(57)【要約】  本発明は、視神経症を処置するためのマスティックガムの単離画分の治療的使用に関する。より詳細には本発明は、マスティックガムの単離画分を含む組成物を使用して視神経症状態を処置する方法に関する。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
視神経症状態を処置するための、マスティックガムの単離画分および医薬的に許容し得る担体を含む組成物の使用であって、前記マスティックガムの単離画分が、少なくとも１種の極性有機溶媒および少なくとも１種の非極性有機溶媒に可溶性であることを特徴とし、前記画分が、前記極性有機溶媒に可溶性であるが前記非極性有機溶媒に不溶性である化合物を実質的に含まない、使用。
【請求項２】
前記視神経症状態が、外傷性神経症、虚血性神経症、放射線視神経症（ＲＯＮ）、緑内障、視神経炎、圧迫性視神経症、浸潤性視神経症、ミトコンドリア病による視神経症、栄養性視神経症、中毒性視神経症、遺伝性視神経症およびそれらの組み合わせから選択される、請求項１に記載の使用。
【請求項３】
前記虚血性視神経症（ｉｓｃｈｅｍｉｃ  ｎｅｕｒｏｐａｔｈｙ  ｏｐｔｉｃ）が、非動脈性虚血性神経症（ＮＡＩＯＮ）、前部虚血性視神経症（ＡＩＯＮ）および後部虚血性視神経症から選択される、請求項２に記載の使用。
【請求項４】
前記視神経症状態が、蓄積症の結果である、請求項１に記載の使用。
【請求項５】
前記蓄積症が、視神経中のリポタンパク質性物質の沈着を起こしている、請求項４に記載の使用。
【請求項６】
前記組成物が、非経口経路によって投与される、請求項１に記載の使用。
【請求項７】
前記非経口経路が、静脈内、筋肉内、皮下、皮内、腹腔内、動脈内、子宮内、尿道内、心臓内、脳内、脳室内、腎臓内、肝臓内、腱内、骨内、眼内、および髄腔内からなる群から選択される、請求項６に記載の使用。
【請求項８】
前記マスティックガムの単離画分が、ポリマー性ミルセンを実質的に含まない、請求項１に記載の使用。
【請求項９】
前記少なくとも１種の極性有機溶媒が、アルコール、エーテル、エステル、アミド、アルデヒド、ケトン、ニトリルおよびそれらの組み合わせからなる群から選択される、請求項１に記載の使用。
【請求項１０】
前記極性有機溶媒が、メタノール、エタノール、プロパノール、イソプロパノール、１−ブタノール、２−ブタノール、ｓｅｃ−ブタノール、ｔ−ブタノール、１−ペンタノール、２−ペンタノール、３−ペンタノール、ネオペンタノール、３−メチル−１−ブタノール、２−メチル−１−ブタノール、３−メチル−２−ブタノール、２−メチル−２−ブタノール、エチレングリコール、エチレングリコールモノメチルエーテル、ジエチルエーテル、メチルエチルエーテル、エチルプロピルエーテル、メチルプロピルエーテル、１，２−ジメトキシエタン、テトラヒドロフラン、ジヒドロフラン、フラン、ピラン、ジヒドロピラン、テトラヒドロピラン、酢酸メチル、酢酸エチル、酢酸プロピル、アセトアルデヒド、ギ酸メチル、ギ酸エチル、プロピオン酸エチル、プロピオン酸メチル、ジクロロメタン、クロロホルム、ジメチルホルムアミド、アセトアミド、ジメチルアセトアミド、Ｎ−メチルピロリドン、アセトン、エチルメチルケトン、ジエチルケトン、アセトニトリル、プロピオニトリル、およびそれらの組み合わせからなる群から選択される、請求項９に記載の使用。
【請求項１１】
前記少なくとも１種の非極性溶媒が、それぞれが１種または複数のハロゲンによって場合により置換された、非環式または環式飽和または不飽和脂肪族炭化水素および芳香族炭化水素、ならびにそれらの組み合わせからなる群から選択される、請求項１に記載の使用。
【請求項１２】
前記非極性有機溶媒が、Ｃ５〜Ｃ１０アルカン、Ｃ５〜Ｃ１０シクロアルカン、Ｃ６〜Ｃ１４芳香族炭化水素およびＣ７〜Ｃ１４ペルフルオロアルカン、ならびにそれらの組み合わせからなる群から選択される、請求項１１に記載の使用。
【請求項１３】
前記非極性有機溶媒が、ペンタン、ヘキサン、ヘプタン、オクタン、ノナン、デカン、シクロペンタン、シクロヘキサン、シクロヘプタン、ベンゼン、トルエン、キシレン、ならびにそれらの異性体および混合物からなる群から選択される、請求項１１に記載の使用。
【請求項１４】
前記単離画分が、
（ａ）マスティックガムを極性有機溶媒で処理するステップと、
（ｂ）前記極性有機溶媒に可溶性の画分を単離するステップと、
（ｃ）場合により前記極性有機溶媒を除去するステップと、
（ｄ）ステップ（ｂ）または（ｃ）で得られた前記可溶性画分を非極性有機溶媒で処理するステップと、
（ｅ）前記非極性有機溶媒に可溶性の画分を単離するステップと、
（ｆ）場合により前記非極性有機溶媒を除去するステップと、
を含み、
ステップ（ｄ）〜（ｆ）をステップ（ａ）〜（ｃ）より前に実行し得る、工程によって得られる、請求項１に記載の使用。
【請求項１５】
前記工程が、ステップ（ｃ）または（ｆ）において得られた前記画分をサイズ分画するステップをさらに含む、請求項１４に記載の使用。
【請求項１６】
ステップ（ｃ）および（ｆ）のいずれかまたは両方が、ロータリーエバポレーション、高真空の適用、およびそれらの組み合わせからなる群から選択される手段によって前記溶媒を除去することを含む、請求項１４に記載の使用。
【請求項１７】
前記極性有機溶媒が、エタノールを含み、前記非極性有機溶媒が、ヘキサンを含む、請求項１に記載の使用。
【請求項１８】
前記工程が、ステップ（ａ）〜（ｃ）および／またはステップ（ｄ）〜（ｆ）を複数サイクル繰り返すことをさらに含む、請求項１１に記載の使用。
【請求項１９】
前記マスティックガムが、Ｐ．レンティスクス、Ｐ．アトランティカ、Ｐ．パレスティナ、Ｐ．サポルタエ、Ｐ．テレビンツス、Ｐ．ベラおよびＰ．インテゲリマからなる群から選択されるピスタキア属の種から得られる、請求項１に記載の使用。
【請求項２０】
前記担体が、少なくとも１種の油、少なくとも１種のワックスおよびそれらの組み合わせからなる群から選択される疎水性担体である、請求項１に記載の使用。
【請求項２１】
前記少なくとも１種の油が、アーモンドオイル、キャノーラ油、ココナッツオイル、コーン油、綿実油、グレープシードオイル、オリーブ油、ピーナッツ油、サフラン油、ゴマ油、大豆油およびそれらの組み合わせからなる群から選択される、請求項２０に記載の使用。
【請求項２２】
視神経症状態を処置する方法であって、少なくとも１種の極性有機溶媒および少なくとも１種の非極性有機溶媒に可溶性であることを特徴とし、前記極性有機溶媒に可溶性であるが前記非極性有機溶媒に不溶性である化合物を実質的に含まない、マスティックガムの単離画分の治療有効量と、医薬的に許容し得る担体とを、必要とする対象に投与し、それによって前記視神経症状態を処置することを含む、方法。
【請求項２３】
前記視神経症状態が、外傷性神経症、虚血性神経症、放射線視神経症（ＲＯＮ）、緑内障、視神経炎、圧迫性視神経症、浸潤性視神経症、ミトコンドリア病による視神経症、栄養性視神経症、中毒性視神経症、遺伝性視神経症およびそれらの組み合わせから選択される、請求項２２に記載の方法。
【請求項２４】
前記虚血性視神経症が、非動脈性虚血性神経症（ＮＡＩＯＮ）、前部虚血性視神経症（ＡＩＯＮ）および後部虚血性視神経症から選択される、請求項２３に記載の方法。
【請求項２５】
前記視神経症状態が、蓄積症の結果である、請求項２２に記載の方法。
【請求項２６】
前記蓄積症が、視神経中のリポタンパク質性物質の沈着を起こす、請求項２５に記載の方法。
【請求項２７】
前記組成物が、静脈内、筋肉内、皮下、皮内、腹腔内、動脈内、子宮内、尿道内、心臓内、脳内、脳室内、腎臓内、肝臓内、腱内、骨内、眼内、および髄腔内から選択される非経口経路によって投与される、請求項２２に記載の方法。
【請求項２８】
前記担体が、少なくとも１種の油、少なくとも１種のワックスおよびそれらの組み合わせからなる群から選択される疎水性担体である、請求項２２に記載の方法。
【請求項２９】
前記少なくとも１種の油が、アーモンドオイル、キャノーラ油、ココナッツオイル、コーン油、綿実油、グレープシードオイル、オリーブ油、ピーナッツ油、サフラン油、ゴマ油、大豆油およびそれらの組み合わせからなる群から選択される、請求項２８に記載の方法。
【請求項３０】
前記少なくとも１種の極性有機溶媒が、アルコール、エーテル、エステル、アミド、アルデヒド、ケトン、ニトリルおよびそれらの組み合わせからなる群から選択される、請求項２２に記載の方法。
【請求項３１】
前記少なくとも１種の非極性溶媒が、それぞれが１種または複数のハロゲンによって場合により置換された、非環式または環式飽和または不飽和脂肪族炭化水素および芳香族炭化水素、ならびにそれらの組み合わせからなる群から選択される、請求項２２に記載の方法。
【請求項３２】
前記マスティックガムの単離画分が、ポリマー性ミルセンを実質的に含まない、請求項２２に記載の方法。
【請求項３３】
前記単離画分が、
（ａ）マスティックガムを極性有機溶媒で処理するステップと、
（ｂ）前記極性有機溶媒に可溶性の画分を単離するステップと、
（ｃ）場合により前記極性有機溶媒を除去するステップと、
（ｄ）ステップ（ｂ）または（ｃ）で得られた前記可溶性画分を非極性有機溶媒で処理するステップと、
（ｅ）前記非極性有機溶媒に可溶性の画分を単離するステップと、
（ｆ）場合により前記非極性有機溶媒を除去するステップと、
を含み、
ステップ（ｄ）〜（ｆ）をステップ（ａ）〜（ｃ）より前に実行し得る、工程によって得られる、請求項２２に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
発明の分野
本発明は、視神経虚血および緑内障などの視神経症を処置するためのマスティックガムの単離画分の治療的使用に関する。より詳細には本発明は、マスティックガムの単離画分を含む組成物を使用してそのような視神経症状態を処置する方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
発明の背景
ガムマスティックまたはマスティックガムとしても知られるマスティックは、ウルシ科の一種であるピスタキア・レンティスクスの滲出液として得られる樹木樹脂である。マスティックは、胃痛、消化不良および消化性潰瘍などの胃腸障害など、様々な病気を処置するために古代地中海世界で用いられた。十二指腸潰瘍のヒト患者、ならびに誘導された胃潰瘍および十二指腸潰瘍を有する実験ラットへのマスティックの経口投与が、治療効果を有することが開示された（Ａｌ−Ｈａｂｂａｌ  ｅｔ  ａｌ  （１９８４）  Ｃｌｉｎ  Ｅｘｐ  Ｐｈａｒｍａｃｏｐ  Ｐｈｙｓｉｏ  １１（５）：５４１−４；  Ｓａｉｄ  ｅｔ  ａｌ  （１９８６）  Ｊ  Ｅｔｈｎｏｐｈａｒｍａｃｏｌ  １５（３）：２７１−８）。
【０００３】
米国特許出願公開第２００５／０２３８７４０号には、マスティック樹脂から抽出された特定の画分が、抗微生物および抗細胞増殖活性を示すことが開示されている。
【０００４】
前述の特許出願の発明者らの一部によって権限を与えられたＰａｒａｓｃｈｏｓら（２００７）は、粗マスティックの極性溶媒抽出と、そこからの不溶性ポリマーであるポリ−β−ミルセンの除去と、によって調製されるポリマー以外の全マスティック抽出物（ＴＭＥＷＰ）、ならびにＴＭＥＷＰから分離された酸性および中性分画の調製を開示している（Ｐａｒａｓｃｈｏｓ  ｅｔ  ａｌ  （２００７）  Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂ  Ａｇｅｎｔｓ  Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ  ５１（２）：５５１−５５９）。
【０００５】
欧州特許出願第１５２０５８５号には、癌を処置または予防する薬剤を製造するための、ピスタキア属の植物から得られた生成物の使用が開示されている。
【０００６】
国際特許出願公開第ＷＯ２００５／１１２９６７号には、非酸性脂肪族炭化水素、少なくとも２５％の水溶性非酸性脂肪族炭化水素を含有する水溶液、またはそれらの組み合わせから選択される溶媒にマスティックを懸濁させること、および不溶性画分を除去すること、によって得られる可溶性画分中に見出される抗増殖効果を有する抗癌材料をマスティックから精製することが開示される。
【０００７】
本出願の発明者らの一部に対する国際特許出願公開第２０１３／１８６７６６号は、ヒノキの植物材料から得られた単離画分を含む組成物および配合剤、線維性の病気および神経変性障害を処置するためのそれらの使用に関する。
【０００８】
本出願の発明者らの一部に対する国際特許出願公開第２０１０／１００６５０号は、ガムマスティックの治療的使用、その中に見出されるポリマー性ミルセンをはじめとする化合物、およびポリマー性ミルセン含む組成物を使用する神経機能障害を処置する方法に関する。
【０００９】
本出願の発明者らの一部に対する国際特許出願公開第２０１０／１００６５１号は、マスティックガムから単離された組成物、それらの治療的使用、ポリマー性ミルセンの単離画分を含む組成物、および活性ポリマーの生物活性を保持する配合剤に関する。
【００１０】
中国特許第１０３６５６２９０号には、特定の重量比によって調製される、ジオウ、シカダ（ｃｉｃａｄａ）、シシウド、アストラガルス、ブライト、乳光、ミルラ、マルベリー、ゴマノハグサおよび他の薬物をはじめとする化合物の組み合わせで主に構成された視神経萎縮症の処置および調製の方法が開示されている。本開示の薬物は、視神経萎縮症を急速に、効果的に、そして毒性副作用を有さずに処置するためのＳｈｕｇａｎ視力（Ｓｈｕｇａｎ  ｅｙｅｓｉｇｈｔ）および解毒作用を有し、Ｒｕｎ肝機能（Ｒｕｎ  ｌｉｖｅｒ  ｆｕｎｃｔｉｏｎ）を鎮静化する。
【００１１】
視神経は、網膜から発生する神経細胞の軸索を含み、視神経乳頭で目を離れて視覚野に進み、そこで目から入った情報を映像に処理する。視神経症は、任意の原因による視神経への損傷を指す。これらの神経細胞の損傷および死は、視神経症の特徴につながる。主な症状は、視野欠損と、罹患した目の中に微妙に脱色された部分が現れることである。医療検査では、視神経頭が、検眼鏡によって視覚化され得る。乳頭の褪色が、長年の視神経症の特徴である。多くの症例では、目の一方だけが罹患し、患者が身体検査まで色覚の欠損を認識していない場合がある。
【００１２】
視神経症は、虚血性視神経症、視神経炎、圧迫性視神経症、浸潤性視神経症、外傷性視神経症、ミトコンドリア異常による視神経症、栄養障害性視神経症、中毒性視神経症、遺伝性視神経症など、様々な原因によって起こり得る。視神経症で現在用いられている処置は非常に少なく、ほとんどが特殊なタイプの視神経症に限定的な効果を有する。
【００１３】
緑内障は、世界中の盲目の主因の１つである。種々の異なるタイプの緑内障が存在し、その全てが網膜神経節細胞（ＲＧＣ）損失という同じ病理生理学的作用を共有する（Ｎｅｕｒｏｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ  ｉｎ  ｇｌａｕｃｏｍａ，  Ｋａｕｓｈｉｋ  Ｓ，  Ｐａｎｄａｖ  ＳＳ，  Ｒａｍ  ＪＪ  Ｐｏｓｔｇｒａｄ  Ｍｅｄ．  ２００３  Ｊａｎ−Ｍａｒ；  ４９（１）：９０−５）。 最も一般的形態の緑内障は、原発開放隅角緑内障（ＰＯＡＧ）、原発閉塞隅角緑内障（ＰＣＡＧ）、原発先天性緑内障（ＰＣＧ）である。緑内障は、他の病理生理学的状態の続発的合併症としても起こり得る。続発性緑内障の例が、色素性、ステロイド誘発性、落屑、隅角後退、水晶体融解および血管性の緑内障である。この疾患の一般的メカニズムは、ＲＧＣへのストレスを誘導して最終的にＲＧＣの緩徐な損失に至らしめる眼内圧（ＩＯＰ）の上昇である。ＲＧＣの損失を遅延または停止させる治療的アプローチが、緑内障における視覚維持にとって潜在的に有益であることが認められている。実際、現在利用可能な処置は、薬物または外科的介入のいずれかによる眼内圧（ＩＯＰ）低下に照準を合わせている(Ｃｕｒｒｅｎｔ  ａｎｄ  ｅｍｅｒｇｉｎｇ  ｍｅｄｉｃａｌ  ｔｈｅｒａｐｉｅｓ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｏｆ  ｇｌａｕｃｏｍａ，  Ｂａｇｎｉｓ  Ａ，  Ｐａｐａｄｉａ  Ｍ，  Ｓｃｏｔｔｏ  Ｒ，  Ｔｒａｖｅｒｓｏ  ＣＥ，  Ｅｘｐｅｒｔ  Ｏｐｉｎ  Ｅｍｅｒｇ  Ｄｒｕｇｓ．  ２０１１  Ｊｕｎ；  １６（２）：２９３−３０７）。加えて、神経変性疾患の治療は、細胞生存メカニズムを通してＲＧＣ損失を停止させる可能性を有し得る（Ｇｌａｕｃｏｍａ  ２．０：  ｎｅｕｒｏｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ，  ｎｅｕｒｏｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ，  ｎｅｕｒｏｅｎｈａｎｃｅｍｅｎｔ．，  Ｃｈａｎｇ  ＥＥ，  Ｇｏｌｄｂｅｒｇ  ＪＬ，  Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌｏｇｙ．  ２０１２  Ｍａｙ；  １１９（５）：９７９−８６）。しかしこれらの介入は、患者の間で必ずしも緑内障および視野欠損の進行を停止させるわけではない。
【００１４】
したがって、様々な原因から生じる視神経症の状態を処置する上で有用かつ効果的である組成物が、当該技術分野で求められている。当該技術分野は、マスティックガムの単離画分が視神経症状態を処置するのに用いられ得るという任意の教示を提供していない。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１５】
発明の概要
本発明は、視神経の神経再生性を有する組成物、および視神経虚血状態、緑内障などの視神経症状態を処置するために該組成物を使用する方法を提供する。より具体的にはマスティックガムから抽出された単離画分を含む組成物は、視神経の虚血および／または外傷から生じるような関連状態を処置し得ることが開示される。
【課題を解決するための手段】
【００１６】
幾つかの実施形態において、本発明は一部が、マスティックガムの単離画分がそのような高い視神経再生の生物活性を示す、という予想外の発見に基づいている。本発明はさらに、該単離画分中のポリマー性ミルセンが欠如する（または非検出可能レベルを有する）としても、そのような画分が視神経へ、そして視神経症状態への高い有益活性を示すという予想外の発見に基づいている。
【００１７】
マスティックガムの抽出物は、ミルセンとして知られるモノテルペン化合物のポリマー形態を含むことが知られている。したがって、検出可能なレベルのポリマー性ミルセンを含まないマスティックガムの単離画分が、外傷性神経症、虚血性視神経症、緑内障などの視神経症関連障害を処置するための医薬組成物中の有効成分として用いられ得ることが、本明細書においてさらに開示される。
【００１８】
幾つかの実施形態によれば、視神経症状態を処置するための、マスティックガムの単離画分および医薬的に許容し得る担体を含む組成物の使用が提供される。幾つかの実施形態によれば、マスティックガムの単離画分および医薬的に許容し得る担体を含む組成物を、必要とする対象に投与することを含む、視神経症状態を処置する方法が提供される。
【００１９】
さらなる実施形態によれば、視神経症を処置する薬剤を調製するための、マスティックガムの単離画分の使用が提供される。
【００２０】
別の態様によれば、視神経症を処置する際に使用するためのマスティックガムの単離画分が提供される。
【００２１】
幾つかの実施形態によれば、視神経症を処置する際に使用するための、マスティックガムの単離画分および医薬的に許容し得る担体を含む医薬組成物が提供される。
【００２２】
様々な実施形態において、該組成物は、非経口経路によって投与され得る。幾つかの実施形態によれば、該投与経路は、非経口注射を介したものである。様々な実施形態において、投与のステップは、静脈内（ｉ．ｖ．）、筋肉内、皮下（ｓｃ）、皮内、腹腔内、動脈内、脳内、脳室内、骨内、眼内、硝子体内、および髄腔内からなる群から選択される非経口経路によって実施される。
【００２３】
幾つかの実施形態において、該視神経症状態は、視神経が損傷された任意の状態を含む。幾つかの実施形態において、該視神経症状態は、非限定的に外傷性神経症（視神経への任意の型の外傷から生じ得る）；虚血性神経症（例えば、非動脈性虚血性神経症（ＮＡＩＯＮ）、前部虚血性視神経症（ＡＩＯＮ）、後部虚血性視神経症）；放射線視神経症（ＲＯＮ）；緑内障、視神経炎、圧迫性視神経症、浸潤性視神経症、ミトコンドリア病による視神経症、栄養性視神経症、中毒性視神経症、遺伝性視神経症など、またはそれらの組み合わせのような状態から選択され得る。各可能性は、別の実施形態である。
【００２４】
幾つかの実施形態において、該視神経症状態は、ＮＡＩＯＮである。幾つかの実施形態において、該視神経症状態は、緑内障である。
【００２５】
幾つかの実施形態において、該視神経症状態は、視神経中のリポタンパク質性物質の沈着の結果である視神経の損傷によるか、または該損傷に関連する。
【００２６】
幾つかの実施形態において、該視神経症状態は、視神経中のリポタンパク質性物質の沈着の結果である視神経の損傷によるか、または該損傷に関連し、該リポタンパク質性物質の沈着は、蓄積症の結果である。
【００２７】
幾つかの実施形態において、該視神経症状態は、視神経中のリポタンパク質性物質の沈着の結果である視神経の損傷によるか、または該損傷に関連し、該リポタンパク質性物質の沈着は、蓄積症の結果であり、該リポタンパク質性物質は、リポフスチンである。幾つかの実施形態において、該リポタンパク質性物質の沈着は、ブルッフ膜とＲＰＥ層の間の網膜下層にある。
【００２８】
幾つかの実施形態において、該マスティックガムの単離画分は、少なくとも１種の極性有機溶媒および少なくとも１種の非極性有機溶媒に可溶性であることを特徴とする。特別な実施形態において、該マスティックガムの単離画分はさらに、前記極性有機溶媒に可溶性であるが前記非極性有機溶媒に不溶である化合物を実質的に含まないことを特徴とする。
【００２９】
幾つかの実施形態において、該マスティックガムの単離画分は、少なくとも１種の極性有機溶媒および少なくとも１種の非極性有機溶媒の両方に可溶性であることを特徴とし、前記極性有機溶媒に可溶性であるが前記非極性有機溶媒に不溶である化合物を実質的に含まない。
【００３０】
幾つかの実施形態によれば、該マスティックガムの単離画分は、マスティックガムを少なくとも１種の極性有機溶媒で処理するステップと、前記極性有機溶媒に可溶性の画分を単離するステップと、を含む工程によって得られる。特別な実施形態において、該マスティックガムの単離画分は、マスティックガムを少なくとも１種の非極性有機溶媒で処理するステップと、前記非極性有機溶媒に可溶性の画分を単離するステップと、を含む工程によって得られる。
【００３１】
幾つかの模範的実施形態において、該マスティックガムの単離画分は、
（ａ）マスティックガムを極性有機溶媒で処理するステップと、
（ｂ）前記極性有機溶媒に可溶性の画分を単離するステップと、
（ｃ）場合により前記極性有機溶媒を除去するステップと、
（ｄ）ステップ（ｂ）または（ｃ）で得られた可溶性画分を非極性有機溶媒で処理するステップと、
（ｅ）前記非極性有機溶媒に可溶性の画分を単離するステップと、
（ｆ）場合により前記非極性有機溶媒を除去するステップと、
を含み、ステップ（ｄ）〜（ｆ）をステップ（ａ）〜（ｃ）より前に実行し得る、工程によって得られる。
【００３２】
幾つかの実施形態において、該マスティックガムの単離画分を得る工程は、ステップ（ｃ）またはステップ（ｆ）に従って得られた可溶性画分のサイズ分画をさらに含む。特別な実施形態において、該サイズ分画は、サイズ排除クロマトグラフィーを含む。特別な実施形態において、ステップ（ｃ）または（ｆ）は、ロータリーエバポレーション、高真空の適用、およびそれらの組み合わせからなる群から選択される手段によって溶媒を除去することを含む。特別な実施形態において、ステップ（ａ）〜（ｃ）は、ステップ（ｄ）〜（ｆ）の前に実施される。特別な実施形態において、ステップ（ｄ）〜（ｆ）は、ステップ（ａ）〜（ｃ）の前に実施される。特別な実施形態において、該極性有機溶媒は、エタノールを含み、該非極性有機溶媒は、ヘキサンを含む。特別な実施形態において、ステップ（ａ）〜（ｃ）およびステップ（ｄ）〜（ｆ）はそれぞれ独立して、複数サイクル実施される。
【００３３】
幾つかの実施形態において、本発明の方法において有用な抽出物を得るのに適した極性有機溶媒としては、アルコール、エーテル、エステル、アミド、アルデヒド、ケトン、ニトリルおよびそれらの組み合わせのような極性溶媒が挙げられるが、これらに限定されない。極性有機溶媒の特別な例は、メタノール、エタノール、プロパノール、イソプロパノール、１−ブタノール、２−ブタノール、ｓｅｃ−ブタノール、ｔ−ブタノール、１−ペンタノール、２−ペンタノール、３−ペンタノール、ネオペンタノール、３−メチル−１−ブタノール、２−メチル−１−ブタノール、３−メチル−２−ブタノール、２−メチル−２−ブタノール、エチレングリコール、エチレングリコールモノメチルエーテル、ジエチルエーテル、メチルエチルエーテル、エチルプロピルエーテル、メチルプロピルエーテル、１，２−ジメトキシエタン、テトラヒドロフラン、ジヒドロフラン、フラン、ピラン、ジヒドロピラン、テトラヒドロピラン、酢酸メチル、酢酸エチル、酢酸プロピル、アセトアルデヒド、ギ酸メチル、ギ酸エチル、プロピオン酸エチル、プロピオン酸メチル、ジクロロメタン、クロロホルム、ジメチルホルムアミド、アセトアミド、ジメチルアセトアミド、Ｎ−メチルピロリドン、アセトン、エチルメチルケトン、ジエチルケトン、アセトニトリル、プロピオニトリル、およびそれらの組み合わせである。各可能性は、別の実施形態である。
【００３４】
幾つかの実施形態において、該単離画分の調製方法における使用に適した非極性溶媒としては、非環式または環式飽和または不飽和脂肪族炭化水素および芳香族炭化水素、例えばＣ５〜Ｃ１０アルカン、Ｃ５〜Ｃ１０シクロアルカン、Ｃ６〜Ｃ１４芳香族炭化水素、およびそれらの組み合わせのような溶媒を挙げることができるが、これらに限定されない。前述のそれぞれは、１種または複数のハロゲンによって場合により置換され得る（例えば、Ｃ７〜Ｃ１４ペルフルオロアルカン）。非極性有機溶媒の特別な例は、ペンタン、ヘキサン、ヘプタン、オクタン、ノナン、デカン、シクロペンタン、シクロヘキサン、シクロヘプタン、ベンゼン、トルエン、キシレン、ならびにそれらの異性体および混合物である。各可能性は、別の実施形態である。
【００３５】
幾つかの実施形態において、該マスティックガムは、Ｐ．レンティスクス、Ｐ．アトランティカ、Ｐ．パレスティナ、Ｐ．サポルタエ（Ｐ．ｓａｐｏｒｔａｅ）、Ｐ．テレビンツス、Ｐ．ベラおよびＰ．インテゲリマからなる群から選択されるピスタキア属の種から得られる。各可能性は、別の実施形態である。
【００３６】
幾つかの実施形態において、該組成物は、該組成物の総重量に基づき、約０．０１〜約２５％（ｗ／ｗ）のマスティックガムの単離画分を含み得る。幾つかの実施形態において、該組成物は、該組成物の総重量に基づき、約０．０１〜約１２％（ｗ／ｗ）のマスティックガムの単離画分を含む。幾つかの実施形態において、該組成物は、該組成物の総重量に基づき、約１〜約１０％のマスティックガムの単離画分を含む。幾つかの実施形態において、該組成物は、該組成物の総重量に基づき、約１〜約５％のマスティックガムの単離画分を含む。幾つかの実施形態において、該組成物は、該組成物の総重量に基づき、約１〜約３％のマスティックガムの単離画分を含む。幾つかの実施形態において、該組成物は、該組成物の総重量に基づき、約１０％のマスティックガムの単離画分を含む。幾つかの実施形態において、該組成物は、該組成物の総重量に基づき、約５％のマスティックガムの単離画分を含む。幾つかの実施形態において、該組成物は、約０．０１％、０．０５％、０．１％、０．５％、１％、２％、３％、４％、６％、７％、８％、９％、１１％、１２％、１３％、１４％、１５％、１６％、１７％、１８％、または１９％（ｗ／ｗ）のマスティックガムの単離画分を含む。
【００３７】
幾つかの実施形態において、該マスティックガムの単離画分は、検出可能な量のポリマー性ミルセンを含まない。幾つかの実施形態において、該マスティックガムの単離画分は、ポリマー性ミルセンを実質的に含まない。幾つかの実施形態において、該マスティックガムの単離画分は、非検出可能な量のポリマー性ミルセンを含む。
【００３８】
特別な実施形態において、該組成物は、約１０％（ｗ／ｗ）未満の、より好ましくは約５％（ｗ／ｗ）未満の、極性有機溶媒に可溶性で非極性有機溶媒に不溶性のテルペン化合物を含む。特別な実施形態において、該組成物は、極性有機溶媒に可溶性で非極性有機溶媒に不溶性のテルペン化合物を実質的に含まない。幾つかの実施形態において、該組成物は、約１０％（ｗ／ｗ）未満含む。幾つかの実施形態において、該組成物は、約５％（ｗ／ｗ）のモノマーテルペン化合物を含む。特別な実施形態において、該組成物は、ミルセンモノマーを実質的に含まない。
【００３９】
本明細書で参照されるテルペン化合物は、モノテルペン、ジテルペン、およびセスキテルペンとして様々に分類されるものをはじめとする、モノマーおよびオリゴマー形態のテルペン化合物を包含する。特別な実施形態において、該組成物は、約１０％（ｗ／ｗ）未満の、より好ましくは約５％（ｗ／ｗ）未満の、β−ミルセン、α−ミルセン、シス−α−ミルセン、ジヒドロミルセン、リモネン、α−ピネン、β−ピネンおよびそれらの組み合わせからなる群から選択されるモノテルペン化合物を含む。
【００４０】
幾つかの実施形態において、該ポリマー性ミルセンの単離画分は、植物由来であり、該組成物は、少なくとも１種の極性有機溶媒に可溶性で少なくとも１種の非極性有機溶媒に不溶性であるテルペン化合物を実質的に含まない。
【００４１】
特別な実施形態において、該医薬的に許容し得る担体は、疎水性担体を含む。幾つかの実施形態において、該医薬的に許容し得る疎水性担体は、少なくとも１種の油を含む。特別な実施形態において、該油は、鉱油、植物油およびそれらの組み合わせからなる群から選択される。特別な実施形態において、該植物油は、アーモンドオイル、キャノーラ油、ココナッツオイル、コーン油、綿実油、グレープシードオイル、オリーブ油、ピーナッツ油、サフラン油、ゴマ油、大豆油およびそれらの組み合わせからなる群から選択される。特別な実施形態において、該鉱油は、軽鉱油である。特別な実施形態において、該油は、綿実油である。特別な実施形態において、該疎水性担体は、少なくとも１種のワックスを含む。特別な実施形態において、該疎水性担体は、少なくとも１種の油と少なくとも１種のワックスとの組み合わせを含む。
【００４２】
幾つかの実施形態において、該組成物は、カプセル、錠剤、リポソーム、坐剤、懸濁液、軟膏、クリーム、ローション、溶液、エマルジョン、フィルム、セメント、粉末、ニカワ、エアロゾルおよびスプレーから選択される形態である。
【００４３】
幾つかの実施形態において、該組成物は、医薬組成物である。
【００４４】
幾つかの実施形態において、該対象は、ヒトである。幾つかの実施形態において、該対象は、非ヒト哺乳動物である。
【００４５】
幾つかの実施形態によれば、視神経症状態を処置するための、マスティックガムの単離画分および医薬的に許容し得る担体を含む組成物の使用であって、前記マスティックガムの単離画分が、少なくとも１種の極性有機溶媒および少なくとも１種の非極性有機溶媒に可溶性であることを特徴とし、前記画分が前記極性有機溶媒に可溶性であるが前記非極性有機溶媒に不溶性である化合物を実質的に含まない、使用が提供される。
【００４６】
幾つかの実施形態において、該視神経症状態は、外傷性神経症、虚血性神経症、放射線視神経症（ＲＯＮ）、緑内障、視神経炎、圧迫性視神経症、浸潤性視神経症、ミトコンドリア病による視神経症、栄養性視神経症、中毒性視神経症、遺伝性視神経症およびそれらの組み合わせから選択され得る。幾つかの実施形態において、該虚血性視神経症（ｉｓｃｈｅｍｉｃ  ｎｅｕｒｏｐａｔｈｙ  ｏｐｔｉｃ）は、非動脈性虚血性神経症（ＮＡＩＯＮ）、前部虚血性視神経症（ＡＩＯＮ）および後部虚血性視神経症から選択され得る。各可能性は、別の実施形態である。
【００４７】
幾つかの実施形態において、該視神経症状態は、蓄積症の結果であり得るか、またはそれに誘発され得る。幾つかの実施形態において、該蓄積症は、視神経中のリポタンパク質性物質の沈着を起こし得る。幾つかの実施形態において、視神経中に蓄積されたリポタンパク質性物質は、リポフスチン（ｌｉｐｏｆｕｃｓｉｎ）である。幾つかの実施形態において、該蓄積症は、鉱物性物質の沈着を起こし得る。幾つかの実施形態において、視神経中に蓄積された鉱物性物質は、カルシウムおよび／または鉄を含有する。
【００４８】
幾つかの実施形態において、該組成物は、非経口経路によって投与され得る。幾つかの実施形態において、該非経口経路は、静脈内、筋肉内、皮下、皮内、腹腔内、動脈内、子宮内、尿道内、心臓内、脳内、脳室内、腎臓内、肝臓内、腱内、骨内、眼内、および髄腔内からなる群から選択され得る。各可能性は、別の実施形態である。幾つかの実施形態において、該組成物は、皮下投与によって投与される。
【００４９】
幾つかの実施形態において、該マスティックガムの単離画分は、ポリマー性ミルセンを実質的に含み得ない。
【００５０】
幾つかの実施形態において、該少なくとも１種の極性有機溶媒は、アルコール、エーテル、エステル、アミド、アルデヒド、ケトン、ニトリルおよびそれらの組み合わせからなる群から選択され得る。幾つかの実施形態において、該極性有機溶媒は、メタノール、エタノール、プロパノール、イソプロパノール、１−ブタノール、２−ブタノール、ｓｅｃ−ブタノール、ｔ−ブタノール、１−ペンタノール、２−ペンタノール、３−ペンタノール、ネオペンタノール、３−メチル−１−ブタノール、２−メチル−１−ブタノール、３−メチル−２−ブタノール、２−メチル−２−ブタノール、エチレングリコール、エチレングリコールモノメチルエーテル、ジエチルエーテル、メチルエチルエーテル、エチルプロピルエーテル、メチルプロピルエーテル、１，２−ジメトキシエタン、テトラヒドロフラン、ジヒドロフラン、フラン、ピラン、ジヒドロピラン、テトラヒドロピラン、酢酸メチル、酢酸エチル、酢酸プロピル、アセトアルデヒド、ギ酸メチル、ギ酸エチル、プロピオン酸エチル、プロピオン酸メチル、ジクロロメタン、クロロホルム、ジメチルホルムアミド、アセトアミド、ジメチルアセトアミド、Ｎ−メチルピロリドン、アセトン、エチルメチルケトン、ジエチルケトン、アセトニトリル、プロピオニトリル、およびそれらの組み合わせからなる群から選択され得る。各可能性は、別の実施形態である。
【００５１】
幾つかの実施形態において、該少なくとも１種の非極性溶媒は、それぞれが１種または複数のハロゲンによって場合により置換された、非環式または環式飽和または不飽和脂肪族炭化水素および芳香族炭化水素、ならびにそれらの組み合わせからなる群から選択され得る。幾つかの実施形態において、該非極性有機溶媒は、Ｃ５〜Ｃ１０アルカン、Ｃ５〜Ｃ１０シクロアルカン、Ｃ６〜Ｃ１４芳香族炭化水素およびＣ７〜Ｃ１４ペルフルオロアルカン、ならびにそれらの組み合わせからなる群から選択され得る。幾つかの実施形態において、該非極性有機溶媒は、ペンタン、ヘキサン、ヘプタン、オクタン、ノナン、デカン、シクロペンタン、シクロヘキサン、シクロヘプタン、ベンゼン、トルエン、キシレン、ならびにそれらの異性体および混合物からなる群から選択され得る。各可能性は、別の実施形態である。
【００５２】
幾つかの実施形態において、該単離画分は、
（ａ）マスティックガムを極性有機溶媒で処理するステップと、
（ｂ）前記極性有機溶媒に可溶性の画分を単離するステップと、
（ｃ）場合により前記極性有機溶媒を除去するステップと、
（ｄ）ステップ（ｂ）または（ｃ）で得られた該可溶性画分を非極性有機溶媒で処理するステップと、
（ｅ）前記非極性有機溶媒に可溶性の画分を単離するステップと、
（ｆ）場合により前記非極性有機溶媒を除去するステップと、
を含み、ステップ（ｄ）〜（ｆ）をステップ（ａ）〜（ｃ）より前に実行し得る、工程によって得ることができる。
【００５３】
幾つかの実施形態において、該工程は、ステップ（ｃ）または（ｆ）において得られた画分をサイズ分画するステップをさらに含み得る。幾つかの実施形態において、ステップ（ｃ）および（ｆ）のいずれかまたは両方は、ロータリーエバポレーション、高真空の適用、およびそれらの組み合わせからなる群から選択される手段によって溶媒を除去することを含む。幾つかの実施形態において、該工程は、ステップ（ａ）〜（ｃ）および／またはステップ（ｄ）〜（ｆ）を複数サイクル繰り返すことをさらに含み得る。
【００５４】
幾つかの模範的実施形態において、該極性有機溶媒は、エタノールであり得、該非極性有機溶媒は、ヘキサンであり得る。
【００５５】
幾つかの実施形態において、該マスティックガムは、Ｐ．レンティスクス、Ｐ．アトランティカ、Ｐ．パレスティナ、Ｐ．サポルタエ、Ｐ．テレビンツス、Ｐ．ベラおよびＰ．インテゲリマからなる群から選択されるピスタキア属の種から得られる。
【００５６】
幾つかの実施形態において、該担体は、少なくとも１種の油、少なくとも１種のワックスおよびそれらの組み合わせからなる群から選択される疎水性担体である。幾つかの実施形態において、該少なくとも１種の油は、アーモンドオイル、キャノーラ油、ココナッツオイル、コーン油、綿実油、グレープシードオイル、オリーブ油、ピーナッツ油、サフラン油、ゴマ油、大豆油およびそれらの組み合わせからなる群から選択される。
【００５７】
幾つかの実施形態によれば、視神経症状態を処置する方法であって、少なくとも１種の極性有機溶媒および少なくとも１種の非極性有機溶媒に可溶性であることを特徴とし、前記極性有機溶媒に可溶性であるが前記非極性有機溶媒に不溶性である化合物を実質的に含まない、マスティックガムの単離画分の治療有効量と、医薬的に許容し得る担体とを、必要とする対象に投与し、それによって該視神経症状態を処置することを含む、方法が提供される。
【００５８】
本発明の他の目的、特色および利点は、以下の説明および図面から明白となろう。
【図面の簡単な説明】
【００５９】
【図１】幾つかの実施形態による、マスティックガムの単離画分を得る工程におけるステップの略図。
【図２】マスティックガムの単離画分（「ＲＰＨ−２０１」）で処置された対象、またはプラセボで処置された対象における様々な時点（１３週目、２６週目および退薬後のフォローアップ来院時）でのＥＴＤＲＳ文字読み取りのベースラインからの平均増加を示す棒グラフ。
【図３】マスティックガムの単離画分（「ＲＰＨ−２０１」）で処置された対象、またはプラセボ処置対象についての様々な時点（１３週目、２６週目および退薬後のフォローアップ来院時）での測定で、１０文字以上増加した対象の割合を示す棒グラフ。
【図４】初代網膜神経節細胞でＲＰｈ２０１Ａによって誘導された神経保護活性を示す棒グラフ。正常条件（５％血清）中で生育された初代網膜神経節細胞がアポトーシスを有さないことが記録された。血清枯渇条件下では、培養物は有意な量のアポトーシスを実証している。この効果は、ＲＰｈ２０１Ａを培養物に添加することにより、ドープ依存性パターンで救済された。
【図５】Ａ―Ｂ。軸索切断を受けていて、３ヶ月の期間にわたるＲＰｈ２０１Ａ（図５Ａ）またはビヒクル（図５Ｂ）のいずれかで処置された後１ヶ月目のラットから得られた網膜ＲＧＣ細胞の蛍光顕微鏡画像のピクトグラム（ＲＧＣ生存性を示す）。動物殺処分の２４時間前に、ＦＩＴＣコンジュゲートＤｉ−Ａｓｐ（逆行性神経トレーサー）を視神経に挿入した。網膜を分離し、スライドガラスに平坦に載せて、蛍光顕微鏡で視覚化した。倍率２０倍。
【発明を実施するための形態】
【００６０】
幾つかの実施形態によれば、マスティックガムから抽出された単離画分を含む組成物、および視神経症を処置するためのその使用が提供される。
【００６１】
開示された、本明細書に記載のマスティックガムの単離画分が、重度の病気であり罹患した対象の視覚喪失に導き得る視神経症（様々な結果から生じる）を処置する医薬組成物中の有効成分として用いられ得ることが、本明細書に初めて開示される。
【００６２】
定義
本明細書で用いられる用語「マスティック」、「マスティック樹脂」、「ガムマスティック」および「マスティックガム」は、ウルシ科に分類される任意の樹木からの滲出液として得られる樹木樹脂（含油樹脂としても公知）を指すために互換的に用いられる。ピスタキア属の樹木の最も注目すべきピスタキア・レンティスクス  Ｌ．および特に栽培品種のＰ．レンティスクス  Ｌ．ｃｖ．Ｃｈｉａ（ギリシャのキオス島で栽培）は、マスティックが高収量であることで知られる。他の種類としては、Ｐ．レティンスクス  Ｌ．ｖａｒ．エマルギナタ  Ｅｎｇｌ．およびＰ．レティンスクス  Ｌ．ｖａｒ．ラティフォリア・コスが挙げられる。ピスタキアのさらなる種としては、例えばＰ．アトランティカ、Ｐ．パレスティナ、Ｐ．サポルタエ、Ｐ．テレビンサス、Ｐ．ベラおよびＰ．インテゲリマが挙げられる。
【００６３】
本明細書で用いられる用語「ポリマー」は、同じ化学構造の繰り返しサブユニット（モノマーとも称される）を含み、該モノマーが共有結合されている、化合物または混合化合物を指す。ポリマーを形成し得るモノマーの例は、テルペン、例えばミルセンなどのモノテルペンである。ポリマーは、様々な重合度を有し得、したがって様々な鎖長のポリマー形態を包含し得る。ポリマーは、ホモポリマーおよびヘテロポリマー（コポリマーとしても知られる）を包含し、様々な異性体および立体異性体配置を有し得る。
【００６４】
本明細書で用いられる用語「ポリマー性ミルセン」および「ポリミルセン」は互換的に、ミルセンモノマーから形成されたポリマーを指す。ポリマー性ミルセンは、様々な重合度を有するポリマー形態、好ましくは少なくとも６の重合度を有するミルセンポリマーを包含する。本発明は、ポリマー性β−ミルセン（ポリ−β−ミルセン）、ポリマー性α−ミルセン（ポリ−α−ミルセン）、それらのホモポリマー、異種モノマーと直接的もしくは間接的共有結合を有するミルセンモノマーを含むヘテロポリマー（コポリマーとしても知られる）、それらのトランス−およびシス−異性体、それらのＤ−およびＬ−鏡像異性体、またはそれらの組み合わせを包含するが、これらに限定されない。ポリマー性ミルセンは、植物源から、特にマスティックから単離された形態で得ることができ、または化学合成反応の生成物であり得る。
【００６５】
本明細書で用いられる用語「マスティックガムの単離画分」は、少なくとも１種の極性もしくは非極性有機溶媒、またはそれらの組み合わせでのガムマスティックの抽出に従って得られる画分を指す。本発明の単離画分は一般に、極性および非極性有機溶媒の一方または両方に可溶性である。
【００６６】
本明細書で用いられる「テルペン化合物」は、イソプレン含有炭化水素および関連の酸素含有化合物、例えばアルコール、アルデヒドまたはケトン（テルペノイド）を指す。イソプレン単位（ＣＨ２＝Ｃ（ＣＨ３）−ＣＨ＝ＣＨ２）は、そのような化合物の基本的なビルディングブロックである。一般にテルペン炭化水素は、分子式（Ｃ５Ｈ８）ｎを有し、２個、３個、４個のイソプレン単位を有するそれぞれモノテルペン、セスキテルペン、ジテルペンを包含する。テルペンはさらに、非環式または環式として分類され得る。モノテルペンの例としては、ミルセン、リモネン、およびピネンが挙げられ、それらはそれぞれ、非環式、単環式および二環式モノテルペンの例である。セスキテルペンの例としては、ネロリドールおよびファルネソールが挙げられる。ジテルペンの例としては、カフェストールおよびフィトールが挙げられる。
【００６７】
本明細書で用いられる「実質的に含まない」は、指定の物質を一般に３％未満、好ましくは１％未満、最も好ましくは０．５％未満含有する本発明による調製物または医薬組成物を意味する。
【００６８】
本明細書で用いられる「検出可能なレベル」は、指定の物質の約３％を超える量、指定の物質の約１％を超える量、好ましくは指定の物質の約０．５％以下の量、最も好ましくは０．１％以下の量を指す。したがって用語「非検出可能なレベル」は、指定の物質の３％以下の量、指定の物質の１％以下の量、好ましくは０．５％以下の量、最も好ましくは０．１％以下の量を指す。
【００６９】
本明細書で用いられる「治療有効量」は、所望の治療効果を実質的に誘導する、促進する、またはもたらす医薬成分の量を指す。
【００７０】
本明細書で用いられる「医薬的に許容し得る担体」は、配合されるがそれ自体は治療効果を有さず、対象における任意の望ましくない効果もしくは不都合な効果もしくは有害反応を誘発もしくは誘起しない医薬的成分の送達および／または薬物動態特性を増強するために用いられる希釈剤もしくはビヒクルを指す。
【００７１】
本明細書で用いられる「医薬的に許容し得る疎水性担体」は、マスティックガムの単離画分および／またはポリマー性ミルセンを溶解または懸濁する疎水性非極性希釈剤またはビヒクルを指す。
【００７２】
本明細書で用いられる用語「視神経症」および「視神経萎縮症」は、互換的に用いられ得る。該用語は、任意の原因による視神経への損傷を指す。該用語は、虚血性神経症（非動脈性虚血性神経症（ＮＡＩＯＮ）、前部虚血性視神経症（ＡＩＯＮ）、後部虚血性視神経症など）；放射線視神経症（ＲＯＮ）；外傷性神経症、緑内障、視神経炎、圧迫性視神経症、浸潤性視神経症、ミトコンドリア病による視神経症、栄養性視神経症、中毒性視神経症、遺伝性視神経症、蓄積症から生じる損傷などの視神経症、またはそれらの組み合わせから生じるまたはそれに関連する任意の病気または障害をさらに包含する。各可能性は、別の実施形態である。
【００７３】
本明細書で用いられる用語「蓄積症」は、正常または異常な性質の物質、例えば脂質、タンパク質、リポタンパク質、炭水化物などの過剰な蓄積に導く任意のタイプの代謝障害を指す。特に重要なことは、視神経への病的損傷に関連するリポフスチンの蓄積である。
【００７４】
本明細書で指定された数値は、指定された値±１０％と理解されなければならない。
【００７５】
用語「約」は、指定された値±指定された値の１０％を含むことを対象とする。
【００７６】
幾つかの実施形態によれば、本発明は、マスティックガムの単離画分、および視神経症の処置のためのその使用を提供する。該マスティックガムの単離画分は、植物源から、特にマスティックガムから得ることができ、または化学合成反応の生成物であり得る。マスティックガムの単離画分を得ることができる植物種は、ピスタキア属のものであり、Ｐ．レンティスクス、Ｐ．アトランティカ、Ｐ．パレスティナ、Ｐ．サポルタエ、Ｐ．テレビンツス、Ｐ．ベラおよびＰ．インテゲリマからなる群から選択されるピスタキア属の種から選択され得る。
【００７７】
幾つかの実施形態によれば、マスティックガムの単離画分を得るために用いられる方法は、概要として、採取された植物材料、例えばマスティックガムを適切な容器内で適切な溶媒、通常は極性溶媒と混和するようなステップを含む。適切な極性有機溶媒としては、アルコール、エーテル、エステル、アミド、アルデヒド、ケトン、ニトリルおよびそれらの組み合わせのような極性溶媒が挙げられる。極性有機溶媒の特別な例は、メタノール、エタノール、プロパノール、イソプロパノール、１−ブタノール、２−ブタノール、ｓｅｃ−ブタノール、ｔ−ブタノール、１−ペンタノール、２−ペンタノール、３−ペンタノール、ネオペンタノール、３−メチル−１−ブタノール、２−メチル−１−ブタノール、３−メチル−２−ブタノール、２−メチル−２−ブタノール、エチレングリコール、エチレングリコールモノメチルエーテル、ジエチルエーテル、メチルエチルエーテル、エチルプロピルエーテル、メチルプロピルエーテル、１，２−ジメトキシエタン、テトラヒドロフラン、ジヒドロフラン、フラン、ピラン、ジヒドロピラン、テトラヒドロピラン、酢酸メチル、酢酸エチル、酢酸プロピル、アセトアルデヒド、ギ酸メチル、ギ酸エチル、プロピオン酸エチル、プロピオン酸メチル、ジクロロメタン、クロロホルム、ジメチルホルムアミド、アセトアミド、ジメチルアセトアミド、Ｎ−メチルピロリドン、アセトン、エチルメチルケトン、ジエチルケトン、アセトニトリル、プロピオニトリル、およびそれらの組み合わせである。
【００７８】
幾つかの実施形態によれば、該マスティックガムおよび溶媒を、溶媒が大過剰、例えば１０：１〜２０：１になるように混和し得る。混合物は、２、３分〜数時間の範囲内の期間に定期的または連続で撹拌され得る。溶媒は、任意の処理を行わずにデカンテーションすることができ、または場合により混合物を最初に低速、例えば１００〜２０００ｒｐｍの遠心分離に供することができる。不溶性材料を抽出物から回収し、新たな溶媒アリコットを不溶性材料に添加して、極性溶媒の可溶性化合物を可能な限り多量に得るために、抽出および溶解工程を数サイクル繰り返す。最後の溶解ステップの後、極性溶媒可溶性材料を含む抽出物を混和して、極性溶媒を蒸発させて（例えば、当該技術分野で知られる通りロータリーエバポレーションを利用することによる）、極性溶媒可溶性材料を得るが、それは粗抽出または「第一のステップの」抽出と称され得る。
【００７９】
幾つかの実施形態によれば、第一のステップの抽出材料は、非極性有機溶媒と混和されて、１〜２４時間の期間にわたって振とうすることにより抽出することができる。適切な非極性溶媒としては、例えば非環式または環式飽和または不飽和脂肪族炭化水素および芳香族炭化水素、例えばＣ５〜Ｃ１０アルカン、Ｃ５〜Ｃ１０シクロアルカン、Ｃ６〜Ｃ１４芳香族炭化水素、およびそれらの組み合わせが挙げられる。前述のそれぞれは、１種または複数のハロゲンによって場合により置換され得る（例えば、Ｃ７〜Ｃ１４ペルフルオロアルカン）。非極性有機溶媒の特定の例は、ペンタン、ヘキサン、ヘプタン、オクタン、ノナン、デカン、シクロペンタン、シクロヘキサン、シクロヘプタン、ベンゼン、トルエン、キシレン、ならびにそれらの異性体および混合物である。
【００８０】
幾つかの実施形態によれば、非極性溶媒の存在下で不溶性のままであるか、または沈殿する材料を、除去および廃棄することができる。非極性溶媒可溶性画分は、その後、非極性溶媒を蒸発させることにより（例えば、ロータリーエバポレーションによって）得ることができる。この画分は、精製抽出物または「二段階」抽出物と称することができ、極性溶媒および非極性溶媒の両方に可溶性であり、極性溶媒に可溶性で非極性溶媒に不溶性の材料が除去されていることを特徴とするマスティックガムの単離画分に対応する。この特色によって、本発明の単離画分が先行技術のマスティックガム抽出物と識別され、後者は一般に極性溶媒のみに可溶性である非常に様々な化合物を含む。本発明の教示によれば、そのような化合物は、本明細書に開示された単離画分の有益な生物活性を妨害する。
【００８１】
幾つかの実施形態において、二段階抽出物をさらに、例えば高真空処理（例えば、数日までの間０．０１ｍｂａｒ未満）によって乾燥させて、残留溶媒および他の揮発性材料を除去して計量し、適切な非極性有機溶媒または他の担体と混和されて、溶解を実行することができる。得られた画分は、直接使用されるか、または当該技術分野で公知の手段を利用してさらに精製、特徴づけ、および／もしくは分画され得る。
【００８２】
ここで、幾つかの実施形態によるマスティックガムの単離画分を得る工程のステップの略図である図１を参照する。図１に示された通り、ステップ２では、マスティックガムの樹脂が得られる。次にステップ４で、樹脂が極性有機溶媒で抽出される。極性有機溶媒（例えばエタノールなど）を樹脂に添加し、一定期間、場合により時々振とうしながら、インキュベートする（例えば暗室で）。有機極性溶媒（抽出物を含む）を透明な容器に移す。新たな極性有機溶媒を残留する材料に添加して、一定期間インキュベートし、透明な容器（最初の極性溶媒画分を含む）に移す。次にステップ６で、極性有機溶媒を、例えば蒸発により、除去する。ステップ８では、非極性溶媒（例えば、ヘキサンなど）を極性有機溶媒抽出物に一定期間、時々振とうしながら添加して、好ましくは暗室で、インキュベートする。非極性溶媒（抽出物を含む）を透明な容器に移す。新たな非極性溶媒を残留する材料に添加して、一定期間インキュベートし、透明な容器（最初の非極性画分を含む）に移す。次にステップ１０では、非極性溶媒を除去する（例えば、ロータリーエバポレーターでの蒸発により）。次にステップ１２で、油（例えば、綿実油など）を抽出物に添加し得る。添加される油の量は、工程の収率に基づいて決定され得る。幾つかの実施形態において、油は、２０％（ｗ／ｗ）の配合剤を提供するように添加され得る。幾つかの実施形態において、油は、５％（ｗ／ｗ）の配合剤を提供するように添加され得る。ステップ１４では、任意の残留する極性および／または非極性溶媒を除去する（例えば、蒸発による）。場合によりステップ１６で、配合剤を所望の％濃度（ｗ／ｗ）（例えば、５％（ｗ／ｗ））まで希釈し得る。例えば必要量の油の添加によって、希釈を実施し得る。任意のステップ１８では、配合剤をさらにろ過し、例えば０．２ミクロンフィルターを用いた滅菌ろ過により、滅菌し得る。滅菌配合剤をさらに、適切なバイアル／アンプルに充填し、標識し得る。
【００８３】
幾つかの実施形態において、本発明の単離画分は、
（ａ）マスティックガムを極性有機溶媒で処理するステップと、
（ｂ）前記極性有機溶媒に可溶性の画分を単離するステップと、
（ｃ）場合により前記極性有機溶媒を除去するステップと、
（ｄ）ステップ（ｂ）または（ｃ）で得られた該可溶性画分を非極性有機溶媒で処理するステップと、
（ｅ）前記非極性有機溶媒に可溶性の画分を単離するステップと、
（ｆ）場合により前記非極性有機溶媒を除去するステップと、
を含み、ステップ（ｄ）〜（ｆ）をステップ（ａ）〜（ｃ）より前に実行し得る、工程によって得ることができる。
【００８４】
該工程は、例えばサイズ排除クロマトグラフィーまたは任意の他の当該技術分野で知られる方法によって、ステップ（ｃ）またはステップ（ｆ）に従って得られた可溶性画分のサイズ分画をさらに含み得る。
【００８５】
幾つかの実施形態において、該工程は、ステップ（ｃ）または（ｆ）のいずれかまたは両方の後に溶媒を除去することをさらに含み得る。溶媒除去は、当該技術分野で知られる任意の手段によって、例えばロータリーエバポレーション、高真空の適用、およびそれらの組み合わせによって実施され得る。特別な実施形態において、ステップ（ａ）〜（ｃ）は、ステップ（ｄ）〜（ｆ）の前、またはその逆で実施される。特別な実施形態において、該極性有機溶媒は、エタノールを含み、該非極性有機溶媒は、ヘキサンを含む。ステップ（ａ）〜（ｃ）およびステップ（ｄ）〜（ｆ）はそれぞれ独立して、複数サイクル実施されて、生成物の抽出工程および精製の度合いが最適化され得る。
【００８６】
幾つかの実施形態によれば、治療的使用のための組成物の調製では、本明細書に記載された通り、適切な担体、例えば医薬的に許容し得る油を含む疎水性担体は、場合によりワックスと組み合わせて、使用され得る。
【００８７】
幾つかの実施形態において、本明細書に記載されたマスティックガムの単離画分を含む組成物は、極性有機溶媒に可溶性で非極性有機溶媒に実質的に不溶性であるモノマー、オリゴマーテルペン化合物を約２０％（ｗ／ｗ）未満含まなければならず、前述の溶媒は、画分の調製で用いられるものを指す。より好ましくは単離画分は、そのようなテルペン化合物を約５％（ｗ／ｗ）未満含む。より好ましくは単離画分は、そのようなテルペン化合物を実質的に含まない。
【００８８】
ポリマー生成物の分子量は、当該技術分野で知られる通り、複数の方法で、例えば重量平均分子量または数平均分子量で表現され得る。分子量は、光散乱、多角度レーザ光散乱（ＭＡＬＩＳ）、小角中性子散乱、Ｘ線散乱、沈降速度、粘度測定（マーク・ホーウィンク式）、質量分析（例えば、ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ）およびゲル浸透クロマトグラフィーによって決定され得る。
【００８９】
該ポリマー性ミルセンは、炭素−炭素二重結合周囲の置換基の配列から生じる異なる幾何異性体として存在し得る。そのような異性体は、シス−またはトランス−配置（それぞれＺまたはＥ配置とも称される）と呼ばれ、シス−（またはＺ）は、炭素−炭素二重結合の同じ側の置換基を表し、トランス−（またはＥ）は、炭素−炭素二重結合の反対側の置換基を表す。様々な幾何異性体およびその混合物は、本発明の範囲に含まれる。
【００９０】
幾つかの実施形態において、本明細書で用いられるマスティックガムの単離画分は、ポリマー性ミルセンを実質的に含まない。幾つかの実施形態において、該マスティックガムの単離画分は、任意の検出可能なレベルのポリマー性ミルセンを含まない。幾つかの実施形態において、該マスティックガムの単離画分は、非検出可能なレベルのポリマー性ミルセンを有する。
【００９１】
幾つかの実施形態によれば、マスティックガムの単離画分の治療有効量および医薬的に許容し得る担体を含む、視神経症状態を処置する際に使用するための組成物が提供される。幾つかの実施形態において、該担体は、疎水性である。
【００９２】
幾つかの実施形態において、適切な疎水性担体は、例えば鉱油、植物油またはそれらの組み合わせなどの少なくとも１種の油を含み得る。
【００９３】
幾つかの実施形態によれば、用語「鉱油」は、石油の蒸留から得られる透明無色でほぼ無臭および無味の液体を指す。それは、ホワイト油、白色鉱油、液体ワセリン、流動パラフィン、または白色パラフィンオイルとも称され得る。本発明の特別な実施形態によれば、該鉱油は、ＮＦ（国民医薬品集）等級の製品またはＵＳＰ（米国薬局方）等級の製品のいずれかとして得ることができる市販製品の軽鉱油である。本発明における使用では、該鉱油は、好ましくは芳香族および不飽和化合物を含まない。
【００９４】
幾つかの実施形態によれば、適切な植物油としては、アーモンドオイル、キャノーラ油、ココナッツオイル、コーン油、綿実油、グレープシードオイル、オリーブ油、ピーナッツ油、サフラン油、ゴマ油、大豆油、またはそれらの組み合わせが挙げられるが、これらに限定されない。各可能性は、別の実施形態である。本発明の特別な実施形態によれば、該植物油は、ＮＦ（国民医薬品集）等級の製品またはＵＳＰ（米国薬局方）等級の製品のいずれかとして得ることができる市販の製品である。幾つかの実施形態において、該鉱油は、軽鉱油である。幾つかの模範的実施形態において、該植物油は、綿実油である。幾つかの実施形態において、該植物油は、ＮＦ（国民医薬品集）等級またはＵＳＰ（米国薬局方）等級の綿実油であり、非経口投与に適する。幾つかの実施形態において、該油は、安定化され得る。
【００９５】
幾つかの実施形態において、例えば酸化によって引き起こされる、分解を予防するために、抗酸化剤／安定化剤が配合剤に含まれ得、該抗酸化剤は、所望の機能を生じる量で用いられるが、但しその量が溶液の安定性に影響を及ぼさないことが条件である。抗酸化剤としては、フリーラジカルスカベンジャーおよび還元剤、例えばアセチルシステイン、アスコルビン酸、ブチル化ヒドロキシトルエン、緑茶抽出物、コーヒー酸、システイン、トコフェロール、ユビキノン、および没食子酸プロピル、好ましくは２，６−ジ−ｔｅｒｔ−ブチル−４−メチルフェノール（ブチル化ヒドロキシトルエンまたは「ＢＨＴ」、ＣＡＳ  ｎｒ．［１２８−３７−０］としても公知）が挙げられるが、これらに限定されない。
【００９６】
幾つかの実施形態によれば、該医薬的に許容し得る担体は、代わりまたは追加として、適切な代用油（ｏｉｌ  ｒｅｐｌａｃｅｍｅｎｔｓ）を含み得る。代用油としては、炭素を少なくとも１０個有するアルカン（例えば、イソヘキサデカン）、安息香酸エステル、脂肪族エステル、ノンコメドジェニック（ｎｏｎｃｏｍｏｄｏｇｅｎｉｃ）エステル、揮発性シリコーン化合物（例えば、シクロメチコーン）、および代用揮発性シリコーンが挙げられる。安息香酸エステルの例としては、安息香酸Ｃ１２Ｃ１５アルキル、安息香酸イソステアリル、安息香酸２−エチルヘキシル、安息香酸ジプロピレングリコール、安息香酸オクチルドデシル、安息香酸ステアリル、および安息香酸ベヘニルが挙げられる。脂肪族エステルの例としては、オクタン酸（ｏｃｔｏｎｏａｔｅ）Ｃ１２Ｃ１５アルキルおよびマレイン酸ジオクチルが挙げられる。ノンコメドジェニックエステルの例としては、イソノナン酸イソノニル、イソノナン酸イソデシル、ジリノール酸ジイソステアリルダイマー、プロピオン酸アラキジル、およびイソノナン酸イソトリデシルが挙げられる。代用揮発性シリコーンの例としては、デカン酸イソヘキシル、イソノナン酸オクチル、オクタン酸イソノニル、およびジオクタン酸ジエチレングリコールが挙げられる。
【００９７】
幾つかの実施形態において、該疎水性担体としては、さらに、少なくとも１つのワックスを挙げることができる。ワックスとしては、例えば、蜜ロウ、植物性ワックス、サトウキビワックス、ミネラルワックス、および合成ワックスが挙げられる。植物性ワックスとしては、例えば、カルナウバ、キャンデリラ、オーリクリーおよびホホバワックスが挙げられる。ミネラルワックスとしては、例えばパラフィンワックス、亜炭ワックス、微結晶ワックス、およびオゾケライトが挙げられる。合成ワックスとしては、例えばポリエチレンワックスが挙げられる。
【００９８】
幾つかの実施形態において、該医薬組成物は、例えばカプセル（ソフトゲルカプセルなど）、錠剤、ゲル、リポソーム、坐剤、懸濁液、軟膏、溶液、エマルジョンまたはマイクロエマルジョン、フィルム、セメント、粉末、ニカワ、エアゾル、スプレー、およびゲルなど、投与経路に適した複数の形態のいずれかで配合され得る。
【００９９】
幾つかの実施形態において、該医薬組成物を調製するために、該単離画分は適宜、包接複合体、ナノエマルジョン、マイクロエマルジョン、粉末およびリポソームとして配合され得る。特別な実施形態において、包接複合体は、少なくとも１種のシクロデキストリンを含む。特別な実施形態において、シクロデキストリンは、ヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリンを含む。特別な実施形態において、ナノエマルジョンは、８００ｎｍ未満の平均粒子径を有する液滴を含む。特別な実施形態において、該液滴は、５００ｎｍ未満の平均粒子径を有する。特別な実施形態において、該液滴は、２００ｎｍ未満の平均粒子径を有する。特別な実施形態において、粉末は、噴霧乾燥された粉末である。特別な実施形態において、リポソームは、多重膜小胞を含む。特別な実施形態において、マイクロエマルジョンは、非イオン性界面活性剤を含む。非イオン性界面活性剤としては、ポリオキシヒマシ油、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル（ポリソルベート）、ポロキサマー、ビタミンＥ誘導体、ポリオキシエチレンアルキルエーテル、ポリオキシエチレンステアリン酸塩、飽和ポリグリコール化グリセリド、またはその組み合わせが挙げられるが、これらに限定されない。
【０１００】
幾つかの実施形態によれば、単離画分の様々な配合剤およびその調製は、本明細書に実施例１に開示される。本発明の医薬組成物は、意図された目的を実現する任意の手段により投与され得る。幾つかの実施形態において、投与は、非経口経路による。幾つかの実施形態において、投与は、非経口の局所投与である。幾つかの実施形態において、非経口投与は、非限定的に静脈内、筋肉内、皮下、皮内、腹腔内、動脈内、子宮内、尿道内、心臓内、脳内、脳室内、腎臓内、肝臓内、腱内、骨内、眼内、および髄腔内の投与経路から選択され得る。
【０１０１】
幾つかの実施形態によれば、投与される投薬量は、対象の年齢、健康状態および体重、あるとすれば併用処置の利用、処置の頻度、および所望の効果の性質に依存する。任意の単位投与剤型における本発明の単離画分の量は、治療有効量を含み、治療有効量は、レシピエント対象、投与経路、および投与頻度に応じて変動し得る。
【０１０２】
幾つかの実施形態によれば、該医薬組成物に存在する単離されたマスティックガム画分の量は、簡便には、組成物の総重量に基づき、重量／重量ベースで約０．０１％〜約２５％、例えば０．０１％〜約１２％の範囲内であり得る。例えば注射による投与では、組成物中の単離されたマスティックガム画分の割合％は、約０．１％〜約１０％、例えば１０％、７．５％、５％、３％、２．５％、１．５％、１％および０．５％範囲内であり得る。
【０１０３】
幾つかの実施形態において、本発明の医薬組成物は、それ自体が当業者に知られる手法で、例えば従来の混合、造粒、溶解、抽出、または凍結乾燥工程の手段によって製造され得る。
【０１０４】
幾つかの実施形態において、非経口投与のための配合剤は適宜、活性化合物の懸濁液および微粒子分散体を含み得る。幾つかの実施形態において、油性注射懸濁液が投与され得る。適切な親油性溶媒またはビヒクルとしては、脂肪油、例えばゴマ油、または合成脂肪酸エステル、例えばオレイン酸エチル、トリグリセリド、ポリエチレングリコール−４００、Ｃｒｅｍｏｐｈｏｒ、またはシクロデキストリンが挙げられる。注射懸濁液は、懸濁液の粘度を上昇させる物質を含有し得、それにはカルボキシメチルセルロースナトリウム、ソルビトール、および／またはデキストランがある。場合により懸濁液は、安定化剤も含有し得る。
【０１０５】
幾つかの実施形態において、医薬組成物はまた、有効成分を含むリポソームを用いて調製され得る。当業者に知られる通り、リポソームは一般に、リン脂質または他の脂質物質に由来する。リポソームは、単一膜または多重膜水和液晶により形成され、水性媒体中に分散される。リポソームを形成することが可能な任意の非毒性で生理学的に許容し得る代謝可能な脂質を使用することができる。一般に好ましい脂質は、天然および合成の両方のリン脂質およびホスファチジルコリン（レシチン）である。リポソームを形成する方法は、例えば、Ｐｒｅｓｃｏｔｔ，  Ｅｄ．，  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，  Ｖｏｌｕｍｅ  ＸＩＶ，  Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，  Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，  Ｎ．Ｙ．  （１９７６）および米国特許第７，０４８，９４３号に開示された通り、当該技術分野で既知である。
【０１０６】
幾つかの実施形態において、該医薬組成物は、非経口使用のための配合を容易にするために、水中油型エマルションまたはマイクロエマルションを含み得る。このようなエマルジョン／マイクロエマルジョンは一般に、脂質、界面活性剤、場合により保湿剤、および水を含む。適切な脂質は、水中油エマルジョン／マイクロエマルジョンを生成するのに有用であることが一般に知られるもの、例えば脂肪酸グリセリドエステルを包含する。適切な界面活性剤は、脂質がエマルション中の油成分として使用される水中油エマルジョン／マイクロエマルジョンを生成するのに有用であることが一般に知られるものを包含する。非イオン性界面活性剤は、例えばエトキシル化ヒマシ油、リン脂質、およびエチレンオキシドとプロピレンオキシドのブロックコポリマーが好適になり得る。使用される場合の適切な保湿剤としては、例えばプロピレングリコールまたはポリエチレングリコールが挙げられる。
【０１０７】
幾つかの実施形態によれば、該医薬組成物は、カラギーナン、キサンタンガム、カラヤガム、アカシアガム、ローカストビーンガム、グアーガムなどのゲル形成ポリマーから形成されたヒドロゲルなどのゲルの形態で配合され得る。ヒドロゲルは、有効成分を含む水中油エマルジョンと組み合わせられ得る。
【０１０８】
さらなる実施形態によれば、視神経症の処置の治療的使用および方法が提供される。該方法は、本明細書に記載された通り、マスティックガムの単離画分を含む組成物の治療有効量を、対象に投与することを含む。
【０１０９】
幾つかの実施形態において、該組成物を投与するステップは、非経口経路をはじめとする任意の許容し得る経路を含み得る。非経口投与としては、例えば静脈内、筋肉内、皮下、皮内、腹腔内、動脈内、子宮内、尿道内、心臓内、脳内、脳室内、腎臓内、肝臓内、腱内、骨内、眼内、および髄腔内の投与経路が挙げられる。各可能性は、ステアリン酸塩の実施形態である。
【０１１０】
幾つかの実施形態において、該組成物は、等間隔で週２回のスケジュールで皮下投与され得る。幾つかの実施形態において、該組成物は、２日おきのスケジュールで皮下投与され得る。幾つかの実施形態において、該組成物は、７日おきに１回（週１回）のスケジュールで皮下投与され得る。幾つかの実施形態において、該組成物は、１日１回皮下投与され得る。
【０１１１】
幾つかの実施形態において、該組成物は、綿実油中のマスティックガムの単離画分を５％（ｗ／ｗ）配合剤として皮下投与され得る。幾つかの実施形態において、該組成物は、安定化された綿実油中のマスティックガムの単離画分を５％（ｗ／ｗ）配合剤として皮下投与され得る。幾つかの実施形態において、該配合剤は、原薬（単離画分）を２０ｍｇ含み得る。
【０１１２】
幾つかの実施形態において、該組成物は、ＢＨＴ安定化綿実油中のマスティックガムの単離画分を５％（ｗ／ｗ）配合剤として皮下投与され得る。幾つかの実施形態において、該組成物は、綿実油中のマスティックガムの単離画分を５％（ｗ／ｗ）配合剤として、等間隔で週２回のスケジュールで皮下投与され得る。幾つかの実施形態において、該組成物は、綿実油中のマスティックガムの単離画分を５％（ｗ／ｗ）配合剤として、等間隔で週１回（７日おき）のスケジュールで皮下投与され得る。幾つかの実施形態において、該組成物は、綿実油中のマスティックガムの単離画分を５％（ｗ／ｗ）配合剤として、等間隔で１日１回のスケジュールで皮下投与され得る。
【０１１３】
幾つかの実施形態において、該組成物は、マスティックガムの単離画分の５％（ｗ／ｗ）配合剤の０．４ミリリットル（ＭＬ）用量で皮下投与され得る。幾つかの実施形態において、該組成物は、マスティックガムの単離画分の５％（ｗ／ｗ）配合剤の０．２ミリリットル（ＭＬ）用量で皮下投与され得る。幾つかの実施形態において、該組成物は、マスティックガムの単離画分の５％（ｗ／ｗ）配合剤の０．８ミリリットル（ＭＬ）用量で皮下投与され得る。幾つかの実施形態において、該組成物は、綿実油中のマスティックガムの単離画分の５％（ｗ／ｗ）配合剤として０．４ミリリットル（ＭＬ）用量で、等間隔で週２回皮下投与され得る。幾つかの実施形態において、該組成物は、綿実油中のマスティックガムの単離画分の５％（ｗ／ｗ）配合剤として０．２ミリリットル（ＭＬ）用量で、等間隔で週２回皮下投与され得る。幾つかの実施形態において、該組成物は、綿実油中のマスティックガムの単離画分の５％（ｗ／ｗ）配合剤として０．８ミリリットル（ＭＬ）用量で、等間隔で週２回皮下投与され得る。
【０１１４】
幾つかの実施形態において、該原薬（マスティックガムの単離画分）の投薬量は、任意の適切な配合剤中に５〜２００ｍｇの範囲内であり得る。幾つかの実施形態において、該原薬（マスティックガムの単離画分）の投薬量は、任意の適切な配合剤中に０．１ｍｇ〜２００ｍｇの範囲内であり得る。幾つかの実施形態において、該原薬（マスティックガムの単離画分）の投薬量は、任意の適切な配合剤中に２００ｍｇ〜６００ｍｇの範囲内であり得る。幾つかの実施形態において、該原薬は、（適切な配合剤中に）該原薬２０ｍｇの投薬量で投与され得る。幾つかの実施形態において、該原薬は、（適切な配合剤中に）該原薬４０ｍｇの投薬量で投与され得る。幾つかの実施形態において、該原薬は、（適切な配合剤中に）該原薬５０ｍｇの投薬量で投与され得る。幾つかの実施形態において、該原薬は、（適切な配合剤中に）該原薬６０ｍｇの投薬量で投与され得る。幾つかの実施形態において、該原薬は、（適切な配合剤中に）該原薬８０ｍｇの投薬量で投与され得る。幾つかの実施形態において、該原薬は、（適切な配合剤中に）該原薬１００ｍｇの投薬量で投与され得る。
【０１１５】
幾つかの実施形態において、該組成物は、１日あたり１〜４回で１週間に１〜７回投与され得る。幾つかの実施形態において、該組成物は、１週間に４回投与され得る。幾つかの実施形態において、該組成物は、１週間に２回投与され得る。幾つかの実施形態において、該組成物は、１週間に１回投与され得る。
【０１１６】
先に示された投与経路、スケジュール、用量およびレジメンの多くの変更が予期および設計され得ることは、当業者に明白である。投与経路、スケジュール、用量およびレジメンにおけるそのような変更もまた本発明の範囲内であることが、理解されなければならない。
【０１１７】
幾つかの実施形態によれば、視神経症を処置するための本明細書に開示された方法は、例えば、緑内障、外傷性神経症、虚血性神経症、緑内障、腫瘍により引き起こされた神経症、感染により引き起こされた神経症、ミトコンドリア病による視神経症、栄養性視神経症、放射線視神経症、中毒性視神経症、蓄積症により引き起こされた損傷など、またはそれらの組み合わせなど、視神経への損傷から生じる、またはそれに関連する病気に罹患した対象にとって特に有利である。各可能性は、別の実施形態である。
【０１１８】
幾つかの実施形態において、視神経症を処置するための本明細書に開示された使用および方法は、視神経におけるリポタンパク質性物質の沈着、リポフスチンの沈着などの、沈着疾患の結果としての視神経への損傷から生じる、またはそれに関連する病気に罹患した対象に特に有利である。
【０１１９】
幾つかの実施形態において、視神経症を処置するための本明細書に開示された使用および方法は、視神経におけるリポタンパク質性物質の沈着から生じる、またはそれに関連する病気に罹患した対象に特に有利である。
【０１２０】
幾つかの実施形態において、視神経症を処置するための本明細書に開示された使用および方法は、視神経におけるリポタンパク質性物質の沈着の結果としての視神経への損傷から生じる、またはそれに関連する病気に罹患した対象に特に有利であり、リポタンパク質性物質の沈着は、蓄積症の結果である。
【０１２１】
幾つかの実施形態において、視神経症を処置するための本明細書に開示された使用および方法は、視神経におけるリポタンパク質性物質の沈着の結果としての視神経への損傷から生じる、またはそれに関連する病気に罹患した対象に特に有利であり、リポタンパク質性物質の沈着は、蓄積症の結果であり、沈着されたリポタンパク質性物質は、リポフスチンである。
【０１２２】
幾つかの実施形態において、視神経症を処置するための本明細書に開示された使用および方法は、視神経における鉱物物質の沈着の結果としての視神経への損傷から生じる、またはそれに関連する病気に罹患した対象に特に有利であり、鉱物物質の沈着は、蓄積症の結果であり、視神経に沈着された鉱物物質は、カルシウムおよび／または鉄を含む。
【０１２３】
幾つかの実施形態において、本明細書に開示された組成物は、例えばＮＡＩＯＮなどの視神経症状態に罹患した対象の最高矯正視力（ＢＣＶＡ）（即ち、眼鏡またはコンタクトレンズを含む最高の遠見視力）を改善するために用いられ得る。幾つかの実施形態において、該ＢＣＶＡは、本明細書に開示された組成物での処置後に１０ＥＴＤＲＳ（網膜症早期治療研究重症度スケール）以上改善され得る。ＥＴＤＲＳチャートは、集団研究および臨床検査における視力測定の「ゴールドスタンダード」として採用された比例するレイアウトおよび幾何学的な文字サイズ拡大を特徴とする。
【０１２４】
幾つかの実施形態において、本明細書に開示された処置の使用および方法は、ヒトおよび非ヒト哺乳動物における適用に適している。
【０１２５】
幾つかの実施形態によれば、本発明の方法は、本明細書に記載された通り、マスティックガムの単離画分を含む組成物を組み込む製造品の使用を包含し得る。
【０１２６】
幾つかの実施形態において、該医薬組成物は、製造品へのコーティングの形態であり得、または容器に含まれて製造品と一体化され得る。
【０１２７】
幾つかの実施形態において、該医薬組成物は、該組成物を治療が必要となる身体部位へ送達する針、注射装置、またはスプレーディスペンサーなどの送達デバイスに組み入れられ得る。
【０１２８】
幾つかの実施形態において、製造品としては、針、マイクロニードル、注射装置およびスプレーディスペンサーが挙げられるが、これらに限定されない。
【０１２９】
以下の実施例は、本発明の特定の実施形態をより完全に例示するために示されている。しかしそれらは、本発明の広い範囲を限定するものと解釈されてはならない。当業者は、本発明の範囲を逸脱することなく、本明細書に開示された主旨の多くの変更および改良を即座に案出し得る。
【０１３０】
実施例
実施例１  マスティックガムの単離画分（Ｒｐｈ−ＤＳ−１物質）およびその様々な配合剤の調製
方法１−マスティックガムの単離画分（本明細書ではＲＰｈ−ＤＳ−１物質（薬物）と称される）の調製
１０Ｌ実験用ボトル（Ｂ１）において、マスティック樹脂（２５０ｇ）を導入した後、無水エタノール（４Ｌ）を添加した。混合物を室温で少なくとも１２時間放置した（好ましくは暗室で）。ボトル上の非溶解樹脂粒子をかく乱させずにエタノールを一部ホモジナイズさせるために、混合物を１０〜３０秒間、穏やかに振とうした。その後、混合物をさらに少なくとも２時間放置した。混合物を含むボトルを、次にオービタルシェーカーにおいて１００〜１５０ｒｐｍで少なくとも１５分間、振とうし、大きな粒子を沈降させるために少なくとも１５分間放置した。得られたエタノール溶液（Ｅ１）を不溶性材料から透明１０Ｌ実験用ボトル（Ｂ２）へ注意深くデカンテーションした。ボトルＢ１中の不溶性材料に、新たなエタノール（２Ｌ）を添加し、混合物を再度、オービタルシェーカーにおいて１００〜１５０ｒｐｍで少なくとも１５分間振とうした。少なくとも１５分間放置した後、第二のエタノール溶液（Ｅ２）をボトルＢ２へ注意深くデカンテーションし、こうしてエタノール画分Ｅ１と混和した。ボトルＢ１中の残留物に、新たなエタノール（１Ｌ）を添加し、同じ順序を繰り返して、エタノール溶液Ｅ３を得た。エタノール溶液Ｅ３を既に混和された溶液Ｅ１およびＥ２と混和して、合計７Ｌのエタノール溶液（Ｅ）をボトルＢ２内に得た。
【０１３１】
ボトルＢ２内のエタノール溶液（Ｅ）を３リットルのエバポレーションフラスコ５本（Ｆ１〜Ｆ５）に均等に分配し、過剰な発泡を回避しながら、ロータリーエバポレーターを用いてエタノールを真空蒸発させた。エタノールを蒸発させて、ｎ−ヘキサン１．５ＬをフラスコＦ１〜Ｆ５のそれぞれに添加した。混合物をオービタルシェーカーにおいて１２０〜１５０ｒｐｍで少なくとも１．５時間振とうし、その後、少なくとも１．５時間放置した。各フラスコから得られたｎ−ヘキサン溶液を、注意深いデカンテーションによって透明１５Ｌ実験用ボトル（Ｂ３）内へ混和した。フラスコＦ１〜Ｆ５のそれぞれの残留物に、新たなＮ−ヘキサンのさらなる７００ｍｌを添加し、振とうおよび放置手順を繰り返した。第二のｎ−ヘキサン溶液をフラスコＢ３に混和して、約１１Ｌのヘキサン溶液Ｈを得た。この溶液を５本の透明な予め計量された３Ｌエバポレーションフラスコ（Ｆ６〜Ｆ１０）に分配して、ｎ−ヘキサンを真空蒸発させた。エバポレーションは、最初は１．５Ｌヘキサン溶液を添加してほとんどのヘキサンを蒸発させ、その後、残りのヘキサン溶液７００ｍｌを添加して蒸発を完了させる、という二段階で実施することができる。蒸発を完了した後のフラスコＦ６〜Ｆ１０に得られた原薬の合計収率は、マスティック樹脂出発原料の５０〜７０％（１２５〜１７５グラム）であり、ほとんどの例で５５〜６５％（１３７．５〜１６２．５グラム）の範囲内であった。こうして得られた単離マスティック画分（本明細書ではＲｐｈ−Ｄｓ−１物質（薬物）と称される）は、白色〜オフホワイト色、またはわずかに黄色を有し、室温で粘着性の泡状物／半固形の粘稠性を有した。該材料を約３５〜４０℃を超える非常に粘性の液体／油性材料に融解した。１５℃未満に冷却されると、該材料はより硬質になる。
【０１３２】
同じ手順を異なる溶媒の組み合わせで利用して、さらなるマスティックガムの単離画分を調製した。これらを、以下の表１に要約する。
【表１】
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【０１３３】
方法２：単離されたマスティックガム画分（ＲＰｈ−ＤＳ−１原薬）の配合剤：ＢＨＴ安定化綿実油中の配合剤（原薬）ＲＰｈ２０１−Ａ（５％ｗ／ｗ）の調製
各フラスコ（Ｆ６〜Ｆ１０）中の上記方法１の単離されたマスティックガム画分（ＲＰｈ−ＤＳ−１原薬）に、ＢＨＴ安定化綿実油中の５％（ｗ／ｗ）原薬溶液を得るのに必要となるＢＨＴ安定化綿実油量（以下の実施例２方法１に詳述された通り調製）を添加した。透明で均質な溶液が形成されるまで、フラスコをオービタルシェーカーで振とうした。各フラスコを、次に、水浴温度３０℃で少なくとも２時間のロータリーエバポレーションにより、残留するエタノールおよびｎ−ヘキサンの真空でのさらなる除去に供した。エタノールでは５０００ｐｐｍ未満で、ｎ−ヘキサンでは２００ｐｐｍ未満で残留溶媒を効率的に除去するために、０．１ｍｂａｒ以下の真空に達することが必要となる場合がある。エタノールおよびｎ−ヘキサンの残留レベルを、ガスクロマトグラフィー手順によって測定した。
【０１３４】
水浴温度３０℃での３〜５時間の真空処理により、残留エタノールおよびｎ−ヘキサンのレベルがそれぞれ５０００ｐｐｍおよび２００ｐｐｍ未満になることが見出された。その後、油性溶液を透明の予め計量された５Ｌ実験用フラスコ内へ混和した。配合剤の典型的に得られた量は、２．６５〜３．２５ｋｇ（２．８〜３．４リットル）の範囲内であった。溶液を滅菌ろ過に供し、滅菌性および内毒素に関するテストに合格した後、所望のバイアルまたはアンプルへ無菌的に充填した。
【０１３５】
方法３：単離されたマスティックガム画分（ＲＰｈ−ＤＳ−１原薬）の配合剤  −  ＲＰｈ２０１−Ｂ配合剤（原薬）（１０％ｗ／ｗ）、ＢＨＴ安定化綿実油の調製
マスティックガムの単離画分の濃縮配合剤（１０％（ｗ／ｗ））を、本質的には先の実施例１の方法２に記載されたものと同じ手順であるが、半量のＢＨＴ安定化綿実油を使用して調製した。これにより、ＢＨＴ安定化綿実油中の単離されたマスティックガム画分（原薬）の１０％（ｗ／ｗ）配合剤（ＲＰｈ−２０１Ｂ）を得た。この濃縮された配合剤は、ＲＰｈ２０１−Ａ（５％ｗ／ｗ）の生成の中間段階として用いることができる。ＲＰｈ２０１−Ａ  ５％（ｗ／ｗ）配合剤は、次に、必要量のＢＨＴ安定化綿実油による１０％（ｗ／ｗ）ＲＰｈ２０１−Ｂの希釈によって得ることができる。
【０１３６】
方法４：単離されたマスティックガム画分（ＲＰｈ−ＤＳ−１原薬）の配合剤  −  ＢＨＴ安定化綿実油中のＲＰｈ２０１−Ｃ配合剤（原薬）（２０％ｗ／ｗ）の調製
マスティックガムの単離画分の濃縮配合剤（１０％（ｗ／ｗ））を、本質的には先の実施例１の方法２に記載されたものと同じ手順であるが、ＢＨＴ安定化綿実油中の単離されたマスティックガム画分（原薬）の２０％（ｗ／ｗ）を得るＢＨＴ安定化綿実油量を使用して調製した。このＢＨＴ安定化綿実油中のＲＰｈ−ＤＳ−１の２０％（ｗ／ｗ）配合剤を、本明細書ではＲＰｈ２０１−Ｃと称した。このより濃縮されたＲＰＨ２０１−Ｃ配合剤は、ＲＰｈ２０１−Ａ（５％ｗ／ｗ）の生成の中間段階として用いることができる。ＲＰｈ２０１−Ａ  ５％（ｗ／ｗ）配合剤は、次に、必要量のＢＨＴ安定化綿実油による２０％（ｗ／ｗ）ＲＰｈ２０１−Ｃの希釈によって得られる。
【０１３７】
方法５：単離されたマスティックガム画分（ＲＰｈ−ＤＳ−１原薬）の配合剤  −  様々な濃度を有する配合剤の調製
０．０１％、０．０５％、０．１％、０．５％、１％、２％、３％、４％、６％、７％、８％、９％、１１％、１２％、１３％、１４％、１５％、１６％、１７％、１８％、１９％（ｗ／ｗ）を含むマスティックガムの単離画分（原薬）の配合剤を、同様に必要量のＢＨＴ安定化綿実油での希釈により調製した。より濃縮された配合剤の希釈の代わりに、例示的濃度全てを、適当量のＢＨＴ安定化綿実油での単離されたマスティックガム画分（ＲＰｈ−ＤＳ−１原薬）の直接配合によって得ることもできる。
【０１３８】
同じ濃度の配合剤を、同じく安定化剤としての任意のＢＨＴを含有しない綿実油を用い、そしてアーモンドオイル、キャノーラ油、ココナッツオイル、コーン油、綿実油、グレープシードオイル、オリーブ油、ピーナッツ油、サフラン油、ゴマ油、大豆油またはそれらの組み合わせをはじめとする異なるタイプの油を用いて調製した。
【０１３９】
飽和溶液までの任意の所望の濃度の配合剤が、上記アプローチによって、または当業者に明白な類似のアプローチによって調製され得ることが、理解されなければならない。
【０１４０】
実施例２：ＢＨＴ安定化綿実油の調製
方法１：ＢＨＴ安定化綿実油の調製
ＮＦ等級綿実油（ＣＲＯＤＡ  ＩＮＣ．「Ｓｕｐｅｒ  Ｒｅｆｉｎｅｄ  Ｃｏｔｔｏｎｓｅｅｄ  ＮＦ  ＮＰ−ＬＱ−（ＭＨ）；ＳＲ４０３６７」）９．９９１Ｋｇに、ＢＨＴ（２，６−ジ−ｔｅｒｔ−ブチル−４−メチルフェノール；欧州薬局方等級または米国薬局方等級、ＣＡＳ［１２８−３７−０］）９グラムを適切な容器において添加して、透明で均質な溶液が得られるまで、光を遮断して混合物を撹拌または振とうした。撹拌／振とう時間は、典型的には１５〜３０時間前後であった。得られた材料は、ＢＨＴ  ９００ｐｐｍで安定化された綿実油であった。この材料を、さらなる使用まで窒素ブランケットの下の暗室条件で貯蔵した。場合により、該材料を、ロータリーエバポレーターおよび３０℃での１時間の少なくとも０．１ｍｂａｒの真空を用いた真空処理に供することができる。得られた溶液は、単離画分配合剤（実施例１の方法１〜５の薬物生成物）およびプラセボ（以下参照）の調製に用いられる。
【０１４１】
方法２：プラセボの調製
先に調製されたＢＨＴ安定化綿実油溶液を滅菌ろ過に供し、対照／プラセボ処置として使用するために、滅菌性および内毒素に関して合格した後、所望のバイアル／アンプルに無菌的に充填した。
【０１４２】
実施例３：虚血性視神経症（ＩＯＮ）の処置におけるマスティックガムの単離画分の使用
マスティックガムの単離画分の配合剤を、被験対象における虚血性視神経症を処置するのに用いる。虚血性視神経症（ＩＯＮ）の処置に関する二重盲検試験を、マスティックガム単離画分の５％配合剤（先のＲＰｈ２０１−Ａ配合剤）またはプラセボ処置（先のＢＨＴ安定化綿実油溶液）を用いて実施する。マスティックガム配合剤の単離画分を、外傷性神経症および虚血性視神経症（非動脈性虚血性神経症（ＮＡＩＯＮ））をはじめとする異なるタイプの視神経症を有する対象の左もしくは右上腕、右もしくは左大腿部、または右もしくは左側の腹部の皮下脂肪へ皮下（ｓ．ｃ．）投与する。対象を、配合剤（９５％ＢＨＴ安定化綿実油中の５％ＲＰｈ−ＤＳ１を含む５０ｍｇ／ｍｌを０．４ｍｌ）のｓ．ｃ．注射によって連続する１３〜２６週間にわたり１週間に２回処置する。
【０１４３】
対象の状態を評価するために、対象のベースライン状態を処置開始前に決定し、処置時および処置後のフォローアップ検査をさらに実施する。
【０１４４】
処置の影響を評価するために用いられたパラメータは、視力および視野の変化、視覚誘発電位の変化、ならびに光干渉断層撮影（ＯＣＴ）の変化である。とりわけ、以下のパラメータを処置前、処置時および処置後に測定／決定する：ＥＴＤＲＳに基づき最高に矯正された視力（ＶＡ）検査の成績、患者の視野（ＶＦ）は、ハンフリー視野（ＨＶＦ）２４−２プログラムでの２４−２全点閾値プログラムを利用して測定した。視覚誘発応答（ＶＥＲ）としても公知の視覚誘発電位（ＶＥＰ）を用いて、視覚刺激に応答して脳内ニューロンにより発生した電気生理学的シグナルを記録した。所望の刺激タイプを選択するのに用いられる刺激発生装置は、フラッシュＶＥＰ、パターンＶＥＰおよびマルチフォーカルＶＥＰである。高分解能ＯＣＴを用いて、網膜神経線維層の厚さ（ＲＮＦＬＴ）、ならびに罹患した象限および黄斑体積などの変化を測定した。
【０１４５】
加えて、バイタルサイン（ＨＲ、ＢＰ、体温）、臨床検査（血液学的検査、臨床化学検査、尿分析およびサイトカイン発現など）の変数の測定を、処置前、処置時および／または処置後に各対象でさらに実施し得る。
【０１４６】
被験対象には、外傷性事象の後、最大３年間にわたり外傷性神経症または虚血性視神経症（非動脈性虚血性神経症（ＮＡＩＯＮ））により生じた片側または両側の虚血性視神経症と診断され、事象後任意の処置を行わず少なくとも６ヶ月経て安定している（即ち、視野および／または視力の改善を有さない）、１８歳を超える男性または女性が含まれる。両側視神経症の場合、最後の事象を判断する。対象を、６／６０以下の矯正視力もしくは１５°未満の視野、またはそれらの両方を有することについて特徴づける。
【０１４７】
幾つかの実施形態において、以下の状態の１つに罹患した対象は、実験から除外され得る：緑内障、腫瘍により引き起こされた神経症、感染により引き起こされた神経症、ミトコンドリア病による視神経症、栄養性視神経症、放射線視神経症、中毒性視神経症、網膜への糖尿病合併症、遺伝性視神経症、３象限を超える完全な視野暗点の対象、感染の提示に関する臨床的エビデンス、コルチコステロイド、免疫抑制剤、細胞傷害性薬、放射線療法および化学療法を投与されている、もしくは６ヶ月以内に受けた対象、少なくとも２年以内にアルコール依存もしくは薬物依存の履歴を有した対象、妊娠中もしくは授乳中の女性対象、出産能力を有し適切な避妊法を利用していない女性対象、臨床的に重大で、そして／もしくは非制御の病気、または他の重大な医学的疾患、異常な臨床検査結果、臨床的に重大な非制御の網膜疾患（ＡＭＤ）、配合剤の任意の成分に対して既知のアレルギーを有すること。
【０１４８】
本明細書で提供されるのは、対象２３名が含まれる試験から得られた暫定的データの分析である。登録対象２３名中１０名が全ての試験来院を完了した後、分析を実施した。
【０１４９】
連続する少なくとも１３週間の全処置期間（薬物関連の重篤な有害事象を有さない場合にはさらに１３週間（合計で２６週間まで）処置期間を延長する選択肢を有する）の間、および視神経症を有する対象の処置終了後３ヶ月目のフォローアップ来院の際に、ＲＰｈ２０１−Ａ配合剤のＳ．Ｃ．投与後に観察された視力（ＶＡ）および視野（ＶＦ）の任意の変化を評価するために、暫定的な試験分析を１週間に２回実施した。
【０１５０】
適格性を確認する際に、対象を、ビヒクル（綿実油）４００μＬ中のＲＰｈ２０１−Ａ  ２０ｍｇまたはビヒクル単独のいずれかである２つの処置群のうちの一方へ１．５：１比で無作為に割り付けた。合計で、ＲＰｈ２０１−Ａ処置対象１２名およびプラセボ処置患者８名を、試験終了時に評価した。 
【０１５１】
最初、処置を連続で１３週間、施し、さらに１３週間、即ち合計で２６週間に延長した（患者および／または処置担当医が望む場合）。処置の終了時に、対象全員が、さらに１３週間の無処置期間に従った。
【０１５２】
暫定的タイムラインの際に、合計９名の対象（ＲＰｈ２０１−Ａ処置患者６名およびプラセボ処置３名）が、全ての来院を完了した（「初期コホート」）。対象９名のうち８名が、さらなる１３週間の処置、即ち１３週間から２６週間への処置の延長に同意した。対象１名は、１３週間を超える処置の継続を辞退した。９名は全員、最終投与後１３週間行われる退薬来院に戻った。試験における残り１１名は、後期コホートの部分である。
【０１５３】
初期コホートの対象の来院が完了した後、安全性評価の暫定的再調査を、初期コホートの対象（＃００１〜０１０；１２週後に離脱した対象１名（＃００４）を含む）で実施した。対象全１０名は、少なくとも１つの有害事象（ＡＥ）に見舞われ、合計８１のＡＥが、データ締切日より前に報告された。報告されたＡＥに関して最も一般的な全身臓器分類は、全身障害および投与部位の病気（８名）および神経系障害（５名）であった。
【０１５４】
試験期間中、死亡は報告されなかった。４例の重篤な有害事象（ＳＡＥ）が、対象２名に生じた。対象＃００１（ＲＰｈ２０１−Ａ処置）は、中等度の空間識失調、めまい、および軽度の左目視力低下の同時ＳＡＥに見舞われ、それらは全て無関係と評価された。対象＃００４（ＲＰｈ２０１−Ａ処置され、１２回目の来院後に試験から離脱）は、重度ブルセラ症のＳＡＥに見舞われ、それも無関係と評価された。ＡＥはいずれも、試験薬物の中止または試験からの離脱をもたらさなかった。
【０１５５】
試験期間中、収縮期血圧、拡張期血圧および心拍数をはじめとするバイタルサインの臨床的に重大な変化、または異常な臨床検査評価は、観察されなかった。試験期間中および／または退薬フォローアップ期間中、ＲＰｈ２０１−Ａを受けた対象において、罹患していないもう一方の目に増悪はなかった。
【０１５６】
暫定的な有効性分析を、全ての来院が完了した対象１０名で実施した。対象１０名のうち２名は、それまで両眼のＮＡＩＯＮを有し、各対象の両眼が分析に含まれた。両側性疾患の対象２名のうち、１名はＲＰｈ２０１−Ａ群、１名は対照群であった。それゆえ、有効性分析は、１１の目で実施され、そのうち７は、ＲＰｈ２０１−Ａ処置群、４は対照群であった。
【０１５７】
有効性分析は、以下のパラメータについて実施した：視力、視野および光干渉断層撮影（ＯＣＴ）による網膜神経線維層の厚さ。結果から、ＲＰｈ２０１Ａ処置対象がプラセボ処置対象に比較して視力の改善傾向を示し、ほとんどが２６週目にＥＴＤＲＳ（糖尿病性網膜症早期治療研究重症度スケール）チャート文字による最高矯正視力（ＢＣＶＡ）をベースラインから１０以上改善していることが示された。ＥＴＤＲＳチャートは、集団研究および臨床検査における視力測定の「ゴールドスタンダード」として採用された比例するレイアウトおよび幾何学的な文字サイズ拡大を特徴とする。
【０１５８】
処置の１３週後に、ＲＰｈ２０１群は、プラセボ群よりも小さなＢＣＶＡ改善を示した（それぞれベースラインから平均±ＳＥＭで１７．７±７．０対３６．０±９．９文字の改善；ｐ＝０．１５６３）。しかし処置の２６週後には、ＲＰｈ２０１群は、プラセボ群よりも大きなベースラインからのＢＣＶＡ改善を示した（それぞれ３５．２±１０．４対２２．２±１１．２文字の改善；ｐ＝０．３２５２)。１３週間の退薬フォローアップ期間の後、ＲＰｈ２０１およびプラセボ群の両方のＢＣＶＡは、ベースラインに比較してわずかに下降したが、それでもプラセボに比較してＲＰｈ２０１処置対象でＢＣＶＡが高かった(それぞれ２８．９±９．１および２０．０±１２．１文字；ｐ＝０．５４９８）。結果を図２に表しており、処置（「ＲＰＨ２０１」）または非処置（「プラセボ」）対象における１３週目、２６週目および退薬フォローアップ来院時のＥＴＤＲＳ文字読み取りにおけるベースラインからの平均増加が示される。
【０１５９】
ベースラインからのＢＣＶＡの平均改善の比較からは、処置群間の有意差は検出されなかった。しかし２６週間の処置後に、ＲＰｈ２０１群の６つの目のうち６つ（１００％）が、プラセボ群の４つの目のうち２つ（５０％）に比較して１０文字（２行）を超える視力の改善に達した。１３週間の退薬フォローアップ期間に、ＲＰｈ２０１群の７つの目のうち５つ（７１％）が、プラセボ群の４つの目のうち２つ（５０％）に比較して１０文字（２行）を超える視力の改善を示した。結果を図３に表しており、処置対象（「ＲＰＨ２０１」）および非処置対象（「プラセボ」）で１０文字以上の増加を有した対象の割合が示されている。
【０１６０】
結論：表された結果から、週２回で６ヶ月にわたるＲＰｈ２０１Ａ  ２０ｍｇのｓ．ｃ．投与が良好に耐容されたこと、および投与部位の反応が最も多く報告された処置による有害作用（ＴＥＡＥ）であるがＴＥＡＥがバイタルサイン測定に関係しなかったことが示される。さらに、正常なもう一方の目の増悪は、試験期間および退薬フォローアップ期間に、処置を受けた対象で観察されなかった。重要なこととして、ＲＰｈ２０１処置対象は全員、６ヶ月目にＥＴＤＲＳチャート文字によるＢＣＶＡをベースラインよりも１０を超えて改善し、処置がそれまでＮＡＩＯＮを有した患者の視覚機能改善に有用であることが示される。
【０１６１】
実施例４：インビトロモデルを用いた緑内障の処置におけるマスティックガムの単離画分の使用
これらの実験の目的は、アポトーシスを受けた初代ラット網膜神経節細胞の混合物において、ＲＰｈ２０１による直接の細胞処置を用いて、またはＲＰｈ２０１で予め処置されたラットから採取された血清によって、ＲＰｈ２０１組成物（ＲＰｈ２０１Ａ、ＲＰｈ２０１Ｂおよび／またはＲＰｈ２０１Ｃを含む）の保護活性を同定することである。
【０１６２】
ブタ、イヌ、サルおよびげっ歯類をはじめとし、非常に様々な緑内障動物モデルが存在し、これらのモデルのほとんどが、高眼圧を介した視神経損傷を含む。緑内障を研究するために利用可能な他の確立されたモデルは、遺伝子突然変異によるＲＧＣ誘導性死、視神経の機械的外傷、網膜ニューロンへの毒性損傷、または網膜虚血の誘導に依存する（Ｒｏｄｅｎｔ  ｍｏｄｅｌｓ  ｏｆ  ｇｌａｕｃｏｍａ．  Ｊｏｈｎｓｏｎ  ＴＶ，  Ｔｏｍａｒｅｖ  ＳＩ．  Ｂｒａｉｎ  Ｒｅｓ  Ｂｕｌｌ．  ２０１０  Ｆｅｂ  １５；８１（２−３）：３４９−５８）。そのようなモデルは、ＲＧＣ死に導く工程の研究、および異なるタイプの初期損傷の間での識別が可能である。加えて、異質性の複雑な自然環境に一部類似していて緑内障のメカニズムにおける重要な原理を研究するための強力で有用なツールを提供するインビトロ系からの蓄積データが存在する。緑内障研究に適用可能な主なインビトロ系の１つが、新たに単離されたげっ歯類網膜から単離されたＲＧＣ初代培養物である（Ｊ．  Ｔｏｍｂｒａｎ−Ｔｉｎｋ，  Ｃ．Ｊ．  Ｂａｒｎｓｔａｂｌｅ，  Ｍ．Ｂ．  Ｓｈｉｅｌｄｓ  （Ｅｄｓ．），  Ｏｐｈｔｈａｌ−  ｍｏｌｏｇｙ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ：  Ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｇｌａｕｃｏｍａｓ，  Ｈｕｍａｎａ  Ｐｒｅｓｓ，  Ｔｏｔｏｗａ，  ＮＪ，  ２００８，  ｐｐ．  ６０１−６０７内のＹ．  Ｏｔｏｒｉ，  Ｕｓｅ  ｏｆ  ｐｕｒｉｆｉｅｄ  ｒｅｔｉｎａｌ  ｇａｎｇｌｉｏｎ  ｃｅｌｌｓ  ｆｏｒ  ａｎ  ｉｎ  ｖｉｔｒｏ  ｍｏｄｅｌ  ｔｏ  ｓｔｕｄｙ  ｇｌａｕｃｏｍａ）。それは、酸化ストレス、ミトコンドリア機能不全、および神経毒などの特異的要因によって誘導された緑内障性損傷に対するＲＧＣ感受性を評価するための強力なシステムと見なされる（Ｋａｗａｓａｋｉ  ｅｔ  ａｌ．  Ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｖｅ  ｏｐｈｔａｌｍｏｌｏｇｙ  ｖｉｓ．ｓｃｉ．２００２  ｊｕｎ；４３（６）；１８３５−４２）。
【０１６３】
材料と方法
細胞培養プレートは、Ｂｅｃｔｏｎ  Ｄｉｃｋｓｏｎ（マサチューセッツ州ベッドフォード）から購入した。最小必須培地（ＭＥＭ）およびリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）は、Ｍｅｄｉａｔｅｃｈ（バージニア州マナサス）からであった。ウシ胎児血清は、Ｇｅｍｉｎｉ  Ｂｉｏ−Ｐｒｏｄｕｃｔｓ（カリフォルニア州ウェストサクラメント）からである。カルセインＡＭおよび１，１’−ジオクタデシル−３，３，３’，３’−テトラメチルインドカルボシアニンペルクロラート（ＤｉＩ）は、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｒｏｂｅｓ（オレゴン州ユージーン）からである。ポリ−Ｌ−リジン、スタウロスポリン、Ｎ−メチル−Ｄ−アスパルタート（ＮＭＤＡ）およびグルタマートは、Ｓｉｇｍａ  Ａｌｄｒｉｃｈ（ミズーリ州セントルイス）からである。パパイン、オボムコイドおよびＤＮａｓｅ  Ｉは、Ｗｏｒｔｈｉｎｇｔｏｎ  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ（ニュージャージー州レークウッド）からである。アネキシンＶ  Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ  ４８８は、ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ（マサチューセッツ州ウォルサム）からである。
【０１６４】
動物  −  若齢（試験開始時８〜９週齢）の動物に、ＲＰｈ２０１を２週間にわたり週に２回注射する。最後の注射の７２時間後に、採血のために動物をイソフルランで麻酔する。終末麻酔の下、採血のために動物を眼窩後から採血した。妊娠した雌スプラグードーリーラットを、Ｅｎｖｉｇｏ（インディアナ州インディアナポリス）から得る。出生の２〜５日後に幼動物を低体温法により麻酔し、ＤｉＩを上丘に注射することによって網膜神経節細胞（ＲＧＣ）を標識する。標識の２〜４日後に、幼動物を断頭により殺処分して、眼球を摘出して、ハンクス平衡塩溶液（ＨＢＳＳ）ですすぐ。その後、網膜を摘出して、分離のために１２単位／ｍＬ  パパインおよびアール平衡塩溶液中０．００５％  ＤＮＡｓｅ溶液に入れる。
【０１６５】
初代網膜神経節細胞の単離および培養  −  培養法は、Ｗｏｒｔｈｉｎｇｔｏｎ  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎから適合された。初代ＲＧＣ単離の１時間前に、９６ウェル培養プレートをポリ−Ｌ−リジン（１０μｇ／ｍｌ）で少なくとも３０分間コーティングした後、吸引してＨＢＳＳですすぐ。
【０１６６】
パパインおよびＤＮＡｓｅ溶液中の網膜を、一定して撹拌しながら３７℃で３０分間インキュベートする。その後、溶液を１０ｍＬセロロジカルピペットで５０回粉砕し、さらに細胞を解離する。その後、溶液を室温にて３００ｇで５分間遠心分離する。
【０１６７】
その後、上清を除去し、細胞ペレットをＥＢＳＳ中の０．００５％ＤＮＡｓｅ溶液に再懸濁させる。不連続な密度勾配を、オボムコイド・アルブミン阻害剤溶液を用いて調製し、バイアルを７０ｇで６分間での２回目の遠心分離にかける。上清を除去して、細胞を５％ＦＣＳ補充ＤＭＥＭに再懸濁させる。得られた細胞溶液を４０μｍ細胞ステイナーでろ過する。細胞を２０００個／ｍｍ２で播種して、３７℃および５％ＣＯ２で２４時間インキュベートする。
【０１６８】
血清の調製  −  全血試料を、ＥＤＴＡを含まない血清分離管に採取して、血液採取後０．５時間、保持して、３０００ｒｐｍで５分間遠心分離する。ろ過ピペットチップを用いて血清を採取し、直ちに−８０℃で貯蔵する。
【０１６９】
処置  −  アポトーシスを誘導するために、１ｍＭ  ＮＤＭＡを用いて、または最初の播種時の血清枯渇により、細胞を処置する。同時に、細胞をＲＰｈ２０１処置ラットから採取された血清、ビヒクル処置ラットから採取された血清、ＲＰｈ２０１またはビヒクルで処置する。１０μＭスタウロスポリン溶液は、細胞死の陽性対照として働く。
【０１７０】
初代ＲＧＣ生存性の評価  −  アネキシンＶ  Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ  ４８８は、アポトーシスを受けた細胞の透過膜を染色し、４９５／５１５ｎｍの励起および発光波長を有する。最初の播種の２４時間後に、アネキシンＶ  ５μＬを各ウェルに添加し、１０分後に細胞を蛍光顕微鏡測定によりカウントする。
【０１７１】
カルセインＡＭは、生存する細胞のみを染色し、同じく４９５／５１５ｎｍの励起および発光波長を有する。アネキシンＶ  Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ  ４８８の対照として、一部の細胞は代わりにカルセインＡＭで染色させる。最初の播種の２４時間後に、培地を一部の細胞から除去して、１×ＰＢＳ中のカルセインＡＭの溶液と交換する。３０分後に、カルセイン溶液を除去して、１×ＰＢＳと交換し、細胞を蛍光顕微鏡測定によりカウントする。
【０１７２】
蛍光顕微鏡測定  −  全てのＲＧＣを５４９および５６５ｎｍに励起および発光波長を有するＤｉＩで染色する。緑色および赤色の両方の蛍光を帯びた細胞が、アポトーシスを受けたＲＧＣであり、赤色のみの蛍光を帯びたそれらは、生存するＲＧＣである。生存するＲＧＣの数を、アネキシンＶ  Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ  ４８８で染色されないＤｉＩ染色細胞総数の割合％として報告する。対照として、一部の細胞をアネキシンの代わりにカルセインＡＭで染色するが、この場合、生存可能なＲＧＣの割合％を、ＤｉＩで染色された細胞総数に対するＤｉＩおよびカルセインの両方で染色された細胞数として報告する。
【０１７３】
実施例５：インビトロモデルを用いた緑内障の処置におけるマスティックガムの単離画分の使用
これらの実験の目的は、アポトーシスを受けた初代ラット網膜神経節細胞の混合物において、神経保護活性についてＲＰｈ２０１組成物（ＲＰｈ２０１Ａ、ＲＰｈ２０１Ｂおよび／またはＲＰｈ２０１Ｃを含む）の保護活性を同定することである。
【０１７４】
材料と方法
細胞培養プレートは、Ｂｅｃｔｏｎ  Ｄｉｃｋｓｏｎ（マサチューセッツ州ベッドフォード）から購入した。最小必須培地（ＭＥＭ）およびリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）は、Ｍｅｄｉａｔｅｃｈ（バージニア州マナサス）からである。ウシ胎児血清は、Ｇｅｍｉｎｉ  Ｂｉｏ−Ｐｒｏｄｕｃｔｓ（カリフォルニア州ウェストサクラメント）からである。カルセインＡＭおよび１，１’−ジオクタデシル−３，３，３’，３’−テトラメチルインドカルボシアニンペルクロラート（ＤｉＩ）は、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｒｏｂｅｓ（オレゴン州ユージーン）からである。ポリ−Ｌ−リジン、スタウロスポリン、Ｎ−メチル−Ｄ−アスパルタート（ＮＭＤＡ）およびグルタマートは、Ｓｉｇｍａ  Ａｌｄｒｉｃｈ（ミズーリ州セントルイス）からである。パパイン、オボムコイドおよびＤＮａｓｅ  Ｉは、Ｗｏｒｔｈｉｎｇｔｏｎ  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ（ニュージャージー州レークウッド）からである。アネキシンＶ  Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ  ４８８は、ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ（マサチューセッツ州ウォルサム）からである。
【０１７５】
動物  −  妊娠中の雌スプラグードーリーラットを、Ｅｎｖｉｇｏ（インディアナ州インディアナポリス）から得る。出生の２〜５日後に幼動物を低体温法により麻酔し、ＤｉＩを上丘に注射することによって網膜神経節細胞（ＲＧＣ）を標識する。標識の２〜４日後に、幼動物を断頭により殺処分して、眼球を摘出し、ハンクス平衡塩溶液（ＨＢＳＳ）ですすぐ。その後、網膜を摘出して、分離のために１２単位／ｍＬ  パパインおよびアール平衡塩溶液中０．００５％  ＤＮＡｓｅ溶液に入れる。
【０１７６】
初代網膜神経節細胞の単離および培養  −  培養法は、Ｗｏｒｔｈｉｎｇｔｏｎ  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎから適合させる。初代ＲＧＣ単離の１時間以内に、９６ウェル培養プレートをポリ−Ｌ−リジン（１０μｇ／ｍｌ）で少なくとも３０分間コーティングした後、吸引してＨＢＳＳですすぐ。パパインおよびＤＮＡｓｅ溶液中の網膜を、一定して撹拌しながら３７℃で３０分間インキュベートする。その後、溶液を１０ｍＬセロロジカルピペットで５０回粉砕し、さらに細胞を解離する。その後、溶液を室温にて３００ｇで５分間遠心分離する。その後、上清を除去し、細胞ペレットをＥＢＳＳ中の０．００５％ＤＮＡｓｅ溶液に再懸濁させる。不連続な密度勾配を、オボムコイド・アルブミン阻害剤溶液を用いて調製し、バイアルを７０ｇで６分間での２回目の遠心分離にかける。上清を除去して、細胞を５％ＦＣＳ補充ＤＭＥＭに再懸濁させる。得られた細胞溶液を４０μｍ滅菌プラスチックメッシュでろ過して、細菌塊を除去する。細胞を２０００個／ｍｍ２で播種して、３７℃および５％ＣＯ２で２４時間インキュベートする。
【０１７７】
処置  −  アポトーシスを誘導するために、細胞を最初の播種時に血清枯渇で処置する。同時に、細胞を１、２．５、５、および１０μＬのＲＰｈ２０１で処置する。１０μＭスタウロスポリン溶液は、細胞死の陽性対照として働く。
【０１７８】
初代ＲＧＣ生存性の評価  −  アネキシンＶ  Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ  ４８８  −  最初の播種の２４時間後に、Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ  ４８８で標識されたアネキシンＶ  ５μＬを各ウェルに添加して、１０分後に蛍光顕微鏡測定によってカウントする。
【０１７９】
カルセインＡＭ  −  アネキシンＶ  Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ  ４８８の対照として、一部の細胞を、代わりにカルセインＡＭで染色する。最初の播種の２４時間後に、培地を一部の細胞から除去して、１×ＰＢＳ中のカルセインＡＭの溶液と交換する。３０分後に、カルセインＡＭ溶液を除去して１×ＰＢＳと交換し、細胞を蛍光顕微鏡測定によってカウントする。
【０１８０】
蛍光顕微鏡測定  −  アネキシンＶ  Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ  ４８８は、アポトーシスを受けている細胞の膜内で暴露されるようになるホスファチジルセリンに結合する。それは、４９５／５１５ｎｍの励起および発光波長を有する。カルセインＡＭは、蛍光性ではないが、エステラーゼがアセトキシメチル（ＡＭ）エステルとのエステル結合を切断すると、生存細胞の内部で蛍光性になる。それゆえそれは、生存する細胞のみを染色し、同じく４９５／５１５ｎｍの励起および発光波長を有する。この２種の試薬は、このような理由から、同じウェルで用いられない。
【０１８１】
全てのＲＧＣを５４９および５６５ｎｍに励起および発光波長を有するＤｉＩで逆行標識する。緑色（アネキシンＶによる）および赤色の両方の蛍光を帯びた細胞が、アポトーシスを受けているＲＧＣであり、赤色のみの蛍光を帯びたそれらは、生存するＲＧＣである。生存するＲＧＣの数を、アネキシンＶ  Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ  ４８８で染色されないＤｉＩ染色細胞総数の割合％として報告する。対照として、一部の細胞をアネキシンＶの代わりにカルセインＡＭで染色するが、この場合、生存可能なＲＧＣの割合％を、ＤｉＩで染色された細胞総数に対するＤｉＩおよびカルセインの両方で染色された細胞数として報告する。
【０１８２】
神経保護活性の評価  −  神経保護活性量の計算は、被験物質が傷害の範例によって誘導される追加的アポトーシスを如何に良好に減少させるかに基づく。言い換えれば、ベースラインアポトーシスが１０％であり、傷害がアポトーシスを６０％にさせ、被験物質がアポトーシスを３５％減少させれば、神経保護活性は５０％である。被験物質がアポトーシスを１０％に再び減少させれば、神経保護活性は１００％である。
【０１８３】
この計算の式は：
【数１】
2018507873.tif 000003
【０１８４】
結果および結論
図４に表された結果に示す通り、血清枯渇は、培養物に対する有意なアポトーシス比をもたらした。培養物は、用量依存的なＲＰｈ２０１Ａ処置（用量依存性効果）によって救済された。血清枯渇は、視神経頭での圧力および／または虚血および／または緊張が軸索輸送を減少させて軸索傷害を誘発した場合の、緑内障でのＲＧＣの逆行性トロフィックサポートの損失を模倣する、一般に用いられるモデルである。したがって表された結果から、この確立されたインビトロ緑内障モデルにおけるＲＰｈ２０１Ａの神経保護効果が実証される。
【０１８５】
実施例６：インビボモデルを用いた緑内障の処置におけるマスティックガムの単離画分の使用
種々の異なるタイプの緑内障が存在し、その全てが網膜神経節細胞（ＲＧＣ）損失という同じ病理生理学的作用を共有する。この疾患の一般的メカニズムは、網膜神経節細胞（ＲＧＣ）への構造的および機能的損傷を誘発する眼内圧（ＩＯＰ）の上昇である。ＲＧＣの損失を遅延または停止させる治療的アプローチが、緑内障における視覚維持にとって潜在的に有益であることが認められている。したがって適切な動物モデルは、視神経傷害または網膜内傷害に関連するものである。視神経への任意の傷害は、結果的にＲＧＣ死を招くであろう。それゆえ完全に（Ａｌｌｃｕｔｔ  Ｄ，  Ｂｅｒｒｙ  Ｍ，  Ｓｉｅｖｅｒｓ  Ｊ．  Ａ  ｑｕａｌｉｔａｔｉｖｅ  ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｒｅａｃｔｉｏｎｓ  ｏｆ  ｒｅｔｉｎａｌ  ｇａｎｇｌｉｏｎ  ｃｅｌｌ  ａｘｏｎｓ  ｔｏ  ｏｐｔｉｃ  ｎｅｒｖｅ  ｃｒｕｓｈ  ｉｎ  ｎｅｏｎａｔａｌ  ａｎｄ  ａｄｕｌｔ  ｍｉｃｅ．  Ｂｒａｉｎ  Ｒｅｓ  １９８４；  ３１８：  ２３１−４０；    Ａｌｌｃｕｔｔ  Ｄ，  Ｂｅｒｒｙ  Ｍ，  Ｓｉｅｖｅｒｓ  Ｊ．  Ａ  ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ  ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｒｅａｃｔｉｏｎｓ  ｏｆ  ｒｅｔｉｎａｌ  ｇａｎｇｌｉｏｎ  ｃｅｌｌｓ  ｔｏ  ｏｐｔｉｃ  ｎｅｒｖｅ  ｃｒｕｓｈ  ｉｎ  ｎｅｏｎａｔａｌ  ａｎｄ  ａｄｕｌｔ  ｍｉｃｅ．  Ｂｒａｉｎ  Ｒｅｓ  １９８４；  ３１８：  ２１９−３０）、または部分的に視神経を切断することで、これが完遂され得る。同じ効果が、神経そのものの周囲のくも膜腔へのエンドセリン−１の輸液によって誘発される視神経頭への慢性虚血によって実現される（Ｃｉｏｆｆｉ  ＧＡ，  Ｏｒｇｕｌ  Ｓ，  Ｏｎｄａ  Ｅ，  Ｂａｃｏｎ  ＤＲ，  Ｖａｎ  Ｂｕｓｋｉｒｋ  ＥＭ．  Ａｎ  ｉｎ  ｖｉｖｏ  ｍｏｄｅｌ  ｏｆ  ｃｈｒｏｎｉｃ  ｏｐｔｉｃ  ｎｅｒｖｅ  ｉｓｃｈｅmｉａ：  ｔｈｅ  ｄｏｓｅ−ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ  ｅｆｆｅｃｔｓ  ｏｆ  ｅｎｄｏｔｈｅｌｉｎ−１  ｏｎ  ｔｈｅ  ｏｐｔｉｃ  ｎｅｒｖｅ  ｍｉｃｒｏｖａｓｃｕｌａｔｕｒｅ．  Ｃｕｒｒ  Ｅｙｅ  Ｒｅｓ  １９９５；  １４：  １１４７−５３  ；  Ｏｒｇｕｌ  Ｓ，  Ｃｉｏｆｆｉ  ＧＡ，  Ｂａｃｏｎ  ＤＲ，  Ｖａｎ  Ｂｕｓｋｉｒｋ  ＥＭ．  Ａｎ  ｅｎｄｏｔｈｅｌｉｎ−１−ｉｎｄｕｃｅｄ  ｍｏｄｅｌ  ｏｆ  ｃｈｒｏｎｉｃ  ｏｐｔｉｃ  ｎｅｒｖｅ  ｉｓｃｈｅｍｉａ  ｉｎ  ｒｈｅｓｕｓ  ｍｏｎｋｅｙｓ．  Ｊ  Ｇｌａｕｃｏｍａ  １９９６；  ５：  １３５−８）。上述のモデルの全てにおいて、軸索傷害の誘導は、ＲＧＣ死をもたらす。
【０１８６】
慢性損傷後のＲＧＣにおけるＲＰｈ２０１Ａの再生的役割を実証するために、術後１ヶ月目に動物の処置が開始されるラット視神経軸索切断モデルを用いた。 
【０１８７】
方法：
成体雄ウィスターラット（ｎ＝５）を深麻酔して（キシラジン５０ｍｇ／ｋｇおよびケタミン３５ｍｇ／ｋｇ）、右のＯＮを外眼角切開により露出させた。結膜を角膜の境界部で眼球の側方から切開した。外眼筋および眼球後退筋を単離した後、視神経を露出させた。髄膜内の小さな開口部（５０〜１００μｍ）を通して、神経線維を眼球から２〜３ｍｍの長さで完全に切断した。５０μｍチップおよび滑らかな縁部を備えた特殊設計のガラス製解剖器具によって、神経の脈管構造およびＯＮの血液供給に損傷がないこと、ならびに髄膜への最小限の損傷が確実となった。外傷は、全ての動物において片側であった。
【０１８８】
ラットを、各５匹で構成される２つの実験群に分割した。一方の群は、後頸部にＲＰｈ２０１Ａ  ０．０２５ｍｌ容量を含む皮下注射を受け、対照群は、ビヒクル０．０２５ｍｌを注射された。
【０１８９】
最初の注射は、手術の１ヶ月後に全動物に施した。次の注射は、３ヶ月間にわたり１週間に２回投与された。
【０１９０】
軸索切断の４ヶ月後（処置開始の３ヶ月後）に、生存する網膜神経節細胞（ＲＧＣ）を染色するために、蛍光逆行性神経トレーサー（Ｄｉ−Ａｓｐ）を軸索切断された視神経に挿入した。
【０１９１】
２４時間後に、手術を受けたラットをＣＯ２飽和チャンバーで殺処分して、傷害を負った右目を摘出した。網膜を単離し、スライド上に平坦に伸ばして、キシレンを基剤とする封入剤で固定した。
【０１９２】
全組織標本の網膜を蛍光顕微鏡測定で評価して、染色された細胞を目視でカウントした。結果を網膜分析の蛍光顕微鏡像を示す図５Ａ〜Ｂに表すが、対照（図５Ｂ）と比較してＲＰｈ２０１Ａ処置ラット（図５Ａ）から得られた生存ＲＧＣ細胞の数が多いことが示される。
【０１９３】
実施例７：インビボモデルを用いた緑内障の処置におけるマスティックガムの単離画分の使用
緑内障を処置する際のＲＰｈ２０１の影響を実証および評価するために、高い眼内圧（ＩＯＰ）をラットにおいて実施して、ヒト緑内障を模倣するモデルを形成させた。
【０１９４】
前眼房に注射されたマイクロビーズの使用は、ラットおよび他の動物において高ＩＯＰを生成するための確立されたモデルである（”Ｔｈｅ  ｍｉｃｒｏ  ｂｅａｄｓ  ｏｃｃｌｕｓｉｏｎ  ｍｏｄｅｌ；  Ａ  ｐａｒａｄｉｇｍ  ｆｏｒ  ｉｎｄｕｃｅｄ  ｏｃｕｌａｒ  ｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｏｎ  ｉｎ  ｒａｔｓ  ａｎｄ  ｍｉｓｅ．  ＩＯＶＳ，  ２０１０  Ｊａｎ；５１（１）；２０７−２１６”）。マイクロビーズを前房隅角の腔に導入して、眼からの水分の出口を無くし、それにより内圧を上昇させる。
【０１９５】
材料と方法
試験開始時に８〜９週齢の若齢成体Ｓ．Ｄ．雄ラットである。ラットを１週間馴化させる。１４匹からなる２群を、試験に参加させる。群１は、ＲＰｈ２０１Ａで処置され、群２は、対照として働き、ビヒクルで処置される。ラット２８匹は全て、１５ミクロン径と測定されたラテックスマイクロビーズを右目の前眼房に注射される。注射の容量は、５０００ビーズ／μＬ濃度を含むＰＢＳ  ８μＬである。１０μＬ容量および３２Ｇ針のＨａｍｉｌｔｏｎ製シリンジを用いて、注射が実施される。この手順は、動物医療のＡＲＶＯ規定に従って、２％キシラジンおよびケタミン塩酸塩を用いた全身麻酔の下で実施される。
【０１９６】
群１は、ＲＰｈ２０１Ａを皮下注射され、それをビーズ注射当日に開始する。群２（対照）は、ビヒクル（綿実油）を皮下注射される。ＲＰｈ２０１Ａまたはビヒクルの投与を、週に２回実施される。
【０１９７】
ベースラインＩＯＰを、注射前に測定する。２回のＩＯＰ測定を、注射の３日後に開始して、ＴＯＮＯＰＥＮ（Ｒｅｉｃｈｅｒｔ  Ｌｔｄ、ドイツ所在）を用いて１週おきに測定する。局所点眼麻酔薬のロカリンを、イソフルランでの短期全身麻酔と共に使用した。
【０１９８】
各ラットの２つの目の間にある８ｍｍＨｇの差は、緑内障を判断するのに十分と見なされる。この試験を高ＩＯＰの日から開始して４週間継続する。
【０１９９】
試験終了日に、動物を麻酔して、０．１Ｍ  ＰＢＳと、続いて０．１Ｍ  ＰＢＳ（ｐＨ７．４）中の４％パラホルムアルデヒドを１０分間、経心腔的に灌流する。眼球を視神経の球後基部と共に摘出して、４％パラホルムアルデヒドで３時間、後固定する。こうして得られた視神経を精査して、免疫染色またはトルイジンブルー染色のいずれかで処理する（軸索をカウントするため）。
【０２００】
網膜を摘出し、「全組織標本」の網膜として免疫染色用に処理する。他の眼球をパラフィンで包埋し、５ｍｍの厚さに切り出して、スライド上に採取し、脱パラフィンして水和し、免疫染色用に処理して、ＲＧＣの数を評価する。
【０２０１】
加えて、微細構造の影響を評価するために、複数の動物を殺処分して、電子顕微鏡の結果を得る。
【０２０２】
この実験を、先に示された実施例に従って調製されたＲＰｈ２０１Ｂ、ＲＰｈ２０１Ｃおよび他の任意選択による組成物を用いて繰り返す。
【０２０３】
実施例８：緑内障の処置におけるマスティックガムの単離画分の使用
マスティックガムの単離画分の配合剤を、テストされる対象の緑内障を処置する際に用いる。虚血性視神経症（ＩＯＮ）の処置に関する二重盲検試験を、マスティックガムの単離画分の５％配合剤（先のＲＨ−２０１Ａ配合剤）またはプラセボ処置（先のＢＨＴ安定化綿実油溶液）を利用して実施する。マスティックガムの単離画分の配合剤を、様々な度合いの緑内障に罹患した対象へ皮下（ｓ．ｃ．）投与する。対象は、連続する１３〜２６週間にＲＰＨ−２０１Ａ配合剤のｓ．ｃ．注射により１週間に２回処置される。
【０２０４】
対象の状態を評価するために、対象のベースライン状態を処置開始前に測定し、処置の間および処置後にフォローアップテストをさらに実施する。
【０２０５】
処置の影響を評価するために用いられたパラメータは、視力および視野の変化、視覚誘発電位の変化、および光干渉断層撮影（ＯＣＴ）の変化である。とりわけ、以下のパラメータを処置前、処置時および処置後に測定／決定する：ＥＴＤＲＳに基づき最高に矯正された視力（ＶＡ）検査の結果、患者の視野（ＶＦ）は、ハンフリー視野（ＨＶＦ）２４−２プログラムでの２４−２全点閾値プログラムを利用して測定した。視覚誘発応答（ＶＥＲ）としても公知の視覚誘発電位（ＶＥＰ）を用いて、視覚刺激に応答して脳内ニューロンにより発生した電気生理学的シグナルを記録した。所望の刺激タイプを選択するのに用いられた刺激発生装置は、フラッシュＶＥＰ、パターンＶＥＰおよびマルチフォーカルＶＥＰである。高分解能ＯＣＴを用いて、網膜神経線維層の厚さ（ＲＮＦＬＴ）、ならびに罹患した象限および黄斑体積などの変化を測定した。
【０２０６】
加えて、バイタルサイン（ＨＲ、ＢＰ、体温）、臨床検査（血液学的検査、臨床化学検査、尿分析およびサイトカイン発現など）の変数の測定を、処置前、処置時および／または処置後に各対象でさらに実施し得る。
【０２０７】
被験対象には、緑内障の結果として視神経損傷を有する診断された１８歳よりも上の男性または女性が含まれる。
【０２０８】
具体的実施形態の前述の記載は、他者が現行の知識を適用することによって、過度の実験を行わず、そして一般的概念を逸脱することなく、様々な適用例にそのような具体的実施形態を即座に改良および／または適合させ得るという本発明の一般的性質を極めて十分に表しており、それゆえそのような適合および改良は、開示された実施形態の均等物の意味および範囲内のものと解釈されなければならない。本明細書で用いられる語句または用語が説明を目的としており、限定ではないことが、理解されなければならない。様々な開示された機能を実行するための手段、材料、およびステップは、本発明を逸脱することなく種々の代替的形態をとることができる。
【図１】
2018507873.tif 000004
【図２】
2018507873.tif 000005
【図３】
2018507873.tif 000006
【図４】
2018507873.tif 000007
【図５Ａ】
2018507873.tif 000008
【図５Ｂ】
2018507873.tif 000009
【国際調査報告】
2018507873.tif 000010
2018507873.tif 000011
2018507873.tif 000012
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