(57)【要約】葉酸受容体アルファ（ＦＲＡ）発現肺がんを有する患者におけるＦＲＡ標的化剤を用いた処置に対する応答性の見込みを予測するための方法が本明細書に提供されている。ＦＲＡ標的化剤を用いて患者におけるＦＲＡ発現肺がんを処置するための方法も提供されている。本方法は、生体試料中の患者のＦＲＡ発現レベルを定量化または決定するステップと、患者のＦＲＡ発現レベルを、ＦＲＡ発現レベルを定量化するのに使用される参照標準と比較するステップとを伴い、患者のＦＲＡ発現レベルが参照ＦＲＡ発現レベルに等しい、またはそれを超える場合、患者は、ＦＲＡ標的化剤を用いた処置に応答する可能性がある。ＦＲＡ発現肺がん患者の同定された集団の応答の予測および処置のための関連したキットもさらに提供される。
2018516244.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
葉酸受容体アルファ（ＦＲＡ）に免疫特異的に結合する抗体を用いて患者における葉酸受容体アルファ（ＦＲＡ）発現肺がんを処置するための方法であって、
前記患者の生体試料中の前記患者のＦＲＡ発現レベルを決定するステップと；
前記患者のＦＲＡ発現レベルを参照ＦＲＡ発現レベルと比較するステップと；
前記患者のＦＲＡ発現レベルが前記参照ＦＲＡ発現レベルに等しい、またはそれを超える場合、前記患者に治療有効量の前記抗体を投与するステップと
を含む、方法。
【請求項２】
患者における葉酸受容体アルファ（ＦＲＡ）発現肺がんを処置するための方法であって、前記方法は、前記患者に葉酸受容体アルファ（ＦＲＡ）に免疫特異的に結合する抗体を投与するステップを含み、前記患者のＦＲＡ発現レベルは、参照ＦＲＡ発現レベルに等しい、またはそれを超える、方法。
【請求項３】
葉酸受容体アルファ（ＦＲＡ）発現肺がんを有する患者における、葉酸受容体アルファ（ＦＲＡ）に免疫特異的に結合する抗体を用いた処置に対する応答性の見込みを予測するための方法であって、前記方法は、
前記患者の生体試料中の前記患者のＦＲＡ発現レベルを決定するステップと；
前記患者のＦＲＡ発現レベルを参照ＦＲＡ発現レベルと比較するステップと；
を含み、前記患者のＦＲＡ発現レベルが前記参照ＦＲＡ発現レベルに等しい、またはそれを超える場合、前記患者は、ＦＲＡに免疫特異的に結合する前記抗体を用いた処置に応答する可能性がある、方法。
【請求項４】
前記参照ＦＲＡ発現レベルが、それより上で、ＦＲＡに免疫特異的に結合する前記抗体を投与される前記ＦＲＡ発現肺がんに罹患している患者集団が、プラセボを投与される前記ＦＲＡ発現肺がんに罹患している患者集団に対して少なくとも１つの臨床転帰の統計的に有意な改善を実証したＦＲＡ発現レベルに対応する、前記請求項のいずれかに記載の方法。
【請求項５】
前記患者集団が、化学療法剤をさらに投与された、請求項４に記載の方法。
【請求項６】
前記化学療法剤が、タキサン、シスプラチン、カルボプラチン、および／またはペメトレキセドを含む、請求項５に記載の方法。
【請求項７】
前記ＦＲＡ発現レベルが、タンパク質定量化またはＲＮＡ定量化によって測定される、前記請求項のいずれかに記載の方法。
【請求項８】
前記ＦＲＡ発現レベルが、免疫組織化学的分析によって測定される、前記請求項のいずれかに記載の方法。
【請求項９】
前記ＦＲＡ発現レベルが、細胞質ＦＲＡ発現である、前記請求項のいずれかに記載の方法。
【請求項１０】
前記ＦＲＡ発現レベルが、膜性ＦＲＡ発現である、請求項１から８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１１】
ＦＲＡに免疫特異的に結合する前記抗体が、毒素にコンジュゲートされる、前記請求項のいずれかに記載の方法。
【請求項１２】
前記毒素が、微小管阻害剤、ＤＮＡ損傷剤、ＤＮＡ修復阻害剤、またはシグナル伝達阻害剤を含む、請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
前記ＤＮＡ損傷剤が、放射性核種を含む、請求項１１に記載の方法。
【請求項１４】
ＦＲＡに免疫特異的に結合する前記抗体が、以下：
ＣＤＲＨ１として配列番号１、ＣＤＲＨ２として配列番号２、ＣＤＲＨ３として配列番号３、ＣＤＲＬ１として配列番号４、ＣＤＲＬ２として配列番号５、およびＣＤＲＬ３として配列番号６を含む抗体；
配列番号７のアミノ酸配列を含む成熟軽鎖可変領域および／もしくは配列番号８のアミノ酸配列を含む成熟重鎖可変領域を含む抗体；
ファルレツズマブ；
それぞれ配列番号７および配列番号８と少なくとも９０％、好ましくは少なくとも９５％もしくは９９％の配列同一性を有する成熟した軽鎖可変領域および重鎖可変領域を含む、葉酸受容体アルファに特異的に結合する抗体；または
ファルレツズマブの葉酸受容体アルファへの結合を競合的に阻害することができる抗体もしくはその誘導体
である、前記請求項のいずれかに記載の方法。
【請求項１５】
治療有効量の化学療法剤を前記患者に投与するステップをさらに含む、前記請求項のいずれかに記載の方法。
【請求項１６】
前記化学療法剤が、白金含有化合物を含む、請求項１５に記載の方法。
【請求項１７】
前記白金含有化合物が、シスプラチンまたはカルボプラチンを含む、請求項１６に記載の方法。
【請求項１８】
治療有効量のタキサンを前記患者に投与するステップをさらに含む、前記請求項のいずれかに記載の方法。
【請求項１９】
前記タキサンが、パクリタキセルである、請求項１８に記載の方法。
【請求項２０】
治療有効量のペメトレキセドを前記患者に投与するステップをさらに含む、請求項１５、１６、１７、１８、または１９に記載の方法。
【請求項２１】
カルボプラチンおよびパクリタキセルを前記患者に投与するステップをさらに含む、請求項１から１４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２２】
カルボプラチンが前記患者に投与されて、約６またはそれ未満の曲線下面積（ＡＵＣ）を達成する、請求項２１に記載の方法。
【請求項２３】
パクリタキセルが、約５０ｍｇ／ｍ２〜約２５０ｍｇ／ｍ２の用量で前記患者に投与される、請求項２１または２２に記載の方法。
【請求項２４】
カルボプラチンおよびペメトレキセドを前記患者に投与するステップをさらに含む、請求項１から１４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２５】
前記カルボプラチンが前記患者に投与されて、約５〜６またはそれ未満の曲線下面積を達成する、請求項２４に記載の方法。
【請求項２６】
前記ペメトレキセドが、約４００〜約６００ｍｇ／ｍ２の用量で前記患者に投与される、請求項２４または２５に記載の方法。
【請求項２７】
シスプラチンおよびペメトレキセドを前記患者に投与するステップをさらに含む、請求項１から１４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２８】
シスプラチンが、約５０ｍｇ／ｍ２〜約２５０ｍｇ／ｍ２の用量で前記患者に投与される、請求項２７に記載の方法。
【請求項２９】
ペメトレキセドが、約４００ｍｇ／ｍ２〜約６００ｍｇ／ｍ２の用量で投与される、請求項２７または２８に記載の方法。
【請求項３０】
前記ＦＲＡ発現レベルが、以下の抗体：
（ａ）ファルレツズマブと同じエピトープに結合する抗体；
（ｂ）ＣＤＲＨ１として配列番号１（ＧＦＴＦＳＧＹＧＬＳ）、ＣＤＲＨ２として配列番号２（ＭＩＳＳＧＧＳＹＴＹＹＡＤＳＶＫＧ）、ＣＤＲＨ３として配列番号３（ＨＧＤＤＰＡＷＦＡＹ）、ＣＤＲＬ１として配列番号４（ＳＶＳＳＳＩＳＳＮＮＬＨ）、ＣＤＲＬ２として配列番号５（ＧＴＳＮＬＡＳ）、およびＣＤＲＬ３として配列番号６（ＱＱＷＳＳＹＰＹＭＹＴ）を含む抗体；
（ｃ）配列番号７のアミノ酸配列を含む成熟軽鎖可変領域およびアミノ酸配列番号８を含む成熟重鎖可変領域を含む抗体；
（ｄ）ファルレツズマブ；
（ｅ）５４８９０８抗体；
（ｆ）５４８９０８抗体と同じエピトープに結合する抗体；
（ｇ）６Ｄ３９８抗体；
（ｈ）６Ｄ３９８抗体と同じエピトープに結合する抗体；
（ｉ）ＢＮ３．２抗体；
（ｊ）ＢＮ３．２抗体と同じエピトープに結合する抗体；
（ｋ）２６Ｂ３抗体と同じエピトープに結合する抗体；
（ｌ）ＣＤＲＨ１として配列番号１４（ＧＹＦＭＮ）、ＣＤＲＨ２として配列番号１５（ＲＩＦＰＹＮＧＤＴＦＹＮＱＫＦＫＧ）、ＣＤＲＨ３として配列番号１６（ＧＴＨＹＦＤＹ）、ＣＤＲＬ１として配列番号１７（ＲＴＳＥＮＩＦＳＹＬＡ）、ＣＤＲＬ２として配列番号１８（ＮＡＫＴＬＡＥ）、およびＣＤＲＬ３として配列番号１９（ＱＨＨＹＡＦＰＷＴ）を含む抗体；
（ｍ）２６Ｂ３抗体；
（ｎ）１９Ｄ４抗体と同じエピトープに結合する抗体；
（ｏ）ＣＤＲＨ１として配列番号２０（ＨＰＹＭＨ）、ＣＤＲＨ２として配列番号２１（ＲＩＤＰＡＮＧＮＴＫＹＤＰＫＦＱＧ）、ＣＤＲＨ３として配列番号２２（ＥＥＶＡＤＹＴＭＤＹ）、ＣＤＲＬ１として配列番号２３（ＲＡＳＥＳＶＤＴＹＧＮＮＦＩＨ）、ＣＤＲＬ２として配列番号２４（ＬＡＳＮＬＥＳ）、およびＣＤＲＬ３として配列番号２５（ＱＱＮＮＧＤＰＷＴ）を含む抗体；
（ｐ）１９Ｄ４抗体；
（ｑ）９Ｆ３抗体と同じエピトープに結合する抗体；
（ｒ）ＣＤＲＨ１として配列番号２６（ＳＧＹＹＷＮ）、ＣＤＲＨ２として配列番号２７（ＹＩＫＳＤＧＳＮＮＹＮＰＳＬＫＮ）、ＣＤＲＨ３として配列番号２８（ＥＷＫＡＭＤＹ）、ＣＤＲＬ１として配列番号２９（ＲＡＳＳＴＶＳＹＳＹＬＨ）、ＣＤＲＬ２として配列番号３０（ＧＴＳＮＬＡＳ）、およびＣＤＲＬ３として配列番号３１（ＱＱＹＳＧＹＰＬＴ）を含む抗体；
（ｓ）９Ｆ３抗体；
（ｔ）２４Ｆ１２抗体と同じエピトープに結合する抗体；
（ｕ）ＣＤＲＨ１として配列番号３２（ＳＹＡＭＳ）、ＣＤＲＨ２として配列番号３３（ＥＩＧＳＧＧＳＹＴＹＹＰＤＴＶＴＧ）、ＣＤＲＨ３として配列番号３４（ＥＴＴＡＧＹＦＤＹ）、ＣＤＲＬ１として配列番号３５（ＳＡＳＱＧＩＮＮＦＬＮ）、ＣＤＲＬ２として配列番号３６（ＹＴＳＳＬＨＳ）、およびＣＤＲＬ３として配列番号３７（ＱＨＦＳＫＬＰＷＴ）を含む抗体；
（ｖ）２４Ｆ１２抗体；
（ｗ）（ｉ）ＬＫ２６ＨｕＶＫ；
（ｉｉ）ＬＫ２６ＨｕＶＫＹ；
（ｉｉｉ）ＬＫ２６ＨｕＶＫＰＷ；および
（ｉｖ）ＬＫ２６ＨｕＶＫＰＷ，Ｙ；
からなる群より選択される可変領域軽鎖を含む抗体；
（ｘ）（ｉ）ＬＫ２６ＨｕＶＨ；
（ｉｉ）ＬＫ２６ＨｕＶＨ  ＦＡＩＳ，Ｎ；
（ｉｉｉ）ＬＫ２６ＨｕＶＨ  ＳＬＦ；
（ｉｖ）ＬＫ２６ＨｕＶＨ  Ｉ，Ｉ；
（ｖ）ＬＫ２６ＫＯＬＨｕＶＨ；
からなる群より選択される可変領域重鎖を含む抗体；
（ｙ）重鎖可変領域ＬＫ２６ＫＯＬＨｕＶＨ（配列番号４６）および軽鎖可変領域ＬＫ２６ＨｕＶＫＰＷ，Ｙ（配列番号４１）を含む抗体；
（ｚ）重鎖可変領域ＬＫ２６ＨｕＶＨ  ＳＬＦ（配列番号４４）および軽鎖可変領域ＬＫ２６ＨｕＶＫＰＷ，Ｙ（配列番号４１）を含む抗体；
（ａａ）重鎖可変領域ＬＫ２６ＨｕＶＨ  ＦＡＩＳ，Ｎ（配列番号４３）および軽鎖可変領域ＬＫ２６ＨｕＶＫＰＷ，Ｙ（配列番号４１）を含む抗体；ならびに
（ｂｂ）マウスモノクローナルＬＫ２６抗体
の少なくとも１種を用いたイムノアッセイによって決定される、前記請求項のいずれかに記載の方法。
【請求項３１】
前記患者のＦＲＡ発現レベルが、デジタルイメージング技術またはマニュアル病理定量化によって評価される、前記請求項のいずれかに記載の方法。
【請求項３２】
前記患者のＦＲＡ発現レベルが、ＦＲＡＭＳＣＯＲまたはＨＢＳＣＯＲによって評価される、請求項７に記載の方法。
【請求項３３】
前記参照ＦＲＡ発現レベルが、４２％の＋１またはそれ超の抗ＦＲＡ染色である、請求項３２に記載の方法。
【請求項３４】
前記参照ＦＲＡ発現レベルが、２１％の＋２またはそれ超の抗ＦＲＡ染色である、請求項３２に記載の方法。
【請求項３５】
前記参照ＦＲＡ発現レベルが、１４％の＋３またはそれ超の染色である、請求項３２に記載の方法。
【請求項３６】
前記参照ＦＲＡ発現レベルが、７のＦＲＡＭＳＣＯＲである、請求項３２に記載の方法。
【請求項３７】
前記参照ＦＲＡ発現レベルが、０．２５のＨＢＳＣＯＲである、請求項３２に記載の方法。
【請求項３８】
前記生体試料が、全血、血清、血漿、循環細胞、循環腫瘍細胞、遊離細胞、組織、胸水、尿、唾液、痰、または気管支洗浄液である、前記請求項のいずれかに記載の方法。
【請求項３９】
前記生体試料が、胸膜組織を含む、前記請求項のいずれかに記載の方法。
【請求項４０】
前記生体試料が、滲出液に由来する胸膜細胞を含む、前記請求項のいずれかに記載の方法。
【請求項４１】
前記少なくとも１つの臨床転帰が、無増悪生存期間および／または全生存期間である、請求項４に記載の方法。
【請求項４２】
前記ＦＲＡ発現肺がんが、ＦＲＡ発現非小細胞肺がん（ＮＳＣＬＣ）である、前記請求項のいずれかに記載の方法。
【請求項４３】
前記ＮＳＣＬＣが、腺癌である、請求項４２に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願への相互参照
この出願は、２０１５年４月１７日に出願された米国仮出願第６２／１４９１８４号（この内容は、その全体が参考として本明細書に援用される）の利益を主張する。
【０００２】
配列表
この出願は、ＡＳＣＩＩフォーマットで電子的に提出され、その全体が参考として本明細書に援用される配列表を含む。上記ＡＳＣＩＩコピーは、２０１６年４月１３日に作成され、１０４０１８．０００９５０＿ＳＬ．ｔｘｔという名称であり、サイズが３０，４７３バイトである。
【０００３】
本明細書に記載の主題は、葉酸受容体アルファ（ＦＲＡ）発現肺がんを有する患者におけるＦＲＡ標的化剤を用いた処置に対する応答性の見込みを予測するための方法、およびＦＲＡ標的化剤を用いて患者におけるＦＲＡ発現肺がんを処置する方法に関する。
【背景技術】
【０００４】
米国がん協会によれば、肺および気管支がんの推定２２１，２００件の新しい症例が、２０１５年に米国で診断されるとされ、これはすべての新しいがん症例の約１４％に相当する。さらに、肺および気管支がんによる推定１５８，０４０件の死亡が、２０１５年に米国で発生するとされ、これは、すべてのがんによる死亡の約２７％に相当する。すべての肺がんのおよそ８４％は、非小細胞肺がん（ＮＳＣＬＣ）であり、５年生存率は、わずか１８％である。Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｓｏｃｉｅｔｙ．  Ｃａｎｃｅｒ  Ｆａｃｔｓ  ＆  Ｆｉｇｕｒｅｓ  ２０１５．  Ａｔｌａｎｔａ：  Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｓｏｃｉｅｔｙ。２０１５年。
【０００５】
進行ＮＳＣＬＣは、依然として永続性のある長期生存が非常に希有である処置困難ながんである。化学療法、特に、白金ベースのダブレット（ｄｏｕｂｌｅｔ）は、標的化療法のための活性化変異が存在しない、または未知の患者のための確立された処置である。組織学は、進行ＮＳＣＬＣを有する患者の化学療法を選択するときのますます重要な要因である（Ｌｉら、Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｏｎｃｏｌ、２０１３年；３１巻：１０３９〜１０４９頁）。進行ＮＳＣＬＣにおける大規模第３相研究により、シスプラチン＋ペメトレキセドは、腺癌または大細胞癌を有する被験体において、シスプラチン＋ゲムシタビンと比較したとき、統計的に優れた全生存期間（ＯＳ）をもたらすことが見出された（Ｓｃａｇｌｉｏｔｔｉら、Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｏｎｃｏｌ、２００８年；２６巻：３５４３〜３５５１頁）。しかし、同じ研究において、扁平上皮細胞組織学を有する被験体は、ゲムシタビン＋シスプラチンで処置したとき、良好な転帰を有した。
【０００６】
いくつかのドライバー変異が最近同定され、ＮＳＣＬＣにおけるより良好な転帰を伴った標的化療法を可能にした。肺がん変異コンソーシアムは、彼らが評価した腺癌を有する１，００７人の患者の６４％においてこのような「対処可能な（ａｃｔｉｏｎａｂｌｅ）」変異を見出し、最も一般的なのは、ＫＲＡＳ、ＥＧＦＲ、およびＡＬＫであった。この研究において標的化療法を使用すると、同定された変異を有するが標的化療法を用いなかった患者における２．４年および発癌性ドライバーを示さなかった者における２．１年のＯＳに対して、標的化療法を受けた発癌性ドライバーを有する患者のサブセットにおいて３．５年のＯＳの中央値がもたらされた（Ｐ＝０．００１）（Ｋｒｉｓら、ＪＡＭＡ、２０１４年；３１１巻：１９９８〜２００６頁）。
葉酸受容体アルファ（ＦＲＡ）は、発現および生物学がいくつかの悪性細胞型と関連する細胞表面ＧＰＩ−係留型タンパク質である。ＦＲＡに対する抗体が開発され、前臨床および臨床研究において試験されて、腫瘍がこの抗原を発現する患者におけるがん成長の抑制に対するこれらの効果が評価された。最近、卵巣および肺がんにおける治験が行われてこれらの疾患に対する抗ＦＲＡ抗体の効果が試験された（Ａｒｍｓｔｒｏｎｇら、Ｇｙｎｅｃｏｌ．  Ｏｎｃｏｌ．、２０１３年６月；１２９巻（３号）：４５２〜８頁；Ｔｈｏｍａｓら、Ｌｕｎｇ  Ｃａｎｃｅｒ．、２０１３年；８０巻（１号）：１５〜８頁）。これらの治験からの結果は、抗ＦＲＡ療法が、様々なレベルのＦＲＡ抗原および抗ＦＲＡ抗体の薬理学的活性に影響し得る他の因子を呈するがんを有する患者から部分的になる広い、濃縮されていない（ｎｏｎ−ｅｎｒｉｃｈｅｄ）またはバイオマーカーにより選択された不均質処置企図集団において統計的に有意な臨床的利益をもたらすことに失敗したことを実証する（Ｖｅｒｇｏｔｅら、Ｃａｎｃｅｒ  Ｍｅｔａｓｔａｓｉｓ  Ｒｅｖ．、２０１５年１月７日、ＤＯＩ１０．１００７／ｓ１０５５５−０１４−９５３９−８；Ｔｈｏｍａｓら、Ｌｕｎｇ  Ｃａｎｃｅｒ．、２０１３年；８０巻（１号）：１５〜８頁）。ほとんどの抗ＦＲＡ抗体臨床研究は、すべての来訪者を含んでおり、一方、誰も、ＦＲＡ発現レベルに基づいて患者を選択して、腫瘍におけるＦＲＡ発現の閾値レベルが抗ＦＲＡ抗体療法に対する治療応答と相関し得るか否かを決定していない。現在、ＦＲＡの発現レベルの抗ＦＲＡ抗体療法に対する治療応答との相関を示唆するデータは存在しない。実際に、腫瘍抗原発現と抗原標的化療法に対する応答との間の相関関係の知見は、いくつかの腫瘍抗原について確認することが困難である。最もよく研究された腫瘍抗原の１つ、ＨＥＲ２は、発現−臨床的利益相関の欠如を実証する多くの例のうちの１つであり、それにより、抗ＨＥＲ２抗体ハーセプチン（トラスツズマブ）で処置された患者が、高または低腫瘍抗原にかかわらず臨床的利益を有することが見出された（Ｐａｉｋら；Ｎ  Ｅｎｇｌ  Ｊ  Ｍｅｄ、２００８年；３５８巻：１４０９〜１４１１頁）。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００７】
【非特許文献１】Ｌｉら、Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｏｎｃｏｌ（２０１３年）３１巻：１０３９〜１０４９頁
【非特許文献２】Ｓｃａｇｌｉｏｔｔｉら、Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｏｎｃｏｌ（２００８年）２６巻：３５４３〜３５５１頁
【非特許文献２】Ｋｒｉｓら、ＪＡＭＡ（２０１４年）３１１巻：１９９８〜２００６頁
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
ＦＲＡを標的とする処置レジメンに応答性であるＮＳＣＬＣ患者を同定するための方法が差し迫って必要とされている。本明細書に記載の方法およびキットは、この必要を満たす。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
葉酸受容体アルファ（ＦＲＡ）発現肺がんを有する患者における葉酸受容体アルファ（ＦＲＡ）標的化剤を用いた処置に対する応答性の見込みを予測するための方法が本明細書に提供されている。処置に対する応答性のこのような見込みを予測するための方法は、生体試料中の患者のＦＲＡ発現レベルを決定するステップと、患者のＦＲＡ発現レベルを参照ＦＲＡ発現レベルと比較するステップとを伴う。患者のＦＲＡ発現レベルが参照ＦＲＡ発現レベルに等しい、またはそれを超える場合、患者は、ＦＲＡ標的化剤を用いた処置に応答する可能性がある。
【００１０】
ＦＲＡ標的化剤を用いて患者における葉酸受容体アルファＦＲＡ発現肺がんを処置するための方法も、本明細書に提供されている。このような方法は、生体試料中の患者のＦＲＡ発現レベルを決定するステップと、患者のＦＲＡ発現レベルを参照ＦＲＡ発現レベルと比較するステップと、患者のＦＲＡ発現レベルが参照ＦＲＡ発現レベルに等しい、またはそれを超える場合、患者にＦＲＡ標的化剤を投与するステップとを伴う。一部の実施形態では、化学療法剤（例えば、本明細書に記載の標準治療化学療法）が、ＦＲＡ標的化剤を伴ってまたはそれを伴わずに患者に投与される。
【００１１】
葉酸受容体アルファ（ＦＲＡ）標的化剤を用いた処置に対する応答性の見込みを予測するための方法、および本明細書に記載のＦＲＡ標的化剤を用いて患者における葉酸受容体アルファＦＲＡ発現肺がんを処置するための方法の一部の実施形態では、ＦＲＡ標的化剤は、ＦＲＡに免疫特異的に結合する抗体、またはその抗原結合断片を含む。好適な態様では、ＦＲＡに免疫特異的に結合するこのような抗体は、ファルレツズマブを含む。一部の実施形態では、ＦＲＡに免疫特異的に結合する抗体は、例えば、微小管阻害剤、ＤＮＡ損傷剤（例えば、放射性核種）、ＤＮＡ修復阻害剤、またはシグナル伝達阻害剤などの毒素にコンジュゲートされる。本明細書に記載の方法に従ってＦＲＡ標的化剤として用いられ得る例示的な抗体−薬物コンジュゲートは、ＩＭＧＮ８５３である。本明細書に記載の方法の一部の実施形態では、ＦＲＡ標的化剤は、ビンタフォリドである。
【００１２】
本明細書に記載の方法の一部の実施形態では、ＦＲＡ発現肺がんは、ＦＲＡ発現非小細胞肺がん（ＮＳＣＬＣ）である。一部の実施形態では、ＮＳＣＬＣは、腺癌である。
【００１３】
上述の方法のそれぞれについて、参照ＦＲＡ発現レベルは、それより上で、ＦＲＡ標的化剤を投与されるＦＲＡ発現肺がんに罹患している患者集団が、プラセボを投与されるＦＲＡ発現肺がんに罹患している患者集団に対して少なくとも１つの臨床転帰の統計的に有意な改善を実証するＦＲＡ発現レベルに対応する。改善される臨床転帰は、例えば、無増悪生存期間および／または全生存期間であり得る。一部の実施形態では、参照ＦＲＡ発現レベルは、４２％の＋１またはそれ超の本明細書に記載の抗ＦＲＡ染色に対応する。一部の実施形態では、参照ＦＲＡ発現レベルは、２１％の＋２またはそれ超の本明細書に記載の抗ＦＲＡ染色に対応する。一部の実施形態では、参照ＦＲＡ発現レベルは、１４％の＋３またはそれ超の本明細書に記載の染色に対応する。一部の実施形態では、参照ＦＲＡ発現レベルは、７のＦＲＡＭＳＣＯＲ（またはＭスコア）である。一部の実施形態では、参照ＦＲＡ発現レベルは、０．２５のＨＢＳＣＯＲである。
【００１４】
一部の実施形態では、ＦＲＡ発現肺がんに罹患している患者集団は、化学療法剤、例えば、タキサン、白金含有化合物（例えば、シスプラチン、カルボプラチン）、および葉酸代謝拮抗薬（ａｎｔｉｆｏｌａｔｅ）（例えば、ペメトレキセド）、またはこれらの任意の組合せなどをさらに投与される。
【００１５】
ＦＲＡ発現レベルは、タンパク質定量化またはＲＮＡ定量化によって本明細書に記載の方法に従って測定することができる。細胞質または膜性ＦＲＡ発現を測定することができる。好適な実施形態では、ＦＲＡ発現レベルは、免疫組織化学的分析によって測定される。好適な実施形態では、ＦＲＡ発現レベルは、以下の抗体：
（ａ）ファルレツズマブと同じエピトープに結合する抗体；
（ｂ）ＣＤＲＨ１として配列番号１（ＧＦＴＦＳＧＹＧＬＳ）、ＣＤＲＨ２として配列番号２（ＭＩＳＳＧＧＳＹＴＹＹＡＤＳＶＫＧ）、ＣＤＲＨ３として配列番号３（ＨＧＤＤＰＡＷＦＡＹ）、ＣＤＲＬ１として配列番号４（ＳＶＳＳＳＩＳＳＮＮＬＨ）、ＣＤＲＬ２として配列番号５（ＧＴＳＮＬＡＳ）、およびＣＤＲＬ３として配列番号６（ＱＱＷＳＳＹＰＹＭＹＴ）を含む抗体；
（ｃ）配列番号７のアミノ酸配列を含む成熟軽鎖可変領域およびアミノ酸配列番号８を含む成熟重鎖可変領域を含む抗体；
（ｄ）ファルレツズマブ；
（ｅ）５４８９０８抗体；
（ｆ）５４８９０８抗体と同じエピトープに結合する抗体；
（ｇ）６Ｄ３９８抗体；
（ｈ）６Ｄ３９８抗体と同じエピトープに結合する抗体；
（ｉ）ＢＮ３．２抗体（Ｌｅｉｃａ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）；
（ｊ）ＢＮ３．２抗体と同じエピトープに結合する抗体；
（ｋ）２６Ｂ３抗体と同じエピトープに結合する抗体；
（ｌ）ＣＤＲＨ１として配列番号１４（ＧＹＦＭＮ）、ＣＤＲＨ２として配列番号１５（ＲＩＦＰＹＮＧＤＴＦＹＮＱＫＦＫＧ）、ＣＤＲＨ３として配列番号１６（ＧＴＨＹＦＤＹ）、ＣＤＲＬ１として配列番号１７（ＲＴＳＥＮＩＦＳＹＬＡ）、ＣＤＲＬ２として配列番号１８（ＮＡＫＴＬＡＥ）、およびＣＤＲＬ３として配列番号１９（ＱＨＨＹＡＦＰＷＴ）を含む抗体；
（ｍ）２６Ｂ３抗体；
（ｎ）１９Ｄ４抗体と同じエピトープに結合する抗体；
（ｏ）ＣＤＲＨ１として配列番号２０（ＨＰＹＭＨ）、ＣＤＲＨ２として配列番号２１（ＲＩＤＰＡＮＧＮＴＫＹＤＰＫＦＱＧ）、ＣＤＲＨ３として配列番号２２（ＥＥＶＡＤＹＴＭＤＹ）、ＣＤＲＬ１として配列番号２３（ＲＡＳＥＳＶＤＴＹＧＮＮＦＩＨ）、ＣＤＲＬ２として配列番号２４（ＬＡＳＮＬＥＳ）、およびＣＤＲＬ３として配列番号２５（ＱＱＮＮＧＤＰＷＴ）を含む抗体；
（ｐ）１９Ｄ４抗体；
（ｑ）９Ｆ３抗体と同じエピトープに結合する抗体；
（ｒ）ＣＤＲＨ１として配列番号２６（ＳＧＹＹＷＮ）、ＣＤＲＨ２として配列番号２７（ＹＩＫＳＤＧＳＮＮＹＮＰＳＬＫＮ）、ＣＤＲＨ３として配列番号２８（ＥＷＫＡＭＤＹ）、ＣＤＲＬ１として配列番号２９（ＲＡＳＳＴＶＳＹＳＹＬＨ）、ＣＤＲＬ２として配列番号３０（ＧＴＳＮＬＡＳ）、およびＣＤＲＬ３として配列番号３１（ＱＱＹＳＧＹＰＬＴ）を含む抗体；
（ｓ）９Ｆ３抗体；
（ｔ）２４Ｆ１２抗体と同じエピトープに結合する抗体；
（ｕ）ＣＤＲＨ１として配列番号３２（ＳＹＡＭＳ）、ＣＤＲＨ２として配列番号３３（ＥＩＧＳＧＧＳＹＴＹＹＰＤＴＶＴＧ）、ＣＤＲＨ３として配列番号３４（ＥＴＴＡＧＹＦＤＹ）、ＣＤＲＬ１として配列番号３５（ＳＡＳＱＧＩＮＮＦＬＮ）、ＣＤＲＬ２として配列番号３６（ＹＴＳＳＬＨＳ）、およびＣＤＲＬ３として配列番号３７（ＱＨＦＳＫＬＰＷＴ）を含む抗体；
（ｖ）２４Ｆ１２抗体；
（ｗ）（ｉ）ＬＫ２６ＨｕＶＫ；
（ｉｉ）ＬＫ２６ＨｕＶＫＹ；
（ｉｉｉ）ＬＫ２６ＨｕＶＫＰＷ；および
（ｉｖ）ＬＫ２６ＨｕＶＫＰＷ，Ｙ；
からなる群より選択される可変領域軽鎖を含む抗体；
（ｘ）（ｉ）ＬＫ２６ＨｕＶＨ；
（ｉｉ）ＬＫ２６ＨｕＶＨ  ＦＡＩＳ，Ｎ；
（ｉｉｉ）ＬＫ２６ＨｕＶＨ  ＳＬＦ；
（ｉｖ）ＬＫ２６ＨｕＶＨ  Ｉ，Ｉ；
（ｖ）ＬＫ２６ＫＯＬＨｕＶＨ；
からなる群より選択される可変領域重鎖を含む抗体；
（ｙ）重鎖可変領域ＬＫ２６ＫＯＬＨｕＶＨ（配列番号４６）および軽鎖可変領域ＬＫ２６ＨｕＶＫＰＷ，Ｙ（配列番号４１）を含む抗体；
（ｚ）重鎖可変領域ＬＫ２６ＨｕＶＨ  ＳＬＦ（配列番号４４）および軽鎖可変領域ＬＫ２６ＨｕＶＫＰＷ，Ｙ（配列番号４１）を含む抗体；
（ａａ）重鎖可変領域ＬＫ２６ＨｕＶＨ  ＦＡＩＳ，Ｎ（配列番号４３）および軽鎖可変領域ＬＫ２６ＨｕＶＫＰＷ，Ｙ（配列番号４１）を含む抗体；ならびに
（ｂｂ）マウスモノクローナルＬＫ２６抗体
のうちの少なくとも１種を用いたイムノアッセイによって決定される。
【００１６】
本明細書に記載の方法では、ＦＲＡ発現レベルは、デジタルイメージング技術またはマニュアル病理定量化によって評価することができる。一部の実施形態では、ＦＲＡ発現レベルは、ＦＲＡＭＳＣＯＲまたはＨＢＳＣＯＲによって評価される。
【００１７】
本明細書に記載の方法に従ってアッセイされる生体試料は、尿、血液、血清、血漿、唾液、循環細胞、循環腫瘍細胞、または腫瘍組織（例えば、胸膜組織）であり得る。一部の実施形態では、生体試料は、滲出液に由来する胸膜細胞を含む。
【００１８】
記載した方法は、患者のＦＲＡ発現レベルが、参照ＦＲＡ発現レベルに等しい、またはそれを超えるか否かにかかわらず、患者に化学療法剤をさらに投与することを含み得る。好適な実施形態では、化学療法剤は、白金含有化合物、例えば、シスプラチンまたはカルボプラチンなど；タキサン（例えば、パクリタキセル）；葉酸代謝拮抗薬（例えば、ペメトレキセド）；またはこれらの任意の組合せを含む。例えば、本明細書に記載の方法では、患者は、カルボプラチンおよびパクリタキセル；カルボプラチンおよびペメトレキセド；またはシスプラチンおよびペメトレキセドを投与され得る。
【００１９】
要約した主題の追加の態様は、詳細な説明および提供した実施例および添付の図面においてより詳細に提供されている。
【００２０】
概要および以下の詳細な説明は、添付の図面と併せて読むとさらに理解される。開示された方法を例示する目的で、方法の例示的な実施形態が図面に示されているが、方法は、開示された具体的な実施形態に限定されない。
【図面の簡単な説明】
【００２１】
【図１】図１は、ＦＲＡＭＳＣＯＲおよびＨＢＳＣＯＲを介したＦＲＡ定量化についての胸膜組織適性を示す。正常（左上パネル）または悪性非小細胞肺腺癌（ＮＳＣＬＣ）組織試料（すべての他のパネル）は、患者から調達した。組織をホルマリン固定し、ガラススライド上に切片化し、２６Ｂ３抗ＦＲＡ抗体を使用してＦＲＡ発現について染色した。染色したスライドを顕微鏡観察によって可視化し、写真撮影を介して記録した。この図は、胸膜組織検体および定量化されたＦＲＡ細胞質または膜染色に適した染色に適した染色を表す（上の行）。芳しくない組織保存、芳しくない組織形態、または過剰染色を伴った検体、および胸膜組織でなく、胸水中の悪性細胞からなるものは、ＦＲＡ発現臨床転帰相関研究から省略されている。後者の例は、最下行に示されている。滲出液に由来する細胞を使用して、抗ＦＲＡ治療応答に必要とされる最小限のＦＲＡレベルを測定することができる。
【００２２】
【図２】図２は、悪性胸膜組織内のＦＲＡ発現の＋１（低発現）、＋２（中レベル）、および＋３（高レベル）をスコアリングするのに使用した参照データセットの代表的な試料を示す。
【００２３】
【図３】図３は、ＨＢＳＣＯＲ法を使用して臨床転帰（全生存期間）に対するＦＲＡの細胞質レベルを測定する代表的な発現カットポイント分析を示す。応答における有意な改善が、ＦＲＡ発現レベルが約０．２９またはそれ超のＨＢＳＣＯＲを超える患者において観察される。このレベルで、有意な臨床応答（０．５未満のハザード比）が、腫瘍ＦＲＡ発現レベルがこの値未満である患者と比較した場合、観察される。ポジティブな臨床転帰（ハザード比＜０．７）が、０．２５またはそれ超のＨＢＳＣＯＲを伴って、ファルレツズマブで処置された患者において観察される。
【００２４】
【図４Ａ】図４Ａおよび４Ｂは、標準治療（ＳＯＣ）化学療法＋／−ファルレツズマブで処置され、高レベルの膜局在的（ＦＲＡＭＳＣＯＲ）ＦＲＡを発現する患者の臨床応答を例示する。パネルＡは、ＦＲＡＭＳＣＯＲ法を使用する高レベルのＦＲＡを有する患者における全生存期間（ＯＳ）の代表的測定を示す。この測定によって、ファルレツズマブ＋ＳＯＣで処置された患者（青線；三角形）および７超のＦＲＡＭＳＣＯＲは、プラセボ＋ＳＯＣ処置患者（赤線；円）に対して、ＯＳにおいて臨床的に意味のある改善、それぞれ、１８．３カ月対１０．０カ月（ハザード比０．５４；ｐ＝０．０２６６）を示した。同様の臨床的利益が、ＰＦＳを測定したとき観察された。パネルＢは、７未満のＦＲＡＭＳＣＯＲを伴ったファルレツズマブ＋ＳＯＣで処置された患者（青線；三角形）が、プラセボ＋ＳＯＣ処置患者（赤線；円）に対してＯＳにおいて臨床的に意味のある改善を有さなかったことを示す（ｐ＝０．３８６）。
【図４Ｂ】図４Ａおよび４Ｂは、標準治療（ＳＯＣ）化学療法＋／−ファルレツズマブで処置され、高レベルの膜局在的（ＦＲＡＭＳＣＯＲ）ＦＲＡを発現する患者の臨床応答を例示する。パネルＡは、ＦＲＡＭＳＣＯＲ法を使用する高レベルのＦＲＡを有する患者における全生存期間（ＯＳ）の代表的測定を示す。この測定によって、ファルレツズマブ＋ＳＯＣで処置された患者（青線；三角形）および７超のＦＲＡＭＳＣＯＲは、プラセボ＋ＳＯＣ処置患者（赤線；円）に対して、ＯＳにおいて臨床的に意味のある改善、それぞれ、１８．３カ月対１０．０カ月（ハザード比０．５４；ｐ＝０．０２６６）を示した。同様の臨床的利益が、ＰＦＳを測定したとき観察された。パネルＢは、７未満のＦＲＡＭＳＣＯＲを伴ったファルレツズマブ＋ＳＯＣで処置された患者（青線；三角形）が、プラセボ＋ＳＯＣ処置患者（赤線；円）に対してＯＳにおいて臨床的に意味のある改善を有さなかったことを示す（ｐ＝０．３８６）。
【００２５】
【図５Ａ】図５Ａおよび５Ｂは、ＨＢＳＣＯＲ法を使用して決定した場合の、標準治療化学療法＋／−ファルレツズマブで処置され、高レベルの細胞質ＦＲＡを発現する患者（パネルＢ）  対  低レベルの細胞質ＦＲＡを発現する患者（パネルＡ）の臨床応答を例示する。パネルＡは、低レベルのＦＲＡを有する患者における全生存期間（ＯＳ）の代表的測定を示す。この測定によって、最適以下のＨＢＳＣＯＲ（ＨＢＳＣＯＲ＜０．３８）を有する患者は、プラセボ対照（白丸）と比較した場合に、ファルレツズマブ（黒丸）で処置されたとき、臨床的改善を有さなかった（ハザード比１．０３；ｐ＝０．５３８９）。パネルＢは、最適なＨＢＳＣＯＲ（ＨＢＳＣＯＲ≧０．３８；ハザード比０．２４；ｐ＝０．００６９）を有する患者における全生存期間の統計的に有意な改善を示し、これは、全生存期間の８．８カ月の改善に解釈される。同様の効果が、ＰＦＳを測定したとき、観察された。
【図５Ｂ】図５Ａおよび５Ｂは、ＨＢＳＣＯＲ法を使用して決定した場合の、標準治療化学療法＋／−ファルレツズマブで処置され、高レベルの細胞質ＦＲＡを発現する患者（パネルＢ）  対  低レベルの細胞質ＦＲＡを発現する患者（パネルＡ）の臨床応答を例示する。パネルＡは、低レベルのＦＲＡを有する患者における全生存期間（ＯＳ）の代表的測定を示す。この測定によって、最適以下のＨＢＳＣＯＲ（ＨＢＳＣＯＲ＜０．３８）を有する患者は、プラセボ対照（白丸）と比較した場合に、ファルレツズマブ（黒丸）で処置されたとき、臨床的改善を有さなかった（ハザード比１．０３；ｐ＝０．５３８９）。パネルＢは、最適なＨＢＳＣＯＲ（ＨＢＳＣＯＲ≧０．３８；ハザード比０．２４；ｐ＝０．００６９）を有する患者における全生存期間の統計的に有意な改善を示し、これは、全生存期間の８．８カ月の改善に解釈される。同様の効果が、ＰＦＳを測定したとき、観察された。
【発明を実施するための形態】
【００２６】
開示された方法は、本開示の一部を形成する添付の図面に関連して採用した以下の詳細な説明を参照することによってより容易に理解することができる。開示された方法は、本明細書に記載され、かつ／または示された具体的な方法に限定されず、本明細書で使用される専門用語は、単なる例として特定の実施形態を記載する目的のためであり、特許請求された方法を限定するように意図されていないことが理解されるべきである。
【００２７】
同様に、別段に具体的に述べられていない限り、可能な機構もしくは作用機序または改善の理由に関する任意の記載は、一例にすぎないように意味され、開示された方法は、任意のこのような示唆された機構もしく作用機序または改善の理由の正確さまたは不正確さによって制約されるべきではない。
【００２８】
別個の実施形態の文脈で、明確にするために本明細書に記載されている開示された方法のある特定の特色はまた、単一の実施形態において組合せで提供され得ることが察知されるべきである。反対に、簡潔さのために、単一の実施形態の文脈で記載されている開示された方法の様々な特色は、別個に、または任意のサブコンビネーションでも提供され得る。
【００２９】
本明細書で使用される場合、単数形「ａ」、「ａｎ」、および「ｔｈｅ」は、複数形を含む。
【００３０】
用語「約」は、本明細書で使用される場合、量、時間上の継続時間などの測定可能な値に言及するとき、指定された値から最大で±１０％の変動を包含するように意味する。なぜなら、このような変動は、開示された方法を実施するのに適切であるためである。別段に示されていない限り、明細書および特許請求の範囲で使用される成分の量、分子量などの性質、反応条件などを表すすべての数値は、用語「約」によってすべての事例において修飾されていると理解されるべきである。したがって、それとは反対に示されていない限り、以下の明細書および添付の特許請求の範囲で示される数値パラメータは、本発明が得ようとする所望の性質に応じて変動し得る近似である。最低限でも、かつ特許請求の範囲の範囲に対する均等物の原則の適用を限定する試みとしてではなく、各数値パラメータは、少なくとも、報告された有効数字を踏まえて、かつ通常の丸め技法を適用することによって解釈されるべきである。
【００３１】
用語「抗体」は、（ａ）免疫グロブリンポリペプチド、即ち、別段の指定のない限り、すべての免疫グロブリンアイソタイプ（ＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、およびＩｇＹ）、クラス（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１、ＩｇＡ２）、サブクラス、ならびに各アイソタイプの様々なモノマーおよびポリマー形態を含めた特異的抗原（例えば、葉酸受容体アルファ）に特異的に結合する抗原結合部位を含有する免疫グロブリンファミリーのポリペプチド、ならびに（ｂ）抗原（例えば、葉酸受容体アルファ）に免疫特異的に結合するこのような免疫グロブリンポリペプチドの保存的に置換された改変体を指す。抗体は一般に、例えば、ＨａｒｌｏｗおよびＬａｎｅ、Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：  Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ（Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ、１９８８年）に記載されている。文脈から別段に明らかでない限り、抗体への言及は、以下でより詳細に記載される抗体誘導体も含む。
【００３２】
「抗体断片」は、全長抗体の部分、一般にその抗原結合領域または可変領域、例えば、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、およびＦｖ断片など；ダイアボディ（ｄｉａｂｏｄｙ）；バイオボディ（ｂｉｏｂｏｄｙ）；線状抗体；単鎖抗体分子；ならびに抗体断片から形成される多重特異性抗体を含む。抗体のタンパク質消化および宿主細胞内の組換え産生を含めた様々な技法が抗体断片を生成するために開発されているが、抗体断片を生成するための他の技法が、熟練した実施者に明らかとなるであろう。一部の実施形態では、最適な抗体断片は、単鎖Ｆｖ断片（ｓｃＦｖ）である。「単鎖Ｆｖ」または「ｓｃＦｖ」抗体断片は、抗体のＶＨおよびＶＬドメインを含み、これらのドメインは、単一ポリペプチド鎖中に存在する。一般に、Ｆｖポリペプチドは、ＶＨとＶＬドメインとの間にポリペプチドリンカーをさらに含み、これは、ｓｃＦｖが抗原結合のための所望の構造を形成することを可能にする。ｓｃＦｖおよび他の抗体断片の総説については、Ｊａｍｅｓ  Ｄ．  Ｍａｒｋｓ、Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ、２章、Ｏｘｆｏｒｄ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｐｒｅｓｓ（１９９５年）（Ｃａｒｌ  Ｋ．  Ｂｏｒｒｅｂａｅｃｋ編）を参照。
【００３３】
「抗体誘導体」は、異種分子の共有結合的付着、例えば、異種ポリペプチド（例えば、細胞毒）もしくは治療剤（例えば、化学療法剤）の付着、または抗体に通常付随していないグリコシル化、脱グリコシル化、アセチル化、もしくはリン酸化などによって修飾された、上記に定義された抗体を意味する。
【００３４】
用語「モノクローナル抗体」は、任意の真核もしくは原核細胞クローン、またはファージクローンを含めた単一細胞クローンに由来し、それが生成される方法に由来しない抗体を指す。よって、用語「モノクローナル抗体」は、ハイブリドーマ技術によって生成される抗体に限定されない。
【００３５】
「抗原」は、抗体が特異的に結合する実体である。例えば、葉酸受容体アルファは、抗葉酸受容体アルファ抗体が特異的に結合する抗原である。
【００３６】
ＦＲＡ標的化剤は、ＦＲＡを標的とし、またはＦＲＡを通じてその効果を発揮する治療剤である。ＦＲＡ標的化剤としては、それだけに限らないが、ＦＲＡ結合タンパク質、例えば、ファルレツズマブなどのＦＲＡに免疫特異的に結合する抗体およびその抗原結合断片など；ＩＭＧＮ８５３（Ｉｍｍｕｎｏｇｅｎ）などのこのような抗体および抗原結合断片の薬物コンジュゲート；ならびにビンタフォリド（ＥＣ１４５；Ｅｎｄｏｃｙｔｅ）などの小分子がある。ビンタフォリドは、葉酸−デスアセチルビンブラスチンモノヒドラジドコンジュゲートであり、これは、ＦＲＡおよびエンドサイトーシスを介してがん性細胞の細胞質内への薬物の遊離を可能にする。好適な実施形態では、ＦＲＡ標的化剤は、ファルレツズマブである。
【００３７】
用語「がん」および「腫瘍」は、当技術分野で周知であり、がんを引き起こす細胞に典型的な特性、例えば、制御されない増殖、不死、転移能、急速な成長および増殖速度、ならびにある特定の特徴的な形態学的特色などを有する細胞の、例えば被験体における存在を指す。がん細胞は、腫瘍の形態にあることが多いが、このような細胞は、被験体内に単独で存在する場合があり、または白血病細胞などの非腫瘍形成性がん細胞であり得る。本明細書で使用される場合、用語「がん」は、前悪性および悪性がんを含む。
【００３８】
本明細書で使用される場合、用語「葉酸受容体アルファ」（ＦＲＡ、ＦＲ−アルファ、ＦＯＬＲ−１、またはＦＯＬＲ１とも呼ばれる）は、フォレートに対する高親和性受容体のアルファアイソフォームを指す。膜結合型ＦＲＡは、グリコシルホスファチジルイノシトール（ＧＰＩ）アンカーによって細胞表面に付着され、膜とエンドサイトーシス区画との間を循環し、細胞内にフォレートを輸送することができる。ＦＲＡは、女性生殖器官、胎盤、乳房、腎臓近位尿細管、脈絡叢、肺、および唾液腺のものを含めた様々な上皮組織内で発現される。ＦＲＡの可溶性形態としては、それだけに限らないが、膜係留型葉酸受容体上のプロテアーゼまたはホスホリパーゼの作用によって得られるものがある。
【００３９】
ヒトＦＲＡのコンセンサスヌクレオチド配列およびアミノ酸配列は、それぞれ配列番号９および１０として本明細書に示されている。
【化１】
2018516244.tif 000003
【化２】
2018516244.tif 000004
改変体、例えば、少なくとも１個のアミノ酸置換を含有する天然に存在する対立遺伝子改変体または配列は、本明細書で使用される用語によって包含される。
【００４０】
本明細書で使用される場合、用語「細胞に結合していない」は、がん性細胞などの細胞の細胞膜に付着していないタンパク質を指す。特定の実施形態では、細胞に結合していないＦＲＡは、任意の細胞に結合せず、例えば、尿、血清、血漿、または胸水などの生体液中に自由に浮遊し、または可溶化している。例えば、細胞に結合してないタンパク質は、正常またはがん性細胞から、例えば、がん性細胞の表面から生体液中に脱落し、分泌され、または搬出され得る。
【００４１】
指定されたＲＮＡの「レベル」または「発現レベル」は、本明細書で使用される場合、ＲＮＡレベルの測定について当技術分野で公知の任意の方法を使用して決定した場合のＲＮＡのレベルを指す。このような方法としては、それだけに限らないが、分光光度法（例えば、紫外吸光度）、蛍光光度法、ハイブリダイゼーションアッセイ、およびマイクロキャピラリー電気泳動がある。
【００４２】
指定されたタンパク質の「レベル」または「発現レベル」は、本明細書で使用される場合、タンパク質レベルの測定について当技術分野で公知の任意の方法を使用して決定した場合のタンパク質のレベルを指す。このような方法としては、例えば、電気泳動、キャピラリー電気泳動、高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）、薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）、超拡散クロマトグラフィー（ｈｙｐｅｒｄｉｆｆｕｓｉｏｎ  ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ）、流体またはゲル沈降反応、吸収分光法、比色アッセイ、分光光度アッセイ、フローサイトメトリー、免疫拡散法（一元または二元）、溶液相アッセイ、免疫蛍光定量法、免疫沈降、平衡透析、免疫拡散法、溶液相アッセイ、免疫電気泳動法、ウエスタンブロッティング、ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）、酵素結合免疫吸着測定法（ＥＬＩＳＡ）、免疫蛍光アッセイ、および電気化学発光イムノアッセイ（以下に例示された）などがある。好適な実施形態では、レベルは、本明細書でより詳細に記載されている抗体ベース技法を使用して決定される。
【００４３】
例えば、ＦＲＡなどの指定されたタンパク質の発現のレベルを決定するのにイムノアッセイで使用される抗体は、検出可能な標識で標識することができる。用語「標識された」は、結合剤または抗体に関しては、結合剤または抗体に検出可能な物質をカップリングする（即ち、物理的に連結する）ことによる結合剤または抗体の直接標識、および直接的に標識される別の試薬との反応性による結合剤または抗体の間接標識を包含するように意図されている。間接標識の一例としては、蛍光標識二次抗体を使用する一次抗体の検出がある。一実施形態では、抗体は、標識され、例えば、放射標識され、発色団標識され、フルオロフォア標識され、または酵素標識される。別の実施形態では、抗体は、抗体誘導体（例えば、基質、またはタンパク質−リガンド対（例えば、ビオチン−ストレプトアビジン）のタンパク質もしくはリガンドとコンジュゲートされた抗体）、あるいは抗体断片（例えば、単鎖抗体、単離抗体超可変ドメイン）である。
【００４４】
特異的マーカー（例えば、ＦＲＡ）の発現レベルは、当技術分野で公知のＲＮＡまたはタンパク質定量化の任意の方法によって決定することができる。このような方法としては、それだけに限らないが、分光光度法（例えば、紫外吸光度）、蛍光光度法、ハイブリダイゼーションアッセイ、電気泳動、キャピラリー電気泳動、高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）、薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）、超拡散クロマトグラフィー、流体またはゲル沈降反応、吸収分光法、比色アッセイ、分光光度アッセイ、フローサイトメトリー、免疫拡散法（一元または二元）、溶液相アッセイ、免疫蛍光定量法、免疫沈降、平衡透析、免疫拡散法、溶液相アッセイ、免疫電気泳動法、ウエスタンブロッティング、ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）、酵素結合免疫吸着測定法（ＥＬＩＳＡ）、免疫蛍光アッセイ、および電気化学発光イムノアッセイ（以下に例示された）などがある。好適な実施形態では、レベルは、本明細書でより詳細に記載されている抗体ベース技法を使用して決定される。好適な実施形態では、免疫組織化学的分析（例えば、腫瘍組織の）が用いられる。一実施形態では、プロテオミクス法、例えば、質量分析が使用される。質量分析は、化合物をイオン化して荷電分子（またはその断片）を生成すること、およびこれらの質量対電荷比を測定することからなる分析技法である。典型的な質量分析手順では、試料が被験体から得られ、質量分析にロードされ、その構成成分（例えば、ＦＲＡ）が異なる方法によって（例えば、電子ビームでこれらに衝撃を与えることによって）イオン化され、荷電粒子（イオン）が形成される。次いで粒子の質量対電荷比が、粒子が電磁場を通過する際のイオンの動きから計算される。
【００４５】
例えば、尿または血清などの試料をタンパク質結合チップに適用することを含むマトリックス支援レーザー脱離／イオン化飛行時間型質量分析（ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ  ＭＳ）または表面増強レーザー脱離／イオン化飛行時間型質量分析法（ＳＥＬＤＩ−ＴＯＦ  ＭＳ）（Ｗｒｉｇｈｔ，  Ｇ．Ｌ．，  Ｊｒ．ら（２００２年）、Ｅｘｐｅｒｔ  Ｒｅｖ  Ｍｏｌ  Ｄｉａｇｎ、２巻：５４９頁；Ｌｉ，  Ｊ．ら（２００２年）、Ｃｌｉｎ  Ｃｈｅｍ、４８巻：１２９６頁；Ｌａｒｏｎｇａ，  Ｃ．ら（２００３年）、Ｄｉｓ  Ｍａｒｋｅｒｓ、１９巻：２２９頁；Ｐｅｔｒｉｃｏｉｎ，  Ｅ．Ｆ．ら（２００２年）３５９巻：５７２頁；Ａｄａｍ，  Ｂ．Ｌ．ら（２００２年）、Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ、６２巻：３６０９頁；Ｔｏｌｓｏｎ，  Ｊ．ら（２００４年）、Ｌａｂ  Ｉｎｖｅｓｔ、８４巻：８４５頁；Ｘｉａｏ，  Ｚ．ら（２００１年）、Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ、６１巻：６０２９頁）を使用してＦＲＡのレベルを決定することができる。
【００４６】
さらに、マーカー（例えば、ＦＲＡ）のレベルを決定するためのｉｎ  ｖｉｖｏ技法は、マーカーに対する標識抗体であって、マーカーに結合してその検出を可能にする標識抗体を被験体中に導入することを含む。被験体中の検出可能なマーカーの存在、レベル、または場所は、標準的なイメージング技法（例えば、ＰＥＴ）を使用して決定することができる。
【００４７】
本明細書で使用される場合、肺がん「に罹患している」または肺がん「を有する」被験体は、適格の臨床医によって任意の病期の肺がんと臨床的に診断された者、またはこのようながんの１つもしくは複数の徴候もしくは症状を呈し、適格の臨床医によってこのようながんと引き続いて臨床的に診断される者である。葉酸受容体アルファ発現肺がんの動物モデルとして機能を果たす非ヒト被験体も、「葉酸受容体アルファ発現肺がんに罹患している」被験体の範囲内に入り得る。
【００４８】
本明細書で使用される場合、「葉酸受容体アルファ発現肺がん」は、がん細胞がこれらの表面上で葉酸受容体アルファを発現させ、または提示することを特徴とする任意のタイプの肺がんを含む。肺がんは、ＦＲＡを発現して本明細書で使用する用語「葉酸受容体アルファ発現肺がん」によって包含されると臨床的に診断されている場合があるが、必ずしもそうである必要はない。語句「葉酸受容体アルファ発現肺がん」は、ＦＲＡ発現非小細胞肺がん（ＮＳＣＬＣ）およびＦＲＡ発現非小細胞肺腺癌を具体的に含む。
【００４９】
用語「試料」または「生体試料」は、本明細書で使用される場合、被験体から単離された同様の流体、細胞、または組織、および被験体内に存在する流体、細胞、または組織のコレクションを指す。ＦＲＡの発現レベルについて評価される試料は、尿、血液、血清、血漿、胸水、痰、気管支洗浄液、循環細胞、循環腫瘍細胞、組織に付随してない細胞（即ち、遊離細胞）、組織（例えば、胸膜組織、手術で摘出した腫瘍組織、微細針吸引を含めた生検材料）、組織学的調製物などに由来し得る。
【００５０】
一部の実施形態では、試料の一部のみが、マーカーのレベルを決定するのに一アッセイに付され、または試料の様々な部分が、マーカーのレベルを決定するのに様々なアッセイに付される。また、多くの実施形態では、試料は、アッセイの前に物理的または化学的手段によって予め処理される場合がある。例えば、試料は、マーカーについて試料をアッセイする前に遠心分離、希釈、および／または可溶化物質での処理（例えば、グアニジン処理）に付される場合がある。このような技法は、アッセイの精度、信頼性、および再現性を増強するように機能を果たす。
【００５１】
用語「参照発現レベル」は、マーカー（例えば、ＦＲＡ）の発現のレベルを記載するのに使用されるとき、被験体に由来する試料中のマーカーのレベルと比較するのに使用されるマーカーの認められたまたは予め決定されたレベルを指す。一実施形態では、ＦＲＡの参照発現レベルは、ＦＲＡ標的化剤の代わりにプラセボを受けるＦＲＡ発現肺がんに罹患している患者の集団と比較して、ＦＲＡ標的化剤（例えば、ＦＲＡに免疫特異的に結合する抗体）で処置されるＦＲＡ発現肺がんに罹患している患者の集団を使用して予め決定される。患者集団は、抗体またはプラセボに加えて、このようなＦＲＡ発現肺がんの標準治療療法を受けたことがある場合がある。
【００５２】
本明細書で使用される場合、用語、特異的結合剤、例えば、抗体と「試料を接触させること」は、試料またはその任意の部分をその薬剤に曝露し、その結果、試料の少なくとも一部が薬剤と接触することを含む。試料またはその部分は、それを薬剤と接触させる行為の前に、それを物理的または化学的処理（例えば、希釈またはグアニン処理）に付すなどによって、何らかの方法で変更させることができる。
【００５３】
用語「阻害する」または「〜の阻害」は、測定可能な量だけ低減すること、または完全に防止することを意味する。
【００５４】
用語「枯渇させる」は、葉酸受容体アルファ発現細胞に対する抗ＦＲＡ治療剤の効果の文脈で、葉酸受容体アルファ発現細胞の数の低減または排除を指す。
【００５５】
用語「機能的な」は、本明細書に記載の方法に従って使用される抗体の文脈で、抗体が、（１）抗原に結合することができ、かつ／または（２）抗原発現細胞を枯渇させ、もしくはその増殖を阻害することを示す。
【００５６】
用語「処置」または「処置する」または「ポジティブな治療応答」は、任意の臨床的病期において葉酸受容体アルファ発現肺がんの臨床的または診断的症状を発症した後に、被験体にＦＲＡ標的化剤を投与することによる疾患の臨床的または診断的症状の低下または排除によって証明される、患者における葉酸受容体アルファ発現肺がんの進行の減速、停止、または反転を指す。処置は、例えば、症状の重症度、症状の数、もしくは再発の頻度の低下、ＦＲＡ発現肺がん細胞の枯渇、ＦＲＡ発現肺がん細胞の成長の阻害、または具体的な臨床転帰（例えば、無増悪生存期間、全生存期間）の統計的に有意なおよび／もしくは臨床的に妥当な改善を含むことができる。
【００５７】
語句「ＦＲＡ標的化剤を用いた処置に応答性」は、候補被験体（即ち、ＦＲＡ発現肺がんを有する個体）が、ＦＲＡ標的化剤を投与した後に、肺がんに関してポジティブな治療応答を有することを意味するように意図されている。
【００５８】
用語「薬学的に許容可能な」は、薬理学的／毒物学的視点から患者に対して、かつ組成物、製剤、安定性、患者許容性、および生物学的利用能に関する物理的／化学的視点から製造薬剤師（ｍａｎｕｆａｃｔｕｒｉｎｇ  ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  ｃｈｅｍｉｓｔ）に対して許容可能な性質および／または物質を指し、動物、より特定すれば、ヒトにおいて使用するのに連邦もしくは州政府の規制機関によって承認された、または米国薬局方もしくは他の一般に認知された薬局方で列挙された性質および／または物質を含む。用語「薬学的適合性成分」は、それを用いて抗葉酸受容体アルファ抗体が投与される薬学的に許容可能な希釈剤、アジュバント、賦形剤、またはビヒクルを指す。「薬学的に許容可能な担体」は、活性成分の生物活性の有効性を妨害せず、それが投与される宿主に毒性でない媒体を指す。
【００５９】
用語「有効量」および「治療有効量」は、本明細書で互換的に使用され、医薬剤の投与の文脈で、患者における葉酸受容体アルファ発現肺がんの出現を阻害し、またはその１つもしくは複数の臨床的もしくは診断的症状を好転させる（ａｍｅｌｉｏｒａｔｅ）のに十分である薬剤（例えば、ＦＲＡ標的化剤）の量を指す。薬剤の治療有効量は、個体の疾患状態、年齢、性別、および体重、ならびに個体において所望の応答を誘発する薬剤の能力などの因子によって変動し得る。このような結果として、それだけに限らないが、当技術分野において適した任意の手段によって決定される、葉酸受容体アルファ発現肺がんの処置を挙げることができる。有効量の薬剤は、「有効レジメン」において本明細書に記載の方法によって投与される。用語「有効レジメン」は、葉酸受容体アルファ発現肺がんの処置を達成するのに適切な薬剤の量と投与頻度の組合せを指す。
【００６０】
用語「患者」および「被験体」は、診断的、予防的、または治療的処置を受ける獣医学的被験体を含めたヒトおよび他の非ヒト動物を指すのに互換的に使用される。用語「非ヒト動物」は、すべての脊椎動物、例えば、哺乳動物および非哺乳動物、例えば、非ヒト霊長類、マウス、ウサギ、ヒツジ、イヌ、ネコ、ウマ、ウシ、ニワトリ、両生類、および爬虫類などを含む。好適な実施形態では、被験体は、ヒトである。
【００６１】
治療剤は、典型的には、望まれない混入物から実質的に純粋である。これは、薬剤が、典型的には、少なくとも約５０重量％（重量／重量）純粋であり、かつ干渉するタンパク質および混入物を実質的に含まないことを意味する。時に薬剤は、少なくとも約８０重量％、より好ましくは少なくとも９０または約９５重量％純粋である。しかし、従来のタンパク質精製技法を使用すると、少なくとも９９重量％の純度の均質なペプチドを得ることができる。
【００６２】
ＦＲＡ標的化剤を用いた処置に対する応答性の見込みを予測するための方法
葉酸受容体アルファ（ＦＲＡ）発現肺がんを有する患者におけるＦＲＡ標的化剤（例えば、ＦＲＡに免疫特異的に結合する抗体）を用いた処置に対する応答性の見込みを予測するための方法が本明細書に提供されている。本明細書に記載のＦＲＡ標的化剤を用いた処置に対する応答性の見込みを予測するための方法の一部の実施形態では、ＦＲＡ発現肺がんは、非小細胞肺がん（ＮＳＣＬＣ）である。一部の実施形態では、ＮＳＣＬＣは、腺癌である。
【００６３】
葉酸受容体アルファ（ＦＲＡ）発現肺がんを有する患者におけるＦＲＡ標的化剤を用いた処置に対する応答性の見込みを予測するための記載した方法では、患者の生体試料中の患者のＦＲＡ発現レベルを決定することを含む。
【００６４】
患者の生体試料中のＦＲＡ発現レベルの決定は、診断の際、外科的切除の際、第一選択療法の開始の際、第一選択療法の完了の際、がんの症候性進行、血清学的進行、および／もしくは放射線学的進行の際、第二選択もしくはそれ以降の療法の開始の際、かつ／またはこのような療法の完了の際に実施することができる。
【００６５】
葉酸受容体アルファ（ＦＲＡ）発現肺がんを有する患者におけるＦＲＡ標的化剤を用いた処置に対する応答性の見込みを予測するための開示された方法では、ＦＲＡ発現レベルは、ＲＮＡまたはタンパク質定量化の公知の方法を含めた当技術分野で公知の任意の手段によって決定することができる。このような方法としては、それだけに限らないが、タンパク質発現を検出するための抗体の使用、核酸ハイブリダイゼーション、定量的ＲＴ−ＰＣＲ、免疫沈降、平衡透析、免疫拡散法、免疫組織化学検査、蛍光活性化細胞分類（ＦＡＣＳ）、蛍光定量法、ハイブリダイゼーションアッセイ、電気泳動、キャピラリー電気泳動、高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）、薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）、超拡散クロマトグラフィー、流体またはゲル沈降反応、吸収分光法、比色アッセイ、分光光度アッセイ、フローサイトメトリー、免疫拡散法（一元または二元）、溶液相アッセイ、免疫沈降、平衡透析、免疫拡散法、溶液相アッセイ、免疫電気泳動法、ウエスタンブロッティング、ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）、酵素結合免疫吸着測定法（ＥＬＩＳＡ）、免疫蛍光アッセイ、および電気化学発光イムノアッセイなどがある。好適な実施形態では、レベルは、本明細書でより詳細に記載されている抗体ベース技法を使用して決定される。好適な実施形態では、（例えば、胸膜組織の）免疫組織化学的分析が用いられる。ＦＲＡの発現レベルを決定するステップは、ｅｘ  ｖｉｖｏまたはｉｎ  ｖｉｖｏで実施することができる。
【００６６】
ｅｘ  ｖｉｖｏ評価に関して、ＦＲＡ発現のレベルの決定において使用される生体試料は、尿、全血、血清、血漿、胸水、痰、気管支洗浄液、循環細胞、循環腫瘍細胞、組織に付随してない細胞（即ち、遊離細胞）、組織（例えば、胸膜組織、手術で摘出した腫瘍組織、微細針吸引を含めた生検材料）、組織学的調製物などであり得る。アッセイが実施される組織試料は、固定または凍結して組織学的切片化を可能にすることができる。好ましくは、切り取られた組織試料は、アルデヒド固定液、例えば、ホルムアルデヒド、パラホルムアルデヒド、グルタルアルデヒドなど；または塩化第二水銀などの重金属固定液中に固定される。より好ましくは、切り取られた組織試料は、抗体とのインキュベーションの前にホルマリン中に固定され、パラフィンワックス中に包埋される。任意選択で、ＦＦＰＥ検体は、シトレート、ＥＤＴＡ、酵素消化で処理し、または加熱してエピトープのアクセシビリティを増大させることができる。代わりに、タンパク質画分を、公知のまたは疑われる肺がん由来の細胞から単離し、ＥＬＩＳＡ、ウエスタンブロッティング、免疫沈降などによって分析することができる。別のバリエーションでは、細胞を、ＦＡＣＳ分析によって葉酸受容体アルファの発現について分析することができる。さらなるバリエーションでは、ｍＲＮＡを、公知のまたは疑われる肺がん由来の細胞から抽出することができる。次いでｍＲＮＡ、またはｃＤＮＡなどのそれに由来する核酸を、葉酸受容体アルファをコードするＤＮＡに結合している核酸プローブ（ｎｕｃｌｅｉｃ  ｐｒｏｂｅ）へのハイブリダイゼーションによって分析することができる。
【００６７】
例えば、ＦＲＡ発現レベルを決定するステップでは、被験体から得られた肺がん組織の生体試料中のＦＲＡ発現レベルを決定することを含み得る。ＦＲＡ発現レベルは、イムノアッセイによって決定することができ、このアッセイでは、がん（例えば、肺がん）由来であることが公知であるまたは疑われる細胞を含有する試料が、抗ＦＲＡ抗体または抗原結合断片と接触させられる。接触後、検体中の細胞への抗体または抗原結合断片の結合事象の有無が決定される。結合は、この検体中のがん性細胞上で発現される抗原の有無に関係する。一般に、試料は、検出可能なシグナルを生成することができる抗ＦＲＡ抗体または抗原結合断片の標識された特異的結合パートナーと接触させられる。代わりに、抗ＦＲＡ抗体または断片自体を標識することができる。標識のタイプの例としては、酵素標識、放射性同位体標識、非放射性標識、蛍光標識、毒素標識、および化学発光標識がある。多くのこのような標識は、当業者に容易に公知である。例えば、適当な標識としては、放射標識、蛍光標識（ＤｙＬｉｇｈｔ（登録商標）６４９など）、エピトープタグ、ビオチン、発色団標識、ＥＣＬ標識、または酵素があるが、これらに限定されると見なされるべきでない。より具体的には、記載される標識としては、ルテニウム、１１１Ｉｎ−ＤＯＴＡ、１１１Ｉｎ−ジエチレントリアミン五酢酸（ＤＴＰＡ）、西洋わさびペルオキシダーゼ、アルカリホスファターゼおよびベータ−ガラクトシダーゼ、ポリ−ヒスチジン（ＨＩＳタグ）、アクリジン色素、シアニン色素、フルオロン色素、オキサジン（ｏｘａｚｉｎ）色素、フェナントリジン色素、ローダミン色素、Ａｌｅｘａｆｌｕｏｒ（登録商標）色素などがある。標識からのシグナルの検出は、試料中の葉酸受容体アルファに特異的に結合した抗体または断片の存在を示す。
【００６８】
上述したように、一部の実施形態では、ＦＲＡ発現レベルは、イムノアッセイによって決定することができ、このアッセイでは、がん（例えば、肺がん）由来であることが公知であるまたは疑われる細胞を含有する試料が、抗ＦＲＡ抗体または抗原結合断片と接触させられる。一部の実施形態では、ＦＲＡは、試料中で細胞に結合していない。被験体に由来する試料中のＦＲＡの発現レベルを決定するための方法は、例えば、参照により本明細書に組み込まれている米国特許出願公開第２０１３００１７１９５号に開示されている。被験体に由来する試料中の細胞に結合していないＦＲＡの発現レベルを決定するための方法は、例えば、参照により本明細書に組み込まれている米国特許出願公開第２０１２０２０７７７１号に開示されている。ＦＲＡの発現レベルの決定において用いられる試料は、例えば、尿、血液、血清、血漿、胸水、痰、気管支洗浄液、循環細胞、循環腫瘍細胞、組織に付随してない細胞（即ち、遊離細胞）、組織（例えば、胸膜組織、手術で摘出した腫瘍組織、微細針吸引を含めた生検材料）、組織学的調製物などに由来し得る。好適な実施形態では、試料は、組織、尿、または血清である。
【００６９】
様々な態様では、ＦＲＡの発現レベルは、試料を、ＦＲＡに結合する抗体と接触させることによって決定される。例えば、抗ＦＲＡ抗体は、以下：
（ａ）ＭＯＲＡｂ−００３抗体と同じエピトープに結合する抗体；
（ｂ）ＣＤＲＨ１として配列番号１（ＧＦＴＦＳＧＹＧＬＳ）、ＣＤＲＨ２として配列番号２（ＭＩＳＳＧＧＳＹＴＹＹＡＤＳＶＫＧ）、ＣＤＲＨ３として配列番号３（ＨＧＤＤＰＡＷＦＡＹ）、ＣＤＲＬ１として配列番号４（ＳＶＳＳＳＩＳＳＮＮＬＨ）、ＣＤＲＬ２として配列番号５（ＧＴＳＮＬＡＳ）、およびＣＤＲＬ３として配列番号６（ＱＱＷＳＳＹＰＹＭＹＴ）を含む抗体；
（ｃ）配列番号７のアミノ酸配列：
【化３】
2018516244.tif 000005
を含む成熟軽鎖可変領域、およびアミノ酸配列番号８：
【化４】
2018516244.tif 000006
（ＣＤＲに下線が引かれている）
を含む成熟重鎖可変領域を含む抗体；
（ｄ）そのそれぞれの内容全体が参照により本明細書に組み込まれている米国特許出願公開第２００９０２７４６９７号および米国特許第８，１２４，０８３号に記載されているＭＯＲＡｂ−００３抗体（ＵＳＡＮ名：ファルレツズマブ）；
（ｅ）５４８９０８抗体（Ｎｏｖｕｓ；カタログ番号ＭＡＢ５６４６）；
（ｆ）５４８９０８抗体と同じエピトープに結合する抗体；
（ｇ）６Ｄ３９８抗体（ＵＳＢｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｌｉｆｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）；
（ｈ）６Ｄ３９８抗体と同じエピトープに結合する抗体；
（ｉ）ＢＮ３．２抗体（Ｌｅｉｃａ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）；
（ｊ）ＢＮ３．２抗体と同じエピトープに結合する抗体；
（ｋ）２６Ｂ３抗体と同じエピトープに結合する抗体；
（ｌ）ＣＤＲＨ１として配列番号１４（ＧＹＦＭＮ）、ＣＤＲＨ２として配列番号１５（ＲＩＦＰＹＮＧＤＴＦＹＮＱＫＦＫＧ）、ＣＤＲＨ３として配列番号１６（ＧＴＨＹＦＤＹ）、ＣＤＲＬ１として配列番号１７（ＲＴＳＥＮＩＦＳＹＬＡ）、ＣＤＲＬ２として配列番号１８（ＮＡＫＴＬＡＥ）、およびＣＤＲＬ３として配列番号１９（ＱＨＨＹＡＦＰＷＴ）を含む抗体；
（ｍ）２６Ｂ３抗体；
（ｎ）１９Ｄ４抗体と同じエピトープに結合する抗体；
（ｏ）ＣＤＲＨ１として配列番号２０（ＨＰＹＭＨ）、ＣＤＲＨ２として配列番号２１（ＲＩＤＰＡＮＧＮＴＫＹＤＰＫＦＱＧ）、ＣＤＲＨ３として配列番号２２（ＥＥＶＡＤＹＴＭＤＹ）、ＣＤＲＬ１として配列番号２３（ＲＡＳＥＳＶＤＴＹＧＮＮＦＩＨ）、ＣＤＲＬ２として配列番号２４（ＬＡＳＮＬＥＳ）、およびＣＤＲＬ３として配列番号２５（ＱＱＮＮＧＤＰＷＴ）を含む抗体；
（ｐ）１９Ｄ４抗体（米国特許第８，４７５，７９５号を参照）；
（ｑ）９Ｆ３抗体と同じエピトープに結合する抗体；
（ｒ）ＣＤＲＨ１として配列番号２６（ＳＧＹＹＷＮ）、ＣＤＲＨ２として配列番号２７（ＹＩＫＳＤＧＳＮＮＹＮＰＳＬＫＮ）、ＣＤＲＨ３として配列番号２８（ＥＷＫＡＭＤＹ）、ＣＤＲＬ１として配列番号２９（ＲＡＳＳＴＶＳＹＳＹＬＨ）、ＣＤＲＬ２として配列番号３０（ＧＴＳＮＬＡＳ）、およびＣＤＲＬ３として配列番号３１（ＱＱＹＳＧＹＰＬＴ）を含む抗体；
（ｓ）９Ｆ３抗体（米国特許第８，４７５，７９５号を参照）；
（ｔ）２４Ｆ１２抗体と同じエピトープに結合する抗体；
（ｕ）ＣＤＲＨ１として配列番号３２（ＳＹＡＭＳ）、ＣＤＲＨ２として配列番号３３（ＥＩＧＳＧＧＳＹＴＹＹＰＤＴＶＴＧ）、ＣＤＲＨ３として配列番号３４（ＥＴＴＡＧＹＦＤＹ）、ＣＤＲＬ１として配列番号３５（ＳＡＳＱＧＩＮＮＦＬＮ）、ＣＤＲＬ２として配列番号３６（ＹＴＳＳＬＨＳ）、およびＣＤＲＬ３として配列番号３７（ＱＨＦＳＫＬＰＷＴ）を含む抗体；
（ｖ）２４Ｆ１２抗体（米国特許第８，４７５，７９５号を参照）；
（ｗ）（ｉ）配列番号３８：
【化５】
2018516244.tif 000007
に示したＬＫ２６ＨｕＶＫ
（ｉｉ）配列番号３９：
【化６】
2018516244.tif 000008
に示したＬＫ２６ＨｕＶＫＹ
（ｉｉｉ）配列番号４０：
【化７】
2018516244.tif 000009
に示したＬＫ２６ＨｕＶＫＰＷ、および
（ｉｖ）配列番号４１：
【化８】
2018516244.tif 000010
に示したＬＫ２６ＨｕＶＫＰＷ，Ｙからなる群より選択される可変領域軽鎖を含む抗体
（ｘ）（ｉ）配列番号４２：
【化９】
2018516244.tif 000011
に示したＬＫ２６ＨｕＶＨ
（ｉｉ）配列番号４３：
【化１０】
2018516244.tif 000012
に示したＬＫ２６ＨｕＶＨ  ＦＡＩＳ，Ｎ
（ｉｉｉ）配列番号４４：
【化１１】
2018516244.tif 000013
に示したＬＫ２６ＨｕＶＨ  ＳＬＦ
（ｉｖ）配列番号４５：
【化１２】
2018516244.tif 000014
に示したＬＫ２６ＨｕＶＨ  Ｉ，Ｉ
（ｖ）配列番号４６：
【化１３】
2018516244.tif 000015
に示したＬＫ２６ＫＯＬＨｕＶＨからなる群より選択される可変領域重鎖を含む抗体
（ｙ）重鎖可変領域ＬＫ２６ＫＯＬＨｕＶＨ（配列番号４６）および軽鎖可変領域ＬＫ２６ＨｕＶＫＰＷ，Ｙ（配列番号４１）を含む抗体；
（ｚ）重鎖可変領域ＬＫ２６ＨｕＶＨ  ＳＬＦ（配列番号４４）および軽鎖可変領域ＬＫ２６ＨｕＶＫＰＷ，Ｙ（配列番号４１）を含む抗体；
（ａａ）重鎖可変領域ＬＫ２６ＨｕＶＨ  ＦＡＩＳ，Ｎ（配列番号４３）および軽鎖可変領域ＬＫ２６ＨｕＶＫＰＷ，Ｙ（配列番号４１）を含む抗体；ならびに
（ｂｂ）その内容全体が参照により本明細書に組み込まれている欧州特許出願第８６１０４１７０．５号（Ｒｅｔｔｉｇ）に記載されている、その重鎖および軽鎖が、それぞれ配列番号１１および１２：
【化１４】
2018516244.tif 000016
として本明細書に提示されている、マウスモノクローナルＬＫ２６抗体
からなる群より選択され得る。ある特定の実施形態では、抗ＦＲＡ抗体は、（ｉ）重鎖可変領域ＬＫ２６ＫＯＬＨｕＶＨ（配列番号４６）および軽鎖可変領域ＬＫ２６ＨｕＶＫＰＷ，Ｙ（配列番号４１）；重鎖可変領域ＬＫ２６ＨｕＶＨ  ＳＬＦ（配列番号４４）および軽鎖可変領域ＬＫ２６ＨｕＶＫＰＷ，Ｙ（配列番号４１）；または重鎖可変領域ＬＫ２６ＨｕＶＨ  ＦＡＩＳ，Ｎ（配列番号４３）および軽鎖可変領域ＬＫ２６ＨｕＶＫＰＷ，Ｙ（配列番号４１）を含む。ＭＯＲＡｂ−００３を産生するチャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞が、２００６年４月２４日にＡＴＣＣ（１０８０１  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｂｏｕｌｅｖａｒｄ、Ｍａｎａｓｓａｓ、ＶＡ  ２０１１０）に寄託され、受託番号ＰＴＡ−７５５２を割り当てられた。
【００７０】
葉酸受容体アルファに免疫特異的に結合する他の有用な抗体は、それぞれ配列番号７および配列番号８と少なくとも９０％、好ましくは少なくとも９５％または９９％の配列同一性を有する成熟した軽鎖可変領域および重鎖可変領域を含む。葉酸受容体アルファまたはその誘導体に免疫特異的に結合する他の有用な抗体は、例えば、イムノアッセイによって決定される場合、ファルレツズマブの葉酸受容体アルファへの結合を競合的に阻害することができる。競合的阻害は、抗体が、少なくとも２倍および好ましくは５倍過剰で存在するとき、ファルレツズマブの葉酸受容体アルファへの結合を、少なくとも５０％、より典型的には、少なくとも６０％、なおより典型的には、少なくとも７０％、最も典型的には少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、または少なくとも９５％阻害することを意味する。
【００７１】
葉酸受容体アルファに免疫特異的に結合する抗体は、上記に開示された抗葉酸受容体アルファ抗体の誘導体であってもよい。典型的な修飾としては、例えば、グリコシル化、脱グリコシル、アセチル化、ペグ化、リン酸化、アミド化、公知の保護基／ブロッキング基による誘導体化、タンパク質分解的切断、細胞リガンドまたは他のタンパク質への連結などがある。さらに、誘導体は、１種または複数の非古典的アミノ酸を含有し得る。
【００７２】
ある特定の実施形態では、抗ＦＲＡ抗体は、マウス抗体、ヒト抗体、ヒト化抗体、二重特異性抗体、キメラ抗体、Ｆａｂ、Ｆａｂ’２、ＳｃＦｖ、ＳＭＩＰ、アフィボディ（ａｆｆｉｂｏｄｙ）、アビマー（ａｖｉｍｅｒ）、ベルサボディ（ｖｅｒｓａｂｏｄｙ）、ナノボディ、バイオボディ、およびドメイン抗体からなる群より選択される。代わりに、または組合せで、抗ＦＲＡ抗体は、例えば、放射標識、ビオチン標識、発色団標識、フルオロフォア標識、または酵素標識からなる群より選択される標識で標識される。
【００７３】
さらなる態様では、被験体に由来する試料中の葉酸受容体アルファ（ＦＲＡ）発現のレベルは、２抗体サンドイッチアッセイによって評価される。サンドイッチアッセイの一部の実施形態では、試料は、（ａ）固体支持体に固定化された９Ｆ３抗体および標識２４Ｆ１２抗体、（ｂ）固体支持体に固定化された２６Ｂ３抗体および標識１９Ｄ４抗体、ならびに（ｃ）固体支持体に固定化された９Ｆ３抗体および標識２６Ｂ３抗体と接触させられる。例えば、試料は、尿、全血、血清、血漿、胸水、痰、気管支洗浄液、循環細胞、循環腫瘍細胞、組織に付随してない細胞（即ち、遊離細胞）、組織（例えば、胸膜組織、手術で摘出した腫瘍組織、微細針吸引を含めた生検材料）、組織学的調製物などであり得る。
【００７４】
ある特定の実施形態では、試料は、試料中のＦＲＡ発現のレベルを決定する前にグアニジンで処理される。代わりにまたは組合せで、試料は、試料中のＦＲＡ発現のレベルを決定する前に希釈される。代わりに、または組合せで、試料は、試料中のＦＲＡ発現のレベルを決定する前に遠心分離され、ボルテックスされ、または両方を行われる。
【００７５】
別のバリエーションでは、公知のまたは疑われる肺がんにおけるＦＲＡ発現レベルは、標識抗ＦＲＡ抗体またはその抗原結合断片を患者に投与し、ｉｎ  ｖｉｖｏイメージングによって抗体または断片を検出することによってｉｎ  ｖｉｖｏで検出することができる。上述した抗体のいずれも、ｉｎ  ｖｉｖｏイメージング分析において同様に用いられ得る。
【００７６】
肺組織試料中のＦＲＡのレベルは、１種または複数の標準物質に関して決定することができる（しかし、必ずしもそうする必要はない）。標準物質は、歴史的にまたは同時に決定することができる。標準物質は、例えば、異なる被験体由来のがん性であることが公知のＦＲＡ発現肺組織試料、異なる被験体由来のがん性でないことが公知のＦＲＡ発現肺組織試料、ＦＲＡを発現しないことが公知の患者もしくは他の被験体由来の組織、またはＦＲＡ発現肺がん細胞株であり得る。
【００７７】
標準物質（使用される場合）と比べた抗ＦＲＡ抗体または断片のＦＲＡへの結合からの検出可能なシグナルの存在は、組織試料中のＦＲＡの存在を示し、検出可能な結合のレベルは、ＦＲＡ発現レベルの指標を提供する。組織切片に対して実施されるアッセイでは、発現のレベルは、ＦＲＡの検出可能な発現を示す試料の表面積のパーセンテージとして表すことができる。代替としてまたは追加的に、発現のレベル（強度）は、試料中の全発現または試料中のＦＲＡを発現する細胞の尺度として使用することができる。発現の強度は、例えば、以前に記載された方法を使用して組織切片のデジタルイメージングまたはマニュアル顕微鏡評価を介して決定することができる（Ｐｏｔｔｓ、Ｄｒｕｇ  Ｄｉｓｃｏｖ  Ｔｏｄａｙ、２００９年；１４巻（１９〜２０号）：９３５〜４１頁；Ｏ’Ｓｈａｎｎｅｓｓｙら、Ｏｎｃｏｔａｒｇｅｔ、２０１２年；３巻（４号）：４１４〜２５頁；米国特許第８，４７５，７９５号；製造者の指示、カタログ番号ＩＰＩ４００６Ｋ  Ｇ１０（Ｂｉｏｃａｒｅ  Ｍｅｄｉｃａｌ；Ｃｏｎｃｏｒｄ、ＣＡ）。ＦＲＡ発現の強度は、本明細書に記載のＦＲＡＭＳＣＯＲまたはＨＢＳＣＯＲを決定するのに使用することができる。特に、ＦＲＡＭＳＣＯＲ（Ｍ−スコア）は、以下の通り０、１＋、２＋、３＋スコアリングシステムを仮定して加重平均として計算される（図２を参照）：
ｘ＝％  １＋の染色された腫瘍
ｙ＝％  ２＋の染色された腫瘍
ｚ＝％  ３＋の染色された腫瘍
ここで、
【化１５】
2018516244.tif 000017
である。例示の目的で、患者の腫瘍が、２０％の＋１のＦＲＡ染色、１０％の＋２のＦＲＡ染色、および２０％の＋３のＦＲＡ染色を有する場合、Ｍスコア＝１６．６である。ＨＢＳＣＯＲ（Ｈ−スコア）は、標的組織区画内のすべての細胞から算出されるバイオマーカー染色（この場合、ＦＲＡの染色）の平均光学密度値を報告する。これは、専売の組織認識特色を利用して、細胞を分類することなく、線形スコア、およびＨ−スコアの連続拡張を介して組織区画を決定する。Ｈ−スコアは、組織内のバイオマーカー発現をスコアリングするのに病理学者および当業者が一般に使用する標準的なスコアリング法であり、これは基本的に、すべての強度レベル（１＋、＋２×２＋、＋３×３＋）における強度スコアの和である。ＨＢＳＣＯＲは、細胞測定値（光学密度）の和を細胞の総数で除すことによって導出される。ＨＢＳＣＯＲは、今度は、標的組織区画内のすべての細胞から算出されるバイオマーカー染色の値を報告する。この計算は、以下の式を使用して定量化される：
【化１６】
2018516244.tif 000018
【００７８】
患者のＦＲＡ発現レベルが決定されると、これは、参照ＦＲＡ発現レベルと比較される。好適な実施形態では、患者のＦＲＡ発現レベルは、参照ＦＲＡ発現レベルと比較するためにＦＲＡＭＳＣＯＲ（即ち、Ｍ−スコア）またはＨＢＳＣＯＲ（即ち、Ｈ−スコア）の単位で提示される。好適な実施形態では、参照ＦＲＡ発現レベルは、予め決定される。例えば、参照データセットは、低、中、および高ＦＲＡ発現レベルを有する無関係の患者由来の試料を使用して確立することができる。このデータセットは、相対的なＦＲＡ発現レベルが患者の間で比較され、マニュアルおよびデジタル分析ＦＲＡＭＳＣＯＲおよびＨＢＳＣＯＲ法を使用して定量化される標準を表す。一部の実施形態では、参照ＦＲＡ発現レベルは、ＦＲＡ標的化剤を投与されるＦＲＡ発現肺がんに罹患している患者集団を、プラセボを投与されるＦＲＡ発現肺がんに罹患している患者集団と比較することによって決定される。ＦＲＡ発現肺がんに罹患している患者集団は、標準治療化学療法も受けたことがある場合がある。ＦＲＡ発現肺がんに罹患しているそれぞれの集団における各患者のＦＲＡ発現レベルは、上述した方法に従って決定される。患者集団の臨床転帰（例えば、無増悪生存期間または全生存期間）が監視される。次いで、ＦＲＡ発現レベルに対する患者集団の臨床転帰が、以下に提供される実施例に記載されるように比較される。参照ＦＲＡ発現レベルは、それより上で、ＦＲＡ標的化剤（例えば、ＦＲＡに免疫特異的に結合する抗体）を投与されるＦＲＡ発現肺がんに罹患している患者集団が、プラセボを投与されるＦＲＡ発現肺がんに罹患している患者集団に対して少なくとも１つの臨床転帰の統計的に有意な改善を実証するＦＲＡ発現レベルに対応する。参照ＦＲＡ発現レベルに等しい、またはそれを超える患者ＦＲＡ発現レベルは、患者がＦＲＡ標的化剤を用いた処置から利益を得ることになることを示す。
【００７９】
処置の方法
【００８０】
葉酸受容体アルファ（ＦＲＡ）発現肺がんを有する患者を処置する方法も本明細書に提供されている。ＦＲＡ発現肺がんを有する患者を処置するための方法の一部の実施形態では、がんは、ＮＳＣＬＣである。一部の実施形態では、ＮＳＣＬＣは、腺癌である。患者におけるＦＲＡ発現肺がんを処置するための開示された方法は、葉酸受容体アルファ（ＦＲＡ）に免疫特異的に結合する抗体が、ＦＲＡ発現レベルが参照ＦＲＡ発現レベルに等しい、またはそれを超える患者に投与される方法を含む。
【００８１】
本明細書に記載の葉酸受容体アルファ（ＦＲＡ）発現肺がんを有する患者を処置する方法によれば、患者の生体試料中の患者のＦＲＡ発現レベルが、定量化され、上述した参照ＦＲＡ発現レベルと比較される。患者のＦＲＡ発現レベルが参照ＦＲＡ発現レベルに等しい、またはそれを超える場合、患者は、ＦＲＡ標的化剤（例えば、ＦＲＡに免疫特異的に結合する抗体）を投与される。
【００８２】
本明細書に記載の処置の方法の一部の実施形態では、ＦＲＡ標的化剤は、ビンタフォリドである。一部の実施形態では、ＦＲＡ標的化剤は、ＦＲＡに免疫特異的に結合する抗体、例えば、それだけに限らないが、肺がん細胞上で発現される葉酸受容体アルファに免疫特異的に結合する抗体；このような抗体の抗原結合断片；誘導体；およびこれらの改変体である。好適な実施形態では、葉酸受容体アルファに免疫特異的に結合する抗体は、以下：
（ａ）ＣＤＲＨ１として配列番号１、ＣＤＲＨ２として配列番号２、ＣＤＲＨ３として配列番号３、ＣＤＲＬ１として配列番号４、ＣＤＲＬ２として配列番号５、およびＣＤＲＬ３として配列番号６を含む抗体；
（ｂ）配列番号７のアミノ酸配列を含む成熟軽鎖可変領域および／または配列番号８のアミノ酸配列を含む成熟重鎖可変領域を含む抗体；
（ｃ）ファルレツズマブ；
（ｄ）それぞれ配列番号７および配列番号８と少なくとも９０％、好ましくは少なくとも９５％または９９％の配列同一性を有する成熟した軽鎖可変領域および重鎖可変領域を含む、葉酸受容体アルファに特異的に結合する抗体；
（ｅ）例えば、イムノアッセイによって決定される場合、ファルレツズマブの葉酸受容体アルファへの結合を競合的に阻害することができる抗体またはその誘導体
からなる群より選択される抗体である。ＦＲＡに免疫特異的に結合する抗体の誘導体も、本方法の実施において使用することができる。典型的な修飾としては、例えば、グリコシル化、脱グリコシル化、アセチル化、ペグ化、リン酸化、アミド化、公知の保護基／ブロッキング基による誘導体化、タンパク質分解的切断、細胞リガンドまたは他のタンパク質への連結などがある。さらに、誘導体は、１種または複数の非古典的アミノ酸を含有し得る。一部の実施形態では、ＦＲＡに免疫特異的に結合する抗体は、毒素、例えば、それだけに限らないが、微小管阻害剤、ＤＮＡ損傷剤（例えば、放射性核種）、ＤＮＡ修復阻害剤、またはシグナル伝達阻害剤などにコンジュゲートされる。抗体コンジュゲーションのためのリンカーおよび抗体をコンジュゲートするための方法は、当技術分野で公知である。本明細書に記載の方法に従ってＦＲＡ標的化剤として用いられ得る例示的な抗体−薬物コンジュゲートは、ＩＭＧＮ８５３である。
【００８３】
本方法は、処置の他の手段、例えば、手術（例えば、減量手術）、放射線、標的化療法、化学療法、免疫療法、増殖因子阻害剤または抗血管新生因子の使用などと組み合わせることができる。ＦＲＡ標的化剤は、手術、化学療法、または放射線療法処置を受けている患者に同時的に投与することができる。代わりに、患者は、少なくとも１時間、最大で数カ月ＦＲＡ標的化剤を投与する前または後に、例えば、少なくとも１時間、５時間、１２時間、１日、１週間、１カ月、または３カ月、ＦＲＡ標的化剤を投与する前または後に手術、化学療法、または放射線療法を受けることができる。例えば、本明細書に提供される処置の方法の一部の実施形態では、さらに、治療有効量の白金含有化合物、葉酸代謝拮抗薬、および／またはタキサンを、ＦＲＡ標的化剤に加えて被験体に投与することを伴う。例示的な白金含有化合物は、シスプラチンまたはカルボプラチンである。処置の方法において使用するためのタキサンの例としては、それだけに限らないが、パクリタキセル、ドセタキセル、ならびにそれだけに限らないが、ｎａｂ−パクリタキセル（Ａｂｒａｘａｎｅ（登録商標））、カバジタキセル（Ｊｅｖｔａｎａ（登録商標））、ＤＪ−９２７（Ｔｅｓｅｔａｘｅｌ（登録商標））、パクリタキセルポリグルメックス（Ｏｐａｘｉｏ（登録商標））、ＸＲＰ９８８１（Ｌａｒｏｔａｘｅｌ（登録商標））、ＥｎｄｏＴＡＧ＋パクリタキセル（ＥｎｄｏＴＡＧ（登録商標）−１）、ポリマー−ミセルパクリタキセル（Ｇｅｎｅｘｏｌ−ＰＭ（登録商標））、ＤＨＡ−パクリタキセル（Ｔａｘｏｐｒｅｘｉｎ（登録商標））、ＢＭＳ−１８４４７６を含めたこれらの半合成、合成、および／または修飾バージョンおよび製剤がある。例示的な葉酸代謝拮抗薬は、ペメトレキセドである。白金含有化合物は、患者に、毎週１回、２週間に１回、３週間に１回、または４週間に１回投与することができる。タキサンは、患者に、毎週１回、２週間に１回、３週間に１回、または４週間に１回投与することができる。葉酸代謝拮抗薬は、患者に、毎週１回、２週間に１回、３週間に１回、または４週間に１回投与することができる。白金含有化合物およびタキサンまたは葉酸代謝拮抗薬の両方が処置レジメンの一部として患者に投与される実施形態では、タキサンまたは葉酸代謝拮抗薬は、白金含有化合物の前、後、またはそれと同時に投与され得る。
【００８４】
本明細書に記載の処置の方法の一部の実施形態では、患者は、患者のＦＲＡ発現レベルを定量化する前に、がんを処置するために肺がんの外科的切除、事前の白金ベース療法、事前のタキサンベース療法、および／または事前の白金およびタキサンベース療法を受けたことがある場合がある。患者が、患者のＦＲＡ発現レベルを決定する前に、がんを処置するためにがんの外科的切除、事前の白金ベース療法、事前のタキサンベース療法、および／または事前の白金およびタキサンベース療法を受けた、本方法の一部の実施形態では、患者は、患者のＦＲＡ発現レベルを決定するステップの前にがんの症候性進行、血清学的進行、および／または放射線学的進行を呈したことがある場合がある。
【００８５】
本明細書に記載の処置の方法による治療剤（ＦＲＡ標的化剤、タキサン、葉酸代謝拮抗薬、および／または白金含有化合物を含む）の投与は、当技術分野で公知の任意の手段によるものであり得る。
【００８６】
皮内、筋肉内、腹腔内、静脈内、皮下、鼻腔内、硬膜外、および経口経路を含めた様々な送達システムを、治療剤（ＦＲＡ標的化剤、タキサン、葉酸代謝拮抗薬、および／または白金含有化合物を含む）を投与するのに使用することができる。薬剤は、例えば、注入またはボーラス注射によって、上皮または粘膜皮膚内層（例えば、口腔粘膜、直腸、および腸粘膜など）を通じた吸収によって投与することができる。投与は、全身的または局所的であり得る。
【００８７】
治療剤は、注射によって、カテーテルによって、坐剤によって、またはシラスティック膜（ｓｉａｌａｓｔｉｃ  ｍｅｍｂｒａｎｅ）などの膜、もしくは繊維を含めた多孔質、非多孔質、もしくはゼラチン状材料のものであるインプラントによって投与することができる。本明細書に記載の使用のための治療剤およびこれらの医薬組成物は、任意の許容される剤形、例えば、カプセル剤、錠剤、水性懸濁剤、液剤などで経口投与することができる。
【００８８】
治療剤を投与する好適な方法としては、それだけに限らないが、静脈内注射および腹腔内投与がある。
【００８９】
代わりに、治療剤は、制御放出システムで送達することができる。例えば、ポンプを使用することができる（Ｌａｎｇｅｒ、１９９０年、Ｓｃｉｅｎｃｅ、２４９巻：１５２７〜１５３３頁；Ｓｅｆｔｏｎ、１９８９年、ＣＲＣ  Ｃｒｉｔ．  Ｒｅｆ  Ｂｉｏｍｅｄ．  Ｅｎｇ．、１４巻：２０１頁；Ｂｕｃｈｗａｌｄら、１９８０年、Ｓｕｒｇｅｒｙ、８８巻：５０７頁；Ｓａｕｄｅｋら、１９８９年、Ｎ．  Ｅｎｇｌ．  Ｊ．  Ｍｅｄ．、３２１巻：５７４頁を参照）。代わりに、ポリマー材料を使用することができる（Ｍｅｄｉｃａｌ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ  ｏｆ  Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  Ｒｅｌｅａｓｅ（ＬａｎｇｅｒおよびＷｉｓｅ編、ＣＲＣ  Ｐｒｅｓｓ、Ｂｏｃａ  Ｒａｔｏｎ、Ｆｌａ．、１９７４年）；Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  Ｄｒｕｇ  Ｂｉｏａｖａｉｌａｂｉｌｉｔｙ、Ｄｒｕｇ  Ｐｒｏｄｕｃｔ  Ｄｅｓｉｇｎ  ａｎｄ  Ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ（ＳｍｏｌｅｎおよびＢａｌｌ編、Ｗｉｌｅｙ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ、１９８４年）；ＲａｎｇｅｒおよびＰｅｐｐａｓ、１９８３年、Ｍａｃｒｏｍｏｌ．  Ｓｃｉ．  Ｒｅｖ．  Ｍａｃｒｏｍｏｌ．  Ｃｈｅｍ．、２３巻：６１頁を参照。Ｌｅｖｙら、１９８５年、Ｓｃｉｅｎｃｅ、２２８巻：１９０頁；Ｄｕｒｉｎｇら、１９８９年、Ａｎｎ．  Ｎｅｕｒｏｌ．、２５巻：３５１頁；Ｈｏｗａｒｄら、１９８９年、Ｊ．  Ｎｅｕｒｏｓｕｒｇ．、７１巻：１０５頁も参照）。他の制御放出システムは、例えば、Ｌａｎｇｅｒ、上記に論じられている。
【００９０】
治療剤は、治療有効量または予防有効量の治療剤および１種または複数の薬学的に許容可能なまたは適合性の成分を含む医薬組成物として投与することができる。例えば、医薬組成物は、典型的には、１種または複数の薬学的担体（例えば、滅菌液体、例えば、水、および石油、動物、植物、または合成起源のものを含めた油、例えば、ラッカセイ油、ダイズ油、鉱油、ゴマ油など）を含む。水は、医薬組成物が静脈内投与されるとき、より典型的な担体である。食塩溶液（例えば、リン酸緩衝食塩水）ならびに水性デキストロースおよびグリセロール溶液も、特に注射用溶液のための液体担体として用いられ得る。適当な薬学的賦形剤としては、例えば、デンプン、グルコース、ラクトース、スクロース、ゼラチン、麦芽、イネ、小麦粉、チョーク、シリカゲル、ステアリン酸ナトリウム、モノステアリン酸グリセロール、タルク、塩化ナトリウム、乾燥脱脂乳、グリセロール、プロピレン、グリコール、水、エタノールなどがある。組成物は、必要に応じて、少量の湿潤剤もしくは乳化剤、ｐＨ緩衝剤（例えば、アミノ酸）、および／または可溶化剤もしくは安定化剤（例えば、ｔｗｅｅｎなどの非イオン性界面活性剤、もしくは糖、例えば、スクロース、トレハロースなど）も含有し得る。ファルレツズマブの好適な製剤は、ファルレツズマブ、リン酸ナトリウム、塩化ナトリウム（ＮａＣｌ）、およびポリソルベート−８０、ｐＨ７．２を含有する。ファルレツズマブの好適な最終製剤は、５ｍｇ／ｍＬファルレツズマブ、１０ｍＭリン酸ナトリウム、１５０ｍＭ  ＮａＣｌ、および０．０１％ポリソルベート−８０、ｐＨ７．２を含有する。
【００９１】
本明細書に提供される医薬組成物は、液剤、懸濁剤、エマルジョン、錠剤、丸剤、カプセル剤、散剤、持続放出製剤などの形態を採ることができる。使用直前に液体調製物に変換されるように意図されている固体形態調製物も含まれる。組成物は、トリグリセリドなどの伝統的なバインダーおよび担体とともに坐剤として製剤化され得る。経口製剤は、標準的な担体、例えば、医薬品グレードのマンニトール、ラクトース、デンプン、ステアリン酸マグネシウム、サッカリンナトリウム、セルロース、炭酸マグネシウムなどを含むことができる。適当な薬学的担体の例は、Ｅ．  Ｗ．  Ｍａｒｔｉｎによる「Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ」に記載されている。このような組成物は、患者への適切な投与のための形態をもたらすように、適当な量の担体と一緒に、典型的には精製形態で治療有効量の核酸またはタンパク質を含有する。製剤は、投与様式に対応する。
【００９２】
典型的には、静脈内投与用組成物は、滅菌等張性水性緩衝液中の溶液である。必要な場合、医薬品は、可溶化剤、および注射部位における痛みを和げるためのリグノカインなどの局所麻酔薬をも含むことができる。一般に、成分は、活性剤の量を示すアンプルまたはサッシェ（ｓａｃｈｅｔｔｅ）などの密封容器内に、例えば、乾燥凍結乾燥粉末（ｄｒｙ  ｌｙｏｐｈｉｌｉｚｅｄ  ｐｏｗｄｅｒ）または濃縮物として別個に、または単位剤形中に一緒に混合されて供給される。医薬組成物が注入によって投与される場合、これは、滅菌医薬品グレード水または生理食塩水を含有する注入ボトルで分注することができる。医薬組成物が注射によって投与される場合、成分を投与前に混合することができるように、注射用滅菌水または生理食塩水のアンプルが提供され得る。
【００９３】
肺がんの処置に有効である治療剤の量は、標準的な臨床技法によって決定することができる。さらに、最適な投与量範囲の同定を助けるために、ｉｎ  ｖｉｔｒｏアッセイが任意選択で用いられ得る。製剤において用いられる正確な用量も、投与経路およびがんの病期に依存し、実施者の判断および各患者の状況によって決められるべきである。有効用量は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏまたは動物モデル検定システムから導出される用量−応答曲線から外挿されてもよい。用量は、細胞培養において決定する場合、ＩＣ５０（即ち、症状の半最大阻害を実現する試験化合物の濃度）を含む循環血漿濃度範囲を達成するように動物モデルにおいて処方することができる。
【００９４】
例えば、薬剤の毒性および治療効力は、ＬＤ５０（集団の５０％に致死性の用量）およびＥＤ５０（集団の５０％において治療上有効な用量）を決定するための標準的な薬学的手順によって細胞培養または実験動物で決定することができる。毒性効果と治療効果との用量比は、治療指数であり、これは、比ＬＤ５０／ＥＤ５０として表すことができる。大きい治療指数を呈する薬剤が好適である。薬剤が毒性副作用を呈する場合、薬剤を患部組織の部位を標的とする送達システムを使用して、葉酸受容体アルファを発現しない細胞への潜在的な損傷を最小限にし、それによって副作用を低減することができる。
【００９５】
一部の実施形態では、被験体は、被験体の体重１ｋｇ当たり約０．０１μｇ〜約５００ｍｇの範囲の一日用量で本明細書に記載の治療剤を投与され得る。典型的には、葉酸受容体アルファ発現肺がんを有する患者に投与される治療剤（例えば、ＦＲＡに免疫特異的に結合する抗体などのＦＲＡ標的化剤、好ましくはファルレツズマブ）の投与量は、被験体の体重１ｋｇ当たり約０．１ｍｇ〜約１００ｍｇである。より典型的には、被験体に投与される投与量は、被験体の体重１ｋｇ当たり約１．２５ｍｇ〜約１２．５ｍｇ、またはさらにより典型的には、被験体の体重１ｋｇ当たり約２．５ｍｇ〜約１０．０ｍｇである。一部の実施形態では、葉酸受容体アルファ発現肺がんを有する被験体に投与されるＦＲＡ標的化剤（例えば、ＦＲＡに免疫特異的に結合する抗体、好ましくはファルレツズマブ）の投与量は、被験体の体重１ｋｇ当たり約５．０ｍｇ〜約７．５ｍｇである。本明細書に記載の処置の方法の一部の実施形態では、約７．５ｍｇ／ｋｇ〜約１２．５ｍｇ／ｋｇ、好ましくは約１０ｍｇ／ｋｇのＦＲＡ標的化剤（例えば、ＦＲＡに免疫特異的に結合する抗体）の負荷用量が、被験体に投与される。本明細書に記載の処置の方法の一部の実施形態では、毎週約７．５ｍｇ／ｋｇ〜約１２．５ｍｇ／ｋｇ、好ましくは約１０ｍｇ／ｋｇのＦＲＡ標的化剤（例えば、ＦＲＡに免疫特異的に結合する抗体）の２回の負荷用量が、処置の最初の２週間に被験体に投与される。一部の実施形態では、葉酸受容体アルファ発現肺がんを有する被験体に投与されるタキサンの投与量は、被験体の体重の、約５０ｍｇ／ｍ２〜約２５０ｍｇ／ｍ２、好ましくは約７５ｍｇ／ｍ２〜約２００ｍｇ／ｍ２である。一部の実施形態では、葉酸受容体アルファ発現肺がんを有する被験体に投与されるカルボプラチンの投与量は、約ＡＵＣ  ３、好ましくは約ＡＵＣ  ４、より好ましくは約ＡＵＣ  ５〜６、一部の好適な実施形態では、約ＡＵＣ  ６である。一部の実施形態では、葉酸受容体アルファ発現肺がんを有する被験体に投与されるシスプラチンの投与量は、被験体の体重の、約５０ｍｇ／ｍ２〜約２５０ｍｇ／ｍ２、好ましくは約７５ｍｇ／ｍ２〜約２００ｍｇ／ｍ２である。一部の実施形態では、葉酸受容体アルファ発現肺がんを有する被験体に投与される葉酸代謝拮抗薬の投与量は、約４００〜約６００ｍｇ／ｍ２である。好適な実施形態では、ＦＲＡ標的化剤の投与と組み合わせた化学療法の少なくとも４〜６サイクルが、患者に投与される。
【００９６】
有効な処置のために、当業者は、処置されている被験体に適切な治療剤の投与スケジュールおよび投与量を推奨することできる。投薬は、必要とされる限り、毎日１〜４回もしくはそれ超、１週間当たり１回、２週間毎に１回、３週間毎に１回、または４週間毎に１回行われることが好適であり得る。典型的には、ＦＲＡ標的化剤は、毎週被験体に投与される。
【００９７】
投薬は、組成物が持続送達ビヒクルで製剤化される場合、より少ない頻度で行うことができる。投与スケジュールは、被験体の必要性に依存し得る活性薬物濃度に応じて変動し得る。
【００９８】
キット
【００９９】
ＦＲＡ発現肺がんを有する患者におけるＦＲＡ標的化剤を用いた処置に対する応答性の見込みを予測するためのキットが本明細書でさらに提供されている。一部の実施形態では、キットは、抗ＦＲＡ抗体、使用していないとき抗体を収容するための容器、および被験体のＦＲＡ発現のレベルを決定するのに抗ＦＲＡ抗体を使用するための指示を含有する。１つまたは複数の追加の容器が、マーカーアッセイで使用される試薬または緩衝液などの要素を封入する場合がある。このようなキットはまた、または代わりに、抗体結合の直接または間接検出に適したレポーター基を含有する検出試薬を含有し得る。
【０１００】
患者におけるＦＲＡ発現肺がんを処置するためのキットであって、ＦＲＡ標的化剤（例えば、ビンタフォリド、ファルレツズマブなどのＦＲＡに免疫特異的に結合する抗体、またはＩＭＧＮ８５３などの抗体−薬物コンジュゲート）、使用していないときＦＲＡ標的化剤を収容するための容器、およびＦＲＡ標的化剤を使用するための指示を含む、キットも本明細書に提供されている。ファルレツズマブは、キットにおいてＦＲＡに免疫特異的に結合する好適な抗体である。一部の実施形態では、ＦＲＡ発現肺がんを有する被験体を処置するためのキットは、患者の生体試料中のＦＲＡ発現のレベルを定量化するのに使用するための抗ＦＲＡ抗体も含有する。この後者の抗ＦＲＡ抗体は、治療的に投与されるＦＲＡに免疫特異的に結合する抗体と同じであっても、異なっていてもよい。一部の実施形態では、キットは、使用していないとき抗ＦＲＡ抗体を収容するための容器、および被験体のＦＲＡの発現レベルを決定するのに抗ＦＲＡ抗体を使用するための指示も含有する。
【０１０１】
ＦＲＡ発現肺がんを有する被験体を処置するためのキットは、本明細書に記載の追加の治療剤（例えば、白金含有化合物、タキサン、および／または葉酸代謝拮抗薬）も含有し得る。キットに含めるための白金含有化合物の例としては、それだけに限らないが、シスプラチンおよびカルボプラチンがある。キットに含めるためのタキサンの例としては、それだけに限らないが、パクリタキセル、ドセタキセル、ならびにそれだけに限らないが、ｎａｂ−パクリタキセル（Ａｂｒａｘａｎｅ（登録商標））、カバジタキセル（Ｊｅｖｔａｎａ（登録商標））、ＤＪ−９２７（Ｔｅｓｅｔａｘｅｌ（登録商標））、パクリタキセルポリグルメックス（Ｏｐａｘｉｏ（登録商標））、ＸＲＰ９８８１（Ｌａｒｏｔａｘｅｌ（登録商標））、ＥｎｄｏＴＡＧ＋パクリタキセル（ＥｎｄｏＴＡＧ（登録商標）−１）、ポリマーミセルパクリタキセル（Ｇｅｎｅｘｏｌ−ＰＭ（登録商標））、ＤＨＡ−パクリタキセル（Ｔａｘｏｐｒｅｘｉｎ（登録商標））、ＢＭＳ−１８４４７６を含めたこれらの半合成、合成、および／または修飾バージョンおよび製剤がある。キットに含めるための葉酸代謝拮抗薬の一例は、ペメトレキセドである。治療剤は、キットに分配するのに適した様々な形態のいずれかにあり得る。キットに分配するのに適した治療剤の形態として、液体剤（ｌｉｑｕｉｄ）、散剤、錠剤、懸濁剤、および治療剤を提供するための同様の製剤を挙げることができる。キットは、治療剤を注射、再構成、または希釈するための薬学的に許容可能な希釈剤（例えば、滅菌水）も含み得る。１つまたは複数の追加の容器が、マーカーアッセイで使用される試薬または緩衝液などの要素を封入する場合がある。このようなキットはまた、または代わりに、抗体結合の直接または間接検出に適したレポーター基を含有する検出試薬を含有し得る。
【０１０２】
キットはまた、典型的には、本明細書に記載の方法で使用するためのラベルまたは指示を含有する。ラベルまたは指示は、キットの製造、輸送、販売、または使用中どんな時もキットに付けられ、または別段に伴う任意の書面での、または記録された資料を指す。これは、医薬品または生物学的製品の製造、使用、または販売を規制する政府機関によって規定された形態での通知であり得、この通知は、ヒト投与のための製造、使用、または販売の機関による認可を反映する。ラベルまたは指示は、宣伝リーフレットおよびパンフレット、包装材、指示、オーディオまたはビデオカセット、コンピューターディスク、ならびに医薬キットに直接印刷された書類も包含し得る。
【０１０３】
以下の実施例は、本明細書に開示の実施形態の一部をさらに記載するために提供されている。実施例は、開示された実施形態を例示するように意図されているが、限定するように意図されていない。
【実施例】
【０１０４】
（実施例１）
【０１０５】
患者
【０１０６】
適格被験体は、免疫組織化学検査によって腫瘍細胞の少なくとも５％において、ＦＲＡ発現（１＋またはそれ超の膜染色によって定義される）を伴った、コンピューター断層撮影（ＣＴ）または磁気共鳴画像法（ＭＲＩ）を使用して固形腫瘍における応答評価基準（ＲＥＣＩＳＴ）バージョン１．１によって少なくとも１つの一次元で測定可能な病変を有する病期ＩＶと分類された、肺の新しく診断された、切除不能な、組織学的または細胞学的に確認された腺癌を有していたのでなければならない（ＣｌｉｎｉｃａｌＴｒｉａｌｓ．ｇｏｖ識別名ＮＣＴ０１２１８５１６）。理論的に最大抗ＦＲＡ抗体薬理的効果に必要とされ得るＦＲＡ陽性の程度および頻度に関するデータは存在しないので、腫瘍が＋１の強度の膜ＦＲＡ発現について少なくとも５％陽性であった（当業者によって典型的に用いられる方法を使用して）患者を、ＦＲＡ陽性腫瘍を有し、研究に含めるのに適格であると指定した。被験体は、彼らの肺がんについて治癒目的で事前の化学療法も放射線療法も手術も受けていなかった。
【０１０７】
処置
【０１０８】
被験体を、ファルレツズマブまたはプラセボのいずれかとともに、選択されたプラチナダブレット（カルボプラチン  曲線下面積（ＡＵＣ）薬物動態学的曝露レベル６およびパクリタキセル２００ｍｇ／ｍ２；カルボプラチンＡＵＣ  ５〜６およびペメトレキセド５００ｍｇ／ｍ２；またはシスプラチン７５ｍｇ／ｍ２およびペメトレキセド５００ｍｇ／ｍ２）を受けるように１：１の比でランダム化した。ランダム化は、米国東海岸がん臨床試験グループ（Ｅａｓｔｅｒｎ  Ｃｏｏｐｅｒａｔｉｖｅ  Ｏｎｃｏｌｏｇｙ  Ｇｒｏｕｐ）（ＥＣＯＧ）パフォーマンスステータス（０または１）および選択した化学療法レジメンのタイプによって階層化した。すべてのランダム化された被験体を、３つの許容される化学療法レジメンのうちの１つと組み合わせてファルレツズマブ７．５ｍｇ／ｋｇまたはプラセボで処置し、ファルレツズマブまたはプラセボ単剤療法を負荷用量として８日目に投与したとき、第１のサイクルを除いて、２１日サイクルの１日目に静脈内（ＩＶ）投与した。サイクル２から始めて、ファルレツズマブまたはプラセボを、化学療法と組み合わせてすべての追加のサイクルの１日目に投与した。
【０１０９】
すべてのプロトコール許容プラチナダブレットを、少なくとも４、しかし６以下のサイクルについて３週間ごとに１回投与した。化学療法レジメンは、ひとたび開始したら変更しなかった。化学療法用量は、各国に特異的な承認された添付文書による毒性によって、かつ被験体が経験した毒性の程度に基づいて低減し、または遅延させることができる。化学療法が４番目のサイクルの前に中止され、または６週間超にわたって見合わされた事象では、被験体は、プロトコール処置を中止した。
【０１１０】
組合せ療法から臨床的利益を経験した被験体は、Ｘ線検査上での進行、または疾患進行の他のプロトコール承認尺度が記録されるまで、各２１日サイクルの１日目にファルレツズマブまたはプラセボを受け続けることができる。ひとたび疾患進行が起こったら、各被験体を、生存状態および肺の病期ＩＶ腺癌のための追加の全身療法について経過観察した。この経過観察期間の後、最初の９カ月間に毎月、その後死亡するまで２カ月毎、被験体に接触した。
【０１１１】
評価
【０１１２】
Ｘ線検査での疾患評価を、組合せ療法中２サイクル毎および単剤療法中３サイクル毎に行い、独立した点検ごとに局所的に読み取った。ＣＴスキャン（またはＭＲＩ）も、ＲＥＣＩＳＴ  ｖ．１．１を使用して中央点検（ｃｅｎｔｒａｌ  ｖｉｅｗ）によって独立に評価した。何らかの理由でＸ線検査上での進行の前に研究処置を中止した被験体は、Ｘ線検査上での進行、または疾患進行の他のプロトコール承認尺度を記録するまで、９週間毎にＸ線検査で経過観察した。
【０１１３】
安全性評価は、研究全体にわたって行い、有害事象（ＡＥ）の点検、身体検査、実験室評価、抗薬物抗体（ＡＤＡ）、および心電図検査（ＥＣＧ）を含んでいた。
【０１１４】
ＰＦＳは、ランダム化の日付からＲＥＣＩＳＴによる放射線学的評価に基づく進行もしくは研究者によって評価される最終的な臨床的疾患進行の最初の観察（例えば、陽性の流体細胞診の新しい出現）の日付、または進行性疾患の非存在下での原因が何であれ死亡の日付までの（月数での）時間として定義した。
【０１１５】
腫瘍組織内の相対的ＦＲＡ発現レベルまたは発現の閾値レベルが、標準治療化学療法（カルボプラチン＋パクリタキセル；カルボプラチン＋ペメトレキセド；またはシスプラチン＋ペメトレキセド）と組み合わせた非小細胞肺腺癌（ＮＳＣＬＣ）を有する患者における改善されたファルレツズマブ媒介臨床的改善に重要であることを実証するために、ＮＳＣＬＣ腺癌を有する化学療法未施行、病期ＩＶ患者由来の腫瘍病変から調製した５μｍ組織切片スライドを、細胞質または膜ＦＲＡ発現レベルについて分析した。
【０１１６】
ＦＲＡタンパク質レベルを、標準プロトコール指示に従って２６Ｂ３抗ＦＲＡ抗体（Ｏ’Ｓｈａｎｎｅｓｓｙら、Ｏｎｃｏｔａｒｇｅｔ、２０１２年；３巻（４号）：４１４〜２５頁；カタログ番号ＩＰＩ４００６Ｋ  Ｇ１０（Ｂｉｏｃａｒｅ  Ｍｅｄｉｃａｌ；Ｃｏｎｃｏｒｄ、ＣＡ）にも含まれている；米国特許第８，４７５，７９５号も参照）を使用して本研究について免疫組織学的（ＩＨＣ）分析によって決定した。ＦＲＡ発現を定量化するために、レベルを、２つの手順のうちの１つによって決定し、盲検様式で訓練された病理学者によって分析した。細胞質または膜ＦＲＡ発現を、以前に記載された方法を使用して２６Ｂ３染色組織切片のデジタルイメージングまたはマニュアル顕微鏡評価を介して決定した（Ｐｏｔｔｓ、Ｄｒｕｇ  Ｄｉｓｃｏｖ  Ｔｏｄａｙ、２００９年；１４巻（１９〜２０号）：９３５〜４１頁；Ｏ’Ｓｈａｎｎｅｓｓｙら、Ｏｎｃｏｔａｒｇｅｔ、２０１２年；３巻（４号）：４１４〜２５頁；米国特許第８，４７５，７９５号；製造者の指示、カタログ番号ＩＰＩ４００６Ｋ  Ｇ１０（Ｂｉｏｃａｒｅ  Ｍｅｄｉｃａｌ；Ｃｏｎｃｏｒｄ、ＣＡ）。
【０１１７】
２６Ｂ３染色切片化組織スライド中のＦＲＡのデジタル分析を、Ｆｌａｇｓｈｉｐ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ（Ｗｅｓｔｍｉｎｓｔｅｒ、ＣＯ）によるＣｅｌｌ  Ｍａｐおよび／またはＳｔａｉｎ  Ｍａｐアルゴリズムを介して画像分析を使用して行った。ＦＲＡ発現のマニュアル分析を、当技術分野で熟練した訓練された病理学者を有する２つの独立した研究所により、顕微鏡評価によって行った。
【０１１８】
デジタルイメージングまたはマニュアル分析によって導出された膜または細胞質ＦＲＡ発現レベルを定量化するために、腫瘍陽性およびシグナル強度のパーセンテージとしてＦＲＡ染色を定量化するアルゴリズムを開発した。マニュアル病理スコアリング法で使用するために同定したこれらの値を、膜染色のＦＲＡ  Ｍスコア（ＦＲＡＭＳＣＯＲ）として表した。デジタルイメージング分析で使用するために同定した値を、細胞質染色のＨＢＳスコア（ＨＢＳＣＯＲ）として表した。バイオマーカー発現レベルを正確に定量化するのに使用される以前の方法は、高度に正確なスコアリングを達成するために、腫瘍切片が良好に画定されていなければならず、ＩＨＣ染色が均一である必要があることを決定した。本研究に患者を含めるために得た組織切片および染色の品質を評価するために、当技術分野で熟練した盲検化された病理学者が、ＦＲＡ  ２６Ｂ３染色ＮＳＣＬＣ腫瘍組織切片の完全性を独立に評価して、胸膜組織由来標準物質を使用して胸膜組織内のＦＲＡ発現を比較した。完全な評価の後、病理学者は、１３０組織スライドのうち８５がＦＲＡＭＳＣＯＲおよびＨＢＳＣＯＲ胸膜組織分析に適していると見なした。残りの４５スライドはＦＲＡ発現の「存在」を検出するのに適するものの、その詳細な発現分析は、１．）膜発現を正確に分析する能力を妨げた芳しくない組織保存；２．）胸膜組織内のＦＲＡ発現を正確に決定することができない（スライドのサブセットは、胸水バックグラウンド内に悪性細胞のみを含有していた）；および／または３．）線形範囲内での正確な染色分析を禁じた甚だしい過剰染色に起因して可能でなかった。図１は、処置企図集団（ＩＴＴ）の元の臨床セットの一部であったＦＲＡＭＳＣＯＲまたはＨＢＳＣＯＲによるＦＲＡ発現定量化に適していないものの例に対する組織完全性／形態および染色の適性を示す。
【０１１９】
８５の適当な胸膜腫瘍切片におけるＦＲＡ染色強度を決定するために、胸膜組織参照データセットを、低、中、および高ＦＲＡ発現レベルを有する無関係の患者由来の試料を使用して最初に確立した。このデータセットは、相対的なＦＲＡ発現レベルが患者の間で比較され、マニュアルおよびデジタル分析ＦＲＡＭＳＣＯＲおよびＨＢＳＣＯＲ法を使用して定量化される標準を表す。図２は、ＮＳＣＬＣ腺癌試料におけるＦＲＡの当業者に公知の＋１（低発現）、＋２（中発現）、および＋３（高発現）をスコアリングするのに使用される参照データセットの一例を提供する。さらに、腫瘍陽性のパーセンテージも、以下の式を使用して各方法のアルゴリズムの因子となっている（腫瘍表面積の１〜１００％陽性）（図示せず）。
【０１２０】
ＦＲＡＭＳＣＯＲ（Ｍ−スコア）は、以下の通り０、１＋、２＋、３＋スコアリングシステムを仮定して加重平均として計算される（図２を参照）：
ｘ＝％  １＋の染色された腫瘍
ｙ＝％  ２＋の染色された腫瘍
ｚ＝％  ３＋の染色された腫瘍
ここで
【化１７】
2018516244.tif 000019
である。例示の目的で、患者の腫瘍が、２０％の＋１の２６Ｂ３−ＦＲＡ染色、１０％の＋２の２６Ｂ３−ＦＲＡ染色、および２０％の＋３の２６Ｂ３−ＦＲＡ染色を有する場合、Ｍスコア＝１６．６である。
【０１２１】
ＨＢＳＣＯＲは、標的組織区画内のすべての細胞から算出されるバイオマーカー染色（この場合、ＦＲＡの２６Ｂ３染色）の平均光学密度値を報告する。これは、専売の組織認識特色を利用して、細胞を分類することなく、線形スコア、およびＨ−スコアの連続拡張を介して組織区画を決定する。Ｈ−スコアは、組織内のバイオマーカー発現をスコアリングするのに病理学者および当業者が一般に使用する標準的なスコアリング法であり、これは基本的に、すべての強度レベル（１＋、＋２×２＋、＋３×３＋）における強度スコアの和である。ＨＢＳＣＯＲは、細胞測定値（光学密度）の和を細胞の総数で除すことによって導出される。ＨＢＳＣＯＲは、今度は、標的組織区画内のすべての細胞から算出されるバイオマーカー染色の値を報告する。この計算は、以下の式を使用して定量化される：
【化１８】
2018516244.tif 000020
【０１２２】
２６Ｂ３抗体を使用してＦＲＡについて染色された患者由来組織を含有する評価可能なスライドを、盲検化分析下で上述したＦＲＡＭＳＣＯＲおよびＨＢＳＣＯＲ法を使用して分析および定量化した。データを、発現カットポイント分析を使用して最初に分析した。全生存期間（ＯＳ）に対する葉酸受容体アルファ（ＦＲＡ）発現相関を行って、高または低ＦＲＡ発現がプラセボ対照処置患者に対してファルレツズマブ処置に対する治療応答と相関するか否かを決定した。図３は、患者検体がＨＢＳＣＯＲ法を介してＦＲＡ発現について定量化されたこの分析の一例を示す。示したように、患者ＯＳにおける有意な応答が観察された。なぜなら、臨床的に陽性のハザード比が、低発現を有する者に対してより高いレベルのＦＲＡを発現するファルレツズマブ処置患者において発生するためである。無増悪生存期間（ＰＦＳ）またはＯＳの関数としてＦＲＡ発現およびファルレツズマブ処置の患者臨床応答に対する全体的な影響を決定するために、カプランマイヤー分析を行った。図４に示したように、ＦＲＡＭＳＣＯＲを使用して高ＦＲＡ膜発現について選択された患者は、プラセボ＋ＳＯＣのみで処置された者（ｐ＝０．３８６）と比較してファルレツズマブ＋ＳＯＣで処置されたとき、ＯＳにおける統計的に有意な臨床的改善を示した（８．４カ月の改善、ＨＲ０．５４；ｐ＝０．０２６６）。ＰＦＳ応答の改善も、低膜染色に対して高ＦＲＡ膜染色を呈する患者において見出された（図示せず）。同様の効果が、ＨＢＳＣＯＲ法を使用して最適なＦＲＡ細胞質発現を有する患者を使用したとき観察され、この効果によって、ファルレツズマブで処置された患者は、最適未満のＦＲＡレベルを発現するファルレツズマブで処置された者（図５、パネルＡ）と比較して、ＰＦＳおよびＯＳにおいて統計的に有意な臨床的利益を有した（図５、パネルＢ）。これらの知見は、ＦＲＡＭＳＣＯＲまたはＨＢＳＣＯＲ法を使用して最小限の閾値レベルを呈する者を決定するには、プラセボ＋ＳＯＣで処置された者に対してファルレツズマブ＋ＳＯＣで処置された患者における統計的臨床的利益を実証することに失敗した（ＰＦＳ  ＨＲ０．９１、ｐ＝０．７０４５およびＯＳ  ＨＲ０．９１、ｐ＝０．６５２５）ＩＴＴ集団について行われたように任意のＦＲＡ発現を呈する腫瘍を有する患者を単に動員するより、治療上の利益を改善するための肺がん患者の生検材料中のＦＲＡ発現の同定の使用を教示する。
【０１２３】
多変量分析を、ＳＯＣ処置に対するＮＳＣＬＣ肺がん患者臨床応答に影響し得る標準的な因子、例えば、喫煙、年齢、またはＥＣＯＧステータスを使用して行った。高レベルのＦＲＡを有する患者における臨床応答に対するファルレツズマブの統計的にポジティブな効果に影響を与える効果は、多変量分析において見られなかった。
【０１２４】
これらの知見は、胸膜悪性組織を含有し、抗葉酸受容体アルファ抗体療法に応答し得る患者を同定するのに使用するための膜に局在するか、または細胞質内のＦＲＡ発現の定量化可能な分析を可能にする様式で染色された高品質組織生検材料を用いることの使用を教示する。後続の分析は、胸水および微細針吸引物に由来する患者試料も、定量化して抗ＦＲＡ治療効果に関して適当なＦＲＡ発現を呈する者を同定することができることを見出した。これらの場合では、非胸膜ベース参照標準を比較のために開発することができる。さらに、これらの結果は、ＦＲＡＭＳＣＯＲまたはＨＢＳＣＯＲ法を介して決定した場合に、膜および／または細胞質内でより高いレベルのＦＲＡを発現する腫瘍を有する患者が、ＰＦＳおよびＯＳを含めた臨床転帰の有意な改善を有することを実証する。これらの教示によって、抗ＦＲＡ抗体療法に応答する可能性が最も高いＮＳＣＬＣ患者における抗ＦＲＡ抗体療法の使用の位置付けが得られるはずである。ＦＲＡのレベルは、ＳＯＣと組み合わせた抗ＦＲＡ抗体療法に応答することになる患者を定義するのに重要である。将来の治験および臨床的有用性は、効力について最小カットポイントを上回るＦＲＡの必要な閾値レベルを呈する患者の処置を組み入れるべきである。ここで定義したレベルには、７またはそれ超のＦＲＡＭＳＣＯＲおよび０．２５またはそれ超のＨＢＳＣＯＲを有するものが含まれる（図３を参照）。平均で、これは、４２％超の＋１の強度のＦＲＡの発現、２１％の＋２の強度のＦＲＡの発現を有するＮＳＣＬＣ腫瘍および／または１４％超の＋３の強度のＦＲＡの発現を有する腫瘍と解釈される。
【図１】
2018516244.tif 000021
【図２】
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【図３】
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【図４Ａ】
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【図４Ｂ】
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【図５Ａ】
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【図５Ｂ】
2018516244.tif 000027
【配列表】
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【国際調査報告】
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