(57)【要約】  Ｌ型電位開口型カルシウムチャネルのα１ａサブユニットの細胞外プア（ｐｏｏｒ）ループに特異的に結合する抗体、およびその抗原結合断片、ならびに関連する組成物、キット、およびその使用方法、例として、例えば癌の治療において、免疫応答を修飾するためにそれを必要とする対象に投与する方法が提供される。
2018508206.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
Ｌ型電位開口型カルシウムチャネルのα１サブユニットに特異的に結合する単離された抗体またはその抗原結合断片であって、前記抗体またはその抗原結合断片が、（ａ）前記α１サブユニットのモチーフＩの膜貫通部位Ｓ５とＳ６との間のポアループの細胞外ドメインのアミノ酸配列に特異的に結合するか、または（ｂ）（ａ）の前記α１サブユニットへの結合を競合的に阻害する、単離された抗体またはその抗原結合断片。
【請求項２】
前記Ｌ型電位開口型カルシウムチャネルが、ヒトまたはマウスからのものである、請求項１に記載の単離された抗体またはその抗原結合断片。
【請求項３】
前記抗体またはその抗原結合断片の前記α１サブユニットへの前記結合が、前記Ｌ型電位開口型カルシウムチャネルの活性を変化させる、請求項１または２に記載の単離された抗体またはその抗原結合断片。
【請求項４】
前記Ｌ型電位開口型カルシウムチャネルが、Ｃａｖ１．４である、請求項１〜３のいずれかに記載の単離された抗体またはその抗原結合断片。
【請求項５】
前記細胞外ドメインのアミノ酸配列が、ＧＰＧＲＰＧＤＡＰＨＴＧ［配列番号１］であるか、またはＧＰＧＲＰＧＤＡＰＨＴＧ［配列番号１］に少なくとも９０％同一である、請求項４に記載の単離された抗体またはその抗原結合断片。
【請求項６】
前記Ｌ型電位開口型カルシウムチャネルが、Ｃａｖ１．３である、請求項１〜３のいずれかに記載の抗体またはその抗原結合断片。
【請求項７】
前記細胞外ドメインのアミノ酸配列が、ＬＴＫＥＴＥＧＧＮＨＳＳＧＫＳＧ［配列番号２］であるか、またはＬＴＫＥＴＥＧＧＮＨＳＳＧＫＳＧ［配列番号２］に少なくとも９０％同一である、請求項６に記載の単離された抗体またはその抗原結合断片。
【請求項８】
前記Ｌ型電位開口型カルシウムチャネルが、Ｃａｖ１．２である、請求項１〜３のいずれかに記載の抗体またはその抗原結合断片。
【請求項９】
前記細胞外ドメインのアミノ酸配列が、ＡＴＫＡＤＧＡＮＡＬＧＧＫＧＡ［配列番号３］に少なくとも９０％同一である、ＡＴＫＡＤＧＡＮＡＬＧＧＫＧＡ［配列番号３］である、請求項８に記載の単離された抗体またはその抗原結合断片。
【請求項１０】
前記Ｌ型電位開口型カルシウムチャネルが、Ｃａｖ１．１である、請求項１〜４のいずれかに記載の抗体またはその抗原結合断片。
【請求項１１】
前記細胞外ドメインのアミノ酸配列が、ＰＭＱＩＥＬＲＨＲＥＷＶＨ［配列番号４］であるか、またはＰＭＱＩＥＬＲＨＲＥＷＶＨ［配列番号４］に少なくとも９０％同一である、請求項１０に記載の単離された抗体またはその抗原結合断片。
【請求項１２】
前記抗体またはその抗原結合断片が、Ｃａｖ１．４、Ｃａｖ１．３、Ｃａｖ１．２、またはＣａｖ１．１のいずれかに結合する、請求項１〜１１のいずれかに記載の単離された抗体またはその抗原結合断片。
【請求項１３】
前記抗体またはその抗原結合断片が、Ｃａｖ１．４、Ｃａｖ１．３、Ｃａｖ１．２、またはＣａｖ１．１のいずれか３つに結合する、請求項１〜１１のいずれかに記載の単離された抗体またはその抗原結合断片。
【請求項１４】
前記抗体またはその抗原結合断片が、Ｃａｖ１．４、Ｃａｖ１．３、またはＣａｖ１．２のいずれかに結合する、請求項１３に記載の単離された抗体またはその抗原結合断片。
【請求項１５】
前記抗体またはその抗原結合断片が、Ｃａｖ１．４、Ｃａｖ１．３、またはＣａｖ１．１のいずれかに結合する、請求項１３に記載の単離された抗体またはその抗原結合断片。
【請求項１６】
前記抗体またはその抗原結合断片が、Ｃａｖ１．４、Ｃａｖ１．２、またはＣａｖ１．１のいずれかに結合する、請求項１３に記載の単離された抗体またはその抗原結合断片。
【請求項１７】
前記抗体またはその抗原結合断片が、Ｃａｖ１．３、Ｃａｖ１．２、またはＣａｖ１．１のいずれかに結合する、請求項１３に記載の単離された抗体またはその抗原結合断片。
【請求項１８】
前記抗体またはその抗原結合断片が、Ｃａｖ１．４、Ｃａｖ１．３、Ｃａｖ１．２、またはＣａｖ１．１のいずれか２つに結合する、請求項１〜１１のいずれかに記載の単離された抗体またはその抗原結合断片。
【請求項１９】
前記抗体またはその抗原結合断片が、Ｃａｖ１．４またはＣａｖ１．３に結合する、請求項１８に記載の単離された抗体またはその抗原結合断片。
【請求項２０】
前記抗体またはその抗原結合断片が、Ｃａｖ１．４またはＣａｖ１．２に結合する、請求項１８に記載の単離された抗体またはその抗原結合断片。
【請求項２１】
前記抗体またはその抗原結合断片が、Ｃａｖ１．４またはＣａｖ１．１に結合する、請求項１８に記載の単離された抗体またはその抗原結合断片。
【請求項２２】
前記抗体またはその抗原結合断片が、Ｃａｖ１．３またはＣａｖ１．２に結合する、請求項１８に記載の単離された抗体またはその抗原結合断片。
【請求項２３】
前記抗体またはその抗原結合断片が、Ｃａｖ１．３またはＣａｖ１．１に結合する、請求項１８に記載の単離された抗体またはその抗原結合断片。
【請求項２４】
前記抗体またはその抗原結合断片が、Ｃａｖ１．２またはＣａｖ１．１に結合する、請求項１８に記載の単離された抗体またはその抗原結合断片。
【請求項２５】
前記抗体またはその抗原結合断片が、Ｃａｖ１．４に結合し、Ｃａｖ１．１、Ｃａｖ１．２、またはＣａｖ１．３に顕著に結合しない、請求項１〜１１のいずれかに記載の単離された抗体またはその抗原結合断片。
【請求項２６】
前記抗体またはその抗原結合断片が、Ｃａｖ１．３に結合し、Ｃａｖ１．１、Ｃａｖ１．２、またはＣａｖ１．４に顕著に結合しない、請求項１〜１１のいずれかに記載の単離された抗体またはその抗原結合断片。
【請求項２７】
前記抗体またはその抗原結合断片が、Ｃａｖ１．２に結合し、Ｃａｖ１．１、Ｃａｖ１．３、またはＣａｖ１．４に顕著に結合しない、請求項１〜１１のいずれかに記載の単離された抗体またはその抗原結合断片。
【請求項２８】
前記抗体またはその抗原結合断片が、Ｃａｖ１．１に結合し、Ｃａｖ１．２、Ｃａｖ１．３、またはＣａｖ１．４に顕著に結合しない、請求項１〜１１のいずれかに記載の単離された抗体またはその抗原結合断片。
【請求項２９】
ＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、およびＶＨＣＤＲ３アミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）、ならびに／またはＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２、およびＶＬＣＤＲ３アミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＬＨ）を含み、これらは、
（Ａ）（ｉ）ＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、およびＶＨＣＤＲ３が、それぞれ、配列番号１４〜１６のアミノ酸配列を含み、（ｉｉ）ＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２、およびＶＬＣＤＲ３が、それぞれ、（ｉ）配列番号１８〜２０のアミノ酸配列を含む（前記ＶＨＣＤＲまたはＶＬＣＤＲアミノ酸配列のうちの少なくとも１つが約１、２、または３つのアミノ酸置換、付加、または欠失により修飾される、それらの変異型を含む）、
（Ｂ）（ｉ）ＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、およびＶＨＣＤＲ３が、それぞれ、配列番号２２〜２４のアミノ酸配列を含み、（ｉｉ）ＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２、およびＶＬＣＤＲ３が、それぞれ、配列番号２６〜２８のアミノ酸配列を含む（前記ＶＨＣＤＲまたはＶＬＣＤＲアミノ酸配列のうちの少なくとも１つが約１、２、または３つのアミノ酸置換、付加、または欠失により修飾される、それらの変異型を含む）、
（Ｃ）（ｉ）ＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、およびＶＨＣＤＲ３が、それぞれ、配列番号３０〜３２のアミノ酸配列を含み、（ｉｉ）ＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２、およびＶＬＣＤＲ３が、それぞれ、（ｉ）配列番号３４〜３６のアミノ酸配列を含む（前記ＶＨＣＤＲまたはＶＬＣＤＲアミノ酸配列のうちの少なくとも１つが約１、２、または３つのアミノ酸置換、付加、または欠失により修飾される、それらの変異型を含む）、
（Ｄ）（ｉ）ＶＨＣＤＲ１およびＶＨＣＤＲ２が、それぞれ、配列番号３８〜３９のアミノ酸配列を含み、（ｉｉ）ＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２、およびＶＬＣＤＲ３が、それぞれ、（ｉ）配列番号４２〜４４のアミノ酸配列を含む（前記ＶＨＣＤＲまたはＶＬＣＤＲアミノ酸配列のうちの少なくとも１つが約１、２、または３つのアミノ酸置換、付加、または欠失により修飾される、それらの変異型を含む）、
（Ｅ）（ｉ）ＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、およびＶＨＣＤＲ３が、それぞれ、配列番号４６〜４８のアミノ酸配列を含み、（ｉｉ）ＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２、およびＶＬＣＤＲ３が、それぞれ、（ｉ）配列番号５０〜５２のアミノ酸を含む（前記ＶＨＣＤＲまたはＶＬＣＤＲアミノ酸配列のうちの少なくとも１つが約１、２、または３つのアミノ酸置換、付加、または欠失により修飾される、それらの変異型を含む）、
（Ｆ）（ｉ）ＶＨＣＤＲ１およびＶＨＣＤＲ２が、それぞれ、配列番号５４〜５５のアミノ酸を含み、（ｉｉ）ＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２、およびＶＬＣＤＲ３が、それぞれ、（ｉ）配列番号５８〜６０のアミノ酸配列を含む（前記ＶＨＣＤＲまたはＶＬＣＤＲアミノ酸配列のうちの少なくとも１つが約１、２、または３つのアミノ酸置換、付加、または欠失により修飾される、それらの変異型を含む）、
（Ｇ）（ｉ）ＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、およびＶＨＣＤＲ３が、それぞれ、配列番号６２〜６４のアミノ酸配列を含む（前記ＶＨＣＤＲまたはＶＬＣＤＲアミノ酸配列のうちの少なくとも１つが約１、２、または３つのアミノ酸置換、付加、または欠失により修飾される、それらの変異型を含む）、
（Ｈ）（ｉ）ＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、およびＶＨＣＤＲ３が、それぞれ、配列番号７０〜７２のアミノ酸配列を含み、（ｉｉ）ＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２、およびＶＬＣＤＲ３が、それぞれ、（ｉ）配列番号７４〜７６のアミノ酸配列を含む（前記ＶＨＣＤＲまたはＶＬＣＤＲアミノ酸配列のうちの少なくとも１つが約１、２、または３つのアミノ酸置換、付加、または欠失により修飾される、それらの変異型を含む）、
（Ｉ）（ｉ）ＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、およびＶＨＣＤＲ３が、それぞれ、配列番号７８〜８０のアミノ酸配列を含み、（ｉｉ）ＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２、およびＶＬＣＤＲ３が、それぞれ、（ｉ）配列番号８２〜８４のアミノ酸配列を含む（前記ＶＨＣＤＲまたはＶＬＣＤＲアミノ酸配列のうちの少なくとも１つが約１、２、または３つのアミノ酸置換、付加、または欠失により修飾される、それらの変異型を含む）、
（Ｊ）（ｉ）ＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、およびＶＨＣＤＲ３が、それぞれ、配列番号８６〜８８のアミノ酸配列を含み、（ｉｉ）ＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２、およびＶＬＣＤＲ３が、それぞれ、（ｉ）配列番号９０〜９２のアミノ酸配列を含む（前記ＶＨＣＤＲまたはＶＬＣＤＲアミノ酸配列のうちの少なくとも１つが約１、２、または３つのアミノ酸置換、付加、または欠失により修飾される、それらの変異型を含む）、
（Ｋ）（ｉ）ＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２、およびＶＬＣＤＲ３が、それぞれ、（ｉ）配列番号９８〜１００のアミノ酸配列を含む（前記ＶＨＣＤＲまたはＶＬＣＤＲアミノ酸配列のうちの少なくとも１つが約１、２、または３つのアミノ酸置換、付加、または欠失により修飾される、それらの変異型を含む）、ならびに
（Ｌ）（ｉ）ＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２、およびＶＬＣＤＲ３が、それぞれ、（ｉ）配列番号１０６〜１０８のアミノ酸配列を含む（前記ＶＨＣＤＲまたはＶＬＣＤＲアミノ酸配列のうちの少なくとも１つが約１、２、または３つのアミノ酸置換、付加、または欠失により修飾される、それらの変異型を含む）、から選択される、先行請求項のいずれか１項に記載の単離された抗体またはその抗原結合断片。
【請求項３０】
配列番号１３、２１、２９、３７、４５、５３、６１、６９、７７、または８５に少なくとも９０％同一であるＶＨ配列を含む、先行請求項のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合断片。
【請求項３１】
配列番号１７、２５、３３、４１、４９、５７、７３、８１、８９、９７、または１０５に少なくとも９０％同一であるＶＬ配列を含む、先行請求項のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合断片。
【請求項３２】
配列番号１３、２１、２９、３７、４５、５３、６１、６９、７７、または８５に少なくとも９０％同一であるＶＨ配列、および配列番号１７、２５、３３、４１、４９、５７、７３、８１、８９、９７、または１０５に少なくとも９０％同一であるＶＬ配列を含む、先行請求項のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合断片。
【請求項３３】
（Ａ）前記配列番号１３のＶＨ配列および前記配列番号１７のＶＬ配列、
（Ｂ）前記配列番号２１のＶＨ配列および前記配列番号２５のＶＬ配列、
（Ｃ）前記配列番号２９のＶＨ配列および前記配列番号３３のＶＬ配列、
（Ｄ）前記配列番号３７のＶＨ配列および前記配列番号４１のＶＬ配列、
（Ｅ）前記配列番号４５のＶＨ配列および前記配列番号４９のＶＬ配列、
（Ｆ）前記配列番号５３のＶＨ配列および前記配列番号５７のＶＬ配列、
（Ｇ）前記配列番号６９のＶＨ配列および前記配列番号７３のＶＬ配列、
（Ｈ）前記配列番号７７のＶＨ配列および前記配列番号８１のＶＬ配列、
（Ｉ）前記配列番号８５のＶＨ配列および前記配列番号８９のＶＬ配列、ならびに
（Ｊ）（Ａ）〜（Ｉ）のいずれかに少なくとも９０％同一である変異型ＶＨ配列および変異型ＶＬ配列、から選択されるＶＨ配列およびＶＬ配列を含む、先行請求項のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合断片。
【請求項３４】
先行請求項のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合断片をコードする、ポリヌクレオチド。
【請求項３５】
請求項３４に記載のポリヌクレオチドをコードする、ベクター。
【請求項３６】
請求項３４に記載のポリヌクレオチドまたは請求項３５に記載のベクターを発現する、細胞。
【請求項３７】
Ｌ型電位開口型カルシウムチャネルを発現する細胞の機能の調節方法であって、前記細胞を、（ａ）前記Ｌ型電位開口型カルシウムチャネルのα１サブユニットのドメイン１の膜貫通部位Ｓ５とＳ６との間のポアループの細胞外ドメインのアミノ酸配列に特異的に結合するか、または（ｂ）（ａ）の前記α１サブユニットへの前記結合を競合的に阻害する、抗体またはその抗原結合断片と接触させることを含み、前記α１サブユニットへの前記薬剤の結合が、前記Ｌ型電位開口型カルシウムチャネルの前記活性を調節する、方法。
【請求項３８】
前記抗体またはその結合断片が、先行請求項のいずれか１項に記載の抗体またはその結合断片である、請求項３７に記載の方法。
【請求項３９】
前記細胞が、造血細胞である、請求項３７または３８に記載の方法。
【請求項４０】
前記抗体またはその抗原結合断片が、前記Ｌ型電位開口型カルシウムチャネルの前記活性を阻害する、先行請求項のいずれか１項に記載の方法。
【請求項４１】
前記抗体またはその抗原結合断片が、前記Ｌ型電位開口型カルシウムチャネルの前記活性を増加させる、先行請求項のいずれか１項に記載の方法。
【請求項４２】
前記細胞が、リンパ球系列の造血細胞である、請求項３９〜４１のいずれかに記載の方法。
【請求項４３】
前記細胞が、Ｔ細胞である、請求項４２に記載の方法。
【請求項４４】
前記細胞の前記機能が、Ｔ細胞成熟を含む、請求項４３に記載の方法。
【請求項４５】
前記Ｔ細胞の前記機能が、抗原結合を含む、請求項４３に記載の方法。
【請求項４６】
前記細胞が、Ｂ細胞である、請求項４２に記載の方法。
【請求項４７】
前記細胞の前記機能が、Ｂ細胞成熟を含む、請求項４６に記載の方法。
【請求項４８】
前記細胞の前記機能が、Ｂ細胞受容体誘導活性化を含む、請求項４６に記載の方法。
【請求項４９】
前記Ｌ型電位開口型カルシウムチャネルが、Ｃａｖ１．４である、先行請求項のいずれか１項に記載の方法。
【請求項５０】
前記Ｌ型電位開口型カルシウムチャネルが、Ｃａｖ１．３である、先行請求項のいずれか１項に記載の方法。
【請求項５１】
前記Ｌ型電位開口型カルシウムチャネルが、Ｃａｖ１．２である、先行請求項のいずれか１項に記載の方法。
【請求項５２】
前記Ｌ型電位開口型カルシウムチャネルが、Ｃａｖ１．１である、先行請求項のいずれか１項に記載の方法。
【請求項５３】
対象における免疫応答の調節方法であって、前記対象に、（ａ）前記Ｌ型電位開口型カルシウムチャネルのα１サブユニットのドメイン１の膜貫通部位Ｓ５とＳ６との間のポアループの細胞外ドメインのアミノ酸配列に特異的に結合するか、または（ｂ）（ａ）の前記α１サブユニットへの前記結合を競合的に阻害する、有効量の抗体またはその抗原結合断片を投与することを含み、前記Ｌ型電位開口型カルシウムチャネルが、造血細胞において発現される、方法。
【請求項５４】
前記抗体またはその結合断片が、請求項１〜１０のいずれかに記載の抗体またはその結合断片である、請求項５３に記載の方法。
【請求項５５】
前記造血細胞が、リンパ球系列のものである、請求項５３または５４に記載の方法。
【請求項５６】
前記造血細胞が、Ｔ細胞またはＢ細胞である、請求項５３〜５５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項５７】
前記Ｌ型電位開口型カルシウムチャネルが、Ｃａｖ１．４である、請求項５３〜５６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項５８】
前記Ｌ型電位開口型カルシウムチャネルが、Ｃａｖ１．３である、請求項５３〜５７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項５９】
前記Ｌ型電位開口型カルシウムチャネルが、Ｃａｖ１．２である、請求項５３〜５８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項６０】
前記Ｌ型電位開口型カルシウムチャネルが、Ｃａｖ１．１である、請求項５３〜５９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項６１】
対象における免疫応答の阻害方法であって、前記対象に、（ａ）前記Ｌ型電位開口型カルシウムチャネルのα１サブユニットのドメイン１の膜貫通部位Ｓ５とＳ６との間のポアループの細胞外ドメインのアミノ酸配列に特異的に結合するか、または（ｂ）（ａ）の前記α１サブユニットへの前記結合を競合的に阻害する、有効量の抗体またはその抗原結合断片を投与することを含み、前記Ｌ型電位開口型カルシウムチャネルが、造血細胞において発現される、方法。
【請求項６２】
前記抗体またはその結合断片が、先行請求項のいずれか１項に記載の抗体またはその結合断片である、請求項６１に記載の方法。
【請求項６３】
前記造血細胞が、リンパ球系列のものである、請求項６１または６２に記載の方法。
【請求項６４】
前記造血細胞が、Ｔ細胞である、請求項６１〜６３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項６５】
前記有効量の前記抗体またはその抗原結合断片の前記投与が、Ｔ細胞受容体誘導Ｃａ２＋流動を減少させる、請求項６４に記載の方法。
【請求項６６】
前記有効量の前記抗体またはその抗原結合断片の前記投与が、ナイーブＴ細胞の生存を低減する、請求項６４に記載の方法。
【請求項６７】
前記有効量の前記抗体またはその抗原結合断片の前記投与が、ＣＤ３／ＣＤ２８誘導Ｔ細胞増殖を低減する、請求項６４に記載の方法。
【請求項６８】
前記造血細胞が、Ｂ細胞である、請求項６１〜６３のいずれかに記載の方法。
【請求項６９】
前記有効量の前記抗体またはその抗原結合断片の前記投与が、Ｂ細胞受容体誘導活性化を阻害する、請求項６８に記載の方法。
【請求項７０】
前記Ｌ型電位開口型カルシウムチャネルが、Ｃａｖ１．４である、請求項６１〜６９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項７１】
前記Ｌ型電位開口型カルシウムチャネルが、Ｃａｖ１．３である、請求項６１〜７０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項７２】
前記Ｌ型電位開口型カルシウムチャネルが、Ｃａｖ１．２である、請求項６１〜７１のいずれか１項に記載の方法。
【請求項７３】
前記Ｌ型電位開口型カルシウムチャネルが、Ｃａｖ１．１である、請求項６１〜７２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項７４】
対象における疾患の治療方法であって、前記対象に、（ａ）前記Ｌ型電位開口型カルシウムチャネルのα１サブユニットのドメイン１の膜貫通部位Ｓ５とＳ６との間のポアループの細胞外ドメインのアミノ酸配列に特異的に結合するか、または（ｂ）（ａ）の前記α１サブユニットへの前記結合を競合的に阻害する、有効量の抗体またはその抗原結合断片を投与することを含む、方法。
【請求項７５】
前記抗体またはその結合断片が、先行請求項のいずれか１項に記載の抗体またはその結合断片である、請求項７４に記載の方法。
【請求項７６】
前記疾患が、炎症疾患である、請求項７４または７５に記載の方法。
【請求項７７】
前記炎症疾患が、Ｘ連鎖無ガンマグロブリン血症、全身性エリテマトーデス、炎症性（リウマチ）関節炎、橋本甲状腺炎、悪性貧血、炎症性腸疾患（クローン病および潰瘍性大腸炎）、乾癬、腎線維症、肺線維症、肝線維症、アジソン病、Ｉ型糖尿病、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、皮膚筋炎、シェーグレン症候群、多発性硬化症、重症筋無力症、ライター症候群、喘息、またはグレーブス病である、請求項７６に記載の方法。
【請求項７８】
前記疾患が、癌である、請求項７４または７５に記載の方法。
【請求項７９】
前記癌が、造血器癌である、請求項７８に記載の方法。
【請求項８０】
前記造血器癌が、リンパ腫、白血病、または多発性骨髄腫である、請求項７９に記載の方法。
【請求項８１】
前記リンパ腫が、Ｔ細胞リンパ腫、Ｂ細胞リンパ腫、小リンパ球性リンパ腫、マングル（ｍａｎｇｌｅ）細胞リンパ腫、未分化大細胞リンパ腫（ＡＬＣＬ）、濾胞性リンパ腫、ホジキンリンパ腫、または非ホジキンリンパ腫である、請求項８０に記載の方法。
【請求項８２】
前記白血病が、慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）、有毛細胞白血病、急性リンパ芽球性白血病、骨髄性白血病、急性骨髄もしくは骨髄性白血病、または慢性骨髄性白血病である、請求項８０に記載の方法。
【請求項８３】
前記癌は、乳癌、子宮頸癌、前立腺癌、消化器癌、肺癌、卵巣癌、精巣癌、頭頸部癌、膀胱癌、腎癌（例えば、腎細胞癌）、軟部組織肉腫、扁平上皮癌、ＣＮＳまたは脳癌、黒色腫、非黒色腫癌、甲状腺癌、子宮内膜癌、上皮性腫瘍、および骨癌のうちの１つ以上から選択される、請求項７８に記載の方法。
【請求項８４】
前記癌が、Ｃａｖ１．１、Ｃａｖ１．２、Ｃａｖ１．３、Ｃａｖ１．４、またはこれらの任意の組み合わせを発現または過剰発現する、請求項７４〜８３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項８５】
前記癌がＣａｖ１．１を発現または過剰発現し、前記抗体またはその抗原結合断片がＣａｖ１．１に特異的に結合する、請求項８４に記載の方法。
【請求項８６】
前記癌がＣａｖ１．２を発現または過剰発現し、前記抗体またはその抗原結合断片がＣａｖ１．２に特異的に結合する、請求項８４に記載の方法。
【請求項８７】
前記癌がＣａｖ１．３を発現または過剰発現し、前記抗体またはその抗原結合断片がＣａｖ１．３に特異的に結合する、請求項８４に記載の方法。
【請求項８８】
前記癌がＣａｖ１．４を発現または過剰発現し、前記抗体またはその抗原結合断片がＣａｖ１．４に特異的に結合する、請求項８４に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願の相互参照
本出願は、３５  Ｕ．Ｓ．Ｃ．１１９（ｅ）に基づき、２０１５年２月１３日に出願された米国出願第６２／１１５，８２３号、および２０１６年１月１９日に出願された米国出願第６２／２８０，５５７号に対する優先権を主張するものであり、これらのそれぞれは、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
【０００２】
配列表に関する記載
本出願に関連する配列表は、ハードコピーの代わりにテキスト形式で提供され、これによって参照により本明細書に組み込まれる。配列表を含むテキストファイルの名称はＢＩＭＮ＿００５＿０２ＷＯ＿ＳＴ２５．ｔｘｔである。テキストファイルは約１７７ＫＢであり、２０１６年２月１６日に作成され、ＥＦＳ−Ｗｅｂを介して電子的に提出される。
背景
【０００３】
本発明の実施形態は、Ｌ型電位開口型カルシウムチャネルＣａｖ１．４、Ｃａｖ１．３、Ｃａｖ１．２、およびＣａｖ１．１のうちの１つ以上に特異的に結合する抗体およびその抗原結合断片、ならびにその関連組成物およびその使用方法を含む。
関連技術分野の説明
【０００４】
ＴおよびＢリンパ球を含む免疫細胞は、病原体に対する免疫応答の主なメディエーターである。細胞内カルシウムイオン（Ｃａ２＋）レベルの上昇は、免疫細胞において、細胞活性化、増殖、分化、および細胞死を調節する重要な事象である。免疫細胞におけるカルシウム応答の調節不全は、Ｘ連鎖無ガンマグロブリン血症および全身性エリテマトーデスなどのいくつかの免疫不全および自己免疫疾患に関連付けられてきた。カルシウムシグナル伝達は免疫機能において役割を果たすことが知られているが、カルシウムシグナルが免疫細胞において生成されるその手段は、完全には特徴付けされていない。免疫細胞内へのカルシウム流入の１つの機序は、カルシウム放出依存性カルシウム（ＣＲＡＣ）チャネルを通してである。免疫細胞で機能する他の候補である形質膜カルシウムチャネルは、Ｐ２Ｘ受容体、一過性受容器電位（ＴＲＰ）チャネル、および電位開口型カルシウムチャネルを含む。
【０００５】
電位開口型カルシウムチャネルは、ポア形成α１サブユニット、ならびに少なくとも１つのα２サブユニット、δサブユニット、およびβサブユニット、ならびに任意選択で、γサブユニットで構成される多サブユニットタンパク質である。Ｌ型電位開口型カルシウムチャネルのうちの少なくとも４つのサブタイプ（Ｃａｖ１チャネルまたはＣａｖ１としても知られる）であるＣａｖ１．１Ｃａｖ１．１、Ｃａｖ１．２、Ｃａｖ１．３、およびＣａｖ１．４が説明されている。これらのサブタイプは、それらが含有するα１サブユニットによって分類される。これらのチャネルは、形質膜における脱分極に応答して開口し、それにより、神経、筋肉、および内分泌細胞などの興奮性細胞内へのＣａ２＋流入を媒介する。電位開口型カルシウムチャネルは、様々な造血細胞を含む、伝統的に興奮性とは考えられない多くの細胞にも存在する。注目すべきことに、Ｌ型電位開口型カルシウムチャネルの発現は、マウスおよびヒトのリンパ球において観察されてきた（Ｋｏｔｔｕｒｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７８：４６９４９−４６９６０（２００３）、Ｋｏｔｔｕｒｉ  ａｎｄ  Ｊｅｆｆｅｒｉｅｓ，Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．４２：１４６１−１４７４（２００５））。
【０００６】
免疫細胞におけるカルシウムシグナル伝達の調節不全は、炎症性および自己免疫疾患の一因となる。当該技術分野に必要なのは、カルシウムシグナル伝達を調節する免疫細胞における標的に結合し、その活性を修飾することができる新しい薬剤である。Ｌ型電位開口型カルシウムチャネルに対する阻害剤は現在利用可能であるが、これらの阻害剤は広範囲を標的とし、望ましくない副作用をもたらす。本発明は、Ｌ型電位開口型カルシウムチャネルサブタイプを特異的に標的とする抗体およびその抗原結合断片を提供することによって、これらの必要性に対処する。
【図面の簡単な説明】
【０００７】
【図１】Ｌ型電位開口型カルシウムチャネルのα１サブユニットポリペプチドの模式図を示す。膜貫通ドメインは円柱で表される。細胞質ドメインは膜貫通ドメインの下に描写され、細胞外ドメインは膜貫通ドメインの上に描写される。Ｎ末端は左下に描写され、Ｃ末端は図の右下に描写される。ポリペプチドを二分する線は、メッセンジャーＲＮＡの異なるエキソンによりコードされる領域の境界を表す。ボックスは、α１サブユニットのドメインＩの膜貫通部位Ｓ５およびＳ６間のポアループの細胞外ドメインを示す。
【図２】ハイブリドーマ生成の結果を要約する表を示す。
【図３】抗体を用いて行われたＥｌｉｚａ実験の代表的な結果を表す表を示す。Ｌ型電位開口型カルシウムチャネルの細胞外ループから取ったアミノ酸配列を有するペプチドへの結合に関して、ハイブリドーマにより産生されたモノクローナル抗体を試験した。ウェルをＢＳＡおよび全てのサブタイプ（Ｃａｖ１全て）からのペプチド、またはＣａｖ１．１、Ｃａｖ１．２、Ｃａｖ１．３、もしくはＣａｖ１．４からのペプチドでコーティングした。
【図４】ハイブリドーマクローンにより産生された抗体に対して行われたフローサイトメトリー実験の代表的な結果を示す。ハイブリドーマにより産生されたモノクローナル抗体を含有する上清は、野生型マウス脾細胞への結合を決定するために試験された。ＩｇＧ２ｂ対照抗体に対するモノクローナル抗体の結合シグナルが表される。
【図５】ハイブリドーマクローンにより産生された抗体に対して行われたフローサイトメトリー実験の代表的な結果を示す。ハイブリドーマにより産生されたモノクローナル抗体を含有する上清は、野生型マウス脾細胞への結合を決定するために試験された。ＩｇＭ対照抗体に対するモノクローナル抗体の結合シグナルが表示される。
【図６】ハイブリドーマクローンにより産生された抗体に対して行われたフローサイトメトリー実験の代表的な結果を示す。ハイブリドーマにより産生されたモノクローナル抗体を含有する上清は、野生型マウス胸腺細胞への結合を決定するために試験された。ＩｇＧ２ｂ対照抗体に対するモノクローナル抗体の結合シグナルが表示される。
【図７】ハイブリドーマクローンにより産生された抗体に対して行われたフローサイトメトリー実験の代表的な結果を示す。ハイブリドーマにより産生されたモノクローナル抗体を含有する上清は、野生型マウス胸腺細胞への結合を決定するために試験された。ＩｇＭ対照抗体に対するモノクローナル抗体の結合シグナルが表示される。
【図８】チャネル特異性ならびに胸腺および／または脾細胞に結合するモノクローナル抗体の能力に関して、３１の選択されたクローンにより産生されたモノクローナル抗体の特徴を要約する表を示す。
【図９】ハイブリドーマの選択的結合データの代表的な結果を示す。クローン１Ｃ１０（９Ａ）はＣａｖ１．４に選択的に結合し、クローン６Ｃ６（９Ｂ）はＣａｖ１．２に選択的に結合する。クローン１Ｃ８（９Ｃ）、Ｃａｖ１．２に選択的に結合するクローン６Ａ３（９Ｄ）、Ｃａｖ１．２に選択的に結合するクローン１Ｄ２（９Ｆ）、Ｃａｖ１．２に選択的に結合するクローン１Ｅ７（９Ｆ）、Ｃａｖ１．１に選択的に結合するクローン１Ｆ４（９Ｇ）、Ｃａｖ１．４に選択的に結合するクローン２Ｄ５（９Ｈ）、クローン５Ｆ４（９Ｉ）、クローン５Ｇ１０（９Ｊ）、クローン６Ｅ１（９Ｋ）、クローン６Ｈ７（９Ｌ）、クローン８Ｇ１（９Ｍ）、クローン９Ｃ３（９Ｎ）、およびクローン１０Ｅ１１（９Ｏ）の結合データも示される。
【図１０】癌において見出され得るＣａＶ１チャネルの突然変異を図示する。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
本開示の実施形態は、Ｌ型電位開口型カルシウムチャネルのα１サブユニットに特異的に結合する単離された抗体またはその抗原結合断片を含み、この抗体またはその抗原結合断片は、（ａ）α１サブユニットのモチーフＩの膜貫通部位Ｓ５およびＳ６間のポアループの細胞外ドメインのアミノ酸配列に特異的に結合するか、または（ｂ）（ａ）のα１サブユニットへの結合を競合的に阻害する。
【０００９】
ある特定の実施形態では、Ｌ型電位開口型カルシウムチャネルは、ヒトまたはマウスからのものである。ある特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合断片のα１サブユニットへの結合は、Ｌ型電位開口型カルシウムチャネルの活性を変化させる。
【００１０】
ある特定の実施形態では、Ｌ型電位開口型カルシウムチャネルはＣａｖ１．４である。いくつかの実施形態では、細胞外ドメインのアミノ酸配列は、ＧＰＧＲＰＧＤＡＰＨＴＧ［配列番号１］であるか、またはＧＰＧＲＰＧＤＡＰＨＴＧ［配列番号１］に少なくとも９０％同一である。
【００１１】
ある特定の実施形態では、Ｌ型電位開口型カルシウムチャネルはＣａｖ１．３である。特定の実施形態では、細胞外ドメインのアミノ酸配列は、ＬＴＫＥＴＥＧＧＮＨＳＳＧＫＳＧ［配列番号２］であるか、またはＬＴＫＥＴＥＧＧＮＨＳＳＧＫＳＧ［配列番号２］に少なくとも９０％同一である。
【００１２】
いくつかの実施形態では、Ｌ型電位開口型カルシウムチャネルはＣａｖ１．２である。ある特定の実施形態では、細胞外ドメインのアミノ酸配列は、ＡＴＫＡＤＧＡＮＡＬＧＧＫＧＡ［配列番号３］に少なくとも９０％同一のＡＴＫＡＤＧＡＮＡＬＧＧＫＧＡ［配列番号３］である。
【００１３】
ある特定の実施形態では、Ｌ型電位開口型カルシウムチャネルはＣａｖ１．１である。ある特定の実施形態では、細胞外ドメインのアミノ酸配列は、ＰＭＱＩＥＬＲＨＲＥＷＶＨ［配列番号４］であるか、またはＰＭＱＩＥＬＲＨＲＥＷＶＨ［配列番号４］に少なくとも９０％同一である。
【００１４】
いくつかの実施形態では、抗体または抗原結合断片は、Ｃａｖ１．４、Ｃａｖ１．３、Ｃａｖ１．２、またはＣａｖ１．１のうちのいずれかに結合する。ある特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、Ｃａｖ１．４、Ｃａｖ１．３、Ｃａｖ１．２、またはＣａｖ１．１のうちのいずれか３つに結合する。ある特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、Ｃａｖ１．４、Ｃａｖ１．３、またはＣａｖ１．２のうちのいずれかに結合する。いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、Ｃａｖ１．４、Ｃａｖ１．３、またはＣａｖ１．１のうちのいずれかに結合する。ある特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、Ｃａｖ１．４、Ｃａｖ１．２、またはＣａｖ１．１のうちのいずれかに結合する。ある特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、Ｃａｖ１．３、Ｃａｖ１．２、またはＣａｖ１．１のうちのいずれかに結合する。ある特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、Ｃａｖ１．４、Ｃａｖ１．３、Ｃａｖ１．２、またはＣａｖ１．１のうちのいずれか２つに結合する。ある特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、Ｃａｖ１．４またはＣａｖ１．３に結合する。ある特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、Ｃａｖ１．４またはＣａｖ１．２に結合する。いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、Ｃａｖ１．４またはＣａｖ１．１に結合する。いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、Ｃａｖ１．３またはＣａｖ１．２に結合する。特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、Ｃａｖ１．３またはＣａｖ１．１に結合する。特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、Ｃａｖ１．２またはＣａｖ１．１に結合する。ある特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、Ｃａｖ１．４にのみ結合する、つまり、それは、Ｃａｖ１．１、Ｃａｖ１．２、またはＣａｖ１．３に顕著に結合しない。ある特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、Ｃａｖ１．３にのみ結合する、つまり、それは、Ｃａｖ１．１、Ｃａｖ１．２、またはＣａｖ１．４に顕著に結合しない。ある特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、Ｃａｖ１．２にのみ結合する、つまり、それは、Ｃａｖ１．１、Ｃａｖ１．３、またはＣａｖ１．４に顕著に結合しない。ある特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、Ｃａｖ１．１にのみ結合する、つまり、それは、Ｃａｖ１．２、Ｃａｖ１．３、またはＣａｖ１．４に顕著に結合しない。
【００１５】
いくつかの実施形態では、単離された抗体またはその抗原結合断片は、ＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、およびＶＨＣＤＲ３アミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）、ならびに／またはＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２、およびＶＬＣＤＲ３アミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＬＨ）を含み、これらは、
（Ａ）（ｉ）ＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、およびＶＨＣＤＲ３が、それぞれ、配列番号１４〜１６のアミノ酸配列を含み、（ｉｉ）ＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２、およびＶＬＣＤＲ３が、それぞれ、（ｉ）配列番号１８〜２０のアミノ酸配列を含む（該ＶＨＣＤＲまたはＶＬＣＤＲアミノ酸配列のうちの少なくとも１つが約１、２、または３つのアミノ酸置換、付加、または欠失により修飾される、それらの変異型を含む）、
（Ｂ）（ｉ）ＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、およびＶＨＣＤＲ３が、それぞれ、配列番号２２〜２４のアミノ酸配列を含み、（ｉｉ）ＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２、およびＶＬＣＤＲ３が、それぞれ、配列番号２６〜２８のアミノ酸配列を含む（該ＶＨＣＤＲまたはＶＬＣＤＲアミノ酸配列のうちの少なくとも１つが約１、２、または３つのアミノ酸置換、付加、または欠失により修飾される、それらの変異型を含む）、
（Ｃ）（ｉ）ＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、およびＶＨＣＤＲ３が、それぞれ、配列番号３０〜３２のアミノ酸配列を含み、（ｉｉ）ＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２、およびＶＬＣＤＲ３が、それぞれ、（ｉ）配列番号３４〜３６のアミノ酸配列を含む（該ＶＨＣＤＲまたはＶＬＣＤＲアミノ酸配列のうちの少なくとも１つが約１、２、または３つのアミノ酸置換、付加、または欠失により修飾される、それらの変異型を含む）、
（Ｄ）（ｉ）ＶＨＣＤＲ１およびＶＨＣＤＲ２が、それぞれ、配列番号３８〜３９のアミノ酸配列を含み、（ｉｉ）ＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２、およびＶＬＣＤＲ３が、それぞれ、（ｉ）配列番号４２〜４４のアミノ酸配列を含む（該ＶＨＣＤＲまたはＶＬＣＤＲアミノ酸配列のうちの少なくとも１つが約１、２、または３つのアミノ酸置換、付加、または欠失により修飾される、それらの変異型を含む）、
（Ｅ）（ｉ）ＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、およびＶＨＣＤＲ３が、それぞれ、配列番号４６〜４８のアミノ酸配列を含み、（ｉｉ）ＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２、およびＶＬＣＤＲ３が、それぞれ、（ｉ）配列番号５０〜５２のアミノ酸を含む（該ＶＨＣＤＲまたはＶＬＣＤＲアミノ酸配列のうちの少なくとも１つが約１、２、または３つのアミノ酸置換、付加、または欠失により修飾される、それらの変異型を含む）、
（Ｆ）（ｉ）ＶＨＣＤＲ１およびＶＨＣＤＲ２が、それぞれ、配列番号５４〜５５のアミノ酸を含み、（ｉｉ）ＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２、およびＶＬＣＤＲ３が、それぞれ、（ｉ）配列番号５８〜６０のアミノ酸配列を含む（該ＶＨＣＤＲまたはＶＬＣＤＲアミノ酸配列のうちの少なくとも１つが約１、２、または３つのアミノ酸置換、付加、または欠失により修飾される、それらの変異型を含む）、
（Ｇ）（ｉ）ＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、およびＶＨＣＤＲ３が、それぞれ、配列番号６２〜６４のアミノ酸配列を含む（該ＶＨＣＤＲまたはＶＬＣＤＲアミノ酸配列のうちの少なくとも１つが約１、２、または３つのアミノ酸置換、付加、または欠失により修飾される、それらの変異型を含む）、
（Ｈ）（ｉ）ＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、およびＶＨＣＤＲ３が、それぞれ、配列番号７０〜７２のアミノ酸配列を含み、（ｉｉ）ＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２、およびＶＬＣＤＲ３が、それぞれ、（ｉ）配列番号７４〜７６のアミノ酸配列を含む（該ＶＨＣＤＲまたはＶＬＣＤＲアミノ酸配列のうちの少なくとも１つが約１、２、または３つのアミノ酸置換、付加、または欠失により修飾される、それらの変異型を含む）、
（Ｉ）（ｉ）ＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、およびＶＨＣＤＲ３が、それぞれ、配列番号７８〜８０のアミノ酸配列を含み、（ｉｉ）ＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２、およびＶＬＣＤＲ３が、それぞれ、（ｉ）配列番号８２〜８４のアミノ酸配列を含む（該ＶＨＣＤＲまたはＶＬＣＤＲアミノ酸配列のうちの少なくとも１つが約１、２、または３つのアミノ酸置換、付加、または欠失により修飾される、それらの変異型を含む）、
（Ｊ）（ｉ）ＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、およびＶＨＣＤＲ３が、それぞれ、配列番号８６〜８８のアミノ酸配列を含み、（ｉｉ）ＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２、およびＶＬＣＤＲ３が、それぞれ、（ｉ）配列番号９０〜９２のアミノ酸配列を含む（該ＶＨＣＤＲまたはＶＬＣＤＲアミノ酸配列のうちの少なくとも１つが約１、２、または３つのアミノ酸置換、付加、または欠失により修飾される、それらの変異型を含む）、
（Ｋ）（ｉ）ＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２、およびＶＬＣＤＲ３が、それぞれ、（ｉ）配列番号９８〜１００のアミノ酸配列を含む（該ＶＨＣＤＲまたはＶＬＣＤＲアミノ酸配列のうちの少なくとも１つが約１、２、または３つのアミノ酸置換、付加、または欠失により修飾される、それらの変異型を含む）、ならびに
（Ｌ）（ｉ）ＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２、およびＶＬＣＤＲ３が、それぞれ、（ｉ）配列番号１０６〜１０８のアミノ酸配列を含む（該ＶＨＣＤＲまたはＶＬＣＤＲアミノ酸配列のうちの少なくとも１つが約１、２、または３つのアミノ酸置換、付加、または欠失により修飾される、それらの変異型を含む）、から選択される。
【００１６】
ある特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、配列番号１３、２１、２９、３７、４５、５３、６１、６９、７７、または８５に少なくとも９０％同一であるＶＨ配列を含む。
【００１７】
ある特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、配列番号１７、２５、３３、４１、４９、５７、７３、８１、８９、９７、または１０５に少なくとも９０％同一であるＶＬ配列を含む。
【００１８】
いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、配列番号１３、２１、２９、３７、４５、５３、６１、６９、７７、または８５に少なくとも９０％同一であるＶＨ配列、および配列番号１７、２５、３３、４１、４９、５７、７３、８１、８９、９７、または１０５に少なくとも９０％同一であるＶＬ配列を含む。
【００１９】
特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、
（Ａ）配列番号１３のＶＨ配列および配列番号１７のＶＬ配列、
（Ｂ）配列番号２１のＶＨ配列および配列番号２５のＶＬ配列、
（Ｃ）配列番号２９のＶＨ配列および配列番号３３のＶＬ配列、
（Ｄ）配列番号３７のＶＨ配列および配列番号４１のＶＬ配列、
（Ｅ）配列番号４５のＶＨ配列および配列番号４９のＶＬ配列、
（Ｆ）配列番号５３のＶＨ配列および配列番号５７のＶＬ配列、
（Ｇ）配列番号６９のＶＨ配列および配列番号７３のＶＬ配列、
（Ｈ）配列番号７７のＶＨ配列および配列番号８１のＶＬ配列、
（Ｉ）配列番号８５のＶＨ配列および配列番号８９のＶＬ配列、ならびに
（Ｊ）（Ａ）〜（Ｉ）のいずれかに少なくとも９０％同一である変異型ＶＨ配列および変異型ＶＬ配列、から選択されるＶＨ配列およびＶＬ配列を含む。
【００２０】
本明細書に記載される抗体またはその抗原結合断片をコードするポリヌクレオチド、かかるポリヌクレオチドを含むベクター、ならびにポリヌクレオチドおよび／もしくはベクターを含み、任意選択でそれらを発現する宿主細胞もまた含まれる。
【００２１】
細胞を、（ａ）Ｌ型電位開口型カルシウムチャネルのα１サブユニットのドメイン１の膜貫通部位Ｓ５およびＳ６間のポアループの細胞外ドメインのアミノ酸配列に特異的に結合するか、または（ｂ）（ａ）のα１サブユニットへの結合を競合的に阻害する、抗体またはその抗原結合断片と接触させることを含み、このα１サブユニットへの薬剤の結合が、Ｌ型電位開口型カルシウムチャネルの活性を調節する、Ｌ型電位開口型カルシウムチャネルを発現する細胞の機能の調節方法もまた含まれる。
【００２２】
ある特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、本明細書に記載される抗体または結合断片である。ある特定の実施形態では、細胞は造血細胞である。ある特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、Ｌ型電位開口型カルシウムチャネルの活性を阻害する。ある特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、Ｌ型電位開口型カルシウムチャネルの活性を増加させる。ある特定の実施形態では、細胞はリンパ球系列の造血細胞である。
【００２３】
ある特定の実施形態では、細胞はＴ細胞である。ある特定の実施形態では、細胞の機能は、Ｔ細胞成熟を含む。ある特定の実施形態では、細胞の機能は、抗原結合を含む。
【００２４】
ある特定の実施形態では、細胞はＢ細胞である。ある特定の実施形態では、細胞の機能は、Ｂ細胞成熟を含む。ある特定の実施形態では、細胞の機能は、Ｂ細胞受容体誘導活性化を含む。
【００２５】
ある特定の実施形態では、Ｌ型電位開口型カルシウムチャネルはＣａｖ１．４である。ある特定の実施形態では、Ｌ型電位開口型カルシウムチャネルはＣａｖ１．３である。ある特定の実施形態では、Ｌ型電位開口型カルシウムチャネルはＣａｖ１．２である。ある特定の実施形態では、Ｌ型電位開口型カルシウムチャネルはＣａｖ１．１である。
【００２６】
いくつかの実施形態は、（ａ）Ｌ型電位開口型カルシウムチャネルのα１サブユニットのドメイン１の膜貫通部位Ｓ５およびＳ６間のポアループの細胞外ドメインのアミノ酸配列に特異的に結合するか、または（ｂ）（ａ）のα１サブユニットへの結合を競合的に阻害する、有効量の抗体またはその抗原結合断片を対象に投与することを含み、このＬ型電位開口型カルシウムチャネルが造血細胞において発現される、対象における免疫応答の調節方法に関する。
【００２７】
ある特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、本明細書に記載される抗体またはその結合断片である。ある特定の実施形態では、造血細胞はリンパ球系列のものである。ある特定の実施形態では、造血細胞は、Ｔ細胞またはＢ細胞である。
【００２８】
ある特定の実施形態では、Ｌ型電位開口型カルシウムチャネルはＣａｖ１．４である。ある特定の実施形態では、Ｌ型電位開口型カルシウムチャネルはＣａｖ１．３である。ある特定の実施形態では、Ｌ型電位開口型カルシウムチャネルはＣａｖ１．２である。ある特定の実施形態では、Ｌ型電位開口型カルシウムチャネルはＣａｖ１．１である。
【００２９】
（ａ）Ｌ型電位開口型カルシウムチャネルのα１サブユニットのドメイン１の膜貫通部位Ｓ５およびＳ６間のポアループの細胞外ドメインのアミノ酸配列に特異的に結合するか、または（ｂ）（ａ）のα１サブユニットへの結合を競合的に阻害する、有効量の抗体またはその抗原結合断片を対象に投与することを含み、このＬ型電位開口型カルシウムチャネルが造血細胞において発現される、対象における免疫応答の阻害方法もまた含まれる。
【００３０】
ある特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、本明細書に記載される抗体またはその結合断片である。ある特定の実施形態では、造血細胞はリンパ球系列のものである。ある特定の実施形態では、造血細胞はＴ細胞である。ある特定の実施形態では、有効量の抗体またはその抗原結合断片の投与は、Ｔ細胞受容体誘導Ｃａ２＋流動を減少させる。ある特定の実施形態では、有効量の抗体またはその抗原結合断片の投与は、ナイーブＴ細胞の生存を低減する。
【００３１】
ある特定の実施形態では、有効量の抗体または抗原結合断片の投与は、ＣＤ３／ＣＤ２８誘導Ｔ細胞増殖を低減する。ある特定の実施形態では、造血細胞はＢ細胞である。
【００３２】
ある特定の実施形態では、有効量の抗体または抗原結合断片の投与は、Ｂ細胞受容体誘導活性化を阻害する。
【００３３】
ある特定の実施形態では、Ｌ型電位開口型カルシウムチャネルはＣａｖ１．４である。ある特定の実施形態では、Ｌ型電位開口型カルシウムチャネルはＣａｖ１．３である。ある特定の実施形態では、Ｌ型電位開口型カルシウムチャネルはＣａｖ１．２である。ある特定の実施形態では、Ｌ型電位開口型カルシウムチャネルはＣａｖ１．１である。
【００３４】
（ａ）Ｌ型電位開口型カルシウムチャネルのα１サブユニットのドメイン１の膜貫通部位Ｓ５およびＳ６間のポアループの細胞外ドメインのアミノ酸配列に特異的に結合するか、または（ｂ）（ａ）のα１サブユニットへの結合を競合的に阻害する、有効量の抗体またはその抗原結合断片を対象に投与することを含む、対象における疾患の治療方法もまた含まれる。
【００３５】
ある特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、本明細書に記載される抗体またはその結合断片である。
【００３６】
いくつかの実施形態では、疾患は炎症疾患である。特定の実施形態では、炎症疾患は、Ｘ連鎖無ガンマグロブリン血症、全身性エリテマトーデス、炎症性（リウマチ）関節炎、橋本甲状腺炎、悪性貧血、炎症性腸疾患（クローン病および潰瘍性大腸炎）、乾癬、腎線維症、肺線維症、肝線維症、アジソン病、Ｉ型糖尿病、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、皮膚筋炎、シェーグレン症候群、多発性硬化症、重症筋無力症、ライター症候群、喘息、またはグレーブス病である。
【００３７】
いくつかの実施形態では、疾患は癌である。ある特定の実施形態では、癌は造血器癌である。いくつかの実施形態において、造血器癌は、リンパ腫、白血病、または多発性骨髄腫である。
【００３８】
特定の実施形態では、リンパ腫は、Ｔ細胞リンパ腫、Ｂ細胞リンパ腫、小リンパ球性リンパ腫、マングル（ｍａｎｇｌｅ）細胞リンパ腫、未分化大細胞リンパ腫（ＡＬＣＬ）、濾胞性リンパ腫、ホジキンリンパ腫、または非ホジキンリンパ腫である。いくつかの実施形態では、白血病は、慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）、有毛細胞白血病、急性リンパ芽球性白血病、骨髄性白血病、急性骨髄もしくは骨髄性白血病、または慢性骨髄性白血病である。
【００３９】
いくつかの実施形態において、癌は、乳癌、子宮頸癌、前立腺癌、消化器癌、肺癌、卵巣癌、精巣癌、頭頸部癌、膀胱癌、腎癌（例えば、腎細胞癌）、軟部組織肉腫、扁平上皮癌、ＣＮＳまたは脳癌、黒色腫、非黒色腫癌、甲状腺癌、子宮内膜癌、上皮性腫瘍、および骨癌のうちの１つ以上から選択される。
【００４０】
いくつかの実施形態では、癌（細胞）は、Ｃａｖ１．１、Ｃａｖ１．２、Ｃａｖ１．３、Ｃａｖ１．４、またはこれらの任意の組み合わせを発現または過剰発現する。特定の実施形態では、癌はＣａｖ１．１を発現または過剰発現し、抗体またはその抗原結合断片はＣａｖ１．１に特異的に結合する。ある特定の実施形態では、癌はＣａｖ１．２を発現または過剰発現し、抗体またはその抗原結合断片はＣａｖ１．２に特異的に結合する。いくつかの実施形態では、癌はＣａｖ１．３を発現または過剰発現し、抗体またはその抗原結合断片はＣａｖ１．３に特異的に結合する。特定の実施形態では、癌はＣａｖ１．４を発現または過剰発現し、抗体またはその抗原結合断片はＣａｖ１．４に特異的に結合する。
【発明を実施するための形態】
【００４１】
別途定義されない限り、本明細書で使用される全ての技術用語および科学用語は、本発明が属する分野の当業者によって一般的に理解されるものと同じ意味を有する。本明細書に記載するものと類似または同等の任意の方法および材料を、本発明の実施または試験に使用することができるが、好ましい方法および材料が記載される。本発明の目的のために、以下の用語が下記で定義される。本明細書に列挙される全ての特許および非特許参考文献は、参照によりそれらの全体が本明細書に組み込まれる。
【００４２】
冠詞「ａ」および「ａｎ」は、その冠詞の文法上の対象のうちの１つまたは１つより多く（すなわち、少なくとも１つ）を指すために本明細書で使用される。例として、「要素（ａｎ  ｅｌｅｍｅｎｔ）」は、１つの要素または１つより多くの要素を意味する。
【００４３】
「約」は、基準となる数量、レベル、値、数、頻度、パーセンテージ、寸法、サイズ、量、重量、または長さと３０、２５、２０、１５、１０、９、８、７、６、５、４、３、２、または１％だけ異なる数量、レベル、値、数、頻度、パーセンテージ、寸法、サイズ、量、重量、または長さを意味する。
【００４４】
本明細書で使用される場合、「アミノ酸」という用語は、天然型アミノ酸、および非天然型アミノ酸の両方、ならびにアミノ酸類似体および模倣体を意味することが意図される。天然型アミノ酸は、タンパク質生合成中に利用される２０の（Ｌ）−アミノ酸、ならびに例えば、４−ヒドロキシプロリン、ヒドロキシリジン、デスモシン、イソデスモシン、ホモシステイン、シトルリン、およびオルニチンなどのその他を含む。非天然型アミノ酸は、例えば、（Ｄ）−アミノ酸、ノルロイシン、ノルバリン、ｐ−フルオロフェニルアラニン、エチオニンなどを含み、これらは当業者に知られている。アミノ酸類似体は、天然型および非天然型アミノ酸の修飾形態を含む。かかる修飾は、例えば、アミノ酸上の化学基および部分の置換もしくは置き換え、またはアミノ酸の誘導体化を含み得る。アミノ酸模倣体は、例えば、基準となるアミノ酸の電荷および電荷空間特徴など、機能的に類似する特性を呈する有機構造を含む。例えば、アルギニン（ＡｒｇまたはＲ）を模倣する有機構造は、類似する分子空間に位置し、天然型Ａｒｇアミノ酸の側鎖のε−アミノ基と同程度の移動度を有する正電荷部分を有するだろう。模倣体は、アミノ酸またはアミノ酸官能基の最適な空間および電荷相互作用を維持するように制限された構造もまた含まれる。当業者は、機能的に等しいアミノ酸類似体およびアミノ酸模倣体を構成する構造が何であるかを理解しているか、またはそれを決定することができる。
【００４５】
本明細書を通して、文脈上、別途要求されない限り、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅ）」、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ）」、および「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」という語は、記載されるステップもしくは要素、またはステップもしくは要素の群の包含を暗示するが、いずれか他のステップもしくは要素、またはステップもしくは要素の群の除外を暗示するものではない。「〜からなる」は、「〜からなる」という句の後に続くものを含み、それに限定されることを意味する。よって、「〜からなる」という句は、列挙される要素が必要または必須であり、他の要素が存在してはならないことを示す。「〜から本質的になる」は、その句の後に列挙されるあらゆる要素を含み、列挙される要素に関して本開示中に特定される活性または作用に干渉しないかまたは寄与しない他の要素に限定されることを意味する。よって、「〜から本質的になる」という句は、列挙される要素は必要または必須であるが、他の要素は任意選択的であり、列挙される要素の活性または作用に実質的に影響を及ぼすかどうかに依存して、存在してもしなくてもよいことを示す。
【００４６】
「生物学的試料」という用語は、対象から回収し、生物学的状態の診断または監視に関して使用することができる生物学的材料を含む。生物学的試料は、体腔液、尿液、脳脊髄液、血液、および生物学的起源の他の液体試料などの体液試料、ならびに生検試料、腫瘍、または疑わしい腫瘍試料、および生物学的起源の他の固体試料などの組織試料を含む、臨床試料を含み得る。生物学的試料は、試薬による処理、培養、可溶化、ある特定の生物学的成分、培養物、またはそれに由来する細胞の濃縮、およびそれらの後代などにより、それらの回収後に何らかの方法で操作されるものも含み得る。
【００４７】
「抱合体」という用語は、薬剤または他の分子の、例えば、検出可能な実体、生物学的に活性な分子、ＰＥＧ、または他のポリマーの、本明細書に記載される抗体への共有結合もしくは非共有結合による結合、または連結の結果として形成された実体を含む。
【００４８】
「対照対象」または「対照組織」などの「対照」は、例えば、病的でない、または疾患を有していない健康な対象または健康な組織試料を含む。ある特定の実施形態では、対照は、異なる健康な対象、または試験もしくは診断された同じ対象からの疾患を有していない組織を含む。対照は、基準となる標準的な、例えば、１つ以上の健康な対象または組織から生成された標準的な値も含み得る。
【００４９】
本明細書で使用される場合、「機能」および「機能的な」などの用語は、生物学的、酵素的、または治療的機能を指す。
【００５０】
「有効量」は、有益または所望の結果をもたらすのに十分な量である。例えば、治療量は、所望の治療効果を達成するものである。この量は、疾患または疾患の症状の開始を阻止するのに必要な量である、予防的有効量と同じまたは異なり得る。有効量は、１回以上の投与、適用、または投薬量で投与され得る。組成物の治療有効量は、選択された組成物に依存する。組成物は、１日に１回以上から１週間に１回以上で投与され得、２日に１回を含む。当業者は、限定されないが、疾患もしくは障害の重症度、以前の治療、対象の一般的な健康状態、および／または年齢、ならびに存在する他の疾患を含む、ある特定の要因が、対象を効果的に治療するために必要とされる投薬量およびタイミングに影響を及ぼし得ることを理解するだろう。更に、本発明の治療有効量の組成物で対象を治療することは、単一治療または一連の治療を含み得る。
【００５１】
「相同性」は、同一であるか、または保存的置換を構成するアミノ酸のパーセント数を指す。相同性は、ＧＡＰなどの配列比較プログラムを使用して決定され得る（Ｄｅｖｅｒａｕｘ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ．１２，３８７−３９５，１９８４）（参照により本明細書により組み込まれる）。このようにして、本明細書に引用されるものに対して類似するまたは実質的に異なる長さの配列はギャップをアライメントに挿入することにより比較され得、かかるギャップは、例えば、ＧＡＰにより使用される比較アルゴリズムにより決定される。
【００５２】
「単離された」とは、その本来の状態においてそれに通常付随する構成成分を実質的にまたは本質的に含まない材料を意味する。例えば、「単離されたペプチド」または「単離されたポリペプチド」などは、本明細書で使用される場合、その天然の細胞環境から、およびその細胞の他の構成成分との会合からのペプチドまたはポリペプチド分子のインビトロ単離および／または精製を含む、すなわち、インビトロ物質と顕著に会合しない。特定の実施形態では、単離されたポリペプチドは抗体である。
【００５３】
「減少した」または「低減された」量は典型的に、「統計的に有意な」量であり、対照に対して、例えば、５％、６％、７％、８％、９％、１０％、１１％、１２％、１３％、１４％、１５％、１６％、１７％、１８％、１９％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、または１００％（それらの間の全ての整数および範囲を含む）の減少を含み得る。比較および「統計的に有意な」量の他の例が本明細書に記載されている。本明細書で使用される場合、「減少する」は、「阻害する」、「低減する」、「抑制する」、「寛解する」、「軽減する」、「縮小する」、「低下させる」、または「弱める」を指し得る。
【００５４】
「増加した」または「強化された」量は典型的に、「統計的に有意な」量であり、例えば、５％、６％、７％、８％、９％、１０％、１１％、１２％、１３％、１４％、１５％、１６％、１７％、１８％、１９％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、または１００％の増加を含み得る。増加したまたは強化された量は、対照に対して、２倍、３倍、４倍、５倍、６倍、７倍、８倍、９倍、１０倍、２０倍、３０倍、４０倍、５０倍、６０倍、７０倍、８０倍、９０倍、１００倍、２００倍、３００倍、４００倍、５００倍、１，０００倍、１０，０００倍、または１０，０００倍超（それらの間の全ての整数および範囲を含む）の増加もまた含まれる。比較および「統計的に有意な」量の他の例が本明細書に記載されている。本明細書で使用される場合、「増加する」は、「作動させる」、「強化する」、「膨張させる」、「増大する」、「拡張する」、「増強する」、「拡大する」、または「上昇させる」を指し得る。
【００５５】
ある特定の実施形態において、組成物中の任意の所要の薬剤（例えば、抗体）の「純度」は、具体的に定義され得る。例えば、ある特定の組成物は、例えば、決して限定するものではないが、化合物を分離、同定、および定量するために生化学および分析化学において頻繁に使用される周知の形態のカラムクロマトグラフィーである、高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）によって測定した場合、少なくとも８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％（これらの間の全ての小数点を含む）純粋な薬剤を含んでもよい。
【００５６】
「ポリペプチド」および「タンパク質」という用語は、本明細書において、アミノ酸残基のポリマーならびにその変異型および合成類似体を指すように交換可能に使用される。よって、これらの用語は、１つ以上のアミノ酸残基が、合成の非天然型アミノ酸、例えば、対応する天然型アミノ酸の化学類似体などであるアミノ酸ポリマー、ならびに天然型アミノ酸ポリマーに適用される。本明細書に記載されるポリペプチドは、特定の長さの産物に限定されず、よって、ペプチド、オリゴペプチド、およびタンパク質は、ポリペプチドの定義内に含まれ、かかる用語は、特に別途指定されない限り、本明細書において交換可能に使用され得る。本明細書に記載されるポリペプチドは、天然型、および非天然型両方の、グリコシル化、アセチル化、リン酸化などの発現後修飾、ならびに当該技術分野において既知の他の修飾も含み得る。ポリペプチドは、タンパク質全体、またはそのサブ配列、断片、変異型、もしくは誘導体であり得る。
【００５７】
「基準となる配列」という用語は一般的に、別の配列が比較される核酸コード配列またはアミノ酸配列を指す。本明細書に記載される全てのポリペプチドおよびポリヌクレオチド配列は、名称で記載されるもの、ならびに表および配列表に記載されるものを含む、基準となる配列として含まれる。
【００５８】
本明細書で使用される場合、「配列同一性」、または例えば、「に５０％同一の配列」を含む用語は、配列が比較枠にわたってヌクレオチド単位ベースでまたはアミノ酸単位ベースで同一である程度を指す。よって、「配列同一性のパーセント」は、比較枠にわたって２つの最適にアライメントされた配列を比較し、同一の核酸塩基（例えば、Ａ、Ｔ、Ｃ、Ｇ、Ｉ）または同一のアミノ酸残基（例えば、Ａｌａ、Ｐｒｏ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｇｌｙ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ｈｉｓ、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ｃｙｓ、およびＭｅｔ）が両配列に生じ、一致した位置の数をもたらす位置の数を決定し、一致した位置の数を比較枠（すなわち、枠のサイズ）内の合計位置数で除し、結果を１００で乗じて配列同一性のパーセントを得ることにより計算され得る。典型的に、ポリペプチド変異型が基準となるポリペプチドの少なくとも１つの生物学的活性を維持する、本明細書に記載される基準となる配列（例えば、配列表を参照されたい）のいずれかに少なくとも約５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９７％、９８％、９９％、または１００％配列同一性を有するヌクレオチドおよびポリペプチドを含む。
【００５９】
２つ以上のポリヌクレオチドまたはポリペプチド間の配列関係を記載するために使用される用語は、「基準となる配列」、「比較枠」、「配列同一性」、「配列同一性のパーセント」、および「実質的な同一性」を含む。「基準となる配列」は、少なくとも１２であるが、頻繁に１５〜１８、多くの場合少なくとも２５モノマー単位の長さのヌクレオチドおよびアミノ酸残基である。２つのポリヌクレオチドは、各々、（１）２つのポリヌクレオチド間で類似する配列（すなわち、完全なポリヌクレオチド配列の一部のみ）、および（２）２つのポリヌクレオチド間で異なる配列を含み得るため、２つ（以上）のポリヌクレオチド間の配列比較は典型的に、「比較枠」にわたって２つのポリヌクレオチドの配列を比較して、配列類似性を同定し、局所領域を比較することによって行われる。「比較枠」は、２つの配列が最適にアライメントされた後に、配列が同数の近接位置の基準となる配列と比較される、少なくとも６つの近接位置、一般的には約５０〜約１００、より一般的には約１００〜約１５０の概念的部位を指す。比較枠は、２つの配列の最適なアライメントに関して、基準となる配列（付加または欠失を含まない）と比較されたとき、約２０％以下の付加または欠失（すなわち、ギャップ）を含み得る。比較枠をアライメントするための配列の最適なアライメントは、コンピュータ化されたアルゴリズムの実装により（Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ  Ｓｏｆｔｗａｒｅ  Ｐａｃｋａｇｅ  Ｒｅｌｅａｓｅ  ７．０，Ｇｅｎｅｔｉｃｓ  Ｃｏｍｐｕｔｅｒ  Ｇｒｏｕｐ，５７５  Ｓｃｉｅｎｃｅ  Ｄｒｉｖｅ  Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩ，ＵＳＡのＧＡＰ、ＢＥＳＴＦＩＴ、ＦＡＳＴＡ、およびＴＦＡＳＴＡ）、または選択された様々な方法のいずれかによる検査およびそれにより生成された最適なアライメント（すなわち、比較枠にわたって最高パーセントの相同性をもたらす）により行うことができる。例えば、Ａｌｔｓｃｈｕｌ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．２５：３３８９，１９９７により開示されるように、ＢＬＡＳＴファミリーのプログラムも参照されたい。配列分析の詳細な考察は、Ｕｎｉｔ  １９．３  ｏｆ  Ａｕｓｕｂｅｌ  ｅｔ  ａｌ．，“Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，”Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ  Ｉｎｃ，１９９４−１９９８，Ｃｈａｐｔｅｒ  １５に見出すことができる。
【００６０】
「有意」または「統計的に有意」とは、その結果が偶然に起こったものである可能性が低いことを意味する。統計的有意性は、当該技術分野で既知の任意の方法によって決定することができる。一般的に用いられる有意性の尺度はｐ値を含むが、これは、帰無仮説が真である場合に、観察される事象が起こるであろう頻度または確率である。得られたｐ値が有意水準より低い場合、帰無仮説が棄却される。単純な場合において、有意水準は０．０５以下のｐ値で定義される。
【００６１】
「溶解度」という用語は、液体溶媒に溶解し、均一な溶剤を形成する、本明細書に記載される抗体の特性を指す。溶解度は典型的に、溶媒の単位体積当たりの溶質の質量（溶媒のｋｇ当たりのｇ、ｄＬ（１００ｍＬ）当たり、ｍｇ／ｍＬ等当たりのｇ）、容積モル濃度、重量モル濃度、モル分率、または他の類似する濃度説明のいずれかにより、濃度として表される。溶媒の量当たりに溶解し得る溶質の最大平衡量は、温度、圧力、ｐＨ、および溶媒の性質を含む、指定の条件下でのその溶媒におけるその溶質の溶解度である。ある特定の実施形態では、溶解度は、生理学的ｐＨ、または他のｐＨ、例えば、ｐＨ５．０、ｐＨ６．０、ｐＨ７．０、またはｐＨ７．４で測定される。ある特定の実施形態では、溶解度は、水、またはＰＢＳもしくはＮａＣｌ（ＮａＰを含む、または含まない）などの生理学的緩衝剤において測定される。特定の実施形態では、溶解度は、比較的低いｐＨ（例えば、ｐＨ６．０）、および比較的高い塩（例えば、５００ｍＭ  ＮａＣｌおよび１０ｍＭ  ＮａＰ）で測定される。ある特定の実施形態では、溶解度は、血液または血清などの生物学的流体（溶媒）において測定される。ある特定の実施形態では、温度は、およそ室温（例えば、約２０、２１、２２、２３、２４、２５℃）、またはおよそ体温（約３７℃）であり得る。ある特定の実施形態では、抗体は、室温で、または約３７℃で、少なくとも約０．１、０．２、０．３、０．４、０．５、０．６、０．７、０．８、０．９、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２５、もしくは３０ｍｇ／ｍＬの溶解度を有する。
【００６２】
「対象」は、本明細書で使用される場合、本明細書に記載の抗体で診断することができる、症状もしくは状態を呈するか、あるいは症状もしくは状態を呈するリスクがあるまたは症状もしくは状態を呈することが疑われる、任意の動物を含む。好適な対象（患者）は、実験動物（マウス、ラット、ウサギ、もしくはモルモット等）、家畜、および家庭動物またはペット（ネコもしくはイヌ等）を含む。非ヒト霊長類、および好ましくはヒト患者が含まれる。
【００６３】
本明細書で使用される場合、「対象亜集団」または「患者亜集団」は、対象または患者のサブセットを、それが属するより広い疾患カテゴリー（例えば、癌）において他と区別する１つ以上の特有の測定可能かつ／もしくは同定可能な特徴を有すると特徴付けされる対象または患者のサブセットを含む。かかる特徴は、疾患の下位カテゴリー、性別、ライフスタイル、健康歴、関与する臓器／組織、治療歴等を含む。いくつかの実施形態では、患者または対象の亜集団は、生物学的試料、例えば、腫瘍試料における（例えば、低減した）量またはレベルのＬ型電位開口型カルシウムチャネルα１サブユニットポリペプチドを特徴とする。
【００６４】
「実質的に」または「本質的に」は、ほぼ全体的にまたは完全に、を意味し、例えば、ある所与の量の９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上を意味する。
【００６５】
「実質的に含まない」は、所与の量がほぼ完全にまたは完全に存在しないこと、例えば、ある所与の量の約１０％、５％、４％、３％、２％、１％、０．５％以下であることを指す。例えば、ある特定の組成物は、細胞タンパク質、膜、核酸、内毒素、または他の汚染物質を「実質的に含まない」場合がある。
【００６６】
「治療」または「治療すること」は、本明細書で使用される場合、症状または病態または状態に対する任意の望ましい効果を含み、治療されている疾患または状態の１つ以上の測定可能なマーカーにおけるわずかな変化または改善さえも含み得る。「治療」または「治療すること」は、必ずしも、疾患もしくは状態、またはその関連症状の完全な根絶もしくは治癒を示すものではない。この治療を受けている対象は、それを必要とする任意の対象である。臨床的改善の例示的マーカーは、当業者には明らかであろう。
【００６７】
「野生型」という用語は、天然型供給源から単離されたときにその遺伝子または遺伝子産物の特徴を有する遺伝子または遺伝子産物を指す。野生型遺伝子または遺伝子産物（例えば、ポリペプチド）は、ある集団において最も頻繁に観察され、よって、その遺伝子の「通常」または「野生型」形態と独断的に設計されるものである。
【００６８】
Ｌ型電位開口型カルシウムチャネル
電位開口型カルシウムチャネルは、膜の脱分極に応答してカルシウム流入を媒介し、多くの異なる細胞型における収縮、分泌、神経伝達、および遺伝子発現などの細胞内プロセスを調節する。電位開口型カルシウムチャネルは、細胞における生理学的プロセスに、細胞表面で膜電位を変更する電気的事象を結合する。電位開口型カルシウムチャネルは、電位開口型カリウムおよびナトリウムチャネルを含む膜貫通イオンチャネルタンパク質の遺伝子スーパーファミリーのメンバーである。
【００６９】
異なる細胞型で記録されたカルシウム電流は、異なる生理学的および薬理学的特性を有し、そのため、電位開口型カルシウムチャネルは、それらのそれぞれの電流の特性に基づいて分類される。一般に、Ｌ型電位開口型カルシウムチャネルは、強い脱分極に応答して開口し、長く持続するカルシウム電流を産生する。Ｌ型電位開口型カルシウムチャネルは、ジヒドロピリジン、フェニルアルキルアミン、およびベンゾチアゼピンを含む有機Ｌ型カルシウムチャネルアンタゴニストにより遮断される。Ｌ型電位開口型カルシウムチャネルは、筋肉および内分泌細胞が収縮および分泌を開始するそれらの細胞において記録される主なカルシウム電流を生成する。低電位で活性化するＬ型電流は、主に神経および心臓ペースマーカー細胞にも存在する。Ｌ型電位開口型カルシウムチャネルは、Ｔ細胞およびＢ細胞などの造血細胞を含む興奮性と考えられない細胞においても発現される。
【００７０】
Ｌ型電位開口型カルシウムチャネルは、複数の遺伝子によってコードされる４または５つの別個のサブユニットで構成される複合タンパク質である。１９０〜２５０ｋＤａのα１サブユニットは最も大きいサブユニットであり、透過孔、電位センサおよび開口装置チャネル、ならびに二次メッセンジャー、薬物、および毒素によるチャネル調節の既知の部位の大半を組み込む。特定のＬ型電位開口型チャネルは、それが含有するα１サブユニットからその名称（すなわち、Ｃａｖ１．４）を取る。ナトリウムチャネルのαサブユニット同様、電位開口型カルシウムチャネルのα１サブユニットは、各々に６つの膜貫通部位（Ｓ１〜Ｓ６）を有する、モチーフとも呼ばれる４つの相同ドメイン（Ｉ〜ＩＶ）に組織化される。各ドメインの膜貫通部位は、それらがＮ末端からＣ末端に配置される順番で番付される。
【００７１】
α１サブユニットは電位開口型カルシウムチャネルタンパク質のチャネル構造を形成する。カルシウムチャネルのポアは４つのドメインの疑対称配置の中心で形成され、各ドメインのＳ５およびＳ６間のポアループはチャネルの狭い細胞外端部を形成する。これらのポアループはイオン透過（ｉｏｎ  ｃｏｎｄｕｃｔａｎｃｅ）および選択性を決定し、ドメインＩ、ＩＩＩ、およびＩＶのポアループの３つの特定のアミノ酸のみの変化がカルシウムイオンからナトリウムイオンにチャネルの選択性を変換する。各ドメインのＳ４部位はチャネルの電位センサとして機能する。細胞内βサブユニットおよび膜貫通ジスルフィド結合α２βサブユニット複合体は、カルシウムチャネルの大半のタイプの構成成分である。γサブユニットは骨格筋カルシウムチャネルにも見られ、関連するサブユニットは心臓および脳において発現される。これらの補助サブユニットはチャネル複合体の特性を調節するが、カルシウムチャネルの薬理学的および電気生理学的多様性は主にα１サブユニットから生じる。
【００７２】
電位開口型カルシウムチャネルの開口および閉鎖は主に、膜を横断して電荷を移動させ、ポアを開口および閉鎖する構造変化を駆動する膜電位の変化により開閉される。正に荷電したＳ４部位は、開閉の「スライディングヘリックス」および「ヘリカルスクリュー」モデルに提案されるように（Ｃａｔｔｅｒａｌｌ  ｅｔ  ａｌ，（２００７）Ｔｏｘｉｃｏｌ．４９（２），ｐｐ１２４−１４１に概説される）、開閉プロセス中にタンパク質構造を通して外向きおよび回転移動を受けると考えられる。この構造は、ポアがその細胞内端部で閉鎖され、その細胞外端部で狭いイオン選択性フィルタでイオンを識別することを示唆する。
【００７３】
Ｌ型電位開口型カルシウムチャネルは、興奮性であると考えられる細胞集団に見られる。興奮性細胞は、特定の刺激が全体的に細胞全体を通して、または局所的に細胞の領域において膜電位の変化を引き起こすことができる細胞である。カルシウムチャネルは、膜電位の変化を調節するように機能することができる。加えて、カルシウムチャネルが開口するときに細胞質に入るカルシウムイオンは、脱分極事象後に細胞プロセスを調節し続けることができる二次メッセンジャーとして作用することができる。Ｌ型電位カルシウムチャネルの発現は、興奮性であると考えられない細胞においても見られる。
【００７４】
Ｌ型電位開口型カルシウムチャネルの少なくとも４つのサブタイプが記載されてきた。これらのサブタイプは、各々、別個の遺伝子によりコードされる、それらが含有するα１サブユニットによって分類される。Ｃａｖ１．４をコードする遺伝子はＣＡＣＮＡ１Ｆである。高レベルのＣａｖ１．４は、網膜、脾臓、胸腺、および骨髄に見られる。Ｃａｖ１．３はＣＡＣＮＡ１Ｄによりコードされ、脳、膵臓、腎臓、卵巣、および蝸牛に見られる。Ｃａｖ１．２はＣＡＣＮＡ１Ｃによりコードされ、心臓、平滑筋、脳、下垂体、および副腎において高い発現を示す。Ｃａｖ１．１はＣＡＣＮＡ１Ｓによりコードされ、骨格筋において高いレベルの発現を有する。
【００７５】
マウスおよびヒトの研究からのデータは、Ｌ型電位開口型カルシウムチャネルサブタイプが免疫細胞において見られることを示す（Ｒｅｖｉｅｗｅｄ  ｉｎ  Ｏｍｉｌｕｓｉｋ  ｅｔ  ａｌ（２０１３）Ｆｒｏｎｔｉｅｒｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，ｖｏｌ  ４：１６４）。Ｃａｖ１．４の発現は、ヒトＪｕｒｋａｔ  Ｔ細胞系、ならびにヒトおよびラットの脾臓および胸腺、ならびにヒトおよびマウスのＴ細胞において観察されている。Ｃａｖ１．３の発現は、ヒトＪｕｒｋａｔ  Ｔ細胞系およびマウスＴ細胞において観察されている。Ｃａｖ１．２の発現は、ヒト末梢血Ｔ細胞、ならびにヒトＪｕｒｋａｔ、ＭＯＬＴ−４、およびＣＥＭ  Ｔ細胞系において観察されている。Ｃａｖ１．２は、マウスＴ細胞においても報告されている。Ｃａｖ１．１は、マウスＴ細胞において観察されている。これらのサブタイプの発現プロファイルは、Ｌ型電位開口型カルシウムチャネルが免疫細胞におけるカルシウムシグナル伝達の調節に関与することを示唆する。
【００７６】
抗体
ある特定の実施形態は、１つ以上の近接しているまたは近接していない断片またはそのエピトープに特異的に結合するものを含む、１つ以上のＬ型電位開口型カルシウムチャネルのヒトまたはマウスのα１サブユニットに特異的に結合する単離された抗体に関する。いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、Ｌ型電位開口型カルシウムチャネルα１サブユニットの細胞外ドメインに特異的に結合する。特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、Ｌ型電位開口型カルシウムチャネルのα１サブユニットのドメインの部位Ｓ５およびＳ６間のポアループの細胞外ドメインに存在するα１サブユニットのアミノ酸配列に特異的に結合する。いくつかの実施形態では、ポアループは、α１サブユニットのドメインＩに位置する。この領域は、α１サブユニットをコードするメッセンジャーＲＮＡのエキソン７および８によりコードされる。いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、第２の抗体の、電位開口型カルシウムチャネルのα１サブユニットのドメインＩのＳ５およびＳ６間の細胞外ポアループへの結合を阻止する。いくつかの実施形態では、α１サブユニットは、ヒトまたはマウス起源のものであり得る。ある特定の実施形態では、抗体はモノクローナルである。
【００７７】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載される抗体またはその抗原結合断片は、Ｌ型開口型電位カルシウムチャネルの活性を調節する。本明細書で使用される場合、「調節する」は、「変更する」、「修飾する」、「変化させる」、「シフトする」、「変換する」、または「調整する」、ことを指す。変更は、チャネル活性の増加もしくは減少、または両方の組み合わせの形態であり得る。活性の増加および減少の組み合わせを含む活性を変化させる例は、抗体の電位開口型カルシウムチャネルへの結合時にチャネル活性において初期の短期間の増加、続いてチャネル活性において持続的な減少をもたらすであろうインバースアゴニストとして機能する抗体である。
【００７８】
本明細書で使用される場合、Ｌ型電位開口型カルシウムチャネルの「活性」は、チャネルのカルシウム透過（ｃａｌｃｉｕｍ  ｃｏｎｄｕｃｔａｎｃｅ）を指す。Ｌ型電位開口型カルシウムチャネルは、静止膜状態で閉構造にあると考えられる。「閉鎖」は、カルシウム透過がほとんどまたは全くないチャネルの構造を指す。形質膜が脱分極になるとき、チャネルはカルシウム透過を可能にする開構造を取る。膜脱分極後、チャネルは、閉構造に戻る前に、ある時間の間開口したままである。「開口」は、カルシウムイオンがチャネルを通過するのを可能にする構造を指す。Ｌ型電位開口型カルシウムチャネルは、１つ以上の開構造および閉構造を有し得る。いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、電位開口型カルシウムチャネルのα１サブユニットに特異的に結合し、その活性を変化させる。この作用は、例えば、限定されないが、チャネルが開構造または閉構造にある確率を変化させる、チャネルの構造を変化させる膜の脱分極の程度などの状態を変化させる、カルシウムチャネルが開状態もしくは閉状態にとどまる継続時間を変化させる、開状態もしくは閉状態にあるときのチャネルのカルシウム透過を変化させる、またはそれらの任意の組み合わせにより達成され得る。いくつかの実施形態では、Ｌ型電位開口型カルシウムチャネルの活性の阻害は、膜脱分極に応答して開構造を取る確率を低減させる、チャネルを開構造にシフトするのに必要とされる膜脱分極の程度を増加させる、形質膜の脱分極後に開構造にとどまるチャネルの継続時間を減少させる、開状態にあるときのチャネルのカルシウム透過を低減する、またはそれらの任意の組み合わせにより達成される。
【００７９】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載される、抗体またはその抗原結合断片は、Ｌ型電位開口型チャネルの特定のサブタイプのαサブユニットに特異的に結合する。Ｌ型電位開口型カルシウムチャネルのサブタイプは、Ｃａｖ１．４、Ｃａｖ１．３、Ｃａｖ１．２、およびＣａｖ１．１を含む。特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、Ｃａｖ１．４、Ｃａｖ１．３、Ｃａｖ１．２、またはＣａｖ１．１のα１サブユニットの細胞外領域に特異的に結合する。いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、Ｃａｖ１．４、Ｃａｖ１．３、Ｃａｖ１．２、またはＣａｖ１．１α１サブユニットのドメインＩのＳ５およびＳ６間の細胞外ポアループ上に位置するアミノ酸配列に特異的に結合する。特定の実施形態では、アミノ酸配列は、Ｃａｖ１．４のＧＰＧＲＰＧＤＡＰＨＴＧ［配列番号１］であるか、またはＧＰＧＲＰＧＤＡＰＨＴＧ［配列番号１］に少なくとも９０％同一である。いくつかの実施形態では、アミノ酸配列は、Ｃａｖ１．３のＬＴＫＥＴＥＧＧＮＨＳＳＧＫＳＧ［配列番号２］であるか、またはＬＴＫＥＴＥＧＧＮＨＳＳＧＫＳＧ［配列番号２］に少なくとも９０％同一である。いくつかの実施形態では、アミノ酸配列は、Ｃａｖ１．２のＡＴＫＡＤＧＡＮＡＬＧＧＫＧＡ［配列番号３］であるか、またはＣａｖ１．２のＡＴＫＡＤＧＡＮＡＬＧＧＫＧＡ［配列番号３］に少なくとも９０％同一である。特定の実施形態では、アミノ酸配列は、Ｃａｖ１．１のＰＭＱＩＥＬＲＨＲＥＷＶＨ［配列番号４］であるか、またはＰＭＱＩＥＬＲＨＲＥＷＶＨ［配列番号４］に少なくとも９０％同一である。
【００８０】
各Ｌ型電位開口型カルシウムチャネルのサブタイプはいくつかのスプライス変異型を有する。代替えのスプライシングは、タンパク質の複数のイソフォームをコードする単一遺伝子をもたらす遺伝子発現中の調節されたプロセスである。このプロセスにおいて、遺伝子の特定のエキソンは、その遺伝子から産生された最終の処理されたメッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）内に含まれるか、またはそれから除外され得る。結果的に、代替的にスプライスされたｍＲＮＡから翻訳されたタンパク質は、それらのアミノ酸配列に差異を含有する。代替えのスプライシングは、真核生物において正常な現象として生じ、Ｌ型電位開口型サブユニットをコードする遺伝子において記載されている。本明細書で使用される場合、「Ｌ型電位開口型カルシウムチャネル」という用語は、特に指定されない限り、Ｃａｖ１．１、Ｃａｖ１．２、Ｃａｖ１．３、およびＣａｖ１．４、ならびにＣａｖ１．１、Ｃａｖ１．２、Ｃａｖ１．３、およびＣａｖ１．４をコードするｍＲＮＡの代替えのスプライシングから生じるα１サブユニットの全てのイソフォームを含む。
【００８１】
Ｌ型電位開口型カルシウムチャネルのサブタイプは、身体全体を通して異なる細胞型および組織型において発現され、メッセンジャーＲＮＡの代替えのスプライシング、またはグリコシル化もしくはリン酸化などの異なる翻訳後修飾から生じる変異型を含む、異なる変異型として発現され得る。サブタイプの異なる変異型は、異なる組織もしくは細胞型において発現され得るか、または代替的に、サブタイプの異なる変異型は、同じ細胞を含む、同じ組織もしくは細胞型において発現され得る。特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、サブタイプの全ての変異型に特異的に結合する。いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、サブタイプの変異型のサブセットに特異的に結合する。特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、任意の細胞または組織において発現されたサブタイプに特異的に結合する。いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、サブタイプが発現される細胞または組織のサブセットのサブタイプに特異的に結合する。
【００８２】
特定の実施形態では、本明細書に記載される抗体またはその抗原結合断片は、Ｃａｖ１．４、Ｃａｖ１．３、Ｃａｖ１．２、およびＣａｖ１．１のうちのいずれか１つ以上に特異的に結合する。いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、Ｃａｖ１．４、Ｃａｖ１．３、Ｃａｖ１．２、およびＣａｖ１．１のうちのいずれか３つに特異的に結合する。かかる抗体またはその抗原結合断片は、Ｃａｖ１．４、Ｃａｖ１．３、およびＣａｖ１．２；Ｃａｖ１．４、Ｃａｖ１．３、およびＣａｖ１．１；Ｃａｖ１．４、Ｃａｖ１．２、およびＣａｖ１．１：またはＣａｖ１．３、Ｃａｖ１．２、およびＣａｖ１．１のうちのいずれかに特異的に結合し得る。いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、Ｃａｖ１．４、Ｃａｖ１．３、Ｃａｖ１．２、およびＣａｖ１．１のうちのいずれか２つに特異的に結合する。かかる抗体またはその抗原結合断片は、Ｃａｖ１．４およびＣａｖ１．３；Ｃａｖ１．４およびＣａｖ１．２；Ｃａｖ１．４およびＣａｖ１．１：Ｃａｖ１．３およびＣａｖ１．２；Ｃａｖ１．３およびＣａｖ１．１；またはＣａｖ１．２およびＣａｖ１．１のうちのいずれかに特異的に結合し得る。いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、Ｌ型電位開口型カルシウムチャネルの１つのサブタイプにのみ特異的に結合する。かかる抗体は、他のＣａｖ１サブタイプに対して、Ｃａｖ１．４、Ｃａｖ１．３、Ｃａｖ１．２、またはＣａｖ１．１にのみ結合する。
【００８３】
ある特定の実施形態では、本明細書に記載される抗体またはその抗原結合断片は、Ｌ型電位開口型カルシウムチャネルを発現する細胞に特異的に結合する。いくつかの実施形態では、抗体または抗原結合断片は、Ｌ型電位開口型カルシウムチャネルを発現する任意の細胞に結合する。いくつかの実施形態では、抗体または抗原結合断片は、Ｌ型電位開口型カルシウムチャネルを発現する細胞のサブセットに結合する。特定の実施形態では、抗体または抗原結合断片は、Ｌ型電位開口型カルシウムチャネルを発現する細胞のサブセットに特異的に結合するが、Ｌ型電位開口型カルシウムチャネルを発現する細胞の別のサブセットに結合しない。いくつかの実施形態では、抗体または抗原結合断片は、Ｃａｖ１．４、Ｃａｖ１．３、Ｃａｖ１．２、およびＣａｖ１．１のうちの１つ以上を発現する任意の細胞に特異的に結合する。ある特定の実施形態では、本明細書に記載される抗体またはその抗原結合断片は、Ｃａｖ１．４、Ｃａｖ１．３、Ｃａｖ１．２、およびＣａｖ１．１のうちの１つ以上を発現する細胞のサブセットに特異的に結合する。特定の実施形態では、抗体または抗原結合断片は、Ｌ型電位開口型カルシウムチャネルの特定のサブタイプを発現するいくつかの細胞型に特異的に結合するが、Ｌ型電位開口型カルシウムチャネルの同じサブタイプを発現する他の細胞型に結合しない。特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、チャネルサブタイプの変異型を発現するいくつかの細胞型に特異的に結合するが、チャネルサブタイプの同じ変異型を発現する他の細胞型に結合しない。ある特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、チャネルサブタイプの１つ以上の変異型を発現する細胞に特異的に結合するが、チャネルサブタイプの異なる変異型を発現する細胞に結合しない。
【００８４】
いくつかの実施形態では、抗体は、本明細書に記載される軽鎖可変領域配列および／もしくは重鎖可変領域、ならびに／または相補性決定領域（ＣＤＲ）配列もしくはそれに含有される抗原結合領域（ＡＢＲ）（Ｌ型電位開口型カルシウムチャネルのα１サブユニットのドメインＩのＳ５およびＳ６間の細胞外ポアループ上のアミノ酸配列に特異的に結合するこれらの配列の変異型および組み合わせを含む）により定義される。Ｌ型電位開口型カルシウムチャネルのα１サブユニットのドメインＩのＳ５およびＳ６間の細胞外ポアループへのかかる抗体の結合を競合的に阻止する抗体も含まれる。
【００８５】
本明細書で使用される場合、「抗原結合断片」という用語は、対象の抗原に特異的に結合する免疫グロブリン重鎖および／または軽鎖の少なくとも１つのＣＤＲを含有するポリペプチド断片を指す。この点に関して、本明細書に記載される抗体の抗原結合断片は、その断片を含む、Ｌ型電位開口型カルシウムチャネルのα１サブユニットのドメインＩのＳ５およびＳ６間の細胞外ポアループなどの治療用または診断用標的に特異的に結合する抗体からのＶＨおよびＶＬ配列の１、２、３、４、５、または６つ全てのＣＤＲを含み得る。
【００８６】
「抗原」という用語は、選択的抗体またはその抗原結合断片によって結合されることができ、加えて、その抗原のエピトープに結合することができる抗体を産生するために動物において使用することができる分子または分子の一部を指す。抗原は１つ以上のエピトープを有し得る。
【００８７】
「エピトープ」という用語は、免疫グロブリンまたはＴ細胞受容体に特異的に結合することができる任意の決定基、好ましくはポリペプチド決定基を含む。エピトープは、抗体によって結合される抗原の領域である。ある特定の実施形態では、エピトープ決定基は、アミノ酸、糖側鎖、ホスホリル、またはスルホニルなどの分子の化学的に活性な表面分類を含み、ある特定の実施形態では、特定の３次元構造特徴、および／または特定の電荷特徴を有し得る。エピトープは、抗原の一次構造に関して近接しているか、または近接していなくてもよい。
【００８８】
抗体またはその抗原結合断片は、それが代替えの細胞または物質と反応または会合するよりも特定の細胞もしくは物質とより頻繁に、より迅速に、より長い継続期間、および／またはより大きい親和性で反応または会合する場合、「特異的な結合」または「優先的結合」を呈すると言われる。抗体は、それが他の物質に結合するよりも大きい親和性で、活性で、より容易に、および／またはより長い継続期間結合する場合、標的に「特異的に結合する」、または「優先的に結合する」。例えば、特定のエピトープに特異的または優先的に結合する抗体は、それが他のエピトープに結合するよりも大きい親和性で、活性で、より容易に、および／またはより長い期間、その特定のエピトープに結合する抗体である。例えば、第１の標的に特異的にまたは優先的に結合する抗体（または部分もしくはエピトープ）が第２の標的に特異的にまたは優先的に結合しても、結合しなくてもよいことも、本定義を読むことによって理解される。そのため、「特異的結合」または「優先的結合」は、必ずしも排他的結合を必要としない（が含み得る）。一般的に、必要ではないが、結合への言及は優先的結合を意味する。
【００８９】
免疫学的結合は一般的に、免疫グロブリンが、例えば、例示であって、限定するものではないが、静電、イオン、親水性および／もしくは疎水性引力または反発、立体的力、水素結合、ファンデルワールス力、ならびに他の相互作用の結果として特異的である、免疫グロブリン分子と抗原との間に生じるタイプの非共有結合相互作用を指す。免疫学的結合相互作用の強度または親和性は、相互作用の解離定数（Ｋｄ）に関して表すことができ、より小さいＫｄはより大きい親和性を表す。選択されたポリペプチドの免疫学的結合特性は、当該技術分野において周知の方法を使用して定量化され得る。かかる方法の１つは、抗原結合部位／抗原複合体形成および解離の速度を測定することを伴い、これらの速度は、複合体パートナーの濃度、相互作用の親和性、および両方向の速度に等しく影響を及ぼす幾何学的パラメータに依存する。よって、「オン速度定数」（ｋｏｎ）および「オフ速度定数」（ｋｏｆｆ）の両方は、濃度ならびに実際の会合および解離速度を計算することによって決定され得る。ｋｏｆｆ／ｋｏｎの比率は、親和性に関係しない全てのパラメータを取り消すことができ、よって、解離定数Ｋｄに等しい。
【００９０】
抗体およびその抗原結合断片の免疫学的結合特性は、当該技術分野において周知の方法を使用して定量化され得る（Ｄａｖｉｅｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｎｎｕａｌ  Ｒｅｖ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．５９：４３９−４７３，１９９０を参照されたい）。いくつかの実施形態では、抗体は、平衡解離定数が約≦１０−７または１０−８Ｍであるとき、抗原またはそのエピトープに特異的に結合すると言われる。いくつかの実施形態では、タンパク質の平衡解離定数は約≦１０−９Ｍまたは≦１０−１０Ｍである。ある特定の例示的な実施形態では、タンパク質は、（それが特異的に結合する）本明細書に記載される抗原または標的に関して、約、少なくとも約、もしくは約０．０１、０．０５、０．１、０．２、０．３、０．４、０．５、０．６、０．７、０．８、０．９、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、４０、または５０ｎＭ以下の親和性（Ｋｄ）を有する。
【００９１】
本明細書で使用される場合、「Ｌ型電位開口型カルシウムチャネル」および「ＣａＶ１」チャネルという用語は、交換可能に使用され、特に別途指定されない限り、Ｃａｖ１．１、Ｃａｖ１．２、Ｃａｖ１．３、およびＣａｖ１．４を含むことを意味する。「Ｌ型電位開口型カルシウムチャネル」および「ＣａＶ１」チャネルは、グリコシル化、アセチル化、リン酸化などの発現後修飾において変化を受け得るＣａｖ１．１、Ｃａｖ１．２、Ｃａｖ１．３、およびＣａｖ１．４チャネルも含み、Ｃａｖ１．１、Ｃａｖ１．２、Ｃａｖ１．３、およびＣａｖ１．４タンパク質全体、ならびにそのサブ配列、断片、変異型（代替えのスプライシングから生じた変異型を含むが、これらに限定されない）、または誘導を含む。
【００９２】
ヒトおよびマウスＬ型電位開口型カルシウムチャネルα１サブユニットの一次アミノ酸配列が、下記の表１に示される。Ｌ型電位開口型カルシウムチャネルのα１サブユニットをコードするｍＲＮＡは、ポリペプチドの異なるアイソフォームをもたらし得るスプライス変異型を有することに留意されたい。したがって、表１に列挙されるアミノ酸配列は、例示的なものである。
【表１−１】
2018508206.tif 000003
【表１−２】
2018508206.tif 000004
【表１−３】
2018508206.tif 000005
【表１−４】
2018508206.tif 000006
【表１−５】
2018508206.tif 000007
【表１−６】
2018508206.tif 000008
【表１−７】
2018508206.tif 000009
【表１−８】
2018508206.tif 000010
【００９３】
よって、本明細書に記載される抗体は、配列番号５〜１２のポリペプチド、またはその断片もしくはエピトープに特異的に結合する。ある特定の実施形態において、かかる抗体は、配列番号５〜１２の約または少なくとも約５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、４０、もしくは５０個またはそれよりも多くのアミノ酸の連続した断片に特異的に結合する。特定の実施形態において、抗体またはその抗原結合断片は、表Ｅ１における１つ以上の配列に特異的に結合する（実施例１、および配列番号１〜４を参照されたい）。
【００９４】
ある特定の実施形態では、本明細書に記載される、抗体およびその抗原結合断片は、ＣＤＲに支持を提供し、互いに対してＣＤＲの空間的関係を定義する重鎖および軽鎖のフレームワーク領域（ＦＲ）セット間にそれぞれ配置される、重鎖および軽鎖ＣＤＲセットを含む。本明細書で使用される場合、「ＣＤＲセット」という用語は、重鎖または軽鎖Ｖ領域の３つの超可変領域を指す。重鎖または軽鎖のＮ末端から始まって、これらの領域は、それぞれ、「ＣＤＲ１」、「ＣＤＲ２」、および「ＣＤＲ３」と表記される。したがって、抗原結合部位は、重鎖および軽鎖Ｖ領域の各々からのＣＤＲセットを含む、６つのＣＤＲを含む。単一のＣＤＲ（例えば、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、またはＣＤＲ３）を含むポリペプチドは、本明細書において、「分子認識ユニット」と称される。いくつかの抗原−抗体複合体の結晶分析は、ＣＤＲのアミノ酸残基が結合抗原と広範囲の接触を形成することを示し、最も広範囲の抗原接触は重鎖ＣＤＲ３とである。よって、分子認識ユニットは主に、抗原結合部位の特異性に関与する。
【００９５】
例示的な抗体配列が、下記の表２に提供される。
【表２−１】
2018508206.tif 000011
【表２−２】
2018508206.tif 000012
【表２−３】
2018508206.tif 000013
【表２−４】
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【表２−５】
2018508206.tif 000015
【００９６】
したがって、ある特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、それらの組み合わせおよび変異型を含む、表２の配列のうちの１つ以上（例えば、配列番号１３〜１０８）を含む。例えば、特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、配列番号１３に記載されるＶＨ配列および／または配列番号１７に記載されるＶＬ配列を含む。いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、配列番号１３（例えば、それぞれ、配列番号１４〜１６）に含有される相補性決定領域ＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、および／もしくはＶＨＣＤＲ３配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）、ならびに／または配列番号１７（例えば、それぞれ、配列番号１８〜２０）に含有される相補性決定領域ＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２、および／もしくはＶＬＣＤＲ３配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む。
【００９７】
いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、配列番号２１に記載されるＶＨ配列および／または配列番号２５に記載されるＶＬ配列を含む。いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、配列番号２１（例えば、それぞれ、配列番号２２〜２４）に含有される相補性決定領域ＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、および／もしくはＶＨＣＤＲ３配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）、ならびに／または配列番号２５（例えば、それぞれ、配列番号２６〜２８）に含有される相補性決定領域ＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２、および／もしくはＶＬＣＤＲ３配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む。
【００９８】
いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、配列番号２９に記載されるＶＨ配列および／または配列番号３３に記載されるＶＬ配列を含む。いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、配列番号２９（例えば、それぞれ、配列番号３０〜３２）に含有される相補性決定領域ＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、および／もしくはＶＨＣＤＲ３配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）、ならびに／または配列番号３３（例えば、それぞれ、配列番号３４〜３６）に含有される相補性決定領域ＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２、および／もしくはＶＬＣＤＲ３配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む。
【００９９】
いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、配列番号３７に記載されるＶＨ配列および／または配列番号４１に記載されるＶＬ配列を含む。いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、配列番号３７（例えば、それぞれ、配列番号３８〜４０）に含有される相補性決定領域ＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、および／もしくはＶＨＣＤＲ３配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）、ならびに／または配列番号４１（例えば、それぞれ、配列番号４２〜４４）に含有される相補性決定領域ＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２、および／もしくはＶＬＣＤＲ３配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む。
【０１００】
いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、配列番号４５に記載されるＶＨ配列および／または配列番号４９に記載されるＶＬ配列を含む。いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、配列番号４５（例えば、それぞれ、配列番号４６〜４８）に含有される相補性決定領域ＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、および／もしくはＶＨＣＤＲ３配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）、ならびに／または配列番号４９（例えば、それぞれ、配列番号５０〜５２）に含有される相補性決定領域ＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２、および／もしくはＶＬＣＤＲ３配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む。
【０１０１】
いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、配列番号５３に記載されるＶＨ配列および／または配列番号５７に記載されるＶＬ配列を含む。いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、配列番号５３（例えば、それぞれ、配列番号５４〜５６）に含有される相補性決定領域ＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、および／もしくはＶＨＣＤＲ３配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）、ならびに／または配列番号５７（例えば、それぞれ、配列番号５８〜６０）に含有される相補性決定領域ＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２、および／もしくはＶＬＣＤＲ３配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む。
【０１０２】
いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、配列番号６１に記載されるＶＨ配列および／または配列番号６５に記載されるＶＬ配列を含む。いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、配列番号６１（例えば、それぞれ、配列番号６２〜６４）に含有される相補性決定領域ＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、および／もしくはＶＨＣＤＲ３配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）、ならびに／または配列番号６５（例えば、それぞれ、配列番号６６〜６８）に含有される相補性決定領域ＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２、および／もしくはＶＬＣＤＲ３配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む。
【０１０３】
いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、配列番号６９に記載されるＶＨ配列および／または配列番号７３に記載されるＶＬ配列を含む。いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、配列番号６９（例えば、それぞれ、配列番号７０〜７２）に含有される相補性決定領域ＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、および／もしくはＶＨＣＤＲ３配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）、ならびに／または配列番号７３（例えば、それぞれ、配列番号７４〜７６）に含有される相補性決定領域ＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２、および／もしくはＶＬＣＤＲ３配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む。
【０１０４】
いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、配列番号７７に記載されるＶＨ配列および／または配列番号８１に記載されるＶＬ配列を含む。いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、配列番号７７（例えば、それぞれ、配列番号７８〜８０）に含有される相補性決定領域ＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、および／もしくはＶＨＣＤＲ３配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）、ならびに／または配列番号８１（例えば、それぞれ、配列番号８２〜８４）に含有される相補性決定領域ＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２、および／もしくはＶＬＣＤＲ３配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む。
【０１０５】
いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、配列番号８５に記載されるＶＨ配列および／または配列番号８９に記載されるＶＬ配列を含む。いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、配列番号８５（例えば、それぞれ、配列番号８６〜８８）に含有される相補性決定領域ＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、および／もしくはＶＨＣＤＲ３配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）、ならびに／または配列番号８９（例えば、それぞれ、配列番号９０〜９２）に含有される相補性決定領域ＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２、および／もしくはＶＬＣＤＲ３配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む。
【０１０６】
いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、配列番号９３に記載されるＶＨ配列および／または配列番号９７に記載されるＶＬ配列を含む。いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、配列番号９３（例えば、それぞれ、配列番号９４〜９６）に含有される相補性決定領域ＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、および／もしくはＶＨＣＤＲ３配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）、ならびに／または配列番号９７（例えば、それぞれ、配列番号９８〜１００）に含有される相補性決定領域ＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２、および／もしくはＶＬＣＤＲ３配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む。
【０１０７】
いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、配列番号１０１に記載されるＶＨ配列および／または配列番号１０５に記載されるＶＬ配列を含む。いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、配列番号１０１（例えば、それぞれ、配列番号１０２〜１０４）に含有される相補性決定領域ＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、および／もしくはＶＨＣＤＲ３配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）、ならびに／または配列番号１０５（例えば、それぞれ、配列番号１０６〜１０８）に含有される相補性決定領域ＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２、および／もしくはＶＬＣＤＲ３配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む。
【０１０８】
いくつかの実施形態では、ＣＤＲ配列は、Ｋａｂａｔ、Ｃｌｏｔｈｉａ、またはそれらの組み合わせに従い定義される（ＩＭＧＴ（登録商標）、ｔｈｅ  ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  ＩｍＭｕｎｏＧｅｎｅＴｉｃｓ  ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ  ｓｙｓｔｅｍ（登録商標）も参照されたい）。
【０１０９】
本明細書で使用される場合、「ＦＲセット」という用語は、重鎖または軽鎖Ｖ領域のＣＤＲセットのＣＤＲを取り囲む４つの隣接アミノ酸配列を指す。いくつかのＦＲ残基は、結合抗原に接触し得るが、ＦＲ、特にＣＤＲに直接隣接するＦＲ残基は主に、Ｖ領域を抗原結合部位に折り畳むのに関与する。ＦＲ内のある特定のアミノ残基およびある特定の構造的特徴は、非常に高度に保存される。この点に関して、全てのＶ領域は、約９０のアミノ酸残基の内部ジスルフィドループを含有する。Ｖ領域が結合部位に折り畳まれるとき、ＣＤＲは、抗原結合表面を形成する突出したループモチーフとして提示される。正確なＣＤＲアミノ酸配列に関わらず、ある特定の「基準」構造へのＣＤＲループの折り畳み形状に影響を及ぼすＦＲの保存された構造領域があることが一般的に認識されている。更に、ある特定のＦＲ残基は、抗体重鎖および軽鎖の相互作用を安定させる非共有結合のドメイン間接触に関与することが知られている。
【０１１０】
免疫グロブリン可変ドメインの構造および位置は、Ｋａｂａｔ，Ｅ．  Ａ．ｅｔ  ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ．４ｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ．ＵＳ  Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ  ａｎｄ  Ｈｕｍａｎ  Ｓｅｒｖｉｃｅｓ．１９８７およびその最新版を参照することにより決定され得る。
【０１１１】
いくつかの実施形態では、抗体は、均一な抗体集団を指す、「モノクローナル抗体」であり、このモノクローナル抗体は、エピトープの選択的結合に関与するアミノ酸（天然型および非天然型）で構成される。モノクローナル抗体は、非常に特異的であり、単一のエピトープに対して指向される。「モノクローナル抗体」という用語は、インタクトなモノクローナル抗体および完全長モノクローナル抗体だけでなく、それらの断片（Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖなど）、単鎖（ＳｃＦｖ）、それらの変異型、抗原結合部分を含む融合タンパク質、ヒト化モノクローナル抗体、キメラモノクローナル抗体、ならびに必要とされる特異性の抗原結合断片（エピトープ認識部位）およびエピトープに結合する能力を含む免疫グロブリン分子の任意の他の修飾された構成も包含する。抗体の供給源またはそれが作製される方法（例えば、ハイブリドーマ、ファージ選択、組換え発現、トランスジェニック動物により）に関しては、制限されるものではない。本用語は、「抗体」の定義下で本明細書に記載される全免疫グログリンならびに断片などを含む。
【０１１２】
タンパク質分解酵素パパインは、優先的にＩｇＧ分子を切断していくつかの断片をもたらし、そのうちの２つ（Ｆ（ａｂ）断片）は各々、インタクトな抗原結合部位を含む共有結合ヘテロダイマーを含む。酵素ペプシンは、ＩｇＧ分子を切断して、両方の抗原結合部位を含むＦ（ａｂ’）２断片を含む、いくつかの断片をもたらすことができる。ある特定の実施形態に従い使用するためのＦｖ断片は、ＩｇＭおよび稀にＩｇＧまたはＩｇＡ免疫グロブリン分子の優先的タンパク質分解切断により産生され得る。しかしながら、Ｆｖ断片は、より一般的に、当該技術分野において既知の組換え技法を使用して得られる。Ｆｖ断片は、ナイーブ抗体分子の抗原認識および結合能力のほとんどを維持する抗原結合部位を含む非共有結合ＶＨ：：ＶＬヘテロダイマーを含む。Ｉｎｂａｒ  ｅｔ  ａｌ．，ＰＮＡＳ  ＵＳＡ．６９：２６５９−２６６２，１９７２、Ｈｏｃｈｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｅｍ．１５：２７０６−２７１０，１９７６、およびＥｈｒｌｉｃｈ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｅｍ．１９：４０９１−４０９６，１９８０を参照されたい。
【０１１３】
ある特定の実施形態では、単鎖ＦｖまたはｓｃＦＶ抗体が企図される。例えば、カッパボディ（Ｉｌｌ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｔ．Ｅｎｇ．１０：９４９−５７，１９９７）、ミニボディ（Ｍａｒｔｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，ＥＭＢＯ  Ｊ  １３：５３０５−９，１９９４）、ダイアボディ（Ｈｏｌｌｉｇｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，ＰＮＡＳ  ９０：６４４４−８，１９９３）、またはジャヌシン（Ｊａｎｕｓｉｎｓ）（Ｔｒａｕｎｅｃｋｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，ＥＭＢＯ  Ｊ  １０：３６５５−５９，１９９１およびＴｒａｕｎｅｃｋｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｉｎｔ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｓｕｐｐｌ．７：５１−５２，１９９２）は、所望の特異性を有する抗体の選択に関して本出願の教示に従う標準的な分子生物学技法を使用して調製され得る。
【０１１４】
単鎖Ｆｖ（ｓＦｖ）ポリペプチドは、ペプチドコードリンカーにより結合されたＶＨ−およびＶＬコード遺伝子を含む遺伝子融合から発現される共有結合されたＶＨ：：ＶＬヘテロダイマーである。Ｈｕｓｔｏｎ  ｅｔ  ａｌ．（ＰＮＡＳ  ＵＳＡ．８５（１６）：５８７９−５８８３，１９８８）。抗体Ｖ領域からの天然に凝集するが化学的に分離された軽および重ポリペプチド鎖を、抗原結合部位の構造に実質的に類似する３次元構造に折り畳むｓＦｖ分子に変換するための化学構造を判別するためのいくつかの方法が記載されている。例えば、Ｈｕｓｔｏｎ  ｅｔ  ａｌ．の米国特許第５，０９１，５１３号および第５，１３２，４０５号、ならびにＬａｄｎｅｒ  ｅｔ  ａｌ．の米国特許第４，９４６，７７８号を参照されたい。
【０１１５】
ある特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合断片はヒト化される。これらの実施形態は、非ヒト種からの免疫グロブリン、ならびにヒト免疫グロブリンの構造および／または配列に基づいた分子の残りの免疫グロブリン構造に由来する抗原結合部位を有する、一般的に、組換え技法を使用して調製された、キメラ分子を指す。抗原結合部位は、定常ドメイン上に融合した完全な可変ドメイン、または可変ドメインの適切なフレームワーク領域上にグラフトされたＣＤＲのみのいずれかを含み得る。エピトープ結合部位は、野生型であるか、または１つ以上のアミノ酸置換により修飾され得る。これは、ヒト個体において免疫原として定常領域を排除するが、外来性可変領域に応答する免疫の可能性は残存する（ＬｏＢｕｇｌｉｏ  ｅｔ  ａｌ．，ＰＮＡＳ  ＵＳＡ  ８６：４２２０−４２２４，１９８９、Ｑｕｅｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，ＰＮＡＳ  ＵＳＡ．８６：１００２９−１００３３，１９８８、Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ．３３２：３２３−３２７，１９８８）。抗体をヒト化するための例示的な方法は、米国特許第７，４６２，６９７号に記載される方法を含む。
【０１１６】
別のアプローチは、ヒト由来定常領域を提供するだけでなく、それらをヒト形態にできる限り近く再形成するように可変領域を修飾することにも重点を置く。重鎖および軽鎖両方の可変領域が、所与の種において比較的保存され、ＣＤＲの足場を推定的に提供する４つのフレームワーク領域（ＦＲ）に隣接している、問題のエピトープに応答して変動し、結合能力を決定する３つの相補性決定領域（ＣＤＲ）を含有することは知られている。非ヒト抗体が特定のエピトープに関して調製されるとき、可変領域は、修飾されるヒト抗体に存在するＦＲ上の非ヒト抗体に由来するＣＤＲをグラフトすることによって「再形成」または「ヒト化」され得る。様々な抗体に対するこのアプローチの適用は、Ｓａｔｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．５３：８５１−８５６，１９９３、Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  ３３２：３２３−３２７，１９８８、Ｖｅｒｈｏｅｙｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２３９：１５３４−１５３６，１９８８、Ｋｅｔｔｌｅｂｏｒｏｕｇｈ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ．４：７７３−３７８３，１９９１、Ｍａｅｄａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｈｕｍａｎ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  Ｈｙｂｒｉｄｏｍａ  ２：１２４−１３４，１９９１、Ｇｏｒｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．，ＰＮＡＳ  ＵＳＡ．８８：４１８１−４１８５，１９９１、Ｔｅｍｐｅｓｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ９：２６６−２７１，１９９１、Ｃｏ  ｅｔ  ａｌ．，ＰＮＡＳ  ＵＳＡ．８８：２８６９−２８７３，１９９１、Ｃａｒｔｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，ＰＮＡＳ  ＵＳＡ．８９：４２８５−４２８９，１９９２、およびＣｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４８：１１４９−１１５４，１９９２により報告されている。いくつかの実施形態では、ヒト化抗体は、全てのＣＤＲ配列（例えば、マウス抗体からの６つ全てのＣＤＲを含有するヒト化マウス抗体）を保存する。他の実施形態では、ヒト化抗体は、本来の抗体に対して変更される１つ以上のＣＤＲ（１、２、３、４、５、６つ）を有し、これは本来の抗体からの１つ以上のＣＤＲに「由来する」１つ以上のＣＤＲとも呼ばれる。
【０１１７】
本明細書に記載される抗体およびその抗原結合断片は、マウス、ヒト、ウサギ、またはヤギなどの任意の様々な哺乳動物からの、任意の様々な免疫グロブリンサブタイプ（例えば、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、ＩｇＭ、それらのサブクラスおよび組み合わせ、例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４を含む）の軽鎖定常領域または重鎖定常領域（例えば、Ｆｃ領域）を含み得る。「Ｆｃ領域」配列は、通常、免疫グロブリン（Ｉｇ）分子の重鎖に由来する。典型的なＩｇ分子は、２本の重鎖および２本の軽鎖から構成される。重鎖は、少なくとも３つの機能領域：Ｆｄ領域、Ｆｃ領域（断片結晶化領域）、およびヒンジ領域に分けることができ、後者はＩｇＧ、ＩｇＡ、およびＩｇＤ免疫グロブリンにのみ見られる。Ｆｄ領域は、重鎖の可変（ＶＨ）および定常（ＣＨ１）ドメインを含み、軽鎖の可変（ＶＬ）および定常（ＣＬ）ドメインと一緒に抗原結合断片またはＦａｂ領域を形成する。
【０１１８】
ＩｇＧ、ＩｇＡ、およびＩｇＤ免疫グロブリンのＦｃ領域は、それぞれ、ＣＨ２およびＣＨ３領域と指定される重鎖定常ドメイン２および３を含み、ＩｇＥおよびＩｇＭ免疫グロブリンのＦｃ領域は、それぞれ、ＣＨ２、ＣＨ３、およびＣＨ４領域と指定される重鎖定常ドメイン２、３、および４を含む。Ｆｃ領域は主に、例えば、補体結合およびエフェクター細胞の同族Ｆｃ受容体への結合を含む、免疫グロブリンエフェクター機能に関与する。
【０１１９】
ヒンジ領域（ＩｇＧ、ＩｇＡ、およびＩｇＤに見られる）は、Ｆａｂ部分がＦｃ領域に対して空間で自由に移動することを可能にする柔軟なスペーサーとして作用する。定常領域とは対照的に、ヒンジ領域は、構造的に多様であり、免疫グロブリンのクラスおよびサブクラス（上記を参照されたい）の中で配列および長さの両方において変動する。ヒンジ領域は、炭水化物付着のためのいくつかの構造的に別個のタイプの部位を含む、１つ以上のグリコシル化部位（複数可）も含有し得る。例えば、ＩｇＡ１は、ヒンジ領域の１７個のアミノ酸部位内に５つのグリコシル化部位を含有し、消化管プロテアーゼに対するヒンジ領域ポリペプチドの大幅な耐性を付与する。ＣＨ２ドメインのヒンジ近位領域の残基も免疫グロブリンとそのそれぞれのＦｃ受容体（複数可）との間の相互作用の特異性に影響を及ぼすことができる（例えば、Ｓｈｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｉｎｔｅｒｎ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１０：１７７−１８６，１９９３を参照されたい）。
【０１２０】
本明細書で使用される場合、「Ｆｃ領域」または「Ｆｃ断片」または「Ｆｃ」という用語は、よって、１つ以上の選択された免疫グロブリン（複数可）（その断片および変異型ならびに組み合わせを含む）からのＣＨ２領域、ＣＨ３領域、および／またはＣＨ４領域のうちの１つ以上を含有する抗体の一部またはその抗原結合断片を指す。「Ｆｃ領域」は、免疫グロブリンの重鎖定常領域の１つ以上のヒンジ領域（複数可）も含み得る。ある特定の実施形態では、Ｆｃ領域は、免疫グロブリンのＣＨ１、ＣＬ、ＶＬ、および／またはＶＨ領域のうちの１つ以上を含有しない。
【０１２１】
Ｆｃ領域は、限定されないが、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、ＩｇＭを含む（それらのサブクラスおよび組み合わせを含む）任意の１つ以上の免疫グロブリンクラスのＣＨ２領域、ＣＨ３領域、ＣＨ４領域、および／またはヒンジ領域（複数可）を含み得る。いくつかの実施形態では、Ｆｃ領域は、サブクラスのＩｇＡ１および／またはＩｇＡ２を含む、ＩｇＡ免疫グロブリン（例えば、マウス、ヒト、ウサギ、ヤギ）からのものである。ある特定の実施形態では、Ｆｃ領域は、ＩｇＤ免疫グロブリン（例えば、マウス、ヒト、ウサギ、ヤギ）からのものである。特定の実施形態では、Ｆｃ領域は、ＩｇＥ免疫グロブリン（例えば、マウス、ヒト、ウサギ、ヤギ）からのものである。いくつかの実施形態では、Ｆｃ領域は、サブクラスのＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、および／またはＩｇＧ４を含む、ＩｇＧ免疫グロブリン（例えば、マウス、ヒト、ウサギ、ヤギ）からのものである。ある特定の実施形態では、Ｆｃ領域は、ＩｇＭ免疫グロブリン（例えば、マウス、ヒト、ウサギ、ヤギ）からのものである。
【０１２２】
本明細書に記載される配列（例えば、表２、配列番号１３−１０８）の「変異型」を含む、抗体またはその抗原結合断片も含まれる。「変異型」配列は、本用語が本明細書において使用される場合、本明細書に開示される基準となる配列（例えば、表２、配列番号１３〜１０８とは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２９以上の置換、欠失（例えば、切り詰め）、付加、および／もしくは挿入により異なるポリペプチドまたはポリヌクレオチド配列を指す。よって、ある特定の変異型は、本明細書に記載される基準となる配列の断片を含む。変異型ポリペプチドは、生物学的に活性である、つまり、それらは基準となるポリペプチドの結合活性を継続して保有する。かかる変異型は、例えば、遺伝的多型および／またはヒトによる操作から生じる。
【０１２３】
多くの場合、生物学的に活性な変異型は、１つ以上の保存的置換を含有する。「保存的置換」は、ペプチド化学の当業者がポリペプチドの二次構造およびヒドロパシー性質が実質的に未変化であると予想するように、アミノ酸が類似する特性を有する別のアミノ酸に置換されるものである。上述のように、修飾は、本明細書に記載されるポリヌクレオチドおよびポリペプチドの構造において行われ、なおも所望の特徴を有する変異型または誘導体ポリペプチドをコードする機能分子を得ることができる。等価物または更には本発明のポリペプチドの改善された変異型もしくは一部を創出するために、ポリペプチドのアミノ酸配列を変化させることが所望される場合、当業者は典型的に、下記の表Ａに従うコードＤＮＡ配列のコドンのうちの１つ以上を変化させる。
【表３】
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【０１２４】
例えば、ある特定のアミノ酸は、例えば、抗体の抗原結合領域または基質分子上の結合部位などの構造との相互作用的結合能力を明らかに損失することなく、タンパク質構造において他のアミノ酸に置換され得る。これは、そのタンパク質の生物学的機能活性を定義するタンパク質の相互作用能力および性質であるため、ある特定のアミノ酸配列置換は、タンパク質配列、および勿論、その基礎となるＤＮＡコード配列において行われ、それでもなお同様の特性を有するタンパク質を得ることができる。よって、様々な変更が、開示される組成物のペプチド配列、または該ペプチドをコードする対応するＤＮＡ配列において、それらの有用性を顕著に損失することなく行われ得ることが企図される。
【０１２５】
かかる変更を行う際に、アミノ酸のヒドロパシーインデックスが考慮され得る。タンパク質に相互作用的な生物学的機能を付与する際のヒドロパシーアミノ酸インデックスの重要性は、当該技術分野において一般的に理解されている（Ｋｙｔｅ＆Ｄｏｏｌｉｔｔｌｅ，１９８２、参照により本明細書に組み込まれる）。アミノ酸の相対的なヒドロパシー性質が、得られるタンパク質の二次構造に寄与し、これが次にタンパク質の、他の分子、例えば、酵素、基質、受容体、ＤＮＡ、抗体、抗原などとの相互作用を定義することは受け入れられている。各アミノ酸は、その疎水性および荷電特徴に基づいてヒドロパシーインデックスを割り当てられている（Ｋｙｔｅ＆Ｄｏｏｌｉｔｔｌｅ，１９８２）。それらの値は、イソロイシン（＋４．５）、バリン（＋４．２）、ロイシン（＋３．８）、フェニルアラニン（＋２．８）、システイン（＋２．５）、メチオニン（＋１．９）、アラニン（＋１．８）、グリシン（−０．４）、スレオニン（−０．７）、セリン（−０．８）、トリプトファン（−０．９）、チロシン（−１．３）、プロリン（−１．６）、ヒスチジン（−３．２）、グルタミン酸（−３．５）、グルタミン（−３．５）、アスパラギン酸（−３．５）、アスパラギン（−３．５）、リジン（−３．９）、およびアルギニン（−４．５）である。ある特定のアミノ酸が、類似するヒドロパシーインデックスまたはスコアを有する他のアミノ酸により置換され、それでも類似する生物学的活性を有するタンパク質をもたらし得る、すなわち、それでも生物学機能的に等価なタンパク質が得られることは当該分野において知られている。かかる変更を行う際に、ヒドロパシーインデックスが±２以内であるアミノ酸の置換が好ましく、±１以内のものが特に好ましく、±０．５以内のものが更により特に好ましい。
【０１２６】
同様のアミノ酸の置換が親水性に基づいて効果的に行うことができることも当該分野において理解されている。米国特許第４，５５４，１０１号（参照によりその全体が本明細書に具体的に組み込まれる）は、タンパク質の最大局部平均親水性が、その隣接するアミノ酸の親水性により決定されるとき、タンパク質の生物学的特性と相関すると述べている。米国特許第４，５５４，１０１号に詳述されているように、以下の親水性値がアミノ酸残基に割り当てられている：アルギニン（＋３．０）、リジン（＋３．０）、アルパラギン酸（＋３．０±１）、グルタミン酸（＋３．０±１）、セリン（＋０．３）、アスパラギン（＋０．２）、グルタミン（＋０．２）、グリシン（０）、スレオニン（−０．４）、プロリン（−０．５±１）、アラニン（−０．５）、ヒスチジン（−０．５）、システイン（−１．０）、メチオニン（−１．３）、バリン（−１．５）、ロイシン（−１．８）、イソロイシン（−１．８）、チロシン（−２．３）、フェニルアラニン（−２．５）、トリプトファン（−３．４）。アミノ酸は類似する親水性値を有する別のものに置換することができ、それでも生物学的に等価な、特に免疫学的に等価なタンパク質を得られることが理解される。かかる変更の際に、親水性値が±２以内であるアミノ酸の置換が好ましく、±１以内のものが特に好ましく、±０．５以内のものが更により特に好ましい。
【０１２７】
上に要約されるように、したがって、アミノ酸置換は一般的に、アミノ酸側鎖置換基の、例えば、それらの疎水性、親水性、電荷、サイズなどの相対的類似性に基づく。様々な前述の特徴を考慮する例示的な置換は、当業者には周知であり、アルギニンおよびリジン、グルタミン酸およびアスパラギン酸、セリンおよびスレオニン、グルタミンおよびアスパラギン、ならびにバリン、ロイシン、およびイソロイシンを含む。
【０１２８】
アミノ酸置換は、更に、残基の極性、電荷、溶解度、疎水性、親水性、および／または両親媒性の類似性に基づいて行われ得る。例えば、負に荷電されたアミノ酸はアスパラギン酸およびグルタミン酸を含み、正に電荷されたアミノ酸はリジンおよびアルギニンを含み、類似する親水性値を有する未荷電の極性頭基を伴うアミノ酸は、ロイシン、イソロイシン、およびバリン、グリシンおよびアラニン、アスパラギンおよびグルタミン、ならびにセリン、スレオニン、フェニルアラニン、およびチロシンを含む。保存的な変更を表し得るアミノ酸の他の基は、（１）ａｌａ、ｐｒｏ、ｇｌｙ、ｇｌｕ、ａｓｐ、ｇｌｎ、ａｓｎ、ｓｅｒ、ｔｈｒ、（２）ｃｙｓ、ｓｅｒ、ｔｙｒ、ｔｈｒ、（３）ｖａｌ、ｉｌｅ、ｌｅｕ、ｍｅｔ、ａｌａ、ｐｈｅ、（４）ｌｙｓ、ａｒｇ、ｈｉｓ、および（５）ｐｈｅ、ｔｙｒ、ｔｒｐ、ｈｉｓを含む。
【０１２９】
変異型は非保存的な変更も含有するか、または代替的に含有し得る。ある特定の実施形態では、変異型ポリペプチドは、約１０、９、８、７、６、５、４、３、２個のアミノ酸もしくは約それ未満、または更には１個のアミノ酸の置換、欠失、または付加により天然もしくは基準となる配列と異なる。変異型は、例えば、ポリペプチドの免疫原性、二次構造、酵素活性、および／またはヒドロパシー性質に対して最小限の影響を有するアミノ酸の欠失または付加によっても（または代替的に）修飾され得る。
【０１３０】
一般に、変異型は、基準となるポリペプチド配列（例えば、表２の配列番号１３〜１０８）に少なくとも約３０％、４０％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の類似性、または配列同一性、または配列相同性を示す。更に、約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、または１００個のアミノ酸（その間の全ての整数および範囲を含む）の付加（例えば、Ｃ末端付加、Ｎ末端付加、その両方）、欠失、切り詰め、挿入、または置換（例えば、保存的置換）により基準となる配列と異なるが、親もしくは基準となるポリペプチド配列の特性または活性を維持する配列が企図される。
【０１３１】
いくつかの実施形態では、変異型ポリペプチドは、少なくとも１個であるが、５０、４０、３０、２０、１５、１０、９、８、７、６、５、４、３、または２個未満のアミノ酸残基（複数可）基準となる配列と異なる。他の実施形態では、変異型ポリペプチドは、少なくとも１％だが、２０％、１５％、１０％、または５％の残基基準となる配列と異なる。（この比較がアライメントを必要とする場合、配列は類似性最大にアライメントされるべきである。いくつかの場合、欠失もしくは挿入、またはミスマッチからの「ループ」アウト配列は異なるものと考えられる。
【０１３２】
配列間の配列類似性または配列同一性（本用語は本明細書において交換可能に使用される）の計算は以下のように行われる。２つのアミノ酸配列または２つの核酸配列のパーセント同一性を決定するために、配列は、最適な比較目的のためにアライメントされる（例えば、ギャップは、最適なアライメントのために第１および第２のアミノ酸または核酸配列のうちの１つまたはその両方に導入され得、非相同配列は比較目的のために無視される）。ある特定の実施形態では、比較目的のためにアライメントされた基準となる配列の長さは、基準となる配列の長さの少なくとも３０％、好ましくは少なくとも４０％、より好ましくは少なくとも５０％、６０％、および更により好ましくは少なくとも７０％、８０％、９０％、１００％である。次に、対応するアミノ酸位置もしくはヌクレオチド位置でのアミノ酸残基またはヌクレオチドが比較される。第１の配列での位置が第２の配列での対応する位置と同じアミノ酸残基またはヌクレオチドで占められる場合、分子はその位置で同一である。
【０１３３】
２つの配列間のパーセント同一性は、配列により共有された同一位置の数の関数であり、２つの配列の最適なアライメントのために導入される必要があるギャップの数および各ギャップの長さを考慮する。
【０１３４】
配列の比較および２つの配列間のパーセント同一性の決定は、数学的アルゴリズムを使用して達成することができる。ある特定の実施形態では、２つのアミノ酸配列間のパーセント同一性は、Ｂｌｏｓｓｕｍ６２マトリックスまたはＰＡＭ２５０マトリックスのいずれか、および１６、１４、１２、１０、８、６、または４のギャップ加重、ならびに１、２、３、４、５、または６の長さ加重を使用して、ＧＣＧソフトウェアパッケージのＧＡＰプログラムに組み込まれているＮｅｅｄｌｅｍａｎ  ａｎｄ  Ｗｕｎｓｃｈ（Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．４８：４４４−４５３，１９７０）アルゴリズムを使用して決定される。ある特定の実施形態では、２つのヌクレオチド配列間のパーセント同一性は、ＮＷＳｇａｐｄｎａ．ＣＭＰマトリックス、および４０、５０、６０、７０、または８０のギャップ加重、ならびに１、２、３、４、５、または６の長さ加重を使用して、ＧＣＧソフトウェアパッケージのＧＡＰプログラムを使用して決定される。パラメータの好ましいセットは、１２のギャップペナルティ、および４のギャップ伸長ペナルティ、ならびに５のフレームシフトギャップペナルティのＢｌｏｓｓｕｍ６２スコアマトリックスを含む。
【０１３５】
２つのアミノ酸またはヌクレオチド配列間のパーセント同一性は、ＰＡＭ１２０重量残基表、１２のギャップ長ペナルティ、および４のギャップペナルティを使用して、ＡＬＩＧＮプログラム（バージョン２．０）に組み込まれているＥ．Ｍｅｙｅｒｓ  ａｎｄ  Ｗ．Ｍｉｌｌｅｒ（Ｃａｂｉｏｓ．４：１１−１７，１９８９）のアルゴリズムを使用して決定され得る。
【０１３６】
本明細書に記載される核酸およびタンパク質配列は、例えば、他のファミリーメンバーまたは関連する配列を同定するために、公共データベースに対して検索を行うための「問い合わせ配列」として使用され得る。かかる検索は、Ａｌｔｓｃｈｕｌ，ｅｔ  ａｌ．，（１９９０，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ，２１５：４０３−１０）のＮＢＬＡＳＴおよびＸＢＬＡＳＴプログラム（バージョン２．０）を使用して行うことができる。ＢＬＡＳＴヌクレオチド検索は、本発明の核酸分子に相同であるヌクレオチド配列を得るために、スコア＝１００、ワード長＝１２のＮＢＬＡＳＴプログラムで行うことができる。ＢＬＡＳＴタンパク質検索は、本発明のタンパク質分子に相同であるアミノ酸配列を得るために、スコア＝５０、ワード長＝３のＸＢＬＡＳＴプログラムで行うことができる。比較目的のためのギャップありアライメントを得るために、Ｇａｐｐｅｄ  ＢＬＡＳＴは、Ａｌｔｓｃｈｕｌ  ｅｔ  ａｌ．，（Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．２５：３３８９−３４０２，１９９７）に記載されるように利用され得る。ＢＬＡＳＴおよびＧａｐｐｅｄ  ＢＬＡＳＴプログラムを利用する際、それぞれのプログラム（例えば、ＸＢＬＡＳＴおよびＮＢＬＡＳＴ）のデフォルトパラメータが使用され得る。
【０１３７】
一実施形態では、上述のように、ポリヌクレオチドおよび／またはポリペプチドは、ＢＬＡＳＴアライメントツールを使用して評価され得る。ローカルアライメントは、単純に、比較される配列の各々から１つずつの一対の配列セグメントからなる。Ｓｍｉｔｈ−ＷａｔｅｒｍａｎまたはＳｅｌｌｅｒｓアルゴリズムの修正は、高スコアセグメント対（ＨＳＰｓ）と呼ばれる、スコアが伸長またはトリミングによって改善することができない全てのセグメント対を見つけ出す。ＢＬＡＳＴアライメントの結果は、ＢＬＡＳＴスコアが単に偶然から予想され得る可能性を示す統計的指標を含む。
【０１３８】
粗点Ｓは、各々のアライメントされた配列に関連付けられたギャップおよび置換の数から計算され、より高い類似性スコアがより有意なアライメントを示す。置換スコアはルックアップ表により得られる（ＰＡＭ、ＢＬＯＳＵＭを参照されたい）。
【０１３９】
ギャップスコアは典型的に、ギャップ開始ペナルティＧおよびギャップ伸長ペナルティＬの合計として計算される。ギャップの長さｎに関して、ギャップコストはＧ＋Ｌｎであろう。ギャップコストＧおよびＬの選択は経験によるが、Ｇに関しては高い値（１０〜１５）、例えば、１１、そしてＬに関しては低い値（１〜２）、例えば、１を選択することが通例である。
【０１４０】
ビットスコアＳ’は、使用されたスコアシステムの統計的性質が考慮されている粗アライメントスコアＳから導かれる。ビットスコアは、スコアシステムに関して正規化され、したがって、それらは異なる検索からのアライメントスコアを比較するために使用され得る。「ビットスコア」および「類似性スコア」という用語は、交換可能に使用される。ビットスコアはアライメントがどのくらい良好かを示し、スコアが高いほど、アライメントが良好となる。
【０１４１】
Ｅ値または期待値は、類似するスコアを有する配列が偶然にデータベースにおいて生じる可能性を説明する。これは、データベース検索において偶然に生じると期待されるＳと等しいまたはそれよりも良好なスコアを有する異なるアライメントの数の予想である。Ｅ値が小さいほど、アライメントが有意となる。例えば、ｅ−１１７のＥ値を有するアライメントは、類似するスコアの配列が単に偶然により生じる可能性がかなり低いことを意味する。加えて、ランダム対のアミノ酸をアライメントすることに関して期待されるスコアは、負であることが要求される、さもなければ、長いアライメントは、アライメントされたセグメントが関連するかどうかに関係なく、高スコアを有する傾向があるだろう。加えて、ＢＬＡＳＴアルゴリズムは、適切な置換マトリックス、ヌクレオチド、またはアミノ酸を使用し、ギャップありアライメントに関してはギャップ生成および伸長ペナルティを使用する。例えば、ポリペプチド配列のＢＬＡＳＴアライメントおよび比較は典型的に、ＢＬＯＳＵＭ６２マトリックス、１１のギャップ存在ペナルティ、および１のギャップ伸長ペナルティを使用して行われる。
【０１４２】
一実施形態では、配列類似性スコアは、ＢＬＯＳＵＭ６２マトリックス、１１のギャップ存在ペナルティ、および１のギャップ伸長ペナルティを使用して行われたＢＬＡＳＴ分析から報告される。
【０１４３】
特定の実施形態では、本明細書において提供される配列同一性／類似性スコアは、ヌクレオチド配列の％同一性および％類似性には、５０のＧＡＰ加重、および３の長さ加重、ならびにｎｗｓｇａｐｄｎａ．ｃｍｐスコアマトリックスを使用して、アミノ酸配列の％同一性および％類似性には、８のＧＡＰ加重、および２の長さ加重、ならびにＢＬＯＳＵＭ６２スコアマトリックスを使用するパラメータを使用して、ＧＡＰバージョン１０（ＧＣＧ，Ａｃｃｅｌｒｙｓ，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，Ｃａｌｉｆ．）を使用して得られた値を指す（Ｈｅｎｉｋｏｆｆ  ａｎｄ  Ｈｅｎｉｋｏｆｆ，ＰＮＡＳ  ＵＳＡ．８９：１０９１５−１０９１９，１９９２）。ＧＡＰは、一致数を最大にし、ギャップ数を最小にする２つの完全な配列のアライメントを見つけ出すために、Ｎｅｅｄｌｅｍａｎ  ａｎｄ  Ｗｕｎｓｃｈ（Ｊ  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ．４８：４４３−４５３，１９７０）のアルゴリズムを使用する。
【０１４４】
一実施形態では、変異型ポリペプチドは、少なくとも約５０、６０、７０、８０、９０、１００、１００、１１０、１２０、１３０、１４０、１５０、１６０、１７０、１８０、１９０、２００、２１０、２２０、２３０、２４０、２５０、２６０、２７０、２８０、２９０、３００、３１０、３２０、３３０、３４０、３５０、３６０、３７０、３８０、３９０、４００、４１０、４２０、４３０、４４０、４５０、４６０、４７０、４８０、４９０、５００、５１０、５２０、５３０、５４０、５５０、５６０、５７０、５８０、５９０、６００、６１０、６２０、６３０、６４０、６５０、６６０、６７０、６８０、６９０、７００、７１０、７２０、７３０、７４０、７５０、７６０、７７０、７８０、７９０、８００、８１０、８２０、８３０、８４０、８５０、８６０、８７０、８８０、８９０、９００、９１０、９２０、９３０、９４０、９５０、９６０、９７０、９８０、９９０、１０００以上（その間の全ての整数および範囲を含む）のＢＬＡＳＴビットスコアまたは配列類似性スコアを生成するために、基準となるポリペプチド配列（例えば、表、配列表、配列番号１〜１０８を参照されたい）と最適にアライメントされ得るアミノ酸配列を含み、ＢＬＡＳＴアライメントは、ＢＬＯＳＵＭ６２マトリックス、１１のギャップ存在ペナルティ、および１のギャップ伸長ペナルティを使用した。
【０１４５】
上述のように、基準となるポリペプチドは、アミノ酸置換、欠失、切り詰め、付加、および挿入を含む様々な方法で変更され得る。かかる操作方法は、当該技術分野において一般的に知られている。例えば、基準となるポリペプチドのアミノ酸配列変異型は、ＤＮＡにおける突然変異により調製され得る。突然変異誘発およびヌクレオチド配列変化の方法は、当該技術分野において周知である。例えば、Ｋｕｎｋｅｌ（ＰＮＡＳ  ＵＳＡ．８２：４８８−４９２，１９８５）、Ｋｕｎｋｅｌ  ｅｔ  ａｌ．，（Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌ．１５４：３６７−３８２，１９８７）、米国特許第４，８７３，１９２号、Ｗａｔｓｏｎ，Ｊ．Ｄ．ｅｔ  ａｌ．，（“Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｇｅｎｅ，”Ｆｏｕｒｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｂｅｎｊａｍｉｎ／Ｃｕｍｍｉｎｇｓ，Ｍｅｎｌｏ  Ｐａｒｋ，Ｃａｌｉｆ．，１９８７）、およびこれらの中で引用される参考文献を参照されたい。対象のタンパク質の生物学的活性に影響を及ぼさない適切なアミノ酸置換に関するガイダンスは、Ｄａｙｈｏｆｆ  ｅｔ  ａｌ．，（１９７８）Ａｔｌａｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ（Ｎａｔｌ．Ｂｉｏｍｅｄ．Ｒｅｓ．Ｆｏｕｎｄ．，Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ，Ｄ．Ｃ．）のモデルに見出すことができる。
【０１４６】
かかる修飾により作製されたコンビナトリアルライブラリの遺伝子産物のスクリーニング方法および選択された特性を有する遺伝子産物のｃＤＮＡライブラリのスクリーニング方法は、当該技術分野において知られている。かかる方法は、基準となるポリペプチドのコンビナトリアル突然変異誘発により生成された遺伝子ライブラリの迅速なスクリーニングに適応可能である。１例として、再帰的アンサンブル突然変異誘発（ＲＥＭ）、すなわち、ライブラリ中の機能的突然変異体の頻度を増加させる技法は、ポリペプチド変異型を同定するために、スクリーニングアッセイと組み合わせて使用され得る（Ａｒｋｉｎ  ａｎｄ  Ｙｏｕｒｖａｎ，ＰＮＡＳ  ＵＳＡ  ８９：７８１１−７８１５，１９９２、Ｄｅｌｇｒａｖｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ．６：３２７−３３１，１９９３）。
【０１４７】
本明細書に記載される抗体（例えば、実施例１を参照されたい）の、ヒトまたはマウスＬ型電位開口型カルシウムチャネルα１サブユニットポリペプチドへの結合を「競合的に阻害する」抗体またはその抗原結合断片も含まれる。競合阻害によるｍＡｂ特異性および親和性の決定方法は、例えば、Ｈａｒｌｏｗ，ｅｔ  ａｌ．，Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ，Ｎ．Ｙ．，１９８８）、Ｃｏｌｌｉｇａｎ  ｅｔ  ａｌ．，ｅｄｓ．，Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，Ｇｒｅｅｎｅ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ａｓｓｏｃ．ａｎｄ  Ｗｉｌｅｙ  Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ，Ｎ．Ｙ．，（１９９２，１９９３）、Ｍｕｌｌｅｒ，Ｍｅｔｈ．Ｅｎｚｙｍｏｌ．９２：５８９−６０１，１９８３、およびＪｉａ，Ｘ−Ｃ．ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ  ２８８：９１−９８，２００４（これらの各々は参照により組み込まれる）に見出すことができる。
【０１４８】
特定の実施形態は、抗体の、ヒトまたはマウスＬ型電位開口型カルシウムチャネル上のアミノ酸配列（配列番号１〜４）への結合を競合的に阻害する抗体またはその抗原結合断片を含む。特定の実施形態では、抗体（競合的に阻害される）は、モノクローナル抗体、例えば、本明細書に記載される、ＩｇＧ抗体などの全モノクローナル抗体である。特定の実施形態では、抗体（競合的に阻害される）は、ＩｇＧ１またはＩｇＧ２ａ免疫グロブリンサブタイプである。
【０１４９】
ある特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、例えば、検出を容易にするために、検出可能な実体に抱合または共有結合される。例示的な検出可能な実体は、限定されないが、ヨウ素系標識、放射性同位体、フルオロフォア／蛍光色素、およびナノ粒子を含む。
【０１５０】
例示的なヨウ素系標識としては、ジアトリゾ酸（Ｈｙｐａｑｕｅ（登録商標）、ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）およびそのアニオン性形態であるジアトリゾエートが挙げられる。ジアトリゾ酸は、ＣＴスキャンなどの高度Ｘ線技法に使用される造影剤である。以下に記載されるヨウ素放射性同位体も含まれる。
【０１５１】
検出可能な実体として使用され得る例示的な放射性同位体としては、３２Ｐ、３３Ｐ、３５Ｓ、３Ｈ、１８Ｆ、１１Ｃ、１３Ｎ、１５Ｏ、１１１Ｉｎ、１６９Ｙｂ、９９ｍＴＣ、５５Ｆｅ、ならびに１２３Ｉ、１２４Ｉ、１２５Ｉ、および１３１Ｉなどのヨウ素の同位体が挙げられる。これらの放射性同位体は、異なる半減期、崩壊のタイプ、および特定のプロトコルのニーズに見合うように調整され得るエネルギーレベルを有する。
【０１５２】
直接検出可能な実体として使用され得るフルオロフォアまたは蛍光色素の例としては、フルオレセイン、テトラメチルローダミン、Ｔｅｘａｓ  Ｒｅｄ、Ｏｒｅｇｏｎ  Ｇｒｅｅｎ（登録商標）、およびその他いくつか（例えば、Ｈａｕｇｌａｎｄ，Ｈａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔ  Ｐｒｏｂｅｓ−９ｔｈ  Ｅｄ．，２００２，Ｍｏｌｅｃ．Ｐｒｏｂｅｓ，Ｉｎｃ．，Ｅｕｇｅｎｅ  ＯＲ、Ｈａｕｇｌａｎｄ，Ｔｈｅ  Ｈａｎｄｂｏｏｋ：Ａ  Ｇｕｉｄｅ  ｔｏ  Ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔ  Ｐｒｏｂｅｓ  ａｎｄ  Ｌａｂｅｌｉｎｇ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ−１０ｔｈ  Ｅｄ．，２００５，Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，Ｃａｒｌｓｂａｄ，ＣＡ）が挙げられる。発光性、またはさもなければ検出可能な色素も含まれる。色素により発せられる光は、紫外線または赤外光などの可視光または不可視光であり得る。例示的な実施形態では、色素は、蛍光共鳴エネルギー移動（ＦＲＥＴ）色素；フルオロセインおよびローダミンなどのキサンテン色素；αまたはβ位置にアミノ基を有する色素（ナフチルアミン色素、１−ジメチルアミノナフチル−５−スルホネート、１−アニリノ−８−ナフタレンド（ｎａｐｈｔｈａｌｅｎｄｅ）スルホネート、および２−ｐ−トウイジニル（ｔｏｕｉｄｉｎｙｌ）−６−ナフタレンスルホネートなど）；９−イソチオシアナトクリジンおよびアクリジンオレンジなどの３−フェニル−７−イソシアナトクマリンを有する色素；ピレン、ベンゾオキサジアゾール（ｂｅｎｓｏｘａｄｉａｚｏｌｅ）、およびスチルベン；３−（ε−カルボキシペンチル）−３’−エチル−５，５’−ジメチルオキサカルボシアニン（ＣＹＡ）を有する色素；６−カルボキシフルオレセイン（ＦＡＭ）；５＆６−カルボキシローダミン−１１０（Ｒ１１０）；６−カルボキシローダミン−６Ｇ（Ｒ６Ｇ）；Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチル−６−カルボキシローダミン（ＴＡＭＲＡ）；６−カルボキシ−Ｘ−ローダミン（ＲＯＸ）；６−カルボキシ−４’，５’−ジクロロ−２’，７’−ジメトキシフルオレセイン（ＪＯＥ）；ＡＬＥＸＡ  ＦＬＵＯＲ（商標）；Ｃｙ２；Ｔｅｘａｓ  ＲｅｄおよびＲｈｏｄａｍｉｎｅ  Ｒｅｄ；６−カルボキシ−２’，４，７，７’−テトラクロロフルオレセイン（ＴＥＴ）；６−カルボキシ−２’，４，４’，５’，７，７’−ヘキサクロロフルオレセイン（ＨＥＸ）；５−カルボキシ−２’，４’，５’，７’−テトラクロロフルオレセイン（ＺＯＥ）；ＮＡＮ；ＮＥＤ；Ｃｙ３；Ｃｙ３．５；Ｃｙ５；Ｃｙ５．５；Ｃｙ７；およびＣｙ７．５；ＩＲ８００ＣＷ、ＩＣＧ、Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ  ３５０；Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ  ４８８；Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ  ５３２；Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ  ５４６；Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ  ５６８；Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ  ５９４；Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ  ６４７；Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ  ６８０、またはＡｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ  ７５０であり得る。
【０１５３】
ナノ粒子は通常、サイズが約１〜１０００ｎｍの範囲であり、金および銀粒子ならびに量子ドットなどの多様な化学構造を含む。角度のある入射白色光で照射されると、約４０〜１２０ｎｍの範囲の銀または金のナノ粒子は高強度の単色光を散乱する。散乱光の波長は粒子のサイズに依存する。近接して４または５つの異なる粒子が各々単色光を散乱し、重なり合うとき、これは特定の固有の色をもたらす。銀または金の粒子などの誘導体化ナノ粒子は、タンパク質、抗体、小分子、受容体リガンド、および核酸を含む広範囲にわたる分子に結合され得る。ナノ粒子の特定の例としては、金粒子、銀粒子、銅粒子、白金粒子、カドミウム粒子、複合粒子、金中空球、金被覆シリカナノシェル、およびシリカ被覆金シェルなどの金属ナノ粒子および金属ナノシェルが挙げられる。シリカ、ラテックス、ポリスチレン、ポリカーボネート、ポリアクリレート、ＰＶＤＦナノ粒子、およびこれらの材料の任意の着色粒子も含まれる。
【０１５４】
量子ドットは、広範囲の波長にわたって光によって励起される、直径が約１〜５ｎｍの蛍光を発する結晶である。適切な波長を有する光によって励起されるとき、これらの結晶は単色光などの光を放射し、波長はそれらの化学組成およびサイズに依存する。ＣｄＳｅ、ＺｎＳｅ、ＩｎＰ、またはＩｎＡｓなどの量子ドットは固有の光学特性を有し、これらおよび類似する量子ドットは、いくつかの商業源（例えば、ＮＮ−Ｌａｂｓ，Ｆａｙｅｔｔｅｖｉｌｌｅ，ＡＲ、Ｏｃｅａｎ  Ｎａｎｏｔｅｃｈ，Ｆａｙｅｔｔｅｖｉｌｌｅ，ＡＲ、Ｎａｎｏｃｏ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｍａｎｃｈｅｓｔｅｒ，ＵＫ、Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）から入手可能である。
【０１５５】
抗体は、当業者に既知の様々な技法のいずれかにより調製され得る。例えば、Ｈａｒｌｏｗ  ａｎｄ  Ｌａｎｅ，Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，１９８８を参照されたい。対象のポリペプチドに特異的なモノクローナル抗体は、例えば、Ｋｏｈｌｅｒ  ａｎｄ  Ｍｉｌｓｔｅｉｎ，Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．６：５１１−５１９，１９７６の技法およびその改良版を使用して調製され得る。ヒト抗体を発現するために、マウスなどのトランスジェニック動物を利用する方法も含まれる。例えば、Ｎｅｕｂｅｒｇｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  １４：８２６，１９９６、Ｌｏｎｂｅｒｇ  ｅｔ  ａｌ．，Ｈａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ  １１３：４９−１０１，１９９４、およびＬｏｎｂｅｒｇ  ｅｔ  ａｌ．，Ｉｎｔｅｒｎａｌ  Ｒｅｖｉｅｗ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  １３：６５−９３，１９９５を参照されたい。特定の例としては、ＲＥＧＥＲＮＥＲＥＸ（登録商標）によるＶＥＬＯＣＩＭＭＵＮＥ（登録商標）プラットホームが挙げられる（例えば、米国特許第６，５９６，５４１号を参照されたい）。抗体は、本明細書に記載され、当該技術分野において既知の組換え技法によっても調製され得る。
【０１５６】
本明細書に記載される抗体は、本明細書に記載される治療方法および組成物のいずれかにおいて使用され得る。
【０１５７】
ポリヌクレオチド、宿主細胞、および産生方法
ある特定の実施形態は、抗体およびその抗原結合断片をコードするポリヌクレオチド、ならびに例えば、ポリヌクレオチドが１つ以上の調節要素に動作可能に連結される、かかるポリヌクレオチドを含むベクターに関する。前述の組換え産生の方法に加えて、かかるポリヌクレオチド、ベクター、抗体、およびその抗原結合断片を含む組換え宿主細胞も含まれる。
【０１５８】
抗体およびその抗原結合断片は標準的な方法を使用して調製され得る。特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、本明細書に記載され、当該技術分野において知られているように、発現系において組換えタンパク質として発現される。
【０１５９】
ポリヌクレオチドは、抗体またはその抗原結合断片をコードする核酸の１つまたは複数のコピーを含有し得る。
【０１６０】
プロモーター配列、ターミネーター配列、ポリアデニル化配列、エンハンサー配列、マーカー遺伝子、および必要に応じて他の配列を含む、適切な調節配列を含有する好適なベクターが選択されるか、または構築され得る。ベクターは、必要に応じて、プラスミド、ウイルス、例えば、ファージまたはファージミドであり得る。更なる詳細は、例えば、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ：２ｎｄ  ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｓａｍｂｒｏｏｋ  ｅｔ  ａｌ．，１９８９，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓを参照されたい。核酸の操作、例えば、核酸構築物の調製、突然変異誘発、配列決定、ＤＮＡの細胞内への導入および遺伝子発現、ならびにタンパク質の分析のための多くの既知の技法およびプロトコルが、Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｓｅｃｏｎｄ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ａｕｓｕｂｅｌ  ｅｔ  ａｌ．ｅｄｓ．，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ，１９９２またはその後の最新版に詳細に記載されている。
【０１６１】
当業者に理解されるように、いくつかの場合では、非天然型コドンを有するポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を産生することが利点であり得る。例えば、タンパク質発現の速度を増加させるために、または天然型配列から生成された転写物よりも長い半減期など、望ましい特性を有する組換えＲＮＡ転写物を産生するために、特定の原核生物または真核生物宿主が好むコドンが選択され得る。かかるポリヌクレオチドは一般的に、「コドン最適化」と称される。本明細書に記載されるポリヌクレオチドのいずれかがコドン最適化形態で利用され得る。ある特定の実施形態では、ポリヌクレオチドは、Ｅ．ｃｏｌｉなどの特定の細菌またはＳ．ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅなどの酵母において使用するためにコドン最適化され得る（例えば、Ｂｕｒｇｅｓｓ−Ｂｒｏｗｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｘｐｒ  Ｐｕｒｉｆ．５９：９４−１０２，２００８を参照されたい）。
【０１６２】
いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合断片をコードする核酸またはベクターは、宿主細胞内に直接導入され、その細胞はコードされたポリペプチド（複数可）の発現を誘導するのに十分な条件下でインキュベートされる。したがって、ある特定の関連実施形態に従い、任意選択で、抗体の他の構成成分（例えば、Ｆｃ領域）と組み合わせて、および任意選択で、追加の外因性ポリヌクレオチドを含む、本明細書に記載される１つ以上の抗体またはその抗原結合断片をコードするポリヌクレオチドを含む組換え宿主細胞が提供される。
【０１６３】
宿主細胞における抗体またはその抗原結合断片の発現は、適切な条件下で組換え宿主細胞（ポリヌクレオチド（複数可）を含有する）を培養することによって達成され得る。発現による産生後、抗体またはその抗原結合断片は、任意の好適な技法を使用して単離および／または精製され、その後所望に応じて使用され得る。「宿主細胞」という用語は、本明細書に記載される抗体またはその抗原結合断片のうちの１つ以上をコードする核酸配列を導入された細胞、またはその中に導入することができる細胞を指すように使用される。本用語は、後代が元の親に対して形態または遺伝子構成が同一であるか否かに関わらず、選択された遺伝子が存在する限り、親細胞の後代を含む。宿主細胞は、ある特定の特徴、例えば、非天然アミノ酸を抗体またはその抗原結合断片に組み込むことができるアミノアシルｔＲＮＡシンテターゼ（複数可）の発現に関して選択され得る。
【０１６４】
様々な異なる宿主細胞における異種または組換えタンパク質のクローニングおよび発現のための系は周知である。好適な宿主細胞は、哺乳類細胞、細菌、酵母、およびバキュロウイルス系を含む。タンパク質の発現のための当該技術分野において利用可能な哺乳類細胞系は、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞、ＨｅＬａ細胞、ベビーハムスター腎臓細胞、ＨＥＫ−２９３細胞、ＮＳＯマウスメラノーマ細胞、およびその他多くを含む。有用な哺乳類宿主細胞系の更なる例としては、ＳＶ４０（ＣＯＳ−７，ＡＴＣＣ  ＣＲＬ  １６５１）によって形質転換されたサル腎臓ＣＶ１系；ヒト胚性腎臓系（懸濁培養中での増殖のためにサブクローニングされた２９３または２９３細胞、Ｇｒａｈａｍ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｇｅｎ  Ｖｉｒｏｌ．３６：５９（１９７７））；ベビーハムスター腎臓細胞（ＢＨＫ、ＡＴＣＣ  ＣＣＬ  １０）；マウスセルトリ細胞（ＴＭ４、Ｍａｔｈｅｒ，Ｂｉｏｌ．Ｒｅｐｒｏｄ．２３：２４３−２５１（１９８０））；サル腎臓細胞（ＣＶ１  ＡＴＣＣ  ＣＣＬ  ７０）；アフリカミドリザル腎臓細胞（ＶＥＲＯ−７６、ＡＴＣＣ  ＣＲＬ−１５８７）；ヒト頸部癌細胞（ＨＥＬＡ、ＡＴＣＣ  ＣＣＬ  ２）；イヌ腎臓細胞（ＭＤＣＫ、ＡＴＣＣ  ＣＣＬ  ３４）；ｂｕｆｆａｌｏラット肝臓細胞（ＢＲＬ  ３Ａ、ＡＴＣＣ  ＣＲＬ  １４４２）；ヒト肺細胞（Ｗ１３８、ＡＴＣＣ  ＣＣＬ  ７５）；ヒト肝臓細胞（Ｈｅｐ  Ｇ２、ＨＢ  ８０６５）；マウス乳房腫瘍（ＭＭＴ  ０６０５６２、ＡＴＣＣ  ＣＣＬ５１）；ＴＲ１細胞（Ｍａｔｈｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｎｎａｌｓ  Ｎ．Ｙ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．３８３：４４−６８（１９８２））；ＭＲＣ  ５細胞；ＦＳ４細胞；およびヒト肝細胞腫系（Ｈｅｐ  Ｇ２）が挙げられる。他の有用な哺乳類宿主細胞系は、ＤＨＦＲ−ＣＨＯ細胞（Ｕｒｌａｕｂ  ｅｔ  ａｌ．，ＰＮＡＳ  ＵＳＡ  ７７：４２１６（１９８０））を含むチャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞、ならびにＮＳＯおよびＳｐ２／０などの骨髄腫細胞系を含む。抗体産生に好適なある特定の哺乳類宿主細胞系の概説に関しては、例えば、Ｙａｚａｋｉ  ａｎｄ  Ｗｕ，Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌ．２４８（Ｂ．Ｋ．Ｃ  Ｌｏ，ｅｄ．，Ｈｕｍａｎａ  Ｐｒｅｓｓ，Ｔｏｔｏｗａ，Ｎ．Ｊ．，２００３），ｐｐ．２５５−２６８を参照されたい。ある特定の好ましい哺乳類細胞発現系は、ＣＨＯおよびＨＥＫ２９３細胞ベースの発現系（２９３Ｆ細胞を含む）を含む。哺乳類発現系は、当該技術分野において既知の中でも、例えば、Ｔフラスコ、ローラーボトル、もしくは細胞工場、または懸濁培養物中で、例えば、１Ｌおよび５Ｌのスピナー、５Ｌ、１４Ｌ、４０Ｌ、１００Ｌ、および２００Ｌの撹拌タンクバイオリアクター、または２０／５０Ｌおよび１００／２００Ｌ  ＷＡＶＥバイオリアクター中で接着細胞系を利用することができる。
【０１６５】
一般的な好ましい細菌宿主はＥ．ｃｏｌｉである。Ｅ．ｃｏｌｉなどの原核細胞におけるタンパク質の発現は当該技術分野において十分に確立されている。概説に関しては、例えば、Ｐｌｕｃｋｔｈｕｎ，Ａ．Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ．９：５４５−５５１（１９９１）を参照されたい。培養での真核細胞における発現もポリペプチドの組換え産生の選択肢として当業者に利用可能である（Ｒｅｆ，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎｉｏｎ  Ｂｉｏｔｅｃｈ．４：５７３−５７６，１９９３およびＴｒｉｌｌ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎｉｏｎ  Ｂｉｏｔｅｃｈ．６：５５３−５６０，１９９５を参照されたい）。特定の実施形態では、タンパク質発現は、Ｔ７  ＲＮＡポリメラーゼ（例えば、ｐＥＴベクターシリーズ）により制御され得る。これらのおよび関連実施形態は、Ｔ７媒介発現を支持し、標的タンパク質の安定性の改善のためにｌｏｎおよびｏｍｐＴプロテアーゼを欠損するＢＬ２１のλＤＥ３溶原菌である発現宿主株ＢＬ２１（ＤＥ３）を利用することができる。Ｒｏｓｅｔｔａ（商標）（ＤＥ３）およびＲｏｓｅｔｔａ  ２（ＤＥ３）株など、Ｅ．ｃｏｌｉにおいて稀に使用されるｔＲＮＡをコードするプラスミドを保有する発現宿主株も含まれる。細胞溶解および試料の取り扱いは、Ｂｅｎｚｏｎａｓｅ（登録商標）ヌクレアーゼおよびＢｕｇＢｕｓｔｅｒ（登録商標）Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ  Ｒｅａｇｅｎｔなどの試薬を使用することによっても改善され得る。細胞培養に関して、自己誘導性培地は、高処理発現系を含む、多くの発現系の効率を改善することができる。このタイプの培地（例えば、Ｏｖｅｒｎｉｇｈｔ  Ｅｘｐｒｅｓｓ（商標）Ａｕｔｏｉｎｄｕｃｔｉｏｎ  Ｓｙｓｔｅｍ）は、ＩＰＴＧなどの人工誘導剤を添加することなく、代謝シフトを通してタンパク質発現を徐々に誘発する。特定の実施形態は、ヘキサヒスチジンタグ（Ｈｉｓ・Ｔａｇ（登録商標）融合など）、続いて固定化金属親和性クロマトグラフィー（ＩＭＡＣ）精製または関連技法を採用する。しかしながら、ある特定の態様では、臨床グレードのタンパク質は、親和性タグを使用することなく、または使用することなく、Ｅ．ｃｏｌｉ封入体から単離され得る（例えば、Ｓｈｉｍｐ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｘｐｒ  Ｐｕｒｉｆ．５０：５８−６７，２００６を参照されたい）。更なる例として、ある特定の実施形態は、低温でのＥｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉにおけるタンパク質の過剰発現がそれらの溶解度および安定性を改善するため、低温ショック誘導性Ｅ．ｃｏｌｉ高収率産生系を採用し得る（例えば、Ｑｉｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ．２２：８７７−８８２，２００４を参照されたい）。
【０１６６】
加えて、宿主細胞株は、挿入された配列の発現を調節する、または所望の様式で発現されたタンパク質を処理するその能力について選択され得る。ポリペプチドのかかる修飾は、限定されないが、アセチル化、カルボキシル化、グリコシル化、リン酸化、脂質化、およびアシル化などの翻訳後修飾を含む。タンパク質の「プレプロ」形態を切断する翻訳後プロセシングも、正しい挿入、折り畳み、および／または機能を容易にするために使用され得る。細菌細胞に加えて、かかる翻訳後活性に特異的な細胞機構および特徴機序を有する、または更にはそれらを欠く酵母、ＣＨＯ、ＨｅＬａ、ＭＤＣＫ、ＨＥＫ２９３、およびＷ１３８などの異なる宿主細胞が、対象のタンパク質（例えば、抗体）の正しい修飾およびプロセシングを確実にするために選択され得る。
【０１６７】
組換えタンパク質の長期高収率産生に関して、安定した発現が一般的に好ましい。例えば、対象のポリヌクレオチドを安定して発現する細胞系は、ウイルスの複製起点および／または内因性発現要素、ならびに同じまたは別個のベクター上に選択マーカー遺伝子を含有し得る発現ベクターを使用して形質転換され得る。ベクターの導入後、選択的培地に交換される前に、富化培地中で細胞を約１〜２日間増殖させる。選択マーカーの目的は、選択に対する耐性を付与することであり、その存在は、導入された配列を良好に発現する、細胞の増殖および回収を可能にする。安定して形質転換された細胞の耐性クローンは、細胞型に適切な組織培養技法を使用して増殖され得る。一過性の遺伝子導入または感染などによる一過性の産生も採用され得る。一過性の産生に好適である例示的な哺乳類発現系は、ＨＥＫ２９３（例えば、２９３Ｆ細胞）およびＣＨＯベースの系を含む。
【０１６８】
対象のポリヌクレオチド配列で形質転換された宿主細胞は、タンパク質の発現および細胞培養物からのその回収に好適な条件下で培養され得る。ある特定の実施形態は、無血清細胞発現系を利用する。例としては、無血清培地で増殖することができるＨＥＫ２９３細胞およびＣＨＯ細胞が挙げられる（例えば、Ｒｏｓｓｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｘｐｒ．Ｐｕｒｉｆ．４０：２３７−４３，２００５および米国特許第６，２１０，９２２号を参照されたい）。
【０１６９】
組換え細胞により産生されたタンパク質（複数可）は、当該技術分野において既知の様々な技法に従い精製および特徴付けされ得る。タンパク質精製を行い、タンパク質純度を分析するための例示的な系は、高速タンパク質液体クロマトグラフィー（ＦＰＬＣ）（例えば、ＡＫＴＡおよびＢｉｏ−Ｒａｄ  ＦＰＬＣ系）、高性能液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）（例えば、ＢｅｃｋｍａｎおよびＷａｔｅｒｓ  ＨＰＬＣ）を含む。例示的な精製化学は、当該技術分野において既知の中でも、イオン交換クロマトグラフィー（例えば、Ｑ，Ｓ）、サイズ排除クロマトグラフィー、塩勾配、親和性精製（例えば、Ｎｉ、Ｃｏ、ＦＬＡＧ、マルトース、グルタチオン、プロテインＡ／Ｇ）、ゲル濾過、逆相、セラミックＨｙｐｅｒＤ（登録商標）イオン交換クロマトグラフィー、および疎水性相互作用カラム（ＨＩＣ）を含む。ＳＤＳ−ＰＡＧＥ（例えば、クマシー、銀染色）、免疫ブロット、ブラッドフォード、およびＥＬＩＳＡなどの分析法も含まれ、これらは、典型的に、タンパク質組成物の純度を測定するために、産生または精製プロセスの任意のステップ中に利用され得る。
【０１７０】
組換えによって産生されたタンパク質、例えば抗体の濃縮方法も含まれる。典型的に、溶液が対象のタンパク質以外の可溶性構成成分をわずかしか含有しないときに採用される凍結乾燥が例として挙げられる。凍結乾燥は、多くの場合、ＨＰＬＣの実行後に行われ、混合物から大半のまたは全ての揮発性構成成分を除去することができる。典型的に、タンパク質溶液を濃縮するために、１つ以上の選択透過性膜を採用する、限外濾過技法も含まれる。膜は、水および小分子を通過させ、タンパク質を保持する。溶液は、他の技法の中でも、機械式ポンプ、ガス圧力、または遠心分離により膜に対して通され得る。
【０１７１】
ある特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、当該技術分野において慣用的な技法に従い測定されたとき、少なくとも約９０％の純度を有する。ある特定の実施形態では、診断用組成物またはある特定の治療用組成物など、抗体またはその抗原結合断片は、少なくとも約９５％の純度を有する。特定の実施形態では、治療用または薬学的組成物など、抗体またはその抗原結合断片は、少なくとも約９７％、または９８％、または９９％の純度を有する。他の実施形態では、基準となるまたは研究用試薬として使用されるときなど、抗体またはその抗原結合断片は、より低い純度ものであり得るか、または少なくとも約５０％、６０％、７０％、または８０％の純度を有し得る。純度は、全体として、または他のタンパク質、例えば、タンパク質ベースの純度など、選択された構成成分に関して測定され得る。
【０１７２】
ある特定の実施形態では、本明細書に記載される組成物は、例えば、約９５％内毒素を含まない、好ましくは約９９％内毒素を含まない、より好ましくは約９９．９９％内毒素を含まない、を含む、ほぼ実質的に内毒素を含まない。内毒素の存在は、本明細書に記載されるように、当該技術分野において慣用的な技法に従い検出され得る。特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、実質的に無血清培地中で、哺乳類またはヒトの細胞などの真核細胞から作製される。
【０１７３】
使用方法
実施形態は、本明細書に記載される抗体およびその抗原結合断片の使用に関連する方法を含む。特定の実施形態では、かかる方法は、Ｌ型電位開口型カルシウムチャネルを発現する細胞を、本明細書に記載される抗体またはその抗原結合断片と接触させ、それによりＬ型電位開口型カルシウムチャネルの活性を調節することを含む。いくつかの態様では、抗体または抗原結合断片は、チャネルに特異的に結合する。いくつかの実施形態では、抗体または抗原結合断片は、Ｌ型電位開口型カルシウムチャネルのα１サブユニットの細胞外ポアループに特異的に結合する。特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、α１サブユニットのドメイン１の膜貫通部位Ｓ５およびＳ６間の細胞外ポアループに特異的に結合する。α１サブユニットは、Ｃａｖ１．１、Ｃａｖ１．２、Ｃａｖ１．３、もしくはＣａｖ１．４カルシウムチャネル、またはその任意のイソフォームもしくは変異型に属し得る。ある特定の実施形態では、細胞は造血細胞などの免疫細胞である。
【０１７４】
ある特定の実施形態は、細胞を、本明細書に記載される、抗体またはその抗原結合断片と接触させることを含む、細胞の活性の調節方法を提供する。いくつかの実施形態では、細胞は、Ｌ型電位開口型カルシウムチャネルを発現する。いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、細胞の細胞活性を増加させる。いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、細胞の細胞活性を減少させる。
【０１７５】
特定の実施形態は、対象に、有効量の本明細書に記載される抗体またはその抗原結合断片を投与することを含む、対象における免疫応答の調節方法に関する。いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、Ｌ型電位開口型カルシウムチャネルを発現する免疫細胞に接触し、免疫細胞の活性を調節する。ある特定の実施形態では、本明細書に記載される抗体または抗原結合断片を投与することにより、対象における免疫応答が増加する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載される抗体または抗原結合断片を投与することにより、対象における免疫応答が減少する。
【０１７６】
ある特定の実施形態は、対象に、有効量の本明細書に記載される抗体またはその抗原結合断片を投与することを含む、対象における疾患の治療方法に関する。いくつかの実施形態では、疾患は炎症疾患である。いくつかの実施形態では、疾患は癌である。
【０１７７】
特定の実施形態は、Ｌ型電位開口型カルシウムチャネルの活性を調節することに関する。活性の調節は、活性を増加させること、活性を減少させること、またはその両方の組み合わせを指す。いくつかの態様では、チャネルの活性は、チャネルのカルシウム透過を指す。チャネル活性の変更方法は、チャネルが開構造または閉構造にある確率を変化させる、開構造への変換を引き起こす電位閾値を変更する、チャネルの活性後にチャネルが開口している継続時間を変化させる、またはチャネルが開口または閉鎖しているときのチャネルのカルシウム透過を変更することにより、カルシウム伝透過を変更することを含み得る。
【０１７８】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載される、抗体またはその抗原結合断片は、Ｌ型電位開口型カルシウムチャネルに接触し、それによりチャネルの活性を調節する。いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、Ｌ型電位開口型チャネルの活性を阻害する。特定の実施形態では、Ｌ型電位開口型カルシウムチャネルの活性を阻害することにより、活性が統計的に有意な量低減される。特定の実施形態では、Ｌ型電位開口型カルシウムチャネルの活性を阻害することにより、チャネル活性が５％、６％、７％、８％、９％、１０％、１１％、１２％、１３％、１４％、１５％、１６％、１７％、１８％、１９％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、または１００％（その間の全ての整数および範囲を含む）減少する。
【０１７９】
いくつかの実施形態では、抗体または抗原結合断片は、Ｌ型電位開口型チャネルの活性を増加させる。特定の実施形態では、Ｌ型電位開口型カルシウムチャネルの活性を増加させることにより、活性が統計的に有意な量増加する。特定の実施形態では、Ｌ型電位開口型カルシウムチャネルの活性を増加させることにより、チャネル活性が５％、６％、７％、８％、９％、１０％、１１％、１２％、１３％、１４％、１５％、１６％、１７％、１８％、１９％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、または１００％（その間の全ての整数および範囲を含む）増加する。ある特定の実施形態では、チャネル活性における増加は、２倍、３倍、４倍、５倍、６倍、７倍、８倍、９倍、１０倍、２０倍、３０倍、４０倍、５０倍、６０倍、７０倍、８０倍、９０倍、１００倍、２００倍、３００倍、４００倍、５００倍、１，０００倍、１０，０００倍、または１０，０００倍超（それらの間の全ての整数および範囲を含む）のチャネル活性の増加をもたらす。
【０１８０】
ある特定の実施形態では、Ｌ型電位開口型カルシウムチャネルの活性の調節は、当該技術分野において既知の標準的な技法により定量化される。いくつかの実施形態では、Ｌ型電位開口型カルシウムチャネルの活性の調節は、チャネルを、本明細書に記載される抗体または抗原結合断片と接触させ、チャネルの活性を測定し、その測定値を対照チャネルの測定値と比較することにより測定される。特定の実施形態では、チャネルの活性は、チャネルのカルシウム透過を測定することにより評価される。Ｌ型電位開口型カルシウムチャネルのカルシウム透過を測定するための標準的な技法は、当該技術分野において既知であり、限定されないが、パッチクランプ記録、シングルチャネルレコーディング、およびホールセル記録などの電気生理学的技法；フラ−２、インド−１、フルオ−３、フルオ−４、カルシウムグリーン−１などの化学インジケータ、またはＰｅｒｉｃａｍｓ、Ｃａｍｅｌｅｏｎｓ、およびＧＣａＭＰなどの遺伝子コード型インジケータを利用するカルシウムイメージング技法、ならびにタンパク質の発現、リン酸化、または転位などのＬ型電位開口型カルシウムチャネル活性に相関する事象の測定を含む。
【０１８１】
いくつかの実施形態では、Ｌ型電位開口型チャネルを発現する細胞を、本発明の抗体またはその抗原結合断片と接触させることにより、細胞の活性が調節される。細胞の活性の調節は、少なくとも１つの細胞プロセスを調節することを指す。細胞プロセスの例としては、限定されないが、細胞生存、アポトーシス、壊死、プログラム細胞死、転写、翻訳、脂質合成、成熟、分化、異化、消化、吸収、分泌、分裂、細胞増殖、遊走、リモデリング、修復、および保存が挙げられる。いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、細胞の活性を減少させる。いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、細胞の活性を増加させる。いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、細胞の活性を増加および減少の両方を行う。細胞の活性は、例えば、細胞が活性を行う程度を調節することにより、または活性を行う細胞の数を増加または減少させることにより調節され得る。細胞活性は、例えば、の活性を最初に増加させ、次に細胞において持続的な減少をもたらす抗体により、または例えば、細胞の１集団の活性を増加させ、異なる細胞集団の活性を減少させることにより、増加および減少の両方が行われ得る。
【０１８２】
いくつかの実施形態は、Ｌ型電位開口型カルシウムチャネルがカルシウムの細胞内濃度を調節することにより細胞活性およびプロセスを調節するモデルを企図する。カルシウムイオンの細胞質濃度が多数の酵素およびタンパク質を調節するため、カルシウムイオンはシグナル伝達分子である。カルシウムイオンの細胞質内への移動は、膜にわたって電位の傾きを調節することにより、例えば、心細胞の活動電位に寄与することにより、または二次メッセンジャーとして作用することにより、細胞プロセスまたは活性に影響を与えることができる。二次メッセンジャーは、例えば、細胞表面から、細胞質および／または核などの細胞の標的分子にシグナルを中継し、それを増幅する分子である。カルシウムイオンは通常、カルシウムイオンの活性な細胞外輸送、またはカルシウムイオンの、小胞体などの細胞内貯蔵への輸送を通して、細胞質において低濃度に維持される。細胞質カルシウム濃度の一時的な上昇は、カルシウムイオンが、分子標的として機能する多くのカルシウム結合タンパク質、例えば、細胞の細胞質に豊富なＣａ２＋結合タンパク質であるカルモジュリンに結合することを可能にする。カルシウムイオンは、後にタンパク質キナーゼなどの更に他の下流標的に結合することによってその作用を開始するカルモジュリンに結合し、それを活性化する。カルシウムシグナル伝達は、ホスホリパーゼＣ／タンパク質キナーゼＣシグナル伝達カスケードなどの他の二次メッセンジャー系を活性化することができる。このシグナル伝達は、次に、細胞プロセスまたは活性、例えば、転写、翻訳、分泌、または成熟を調整および引き起こすことができる。
【０１８３】
よって、いくつかの実施形態は、拘束されないが、Ｌ型電位開口型カルシウムチャネルが細胞質カルシウム濃度を調節することによって細胞プロセスまたは活性を調節するモデルを企図する。いくつかの実施形態では、Ｌ型カルシウムチャネルの活性の調節は、細胞内カルシウムシグナル伝達を調節することによりチャネルを発現する細胞の活性を調節する。よって、いくつかの実施形態では、細胞の活性がカルシウムにより正に調節される場合、Ｌ型カルシウムチャネルの活性の強化、作動、活性化、または増加は、細胞におけるカルシウムイオンの細胞質濃度を増加させることにより細胞の活性を増加させ、逆に、カルシウムチャネル活性の減少または阻害は、細胞内カルシウム濃度の増加を減少または阻止し、細胞の活性を阻害または減少させる。逆に、細胞活性がＬ型電位開口型カルシウムチャネルを発現する細胞においてカルシウムシグナル伝達に負に結合される場合、チャネル活性の増加は細胞活性を阻害し、チャネル活性の阻害は細胞活性を増加させる。いくつかの実施形態では、細胞のＬ型電位開口型カルシウムチャネルの調節は、細胞においてカルシウムにより調節された１つ以上の細胞活性を調節するが、細胞においてカルシウムにより調節された１つ以上の異なる細胞活性を調節しない。
【０１８４】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載される、抗体またはその抗原結合断片は、Ｌ型電位開口型カルシウムチャネルを発現する細胞に接触し、それにより細胞の活性を調節する。いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、細胞の活性を阻害する。特定の実施形態では、細胞の活性を阻害することにより、細胞の活性が統計的に有意な量低減する。特定の実施形態では、細胞の活性を阻害することにより、細胞活性が５％、６％、７％、８％、９％、１０％、１１％、１２％、１３％、１４％、１５％、１６％、１７％、１８％、１９％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、または１００％（その間の全ての整数および範囲を含む）減少する。
【０１８５】
いくつかの実施形態では、抗体または抗原結合断片は、細胞の細胞活性を増加させる。特定の実施形態では、細胞の活性を増加させることにより、活性が統計的に有意な量増加する。特定の実施形態では、細胞の活性を増加させることにより、細胞活性が５％、６％、７％、８％、９％、１０％、１１％、１２％、１３％、１４％、１５％、１６％、１７％、１８％、１９％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、または１００％（その間の全ての整数および範囲を含む）増加する。ある特定の実施形態では、細胞の活性における増加は、２倍、３倍、４倍、５倍、６倍、７倍、８倍、９倍、１０倍、２０倍、３０倍、４０倍、５０倍、６０倍、７０倍、８０倍、９０倍、１００倍、２００倍、３００倍、４００倍、５００倍、１，０００倍、１０，０００倍、または１０，０００倍超のチャネル活性の増加（それらの間の全ての整数および範囲を含む）をもたらす。
【０１８６】
ある特定の実施形態では、細胞における活性の調節は、当該技術分野において既知の標準的な技法により定量化される。いくつかの実施形態では、Ｌ型電位開口型カルシウムチャネルの活性の調節は、細胞を、抗体またはその抗原結合断片と接触させ、細胞の活性を測定し、その測定値を対照細胞の測定値と比較することにより測定される。いくつかの実施形態では、細胞活性は、培養された細胞、動物モデル、または対象から採取された試料もしくは生検において測定される。細胞活性を検査するための技法は、当該技術分野において周知であり、細胞生存、転写、翻訳、脂質合成、分化、吸収、分泌、分裂、増殖、遊走、およびリモデリングを検査するためのアッセイを含む。適切な機能アッセイは、関わる細胞型および測定される活性を考慮して、当業者により容易に決定され得る。
【０１８７】
ある特定の実施形態では、本明細書に記載される、抗体およびその抗原結合断片は、造血細胞などの免疫細胞において発現される電位開口型カルシウムチャネルに接触する。造血細胞は、骨髄系列（単球、マクロファージ、好中球、好塩基球、好酸球、赤血球、巨核球、血小板、マスト細胞、および樹状細胞を含む）からの細胞、およびリンパ球系列（Ｔ細胞、Ｂ細胞、およびナチュラルキラー（ＮＫ）細胞）からの細胞を含む。いくつかの実施形態では、抗体およびその抗原結合断片は、免疫細胞活性を減少させる。いくつかの実施形態では、抗体およびその抗原結合断片は、免疫細胞活性を増加させる。いくつかの実施形態では、抗体およびその抗原結合断片は、例えば、免疫細胞機能を最初に増加させ、次に免疫細胞機能を減少させることにより、または免疫細胞の１集団の活性を増加させ、免疫細胞の別の集団の活性を減少させることにより、免疫細胞活性を増加および減少させる。
【０１８８】
免疫細胞活性の例としては、限定されないが、免疫細胞の細胞プロセス、ならびに自然または適応免疫応答に寄与する細胞プロセスまたは活性が挙げられる。適応免疫応答に寄与する活性は、Ｔ細胞およびＢ細胞などのリンパ球系列の細胞により行われる活性を含む。Ｔ細胞において、これらの活性は、限定されないが、形質細胞およびメモリーＢ細胞におけるＢ細胞の成熟、細胞傷害性Ｔ細胞およびマクロファージの活性化、ヘルパー（ＣＤ４＋）Ｔ細胞によるサイトカイン産生および分泌；細胞傷害性（ＣＤ８＋）Ｔ細胞による細胞の溶解（ウイルス感染細胞または腫瘍細胞など）；調節性（サプレッサー）Ｔ細胞によるＴ細胞媒介免疫の抑制；メモリーＴ細胞における細胞分裂による拡張を含む。Ｔ細胞活性は、抗原へのＴ細胞受容体結合およびＴ細胞成熟もまた含まれる。Ｂ細胞において、活性は、形質細胞による抗体産生および分泌、Ｂ細胞受容体への抗原結合、ならびにＢ細胞受容体活性化を含む。Ｂ細胞活性は成熟および生存もまた含まれる。自然免疫に寄与する免疫細胞活性の例としては、マスト細胞によるヒスタミン含有顆粒およびケモカインの放出、貪食細胞およびマクロファージによる細胞、病原体、または粒子の貪食；好中球による酸化剤、遊離酸素ラジカル、および次亜塩素酸塩の放出；好塩基球および好酸球によるヒスタミン、毒素タンパク質、および遊離ラジカルの放出；ならびにナチュラルキラー（ＮＫ）細胞による感染細胞の破壊が挙げられる。ある特定の実施形態は、限定されないが、免疫細胞機能のこれらの例がカルシウムシグナル伝達に正に結び付けられると考えられるモデルを企図する。
【０１８９】
成熟は一般的に、あまり特殊化していない細胞がより特殊化した細胞型に発達するプロセスを指す。成熟は、細胞の特殊化をもたらす細胞、免疫細胞、および／または胸腺細胞におけるシグナルにより調節された調整を伴う。免疫系における成熟の例としては、限定されないが、単球のマクロファージへの成熟；Ｂ胸腺細胞のＢリンパ球への成熟、および形質細胞またはメモリーＢ細胞への更なる成熟；ならびにＴ胸腺細胞のＴリンパ球への成熟、および細胞傷害性Ｔリンパ球、サイトカイン誘導性キラーＴ細胞、ヘルパーＴ細胞、調節性Ｔ細胞、またはナチュラルキラーＴ細胞への更なる成熟が挙げられる。
【０１９０】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載される、抗体またはその抗原結合断片は、Ｌ型電位開口型カルシウムチャネルを発現する免疫細胞に接触し、それにより免疫細胞の活性を調節する。いくつかの実施形態では、抗体または抗原結合断片は、免疫細胞の活性を阻害する。特定の実施形態では、免疫細胞の活性を阻害することにより、活性が統計的に有意な量低減する。特定の実施形態では、細胞の活性を阻害することにより、細胞活性が５％、６％、７％、８％、９％、１０％、１１％、１２％、１３％、１４％、１５％、１６％、１７％、１８％、１９％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、または１００％（その間の全ての整数および範囲を含む）減少する。
【０１９１】
いくつかの実施形態では、抗体または抗原結合断片は、免疫細胞の活性を増加させる。特定の実施形態では、免疫細胞の活性を増加させることにより、活性が統計的に有意な量増加する。特定の実施形態では、免疫細胞活性を増加させることにより、免疫細胞活性が５％、６％、７％、８％、９％、１０％、１１％、１２％、１３％、１４％、１５％、１６％、１７％、１８％、１９％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、または１００％（その間の全ての整数および範囲を含む）増加する。ある特定の実施形態では、免疫細胞の活性を増加させることにより、チャネル活性が２倍、３倍、４倍、５倍、６倍、７倍、８倍、９倍、１０倍、２０倍、３０倍、４０倍、５０倍、６０倍、７０倍、８０倍、９０倍、１００倍、２００倍、３００倍、４００倍、５００倍、１，０００倍、１０，０００倍、または１０，０００倍超（それらの間の全ての整数および範囲を含む）増加する。
【０１９２】
適切な機能アッセイは、関わる細胞型を考慮して、当業者により容易に決定され得る。例えば、免疫細胞の細胞生存、細胞増殖、細胞分化、および／または細胞活性化は標準的な技法により評価され得る。例えば、特定のプロセスに関連付けられた遺伝子発現における変化は、当該技術分野において既知の技法、例えば、蛍光インシツハイブリダイゼーション、免疫組織化学、ｑＰＣＲ、およびウェスタンブロット分析で測定され得る。代替的に、サイトカイン分泌または細胞溶解能などのプロセスの測定は、当該技術分野において既知の技法を使用して直接評価され得る。様々な造血細胞の免疫機能を評価するための好適なアッセイは当該技術分野において知られている。
【０１９３】
いくつかの実施形態は、治療を必要とする対象にそれを行う目的のために、免疫細胞を、本明細書に記載される抗体または抗原結合断片と接触させて、免疫細胞の活性を修飾する方法に関する。いくつかの態様では、対象は、疾患の治療を必要とする。特定の実施形態では、免疫細胞は、例えば、養子細胞移入を通して、対象を治療する目的のため、インビトロで接触させられる。本明細書で使用される場合、養子細胞移入は、免疫由来細胞を同じ患者に移入し戻す、または免疫機能性および特徴を新しい宿主に移入することを目標として新しいレシピエント宿主に移入することを指す。可能な場合、自家細胞の使用は、移植片対宿主病問題を最小限にすることによりレシピエントを助ける。ある特定の実施形態では、本明細書に記載される抗体またはその抗原結合断片は、対象に投与される。
【０１９４】
本明細書で使用される場合、「免疫応答」という用語は、Ｔ細胞媒介および／またはＢ細胞媒介免疫応答を含む。例示的な免疫応答は、Ｔ細胞応答、例えば、サイトカイン産生および細胞傷害活性を含む。加えて、免疫応答という用語は、Ｔ細胞活性化により間接的に影響を受ける免疫応答、例えば、抗体産生（体液性応答）およびサイトカイン応答細胞、例えば、マクロファージの活性化を含む。免疫応答に関与する免疫細胞は、Ｂ細胞およびＴ細胞（ＣＤ４＋、ＣＤ８＋、Ｔｈ１、およびＴｈ２細胞）などのリンパ球；抗原提示細胞（例えば、樹状細胞、マクロファージ、Ｂリンパ球、ランゲルハンス細胞などのプロフェッショナルな抗原提示細胞、およびケラチノサイト、内皮細胞、星状膠細胞、線維芽細胞、乏突起膠細胞などの非プロフェッショナルな抗原提示細胞）；ナチュラルキラー細胞；マクロファージ、好酸球、マスト細胞、好塩基球、および顆粒球などの骨髄性細胞を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に記載される抗体または抗原結合断片は、炎症部位への炎症細胞輸送を低減するのに効果的である。いくつかの実施形態では、「免疫応答」という用語は、パターン認識受容体（ＰＲＲ）の活性化ならびにマクロファージ、樹状細胞、組織球、クッパー細胞、および／またはマスト細胞上の炎症メディエーターの放出を包含する。炎症メディエーターの例としては、リソソーム顆粒、ヒスタミン、ＩＦＮ−γ、ＩＬ−８、ロイコトリエンＢ４、一酸化窒素、プロスタグランジン、およびＴＮＦ−αが挙げられる。
【０１９５】
特定の実施形態では、Ｌ型電位チャネル活性を減少させる、本明細書に記載される抗体および抗原結合断片は、例えば、自己免疫疾患の治療、移植片拒絶のリスクの低減、および／またはアレルギーの治療などの免疫系の抑制を必要とする他の障害の治療に用途を見出す免疫抑制剤として使用される。いくつかの実施形態では、Ｔ細胞またはＢ細胞において発現されるＬ型電位開口型カルシウムチャネルを阻害する抗体またはその抗原結合断片は、例えば、免疫抑制剤として有用である。別の例では、マスト細胞におけるＬ型電位開口型カルシウムチャネルを阻害する抗体またはその抗原結合断片は、例えば、マスト細胞活性を低減し、アレルギーを治療するのに有用である。
【０１９６】
本発明のある特定の実施形態に従い治療され得る自己免疫疾患の例としては、限定されないが、Ｘ連鎖無ガンマグロブリン血症、全身性エリテマトーデス、炎症性（リウマチ）関節炎、橋本甲状腺炎、悪性貧血、炎症性腸疾患（クローン病および潰瘍性大腸炎）、乾癬、腎線維症、肺線維症、肝線維症、アジソン病、Ｉ型糖尿病、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、皮膚筋炎、シェーグレン症候群、多発性硬化症、重症筋無力症、ライター症候群、およびグレーブス病が挙げられる。応答の臨床指標は、これらの疾患の各々に関して測定され得る。例えば、痛みの低減、組織（例えば、関節）の炎症の低減、組織（例えば、腎臓）機能の改善、または食物を消化する能力の改善は、良好な免疫抑制の指標として機能する。
【０１９７】
ある特定の実施形態は、抗炎症剤または免疫抑制剤と併用して、造血細胞において発現される電位開口型カルシウムチャネルを標的とする治療薬の投与を企図する。ある特定の実施形態は、既知の抗炎症剤または免疫抑制剤と併用して、本明細書に記載される抗体または抗原結合断片の投与を企図する。ある特定の実施形態は、抗炎症剤または免疫抑制剤と併用して、本明細書に記載される抗体または抗原結合断片の投与を企図する。免疫抑制剤の例としては、非ステロイド系抗炎症剤（ジクロフェナク、ジフルニサル、エトドラク、フルルビプロフェン、イブプロフェン、インドメタシン、ケトプロフェン、ケトロラク、ナブメトン、ナプロキセン、オキサプロジン、ピロキシカム、スリンダク、トルメチン、セレコキシブ、またはロフェコキシブなど）、ステロイド（コルチゾン、デキサメタゾン、ヒドロコルチゾン、メチルプレドニゾロン、プレドニゾロン、プレドニゾン、またはトリアムシノロンなど）、および免疫抑制剤（シクロスポリン、タクロリムス、ミコフェノール酸、またはシロリムスなど）が挙げられる。他の例としては、生体応答修飾物質（Ｋｉｎｅｒｅｔ（登録商標）（アナキンラ）、Ｅｎｂｒｅｌ（登録商標）（エタネルセプト）、またはＲｅｍｉｃａｄｅ（登録商標）（インフリキシマブ）など）、疾患修飾性抗リウマチ薬（ＤＭＡＲＤ）（Ａｒａｖａ（登録商標）（レフルノミド）など）、Ｈｙａｌｇａｎ（登録商標）（ヒアルロナン）、およびＳｙｎｖｉｓｃ（登録商標）（ヒランＧ−Ｆ２０）が挙げられる。
【０１９８】
特定の実施形態では、免疫細胞上で発現されるＬ型電位開口型カルシウムチャネルの活性を増加させる、本明細書に記載の抗体および抗原結合断片。これらの抗体は、例えば、免疫応答を増加または生成するために使用される。このような薬剤および方法は、癌の治療および／または免疫抑制の治療に有用であり得る。
【０１９９】
ある特定の実施形態はしたがって、本明細書に記載されるように、対象に抗体またはその抗原結合断片を投与することを含む、癌の治療を必要とする対象における癌の治療に関する。いくつかの実施形態において、対象は、著しく免疫抑制または免疫不全ではない。癌の例として、乳癌、子宮頸癌、前立腺癌、消化器癌、肺癌、卵巣癌、精巣癌、頭頸部癌、膀胱癌、腎癌（例えば、腎細胞癌）、軟部組織肉腫、扁平上皮癌、ＣＮＳまたは脳癌、黒色腫、非黒色腫癌、甲状腺癌、子宮内膜癌、上皮性腫瘍、骨癌、および造血器癌が挙げられる。ある特定の実施形態において、肺癌は、骨肉腫、軟骨肉腫、またはユーイング肉腫ファミリー腫瘍（ＥＳＦＴ）である。ある特定の実施形態において、消化器癌は、食道癌、胃（ｓｔｏｍａｃｈ／ｇａｓｔｒｉｃ）癌、膵臓癌、肝癌、胆嚢（胆道）癌、小腸癌、結腸直腸癌、肛門もしくは直腸癌、または消化管カルチノイドもしくは間質性腫瘍である。ある特定の実施形態において、黒色腫は、悪性黒子、悪性黒子由来黒色腫、表在拡大型黒色腫、末端黒子型黒色腫、粘膜黒色腫、結節性黒色腫、ポリープ状黒色腫、線維形成性黒色腫、無色毒性黒色腫、軟部組織黒色腫、またはブドウ膜黒色腫である。ある特定の実施形態において、造血器癌は、リンパ腫、白血病、または多発性骨髄腫である。ある特定の実施形態において、リンパ腫は、Ｔ細胞リンパ腫、Ｂ細胞リンパ腫、小リンパ球性リンパ腫、マングル（ｍａｎｇｌｅ）細胞リンパ腫、未分化大細胞リンパ腫（ＡＬＣＬ）、濾胞性リンパ腫、ホジキンリンパ腫、または非ホジキンリンパ腫である。ある特定の実施形態において、白血病は、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、有毛細胞白血病、急性リンパ芽球性白血病、骨髄球性白血病、急性骨髄性（ｍｙｅｌｏｉｄもしくはｍｙｅｌｏｇｅｎｏｕｓ）白血病、または慢性骨髄性白血病である。ある特定の実施形態において、脳癌は、神経膠腫、髄膜腫、下垂体腺腫、前庭神経鞘腫、原発性ＣＮＳリンパ腫、神経芽細胞腫、原始神経外胚葉性腫瘍（髄芽腫）、または多形神経膠芽腫である。
【０２００】
ある特定の方法は、１つ以上のＣａｖ１チャネルを発現する（例えば、過剰発現する）癌の治療を含む。例えば、ある特定の実施形態では、癌は、Ｃａｖ１．１、Ｃａｖ１．２、Ｃａｖ１．３、Ｃａｖ１．４、またはこれらの任意の組み合わせを発現する（例えば、過剰発現する）。いくつかの実施形態では、癌はＣａｖ１．１を発現し（例えば、過剰発現する）、治療用抗体またはその抗原結合断片はＣａｖ１．１に結合する（例えば、選択的に結合する）。いくつかの実施形態では、癌はＣａｖ１．２を発現し（例えば、過剰発現する）、治療用抗体またはその抗原結合断片はＣａｖ１．２に結合する（例えば、選択的に結合する）。いくつかの実施形態では、癌はＣａｖ１．３を発現し（例えば、過剰発現する）、治療用抗体またはその抗原結合断片はＣａｖ１．３に結合する（例えば、選択的に結合する）。いくつかの実施形態では、癌はＣａｖ１．４を発現し（例えば、過剰発現する）、治療用抗体またはその抗原結合断片はＣａｖ１．４に結合する（例えば、選択的に結合する）。
【０２０１】
図１０は、Ｃａｖチャネル発現と、ある特定の癌の種類との関係を図示する。よって、ある特定の実施形態は、１つ以上のＣａｖ１チャネルを任意選択で発現する（例えば、過剰発現する）、図１０の癌のうちの任意の１つ以上の治療に関する。いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、Ｃａｖ１．１に結合し、Ｃａｖ１．１を発現する（例えば、過剰発現する）骨格筋癌、咽頭癌、甲状腺癌、前立腺癌、白血病、固形腫瘍、バーキットリンパ腫、髄芽腫（ｍｅｄｕｌｏｂｌａｓｔｏｍａ）、子宮内膜癌、または肺癌の治療に使用される（例えば、図１０を参照されたい）。いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、Ｃａｖ１．２に結合し、Ｃａｖ１．２を発現する（例えば、過剰発現する）脾臓の癌、胸腺の癌、子宮癌、脳癌、結腸癌、軟骨肉腫、リンパ腫、白血病、神経芽細胞腫、またはホジキンリンパ腫の治療に使用される（例えば、図１０を参照されたい）。いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、Ｃａｖ１．３に結合し、Ｃａｖ１．３を発現する（例えば、過剰発現する）骨、脳、肺、腸、下垂体、膵臓、副腎、腎臓、精巣、気管支上皮、または乳房の癌（例えば、乳癌）の治療に使用される（例えば、図１０を参照されたい）。いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、Ｃａｖ１．４に結合し、Ｃａｖ１．４を発現する（例えば、過剰発現する）肺、筋肉、胸腺、松果体、小腸、脾臓の癌の治療、またはＣａｖ１．４を発現する（例えば、過剰発現する）白血病、リンパ腫、もしくは髄膜腫の治療に使用される（例えば、図１０を参照されたい）。
【０２０２】
いくつかの方法は、更なる癌治療と組み合わせて抗体を投与することを含む。ある特定の実施形態において、更なる癌治療は、抗癌剤、放射線療法、外科手術、移植、光線力学的治療、対症ケア、および抗生物質療法のうちの１つ以上から選択される。ある特定の実施形態において、更なる抗癌剤は、小分子および抗体から選択される。ある特定の実施形態において、小分子は、細胞毒性剤、化学療法剤、または抗血管新生剤である。ある特定の実施形態において、小分子細胞毒性剤、化学療法剤、または抗血管新生剤は、アルキル化剤、代謝拮抗薬、アントラサイクリン、抗腫瘍性抗生物質、白金、トポイソメラーゼＩ阻害剤、トポイソメラーゼＩＩ阻害剤、ビンカアルカロイド、およびタキサンのうちの１つ以上から選択される。
【０２０３】
ある特定の実施形態において、更なる小分子は、クロラムブシル、シクロホスファミド、シレンジタイド、ロムスチン（ＣＣＮＵ）、メルファラン、プロカルバジン、チオテパ、カルムスチン（ＢＣＮＵ）、エンザスタウリン、ブスルファン、ダウノルビシン、ドキソルビシン、ゲフィチニブ、エルロチニブイダルビシン、テモゾロミド、エピルビシン、ミトキサントロン、ブレオマイシン、シスプラチン、カルボプラチン、オキサリプラチン、カンプトテシン、イリノテカン、トポテカン、アムサクリン、エトポシド、リン酸エトポシド、テニポシド、テムシロリムス、エベロリムス、ビンクリスチン、ビンブラスチン、ビノレルビン、ビンデシン、ＣＴ５２９２３、パクリタキセル、イマチニブ、ダサチニブ、ソラフェニブ、パゾパニブ、スニチニブ（ｓｕｎｉｔｎｉｂ）、バタラニブ、ゲフィチニブ（ｇｅｆｔｉｎｉｂ）、エルロチニブ、ＡＥＥ−７８８、ジクロロ酢酸塩（ｄｉｃｈｏｒｏａｃｅｔａｔｅ）、タモキシフェン、ファスジル、ＳＢ−６８１３２３、セマクサニブ、ドネペジル（ｄｏｎｅｐｉｚｉｌ）、ガランタミン、メマンチン、リバスチグミン、タクリン、ラサギリン（ｒａｓｉｇｉｌｉｎｅ）、ナルトレキソン、ルビプロストン、サフィナミド、イストラデフィリン、ピマバンセリン、ピトリサント、イスラジピン、プリドピジン（ＡＣＲ１６）、テトラベナジン、ベキサロテン、グラチラマー酢酸塩（ｇｌａｔｉｒｉｍｅｒ  ａｃｅｔａｔｅ）、フィンゴリモド、およびミトキサントロン（それらの薬学的に許容される塩および酸を含む）のうちの１つ以上から選択される。
【０２０４】
ある特定の実施形態において、更なる抗体は、３Ｆ８、８Ｈ９、アバゴボマブ、アデカツムマブ、アフツズマブ、アラシズマブ（ペゴール）、アレムツズマブ、アルツモマブペンテート、アマツキシマブ、アナツモマブマフェナトクス（ａｎａｔｕｍｏｍａｂ  ｍａｆｅｎｏｔｏｘ）、アポリズマブ、アルシツモマブ、バビツキシマブ、ベクツモマブ、ベリムマブ、ベバシズマブ、ビバツズマブ（メルタンシン）、ブレンツキシマブベドチン、カンツズマブ（メルタンシン）、カンツズマブ（ラブタンシン）、カプロマブ（ペンデチド）、カルルマブ、カツマキソマブ、セツキシマブ、シタツズマブ（ボガトクス）、シクスツムマブ、クリバツズマブ（テトラキセタン）、コナツムマブ、ダセツズマブ、ダクリズマブ、ダロツズマブ、デツモマブ、ドロジツマブ、エクロメキシマブ、エドレコロマブ、エロツズマブ、エナバツズマブ、エンシツキシマブ、エプラツズマブ、エルツマキソマブ、エタラシズマブ、ファルレツズマブ、ＦＢＴＡ０５、フィギツムマブ、フランボツマブ、ガリキシマブ、ゲムツズマブ、ガニツマブ、ゲムツズマブ（オゾガマイシン）、ギレンツキシマブ、グレンバツムマブ（ベドチン）、イブリツモマブチウキセタン、イクルクマブ、イゴボマブ、インダツキシマブラブタンシン、インテツムマブ、イノツズマブオゾガマイシン、イピリムマブ（ＭＤＸ−１０１）、イラツムマブ、ラベツズマブ、レクサツムマブ、リンツズマブ、ロルボツズマブ（メルタンシン）、ルカツムマブ、ルミリキシマブ、マパツムマブ、マツズマブ、ミラツズマブ、ミツモマブ、モガムリズマブ、モキセツモマブ（パスドトクス）、ナコロマブ（タフェナトクス）、ナプツモマブ（エスタフェナトクス）、ナルナツマブ、ネシツムマブ、ニモツズマブ、ニボルマブ、Ｎｅｕｒａｄｉａｂ（登録商標）（放射性ヨードを含むまたは含まない）、ＮＲ−ＬＵ−１０、オファツムマブ、オララツマブ、オナルツズマブ、オポルツズマブ（モナトクス）、オレゴボマブ、パニツムマブ、パトリツマブ、ペムツモマブ、パーツズマブ、プリツムマブ、ラコツモマブ、ラドレツマブ、ラムシルマブ、リロツムマブ、リツキシマブ、ロバツムマブ、サマリズマブ、シブロツズマブ、シルツキシマブ、タバルマブ、タネズマブ、タプリツモマブ（パプトクス）、テナツモマブ、テプロツムマブ、ＴＧＮ１４１２、チシリムマブ、トラスツズマブ、トレメリムマブ、チガツズマブ、ＴＮＸ−６５０、トシツモマブ、ＴＲＢＳ０７、ツコツズマブ（セルモロイキン）、ウブリツキシマブ、ウレルマブ、ベルツズマブ、ボロシキシマブ、ボツムマブ、およびザルツムマブ、（それらの抗原結合断片を含む）のうちの１つ以上から選択される。
【０２０５】
また、薬学的に許容される担体、および本明細書に記載される抗体またはその抗原結合断片を含む、癌の治療に使用するための組成物も含まれる。いくつかの実施形態は、薬学的に許容される担体、抗癌剤、および本明細書に記載される抗体またはその抗原結合断片を含む、組成物（例えば、薬学的組成物）を含む。
【０２０６】
本発明のある特定の実施形態は、免疫不全対象における免疫応答を増加させるために、例えば、免疫不全対象における日和見感染を治療または予防するために、本明細書に記載される抗体およびその抗原結合断片の使用を提供する。免疫不全の対象は、日和見感染、例えば、ウイルス、真菌、原虫、または細菌感染、プリオン病、およびある特定の新生物により感受性である。免疫不全であると考えられるものは、限定されないが、ＡＩＤＳ（またはＨＩＶ陽性）を有する対象、重度の複合免疫不全（ＳＣＩＤ）を有する対象、糖尿病患者、移植片を有し、免疫抑制剤／療法を受けている対象、ならびに癌の化学療法を受けているものを含む。免疫不全の個体は、癌の大半の形態（皮膚癌以外）、鎌状赤血球貧血、嚢胞性線維症を有する対象、脾臓を有しないもの、末期腎疾患（透析）を有する対象、および１年以内に丸剤または注射により、頻繁に副腎皮質ステロイドを摂取していたものもまた含まれる。重度の肝臓、肺、または心臓疾患を有する対象も免疫不全であり得る。
【０２０７】
製剤および投与
本明細書に記載される、抗体およびその抗原結合断片は、医学的に許容される任意の様式で投与され得る。これは、静脈内、血管内、動脈内、皮下、筋肉内、腫瘍内、腹腔内、心室内、硬膜内、またはその他などの非経口経路による注射、ならびに経口、経鼻、点眼、直腸、局所を含み得る。デポ注射剤または侵食性の移植体などの手段による徐放性投与も本発明に具体的に含まれる。カテーテルを介した、１つ以上の動脈（腎動脈または限局性腫瘍をもたらす血管など）への送達などの手段による局所的送達が具体的に企図される。
【０２０８】
対象抗体は、薬学的に許容される担体と共に製剤化され得る。「薬学的に許容される担体」という用語は、抗体がその適用を容易にするために組み合わされる、１つ以上の有機または無機成分、天然または合成物質を意味する。好適な担体は減菌食塩水を含むが、薬学的に許容されることが知られている他の水性および非水性の等張減菌溶液および減菌懸濁剤が当業者に知られている。
【０２０９】
液剤または懸濁剤は、例えば、滅菌希釈液（水等）、食塩液（例えば、リン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）、生理食塩水、リンゲル液、等張食塩水）、固定油、ポリエチレングリコール、グリセリン、プロピレングリコールもしくは他の合成溶媒；抗菌剤（ベンジルアルコールおよびメチルパラベン等）；抗酸化剤（アスコルビン酸および亜硫酸水素ナトリウム等）；キレート剤（エチレンジアミンテトラ酢酸（ＥＤＴＡ）等）；および／または緩衝剤（酢酸塩、クエン酸塩、リン酸塩、および他の有機酸等）（前述のものの組み合わせを含む）を含んでもよい。また、好適な担体として、グルコース、ポリエチレングリコール、ポリプロピレングリコール、およびそれらの混合物等の増粘剤および可溶化剤を含む溶液も含まれる。均一な液剤または懸濁剤の形成を促進するために界面活性剤が添加されてもよい。界面活性剤は、水性系中の抱合体の溶解または均一な懸濁を促進するように、抗体、またはその抗原結合断片と非共有結合的に相互作用する化合物である。
【０２１０】
担体の追加の例としては、低分子量（例えば、約１０残基未満）のポリペプチドもしくはペプチド；血清アルブミン、ゼラチン、もしくは免疫グロブリンなどのタンパク質；ポリビニルピロリドンなどの親水性ポリマー；グリシン、グルタミン、アスパラギン、アルギニン、もしくはリジンなどのアミノ酸；グルコース、マンノース、もしくはデキストリンを含む単糖、二糖、および他の炭水化物；マンニトールもしくはソルビトールなどの糖アルコール；ナトリウムなどの塩形成対イオン；ならびに／またはポリソルベート２０（ＴＷＥＥＮ（商標））ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）およびポロキサマー（ＰＬＵＲＯＮＩＣＳ（商標））などの非イオン性界面活性剤などが挙げられる。
【０２１１】
いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、例えば、コアセルベーション技法により、または界面重合により調製されたマイクロカプセル（例えば、それぞれ、ヒドロキシメチルセルロースまたはゼラチンマイクロカプセルおよびポリ−（メチルメタクリレート）マイクロカプセル）、コロイド状薬物送達系（例えば、リポソーム、アルブミン小球体、マイクロエマルジョン、ナノ粒子、およびナノカプセル）、またはマクロエマルジョンに封入される。かかる技法は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，１６ｔｈ  ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｏｓｌｏ，Ａ．，Ｅｄ．，（１９８０）に開示されている。粒子（複数可）またはリポソームは、検出可能な実体など、他の診断剤を更に含み得る。
【０２１２】
特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、凍結乾燥（ｆｒｅｅｚｅ−ｄｒｉｅｄ）または凍結乾燥（ｌｙｏｐｈｉｌｉｚｅｄ）、低温乾燥される。これらの用語は、抗体組成物を凍結し、次いで、組成物中の凍結水分を、固相から気相に直接昇華させることを可能にする周囲圧力に低減する脱水プロセスを指す。粉末、顆粒、圧縮錠剤、丸剤、カプセルなどの固体組成物も含まれる。いくつかの実施形態では、固体組成物は、１つ以上の不活性希釈剤または食用担体を含有する。ある特定の実施形態では、カルボキシメチルセルロース、エチルセルロース、微結晶セルロース、トラガカントガム、またはゼラチンなどの結合剤；およびデンプン、ラクトース、またはデキストリンなどの賦形剤、アルギニン酸アルギニン酸ナトリウム、Ｐｒｉｍｏｇｅｌ、コーンスターチなどの崩壊剤のうちの１つ以上が存在し得る。
【０２１３】
ある特定の実施形態は、任意選択で、１つ以上の容器に、本明細書に記載される、抗体またはその抗原結合断片のうちの１つ以上を含むキットを含む。キットは、抗体をどのように使用するか、および／または例えば薬物として使用するための抗体をどのように調製するかの書面による説明書を含み得る。いくつかの実施形態では、書面による説明書は、抗体またはその抗原結合断片を必要とする対象にそれを投与するために、抗体またはその抗原結合断片をどのように使用するかを説明する。
【０２１４】
「有効量」は、疾患、変性、または損傷状態を緩和する、またはその進行を遅延することができる量を指す。有効量は、個体ベースで決定され得、一部には、治療される症状および求められる結果の考慮に基づく。有効量は、かかる要因を用い、単に慣用の実験を使用して、当業者が決定することができる。
【０２１５】
本明細書のキットは、治療される徴候また所望の診断用途に最適なまたは所望される、１つ以上の追加の治療薬または他の構成成分も含み得る。追加の治療薬は、所望に応じて、第２の容器に収容され得る。
【０２１６】
以下の実施例は図示の目的のために提供され、限定するものではない。
【実施例】
【０２１７】
実施例１
Ｌ型電位開口型カルシウムチャネルに対して指向される抗体の設計および生成
抗体は、Ｌ型電位開口型カルシウムチャネルのサブタイプＣａｖ１．１、Ｃａｖ１．２、Ｃａｖ１．３、またはＣａｖ１．４を標的とするように設計された。各チャネルに関して、アミノ酸配列は、マウスモノクローナル抗体を生成するための抗原として使用するための標的として使用するために選択された。アミノ酸配列は、いくつかの基準を満たすように選択された。第１に、アミノ酸配列は、それらのそれぞれのチャネルに固有でなければならなかった。第２に、アミノ酸配列は、細胞の外側に位置付けられたチャネルの露出部分上に存在しなければならなかった。第３に、アミノ酸配列は、マウスおよびヒトチャネルの両方に見られなければならなかった。第４に、配列は、抗体によって結合されたときにチャネルの活性に影響を与えるであろうチャネルの領域にある必要があった。
【０２１８】
Ｌ型電位開口型カルシウムチャネルサブタイプの各々については、α１サブユニットのモチーフＩの膜貫通部位Ｓ５およびＳ６間のポアループの細胞外ドメインに位置するアミノ酸配列を選択した（図１を参照されたい）。これらのアミノ酸配列が表Ｅ１に表示される。選択した各配列は、このチャネルサブタイプに固有であり、チャネルの細胞外領域に位置付けられ、マウスおよびヒトにおいて保存されている。更に、膜貫通部位Ｓ５およびＳ６間のポアループの細胞外ドメインは、チャネル選択性に寄与する。
【表４】
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【０２１９】
モノクローナル抗体は、当該技術分野において既知の標準的な方法を使用して生成された。簡潔に、表Ｅ１からの各ペプチドが、２匹のマウスを免疫化するために使用された。免疫応答が検出された後、免疫化したマウスの脾臓を採取し、次いで、リンパ球を単離し、ハイブリドーマを生成するために骨髄腫細胞と融合させた。ハイブリドーマを継代培養し、冷凍保存した（図２）。
【０２２０】
実施例２
Ｌ型電位開口型カルシウムチャネルに対して指向されたハイブリドーマ抗体の特徴付け
Ｌ型電位開口型カルシウムチャネルの細胞外ポアドメインを標的とするように生成されたモノクローナル抗体を特徴付けするために、ＥＬＩＳＡ実験を行った。対象の６３の抗体を、抗体を生成するために使用された表Ｅ１からのアミノ酸配列を有するペプチドに結合するそれらの能力に関して試験した。抗体結合は、ＢＳＡおよび各Ｌ型電位開口型カルシウムチャネルからのものを有する全てのペプチド、ＢＳＡおよびＣａｖ１．ペプチド、ＢＳＡおよびＣａｖ１．２ペプチド、ＢＳＡおよびＣａｖ１．３ペプチド、ならびにＢＳＡおよびＣａｖａ．４ペプチドでコーティングされたウェルで試験された。結合はＩｇＧおよびＩｇＭ二次抗体の混合物を用いて検出され、シグナルは陰性対照と比較された。これらの実験の代表的な結果が提示される（図３）。結果は、抗体が標的ペプチドに特異的に結合し得ることを示した。Ｃａｖ１．１にのみ（例えば、クローン１Ｅ７および１Ｆ４を参照されたい、図３）、Ｃａｖ１．２にのみ（クローン１Ｆ７および６Ｃ６、図３および９）、Ｃａｖ１．３にのみ（クローン１Ｂ１０、１Ｂ１１、および２Ｄ４、図３）、およびＣａｖ１．４にのみ（クローン１Ｃ１０および２Ｂ３、図３）結合したクローンが観察された。加えて、２つのＣａｖ１チャネル（例えば、クローン１Ａ３、１Ｂ９、および１Ｃ８）または３つのＣａｖ１チャネル（１Ｄ２）に結合することができたいくつかの抗体が観察された。これらの結果は、Ｌ型電位開口型カルシウムチャネルの細胞外ポアループを認識するモノクローナル抗体が良好に生成されたことを示す。
【０２２１】
抗体が免疫細胞上に発現されたＬ型電位開口型カルシウムチャネルに結合することができるかを決定するために、フローサイトメトリー実験がモノクローナル抗体の免疫細胞への結合を試験するために行われた。脾細胞および胸腺細胞を、野生型Ｃ５７Ｂｌ６マウスから採取された脾臓および胸腺から単離した。細胞をフローサイトメトリー用に調製した。抗体を含有する上清をハイブリドーマ培養物から回収して、モノクローナル抗体が細胞に結合する能力を試験した。モノクローナル結合を検出するために、ＦＩＴＣ抱合ヤギ抗マウスＩｇＧ  ａｎｄａｎｔｅマウスＩｇＭが二次抗体に使用された。
【０２２２】
ハイブリドーマクローンから回収した抗体を、野生型マウス脾細胞に結合するそれらの能力に関して試験した。脾細胞は、ＴおよびＢリンパ球、樹状細胞、ならびにマクロファージなどの様々な細胞集団からなる。陰性対照は、未染色（抗体または培地なし）、陰性対照ＤＭＥＭ培地、陰性対照ＩｇＧ２ｂ抗体、および陰性ＩｇＭ抗体を含んだ。結合は、試験抗体シグナル対陰性対照ｉｇＧ２ｂ抗体（図４）または陰性対照ＩｇＭ抗体（図５）の比率として定量化された。代表的な結果（図４および５）は、脾細胞に結合するモノクローナル抗体、例えば、クローン３Ａ１、５Ｆ４、および７Ｄ１０が同定されたことを示す。
【０２２３】
類似する実験は、ハイブリドーマクローンから回収された抗体を、野生型マウス胸腺細胞に結合するそれらの能力に関して試験した。胸腺細胞は、成熟Ｔリンパ球に分化する、胸腺に存在する造血前駆細胞である。Ｃａｖ１．１、Ｃａｖ１．２、Ｃａｖ１．３、およびＣａｖ１．４で免疫化されたマウスからの免疫血清は陽性対照として使用された。陰性対照は、未染色（抗体または培地なし）、陰性対照ＤＭＥＭ培地、陰性対照ＩｇＧ２ｂ抗体、および陰性ＩｇＭ抗体を含んだ。結合は、試験抗体シグナル対陰性対照ｉｇＧ２ｂ抗体（図６）または陰性対照ＩｇＭ抗体（図７）の比率として定量化された。代表的な結果（図５および６）は、胸腺細胞に結合するモノクローナル抗体、例えば、クローン１Ｅ１０および７Ｅ３が同定されたことを示す。
【０２２４】
総合すれば、これらの結果は、Ｌ型電位開口型カルシウムチャネルα１サブユニットの細胞外ポアループを認識でき、免疫細胞上の標的に結合することができるモノクローナル抗体が生成されたことを示す。この一連の実験後、対象上の３１のクローンが、Ｌ型電位開口型カルシウムチャネルサブタイプに結合し、脾細胞または胸腺細胞上の標的に結合するそれらの能力に基づき同定された（図８に要約される）。１つのサブタイプ（Ｃａｖ１．４、Ｃａｖ１．３、Ｃａｖ１．２、またはＣａｖ１．１）に選択的な抗体を産生する２８のハイブリドーマが同定され、２つのサブタイプ（Ｃａｖ１．４およびＣａｖ１．２またはＣａｖ１．３およびＣａｖ１．２）に選択的な抗体を産生する３つのハイブリドーマが同定され、３つのサブタイプ（Ｃａｖ１．４、Ｃａｖ１．３、およびＣａｖ１．２）に選択的な抗体を産生する１つのハイブリドーマが同定された。
【０２２５】
実施例３
ハイブリドーマ抗体はＪＵＲＫＡＴ  Ｔ細胞に結合し、その増殖を阻害する
ヒトＪｕｒｋａｔ白血病細胞株（Ｊｕｒｋａｔ）を用いて、ハイブリドーマクローンをフローサイトメトリーに基づく結合アッセイにおいて更に評価した。標準技法を用いて細胞結合および増殖阻害アッセイを行った。結果が下記の表Ｅ２に示される。
【表５】
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【０２２６】
これらの結果は、表Ｅ２のハイブリドーマクローンからの上清がヒトＪｕｒｋａｔ  Ｔ細胞に結合し、その増殖を阻害することができることを示し、造血器癌を含む様々な癌の治療におけるこれらの抗体の治療可能性を示す。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９Ａ】
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【図９Ｂ】
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【図９Ｃ】
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【図９Ｄ】
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【図９Ｅ】
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【図９Ｆ】
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【図９Ｇ】
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【図９Ｈ】
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【図９Ｉ】
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【図９Ｊ】
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【図９Ｋ】
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【図９Ｌ】
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【図９Ｍ】
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【図９Ｎ】
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【図９Ｏ】
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【図１０】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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