(57)【要約】  懸濁液は、懸濁化剤および非イオン性セルロース誘導体を含む製剤ビヒクル中に懸濁された眼用活性成分を含む。その眼用活性成分は、Ｄｖ９０＜５μｍおよびＤｖ５０＜１μｍを有する粒子として存在する。その懸濁液は、目の炎症状態を治療するために患者に投与してよい。
2018507252.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
製剤ビヒクル中に懸濁された眼用活性成分を含む眼用懸濁液であって、前記眼用活性成分が、Ｄv90＜５μｍおよびＤv50＜１μｍを有する粒子として存在し、前記製剤ビヒクルが懸濁化剤および非イオン性セルロース誘導体を含む、眼用懸濁液。
【請求項２】
少なくとも一年に亘り貯蔵に安定している、請求項１記載の懸濁液。
【請求項３】
少なくとも二年に亘り貯蔵に安定している、請求項１記載の懸濁液。
【請求項４】
前記眼用活性成分がコルチコステロイドである、請求項１記載の懸濁液。
【請求項５】
前記眼用活性成分がエタボン酸ロテプレドノールである、請求項４記載の懸濁液。
【請求項６】
前記眼用活性成分がジフルプレドナートである、請求項４記載の懸濁液。
【請求項７】
前記懸濁化剤がカルボキシビニルポリマーを含む、請求項１記載の懸濁液。
【請求項８】
前記カルボキシビニルポリマーが、ポリカルボフィルおよびカルボマーからなる群より選択される、請求項７記載の懸濁液。
【請求項９】
前記非イオン性セルロース誘導体がヒドロキシプロピルメチルセルロースである、請求項８記載の懸濁液。
【請求項１０】
前記非イオン性セルロース誘導体がヒドロキシプロピルメチルセルロースＥ４Ｍである、請求項９記載の懸濁液。
【請求項１１】
前記製剤ビヒクルが界面活性剤をさらに含む、請求項１記載の懸濁液。
【請求項１２】
前科界面活性剤がポロキサマー４０７を含む、請求項１１記載の懸濁液。
【請求項１３】
前記製剤ビヒクルが、ポリカルボフィル、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ポロキサマー界面活性剤、グリセリン、プロピレングリコール、およびホウ酸塩緩衝剤を含む、請求項１記載の懸濁液。
【請求項１４】
０．１質量％から０．４質量％でロテプレドノールを含む、請求項１記載の懸濁液。
【請求項１５】
０．３８質量％でエタボン酸ロテプレドノールを含む、請求項１４記載の懸濁液。
【請求項１６】
０．０１から０．１質量％でジフルプレドナートを含む、請求項１１記載の懸濁液。
【請求項１７】
０．０５質量％でジフルプレドナートを含む、請求項１６記載の懸濁液。
【請求項１８】
前記眼用活性成分が、Ｄv90＜３μｍおよびＤv50＜１μｍを有する粒子として存在する、請求項１記載の懸濁液。
【請求項１９】
前記眼用活性成分が、Ｄv90＜３μｍおよびＤv50＜０．６μｍを有する粒子として存在する、請求項１記載の懸濁液。
【請求項２０】
眼の炎症状態を治療する方法において、治療する必要のある患者の眼に、製剤ビヒクル中に懸濁された眼用抗炎症活性成分を含む懸濁液を投与する工程を有してなり、前記眼用抗炎症活性成分が、Ｄv90＜５μｍおよびＤv50＜１μｍを有する粒子として存在し、前記製剤ビヒクルが懸濁化剤および非イオン性セルロース誘導体を含む、方法。
【請求項２１】
前記懸濁液が、一日一回または二回の頻度で投与される、請求項２０記載の方法。
【請求項２２】
前記眼の炎症状態が、眼科手術後またはブドウ膜炎から生じる炎症である、請求項２０記載の方法。
【請求項２３】
前記眼用抗炎症活性成分がコルチコステロイドであり、前記製剤ビヒクルが、ポリカルボフィル、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、塩化ベンザルコニウム、非イオン性界面活性剤、グリセリン、プロピレングリコール、およびホウ酸塩緩衝剤を含む、請求項２０記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、眼用懸濁組成物に関し、特に、改善された治療効果を与えるコルチコステロイドを含有する眼用懸濁組成物に関する。
【背景技術】
【０００２】
様々な眼症状および眼疾患状態を軽減するために、眼用組成物が使用される。大抵、眼用組成物は、溶液、懸濁液、軟膏またはゲルの形態で、複数回投与容器からの眼薬を用いて眼に投与または点眼される。眼用活性成分が十分に水溶性である場合、その製剤の形態は点眼溶液製品であることがある。しかしながら、その溶液製品の粘度が低すぎる、例えば、約３０ｃｐ（またはｍＰａ・ｓ）未満である場合、点眼の際に、眼用活性成分は、涙液分泌および鼻涙排液のために、眼の角膜前区域から急速に排出され得る。その結果、眼用活性成分の約８０〜９９％が、その活性成分が所望の眼組織に接触してその所望の臨床効果を達成する前に、眼から洗浄されるかまたは洗い流されるだけであると推定されてきた。それゆえ、眼内の活性成分の滞留時間が不十分であるために、所望の臨床効果を達成するために頻繁な点眼またはより濃縮された活性製品の使用が必要である。眼用活性成分の滞留時間を長くするために、それゆえ、点眼当たりの眼用活性成分の生体利用効率を向上させるために、非溶液系眼用ビヒクルが開発されてきた。そのような眼用ビヒクルの例に、軟膏、懸濁液、および水性ゲルがある。しかしながら、これらの眼用ビヒクルにも、同様に欠点があり得る。例えば、軟膏を使用すると、大抵、点眼直後に視覚のぼけが生じる。ある場合には、患者は、眼に「べとつく感触」を覚えることがあり、これは望ましくない。
【０００３】
ある眼用製剤の形態は、いわゆる、その場のゲル形成系である。これらの眼用ビヒクルは、角膜前での滞留時間を延ばし、眼用活性成分の眼の生体利用効率を改善することができる。典型的に、その場のゲル形成系は、高分子系を含有する水溶液である。その眼用製品は、分配容器内での貯蔵中に低粘度液体として存在し、涙液と接触した際にゲルを形成する傾向にある。液体からゲルへの移行は、使用される特定の高分子系に応じて、温度、ｐＨ、イオン強度の変化、または涙液タンパク質の存在により誘発され得る。堅いゲルは、眼内の滞留が長く、より高い薬剤の生体利用効率を促進するのに役立ち、ことによると、点眼当たりの臨床転帰を向上させ得るが、そのようなその場のゲル形成系は、軟膏のように、視覚を不利に妨げ、患者に不満をもたらし得る。その上、そのような組成物は、大抵、かなり酸性のｐＨで処方しなければならず、これは、患者の眼に点眼した際に、心地よくない。
【０００４】
ある製剤において、眼用活性成分は、水溶液系製剤中に実質的に、または完全に不溶性である。例えば、特許文献１および２には、アミノ置換ステロイド治療薬、および効果的な安定化量の軽度に架橋したカルボキシ含有高分子を含む医薬組成物が記載されている。水媒体中に治療薬を少なくともある程度可溶化させるために、シクロデキストリンも使用されてきた。
【０００５】
Ｌｏｔｅｍａｘ（登録商標）（エタボン酸ロテプレドノール（ＬＥ）眼用ゲル、０．５％のＬＥ）（Ｂａｕｓｃｈ  ＆  Ｌｏｍｂ  Ｉｎｃｏｒｐｏｒａｔｅｄ）は、無菌保存眼用ゲル懸濁液として、５ｍｇ／ｇのエタボン酸ロテプレドノールを含有し、眼科手術後の術後炎症および疼痛の治療に効果があると実証された。「Ｌｏｔｅｍａｘ」眼用ゲル、０．５％のＬＥは、ホウ酸、エデト酸二ナトリウム二水和物、グリセリン、ポリカルボフィル、プロピレングリコール、塩化ナトリウム、チロキサポール、水、およびｐＨを６と７の間に調節するための水酸化ナトリウムを含有し、０．００３％の塩化ベンザルコニウム（ＢＡＫ）で保存される。
【０００６】
局所性点眼のための無菌保存眼用エマルションである、ＤＵＲＥＺＯＬ（登録商標）（ジフルプレドナート眼用エマルション０．０５％）（Ａｌｃｏｎ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｉｎｃ．）は、眼科手術に関連する炎症および疼痛の治療に効果があると実証され、内因性前部ブドウ膜炎の治療にも必要とされる。「ＤＵＲＥＺＯＬ」眼用エマルションは、ジフルプレドナート（０．０５％）、ホウ酸、ヒマシ油、グリセリン、酢酸ナトリウム、ＥＤＴＡナトリウム塩、ｐＨを調節するための水酸化ナトリウム、ポリソルベート８０および水を含有し、０．１％のソルビン酸で保存されている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００７】
【特許文献１】米国特許第５５３８７２１号明細書
【特許文献２】米国特許第４５４０９３０号明細書
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００８】
本発明は、製剤ビヒクル中に懸濁された眼用活性成分を含む眼用懸濁液であって、その眼用活性成分が、Ｄv90＜５μｍおよびＤv50＜１μｍを有する粒子として存在する、眼用懸濁液を提供する。Ｄv90は、それより小さい粒子が、全粒子の累積体積の９０％となる粒径であり、Ｄv50は、それより小さい粒子が、全粒子の累積体積の５０％となる粒径である。
【０００９】
１つの態様において、前記活性成分は眼用活性薬剤成分（「ＡＰＩ」）を含む。別の態様において、眼用ＡＰＩは抗炎症薬を含む。さらに別の態様において、眼用ＡＰＩはステロイド（当該技術分野において、グルココルチコステロイドまたはコルチコステロイドとしても知られている）を含む。また別の態様において、眼用ＡＰＩは非ステロイド系抗炎症薬（「ＮＳＡＩＤ」）を含む。
【００１０】
前記製剤ビヒクルは、懸濁化剤および非イオン性セルロース誘導体を含む。その懸濁化剤は、ポリカルボフィルまたはカルボマーなどのカルボキシビニルポリマーを含むことがある。その非イオン性セルロース誘導体は、ヒドロキシプロピルメチルセルロースであってよい。
【００１１】
前記懸濁液は、少なくとも１年に亘り、または少なくとも２年に亘り、貯蔵安定性であることがある。
【００１２】
前記眼用活性成分は、エタボン酸ロテプレドノールまたはジフルプレドナートなどのコルチコステロイドであることがある。その活性成分は、ネパフェナクなどの非ステロイドであってもよい。
【００１３】
前記製剤ビヒクルは、防腐剤および／または界面活性剤をさらに含むことがある。
【００１４】
様々な態様によれば、前記製剤ビヒクルは、ポリカルボフィル、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、塩化ベンザルコニウム、ポロキサマー界面活性剤、グリセリン、プロピレングリコール、およびホウ酸塩緩衝剤を含む。
【００１５】
前記懸濁液の形態は、点眼した際に液体を形成する、室温ではゲルであることができる。
【００１６】
様々な態様によれば、前記眼用活性成分は、Ｄv90＜３μｍおよびＤv50＜１μｍを有する粒子として存在する、またはＤv90＜３μｍおよびＤv50＜０．６μｍを有する粒子として存在する、またはＤv90＜１μｍを有する粒子として存在することがある。
【００１７】
別の態様において、本発明は、眼の炎症状態を治療する方法であって、治療する必要のある患者の眼に、上述した態様のいずれかによる懸濁液を投与する工程を有してなる方法を提供する。その懸濁液は、一日一回または二回の頻度で、もしくは一日三回または四回の頻度で、投与してよい。その眼の炎症状態は、眼科手術後またはアレルギー反応から生じる炎症であることがある。
【図面の簡単な説明】
【００１８】
【図１】マイクロフルイダイザー内でミリングされたＬＥサンプルの粒径分布を示すグラフ
【図２】マイクロフルイダイザー内のミリング中の時間に亘る粒径Ｄv50の変化を示すグラフ
【図３】ビーズミリングされたサンプル対３０分間マイクロフルイダイザーにかけたサンプルの粒径分布を示すグラフ
【図４】ビーズミリングされたサンプル対３０〜１８０分間マイクロフルイダイザーにかけたサンプルの粒径分布を示すグラフ
【図５】２．０、１．０および０．５ｍｍのビーズ直径を使用した、ＢＡＫの有無による、ビーズミリングされたサンプルの粒径分布を示すグラフ
【図６】Ｔ＝０週間およびＴ＝３週間でのＢＡＫを有するビーズミリングされたサンプルの粒径分布を示すグラフ
【図７】Ｔ＝０週間およびＴ＝３週間でのＢＡＫを有さないビーズミリングされたサンプルの粒径分布を示すグラフ
【図８】様々なＬＥ：ポロキサマー比によるビーズミリングされたサンプルの粒径分布を示すグラフ
【図９】様々なＬＥ：ポロキサマー比によるビーズミリングされたサンプルの粒径分布を示すグラフ
【図１０】１７時間対３４時間でのビーズミリングされたサンプルの粒径分布を示すグラフ
【図１１】ダッチウサギへの一回の局所性点眼後の涙液中の個々のＬＥ濃度を示すグラフ
【図１２】ダッチウサギへの一回の局所性点眼後の涙液中の平均（±ＳＤ）ＬＥ濃度を示すグラフ
【図１３】ダッチウサギへの一回の局所性点眼後の眼球結膜中の個々のＬＥ濃度を示すグラフ
【図１４】ダッチウサギへの一回の局所性点眼後の眼球結膜中の平均（±ＳＤ）ＬＥ濃度を示すグラフ
【図１５】ダッチウサギへの一回の局所性点眼後の角膜中の個々のＬＥ濃度を示すグラフ
【図１６】ダッチウサギへの一回の局所性点眼後の角膜中の平均（±ＳＤ）ＬＥ濃度を示すグラフ
【図１７】ダッチウサギへの一回の局所性点眼後の房水中の個々のＬＥ濃度を示すグラフ
【図１８】ダッチウサギへの一回の局所性点眼後の房水中の平均（±ＳＤ）ＬＥ濃度を示すグラフ
【図１９】ダッチウサギへの一回の局所性点眼後の虹彩／毛様体中の個々のＬＥ濃度を示すグラフ
【図２０】ダッチウサギへの一回の局所性点眼後の虹彩／毛様体中の平均（±ＳＤ）ＬＥ濃度を示すグラフ
【図２１】ダッチウサギへの一回の局所性点眼後の涙液中の平均（±ＳＤ）ＣmaxおよびＡＵＣ(0-24h)（±ＳＥ）値のＬＥ濃度を示すグラフ
【図２２】ダッチウサギへの一回の局所性点眼後の眼球結膜中の平均（±ＳＤ）ＣmaxおよびＡＵＣ(0-24h)（±ＳＥ）値のＬＥ濃度を示すグラフ
【図２３】ダッチウサギへの一回の局所性点眼後の角膜中の平均（±ＳＤ）ＣmaxおよびＡＵＣ(0-24h)（±ＳＥ）値のＬＥ濃度を示すグラフ
【図２４】ダッチウサギへの一回の局所性点眼後の房水中の平均（±ＳＤ）ＣmaxおよびＡＵＣ(0-24h)（±ＳＥ）値のＬＥ濃度を示すグラフ
【図２５】ダッチウサギへの一回の局所性点眼後の虹彩／毛様体中の平均（±ＳＤ）ＣmaxおよびＡＵＣ(0-24h)（±ＳＥ）値のＬＥ濃度を示すグラフ
【図２６】ダッチウサギへの一回の局所性点眼後の涙液中のＬＥ濃度（μｇ／ｇ）に関する個別および要約統計量を列挙した表（グループ１および２）
【図２７】ダッチウサギへの一回の局所性点眼後の涙液中のＬＥ濃度（μｇ／ｇ）に関する個別および要約統計量を列挙した表（グループ３および４）
【図２８】ダッチウサギへの一回の局所性点眼後の眼球結膜中のＬＥ濃度（μｇ／ｇ）に関する個別および要約統計量を列挙した表（グループ１および２）
【図２９】ダッチウサギへの一回の局所性点眼後の眼球結膜中のＬＥ濃度（μｇ／ｇ）に関する個別および要約統計量を列挙した表（グループ３および４）
【図３０】ダッチウサギへの一回の局所性点眼後の角膜中のＬＥ濃度（μｇ／ｇ）に関する個別および要約統計量を列挙した表（グループ１および２）
【図３１】ダッチウサギへの一回の局所性点眼後の角膜中のＬＥ濃度（μｇ／ｇ）に関する個別および要約統計量を列挙した表（グループ３および４）
【図３２】ダッチウサギへの一回の局所性点眼後の房水中のＬＥ濃度（μｇ／ｇ）に関する個別および要約統計量を列挙した表（グループ１および２）
【図３３】ダッチウサギへの一回の局所性点眼後の房水中のＬＥ濃度（μｇ／ｇ）に関する個別および要約統計量を列挙した表（グループ３および４）
【図３４】ダッチウサギへの一回の局所性点眼後の虹彩／毛様体中のＬＥ濃度（μｇ／ｇ）に関する個別および要約統計量を列挙した表（グループ１および２）
【図３５】ダッチウサギへの一回の局所性点眼後の虹彩／毛様体中のＬＥ濃度（μｇ／ｇ）に関する個別および要約統計量を列挙した表（グループ３および４）
【図３６】ダッチウサギへのジフルプレドナートの一回の局所性点眼後の房水中のジフルプレドナート代謝産物濃度を示すグラフ
【図３７】ダッチウサギへのジフルプレドナートの一回の局所性点眼後の房水中のジフルプレドナート代謝産物濃度を示すグラフ
【図３８】ダッチウサギへのジフルプレドナートの一回の局所性点眼後の房水中のジフルプレドナート代謝産物濃度を示すグラフ
【図３９】ダッチウサギへのジフルプレドナートの一回の局所性点眼後の虹彩／毛様体中のジフルプレドナート代謝産物濃度を示すグラフ
【図４０】ダッチウサギへのジフルプレドナートの一回の局所性点眼後の角膜中のジフルプレドナート代謝産物濃度を示すグラフ
【図４１】ダッチウサギへのジフルプレドナートの一回の局所性点眼後の眼球結膜中のジフルプレドナート代謝産物濃度を示すグラフ
【図４２】ダッチウサギへのジフルプレドナートの一回の局所性点眼後の血漿中のジフルプレドナート代謝産物濃度を示すグラフ
【発明を実施するための形態】
【００１９】
本発明に、様々な眼用活性成分を使用できる。一般に、眼用活性成分は、ドライアイ、アレルギー、緑内障、炎症、または感染の治療のためのどのような活性成分も含む。
【００２０】
第１の部類の眼用活性薬剤成分（ＡＰＩ）は、特に、目の炎症状態を治療するための、グルココルチコステロイドまたはコルチコステロイドとしても知られている、ステロイドである。その例としては、エタボン酸ロテプレドノール、デキサメタゾン、フルオロメタロン、プレドニゾロン、およびジフルプレドナートが挙げられる。眼用ＡＰＩの別の部類は、ネパフェナクなどのＮＳＡＩＤである。眼用ＡＰＩの他の部類としては、ベシフロキサシンなどの抗菌剤、およびシクロスポリンなどの免疫抑制剤が挙げられる。
【００２１】
様々な態様によれば、前記製剤ビヒクル中に懸濁されるコルチコステロイドは、０．１質量％から０．２質量％の濃度でのデキサメタゾン、０．０５質量％から０．２５質量％の濃度でのフルオロメタロン、０．１質量％から１質量％の濃度でのプレドニゾロン、０．１質量％から０．５質量％の濃度でのエタボン酸ロテプレドノール、および０．０１質量％から０．１質量％の濃度でのジフルプレドナートから選択される。あるいは、様々な態様によれば、その製剤ビヒクル中に懸濁される非ステロイドは、０．１質量％から０．５質量％の濃度でのネパフェナクである。
【００２２】
一般に、本発明の懸濁液は、前記眼用製剤中のｍｇ／ｍＬで表された処方濃度の１０％未満の、２５℃およびｐＨ７での水中の溶解度を有する眼用活性成分を含む。例えば、その眼用活性成分が０．１ｍｇ／ｍＬの濃度で眼用製剤中に存在する場合、その眼用活性成分は、０．１×（０．１ｍｇ／ｍＬ）未満、すなわち、０．０１ｍｇ／ｍＬ未満の、２５℃およびｐＨ７での水中の溶解度を有する。同様に、１０ｍｇ／ｍＬの濃度で眼用製剤中に存在する眼用活性成分について、その眼用活性成分は、０．１×（１０ｍｇ／ｍＬ）未満、すなわち、１．０ｍｇ／ｍＬ未満の、２５℃およびｐＨ７での水中の溶解度を有する。したがって、ｍｇ／ｍＬで表される、懸濁液中の特定の作用物質の水溶性および懸濁剤中のその作用物質の濃度は、懸濁液の形成に関連付けられる。言い換えると、懸濁液中に比較的高濃度で存在する眼用活性成分は、それより低濃度で別の懸濁液中に存在するより低い水溶性を有する別の作用物質よりもいくぶん大きい水溶性を有することができるが、先の懸濁液中のより高い濃度のために、先の作用物質のかなりの部分は製剤中に懸濁されたままである。
【００２３】
様々な態様によれば、前記眼用活性成分はエタボン酸ロテプレドノールである。エタボン酸ロテプレドノール（ここでは「ＬＥ」とも称される）は、公知の化合物であり、その全ての内容が本明細書に引用される米国特許第４９９６３３５号明細書に開示された方法によって合成できる。様々な態様によれば、製剤ビヒクル中のＬＥの濃度は、０．１質量％から２質量％、または０．１４質量％から１．５質量％、または０．２質量％から１質量％、または０．２質量％から０．５質量％の範囲にある。ＬＥの特定の濃度は０．３８質量％であることがある。
【００２４】
別の眼用活性成分はジフルプレドナートである。ジフルプレドナート（ここでは「ＤＦＢＡ」とも称される）は、プレドニゾロンの誘導体であり、公知の化合物であり、当該技術分野で公知の方法により合成できる。様々な態様によれば、前記製剤ビヒクル中のＤＦＢＡの濃度は、０．０１から０．１質量％、または０．０２から０．０７質量％の範囲にある。ＤＦＢＡの特定の濃度は０．０５質量％であることがある。
【００２５】
前記製剤ビヒクルは少なくとも１種類の懸濁化剤を含む、懸濁化剤の１つの部類は、存在するモノマーの総質量に基づいて、少なくとも約９０質量％、または少なくとも約９５質量％の１種類以上のカルボキシ含有モノエチレン性不飽和モノマーから調製されたポリマーである。アクリル酸が適切なカルボキシ含有モノエチレン性不飽和モノマーであるが、他のエチレン性不飽和の重合性カルボキシ含有モノマーを使用してもよい。これらの例としては、アクリル酸に加えて、またはその代わりに、使用できる、メタクリル酸、エタクリル酸、β−メタクリル酸（クロトン酸）、シス−α−メチルクロトン酸（アンゲリカ酸）、トランス−α−メチルクロトン酸（チグリン酸）、α−ブチルクロトン酸、α−フェニルアクリル酸、α−ベンジルアクリル酸、α−シクロヘキシルアクリル酸、β−フェニルアクリル酸（桂皮酸）、クマル酸（ｏ−ヒドロキシ桂皮酸）、ウンベル酸（ｐ−ヒドロキシクマル酸）などが挙げられる。
【００２６】
これらのモノエチレン性不飽和モノマーから調製されるカルボキシ含有ポリマーは、少ない百分率、すなわち、存在するモノマーの総質量に基づいて、約０．５％から約５％、または約０．２％から約３％の多官能性架橋剤を使用することにより、軽度に架橋されることがある。そのような架橋剤としては、ジビニルグリコール；３，４−ジヒドロキシ−ヘキサ−１，５−ジエン；２，５−ジメチル−１，５−ヘキサジエン；ジビニルベンゼン；Ｎ，Ｎ−ジアリルアクリルアミド；Ｎ，Ｎ−ジアリルメチクリルアミドなどの非ポリアルケニルポリエーテル二官能性架橋モノマーが挙げられる。
【００２７】
様々な軽度に架橋したポリマーが、市販されており、または従来のフリーラジカル重合触媒を使用した懸濁またはエマルション重合によって、一般的に調製されてもよい。一般に、そのようなポリマーの分子量は、約２５０，０００から約４，０００，０００、または約５００，０００から約２，０００，０００に及ぶ。
【００２８】
前記軽度に架橋したポリマーは、１種類以上の前記架橋剤と共に、存在する唯一のモノエチレン性不飽和モノマーとしてのカルボキシ含有モノマーから製造できる。それらのポリマーは、約４０質量％までの、または約０質量％から約２０質量％の範囲内の１種類以上のカルボキシ含有モノエチレン性不飽和モノマーが、メタクリル酸メチル、アクリル酸エチル、アクリル酸ブチル、アクリル酸２−エチルヘキシル、酢酸ビニル、メタクリル酸２−ヒドロキシエチル、アクリル酸３−ヒドロキシプロピルなどのアクリル酸およびメタクリル酸エステルを含む、生理的かつ眼科的に無害な置換基のみを含有する１種類以上の非カルボキシ含有モノエチレン性不飽和モノマーにより置き換えられた、ポリマーであって差し支えない。
【００２９】
様々な軽度に架橋したカルボキシ含有ポリマーが当該技術分野において公知である。例えば、Robinsonの米国特許第４６１５６９７号明細書、国際公開第８９／０６９６４号、およびDavis等の米国特許第５１９２５３５号明細書に開示されたもの。軽度に架橋したポリマーの例に、架橋モノマーが３，４−ジヒドロキシヘキサ−１，５−ジエンまたは２，５−ジメチルヘキサ−１，５−ジエンである、アクリル酸ポリマーがある。
【００３０】
軽度に架橋したポリマーの別の部類は、ＮＯＶＥＯＮ  ＡＡ−１ポリカルボフィル（Ｌｕｂｒｉｚｏｌから入手できる）を含む、アクリル酸およびジビニルグリコールの懸濁重合により調製されたカルボキシ含有ポリマーである。他の軽度に架橋したカルボキシ含有ポリマーとしては、Ｃａｒｂｏｐｏｌカルボマー（Ｌｕｂｒｉｚｏｌから入手できる）などの様々なカルボマーが挙げられる。様々な態様によれば、前記懸濁化剤は、ポリカルボフィルおよびカルボマーから選択されたカルボキシビニルポリマーである。
【００３１】
前記懸濁化剤は、前記眼用活性成分が前記製剤ビヒクル中に懸濁されたままでいることを確実にする働きをする。その製剤ビヒクルは、ゲル形態などの、眼用活性成分の貯蔵安定性懸濁液を提供する。しかしながら、そのゲルは、眼薬として眼に一旦点眼されたら、液体形態に徐々に移行する、すなわち、ゲルの剪断減粘性のために、ゲル特徴を失う。点眼後、眼が瞬いたときに、瞼が製剤に剪断を印加し、この剪断により粘度が劇的に低下し、それによって、眼中にある間にゲル形態のままであることを目的とする多くの軟膏および眼薬に見られるような、どろりとした「べとつく」感覚が避けられる。しかしながら、一旦、瞼の動きが止まり、それにより、剪断力がなくなると、粘度はもはや低下せず、製剤が眼上に居続けるのに役立つ。最終的に、ゲルは液体に完全に移行する。特定の態様において、眼用懸濁液は、その点より下では組成物が固体のゲルである、２〜８パスカル（Ｐａ）、より適切には３〜５Ｐａの降伏点を有する。
【００３２】
「貯蔵安定性」という用語は、包装された組成物を撹拌または振盪する必要なく、ＡＰＩが、長期間に亘り製剤ビヒクル中に効果的に懸濁されたままでいることを表す。言い換えると、ＡＰＩを製剤ビヒクル中に再び懸濁させるために、パッケージ内でのその製剤のかき混ぜは必要ない。反対に、非貯蔵安定性懸濁液は、ＡＰＩが担体ビヒクル中に均一に分布しているように、点眼前に包装された組成物をユーザが振盪する必要がある；しかしながら、ユーザがそのパッケージを振盪するのを怠ると、ユーザは、一貫した適切な投薬量を点眼できないであろう。
【００３３】
したがって、本発明の貯蔵安定性眼用懸濁液は、患者が容器内の懸濁液をかき混ぜる必要なく、一回の点眼当たり薬剤活性成分の所定の投薬量の９０％から１１０％を一貫して送達する。
【００３４】
様々な態様によれば、前記組成物は、少なくとも一年に亘りパッケージ内で貯蔵安定性であり、その場合、製品の貯蔵寿命は一年である。他の態様によれば、その組成物は、少なくとも二年に亘りパッケージ内で貯蔵安定性であり、その場合、製品の貯蔵寿命は二年である。
【００３５】
様々な態様によれば、前記製剤ビヒクルは、補助的懸濁化剤として非イオン性セルロース誘導体を含む。代表的な作用物質としては、ヒドロキシプロピルメチルセルロース（「ＨＰＭＣ」）またはヒドロキシプロピルセルロース（「ＨＰＣ」）が挙げられる。
【００３６】
ここに記載されたビヒクル製剤は、以下に限られないが、界面活性剤、等張化剤、緩衝剤、防腐剤、キレート化剤、共溶媒および増粘剤を含む様々な他の成分も含み得る。
【００３７】
使用できる界面活性剤は、眼科用途にふさわしい界面活性剤である。有用な界面活性剤としては、ポリソルベート８０（ＩＣＩ  Ａｍｅｒｉｃａ  Ｉｎｃ．からのＴｗｅｅｎ（登録商標）８０界面活性剤）、チロキサポール、並びにポロキサマー１８８（ＢＡＳＦから入手できるＰｌｕｒｏｎｉｃ（登録商標）Ｆ−６８界面活性剤など）およびポロキサマー４０７（ＢＡＳＦから入手できる「Ｐｌｕｒｏｎｉｃ」Ｆ１２７など）を含む様々なポロキサマー界面活性剤が挙げられる。これらの界面活性剤は、ヒドロキシル基を含有する有機化合物の非イオン性アルカリ性酸化物縮合物である。界面活性剤を使用してよい濃度は、付随する防腐剤（存在する場合）に対する殺菌効果の中和、または眼の刺激を生じるかもしれない濃度によってしか制限されない。
【００３８】
前記製剤の張性を調節するために、様々な等張化剤を使用してよい。その例に、塩化ナトリウム、塩化カリウム、塩化マグネシウム、塩化カルシウム、並びにグリセロールおよびプロピレングリコールなどの非イオン性ジオール、デキストロースおよび／またはマンニトールがある。これらの作用物質は、生理的張性に近づけるために、その製剤に添加してよい。等張化剤のそのような量は、添加すべき特定の作用物質に応じて、様々である。しかしながら、一般に、製剤は、最終的な製剤が眼用にふさわしいオスモル濃度（一般に、約１５０〜４５０ｍＯｓｍ／ｋｇ）を有するのに十分な量で等張化剤を有する。様々な態様によれば、鎮痛薬としても機能する非イオン性等張化剤が利用されることがある。
【００３９】
貯蔵条件下でｐＨがはずれるのを防ぐために、前記製剤に適切な緩衝剤系を添加してもよい。そのような添加剤としては、リン酸塩緩衝剤（例えば、リン酸二水素ナトリウム）、酢酸塩緩衝剤（例えば、酢酸ナトリウム）、クエン酸塩緩衝剤（例えば、クエン酸ナトリウムおよび／またはクエン酸）およびホウ酸塩緩衝剤（例えば、ホウ酸ナトリウムおよび／またはホウ酸）が挙げられる。緩衝剤の特定の濃度は、使用される特定の作用物質に応じて、様々である。
【００４０】
局所性眼用製品は、典型的に、複数回投与形態で包装され、その場合、使用中の微生物汚染を防ぐために、一般に、防腐剤が必要である。適切な防腐剤としては、ビグアニド、過酸化水素、過酸化水素生成物、塩化ベンザルコニウム、クロロブタノール、臭化ベンゾドデシニウム、フェニルエチルアルコール、ソルビン酸、ポリクオタニウム−１、および当該技術分野で公知の他の作用物質が挙げられる。そのような防腐剤は、典型的に、０．００１から１％（ｗ／ｗ）  のレベルで使用される。防腐剤として使用される抗菌剤の有効性を向上させるために、エデト酸二ナトリウムなどのキレート化剤を含ませてもよい。眼用懸濁液が単回投与形態で包装されている場合、その無菌懸濁液は、概して、防腐剤が必要ない。
【００４１】
前記製剤ビヒクルに、補助的共溶媒または増粘剤を添加してもよい。そのような物質は、眼に投与した際に、潤滑を与えるため、その製剤ビヒクルを内因性涙の粘稠度に近づけるため、自然涙の増加を補助するため、もしくは別の様式でドライアイ症候群および症状の一時的緩和を与えるために含まれてもよい。補助的な増粘剤としては、ポリエチレングリコールなどの高分子ポリオール、デキストラン７０などのデキストラン、ゼラチンなどの水溶性タンパク質、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、並びにヒアルロン酸とその塩およびコンドロイチン硫酸とその塩などの多糖類が挙げられる。
【００４２】
本発明の代表的なゲル懸濁液は、以下の組成を含む、またはから実質的になる、またはからなる：
2018507252.tif 000003
【００４３】
様々な態様によれば、ゲル懸濁液は、以下の組成を含む、またはから実質的になる、またはからなる：
2018507252.tif 000004
【００４４】
様々な他の実施の形態によれば、ゲル懸濁液は、以下の組成を含む、またはから実質的になる、またはからなる：
2018507252.tif 000005
【００４５】
第１の組成は、様々な態様によれば、以下の組成Ａを含む、またはから実質的になる、またはからなる：
2018507252.tif 000006
【００４６】
他の態様によれば、ゲル懸濁液は、以下の組成を含む、またはから実質的になる、またはからなる：
2018507252.tif 000007
【００４７】
別の組成は、様々な態様によれば、以下の組成Ｂを含む、またはから実質的になる、またはからなる：
2018507252.tif 000008
【００４８】
追加の組成である組成ＣおよびＤは、以下の組成を含む、またはから実質的になる、またはからなる：
2018507252.tif 000009
【００４９】
追加の組成である組成ＥおよびＦは、以下の組成を含む、またはから実質的になる、またはからなる：
2018507252.tif 000010
【００５０】
上述したように、本発明の眼用懸濁液は、製剤ビヒクル中に懸濁された眼用活性成分を含み、その眼用活性成分は、Ｄv90＜５μｍおよびＤv50＜１μｍを有する粒子として存在する。Ｄv90は、それより小さい粒子が、全粒子の累積体積の９０％となる粒径であり、Ｄv50は、それより小さい粒子が、全粒子の累積体積の５０％となる粒径である。Ｄv90およびＤv50は、当該技術分野で一般に知られた光回折技術により測定できる。
【００５１】
光回折（ＬＤ）は、液体中に懸濁されたまたは空気中に分散した物質の粒径を決定するための公知の方法である。この技術では、粒子がその直径に反比例する角度で光を回折する（散乱させる）光回折の原理を利用する。すなわち、大きい粒子は小さい角度で光を回折するのに対し、小さい粒子は大きい角度で光を回折する。実際に、市販の装置は、試料セル内の測定ゾーンを通過する粒子を照らす、低出力レーザなどの光源を備える。ビームが粒子と相互作用して生じた回折光の円錐が、２つの光検出器配列などの検出器上に焦点が合わせられた静止回折パターンを生じる。これらの検出器は、典型的に、光エネルギーの放射分散を測定するように配置された一連の電子的に分離された光素子からなる。これらの検出器に衝突する光の量および方向は、電子的にコード化され、処理のためにコンピュータに伝送される。適切な期間に亘り測定を行い、照射区域を通る粒子の連続流束を使用することによって、代表的な光回折プロファイルが得られる。
【００５２】
回折パターンを測定した後、その市販の測定装置は一般に、観察された回折パターンプロファイルに「最良適合する」サイズ分布モデルを計算するために、回折パターン測定、バックグラウンド測定、およびオペレータにより入力される任意の必須情報（例えば、屈折率、粒子形状、球状または不規則）を分析するＣＵＰおよびソフトウェアを備える。この「最良適合」が一旦達成されたら、その装置は一般に、そのモデルを特徴付けるサイズ分布パラメータの印刷出力または表示を与える。典型的に、その結果は、体積サイズ分布、例えば、Ｄv10＝ｘ、Ｄv50＝ｙ、Ｄv90＝ｚなどに関して与えられる。
【００５３】
本発明の眼用懸濁液について、適切な測定技術は以下のとおりである。５グラムのゲルを平底ガラスビーカーに計り取る。２０８グラムの６％生理食塩水分散剤をそのビーカーに加える。そのビーカーの内容物を磁気撹拌し、超音波処理装置の先端をその内容物の表面下に浸し、その内容物を撹拌しながら、超音波処理する。その撹拌され超音波処理された試料の約３ｍＬ分を抜き取り、その全体を、再循環された分散剤を収容する光回折装置の再循環器のボウルに迅速に分配する。必要ならば、０．９２〜０．９６の透過値に到達するまで、試料懸濁液の追加分を加えてもよい。試料懸濁液を再循環器に最終的に加えた後、数分以内でその試料回折パターンの収集を開始する。その装置のソフトウェアにより、所望のサイズ分布（例えば、Ｄv10、Ｄv50、Ｄv90）が生成される。装置の一例は、Ｍｉｃｒｏｔｒａｃ（米国、ペンシルベニア州、ヨークおよび独国、クレーフェルト）から入手できるＳ３５００レーザ回折分析装置である。
【００５４】
そのような粒径を持つ眼用活性成分は、当該技術分野で一般に知られた方法により得てもよい。例えば、活性成分および製剤ビヒクルを含有する水性スラリーに、所望の粒径を得るのに適切な時間に亘り、流体微粒子化またはビーズミリングを行ってよい。流体微粒子化およびビーズミリングの代表的な技術が、実施例１に与えられている。実施例１において、ビーズミリングを最適化して、所望の粒径を有する眼用活性成分を提供したが、他の方法、または記載されたビーズミリング方法の変種を用いてもよい。
【実施例】
【００５５】
ここで、請求項により定義される本発明の範囲を制限せずに説明することが意図されたいくつかの実施例によって、本発明をさらに説明する。
【００５６】
実施例１−ＡＰＩのミリング
以下の実験において、ＡＰＩの粒径を減少させるための２つの選択肢である高圧均質化マイクロフルイダイザーおよびビーズミリングを調べた。使用した高圧均質化マイクロフルイダイザーは、ＭｉｃｒｏｆｌｕｉｄｉｃｓモデルＭ−１１０ＥＨマイクロフルイダイザーであった。それに加え、ミリングのための様々なビヒクルを調べた。粒径分析は、特に明記のない限り、光回折（ＬＤ）により決定した。
【００５７】
最初の一連の実験において、マイクロフルイダイザーについて研究した。表１に纏められているように、様々な製剤は、Ｔｙｌｏｘａｐｏｌ（Ｔｙｌｏｘ）界面活性剤、「Ｐｌｕｒｏｎｉｃ」Ｆ６８（Ｆ６８）界面活性剤、および塩化ベンザルコニウム（ＢＡＫ）を含む様々な他の賦形剤と共に、１％のポリソルベート２０（Ｔｗ２０）および０．５％のホウ酸中の１０％のエタボン酸ロテプレドノール（ＬＥ）を使用した。それに加え、１％のＨＰＭＣ（ヒドロキシプロピルメチルセルロース）および０．２％のＢＡＫを含む製剤を試験した。その結果が表１に示されている。この実験から、ポリソルベート２０は、ミリングにとって重要な賦形剤ではないと決定された。
【００５８】
【表１】
2018507252.tif 000011
【００５９】
別の一連の実験において、各々がＡＰＩとして１０％のＬＥを含有する、４種類のミリングビヒクルを試験した。それに加え、そのミリングビヒクルは、以下を含有した：
Ａ−０．５％ホウ酸、０．２％ＢＡＫ、０．５％ＨＰＭＣ  Ｅ３
Ｂ−０．５％ホウ酸、０．２％ＢＡＫ、０．５％ポロキサマー  ４０７
Ｃ−０．５％ホウ酸、０．２％ＢＡＫ、０．５％ＰＶＰ  Ｃ３０
Ａ−０．５％ホウ酸、０．５％ＣＭＣ  ＬＶ、０．２％ポロキサマー  ４０７。
【００６０】
試料を、２５ｋ  ｐｓｉ（約１７２Ｍｐａ）で再循環様式で２０分間に亘りマイクロフルイダイザー内でミリングした。ＢＡＫと共にポロキサマー４０７を含有する試料Ｂは、図１に示されるように、最も狭く、最も単峰性の分布を有する。ＣＭＣ／ポロキサマーを含有する試料Ｄは、より大きくより高度に凝集しているようであった。
【００６１】
別の一連の実験において、ＡＰＩ濃度を、ミリングに対する効果について試験した。１０％、２０％または３０％いずれかのＬＥと共に、０．５％のホウ酸＋０．５％のポロキサマー４０７＋０．２％のＢＡＫを含有する、先の試料Ｂと同様のビヒクルを用いた。そのスラリーを、２５ｋ  ｐｓｉ（約１７２Ｍｐａ）で再循環様式で、同様に試験した。試料を粒径分析のために、１０分、２０分および３０分の間隔で採取した。１０％のＬＥを有する、３０分の試料が適切な結果を生じた。それより高い濃度でＡＰＩを有する試料は、より効率的であるとは思えなかった。その結果が図２に報告されている。
【００６２】
ビーズミリングに関する以前の経験から、ビーズミリング中にＢＡＫを使用すると、凝集が生じるかもしれないことが知られている。したがって、Ｆｌａｃｋｔｅｋミキサ内で２０分間に亘り０．５ｍｍの酸化ジルコニウム（ＺｒＯ2）ビーズで、３０％のＬＥ懸濁液（０．５％のポロキサマー４０７＋０．２％のＢＡＫを含有する）をミリングすることによって、このことをＬＥについて試験した。光学顕微鏡検査法により、粒径分布が悪化したように見えた。これは、バイアルが極めて熱くなったときの再結晶化のためであったのかもしれない。ミリング中の温度をよりうまく制御するために、試料をリストシェイカー(wrist shaker)に置き、一晩振盪した。ポロキサマー４０７を含むが、ＢＡＫを含まない、３０％のＬＥを含有する追加の試料も、リストシェイカーに置いた。両方のビーズミリングした試料の粒径は、３０分マイクロフルイダイザーにかけた試料（０．５％のポロキサマー４０７＋０．２％のＢＡＫを含有する）よりも小さく、ビーズミリングした試料で、ＢＡＫを含むものと、含まないのもとの間には、識別できる違いはなかった。このデータが図３に纏められている。
【００６３】
マイクロフルイダイザー内でのミリングが、ビーズミリングに匹敵する粒径を提供できるか否かをさらに調べるために、ポロキサマー／ＢＡＫビヒクル中に１０％のＬＥを使用して追加の研究を行った。このとき、スラリーは、１８０分まで、２５ｋ  ｐｓｉ（約１７２ＭＰａ）でマイクロフルイダイザー内においてミリングした。試料を３０分間隔で採取した。９０分で、１μｍ未満のＤv90の粒径が達成された。追加のミリング時間で、粒径がゆっくりとさらに低下したが、ビーズミリングにより達成できるより小さい粒径は生じなかった。その結果が図４に報告されている。
【００６４】
先の実験は、より小さい粒径がビーズミリングにより得られることを示したので、ビーズミリングプロセスをさらに最適化するために、追加の研究を行った。
【００６５】
図５には、表示されたＺｒＯ2ビーズサイズと共に、１６時間に亘りリストシェイカーで振盪された、以下のビーズミリングされた試料の粒径分布が報告されている：
Ａ−２０％ＬＥ、８％ポロキサマーＦ１２７−２．０ｍｍビーズ
Ｂ−２０％ＬＥ、２％ポロキサマーＦ１２７−１．０ｍｍビーズ
Ｃ−２０％ＬＥ、２％ポロキサマーＦ１２７−０．５ｍｍビーズ
Ｄ−２２％ＬＥ、２．２％ポロキサマーＦ１２７、０．２２５％ＢＡＫ−０．５ｍｍビーズ
Ｅ−２０％ＬＥ、２．２％ポロキサマーＦ１２７、０．２２５％ＢＡＫ−１．０ｍｍビーズ
Ｆ−２０％ＬＥ、２．２％ポロキサマーＦ１２７、０．２２５％ＢＡＫ−２．０ｍｍビーズ
０．５ｍｍのビーズにより、最小の粒径分布が得られた。スラリーのミリングにＢＡＫを使用することには、粒径に即効はなかった。
【００６６】
図６には、時間＝０と、３週間後（Ｔ＝３週間）とでの、３０％のＬＥ、ポロキサマー４０７およびＢＡＫを含有する、ビーズミリングしたスラリーの粒径分布が報告されており、図７には、時間＝０と、３週間後（Ｔ＝３週間）とでの、３０％のＬＥおよびポロキサマー４０７を含有するが、ＢＡＫを含有しない、ビーズミリングしたスラリーの粒径分布が報告されている。ＢＡＫ試料（図６）は粒子の成長を示すのに対し、ＢＡＫを含まないスラリー中では著しい変化はなかった（図７）。
【００６７】
それに加え、ＡＰＩ：界面活性剤の比率を研究した。２０：１、１０：１および５：１のＬＥ：ポロキサマーの比率を得るために、３０％のＬＥ＋０．７１４％のホウ酸＋ポロキサマー４０７（「Ｐｌｕｏｒｎｉｃ」Ｆ１２７界面活性剤）を含有するサンプルを生成した。試料を一晩に亘り、リストシェイカーにより０．５ｍｍのＺｒＯ2ビーズでミリングした。その結果が図８に纏められている。より低いポロキサマー濃度が、より高いポロキサマー濃度よりも良好な結果を示した（これは、文献（Liu et al., “Nanosuspensions of poorly soluble drugs: preparation and development by wet milling”, Int. J. of Pharm 411(1-2):215-222, 2011）からの情報と相反していることに留意のこと）。
【００６８】
３０：１、４０：１および５０：１のＬＥ：ポロキサマーの比率を使用して、追加の３０％ＬＥ試料を生成した。２０：１、３０：１および４０：１の試料は、１７時間のミリング後に同様の粒径を示した（図９）。次いで、これらの３種類の試料をさらに１７時間に亘りミリングした。合計で３４時間のミリング後、４０：１の試料は、おそらくＬＥの表面積の増加にとって不十分な量の界面活性剤のために、より大きく、二峰性となった。３０：１と２０：１の試料の両方とも、時間の経過により、より小さくなり続け、２０：１の試料が最小の粒径を得た（図１０）。
【００６９】
実施例２−ポリカルボフィル製剤の安定化
本出願の発明者等は、ポリカルボフィル製剤中のＬＥのサブミクロン粒子が、物理的に安定ではなく、時間の経過で凝集する傾向にあることを認識した。ポリカルボフィルポリマーは、剪断減粘性ゲルを生じるが、マトリクス内での粒子のスムーズな運動を可能にするオープンメッシュ型の構造を形成すると考えられる。反対に、ヒドロキシプロピルメチルセルロース（ＨＰＭＣ）は、ポリカルボフィルマトリクス内で粘度を高め、粒子運動を低下させることのできるよりコンパクトな構造を形成する。また、ＨＰＭＣは、オストワルド熟成効果を減少させることによって、小粒子を安定化させる核形成を阻害する。したがって、この研究は、ヒドロキシプロピルメチルセルロース（ＨＰＭＣ）、特に、ＨＰＭＣ  Ｅ４Ｍ、および他の潜在的な安定剤の安定化特性に対する粘度増大および核形成阻害の寄与を理解するために設計した。
【００７０】
０．２５％のＨＰＭＣ  Ｅ４Ｍまたは他の安定剤と共に、ポリカルボフィルを使用して、０．３８％のＥＬゲルの様々な試料を生成した。スラリーは、実施例１におけるようにビーズミリングした。次いで、これらの試料をガラスバイアル内に入れ、２５℃および４０℃でインキュベーションした。様々な時点で試料を取り出し、光回折技術によって粒径について試験した。４０℃で貯蔵した、８．５ヶ月後の粒径が、表２に報告されている：ＶＭＤは体積平均直径を表し、Ｄv95は、それより小さい粒子が、全粒子の累積体積の９５％となる粒径である。表２には、粘度を高める、および／または核形成を阻害するように働く安定剤が纏められている。
【００７１】
【表２】
2018507252.tif 000012
【００７２】
ＨＰＭＣ  Ｅ４Ｍの滴定により、サブミクロンＬＥ粒子を安定化させるために、約０．０５％の最小臨界濃度が必要であることが示された。ＨＰＭＣ  Ｅ３ＬＶ試料は、ＨＰＭＣ  Ｅ４Ｍと同様の核形成阻害特性を有するが、より小さい粘度増加を与え、０．０５％のＨＰＭＣ  Ｅ４Ｍサンプルに似た中程度の保護を示す。ポリビニルピロリジノン（ＰＶＰ）試料は、粘度増加を与え、無安定剤試料と似た結果を示す。カルボキシメチルセルロース（ＣＭＣ）は、粘度増加および表面活性の両方を与える公知の懸濁化剤である。使用したグレードは、低粘度を有する。この試料も、無安定剤試料に似た結果を示す。ポリビニルカプロラクタム−ポリ酢酸ビニル−ポリエチレングリコールグラフト共重合体を含有する、Ｓｏｌｕｐｌｕｓ（商標）安定剤（ＢＡＳＦから入手できる）は、粘度増加を示さない、強力な核形成阻害剤である。この試料は、０．２５％のＨＰＭＣ  Ｅ４Ｍ試料と似た安定性を示す。
【００７３】
この研究により、粘度増加および核形成阻害の理想的な組合せが、ＨＰＭＣ、特に、Ｅ４Ｍのグレードのものにより与えられ、この補助的懸濁化剤が、サブミクロン粒子を安定化させるのに効果的であったことが示される。
【００７４】
実施例３−レオロジー研究
局所性コルチコステロイドの有効性は、その溶解および眼表面上の滞留時間により制限され得る。この研究では、市販のＬＥゲルである、Ｌｏｔｅｍａｘ（登録商標）Ｏｐｈｔｈａｌｍｉｃ  Ｇｅｌ、０．５％と比べた、組成Ａ（サブミクロンＬＥ粒子、０．３８％を含有する）の溶解および粘弾性特性を試験した。
【００７５】
２５℃で、４０ｇの不希釈製品を収容するカップおよび羽根付きロータが取り付けられたＴＡ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓの流量計を使用して、降伏応力および振動レオロジー測定を行った。ＬＥサブミクロン粒子（直径０．６μｍ）およびＬＥ微粉化粒子（「Ｌｏｔｅｍａｘ」Ｏｐｈｔｈａｌｍｉｃ  Ｇｅｌ、０．５％に使用された直径３μｍ）の溶解を、ＶａｎＫｅｌ溶解試験装置を使用して、ＰＢＳ／０．４５％ＳＤＳ中の２００％飽和で測定した。溶解は、眼の上での涙の流れをシミュレーションしたフロースルーアッセイでも決定した。８ｍＬのＬＥサブミクロンまたは微粉化懸濁液を、３ｍＬのＰＢＳ／３．７５％ＢＡＫと混合した。次いで、ＰＢＳ／３．７５％ＢＡＫを、１０ｍＬ／分で希釈ＬＥ懸濁液に流し込んだ。流出物から試料を採取し、溶解したＬＥの量をＨＰＬＣにより決定した。この方法は、１０μＬ／分の流量での１１μＬの涙体積をシミュレーションしている。
【００７６】
サブミクロンＬＥゲル０．３８％のレオロジー分析は約４Ｐａの降伏応力を示し、そのゲル構造が「Ｌｏｔｅｍａｘ」Ｏｐｈｔｈａｌｍｉｃ  Ｇｅｌ、０．５％と似ていることが裏付けられる。３０秒で、マイクロメートルＥＬ（０．５％）と比べて、サブミクロン粒子（０．３８％）は、溶解で、２．６倍に増加した。この０．３８％のサブミクロン試料は、０．５微粉化試料の約５分と比べて、約１．５分で飽和に到達した。フロースルーモデルにおいて、サブミクロン対微粉化ＬＥについて、より長い期間に亘り、溶解が増加する。増加する薬物濃度での濃度対時間の曲線のＡＵＣを比較すると、０．３８％のサブミクロン対０．５％の微粉化製剤に関する溶解速度において全体で１．３倍の増加があることが示された。
【００７７】
その結果、サブミクロンＬＥゲル、０．３８％（組成Ａ）は、「Ｌｏｔｅｍａｘ」Ｏｐｈｔｈａｌｍｉｃ  Ｇｅｌ、０．５％と同様の粘弾性特性を有し、したがって、貯蔵安定性であり、非沈降性であり、容器からの均一な薬物送達を与えると期待される。
【００７８】
実施例４−ダッチウサギへの単回局所性点眼後のエタボン酸ロテプレドノールの眼の薬物動態に対する粒径および濃度の影響の調査
この研究の目的は、ダッチウサギへの一回の局所性点眼後のエタボン酸ロテプレドノール（ＬＥ）の眼の薬物動態（ＰＫ）に対する粒径の影響を評価し、より高濃度のＬＥが、眼に対する暴露を増加させるか否かを決定することであった。「Ｌｏｔｅｍａｘ」Ｇｅｌ（エタボン酸ロテプレドノール０．５％の眼用ゲル）（ＬＥ）は、眼科手術後の術後疼痛および炎症の治療に承認されたポリカルボフィル系ゲル製剤における強力なコルチコステロイドである。この調査は、ダッチウサギへの一回の局所性点眼後のＬＥの眼のＰＫに対する減少した粒径の影響を評価するために設計した。より多い投薬量のＬＥが眼に対する暴露を増加させるか否かを決定するために、市販の製剤と同じ粒径のＬＥを含有するが、より高濃度で含有する第３の製剤も評価した。比較製剤として、「Ｌｏｔｅｍａｘ」Ｇｅｌを使用した。
【００７９】
この非ＧＬＰ、非クロスオーバー薬物動態研究に、合計で１０８匹の雄のダッチウサギを使用した。これらのウサギは、約７〜８ヶ月の月齢であり、体重が１．５６〜２．６９ｋｇの間であった。研究の開始前に、これらの動物を４つの研究グループの内の１つに無作為に割り当てた。投与の日に、動物は両目に、適切な製剤を含有する３５μＬの局所性の眼の投薬を一回受けた。
・グループ１の動物には、ＬＥのサブミクロンサイズの粒子で調製された０．３８％のゲル製剤(製剤１)を投与した。
・グループ２の動物には、ＬＥの微粉化粒子を含有する０．３８％のゲル製剤（製剤２）を投与した。
・グループ３の動物には、現行の「Ｌｏｔｅｍａｘ」Ｇｅｌ製品と同じ粒径を有する０．７５％のゲル製剤（製剤３）を投与した。
・グループ４の動物には、市販の「Ｌｏｔｅｍａｘ」Ｇｅｌ（０．５％）（製剤４）を投与した。
この研究の期間中ずっと、全体的な健康および様子について、動物を観察した。投薬後の所定の時間間隔で、動物を安楽死させ、選択した眼組織試料を収集した。眼組織中のＬＥの濃度をＬＣ／ＭＳ／ＭＳによって決定した。全ての存命中の手順は、ＰｈａｒｍＯｐｔｉｍａ（ミシガン州、ポーテジ）で行った。眼組織試料の生物分析は、Ｂａｕｓｃｈ＋Ｌｏｍｂ（ニューヨーク州、ロチェスター）で行った。実験用製剤は、Ｂａｕｓｃｈ＋Ｌｏｍｂ  Ｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎｓ  Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔが調製し、物質を使用する準備ができたときに、試験場所に出荷した。「Ｌｏｔｅｍａｘ」Ｇｅｌは、Ｂａｕｓｃｈ＋Ｌｏｍｂ（フロリダ州、タンパ）により提供された。試験製剤の詳細が、表４−１に与えられている。
【００８０】
【表３】
2018507252.tif 000013
【００８１】
製造供給元から試験施設への出荷前に、全ての研究動物の両目に眼科検査を行った。その検査は、この研究の結末に支障を来すであろう既存の眼の異常がないことを確認するための、細隙灯単対物双眼顕微鏡を使用した眼の前部の評価からなった。試験施設に到着した際に、全ての動物が良好な健康状態にあることを確認するために、それらに目視検査を行った。次いで、動物の体重を量り、乱数発生器を使用して、各々が２７匹の動物の４つの研究グループの内の１つに無作為に割り当てた。
【００８２】
投薬の日に、動物の各眼に一回の３５μＬの適切な試験製剤を局所性点眼した（供給した）。グループ１の動物に、ＬＥのサブミクロンサイズの粒子により調製された０．３８％のゲル製剤（サブミクロン製剤および製剤１とも称される）を投与した。グループ２の動物に、ＬＥの微粉化粒子を含有する０．３８％のゲル製剤（微粉化製剤および製剤２とも称される）を投与した。グループ３の動物に、現行の「Ｌｏｔｅｍａｘ」Ｇｅｌ製品と同じ粒径を有する０．７５％のゲル製剤（未処理製剤および製剤３とも称される）を投与し、グループ４の動物に、「Ｌｏｔｅｍａｘ」Ｇｅｌ（０．５％）（比較製剤および製剤４とも称される）を投与した。これら製剤は、投与前に振盪しなかった。目盛り付きＧｉｌｓｏｎ  Ｍ−５０容積式ピペットを使用して、各眼の下側結膜嚢に一回分を滴下した。投薬直後、数秒間に亘り瞼をやさしく閉じたままにして、眼表面上の試験物質の均一な分布を促進し、流出を最小にした。全体的な健康および様子について、この研究の期間中ずっと、動物を観察した。
【００８３】
投薬後の所定の時間間隔で、ペントバルビタールナトリウムの静脈内過剰投与によって、動物（ｎ＝３／グループ／採取時間）を、苦痛を最小限にして安楽死させ、眼組織を各眼から採取した。涙液（Ｓｃｈｉｒｍｅｒティアーストリップを使用して採取）、眼球結膜、および房水（注射器と針を使用して採取）をその場で採取する一方で、一旦、眼を摘出し、液体窒素中で急速冷凍したら、角膜および／または虹彩／毛様体を採取した。眼組織試料を、投薬後、０．０８３３時間（５分）、０．２５時間（１５分）、０．５時間（３０分）、１時間、２時間、４時間、８時間、１２時間、および２４時間で採取した。Ｂａｕｓｃｈ＋Ｌｏｍｂ施設にドライアイスに載せて出荷するまで、眼組織試料を凍結貯蔵した。到着した際に、生物分析まで、試料を−２０℃以下に保持した。
【００８４】
眼組織中のＬＥの濃度をＬＣ／ＭＳ／ＭＳによって決定した。平均濃度を計算する目的で、ＬＬＱ未満の濃度（ＢＬＱ）を有する全ての試料に、定量下限（ＬＬＱ）の半分の値を割り当てた。それに加え、ＢＬＱであった測定濃度およびそれぞれの試料プールにおいて、中央濃度より少なくとも１０倍低いまたは中央濃度より１０倍超高い濃度を有するどの試料も、異常値と考え、どの計算にも含めなかった。これらの基準に基づいて、１７個（約８％）の涙液試料、３個（約１％）の眼球結膜試料、２個（約１％）の角膜試料、３個（約１％）の房水試料、および１個（約０．５％）の虹彩／毛様体試料が異常値と判定された。
【００８５】
ＷｉｎＮｏｎｌｉｎ  Ｐｒｏｆｅｓｓｉｏｎａｌ（登録商標）（バージョン５．３、ミズーリ州、セントルイス所在のＰｈａｒｓｉｇｈｔ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）において非コンパートメント方法を使用して、化合物濃度対時間のデータの薬物動態解析を行った。この研究に使用したサンプリング計画の破壊的性質のために、ＰＫ解析に平均化合物データを使用した。ＰＫ解析に公称試料採取時間を使用した。最大濃度（Ｃmax）およびその最大濃度が観察された時間（Ｔmax）を含むＰＫパラメータは、濃度対時間のプロファイルから直接決定した。濃度対時間曲線の下の面積（ＡＵＣ(0-24h)）値および対応する標準誤差（ＳＥ）推定値は、「ＷｉｎＮｏｎｌｉｎ」および／またはＭｉｃｒｏｓｏｆｔ（登録商標）Ｅｘｃｅｌ（登録商標）（２０１０）において線形台形方法を使用して計算した。
【００８６】
実験製剤（製剤１〜３）の投与後の眼組織中のＬＥへの暴露が、市販製品（製剤４）に得られた暴露と著しく異なるか否かを決定するために、Ｓｃｈｏｅｎｗａｌｄ（１９８７）並びにＴａｎｇ−ＬｉｕおよびＢｕｒｋｅ（１９８８）により示されたような、Ｗｅｌｃｈのｔ−検定を使用して、（ＡＵＣ(0-24h)）およびＳＥ推定値を比較した。Ｓｃｈｏｅｎｗａｌｄ  ＲＤ、Ｈａｒｒｉｓ  ＲＧ、Ｔｕｒｎｅｒ  Ｄ等、Ophthalmic bioequivalence of steroid/antibiotic combination formulations. Biopharm Drug Dispos. 1987; 8:527-548；Ｔａｎｇ−Ｌｉｕ  ＤＤ、Ｂｕｒｋｅ  ＰＪ、The effect of azone on ocular levobunolol absorption: calculating the area under the curve and its standard error using tissue sampling compartments. Pharm Res. 1988; 5:238-241。Ｃmaxでの個々の濃度値の間の等分散または不等分散を決定するためにＦ検定を使用した後、Ｃmaxにおける有意差を決定するために、両側スチューデントｔ−検定を使用した。計算したＰ値が０．０５以下であったときに、差は統計的に有意であると考えた。全ての統計的計算は、「Ｍｉｃｒｏｓｏｆｔ」「Ｅｘｃｅｌ」（２０１０）を使用して行った。
【００８７】
単回両側局所性点眼後にＬＥについて得られた薬物動態パラメータ値が、表４−２に示されている。平均および個別濃度対時間データが、図１１から２５に示されており、ここで、ＢＬＱは定量レベル未満を表す。図２１〜２４において、アスタリスク（*）は、「Ｌｏｔｅｍａｘ」Ｇｅｌ  ０．５％ＬＥからの統計的有意（ｐ≦０．０５）を表す。平均および個別濃度対時間データの纏めが、図２６〜３５に示されている；これらの図面において、上付き文字（ａ）は、この採取時間での他の結果から１０倍超異なる明白な異常値の個別の結果を表し、よって、その値は計算に含めなかった。図３３および３４において、上付き文字（ｂ）は、定量下限未満の結果を表し、よって、ＬＬＱの値の半分と等しい値を、要約統計量を計算する目的に割り当てた。
【００８８】
【表４】
2018507252.tif 000014
【００８９】
生物分析方法の纏め−ダッチウサギの眼組織中のエタボン酸ロテプレドノール（ＬＥ）の定量のためのＬＣ／ＭＳ／ＭＳ方法をＢａｕｓｃｈ＋Ｌｏｍｂで開発した。これらの方法を、精度と確度について評価したが、完全には確認されなかった、またはＧＬＰ準拠しなかった。全体として、この分析方法の性能は、この非臨床ＰＫ研究を支持するために、許容できると考えた。
【００９０】
６回の生物分析の実施で、合計で１０８０個の眼組織試料をうまく分析した。その試料は、涙液、眼球結膜、角膜、房水、および虹彩／毛様体からなった。Ｔｅｃａｎ  Ｆｒｅｅｄｏｍ  ＥＶＯ１５０を使用して、涙液、眼球結膜、角膜、および虹彩／毛様体試料に可変量の１：１のアセトニトリル：水を加えた。全ての試料、基準、および品質管理試料について、定数マトリクス濃度を確認するために、個々の試料質量に基づいて、各試料について、溶媒の体積を調節した。９６ウェル試料プレートにアリコートを移す前に、全ての試料を超音波処理し、ボルテックスにかけた。ＨＬＱを超える全ての試料を１：１のアセトニトリル：水で１００倍に希釈した。２つの「ゼロ」試料（内部標準を有するブランクマトリクス）および５個の対照ブランク（ブランクマトリクス）と共に、少なくとも８個の基準および３個の品質対照（低、中、および高、三重）の二組が各生物分析の実施に含まれた。
【００９１】
ダッチウサギの眼組織に関する生物分析範囲の纏めが、表４−３に与えられている。
【００９２】
【表５】
2018507252.tif 000015
【００９３】
議論
涙液を除いて、「Ｌｏｔｅｍａｘ」Ｇｅｌ（製剤４）と比べて、より高い（０．７５％）濃度の未処理ＬＥ製剤（製剤３）の投与後に試験した全ての眼組織において、ＬＥへの暴露は、同様またはより大きかった。ほとんどの場合、暴露において観察された差は、投与量に対して比例しているとはいえず（ＣmaxおよびＡＵＣ(0-24h)に基づいて、１．０から２．５倍の差）であり、統計的有意ではなかった。
【００９４】
「Ｌｏｔｅｍａｘ」Ｇｅｌと比べた場合、０．３８％の微粉化製剤（製剤２）の投与後のＬＥへの暴露は、ＣmaxおよびＡＵＣ(0-24h)に基づいて、試験した全ての眼組織において、１．２から４．３倍低かった。涙液および角膜において、暴露における差は統計的有意であった。
【００９５】
ＬＥのサブミクロン粒子により調製されたより低い濃度（０．３８％）の製剤（製剤１）の局所性点眼により、Ｃmax値およびＡＵＣ(0-24h)値に基づいて、「Ｌｏｔｅｍａｘ」Ｇｅｌ（製剤）と比べて、房水においてＬＥへの有意に（ｐ≦０．０５）大きい暴露（１．９から２．５倍）、虹彩／毛様体（１．０から１．６倍）および角膜（１．０から１．３倍）において、ＬＥへの同様またはわずかに大きい暴露が与えられた。ＬＥに対する暴露は、涙液において低く（１．４から１．９倍）、眼球結膜において著しく低かったが（１．４から２．８倍）、これらは、標的組織と考えられない。纏めると、Ｃmax値および／またはＡＵＣ(0-24h)値に基づいて、「Ｌｏｔｅｍａｘ」Ｇｅｌと比べて、０．３８％のサブミクロン製剤（製剤１）の投与後に、ＬＥへの暴露は、房水において著しく大きく、虹彩／毛様体および角膜において、同様または大きく、涙液および眼球結膜において、低かった。投与量の２４％の減少にもかかわらず、０．３８％のサブミクロン製剤（製剤１）について、ＬＥへの暴露は、重要な標的組織である房水において、統計的に高かった。このデータは、サブミクロン粒径が、重要な眼組織への薬物の浸透を向上させることを示す。
【００９６】
「Ｌｏｔｅｍａｘ」Ｇｅｌ  ０．５％ＬＥと比べた、製剤に関する倍率差が、表４−４から４−６に纏められている。
【００９７】
【表６】
2018507252.tif 000016
【００９８】
【表７】
2018507252.tif 000017
【００９９】
【表８】
2018507252.tif 000018
【０１００】
実施例５−ダッチウサギへのゲル製剤のジフルプレドナートの単回局所性点眼後の２１−デスアセチルジフルプレドナートの眼および全身薬物動態に対する粒径および濃度の影響の調査
この薬物動態研究に、合計で１３５匹のダッチウサギを使用した。投与の日に、動物は両目に、適切な製剤を含有する３５μＬの局所性の眼の投薬を一回受けた。ジフルプレドナート（ＤＦＢＡ）は、プロドラッグであり、点眼後に、２１−デスアセチルＤＦＢＡに急速に加水分解される。ダッチウサギの眼組織および血漿中の２１−デスアセチルＤＦＢＡの定量のためのＬＣ／ＭＳ／ＭＳ方法は、精度および確度について評価したが、完全には確認されなかった、またはＧＬＰ準拠しなかった。全体として、この分析方法の性能は、この非臨床ＰＫ研究を支持するために、許容できると考えた。
・製剤５−１：０．０５％のサブミクロンＤＦＢＡゲル懸濁液−−０．２μｍのＤv50およびｐＨ６．１〜６．２を有する組成Ｂに相当する。
・製剤５−２：０．２％のサブミクロンＤＦＢＡゲル懸濁液−−製剤５−１に類似しているが、０．２％のＤＦＢＡを含有する。
・製剤５−３：０．８％のサブミクロンＤＦＢＡゲル懸濁液−−製剤５−１に類似しているが、０．８％のＤＦＢＡを含有する。
・製剤５−４：０．８％の微粉化ＤＦＢＡゲル懸濁液−−製剤５−３に類似しているが、３μｍのＤv50を有する０．８％のＤＦＢＡを含有する。
・製剤５−５：無菌保存の眼科用エマルションである、「ＤＵＲＥＺＯＬ」ジフルプレドナート眼科用エマルション、０．０５％のＤＦＢＡ。
【０１０１】
図３６〜４２には、様々な眼組織および血漿中のＤＦＢＡ代謝産物である２１−デスアセチルジフルプレドナートの濃度が報告されている。表５．１には、ＤＦＢＡの単回局所性点眼後のウサギの房水中の代謝産物の暴露に対するＤＦＢＡの製剤および粒径の影響が纏められている。表５．２には、ＤＦＢＡの単回局所性点眼後の血漿中の２１−デスアセチルＤＦＢＡの全身暴露に対するＤＦＢＡの製剤および粒径の影響が纏められている。
【０１０２】
【表９】
2018507252.tif 000019
【０１０３】
【表１０】
2018507252.tif 000020
【０１０４】
以下の観察が、この研究から行われた。
【０１０５】
サブミクロン粒径のゲル懸濁液（製剤５−１）による０．０５％のＤＦＢＡの単回局所性点眼は、０．０５％のＤＦＢＡの市販のエマルション製品（製剤５−５）と比べて、全ての眼組織において活性代謝産物の著しく大きい濃度および暴露をもたらした。房水において、ＣmaxおよびＡＵＣが約３倍増加した。
【０１０６】
ＤＦＢＡ代謝産物濃度の最大濃度および暴露が、結膜および角膜において見られ、それに、虹彩／毛様体および房水が続いた。
【０１０７】
サブミクロンゲル製剤中の増加する濃度のＤＦＢＡの投与により、房水および他の眼組織中の活性代謝産物の暴露の増加がもたらされた；しかしながら、この増加は、投与量に比例していなかった。増加する濃度でのサブミクロンゲル製剤の間には、房水におけるＣmaxの有意差はなかった。
【０１０８】
虹彩／毛様体を除いて、どの眼組織においても、０．８％のＤＦＢＡでのサブミクロン粒子と微粉化粒子（製剤５−３と５−４）の間に有意差はなかった。
【０１０９】
製剤５−１の全身暴露は、製剤５−５と比べて、局所性投与後に、著しく大きかった。全身暴露も、ＤＦＢＡの増加する濃度（製剤５−２、５−３および５−４）と共に増加した。
【０１１０】
実施例６−安定性研究
安定性研究により、組成Ａが二年の貯蔵寿命に亘り保存に安定していることを示した。
【０１１１】
本発明を、特定の好ましい実施の形態を参照することによって記載してきた；しかしながら、特別なまたは必須の特徴から逸脱せずに、他の特別な形態または変種で具体化されることがあることを理解すべきである。したがって、上述した実施の形態は、制限ではなく、全ての点で説明であると考えられ、本発明の範囲は、先の説明によるよりも、付随の特許請求の範囲によって示される。
【図１】
2018507252.tif 000021
【図２】
2018507252.tif 000022
【図３】
2018507252.tif 000023
【図４】
2018507252.tif 000024
【図５】
2018507252.tif 000025
【図６】
2018507252.tif 000026
【図７】
2018507252.tif 000027
【図８】
2018507252.tif 000028
【図９】
2018507252.tif 000029
【図１０】
2018507252.tif 000030
【図１１】
2018507252.tif 000031
【図１２】
2018507252.tif 000032
【図１３】
2018507252.tif 000033
【図１４】
2018507252.tif 000034
【図１５】
2018507252.tif 000035
【図１６】
2018507252.tif 000036
【図１７】
2018507252.tif 000037
【図１８】
2018507252.tif 000038
【図１９】
2018507252.tif 000039
【図２０】
2018507252.tif 000040
【図２１】
2018507252.tif 000041
【図２２】
2018507252.tif 000042
【図２３】
2018507252.tif 000043
【図２４】
2018507252.tif 000044
【図２５】
2018507252.tif 000045
【図２６】
2018507252.tif 000046
【図２７】
2018507252.tif 000047
【図２８】
2018507252.tif 000048
【図２９】
2018507252.tif 000049
【図３０】
2018507252.tif 000050
【図３１】
2018507252.tif 000051
【図３２】
2018507252.tif 000052
【図３３】
2018507252.tif 000053
【図３４】
2018507252.tif 000054
【図３５】
2018507252.tif 000055
【図３６】
2018507252.tif 000056
【図３７】
2018507252.tif 000057
【図３８】
2018507252.tif 000058
【図３９】
2018507252.tif 000059
【図４０】
2018507252.tif 000060
【図４１】
2018507252.tif 000061
【図４２】
2018507252.tif 000062
【国際調査報告】
2018507252.tif 000063
2018507252.tif 000064
2018507252.tif 000065