(57)【要約】  本発明は、ヒトＣＤ４０に特異的に結合するアンタゴニスト抗体、この抗体又はその抗原結合断片をコードするポリヌクレオチド、及び前述のものを作製及び使用する方法に関する。
2018529351.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
配列番号１のヒトＣＤ４０に特異的に結合する単離されたアンタゴニスト抗体又はその抗原結合断片であって、配列番号５の重鎖相補性決定領域（ＨＣＤＲ）１と、配列番号６１のＨＣＤＲ２と、配列番号６２のＨＣＤＲ３と、配列番号６３の軽鎖相補性決定領域（ＬＣＤＲ）１と、配列番号９のＬＣＤＲ２と、配列番号１０のＬＣＤＲ３と、を含む、単離されたアンタゴニスト抗体又はその抗原結合断片。
【請求項２】
前記抗体が、配列番号１のヒトＣＤ４０への結合について、
ａ）配列番号１１の重鎖可変領域（ＶＨ）及び配列番号１２の軽鎖可変領域（ＶＬ）、
ｂ）配列番号２５のＶＨ及び配列番号２７のＶＬ、又は
ｃ）配列番号２６のＶＨ及び配列番号２７のＶＬ
を含む抗体と競合する、請求項１に記載の単離された抗体又はその抗原結合断片。
【請求項３】
前記抗体が、
ａ）それぞれ、配列番号５、６、７、８、９、及び１０、
ｂ）それぞれ、配列番号５、１５、７、２０、９、及び１０、
ｃ）それぞれ、配列番号５、１６、７、２０、９、及び１０、
ｄ）それぞれ、配列番号５、１７、７、２０、９、及び１０、
ｅ）それぞれ、配列番号５、１８、７、２０、９、及び１０、
ｆ）それぞれ、配列番号５、１８、１９、２０、９、及び１０、又は
ｇ）それぞれ、配列番号５、１７、１９、２０、９、及び１０の、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む、請求項１又は２に記載の単離された抗体又はその抗原結合断片。
【請求項４】
前記抗体が、０．０１％のポリソルベート２０（ＰＳ−２０）及び１００μｇ／ｍＬのウシ血清アルブミンを含有するダルベッコリン酸緩衝生理食塩水で、２５℃でＰｒｏｔｅＯｎ  ＸＰＲ３６システムを使用して解離定数（ＫＤ）を測定したときに、約１．５×１０−１０Ｍ以下のＫＤでヒトＣＤ４０に結合する、請求項１〜３のいずれかに記載の抗体又はその抗原結合断片。
【請求項５】
前記抗体が、約１×１０−９Ｍ未満のＩＣ５０値で、可溶性ヒトＣＤ４０Ｌによって駆動されるヒト扁桃Ｂ細胞増殖を阻害する、請求項１〜４のいずれかに記載の単離された抗体又はその抗原結合断片。
【請求項６】
前記抗体が、約１×１０−９Ｍ未満のＩＣ５０値で、ヒト樹状細胞によるＩＬ−１２ｐ４０の可溶性ヒトＣＤ４０Ｌによって駆動される生成を阻害する、請求項１〜５のいずれかに記載の単離された抗体又はその抗原結合断片。
【請求項７】
ａ）それぞれ、配列番号１１及び１２、
ｂ）それぞれ、配列番号２１及び２７、
ｃ）それぞれ、配列番号２２及び２７、
ｄ）それぞれ、配列番号２３及び２７、
ｅ）それぞれ、配列番号２４及び２７、
ｆ）それぞれ、配列番号２５及び２７、又は
ｇ）それぞれ、配列番号２６及び２７の、ＶＨ及びＶＬを含む、請求項１〜６のいずれかに記載の単離された抗体又はその抗原結合断片。
【請求項８】
ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、又はＩｇＧ４アイソタイプである、請求項１〜７のいずれかに記載の単離された抗体又はその抗原結合断片。
【請求項９】
前記抗体が、野生型Ｆｃと比較してＦｃγ受容体への前記抗体の結合を低減する、Ｆｃ領域における少なくとも１つの変異を含む、請求項８に記載の単離された抗体又はその抗原結合断片。
【請求項１０】
前記Ｆｃ領域における前記少なくとも１つの変異が、Ｓ２２８Ｐ変異、Ｆ２３４Ａ変異、Ｌ２３４Ａ変異、Ｌ２３５Ａ変異、Ｇ２３７Ａ変異、Ｐ２３８Ｓ変異、Ｈ２６８Ａ変異、Ａ３３０Ｓ変異、又はＰ３３１Ｓ変異であり、残基付番はＥＵインデックスに準拠する、請求項９に記載の単離された抗体又はその抗原結合断片。
【請求項１１】
前記抗体が、ＩｇＧ１アイソタイプであり、Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３７Ａ／Ｐ２３８Ｓ／Ｈ２６８Ａ／Ａ３３０Ｓ／Ｐ３３１Ｓ変異を含む、請求項９に記載の単離された抗体又はその抗原結合断片。
【請求項１２】
前記抗体が、ＩｇＧ４アイソタイプであり、Ｓ２２８Ｐ／Ｆ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ変異を含む、請求項９に記載の単離された抗体又はその抗原結合断片。
【請求項１３】
ａ）それぞれ、配列番号３５及び４７、
ｂ）それぞれ、配列番号３６及び４８、
ｃ）それぞれ、配列番号３７及び４８、
ｄ）それぞれ、配列番号３８及び４８、
ｅ）それぞれ、配列番号３９及び４８、
ｆ）それぞれ、配列番号４０及び４８、
ｇ）それぞれ、配列番号４１及び４８、
ｈ）それぞれ、配列番号４２及び４８、
ｉ）それぞれ、配列番号４３及び４８、
ｊ）それぞれ、配列番号４４及び４８、
ｋ）それぞれ、配列番号４５及び４８、又は
ｌ）それぞれ、配列番号４６及び４８の、重鎖及び軽鎖を含む、請求項１〜７のいずれかに記載の単離された抗体又はその抗原結合断片。
【請求項１４】
前記抗体が、二重特異性又は多重特異性抗体である、請求項１〜１３に記載の抗体又はその抗原結合断片。
【請求項１５】
請求項１〜１４のいずれかに記載の単離された抗体又はその抗原結合断片と、医薬的に許容される担体と、を含む、医薬組成物。
【請求項１６】
細胞毒性剤又は造影剤に結合させた請求項１〜１４のいずれかに記載の単離された抗体又はその抗原結合断片を含む、免疫複合体。
【請求項１７】
ａ）配列番号１１、２１、２２、２３、２４、２５、若しくは２６のＶＨ、
ｂ）配列番号１２若しくは２７のＶＬ、又は
ｃ）配列番号１１、２１、２２、２３、２４、２５、若しくは２６のＶＨ、及び配列番号１２若しくは２７のＶＬをコードする、単離されたポリヌクレオチド。
【請求項１８】
配列番号１３、１４、２８、２９、３０、３１、３２、３３、又は３４のポリヌクレオチド配列を含む、単離されたポリヌクレオチド。
【請求項１９】
請求項１７に記載のポリヌクレオチドを含む、ベクター。
【請求項２０】
請求項１８に記載のポリヌクレオチドを含む、ベクター。
【請求項２１】
請求項１９に記載のベクターを含む、宿主細胞。
【請求項２２】
請求項２０に記載のベクターを含む、宿主細胞。
【請求項２３】
配列番号１のヒトＣＤ４０に特異的に結合するアンタゴニスト抗体又はその抗原結合断片の生成方法であって、前記抗体が発現される条件下で請求項２１又は２２に記載の宿主細胞を培養することと、前記抗体を単離することと、を含む、方法。
【請求項２４】
炎症性疾患を有する対象の治療方法であって、請求項１〜１４のいずれかに記載の単離された抗体又はその抗原結合断片を、前記炎症性疾患を治療するために十分な時間にわたって、治療を必要とする前記対象に投与することを含む、方法。
【請求項２５】
前記炎症性疾患が、自己免疫疾患である、請求項２４に記載の方法。
【請求項２６】
前記炎症性疾患が、アディソン病、強直性脊椎炎、アテローム性動脈硬化症、自己免疫性肝炎、自己免疫糖尿病、グレーブス病、ギラン・バレー症候群、橋本病、特発性血小板減少症、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）、全身性紅斑性狼瘡、ループス腎炎、皮膚エリテマトーデス、多発性硬化症、重症筋無力症、乾癬、関節炎、強皮症、ショーグレン症候群、全身性硬化症、移植、腎移植、皮膚移植、骨髄移植、移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）、又はＩ型糖尿病である、請求項２４に記載の方法。
【請求項２７】
前記関節炎が、関節リウマチ、若年性関節炎、乾癬性関節炎、ライター症候群、強直性脊椎炎、又は痛風性関節炎である、請求項２６に記載の方法。
【請求項２８】
前記ＩＢＤが、クローン病又は潰瘍性大腸炎である、請求項２６に記載の方法。
【請求項２９】
第２の治療剤を更に投与する、請求項２４に記載の方法。
【請求項３０】
前記第２の治療薬が、非ステロイド性抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）、サリチラート、ヒドロキシクロロキン、スルファサラジン、コルチコステロイド、細胞毒性剤、免疫抑制剤、及び／又は抗体である、請求項２９に記載の方法。
【請求項３１】
治療において使用するための、請求項１５に記載の医薬組成物の、請求項１〜１４のいずれかに記載の抗体又はその抗原結合断片。
【請求項３２】
請求項７に記載の抗体又はその抗原結合断片に結合する、抗イディオタイプ抗体。
【請求項３３】
請求項７に記載の抗体又はその抗原結合断片を含む、キット。
【請求項３４】
前記抗体を検出するための試薬及び使用説明書を更に含む、請求項３３に記載のキット。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ヒトＣＤ４０に特異的に結合するアンタゴニスト抗体、この抗体又はその抗原結合断片をコードするポリヌクレオチド、及び前述のものを作製及び使用する方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
細胞表面ＣＤ４０分子は、腫瘍壊死因子受容体スーパーファミリー（ＴＮＦＲ）のメンバ、並びに先天的及び適応性両方の免疫応答における主要制御因子である。ＣＤ４０は、特にＢ細胞、樹状細胞、及びマクロファージにおいて、抗原提示細胞上で構成的に発現されるが、線維芽細胞、滑膜細胞、平滑筋細胞、内皮細胞、及び上皮細胞上でも見出され得る。
【０００３】
ＣＤ１５４又はＣＤ４０Ｌと指定されるＣＤ４０の天然リガンドは、主に、活性化されたＴリンパ球及び血小板上で発現される。ＣＤ４０の、Ｔ細胞上でのＣＤ４０Ｌとの相互作用は、体液媒介性及び細胞媒介性両方の免疫応答を誘導する。ＣＤ４０は、このリガンド−受容体対を制御して、Ｂ細胞、及び樹状細胞（ＤＣ）を含む他の抗原提示細胞（ＡＰＣ）を活性化し、Ｔ細胞活性化を駆動する。例えば、Ｂ細胞上のＣＤ４０の活性化は、Ｂ細胞増殖、体細胞超変異、抗体分泌細胞への分化、及び二次リンパ器官の胚中心におけるアイソタイプスイッチを誘導する。インビトロ研究は、サイトカイン生成（例えば、ＩＬ−６、ＩＬ−１０、ＩＬ−１２、ＴＮＦ−α）に対するＣＤ４０活性化の直接効果、接着分子及び共刺激受容体（例えば、ＩＣＡＭ、ＣＤ２３、ＣＤ８０、及びＣＤ８６）、並びにＢリンパ球によるＭＨＣクラスＩ、ＭＨＣクラスＩＩ、及びＴＡＰ輸送体の増加した発現を示してきた。
【０００４】
ＣＤ４０／ＣＤ４０Ｌ相互作用を調節する抗体は、自己免疫疾患を含む炎症性疾患などの疾患を治療することにおける関心対象である。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００５】
本発明は、配列番号１のヒトＣＤ４０に特異的に結合する単離されたアンタゴニスト抗体又はその抗原結合部分であって、配列番号５の重鎖相補性決定領域（ＨＣＤＲ）１と、配列番号６１のＨＣＤＲ２と、配列番号６２のＨＣＤＲ３と、配列番号６３の軽鎖相補性決定領域（ＬＣＤＲ）１と、配列番号９のＬＣＤＲ２と、配列番号１０のＬＣＤＲ３と、を含む、単離されたアンタゴニスト抗体又はその抗原結合部分を提供する。
【０００６】
本発明は、配列番号１のヒトＣＤ４０に特異的に結合する、単離されたアンタゴニスト抗体又はその抗原結合部分であって、ある特定のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ３、ＬＣＤＲ３、ＶＨ、ＶＬ、ＨＣ、及び／又はＬＣ配列を含む、単離されたアンタゴニスト抗体又はその抗原結合部分も提供する。
【０００７】
本発明は、本発明の抗体と、医薬的に許容される担体と、を含む、医薬組成物も提供する。
【０００８】
本発明は、治療薬又は造影剤に結合させた本発明の抗体を含む、免疫複合体も提供する。
【０００９】
本発明は、
配列番号１１、２１、２２、２３、２４、２５、若しくは２６のＶＨ、
配列番号１２若しくは２７のＶＬ、又は
配列番号１１、２１、２２、２３、２４、２５、若しくは２６のＶＨ、及び配列番号１２若しくは２７のＶＬをコードする、単離されたポリヌクレオチドも提供する。
【００１０】
本発明は、配列番号１３、１４、２８、２９、３０、３１、３２、３３、又は３４のポリヌクレオチド配列を含む、単離されたポリヌクレオチドも提供する。
【００１１】
本発明は、配列番号３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、又は４６の重鎖をコードする、単離されたポリヌクレオチドも提供する。
【００１２】
本発明は、配列番号７７又は７８の軽鎖をコードする、単離されたポリヌクレオチドも提供する。
【００１３】
本発明は、配列番号３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、又は４６の重鎖及び配列番号７７又は７８の軽鎖をコードする、単離されたポリヌクレオチドも提供する。
【００１４】
本発明は、配列番号３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、７７、又は７８のポリヌクレオチド配列を含む、単離されたポリヌクレオチドも提供する。
【００１５】
本発明は、本発明のポリヌクレオチドを含むベクターも提供する。
【００１６】
本発明は、本発明のベクターを含む宿主細胞も提供する。
【００１７】
本発明は、配列番号１のヒトＣＤ４０に特異的に結合するアンタゴニスト抗体又はその抗原結合断片の生成方法であって、抗体が発現される条件下で本発明の宿主細胞を培養することと、抗体を単離することと、を含む、方法も提供する。
【００１８】
本発明は、炎症性疾患を有する対象の治療方法であって、本発明の単離された抗体を、炎症性疾患を治療するために十分な時間にわたって、炎症性疾患の治療を必要とする対象に投与することを含む、方法も提供する。
【００１９】
本発明は、治療において使用するための本発明の抗体も提供する。
【００２０】
本発明は、本発明の抗体に結合する抗イディオタイプ抗体も提供する。
【００２１】
本発明は、本発明の抗体を含むキットも提供する。
【図面の簡単な説明】
【００２２】
【図１】野生型ＩｇＧ１としてのＣ４０Ｂ１６は、Ｆｃエフェクタサイレント抗体Ｄと比較して、同等の最小アゴニズムを明示したことを示す。ＦｃエフェクタサイレントＡＳＫＰ−１２４０、ＣＦＺ５３３、及びＢＭＳ−９８６０９０  ｍＡｂは、Ｃ４０Ｂ１６と比較して、より高いレベルのアゴニズムを明示した。アゴニズムは、ＨＥＫ−Ｂｌｕｅ（商標）ＣＤ４０Ｌ  ＮＦ−κＢ活性化アッセイにおいて評価した。
【図２】Ｃ４０Ｂ１６は、ヒト樹状細胞（ＤＣ）による抗体媒介性ＩＬ−１２ｐ４０産生を測定するアッセイにおいて、アゴニズムを誘導しないが、ＡＳＫＰ−１２４０、ＣＦＺ５３３、及びＢＭＳ−９８６０９０は、ＩＬ−１２ｐ４０産生を誘導することを示す。ＩＬ−１２ｐ４０産生を、６つの異なる抗体濃度（３５０、１１０、３５、１１、３．５、及び１．１ｎＭ）で評価し、各々を、図において各抗体について別個の列で表した。ＤＣ＋ＣＤ４０Ｌ：陽性対照。ＤＣのみ：陰性対照。
【図３Ａ】５００ｎｇ／ｍＬ濃度の抗ＣＤ４０抗体Ｃ４０Ｂ１７６、Ｃ４０Ｂ１７９、Ｃ４０Ｂ１８０、及びＣ４０Ｂ１８３は、樹状細胞（ＤＣ）の活性化を誘導しないが、３５０ｎＭ  ＡＳＫＰ−１２４０は、ＩＬ−１２ｐ４０産生を誘導することを示す。ＤＣ活性化を、抗体の存在下でのＤＣによるＩＬ−１２ｐ４０産生によって評価した。ＰＰ１Ｂ４０：ＩｇＧ１ｓｉｇｍａアイソタイプ対照。ＣＮＴＯ９４１２：ＩｇＧ４＿ＰＡＡアイソタイプ対照。
【図３Ｂ】高濃度の抗ＣＤ４０抗体Ｃ４０Ｂ１７６、Ｃ４０Ｂ１７９、Ｃ４０Ｂ１８０、及びＣ４０Ｂ１８３は、Ｂ細胞の増殖を誘導しないが、５００ｎＭ  ＡＳＫＰ−１２４０は誘導することを示す。ＰＰ１Ｂ４０：ＩｇＧ１ｓｉｇｍａアイソタイプ対照。ＣＮＴＯ９４１２：ＩｇＧ４＿ＰＡＡアイソタイプ対照。ＡＳＫＰ−１２４０について、２つの別個の用量応答曲線を示す。
【発明を実施するための形態】
【００２３】
定義
本明細書に引用される特許及び特許出願を含む（ただしそれらに限定されない）全ての刊行物は、参照によりそれらの全体が記載されているのと同様に、本明細書に援用される。
【００２４】
本明細書で使用される用語は、特定の実施形態を記載する目的でのみ使用され、限定を意図するものではないと理解すべきである。特に断らない限り、本明細書において使用される全ての技術用語及び科学用語は、本発明が属する技術分野における当業者によって一般的に理解されているものと同じ意味を有する。
【００２５】
本明細書で使用するとき、文脈上特に明記されない限り、単数形「ａ」、「ａｎ」、及び「ｔｈｅ」は、複数の指示物を含むものとする。
【００２６】
本明細書に記載されているものと同様又は同等の任意の方法及び材料を、本発明の試験を実施するために使用することができるが、例示的な材料及び方法を本明細書に記載する。
【００２７】
「特異的結合」又は「特異的に結合する」又は「結合する」とは、非関連抗原に対するよりも高い親和性で、ヒトＣＤ４０に結合する抗体を指す。典型的には、抗体は、約１×１０−８Ｍ以下、例えば約１×１０−９Ｍ以下、約１×１０−１０Ｍ以下、約１×１０−１１Ｍ以下、約１×１０−１１Ｍ以下、又は約１×１０−１２Ｍ以下の解離定数（ＫＤ）でヒトＣＤ４０に結合し、典型的には、非関連抗原（例えば、ＢＳＡ、カゼイン）への結合については、そのＫＤより少なくとも１００倍小さいＫＤで結合する。解離定数は、標準的手法を使用して測定することができる。しかしながら、ヒトＣＤ４０に特異的に結合する抗体は、他の関連抗原、例えば、ヒト又はサル、例えばカニクイザル（Macaca fascicularis）又はチンパンジー（Pan troglodytes）、又はコモンマーモセット（Callithrix jacchus）などの他の種由来の同様の抗原（ホモログ）に対して交差反応性を有する可能性がある。単一特異性の抗体は、１つの抗原又は１つのエピトープに特異的に結合するのに対し、二重特異性抗体は、２つの異なるエピトープに特異的に結合する。
【００２８】
「抗体」は、広義が意図され、マウス、ヒト、ヒト化、及びキメラモノクローナル抗体を含むモノクローナル抗体、抗原結合断片、二重特異性抗体又は多重特異性抗体、二量体の、四量体の、若しくは多量体の抗体、一本鎖抗体、抗体ドメイン、及び必要とされる特異性の抗原結合部位を含む免疫グロブリン分子の任意の他の修飾された構造を含む、免疫グロブリン分子を含む。「完全長抗体」は、ジスルフィド結合により相互接続されている２つの重鎖（Ｈ）及び２つの軽鎖（Ｌ）、並びにそれらの多量体（例えば、ＩｇＭ）から構成される。各重鎖は、重鎖可変領域（ＶＨ）及び重鎖定常領域（ドメインＣＨ１、ヒンジＣＨ２、及びＣＨ３からなる）から構成される。各軽鎖は、軽鎖可変領域（ＶＬ）及び軽鎖定常領域（ＣＬ）から構成される。ＶＨ領域及びＶＬ領域は、フレームワーク領域（ＦＲ）が散在しており相補性決定領域（ＣＤＲ）と呼称される超可変領域位に更に分類され得る。各ＶＨ及びＶＬは、アミノ末端からカルボキシ末端に向かって次の順：ＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、及びＦＲ４と並ぶ３つのＣＤＲと４つのＦＲ断片とからなる。
【００２９】
「相補性決定領域（ＣＤＲ）」は、抗体における「抗原結合部位」である。ＣＤＲは、様々な用語を使用して定義され得る：（ｉ）ＶＨ内に３つ（ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３）及びＶＬ内に３つ（ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３）存在する配列多様性に基づく相補性決定領域（ＣＤＲ）（Ｗｕ  ａｎｄ  Ｋａｂａｔ，Ｊ  Ｅｘｐ  Ｍｅｄ１３２：２１１〜５０，１９７０；Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈ  Ｅｄ．Ｐｕｂｌｉｃ  Ｈｅａｌｔｈ  Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，Ｍｄ．，１９９１）。（ｉｉ）「超可変領域」、「ＨＶＲ」、又は「ＨＶ」、ＶＨ内の３つ（Ｈ１、Ｈ２、Ｈ３）及びＶＬ内の３つ（Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３）は、Ｃｈｏｔｈｉａ  ａｎｄ  Ｌｅｓｋ（Ｃｈｏｔｈｉａ  ａｎｄ  Ｌｅｓｋ，Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ  １９６：９０１〜１７，１９８７）により定義される構造において超可変性である、抗体可変ドメインの領域を指す。Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  ＩｍＭｕｎｏＧｅｎｅＴｉｃｓ（ＩＭＧＴ）データベース（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ＿ｉｍｇｔ＿ｏｒｇ）は、抗原結合部位についての標準化付番及び定義を提供する。ＣＤＲ、ＨＶ、及びＩＭＧＴの表記間の対応関係については、Ｌｅｆｒａｎｃ  ｅｔ  ａｌ．，Ｄｅｖ  Ｃｏｍｐａｒａｔ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ２７：５５〜７７，２００３に記載されている。本明細書で使用される「ＣＤＲ」、「ＨＣＤＲ１」、「ＨＣＤＲ２」、「ＨＣＤＲ３」、「ＬＣＤＲ１」、「ＬＣＤＲ２」、及び「ＬＣＤＲ３」という用語は、本明細書において別途記載のない限り、上で説明される方法、Ｋａｂａｔ、Ｃｈｏｔｈｉａ、又はＩＭＧＴのうちのいずれかにより定義されるＣＤＲを含む。
【００３０】
免疫グロブリンは、重鎖定常ドメインのアミノ酸配列に応じて、５つの主要なクラス、すなわちＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、及びＩｇＭに割り当てられ得る。ＩｇＡ及びＩｇＧは、アイソタイプＩｇＡ１、ＩｇＡ２、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、及びＩｇＧ４に更に下位分類される。いずれの脊椎動物種の抗体軽鎖も、それらの定常ドメインのアミノ酸配列に基づいて２つの明確に異なるタイプ、すなわちカッパ（κ）及びラムダ（λ）のうちの一方に分類することができる。
【００３１】
「抗原結合断片」とは、親完全長抗体の抗原結合特性を保持する免疫グロブリン分子の部分を指す。例示的な抗原結合断片は、重鎖相補性決定領域（ＨＣＤＲ）１、２、及び／若しくは３、軽鎖相補性決定領域（ＬＣＤＲ）１、２、及び／若しくは３、重鎖可変領域（ＶＨ）、又は軽鎖可変領域（ＶＬ）、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｄ、及びＦｖ断片、並びに１つのＶＨドメイン又は１つのＶＬドメインのいずれかからなるドメイン抗体（ｄＡｂ）としてである。ＶＨドメイン及びＶＬドメインは、合成リンカーを介して１つに連結されて様々な種類の一本鎖抗体の設計を形成することができ、ここでＶＨ／ＶＬドメインは、分子内で対形成するか、又はＶＨドメイン及びＶＬドメインが別個の鎖によって発現される場合には分子間で対形成して、一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）などの一価抗原結合部位又は二重特異性抗体を形成する。例えば、国際公開第１９９８／４４００１号、同第１９８８／０１６４９号、同第１９９４／１３８０４号、同第１９９２／０１０４７号に記載される。
【００３２】
「モノクローナル抗体」は、抗体重鎖からのＣ末端リシンの除去などの可能な公知の改変を除き、各重鎖及び各軽鎖において単一のアミノ酸組成を有する抗体集団を指す。多重特異性モノクローナル抗体が、２つ又は３つ以上の異なる抗原又はエピトープに結合することを除き、モノクローナル抗体は、典型的に１つの抗原エピトープに結合する。二重特異性モノクローナル抗体は、２つの異なる抗原エピトープに結合する。モノクローナル抗体は、抗体集団内に不均一なグリコシル化を有し得る。モノクローナル抗体は、単一特異性若しくは多重特異性、又は一価、二価、若しくは多価であり得る。二重特異性抗体又は三重特異性抗体などの多重特異性抗体は、モノクローナル抗体という用語に含まれる。
【００３３】
「単離された抗体」は、異なる抗原特異性を有する他の抗体を実質的に含まない抗体又は抗体断片を指す（例えば、ヒトＣＤ４０に特異的に結合する単離された抗体は、ヒトＣＤ４０以外の抗原に特異的に結合する抗体を実質的に含まない）。二重特異性抗体の場合、二重特異性抗体は、関心対象の２つの抗原に特異的に結合し、関心対象の２つの抗原以外の抗原に特異的に結合する抗体を実質的に含まない。「単離された抗体」は、純度８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％などといった高純度に単離された抗体を包含する。
【００３４】
「ヒト化抗体」とは、抗原結合部位がヒト以外の種に由来しかつ可変領域フレームワークがヒト免疫グロブリン配列に由来する、抗体を指す。ヒト化抗体は、フレームワーク領域内に意図的に導入された変異を含む可能性があることから、このフレームワークは、発現したヒト免疫グロブリン又は生殖細胞系列遺伝子配列の完全な複製物でなくてもよい。
【００３５】
「ヒト抗体」とは、フレームワーク及び抗原結合部位の両方がヒト起源の配列に由来する重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を有する抗体を指す。抗体が定常領域又は定常領域の一部を含む場合、定常領域もヒト起源の配列に由来する。
【００３６】
ヒト抗体は、抗体の可変領域が、ヒト生殖系列免疫グロブリン又は再編成された免疫グロブリン遺伝子を使用する系から得られた場合、ヒト起源の配列に由来する重鎖可変領域又は軽鎖可変領域を含む。そのような例示的な系には、ファージ上に提示されたヒト免疫グロブリン遺伝子ライブラリ、及び本明細書に記載されるヒト免疫グロブリン遺伝子座を保有するマウス又はラットなどといったヒト以外の遺伝子導入動物を含む。ヒト抗体は、典型的には、例えば天然に存在する体細胞変異、フレームワーク若しくは抗原結合部位への意図的な置換の導入、及び非ヒト動物におけるクローニング及びＶＤＪ組換え中に導入されたアミノ酸変化に起因する、ヒト生殖系列又は再編成された免疫グロブリン配列と比較したときに、アミノ酸の相違を含む。典型的には、ヒト抗体は、アミノ酸配列において、ヒト生殖系列又は再編成された免疫グロブリン遺伝子によってコードされるアミノ酸配列と少なくとも約８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一である。いくつかの場合では、ヒト抗体は、例えばＫｎａｐｐｉｋ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ  ２９６：５７〜８６，２０００）に記載されるヒトフレームワーク配列分析から得られたコンセンサスフレームワーク配列、又は例えばＳｈｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ  ３９７：３８５〜９６，２０１０及び国際特許公開第ＷＯ２００９／０８５４６２号）に記載されるファージ上に提示されたヒト免疫グロブリン遺伝子ライブラリに組み込まれた合成ＨＣＤＲ３を含有し得る。
【００３７】
抗原結合部位がヒト以外の種に由来する抗体は、ヒト抗体の定義には含まれない。
【００３８】
「組換え抗体」としては、組換え法によって調製、発現、作製、又は単離される抗体及びその他のタンパク質を含む。
【００３９】
「エピトープ」とは、抗体が特異的に結合する抗原の部分を指す。エピトープは、典型的には、アミノ酸又は多糖類側鎖などの部分の化学的に活性な（例えば、極性、非極性、若しくは疎水性の）表面基からなり、特定の三次元構造特性並びに特定の電荷特性を有し得る。エピトープは、立体配座の空間単位を形成する連続した及び／又は連続していないアミノ酸からなり得る。非連続的なエピトープでは、抗原の直鎖配列の異なる部分のアミノ酸が、タンパク質分子の折り畳みにより三次元空間で近接する。
【００４０】
「多重特異性」とは、少なくとも２つの異なる抗原、又はこの抗原内の２つの異なるエピトープ、例えば、３つ、４つ、又は５つの異なる抗原又はエピトープに特異的に結合する抗体を指す。
【００４１】
「二重特異性」とは、２種の異なる抗原と特異的に結合する抗体、又は同じ抗原内の２箇所の異なるエピトープと結合する抗体を指す。二重特異性抗体は、その他の関連する抗原に対し交差反応性を有し得る、あるいは２つ又は３つ以上の異なる抗原間で共有されるエピトープに結合し得る。
【００４２】
「変異体」とは、例えば、置換、挿入、又は欠失のような１つ又は２つ以上の改変において参照ポリペプチド又は参照ポリヌクレオチドと異なるポリペプチド又はポリヌクレオチドを指す。
【００４３】
「ベクター」とは、生物系内で複製可能な、又はかかる系間を移動することができるポリヌクレオチドを指す。ベクターポリヌクレオチドは、典型的には、生物系内でこれらのポリヌクレオチドの複製又は維持を促進するように機能する複製起点、ポリアデニル化シグナル又は選択マーカなどの要素を含んでいる。そのような生物系の例としては、細胞、ウイルス、動物、植物、及びベクターの複製を可能にする生物学的要素を利用して再構成された生物系を挙げることができる。ベクターを構成するポリヌクレオチドは、ＤＮＡ若しくはＲＮＡ分子又はこれらのハイブリッド分子であってもよい。
【００４４】
「発現ベクター」とは、発現ベクター中に存在するポリヌクレオチド配列によってコードされるポリペプチドの翻訳を指示するために、生物系又は再構成された生物系において利用可能なベクターを指す。
【００４５】
「ポリヌクレオチド」は、糖−リン酸骨格鎖又は他の同等の共有結合化学によって共有結合されたヌクレオチド鎖を含む合成分子を指す。
【００４６】
「ポリペプチド」又は「タンパク質」は、ペプチド結合により連結されてポリペプチドを形成する少なくとも２つのアミノ酸残基を含む分子を指す。５０個未満のアミノ酸からなる小分子ポリペプチドは、「ペプチド」と称され得る。
【００４７】
「ＣＤ４０」又は「ｈｕＣＤ４０」は、ヒトＣＤ４０タンパク質を指す。ＣＤ４０は、腫瘍壊死因子受容体スーパーファミリーメンバ５（ＴＮＦＲＳＦ５）、ＣＤ４０Ｌ受容体、又はＣＤ１５４受容体としても知られている。完全長ヒトＣＤ４０のアミノ酸配列を配列番号１に示す。ヒト完全長ＣＤ４０タンパク質は、２７７個のアミノ酸を有するＩ型膜タンパク質である。シグナル配列は、配列番号１の残基１〜２０の範囲であり、細胞外ドメインは、残基２１〜１９３の範囲であり、膜貫通ドメインは、残基１９４〜２１５の範囲であり、細胞質ドメインは、残基２１６〜２７７の範囲である。本明細書全体で、ＣＤ４０、「ＣＤ４０−ＥＣＤ」の細胞外ドメインは、配列番号１の残基２１〜１９３のＣＤ４０断片を指す。
【００４８】
「アンタゴニスト」又は「アンタゴニストの」とは、細胞アッセイにおいて、ＣＤ４０Ｌの存在下でヒトＣＤ４０に特異的に結合し、ヒト樹状細胞による、ＣＤ４０Ｌによって駆動されるヒトＢ細胞増殖又はＣＤ４０Ｌにより駆動されるＩＬ−１２ｐ４０産生などのＣＤ４０生物活性を阻害する抗体を指す。アンタゴニストは、抗体を有しない対照試料と比較して、統計的に有意な様式でＣＤ４０生物活性を阻害し得る。代替的に、ヒトＣＤ４０に特異的に結合するアンタゴニスト抗体は、約１ｎＭ以下のＩＣ５０値で、ＣＤ４０生物活性を阻害し得る。アッセイにおけるＣＤ４０Ｌは、可溶性形態として、又は膜結合されて（例えば、Ｊｕｒｋａｔ細胞などのＣＤ４０Ｌを発現する細胞として）提供されてもよい。
【００４９】
「ＣＤ４０生物活性」とは、ＣＤ４０Ｌがヒト細胞上でＣＤ４０に結合する結果として起こる、細胞内の測定可能な事象を指す。ＣＤ４０生物活性は、例えば、ヒト樹状細胞によるヒトＢ細胞の増殖若しくはＩＬ−１２ｐ４０の産生、又はＣＤ４０シグナル伝達経路の下流活性化であり得る。ＣＤ４０生物活性は、既知の方法及び本明細書に記載される方法を使用して測定することができる。
【００５０】
「約」は、当業者により決定される特定の値について許容される誤差の範囲内を意味し、これは部分的に、値が測定又は決定される方法、すなわち、測定システムの限界に依存する。特定のアッセイ、結果、又は実施形態の文脈において、本明細書における実施例又は他の箇所において特に明記しない限り、「約」は、当該技術分野における実施当たり１標準偏差内、又は最大５％の範囲内のどちらか大きい方を意味する。
【００５１】
「〜と併用される」とは、２つ又は３つ以上の治療薬が、対象に混合物の状態で一緒に、又は単独の薬剤として同時に、又は単独の薬剤として任意の順番で順次に投与することができることを意味する。
【００５２】
「架橋」とは、ＦｃγＲＩＩｂ  ｃｉｓ又はｔｒａｎｓに結合するヒトＣ４０に特異的に結合する抗体により誘導され、ＣＤ４０アゴニスト活性の誘導をもたらす、細胞上のＣＤ４０の高次多量体化を指す。
【００５３】
本明細書では、表１に示すような従来の１文字及び３文字のアミノ酸コードを使用する。
【００５４】
【表１】
2018529351.tif 000003
【００５５】
本発明の抗体
本発明は、ヒトＣＤ４０に特異的に結合するアンタゴニスト抗体、この抗体、ベクター、宿主細胞をコードするポリヌクレオチド、及びこの抗体を使用する方法に関する。
【００５６】
本発明の抗体は、ＣＤ４０の強力な阻害剤であり、最小アゴニスト活性を有する。アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体は、アンタゴニストであるにもかかわらず、Ｆｃ依存性架橋（例えば、米国特許第７，５３７，７６３号を参照されたい）の結果としてアゴニスト活性も有し得るため、自己免疫疾患を有する患者などのＣＤ４０シグナル伝達の抑制が所望される対象に投与するとき、潜在的な安全性リスクをもたらす。したがって、ＣＤ４０生物学的機能の阻害が所望される病態の治療に好ましい抗ＣＤ４０抗体は、アゴニスト活性を欠くか、又は最小アゴニスト活性を有するものである。故に、好適な治療的ＣＤ４０抗体は、ＦｃγＲ結合を排除するようにＦｃ操作され、結果として、Ｆｃ媒介性架橋及びＦｃ媒介性アゴニズムの可能性を欠く。そのようなエフェクタサイレントＦｃ操作された抗体は、例えば、ＡＳＫＰ−１２４０、ＣＦＺ５３３、ＢＭＳ−９８６０９０、及び抗体Ｄ（「ベンチマーク抗体」）である。ＡＳＫＰ−１２４０及びＣＦＺ５３３は、現在、炎症性疾患又は自己免疫疾患のために臨床開発されている。
【００５７】
本発明の抗体は、ベンチマーク抗体と比較して、改善された特性を明示する。本発明の抗体Ｃ４０Ｂ１６は、最小アゴニスト活性を有し、ベンチマーク抗体ＡＳＫＰ−１２４０、ＣＦＺ５３３、及びＢＭＳ−９８６０９０と比較して、より低い程度のＣＤ４０シグナル伝達を活性化する。ＡＳＫＰ−１２４０、ＣＦＺ５３３、及びＢＭＳ−９８６０９０は、Ｆｃエフェクタサイレント抗体であるため、これらの抗体の観測されたアゴニズムは、エピトープ依存性であり得る。反対にＣ４０Ｂ１６は、野生型ＩｇＧ１であるため、エピトープ依存性アゴニズムもＦｃ依存性アゴニズムも有しない。更に、本発明のＦｃ操作されたエフェクタサイレント抗体Ｃ４０Ｂ１７６、Ｃ４０Ｂ１７９、Ｃ４０Ｂ１８０、及びＣ４０Ｂ１８３は、最小アゴニズムだけでなく、抗体Ｄと比較して最大１０倍改善された能力を明示する。
【００５８】
本発明は、配列番号１のヒトＣＤ４０に特異的に結合する単離されたアンタゴニスト抗体又はその抗原結合部分であって、配列番号５の重鎖相補性決定領域（ＨＣＤＲ）１と、配列番号６１のＨＣＤＲ２と、配列番号６２のＨＣＤＲ３と、配列番号６３の軽鎖相補性決定領域（ＬＣＤＲ）１と、配列番号９のＬＣＤＲ２と、配列番号１０のＬＣＤＲ３と、を含む、単離されたアンタゴニスト抗体又はその抗原結合部分を提供する。
【００５９】
配列番号６１、６２、及び６３は、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、及びＬＣＤＲ１、ＣＤ４０に特異的に結合するアンタゴニスト抗体の属配列を表し、それらの属は、翻訳後修飾のための推定部位が変異した親抗体Ｃ４０Ｂ１６の変異体を包含する。その属内の抗体は、エピトープ内のシフトを示さないことが予想され、例えば、配列番号５、６１、６２、６３、９、及び１０のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３は、親Ｃ４０Ｂ１６抗体と比較して同様の特徴を有することが予想される。例示的なかかる抗体は、表２及び表７に示される抗体Ｃ４０Ｍ１４１、Ｃ４０Ｍ１５２、Ｃ４０Ｍ１４２、Ｃ４０Ｍ１５３、Ｃ４０Ｍ１４４、Ｃ４０Ｍ１５５、Ｃ４０Ｍ１４８、Ｃ４０Ｍ１９４、Ｃ４０Ｍ１９８、Ｃ４０Ｍ１９７、Ｃ４０Ｍ２０１、又はＣ４０Ｍ１２６の、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３、又はＶＨ及びＶＬアミノ酸配列を含む抗体である。
【００６０】
配列番号６１属ＨＣＤＲ２配列：
ＴＩＸ１Ｘ２Ｘ３ＧＧＧＴＹＹＡＤＳＶＫＧ式中、
Ｘ１は、Ｎ、Ｄ、又はＱであり、
Ｘ２は、Ｎ、Ｑ、又はＡであり、
Ｘ３は、Ｓ又はＡである。
【００６１】
配列番号６２属ＨＣＤＲ３配列
ＥＧＧＫＹＹＹＹＡＸ１ＤＶ式中、
Ｘ１は、Ｍ又はＬである。
【００６２】
配列番号６３属ＬＣＤＲ１配列
ＳＧＤＫＬＧＤＫＹＡＸ１式中、
Ｘ１は、Ｃ又はＡである。
【００６３】
【表２】
2018529351.tif 000004
【００６４】
いくつかの実施形態では、抗体は、配列番号１のヒトＣ４０への結合について、
配列番号１１の重鎖可変領域（ＶＨ）及び配列番号１２の軽鎖可変領域（ＶＬ）、
配列番号２５のＶＨ及び配列番号２７のＶＬ、又は
配列番号２６のＶＨ及び配列番号２７のＶＬを含む抗体と競合する。
【００６５】
いくつかの実施形態では、抗体は、
配列番号１１の重鎖可変領域（ＶＨ）及び配列番号１２の軽鎖可変領域（ＶＬ）、
配列番号２５のＶＨ及び配列番号２７のＶＬ、又は
配列番号２６のＶＨ及び配列番号２７のＶＬを含む抗体が結合する、配列番号１のヒトＣＤ４０上の同じエピトープに結合する。
【００６６】
いくつかの実施形態では、０．０１％のポリソルベート２０（ＰＳ−２０）及び１００μｇ／ｍＬのウシ血清アルブミンを含有するダルベッコリン酸緩衝生理食塩水で、２５℃でＰｒｏｔｅＯｎ  ＸＰＲ３６システムを使用してＫＤを測定したときに、約１．５×１０−１０Ｍ以下の解離定数（ＫＤ）でＣＤ４０に結合する。
【００６７】
いくつかの実施形態では、抗体は、約１×１０−９Ｍ未満のＩＣ５０値で、可溶性ヒトＣＤ４０Ｌによって駆動されるヒト扁桃Ｂ細胞増殖を阻害する。
【００６８】
いくつかの実施形態では、抗体は、約１×１０−９Ｍ未満のＩＣ５０値で、ヒト樹状細胞によるＩＬ−１２ｐ４０の可溶性ヒトＣＤ４０Ｌによって駆動される産生を阻害する。
【００６９】
いくつかの実施形態では、抗体は、０．０１％  ＰＳ−２０及び１００μｇ／ｍＬウシ血清アルブミンを含有するダルベッコリン酸緩衝生理食塩水で、２５℃でＰｒｏｔｅＯｎ  ＸＰＲ３６システムを使用してＫＤを測定したときに、約１．５×１０−１０Ｍ以下の解離定数（ＫＤ）でヒトＣＤ４０に結合し、約１×１０−９Ｍ未満のＩＣ５０値で、可溶性ヒトＣＤ４０Ｌによって駆動されるヒト扁桃Ｂ細胞増殖を阻害し、約１×１０−９Ｍ未満のＩＣ５０値で、ＩＬ−１２ｐ４０の可溶性ヒトＣＤ４０Ｌによって駆動される産生を阻害する。
【００７０】
いくつかの実施形態では、抗体は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、又はＩｇＧ４アイソタイプである。
【００７１】
いくつかの実施形態では、抗体は、ＩｇＧ１アイソタイプである。
【００７２】
いくつかの実施形態では、抗体は、ＩｇＧ２アイソタイプである。
【００７３】
いくつかの実施形態では、抗体は、ＩｇＧ３アイソタイプである。
【００７４】
いくつかの実施形態では、抗体は、ＩｇＧ４アイソタイプである。
【００７５】
いくつかの実施形態では、抗体は、ＩｇＧ１アイソタイプであり、任意に、野生型ＩｇＧ１と比較してＬ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３７Ａ／Ｐ２３８Ｓ／Ｈ２６８Ａ／Ａ３３０Ｓ／Ｐ３３１Ｓ変異を含む。
【００７６】
いくつかの実施形態では、抗体は、ＩｇＧ１／λアイソタイプであり、任意に、野生型ＩｇＧ１と比較してＬ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３７Ａ／Ｐ２３８Ｓ／Ｈ２６８Ａ／Ａ３３０Ｓ／Ｐ３３１Ｓ変異を含む。
【００７７】
いくつかの実施形態では、抗体は、ＩｇＧ１／λアイソタイプであり、野生型ＩｇＧ１と比較してＬ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３７Ａ／Ｐ２３８Ｓ／Ｈ２６８Ａ／Ａ３３０Ｓ／Ｐ３３１Ｓ変異を含む。
【００７８】
いくつかの実施形態では、抗体は、ＩｇＧ４アイソタイプであり、任意に、野生型ＩｇＧ４と比較してＳ２２８Ｐ変異を含む。
【００７９】
いくつかの実施形態では、抗体は、ＩｇＧ４／λアイソタイプであり、任意に、野生型ＩｇＧ４と比較してＳ２２８Ｐ変異を含む。
【００８０】
いくつかの実施形態では、抗体は、ＩｇＧ４／λアイソタイプであり、野生型ＩｇＧ４と比較してＳ２２８Ｐ変異を含む。
【００８１】
いくつかの実施形態では、抗体は、ＩｇＧ４アイソタイプであり、任意に、野生型ＩｇＧ４と比較してＳ２２８Ｐ／Ｆ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ変異を含む。
【００８２】
いくつかの実施形態では、抗体は、ＩｇＧ４／λアイソタイプであり、任意に、野生型ＩｇＧ４と比較してＳ２２８Ｐ／Ｆ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ変異を含む。
【００８３】
いくつかの実施形態では、抗体は、ＩｇＧ４／λアイソタイプであり、野生型ＩｇＧ４と比較してＳ２２８Ｐ／Ｆ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ変異を含む。
【００８４】
いくつかの実施形態では、抗体は、二重特異性抗体などの多重特異性抗体である。
【００８５】
抗体は、治療、例えば、炎症性疾患の治療に使用するのに好適である。
【００８６】
抗体は、治療、例えば、自己免疫疾患の治療に使用するのに好適である。
【００８７】
抗体は、治療、例えば、アディソン病の治療に使用するのに好適である。
【００８８】
抗体は、治療、例えば、強直性脊椎炎の治療に使用するのに好適である。
【００８９】
抗体は、治療、例えば、アテローム性動脈硬化症の治療に使用するのに好適である。
【００９０】
抗体は、治療、例えば、自己免疫性肝炎の治療に使用するのに好適である。
【００９１】
抗体は、治療、例えば、自己免疫糖尿病の治療に使用するのに好適である。
【００９２】
抗体は、治療、例えば、グレーブス病の治療に使用するのに好適である。
【００９３】
抗体は、治療、例えば、ギラン・バレー症候群の治療に使用するのに好適である。
【００９４】
抗体は、治療、例えば、橋本病の治療に使用するのに好適である。
【００９５】
抗体は、治療、例えば、特発性血小板減少症の治療に使用するのに好適である。
【００９６】
抗体は、治療、例えば、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）の治療に使用するのに好適である。
【００９７】
抗体は、治療、例えば、全身性紅斑性狼瘡の治療に使用するのに好適である。
【００９８】
抗体は、治療、例えば、多発性硬化症の治療に使用するのに好適である。
【００９９】
抗体は、治療、例えば、重症筋無力症の治療に使用するのに好適である。
【０１００】
抗体は、治療、例えば、乾癬の治療に使用するのに好適である。
【０１０１】
抗体は、治療、例えば、関節炎の治療に使用するのに好適である。
【０１０２】
抗体は、治療、例えば、強皮症の治療に使用するのに好適である。
【０１０３】
抗体は、治療、例えば、シェーグレン症候群の治療に使用するのに好適である。
【０１０４】
抗体は、治療、例えば、全身性硬化症の治療に使用するのに好適である。
【０１０５】
抗体は、治療、例えば、移植の処置に使用するのに好適である。
【０１０６】
抗体は、治療、例えば、腎移植の処置に使用するのに好適である。
【０１０７】
抗体は、治療、例えば、皮膚移植の処置に使用するのに好適である。
【０１０８】
抗体は、治療、例えば、骨髄移植の処置に使用するのに好適である。
【０１０９】
抗体は、治療、例えば、移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）の治療に使用するのに好適である。
【０１１０】
抗体は、治療、例えば、Ｉ型糖尿病の治療に使用するのに好適である。
【０１１１】
抗体は、治療、例えば、関節リウマチの治療に使用するのに好適である。
【０１１２】
抗体は、治療、例えば、若年性関節炎の治療に使用するのに好適である。
【０１１３】
抗体は、治療、例えば、乾癬性関節炎の治療に使用するのに好適である。
【０１１４】
抗体は、治療、例えば、ライター症候群の治療に使用するのに好適である。
【０１１５】
抗体は、治療、例えば、痛風性関節炎の治療に使用するのに好適である。
【０１１６】
抗体は、治療、例えば、クローン病の治療に使用するのに好適である。
【０１１７】
抗体は、治療、例えば、潰瘍性大腸炎の治療に使用するのに好適である。
【０１１８】
抗体は、治療、例えば、炎症性疾患の治療に第２の治療剤と組み合わせて使用するのに好適である。
【０１１９】
抗体は、治療、例えば、自己免疫疾患の治療に第２の治療剤と組み合わせて使用するのに好適である。
【０１２０】
抗体は、治療、例えば、関節リウマチの治療に第２の治療薬と組み合わせて使用するのに好適である。
【０１２１】
抗体は、治療、例えば、全身性紅斑性狼瘡の治療に第２の治療剤と組み合わせて使用するのに好適である。
【０１２２】
本発明は、配列番号１のヒトＣＤ４０に特異的に結合する単離されたアンタゴニスト抗体又はその抗原結合断片を提供し、それぞれ配列番号５、６、７、８、９、及び１０のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む。
【０１２３】
いくつかの実施形態では、抗体は、それぞれ配列番号１１及び１２のＶＨ及びＶＬを含む。
【０１２４】
いくつかの実施形態では、ＶＨは、配列番号１３のポリヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチドによってコードされ、ＶＬは、配列番号１４のポリヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチドによってコードされる。
【０１２５】
いくつかの実施形態では、抗体は、配列番号３５の重鎖と、配列番号４７の軽鎖とを含む。
【０１２６】
いくつかの実施形態では、重鎖は、配列番号６５のポリヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチドによってコードされ、軽鎖は、配列番号７７のポリヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチドによってコードされる。
【０１２７】
本発明は、配列番号１のヒトＣＤ４０に特異的に結合する単離されたアンタゴニスト抗体又はその抗原結合断片を提供し、それぞれ配列番号５、１５、７、２０、９、及び１０のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む。
【０１２８】
いくつかの実施形態では、抗体は、それぞれ配列番号２１及び２７のＶＨ及びＶＬを含む。
【０１２９】
いくつかの実施形態では、ＶＨは、配列番号２８のポリヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチドによってコードされ、ＶＬは、配列番号３４のポリヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチドによってコードされる。
【０１３０】
いくつかの実施形態では、抗体は、配列番号３６の重鎖と、配列番号４８の軽鎖とを含む。
【０１３１】
いくつかの実施形態では、重鎖は、配列番号６６のポリヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチドによってコードされ、軽鎖は、配列番号７８のポリヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチドによってコードされる。
【０１３２】
いくつかの実施形態では、抗体は、配列番号３７の重鎖と、配列番号４８の軽鎖とを含む。
【０１３３】
いくつかの実施形態では、重鎖は、配列番号６７のポリヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチドによってコードされ、軽鎖は、配列番号７８のポリヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチドによってコードされる。
【０１３４】
本発明は、配列番号１のヒトＣＤ４０に特異的に結合する単離されたアンタゴニスト抗体又はその抗原結合断片を提供し、それぞれ配列番号５、１６、７、２０、９、及び１０のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む。
【０１３５】
いくつかの実施形態では、抗体は、それぞれ配列番号２２及び２７のＶＨ及びＶＬを含む。
【０１３６】
いくつかの実施形態では、ＶＨは、配列番号２９のポリヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチドによってコードされ、ＶＬは、配列番号３４のポリヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチドによってコードされる。
【０１３７】
いくつかの実施形態では、抗体は、配列番号３８の重鎖と、配列番号４８の軽鎖とを含む。
【０１３８】
いくつかの実施形態では、重鎖は、配列番号６８のポリヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチドによってコードされ、軽鎖は、配列番号７８のポリヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチドによってコードされる。
【０１３９】
いくつかの実施形態では、抗体は、配列番号３９の重鎖と、配列番号４８の軽鎖とを含む。
【０１４０】
いくつかの実施形態では、重鎖は、配列番号６９のポリヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチドによってコードされ、軽鎖は、配列番号７８のポリヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチドによってコードされる。
【０１４１】
本発明は、配列番号１のヒトＣＤ４０に特異的に結合する単離されたアンタゴニスト抗体又はその抗原結合断片を提供し、それぞれ配列番号５、１７、７、２０、９、及び１０のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む。
【０１４２】
いくつかの実施形態では、抗体は、それぞれ配列番号２３及び２７のＶＨ及びＶＬを含む。
【０１４３】
いくつかの実施形態では、ＶＨは、配列番号３０のポリヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチドによってコードされ、ＶＬは、配列番号３４のポリヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチドによってコードされる。
【０１４４】
いくつかの実施形態では、抗体は、配列番号４０の重鎖と、配列番号４８の軽鎖とを含む。
【０１４５】
いくつかの実施形態では、重鎖は、配列番号７０のポリヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチドによってコードされ、軽鎖は、配列番号７８のポリヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチドによってコードされる。
【０１４６】
いくつかの実施形態では、抗体は、配列番号４１の重鎖と、配列番号４８の軽鎖とを含む。
【０１４７】
いくつかの実施形態では、重鎖は、配列番号７１のポリヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチドによってコードされ、軽鎖は、配列番号７８のポリヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチドによってコードされる。
【０１４８】
本発明は、配列番号１のヒトＣＤ４０に特異的に結合する単離されたアンタゴニスト抗体又はその抗原結合断片を提供し、それぞれ配列番号５、１８、７、２０、９、及び１０のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む。
【０１４９】
いくつかの実施形態では、抗体は、それぞれ配列番号２４及び２７のＶＨ及びＶＬを含む。
【０１５０】
いくつかの実施形態では、ＶＨは、配列番号３１のポリヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチドによってコードされ、ＶＬは、配列番号３４のポリヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチドによってコードされる。
【０１５１】
いくつかの実施形態では、抗体は、配列番号４２の重鎖と、配列番号４８の軽鎖とを含む。
【０１５２】
いくつかの実施形態では、重鎖は、配列番号７２のポリヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチドによってコードされ、軽鎖は、配列番号７８のポリヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチドによってコードされる。
【０１５３】
本発明は、配列番号１のヒトＣＤ４０に特異的に結合する単離されたアンタゴニスト抗体又はその抗原結合断片を提供し、それぞれ配列番号５、１８、１９、２０、９、及び１０のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む。
【０１５４】
いくつかの実施形態では、抗体は、配列番号１のヒトＣ４０への結合について、
配列番号１１の重鎖可変領域（ＶＨ）及び配列番号１２の軽鎖可変領域（ＶＬ）、
配列番号２５のＶＨ及び配列番号２７のＶＬ、又は
配列番号２６のＶＨ及び配列番号２７のＶＬを含む抗体と競合する。
【０１５５】
いくつかの実施形態では、抗体は、
配列番号１１の重鎖可変領域（ＶＨ）及び配列番号１２の軽鎖可変領域（ＶＬ）、
配列番号２５のＶＨ及び配列番号２７のＶＬ、又は
配列番号２６のＶＨ及び配列番号２７のＶＬを含む抗体が結合する、配列番号１のヒトＣＤ４０上の同じエピトープに結合する。
【０１５６】
いくつかの実施形態では、０．０１％  ＰＳ−２０及び１００μｇ／ｍＬのウシ血清アルブミンを含有しているダルベッコリン酸緩衝生理食塩水で、２５℃でＰｒｏｔｅＯｎ  ＸＰＲ３６システムを使用してＫＤを測定したときに、約１．５×１０−１０Ｍ以下の解離定数（ＫＤ）でヒトＣＤ４０に結合する。
【０１５７】
いくつかの実施形態では、抗体は、約１×１０−９Ｍ未満のＩＣ５０値で、可溶性ヒトＣＤ４０Ｌによって駆動されるヒト扁桃Ｂ細胞増殖を阻害する。
【０１５８】
いくつかの実施形態では、抗体は、約１×１０−９Ｍ未満のＩＣ５０値で、ヒト樹状細胞によるＩＬ−１２ｐ４０の可溶性ヒトＣＤ４０Ｌによって駆動される産生を阻害する。
【０１５９】
いくつかの実施形態では、抗体は、０．０１％  ＰＳ−２０及び１００μｇ／ｍＬウシ血清アルブミンを含有するダルベッコリン酸緩衝生理食塩水で、２５℃でＰｒｏｔｅＯｎ  ＸＰＲ３６システムを使用してＫＤを測定したときに、約１．５×１０−１０Ｍ以下の解離定数（ＫＤ）でヒトＣＤ４０に結合し、約１×１０−９Ｍ未満のＩＣ５０値で、可溶性ヒトＣＤ４０Ｌによって駆動されるヒト扁桃Ｂ細胞増殖を阻害し、約１×１０−９Ｍ未満のＩＣ５０値で、ＩＬ−１２ｐ４０の可溶性ヒトＣＤ４０Ｌによって駆動される産生を阻害する。
【０１６０】
いくつかの実施形態では、抗体は、それぞれ配列番号２５及び２７のＶＨ及びＶＬを含む。
【０１６１】
いくつかの実施形態では、ＶＨは、配列番号３２のポリヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチドによってコードされ、ＶＬは、配列番号３４のポリヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチドによってコードされる。
【０１６２】
いくつかの実施形態では、抗体は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、又はＩｇＧ４アイソタイプである。
【０１６３】
いくつかの実施形態では、抗体は、ＩｇＧ１アイソタイプである。
【０１６４】
いくつかの実施形態では、抗体は、ＩｇＧ２アイソタイプである。
【０１６５】
いくつかの実施形態では、抗体は、ＩｇＧ３アイソタイプである。
【０１６６】
いくつかの実施形態では、抗体は、ＩｇＧ４アイソタイプである。
【０１６７】
いくつかの実施形態では、抗体は、ＩｇＧ１アイソタイプであり、任意に、野生型ＩｇＧ１と比較してＬ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３７Ａ／Ｐ２３８Ｓ／Ｈ２６８Ａ／Ａ３３０Ｓ／Ｐ３３１Ｓ変異を含む。
【０１６８】
いくつかの実施形態では、抗体は、ＩｇＧ１／λアイソタイプであり、任意に、野生型ＩｇＧ１と比較してＬ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３７Ａ／Ｐ２３８Ｓ／Ｈ２６８Ａ／Ａ３３０Ｓ／Ｐ３３１Ｓ変異を含む。
【０１６９】
いくつかの実施形態では、抗体は、配列番号２５のＶＨと、配列番号２７のＶＬとを含み、かつＩｇＧ１アイソタイプであり、任意に、野生型ＩｇＧ１と比較してＬ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３７Ａ／Ｐ２３８Ｓ／Ｈ２６８Ａ／Ａ３３０Ｓ／Ｐ３３１Ｓ変異を含む。
【０１７０】
いくつかの実施形態では、抗体は、配列番号２５のＶＨと、配列番号２７のＶＬとを含み、かつＩｇＧ１／κアイソタイプであり、野生型ＩｇＧ１と比較してＬ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３７Ａ／Ｐ２３８Ｓ／Ｈ２６８Ａ／Ａ３３０Ｓ／Ｐ３３１Ｓ変異を含む。
【０１７１】
いくつかの実施形態では、抗体は、ＩｇＧ４アイソタイプであり、任意に、野生型ＩｇＧ４と比較してＳ２２８Ｐ変異を含む。
【０１７２】
いくつかの実施形態では、抗体は、ＩｇＧ４／λアイソタイプであり、任意に、野生型ＩｇＧ４と比較してＳ２２８Ｐ変異を含む。
【０１７３】
いくつかの実施形態では、抗体は、配列番号２５のＶＨと、配列番号２７のＶＬとを含み、かつＩｇＧ４／λアイソタイプであり、任意に、野生型ＩｇＧ４と比較してＳ２２８Ｐ変異を含む。
【０１７４】
いくつかの実施形態では、抗体は、配列番号２５のＶＨと、配列番号２７のＶＬとを含み、かつＩｇＧ４／λアイソタイプであり、野生型ＩｇＧ４と比較してＳ２２８Ｐ変異を含む。
【０１７５】
いくつかの実施形態では、抗体は、ＩｇＧ４アイソタイプであり、任意に、野生型ＩｇＧ４と比較してＳ２２８Ｐ／Ｆ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ変異を含む。
【０１７６】
いくつかの実施形態では、抗体は、ＩｇＧ４／λアイソタイプであり、任意に、野生型ＩｇＧ４と比較してＳ２２８Ｐ／Ｆ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ変異を含む。
【０１７７】
いくつかの実施形態では、抗体は、配列番号２５のＶＨと、配列番号２７のＶＬとを含み、かつＩｇＧ４／λアイソタイプであり、任意に、野生型ＩｇＧ４と比較してＳ２２８Ｐ／Ｆ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ変異を含む。
【０１７８】
いくつかの実施形態では、抗体は、配列番号２５のＶＨと、配列番号２７のＶＬとを含み、かつＩｇＧ４／λアイソタイプであり、野生型ＩｇＧ４と比較してＳ２２８Ｐ／Ｆ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ変異を含む。
【０１７９】
いくつかの実施形態では、抗体は、配列番号４３の重鎖と、配列番号４８の軽鎖とを含む。
【０１８０】
いくつかの実施形態では、重鎖は、配列番号７３のポリヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチドによってコードされ、軽鎖は、配列番号７８のポリヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチドによってコードされる。
【０１８１】
いくつかの実施形態では、抗体は、配列番号４４の重鎖と、配列番号４８の軽鎖とを含む。
【０１８２】
いくつかの実施形態では、重鎖は、配列番号７４のポリヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチドによってコードされ、軽鎖は、配列番号７８のポリヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチドによってコードされる。
【０１８３】
いくつかの実施形態では、抗体は、二重特異性抗体などの多重特異性抗体である。
【０１８４】
抗体は、治療、例えば、炎症性疾患の治療に使用するのに好適である。
【０１８５】
抗体は、治療、例えば、自己免疫疾患の治療に使用するのに好適である。
【０１８６】
抗体は、治療、例えば、アディソン病の治療に使用するのに好適である。
【０１８７】
抗体は、治療、例えば、強直性脊椎炎の治療に使用するのに好適である。
【０１８８】
抗体は、治療、例えば、アテローム性動脈硬化症の治療に使用するのに好適である。
【０１８９】
抗体は、治療、例えば、自己免疫性肝炎の治療に使用するのに好適である。
【０１９０】
抗体は、治療、例えば、自己免疫糖尿病の治療に使用するのに好適である。
【０１９１】
抗体は、治療、例えば、グレーブス病の治療に使用するのに好適である。
【０１９２】
抗体は、治療、例えば、ギラン・バレー症候群の治療に使用するのに好適である。
【０１９３】
抗体は、治療、例えば、橋本病の治療に使用するのに好適である。
【０１９４】
抗体は、治療、例えば、特発性血小板減少症の治療に使用するのに好適である。
【０１９５】
抗体は、治療、例えば、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）の治療に使用するのに好適である。
【０１９６】
抗体は、治療、例えば、全身性紅斑性狼瘡の治療に使用するのに好適である。
【０１９７】
抗体は、治療、例えば、多発性硬化症の治療に使用するのに好適である。
【０１９８】
抗体は、治療、例えば、重症筋無力症の治療に使用するのに好適である。
【０１９９】
抗体は、治療、例えば、乾癬の治療に使用するのに好適である。
【０２００】
抗体は、治療、例えば、関節炎の治療に使用するのに好適である。
【０２０１】
抗体は、治療、例えば、強皮症の治療に使用するのに好適である。
【０２０２】
抗体は、治療、例えば、シェーグレン症候群の治療に使用するのに好適である。
【０２０３】
抗体は、治療、例えば、全身性硬化症の治療に使用するのに好適である。
【０２０４】
抗体は、治療、例えば、移植の処置に使用するのに好適である。
【０２０５】
抗体は、治療、例えば、腎移植の処置に使用するのに好適である。
【０２０６】
抗体は、治療、例えば、皮膚移植の処置に使用するのに好適である。
【０２０７】
抗体は、治療、例えば、骨髄移植の処置に使用するのに好適である。
【０２０８】
抗体は、治療、例えば、移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）の治療に使用するのに好適である。
【０２０９】
抗体は、治療、例えば、Ｉ型糖尿病の治療に使用するのに好適である。
【０２１０】
抗体は、治療、例えば、関節リウマチの治療に使用するのに好適である。
【０２１１】
抗体は、治療、例えば、若年性関節炎の治療に使用するのに好適である。
【０２１２】
抗体は、治療、例えば、乾癬性関節炎の治療に使用するのに好適である。
【０２１３】
抗体は、治療、例えば、ライター症候群の治療に使用するのに好適である。
【０２１４】
抗体は、治療、例えば、痛風性関節炎の治療に使用するのに好適である。
【０２１５】
抗体は、治療、例えば、クローン病の治療に使用するのに好適である。
【０２１６】
抗体は、治療、例えば、潰瘍性大腸炎の治療に使用するのに好適である。
【０２１７】
抗体は、治療、例えば、炎症性疾患の治療に第２の治療剤と組み合わせて使用するのに好適である。
【０２１８】
抗体は、治療、例えば、自己免疫疾患の治療に第２の治療剤と組み合わせて使用するのに好適である。
【０２１９】
抗体は、治療、例えば、関節リウマチの治療に第２の治療薬と組み合わせて使用するのに好適である。
【０２２０】
抗体は、治療、例えば、全身性紅斑性狼瘡の治療に第２の治療剤と組み合わせて使用するのに好適である。
【０２２１】
本発明は、配列番号１のヒトＣＤ４０に特異的に結合する単離されたアンタゴニスト抗体又はその抗原結合断片を提供し、それぞれ配列番号５、１７、１９、２０、９、及び１０のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む。
【０２２２】
いくつかの実施形態では、抗体は、配列番号１のヒトＣ４０への結合について、
配列番号１１の重鎖可変領域（ＶＨ）及び配列番号１２の軽鎖可変領域（ＶＬ）、
配列番号２５のＶＨ及び配列番号２７のＶＬ、又は
配列番号２６のＶＨ及び配列番号２７のＶＬを含む抗体と競合する。
【０２２３】
いくつかの実施形態では、抗体は、
配列番号１１の重鎖可変領域（ＶＨ）及び配列番号１２の軽鎖可変領域（ＶＬ）、
配列番号２５のＶＨ及び配列番号２７のＶＬ、又は
配列番号２６のＶＨ及び配列番号２７のＶＬを含む抗体が結合する、配列番号１のヒトＣＤ４０上の同じエピトープに結合する。
【０２２４】
いくつかの実施形態では、０．０１％  ＰＳ−２０及び１００μｇ／ｍＬのウシ血清アルブミンを含有しているダルベッコリン酸緩衝生理食塩水で、２５℃でＰｒｏｔｅＯｎ  ＸＰＲ３６システムを使用してＫＤを測定したときに、約１．５×１０−１０Ｍ以下の解離定数（ＫＤ）でヒトＣＤ４０に結合する。
【０２２５】
いくつかの実施形態では、抗体は、約１×１０−９Ｍ未満のＩＣ５０値で、可溶性ヒトＣＤ４０Ｌによって駆動されるヒト扁桃Ｂ細胞増殖を阻害する。
【０２２６】
いくつかの実施形態では、抗体は、約１×１０−９Ｍ未満のＩＣ５０値で、ヒト樹状細胞によるＩＬ−１２ｐ４０の可溶性ヒトＣＤ４０Ｌによって駆動される生成を阻害する。
【０２２７】
いくつかの実施形態では、抗体は、０．０１％  ＰＳ−２０及び１００μｇ／ｍＬウシ血清アルブミンを含有するダルベッコリン酸緩衝生理食塩水で、２５℃でＰｒｏｔｅＯｎ  ＸＰＲ３６システムを使用してＫＤを測定したとき、約１．５×１０−１０Ｍ以下の解離定数（ＫＤ）でヒトＣＤ４０に結合し、約１×１０−９Ｍ未満のＩＣ５０値で、可溶性ヒトＣＤ４０Ｌによって駆動されるヒト扁桃Ｂ細胞増殖を阻害し、約１×１０−９Ｍ未満のＩＣ５０値で、ＩＬ−１２ｐ４０の可溶性ヒトＣＤ４０Ｌによって駆動される産生を阻害する。
【０２２８】
いくつかの実施形態では、抗体は、それぞれ配列番号２６及び２７のＶＨ及びＶＬを含む。
【０２２９】
いくつかの実施形態では、ＶＨは、配列番号３３のポリヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチドによってコードされ、ＶＬは、配列番号３４のポリヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチドによってコードされる。
【０２３０】
いくつかの実施形態では、抗体は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、又はＩｇＧ４アイソタイプである。
【０２３１】
いくつかの実施形態では、抗体は、ＩｇＧ１アイソタイプである。
【０２３２】
いくつかの実施形態では、抗体は、ＩｇＧ２アイソタイプである。
【０２３３】
いくつかの実施形態では、抗体は、ＩｇＧ３アイソタイプである。
【０２３４】
いくつかの実施形態では、抗体は、ＩｇＧ４アイソタイプである。
【０２３５】
いくつかの実施形態では、抗体は、ＩｇＧ１アイソタイプであり、任意に、野生型ＩｇＧ１と比較してＬ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３７Ａ／Ｐ２３８Ｓ／Ｈ２６８Ａ／Ａ３３０Ｓ／Ｐ３３１Ｓ変異を含む。
【０２３６】
いくつかの実施形態では、抗体は、ＩｇＧ１／λアイソタイプであり、任意に、野生型ＩｇＧ１と比較してＬ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３７Ａ／Ｐ２３８Ｓ／Ｈ２６８Ａ／Ａ３３０Ｓ／Ｐ３３１Ｓ変異を含む。
【０２３７】
いくつかの実施形態では、抗体は、配列番号２６のＶＨと、配列番号２７のＶＬとを含み、かつＩｇＧ１／λアイソタイプであり、任意に、野生型ＩｇＧ１と比較してＬ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３７Ａ／Ｐ２３８Ｓ／Ｈ２６８Ａ／Ａ３３０Ｓ／Ｐ３３１Ｓ変異を含む。
【０２３８】
いくつかの実施形態では、抗体は、配列番号２６のＶＨと、配列番号２７のＶＬとを含み、かつＩｇＧ１／λアイソタイプであり、野生型ＩｇＧ１と比較してＬ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３７Ａ／Ｐ２３８Ｓ／Ｈ２６８Ａ／Ａ３３０Ｓ／Ｐ３３１Ｓ変異を含む。
【０２３９】
いくつかの実施形態では、抗体は、ＩｇＧ４アイソタイプであり、任意に、野生型ＩｇＧ４と比較してＳ２２８Ｐ変異を含む。
【０２４０】
いくつかの実施形態では、抗体は、ＩｇＧ４／λアイソタイプであり、任意に、野生型ＩｇＧ４と比較してＳ２２８Ｐ変異を含む。
【０２４１】
いくつかの実施形態では、抗体は、配列番号２６のＶＨと、配列番号２７のＶＬとを含み、かつＩｇＧ４／λアイソタイプであり、任意に、野生型ＩｇＧ４と比較してＳ２２８Ｐ変異を含む。
【０２４２】
いくつかの実施形態では、抗体は、配列番号２６のＶＨと、配列番号２７のＶＬとを含み、かつＩｇＧ４／λアイソタイプであり、野生型ＩｇＧ４と比較してＳ２２８Ｐ変異を含む。
【０２４３】
いくつかの実施形態では、抗体は、ＩｇＧ４アイソタイプであり、任意に、野生型ＩｇＧ４と比較してＳ２２８Ｐ／Ｆ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ変異を含む。
【０２４４】
いくつかの実施形態では、抗体は、ＩｇＧ４／λアイソタイプであり、任意に、野生型ＩｇＧ４と比較してＳ２２８Ｐ／Ｆ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ変異を含む。
【０２４５】
いくつかの実施形態では、抗体は、配列番号２６のＶＨと、配列番号２７のＶＬとを含み、かつＩｇＧ４／λアイソタイプであり、任意に、野生型ＩｇＧ４と比較してＳ２２８Ｐ／Ｆ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ変異を含む。
【０２４６】
いくつかの実施形態では、抗体は、配列番号２６のＶＨと、配列番号２７のＶＬとを含み、かつＩｇＧ４／λアイソタイプであり、野生型ＩｇＧ４と比較してＳ２２８Ｐ／Ｆ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ変異を含む。
【０２４７】
いくつかの実施形態では、抗体は、配列番号４５の重鎖と、配列番号４８の軽鎖とを含む。
【０２４８】
いくつかの実施形態では、重鎖は、配列番号７５のポリヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチドによってコードされ、軽鎖は、配列番号７８のポリヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチドによってコードされる。
【０２４９】
いくつかの実施形態では、抗体は、配列番号４６の重鎖と、配列番号４８の軽鎖とを含む。
【０２５０】
いくつかの実施形態では、重鎖は、配列番号７６のポリヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチドによってコードされ、軽鎖は、配列番号７８のポリヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチドによってコードされる。
【０２５１】
いくつかの実施形態では、抗体は、二重特異性抗体などの多重特異性抗体である。
【０２５２】
抗体は、治療、例えば、炎症性疾患の治療に使用するのに好適である。
【０２５３】
抗体は、治療、例えば、自己免疫疾患の治療に使用するのに好適である。
【０２５４】
抗体は、治療、例えば、アディソン病の治療に使用するのに好適である。
【０２５５】
抗体は、治療、例えば、強直性脊椎炎の治療に使用するのに好適である。
【０２５６】
抗体は、治療、例えば、アテローム性動脈硬化症の治療に使用するのに好適である。
【０２５７】
抗体は、治療、例えば、自己免疫性肝炎の治療に使用するのに好適である。
【０２５８】
抗体は、治療、例えば、自己免疫糖尿病の治療に使用するのに好適である。
【０２５９】
抗体は、治療、例えば、グレーブス病の治療に使用するのに好適である。
【０２６０】
抗体は、治療、例えば、ギラン・バレー症候群の治療に使用するのに好適である。
【０２６１】
抗体は、治療、例えば、橋本病の治療に使用するのに好適である。
【０２６２】
抗体は、治療、例えば、特発性血小板減少症の治療に使用するのに好適である。
【０２６３】
抗体は、治療、例えば、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）の治療に使用するのに好適である。
【０２６４】
抗体は、治療、例えば、全身性紅斑性狼瘡の治療に使用するのに好適である。
【０２６５】
抗体は、治療、例えば、多発性硬化症の治療に使用するのに好適である。
【０２６６】
抗体は、治療、例えば、重症筋無力症の治療に使用するのに好適である。
【０２６７】
抗体は、治療、例えば、乾癬の治療に使用するのに好適である。
【０２６８】
抗体は、治療、例えば、関節炎の治療に使用するのに好適である。
【０２６９】
抗体は、治療、例えば、強皮症の治療に使用するのに好適である。
【０２７０】
抗体は、治療、例えば、シェーグレン症候群の治療に使用するのに好適である。
【０２７１】
抗体は、治療、例えば、全身性硬化症の治療に使用するのに好適である。
【０２７２】
抗体は、治療、例えば、移植の処置に使用するのに好適である。
【０２７３】
抗体は、治療、例えば、腎移植の処置に使用するのに好適である。
【０２７４】
抗体は、治療、例えば、皮膚移植の処置に使用するのに好適である。
【０２７５】
抗体は、治療、例えば、骨髄移植の処置に使用するのに好適である。
【０２７６】
抗体は、治療、例えば、移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）の治療に使用するのに好適である。
【０２７７】
抗体は、治療、例えば、Ｉ型糖尿病の治療に使用するのに好適である。
【０２７８】
抗体は、治療、例えば、関節リウマチの治療に使用するのに好適である。
【０２７９】
抗体は、治療、例えば、若年性関節炎の治療に使用するのに好適である。
【０２８０】
抗体は、治療、例えば、乾癬性関節炎の治療に使用するのに好適である。
【０２８１】
抗体は、治療、例えば、ライター症候群の治療に使用するのに好適である。
【０２８２】
抗体は、治療、例えば、痛風性関節炎の治療に使用するのに好適である。
【０２８３】
抗体は、治療、例えば、クローン病の治療に使用するのに好適である。
【０２８４】
抗体は、治療、例えば、潰瘍性大腸炎の治療に使用するのに好適である。
【０２８５】
抗体は、治療、例えば、炎症性疾患の治療に第２の治療剤と組み合わせて使用するのに好適である。
【０２８６】
抗体は、治療、例えば、自己免疫疾患の治療に第２の治療剤と組み合わせて使用するのに好適である。
【０２８７】
抗体は、治療、例えば、関節リウマチの治療に第２の治療薬と組み合わせて使用するのに好適である。
【０２８８】
抗体は、治療、例えば、全身性紅斑性狼瘡の治療に第２の治療剤と組み合わせて使用するのに好適である。
【０２８９】
ヒトＣＤ４０への結合の、ある特定のＶＨ及びＶＬ配列を含む本発明の抗体との競合は、以下のプロトコルを使用してインビトロでアッセイされ得る。Ｈｉｓタグ付き組換え可溶性ヒトＣＤ４０（ＣＤ４０−ＥＣＤ−ｈｉｓ）をアッセイに使用する。５μＬの抗ｈｉｓ  ｍＡｂ（１０μｇ／ｍＬ、Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ，ＭＡＢ０５０）を、室温で２時間、ＭＳＤ  ＨｉｇｈＢｉｎｄプレート上に直接コーティングし、次いで室温で更に２時間、５％  ＭＳＤ  Ｂｌｏｃｋｅｒ  Ａ緩衝剤で遮断する。２５μＬの１０μｇ／ｍＬ  ＣＤ４０−ＥＣＤ−ｈｉｓタンパク質を添加して、抗ｈｉｓ  ｍＡｂによって捕捉されるようにする。プレートを、室温で２時間、穏やかに振盪させながらインキュベートした後、０．１Ｍ  ＨＥＰＥＳ緩衝剤、ｐＨ７．４で３回洗浄し、続いて１０ｎＭルテニウム（Ｒｕ）標識化参照抗ＣＤ４０−ｍＡｂ又はそのＦａｂ部分の混合物に添加し、これを室温で３０分間、異なる濃度、２μＭ〜１ｎＭの試験抗ＣＤ４０抗体でプレインキュベートする。プレートを、穏やかに振盪させながら室温で１時間インキュベートした後、０．１ＭのＨＥＰＥＳ緩衝液（ｐＨ７．４）で３回洗浄する。ＭＳＤ  Ｒｅａｄ  Ｂｕｆｆｅｒ  Ｔを蒸留水で（４倍）希釈し、各ウェルに分注した後、ＳＥＣＴＯＲ  Ｉｍａｇｅｒ  ６０００（Ｍｅｓｏ  Ｓｃａｌｅ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ，Ｇａｉｔｈｅｒｓｂｕｒｇ，ＭＤ）で分析する。試験抗体は、この試験抗体が、Ｒｕ標識化参照抗体又はそのＦａｂ部分を使用して、上記アッセイにおいて得られたＭＤＳシグナルを９０％超低減するとき、ヒトＣＤ４０への結合について、参照抗体（例えば、配列番号１１のＶＨ及び配列番号１２のＶＬを含む抗体、配列番号２５のＶＨ及び配列番号２７のＶＬを含む抗体、又は配列番号２６のＶＨ及び配列番号２７のＶＬを含む抗体）と競合する。ＣＤ４０への結合について、配列番号１１のＶＨ及び配列番号１２のＶＬを含む抗体、配列番号２５のＶＨ及び配列番号２７のＶＬを含む抗体、又は配列番号２６のＶＨ及び配列番号２７のＶＬを含む抗体と競合する抗体は、ファージディスプレイライブラリを使用してヒトＣＤ４０に特異的に結合する抗体を単離することによって生成することができ、生成された抗体を、ＣＤ４０への結合について前述の抗体と競合する能力をスクリーニングする。
【０２９０】
本発明の抗体が結合するＣ４０エピトープは、例えば、水素／重水素効果（Ｈ／Ｄ交換）を使用するか、又はＣＤ４０と複合した抗体の結晶構造を分析することによって解明され得る。２つのＣＤ４０抗体は、Ｈ／Ｄ交換を通じて少なくとも５％の重水素化レベルの差で抗体により保護されるＣＤ４０アミノ酸残基の８０％以上が、２つの抗体間で同一であるとき、又は抗体及びＣＤ４０の複合体の結晶構造において抗体に結合すると判断されたＣＤ４０表面露出したアミノ酸残基の８０％以上が、２つの抗体間で同一であるとき、「ＣＤ４０上の同じエピトープに結合する」。抗体及びＣＤ４０の複合体の結晶構造において、エピトープ残基は、抗体ＣＤＲ残基のうちのいずれかから４Å以下の距離内に常在するＣＤ４０残基である。
【０２９１】
Ｈ／Ｄ交換アッセイでは、ＣＤ４０タンパク質を、抗体の存在又は非存在下、重水素化水中で既定の時間にわたってインキュベートし、抗体によって保護されていない交換可能な水素原子での重水素組み込みに続いて、タンパク質のプロテアーゼ消化及びＬＣ−ＭＳを使用するペプチド断片の分析をもたらす。例示的なアッセイでは、５μＬの試験抗体（１０μｇ）又は５μＬのＣＤ４０及び試験抗体（それぞれ１０μｇ及び７．３５μｇ）の複合体を、１２０μＬの酸化重水素標識化緩衝液（５０ｍＭリン酸塩、１００ｍＭ塩化ナトリウム、ｐＨ７．４）で０秒、６０秒、３００秒、１８００秒、７２００秒、及び１４４００秒にわたってインキュベートする。６３μＬの５Ｍ塩酸グアニジンを添加することによって重水素交換をクエンチし、最終ｐＨは２．５である。クエンチした試料を、オンカラムペプシン／プロテアーゼＸＩＩＩ型消化及びＬＣ−ＭＳ分析に供する。ペプシン／プロテアーゼＸＩＩＩ型消化について、１２５μＬの対照緩衝液（５０ｍＭリン酸塩、１００ｍＭ塩化ナトリウム、ｐＨ７．４）中の５μｇの試料を、６３μＬの５Ｍ塩酸グアニジンを添加し（最終ｐＨは２．５である）、混合物を３分間インキュベートすることによって変性される。次いで、混合物をオンカラムペプシン／プロテアーゼＸＩＩＩ型消化に供し、得られるペプチドを、Ｑ  Ｅｘａｃｔｉｖｅ（商標）Ｈｙｂｒｉｄ  Ｑｕａｄｒｕｐｏｌｅ−Ｏｒｂｉｔｒａｐ質量分析計（Ｔｈｅｒｍｏ）に連結されたＷａｔｅｒｓ  Ａｃｑｕｉｔｙ  ＵＰＬＣからなるＵＰＬＣ−ＭＳシステムを使用して分析した。未加工のＭＳデータを、Ｈ／Ｄ交換ＭＳデータの分析のためのソフトウェア、ＨＤＸ  ＷｏｒｋＢｅｎｃｈを使用して処理する。重水素化ペプチドとその天然形態（ｔ０）との平均質量差を使用して、重水素レベルを算出する。ペプチド同定は、ＣＤ４０配列に対するＭＳ／ＭＳデータをＭａｓｃｏｔで検索することを通じて行う。前駆体及び産生物イオンに対する質量許容差は、それぞれ２０ｐｐｍ及び０．０５Ｄａである。
【０２９２】
Ｘ線結晶学のために、ＣＤ４０及び試験抗体を、標準プロトコルを使用して発現及び精製する。ＣＤ４０／試験抗体複合体を、４℃で一晩インキュベートし、サイズ排除クロマトグラフィーを使用して、非複合体化種から分離する。複合体は、種々の既知の試験溶液、例えば、ＰＥＧ３３５０、クエン酸アンモニウム、及び２−（Ｎ−モルホリノ）エタンスルホン酸（ＭＥＳ）を含有する溶液から蒸気拡散方法によって結晶化する。
【０２９３】
参照抗体としてＣＤ４０上の同じエピトープに結合する抗体は、ファージディスプレイライブラリを使用してＣＤ４０に結合する抗体を単離することと、１００％のＣＤ４０への結合について参照抗体と競合する抗体を選択することと、Ｈ／Ｄ交換によって又はＸ線結晶学によって抗体エピトープを同定することによって生成され得る。
【０２９４】
代替的に、エピトープ残基を包含するペプチドを使用して、マウス又はウサギを免疫することができ、生成された抗体を、列挙された領域内でのそれらの結合について評価することができる。
【０２９５】
ヒト又はカニクイザルＣＤ４０に対する抗体の親和性は、任意の好適な方法を使用して実験により決定することができる。例示的な方法は、ＰｒｏｔｅＯｎ  ＸＰＲ３６、Ｂｉａｃｏｒｅ  ３０００又はＫｉｎＥｘＡ装置、ＥＬＩＳＡ、若しくは当業者に既知の競合的結合アッセイを利用する。特定の抗体のＣＤ４０に対する親和性についての測定値は、異なる条件（例えば、容量オスモル濃度、ｐＨ）下で測定した場合に異なり得る。したがって、親和性及び他の結合パラメータ（例えば、ＫＤ、Ｋｏｎ、Ｋｏｆｆ）の測定は、典型的には、標準的な条件及び本明細書に記載される緩衝液などの標準化緩衝液を用いて行われる。例えばＢｉａｃｏｒｅ  ３０００又はＰｒｏｔｅＯｎを使用した親和性測定での内部エラー（標準偏差（ＳＤ）として測定されるもの）は典型的に、典型的な検出範囲内で測定した場合、５〜３３％の範囲内であり得ることが当業者には分かるであろう。したがって、「約」という用語は、アッセイにおける典型的な標準偏差を表す。例えば、ＫＤが１×１０−９Ｍの場合の典型的なＳＤは、＋０．３３×１０−９Ｍ以下である。
【０２９６】
Ｂ細胞増殖アッセイでは、１×１０５ヒト扁桃Ｂ細胞を、グルタマックス、１０％  ＦＢＳ、及び１％  Ｐｅｎ／Ｓｔｒｅｐを含有するＲＰＭＩ培地中で培養することができ、ヒトＣＤ４０に特異的に結合する抗体の各々の滴定を細胞に添加し、続いて０．５μｇ／ｍＬの可溶性ヒトＣＤ１５４を添加することができる。細胞を、３７℃で４８時間培養し、５０μＬ培地中で３Ｈ−チミジン（１μＣｉ／ウェル）でパルス化し、採取及び計数前に１６〜１８時間培養することができる。
【０２９７】
ＤＣ  ＩＬ−１２ｐ４０産生アッセイでは、ヒトＤＣを、精製されたヒト単球（２．５×１０６／ウェルの６ウェルプレート）を６日間、グルタマックス、２５ｍＭ  ＨＥＰＥＳ、１０％  ＦＢＳ、１％  Ｐｅｎ／Ｓｔｒｅｐ、及び各５０ｎｇのＧＭ−ＣＳＦ及びＩＬ−４を含有する３ｍＬのＲＰＭＩ培地中で培養することによって生成することができる。３日目に、１ｍＬの培地を取り除き、各５０ｎｇ／ｍＬのＧＭ−ＣＳＦ及びＩＬ−４を含有する２ｍＬの新鮮な培地で置き換えることができる。６日目に、ＤＣを、９６ウェルプレートに播種し（１００，０００細胞／ウェル）、続いてヒトＣＤ４０に特異的に結合する抗体の各々を滴定し、１μｇ／ｍＬの可溶性ヒトＣＤ１５４を培養物に添加することができる。ＭＳＤによってＩＬ−１２ｐ４０の上澄みを収集及び分析する前に、細胞を４８時間培養することができる。
【０２９８】
本発明の抗体の免疫エフェクタ特性は、Ｆｃ修飾によって強化又はサイレンシングすることができる。例えば、Ｃ１ｑ結合、補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）、抗体依存性細胞介在性細胞傷害（ＡＤＣＣ）、貧食、細胞表面受容体（例えば、Ｂ細胞受容体（ＢＣＲ））の下方制御などのＦｃエフェクタ機能は、これらの活性に関与するＦｃの残基を修飾することによって提供及び／又は調節され得る。
【０２９９】
いくつかの実施形態では、本発明の抗体は、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩａ、ＦｃγＲＩＩｂ、ＦｃγＲＩＩＩａ、又はＦｃγＲＩＩＩｂに対する結合が低減されている。
【０３００】
「結合が低減されている」とは、同じＦｃγＲに対する変異を有しない親抗体の結合と比較して、Ｆｃ領域に少なくとも１つの変異を有する本発明の抗体の、Ｆｃγ受容体（ＦｃγＲ）に対する結合が低減されていることを指す。「結合が低減されている」とは、結合が少なくとも約１／１００、少なくとも約１／５００、少なくとも約１／１０００、少なくとも約１／５０００、少なくとも約１／１０，０００、又は少なくとも約１／２０，０００に低減されていることであり得る。実際には、特定のＦｃγＲに対する「結合の低減」を示す抗体は、特定のＦｃγＲにより介在される統計的に有意なエフェクタ機能を有する抗体を指す。
【０３０１】
いくつかの実施形態では、本発明の抗体は、ＦｃγＲに対する抗体の結合を低減するＦｃ領域に少なくとも１つの変異を含む。
【０３０２】
いくつかの実施形態では、ＦｃγＲは、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩａ、又はＦｃγＲＩＩＩａ若しくはＦｃγＲＩＩＩｂである。
【０３０３】
いくつかの実施形態では、Ｆｃ領域における少なくとも１つの変異は、Ｌ２３４Ａ変異、Ｌ２３５Ａ変異、Ｇ２３７Ａ変異、Ｐ２３８Ｓ変異、Ｍ２５２Ｙ変異、Ｓ２５４Ｔ変異、Ｔ２５６Ｅ変異、Ｈ２６８Ａ変異、Ａ３３０Ｓ変異、又はＰ３３１Ｓ変異であり、残基付番は、ＥＵインデックスに準拠する。
【０３０４】
いくつかの実施形態では、本発明の抗体は、Ｆｃ領域にＬ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３７Ａ／Ｐ２３８Ｓ／Ｈ２６８Ａ／Ａ３３０Ｓ／Ｐ３３１Ｓ変異を含み、残基付番は、ＥＵインデックスに準拠する。
【０３０５】
いくつかの実施形態では、Ｆｃ領域における少なくとも１つの変異は、Ｖ２３４Ａ変異、Ｇ２３７Ａ変異、Ｐ２３８Ｓ変異、Ｍ２５２Ｙ変異、Ｓ２５４Ｔ変異、Ｔ２５６Ｅ変異、Ｈ２６８Ａ変異、Ｖ３０９Ｌ変異、Ａ３３０Ｓ変異、又はＰ３３１Ｓ変異であり、残基付番は、ＥＵインデックスに準拠する。
【０３０６】
いくつかの実施形態では、本発明の抗体は、Ｆｃ領域にＶ２３４Ａ／Ｇ２３７Ａ／Ｐ２３８Ｓ／Ｈ２６８Ａ／Ｖ３０９Ｌ／Ａ３３０Ｓ／Ｐ３３１Ｓ変異を含み、残基付番は、ＥＵインデックスに準拠する。
【０３０７】
いくつかの実施形態では、本発明の抗体は、Ｆｃ領域にＳ２２８Ｐ変異を含み、残基付番は、ＥＵインデックスに準拠する。
【０３０８】
いくつかの実施形態では、本発明の抗体は、Ｆｃ領域にＦ２３４Ａ変異を含み、残基付番は、ＥＵインデックスに準拠する。
【０３０９】
いくつかの実施形態では、本発明の抗体は、Ｆｃ領域にＬ２３５Ａ変異を含み、残基付番は、ＥＵインデックスに準拠する。
【０３１０】
いくつかの実施形態では、本発明の抗体は、Ｓ２２８Ｐ／Ｆ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ変異を含み、残基付番は、ＥＵインデックスに準拠する。
【０３１１】
本発明の抗体の、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩａ、ＦｃγＲＩＩｂ、ＦｃγＲＩＩＩａ、及びＦｃγＲＩＩＩｂに対する結合は、Ｆｃγ受容体の可溶性組換体又は細胞に伴う形態を使用して、評価され得る。例えば、本発明の抗体の様々なＦｃγＲに対する相対的親和性及び結合活性を評価する際、直接的又は間接的測定（例えば、競合的結合測定）を行うことができる。例示的なアッセイでは、プレート上に捕捉した可溶性ＦｃγＲに結合する試験抗体は、１μｇ／ｍＬのビオチニル化ヒトＩｇＧ１と、抗原と予め複合体化した試験抗体の段階希釈物との間の競合的な結合を使用して、評価される。
【０３１２】
いくつかの実施形態では、Ｆｃ領域に少なくとも１つの変異を含む本発明の抗体は、抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）、抗体依存性細胞貪食（「ＡＤＣＰ」）、及び／又は補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）が低減されている。
【０３１３】
「抗体依存性細胞傷害」、「抗体依存性細胞介在性細胞傷害」、又は「ＡＤＣＣ」は、エフェクタ細胞で発現されるＦｃγ受容体（ＦｃγＲ）を介し、抗体被覆標的細胞の、ナチュラルキラー細胞、単球、マクロファージ、及び好中球などの溶解活性を有するエフェクタ細胞との相互作用に基づき、細胞死を誘導する機構である。例えば、ＮＫ細胞はＦｃγＲＩＩＩａを発現し、一方単球はＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩ、及びＦｃγＲＩＩＩａを発現する。本発明の抗体のＡＤＣＣ活性を評価する際、抗体を免疫エフェクタ細胞と組み合わせて標的細胞に添加することもでき、免疫エフェクタ細胞が抗原抗体複合体により活性化されることで、標的細胞の細胞溶解が生じ得る。細胞溶解は、通常、溶解した細胞からの標識（例えば、放射性基質、蛍光染料、又は天然の細胞内タンパク質）の放出によって検出される。そのようなアッセイ用のエフェクタ細胞の例としては、末梢血単核球（ＰＢＭＣ）及びＮＫ細胞が挙げられる。例示的な標的細胞は、ＣＤ４０を発現する細胞を含む。
【０３１４】
「抗体依存性細胞貪食作用」（「ＡＤＣＰ」）とは、例えばマクロファージ又は樹状細胞などの貪食細胞による取り込みを通じ、抗体により被覆された標的細胞を排除する機構を指す。ＡＤＣＰは、単球由来マクロファージをエフェクタ細胞として使用し、ＧＦＰ又は他の標識化分子を発現するように操作されたＣＤ４０を発現する細胞を標的細胞として使用して、評価することができる。エフェクタ：標的細胞比は例えば４：１とすることができる。エフェクタ細胞を、標的細胞と共に、抗ＣＤ４０抗体を添加し又は添加せずに４時間インキュベートすることができる。インキュベーション後、細胞は、Ａｃｃｕｔａｓｅを使用して剥離することができる。マクロファージは、蛍光標識に結合した抗ＣＤ１１ｂ抗体及び抗ＣＤ１４抗体により識別され得るが、貪食作用の割合（％）は、標準的な方法を使用して、ＣＤ１１＋及びＣＤ１４＋マクロファージにおけるＧＦＰ蛍光の割合（％）に基づいて決定され得る。
【０３１５】
「補体依存性細胞傷害」又は「ＣＤＣ」は、標的結合抗体のＦｃエフェクタドメインが補体成分Ｃ１ｑに結合してこれを活性化し、かかる補体成分Ｃ１ｑが次に補体カスケードを活性化して標的細胞の細胞死を導く、細胞死を誘導する機構を指す。補体の活性化はまた、標的細胞表面に対する補体成分の沈着を生じさせて、白血球への補体受容体（例えば、ＣＲ３）の結合によって、ＡＤＣＣを容易にし得る。ＣＤ４０発現細胞のＣＤＣは、例えば、適切な培地にＣＤ４０を発現する細胞を播種し、抗ＣＤ４０抗体を混合物に添加した後、プールしたヒト血清を添加することにより測定することができる。インキュベート時間後、溶解した細胞の割合（％）は、標準法を使用して、ＦＡＣＳアッセイにおいてヨウ化プロピジウム染色細胞の割合（％）として検出することができる。
【０３１６】
「ＡＤＣＣが低減されている」、「ＣＤＣが低減されている」、及び「ＡＤＣＰが低減されている」とは、変異を有しない同じ抗体と比較して、Ｆｃ領域に少なくとも１つの変異を含む本発明の抗体によって媒介されるＡＤＣＣ、ＣＤＣ、及び／又はＡＤＣＰの統計的に有意な低減を指す。本明細書に記載されるアッセイ、及び米国特許第８，８７１，２０４号に記載されるアッセイにおけるＡＤＣＣ、ＣＤＣ、及び／又はＡＤＣＰ。
【０３１７】
表７に示すＶＨ又はＶＬアミノ酸配列を含む本発明の抗体の変異体は、本発明の範囲内である。例えば、変異体は、抗体の特性に悪影響を及ぼさないＶＨ及び／又はＶＬ中に１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、又は１５個のアミノ酸置換を含み得る。いくつかの実施形態では、配列同一性は、本発明の抗体ＶＨ又はＶＬアミノ酸配列に対して約９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％であり得る。
【０３１８】
２つの配列間の同一性パーセントは、ギャップ数及び各ギャップの長さを考慮して、配列により共有される同一の位置の数の関数である（すなわち、相同性の割合（％）＝同一位置数／位置の総数×１００）。同一性パーセントは、２つの配列の最適なアライメントを導くのに必要である。
【０３１９】
２つのアミノ酸配列間の相同性（％）は、例えば、Ｅ．Ｍｅｙｅｒｓ  ａｎｄ  Ｗ．Ｍｉｌｌｅｒ（Ｃｏｍｐｕｔ．Ａｐｐｌ．Ｂｉｏｓｃｉ  ４，１１〜１７（１９８８）のアルゴリズムを使用して求めることもできる。同アルゴリズムは、ＡＬＩＧＮプログラム（バージョン２．０）に組み込まれており、ＰＡＭ１２０重み付け残基テーブル、ギャップ長ペナルティ１２、及びギャップペナルティ４を使用する。更に、２つのアミノ酸配列間の配列相同性は、ＧＣＧソフトウェアパッケージ（ｈｔｔｐ：／／＿ｗｗｗ＿ｇｃｇ＿ｃｏｍで入手可能）のＧＡＰプログラムに組み込まれているＮｅｅｄｌｅｍａｎ及びＷｕｎｓｃｈのアルゴリズム（Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．４８：４４４〜４５３（１９７０））を、Ｂｌｏｓｓｕｍ  ６２マトリックス又はＰＡＭ２５０マトリックスのいずれかで、ギャップ重み（gap weight）１６、１４、１２、１０、８、６、又は４、長さ重み（length weight）１、２、３、４、５、又は６で使用して、求めることができる。
【０３２０】
いくつかの実施形態では、本発明の抗体は、配列番号１１、２１、２２、２３、２４、２５、又は２６のＶＨと少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるＶＨと、配列番号１２又は２７のＶＬと少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるＶＬとを含み、ここで抗体は、次の特性のうちの１つ又は２つ以上を示す。
約１×１０−９Ｍ未満のＩＣ５０値で、０．５μｇ／ｍＬのヒト可溶性ＣＤ４０Ｌによって駆動されるヒト扁桃Ｂ細胞増殖を阻害する。
約１×１０−９Ｍ未満のＩＣ５０値で、ヒト樹状細胞によるＩＬ−１２ｐ４０の、１μｇ／ｍＬのヒト可溶性ＣＤ４０Ｌによって駆動される産生を阻害する。又は
実施例４の親和性測定に記載の試験デザインを使用して、ＰｒｏｔｅＯｎ  ＸＰＲ３６システムを使用してＫＤを測定したときに、約５×１０−９Ｍ以下の解離定数（ＫＤ）でヒトＣＤ４０に結合する。
【０３２１】
いくつかの実施形態では、本発明の抗体は、配列番号１１のＶＨ及び配列番号１２のＶＬと少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるＶＨ及びＶＬを含む。
【０３２２】
いくつかの実施形態では、本発明の抗体は、配列番号２１のＶＨ及び配列番号２７のＶＬと少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるＶＨ及びＶＬを含む。
【０３２３】
いくつかの実施形態では、本発明の抗体は、配列番号２２のＶＨ及び配列番号２７のＶＬと少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるＶＨ及びＶＬを含む。
【０３２４】
いくつかの実施形態では、本発明の抗体は、配列番号２３のＶＨ及び配列番号２７のＶＬと少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるＶＨ及びＶＬを含む。
【０３２５】
いくつかの実施形態では、本発明の抗体は、配列番号２４のＶＨ及び配列番号２７のＶＬと少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるＶＨ及びＶＬを含む。
【０３２６】
いくつかの実施形態では、本発明の抗体は、配列番号２５のＶＨ及び配列番号２７のＶＬと少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるＶＨ及びＶＬを含む。
【０３２７】
いくつかの実施形態では、本発明の抗体は、配列番号２６のＶＨ及び配列番号２７のＶＬと少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるＶＨ及びＶＬを含む。
【０３２８】
いくつかの実施形態では、本発明の抗体は、配列番号１１のＶＨと配列番号１２のＶＬとを含み、ここでＶＨ、ＶＬ、又はＶＨ及びＶＬの両方は、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、又は１５個の保存的アミノ酸置換を含み、抗体は、次の特性のうちの１つ又は２つ以上を示す。
約１×１０−９Ｍ未満のＩＣ５０値で、０．５μｇ／ｍＬのヒト可溶性ＣＤ４０Ｌによって駆動されるヒト扁桃Ｂ細胞増殖を阻害する。
約１×１０−９Ｍ未満のＩＣ５０値で、ヒト樹状細胞によるＩＬ−１２ｐ４０の、１μｇ／ｍＬのヒト可溶性ＣＤ４０Ｌによって駆動される産生を阻害する。又は
実施例４の親和性測定に記載の試験デザインを使用して、ＰｒｏｔｅＯｎ  ＸＰＲ３６システムを使用してＫＤを測定したときに、約５×１０−９Ｍ以下の解離定数（ＫＤ）でヒトＣＤ４０に結合する。
【０３２９】
いくつかの実施形態では、本発明の抗体は、配列番号１１のＶＨと配列番号１２のＶＬとを含み、ここでＶＨ、ＶＬ、又はＶＨ及びＶＬの両方は、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、又は１５個の保存的アミノ酸置換を含む。
【０３３０】
いくつかの実施形態では、本発明の抗体は、配列番号２１のＶＨと配列番号２７のＶＬとを含み、ここでＶＨ、ＶＬ、又はＶＨ及びＶＬの両方は、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、又は１５個の保存的アミノ酸置換を含む。
【０３３１】
いくつかの実施形態では、本発明の抗体は、配列番号２２のＶＨと配列番号２７のＶＬとを含み、ここでＶＨ、ＶＬ、又はＶＨ及びＶＬの両方は、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、又は１５個の保存的アミノ酸置換を含む。
【０３３２】
いくつかの実施形態では、本発明の抗体は、配列番号２３のＶＨと配列番号２７のＶＬとを含み、ここでＶＨ、ＶＬ、又はＶＨ及びＶＬの両方は、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、又は１５個の保存的アミノ酸置換を含む。
【０３３３】
いくつかの実施形態では、本発明の抗体は、配列番号２４のＶＨと配列番号２７のＶＬとを含み、ここでＶＨ、ＶＬ、又はＶＨ及びＶＬの両方は、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、又は１５個の保存的アミノ酸置換を含む。
【０３３４】
いくつかの実施形態では、本発明の抗体は、配列番号２５のＶＨと配列番号２７のＶＬとを含み、ここでＶＨ、ＶＬ、又はＶＨ及びＶＬの両方は、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、又は１５個の保存的アミノ酸置換を含む。
【０３３５】
いくつかの実施形態では、本発明の抗体は、配列番号２６のＶＨと配列番号２７のＶＬとを含み、ここでＶＨ、ＶＬ、又はＶＨ及びＶＬの両方は、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、又は１５個の保存的アミノ酸置換を含む。
【０３３６】
「保存的改変」は、アミノ酸配列を含む抗体の結合特性に有意に影響しないか、又は結合特性を変更しない、アミノ酸改変を指す。保存的改変は、アミノ酸置換、付加、及び欠失を含む。保存的アミノ酸置換は、アミノ酸が、類似の側鎖を有するアミノ酸残基に置き換えられる置換である。類似の側鎖を有するアミノ酸残基のファミリーは、明確に定義されており、酸性側鎖（例えば、アスパラギン酸、グルタミン酸）、塩基性側鎖（例えば、リシン、アルギニン、ヒスチジン）、非極性側鎖（例えば、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、フェニルアラニン、メチオニン）、非荷電極性側鎖（例えば、グリシン、アスパラギン、グルタミン、システイン、セリン、スレオニン、チロシン、トリプトファン）、芳香族側鎖（例えば、フェニルアラニン、トリプトファン、ヒスチジン、チロシン）、脂肪族側鎖（例えば、グリシン、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、セリン、スレオニン）、アミド（例えば、アスパラギン、グルタミン）、β分岐側鎖（例えば、スレオニン、バリン、イソロイシン）、及び含硫黄側鎖（システイン、メチオニン）を有する、アミノ酸を含む。更に、アラニン・スキャニング変異導入法についてこれまでに述べられているように（ＭａｃＬｅｎｎａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｃｔａ  Ｐｈｙｓｉｏｌ．Ｓｃａｎｄ．Ｓｕｐｐｌ．６４３：５５〜６７，１９９８；Ｓａｓａｋｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｄｖ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．３５：１〜２４，１９９８）、ポリペプチド内の任意の天然残基をアラニンで置換することもできる。本発明の抗体へのアミノ酸置換は、例えば、ＰＣＲによる変異導入（米国特許第４，６８３，１９５号）によるものなどの、よく知られている方法によって行われ得る。代替的に、変異体のライブラリは、例えば、ランダムコドン（ＮＮＫ）又は非ランダムコドン、例えば１１個のアミノ酸（Ａｌａ、Ｃｙｓ、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ｇｌｙ、Ｌｙｓ、Ａｓｎ、Ａｒｇ、Ｓｅｒ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ）をコードするＤＶＫコドンを使用する既知の手法を使用して、生成することができる。得られる抗体変異体は、それらの特性に関して、本明細書に記載のアッセイを使用して試験することができる。
【０３３７】
実施例で説明する実施形態は、１つが重鎖に由来し、１つが軽鎖に由来する１対の可変領域を有しているが、当業者であれば代替的な実施形態は、１つの重鎖又は軽鎖の可変領域を有してもよいということを認識するであろう。１つの可変領域を使用して、例えばＣＤ４０に特異的に結合可能な２ドメイン特異的抗原結合断片を形成することができる可変ドメインについてスクリーニングすることができる。スクリーニングは、例えば、国際特許公開第ＷＯ１９９２／０１０４７号に開示される階層的２重コンビナトリアルアプローチを使用したファージ提示スクリーニング法によって実現することができる。
【０３３８】
本発明の抗体は、様々な技術を使用して生成することができる。例えばＫｏｈｌｅｒ  ａｎｄ  Ｍｉｌｓｔｅｉｎ，Ｎａｔｕｒｅ  ２５６：４９５，１９７５のハイブリドーマ法を使用して、モノクローナル抗体を生成することができる。ハイブリドーマ法において、マウス又は他の宿主動物、例えばハムスター、ラット、ウサギ、又はサルを、可溶型のＣＤ４０などのヒト、マーモセット、又はカニクイザルＣＤ４０若しくはＣＤ４０断片で免疫し、続いて標準的な方法を使用して免疫した動物由来の脾臓細胞を骨髄腫細胞と融合させてハイブリドーマ細胞を形成する（Ｇｏｄｉｎｇ，Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ，ｐｐ．５９〜１０３（Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，１９８６））。１個の不死化したハイブリドーマ細胞から発生したコロニーを、結合特異性、交差反応性又はその欠如、及び抗原の親和性などの所望の特性を有する抗体の生成についてスクリーニングする。
【０３３９】
様々な宿主動物を使用して、本発明の抗体を生成することができる。例えば、Ｂａｌｂ／ｃマウスを使用して、抗体を生成することができる。Ｂａｌｂ／ｃマウス及び他のヒト以外の動物において作製された抗体を、様々な技術を使用してヒト化して、よりヒトに近い配列を生成することもできる。ヒト受容体フレームワークの選択を含む例示的なヒト化技術は既知であり、ＣＤＲ移植（米国特許第５，２２５，５３９号）、ＳＤＲ移植（米国特許第６，８１８，７４９号）、リサーフェーシング（Resurfacing）（Ｐａｄｌａｎ，Ｍｏｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ２８：４８９〜４９９，１９９１）、特異性決定残基リサーフェーシング（米国特許公開第２０１００２６１６２０号）、ヒト適応（又はヒトフレームワーク適応）（米国特許公開第２００９／０１１８１２７号）、超ヒト化（米国特許第７，７０９，２２６号）、及びガイド選択（（Ｏｓｂｏｕｒｎ  ｅｔ  ａｌ（２００５）Ｍｅｔｈｏｄｓ  ３６：６１〜６８，２００５、米国特許第５，５６５，３３２号）を含む。これらの方法では、親抗体のＣＤＲが、フレームワークＣＤＲの長さ、相同性、若しくはカノニカル構造の情報、又はこれらの組み合わせに基づいた、親フレームワークに対する総合的な相同性に基づいて選択され得る、ヒトフレームワーク上に移植される。
【０３４０】
ヒト化抗体は、国際公開第９０／００７８６１号及び国際公開第９２／２２６５３号に記載される開示物などの技術により、結合親和性を保存するように、改変したフレームワーク支持残基を組み込むことによって（復帰変異）、所望の抗原に対するそれらの選択性若しくは親和性を向上させるように更に最適化させることもでき、又は任意のＣＤＲに変異を導入して例えば抗体の親和性を向上させることにより、更に最適化させることもできる。
【０３４１】
それらのゲノムにヒト免疫グロブリン（Ｉｇ）遺伝子座を保有するトランスジェニックマウスを使用して、標的タンパク質に対するヒト抗体を生成することができ、例えば、国際公開第９０／０４０３６号、米国第６，１５０，５８４号、国際公開第９９／４５９６２号、国際公開第０２／０６６６３０号、国際公開第０２／４３４７８号、Ｌｏｎｂｅｒｇ  ｅｔ  ａｌ（１９９４）Ｎａｔｕｒｅ  ３６８：８５６〜９；Ｇｒｅｅｎ  ｅｔ  ａｌ（１９９４）Ｎａｔｕｒｅ  Ｇｅｎｅｔ．７：１３〜２１、Ｇｒｅｅｎ  ＆  Ｊａｋｏｂｏｖｉｔｓ（１９９８）Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１８８：４８３〜９５；Ｌｏｎｂｅｒｇ  ａｎｄ  Ｈｕｓｚａｒ（１９９５）Ｉｎｔ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３：６５〜９３；Ｂｒｕｇｇｅｍａｎｎ  ｅｔ  ａｌ（１９９１）Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２１：１３２３〜１３２６；Ｆｉｓｈｗｉｌｄ  ｅｔ  ａｌ（１９９６）Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．１４：８４５〜８５１；Ｍｅｎｄｅｚ  ｅｔ  ａｌ（１９９７）Ｎａｔ．Ｇｅｎｅｔ．１５：１４６〜１５６；Ｇｒｅｅｎ（１９９９）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ  ２３１：１１〜２３；Ｙａｎｇ  ｅｔ  ａｌ（１９９９）Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．５９：１２３６〜１２４３；Ｂｒｕｇｇｅｍａｎｎ  ａｎｄ  Ｔａｕｓｓｉｇ（１９９７）Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．８：４５５〜４５８；国際公開第０２／０４３４７８号）に記載されている。そのようなマウスにおける内因性免疫グロブリン遺伝子座は、破壊又は欠失されてよく、相同又は非相同組換え、導入染色体（transchromosome）、又はミニ遺伝子を使用して、少なくとも１つの完全な又は部分的なヒト免疫グロブリン遺伝子座をマウスゲノム内に挿入することができる。Ｒｅｇｅｎｅｒｏｎ（ｈｔｔｐ：／／＿ｗｗｗ＿ｒｅｇｅｎｅｒｏｎ＿ｃｏｍ）、Ｈａｒｂｏｕｒ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ（ｈｔｔｐ：／／＿ｗｗｗ＿ｈａｒｂｏｕｒａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ＿ｃｏｍ）、Ｏｐｅｎ  Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｉｎｃ．（ＯＭＴ）（ｈｔｔｐ：／／＿ｗｗｗ＿ｏｍｔｉｎｃ＿ｎｅｔ）、ＫｙＭａｂ（ｈｔｔｐ：／／＿ｗｗｗ＿ｋｙｍａｂ＿ｃｏｍ）、Ｔｒｉａｎｎｉ（ｈｔｔｐ：／／＿ｗｗｗ．ｔｒｉａｎｎｉ＿ｃｏｍ）、及びＡｂｌｅｘｉｓ（ｈｔｔｐ：／／＿ｗｗｗ＿ａｂｌｅｘｉｓ＿ｃｏｍ）などの企業は、上記の技術を使用して、選択抗原を標的としたヒト抗体を提供するべく取り組んでいる。
【０３４２】
ヒト抗体はファージディスプレイライブラリから選択することができ、ここでファージは、ヒト免疫グロブリン、あるいは例えばＦａｂ、単鎖抗体（ｓｃＦｖ）、又は非対化若しくは対化抗体可変領域などのそれらの部分を発現するよう改変されている（Ｋｎａｐｐｉｋ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ  ２９６：５７〜８６，２０００；Ｋｒｅｂｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｍｅｔｈ  ２５４：６７〜８４，２００１；Ｖａｕｇｈａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  １４：３０９〜３１４，１９９６；Ｓｈｅｅｔｓ  ｅｔ  ａｌ．，ＰＩＴＡＳ（ＵＳＡ）９５：６１５７〜６１６２，１９９８；Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍ  ａｎｄ  Ｗｉｎｔｅｒ，Ｊ  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ  ２２７：３８１，１９９１；Ｍａｒｋｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ  ２２２：５８１，１９９１）。本発明の抗体は、例えば、Ｓｈｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ  ３９７：３８５〜９６，２０１０及び国際特許公開第０９／０８５４６２号）に記載されるバクテリオファージｐＩＸ被覆タンパク質との融合タンパク質として抗体の重鎖及び軽鎖可変領域を発現するファージディスプレイライブラリから単離され得る。ライブラリを、ヒト及び／又はカニクイザルＣＤ４０のファージ結合についてスクリーニングして、得られた陽性クローンの特性評価を更に行い、Ｆａｂをクローンの溶解物から単離し、完全長のＩｇＧとして発現させることができる。ヒト抗体を単離するためのかかるファージディスプレイ法は、例えば、米国特許第５，２２３，４０９号、同第５，４０３，４８４号、及びＬａｄｎｅｒ  ｅｔ  ａｌ．の同第５，５７１，６９８号、Ｄｏｗｅｒｅｔ  ａｌ．の米国特許第５，４２７，９０８号、及び同第５，５８０，７１７号、ＭｃＣａｆｆｅｒｔｙｅｔ  ａｌ．の米国特許第５，９６９，１０８号及び同第６，１７２，１９７号、並びにＧｒｉｆｆｉｔｈｓｅｔ  ａｌ．の米国特許第５，８８５，７９３号、同第６，５２１，４０４号、同第６，５４４，７３１号、同第６，５５５，３１３号、同第６，５８２，９１５号及び同第６，５９３，０８１号に記載されている。
【０３４３】
免疫原性抗原の調製及びモノクローナル抗体の産生は、組換えタンパク質産生等の任意の好適な技術を使用して実施することができる。免疫原性抗原は、精製タンパク質の形態、又は全細胞又は細胞若しくは組織抽出物を含むタンパク質混合物の形態で動物に投与されるか、あるいは抗原は、動物の身体内で、この抗原又はその一部をコードする核酸から新規に形成されてよい。
【０３４４】
本発明の抗体は、ヒト抗体又はヒト化抗体であってもよい。
【０３４５】
いくつかの実施形態では、本発明の抗体は、ヒト生殖細胞系列遺伝子ＶＨ３＿３−２３（配列番号４９）に由来するＶＨフレームワークを含む。
【０３４６】
いくつかの実施形態では、本発明の抗体は、ヒト生殖細胞系列遺伝子ＶＬ３＿３Ｒ（ＩＧＬＶ３−１）（配列番号５０）に由来するＶＬフレームワークを含む。
【０３４７】
本発明の抗体は、ＩｇＡ型、ＩｇＤ型、ＩｇＥ型、ＩｇＧ型又はＩｇＭ型であってもよい。本発明の抗体は、ＩｇＧ１型、ＩｇＧ２型、ＩｇＧ３型、ＩｇＧ４型であってもよい。
【０３４８】
本発明の抗体を更に改変して、親抗体と比較して特性が類似している又は変更されている修飾抗体を生成することができる。本発明の抗体では、ＶＨ、ＶＬ、ＶＨ及びＶＬ、定常領域、ＶＨフレームワーク、ＶＬフレームワーク、又は６つのうちの任意の若しくは全てのＣＤＲを改変することもできる。
【０３４９】
本発明の抗体は、ＣＤＲグラフトにより改変することもできる。本発明の抗体の１つ又は２つ以上のＣＤＲ配列を異なるフレームワーク配列にグラフトしてもよい。ＣＤＲグラフトは、本明細書に記載の方法を使用して、行うこともできる。いくつかの実施形態では、本発明の抗体は、配列番号５のＨＤＣＲ１、配列番号６、１５、１６、１７、若しくは１８のＨＣＤＲ２、配列番号７若しくは１９のＨＣＤＲ３を含むＶＨと、配列番号８若しくは２０のＬＣＤＲ１、配列番号９のＬＣＤＲ２、及び／又は配列番号１０のＬＣＤＲ３を含むＶＬとを含み、ここでＶＨフレームワークは、ＶＨ３＿３−２３（配列番号４９）に由来せず、ＶＬフレームワークは、ＶＬ３＿３Ｒ(ＩＧＬＶ３−１）（配列番号５０）に由来しない。使用するフレームワーク配列は、生殖系列の抗体遺伝子配列を含む公的なＤＮＡデータベース又は公開されているレファレンスから得ることもできる。例えば、ヒト重鎖及び軽鎖可変領域遺伝子に関し、生殖系列ＤＮＡ及びコードされるタンパク質配列は、ＩＭＧＴ（登録商標）、ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  ＩｍＭｕｎｏＧｅｎｅＴｉｃｓ  ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ  ｓｙｓｔｅｍ（登録商標）ｈｔｔｐ：／／＿ｗｗｗ−ｉｍｇｔ＿ｏｒｇに見ることができる。本発明の抗体において既存のフレームワーク配列と置き換えて使用することのできるフレームワーク配列は、Ｃ４０Ｂ１６、Ｃ４０Ｂ１２４、Ｃ４０Ｂ１３５、Ｃ４０Ｂ１２５、Ｃ４０Ｂ１３６、Ｃ４０Ｂ１２７、Ｃ４０Ｂ１３８、Ｃ４０Ｂ１３１、Ｃ４０Ｂ１７６、Ｃ４０Ｂ１８０、Ｃ４０Ｂ１７９、及びＣ４０Ｂ１８３に対し最も高い同一性パーセントを示すものである。
【０３５０】
親抗体及び改変抗体のフレームワーク配列は、例えば、米国特許第６，１８０，３７０号に記載のとおり、得られた抗体の抗原への結合を回復及び／又は向上させる復帰変異により更に改変され得る。親抗体及び改変抗体のフレームワーク配列は、フレームワーク領域内の１つ又は２つ以上の残基又は更には１つ又は２つ以上のＣＤＲ領域に変異を導入することにより更に改変してＴ細胞エピトープを除去することで、抗体のもつ潜在的な免疫原性を除去することもできる。このアプローチは「脱免疫」とも呼ばれ、米国特許公開第２００３０１５３０４３号に更に詳述されている。
【０３５１】
本発明の抗体のＣＤＲ残基を変異させて、対象とする抗体の結合特性のうちの１つ又は２つ以上を向上させることもできる。部位特異的変異導入又はＰＣＲ介在性変異導入を実施して、変異（複数可）を導入することもでき、抗体の結合、又は他の対象とする機能特性に対する影響は、本明細書に記載のとおり、かつ実施例において提供されるとおり、インビトロ又はインビボで評価することができる。導入可能な例示的な置換は、上掲のとおり保存的な改変である。更に、典型的には、ＣＤＲ領域内の１、２、３、４、又は５個以上の残基が変更される。
【０３５２】
本発明の抗体を、グリコシル化、異性化、脱グリコシル化などのプロセスによって、あるいはポリエチレングリコール部分の付加（ＰＥＧ化）及び脂質化などの自然界では生じない共有結合修飾によって翻訳後修飾してもよい。こうした修飾はインビボあるいはインビトロで行われ得る。例えば、本発明の抗体にポリエチレングリコールを融合させる（ＰＥＧ化）することによって薬物動態のプロファイルを向上させることができる。融合は当業者に既知の技術によって行われ得る。治療用抗体をＰＥＧと融合させると、機能は干渉されずに薬物動態が強化されることが示されている（Ｋｎｉｇｈ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｌａｔｅｌｅｔｓ  １５：４０９〜１８，２００４；Ｌｅｏｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｙｔｏｋｉｎｅ  １６：１０６〜１９，２００１；Ｙａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｎｇ．１６：７６１〜７０，２００３）。
【０３５３】
安定性、選択性、交差反応性、親和性、免疫原性、又は他の望ましい生物学的若しくは生物物理学的特性を向上させるように修飾され得る、本発明の抗体又はその抗原結合断片は、発明の範囲内である。抗体の安定性は、分子内力及び分子間力の中でも特に固有の安定性に影響を及ぼす個々のドメインのコアパッキング、ＨＣとＬＣとの対形成に影響するタンパク質／タンパク質の界面相互作用、極性及び荷電残基の埋込み、（４）極性及び荷電残基のＨ結合ネットワーク、並びに表面電荷及び極性残基の分布を含む多くの因子によって影響される（Ｗｏｒｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ  ３０５：９８９〜１０１０，２００１）。ある場合においては、構造を不安定化させる可能性のある残基は、抗体の結晶構造に基づいて、あるいは場合によっては分子モデリングによって特定することが可能であり、また、抗体の安定性に対するこれらの残基の作用は、特定された残基に変異を含む変異体を生成及び評価することにより試験することができる。示差走査熱量測定法（ＤＳＣ）で測定する場合、抗体の安定性を高める方法の１つは、変性の中点温度（Ｔｍ）を高くすることである。一般に、タンパク質のＴｍは、その安定性と相関し、溶液中でのアンフォールディングし易さ及び変性し易さ、並びにそのタンパク質のアンフォールディングし易さに応じた分解プロセスとは逆相関する（Ｒｅｍｍｅｌｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｐｈａｒｍ．，１３：３６〜４６，２０００）。多数の研究では、ＤＳＣで熱安定性として測定された製剤の物理的安定性のランク付けと他の方法で測定された物理的安定性との間に相関があることが発見されている（Ｇｕｐｔａ  ｅｔ  ａｌ．，ＡＡＰＳ  ＰｈａｒｍＳｃｉ  ５Ｅ８，２００３；Ｚｈａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｐｈａｒｍ  Ｓｃｉ  ９３：３０７６〜８９，２００４；Ｍａａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｉｎｔ  Ｊ  Ｐｈａｒｍ  １４０：１５５〜６８，１９９６；Ｂｅｄｕ−Ａｄｄｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｈａｒｍ  Ｒｅｓ  ２１：１３５３〜６１，２００４；Ｒｅｍｍｅｌｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｈａｒｍ  Ｒｅｓ  １５：２００〜８，１９９７）。製剤研究では、ＦａｂのＴｍが、対応するｍＡｂの長期物理的安定性と密接な関係があることを示唆している。
【０３５４】
いくつかの実施形態では、本発明の抗体は、多重特異性抗体である。
【０３５５】
いくつかの実施形態では、本発明の抗体は、二重特異性抗体である。
【０３５６】
ＣＤ４０に特異的に結合する本発明の単一特異性アンタゴニスト抗体は、二重特異性抗体として設計することもでき、このような抗体も本発明の範囲内に包含される。
【０３５７】
完全長二重特異性抗体は、例えば、２つの単一特異性二価抗体間でのＦａｂアーム交換（又は半分子交換、１つの重鎖−軽鎖対を交換する）を使用して、インビトロでのセルフリー環境において又は共発現を使用するかのいずれかにおいて、異なる特異性を有する２つの抗体半分子の好ましいヘテロ二量体形成のために、各半分子における重鎖ＣＨ３界面に置換を導入することにより生成されてもよい。Ｆａｂアーム交換反応は、ジスルフィド結合異性化反応及びＣＨ３ドメインの解離−会合の結果である。親単一特異性抗体のヒンジ領域における重鎖ジスルフィド結合は減少する。親単一特異性抗体のうちの１つの得られた遊離システインは、第２の親単一特異性抗体分子のシステイン残基と重鎖内ジスルフィド結合を形成し、同時に、親抗体のＣＨ３ドメインは、解離−会合により解放及び再形成する。ＦａｂアームのＣＨ３ドメインは、ホモ二量体化より好ましいヘテロ二量体化に操作されてもよい。得られた生成物は、それぞれ異なるエピトープに結合する、２つのＦａｂアーム又は半分子を有する二重特異性抗体である。
【０３５８】
二重特異性抗体は、Ｔｒｉｏｍａｂ／Ｑｕａｄｒｏｍａ（Ｔｒｉｏｎ  Ｐｈａｒｍａ／Ｆｒｅｓｅｎｉｕｓ  Ｂｉｏｔｅｃｈ）、Ｋｎｏｂｓ−ｉｎｔｏ−Ｈｏｌｅｓ（Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ）、ＣｒｏｓｓＭＡｂｓ（Ｒｏｃｈｅ）及び静電的に誘導されたＣＨ３相互作用（Ｃｈｕｇａｉ，Ａｍｇｅｎ，ＮｏｖｏＮｏｒｄｉｓｋ，Ｏｎｃｏｍｅｄ）、ＬＵＺ−Ｙ（Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ）、ストランド交換操作ドメインボディ（ＳＥＥＤｂｏｄｙ）（ＥＭＤ  Ｓｅｒｏｎｏ）、Ｂｉｃｌｏｎｉｃ（Ｍｅｒｕｓ）、並びにＤｕｏＢｏｄｙ（登録商標）製品（Ｇｅｎｍａｂ  Ａ／Ｓ）などの設計を使用して生成することもできる。
【０３５９】
Ｔｒｉｏｍａｂ  ｑｕａｄｒｏｍａ技術を使用して、本発明の完全長二重特異性抗体を生成することができる。Ｔｒｉｏｍａｂ技術は、２つの親キメラ抗体、ＩｇＧ２ａを有する１つの親ｍＡｂと、ラットＩｇＧ２ｂ定常領域を有する第２の親ｍＡｂとの間のＦａｂアーム交換を促進し、キメラ二重特異性抗体をもたらす。
【０３６０】
「ノブ−イン−ホール」戦略（例えば、国際公開第２００６／０２８９３６号を参照されたい）を使用して、完全長二重特異性抗体を生成することができる。簡潔に、ヒトＩｇＧにおけるＣＨ３ドメインの界面を形成する選択されたアミノ酸は、ヘテロ二量体形成を促進するために、ＣＨ３ドメイン相互作用に影響を及ぼす位置において変異され得る。小さな側鎖を有するアミノ酸（ホール）が、第１の抗原に特異的に結合する抗体の重鎖内に導入され、大きな側鎖を有するアミノ酸（ノブ）が、第２の抗原に特異的に結合する抗体の重鎖内に導入される。２つの抗体の共発現後に、ヘテロ二量体が、「ホール」を有する重鎖と「ノブ」を有する重鎖との優先的な相互作用の結果として形成される。ノブ及びホールを形成する例示的なＣＨ３置換ペアは、Ｔ３６６Ｙ／Ｆ４０５Ａ、Ｔ３６６Ｗ／Ｆ４０５Ｗ、Ｆ４０５Ｗ／Ｙ４０７Ａ、Ｔ３９４Ｗ／Ｙ４０７Ｔ、Ｔ３９４Ｓ／Ｙ４０７Ａ、Ｔ３６６Ｗ／Ｔ３９４Ｓ、Ｆ４０５Ｗ／Ｔ３９４Ｓ、及びＴ３６６Ｗ／Ｔ３６６Ｓ＿Ｌ３６８Ａ＿Ｙ４０７Ｖである（第１の重鎖の第１のＣＨ３ドメインにおける改変位置／第２の重鎖の第２のＣＨ３ドメインにおける改変位置として表現）。
【０３６１】
ＣｒｏｓｓＭＡｂ技術を使用して、本発明の完全長二重特異性抗体を生成することができる。ＣｒｏｓｓＭＡｂは、「ノブ−イン−ホール」戦略を利用してＦａｂアーム交換を促進することに加えて、半アームのうちの１つに、得られる二重特異性抗体の正しい軽鎖対形成を保証するために交換されたＣＨ１及びＣＬドメインを有する（例えば、米国特許第８，２４２，２４７号を参照されたい）。
【０３６２】
他の交差戦略を使用して、一方のアーム又は両方のアームのいずれかにおける、重鎖と軽鎖との間若しくは二重特異性抗体の重鎖内の、変数若しくは定数、又は両方のドメインを交換することによって、完全長二重特異性抗体を生成することができる。これらの交換としては、例えば、国際特許公開第２００９／０８０２５４号、同第２００９／０８０２５１号、同第２００９／０１８３８６号、及び同第２００９／０８０２５２号に記載されるＶＨ−ＣＨ１とＶＬ−ＣＬ、ＶＨとＶＬ、ＣＨ３とＣＬ、及びＣＨ３とＣＨ１が挙げられる。
【０３６３】
他の戦略、例えば、あるＣＨ３表面における正に荷電した残基及び第２のＣＨ３表面における負に荷電した残基を置換することによる静電的相互作用を使用する重鎖ヘテロ二量体化の促進が、米国特許出願公開第２０１０／００１５１３３号、米国特許出願公開第２００９／０１８２１２７号、米国特許出願公開第２０１０／０２８６３７号、又は米国特許出願公開第２０１１／０１２３５３２号に記載されるように使用されてもよい。他の戦略では、ヘテロ二量体化は、米国特許出願公開第２０１２／０１４９８７６号又は米国特許出願公開第２０１３／０１９５８４９号に記載されるように、下記置換：Ｌ３５１Ｙ＿Ｆ４０５Ａ＿Ｙ４０７Ｖ／Ｔ３９４Ｗ、Ｔ３６６Ｉ＿Ｋ３９２Ｍ＿Ｔ３９４Ｗ／Ｆ４０５Ａ＿Ｙ４０７Ｖ、Ｔ３６６Ｌ＿Ｋ３９２Ｍ＿Ｔ３９４Ｗ／Ｆ４０５Ａ＿Ｙ４０７Ｖ、Ｌ３５１Ｙ＿Ｙ４０７Ａ／Ｔ３６６Ａ＿Ｋ４０９Ｆ、Ｌ３５１Ｙ＿Ｙ４０７Ａ／Ｔ３６６Ｖ＿Ｋ４０９Ｆ＿Ｋ４０９Ｆ＿Ｙ４０７Ａ／Ｔ３６６Ａ＿Ｋ４０９Ｆ、又はＴ３５０Ｖ＿Ｌ３５１Ｙ＿Ｆ４０５Ａ＿Ｙ４０７Ｖ／Ｔ３５０Ｖ＿Ｔ３６６Ｌ＿Ｋ３９２Ｌ＿Ｔ３９４Ｗ（第１の重鎖の第１のＣＨ３ドメインにおける修飾位置／第２の重鎖の第２のＣＨ３ドメインにおける修飾位置として表現）により促進されてもよい。
【０３６４】
ＬＵＺ−Ｙ技術を利用して、二重特異性抗体を生成することができる。この技術では、ロイシンジッパーをＣＨ３ドメインのＣ末端に付加して、Ｗｒａｎｉｋ  ｅｔ  ａｌ．，（２０１２）Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ  ２８７（５２）：４２２２１〜９に記載されるように、精製後に除去される親ｍＡｂからヘテロ二量体アセンブリを駆動する。
【０３６５】
ＳＥＥＤｂｏｄｙ技術を利用して、二重特異性抗体を生成することができる。ＳＥＥＤｂｏｄｙは、それらの定常ドメインにおいて、米国特許第２００７／０２８７１７０号に記載されるように、ヘテロ二量体化を促進するためにＩｇＡ残基で置換された選択ＩｇＧ残基を有する。
【０３６６】
二重特異性抗体は、国際特許出願公開第２０１１／１３１７４６号に記載の方法に従って、２つの単一特異性ホモ二量体抗体のＣＨ３領域に非対称な変異を導入し、ジスルフィド結合を異性化させる還元条件下で、２つの親単一特異性ホモ二量体抗体から二重特異性ヘテロ二量体抗体を形成することによって、セルフリー環境においてインビトロで生成されてもよい。この方法においては、第１の単一特異性二価抗体及び第２の単一特異性二価抗体は、ヘテロ二量体の安定性を促進するＣＨ３ドメインにおける特定の置換を有するように操作されるが、これらの抗体を、ヒンジ領域におけるシステインがジスルフィド結合異性化を受けるのに十分な還元条件下において共にインキュベートすることで、Ｆａｂアーム交換により二重特異性抗体が生成される。使用され得る置換は、１つの重鎖においてＦ４０５Ｌ、もう１つの重鎖においてＫ４０９Ｒである。インキュベート条件は、最適には、非還元条件に戻されてもよい。使用され得る例示的な還元剤は、２−メルカプトエチルアミン（２−ＭＥＡ）、ジチオスレイトール（ＤＴＴ）、ジチオエリスリトール（ＤＴＥ）、グルタチオン、トリス（２−カルボキシエチル）ホスフィン（ＴＣＥＰ）、Ｌ−システイン、及びβ−メルカプトエタノールである。例えば、少なくとも２０℃の温度において、少なくとも２５ｍＭの２−ＭＥＡの存在下又は少なくとも０．５ｍＭのジチオスレイトールの存在下で、ｐＨ５〜８、例えば、ｐＨ７．０又はｐＨ７．４において、少なくとも９０分のインキュベートを使用することができる。
【０３６７】
置換は、典型的には、標準方法を使用して抗体の定常ドメインなどの分子に対してＤＮＡレベルで行われる。
【０３６８】
本発明の抗体は、様々な周知の抗体形態に設計されてもよい。
【０３６９】
いくつかの実施形態では、二重特異性抗体としては、組換えＩｇＧ様二重標的分子（分子の２つの側が各々、少なくとも２つの異なる抗体のＦａｂ断片又はＦａｂ断片の一部を含有する）、ＩｇＧ融合分子（完全長ＩｇＧ抗体が、余分のＦａｂ断片又はＦａｂ断片の一部に融合される）、Ｆｃ融合分子（一本鎖Ｆｖ分子又は安定化された二重特異性抗体が、重鎖定常ドメイン、Ｆｃ領域、又はその一部に融合される）、Ｆａｂ融合分子（異なるＦａｂ断片が１つに融合される）、ＳｃＦｖ及び二重特異性抗体に基づく抗体及び重鎖抗体（例えば、ドメイン抗体、ナノボディ）（異なる一本鎖Ｆｖ分子又は異なる二重特異性抗体又は異なる重鎖抗体（例えば、ドメイン抗体、ナノボディ）を互いに融合するか、又は別のタンパク質若しくは担体分子に融合する）が挙げられる。
【０３７０】
ポリヌクレオチド、ベクター、宿主細胞
本発明は、本発明の抗体重鎖可変領域のいずれか、抗体軽鎖可変領域のいずれか、又は抗体重鎖及び／若しくは抗体軽鎖のいずれかをコードする単離されたポリヌクレオチドも提供する。
【０３７１】
本発明は、配列番号１１、２１、２２、２３、２４、２５、又は２６のＶＨをコードする、単離されたポリヌクレオチドも提供する。
【０３７２】
本発明は、配列番号１２又は２７のＶＬをコードする、単離されたポリヌクレオチドも提供する。
【０３７３】
本発明は、配列番号１１、２１、２２、２３、２４、２５、又は２６のＶＨ、及び配列番号１２又は２７のＶＬをコードする、単離されたポリヌクレオチドも提供する。
【０３７４】
本発明は、配列番号１３、１４、２８、２９、３０、３１、３２、３３、又は３４のポリヌクレオチド配列を含む、単離されたポリヌクレオチドも提供する。
【０３７５】
本発明は、配列番号３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、又は４６の重鎖をコードする、単離されたポリヌクレオチドも提供する。
【０３７６】
本発明は、配列番号７７又は７８の軽鎖をコードする、単離されたポリヌクレオチドも提供する。
【０３７７】
本発明は、配列番号３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、又は４６重鎖及び配列番号７７又は７８の軽鎖をコードする、単離されたポリヌクレオチドも提供する。
【０３７８】
本発明は、配列番号３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、７７、又は７８のポリヌクレオチド配列を含む、単離されたポリヌクレオチドも提供する。
【０３７９】
本発明の抗体のＶＨ若しくはＶＬ又はそれらの断片をコードするポリヌクレオチド配列、あるいは本発明の抗体の重鎖及び軽鎖は、意図される宿主細胞におけるヌクレオチド配列の発現を可能にする、プロモータ又はエンハンサなどの１つ又は２つ以上の制御因子に操作可能に連結され得る。ポリヌクレオチドはｃＤＮＡであってよい。
【０３８０】
本発明は、本発明のポリヌクレオチドを含むベクターも提供する。そのようなベクターは、プラスミドベクター、ウイルスベクター、バキュロウイルス発現ベクター、トランスポゾンベースのベクター、又は任意の手段によって所与の生物又は遺伝子的バックグラウンドに本発明の合成ポリヌクレオチドを導入するのに適した任意の他のベクターであってよい。例えば、任意に定常領域に連結される本発明の抗体の軽鎖及び／又は重鎖可変領域をコードするポリヌクレオチドは、発現ベクターに挿入される。軽鎖及び／又は重鎖は、同じ又は異なる発現ベクターにクローン化され得る。免疫グロブリン鎖をコードするＤＮＡセグメントは、免疫グロブリンポリペプチドの発現を確実にする発現ベクター（複数可）内の制御配列に操作可能に連結されてよい。そのような制御配列は、シグナル配列、プロモータ（例えば、天然に会合する又は異種プロモータ）、エンハンサ因子、及び転写終結配列を含み、抗体を発現するように選択された宿主細胞と適合性があるように選択される。ベクターを適切な宿主内に組み込んだなら、組み込んだポリヌクレオチドがコードしているタンパク質を高レベルで発現させるのに適した条件下で宿主を維持する。
【０３８１】
いくつかの実施形態では、ベクターは、配列番号１３のポリヌクレオチドと、配列番号１４のポリヌクレオチドとを含む。
【０３８２】
いくつかの実施形態では、ベクターは、配列番号２８のポリヌクレオチドと、配列番号３４のポリヌクレオチドとを含む。
【０３８３】
いくつかの実施形態では、ベクターは、配列番号２９のポリヌクレオチドと、配列番号３４のポリヌクレオチドとを含む。
【０３８４】
いくつかの実施形態では、ベクターは、配列番号３０のポリヌクレオチドと、配列番号３４のポリヌクレオチドとを含む。
【０３８５】
いくつかの実施形態では、ベクターは、配列番号３１のポリヌクレオチドと、配列番号３４のポリヌクレオチドとを含む。
【０３８６】
いくつかの実施形態では、ベクターは、配列番号３２のポリヌクレオチドと、配列番号３４のポリヌクレオチドとを含む。
【０３８７】
いくつかの実施形態では、ベクターは、配列番号３３のポリヌクレオチドと、配列番号３４のポリヌクレオチドとを含む。
【０３８８】
いくつかの実施形態では、ベクターは、配列番号６５のポリヌクレオチドと、配列番号７７のポリヌクレオチドとを含む。
【０３８９】
いくつかの実施形態では、ベクターは、配列番号６６のポリヌクレオチドと、配列番号７８のポリヌクレオチドとを含む。
【０３９０】
いくつかの実施形態では、ベクターは、配列番号６７のポリヌクレオチドと、配列番号７８のポリヌクレオチドとを含む。
【０３９１】
いくつかの実施形態では、ベクターは、配列番号６８のポリヌクレオチドと、配列番号７８のポリヌクレオチドとを含む。
【０３９２】
いくつかの実施形態では、ベクターは、配列番号６９のポリヌクレオチドと、配列番号７８のポリヌクレオチドとを含む。
【０３９３】
いくつかの実施形態では、ベクターは、配列番号７０のポリヌクレオチドと、配列番号７８のポリヌクレオチドとを含む。
【０３９４】
いくつかの実施形態では、ベクターは、配列番号７１のポリヌクレオチドと、配列番号７８のポリヌクレオチドとを含む。
【０３９５】
いくつかの実施形態では、ベクターは、配列番号７２のポリヌクレオチドと、配列番号７８のポリヌクレオチドとを含む。
【０３９６】
いくつかの実施形態では、ベクターは、配列番号７３のポリヌクレオチドと、配列番号７８のポリヌクレオチドとを含む。
【０３９７】
いくつかの実施形態では、ベクターは、配列番号７４のポリヌクレオチドと、配列番号７８のポリヌクレオチドとを含む。
【０３９８】
いくつかの実施形態では、ベクターは、配列番号７５のポリヌクレオチドと、配列番号７８のポリヌクレオチドとを含む。
【０３９９】
いくつかの実施形態では、ベクターは、配列番号７６のポリヌクレオチドと、配列番号７８のポリヌクレオチドとを含む。
【０４００】
好適な発現ベクターは、典型的には、エピソームとして、又は宿主染色体ＤＮＡの不可欠な部分として、宿主生物において複製可能である。通常、発現ベクターは、所望のＤＮＡ配列で形質転換されたこれらの細胞の検出を可能にするため、アンピシリン耐性、ヒグロマイシン耐性、テトラサイクリン耐性、カナマイシン耐性、又はネオマイシン耐性などの選択マーカを含む。
【０４０１】
好適なプロモータ及びエンハンサ因子は、当該技術分野において既知である。真核細胞における発現について、例示的なプロモータとしては、軽鎖及び／又は重鎖免疫グロブリン遺伝子プロモータ及びエンハンサ因子、サイトメガロウイルス最初期プロモータ（cytomegalovirus immediate early promoter）、単純ヘルペスウイルスチミジンキナーゼプロモータ、ＳＶ４０初期及び後期プロモータ、レトロウイルス由来の長鎖末端反復配列に存在するプロモータ、マウスメタロチオネイン−Ｉプロモータ、並びに様々な当該技術分野に既知の組織特異的プロモータが挙げられる。適切なベクター及びプロモータの選択は、当業者の技量の範囲内である。
【０４０２】
数多くの好適なベクター及びプロモータが当業者に既知であり、多くは、対象とする組換え構築物を生成するために市販されている。例えば以下のベクターを提供する。細菌系：ｐＢｓ、ｐｈａｇｅｓｃｒｉｐｔ、ＰｓｉＸ１７４、ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔ  ＳＫ、ｐＢｓ  ＫＳ、ｐＮＨ８ａ、ｐＮＨ１６ａ、ｐＮＨ１８ａ、ｐＮＨ４６ａ（Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ，Ｌａ  Ｊｏｌｌａ，Ｃａｌｉｆ．，ＵＳＡ）；ｐＴｒｃ９９Ａ、ｐＫＫ２２３−３、ｐＫＫ２３３−３、ｐＤＲ５４０、及びｐＲＩＴ５（Ｐｈａｒｍａｃｉａ，Ｕｐｐｓａｌａ，Ｓｗｅｄｅｎ）。真核細胞系：ｐＷＬｎｅｏ、ｐＳＶ２ｃａｔ、ｐＯＧ４４、ＰＸＲ１、ｐＳＧ（Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ）ｐＳＶＫ３、ｐＢＰＶ、ｐＭＳＧ、及びｐＳＶＬ（Ｐｈａｒｍａｃｉａ）。
【０４０３】
本発明は、本発明の１つ又は２つ以上のベクターを含む宿主細胞も提供する。「宿主細胞」は、ベクターが導入された細胞を指す。宿主細胞という用語は、対象とする特定の細胞だけでなく、そのような細胞の子孫並びに対象とする特定の細胞から生成された安定した細胞株をも指すものと理解される。変異又は環境による影響のいずれかにより、後の世代において特定の修飾が生じる可能性があるため、そのような後代は親細胞と同一ではない可能性があるが、本明細書で使用される「宿主細胞」という用語の範囲内には依然として含まれる。そのような宿主細胞は、真核細胞、原核細胞、植物細胞、又は古細菌（archeal）細胞であってもよい。
【０４０４】
原核宿主細胞の例は、大腸菌、バチルス・ズブチルス（Bacillus subtilis）などの桿菌、及びサルモネラ（Salmonella）、セラチア（Serratia）、並びに様々なシュードモナス（Pseudomonas）種などの他の腸内細菌科のものである。酵母などの他の微生物も発現に有用である。好適な酵母宿主細胞の例は、サッカロミセス（Saccharomyces）（例えば、Ｓ．セレビジアエ（S. cerevisiae））及びピキア（Pichia）である。例示的な真核細胞は、哺乳動物、昆虫、鳥類、又は他の動物由来のものであってもよい。哺乳類真核細胞としては、不死化細胞株（例えばハイブリドーマ）又は骨髄腫細胞株（例えばＳＰ２／０（Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ）、Ｍａｎａｓｓａｓ、ＶＡ、ＣＲＬ−１５８１）、ＮＳ０（Ｅｕｒｏｐｅａｎ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｃｅｌｌ  Ｃｕｌｔｕｒｅｓ（ＥＣＡＣＣ）、Ｓａｌｉｓｂｕｒｙ，Ｗｉｌｔｓｈｉｒｅ，ＵＫ、ＥＣＡＣＣ  Ｎｏ．８５１１０５０３）、ＦＯ（ＡＴＣＣ  ＣＲＬ−１６４６）及びＡｇ６５３（ＡＴＣＣ  ＣＲＬ−１５８０）マウス細胞株）が挙げられる。例示的なヒト骨髄腫細胞株は、Ｕ２６６（ＡＴＴＣ  ＣＲＬ−ＴＩＢ−１９６）である。他の有用な細胞系としては、ＣＨＯ−Ｋ１ＳＶ（Ｌｏｎｚａ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃｓ（Ｗａｌｋｅｒｓｖｉｌｌｅ，ＭＤ））、ＣＨＯ−Ｋ１（ＡＴＣＣ  ＣＲＬ−６１）、又はＤＧ４４などの、チャイニーズハムスターの卵巣（ＣＨＯ）細胞に由来するものが挙げられる。
【０４０５】
本発明は、抗体が発現される条件下で本発明の宿主細胞を培養することと、この宿主細胞により生成された抗体を回収することと、を含む、本発明の抗体の生成方法も提供する。抗体を作製し、それらを精製する方法は既知である。合成されたら（化学的又は組換えのいずれか）、全抗体、それらの二量体、個々の軽鎖及び／若しくは重鎖、又はＶＨ及び／若しくはＶＬなどの他の抗体断片を、硫酸アンモニウム沈澱、親和性カラム、カラムクロマトグラフィー、高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）精製、ゲル電気泳動など（一般に、Ｓｃｏｐｅｓ，Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ（Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ，Ｎ．Ｙ．，（１９８２）を参照）などの標準的な手順により精製することができる。対象抗体は、実質的に純粋なものであってよく、例えば、細胞残屑、対象抗体以外の巨大分子などの混入物を含まず、例えば、純度が少なくとも約８０％〜８５％、純度が少なくとも約８５％〜９０％、純度が少なくとも約９０％〜９５％、又は純度が少なくとも約９８％〜９９％以上であり得る。
【０４０６】
本発明は、
抗体のＶＨをコードしている第１のポリヌクレオチドと、抗体のＶＬをコードしている第２のポリヌクレオチドと、を発現ベクターに組み込むことと、
宿主細胞を発現ベクターで形質転換させることと、
ＶＬ及びＶＨが発現し、抗体を形成する条件下で、培養培地中で宿主細胞を培養することと、
宿主細胞又は培養培地から抗体を回収することと、を含む、配列番号１のＣＤ４０に特異的に結合するアンタゴニスト抗体を産生する方法も提供する。
【０４０７】
本発明の特定のＶＨ配列又はＶＬ配列をコードしているポリヌクレオチドを、標準的な分子生物学的手法を使用して、ベクターに組み込むこともできる。宿主細胞の形質転換、培養、抗体発現、及び精製は、周知の方法を使用して行われる。
【０４０８】
治療方法
本発明のＣＤ４０に特異的に結合するアンタゴニスト抗体、例えば、抗体Ｃ４０Ｂ１６、Ｃ４０Ｂ１２４、Ｃ４０Ｂ１３５、Ｃ４０Ｂ１２５、Ｃ４０Ｂ１３６、Ｃ４０Ｂ１２７、Ｃ４０Ｂ１３８、Ｃ４０Ｂ１３１、Ｃ４０Ｂ１７６、Ｃ４０Ｂ１８０、Ｃ４０Ｂ１７９、又はＣ４０Ｂ１８３を、任意の病態又は疾患の治療及び／又は予防に使用することもでき、ここでＣＤ４０の作用をアンタゴナイズすることは、治療上有効であり得、かつ疾患の症状を低減し得る。これらの例としては、自己免疫疾患などの炎症性疾患の治療が挙げられ、ここで耐性の誘導及び／又は体液性免疫の抑制が治療として望ましい。本発明の抗体で治療され得る疾患は、自己免疫疾患、アディソン病、強直性脊椎炎、アテローム性動脈硬化症、自己免疫性肝炎、自己免疫糖尿病、グレーブス病、ギラン・バレー症候群、橋本病、特発性血小板減少症、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）、全身性紅斑性狼瘡、多発性硬化症、重症筋無力症、乾癬、関節炎、強皮症、ショーグレン症候群、全身性硬化症、移植、腎移植、皮膚移植、骨髄移植、移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）、Ｉ型糖尿病、関節リウマチ、若年性関節炎、乾癬性関節炎、ライター症候群、強直性脊椎炎若しくは痛風性関節炎、クローン病、又は潰瘍性大腸炎である。
【０４０９】
本発明は、治療有効量の本発明の抗体を、関節炎を治療するのに十分な時間にわたって、関節炎の治療を必要としている対象に投与することを含む、関節炎の治療方法も提供する。
【０４１０】
いくつかの実施形態では、関節炎は、若年性関節炎、関節リウマチ、乾癬性関節炎、ライター症候群、強直性脊椎炎、又は痛風性関節炎である。
【０４１１】
本発明は、治療有効量の本発明の抗体を、狼瘡を治療するのに十分な時間にわたって、狼瘡の治療を必要としている対象に投与することを含む、狼瘡の治療方法も提供する。
【０４１２】
いくつかの実施形態では、狼瘡は、全身性紅斑性狼瘡（ＳＬＥ）又は皮膚エリテマトーデス（ＣＬＥ）である。
【０４１３】
いくつかの実施形態では、対象は、ループス腎炎を有する。
【０４１４】
いくつかの実施形態では、対象は、皮膚エリテマトーデスを有する。
【０４１５】
本発明は、治療有効量の本発明の抗体を、炎症性腸疾患を治療するのに十分な時間にわたって、炎症性腸疾患の治療を必要としている対象に投与することを含む、炎症性腸疾患の治療方法も提供する。
【０４１６】
いくつかの実施形態では、炎症性腸疾患は、クローン病である。
【０４１７】
いくつかの実施形態では、炎症性腸疾患は、潰瘍性大腸炎である。
【０４１８】
「治療」又は「治療する」は、治癒を目的とした処置（therapeutic treatment）を指す。治療を必要としている対象としては、障害を有すると診断されたか、又は疾患の症状のうちの少なくとも１つを経験している対象が挙げられる。治療され得る対象としては、障害を有する傾向があるもの又は障害に対し感受性を有するもののうち、かかる障害が予防され得るものも挙げることができる。有益な又は所望の臨床結果としては、検出可能であろうと又は検出不可能であろうと、症状の緩和、疾患の程度の軽減、安定した（すなわち、悪化しない）疾患状態、疾患の進行の遅延又は鈍化、疾患状態の改善又は緩和、及び寛解（部分的であろうと又は全体的であろうと）が挙げられる。有益な臨床結果としては、治療を受けた対象における、炎症性サイトカイン、接着分子、プロテアーゼ、免疫グロブリン、これらの組み合わせの減少、抗炎症性タンパク質の産生増大、自己反応性細胞数の低減、免疫寛容の増強、自己反応性細胞の生存阻害、及び／又はＣＤ４０を発現している細胞がＣＤ１５４による刺激を受けることで介在される１つ又は２つ以上の症状の低減が挙げられる。
【０４１９】
臨床応答は、磁気共鳴画像（ＭＲＩ）スキャン、Ｘ線透視撮影、コンピューター断層撮影（ＣＴ）スキャン、フローサイトメトリー、又は蛍光標示式細胞分取器（ＦＡＣＳ）分析、組織診断、肉眼所見、及びＥＬＩＳＡ、ＲＩＡ、及びクロマトグラフィーなどにより検出可能な変化を含むがこれらに限定されない血液化学法などといった、スクリーニング技術を使用して、評価され得る。
【０４２０】
本発明の方法を使用して任意の動物分類に属する対象を治療することができる。治療され得る対象の例としては、ヒト、齧歯類、イヌ、ネコ、及び家畜などの哺乳動物が挙げられる。
【０４２１】
本発明の抗体はまた、かかる治療のための薬剤の調製においても有用であり得るものであり、薬剤は、本明細書に定められる投薬量で投与するために調製される。
【０４２２】
本発明の抗体は、第２の治療剤と併用して投与され得る。
【０４２３】
第２の治療剤は、有用であることが知られている、あらゆる薬剤又は薬剤の組み合わせ、あるいはこれまで治療に使用されてきた又は現在使用されているものなどの、自己免疫疾患などの炎症性疾患のためのあらゆる既知の治療薬であり得る。このような治療法及び治療薬としては、外科術又は外科手技（例えば、脾摘出、リンパ節郭清、甲状腺摘除術、プラズマフェレーシス、白血球アフェレーシス（leukophoresis）、細胞、組織又は臓器移植、消化器外科手術（intestinal procedures）、及び臓器かん流など）、例えば、ステロイド療法及び非ステロイド療法、ホルモン療法、サイトカイン療法、皮膚病薬による治療（例えば、アレルギー、接触性皮膚炎、及び乾癬などの皮膚病態の治療に使用される外用薬）、免疫抑制療法、並びにその他の抗炎症性モノクローナル抗体療法などの治療法が挙げられる。
【０４２４】
第２の治療剤は、コルチコステロイド、免疫抑制剤、細胞毒性剤、又はＢ細胞調製剤であり得る。
【０４２５】
いくつかの実施形態では、本発明の抗体は、第２の治療薬と組み合わせて投与される。例示的な第２の治療薬は、コルチコステロイド、非ステロイド性抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）、サリチレート、ヒドロキシクロロキン、スルファサラジン、細胞毒性剤、免疫抑制剤、免疫調節機能のある抗体、メトトレキサート、シクロホスファミド、ミゾリビン、クロラムブシル、シクロスポリン、タクロリムス（ＦＫ５０６；ＰｒｏＧｒａｆｒＭ）、ミコフェノール酸モフェチル、及びアザチオプリン（６−メルカプトプリン）、シロリムス（ラパマイシン）、デオキシスパガリン、レフルノミド、及びそのマロノニトリロアミド（malononitriloamide）類似体、抗ＣＴＬＡ４抗体及びＩｇ融合体、抗Ｂリンパ球刺激因子抗体（例えば、ＬＹＭＰＨＯＳＴＡＴ−ＢＴＭ）及びＣＴＬＡ４−Ｉｇ融合、抗ＣＤ８０抗体、抗Ｔ細胞抗体、例えば、抗ＣＤ３（ＯＫＴ３）、抗ＣＤ４、コルチコステロイド、例えば、クロベタゾール、ハロベタゾール、ヒドロコルチゾン、トリアムシノロン、ベタメタゾン、フルオシノール（fluocinole）、フルオシノニド、プレドニゾン、プレドニゾロン、メチルプレドニゾロン、非ステロイド性抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）、例えば、スルファサラジン、メサラミン含有薬剤（５−ＡＳＡ剤として知られる）、セレコキシブ、ジクロフェナク、エトドラク、フェノプロフェン（fenprofen）、フルルビプロフェン、イブプロフェン、ケトプロフェン、メクロフェナマート（meclofamate）、メロキシカム、ナブメトン、ナプロキセン、オキサプロジン、ピロキシカム、ロフェコキシブ、サリチラート、スリンダク、及びトルメチン、ホスホジエステラーゼ−４阻害剤、抗ＴＮＦγ抗体ＲＥＭＩＣＡＤＥ（登録商標）（インフリキシマブ）、ＳＩＭＰＯＮＩ（登録商標）（ゴリムマブ）、及びＨＵＭＩＲＡ（登録商標）（アダリムマブ）、サリドマイド、又はレナリドミドである。
【０４２６】
本発明の抗体は、第２の治療剤と組み合わせて、同時、順次、又は別々に投与することもできる。
【０４２７】
治療効果又はＲＡ（Treatment effectiveness or RA）は、米国リウマチ学会による診断基準、欧州リウマチ学会による診断基準、又は任意の他の診断基準により定義される臨床応答に基づき測定されるとおりの有効性を使用して、評価することができる。例えば、Ｆｅｌｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．（１９９５）Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  Ｒｈｅｕｍ．３８：７２７〜３５  ａｎｄ  ｖａｎ  Ｇｅｓｔｅｌ  ｅｔ  ａｌ．（１９９６）Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  Ｒｈｅｕｍ．３９：３４〜４０を参照されたい。
【０４２８】
投与／医薬組成物
本発明は、本発明のＣＤ４０に特異的に結合するアンタゴニスト抗体及び医薬的に許容される担体の医薬組成物も提供する。治療用途では、抗体本発明（the antibodies the invention）は、医薬的に許容される担体中の活性成分として有効量の抗体を含有する医薬組成物として調製することができる。「担体」とは、活性化合物と共に投与される希釈剤、補助剤、賦形剤、又はビヒクルを指す。そのようなビヒクルは、落花生油、大豆油、鉱物油、ゴマ油などの、石油、動物、植物、又は合成物起源のものを含む、水及び油などの液体であってよい。例えば、０．４％生理食塩水及び０．３％グリシンを使用してもよい。これらの溶液は滅菌され、一般には粒子状物質を含まない。これらは、通常の周知の滅菌技術（例えば、濾過）によって滅菌することができる。この組成物には、生理学的条件に近づけるために必要とされる医薬的に許容される補助物質、例えばｐＨ調整剤及び緩衝剤、安定化剤、増粘剤、潤滑剤及び着色剤などを含有させることができる。そのような医薬製剤中の本発明の分子又は抗体の濃度は幅広く異なってもよく、すなわち約０．５重量％未満から、通常は少なくとも約１重量％まで、最大で５重量％、１０重量％、１５重量％、２０重量％、２５重量％、３０重量％、３５重量％、４０重量％、４５重量％、又は５０重量％までであってよく、また、選択される具体的な投与方法に従って、必要とされる用量、流体体積、粘度などに主に基づいて選択される。好適なビヒクル及び製剤（他のヒトタンパク質、例えばヒト血清アルブミンを含む）は、例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ，２１ｓｔ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｔｒｏｙ，Ｄ．Ｂ．ｅｄ．，Ｌｉｐｉｎｃｏｔｔ  Ｗｉｌｌｉａｍｓ  ａｎｄ  Ｗｉｌｋｉｎｓ，Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ，ＰＡ  ２００６，Ｐａｒｔ  ５，Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｍａｎｕｆａｃｔｕｒｉｎｇ  ｐｐ６９１〜１０９２に記載され、特にｐｐ．９５８〜９８９を参照されたい。
【０４２９】
本発明の方法における本発明の抗体の投与方法は、当該技術分野において周知のように、非経口投与、例えば、皮内、筋肉内、腹腔内、静脈内若しくは皮下、経粘膜（経口、鼻腔内、膣内、及び直腸）、又は当業者に理解される他の手段などの任意の好適な経路であり得る。
【０４３０】
本発明の抗体を、任意の適当な経路によって、例えば、静脈内（ＩＶ）注入又はボーラス注射により非経口的に、筋肉内又は皮下又は腹腔内に対象に投与することができる。静脈内注入は、例えば、１５、３０、６０、９０、１２０、１８０、又は２４０分にわたって、あるいは１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、又は１２時間にわたって与えられてもよい。
【０４３１】
対象に与える用量は、治療される疾患を緩和するか又は少なくとも部分的に停止するのに十分（「治療的に有効な量」）であり、約０．００５ｍｇ／ｋｇ〜約１００ｍｇ／ｋｇ、例えば、約０．０５ｍｇ／ｋｇ〜約２０ｍｇ／ｋｇ又は約０．１ｍｇ〜約２０ｍｇ／ｋｇ、又は約１ｍｇ〜約２０ｍｇ／ｋｇ、又は約４ｍｇ／ｋｇ、約８ｍｇ／ｋｇ、約１６ｍｇ／ｋｇ、又は約２４ｍｇ／ｋｇ、あるいは、例えば１、２、３、４、５、６、７、８、９又は１０ｍｇ／ｋｇであってもよいが、更により高い量、例えば、約１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、又は１００ｍｇ／ｋｇであってもよい。
【０４３２】
例えば、５０、１００、２００、５００、若しくは１０００ｍｇの固定単位用量を与えても、又は患者の表面積に基づいて例えば、５００、４００、３００、２５０、２００、若しくは１００ｍｇ／ｍ２の用量で与えてもよい。通常、１〜８用量（例えば、１、２、３、４、５、６、７、又は８）が関節リウマチなどの自己免疫疾患などの炎症性疾患を治療するために投与され得るが、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、又はそれよりも多い用量を与えてもよい。
【０４３３】
本発明の抗体の投与は、１日、２日、３日、４日、５日、６日、１週間、２週間、３週間、１ヶ月、５週間、６週間、７週間、２ヶ月、３ヶ月、４ヶ月、５ヶ月、６ヶ月後に、又はそれ以上後に繰り返すことができる。治療過程を繰り返すことも可能であり、長期にわたる投与も同様に可能である。繰り返し投与は、同一用量であるか、又は異なる用量であってよい。例えば、本発明の抗体は、０．１ｍｇ／ｋｇ、１ｍｇ／ｋｇ、５ｍｇ／ｋｇ、８ｍｇ／ｋｇ、又は１６ｍｇ／ｋｇで１週間間隔で８週間にわたり投与され、８ｍｇ／ｋｇ又は少なくとも１６ｍｇ／ｋｇで２週間毎に更に１６週間の投与が続き、その後、４週間毎に８ｍｇ／ｋｇ又は１６ｍｇ／ｋｇの静脈内注入による投与を続けて行うことができる。
【０４３４】
本発明の抗体は、例えば、週１回、月１回、２ヶ月に１回、３ヶ月に１回、４ヶ月に１回、５ヶ月に１回、又は６ヶ月に１回、１年若しくは２年以上にわたるなど、維持療法によって提供されてもよい。
【０４３５】
例えば、本発明の抗体は、単回投与、若しくは、２４、１２、８、６、４、若しくは２時間毎の分割投与を使用して、又はこれらの併用を使用して、約０．１〜１００ｍｇ／ｋｇの量の１日用量として、例えば、１日当たり０．５、０．９、１．０、１．１、１．５、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、４０、４５、５０、６０、７０、８０、９０、又は１００ｍｇ／ｋｇで、治療開始後、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、又は４０日目のうちの少なくとも１日に、又は代替的に、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、又は２０週目のうちの少なくとも１週に、あるいはこれらの組み合わせで提供されてもよい。
【０４３６】
本発明の抗体は、疾患を発達させるリスクを低減する、及び／又は治療される疾患の発症を遅らせるために、予防的に投与されてもよい。
【０４３７】
筋肉内注射用の本発明の例示的な医薬組成物は、１ｍＬの滅菌緩衝水と、約１ｎｇ〜約１００ｍｇ／ｋｇ、例えば約５０ｎｇ〜約３０ｍｇ／ｋｇ、又は約５ｍｇ〜約２５ｍｇ／ｋｇの本発明の抗体とを含むように調製することができる。
【０４３８】
静脈内注入用の本発明の例示的な医薬組成物は、８０ｋｇの患者に投与する際には、約２００ｍＬの減菌リンガー液と、約８ｍｇ〜約２４００ｍｇ、約４００ｍｇ〜約１６００ｍｇ、又は約４００ｍｇ〜約８００ｍｇの本発明の抗体とを含むように作製することができる。非経口的に投与可能な組成物を調製する方法は周知のものであり、例えば、「Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅ」（１５ｔｈ  ｅｄ．，Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｅａｓｔｏｎ，ＰＡ）に、より詳細に記載されている。
【０４３９】
疾患の治療に有効な本発明の抗体の「治療有効量」は、標準的な研究技術によって決定することができる。例えば、インビトロアッセイを採用して至適用量範囲を特定する手立てとすることもできる。任意に、炎症性疾患などの疾患の治療において有効であり得る本発明の抗体の投与量は、当該技術分野において周知の関連する動物モデルに抗体を投与することによって決定することができる。具体的な有効量の選択は、当業者であればいくつかの因子を考慮し（例えば臨床試験によって）決定することができる。このような因子には、治療又は予防しようとする疾患、疾患症状、患者の体重、患者の免疫状態、及び当業者には公知のその他の因子が含まれる。正確な用量は、投与経路、及び疾患の重篤度によって決まり、医師の判断及び各患者の状況に基づいて決定されなければならない。有効量は、インビトロ又は動物モデル試験系から導出される用量反応曲線から推定することができる。本発明の抗体の有効性及び有効量について、本明細書に記載したモデルのいずれかを使用して試験することができる。
【０４４０】
本発明の抗体を、保管のために凍結乾燥し、使用前に好適な担体に溶解させてもよい。この技術は、通常のタンパク調製物に関して有効であることが示されており、周知の凍結乾燥法及び再構成技術を用いることができる。
【０４４１】
抗イディオタイプ抗体
本発明は、本発明の抗体に結合する抗イディオタイプ抗体を提供する。
【０４４２】
本発明は、配列番号１１のＶＨと、配列番号１２のＶＬとを含む抗体に特異的に結合する抗イディオタイプ抗体も提供する。
【０４４３】
本発明は、配列番号２１のＶＨと、配列番号２７のＶＬとを含む抗体に特異的に結合する抗イディオタイプ抗体も提供する。
【０４４４】
本発明はまた、配列番号２２のＶＨと、配列番号２７のＶＬとを含む抗体に特異的に結合する抗イディオタイプ抗体を提供する。
【０４４５】
本発明はまた、配列番号２３のＶＨと、配列番号２７のＶＬとを含む抗体に特異的に結合する抗イディオタイプ抗体を提供する。
【０４４６】
本発明はまた、配列番号２４のＶＨと、配列番号２７のＶＬとを含む抗体に特異的に結合する抗イディオタイプ抗体を提供する。
【０４４７】
本発明はまた、配列番号２５のＶＨと、配列番号２７のＶＬとを含む抗体に特異的に結合する抗イディオタイプ抗体を提供する。
【０４４８】
本発明はまた、配列番号２６のＶＨと、配列番号２７のＶＬとを含む抗体に特異的に結合する抗イディオタイプ抗体を提供する。
【０４４９】
抗イディオタイプ（Ｉｄ）抗体は、抗体の抗原決定基（例えば、パラトープ又はＣＤＲ）を認識する抗体である。Ｉｄ抗体は、抗原をブロッキングするものであっても、しないものであってもよい。抗原をブロッキングするＩｄを使用して、試料中の未結合の抗体（例えば、本明細書に記載の本発明のＣＤ４０抗体）を検出することもできる。ブロッキングしないＩｄを使用して、試料中の全ての抗体（未結合のもの、抗原に一部結合しているもの、又は抗原に完全に結合しているもの）を検出することもできる。Ｉｄ抗体は、抗Ｉｄが調製される抗体で動物を免疫することにより調製することができる。
【０４５０】
抗Ｉｄ抗体を、更に別の動物で免疫応答を誘導する免疫原として使用して、いわゆる抗−抗Ｉｄ抗体を産生させてもよい。抗−抗Ｉｄは、抗Ｉｄを誘導する元のｍＡｂとエピトープが同一であってもよい。したがって、ｍＡｂのイディオタイプ決定基に対する抗体を使用することによって、同じ特異性の抗体を発現する他のクローンを同定することが可能である。抗Ｉｄ抗体は、任意の好適な技術によって変化（それにより、抗Ｉｄ抗体変異体を産生する）、及び／又は誘導体化することができる。
【０４５１】
免疫複合体（Immunoconjugates）
「免疫複合体」は、１つ又は２つ以上の異種分子（複数可）と融合させた本発明の抗体を指す。
【０４５２】
いくつかの実施形態では、本発明の抗体を、１種又は２種以上の細胞毒性剤又は造影剤と複合する。
【０４５３】
例示的な細胞毒性剤としては、化学療法剤又は薬物、増殖阻害剤、毒素（例えば、タンパク質毒素、細菌、真菌、植物、若しくは動物由来の酵素活性を有する毒素、又はそれらの断片）、及び放射性同位体が挙げられる。
【０４５４】
細胞毒性剤は、マヤタンシノイドなどの１種又は２種以上の薬物（例えば、米国特許第５，２０８，０２０号、同第５，４１６，０６号を参照されたい）、モノメチルオーリスタチン薬剤部分ＤＥ及びＤＦ（ＭＭＡＥ及びＭＭＡＦ）などのオーリスタチン（例えば、米国特許第５，６３５，４８３号、及び同第５，７８０，５８８号、及び同第７，４９８，２９８号を参照されたい）、ドラスタチン、カリチアマイシン、又はこれらの誘導体（例えば、米国特許第５，７１２，３７４号、同第５，７１４，５８６号、同第５，７３９，１１６号、同第５，７６７，２８５号、同第５，７７０，７０１号、同第５，７７０，７１０号、同第５，７７３，００１号、及び同第５，８７７，２９６号；Ｈｉｎｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９３）Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ  ５３：３３３６〜３３４２；ａｎｄ  Ｌｏｄｅ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９８）Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ  ５８：２９２５〜２９２８を参照されたい）；ダウノマイシン又はドキソルビシンなどのアントラサイクリン（例えば、Ｋｒａｔｚ  ｅｔ  ａｌ．，（２００６）Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ  １３：４７７〜５２３；Ｊｅｆｆｒｅｙ  ｅｔ  ａｌ．，（２００６）Ｂｉｏｏｒｇａｎｉｃ  ＆  Ｍｅｄ  Ｃｈｅｍ  Ｌｅｔｔｅｒｓ  １６：３５８〜３６２；Ｔｏｒｇｏｖ  ｅｔ  ａｌ．，（２００５）Ｂｉｏｃｏｎｊ  Ｃｈｅｍ  １６：７１７〜７２１；Ｎａｇｙ  ｅｔ  ａｌ．，（２０００）Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ  ９７：８２９〜８３４；Ｄｕｂｏｗｃｈｉｋ  ｅｔ  ａｌ，Ｂｉｏｏｒｇ．＆  Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔｅｒｓ  １２：１５２９〜１５３２（２００２）；Ｋｉｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，（２００２）Ｊ  Ｍｅｄ  Ｃｈｅｍ  ４５：４３３６〜４３４３；並びに米国特許第６，６３０，５７９号を参照されたい）、メトトレキサート、ビンデシン、タキサン、例えば、ドセタキセル、パクリタキセル、ラロタキセル、テセタキセル、及びオルタタキセルなどであり得る。
【０４５５】
細胞毒性剤は、ジフテリアＡ鎖、ジフテリア毒素の未結合活性断片、エキソトキシンＡ鎖（シュードモナス・エルジノーサ（Pseudomonas aeruginosa））、リシンＡ鎖、アブリンＡ鎖、モデシンＡ鎖、α−サルシン、シナアブラギリ（Aleurites fordii）タンパク質、ジアンチンタンパク質、ヨウシュヤマゴボウ（Phytolaca americana）タンパク質（ＰＡＰＩ、ＰＡＰＩＩ、及びＰＡＰ−Ｓ）、ニガウリ（momordica charantia）阻害剤、クルシン、クロチン、サボン草（sapaonaria officinalis）阻害剤、ゲロニン、マイトジェリン（mitogellin）、レストリクトシン、フェノマイシン、エノマイシン、並びにトリコテセン（tricothecenes）などの、酵素活性毒素又はその断片であってもよい。
【０４５６】
細胞毒性剤又は造影剤は、放射性核種であってもよい。例示的な放射線核種としては、Ａｃ−２２５、Ａｔ−２１１、Ｉ−１３１、Ｉ−１２５、Ｙ−９０、Ｒｅ−１８６、Ｒｅ−１８８、Ｓｍ−１５３、Ｂｉ−２１２、Ｐ−３２、Ｐｂ−２１２、及び放射性同位元素Ｌｕが挙げられる。放射性複合体を検出に使用する場合、シンチグラフ検査用の放射線原子、例えば、Ｔｃ９９ｍ若しくはＩ−１２３、又はＩ−１２３、Ｉ−１３１、Ｉｎ−１１１、Ｆ−１９、Ｃ−１３、Ｎ−１５、又はＯ−１７などの核磁気共鳴（ＮＭＲ）画像法（磁気共鳴画像法、ｍｒｉとしても知られる）用のスピン標識を含み得る。
【０４５７】
本発明の抗体と、異種分子との複合体は、Ｎ−スクシンイミジル−３−（２−ピリジルジチオ）プロピオナート（ＳＰＤＰ）、スクシンイミジル−４−（Ｎ−マレイミドメチル）シクロヘキサン−１−カルボキシレート（ＳＭＣＣ）、イミノチオラン（ＩＴ）、イミドエステルの二官能性誘導体（ジメチルアジピミダートＨＱなど）、活性エステル（例えば、ジスクシンイミジル基質）、アルデヒド（グルタルアルデヒドなど）、ビス−アジド化合物（例えば、ビス（ｐ−アジドベンゾイル）ヘキサンジアミン）、ビス−ジアゾニウム誘導体（例えば、ビス−（ｐ−ジアゾニウムベンゾイル）エチレンジアミン）、ジイソシアネート（例えば、トルエン−２，６−ジイソシアネート）、及びビス活性（bis−active）フッ素化合物（例えば、１，５−ジフルオロ−２，４−ジニトロベンゼン）などの様々な二官能性タンパク質カップリング剤を使用して作製することができる。例えば、リシン免疫毒素は、Ｖｉｔｅｔｔａ  ｅｔ  ａｌ．，（１９８７）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２３８：１０９８に記載のとおりに調製することができる。炭素１４で標識した１−イソチオシアナトベンジル−３−メチルジエチレントリアミン五酢酸（ＭＸ−ＤＴＰＡ）は放射性核種を抗体に融合させるにあたり例示的なキレート剤である。例えば、国際公開第９４／１１０２６号を参照されたい。リンカーは、細胞中で細胞毒性剤を放出するのを促進する「分解可能なリンカー（cleavable linker）」とすることができる。例えば、酸不安定性リンカー、ペプチダーゼ感受性リンカー、光不安定性リンカー、ジメチルリンカー、又はジスルフィド含有リンカー（Ｃｈａｒｉ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９２）Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ  ５２：１２７〜１３１；米国特許第５，２０８，０２０号）を使用することができる。
【０４５８】
本発明の抗体及び異種分子の複合体は、市販（例えば、Ｐｉｅｒｃｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｉｎｃ．，（Ｒｏｃｋｆｏｒｄ，ＩＬ．，Ｕ．Ｓ．Ａ）から）のＢＭＰＳ、ＥＭＣＳ、ＧＭＢＳ、ＨＢＶＳ、ＬＣ−ＳＭＣＣ、ＭＢＳ、ＭＰＢＨ、ＳＢＡＰ、ＳＩＡ、ＳＩＡＢ、ＳＭＣＣ、ＳＭＰＢ、ＳＭＰＨ、スルホ−ＥＭＣＳ、スルホ−ＧＭＢＳ、スルホ−ＫＭＵＳ、スルホ−ＭＢＳ、スルホ−ＳＩＡＢ、スルホ−ＳＭＣＣ、及びスルホ−ＳＭＰＢ、並びにＳＶＳＢ（スクシンイミジル−（４−ビニルスルホン）ベンゾアート）などの架橋剤により調製することができる。
【０４５９】
本発明は、治療薬又は造影剤に結合させた、配列番号１のＣＤ４０に特異的に結合する抗体を含む、免疫複合体も提供する。
【０４６０】
診断用途及びキット
キット
本発明は、本発明のヒトＣＤ４０に特異的に結合するアンタゴニスト抗体を含むキットも提供する。
【０４６１】
このキットは、治療用途で、及び診断キットとして使用することができる。
【０４６２】
キットを使用して、生体試料中のＣＤ４０の存在を検出することができる。
【０４６３】
いくつかの実施形態では、キットは、本発明のヒトＣＤ４０に特異的に結合するアンタゴニスト抗体と、その抗体を検出するための試薬とを含む。キットは、使用説明書と、他の試薬、例えば、標識、治療剤、又は抗体をキレート化するか若しくは他の方法で標識若しくは治療剤に連結するために有用な薬剤、あるいは放射保護性組成物と、投与のための抗体を調製するためのデバイス又は他の材料と、医薬的に許容される担体と、対象に投与するためのデバイス又は他の材料と、を含む、１つ又は２つ以上の要素を含み得る。
【０４６４】
いくつかの実施形態では、キットは、容器内の本発明の抗体と、キットの使用説明書とを含む。
【０４６５】
いくつかの実施形態では、キット内の抗体は、標識化される。
【０４６６】
いくつかの実施形態では、キットは、抗体Ｃ４０Ｂ１６、Ｃ４０Ｂ１２４、Ｃ４０Ｂ１３５、Ｃ４０Ｂ１２５、Ｃ４０Ｂ１３６、Ｃ４０Ｂ１２７、Ｃ４０Ｂ１３８、Ｃ４０Ｂ１３１、Ｃ４０Ｂ１７６、Ｃ４０Ｂ１８０、Ｃ４０Ｂ１７９、又はＣ４０Ｂ１８３を含む。
【０４６７】
ＣＤ４０を検出する方法
本発明は、試料中のＣＤ４０を検出する方法であって、試料を得ることと、試料を本発明の抗体と接触させることと、試料中のＣＤ４０に結合された抗体を検出することと、を含む、方法も提供する。
【０４６８】
いくつかの実施形態では、試料は、尿、血液、血清、血漿、唾液、腹水、循環細胞、循環腫瘍細胞、組織会合していない細胞（すなわち、遊離細胞）、組織（例えば、外科手術的に切除された腫瘍組織、微小針吸引を含む生検）、組織学的調製物等に由来し得る。
【０４６９】
本発明の抗体は、既知の方法を使用して検出することができる。例示的な方法としては、蛍光若しくは化学発光標識、又は放射線標識を使用する抗体の直接標識化、あるいはビオチン、酵素、又はエピトープタグなどの容易に検出可能な部分の、本発明の抗体への取り付けが挙げられる。例示的な標識及び部分は、ルテニウム、１１１Ｉｎ−ＤＯＴＡ、１１１Ｉｎ−ジエチレントリアミン五酢酸（ＤＴＰＡ）、西洋わさびペルオキシダーゼ、アルカリホスファターゼ、及びベータガラクトシダーゼ、ポリヒスチジン（ＨＩＳタグ）、アクリジン染料、シアニン染料、フルオロン染料、オキサジン染料、フェナントリジン染料、ローダミン染料、Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ（登録商標）染料である。
【０４７０】
本発明の抗体は、試料中のＣＤ４０を検出するための各種のアッセイに使用されてもよい。例示的なアッセイは、ウェスタンブロット分析、ラジオイムノアッセイ、表面プラズモン共鳴、免疫蛍光測定法、免疫沈澱法、平衡透析法、免疫拡散法、電気化学発光（ＥＣＬ）免疫アッセイ、及び免疫組織化学法、蛍光発色細胞選別（ＦＡＣＳ）又はＥＬＩＳＡアッセイである。
【０４７１】
次に、本発明を以下の特定の非限定的な実施例を参照して説明する。
【０４７２】
一般的な材料及び方法
研究に使用される抗原の生成
標準方法を使用して、抗原のクローニング、発現、及び精製を行った。使用されるタンパク質のアミノ酸配列を下に示す。
【０４７３】
完全長ヒトＣＤ４０（ｈｕＣＤ４０）、配列番号１
ＭＶＲＬＰＬＱＣＶＬＷＧＣＬＬＴＡＶＨＰＥＰＰＴＡＣＲＥＫＱＹＬＩＮＳＱＣＣＳＬＣＱＰＧＱＫＬＶＳＤＣＴＥＦＴＥＴＥＣＬＰＣＧＥＳＥＦＬＤＴＷＮＲＥＴＨＣＨＱＨＫＹＣＤＰＮＬＧＬＲＶＱＱＫＧＴＳＥＴＤＴＩＣＴＣＥＥＧＷＨＣＴＳＥＡＣＥＳＣＶＬＨＲＳＣＳＰＧＦＧＶＫＱＩＡＴＧＶＳＤＴＩＣＥＰＣＰＶＧＦＦＳＮＶＳＳＡＦＥＫＣＨＰＷＴＳＣＥＴＫＤＬＶＶＱＱＡＧＴＮＫＴＤＶＶＣＧＰＱＤＲＬＲＡＬＶＶＩＰＩＩＦＧＩＬＦＡＩＬＬＶＬＶＦＩＫＫＶＡＫＫＰＴＮＫＡＰＨＰＫＱＥＰＱＥＩＮＦＰＤＤＬＰＧＳＮＴＡＡＰＶＱＥＴＬＨＧＣＱＰＶＴＱＥＤＧＫＥＳＲＩＳＶＱＥＲＱ
【０４７４】
ヒトＣＤ４０細胞外ドメイン（ｈｕＣＤ４０−ＥＣＤ）、配列番号２
ＥＰＰＴＡＣＲＥＫＱＹＬＩＮＳＱＣＣＳＬＣＱＰＧＱＫＬＶＳＤＣＴＥＦＴＥＴＥＣＬＰＣＧＥＳＥＦＬＤＴＷＮＲＥＴＨＣＨＱＨＫＹＣＤＰＮＬＧＬＲＶＱＱＫＧＴＳＥＴＤＴＩＣＴＣＥＥＧＷＨＣＴＳＥＡＣＥＳＣＶＬＨＲＳＣＳＰＧＦＧＶＫＱＩＡＴＧＶＳＤＴＩＣＥＰＣＰＶＧＦＦＳＮＶＳＳＡＦＥＫＣＨＰＷＴＳＣＥＴＫＤＬＶＶＱＱＡＧＴＮＫＴＤＶＶＣＧＰＱＤＲＬＲ
【０４７５】
カニクイザル（Macaca fascicularis）（本明細書においてカニクイザルとして呼称）のＣＤ４０（ｃＣＤ４０）、配列番号３
ＭＶＲＬＰＬＱＣＶＬＷＧＣＬＬＴＡＶＹＰＥＰＰＴＡＣＲＥＫＱＹＬＩＮＳＱＣＣＳＬＣＱＰＧＱＫＬＶＳＤＣＴＥＦＴＥＴＥＣＬＰＣＳＥＳＥＦＬＤＴＷＮＲＥＴＲＣＨＱＨＫＹＣＤＰＮＬＧＬＲＶＱＱＫＧＴＳＥＴＤＴＩＣＴＣＥＥＧＬＨＣＭＳＥＳＣＥＳＣＶＰＨＲＳＣＬＰＧＦＧＶＫＱＩＡＴＧＶＳＤＴＩＣＥＰＣＰＶＧＦＦＳＮＶＳＳＡＦＥＫＣＲＰＷＴＳＣＥＴＫＤＬＶＶＱＱＡＧＴＮＫＴＤＶＶＣＧＰＱＤＲＱＲＡＬＶＶＩＰＩＣＬＧＩＬＦＶＩＬＬＬＶＬＶＦＩＫＫＶＡＫＫＰＮＤＫＡＰＨＰＫＱＥＰＱＥＩＮＦＬＤＤＬＰＧＳＮＰＡＡＰＶＱＥＴＬＨＧＣＱＰＶＴＱＥＤＧＫＥＳＲＩＳＶＱＥＲＱ
【０４７６】
カニクイザルＣＤ４０細胞外ドメイン（ｃＣＤ４０−ＥＣＤ）、配列番号４
ＥＰＰＴＡＣＲＥＫＱＹＬＩＮＳＱＣＣＳＬＣＱＰＧＱＫＬＶＳＤＣＴＥＦＴＥＴＥＣＬ
ＰＣＳＥＳＥＦＬＤＴＷＮＲＥＴＲＣＨＱＨＫＹＣＤＰＮＬＧＬＲＶＱＱＫＧＴＳＥＴＤＴＩＣＴＣＥＥＧＬＨＣＭＳＥＳＣＥＳＣＶＰＨＲＳＣＬＰＧＦＧＶＫＱＩＡＴＧＶＳＤＴＩＣＥＰＣＰＶＧＦＦＳＮＶＳＳＡＦＥＫＣＲＰＷＴＳＣＥＴＫＤＬＶＶＱＱＡＧＴＮＫＴＤＶＶＣＧＰＱＤＲＱＲ
【０４７７】
可溶性ヒトＣＤ１５４、配列番号６０
ＭＱＫＧＤＱＮＰＱＩＡＡＨＶＩＳＥＡＳＳＫＴＴＳＶＬＱＷＡＥＫＧＹＹＴＭＳＮＮＬＶＴＬＥＮＧＫＱＬＴＶＫＲＱＧＬＹＹＩＹＡＱＶＴＦＣＳＮＲＥＡＳＳＱＡＰＦＩＡＳＬＣＬＫＳＰＧＲＦＥＲＩＬＬＲＡＡＮＴＨＳＳＡＫＰＣＧＱＱＳＩＨＬＧＧＶＦＥＬＱＰＧＡＳＶＦＶＮＶＴＤＰＳＱＶＳＨＧＴＧＦＴＳＦＧＬＬＫＬ
【０４７８】
完全長ヒトＣＤ１５４、配列番号６４
ＭＩＥＴＹＮＱＴＳＰＲＳＡＡＴＧＬＰＩＳＭＫＩＦＭＹＬＬＴＶＦＬＩＴＱＭＩＧＳＡＬＦＡＶＹＬＨＲＲＬＤＫＩＥＤＥＲＮＬＨＥＤＦＶＦＭＫＴＩＱＲＣＮＴＧＥＲＳＬＳＬＬＮＣＥＥＩＫＳＱＦＥＧＦＶＫＤＩＭＬＮＫＥＥＴＫＫＥＮＳＦＥＭＱＫＧＤＱＮＰＱＩＡＡＨＶＩＳＥＡＳＳＫＴＴＳＶＬＱＷＡＥＫＧＹＹＴＭＳＮＮＬＶＴＬＥＮＧＫＱＬＴＶＫＲＱＧＬＹＹＩＹＡＱＶＴＦＣＳＮＲＥＡＳＳＱＡＰＦＩＡＳＬＣＬＫＳＰＧＲＦＥＲＩＬＬＲＡＡＮＴＨＳＳＡＫＰＣＧＱＱＳＩＨＬＧＧＶＦＥＬＱＰＧＡＳＶＦＶＮＶＴＤＰＳＱＶＳＨＧＴＧＦＴＳＦＧＬＬ
【０４７９】
一次ヒト及びカニクイザル樹状細胞（ＤＣ）における結合アッセイ
ヒト単球を、製造元のプロトコル（ＭＡＣＳ  Ｍｉｌｔｅｎｙｉ）に従い、ＣＤ１４陰性単離キットを使用して、冷凍した／新鮮なＰＢＭＣのいずれかから単離した。カニクイザル単球を、製造元のプロトコル（ＭＡＣＳ  Ｍｉｌｔｅｎｙｉ）に従い、ＣＤ１４陽性単離キットを使用して、新鮮なＰＢＭＣから単離した。ＤＣを生成するために、１００ｎｇ／ｍＬヒトＧＭ−ＣＳＦ及びヒトＩＬ−４（Ｐｅｐｒｏｔｅｃｈ）の存在下、完全ＲＰＭＩ培地（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）内で単球を５日間培養し、培地を２日毎に補填した。５日目に、ＤＣを１００ｎｇ／ｍＬ  ＬＰＳ（Ｓｉｇｍａ）で２４時間刺激した。次いで細胞を、１００μＬ量のフローサイトメトリー緩衝液（ＰＢＳ＋１％  ＦＢＳ、ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）中の異なる濃度で、試験したＣＤ４０抗体の各々で３０分間氷上で染色した後、フロー緩衝液で２回洗浄した。次いで細胞を、推奨される希釈（１：１００）のＡＰＣ複合された抗ヒトＩｇＧ（Ｊａｃｋｓｏｎ  ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ）により氷上で更に３０分間染色し、フロー緩衝液で２回洗浄した。細胞を、陽性パーセント及び平均蛍光強度（ＭＦＩ）について分析し、Ｆｏｒｔｅｓｓａ（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）を使用して抗体結合を決定した。
【０４８０】
Ｒａｊｉ（Ｂ細胞リンパ球株）及びＨＥＫ−Ｂｌｕｅ（商標）ＣＤ４０Ｌ  ＮＦ−κＢ細胞株における結合アッセイ
Ｒａｊｉ細胞は、ＡＴＣＣから入手し、ＨＥＫ−Ｂｌｕｅ（商標）ＣＤ４０Ｌ  ＮＦ−κＢ細胞株は、Ｉｎｖｉｖｏｇｅｎから入手した。細胞を、企業の推奨に従い、完全ＲＰＭＩ培地中で培養した。一次ヒト及びカニクイザルＤＣにおける結合アッセイについて上記のように、染色を行った。
【０４８１】
ヒトＤＣ  ＩＬ−１２ｐ４０産生アッセイ
ヒトＤＣを、精製されたヒト単球（２．５×１０６／ウェルの６ウェルプレート）を６日間、グルタマックス、２５ｍＭ  ＨＥＰＥＳ、１０％  ＦＢＳ、１％  Ｐｅｎ／Ｓｔｒｅｐ、及び各５０ｎｇのＧＭ−ＣＳＦ及びＩＬ−４を含有する３ｍＬのＲＰＭＩ培地中で培養することによって生成した。３日目に、１ｍＬの培地を取り除き、各５０ｎｇ／ｍＬのＧＭ−ＣＳＦ及びＩＬ−４を含有する２ｍＬの新鮮な培地で置き換えた。アゴニストアッセイに関しては、６日目に、ＤＣを９６ウェルプレートに播種し（１００，０００細胞／ウェル）、続いてＣＤ４０抗体の各々を滴定した。アンタゴニストアッセイに関しては、６日目に、ＤＣを９６ウェルプレートに播種し（１００，０００細胞／ウェル）、続いてヒトＣＤ４０に特異的に結合する抗体の各々を滴定し、１μｇ／ｍＬの可溶性ヒトＣＤ１５４（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ）を培養物に添加した。両方のアッセイに関して、ＭＳＤによって（製造元の指示に従い）ＩＬ−１２ｐ４０の上澄みを収集及び分析する前に、細胞を４８時間培養した。Ｊｕｒｋａｔ  Ｄ１．１（ＡＴＣＣ）アンタゴニストアッセイに関しては、６日目に、ＤＣを９６ウェルプレートに播種し（１００，０００細胞／ウェル）、続いてＣＤ４０抗体の各々を滴定し、その後に照射したＪｕｒｋａｔ  Ｄ１．１細胞（１，０００ラド、１００，０００／ウェル）を培養物に添加した。ＭＳＤによってＩＬ−１２ｐ４０の上澄みを収集及び分析する前に、細胞を２４時間培養した。
【０４８２】
ヒトＢ細胞増殖アッセイ
ヒト扁桃Ｂ細胞を、グルタマックス、１０％  ＦＢＳ、及び１％  Ｐｅｎ／Ｓｔｒｅｐを含有するＲＰＭＩ培地中、９６ウェルプレート（１００，０００細胞／ウェル）に播種した。アゴニストアッセイに関しては、ＣＤ４０抗体の各々の滴定を細胞に添加し、４８時間培養した。アンタゴニストアッセイに関しては、ＣＤ４０抗体の各々の滴定を細胞に添加し、続いて０．５μｇ／ｍＬの可溶性ヒトＣＤ１５４（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ）を添加した。細胞を３７℃で４８時間培養した。Ｊｕｒｋａｔ  Ｄ１．１アンタゴニストアッセイに関しては、ＣＤ４０抗体の各々の滴定を、ＩＬ−２１（１００ｎｇ／ｍＬ最終、Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）と共に細胞に添加し、その後に照射したＪｕｒｋａｔ  Ｄ１．１細胞（５，０００ラド、１００，０００／ウェル）を培養物に添加し、３７℃で４８時間インキュベートした。全てのアッセイに関して、４８時間後に、細胞を５０μＬ培地中で３Ｈ−チミジン（１ｕＣｉ／ウェル）でパルス化し、採取及び計数前に１６〜１８時間培養した。
【０４８３】
カニクイザルＢ細胞増殖アッセイ
カニクイザル脾臓細胞を、グルタマックス、１０％  ＦＢＳ、及び１％  Ｐｅｎ／Ｓｔｒｅｐを含有するＲＰＭＩ培地中、９６ウェルプレート（１００，０００細胞／ウェル）に播種した。ＣＤ４０抗体の各々の滴定を細胞に添加し、続いて０．５μｇ／ｍＬの可溶性ヒトＣＤ１５４（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ）を添加した。細胞を３７℃で４８時間培養した。４８時間後に、細胞を５０μＬ培地中で３Ｈ−チミジン（１ｕＣｉ／ウェル）でパルス化し、採取及び計数前に１６〜１８時間培養した。
【０４８４】
ＨＥＫ−Ｂｌｕｅ（商標）ＣＤ４０Ｌ  ＮＦ−κＢ活性化アッセイ
ＨＥＫ−Ｂｌｕｅ（商標）ＣＤ４０Ｌ細胞株は、ヒトＣＤ４０及びＮＦ−κＢ誘導性の分泌された胚性アルカリホスファターゼ（ＳＥＡＰ）を安定して発現する。ＨＥＫ−Ｂｌｕｅ（商標）ＣＤ４０Ｌ細胞上のＣＤ４０の活性化は、下流シグナル伝達事象を誘導し、ＮＦ−κＢの活性化及びＳＥＡＰの分泌につながり、ＱＵＡＮＴＩ−Ｂｌｕｅ（商標）基質変換によって測定することができる。これらの細胞を使用して、抗体がＣＤ４０−ＣＤ１５４相互作用を遮断するか、又はＣＤ４０を活性化（アゴナイズ）する能力を評価した。
【０４８５】
ＨＥＫ−Ｂｌｕｅ  ＣＤ４０Ｌ細胞株におけるＣＤ４０依存性ＮＦ−ｋＢ活性化の阻害
供給メーカーのプロトコルに従って維持されたＨＥＫ−Ｂｌｕｅ（商標）ＣＤ４０細胞（Ｉｎｖｉｖｏｇｅｎ）を、１００μＬ容量で９６ウェル組織培養プレートに播種した（２．５×１０４細胞／ウェル）。アッセイプレートを被覆し、一晩インキュベートして（３７℃、５％  ＣＯ２）、細胞を回復させた。翌日、ｒｈＣＤ１５４−ＥＣＤ−Ｈｉｓ（８０ｎｇ／ｍＬ最終濃度）の４倍溶液及びＣＤ４０抗体の４倍溶液、又はＦａｂ（１〜２５μｇ／ｍＬ最終濃度）を予混合し、得られた２倍溶液を、細胞（２００μＬ／ウェル最終容量）を含有する９６ウェルアッセイプレートに添加した。１６〜２４時間のインキュベーション後に（３７℃、５％  ＣＯ−２）、４０μＬ分量の上澄みを、１６０μＬの予熱したＱＵＡＮＴＩ−Ｂｌｕｅ（商標）（Ｉｎｖｉｖｏｇｅｎ）溶液と混合し、６５０ｎｍで吸光度読取り値を得る前に３０〜６０分間インキュベートした。
【０４８６】
ＨＥＫ−Ｂｌｕｅ  ＣＤ４０Ｌ  ＮＦｋＢ−ＳＥＡＰ細胞株におけるＣＤ４０依存性ＮＦ−ｋＢ活性化
ＨＥＫ−Ｂｌｕｅ（商標）ＣＤ４０Ｌ細胞を、上記のように播種し、一晩回復させた。翌日、２倍ＣＤ４０抗体溶液（１〜２５μｇ／ｍＬ最終濃度）を、１００μＬ／ウェルでプレートに添加し、一晩インキュベートした（３７℃、５％  ＣＯ２）。１６〜２４時間のインキュベーション後（３７℃、５％  ＣＯ２）、４０μＬ分量の上澄みを、上記のように分析した。
【実施例】
【０４８７】
実施例１．ヒト免疫グロブリン遺伝子座を発現するラットを使用したヒトＣＤ４０に特異的に結合する抗体の単離
ヒト免疫グロブリンの遺伝子座を発現しているトランスジェニックラット、ＯｍｎｉＲａｔ（登録商標）；ＯＭＴ，Ｉｎｃを使用して、抗体を生成した。ＯｍｎｉＲａｔ（登録商標）の内在性イムノグロブリン遺伝子座は、ラットＣＨ遺伝子座に連結させたヒトＩｇκ及びＩｇλ遺伝子座と、ヒト由来のＶセグメント、Ｄセグメント、及びＪセグメントを有するヒト／ラットキメラＩｇＨ遺伝子座とにより置き換えられている。ＩｇＨ遺伝子座は、２２個のヒトＶＨセグメントと、全てのヒトＤセグメント及びＪＨセグメントとを天然の構成でラットＣＨ遺伝子座に連結して含有する。ＯｍｎｉＲａｔ（登録商標）の生成及び特性評価は、Ｏｓｂｏｒｎ，ｅｔ  ａｌ．Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １９０：１４８１〜１４９０，２０１３、及び国際公開第２０１４／０９３９０８号に記載されている。
【０４８８】
５匹のラットの別個の群を、組換えヒト及びカニクイザルＣＤ４０  ＥＣＤ−Ｈｉｓ又はヒト及びカニクイザルＣＤ４０  ＥＣＤ−Ｆｃタンパク質で免疫した。３１〜３４日間の免疫レジメン後、２匹のラットからリンパ節を摘出し、ハイブリドーマの生成に使用した。生成されたハイブリドーマを、ヒト及びカニクイザル両方のＣＤ４０−ＥＣＤへの結合についてスクリーニングした。ヒト及びカニクイザル両方のＣＤ４０−ＥＣＤへの統計的に有意な結合を呈するハイブリドーマに続いて、ダネットの平均比較事後検定による一元配置分散分析をクローン化し、標準手順を使用してそれらのＶ領域を配列決定した。
【０４８９】
実施例２．Ｃ４０Ｂ１６の操作
ＯｍｎｉＲａｔ（登録商標）を使用することによりＣ４０Ｂ１６を生成し、アンタゴニストが、ｒｈＣＤ１５４−ＥＣＤ−ｈｉｓ単独で処置されたＨＥＫ−Ｂｌｕｅ（商標）ＣＤ４０Ｌ細胞の平均シグナルの３標準偏差より低いシグナルを有していたという基準に基づいて、ＨＥＫ−Ｂｌｕｅ（商標）ＣＤ４０Ｌ  ＮＦ−κＢ活性化アッセイにおいてアンタゴニスト活性を有すると特定した。
【０４９０】
Ｃ４０Ｂ１６  ＶＨ及びＶＬを、標準方法を使用して配列決定し、フレームワーク配列を、潜在的な免疫原性リスクを特定する最も近い生殖系列遺伝子配列と比較した。Ｃ４０Ｂ１６  ＶＨアミノ酸配列は、ＩＧＨＶ３−２３（配列番号４９）に最も相同性であり、フレームワーク内に２アミノ酸変化を有していた。Ｃ４０Ｂ１６  ＶＬフレームワークは、ＩＧＬＶ３−１（配列番号５０）のものと同一であった。
【０４９１】
Ｃ４０Ｂ１６の可変領域を操作して、ＶＨ（配列番号１１に従う残基付番）内のＲ４３、Ｈ８２、Ｎ５２、Ｓ５４、及び／又はＭ１０８位において、並びにＶＬ（配列番号１２に従う残基付番）内のＣ３３位において変異を生成し、対形成していないシステインによって引き起こされた潜在的異質性を排除することによって、可能な免疫原性及び／又は発展性リスク（複数可）を低減した。生成されたＶＨ／ＶＬドメインを、エフェクタサイレントＦｃアイソフォームＩｇＧ１ｓｉｇｍａ又はＩｇＧ４ＰＡＡとしてクローン化した。ＩｇＧ１ｓｉｇｍａは、野生型ＩｇＧ１と比較して、変異Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｇ２３７Ａ、Ｐ２３８Ｓ、Ｈ２６８Ａ、Ａ３３０Ｓ、及びＰ３３１Ｓを含む。ＩｇＧ４ＰＡＡは、野生型ＩｇＧ４と比較して、変異Ｓ２２８Ｐ、Ｆ２３４Ａ、及びＬ２３５Ａを含む。残基付番は、ＥＵインデックスに準拠する。表３は、親Ｃ４０Ｂ１６  ｍＡｂと比較して、生成された抗体及び導入された変異を示す。親Ｃ４０Ｂ１６  ＶＬと比較して、全ての生成された抗体のＶＬにおいてＣ３３Ａ変異を操作した。
【０４９２】
表４は、抗体のＨＣＤＲ１及びＨＣＤＲ２アミノ酸配列を示す。
【０４９３】
表５は、抗体のＨＣＤＲ３及びＬＣＤＲ１アミノ酸配列を示す。
【０４９４】
表６は、抗体のＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３アミノ酸配列を示す。
【０４９５】
表７は、抗体のＶＨ及びＶＬ領域のアミノ酸及びｃＤＮＡ配列の配列番号を示す。
【０４９６】
表８は、抗体の重鎖及び軽鎖のアミノ酸配列の配列番号を示す。
【０４９７】
表９は、配列番号１１〜１４、２１〜５２、及び６５〜７８に対応するアミノ酸又はポリヌクレオチド配列を示す。
【０４９８】
【表３】
2018529351.tif 000005
【０４９９】
【表４】
2018529351.tif 000006
【０５００】
【表５】
2018529351.tif 000007
【０５０１】
【表６】
2018529351.tif 000008
【０５０２】
【表７】
2018529351.tif 000009
【０５０３】
【表８】
2018529351.tif 000010
【０５０４】
【表９−１】
2018529351.tif 000011
【０５０５】
【表９−２】
2018529351.tif 000012
【０５０６】
【表９−３】
2018529351.tif 000013
【０５０７】
【表９−４】
2018529351.tif 000014
【０５０８】
【表９−５】
2018529351.tif 000015
【０５０９】
【表９−６】
2018529351.tif 000016
【０５１０】
【表９−７】
2018529351.tif 000017
【０５１１】
【表９−８】
2018529351.tif 000018
【０５１２】
【表９−９】
2018529351.tif 000019
【０５１３】
【表９−１０】
2018529351.tif 000020
【０５１４】
【表９−１１】
2018529351.tif 000021
【０５１５】
【表９−１２】
2018529351.tif 000022
【０５１６】
【表９−１３】
2018529351.tif 000023
【０５１７】
実施例３．アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体の特徴付け
親Ｃ４０Ｂ１６及び操作された変異体を、抗体がヒト又はカニクイザルＢ細胞のヒト可溶性ＣＤ４０Ｌ（ｓｃＤ４０Ｌ）又は膜結合ＣＤ４０Ｌ（ｍＣＤ４０Ｌ）媒介性増殖を阻害する能力、及びヒトＤＣによるＩＬ−１２ｐ４０産生の阻害を含む、それらのアンタゴニスト活性について、一連のアッセイにおいて試験した。実施例１に記載されるプロトコルに従い、実験を行った。膜結合ＣＤ４０Ｌは、アッセイにおいてＪｕｒｋａｔ細胞上で提供された。
【０５１８】
全ての抗体は、実施したアッセイにおいてアンタゴニズムを明示した。
【０５１９】
表１０は、可溶性又は膜結合ＣＤ４０Ｌによって駆動されるＢ細胞増殖の阻害に対するＩＣ５０値を示す。表１１は、ヒト樹状細胞による可溶性又は膜結合ＣＤ４０Ｌによって駆動されるＩＬ−１２ｐ４０産生の阻害に対するＩＣ５０値を示す。
【０５２０】
【表１０】
2018529351.tif 000024
【０５２１】
【表１１】
2018529351.tif 000025
【０５２２】
ヒトＣＤ４０に対する抗体の親和性を、ＰｒｏｔｅＯｎ  ＸＰＲ３６システム（ＢｉｏＲａｄ）を使用する表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）を使用して、評価した。アミンカップリング化学反応についての製造元の使用説明書を使用し、抗ヒトＩｇＧ  Ｆｃ（Ｊａｃｋｓｏｎ  カタログ番号１０９−００５−０９８）を、ＧＬＣチップ（ＢｉｏＲａｄ，カタログ番号１７６−５０１１）の加工アルギン酸ポリマー層にカップリングさせて、バイオセンサ表面を調製した。約５０００ＲＵ（応答単位）のｍＡｂを固定化した。動態実験を、ランニング緩衝液（ＤＰＢＳ＋０．０１％Ｐ２０＋１００μｇ／ｍＬ  ＢＳＡ）中、２５℃で実施した。動態実験を実施するために、２００ＲＵのｍＡｂを補足し、続いて５濃度（４倍段階希釈）の分析種（ヒト又はカニクイザルＣＤ４０）を注入した。５０μＬ／分で３分間会合段階をモニタした後、１５分間緩衝液を流した（解離段階）。１００μＬ／分で１００ｍＭ  Ｈ３ＰＯ４（Ｓｉｇｍａ、カタログ番号７９６１）を１８秒間ずつ２回流してチップ表面を再生した。
【０５２３】
回収したデータはＰｒｏｔｅＯｎ  Ｍａｎａｇｅｒソフトウェアを使用して、加工した。まず、インタースポットを使用して、バックグラウンドについてデータを補正した。次に、分析物の注入のため緩衝液注入を使用して、データのダブルリファレンスサブトラクション（double reference subtraction）を行った。ラングミュア型の１：１結合モデルを使用して、データの速度論的分析を実施した。結果を、Ｋａ（会合速度）、Ｋｄ（解離速度）、及びＫＤ（平衡解離定数）の形で報告した。
【０５２４】
ヒトＣＤ４０に結合するためのｍＡｂの動態の要約を表１２に示す。この表で報告されるパラメータは、全ての試料の１：１のＬａｎｇｍｕｉｒ結合モデルから得た。親和性、ＫＤ＝ｋｄ／ｋａ。
【０５２５】
【表１２】
2018529351.tif 000026
【０５２６】
実施例４．ヒトＣＤ４０に特異的に結合するアンタゴニスト抗体は、ＣＤ４０／ＣＤ４０Ｌ経路の強力な阻害因子であり、最小アゴニスト活性を示す
４つのアンタゴニスト抗体（Ｃ４０Ｂ１７６、Ｃ４０Ｂ１７９、Ｃ４０Ｂ１８０、及びＣ４０Ｂ１８３）は、現在臨床開発において、抗ＣＤ４０抗体に対してベンチマークされている。比較に使用した抗体は、Ａｓｔｅｌｌａｓ／Ｋｉｒｉｎ  ＡＳＫＰ−１２４０（ＨＣ配列番号５３、ＬＣ配列番号５４、Ｓ２２８Ｐ及びＬ２３５Ｅ変異を有するＦｃサイレントＩｇＧ４）、抗体Ｄ（ＨＣ配列番号５５、ＬＣ配列番号５６、Ｌ２３４Ａ及びＬ２３５Ａ変異を有するＦｃサイレントＩｇＧ１、米国特許第８，５９１，９００号において抗体Ｂ  ＩｇＧ１ＫＯｂとして記載）、Ｎｏｖａｒｔｉｓ  ＣＦＺ５３３（ＨＣ配列番号５７、ＬＣ配列番号５８、Ｎ２９７Ａ変異を有するＦｃサイレントＩｇＧ１）、及びＢＭＳ−９８６０９０（ＨＣ配列番号５９、Ｓ２２８Ｐ変異を有するＩｇＧ４）であった。
【０５２７】
配列番号５３（ＡＳＫＰ−１２４０  ＨＣ）
ＱＬＱＬＱＥＳＧＰＧＬＬＫＰＳＥＴＬＳＬＴＣＴＶＳＧＧＳＩＳＳＰＧＹＹＧＧＷＩＲＱＰＰＧＫＧＬＥＷＩＧＳＩＹＫＳＧＳＴＹＨＮＰＳＬＫＳＲＶＴＩＳＶＤＴＳＫＮＱＦＳＬＫＬＳＳＶＴＡＡＤＴＡＶＹＹＣＴＲＰＶＶＲＹＦＧＷＦＤＰＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＣＳＲＳＴＳＥＳＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＫＴＹＴＣＮＶＤＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＲＶＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＦＥＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＱＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＬＰＳＳＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＱＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＲＬＴＶＤＫＳＲＷＱＥＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＬＧＫ
【０５２８】
配列番号５４（ＡＳＫＰ−１２４０  ＬＣ）
ＡＩＱＬＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＧＩＳＳＡＬＡＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＤＡＳＮＬＥＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＦＮＳＹＰＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ
【０５２９】
配列番号５５（抗体Ｄ  ＨＣ）
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＫＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＤＹＧＭＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＹＩＳＳＧＮＲＩＩＹＹＡＤＴＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＳＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＱＤＧＹＲＹＡＭＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＫＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＡＡＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ
【０５３０】
配列番号５６（抗体Ｄ  ＬＣ）
ＤＩＶＭＴＱＳＰＤＳＬＡＶＳＬＧＥＫＶＴＩＮＣＫＳＳＱＳＬＬＮＳＧＮＱＫＮＹＬＴＷＨＱＱＫＰＧＱＰＰＫＬＬＩＹＷＴＳＴＲＥＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＡＥＤＶＡＶＹＹＣＱＮＤＹＴＹＰＬＴＦＧＧＧＴＫＶＥＩＫＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ
【０５３１】
配列番号５７（ＣＦＺ５３３  ＨＣ）
ＱＶＱＬＶＥＳＧＧＧＶＶＱＰＧＲＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＳＹＧＭＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＶＩＳＹＥＥＳＮＲＹＨＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＩＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＴＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＤＧＧＩＡＡＰＧＰＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＫＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＡＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ
【０５３２】
配列番号５８（ＣＦＺ５３３  ＬＣ）
ＤＩＶＭＴＱＳＰＬＳＬＴＶＴＰＧＥＰＡＳＩＳＣＲＳＳＱＳＬＬＹＳＮＧＹＮＹＬＤＷＹＬＱＫＰＧＱＳＰＱＶＬＩＳＬＧＳＮＲＡＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＫＩＳＲＶＥＡＥＤＶＧＶＹＹＣＭＱＡＲＱＴＰＦＴＦＧＰＧＴＫＶＤＩＲＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ
【０５３３】
配列番号５９（ＢＭＳ−９８６０９０  ＨＣ）
ＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＲＤＹＥＭＷＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＲＶＳＡＩＮＰＱＧＴＲＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＫＬＰＦＲＦＳＤＲＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＡＳＴＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＦＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＱＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＬＰＳＳＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＱＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＲＬＴＶＤＫＳＲＷＱＥＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＬＧＫ
【０５３４】
表１３は、試験した抗体の、可溶性又は膜結合ＣＤ４０Ｌによって駆動されるヒト又はカニクイザルＢ細胞増殖の阻害に対するＩＣ５０値を示す。表１４は、ヒト樹状細胞（ＤＣ）による、可溶性又は膜結合ＣＤ４０Ｌによって駆動されるＩＬ−１２ｐ４０産生の阻害に対するＩＣ５０値、及び各ｍＡｂの親和性動態を示す。ｍＡｂ  ＣＤ４０Ｂ１７６、ＣＤ４０Ｂ１７９、ＣＤ４０Ｂ１８０、及び１８３は、最高性能のベンチマークｍＡｂ  ＡＳＫＰ−１２４０と比較して、同等の能力を呈した。
【０５３５】
【表１３】
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【０５３６】
【表１４】
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【０５３７】
ｍＡｂの可能な望ましくないアゴニスト活性を、ＨＥＫ−Ｂｌｕｅ（商標）ＣＤ４０Ｌ  ＮＦ−κＢ活性化アッセイ、及び樹状細胞によるＩＬ１２ｐ４０産生を読出し値として使用し、実施例１に記載される実験プロトコルを使用する架橋なしに評価した。エフェクタサイレントＡＳＫＰ−１２４０、ＣＦＺ５３３、ＢＭＳ−９８６０９０、及び抗体Ｄに加えて、野生型ＩｇＧ１上の親抗体Ｃ４０Ｂ１６を評価した。
【０５３８】
野生型ＩｇＧ１としてのＣ４０Ｂ１６及びサイレントＦｃ上の抗体Ｄは、アッセイにおいて同等の非存在又は最小アゴニズムを呈した。ＡＳＫＰ−１２４０、ＣＦＺ５３３、及びＢＭＳ−９８６０９０は、抗ＣＤ４０抗体濃度が増加するにつれていくらかのアゴニズムを呈した。図１は、ＮＦ−κＢレポータアッセイの用量応答曲線を示す。図２は、３５０ｎＭ〜１．１ｎＭの抗体濃度を使用する、ＤＣによる抗体媒介性ＩＬ１２ｐ４０産生を示す。
【０５３９】
これらの結果は、ＡＳＫＰ−１２４０、ＣＦＺ５３３、及びＢＭＳ−９８６０９０が、アゴニズムがエフェクタサイレントＦｃにおいて明示されたとき、Ｖ領域によって駆動されるアゴニズムを呈し得ることを示唆する。
【０５４０】
アゴニズムはまた、ＤＣ又はＢ細胞アゴニストアッセイにおいて５００ｎｇ／ｍＬの抗体濃度で評価し、ＡＳＫＰ−１２４０及びＣ４０Ｂ１７６、Ｃ４０Ｂ１７９、Ｃ４０Ｂ１８０、及びＣ４０Ｂ１８３を比較する。より高い抗体濃度で、ＡＳＫＰ−１２４０は、ＤＣによるＩＬ−１２ｐ４０産生（図３Ａ）及びＢ細胞の増殖（図３Ｂ）を誘導したが、Ｃ４０Ｂ１７６、Ｃ４０Ｂ１７９、Ｃ４０Ｂ１８０、及びＣ４０Ｂ１８３は誘導しなかった。
【０５４１】
全体として、結果は、Ｃ４０Ｂ１６及びその変異体Ｃ４０Ｂ１７６、Ｃ４０Ｂ１７９、Ｃ４０Ｂ１８０、及びＣ４０Ｂ１８３、並びに抗体Ｄが、ＡＳＫＰ−１２４０、ＣＦＺ５３３、及びＢＭＳ−９８６０９０と比較してアゴニスト能力が低減されたことを示唆する。明らかに、結果は、細胞ベースアッセイにおけるＣ４０Ｂ１７６、Ｃ４０Ｂ１７９、Ｃ４０Ｂ１８０、及びＣ４０Ｂ１８３の能力が、抗体Ｄ分子よりも１０倍良好であり、最も強力なベンチマーク分子（ＡＳＫＰ−１２４０）と同等であることも示唆する。
【図１】
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【図２】
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【図３Ａ】
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【図３Ｂ】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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