム当たりのマイクログラムであり、つまり、１０ｐｐｍで存在する成分は、凝集混合物１グラムあたり、その特定の成分が１０マイクログラム存在することとなる。
【００４８】
本明細書で用いられる場合、「おいしさ」とは、動物がある特定の食品を食べる全般的な意欲のことを称しうる。ペットフード製品の「おいしさ」の増加は、動物が「健康量」のペットフードを食べることを確実にするための愛玩動物によるペットフードの享受及び受容の増加につながりうる。本明細書で用いられる、ペットフードの「健康量」という用語は、愛玩動物が、「Mars Petcare Essential Nutrient Standards」に記載されるように、微量栄養素、主要栄養素及びカロリーの観点から、その一般的な健康全般に寄与する摂取を維持又は達成可能にする量のことを指す。ある特定の実施形態では、「おいしさ」とは、１つの食品が別の食品に対して上回る、動物の相対的な嗜好性を意味しうる。例えば、動物が、２つ以上の食品のうちの１つについて嗜好性を示す場合、好ましい食品は、より「おいしく」、「増強されたおいしさ」を有する。ある特定の実施形態では、１つの食品を１つ以上の他の食品と比較した相対的なおいしさは、例えば食品の相対的な消費による、例えば、対照比較、自由選択的な比較等、又はおいしさを示す嗜好性の他の適切な評価において、決定されうる。おいしさは、「２ボウル試験」又は「対比試験（versus test）」と呼ばれる試験など、動物が両方の食品に平等にアクセス可能な標準的な試験プロトコルによって決定されうる。このような嗜好性は、動物の感覚から生じうるが、とりわけ、味、後味、匂い、口当たり及び／又は食感に関連しうる。
【００４９】
用語「ペットフード」又は「ペットフード製品」は、猫、犬、モルモット、ウサギ、鳥及び馬などの愛玩動物による消費を対象とした製品又は組成物を意味する。例えば、限定はしないが、愛玩動物は、飼い猫（Felis domesticus）などの「飼い（domestic）」猫でありうる。ある特定の実施形態では、愛玩動物は、例えば、イヌ（Canis lupus familiaris）などの「飼い」犬でありうる。「ペットフード」又は「ペットフード製品」としては、任意の食物、餌、スナック、栄養補助食品、液体、飲料、おやつ、玩具（チュアブル型及び／又は消費型の玩具）、及び食事代替品又は食事置換品が挙げられる。
【００５０】
本明細書で用いられる場合、「栄養的に完全な」とは、例えば、愛玩動物の栄養の分野における第一人者又は監督官庁に基づいた適切な量及び割合で、意図されるペットフード製品の受益者に必要とされる既知の栄養素のすべてを含むペットフード製品を指す。したがって、このような食物は、補助栄養供給源を追加せずに、生命を維持するための食物摂取の唯一の供給源としての役目を果たすことが可能である。
【００５１】
本明細書で用いられる場合「フレーバ組成物」とは、動物又はヒトにおける、天然又は合成の味物質、フレーバ剤、味覚プロファイル、フレーバプロファイル及び／又は食感プロファイルの味、匂い、フレーバ及び／又は食感を、増強、拡大、強化、低下、抑制、又は誘発することを含めて調節する、少なくとも１つの化合物又はそれらの生物学的に許容される塩を指す。ある特定の実施形態では、フレーバ組成物は、化合物又はそれらの生物学的に許容される塩の組合せを含む。ある特定の実施形態では、フレーバ組成物は、１つ以上の賦形剤を含む。
【００５２】
本明細書で用いられる場合、用語「調節する」又は「改変する」とは、受容体の特定の活性の量、質又は効果における増加又は低下、及び／又は、受容体の発現、活性又は機能における増加又は低下を指す。「調節因子」とは、本明細書で用いられる場合、例えば、アゴニスト、アンタゴニスト、並びに、断片、変異体及び模倣体を含むそれらの相同体について、インシリコ、インビトロ及び／又はインビボのアッセイを使用して特定される化合物の抑制又は活性化を指す。
【００５３】
「抑制剤」又は「アンタゴニスト」とは、本明細書で用いられる場合、対象とする受容体又は経路の生物活性及び／又は発現を、低減、低下、阻害、防止、活性化遅延、不活化、鈍感化、又は下方制御する、調節化合物を指す。
【００５４】
「誘発剤」、「活性剤」又は「アゴニスト」とは、本明細書で用いられる場合、対象とする受容体又は経路を、増加、誘発、刺激、解放、活性化、促進、活性化増強、敏感化、又は上方制御する、調節化合物を指す。
【００５５】
本明細書で用いられる場合、用語「ベクター」及び「発現ベクター」とは、適切な大きさの別のＤＮＡ配列断片が組み込まれうる、線形又は円形のいずれかのＤＮＡ分子を指す。このようなＤＮＡ断片は、該ＤＮＡ配列断片によってコードされる遺伝子の転写をもたらす追加的なセグメントを含みうる。追加的なセグメントとしては、プロモーター、転写終結因子、エンハンサー、内部リボソーム進入部位、非翻訳領域、ポリアデニル化シグナル、選択可能なマーカー、複製開始点などが挙げられうるが、それらに限られない。発現ベクターは、プラスミド、コスミド、ウイルスベクター、及び酵母人工染色体に由来することが多い。ベクターは、幾つかの供給源に由来するＤＮＡ配列を含む組み換え分子であることが多い。
【００５６】
用語「動作可能に連結された」とは、例えば発現ベクターなど、ＤＮＡ配列に適用される場合には、それらの意図された目的を達成するためにそれらが協働して機能するように、それらの配列が配置されることを示し、すなわち、プロモーター配列は、連結されたコード配列を終結シグナルまで進行する、転写の開始を可能にする。
【００５７】
用語「核酸分子」及び「ヌクレオチド配列」とは、本明細書で用いられる場合、各ヌクレオチド上の３’及び５’末端がホスホジエステル結合によって結合されている、ヌクレオチドの一本鎖又は二本鎖の共有結合した配列を指す。核酸分子は、デオキシリボヌクレオチド塩基又はリボヌクレオチド塩基を含んでよく、また、合成的にインビトロで製造、あるいは天然源から単離されうる。
【００５８】
本明細書において互いに置換可能に用いられる用語「ポリペプチド」、「ペプチド」、「アミノ酸配列」及び「タンパク質」とは、少なくとも２つのアミノ酸の結合から形成される分子を指す。１つのアミノ酸残基と次のアミノ酸残基との結合は、アミド結合であり、時折、ペプチド結合とも称される。ポリペプチドは、天然源からの単離、組み換え発現系での発現、化学合成又は酵素合成を含む、当技術分野で知られている適切な方法によって得られうる。用語は、１つ以上のアミノ酸残基が対応する天然のアミノ酸の人工的な化学的模倣体であるアミノ酸ポリマー、並びに、天然のアミノ酸ポリマー及び非天然のアミノ酸ポリマーに適用されうる。
【００５９】
用語「アミノ酸」とは、本明細書で用いられる場合、天然及び合成のアミノ酸、並びに、天然のアミノ酸に似た様式で機能するアミノ酸類似体及びアミノ酸模倣体のことを指す。天然のアミノ酸は、遺伝子コードによってコードされるアミノ酸、並びに、後に改変されるアミノ酸、例えば、ヒドロキシプロリン、γ−カルボキシグルタミン酸及びＯ−ホスホセリンなどである。アミノ酸類似体及び誘導体とは、天然のアミノ酸と同じ基本的化学構造を有する化合物、すなわち、例えば、ホモセリン、ノルロイシン、メチオニンスルホキシド及びメチオニンメチルスルホニウムなど、炭素が水素、カルボキシル基、アミノ基及びＲ基と結合している化合物のことを指しうる。このような類似体は、改変されたＲ基（例えばノルロイシン）又は改変されたペプチド骨格を有しうるが、天然のアミノ酸と同じ基本的化学構造を保持しうる。アミノ酸模倣体とは、アミノ酸の一般的な化学構造とは異なる構造を有するが、天然のアミノ酸に似た様式で機能する化合物を意味する。
【００６０】
本明細書において互いに置換可能に用いられる用語「単離された」又は「精製された」とは、それが生来的に関連していた成分から取り出された、核酸、ポリペプチド、又は他の生物学的部分を指す。用語「単離された」とは、分子が、自然界に見られる、又は、同一の種類の他の生物学的なマクロ分子の実質的不存在下において存在する、有機体全体から分離した、個々のポリペプチドのことを称しうる。ポリヌクレオチドに関して、用語「単離された」とは、通常は天然においてそれと関連する配列の全部または一部を持っていない核酸分子；又は、天然に存在するが、それらに関連する異種配列を有する配列；又は染色体から切り離された分子のことを称しうる。
【００６１】
本明細書で用いられる場合、用語「組み換え」は、核酸分子の説明に用いることができ、その起源又は操作の理由から、天然ではそれに関連するポリヌクレオチドに全部又は一部が関連していない、ゲノム、ＲＮＡ、ＤＮＡ、ｃＤＮＡ、ウイルス、半合成又は合成起源のポリヌクレオチドのことを指す。
【００６２】
用語「融合」とは、本明細書で用いられる場合、遺伝子的又は化学的方法によって異なるペプチド又はタンパク質セグメントの結合を指し、ペプチド又はタンパク質セグメントの結合末端は、互いに直接隣接してもよく、あるいは、アミノ酸残基又は他の結合基などのリンカー又はスペーサー部分によって分離されていてもよい。
【００６３】
２．脂肪酸受容体
本明細書に開示される主題は、本開示の方法に使用するための脂肪酸受容体を提供する。本開示の脂肪酸受容体としては、限定はしないが、ネコ、イヌ及びヒトの脂肪酸受容体などの哺乳動物の脂肪酸受容体が挙げられうる。
【００６４】
ある特定の非限定的な実施形態では、本開示の脂肪酸受容体は、その全体がここに参照することによって本明細書に取り込まれる、２０１４年１２月１８日公開の国際公開第２０１４／１９９１１４号に記載される核酸によってコードされる。ある特定の非限定的な実施形態では、本開示の脂肪酸受容体は、国際公開第２０１４／１９９１１４号に記載されるアミノ酸配列を含む。
【００６５】
ある特定の非限定的な実施形態では、脂肪酸受容体は、２０１４年１２月１８日公開の国際公開第２０１４／１９９１１４号に記載される、ネコ、イヌ又はヒトの脂肪酸受容体ヌクレオチド配列を含む。
【００６６】
ある特定の非限定的な実施形態では、脂肪酸受容体は、２０１４年１２月１８日公開の国際公開第２０１４／１９９１１４号に記載される、ネコ、イヌ又はヒトの脂肪酸受容体アミノ酸配列を含む。
【００６７】
ある特定の実施形態では、本明細書に開示される主題における使用のための脂肪酸受容体は、ネコ、イヌ又はヒトの脂肪酸受容体ヌクレオチド配列と少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％又は少なくとも９９％の同一性を有するヌクレオチド配列を含む受容体を含みうる。
【００６８】
ある特定の実施形態では、本明細書に開示される主題における使用のための脂肪酸受容体は、ネコ、イヌ又はヒトの脂肪酸受容体アミノ酸配列と少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％又は少なくとも９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む受容体を含みうる。
【００６９】
ある特定の実施形態では、本開示の主題は、単離された又は精製された脂肪酸受容体及び／又は変異体並びにそれらの断片の使用を提供する。本開示の主題はまた、配列変異体の使用も包含する。ある特定の実施形態では、変異は、脂肪酸受容体のヌクレオチド配列のコード領域及び非コード領域のいずれか又は両方に生じうる。変異体は、有機体における同一の遺伝子座によってコードされる実質的に相同なタンパク質、すなわち対立遺伝子多型を含みうる。変異体はまた、例えば、ネコなどの有機体における他の遺伝子座に由来するが、脂肪酸受容体に対して実質的な相同を有するタンパク質、すなわち相同体も包含する。変異体はまた、脂肪酸受容体に対して実質的に相同であるが別の有機体に由来するタンパク質、すなわち、相同分子種も含みうる。変異体はまた、化学合成によって生成された、脂肪酸受容体に対して実質的に相同なタンパク質も含む。変異体はまた、組み換え法によって生成された、脂肪酸受容体に対して実質的に相同なタンパク質も含む。
【００７０】
本開示の主題はまた、脂肪酸受容体又はそれらの断片を含む融合タンパク質も提供する。ある特定の実施形態では、本開示の融合タンパク質は、それによって脂肪酸受容体アゴニストの結合を検出可能にする、キャリア、標識、安定化配列又は機構などの官能基である、検出マーカーを含みうる。標識の非限定的な実施形態としては、ＦＬＡＧタグ、Ｈｉｓタグ、ＭＹＣタグ、マルトース結合タンパク質及び当技術分野で知られている他のものが挙げられる。本明細書に開示される主題はまた、このような融合タンパク質をコードする核酸、融合タンパク質をコードする核酸を含むベクター、及び、このような核酸又はベクターを含む宿主細胞も提供する。ある特定の実施形態では、融合は、脂肪酸受容体のアミノ末端（Ｎ−末端）又は脂肪酸受容体のカルボキシ末端（Ｃ−末端）で生じうる。
【００７１】
ある特定の実施形態では、本明細書に開示される脂肪酸受容体は、例えば、開示される主題の方法に用いられる場合に、配列のＮ−末端及び／又はＣ−末端に追加的なアミノ酸を含みうる。ある特定の実施形態では、追加的なアミノ酸は、スクリーニングの目的でポリペプチドを固定化し易くすることができる、又は、生物活性を検出し易くするために、上記のように、ポリペプチドを融合タンパク質の一部分とすることを可能にしうる。
【００７２】
３．脂肪酸受容体結合性化合物
本開示は、脂肪酸受容体、例えばＧＰＲ１２０受容体の活性を調節することができる少なくとも１つの化合物を含むフレーバ組成物に関する。ある特定の実施形態では、組成物は遊離脂肪酸を含む。本明細書に開示される化合物は、培養において細胞によって発現されたネコＧＰＲ１２０受容体（ｆＧＰＲ１２０）を活性化する化合物の能力が決定されたインビトロアッセイを通じて、及び／又は、ｆＧＰＲ１２０に結合する化合物の能力がインシリコにおいて決定されたインシリコアッセイを通じて、特定された。フレーバ組成物は、ペットフード製品のおいしさ、味又はフレーバを増強又は改変するのに用いられうる。フレーバ組成物は、例えば、本明細書及び、各々の全体がここに参照することによって本明細書に取り込まれる、２０１３年１０月３１日出願の国際出願第ＰＣＴ／ＥＰ２０１３／０７２７８８号、２０１３年１０月３１日出願の同第ＰＣＴ／ＥＰ２０１３／０７２７８９号、２０１３年１０月３１日出願の同第ＰＣＴ／ＥＰ２０１３／０７２７９０号、２０１３年１０月３１日出願の同第ＰＣＴ／ＥＰ２０１３／０７２７９４号に記載される、１つ以上の化合物及び／又は１つ以上のアミノ酸及び／又は１つ以上のヌクレオチド及び／又は１つ以上のフラノン；及び／又は、本明細書及び、その全体がここに参照することによって本明細書に取り込まれる、２０１５年１２月１０日出願の国際出願第ＰＣＴ／ＵＳ１５／６５０４６号に記載される１つ以上のヌクレオチド誘導体；及び／又は、本明細書及び、その全体がここに参照することによって本明細書に取り込まれる、２０１５年１２月１０日出願の国際出願第ＰＣＴ／ＵＳ１５／６５０３６号に記載される１つ以上の膜貫通化合物の組合せなどの化合物の組合せを含んでよく、このフレーバ組成物は、さまざまな供給系フォーマットにおいてペットフード製品組成物に添加することができる。
【００７３】
ある特定の実施形態では、少なくとも１つの脂肪酸受容体調節化合物は、以下の化合物から選択される：
（５Ｚ，８Ｚ，１１Ｚ，１４Ｚ）−イコサ−５，８，１１，１４−テトラエン酸（アラキドン酸としても知られる）；
（５Ｚ，８Ｚ）−イコサ−５，８−ジエン酸；
４−［４−（ヘプチルオキシ）フェニル］−４−オキソブタン酸；
（１１Ｚ）−オクタデカ−１１−エン酸（ｃｉｓ−バクセン酸としても知られる）；
（９Ｅ）−ヘキサデカ−９−エン酸（パルミテライジン酸としても知られる）；
トリデカ−１２−エン酸（１２−トリデセン酸としても知られる）；
Ｓ−ファルネシルチオ酢酸；
（１０Ｚ）−ペンタデカ−１０−エン酸（（１０Ｚ）−１０−ペンタデセン酸としても知られる）；
１０（Ｅ），１２（Ｚ）−共役リノール酸（（１０Ｚ，１２Ｚ）−１０，１２−オクタデカジエン酸としても知られる）；
（１０Ｚ，１３Ｚ）−ノナデカ−１０，１３−ジエン酸；
（９Ｚ，１１Ｅ）−オクタデカ−９，１１−ジエン酸；
ｃｉｓ−７−ヘキサデセン酸；
ドデカン酸（ラウリン酸としても知られる）；
（９Ｚ）−テトラデカ−９−エン酸（ミリストレイン酸としても知られる）；
（１１Ｚ，１４Ｚ，１７Ｚ）−イコサ−１１，１４，１７−トリエン酸（ジホモ−α−リノレン酸（２０：３（ｎ−３））としても知られる）；
（６Ｚ，９Ｚ，１２Ｚ）−オクタデカ−６，９，１２−トリエン酸（γ−リノレン酸としても知られる）；
（１１Ｚ，１４Ｚ）−イコサ−１１，１４−ジエン酸（ジホモリノール酸（２０：２（ｎ−６））としても知られる）；
（９Ｚ）−ヘキサデカ−９−エン酸（パルミトレート、（Ｚ）−パルミトレイン酸としても知られる）；
１２−メトキシドデカン酸；
（８Ｚ，１１Ｚ，１４Ｚ）−イコサ−８，１１，１４−トリエン酸；
（９Ｚ，１２Ｚ）−オクタデカ−９，１２−ジエン酸（リノール酸としても知られる）；
（１０Ｚ）−ヘプタデカ−１０−エン酸；
ピノレン酸；
（９Ｚ，１２Ｚ，１５Ｚ）−オクタデカ−９，１２，１５−トリエン酸（α−リノレン酸としても知られる）；
トリデカン酸（トリデシル酸としても知られる）；
テトラデカン酸（ミリスチン酸としても知られる）；
（９Ｚ）−オクタデカ−９−エン酸（オレイン酸としても知られる）；
ＧＷ  ９５０８（４−［［（３−フェノキシフェニル）メチル］アミノ］ベンゼンプロパン酸としても知られる）；
（５Ｚ，８Ｚ，１１Ｚ，１４Ｚ，１７Ｚ）−イコサ−５，８，１１，１４，１７−ペンタエン酸（エイコサペンタエン酸としても知られる）；
３−（４−（（４−フルオロ−４’−メチルビフェニル−２−イル）メトキシ）フェニル）プロパン酸（ＴＵＧ  ８９１及び４−［（４−フルオロ−４’−メチル［１，１’−ビフェニル］−２−イル）メトキシ］−ベンゼンプロパン酸としても知られる）；
（１０Ｅ）−ペンタデカ−１０−エン酸；
（９Ｅ）−テトラデカ−９−エン酸（ミリストレートとしても知られる）；
（６Ｚ，９Ｚ，１２Ｚ，１５Ｚ）−オクタデカ−６，９，１２，１５−テトラエン酸；
（５Ｚ，８Ｚ，１１Ｚ）−イコサ−５，８，１１−トリエン酸（ミード酸としても知られる）；及び
リン酸二水素ドデシル。
【００７４】
本開示はまた、本明細書に記載の化合物の塩、立体異性体、及び食べられる形態も提供する。
【００７５】
ある特定の実施形態では、化合物は、飽和脂肪酸である。
【００７６】
ある特定の実施形態では、化合物は、不飽和又は多価不飽和脂肪酸である。
【００７７】
ある特定の実施形態では、化合物は、構造Ｒ−Ｘを含み、式中、
Ｘは、カルボキシル基又は、限定はしないが、ホスフェート；ボロン酸；ホスホエステル；ホスホジエステル；ホスフィン酸；スルホンアミド；マロン酸；２−スルホ酢酸；スルホン酸；ヒドロキサム酸；テトラゾール；ヒドロキシ尿素；ホスホラミド、Ｃ（Ｏ）ＯＣＨ２ＣＨ（ＯＨ）ＯＰ（Ｏ）（ＯＲ１）（ＯＲ２）［式中、Ｒ１及びＲ２は、Ｈ、低級アルキル（Ｃ１〜Ｃ６）、及びＰｈから各々独立して選択される］；又は、当技術分野で知られているカルボキシレート基についての任意の他の生物学的等価置換など、カルボキシレートの生物学的等価置換であり；
Ｒは、約Ｃ２〜約Ｃ４０、又は約Ｃ４〜約Ｃ３５、又は約Ｃ６〜約Ｃ３０、又は約Ｃ８〜約Ｃ２８、又は約Ｃ１０〜約Ｃ２６、又は約Ｃ１２〜約Ｃ２４、又は約Ｃ１４〜約Ｃ２２、又は約Ｃ１６〜約Ｃ２０の炭素長を有する炭化水素鎖である。ある特定の実施形態では、炭化水素鎖は、約Ｃ１４〜約Ｃ２２の炭素長を有する。
【００７８】
ある特定の実施形態では、炭化水素鎖は、非置換であるか、又は、Ｈ、ＣＨ３、Ｃ１〜Ｃ２０、ＣＯＯＨ、ＳＯ３Ｈ、ＣＨＯ、Ｃ（Ｏ）Ｒ１、Ｃ＝ＣＲ１Ｒ２、Ｃ＝ＮＯＨ、ＯＰ（Ｏ）（ＯＲ１）（ＯＲ２）、ＯＲ１、ＳＲ１、ＣＮ、ＣＯＯＲ１、ＣＯＮＲ１Ｒ２、ＮＯ２、ＮＨＯＨ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、及びＮＲ１Ｒ２［式中、Ｒ１、Ｒ２は、Ｈ及び分岐又は非分岐の低級アルキル（例えば、Ｃ１〜Ｃ６）から各々独立して選択される］のうちの１つ以上で置換されうる。
【００７９】
ある特定の実施形態では、炭化水素鎖は、例えば、炭化水素鎖に沿って単結合と交互に位置する、０〜８つの二重結合を含む。ある特定の実施形態では、化合物は、（Ｅ）異性体である。ある特定の実施形態では、化合物は、（Ｚ）異性体である。ある特定の実施形態では、二重結合は、必要に応じて、水素、メチル、又は、例えば、約Ｃ１〜Ｃ１２の炭素長を有するアルキルなどの低級アルキル基のうちの１つ以上で置換されうる。
【００８０】
ある特定の実施形態では、炭化水素鎖中の炭素の１つ以上は、酸素、硫黄、窒素、ケトン、スルホン、スルホキシド、アミド、尿素、又はスルホンアミドで置換される。
【００８１】
ある特定の実施形態では、本開示の化合物は、炭化水素鎖に結合した１つ以上の負に荷電した基を含む。ある特定の実施形態では、負に荷電した基は、例えば、カルボキシル基、若しくは、限定はしないが、ホスフェート、ボロン酸、ホスホエステル、ホスホジエステル、ホスフィン酸、スルホンアミド、マロン酸、２−スルホ酢酸、スルホン酸、ヒドロキサム酸、テトラゾール、ヒドロキシ尿素、ホスホラミド、又は当技術分野における実施者に知られたカルボキシレートについての任意の他の生物学的等価置換など、カルボキシレートの生物学的等価置換を含む。
【００８２】
ある特定の実施形態では、化合物は脂肪酸を含む。ある特定の実施形態では、脂肪酸は、例えば、メチルエステル又はエチルエステルなどの脂肪酸エステルを含まない。
【００８３】
ある特定の実施形態では、化合物は、ＧＰＲ１２０の位置９９のアルギニン（すなわちＡｒｇ９９）と相互作用するカルボキシル基を含む。ある特定の実施形態では、カルボキシル基は、Ａｒｇ９９と塩橋を形成する。ある特定の実施形態では、化合物の炭化水素鎖は、ＧＰＲ１２０脂肪酸結合ドメインに存在する他のＧＰＲ１２０アミノ酸残基と疎水性の相互作用を形成する。
【００８４】
ある特定の実施形態では、本開示の化合物は、以下の構造を有する式Ｉの化合物を含み、
【００８５】
【化４】
2018506263.tif 000006
【００８６】
式中、Ｒは、例えば、約Ｃ１〜約Ｃ４０、又は約Ｃ４〜約Ｃ３５、又は約Ｃ６〜約Ｃ３０、又は約Ｃ８〜約Ｃ２８、又は約Ｃ１０〜約Ｃ２６、又は約Ｃ１２〜約Ｃ２４、又は約Ｃ１４〜約Ｃ２２、又は約Ｃ１６〜約Ｃ２０の炭素長を有する置換又は非置換の炭化水素鎖など、炭化水素鎖である。ある特定の実施形態では、炭化水素鎖は、約Ｃ１４〜約Ｃ２２の炭素長を有する。置換としては、限定はしないが、上述のものを挙げることができ、例えば、炭化水素鎖は、Ｈ、ＣＨ３、Ｃ１〜Ｃ２０、ＣＯＯＨ、ＳＯ３Ｈ、ＣＨＯ、Ｃ（Ｏ）Ｒ１、Ｃ＝ＣＲ１Ｒ２、Ｃ＝ＮＯＨ、ＯＰ（Ｏ）（ＯＲ１）（ＯＲ２）、ＯＲ１、ＳＲ１、ＣＮ、ＣＯＯＲ１、ＣＯＮＲ１Ｒ２、ＮＯ２、ＮＨＯＨ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、及びＮＲ１Ｒ２［式中、Ｒ１、Ｒ２は、Ｈ又は分岐又は非分岐の低級アルキル（例えば、Ｃ１〜Ｃ６）から各々独立して選択される］のうちの１つ以上で置換されうる。
【００８７】
ある特定の実施形態では、本開示の化合物は、以下の構造を有する式ＩＩの化合物を含み、
【００８８】
【化５】
2018506263.tif 000007
【００８９】
式中、
Ｘは、（Ｃ）Ｒ１Ｒ２、Ｏ、Ｓ、Ｃ（Ｏ）、又は化学結合であり；
Ｘ１は、（Ｃ）Ｒ１Ｒ２、Ｏ、Ｓ、又はＮ（Ｒ１）であり；
Ｙは、ＣＯＯＨ、ＳＯ３Ｈ、−ＯＰ（Ｏ）（ＯＨ）２、又はテトラゾールであり；
Ｗは、ハロゲン、ＣＯＯＨ、ＣＯＯＭｅ、ＣＮ、Ｎ（Ｒ１）（Ｒ２）、ＣＨＯ、ＣＯＮＲ１Ｒ２、アリール、ＯＨ、Ｈ、−Ｓ−アリール、−Ｏ−アリール、−Ｎ−アリール、ＣＦ３、ＯＣＨ３、ＣＨ３、ＮＯ２、又はＯＥｔであり；
Ｚ１及びＺ２は、ハロゲン、ＣＯＯＨ、ＣＯＯＭｅ、ＣＮ、Ｎ（Ｒ１）（Ｒ２）、ＣＨＯ、ＣＯＮＲ１Ｒ２、アリール、ＯＨ、Ｈ、−Ｓ−アリール、−Ｏ−アリール、−Ｎ−アリール、ＣＦ３、ＯＣＨ３、ＣＨ３、ＮＯ２、及びＯＥｔから各々独立して選択され；
Ｒ１及びＲ２は、Ｈ及び分岐又は非分岐のＣ１〜Ｃ６低級アルキルから各々独立して選択され；
ｎ１は、０〜４であり；
ｎ２は、０〜２であり；
ｎ３は、０〜４である。
【００９０】
ある特定の実施形態では、本開示の化合物は、以下の構造を有する式ＩＩＩの化合物を含み、
【００９１】
【化６】
2018506263.tif 000008
【００９２】
式中、
Ｘは、（Ｃ）Ｒ１Ｒ２、Ｏ、Ｓ、Ｃ（Ｏ）、又は化学結合であり；
Ｘ１は、（Ｃ）Ｒ１Ｒ２、Ｏ、Ｓ、又はＮ（Ｒ１）であり；
Ｙは、ＣＯＯＨ、ＳＯ３Ｈ、−ＯＰ（Ｏ）（ＯＨ）２、又はテトラゾールであり；
Ｗは、ハロゲン、ＣＯＯＨ、ＣＯＯＭｅ、ＣＮ、Ｎ（Ｒ１）（Ｒ２）、ＣＨＯ、ＣＯＮＲ１Ｒ２、アリール、ＯＨ、Ｈ、−Ｓ−アリール、−Ｏ−アリール、−Ｎ−アリール、ＣＦ３、ＯＣＨ３、ＣＨ３、ＮＯ２、又はＯＥｔであり；
Ｒは、ＣＨ３、又は（Ｒ４）（Ｒ５）Ｘ２であり；
Ｒ１及びＲ２は、Ｈ及び分岐又は非分岐のＣ１〜Ｃ６低級アルキルから各々独立して選択され；
Ｒ４及びＲ５は、Ｈ、アリール、及び分岐又は非分岐の低級アルキル（Ｃ１〜Ｃ１０）から各々独立して選択され；
ｎ１は、０〜４であり；
ｎ２は、０〜２であり；
ｎ３は、１〜１２（分岐又は非分岐のＣ２〜Ｃ２０）であり；
Ｘ２は、Ｃ又はＮである。
【００９３】
ある特定の実施形態では、本開示の脂肪酸受容体調節因子は、例えば、限定はしないが、酢酸塩又はギ酸塩などの脂肪酸受容体調節因子の塩を含む。ある特定の実施形態では、脂肪酸受容体調節因子の塩は、イオン結合を介してカチオン（＋）（例えば、限定はしないが、Ａｌ３＋、Ｃａ２＋、Ｎａ＋、Ｋ＋、Ｃｕ２＋、Ｈ＋、Ｆｅ３＋、Ｍｇ２＋、ＮＨ４＋及びＨ３Ｏ＋）と結合する、アニオン（−）（例えば、限定はしないが、Ｃｌ−、Ｏ２−、ＣＯ３２−、ＨＣＯ３−、ＯＨ−、ＮＯ３−、ＰＯ４３−、ＳＯ４２−、ＣＨ３ＣＯＯ−、ＨＣＯＯ−及びＣ２Ｏ４２−）を含む。他の実施形態では、脂肪酸受容体アゴニストの塩は、イオン結合を介してアニオン（−）と結合するカチオン（＋）を含む。ある特定の実施形態では、本開示の化合物は、化合物のナトリウム塩又はカリウム塩を含む。
【００９４】
ある特定の実施形態では、本願の脂肪酸受容体調節因子は、例えば、ネコ又はイヌの脂肪酸受容体などの脂肪酸受容体（ＧＰＲ１２０受容体など）のインシリコモデリングを通して特定され、本願の脂肪酸受容体調節化合物は、脂肪酸受容体の結合部位内に適合する構造を含む。ある特定の実施形態では、インシリコでの方法は、本セクション及び本明細書の実施例のセクションに記載されるインシリコの方法を含む。
【００９５】
ある特定の実施形態では、本願の脂肪酸受容体調節因子は、インビトロにおける方法を通して特定され、脂肪酸受容体アゴニスト化合物は、インビトロで細胞によって発現される本明細書に開示される脂肪酸受容体を活性化及び／又は調節する。ある特定の実施形態では、インビトロでの方法は、本セクション及び本明細書の実施例のセクションに記載されるインビトロの方法を含む。
【００９６】
ある特定の実施形態では、化合物は、他のおいしさ増強剤なしに、フレーバ組成物中に含まれる。ある特定の実施形態では、化合物は、例えば、異なる受容体（例えば、旨味受容体）上の異なる活性部位を活性化する本明細書に記載されるヌクレオチド、ヌクレオチド誘導体、アミノ酸、フラノン及び膜貫通化合物などの１つ以上の追加的なおいしさ増強剤とともに、１つ以上のフレーバ組成物中に含まれる。
【００９７】
４．脂肪酸受容体調節化合物を特定する方法
本開示はさらに、脂肪酸受容体の活性及び／又は発現を調節する化合物を特定する方法を提供する。例えば及び限定はしないが、調節因子は、アゴニスト又はアンタゴニストでありうる。本明細書に開示される主題は、上記開示される脂肪酸受容体の活性及び／又は発現を調節する化合物を特定するためのインシリコ及びインビトロにおける方法を提供する。
【００９８】
４．１  インシリコにおける方法
本明細書に開示される主題はさらに、脂肪酸受容体と相互作用する可能性のありうる化合物、及び／又は、例えば、ネコ、イヌ又はヒトの脂肪酸受容体などの脂肪酸受容体の活性及び／又は発現を調節することができる化合物を特定するインシリコにおける方法を提供する。
【００９９】
ある特定の実施形態では、本方法は、脂肪酸受容体の三次元の構造（３Ｄ）を予測する工程、及び、推定上の脂肪酸受容体調節化合物（すなわち試験化合物）を用いて予測された３Ｄ構造をスクリーニングする工程を含みうる。本方法はさらに、推定上の化合物と受容体のアミノ酸との相互作用の可能性を解析することによって、推定上の化合物が、受容体の結合部位と相互作用するかどうかを予測する工程をさらに含みうる。本方法はさらに、化合物の３Ｄ構造が受容体の３Ｄ構造の結合部位内に適合するかどうかを決定することによって、脂肪酸受容体に結合することができる試験化合物、及び／又は、脂肪酸受容体の生物活性を調節することができる試験化合物を特定する工程を含みうる。
【０１００】
ある特定の実施形態では、本開示の方法に使用するための脂肪酸受容体は、２０１４年１２月１８日公開の国際公開第２０１４／１９９１１４号に記載されるアミノ酸又はヌクレオチド配列、若しくはそれらの断片又は変異体を含みうる。
【０１０１】
本開示の方法を使用して試験されうる化合物（例えば、脂肪酸受容体調節因子の可能性のあるもの）の非限定的な例としては、当技術分野で知られているペプチド、塩、アミノ酸及び脂肪酸化合物など、任意の小化合物又は任意の生物学的実体（entity）が挙げられる。ある特定の実施形態では、試験化合物は、小化学分子（small chemical molucule）でありうる。
【０１０２】
ある特定の実施形態では、脂肪酸受容体の構造モデルは、相同性モデリングのテンプレートとして、他のＧＰＣＲの結晶構造を使用して構築されうる。例えば及び限定はしないが、構造モデルは、グループＡのＧＰＣＲの結晶構造を使用して生成されうる。ある特定の実施形態では、脂肪酸受容体の構造モデルは、ＧＰＣＲの既知の結晶構造、又はＧＰＣＲの既知の結晶構造の組合せをベースとしうる（例えば、各々の全体がここに参照することによって本明細書に取り込まれる、Rasmussen, S.G. et al., (2011) Nature 477:549-555；Wu, B. et al., (2010) Science 330:1066-1071；及び、Wu, H. et al., (2012) Nature 485:327-332を参照）。例えば及び限定はしないが、脂肪酸受容体の膜貫通ドメインの構造モデルは、タンパク質データベース（ＰＤＢ）ＩＤ番号４ＤＪＨ、３ＯＥ６、及び／又は３ＳＮ６を有する結晶構造に基づいて生成されうる。図４〜６、８及び９は、本開示のインシリコの方法に使用されうる脂肪酸受容体の構造モデルを示している。当技術分野で知られている任意の適切なモデリングソフトウェアが使用されうる。ある特定の実施形態では、Ｍｏｄｅｌｌｅｒソフトウェアパッケージ（Ａｃｃｅｌｒｙｓ社、ＢＩＯＶＩＡ、Ｄａｓｓａｕｌｔ  Ｓｙｓｔｅｍｅｓ）は、三次元タンパク質構造の生成に使用されうる。
【０１０３】
ある特定の実施形態では、脂肪酸受容体に結合する化合物を特定するインシリコにおける方法は、試験化合物が、本明細書に記載される脂肪酸受容体相互作用ドメインの１つ以上のアミノ酸と相互作用するかどうかを決定する工程を含む。
【０１０４】
本開示のインシリコの方法によって特定される化合物は、本明細書に開示されるインビトロの方法を使用してさらに試験されうる。
【０１０５】
４．２  脂肪酸受容体の結合部位
本願は、例えば、ネコ、イヌ又はヒトの脂肪酸受容体などの脂肪酸受容体の活性を調節する化合物のスクリーニング方法を提供し、該化合物は、脂肪酸受容体の１つ以上のアミノ酸と相互作用する。ある特定の実施形態では、脂肪酸受容体の結合部位は、受容体の、例えば、７−膜貫通（７ＴＭ）ドメインなどの膜貫通ドメイン内にアミノ酸を含み、本明細書に記載されるインシリコモデリングを使用して、受容体の相互作用マップを生成することによって特定されうる。１つの非限定的な例では、膜貫通相互作用マップにおけるアミノ酸の存在は、残基がリガンド結合環境の近くにあり、リガンドと相互作用することを意味する。
【０１０６】
ある特定の実施形態では、化合物と、本明細書に記載される脂肪酸受容体の１つ以上のアミノ酸との相互作用は、水素結合、共有結合、非共有結合、塩橋、物理的相互作用、及びそれらの組合せのうちの１つ以上を含みうる。相互作用はまた、当技術分野で知られているリガンド受容体相互作用の任意の相互作用特性であってもよい。このような相互作用は、例えば、部位特異的突然変異導入、ｘ線結晶構造解析、ｘ線又は他の分光学的方法、核磁気共鳴（ＮＭＲ）、架橋評価、質量分析又は電気泳動、クライオ電子顕微鏡、既知のアゴニストに基づいた置換分析、構造決定及びそれらの組合せによって決定されうる。ある特定の実施形態では、相互作用は、例えば、分子ドッキング、分子モデリング、分子シミュレーション、又は当業者に既知の他の手法を使用して、例えば、化合物を本明細書に記載されるネコ又はイヌの脂肪酸受容体結合ポケット内へドッキングするなどの理論的手法によって、インシリコにおいて決定される。
【０１０７】
ある特定の実施形態では、相互作用は水素結合相互作用である。
【０１０８】
ある特定の実施形態では、相互作用は疎水性相互作用である。
【０１０９】
ある特定の実施形態では、脂肪酸受容体の活性を調節する本明細書に記載される方法に従って特定される化合物は、例えば、７つの膜貫通ドメイン（７ＴＭ）など、脂肪酸受容体の膜貫通ドメインにおける１つ以上のアミノ酸と相互作用する。ある特定の実施形態では、化合物と相互作用するアミノ酸は、例えば、ネコ脂肪酸受容体を含む脂肪酸受容体など、脂肪酸受容体のヘリックス２のＰＨＥ８８、ＶＡＬ９５、ＶＡＬ９８及びＡＲＧ９９；ヘリックス３のＰＨＥ１１５、ＭＥＴ１１８、ＳＥＲ１１９、ＧＬＹ１２２、ＳＥＲ１２３；ヘリックス５のＴＲＰ２０７、ＰＨＥ２１１、ＶＡＬ２１２、ＡＳＮ２１５；ヘリックス６のＴＲＰ２７７、ＩＬＥ２８０、ＩＬＥ２８１、ＩＬＥ２８４；及びヘリックス７のＴＲＰ２９９、ＰＨＥ３０３、ＰＨＥ３０４、ＶＡＬ３０７、ＴＨＲ３１０、ＰＨＥ３１１のアミノ酸、あるいは、イヌの脂肪酸受容体又はヒトの脂肪酸受容体の対応するアミノ酸のうち、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３又はそれ以上を含む。
【０１１０】
ある特定の実施形態では、ネコ脂肪酸受容体の活性を調節する組成物を特定する方法は、（ａ）試験薬を、例えば配列番号：１のアミノ酸配列を含むネコ脂肪酸受容体などの脂肪酸受容体と接触させる工程、（ｂ）試験薬と、ヘリックス２のＰＨＥ８８、ＶＡＬ９５、ＶＡＬ９８及びＡＲＧ９９；ヘリックス３のＰＨＥ１１５、ＭＥＴ１１８、ＳＥＲ１１９、ＧＬＹ１２２、ＳＥＲ１２３；ヘリックス５のＴＲＰ２０７、ＰＨＥ２１１、ＶＡＬ２１２、ＡＳＮ２１５；ヘリックス６のＴＲＰ２７７、ＩＬＥ２８０、ＩＬＥ２８１、ＩＬＥ２８４；及びヘリックス７のＴＲＰ２９９、ＰＨＥ３０３、ＰＨＥ３０４、ＶＡＬ３０７、ＴＨＲ３１０、ＰＨＥ３１１；並びにそれらの組合せからなる群より選択される脂肪酸受容体の相互作用部位における１つ以上のアミノ酸との相互作用を検出する工程、及び、（ｃ）  １つ以上のアミノ酸と相互作用する試験薬を組成物として選択する工程を含む。
【０１１１】
ある特定の実施形態では、本方法は、工程（ａ）の後に脂肪酸受容体の活性を決定し、脂肪酸受容体の活性を増加させる試験薬を組成物として選択する工程をさらに含む。
【０１１２】
ある特定の実施形態では、本方法は、脂肪酸受容体を、例えばアゴニストなどのリガンドと接触させ、アゴニストが脂肪酸受容体を活性化する能力を増加又は増強する試験薬を組成物として選択する工程をさらに含む。
【０１１３】
４．３  インビトロにおける方法
本明細書に開示される主題はさらに、脂肪酸受容体の活性及び／又は発現を調節可能な化合物を特定するためのインビトロにおける方法も提供する。
【０１１４】
本明細書に開示される方法に使用するための脂肪酸受容体は、単離又は組み換え脂肪酸受容体、又は、本明細書に開示される脂肪酸受容体を発現する細胞を含みうる。ある特定の実施形態では、本開示の方法に使用するための脂肪酸受容体は、２０１４年１２月１８日公開の国際公開第２０１４／１９９１１４号に記載されるアミノ酸又はヌクレオチド配列、又はそれらの断片又は変異体を有しうる。
【０１１５】
ある特定の実施形態では、脂肪酸受容体の活性及び／又は発現を調節する化合物を特定する方法は、試験化合物の不存在下及び／又は存在下で脂肪酸受容体の生物活性を測定する工程を含む。ある特定の実施形態では、本方法は、可変濃度の試験化合物の存在下で脂肪酸受容体の生物活性を測定する工程を含みうる。本方法は、試験化合物の不存在下での脂肪酸受容体の活性及び／又は発現と比較して、脂肪酸受容体の活性及び／又は発現の調節を結果的に生じる試験化合物を特定する工程をさらに含みうる。
【０１１６】
ある特定の実施形態では、本明細書に記載される方法に従って特定される化合物は、化合物が存在しない場合の脂肪酸受容体の生物活性と比較して、少なくとも約５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、１００％、又はそれ以上、脂肪酸受容体の生物活性を増加させる。ある特定の実施形態では、本明細書に記載される方法に従って特定される化合物は、化合物が存在しない場合の脂肪酸受容体の生物活性と比較して、少なくとも約３０％、脂肪酸受容体の生物活性を増加させる。
【０１１７】
ある特定の実施形態では、本方法は、２つ以上、３つ以上又は４つ以上の試験化合物を組み合わせて分析する工程をさらに含みうる。ある特定の実施形態では、２つ以上、３つ以上又は４つ以上の試験化合物は、例えばアミノ酸と小化合物など、異なる分類の化合物に由来しうる。例えば及び限定はしないが、本方法は、１つ以上のアミノ酸試験化合物の存在下での脂肪酸受容体の生物活性及び／又は発現における１つ以上の小化学試験化合物の影響を分析する工程を含みうる。ある特定の実施形態では、脂肪酸受容体の活性及び／又は発現における化合物の影響を特定するための方法は、１つ以上のヌクレオチド又はヌクレオチド誘導体試験化合物の存在下での脂肪酸受容体の生物活性及び／又は発現における試験化合物の影響を分析する工程を含む。
【０１１８】
ある特定の実施形態では、脂肪酸受容体の活性及び／又は発現を調節する化合物を特定する方法は、化合物が、例えばアゴニスト又はアンタゴニストとして、受容体を直接的に調節するかどうかを決定する工程を含む。ある特定の実施形態では、本方法は、化合物が、例えば、受容体活性の活性化又は抑制における他の化合物の影響を増強又は低減することにより、受容体の活性を（例えば、アロステリック調節因子として）間接的に調節するかどうかを決定する工程を含む。
【０１１９】
ある特定の実施形態では、脂肪酸受容体の活性及び／又は発現を調節する化合物を特定する方法は、細胞株において脂肪酸受容体を発現する工程、及び、試験化合物の存在及び／又は不存在下における受容体の生物活性を測定する工程を含む。本方法は、試験化合物の不存在下での受容体の活性と比較して、試験化合物の存在下での受容体の活性化に相違があるかどうかを決定することによる、受容体の活性を調節する試験化合物を特定する工程をさらに含みうる。ある特定の実施形態では、推定上の脂肪酸受容体調節因子の選択性は、他のＧＰＣＲ又は味覚受容体、例えば、旨味、ＣａＳＲ、Ｔ１Ｒ等の受容体における影響を比較することによって評価されうる。
【０１２０】
本開示の方法における受容体の活性化は、標識化合物及び／又は標識剤の使用を通して検出されうる。ある特定の実施形態では、脂肪酸受容体の活性は、限定はしないが、ｃＡＭＰ、ｃＧＭＰ、ＩＰ３、ＤＡＧ又はカルシウムなどの二次伝達物質の検出によって決定されうる。ある特定の実施形態では、脂肪酸受容体の活性は、細胞内カルシウムレベルの検出によって決定されうる。モニタリングは、カルシウム感受性の蛍光染料によってなど、発光又は蛍光検出によるものでありうる。ある特定の実施形態では、細胞内カルシウムレベルは、例えば、カルシウム４などの蛍光カルシウムインジケーター等の細胞染色を使用して決定されうる。ある特定の実施形態では、細胞内カルシウムレベルは、例えば、カルモジュリンなどのカルシウム結合性タンパク質に結合するカルシウムレベルを測定することによって決定されうる。代替的に及び／又は加えて、脂肪酸受容体の活性は、脂肪酸受容体の１つ以上の下流のタンパク質標的のリン酸化、転写レベル及び／又はタンパク質レベルの検出によって決定されうる。
【０１２１】
本開示の方法に使用される細胞株は、脂肪酸受容体を発現可能な任意の細胞型を含みうる。本開示の方法に使用可能な細胞の非限定的な例としては、ＨｅＬａ細胞、チャイニーズハムスター卵巣細胞（ＣＨＯ細胞）、アフリカミドリザルの腎臓細胞（ＣＯＳ細胞）、アフリカツメガエル卵細胞、ＨＥＫ−２９３細胞及びマウス３Ｔ３線維芽細胞が挙げられる。ある特定の実施形態では、本方法は、ＣＨＯ−Ｋ１細胞において脂肪酸受容体を発現する工程を含みうる。ある特定の実施形態では、本方法は、ＨＥＫ−２９３細胞において脂肪酸受容体を発現する工程を含みうる。ある特定の実施形態では、本方法は、ＣＯＳ細胞において脂肪酸受容体を発現する工程を含みうる。ある特定の実施形態では、細胞は、脂肪酸受容体を構成的に発現する。別の実施形態では、細胞による脂肪酸受容体の発現は誘発性である。
【０１２２】
ある特定の実施形態では、細胞は、カルシウム結合型発光タンパク質を発現し、該発光タンパク質は、カルシウムに結合すると発光する。ある特定の実施形態では、カルシウム結合性発光タンパク質は、タンパク質クライティンを含む。ある特定の実施形態では、クライティンは組み換えクライティンである。ある特定の実施形態では、クライティンは、例えば、クリティア・グレガリア（Clytia gregarium）から単離されたクライティンなど、単離されたクライティンを含む。ある特定の実施形態では、カルシウム結合型発光タンパク質は、例えば、オワンクラゲ（Aequorea victoria）から単離されたイクオリンなど、組み換えイクオリン又は単離されたイクオリン等のタンパク質イクオリンを含む。ある特定の実施形態では、カルシウム結合型発光タンパク質は、例えば、オベリア・ロンギシマ（Obelia longissima）から単離されたオベリンなど、組み換えオベリン又は単離されたオベリン等のタンパク質オベリンを含む。
【０１２３】
ある特定の実施形態では、細胞における脂肪酸受容体の発現は、脂肪酸受容体をコードする核酸を細胞内に導入することによって行われうる。例えば及び限定はしないが、２０１４年１２月１８日公開の国際公開第２０１４／１９９１１４号に記載されるヌクレオチド配列を有する核酸又はそれらの断片が細胞内に導入されうる。ある特定の実施形態では、細胞内への核酸の導入は、形質移入、電気穿孔、微量注射、核酸配列を含むウイルスベクター又はバクテリオファージベクターによる感染、細胞融合、染色体介在性の遺伝子移入、微小核細胞介在性の遺伝子移入、スフェロプラスト融合等が挙げられるがこれらに限られない、当技術分野で知られている任意の方法によって行うことができる。外来遺伝子を細胞内に導入するための多くの技術が当技術分野で知られており（例えば、それらの開示全体がここに参照することによって本明細書に取り込まれる、Loeffler and Behr, Meth. Enzymol. 217:599-618(1993);Cohen et al., Meth. Enzymol. 217:618-644(1993)；Cline, Pharmac. Ther. 29:69-92(1985)を参照）、開示される主題に従って使用されうる。ある特定の実施形態では、技法は、核酸が細胞によって発現可能であり、かつ、その子孫によって遺伝かつ発現可能になるように、細胞への核酸の安定な移入をもたらすことができる。ある特定の実施形態では、技法は、核酸が細胞によって発現可能であり、細胞の子孫の後続の世代において遺伝可能性及び発現可能性が低下するように、細胞への核酸の一過性移入をもたらすことができる。
【０１２４】
ある特定の実施形態では、本方法は、脂肪酸受容体に結合する化合物を特定する工程を含みうる。本方法は、脂肪酸受容体を試験化合物と接触させる工程、及び、化合物と脂肪酸受容体との結合を測定する工程を含みうる。例えば及び限定はしないが、本方法は、無細胞系において、単離された又は精製された脂肪酸受容体を提供する工程、及び、無細胞系において、受容体を試験化合物と接触させて、試験化合物が脂肪酸受容体に結合するかどうかを決定する工程を含みうる。ある特定の実施形態では、本方法は、細胞の表面に発現された脂肪酸受容体を試験化合物と接触させる工程、及び、脂肪酸受容体への試験化合物の結合を検出する工程を含みうる。結合は、例えば、標識された試験化合物を使用することによって、直接的に測定されてもよく、あるいは、間接的に測定されてもよい。ある特定の実施形態では、検出は、脂肪酸受容体への化合物の結合によって生じる細胞の生理学的事象、例えば、細胞内カルシウムレベルの増加などを検出する工程を含む。例えば及び限定はしないが、検出は、カルシウム感受性の蛍光染料などの蛍光検出によって、発光の検出によって、又は当技術分野で知られている任意の他の検出方法によって行われうる。
【０１２５】
ある特定の非限定的な実施形態では、インビトロのアッセイは、細胞由来の（native to）脂肪酸受容体を発現する細胞を含む。天然（native）の脂肪酸受容体を発現するこのような細胞の例としては、例えば、犬（イヌ）及び／又は猫（ネコ）の味細胞（例えば、一次味覚受容体細胞）が挙げられるが、これらに限られない。ある特定の実施形態では、脂肪酸受容体を発現する犬及び／又は猫の味細胞は、犬及び／又は猫から単離され、インビトロで培養される。ある特定の実施形態では、味覚受容体細胞は、例えば、犬及び／又は猫から単離された細胞が培養において増殖可能になるように不死化されうる。
【０１２６】
ある特定の実施形態では、細胞における脂肪酸受容体の発現は、細胞のゲノム内に脂肪酸受容体遺伝子を導入するため、又は、細胞由来の脂肪酸受容体遺伝子を編集又は改変するために、例えば、ＣＲＩＳＰＲ遺伝子編集システムを通してなど、遺伝子編集を通して誘発されうる。
【０１２７】
ある特定の実施形態では、脂肪酸受容体に結合する化合物を特定するインビトロにおける方法は、試験化合物が、本明細書に記載される脂肪酸受容体相互作用ドメインの１つ以上のアミノ酸と相互作用するかどうかを決定する工程を含む。
【０１２８】
ある特定の実施形態では、脂肪酸受容体の調節因子として特定される化合物は、それらの調節活性を確認又は定量化するために、インビボアッセイを含むがこれに限られない、他の分析的方法においてさらに試験されうる。
【０１２９】
ある特定の実施形態では、本明細書に記載される方法は、脂肪酸受容体調節因子が、例えば、脂肪酸受容体アゴニストなど、脂肪酸の味を増強する化合物であるかどうかを決定する工程を含みうる。
【０１３０】
ある特定の実施形態では、脂肪酸受容体調節因子を特定する方法は、脂肪酸受容体アゴニストに対する試験化合物の影響を比較する工程を含みうる。例えば、脂肪酸受容体アゴニストと接触した場合の受容体の活性と比較して、受容体の活性を増加させる試験化合物は、脂肪酸受容体調節化合物として（例えば、アゴニストとして）選択されうる。
【０１３１】
ある特定の実施形態では、脂肪酸受容体調節因子を特定する方法は、受容体がアゴニストと接触した場合に試験化合物が受容体の活性を調節するかどうか、あるいは、試験化合物が、陽性アロステリック調節因子（ＰＡＭ）の活性を調節可能かどうかを決定する工程を含みうる。受容体における上記アゴニスト又はＰＡＭの影響を増加又は低下させる試験化合物は、脂肪酸受容体調節化合物として（例えば、アロステリック調節因子として）選択されうる。
【０１３２】
５．フレーバ組成物
ある特定の実施形態では、本開示のフレーバ組成物は、キャットフード製品などのペットフード製品のおいしさを増加させるために用いられうる。フレーバ組成物は、化合物の組合せを含んでよく、また、さまざまな供給系においてペットフード製品に添加されうる。
【０１３３】
ある特定の実施形態では、本開示は、ａ）少なくとも１つのペットフード製品又はそれらの前駆体を提供する工程、及びｂ）ペットフード製品又はそれらの前駆体を、例えば、１つ以上の化合物又はそれらの食物的に許容される塩を含む、少なくとも脂肪酸の味を調節する量の少なくとも１つのフレーバ組成物と混合し、それによって増強されたペットフード製品を形成する工程を含む、脂肪酸の味（例えば、ｆＧＰＲ１２０を含む、ＧＰＲ１２０などの脂肪酸受容体の活性）及び／又はペットフード製品のおいしさを調節する方法に関する。
【０１３４】
ある特定の実施形態では、本開示のフレーバ組成物は、ＧＰＲ１２０受容体の活性を増強することができる、及び／又は、例えば、ウエットペットフード製品、ドライペットフード製品、湿性ペットフード製品、ペット用飲料製品及び／又はスナックペットフード製品を含むペットフード製品など、ペットフード製品のおいしさを増強することができる。
【０１３５】
ある特定の実施形態では、本開示の１つ以上のフレーバ組成物は、ペットフード製品の味又は味覚プロファイルを改変、増強、又は他の方法で変更するのに有効な量で、ペットフード製品に添加されうる。改変には、例えば猫及び／又は犬などの動物によって決定して、又は、配合試験の事例では、当技術分野で知られている手法による、例えば猫及び／又は犬などの動物の味覚テスターのパネルによって決定して、例えば、ペットフード製品のおいしさを増加又は増強することなどが含まれうる。
【０１３６】
本開示のある特定の実施形態では、例えば脂肪酸の味などの所望の味を有するペットフード製品を生産するために、例えば化合物を含む、本明細書に記載される少なくとも１つのフレーバ組成物を十分な量で含むペットフード製品が生産されうる。
【０１３７】
本開示のある特定の実施形態では、少なくとも１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、６つ又はそれ以上の化合物を含むフレーバ組成物を十分な量で含むペットフード製品が生産されうる。
【０１３８】
ある特定の実施形態では、本開示の１つ以上のフレーバ組成物のＧＰＲ１２０調節量は、例えば、猫及び／又は犬などの動物によって決定して、又は、配合試験の事例では、当技術分野で知られている手法による動物の味覚テスターのパネルによって決定して、ペットフード製品が、フレーバ組成物なしで調製されたペットフード製品と比較して、おいしさが増加するようにペットフード製品に添加されうる。
【０１３９】
本開示のある特定の実施形態では、フレーバ組成物は、ペットフード製品のおいしさを増加、増強、及び／又は改変するのに有効な量でペットフード製品に加えられる。
【０１４０】
ペットフード製品のおいしさを調節及び／又は改善するためにペットフード製品に混和されるフレーバ組成物の濃度は、例えば、ペットフード製品の特定の種類、どの脂肪酸化合物がペットフード製品中に既に存在するか、及びその濃度、並びに、このような脂肪酸化合物における特定のフレーバ組成物のエンハンサー効果などの変数に応じて、変化しうる。
【０１４１】
幅広い範囲の濃度のフレーバ組成物が、このようなおいしさの改変をもたらすために用いられうる。本願のある特定の実施形態では、フレーバ組成物はペットフード製品と混和され、該フレーバ組成物は、約０．０１ｐｐｍ〜約１，０００ｐｐｍの量で存在する。例えば、限定はしないが、フレーバ組成物は、約０．０１ｐｐｍ〜約７５０ｐｐｍ、約０．０１ｐｐｍ〜約５００ｐｐｍ、約０．０１ｐｐｍ〜約２５０ｐｐｍ、約０．０１ｐｐｍ〜約１５０ｐｐｍ、約０．０１ｐｐｍ〜約１００ｐｐｍ、約０．０１ｐｐｍ〜約７５ｐｐｍ、約０．０１ｐｐｍ〜約５０ｐｐｍ、約０．０１ｐｐｍ〜約２５ｐｐｍ、約０．０１ｐｐｍ〜約１５ｐｐｍ、約０．０１ｐｐｍ〜約１０ｐｐｍ、約０．０１ｐｐｍ〜約５ｐｐｍ、約０．０１ｐｐｍ〜約４ｐｐｍ、約０．０１ｐｐｍ〜約３ｐｐｍ、約０．０１ｐｐｍ〜約２ｐｐｍ、約０．０１ｐｐｍ〜約１ｐｐｍ、約０．０１ｐｐｍ〜約１，０００ｐｐｍ、約０．１ｐｐｍ〜１，０００ｐｐｍ、約１ｐｐｍ〜１，０００ｐｐｍ、約２ｐｐｍ〜約１，０００ｐｐｍ、約３ｐｐｍ〜約１，０００ｐｐｍ、約４ｐｐｍ〜約１，０００ｐｐｍ、約５ｐｐｍ〜約１，０００ｐｐｍ、約１０ｐｐｍ〜約１，０００ｐｐｍ、約１５ｐｐｍ〜約１，０００ｐｐｍ、約２５ｐｐｍ〜約１，０００ｐｐｍ、約５０ｐｐｍ〜約１，０００ｐｐｍ、約７５ｐｐｍ〜約１，０００ｐｐｍ、約１００ｐｐｍ〜約１，０００ｐｐｍ、約１５０ｐｐｍ〜約１，０００ｐｐｍ、約２５０ｐｐｍ〜約１，０００ｐｐｍ、約２５０ｐｐｍ〜約１，０００ｐｐｍ、約５００ｐｐｍ〜約１，０００ｐｐｍ又は約７５０ｐｐｍ〜約１，０００ｐｐｍ、及びそれらの間の値の量で存在する。
【０１４２】
本願のある特定の実施形態では、フレーバ組成物はペットフード製品と混和され、該フレーバ組成物は、約０．０１ｐｐｍ〜約５００ｐｐｍ、又は約０．１ｐｐｍ〜約５００ｐｐｍ、又は約１ｐｐｍ〜約５００ｐｐｍ、及びそれらの間の値の量で存在する。
【０１４３】
本願のある特定の実施形態では、フレーバ組成物はペットフード製品と混和され、該フレーバ組成物は、約０．０１ｐｐｍ〜約１００ｐｐｍ、又は約０．１ｐｐｍ〜約１００ｐｐｍ、又は約１ｐｐｍ〜約１００ｐｐｍの量、及びそれらの間の値で存在する。
【０１４４】
ある特定の実施形態では、フレーバ組成物は、ペットフード製品中に、約０．０１ｐｐｍ超、約０．１ｐｐｍ超、約１ｐｐｍ超、約２ｐｐｍ超、約３ｐｐｍ超、約４ｐｐｍ超、約５ｐｐｍ超、約１０ｐｐｍ超、約２５ｐｐｍ超、約５０ｐｐｍ超、約７５ｐｐｍ超、約１００ｐｐｍ超、約２５０ｐｐｍ超、約５００ｐｐｍ超、約７５０ｐｐｍ超、又は約１０００ｐｐｍ超、及びそれらの間の値の量で存在する。
【０１４５】
ある特定の実施形態では、本開示の化合物は、食品中に、例えばＧＰＲ１２０受容体などの脂肪酸受容体を調節、活性化、及び／又は増強するのに十分な量で存在する。例えば、限定はしないが、化合物は、食品中に、約１０ｐＭ〜約１Ｍ、約１ｎＭ〜約１Ｍ、約１μＭ〜約１Ｍ、約１ｍＭ〜約１Ｍ、約１０ｍＭ〜約１Ｍ、約１００ｍＭ〜約１Ｍ、約２５０ｍＭ〜約１Ｍ、約５００ｍＭ〜約１Ｍ、約７５０ｍＭ〜約１Ｍ、約０．００１μＭ〜約１Ｍ、約０．００１μＭ〜約７５０ｍＭ、約０．００１μＭ〜約５００ｍＭ、約０．００１μＭ〜約２５０ｍＭ、約０．００１μＭ〜約１００ｍＭ、約０．００１μＭ〜約５０ｍＭ、約０．００１μＭ〜約２５ｍＭ、約０．００１μＭ〜約１０ｍＭ、約０．００１μＭ〜約１ｍＭ、約０．００１μＭ〜約１００μＭ又は約０．００１μＭ〜約１０μＭ、及びそれらの間の値の量で存在しうる。
【０１４６】
本願のある特定の実施形態では、フレーバ組成物はペットフード製品と混和され、該フレーバ組成物は、約１０ｐＭ〜約１Ｍ、又は約１ｐＭ〜約１Ｍ、又は約０．１ｐＭ〜約１Ｍ、及びそれらの間の値の量で存在する。
【０１４７】
本願のある特定の実施形態では、フレーバ組成物はペットフード製品と混和され、該フレーバ組成物は、約１０ｐＭ〜約０．５Ｍ、又は約１ｐＭ〜約０．５Ｍ、又は約０．１ｐＭ〜約０．５Ｍ、及びそれらの間の値の量で存在する。
【０１４８】
本願のある特定の実施形態では、フレーバ組成物はペットフード製品と混和され、該フレーバ組成物は、約１０ｐＭ〜約０．１Ｍ、又は約１ｐＭ〜約０．１Ｍ、又は約０．１ｐＭ〜約０．１Ｍ、及びそれらの間の値の量で存在する。
【０１４９】
本願のある特定の実施形態では、フレーバ組成物は食品と混和され、該フレーバ組成物は、食品の約０．００１〜約１０％質量／質量（ｗ／ｗ）の量で存在する。例えば、限定はしないが、フレーバ組成物は、約０．００１〜約１０％ｗ／ｗ、約０．０１〜約２０％ｗ／ｗ、約０．００１〜約１％ｗ／ｗ、約０．００１〜約０．１％ｗ／ｗ、約０．００１〜約０．０１％ｗ／ｗ、約０．０１〜約１０％ｗ／ｗ、約０．０１〜約１％ｗ／ｗ、又は約０．１〜約１０％ｗ／ｗ、又は約０．１〜約１％ｗ／ｗ、及びそれらの間の値の量で存在しうる。
【０１５０】
本願のある特定の実施形態では、フレーバ組成物は食品と混和され、該フレーバ組成物は、約０．００１〜約５％ｗ／ｗ、又は約０．０１〜約５％ｗ／ｗ、又は約０．１〜約５％ｗ／ｗ、及びそれらの間の値の量で存在する。
【０１５１】
本願のある特定の実施形態では、フレーバ組成物は食品と混和され、該フレーバ組成物は、約０．００１〜約１％ｗ／ｗ、又は約０．０１〜約１％ｗ／ｗ、又は約０．１〜約１％ｗ／ｗ、及びそれらの間の値の量で存在する。
【０１５２】
本願のある特定の実施形態では、フレーバ組成物は食品と混和され、該フレーバ組成物は、約０．０１〜約１０％ｗ／ｗの量で存在する。
【０１５３】
ある特定の実施形態では、本明細書の化合物は、例えば、ヌクレオチド及び／又はヌクレオチド誘導体及び／又はフラノン及び／又はアミノ酸及び／又は膜貫通化合物などの他の化合物とともに、さまざまな比率でブレンドされる、又はブレンドされて、さまざまなフレーバ組成物を形成する。ヌクレオチド、ヌクレオチド誘導体、フラノン、アミノ酸及び膜貫通化合物の非限定的な例は、それらの全体がここに参照することによって本明細書に取り込まれる、２０１３年１０月３１日出願の国際出願第ＰＣＴ／ＥＰ２０１３／０７２７８８号、２０１３年１０月３１日出願の同第ＰＣＴ／ＥＰ２０１３／０７２７８９号、２０１３年１０月３１日出願の同第ＰＣＴ／ＥＰ２０１３／０７２７９０号、２０１３年１０月３１日出願の同第ＰＣＴ／ＥＰ２０１３／０７２７９４号、２０１５年１２月１０日出願の同第ＰＣＴ／ＵＳ１５／６５０４６号、２０１５年１２月１０日出願の同第ＰＣＴ／ＵＳ１５／６５０３６号、及び２０１５年１２月１０日出願の同第ＰＣＴ／ＵＳ１５／６５０６７号に開示されている。
【０１５４】
５．１  ヌクレオチド及びヌクレオチド誘導体
本開示のある特定の実施形態では、フレーバ組成物は、少なくとも１つの化合物、並びに、本明細書に記載され、かつ、その全体がここに参照することによって本明細書に取り込まれる、２０１５年１２月１０日出願の国際出願第ＰＣＴ／ＵＳ１５／６５０４６号による、少なくとも１つのヌクレオチド及び／又はヌクレオチド誘導体を含む。
【０１５５】
本開示のある特定の実施形態では、フレーバ組成物は、本明細書に記載される、少なくとも１つの化合物、並びに、少なくとも２つ、３つ、４つ、５つ、又はそれ以上のヌクレオチド及び／又はヌクレオチド誘導体を含む。ヌクレオチドの非限定的な例としては、グアノシン一リン酸（ＧＭＰ）、イノシン一リン酸（ＩＭＰ）、アデノシン一リン酸（ＡＭＰ）、シチジン一リン酸（ＣＭＰ）、チミン一リン酸（ＴＭＰ）、キサントシン一リン酸（ＸＭＰ）、ウリジン一リン酸（ＵＭＰ）及びそれらの組合せが挙げられる。
【０１５６】
ある特定の実施形態では、フレーバ組成物は、食品中に、約１ｐＭ〜約１Ｍ、約１  ｎＭ〜約１Ｍ、約１μＭ〜約１Ｍ、約１ｍＭ〜約１Ｍ、約１０ｍＭ〜約１Ｍ、約１００ｍＭ〜約１Ｍ、約２５０ｍＭ〜約１Ｍ、約５００ｍＭ〜約１Ｍ、約７５０ｍＭ〜約１Ｍ、約１μＭ〜約１Ｍ、約１μＭ〜約７５０ｍＭ、約１μＭ〜約５００ｍＭ、約１μＭ〜約２５０ｍＭ、約１μＭ〜約１００ｍＭ、約１μＭ〜約５０ｍＭ、約１μＭ〜約２５ｍＭ、約１μＭ〜約１０ｍＭ、約１μＭ〜約１ｍＭ、約１μＭ〜約１００μＭ又は約１μＭ〜約１０μＭ、及びそれらの間の値の量で存在しうる、ヌクレオチド及び／又はヌクレオチド誘導体を含みうる。
【０１５７】
ある特定の実施形態では、ヌクレオチド及び／又はヌクレオチド誘導体は、ペットフード製品の約１ｍＭ超又は約２．５ｍＭ超の量で存在しうる。ある特定の非限定的な実施形態では、ヌクレオチド及び／又はヌクレオチド誘導体は、ペットフード製品の約１００ｍＭ未満、約５０ｍＭ未満、約２０ｍＭ未満又は約１０ｍＭ未満の量で存在しうる。ある特定の非限定的な実施形態では、ヌクレオチド及び／又はヌクレオチド誘導体は、ペットフード製品の約５ｍＭの量で存在する。
【０１５８】
本開示のある特定の実施形態では、フレーバ組成物は、本明細書に記載される少なくとも１つのアミノ酸をさらに含む。
【０１５９】
本開示のある特定の実施形態では、フレーバ組成物は、本明細書に記載される少なくとも１つの膜貫通化合物をさらに含む。
【０１６０】
５．２  アミノ酸
本開示のある特定の実施形態では、フレーバ組成物は、少なくとも１つの化合物、及び、本明細書に記載され、かつ、各々の全体がここに参照することによって本明細書に取り込まれる、２０１３年１０月３１日出願の国際出願第ＰＣＴ／ＥＰ２０１３／０７２７８８号、２０１３年１０月３１日出願の同第ＰＣＴ／ＥＰ２０１３／０７２７８９号、２０１３年１０月３１日出願の同第ＰＣＴ／ＥＰ２０１３／０７２７９０号、及び２０１３年１０月３１日出願の同第ＰＣＴ／ＥＰ２０１３／０７２７９４号の各明細書による、少なくとも１つのアミノ酸を含む。ある特定の実施形態では、フレーバ組成物は、本明細書に記載される少なくとも１つの化合物及び少なくとも２つ、３つ、４つ、５つ又はそれ以上のアミノ酸を含む。
【０１６１】
ある特定の実施形態では、フレーバ組成物は、少なくとも１つの化合物、少なくとも１つ、２つ、３つ、４つ、５つ又はそれ以上の第１のアミノ酸、及び／又は、少なくとも１つ、２つ、３つ、４つ、５つ又はそれ以上の第２のアミノ酸を含む。
【０１６２】
本開示のある特定の実施形態では、フレーバ組成物は、少なくとも１つの化合物、少なくとも１つの第１のアミノ酸、及び少なくとも１つの第２のアミノ酸を含む。
【０１６３】
本開示のある特定の実施形態では、フレーバ組成物は、少なくとも１つの化合物、少なくとも２つの第１のアミノ酸、及び少なくとも１つの第２のアミノ酸を含む。
【０１６４】
本開示のある特定の実施形態では、フレーバ組成物は、少なくとも１つの化合物、少なくとも１つの第１のアミノ酸、及び少なくとも２つの第２のアミノ酸を含む。
【０１６５】
本開示のある特定の実施形態では、フレーバ組成物は、少なくとも１つの化合物、少なくとも２つの第１のアミノ酸、及び少なくとも２つの第２のアミノ酸を含む。
【０１６６】
本開示のある特定の実施形態では、フレーバ組成物は、本明細書に記載される少なくとも１つの脂肪酸をさらに含む。
【０１６７】
本開示のある特定の実施形態では、フレーバ組成物は、本明細書に記載される少なくとも１つの膜貫通化合物をさらに含む。
【０１６８】
第１のアミノ酸の非限定的な例としては、トリプトファン、フェニルアラニン、ヒスチジン、グリシン、システイン、アラニン、チロシン、セリン、メチオニン、アスパラギン、ロイシン及びそれらの組合せが挙げられる。
【０１６９】
第２のアミノ酸の非限定的な例としては、トレオニン、イソロイシン、プロリン、グルタミン酸、アスパラギン酸、ヒドロキシプロリン、アルギニン、シスチン、グルタミン、リシン、バリン、オルニチン（orthinine）、タウリン、グルタミン酸ナトリウム（ＭＳＧ）及びそれらの組合せが挙げられる。
【０１７０】
ある特定の実施形態では、少なくとも１つの第１のアミノ酸及び／又は第２のアミノ酸は、単独で又は組み合わせて、ペットフード製品の約１ｍＭ〜約１Ｍ、又は約２５０ｍＭ〜約１Ｍ、又は約５ｍＭ〜約５００ｍＭ、又は約１０ｍＭ〜約１００ｍＭ、又は約１５ｍＭ〜約５０ｍＭ、又は約２０ｍＭ〜約４０ｍＭの量で存在しうる。ある特定の実施形態では、アミノ酸は、ペットフード製品の約１Ｍ未満、約２００ｍＭ未満、約１００ｍＭ未満、約５０ｍＭ未満、約２０ｍＭ未満、又は約１０ｍＭ未満の量で存在しうる。ある特定の実施形態では、第１のアミノ酸及び／又は第２のアミノ酸は、単独で又は組み合わせて、ペットフード製品の約２５ｍＭの量で存在しうる。
【０１７１】
５．３  膜貫通化合物
本開示のある特定の実施形態では、フレーバ組成物は、本明細書に記載される少なくとも１つの化合物、及び、その全体がここに参照することによって本明細書に取り込まれる、２０１５年１２月１０日出願の国際出願第ＰＣＴ／ＵＳ１５／６５０３６号、及び下記表１に記載される少なくとも１つの膜貫通化合物を含む。
【０１７２】
本開示のある特定の実施形態では、フレーバ組成物は、少なくとも１つの化合物及び少なくとも２つ、３つ、４つ、５つ又はそれ以上の膜貫通化合物を含む。
【０１７３】
本開示のある特定の実施形態では、フレーバ組成物は、本明細書に記載される、少なくとも１つの化合物、少なくとも１つの膜貫通化合物、及び、少なくとも１つのアミノ酸を含む。
【０１７４】
本開示のある特定の実施形態では、フレーバ組成物は、本明細書に記載される、少なくとも１つの化合物、少なくとも１つの膜貫通化合物、少なくとも１つの第１のアミノ酸、及び、少なくとも１つの第２のアミノ酸を含む。
【０１７５】
本開示のある特定の実施形態では、フレーバ組成物は、本明細書に記載される、少なくとも１つの化合物、少なくとも１つの膜貫通化合物、並びに、少なくとも１つのヌクレオチド及び／又はヌクレオチド誘導体を含む。
【０１７６】
本開示のある特定の実施形態では、フレーバ組成物は、少なくとも１つの化合物、少なくとも１つの膜貫通化合物、少なくとも１つのヌクレオチド及び／又はヌクレオチド誘導体、並びに、少なくとも１つのアミノ酸を含む。
【０１７７】
本開示のある特定の実施形態では、フレーバ組成物は、少なくとも１つの化合物、少なくとも１つの膜貫通化合物、少なくとも１つのヌクレオチド及び／又はヌクレオチド誘導体、少なくとも１つの第１のアミノ酸、並びに、少なくとも１つの第２のアミノ酸を含む。
【０１７８】
ある特定の実施形態では、本開示の膜貫通化合物は、食品中に、約１ｐＭ〜約１Ｍ、約１ｎＭ〜約１Ｍ、約１μＭ〜約１Ｍ、約１ｍＭ〜約１Ｍ、約１０ｍＭ〜約１Ｍ、約１００ｍＭ〜約１Ｍ、約２５０ｍＭ〜約１Ｍ、約５００ｍＭ〜約１Ｍ、約７５０ｍＭ〜約１Ｍ、約１μＭ〜約１Ｍ、約１μＭ〜約７５０ｍＭ、約１μＭ〜約５００ｍＭ、約１μＭ〜約２５０ｍＭ、約１μＭ〜約１００ｍＭ、約１μＭ〜約５０ｍＭ、約１μＭ〜約２５ｍＭ、約１μＭ〜約１０ｍＭ、約１μＭ〜約１ｍＭ、約１μＭ〜約１００μＭ又は約１μＭ〜約１０μＭ、及びそれらの間の値の量で存在しうる。
【０１７９】
ある特定の実施形態では、膜貫通化合物は、本明細書に記載される膜貫通化合物の塩、立体異性体、又は食べられる形態でありうる。
【０１８０】
【表１】
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【０１８１】
６．供給系
ある特定の実施形態では、本願のフレーバ組成物は、ペットフード製品における使用のために供給系内に取り込まれうる。供給系は、非水性液体、固体、又はエマルションでありうる。供給系は、概して、フレーバ組成物及び／又はフレーバ組成物が取り込まれるペットフード製品のニーズに適合するように構成される。
【０１８２】
フレーバ付け組成物は、非水性液体形態で、乾燥形態で、固体形態で、及び／又は、エマルションとして用いられうる。乾燥形態で用いられる場合には、噴霧乾燥などの適切な乾燥手段が用いられうる。あるいは、フレーバ付け組成物は、カプセル封入、又は、不水溶性の材料上に吸収されうる。このような乾燥形態を調製するための実際の技法は当技術分野でよく知られており、本明細書に開示される主題に適用されうる。
【０１８３】
本明細書に開示される主題のフレーバ組成物は、味、フレーバ及び／又は食感の初期バースト；及び／又は、味、フレーバ及び／又は食感の長引く感覚をもたらすように、当技術分野でよく知られている多くの異なる物理的形態で用いられうる。限定はしないが、このような物理的形態としては、噴霧乾燥、粉末、及びビーズの形態、及びカプセル封入形態、及びそれらの混合など、自由形態（free forms）が挙げられる。
【０１８４】
ある特定の実施形態では、フレーバ組成物の化合物は、ペットフード製品中に存在する前駆体化合物から、例えば、殺菌、レトルト処理及び／又は押出成形など、ペットフード製品の加工の間に生成されうる。非限定的な例では、組成物は、ペットフード製品の加工の間に１つ以上のトリグリセリドから遊離した遊離脂肪酸でありうる。ある特定の実施形態では、遊離脂肪酸は、トリグリセリドの熱、酸、及び／又は酵素処理の間に生成される。ある特定の実施形態では、トリグリセリドは、ペットフードを生産するために加工される肉（例えば、鶏肉、牛肉、豚肉、魚肉、及び／又は獣脂）及び／又は植物（例えば、植物油及びヒマワリ油などの油）の供給源中に存在する。
【０１８５】
ある特定の実施形態では、上で述べたように、カプセル封入技法は、フレーバ系を改変するために用いられうる。ある特定の実施形態では、フレーバ化合物、フレーバ成分、又はフレーバ組成物全体は、完全に又は部分的にカプセル封入されうる。カプセル封入材料及び／又は技法は、フレーバ系の改変の種類を決定するために選択されうる。
【０１８６】
ある特定の実施形態では、カプセル封入材料及び／又は技法は、フレーバ化合物、フレーバ成分、又はフレーバ組成物の安定性を改善するように選択されるが、他の実施形態では、カプセル封入材料及び／又は技法は、フレーバ組成物の放出プロファイルを改変するように選択される。
【０１８７】
適切なカプセル封入材料としては、アルギン酸塩、ペクチン、寒天、グアーガム、セルロースなどの親水コロイド、タンパク質、ポリ酢酸ビニル、ポリエチレン、架橋ポリビニルピロリドン、ポリメタクリル酸メチル、ポリ乳酸（polylactidacid）、ポリヒドロキシアルカノエート、エチルセルロース、ポリビニルアセテートフタレート、ポリエチレングリコールエステル、メタクリル酸−ｃｏ−メタクリル酸メチル、エチレン−酢酸ビニル（ＥＶＡ）共重合体など、及びそれらの組合せが挙げられうるが、それらに限られない。適切なカプセル封入技法としては、噴霧コーティング、噴霧乾燥、噴霧冷却、吸収、吸着、包接錯体（例えば、フレーバ／シクロデキストリン錯体を生成）、コアセルベーション、流動層コーティング、又は、カプセル封入材料とともに原料をカプセル封入するために用いられうる他の方法が挙げられうるが、それらに限られない。
【０１８８】
フレーバ剤又は甘味剤のためのカプセル封入供給系は、甘味剤又はフレーバ剤のコアを取り囲む脂肪又はワックスの疎水性マトリクスを含みうる。脂肪は、脂肪酸、グリセリド又はポリグリセロール・エステル、ソルビトールエステル、及びそれらの混合物など、通常用いられるあらゆる材料から選択されうる。脂肪酸の例としては、パーム油、パーム核油、ピーナツ油、菜種油、米糠油、大豆油、綿実油、ヒマワリ油、サフラワー油及びそれらの組合せなど、水素添加された及び部分的に水素添加された植物油が挙げられるがこれらに限られない。グリセリドの例としては、モノグリセリド、ジグリセリド及びトリグリセリドが挙げられるがこれらに限られない。
【０１８９】
ワックスは、天然及び合成のワックス及びそれらの混合物からなる群より選択されうる。非限定的な例としては、パラフィンワックス、ペトロラタム、カーボワックス、微結晶ワックス、ビーワックス、カルナバワックス、キャンデリラワックス、ラノリン、ヤマモモワックス、サトウキビワックス、鯨蝋、ライスワックス、及びそれらの混合物が挙げられる。
【０１９０】
脂肪及びワックスは、カプセル封入系の約１０〜約７０質量％の可変の量で、及び、代替的に約３０〜約６０質量％の量で、個別に又は組み合わせて使用されうる。組み合わせて用いられる場合、脂肪及びワックスは、それぞれ、約７０：１０〜８５：１５の比で存在しうる。
【０１９１】
典型的なカプセル封入されたフレーバ組成物、フレーバ剤又は甘味剤の供給系は、それらの全体がここに参照することによって本明細書に取り込まれる、米国特許第４，５９７，９７０号及び同第４，７２２，８４５号に開示されている。
【０１９２】
液体供給系としては、炭水化物のシロップ及び／又はエマルションなど、本願のフレーバ組成物の分散を用いた系が挙げられうるが、それらに限られない。液体供給系には、化合物及び／又はフレーバ組成物が溶媒に可溶化された抽出物も含まれうる。固体供給系は、噴霧乾燥、噴霧コーティング、噴霧冷却、流動層乾燥、吸収、吸着、コアセルベーション、錯化、又は任意の他の標準的な技法によって生み出されうる。幾つかの実施形態では、供給系は、食用組成物と相容性であるか、又は食用組成物中で機能するように選択されうる。ある特定の実施形態では、供給系は、脂肪又は油などの油性の材料を含む。ある特定の実施形態では、供給系は、カカオバター、カカオバター代用物、カカオバター代替物、又はカカオバター等価物などの菓子用脂肪を含む。
【０１９３】
乾燥形態で用いられる場合、噴霧乾燥などの適切な乾燥手段が使用されうる。あるいは、フレーバ付け組成物は、不水溶性の材料などの基材上に吸着又は吸収されてよく、また、カプセル封入されてもよい。このような乾燥形態を調製するための実際の技法は、当技術分野でよく知られている。
【０１９４】
７．ペットフード製品
本開示の主題のフレーバ組成物は、多種多様なペットフード製品に用いられうる。適切なペットフード製品の非限定的な例としては、本明細書に記載されるウエットフード製品、ドライフード製品、湿性食品（moist food product）、ペットフード補助食品（例えば、ビタミン）、ペット用飲料製品、スナック及びおやつが挙げられる。
【０１９５】
本明細書に開示される主題のフレーバ付け組成物と、ペットフード製品及び随意的な原料との組合せは、乾燥している場合には、予想外の味を有し、かつ、例えばＧＰＲ１２０脂肪酸受容体の活性を増加させることを通して、例えば、脂肪酸の感覚的経験を与える、フレーバ剤を提供する。本明細書に開示されるフレーバ組成物は、ペットフード製品の配合加工又は包装の前、間、又は後に添加されて差し支えなく、フレーバ組成物の成分は、連続的に又は同時に添加されてよい。ある特定の実施形態では、フレーバ組成物の化合物は、ペットフード製品中に存在する前駆体化合物から、例えば、殺菌、レトルト処理及び／又は押出成形などのペットフード製品の加工の間に生成されうる。非限定的な例では、組成物は、ペットフード製品の加工の間に１つ以上のトリグリセリドから遊離した遊離脂肪酸でありうる。ある特定の実施形態では、遊離脂肪酸は、トリグリセリドの熱、酸、及び／又は酵素処理の間に生成される。ある特定の実施形態では、トリグリセリドは、ペットフードを生産するために加工される、肉（例えば、鶏肉、牛肉、豚肉、魚肉、及び／又は獣脂）及び／又は植物（例えば、植物油及びヒマワリ油などの油）の供給源中に存在する。
【０１９６】
ある特定の実施形態では、ペットフード製品は、栄養的に完全なドライフード製品である。乾燥した又は低水分含量の栄養的に完全なペットフード製品は、約１５％未満の水分を含んでよく、約１０〜約６０％の脂肪、約１０％〜約７０％のタンパク質及び約３０％〜約８０％の炭水化物、例えば食物繊維及び灰分などを含む。
【０１９７】
ある特定の実施形態では、ペットフード製品は、栄養的に完全なウエットフード製品である。湿った又は高水分含量の栄養的に完全なペットフード製品は、約５０％を超える水分を含みうる。ある特定の実施形態では、ウエットペットフード製品は、約４０％〜の脂肪、約５０％〜のタンパク質及び約１０％〜の炭水化物、例えば食物繊維及び灰分などを含む。
【０１９８】
ある特定の実施形態では、ペットフード製品は、栄養的に完全な湿性食品である。例えば、セミモイスト型又はセミドライ型又はソフトドライ型又はソフトモイスト型の水分、若しくは、中間又は中程度の水分含量の栄養的に完全なペットフード製品は、約１５〜約５０％の水分を含む。
【０１９９】
ある特定の実施形態では、ペットフード製品は、ペットフードスナック製品である。ペットフードスナック製品の非限定的な例としては、スナックバー、ペット用噛み物、カリッとしたおやつ（crunchy treats）、シリアルバー、スナック、ビスケット及び甘味製品が挙げられる。
【０２００】
ある特定の実施形態では、タンパク質源は、ルピナスタンパク質、小麦タンパク質、大豆タンパク質及びそれらの組合せなどの植物源に由来しうる。代替的に又は加えて、タンパク質源は、さまざまな動物源に由来しうる。動物のタンパク質の非限定的な例としては、例えば、筋肉、食肉副産物、肉粉又は魚粉を含む、牛肉、豚肉、鶏肉、羊肉、又は魚肉が挙げられる。
【０２０１】
８．味の特質の測定方法
本開示のある特定の実施形態では、ペットフード製品の味、フレーバ及び／又はおいしさの特質は、フレーバ組成物を食品と混和することによって改変されうるか、あるいは、本明細書に記載される食物調製条件下で生成されうる。ある特定の実施形態では、特質は、食品に混和された又は生成されたフレーバ組成物の濃度を増加又は低下させることによって、増強又は低減されうる。ある特定の実施形態では、改変された食品の味覚特質は、本明細書に記載されるように上昇させることができ、食品に混和された又は生成されたフレーバ組成物の濃度は、評価結果に基づいて増加又は低下されうる。
【０２０２】
本開示のある特定の実施形態では、味及び／又はおいしさの特質は、異なる濃度におけるインビトロで細胞によって発現されるネコＧＰＲ１２０受容体を活性化する化合物の能力が測定される、インビトロのアッセイを使用して測定されうる。ある特定の実施形態では、受容体の活性化の増加は、化合物の味及び／又はおいしさの特質の増加と相関する。ある特定の実施形態では、組成物は、単独で又は他の化合物と組み合わせて測定される。ある特定の実施形態では、インビトロのアッセイは、本明細書の実施例のセクションに記載されるインビトロのアッセイを含む。
【０２０３】
本開示のある特定の実施形態では、味及び／又はおいしさの特質は、味覚テスターのパネリストを使用して測定されうる。例えば、限定はしないが、パネルには、ネコのパネリストが含まれうる。ある特定の実施形態では、パネルには、イヌのパネリストが含まれうる。ある特定の実施形態では、ペットフード製品のおいしさは、フレーバ組成物を単独で含むペットフード製品の消費（例えば、１ボウル試験、１点試験法によるランキングなど）によって決定されうる。ある特定の実施形態では、ペットフード製品のおいしさは、フレーバ組成物を含まない又は別のフレーバ組成物を含むペットフード製品に対する、本明細書に開示されるフレーバ組成物を含むペットフード製品の優先的消費（例えば、嗜好性、相違性及び／又は選択性を試験するための２ボウル試験など）によって決定されうる。
【０２０４】
ある特定の実施形態では、フレーバ組成物のおいしさ及び／又は脂肪酸の味は、フレーバ組成物を含まない又は異なるフレーバ組成物を含むエマルションに対する、本明細書に開示されるフレーバ組成物を含むエマルション（又は、本願の化合物が、例えばゲル又はゼラチンと混和されうる、任意の他の組成物）の優先的消費によって決定されうる。例えば、ゲルのパネルは、単独曝露においてさまざまな濃度の化合物のおいしさを比較するために用いられうる。ある特定の実施形態では、エマルションは、ベースラインのエマルション摂取を増加させ、したがって試験化合物による悪影響の可能性の特定を可能にする、摂食性／陽性の味物質として、例えば、Ｌ−ヒスチジンなどのおいしさのエンハンサーを含みうる。
【０２０５】
各ペットフード製品又はエマルションについての摂取比率は、消費される１つの配給量を全消費量で割った量を測定することによって決定されうる。次に、消費比率（ＣＲ）を計算して、１つの配給量の消費を他の配給量に関して比較し、１つの食品又はエマルションの他のものに対する優先的消費を決定することができる。代替的に又は加えて、摂取の差異（ｇ）を用いて、例えば、５％有意水準などの選択された有意水準で、２ボトル試験における２つのエマルション間の摂取における平均差異、又は、２つのボウル試験における２つのペットフード製品間の摂取における平均差異を算定し、９５％の信頼区間での摂取の平均差異を決定してもよい。しかしながら、例えば、１、２、３、４、５、１０、１５、２０、２５、又は５０％の有意水準など、任意の有意水準を使用して差し支えない。ある特定の実施形態では、エマルション又は食品が占める、試験の間に摂食した全エマルション又は食品のパーセンテージである、動物による１つのエマルション又は食品についての例えばパーセンテージ嗜好性など、パーセンテージ嗜好性スコアを算出してもよい。
【０２０６】
９．生成方法 
ある特定の実施形態では、本開示の化合物は、標準的な化学合成プロセスを使用して生成されうる。ある特定の実施形態では、化学合成プロセスは、少なくとも９９．９９９％、又は少なくとも９９％、又は少なくとも９５％、又は少なくとも９０％、又は少なくとも８５又は少なくとも８０％の純度を有する化合物をもたらす。ある特定の実施形態では、化合物は、酸、酵素又は酸と酵素の組合せなどを使用するものなど、標準的な加水分解プロセスを使用して調製されうる。
【０２０７】
ある特定の実施形態では、本開示の化合物は、例えばペットフード製品の生産中に、食物調製条件下で生成されうる。例えば、限定はしないが、本開示の化合物は、ペットフード中に存在する前駆体化合物から、例えば、殺菌、レトルト処理及び／又は押出成形などの熱食品加工の間に生成されうる。ある特定の実施形態では、液体及び／又は粉末の嗜好剤（palatant）もまた、例えばドライペットフード製品などのペットフードの味を増強し、ペットフードのおいしさを増加するために添加されうる。嗜好剤は、肉（例えば肝臓）の消化物及び／又は植物消化物であってよく、必要に応じて、当技術分野で知られている他の嗜好剤を含みうる。ある特定の実施形態では、化合物は、ペットフード製品に添加する前に、液体及び／又は粉末の嗜好剤とともに混合されうる又はそれらの中で生成されうる。代替的に又は加えて、化合物は、ペットフード製品に添加した後で、液体及び／又は粉末の嗜好剤と混和されうる又はそれらの中で生成されうる。
【０２０８】
１０．本開示の方法の非限定的な例
ある特定の非限定的な実施形態では、本開示は、ペットフード製品を本明細書に記載される化合物を含むフレーバ組成物と混和する工程を含む、ペットフード製品のおいしさを増加させる方法を提供し、該化合物は、混和物中に約１０ｐＭ〜約１Ｍの濃度で存在する。
【０２０９】
ある特定の非限定的な実施形態では、本開示は、本明細書に記載される化合物を含むフレーバ組成物を有するペットフード製品を生産する工程を含む、ペットフード製品のおいしさを増加させる方法を提供し、該化合物は、製品中に、約１０ｐＭ〜約１Ｍの濃度で存在する。
【０２１０】
ある特定の非限定的な実施形態では、本開示は、ペットフード製品を本明細書に記載される化合物を含むフレーバ組成物と混和する工程を含む、例えばＧＰＲ１２０受容体の活性を増加することによって、ペットフード製品の脂肪酸の味を増加させる方法を提供し、該化合物は、混和物中に、０．０１ｐｐｍ〜１，０００ｐｐｍの濃度で存在する。
【０２１１】
ある特定の非限定的な実施形態では、本開示は、ペットフード製品を本明細書に記載される化合物を含むフレーバ組成物と混和する工程を含む、ペットフード製品のおいしさを増加させる方法を提供し、該フレーバ組成物は、混合物中に約０．０１ｐｐｍ〜１，０００ｐｐｍの濃度で存在する。
【０２１２】
ある特定の非限定的な実施形態では、本開示は、ペットフード製品を本明細書に記載される化合物を含むフレーバ組成物と混和する工程を含む、例えばＧＰＲ１２０受容体の活性を増加させることによって、ペットフード製品の脂肪酸の味を増加させる方法を提供し、該フレーバ組成物は、混和物中に約０．００１〜約１０％ｗ／ｗ、又は約０．０１〜約２０％ｗ／ｗ、又は約０．０１〜約５％ｗ／ｗ、又は約０．０１〜約１％ｗ／ｗの濃度で存在する。
【０２１３】
ある特定の非限定的な実施形態では、本開示は、ペットフード製品を本明細書に記載される化合物を含むフレーバ組成物と混和する工程を含む、ペットフード製品のおいしさを増加させる方法を提供し、該フレーバ組成物は、混和物中に、約０．００１〜約１０％ｗ／ｗ、又は約０．０１〜約２０％ｗ／ｗ、又は約０．０１〜約５％ｗ／ｗ、又は約０．０１〜約１％ｗ／ｗの濃度で存在する。
【実施例】
【０２１４】
本明細書に開示される主題は、本発明の例として提供される、これらに限定されない、以下の実施例を参照することによってよりよく理解されよう。
【０２１５】
実施例１−ｆＧＰＲ１２０受容体を活性化する化合物。
【０２１６】
本実施例は、インビトロにおける、化合物によるネコＧＰＲ１２０受容体（ｆＧＰＲ１２０）の活性化について説明する。
【０２１７】
ＧＰＲ１２０アゴニストとして作用しうる化合物を、インビトロでの機能的特性化によって特定した。ｆＧＰＲ１２０受容体の活性化における化合物の有効性を評価した。
【０２１８】
方法：ｆＧＰＲ１２０を安定して発現するＣＨＯ−Ｋ１細胞を用いて約１２０の試験化合物をスクリーニングし、ｆＧＰＲ１２０脂肪酸受容体を活性化する化合物を特定した。カルシウム感受性の蛍光染料を使用する、細胞内カルシウムレベルにおける変化によって、ｆＧＰＲ１２０受容体の活性化を検出した。ｆＧＰＲ１２０受容体を発現しない細胞（モック細胞）を対照として使用した。ＦＬＩＰＲ（登録商標）Ｔｅｔｒａをデータの捕捉に使用した。
【０２１９】
各化合物を、３つの異なる用量レベル（１０、３及び１μＭ；５０、１６．７、及び５．６μＭ；又は１００、３０及び１０μＭ）におけるｆＧＰＲ１２０を活性化する能力について、最初に試験した（図１）。次に、用量反応曲線を各化合物について生成した（図２）。以下の特性を決定した：ｆＧＰＲ１２０アゴニスト対照（α−リノレン酸）と比較して、化合物によって誘発されたｆＧＰＲ１２０活性におけるパーセント増加、ＡＴＰバックグラウンド対照と比較して、化合物によって誘発されたｆＧＰＲ１２０活性のパーセント増加、及び、ＥＣ５０の達成に必要な化合物の濃度（すなわち、最大活性の５０％を達成）。
【０２２０】
結果：対照と比較してｆＧＰＲ１２０の活性を少なくとも３０％増加させる３４の活性化合物を用いた、ｆＧＰＲ１２０受容体を発現するＣＨＯ−Ｋ１細胞、又はｆＧＰＲ１２０を発現しないＣＨＯ−Ｋ１細胞（モック対照細胞）の処理後のｆＧＰＲ１２０の活性の変化が図１及び２に示されている。表２は、対照と比較してｆＧＰＲ１２０の活性を少なくとも３０％増加させる３４の化合物を特定している。
【０２２１】
【表２】
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【０２２２】
実施例２−インシリコスクリーニングを使用するＧＰＲ１２０アゴニストの特定。
【０２２３】
部位特異的突然変異導入は、ＧＰＲ１２０結合性化合物と相互作用するヒトＧＰＲ１２０のアミノ酸残基を特定するために用いられている（Hudson et al.）。しかしながら、本実施例は、ＧＰＲ１２０受容体の推定上の化合物アゴニストを特定するために行われたネコ及びイヌＧＰＲ１２０の計算モデリングについて説明する。ＧＰＲ１２０は、受容体のＧ−タンパク質共役受容体（ＧＰＣＲ）グループＡのファミリーに属する。ネコＧＰＲ１２０は、イヌＧＰＲ１２０に対して９６％の配列同一性、及び、ヒトＧＰＲ１２０に対して８９％の配列同一性を示す（例えば、その全体がここに参照することによって本明細書に取り込まれる、２０１４年１２月１８日公開の国際公開第２０１４／１９９１１４号を参照）。
【０２２４】
ＧＰＲ１２０受容体の三次元構造を解析して、受容体の選択的活性化に利用されうるポリペプチド領域を特定するために、計算論的アプローチを行った。ＧＰＲ１２０受容体の構造的な相同性モデルを、分類ＡのＧＰＣＲの構造に基づいて生成した。ＳＷＩＳＳ−ＭＯＤＥＬ及びＧＰＣＲ−Ｉ−ＴＡＳＳＥＲウェブベース環境において相同性モデルを構築し、Ａｃｃｅｌｒｙｓ社のプログラムＤｉｓｃｏｖｅｒｙ  Ｓｔｕｄｉｏ（ＤＳ）スイート（ＢＩＯＶＩＡ、Ｄａｓｓａｕｌｔ  Ｓｙｓｔｅｍｅｓ）でさらに細分化した。ＤＳのＭｏｄｅｌｌｅｒプログラムをモデルの細分化に使用した（その全体がここに参照することによって本明細書に取り込まれる、Eswar et al., Current Protocols in Bioinformatics, Supplement 15: 5.6.1-5.6.30(2006)を参照）。ＧＰＲ１２０と相互作用する化合物を特定するために、「インシリコ」スクリーニングを行った。
【０２２５】
タンパク質のＧＰＣＲグループＡファミリーには、多くの解決済みの結晶構造が含まれる。タンパク質データバンク（ＰＤＢ）から得たＧＰＣＲグループＡの結晶構造に基づいて、ネコ及びイヌＧＰＲ１２０膜貫通ドメインの相同性モデルを生成した：４ＤＪＨ（ヒトκオピオイド受容体（Wu, H. et al.））、３ＯＥ６（ＣＸＣＲ４ケモカイン受容体（Wu, B. et al.））及び３ＳＮ６（β２アドレナリン受容体（Rasmussen et al.））。ＢｉｏＰｒｅｄｉｃｔ社のドッキングプログラムであるＢｉｏｄｏｃｋを使用して、化合物３−（４−（（４−フルオロ−４’−メチルビフェニル−２−イル）メトキシ）フェニル）プロパン酸（ＴＵＧ８９１としても知られる）（図４）；４−［４−（ヘプチルオキシ）フェニル］−４−オキソブタン酸（図５）；エイコサペンタエン酸（図６）；オレイン酸（図８）；及びリノール酸（図９）を、インシリコにおいて、ネコＧＰＲ１２０の膜貫通ドメインの活性部位内にドッキングさせた。これらの化合物を、インシリコにおいて、イヌＧＰＲ１２０の膜貫通ドメインの活性部位内にもドッキングさせた。ヒト、ネコ及びイヌのＧＰＣＲの活性部位は、構造が類似している。
【０２２６】
インシリコ結合モデルに基づいて、化合物は、以下のネコＧＰＲ１２０の膜貫通ドメインのアミノ酸と相互作用する可能性を有することが観察された：
ヘリックス２のＰＨＥ８８、ＶＡＬ９５、ＶＡＬ９８及びＡＲＧ９９；
ヘリックス３のＰＨＥ１１５、ＭＥＴ１１８、ＳＥＲ１１９、ＧＬＹ１２２、ＳＥＲ１２３；
ヘリックス５のＴＲＰ２０７、ＰＨＥ２１１、ＶＡＬ２１２、ＡＳＮ２１５；
ヘリックス６のＴＲＰ２７７、ＩＬＥ２８０、ＩＬＥ２８１、ＩＬＥ２８４；
ヘリックス７のＴＲＰ２９９、ＰＨＥ３０３、ＰＨＥ３０４、ＶＡＬ３０７、ＴＨＲ３１０、ＰＨＥ３１１。
【０２２７】
化合物とネコＧＰＲ１２０活性部位との相互作用の多くは、ＧＰＲ１２０の疎水性残基に作用する。加えて、化合物のカルボキシル基とＡＲＧ９９の間には塩橋及び水素結合が存在する。
【０２２８】
参照文献：
1. Rasmussen, S.G. et al., “Crystal structure of the beta2 adrenergic receptor-Gs protein complex.” (2011) Nature 477: 549-555.
2. Wu, B. et al., “Structures of the CXCR4 chemokine GPCR with small-molecule and cyclic peptide antagonists.” (2010) Science 330: 1066-1071.
3. Wu, H. et al., “Structure of the human kappa-opioid receptor in complex with JDTic.” (2012) Nature 485: 327-332.
4. Brian D. Hudson et al., “The Molecular Basis of Ligand Interaction at Free Fatty Acid Receptor 4 (FFA4/GPR120).” The Journal of Biological Chemistry, 2014 Jul 18;289(29):20345-58.
5. Arnold K, Bordoli L, Kopp J, and Schwede T., “The SWISS-MODEL Workspace: A web-based environment for protein structure homology modelling.” (2006) Bioinformatics., 22,195-201. 
6. Zhang, J Yang, R Jang, Y Zhang., “GPCR-I-TASSER: A hybrid approach to G protein-coupled receptor structure modeling and the application to the human genome.” Structure, 23: 1538-1549, 2015 20345-20358, July 18, 2014。
【０２２９】
実施例３−インビトロスクリーニングを使用する、ＧＰＲ１２０の陽性アロステリック調節因子としてのリン酸二水素ドデシルの特定。
【０２３０】
本実施例は、ＧＰＲ１２０アゴニスト及び陽性アロステリック調節因子（ＰＡＭ）としてのリン酸二水素ドデシルの活性を測定するためのインビトロアッセイについて説明する。
【０２３１】
方法：ｆＧＰＲ１２０を安定して発現するＣＨＯ細胞を使用して、ｆＧＰＲ１２０アゴニスト又はＰＡＭとしての活性について、リン酸二水素ドデシルのアッセイを行った。
【０２３２】
ＣＨＯ／ＮａｔＣｌｙｔｉｎ／ｆＧｐｒ１２０＋Ｇα１６（ｆＧｐｒ１２０）細胞及びＣＨＯ／ＮａｔＣｌｙｔｉｎ／Ｍｏｃｋ＋Ｇα１６（モック）細胞を、５，０００細胞／ウェルで播種した。細胞播種の２４時間後、細胞に、室温で１時間、標準タイロードバッファ中０．５×Ｆｌｕｏ８−ＮＷ染料（２０μｌ／ウェル）を負荷した。細胞を、以下のプロトコルに従ったアゴニストモード及びＰＡＭモードで、化合物と接触させた後、「ＦＬＩＰＲ」Ｔｅｔｒａスクリーニングシステムを使用して蛍光を測定することによって、リン酸二水素ドデシルのＣＨＯ細胞によって発現されるｆＧＰＲ１２０を活性化する能力を決定した：
１．アゴニストモード：３×リン酸二水素ドデシル（１０μｌ／ウェル）を注入し、蛍光（すなわち、アゴニスト活性）を３分間、測定した。
【０２３３】
２．ＰＡＭモード：３×リン酸二水素ドデシル（１０μｌ／ウェル）を注入し、蛍光を３分間測定した。さらに約１分経過後、３×ｆＧＰＲ１２０アゴニストを、該アゴニストのＥＣ２０（１５μｌ／ウェル）に対応する濃度で注入し、蛍光（すなわち、ＰＡＭ活性）を３分間、測定した。ｆＧＰＲ１２０アゴニストは１．５μＭのα−リノレン酸であった。モック対照については、０．２μＭのＡＴＰをアゴニストとして使用した。
【０２３４】
「ＦＬＩＰＲ」（登録商標）Ｔｅｔｒａシステムを使用して測定したΔＦ／Ｆの最大値をエクスポートし、データ解析に使用した。ＰＡＭのデータ解析については、データを、ＥＣ１００（活性１００％）及びＥＣ２０（活性０％）の値に対して正規化した。
【０２３５】
実験に用いられた化合物を、０．０１％ＢＳＡ（脂肪酸非含有）中６×で溶解し、化合物プレート上でバッファと予混合した。細胞の最終的なＢＳＡ濃度は０．００１６７％であった。
【０２３６】
アゴニストモードの実験についての対照−α−リノレン酸の用量反応曲線（図１２）：１００μＭのα−リノレン酸（ｆＧＰＲ１２０最大信号）、３０μＭのＡＴＰ（最大信号）、バッファ（最小信号）、バッファ＋０．０１％のＢＳＡ（最小信号）。
【０２３７】
ＰＡＭモード実験についての対照−α−リノレン酸（ｆＧｐｒ１２０）又はＡＴＰ（モック）の用量反応曲線（図１２）：１００μＭのα−リノレン酸（Ｇｐｒ１２０についての最大信号）、１．５μＭのα−リノレン酸（ＥＣ２０、Ｇｐｒ１２０についての最小信号）、３０μＭのＡＴＰ（最大信号）、０．２μＭのＡＴＰ（ＥＣ２０、最小信号）。
【０２３８】
結果：図１１に示されるように、リン酸二水素ドデシルは、ｆＧＰＲ１２０アゴニストの存在下で、ＰＡＭとして、ｆＧＰＲ１２０の活性を調節した。
【０２３９】
本明細書に開示される主題及びその利点について詳細に述べてきたが、添付の特許請求の範囲に定められる本発明の精神および範囲を逸脱することなく、さまざまな変更、置換及び改変がなされうるものと解されたい。さらには、本願の範囲は、本明細書に記載されるプロセス、機械、製造、組成物、手段、方法及び工程の特定の実施形態に限定されることは意図されていない。当業者は、本明細書に開示される主題の開示から、本明細書に記載される対応する実施形態と実質的に同一の機能を果たす、又は実質的に同一の結果を達成する、既存の又は後に開発される、プロセス、機械、製造、組成物、手段、方法、又は工程が、本明細書に開示される主題に従って用いられうることを容易に認識するであろう。したがって、添付の特許請求の範囲は、このようなプロセス、機械、製造、組成物、手段、方法、又は工程をそれらの範囲内に含むことが意図されている。
【０２４０】
特許、特許出願、公開公報、製品説明及びプロトコルは、本明細書全体にわたって引用されており、それらの全体が、すべての目的で、ここに参照することによって本明細書に取り込まれる。
【図１−１】
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【図１−２】
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【図１−３】
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【図１−４】
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【図１−５】
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【図１−６】
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【図１−７】
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【図１−８】
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【図１−９】
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【図１−１０】
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【図１−１１】
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【図１−１２】
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【図１−１３】
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【図１−１４】
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【図１−１５】
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【図１−１６】
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【図１−１７】
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【図１−１８】
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【図１−１９】
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【図１−２０】
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【図１−２１】
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【図１−２２】
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【図１−２３】
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【図１−２４】
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【図１−２５】
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【図１−２６】
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【図１−２７】
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【図１−２８】
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【図１−２９】
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【図１−３０】
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【図１−３１】
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【図１−３２】
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【図１−３３】
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【図１−３４】
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【図２−１】
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【図２−２】
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【図２−３】
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【図２−４】
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【図２−５】
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【図２−６】
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【図２−７】
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【図２−８】
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【図２−９】
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【図２−１０】
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【図２−１１】
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【図２−１２】
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【図２−１３】
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【図２−１４】
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【図２−１５】
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【図２−１６】
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【図２−１７】
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【図２−１８】
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【図２−１９】
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【図２−２０】
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【図２−２１】
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【図２−２２】
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【図２−２３】
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【図２−２４】
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【図２−２５】
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【図２−２６】
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【図２−２７】
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【図２−２８】
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【図２−２９】
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【図２−３０】
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【図２−３１】
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【図２−３２】
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【図２−３３】
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【図２−３４】
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【図３−１】
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【図３−２】
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【図３−３】
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【図３−４】
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【図３−５】
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【図３−６】
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【図３−７】
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【図４Ａ】
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【図４Ｂ】
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【図４Ｃ】
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【図５Ａ】
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【図５Ｂ】
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【図５Ｃ】
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【図６Ａ】
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【図６Ｂ】
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【図６Ｃ】
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【図７】
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【図８Ａ】
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【図８Ｂ】
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【図９Ａ】
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【図９Ｂ】
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【図９Ｃ】
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【図１０】
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【図１１Ａ】
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【図１１Ｂ】
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【図１２Ａ】
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【図１２Ｂ】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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