(57)【要約】  神経変性疾患を治療する方法が開示される。本方法は、治療有効量のＣＸＣＲ４アンタゴニストと、乳酸または／および亜鉛とを対象に投与することを含む。それを治療するためのキットも開示される。【選択図】  図１４
2018530577.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
治療有効量のＣＸＣＲ４アンタゴニストと、乳酸とを対象に投与することによって、神経変性疾患を治療することを含む、治療を必要とする対象の神経変性疾患を治療する方法。
【請求項２】
前記神経変性疾患が、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）、パーキンソン病（ＰＤ）、アルツハイマー病（ＡＤ）、ハンチントン病、多発性硬化症（ＭＳ）、クロイツフェルトヤコブ病（ＣＪＤ）、てんかん、卒中、自己免疫性脳脊髄炎、糖尿病性神経障害および緑内障性神経障害からなる群から選択される、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記神経変性疾患が、ＡＬＳである、請求項１または２に記載の方法。
【請求項４】
前記ＣＸＣＲ４アンタゴニストが、ＡＭＤ３１００（プレリキサフォル）、ＢＫＴ１４０、ＴＮ１４００３、ＣＴＣＥ−９９０８、ＫＲＨ−２７３１、ＴＣ１４０１２、ＫＲＨ−３９５５、およびＡＭＤ０７０からなる群から選択される、請求項１〜３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５】
前記ＣＸＣＲ４アンタゴニストが、ＡＭＤ３１００である、請求項１〜４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６】
前記ＣＸＣＲ４アンタゴニストと同時に、前記乳酸を投与する、請求項１〜３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７】
前記ＣＸＣＲ４アンタゴニストの投与前または投与後に、前記乳酸を投与する、請求項１に記載の方法。
【請求項８】
前記ＡＭＤ３１００の用量が、２４０μｇ／ｋｇ未満である、請求項５に記載の方法。
【請求項９】
前記ＡＭＤ３１００の用量が、０．１〜５００μｇ／ｋｇの範囲内である、請求項５に記載の方法。
【請求項１０】
前記ＡＭＤ３１００の用量が、１０〜１５０μｇ／ｋｇの範囲内である、請求項５に記載の方法。
【請求項１１】
前記ＣＸＣＲ４アンタゴニストを皮下投与する、請求項１〜３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１２】
前記対象に亜鉛を投与することをさらに含む、請求項１〜３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１３】
前記ＡＭＤ３１００が、亜鉛と複合体化されている、請求項５に記載の方法。
【請求項１４】
治療有効量のＡＭＤ３１００と、亜鉛とを対象に投与することによって、神経変性疾患を治療することを含み、但し、前記神経変性疾患はＡＬＳではない、神経変性疾患の治療を必要とする対象の神経変性疾患を治療する方法。
【請求項１５】
前記神経変性疾患が、パーキンソン病（ＰＤ）、アルツハイマー病（ＡＤ）、ハンチントン病、多発性硬化症（ＭＳ）、クロイツフェルトヤコブ病（ＣＪＤ）、てんかん、卒中、自己免疫性脳脊髄炎、糖尿病性神経障害および緑内障性神経障害からなる群から選択される、請求項１４に記載の方法。
【請求項１６】
前記神経変性疾患が、ＡＬＳである、請求項１４または１５に記載の方法。
【請求項１７】
前記ＡＭＤ３１００と同時に、前記亜鉛を投与する、請求項１４〜１６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１８】
前記投与の前に、前記亜鉛と前記ＡＭＤ３１００とが複合体化されている、請求項１７に記載の方法。
【請求項１９】
前記ＡＭＤ３１００の投与前または投与後に、前記亜鉛を投与する、請求項１４に記載の方法。
【請求項２０】
前記対象に乳酸を投与することをさらに含む、請求項１４〜１９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２１】
前記ＡＭＤ３１００の用量が、２４０μｇ／ｋｇ未満である、請求項１４〜２０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２２】
前記ＡＭＤ３１００の用量が、０．１〜５００μｇ／ｋｇの範囲内である、請求項１４〜２１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２３】
前記ＡＭＤ３１００の用量が、１０〜１５０μｇ／ｋｇの範囲内である、請求項１４〜２２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２４】
前記ＡＭＤ３１００を皮下投与する、請求項１４〜２３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２５】
ＣＸＣＲ４アンタゴニストと、乳酸とを含む、神経変性疾患治療用のキット。
【請求項２６】
前記ＣＸＣＲ４アンタゴニストが、ＡＭＤ３１００である、請求項２５に記載のキット。
【請求項２７】
前記ＡＭＤ３１００が、亜鉛と複合体化されている、請求項２６に記載のキット。
【請求項２８】
亜鉛をさらに含む、請求項２５に記載のキット。
【請求項２９】
前記神経変性疾患が、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）、パーキンソン病（ＰＤ）、アルツハイマー病（ＡＤ）、ハンチントン病、多発性硬化症（ＭＳ）、クロイツフェルトヤコブ病（ＣＪＤ）、てんかん、卒中、自己免疫性脳脊髄炎、糖尿病性神経障害および緑内障性神経障害からなる群から選択される、請求項２５に記載のキット。
【請求項３０】
前記神経変性疾患が、ＡＬＳである、請求項２５に記載のキット。
【請求項３１】
神経変性疾患の治療用である、ＣＸＣＲ４アンタゴニストおよび乳酸。
【請求項３２】
神経変性疾患の治療用であり、但し前記神経変性疾患はＡＬＳではない、ＡＭＤ３１００および亜鉛。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、そのいくつかの実施形態において、神経変性疾患の治療のための方法および組成物、より詳細には筋萎縮性側索硬化症の治療のための方法および組成物に関する。
【背景技術】
【０００２】
筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）は、成人運動ニューロン（ＭＮ）変性の中で最も一般的であり、且つ悪性度の最も高い形態である。この神経変性疾患の病態生理学は、コリン作動性欠乏、グルタミン酸興奮毒性（ｅｘｃｉｔａｔｏｘｉｃｉｔｙ）、神経炎症、免疫の調節異常、グルコースの代謝低下および血液−中枢神経系関門（Ｂ−ＣＮＳ−Ｂ）の破壊を含む複雑なものである。
【０００３】
アストロサイト細胞は、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）の病理学的過程において主要な役割を果たすと考えられており、運動ニューロンの死に実質的に寄与する因子である。アストログリア細胞の異常、例えばアストロサイトのグルタミン酸の放出および取り込みにおける変化が、疾患の臨床症状の前兆となる（Ｖａｒｇａｓ  ｅｔ  ａｌ．，２０１０）。
【０００４】
ケモカイン受容体、例えばＧタンパク質結合受容体ＣＸＣＲ４などは、ニューロンおよびグリア細胞中で広く発現される。ＣＸＣＲ４のリガンドであるケモカイン間質由来因子１（ＳＤＦ−１）は、ＣＸＣＬ１２としても公知であり、グルタミン酸放出を誘発し、それによってニューロンの機能またはアポトーシスを制御する。作用機序には、細胞内Ｃａ２＋濃度の増加、細胞外シグナル関連キナーゼの刺激、ならびにアストロサイトおよび小グリア細胞の表面からのＴＮＦαの放出が含まれる（Ａｌｌｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，２００１）。
【０００５】
ＡＭＤ３１００（１，１’−［１，４−フェニレンビス（メチレン）］ビス−１，４，８，１１−テトラアザシクロテトラデカン）は、ＣＸＣＲ４へのＳＤＦ−１の結合を特異的および可逆的にブロックするビシクラム（ｂｉｃｙｃｌａｍ）分子である。ＡＭＤ３１００は、マウス、ヒト以外の霊長類およびヒトにおいて、造血幹細胞および前駆細胞（ＨＳＰＣ）を骨髄（ＢＭ）から血液へ迅速に動員することが示されている。ＡＭＤ３１００によるＣＸＣＲ４シグナル伝達の破壊は、片麻痺のマウスで観察されたように、移植されたニューロン幹細胞／前駆細胞の移動活性を阻害することが観察されている（Ａｒｉｍｉｔｓｕ  ｅｔ  ａｌ．，２０１２）。２００８年にＡＭＤ３１００は、非ホジキンリンパ腫および多発性骨髄腫を発症し、自家移植を受けた患者における、顆粒球コロニー刺激因子（Ｇ−ＣＳＦ）との組み合わせによるＨＳＰＣ動員に関して、ＦＤＡによって承認された（Ｐｕｓｉｃ  ｅｔ  ａｌ．，２０１０）。
【０００６】
ＡＭＤ３１００の別の実質的な臨床特徴は、血漿ＳＤＦ−１レベルの調節を介したＣＸＣＲ４＋ＶＥＧＦＲ１＋細胞動員の促進である。これは、中枢神経系（ＣＮＳ）ニューロンの維持および機能において重要な、血管新生促進性の細胞の動員、ならびに血管再生の局面において、ＡＭＤ３１００が調節的な役割を果たすことを示唆している（Ｐｅｔｉｔ  ｅｔ  ａｌ．，２００７）。
【０００７】
ＡＬＳ患者、およびＡＬＳ関連スーパーオキシドジスムターゼ１（ＳＯＤ１）突然変異を発現するげっ歯類において、内皮細胞間におけるＺＯ−１、オクルディンおよびクローディン−５などの様々な密着結合タンパク質のレベルの低減から示唆されるように、血液脳関門（ＢＢＢ）、血液−脊髄関門（ＢＳＣＢ）、および血液−髄液関門（ＢＣＳＦＢ）で構成される血液−中枢神経系関門（Ｂ−ＣＮＳ−Ｂ）における改変が報告されている。また微小血管系における密着結合タンパク質であるオクルディンおよびＺＯ−１の損失は、単球走化性促進タンパク質−１（ＭＣＰ１）、ＴＮＦ−α、ＩＬ−１β、およびＩＦＮ−γなどの様々なサイトカインによって媒介されることも示されている。密着結合タンパク質の低減は、ヘモグロビン由来の神経毒性生成物の放出を伴う微小出血、微小循環および低循環の低減を引き起こした。ＳＯＤ１突然変異体は、運動ニューロンの死や低酸素の前でも内皮損傷を媒介することが提唱されており、炎症がＢＳＣＢ透過の増加やＢＳＣＢの破壊を引き起こす。早期の運動ニューロンの機能不全および傷害は、ＢＳＣＢ破壊の程度に比例することが示され、ＢＳＣＢ完全性の早期保護は、運動ニューロンの欠陥および変性の発病を遅延させることが見出された。総じて、マウスにおけるこれらの発見から、ＢＳＣＢの解体は、疾患の早期段階において役割を果たすこと、およびＢＳＣＢの完全性を回復させると疾患の進行が遅くなることを示す。
【０００８】
追加の背景技術としては、国際公開第２０１５／０３１７２２号およびＢｒｉｄｇｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，１９９５，Ｊ  Ｍｅｄ  Ｃｈｅｍ．，２０；３８（２）：３６６−７８が挙げられる。
【発明の概要】
【０００９】
本発明のいくつかの実施形態の態様によれば、治療有効量のＣＸＣＲ４アンタゴニストと、乳酸とを対象に投与することによって、神経変性疾患を治療することを含む、治療を必要とする対象の神経変性疾患を治療する方法が提供される。
【００１０】
本発明のいくつかの実施形態の態様によれば、治療有効量のＡＭＤ３１００と、亜鉛とを対象に投与することによって、神経変性疾患を治療することを含み、但し、前記神経変性疾患はＡＬＳではない、神経変性疾患の治療を必要とする対象の神経変性疾患を治療する方法が提供される。
【００１１】
本発明のいくつかの実施形態の態様によれば、ＣＸＣＲ４アンタゴニストと、乳酸とを含む、神経変性疾患治療用のキットが提供される。
【００１２】
本発明のいくつかの実施形態の態様によれば、神経変性疾患の治療用である、ＣＸＣＲ４アンタゴニストと乳酸との組み合わせが提供される。
【００１３】
本発明のいくつかの実施形態の態様によれば、神経変性疾患の治療用であり、但し前記神経変性疾患はＡＬＳではない、ＡＭＤ３１００と亜鉛との組み合わせが提供される。
【００１４】
本発明のいくつかの実施形態によれば、神経変性疾患は、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）、パーキンソン病（ＰＤ）、アルツハイマー病（ＡＤ）、ハンチントン病、多発性硬化症（ＭＳ）、クロイツフェルトヤコブ病（ＣＪＤ）、てんかん、卒中、自己免疫性脳脊髄炎、糖尿病性神経障害および緑内障性神経障害からなる群から選択される。
【００１５】
本発明のいくつかの実施形態によれば、神経変性疾患は、ＡＬＳである。
【００１６】
本発明のいくつかの実施形態によれば、ＣＸＣＲ４アンタゴニストは、ＡＭＤ３１００（プレリキサフォル）、ＢＫＴ１４０、ＴＮ１４００３、ＣＴＣＥ−９９０８、ＫＲＨ−２７３１、ＴＣ１４０１２、ＫＲＨ−３９５５、およびＡＭＤ０７０からなる群から選択される。
【００１７】
本発明のいくつかの実施形態によれば、ＣＸＣＲ４アンタゴニストは、ＡＭＤ３１００である。
【００１８】
本発明のいくつかの実施形態によれば、乳酸は、ＣＸＣＲ４アンタゴニストと同時に投与される。
【００１９】
本発明のいくつかの実施形態によれば、ＣＸＣＲ４アンタゴニストの投与前または投与後に、前記乳酸を投与する。
【００２０】
本発明のいくつかの実施形態によれば、ＡＭＤ３１００の用量は、２４０μｇ／ｋｇ未満である。
【００２１】
本発明のいくつかの実施形態によれば、ＡＭＤ３１００の用量は、０．１〜５００μｇ／ｋｇの範囲内である。
【００２２】
本発明のいくつかの実施形態によれば、ＡＭＤ３１００の用量は、１０〜１５０μｇ／ｋｇの範囲内である。
【００２３】
本発明のいくつかの実施形態によれば、ＣＸＣＲ４アンタゴニストを皮下投与する。
【００２４】
本発明のいくつかの実施形態によれば、本方法は、前記対象に亜鉛を投与することをさらに含む。
【００２５】
本発明のいくつかの実施形態によれば、ＡＭＤ３１００は、亜鉛と複合体化されている。
【００２６】
本発明のいくつかの実施形態によれば、神経変性疾患は、パーキンソン病（ＰＤ）、アルツハイマー病（ＡＤ）、ハンチントン病、多発性硬化症（ＭＳ）、クロイツフェルトヤコブ病（ＣＪＤ）、てんかん、卒中、自己免疫性脳脊髄炎、糖尿病性神経障害および緑内障性神経障害からなる群から選択される。
【００２７】
本発明のいくつかの実施形態によれば、神経変性疾患は、ＡＬＳである。
【００２８】
本発明のいくつかの実施形態によればＡＭＤ３１００と同時に、亜鉛を投与する。
【００２９】
本発明のいくつかの実施形態によれば、投与の前に、亜鉛とＡＭＤ３１００とが複合体化されている。
【００３０】
本発明のいくつかの実施形態によれば、ＡＭＤ３１００の投与前または投与後に、亜鉛を投与する。
【００３１】
本発明のいくつかの実施形態によれば、本方法は、前記対象に乳酸を投与することをさらに含む。
【００３２】
本発明のいくつかの実施形態によれば、ＡＭＤ３１００の用量は、２４０μｇ／ｋｇ未満である。
【００３３】
本発明のいくつかの実施形態によれば、ＡＭＤ３１００の用量は、０．１〜５００μｇ／ｋｇの範囲内である。
【００３４】
本発明のいくつかの実施形態によれば、ＡＭＤ３１００の用量は、１０〜１５０μｇ／ｋｇの範囲内である。
【００３５】
本発明のいくつかの実施形態によれば、ＡＭＤ３１００を皮下投与する。
【００３６】
本発明のいくつかの実施形態によれば、ＣＸＣＲ４アンタゴニストは、ＡＭＤ３１００である。
【００３７】
本発明のいくつかの実施形態によれば、ＡＭＤ３１００は、亜鉛に複合体化されている。
【００３８】
本発明のいくつかの実施形態によれば、キットは、亜鉛をさらに含む。
【００３９】
本発明のいくつかの実施形態によれば、神経変性疾患は、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）、パーキンソン病（ＰＤ）、アルツハイマー病（ＡＤ）、ハンチントン病、多発性硬化症（ＭＳ）、クロイツフェルトヤコブ病（ＣＪＤ）、てんかん、卒中、自己免疫性脳脊髄炎、糖尿病性神経障害および緑内障性神経障害からなる群から選択される。
【００４０】
別段の指定がない限り、本明細書で使用される全ての技術的および／または科学的な用語は、本発明が関連する当業者により一般的に理解されるのと同じ意味を有する。本明細書で説明したものに類似した、または同等な方法および材料も本発明の実施形態の実施または試験で使用することができるが、例示的な方法および／または材料が後述される。矛盾がある場合、定義を含めて本特許明細書が優先される。加えて、材料、方法、および実施例は単なる例示にすぎず、必ずしも限定を意図するものではない。
【００４１】
単なる例示として、添付の図面を参照しながら、本発明のいくつかの実施形態について記載する。ここで、具体的な図面に詳細に参照するが、ここに示す詳細は例示に過ぎず、本発明の実施形態を例証するための考察を目的とすることを強調する。この観点から、図面とともに本記載を検討することで、当業者には、いかに本発明の実施形態を実施するかが明らかとなる。
【図面の簡単な説明】
【００４２】
【図１】図１は、様々な処理後の５０日齢の雌ＳＯＤ１−Ｇ９３Ａマウスの生存率プロットである。ＰＢＳ；５ｍｇ／ｋｇのＡＭＤ３１００；５ｍｇ／ｋｇのＡＭＤ３１００＋８９６ｍｇ／ｋｇの乳酸；８９６ｍｇ／ｋｇの乳酸。ＰＢＳ処理の中央値は１３１日であり、５ｍｇ／ｋｇのＡＭＤ３１００処理の中央値は１４４日であり、５ｍｇ／ｋｇのＡＭＤ３１００＋８９６ｍｇ／ｋｇの乳酸処理の中央値は１４１日であり、８９６ｍｇ／ｋｇの乳酸中央値は１４８日である。雌マウスの生存率プロットによれば、５ｍｇ／ｋｇのＡＭＤ３１００＋８９６ｍｇ／ｋｇの乳酸で処理したマウスの５０％の寿命が、最小で１３８日齢、最大で１４９日齢に延長されたと結論付けることができる。（Ｐ値＜０．０００１とし、マンテル−コックス検定で実施）。生存確率によれば、５ｍｇ／ｋｇのＡＭＤ３１００＋８９６ｍｇ／ｋｇの乳酸で処理したマウスの１００％が１３８日目でなければ死に始めることはなく、それに対して全てのＰＢＳマウスはこの日齢までに死んだ。
【図２】図２は、５０日齢の雌ＳＯＤ１−Ｇ９３Ａマウスにおける様々な処理後の体重変化を示すグラフである。５ｍｇ／ｋｇのＡＭＤ３１００；ＰＢＳ；５ｍｇ／ｋｇのＡＭＤ３１００＋８９６ｍｇ／ｋｇの乳酸；８９６ｍｇ／ｋｇの乳酸。
【図３】図３は、５０日齢の雌ＳＯＤ１−Ｇ９３Ａマウスにおける様々な処理後の運動機能における変化を示すグラフである。５ｍｇ／ｋｇのＡＭＤ３１００；ＰＢＳ；５ｍｇ／ｋｇのＡＭＤ３１００＋８９６ｍｇ／ｋｇの乳酸；８９６ｍｇ／ｋｇの乳酸。
【図４】図４のＡ〜Ｂは、５０日齢の雌ＳＯＤ１−Ｇ９３Ａマウスにおける、５ｍｇ／ｋｇのＡＭＤ３１００処理後のＭＣＴ１レベルの変化を示す図である。図４Ａは、脊髄におけるＭＣＴ１レベルの増加を示す。図４Ｂは、筋肉におけるＭＣＴ１レベルを示す。対照群を１００％に設定する。結果は、平均±標準誤差、Ｔ検定；＊ｐ＜０．０５である。
【図５】図５は、ＳＯＤ１−Ｇ９３Ａマウスの５０日齢の雌同腹マウスにおける５ｍｇ／ｋｇのＡＭＤ３１００処理対５ｍｇ／ｋｇのＡＭＤ３１００＋８９６ｍｇ／ｋｇの乳酸処理の後の、ＭＣＴ１レベルの変化を示す図である。５０日齢で開始した５ｍｇ／ｋｇのＡＭＤ３１００処理を受けたＳＯＤ１−Ｇ９３Ａの同腹マウスは、未処理マウスと比較してＭＣＴ１レベルの有意な増加を示した。
【図６】図６Ａ〜Ｂは、５０日齢の雌のＳＯＤ１−Ｇ９３Ａマウスにおける、５ｍｇ／ｋｇのＡＭＤ３１００処理対５ｍｇ／ｋｇのＡＭＤ３１００＋８９６ｍｇ／ｋｇの乳酸処理の後の、ＭＢＰおよびＢＡＣＥ１の変化を示す図である。図６Ａは、ＭＢＰレベルを示す。図６Ｂは、ＢＡＣＥ１レベルを示す。結果は、平均±標準誤差、Ｔ検定；＊ｐ＜０．０５である。
【図７】図７Ａ〜Ｂは、５０日齢の雌のＳＯＤ１−Ｇ９３Ａマウスにおける、５ｍｇ／ｋｇのＡＭＤ３１００処理対５ｍｇ／ｋｇのＡＭＤ３１００＋８９６ｍｇ／ｋｇの乳酸処理の後の、アストロサイトの活性化の変化を示す図である。図７Ａは、ＧＦＡＰレベルを示す。図７Ｂは、Ｓ１００Ｂレベルを示す。結果は、平均±標準誤差、Ｔ検定；＊ｐ＜０．０５である。
【図８】図８Ａ〜Ｂは、５０日齢の雌のＳＯＤ１−Ｇ９３Ａマウスにおける、５ｍｇ／ｋｇのＡＭＤ３１００対５ｍｇ／ｋｇのＡＭＤ３１００＋８９６ｍｇ／ｋｇの乳酸処理の後の、小グリア細胞の反応性の変化を示す図である。図８Ａは、Ｉｂａ−１レベルを示す。図８Ｂは、ＩＬ−６レベルを示す。結果は、平均±標準誤差、Ｔ検定；＊ｐ＜０．０５である。
【図９】図９は、５０日齢のときに０．２５ｍｇ／ｋｇのＡＭＤ３１００＋０．０８ｍｇ／ｋｇのＺｎまたは０．１２５ｍｇ／ｋｇのＡＭＤ３１００＋０．０４ｍｇ／ｋｇのＺｎで処理した雌ＳＯＤ１−Ｇ９３Ａマウスの生存率プロットである。ＰＢＳ；５ｍｇ／ｋｇのＡＭＤ３１００；０．２５ｍｇ／ｋｇのＡＭＤ３１００＋０．０８ｍｇ／ｋｇのＺｎ；０．１２５ｍｇ／ｋｇのＡＭＤ３１００＋０．０４ｍｇ／ｋｇのＺｎ。ＰＢＳ処理の中央値は１３１日であり、５ｍｇ／ｋｇのＡＭＤ３１００処理の中央値は１４４日であり、０．２５ｍｇ／ｋｇのＡＭＤ３１００＋０．０８ｍｇ／ｋｇのＺｎ処理の中央値は１４３日であり、０．１２５ｍｇ／ｋｇのＡＭＤ３１００＋０．０４ｍｇ／ｋｇのＺｎ処理の中央値は１４８日である。（Ｐ値＜０．０００１とし、マンテル−コックス検定で実施）。生存確率によれば、ＡＭＤ３１００−亜鉛で処理したマウスの１００％が１４１日後でなければ死に始めることはなく、それに対して全てのＰＢＳマウスはこの日齢までに死んだ。
【図１０】図１０は、５０日齢の雌ＳＯＤ１−Ｇ９３Ａマウスにおける様々な処理後の体重変化を示すグラフである。５ｍｇ／ｋｇのＡＭＤ３１００；ＰＢＳ；０．２５ｍｇ／ｋｇのＡＭＤ３１００＋０．０８ｍｇ／ｋｇの亜鉛。
【図１１】図１１は、５０日齢の雌ＳＯＤ１−Ｇ９３Ａマウスにおける様々な処理後の運動機能の変化を示すグラフである。ＰＢＳ；５ｍｇ／ｋｇのＡＭＤ３１００；０．２５ｍｇ／ｋｇのＡＭＤ３１００＋０．０８ｍｇ／ｋｇのＺｎ。
【図１２】図１２は、様々な処理後の５０日齢の雄ＳＯＤ１−Ｇ９３Ａマウスの生存率プロットである。ＰＢＳ；５ｍｇ／ｋｇのＡＭＤ３１００；０．５ｍｇ／ｋｇのＡＭＤ３１００＋０．１７ｍｇ／ｋｇのＺｎ＋８９６ｍｇ／ｋｇの乳酸。ＰＢＳ処理の中央値は１２６日であり、５ｍｇ／ｋｇのＡＭＤ３１００処理の中央値は１４０日であり、０．５ｍｇ／ｋｇのＡＭＤ３１００＋０．１７ｍｇ／ｋｇのＺｎ＋８９６ｍｇ／ｋｇの乳酸処理の中央値は１４５日である。生存率プロットによれば、０．５ｍｇ／ｋｇのＡＭＤ３１００＋０．１７ｍｇ／ｋｇのＺｎ＋８９６ｍｇ／ｋｇの乳酸の群の生存が、５ｍｇ／ｋｇのＡＭＤ３１００処理単独と比較して５日延長されており、ＰＢＳと比較して１９日延長されている（Ｐ値＜０．０００１とし、マンテル−コックス検定で実施）。
【図１３】図１３Ａ〜Ｂは、５０日齢の雌のＳＯＤ１−Ｇ９３Ａマウスにおける５ｍｇ／ｋｇのＡＭＤ３１００処理対０．２５ｍｇ／ｋｇのＡＭＤ３１００＋０．０８ｍｇ／ｋｇの亜鉛処理の後の、炎症の変化を示す図である。図１３Ａは、ＧＦＡＰレベルを示す。図１３Ｂは、Ｉｂａ−１レベルを示す図である。結果は、平均±標準誤差、Ｔ検定；＊ｐ＜０．０５である。
【図１４】図１４Ａ〜Ｂは、様々な処理後の５０日齢の雌および雄ＳＯＤ１−Ｇ９３Ａマウスの生存率プロットである。ＰＢＳ；５ｍｇ／ｋｇのＡＭＤ３１００；０．１２５ｍｇ／ｋｇのＡＭＤ３１００＋０．０４ｍｇ／ｋｇの亜鉛＋８９６ｍｇ／ｋｇの乳酸。図１４Ａにおいて、雌のＰＢＳ処理の中央値は１３１日であり、雌の５ｍｇ／ｋｇのＡＭＤ３１００処理の中央値は１４４日であり、雌の０．１２５ｍｇ／ｋｇのＡＭＤ３１００＋０．０４ｍｇ／ｋｇの亜鉛＋８９６ｍｇ／ｋｇの乳酸処理の中央値は１４４日である。図１４Ｂにおいて、雄のＰＢＳ処理の中央値は１３２日であり、雄の５ｍｇ／ｋｇのＡＭＤ３１００処理の中央値は１４０日であり、雄の０．１２５ｍｇ／ｋｇのＡＭＤ３１００＋０．０４ｍｇ／ｋｇの亜鉛＋８９６ｍｇ／ｋｇの乳酸処理の中央値は１５１日である。（Ｐ値＜０．０００１とし、マンテル−コックス検定で実施）。
【図１５】図１５Ａ〜Ｂは、ＰＢＳ；０．５ｍｇ／ｋｇのＡＭＤ３１００（ＡＭＤ）；０．５ｍｇ／ｋｇのＡＭＤ３１００＋０．１７ｍｇ／ｋｇのＺｎ（ＡＭＤ＋Ｚｎ）；０．５ｍｇ／ｋｇのＡＭＤ３１００＋０．１７ｍｇ／ｋｇのＺｎ＋８９６ｍｇ／ｋｇの乳酸（ＡＭＤ＋複合体）で処理した雌３ｘＴｇ−ＡＤマウスのＹ迷路の結果を示す棒グラフである。Ａは、新規アームに浸入する頻度を表す。Ｂは、新規アームで費やした時間を表す。
【図１６】図１６Ａ〜Ｂは、ＰＢＳ；０．５ｍｇ／ｋｇのＡＭＤ３１００（ＡＭＤ）；０．５ｍｇ／ｋｇのＡＭＤ３１００＋０．１７ｍｇ／ｋｇのＺｎ（ＡＭＤ＋Ｚｎ）；０．５ｍｇ／ｋｇのＡＭＤ３１００＋０．１７ｍｇ／ｋｇのＺｎ＋８９６ｍｇ／ｋｇの乳酸で処理した３ｘＴｇ−ＡＤマウスにおけるＰＨＦ−１結果およびＭＣＴ−１結果の変化を示す棒グラフである。Ａ（ＡＭＤ＋複合体）。Ａ．ＰＨＦ−１の低減は、ＡＭＤのみと比較して、ＡＭＤ＋ＺｎおよびＡＭＤ＋複合体において顕著である。Ｂ．ＭＣＴ−１の増加傾向が観察されたが、統計学的に有意ではなかった。結果は、平均±標準誤差、Ｔ検定；＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１、＊＊＊ｐ＜０．００１である。
【図１７】図１７Ａ〜Ｂは、ミエリン結合タンパク質（ＭＢＰ）アイソタイプにおける変化を示す棒グラフである。ＰＢＳ；０．５ｍｇ／ｋｇのＡＭＤ３１００（ＡＭＤ）；０．５ｍｇ／ｋｇのＡＭＤ３１００＋０．１７ｍｇ／ｋｇのＺｎ（ＡＭＤ＋Ｚｎ）；０．５ｍｇ／ｋｇのＡＭＤ３１００＋０．１７ｍｇ／ｋｇのＺｎ＋；８９６ｍｇ／ｋｇの乳酸で処理した３ｘＴｇ−ＡＤマウスの結果。Ａ（ＡＭＤ＋複合体）。Ａ．ＭＢＰ−２３ｋＤａアイソタイプの増加。Ｂ．ＭＢＰ−１８ｋＤａアイソタイプの増加。結果は、平均±標準誤差、Ｔ検定；＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１である。
【図１８】図１８は、ＣｈＡＴの変化を示す棒グラフである。ＰＢＳ；０．５ｍｇ／ｋｇのＡＭＤ３１００（ＡＭＤ）；０．５ｍｇ／ｋｇのＡＭＤ３１００＋０．１７ｍｇ／ｋｇのＺｎ（ＡＭＤ＋Ｚｎ）；０．５ｍｇ／ｋｇのＡＭＤ３１００＋０．１７ｍｇ／ｋｇのＺｎ＋８９６ｍｇ／ｋｇの乳酸で処理した３ｘＴｇ−ＡＤマウスの結果。ＡＭＤ＋Ｚｎ群およびＡＭＤ＋複合体処理群においてのみ、ＣｈＡＴの増加が統計学的に有意であった。結果は、平均±標準誤差、Ｔ検定；＊＊ｐ＜０．０１である。
【図１９】図１９は、ＥＬＩＳＡにおけるＡβの変化を示す棒グラフである。ＰＢＳ；０．５ｍｇ／ｋｇのＡＭＤ３１００（ＡＭＤ）；０．５ｍｇ／ｋｇのＡＭＤ３１００＋０．１７ｍｇ／ｋｇのＺｎ（ＡＭＤ＋Ｚｎ）；０．５ｍｇ／ｋｇのＡＭＤ３１００＋０．１７ｍｇ／ｋｇのＺｎ＋８９６ｍｇ／ｋｇの乳酸で処理した３ｘＴｇ−ＡＤマウスの結果。Ａβの低減は、膜画分において、ＡＭＤ群およびＡＭＤ＋複合体処理群で統計学的に有意であった。結果は、平均±標準誤差、Ｔ検定；＊＊ｐ＜０．０１である。
【発明を実施するための形態】
【００４３】
本発明は、そのいくつかの実施形態では、神経変性疾患を治療するための方法および組成物、より詳細には筋萎縮性側索硬化症を治療するための方法および組成物に関する。
【００４４】
本発明の少なくとも１つの実施形態を詳細に説明する前に、本発明が、その適用において、以下の説明に記載されるか、または実施例によって例示される詳細に限定されないことを理解するべきである。本発明は、他の実施形態が可能であり、または、様々な方法で実践もしくは遂行することが可能である。
【００４５】
ＣＸＣＲ４は、免疫系および中枢神経系の細胞によって発現される。ＣＸＣＬ１２の結合に応答するシグナル伝達は、脳へのＴ細胞および単球などの免疫細胞の移動および動員に加えて、ニューロンおよび希突起膠細胞の前駆細胞の移動も引き起こす。
【００４６】
これまでに、ＣＸＣＲ４（ＡＭＤ３１００）のアンタゴニストは、ＳＯＤ１−Ｇ９３Ａトランスジェニックマウス（筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）の動物モデル）の生存率を有意に増加させ、疾患の発病をさらに遅延させ、それらの運動機能を改善したことが示されている。加えて、ＡＭＤ３１００は、血液−脊髄関門（ＢＳＣＢ）の完全性の回復、再ミエリン化マーカーの増加および炎症の低減に有益な効果を有することが示された。
【００４７】
本発明者らはここで、亜鉛および乳酸の両方が、ＳＯＤ１−Ｇ９３Ａトランスジェニックマウスに対するＡＭＤ３１００の治療効果の効能を高めることを示した。より具体的には、ＡＭＤ３１００および亜鉛の複合体は、マウスの体重を有意に増加させ（図１０）、マウスの運動機能を改善すること（図１１）が示され、ＡＭＤ３１００および乳酸の混合物は、疾患の発病を遅延させ、マウスが死に始める時間を統計学的に有意に遅らせることが示された（図１）。ＡＭＤ３１００、亜鉛および乳酸の組合せは、相乗効果を有することが示された（図１４）。
【００４８】
さらに本発明の実施化する一方で、本発明者らは、ＡＭＤ３１００および亜鉛の複合体は、さらに別の神経変性疾患であるアルツハイマーの治療にとっても有益な効果を有していることを示した（図１５Ａ〜Ｂ）。
【００４９】
したがって、本発明の第１の態様によれば治療有効量のＣＸＣＲ４アンタゴニストと、乳酸とを対象に投与することによって、神経変性疾患を治療することを含む、治療を必要とする対象の神経変性疾患を治療する方法が提供される。
【００５０】
本明細書で使用する場合、用語「神経変性疾患」は、ニューロンの機能や構造の損失、および／またはニューロンの死を特徴とする状態を指す。神経変性疾患の例としては、これらに限定されないが、アレキサンダー病、アルパース病、アルツハイマー病、筋萎縮性側索硬化症、毛細血管拡張性運動失調、バッテン病（また、シュピールマイヤー−フォークト−シェーグレン−バッテン病としても公知）、牛海綿状脳症（ＢＳＥ）、カナバン病、コケーン症候群、大脳皮質基底核変性症、クロイツフェルトヤコブ病、ハンチントン病、ＨＩＶ関連認知症、ケネディ病、クラッベ病、レヴィ小体認知症、マシャド−ジョセフ病（脊髄小脳変性症３型）、多発性硬化症、多系統萎縮症、神経ボレリア症、パーキンソン病、ペリツェウス−メルツバッハー病、ピック病、原発性側索硬化症、プリオン病、レフサム病、サンドホフ病、シルダー病、悪性貧血に続発する亜急性連合性脊髄変性症、統合失調症、シュピールマイヤー−フォークト−シェーグレン−バッテン病（また、バッテン病としても公知）、脊髄小脳変性症（様々な特徴を有する複数のタイプがある）、脊髄性筋萎縮症、スティール−リチャードソン−オルゼウスキー病および脊髄癆が挙げられる。
【００５１】
特定の実施形態によれば、神経変性疾患は、運動ニューロン疾患である。
【００５２】
用語「運動ニューロン（ｍｏｔｏｒ  ｎｅｕｒｏｎ）疾患」または「運動ニューロン（ｍｏｔｏｎｅｕｒｏｎ）疾患」は、運動ニューロンの進行性変性を特徴とする、一群の神経系重度障害を含む（ニューロンは基礎的な神経細胞であり、それらが組み合わされて神経を形成する）。運動ニューロンは、筋肉の挙動を制御する。運動ニューロン疾患は、脳から延髄（脳幹の一部）または脊髄に至る神経である上位運動ニューロン、もしくは脊髄から体の筋肉に至る神経である下位運動ニューロン、またはその両方に影響を与える場合がある。痙攣および反射の増大は、上位運動ニューロンへの損傷を示す。進行性の衰弱（萎縮）およびその神経分布が失われた筋肉の衰弱は、下位運動ニューロンへの損傷を示す。運動ニューロン疾患の例としては、これらに限定されないが、進行性球麻痺、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）、脊髄性筋萎縮症、クーゲルベルク−ヴェランダー症候群、ルーゲーリッグ病、デュシェンヌ麻痺、ウェルドニッヒ−ホフマン病、若年性脊髄性筋萎縮症、良性の限局性筋萎縮および乳児脊髄性筋萎縮症が挙げられる。
【００５３】
本明細書で使用される場合、用語「ＣＸＣＲ４アンタゴニスト」は、間質細胞由来因子−１（ＳＤＦ１）のＣＸＣＲ４への結合をブロックすることが可能な薬剤を指す。
【００５４】
一実施形態において、ＣＸＣＲ４アンタゴニストは、抗ＣＸＣＲ４抗体である。
【００５５】
一実施形態において、ＣＸＣＲ４アンタゴニストは、ＣＸＣＬ１２類似体である。ＣＴＣＥ−９９０８およびＣＴＣＥ−０２１４は、それぞれ阻害およびアゴニスト活性を有するＣＸＣＬ１２のペプチド類似体である。
【００５６】
別の実施形態において、ＣＸＣＲ４アンタゴニストは、ペプチドである。例示的なペプチドアンタゴニストとしては、ＬＹ２５１０９２４（Ｇａｌｓｋｙ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｌｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ  Ｊｕｌｙ  １，２０１４  ２０；３５８１）、Ｔ２２、Ｔ１３４、Ｔ１４０、ＴＮ１４００３およびＴＣ１４０１２（Ｂｕｒｇｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｌｅｕｋｅｍｉａ  （２００９）２３，４３−５２によって開示された通り）が挙げられる。他のペプチドアンタゴニストは、Ｐｏｒｔｅｌｌａ  ｅｔ  ａｌ．，ＰＬｏＳ  Ｏｎｅ．２０１３；８（９）：ｅ７４５４８によって開示されている。
【００５７】
別の実施形態において、ＣＸＣＲ４アンタゴニストは、非ペプチドアンタゴニストであり、例えばビシクラムＡＭＤ３１００などである。
【００５８】
さらに好ましい実施形態において、ＣＸＣＲ４アンタゴニストは、ＢＭＳ−９３６５６４／ＭＤＸ−１３３８、ＬＹ２５１０９２４、１，１’−［１，４−フェニレンビス（メチレン）］ビス［１，４，８，１１−テトラアザシクロテトラデカン］（ＡＭＤ３１００；プレリキサフォル）、Ｎ，Ｎ−ジプロピル−Ｎ−［４−（｛［（１Ｈ−イミダゾール−２−イル）メチル）ベンジル］［（１−メチル−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）メチル］アミノ］メチル）ベンジル］−Ｎ−メチルブタン−１，４−ジアミントリ（２Ｒ，３Ｒ）−酒石酸塩（ＫＲＨ−３９５５）、（［５−（４−メチル−１−ピペラジニル）−２−（｛メチル［（８Ｓ）−５，６，７，８−テトラヒドロ−８−キノリニル］アミノ｝メチル）イミダゾ［１，２−ａ］ピリジン−３−イル］メタノール）（ＧＳＫ８１２３９７）、またはＮ−（１Ｈ−ベンゾイミダゾール−２−イルメチル）−Ｎ’−（５，６，７，８−テトラヒドロキノリン−８−イル）ブタン−１，４−ジアミン（ＡＭＤ１１０７０）である。
【００５９】
乳酸は、乳酸塩または乳酸であり得る。
【００６０】
用語「乳酸」は、乳酸の酸の形態、すなわち、２−ヒドロキシプロピオン酸を指す。
【００６１】
乳酸の塩または解離した形態は、本明細書では特に「乳酸塩」と称され、例えば、乳酸のナトリウム（またはカルシウム）塩または乳酸ナトリウム（または乳酸カルシウム）と称される。
【００６２】
一実施形態において、ＣＸＣＲ４アンタゴニストは、乳酸の前に投与される。
【００６３】
別の実施形態において、ＣＸＣＲ４アンタゴニストは、乳酸の投与後に投与される。さらに別の実施形態において、ＣＸＣＲ４アンタゴニストは、乳酸と同時に投与される。
【００６４】
本発明のＣＸＣＲ４アンタゴニストおよび乳酸は、典型的には、治療的および／または予防的な有効性を達成できるように組み合わされた量で提供される。この量は、使用ごとに選択された特定の化合物、他の治療様式の性質および数、治療または予防しようとする状態、対象の種、年齢、性別、体重、健康状態および予後、投与様式、標的化の有効性、滞留時間、クリアランス様式、ＣＸＣＲ４アンタゴニストの副作用のタイプおよび重症度、ならびに当業者にとって明白と予想される他の多くの因子に明らかに依存し得る。
【００６５】
一実施形態において、乳酸は、典型的には、通常の最小治療用量の１０％から、通常の最大治療用量の２００％の間のレベルで使用される。より好ましくは、この範囲は、その通常の最小用量の２５％から、その通常の最大用量の９０％とし得る。
【００６６】
好ましい一実施形態において、ＣＸＣＲ４アンタゴニストの量は、単回療法として使用する場合に治療または予防的な有効性を達成するのに必要な最小用量未満（例えばの最小用量の１０〜９９％、好ましくは２５から７５％）である。こうすることで、ＣＸＣＲ４アンタゴニストによって生じる副作用の低減を可能にしながらも、乳酸と組み合わせることで、その組合せが全体として効果的になることから、この療法は有効になる。
【００６７】
したがって、例えばＣＸＣＲ４アンタゴニストがＡＭＤ３１００である場合、その用量は、好ましくは５００μｇ／ｋｇ未満であり、例えば０．１〜２００μｇ／ｋｇの範囲内もしくは０．１〜２００μｇ／ｋｇの範囲内、または１０〜１５０μｇ／ｋｇの範囲内、または２０〜１００μｇ／ｋｇの範囲内である。
【００６８】
乳酸は、典型的には、乳酸の０．１〜１０ｍｍｏｌ／ｍｌの溶液、より好ましくは０．１〜１ｍｍｏｌ／ｍｌの溶液、例えば約０．５ｍｍｏｌ／ｍｌまたは０．６ｍｍｏｌ／ｍｌの輸液（例えば５００ｍｌまたは１０００ｍｌ）として提供される。乳酸の例示的な用量は、１００〜１０，０００ｍｇ／ｋｇの範囲内であり、より好ましくは１００〜２０００ｍｇ／ｋｇの範囲内、５００〜１０００ｍｇ／ｋｇの範囲内である。
【００６９】
本発明の好ましい一態様において、ＣＸＣＲ４アンタゴニストおよび乳酸は、それらの投与量に関して相乗的である。すなわち、ＣＸＣＲ４アンタゴニストによって達成される効果は、ＣＸＣＲ４アンタゴニストと乳酸とを個別に使用した場合の相加効果から予想される効果より大きい。代替の、ただし等しく好ましい実施形態において、ＣＸＣＲ４アンタゴニストおよび乳酸は、それらの副作用に関して相乗的である。すなわち、乳酸と組み合わせたＣＸＣＲ４アンタゴニストによって引き起こされる副作用は、ＣＸＣＲ４アンタゴニストまたは乳酸を個別に使用して同等の治療効果を達成する場合に予想される作用よりも小さい。
【００７０】
乳酸と組み合わされたＣＸＣＲ４アンタゴニストは、それらの治療効果を強化するために追加の薬剤と共に投与することができる。一実施形態において、追加の薬剤は、亜鉛である。亜鉛は、個別に投与してもよいし、またはＣＸＣＲ４アンタゴニストが亜鉛キレート化剤であるＡＭＤ３１００の場合、亜鉛をＡＭＤ３１００と複合体化させてもよい。
【００７１】
治療有効量のＡＭＤ３１００と、亜鉛とを対象に投与することによって、神経変性疾患を治療することを含む、神経変性疾患の治療を必要とする対象の神経変性疾患を治療する方法が提供される。
【００７２】
一実施形態において、本発明のこの態様の亜鉛は、塩として提供される。
【００７３】
一実施形態によれば、ＡＭＤ３１００は、亜鉛の投与前に投与される。別の実施形態において、ＡＭＤ３１００は、亜鉛の投与後に投与される。
【００７４】
さらに別の実施形態において、ＡＭＤ３１００は、乳酸と同時に投与される。この実施形態において、ＡＭＤ３１００は、亜鉛との複合体として投与することができる。
【００７５】
ＡＭＤ３１００および亜鉛の複合体を調製するために、典型的には、これら２成分は、約１：１〜１：１０のモル比で、より好ましくは１：１〜１：５の間、例えば約１：２のモル比で組み合わせることができる。ＡＭＤ３１００は亜鉛の天然キレート化剤であるため、複合体が生成し得る。
【００７６】
ＡＭＤ３１００および亜鉛は、典型的には、治療的および／または予防的な有効性を達成できるような組み合わされた量で提供される。この量は、使用ごとに選択された特定の化合物、他の治療様式の性質および数、治療または予防しようとする状態、対象の種、年齢、性別、体重、健康状態および予後、投与様式、標的化の有効性、滞留時間、クリアランス様式、ＡＭＤ３１００の副作用のタイプおよび重症度、ならびに当業者にとって明白と予想される他の多くの因子に明らかに依存し得る。
【００７７】
亜鉛は、典型的には、通常の最小治療用量の１０％から、通常の最大治療用量の２００％の間のレベルで使用される。より好ましくは、この範囲は、通常の最小用量の２５％から、通常の最大用量の９０％とし得る。
【００７８】
亜鉛の量は、典型的には０．１〜１００μｇ／ｋｇの範囲内であり、より好ましくは約０．１〜１０μｇ／ｋｇの範囲内である。
【００７９】
好ましい一実施形態において、ＡＭＤ３１００の量は、単回療法として使用する場合に治療または予防的な有効性を達成するのに必要な最小用量未満（例えばその最小用量の１０〜９９％、好ましくは２５から７５％）。こうすることで、ＣＸＣＲ４アンタゴニストによって生じる副作用の低減を可能にしながらも、亜鉛と組み合わせることで、その組合せが全体として効果的になることから、この療法は有効になる。
【００８０】
したがって、例えばＡＭＤ３１００の用量は、好ましくは５００μｇ／ｋｇ未満であり、より好ましくは２４０μｇ／ｋｇ未満であり、例えば０．１〜２００μｇ／ｋｇの範囲内または１０〜１５０μｇ／ｋｇの範囲内である。ＣＸＣＲ４アンタゴニスト（例えばＡＭＤ３１００）、乳酸、および／または亜鉛は、それぞれ単独で生物に投与してもよいし、好適な担体または賦形剤と混合した単一の医薬組成物または個別の医薬組成物として生物に投与してもよい。
【００８１】
本明細書で使用する、「医薬組成物」とは、１種または複数種の本明細書に記載の活性成分を、生理的に好適な担体および賦形剤などの他の化学的成分と共に含む製剤を指す。医薬組成物の目的は、生物への化合物の投与を容易にすることである。
【００８２】
ここで、用語「活性成分」は、生物学的効果を生じ得るＣＸＣＲ４アンタゴニスト／亜鉛／乳酸を指す。
【００８３】
以降、「生理的に許容される担体」および「薬学的に許容される担体」とは、互換使用可能な語句であって、生物に対して顕著な刺激を引き起こすことなく、投与される化合物の生物活性および特性を無効化しない担体または希釈剤を指す。補助剤は、これらの語句に含まれる。
【００８４】
ここで、用語「賦形剤」とは、活性成分の投与をさらに容易にするために医薬組成物に添加される不活性物質を指す。賦形剤の例としては、炭酸カルシウム、リン酸カルシウム、様々な糖およびデンプン型、セルロース誘導体、ゼラチン、植物油ならびにポリエチレングリコールが挙げられるが、これらに限定されるものではない。
【００８５】
薬物の処方および投与のための技術は、参照により本明細書に組み込まれる“Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ”、Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏ．，Ｅａｓｔｏｎ，ＰＡ，最新版に見出すことができる。
【００８６】
好適な投与経路は、例えば、経口投与、直腸投与、経粘膜投与、特に、経鼻投与、経腸送達または非経口送達、例えば、筋肉内注射、皮下注射および髄内注射ならびにくも膜下注射、直接脳室内注射、例えば、右心室腔または左心室腔への心臓内注射、共通冠動脈注射、静脈内注射、腹腔内注射、鼻内注射、または眼内注射を含んでもよい。
【００８７】
特定の実施形態によれば、ＣＸＣＲ４アンタゴニストがＡＭＤ３１００である場合、投与経路は皮下である。
【００８８】
中枢神経系（ＣＮＳ）への薬物送達のための従来のアプローチとしては、以下が挙げられる：脳神経外科的な戦略（例えば、大脳内注射または脳室内注入）；ＢＢＢの内因性輸送経路の１つを利用する試みにおける、薬剤の分子操作（例えば、単独ではＢＢＢを通過できない薬剤と、内皮細胞表面分子に関して親和性を有する輸送ペプチドとの組み合わせを含むキメラ融合タンパク質の産生）；薬剤の脂質溶解性を増加させるように設計する薬理学的戦略（例えば、水溶性薬剤の脂質またはコレステロール担体へのコンジュゲーション）；および（頸動脈へのマンニトール溶液の注入、またはアンギオテンシンペプチドなどの生物学的に活性な薬剤の使用により生じる）高浸透圧破壊によるＢＢＢの完全性の一時的な破壊。しかしながら、これらの戦略のそれぞれは、例えば、侵襲的な外科手術に関連する固有のリスク、内因性輸送系に固有の制限によって課せられたサイズの制限、ＣＮＳの外側で活性な可能性がある担体モチーフで構成されるキメラ分子の全身投与に関連する望ましくないと考え得る生物学的副作用、およびＢＢＢが破壊された脳領域内で発生し得る脳傷害のリスクなどの制限を有し、そのためこれらの戦略は最適には及ばない送達方法になっている。
【００８９】
あるいは、全身よりもむしろ局所法で、患者の組織領域への医薬組成物の直接の注射によって医薬組成物を投与してもよい。
【００９０】
用語「組織」は、１つまたは複数の機能を実行するように設計された細胞からなる、生物の一部を指す。例としては、これらに限定されないが、脳組織、網膜、皮膚組織、肝臓組織、膵臓組織、骨、軟骨、結合組織、血液組織、筋肉組織、心臓組織、脳組織、血管組織、腎臓組織、肺組織、生殖腺組織、造血組織が挙げられる。
【００９１】
特定の実施形態によれば、薬剤の少なくとも１つは、対象の筋肉に投与される。
【００９２】
本発明のいくつかの実施形態の医薬組成物を、当業界で周知のプロセスにより、例えば、従来の混合プロセス、溶解プロセス、顆粒化プロセス、糖衣錠作製プロセス、微粒子化プロセス、乳化プロセス、カプセル化プロセス、捕捉化プロセスまたは凍結乾燥プロセスなどの手段により製造することができる。
【００９３】
かくして、本発明のいくつかの実施形態における使用のための医薬組成物は、賦形剤および補助剤を含む、活性成分の製剤への調製を容易にし、薬学的に使用可能な製剤をもたらす１種または複数種の生理的に許容される担体を用いて、公知の方法で処方することができる。適切な処方は、選択される投与経路に依存する。
【００９４】
注射用には、医薬組成物の活性成分を、水性溶液、好ましくは、ハンクス液、リンゲル液、または生理食塩緩衝液などの生理的に適合可能な緩衝液の溶液として処方することができる。経粘膜投与用には、透過させようとする障壁に適した浸透剤が処方に用いられる。そのような浸透剤は、当業界で一般的に知られている。
【００９５】
経口投与用には、活性化合物と当業界で周知の薬学的に許容される担体とを混合することによって、医薬組成物を容易に処方することができる。そのような担体は、医薬組成物を患者による経口摂取のための錠剤、ピル、糖衣錠、カプセル剤、液体、ゲル、シロップ、スラリー、懸濁液などへの処方を可能にする。経口使用のための薬理学的製剤は、固体賦形剤を用いて作製可能であり、場合により、得られる混合物を粉砕し、得られた顆粒に必要に応じて好適な補助剤を添加した後、混合物を加工して、錠剤または糖衣錠のコアを得ることができる。好適な賦形剤は、特に充填剤であり、充填剤は、ラクトース、スクロース、マンニトール、またはソルビトールを含む糖、もろこしデンプン、コムギデンプン、コメデンプン、ジャガイモデンプン、ゼラチン、トラガカントゴム、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、カルボメチルセルロースナトリウムなどのセルロース製剤、および／またはポリビニルピロリドン（ＰＶＰ）などの生理的に許容されるポリマーである。必要に応じて崩壊剤を添加することができ、その例として、架橋ポリビニルピロリドン、寒天、またはアルギン酸またはその塩、例えばアルギン酸ナトリウム、などが挙げられる。
【００９６】
糖衣錠のコアは、好適なコーティングと共に提供される。この目的のために、濃縮糖溶液を用いることができ、所望により、アラビアゴム、タルク、ポリビニルピロリドン、カルボポールゲル、ポリエチレングリコール、二酸化チタン、ラッカー溶液および好適な有機溶媒または溶媒混合物を含有してもよい。染料または色素を、識別のため、または活性化合物用量の異なる組合せを特徴付けるために、錠剤または糖衣錠コーティングに添加することができる。
【００９７】
経口的に用いることができる医薬組成物は、ゼラチンから作られた押し込み式カプセルならびにゼラチンとグリセロールまたはソルビトールなどの可塑剤とから作られた軟質密封カプセルを含む。押し込み式カプセルは、ラクトースなどの充填剤、デンプンなどの結合剤、タルクまたはステアリン酸マグネシウムなどの潤滑剤、および場合により安定化剤、と混合した活性成分を含有してもよい。軟質カプセル中では、活性成分を、脂肪油、液体パラフィン、または液体ポリエチレングリコールなどの好適な液体中に溶解または懸濁することができる。さらに、安定化剤を添加することができる。経口投与のための全ての処方は、選択された投与経路に好適な用量にあるべきである。
【００９８】
口腔内投与用には、組成物は、公知の方法で処方した錠剤またはロゼンジ剤の形態を取ってもよい。
【００９９】
鼻吸入による投与用には、本発明のいくつかの実施形態における使用のための活性成分を、好適な推進剤、例えば、ジクロロジフルオロメタン、トリクロロフルオロメタン、ジクロロテトラフルオロエタンもしくは二酸化炭素を使用した加圧パックまたはネブライザーからのエアロゾルスプレー形状で、容易に送達される。加圧式のエアロゾルの場合、一定量を送達するためのバルブを提供することにより、用量単位を決定することができる。当該化合物と、ラクトースまたはスターチなどの好適な粉末基剤との粉末混合物を含有する、ディスペンサー中で使用するための、例えばゼラチンからなるカプセルやカートリッジに処方することができる。
【０１００】
本明細書に記載の医薬組成物を、例えば、ボーラス注射または連続輸注による非経口投与用に処方することができる。注射用の処方は、単位用量形態、例えば、アンプルに封入して、または複数用量容器で、所望により保存剤を添加して提供することができる。組成物は、油性または水性ビヒクル中の懸濁液、溶液または乳液であってもよく、懸濁剤、安定化剤および／または分散剤などの処方剤を含有してもよい。
【０１０１】
非経口投与用の医薬組成物は、水溶性形態の活性製剤の水性溶液を含む。さらに、活性成分の懸濁液を、適切な油性または水系の注射用懸濁液として調製することができる。好適な親油性溶媒またはビヒクルは、ゴマ油などの脂肪油、またはオレイン酸エチルなどの合成脂肪酸エステル、トリグリセリドまたはリポソームを含む。水性注射用懸濁液は、カルボキシメチルセルロースナトリウム、ソルビトールまたはデキストランなどの懸濁液の粘度を増加させる物質を含有してもよい。
【０１０２】
場合により、懸濁液はまた、好適な安定化剤、または活性成分の溶解度を高めて高濃縮溶液の調製を可能にするための薬剤を含有してもよい。
【０１０３】
あるいは、活性成分は粉末形態でもよく、使用前に好適なビヒクル、例えば、滅菌済みでパイロジェンを含まない水系溶液を用いて構成することができる。
【０１０４】
本発明のいくつかの実施形態の医薬組成物を、例えば、ココアバターまたは他のグリセリドなどの公知の坐剤基剤を用いて、坐剤または停留浣腸などの直腸用組成物に処方することもできる。
【０１０５】
本発明のいくつかの実施形態の状況での使用に好適な医薬組成物は、意図される目的を達成するのに有効な量の活性成分を含有する組成物を含む。
【０１０６】
特に、本明細書の提供する詳細な開示に照らせば、当業者の能力の範囲内において治療有効量を決定することが十分可能である。
【０１０７】
本発明の方法において用いられる製剤について、治療有効量または用量は、最初に、ｉｎ  ｖｉｔｒｏおよび細胞培養アッセイから見積もることができる。例えば、所望の濃度または力価を達成するための用量を、動物モデルにおいて処方することができる。そのような情報を用いて、ヒトにおける有用な用量をより正確に決定することができる。
【０１０８】
本明細書に記載の活性成分の毒性および治療効能を、ｉｎ  ｖｉｔｒｏで、培養細胞中で、または実験動物によって、標準的な薬学的手順によって決定することができる。これらのｉｎ  ｖｉｔｒｏおよび細胞培養アッセイならびに動物試験から得られたデータを、ヒトにおける使用のための用量範囲を処方する際に用いることができる。用量は、用いられる剤形および利用する投与経路に応じて変化させてもよい。医師はそれぞれ、患者の病態を鑑みて、正確な処方、投与経路および用量を選択することができる（例えば、Ｆｉｎｇｌ，ｅｔ  ａｌ．，１９７５，“Ｔｈｅ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｂａｓｉｓ  ｏｆ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ”、Ｃｈ．１  ｐ．１を参照されたい）。
【０１０９】
投薬量および間隔を個別に調整して、生物学的効果を誘導するか、または抑制するのに十分な活性成分の筋肉または脳レベル（最小有効濃度、ＭＥＣ）を確実にすることができる。ＭＥＣは、それぞれの製剤について変化するが、ｉｎ  ｖｉｔｒｏのデータから見積もることができる。ＭＥＣを達成するのに必要な用量は、個体の特徴および投与経路に依存する。検出アッセイを用いて、血漿濃度を決定することができる。
【０１１０】
治療される病態の重症度および応答性に応じて、投薬は単回または複数回のいずれであってもよく、治療過程は、数日から数週間、または治癒が達成されるまで、または疾患状態の縮小が達成されるまで継続する。
【０１１１】
投与される組成物の量は、勿論、治療される対象、苦痛の重篤度、投与様式、処方する医師の判断などに依存する。
【０１１２】
本発明のいくつかの実施形態の組成物は、必要に応じて、活性成分を含有する１つまたは複数の単位剤形を含有してもよい、パックまたはディスペンサー装置、例えば、ＦＤＡ認可済キットとして提供することができる。
【０１１３】
したがって、例えばＣＸＣＲ４アンタゴニスト（例えばＡＭＤ３１００）は、亜鉛または乳酸のいずれか一方または両方と共にキットとして提供することができる。
【０１１４】
パックは、例えば、ブリスターパックなどの、金属またはプラスチックホイルを含んでもよい。パックまたはディスペンサー装置に、投与のための指示書を添付してもよい。パックまたはディスペンサーには、医薬品の製造、使用または販売を規制する政府機関が規定した形態で容器と関連した通知書が収容されていてもよく、当該通知書は、組成物の形態またはヒトもしくは動物への投与が機関によって認可されていることを示す。そのような通知書は、例えば、処方薬について米国食品医薬品局により認可されたラベルまたは認可された製品挿入物のものであってもよい。上述したように、適合する薬学的な担体を用いて処方した本発明の製剤を含む組成物を調製し、適切な容器に入れ、示された病態の治療のためであるというラベルを付けることもできる。
【０１１５】
この出願から特許満了までの期間中、多くの関連ＣＸＣＲ４アンタゴニストが開発されることが予想されるが、ＣＸＣＲ４アンタゴニストという用語の範囲は、このような全ての新しい技術をすでに包含することが意図される。
【０１１６】
本明細書において、用語「約」とは、±１０％を指す。
【０１１７】
用語「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ）」、「含んでいる（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」、「含む（ｉｎｃｌｕｄｅｓ）」、「含んでいる（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」、「有している（ｈａｖｉｎｇ）」およびその同根語は、「それだけには限定されないが含む」を意味する。
【０１１８】
用語「からなる」とは、「含み、それに限定されること」を意味する。
【０１１９】
用語「実質的になる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ  ｅｓｓｅｎｔｉａｌｌｙ  ｏｆ）」は、組成物、方法または構造が、追加の成分、ステップ、および／または部分を含んでいてもよいが、当該追加の成分、ステップ、および／または部分が、特許請求の範囲に記載された組成物、方法、または構造の基本的および新規な特徴を物質的に変化させない場合に限られることを意味する。
【０１２０】
本明細書において、単数形の「ａ」、「ａｎ」および「ｔｈｅ」は、文脈が別途明確に示さない限り、複数の言及を含む。例えば、用語「化合物」または「少なくとも１種の化合物」は、その混合物を含む、複数の化合物を含み得る。
【０１２１】
本出願の全体を通して、本発明の様々な実施形態を範囲の形で提示することができる。範囲の形の記載は、単なる便宜上および簡潔さのためであり、本発明の範囲の変更不可能な限定と解釈すべきではないことを理解されたい。したがって、ある範囲の記述は、その範囲に含まれうる全ての部分範囲のみならず、範囲内の個々の数値をも具体的に開示するものと見なすべきである。例えば、１から６などの範囲の記述は、１から３、１から４、１から５、２から４、２から６、３から６などの部分範囲のみならず、その範囲内の個々の数値、例えば１、２、３、４、５、および６を具体的に開示するものと見なすべきである。これは、範囲の幅とは無関係に適用される。
【０１２２】
本発明の特徴であって、明確にするために個別の実施形態のとして記載したものは、組み合わせて１つの実施形態としても提供可能であることを理解されたい。逆に、簡潔にするために１つの実施形態として記載した本発明の様々な特徴を、個別に、または任意の適切な部分組合せで、または本発明で記載した他の実施形態との適切な組み合わせとして提供することもできる。様々な実施形態に関連して記載された特徴は、その特徴なしでは実施形態が動作不能でない限り、それらの実施形態の必須要件とは見なさない。
【０１２３】
上記で詳細に説明し、下記の請求の範囲内で請求する発明の様々な実施形態および態様について、以下の実施例で実験的裏付けを示す。
【０１２４】
実施例
上記説明と共に、本発明のいくつかの実施形態を限定することなく示す実施例を、以下に参照する。
【０１２５】
一般に、本明細書で用いられる命名法および本発明で用いられる実験手順は、分子技術、生化学的技術、微生物学的技術および組換えＤＮＡ技術を含む。そのような技術は、文献中に余すところなく説明されている。例えば、“Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ”，Ｓａｍｂｒｏｏｋ  ｅｔ  ａｌ．，（１９８９）、“Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ”，Ｖｏｌｕｍｅｓ  Ｉ−ＩＩＩ  Ａｕｓｕｂｅｌ，Ｒ．Ｍ．，ｅｄ．（１９９４）、Ａｕｓｕｂｅｌ  ｅｔ  ａｌ．，“Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ”，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ，Ｂａｌｔｉｍｏｒｅ，Ｍａｒｙｌａｎｄ（１９８９）、Ｐｅｒｂａｌ，“Ａ  Ｐｒａｃｔｉｃａｌ  Ｇｕｉｄｅ  ｔｏ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ”，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ（１９８８）、Ｗａｔｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，“Ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ  ＤＮＡ”，Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｂｏｏｋｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ、Ｂｉｒｒｅｎ  ｅｔ  ａｌ．（ｅｄｓ）“Ｇｅｎｏｍｅ  Ａｎａｌｙｓｉｓ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ  Ｓｅｒｉｅｓ”，Ｖｏｌｓ．１−４，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ（１９９８）；米国特許第４，６６６，８２８号、米国特許第４，６８３，２０２号、米国特許第４，８０１，５３１号、米国特許第５，１９２，６５９号および米国特許第５，２７２，０５７号に記載の方法；“Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌｏｇｙ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｈａｎｄｂｏｏｋ”，Ｖｏｌｕｍｅｓ  Ｉ−ＩＩＩ  Ｃｅｌｌｉｓ，Ｊ．Ｅ．，ｅｄ．（１９９４）、“Ｃｕｌｔｕｒｅ  ｏｆ  Ａｎｉｍａｌ  Ｃｅｌｌｓ  −  Ａ  Ｍａｎｕａｌ  ｏｆ  Ｂａｓｉｃ  Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅ”  ｂｙ  Ｆｒｅｓｈｎｅｙ，Ｗｉｌｅｙ−Ｌｉｓｓ，Ｎ．Ｙ．（１９９４），Ｔｈｉｒｄ  Ｅｄｉｔｉｏｎ、“Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ”，Ｖｏｌｕｍｅｓ  Ｉ−ＩＩＩ  Ｃｏｌｉｇａｎ  Ｊ．Ｅ．，ｅｄ．（１９９４）、Ｓｔｉｔｅｓ  ｅｔ  ａｌ．（ｅｄｓ），“Ｂａｓｉｃ  ａｎｄ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ”（８ｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ），Ａｐｐｌｅｔｏｎ  ＆  Ｌａｎｇｅ，Ｎｏｒｗａｌｋ，ＣＴ（１９９４）、Ｍｉｓｈｅｌｌ  ａｎｄ  Ｓｈｉｉｇｉ（ｅｄｓ），“Ｓｅｌｅｃｔｅｄ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｃｅｌｌｕｌａｒ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ”，Ｗ．Ｈ．Ｆｒｅｅｍａｎ  ａｎｄ  Ｃｏ．，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ（１９８０）；利用可能なイムノアッセイは、特許文献および科学文献に広く記載されており、例えば、米国特許第３，７９１，９３２号、米国特許第３，８３９，１５３号、米国特許第３，８５０，７５２号、米国特許第３，８５０，５７８号、米国特許第３，８５３，９８７号、米国特許第３，８６７，５１７号、米国特許第３，８７９，２６２号、米国特許第３，９０１，６５４号、米国特許第３，９３５，０７４号、米国特許第３，９８４，５３３号、米国特許第３，９９６，３４５号、米国特許第４，０３４，０７４号、米国特許第４，０９８，８��６号、米国特許第４，８７９，２１９号、米国特許第５，０１１，７７１号および米国特許第５，２８１，５２１号を参照されたい；“Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ”，Ｇａｉｔ，Ｍ．Ｊ．，ｅｄ．（１９８４）、“Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄ  Ｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ”，Ｈａｍｅｓ，Ｂ．Ｄ．，ａｎｄ  Ｈｉｇｇｉｎｓ  Ｓ．Ｊ．，ｅｄｓ．（１９８５）、“Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎ”，Ｈａｍｅｓ，Ｂ．Ｄ．，ａｎｄ  Ｈｉｇｇｉｎｓ  Ｓ．Ｊ．，ｅｄｓ．（１９８４）、“Ａｎｉｍａｌ  Ｃｅｌｌ  Ｃｕｌｔｕｒｅ”，Ｆｒｅｓｈｎｅｙ，Ｒ．Ｉ．，ｅｄ．（１９８６）、“Ｉｍｍｏｂｉｌｉｚｅｄ  Ｃｅｌｌｓ  ａｎｄ  Ｅｎｚｙｍｅｓ”，ＩＲＬ  Ｐｒｅｓｓ，（１９８６）、“Ａ  Ｐｒａｃｔｉｃａｌ  Ｇｕｉｄｅ  ｔｏ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ”，Ｐｅｒｂａｌ，Ｂ．，（１９８４），“Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ”、Ｖｏｌ．１−３１７，Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ、“ＰＣＲ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ：Ａ  Ｇｕｉｄｅ  Ｔｏ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ａｎｄ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ”，Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ（１９９０）、Ｍａｒｓｈａｋ  ｅｔ  ａｌ．，“Ｓｔｒａｔｅｇｉｅｓ  ｆｏｒ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ  −  Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｃｏｕｒｓｅ  Ｍａｎｕａｌ”，ＣＳＨＬ  Ｐｒｅｓｓ（１９９６）を参照されたい。これらの全ては、参照により、本明細書に完全に記載されたように組み込まれる。他の一般的な参考文献は、本明細書を通して提供する。これらに記載の手順は、当業者には周知であると考えられ、読者の便宜のために提供する。これらに含まれる情報は全て、参照により本明細書に組み込まれる。
【実施例１】
【０１２６】
ＡＬＳを治療するためのＡＭＤ３１００および乳酸
実験の設定：５０日齢の雌ＳＯＤ１−Ｇ９３Ａマウスを、５ｍｇ／ｋｇのＡＭＤ３１００単独、８９６ｍｇ／ｋｇのＮａ−Ｌ−乳酸単独、または５ｍｇ／ｋｇのＡＭＤ３１００と８９６ｍｇ／ｋｇのＮａ−Ｌ−乳酸との組合せのいずれかで、週２回、５０日齢から開始して（ＡＬＳの場合）死ぬまで処理した。全ての処理を皮下投与で実施した。様々な処理後にマウスの体重を、週１回量り、同様に週１回、運動機能を試験した。死ぬまでにかかった時間を記録した。
【０１２７】
結果：組み合わ処理は、死ぬまでの時間を遅らせることに加えて、生存率、体重および運動機能を増加させるという相乗効果を示した。マウスの１００％が処理に応答した（図１〜３）。さらに、ＳＯＤ１−Ｇ９３Ａマウスおよびそれらの同腹子は、５ｍｇ／ｋｇのＡＭＤ３１００単独の処理によって、ＭＣＴ１レベルの増加を示し、これが乳酸とＡＭＤ３１００との相乗効果の説明を提供している（図４および５）。
【０１２８】
図６Ａ〜Ｂは、５０日齢の雌のＳＯＤ１−Ｇ９３Ａマウスにおける５ｍｇ／ｋｇのＡＭＤ３１００処理対５ｍｇ／ｋｇのＡＭＤ３１００＋８９６ｍｇ／ｋｇの乳酸処理の後の、ＭＢＰおよびＢＡＣＥ１のそれぞれの変化を示す。図７Ａ〜Ｂは、５０日齢の雌のＳＯＤ１−Ｇ９３Ａマウスにおける、５ｍｇ／ｋｇのＡＭＤ３１００処理対５ｍｇ／ｋｇのＡＭＤ３１００と８９６ｍｇ／ｋｇの乳酸との組み合わせ処理の後の、アストロサイトの活性化における変化を示す。具体的には、図７ＡはＧＦＡＰレベルを示し、図７ＢはＳ１００Ｂレベルを示す。図８Ａ〜Ｂは、５０日齢の雌のＳＯＤ１−Ｇ９３Ａマウスにおける５ｍｇ／ｋｇのＡＭＤ３１００対５ｍｇ／ｋｇのＡＭＤ３１００＋８９６ｍｇ／ｋｇの乳酸処理の後の、小グリア細胞の反応性の変化を示す。具体的には、図８ＡはＩｂａ−１レベルを示し、一方で図８ＢはＩＬ−６レベルを示す。
【実施例２】
【０１２９】
ＡＬＳを治療するためのＡＭＤ３１００および亜鉛
実験の設定：５０日齢の雌のＳＯＤ１−Ｇ９３Ａマウスを、５ｍｇ／ｋｇのＡＭＤ３１００単独、または０．２５ｍｇ／ｋｇのＡＭＤ３１００＋０．０８ｍｇ／ｋｇの亜鉛の複合体もしくは０．１２５ｍｇ／ｋｇのＡＭＤ３１００＋０．０４ｍｇ／ｋｇの亜鉛の複合体のいずれかで、週２回、５０日齢から開始して死ぬまで処理した。全ての処理を皮下投与で実施した。様々な処理後、週１回マウスの体重を量り、同様に週１回、運動機能も試験した。死ぬまでにかかった時間を記録した。
【０１３０】
結果：複合体は、生存率、体重および特に運動機能を増加させるという有益な効果を示した（図９〜１２）。図１３Ａ〜Ｂは、５０日齢の雌のＳＯＤ１−Ｇ９３Ａマウスにおける５ｍｇ／ｋｇのＡＭＤ３１００対０．２５ｍｇ／ｋｇのＡＭＤ３１００＋０．０８ｍｇ／ｋｇの亜鉛の処理の後の、炎症における変化を示す。具体的には、図１３ＡはＧＦＡＰレベルを示し、一方で図１３ＢはＩｂａ−１レベルを示す。
【実施例３】
【０１３１】
ＡＬＳを治療するためのＡＭＤ３１００−亜鉛および乳酸
実験の設定：５０日齢の雄のＳＯＤ１−Ｇ９３Ａマウスを、５ｍｇ／ｋｇのＡＭＤ３１００単独または０．５ｍｇ／ｋｇのＡＭＤ３１００＋０．１７ｍｇ／ｋｇの亜鉛＋８９６ｍｇ／ｋｇの乳酸の複合体のいずれかで、週２回、５０日齢から開始して死ぬまで処理した。全ての処理を皮下投与で実施した。死ぬまでにかかった時間を記録した。
【０１３２】
結果：複合体は、ＰＢＳと比較して１９日、および５ｍｇ／ｋｇのＡＭＤ３１００単独と比較して５日、生存率を増加させるという有益な効果を示した（図１４）。
【実施例４】
【０１３３】
アルツハイマー病を治療するためのＡＭＤ３１００−亜鉛（および乳酸）
実験の設定：９カ月齢の３ｘＴｇ−ＡＤマウスを、ＰＢＳ、または０．５ｍｇ／ｋｇのＡＭＤ３１００、または０．５ｍｇ／ｋｇのＡＭＤ３１００＋０．１７ｍｇ／ｋｇのＺｎ、または０．５ｍｇ／ｋｇのＡＭＤ３１００＋０．１７ｍｇ／ｋｇのＺｎ＋８９６ｍｇ／ｋｇの乳酸で週１回処理した。全ての処理を皮下投与で実施した。処理の３カ月後、全てのマウスを、それらの認知機能を評価するためにＹ迷路試験に付した。各マウスにＹ迷路の２つのアームを５分にわたり探索させ、次の５分にわたり休憩させ、次いでＹ迷路の３つのアーム全てを次の５分にわたり探索させた。
【０１３４】
結果：０．５ｍｇ／ｋｇのＡＭＤ３１００＋０．１７ｍｇ／ｋｇのＺｎまたは０．５ｍｇ／ｋｇのＡＭＤ３１００＋０．１７ｍｇ／ｋｇのＺｎ＋８９６ｍｇ／ｋｇの乳酸で処理した雌３ｘＴｇ−ＡＤマウスは、それらの認知機能における改善を示した（図１５Ａ〜Ｂ）。図１６Ａ〜Ｂは、３ｘＴｇ−ＡＤマウスのＰＨＦ−１結果およびＭＣＴ−１結果における変化を示す棒グラフである。具体的には、図１６Ａは、ＰＨＦ−１の低減が、ＡＭＤのみと比較して、ＡＭＤ＋ＺｎおよびＡＭＤ＋複合体において顕著であることを示す。図１６Ｂは、ＭＣＴ−１の増加に関する傾向が観察されたが、統計学的に有意ではなかったことを示す。図１７Ａ〜Ｂは、ミエリン結合タンパク質（ＭＢＰ）アイソタイプにおける変化を示す棒グラフである。具体的には、図１７ＡはＭＢＰ−２３ｋＤａアイソタイプの増加を示し、一方で図１７ＢはＭＢＰ−１８ｋＤａアイソタイプの増加を示す。図１８は、ＣｈＡＴにおける変化を示す棒グラフである。ＡＭＤ＋ＺｎおよびＡＭＤ＋複合体処理群におけるＣｈＡＴの増加のみが、統計学的に有意であった。図１９は、ＥＬＩＳＡによるＡβにおける変化を示す棒グラフである。Ａβの低減は、膜画分において、ＡＭＤおよびＡＭＤ＋複合体処理群で統計学的に有意であった。
【０１３５】
本発明をその特定の実施形態とともに記載したが、多数の代替法、改変および変法も当業者に明らかとなる。したがって、添付の特許請求の範囲の趣旨および広い範囲内に入るすべてのこのような代替法、改変および変法も包含するものとする。
【０１３６】
本明細書で述べた全ての刊行物、特許、および特許出願は、当該刊行物、特許、または特許出願について具体的かつ個別に記載した場合と同様に、参照によりそれらが完全に本明細書に組み込まれるものとする。さらに、本願におけるいかなる参考文献の引用または記載も、そのような参考文献が本願に対する従来技術として存在することの自認と解釈すべきではない。セクションの見出しの使用についても、それらを必ずしも限定として解釈すべきではない。
【図１】
2018530577.tif 000003
【図２】
2018530577.tif 000004
【図３】
2018530577.tif 000005
【図４】
2018530577.tif 000006
【図５】
2018530577.tif 000007
【図６】
2018530577.tif 000008
【図７】
2018530577.tif 000009
【図８】
2018530577.tif 000010
【図９】
2018530577.tif 000011
【図１０】
2018530577.tif 000012
【図１１】
2018530577.tif 000013
【図１２】
2018530577.tif 000014
【図１３】
2018530577.tif 000015
【図１４】
2018530577.tif 000016
【図１５】
2018530577.tif 000017
【図１６】
2018530577.tif 000018
【図１７】
2018530577.tif 000019
【図１８】
2018530577.tif 000020
【図１９】
2018530577.tif 000021
【国際調査報告】
2018530577.tif 000022
2018530577.tif 000023
2018530577.tif 000024