(57)【要約】  本発明は、動物又はヒトの生体流において循環する細胞バイオマーカーを捕捉するデバイス１００であって、該デバイスはｉｎ  ｖｉｖｏで使用することができ、上記細胞バイオマーカーを保持するために設けられた濾過手段１０４、１２０を備え、該濾過手段が上記細胞バイオマーカーを保持するのに好適な寸法の、支持体１０５、１１０に堅く接続された少なくとも１つの貫通開口１２１を備え、該支持体が中空部品の形態をとることを特徴とする、デバイスに関する。【選択図】図１
2018509954.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
動物又はヒトの生体流において循環する細胞バイオマーカーを捕捉するデバイス（１００、１０１、１０２、１０３）であって、該デバイスがｉｎ  ｖｉｖｏでの使用に好適であり、前記細胞バイオマーカーを保持することを意図した濾過手段（１０４、１２０）を備え、該濾過手段が前記細胞バイオマーカーを保持するのに好適な寸法の、支持体（１０５、１１０）と一体となった少なくとも１つの貫通開口（１２１）を備え、該支持体が中空部材の形態をとることを特徴とする、デバイス。
【請求項２】
前記少なくとも１つの貫通開口（１２１）が１μｍ〜２００μｍ、好ましくは５μｍ〜２５μｍの少なくとも１つの横断寸法を有することを特徴とする、請求項１に記載の細胞バイオマーカーを捕捉するデバイス。
【請求項３】
前記少なくとも１つの開口（１２１）が実質的に円形若しくは実質的に楕円形若しくは実質的に多角形であるか、又は亀裂の形態をとることを特徴とする、請求項１又は２に記載の細胞バイオマーカーを捕捉するデバイス。
【請求項４】
前記濾過手段（１０４、１２０）が平坦であることを特徴とする、請求項１〜３のいずれか一項に記載の細胞バイオマーカーを捕捉するデバイス。
【請求項５】
前記支持体（１１０）が、軸（Ｘ−Ｘ’）を中心に、全体的(total)又は該軸（Ｘ−Ｘ’）に平行な面に沿って切頭された回転対称性を有することを特徴とする、請求項１〜４のいずれか一項に記載の細胞バイオマーカーを捕捉するデバイス。
【請求項６】
前記濾過手段（１２０）が前記支持体の底部を形成することを特徴とする、請求項１〜５のいずれか一項に記載の細胞バイオマーカーを捕捉するデバイス。
【請求項７】
軸（Ｘ−Ｘ’）を中心に回転対称性を有することを特徴とする、請求項１〜６のいずれか一項に記載の細胞バイオマーカーを捕捉するデバイス。
【請求項８】
前記支持体（１１０）が円柱の軸（Ｘ−Ｘ’）に平行な面に沿って切頭された中空円柱の形態をとり、前記濾過手段（１２０）が該切頭円柱の底部を形成することを特徴とする、請求項１〜６のいずれか一項に記載の細胞バイオマーカーを捕捉するデバイス。
【請求項９】
前記支持体（１１０）が少なくとも１つの実質的に円形若しくは実質的に楕円形若しくは実質的に多角形の貫通開口を有するか、又は亀裂の形態をとることを特徴とする、請求項１〜８のいずれか一項に記載の細胞バイオマーカーを捕捉するデバイス。
【請求項１０】
感光性樹脂から作製されることを特徴とする、請求項１〜９のいずれか一項に記載の細胞バイオマーカーを捕捉するデバイス。
【請求項１１】
生体適合性材料から作製されるか、又は生体適合性材料で覆われることを特徴とする、請求項１〜１０のいずれか一項に記載の細胞バイオマーカーを捕捉するデバイス。
【請求項１２】
抗血栓化合物を用いて機能化されることを特徴とする、請求項１〜１１のいずれか一項に記載の細胞バイオマーカーを捕捉するデバイス。
【請求項１３】
細胞バイオマーカーをサンプリングするデバイス（３００）であって、捕捉デバイスを生体流管に導入する手段（２００）に取り付けられた請求項１〜１２のいずれか一項に記載の細胞バイオマーカーを捕捉する少なくとも１つのデバイス（１００、１０１、１０２、１０３）を備えることを特徴とする、デバイス。
【請求項１４】
前記捕捉デバイスを血液循環中に導入する手段がストリップ（２００）を含むことを特徴とする、請求項１３に記載の細胞バイオマーカーをサンプリングするデバイス。
【請求項１５】
前記ストリップが金属合金、又は樹脂及び繊維ベースの複合材料を含むことを特徴とする、請求項１４に記載の細胞バイオマーカーをサンプリングするデバイス。
【請求項１６】
前記導入手段（２００）が、濾過手段の脱離を回避することを意図した濾過手段の第１の保護手段を備えることを特徴とする、請求項１３〜１５のいずれか一項に記載の細胞バイオマーカーをサンプリングするデバイス。
【請求項１７】
前記第１の保護手段が、前記導入手段（２００）に取り付けられた少なくとも１つのスタッド（２１０）を含むことを特徴とする、請求項１６に記載の細胞バイオマーカーをサンプリングするデバイス。
【請求項１８】
前記導入手段（２００）が、導入される血管を保護することを意図した第２の保護手段を有することを特徴とする、請求項１３〜１７のいずれか一項に記載の細胞バイオマーカーをサンプリングするデバイス。
【請求項１９】
前記導入手段（２００）の先端（２０１）に取り付けられ、第１及び／又は第２の保護手段を形成するエンドピース（２２０）を有することを特徴とする、請求項１６又は１８に記載の細胞バイオマーカーをサンプリングするデバイス。
【請求項２０】
前記エンドピース（２２０）が少なくとも１つのアーチ（２２１、２２２）を備えることを特徴とする、請求項１９に記載の細胞バイオマーカーをサンプリングするデバイス。
【請求項２１】
前記導入手段（２００）が、その先端（２０１）の付近に第１及び／又は第２の保護手段を形成する少なくとも１つの長手方向アーチ（２３１、２３２）を有することを特徴とする、請求項１６又は１８に記載の細胞バイオマーカーをサンプリングするデバイス。
【請求項２２】
生体適合性材料で覆われることを特徴とする、請求項１３〜２１のいずれか一項に記載の細胞バイオマーカーをサンプリングするデバイス。
【請求項２３】
抗血栓化合物を用いて機能化されることを特徴とする、請求項１３〜２２のいずれか一項に記載の細胞バイオマーカーをサンプリングするデバイス。
【請求項２４】
カテーテル内での使用に好適となるように把持手段を備えることを特徴とする、請求項１３〜２３のいずれか一項に記載の細胞バイオマーカーをサンプリングするデバイス。
【請求項２５】
細胞バイオマーカーをサンプリングするセットであって、カテーテルと、該カテーテル内に挿入される請求項１３〜２４のいずれか一項に記載のサンプリングデバイスとを含む、セット。
【請求項２６】
癌の診断又は治療法に利用されることを意図した、請求項１３〜２４のいずれか一項に記載の細胞バイオマーカーをサンプリングするデバイス。
【請求項２７】
診断又は治療目的で使用される、請求項１〜１２のいずれか一項に記載の細胞バイオマーカーを捕捉するデバイス。
【請求項２８】
診断又は治療目的で使用される、請求項１３〜２４のいずれか一項に記載の細胞バイオマーカーをサンプリングするデバイス。
【請求項２９】
診断又は治療目的で使用される、請求項２５に記載の細胞バイオマーカーをサンプリングするセット。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、血液等の生体流の循環中に存在し、捕捉後の分析により特に診断を行うことが可能となる対象の細胞を捕捉及びサンプリングするデバイスの分野にある。
【背景技術】
【０００２】
ここ数年間、癌の特定及び治療の傾向は腫瘍細胞の精細な研究によって実行される個別化医療に向いている。これらの細胞は、通常は生検によってサンプリングされる。しかしながら、生検は侵襲的であり、それを回避するために代替的な方法が開発されている。
【０００３】
癌性腫瘍は、「循環腫瘍細胞」又はＣＴＣと称される細胞を血液循環中に放出する。この現象が疾患の初期段階に見られることが一般に認められている。これらの細胞の免疫組織化学的分析により、診断を行い、特に癌の悪性度に関する情報を提供することが可能となる。このため、ＣＴＣは癌疾患の医療、診断、予後診断及びモニタリングにおいて常に対象のバイオマーカーとなっている。
【０００４】
ここで、ＣＴＣは癌を患う患者の血液中に極めて低い濃度で存在する（正常血液細胞の約１／１０９）（非特許文献１）。このため、これらの細胞の単離は極めて困難である。この単離を達成するために様々な手法が知られている。
【０００５】
ＣｅｌｌＳｅａｒｃｈ（商標）システムは免疫検出に基づくものである。このシステムは、ＣＴＣの表面上の上皮起源の細胞に特異的な膜抗原であるＥｐＣＡＭの存在に基づく。７．５ｍｌの血液サンプルを遠心分離した後、抗ＥｐＣＡＭ抗体を表面上に備える強磁性ナノ粒子と接触させる。次いで、ＣＴＣを磁場の印加によって他の細胞から分離する。このシステムは以下の二重の不利点を有する：
非常に限られた血液サンプル（全血液量の０．１５％に相当する７．５ｍｌ）しか利用されず、ＣＴＣの数は低濃度であるため非常に少ない。
上皮間葉移行（ＥＭＴ）中にこれらの細胞の全集団の約２／３を占めるタンパク質ＥｐＣＡＭを失っているため、ＣＴＣの検出が不可能となる（非特許文献２）。さらに、寿命が限られ、最も危険なものではない分化細胞の検出しか可能でない。
【０００６】
ＣＴＣのサイズに基づいてＣＴＣをｉｎ  ｖｉｔｒｏで血液サンプルから単離する他のアプローチが知られている。特に、ＩＳＥＴシステム（「上皮腫瘍細胞のサイズによる単離（Isolation by Size of Epithelial Tumour Cells）」）は、処理血液サンプル（赤血球の溶解の前）の微細穿孔ポリカーボネート膜での濾過を利用するものである。このシステムでは、ＣＴＣは加えられる強い圧力に耐えるように、パラホルムアルデヒドの適用によって予め剛性が与えられている（rigidified）（非特許文献３）。
【０００７】
概して、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ検出の感度は、サンプルが低容量であるために低下している。実際に、血液におけるＣＴＣの希少性を考えると、数ミリリットルのサンプルにおけるそれらの存在は、既に進行段階の癌で数単位に達している場合がある。はるかに早い段階でのそれらの検出は実際にはほぼ不可能である。
【０００８】
特許文献１から、ｉｎ  ｖｉｖｏ検出を可能にするＧＩＬＵＰＩ（商標）システムが知られている。このシステムは、血液循環中に導入される抗ＥｐＣＡＭ抗体を用いた金属棒の機能化に基づくものである。このシステムは低容量のサンプルに固有の制限を回避することが可能であるが、依然として免疫学的な捕捉方法によって制限されている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００９】
【特許文献１】国際公開第２０１０／１４５８２４号
【非特許文献】
【００１０】
【非特許文献１】Nagrath, S., et al.
【非特許文献２】Small, A.C., et al.
【非特許文献３】Williams, A., et al.
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１１】
本発明の目的は、サンプリング及び循環細胞バイオマーカーを単離する免疫学的方法に関連する欠点を回避することを可能にするデバイスを提案することである。この目的のために、本発明では、動物又はヒトの生体流において循環する細胞バイオマーカーを捕捉するデバイスであって、該デバイスがｉｎ  ｖｉｖｏでの使用に好適であり、前記細胞バイオマーカーを保持することを意図した濾過手段を備え、該濾過手段が前記細胞バイオマーカーを保持するのに好適な寸法の、支持体と一体となった少なくとも１つの貫通開口を備え、該支持体が中空部材の形態をとることを特徴とする、デバイスが提案されている。
【課題を解決するための手段】
【００１２】
本発明によるデバイスは、循環細胞バイオマーカーの物理的特性であるサイズ及び変形性に基づくものである。血小板は２μｍ〜４μｍのサイズを有し、赤血球は約７μｍのサイズを有し、白血球は７μｍ〜２５μｍの様々な寸法を有するが、極めて変形性が高いため、最小血管内を循環することが可能である。循環細胞バイオマーカーの中でも、特に循環腫瘍細胞は４μｍ〜２５μｍの様々な寸法を有するが、極めて変形性が低い。その結果として、ＣＴＣ等の循環細胞バイオマーカーを保持する一方で、生体流の他の全ての構成要素を特に圧力及び速度のｉｎ  ｖｉｖｏ条件下で通過させる濾過手段を提供することが可能である。本発明による捕捉デバイスは細胞バイオマーカーの物理的特性（サイズ、変形性）のみを利用するため、ＣＴＣの表面上の膜タンパク質の存在に関する任意の仮定が回避される。デバイスはバイオマーカーの化学親和性に基づいて細胞バイオマーカーを捕捉する手段を備えないのが好ましい。細胞バイオマーカーは支持体の空洞に入り込み、それらの物理的特性のために濾過によって保持される。この形態の捕捉デバイスにより、細胞バイオマーカーの再循環の現象を制限することが可能となる。一方、中空支持体を有する捕捉デバイスにより、バイオマーカーが横から逃げるのを回避することが可能となる。さらに、捕捉デバイスにより、捕捉デバイスに入り込んだバイオマーカーがその内部の流の運動によって捕捉デバイスの外側に同伴されるのを回避することも可能となる。捕捉デバイスは、特に反転渦（contra-rotating vortices）を制限することを意図したものである。
【００１３】
生体流の例は、血液、リンパ液、尿等である。
【００１４】
捕捉デバイスに適した循環細胞バイオマーカーの例は、間質細胞及び上皮細胞、循環胎児細胞（ＣＦＣ）、幹細胞、腫瘍細胞のクラスター又は集合体、全てのタイプの癌と関連する腫瘍細胞：前立腺腫瘍細胞、乳癌細胞又は結腸癌細胞等、並びに他の細胞型：単球（マクロファージ）である。このため、本発明によるデバイスは特に、循環腫瘍細胞の捕捉による種々のタイプの癌の診断に特に好適である。
【００１５】
細胞バイオマーカーが、細胞内若しくは細胞外の寄生生物又はそれらの卵等のサイズの大きな侵入要素（infesting elements）も意図することが理解される。例えば、リーシュマニア症はサイズが１０μｍ〜１５μｍの感染性のその前鞭毛体の存在によって診断することができる。同様に、住血吸虫症は、サイズが７０μｍ〜２００μｍのその卵の存在によって診断することができる。
【００１６】
細胞バイオマーカーは、真核細胞であるのが好ましい。これらの細胞は、単一であるか、又は集合体の形態であり得る。
【００１７】
特に異常を示し得る他の循環細胞バイオマーカーの捕捉を受けた他の疾患の診断を想定することができる。循環細胞バイオマーカーの捕捉による疾患以外の生理的状態の診断又は疾患の予防を想定することもできる。
【００１８】
本発明による捕捉デバイスは、ｉｎ  ｖｉｖｏでの使用に好適である。特に、捕捉デバイスは、血液循環流中に留置されるように準備することができる。このため、濾過手段は、それに剛性を与え、及び／又はそれを生体流中に保持し、その回収を可能にするために支持体と連結される。捕捉デバイスは、ｉｎ  ｖｉｖｏ、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ又はｅｘ  ｖｉｖｏ捕捉デバイスであり得る。捕捉デバイスは、ｉｎ  ｖｉｖｏデバイスであるのが好ましい。しかしながら、捕捉デバイスがｅｘ  ｖｉｖｏ又はｉｎ  ｖｉｔｒｏで利用され得る可能性は排除されない。
【００１９】
捕捉デバイスは、以下の特徴のいずれかを単独又は組合せで含み得る。
【００２０】
有利には、捕捉デバイスは、曝される生体流の圧力が９ｍｍ  Ｈｇ〜１６ｍｍ  Ｈｇである場合に細胞バイオマーカーを濾過することが可能である。これらの圧力は、通例、ｉｎ  ｖｉｖｏの生体流、末梢静脈において見られる圧力である（Munis, J. R. et al.）。
【００２１】
有利には、濾過手段は、寸法が血流中のそれらのサイズ及びそれらの変形性に基づいて細胞バイオマーカーを保持するのに好適である少なくとも１つの貫通開口を備えることができる。
【００２２】
寸法は、例えば深さ及び少なくとも１つの横断寸法である。
【００２３】
有利には、少なくとも１つの開口は、実質的に円形若しくは実質的に楕円形若しくは実質的に多角形であるか、又は亀裂の形態をとることができる。
【００２４】
本発明は、当然ながら開口が貫通開口である限りにおいて、それらの形状によって限定されない。開口の形状及びサイズは、種々の厚さを有する種々のタイプの細胞バイオマーカーの捕捉を可能にするために濾過手段の厚さの範囲内で変化し得る。これらの開口の壁は切頭円錐（truncated cone：円錐台）を形成していてもよいが、好ましくは円柱を形成し、すなわち平行な母線を有する。
【００２５】
濾過手段は、最小寸法が検討中の細胞バイオマーカーを保持することが可能となるように選択される例えば直線若しくは曲線の亀裂の形態の開口を１つのみ備えていてもよく、又は同じ形状及び寸法若しくは異なる形状及び／又は寸法の濾過手段にわたって均等若しくは不均等に分布した幾つかの開口を備えていてもよい。
【００２６】
好ましい実施の形態によると、各々の開口は１μｍ〜２００μｍ、より好ましくは１μｍ〜１００μｍ、更により好ましくは５μｍ〜１００μｍの横断寸法、好ましくはその最小横断寸法を示す。特に、各々の開口はＣＴＣタイプの細胞バイオマーカーに対して好ましくは１μｍ〜２５μｍ、より好ましくは５μｍ〜２５μｍ、更により好ましくは１２μｍ〜２５μｍの横断寸法を示し、最適直径はこの場合１２μｍ付近である。
【００２７】
濾過手段の各々の貫通開口は円形であるのが好ましい。この場合、横断寸法は、開口の直径に相当する。
【００２８】
好ましい実施の形態によると、支持体は、一方の端が開き、別の端が濾過手段によって閉じられた中空部材である。支持体は、長手方向に沿って伸びるのが好ましい。この場合、支持体の開口が一方の長手方向先端に位置し、濾過手段が反対の長手方向先端に位置し得る。
【００２９】
有利には、濾過手段は、平面とすることができる。
【００３０】
本発明は、濾過手段の形状によって限定されないが、濾過手段は、平面であるのが好ましい。
【００３１】
一実施の形態によると、支持体は、軸を中心に回転対称性を有する。支持体は、軸を中心に完全回転対称性を有するか、又は部分回転対称性を有し、軸に平行な面に沿って切頭であってもよい。回転対称性を有するデバイスを利用することによって、デバイスをその回転軸を生体流の主方向にして設置する場合に生体流の経路の乱れが減る。このタイプの形状により、特にデバイスをｉｎ  ｖｉｖｏで利用する場合の血栓症のリスクを減らすことが可能となる。切頭部により、捕捉デバイスを導入手段により良好に取り付けることが可能となる。切頭部は、好ましくは導入手段と接触させることを意図したものである。回転軸は、支持体が伸びる長手方向であるのが好ましい。
【００３２】
捕捉デバイスは、例えば円柱又は切頭、若しくは非切頭円錐又は放物面の形態をとることができる。
【００３３】
濾過手段は、支持体の底部の全体又は一部を形成することができる。濾過手段が支持体の底部を形成するのが好ましい。
【００３４】
有利には、デバイスは軸を中心に回転対称性を有することができる。捕捉デバイスは、例えば円柱又は円錐、又は円錐若しくは球形キャップが載った円柱の形態をとることができる。
【００３５】
好ましい実施の形態では、デバイスは、円柱の軸に平行な面に沿って切頭された中空円柱の形態をとり、濾過手段は、切頭円柱の底部を形成することができる。
【００３６】
支持体は少なくとも１つの実質的に円形若しくは実質的に楕円形若しくは実質的に多角形の貫通開口を有するか、又は亀裂の形態をとることができる。支持体は細胞バイオマーカーを保持することを意図する寸法の貫通開口を有しないのが好ましい。
【００３７】
本発明は支持体における貫通開口の有無、それらの形状又はそれらの数のいずれによっても限定されず、これらは濾過手段に存在する開口とは異なっていてもよい。
【００３８】
一実施の形態によると、支持体及び濾過手段は単一部品を形成する。
【００３９】
有利には、デバイス、濾過手段及び支持体は、感光性樹脂から作製することができる。
【００４０】
デバイス、濾過手段及び支持体は、三次元レーザーリソグラフィー、又は従来のフォトリソグラフィーによって作製することができる。照射を受けた部位の樹脂が重合した後、重合していない樹脂を溶解する。
【００４１】
有利には、デバイスは、生体適合性材料から作製するか、又は生体適合性材料、例えばパリレン等のポリマーで覆うか、又は生体適合性金属層（Ａｕ、Ｔｉ等）で覆うことができる。この生体適合性材料は、細胞培養物に適合するゲルの形態をとっていてもよい。
【００４２】
有利には、捕捉デバイスは、血栓症又は凝固のリスクを回避するためにヘパリン等の抗血栓化合物を用いて機能化することができる。デバイスは、特に、循環する生物学的実体に対するその吸着特性を改変することを目的とする様々な表面処理を受けることができる。これらの処理は、表面張力、表面化学反応性又は表面粗度の制御を可能にするプラズマ処理だけでなく、グラフト又は機能化の化学処理であってもよい。有利には、捕捉デバイスは、抗血栓化合物を用いて機能化することができる。
【００４３】
本発明は、捕捉デバイスを生体流管（biological flow vessel）に導入する手段に取り付けられた少なくとも１つの本発明によるバイオマーカーの捕捉デバイスを備える、細胞バイオマーカーをサンプリングするデバイスにも関する。
【００４４】
捕捉デバイスを生体流管、特に血管、動脈若しくは、好ましくは、静脈、又はリンパ管に容易に導入するために導入手段と連結することが有利である。捕捉デバイスは、導入手段に直接取り付けるか、又はスタッド等の部品を介して取り付けることができる。当然ながら、サンプリングデバイスは、幾つかの捕捉デバイスを備えることができ、これらの捕捉デバイスは、特に開口の形状及び直径に関して互いに異なっていてもよい。
【００４５】
一変更形態では、捕捉デバイスを血液循環中に導入する手段は、支持体を形成することができる。
【００４６】
この変更形態では、濾過手段の支持体と導入手段との間に同一性がある。
【００４７】
有利には、捕捉デバイスを血液循環中に導入する手段は、ストリップを含むことができる。
【００４８】
例えば金属製の細いストリップを、捕捉デバイスを血管内に導入する手段として使用することができる。
【００４９】
有利には、ストリップは金属合金、又は樹脂及び繊維ベースの複合材料を含むことができる。
【００５０】
ストリップは、ステンレス鋼、又はその生体適合特性及びその柔軟性で知られるニチノール等のニッケルとチタンとの合金であり得る。実際に、ストリップは、血管の長軸に沿って挿入することが可能なほど十分に柔軟な材料からなる必要がある。
【００５１】
ステンレス鋼又は複合材料のストリップの場合、パリレン等の生体適合性材料又は生体適合性金属層（Ａｕ、Ｔｉ等）で覆われていてもよい。生体適合性材料の沈着により、ストリップに剛性を付与するか又はその機械的挙動を改善することも可能となる。
【００５２】
有利には、導入手段は濾過手段の脱離を回避することを意図した濾過手段の第１の保護手段を備えることができる。
【００５３】
捕捉デバイスの濾過手段、又は実際には捕捉デバイス全体を、導入又は引抜き操作中の導入手段からのその脱離を回避するために保護することが有利である。この目的で、サンプリングデバイスは、第１の保護手段を有し得る。この第１の保護手段の一機能は、同様にサンプリングデバイスを血管内の流れに対して、またカテーテル内に導入する場合にはカテーテルに対して等しく中央化する（centre：中央に置かれる）ことでもあり得る。
【００５４】
有利には、第１の保護手段は、導入手段に取り付けられた少なくとも１つのスタッドを有することができる。
【００５５】
導入手段は、例えば、捕捉デバイス又はデバイスに隣接し、血流を乱さないように十分に離れた２つのスタッドを備えることができる。
【００５６】
有利には、導入手段は、導入される血管を保護することを意図した第２の保護手段を備えることができる。
【００５７】
サンプリングデバイスが示す異物から血管壁を保護することが有利である。
【００５８】
有利には、サンプリングデバイスは、導入手段の先端に取り付けられ、第１及び／又は第２の保護手段を形成する末端部を有することができる。
【００５９】
有利には、末端部は、少なくとも１つのアーチを備えることができる。
【００６０】
アーチは、第１及び第２の先端を備える細長い湾曲部を意味することが理解され、第１及び第２の先端はその先端の少なくとも一方でストリップに接合することができる。
【００６１】
末端部がサンプリングデバイスの先端に取り付けられている場合、少なくとも１つのアーチが非積極的に（non-aggressively）管の壁に押しつけられ、管、またカテーテルが利用される場合には、カテーテルの内部においてデバイスを中央化する。少なくとも１つのアーチは、捕捉デバイスを保護することを意図したものでもあり得る。
【００６２】
別の変更形態では、導入手段は、その先端の付近に第１及び／又は第２の保護手段を形成する少なくとも１つの長手方向アーチを有し得る。
【００６３】
有利には、サンプリングデバイスは、パリレン等の生体適合性材料で覆うことができる。
【００６４】
有利には、サンプリングデバイスは、抗血栓化合物、例えばヘパリンを用いて機能化することができる。
【００６５】
有利には、サンプリングデバイスは、カテーテル内での使用に好適となるように把持手段を有することができる。
【００６６】
サンプリングデバイスは、導入手段の遠位端に設置され、デバイスの把持を容易にし、デバイスをカテーテルに導入する際に止め具として働くプラスチックストッパー等の「ストッパー」、すなわち把持手段を備えることができる。捕捉デバイスを有する側とは逆の先端がサンプリングデバイスの遠位端と呼ばれる。
【００６７】
有利には、サンプリングデバイスは、カテーテル内に挿入することができる。
【００６８】
本発明はまた、細胞バイオマーカーをサンプリングするセットであって、カテーテルと、該カテーテル内に挿入される本発明によるサンプリングデバイスとを含む、セットに関する。
【００６９】
場合により、ヘパリン等の抗血栓化合物を用いて機能化される潅流カテーテルは、サンプリングデバイスをガイドし、有利に保護する。カテーテルを血管内に導入し、サンプリングデバイスをカテーテルの内部に挿入した後、サンプリングデバイスをカテーテルから押し出し、血流中に留置する。サンプリングの終了時に逆の操作、すなわちカテーテルへのサンプリングデバイスの再挿入及びカテーテルの引抜きを行う。次いで、捕捉された細胞を計数し、免疫標識し、捕捉デバイス上で直接培養するか、又は計数、免疫標識のために容易に回収し、ｉｎ  ｖｉｔｒｏで培養に戻すことができる。
【００７０】
本発明によるデバイスの利点は以下の通りである：
ｉｎ  ｖｉｖｏでの使用に好適である。通例、その寸法により血管等の生体流路への導入が可能である。
細胞バイオマーカーの物理的特性（サイズ及び変形性）のみを利用するため、細胞バイオマーカーの表面上の実際の又は推定される特定の膜タンパク質の存在を懸念する必要はない。
血液循環を流体系として直接利用することができる。
分析される血液量が大幅に増大する。デバイスは、５分間に１００ｍｌ、すなわちサンプルを利用するシステムによって分析される量の１０倍〜１００倍の量の血液を分析することができる。
サンプリング時間を増やし、幾つかの捕捉デバイスを備えるデバイスを設けることによって捕捉数を増加させることができる。
その形状寸法、特に開口のサイズを適合させることによって上述の任意のタイプの循環細胞バイオマーカーに適用可能である。
【００７１】
本発明は、本発明による捕捉デバイスによる細胞バイオマーカーの捕捉段階、及び捕捉された細胞バイオマーカーの分析段階を含む、患者において疾患又は生理的状態を検出する方法にも関する。
【００７２】
細胞バイオマーカーの捕捉段階は、ｉｎ  ｖｉｖｏ、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ又はｅｘ  ｖｉｖｏで行うことができる。
【００７３】
分析段階は、定量的又は定性的な分析段階であり得る。例えば、決定段階は、細胞バイオマーカーが癌性細胞であるかを決定する段階であり得る。
【００７４】
分析段階は、細胞バイオマーカーを培養に戻す段階を含み得る。
【００７５】
本発明は、診断目的、特に癌診断目的で使用される本発明による細胞バイオマーカーを捕捉するデバイスに関する。
【００７６】
本発明は、本発明によるサンプリングデバイスによる細胞バイオマーカーの捕捉段階及び捕捉された細胞バイオマーカーの分析段階を含む、患者において疾患又は生理的状態を検出する方法にも関する。
【００７７】
本発明は、診断目的、特に癌診断目的で使用される本発明による細胞バイオマーカーをサンプリングするデバイスにも関する。
【００７８】
本発明は、本発明によるサンプリングセットによる細胞バイオマーカーの捕捉段階及び捕捉された細胞バイオマーカーの分析段階を含む、患者において疾患又は生理的状態を検出する方法にも関する。
【００７９】
本発明は、診断目的、特に癌診断目的で使用される本発明による細胞バイオマーカーをサンプリングするセットにも関する。
【００８０】
本発明は、本発明による捕捉デバイスによる細胞バイオマーカーの捕捉段階を含む、患者において疾患を治療する方法にも関する。
【００８１】
本発明は、治療目的、特に癌治療目的で使用される本発明による細胞バイオマーカーを捕捉するデバイスに関する。
【００８２】
本発明は、本発明によるサンプリングデバイスによる細胞バイオマーカーの捕捉段階を含む患者において疾患を治療する方法にも関する。
【００８３】
本発明は、治療目的、特に癌治療目的で使用される本発明によるバイオマーカーをサンプリングするデバイスにも関する。
【００８４】
本発明は、本発明によるサンプリングセットによる細胞バイオマーカーの捕捉段階を含む患者において疾患を治療する方法にも関する。
【００８５】
本発明は、治療目的、特に癌治療目的で使用される本発明による細胞バイオマーカーをサンプリングするセットにも関する。
【００８６】
実施形態及び変更形態を非限定的な例として、添付の図面を参照して下記に説明する。
【図面の簡単な説明】
【００８７】
【図１】捕捉デバイスの透視図であり、図１Ａはこのデバイスの一部の拡大図である。
【図２Ａ】濾過手段の変更形態の透視図である。
【図２Ｂ】濾過手段の変更形態の透視図である。
【図２Ｃ】捕捉デバイスの一変更形態の透視図である。
【図３Ａ】サンプリングデバイスの一実施形態の先端を示す図である。
【図３Ｂ】サンプリングデバイスの一実施形態の先端を示す図である。
【図４】２つの保護手段を有するサンプリングデバイスの先端を示す図である。
【図５Ａ】サンプリングデバイスの先端及び末端保護部を示す図である。
【図５Ｂ】サンプリングデバイスの先端及び末端保護部を示す図である。
【図５Ｃ】図５Ｂの拡大図である。
【図６Ａ】一変更形態における保護及び中央化手段を有するサンプリングデバイスの先端を示す図である。
【図６Ｂ】一変更形態における保護及び中央化手段を有するサンプリングデバイスの先端を示す図である。
【図７Ａ】捕捉デバイスの一変更形態を示す図である。
【図７Ｂ】捕捉デバイスの一変更形態を示す図である。
【図７Ｃ】捕捉デバイスの一変更形態を示す図である。
【図７Ｄ】捕捉デバイスの一変更形態を示す図である。
【図７Ｅ】捕捉デバイスの一変更形態を示す図である。
【発明を実施するための形態】
【００８８】
図１に示す捕捉デバイス１００は、円柱の軸Ｘ−Ｘ’に平行な面に沿って切頭された円柱形支持体１１０を備え、すなわちこの支持体は平坦部１１１と円形部１１２とを備える。後述のように、平坦部１１１は導入手段へのデバイスの取付けに有用である。しかしながら、デバイスは非切頭円柱の母線によって又は切頭円柱の母線の端で取り付けられていてもよい。
【００８９】
第１の先端では、円柱は平坦底部１２０によって閉じられ、他方の先端で開かれている。底部１２０は、フィルター膜の形態でデバイス１００の濾過手段を構成する。図１Ａに見られるように、フィルター膜１２０は、同じ直径の円形断面の円柱形状の一連の貫通開口１２１を備える。
【００９０】
捕捉デバイス１００は、血液循環中に留置されることを意図し、開口は探索されるバイオマーカーが捕捉デバイスに入り込み、フィルター１２０によって保持されるように循環の上流に面する。これらのバイオマーカーが捕捉デバイスに入った後に捕捉デバイスから逃げないことが重要である。ここで、或る特定の構成では、デジタルシミュレーションから、再循環渦がデバイスの内部に存在する可能性があり、バイオマーカーがデバイスから逃げる可能性があることが示されている。図１に示す円柱形デバイスの場合、この現象は支持体１１０がフィルター１２０と同じ開口１２１を有する場合に生じる。図１に示す好ましい実施形態では、支持体の円形部１１２は開口を全く有さず、血流がデバイスを通過する際に本質的に層流を維持することが可能である。
【００９１】
図２Ａ、図２Ｂ及び図２Ｃに捕捉デバイスの他の実施形態を示す。図２Ａ及び図２Ｂでは、デバイス１０１、１０２は、回転放物面の形態をとる濾過手段を有し、濾過手段の支持体はこの場合、ストリップ等の導入手段から構成される。デバイス１０１は、円形の開口を有し、デバイス１０２は多角形の開口を有する。これらのデバイスは、先に図１を参照して述べたように導入手段へのそれらの取付けを容易にするために切頭されていても、又は基部若しくは台座を備えていてもよい。
【００９２】
図２Ｃに、フィルター１０４の面に平行なクロスバー１０５ｃによって連接された、２つの側板１０５ａ及び１０５ｂを備える支持体１０５によって堅固に保持された平坦フィルター１０４を備える捕捉デバイス１０３を示す。
【００９３】
デバイスの寸法は、血管内へのデバイスの実装に好適である。特に血栓症のリスクを生じないためには、血液循環を乱してはならない。
【００９４】
図１に示すデバイス１００の場合、寸法は以下の通りである：
５０μｍ〜３ｍｍ、好ましくは５０μｍ〜１．７ｍｍ、より好ましくは２００μｍ近くの直径。一実施形態によると、デバイスの直径はデバイスが導入される流路の直径の０．５％〜１５％、好ましくは特に捕捉デバイスが尺側皮静脈内に留置される予定の場合に０．５％〜５％である。
５０μｍ〜３ｍｍ、好ましくは１５０μｍ近く、好ましくはデバイスの壁の厚さと捕捉される予定の細胞バイオマーカーの直径との合計よりも大きい長さ。
概して上述の細胞バイオマーカーに対しては、１μｍ〜２００μｍ、好ましくは１μｍ〜１００μｍ、更により好ましくは５μｍ〜１００μｍ、ＣＴＣに対しては１μｍ〜２５μｍ、より好ましくは５μｍ〜２５μｍ、更により好ましくは１２μｍ〜２５μｍの開口の直径。驚くべきことに、非限定的な例としては、サイズが１２μｍ〜２５μｍのＰＣ３前立腺系統の腫瘍細胞については、捕捉デバイスが開口の直径に非常に影響されやすく、最適直径はこの場合１２μｍ近くであることが見出された。
開口が亀裂の形態をとる場合、その横断寸法は１μｍ〜２００μｍ、好ましくは１μｍ〜１００μｍ、更により好ましくは５μｍ〜１００μｍであり、好ましくは１μｍ〜２５μｍ、より好ましくは５μｍ〜２５μｍ、更により好ましくは１２μｍ〜２５μｍ、好ましくは１２μｍ近くである。
開口は切頭円錐形状であってもよく、直径は細胞バイオマーカー、より特にはＣＴＣを開口の内部に保持するように、細胞バイオマーカーに対しては、１μｍ〜２００μｍ、好ましくは１μｍ〜１００μｍ、更により好ましくはおよそ５μｍ〜１００μｍ、ＣＴＣに対しては好ましくは１μｍ〜２５μｍ、より好ましくは５μｍ〜２５μｍ、更により好ましくは１２μｍ〜２５μｍ、約１５μｍ〜約８μｍと様々である。
支持体の壁及びフィルター膜の厚さは、５μｍ〜２０μｍ、好ましくは９μｍ近くである。捕捉デバイスの機械的挙動を改善するためには、フィルター膜の厚さは、６μｍ近くであり、壁の厚さは、１０μｍ近くであるのが好ましい。
図２Ｃに示すような平坦な長方形フィルター膜面の場合、側板の特徴的寸法は、５０μｍ〜１．５ｍｍである。
【００９５】
捕捉デバイスは、デバイスの寸法に好適な三次元レーザーリソグラフィー又は任意の他のリソグラフィー法によって加工される感光性樹脂から作製することができる。
【００９６】
生体適合性に関しては、本発明は以下の２つの選択肢を提案する：
利用される樹脂が生体適合性であるか、
又はデバイスが作製された後にパリレン等の生体適合性フィルム、又はＡｕ、Ｔｉ等の生体適合性金属で覆われる。
【００９７】
本発明の捕捉デバイスは前述の記載によって限定されない。特に、以下の通りである：
切頭面は、軸Ｘ−Ｘ’に対して角度的にシフトし得る。
支持体は、例えば円錘形、球形、面によって切頭された又は切頭されていない円柱形以外の形状を有し得る。
支持体が回転軸を有しない場合、支持体の形状は、２つの側板及び１つのクロスバーの使用に限定されない。
フィルター膜が円柱の断面に沿って設置され、その底部を構成しない、すなわち支持体１１０が血流の下流部を含有していてもよい。
デバイス１００のフィルター膜を形成する円柱の底部１２０は、非平面であり、例えば半球形キャップ又は円錐の形態をとっていてもよい。
【００９８】
図３Ａに、ストリップの先端２０１の付近に支持体１１０の平坦部１１１によって導入手段、ここではストリップ２００に取り付けられた捕捉デバイス１００を備えるサンプリングデバイス３００を示す。捕捉デバイス１００は、溶接若しくは金属沈着、又は生体適合性接着剤若しくは樹脂の利用によって取り付けることができる。
【００９９】
ストリップ２００は、ニッケルとチタンとの合金であり、生体適合性かつ柔軟であるという特性を有し、血管内へのその導入を容易にすることを可能とするニチノールから作製される。ストリップ２００は、別の非生体適合性材料から構成されている場合に、その製造の一段階でパリレン等の生体適合性材料のフィルムにより覆われ得る。
【０１００】
ストリップの幅は、ストリップが挿入され得るカテーテルの内径に適合するように３００μｍ〜３ｍｍ、好ましくは３００μｍ〜１．５ｍｍ、好ましくは９００μｍ近くである。ニチノールのストリップの場合、その厚さは、５０μｍ〜７６μｍである。ストリップは、切り取られる場合に長さ数センチメートル、例えば５ｃｍであるが、血液循環中に効果的に導入される長さは、１ｃｍ又は２ｃｍに制限される。
【０１０１】
図３Ｂに、膜１３０の支持体がストリップ２００から構成される実施形態を示す。フィルター膜は、血流中の上流に面して配向することを意図した開口を示すように端部１３１によってストリップ２００に取り付けられる。フィルター膜は血流を乱さないように構成される。
【０１０２】
サンプリングデバイス３００と関連するリスクは、例えばサンプリングデバイスの導入又は引抜きの際に捕捉デバイス（単数又は複数）１００がストリップ２００から脱離し、血液循環中に入ることである。この理由から、図４に示すように、ストリップ２００は、長手方向に１つ又は幾つかの捕捉デバイス１００の両側でストリップ２００に取り付けられたスタッド２１０の形態の第１の保護手段を備える。図４に示すスタッドは、円形の頂部を有する「樽」の形状を有するが、それらがデバイスの規模に対して比較的大きな物体の形態をとり、血液循環を乱さず、管壁を損傷しないように丸みを帯びた形状である限りにおいて円柱、半球又は切頭円錐形状等を有していてもよい。
【０１０３】
スタッド２１０は保護をもたらすために捕捉デバイス１００と十分に近いが、捕捉デバイス１００周辺の血流を乱さないように十分に離れている、例えば約１ｍｍ隔てられている。
【０１０４】
ストリップに接着されたスタッド２１０は、樹脂から有利に構成され、捕捉デバイス１００と同じ製造プロセスを用いて製造されるが、これに限定されない。
【０１０５】
スタッド２１０の別の利点は、管及び／又はカテーテルにおけるサンプリングデバイスの中央化の機能に関与し得るということである。
【０１０６】
サンプリングデバイス３００と関連する別のリスクは、特に数分間の捕捉時間を鑑みて、挿入される管の壁を損傷するリスクである。この理由から、本発明は以下の２つの第２の保護手段を提案する：
図５Ｂ及び図５Ｃに、ストリップにその先端の付近で取り付けられることを意図したエンドピース２２０を備えるストリップ２００を示す。この末端部２２０は、第１の共通先端２２３及び自由な第２の先端２２４ａ、２２４ｂで接合する２つのアーチ２２１、２２２を形成する。この末端部２２０は、一方で共通先端２２３とストリップの先端２０１とを接合し、他方で第２の先端２２４ａ、２２４ｂをストリップの対向面に取り付けることによってストリップ２００に取り付けられる。これらのアーチ２２１、２２２は管壁に対して非積極的に押しつけられ、それを保護する。これらは、これらのアーチの第１の先端と第２の先端との間のストリップ２００に取り付けられた捕捉デバイス１００が引きはがされることも防ぐ。
図６Ａは、層板２３１、２３２がストリップ２００の端部２０２、２０３の各々から離れてアーチを形成し、これらの層板の先端２３１ａ、２３１ｂ、２３２ａ、２３２ｂがストリップに取り付けられたままであるストリップ２００を示す。層板２３１、２３２が図５の場合のように、これらのアーチが管を保護し、サンプリングデバイス３００を管において中央化するようにストリップ２００の面の両側で伸びる。図６Ｂの変更形態では、下流の先端２３１ａ、２３２ａのみがストリップ２００の端部２０２、２０３に取り付けられたままである。層板２３１、２３２は上流の先端２３１ｂ、２３２ｂがストリップ２００の端部から離れ、ストリップの面に両側で取り付けられるように軽く捻れている。当然ながら、本発明は、層板の上流の先端２３１ｂ、２３２ｂのみがストリップの端部に取り付けられたままであり、下流の先端がストリップの面に両側で取り付けられた対称的構成にも関する。
【０１０７】
本発明は、上述の記載によって限定されない：
導入手段は場合により平面でなく、別の形状、例えば円柱又はワイヤの形状をとっていてもよい。
サンプリングデバイス３００は、例えば血流を過度に乱さないように長手方向に若しくは互い違いに整列するか、又はストリップ２００上に横方向に整列した幾つかの捕捉デバイスを備えていてもよく、捕捉デバイスは場合により特に形状、サイズ、開口の寸法及びサイズの点で２つずつ異なるデバイスである。
【実施例】
【０１０８】
デジタルシミュレーション
装置及び方法：
流速、レイノルズ数、剪断応力及び血小板活性化に対する捕捉デバイスの影響力を評価するために、血流に対する捕捉デバイスの様々なプロトタイプの影響を「計算流体力学」（ＣＦＤ）によってシミュレートした。流体構造連成（ＦＳＩ）のデジタルシミュレーションのこの段階は、Ａｎｓｙｓ  Ｆｌｕｅｎｔ（商標）  １５．０ソフトウェアを用いて行った。文献研究により、血流の流れを左右する定数、及び最も適切な計算アルゴリズムを規定することが可能となった。
【０１０９】
血液は、粘度が一定であるニュートン流体とは対照的に粘度が剪断レベルに左右されることを意味する非ニュートン流体とみなされる。この特性を考慮することが重要である。非ニュートン流体の粘度をシミュレートする種々のモデルの中でも、べき乗則モデルを選択した（Petkova, S., et al.）。このモデルは以下の式に従って表される：ηｍｉｎ＞η＝ｋγｎ−１ｅＴ０  Ｔ＜ηｍａｘ（式中、ｋは流体の平均粘度の尺度（コンシステンシー指数）であり、ｎはニュートン流体からの偏差の尺度（べき乗則指数）であり、Ｔ０は基準温度であり、ηｍｉｎ及びηｍａｘはそれぞれ粘度の下限及び上限である）。シミュレーション中に利用されるべき乗則パラメーターを下記表１に提示する。
【０１１０】
【表１】
2018509954.tif 000003
【０１１１】
捕捉デバイスは、好ましくは前腕の静脈内に留置される予定になっている場合に、利用される静脈モデルは尺側皮静脈のモデルとした。
【０１１２】
尺側皮静脈モデルは、Baptista-Silva et al.によるものを含む様々な解剖学的研究に基づいて開発した。
【０１１３】
尺側皮静脈を下記表２に提示する変数を利用してモデル化した（Munis, J.R., L.J. Bhatia S Fau - Lozada, and L.J. Lozada）。
【０１１４】
【表２】
2018509954.tif 000004
【０１１５】
血栓形成を剪断応力及び曝露時間の研究によって決定し、血小板活性化はＨｅｌｌｕｍｓ閾値と称されるダイン・ｓ／ｃｍ２の値から得られる（Bludszuweit, C.）。
【０１１６】
結果：
捕捉デバイスの最適形状の決定：
種々の形状の捕捉デバイスを試験した。これらの形状の各々について、血流の流速、レイノルズ数、剪断応力及び血小板活性化に対する捕捉デバイスの影響を決定した。デバイス内及びデバイス付近の速度ベクトルの３Ｄマッピングを、種々の値の流路内の血流速度について行った。
【０１１７】
試験した種々の形状を図７Ａ〜図７Ｅに示す。結果を表３にまとめる。
【０１１８】
【表３】
2018509954.tif 000005
【０１１９】
結論：
放物面及び円柱形状により、血流の層流性を保存することが可能となる。
【０１２０】
反転渦、ひいてはバイオマーカーの再循環の存在は、デバイスの壁を流れと平行にした場合、及び捕捉デバイスがその側壁に開口を有しない場合に実質的に減少する。
【０１２１】
捕捉の有効性
装置及び方法
静脈内の循環の条件をｉｎ  ｖｉｔｒｏで再現した。
【０１２２】
試験される血液サンプルは、ＰＣ３−ＧＦＰ腫瘍細胞を５００腫瘍細胞／ｍｌ〜２５０００腫瘍細胞／ｍｌの濃度で添加したＶａｃｕｔａｉｎｅｒ（商標）  ＥＤＴＡ管（Becton, Dickinson & Company）でサンプリングした健常ボランティアに由来する血液のサンプルである。
【０１２３】
種々の開口を有する図７Ｂに示すような円柱形捕捉デバイスを試験した。これらのデバイスは、円柱形開口については直径１０μｍ、円錘形開口については入口で１５μｍ及び出口で８μｍの開口を有する。
【０１２４】
次いで、捕捉された細胞の生存能力を、トリプシン処理による細胞の回収及び培養ウェルでのこれらの再培養によって評価した。
【０１２５】
結果：
【０１２６】
【表４】
2018509954.tif 000006
【０１２７】
結論：
表４にまとめた結果から、捕捉デバイスの厚さ及び長さが捕捉効力に対して影響を有することが示される。捕捉デバイスは、細胞バイオマーカーの捕捉を可能とするために所与の最小長さを有しなくてはならない。その最小長さがなければ、濾過手段によって保持される細胞バイオマーカーは、ほぼ即座に生体流中の循環に戻される。捕捉デバイスの厚さも捕捉効力に影響を与える。厚さが大きすぎると捕捉効力が実際に減少する可能性がある。
【０１２８】
捕捉デバイスはＣＴＣ等の細胞バイオマーカーの特異的な捕捉を可能とする。白血球等の血液の他の細胞は捕捉されない。実際、ＣＴＣとは異なり、これらの他の細胞は粘弾性特性を有するため、それらの直径よりも小さい開口を通過することが可能である。
【０１２９】
円形形状の開口は、ＣＴＣ等の細胞バイオマーカーの捕捉に最も好適である。開口の直径はバイオマーカーの直径だけでなく、中でも末梢静脈系において見られる圧力条件に適合しなくてはならない。
【０１３０】
捕捉された癌細胞は捕捉後に生存能力を有する。
【０１３１】
参照文献
本願全体を通して、様々な参照文献により本発明が属する従来技術が記載される。これらの参照文献の記載は引用することにより本願の一部をなす。
Baptista-Silva, J.C.C, et al. Anatomy of the basilic vein in the arm and its importance for surgery, Braz J. Morphol. Sci., 2003, 20(3): p.171-175
Bludszuweit, C., Three-dimensional numerical prediction of stress loading of blood particles in a centrifugal pump. (0160-564X (Print)).
Hellums, J., et al., Studies on the mechanisms of shear-induced platelet activation, in Cerebral ischemia and hemorheology. 1987, Springer. p.80-89
Munis, J.R., L.J. Bhatia S Fau - Lozada, and L.J. Lozada, Peripheral venous pressure as a hemodynamic variable in neurosurgical patients. (0003-2999 (Print))
Nagrath, S., et al., Isolation of rare circulating tumour cells in cancer patients by microchip technology. Nature, 2007. 450 (7173): p.1235-9
Petkova, S., et al. CFD modelling of bloodstream in portal vein hypertension with and without thrombosis. Third international conference on CFD in the minerals and process industries. 2003
Small, A.C., et al., The emerging role of circulating tumor cell detection in genitourinary cancer. J Urol, 2012. 188(1): p.21-6
Williams, A., et al. Clinical translation of a novel microfilter technology Capture, characterization and culture of circulating tumor cells. Point-of-Care Healthcare Technologies (PHT), 2013 IEEE.  
【図１−１Ａ】
2018509954.tif 000007
【図２Ａ】
2018509954.tif 000008
【図２Ｂ】
2018509954.tif 000009
【図２Ｃ】
2018509954.tif 000010
【図３Ａ】
2018509954.tif 000011
【図３Ｂ】
2018509954.tif 000012
【図４】
2018509954.tif 000013
【図５Ａ】
2018509954.tif 000014
【図５Ｂ】
2018509954.tif 000015
【図５Ｃ】
2018509954.tif 000016
【図６Ａ】
2018509954.tif 000017
【図６Ｂ】
2018509954.tif 000018
【図７Ａ】
2018509954.tif 000019
【図７Ｂ】
2018509954.tif 000020
【図７Ｃ】
2018509954.tif 000021
【図７Ｄ】
2018509954.tif 000022
【図７Ｅ】
2018509954.tif 000023
【国際調査報告】
2018509954.tif 000024
2018509954.tif 000025
2018509954.tif 000026
2018509954.tif 000027
2018509954.tif 000028
2018509954.tif 000029