(57)【要約】  本発明は、置換されたオキソ−ピリジン誘導体およびそれの製造方法、ならびに疾患、特には心血管系の疾患、好ましくは血栓性もしくは血栓塞栓性疾患、ならびに浮腫、さらには眼科疾患を治療および／または予防するための医薬製造におけるそれの使用に関するものである。【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記式の化合物または該化合物の塩、該化合物の溶媒和物もしくは該化合物の塩の溶媒和物のうちの一つ。
【化１】
2018509426.tif 000074
［式中、
Ｒ１は、下記式の基：
【化２】
2018509426.tif 000075
を表し、
＊は、オキソピリジン環への結合箇所であり、
Ｒ６は、塩素を表し、
Ｒ７は、シアノ、ジフルオロメチルまたはジフルオロメトキシを表し、
Ｒ８は、水素またはフッ素を表し、
Ｒ２は、塩素またはメトキシを表し、
Ｒ３は、エチルを表し、
エチルは、ｔｅｒｔ−ブトキシ、イソプロポキシ、Ｃ３−Ｃ６−シクロアルキルオキシおよび４から６員のオキソ複素環オキシからなる群から選択される置換基で置換されており、
ｔｅｒｔ−ブトキシおよびイソプロポキシは、１から３個のフッ素置換基によって置換されていても良く、
シクロアルキルオキシおよびオキソ複素環オキシは、それぞれ独立にフッ素およびメチルからなる群から選択される１から２個の置換基によって置換されていても良く、
Ｒ４は、水素を表し、
Ｒ５は、下記式の基：
【化３】
2018509426.tif 000076
を表し、
＃は、窒素原子への結合箇所であり、
Ｒ９は、ヒドロキシカルボニルを表し、
Ｒ１０は、水素またはフッ素を表す。］
【請求項２】
Ｒ１が、下記式の基：
【化４】
2018509426.tif 000077
を表し、
＊が、オキソピリジン環への結合箇所であり、
Ｒ６が、塩素を表し、
Ｒ７が、シアノ、またはジフルオロメトキシを表し、
Ｒ８が、水素を表し、
Ｒ２が、メトキシを表し、
Ｒ３が、エチルを表し、
エチルが、ｔｅｒｔ−ブトキシ、イソプロポキシおよびシクロブチルオキシからなる群から選択される置換基によって置換されており、
シクロブチルオキシがメチル置換基によって置換されていても良く、
Ｒ４が、水素を表し、
Ｒ５が、下記式の基：
【化５】
2018509426.tif 000078
を表し、
＃が窒素原子への結合箇所であり、
Ｒ９が、ヒドロキシカルボニルを表し、
Ｒ１０が、水素を表す、
請求項１に記載の化合物、または該化合物の塩、該化合物の溶媒和物もしくは該化合物の塩の溶媒和物のうちの一つ。
【請求項３】
下記式を有する請求項１又は２に記載の化合物または該化合物の塩、該化合物の溶媒和物もしくは該化合物の塩の溶媒和物のうちの一つ。
【化６】
2018509426.tif 000079
［式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４およびＲ５はそれぞれ、請求項１または２で定義の通りである。］
【請求項４】
請求項１に記載の式（Ｉ）の化合物または該化合物の塩、該化合物の溶媒和物もしくは該化合物の塩の溶媒和物の製造方法であって、
［Ａ］下記式の化合物：
【化７】
2018509426.tif 000080
［式中、
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４およびＲ１０は請求項１で定義の通りであり、
Ｒ１４は、ｔｅｒｔ−ブチルを表す。］を酸と反応させて、下記式の化合物：
【化８】
2018509426.tif 000081
［式中、
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４およびＲ１０はそれぞれ請求項１で定義の通りであり、
Ｒ９は、ヒドロキシカルボニルを表す。］を得るか、
または
［Ｂ］下記式の化合物：
【化９】
2018509426.tif 000082
［式中、
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４およびＲ１０はそれぞれ請求項１で定義の通りであり、
Ｒ１４は、メチルまたはエチルを表す。］を塩基と反応させて、下記式の化合物：
【化１０】
2018509426.tif 000083
［式中、
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４およびＲ１０はそれぞれ請求項１で定義の通りであり、
Ｒ９は、ヒドロキシカルボニルを表す。］を得る、方法。
【請求項５】
疾患の治療および／または予防のための請求項１から３のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項６】
血栓性または血栓塞栓性障害の治療および／または予防方法で使用される請求項１から３のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項７】
疾患の治療および／または予防のための医薬品の製造における、請求項１から３のいずれか１項に記載の化合物の使用。
【請求項８】
血栓性または血栓塞栓性障害の治療および／または予防のための医薬品の製造における、請求項１から３のいずれか１項に記載の化合物の使用。
【請求項９】
眼科疾患の治療および／または予防のための医薬品の製造における、請求項１から３のいずれか１項に記載の化合物の使用。
【請求項１０】
クローン病もしくは潰瘍性大腸炎などの腸の遺伝性血管浮腫または炎症性障害の治療および／または予防のための医薬品の製造における、請求項１から３のいずれか１項に記載の化合物の使用。
【請求項１１】
不活性で無毒性の医薬として好適な賦形剤と組み合わせて請求項１から３のいずれか１項に記載の化合物を含む医薬。
【請求項１２】
血栓性または血栓塞栓性障害の治療および／または予防のための請求項１１に記載の医薬。
【請求項１３】
眼科疾患の治療および／または予防のための請求項１１に記載の医薬。
【請求項１４】
クローン病もしくは潰瘍性大腸炎などの腸の遺伝性血管浮腫または炎症性障害の治療および／または予防のための請求項１１に記載の医薬。
【請求項１５】
治療上有効量の少なくとも一つの請求項１から３のいずれか１項に記載の化合物、請求項１１に記載の医薬、または請求項７、８、９もしくは１０に従って得られる医薬を投与することによる、ヒトおよび動物での、血栓性もしくは血栓塞栓性障害または眼科障害またはクローン病もしくは潰瘍性大腸炎などの腸の遺伝性血管浮腫もしくは炎症性障害の治療方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、置換されたオキソピリジン誘導体およびそれらの製造方法、ならびに疾患、特には心血管障害、好ましくは血栓性もしくは血栓塞栓性障害、および浮腫、さらには眼科疾患の治療および／または予防のための医薬を製造するためのそれらの使用に関するものである。
【背景技術】
【０００２】
血液凝固は、血管壁における欠陥を迅速かつ信頼性高く「塞ぐ」上で役立つ生物の保護機序である。そうして、血液の喪失を回避することができるか、最小限に維持することができる。血管損傷後の止血は、主として血漿タンパク質の複合反応の酵素的カスケードが誘発される凝固システムによって行われる。多くの血液凝固因子がこのプロセスには関与しており、そのそれぞれの因子が、活性化時に、個々の次の不活性前駆体をそれの活性化形に変換する。そのカスケードが終了すると、可溶性のフィブリノゲンが不溶性のフィブリンになり、その結果として血塊が形成される。血液凝固においては、従来から、最終的な結合反応経路に終わる内在系と外因系が良く知られている。ここで、Ｘａ因子およびＩＩａ因子（トロンビン）が重要な役割を果たす。Ｘａ因子は、ＶＩＩａ因子／組織因子（外因経路）およびＸ因子の変換によるテンナーゼ複合体（内因性経路）の両方を介して形成されることから、二つの凝固経路のシグナルをまとめるものである。活性化セリンプロテアーゼＸａは、プロトロンビンを開裂させてトロンビンとし、それは一連の反応を介して、カスケードからのインパルスを血液の凝固状態に変換する。
【０００３】
さらに最近では、凝血カスケードの二つの別個の領域（外因性経路および内因性経路）の従来の理論が、新たな知見により変わった。これらのモデルでは、活性化されたＶＩＩａ因子の組織因子（ＴＦ）への結合によって凝固が開始する。生じた複合体がＸ因子を活性化し、それによって次に、トロンビンが生成し、その後フィブリンの産生と止血の損傷封着最終産生物としての血小板活性化（ＰＡＲ−１を介して）に至る。その後の増幅／伝播期と比較して、この最初の期でのトロンビン産生速度は低く、ＴＦ−ＦＶＩＩａ−ＦＸ複合体の阻害剤としてのＴＦＰＩの発生の結果として、時間が限られている。
【０００４】
凝固の開始から増幅および伝播への移行の中心成分はＸＩａ因子である。正のフィードバック・ループにおいて、トロンビンは、Ｖ因子およびＶＩＩＩ因子に加えて、ＸＩ因子も活性化してＸＩａ因子とし、それによってＩＸ因子はＩＸａ因子に変換され、そしてこのようにして生じたＩＸａ因子／ＶＩＩＩａ因子複合体を介して、Ｘが活性化され、従って次にトロンビン形成が非常に刺激されて、
強い血栓成長が生じ、血栓が安定する。
【０００５】
さらに、組織因子を介した刺激に加えて、凝固系は、特には外来細胞（例えば細菌）の表面構造だけでなく人工血管、ステントおよび体外循環などの人工的表面などの負に帯電した表面で活性化され得ることが注目されるようになっている。その表面では、最初に、ＸＩＩ因子（ＦＸＩＩ）が活性化されてＸＩＩａ因子となり、それが次に、細胞表面に結合したＸＩ因子を活性化してＸＩａ因子とする。これによって、上記のような凝固カスケードがさらに活性化される。さらに、ＸＩＩａ因子は、結合した血漿プロカリクレインも活性化して、血漿カリクレイン（ＰＫ）とし、それは増強ループで、最初に、さらなるＸＩＩ因子活性化を生じ、全体的に凝固カスケード開始の増幅が生じる。さらに、ＰＫは、重要なブラジキニン放出プロテーアゼであり、それによって特に、内皮透過性が高くなる。報告されているさらなる基質は、プロレニンおよびプロウロキナーゼであり、それの活性化がレニン−アンギオテンシン系および線維素溶解の調節プロセスに影響し得る。従って、ＰＫの活性化は、凝固プロセスと炎症プロセスの間の重要な連結作用である。
【０００６】
凝固系の無制御の活性化または活性化プロセスの阻害欠陥によって、血管（動脈、静脈、リンパ管）または心腔における局所的な血栓または塞栓の形成が生じ得る。さらに、全身凝固性亢進により、全身的な血栓形成が生じ、最終的に播種性血管内凝固の文脈での消費性凝固障害に至る可能性がある。血栓塞栓性合併症が、血液透析中などの体外循環系で、さらには人工血管もしくは人工心臓弁およびステントでも起こり得る。
【０００７】
多くの心血管障害および代謝障害の過程で、高脂血症、糖尿病もしくは喫煙などの全身性因子により、鬱血を伴う血流における変化、例えば心房細動における変化のため、または血管壁における病的変化、例えば内皮機能不全もしくはアテローム性動脈硬化のために、凝血および血小板活性化を起こす傾向が高まる。この望ましくない、そして過剰な凝固活性化によって、フィブリン豊富および血小板豊富の血栓の形成により、生命を脅かす状態を伴う血栓塞栓障害および血栓合併症が生じる可能性がある。その場合、炎症プロセスも関与している可能性がある。従って、血栓塞栓性疾患は現在もなお、最も先進の工業国での罹患および死亡の最大の原因である。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
先行技術から公知の抗凝血剤、すなわち血液凝固を阻害もしくは予防する物質は、各種の欠点を有する。従って、実際には、血栓／血栓塞栓障害の有効な治療方法または予防は、非常に難しく、不満足であることが認められる。
【０００９】
血栓塞栓障害の治療法および予防において、最初にヘパリンを使用し、それは非経口投与または皮下投与される。より好ましい薬物動態特性が得られることから、今日では低分子量ヘパリンが好まれるケースが増えている。しかしながら、ヘパリン療法で遭遇する下記の公知の欠点は、このようにいずれにしても回避することができない。従って、ヘパリンは経口的には効果がなく、比較的短い半減期しかもたない。さらに、出血リスクが高く、特に脳出血および消化管での出血が起こり得るものであり、血小板減少症、薬物性脱毛症または骨粗鬆症が生じ得る。低分子量ヘパリンにより、ヘパリン誘発血小板減少症の発症に至る確率が低下する。しかしながら、それも、皮下でしか投与できない。これは、長い半減期を有する合成の選択的Ｘａ因子阻害薬であるフォンダパリヌクスにも当てはまる。
【００１０】
第２の種類の抗凝血剤は、ビタミンＫ拮抗薬である。それには例えば、１，３−インダンジオン類、特には肝臓におけるある種のビタミンＫ依存性凝固因子の各種産生物の合成を非選択的に阻害するワーファリン、フェンプロクーモン、ジクマロールおよび他のクマリン誘導体などの化合物などがある。作用機序のため、作用開始はごく非常に遅い（作用開始までの待ち時間３６から４８時間）。その化合物は経口投与することができる。しかしながら、出血のリスクが高く、治療係数が狭いために、複雑な個々の調節および患者のモニタリングが必要である。さらに、消化管の問題、脱毛および皮膚壊死などの他の副作用が報告されている。
【００１１】
経口抗凝血剤のより最近のアプローチは、臨床評価の各種相または臨床使用でのものであり、各種試験でそれらの有効性を明らかにしている。しかしながら、これらの医薬を使用することで、特に素因のある患者で出血合併症を生じることもあり得る。従って、抗血栓薬の場合、治療ウィンドウが非常に重要である。凝血阻害の治療活性用量と出血を起こし得る用量との間の距離は、できるだけ大きくして、最小のリスクプロファイルで最大の治療活性が達成されるようにすべきである。
【００１２】
例えばＸＩａ因子阻害薬などの抗体による各種イン・ビトロおよびイン・ビボモデルだけでなく、ＸＩａ因子ノックアウトモデルでも、出血時間の延長や出血量の拡大が小さいか全くなく抗血栓効果が確認された。臨床試験では、高いＸＩａ因子濃度は、事象の割合上昇に関連していた。対照的に、ＸＩ因子欠乏症（Ｃ型血友病）は自然出血を生じさせず、外科手術および外傷時にのみ認められたが、ある種の血栓塞栓事象に関して保護を示した。
【００１３】
さらに血漿カリクレイン（ＰＫ）は、糖尿病性網膜症、黄斑浮腫および遺伝性血管浮腫もしくは慢性炎症性腸障害での場合のような血管透過性上昇または慢性炎症障害を伴う他の障害に関連している。糖尿病性網膜症は、主として、微小血管欠乏によって引き起こされ、それによって血管の基底膜肥厚および血管周皮細胞の喪失があり、それに続いて血管閉塞と網膜虚血があり、そうして引き起こされた網膜低酸素症のために、血管透過性上昇が生じ、それに続いて黄斑浮腫が形成され、存在する全てのプロセスの故に患者は失明する。遺伝性血管浮腫（ＨＡＥ）では、生理的カリクレイン阻害剤であるＣ１−エステラーゼ阻害剤の生成低下によって、血漿カリクレイン活性化が制御されなくなり、結果的に劇症性浮腫形成および強い疼痛を伴う炎症が生じる。実験動物モデルから、血漿カリクレインの阻害によって、血管透過性上昇が阻害され、従って、黄斑浮腫および／または糖尿病性網膜症の形成が防止され得るか、ＨＡＥの急性症状を改善し得ることが示されている。経口血漿カリクレイン阻害剤も、ＨＡＥの予防に使用可能であると考えられる。
【００１４】
血漿カリクレインによって生じるキニン類は特に、慢性炎症性腸障害（ＣＩＤ）の進行を引き起こす作用を有する。ブラジキニン受容体の活性化によるそれらの炎症誘発効果が、その疾患の進行を誘発し、強化する。クローン病患者についての研究で、腸管上皮におけるカリクレイン濃度と腸炎症の度合いの間に相関があることが示されている。カリクレイン−キニン系の活性化が、同様に実験動物試験で認められている。従って、カリクレイン阻害剤によるブラジキニン合成の阻害は、慢性炎症性腸障害の予防および／または治療にも使用可能であると考えられる。
【００１５】
さらに、多くの障害において、抗血栓原理と抗炎症原理の組み合わせも、凝血および炎症の相互促進を防止する上で特に興味深いものであると考えられる。
【００１６】
従って本発明の目的は、ヒトおよび動物での心血管障害、特に血栓もしくは血栓塞栓障害、および／または浮腫性障害、および／または眼科障害、特に糖尿病性網膜症および／または黄斑浮腫の治療のための新規な化合物であって、広い治療幅を有する化合物を提供することにある。
【００１７】
ＷＯ２００６／０３００３２には特に、ｍＧｌｕＲ２受容体のアロステリック調節因子としての置換されたピリジノンが記載されており、ＷＯ２００８／０７９７８７には、置換されたピリジン−２−オンおよびグルコキナーゼ活性化剤としてのそれの使用が記載されている。ＷＯ２０１４／１５４７９４、ＷＯ２０１４／１６０５９２、ＷＯ２０１５／０１１０８７およびＷＯ２０１５／０６３０９３には、血栓症の治療のためのＸＩａ因子阻害剤としての置換されたオキソピリジン誘導体が記載されている。
【課題を解決するための手段】
【００１８】
本発明は、下記式の化合物ならびにそれの塩、それの溶媒和物およびそれの塩の溶媒和物を提供する。
【化１】
2018509426.tif 000002
【００１９】
式中、
Ｒ１は、下記式の基：
【化２】
2018509426.tif 000003
【００２０】
を表し、
＊は、オキソピリジン環への結合箇所であり、
Ｒ６は、塩素を表し、
Ｒ７は、シアノ、ジフルオロメチルまたはジフルオロメトキシを表し、
Ｒ８は、水素またはフッ素を表し、
Ｒ２は、塩素またはメトキシを表し、
Ｒ３は、エチルを表し、
エチルは、ｔｅｒｔ−ブトキシ、イソプロポキシ、Ｃ３−Ｃ６−シクロアルキルオキシおよび４から６員のオキソ複素環オキシからなる群から選択される置換基で置換されており、
ｔｅｒｔ−ブトキシおよびイソプロポキシは、１から３個のフッ素置換基によって置換されていても良く、
シクロアルキルオキシおよびオキソ複素環オキシは、それぞれ独立にフッ素およびメチルからなる群から選択される１から２個の置換基によって置換されていても良く、
Ｒ４は、水素を表し、
Ｒ５は、下記式の基：
【化３】
2018509426.tif 000004
【００２１】
を表し、
＃は、窒素原子への結合箇所であり、
Ｒ９は、ヒドロキシカルボニルを表し、
Ｒ１０は、水素またはフッ素を表す。
【発明を実施するための形態】
【００２２】
本発明による化合物は、式（Ｉ）による化合物ならびにそれの塩、溶媒和物および塩の溶媒和物、さらには式（Ｉ）によって包含され、実施例として後述される化合物、ならびにそれの塩、溶媒和物および塩の溶媒和物であるが、それは式（Ｉ）によって包含され、後述される化合物がまだ塩、溶媒和物および塩の溶媒和物ではない限りにおいてである。
【００２３】
構造に応じて、本発明による化合物は、異なる立体異性体型で存在することができ、すなわち立体配置異性体の形態で、または、適切な場合、コンホメーション異性体の形態で存在することができる（エナンチオマーおよび／またはジアステレオマー、アトロプ異性体の場合のものなど）。従って本発明は、エナンチオマーおよびジアステレオマーおよびそれらの個々の混合物を包含する。立体異性体的に均一な構成成分は、公知の方法でエナンチオマーおよび／またはジアステレオマーのそのような混合物から単離することができる。クロマトグラフィープロセスがこれには好ましく用いられ、特にはアキラルもしくはキラル相でのＨＰＬＣクロマトグラフィーである。
【００２４】
本発明による化合物が互変異型であることが可能な場合、本発明は全ての互変異型を包含する。
【００２５】
本発明はまた、本発明による化合物の全ての好適な同位体形態を包含する。本発明の化合物の同位体形態は本明細書において、本発明による化合物内の少なくとも一つの原子が同じ原子番号であるが、自然界において通常もしくは支配的にある原子質量とは異なる原子質量を有する別の原子に交換されている化合物を意味するものと理解される。本発明による化合物に組み込むことができる同位体の例には、水素、炭素、窒素、酸素、リン、硫黄、フッ素、塩素、臭素およびヨウ素の同位体があり、例えば２Ｈ（重水素）、３Ｈ（三重水素）、１３Ｃ、１４Ｃ、１５Ｎ、１７Ｏ、１８Ｏ、３２Ｐ、３３Ｐ、３３Ｓ、３４Ｓ、３５Ｓ、３６Ｓ、１８Ｆ、３６Ｃｌ、８２Ｂｒ、１２３Ｉ、１２４Ｉ、１２９Ｉおよび１３１Ｉである。本発明による化合物の特定の同位体型、特別には１以上の放射性同位体が組み込まれているものは、例えば、作用機序または身体中での有効成分分布の試験に有用となり得る。製造および検出が比較的容易であることから、特には、３Ｈまたは１４Ｃ同位体で標識された化合物がこの目的には好適である。さらに、同位体、例えば重水素を組み込むことにより、化合物の代謝安定性が高くなることで、例えば身体中での半減期が長くなり、必要な活性成分用量が減ることで、治療上特に有利となり得る。従って、本発明の化合物のそのような修飾も場合により、本発明の好ましい実施形態を構成することができる。本発明による化合物の同位体型は、当業者に公知の方法によって、例えばさらに下記に記載の方法および実施例に記載の手順によって、個々の試薬および／または出発化合物の相当する同位体修飾を用いることで製造することができる。
【００２６】
本発明の文脈における好ましい塩は、本発明による化合物の生理的に許容される塩である。しかしながら、本発明は、自体は医薬用途には適さないが、例えば本発明による化合物の単離や精製には用いることができる塩も包含する。
【００２７】
本発明による化合物の生理的に許容される塩には、鉱酸、カルボン酸およびスルホン酸の酸付加塩、例えば塩酸、臭化水素酸、硫酸、リン酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、トルエンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、ナフタレンジスルホン酸、酢酸、トリフルオロ酢酸、プロピオン酸、乳酸、酒石酸、リンゴ酸、クエン酸、フマル酸、マレイン酸および安息香酸の塩などがある。
【００２８】
本発明による化合物の生理的に許容される塩にはさらに、通常の塩基の塩、例えば好ましくは、アルカリ金属塩（例えばナトリウムおよびカリウム塩）、アルカリ土類金属塩（例えばカルシウムおよびマグネシウム塩）およびアンモニアもしくは１から１６個の炭素原子を有する有機アミンから誘導されるアンモニウム塩、例えば好ましくはエチルアミン、ジエチルアミン、トリエチルアミン、エチルジイソプロピルアミン、モノエタノールアミン、ジエタノールアミン、トリエタノールアミン、ジシクロヘキシルアミン、ジメチルアミノエタノール、プロカイン、ジベンジルアミン、Ｎ−メチルモルホリン、アルギニン、リジン、エチレンジアミン、Ｎ−メチルピペリジンおよびコリンの塩などがある。
【００２９】
本発明の文脈における溶媒和物は、固体または液体で、溶媒分子による配位によって錯体を形成している本発明の化合物の形態と記述される。水和物は、配位が水によるものである溶媒和物の特定の形態である。
【００３０】
さらに、本発明は、本発明の化合物のプロドラッグも包含する。「プロドラッグ」という用語は、それに関する限り、生理活性であるか生理的に不活性であり得るが、身体中での滞留中に、本発明による化合物に変換される（例えば、代謝または加水分解により）化合物を包含する。
【００３１】
本発明の文脈において、「治療」または「治療する」には、疾患、状態、障害、外傷もしくは健康問題、またはそのような状態および／またはそのような状態の症状の発達、経過もしくは進行の阻害、遅延、抑制、緩和、減弱、制限、低減、抑止、対抗または治癒などがある。「療法」という用語は本明細書において、「治療」という用語と同義であると理解される。
【００３２】
「防止」、「予防」および「阻止」という用語は、本発明の文脈において同義的に使用され、疾患、状態、障害、外傷もしくは健康問題を被る、経験する、患うまたは有するリスク、またはそのような状態および／またはそのような状態の症状の発達もしくは進行の回避もしくは軽減を指す。
【００３３】
疾患、状態、障害、外傷または健康問題の治療または予防は、部分的であっても完全であっても良い。
【００３４】
本発明の文脈において、別段の断りがない限り、置換基は下記のように定義される。
【００３５】
シクロアルキルは、３から６個の炭素原子を有する単環式シクロアルキル基を表し、シクロアルキルの好ましい例には、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチルおよびシクロヘキシルがある。
【００３６】
シクロアルキルオキシは、酸素原子を介して結合しており、３から６個の炭素原子を有する単環式シクロアルキル基を表し、シクロアルキルオキシの好ましい例はシクロプロポキシ、シクロブチルオキシ、シクロペンチルオキシおよびシクロヘキシルオキシである。
【００３７】
基Ｒ３の定義における４から６員のオキソ複素環は、１個の環原子が酸素原子でであり、酸素原子を介して結合している４から６個の環原子を有する飽和単環式基を表し、例えば好ましくは、オキセタニルオキシ、テトラヒドロフラニルオキシおよびテトラヒドロ−２Ｈ−ピラニルオキシである。
【００３８】
Ｒ１を表すことができる基の式において、＊によって印を付けた線の終点は各場合で、炭素原子やＣＨ２基を表すのではなく、Ｒ１が結合している原子への結合の一部である。
【００３９】
Ｒ５を表すことができる基の式において、＃によって印を付けた線の終点は各場合で、炭素原子やＣＨ２基を表すのではなく、Ｒ５が結合している原子への結合の一部である。
【００４０】
好ましいものは、
Ｒ１が、下記式の基：
【化４】
2018509426.tif 000005
【００４１】
を表し、
＊が、オキソピリジン環への結合箇所であり、
Ｒ６が、塩素を表し、
Ｒ７が、シアノ、またはジフルオロメトキシを表し、
Ｒ８が、水素を表し、
Ｒ２が、メトキシを表し、
Ｒ３が、エチルを表し、
エチルが、ｔｅｒｔ−ブトキシ、イソプロポキシおよびシクロブチルオキシからなる群から選択される置換基によって置換されており、
シクロブチルオキシがメチル置換基によって置換されていても良く、
Ｒ４が、水素を表し、
Ｒ５が、下記式の基：
【化５】
2018509426.tif 000006
【００４２】
を表し、
＃が窒素原子への結合箇所であり、
Ｒ９が、ヒドロキシカルボニルを表し、
Ｒ１０が、水素を表す、
式（Ｉ）の化合物ならびにそれの塩、それの溶媒和物およびそれの塩の溶媒和物である。
【００４３】
やはり好ましいものは、
Ｒ１が、下記式の基：
【化６】
2018509426.tif 000007
【００４４】
を表し、
＊が、オキソピリジン環への結合箇所であり、
Ｒ６が、塩素を表し、
Ｒ７が、シアノまたはジフルオロメトキシを表し、
Ｒ８が、水素を表し、
Ｒ２が、メトキシを表し、
Ｒ３が、エチルを表し、
エチルが、ｔｅｒｔ−ブトキシ、イソプロポキシおよびシクロブチルオキシからなる群から選択される置換基によって置換されており、
Ｒ４が、水素を表し、
Ｒ５は、下記式の基：
【化７】
2018509426.tif 000008
【００４５】
を表し、
＃が窒素原子への結合箇所であり、
Ｒ９が、ヒドロキシカルボニルを表し、
Ｒ１０が、水素を表す，
式（Ｉ）の化合物ならびにそれの塩、それの溶媒和物およびそれの塩の溶媒和物である。
【００４６】
やはり好ましいものは、
Ｒ１が、下記式の基：
【化８】
2018509426.tif 000009
【００４７】
を表し、
＊が、オキソピリジン環への結合箇所であり、
Ｒ６が、塩素を表し、
Ｒ７が、シアノを表し、
Ｒ８が、水素を表す式（Ｉ）の化合物である。
【００４８】
やはり好ましいものは、Ｒ３がエチルを表し、エチルがｔｅｒｔ−ブトキシ置換基によって置換されている式（Ｉ）の化合物である。
【００４９】
やはり好ましいものは、Ｒ３がエチルを表し、エチルがシクロブチルオキシ置換基によって置換されている式（Ｉ）の化合物である。
【００５０】
やはり好ましいものは、Ｒ３がエチルを表し、エチルがシクロブチルオキシ置換基によって置換されており、シクロブチルオキシがメチル置換基によって置換されていても良い式（Ｉ）の化合物である。
【００５１】
やはり好ましいものは、Ｒ３がエチルを表し、エチルが１−メチルシクロブチルオキシ置換基によって置換されている式（Ｉ）の化合物である。
【００５２】
やはり好ましいものは、下記式（Ｉａ）を有する化合物である。
【化９】
2018509426.tif 000010
【００５３】
式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４およびＲ５は上記で定義の通りである。
【００５４】
本発明はさらに、式（Ｉ）の化合物またはそれの塩、それの溶媒和物もしくはそれの塩の溶媒和物の製造方法であって、
［Ａ］下記式の化合物：
【化１０】
2018509426.tif 000011
【００５５】
［式中、
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４およびＲ１０はそれぞれ上記で定義の通りであり、
Ｒ１４は、ｔｅｒｔ−ブチルを表す。］を酸と反応させて、下記式の化合物：
【化１１】
2018509426.tif 000012
【００５６】
［式中、
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４およびＲ１０はそれぞれ上記で定義の通りであり、
Ｒ９は、ヒドロキシカルボニルを表す。］を得ること、
または
［Ｂ］下記式の化合物：
【化１２】
2018509426.tif 000013
【００５７】
［式中、
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４およびＲ１０はそれぞれ上記で定義の通りであり、
Ｒ１４は、メチルまたはエチルを表す。］を塩基と反応させて、下記式の化合物：
【化１３】
2018509426.tif 000014
【００５８】
［式中、
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４およびＲ１０はそれぞれ上記で定義の通りであり、
Ｒ９は、ヒドロキシカルボニルを表す。］を得ることを含む方法を提供する。
【００５９】
式（ＩＩａ）および（ＩＩｂ）の化合物が一緒に、式（ＩＩ）の化合物の群を形成している。
【００６０】
方法［Ａ］による反応は通常、不活性溶媒中、好ましくは室温から６０℃の温度範囲で常圧下に行う。
【００６１】
不活性溶媒は、例えば、ハロゲン化炭化水素、例えばジクロロメタン、トリクロロメタン、四塩化炭素または１，２−ジクロロエタン、またはエーテル類、例えばテトラヒドロフランまたはジオキサンであり、好ましいものはジクロロメタンである。
【００６２】
酸は、例えば、トリフルオロ酢酸または塩化水素／ジオキサンであり、好ましいものはトリフルオロ酢酸である。
【００６３】
方法［Ｂ］による反応は通常、不活性溶媒中、好ましくは室温から溶媒還流の温度範囲で常圧下に行う。
【００６４】
不活性溶媒は、例えば、ハロゲン化炭化水素、例えばジクロロメタン、トリクロロメタン、四塩化炭素または１，２−ジクロロエタン、アルコール類、例えばメタノールまたはエタノール、エーテル類、例えばジエチルエーテル、メチルｔｅｒｔ−ブチルエーテル、１，２−ジメトキシエタン、ジオキサンまたはテトラヒドロフラン、または他の溶媒、例えばジメチルホルムアミド、ジメチルアセトアミド、アセトニトリルもしくはピリジン、または溶媒の混合物、または溶媒の水との混合物であり、好ましいものは、テトラヒドロフランおよび水の混合物またはメタノールおよび水の混合物である。
【００６５】
塩基は、例えば、アルカリ金属水酸化物、例えば水酸化ナトリウム、水酸化リチウムまたは水酸化カリウム、またはアルカリ金属炭酸塩、例えば炭酸セシウム、炭酸ナトリウムまたは炭酸カリウム、またはアルコキシド類、例えばカリウムｔｅｒｔ−ブトキシドまたはナトリウムｔｅｒｔ−ブトキシドであり、好ましいものは水酸化リチウムまたは炭酸セシウムである。
【００６６】
式（ＩＩ）の化合物は公知であるか、下記式の化合物：
【化１４】
2018509426.tif 000015
【００６７】
［式中、Ｒ１、Ｒ２およびＲ３はそれぞれ上記で定義の通りである。］を、下記式の化合物：
【化１５】
2018509426.tif 000016
【００６８】
［式中、
Ｒ４およびＲ１０はそれぞれ上記で定義の通りであり、
Ｒ１４は、メチル、エチルまたはｔｅｒｔ−ブチルを表す。］と、脱水試薬の存在下に反応させることで製造することができる。
【００６９】
その反応は、通常、不活性溶媒中、適切な場合には塩基存在下に、好ましくは常圧下に０℃から室温の温度範囲内で行う。
【００７０】
この場合に好適な脱水剤には、例えば、カルボジイミド類、例えばＮ，Ｎ′−ジエチル−、Ｎ，Ｎ′−ジプロピル−、Ｎ，Ｎ′−ジイソプロピル−、Ｎ，Ｎ′−ジシクロヘキシルカルボジイミド、Ｎ−（３−ジメチルアミノイソプロピル）−Ｎ′−エチルカルボジイミド塩酸塩（ＥＤＣ）（適宜にペンタフルオロフェノール（ＰＦＰ）の存在下に）、Ｎ−シクロヘキシルカルボジイミド−Ｎ′−プロピルオキシメチル−ポリスチレン（ＰＳ−カルボジイミド）、またはカルボニル化合物、例えばカルボニルジイミダゾール、または１，２−オキサゾリウム化合物、例えば３−硫酸２−エチル−５−フェニル−１，２−オキサゾリウムもしくは過塩素酸２−ｔｅｒｔ−ブチル−５−メチル−イソオキサゾリウム、またはアシルアミノ化合物、例えば２−エトキシ−１−エトキシカルボニル−１，２−ジヒドロキノリン、またはプロパンホスホン酸無水物、またはクロルギ酸イソブチル、またはビス−（２−オキソ−３−オキサゾリジニル）ホスホリルクロライドまたはヘキサフルオロリン酸ベンゾトリアゾリルオキシトリ（ジメチルアミノ）ホスホニウム、またはヘキサフルオロリン酸Ｏ−（ベンゾトリアゾール−１−イル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ′，Ｎ′−テトラメチルウロニウム（ＨＢＴＵ）、テトラフルオロホウ酸２−（２−オキソ−１−（２Ｈ）−ピリジル）−１，１，３，３−テトラメチルウロニウム（ＴＰＴＵ）、フルオロホウ酸（ベンゾトリアゾール−１−イルオキシ）ビスジメチルアミノメチリウム（ＴＢＴＵ）またはヘキサフルオロリン酸Ｏ−（７−アザベンゾトリアゾール−１−イル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ′，Ｎ′−テトラメチルウロニウム（ＨＡＴＵ）、または１−ヒドロキシベンゾトリアゾール（ＨＯＢｔ）、またはヘキサフルオロリン酸ベンゾトリアゾール−１−イルオキシトリス（ジメチルアミノ）ホスホニウム（ＢＯＰ）、またはこれらの塩基との混合物がある。その縮合は好ましくは、ＨＡＴＵで行う。
【００７１】
塩基は、例えば、炭酸ナトリウムまたは炭酸カリウムなどのアルカリ金属炭酸塩、または重炭酸ナトリウムもしくは重炭酸カリウム、またはトリアルキルアミン類などの有機塩基、例えばトリエチルアミン、Ｎ−メチルモルホリン、Ｎ−メチルピペリジン、４−ジメチルアミノピリジンもしくはジイソプロピルエチルアミンである。その縮合は好ましくは、ジイソプロピルエチルアミンを用いて行う。
【００７２】
不活性溶媒は、例えば、ジクロロメタンもしくはトリクロロメタンなどのハロゲン化炭化水素、ベンゼンなどの炭化水素、またはニトロメタン、ジオキサン、ジメチルホルムアミド、ジメチルスルホキシドもしくはアセトニトリルなどの他の溶媒である。溶媒の混合物を使用することも可能である。特に好ましいものは、ジメチルホルムアミドである。
【００７３】
式（ＩＶ）の化合物は公知であるか、公知の方法によって相当する出発化合物から合成することができる。
【００７４】
式（ＩＩＩ）の化合物は公知であるか、
［Ｃ］下記式の化合物：
【化１６】
2018509426.tif 000017
【００７５】
［式中、
Ｒ１、Ｒ２およびＲ３はそれぞれ上記で定義の通りであり、
Ｒ１５は、ｔｅｒｔ−ブチルを表す。］を酸と反応させることで、
または
［Ｄ］下記式の化合物：
【化１７】
2018509426.tif 000018
【００７６】
［式中、
Ｒ１、Ｒ２およびＲ３はそれぞれ上記で定義の通りであり、
Ｒ１５は、メチル、エチルまたはベンジルを表す。］を塩基と反応させることで製造することができる。
【００７７】
式（Ｖａ）および（Ｖｂ）の化合物が一緒に、式（Ｖ）の化合物の群を形成している。
【００７８】
方法［Ｃ］による反応は、方法［Ａ］について記載の方法に従って実施する。
【００７９】
方法［Ｄ］における反応は、方法［Ｂ］について記載の方法に従って行う。
【００８０】
式（Ｖ）の化合物は公知であるか、下記式の化合物：
【化１８】
2018509426.tif 000019
【００８１】
［式中、
Ｒ１およびＲ２はそれぞれ上記で定義の通りであり、
Ｒ１５は、メチル、エチル、ベンジルまたはｔｅｒｔ−ブチルを表す。］を、式の化合物：
【化１９】
2018509426.tif 000020
【００８２】
［式中、
Ｒ３は上記の意味を有し、
Ｘ１は、塩素、臭素、ヨウ素、メタンスルホニルオキシ、トリフルオロメタンスルホニルオキシまたはパラ−トルエンスルホニルオキシを表す。］と反応させることで製造することができる。
【００８３】
その反応は、通常、不活性溶媒中、適宜に塩基存在下に、好ましくは常圧下に−７８℃から室温の温度範囲内で行う。
【００８４】
不活性溶媒は、例えば、ハロ炭化水素、例えばジクロロメタン、トリクロロメタン、テトラクロロメタンまたは１，２−ジクロロエタン、アルコール類、例えばメタノールまたはエタノール、エーテル類、例えばジエチルエーテル、メチルｔｅｒｔ−ブチルエーテル、１，２−ジメトキシエタン、ジオキサンまたはテトラヒドロフラン、または他の溶媒、例えばジメチルホルムアミド、ジメチルアセトアミド、アセトニトリルまたはピリジン、または溶媒の水との混合物であり、好ましいものはテトラヒドロフランである。
【００８５】
塩基は、例えば、カリウムまたはナトリウムｔｅｒｔ−ブトキシド、水素化ナトリウム、Ｎ−ブチルリチウムまたはリチウムビス（トリメチルシリル）アミドであり、好ましいものはリチウムビス（トリメチルシリル）アミドである。
【００８６】
式（ＶＩＩ）の化合物は公知であり、相当する出発化合物から公知の方法によって合成することができ、または実験セクションに記載の方法と同様に製造することができる。
【００８７】
式（ＶＩ）の化合物は公知であるか、下記式の化合物：
【化２０】
2018509426.tif 000021
【００８８】
［式中、Ｒ１およびＲ２は上記で記載の定義を有する。］を、下記式の化合物：
【化２１】
2018509426.tif 000022
【００８９】
［式中、
Ｒ１５は、メチル、エチル、ベンジルまたはｔｅｒｔ−ブチルを表し、
Ｘ２は、塩素、臭素、ヨウ素、メタンスルホニルオキシまたはトリフルオロメタンスルホニルオキシを表す。］と反応させることによって製造することができる。
【００９０】
その反応は概して、不活性溶媒中、適宜に塩基の存在下に、好ましくは室温から溶媒還流の温度範囲で常圧下に行う。
【００９１】
不活性溶媒は、例えば、ハロゲン化炭化水素、例えばジクロロメタン、トリクロロメタン、四塩化炭素または１，２−ジクロロエタン、アルコール類、例えばメタノールまたはエタノール、エーテル類、例えばジエチルエーテル、メチルｔｅｒｔ−ブチルエーテル、１，２−ジメトキシエタン、ジオキサンまたはテトラヒドロフラン、または他の溶媒、例えばジメチルホルムアミド、ジメチルアセトアミド、アセトニトリルまたはピリジン、または溶媒の混合物、または溶媒の水との混合物であり、好ましいものはジメチルホルムアミドである。
【００９２】
塩基は、例えば、アルカリ金属水酸化物、例えば水酸化ナトリウム、水酸化リチウムまたは水酸化カリウム、またはアルカリ金属炭酸塩、例えば炭酸セシウム、炭酸ナトリウムまたは炭酸カリウム、またはカリウムｔｅｒｔ−ブトキシドまたはナトリウムｔｅｒｔ−ブトキシド、水素化ナトリウムまたはこれらの塩基の混合物または水素化ナトリウムおよび臭化リチウムの混合物であり、好ましいものは炭酸カリウムまたは水素化ナトリウムである。
【００９３】
式（ＩＸ）の化合物は公知であるか、相当する出発化合物からの公知の方法によって合成することができる。
【００９４】
式（ＶＩＩＩ）の化合物は公知であるか、下記式の化合物：
【化２２】
2018509426.tif 000023
【００９５】
［式中、Ｒ１およびＲ２は上記で記載の定義を有する。］をピリジニウム塩酸塩またはピリジニウム臭化水素酸塩と反応させることで製造することができる。
【００９６】
その反応は概して、不活性溶媒中、好ましくは８０℃から１２０℃の温度範囲で標準圧下で行う。
【００９７】
不活性溶媒は、例えば、炭化水素、例えばベンゼン、または他の溶媒、例えばニトロメタン、ジオキサン、ジメチルホルムアミド、ジメチルスルホキシドまたはアセトニトリルである。溶媒の混合物を用いることも可能である。特に好ましいものはジメチルホルムアミドである。
【００９８】
式（Ｘ）の化合物は公知であるか、下記式の化合物：
【化２３】
2018509426.tif 000024
【００９９】
［式中、
Ｒ２は上記で記載の定義を有し、
Ｑ１は、−Ｂ（ＯＨ）２、ボロン酸エステル、好ましくはボロン酸ピナコールエステル、または−ＢＦ３−Ｋ＋を表す。］を、下記式の化合物：
【化２４】
2018509426.tif 000025
【０１００】
［式中、
Ｒ１は上記で記載の定義を有し、
Ｘ３は、塩素、臭素またはヨウ素を表す。］と、スズキカップリング条件下に反応させることで製造することができる。
【０１０１】
その反応は概して、不活性溶媒中、触媒の存在下に、適宜に追加の試薬の存在下に、適宜にマイクロ波で、好ましくは室温から１５０℃の温度範囲内で、標準圧から３バール下に行う。
【０１０２】
触媒は、例えば、スズキ反応条件に一般的なパラジウム触媒であり、好ましいものは、ジクロロビス（トリフェニルホスフィン）パラジウム、テトラキストリフェニルホスフィンパラジウム（０）、酢酸パラジウム（ＩＩ）／トリスシクロヘキシルホスフィン、トリス（ジベンジリデンアセトン）ジパラジウム、ビス（ジフェニルホスファンフェロセニル）パラジウム（ＩＩ）クロライド、１，３−ビス（２，６−ジイソプロピルフェニル）イミダゾール−２−イリデン（１，４−ナフトキノン）パラジウム二量体、アリル（クロロ）（１，３−ジメシチル−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−イミダゾール−２−イリデン）パラジウム、酢酸パラジウム（ＩＩ）／ジシクロヘキシル（２′，４′，６′−トリイソプロピル−ビフェニル−２−イル）ホスフィン、［１，１−ビス−（ジフェニルホスフィノ）フェロセン］パラジウム（ＩＩ）クロライド・モノジクロロメタン付加物またはＸＰｈｏｓプレ触媒［（２′−アミノビフェニル−２−イル）（クロロ）パラジウムジシクロヘキシル（２′，４′，６′−トリイソプロピルビフェニル−２−イル）ホスファン（１：１）］などの触媒であり、好ましいものはテトラキストリフェニルホスフィンパラジウム（０）、［１，１−ビス−（ジフェニルホスフィノ）フェロセン］パラジウム（ＩＩ）クロライド・モノジクロロメタン付加物またはＸＰｈｏｓプレ触媒［（２′−アミノビフェニル−２−イル）（クロロ）パラジウムジシクロヘキシル（２′，４′，６′−トリイソプロピルビフェニル−２−イル）ホスフィン（１：１）］である。
【０１０３】
追加の試薬は、例えば、酢酸カリウム、炭酸セシウム、炭酸カリウムまたは炭酸ナトリウム、カリウムｔｅｒｔ−ブトキシド、フッ化セシウムまたはリン酸カリウムであり、それらは水溶液で存在していても良い。炭酸カリウムまたはリン酸カリウム水溶液などの追加試薬が好ましい。
【０１０４】
不活性溶媒は、例えば、ジオキサン、テトラヒドロフランもしくは１，２−ジメトキシエタンなどのエーテル類、ベンゼン、キシレンもしくはトルエンなどの炭化水素、またはジメチルホルムアミドもしくはジメチルアセトアミドなどのカルボキシアミド類、ジメチルスルホキシドなどのアルキルスルホキシド類、またはＮ−メチルピロリドンもしくはアセトニトリル、またはその溶媒とメタノールもしくはエタノールなどのアルコール類および／または水との混合物であり、好ましいものはテトラヒドロフラン、ジオキサンまたはアセトニトリルである。
【０１０５】
式（ＸＩ）および（ＸＩＩ）の化合物は、公知であるか、適切な出発化合物から公知の方法によって合成することができる。
【０１０６】
出発化合物および式（Ｉ）の化合物の製造を、下記の合成図式によって示すことができる。
【０１０７】
図式１：
【化２４】
2018509426.tif 000026
【０１０８】
本発明による化合物は、予想外の有用な薬理活性スペクトルおよび良好な薬物動態挙動を有する。それらは、セリンプロテアーゼＸＩａ因子（ＦＸＩａ）および／またはセリンプロテアーゼ血漿カリクレイン（ＰＫ）のタンパク質分解活性に影響する化合物である。本発明による化合物は、特に血管浸透性上昇が関与する、血小板のＰＡＲ−１活性化に必要なトロンビンの減少を介した血小板の凝集および炎症プロセスで非常に重要な役割を有するＦＸＩａおよび／またはＰＫが触媒する基質の酵素的開裂を阻害する。
【０１０９】
従ってそれらは、ヒトおよび動物における疾患の治療および／または予防のための医薬としての使用に好適である。
【０１１０】
本発明はさらに、障害、特には心血管障害、好ましくは血栓または血栓塞栓障害および／または血栓もしくは血栓塞栓合併症、および／または眼科障害、特には糖尿病性網膜症または黄斑浮腫、および／または炎症障害、特には過剰な血漿カリクレイン活性関連のもの、例えば遺伝性血管浮腫（ＨＡＥ）または慢性炎症性障害、特にはクローン病などの小腸の障害の治療および／または予防のための本発明による化合物の使用を提供する。
【０１１１】
ＸＩａ因子（ＦＸＩａ）は、凝固の関連において重要な酵素であり、トロンビンおよびＸＩＩａ因子（ＦＸＩＩａ）の両方により活性化され得ることから、凝固の二つの必須の過程に関与する。これは、凝固の開始から増幅および拡大への移行の中心的な要素である。正のフィードバックループにおいて、トロンビンは、Ｖ因子およびＶＩＩＩ因子に加えて、ＸＩ因子もＸＩａ因子に活性化し、それによりＩＸ因子がＩＸａ因子に変換され、このように生成されるＩＸａ因子／ＶＩＩＩａ因子複合体を介して、Ｘ因子が活性化され、従って次にトロンビン形成が強く刺激され、強い血栓成長に至り、血栓を安定化する。
【０１１２】
さらに、ＸＩａ因子は内因性の凝固開始のための重要な成分である。組織因子（ＴＦ）を介した刺激に加えて、特にまた外来細胞（例えば細菌）の表面構造だけでなく、人工血管、ステントおよび体外循環などの人工的表面も含む負に帯電した表面上でも凝固系が活性化され得る。その表面上で、最初にＸＩＩ因子（ＦＸＩＩ）が活性化されてＸＩＩａ因子（ＦＸＩＩＡ）になり、これが次にＦＸＩを活性化し、細胞表面に接着させて、ＦＸＩａとなる。これは、上記のような凝固カスケードのさらなる活性化につながる。
【０１１３】
対照的に、開始期でのトロンビン生成は、ＴＦ／ＶＩＩａ因子およびＸ因子活性化を介して影響を受けないままであり、最終的に血管損傷時の生理的反応であるトロンビン形成は影響を受けないままである。これは、ＦＸＩａの投与によって、ウサギおよび他の動物種でのように、出血時間延長がＦＸＩａノックアウトマウスにおいて認められなかった理由を説明し得るものと考えられる。本物質により引き起こされるこの低出血傾向は、ヒトで、特に出血リスクが高い患者での使用に非常に有利である。
【０１１４】
さらに、ＸＩＩａ因子はまた、血漿プロカリクレインを活性化して、とりわけ増強ループにおいてさらなるＸＩＩ因子活性化につながる内因性活性化に関連して血漿カリクレイン（ＰＫ）とし、全体として、表面上での凝固カスケードの開始の増幅が起こる。従って、本発明による化合物のＰＫ−阻害活性は、表面活性化を介した凝固を減らし、従って抗凝固効果を有する。均衡のとれた抗血栓効果を可能にするＸＩａ因子阻害活性およびＰＫ阻害活性の組み合わせは有利であると考えられる。
【０１１５】
従って、本発明による化合物は、血塊の形成から生じる得る障害または合併症の処置および／または予防に適している。
【０１１６】
本発明に関して、「血栓性または血栓塞栓障害」には、動脈血管系および静脈血管系の両方において発生し、本発明による化合物で処置可能な障害、特に、心臓の冠動脈における障害、例えば急性冠症候群（ＡＣＳ）、ＳＴ上昇を伴う（ＳＴＥＭＩ）およびＳＴ上昇を伴わない（非ＳＴＥＭＩ）心筋梗塞、安定狭心症、不安定狭心症、血管形成術、ステント留置もしくは大動脈冠状動脈バイパスなどの冠動脈介入後の再閉塞および再狭窄だけでなく、末梢動脈性閉塞性障害に至るさらなる血管における血栓性または血栓塞栓障害、肺塞栓症、静脈性血栓塞栓症、静脈血栓、特に深部下肢静脈および腎臓静脈におけるもの、一過性虚血性発作、さらには血栓性卒中および血栓塞栓性卒中などもある。
【０１１７】
凝固系の刺激は各種の原因または関連障害によって起こり得る。外科的介入、身体固定、ベッドへの拘束、感染、炎症もしくは癌または癌治療に関連して、とりわけ凝固系が非常に活性化される可能性があり、血栓性合併症、特に静脈性血栓症があり得る。従って、本発明による化合物は、癌を患う患者における外科的介入に関連した血栓症の予防に適している。従って、本発明による化合物はまた、例えば記載の刺激状態において凝固系が活性化されている患者における血栓症の予防にも適している。
【０１１８】
従って、本発明による化合物はまた、急性、間欠性または持続性心不整脈、例えば、心房細動患者、および電気的除細動を受ける患者にて、さらには心臓弁障害患者または人工心臓弁を有する患者における、心原性血栓塞栓症、例えば、脳虚血、脳卒中ならびに全身性血栓塞栓症および虚血の予防および処置にも好適である。
【０１１９】
さらに、本発明の化合物は、特に敗血症に関連して、さらには外科的介入、腫瘍障害、火傷その他の外傷によって起こり得て、微小血栓症による重度の臓器損傷に至り得る播種性血管内血液凝固（ＤＩＣ）の治療および予防に好適である。
【０１２０】
血栓塞栓合併症はまた、微小血管性溶血性貧血で起こり、体外循環、例えば血液透析、ＥＣＭＯ（「体外膜酸素化」）、ＬＶＡＤ（「左心室補助装置」）および類似の方法、ＡＶ瘻孔、血管および心臓弁補綴などの体外循環の文脈で異物表面と接触する血液によって起こる。
【０１２１】
さらに、本発明による化合物は、血管性認知症またはアルツハイマー病などの認知症障害になり得る脳血管における微小血塊形成またはフィブリン沈着が関与する障害の治療および／または予防に適している。ここで、血塊は、閉塞を介して、およびさらなる疾患関連因子と結合することの両方によって障害に寄与し得る。
【０１２２】
さらに、本発明による化合物は、特に、凝血促進成分に加えて、炎症誘発性成分が非常に重要な役割を果たす障害の治療および／または予防に適切である。凝固および炎症の相互促進は特に、本発明による化合物によって防止され得ることから、血栓性合併症の確立が確実に低下する。この場合、ＸＩａ因子阻害成分（トロンビン産生阻害による）およびＰＫ阻害成分の両方が抗凝固および抗炎症効果（例えばブラジキニンを介する。）に寄与し得る。従って、アテローム性動脈硬化性血管障害、運動系のリウマチ障害に関連した炎症、肺の炎症障害、例えば肺線維症、腎臓の炎症障害、例えば糸球体腎炎、腸の炎症障害、例えばクローン病もしくは潰瘍性大腸炎、または糖尿病性基礎疾患に関連して存在し得る障害、例えば糖尿病性網膜症もしくは腎症と関連した治療および／または予防がとりわけ考え得る。
【０１２３】
血漿カリクレインにより生成されるキニン類は、とりわけ、慢性炎症性腸障害（ＣＩＤ）の進行における原因となり得る。ブラジキニン受容体の活性化を介したそれらの炎症誘発効果は、疾患進行を誘発および促進する。クローン病患者における研究から、腸上皮でのカリクレイン濃度と腸の炎症の度合いとの間の相関が明らかになっている。カリクレイン−キニン系の活性化は、同様に実験動物研究でも認められた。従って、カリクレイン阻害剤によるブラジキニン合成の阻害は、慢性炎症性腸障害の予防および／または治療にも使用することができると考えられる。
【０１２４】
さらに、本発明による化合物は、腫瘍成長および転移の形成を阻害するために、さらには血栓塞栓性合併症、例えば静脈性血栓塞栓症などの予防および／または治療のために、腫瘍患者、特に大きな外科的介入または化学療法もしくは放射線療法を受けている患者のために使用可能である。
【０１２５】
さらに、本発明の化合物は、肺高血圧の予防および／または治療にも好適である。
【０１２６】
本発明に関連して、「肺高血圧」という用語は、肺動脈高血圧、左心の障害に関連する肺高血圧、肺障害および／または低酸素症に関連する肺高血圧、および慢性血栓塞栓症（ＣＴＥＰＨ）による肺高血圧を含むものである。
【０１２７】
「肺動脈高血圧」には、特発性肺動脈高血圧（ＩＰＡＨ、以前は原発性肺高血圧とも称されていた）、家族性肺動脈高血圧（ＦＰＡＨ）および膠原病、先天性全身−肺シャント（ｃｏｎｇｅｎｉｔａｌ  ｓｙｓｔｅｍｉｃ−ｐｕｌｍｏｎａｒｙ  ｓｈｕｎｔ  ｖｉｔｉａ）、門脈圧高血圧、ＨＩＶ感染、ある種の薬物および医薬の摂取に、他の障害（甲状腺障害、糖原病、ゴーシェ病、遺伝性末梢血管拡張症、異常ヘモグロビン症、骨髄増殖性障害、脾摘出）に、肺静脈閉塞症および肺毛細血管腫症などの重大な静脈／毛細血管の寄与のある障害に関連する、随伴性肺動脈高血圧（ＡＰＡＨ）、ならびに、新生児の持続性肺高血圧が含まれる。
【０１２８】
左心障害に関連する肺高血圧には、疾患のある左心房または左心室、および、僧帽弁または大動脈弁の欠陥が含まれる。
【０１２９】
肺障害および／または低酸素症に関連する肺高血圧には、慢性閉塞性肺障害、間質性肺障害、睡眠時無呼吸症候群、肺胞低換気、慢性高山病および遺伝的欠陥が含まれる。
【０１３０】
慢性血栓塞栓症に起因する肺高血圧（ＣＴＥＰＨ）には、近位肺動脈の血栓塞栓性閉塞、遠位肺動脈の血栓塞栓性閉塞および非血栓性肺塞栓症（腫瘍、寄生生物、異物）が含まれる。
【０１３１】
本発明は、さらに、サルコイドーシス、組織球症Ｘおよびリンパ管腫に関連する肺高血圧の治療および／または予防のための医薬を製造するための、本発明の化合物の使用を提供する。
【０１３２】
さらに、本発明の物質は、肺および肝臓の線維症の治療にも有用であり得る。
【０１３３】
さらに、本発明の化合物は、感染性疾患関連での播種性血管内凝固および／または全身性炎症症候群（ＳＩＲＳ）、敗血性臓器機能不全、敗血性臓器不全および多臓器不全、急性呼吸促迫症候群（ＡＲＤＳ）、急性肺損傷（ＡＬＩ）、敗血性ショックおよび／または敗血性臓器不全の治療および／または予防にも好適であり得る。
【０１３４】
感染の過程では、多様な器官の微小血栓および続発性出血性合併症を伴う全身的な凝血系の活性化があり得る（播種性血管内凝固または消費性凝固障害、以後「ＤＩＣ」と称する）。さらに、血管の透過性の増大ならびに液およびタンパク質の血管外腔への滲出を伴う内皮損傷があり得る。感染が進行するにつれて、臓器不全（例えば、腎不全、肝不全、呼吸不全、中枢神経の欠陥および／または心血管系の不全）または多臓器不全があり得る。
【０１３５】
ＤＩＣでは、損傷を受けた内皮細胞の表面、異物の表面または架橋した（ｃｒｏｓｓｌｉｎｋｅｄ）血管外の組織で、凝血系の大きい活性化がある。結果として、様々な臓器の小血管での凝血があり、低酸素およびそれに続く臓器の機能不全を伴う。二次的に、凝固因子（例えば、Ｘ因子、プロトロンビンおよびフィブリノゲン）および血小板の消費があり、それは、血液が凝固する能力を低下させ、深刻な出血をもたらし得る。
【０１３６】
単独でまたはＸＩａ因子との組み合わせで血漿カリクレインを阻害する本発明による化合物は、過程において血漿カリクレインが関与する障害の治療および／または予防にも有用である。抗凝固活性に加えて、血漿カリクレインは重要なブラジキニン−放出プロテアーゼであることから、特に内皮透過性の上昇をもたらす。従って本化合物は、眼科障害、特に糖尿病性網膜症または黄斑浮腫または遺伝性血管浮腫などの浮腫形成が関与する障害の治療および／または予防のために使用可能である。
【０１３７】
本発明の文脈での「眼科障害」には特には、糖尿病性網膜症、糖尿病性黄斑浮腫（ＤＭＥ）、黄斑浮腫、網膜静脈閉塞に関連する黄斑浮腫、加齢性黄斑変性（ＡＭＤ）、脈絡膜新血管形成（ＣＮＶ）、脈絡膜新生血管膜（ＣＮＶＭ）、類嚢胞黄斑浮腫（ＣＭＥ）、網膜上膜（ＥＲＭ）および黄斑穿孔、近視関連脈絡膜新血管形成、網膜色素線条症、血管性線条症、網膜剥離、網膜色素上皮の萎縮変化、網膜色素上皮の肥厚性変化、網膜静脈閉塞、脈絡膜網膜静脈閉塞、網膜色素変性症、スタルガルト病、未熟児網膜症、緑内障、ブドウ膜炎、強膜炎もしくは眼内炎などの炎症性眼球障害、白内障、近視、遠視もしくは乱視などの屈折異常および円錐角膜、例えば角膜炎（ｃｅｒａｔｉｔｉｓ）、角膜移植もしくは角膜形成の後遺症としての角膜血管新生などの前眼部の障害、低酸素症の後遺症としての角膜血管新生（例えば、コンタクトレンズの過剰使用）、翼状片結膜（ｐｔｅｒｙｇｉｕｍ  ｃｏｎｊｕｎｃｔｉｖａｅ）、角層下浮腫および角膜内浮腫等の障害などがある。
【０１３８】
本発明による化合物は、遺伝子突然変異が酵素活性上昇またはチモーゲンレベル上昇につながる患者における、血栓性または血栓塞栓障害および／または炎症障害および／または血管透過性上昇を伴う障害の一次予防にも適しており、これらは、酵素活性またはチモーゲン濃度の関連する試験／測定によって確立される。
【０１３９】
本発明は、さらに、障害、特に上述の障害の治療および／または予防のための、本発明による化合物の使用を提供する。
【０１４０】
本発明は、さらに、障害、特に上述の障害の治療および／または予防用の医薬を製造するための、本発明による化合物の使用を提供する。
【０１４１】
本発明は、さらに、治療上有効量の本発明による化合物を使用する、障害、特に上述の障害の治療および／または予防方法を提供する。
【０１４２】
本発明はさらに、治療上有効量の本発明による化合物を用いる、障害、特に上述の障害の治療および／または予防方法における使用のための本発明による化合物を提供する。
【０１４３】
本発明はさらに、本発明による化合物および１以上のさらなる活性化合物を含む医薬を提供する。
【０１４４】
さらに、本発明による化合物は、エクス・ビボでの凝固防止のために、例えば、移植される臓器を血塊形成によって生じる臓器損傷から保護するために、および移植臓器からの血栓塞栓に対して臓器被移植者を保護するために、血液製剤および血漿製剤を保存するために、カテーテルおよび他の医療補助具および機器をクリーニング／前処理するために、イン・ビボまたはエクス・ビボで使用される医療補助具および機器の合成表面をコーティングするために、またはＸＩａ因子または血漿カリクレインを含み得る生体試料のためにも使用することができる。
【０１４５】
本発明は、さらに、特に、保存血液またはＸＩａ因子もしくは血漿カリクレインまたは両方の酵素を含有し得る生体サンプルにおける、イン・ビトロでの血液凝固の防止方法であって、抗凝血的に有効量の本発明による化合物を添加することを特徴とする方法を提供する。
【０１４６】
本発明は、さらに、特に、上述の障害の治療および／または予防のための、本発明による化合物および１以上の別の活性化合物を含む医薬を提供する。組み合わせに好適な活性化合物の好ましい例には、下記のものなどがある。
【０１４７】
・脂質低下物質、特に、ＨＭＧ−ＣｏＡ−（３−ヒドロキシ−３−メチルグルタリル−コエンザイムＡ）レダクターゼ阻害剤、例えば、ロバスタチン（メバコル（Ｍｅｖａｃｏｒ））、シンバスタチン（ゾコル（Ｚｏｃｏｒ））、プラバスタチン（プラバコール（Ｐｒａｖａｃｈｏｌ））、フルバスタチン（レスコール（Ｌｅｓｃｏｌ））およびアトルバスタチン（リピトール）；
・冠血管治療剤／血管拡張剤、特に、ＡＣＥ（アンジオテンシン変換酵素）阻害剤、例えば、カプトプリル、リシノプリル、エナラプリル、ラミプリル、シラザプリル、ベナゼプリル、ホシノプリル、キナプリルおよびペリンドプリル、または、ＡＩＩ（アンジオテンシンＩＩ）受容体拮抗薬、例えば、エンブサルタン（ｅｍｂｕｓａｒｔａｎ）、ロサルタン、バルサルタン、イルベサルタン、カンデサルタン、エプロサルタンおよびテミサルタン（ｔｅｍｉｓａｒｔａｎ）、または、β−アドレナリン受容体拮抗薬、例えば、カルベジロール、アルプレノロール、ビソプロロール、アセブトロール、アテノロール、ベタキソロール、カルテオロール、メトプロロール、ナドロール、ペンブトロール、ピンドロール、プロパノロール（ｐｒｏｐａｎｏｌｏｌ）およびチモロール、または、α−１−アドレナリン受容体拮抗薬、例えば、プラゾシン、ブナゾシン、ドキサゾシンおよびテラゾシン、または、利尿剤、例えば、ヒドロクロロチアジド、フロセミド、ブメタニド、ピレタニド、トラセミド、アミロライドおよびジヒドララジン、または、カルシウムチャンネル遮断薬、例えば、ベラパミルおよびジルチアゼム、または、ジヒドロピリジン誘導体、例えば、ニフェジピン（アダラート）およびニトレンジピン（バイオテンシン（Ｂａｙｏｔｅｎｓｉｎ））、または、ニトロ製剤、例えば、５−一硝酸イソソルビド、二硝酸イソソルビドおよび三硝酸グリセリン、または、環状グアノシン一リン酸（ｃＧＭＰ）の増加を引き起こす物質、例えば、可溶性グアニル酸シクラーゼの刺激剤、例えばリオシグアト；
・プラスミノーゲン活性化剤（血栓溶解剤／線維素溶解剤）および血栓溶解／線維素溶解を促進する化合物、例えば、プラスミノーゲン活性化因子阻害因子の阻害剤（ＰＡＩ阻害剤）またはトロンビン活性化線維素溶解阻害因子の阻害剤（ＴＡＦＩ阻害剤）、例えば組織プラスミノーゲン活性化剤（ｔ−ＰＡ、例えばＡｃｔｉｌｙｓｅ（登録商標）、ストレプトキナーゼ、レテプラーゼおよびウロキナーゼまたはプラスミノーゲン形成増加を引き起こすプラスミノーゲン調節物質；
・抗凝血物質（抗凝血剤）、例えば、ヘパリン（ＵＦＨ）、低分子量ヘパリン（ＬＭＷ）、例えば、チンザパリン、セルトパリン（ｃｅｒｔｏｐａｒｉｎ）、パルナパリン、ナドロパリン、アルデパリン、エノキサパリン、レビパリン、ダルテパリン、ダナパロイド、セムロパリン（ＡＶＥ５０２６）、アドミパリン（Ｍ１１８）およびＥＰ−４２６７５／ＯＲＧ４２６７５；
・直接トロンビン阻害剤（ＤＴＩ）、例えば、プラダキサ（ダビガトラン）、アテセガトラン（ａｔｅｃｅｇａｔｒａｎ）（ＡＺＤ−０８３７）、ＤＰ−４０８８、ＳＳＲ−１８２２８９Ａ、アルガトロバン、ビバリルジンおよびタノギトラン（ＢＩＢＴ−９８６およびプロドラッグＢＩＢＴ−１０１１）、ヒルジン；
・直接Ｘａ因子阻害剤、例えば、リバロキサバン、アピキサバン、エドキサバン（ＤＵ−１７６ｂ）、ベトリキサバン（ＰＲＴ−５４０２１）、Ｒ−１６６３、ダレキサバン（ＹＭ−１５０）、オタミキサバン（ｏｔａｍｉｘａｂａｎ）（ＦＸＶ−６７３／ＲＰＲ−１３０６７３）、レタキサバン（ｌｅｔａｘａｂａｎ）（ＴＡＫ−４４２）、ラザキサバン（ｒａｚａｘａｂａｎ）（ＤＰＣ−９０６）、ＤＸ−９０６５ａ、ＬＹ−５１７７１７、タノギトラン（ｔａｎｏｇｉｔｒａｎ）（ＢＩＢＴ−９８６、プロドラッグ：ＢＩＢＴ−１０１１）、イドラパリナックスおよびフォンダパリナックス、
・血小板凝集を阻害する物質（血小板凝集阻害剤、栓球凝集阻害剤）、例えば、Ｐ２Ｙ１２拮抗薬、例えばアセチルサリチル酸（例えばアスピリンなど）、Ｐ２Ｙ１２拮抗薬、例えばチクロピジン（チクリド（Ｔｉｃｌｉｄ））、クロピドグレル（プラビックス）、プラスグレル、チカグレロル、カングレロル、エリノグレル、ＰＡＲ−１拮抗薬、例えば、ボラパクサール、ＰＡＲ−４拮抗薬、ＥＰ３拮抗薬、例えば、ＤＧ０４１；
・血小板付着阻害薬、例えばＧＰＶＩおよび／またはＧＰＩｂ拮抗薬、例えばレバセプトまたはカプラシズマブ（ｃａｐｌａｃｉｚｕｍａｂ）；
・フィブリノゲン受容体拮抗薬（糖タンパク質−ＩＩｂ／ＩＩＩａ拮抗薬）、例えば、アブシキシマブ、エプチフィバチド、チロフィバン、ラミフィバン（ｌａｍｉｆｉｂａｎ）、レフラダフィバン（ｌｅｆｒａｄａｆｉｂａｎ）およびフラダフィバン（ｆｒａｄａｆｉｂａｎ）；
・組み換えヒト活性化タンパク質Ｃ、例えばキシグリスまたは組み換えトロンボモジュリン（ｔｈｒｏｍｂｏｍｕｄｕｌｉｎ）；
・ならびに、抗不整脈薬；
・ＶＥＧＦおよび／またはＰＤＧＦシグナル経路の阻害薬、例えばアフリベルセプト、ラニビズマブ、ベバシズマブ、ＫＨ−９０２、ペガプタニブ、ラムシルマブ、スクアラミンもしくはベバシラニブ、アパチニブ、アキシチニブ、ブリバニブ、セディラニブ、ドビチニブ、レンバチニブ、リニファニブ、モテサニブ、パゾパニブ、レゴラフェニブ、ソラフェニブ、スニチニブ、チボザニブ、バンデタニブ、バタラニブ、バルガテフおよびＥ−１００３０；
・アンギオポイエチン−Ｔｉｅシグナル経路の阻害薬、例えば、ＡＭＧ３８６；
・Ｔｉｅ２受容体チロシンキナーゼの阻害薬；
・インテグリンシグナル経路の阻害薬、例えば、ボロシキシマブ、シレンジタイドおよびＡＬＧ１００１；
・ＰＩ３Ｋ−Ａｋｔ−ｍＴｏｒシグナル経路の阻害薬、例えば、ＸＬ−１４７、ペリホシン、ＭＫ２２０６、シロリムス、テムシロリムスおよびエベロリムス；
・コルチコステロイド類、例えばアネコルタブ、ベタメタゾン、デキサメタゾン、トリアムシノロン、フルオシノロンおよびフルオシノロンアセトニド；
・ＡＬＫ１−Ｓｍａｄ１／５シグナル経路の阻害薬、例えば、ＡＣＥ０４１；
・シクロオキシゲナーゼ阻害薬、例えば、ブロムフェナクおよびネパフェナク；
・カリクレイン−キニン系の阻害薬、例えば、サフォチバント（ｓａｆｏｔｉｂａｎｔ）およびエカランチド；
・スフィンゴシン１−ホスフェートシグナル経路の阻害薬、例えば、ソネプシズマブ；
・補体−Ｃ５ａ受容体の阻害薬、例えば、エクリズマブ；
・５ＨＴ１ａ受容体の阻害薬、例えば、タンドスピロン；
・Ｒａｓ−Ｒａｆ−Ｍｅｋ−Ｅｒｋシグナル経路の阻害薬；ＭＡＰＫシグナル経路の阻害薬；ＦＧＦシグナル経路の阻害薬；内皮細胞増殖の阻害薬；アポトーシス誘発性活性化合物；
・活性化合物および光の作用からなる光線力学的療法（活性化合物は、例えばベルテポルフィンである。）。
【０１４８】
本発明に関する「組み合わせ」は、成分全て（いわゆる固定の組み合わせ）を含有する製剤および互いに分かれている成分を含有する組み合わせパックだけでなく、同時もしくは順次投与される成分も意味するが、ただし、これらは同じ疾患の予防および／または治療に使用される。２以上の有効成分を互いに組み合わせることも同様に可能であり、それは、そうしてこれらがそれぞれ２成分または多成分の組み合わせであることを意味する。
【０１４９】
本発明の化合物は、全身的および／または局所的に作用し得る。これに関しては、それら化合物は、好適な方法で、例えば、経口、非経口、肺、経鼻、舌下、舌、口腔、直腸、皮膚、経皮、結膜、もしくは耳経路で、または、インプラントもしくはステントとして投与することができる。
【０１５０】
本発明の化合物は、これらの投与経路に好適な投与形態で投与することができる。
【０１５１】
経口投与に好適な投与形態は、先行技術に従って機能し、本発明の化合物を迅速および／または改変された様式で送達し、本発明の化合物を結晶形および／または非晶質および／または溶解形で含有する投与形態、例えば、錠剤（非コートまたはコート錠、例えば、腸溶性コーティング、または不溶であるか、遅れて溶解し、本発明による化合物の放出を制御するコーティングを有するもの）、口中で迅速に崩壊する錠剤、または、フィルム／ウェハ、フィルム／凍結乾燥物、カプセル（例えば、硬または軟ゼラチンカプセル）、糖衣錠、粒剤、ペレット、粉剤、乳濁液、懸濁液、エアロゾルまたは液剤である。
【０１５２】
非経口投与は、吸収段階を回避するか（例えば、静脈、動脈、心臓内、脊髄内または腰椎内経路により）、または吸収を含めて（例えば、筋肉、皮下、皮内、経皮または腹腔内経路により）行うことができる。非経口投与に適した投与形態には、液剤、懸濁液、乳濁液、凍結乾燥物または無菌粉剤の形態での注射製剤および注入製剤などがある。
【０１５３】
眼外（局所）投与に好適なものは、投与形態は、急速におよび／または改変もしくは制御された形で活性化合物を放出する先行技術によって機能し、結晶形および／または非晶質形および／または溶解形での活性化合物を含む投与形態であり、例えば、点眼剤、噴霧剤およびローション（例えば液剤、懸濁液、小胞／コロイド系、乳濁液、エアロゾル）、点眼用粉剤、噴霧剤およびローション（例えば粉砕活性化合物、混合物、凍結乾燥物、沈澱活性化合物）、半固体眼球製剤（例えばヒドロゲル、イン・サイツヒドロゲル、クリームおよび軟膏）、眼球挿入物（固体および半固体製剤、例えば生体接着剤、フィルム／ウェハ、錠剤、コンタクトレンズ）である。
【０１５４】
眼内投与には、例えば、硝子体内、網膜下、強膜下、脈絡膜内、結膜下、球後および眼球鞘下投与などがある。眼内投与に好適なものは、急速におよび／または改変もしくは制御された形で活性化合物を放出する先行技術によって機能し、結晶形および／または非晶質形および／または溶解形での活性化合物を含む投与形態であり、例えば、注射用製剤および注射用製剤用の濃厚物（例えば液剤、懸濁液、小胞／コロイド系、乳濁液）、注射用製剤用粉剤（例えば粉砕活性化合物、混合物、凍結乾燥物、沈澱活性化合物）、注射用ゲル（半固体製剤、例えばヒドロゲル、イン・サイツヒドロゲル）およびインプラント（固体製剤、例えば生体分解性および非生体分解性インプラント、埋込ポンプ）である。
【０１５５】
好ましいのは、経口投与であるか、眼科障害の場合には、眼外および眼内投与である。
【０１５６】
他の投与経路に好適な投与形態は、例えば、吸入用医薬形態（粉末吸入器、噴霧器など）、点鼻薬、液剤または噴霧剤；舌投与、舌下投与または口腔投与用錠剤、フィルム／ウェハまたはカプセル、坐剤、耳もしくは眼球用製剤、膣カプセル、水系懸濁液（ローション、振盪混合物）、親油性懸濁液、軟膏、クリーム、経皮療法システム（例えば貼付剤）、乳液、ペースト、泡剤、粉剤、インプラントまたはステントである。
【０１５７】
本発明の化合物は、言及した投与形態に変換することができる。これは、自体公知の方法で、不活性な無毒性の医薬として好適な賦形剤と混合することで行うことができる。これらの賦形剤には、担体（例えば微結晶セルロース、ラクトース、マンニトール）、溶媒（例えば液体ポリエチレングリコール類）、乳化剤および分散剤または湿展剤（例えばドデシル硫酸ナトリウム、ポリオキシソルビタンオレエート）、結合剤（例えばポリビニルピロリドン）、合成および天然ポリマー（例えばアルブミン）、安定化剤（例えば抗酸化剤、例えばアスコルビン酸など）、着色剤（例えば無機顔料、例えば酸化鉄など）および香味剤および／または臭気矯正剤などがある。
【０１５８】
本発明はさらに、好ましくは１以上の不活性な無毒性の医薬として好適な賦形剤とともに少なくとも一つの本発明の化合物を含む医薬、および上記目的のためのそれらの使用を提供する。
【０１５９】
非経口投与の場合、２４時間ごとに約５から２５０ｍｇの量を投与して効果的な結果を達成することが有利であることが認められている。経口投与の場合、その量は、２４時間ごとに約５から５００ｍｇである。
【０１６０】
それにも拘わらず、適切であれば、特に、体重、投与経路、有効成分に対する個体の挙動、製剤の性質および投与の時点もしくは間隔に応じて、指定量から逸脱することが必要な場合がある。
【０１６１】
別段の断りがない限り、下記の試験および実施例におけるパーセントは、重量基準パーセントであり、部は重量部である。液体／液体溶液についての溶媒比、希釈比および濃度データは、各場合、体積基準である。「ｗ／ｖ」は「重量／体積」を意味する。例えば、「１０％ｗ／ｖ」は、溶液または懸濁液１００ｍＬが物質１０ｇを含むことを意味する。
【０１６２】
Ａ）実施例
略称：
Ｂｏｃ：ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニル
ｃａ．：約
ｄ：日、二重線（ＮＭＲで）
ＴＬＣ：薄層クロマトグラフィー
ＤＣＭ：ジクロロメタン
ＤＣＩ：直接化学的イオン化（ＭＳで）
ｄｄ：二重線の二重線（ＮＭＲ）
ＤＩＥＡ：Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン
ＤＭＦ：Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド
ＤＭＳＯ：ジメチルスルホキシド
理論値の：理論値の（収率）
ｅｑ．：当量
ＥＳＩ：エレクトロスプレイイオン化（ＭＳで）
ｈ：時間
ＨＡＴＵ：Ｏ−（７−アザベンゾトリアゾール−１−イル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ′，Ｎ′−テトラメチルウロニウム・ヘキサフルオロホスフェート
ＨＰＬＣ：高圧、高速液体クロマトグラフィー
ＨＶ：高真空
ＬＣ−ＭＳ：液体クロマトグラフィー結合質量分析
ｍ：多重線（ＮＭＲで）
ｍｉｎ：分
ＭＳ：質量分析
ＮＭＲ：核磁気共鳴スペクトル測定
Ｏｘｉｍａ：ヒドロキシイミノシアノ酢酸エチル
ｑ：四重線（ＮＭＲで）
ｑｕｉｎ：五重線（ＮＭＲで）
ｑｕａｎｔ．：定量的
ＲＰ：逆相（ＨＰＬＣで）
ＲＴ：室温
Ｒｔ：保持時間（ＨＰＬＣで）
ｓ：一重線（ＮＭＲで）
ｓｘｔ：六重線（ＮＭＲで）
ＳＦＣ：超臨界液体クロマトグラフィー（超臨界二酸化炭素を移動相として使用）
ｔ：三重線（ＮＭＲで）
ＴＨＦ：テトラヒドロフラン
ＴＦＡ：トリフルオロ酢酸
Ｔ３Ｐ：２，４，６−トリプロピル−１，３，５，２，４，６−トリオキサトリホスフィナン２，４，６−トリオキシド。
【０１６３】
ＨＰＬＣ、ＬＣ／ＭＳおよびＧＣ方法：
方法１：装置：Ｗａｔｅｒｓ  ＡＣＱＵＩＴＹ  ＳＱＤ  ＵＰＬＣシステム；カラム：Ｗａｔｅｒｓ  Ａｃｑｕｉｔｙ  ＵＰＬＣ  ＨＳＳ  Ｔ３  １．８μ  ５０ｍｍ×１ｍｍ；移動相Ａ：水１リットル＋９９％強度ギ酸０．２５ｍＬ、移動相Ｂ：アセトニトリル１リットル＋９９％強度ギ酸０．２５ｍＬ；勾配：０．０分間９０％Ａ→１．２分５％Ａ→２．０分間５％Ａ；オーブン：５０℃；流量：０．４０ｍＬ／分；ＵＶ検出：２０８−４００ｎｍ。
【０１６４】
方法２：装置：Ｗａｔｅｒｓ  ＡＣＱＵＩＴＹ  ＳＱＤ  ＵＰＬＣシステム；カラム：Ｗａｔｅｒｓ  Ａｃｑｕｉｔｙ  ＵＰＬＣ  ＨＳＳ  Ｔ３  １．８μ  ５０ｍｍ×１ｍｍ；移動相Ａ：水１リットル＋９９％強度ギ酸０．２５ｍＬ、移動相Ｂ：１リットルアセトニトリル＋９９％強度ギ酸０．２５ｍＬ；勾配：０．０分間９５％Ａ→６．０分間５％Ａ→７．５分間５％Ａ；オーブン：５０℃；流量：０．３５ｍＬ／分；ＵＶ検出：２１０−４００ｎｍ。
【０１６５】
方法３：装置：Ｗａｔｅｒｓ  ＵＰＬＣ  Ａｃｑｕｉｔｙ搭載Ｍｉｃｒｏｍａｓｓ  Ｑｕａｔｔｒｏ  Ｐｒｅｍｉｅｒ；カラム：Ｔｈｅｒｍｏ  Ｈｙｐｅｒｓｉｌ  ＧＯＬＤ  １．９μ  ５０ｍｍ×１ｍｍ；移動相Ａ：水１リットル＋５０％強度ギ酸０．５ｍＬ、移動相Ｂ：アセトニトリル１リットル＋５０％強度ギ酸０．５ｍＬ；勾配：０．０分間９７％Ａ→０．５分間９７％Ａ→３．２分５％Ａ→４．０分間５％Ａ；オーブン：５０℃；流量：０．３ｍＬ／分；ＵＶ検出：２１０ｎｍ。
【０１６６】
方法４：ＭＳ装置：Ｗａｔｅｒｓ（Ｍｉｃｒｏｍａｓｓ）Ｑｕａｔｔｒｏ  Ｍｉｃｒｏ；ＨＰＬＣ装置：Ａｇｉｌｅｎｔ  １１００シリーズ；カラム：ＹＭＣ−Ｔｒｉａｒｔ  Ｃ１８  ３μ  ５０×３ｍｍ；移動相Ａ：水１リットル＋炭酸アンモニウム０．０１ｍｏｌ、移動相Ｂ：アセトニトリル１リットル；勾配：０．０分間１００％Ａ→２．７５分間５％Ａ→４．５分間５％Ａ；オーブン：４０℃；流量：１．２５ｍＬ／分；ＵＶ検出：２１０ｎｍ。
【０１６７】
方法５：装置ＭＳ：Ｗａｔｅｒｓ  （Ｍｉｃｒｏｍａｓｓ）ＱＭ；装置ＨＰＬＣ：Ａｇｉｌｅｎｔ  １１００シリーズ；カラム：Ａｇｉｅｎｔ  ＺＯＲＢＡＸ  Ｅｘｔｅｎｄ−Ｃ１８  ３．０ｍｍ×５０ｍｍ  ３．５ミクロン；溶離液Ａ：水１リットル＋炭酸アンモニウム０．０１ｍｏｌ、溶離液Ｂ：１リットルアセトニトリル；勾配：０．０分間９８％Ａ→０．２分９８％Ａ→３．０分間５％Ａ→４．５分間５％Ａ；オーブン：４０℃；流量：１．７５ｍＬ／分；ＵＶ検出：２１０ｎｍ。
【０１６８】
方法６：ＭＳ装置：Ｗａｔｅｒｓ  （Ｍｉｃｒｏｍａｓｓ）ＺＱ；ＨＰＬＣ装置：Ａｇｉｌｅｎｔ  １１００シリーズ；カラム：Ａｇｉｅｎｔ  ＺＯＲＢＡＸ  Ｅｘｔｅｎｄ−Ｃ１８  ３．０ｍｍ×５０ｍｍ  ３．５ミクロン；移動相Ａ：水１リットル＋炭酸アンモニウム０．０１ｍｏｌ、移動相Ｂ：アセトニトリル１リットル；勾配：０．０分間９８％Ａ→０．２分９８％Ａ→３．０分間５％Ａ→４．５分間５％Ａ；オーブン：４０℃；流量：１．７５ｍＬ／分；ＵＶ検出：２１０ｎｍ。
【０１６９】
方法７：装置：Ｔｈｅｒｍｏ  ＤＦＳ、Ｔｒａｃｅ  ＧＣ  Ｕｌｔｒａ；カラム：Ｒｅｓｔｅｋ  ＲＴＸ−３５、１５ｍ×２００μｍ×０．３３μｍ；一定流量のヘリウム：１．２０ｍＬ／分；オーブン：６０℃；注入口：２２０℃；勾配：６０℃、３０℃／分→３００℃（３．３３分間保持）。
【０１７０】
方法８：装置：Ａｇｉｌｅｎｔ  ＭＳ  Ｑｕａｄ  ６１５０；ＨＰＬＣ：Ａｇｉｌｅｎｔ  １２９０；カラム：Ｗａｔｅｒｓ  Ａｃｑｕｉｔｙ  ＵＰＬＣＨＳＳ  Ｔ３  １．８μ  ５０ｍｍ×２．１ｍｍ；溶離液Ａ：水１リットル＋９９％ギ酸０．２５ｍＬ、溶離液Ｂ：アセトニトリル１リットル＋９９％ギ酸０．２５ｍＬ；勾配：０．０分間９０％Ａ→０．３分９０％Ａ→１．７分５％Ａ→３．０分間５％Ａ；オーブン：５０℃；流量：１．２０ｍＬ／分；ＵＶ検出：２０５−３０５ｎｍ。
【０１７１】
方法９：装置：Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  ＤＳＱＩＩ、Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  Ｔｒａｃｅ  ＧＣ  Ｕｌｔｒａ；カラム：Ｒｅｓｔｅｋ  ＲＴＸ−３５ＭＳ、１５ｍ×２００μｍ×０．３３μｍ；一定流量のヘリウム：１．２０ｍＬ／分；オーブン：６０℃；注入口：２２０℃；勾配：６０℃、３０℃／分→３００℃（３．３３分間保持）。
【０１７２】
方法１０：ＭＳ装置Ｔｈｅｒｍｏ  ＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃＦＴ−ＭＳ；ＵＨＰＬＣ＋装置Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  ＵｌｔｉＭａｔｅ  ３０００；カラムＷａｔｅｒｓ、ＨＳＳＴ３、２．１ｍｍ×７５ｍｍ、Ｃ１８１．８μｍ；溶離液Ａ：水１リットル＋０．０１％ギ酸；溶離液Ｂ：アセトニトリル１リットル＋０．０１％ギ酸；勾配０．０分１０％Ｂ→２．５分９５％Ｂ→３．５分９５％Ｂ；オーブン５０℃；流量０．９０ｍＬ／分；ＵＶ検出２１０ｎｍ／至適積分経路２１０から３００ｎｍ。
【０１７３】
マイクロ波：使用したマイクロ波リアクターは、Ｅｍｒｙｓ（商標名）Ｏｐｔｉｍｉｚｅｒ型の単一モード装置であった。
【０１７４】
本発明による化合物を、溶離液が添加剤、例えばトリフルオロ酢酸、ギ酸またはアンモニアを含む上記方法による分取ＨＰＬＣによって精製する場合、本発明による化合物が十分に塩基性または酸性官能基を含むのであれば、本発明による化合物は塩の形態で、例えばトリフルオロ酢酸塩、ギ酸塩またはアンモニウム塩として得ることができる。そのような塩は、当業者には公知の各種方法によって、相当する遊離塩基または酸に変換することができる。
【０１７５】
後述される本発明の合成中間体および作業例の場合、相当する塩基もしくは酸の塩の形態で特定される化合物は通常、個々の製造方法および／または精製方法によって得られる正確な化学量論的組成が未知の塩である。従って、より詳細に特定されない限り、「塩酸塩」、「トリフルオロ酢酸塩」、「ナトリウム塩」または「ｘＨＣｌ」、「ｘＣＦ３ＣＯＯＨ」、「ｘＮａ＋」などの名称および構造式に付加される言葉は、そのような塩の場合に化学量論的意味において理解すべきではなく、単にそこに存在する塩形成成分に関する説明文字を有するものである。
【０１７６】
合成中間体もしくは作業例またはそれらの塩が、記載の製造方法および／または精製方法によって化学量論的組成が未知の溶媒和物、例えば水和物（それらが所定の型のものである場合）の形態で得られた場合、上記はそれに応じて適用される。
【０１７７】
原料
出発化合物
一般法１Ａ：ボロン酸の製造
リチウムジイソプロピルアミド（２Ｍテトラヒドロフラン／ヘプタン／エチルベンゼン中溶液）を、相当するピリジン誘導体のテトラヒドロフラン（約３ｍＬ／ｍｍｏｌ）中溶液に−７８℃で加え、混合物を２から４時間撹拌し、次にトリイソプロピルボレートを急速に加えた。反応混合物をさらに２から３時間−７８℃に維持し、次に終夜かけてゆっくり解凍してＲＴとした。水を加えた後、テトラヒドロフランを減圧下に除去し、水相を酢酸エチルで２回抽出した。水相を塩酸水溶液（２Ｍ）で酸性とし、沈殿が析出し、それを濾過し、水で洗浄し、乾燥させた。水相を、酢酸エチルで３回抽出した。合わせた有機相を脱水し（硫酸ナトリウムもしくはマグネシウム）、濾過し、減圧下に濃縮した。
【０１７８】
一般法２Ａ：スズキカップリング
アルゴンでパージした火炎乾燥したフラスコに最初に、１．０当量の適切なボロン酸、１．０当量のアリールブロミドまたはアリールヨージド、３．０当量の炭酸カリウムおよび０．１当量の［１，１−ビス（ジフェニルホスフィノ）フェロセン］パラジウム（ＩＩ）クロライドモノジクロロメタン付加物またはテトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（０）を入れた。フラスコを３回排気し、アルゴンを再充填した。ジオキサン（約６ｍＬ／ｍｍｏｌ）を反応混合物に加え、それを１１０℃で反応がほぼ完了するまで数時間撹拌した。反応混合物をセライトで濾過し、濾液を減圧下に濃縮した。残留物に水を加えた。酢酸エチル添加および相分離後に、有機相を水で１回および飽和塩化ナトリウム水溶液で１回洗浄し、脱水し（硫酸ナトリウムもしくはマグネシウム）、濾過し、減圧下に濃縮した。次に、粗生成物を順相クロマトグラフィー（シクロヘキサン−酢酸エチル混合物またはジクロロメタン−メタノール混合物）または分取ＲＰ−ＨＰＬＣ（水−アセトニトリル勾配または水−メタノール勾配）によって精製した。
【０１７９】
一般法３Ａ：メトキシピリジン開裂
２０当量のピリジニウム塩酸塩またはピリジニウム臭化水素酸塩を適切なメトキシピリジンのジメチルホルムアミド中溶液（１０から１２．５ｍＬ／ｍｍｏｌ）に加え、混合物を１００℃で、反応がほぼ完了するまで、可能であれば追加のピリジニウム塩酸塩またはピリジニウム臭化水素酸塩を加えながら数時間から数日間撹拌した。次に、反応溶液を減圧下に濃縮し、残留物を水とともに撹拌した。得られた沈殿を濾過し、水で洗浄し、真空乾燥した。
【０１８０】
一般法４Ａ：炭酸カリウム存在下での相当する２−ブロモ−または２−クロロプロパン酸エステル誘導体による２−ピリジノン誘導体のＮ−アルキル化
１．２当量の適切な２−ブロモ−または２−クロロプロパン酸エステル誘導体および１．５当量の炭酸カリウムを、アルゴン下に室温で１．０当量の相当する２−ピリジノン誘導体のジメチルホルムアミド中溶液（５から１０ｍＬ／ｍｍｏｌ）に加え、混合物を１００℃で撹拌した。ジメチルホルムアミドの除去および水／酢酸エチルの添加および相分離後に、有機相を水および飽和塩化ナトリウム水溶液で洗浄し、脱水し（硫酸ナトリウムもしくはマグネシウム）、濾過し、減圧下に濃縮した。粗生成物を、順相クロマトグラフィー（シクロヘキサン−酢酸エチル混合物またはジクロロメタン−メタノール混合物）または分取ＲＰ−ＨＰＬＣ（水−アセトニトリル勾配または水−メタノール勾配）によって精製した。
【０１８１】
一般法５Ａ：Ｔ３Ｐ／ピリジンによるアミドカップリング
相当するカルボン酸（１当量）および相当するアミン（１．１から１．５当量）のピリジン（約０．１Ｍ）中溶液を加熱して６０から８０℃とし、Ｔ３Ｐ（５０％酢酸エチル中溶液、４当量）を滴下した。あるいは、Ｔ３Ｐを室温で加え、次に、混合物を室温で撹拌し、加熱して６０から９０℃とした。１から２０時間後、反応混合物を冷却して室温とし、水および酢酸エチルを加えた。水相を酢酸エチルで抽出した。合わせた有機相を、緩衝水溶液（ｐＨ＝５）、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液および飽和塩化ナトリウム水溶液で洗浄し、硫酸ナトリウムで脱水し、減圧下に濃縮した。粗生成物を、順相クロマトグラフィー（溶離液：シクロヘキサン−酢酸エチル混合物またはジクロロメタン−メタノール混合物）または分取ＲＰ−ＨＰＬＣ（水−アセトニトリル勾配または水−メタノール勾配）のいずれかによって精製しても良い。
【０１８２】
一般法５Ｂ：ＨＡＴＵ／ＤＩＥＡによるアミドカップリング
アルゴン下および室温で、アミン（１．１当量）、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（２．２当量）およびＨＡＴＵ（１．２当量）の少量のＤＭＦ中溶液を、適切なカルボン酸（１．０当量）のジメチルホルムアミド（７から１５ｍＬ／ｍｍｏｌ）中溶液に加えた。反応混合物を室温で撹拌した。水／酢酸エチルの添加および相分離後、有機相を水および飽和塩化ナトリウム水溶液で洗浄し、脱水し（硫酸ナトリウム）、濾過し、減圧下に濃縮した。粗生成物を、フラッシュクロマトグラフィー（シリカゲル６０、移動相：シクロヘキサン／酢酸エチル混合物またはジクロロメタン／メタノール混合物）または分取ＨＰＬＣ（Ｒｅｐｒｏｓｉｌ  Ｃ１８、水／アセトニトリル勾配または水／メタノール勾配）のいずれかによって精製した。
【０１８３】
一般法６Ａ：ＴＦＡを用いるｔｅｒｔ−ブチルエステルまたはＢｏｃ保護アミンの加水分解
室温で、２０当量のＴＦＡを、１．０当量の適切なｔｅｒｔ−ブチルエステル誘導体のジクロロメタン中溶液に（約５から１０ｍＬ／ｍｍｏｌ）加え、混合物を室温で１から８時間撹拌した。反応混合物を減圧下に濃縮し、残留物をジクロロメタンおよびトルエンと数回共留去し、真空乾燥した。粗生成物を、順相クロマトグラフィー（シクロヘキサン／酢酸エチル混合物もしくはジクロロメタン／メタノール混合物）または分取ＲＰ−ＨＰＬＣ（水／アセトニトリル勾配または水／メタノール勾配）のいずれかによって精製しても良い。
【０１８４】
一般法６Ｂ：メチル／エチルまたはベンジルエステルの水酸化リチウムによる加水分解
室温で、水酸化リチウム（２から４当量）を、１．０当量の適切なメチルまたはエチルエステルのテトラヒドロフラン／水（３：１、約７から１５ｍＬ／ｍｍｏｌ）中溶液に加えた。反応混合物を室温から６０℃で撹拌し、塩酸水溶液（１Ｎ）を用いてｐＨ１に調節した。水／酢酸エチルの添加および相分離後に、水相を、酢酸エチルで３回抽出した。合わせた有機相を脱水し（硫酸ナトリウムまたは硫酸マグネシウム）、濾過し、減圧下に濃縮した。粗生成物を、順相クロマトグラフィー（シクロヘキサン／酢酸エチル混合物またはジクロロメタン／メタノール混合物）または分取ＲＰ−ＨＰＬＣ（水／アセトニトリル勾配または水／メタノール勾配）のいずれかによって精製した。
【０１８５】
一般法６Ｃ：水酸化リチウムによるｔｅｒｔ−ブチルエステルのケン化
水酸化リチウム（２−５当量）を、１．０当量の相当するｔｅｒｔ−ブチルエステルのテトラヒドロフラン／エタノール中溶液（１：２、１５−５０ｍＬ／ｍｍｏｌ）に室温で加えた。反応混合物を室温から６０℃で撹拌し、飽和塩化アンモニウム水溶液を加え、塩酸水溶液（１Ｎ）でｐＨ１に調節した。水／酢酸エチルの添加および相分離後に、水相を、酢酸エチルで３回抽出した。合わせた有機相を脱水し（硫酸ナトリウムまたは硫酸マグネシウム）、濾過し、減圧下に濃縮した。粗生成物を、順相クロマトグラフィー（シクロヘキサン−酢酸エチル混合物またはジクロロメタン−メタノール混合物）または分取ＲＰ−ＨＰＬＣ（水−アセトニトリル勾配または水−メタノール勾配）のいずれかによって精製した。
【０１８６】
一般法７Ａ：トリフレートの製造
最初に、相当するアルコールの溶液（１当量）をジクロロメタン（０．１から１Ｍ）に入れ、ルチジン（１．１から１．５当量）またはトリエチルアミン（１．１から１．５当量）またはＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（１．１から１．５当量）およびトリフルオロメタンスルホン酸無水物（１．０５から１．５当量）をその順に−２０℃から０℃で加えた。反応混合物を、−２０℃から０℃でさらに１時間撹拌し、次に３倍量（反応体積に基づいて）のメチルｔｅｒｔ−ブチルエーテルで希釈した。有機相を飽和塩化ナトリウム水溶液／１Ｎ塩酸の３：１混合物で３回洗浄し、最後に飽和炭酸水素ナトリウム水溶液で洗浄し、脱水し（硫酸ナトリウムもしくはマグネシウム）、濾過し、溶媒を減圧下に除去した。粗生成物を、それ以上精製せずに次の段階で用いた。
【０１８７】
一般法８Ａ：トリフレートによるアセテートのアルキル化
相当するアセテート（１当量）のテトラヒドロフラン（０．１から０．２Ｍ）中溶液に、アルゴン下に−７８℃でリチウムビス（トリメチルシリル）アミド（１．０Ｍ  ＴＨＦ中溶液、１．１から１．３当量）を滴下し、混合物を１５分間撹拌した。相当するアルキルトリフレート（１．５から２．０当量）を純粋な物質として、またはＴＨＦ中溶液として加えた。得られた反応混合物を、−７８℃で１５分間および室温で１時間撹拌した。飽和塩化アンモニウム水溶液を反応混合物に加えた。相分離後、水相を酢酸エチルで抽出した。合わせた有機相を脱水し（硫酸ナトリウムまたは硫酸マグネシウム）、濾過し、減圧下に濃縮した。粗生成物を、順相クロマトグラフィー（シクロヘキサン−酢酸エチル混合物またはジクロロメタン−メタノール混合物）または分取ＲＰ−ＨＰＬＣ（水−アセトニトリル勾配または水−メタノール勾配）のいずれかによって精製した。
【０１８８】
実施例１．１Ａ
２，５−ジメトキシピリジン−４−イルボロン酸
【化２５】
2018509426.tif 000027
【０１８９】
２，５−ジメトキシピリジン１１．５３ｇ（８２．９ｍｍｏｌ）を、一般法１Ａに従って反応させた。水相を酸性とした後、所望の生成物が沈殿として析出した。収量：９．５３ｇ（理論値の６１％）。
【０１９０】
ＬＣ／ＭＳ［方法１］：Ｒｔ＝０．４７分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝１８４（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０１９１】
実施例１．１Ｂ
４−クロロ−２−（２，５−ジメトキシピリジン−４−イル）ベンゾニトリル
【化２６】
2018509426.tif 000028
【０１９２】
一般法２Ａに従って、２，５−ジメトキシピリジン−４−イルボロン酸７．８７ｇ（純度９５％、４０．８６ｍｍｏｌ）を、［１，１−ビス（ジフェニルホスフィノ）フェロセン］パラジウム（ＩＩ）クロライド−ジクロロメタン・モノ付加物の存在下に２−ブロモ−４−クロロベンゾニトリル８．８５ｇ（４０．８６ｍｍｏｌ）と反応させた。収量：６．２３ｇ（純度９２％、理論値の５１％）。
【０１９３】
ＬＣ／ＭＳ［方法１］：Ｒｔ＝１．０８分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝２７５（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０１９４】
実施例１．１Ｃ
４−クロロ−２−（５−メトキシ−２−オキソ−１，２−ジヒドロピリジン−４−イル）ベンゾニトリル
【化２７】
2018509426.tif 000029
【０１９５】
一般法３Ａに従って、４−クロロ−２−（２，５−ジメトキシピリジン−４−イル）ベンゾニトリル７．２３ｇ（純度９２％、２４．２１ｍｍｏｌ）をピリジニウム塩酸塩と反応させた。収量：６．６６ｇ（純度９１％、理論値の９６％）。
【０１９６】
ＬＣ／ＭＳ［方法１］：Ｒｔ＝０．７６分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝２６１（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０１９７】
１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ［ｐｐｍ］＝１１．４５（ｂｒｓ、、１Ｈ）、７．９８（ｄ、１Ｈ）、７．７５−７．６７（ｍ、２Ｈ）、７．２９（ｂｒｓ、、１Ｈ）、６．４３（ｓ、１Ｈ）、３．６４（ｓ、３Ｈ）。
【０１９８】
実施例１．１Ｄ
ｔｅｒｔ−ブチル［４−（５−クロロ−２−シアノフェニル）−５−メトキシ−２−オキソピリジン−１（２Ｈ）−イル］アセテート
【化２８】
2018509426.tif 000030
【０１９９】
一般法４Ａに従って、４−クロロ−２−（５−メトキシ−２−オキソ−１，２−ジヒドロピリジン−４−イル）ベンゾニトリル５１６ｍｇ（純度９１％、１．８ｍｍｏｌ）を、１００℃で１．２当量のｔｅｒｔ−ブチルブロモアセテートと反応させた。収量：４６４ｍｇ（理論値の６８％）。
【０２００】
ＬＣ／ＭＳ［方法１］：Ｒｔ＝１．００分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝３７５（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０２０１】
実施例１．２Ａ
２−ブロモ−４−クロロフェニルジフルオロメチルエーテル
【化２９】
2018509426.tif 000031
【０２０２】
水酸化カリウム水溶液（６Ｍ）３６ｍＬを、氷浴で冷却した２−ブロモ−４−クロロフェノール３．５ｇ（１６．９ｍｍｏｌ）のアセトニトリル（３６ｍＬ）中溶液に加え、高撹拌しながらジフルオロメチルトリフルオロメタンスルホネート６．５ｍＬ（２６．９ｍｍｏｌ、１．６当量）を滴下した［Ａｎｇｅｗ．  Ｃｈｅｍ．  Ｉｎｔ．  Ｅｄ．  ２０１３，  ５２，  １−５；Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｆｌｕｏｒｉｎｅ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ２００９，  １３０，  ６６７−６７０］。反応混合物を５分間撹拌し、水２００ｍＬで希釈した。水相を各回ジエチルエーテル１５０ｍＬで２回抽出した。合わせた有機相を脱水し（硫酸ナトリウム）、濾過し、減圧下に濃縮し、乾燥させた。水相をジエチルエーテルで再度抽出した。有機相を脱水し（硫酸ナトリウム）、濾過し、減圧下に濃縮し、乾燥させた。両方の合わせた残留物の収量：３．４ｇ（理論値の８０％）。
【０２０３】
ＬＣ／ＭＳ［方法９］：Ｒｔ＝３．５１分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝２５６（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０２０４】
１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ［ｐｐｍ］＝７．９１（ｄ、１Ｈ）、７．５５（ｄｄ、１Ｈ）、７．３７（ｄ、１Ｈ）、７．３０（ｔ、１Ｈ）。
【０２０５】
実施例１．２Ｂ
４−［５−クロロ−２−（ジフルオロメトキシ）フェニル］−２，５−ジメトキシピリジン
【化３０】
2018509426.tif 000032
【０２０６】
一般法２Ａに従って、２，５−ジメトキシピリジン−４−イルボロン酸４１７ｍｇ（２．１９ｍｍｏｌ、１．２当量）を、［１，１−ビス（ジフェニルホスフィノ）フェロセン］パラジウム（ＩＩ）クロライド−ジクロロメタン・モノ付加物の存在下に２−ブロモ−４−クロロフェニルジフルオロメチルエーテル４９４ｍｇ（１．８２ｍｍｏｌ）と反応させた。粗生成物を、フラッシュクロマトグラフィー（ＫＰ−ＳＩＬ、石油エーテル／酢酸エチル１５％から２０％）によって精製した。収量：１７０ｍｇ（純度９０％、理論値の２７％）。
【０２０７】
ＬＣ／ＭＳ［方法１］：Ｒｔ＝１．１６分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝３１６（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０２０８】
１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ［ｐｐｍ］＝７．９６（ｓ、１Ｈ）、７．５７（ｄｄ、１Ｈ）、７．４５（ｄ、１Ｈ）、７．３０（ｄ、１Ｈ）、７．１１（ｔ、１Ｈ）、６．７４（ｓ、１Ｈ）、３．８３（ｓ、３Ｈ）、３．７５（ｓ、３Ｈ）。
【０２０９】
実施例１．２Ｃ
４−［５−クロロ−２−（ジフルオロメトキシ）フェニル］−５−メトキシピリジン−２（１Ｈ）−オン
【化３１】
2018509426.tif 000033
【０２１０】
一般法３Ａに従って、４−［５−クロロ−２−（ジフルオロメトキシ）フェニル］−２，５−ジメトキシピリジン１７０ｍｇ（純度９０％、０．４９ｍｍｏｌ）をピリジニウム臭化水素酸塩と反応させた。収量：１２７ｍｇ（理論値の８７％）。
【０２１１】
ＬＣ／ＭＳ［方法１］：Ｒｔ＝０．８４分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝３０２（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０２１２】
実施例１．２Ｄ
ｔｅｒｔ−ブチル｛４−［５−クロロ−２−（ジフルオロメトキシ）フェニル］−５−メトキシ−２−オキソピリジン−１（２Ｈ）−イル｝アセテート
【化３２】
2018509426.tif 000034
【０２１３】
一般法４Ａに従って、１．５当量の炭酸カリウムの存在下に１００℃で、４−［５−クロロ−２−（ジフルオロメトキシ）フェニル］−５−メトキシピリジン−２（１Ｈ）−オン５．４３ｇ（純度８０％、１４．４ｍｍｏｌ）を、１．２当量のｔｅｒｔ−ブチルブロモアセテートと反応させた。収量：３．６４ｇ（理論値の６１％）。
【０２１４】
ＬＣ／ＭＳ［方法１］：Ｒｔ＝１．０５分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝４１６（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０２１５】
１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ［ｐｐｍ］＝７．５７（ｄｄ、１Ｈ）、７．４５（ｄ、１Ｈ）、７．４３（ｓ、１Ｈ）、７．３０（ｄ、１Ｈ）、７．１３（ｔ、１Ｈ）、６．３５（ｓ、１Ｈ）、４．５８（ｓ、２Ｈ）、３．５６（ｓ、３Ｈ）、１．４４（ｓ、９Ｈ）。
【０２１６】
実施例２．１Ａ
２−イソプロポキシエチルトリフルオロメタンスルホネート
【化３３】
2018509426.tif 000035
【０２１７】
一般法７Ａに従って、０℃で、２，６−ジメチルピリジン０．８４ｍＬ（７．２ｍｍｏｌ、１．５当量）の存在下に、２−イソプロポキシエタノール５００ｍｇ（４．８ｍｍｏｌ）をトリフルオロメタンスルホン酸無水物１．２ｍＬ（７．２ｍｍｏｌ、１．５当量）と反応させた。粗生成物を、それ以上精製せずに次の段階で反応させた。
【０２１８】
１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）：δ［ｐｐｍ］＝４．６０（ｔ、２Ｈ）、３．７３（ｔ、２Ｈ）、３．６９−３．５９（ｍ、１Ｈ）、１．１８（ｄ、６Ｈ）。
【０２１９】
実施例２．２Ａ
２−（シクロブチルオキシ）エチルトリフルオロメタンスルホネート
【化３４】
2018509426.tif 000036
【０２２０】
一般法７Ａに従って、０℃で、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン１．１ｍＬ（６．５ｍｍｏｌ、１．５当量）の存在下に、２−（シクロブチルオキシ）エタノール５００ｍｇ（４．３ｍｍｏｌ）を、トリフルオロメタンスルホン酸無水物１．１ｍＬ（６．５ｍｍｏｌ、１．５当量）と反応させた。粗生成物を、それ以上精製せずに次の段階で反応させた。
【０２２１】
１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）：δ［ｐｐｍ］＝４．６０（ｔ、２Ｈ）、４．０１−３．９３（ｍ、１Ｈ）、３．６５（ｔ、２Ｈ）、２．２６−２．１６（ｍ、２Ｈ）、２．００−１．９０（ｍ、２Ｈ）、１．７７−１．６７（ｍ、２Ｈ）。
【０２２２】
実施例２．３Ａ
２−ｔｅｒｔ−ブトキシエチルトリフルオロメタンスルホネート
【化３５】
2018509426.tif 000037
【０２２３】
一般法７Ａに従って、０℃で、２，６−ジメチルピリジン０．７４ｍＬ（６．３ｍｍｏｌ、１．５当量）の存在下に、２−ｔｅｒｔ−ブトキシエタノール５００ｍｇ（４．２ｍｍｏｌ）を、トリフルオロメタンスルホン酸無水物１．１ｍＬ（６．３ｍｍｏｌ、１．５当量）と反応させた。粗生成物を、それ以上精製せずに次の段階で反応させた。
【０２２４】
１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）：δ［ｐｐｍ］＝４．５８（ｔ、２Ｈ）、３．６７（ｔ、２Ｈ）、１．２１（ｓ、９Ｈ）。
【０２２５】
実施例２．４Ａ
２−［（１−メチルシクロブチル）オキシ］エタノール
【化３６】
2018509426.tif 000038
【０２２６】
［（１−メチルシクロブチル）オキシ］酢酸５００ｍｇ（３．４７ｍｍｏｌ）のテトラヒドロフラン（２０ｍＬ）中溶液に、アルゴン下に氷冷しながら、水素化リチウムアルミニウム溶液（１Ｍテトラヒドロフラン中溶液）１０．４ｍＬ（１０．４ｍｍｏｌ、３当量）を加え、混合物を室温で４５分間撹拌した。その反応混合物に、氷冷しながら水０．４ｍＬ、２０％水酸化ナトリウム水溶液０．４ｍＬおよび水０．４ｍＬ  ３回を滴下した。得られた沈殿をセライトで濾過し、テトラヒドロフランで洗浄した。合わせた濾液を減圧下に濃縮した。粗生成物を、フラッシュクロマトグラフィー（シクロヘキサン−酢酸エチル混合物）によって精製した。収量：４１１ｍｇ（理論値の９１％）。
【０２２７】
１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ［ｐｐｍ］＝４．５０（ｔ、１Ｈ）、３．４４（ｑ、２Ｈ）、３．２５（ｔ、２Ｈ）、２．１０−１．９８（ｍ、２Ｈ）、１．８１−１．７１（ｍ、２Ｈ）、１．６９−１．４７（ｍ、２Ｈ）、１．２６（ｓ、３Ｈ）。
【０２２８】
実施例２．４Ｂ
２−［（１−メチルシクロブチル）オキシ］エチルトリフルオロメタンスルホネート
【化３７】
2018509426.tif 000039
【０２２９】
一般法７Ａに従って、−７８℃で、トリエチルアミン０．４８ｍＬ（３．４７ｍｍｏｌ、１．１当量）の存在下に、２−［（１−メチルシクロブチル）オキシ］エタノール４１１ｍｇ（３．１６ｍｍｏｌ）を、トリフルオロメタンスルホン酸無水物０．５９ｍＬ（３．４７ｍｍｏｌ、１．１当量）と反応させた。収量：７１１ｍｇ、粗生成物を、それ以上精製せずに次の段階で反応させた。
【０２３０】
１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ［ｐｐｍ］＝４．４５−４．３７（ｍ、２Ｈ）、３．５６−３．４９（ｍ、２Ｈ）、２．１６−２．０４（ｍ、２Ｈ）、１．８７−１．７７（ｍ、２Ｈ）、１．７３−１．５３（ｍ、２Ｈ）、１．３２（ｓ、３Ｈ）。
【０２３１】
実施例３．１Ａ
ｔｅｒｔ−ブチル２−［４−（５−クロロ−２−シアノフェニル）−５−メトキシ−２−オキソピリジン−１（２Ｈ）−イル］−４−イソプロポキシブタノエート（ラセミ体）
【化３８】
2018509426.tif 000040
【０２３２】
一般法８Ａに従って、ｔｅｒｔ−ブチル［４−（５−クロロ−２−シアノフェニル）−５−メトキシ−２−オキソピリジン−１（２Ｈ）−イル］アセテート１．００ｇ（２．６７ｍｍｏｌ）、２−イソプロポキシエチルトリフルオロメタンスルホネート１．１３ｇ（４．８０ｍｍｏｌ、１．８当量）およびリチウムビス（トリメチルシリル）アミド（１Ｍ  ＴＨＦ中溶液）３．４７ｍＬ（３．４７ｍｍｏｌ、１．３当量）を、ＴＨＦ  ２７ｍＬ中で反応させた。水系後処理後、粗生成物を、フラッシュクロマトグラフィー（５０ｇシリカカートリッジ、流量：５０ｍＬ／分、シクロヘキサン−酢酸エチル混合物）によって精製した。収量：７８４ｍｇ（理論値の６４％）。
【０２３３】
ＬＣ／ＭＳ［方法１］：Ｒｔ＝１．１１分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝４６１（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０２３４】
１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ［ｐｐｍ］＝７．９９（ｄ、１Ｈ）、７．７５−７．６９（ｍ、２Ｈ）、７．３６（ｓ、１Ｈ）、６．４８（ｓ、１Ｈ）、５．１３（ｄｄ、１Ｈ）、３．６３（ｓ、３Ｈ）、３．４８−３．３９（ｍ、２Ｈ）、３．２０−３．１１（ｍ、１Ｈ）、２．４１−２．２３（ｍ、２Ｈ）、１．４１（ｓ、９Ｈ）、１．０５（ｄ、３Ｈ）、１．０３（ｄ、３Ｈ）。
【０２３５】
実施例３．１Ｂ
２−［４−（５−クロロ−２−シアノフェニル）−５−メトキシ−２−オキソピリジン−１（２Ｈ）−イル］−４−イソプロポキシブタン酸（ラセミ体）
【化３９】
2018509426.tif 000041
【０２３６】
一般法６Ｃに従って、水酸化リチウム２０４ｍｇ（８．５０ｍｍｏｌ、５．０当量）の存在下に、ｔｅｒｔ−ブチル２−［４−（５−クロロ−２−シアノフェニル）−５−メトキシ−２−オキソピリジン−１（２Ｈ）−イル］−４−イソプロポキシブタノエート（ラセミ体）７８４ｍｇ（１．７０ｍｍｏｌ）のエタノール（５０ｍＬ）およびテトラヒドロフラン（２５ｍＬ）を反応させた。収量：６８１ｍｇ（理論値の９９％）。
【０２３７】
ＬＣ／ＭＳ［方法１］：Ｒｔ＝０．８５分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝４０５（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０２３８】
実施例３．１Ｃ
エチル４−（｛２−［４−（５−クロロ−２−シアノフェニル）−５−メトキシ−２−オキソピリジン−１（２Ｈ）−イル］−４−イソプロポキシブタノイル｝−アミノ）ベンゾエート（ラセミ体）
【化４０】
2018509426.tif 000042
【０２３９】
一般法５Ａに従って、ピリジン（７ｍＬ）中の２−［４−（５−クロロ−２−シアノフェニル）−５−メトキシ−２−オキソピリジン−１（２Ｈ）−イル］−４−イソプロポキシブタン酸（ラセミ体）２５０ｍｇ（０．６２ｍｍｏｌ）およびエチル４−アミノベンゾエート１５３ｍｇ（０．９３ｍｍｏｌ、１．５当量）を、８０℃でプロピルホスホン酸無水物（Ｔ３Ｐ、酢酸エチル中５０％）１．４４ｍＬ（２．４７ｍｍｏｌ、４．０当量）と反応させた。粗生成物を、分取ＨＰＬＣ［カラム：ＣｈｒｏｍａｔｏｒｅｘＣ１８、１０μｍ、１２５ｍｍ×３０ｍｍ、溶離液：水／０．１％ギ酸勾配（０から３分１０％アセトニトリル、３５分で９０％アセトニトリルまでおよび９０％アセトニトリルでさらに３分）］によって精製した。収量：２７８ｍｇ（理論値の８２％）。
【０２４０】
ＬＣ／ＭＳ［方法１］：Ｒｔ＝１．１６分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝５５２（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０２４１】
１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ［ｐｐｍ］＝１０．７６（ｓ、１Ｈ）、７．９９（ｄ、１Ｈ）、７．９３（ｄ、２Ｈ）、７．８０（ｄ、２Ｈ）、７．７６−７．７０（ｍ、２Ｈ）、７．５０（ｓ、１Ｈ）、６．５２（ｓ、１Ｈ）、５．７８（ｄｄ、１Ｈ）、４．２９（ｑ、２Ｈ）、３．６９（ｓ、３Ｈ）、３．５１−３．３８（ｍ、２Ｈ）、３．３−３．２５（ｍ、１Ｈ）、２．４５−２．３５（ｍ、２Ｈ）、１．３１（ｔ、３Ｈ）、１．０２（ｄ、３Ｈ）、０．９８（ｄ、３Ｈ）。
【０２４２】
実施例４．１Ａ
ｔｅｒｔ−ブチル２−［４−（５−クロロ−２−シアノフェニル）−５−メトキシ−２−オキソピリジン−１（２Ｈ）−イル］−４−（シクロブチルオキシ）ブタノエート（ラセミ体）
【化４１】
2018509426.tif 000043
【０２４３】
一般法８Ａに従って、ｔｅｒｔ−ブチル［４−（５−クロロ−２−シアノフェニル）−５−メトキシ−２−オキソピリジン−１（２Ｈ）−イル］アセテート５００ｍｇ（１．３３ｍｍｏｌ）、２−（シクロブチルオキシ）エチルトリフルオロメタンスルホネート４０５ｍｇ（純度９０％、１．４７ｍｍｏｌ、１．１当量）およびリチウムビス（トリメチルシリル）アミド（１Ｍ  ＴＨＦ中溶液）１．６０ｍＬ（１．６０ｍｍｏｌ、１．２当量）を、ＴＨＦ  ２５ｍＬ中で反応させた。水系後処理後、粗生成物を、フラッシュクロマトグラフィー（５０ｇシリカカートリッジ、流量：５０ｍＬ／分、シクロヘキサン−酢酸エチル混合物）によって精製した。収量：４９３ｍｇ（理論値の７７％）。
【０２４４】
ＬＣ／ＭＳ［方法１］：Ｒｔ＝１．２２分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝４７３（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０２４５】
１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ［ｐｐｍ］＝７．９９（ｄ、１Ｈ）、７．７５−７．６９（ｍ、２Ｈ）、７．３８（ｓ、１Ｈ）、６．４９（ｓ、１Ｈ）、５．１４（ｄｄ、１Ｈ）、３．８６−３．７７（ｍ、１Ｈ）、３．６４（ｓ、３Ｈ）、３．３６−３．２８（ｍ、１Ｈ、ＤＭＳＯに隣接）、３．１５−３．０８（ｍ、１Ｈ）、２．３９−２．２７（ｍ、２Ｈ）、２．１４−２．０２（ｍ、２Ｈ）、１．８６−１．７０（ｍ、２Ｈ）、１．６３−１．５５（ｍ、１Ｈ）、１．４８−１．４（ｍ、１Ｈ）、１．４１（ｓ、９Ｈ）。
【０２４６】
実施例４．１Ｂ
２−［４−（５−クロロ−２−シアノフェニル）−５−メトキシ−２−オキソピリジン−１（２Ｈ）−イル］−４−（シクロブチルオキシ）ブタン酸（ラセミ体）
【化４２】
2018509426.tif 000044
【０２４７】
一般法６Ｃに従って、エタノール２８ｍＬおよびテトラヒドロフラン１４ｍＬ中のｔｅｒｔ−ブチル２−［４−（５−クロロ−２−シアノフェニル）−５−メトキシ−２−オキソピリジン−１（２Ｈ）−イル］−４−（シクロブチルオキシ）ブタノエート（ラセミ体）４９１ｍｇ（１．０４ｍｍｏｌ）を、水酸化リチウム１２４ｍｇ（５．１９ｍｍｏｌ、５．０当量）の存在下に反応させた。収量：５１０ｍｇ（定量的）。
【０２４８】
ＬＣ／ＭＳ［方法１］：Ｒｔ＝０．９９分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝４１７（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０２４９】
実施例４．１Ｃ
エチル４−（｛２−［４−（５−クロロ−２−シアノフェニル）−５−メトキシ−２−オキソピリジン−１（２Ｈ）−イル］−４−（シクロブチルオキシ）ブタノイル｝アミノ）ベンゾエート（ラセミ体）
【化４３】
2018509426.tif 000045
【０２５０】
一般法５Ａに従って、ピリジン（１４ｍＬ）中の２−［４−（５−クロロ−２−シアノフェニル）−５−メトキシ−２−オキソピリジン−１（２Ｈ）−イル］−４−（シクロブチルオキシ）ブタン酸（ラセミ体）３８７ｍｇ（０．９３ｍｍｏｌ）および４−エチルアミノベンゾエート２３０ｍｇ（１．３９ｍｍｏｌ、１．５当量）を、８０℃でプロピルホスホン酸無水物（Ｔ３Ｐ、５０％酢酸エチル中溶液）２．１７ｍＬ（３．７１ｍｍｏｌ、４．０当量）と反応させた。粗生成物を、フラッシュクロマトグラフィー（５０ｇシリカカートリッジ、流量：５０ｍＬ／分、シクロヘキサン−酢酸エチル混合物）によって精製した。収量：４０３ｍｇ（理論値の７７％）。
【０２５１】
ＬＣ／ＭＳ［方法１］：Ｒｔ＝１．１８分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝５６４（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０２５２】
実施例５．１Ａ
ｔｅｒｔ−ブチル４−ｔｅｒｔ−ブトキシ−２−［４−（５−クロロ−２−シアノフェニル）−５−メトキシ−２−オキソピリジン−１（２Ｈ）−イル］ブタノエート（ラセミ体）
【化４４】
2018509426.tif 000046
【０２５３】
一般法８Ａに従って、ｔｅｒｔ−ブチル［４−（５−クロロ−２−シアノフェニル）−５−メトキシ−２−オキソピリジン−１（２Ｈ）−イル］アセテート９５３ｍｇ（２．５４ｍｍｏｌ）、２−ｔｅｒｔ−ブトキシエチルトリフルオロメタンスルホネート１．０６ｇ（４．２２ｍｍｏｌ、１．７当量）およびリチウムビス（トリメチルシリル）アミド（１Ｍ  ＴＨＦ中溶液）３．３１ｍＬ（３．３１ｍｍｏｌ、１．３当量）を、ＴＨＦ  ２５ｍＬ中で反応させた。水系後処理後、粗生成物を、フラッシュクロマトグラフィー（５０ｇシリカカートリッジ、流量：５０ｍＬ／分、シクロヘキサン−酢酸エチル混合物）によって精製した。収量：９００ｍｇ（理論値の７５％）。
【０２５４】
ＬＣ／ＭＳ［方法１］：Ｒｔ＝１．１５分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝４７５（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０２５５】
１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ［ｐｐｍ］＝７．９８（ｄ、１Ｈ）、７．７５−７．６８（ｍ、２Ｈ）、７．３７（ｓ、１Ｈ）、６．４８（ｓ、１Ｈ）、５．１５（ｄｄ、１Ｈ）、３．６４（ｓ、３Ｈ）、３．４１−３．３３（ｍ、１Ｈ）、３．１９−３．１０（ｍ、１Ｈ）、２．４２−２．３１（ｍ、１Ｈ）、２．３１−２．２０（ｍ、１Ｈ）、１．４１（ｓ、９Ｈ）、１．０８（ｓ、９Ｈ）。
【０２５６】
実施例５．１Ｂ
４−ｔｅｒｔ−ブトキシ−２−［４−（５−クロロ−２−シアノフェニル）−５−メトキシ−２−オキソピリジン−１（２Ｈ）−イル］ブタン酸（ラセミ体）
【化４５】
2018509426.tif 000047
【０２５７】
一般法６Ｃに従って、水酸化リチウム２２７ｍｇ（９．４７ｍｍｏｌ、５．０当量）の存在下に、エタノール（５０ｍＬ）およびテトラヒドロフラン（２５ｍＬ）中のｔｅｒｔ−ブチル４−ｔｅｒｔ−ブトキシ−２−［４−（５−クロロ−２−シアノフェニル）−５−メトキシ−２−オキソピリジン−１（２Ｈ）−イル］ブタノエート（ラセミ体）９００ｍｇ（１．９０ｍｍｏｌ）を反応させた。収量：６０９ｍｇ（理論値の７４％）。
【０２５８】
ＬＣ／ＭＳ［方法１］：Ｒｔ＝０．９０分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝４１９（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０２５９】
実施例５．１Ｃ
エチル４−（｛４−ｔｅｒｔ−ブトキシ−２−［４−（５−クロロ−２−シアノフェニル）−５−メトキシ−２−オキソピリジン−１（２Ｈ）−イル］ブタノイル｝−アミノ）ベンゾエート（ラセミ体）
【化４６】
2018509426.tif 000048
【０２６０】
一般法５Ａに従って、ピリジン（１０ｍＬ）中の４−ｔｅｒｔ−ブトキシ−２−［４−（５−クロロ−２−シアノフェニル）−５−メトキシ−２−オキソピリジン−１（２Ｈ）−イル］ブタン酸（ラセミ体）２１０ｍｇ（０．４９ｍｍｏｌ）およびエチル４−アミノベンゾエート１２０ｍｇ（０．７３ｍｍｏｌ、１．５当量）を、８０℃でプロピルホスホン酸無水物（Ｔ３Ｐ、５０％酢酸エチル中溶液）１．１３ｍＬ（１．９５ｍｍｏｌ、４．０当量）と反応させた。粗生成物を、分取ＨＰＬＣ［カラム：ＣｈｒｏｍａｔｏｒｅｘＣ１８、１０μｍ、１２５ｍｍ×３０ｍｍ、溶離液：水／０．１％ギ酸勾配（０から３分１０％アセトニトリル、３５分で９０％アセトニトリルまで、および９０％アセトニトリルでさらに３分）］によって精製した。収量：２１５ｍｇ（理論値の７８％）。
【０２６１】
ＬＣ／ＭＳ［方法１］：Ｒｔ＝１．１６分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝５６６（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０２６２】
１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ［ｐｐｍ］＝１０．７７（ｓ、１Ｈ）、７．９９（ｄ、１Ｈ）、７．９３（ｄ、２Ｈ）、７．８０（ｄ、２Ｈ）、７．７６−７．６７（ｍ、２Ｈ）、７．４９（ｓ、１Ｈ）、６．５２（ｓ、１Ｈ）、５．７９（ｔ、１Ｈ）、４．２９（ｑ、２Ｈ）、３．６９（ｓ、３Ｈ）、３．４４−３．３６（ｍ、１Ｈ）、３．３−３．２４（ｍ、１Ｈ）、２．４３−２．３５（ｍ、２Ｈ）、１．３１（ｔ、３Ｈ）、１．０４（ｓ、９Ｈ）。
【０２６３】
実施例６．１Ａ
ｔｅｒｔ−ブチル４−ｔｅｒｔ−ブトキシ−２−｛４−［５−クロロ−２−（ジフルオロメトキシ）フェニル］−５−メトキシ−２−オキソピリジン−１（２Ｈ）−イル｝ブタノエート（ラセミ体）
【化４７】
2018509426.tif 000049
【０２６４】
一般法８Ａに従って、ｔｅｒｔ−ブチル｛４−［５−クロロ−２−（ジフルオロメトキシ）フェニル］−５−メトキシ−２−オキソピリジン−１（２Ｈ）−イル｝アセテート５００ｍｇ（１．２０ｍｍｏｌ）、２−ｔｅｒｔ−ブトキシエチルトリフルオロメタンスルホネート１．０５ｇ（４．２１ｍｍｏｌ、３．５当量）およびリチウムビス（トリメチルシリル）アミド（１Ｍ  ＴＨＦ中溶液）３．３１ｍＬ（３．３１ｍｍｏｌ、１．３当量）を、ＴＨＦ  ２０ｍＬ中で反応させた。水系後処理後、粗生成物を、フラッシュクロマトグラフィー（５０ｇシリカカートリッジ、流量：５０ｍＬ／分、シクロヘキサン−酢酸エチル混合物）によって精製した。収量：３０９ｍｇ（理論値の５０％）。
【０２６５】
ＬＣ／ＭＳ［方法１］：Ｒｔ＝１．２４分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝５１６（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０２６６】
１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ［ｐｐｍ］＝７．５７（ｄｄ、１Ｈ）、７．４４（ｄ、１Ｈ）、７．２９（ｄ、１Ｈ）、７．２５（ｓ、１Ｈ）、７．１０（ｔ、１Ｈ）、６．３３（ｓ、１Ｈ）、５．１２（ｄｄ、１Ｈ）、３．６９（ｓ、３Ｈ）、３．３９−３．３３（ｍ、１Ｈ）、３．１８−３．１０（ｍ、１Ｈ）、２．４０−２．３０（ｍ、１Ｈ）、２．２９−２．１８（ｍ、１Ｈ）、１．４１（ｓ、９Ｈ）、１．０７（ｓ、９Ｈ）。
【０２６７】
実施例６．１Ｂ
４−ｔｅｒｔ−ブトキシ−２−｛４−［５−クロロ−２−（ジフルオロメトキシ）フェニル］−５−メトキシ−２−オキソピリジン−１（２Ｈ）−イル｝ブタン酸（ラセミ体）
【化４８】
2018509426.tif 000050
【０２６８】
一般法６Ｃに従って、エタノール（７ｍＬ）およびテトラヒドロフラン（３．５ｍＬ）中のｔｅｒｔ−ブチル４−ｔｅｒｔ−ブトキシ−２−｛４−［５−クロロ−２−（ジフルオロメトキシ）フェニル］−５−メトキシ−２−オキソピリジン−１（２Ｈ）−イル｝ブタン酸（ラセミ体）３０７ｍｇ（０．６０ｍｍｏｌ）を、水酸化リチウム７１ｍｇ（２．９８ｍｍｏｌ、５．０当量）の存在下に反応させた。収量：２２７ｍｇ（理論値の８３％）。
【０２６９】
ＬＣ／ＭＳ［方法１］：Ｒｔ＝１．０１分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝４６０（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０２７０】
実施例６．１Ｃ
エチル４−［（４−ｔｅｒｔ−ブトキシ−２−｛４−［５−クロロ−２−（ジフルオロメトキシ）フェニル］−５−メトキシ−２−オキソピリジン−１（２Ｈ）−イル｝ブタノイル）アミノ］ベンゾエート（ラセミ体）
【化４９】
2018509426.tif 000051
【０２７１】
一般法５Ａに従って、ピリジン（３ｍＬ）中の４−ｔｅｒｔ−ブトキシ−２−｛４−［５−クロロ−２−（ジフルオロメトキシ）フェニル］−５−メトキシ−２−オキソピリジン−１（２Ｈ）−イル｝ブタン酸（ラセミ体）１２６ｍｇ（０．２７ｍｍｏｌ）および４−エチルアミノベンゾエート６８ｍｇ（０．４１ｍｍｏｌ、１．５当量）を、８０℃でプロピルホスホン酸無水物（Ｔ３Ｐ、５０％酢酸エチル中溶液）０．６４ｍＬ（１．１０ｍｍｏｌ、４．０当量）と反応させた。粗生成物を、分取ＨＰＬＣ［カラム：ＣｈｒｏｍａｔｏｒｅｘＣ１８、１０μｍ、１２５ｍｍ×３０ｍｍ、溶離液：水／０．１％ギ酸勾配（０から３分１０％アセトニトリル、３５分で９０％アセトニトリルまでおよび９０％アセトニトリルでさらに３分）］によって精製した。収量：１３２ｍｇ（理論値の７９％）。
【０２７２】
ＬＣ／ＭＳ［方法１］：Ｒｔ＝１．２７分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝６０７（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０２７３】
１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ［ｐｐｍ］＝１０．７５（ｓ、１Ｈ）、７．９３（ｄ、２Ｈ）、７．８０（ｄ、２Ｈ）、７．５７（ｄｄ、１Ｈ）、７．４４（ｄ、１Ｈ）、７．３９（ｓ、１Ｈ）、７．２９（ｄ、１Ｈ）、７．１３（ｔ、１Ｈ）、６．３７（ｓ、１Ｈ）、５．７６（ｔ、１Ｈ）、４．２９（ｑ、２Ｈ）、３．６３（ｓ、３Ｈ）、３．４３−３．３５（ｍ、１Ｈ）、３．３−３．２５（ｍ、１Ｈ）、２．４１−２．３２（ｍ、２Ｈ）、１．３１（ｔ、３Ｈ）、１．０３（ｓ、９Ｈ）。
【０２７４】
実施例７．１Ａ
ｔｅｒｔ−ブチル２−［４−（５−クロロ−２−シアノフェニル）−５−メトキシ−２−オキソピリジン−１（２Ｈ）−イル］−４−［（１−メチルシクロブチル）オキシ］ブタノエート（ラセミ体）
【化５０】
2018509426.tif 000052
【０２７５】
一般法８Ａに従って、ｔｅｒｔ−ブチル［４−（５−クロロ−２−シアノフェニル）−５−メトキシ−２−オキソピリジン−１（２Ｈ）−イル］アセテート７５９ｍｇ（２．０３ｍｍｏｌ）、２−［（１−メチルシクロブチル）オキシ］エチルトリフルオロメタンスルホネート６６４ｍｇ（２．５３ｍｍｏｌ、１．２５当量）およびリチウムビス（トリメチルシリル）アミド（１Ｍ  ＴＨＦ中溶液）２．４３ｍＬ（２．４３ｍｍｏｌ、１．２当量）をＴＨＦ  １０ｍＬ中で反応させた。水系後処理後、粗生成物を、フラッシュクロマトグラフィー（シクロヘキサン−酢酸エチル混合物）によって精製した。収量：７４３ｍｇ（理論値の７５％）。
【０２７６】
ＬＣ／ＭＳ［方法１０］：Ｒｔ＝２．２９分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝４８７（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０２７７】
１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ［ｐｐｍ］＝７．９９（ｄ、１Ｈ）、７．７３（ｄｄ、１Ｈ）、７．７０（ｄ、１Ｈ）、７．３９（ｓ、１Ｈ）、６．４９（ｓ、１Ｈ）、５．１７（ｄｄ、１Ｈ）、３．６４（ｓ、３Ｈ）、３．３６−３．３（ｍ、１Ｈ）、３．１３−３．０４（ｍ、１Ｈ）、２．４４−２．２４（ｍ、２Ｈ）、２．０３（ｑ、１Ｈ）、１．９４（ｑ、１Ｈ）、１．７６−１．６４（ｍ、２Ｈ）、１．６４−１．４６（ｍ、２Ｈ）、１．４１（ｓ、９Ｈ）、１．２２（ｓ、３Ｈ）。
【０２７８】
実施例７．１Ｂ
２−［４−（５−クロロ−２−シアノフェニル）−５−メトキシ−２−オキソピリジン−１（２Ｈ）−イル］−４−［（１−メチルシクロブチル）オキシ］ブタン酸（ラセミ体）
【化５１】
2018509426.tif 000053
【０２７９】
一般法６Ｃに従って、エタノール（２８ｍＬ）およびテトラヒドロフラン（１４ｍＬ）中のｔｅｒｔ−ブチル２−［４−（５−クロロ−２−シアノフェニル）−５−メトキシ−２−オキソピリジン−１（２Ｈ）−イル］−４−［（１−メチルシクロブチル）オキシ］ブタノエート（ラセミ体）６９０ｍｇ（１．４２ｍｍｏｌ）を、水酸化リチウム１７０ｍｇ（７．０８ｍｍｏｌ、５．０当量）の存在下に反応させた。収量：７４４ｍｇ。粗生成物を、それ以上精製せずに次の段階で反応させた。
【０２８０】
ＬＣ／ＭＳ［方法１０］：Ｒｔ＝１．７８分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝４３１（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０２８１】
実施例７．１Ｃ
エチル４−（｛２−［４−（５−クロロ−２−シアノフェニル）−５−メトキシ−２−オキソピリジン−１（２Ｈ）−イル］−４−［（１−メチルシクロブチル）オキシ］ブタノイル｝アミノ）ベンゾエート（ラセミ体）
【化５２】
2018509426.tif 000054
【０２８２】
一般法５Ｂに従って、２−［４−（５−クロロ−２−シアノフェニル）−５−メトキシ−２−オキソピリジン−１（２Ｈ）−イル］−４−［（１−メチルシクロブチル）オキシ］ブタン酸（ラセミ体）７９５ｍｇ（前駆体において理論収率１００％に相当すると仮定して純度８０％、１．４８ｍｍｏｌ）および４−アミノ安息香酸エチル２６８ｍｇ（１．６２ｍｍｏｌ、１．１当量）を反応させた。水系後処理後、粗生成物を、フラッシュクロマトグラフィー（シクロヘキサン−酢酸エチル混合物）によって精製した。収量：４４９ｍｇ（理論値の５１％）。
【０２８３】
ＬＣ／ＭＳ［方法１］：Ｒｔ＝１．２０分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝５７８（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０２８４】
実施例８．１Ａ
ｔｅｒｔ−ブチル２−｛４−［５−クロロ−２−（ジフルオロメトキシ）フェニル］−５−メトキシ−２−オキソピリジン−１（２Ｈ）−イル｝−４−［（１−メチルシクロブチル）オキシ］ブタノエート（ラセミ体）
【化５３】
2018509426.tif 000055
【０２８５】
一般法８Ａに従って、ｔｅｒｔ−ブチル｛４−［５−クロロ−２−（ジフルオロメトキシ）−フェニル］−５−メトキシ−２−オキソピリジン−１（２Ｈ）−イル｝アセテート７００ｍｇ（１．６８ｍｍｏｌ）、２−［（１−メチルシクロブチル）オキシ］エチルトリフルオロメタンスルホネート６１８ｍｇ（２．３６ｍｍｏｌ、１．４当量）およびリチウムビス（トリメチルシリル）アミド（１Ｍ  ＴＨＦ中溶液）２．０２ｍＬ（２．０２ｍｍｏｌ、１．２当量）をＴＨＦ  １０ｍＬ中で反応させた。水系後処理後、粗生成物を、フラッシュクロマトグラフィー（シクロヘキサン−酢酸エチル混合物）によって精製した。収量：７５３ｍｇ（理論値の８３％）。
【０２８６】
ＬＣ／ＭＳ［方法１０］：Ｒｔ＝２．３９分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝５２８（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０２８７】
実施例８．１Ｂ
２−｛４−［５−クロロ−２−（ジフルオロメトキシ）フェニル］−５−メトキシ−２−オキソピリジン−１（２Ｈ）−イル｝−４−［（１−メチルシクロブチル）オキシ］ブタン酸（ラセミ体）
【化５４】
2018509426.tif 000056
【０２８８】
一般法６Ｃに従って、エタノール（２７ｍＬ）およびテトラヒドロフラン（１３．５ｍＬ）中のｔｅｒｔ−ブチル２−｛４−［５−クロロ−２−（ジフルオロメトキシ）フェニル］−５−メトキシ−２−オキソピリジン−１（２Ｈ）−イル｝−４−［（１−メチルシクロブチル）オキシ］ブタノエート（ラセミ体）７５３ｍｇ（１．４０ｍｍｏｌ）を、水酸化リチウム１６７ｍｇ（６．９９ｍｍｏｌ、５．０当量）の存在下に反応させた。収量：６４３ｍｇ（理論値の９３％）。
【０２８９】
ＬＣ／ＭＳ［方法１０］：Ｒｔ＝１．９２分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝４７２（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０２９０】
実施例８．１Ｃ
エチル４−［（２−｛４−［５−クロロ−２−（ジフルオロメトキシ）フェニル］−５−メトキシ−２−オキソピリジン−１（２Ｈ）−イル｝−４−［（１−メチルシクロブチル）オキシ］ブタノイル）アミノ］ベンゾエート（ラセミ体）
【化５５】
2018509426.tif 000057
【０２９１】
一般法５Ｂに従って、２−｛４−［５−クロロ−２−（ジフルオロメトキシ）フェニル］−５−メトキシ−２−オキソピリジン−１（２Ｈ）−イル｝−４−［（１−メチルシクロブチル）オキシ］ブタン酸（ラセミ体）６４３ｍｇ（１．２９ｍｍｏｌ）およびエチル４−アミノベンゾエート２３５ｍｇ（１．４２ｍｍｏｌ、１．１当量）を反応させた。水系後処理後、粗生成物を、フラッシュクロマトグラフィー（シクロヘキサン−酢酸エチル混合物）によって精製した。収量：６７９ｍｇ（純度９４％、理論値の８０％）。
【０２９２】
ＬＣ／ＭＳ［方法１０］：Ｒｔ＝２．４０分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝６１９（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０２９３】
作業例
実施例１
４−（｛２−［４−（５−クロロ−２−シアノフェニル）−５−メトキシ−２−オキソピリジン−１（２Ｈ）−イル］−４−イソプロポキシブタノイル｝−アミノ）安息香酸（ラセミ体）
【化５６】
2018509426.tif 000058
【０２９４】
炭酸セシウム３２８ｍｇ（１．０１ｍｍｏｌ、２当量）を、４−（｛２−［４−（５−クロロ−２−シアノフェニル）−５−メトキシ−２−オキソピリジン−１（２Ｈ）−イル］−４−イソプロポキシブタノイル｝アミノ）ベンゾエートエチル（ラセミ体）２７８ｍｇ（０．５０ｍｍｏｌ）のメタノール（１０ｍＬ）および水（２．５ｍＬ）中溶液に加え、混合物を６０℃で終夜撹拌した。メタノールを減圧下に除去した。水系残留物を水１０ｍＬで希釈し、塩酸水溶液（１Ｎ）でｐＨ３に調節し、酢酸エチルで３回抽出した。合わせた有機相を脱水し（硫酸ナトリウム）、濾過し、減圧下に濃縮した。粗生成物を、分取ＨＰＬＣ［カラム：ＣｈｒｏｍａｔｏｒｅｘＣ１８、１０μｍ、１２５ｍｍ×３０ｍｍ、溶離液：水／０．０５％ギ酸勾配（０から３分１０％アセトニトリル、３５分で９０％アセトニトリルまで、および９０％アセトニトリルでさらに３分）］によって精製した。収量：１５４ｍｇ（理論値の５８％）。
【０２９５】
ＬＣ／ＭＳ［方法１］：Ｒｔ＝０．９４分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝５２４（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０２９６】
１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ［ｐｐｍ］＝１２．７４（ｂｒｓ、、１Ｈ）、１０．７３（ｓ、１Ｈ）、７．９９（ｄ、１Ｈ）、７．９０（ｄ、２Ｈ）、７．７７（ｄ、２Ｈ）、７．７５−７．６９（ｍ、２Ｈ）、７．５０（ｓ、１Ｈ）、６．５３（ｓ、１Ｈ）、５．７９（ｄｄ、１Ｈ）、３．６９（ｓ、３Ｈ）、３．５１−３．３９（ｍ、２Ｈ）、２．４６−２．３４（ｍ、２Ｈ）、１．０２（ｄ、３Ｈ）、０．９８（ｄ、３Ｈ）。
【０２９７】
実施例２
４−（｛（２Ｓ）−２−［４−（５−クロロ−２−シアノフェニル）−５−メトキシ−２−オキソピリジン−１（２Ｈ）−イル］−４−イソプロポキシブタノイル｝−アミノ）安息香酸（エナンチオマー２）
【化５７】
2018509426.tif 000059
【０２９８】
実施例１からのラセミ体１２５ｍｇのエナンチオマー分離によって、エナンチオマー１（キラルＨＰＬＣ：Ｒｔ＝２．７０分；９９％ｅｅ）５５ｍｇに加えて、標題化合物実施例２（エナンチオマー２）５１ｍｇを得た。キラルＨＰＬＣ：Ｒｔ＝３．２９分；９９％ｅｅ。
【０２９９】
分離方法（ＳＦＣ）：カラム：ＡＺ−Ｈ２５０ｍｍ×３０ｍｍ；溶離液：７５％二酸化炭素／２５％エタノール；温度：４０℃；流量：８０ｍＬ／分；圧力：１００バール；ＵＶ検出：２１０ｎｍ。
【０３００】
分析（ＳＦＣ）：カラム：ＡＺ−３  ２５０ｍｍ×４．６ｍｍ；溶離液：二酸化炭素／エタノール勾配５％→６０％；温度：４０℃；流量：３ｍＬ／分；ＵＶ検出：２２０ｎｍ。
【０３０１】
分取ＨＰＬＣ［カラム：ＣｈｒｏｍａｔｏｒｅｘＣ１８、１０μｍ、１２５ｍｍ×３０ｍｍ、溶離液：水／０．０５％ギ酸勾配（０から３分１０％アセトニトリル、３５分で９０％アセトニトリルまでおよび９０％アセトニトリルでさらに３分）］によるさらなる精製によって、実施例３の標題化合物３２ｍｇを得た。
【０３０２】
ＬＣ／ＭＳ［方法１］：Ｒｔ＝０．９９分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝５２４（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０３０３】
１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ［ｐｐｍ］＝１２．７４（ｂｒｓ、、１Ｈ）、１０．７３（ｓ、１Ｈ）、７．９９（ｄ、１Ｈ）、７．９０（ｄ、２Ｈ）、７．７７（ｄ、２Ｈ）、７．７５−７．６９（ｍ、２Ｈ）、７．５０（ｓ、１Ｈ）、６．５３（ｓ、１Ｈ）、５．７９（ｄｄ、１Ｈ）、３．６９（ｓ、３Ｈ）、３．５１−３．３９（ｍ、２Ｈ）、２．４６−２．３４（ｍ、２Ｈ）、１．０２（ｄ、３Ｈ）、０．９８（ｄ、３Ｈ）。
【０３０４】
実施例３
４−（｛２−［４−（５−クロロ−２−シアノフェニル）−５−メトキシ−２−オキソピリジン−１（２Ｈ）−イル］−４−（シクロブチルオキシ）ブタノイル｝アミノ）安息香酸（ラセミ体）
【化５８】
2018509426.tif 000060
【０３０５】
炭酸セシウム４６４ｍｇ（１．４３ｍｍｏｌ、２当量）を、エチル４−（｛２−［４−（５−クロロ−２−シアノフェニル）−５−メトキシ−２−オキソピリジン−１（２Ｈ）−イル］−４−（シクロブチルオキシ）ブタノイル｝アミノ）ベンゾエート（ラセミ体）４０２ｍｇ（０．７１ｍｍｏｌ）のメタノール（１４ｍＬ）および水（３．５ｍＬ）中溶液に加え、混合物を６０℃で終夜撹拌した。メタノールを減圧下に除去した。水系残留物を水１０ｍＬで希釈し、塩酸水溶液（１Ｎ）でｐＨ３に調節し、酢酸エチルで３回抽出した。合わせた有機相を脱水し（硫酸ナトリウム）、濾過し、減圧下に濃縮した。粗生成物を、分取ＨＰＬＣ［カラム：ＣｈｒｏｍａｔｏｒｅｘＣ１８、１０μｍ、１２５ｍｍ×３０ｍｍ、溶離液：水／０．１％ギ酸勾配（０から３分１０％アセトニトリル、３５分で９０％アセトニトリルまでおよび９０％アセトニトリルでさらに３分）によって精製した。収量：２５８ｍｇ（理論値の６７％）。
【０３０６】
ＬＣ／ＭＳ［方法１］：Ｒｔ＝１．０２分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝５３６（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０３０７】
１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ［ｐｐｍ］＝１２．７４（ｂｒｓ、、１Ｈ）、１０．７６（ｓ、１Ｈ）、８．００（ｄ、１Ｈ）、７．９０（ｄ、２Ｈ）、７．７７（ｄ、２Ｈ）、７．７５−７．６９（ｍ、２Ｈ）、７．５１（ｓ、１Ｈ）、６．５４（ｓ、１Ｈ）、５．７９（ｔ、１Ｈ）、３．８２（ｍ、１Ｈ）、３．６９（ｓ、３Ｈ）、３．４０−３．３（ｍ、１Ｈ）、３．２７−３．１８（ｍ、１Ｈ）、２．４６−２．３５（ｍ、２Ｈ）、２．１２−１．９７（ｍ、２Ｈ）、１．８２−１．６４（ｍ、２Ｈ）、１．６１−１．５０（ｍ、１Ｈ）、１．４６−１．３２（ｍ、１Ｈ）。
【０３０８】
実施例４
４−｛［（２Ｓ）−２−［４−（５−クロロ−２−シアノフェニル）−５−メトキシ−２−オキソピリジン−１（２Ｈ）−イル］−４−（シクロブチルオキシ）ブタノイル］アミノ｝安息香酸（エナンチオマー２）
【化５９】
2018509426.tif 000061
【０３０９】
実施例３からのラセミ体２５０ｍｇのエナンチオマー分離によって、エナンチオマー１（キラルＨＰＬＣ：Ｒｔ＝４．８８分；９９％ｅｅ）１０９ｍｇに加えて、実施例４の標題化合物（エナンチオマー２）１１２ｍｇを得た。キラルＨＰＬＣ：Ｒｔ＝９．７１分；９９％ｅｅ。
【０３１０】
分離方法（ＳＦＣ）：カラム：ＡＺ−Ｈ２５０ｍｍ×２０ｍｍ；溶離液：７０％二酸化炭素／３０％エタノール；温度：４０℃；流量：１００ｍＬ／分；圧力：１００バール；ＵＶ検出：２１０ｎｍ。
【０３１１】
分析（ＳＦＣ）：カラム：ＡＺ−３２５０ｍｍ×４．６ｍｍ；溶離液：７０％二酸化炭素／３０％エタノール；温度：４０℃；流量：３ｍＬ／分；ＵＶ検出：２２０ｎｍ。
【０３１２】
ＬＣ／ＭＳ［方法１］：Ｒｔ＝０．９８分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝５３６（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０３１３】
１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ［ｐｐｍ］＝１２．７４（ｂｒｓ、、１Ｈ）、１０．７５（ｓ、１Ｈ）、７．９９（ｄ、１Ｈ）、７．９０（ｄ、２Ｈ）、７．７７（ｄ、２Ｈ）、７．７５−７．６９（ｍ、２Ｈ）、７．５０（ｓ、１Ｈ）、６．５４（ｓ、１Ｈ）、５．７９（ｔ、１Ｈ）、３．８２（ｍ、１Ｈ）、３．６９（ｓ、３Ｈ）、３．３９−３．３（ｍ、１Ｈ）、３．２７−３．１８（ｍ、１Ｈ）、２．４５−２．３５（ｍ、２Ｈ）、２．１２−１．９７（ｍ、２Ｈ）、１．８２−１．６４（ｍ、２Ｈ）、１．６１−１．５０（ｍ、１Ｈ）、１．４６−１．３２（ｍ、１Ｈ）。
【０３１４】
実施例５
４−（｛４−ｔｅｒｔ−ブトキシ−２−［４−（５−クロロ−２−シアノフェニル）−５−メトキシ−２−オキソピリジン−１（２Ｈ）−イル］ブタノイル｝アミノ）安息香酸（ラセミ体）
【化６０】
2018509426.tif 000062
【０３１５】
炭酸セシウム２４８ｍｇ（０．７６ｍｍｏｌ、２当量）を、エチル４−（｛４−ｔｅｒｔ−ブトキシ−２−［４−（５−クロロ−２−シアノフェニル）−５−メトキシ−２−オキソピリジン−１（２Ｈ）−イル］ブタノイル｝アミノ）ベンゾエート（ラセミ体）２１５ｍｇ（０．３８ｍｍｏｌ）のメタノール（１０ｍＬ）および水（２．５ｍＬ）中溶液に加え、混合物を６０℃で終夜撹拌した。メタノールを減圧下に除去した。水系残留物を水１０ｍＬで希釈し、塩酸水溶液（１Ｎ）でｐＨ３に調節し、酢酸エチルで３回抽出した。合わせた有機相を脱水し（硫酸マグネシウム）、濾過し、減圧下に濃縮した。粗生成物を、分取ＨＰＬＣ［カラム：ＣｈｒｏｍａｔｏｒｅｘＣ１８、１０μｍ、１２５ｍｍ×３０ｍｍ、溶離液：水／０．１％ギ酸勾配（０から３分１０％アセトニトリル、３５分で９０％アセトニトリルまでおよび９０％アセトニトリルでさらに３分）によって精製した。収量：１４１ｍｇ（理論値の６８％）。
【０３１６】
ＬＣ／ＭＳ［方法１］：Ｒｔ＝０．９９分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝５３８（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０３１７】
１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ［ｐｐｍ］＝１２．７４（ｂｒｓ、、１Ｈ）、１０．７３（ｓ、１Ｈ）、７．９９（ｄ、１Ｈ）、７．９０（ｄ、２Ｈ）、７．７７（ｄ、２Ｈ）、７．７３（ｄｄ、１Ｈ）、７．７０（ｄ、１Ｈ）、７．５０（ｓ、１Ｈ）、６．５２（ｓ、１Ｈ）、５．７９（ｔ、１Ｈ）、３．６９（ｓ、３Ｈ）、３．４３−３．３７（ｍ、１Ｈ）、３．３−３．２５（ｍ、１Ｈ）、２．４３−２．３４（ｍ、２Ｈ）、１．０４（ｓ、９Ｈ）。
【０３１８】
実施例６
４−（｛（２Ｓ）−４−ｔｅｒｔ−ブトキシ−２−［４−（５−クロロ−２−シアノフェニル）−５−メトキシ−２−オキソピリジン−１（２Ｈ）−イル］−ブタノイル｝アミノ）安息香酸（エナンチオマー２）
【化６１】
2018509426.tif 000063
【０３１９】
実施例５からのラセミ体１１０ｍｇのエナンチオマー分離によって、エナンチオマー１（キラルＨＰＬＣ：Ｒｔ＝２．６４分；９９％ｅｅ）４０ｍｇに加えて、実施例６の標題化合物（エナンチオマー２）４９ｍｇを得た。キラルＨＰＬＣ：Ｒｔ＝３．３５分；９９％ｅｅ。
【０３２０】
分離方法（ＳＦＣ）：カラム：ＡＺ−Ｈ２５０ｍｍ×２０ｍｍ；溶離液：７５％二酸化炭素／２５％エタノール；温度：４０℃；流量：８０ｍＬ／分；圧力：１００バール；ＵＶ検出：２１０ｎｍ。
【０３２１】
分析（ＳＦＣ）：カラム：ＡＺ−３２５０ｍｍ×４．６ｍｍ；溶離液：二酸化炭素／エタノール勾配５％→６０％；温度：４０℃；流量：３ｍＬ／分；ＵＶ検出：２２０ｎｍ。
【０３２２】
分取ＨＰＬＣ［カラム：ＣｈｒｏｍａｔｏｒｅｘＣ１８、１０μｍ、１２５ｍｍ×３０ｍｍ、溶離液：水／０．０５％ギ酸勾配（０から３分１０％アセトニトリル、３５分で９０％アセトニトリルまでおよび９０％アセトニトリルでさらに３分）］によるさらなる精製によって、実施例９の標題化合物３３ｍｇを得た。
【０３２３】
ＬＣ／ＭＳ［方法２］：Ｒｔ＝３．１９分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝５３８（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０３２４】
１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ［ｐｐｍ］＝１２．７（ｂｒｓ、、１Ｈ）、１０．７３（ｓ、１Ｈ）、７．９９（ｄ、１Ｈ）、７．９０（ｄ、２Ｈ）、７．７７（ｄ、２Ｈ）、７．７３（ｄｄ、１Ｈ）、７．７０（ｄ、１Ｈ）、７．４９（ｓ、１Ｈ）、６．５２（ｓ、１Ｈ）、５．７９（ｔ、１Ｈ）、３．６９（ｓ、３Ｈ）、３．４５−３．３（ｍ、１Ｈ）、２．４３−２．３４（ｍ、２Ｈ）、１．０４（ｓ、９Ｈ）。
【０３２５】
実施例７
４−［（４−ｔｅｒｔ−ブトキシ−２−｛４−［５−クロロ−２−（ジフルオロメトキシ）フェニル］−５−メトキシ−２−オキソピリジン−１（２Ｈ）−イル｝ブタノイル）アミノ］安息香酸（ラセミ体）
【化６２】
2018509426.tif 000064
【０３２６】
炭酸セシウム１４２ｍｇ（０．４４ｍｍｏｌ、２当量）を、エチル４−［（４−ｔｅｒｔ−ブトキシ−２−｛４−［５−クロロ−２−（ジフルオロメトキシ）フェニル］−５−メトキシ−２−オキソピリジン−１（２Ｈ）−イル｝ブタノイル）アミノ］ベンゾエート（ラセミ体）１３２ｍｇ（０．２２ｍｍｏｌ）のメタノール（４ｍＬ）および水（１ｍＬ）中溶液に加え、混合物を６０℃で終夜撹拌した。メタノールを減圧下に除去した。水系残留物を水１０ｍＬで希釈し、塩酸水溶液（１Ｎ）でｐＨ３に調節し、酢酸エチルで３回抽出した。合わせた有機相を減圧下に濃縮した。粗生成物を、分取ＨＰＬＣ［カラム：ＣｈｒｏｍａｔｏｒｅｘＣ１８、１０μｍ、１２５ｍｍ×３０ｍｍ、溶離液：水／０．１％ギ酸勾配（０から３分１０％アセトニトリル、３５分で９０％アセトニトリルまでおよび９０％アセトニトリルでさらに３分）によって精製した。収量：３４ｍｇ（理論値の２７％）。
【０３２７】
ＬＣ／ＭＳ［方法１］：Ｒｔ＝１．０８分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝５７９（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０３２８】
１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ［ｐｐｍ］＝１２．７４（ｂｒｓ、、１Ｈ）、１０．７２（ｓ、１Ｈ）、７．９０（ｄ、２Ｈ）、７．７７（ｄ、２Ｈ）、７．５７（ｄｄ、１Ｈ）、７．４４（ｄ、１Ｈ）、７．３９（ｓ、１Ｈ）、７．３０（ｄ、１Ｈ）、７．１３（ｔ、１Ｈ）、６．３８（ｓ、１Ｈ）、５．７７（ｔ、１Ｈ）、３．６３（ｓ、３Ｈ）、３．４２−３．２５（ｍ、２Ｈ）、２．４０−２．３１（ｍ、２Ｈ）、１．０３（ｓ、９Ｈ）。
【０３２９】
実施例８
４−｛［（２Ｓ）−４−ｔｅｒｔ−ブトキシ−２−｛４−［５−クロロ−２−（ジフルオロメトキシ）フェニル］−５−メトキシ−２−オキソピリジン−１（２Ｈ）−イル｝ブタノイル］アミノ｝安息香酸（エナンチオマー２）
【化６３】
2018509426.tif 000065
【０３３０】
実施例７からのラセミ体３０ｍｇのエナンチオマー分離によって、エナンチオマー１（キラルＨＰＬＣ：Ｒｔ＝３．８９分）１３ｍｇに加えて、実施例８の標題化合物（エナンチオマー２）１２ｍｇを得た。キラルＨＰＬＣ：Ｒｔ＝６．２５分；９９％ｅｅ。
【０３３１】
分離法：カラム：Ｃｈｉｒａｌｐａｋ  ＩＡ  ５μｍ、２５０ｍｍ×２０ｍｍ；溶離液：６０％イソヘキサン／４０％エタノール＋０．２％トリフルオロ酢酸；温度：２５℃；流量：１５ｍＬ／分；ＵＶ検出：２２０ｎｍ。
【０３３２】
分析：カラム：Ｃｈｉｒａｌｐａｋ  ＩＡ５μｍ、２５０ｍｍ×４．６ｍｍ；溶離液：６０％イソヘキサン／４０％エタノール＋０．２％トリフルオロ酢酸および１％水；温度：３０℃；流量：１．０ｍＬ／分；ＵＶ検出：２２０ｎｍ。
【０３３３】
ＬＣ／ＭＳ［方法１］：Ｒｔ＝１．０５分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝５７９（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０３３４】
１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ［ｐｐｍ］＝１２．７（ｂｒｓ、、１Ｈ）、１０．７１（ｓ、１Ｈ）、７．９０（ｄ、２Ｈ）、７．７７（ｄ、２Ｈ）、７．５７（ｄｄ、１Ｈ）、７．４４（ｄ、１Ｈ）、７．３９（ｓ、１Ｈ）、７．２９（ｄ、１Ｈ）、７．１３（ｔ、１Ｈ）、６．３８（ｓ、１Ｈ）、５．７７（ｔ、１Ｈ）、３．６３（ｓ、３Ｈ）、３．４３−３．３５（ｍ、１Ｈ）、３．３３−３．２５（ｍ、１Ｈ）、２．４０−２．３１（ｍ、２Ｈ）、１．０３（ｓ、９Ｈ）。
【０３３５】
実施例９
４−（｛２−［４−（５−クロロ−２−シアノフェニル）−５−メトキシ−２−オキソピリジン−１（２Ｈ）−イル］−４−［（１−メチルシクロブチル）オキシ］ブタノイル｝アミノ）安息香酸（ラセミ体）
【化６４】
2018509426.tif 000066
【０３３６】
炭酸セシウム４９１ｍｇ（１．５１ｍｍｏｌ、２当量）の存在下に、エチル４−（｛２−［４−（５−クロロ−２−シアノフェニル）−５−メトキシ−２−オキソピリジン−１（２Ｈ）−イル］−４−［（１−メチルシクロブチル）オキシ］ブタノイル｝アミノ）ベンゾエート（ラセミ体）４４９ｍｇ（０．７５ｍｍｏｌ）のメタノール（１０ｍＬ）および水（２．５ｍＬ）中溶液を、８０℃で３時間撹拌した。メタノールを減圧下に除去した。水系残留物を水３０ｍＬで希釈し、塩酸水溶液（１Ｎ）でｐＨ２から３に調節し、酢酸エチルで２回抽出した。合わせた有機相を脱水し（硫酸ナトリウム）、濾過し、減圧下に濃縮した。粗生成物を、フラッシュクロマトグラフィー（シクロヘキサン−酢酸エチル混合物）によって精製した。収量：２９８ｍｇ（理論値の７２％）。
【０３３７】
ＬＣ／ＭＳ［方法１］：Ｒｔ＝１．０３分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝５５０（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０３３８】
１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ［ｐｐｍ］＝１２．７３（ｂｒｓ、、１Ｈ）、１０．７６（ｓ、１Ｈ）、７．９９（ｄ、１Ｈ）、７．９０（ｄ、２Ｈ）、７．７７（ｄ、２Ｈ）、７．７３（ｄｄ、１Ｈ）、７．７０（ｄ、１Ｈ）、７．５１（ｓ、１Ｈ）、６．５４（ｓ、１Ｈ）、５．８２（ｄｄ、１Ｈ）、３．６９（ｓ、３Ｈ）、３．３９−３．３（ｍ、１Ｈ）、３．２３−３．１４（ｍ、１Ｈ）、２．４５−２．３５（ｍ、２Ｈ）、２．０３−１．８４（ｍ、２Ｈ）、１．７３−１．６１（ｍ、２Ｈ）、１．６０−１．４２（ｍ、２Ｈ）、１．１８（ｓ、３Ｈ）。
【０３３９】
実施例１０
４−（｛（２Ｓ）−２−［４−（５−クロロ−２−シアノフェニル）−５−メトキシ−２−オキソピリジン−１（２Ｈ）−イル］−４−［（１−メチルシクロブチル）オキシ］ブタノイル｝アミノ）安息香酸（エナンチオマー２）
【化６５】
2018509426.tif 000067
【０３４０】
実施例９からのラセミ体２９８ｍｇのエナンチオマー分離によって、実施例９のエナンチオマー１（キラルＨＰＬＣ：Ｒｔ＝１．０１分）１１４ｍｇに加えて、実施例１０の標題化合物（エナンチオマー２）１１２ｍｇを得た。キラルＨＰＬＣ：Ｒｔ＝２．０８分；９９％ｅｅ。
【０３４１】
分離方法（ＳＦＣ）：カラム：Ｄａｉｃｅｌ  Ｃｈｉｒａｌｐａｋ  ＡＺ−Ｈ５μｍ、２５０ｍｍ×２０ｍｍ；溶離液：７０％二酸化炭素／３０％エタノール；温度：４０℃；流量：１００ｍＬ／分；ＵＶ検出：２１０ｎｍ。
【０３４２】
分析（ＳＦＣ）：カラム：Ｃｈｉｒａｌｐａｋ  ＡＺ−Ｈ５μｍ、２５０ｍｍ×４．６ｍｍ；溶離液：６０％二酸化炭素／４０％エタノール；流量：３．０ｍＬ／分；ＵＶ検出：２１０ｎｍ。
【０３４３】
１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ［ｐｐｍ］＝１２．７４（ｂｒｓ、、１Ｈ）、１０．７６（ｓ、１Ｈ）、７．９９（ｄ、１Ｈ）、７．９０（ｄ、２Ｈ）、７．７７（ｄ、２Ｈ）、７．７３（ｄｄ、１Ｈ）、７．７０（ｄ、１Ｈ）、７．５１（ｓ、１Ｈ）、６．５４（ｓ、１Ｈ）、５．８２（ｄｄ、１Ｈ）、３．６９（ｓ、３Ｈ）、３．３８−３．３（ｍ、１Ｈ）、３．２３−３．１４（ｍ、１Ｈ）、２．４５−２．３５（ｍ、２Ｈ）、２．０３−１．８４（ｍ、２Ｈ）、１．７３−１．６１（ｍ、２Ｈ）、１．６０−１．４２（ｍ、２Ｈ）、１．１８（ｓ、３Ｈ）。
【０３４４】
実施例１１
４−［（２−｛４−［５−クロロ−２−（ジフルオロメトキシ）フェニル］−５−メトキシ−２−オキソピリジン−１（２Ｈ）−イル｝−４−［（１−メチルシクロブチル）オキシ］ブタノイル）アミノ］安息香酸（ラセミ体）
【化６６】
2018509426.tif 000068
【０３４５】
エチル４−［（２−｛４−［５−クロロ−２−（ジフルオロメトキシ）フェニル］−５−メトキシ−２−オキソピリジン−１（２Ｈ）−イル｝−４−［（１−メチルシクロブチル）オキシ］ブタノイル）アミノ］ベンゾエート（ラセミ体）６７９ｍｇ（純度９４％、１．０３ｍｍｏｌ）のメタノール（１０ｍＬ）および水（３ｍＬ）中溶液を、炭酸セシウム６７２ｍｇ（２．０６ｍｍｏｌ、２当量）の存在下に８０℃で３時間撹拌した。メタノールを減圧下に除去した。水系残留物を水３０ｍＬで希釈し、塩酸水溶液（１Ｎ）でｐＨ２から３に調節した。析出した沈殿を濾過し、真空乾燥した。合わせた濾液を酢酸エチルで２回抽出した。合わせた有機相を脱水し（硫酸ナトリウム）、濾過し、減圧下に濃縮した。沈殿および濾液からの残留物を一緒に、フラッシュクロマトグラフィー（シクロヘキサン−酢酸エチル混合物）によって精製した。収量：４８５ｍｇ（理論値の７８％）。
【０３４６】
ＬＣ／ＭＳ［方法１］：Ｒｔ＝１．０８分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝５９１（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０３４７】
１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ［ｐｐｍ］＝１２．７２（ｂｒｓ、１Ｈ）、１０．７４（ｓ、１Ｈ）、７．９０（ｄ、２Ｈ）、７．７７（ｄ、２Ｈ）、７．５８（ｄｄ、１Ｈ）、７．４５（ｄ、１Ｈ）、７．４０（ｓ、１Ｈ）、７．３０（ｄ、１Ｈ）、７．１３（ｔ、１Ｈ）、６．３９（ｓ、１Ｈ）、５．８０（ｔ、１Ｈ）、３．６３（ｓ、３Ｈ）、３．３７−３．３（ｍ、１Ｈ）、３．２３−３．１４（ｍ、１Ｈ）、２．４４−２．３４（ｍ、２Ｈ）、２．０２−１．８３（ｍ、２Ｈ）、１．７２−１．６１（ｍ、２Ｈ）、１．５９−１．４２（ｍ、２Ｈ）、１．１８（ｓ、３Ｈ）。
【０３４８】
実施例１２
４−（｛（２Ｓ）−２−｛４−［５−クロロ−２−（ジフルオロメトキシ）フェニル］−５−メトキシ−２−オキソピリジン−１（２Ｈ）−イル｝−４−［（１−メチルシクロブチル）オキシ］ブタノイル｝アミノ）安息香酸（エナンチオマー２）
【化６７】
2018509426.tif 000069
【０３４９】
実施例１１からのラセミ体４８５ｍｇのエナンチオマー分離によって、エナンチオマー１（キラルＨＰＬＣ：Ｒｔ＝０．９６分）２１６ｍｇに加えて、実施例１２の標題化合物（エナンチオマー２）１９５ｍｇを得た。キラルＨＰＬＣ：Ｒｔ＝２．３４分；９６％ｅｅ。
【０３５０】
分離方法（ＳＦＣ）：カラム：Ｄａｉｃｅｌ  Ｃｈｉｒａｌｐａｋ  ＡＺ−Ｈ５μｍ、２５０ｍｍ×２０ｍｍ；溶離液：０から２．９９分：６５％二酸化炭素／３５％エタノール→３から４．９９分：６０％二酸化炭素／４０％エタノール→５から６分：６５％二酸化炭素／３５％エタノール；温度：３０℃；流量：８０ｍＬ／分；ＵＶ検出：２１０ｎｍ。
【０３５１】
分析（ＳＦＣ）：カラム：Ｃｈｉｒａｌｐａｋ  ＡＺ−Ｈ５μｍ、２５０ｍｍ×４．６ｍｍ；溶離液：６０％二酸化炭素／４０％エタノール；流量：３．０ｍＬ／分；ＵＶ検出：２１０ｎｍ。
【０３５２】
１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ［ｐｐｍ］＝１２．７３（ｂｒｓ、、１Ｈ）、１０．７４（ｓ、１Ｈ）、７．９０（ｄ、２Ｈ）、７．７７（ｄ、２Ｈ）、７．５７（ｄｄ、１Ｈ）、７．４５（ｄ、１Ｈ）、７．４０（ｓ、１Ｈ）、７．３０（ｄ、１Ｈ）、７．１３（ｔ、１Ｈ）、６．３９（ｓ、１Ｈ）、５．８０（ｔ、１Ｈ）、３．６３（ｓ、３Ｈ）、３．３７−３．３（ｍ、１Ｈ）、３．２３−３．１４（ｍ、１Ｈ）、２．４４−２．３４（ｍ、２Ｈ）、２．０２−１．８３（ｍ、２Ｈ）、１．７２−１．６１（ｍ、２Ｈ）、１．５９−１．４２（ｍ、２Ｈ）、１．１８（ｓ、３Ｈ）。
【０３５３】
Ｂ）生理的効力の評価
本発明による化合物の血栓塞栓障害の治療への好適性を、以下のアッセイ系で示すことができる。
【０３５４】
ａ）試験の説明（イン・ビトロ）
ａ．１）ＦＸＩａ阻害の測定
ペプチド性ＸＩａ因子基質の反応を利用してヒトＸＩａ因子の酵素活性を求める生化学的試験システムを用いて、本発明の物質のＸＩａ因子阻害を測定する。ここで、ＸＩａ因子がペプチド性（ｐｅｐｔｉｃ）ＸＩａ因子基質から、Ｃ末端アミノメチルクマリン（ＡＭＣ）を開裂させ、それの蛍光が測定される。測定はマイクロタイタープレートで実施する。
【０３５５】
試験物質をジメチルスルホキシドに溶かし、ジメチルスルホキシドで連続希釈する（３０００μＭから０．００７８μＭ；試験での得られた最終濃度：５０μＭから０．０００１３μＭ）。各場合で、希釈された物質の溶液１μＬを、Ｇｒｅｉｎｅｒからのマイクロタイタープレート（３８４ウェル）のウェルに入れる。アッセイ緩衝液（５０ｍＭ  Ｔｒｉｓ／ＨＣｌ  ｐＨ７．４；１００ｍＭ塩化ナトリウム；５ｍＭ塩化カルシウム；０．１％ウシ血清アルブミン）２０μＬおよびＫｏｒｄｉａからのＸＩａ因子（０．４５ｎＭアッセイ緩衝液中溶液）２０μＬをその順で加える。１５分間インキュベートした後、Ｂａｃｈｅｍからのアッセイ緩衝液に溶かしたＸＩａ因子基質Ｂｏｃ−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ａｌａ−Ａｒｇ−ＡＭＣ（１０μＭアッセイ緩衝液中溶液）２０μＬを加えることで酵素反応を開始し、混合物を室温で（２２℃）３０分間インキュベートしてから、蛍光を測定する（励起：３６０ｎｍ、発光：４６０ｎｍ）。試験物質を含む試験バッチの測定された発光を、試験物質を含まない対照バッチ（試験物質のジメチルスルホキシド中溶液ではなくジメチルスルホキシドのみ）の発光と比較し、濃度／活性関係から、ＩＣ５０値を計算する。この試験からの活性データを下記の表Ａに挙げている。
【０３５６】
表Ａ
【表１】
2018509426.tif 000070
2018509426.tif 000071
【０３５７】
ａ．２）選択性の測定
ＦＸＩａ阻害に関する物質の選択性を示すため、因子Ｘａ、トリプシンおよびプラスミンなどの他のヒトセリンプロテアーゼの阻害について、試験物質を調べる。因子Ｘａ（１．３ｎｍｏｌ／Ｌ、Ｋｏｒｄｉａから）、トリプシン（８３ｍＵ／ｍＬ、Ｓｉｇｍａから）およびプラスミン（０．１μｇ／ｍＬ、Ｋｏｒｄｉａから）の酵素活性を測定するため、これらの酵素を溶解し（５０ｍｍｏｌ／Ｌ  Ｔｒｉｓ緩衝液［Ｃ，Ｃ，Ｃ−トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン］、１００ｍｍｏｌ／Ｌ  ＮａＣｌ、０．１％ＢＳＡ［ウシ血清アルブミン］、５ｍｍｏｌ／Ｌ塩化カルシウム、ｐＨ７．４）、ジメチルスルホキシド中の各種濃度の試験物質と、そして、試験物質を含まないジメチルスルホキシドと、１５分間インキュベートする。次いで、適当な基質（因子ＸａおよびトリプシンについてはＢａｃｈｅｍからの５μｍｏｌ／Ｌ  Ｂｏｃ−Ｉｌｅ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ａｒｇ−ＡＭＣ、プラスミンについてはＢａｃｈｅｍからの５０μｍｏｌ／Ｌ  ＭｅＯＳｕｃ−Ａｌａ−Ｐｈｅ−Ｌｙｓ−ＡＭＣ）の添加により酵素反応を開始する。２２℃で３０分間のインキュベーション時間の後、蛍光を測定する（励起：３６０ｎｍ、発光：４６０ｎｍ）。試験物質を含む試験混合物の測定された発光を、試験物質を含まない対照混合物（試験物質ジメチルスルホキシド中溶液ではなく、ジメチルスルホキシドのみ）と比較し、濃度／活性関係から、ＩＣ５０値を計算する。
【０３５８】
ａ．３）トロンビン発生アッセイ（トロンボグラム）
トロンボグラム（Ｈｅｍｋｅｒによるトロンビン発生アッセイ）に対する試験物質の効果を、ヒト血漿（Ｏｃｔａｐｌａｓ（登録商標）、Ｏｃｔａｐｈａｒｍａから）においてイン・ビトロで求める。
【０３５９】
Ｈｅｍｋｅｒによるトロンビン発生アッセイでは、基質Ｉ−１１４０（Ｚ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ａｒｇ−ＡＭＣ、Ｂａｃｈｅｍ）の蛍光性開裂生成物を測定することで、血漿凝固におけるトロンビンの活性を求める。反応は、多様な濃度の試験物質または相当する溶媒の存在下に行う。反応を開始するには、Ｔｈｒｏｍｂｉｎｏｓｃｏｐｅからの試薬（３０ｐＭもしくは０．１ｐＭ組換え組織因子、２４μＭリン脂質のＨＥＰＥＳ中溶液）を用いる。さらに、Ｔｈｒｏｍｂｉｎｏｓｃｏｐｅからのトロンビン較正物質を用い、それのアミド分解活性が未知量のトロンビンを含むサンプルにおけるトロンビン活性を計算するのに必要である。その試験は、製造者説明書（Ｔｈｒｏｍｂｉｎｏｓｃｏｐｅ  ＢＶ）に従って行う。試験物質または溶媒４μＬ、血漿７６μＬおよびＰＰＰ試薬もしくはトロンビン較正物質２０μＬを、３７℃で５分間インキュベートする。２．５ｍＭトロンビン基質の２０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ、６０ｍｇ／ｍＬ  ＢＳＡ、１０２ｍＭ塩化カルシウム２０μＬを加えた後、１２０分間の期間にわたり２０秒ごとにトロンビン発生を測定する。測定は、３９０／４６０ｎｍフィルター対およびディスペンサーを取り付けたＴｈｅｒｍｏ  Ｅｌｅｃｔｒｏｎからの蛍光光度計（Ｆｌｕｏｒｏｓｋａｎ  Ａｓｃｅｎｔ）を用いて行う。
【０３６０】
Ｔｈｒｏｍｂｏｓｃｏｐｅソフトウェアを用い、トロンボグラムを計算し、グラフ表示する。次のパラメータ：遅延時間、ピークまでの時間、ピーク、ＥＴＰ（内因性トロンビン生成能）およびスタート・テール（ｓｔａｒｔ  ｔａｉｌ）を計算する。
【０３６１】
ａ．４）抗凝血活性の測定
試験物質の抗凝血活性を、イン・ビトロで、ヒト血漿およびラット血漿で測定する。このためには、０．１１モル濃度のクエン酸ナトリウム溶液をレシーバーとして使用して、クエン酸ナトリウム／血液の混合比１／９で、採血する。採血直後に、それを十分に混和し、約４０００ｇで１５分間遠心する。上清をピペットで取る。
【０３６２】
プロトロンビン時間（ＰＴ、同義語：トロンボプラスチン時間、クイック試験）を、各種濃度の試験物質または相当する溶媒の存在下で、市販の試験キット（Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ  ＭａｎｎｈｅｉｍからのＮｅｏｐｌａｓｔｉｎ（登録商標）またはＩｎｓｔｒｕｍｅｎｔａｔｉｏｎ  ＬａｂｏｒａｔｏｒｙからのＨｅｍｏｌｉａｎｃｅ（登録商標）  ＲｅｃｏｍｂｉＰｌａｓｔｉｎ）を使用して測定する。試験化合物を、血漿と共に、３７℃で、３分間インキュベートする。次いで、トロンボプラスチンの添加により凝固を開始させ、凝固が起こる時間を測定する。プロトロンビン時間を倍増させる試験物質の濃度を求める。
【０３６３】
活性化部分トロンボプラスチン時間（ＡＰＴＴ）を、各種濃度の試験物質または相当する溶媒の存在下で、市販の試験キット（ＰＴＴ試薬、Ｒｏｃｈｅから）を使用して測定する。試験化合物を、血漿およびＰＴＴ試薬（セファリン、カオリン）と、３７℃で３分間インキュベートする。次いで、２５ｍＭ塩化カルシウムの添加により凝固を開始させ、凝固が起こる時間を測定する。ＡＰＴＴを５０％延長または倍増させる試験物質の濃度を求める。
【０３６４】
ａ．５）血漿カリクレイン活性の測定
本発明による物質の血漿カリクレイン阻害を測定するため、ペプチド性血漿カリクレイン基質の反応を利用してヒト血漿カリクレインの酵素活性を測定する生化学試験系を用いる。ここで、血漿カリクレインがペプチド性（ｐｅｐｔｉｃ）血漿カリクレイン基質からＣ末端アミノメチルクマリン（ＡＭＣ）を開裂させ、それの蛍光が測定される。測定はマイクロタイタープレートで実施する。
【０３６５】
試験物質をジメチルスルホキシドに溶かし、ジメチルスルホキシドで連続希釈する（３０００μＭから０．００７８μＭ；試験での得られた最終濃度：５０μＭから０．０００１３μＭ）。各場合、希釈された物質の溶液１μＬを、Ｇｒｅｉｎｅｒからのマイクロタイタープレート（３８４ウェル）のウェルに入れる。アッセイ緩衝液（５０ｍＭ  Ｔｒｉｓ／ＨＣｌ  ｐＨ７．４；１００ｍＭ塩化ナトリウム溶液；５ｍＭ塩化カルシウム溶液；０．１％ウシ血清アルブミン）２０μＬおよびＫｏｒｄｉａからの血漿カリクレイン（０．６ｎＭアッセイ緩衝液中溶液）２０μＬをその順で加える。１５分間インキュベートした後、Ｂａｃｈｅｍからのアッセイ緩衝液に溶かした基質Ｈ−Ｐｒｏ−Ｐｈｅ−Ａｒｇ−ＡＭＣ（１０μＭアッセイ緩衝液中溶液）２０μＬを加えることで酵素反応を開始し、混合物を室温で（２２℃）３０分間インキュベートしてから、蛍光を測定する（励起：３６０ｎｍ、発光：４６０ｎＭ）。試験物質を含む試験バッチの測定された発光を、試験物質を含まない対照バッチ（試験物質のジメチルスルホキシド中溶液ではなくジメチルスルホキシドのみ）の発光と比較し、濃度／活性関係から、ＩＣ５０値を計算する。本試験からの活性データを、下記の表Ｂに挙げてある。
【表２】
2018509426.tif 000072
【０３６６】
ａ．６）内皮完全性の測定
本発明による化合物の活性を、「ヒト臍静脈細胞」（ＨＵＶＥＣ）についてのイン・ビトロ浸透性アッセイによってと特性決定する。ＥＯＳ装置（ＥＣ  ＩＳ：電気的細胞−基質インピーダンス検知；Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｐｈｙｓｉｃｓ  Ｉｎｃ；  Ｔｒｏｙ，  ＮＹ）を用いて、金電極表面に蒔かれた内皮細胞単層を通る経内皮電気抵抗（ＴＥＥＲ）における変動を連続的に測定することができる。ＨＵＶＥＣを、９６ウェルセンサー電極プレート（９６Ｗ１Ｅ，  Ｉｂｉｄｉ  Ｇｍｂｈ,  Ｍａｒｔｉｎｓｒｉｅｄ,  Ｇｅｒｍａｎｙ）上に播く。キニノーゲン、プレカリクレインおよびＸＩＩ因子（それぞれ１００ｎＭ）による刺激によって、形成された密集細胞単層の透過性亢進を誘発する。本発明による化合物を加えてから、上記で示した物質を加える。化合物の一般的な濃度は、１×１０−１０から１×１０−６Ｍである。
【０３６７】
ａ．７）内皮細胞のイン・ビトロ浸透性の測定
別の透過性亢進モデルで、巨大分子浸透性の調節に対する物質の活性を測定する。ＨＵＶＥＣを、フィブロネクチンでコートしたＴｒａｎｓｗｅｌｌフィルター膜（２４ウェルプレート、０．４μＭポリカーボネート膜による６．５ｍｍ挿入；Ｃｏｓｔａｒ  ＃３４１３）上に播く。フィルター膜が上側を下側の細胞培養スペースから分離しており、上側の細胞培養スペースの床上に密集内皮細胞層がある。２５０ｇ／ｍＬの４０ｋＤａ  ＦＩＴＣ  ｄｅｘｔａｎ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ,  Ｄ１８４４）を、上側チャンバの培地に加える。キニノーゲン、プレカリクレインおよびＸＩＩ因子（それぞれ１００ｎＭ）による刺激によって、単層の透過性亢進を誘発する。３０分ごとに、培地サンプルを下側チャンバから取り、時間の関数としての巨大分子浸透性における変化のパラメータとしての相対蛍光を、蛍光光度計を用いて求める。本発明による化合物を加えてから、上記で示した物質を加える。化合物の一般的な濃度は、１×１０−１０から１×１０−６Ｍである。
【０３６８】
ｂ）抗血栓活性（イン・ビボ）の測定
ｂ．１）ウサギにおける耳出血と組み合わせた人工血栓症モデル（塩化鉄（ＩＩ）誘発血栓症）
ＦＸＩａ阻害薬の抗血栓活性を人工血栓症モデルで調べる。この場合、ウサギにおける頸動脈のある領域に対する化学的外傷を引き起こすことで、血栓形成を誘発する。同時に、耳出血時間を測定する。
【０３６９】
通常の飼料を与え、体重が２．２から２．５ｋｇである雄ウサギ（Ｃｒｌ：ＫＢＬ（ＮＺＷ）ＢＲ,  Ｃｈａｒｌｅｓ  Ｒｉｖｅｒ）に、キシラジンおよびケタミン（Ｒｏｍｐｕｎ,  Ｂａｙｅｒ、５ｍｇ／ｋｇおよびＫｅｔａｖｅｔ、Ｐｈａｒｍａｃｉａ  ＆  Ｕｐｊｏｈｎ  ＧｍｂＨ、４０ｍｇ／ｋｇ）の筋肉投与によって麻酔を施す。右耳介静脈を介した同じ製剤（ボラス：連続注入）の静脈投与によって、麻酔をさらに維持する。
【０３７０】
右頸動脈を露出させ、血流を乱すことなく頸動脈周囲にＰａｒａｆｉｌｍ（登録商標）片（２５ｍｍ×１２ｍｍ）上の濾紙片（１０ｍｍ×１０ｍｍ）を巻くことで、血管外傷を引き起こす。濾紙は１３％強度の塩化鉄（ＩＩ）（Ｓｉｇｍａ）の水溶液１００μＬを含んでいる。５分後、濾紙を除去し、容器を０．９％強度塩化ナトリウム水溶液で２回洗う。外傷から３０分後、頸動脈の外傷を受けた領域を外科的に摘出し、血栓物を除去し、秤量する。
【０３７１】
試験物質は、大腿静脈を介して麻酔された動物に静脈投与するか、覚醒している動物に強制経口投与し、それは各場合で外傷のそれぞれ５分前および２時間前である。
【０３７２】
頸動脈への外傷から２分後に、耳出血時間を測定する。このためには、左耳を剪毛し、耳の縦軸に平行に、規定の長さ３ｍｍの切開（刃の品番１０−１５０−１０、Ｍａｒｔｉｎ,  Ｔｕｔｔｌｉｎｇｅｎ,  Ｇｅｒｍａｎｙ）を行う。この場合、目に見える血管に損傷を与えないように注意を払う。創傷部に直接触れないようにしながら、正確に秤量された濾紙片を用いて、浸出する血液を１５秒間隔で採取する。切開を行った時点から濾紙上で血液の検出がなくなる時点までの時間として、出血時間を計算する。濾紙片を秤量することで、浸出した血液の体積を計算する。
【０３７３】
ｃ）眼球における溢血／浮腫形成および／または新血管形成に対する効果の測定（イン・ビボ）
ｃ．１）レーザー誘発脈絡膜新血管形成モデルにおける物質の効力の試験
この試験は、レーザー誘発脈絡膜新血管形成のラットモデルにおける溢血／浮腫形成および／または脈絡膜新血管形成の低減に対する試験物質の効力を調べる上で役立つものである。
【０３７４】
このためには、眼科障害の徴候を全く示さないＢｒｏｗｎ−Ｎｏｒｗａｙ系統の有色ラットを選択し、処置群に無作為に割り付けた。第０日に、腹腔内注射（１５ｍｇ／ｋｇキシラジンおよび８０ｍｇ／ｋｇケタミン）によって動物に麻酔を施す。０．５％強度トロピカミド溶液１滴を点眼して瞳孔を拡張した後、５３２ｎｍアルゴンレーザー光凝固装置（直径５０から７５μｍ、強度１５０ｍＷ、期間１００ｍｓ）を用いて、視神経周囲の規定の６箇所で脈絡膜新血管形成を誘発する。試験物質および適切な媒体（例えばＰＢＳ、等張性生理食塩水）を、経口もしくは腹腔内経路によって全身投与するか、点眼剤もしくは硝子体内注射として繰り返し投与することで眼球に局所的に投与する。試験開始前および試験中は１日１回、全動物の体重を測定する。
【０３７５】
第２１日に、蛍光眼底カメラ（例えばＫｏｗｅ、ＨＲＡ）を用いて血管造影を行う。麻酔下およびさらなる瞳孔拡張後に、１０％強度フルオレセインナトリウム色素を皮下（ｓ．ｃ．）注射する。２から１０分後、眼球背景の写真を撮る。フルオレセイン漏出によって表される溢血／浮腫の程度を、２から３名の盲検観察者が評価し、０（溢血なし）から３（実際の病変を超える強い呈色）の重度に分類する。
【０３７６】
第２３日に動物を屠殺し、その後、眼球を摘出し、４％強度パラホルムアルデヒド溶液中室温で１時間固定する。１回洗浄後、網膜を注意深く剥離し、ＦＩＴＣイソレクチンＢ４抗体を用いて強膜−脈絡膜複合体を染色し、顕微鏡スライドグラスに平らに乗せる。このようにして得られた標本を、励起波長４８８ｎｍで蛍光顕微鏡（Ａｐｏｔｏｍ、Ｚｅｉｓｓ）を用いて評価する。脈絡膜新血管形成の面積および体積（それぞれ、μｍ２およびμｍ３）を、Ａｘｉｏｖｉｓｉｏｎ  ４．６ソフトウェアを用いる形態計測解析によって計算する。
【０３７７】
ｃ．２）酸素誘発網膜症モデルにおける物質の効力の試験
酸素誘発網膜症が、病的な網膜血管新生の研究のための有用な動物モデルであることが明らかになっている。このモデルは、網膜での出生後発達初期中の過酸素が正常な網膜血管の成長の停止もしくは遅延を引き起こすという所見に基づくものである。７日間の過酸素期の後に、正常酸素の室内空気に動物を戻した時、正常酸素条件下で神経組織の十分な供給を確保する上で必要な正常な血管を網膜が持たないことから、これは相対的低酸素症と等しいものである。このようにして引き起こされる虚血状況により、異常な新血管形成となり、それは滲出型ＡＭＤなどの眼球障害での病態生理的新血管形成といくつか類似点を有する。さらに、引き起こされる新血管形成は、各種形態の網膜障害の疾患機序および可能な治療を調べる上での非常に再現性の高い、定量化可能な重要なパラメータである。
【０３７８】
この試験の目的は、酸素誘発性網膜症モデルでの網膜血管の成長に対する１日１回全身投与用量の試験化合物の効力を調べることにある。Ｃ５７Ｂｌ／６マウスの新生仔およびそれらの母親を、出生後第７日（ＰＤ７）に５日にわたり過酸素（７０％酸素）に曝露する。ＰＤ１２から、ＰＤ１７までマウスを成長酸素条件（室内空気、２１％酸素）下に維持する。第１２日から第１７日まで、マウスは１日１回、試験物質または媒体で処理する。第１７日に、全てのマウスにイソフルランで麻酔を施し、頸椎骨折によって屠殺する。眼球を摘出し、４％ホルマリンで固定する。リン酸緩衝生理食塩水で洗浄後、網膜を切除し、それの平らな標本を作り、これをイソレクチンＢ４抗体で染色する。Ｚｅｉｓｓ  ＡｐｏＴｏｍｅを用いて、新血管形成の定量を行う。
【０３７９】
ｄ）静脈投与後の薬物動態パラメータの測定
試験物質の薬物動態特性を調べるため、動物に、ボラス（ラット）または注入（イヌもしくはサル）として個々の試験物質を注射する。ラットにおいては、試験物質の好ましい製剤は、比率９９：１での血漿／ジメチルスルホキシドである。イヌおよびサルにおいては、試験物質の注入溶液は、比率５０／１０／４０でのポリエチレングリコール／エタノール／水からなる。ラットにおける投与容量は、２から１０ｍＬ／ｋｇであり、ラットおよびサルでは０．５から２ｍＬ／ｋｇである。
【０３８０】
次の時間点：ボラス投与では試験物質投与から０．０３３、０．０８３、０．１６７、０．２５、０．２８３、０．３３３、０．５、０．７５、１、２、３、５、７、２４時間後および注入では試験物質投与から０．０８３、０．１６７、０．２５、０．２８３、０．３３３、０．５、０．７５、１、２、３、５、７、２４時間後で、被験動物からナトリウムＥＤＴＡ含有管に血液サンプルを採取する。
【０３８１】
採血後、血液サンプルを１２８０ｇで１０分間遠心する。上清（血漿）を抜き取り、直ちにさらなる処理を行うか、後のサンプル後処理のために凍結する。サンプル後処理については、血漿５０μＬをアセトニトリル２５０μＬと混和し（アセトニトリル沈殿試薬は、後の分析測定のために内部標準ＩＳＴＤも含む。）、室温で５分間放置する。次に、その混合物を１６０００ｇで３分間遠心する。上清を抜き取り、溶離液に合わせた緩衝液５００μＬを加える。次に、ＬＣ−ＭＳ／ＭＳ分析（例えば、ＰｈｅｎｏｍｅｎｅｘからのＧｅｍｉｎｉ  ５μＭ  Ｃ１８  １１０Ａ  ５０ｍｍ×３ｍｍ（または１５０ｍｍ×３ｍｍ）カラム；ＡＰＩ５５００またはＡＰＩ６５００を用いる質量分析；ＳＣＩＥＸ，  Ｃａｎａｄａを搭載した液体クロマトグラフィー）によってサンプルを調べて、個々のサンプル中の試験物質の濃度を求める。
【０３８２】
血漿濃度に加えて、全血：血漿の濃度比を、個々の試験物質について求める。そのために、試験物質を、一定濃度で全血中にて２０分間インキュベートする。次に、血漿での試験物質濃度の測定に関して上記で記載の方法に従って、サンプルの後処理を行う。調節濃度を測定血漿濃度で割って、パラメータＣｂ／Ｃｐを得る。
【０３８３】
薬物動態パラメータを、ノンコンパートメント解析（ＮＣＡ）によって計算する。それらパラメータを計算するためのアルゴリズムは社内プロセス記述で定義されており、薬物動態についての一般的書籍で刊行されている規則に基づくものである。
【０３８４】
主要な薬物動態パラメータクリアランス（ＣＬ）および分布容積（Ｖｓｓ）は次のように計算される。
【表３】
2018509426.tif 000073
【０３８５】
Ｃ）医薬組成物の作業例
本発明による物質は、下記のように医薬製剤に変換することができる。
【０３８６】
錠剤：
組成：
実施例１の化合物１００ｍｇ、ラクトース（１水和物）５０ｍｇ、トウモロコシデンプン５０ｍｇ、ポリビニルピロリドン（ＰＶＰ２５）（ＢＡＳＦ，  Ｇｅｒｍａｎｙから）１０ｍｇおよびステアリン酸マグネシウム２ｍｇ。
【０３８７】
錠剤重量２１２ｍｇ。直径８ｍｍ、曲率半径１２ｍｍ。
【０３８８】
製造：
実施例１の化合物、ラクトースおよびデンプンの混合物を、５％強度ＰＶＰ水溶液（ｍ／ｍ）で造粒する。顆粒を乾燥させ、次いで、ステアリン酸マグネシウムと５分間混和する。この混合物を常套の打錠機で圧縮する（錠剤の形態については、上記参照）。
【０３８９】
経口懸濁液：
組成：
実施例１の化合物１０００ｍｇ、エタノール（９６％）１０００ｍｇ、Ｒｈｏｄｉｇｅｌ（キサンタンガム）（ＦＭＣ，  ＵＳＡから）４００ｍｇおよび水９９ｇ。
【０３９０】
経口懸濁液１０ｍＬが、本発明の化合物の単回用量１００ｍｇに相当する。
【０３９１】
製造：
Ｒｈｏｄｉｇｅｌをエタノールに懸濁させ、実施例１の化合物を懸濁液に加える。撹拌しながら水を加える。Ｒｈｏｄｉｇｅｌの膨潤が完了するまで、混合物を約６時間撹拌する。
【０３９２】
眼球への局所投与用の液剤または懸濁液（点眼液）：
眼球への局所投与用の無菌医薬製剤は、本発明の化合物の凍結乾燥品を無菌生理食塩水中で再生することで調製することができる。そのような溶液または懸濁液に好適な保存剤は、例えば、濃度範囲０．００１から１重量パーセントでの塩化ベンザルコニウム、チオマーサルまたは硝酸フェニル水銀である。
【０３９３】
眼球への局所投与用の液剤または懸濁液（点眼液）：
眼球への局所投与用の無菌医薬製剤は、本発明の化合物の凍結乾燥品を無菌生理食塩水中で再生することで調製することができる。そのような溶液または懸濁液に好適な保存剤は、例えば、濃度範囲０．００１から１重量パーセントでの塩化ベンザルコニウム、チオマーサルまたは硝酸フェニル水銀である。
【国際調査報告】
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