(57)【要約】本開示は、とりわけ、筋ジストロフィーを処置するための改善された組成物および方法を提供する。例えば、本開示は、ＤＭＤ遺伝子においてエキソン５１スキッピングを受け入れられる変異を有するデュシェンヌ型筋ジストロフィー患者を、有効量のエテプリルセンを投与することにより処置する方法を提供する。エキソン５１スキッピングを受け入れられるデュシェンヌ型筋ジストロフィー（ＤＭＤ）遺伝子変異を有する、処置を必要とするＤＭＤ患者を、疾患の進行を遅らせることにより処置する方法であって、該患者に、３０ｍｇ／ｋｇの用量のエテプリルセンを、毎週、１６８週間より長い期間静脈内投与して、６分間歩行試験（６ＭＷＴ）により測定したとき、該患者における疾患の進行が遅れるようにし、それによって該患者を処置することを含む方法。
2018529715.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
エキソン５１スキッピングを受け入れられるデュシェンヌ型筋ジストロフィー（ＤＭＤ）遺伝子変異を有する、処置を必要とするＤＭＤ患者を、疾患の進行を遅らせることにより処置する方法であって、該患者に、３０ｍｇ／ｋｇの用量のエテプリルセンを、毎週、１６８週間より長い期間静脈内投与して、６分間歩行試験（６ＭＷＴ）により測定したとき、該患者における疾患の進行が遅れるようにし、それによって該患者を処置することを含む方法。
【請求項２】
エキソン５１スキッピングを受け入れられるデュシェンヌ型筋ジストロフィー（ＤＭＤ）遺伝子変異を有する、歩行維持または歩行喪失の低減を必要とするＤＭＤ患者において、歩行を維持させる、または歩行喪失を低減する方法であって、該患者に、３０ｍｇ／ｋｇの用量のエテプリルセンを、毎週、１６８週間より長い期間静脈内投与し、それによって、該患者において、６分間歩行試験（６ＭＷＴ）により測定したとき、ベースラインと比較して、歩行を維持させる、または、歩行喪失を低減することを含む方法。
【請求項３】
エキソン５１スキッピングを受け入れられるデュシェンヌ型筋ジストロフィー（ＤＭＤ）遺伝子変異を有する、肺機能の維持または肺機能の喪失の低減を必要とするＤＭＤ患者において、肺機能を維持させる、または肺機能の喪失を低減する方法であって、該患者に、３０ｍｇ／ｋｇの用量のエテプリルセンを、毎週、１６８週間より長い期間静脈内投与し、それによって、該患者において、ベースラインと比較して、肺機能を維持させる、または肺機能の喪失を低減することを含む方法。
【請求項４】
エキソン５１スキッピングを受け入れられるデュシェンヌ型筋ジストロフィー（ＤＭＤ）遺伝子変異を有する、ｍＲＮＡリーディングフレームを回復させてジストロフィンタンパク質産生を誘導することを必要とするＤＭＤ患者において、ｍＲＮＡリーディングフレームを回復させてジストロフィンタンパク質産生を誘導する方法であって、該患者に、３０ｍｇ／ｋｇの用量のエテプリルセンを、毎週、１６８週間より長い期間静脈内投与し、それによって、該患者において該ｍＲＮＡリーディングフレームを回復させてジストロフィンタンパク質産生を誘導することを含む方法。
【請求項５】
エキソン５１スキッピングを受け入れられるデュシェンヌ型筋ジストロフィー（ＤＭＤ）遺伝子変異を有する、処置を必要とするＤＭＤ患者を、疾患の進行を遅らせることにより処置する方法であって、該患者に、３０ｍｇ／ｋｇの用量のエテプリルセンを、毎週静脈内投与して、６分間歩行試験（６ＭＷＴ）により測定したとき、該患者における疾患の進行が遅れるようにし、それによって該患者を処置することを含み、ここで、該患者は、エテプリルセンによる処置より前に、独力で仰臥から起き上がる能力を失っている、方法。
【請求項６】
エキソン５１スキッピングを受け入れられるデュシェンヌ型筋ジストロフィー（ＤＭＤ）遺伝子変異を有する、処置を必要とするＤＭＤ患者を、疾患の進行を遅らせることにより処置する方法であって、該患者に、３０ｍｇ／ｋｇの用量のエテプリルセンを、毎週静脈内投与して、６分間歩行試験（６ＭＷＴ）により測定したとき、該患者における疾患の進行が遅れるようにし、それによって該患者を処置することを含み、ここで、該患者は、エテプリルセンによる処置の期間中に、独力で仰臥から起き上がる能力を失う、方法。
【請求項７】
エキソン５１スキッピングを受け入れられるデュシェンヌ型筋ジストロフィー（ＤＭＤ）遺伝子変異を有する、歩行の維持または歩行喪失の低減を必要とするＤＭＤ患者において、歩行を維持させる、または歩行喪失を低減する方法であって、該患者に、３０ｍｇ／ｋｇの用量のエテプリルセンを、毎週静脈内投与し、それによって、該患者において、６分間歩行試験（６ＭＷＴ）により測定したとき、ベースラインと比較して、歩行を維持させる、または、歩行喪失を低減することを含み、ここで、該患者は、エテプリルセンによる処置より前に、独力で仰臥から起き上がる能力を失っている、方法。
【請求項８】
エキソン５１スキッピングを受け入れられるデュシェンヌ型筋ジストロフィー（ＤＭＤ）遺伝子変異を有する、歩行の維持または歩行喪失の低減を必要とするＤＭＤ患者において、歩行を維持させる、または歩行喪失を低減する方法であって、該患者に、３０ｍｇ／ｋｇの用量のエテプリルセンを、毎週静脈内投与し、それによって、該患者において、６分間歩行試験（６ＭＷＴ）により測定したとき、ベースラインと比較して、歩行を維持させる、または、歩行喪失を低減することを含み、ここで、該患者は、エテプリルセンによる処置の期間中に、独力で仰臥から起き上がる能力を失う、方法。
【請求項９】
エキソン５１スキッピングを受け入れられるデュシェンヌ型筋ジストロフィー（ＤＭＤ）遺伝子変異を有する、肺機能の維持または肺機能の喪失の低減を必要とするＤＭＤ患者において、肺機能を維持させる、または肺機能の喪失を低減する方法であって、該患者に、３０ｍｇ／ｋｇの用量のエテプリルセンを、毎週静脈内投与し、それによって、該患者において、ベースラインと比較して、肺機能を維持させる、または肺機能の喪失を低減することを含み、ここで、該患者は、エテプリルセンによる処置より前に、独力で仰臥から起き上がる能力を失っている、方法。
【請求項１０】
エキソン５１スキッピングを受け入れられるデュシェンヌ型筋ジストロフィー（ＤＭＤ）遺伝子変異を有する、肺機能の維持または肺機能の喪失の低減を必要とするＤＭＤ患者において、肺機能を維持させる、または肺機能の喪失を低減する方法であって、該患者に、３０ｍｇ／ｋｇの用量のエテプリルセンを、毎週静脈内投与し、それによって、該患者において、ベースラインと比較して、肺機能を維持させる、または肺機能の喪失を低減することを含み、ここで、該患者は、エテプリルセンによる処置の期間中に、独力で仰臥から起き上がる能力を失う、方法。
【請求項１１】
エキソン５１スキッピングを受け入れられるデュシェンヌ型筋ジストロフィー（ＤＭＤ）遺伝子変異を有する、ｍＲＮＡリーディングフレームを回復させてジストロフィンタンパク質産生を誘導することを必要とするＤＭＤ患者において、ｍＲＮＡリーディングフレームを回復させてジストロフィンタンパク質産生を誘導する方法であって、該患者に、３０ｍｇ／ｋｇの用量のエテプリルセンを、毎週静脈内投与し、それによって、該患者において該ｍＲＮＡリーディングフレームを回復させてジストロフィンタンパク質産生を誘導することを含み、ここで、該患者は、エテプリルセンによる処置より前に、独力で仰臥から起き上がる能力を失っている、方法。
【請求項１２】
エキソン５１スキッピングを受け入れられるデュシェンヌ型筋ジストロフィー（ＤＭＤ）遺伝子変異を有する、ｍＲＮＡリーディングフレームを回復させてジストロフィンタンパク質産生を誘導することを必要とするＤＭＤ患者において、ｍＲＮＡリーディングフレームを回復させてジストロフィンタンパク質産生を誘導する方法であって、該患者に、３０ｍｇ／ｋｇの用量のエテプリルセンを、毎週静脈内投与し、それによって、該患者において該ｍＲＮＡリーディングフレームを回復させてジストロフィンタンパク質産生を誘導することを含み、ここで、該患者は、エテプリルセンによる処置の期間中に、独力で仰臥から起き上がる能力を失う、方法。
【請求項１３】
エキソン５１をスキッピングすることにより補正することができる、デュシェンヌ型筋ジストロフィー（ＤＭＤ）遺伝子の変異を有する、ＤＭＤを処置することを必要とする患者におけるＤＭＤの処置において使用するためのエテプリルセンであって、ここで、該処置は、該患者に、３０ｍｇ／ｋｇの１回の静脈内用量のエテプリルセンを週１回投与し、それによって、６分間歩行試験（６ＭＷＴ）により決定したとき、疾患の進行を１６８週間にわたって遅らせることを含む、エテプリルセン。
【請求項１４】
エキソン５１をスキッピングすることにより補正することができる、デュシェンヌ型筋ジストロフィー（ＤＭＤ）遺伝子の変異を有する、ＤＭＤを有する患者において、歩行を維持させる、または歩行喪失を低減する際に使用するためのエテプリルセンであって、ここで、該処置は、該患者に、３０ｍｇ／ｋｇの１回の静脈内用量のエテプリルセンを週１回投与し、それによって、６分間歩行試験（６ＭＷＴ）により決定したとき、１６８週間にわたって、ベースラインと比較して、歩行を維持させる、または歩行喪失を低減することを含む、エテプリルセン。
【請求項１５】
エキソン５１をスキッピングすることにより補正することができる、デュシェンヌ型筋ジストロフィー（ＤＭＤ）遺伝子の変異を有する、ＤＭＤを有する患者において、肺機能を維持させる、または肺機能の喪失を低減する際に使用するためのエテプリルセンであって、ここで、該処置は、該患者に、３０ｍｇ／ｋｇの１回の静脈内用量のエテプリルセンを週１回投与し、それによって、１６８週間にわたって、ベースラインと比較して、肺機能を維持させる、または肺機能の喪失を低減することを含む、エテプリルセン。
【請求項１６】
エキソン５１をスキッピングすることにより補正することができる、デュシェンヌ型筋ジストロフィー（ＤＭＤ）遺伝子の変異を有する、ＤＭＤを有する患者において、ｍＲＮＡリーディングフレームを回復させてジストロフィンタンパク質産生を誘導する際に使用するためのエテプリルセンであって、ここで、該処置は、該患者に、３０ｍｇ／ｋｇの１回の静脈内用量のエテプリルセンを週１回投与し、それによって、１６８週間にわたって、該ｍＲＮＡリーディングフレームを回復させてジストロフィンタンパク質産生を誘導することを含む、エテプリルセン。
【請求項１７】
エキソン５１をスキッピングすることにより補正することができる、デュシェンヌ型筋ジストロフィー（ＤＭＤ）遺伝子の変異を有する、ＤＭＤを有する患者において、ｍＲＮＡリーディングフレームを回復させてジストロフィンタンパク質産生を誘導する際に使用するためのエテプリルセンであって、ここで、該処置は、該患者に、３０ｍｇ／ｋｇの１回の静脈内用量のエテプリルセンを週１回投与し、それによって、少なくとも２１６週間、該ｍＲＮＡリーディングフレームを回復させてジストロフィンタンパク質産生を誘導することを含む、エテプリルセン。
【請求項１８】
エテプリルセンが、少なくとも１８０週間、前記患者に毎週静脈内投与される、請求項１から１２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１９】
エテプリルセンが、少なくとも１９２週間、前記患者に毎週静脈内投与される、請求項１から１２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２０】
エテプリルセンが、１９２週間より長い期間、前記患者に毎週静脈内投与される、請求項１から１２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２１】
エテプリルセンが、少なくとも２１６週間、前記患者に毎週静脈内投与される、請求項１から１２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２２】
肺機能が、最大呼気圧（ＭＥＰ）、最大吸気圧（ＭＩＰ）、または努力肺活量（ＦＶＣ）によって測定される、請求項３、９、１０のいずれか一項に記載の方法、または請求項１５に記載の使用。
【請求項２３】
前記ジストロフィンタンパク質産生が、逆転写ポリメラーゼ連鎖反応（ＲＴ−ＰＣＲ）、ウエスタンブロット分析、または免疫組織化学（ＩＨＣ）によって測定される、請求項４、１１、１２のいずれか一項に記載の方法、または請求項１６もしくは１７に記載の使用。
【請求項２４】
前記患者が、２１６週間の処置の時点で、少なくとも５５メートル、少なくとも１００メートル、少なくとも２００メートル、少なくとも３００メートル、または少なくとも４００メートルの６分間歩行距離を維持する、請求項２０または２１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２５】
エテプリルセンが、静脈内注入として３５〜６０分かけて投与される、請求項１から１２または１８から２１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２６】
エテプリルセンを投与する前に、前記患者が、前記ＤＭＤ遺伝子においてエキソン５１スキッピングを受け入れられる変異を有することを確認することをさらに含む、請求項１から１２または１８から２１のいずれか一項に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願の引用
この出願は、２０１５年９月３０日に出願された米国仮出願第６２／２３５，４７７号、２０１６年１月１４日に出願された米国仮出願第６２／２７８，８６６号、２０１６年２月９日に出願された米国仮出願第６２／２９３，２３５号および２０１６年２月２５日に出願された米国仮出願第６２／２９９，９５２号に対する優先権を主張する。これらの内容は、本明細書に具体的に参考として援用される。本明細書を通して引用されたあらゆる特許、特許出願および参考文献の内容は、それらの全体が、これにより参考として援用される。
【０００２】
発明の分野
本発明は、患者においてエテプリルセンにより筋ジストロフィーを処置する改善された方法に関する。また、ヒトジストロフィン遺伝子におけるエキソン５１スキッピングを促進するのに適した組成物も提供する。
【背景技術】
【０００３】
発明の背景
種々の遺伝学的疾患において、遺伝子の最終的な発現に対する変異の効果は、スプライシングプロセスの間の標的とされたエキソンスキッピングのプロセスによってモジュレートすることができる。正常に機能しているタンパク質が、その中の変異のために未成熟に終結される場合、アンチセンス技術によっていくつかの機能タンパク質の産生を回復させるための手段はスプライシングプロセスの間の介入によって可能であることが示されてきており、疾患をもたらす変異と関連するエキソンをいくつかの遺伝子から特異的に欠失させることができる場合、未変性タンパク質の同様の生物学的特性を有するか、またはエキソンと関連する変異によってもたらされる疾患を改善するのに十分な生物活性を有する、短縮されたタンパク質産物を産生することができることがある（例えば、Ｓｉｅｒａｋｏｗｓｋａ，  Ｓａｍｂａｄｅら、１９９６年；Ｗｉｌｔｏｎ，  Ｌｌｏｙｄら、１９９９年；ｖａｎ  Ｄｅｕｔｅｋｏｍ，  Ｂｒｅｍｍｅｒ−Ｂｏｕｔら、２００１年；Ｌｕ，  Ｍａｎｎら、２００３年；Ａａｒｔｓｍａ−Ｒｕｓ，  Ｊａｎｓｏｎら、２００４年を参照されたい）。
【０００４】
デュシェンヌ型筋ジストロフィー（ＤＭＤ）は、タンパク質ジストロフィンの発現の欠陥によってもたらされる。タンパク質をコードする遺伝子は、ＤＮＡの２百万超のヌクレオチドに亘って広がる７９のエキソンを含有する。エキソンのリーディングフレームを変化させるか、もしくは終止コドンを導入するか、または全アウトオブフレームエキソン（複数可）の除去、または１つもしくは複数のエキソンの重複によって特徴付けられる、任意のエキソンの変異は、機能的ジストロフィンの産生を撹乱する可能性を有し、ＤＭＤをもたらす。
【０００５】
疾患の発症は、出生時に、クレアチンキナーゼレベルの上昇をもって記録に残すことができ、生後１年で、著しい運動障害が存在する場合もある。大部分のＤＭＤ患者は、７歳または８歳までに、だんだんと歩行が困難になり、床から起き上がり、階段を上る能力を失っていき、１０〜１４歳までには、ほとんどが車いすに頼っている。ＤＭＤは、おしなべて致死的であり、罹患した個体は通常、１０代の終わりまたは２０代の始めに、呼吸不全および／または心不全で死亡する。ＤＭＤは絶え間なく進行するため、疾患のすべての段階で治療介入が用意されるが、しかし、処置は現在、体重増加、行動変化、思春期変化、骨粗鬆症、クッシング様顔貌、成長阻害、および白内障を含めたおびただしい副作用を伴う糖質コルチコイドに限られる。したがって、この疾患の根源的な原因を処置するためのよりよい治療を開発することが肝要である。
【０００６】
変異、典型的には１つまたは複数のエキソンの欠失が、全ジストロフィン転写物に沿った正確なリーディングフレームをもたらし、その結果、タンパク質へのｍＲＮＡの翻訳が未成熟で終結しない場合、筋ジストロフィーのより重度でない形態であるベッカー型筋ジストロフィー（ＢＭＤ）が生じることが見出されてきた。変異したジストロフィンプレｍＲＮＡのプロセシングにおける上流および下流のエキソンの接合によって遺伝子の正確なリーディングフレームが維持される場合、結果は、いくらかの活性を保持する短い内部欠失を有するタンパク質をコードするｍＲＮＡであり、ベッカー表現型がもたらされる。
【０００７】
何年にも亘って、ジストロフィンタンパク質のリーディングフレームを変化させないエキソン（複数可）の欠失は、ＢＭＤ表現型を生じさせ、一方では、フレームのシフトをもたらすエキソン欠失は、ＤＭＤを生じさせることが公知であった（Ｍｏｎａｃｏ，  Ｂｅｒｔｅｌｓｏｎら、１９８８年）。一般に、リーディングフレームを変化させ、したがって、適切なタンパク質翻訳を中断する点変異およびエキソン欠失を含めたジストロフィン変異は、ＤＭＤをもたらす。一部のＢＭＤおよびＤＭＤ患者は、複数のエキソンをカバーするエキソン欠失を有することにも留意すべきである。
【０００８】
ＤＭＤの処置のためのスプライススイッチングオリゴヌクレオチド（ＳＳＯ）の安全性および有効性を試験する最近の臨床治験は、スプライソゾームの立体的遮断によるプレｍＲＮＡの選択的スプライシングを誘導するＳＳＯ技術に基づいている（Ｃｉｒａｋら、２０１１年；Ｇｏｅｍａｎｓら、２０１１年；Ｋｉｎａｌｉら、２００９年；ｖａｎ  Ｄｅｕｔｅｋｏｍら、２００７年）。しかし、こうした成功にもかかわらず、ＤＭＤの処置に利用できる薬理学的選択肢は限られている。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００９】
【非特許文献１】Aartsma-Rus  A,  Janson  AA,  Kaman  WE,  Bremmer-Bout  M,  van  Ommen  GJ,  den  Dunnen  JT,  et  al.  Antisense-induced  multiexon  skipping  for  Duchenne  muscular  dystrophy  makes  more  sense.  Am  J  Hum  Genet  2004;74:83-92.
【非特許文献２】Cirak  S,  Arechavala-Gomeza  V,  Guglieri  M,  Feng  L,  Torelli  S,  Anthony  K,  et  al.  Exon  skipping  and  dystrophin  restoration  in  patients  with  Duchenne  muscular  dystrophy  after  systemic  phosphorodiamidate  morpholino  oligomer  treatment:  an  open-label,  phase  2,  dose-escalation  study.  Lancet  2011;378:595-605.
【非特許文献３】Goemans  NM,  Tulinius  M,  van  den  Akker  JT,  Burm  BE,  Ekhart  PF,  Heuvelmans  N,  et  al.  Systemic  administration  of  PRO051  in  Duchenne’s  muscular  dystrophy.  N  Engl  J  Med  2011;364:1513-22.
【非特許文献４】Kinali  M,  Arechavala-Gomeza  V,  Feng  L,  Cirak  S,  Hunt  D,  Adkin  C,  et  al.  Local  restoration  of  dystrophin  expression  with  the  morpholino  oligomer  AVI-4658  in  Duchenne  muscular  dystrophy:  a  single-blind,  placebo-controlled,  dose-escalation,  proof-of-concept  study.  Lancet  Neurol  2009;8:918-28.
【非特許文献５】van  Deutekom  JC,  Janson  AA,  Ginjaar  IB,  Frankhuizen  WS,  Aartsma-Rus  A,  Bremmer-Bout  M,  et  al.  Local  dystrophin  restoration  with  antisense  oligonucleotide  PRO051.  N  Engl  J  Med  2007;357:2677-86.
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１０】
このように、患者においてＤＭＤやＢＭＤなどの筋ジストロフィーを処置するための改善された組成物および方法が依然として求められている。
【課題を解決するための手段】
【００１１】
本開示は、少なくとも一部は、エキソン５１スキッピングアンチセンスオリゴヌクレオチドであるエテプリルセンでの処置により、ＤＭＤ患者の筋肉において新たなジストロフィンが同時に産生されたのと併せて、６分間歩行試験（６ＭＷＴ）によって測定される歩行能力が、４年間にわたって安定化したこと（例えば、歩行の安定化）を示す説得力のある臨床的証拠を根拠としている。詳細には、３０ｍｇ／ｋｇの用量のエテプリルセンによる１週間に１回の処置を長期間受けたＤＭＤ患者の８３％（１０／１２）が、１９２週目の時点で歩行可能なままであり、肺機能の安定化も持続した。実際には、エテプリルセン処置期間の１６８週目と１９２週目の間に、患者の歩行が安定化した。この治療有効性は、１８０週間の時点で、すべての患者が測定可能なエキソン５１スキッピングを有する所見と関連付けられた。さらに、１８０週間の時点で、１１人のうち１０人の患者が、免疫組織化学によって測定されるジストロフィン陽性線維を有し、１１人のうち９人の患者が、ウエスタンブロット分析によって測定されるジストロフィンタンパク質発現を有した。エテプリルセンを与えられなかったマッチさせた外部対照患者は、免疫組織化学によって決定されるジストロフィン陽性線維を有さず、９人のうち１人の患者だけが、ウエスタンブロット分析によって決定されるジストロフィンタンパク質発現を有した。
【００１２】
加えて、１９２週間の処置期間にわたって２３００を超える用量のエテプリルセンで処置した患者において、薬物に関連した重篤な有害事象は認められなかった。
【００１３】
エテプリルセンでのこうした予想外の臨床所見の重要性は、エキソン５１スキッピングを受け入れられる変異（mutation amenable to exon 51 skipping）を有する患者が、すべてのＤＭＤ患者、またはＤＭＤ遺伝子のいずれかのエキソンに変異を有するＤＭＤ患者に比べて、予後が特に不良である（図５を参照されたい）という事実によって、さらに強められる。さらに、エテプリルセンは、７歳またはそれより年長の患者において、こうした説得力のある治療効果を実現することができた。図４に示すとおり、この年齢群の患者は、７歳より若い患者について歩行が低下する速度に比べて、一般に、急激な歩行の衰えを被る。こうして、本開示は、エテプリルセン処置が、特に侵攻型のＤＭＤを有する患者亜集団において、疾患の進行を遅らせ、かつ／または疾患を安定させうることを確立するものである。
【００１４】
したがって、一態様において、本発明は、エキソン５１スキッピングを受け入れられるデュシェンヌ型筋ジストロフィー（ＤＭＤ）遺伝子変異を有するＤＭＤ患者を処置する方法であって、患者に、３０ｍｇ／ｋｇの用量のエテプリルセンを、毎週１回、１６８週間より長い期間静脈内投与し、それによって患者を処置することを含む方法に関する。
【００１５】
別の態様において、本発明は、エキソン５１スキッピングを受け入れられるデュシェンヌ型筋ジストロフィー（ＤＭＤ）遺伝子変異を有するＤＭＤ患者を、疾患の進行を遅らせることにより処置する方法であって、患者に、３０ｍｇ／ｋｇの用量のエテプリルセンを、毎週１回、１６８週間より長い期間静脈内投与して、６分間歩行試験（６ＭＷＴ）により測定したとき、患者における疾患の進行が遅れるようにし、それによって患者を処置することを含む方法に関する。
【００１６】
別の態様において、本発明は、エキソン５１スキッピングを受け入れられるデュシェンヌ型筋ジストロフィー（ＤＭＤ）遺伝子変異を有するＤＭＤ患者において、歩行を維持させる、または歩行喪失を低減する方法であって、患者に、３０ｍｇ／ｋｇの用量のエテプリルセンを、毎週１回、１６８週間より長い期間静脈内投与し、それによって、患者において、６分間歩行試験（６ＭＷＴ）により測定したとき、ベースラインと比較して、歩行を維持させる、または、歩行喪失を低減することを含む方法に関する。
【００１７】
本発明の一部の態様において、エテプリルセンは、少なくとも１８０週間、患者に毎週１回静脈内投与される。本発明の他の態様において、エテプリルセンは、少なくとも１９２週間、患者に毎週１回静脈内投与される。
【００１８】
本発明の他の態様は、エキソン５１スキッピングを受け入れられるデュシェンヌ型筋ジストロフィー（ＤＭＤ）遺伝子変異を有するＤＭＤ患者において、歩行を維持させる、または歩行喪失を低減する方法であって、患者に、３０ｍｇ／ｋｇの用量のエテプリルセンを、毎週１回、少なくとも１９２週間静脈内投与して、患者が、１９２週まで、６分間歩行試験（６ＭＷＴ）により測定したとき、ベースラインと比較して歩行を維持し、またはベースラインと比較して５０％もしくはそれ未満（例えば、４９、４８、４７、４６、４５、４４、または４３％もしくはそれ未満）しか歩行を喪失しないようにすることを含む方法に関する。
【００１９】
本発明の他の態様は、エキソン５１スキッピングを受け入れられるデュシェンヌ型筋ジストロフィー（ＤＭＤ）遺伝子変異を有するＤＭＤ患者において、歩行を維持させる、または歩行喪失を低減する方法であって、患者に、３０ｍｇ／ｋｇの用量のエテプリルセンを、毎週１回、少なくとも１９２週間静脈内投与して、患者が、１９２週まで、６分間歩行試験（６ＭＷＴ）により測定したとき、ベースラインと比較して歩行を維持し、またはベースラインと比較して４３％もしくはそれ未満しか歩行を喪失しないようにすることを含む方法に関する。
【００２０】
別の態様において、本発明は、エキソン５１スキッピングを受け入れられるデュシェンヌ型筋ジストロフィー（ＤＭＤ）遺伝子変異を有するＤＭＤ患者において、肺機能を維持させる、または肺機能の喪失を低減する方法であって、患者に、３０ｍｇ／ｋｇの用量のエテプリルセンを、毎週１回、１６８週間より長い期間静脈内投与し、それによって、患者において、ベースラインと比較して、肺機能を維持させる、または肺機能の喪失を低減することを含む方法に関する。
【００２１】
本発明のこれらおよび他の態様において、肺機能は、最大呼気圧（ＭＥＰ）として測定される。本発明のこれらおよび他の態様において、肺機能は、最大吸気圧（ＭＩＰ）として測定される。本発明のこれらおよび他の態様において、肺機能は、努力肺活量（ＦＶＣ）として測定される。
【００２２】
本発明の他の態様は、エキソン５１スキッピングを受け入れられるデュシェンヌ型筋ジストロフィー（ＤＭＤ）遺伝子変異を有するＤＭＤ患者において、ｍＲＮＡリーディングフレームを回復させてジストロフィンタンパク質産生を誘導する方法であって、患者に、３０ｍｇ／ｋｇの用量のエテプリルセンを、毎週１回、１６８週間より長い期間静脈内投与し、それによって、患者においてｍＲＮＡリーディングフレームを回復させてジストロフィンタンパク質産生を誘導することを含む方法に関する。
【００２３】
本発明のこれらおよび他の態様において、ジストロフィンタンパク質産生は、例えば、逆転写ポリメラーゼ連鎖反応（ＲＴ−ＰＣＲ）、ウエスタンブロット分析、または免疫組織化学（ＩＨＣ）によって測定することができる。
【００２４】
本発明の別の態様は、エキソン５１スキッピングを受け入れられるデュシェンヌ型筋ジストロフィー（ＤＭＤ）遺伝子変異を有するＤＭＤ患者を、疾患の進行を遅らせることにより処置する方法であって、患者に、３０ｍｇ／ｋｇの用量のエテプリルセンを、毎週１回、１６８週間より長い期間静脈内投与して、患者における疾患の進行が遅れるようにし、それによって患者を処置することを含む方法に関する。
【００２５】
本発明の他の態様は、エキソン５１スキッピングを受け入れられるデュシェンヌ型筋ジストロフィー（ＤＭＤ）遺伝子変異を有するＤＭＤ患者において、歩行を維持させる、または歩行喪失を低減する方法であって、患者に、３０ｍｇ／ｋｇの用量のエテプリルセンを、毎週１回、１６８週間より長い期間静脈内投与し、それによって、患者において、ベースラインと比較して、歩行を維持させる、または歩行喪失を低減することを含む方法に関する。
【００２６】
本発明のこれらおよび他の態様において、エテプリルセンは、少なくとも１８０週間または少なくとも１９２週間、患者に毎週１回静脈内投与される。
【００２７】
本発明の別の態様は、エキソン５１スキッピングを受け入れられるデュシェンヌ型筋ジストロフィー（ＤＭＤ）遺伝子変異を有するＤＭＤ患者において、歩行を維持させる、または歩行喪失を低減する方法であって、患者に、３０ｍｇ／ｋｇの用量のエテプリルセンを、毎週１回、少なくとも１９２週間静脈内投与して、患者が、１９２週まで、ベースラインと比較して歩行を維持し、またはベースラインと比較して４３％もしくはそれ未満しか歩行を喪失しないようにすることを含む方法に関する。
【００２８】
本発明のこれらおよび他の態様において、歩行は、Ｎｏｒｔｈ  Ｓｔａｒ  Ａｍｂｕｌａｔｏｒｙ  Ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ（ＮＳＡＡ）を使用して測定される。
【００２９】
本発明の他の態様は、エキソン５１スキッピングを受け入れられるデュシェンヌ型筋ジストロフィー（ＤＭＤ）遺伝子変異を有するＤＭＤ患者の処置において使用するためのエテプリルセンに関し、エテプリルセンは、３０ｍｇ／ｋｇの用量で、毎週１回、１６８週間より長い期間、患者に静脈内投与される。
【００３０】
別の態様において、本発明は、エキソン５１スキッピングを受け入れられるデュシェンヌ型筋ジストロフィー（ＤＭＤ）遺伝子変異を有するＤＭＤ患者の処置において使用するためのエテプリルセンに関し、エテプリルセンは、６分間歩行試験（６ＭＷＴ）により測定したとき、患者における疾患の進行が遅れるように、３０ｍｇ／ｋｇの用量で、毎週１回、１６８週間より長い期間、患者に静脈内投与される。
【００３１】
別の態様において、本発明は、エキソン５１スキッピングを受け入れられるデュシェンヌ型筋ジストロフィー（ＤＭＤ）遺伝子変異を有するＤＭＤ患者において、歩行を維持させる、または歩行喪失を低減する際に使用するためのエテプリルセンに関し、エテプリルセンは、３０ｍｇ／ｋｇの用量で、毎週１回、１６８週間より長い期間、患者に静脈内投与され、それによって、患者において、６分間歩行試験（６ＭＷＴ）により測定したとき、ベースラインと比較して、歩行が維持され、または、歩行喪失が低減する。
【００３２】
本発明の別の態様は、エキソン５１スキッピングを受け入れられるデュシェンヌ型筋ジストロフィー（ＤＭＤ）遺伝子変異を有するＤＭＤ患者において、歩行を維持させる、または歩行喪失を低減する際に使用するためのエテプリルセンに関し、エテプリルセンは、患者が、１９２週まで、ベースラインと比較して歩行を維持し、またはベースラインと比較して４３％もしくはそれ未満しか歩行を喪失しないように、３０ｍｇ／ｋｇの用量で、毎週１回、少なくとも１９２週間、患者に静脈内投与される。
【００３３】
別の態様において、本発明は、エキソン５１スキッピングを受け入れられるデュシェンヌ型筋ジストロフィー（ＤＭＤ）遺伝子変異を有するＤＭＤ患者において、肺機能を維持させる、または肺機能の喪失を低減する際に使用するためのエテプリルセンに関し、エテプリルセンは、３０ｍｇ／ｋｇの用量で、毎週１回、１６８週間より長い期間、患者に静脈内投与され、それによって、患者において、ベースラインと比較して、肺機能が維持される、または肺機能の喪失が低減される。
【００３４】
本発明の他の態様は、エキソン５１スキッピングを受け入れられるデュシェンヌ型筋ジストロフィー（ＤＭＤ）遺伝子変異を有するＤＭＤ患者において、ｍＲＮＡリーディングフレームを回復させてジストロフィンタンパク質産生を誘導する際に使用するためのエテプリルセンに関し、エテプリルセンは、３０ｍｇ／ｋｇの用量で、毎週１回、１６８週間より長い期間、患者に静脈内投与され、それによって、患者において、ｍＲＮＡリーディングフレームが回復して、ジストロフィンタンパク質産生が誘導される。
【００３５】
本発明の別の態様は、エキソン５１スキッピングを受け入れられるデュシェンヌ型筋ジストロフィー（ＤＭＤ）遺伝子変異を有するＤＭＤ患者を、疾患の進行を遅らせることにより処置する際に使用するためのエテプリルセンに関し、エテプリルセンは、患者における疾患の進行が遅れるように、３０ｍｇ／ｋｇの用量で、毎週１回、１６８週間より長い期間、患者に静脈内投与され、それによって患者が処置される。
【００３６】
本発明の他の態様は、エキソン５１スキッピングを受け入れられるデュシェンヌ型筋ジストロフィー（ＤＭＤ）遺伝子変異を有するＤＭＤ患者において、歩行を維持させる、または歩行喪失を低減する際に使用するためのエテプリルセンに関し、エテプリルセンは、３０ｍｇ／ｋｇの用量で、毎週１回、１６８週間より長い期間、患者に静脈内投与され、それによって、患者において、ベースラインと比較して、歩行が維持され、または、歩行喪失が低減する。
【００３７】
本発明の別の態様は、エキソン５１スキッピングを受け入れられるデュシェンヌ型筋ジストロフィー（ＤＭＤ）遺伝子変異を有するＤＭＤ患者において、歩行を維持させる、または歩行喪失を低減する際に使用するためのエテプリルセンに関し、エテプリルセンは、患者が、１９２週まで、ベースラインと比較して歩行を維持し、またはベースラインと比較して４３％もしくはそれ未満しか歩行を喪失しないように、３０ｍｇ／ｋｇの用量で、毎週１回、少なくとも１９２週間、患者に静脈内投与される。
【００３８】
本発明の前述および他の態様のいずれかにおいて、ＤＭＤ患者は、７歳またはそれより年長である。
【００３９】
本発明の前述および他の態様のいずれかにおいて、エテプリルセンは、静脈内注入として３５〜６０分かけて投与される。
【００４０】
本発明の前述および他の態様のいずれかにおいて、患者は、エテプリルセンの投与に加えて、副腎皮質ステロイド（例えば、プレドニゾン）を投与される。副腎皮質ステロイドは、エテプリルセンでの処置より前に、またはエテプリルセン処置と併せて、またはエテプリルセンでの処置に続いて投与される場合がある。
【００４１】
本発明の前述および他の態様のいずれかにおいて、本発明の方法は、患者が、ＤＭＤ遺伝子においてエキソン５１スキッピングを受け入れられる変異を有することを確認することをさらに含む。
【００４２】
本開示は、エテプリルセンによる処置を受けた１２人のうち１０人（８３．３％）の患者が、２１６週間の時点で（４年を超えて）歩行可能なままであったことを示す、説得力のある臨床的証拠も提供する。対照的に、マッチさせた外部対照コホートにおける患者の８９．７％は、カプランマイヤー分析（作業実施例を参照されたい）によって測定される歩行を喪失した。実際に、処置４年の時点での歩行喪失率についてのカプランマイヤー推定値は、エテプリルセン処置患者では１６．７％、外部対照では８９．７％である（ｐ＝０．００３８、ログランク検定）。
【００４３】
さらに、以下で表２および３に示すとおり、１２人のうち１０人の患者が、歩行が喪失すると予想される年齢において、２１６週間の処置過程にわたって歩行可能なままであるだけでなく、場合によって、患者は、６分間歩行試験（６ＭＷＴ）により測定したときその歩行能力をかなりの百分率で保持した。例えば、被験体番号１５は、２１６週間の時点の６ＭＷＴにおいて、ベースラインと比較して１メートルを喪失した（表２）。別の例では、被験体番号４を含めた、エテプリルセン処置を受けた幾人かの被験体は、その歩行能力を、ベースラインと比較して５０％より高く保持した。こうしたデータは、エテプリルセン処置が、デュシェンヌ型筋ジストロフィー患者の処置において、他の用途の中でも、そうした患者において、疾患の進行を遅らせる、疾患の進行の激しさを低減する、歩行喪失速度を低減する、歩行を維持させる、および歩行喪失を低減することを含めて、非常に有効であることを示している。
【００４４】
したがって、別の態様において、本開示は、エキソン５１スキッピングを受け入れられるデュシェンヌ型筋ジストロフィー（ＤＭＤ）遺伝子変異を有する、処置を必要とするＤＭＤ患者を、疾患の進行を遅らせることにより処置する方法を提供する。本方法は、６分間歩行試験（６ＭＷＴ）により測定したとき、患者における疾患の進行が遅れるように、毎週３０ｍｇ／ｋｇの用量のエテプリルセンを、１９２週間より長い期間（例えば、１９３、１９４、１９５、１９６、１９７、１９８、１９９、２００、２０１、２０２、２０３、２０４、２０５、２０６、２０７、２０８、２０９、２１０、２１１、２１２、２１３、２１４、２１５、２１６、２１７、２１８、２１９、２２０、２２１、２２２、２２３、２２４、２２５、２３０、２３５、２４０、２４５、２５０、２５５、もしくは２６０、またはより長い期間）、患者に静脈内投与し、それによって、患者が処置されることを含む。
【００４５】
本発明の他の態様は、疾患の進行の激しさを低減することにより、エキソン５１スキッピングを受け入れられるデュシェンヌ型筋ジストロフィー（ＤＭＤ）遺伝子変異を有する、処置を必要とするＤＭＤ患者を処置する方法であって、患者に、３０ｍｇ／ｋｇの用量のエテプリルセンを、毎週、１９２週間より長い期間静脈内投与して、患者において、６分間歩行試験（６ＭＷＴ）により測定したとき、疾患の進行の激しさが低減されるようにし、それによって患者を処置することを含む方法に関する。
【００４６】
別の態様では、本発明は、患者において歩行喪失速度を低減することにより、エキソン５１スキッピングを受け入れられるデュシェンヌ型筋ジストロフィー（ＤＭＤ）遺伝子変異を有する、処置を必要とするＤＭＤ患者を処置する方法であって、患者に、３０ｍｇ／ｋｇの用量のエテプリルセンを、毎週、１９２週間より長い期間静脈内投与して、患者において、６分間歩行試験（６ＭＷＴ）により測定したとき、歩行喪失率が、２１６週間の時点で２０％以下になるようにし、それによって患者を処置することを含む方法に関する。
【００４７】
本発明の別の態様は、エキソン５１スキッピングを受け入れられるデュシェンヌ型筋ジストロフィー（ＤＭＤ）遺伝子変異を有する、歩行の維持または歩行喪失の低減を必要とするＤＭＤ患者において、歩行を維持させる、または歩行喪失を低減する方法であって、患者に、３０ｍｇ／ｋｇの用量のエテプリルセンを、毎週、１９２週間より長い期間静脈内投与し、それによって、患者において、６分間歩行試験（６ＭＷＴ）により測定したとき、ベースラインと比較して、歩行を維持させる、または、歩行喪失を低減することを含む方法に関する。
【００４８】
本発明のこれらおよび他の態様において、歩行は、少なくとも２１６週間の処置の間維持される。
【００４９】
本発明のこれらおよび他の態様において、処置約３年〜処置約４年の間の患者の歩行喪失は、２０％以下である。本発明の他の態様において、処置約３年〜処置約４年の間の患者の歩行喪失は、３０％以下である。本発明のさらに別の態様において、処置約３年〜処置約４年の間の患者の歩行喪失は、４０％以下である。本発明の他の態様において、処置約３年〜処置約４年の間の患者の歩行喪失は、５０％以下である。
【００５０】
本発明のこれらおよび他の態様において、患者の歩行喪失は、ベースラインと比較して、約２０％以下である。本発明の他の態様において、患者の歩行喪失は、ベースラインと比較して、約３０％以下である。本発明のさらに他の態様において、患者の歩行喪失は、ベースラインと比較して、約４０％以下である。本発明の他の態様において、患者の歩行喪失は、ベースラインと比較して、約５０％以下である。本発明の他の態様において、患者の歩行喪失は、ベースラインと比較して、約６０％以下である。
【００５１】
本発明の別の態様は、エキソン５１スキッピングを受け入れられるデュシェンヌ型筋ジストロフィー（ＤＭＤ）遺伝子変異を有する、歩行の維持を必要とするＤＭＤ患者において歩行を維持させる方法であって、患者に、３０ｍｇ／ｋｇの用量のエテプリルセンを、毎週、１９２週間より長い期間静脈内投与して、患者が、６分間歩行試験（６ＭＷＴ）により測定したとき、２１６週間の時点で歩行可能なままであるようにすることを含む方法に関する。
【００５２】
本発明のこれらおよび他の態様において、エテプリルセンは、少なくとも２１６週間、毎週患者に静脈内投与される。
【００５３】
本発明のこれらおよび他の態様において、患者は、（例えば、エテプリルセン処置開始時に）７歳またはそれより年長である。本発明の別の態様において、患者は、エテプリルセンによる処置が２１６週間の時点で、１１歳またはそれより年長である。本発明のさらに他の態様において、患者は、エテプリルセンによる処置が２１６週間の時点で、１４歳またはそれより年長である。
【００５４】
本発明のこれらおよび他の態様において、エテプリルセンは、静脈内注入として３５〜６０分かけて投与される。
【００５５】
本発明のこれらおよび他の態様において、患者は、処置が２１６週間の時点で、少なくとも５５メートルの６分間歩行距離（６ＭＷＤ）を維持する。本発明の他の態様において、患者は、処置が２１６週間の時点で、少なくとも１００メートルの６分間歩行距離（６ＭＷＤ）を維持する。本発明のさらに他の態様において、患者は、処置が２１６週間の時点で、少なくとも２００メートルの６分間歩行距離（６ＭＷＤ）を維持する。本発明の他の態様において、患者は、処置が２１６週間の時点で、少なくとも３００メートルの６分間歩行距離（６ＭＷＤ）を維持する。本発明の別の態様において、患者は、処置が２１６週間の時点で、少なくとも４００メートルの６分間歩行距離（６ＭＷＤ）を維持する。
【００５６】
本発明のこれらおよび他の態様において、患者は、エテプリルセンの投与に加えて、ステロイドを投与される。本発明の他の態様において、ステロイドは、エテプリルセンの投与より前に、それと併せて、またはそれに続いて患者に投与される。
【００５７】
本発明のこれらおよび他の態様において、患者は、背景にステロイド療法を受けている。本発明の他の態様において、ステロイドは、副腎皮質ステロイドである。本発明のさらに他の態様において、副腎皮質ステロイドは、ベタメタゾン、ブデソニド、コルチゾン、デキサメタゾン、ヒドロコルチゾン、メチルプレドニゾロン、プレドニゾン、プレドニゾロン、またはデフラザコートである。
【００５８】
本発明のこれらおよび他の態様において、本発明の方法は、患者が、ＤＭＤ遺伝子においてエキソン５１スキッピングを受け入れられる変異を有することを確認することをさらに含む。
【００５９】
本発明の別の態様は、エキソン５１スキッピングを受け入れられるデュシェンヌ型筋ジストロフィー（ＤＭＤ）遺伝子変異を有する、ｍＲＮＡリーディングフレームを回復させてジストロフィンタンパク質産生を誘導することを必要とするＤＭＤ患者において、ｍＲＮＡリーディングフレームを回復させてジストロフィンタンパク質産生を誘導する方法であって、患者に、３０ｍｇ／ｋｇの用量のエテプリルセンを、毎週、少なくとも２１６週間静脈内投与し、それによって、患者においてｍＲＮＡリーディングフレームを回復させてジストロフィンタンパク質産生を誘導することを含む方法に関する。
【００６０】
本発明のこれらおよび他の態様において、ジストロフィンタンパク質産生は、逆転写ポリメラーゼ連鎖反応（ＲＴ−ＰＣＲ）、ウエスタンブロット分析、または免疫組織化学（ＩＨＣ）によって測定される。
【００６１】
本発明の他の態様は、エキソン５１スキッピングを受け入れられるデュシェンヌ型筋ジストロフィー（ＤＭＤ）遺伝子変異を有する、処置を必要とするＤＭＤ患者を、疾患の進行を遅らせることにより処置する方法であって、患者に、３０ｍｇ／ｋｇの用量のエテプリルセンを、毎週、少なくとも２１６週間静脈内投与して、患者における疾患の進行が遅れるようにし、それによって患者を処置することを含む方法に関する。
【００６２】
本発明の別の態様は、エキソン５１スキッピングを受け入れられるデュシェンヌ型筋ジストロフィー（ＤＭＤ）遺伝子変異を有する、歩行維持または歩行喪失の低減を必要とするＤＭＤ患者において、歩行を維持させる、または歩行喪失を低減する方法であって、患者に、３０ｍｇ／ｋｇの用量のエテプリルセンを、毎週、１９２週間より長い期間静脈内投与し、それによって、患者において、少なくとも２１６週間、ベースラインと比較して、歩行を維持させる、または、歩行喪失を低減することを含む方法に関する。
【００６３】
別の態様において、本発明は、エキソン５１スキッピングを受け入れられるデュシェンヌ型筋ジストロフィー（ＤＭＤ）遺伝子変異を有する、肺機能の維持または肺機能の喪失の低減を必要とするＤＭＤ患者において、肺機能を維持させる、または肺機能の喪失を低減する方法であって、患者に、３０ｍｇ／ｋｇの用量のエテプリルセンを、毎週、１９２週間より長い期間静脈内投与し、それによって、患者において、少なくとも２１６週間、ベースラインと比較して、肺機能を維持させる、または肺機能の喪失を低減することを含む方法に関する。
【００６４】
本発明のこれらおよび他の態様において、肺機能は、最大呼気圧（ＭＥＰ）として測定される。本発明の他の態様において、肺機能は、最大吸気圧（ＭＩＰ）として測定される。本発明のさらに他の態様において、肺機能は、努力肺活量（ＦＶＣ）として測定される。
【００６５】
本明細書に記載する方法のいずれかの一部の実施形態において、患者は、背景にステロイド療法を受けている患者である。
【００６６】
一部の文献報告では、ＤＭＤ患者における、独力で床から起き上がる能力の喪失と、その後の翌年内の歩行喪失との関連が示唆されている（BushbyおよびConnor（２０１１年）Clin  Investig  (Lond.)１巻（９号）：１２１７〜１２３５頁、およびHenricsonら（２０１３年）Muscle  Nerve  ４８巻（１号）：５５〜６７頁）。以下で作業実施例におい
て記載されるとおり、４人のエテプリルセン処置患者は、１〜３年目に、外部支援なしで起き上がる能力を失った。しかし、仰臥から起き上がる能力の喪失にもかかわらず、こうしたエテプリルセン患者は、処置４年目の時点で歩行可能なままであった。すなわち、こうしたデータは、エテプリルセン処置によって、独力で仰臥から起き上がる能力を失っている患者でも、歩行能力が保たれることを示している。
【００６７】
したがって、さらに別の態様において、本明細書に記載の方法のいずれかは、独力で仰臥から起き上がる能力を失っている患者を処置することに関与しうる。本明細書に記載の方法のいずれかの一部の実施形態において、患者は、エテプリルセンによる処置の少なくとも１年前に、独力で仰臥から起き上がる能力を失っている。本明細書に記載の方法のいずれかの一部の実施形態において、患者は、エテプリルセンによる処置開始から１年以内に、独力で仰臥から起き上がる能力を失っている。本明細書に記載の方法のいずれかの一部の実施形態において、患者は、処置開始から２年以内に、独力で仰臥から起き上がる能力を失っている。
【００６８】
一部の実施形態において、本明細書に記載の方法のいずれかは、患者が、エテプリルセンによる処置の期間中に仰臥位から起き上がる能力を失うとしても、エテプリルセンによる処置を継続することを含む。
【００６９】
本明細書に記載の方法のいずれかの一部の実施形態において、患者は、起き上がる時間が１０秒を超えている。本明細書に記載の方法のいずれかの一部の実施形態において、患者は、起き上がる時間が１５秒を超えている。本明細書に記載の方法のいずれかの一部の実施形態において、患者は、起き上がる時間が２０秒を超えている。
【００７０】
別の態様において、本発明は、エキソン５１スキッピングを受け入れられるデュシェンヌ型筋ジストロフィー（ＤＭＤ）遺伝子変異を有する、処置を必要とするＤＭＤ患者を、疾患の進行を遅らせることにより処置する方法であって、患者に、３０ｍｇ／ｋｇの用量のエテプリルセンを、毎週静脈内投与して、６分間歩行試験（６ＭＷＴ）により測定したとき、患者における疾患の進行が遅れるようにし、それによって患者を処置することを含み、ここで、患者は、エテプリルセンによる処置より前に、独力で仰臥から起き上がる能力を失っている、方法を提供する。
【００７１】
別の態様において、本発明は、エキソン５１スキッピングを受け入れられるデュシェンヌ型筋ジストロフィー（ＤＭＤ）遺伝子変異を有する、処置を必要とするＤＭＤ患者を、疾患の進行を遅らせることにより処置する方法であって、患者に、３０ｍｇ／ｋｇの用量のエテプリルセンを、毎週静脈内投与して、６分間歩行試験（６ＭＷＴ）により測定したとき、患者における疾患の進行が遅れるようにし、それによって患者を処置することを含み、ここで、患者は、エテプリルセンによる処置の期間中に（例えば、エテプリルセンによる処置開始後、約６か月、１年、２年、またはさらに３年の時点で）、独力で仰臥から起き上がる能力を失う、方法を特徴とする。
【００７２】
さらに別の態様において、本発明は、エキソン５１スキッピングを受け入れられるデュシェンヌ型筋ジストロフィー（ＤＭＤ）遺伝子変異を有する、処置を必要とするＤＭＤ患者を、疾患の進行を遅らせることにより処置する方法であって、患者に、３０ｍｇ／ｋｇの用量のエテプリルセンを、毎週静脈内投与して、６分間歩行試験（６ＭＷＴ）により測定したとき、患者における疾患の進行が遅れるようにし、それによって患者を処置することを含み、ここで、患者は、エテプリルセンによる処置より前に、独力で仰臥から起き上がる能力を失っている、方法を特徴とする。
【００７３】
別の態様において、本発明は、エキソン５１スキッピングを受け入れられるデュシェンヌ型筋ジストロフィー（ＤＭＤ）遺伝子変異を有する、処置を必要とするＤＭＤ患者を、疾患の進行を遅らせることにより処置する方法であって、患者に、３０ｍｇ／ｋｇの用量のエテプリルセンを、毎週静脈内投与して、６分間歩行試験（６ＭＷＴ）により測定したとき、患者における疾患の進行が遅れるようにし、それによって患者を処置することを含み、ここで、患者は、エテプリルセンによる処置の期間中に（例えば、エテプリルセンによる処置開始後、約６か月、１年、２年、またはさらに３年の時点で）、独力で仰臥から起き上がる能力を失う、方法を特徴とする。
【００７４】
別の態様では、本発明は、エキソン５１スキッピングを受け入れられるデュシェンヌ型筋ジストロフィー（ＤＭＤ）遺伝子変異を有する、処置必要とするＤＭＤ患者において、歩行を維持させる、または歩行喪失を低減する方法であって、患者に、３０ｍｇ／ｋｇの用量のエテプリルセンを、毎週静脈内投与し、それによって、患者において、６分間歩行試験（６ＭＷＴ）により測定したとき、ベースラインと比較して、歩行を維持させる、または、歩行喪失を低減することを含み、ここで、患者は、エテプリルセンによる処置より前に、独力で仰臥から起き上がる能力を失っている、方法を特徴とする。
【００７５】
別の態様において、本発明は、エキソン５１スキッピングを受け入れられるデュシェンヌ型筋ジストロフィー（ＤＭＤ）遺伝子変異を有する、歩行の維持または歩行喪失の低減を必要とするＤＭＤ患者において、歩行を維持させる、または歩行喪失を低減する方法であって、患者に、３０ｍｇ／ｋｇの用量のエテプリルセンを、毎週静脈内投与し、それによって、患者において、６分間歩行試験（６ＭＷＴ）により測定したとき、ベースラインと比較して、歩行を維持させる、または、歩行喪失を低減することを含み、ここで、患者は、エテプリルセンによる処置の期間中に（例えば、エテプリルセンによる処置開始後、約６か月、１年、２年、またはさらに３年の時点で）、独力で仰臥から起き上がる能力を失う、方法を特徴とする。
【００７６】
別の態様において、本発明は、エキソン５１スキッピングを受け入れられるデュシェンヌ型筋ジストロフィー（ＤＭＤ）遺伝子変異を有する、肺機能の維持または肺機能の喪失の低減を必要とするＤＭＤ患者において、肺機能を維持させる、または肺機能の喪失を低減する方法であって、患者に、３０ｍｇ／ｋｇの用量のエテプリルセンを、毎週静脈内投与し、それによって、患者において、ベースラインと比較して、肺機能を維持させる、または肺機能の喪失を低減することを含み、ここで、患者は、エテプリルセンによる処置より前に、独力で仰臥から起き上がる能力を失っている、方法を特徴とする。
【００７７】
別の態様において、本発明は、エキソン５１スキッピングを受け入れられるデュシェンヌ型筋ジストロフィー（ＤＭＤ）遺伝子変異を有する、肺機能の維持または肺機能の喪失の低減を必要とするＤＭＤ患者において、肺機能を維持させる、または肺機能の喪失を低減する方法であって、患者に、３０ｍｇ／ｋｇの用量のエテプリルセンを、毎週静脈内投与し、それによって、患者において、ベースラインと比較して、肺機能を維持させる、または肺機能の喪失を低減することを含み、ここで、患者は、エテプリルセンによる処置の期間中に（例えば、エテプリルセンによる処置開始後、約６か月、１年、２年、またはさらに３年の時点で）、独力で仰臥から起き上がる能力を失う、方法を特徴とする。
【００７８】
本明細書に記載の方法のいずれかの一部の実施形態において、肺機能は、最大呼気圧（ＭＥＰ）として測定される。一部の実施形態において、肺機能は、最大吸気圧（ＭＩＰ）として測定される。一部の実施形態において、肺機能は、努力肺活量（ＦＶＣ）として測定される。
【００７９】
別の態様において、本発明は、エキソン５１スキッピングを受け入れられるデュシェンヌ型筋ジストロフィー（ＤＭＤ）遺伝子変異を有する、ｍＲＮＡリーディングフレームを回復させてジストロフィンタンパク質産生を誘導することを必要とするＤＭＤ患者において、ｍＲＮＡリーディングフレームを回復させてジストロフィンタンパク質産生を誘導する方法であって、患者に、３０ｍｇ／ｋｇの用量のエテプリルセンを、毎週静脈内投与し、それによって、患者においてｍＲＮＡリーディングフレームを回復させてジストロフィンタンパク質産生を誘導することを含み、ここで、患者は、エテプリルセンによる処置より前に、独力で仰臥から起き上がる能力を失っている、方法を特徴とする。
【００８０】
別の態様において、本発明は、エキソン５１スキッピングを受け入れられるデュシェンヌ型筋ジストロフィー（ＤＭＤ）遺伝子変異を有する、ｍＲＮＡリーディングフレームを回復させてジストロフィンタンパク質産生を誘導することを必要とするＤＭＤ患者において、ｍＲＮＡリーディングフレームを回復させてジストロフィンタンパク質産生を誘導する方法であって、患者に、３０ｍｇ／ｋｇの用量のエテプリルセンを、毎週静脈内投与し、それによって、患者においてｍＲＮＡリーディングフレームを回復させてジストロフィンタンパク質産生を誘導することを含み、ここで、患者は、エテプリルセンによる処置の期間中に（例えば、エテプリルセンによる処置開始後、約６か月、１年、２年、またはさらに３年の時点で）、独力で仰臥から起き上がる能力を失う、方法を特徴とする。
【００８１】
一部の実施形態において、ジストロフィンタンパク質産生は、逆転写ポリメラーゼ連鎖反応（ＲＴ−ＰＣＲ）、ウエスタンブロット分析、または免疫組織化学（ＩＨＣ）によって測定される。
【００８２】
本明細書に記載の方法のいずれかの一部の実施形態において、患者は、７歳またはそれより年長である。本明細書に記載の方法のいずれかの一部の実施形態において、エテプリルセンは、静脈内注入として３５〜６０分かけて投与される。
【００８３】
一部の実施形態において、本明細書に記載の方法のいずれかは、患者に、ステロイド、例えば副腎皮質ステロイドを投与することを含む。一部の実施形態において、副腎皮質ステロイドは、ベタメタゾン、ブデソニド、コルチゾン、デキサメタゾン、ヒドロコルチゾン、メチルプレドニゾロン、プレドニゾロン、プレドニゾン、またはデフラザコートである。
【００８４】
本明細書に記載の方法のいずれかの一部の実施形態において、副腎皮質ステロイドは、エテプリルセンの投与より前に、それと併せて、またはそれに続いて投与される。
【００８５】
本明細書に記載の方法のいずれかの一部の実施形態において、患者は、背景にステロイド療法（例えば、間欠的または連続的／長期的な背景のステロイド療法（background  steroid  therapy））を受けている。
【００８６】
一部の実施形態において、本明細書に記載の方法のいずれかは、患者が、ＤＭＤ遺伝子においてエキソン５１スキッピングを受け入れられる変異を有することを確認することをさらに含む。
【００８７】
一部の実施形態において、本明細書に記載の方法のいずれかは、エテプリルセンを投与する前に、患者が、ＤＭＤ遺伝子においてエキソン５１スキッピングを受け入れられる変異を有することを確認することをさらに含む。
【００８８】
本明細書に記載の方法のいずれかの一部の実施形態において、患者は、エテプリルセンによる処置開始後１年以内に、独力で仰臥から起き上がる能力を失う。本明細書に記載の方法のいずれかの一部の実施形態において、患者は、処置開始後２年以内に、独力で仰臥から起き上がる能力を失う。本明細書に記載の方法のいずれかの一部の実施形態において、患者は、処置開始時に、起き上がる時間が１０秒を超えている。本明細書に記載の方法のいずれかの一部の実施形態において、患者は、処置開始時に、起き上がる時間が１５秒を超えている。本明細書に記載の方法のいずれかの一部の実施形態において、患者は、起き上がる時間が２０秒を超えている。
【００８９】
本明細書に記載する方法のいずれかの一部の実施形態において、患者は、間欠的な背景のステロイド療法を受けている。本明細書に記載する方法のいずれかの一部の実施形態において、患者は、連続的な背景のステロイド療法を受けている。
【００９０】
本明細書に記載する方法または組成物のいずれかの一部の実施形態において、患者は、約６か月齢〜約４歳の間（両端を含む）である。一部の実施形態において、患者は、少なくとも６（例えば、少なくとも７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２４、３０、または３６）か月齢である。一部の実施形態において、患者は、４歳以下である。一部の実施形態において、エテプリルセンは、そのような患者に、非経口投与、例えば、皮下投与することができる。
【００９１】
さらに別の態様において、本開示は、エキソン５１スキッピングを受け入れられるデュシェンヌ型筋ジストロフィー（ＤＭＤ）遺伝子変異を有する、処置を必要とするＤＭＤ患者を、疾患の進行を遅らせることにより処置する方法であって、患者に、ステロイドと併せて、３０ｍｇ／ｋｇの用量のエテプリルセンを、毎週静脈内投与して、６分間歩行試験（６ＭＷＴ）により測定したとき、患者における疾患の進行が遅れるようにし、それによって患者を処置することを含み、ここで、エテプリルセンの投与によって、ＣＤＣ／ＴＲＥＡＴ−ＮＭＤガイドラインのステロイド推奨用量に比べて、患者に投与されるステロイドの用量を少なくすることが可能になり（Bushby  K、Lynn  S、Straub  V.、Collaborating  to  bring  new  therapies  to  the  patient:  the  TREAT-NMD  model.、Acta  Myo、２００９年；２８巻：１２〜１５頁）、同等、同一、または増大したレベルの有効性が実現される、方法を特徴とする。例えば、患者に投与されるステロイドの用量は、推奨ステロイド投与量の約７５％〜約８０％の間でありうる。
【００９２】
別の態様において、本発明は、エキソン５１をスキッピングすることにより補正することができる、デュシェンヌ型筋ジストロフィー（ＤＭＤ）遺伝子の変異を有する、ＤＭＤを処置することを必要とする患者におけるＤＭＤの処置において使用するためのエテプリルセンであって、ここで、該処置は、該患者に、３０ｍｇ／ｋｇの１回の静脈内用量のエテプリルセンを週１回投与し、それによって、６分間歩行試験（６ＭＷＴ）により決定したとき、疾患の進行を１６８週間にわたって遅らせることを含む、エテプリルセンに関する。
【００９３】
別の態様において、本発明は、エキソン５１をスキッピングすることにより補正することができる、デュシェンヌ型筋ジストロフィー（ＤＭＤ）遺伝子の変異を有する、ＤＭＤを有する患者において、歩行を維持させる、または歩行喪失を低減する際に使用するためのエテプリルセンであって、ここで、該処置は、該患者に、３０ｍｇ／ｋｇの１回の静脈内用量のエテプリルセンを週１回投与し、それによって、６分間歩行試験（６ＭＷＴ）により決定したとき、１６８週間にわたって、ベースラインと比較して、歩行を維持させる、または歩行喪失を低減することを含む、エテプリルセンに関する。
【００９４】
本発明の他の態様は、エキソン５１をスキッピングすることにより補正することができる、デュシェンヌ型筋ジストロフィー（ＤＭＤ）遺伝子の変異を有する、ＤＭＤを有する患者において、肺機能を維持させる、または肺機能の喪失を低減する際に使用するためのエテプリルセンであって、ここで、該処置は、該患者に、３０ｍｇ／ｋｇの１回の静脈内用量のエテプリルセンを週１回投与し、それによって、１６８週間にわたって、ベースラインと比較して、肺機能を維持させる、または肺機能の喪失を低減することを含む、エテプリルセンに関する。
【００９５】
別の態様において、本発明は、エキソン５１をスキッピングすることにより補正することができる、デュシェンヌ型筋ジストロフィー（ＤＭＤ）遺伝子の変異を有する、ＤＭＤを有する患者において、ｍＲＮＡリーディングフレームを回復させてジストロフィンタンパク質産生を誘導する際に使用するためのエテプリルセンであって、ここで、該処置は、該患者に、３０ｍｇ／ｋｇの１回の静脈内用量のエテプリルセンを週１回投与し、それによって、１６８週間にわたって、該ｍＲＮＡリーディングフレームを回復させてジストロフィンタンパク質産生を誘導することを含む、エテプリルセンに関する。
【００９６】
本発明の別の態様は、エキソン５１をスキッピングすることにより補正することができる、デュシェンヌ型筋ジストロフィー（ＤＭＤ）遺伝子の変異を有する、ＤＭＤを有する患者において、ｍＲＮＡリーディングフレームを回復させてジストロフィンタンパク質産生を誘導する際に使用するためのエテプリルセンであって、ここで、該処置は、該患者に、３０ｍｇ／ｋｇの１回の静脈内用量のエテプリルセンを週１回投与し、それによって、少なくとも２１６週間、該ｍＲＮＡリーディングフレームを回復させてジストロフィンタンパク質産生を誘導することを含む、エテプリルセンに関する。
【図面の簡単な説明】
【００９７】
【図１】図１は、ＤＭＤ患者の処置についての試験デザインの概略図である。１２人のＤＭＤ患者を、二重盲検プラセボ対照試験２０１の３つのコホート：コホート１、エテプリルセン３０ｍｇ／ｋｇ／週；コホート２、エテプリルセン５０ｍｇ／ｋｇ／週；およびコホート３、プラセボ／遅延エテプリルセンのうちの１つに無作為化した。２５週目に、コホート３のプラセボ処置患者を、３０または５０ｍｇ／ｋｇ／週のエテプリルセンによる非盲検処置に切り替えた。非盲検延長試験２０２のもと、患者に、各自の同じ用量のエテプリルセンを継続させた。有効性評価。６ＭＷＴを機能的転帰尺度として使用した。
【図２】図２は、マッチさせた外部対照コホートの選抜についての概略図である。エキソン５１を受け入れられる患者の６ＭＷＴデータ、３６か月までの縦断的な６ＭＷＴデータ、遺伝子変異データ、および等価な医療基準を有するＩｔａｌｉａｎ  Ｔｅｌｅｔｈｏｎ（ｎ＝９７）およびＬｅｕｖｅｎ  ＮＭＲＣ（ｎ＝８９）登録簿を選択した。患者を選択する因子は、ステロイド処置を受けていること、７歳を超えていること、エキソン５１スキッピングを受け入れられること、およびベースライン６ＭＷＴが１８０〜４００ｍであることとした。この結果、１３人の患者がマッチさせた対照として選択された。
【図３】図３は、エキソンスキッピングを受け入れられるＤＭＤ患者における、疾患進行の自然歴の過程の６ＭＷＴの距離としての結果を、年齢群（すなわち、７歳より年少または７歳およびそれより年長）に基づいて経時的にグラフで示すものである。濃い線は、７歳より年少の患者における距離の変化を示す。薄い線は、７歳またはそれより年長の患者における距離の変化を示す。３６か月の終わりに、１９４ｍの差が記録されている。
【図４】図４は、任意の遺伝子型を有するＤＭＤ患者における、疾患進行の自然歴の過程の６ＭＷＴの距離としての結果を、年齢群（すなわち、７歳より年少または７歳およびそれより年長）に基づいて経時的にグラフで示すものである。濃い線は、７歳より年少の患者における距離の変化を示す。薄い線は、７歳またはそれより年長の患者における距離の変化を示す。３６か月の終わりに、１６７ｍの差が記録されている。
【図５】図５は、ＤＭＤ患者における疾患進行の自然歴の過程の６ＭＷＴの距離としての結果を、遺伝子型に基づいて経時的にグラフで示すものである。上方の線は、すべての変異を有する患者における距離の変化を示す。中間の線は、いずれかのエキソンに変異を有する患者における距離の変化を示す。下方の線は、エキソン５１変異を有する患者における距離の変化を示す。
【図６】図６は、エテプリルセンの機能的有効性をグラフで示すものである。濃い線は、エテプリルセンを与えられた１２人の患者であって、試験開始からエテプリルセンを与えられた、または最初はプラセボを与えられた１２人の患者について、６ＭＷＴにおいて歩いた距離のベースラインからの距離（ｍ）の変化を経時的に示す。より薄い線は、１３人のマッチさせた対照患者について、６ＭＷＴにおいて歩いた距離のベースラインからの変化を経時的に示す。３６か月の終わりに、１５１ｍの差が記録されている。
【図７】図７は、６ＭＷＴの結果を、ベースラインからのパーセント変化として経時的にグラフで示すものである。濃い線は、エテプリルセンを与えられた１２人の患者であって、試験開始からエテプリルセンを与えられた、または最初はプラセボを与えられた１２人の患者を表す。破線は、プラセボ−遅延（placebo-delayed）でなかった８人の患者における変化を示す。より薄い線は、１１人のマッチさせた対照患者を表す。
【図８】図８は、歩行を喪失した患者のパーセントを経時的にグラフで示すものである。濃色のバーは、エテプリルセンが与えられた１２人の患者を表し、より薄い色のバーは、１３人のマッチさせた対照患者を表す。
【図９】図９は、ベースラインから１８０週間の時点でのエテプリルセン処置コホート（「処置」）およびマッチさせた外部対照コホート（「未処置」）の両方におけるジストロフィン陽性線維のパーセントをグラフで示すものである。４人の独立した病理学者が組織切片を観察し、ジストロフィン陽性線維の百分率を決定した。
【図１０Ａ】図１０Ａは、エテプリルセン処置コホートにおける肺機能の経過を示す。一番上の線は、百分率としての努力肺活量（ＦＶＣ）を表す。中間の線は、百分率としての最大吸気圧（ＭＩＰ）を示し、下方の線は、百分率としての最大呼気圧（ＭＥＰ）を示す。
【図１０Ｂ】図１０Ｂ〜１０Ｄは、マッチさせた外部対照コホートにおける肺機能の経過を示す。図１０Ｂは、百分率としての努力肺活量（ＦＶＣ）を示す。図１０Ｃは、百分率としての最大吸気圧（ＭＩＰ）を示す。図１０Ｄは、百分率としての最大呼気圧（ＭＥＰ）を示す。
【図１０Ｃ】図１０Ｂ〜１０Ｄは、マッチさせた外部対照コホートにおける肺機能の経過を示す。図１０Ｂは、百分率としての努力肺活量（ＦＶＣ）を示す。図１０Ｃは、百分率としての最大吸気圧（ＭＩＰ）を示す。図１０Ｄは、百分率としての最大呼気圧（ＭＥＰ）を示す。
【図１０Ｄ】図１０Ｂ〜１０Ｄは、マッチさせた外部対照コホートにおける肺機能の経過を示す。図１０Ｂは、百分率としての努力肺活量（ＦＶＣ）を示す。図１０Ｃは、百分率としての最大吸気圧（ＭＩＰ）を示す。図１０Ｄは、百分率としての最大呼気圧（ＭＥＰ）を示す。
【図１１】図１１は、エテプリルセン処置コホート（「ＥＴＥＴＲＴＤ」）およびマッチさせた外部対照コホート（「ＥＸＴＣＴＲＬ」）の両方における、カプランマイヤー曲線によって決定される、４年にわたる歩行確率をグラフで示すものである。推定される歩行喪失は、ＥＴＥＴＲＴＤコホートについては１６．７％、ＥＸＴＣＴＲＬコホートについては８９．７％である。ログランク検定に基づいてＰ＝０．００３８。
【図１２】図１２は、エテプリルセンの機能的有効性をグラフで示すものである。上方の線（菱形）は、エテプリルセンを与えられた１２人の患者であって、試験開始からエテプリルセンを与えられた、または最初はプラセボを与えられた１２人の患者について、６ＭＷＴにおいて歩いた距離のベースラインからの距離（ｍ）の平均変化（mean  change）を経時的に示す。下方の線（四角形）は、１３人のマッチさせた対照患者について、６ＭＷＴにおいて歩いた距離のベースラインからの平均変化を経時的に示す。４年の終わりに、１６２ｍの差が記録されている。
【図１３】図１３は、各コホート（エテプリルセン処置コホートおよびマッチさせた外部対照コホート）における、歩行を喪失している患者の百分率を、時間ごとに示す棒グラフである。
【図１４】図１４は、各コホート（エテプリルセン処置コホートおよびマッチさせた外部対照コホート）における患者に投与されたステロイド（デフラザコート（ＤＦＺ）またはプレドニゾン（Ｐｒｅｄ）のいずれか）の、推奨用量に対する平均百分率を示す棒グラフである。
【発明を実施するための形態】
【００９８】
詳細な説明
本開示の実施形態は、ＤＭＤやＢＭＤなどの筋ジストロフィーを、ヒトジストロフィン遺伝子においてエキソン５１スキッピングを誘導するように特に設計されたアンチセンス化合物であるエテプリルセンを投与することによって処置する、改善された方法に関する。ジストロフィンは筋機能において極めて重要な役割を果たし、筋肉に関連した様々な疾患は、この遺伝子の変異型によって特徴付けられる。したがって、ある特定の実施形態では、本明細書に記載する改善された方法を使用して、ＤＭＤおよびＢＭＤにおいて見出される変異したジストロフィン遺伝子などの、ヒトジストロフィン遺伝子の変異型において、エキソン５１スキッピングを誘導することができる。
【００９９】
変異によってもたらされる異常なｍＲＮＡスプライシング事象によって、これらの変異したヒトジストロフィン遺伝子（すなわち、ＤＭＤ遺伝子）は、欠陥のあるジストロフィンタンパク質を発現するか、または測定可能なジストロフィンを全く発現せず、これは様々な形態の筋ジストロフィーをもたらす状態である。この状態を治療するために、エテプリルセンは、変異したヒトジストロフィン遺伝子のプロセシングを受ける前のＲＮＡの選択された領域にハイブリダイズし、さもないと異常にスプライシングされるジストロフィンｍＲＮＡにおけるエキソンスキッピングおよび差次的なスプライシングを誘導し、それによって筋細胞が機能的ジストロフィンタンパク質をコードするｍＲＮＡ転写物を生じさせることを可能とする。ある特定の実施形態において、このように得られたジストロフィンタンパク質は、必ずしもジストロフィンの「野性型」形態ではないが、むしろ切断型であるが依然として機能的または半機能的形態のジストロフィンである。
【０１００】
筋細胞中の機能的ジストロフィンタンパク質のレベルを増大させることによって、これらおよび関連する実施形態は、筋ジストロフィー、特に、異常なｍＲＮＡスプライシングによる欠陥のあるジストロフィンタンパク質の発現によって特徴付けられる筋ジストロフィーの形態、例えば、ＤＭＤおよびＢＭＤの予防法および処置において有用である。本明細書に記載されている方法は、筋ジストロフィー患者に対して改善された処置選択肢をさらに提供し、関連する形態の筋ジストロフィーを処置する代替方法を超える有意かつ実施上の利点を提供する。
【０１０１】
したがって、本発明は、患者においてエキソン５１スキッピングを誘導することにより、ＤＭＤやＢＭＤなどの筋ジストロフィーを処置する、改善された方法に関する。一部の実施形態では、有効量のエテプリルセン（例えば、患者の体重１ｋｇあたり３０ｍｇ）が、ＤＭＤ遺伝子においてエキソン５１スキッピングを受け入れられる変異を有するＤＭＤ患者に投与され、投与は、疾患の処置に十分な期間にわたる。一部の実施形態では、エテプリルセンは、約２５ｍｇ／ｋｇ〜約５０ｍｇ／ｋｇの間（例えば、約２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、または５０ｍｇ／ｋｇ）の用量で、例えば１週間に１回、患者に投与される。一部の実施形態では、エテプリルセンは、約２５ｍｇ／ｋｇ〜約５０ｍｇ／ｋｇの間（例えば、約３０ｍｇ／ｋｇ〜約５０ｍｇ／ｋｇ、約２５ｍｇ／ｋｇ〜約４０ｍｇ／ｋｇ、約２８ｍｇ／ｋｇ〜約３２ｍｇ／ｋｇ、または約３０ｍｇ／ｋｇ〜約４０ｍｇ／ｋｇ）の用量で、例えば１週間に１回、患者に投与される。一部の実施形態では、有効量のエテプリルセンが、少なくとも１６８（例えば、少なくとも１６９、１７０、１７１、１７２、１７３、１７４、１７５、１７６、１７７、１７８、１７９、１８０、１８１、１８２、１８３、１８４、１８５、１８６、１８７、１８８、１８９、１９０、１９１、１９２、１９３、１９４、１９５、１９６、１９７、１９８、１９９、２００、２０１、２０２、２０３、２０４、２０５、２０６、２０７、２０８、２０９、２１０、２１１、２１２、２１３、２１４、２１５、または２１６）週間、それを必要とする患者に投与される。一部の実施形態では、ＤＭＤ患者の処置は、（例えば、３０ｍｇ／ｋｇの用量の）エテプリルセンを１６８週間より長い期間（例えば、１６９、１７０、１７１、１７２、１７３、１７４、１７５、１７６、１７７、１７８、１７９、１８０、１８１、１８２、１８３、１８４、１８５、１８６、１８７、１８８、１８９、１９０、１９１、１９２、１９３、１９４、１９５、１９６、１９７、１９８、１９９、２００、２０１、２０２、２０３、２０４、２０５、２０６、２０７、２０８、２０９、２１０、２１１、２１２、２１３、２１４、２１５、２１６週間より長い期間、または２１６週間より長い期間）投与することを含む。一部の実施形態では、ＤＭＤ患者の処置は、（例えば、３０ｍｇ／ｋｇの用量の）エテプリルセンを、少なくとも約１６８〜約１９２週間または約１６８〜約２１６週間投与することを含む。一部の実施形態では、有効量のエテプリルセンが、少なくとも１９２（例えば、少なくとも１６９、１７０、１７１、１７２、１７３、１７４、１７５、１７６、１７７、１７８、１７９、１８０、１８１、１８２、１８３、１８４、１８５、１８６、１８７、１８８、１８９、１９０、１９１、１９２、１９３、１９４、１９５、１９６、１９７、１９８、１９９、２００、２０１、２０２、２０３、２０４、２０５、２０６、２０７、２０８、２０９、２１０、２１１、２１２、２１３、２１４、２１５、または２１６）週間、それを必要とする患者に投与される。一部の実施形態では、有効量のエテプリルセンが、１９２週間より長い期間（例えば、１９３、１９４、１９５、１９６、１９７、１９８、１９９、２００、２０１、２０２、２０３、２０４、２０５、２０６、２０７、２０８、２０９、２１０、２１１、２１２、２１３、２１４、２１５、２１６、２１７、２１８、２１９、２２０、２２１、２２２、２２３、２２４、２２５、２３０、２３５、２４０、２４５、２５０、２５５週間より長い期間、または２６０週間もしくはそれより長い期間）、それを必要とする患者に投与される。一部の実施形態では、ＤＭＤ患者の処置は、（例えば、３０ｍｇ／ｋｇの用量の）エテプリルセンを少なくとも２１６週間（例えば、少なくとも２１７、２１８、２１９、２２０、２２１、２２２、２２３、２２４、２２５、２３０、２３５、２４０、２４５、２５０、２５５、または２６０週間もしくはそれより長い期間）投与することを含む。一部の実施形態では、ＤＭＤ患者の処置は、（例えば、３０ｍｇ／ｋｇの用量の）エテプリルセンを、少なくとも約１９２週間〜約２１６週間投与することを含む。
【０１０２】
ジストロフィン遺伝子における種々の変異が、エキソン５１スキッピングを受け入れられる。エキソン５１スキッピングを受け入れられる、次のエキソンにおける変異の非限定的な例としては、例えば、４５〜５０、４７〜５０、４８〜５０、４９〜５０、５０、５２、５２〜６３が挙げられる（Ｌｅｉｄｅｎデュシェンヌ型筋ジストロフィー変異データベース、Ｌｅｉｄｅｎ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｃｅｎｔｅｒ、オランダ国）。患者が、エキソンスキッピングを受け入れられるＤＭＤ遺伝子における変異を有するかどうかを決定することは、十分に当業者の範囲内である（例えば、Aartsma-Rusら（２００９年）Hum  Mut、３０巻：２９３〜２９９頁を参照されたい）。
【０１０３】
他に定義しない限り、本明細書において使用する全ての技術および科学用語は、本発明が属する分野の当業者によって通常理解されるのと同じ意味を有する。本明細書に記載されているものと同様または同等である任意の方法および材料を、本発明の実施または試験において使用することができるが、好ましい方法および材料を記載する。本発明の目的のために、下記の用語を、下記で定義する。
【０１０４】
Ｉ．定義
「約」とは、参照の分量、レベル、値、数、頻度、百分率、寸法、サイズ、量、重量または長さに対して、３０％、２５％、２０％、１５％、１０％、９％、８％、７％、６％、５％、４％、３％、２％または１％ほど変動する、分量、レベル、値、数、頻度、百分率、寸法、サイズ、量、重量または長さを意味する。
【０１０５】
「アンチセンスオリゴマー」および「アンチセンス化合物」および「アンチセンスオリゴヌクレオチド」という用語は互換的に使用され、環状サブユニットの配列を指し、これはそれぞれが、サブユニット間連結によって連結される塩基対合部分を担持し、サブユニット間連結は、塩基対合部分がワトソン−クリック塩基対合によって核酸（典型的にはＲＮＡ）中の標的配列にハイブリダイズし、標的配列内で核酸：オリゴマーヘテロ二重鎖を形成することを可能とする。環状サブユニットは、リボースもしくは別のペントース糖、または好ましい実施形態において、モルホリノ基（下記のモルホリノオリゴマーの記載を参照されたい）をベースとする。オリゴマーは、標的配列と相補性な正確または近似の配列を有し得る。オリゴマーの末端近くの配列におけるバリエーションは一般に、内部におけるバリエーションより好ましい。
【０１０６】
「モルホリノオリゴマー」または「ＰＭＯ」（ホスホロアミデートモルホリノオリゴマーまたはホスホロジアミデートモルホリノオリゴマー）という用語は、モルホリノサブユニット構造から構成されるオリゴヌクレオチド類似体を指し、（ｉ）構造は、１〜３個の原子長、好ましくは２個の原子長であり、好ましくは荷電していないか、またはカチオン性であり、１つのサブユニットのモルホリノ窒素と隣接するサブユニットの５’環外炭素とを接合する、リン含有連結によって一緒に連結されており、（ｉｉ）各モルホリノ環は、塩基特異的水素結合によって、ポリヌクレオチド中の塩基に結合するのに有効なプリンまたはピリミジン塩基対合部分を担持する。例えば、好ましいホスホロジアミデート連結タイプを示す図１Ａにおける構造を参照されたい。バリエーションが結合または活性を妨害しない限り、この連結に対してバリエーションを作製することができる。例えば、リンに付着している酸素は、硫黄で置換され得る（チオホスホロジアミデート）。５’酸素は、アミノまたは低級アルキル置換アミノで置換されていてもよい。リンに付着しているペンダント窒素は、置換されていないか、（任意選択で置換されている）低級アルキルで一置換、または二置換されていてもよい。プリンまたはピリミジン塩基対合部分は典型的には、アデニン、シトシン、グアニン、ウラシル、チミンまたはイノシンである。モルホリノオリゴマーの合成、構造、および結合特徴は、これらの全てが参照により本明細書中に組み込まれている米国特許第５，６９８，６８５号、同第５，２１７，８６６号、同第５，１４２，０４７号、同第５，０３４，５０６号、同第５，１６６，３１５号、同第５，５２１，０６３号、同第５，５０６，３３７号、同第８，０７６，４７６号、同第８，２９９，２０６号および同第７，９４３，７６２号（カチオン性連結）において詳述されている。修飾されたサブユニット間連結および末端基は、これらの全内容が参照により本明細書中に組み込まれているＰＴＣ出願ＵＳ２０１１／０３８４５９および公報ＷＯ／２０１１／１５０４０８において詳述されている。
【０１０７】
「ＡＶＮ−４６５８」としても公知の「エテプリルセン」は、塩基配列５’−ＣＴＣＣＡＡＣＡＴＣＡＡＧＧＡＡＧＡＴＧＧＣＡＴＴＴＣＴＡＧ−３’（配列番号１）を有するＰＭＯである。エテプリルセンは、ＣＡＳ登録番号１１７３７５５−５５−９で登録されている。化学名としては、
ＲＮＡ，［Ｐ−デオキシ−Ｐ−（ジメチルアミノ）］（２’，３’−ジデオキシ−２’，３’−イミノ−２’，３’−セコ）（２’ａ→５’）（Ｃ−ｍ５Ｕ−Ｃ−Ｃ−Ａ−Ａ−Ｃ−Ａ−ｍ５Ｕ−Ｃ−Ａ−Ａ−Ｇ−Ｇ−Ａ−Ａ−Ｇ−Ａ−ｍ５Ｕ−Ｇ−Ｇ−Ｃ−Ａ−ｍ５Ｕ−ｍ５Ｕ−ｍ５Ｕ−Ｃ−ｍ５Ｕ−Ａ−Ｇ），５’［Ｐ−［４−［［２−［２−（２−ヒドロキシエトキシ）エトキシ］エトキシ］カルボニル］−１−ピペラジニル］−Ｎ，Ｎ−ジメチルホスホンアミデート］
および
Ｐ，２’，３’−トリデオキシ−Ｐ−（ジメチルアミノ）−５’−Ｏ−｛Ｐ−［４−（１０−ヒドロキシ−２，５，８−トリオキサデカノイル）ピペラジン−１−イル］−Ｎ，Ｎ−ジメチルホスホンアミドイル｝−２’，３’−イミノ−２’，３’−セコシチジリル−（２’ａ→５’）−Ｐ，３’−ジデオキシ−Ｐ−（ジメチルアミノ）−２’，３’−イミノ−２’，３’−セコチミジリル−（２’ａ→５’）−Ｐ，２’，３’−トリデオキシ−Ｐ−（ジメチルアミノ）−２’，３’−イミノ−２’，３’−セコシチジリル−（２’ａ→５’）−Ｐ，２’，３’−トリデオキシ−Ｐ−（ジメチルアミノ）−２’，３’−イミノ−２’，３’−セコシチジリル−（２’ａ→５’）−Ｐ，２’，３’−トリデオキシ−Ｐ−（ジメチルアミノ）−２’，３’−イミノ−２’，３’−セコアデニリル−（２’ａ→５’）−Ｐ，２’，３’−トリデオキシ−Ｐ−（ジメチルアミノ）−２’，３’−イミノ−２’，３’−セコアデニリル−（２’ａ→５’）−Ｐ，２’，３’−トリデオキシ−Ｐ−（ジメチルアミノ）−２’，３’−イミノ−２’，３’−セコシチジリル−（２’ａ→５’）−Ｐ，２’，３’−トリデオキシ−Ｐ−（ジメチルアミノ）−２’，３’−イミノ−２’，３’−セコアデニリル−（２’ａ→５’）−Ｐ，３’−ジデオキシ−Ｐ−（ジメチルアミノ）−２’，３’−イミノ−２’，３’−セコチミジリル−（２’ａ→５’）−Ｐ，２’，３’−トリデオキシ−Ｐ−（ジメチルアミノ）−２’，３’−イミノ−２’，３’−セコシチジリル−（２’ａ→５’）−Ｐ，２’，３’−トリデオキシ−Ｐ−（ジメチルアミノ）−２’，３’−イミノ−２’，３’−セコアデニリル−（２’ａ→５’）−Ｐ，２’，３’−トリデオキシ−Ｐ−（ジメチルアミノ）−２’，３’−イミノ−２’，３’−セコアデニリル−（２’ａ→５’）−Ｐ，２’，３’−トリデオキシ−Ｐ−（ジメチルアミノ）−２’，３’−イミノ−２’，３’−セコグアニリル−（２’ａ→５’）−Ｐ，２’，３’−トリデオキシ−Ｐ−（ジメチルアミノ）−２’，３’−イミノ−２’，３’−セコグアニリル−（２’ａ→５’）−Ｐ，２’，３’−トリデオキシ−Ｐ−（ジメチルアミノ）−２’，３’−イミノ−２’，３’−セコアデニリル−（２’ａ→５’）−Ｐ，２’，３’−トリデオキシ−Ｐ−（ジメチルアミノ）−２’，３’−イミノ−２’，３’−セコアデニリル−（２’ａ→５’）−Ｐ，２’，３’−トリデオキシ−Ｐ−（ジメチルアミノ）−２’，３’−イミノ−２’，３’−セコグアニリル−（２’ａ→５’）−Ｐ，２’，３’−トリデオキシ−Ｐ−（ジメチルアミノ）−２’，３’−イミノ−２’，３’−セコアデニリル−（２’ａ→５’）−Ｐ，３’−ジデオキシ−Ｐ−（ジメチルアミノ）−２’，３’−イミノ−２’，３’−セコチミジリル−（２’ａ→５’）−Ｐ，２’，３’−トリデオキシ−Ｐ−（ジメチルアミノ）−２’，３’−イミノ−２’，３’−セコグアニリル−（２’ａ→５’）−Ｐ，２’，３’−トリデオキシ−Ｐ−（ジメチルアミノ）−２’，３’−イミノ−２’，３’−セコグアニリル−（２’ａ→５’）−Ｐ，２’，３’−トリデオキシ−Ｐ−（ジメチルアミノ）−２’，３’−イミノ−２’，３’−セコシチジリル−（２’ａ→５’）−Ｐ，２’，３’−トリデオキシ−Ｐ−（ジメチルアミノ）−２’，３’−イミノ−２’，３’−セコアデニリル−（２’ａ→５’）−Ｐ，３’−ジデオキシ−Ｐ−（ジメチルアミノ）−２’，３’−イミノ−２’，３’−セコチミジリル−（２’ａ→５’）−Ｐ，３’−ジデオキシ−Ｐ−（ジメチルアミノ）−２’，３’−イミノ−２’，３’−セコチミジリル−（２’ａ→５’）−Ｐ，３’−ジデオキシ−Ｐ−（ジメチルアミノ）−２’，３’−イミノ−２’，３’−セコチミジリル−（２’ａ→５’）−Ｐ，２’，３’−トリデオキシ−Ｐ−（ジメチルアミノ）−２’，３’−イミノ−２’，３’−セコシチジリル−（２’ａ→５’）−Ｐ，３’−ジデオキシ−Ｐ−（ジメチルアミノ）−２’，３’−イミノ−２’，３’−セコチミジリル−（２’ａ→５’）−Ｐ，２’，３’−トリデオキシ−Ｐ−（ジメチルアミノ）−２’，３’−イミノ−２’，３’−セコアデニリル−（２’ａ→５’）−２’，３’−ジデオキシ−２’，３’−イミノ−２’，３’−セコグアノシン
が挙げられる。
【０１０８】
エテプリルセンは、次の構造を有する。
【化１】
2018529715.tif 000003
【化２】
2018529715.tif 000004
【０１０９】
「エキソン」は、タンパク質をコードする核酸の規定されたセクション、またはプロセシングを受ける前の（または前駆体）ＲＮＡのいずれかの一部がスプライシングによって除去された後の成熟形態のＲＮＡ分子において示される核酸配列を指す。成熟ＲＮＡ分子は、メッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）または機能的形態の非コードＲＮＡ、例えば、ｒＲＮＡまたはｔＲＮＡでよい。ヒトジストロフィン遺伝子は、約７９のエキソンを有する。
【０１１０】
「イントロン」は、タンパク質に翻訳されない核酸領域（遺伝子内）を指す。イントロンは、ｍＲＮＡ前駆体（プレｍＲＮＡ）に転写され、それに続いて成熟ＲＮＡの形成の間にスプライシングによって除去される非コードセクションである。
【０１１１】
「有効量」または「治療有効量」は、単回用量として、または一連の用量の一部として、所望の治療効果を生じさせるのに有効な、ヒト被験体に投与される治療化合物、例えば、アンチセンスオリゴヌクレオチドの量を指す。アンチセンスオリゴヌクレオチドについて、この効果は典型的には、選択した標的配列の翻訳または天然のスプライス−プロセシングを阻害することによってもたらされる。一部の実施形態では、有効量は、被験体を処置する期間の間の、エテプリルセンを含む組成物３０ｍｇ／ｋｇである。一部の実施形態では、有効量は、被験体におけるジストロフィン陽性線維の数を正常の少なくとも２０％に増加させる、約３０ｍｇ／ｋｇのエテプリルセンである。別の実施形態では、有効量は、患者において、健康な同等者と比較して、例えば６ＭＷＴにおける歩行距離を２０％の障害から安定させ、維持させ、または改善させる、約３０ｍｇ／ｋｇのエテプリルセンである。別の態様において、有効量は、１６８週間より長い期間（例えば、少なくとも１６９、１７０、１７１、１７２、１７３、１７４、１７５、１７６、１７７、１７８、１７９、１８０、１８１、１８２、１８３、１８４、１８５、１８６、１８７、１８８、１８９、１９０、１９１、１９２、１９３、１９４、１９５、１９６、１９７、１９８、１９９、２００、２０１、２０２、２０３、２０４、２０５、２０６、２０７、２０８、２０９、２１０、２１１、２１２、２１３、２１４、２１５、または２１６週間）、１週間あたり１回、約３０ｍｇ／ｋｇであり、それによって、患者において、（歩行喪失後に）歩行を安定させ、または（例えば、６ＭＷＴにより測定される）歩行を改善する。別の態様において、有効量は、１６８週間より長い期間（例えば、少なくとも１６９、１７０、１７１、１７２、１７３、１７４、１７５、１７６、１７７、１７８、１７９、１８０、１８１、１８２、１８３、１８４、１８５、１８６、１８７、１８８、１８９、１９０、１９１、１９２、１９３、１９４、１９５、１９６、１９７、１９８、１９９、２００、２０１、２０２、２０３、２０４、２０５、２０６、２０７、２０８、２０９、２１０、２１１、２１２、２１３、２１４、２１５、または２１６週間）、１週間あたり１回、約３０ｍｇ／ｋｇであり、約１６８〜約１９２週目の間に、患者の歩行が（歩行喪失後に）安定し、または改善するようにする。別の態様において、有効量は、１９２週間より長い期間、１週間あたり１回、約３０ｍｇ／ｋｇであり、それによって、患者において、（歩行喪失後に）歩行を安定させ、歩行喪失速度を低減し、歩行喪失を低減し、または（例えば、６ＭＷＴにより測定される）歩行を改善する。別の態様において、有効量は、少なくとも２１６週間、１週間あたり１回、約３０ｍｇ／ｋｇであり、約１９２週目〜約２１６週目の間に、エテプリルセンによる処置を受けていないマッチさせた患者に比べて、患者の歩行喪失が低減され、歩行が（例えば、ベースラインと比較して）安定し、または歩行喪失速度が低減されるようにする。
【０１１２】
「エキソンスキッピング」は一般に、全エキソン、またはその一部が、所与のプロセシングを受ける前のＲＮＡから除去され、それによって成熟ＲＮＡ、例えば、タンパク質に翻訳される成熟ｍＲＮＡにおいて存在することから除外されるプロセスを指す。したがって、スキッピングされるエキソンによって別途コードされるタンパク質の一部は、タンパク質の発現した形態において存在せず、典型的には変化してはいるがまだ機能的形態であるタンパク質を生じさせる。ある特定の実施形態において、スキッピングされるエキソンは、異常なスプライシングをさもないともたらすその配列における変異または他の変化を含有し得る、ヒトジストロフィン遺伝子からの異常なエキソンである。ある特定の実施形態において、スキッピングされるエキソンは、ヒトジストロフィン遺伝子のエキソン５１である。
【０１１３】
「ジストロフィン」は、ジストロフィン（すなわち、ＤＭＤ）遺伝子によってコードされる、ロッド形状の細胞質タンパク質であり、筋線維の細胞骨格と周囲の細胞外マトリックスとを細胞膜を介して接続するタンパク質複合体の非常に重要な部分である。ジストロフィンは、複数の機能的ドメインを含有する。例えば、ジストロフィンは、約アミノ酸１４〜２４０においてアクチン結合ドメイン、および約アミノ酸２５３〜３０４０において中央ロッドドメインを含有する。この大きな中央ドメインは、約１０９アミノ酸の２４スペクトリン様三重らせんエレメントによって形成され、これはアルファ−アクチニンおよびスペクトリンとの相同性を有する。リピートは典型的には、またヒンジ領域と称される４つのプロリンに富んだ非リピートセグメントによって中断される。リピート１５および１６は、ジストロフィンのタンパク質分解性切断のための主要な部位を提供するように思われる１８アミノ酸のストレッチによって分離されている。大部分のリピートの間の配列同一性は、１０〜２５％の範囲である。１つのリピートは、３つのアルファ−ヘリックス：１、２および３を含有する。アルファ−ヘリックス１および３はそれぞれ、７つのヘリックスターンによって形成され、疎水性界面によってコイルドコイルとしておそらく相互作用する。アルファ−ヘリックス２はより複雑な構造を有し、グリシンまたはプロリン残基によって分離される４つおよび３つのヘリックスターンのセグメントによって形成される。各リピートは２つのエキソンによってコードされ、アルファ−ヘリックス２の最初の部分におけるアミノ酸４７および４８の間のイントロンによって典型的には中断される。他のイントロンは、リピートにおける異なる位置において見出され、ヘリックス−３に亘って通常点在している。ジストロフィンはまた、約アミノ酸３０８０〜３３６０において、システインに富んだセグメント（すなわち、２８０アミノ酸中の１５システイン）を含めてシステインに富んだドメインを含有し、粘菌（Ｄｉｃｔｙｏｓｔｅｌｉｕｍ  ｄｉｓｃｏｉｄｅｕｍ）のアルファ−アクチニンのＣ末端ドメインとの相同性を示す。カルボキシ末端ドメインは、ほぼアミノ酸３３６１〜３６８５において存在する。
【０１１４】
ジストロフィンのアミノ末端はＦ−アクチンに結合し、カルボキシ末端は筋細胞膜においてジストロフィンが関連するタンパク質複合体（ＤＡＰＣ）に結合する。ＤＡＰＣは、ジストログリカン、サルコグリカン、インテグリンおよびカベオリンを含み、これらの構成要素のいずれかにおける変異は、常染色体性遺伝した筋ジストロフィーをもたらす。ジストロフィンが存在しないときＤＡＰＣは不安定化し、これはメンバータンパク質のレベルの減少をもたらし、進行性の線維損傷および膜漏出に至る。様々な形態の筋ジストロフィー、例えば、デュシェンヌ型筋ジストロフィー（ＤＭＤ）およびベッカー型筋ジストロフィー（ＢＭＤ）において、筋細胞は、主に遺伝子配列における変異（これは不正確なスプライシングをもたらす）によって、変化した機能的に欠陥のある形態のジストロフィンを産生するか、またはジストロフィンを全く産生しない。欠陥のあるジストロフィンタンパク質の優勢な発現、またはジストロフィンもしくはジストロフィン様タンパク質の完全な欠乏は、上で述べたように筋変性の急速な進行をもたらす。これに関しては、「欠陥のある」ジストロフィンタンパク質は、当技術分野において公知のようにＤＭＤもしくはＢＭＤを有する特定の被験体において産生されるジストロフィンの形態によって、または検出可能なジストロフィンが存在しないことによって特徴付けられ得る。
【０１１５】
本明細書において使用する場合、「機能」および「機能的」などという用語は、生物学的、酵素的、または治療的機能を指す。
【０１１６】
「機能的」ジストロフィンタンパク質は一般に、典型的にはＤＭＤまたはＢＭＤを有する特定の被験体において存在するジストロフィンタンパク質の変化した、または「欠陥のある」形態と比較して、別途筋ジストロフィーの特徴である筋組織の進行性の分解を低減させるのに十分な生物活性を有するジストロフィンタンパク質を指す。ある特定の実施形態において、機能的ジストロフィンタンパク質は、当技術分野で通例の技術によって測定して、野性型ジストロフィンのインビトロまたはインビボでの生物活性の約１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、または１００％（中間の全ての整数を含めた）を有し得る。一例として、筋肉培養物におけるインビトロでのジストロフィンに関連する活性は、筋管サイズ、筋原線維の組織化（または解体）、収縮能、およびアセチルコリン受容体の自発的クラスター形成によって測定することができる（例えば、Ｂｒｏｗｎら、Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｃｅｌｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅ、１１２巻：２０９〜２１６頁、１９９９年を参照されたい）。動物モデルはまた、疾患の病因を研究するための貴重なリソースであり、ジストロフィンに関連する活性を試験する手段を提供する。ＤＭＤ研究のために最も広範に使用される動物モデルの２つは、ｍｄｘマウスおよびゴールデンレトリーバ筋ジストロフィー（ＧＲＭＤ）イヌであり、これらの両方は、ジ
ストロフィンネガティブである（例えば、Ｃｏｌｌｉｎｓ  ＆  Ｍｏｒｇａｎ、Ｉｎｔ  Ｊ  Ｅｘｐ  Ｐａｔｈｏｌ、８４巻：１６５〜１７２頁、２００３年を参照されたい）。これらおよび他の動物モデルを使用して、様々なジストロフィンタンパク質の機能的活性を測定することができる。含まれるのは、ジストロフィンの切断型、例えば、特定の本発明のエキソンスキッピングアンチセンス化合物によって産生される形態である。
【０１１７】
ジストロフィン合成または産生の「回復」という用語は、一般に、本明細書に記載のとおりのエテプリルセンによる処置後の筋ジストロフィー患者における、切断型のジストロフィンを含めたジストロフィンタンパク質の産生を指す。一部の実施形態では、処置の結果、患者における新規のジストロフィン産生は、１％、５％、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、または１００％（間にあるすべての整数を含める）まで増加する。一部の実施形態では、処置によって、被験体におけるジストロフィン陽性線維の数が、正常の少なくとも２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、または約９５％〜１００％に増加する。他の実施形態では、処置によって、被験体におけるジストロフィン陽性線維の数が、正常の約２０％〜約６０％、または約３０％〜約５０％に増加する。処置後の患者におけるジストロフィン陽性線維のパーセントは、公知の技術を使用する筋生検によって決定することができる。例えば、筋生検材料は、患者における上腕二頭筋の筋肉などの適切な筋肉から採取することができる。
【０１１８】
陽性ジストロフィン線維の百分率の分析は、処置前および／もしくは処置後、または処置過程の全体にわたる時点で行うことができる。一部の実施形態では、処置後生検材料は、処置前生検材料の対側筋から採取される。処置前および処置後のジストロフィン発現調査は、ジストロフィンに適したいずれかのアッセイを使用して実施することができる。一実施形態では、筋生検からの組織切片において、モノクローナル抗体またはポリクローナル抗体などの、ジストロフィンのマーカーである抗体を使用して、免疫組織化学的検出が行われる。例えば、高感度のジストロフィン用マーカーであるＭＡＮＤＹＳ１０６抗体を使用することができる。適切ないずれかの二次抗体を使用してもよい。
【０１１９】
一部の実施形態では、陽性線維の数をカウントされた線維の合計で割ることにより、ジストロフィン陽性線維パーセントが算出される。正常な筋肉試料は、ジストロフィン陽性線維が１００％である。したがって、ジストロフィン陽性線維パーセントは、正常に対する百分率として示すことができる。処置後の筋肉中のジストロフィン陽性線維をカウントするとき、処置前の筋肉中の微量レベルのジストロフィンならびに復帰変異体線維の存在について照合する（control）ために、各患者からの処置前の筋肉の切片を使用して、ベ
ースラインを設定することができる。これは、患者において処置後筋肉の切片中のジストロフィン陽性線維をカウントする閾値として使用してもよい。他の実施形態では、Ｂｉｏｑｕａｎｔ画像解析ソフトウェア（Ｂｉｏｑｕａｎｔ  Ｉｍａｇｅ  Ａｎａｌｙｓｉｓ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ、テネシー州ナッシュビル）を使用するジストロフィンの定量に、抗体で染色した組織切片を使用することもできる。合計ジストロフィン蛍光シグナル強度を、正常に対する百分率として報告することができる。加えて、モノクローナルまたはポリクローナル抗ジストロフィン抗体を用いたウエスタンブロット分析を使用しても、ジストロフィン陽性線維の百分率を決定することができる。例えば、Ｎｏｖａｃａｓｔｒａの抗ジストロフィン抗体ＮＣＬ−Ｄｙｓ１を使用することができる。ジストロフィン産生は、逆転写ポリメラーゼ連鎖反応（ＲＴ−ＰＣＲ）によって測定することもできる。機能性ジストロフィンタンパク質を産生するジストロフィン遺伝子を測定するように、プライマーを設計することができる。ジストロフィン陽性線維の百分率は、サルコグリカン複合体（β，γ）の成分および／またはニューロンＮＯＳの発現を明らかにすることにより分析することもできる。
【０１２０】
一部の実施形態では、エテプリルセンによる処置によって、処置なしならば予想される、ＤＭＤ患者における進行性の呼吸筋機能障害および／または不全が緩慢化または低減される。一部の実施形態では、エテプリルセンによる処置によって、ＤＭＤ患者における呼吸筋機能が安定する。一実施形態では、エテプリルセンによる処置によって、処置なしならば予想される、換気補助の必要を減らす、または無くすことができる。一実施形態では、疾患の経過を追跡するための呼吸機能の測定、ならびに起こりうる治療介入の評価は、最大吸気圧（ＭＩＰ）、最大呼気圧（ＭＥＰ）、および努力肺活量（ＦＶＣ）を含む。ＭＩＰおよびＭＥＰは、ヒトがそれぞれ吸息および呼息の間に生成することのできる圧力のレベルを測定するものであり、呼吸筋強度の高感度の尺度である。ＭＩＰは、横隔膜筋の衰弱の尺度である。
【０１２１】
一実施形態では、ＭＥＰは、ＭＩＰおよびＦＶＣを含めた他の肺機能試験における変化の前に低下する場合がある。別の実施形態では、ＭＥＰは、呼吸機能障害の早期の指標となりうる。別の実施形態では、ＦＶＣを使用して、最大吸息後の強制呼息の間に排出される空気の合計体積を測定することができる。ＤＭＤ患者では、ＦＶＣは、１０代前半まで、身体的な成長に伴って増大する。しかし、成長が遅くなり、または疾患の進行によって妨げられ、筋衰弱が進行するにつれて、肺活量は、下降段階に入り、１０〜１２歳を過ぎると、１年あたり約８〜８．５パーセントの平均速度で低下する。別の実施形態では、予測ＭＩＰパーセント（体重について調整したＭＩＰ）、予測ＭＥＰパーセント（年齢について調整したＭＥＰ）、および予測ＦＶＣパーセント（年齢および身長について調整したＦＶＣ）が、裏付けとなる分析になる。
【０１２２】
「単離した」とは、その天然の状態において材料に通常伴う構成要素が実質的または本質的にない材料を意味する。例えば、「単離したポリヌクレオチド」は、本明細書において使用する場合、天然の状態においてポリヌクレオチドに隣接する配列から精製または取り出されたポリヌクレオチド、例えば、フラグメントに通常隣接する配列から取り出されたＤＮＡフラグメントを指し得る。
【０１２３】
「増強する」または「増大する」または「回復する」（restore）または「刺激する」
とは一般に、エテプリルセンなしまたは対照化合物によってもたらされる反応と比較して、細胞または被験体においてより大きな生理学的反応（すなわち、下流の効果）を生じさせるか、またはもたらすエテプリルセンの能力を指す。測定可能な生理学的反応は、当技術分野における理解および本明細書における記載から明らかな他の反応の中で、筋組織における機能的形態のジストロフィンタンパク質の発現の増大、またはジストロフィンに関連する生物活性の増大を含み得る。約１％、２％、３％、４％、５％、６％、７％、８％、９％、１０％、１１％、１２％、１３％、１４％、１５％、１６％、１７％、１８％、１９％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、または１００％だけの筋機能における増大または改善を含めて、筋機能の増大はまた測定することができる。筋線維の約１％、２％、％、１５％、１６％、１７％、１８％、１９％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、または１００％におけるジストロフィン発現の増大を含めて、機能的ジストロフィンを発現している筋線維の百分率をまた測定することができる。例えば、線維の２５〜３０％が、ジストロフィンを発現している場合、概ね４０％の筋機能の改善が起こり得ることが示されてきた（例えば、ＤｅｌｌｏＲｕｓｓｏら、Ｐｒｏｃ
Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ、９９巻：１２９７９〜１２９８４頁、２００２年を参照されたい）。「増大された」または「増強された」量は、例えば、エテプリルセンなし（薬剤が存在しないこと）または対照化合物によってもたらされる量の１．１倍、１．２倍、２倍、３倍、４倍、５倍、６倍、７倍、８倍、９倍、１０倍、１５倍、２０倍、３０倍、４０倍、５０倍またはそれを超える（例えば、５００倍、１０００倍）（１の間および１を超える全ての整数および小数点を含めた、例えば、１．５、１．６、１．７、１．８など）である増大を含み得る。
【０１２４】
「低減する」または「阻害する」という用語は、診断の技術分野における通例の技術によって測定して、関連する生理学的反応または細胞反応、例えば、本明細書に記載されている疾患もしくは状態の症状を「減少させる」エテプリルセンの能力に関する。関連する生理学的反応または細胞反応（インビボもしくはインビトロ）は、当業者には明らかであり、筋ジストロフィーの症状もしくは病理学における低減、または欠陥のある形態のジストロフィン、例えば、ＤＭＤもしくはＢＭＤを有する個体において発現している変化した形態のジストロフィンの発現における低減を含み得る。反応における「減少」は、例えば、中間の全ての整数を含めた、１％、２％、３％、４％、５％、６％、７％、８％、９％、１０％、１１％、１２％、１３％、１４％、１５％、１６％、１７％、１８％、１９％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、または１００％の減少を含み得る。
【０１２５】
個体（例えば、哺乳動物、例えば、ヒト）または細胞の「処置」は、個体または細胞の自然の成り行きを変化させる試みにおいて使用される任意のタイプの介入である。処置には、これらに限定されないが、医薬組成物の投与が含まれ、予防的に、または病的事象の開始もしくは病原体との接触に続いて行い得る。処置は、特定の形態の筋ジストロフィーにおけるように、ジストロフィンタンパク質と関連する疾患または状態の症状または病理学に対して任意の望ましい効果を含み、例えば、処置される疾患または状態の１つまたは複数の測定可能なマーカーにおける最小の変化または改善を含み得る。また含まれるのは、処置されている疾患もしくは状態の進行の速度を低減させ、その疾患もしくは状態の発症を遅延するか、またはその発症の重症度を低減させることに向けることができる「予防的」処置である。「処置」または「予防法」は、疾患もしくは状態、またはその関連する症状の完全な根絶、治癒、または予防を必ずしも示さない。
【０１２６】
一実施形態では、エテプリルセンによる処置によって、新規のジストロフィン産生が増加し、歩行が維持され、または処置なしならば予想される、歩行喪失が緩慢化もしくは低減される。例えば、処置により、被験体において、歩行能力（例えば、歩行の安定化）が安定し、維持され、改善され、または増加する場合がある。一部の実施形態では、処置により、患者において、例えば、McDonaldら（参照により本明細書に組み込まれる、Muscle
Nerve、２０１０年；４２巻：９６６〜７４頁；Muscle  Nerve、２０１０年；４１巻：５００〜１０頁）が記載している６分間歩行試験（６ＭＷＴ）により測定したとき、安定した歩行距離が維持され、延長され、またはその喪失が低減される。６ＭＷＴは、歩行機能の経時的な変化を、病状の変化の表れとして特徴付ける、歩行に焦点を当てた臨床的に意味のある評価項目である。
【０１２７】
６分間歩行距離（６ＭＷＤ）の変化は、絶対値、百分率変化、または％予測値の変化として示される場合がある。一部の実施形態では、処置により、被験体において、健康な同等者と比較して、６ＭＷＴにおける安定した歩行距離が、２０％の障害から維持され、または改善される。６ＭＷＴにおける、健康な同等者の典型的な成績と比較したＤＭＤ患者の成績は、％予測値を算出して決定することができる。例えば、％予測６ＭＷＤは、男性については、次式：１９６．７２＋（３９．８１×年齢）−（１．３６×年齢２）＋（１３２．２８×メートルでの身長）を使用して算出することができる。女性について、％予測６ＭＷＤは、次式：１８８．６１＋（５１．５０×年齢）−（１．８６×年齢２）＋（８６．１０×メートルでの身長）を使用して算出することができる（Henricsonら、PLoS  Curr.、２０１２年、２版、参照により本明細書に組み込む）。一部の実施形態では、エテプリルセンによる処置により、患者において、安定した歩行距離が、ベースラインから、３、５、６、７、８、９、１０、１５、２０、２５、３０、または５０メートル（間にあるすべての整数を含める）より長い距離に延長される。一部の実施形態では、エテプリルセンによる処置によって、安定した歩行距離の喪失が低減される。一部の実施形態では、患者は、少なくとも５０メートルの６ＭＷＤを維持する。一部の実施形態では、患者は、少なくとも５５メートルの６ＭＷＤを維持する。一部の実施形態では、患者は、少なくとも１００、２００、３００、または４００メートルの６ＭＷＤを維持する。
【０１２８】
ＤＭＤ患者では筋機能が低下するため、疾患が進行する間に歩行が失われることが多い。歩行は、Ｎｏｒｔｈ  Ｓｔａｒ  Ａｍｂｕｌａｔｏｒｙ  Ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ（ＮＳＡＡ）を含めた種々の方法によって測定することができる。ＮＳＡＡは、Ｐｈｙｓｉｏｔｈｅｒａｐｙ  Ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ  ａｎｄ  Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ  Ｇｒｏｕｐ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｎｏｒｔｈ  Ｓｔａｒｔ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｎｅｔｗｏｒｋによって、歩行可能なＤＭＤの男児を評定するために開発されており、２を正常とし、０を「独力で達成できない」とする、２〜０の評点が付けられた活動の一覧を提供するものである（２００６〜２０１１年  ＭＤＣ／Ｎｏｒｔｈ  Ｓｔａｒ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｎｅｔｗｏｒｋ）。こうした活動は、最低３秒間立つことから、箱への上り下り、走ることに及ぶ。ある特定の実施形態では、エテプリルセンによる処置によって、例えばＮＳＡＡによって判定したとき、歩行を維持し、安定させ、増進し、または改善することができる。
【０１２９】
一部の実施形態では、外部からの援助なしで（独力で）仰臥位から起き上がる能力について、ＤＭＤ患者における筋機能を評定することができる。一部の実施形態では、評定は、被験体が、仰臥位から起き上がる能力を有するか否かを含みうる。一部の実施形態では、評定は、患者が外部からの援助なしで仰臥位から起き上がるのにかかる（例えば秒としての）時間を含む。こうした測定は、当業者に周知されており、例えば、BushbyおよびConnor（２０１１年）Clin  Investig(Lond.)１巻（９号）：１２１７〜１２３５頁ならび
にHenricsonら（２０１３年）Muscle  Nerve  ４８巻（１号）：５５〜６７頁に記載があり、それぞれの開示を全体として参照により本明細書に組み込む。一部の実施形態では、本明細書に記載の方法のいずれかによって処置される患者は、エテプリルセンによる処置を開始する前に、独力で仰臥位から起き上がる能力を失った。一部の実施形態では、患者は、エテプリルセンによる処置を開始する少なくとも１か月前（例えば、少なくとも２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１６、１８、２０、２４か月前、またはそれより前）に、独力で仰臥位から起き上がる能力を失っている。一部の実施形態では、本明細書に記載の方法のいずれかによって処置される患者は、エテプリルセンによる処置を受けている間に、独力で仰臥位から起き上がる能力を失う。一部の実施形態では、患者は、エテプリルセンによる処置を開始してから少なくとも１か月後（例えば、少なくとも２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１６、１８、２０、２４、３０、もしくは３６か月後、またはそれより後）に、独力で仰臥位から起き上がる能力を失う。
【０１３０】
一部の実施形態では、エテプリルセンによる処置を受けた患者は、例えば、約３０ｍｇ／ｋｇのエテプリルセンによる毎週の長期的処置を受けて約１６８週目〜約１９２週目の間または約１６８週目〜約２１６週目の間に、（例えば、６ＭＷＴにより測定したとき、）ベースラインと比較して、６０（例えば、５９、５８、５７、５６、５５、５４、５３、５２、５１、５０、４９、４８、４７、４６、４５、４４、または４３）％以下の歩行の減衰を被る。一部の実施形態では、エテプリルセンによる処置を受けた患者は、例えば、約３０ｍｇ／ｋｇのエテプリルセンによる毎週の長期的処置を受けて約１６８週目〜約１９２週目の間または約１６８週目〜約２１６週目の間に、（例えば、６ＭＷＴにより測定したとき、）ベースラインと比較して、４３（例えば、４２．５、４２、４１．５、４０、３９．５、３９、３８．５、３８、３７．５、３７、３６．５、または３６）％以下の歩行の減衰という喪失を被る。一部の実施形態では、患者の歩行（例えば、６ＭＷＴまたはＮＳＡＡにより測定される歩行能力）は、エテプリルセンによる処置が約１６８週目〜約１９２週目の間に安定する。一部の実施形態では、患者の歩行は、約１６８週目の後、少なくとも２５週間（例えば、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、６０、７２、８４、もしくは９６週間もしくはそれより長い期間）のエテプリルセンによる毎週の長期的処置の間安定する。一部の実施形態では、エテプリルセン処置患者の歩行喪失速度または歩行喪失は、約１９２週間〜約２１６週間の時点で低減する。一部の実施形態では、エテプリルセン処置患者の歩行喪失速度または歩行喪失は、約２１６週間の時点で、ベースラインと比較して低減する。
【０１３１】
本明細書で使用するとき、用語「安定した疾患」、「安定する」、「安定化」、または文法にかなった同様の用語は、２０％未満（例えば、１９、１８、１７、１６、１５、１４、１３、１２、１１、１０、９、８、７、６、５、４、３、２、または１％未満）の増加または減少が、疾患の測定可能または評価可能な少なくとも１つの側面であることを意味する。したがって、一部の実施形態では、所与の処置期間にかけて歩行が安定している患者は、その処置期間の間の歩行の減少が２０％以下である。一部の実施形態では、所与の処置期間にかけて歩行が安定している患者は、その処置期間の間の歩行の衰えが１０％以下である。一部の実施形態では、所与の処置期間にかけて歩行が安定している患者は、その処置期間の間の歩行の衰えが５％以下である。一部の実施形態では、所与の処置期間にかけて歩行が安定している患者は、その処置期間の間の歩行の衰えが２．５％以下である。一部の実施形態では、所与の処置期間にかけて歩行が安定している患者は、その処置期間の間の歩行の衰えが１％以下である。例えば、約１６８週目〜約１９２週目の間に歩行が安定している患者は、その期間の間に経験する歩行の追加の喪失が、ベースラインと比較して５％以下（例えば、４、３、２、または１％未満）である患者でありうる。
【０１３２】
「毎週１回」の投薬、「１週間に１回」投薬する、および「毎週」の投薬は、本明細書では互換的に使用される。
【０１３３】
ＤＭＤ患者における筋機能の喪失は、正常な小児期の成長および発育を背景に起こる場合もある。実際に、ＤＭＤを有するより若い小児は、進行性の筋肉の欠陥にもかかわらず、約１年にわたる６ＭＷＴの間に歩いた距離の延長を示し得る。一部の実施形態では、ＤＭＤ患者からの６ＭＷＤは、通常発育対照被験体、および年齢及び性別をマッチさせた被験体からの既存の標準的データと比較される。一部の実施形態では、正常な成長および発育は、標準的データに適合させた、年齢および身長に基づく式を使用して明らかにすることができる。そのような式を使用して、６ＭＷＤを、ＤＭＤの被験体におけるパーセント予測（％予測）値に変換することができる。ある特定の実施形態では、％予測６ＭＷＤデータの分析は、正常な成長および発育を明らかにする方法を表わし、ＤＭＤ患者において、若年齢（例えば、７歳未満または７歳）での機能の取得が、向上するというよりはむしろ安定した能力を表すということを示しうる（Henricsonら、PLoS  Curr.、２０１２年、２版、参照により本明細書に組み込む）。
【０１３４】
本明細書で使用する「患者」は、エテプリルセンで処置することのできる症状を示す、または症状を示す危険性のある任意のヒト、例えば、ＤＭＤもしくはＢＭＤまたはこれらの状態と関連する症状のいずれか（例えば、筋線維喪失）を有する、または有する危険性のある被験体を包含する。
【０１３５】
本明細書で使用する「小児患者」とは、１〜２１歳（両端を含む）の患者である。一部の実施形態では、小児患者は、７〜２１歳（例えば、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、または２１歳）の患者である。一部の実施形態では、小児患者は、７歳未満の患者である。一部の実施形態では、小児患者は、７歳またはそれより年長の患者である。
【０１３６】
本明細書に記載する方法または組成物のいずれかの一部の実施形態において、患者は、約６か月齢および約４歳の間（両端を含む）である。例えば、一部の実施形態では、患者は、少なくとも約６（例えば、少なくとも７、８、９、１０、１１、または１２）か月齢〜約４８（例えば、４７、４６、４５、４４、４３、４２、４１、４０、３９、３８、３７、３６、３５、３４、３３、３２、３１、または３０）か月齢未満の間である。一部の実施形態では、患者は、少なくとも６（例えば、少なくとも７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２４、３０、または３６）か月齢である。一部の実施形態では、患者は、４歳以下である。一部の実施形態では、エテプリルセンは、そのような患者に、非経口投与、例えば、皮下投与することができる。
【０１３７】
ＩＩ．製剤および処置
特定の実施形態において、本発明は、本明細書に記載のエテプリルセンの治療的送達に適した製剤または組成物を提供する。したがって、特定の実施形態において、本発明は、１種または複数種の薬学的に許容される担体（添加物）および／または希釈剤と一緒に製剤した、治療有効量のエテプリルセンを含む薬学的に許容される組成物を提供する。エテプリルセンを単独で投与することは可能である一方、化合物を医薬製剤（組成物）として投与することが好ましい。
【０１３８】
本発明のエテプリルセンを含む組成物は、単独で、または他の治療薬と組み合わせて投与することができる。追加の治療薬は、本発明の組成物の投与より前に、それと同時に、またはそれに続いて投与してよい。例えば、組成物は、ステロイドおよび／または抗生物質と組み合わせて投与してよい。ある特定の実施形態では、組成物は、背景にステロイド療法（例えば、背景に間欠的または長期／継続的ステロイド療法）を受けている患者に投与される。当業者であれば、このような患者は、ステロイド（または副腎皮質ステロイド）の長期使用を継続する必要があり、これに加えて、エテプリルセンなどの別の処置が施される患者であることを認識されよう。例えば、一部の実施形態では、患者は、エテプリルセンの投与より前に、副腎皮質ステロイドによる処置を受けており（例えば、適切な用量の副腎皮質ステロイドを４〜６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、もしくは２４週間、またはそれより長い期間）、ステロイド治療を受け続けている。ステロイドは、糖質コルチコイドまたはプレドニゾンである場合がある。コルチゾールなどの糖質コルチコイドは、炭水化物、脂肪、およびタンパク質代謝を制御し、リン脂質放出の防止、好酸球作用の低下、および他のいくつかの機序によって抗炎症性である。アルドステロンなどの鉱質コルチコイドは、主に、腎臓においてナトリウム貯留を促進することにより、電解質および水分レベルを制御する。副腎皮質ステロイドは、脊椎動物の副腎皮質において自然に産生されるステロイドホルモン、および実験室で合成される、これらホルモンの類似体を包含する１クラスの化学物質である。副腎皮質ステロイドは、ストレス応答、免疫応答、ならびに炎症、炭水化物代謝、タンパク質異化、血中電解質レベル、および挙動の調節を含めた、広範な生理的過程に関与する。副腎皮質ステロイドには、限定はしないが、ベタメタゾン、ブデソニド、コルチゾン、デキサメタゾン、ヒドロコルチゾン、メチルプレドニゾロン、プレドニゾロン、およびプレドニゾンが含まれる。本発明の組成物の投与より前に、それと同時に、またはそれに続いて投与することのできる、目的となる１つの特定のステロイドは、デフラザコートおよびその製剤（例えば、ＭＰ−１０４、Ｍａｒａｔｈｏｎ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ  ＬＬＣ）である。
【０１３９】
一部の実施形態では、エテプリルセンによる患者の処置によって、より高用量のステロイドで、エテプリルセンなしで実現される有効性と同様のレベル、同じ、またはさらにはより優れた有効性を維持するのに必要となるステロイド併用療法の量を少なくすることができる。一部の実施形態では、疾患の状態または疾患の進行が同様のレベルである患者のためのステロイドの推奨用量（例えば、ＣＤＣ／ＴＲＥＡＴ−ＮＭＤガイドラインが推奨するもの；Bushby  K、Lynn  S、Straub  V.、Collaborating  to  bring  new  therapies  to  the  patient:  the  TREAT-NMD  model.、Acta  Myo、２００９年；２８巻：１２〜１５頁を参照されたい）より少なくとも５（例えば、少なくとも６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３２、３５、３７、４０、４５、５０、５５、６０、６５、または７０）％少ない投与量のステロイド、例えばデフラザコートまたはプレドニゾンを患者に投与することができる。一部の実施形態では、エテプリルセン処置患者には、推奨用量の約７５％〜約８０％の間の所与のステロイドが投与される。
【０１４０】
ガイドラインによれば、プレドニゾンの推奨開始用量は、０．７５ｍｇ／ｋｇ／日であり、デフラザコートの推奨開始用量は、０．９ｍｇ／ｋｇ／日であり、朝に投与される。一部の小児は、投薬を受けた後数時間、一時的な挙動副作用（多動、気分変動）を経験する。このような小児については、午後に投薬を実施することで、こうした問題をある程度解消することができる。歩行可能な個体では、投与量は一般に、体重がおよそ４０ｋｇに達するまで、子供が成長するにつれて増やされる。プレドニゾンの最大用量には、通常、およそ３０ｍｇ／日という上限が設けられ、デフラザコートについては、３６ｍｇ／日という上限が設けられる。長期間のステロイド治療を継続している歩行可能でないティーンエイジャーは、体重が４０ｋｇを超えているのが普通であり、１ｋｇあたりのプレドニゾン投与量を０．３〜０．６ｍｇ／ｋｇ／日の範囲にゆっくりと減らすことがしばしば可能である。この投与量は、およそ３０ｍｇの上限より少ないものの、充実した利益を示す。
【０１４１】
ステロイドの維持量を決めるのは、患者の成長と、ステロイド治療に対する患者の応答と、副作用の負担との間のバランスである。この決定は、実施した試験の結果、および副作用が管理または許容できない問題となっているか否かに基づき、毎回の来院時に見直す必要がある。機能の低下を示し始めている、比較的少ない（体重１ｋｇあたりの開始用量より少ない）投与量のステロイドを続けているＤＭＤ患者では、「機能回復（functional
rescue）」の調整を考慮に入れる必要がある場合もある。この状況では、ステロイドの投与量を目標まで増やし、次いで、およそ２〜３か月のうちに、利益があるか患者を再評価する。
【０１４２】
投与することのできる他の薬剤としては、患者細胞およびＤＭＤマウスモデルにおいてアンチセンスを介したエキソンスキッピングを増強することが示されている、リアノジン受容体のアンタゴニスト、例えばダントロレンが挙げられる（G.  Kendallら、Sci  Tranl  Med、４巻：１６４〜１６０頁（２０１２年）、参照により本明細書に組み込む）。
【０１４３】
核酸分子の送達のための方法は、例えば、Ａｋｈｔａｒら、１９９２年、Ｔｒｅｎｄｓ
Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏ．、２巻：１３９頁；およびＤｅｌｉｖｅｒｙ  Ｓｔｒａｔｅｇｉｅｓ  ｆｏｒ  Ａｎｔｉｓｅｎｓｅ  Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ、ｅｄ．  Ａｋｈｔａｒ、Ｓｕｌｌｉｖａｎら、ＰＣＴ  ＷＯ９４／０２５９５に記載されている。これらおよび他のプロトコルは、エテプリルセンを含めた実際上任意の核酸分子の送達のために利用することができる。
【０１４４】
下記で詳述するように、本発明の医薬組成物は、下記のために適合されたものを含めた、固体または液体形態での投与のために特別に製剤され得る：（１）経口投与、例えば、水薬（水性または非水性の液剤または懸濁剤）、錠剤、例えば、口腔、舌下、および全身的吸収を標的としたもの、ボーラス、散剤、顆粒剤、舌への適用のためのペースト剤；（２）非経口投与、例えば、皮下、筋内、静脈内もしくは硬膜外注射による、例えば、無菌液剤もしくは懸濁剤、または持続放出製剤として；（３）局所適用、例えば、皮膚に適用するクリーム剤、軟膏剤、または制御放出パッチまたはスプレー剤として；（４）膣内または直腸内、例えば、ペッサリー、クリーム剤またはフォーム剤として；（５）舌下；（６）目；（７）経皮的；あるいは（８）経鼻。
【０１４５】
「薬学的に許容される」という語句は、本明細書において、合理的な利益／リスク比と釣り合った、過剰な毒性も刺激もアレルギー反応も他の問題も合併症も伴わない、妥当な医学的判断の範囲内で、人間および動物の組織と接触させる使用に適した化合物、材料、組成物、および／または剤形を指すために用いられる。
【０１４６】
「薬学的に許容される担体」という語句は、本明細書において使用する場合、体の１つの器官または一部から、体の別の器官または一部に対象化合物を運搬または輸送することに関与する、薬学的に許容される材料、組成物またはビヒクル、例えば、液体または固体充填剤、希釈剤、賦形剤、製造助剤（例えば、滑沢剤、タルクマグネシウム、ステアリン酸カルシウムもしくはステアリン酸亜鉛、もしくはステアリン酸（ｓｔｅｒｉｃ  ａｃｉｄ））、または溶媒封入材料を意味する。各担体は、製剤の他の成分と適合性であり、患者に対して傷害性でないという意味で「許容され」なくてはならない。
【０１４７】
薬学的に許容される担体としての役割を果たすことができる材料のいくつかの例には、これらに限定されないが、（１）糖、例えば、ラクトース、グルコースおよびスクロース；（２）デンプン、例えば、トウモロコシデンプンおよびバレイショデンプン；（３）セルロース、およびその誘導体、例えば、カルボキシメチルセルロースナトリウム、エチルセルロースおよび酢酸セルロース；（４）トラガカント粉末；（５）麦芽；（６）ゼラチン；（７）タルク；（８）賦形剤、例えば、カカオバターおよび坐剤ろう；（９）油、例えば、ピーナッツ油、綿実油、サフラワー油、ゴマ油、オリーブ油、トウモロコシ油およびダイズ油；（１０）グリコール、例えば、プロピレングリコール；（１１）ポリオール、例えば、グリセリン、ソルビトール、マンニトールおよびポリエチレングリコール；（１２）エステル、例えば、オレイン酸エチルおよびラウリン酸エチル；（１３）寒天；（１４）緩衝剤、例えば、水酸化マグネシウムおよび水酸化アルミニウム；（１５）アルギン酸；（１６）発熱物質を含まない水；（１７）等張食塩水；（１８）リンゲル液；（１９）エチルアルコール；（２０）ｐＨ緩衝化溶液；（２１）ポリエステル、ポリカーボネートおよび／またはポリ無水物；ならびに（２２）医薬製剤中で用いられる他の無毒性の適合性物質が含まれる。
【０１４８】
エテプリルセンを有する製剤に適した薬剤のさらなる非限定的例には、ＰＥＧが結合体化された核酸、リン脂質が結合体化された核酸、親油性部分を含有する核酸、ホスホロチオエート、様々な組織中への薬物の侵入を増強することができるＰ糖タンパク質阻害剤（例えば、Ｐｌｕｒｏｎｉｃ  Ｐ８５）；生分解性ポリマー、例えば、埋込み後の持続放出送達のためのポリ（ＤＬ−ラクチド−ｃｏグリコリド）ミクロスフィア（Ｅｍｅｒｉｃｈ，Ｄ  Ｆら、１９９９年、Ｃｅｌｌ  Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ、８巻、４７〜５８頁）Ａｌｋｅｒｍｅｓ、Ｉｎｃ．Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ、Ｍａｓｓ．；および負荷されたナノ粒子、例えば、血液脳関門を越えて薬物を送達することができ、かつニューロン取込み機構を変化させることができる、ポリブチルシアノアクリレートでできたもの（Ｐｒｏｇ  Ｎｅｕｒｏｐｓｙｃｈｏｐｈａｒｍａｃｏｌ  Ｂｉｏｌ  Ｐｓｙｃｈｉａｔｒｙ、２３巻、９４１〜９４９頁、１９９９年）が含まれる。
【０１４９】
本発明はまた、ポリ（エチレングリコール）脂質を含有する表面修飾されたリポソーム（ＰＥＧ−修飾された分岐状および非分岐状のもの、もしくはこれらの組合せ、または長期循環リポソームもしくはステルスリポソーム）を含む組成物の使用を特徴とする。エテプリルセンはまた、様々な分子量の共有結合的に付着したＰＥＧ分子を含むことができる。これらの製剤は、標的組織における薬物の蓄積を増大させるための方法を提供する。このクラスの薬物担体は、単核食細胞系（ＭＰＳまたはＲＥＳ）によるオプソニン化および排除に抵抗し、それによってカプセル化された薬物についてより長い血液循環時間および組織曝露の増強を可能とする（Ｌａｓｉｃら、Ｃｈｅｍ．  Ｒｅｖ．、１９９５年、９５巻、２６０１〜２６２７頁；Ｉｓｈｉｗａｔａら、Ｃｈｅｍ．  Ｐｈａｒｍ．  Ｂｕｌｌ．、１９９５年、４３巻、１００５〜１０１１頁）。このようなリポソームは、おそらく血管新生された標的組織における血管外漏出および捕捉によって、腫瘍において選択的に蓄積することが示されてきた（Ｌａｓｉｃら、Ｓｃｉｅｎｃｅ、１９９５年、２６７巻、１２７５〜１２７６頁；Ｏｋｕら、１９９５年、Ｂｉｏｃｈｉｍ．  Ｂｉｏｐｈｙｓ．  Ａｃｔａ、１２３８巻、８６〜９０頁）。長期循環リポソームは、特に、ＭＰＳの組織において蓄積することが公知である従来のカチオン性リポソームと比較して、ＤＮＡおよびＲＮＡの薬物動態および薬力学を増強する（Ｌｉｕら、Ｊ．  Ｂｉｏｌ．  Ｃｈｅｍ．、１９９５年、４２巻、２４８６４〜２４８７０頁；Ｃｈｏｉら、国際ＰＣＴ出願第ＷＯ９６／１０３９１号；Ａｎｓｅｌｌら、国際ＰＣＴ出願第ＷＯ９６／１０３９０号；Ｈｏｌｌａｎｄら、国際ＰＣＴ出願第ＷＯ９６／１０３９２号）。長期循環リポソームはまた、代謝的に活発なＭＰＳ組織、例えば、肝臓および脾臓における蓄積を回避するこれらの能力に基づいて、カチオン性リポソームと比較してより大きな程度まで薬物をヌクレアーゼ分解から保護する可能性が高い。
【０１５０】
さらなる実施形態において、本発明は、米国特許第６，６９２，９１１号、同第７，１６３，６９５号および同第７，０７０，８０７号において記載されるような、送達のために調製されるエテプリルセンを含む。これに関しては、一実施形態において、本発明は、（米国特許第７，１６３，６９５号、同第７，０７０，８０７号、および同第６，６９２，９１１号において記載される）単独での、あるいはＰＥＧ（例えば、分岐状もしくは非分岐状ＰＥＧ、または両方の混合物）と組み合わせた、ＰＥＧおよび標的化部分と組み合わせた、あるいは架橋剤と組み合わせた上記のいずれかと組み合わせた、リシンおよびヒスチジン（ＨＫ）のコポリマーを含む組成物中のエテプリルセンを提供する。特定の実施形態において、本発明は、グルコン酸で修飾されたポリヒスチジンまたはグルコニル化（ｇｌｕｃｏｎｙｌａｔｅｄ）−ポリヒスチジン／トランスフェリン−ポリリシンを含む組成物中のエテプリルセンを提供する。当業者はまた、ＨｉｓおよびＬｙｓと同様の特性を有するアミノ酸が、組成物内で置換され得ることを認識する。
【０１５１】
エテプリルセンの特定の実施形態は、塩基性官能基、例えば、アミノまたはアルキルアミノを含有してもよく、このように、薬学的に許容される酸と共に薬学的に許容される塩を形成することができる。「薬学的に許容される塩」という用語は、この点において、本発明の化合物の比較的毒性のない無機および有機の酸付加塩を指す。これらの塩は、投与ビヒクルまたは剤形製造工程においてインサイチュで調製することができ、あるいはその遊離塩基の形態の精製した本発明の化合物と適切な有機酸または無機酸とを別々に反応させ、それに続く精製の間にこのように形成された塩を単離することによって調製することができる。代表的な塩には、臭化水素酸塩、塩酸塩、硫酸塩、硫酸水素塩、リン酸塩、硝酸塩、酢酸塩、吉草酸塩、オレイン酸塩、パルミチン酸塩、ステアリン酸塩、ラウリン酸塩、安息香酸塩、乳酸塩、リン酸塩、トシル酸塩、クエン酸塩、マレイン酸塩、フマル酸塩、コハク酸塩、酒石酸塩、ナプシル酸（ｎａｐｔｈｙｌａｔｅ）、メシル酸塩、グルコヘプトン酸塩、ラクトビオン酸塩、およびラウリルスルホン酸塩などが含まれる（例えば、Ｂｅｒｇｅら（１９７７年）「Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓａｌｔｓ」、Ｊ．  Ｐｈａｒｍ．  Ｓｃｉ．、６６巻：１〜１９頁を参照されたい）。
【０１５２】
エテプリルセンの薬学的に許容される塩には、例えば、無毒性の有機酸または無機酸からの、化合物の従来の無毒性塩または第四級アンモニウム塩が含まれる。例えば、このような従来の無毒性塩には、無機酸、例えば、塩酸、臭化水素酸、硫酸、スルファミン酸、リン酸、硝酸などに由来するもの；および有機酸、例えば、酢酸、プロピオン酸、コハク酸、グリコール酸、ステアリン酸、乳酸、リンゴ酸、酒石酸、クエン酸、アスコルビン酸、パルミチン酸、マレイン酸、ヒドロキシマレイン酸、フェニル酢酸、グルタミン酸、安息香酸、サリチル酸（ｓａｌｉｃｙｃｌｉｃ）、スルファニル酸、２−アセトキシ安息香酸、フマル酸、トルエンスルホン酸、メタンスルホン酸、エタンジスルホン酸、シュウ酸、イセチオン酸（ｉｓｏｔｈｉｏｎｉｃ）などから調製された塩が含まれる。
【０１５３】
特定の実施形態において、エテプリルセンは、１つまたは複数の酸性官能基を含有してもよく、したがって薬学的に許容される塩基と薬学的に許容される塩を形成することができる。「薬学的に許容される塩」という用語は、これらの場合、本発明の化合物の比較的毒性のない無機および有機の塩基付加塩を指す。これらの塩は同様に、投与ビヒクルまたは剤形製造工程においてインサイチュで調製することができ、あるいはその遊離酸の形態の精製した化合物と、適切な塩基、例えば、薬学的に許容される金属カチオンの水酸化物、炭酸塩または炭酸水素塩とを、アンモニアとを、または薬学的に許容される有機第一級、第二級もしくは第三級アミンとを別々に反応させることによって調製することができる。代表的なアルカリ塩またはアルカリ土類塩には、リチウム塩、ナトリウム塩、カリウム塩、カルシウム塩、マグネシウム塩、およびアルミニウム塩などが含まれる。塩基付加塩の形成のために有用な代表的な有機アミンには、エチルアミン、ジエチルアミン、エチレンジアミン、エタノールアミン、ジエタノールアミン、ピペラジンなどが含まれる（例えば、Ｂｅｒｇｅら、上述を参照されたい）。
【０１５４】
湿潤剤、乳化剤および滑沢剤、例えば、ラウリル硫酸ナトリウムおよびステアリン酸マグネシウム、ならびに着色剤、離型剤、コーティング剤、甘味剤、矯味矯臭剤および香料、保存剤および抗酸化剤はまた、組成物中に存在することができる。
【０１５５】
薬学的に許容される抗酸化剤の例には、（１）水溶性抗酸化剤、例えば、アスコルビン酸、塩酸システイン、硫酸水素ナトリウム、メタ重亜硫酸ナトリウム、亜硫酸ナトリウムなど；（２）油溶性抗酸化剤、例えば、パルミチン酸アスコルビル、ブチル化ヒドロキシアニソール（ＢＨＡ）、ブチル化ヒドロキシトルエン（ＢＨＴ）、レシチン、没食子酸プロピル、α−トコフェロールなど；および（３）金属キレート剤、例えば、クエン酸、エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）、ソルビトール、酒石酸、リン酸などが含まれる。
【０１５６】
本発明の製剤には、経口、経鼻、局所（口腔および舌下を含めた）、直腸、膣および／または非経口投与に適したものが含まれる。製剤は、単位剤形で好都合に提示し得、製剤分野で周知の任意の方法によって調製し得る。単一の剤形を生成するために担体材料と合わせることができる活性成分の量は、処置されている宿主、特定の投与モードによって変化する。単一の剤形を生成するために担体材料と合わせることができる活性成分の量は一般に、治療効果を生じさせる化合物の量である。一般に、１００パーセントの内、この量は、約０．１パーセント〜約９９パーセントの活性成分、好ましくは、約５パーセント〜約７０パーセント、最も好ましくは、約１０パーセント〜約３０パーセントの範囲である。
【０１５７】
特定の実施形態において、本発明の製剤は、シクロデキストリン、セルロース、リポソーム、ミセル形成剤、例えば、胆汁酸、およびポリマー担体、例えば、ポリエステルおよびポリ酸無水物（polyanhydride）から選択される賦形剤；ならびにエテプリルセンを含
む。特定の実施形態において、上記の製剤は、経口的に生物が利用可能なエテプリルセンを与える。
【０１５８】
これらの製剤または組成物を調製する方法は、エテプリルセンを、担体、および任意選択で、１種または複数種の補助成分と合わせるステップを含む。一般に、製剤は、本発明の化合物と、液体担体、または微粉化した固体担体、または両方とを、均質および密接に合わせ、次いで必要に応じて、生成物を成形することによって調製される。
【０１５９】
経口投与に適した本発明の製剤は、それぞれが、活性成分として所定の量の本発明の化合物を含有する、カプセル剤、カシェ剤、丸剤、錠剤、ロゼンジ剤（香味を付けた基剤、通常、スクロースおよびアカシアまたはトラガカントを使用した）、散剤、顆粒剤の形態、あるいは水性もしくは非水性液体中の液剤または懸濁剤として、あるいは水中油型もしくは油中水型液体乳剤として、あるいはエリキシル剤またはシロップ剤として、あるいは香錠（不活性な基剤、例えば、ゼラチンおよびグリセリン、またはスクロースおよびアカシアを使用した）として、ならびに／あるいは口内洗浄剤などとして、でよい。エテプリルセンはまた、ボーラス、舐剤またはペースト剤として投与され得る。
【０１６０】
経口投与のために本発明の固体剤形（カプセル剤、錠剤、丸剤、糖衣錠、散剤、顆粒剤、トローチ剤（ｔｒｏｕｃｈｅｓ）など）において、活性成分は、１種または複数種の薬学的に許容される担体、例えば、クエン酸ナトリウムまたはリン酸二カルシウム、ならびに／あるいは下記のいずれか：（１）充填剤または増量剤（ｅｘｔｅｎｄｅｒ）、例えば、デンプン、ラクトース、スクロース、グルコース、マンニトール、および／またはケイ酸；（２）結合剤、例えば、カルボキシメチルセルロース、アルギネート、ゼラチン、ポリビニルピロリドン、スクロースおよび／またはアカシア；（３）保湿剤（ｈｕｍｅｃｔａｎｔ）、例えば、グリセロール；（４）崩壊剤、例えば、寒天、炭酸カルシウム、ジャガイモまたはタピオカデンプン、アルギン酸、特定のシリケート、および炭酸ナトリウム；（５）溶解遅延剤、例えば、パラフィン；（６）吸収促進剤、例えば、第四級アンモニウム化合物および界面活性剤、例えば、ポロキサマーおよびラウリル硫酸ナトリウム；（７）湿潤剤、例えば、セチルアルコール、モノステアリン酸グリセロール、および非イオン性界面活性剤；（８）吸収剤、例えば、カオリンおよびベントナイトクレイ；（９）滑沢剤、例えば、タルク、ステアリン酸カルシウム、ステアリン酸マグネシウム、固体ポリエチレングリコール、ラウリル硫酸ナトリウム、ステアリン酸亜鉛、ステアリン酸ナトリウム、ステアリン酸、およびこれらの混合物；（１０）着色剤；ならびに（１１）制御放出剤、例えば、クロスポビドンまたはエチルセルロースと混合され得る。カプセル剤、錠剤および丸剤の場合、医薬組成物はまた、緩衝剤を含み得る。同様のタイプの固体組成物はまた、ラクトースまたは乳糖などの賦形剤、および高分子量ポリエチレングリコールなどを使用して、ソフトおよびハードシェルのゼラチンカプセル中の充填剤として用い得る。
【０１６１】
錠剤は、任意選択で１種または複数種の補助成分と共に、圧縮または成形によって作製し得る。圧縮錠剤は、結合剤（例えば、ゼラチンまたはヒドロキシプロピルメチルセルロース）、滑沢剤、不活性な希釈剤、保存剤、崩壊剤（例えば、デンプングリコール酸ナトリウムまたは架橋カルボキシメチルセルロースナトリウム）、表面活性剤または分散化剤を使用して調製し得る。成形錠剤は、適切な機械において不活性な液体希釈剤で湿らせた粉末化した化合物の混合物を成形することによって作製し得る。
【０１６２】
本発明の医薬組成物の錠剤、および他の固体剤形、例えば、糖衣錠、カプセル剤、丸剤および顆粒剤は、コーティングおよびシェル、例えば、腸溶性コーティング、および医薬製剤の技術分野において周知の他のコーティングと共に任意選択で刻み目を付け、または調製し得る。これらはまた、例えば、所望の放出プロファイルを提供するために変化する割合のヒドロキシプロピルメチルセルロース、他のポリマーマトリックス、リポソームおよび／またはミクロスフィアを使用して、その中の活性成分の緩徐な放出または制御放出を提供するために製剤され得る。これらは、急速放出のために製剤され得る（例えば、凍結乾燥）。これらは、例えば、細菌保持フィルターを通した濾過によって、または滅菌水もしくはいくつかの他の無菌の注射用媒体に使用の直前に溶解させることができる無菌の固体組成物の形態の滅菌剤を組み込むことによって無菌化し得る。これらの組成物はまた、乳白剤を任意選択で含有してもよく、これらが、任意選択で遅延された様式で、胃腸管の特定の部分において活性成分（複数可）のみまたはそれを優先的に放出する組成であり得る。使用することができる包埋組成物の例には、ポリマー物質およびろうが含まれる。活性成分はまた、適切な場合、上記の賦形剤の１つまたは複数を有するマイクロカプセル化された形態でよい。
【０１６３】
本発明の化合物の経口投与のための液体剤形には、薬学的に許容される乳剤、マイクロ乳剤、液剤、懸濁剤、シロップ剤およびエリキシル剤が含まれる。活性成分に加えて、液体剤形は、当技術分野で通常使用される不活性な希釈剤、例えば、水または他の溶媒、可溶化剤および乳化剤、例えば、エチルアルコール、イソプロピルアルコール、炭酸エチル、酢酸エチル、ベンジルアルコール、安息香酸ベンジル、プロピレングリコール、１，３−ブチレングリコール、油（特に、綿実油、ラッカセイ油、トウモロコシ油、胚芽油、オリーブ油、ヒマシ油およびゴマ油）、グリセロール、テトラヒドロフリルアルコール、ポリエチレングリコール、およびソルビタンの脂肪酸エステル、ならびにこれらの混合物を含有し得る。
【０１６４】
不活性な希釈剤に加えて、経口組成物はまた、佐剤、例えば、湿潤剤、乳化剤および懸濁化剤、甘味剤、矯味矯臭剤、着色剤、香料および保存剤を含むことができる。
【０１６５】
懸濁剤は、活性化合物に加えて、例えば、エトキシ化イソステアリルアルコール、ポリオキシエチレンソルビトールおよびソルビタンエステル、微結晶性セルロース、メタ水酸化アルミニウム、ベントナイト、寒天およびトラガカント、ならびにこれらの混合物として、懸濁化剤を含有し得る。
【０１６６】
直腸または膣投与のための製剤は、１種または複数種の本発明の化合物と、例えば、カカオバター、ポリエチレングリコール、坐剤ろうまたはサリチレートを含む１種または複数種の適切な非刺激性の賦形剤または担体とを混合することによって調製してもよく、かつ室温で固体であるが体温で液体であり、したがって、直腸または膣腔内で融解して活性化合物を放出する、坐剤として提示し得る。
【０１６７】
本明細書において提供するようなオリゴマーの局所または経皮的投与のための製剤または剤形には、散剤、スプレー剤、軟膏剤、ペースト剤、クリーム剤、ローション剤、ゲル剤、液剤、パッチおよび吸入剤が含まれる。エテプリルセンは、無菌条件下にて、薬学的に許容される担体と、および必要とし得る任意の保存剤、緩衝液、または噴霧体と混合し得る。軟膏剤、ペースト剤、クリーム剤およびゲル剤は、本発明の活性化合物に加えて、賦形剤、例えば、動物性および植物性脂肪、油、ろう、パラフィン、デンプン、トラガカント、セルロース誘導体、ポリエチレングリコール、シリコーン、ベントナイト、ケイ酸、タルクならびに酸化亜鉛、またはこれらの混合物を含有し得る。
【０１６８】
散剤およびスプレー剤は、エテプリルセンに加えて、賦形剤、例えば、ラクトース、タルク、ケイ酸、水酸化アルミニウム、ケイ酸カルシウムおよびポリアミド粉末、またはこれらの物質の混合物を含有することができる。スプレー剤は、通例の噴霧体、例えば、クロロフルオロ炭化水素および揮発性非置換炭化水素、例えば、ブタンおよびプロパンをさらに含有することができる。
【０１６９】
経皮パッチは、体への本発明のオリゴマーの制御された送達を提供するさらなる利点を有する。このような剤形は、オリゴマーを適当な媒体に溶解または分散させることによって作製することができる。吸収増強剤をまた使用して、皮膚を横切る薬剤のフラックスを増大させることができる。このようなフラックスの速度は、当技術分野において公知の他の方法の中で、速度制御膜を提供することによって、または薬剤をポリマーマトリックスもしくはゲルに分散させることによって制御することができる。
【０１７０】
非経口投与に適した医薬組成物は、糖、アルコール、抗酸化剤、緩衝液、静菌剤、製剤を意図するレシピエントの血液と等張とする溶質、または懸濁化剤もしくは増粘剤（ｔｈｉｃｋｅｎｉｎｇ  ａｇｅｎｔ）を含有し得る、１種または複数種の薬学的に許容される無菌等張性の水性液剤もしくは非水性液剤、分散剤、懸濁剤または乳剤、あるいは使用の直前に無菌の注射用溶液または分散剤に再構成し得る無菌の粉末と組み合わせて、エテプリルセンｎ（ｅｔｅｐｌｉｒｓｅｎ  ｎ）を含有し得る。本発明の医薬組成物において用い得る適切な水性および非水性担体の例には、水、エタノール、ポリオール（例えば、グリセロール、プロピレングリコール、ポリエチレングリコールなど）、および適切なこれらの混合物、植物性油、例えば、オリーブ油、および注射用有機エステル、例えば、オレイン酸エチルが含まれる。例えば、コーティング材料、例えば、レシチンの使用によって、分散剤の場合は必要とされる粒径を維持することによって、および界面活性剤の使用によって、適当な流動性を維持することができる。
【０１７１】
これらの組成物はまた、佐剤、例えば、保存剤、湿潤剤、乳化剤および分散化剤を含有し得る。エテプリルセンに対する微生物の作用の防止は、様々な抗菌剤および抗真菌剤、例えば、パラベン、クロロブタノール、フェノールソルビン酸などを含むことによって確実にし得る。組成物中に等張剤、例えば、糖、塩化ナトリウムなどを含むことがまた望ましくあり得る。さらに、注射用医薬形態の延長された吸収は、吸収を遅延させる薬剤、例えば、モノステアリン酸アルミニウムおよびゼラチンを含むことによってもたらし得る。
【０１７２】
場合によっては、薬物の効果を延長させるために、皮下注射または筋肉内注射からの薬物の吸収を遅らせることが望ましい。これは、当技術分野において公知の他の方法の中でも、水溶性が乏しい結晶性またはアモルファス材料の液体懸濁物を使用することによって達成し得る。そして薬物の吸収の速度は溶解のその速度によって決まり、これはまた、結晶サイズおよび結晶形態によって決まり得る。代わりに、非経口的に投与された薬物形態の吸収の遅延は、油性ビヒクルに薬物を溶解または懸濁させることによって達成される。
【０１７３】
注射用デポー形態は、生分解性ポリマー、例えば、ポリラクチド−ポリグリコリド中でエテプリルセンのマイクロカプセル化マトリックスを形成させることによって作製し得る。エテプリルセンとポリマーの比、および用いる特定のポリマーの性質によって、エテプリルセン放出の速度を制御することができる。他の生分解性ポリマーの例には、ポリ（オルトエステル）およびポリ（無水物）が含まれる。デポー注射用製剤はまた、身体組織と適合性であるリポソームまたはマイクロ乳剤中に薬物を捕捉することによって調製し得る。
【０１７４】
エテプリルセンが医薬としてヒトおよび動物に投与されるとき、これはそれ自体で、または薬学的に許容される担体と組み合わせて、例えば、０．１〜９９％（より好ましくは、１０〜３０％）の活性成分を含有する医薬組成物として与えることができる。
【０１７５】
上で述べたように、本発明の製剤または調製物は、経口的、非経口的、全身的、局所的、直腸または筋肉内投与で与え得る。これらは典型的には、それぞれの投与経路に適した形態で与えられる。例えば、これらは、錠剤またはカプセル剤形態で、注射、吸入、眼用ローション剤（ｅｙｅ  ｌｏｔｉｏｎ）、軟膏剤、坐剤などによる、注射、注入または吸入による投与；ローション剤または軟膏剤による局所；および坐剤による直腸で投与される。
【０１７６】
「非経口投与」および「非経口的に投与された」という語句は、本明細書において使用する場合、通常、注射による、経腸および局所投与以外の投与モードを意味し、これらに限定されないが、静脈内、筋内、動脈内、くも膜下腔内、嚢内、眼窩内、心臓内、皮内、腹腔内、経気管、皮下、表皮下、関節内、被膜下、くも膜下、脊髄内および胸骨内注射および注入が含まれる。
【０１７７】
「全身投与」、「全身的に投与された」、「末梢投与」および「末梢的に投与された」という語句は、本明細書において使用する場合、中枢神経系中への直接の投与以外の、化合物、薬物または他の材料が患者の系に入り、したがって代謝および他の同様のプロセスに供されるような、化合物、薬物または他の材料の投与、例えば、皮下投与を意味する。
【０１７８】
選択した投与経路に関わらず、適切な水和形態で使用し得るエテプリルセン、および／または本発明の医薬組成物は、当業者に公知の従来の方法によって薬学的に許容される剤形に製剤され得る。本発明の医薬組成物中の活性成分の実際の投与量レベルは、患者に対して受容できないほど毒性であることを伴わずに、特定の患者、組成物、および投与モードについて所望の治療反応を達成するのに有効な活性成分の量を得るために変化し得る。
【０１７９】
選択した投与量レベルは、エテプリルセン、またはそのエステル、塩もしくはアミドの活性、投与経路、投与の時間、エテプリルセンの排泄または代謝の速度、吸収の速度および程度、処置の持続期間、エテプリルセンと組み合わせて使用される他の薬物、化合物および／または材料、処置される患者の年齢、性別、体重、状態、身体全体の健康および従前の病歴、ならびに医学の技術分野において周知の同様の要因を含めた種々の要因によって決まる。
【０１８０】
一部の実施形態では、エテプリルセンの投与量は、ＤＭＤまたはＢＭＤの処置に十分な期間にわたって、約３０ｍｇ／ｋｇである。一部の実施形態では、エテプリルセンは、約２５ｍｇ／ｋｇおよび約５０ｍｇ／ｋｇの間（例えば、約２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、または５０ｍｇ／ｋｇ）の用量で、例えば１週間に１回、患者に投与される。一部の実施形態では、エテプリルセンは、約２５ｍｇ／ｋｇおよび約５０ｍｇ／ｋｇの間（例えば、約３０ｍｇ／ｋｇ〜約５０ｍｇ／ｋｇ、約２５ｍｇ／ｋｇ〜約４０ｍｇ／ｋｇ、約２８ｍｇ／ｋｇ〜約３２ｍｇ／ｋｇ、または約３０ｍｇ／ｋｇ〜約４０ｍｇ／ｋｇ）の用量で、例えば１週間に１回、患者に投与される。
【０１８１】
一部の実施形態では、エテプリルセンは、週１回静脈内投与される。ある特定の実施形態では、注入時間は、約１５分〜約４時間である。一部の実施形態では、注入時間は、約３０分〜約３時間である。一部の実施形態では、注入時間は、約３０分〜約２時間である。一部の実施形態では、注入時間は、約１時間〜約２時間である。一部の実施形態では、注入時間は、約３０分〜約１時間である。一部の実施形態では、注入時間は、約６０分である。一部の実施形態では、注入時間は、３５〜６０分である。
【０１８２】
エテプリルセンの投与は、抗生物質、ステロイド、または他の治療薬の投与の後またはそれと同時でよい。処置レジメンは、処置を受けている被験体のイムノアッセイ、他の生化学試験、および身体検査の結果に基づき、指示通りに調整してよい（用量、頻度、経路など）。
【０１８３】
核酸分子は、これらに制限されないが、本明細書に記載され、当技術分野において公知のような、リポソーム中へのカプセル化、イオン導入による、または他のビヒクル、例えば、ヒドロゲル、シクロデキストリン、生分解性ナノカプセル、および生体付着性ミクロスフィア中への組込みによるものを含めて、当業者には公知の種々の方法によって細胞に投与することができる。特定の実施形態において、マイクロ乳化技術を利用して、親油性（水不溶性）医薬品のバイオアベイラビリティーを改善し得る。例には、トリメトリン（Ｔｒｉｍｅｔｒｉｎｅ）（Ｄｏｒｄｕｎｏｏ，  Ｓ．  Ｋ．ら、Ｄｒｕｇ  Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  ａｎｄ  Ｉｎｄｕｓｔｒｉａｌ  Ｐｈａｒｍａｃｙ、１７頁（１２号）、１６８５〜１７１３頁、１９９１年およびＲＥＶ５９０１（Ｓｈｅｅｎ，  Ｐ．  Ｃ．ら、Ｊ  Ｐｈａｒｍ  Ｓｃｉ、８０巻（７号）、７１２〜７１４頁、１９９１年）が含まれる。様々な利益のなかでもとりわけ、マイクロ乳化は、吸収を循環器系の代わりにリンパ系に優先的に向けることによって増強されたバイオアベイラビリティーを実現し、これによって肝臓を迂回し、肝胆道循環における化合物の破壊を防止する。
【０１８４】
本発明の一態様において、製剤は、エテプリルセンおよび少なくとも１種の両親媒性担体から形成されるミセルを含有し、ミセルは、約１００ｎｍ未満の平均直径を有する。より好ましい実施形態は、約５０ｎｍ未満の平均直径を有するミセルを提供し、さらにより好ましい実施形態は、約３０ｎｍ未満、またはさらに約２０ｎｍ未満の平均直径を有するミセルを提供する。
【０１８５】
全ての適切な両親媒性担体が意図される一方、現在好ましい担体は一般に、一般に安全と認められる（ＧＲＡＳ）ステータスを有し、かつ本発明の化合物を可溶化することができ、溶液が複雑な水相（例えば、ヒト消化管において見出されるもの）と接触するとき、より後の段階でマイクロ乳化することができることの両方であるものである。通常、これらの要件を満足させる両親媒性成分は、２〜２０のＨＬＢ（親水親油バランス）値を有し、これらの構造は、Ｃ−６〜Ｃ−２０の範囲の直鎖脂肪族ラジカルを含有する。例は、ポリエチレングリコール化（ｐｏｌｙｅｔｈｙｌｅｎｅ−ｇｌｙｃｏｌｉｚｅｄ）脂肪酸グリセリドおよびポリエチレングリコールである。
【０１８６】
両親媒性担体の例には、飽和および一不飽和ポリエチレングリコール化（ｐｏｌｙｅｔｈｙｌｅｎｅｇｌｙｃｏｌｙｚｅｄ）脂肪酸グリセリド、例えば、完全または部分的に水素付加した様々な植物性油から得られるものが含まれる。このような油は有利には、トリ−、ジ−、およびモノ−脂肪酸グリセリド、ならびに対応する脂肪酸のジ−およびモノ−ポリエチレングリコールエステルからなり、特に好ましい脂肪酸組成物は、カプリン酸４〜１０％、カプリン酸３〜９％、ラウリン酸４０〜５０％、ミリスチン酸１４〜２４％、パルミチン酸４〜１４％およびステアリン酸５〜１５％を含む。別の有用なクラスの両親媒性担体には、飽和もしくは一不飽和脂肪酸（ＳＰＡＮ−シリーズ）または対応するエトキシ化類似体（ＴＷＥＥＮ−シリーズ）を伴う部分的にエステル化されたソルビタンおよび／またはソルビトールが含まれる。
【０１８７】
Ｇｅｌｕｃｉｒｅ−シリーズ、Ｌａｂｒａｆｉｌ、Ｌａｂｒａｓｏｌ、またはＬａｕｒｏｇｌｙｃｏｌ（全てＧａｔｔｅｆｏｓｓｅ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ、Ｓａｉｎｔ  Ｐｒｉｅｓｔ、Ｆｒａｎｃｅによって製造および配布されている）、ＰＥＧ−モノ−オレエート、ＰＥＧ−ジ−オレエート、ＰＥＧ−モノ−ラウレートおよびジ−ラウレート、レシチン、ポリソルベート８０など（米国および世界中のいくつかの会社によって生産および配布されている）を含めて、市販の両親媒性担体は特に有用であり得る。
【０１８８】
特定の実施形態において、送達は、適切な宿主細胞中への本発明の組成物の導入のための、リポソーム、ナノカプセル、微粒子、ミクロスフィア、脂質粒子、小胞などの使用によって起こり得る。特に、本発明の組成物は、脂質粒子、リポソーム、小胞、ナノスフィア、ナノ粒子などのいずれか中にカプセル化されて、送達のために製剤され得る。このような送達ビヒクルの製剤および使用は、公知および従来の技術を使用して行うことができる。
【０１８９】
本発明における使用に適した親水性ポリマーは、容易に水溶性であり、小胞形成脂質に共有結合的に付着させることができ、毒性効果を伴わずにインビボで耐容性を示す（すなわち、生体適合性である）ものである。適切なポリマーには、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、ポリ乳酸（ポリラクチドとまた称される）、ポリグリコール酸（ポリグリコリドとまた称される）、ポリ乳酸−ポリグリコール酸コポリマー、およびポリビニルアルコールが含まれる。特定の実施形態において、ポリマーは、約１００ダルトンもしくは１２０ダルトンから、約５，０００ダルトンもしくは１０，０００ダルトンまで、または約３００ダルトン〜約５，０００ダルトンの分子量を有する。他の実施形態において、ポリマーは、約１００〜約５，０００ダルトンの分子量を有し、または約３００〜約５，０００ダルトンの分子量を有するポリエチレングリコールである。特定の実施形態において、ポリマーは、７５０ダルトンのポリエチレングリコール（ＰＥＧ（７５０））である。ポリマーはまた、その中のモノマーの数によって定義し得る。本発明の好ましい実施形態は、少なくとも約３種のモノマーのポリマーを利用し、このようなＰＥＧポリマーは、３種のモノマーからなる（ほぼ１５０ダルトン）。
【０１９０】
本発明における使用に適し得る他の親水性ポリマーには、ポリビニルピロリドン、ポリメトキサゾリン（ｐｏｌｙｍｅｔｈｏｘａｚｏｌｉｎｅ）、ポリエチルオキサゾリン、ポリヒドロキシプロピルメタクリルアミド、ポリメタクリルアミド、ポリジメチルアクリルアミド、および誘導体化セルロース、例えば、ヒドロキシメチルセルロースまたはヒドロキシエチルセルロースが含まれる。
【０１９１】
特定の実施形態において、本発明の製剤は、ポリアミド、ポリカーボネート、ポリアルキレン、アクリル酸エステルおよびメタクリル酸エステルのポリマー、ポリビニルポリマー、ポリグリコリド、ポリシロキサン、ポリウレタンおよびそのコポリマー、セルロース、ポリプロピレン、ポリエチレン、ポリスチレン、乳酸およびグリコール酸のポリマー、ポリ無水物、ポリ（オルト）エステル、ポリ（酪酸）（ｐｏｌｙ（ｂｕｔｉｃ  ａｃｉｄ））、ポリ（吉草酸）、ポリ（ラクチド−ｃｏ−カプロラクトン）、多糖類、タンパク質、ポリヒアルロン酸、ポリシアノアクリレート、ならびにそのブレンド、混合物、またはコポリマーからなる群より選択される生体適合性ポリマーを含む。
【０１９２】
シクロデキストリンは、それぞれ、ギリシャ文字α、βまたはγと指定される、６つ、７つまたは８つのグルコース単位からなる環状オリゴ糖である。グルコース単位は、α−１，４−グルコシド結合によって連結している。糖単位のいす形配座の結果として、全ての第二級ヒドロキシル基（Ｃ−２、Ｃ−３における）は、環の１つの側面上に位置しており、一方、Ｃ−６における全ての第一級ヒドロキシル基は、他の側面上に配置されている。その結果、外側の面は親水性であり、シクロデキストリンを水溶性とする。対照的に、シクロデキストリンの空洞は、原子Ｃ−３およびＣ−５の水素によって、ならびにエーテル様酸素で裏打ちされているため疎水性である。これらのマトリックスは、例えば、ステロイド化合物、例えば、１７α−エストラジオールを含めた種々の比較的疎水性の化合物と共に複合体を形成することが可能となる（例えば、ｖａｎ  Ｕｄｅｎら、Ｐｌａｎｔ  Ｃｅｌｌ  Ｔｉｓｓ．  Ｏｒｇ．  Ｃｕｌｔ．、３８巻：１−３−１１３（１９９４年）を参照されたい）。複合体形成は、ファンデルワールス相互作用によって、および水素結合形成によって起こる。シクロデキストリンの化学的性質の一般的概説について、Ｗｅｎｚ、Ａｇｎｅｗ．  Ｃｈｅｍ．  Ｉｎｔ．  Ｅｄ．  Ｅｎｇｌ．、３３巻：８０３〜８２２頁（１９９４年）を参照されたい。
【０１９３】
シクロデキストリン誘導体の物理化学的特性は、種類および置換度によって強力に決まる。例えば、水中のこれらの溶解度は、不溶性（例えば、トリアセチル−β−シクロデキストリン）から１４７％可溶性（ｗ／ｖ）（Ｇ−２−β−シクロデキストリン）までの範囲である。さらに、これらは、多くの有機溶媒中で可溶性である。シクロデキストリンの特性により、様々な製剤構成要素の溶解度を増大または減少させることによって、これらの溶解度の制御をすることができる。
【０１９４】
多数のシクロデキストリンおよびこれらの調製のための方法が記載されてきた。例えば、Ｐａｒｍｅｔｅｒ（Ｉ）ら（米国特許第３，４５３，２５９号）およびＧｒａｍｅｒａら（米国特許第３，４５９，７３１号）は、電気的中性のシクロデキストリンを記載した。他の誘導体には、カチオン性特性を有するシクロデキストリン［Ｐａｒｍｅｔｅｒ（ＩＩ）、米国特許第３，４５３，２５７号］、不溶性架橋シクロデキストリン（Ｓｏｌｍｓ、米国特許第３，４２０，７８８号）、およびアニオン性特性を有するシクロデキストリン［Ｐａｒｍｅｔｅｒ（ＩＩＩ）、米国特許第３，４２６，０１１号］が含まれる。アニオン性特性を有するシクロデキストリン誘導体の中で、カルボン酸、亜リン酸、亜ホスフィン酸（ｐｈｏｓｐｈｉｎｏｕｓ  ａｃｉｄ）、ホスホン酸、リン酸、チオホスホン酸（ｔｈｉｏｐｈｏｓｐｈｏｎｉｃ  ａｃｉｄ）、チオスルフィン酸（ｔｈｉｏｓｕｌｐｈｉｎｉｃ  ａｃｉｄ）、およびスルホン酸が、親シクロデキストリンに付加されてきた［Ｐａｒｍｅｔｅｒ（ＩＩＩ）、上述を参照されたい］。さらに、スルホアルキルエーテルシクロデキストリン誘導体は、Ｓｔｅｌｌａらによって記載されてきた（米国特許第５，１３４，１２７号）。
【０１９５】
リポソームは、水性の内部コンパートメントを封入する少なくとも１つの脂質二重層膜からなる。リポソームは、膜タイプにより、およびサイズにより特性決定し得る。小型単層小胞（ｓｍａｌｌ  ｕｎｉｌａｍｅｌｌａｒ  ｖｅｓｉｃｌｅ）（ＳＵＶ）は単一の膜を有し、典型的には直径が０．０２〜０．０５μｍの範囲であり、大型単層小胞（ｌａｒｇｅ  ｕｎｉｌａｍｅｌｌａｒ  ｖｅｓｉｃｌｅ）（ＬＵＶＳ）は典型的には、０．０５μｍより大きい。少層大型小胞（ｏｌｉｇｏｌａｍｅｌｌａｒ  ｌａｒｇｅ  ｖｅｓｉｃｌｅ）および多層小胞（ｍｕｌｔｉｌａｍｅｌｌａｒ  ｖｅｓｉｃｌｅ）は、複数の通常同心円状膜の層を有し、典型的には０．１μｍより大きい。いくつかの非同心円状膜を有するリポソーム、すなわち、より大型小胞内に含有されるいくつかのより小型小胞は、多胞体小胞（ｍｕｌｔｉｖｅｓｉｃｕｌａｒ  ｖｅｓｉｃｌｅ）と称される。
【０１９６】
本発明の一態様は、エテプリルセンを含有するリポソームを含む製剤に関し、リポソーム膜は、増大した運搬能力を有するリポソームを提供するように製剤される。代わりにまたはさらに、本発明の化合物は、リポソームのリポソーム二重層中に含有し得、またはリポソームのリポソーム二重層上に吸着し得る。エテプリルセンは、脂質界面活性剤（ｌｉｐｉｄ  ｓｕｒｆａｃｔａｎｔ）と共に凝集させ、リポソームの内側空間内に運んでもよい。これらの場合、リポソーム膜は、活性剤−界面活性剤凝集物の破壊効果に抵抗するように製剤される。
【０１９７】
本発明の一実施形態によると、ＰＥＧ鎖が、脂質二重層の内面からリポソームによってカプセル化された内部空間中に伸長し、脂質二重層の外部から周囲の環境中に伸長するように、リポソームの脂質二重層は、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）で誘導体化された脂質を含有する。
【０１９８】
本発明のリポソーム内に含有される活性剤は、可溶化形態である。界面活性剤および活性剤の凝集物（例えば、目的とする活性剤を含有する乳剤またはミセル）は、本発明によるリポソームの内部空間内に捕捉し得る。界面活性剤は、活性剤を分散および可溶化するように作用し、これらに限定されないが、変化する鎖長（例えば、約Ｃ１４〜約Ｃ２０）の生体適合性リゾホスファチジルコリン（ＬＰＧ）を含めた任意の適切な脂肪族、脂環式または芳香族の界面活性剤から選択され得る。ポリマー誘導体化脂質は、ミセル／膜融合を阻害するように作用し、界面活性剤分子へポリマーを加えることによって界面活性剤のＣＭＣを減少させ、ミセル形成を助長するため、ポリマー誘導体化脂質、例えば、ＰＥＧ−脂質をまた、ミセル形成のために利用し得る。好ましいのは、マイクロモル濃度範囲のＣＭＯを有する界面活性剤である。より高いＣＭＣの界面活性剤を利用して、本発明のリポソーム内に捕捉されたミセルを調製し得る。
【０１９９】
本発明に従うリポソームは、当技術分野において公知の種々の技術のいずれかによって調製され得る。例えば、米国特許第４，２３５，８７１号；公開されたＰＣＴ出願ＷＯ９６／１４０５７；Ｎｅｗ  ＲＲＣ，  Ｌｉｐｏｓｏｍｅｓ：Ａ  ｐｒａｃｔｉｃａｌ  ａｐｐｒｏａｃｈ、ＩＲＬ  Ｐｒｅｓｓ、Ｏｘｆｏｒｄ（１９９０年）、３３〜１０４頁；Ｌａｓｉｃ  ＤＤ，  Ｌｉｐｏｓｏｍｅｓ  ｆｒｏｍ  ｐｈｙｓｉｃｓ  ｔｏ  ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ、Ｅｌｓｅｖｉｅｒ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ  ＢＶ、Ａｍｓｔｅｒｄａｍ、１９９３年を参照されたい。例えば、リポソーム中で望ましい誘導体化された脂質の最終モルパーセントに相当する脂質濃度で、予め形成されたリポソームを脂質グラフトポリマーから構成されるミセルに曝露させることになどによって、親水性ポリマーで誘導体化した脂質を予め形成されたリポソーム中に拡散させることによって、本発明のリポソームは調製し得る。親水性ポリマーを含有するリポソームはまた、当技術分野において公知のように、均質化、脂質領域水和（ｌｉｐｉｄ−ｆｉｅｌｄ  ｈｙｄｒａｔｉｏｎ）、または押出技術によって形成することができる。
【０２００】
別の例示的な製剤手順において、活性剤は、リゾホスファチジルコリン、または疎水性分子を容易に可溶化する他の低ＣＭＣの界面活性剤（ポリマーグラフト脂質を含めた）中で超音波処理によって最初に分散させる。次いで、このように得られた活性剤のミセル懸濁物を使用して、適切なモルパーセントのポリマーグラフト脂質、またはコレステロールを含有する乾燥した脂質試料を再水和させる。次いで、脂質および活性剤懸濁物を、当技術分野において公知のような押出技術を使用してリポソームに形成し、このように得られたリポソームを、標準的なカラム分離によってカプセル化されていない溶液から分離する。
【０２０１】
本発明の一態様において、リポソームは、選択したサイズ範囲の実質的に均一なサイズを有するように調製される。１つの有効なサイジング方法は、選択した均質な孔径を有する一連のポリカーボネート膜を通してリポソームの水性懸濁物を押し出すことを伴い、膜の孔径は、その膜を通す押出によって生成したリポソームの最も大きなサイズにおおよそ相当する。例えば、米国特許第４，７３７，３２３号（１９８８年４月１２日）を参照されたい。特定の実施形態において、試薬、例えば、ＤｈａｒｍａＦＥＣＴ（登録商標）およびＬｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ（登録商標）を利用して、細胞中にポリヌクレオチドまたはタンパク質を導入し得る。
【０２０２】
本発明の製剤の放出の特徴は、封入材料、カプセル化された薬物の濃度、および放出調節剤の存在によって決まる。例えば、胃におけるように低ｐＨにおいてのみ、または腸におけるようにより高いｐＨで放出するｐＨ感受性コーティングを使用して、例えば、放出をｐＨ依存性であるように操作することができる。腸溶性コーティングを使用して、胃を通過する後まで放出が起こることを防止することができる。複数のコーティング、または異なる材料中にカプセル化されたシアナミドの混合物を使用して、胃における最初の放出、それに続く腸におけるその後の放出を得ることができる。放出はまた、水の取込みまたはカプセルからの拡散による薬物の放出を増大させることができる、塩またはポア形成剤を含むことによって操作することができる。薬物の溶解度を改変させる賦形剤をまた使用して、放出速度を制御することができる。マトリックスの分解またはマトリックスからの放出を増強する薬剤をまた組み込むことができる。これらは、化合物によって、薬物に加え、別々の相として加えることができ（すなわち、微粒子として）、またはポリマー相に同時溶解することができる。殆どの場合、量は、０．１〜３０パーセント（ｗ／ｗポリマー）であるべきである。分解増強剤のタイプには、無機塩、例えば、硫酸アンモニウムおよび塩化アンモニウム、有機酸、例えば、クエン酸、安息香酸、およびアスコルビン酸、無機塩基、例えば、炭酸ナトリウム、炭酸カリウム、炭酸カルシウム、炭酸亜鉛、および水酸化亜鉛、ならびに有機塩基、例えば、硫酸プロタミン、スペルミン、コリン、エタノールアミン、ジエタノールアミン、およびトリエタノールアミン、ならびに界面活性剤、例えば、Ｔｗｅｅｎ（登録商標）およびＰｌｕｒｏｎｉｃ（登録商標）が含まれる。マトリックスに微小構造を加えるポア形成剤（すなわち、水溶性化合物、例えば、無機塩および糖）を、微粒子として加える。範囲は典型的には、１〜３０パーセント（ｗ／ｗポリマー）である。
【０２０３】
腸における粒子の滞留時間を変化させることによって、取込みをまた操作することができる。例えば、粒子を粘膜の接着性ポリマーでコーティングすることによって、または封入材料として粘膜の接着性ポリマーを選択することによって、これは達成することができる。例には、遊離カルボキシル基を有する大部分のポリマー、例えば、キトサン、セルロース、特に、ポリアクリレートが含まれる（本明細書において使用する場合、ポリアクリレートは、アクリレート基および修飾されたアクリレート基、例えば、シアノアクリレートおよびメタアクリレートを含むポリマーを指す）。
【０２０４】
エテプリルセンは、手術デバイスもしくは医療デバイスまたはインプラント内に含有されるように製剤され得るか、あるいはこれらによって放出されるように適合され得る。特定の態様において、インプラントは、エテプリルセンでコーティングまたは別の方法で処理し得る。例えば、ヒドロゲル、または他のポリマー、例えば、生体適合性および／または生分解性ポリマーを使用して、インプラントを本発明の組成物でコーティングし得る（すなわち、組成物は、ヒドロゲルまたは他のポリマーを使用することによって医療デバイスと共の使用のために適合し得る）。医療デバイスを薬剤でコーティングするためのポリマーおよびコポリマーは、当技術分野において周知である。インプラントの例には、これらに限定されないが、ステント、薬物溶出ステント、縫合糸、プロテーゼ、血管カテーテル、透析カテーテル、血管移植片、人工心臓弁、心臓ペースメーカー、埋め込み式電気除細動器、ＩＶ針、接骨（ｂｏｎｅ  ｓｅｔｔｉｎｇ）および骨形成のためのデバイス、例えば、ピン、ネジ、プレート、および他のデバイス、ならびに創傷治癒のための人工組織マトリックスが含まれる。
【０２０５】
本明細書において提供する方法に加えて、エテプリルセンは、ヒトまたは動物用の薬における使用のために、他の医薬から類推して任意の好都合な方法における投与のために製剤され得る。エテプリルセンおよびその対応する製剤は、筋ジストロフィーの処置において、単独で、または他の治療ストラテジ、例えば、筋芽細胞移植、幹細胞治療、アミノグリコシド抗生物質、プロテアソーム阻害剤の投与、および上方調節治療（例えば、ユートロフィン（ジストロフィン常染色体パラログ）の上方調節）と組み合わせて投与され得る。
【０２０６】
当業者は任意の特定の動物および状態のための最適な投与経路および任意の投与量を容易に決定することができるため、記載される投与経路はガイドとしてのみ意図される。インビトロおよびインビボの両方での細胞中への新規な機能的遺伝物質を導入するための複数のアプローチが試みられてきた（Ｆｒｉｅｄｍａｎｎ（１９８９年）、Ｓｃｉｅｎｃｅ、２４４巻：１２７５〜１２８０頁）。これらのアプローチは、修飾されたレトロウイルス中に発現する遺伝子の組み込み（Ｆｒｉｅｄｍａｎｎ（１９８９年）同上；Ｒｏｓｅｎｂｅｒｇ（１９９１年）Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ、５１巻（１８号）、ｓｕｐｐｌ．：５０７４Ｓ〜５０７９Ｓ頁）；非レトロウイルスベクター（例えば、アデノ随伴ウイルスベクター）中への組み込み（Ｒｏｓｅｎｆｅｌｄら（１９９２年）、Ｃｅｌｌ、６８巻：１４３〜１５５頁；Ｒｏｓｅｎｆｅｌｄら（１９９１年）、Ｓｃｉｅｎｃｅ、２５２巻：４３１〜４３４頁）；またはリポソームを介した異種性プロモーター−エンハンサーエレメントに連結している導入遺伝子の送達（Ｆｒｉｅｄｍａｎｎ（１９８９年）、同上；Ｂｒｉｇｈａｍら（１９８９年）、Ａｍ．  Ｊ．  Ｍｅｄ．  Ｓｃｉ．、２９８巻：２７８〜２８１頁；Ｎａｂｅｌら（１９９０年）、Ｓｃｉｅｎｃｅ、２４９巻：１２８５〜１２８８頁；Ｈａｚｉｎｓｋｉら（１９９１年）、Ａｍ．  Ｊ．  Ｒｅｓｐ．  Ｃｅｌｌ  Ｍｏｌｅｃ．  Ｂｉｏｌ．、４巻：２０６〜２０９頁；およびＷａｎｇおよびＨｕａｎｇ（１９８７年）、Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．（ＵＳＡ）、８４巻：７８５１〜７８５５頁）；リガンド特異的なカチオンベースの輸送系へのカップリング（ＷｕおよびＷｕ（１９８８年）、Ｊ．  Ｂｉｏｌ．  Ｃｈｅｍ．、２６３巻：１４６２１〜１４６２４頁）、またはネイキッドＤＮＡ発現ベクターの使用（Ｎａｂｅｌら（１９９０年）、同上）；Ｗｏｌｆｆら（１９９０年）、Ｓｃｉｅｎｃｅ、２４７巻：１４６５〜１４６８頁）を含む。組織中への導入遺伝子の直接注射は、局在化された発現のみを生じさせる（Ｒｏｓｅｎｆｅｌｄ（１９９２年）、同上）；Ｒｏｓｅｎｆｅｌｄら（１９９１年）、同上；Ｂｒｉｇｈａｍら（１９８９年）、同上；Ｎａｂｅｌ（１９９０年）、同上；およびＨａｚｉｎｓｋｉら（１９９１年）、同上）。Ｂｒｉｇｈａｍらのグループ（Ａｍ．  Ｊ．  Ｍｅｄ．  Ｓｃｉ．（１９８９年）、２９８巻：２７８〜２８１頁およびＣｌｉｎｉｃａｌ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ（１９９１年）、３９頁（アブストラクト））は、ＤＮＡリポソーム複合体の静脈内または気管内投与に続く、マウスの肺のインビボでのトランスフェクションのみを報告している。ヒト遺伝子治療手順の総論の一例は、Ａｎｄｅｒｓｏｎ、Ｓｃｉｅｎｃｅ（１９９２年）２５６巻：８０８〜８１３頁である。
【０２０７】
ＩＩＩ．キット
本発明はまた、遺伝病患者を処置するためのキットを提供し、キットは、少なくとも、適切な容器に包装されたエテプリルセンを、その使用についての指示と共に含む。キットは、バッファ、安定剤などの周辺試薬も含み得る。
【実施例】
【０２０８】
ＩＶ．実施例
材料および方法
患者
エテプリルセン処置コホートについて、適格な患者は、７歳および１３歳の間（両端を含む）であり、エキソン５１をスキッピングすることにより補正できるはずである、ＤＭＤ遺伝子のアウトオブフレーム欠失を有していた。患者は、登録前に少なくとも２４週間、心肺機能が安定しており、糖質コルチコイドの用量が安定していることが確認された。ベースライン時に、６分間歩行試験（６ＭＷＴ）において２００メートルおよび４００メートル（±１０％）の間を歩行することのできた患者のみが登録された。
【０２０９】
試験デザイン
エテプリルセン処置コホート
この４年の治験は、（１）処置を２４週目までは二重盲検、（２）その後は非盲検とする、２段階で実施した。主要評価項目は、６分間歩行試験（６ＭＷＴ）により測定される歩行の変化とした。
【０２１０】
試験２０１（試験番号４６５８−ｕｓ−２０１；臨床治験政府識別番号：ＮＣＴ０１３９６２３９）は、エテプリルセンの単一施設無作為化二重盲検プラセボ対照反復投与有効性、安全性、および忍容性試験であった。１２人のＤＭＤ患者を、エテプリルセン３０ｍｇ／ｋｇ／週（コホート１）、エテプリルセン５０ｍｇ／ｋｇ／週（コホート２）、またはプラセボ／遅延エテプリルセン（コホート３）の３つの群の１つに無作為化した。すべての患者が、静脈内のエテプリルセンまたはプラセボ／遅延エテプリルセンの毎週の投薬を受けた。プラセボ処置患者は、２５週目に、毎週のエテプリルセン３０ｍｇ／ｋｇ（ｎ＝２）または５０ｍｇ／ｋｇ（ｎ＝２）に分かれた。有効性および安全性を、予定された来訪時に評定し、独立したデータ安全性モニタリング委員会によって、すべての患者の福祉が確保された。すべての患者が、ベースライン時に二頭筋生検を受けた。５０ｍｇ／ｋｇ群および２人のプラセボ処置患者については１２週目に、３０ｍｇ／ｋｇ群および２人のプラセボ処置患者については２４週目に、反対の腕（二頭筋）で追跡生検を行った。
【０２１１】
患者は、試験２０２（試験番号４６５８−ｕｓ−２０２；臨床治験政府識別番号：ＮＣＴ０１５４０４０９）の長期非盲検延長試験のもと、３０または５０ｍｇ／ｋｇのエテプリルセンでの毎週の投薬を継続した。試験２０２の間、すべての有効性の評定が継続して行われ、４８週目には、すべての患者における３回目の（左三角筋における）生検が含まれた。１８０週目には、随意の４回目の生検（１１／１２人の患者）が行われた。試験の間終始、有害事象のモニタリングを継続した。試験デザインの概略を図１に示す。
【０２１２】
マッチさせた外部対照コホート
エテプリルセンコホートの結果をマッチさせた外部対照コホートと比較するために、Ｉｔａｌｉａｎ  Ｔｅｌｅｔｈｏｎ  （ｎ＝９７）およびＬｅｕｖｅｎ  Ｎｅｕｒｏｍｕｓｃｕｌａｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｃｅｎｔｅｒ  （ＮＭＲＣ）  （ｎ＝８９）登録簿を使用して、対照データを集計した。これらの登録簿を選択したのは、エキソン５１を受け入れられる患者における縦断的な６ＭＷＴデータ、３６か月までの縦断的な６ＭＷＴデータ、および遺伝子変異データが入手可能であったためである。これらの登録簿では、ステロイドを含めた等価な標準治療も存在した。ベースライン６ＭＴＷおよびステロイド処置、７歳またはそれより年長、ならびにエキソン５１スキッピングを受け入れられるという因子に基づき、患者データを選択した（図２）。
【０２１３】
試験薬物
エテプリルセンは、Ｓａｒｅｐｔａ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ，Ｉｎｃ．より、１回使用のリン酸緩衝食塩水バイアル（１００ｍｇ／ｍｌ）として供給された。エテプリルセンを１５０ｍｌのノーマルセーラインで復元し、６０分かけて注入した。試験２０１の最初の２４週間の間投与されたプラセボは、同一のリン酸緩衝食塩水のバイアルとして供給され、エテプリルセンと同じ様式で投与した。
【０２１４】
安全性および忍容性モニタリング
有害事象、バイタルサイン、身体検査、心電図、心エコー図、および臨床検査室試験によって、安全性を評定した。加えて、血清シスタチンＣならびに尿シスタチンＣおよびＫＩＭ−１を定期的に評定することにより腎機能をモニターした。
【０２１５】
生化学的有効性の評定
エテプリルセンおよび他のエキソンスキッピング候補物質の事前試験において使用される、ジストロフィンの高感度マーカーであるＭＡＮＤＹＳ１０６［Ｇｌｅｎ  Ｍｏｒｒｉｓ、ＭＤＡ  Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｌｉｂｒａｒｙからの寄贈品］に基づき、エテプリルセン処置コホートとマッチさせた外部対照コホートの両方において、ジストロフィン発現レベルを決定した。少なくとも２００μｍ隔てられた３片の凍結した１０μｍ切片を、ＭＡＮＤＹＳ１０６で染色した後、二次抗体（Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ  ５９４ヤギ抗マウス抗体）で染色した。４人の病理学者が、組織を盲検で綿密に調べ、陽性線維の数をカウントされた線維の合計で割ることにより算出されたジストロフィン陽性線維パーセントを報告した。正常筋肉試料が１００％のジストロフィン陽性線維を有するとき、ジストロフィン陽性線維パーセントは、正常に対する百分率として示される。
【０２１６】
臨床的有効性の評定
ＳｔｅｐＷａｔｃｈ  ａｃｔｉｍｅｔｒｙデバイスを使用しなかったことを除き、McDonaldら（参照により本明細書に組み込まれるMuscle  Nerve、２０１０年；４２巻：９６６〜７４頁；Muscle  Nerve、２０１０年；４１巻：５００〜１０頁）によるＤＭＤ患者用に確立されたプロトコールを使用して、６ＭＷＴを実施した。探索的な機能的転帰には、Ｎｏｒｔｈ  Ｓｔａｒ  Ａｍｂｕｌａｔｏｒｙ  Ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ、定量的な筋力検査、９−Ｈｏｌｅ  Ｐｅｇ  Ｔｅｓｔ、肺機能検査（ＰＦＴ）、時限機能試験、および生活の質の評定を含めた。
【０２１７】
（実施例１）
被験体の特性
エテプリルセン処置コホートにおける１２人の患者およびマッチさせた外部対照コホートにおける１３人の患者のベースライン特性を、表１に要約する。エテプリルセンと対照の両方の集団において、エキソン５１スキッピングを受け入れられる５種の異なる遺伝子型が示された。ベースライン時の６分間歩行試験（６ＭＷＴ）における平均距離は、ＤＭＤ児の他の研究における平均距離と同様であり、予想されるとおり、年齢をマッチさせた健康児において通常観察される６００メートル超をかなり下回っていた。
【０２１８】
【表１】
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【０２１９】
（実施例２）
安全性、および有害事象の不在
２１６週間の処置を通して、エテプリルセンは、十分に許容され、処置に関連した有害事象、重篤な有害事象、中断、または投与の欠落はなかった。その上、身体検査について、またはバイタルサインに、臨床上重要な変化は認められなかった。心電図、心エコー図、およびＰＦＴは、安定したままであり、化学的に、血液機能、腎臓機能、凝固機能、または肝臓機能の臨床上重要な変化は示されなかった。１人のプラセボ処置被験体において、軽度で一過性の蛋白尿が認められた。
【０２２０】
（実施例３）
外部対照コホートの自然歴
外部対照コホートを立ち上げ、患者データが、年齢およびエキソンスキッピングを受け入れられることによって特徴付けられたなら、対照コホート内での比較を行った。図２に、前向きに定義した（prospectively  defined）フィルタによるマッチさせた外部対照群の導出過程を示す。７歳未満で、エキソンスキッピングを受け入れられる患者（ｎ＝１７）は、最初に、２４か月まで歩行能力が向上し、次いで、３６か月まで、６ＭＷＴ距離をベースラインより上で維持した。しかし、７歳またはそれより年長で、エキソンスキッピングを受け入れられる患者（ｎ＝５０）は、３６か月かけて、６ＭＷＴ距離が有意に落ち込んだ。７歳より若年の患者と７歳またはそれより年長の患者の間には、統計的に有意な１９４ｍの差（ｐ＜０．００１）があった（図３）。
【０２２１】
このことは、外部対照コホートの、任意の遺伝子型を有する患者での傾向に注目すると、さらに明白である。７歳より若年の患者（ｎ＝２５）は、最初に、２４か月まで歩行能力が向上し、３６か月まで、６ＭＷＴ距離をベースラインより上で維持したのに対し、７歳またはそれより年長の患者（ｎ＝９１）は、３６か月まで、６ＭＷＴ距離が有意に落ち込んだ。年齢群間の差は、統計的に有意な１６７ｍ（ｐ＜０．００１）であった（図４）。これらのデータから、７歳またはそれより年長の患者では、より若年の患者に比べて、歩行がはるかに急速に低下することが示される。
【０２２２】
年齢群間の差の比較のほかに、７歳またはそれより年長の患者において、ＤＭＤを引き起こす変異間の比較も行った。図５に示されるとおり、エキソン５１スキッピングを受け入れられる変異を有する患者は、全般にエキソンスキッピングを受け入れられる変異を有する患者または任意の変異を有するＤＭＤ患者に比べて、３６か月にかけての６ＭＷＴ距離の減少がより大きかった。このデータは、エキソン５１変異を有する患者が、他のいずれかの遺伝子型より急速に低下することを示している。
【０２２３】
（実施例４）
機能的転帰
歩行能力の進行性の喪失は、ＤＭＤの普遍的な証であり、ほとんどの患者が、７または８歳までに機能に支障をきたし、１０〜１４歳までに車いすに頼るようになる。これと一致して、マッチさせた外部対照患者からのデータは、３６か月かけての歩行能力の低下を示し、最終的には、およそ２５０メートルの喪失となる。著しく対照的に、エテプリルセン処置患者は、試験期間にかけて安定した歩行距離を維持した（図６）。６ＭＷＴ距離を、ベースラインからのパーセント変化によって分析しても、エテプリルセン処置患者とマッチさせた外部対照コホートにおける患者との間の差は明白であった。外部対照患者では、（３６か月目に）−７４％の低下が認められたのに対し、エテプリルセン処置患者では、４２か月の時点で−４２％の低下しか認められなかった。プラセボ−遅延エテプリルセン処置患者を除外したとき（ｎ＝８）、処置４８か月の時点で、−４３％の低下が認められた（図７）。図７に示されるとおり、エテプリルセン処置によって、思いがけなく、１６８週目〜１９２週目（４２か月〜４８か月）の間の患者の歩行は安定し、これは、以下で記載されるとおり、安定した肺機能およびジストロフィン発現が継続したこととも関連付けられた。
【０２２４】
３６か月にわたる累積的な歩行喪失に注目すると、エテプリルセン処置の利益は、さらに明白となった。マッチさせた外部対照コホートでは、１３人のうち６人の患者が歩行を失ったのに対し、エテプリルセンコホートでは、１２人のうち２人の患者しか歩行を喪失しない（図８）。全体として、マッチさせた外部対照コホートの４６．２％が歩行を喪失し、エテプリルセンコホートでは１６．７％だけが歩行を喪失した。また、上で指摘したとおり、１０／１２人のエテプリルセン処置患者は、処置１９２週間の時点で歩行可能であった。
【０２２５】
（実施例５）
マッチさせた外部対照コホートと比較した有効性
１８０週間後、エテプリルセン処置患者は、免疫組織化学によって決定するとおり、ジストロフィン陽性線維の量が、マッチさせた外部対照患者に比べて有意に多かった。それぞれ盲検で行った４人の独立した病理学者によって、エテプリルセン処置患者において、統計的に有意なより高い百分率のジストロフィン陽性線維（ｐ＜０．００１）が見出された（図９）。
【０２２６】
（実施例６）
肺機能
最大吸気圧および呼気圧（ＭＩＰおよびＭＥＰ）ならびに努力肺活量（ＦＶＣ）によって測定される、ベースラインから１９２週目までの呼吸筋機能を、両方のコホートにおいて決定した（図１０）。エテプリルセン処置患者は、試験期間にわたって、ＭＩＰ、ＭＥＰ、およびＦＶＣのすべてにおいて、わずかな低下を維持するか、またはわずかな低下のみ示した。しかし、マッチさせた外部対照患者は、３種のすべての測定値において、経時的に一様な低下を示した。これは、エテプリルセンが、肺機能の喪失を一定期間にわたって防止しうることを示している。
【０２２７】
（実施例７）
機能的転帰の延長測定
エテプリルセン処置患者の歩行能力を、２１６週間の時点でさらに評価し、実施例４で実施したとおりに外部対照被験体と比較した。表２に、６ＭＷＤとしてメートルで表示する、エテプリルセン処置コホートにおける２１６週間の時点の６ＭＷＴの結果を示す。表３に、マッチさせた外部対照コホートにおける２１６週の時点の６ＭＷＴの結果を示す。
【０２２８】
【表２】
2018529715.tif 000006
【０２２９】
【表３】
2018529715.tif 000007
【０２３０】
エテプリルセン処置コホートとマッチさせた外部対照コホートにおける６ＭＷＴの結果を比較し、統計的有意差があるか分析した。実施例４に記載したデータと一致して、エテプリルセン処置コホートとマッチさせた外部対照コホートの間には、表４に要約するＭＭＲＭ（反復測定の混合モデル（ｍｉｘｅｄ  ｍｏｄｅｌ  ｆｏｒ  ｒｅｐｅａｔｅｄ  ｍｅａｓｕｒｅｍｅｎｔ））およびＡＮＣＯＶＡ（共分散分析）によって決定されるとおり、ベースラインからの平均変化に有意差があった。ＭＭＲＭ法については、エテプリルセン処置コホートにおける１２人全員の患者およびマッチさせた外部対照コホートからの１３人全員の患者からのデータを使用した。ＡＮＣＯＶＡ法については、エテプリルセン処置コホートにおける１２人全員の患者およびマッチさせた外部コホートからの（欠側データのある患者を除外した）１１人の患者からのデータを使用した。
【０２３１】
【表４】
2018529715.tif 000008
【０２３２】
さらに、図１２に示されるとおり、エテプリルセン処置患者コホートをマッチさせた外部対照コホートと比べたベースラインからの平均変化の差は、３年の時点の１５１メートルから４年の時点の１６２メートルに増大した。これらのデータは、エテプリルセン処置によって、ＤＭＤ患者における疾患の進行が時間とともに緩慢になることのさらなる証拠を提供する。
【０２３３】
２１６週間にわたる累積的な歩行喪失に注目すると、エテプリルセン処置の利益は、さらに明白となった。マッチさせた外部対照コホートでは、１３人のうち１０人の患者が歩行を喪失したのに対し、エテプリルセンコホートでは、１２人のうち２人の患者しか歩行を喪失しなかった（図１１）。１９２週間の時点で歩行可能であったエテプリルセン処置患者の１０人全員が、２１６週間の時点で歩行できるままであった。全体として、マッチさせた外部対照コホートの８９．７％が歩行を喪失し、エテプリルセンコホートでは１６．７％だけが歩行を喪失した。各コホートにおける歩行可能でない患者の百分率を時期によって示す図１３を参照されたい。歩行を喪失する年齢中央値は、マッチさせた外部対照コホートでは１２．８歳であったのに対し、エテプリルセン処置コホートにおける歩行喪失年齢は、推定できなかった。このデータによって、エテプリルセン処置患者が、マッチさせた外部対照患者より、統計的に有意な形で良好な成績を示したことがさらに裏付けられた。
【０２３４】
（実施例８）
独力で仰臥から起き上がる能力を失っている患者における有効性
一部の文献において、ＤＭＤ患者における、独力で床から起き上がる能力の喪失と、その後の翌年内の歩行喪失との間の関連が示唆されている。以下の表５に示すとおり、４人のエテプリルセン処置患者は、１〜３年目に、外部支援なしで起き上がる能力を失った。しかし、仰臥から起き上がる能力の喪失にもかかわらず、エテプリルセンで処置されたこれらの患者は、４年目の時点で歩行可能なままである。
【０２３５】
【表５】
2018529715.tif 000009
【０２３６】
これらのデータは、エテプリルセン処置によって、独力で仰臥から起き上がる能力を失っている患者でも、６ＭＷＴにより測定したとき歩行能力が保たれることを示している。
【０２３７】
（実施例９）
エテプリルセンとステロイド使用の強度
ステロイドの使用は、ＤＭＤ患者における疾患の進行に影響を与えることが示されている。重要なこととして、エテプリルセン処置患者、ならびにすべての外部対照が、登録前に、安定した用量のステロイドを少なくとも６か月続けており、試験の間終始ステロイドを続けたままであった。
【０２３８】
デフラザコートおよびプレドニゾンが、エテプリルセンおよび外部対照患者によって等しい割合で使用されていた。図１４は、デフラザコートまたはプレドニゾンを継続的または間欠的なスケジュールで受けている患者の数を示す。各ステロイドレジメン内に、平均推奨ステロイド用量に対するパーセントの計算値を示す。外部対照群が実際に受けた用量のＣＤＣ／ＴＲＥＡＴ−ＮＭＤガイドラインによって確立された標準推奨用量に対する百分率は、エテプリルセン処置患者におけるそれ（７５〜７９％の範囲）より高かった（８８〜１００％の範囲）。
【０２３９】
（実施例１０）
Ｎｏｒｔｈ  Ｓｔａｒ  Ａｍｂｕｌａｔｏｒｙ  Ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ（ＮＳＡＡ）スコアの減少したエテプリルセン患者において保たれた歩行
上述の６ＭＷＴ結果と同様に、エテプリルセン処置患者は、処置後２年および３年の時点で、ＮＳＡＡスコアの減少率がより緩慢になったことが示され、結果として、外部対照群コホートに比べて、３年の時点で２．６ポイントの差が生じた。この結果は、日常生活の１つまたは複数の活動が保たれたことを表す。ＮＳＡＡ閾値を下回った、エテプリルセン処置群における３年目の２人の患者（００３および００５）は、１年で歩行喪失が予見されると予想されたが［Ricottiら（２０１５年）、J  Neurol  Neurosurg  Psychiatry
、０：１〜７頁］、それにもかかわらず、両者とも、４年目で（それぞれ、１４３および１９２メートルの）歩行を維持した。以下の表６を参照されたい。
【０２４０】
【表６】
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【０２４１】
本明細書において引用される全ての刊行物および特許出願は、それぞれの個々の刊行物または特許出願が特におよび個々に参照により組み込まれていることが示されるかのように参照により本明細書に組み込まれている。
【０２４２】
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【図１】
2018529715.tif 000011
【図２】
2018529715.tif 000012
【図３】
2018529715.tif 000013
【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０Ａ】
2018529715.tif 000020
【図１０Ｂ】
2018529715.tif 000021
【図１０Ｃ】
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【図１０Ｄ】
2018529715.tif 000023
【図１１】
2018529715.tif 000024
【図１２】
2018529715.tif 000025
【図１３】
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【図１４】
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【配列表】
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【手続補正書】
【提出日】平成30年5月29日(2018.5.29)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
エキソン５１スキッピングを受け入れられるデュシェンヌ型筋ジストロフィー（ＤＭＤ）遺伝子変異を有する、処置を必要とするＤＭＤ患者を、疾患の進行を遅らせることにより処置するための組成物であって、該組成物は、エテプリルセンを含み、該組成物は、該患者に、３０ｍｇ／ｋｇのエテプリルセンの用量で、毎週、１６８週間より長い期間静脈内投与されて、６分間歩行試験（６ＭＷＴ）により測定したとき、該患者における疾患の進行が遅れるようにされることを特徴とする、組成物。
【請求項２】
エキソン５１スキッピングを受け入れられるデュシェンヌ型筋ジストロフィー（ＤＭＤ）遺伝子変異を有する、歩行維持または歩行喪失の低減を必要とするＤＭＤ患者において、歩行を維持させる、または歩行喪失を低減するための組成物であって、該組成物は、エテプリルセンを含み、該組成物は、該患者に、３０ｍｇ／ｋｇのエテプリルセンの用量で、毎週、１６８週間より長い期間静脈内投与され、それによって、該患者において、６分間歩行試験（６ＭＷＴ）により測定したとき、ベースラインと比較して、歩行が維持される、または、歩行喪失が低減されることを特徴とする、組成物。
【請求項３】
エキソン５１スキッピングを受け入れられるデュシェンヌ型筋ジストロフィー（ＤＭＤ）遺伝子変異を有する、肺機能の維持または肺機能の喪失の低減を必要とするＤＭＤ患者において、肺機能を維持させる、または肺機能の喪失を低減するための組成物であって、該組成物は、エテプリルセンを含み、該組成物は、該患者に、３０ｍｇ／ｋｇのエテプリルセンの用量で、毎週、１６８週間より長い期間静脈内投与され、それによって、該患者において、ベースラインと比較して、肺機能が維持される、または肺機能の喪失が低減されることを特徴とする、組成物。
【請求項４】
エキソン５１スキッピングを受け入れられるデュシェンヌ型筋ジストロフィー（ＤＭＤ）遺伝子変異を有する、ｍＲＮＡリーディングフレームを回復させてジストロフィンタンパク質産生を誘導することを必要とするＤＭＤ患者において、ｍＲＮＡリーディングフレームを回復させてジストロフィンタンパク質産生を誘導するための組成物であって、該組成物は、エテプリルセンを含み、該組成物は、該患者に、３０ｍｇ／ｋｇのエテプリルセンの用量で、毎週、１６８週間より長い期間静脈内投与され、それによって、該患者において該ｍＲＮＡリーディングフレームが回復されてジストロフィンタンパク質産生が誘導されることを特徴とする、組成物。
【請求項５】
エキソン５１スキッピングを受け入れられるデュシェンヌ型筋ジストロフィー（ＤＭＤ）遺伝子変異を有する、処置を必要とするＤＭＤ患者を、疾患の進行を遅らせることにより処置するための組成物であって、該組成物は、エテプリルセンを含み、該組成物は、該患者に、３０ｍｇ／ｋｇのエテプリルセンの用量で、毎週静脈内投与されて、６分間歩行試験（６ＭＷＴ）により測定したとき、該患者における疾患の進行が遅れるようにされることを特徴とし、ここで、該患者は、エテプリルセンによる処置より前に、独力で仰臥から起き上がる能力を失っている、組成物。
【請求項６】
エキソン５１スキッピングを受け入れられるデュシェンヌ型筋ジストロフィー（ＤＭＤ）遺伝子変異を有する、処置を必要とするＤＭＤ患者を、疾患の進行を遅らせることにより処置するための組成物であって、該組成物は、エテプリルセンを含み、該組成物は、該患者に、３０ｍｇ／ｋｇのエテプリルセンの用量で、毎週静脈内投与して、６分間歩行試験（６ＭＷＴ）により測定したとき、該患者における疾患の進行が遅れるようにされることを特徴とし、ここで、該患者は、エテプリルセンによる処置の期間中に、独力で仰臥から起き上がる能力を失う、組成物。
【請求項７】
エキソン５１スキッピングを受け入れられるデュシェンヌ型筋ジストロフィー（ＤＭＤ）遺伝子変異を有する、歩行の維持または歩行喪失の低減を必要とするＤＭＤ患者において、歩行を維持させる、または歩行喪失を低減するための組成物であって、該組成物は、エテプリルセンを含み、該組成物は、該患者に、３０ｍｇ／ｋｇのエテプリルセンの用量で、毎週静脈内投与され、それによって、該患者において、６分間歩行試験（６ＭＷＴ）により測定したとき、ベースラインと比較して、歩行が維持される、または、歩行喪失が低減されることを特徴とし、ここで、該患者は、エテプリルセンによる処置より前に、独力で仰臥から起き上がる能力を失っている、組成物。
【請求項８】
エキソン５１スキッピングを受け入れられるデュシェンヌ型筋ジストロフィー（ＤＭＤ）遺伝子変異を有する、歩行の維持または歩行喪失の低減を必要とするＤＭＤ患者において、歩行を維持させる、または歩行喪失を低減するための組成物であって、該組成物は、エテプリルセンを含み、該組成物は、該患者に、３０ｍｇ／ｋｇのエテプリルセンの用量で、毎週静脈内投与され、それによって、該患者において、６分間歩行試験（６ＭＷＴ）により測定したとき、ベースラインと比較して、歩行が維持される、または、歩行喪失が低減されることを特徴とし、ここで、該患者は、エテプリルセンによる処置の期間中に、独力で仰臥から起き上がる能力を失う、組成物。
【請求項９】
エキソン５１スキッピングを受け入れられるデュシェンヌ型筋ジストロフィー（ＤＭＤ）遺伝子変異を有する、肺機能の維持または肺機能の喪失の低減を必要とするＤＭＤ患者において、肺機能を維持させる、または肺機能の喪失を低減するための組成物であって、該組成物は、エテプリルセンを含み、該組成物は、該患者に、３０ｍｇ／ｋｇのエテプリルセンの用量で、毎週静脈内投与され、それによって、該患者において、ベースラインと比較して、肺機能が維持される、または肺機能の喪失が低減されることを特徴とし、ここで、該患者は、エテプリルセンによる処置より前に、独力で仰臥から起き上がる能力を失っている、組成物。
【請求項１０】
エキソン５１スキッピングを受け入れられるデュシェンヌ型筋ジストロフィー（ＤＭＤ）遺伝子変異を有する、肺機能の維持または肺機能の喪失の低減を必要とするＤＭＤ患者において、肺機能を維持させる、または肺機能の喪失を低減するための組成物であって、該組成物は、エテプリルセンを含み、該組成物は、該患者に、３０ｍｇ／ｋｇのエテプリルセンの用量で、毎週静脈内投与され、それによって、該患者において、ベースラインと比較して、肺機能が維持される、または肺機能の喪失が低減されることを特徴とし、ここで、該患者は、エテプリルセンによる処置の期間中に、独力で仰臥から起き上がる能力を失う、組成物。
【請求項１１】
エキソン５１スキッピングを受け入れられるデュシェンヌ型筋ジストロフィー（ＤＭＤ）遺伝子変異を有する、ｍＲＮＡリーディングフレームを回復させてジストロフィンタンパク質産生を誘導することを必要とするＤＭＤ患者において、ｍＲＮＡリーディングフレームを回復させてジストロフィンタンパク質産生を誘導するための組成物であって、該組成物は、エテプリルセンを含み、該組成物は、該患者に、３０ｍｇ／ｋｇのエテプリルセンの用量で、毎週静脈内投与され、それによって、該患者において該ｍＲＮＡリーディングフレームが回復されてジストロフィンタンパク質産生が誘導されることを特徴とし、ここで、該患者は、エテプリルセンによる処置より前に、独力で仰臥から起き上がる能力を失っている、組成物。
【請求項１２】
エキソン５１スキッピングを受け入れられるデュシェンヌ型筋ジストロフィー（ＤＭＤ）遺伝子変異を有する、ｍＲＮＡリーディングフレームを回復させてジストロフィンタンパク質産生を誘導することを必要とするＤＭＤ患者において、ｍＲＮＡリーディングフレームを回復させてジストロフィンタンパク質産生を誘導するための組成物であって、該組成物は、エテプリルセンを含み、該組成物は、該患者に、３０ｍｇ／ｋｇのエテプリルセンの用量で、毎週静脈内投与され、それによって、該患者において該ｍＲＮＡリーディングフレームが回復されてジストロフィンタンパク質産生が誘導されることを特徴とし、ここで、該患者は、エテプリルセンによる処置の期間中に、独力で仰臥から起き上がる能力を失う、組成物。
【請求項１３】
エキソン５１をスキッピングすることにより補正することができる、デュシェンヌ型筋ジストロフィー（ＤＭＤ）遺伝子の変異を有する、ＤＭＤを有する患者において、ｍＲＮＡリーディングフレームを回復させてジストロフィンタンパク質産生を誘導する際に使用するための、エテプリルセンを含む組成物であって、該組成物は、該患者に、３０ｍｇ／ｋｇの１回の静脈内用量のエテプリルセンで週１回投与され、それによって、少なくとも２１６週間、該ｍＲＮＡリーディングフレームが回復されてジストロフィンタンパク質産生が誘導されることを特徴とする、組成物。
【請求項１４】
前記組成物が、少なくとも１８０週間、前記患者に毎週静脈内投与されることを特徴とする、請求項１から１２のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１５】
前記組成物が、少なくとも１９２週間、前記患者に毎週静脈内投与されることを特徴とする、請求項１から１２のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１６】
前記組成物が、１９２週間より長い期間、前記患者に毎週静脈内投与されることを特徴とする、請求項１から１２のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１７】
前記組成物が、少なくとも２１６週間、前記患者に毎週静脈内投与されることを特徴とする、請求項１から１２のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１８】
肺機能が、最大呼気圧（ＭＥＰ）、最大吸気圧（ＭＩＰ）、または努力肺活量（ＦＶＣ）によって測定される、請求項３、９および１０のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１９】
前記ジストロフィンタンパク質産生が、逆転写ポリメラーゼ連鎖反応（ＲＴ−ＰＣＲ）、ウエスタンブロット分析、または免疫組織化学（ＩＨＣ）によって測定される、請求項４および１１から１３のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項２０】
前記患者が、２１６週間の処置の時点で、少なくとも５５メートル、少なくとも１００メートル、少なくとも２００メートル、少なくとも３００メートル、または少なくとも４００メートルの６分間歩行距離を維持する、請求項１６および１７のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項２１】
前記組成物が、静脈内注入として３５〜６０分かけて投与されることを特徴とする、請求項１から１２および１４から１７のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項２２】
前記組成物を投与する前に、前記患者が、前記ＤＭＤ遺伝子においてエキソン５１スキッピングを受け入れられる変異を有することを確認される、請求項１から１２および１４から１７のいずれか一項に記載の組成物。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００９６
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００９６】
本発明の別の態様は、エキソン５１をスキッピングすることにより補正することができる、デュシェンヌ型筋ジストロフィー（ＤＭＤ）遺伝子の変異を有する、ＤＭＤを有する患者において、ｍＲＮＡリーディングフレームを回復させてジストロフィンタンパク質産生を誘導する際に使用するためのエテプリルセンであって、ここで、該処置は、該患者に、３０ｍｇ／ｋｇの１回の静脈内用量のエテプリルセンを週１回投与し、それによって、少なくとも２１６週間、該ｍＲＮＡリーディングフレームを回復させてジストロフィンタンパク質産生を誘導することを含む、エテプリルセンに関する。
（項目１）
エキソン５１スキッピングを受け入れられるデュシェンヌ型筋ジストロフィー（ＤＭＤ）遺伝子変異を有する、処置を必要とするＤＭＤ患者を、疾患の進行を遅らせることにより処置する方法であって、該患者に、３０ｍｇ／ｋｇの用量のエテプリルセンを、毎週、１６８週間より長い期間静脈内投与して、６分間歩行試験（６ＭＷＴ）により測定したとき、該患者における疾患の進行が遅れるようにし、それによって該患者を処置することを含む方法。
（項目２）
エキソン５１スキッピングを受け入れられるデュシェンヌ型筋ジストロフィー（ＤＭＤ）遺伝子変異を有する、歩行維持または歩行喪失の低減を必要とするＤＭＤ患者において、歩行を維持させる、または歩行喪失を低減する方法であって、該患者に、３０ｍｇ／ｋｇの用量のエテプリルセンを、毎週、１６８週間より長い期間静脈内投与し、それによって、該患者において、６分間歩行試験（６ＭＷＴ）により測定したとき、ベースラインと比較して、歩行を維持させる、または、歩行喪失を低減することを含む方法。
（項目３）
エキソン５１スキッピングを受け入れられるデュシェンヌ型筋ジストロフィー（ＤＭＤ）遺伝子変異を有する、肺機能の維持または肺機能の喪失の低減を必要とするＤＭＤ患者において、肺機能を維持させる、または肺機能の喪失を低減する方法であって、該患者に、３０ｍｇ／ｋｇの用量のエテプリルセンを、毎週、１６８週間より長い期間静脈内投与し、それによって、該患者において、ベースラインと比較して、肺機能を維持させる、または肺機能の喪失を低減することを含む方法。
（項目４）
エキソン５１スキッピングを受け入れられるデュシェンヌ型筋ジストロフィー（ＤＭＤ）遺伝子変異を有する、ｍＲＮＡリーディングフレームを回復させてジストロフィンタンパク質産生を誘導することを必要とするＤＭＤ患者において、ｍＲＮＡリーディングフレームを回復させてジストロフィンタンパク質産生を誘導する方法であって、該患者に、３０ｍｇ／ｋｇの用量のエテプリルセンを、毎週、１６８週間より長い期間静脈内投与し、それによって、該患者において該ｍＲＮＡリーディングフレームを回復させてジストロフィンタンパク質産生を誘導することを含む方法。
（項目５）
エキソン５１スキッピングを受け入れられるデュシェンヌ型筋ジストロフィー（ＤＭＤ）遺伝子変異を有する、処置を必要とするＤＭＤ患者を、疾患の進行を遅らせることにより処置する方法であって、該患者に、３０ｍｇ／ｋｇの用量のエテプリルセンを、毎週静脈内投与して、６分間歩行試験（６ＭＷＴ）により測定したとき、該患者における疾患の進行が遅れるようにし、それによって該患者を処置することを含み、ここで、該患者は、エテプリルセンによる処置より前に、独力で仰臥から起き上がる能力を失っている、方法。
（項目６）
エキソン５１スキッピングを受け入れられるデュシェンヌ型筋ジストロフィー（ＤＭＤ）遺伝子変異を有する、処置を必要とするＤＭＤ患者を、疾患の進行を遅らせることにより処置する方法であって、該患者に、３０ｍｇ／ｋｇの用量のエテプリルセンを、毎週静脈内投与して、６分間歩行試験（６ＭＷＴ）により測定したとき、該患者における疾患の進行が遅れるようにし、それによって該患者を処置することを含み、ここで、該患者は、エテプリルセンによる処置の期間中に、独力で仰臥から起き上がる能力を失う、方法。
（項目７）
エキソン５１スキッピングを受け入れられるデュシェンヌ型筋ジストロフィー（ＤＭＤ）遺伝子変異を有する、歩行の維持または歩行喪失の低減を必要とするＤＭＤ患者において、歩行を維持させる、または歩行喪失を低減する方法であって、該患者に、３０ｍｇ／ｋｇの用量のエテプリルセンを、毎週静脈内投与し、それによって、該患者において、６
分間歩行試験（６ＭＷＴ）により測定したとき、ベースラインと比較して、歩行を維持させる、または、歩行喪失を低減することを含み、ここで、該患者は、エテプリルセンによる処置より前に、独力で仰臥から起き上がる能力を失っている、方法。
（項目８）
エキソン５１スキッピングを受け入れられるデュシェンヌ型筋ジストロフィー（ＤＭＤ）遺伝子変異を有する、歩行の維持または歩行喪失の低減を必要とするＤＭＤ患者において、歩行を維持させる、または歩行喪失を低減する方法であって、該患者に、３０ｍｇ／ｋｇの用量のエテプリルセンを、毎週静脈内投与し、それによって、該患者において、６分間歩行試験（６ＭＷＴ）により測定したとき、ベースラインと比較して、歩行を維持させる、または、歩行喪失を低減することを含み、ここで、該患者は、エテプリルセンによる処置の期間中に、独力で仰臥から起き上がる能力を失う、方法。
（項目９）
エキソン５１スキッピングを受け入れられるデュシェンヌ型筋ジストロフィー（ＤＭＤ）遺伝子変異を有する、肺機能の維持または肺機能の喪失の低減を必要とするＤＭＤ患者において、肺機能を維持させる、または肺機能の喪失を低減する方法であって、該患者に、３０ｍｇ／ｋｇの用量のエテプリルセンを、毎週静脈内投与し、それによって、該患者において、ベースラインと比較して、肺機能を維持させる、または肺機能の喪失を低減することを含み、ここで、該患者は、エテプリルセンによる処置より前に、独力で仰臥から起き上がる能力を失っている、方法。
（項目１０）
エキソン５１スキッピングを受け入れられるデュシェンヌ型筋ジストロフィー（ＤＭＤ）遺伝子変異を有する、肺機能の維持または肺機能の喪失の低減を必要とするＤＭＤ患者において、肺機能を維持させる、または肺機能の喪失を低減する方法であって、該患者に、３０ｍｇ／ｋｇの用量のエテプリルセンを、毎週静脈内投与し、それによって、該患者において、ベースラインと比較して、肺機能を維持させる、または肺機能の喪失を低減することを含み、ここで、該患者は、エテプリルセンによる処置の期間中に、独力で仰臥から起き上がる能力を失う、方法。
（項目１１）
エキソン５１スキッピングを受け入れられるデュシェンヌ型筋ジストロフィー（ＤＭＤ）遺伝子変異を有する、ｍＲＮＡリーディングフレームを回復させてジストロフィンタンパク質産生を誘導することを必要とするＤＭＤ患者において、ｍＲＮＡリーディングフレームを回復させてジストロフィンタンパク質産生を誘導する方法であって、該患者に、３０ｍｇ／ｋｇの用量のエテプリルセンを、毎週静脈内投与し、それによって、該患者において該ｍＲＮＡリーディングフレームを回復させてジストロフィンタンパク質産生を誘導することを含み、ここで、該患者は、エテプリルセンによる処置より前に、独力で仰臥から起き上がる能力を失っている、方法。
（項目１２）
エキソン５１スキッピングを受け入れられるデュシェンヌ型筋ジストロフィー（ＤＭＤ）遺伝子変異を有する、ｍＲＮＡリーディングフレームを回復させてジストロフィンタンパク質産生を誘導することを必要とするＤＭＤ患者において、ｍＲＮＡリーディングフレームを回復させてジストロフィンタンパク質産生を誘導する方法であって、該患者に、３０ｍｇ／ｋｇの用量のエテプリルセンを、毎週静脈内投与し、それによって、該患者において該ｍＲＮＡリーディングフレームを回復させてジストロフィンタンパク質産生を誘導することを含み、ここで、該患者は、エテプリルセンによる処置の期間中に、独力で仰臥から起き上がる能力を失う、方法。
（項目１３）
エキソン５１をスキッピングすることにより補正することができる、デュシェンヌ型筋ジストロフィー（ＤＭＤ）遺伝子の変異を有する、ＤＭＤを処置することを必要とする患者におけるＤＭＤの処置において使用するためのエテプリルセンであって、ここで、該処置は、該患者に、３０ｍｇ／ｋｇの１回の静脈内用量のエテプリルセンを週１回投与し、
それによって、６分間歩行試験（６ＭＷＴ）により決定したとき、疾患の進行を１６８週間にわたって遅らせることを含む、エテプリルセン。
（項目１４）
エキソン５１をスキッピングすることにより補正することができる、デュシェンヌ型筋ジストロフィー（ＤＭＤ）遺伝子の変異を有する、ＤＭＤを有する患者において、歩行を維持させる、または歩行喪失を低減する際に使用するためのエテプリルセンであって、ここで、該処置は、該患者に、３０ｍｇ／ｋｇの１回の静脈内用量のエテプリルセンを週１回投与し、それによって、６分間歩行試験（６ＭＷＴ）により決定したとき、１６８週間にわたって、ベースラインと比較して、歩行を維持させる、または歩行喪失を低減することを含む、エテプリルセン。
（項目１５）
エキソン５１をスキッピングすることにより補正することができる、デュシェンヌ型筋ジストロフィー（ＤＭＤ）遺伝子の変異を有する、ＤＭＤを有する患者において、肺機能を維持させる、または肺機能の喪失を低減する際に使用するためのエテプリルセンであって、ここで、該処置は、該患者に、３０ｍｇ／ｋｇの１回の静脈内用量のエテプリルセンを週１回投与し、それによって、１６８週間にわたって、ベースラインと比較して、肺機能を維持させる、または肺機能の喪失を低減することを含む、エテプリルセン。
（項目１６）
エキソン５１をスキッピングすることにより補正することができる、デュシェンヌ型筋ジストロフィー（ＤＭＤ）遺伝子の変異を有する、ＤＭＤを有する患者において、ｍＲＮＡリーディングフレームを回復させてジストロフィンタンパク質産生を誘導する際に使用するためのエテプリルセンであって、ここで、該処置は、該患者に、３０ｍｇ／ｋｇの１回の静脈内用量のエテプリルセンを週１回投与し、それによって、１６８週間にわたって、該ｍＲＮＡリーディングフレームを回復させてジストロフィンタンパク質産生を誘導することを含む、エテプリルセン。
（項目１７）
エキソン５１をスキッピングすることにより補正することができる、デュシェンヌ型筋ジストロフィー（ＤＭＤ）遺伝子の変異を有する、ＤＭＤを有する患者において、ｍＲＮＡリーディングフレームを回復させてジストロフィンタンパク質産生を誘導する際に使用するためのエテプリルセンであって、ここで、該処置は、該患者に、３０ｍｇ／ｋｇの１回の静脈内用量のエテプリルセンを週１回投与し、それによって、少なくとも２１６週間、該ｍＲＮＡリーディングフレームを回復させてジストロフィンタンパク質産生を誘導することを含む、エテプリルセン。
（項目１８）
エテプリルセンが、少なくとも１８０週間、前記患者に毎週静脈内投与される、項目１から１２のいずれか一項に記載の方法。
（項目１９）
エテプリルセンが、少なくとも１９２週間、前記患者に毎週静脈内投与される、項目１から１２のいずれか一項に記載の方法。
（項目２０）
エテプリルセンが、１９２週間より長い期間、前記患者に毎週静脈内投与される、項目１から１２のいずれか一項に記載の方法。
（項目２１）
エテプリルセンが、少なくとも２１６週間、前記患者に毎週静脈内投与される、項目１から１２のいずれか一項に記載の方法。
（項目２２）
肺機能が、最大呼気圧（ＭＥＰ）、最大吸気圧（ＭＩＰ）、または努力肺活量（ＦＶＣ）によって測定される、項目３、９、１０のいずれか一項に記載の方法、または項目１５に記載の使用。
（項目２３）
前記ジストロフィンタンパク質産生が、逆転写ポリメラーゼ連鎖反応（ＲＴ−ＰＣＲ）、ウエスタンブロット分析、または免疫組織化学（ＩＨＣ）によって測定される、項目４、１１、１２のいずれか一項に記載の方法、または項目１６もしくは１７に記載の使用。
（項目２４）
前記患者が、２１６週間の処置の時点で、少なくとも５５メートル、少なくとも１００メートル、少なくとも２００メートル、少なくとも３００メートル、または少なくとも４００メートルの６分間歩行距離を維持する、項目２０または２１のいずれか一項に記載の方法。
（項目２５）
エテプリルセンが、静脈内注入として３５〜６０分かけて投与される、項目１から１２または１８から２１のいずれか一項に記載の方法。
（項目２６）
エテプリルセンを投与する前に、前記患者が、前記ＤＭＤ遺伝子においてエキソン５１スキッピングを受け入れられる変異を有することを確認することをさらに含む、項目１から１２または１８から２１のいずれか一項に記載の方法。
【国際調査報告】
2018529715.tif 000028
2018529715.tif 000029