(57)【要約】本明細書ではペプチド−オリゴマー−複合体が提供される。本明細書では、中枢神経系障害、筋肉疾患、ウイルス感染、または細菌感染の治療をそれを必要とする対象において行う方法であって、本明細書に記載のペプチド−オリゴマー−複合体を対象に投与することを含む、方法も提供される。特定の実施形態では、前記筋肉疾患がデュシェンヌ型筋ジストロフィーである。特定の実施形態では、前記ウイルス感染が、マールブルグウイルス、エボラウイルス、インフルエンザウイルス、及びデングウイルスから選択されるウイルスによって引き起こされる。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
式Ｉのペプチド−オリゴマー−複合体：
【化４０】
2018538302.tif 000064
（Ｉ）
またはその薬学的に許容可能な塩、
（式中：
Ｒ３は、ＯＨ、−Ｎ（Ｈ）ＣＨ２Ｃ（Ｏ）ＮＨ２、−Ｎ（Ｃ１〜６−アルキル）ＣＨ２Ｃ（Ｏ）ＮＨ２、
【化４１】
2018538302.tif 000065
から選択され；
Ｒ５は、−Ｃ（Ｏ）（Ｏ−アルキル）ｘＯＨ（式中、ｘは３〜１０であり、各アルキル基は、各場合に独立して、Ｃ２〜６アルキルである）であるか、またはＲ５は、−Ｃ（Ｏ）Ｃ１〜６アルキル、トリチル、モノメトキシトリチル、−（Ｃ１〜６−アルキル）Ｒ６、−（Ｃ１〜６ヘテロアルキル）−Ｒ６、アリール−Ｒ６、ヘテロアリール−Ｒ６、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−（Ｃ１〜６アルキル）−Ｒ６、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−アリール−Ｒ６、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−ヘテロアリール−Ｒ６、及びＲ１２からなる群から選択され；
Ｒ６は、ＯＨ、ＳＨ、及びＮＨ２から選択されるか、またはＲ６は、固体支持体に共有結合したＯ、Ｓ、またはＮＨであり：
Ｒ１は、各場合に独立して、ＯＨ、−ＮＲ７Ｒ１２、または−ＮＲ７Ｒ８であり；
各Ｒ７及びＲ８は、各場合に独立して、Ｈまたは−Ｃ１〜６アルキルであり；
Ｒ２は、各場合に独立して、Ｈ、核酸塩基、及び化学保護基で官能化された核酸塩基からなる群から選択され、前記核酸塩基が、各場合に独立して、ピリジン、ピリミジン、トリアジナン、プリン、及びデアザ−プリンから選択されるＣ３〜６複素環式環を含み；
ｚは８〜４０であり；
Ｒ４は、Ｈ、−Ｃ１〜６アルキル、−Ｃ（Ｏ）Ｃ１〜６アルキル、ベンゾイル、ステアロイル、トリチル、モノメトキシトリチル、ジメトキシトリチル、トリメトキシトリチル、
【化４２】
2018538302.tif 000066
から選択され；
Ｒ９は、−Ｃ（Ｏ）（ＣＨ２）６Ｃ（Ｏ）−または−Ｃ（Ｏ）（ＣＨ２）２Ｓ２（ＣＨ２）２Ｃ（Ｏ）−であり；
Ｒ１０は、−（ＣＨ２）２ＯＣ（Ｏ）Ｎ（（ＣＨ２）６Ｎ（Ｈ）Ｃ（＝ＮＨ）ＮＨ２）２であり；
Ｒ１１は、ＯＨ及びＮＲ７Ｒ８から選択され；
Ｒ１２は、
【化４３】
2018538302.tif 000067
からなる群から選択され；
ｎは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０であり；
ｐは、２、３、４、または５であり；
Ｒ１３は結合であるか、またはＲ１３は、
【化４４】
2018538302.tif 000068
【化４５】
2018538302.tif 000069
からなる群から選択され；
Ｒ１５及びＲ１９は、各場合に独立して、Ｈ、−Ｃ１〜４アルキル、−ＣＨ（−Ｃ１〜４アルキル）２、及び−（ＣＨ２）３ＮＨ−Ｃ（＝ＮＨ）−ＮＨ２からなる群から選択され；
ｔ及びｗは、各場合に独立して、２、３、４、または５であり；
Ｒ１４は、
【化４６】
2018538302.tif 000070
からなる群から選択され；
Ｒ１７は、Ｈまたは−Ｃ１〜４アルキルであり；
Ｒ２０は、Ｈ、−Ｃ１〜４アルキル、−ＣＨ（−Ｃ１〜４アルキル）２、及び−（ＣＨ２）３ＮＨ−Ｃ（＝ＮＨ）−ＮＨ２からなる群から選択され；
ｖ及びｑは、各場合に独立して、２、３、４、または５であり；
Ｒ１６は、
【化４７】
2018538302.tif 000071
【化４８】
2018538302.tif 000072
からなる群から選択され、
Ｒ２１及びＲ２２は、各場合に独立して、Ｈまたは−Ｃ１〜４アルキルであり；
Ｒ１８は、Ｈ、−Ｃ（Ｏ）Ｃ１〜６アルキル、ベンゾイル、及びステアロイルから選択され；
ｒは、１、２、３、４、５、６、７、８、または９であり；そして
ｙ及びｕは、各場合に独立して、２、３、４、または５であり；
但し、以下の条件のうち１つのみが存在する：１）Ｒ１がＮＲ７Ｒ１２である；２）Ｒ４がＲ１２である；または３）Ｒ３が
【化４９】
2018538302.tif 000073
である）。
【請求項２】
Ｒ４が、Ｈ、−Ｃ１〜６アルキル、−Ｃ（Ｏ）Ｃ１〜６アルキル、ベンゾイル、ステアロイル、トリチル、モノメトキシトリチル、ジメトキシトリチル、トリメトキシトリチル、及びＲ１２から選択される、請求項１に記載のペプチド−オリゴマー−複合体、またはその薬学的に許容可能な塩。
【請求項３】
Ｒ３が、
【化５０】
2018538302.tif 000074
Ｒ４がＲ１２である、請求項１に記載のペプチド−オリゴマー−複合体、またはその薬学的に許容可能な塩。
【請求項４】
Ｒ３が、−ＯＨ、−Ｎ（Ｃ１〜６−アルキル）ＣＨ２Ｃ（Ｏ）ＮＨ２、
【化５１】
2018538302.tif 000075
から選択される、請求項１または請求項２に記載のペプチド−オリゴマー−複合体、またはその薬学的に許容可能な塩。
【請求項５】
Ｒ４が、Ｈ、−Ｃ（Ｏ）ＣＨ３、トリチル、４−メトキシトリチル、ベンゾイル、ステアロイル、及びＲ１２から選択される、請求項１、２及び４のいずれか１項に記載のペプチド−オリゴマー−複合体、またはその薬学的に許容可能な塩。
【請求項６】
Ｒ３が、−ＯＨ、−Ｎ（Ｃ１〜６−アルキル）ＣＨ２Ｃ（Ｏ）ＮＨ２、及び
【化５２】
2018538302.tif 000076
Ｒ４がＲ１２である、請求項１、２、４及び５のいずれか１項に記載のペプチド−オリゴマー−複合体、またはその薬学的に許容可能な塩。
【請求項７】
Ｒ３が、
【化５３】
2018538302.tif 000077
である、請求項１、２、４、及び５のいずれか１項に記載のペプチド−オリゴマー−複合体、またはその薬学的に許容可能な塩。
【請求項８】
Ｒ４が、Ｈ、−Ｃ（Ｏ）ＣＨ３、トリチル、４−メトキシトリチル、ベンゾイル、及びステアロイルから選択される、請求項７に記載のペプチド−オリゴマー−複合体、またはその薬学的に許容可能な塩。
【請求項９】
Ｒ４が、Ｈ及び−Ｃ（Ｏ）ＣＨ３から選択される、請求項８に記載のペプチド−オリゴマー−複合体、またはその薬学的に許容可能な塩。
【請求項１０】
式Ｉの前記ペプチド−オリゴマー−複合体が、式Ｉａのペプチド−オリゴマー−複合体：
【化５４】
2018538302.tif 000078
（Ｉａ）、
（式中、Ｒ５は−Ｃ（Ｏ）（Ｏ−アルキル）ｘＯＨ（式中、ｘは３〜１０であり、各アルキル基は、各場合に独立して、Ｃ２〜６−アルキルである）であるか、またはＲ５は−Ｃ（Ｏ）Ｃ１〜６アルキル、トリチル、及びモノメトキシトリチルからなる群から選択される）である、請求項１に記載のペプチド−オリゴマー−複合体、またはその薬学的に許容可能な塩。
【請求項１１】
Ｒ５が、−Ｃ（Ｏ）（Ｏ−アルキル）ｘＯＨ（式中、各アルキル基は、各場合に独立して、Ｃ２〜６−アルキルである）である、請求項１または１０に記載のペプチド−オリゴマー−複合体、またはその薬学的に許容可能な塩。
【請求項１２】
Ｒ５が、−Ｃ（Ｏ）（Ｏ−ＣＨ２ＣＨ２）３ＯＨである、請求項１または１１に記載のペプチド−オリゴマー−複合体、またはその薬学的に許容可能な塩。
【請求項１３】
式Ｉの前記ペプチド−オリゴマー−複合体が、式Ｉｂのペプチド−オリゴマー−複合体：
【化５５】
2018538302.tif 000079
（Ｉｂ）、
（式中、Ｒ４は、Ｈ、−Ｃ１〜６アルキル、−Ｃ（Ｏ）Ｃ１〜６アルキル、ベンゾイル、ステアロイル、トリチル、モノメトキシトリチル、ジメトキシトリチル、及びトリメトキシトリチルから選択される）である、請求項１に記載のペプチド−オリゴマー−複合体、またはその薬学的に許容可能な塩。
【請求項１４】
Ｒ４が、Ｈ、Ｃ１〜６アルキル、−Ｃ（Ｏ）ＣＨ３、ベンゾイル、及びステアロイルから選択される、請求項１または１３に記載のペプチド−オリゴマー−複合体、またはその薬学的に許容可能な塩。
【請求項１５】
Ｒ４が、Ｈ及び−Ｃ（Ｏ）ＣＨ３から選択される、請求項１４に記載のペプチド−オリゴマー−複合体、またはその薬学的に許容可能な塩。
【請求項１６】
Ｒ１６が、
【化５６】
2018538302.tif 000080
からなる群から選択される、請求項１〜１５のいずれか１項に記載のペプチド−オリゴマー−複合体、またはその薬学的に許容可能な塩。
【請求項１７】
Ｒ１６が、
【化５７】
2018538302.tif 000081
である、請求項１〜１６のいずれか１項に記載のペプチド−オリゴマー−複合体、またはその薬学的に許容可能な塩。
【請求項１８】
Ｒ１４が、
【化５８】
2018538302.tif 000082
からなる群から選択される、請求項１〜１７のいずれか１項に記載のペプチド−オリゴマー−複合体、またはその薬学的に許容可能な塩。
【請求項１９】
Ｒ１２が、
【化５９】
2018538302.tif 000083
である、請求項１〜１８のいずれか１項に記載のペプチド−オリゴマー−複合体、またはその薬学的に許容可能な塩。
【請求項２０】
ｒが、３、４、５、６、７、または８である、請求項１〜１９のいずれか１項に記載のペプチド−オリゴマー−複合体、またはその薬学的に許容可能な塩。
【請求項２１】
ｒが、５、６、または７である、請求項１〜２０のいずれか１項に記載のペプチド−オリゴマー−複合体、またはその薬学的に許容可能な塩。
【請求項２２】
ｒが６である、請求項１〜２１のいずれか１項に記載のペプチド−オリゴマー−複合体、またはその薬学的に許容可能な塩。
【請求項２３】
Ｒ１３が結合である、請求項１〜２２のいずれか１項に記載のペプチド−オリゴマー−複合体、またはその薬学的に許容可能な塩。
【請求項２４】
ｚが８〜２５である、請求項１〜２３のいずれか１項に記載のペプチド−オリゴマー−複合体、またはその薬学的に許容可能な塩。
【請求項２５】
ｚが１５〜２５である、請求項１〜２４のいずれか１項に記載のペプチド−オリゴマー−複合体、またはその薬学的に許容可能な塩。
【請求項２６】
ｚが１０〜２０である、請求項１〜２４のいずれか１項に記載のペプチド−オリゴマー−複合体、またはその薬学的に許容可能な塩。
【請求項２７】
各Ｒ１が独立してＮＲ７Ｒ８（式中、各Ｒ７及びＲ８が、各場合に独立して、Ｃ１〜３−アルキルである）である、請求項１〜２６のいずれか１項に記載のペプチド−オリゴマー−複合体、またはその薬学的に許容可能な塩。
【請求項２８】
各Ｒ１がＮ（ＣＨ３）２である、請求項１〜２７のいずれか１項に記載のペプチド−オリゴマー−複合体、またはその薬学的に許容可能な塩。
【請求項２９】
各Ｒ２が核酸塩基であり、前記核酸塩基が、各場合に独立して、ピリジン、ピリミジン、トリアジナン、プリン、及びデアザ−プリンから選択されるＣ４〜６−複素環式環を含む、請求項１〜２８のいずれか１項に記載のペプチド−オリゴマー−複合体、またはその薬学的に許容可能な塩。
【請求項３０】
各Ｒ２が核酸塩基であり、前記核酸塩基が、各場合に独立して、ピリミジン、プリン、及びデアザ−プリンから選択されるＣ４〜６−複素環式環を含む、請求項１〜２９のいずれか１項に記載のペプチド−オリゴマー−複合体、またはその薬学的に許容可能な塩。
【請求項３１】
各Ｒ２が核酸塩基であり、前記核酸塩基が、各場合に独立して、アデニン、２，６−ジアミノプリン、７−デアザ−アデニン、グアニン、７−デアザ−グアニン、ヒポキサンチン、シトシン、５−メチル−シトシン、チミン、及びウラシルからなる群から選択される、請求項１〜３０のいずれか１項に記載のペプチド−オリゴマー−複合体、またはその薬学的に許容可能な塩。
【請求項３２】
各Ｒ２が核酸塩基であり、前記核酸塩基が、各場合に独立して、アデニン、グアニン、シトシン、５−メチル−シトシン、チミン、ウラシル、及びヒポキサンチンからなる群から選択される、請求項１〜３１のいずれか１項に記載のペプチド−オリゴマー−複合体、またはその薬学的に許容可能な塩。
【請求項３３】
Ｒ１５が、Ｈ、ＣＨ３、−ＣＨ（ＣＨ３）２、及び−（ＣＨ２）３ＮＨ−Ｃ（＝ＮＨ）−ＮＨ２からなる群から選択される、請求項１〜２２及び２４〜３２のいずれか１項に記載のペプチド−オリゴマー−複合体、またはその薬学的に許容可能な塩。
【請求項３４】
Ｒ１９が、Ｈ、ＣＨ３、−ＣＨ（ＣＨ３）２、及び（ＣＨ２）３ＮＨ−Ｃ（＝ＮＨ）−ＮＨ２からなる群から選択される、請求項１〜２２及び２４〜３３のいずれか１項に記載のペプチド−オリゴマー−複合体、またはその薬学的に許容可能な塩。
【請求項３５】
Ｒ２０が、Ｈ、ＣＨ３、−ＣＨ（ＣＨ３）２、及び（ＣＨ２）３ＮＨ−Ｃ（＝ＮＨ）−ＮＨ２からなる群から選択される、請求項１〜１７及び１９〜３４のいずれか１項に記載のペプチド−オリゴマー−複合体、またはその薬学的に許容可能な塩。
【請求項３６】
Ｒ１７がＨまたはＣＨ３である、請求項１〜３５のいずれか１項に記載のペプチド−オリゴマー−複合体、またはその薬学的に許容可能な塩。
【請求項３７】
Ｒ１７がＨである、請求項１〜３６のいずれか１項に記載のペプチド−オリゴマー−複合体、またはその薬学的に許容可能な塩。
【請求項３８】
Ｒ２１がＨまたはＣＨ３である、請求項１〜３７のいずれか１項に記載のペプチド−オリゴマー−複合体、またはその薬学的に許容可能な塩。
【請求項３９】
Ｒ２１がＨである、請求項１〜３８のいずれか１項に記載のペプチド−オリゴマー−複合体、またはその薬学的に許容可能な塩。
【請求項４０】
Ｒ２２がＨまたはＣＨ３である、請求項１〜１６及び１８〜３９のいずれか１項に記載のペプチド−オリゴマー−複合体、またはその薬学的に許容可能な塩。
【請求項４１】
Ｒ２２がＨである、請求項１〜１６及び１８〜４０のいずれか１項に記載のペプチド−オリゴマー−複合体、またはその薬学的に許容可能な塩。
【請求項４２】
Ｒ６がＯＨ、ＳＨ、及びＮＨ２から選択される、請求項１〜３、５、８〜１０及び１４〜４１のいずれか１項に記載のペプチド−オリゴマー−複合体、またはその薬学的に許容可能な塩。
【請求項４３】
各Ｒ７及びＲ８が、各場合に独立して、ＨまたはＣＨ３である、請求項１〜２６及び２９〜４２のいずれか１項に記載のペプチド−オリゴマー−複合体、またはその薬学的に許容可能な塩。
【請求項４４】
各Ｒ７及びＲ８がＣＨ３である、請求項１〜２６及び２９〜４３のいずれか１項に記載のペプチド−オリゴマー−複合体、またはその薬学的に許容可能な塩。
【請求項４５】
ｎが２、３、４、５、６、または７である、請求項１〜４４のいずれか１項に記載のペプチド−オリゴマー−複合体、またはその薬学的に許容可能な塩。
【請求項４６】
ｐが３または４である、請求項１〜４５のいずれか１項に記載のペプチド−オリゴマー−複合体、またはその薬学的に許容可能な塩。
【請求項４７】
ｔが３または４である、請求項１〜２２及び２４〜４６のいずれか１項に記載のペプチド−オリゴマー−複合体、またはその薬学的に許容可能な塩。
【請求項４８】
ｗが３または４である、請求項１〜２２及び２４〜４７のいずれか１項に記載のペプチド−オリゴマー−複合体、またはその薬学的に許容可能な塩。
【請求項４９】
ｖが３または４である、請求項１〜１７及び１９〜４８のいずれか１項に記載のペプチド−オリゴマー−複合体、またはその薬学的に許容可能な塩。
【請求項５０】
ｘが３または４である、請求項１〜１７及び１９〜４９のいずれか１項に記載のペプチド−オリゴマー−複合体、またはその薬学的に許容可能な塩。
【請求項５１】
ｙが３または４である、請求項１〜１６及び１８〜５０のいずれか１項に記載のペプチド−オリゴマー−複合体、またはその薬学的に許容可能な塩。
【請求項５２】
ｕが３または４である、請求項１〜１６及び１８〜５１のいずれか１項に記載のペプチド−オリゴマー−複合体、またはその薬学的に許容可能な塩。
【請求項５３】
Ｒ１８が、Ｈ、−Ｃ（Ｏ）Ｃ１〜Ｃ３アルキル、ベンゾイル、及びステアロイルから選択される、請求項１〜５２のいずれか１項に記載のペプチド−オリゴマー−複合体、またはその薬学的に許容可能な塩。
【請求項５４】
Ｒ１８がＨまたは−Ｃ（Ｏ）Ｃ１〜Ｃ３アルキルである、請求項１〜５３のいずれか１項に記載のペプチド−オリゴマー−複合体、またはその薬学的に許容可能な塩。
【請求項５５】
Ｒ１８がＨまたは−Ｃ（Ｏ）ＣＨ３である、請求項１〜５４のいずれか１項に記載のペプチド−オリゴマー−複合体、またはその薬学的に許容可能な塩。
【請求項５６】
式Ｉの前記ペプチド−オリゴマー−複合体が、式Ｉｃのペプチド−オリゴマー−複合体：
【化６０】
2018538302.tif 000084
（Ｉｃ）
またはその薬学的に許容可能な塩、
（式中：
Ｒ３はＯＨ、
【化６１】
2018538302.tif 000085
であり；
Ｒ５は−Ｃ（Ｏ）（Ｏ−アルキル）ｘＯＨ（式中、ｘは３〜１０であり、各アルキル基は、各場合に独立して、Ｃ２〜６−アルキルである）であるか、またはＲ５は−Ｃ（Ｏ）Ｃ１〜６アルキルであり；
Ｒ１は、各場合に独立して、ＯＨまたは−ＮＲ７Ｒ８であり；
各Ｒ７及びＲ８は、各場合に独立して、−Ｃ１〜６アルキルであり；
Ｒ２は、各場合に独立して、Ｈ、アデニン、２，６−ジアミノプリン、７−デアザ−アデニン、グアニン、７−デアザ−グアニン、ヒポキサンチン、シトシン、５−メチル−シトシン、チミン、及びウラシルからなる群から選択され；
ｚは８〜４０であり；
Ｒ１２は、
【化６２】
2018538302.tif 000086
からなる群から選択され、
ｎは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０であり；
ｐは、２、３、４、または５であり；
Ｒ１３は結合であり；
Ｒ１４は、
【化６３】
2018538302.tif 000087
からなる群から選択され、
Ｒ１７は、Ｈまたは−Ｃ１〜４アルキルであり；
Ｒ１６は、
【化６４】
2018538302.tif 000088
からなる群から選択され、
Ｒ２１は、Ｈまたは−Ｃ１〜４アルキルであり；
Ｒ１８は、Ｈまたは−Ｃ（Ｏ）Ｃ１〜６アルキルのものであり；そして
ｒは、１、２、３、４、５、６、７、８、または９である）である、請求項１に記載のペプチド−オリゴマー−複合体、またはその薬学的に許容可能な塩。
【請求項５７】
Ｒ３が、
【化６５】
2018538302.tif 000089
Ｒ５が、−Ｃ（Ｏ）（Ｏ−Ｃ２〜６−アルキル）３ＯＨまたは−Ｃ（Ｏ）Ｃ１〜６アルキルである、請求項５６に記載のペプチド−オリゴマー−複合体、またはその薬学的に許容可能な塩。
【請求項５８】
Ｒ１が、各場合に独立して、ＯＨまたは−Ｎ（Ｃ１〜６アルキル）２である、請求項５６または請求項５７のいずれか１項に記載のペプチド−オリゴマー−複合体、またはその薬学的に許容可能な塩。
【請求項５９】
各Ｒ２が、各場合に独立して、アデニン、グアニン、シトシン、５−メチル−シトシン、チミン、ウラシル、及びヒポキサンチンからなる群から選択される、請求項５６〜５８のいずれか１項に記載のペプチド−オリゴマー−複合体、またはその薬学的に許容可能な塩。
【請求項６０】
Ｒ１４が、
【化６６】
2018538302.tif 000090
Ｒ１７がＨである、請求項１〜５９のいずれか１項に記載のペプチド−オリゴマー−複合体、またはその薬学的に許容可能な塩。
【請求項６１】
Ｒ１６が、
【化６７】
2018538302.tif 000091
である、請求項１〜１６及び１８〜６０のいずれか１項に記載のペプチド−オリゴマー−複合体、またはその薬学的に許容可能な塩。
【請求項６２】
ｒが５、６、または７である、請求項１〜６１のいずれか１項に記載のペプチド−オリゴマー−複合体、またはその薬学的に許容可能な塩。
【請求項６３】
前記ペプチド−オリゴマー−複合体が、
【化６８】
2018538302.tif 000092
【化６９】
2018538302.tif 000093
【化７０】
2018538302.tif 000094
（式中、
Ｒ１８は、Ｈ及び−Ｃ（Ｏ）ＣＨ３から選択される）からなる群から選択される、請求項５６〜６２のいずれか１項に記載のペプチド−オリゴマー−複合体、またはその薬学的に許容可能な塩。
【請求項６４】
Ｒ１８がＨである、請求項５６〜６３のいずれか１項に記載のペプチド−オリゴマー−複合体、またはその薬学的に許容可能な塩。
【請求項６５】
Ｒ１８が−Ｃ（Ｏ）ＣＨ３である、請求項５６〜６３のいずれか１項に記載のペプチド−オリゴマー−複合体、またはその薬学的に許容可能な塩。
【請求項６６】
オリゴヌクレオチドが、ＲＮＡ標的に対する配列相補性を有する標的配列を含む、請求項１〜６５のいずれか１項に記載のペプチド−オリゴマー−複合体、またはその薬学的に許容可能な塩。
【請求項６７】
前記ＲＮＡ標的が、細胞性ＲＮＡ標的である、請求項６６に記載のペプチド−オリゴマー−複合体、またはその薬学的に許容可能な塩。
【請求項６８】
前記標的配列が、ＲＮＡ標的に結合するのに十分な配列相補性を有する、請求項６６または６７のいずれか１項に記載のペプチド−オリゴマー−複合体、またはその薬学的に許容可能な塩。
【請求項６９】
前記標的配列が、前記ＲＮＡ標的に対する完全な配列相補性を有する、請求項６６〜６８のいずれか１項に記載のペプチド−オリゴマー−複合体、またはその薬学的に許容可能な塩。
【請求項７０】
中枢神経系障害、筋肉疾患、ウイルス感染、または細菌感染の治療をそれを必要とする対象において行う方法であって、請求項１〜６９のいずれか１項に記載のペプチド−オリゴマー−複合体を前記対象に投与することを含む、前記方法。
【請求項７１】
前記筋肉疾患がデュシェンヌ型筋ジストロフィーである、請求項７０に記載の方法。
【請求項７２】
前記ウイルス感染が、マールブルグウイルス、エボラウイルス、インフルエンザウイルス、及びデングウイルスから選択されるウイルスによって引き起こされる、請求項７０に記載の方法。
【請求項７３】
前記細菌感染がＭｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓによって引き起こされる、請求項７０に記載の方法。
【請求項７４】
前記中枢神経系障害が脊髄性筋萎縮症である、請求項７０に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
配列表
本出願は、コンピュータ可読フォーマットの配列表と一緒に出願されている。配列表は、サイズが４，０７６バイトである２０１６年１２月１３日に作成された５８６５５８ＳＰＴ−００２ＰＣ＿ＳＬ．ｔｘｔという名前が付けられたファイルとして提供されている。配列表のコンピュータ可読フォーマットにおける情報は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。
【０００２】
関連出願
本出願は、２０１５年１２月１５日に出願された米国仮特許出願第６２／２６７，７２３号の優先権を主張し、その内容はその全体が参照により本明細書に組み込まれる。
【背景技術】
【０００３】
背景
アンチセンス技術は、選択的スプライシング産物を含む１つ以上の特定の遺伝子産物の発現を調節するための手段を提供し、多数の治療、診断、及び研究の用途において比類なく有用である。アンチセンス技術の背後にある原理は、標的核酸にハイブリダイズするアンチセンス化合物、例えば、オリゴヌクレオチドが、多数のアンチセンス機構のいずれか１つを介して転写、スプライシングまたは翻訳などの遺伝子発現活性を調節することである。アンチセンス化合物の配列特異性は、それらを、標的検証及び遺伝子機能化のためのツールとして、ならびに疾患に関与する遺伝子の発現を選択的に調節するための治療法として魅力的にする。
【０００４】
アンチセンス技術の分野において著しい進歩がなされているが、改善されたアンチセンスまたはアンチジーン性能を有するオリゴヌクレオチド、及びペプチド−オリゴヌクレオチド−複合体に対する技術の必要性が依然として存在する。そのような改善されたアンチセンスまたはアンチジーン性能には、少なくとも、例えば、より低い毒性、配列選択性を損なうことのないＤＮＡ及びＲＮＡに対するより強い親和性、改善された薬物動態及び組織分布、改善された細胞送達、ならびにインビボ分布における信頼性及び制御可能性が含まれる。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００５】
概要
本明細書ではペプチド−オリゴマー−複合体が提供される。また本明細書では、疾患の治療をそれを必要とする対象において行う方法であって、本開示のペプチド−オリゴマー−複合体を対象に投与することを含む、方法が提供される。
【０００６】
したがって、一態様では、式Ｉのペプチド−オリゴヌクレオチド−複合体：
【化１】
2018538302.tif 000002
（Ｉ）
またはその薬学的に許容可能な塩（式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、及びｚは本明細書で定義されている通りである）が本明細書で提供される。
【０００７】
一実施形態では、式Ｉのペプチド−オリゴマー−複合体は、式Ｉａのペプチド−オリゴマー−複合体：
【化２】
2018538302.tif 000003
（Ｉａ）
またはその薬学的に許容可能な塩（式中、Ｒ２、Ｒ５、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ１２、及びｚは本明細書で定義されている通りである）である。
【０００８】
別の実施形態では、式Ｉのペプチド−オリゴマー−複合体は、式Ｉｂのペプチド−オリゴマー−複合体：
【化３】
2018538302.tif 000004
（Ｉｂ）
またはその薬学的に許容可能な塩（式中、Ｒ２、Ｒ４、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ１２、及びｚは本明細書で定義されている通りである）である。
【０００９】
更に別の実施形態では、式Ｉのペプチド−オリゴマー−複合体は、式Ｉｃのペプチド−オリゴマー−複合体：
【化４】
2018538302.tif 000005
（Ｉｃ）
またはその薬学的に許容可能な塩（式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ１２、及びｚは本明細書で定義されている通りである）である。
【００１０】
別の態様では、中枢神経系障害、筋肉疾患、ウイルス感染、または細菌感染の治療をそれを必要とする対象において行う方法であって、式Ｉ、式Ｉａ、式Ｉｂ、または式Ｉｃのペプチド−オリゴマー−複合体を対象に投与することを含む、方法が本明細書で提供される。
【図面の簡単な説明】
【００１１】
【図１】ＰＰＭＯ−５及びＰＰＭＯ−１を調製するために使用される一般的な合成スキームを示している。
【図２】ＰＰＭＯ−４を調製するために使用される一般的な合成スキームを示している。
【図３】本明細書に記載の他のリンカーと比較した場合に、ＰＥＧ−３リンカーのエクソン２３スキッピング％が、改善された有効性を有することを示している（ＱＣ＝大腿四頭筋、ＨＴ＝心臓、ＤＰ＝横隔膜）。
【図４】ＰＰＭＯ−８と比較した場合に、Ａｐａリンカーまたは全Ｄアミノ酸のエクソン２３スキッピング％が、改善された有効性を有することを示している。
【図５】ＰＰＭＯ−２及びＰＰＭＯ−８と比較したＰＥＧ−３リンカー化合物の有効性を比較している。
【図６】本開示のペプチド−オリゴマー−複合体の様々な投薬レベルでのＢＵＮ（血中尿素窒素）レベルを示している。ＢＵＮレベルは、ＰＰＭＯ−８と比較して増大する。
【図７】本開示のペプチド−オリゴマー−複合体の様々な投薬レベルでのＡＬＴ（アラニンアミノトランスフェラーゼ）、アルカリホスファターゼ、トリグリセリド、クレアチニン、及びＡＳＴ（アスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ）の血清化学レベルを示している（破線／影領域は、内部未治療データベースからの平均及びＳＤをそれぞれ表している）。
【図８】本開示のペプチド−オリゴマー−複合体の様々な投薬レベルでの塩化物、リン、カリウム、及びナトリウムの血清化学レベルを示している（破線／影領域は、内部未治療データベースからの平均及びＳＤをそれぞれ表している）。
【図９】本開示のペプチド−オリゴマー−複合体の様々な投薬レベルでのＫＩＭ−１のレベルを示している（破線／影領域は、内部未治療データベースからの平均及びＳＤをそれぞれ表している）。
【図１０】ＰＰＭＯ−４、ＰＰＭＯ−２、及びＰＰＭＯ−８のエクソン２３スキッピング％及びＫＩＭ−１レベルを比較している。
【発明を実施するための形態】
【００１２】
詳細な説明
本明細書ではペプチド−オリゴマー−複合体が提供される。本明細書では、疾患の治療をそれを必要とする対象において行う方法であって、本開示のペプチド−オリゴヌクレオチド−複合体を対象に投与することを含む、方法も提供される。本明細書に記載されたオリゴマー、及びそれによりペプチド−オリゴマー−複合体は、天然または非修飾オリゴヌクレオチドと比べて、配列選択性を損なうことなくＤＮＡ及びＲＮＡに対してより強い親和性を示す。いくつかの実施形態では、本開示のオリゴマーは、ＲＮａｓｅＨによる切断を最小化または防止する。いくつかの実施形態では、本開示のアンチセンスオリゴマーはＲＮａｓｅＨを活性化しない。
【００１３】
本明細書に記載のペプチドは、それらの対応するペプチド−オリゴマー−複合体に、より低い毒性を付与し、オリゴマーの活性を向上させ、薬物動態及び組織分布を改善し、細胞送達を改善し、インビボ分布における信頼性及び制御可能性を付与する。
【００１４】
定義
本開示を説明するために使用される様々な用語の定義を以下に列挙する。これらの定義は、個別にまたはより大きな群の一部としてのいずれかで、特定の場合に他に限定されない限り、それらが本明細書及び特許請求の範囲を通して使用されているように用語に適用される。
【００１５】
「約」という用語は、当業者によって理解され、それが使用される文脈である程度変動するであろう。量、一次的な継続時間などのような測定可能な値を指すときに本明細書で使用される場合、「約」という用語は、特定された値から±５％、±１％、及び±０．１％を含む±２０％または±１０％の変化を包含することを意味するが、その理由は、そのような変化は開示された方法を実施するのに適切であるからである。
【００１６】
「アルキル」という用語は、所定の実施形態では、１〜６個、または１〜８個の炭素原子をそれぞれ含有する飽和、直鎖または分枝鎖炭化水素部分を指す。Ｃ１〜６−アルキル部分の例には、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、ネオペンチル、ｎ−ヘキシル部分が含まれるがこれらに限定されず；Ｃ１〜８−アルキル部分の例には、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、ネオペンチル、ｎ−ヘキシル、ヘプチル、及びオクチル部分が含まれるがこれらに限定されない。
【００１７】
アルキル置換基における炭素原子の数は、接頭辞「Ｃｘ〜ｙ」によって示され、ｘは置換基における炭素原子数の最小数であり、ｙは最大数である。同様に、Ｃｘ鎖は、ｘ個の炭素原子を含有するアルキル鎖を意味する。
【００１８】
「ヘテロアルキル」という用語は、それ自体または別の用語と組み合わせて、他に記述されない限り、記述された数の炭素原子ならびにＯ、Ｎ、及びＳからなる群から選択される１つまたは２つのヘテロ原子からなる安定な直鎖または分枝鎖アルキル基を意味し、窒素及び硫黄原子は任意に酸化され得、窒素ヘテロ原子は任意に４級化され得る。ヘテロ原子（複数可）は、ヘテロアルキル基の残りとそれが結合される断片との間を含む、ヘテロアルキル基の任意の位置に配置され得、また、ヘテロアルキル基における最も遠位の炭素原子に結合され得る。例には：−Ｏ−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＨ３、−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＨ２−ＯＨ、−ＣＨ２−ＣＨ２−ＮＨ−ＣＨ３、−ＣＨ２−Ｓ−ＣＨ２−ＣＨ３、及び−ＣＨ２−ＣＨ２−Ｓ（＝０）−ＣＨ３が含まれる。最大で２つのヘテロ原子が連続し得、例えば、−ＣＨ２−ＮＨ−ＯＣＨ３、または−ＣＨ２−ＣＨ２−Ｓ−Ｓ−ＣＨ３などである。
【００１９】
単独でまたは他の用語と組み合わせて採用される「アリール」という用語は、他に記述されない限り、１つ以上の環（典型的には１つ、２つ、または３つの環）を含有する炭素環芳香族系を意味し、そのような環は、ビフェニルなどのペンダント様式で共に結合され得、またはナフタレンのように縮合され得る。アリール基の例には、フェニル、アントラシル、及びナフチルが含まれる。様々な実施形態では、アリール基の例には、フェニル（例えば、Ｃ６−アリール）及びビフェニル（例えば、Ｃ１２−アリール）が含まれ得る。いくつかの実施形態では、アリール基は６〜１６個の炭素原子を有する。いくつかの実施形態では、アリール基は６〜１２個の炭素原子を有する（例えば、Ｃ６〜１２−アリール）。いくつかの実施形態では、アリール基は６個の炭素原子を有する（例えば、Ｃ６−アリール）。
【００２０】
本明細書で使用される場合、「ヘテロアリール」または「ヘテロ芳香族」という用語は、芳香族の性質を有する複素環を指す。ヘテロアリール置換基は、炭素原子の数によって定義され得、例えば、Ｃ１〜９−ヘテロアリールは、ヘテロ原子の数を含まずにヘテロアリール基に含有される炭素原子の数を示す。例えば、Ｃ１〜９−ヘテロアリールは、追加の１〜４個のヘテロ原子を含むであろう。多環式ヘテロアリールは、部分的に飽和した１つ以上の環を含み得る。ヘテロアリールの非限定的な例には、ピリジル、ピラジニル、ピリミジニル（例えば、２−及び４−ピリミジニルを含む）、ピリダジニル、チエニル、フリル、ピロリル（例えば、２−ピロリルを含む）、イミダゾリル、チアゾリル、オキサゾリル、ピラゾリル（例えば、３−及び５−ピラゾリルを含む）、イソチアゾリル、１，２，３−トリアゾリル、１，２，４−トリアゾリル、１，３，４−トリアゾリル、テトラゾリル、１，２，３−チアジアゾリル、１，２，３−オキサジアゾリル、１，３，４−チアジアゾリル、及び１，３，４−オキサジアゾリルが含まれる。
【００２１】
多環式複素環及びヘテロアリールの非限定的な例には、インドリル（例えば、３−、４−、５−、６−及び７−インドリルを含む）、インドリニル、キノリル、テトラヒドロキノリル、イソキノリル（例えば、１−及び５−イソキノリルを含む）、１，２，３，４−テトラヒドロイソキノリル、シンノリニル、キノキサリニル（例えば、２−及び５−キノキサリニルを含む）、キナゾリニル、フタラジニル、１，８−ナフチリジニル、１，４−ベンゾジオキサニル、クマリン、ジヒドロクマリン、１，５−ナフチリジニル、ベンゾフリル（例えば、３−、４−、５−、６−及び７−ベンゾフリルを含む）、２，３−ジヒドロベンゾフリル、１，２−ベンズイソキサゾリル、ベンゾチエニル（例えば、３−、４−、５−、６−、及び７−ベンゾチエニルを含む）、ベンゾキサゾリル、ベンゾチアゾリル（例えば、２−ベンゾチアゾリル及び５−ベンゾチアゾリルを含む）、プリニル、ベンズイミダゾリル（例えば、２−ベンズイミダゾリルを含む）、ベンゾトリアゾリル、チオキサンチニル、カルバゾリル、カルボリニル、アクリジニル、ピロリジジニル、及びキノリジジニルが含まれる。
【００２２】
「保護基」または「化学的保護基」という用語は、化合物の一部または全ての反応性部分をブロックし、そのような反応性部分が保護基が除去されるまで化学反応に関与することを防止する化学的部分、例えば、Ｔ．Ｗ．Ｇｒｅｅｎｅ，Ｐ．Ｇ．Ｍ．Ｗｕｔｓ，Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ  Ｇｒｏｕｐｓ  ｉｎ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，３ｒｄ  ｅｄ．Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ（１９９９）に列挙及び記載されているそれらの部分を指す。異なる保護基が採用される場合、各々の（異なる）保護基が異なる手段によって除去可能であることが有利であり得る。全体的に全く異なる反応条件下で切断される保護基は、そのような保護基の区別的除去を可能にする。例えば、保護基は、酸、塩基、及び水素化分解によって除去され得る。トリチル、モノメトキシトリチル、ジメトキシトリチル、アセタール、及びｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルなどの基は、酸に不安定であり、水素化分解によって除去可能なＣｂｚ基、及び塩基に不安定なＦｍｏｃ基で保護されたアミノ基の存在下でカルボキシ及びヒドロキシ反応性部分を保護するために使用され得る。カルボン酸部分は、限定されないが、メチルまたはエチルなどの塩基不安定基でブロックされ得、ヒドロキシ反応性部分は、ｔｅｒｔ−ブチルカルバメートなどの酸不安定基または酸及び塩基の両方に安定であるが加水分解的に除去可能であるカルバメートでブロックされたアミンの存在下でアセチルなどの塩基不安定基でブロックされ得る。
【００２３】
カルボン酸及びヒドロキシル反応性部分はまた、ベンジル基などの加水分解的に除去可能な保護基でブロックされ得る一方で、アミン基は、Ｆｍｏｃなどの塩基不安定基でブロックされ得る。式（Ｉ）の化合物の合成のための特に有用なアミン保護基はトリフルオロアセトアミドである。カルボン酸反応性部分は、２，４−ジメトキシベンジルなどの酸化的に除去可能な保護基でブロックされ得る一方で、共存するアミノ基は、フッ化物に不安定なシリルカルバメートでブロックされ得る。
【００２４】
アリルブロック基は、酸保護基及び塩基保護基の存在下で有用であり、その理由は、前者が安定であり、後に金属またはπ酸触媒によって除去され得るからである。例えば、アリルでブロックされたカルボン酸は、酸不安定なｔ−ブチルカルバメートまたは塩基不安定な酢酸アミン保護基の存在下でパラジウム（０）触媒反応で脱保護され得る。保護基のさらに別の形態は、化合物または中間体が結合され得る樹脂である。残基が樹脂に結合している限り、その官能基はブロックされ、反応することができない。樹脂から開放されると、官能基は利用可能となり反応する。
【００２５】
「核酸塩基」、「塩基対形成部分」、「核酸塩基対形成部分」、または「塩基」という用語は、ヌクレオシド、ヌクレオチド、及び／またはモルホリノサブユニットの複素環の環部分を指す。核酸塩基は、天然に存在し得るか、またはこれらの天然に存在する核酸塩基の修飾もしくは類似体であり得、例えば、核酸塩基の１つ以上の窒素原子はそれぞれの場合に独立して炭素で置換され得る。例示的な類似体には、ヒポキサンチン（ヌクレオシドイノシンの基本成分）；２，６−ジアミノプリン；５−メチルシトシン；Ｃ５−プロピニル修飾ピリミジン；１０−（９−（アミノエトキシ）フェノキサジニル）（Ｇ−クランプ）などが含まれる。
【００２６】
塩基対形成部分の更なる例には、アシル保護基によって保護されたそれらのそれぞれのアミノ基を有するウラシル、チミン、アデニン、シトシン、グアニン及びヒポキサンチン（イノシン）、２−フルオロウラシル、２−フルオロシトシン、５−ブロモウラシル、５−ヨードウラシル、２，６−ジアミノプリン、アザシトシン、ピリミジン類似体、例えばプソイドイソシトシン及びプソイドウラシル、ならびに他の修飾核酸塩基、例えば８−置換プリン、キサンチン、またはヒポキサンチン（後者の２つは天然分解産物である）が含まれるがこれらに限定されない。Ｃｈｉｕ  ａｎｄ  Ｒａｎａ，ＲＮＡ，２００３，９，１０３４−１０４８，Ｌｉｍｂａｃｈ  ｅｔ  ａｌ．Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ，１９９４，２２，２１８３−２１９６及びＲｅｖａｎｋａｒ  ａｎｄ  Ｒａｏ，Ｃｏｍｐｒｅｈｅｎｓｉｖｅ  Ｎａｔｕｒａｌ  Ｐｒｏｄｕｃｔｓ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，ｖｏｌ．７，３１３に開示された修飾ヌクレオチドも企図され、その内容は参照により本明細書に組み込まれる。
【００２７】
塩基対形成部分の更なる例には、１つ以上のベンゼン環が付加された拡張サイズ核酸塩基が含まれるがこれに限定されない。Ｇｌｅｎ  Ｒｅｓｅａｒｃｈのカタログ（ｗｗｗ．ｇｌｅｎｒｅｓｅａｒｃｈ．ｃｏｍ）；Ｋｒｕｅｇｅｒ  ＡＴ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｃｃ．Ｃｈｅｍ．Ｒｅｓ．，２００７，４０，１４１−１５０；Ｋｏｏｌ，ＥＴ，Ａｃｃ．Ｃｈｅｍ．Ｒｅｓ．，２００２，３５，９３６−９４３；Ｒｅｎｎｅｒ  Ｓ．Ａ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔ．Ｒｅｖ．Ｇｅｎｅｔ．，２００５，６，５５３−５４３；Ｒｏｍｅｓｂｅｒｇ，Ｆ．Ｅ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｃｈｅｍ．Ｂｉｏｌ．，２００３，７，７２３−７３３；Ｈｉｒａｏ，Ｉ．，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｃｈｅｍ．Ｂｉｏｌ．，２００６，１０，６２２−６２７（その内容は参照により本明細書に組み込まれる）に記載された核塩基置換は、本明細書に記載のオリゴマーの合成に有用であると企図される。拡張サイズ核酸塩基の例を以下に示す：
【化５】
2018538302.tif 000006
【００２８】
「オリゴヌクレオチド」または「オリゴマー」という用語は、複数の連結したヌクレオシド、ヌクレオチド、またはヌクレオシド及びヌクレオチドの両方の組み合わせを含む化合物を指す。本明細書で提供される特定の実施形態では、オリゴヌクレオチドはモルホリノオリゴヌクレオチドである。
【００２９】
「モルホリノオリゴヌクレオチド」または「ＰＭＯ」という語句は、１つのサブユニットのモルホリノ窒素を隣接サブユニットの５’−環外炭素に繋ぐ、ホスホラミデートまたはホスホロジアミデート結合によって共に結合されたモルホリノサブユニットを有する修飾オリゴヌクレオチドを指す。各モルホリノサブユニットは、核酸塩基特異的水素結合によって、標的中の核酸塩基に結合するのに有効な核酸塩基対形成部分を含む。
【００３０】
「アンチセンスオリゴマー」、「アンチセンス化合物」及び「アンチセンスオリゴヌクレオチド」という用語は、交換可能に使用され、塩基対形成部分をそれぞれ有し、ワトソン−クリック塩基対形成によって塩基対形成部分が核酸（典型的にはＲＮＡ）中の標的配列にハイブリダイズして、標的配列内に核酸：オリゴマーヘテロ二本鎖を形成することを可能にするサブユニット間結合によって結合されるサブユニットの配列を指す。オリゴマーは、標的配列に対する正確な（完全な）または近い（十分な）配列相補性を有し得る；オリゴマーの末端近くの配列の変化は一般に内部の変化より好ましい。
【００３１】
そのようなアンチセンスオリゴマーは、ｍＲＮＡの翻訳をブロックまたは阻害するか、または天然または異常なｐｒｅ−ｍＲＮＡスプライス処理を阻害／変化させるように設計され得、それがハイブリダイズする標的配列に「向けられる」かまたはそれに「対して標的化される」と言われる場合がある。標的配列は、典型的には、ｍＲＮＡのＡＵＧ開始コドン、翻訳抑制オリゴマー、または前処理されたｍＲＮＡのスプライス部位、スプライス抑制オリゴマー（ＳＳＯ）を含む領域である。スプライス部位についての標的配列は、前処理されたｍＲＮＡ内の正常なスプライス受容部ジャンクションの下流に、その５’末端の１〜約２５塩基対を有するｍＲＮＡ配列を含み得る。様々な実施形態では、標的配列は、スプライス部位を含むか、またはエクソンコード配列内に全体的に含有されているか、またはスプライス受容もしくは供与部位に及ぶ前処理されたｍＲＮＡの任意の領域であり得る。オリゴマーはより一般的には、上記の手法で標的の核酸に対して標的とされる場合、タンパク質、ウイルス、または細菌などの生物学的に関連する標的に「対して標的にされる」と言われる。
【００３２】
オリゴヌクレオチドと標的との間に安定した特異的結合が生じるように、各分子中の十分な数の対応する位置が互いに水素結合し得るヌクレオチドによって占められている場合、アンチセンスオリゴヌクレオチド及び標的ＲＮＡは互いに相補的である。それ故、「特異的にハイブリダイズ可能」及び「相補的」は、オリゴヌクレオチドと標的との間に安定した特異的結合が生じるように、十分な程度の相補性または精確な対形成を示すために使用される用語である。当該技術分野では、オリゴヌクレオチドの配列は、特異的にハイブリダイズされるべきその標的配列の配列に対して１００％相補的である必要はないことが理解される。オリゴヌクレオチドは、標的分子へのオリゴヌクレオチドの結合が標的ＲＮＡの正常な機能を妨げる場合に特異的にハイブリダイズ可能であり、特異的結合が望まれる条件下で、すなわち、インビボアッセイまたは治療的処置の場合の生理学的条件下で、及びインビボアッセイの場合はアッセイが実施される条件下で、アンチセンスオリゴヌクレオチドの非標的配列への非特異的結合を避けるのに十分な程度の相補性が存在する。
【００３３】
オリゴヌクレオチドはまた、核酸塩基（しばしば当該技術分野では単に「塩基」と称される）修飾または置換を含み得る。修飾または置換塩基を含有するオリゴヌクレオチドには、核酸に最も一般的に見られる１つ以上のプリンまたはピリミジン塩基が、より一般的でないまたは非天然の塩基で置換されたオリゴヌクレオチドが含まれる。いくつかの実施形態では、核酸塩基は、プリン塩基のＮ９原子またはピリミジン塩基のＮ１原子で、ヌクレオチドまたはヌクレオシドのモルホリン環に共有結合される。
【００３４】
プリン塩基は、一般式：
【化６】
2018538302.tif 000007
プリン
によって記載されるように、イミダゾール環に縮合したピリミジン環を含む。
【００３５】
アデニン及びグアニンは、核酸において最も一般的に見られる２つのプリン核酸塩基である。これらは、Ｎ６−メチルアデニン、Ｎ２−メチルグアニン、ヒポキサンチン、及び７−メチルグアニンを含むがこれらに限定されない他の天然に存在するプリンで置換され得る。
【００３６】
ピリミジン塩基は、一般式：
【化７】
2018538302.tif 000008
ピリミジン
によって記載されるように６員環のピリミジン環を含む。
【００３７】
シトシン、ウラシル、及びチミンは、核酸において最も一般的に見られるピリミジン塩基である。これらは、５−メチルシトシン、５−ヒドロキシメチルシトシン、プソイドウラシル、及び４−チオウラシルを含むがこれらに限定されない他の天然に存在するピリミジンで置換され得る。一実施形態では、本明細書に記載のオリゴヌクレオチドは、ウラシルの代わりにチミン塩基を含有する。
【００３８】
他の修飾または置換された塩基には、２，６−ジアミノプリン、オロチン酸、アグマチジン、リシジン、２−チオピリミジン（例えば、２−チオウラシル、２−チオチミン）、Ｇ−クランプ及びその誘導体、５−置換ピリミジン（例えば、５−ハロウラシル、５−プロピニルウラシル、５−プロピニルシトシン、５−アミノメチルウラシル、５−ヒドロキシメチルウラシル、５−アミノメチルシトシン、５−ヒドロキシメチルシトシン、ＳｕｐｅｒＴ）、７−デアザグアニン、７−デアザアデニン、７−アザ−２，６−ジアミノプリン、８−アザ−７−デアザグアニン、８−アザ−７−デアザアデニン、８−アザ−７−デアザ−２，６−ジアミノプリン、ＳｕｐｅｒＧ、ＳｕｐｅｒＡ、及びＮ４−エチルシトシン、またはこれらの誘導体；Ｎ２−シクロペンチルグアニン（ｃＰｅｎｔ−Ｇ）、Ｎ２−シクロペンチル−２−アミノプリン（ｃＰｅｎｔ−ＡＰ）、及びＮ２−プロピル−２−アミノプリン（Ｐｒ−ＡＰ）、プソイドウラシルまたはこれらの誘導体；ならびに２，６−ジフルオロトルエンのような縮重もしくはユニバーサル塩基または脱塩基部位のような欠損塩基（例えば、１−デオキシリボース、１，２−ジデオキシリボース、１−デオキシ−２−Ｏ−メチルリボース；または環酸素が窒素で置換されたピロリジン誘導体（アザリボース））が含まれるがこれらに限定されない。プソイドウラシルは、ウリジンのような通常のＮ−グリコシドではなく、Ｃ−グリコシドを有するウラシルの天然に存在する異性化型である。
【００３９】
所定の修飾または置換された核酸塩基は、本開示のアンチセンスオリゴヌクレオチドの結合親和性を増大させるために特に有用である。これらには、５−置換ピリミジン、６−アザピリミジン及びＮ−２、Ｎ−６及びＯ−６置換プリン（２−アミノプロピルアデニンを含む）、５−プロピニルウラシル及び５−プロピニルシトシンが含まれる。様々な実施形態では、核酸塩基は、核酸二本鎖の安定性を０．６〜１．２℃上昇させることが示されている５−メチルシトシン置換を含み得る。
【００４０】
いくつかの実施形態では、修飾または置換された核酸塩基は、アンチセンスオリゴヌクレオチドの精製を容易にするのに有用である。例えば、所定の実施形態では、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、３つ以上の（例えば、３、４、５、６またはそれ以上の）連続したグアニン塩基を含有し得る。所定のアンチセンスオリゴヌクレオチドでは、３つ以上の連続したグアニン塩基のストリングがオリゴヌクレオチドの凝集をもたらして精製を複雑にし得る。そのようなアンチセンスオリゴヌクレオチドでは、連続したグアニンの１つ以上がイノシンで置換され得る。３つ以上の連続したグアニン塩基のストリングにおける１つ以上のグアニンに対するイノシンの置換は、アンチセンスオリゴヌクレオチドの凝集を減少させ、それにより精製を容易し得る。
【００４１】
本明細書で提供されるオリゴヌクレオチドは、合成され、生物起源のアンチセンス組成物を含まない。本開示の分子はまた、例えば、取り込み、分布、もしくは吸収、またはこれらの組み合わせを補助するための、リポソーム、受容体標的分子、経口、直腸、局所または他の製剤として、他の分子、分子構造または化合物の混合物と混合、カプセル化、複合体化、またはあるいは連携され得る。
【００４２】
「相補的」及び「相補性」という用語は、ワトソン−クリック塩基対形成規則によって関連付けられたオリゴヌクレオチド（すなわち、ヌクレオチドの配列）を指す。例えば、配列「Ｔ−Ｇ−Ａ（５’−３’）」は、配列「Ｔ−Ｃ−Ａ（５’−３’）」に対して相補的である。相補性は、核酸の塩基の一部のみが塩基対形成規則に従って一致する「部分的」であり得る。または、核酸間の「完全な」、「全体的な」、または「全くの」（１００％）相補性が存在し得る。核酸鎖間の相補性の程度は、核酸鎖間のハイブリダイゼーションの効率及び強度に重大な影響を及ぼす。完全な相補性がしばしば望ましいが、いくつかの実施形態は、標的ＲＮＡに対して１つ以上、しかし好ましくは６つ、５つ、４つ、３つ、２つ、または１つの不一致を含み得る。そのようなハイブリダイゼーションは、標的配列に対するアンチセンスオリゴマーの「近い」または「実質的な」相補性と共に、及び正確な相補性と共に生じ得る。いくつかの実施形態では、オリゴマーは、約５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９９％または１００％の相補性で標的配列に対してハイブリダイズし得る。オリゴマー内の任意の位置における変化が含まれる。所定の実施形態では、オリゴマーの末端に近い配列の変化は、一般に、内部における変化より好ましく、存在する場合、典型的には、５’−末端、３’−末端、または両方の末端の約６、５、４、３、２、または１ヌクレオチド内にある。
【００４３】
「ＴＥＧ」、「ＥＧ３」、または「トリエチレングリコールテール」という用語は、オリゴマーに、例えば、その３’−または５’−末端で複合体化したトリエチレングリコール部分を指す。例えば、いくつかの実施形態では、「ＴＥＧ」は、例えば、式（Ｉ）または（Ｉｃ）のペプチド−オリゴマー−複合体のＲ３が、一般式：
【化８】
2018538302.tif 000009
であるものを含む。
【００４４】
「ペプチド」という用語は、複数の連結したアミノ酸を含む化合物を指す。本明細書で提供されるペプチドは、細胞透過性ペプチドであると考えられ得る。
【００４５】
「細胞透過性ペプチド」及び「ＣＰＰ」という用語は、交換可能に使用され、カチオン性細胞透過性ペプチド（輸送ペプチド、担体ペプチド、またはペプチド形質導入ドメインとも呼ばれる）を指す。本明細書で提供されるペプチドは、所与の細胞培養集団の細胞の１００％への細胞透過を誘導する能力を有し、全身投与時にインビボで複数の組織内で巨大分子の転移を可能にする。様々な実施形態では、本開示のＣＰＰ実施形態は、以下にさらに説明されるアルギニンリッチなペプチドを含み得る。
【００４６】
「治療」という用語は、疾患の改善のために使用される１つ以上の特定の処置の適用を指す。所定の実施形態では、特定の処置は１種以上の医薬品の投与である。個体（例えば、ヒトなどの哺乳類）または細胞の「治療」は、個体または細胞の自然経過を変化させる試みにおいて使用される任意の種類の介入である。治療は、薬学的組成物の投与を含むがこれに限定されず、病的事象の開始または病原因子との接触に対して予防的にまたはその後のいずれかで実施され得る。所定の実施形態では、治療は、薬学的組成物の投与を含むがこれに限定されず、病的事象の開始または病原因子との接触の後に実施され得る。治療は、疾患または状態の症状または病状に対する任意の所望の効果を含み、例えば、治療される疾患または状態の１つ以上の測定可能なマーカーの最小限の変化または改善を含み得る。また、治療される疾患または状態の進行の速度を低下させて、その疾患または状態の発症を遅延させるか、またはその発症の重症度を低下させることに方向づけられ得る「予防的」治療も含まれる。「有効量」または「治療的有効量」は、所望の治療効果を生じさせるのに有効である、単回用量としてまたは一連の用量の一部としてのいずれかで哺乳動物の対象に投与される、アンチセンスオリゴマーなどの治療化合物の量を指す。
【００４７】
「改善」という用語は、状態または疾患の少なくとも１つの指標の重症度を軽減することを意味する。所定の実施形態では、改善は、状態または疾患の１つ以上の指標の進行の遅延または遅らせることを含む。指標の重症度は、当業者に知られている主観的または客観的な尺度によって決定され得る。
【００４８】
本明細書で使用される場合、「薬学的に許容可能な塩」は、存在する酸または塩基部分をその塩形態に転化することによって親オリゴヌクレオチドが修飾された、開示されたオリゴヌクレオチドの誘導体を指す。好適な塩のリストは、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，１７ｔｈ  ｅｄ．，Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｅａｓｔｏｎ，Ｐａ．，１９８５，ｐ．１４１８及びＪｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅ，６６，２（１９７７）に見られ、その各々はその全体が参照により本明細書に組み込まれる。
【００４９】
ペプチド−オリゴマー−複合体
本明細書では、オリゴマーの活性、細胞分布、または細胞取り込みを向上させる、細胞透過性ペプチドなどの１つ以上の部分に化学的に連結したオリゴマー（例えば、アンチセンス化合物）が提供される。オリゴマーは追加的に、オリゴマーの活性、細胞分布、または細胞取り込みをさらに向上させる１つ以上のヘテロアルキル部分（例えば、ポリエチレングリコール）に化学的に連結され得る。１つの例示的な実施形態では、アルギニンリッチなポリペプチドは、そのＮ末端またはＣ末端残基でアンチセンス化合物の末端、またはアンチセンス化合物の内部のいずれかに共有結合される。
【００５０】
それ故、一態様では、式Ｉのペプチド−オリゴマー−複合体：
【化９】
2018538302.tif 000010
（Ｉ）
またはその薬学的に許容可能な塩が本明細書で提供される、
（式中：
Ｒ３は、ＯＨ、−Ｎ（Ｈ）ＣＨ２Ｃ（Ｏ）ＮＨ２、−Ｎ（Ｃ１〜６−アルキル）ＣＨ２Ｃ（Ｏ）ＮＨ２、
【化１０】
2018538302.tif 000011
から選択され；
Ｒ５は、−Ｃ（Ｏ）（Ｏ−アルキル）ｘＯＨ（式中、ｘは３〜１０であり、各アルキル基は、各場合に独立して、Ｃ２〜６アルキルである）であるか、またはＲ５は、−Ｃ（Ｏ）Ｃ１〜６アルキル、トリチル、モノメトキシトリチル、−（Ｃ１〜６−アルキル）Ｒ６、−（Ｃ１〜６ヘテロアルキル）−Ｒ６、アリール−Ｒ６、ヘテロアリール−Ｒ６、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−（Ｃ１〜６アルキル）−Ｒ６、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−アリール−Ｒ６、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−ヘテロアリール−Ｒ６、及びＲ１２からなる群から選択され；
Ｒ６は、ＯＨ、ＳＨ、及びＮＨ２から選択されるか、またはＲ６は、固体支持体に共有結合したＯ、Ｓ、またはＮＨであり；
Ｒ１は、各場合に独立して、ＯＨ、−ＮＲ７Ｒ１２、または−ＮＲ７Ｒ８であり；
各Ｒ７及びＲ８は、各場合に独立して、Ｈまたは−Ｃ１〜６アルキルであり；
Ｒ２は、各場合に独立して、Ｈ、核酸塩基、及び化学保護基で官能化された核酸塩基からなる群から選択され、その核酸塩基が、各場合に独立して、ピリジン、ピリミジン、トリアジナン、プリン、及びデアザ−プリンから選択されるＣ３〜６複素環式環を含み；
ｚは８〜４０であり；
Ｒ４は、Ｈ、−Ｃ１〜６アルキル、−Ｃ（Ｏ）Ｃ１〜６アルキル、ベンゾイル、ステアロイル、トリチル、モノメトキシトリチル、ジメトキシトリチル、トリメトキシトリチル、
【化１１】
2018538302.tif 000012
から選択され；
Ｒ９は、−Ｃ（Ｏ）（ＣＨ２）６Ｃ（Ｏ）−または−Ｃ（Ｏ）（ＣＨ２）２Ｓ２（ＣＨ２）２Ｃ（Ｏ）−であり；
Ｒ１０は、−（ＣＨ２）２ＯＣ（Ｏ）Ｎ（（ＣＨ２）６Ｎ（Ｈ）Ｃ（＝ＮＨ）ＮＨ２）２であり；
Ｒ１１は、ＯＨ及びＮＲ７Ｒ８から選択され；
Ｒ１２は、
【化１２】
2018538302.tif 000013
からなる群から選択され；
ｎは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０であり；
ｐは、２、３、４、または５であり；
Ｒ１３は結合であるか、またはＲ１３は、
【化１３】
2018538302.tif 000014
【化１４】
2018538302.tif 000015
からなる群から選択され；
Ｒ１５及びＲ１９は、各場合に独立して、Ｈ、−Ｃ１〜４アルキル、−ＣＨ（−Ｃ１〜４アルキル）２、及び−（ＣＨ２）３ＮＨ−Ｃ（＝ＮＨ）−ＮＨ２からなる群から選択され；
ｔ及びｗは、各場合に独立して、２、３、４、または５であり；
Ｒ１４は、
【化１５】
2018538302.tif 000016
からなる群から選択され；
Ｒ１７は、Ｈまたは−Ｃ１〜４アルキルであり；
Ｒ２０は、Ｈ、−Ｃ１〜４アルキル、−ＣＨ（−Ｃ１〜４アルキル）２、及び−（ＣＨ２）３ＮＨ−Ｃ（＝ＮＨ）−ＮＨ２からなる群から選択され；
ｖ及びｑは、各場合に独立して、２、３、４、または５であり；
Ｒ１６は、
【化１６】
2018538302.tif 000017
【化１７】
2018538302.tif 000018
からなる群から選択され；
Ｒ２１及びＲ２２は、各場合に独立して、Ｈまたは−Ｃ１〜４アルキルであり；
Ｒ１８は、Ｈ、−Ｃ（Ｏ）Ｃ１〜６アルキル、ベンゾイル、及びステアロイルから選択され；
ｒは、１、２、３、４、５、６、７、８、または９であり；そして
ｙ及びｕは、各場合に独立して、２、３、４、または５であり；
但し、以下の条件のうち１つのみが存在する：１）Ｒ１がＮＲ７Ｒ１２である；２）Ｒ４がＲ１２である；または３）Ｒ３が
【化１８】
2018538302.tif 000019
である）。
【００５１】
式Ｉのペプチド−オリゴマー−複合体の実施形態では、Ｒ４は、Ｈ、−Ｃ１〜６アルキル、−Ｃ（Ｏ）Ｃ１〜６アルキル、ベンゾイル、ステアロイル、トリチル、モノメトキシトリチル、ジメトキシトリチル、トリメトキシトリチル、及びＲ１２から選択される。
【００５２】
別の実施形態では、Ｒ３は、
【化１９】
2018538302.tif 000020
Ｒ４はＲ１２である。
【００５３】
さらに別の実施形態では、Ｒ３は、−ＯＨ、−Ｎ（Ｃ１〜６−アルキル）ＣＨ２Ｃ（Ｏ）ＮＨ２、
【化２０】
2018538302.tif 000021
から選択される。
【００５４】
また別の実施形態では、Ｒ４は、Ｈ、−Ｃ（Ｏ）ＣＨ３、トリチル、４−メトキシトリチル、ベンゾイル、ステアロイル、及びＲ１２から選択される。
【００５５】
別の実施形態では、Ｒ３は、−ＯＨ、−Ｎ（Ｃ１〜６−アルキル）ＣＨ２Ｃ（Ｏ）ＮＨ２、及び
【化２１】
2018538302.tif 000022
Ｒ４はＲ１２である。
【００５６】
別の実施形態では、Ｒ３は、
【化２２】
2018538302.tif 000023
である。
【００５７】
別の実施形態では、Ｒ４は、Ｈ、−Ｃ（Ｏ）ＣＨ３、トリチル、４−メトキシトリチル、ベンゾイル、及びステアロイルから選択される。
【００５８】
別の実施形態では、Ｒ４は、Ｈ及び−Ｃ（Ｏ）ＣＨ３から選択される。
【００５９】
別の実施形態では、式Ｉのペプチド−オリゴマー−複合体は、式Ｉａのペプチド−オリゴマー−複合体である：
【化２３】
2018538302.tif 000024
（Ｉａ）、
（式中、Ｒ５は−Ｃ（Ｏ）（Ｏ−アルキル）ｘＯＨ（式中、ｘは３〜１０であり、各アルキル基は、各場合に独立して、Ｃ２〜６−アルキルである）であるか、またはＲ５は−Ｃ（Ｏ）Ｃ１〜６アルキル、トリチル、及びモノメトキシトリチルからなる群から選択される）。
【００６０】
式Ｉまたは式Ｉａのペプチド−オリゴマー−複合体の実施形態では、Ｒ５は−Ｃ（Ｏ）（Ｏ−アルキル）ｘＯＨ（式中、各アルキル基は、各場合に独立して、Ｃ２〜６−アルキルである）である。
【００６１】
式Ｉまたは式Ｉａのペプチド−オリゴマー−複合体の別の実施形態では、Ｒ５は−Ｃ（Ｏ）（Ｏ−ＣＨ２ＣＨ２）３ＯＨである。
【００６２】
更に別の実施形態では、式Ｉのペプチド−オリゴマー−複合体は、式Ｉｂのペプチド−オリゴマー−複合体である：
【化２４】
2018538302.tif 000025
（Ｉｂ）、
（式中、Ｒ４は、Ｈ、−Ｃ１〜６アルキル、−Ｃ（Ｏ）Ｃ１〜６アルキル、ベンゾイル、ステアロイル、トリチル、モノメトキシトリチル、ジメトキシトリチル、及びトリメトキシトリチルから選択される）。
【００６３】
式Ｉまたは式Ｉｂのペプチド−オリゴマー−複合体の実施形態では、Ｒ４は、Ｈ、Ｃ１〜６アルキル、−Ｃ（Ｏ）ＣＨ３、ベンゾイル、及びステアロイルから選択される。
【００６４】
式Ｉｂのペプチド−オリゴマー−複合体の実施形態では、Ｒ４は、Ｈ及び−Ｃ（Ｏ）ＣＨ３から選択される。
【００６５】
本開示のペプチド−オリゴマー−複合体の実施形態では、Ｒ１６は、
【化２５】
2018538302.tif 000026
からなる群から選択される。
【００６６】
本開示のペプチド−オリゴマー−複合体の別の実施形態では、Ｒ１６は、
【化２６】
2018538302.tif 000027
である。
【００６７】
本開示のペプチド−オリゴマー−複合体の別の実施形態では、Ｒ１４は、
【化２７】
2018538302.tif 000028
からなる群から選択される。
【００６８】
本開示のペプチド−オリゴマー−複合体の別の実施形態では、Ｒ１２は、
【化２８】
2018538302.tif 000029
である。
【００６９】
本開示のペプチド−オリゴマー−複合体の別の実施形態では、ｒは３、４、５、６、７、または８である。
【００７０】
本開示のペプチド−オリゴマー−複合体の別の実施形態では、ｒは５、６、または７である。
【００７１】
本開示のペプチド−オリゴマー−複合体の別の実施形態では、ｒは６である。
【００７２】
本開示のペプチド−オリゴマー−複合体の別の実施形態では、Ｒ１３は結合である。
【００７３】
本開示のペプチド−オリゴマー−複合体の別の実施形態では、ｚは８〜２５である。
【００７４】
本開示のペプチド−オリゴマー−複合体の別の実施形態では、ｚは１５〜２５である。
【００７５】
本開示のペプチド−オリゴマー−複合体の別の実施形態では、ｚは１０〜２０である。
【００７６】
本開示のペプチド−オリゴマー−複合体の別の実施形態では、各Ｒ１は独立してＮＲ７Ｒ８（式中、各Ｒ７及びＲ８は、各場合に独立して、Ｃ１〜３−アルキルである）である。
【００７７】
本開示のペプチド−オリゴマー−複合体の別の実施形態では、各Ｒ１はＮ（ＣＨ３）２である。
【００７８】
本開示のペプチド−オリゴマー−複合体の別の実施形態では、各Ｒ２は核酸塩基であり、その核酸塩基は、各場合に独立して、ピリジン、ピリミジン、トリアジナン、プリン、及びデアザ−プリンから選択されるＣ４〜６−複素環式環を含む。
【００７９】
本開示のペプチド−オリゴマー−複合体の別の実施形態では、各Ｒ２は核酸塩基であり、その核酸塩基は、各場合に独立して、ピリミジン、プリン、及びデアザ−プリンから選択されるＣ４〜６−複素環式環を含む。
【００８０】
本開示のペプチド−オリゴマー−複合体の別の実施形態では、各Ｒ２は核酸塩基であり、その核酸塩基は、各場合に独立して、アデニン、２，６−ジアミノプリン、７−デアザ−アデニン、グアニン、７−デアザ−グアニン、ヒポキサンチン、シトシン、５−メチル−シトシン、チミン、及びウラシルからなる群から選択される。
【００８１】
本開示のペプチド−オリゴマー−複合体の別の実施形態では、各Ｒ２は核酸塩基であり、その核酸塩基は、各場合に独立して、アデニン、グアニン、シトシン、５−メチル−シトシン、チミン、ウラシル、及びヒポキサンチンからなる群から選択される。
【００８２】
本開示のペプチド−オリゴマー−複合体の別の実施形態では、Ｒ１５は、Ｈ、ＣＨ３、−ＣＨ（ＣＨ３）２、及び−（ＣＨ２）３ＮＨ−Ｃ（＝ＮＨ）−ＮＨ２からなる群から選択される。
【００８３】
本開示のペプチド−オリゴマー−複合体の別の実施形態では、Ｒ１９は、Ｈ、ＣＨ３、−ＣＨ（ＣＨ３）２、及び−（ＣＨ２）３ＮＨ−Ｃ（＝ＮＨ）−ＮＨ２からなる群から選択される。
【００８４】
本開示のペプチド−オリゴマー−複合体の別の実施形態では、Ｒ２０は、Ｈ、ＣＨ３、−ＣＨ（ＣＨ３）２、及び−（ＣＨ２）３ＮＨ−Ｃ（＝ＮＨ）−ＮＨ２から選択される。
【００８５】
本開示のペプチド−オリゴマー−複合体の別の実施形態では、Ｒ１７はＨまたはＣＨ３である。
【００８６】
本開示のペプチド−オリゴマー−複合体の別の実施形態では、Ｒ１７はＨである。
【００８７】
本開示のペプチド−オリゴマー−複合体の別の実施形態では、Ｒ２１はＨまたはＣＨ３である。
【００８８】
本開示のペプチド−オリゴマー−複合体の別の実施形態では、Ｒ２１はＨである。
【００８９】
本開示のペプチド−オリゴマー−複合体の別の実施形態では、Ｒ２２はＨまたはＣＨ３である。
【００９０】
本開示のペプチド−オリゴマー−複合体の別の実施形態では、Ｒ２２はＨである。
【００９１】
本開示のペプチド−オリゴマー−複合体の別の実施形態では、Ｒ６はＯＨ、ＳＨ、及びＮＨ２から選択される。
【００９２】
本開示のペプチド−オリゴマー−複合体の別の実施形態では、各Ｒ７及びＲ８は、各場合に独立して、ＨまたはＣＨ３である。
【００９３】
本開示のペプチド−オリゴマー−複合体の別の実施形態では、各Ｒ７及びＲ８はＣＨ３である。
【００９４】
本開示のペプチド−オリゴマー−複合体の別の実施形態では、ｎは２、３、４、５、６、または７である。
【００９５】
本開示のペプチド−オリゴマー−複合体の別の実施形態では、ｐは３または４である。
【００９６】
本開示のペプチド−オリゴマー−複合体の別の実施形態では、ｔは３または４である。
【００９７】
本開示のペプチド−オリゴマー−複合体の別の実施形態では、ｗは３または４である。
【００９８】
本開示のペプチド−オリゴマー−複合体の別の実施形態では、ｖは３または４である。
【００９９】
本開示のペプチド−オリゴマー−複合体の別の実施形態では、ｘは３または４である。
【０１００】
本開示のペプチド−オリゴマー−複合体の別の実施形態では、ｙは３または４である。
【０１０１】
本開示のペプチド−オリゴマー−複合体の別の実施形態では、ｕは３または４である。
【０１０２】
本開示のペプチド−オリゴマー−複合体の別の実施形態では、ｑは３または４である。
【０１０３】
本開示のペプチド−オリゴマー−複合体の別の実施形態では、Ｒ１８は、Ｈ、−Ｃ（Ｏ）Ｃ１〜Ｃ３アルキル、ベンゾイル、及びステアロイルから選択される。
【０１０４】
本開示のペプチド−オリゴマー−複合体の別の実施形態では、Ｒ１８は、Ｈまたは−Ｃ（Ｏ）Ｃ１〜Ｃ３アルキルである。
【０１０５】
本開示のペプチド−オリゴマー−複合体の別の実施形態では、Ｒ１８は、Ｈまたは−Ｃ（Ｏ）ＣＨ３である。
【０１０６】
別の実施形態では、式Ｉのペプチド−オリゴマー−複合体は、式Ｉｃのペプチド−オリゴマー−複合体：
【化２９】
2018538302.tif 000030
（Ｉｃ）
またはその薬学的に許容可能な塩である、
（式中：
Ｒ３はＯＨ、
【化３０】
2018538302.tif 000031
であり；
Ｒ５は−Ｃ（Ｏ）（Ｏ−アルキル）ｘＯＨ（式中、ｘは３〜１０であり、各アルキル基は、各場合に独立して、Ｃ２〜６−アルキルである）であるか、またはＲ５は−Ｃ（Ｏ）Ｃ１〜６アルキルであり；
Ｒ１は、各場合に独立して、ＯＨまたは−ＮＲ７Ｒ８であり；
各Ｒ７及びＲ８は、各場合に独立して、−Ｃ１〜６アルキルであり；
Ｒ２は、各場合に独立して、Ｈ、アデニン、２，６−ジアミノプリン、７−デアザ−アデニン、グアニン、７−デアザ−グアニン、ヒポキサンチン、シトシン、５−メチル−シトシン、チミン、及びウラシルからなる群から選択され；
ｚは８〜４０であり；
Ｒ１２は、
【化３１】
2018538302.tif 000032
からなる群から選択され；
ｎは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０であり；
ｐは、２、３、４、または５であり；
Ｒ１３は結合であり；
Ｒ１４は、
【化３２】
2018538302.tif 000033
からなる群から選択され；
Ｒ１７は、Ｈまたは−Ｃ１〜４アルキルであり；
Ｒ１６は、
【化３３】
2018538302.tif 000034
からなる群から選択され；
Ｒ２１は、Ｈまたは−Ｃ１〜４アルキルであり；
Ｒ１８は、Ｈまたは−Ｃ（Ｏ）Ｃ１〜６アルキルのものであり；そして
ｒは、１、２、３、４、５、６、７、８、または９である）。
【０１０７】
式Ｉｃのペプチド−オリゴマー−複合体の実施形態では、Ｒ３は、
【化３４】
2018538302.tif 000035
Ｒ５は、−Ｃ（Ｏ）（Ｏ−Ｃ２〜６−アルキル）３ＯＨまたは−Ｃ（Ｏ）Ｃ１〜６アルキルである。
【０１０８】
式Ｉｃのペプチド−オリゴマー−複合体の別の実施形態では、Ｒ１は、各場合に独立して、ＯＨまたは−Ｎ（Ｃ１〜６アルキル）２である。
【０１０９】
式Ｉｃのペプチド−オリゴマー−複合体の別の実施形態では、Ｒ２は、各場合に独立して、アデニン、グアニン、シトシン、５−メチル−シトシン、チミン、ウラシル、及びヒポキサンチンからなる群から選択される。
【０１１０】
本開示のペプチド−オリゴマー−複合体の別の実施形態では、Ｒ１４は、
【化３５】
2018538302.tif 000036
Ｒ１７はＨである。
【０１１１】
本開示のペプチド−オリゴマー−複合体の別の実施形態では、Ｒ１６は、
【化３６】
2018538302.tif 000037
である。
【０１１２】
本開示のペプチド−オリゴマー−複合体の別の実施形態では、ｒは５、６、または７である。
【０１１３】
式Ｉｃのペプチド−オリゴマー−複合体、またはその薬学的に許容可能な塩の別の実施形態では、ペプチド−オリゴマー−複合体は、
【化３７】
2018538302.tif 000038
【化３８】
2018538302.tif 000039
（式中、Ｒ１８は、Ｈ及び−Ｃ（Ｏ）ＣＨ３から選択される）からなる群から選択される。
【０１１４】
式Ｉｃのペプチド−オリゴマー−複合体の別の実施形態では、Ｒ１８はＨである。
【０１１５】
式Ｉｃのペプチド−オリゴマー−複合体の別の実施形態では、Ｒ１８は−Ｃ（Ｏ）ＣＨ３である。
【０１１６】
式Ｉのペプチド−オリゴマー−複合体の代替的な実施形態では、以下の条件の少なくとも１つが存在する：１）Ｒ１がＮＲ７Ｒ１２である；２）Ｒ４がＲ１２である；または３）Ｒ３が
【化３９】
2018538302.tif 000040
である（すなわち、条件１、２、及び３のいずれか１つ、いずれか２つ、または３つ全てが存在する）。
【０１１７】
本開示のペプチド−オリゴマー−複合体の別の実施形態では、オリゴヌクレオチドは、ＲＮＡ標的に対する配列相補性を有する標的配列を含む。
【０１１８】
本開示のペプチド−オリゴマー−複合体の別の実施形態では、ＲＮＡ標的は細胞性ＲＮＡ標的である。
【０１１９】
本開示のペプチド−オリゴマー−複合体の別の実施形態では、標的配列は、ＲＮＡ標的に結合するのに十分な配列相補性を有する。
【０１２０】
本開示のペプチド−オリゴマー−複合体の別の実施形態では、標的配列は、ＲＮＡ標的に結合するのに完全な配列相補性を有する。
【０１２１】
いくつかの実施形態では、本開示のペプチド−オリゴマー−複合体は溶媒和されていない。他の実施形態では、ペプチド−オリゴマー−複合体の１つ以上が溶媒和形態である。当該技術分野で知られているように、溶媒和物は、水、エタノールなどの薬学的に許容可能な溶媒のいずれかであり得る。
【０１２２】
式Ｉ、式Ｉａ、式Ｉｂ、及び式Ｉｃのペプチド−オリゴマー−複合体はそれらの中性形態で図示されているが、いくつかの実施形態では、これらのペプチド−オリゴヌクレオチド−複合体は薬学的に許容可能な塩の形態で使用される。
【０１２３】
オリゴマー
モルホリノ系サブユニットの重要な特性には、１）安定した、非荷電のまたは正に荷電した骨格連結によってオリゴマー形態で連結する能力；２）形成されるポリマーが、比較的短いオリゴマー（例えば、１０〜１５塩基）で約４５℃を超えるＴＭ値で、標的ＲＮＡを含む相補的−塩基標的核酸とハイブリダイズし得るようにヌクレオチド塩基（例えば、アデニン、シトシン、グアニン、チミジン、ウラシル、５−メチル−シトシン及びヒポキサンチン）を支持する能力；３）オリゴマーが哺乳動物細胞に能動的または受動的に輸送される能力；及び４）オリゴマー及びオリゴマー：ＲＮＡヘテロ二本鎖がＲＮＡｓｅ及びＲＮａｓｅＨ分解にそれぞれ耐える能力が含まれる。
【０１２４】
オリゴマーと標的配列との間に形成される二本鎖の安定性は、結合ＴＭ及び二本鎖の細胞酵素切断に対する感受性の関数である。相補的配列ＲＮＡに関するオリゴマーのＴＭは、Ｈａｍｅｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄ  Ｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ，ＩＲＬ  Ｐｒｅｓｓ，１９８５，ｐｐ．１０７−１０８に記載されているまたはＭｉｙａｄａ  Ｃ．Ｇ．ａｎｄ  Ｗａｌｌａｃｅ  Ｒ．Ｂ．，１９８７，Ｏｌｉｇｏｍｅｒ  Ｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ  Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ，Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｅｎｚｙｍｏｌ．Ｖｏｌ．１５４  ｐｐ．９４−１０７に記載されているものなどの従来の方法によって測定され得る。所定の実施形態では、アンチセンスオリゴマーは、体温よりも高く、いくつかの実施形態では約４５℃または５０℃よりも高い、相補的配列ＲＮＡに関する結合ＴＭを有し得る。６０〜８０℃またはそれ以上の範囲のＴＭも含まれている。よく知られている原理によれば、相補性に基づくＲＮＡハイブリッドに関して、オリゴマーのＴＭは、二本鎖におけるＣ：Ｇ対の塩基の比を増大させることによって、もしくはヘテロ二本鎖の（塩基対の）長さを増大させることによって、またはその両方によって上昇し得る。同時に、細胞取り込みを最適化する目的で、オリゴマーのサイズを制限することが有利であり得る。この理由のため、本開示の化合物は、２５塩基以下の長さで高いＴＭ（４５〜５０℃またはそれ以上）を示す化合物を含む。
【０１２５】
オリゴマーの長さは、ｐｒｅ−ｍＲＮＡ分子内の意図された位置に選択的に結合することが可能である限り、変動し得る。そのような配列の長さは、本明細書に記載の選択手順に従って決定され得る。一般に、オリゴマーは、約８ヌクレオチド長から最大で約５０ヌクレオチド長であろう。例えば、オリゴマー（ｚ）の長さは、８〜４０、８〜２５、１５〜２５、１０〜２０、または約１８であり得る。しかしながら、この範囲内の任意の長さのヌクレオチドが、本明細書に記載の方法において使用され得ることが理解されるであろう。
【０１２６】
いくつかの実施形態では、アンチセンスオリゴマーは塩基修飾または置換を含有する。例えば、所定の核酸塩基は、本明細書に記載のアンチセンスオリゴヌクレオチドの結合親和性を増大させるように選択され得る。これらには、５−置換ピリミジン、６−アザピリミジン及びＮ−２、Ｎ−６及びＯ−６置換プリン（２−アミノプロピルアデニンを含む）、５−プロピニルウラシル、５−プロピニルシトシン及び２，６−ジアミノプリンが含まれる。５−メチルシトシン置換は、核酸二本鎖の安定性を０．６〜１．２℃上昇させることが示されており、本明細書に記載のアンチセンスオリゴマーに組み込まれ得る。一実施形態では、オリゴマーの少なくとも１つのピリミジン塩基は、５−置換ピリミジン塩基を含み、ピリミジン塩基は、シトシン、チミン及びウラシルからなる群から選択される。一実施形態では、５−置換ピリミジン塩基は５−メチルシトシンである。別の実施形態では、オリゴヌクレオチドの少なくとも１つのプリン塩基は、Ｎ−２、Ｎ−６置換プリン塩基を含む。一実施形態では、Ｎ−２、Ｎ−６置換プリン塩基は、２，６−ジアミノプリンである。
【０１２７】
モルホリノ系オリゴマー（アンチセンスオリゴマーを含む）は、例えば、米国特許第５，６９８，６８５；５，２１７，８６６；５，１４２，０４７；５，０３４，５０６；５，１６６，３１５；５，１８５，４４４；５，５２１，０６３；５，５０６，３３７，８，２９９，２０６；及び８，０７６，４７６；；ＰＣＴ公開第ＷＯ２００９／０６４４７１及びＷＯ２０１２／０４３７３０；ならびＳｕｍｍｅｒｔｏｎ  ｅｔ  ａｌ．１９９７，Ａｎｔｉｓｅｎｓｅ  ａｎｄ  Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ，７，１８７−１９５に詳述されており、これらはそれらの全体が参照により本明細書に組み込まれる。
【０１２８】
表１には、本明細書に記載のヌクレオチド部分の様々な実施形態が提供されている。
【０１２９】
【表１】
2018538302.tif 000041
【０１３０】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載のオリゴマーは、溶媒和されていない。他の実施形態では、オリゴマーの１つ以上が溶媒和形態である。当該技術分野で知られているように、溶媒和物は、水、エタノールなどの薬学的に許容可能な溶媒のいずれかであり得る。
【０１３１】
ペプチド
本明細書で提供されるオリゴマーには、ＣＰＰに複合体化されたオリゴマー部分が含まれる。いくつかの実施形態では、ＣＰＰは、化合物の細胞への輸送を向上させるのに効果的なアルギニンリッチなペプチド輸送部分であり得る。輸送部分は、いくつかの実施形態では、オリゴマーの末端に結合されている。ペプチドは、所与の細胞培養集団の細胞の３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、または１００％（中間の全ての整数を含む）への細胞透過を誘導する能力を有し、全身投与時にインビボで複数の組織内で巨大分子の転移を可能にする。一実施形態では、細胞透過性ペプチドはアルギニンリッチなペプチドトランスポーターであり得る。様々な実施形態では、本開示のペプチド−オリゴマー−複合体は、ＣＰＰとアンチセンスオリゴヌクレオチドとの間のリンカーとしてグリシンを利用し得る。
【０１３２】
上述のような輸送部分は、連結された輸送部分の非存在下のオリゴマーの取り込みと比較して、連結されたオリゴマーの細胞侵入を大きく向上させることが示されている。取り込みは、非複合化合物に対して少なくとも１０倍、いくつかの実施形態では２０倍向上され得る。
【０１３３】
アルギニンリッチなペプチドトランスポーター（すなわち、細胞透過性ペプチド）の使用は、本開示を実施するのに特に有用である。所定のペプチドトランスポーターは、筋肉細胞を含む初代細胞へのアンチセンス化合物の送達において非常に有効であることが示されている。
【０１３４】
方法
本明細書では、中枢神経系障害、筋肉疾患、ウイルス感染、または細菌感染の治療をそれを必要とする対象において行う方法であって、式Ｉ、式Ｉａ、式Ｉｂ、または式Ｉｃのペプチド−オリゴマー−複合体を対象に投与することを含む、方法が提供される。
【０１３５】
したがって、一態様では、本明細書では、筋肉疾患、ウイルス感染、または細菌感染の治療をそれを必要とする対象において行う方法であって、本開示のペプチド−オリゴマー−複合体を対象に投与することを含む、方法が提供される。
【０１３６】
一実施形態では、筋肉疾患はデュシェンヌ型筋ジストロフィーである。
【０１３７】
別の実施形態では、ウイルス感染は、マールブルグウイルス、エボラウイルス、インフルエンザウイルス、及びデングウイルスから選択されるウイルスによって引き起こされる。
【０１３８】
更に別の実施形態では、細菌感染はＭｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓによって引き起こされる。
【０１３９】
また別の実施形態では、中枢神経系障害は脊髄性筋萎縮症である。
【０１４０】
本明細書で考慮される対象は典型的にはヒトである。しかしながら、対象は治療が望まれる任意の哺乳類であり得る。それ故、本明細書に記載の方法は、ヒト及び獣医学的の両方の用途に適用され得る。
【０１４１】
投与／用量
治療組成物の製剤及びそれらのその後の投与（投薬）は当業者の技術範囲内である。投薬は、数日から数ヶ月続く治療の間、または疾患状態の十分な軽減が達成されるまで、治療されるべき疾患状態の重症度及び応答性に依存する。最適な投薬スケジュールは、患者の体内の薬物蓄積の測定結果から計算され得る。
【０１４２】
当業者は、最適な投薬量、投薬方法及び反復率を容易に決定し得る。最適な投薬量は、個々のオリゴマーの相対効力に依存して変動し得、一般にインビトロ及びインビボ動物モデルにおいて有効であることが見出されたＥＣ５０に基づいて推定され得る。一般に、投薬量は０．０１μｇ〜１００ｇ／ｋｇ体重であり、毎日、毎週、毎月もしくは毎年１回以上、または更に２〜２０年毎に１回で与えられ得る。当業者は、体液または組織における薬物の測定された滞留時間及び濃度に基づいて、投薬の反復率を容易に推定し得る。治療が成功した後、疾患状態の再発を予防するために患者に維持療法を受けさせることが望ましい場合があり、その場合、オリゴマーは、毎日１回以上〜２０年毎に１回、０．０１μｇ〜１００ｇ／ｋｇ体重の範囲の維持用量で投与される。
【０１４３】
いくつかの実施形態では、ペプチド−オリゴマー−複合体（式Ｉ、式Ｉａ、式Ｉｂ、または式Ｉｃのペプチド−オリゴマー−複合体）は単独で投与される。
【０１４４】
いくつかの実施形態では、ペプチド−オリゴマー−複合体は、治療的有効量または投薬量で投与される。「治療的有効量」は、患者にそれだけで投与される場合、筋肉疾患、ウイルス感染、または細菌感染を有効に治療する、ペプチド−オリゴマー−複合体（式Ｉ、式Ｉａ、式Ｉｂ、または式Ｉｃのペプチド−オリゴヌクレオチド−複合体）の量である。特定の対象について、所与の場合では「治療的有効量」であることが判明する量は、そのような投薬量が熟練した実践者によって「治療的有効量」とみなされたとしても、考慮中の疾患または状態について同様に治療された対象の１００％について有効ではない場合がある。治療的有効量に相当するペプチド−オリゴマー−複合体の量は、疾患の種類、疾患の段階、治療されている患者の年齢、及び他の事実に強く依存する。
【０１４５】
異なる実施形態では、ペプチド−オリゴマー−複合体（式Ｉ、式Ｉａ、式Ｉｂ、または式Ｉｃのペプチド−オリゴマー−複合体）及び使用される有効量に依存して、ペプチド−オリゴマー−複合体は、筋肉疾患、ウイルス感染、または細菌感染に関与する遺伝子の発現を調節し得る。
【０１４６】
ペプチド−オリゴマー−複合体（式Ｉ、式Ｉａ、式Ｉｂ、または式Ｉｃのペプチド−オリゴマー−複合体）の量は、中枢神経系障害、筋肉疾患、ウイルス感染、または細菌感染の有効な治療をもたらすべきである一方で、その量は、好ましくは、患者に対して過度に毒性ではない（すなわち、その量は、医学ガイドラインによって確立されているように好ましくは毒性限度内である）。いくつかの実施形態では、過度な毒性を防止するために、もしくは中枢神経系障害、筋肉疾患、ウイルス感染、または細菌感染のより効果的な治療を提供するために、またはその両方のために、投与される総投薬量に対する制限が提供される。典型的には、本明細書で考慮される量は１日当たりである。しかしながら、半日及び２日または３日のサイクルも本明細書で考慮される。
【０１４７】
中枢神経系障害、筋肉疾患、ウイルス感染、または細菌感染を治療するために異なる投薬量の投与計画が使用され得る。いくつかの実施形態では、上述の例示的な投薬量のいずれかなどの毎日の投薬量は、３日間、４日間、５日間、６日間、７日間、８日間、９日間、または１０日間で１日１回、２回、３回、または４回投与される。治療されている疾患の段階及び重症度に依存して、より短い治療時間（例えば、最大で５日）が高い投薬量と併せて採用され得るか、またはより長い治療時間（例えば、１０日以上、もしくは数週間、もしくは１ヶ月、またはそれ以上）が少ない投薬量と併せて採用され得る。いくつかの実施形態では、１日１回または２回の投薬量が１日おきに投与される。
【０１４８】
純粋な形態または適切な薬学的組成物におけるペプチド−オリゴマー−複合体（式Ｉ、式Ｉａ、式Ｉｂ、または式Ｉｃのペプチド−オリゴマー−複合体）、またはそれらの薬学的に許容可能な塩もしくは溶媒和形態は、当該技術分野で知られている承認された投与様式または薬剤のいずれかを介して投与され得る。ペプチド−オリゴマー−複合体は、例えば、経口的、経鼻的、非経口的（静脈内、筋肉内、または皮下）、局所的、経皮的、膣内、膀胱内、嚢内（ｉｎｔｒａｃｉｓｔｅｍａｌｌｙ）、または直腸に投与され得る。剤形は、例えば、精確な投薬量の簡単な投与に好適な単位剤形の、例えば、固体、半固体、凍結乾燥粉末、または液体剤形、例えば、錠剤、丸薬、軟質弾性または硬質ゼラチンカプセル、粉末、溶液、懸濁液、坐剤、エアロゾルなどであり得る。特定の投与経路は経口であり、特に、治療すべき疾患の重症度の程度に応じて都合のよい毎日の投薬量の投与計画が調整され得るものである。
【０１４９】
助剤及びアジュバント剤には、例えば、保存剤、湿潤剤、懸濁化剤、甘味剤、着香料、香料、乳化剤、及び分配剤が含まれ得る。微生物の作用の防止は一般に、パラベン、クロロブタノール、フェノール、ソルビン酸などのような様々な抗菌剤及び抗真菌剤によって提供される。糖、塩化ナトリウムなどのような等張剤も含められ得る。吸収を遅延させる薬剤、例えば、モノステアリン酸アルミニウム及びゼラチンの使用によって、注入可能な薬学的形態の長期吸収がもたらされ得る。助剤にはまた、湿潤剤、乳化剤、ｐＨ緩衝剤、及び、例えば、クエン酸、モノラウリン酸ソルビタン、オレイン酸トリエタノールアミン、ブチル化ヒドロキシトルエンなどのような抗酸化剤が含まれ得る。
【０１５０】
固体投与形態は、腸溶性コーティング及び当技術分野でよく知られている他のものなどのコーティング及びシェルを用いて調製され得る。それらは、静穏剤（ｐａｃｉｆｙｉｎｇ  ａｇｅｎｔ）を含有し得、それらが腸管の所定の部分において遅延させる手法で活性ペプチド−オリゴマー−複合体を放出するような組成物のものであり得る。使用され得る包埋された組成物の例は、ポリマー物質及びワックスである。活性ペプチド−オリゴマー−複合体はまた、適切な場合には、上記の賦形剤のうちの１種以上でマイクロカプセル化された形態であり得る。
【０１５１】
経口投与のための液体剤形には、薬学的に許容可能なエマルション、溶液、懸濁液、シロップ、及びエリキシルが含まれる。そのような剤形は、例えば、本明細書に記載のペプチド−オリゴマー−複合体、またはその薬学的に許容可能な塩、及び任意の薬学的アジュバントを、例えば、水、生理食塩水、水性デキストロース、グリセロール、エタノールなどのような担体；例えば、エチルアルコール、イソプロピルアルコール、炭酸エチル、酢酸エチル、ベンジルアルコール、安息香酸ベンジル、プロピレングリコール、１，３−ブチレングリコール、ジメチルホルムアミドのような可溶化剤及び乳化剤；油、特に、綿実油、落花生油、トウモロコシ胚芽油、オリーブ油、ヒマシ油及びゴマ油、グリセロール、テトラヒドロフルフリルアルコール、ポリエチレングリコール及びソルビタンの脂肪酸エステル；またはこれらの物質の混合物などに溶解、分散などをして、それにより溶液または懸濁液を形成することによって調製され得る。
【０１５２】
一般に、意図される投与様式に依存して、薬学的に許容可能な組成物は、約１重量％〜約９９重量％の本開示のペプチド−オリゴマー−複合体、またはその薬学的に許容可能な塩、及び９９重量％〜１重量％の薬学的に許容可能な賦形剤を含有するであろう。一例では、組成物は、約５重量％〜約７５重量％の本開示のペプチド−オリゴマー−複合体、またはその薬学的に許容可能な塩であり、残りは好適な薬学的賦形剤であろう。
【０１５３】
そのような剤形を調製する実際の方法は、当業者に知られているか、または明らかであろう。例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，１８ｔｈ  Ｅｄ．（Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｅａｓｔｏｎ，Ｐａ．，１９９０）に対する参照がなされる。
【０１５４】
キット
他の実施形態では、キットが提供される。本開示によるキットは、本開示のペプチド−オリゴマー−複合体、または組成物を含むパッケージ（複数可）を含む。いくつかの実施形態では、キットは、式Ｉ、式Ｉａ、式Ｉｂ、または式Ｉｃによるペプチド−オリゴマー−複合体、またはその薬学的に許容可能な塩を含む。
【０１５５】
「パッケージ」という語句は、本明細書に示されるペプチド−オリゴマー−複合体または組成物を含有する任意の容器を意味する。いくつかの実施形態では、パッケージは箱または包装であり得る。薬学的製品をパッケージするのに使用するためのパッケージ材料は、当業者によく知られている。薬学的パッケージ材料の例には、ボトル、チューブ、吸入器、ポンプ、バッグ、バイアル、容器、シリンジ、ボトル、及び選択された製剤及び意図される投与及び治療の様式に好適な任意のパッケージ材料が含まれるがこれらに限定されない。
【０１５６】
キットは、パッケージ内に含有されないがパッケージの外側に取り付けられる品物、例えば、ピペットも含有し得る。
【０１５７】
キットは、本開示のペプチド−オリゴマー−複合体または組成物を患者に投与するための説明書をさらに含有し得る。キットはまた、米国食品医薬品局（ＦＤＡ）などの規制当局による本明細書におけるペプチド−オリゴマー−複合体の承認された使用のための説明書を含み得る。キットはまた、ペプチド−オリゴマー−複合体のための標識または製品挿入物を含有し得る。パッケージ（複数可）もしくは任意の製品挿入物（複数可）、またはその両方は、それら自体が規制当局によって承認され得る。キットは、パッケージ内の固相または液相（提供された緩衝液など）中にペプチド−オリゴマー−複合体を含み得る。キットはまた、方法を行うための溶液を調製するための緩衝液、及びある容器から別の容器に液体を移送するためのピペットを含み得る。
【実施例】
【０１５８】
実施例
実施例は、例示の目的で、また本開示の所定の特定の実施形態を記載するために以下で説明されている。しかしながら、特許請求の範囲は、本明細書で説明された実施例によって何ら限定されるものではない。開示された実施形態に対する様々な変更及び改変が当業者に明らかであろうし、限定されないが、本開示の化学構造、置換基、誘導体、製剤または方法に関するものを含むそのような変更及び改変が、本開示の趣旨及び添付の特許請求の範囲から逸脱することなく行われ得る。本明細書におけるスキーム中の構造における可変事項の定義は、本明細書に示される式における対応する位置のものに見合っている。
【０１５９】
実施例１：ＰＰＭＯ−５及びＰＰＭＯ−１の合成
図１に示されるように、以下の表１ａに記載のＤＭＳＯ中のＰＭＯ（ＰＰＭＯ−３、１当量）、Ｆｍｏｃ−アミノ−ＰＥＧｍ−プロピオン酸（５当量）、ＨＡＴＵ（５当量）の混合物にＤＩＰＥＡ（１０当量）を室温で添加した。４時間撹拌した後、過剰の４−メチルピペリジンを添加し、室温で一晩撹拌を継続した。粗生成物を脱イオン水で希釈し、次いでＳＰＥ（Ａｍｂｅｒｃｈｒｏｍ  ＣＧ３００Ｍ）によって精製した。凍結乾燥によって生成物が白色粉末として得られ、その構造をＬＣ／ＭＳによって確認した。
【０１６０】
ＤＭＳＯ中の上記生成物、Ａｃ−Ｒ６−Ｇｌｙ（４当量；配列番号１）、及びＨＡＴＵ（４当量）の混合物に、室温でＤＩＰＥＡ（１０当量）を添加し、４時間攪拌した。反応混合物を脱イオン水で希釈し、ＩＳＣＯクロマトグラフィシステム（ＳＣＸカラム、Ｓｏｕｒｃｅ３０ｓ、移動相（ｐＨ＝７）：溶媒Ａ：２０ｍＭのＮａＨＰＯ４／２５％ＡＣＮ（ｐＨ＝７）；溶媒Ｂ：１．５Ｍの塩酸グアニジン、２０ｍＭのＮａＨ２ＰＯ４／２５％ＡＣＮによって精製し、次いでＳＰＥ（Ａｍｂｅｒｃｈｒｏｍ  ＣＧ３００Ｍ）によって脱塩した。凍結乾燥によって生成物が白色粉末として得られ、その構造をＬＣ／ＭＳによって確認した。
【０１６１】
【表１ａ】
2018538302.tif 000042
【０１６２】
実施例２：ＰＰＭＯ−４の合成
図２に示されるように、ＤＭＳＯ中のＰＭＯ（ＰＰＭＯ−３、１当量）及び「Ｐ３Ｐ」リンカー（２．５当量）の混合物に、室温でＮ−エチルモルホリン（２．５当量）を添加した。２時間撹拌した後、モルホリン（３当量）を添加し、反応混合物を室温で１時間撹拌した。過剰の５０ｍＭのＣＹＴＦＡ溶液を添加し、１時間撹拌し、次いで１ＭのＮａ２ＨＰＯ４溶液を添加することによって溶液を塩基性化した。粗生成物を脱イオン水で希釈し、ＳＰＥ（Ａｍｂｅｒｃｈｒｏｍ  ＣＧ３００Ｍ）によって精製した。凍結乾燥によって生成物が白色粉末として得られ、その構造をＬＣ／ＭＳによって確認した。
【０１６３】
ＤＭＳＯ中の上記生成物、Ａｃ−Ｒ６−Ｇｌｙ（４当量；配列番号１）、及びＨＡＴＵ（４当量）の混合物に、室温でＤＩＰＥＡ（１０当量）を添加し、４時間攪拌した。粗生成物を脱イオン水で希釈し、ＩＳＣＯクロマトグラフィシステム（ＳＣＸカラム、Ｓｏｕｒｃｅ３０ｓ、移動相（ｐＨ＝７）：溶媒Ａ：２０ｍＭのＮａＨＰＯ４／２５％ＡＣＮ（ｐＨ＝７）；溶媒Ｂ：１．５Ｍの塩酸グアニジン、２０ｍＭのＮａＨ２ＰＯ４／２５％ＡＣＮによって精製し、次いでＳＰＥ（Ａｍｂｅｒｃｈｒｏｍ  ＣＧ３００Ｍ）によって脱塩した。凍結乾燥によって生成物が白色粉末として得られ、その構造をＬＣ／ＭＳによって確認した。
【０１６４】
実施例３：ＭＤＸマウスにおけるリンカー修飾化合物の有効性についての用量応答
この研究の目的は、マウスにおける用量応答研究における本開示のペプチド−オリゴマー−複合体の有効性を比較することであった。ペプチドとＰＭＯとの間の間隔は有効性を調節する。したがって、３、４、及び８のＰＥＧ長を使用してＡｃ−Ｒ６−Ｇｌｙ（配列番号：１）とＰＭＯとの間の間隔を系統的に増加させた。また、全Ｄアミノ酸型のＡｃ−Ｒ６−Ｇｌｙ（配列番号：１）及びＡｃ−Ｒ６−Ａｐａ（配列番号：４）（４−アミノフェニル酢酸）；芳香族、疎水性リンカー）を使用した（表２）。
【０１６５】
次の動物衛生規則：ＵＳＤＡ  Ａｎｉｍａｌ  Ｗｅｌｆａｒｅ  Ａｃｔ９  ＣＦＲ  Ｐａｒｔｓ１−３．Ｆｅｄｅｒａｌ  Ｒｅｇｉｓｔｅｒ  ３９１２９，Ｊｕｌｙ  ２２，１９９３を順守して研究を行った。動物のケアは、研究プロトコルに従い、ＵＳＤＡ  Ａｎｉｍａｌ  Ｗｅｌｆａｒｅ  Ａｃｔ（９ＣＦＲ  ｐａｒｔｓ１，２，ａｎｄ３）に説明された規則及びｔｈｅ  Ｇｕｉｄｅ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  Ｃａｒｅ  ａｎｄ  Ｕｓｅ  ｏｆ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ａｎｉｍａｌｓ（ＩＬＡＲ  Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ  １９９６，Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ａｃａｄｅｍｙ  Ｐｒｅｓｓ）に明記された条件に忠実であった。
【０１６６】
試験材料
試験した選択されたペプチド−オリゴマー−複合体を表２に列挙する（ペプチド−オリゴマー−複合体を生理食塩水中で製剤化し、５℃で保存した）。
【０１６７】
【表２−１】
2018538302.tif 000043
【表２−２】
2018538302.tif 000044
【０１６８】
試験システム
研究に使用された動物が表３に記載されている。
【０１６９】
【表３】
2018538302.tif 000045
【０１７０】
受領したら動物を開梱してケージに入れた。毛、四肢及びオリフィスの評価を含めるように視覚的健康検査を各動物に対して実施した。各動物を姿勢または動きの任意の異常な兆候について検査した。実験手順の開始前に、マウスを最低でも８または９日間順応させた（それぞれコホート１及び２）。
【０１７１】
認定された照射済接触寝床材を有する透明なポリカーボネートマイクロアイソレーターケージ内に１ケージ当たり最大５匹で動物を収容した。ケージは、Ａｎｉｍａｌ  Ｗｅｌｆａｒｅ  Ａｃｔ（全ての改正を有する）及びｔｈｅ  Ｇｕｉｄｅ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  Ｃａｒｅ  ａｎｄ  Ｕｓｅ  ｏｆ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ａｎｉｍａｌｓ，Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ａｃａｄｅｍｙ  Ｐｒｅｓｓ，Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ，Ｄ．Ｃ．，１９９６に説明された基準に合致していた。Ｏｖａｌ  ｐｅｌｌｅｔ  Ｃｅｒｔｉｆｉｅｄ  Ｐｉｃｏ  ｌａｂ  Ｒｏｄｅｎｔ  ２０  Ｄｉｅｔ（ＰＭＩ  Ｆｅｅｄｓ  Ｉｎｃ．，Ｒｉｃｈｍｏｎｄ，Ｉｎｄｉａｎａ，ＵＳＡ）が自由裁量で提供された。研究期間を通して脱イオン水は動物に自由裁量で利用可能であった。Ｅｎｒｉｃｈ−ｏ−ｃｏｂの寝床材ならびに消毒されたイグルー及び／またはトンネルがエンリッチメントとして提供された。この研究に干渉すると予想されるであろう飼料、水、エンリッチメント材料または寝床材に既知の汚染物質は存在しなかった。環境制御は、３０％〜７０％の相対湿度で１８℃〜２６℃（６４°Ｆ〜７９°Ｆ）の温度に維持するように設定された。これらのパラメータを少なくとも１日１回記録した。１２：１２時間の明：暗サイクルを維持した。
【０１７２】
実験手順
表４に指定されるケージ重量に基づいて動物を治療群に無作為化した。
【０１７３】
【表４】
2018538302.tif 000046
【０１７４】
研究における投薬の日を研究１日目と指定した。各ペプチド−オリゴマー−複合体を投薬前におよそ１０秒間ボルテックスし、徐々の押圧ボーラス（約５秒；２００μＬ）として尾静脈を介して投与した。投薬は２日間にわたって実施した。同じペプチド−オリゴマー−複合体を受ける全ての動物に同日に投薬した。投薬することができなかった、注入を失敗した、または投薬直後に死亡した治療群に割り当てられた動物を予備のマウスに交換した。任意の残りの予備の動物を剖検し、以下に特定されるように組織を収集した。
【０１７５】
瀕死及び死亡について動物を１日１回観察した。Ｎｕｍｉｒａ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ  Ｓｔａｎｄａｒｄ  Ｏｐｅｒａｔｉｎｇ  Ｐｒｏｃｅｄｕｒｅｓに従って、苦痛の徴候を示す任意の動物、特に死亡が差し迫っていると思われる場合は人道的に安楽死させた。到着後の日、投薬の日、及び剖検の日に体重を記録した。注入の耐容性を評価するために、投薬後の０分、１５分、及び２時間後に詳細な臨床観察を行い、記録した。
【０１７６】
次の予定された観察まで生存しそうにない動物を計量し、安楽死させた。死亡が発見された動物を計量し、死亡時刻を可能な限り近く推定した。血液及び組織サンプルは収集しなかった。
【０１７７】
８日目（投薬後７日目）に、任意の未治療または予備の動物を含む全ての動物を人道的に二酸化炭素で安楽死させた。安楽死は、承認されたＡｍｅｒｉｃａｎ  Ｖｅｔｅｒｉｎａｒｙ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ（ＡＶＭＡ）の安楽死に対するガイドライン（２００７年６月）に従って実施した。
【０１７８】
部分的肉眼的剖検は検査及び検査結果の文書化を含んでいた。全ての外部表面及びオリフィスを評価した。以下に列挙する組織の収集中に観察された全ての異常を完全に記載し、記録した。追加の組織は採取されなかった。
【０１７９】
安楽死から１５分以内のうちに組織を収集した。使用した全ての器具及び道具を治療群間で変更した。全ての組織を収集後に可能な限り早く急速凍結し、−７０℃より低い温度で保存した。以下の組織を収集した：肝臓、腎臓、心臓、大腿四頭筋、及び横隔膜。
【０１８０】
結果−動物の健康及び体重
動物＃２４０７は体重不足であり、到着時に病気であった。それは研究に配置されず、人道的に安楽死させた。ＴＧ（治療群）４（４０ｍｇ／ｋｇでのＰＰＭＯ−４）、ＴＧ５（８０ｍｇ／ｋｇでのＰＰＭＯ−４）及びＴＧ２０（８０ｍｇ／ｋｇでのＰＰＭＯ−６）における動物は全て、１５分の観察では回復が遅いものと認められたが、２時間の観察では回復した。動物２３５６、ＴＧ１４（ＰＰＭＯ−５を４０ｍｇ／ｋｇ）は、投薬の翌日に死亡したことが発見された。剖検の時点で、動物２４０６、ＴＧ１（５ｍｇ／ｋｇでのＰＰＭＯ−４）はその右目が閉鎖していると認められ、それから白色の物質がにじみ出ていた。また、剖検時の時点で、動物２４２２、ＴＧ１８（２０ｍｇ／ｋｇでのＰＰＭＯ−６）は、左の腎臓に少量の流体が存在することが認められた。研究を通しての動物の体重を表５に示す。
【０１８１】
【表５−１】
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【表５−２】
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【表５−３】
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【表５−４】
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【表５−５】
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【表５−６】
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【表５−７】
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【０１８２】
結果−ＰＣＲ分析
マウスの大腿四頭筋、心臓、及び横隔膜組織からのＲＮＡを、ＧＥ  Ｉｌｌｕｓｔｒａ  ＲＮＡｓｐｉｎ９６穴抽出キットを使用して精製した。簡潔には、ジルコニアビーズ（Ｂｉｏｓｐｅｃ）を有するプレート内の約２０〜３０ｍｇの凍結組織に４００μＬの溶解緩衝液（ＲＡ１＋１％の２−メルカプトエタノールを添加し、ＧｅｎｏＧｒｉｎｄｅｒ（Ｓｐｅｘ  Ｓａｍｐｌｅ  Ｐｒｅｐ）を使用して１７５０ＲＰＭで４ｘ８分でホモジネートした（各実行の間に冷却した）。ホモジネートをＧＥ  ＲＮＡｓｐｉｎ  Ｉｌｌｕｓｔｒａ９６穴プロトコルに従ってＲＮＡ精製のために直ちに処理した。全ＲＮＡをＮａｎｏｄｒｏｐ２０００分光光度計（ＴｈｅｒｍｏＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を用いて定量化した。
【０１８３】
従来のネステッドＰＣＲ反応によってＲＮＡを分析した。他に特定されない限り、ＲＴ−ＰＣＲ試薬はＩｎｖｉｔｒｏｇｅｎからのものであった。ＰＣＲ反応は、ＣＦＸ９６またはＳ１０００サーモサイクラー（ＢｉｏＲａｄ）で実行した。最終ｃＤＮＡ産物を、室温で２００Ｖで１時間でＮｕＰａｇｅ１０％ＴＢＥゲル（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）実行で分離した。６７０ＢＰ３０Ｃｙ５放射フィルターを使用してＴｙｐｈｏｏｎ  Ｔｒｉｏ（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）でゲルをスキャンし、ＩｍａｇｅＱｕａｎｔソフトウェアで分析した。
【０１８４】
ＰＣＲ分析のために使用したプライマーは次の通りである：ジストロフィンアウターフォワード（５’−ＣＡＡＴＧＴＴＴＣＴＧＧＡＴＧＣＡＧＡＣＴＴＴＧＴＧＧ−３’；配列番号：９）、ジストロフィンアウターリバース（５’−ＧＴＴＣＡＧＣＴＴＣＡＣＴＣＴＴＴＡＴＣＴＴＣＴＧＣＣ−３’；配列番号：１０）、ジストロフィンインナーフォワード（５’−ＣＡＣＡＴＣＴＴＴＧＡＴＧＧＴＧＴＧＡＧＧ−３’；配列番号：１１）、及びジストロフィンインナーリバース（５’−ＣＡＡＣＴＴＣＡＧＣＣＡＴＣＣＡＴＴＴＣＴＧ−３’；配列番号：１２）。表６に記載のプロトコルに従ってＰＣＲ反応を実施し、結果を表７及び図３〜５にまとめた。
【０１８５】
【表６−１】
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【表６−２】
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【０１８６】
【表７−１】
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【表７−２】
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【０１８７】
実施例４：ＭＤＸマウスにおけるリンカー修飾化合物の最大耐容用量研究
マウスにおいて本開示の選択されたペプチド−オリゴマー−複合体の最大耐容用量（ＭＴＤ）を表８に示される投与計画に従って決定した。結果は表９にまとめられており、ＰＰＭＯ−５を除く全ての化合物が１５０〜２００ｍｇ／ｋｇのＭＴＤを有することを示している。ＰＰＭＯ−５はＭＴＤ＞２００ｍｇ／ｋｇを有する。ＭＴＤ研究の間の生存中観察が表１０にまとめられている。
【０１８８】
【表８−１】
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【表８−２】
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【０１８９】
【表９】
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【０１９０】
【表１０−１】
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【表１０−２】
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【０１９１】
要約すると、ペプチド−オリゴマー−複合体のリンカーの長さを修飾することは、改善された効力をもたらすが、耐容性が低下し得る。ＰＰＭＯ−４は、ＰＰＭＯ−８（ＰＰＭＯ−４のＥＤ４０はＰＰＭＯ−８よりもおよそ３倍高い）に対して改善された効力を示し、解析された全ての組織型においてＰＰＭＯ−２よりも高い有効性を示した。ＰＥＧ−３リンカーが有効性だけでなく毒性も増加させることが示されたので、毒性もまたリンカーの長さによって影響を受けると思われる（図１０）。
【０１９２】
全ての化合物は、５０ｍｇ／ｋｇで開始するＫＩＭ−１の１０倍を超える上昇を示したが、これは化合物が十分に耐容されなかったことを示唆している（図９）。ＰＰＭＯ−１及びＰＰＭＯ−７の２００ｍｇ／ｋｇの用量は予想されたＫＩＭ−１よりも低いことを示したが、これはＰＰＭＯ−２で先に見られ、腎臓での重度の壊死による可能性がある、ＰＰＭＯ−７（全Ｄ−アミノ酸）は有効性を改善したが、特に高用量では十分に耐容されず、肝臓及び腎臓の血清化学マーカーを上昇させた（図７）。ＰＰＭＯ−６も有効性を改善したが、十分に耐容されず、ＫＩＭ−１レベルを上昇させた（図６〜９）。
【０１９３】
実施例５：治療指数
治療指数（ＴＩ）は以下の方程式に従って決定され得る：
【数１】
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（式中、ＥＤは有効用量を指す）。
【０１９４】
重要なことに、ペプチド−オリゴマー−複合体の毒性は、２つの段階：ｔ１及びｔ２で記述され得る。ｔ１は、おそらく心肺虚脱による急死、または４８時間以内の死を指す。ｔ２は、複数週の投薬量の後にペプチド−オリゴマー−複合体で観察される慢性腎毒性を指す。本明細書に記載のＭＴＤ測定結果はｔ１毒性（４８時間終点）を指す。
【０１９５】
それ故、大腿四頭筋サンプルから測定されるように、ＰＰＭＯ−８のＴＩは１６．６（４００ｍｇ／ｋｇのＭＴＤ；２４ｍｇ／ｋｇのＥＤ４０）である。ＰＰＭＯ−４はＰＰＭＯ−８と比較して低いＭＴＤを有していたが、有効用量はＰＰＭＯ−８のそれの半分であり、１４．６のより低いＴＩをもたらす。同様に、ＰＰＭＯ−２は、約６０ｍｇ／ｋｇのＭＴＤ、１０ｍｇ／ｋｇのＥＤ４０を有し、６のＴＩをもたらす。
【０１９６】
参照による組み込み
本出願を通して引用される全ての参考文献（論文の参考文献、発行された特許、公開された特許出願、及び同時係属中の特許出願を含む）の内容は、本明細書によってそれらの全体が明示的に本明細書に組み込まれる。他に定義されない限り、本明細書で使用される全ての技術的及び科学的用語は、当業者に一般的に知られている意味と一致する。
【０１９７】
均等物
当業者は、本明細書に記載された開示の特定の実施形態の多くの均等物を認識するか、または単なる日常的な実験を使用して確認することができるであろう。そのような均等物は、以下の特許請求の範囲によって包含されることが意図される。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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