(57)【要約】卵白タンパク質を産生するための組成物、タンパク質、ポリヌクレオチド、発現ベクター、宿主細胞、キットおよび系、ならびにこれらを使用する方法が、本明細書で提供される。一態様では、本開示は、卵白タンパク質組成物を産生する方法であって、２種またはそれ超の卵白タンパク質を組換え発現させるステップ；および２種またはそれ超の卵白タンパク質を混合するステップを含む、方法を提供する。一部の実施形態では、卵白タンパク質は、オボアルブミン、オボトランスフェリン、オボムコイド、Ｇ１６２Ｍ  Ｆ１６７Ａオボムコイド、オボグロブリンＧ２、オボグロブリンＧ３、α−オボムチン、β−オボムチン、リゾチーム、オボインヒビター、オボ糖タンパク質、フラボタンパク質、オボマクログロブリン、オボスタチン、シスタチン、アビジン、オボアルブミン関連タンパク質Ｘ、オボアルブミン関連タンパク質Ｙなどからなる群から選択される。
2018501814.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
卵白タンパク質組成物を産生する方法であって、
２種またはそれ超の卵白タンパク質を組換え発現させるステップ；および
２種またはそれ超の前記卵白タンパク質を混合するステップ
を含む、方法。
【請求項２】
前記卵白タンパク質が、オボアルブミン、オボトランスフェリン、オボムコイド、Ｇ１６２Ｍ  Ｆ１６７Ａオボムコイド、オボグロブリンＧ２、オボグロブリンＧ３、リゾチーム、オボインヒビター、オボ糖タンパク質、フラボタンパク質、オボマクログロブリン、オボスタチン、シスタチン、アビジン、オボアルブミン関連タンパク質Ｘ、オボアルブミン関連タンパク質Ｙ、およびそれらの任意の組合せからなる群から選択される、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
２種またはそれ超の前記卵白タンパク質を組換え発現させるステップが、１つまたは複数の宿主細胞において生じる、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
１つまたは複数の前記宿主細胞から、２種またはそれ超の前記卵白タンパク質を分泌させるステップをさらに含む、請求項３に記載の方法。
【請求項５】
食品添加物を前記卵白タンパク質組成物に添加するステップをさらに含む、請求項１に記載の方法。
【請求項６】
前記卵白タンパク質組成物を脱糖するステップ、前記卵白タンパク質組成物を安定化するステップ、または前記卵白タンパク質組成物からグルコースを除去するステップをさらに含む、請求項１に記載の方法。
【請求項７】
前記卵白タンパク質組成物を低温殺菌するステップまたは超低温殺菌するステップをさらに含む、請求項１に記載の方法。
【請求項８】
前記卵白タンパク質組成物を乾燥させるステップをさらに含む、請求項１に記載の方法。
【請求項９】
２種またはそれ超の前記卵白タンパク質のうち１種または複数を、酵素的に、化学的にまたは機械的に消化するステップをさらに含む、請求項１に記載の方法。
【請求項１０】
１種もしくは複数の組換え卵白タンパク質またはそれらの断片を含む、加工された消費可能な製品。
【請求項１１】
１種または複数の前記卵白タンパク質が、オボアルブミン、オボトランスフェリン、オボムコイド、Ｇ１６２Ｍ  Ｆ１６７Ａオボムコイド、オボグロブリンＧ２、オボグロブリンＧ３、リゾチーム、オボインヒビター、オボ糖タンパク質、フラボタンパク質、オボマクログロブリン、オボスタチン、シスタチン、アビジン、オボアルブミン関連タンパク質Ｘ、オボアルブミン関連タンパク質Ｙ、およびそれらの任意の組合せからなる群から選択される、請求項１０に記載の加工された消費可能な製品。
【請求項１２】
２種もしくはそれ超の卵白タンパク質またはそれらの断片を含む、請求項１０に記載の加工された消費可能な製品。
【請求項１３】
１種または複数の卵白タンパク質を欠く、請求項１０に記載の加工された消費可能な製品。
【請求項１４】
オボムコイドを欠く、請求項１０に記載の加工された消費可能な製品。
【請求項１５】
１種または複数の卵黄タンパク質を欠く、請求項１０に記載の加工された消費可能な製品。
【請求項１６】
食品製品、飲料製品、栄養補助食品、食品添加物、医薬品製品、衛生製品、およびそれらの任意の組合せからなる群から選択される、請求項１０に記載の加工された消費可能な製品。
【請求項１７】
食品製品および飲料製品からなる群から選択される、請求項１０に記載の加工された消費可能な製品。
【請求項１８】
消費可能な製品を生産する方法であって、
１種または複数の卵白タンパク質を組換え発現させるステップ；および
１種または複数の前記卵白タンパク質を、１種または複数の成分と混合して、消費可能な製品を生産するステップ
を含む、方法。
【請求項１９】
１種または複数の前記成分が、食品添加物を含む、請求項１８に記載の方法。
【請求項２０】
１種または複数の前記成分が、卵白タンパク質を含む、請求項１８に記載の方法。
【請求項２１】
１種または複数の前記成分が、組換え卵白タンパク質を含む、請求項１８に記載の方法。
【請求項２２】
１種または複数の前記成分が、卵白タンパク質を含まない、請求項１８に記載の方法。
【請求項２３】
１種または複数の前記卵白タンパク質が、２種またはそれ超の卵白タンパク質を含む、請求項１８に記載の方法。
【請求項２４】
組換え卵白タンパク質を加工剤として使用して、加工された消費可能な製品を作製する方法。
【請求項２５】
前記組換え卵白タンパク質を除去するステップをさらに含む、請求項２４に記載の方法。
【請求項２６】
前記加工剤が、乳化剤、結合剤、膨張剤、増粘剤、保湿剤、接着剤、褐色化剤、清澄化剤、ゲル化剤、結晶化制御剤、湿潤剤、食肉軟化剤、エアレーション剤、構造改善剤、凝固剤、コーティング剤、着色剤、光沢剤、矯味矯臭剤、凍結剤、遮蔽剤、食感改善剤、ｐＨ緩衝剤、保存期間延長剤、防腐剤、抗微生物剤、食品品質低下抑制剤、マロラクティック発酵阻害剤、テクスチャー改善剤、卵代用品、またはそれらの任意の組合せとして作用する、請求項２４に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
相互参照
この出願は、２０１４年１１月１１日に出願された米国仮出願第６２／０７８，３８５号（当該出願は、参考として本明細書に援用される）の利益を主張する。
【背景技術】
【０００２】
健康志向のファストフード選択肢に対する消費者の高まる需要により、近年、常に高い卵白の需要が見込まれてきた。ファストフードチェーンで最近導入された「健康的な選択肢」のメニュー品目（例えば、マクドナルドの「エッグホワイトデライト」朝食サンドイッチ）の成功、および冠動脈心疾患と過剰なコレステロール消費との間の関連性についての高まる認識は、比較的高タンパク質で低炭水化物の卵白調製物を好み、コレステロールに富んだ卵黄を避けるように、消費者を促している。この傾向は、世界的な乾燥卵白ストックが常に低いことに寄与しており、液体卵白のコストは、２０１３年を通じて８０％増加した。この傾向は継続すると予測され、２０１４年７月には、価格は、前年の価格の二倍であり、２０１２年の価格の３倍である。価格における劇的な上昇は、特に、卵白が重要な成分である既製食品の製造者（例えば、ベーキングミックスのメーカー）に影響を与えている。
【０００３】
卵タンパク質産生に対する、卵を使用しない代替法は、最終的に、コストをカットし、世界的な高まる需要を満たすための生産者の試みの重圧に耐える、雌鶏産卵ニワトリの劣悪な条件に対する解法を提供することを目的とする。ますます健康志向になる消費者の基盤とは別に、大規模な産業的孵化場業務に供される雌鶏の非人道的条件についての幅広い認識が存在し、これは、複雑な社会的行動の彼らの能力についての科学的コンセンサス、および自由に歩き回る産卵雌鶏に対して、工場畜産された産卵雌鶏において明らかなストレスの証拠によって裏付けられる。産業的孵化場の非人道的な面に対するかかる嫌悪感は、工場畜産された卵を超える、動物を使用しない卵白代替物を受け入れること、および最終的にはそれを好むことを促進する可能性がある。
【０００４】
動物を使用しない卵タンパク質産生の潜在力は、産卵雌鶏の生産性に依存せず、疾患の広範な大流行または原料の不足もしくは価格上昇に起因する市場の不確実性によって影響を受けない。さらに、トリ媒介疾患の最近の世界的大流行によって示唆されているように、トリからヒトへの伝播のリスクは、頻繁なヒト接触および高密度の雌鶏集団の維持に依存する畜産業務によって深刻化される。卵タンパク質産生のための動物を使用しないアプローチの採用は、トリからヒトへの今後の疾患伝播のリスクに対する保護的手段とみなされ得る。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
産生および価格を、それぞれ、世界的な卵ストックにおける不確実性および価格変動から切り離す、代替的な卵を使用しない卵白タンパク質産生方法が必要とされている。かかる方法は、例えば、自分たちのメニューに卵白の選択肢を取り込みたいと願っているファストフードチェーン、ならびに卵白ベースの食品ミックスの製造者にとっての、魅力的な選択肢となる。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
一態様では、本開示は、卵白タンパク質組成物を産生する方法であって、２種またはそれ超の卵白タンパク質を組換え発現させるステップ；および２種またはそれ超の卵白タンパク質を混合するステップを含む、方法を提供する。一部の実施形態では、卵白タンパク質は、オボアルブミン、オボトランスフェリン、オボムコイド、Ｇ１６２Ｍ  Ｆ１６７Ａオボムコイド、オボグロブリンＧ２、オボグロブリンＧ３、α−オボムチン、β−オボムチン、リゾチーム、オボインヒビター、オボ糖タンパク質（ｏｖｏｇｌｙｃｏｐｒｏｔｅｉｎ）、フラボタンパク質、オボマクログロブリン（ｏｖｏｍａｃｒｏｇｌｏｂｕｌｉｎ）、オボスタチン（ｏｖｏｓｔａｔｉｎ）、シスタチン、アビジン、オボアルブミン関連タンパク質Ｘ、オボアルブミン関連タンパク質Ｙ、およびそれらの任意の組合せからなる群から、例えば、オボアルブミン、オボトランスフェリン、オボムコイド、Ｇ１６２Ｍ  Ｆ１６７Ａオボムコイド、オボグロブリンＧ２、オボグロブリンＧ３、リゾチーム、オボインヒビター、オボ糖タンパク質、フラボタンパク質、オボマクログロブリン、オボスタチン、シスタチン、アビジン、オボアルブミン関連タンパク質Ｘ、オボアルブミン関連タンパク質Ｙ、およびそれらの任意の組合せからなる群から、選択され得る。先行する実施形態のいずれか１つでは、２種またはそれ超の卵白タンパク質を組換え発現させるステップは、１つまたは複数の宿主細胞において生じ得る。先行する実施形態のいずれか１つでは、方法は、１つまたは複数の宿主細胞から、２種またはそれ超の卵白タンパク質を分泌させるステップをさらに含み得る。先行する実施形態のいずれか１つでは、２種またはそれ超の卵白タンパク質を組換え発現させるステップは、無細胞タンパク質合成を使用して生じ得る。先行する実施形態のいずれか１つでは、方法は、食品添加物を卵白タンパク質組成物に添加するステップをさらに含み得る。先行する実施形態のいずれか１つでは、方法は、卵白タンパク質組成物を脱糖する（ｄｅｓｕｇａｒ）ステップ、卵白タンパク質組成物を安定化するステップ、または卵白タンパク質組成物からグルコースを除去するステップをさらに含み得る。先行する実施形態のいずれか１つでは、方法は、卵白タンパク質組成物を低温殺菌するステップまたは超低温殺菌する（ｕｌｔｒａｐａｓｔｅｕｒｉｚｅ）ステップをさらに含み得る。先行する実施形態のいずれか１つでは、方法は、卵白タンパク質組成物を乾燥させるステップをさらに含み得る。先行する実施形態のいずれか１つでは、方法は、２種またはそれ超の卵白タンパク質のうち１種または複数を、酵素的に、化学的にまたは機械的に消化するステップをさらに含み得る。
【０００７】
一態様では、本開示は、１種もしくは複数の組換え卵白タンパク質またはそれらの断片を含む、加工された消費可能な製品を提供する。一部の実施形態では、１種または複数の卵白タンパク質は、オボアルブミン、オボトランスフェリン、オボムコイド、Ｇ１６２Ｍ  Ｆ１６７Ａオボムコイド、オボグロブリンＧ２、オボグロブリンＧ３、α−オボムチン、β−オボムチン、リゾチーム、オボインヒビター、オボ糖タンパク質、フラボタンパク質、オボマクログロブリン、オボスタチン、シスタチン、アビジン、オボアルブミン関連タンパク質Ｘ、オボアルブミン関連タンパク質Ｙ、およびそれらの任意の組合せからなる群から、例えば、オボアルブミン、オボトランスフェリン、オボムコイド、Ｇ１６２Ｍ  Ｆ１６７Ａオボムコイド、オボグロブリンＧ２、オボグロブリンＧ３、リゾチーム、オボインヒビター、オボ糖タンパク質、フラボタンパク質、オボマクログロブリン、オボスタチン、シスタチン、アビジン、オボアルブミン関連タンパク質Ｘ、オボアルブミン関連タンパク質Ｙ、およびそれらの任意の組合せからなる群から、選択され得る。先行する実施形態のいずれか１つでは、加工された消費可能な製品は、２種もしくはそれ超、３種もしくはそれ超、４種もしくはそれ超、５種もしくはそれ超、または６種もしくはそれ超の、卵白タンパク質またはその断片を含み得る。先行する実施形態のいずれか１つでは、加工された消費可能な製品は、１種もしくは複数、２種もしくはそれ超、３種もしくはそれ超、５種もしくはそれ超、１０種もしくはそれ超、または２０種もしくはそれ超の卵白タンパク質を欠き得る。先行する実施形態のいずれか１つでは、加工された消費可能な製品は、オボムコイドを欠き得る。先行する実施形態のいずれか１つでは、加工された消費可能な製品は、１種もしくは複数、２種もしくはそれ超、３種もしくはそれ超、５種もしくはそれ超、１０種もしくはそれ超、または２０種もしくはそれ超の卵黄タンパク質を欠き得る。先行する実施形態のいずれか１つでは、加工された消費可能な製品は、食品製品、飲料製品、栄養補助食品、食品添加物、医薬品製品、衛生製品、およびそれらの任意の組合せからなる群から、例えば、食品製品および飲料製品からなる群から、選択され得る。
【０００８】
一態様では、本開示は、消費可能な製品を生産する方法であって、１種または複数の卵白タンパク質を組換え発現させるステップ；および１種または複数の卵白タンパク質を、１種または複数の成分と混合して、消費可能な製品を生産するステップを含む、方法を提供する。一部の実施形態では、１種または複数の成分は、食品添加物を含み得る。先行する実施形態のいずれか１つでは、１種または複数の成分は、卵白タンパク質を含み得る。先行する実施形態のいずれか１つでは、１種または複数の成分は、組換え卵白タンパク質を含み得る。先行する実施形態のいずれか１つでは、１種または複数の成分は、卵白タンパク質を含まなくてもよい。先行する実施形態のいずれか１つでは、１種または複数の卵白タンパク質は、２種もしくはそれ超、３種もしくはそれ超、４種もしくはそれ超、または５種もしくはそれ超の卵白タンパク質を含み得る。
【０００９】
一態様では、本開示は、卵白タンパク質またはその断片を産生するための方法であって、卵白タンパク質またはその断片を宿主細胞において組換え発現させるステップを含み、宿主細胞が、卵白タンパク質またはその断片をコードするポリヌクレオチドを含み得、卵白タンパク質が、オボグロブリンＧ２、オボグロブリンＧ３、α−オボムチン、β−オボムチン、オボ糖タンパク質、フラボタンパク質、オボマクログロブリン、シスタチン、およびそれらの任意の組合せからなる群から、例えば、オボグロブリンＧ２、オボグロブリンＧ３、オボ糖タンパク質、フラボタンパク質、オボマクログロブリン、シスタチン、およびそれらの任意の組合せからなる群から、選択され得る、方法を提供する。一部の実施形態では、方法は、宿主細胞から、卵白タンパク質またはその断片を分泌させるステップをさらに含み得る。先行する実施形態のいずれか１つでは、方法は、卵白タンパク質またはその断片を精製するステップをさらに含み得る。先行する実施形態のいずれか１つでは、方法は、第２の卵白タンパク質またはその断片を宿主細胞において組換え発現させるステップをさらに含み得る。先行する実施形態のいずれか１つでは、断片は、卵白タンパク質の少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％または５０％を構成し得る。
【００１０】
一態様では、本開示は、２種もしくはそれ超の卵白タンパク質またはそれらの断片を産生するための方法であって、２種もしくはそれ超の卵白タンパク質またはそれらの断片を宿主細胞において組換え発現させるステップを含む、方法を提供する。一部の実施形態では、宿主細胞は、２種もしくはそれ超の卵白タンパク質またはそれらの断片をコードする１つまたは複数のポリヌクレオチドを含み得る。先行する実施形態のいずれか１つでは、方法は、宿主細胞から、２種もしくはそれ超の卵白タンパク質またはそれらの断片を分泌させるステップをさらに含み得る。先行する実施形態のいずれか１つでは、方法は、２種もしくはそれ超の卵白タンパク質またはそれらの断片を精製するステップをさらに含み得る。先行する実施形態のいずれか１つでは、２種またはそれ超の卵白タンパク質は、オボアルブミン、オボトランスフェリン、オボムコイド、Ｇ１６２Ｍ  Ｆ１６７Ａオボムコイド、オボグロブリンＧ２、オボグロブリンＧ３、α−オボムチン、β−オボムチン、リゾチーム、オボインヒビター、オボ糖タンパク質、フラボタンパク質、オボマクログロブリン、オボスタチン、シスタチン、アビジン、オボアルブミン関連タンパク質Ｘ、オボアルブミン関連タンパク質Ｙ、およびそれらの任意の組合せからなる群から、例えば、オボアルブミン、オボトランスフェリン、オボムコイド、Ｇ１６２Ｍ  Ｆ１６７Ａオボムコイド、オボグロブリンＧ２、オボグロブリンＧ３、リゾチーム、オボインヒビター、オボ糖タンパク質、フラボタンパク質、オボマクログロブリン、オボスタチン、シスタチン、アビジン、オボアルブミン関連タンパク質Ｘ、オボアルブミン関連タンパク質Ｙ、およびそれらの任意の組合せからなる群から、選択され得る。
【００１１】
一態様では、本開示は、オボグロブリンＧ２、オボグロブリンＧ３、α−オボムチン、β−オボムチン、オボ糖タンパク質、フラボタンパク質、オボマクログロブリン、シスタチン、およびそれらの任意の組合せからなる群から、例えば、オボグロブリンＧ２、オボグロブリンＧ３、オボ糖タンパク質、フラボタンパク質、オボマクログロブリン、シスタチン、およびそれらの任意の組合せからなる群から選択される、単離された組換え卵白タンパク質を提供する。一部の実施形態では、単離された組換え卵白タンパク質は、卵白中の卵白タンパク質とは異なる、グリコシル化、アセチル化またはリン酸化パターンを有し得る。先行する実施形態のいずれか１つでは、単離された組換え卵白タンパク質は、卵白中の卵白タンパク質とは異なる融解温度、例えば、卵白中の卵白タンパク質と比較してより高いまたはより低い融解温度を有し得る。先行する実施形態のいずれか１つでは、単離された組換え卵白タンパク質は、卵白中の卵白タンパク質と比較して、１つまたは複数のアミノ酸挿入、欠失または置換を含み得る。先行する実施形態のいずれか１つでは、単離された組換え卵白タンパク質は、配列番号１、配列番号２、配列番号３、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、配列番号９、配列番号１０、配列番号１１、配列番号１２、配列番号１３、およびそれらの任意の組合せからなる群から選択され得る。
【００１２】
一態様では、本開示は、トリプトファンを含む、単離された変異体オボムコイドを提供する。一部の実施形態では、単離された変異体オボムコイドは、組換え発現され得る。先行する実施形態のいずれか１つでは、単離された変異体オボムコイドは、完全タンパク質であり得る。先行する実施形態のいずれか１つでは、単離された変異体オボムコイドは、最適にアラインさせた場合、配列番号３と比較して、１つもしくは複数、２つもしくはそれ超、３つもしくはそれ超、４つもしくはそれ超、５つもしくはそれ超、または６つもしくはそれ超の、アミノ酸挿入または置換を含み得る。先行する実施形態のいずれか１つでは、単離された変異体オボムコイドは、１つまたは複数のアミノ酸置換を含み得、アミノ酸置換は、１つもしくは複数、２つもしくはそれ超、３つもしくはそれ超、４つもしくはそれ超、５つもしくはそれ超、または６つもしくはそれ超の、チロシンからトリプトファンへの置換を含み得る。先行する実施形態のいずれか１つでは、単離された変異体オボムコイドは、最適にアラインさせた場合、配列番号３と比較して、最大で４、５、６または１０個の、アミノ酸挿入または置換を含み得る。先行する実施形態のいずれか１つでは、単離された変異体オボムコイドは、１つもしくは複数、２つもしくはそれ超、３つもしくはそれ超、または４つもしくはそれ超のトリプトファン残基を含み得る。先行する実施形態のいずれか１つでは、単離された変異体オボムコイドは、Ｎ末端またはＣ末端において、１つもしくは複数、２つもしくはそれ超、３つもしくはそれ超、または４つもしくはそれ超のトリプトファン残基を含み得る。先行する実施形態のいずれか１つでは、単離された変異体オボムコイドは、最適にアラインさせた場合、配列番号３と比較して、１６２位におけるメチオニンおよび１６７位におけるアラニンを含み得る。先行する実施形態のいずれか１つでは、単離された変異体オボムコイドは、野生型オボムコイドと比較して、低減されたアレルゲン性を有し得る。先行する実施形態のいずれか１つでは、単離された変異体オボムコイドは、野生型オボムコイドと比較して、増強された消化性を有し得る。
【００１３】
一態様では、本開示は、本明細書に記載される単離された組換え卵白タンパク質または単離された変異体オボムコイド；および１種または複数の卵白タンパク質を含む、卵白タンパク質組成物を提供する。一部の実施形態では、１種または複数の卵白タンパク質は、組換え発現され得る。
【００１４】
一態様では、本開示は、２種またはそれ超の組換え卵白タンパク質を含む卵白タンパク質組成物を提供する。
【００１５】
一部の実施形態では、本明細書に記載される卵白タンパク質組成物について、２種またはそれ超の組換え卵白タンパク質は、オボアルブミン、オボトランスフェリン、オボムコイド、Ｇ１６２Ｍ  Ｆ１６７Ａオボムコイド、オボグロブリンＧ２、オボグロブリンＧ３、α−オボムチン、β−オボムチン、リゾチーム、オボインヒビター、オボ糖タンパク質、フラボタンパク質、オボマクログロブリン、オボスタチン、シスタチン、アビジン、オボアルブミン関連タンパク質Ｘ、オボアルブミン関連タンパク質Ｙ、およびそれらの任意の組合せからなる群から、例えば、オボアルブミン、オボトランスフェリン、オボムコイド、Ｇ１６２Ｍ  Ｆ１６７Ａオボムコイド、オボグロブリンＧ２、オボグロブリンＧ３、リゾチーム、オボインヒビター、オボ糖タンパク質、フラボタンパク質、オボマクログロブリン、オボスタチン、シスタチン、アビジン、オボアルブミン関連タンパク質Ｘ、オボアルブミン関連タンパク質Ｙ、およびそれらの任意の組合せからなる群から、選択され得る。先行する実施形態のいずれか１つでは、卵白タンパク質組成物は、オボアルブミンを含み得る。先行する実施形態のいずれか１つでは、卵白タンパク質組成物は、本明細書に記載される単離された組換え卵白タンパク質を含み得る。先行する実施形態のいずれか１つでは、卵白タンパク質組成物は、本明細書に記載される単離された変異体オボムコイドを含み得る。先行する実施形態のいずれか１つでは、卵白タンパク質は、単一の種に由来する配列を有し得る。先行する実施形態のいずれか１つでは、種は、Ｇａｌｌｕｓ  ｇａｌｌｕｓ  ｄｏｍｅｓｔｉｃｕｓであり得る。先行する実施形態のいずれか１つでは、種は、Ｇａｌｌｕｓ  ｇａｌｌｕｓ  ｄｏｍｅｓｔｉｃｕｓ以外であり得る。先行する実施形態のいずれか１つでは、卵白タンパク質は、１つよりも多い種に由来する配列を有し得る。先行する実施形態のいずれか１つでは、卵白タンパク質は、飼鳥類（ｐｏｕｌｔｒｙ）、家禽（ｆｏｗｌ）、水鳥、猟鳥、ニワトリ、ウズラ、シチメンチョウ、アヒル、ダチョウ、ガチョウ、カモメ、ホロホロチョウ、キジ、エミュー、およびそれらの任意の組合せからなる群から選択される鳥類に由来する配列を有し得る。先行する実施形態のいずれか１つでは、卵白タンパク質組成物は、３種もしくはそれ超、４種もしくはそれ超、または５種もしくはそれ超の卵白タンパク質を含み得る。先行する実施形態のいずれか１つでは、卵白タンパク質組成物は、最大で５、１０、１５または２０種の卵白タンパク質を含み得る。先行する実施形態のいずれか１つでは、卵白タンパク質組成物は、水をさらに含み得る。先行する実施形態のいずれか１つでは、卵白タンパク質組成物は、最大で９５％の水の百分率を有し得る。先行する実施形態のいずれか１つでは、卵白タンパク質組成物は、８０％から９５％までの範囲内の水の百分率を有し得る。先行する実施形態のいずれか１つでは、卵白タンパク質組成物は、乾燥重量で少なくとも９０％のタンパク質を含み得る。先行する実施形態のいずれか１つでは、卵白タンパク質組成物は、食品添加物をさらに含み得る。先行する実施形態のいずれか１つでは、食品添加物は、甘味料、塩、炭水化物、およびそれ��の任意の組合せからなる群から選択され得る。
【００１６】
先行する実施形態のいずれか１つでは、卵白タンパク質組成物は、コレステロールを欠き得る。先行する実施形態のいずれか１つでは、卵白タンパク質組成物は、乾燥重量で５％未満の脂肪を含み得る。先行する実施形態のいずれか１つでは、卵白タンパク質組成物は、脂肪、飽和脂肪またはトランス脂肪を欠き得る。先行する実施形態のいずれか１つでは、卵白タンパク質組成物は、グルコースを欠き得る。先行する実施形態のいずれか１つでは、卵白タンパク質組成物は、１種または複数の卵白タンパク質、例えば、オボムコイドまたはフラボタンパク質を欠き得る。先行する実施形態のいずれか１つでは、１種または複数の卵白タンパク質は、テンプ（ｔｅｎｐ）、クラスタリン、ＣＨ２１、ＶＭＯ−１、ビテロゲニン、透明帯Ｃタンパク質、オボトランスフェリンＢＣ型、オボインヒビター前駆体、オボムコイド前駆体、クラスタリン前駆体、Ｈｅｐ２１タンパク質前駆体、オボ糖タンパク質前駆体、細胞外脂肪酸結合タンパク質、細胞外脂肪酸結合タンパク質前駆体、プロスタグランジン（ｐｒｓｔａｇｌａｎｄｉｎ）Ｄ２シンターゼ（ｓｙｎｔｍａｙ  ｈａｖｅｅ）脳前駆体、マーカータンパク質、ビテロゲニン−１、ビテロゲニン−２、ビテロゲニン−２前駆体、ビテロゲニン−３、リボフラビン結合タンパク質、ヘモペキシン、血清アルブミン前駆体、アポリポタンパク質Ｄ、オボセクレトグロブリン（ｏｖｏｓｅｃｒｅｔｏｇｌｏｂｕｌｉｎ）、Ｈｅｐ２１、グルタチオンペルオキシダーゼ３、リポカリン型プロスタグランジンＤシンターゼ／軟骨形成関連リポカリン、アポビテレニン−１（ａｐｏｖｉｔｅｌｌｅｎｉｎ−１）、ｄｉｃｋｋｏｐｆ関連タンパク質３、ガリナシン−１１（ｇａｌｌｉｎａｃｉｎ−１１）（ＶＭＯ−ＩＩ、β−デフェンシン−１１）、血清アルブミン（α−リベチン（α−ｌｉｖｅｔｉｎ））、ガリン、分泌型トリプシン阻害剤、リンパ球抗原８６、アクチン、Ｉｇμ鎖Ｃ領域、スルフヒドリルオキシダーゼ１、ヒストンＨ４、アンギオポエチン様タンパク質３、ユビキチン、オボカリキシン−３２（ｏｖｏｃａｌｙｘｉｎ−３２）、多量体免疫グロブリン受容体、ペプチジル−プロリル−シス／トランスイソメラーゼＢ、アミノペプチダーゼＥｙ、プレイオトロフィン、ミッドカイン、レニン／プロレニン受容体、ＴＩＭＰ−２、ＴＩＭＰ−３、ヒストンＨ２Ｂバリアント、Ｉｇλ鎖、ＦＡＭＣ３タンパク質、α−エノラーゼ、６０Ｓ酸性リボソームタンパク質Ｐ１、サイトタクチン／テネイシン、ＣＥＰＵ−１、セレノプロテイン、伸長因子１−α１、精巣上体分泌タンパク質、Ｅ１、１４−３−３タンパク質ζ（ゼータ）、オルファクトメジン様タンパク質３、グルタチオンＳ−トランスフェラーゼ２、β−２−ミクログロブリン、ＲＧＤ−ＣＡＰ、アポリポタンパク質Ｂ、ゴルジ体タンパク質１、コクリン（ｃｏｃｈｌｉｎ）、プロテアソームサブユニットα型−７、アポリポタンパク質Ａ−Ｉ、真核生物開始因子４Ａ−ＩＩ、ＡＳＰＩＣ／軟骨酸性タンパク質１、トリオースリン酸イソメラーゼ、プロテアソームサブユニットα−型、Ｉｇλ鎖Ｃ−領域、プロコラーゲン−リシン２−オキソグルタル酸５−ジオキシゲナーゼ（ｄｉｏｘｇｅｎａｓｅ）１、ＡＤＰ−リボシル化因子５���カルモジュリン、タンパク質ジスルフィドイソメラーゼ、アネキシンＩ、伸長因子２、ペルオキシレドキシン−１、ＨＳＰ７０、タンパク質ジスルフィドイソメラーゼＡ３、カルレティキュリン（ｃａｌｒｅｔｉｃｕｌｉｎ）、４０Ｓリボソームタンパク質ＳＡ／ラミニン受容体１、α−アクチニン−４、腫瘍壊死因子関連アポトーシス誘導リガンド、ビタミンＤ結合タンパク質、セマフォリン−３Ｃ、エンドプラスミン、カタラーゼ、肝α−アミラーゼ、移行型ＥＲ  ＡＴＰａｓｅ、カドヘリン−１、アンギオテンシン変換酵素、骨形成タンパク質１、グアニンヌクレオチド結合タンパク質サブユニットβ２様１、ヒスチジンアンモニアリアーゼ、アネキシンＡ２、β−カテニン、ＲＡＢ−ＧＤＰ解離阻害剤、ラミン−Ａ、オボクレイジン−１１６（ｏｖｏｃｌｅｉｄｉｎ−１１６）、アミノペプチダーゼ、ＨＳＰ９０−α、低酸素上方調節タンパク質１、ヒートショック同族タンパク質ＨＳＰ９０β、ＡＴＰ−クエン酸シンターゼ、ミオシン−９、およびそれらの任意の組合せからなる群から選択され得る。先行する実施形態のいずれか１つでは、卵白タンパク質組成物は、２種もしくはそれ超、３種もしくはそれ超、５種もしくはそれ超、１０種もしくはそれ超、または２０種もしくはそれ超の卵白タンパク質を欠き得る。先行する実施形態のいずれか１つでは、卵白タンパク質組成物は、卵でも卵白でも卵黄でもない。
【００１７】
先行する実施形態のいずれか１つでは、卵白タンパク質組成物は、テンプ、クラスタリン、ＣＨ２１、ＶＭＯ−１、ビテロゲニン、透明帯Ｃタンパク質、オボトランスフェリンＢＣ型、オボインヒビター前駆体、オボムコイド前駆体、クラスタリン前駆体、Ｈｅｐ２１タンパク質前駆体、オボ糖タンパク質前駆体、細胞外脂肪酸結合タンパク質、細胞外脂肪酸結合タンパク質前駆体、プロスタグランジンＤ２シンターゼ脳前駆体、マーカータンパク質、ビテロゲニン−１、ビテロゲニン−２、ビテロゲニン−２前駆体、ビテロゲニン−３、リボフラビン結合タンパク質、ヘモペキシン、血清アルブミン前駆体、アポリポタンパク質Ｄ、オボセクレトグロブリン、Ｈｅｐ２１、グルタチオンペルオキシダーゼ３、リポカリン型プロスタグランジンＤシンターゼ／軟骨形成関連リポカリン、アポビテレニン−１、ｄｉｃｋｋｏｐｆ関連タンパク質３、ガリナシン−１１（ＶＭＯ−ＩＩ、β−デフェンシン−１１）、血清アルブミン（α−リベチン）、ガリン、分泌型トリプシン阻害剤、リンパ球抗原８６、アクチン、Ｉｇμ鎖Ｃ領域、スルフヒドリルオキシダーゼ１、ヒストンＨ４、アンギオポエチン様タンパク質３、ユビキチン、オボカリキシン−３２、多量体免疫グロブリン受容体、ペプチジル−プロリル−シス／トランスイソメラーゼＢ、アミノペプチダーゼＥｙ、プレイオトロフィン、ミッドカイン、レニン／プロレニン受容体、ＴＩＭＰ−２、ＴＩＭＰ−３、ヒストンＨ２Ｂバリアント、Ｉｇλ鎖、ＦＡＭＣ３タンパク質、α−エノラーゼ、６０Ｓ酸性リボソームタンパク質Ｐ１、サイトタクチン／テネイシン、ＣＥＰＵ−１、セレノプロテイン、伸長因子１−α１、精巣上体分泌タンパク質、Ｅ１、１４−３−３タンパク質ζ（ゼータ）、オルファクトメジン様タンパク質３、グルタチオンＳ−トランスフェラーゼ２、β−２−ミクログロブリン、ＲＧＤ−ＣＡＰ、アポリポタンパク質Ｂ、ゴルジ体タンパク質１、コクリン、プロテアソームサブユニットα型−７、アポリポタンパク質Ａ−Ｉ、真核生物開始因子４Ａ−ＩＩ、ＡＳＰＩＣ／軟骨酸性タンパク質１、トリオースリン酸イソメラーゼ、プロテアソームサブユニットα−型、Ｉｇλ鎖Ｃ−領域、プロコラーゲン−リシン２−オキソグルタル酸５−ジオキシゲナーゼ１、ＡＤＰ−リボシル化因子５、カルモジュリン、タンパク質ジスルフィドイソメラーゼ、アネキシンＩ、伸長因子２、ペルオキシレドキシン−１、ＨＳＰ７０、タンパク質ジスルフィドイソメラーゼＡ３、カルレティキュリン、４０Ｓリボソームタンパク質ＳＡ／ラミニン受容体１、α−アクチニン−４、腫瘍壊死因子関連アポトーシス誘導リガンド、ビタミンＤ結合タンパク質、セマフォリン−３Ｃ、エンドプラスミン、カタラーゼ、肝α−アミラーゼ、移行型ＥＲ  ＡＴＰａｓｅ、カドヘリン−１、アンギオテンシン変換酵素、骨形成タンパク質１、グアニンヌクレオチド結合タンパク質サブユニットβ２様１、ヒスチジンアンモニアリアーゼ、アネキシンＡ２、β−カテニン、ＲＡＢ−ＧＤＰ解離阻害剤、ラミン−Ａ、オボクレイジン−１１６、アミノペプチダーゼ、ＨＳＰ９０−α、低酸素上方調節タンパク質１、ヒートショック同族タンパク質ＨＳＰ９０β、ＡＴＰ−クエン酸シンターゼおよびミオシン−９、ならびにそれらの任意の組合せからなる群から選択される１種または複数の卵白タンパク質をさらに含み得る。
【００１８】
先行する実施形態のいずれか１つでは、卵白タンパク質組成物は、６から１０までの範囲内のｐＨを有し得る。先行する実施形態のいずれか１つでは、卵白タンパク質組成物は、１０ｍｍから６０ｍｍまでの、例えば、３０ｍｍから６０ｍｍまでの範囲内の泡高（ｆｏａｍ  ｈｅｉｇｈｔ）を有し得る。先行する実施形態のいずれか１つでは、卵白タンパク質組成物は、少なくとも３０ｍｍの泡高を有し得る。先行する実施形態のいずれか１つでは、卵白タンパク質組成物は、卵白の泡高よりも高い泡高を有し得る。先行する実施形態のいずれか１つでは、卵白タンパク質組成物は、泡立ての３０分後の時点で、最大で１０ｍｍまたは最大で５ｍｍの泡浸出（ｆｏａｍ  ｓｅｅｐ）を有し得る。先行する実施形態のいずれか１つでは、卵白タンパク質組成物は、泡立ての３０分後の時点で、卵白の泡浸出未満の泡浸出を有し得る。先行する実施形態のいずれか１つでは、卵白タンパク質組成物は、３０ｇから１００ｇまで、例えば、４０ｇから１００ｇまでの範囲内の泡強度（ｆｏａｍ  ｓｔｒｅｎｇｔｈ）を有し得る。先行する実施形態のいずれか１つでは、卵白タンパク質組成物は、卵白の泡強度よりも高い泡強度を有し得る。先行する実施形態のいずれか１つでは、卵白タンパク質組成物は、１００ｇから１５００ｇまで、５００ｇから１５００ｇまで、または７００ｇから１５００ｇまでの範囲内のゲル強度を有し得る。先行する実施形態のいずれか１つでは、卵白タンパク質組成物は、卵白のゲル強度よりも高いゲル強度を有し得る。先行する実施形態のいずれか１つでは、卵白タンパク質組成物は、少なくとも１、２、３または６ヵ月間の保存期間を有し得る。先行する実施形態のいずれか１つでは、卵白タンパク質組成物は、卵白と比較して低減されたアレルゲン性を有し得る。先行する実施形態のいずれか１つでは、卵白タンパク質組成物は、液体であり得る。先行する実施形態のいずれか１つでは、卵白タンパク質組成物は、固体または粉末であり得る。先行する実施形態のいずれか１つでは、卵白タンパク質組成物は、凍結され得る。
【００１９】
一態様では、本開示は、本明細書に記載される単離された組換え卵白タンパク質または単離された変異体オボムコイドをコードするポリヌクレオチドを提供する。一部の実施形態では、ポリヌクレオチドは、コドン最適化され得る。先行する実施形態のいずれか１つでは、ポリヌクレオチドは、ＤＮＡまたはＲＮＡであり得る。先行する実施形態のいずれか１つでは、ポリヌクレオチドは、シグナルペプチドをさらにコードし得る。先行する実施形態のいずれか１つでは、シグナルペプチドは、卵白タンパク質またはポリペプチドのＮ末端にあり得る。先行する実施形態のいずれか１つでは、シグナルペプチドは、酸性ホスファターゼ、アルブミン、細胞外アルカリプロテアーゼ、α−接合因子、アミラーゼ、β−カゼイン、炭水化物結合モジュールファミリー２１−デンプン結合ドメイン、カルボキシペプチダーゼＹ、セロビオヒドロラーゼＩ、ジペプチジルプロテアーゼ、グルコアミラーゼ、ヒートショックタンパク質、ヒドロホビン（ｈｙｄｒｏｐｈｏｂｉｎ）、イヌラーゼ、インベルターゼ、キラータンパク質またはキラー毒素、ロイシン−リッチ人工シグナルペプチドＣＬＹ−Ｌ８、リゾチーム、フィトヘマグルチニン、マルトース結合タンパク質、Ｐ因子、Ｐｉｃｈｉａ  ｐａｓｔｏｒｉｓ  Ｄｓｅ、Ｐｉｃｈｉａ  ｐａｓｔｏｒｉｓ  Ｅｘｇ、Ｐｉｃｈｉａ  ｐａｓｔｏｒｉｓ  Ｐｉｒ１、Ｐｉｃｈｉａ  ｐａｓｔｏｒｉｓ  Ｓｃｗ、Ｐｉｒ４、およびそれらの任意の組合せからなる群から選択され得る。先行する実施形態のいずれか１つでは、シグナルペプチドは、配列番号１４、配列番号１５、配列番号１６、配列番号１７、配列番号１８、配列番号１９、配列番号２０、配列番号２１、配列番号２２、配列番号２３、配列番号２４、配列番号２５、配列番号２６、配列番号２７、配列番号２８、配列番号２９、配列番号３０、配列番号３１、配列番号３２、配列番号３３、配列番号３４、配列番号３５、配列番号３６、配列番号３７、配列番号３８、配列番号３９、配列番号４０、配列番号４１、配列番号４２、配列番号４３、配列番号４４、配列番号４５、配列番号４６、配列番号４７、配列番号４８、配列番号４９、配列番号５０、配列番号５１、配列番号５２、配列番号５３、配列番号５４、配列番号５５、配列番号５６、配列番号５７、配列番号５８、配列番号５９、配列番号６０、配列番号６１、配列番号６２、配列番号６３、配列番号６４、配列番号６５、配列番号６６、配列番号６７、配列番号６８、配列番号６９、配列番号７０、配列番号７１、およびそれらの任意の組合せからなる群から選択され得る。先行する実施形態のいずれか１つでは、シグナルペプチドは、最大で１００アミノ酸長であり得る。先行する実施形態のいずれか１つでは、ポリヌクレオチドは、シグナルペプチダーゼの切断または認識部位をさらにコードし得る。先行する実施形態のいずれか１つでは、シグナルペプチダーゼは、ＫＥＸ２、Ｋｒｐ１、エンテロキナーゼ（ＥＫＴ）、トロンビン、第Ｘａ因子（ＦＸａ）、タバコエッチ病ウイルス（Ｔｏｂａｃｃｏ  Ｅｔｃｈ  Ｖｉｒｕｓ）（ＴＥＶ）、３Ｃ  Ｐｒｅｓｃｉｓｓｉｏｎ、およびそれらの任意の組合せからなる群から選択され得る。
【００２０】
一態様では、本開示は、本明細書に記載されるポリヌクレオチドを含む発現ベクターを提供する。一部の実施形態では、発現ベクターは、プロモーターをさらに含み得る。先行する実施形態のいずれか１つでは、プロモーターは、構成的プロモーター、誘導性プロモーターまたはハイブリッドプロモーターであり得る。先行する実施形態のいずれか１つでは、プロモーターは、ａｃｕ−５、ａｄｈ１＋、アルコールデヒドロゲナーゼ（ＡＤＨ１、ＡＤＨ２、ＡＤＨ４）、ＡＨＳＢ４ｍ、ＡＩＮＶ、ａｌｃＡ、α−アミラーゼ、代替オキシダーゼ（ＡＯＤ）、アルコールオキシダーゼＩ（ＡＯＸ１）、アルコールオキシダーゼ２（ＡＯＸ２）、ＡＸＤＨ、Ｂ２、ＣａＭＶ、セロビオヒドロラーゼＩ（ｃｂｈ１）、ｃｃｇ−１、ｃＤＮＡ１、細胞フィラメントポリペプチド（ｃｆｐ）、ｃｐｃ−２、ｃｔｒ４＋、ＣＵＰ１、ジヒドロキシアセトンシンターゼ（ＤＡＳ）、エノラーゼ（ＥＮＯ、ＥＮＯ１）、ホルムアルデヒドデヒドロゲナーゼ（ＦＬＤ１）、ＦＭＤ、ギ酸デヒドロゲナーゼ（ＦＭＤＨ）、Ｇ１、Ｇ６、ＧＡＡ、ＧＡＬ１、ＧＡＬ２、ＧＡＬ３、ＧＡＬ４、ＧＡＬ５、ＧＡＬ６、ＧＡＬ７、ＧＡＬ８、ＧＡＬ９、ＧＡＬ１０、ＧＣＷ１４、ｇｄｈＡ、ｇｌａ−１、α−グルコアミラーゼ（ｇｌａＡ）、グリセルアルデヒド−３−リン酸デヒドロゲナーゼ（ｇｐｄＡ、ＧＡＰ、ＧＡＰＤＨ）、ホスホグリセリン酸ムターゼ（ＧＰＭ１）、グリセロールキナーゼ（ＧＵＴ１）、ＨＳＰ８２、ｉｎｖｌ＋、イソクエン酸リアーゼ（ＩＣＬ１）、アセトヒドロキシ酸イソメロレダクターゼ（ｉｓｏｍｅｒｏｒｅｄｕｃｔａｓｅ）（ＩＬＶ５）、ＫＡＲ２、ＫＥＸ２、β−ガラクトシダーゼ（ｌａｃ４）、ＬＥＵ２、ｍｅｌＯ、ＭＥＴ３、メタノールオキシダーゼ（ＭＯＸ）、ｎｍｔ１、ＮＳＰ、ｐｃｂＣ、ＰＥＴ９、ペルオキシン８（ＰＥＸ８）、ホスホグリセリン酸キナーゼ（ＰＧＫ、ＰＧＫ１）、ｐｈｏ１、ＰＨＯ５、ＰＨＯ８９、ホスファチジルイノシトールシンターゼ（ＰＩＳ１）、ＰＹＫ１、ピルビン酸キナーゼ（ｐｋｉ１）、ＲＰＳ７、ソルビトールデヒドロゲナーゼ（ＳＤＨ）、３−ホスホセリンアミノトランスフェラーゼ（ＳＥＲ１）、ＳＳＡ４、ＳＶ４０、ＴＥＦ、翻訳伸長因子１アルファ（ＴＥＦ１）、ＴＨＩ１１、ホモセリンキナーゼ（ＴＨＲ１）、ｔｐｉ、ＴＰＳ１、トリオースリン酸イソメラーゼ（ＴＰＩ１）、ＸＲＰ２、ＹＰＴ１、およびそれらの任意の組合せからなる群から選択され得る。先行する実施形態のいずれか１つでは、発現ベクターは、栄養素要求性マーカーをさらに含み得る。先行する実施形態のいずれか１つでは、栄養素要求性マーカーは、ａｄｅ１、ａｒｇ４、ｈｉｓ４、ｕｒａ３、ｍｅｔ２、およびそれらの任意の組合せからなる群から選択され得る。先行する実施形態のいずれか１つでは、発現ベクターは、選択可能なマーカーをさらに含み得る。先行する実施形態のいずれか１つでは、選択可能なマーカーは、耐性遺伝子であり得る。先行する実施形態のいずれか１つでは、耐性遺伝子は、ｚｅｏｃｉｎ、アンピシリン、ブラストサイジン、カナマイシン、ノーセオスリシン（ｎｕｒｓｅｏｔｈｒｉｃｉｎ）、クロラムフェニコール（ｃｈｌｏｒｏａｍｐｈｅｎｉｃｏｌ）、テトラサイクリン、トリクロサン、ガンシクロビル、またはそれらの任意の組合せに対する耐性を付与し得る。先行する実施形態のいずれか１つでは、発現ベクターは、プラスミドを含み得る。
【００２１】
一態様では、本開示は、１種または複数の異種卵白タンパク質を発現するように形質転換された宿主細胞であって、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ、Ｐｉｃｈｉａ  ｐａｓｔｏｒｉｓ、イネ、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｎｉｇｅｒ、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｏｒｙｚａｅ、Ａｃｒｅｍｏｎｉｕｍ  ｃｈｒｙｓｏｇｅｎｕｍ、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ、昆虫、マウス、トウモロコシ、Ｐｓｅｕｄｏｚｙｍａ、タバコ、ゼブラフィッシュ、およびそれらの任意の組合せからなる群からは選択されない、宿主細胞を提供する。
【００２２】
一態様では、本開示は、１種または複数の異種卵白タンパク質を発現するように形質転換された宿主細胞であって、１種または複数の卵白タンパク質が、オボアルブミン、オボトランスフェリン、リゾチーム、オボスタチン、オボムコイド、オボインヒビター、アビジン、およびそれらの任意の組合せからなる群からは選択されない、宿主細胞を提供する。
【００２３】
一態様では、本開示は、本明細書に記載されるポリヌクレオチドを含む宿主細胞を提供する。
【００２４】
一態様では、本開示は、本明細書に記載される発現ベクターを含む宿主細胞を提供する。一部の実施形態では、発現ベクターは、ゲノム的に組み込まれ得る。先行する実施形態のいずれか１つでは、宿主細胞は、複数コピーの発現ベクターを含み得る。
【００２５】
先行する実施形態のいずれか１つでは、宿主細胞は、細菌、真菌、植物、昆虫、哺乳動物、およびそれらの任意の組合せからなる群から選択され得る。先行する実施形態のいずれか１つでは、真菌は、酵母または糸状菌であり得る。先行する実施形態のいずれか１つでは、酵母は、Ａｒｘｕｌａ  ｓｐｐ．、Ａｒｘｕｌａ  ａｄｅｎｉｎｉｖｏｒａｎｓ、Ｋｌｕｙｖｅｒｏｍｙｃｅｓ  ｓｐｐ．、Ｋｌｕｙｖｅｒｏｍｙｃｅｓ  ｌａｃｔｉｓ、Ｐｉｃｈｉａ  ｓｐｐ．、Ｐｉｃｈｉａ  ａｎｇｕｓｔａ、Ｐｉｃｈｉａ  ｐａｓｔｏｒｉｓ、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｓｐｐ．、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ、Ｓｃｈｉｚｏｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｓｐｐ．、Ｓｃｈｉｚｏｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｐｏｍｂｅ、Ｙａｒｒｏｗｉａ  ｓｐｐ．、Ｙａｒｒｏｗｉａ  ｌｉｐｏｌｙｔｉｃａ、およびそれらの任意の組合せからなる群から選択され得る。先行する実施形態のいずれか１つでは、真菌は、Ａｇａｒｉｃｕｓ  ｓｐｐ．、Ａｇａｒｉｃｕｓ  ｂｉｓｐｏｒｕｓ、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｓｐｐ．、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ａｗａｍｏｒｉ、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｆｕｍｉｇａｔｕｓ、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｎｉｄｕｌａｎｓ、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｎｉｇｅｒ、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｏｒｙｚａｅ、Ｃｏｌｌｅｔｏｔｒｉｃｈｕｍ  ｓｐｐ．、Ｃｏｌｌｅｔｏｔｒｉｃｈｕｍ  ｇｌｏｅｏｓｐｏｒｉｏｄｅｓ、Ｅｎｄｏｔｈｉａ  ｓｐｐ．、Ｅｎｄｏｔｈｉａ  ｐａｒａｓｉｔｉｃａ、Ｆｕｓａｒｉｕｍ  ｓｐｐ．、Ｆｕｓａｒｉｕｍ  ｇｒａｍｉｎｅａｒｕｍ、Ｆｕｓａｒｉｕｍ  ｓｏｌａｎｉ、Ｍｕｃｏｒ  ｓｐｐ．、Ｍｕｃｏｒ  ｍｉｅｈｅｉ、Ｍｕｃｏｒ  ｐｕｓｉｌｌｕｓ、Ｍｙｃｅｌｉｏｐｈｔｈｏｒａ  ｓｐｐ．、Ｍｙｃｅｌｉｏｐｈｔｈｏｒａ  ｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌａ、Ｎｅｕｒｏｓｐｏｒａ  ｓｐｐ．、Ｎｅｕｒｏｓｐｏｒａ  ｃｒａｓｓａ、Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ  ｓｐｐ．、Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ  ｃａｍｅｍｂｅｒｔｉ、Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ  ｃａｎｅｓｃｅｎｓ、Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ  ｃｈｒｙｓｏｇｅｎｕｍ、Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ（Ｔａｌａｒｏｍｙｃｅｓ）ｅｍｅｒｓｏｎｉｉ、Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ  ｆｕｎｉｃｕｌｏｓｕｍ、Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ  ｐｕｒｐｕｒｏｇｅｎｕｍ、Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ  ｒｏｑｕｅｆｏｒｔｉ、Ｐｌｅｕｒｏｔｕｓ  ｓｐｐ．、Ｐｌｅｕｒｏｔｕｓ  ｏｓｔｒｅａｔｕｓ、Ｒｈｉｚｏｍｕｃｏｒ  ｓｐｐ．、Ｒｈｉｚｏｍｕｃｏｒ  ｍｉｅｈｅｉ、Ｒｈｉｚｏｍｕｃｏｒ  ｐｕｓｉｌｌｕｓ、Ｒｈｉｚｏｐｕｓ  ｓｐｐ．、Ｒｈｉｚｏｐｕｓ  ａｒｒｈｉｚｕｓ、Ｒｈｉｚｏｐｕｓ  ｏｌｉｇｏｓｐｏｒｕｓ、Ｒｈｉｚｏｐｕｓ  ｏｒｙｚａｅ、Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ  ｓｐｐ．、Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ  ａｌｔｒｏｖｉｒｉｄｅ、Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ  ｒｅｅｓｅｉ、Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ  ｖｉｒｅｕｓ、およびそれらの任意の組合せからなる群から選択され得る。先行する実施形態のいずれか１つでは、宿主細胞は、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｏｒｙｚａｅ、Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｕｂｔｉｌｉｓ、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ、Ｍｙｃｅｌｉｏｐｈｔｈｏｒａ  ｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌａ��Ｎｅｕｒｏｓｐｏｒａ  ｃｒａｓｓａ、Ｐｉｃｈｉａ  ｐａｓｔｏｒｉｓ、およびそれらの任意の組合せからなる群から選択され得る。先行する実施形態のいずれか１つでは、宿主細胞は、米国食品医薬品局によって一般に安全とみなされて承認され得る。先行する実施形態のいずれか１つでは、宿主細胞は、栄養素要求性であり得る。
【００２６】
一態様では、本開示は、本明細書に記載される宿主細胞を含む細胞培養物を提供する。
【００２７】
一態様では、本開示は、消費可能な製品を作製するための方法であって、卵に基づく成分の一部分を、本明細書に記載される単離された組換え卵白タンパク質、単離された変異体オボムコイドまたは卵白タンパク質組成物で置換するステップを含む、方法を提供する。
【００２８】
一態様では、本開示は、消費可能な製品を作製するための方法であって、本明細書に記載される単離された組換え卵白タンパク質、単離された変異体オボムコイドまたは卵白タンパク質組成物を添加するステップを含む、方法を提供する。
【００２９】
一態様では、本開示は、組換え卵白タンパク質を加工剤（ｐｒｏｃｅｓｓｉｎｇ  ａｇｅｎｔ）として使用して、加工された消費可能な製品を作製する方法を提供する。一部の実施形態では、方法は、組換え卵白タンパク質を除去するステップをさらに含み得る。
【００３０】
一態様では、本開示は、本明細書に記載される単離された組換え卵白タンパク質、単離された変異体オボムコイドまたは卵白タンパク質組成物を加工剤として使用して、加工された消費可能な製品を作製する方法を提供する。一部の実施形態では、方法は、単離された組換え卵白タンパク質、単離された変異体オボムコイドまたは卵白タンパク質組成物を除去するステップをさらに含み得る。
【００３１】
先行する実施形態のいずれか１つでは、加工剤は、乳化剤、結合剤、膨張剤（ｌｅａｖｅｎｉｎｇ  ａｇｅｎｔ）、増粘剤、保湿剤、接着剤、褐色化剤（ｂｒｏｗｎｉｎｇ  ａｇｅｎｔ）、清澄化剤（ｃｌａｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ  ａｇｅｎｔ）、ゲル化剤、結晶化制御剤、湿潤剤、食肉軟化剤（ｔｅｎｄｅｒｉｚｅｒ）、エアレーション剤、構造改善剤、凝固剤、コーティング剤、着色剤、光沢剤（ｇｌｏｓｓ  ａｇｅｎｔ）、矯味矯臭剤、凍結剤（ｆｒｅｅｚｉｎｇ  ａｇｅｎｔ）、遮蔽剤（ｉｎｓｕｌａｔｉｏｎ  ａｇｅｎｔ）、食感改善剤、ｐＨ緩衝剤、保存期間延長剤、防腐剤、抗微生物剤（例えば、抗細菌剤、抗真菌剤、抗ウイルス剤、抗寄生生物剤）、食品品質低下抑制剤（ｆｏｏｄ  ｓｐｏｉｌａｇｅ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ）、マロラクティック発酵阻害剤（ｍａｌｏｌａｃｔｉｃ  ｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ）、テクスチャー改善剤、卵代用品、またはそれらの任意の組合せとして作用する。
【００３２】
一態様では、本開示は、本明細書に記載される単離された組換え卵白タンパク質、単離された変異体オボムコイドまたは卵白タンパク質組成物を含む、消費可能な製品を提供する。一部の実施形態では、消費可能な製品は、食品製品、飲料製品、医薬品製品、衛生製品、およびそれらの任意の組合せからなる群から選択され得る。
【００３３】
一態様では、本開示は、組換え卵白タンパク質を、乳化剤、結合剤、膨張剤、増粘剤、保湿剤、接着剤、褐色化剤、清澄化剤、ゲル化剤、結晶化制御剤、湿潤剤、食肉軟化剤、エアレーション剤、構造改善剤、凝固剤、コーティング剤、着色剤、光沢剤、矯味矯臭剤、凍結剤、遮蔽剤、食感改善剤、ｐＨ緩衝剤、保存期間延長剤、防腐剤、抗微生物剤（例えば、抗細菌剤、抗真菌剤、抗ウイルス剤、抗寄生生物剤）、食品品質低下抑制剤、マロラクティック発酵阻害剤、テクスチャー改善剤、卵代用品、またはそれらの任意の組合せとして使用する方法を提供する。
【００３４】
一態様では、本開示は、本明細書に記載される単離された組換え卵白タンパク質、単離された変異体オボムコイドまたは卵白タンパク質組成物を、乳化剤、結合剤、膨張剤、増粘剤、保湿剤、接着剤、褐色化剤、清澄化剤、ゲル化剤、結晶化制御剤、湿潤剤、食肉軟化剤、エアレーション剤、構造改善剤、凝固剤、コーティング剤、着色剤、光沢剤、矯味矯臭剤、凍結剤、遮蔽剤、食感改善剤、ｐＨ緩衝剤、保存期間延長剤、防腐剤、抗微生物剤（例えば、抗細菌剤、抗真菌剤、抗ウイルス剤、抗寄生生物剤）、食品品質低下抑制剤、マロラクティック発酵阻害剤、テクスチャー改善剤、卵代用品、またはそれらの任意の組合せとして使用する方法を提供する。
【００３５】
一態様では、本開示は、食物アレルギーを診断するための方法であって、本明細書に記載される単離された組換え卵白タンパク質、単離された変異体オボムコイドまたは卵白タンパク質組成物を、被験体に導入するステップを含む、方法を提供する。一部の実施形態では、導入するステップは、皮膚プリックテスト、血液検査または食物経口負荷を使用して実施され得る。
【００３６】
一態様では、本開示は、食物アレルギーを処置するための方法であって、卵白アレルゲンを、本明細書に記載される単離された組換え卵白タンパク質、単離された変異体オボムコイドもしくは卵白タンパク質組成物で置換するステップ、または本明細書に記載される単離された組換え卵白タンパク質、単離された変異体オボムコイドもしくは卵白タンパク質組成物を消費することによって、卵白アレルゲンに対する被験体の寛容を増加させるステップを含む、方法を提供する。
【００３７】
一態様では、本開示は、ワインにおけるマロラクティック発酵を阻害するための方法であって、卵白リゾチームをワインに提供するステップを含む、方法を提供する。一部の実施形態では、卵白リゾチームは、組換え発現され得る。
【００３８】
参照による組み込み
本明細書中で言及された全ての刊行物、特許および特許出願は、各個々の刊行物、特許または特許出願が具体的かつ個々に参照によって取り込まれると示されるのと同じ程度まで、参照によって本明細書に組み込まれる。
【００３９】
本発明の新規な特徴を、特に添付した特許請求の範囲において説明する。本発明の原理を利用した実例的な実施形態を説明する以下の詳細な説明および付随する図面を参照することにより、本発明の特徴および利点がより良く理解される。
【図面の簡単な説明】
【００４０】
【図１】図１は、オボアルブミンのアミノ酸配列（配列番号１）である。
【００４１】
【図２】図２は、オボトランスフェリンのアミノ酸配列（配列番号２）である。
【００４２】
【図３】図３は、オボムコイドのアミノ酸配列（配列番号３）である。
【００４３】
【図４】図４は、Ｇ１６２Ｍ  Ｆ１６７Ａオボムコイドのアミノ酸配列（配列番号４）である。
【００４４】
【図５】図５は、オボグロブリンＧ２のアミノ酸配列（配列番号５）である。
【００４５】
【図６】図６は、オボグロブリンＧ３のアミノ酸配列（配列番号６）である。
【００４６】
【図７】図７は、α−オボムチンのアミノ酸配列（配列番号７）である。
【００４７】
【図８】図８は、β−オボムチンのアミノ酸配列（配列番号８）である。
【００４８】
【図９】図９は、リゾチームのアミノ酸配列（配列番号９）である。
【００４９】
【図１０】図１０は、オボインヒビターのアミノ酸配列（配列番号１０）である。
【００５０】
【図１１】図１１は、シスタチンのアミノ酸配列（配列番号１１）である。
【００５１】
【図１２】図１２は、オボアルブミン関連タンパク質Ｘのアミノ酸配列（配列番号１２）である。
【００５２】
【図１３】図１３は、オボアルブミン関連タンパク質Ｙのアミノ酸配列（配列番号１３）である。
【００５３】
【図１４】図１４は、実施例によるオボグロブリン発現ベクターの概略図である。
【００５４】
【図１５】図１５は、実施例によるリゾチーム発現ベクターの概略図である。
【００５５】
【図１６】図１６は、実施例による組換えオボアルブミンとタンパク質ラダーのゲルイメージである。
【００５６】
【図１７】図１７は、実施例による組換えオボムコイドとタンパク質ラダーのゲルイメージである。
【００５７】
【図１８】図１８は、実施例による卵白タンパク質組成物および卵白の泡強度の概略図である。
【発明を実施するための形態】
【００５８】
用語「約」または「およそ」とは、当業者によって決定される特定の値についての許容可能な誤差範囲内を意味し、これは、値が如何にして測定または決定されるか、例えば、測定系の制約に、一部依存する。例えば、「約」とは、当該分野での実施に従って、１以内、または１よりも大きい標準偏差を意味し得る。あるいは、「約」とは、所与の値の最大で２０％、最大で１５％、最大で１０％、最大で５％または最大で１％の範囲を意味し得る。あるいは、特に、生物学的な系またはプロセスに関して、用語は、ある値の、１桁以内、好ましくは５倍以内、より好ましくは２倍以内を意味し得る。特定の値が本出願および特許請求の範囲において記載される場合、特記しない限り、特定の値についての許容可能な誤差範囲内を意味する用語「約」を想定すべきである。
【００５９】
用語「ポリヌクレオチド」、「ヌクレオチド」、「ヌクレオチド配列」、「核酸」および「オリゴヌクレオチド」は、相互交換可能に使用される。これらは、デオキシリボヌクレオチドもしくはリボヌクレオチド、またはそれらのアナログを含む、任意の長さのヌクレオチドのポリマー形態を指す。ポリヌクレオチドは、任意の三次元構造を有し得、公知または未知の任意の機能を果たし得る。以下は、ポリヌクレオチドの非限定的な例である：遺伝子または遺伝子断片のコードまたは非コード領域、連鎖分析から規定された遺伝子座（単数）（遺伝子座（複数））、エクソン、イントロン、メッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）、トランスファーＲＮＡ（ｔＲＮＡ）、リボソームＲＮＡ（ｒＲＮＡ）、低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）、低分子ヘアピン型ＲＮＡ（ｓｈＲＮＡ）、ｍｉｃｒｏ−ＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）、リボザイム、ｃＤＮＡ、組換えポリヌクレオチド、分岐鎖ポリヌクレオチド、プラスミド、発現ベクター、任意の配列の単離されたＤＮＡ、任意の配列の単離されたＲＮＡ、核酸プローブおよびプライマー。ポリヌクレオチドは、１つまたは複数の改変されたヌクレオチド、例えば、メチル化されたヌクレオチドおよびヌクレオチドアナログを含み得る。存在する場合、ヌクレオチド構造に対する改変は、ポリマーのアセンブリの前または後に付与され得る。ヌクレオチドの配列は、非ヌクレオチド要素によって中断され得る。ポリヌクレオチドは、例えば、検出可能な標識とのコンジュゲーションによって、重合後にさらに改変され得る。
【００６０】
「発現」とは、ポリヌクレオチドがＤＮＡ鋳型から（例えば、ｍＲＮＡまたは他のＲＮＡ転写物へと）転写されるプロセス、および／または転写されたｍＲＮＡが、ペプチド、ポリペプチドもしくはタンパク質へと引き続いて翻訳されるプロセスを指す。転写物およびコードされるポリペプチドは、集合的に「遺伝子産物」と呼ばれ得る。ポリヌクレオチドがゲノムＤＮＡに由来する場合、発現は、真核生物細胞におけるｍＲＮＡのスプライシングを含み得る。
【００６１】
用語「ポリペプチド」、「ペプチド」および「タンパク質」は、任意の長さのアミノ酸のポリマーを指すために、本明細書で相互交換可能に使用される。ポリマーは、直鎖または分岐鎖であり得、改変されたアミノ酸を含み得、非アミノ酸によって中断され得る。用語は、例えば、ジスルフィド結合の形成、グリコシル化、脂質化、アセチル化、リン酸化または任意の他の操作、例えば、検出可能な標識とのコンジュゲーションによって改変された、アミノ酸ポリマーもまた包含する。
【００６２】
本明細書で使用する場合、用語「アミノ酸」は、グリシン、システイン、およびＤ光学異性体またはＬ光学異性体の両方、ならびにアミノ酸アナログおよびペプチド模倣物を含む、天然および／または非天然もしくは合成のアミノ酸を含む。一部の実施形態では、アミノ酸は、タンパク新生性、天然、標準的、非標準的、非正準的（ｎｏｎ−ｃａｎｏｎｉｃａｌ）、必須、非必須または非天然のアミノ酸である。一部の実施形態では、アミノ酸は、正に荷電した側鎖、負に荷電した側鎖、極性非荷電側鎖、非極性側鎖、疎水性側鎖、親水性側鎖、脂肪族側鎖、芳香族側鎖、環式側鎖、非環式側鎖、塩基性側鎖または酸性側鎖を有する。一部の実施形態では、アミノ酸は、求核性または求電子性側鎖を有する。
【００６３】
「対照」とは、比較目的のための実験において使用される代替的な被験体または試料を指す。一部の実施形態では、対照は、ニワトリ卵由来の卵白を含む。
【００６４】
用語「決定する」、「測定する」、「評価する（ｅｖａｌｕａｔｉｎｇ）」、「評価する（ａｓｓｅｓｓｉｎｇ）」、「アッセイする」および「分析する」は、任意の形態の測定を指すために本明細書で相互交換可能に使用され得、これらは、要素が存在するかしないかを決定すること（例えば、検出）を含む。これらの用語は、定量的決定および／または定性的決定の両方を含み得る。評価する（ａｓｓｅｓｓｉｎｇ）とは、相対的または絶対的であり得る。「〜の存在を検出する」は、存在する何物かの量を決定すること、および／またはそれが存在するかしないかを決定することを含み得る。
【００６５】
「相補性」とは、伝統的なワトソン−クリック型または他の非伝統的な型のいずれかによって、核酸が別の核酸配列と水素結合（複数可）を形成する能力を指す。パーセント相補性は、第２の核酸配列と水素結合（例えば、ワトソン−クリック塩基対合）を形成し得る核酸分子中の残基の百分率を示す（例えば、１０のうち５、６、７、８、９、１０は、それぞれ、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％および１００％相補的である）。「完全に相補的」とは、核酸配列の連続する残基全てが、第２の核酸配列中の同数の連続する残基と水素結合することを意味している。「実質的に相補的」とは、本明細書で使用する場合、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、３０、３５、４０、４５、５０もしくはそれ超のヌクレオチドの領域にわたって少なくとも６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％もしくは１００％である相補性の程度を指す、またはストリンジェントな条件下でハイブリダイズする２つの核酸を指す。
【００６６】
例えば、パーセント相補性を評価することを目的とした配列同一性は、Ｎｅｅｄｌｅｍａｎ−Ｗｕｎｓｃｈアルゴリズム（例えば、任意選択でデフォルト設定を用いる、ｗｗｗ．ｅｂｉ．ａｃ．ｕｋ／Ｔｏｏｌｓ／ｐｓａ／ｅｍｂｏｓｓ＿ｎｅｅｄｌｅ／ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ．ｈｔｍｌにおいて入手可能なＥＭＢＯＳＳ  Ｎｅｅｄｌｅアライナーを参照のこと）、ＢＬＡＳＴアルゴリズム（例えば、任意選択でデフォルト設定を用いる、ｂｌａｓｔ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／Ｂｌａｓｔ．ｃｇｉにおいて入手可能なＢＬＡＳＴアラインメントツールを参照のこと）およびＳｍｉｔｈ−Ｗａｔｅｒｍａｎアルゴリズム（例えば、任意選択でデフォルト設定を用いる、ｗｗｗ．ｅｂｉ．ａｃ．ｕｋ／Ｔｏｏｌｓ／ｐｓａ／ｅｍｂｏｓｓ＿ｗａｔｅｒ／ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ．ｈｔｍｌにおいて入手可能なＥＭＢＯＳＳ  Ｗａｔｅｒアライナーを参照のこと）が含まれるがこれらに限定されない、任意の適切なアラインメントアルゴリズムによって測定され得る。最適なアラインメントは、デフォルトパラメーターを含む、選択されたアルゴリズムの任意の適切なパラメーターを使用して評価され得る。
【００６７】
一般に、「配列同一性」とは、それぞれ、２つのポリヌクレオチドまたはポリペプチド配列の、正確なヌクレオチド対ヌクレオチド対応またはアミノ酸対アミノ酸対応を指す。典型的には、配列同一性を決定するための技術は、ポリヌクレオチドのヌクレオチド配列を決定し、および／またはそれらがコードするアミノ酸配列を決定し、これらの配列を第２のヌクレオチド配列もしくはアミノ酸配列と比較することを含む。２つまたはそれ超の配列（ポリヌクレオチドまたはアミノ酸）は、それらの「パーセント同一性」を決定することによって比較され得る。より長い分子（例えば、ポリヌクレオチドまたはポリペプチド）内の配列であり得る参照配列（例えば、核酸またはアミノ酸配列）に対するパーセント同一性は、参照配列の長さで除算し、１００を乗算した、２つの最適にアラインされた配列間の正確な一致の数として計算され得る。パーセント同一性は、例えば、Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈから入手可能な、バージョン２．２．９を含むアドバンストＢＬＡＳＴコンピュータープログラムを使用して配列情報を比較することによっても、決定され得る。ＢＬＡＳＴプログラムは、ＫａｒｌｉｎおよびＡｌｔｓｃｈｕｌ、Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ  ８７巻：２２６４〜２２６８頁（１９９０年）のアラインメント方法に基づいており、Ａｌｔｓｃｈｕｌら、Ｊ．  Ｍｏｌ．  Ｂｉｏｌ．  ２１５巻：４０３〜４１０頁（１９９０年）；ＫａｒｌｉｎおよびＡｌｔｓｃｈｕｌ、Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ  ９０巻：５８７３〜５８７７頁（１９９３年）；ならびにＡｌｔｓｃｈｕｌら、Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．  ２５巻：３３８９〜３４０２頁（１９９７年）において議論される通りである。簡潔に述べると、ＢＬＡＳＴプログラムは、２つの配列のうち短い方中の記号の総数によって除算した、同一のアラインされた記号（例えば、ヌクレオチドまたはアミノ酸）の数として、同一性を規定する。プログラムは、比較されている配列の全体の長さにわたってパーセント同一性を決定するために使用され得る。デフォルトパラメーターは、例えば、ｂｌａｓｔｐプログラムを用いた、短いクエリー配列を用いた検索を最適化するために提供される。プログラムは、ＷｏｏｔｔｏｎおよびＦｅｄｅｒｈｅｎ、Ｃｏｍｐｕｔｅｒｓ  ａｎｄ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  １７巻：１４９〜１６３頁（１９９３年）のＳＥＧプログラムによって決定されるような、クエリー配列のセグメントをマスクオフするためのＳＥＧフィルターの使用もまた可能にする。配列同一性の所望の程度の範囲は、およそ８０％から１００％、およびそれらの間の整数値である。典型的には、開示された配列と特許請求された配列との間のパーセント同一性は、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％または少なくとも９８％である。一般に、正確な一致は、参照配列の長さにわたる１００％同一性を示す。
【００６８】
用語「有効量」または「治療有効量」とは、以下に規定するような疾患処置が含まれるがこれらに限定されない意図した適用に影響を与えるのに十分な、本明細書に記載される化合物の量を指す。治療有効量は、当業者によって容易に決定され得る、意図した処置適用（ｉｎ  ｖｉｖｏ）、または処置されている被験体および疾患状態、例えば、被験体の体重および年齢、疾患状態の重症度、投与の様式などに依存して変動し得る。用語は、標的細胞における特定の応答、例えば、血小板付着および／または細胞遊走の低減を誘導する用量にも適用される。具体的な用量は、選択された特定の化合物、従うべき投薬レジメン、それが他の化合物と組み合わせて投与されるかどうか、投与のタイミング、それが投与される組織、およびそれが運搬される物理的送達系に依存して変動する。
【００６９】
用語「哺乳動物」は、ヒト、ならびに飼育動物、例えば実験動物および家庭のペット（例えば、ネコ、イヌ、ブタ、ウシ、ヒツジ、ヤギ、ウマ、ウサギ）ならびに非飼育動物、例えば、野生生物などの両方を含む。哺乳動物には、マウス、サル、ヒト、家畜、競技用動物、家畜化動物およびペットが含まれるがこれらに限定されない。ｉｎ  ｖｉｖｏで取得されたまたはｉｎ  ｖｉｔｒｏで培養された生物学的実体の組織、細胞およびそれらの子孫もまた包含される。
【００７０】
用語「鳥類」は、家畜化鳥類および非家畜化鳥類、例えば、野生生物などの両方を含む。鳥類には、飼鳥類、家禽、水鳥、猟鳥、平胸類（例えば、飛べない鳥）、ニワトリ（Ｇａｌｌｕｓ  ｇａｌｌｕｓ  ｄｏｍｅｓｔｉｃｕｓ）、ウズラ、シチメンチョウ、アヒル、ダチョウ（Ｓｔｒｕｔｈｉｏ  ｃａｍｅｌｕｓ）、ソマリダチョウ（Ｓｔｒｕｔｈｉｏ  ｍｏｌｙｂｄｏｐｈａｎｅｓ）、ガチョウ、カモメ、ホロホロチョウ、キジ、エミュー（Ｄｒｏｍａｉｕｓ  ｎｏｖａｅｈｏｌｌａｎｄｉａｅ）、アメリカレア（Ｒｈｅａ  ａｍｅｒｉｃａｎａ）、ダーウィンレア（Ｒｈｅａ  ｐｅｎｎａｔａ）およびキーウィが含まれるがこれらに限定されない。ｉｎ  ｖｉｖｏで取得されたまたはｉｎ  ｖｉｔｒｏで培養された生物学的実体の組織、細胞およびそれらの子孫もまた包含される。鳥類は、産卵し得る。
【００７１】
用語「ｉｎ  ｖｉｖｏ」とは、被験体の身体中で生じる事象を指す。
【００７２】
用語「ｉｎ  ｖｉｔｒｏ」とは、被験体の身体の外側で生じる事象を指す。例えば、ｉｎ  ｖｉｔｒｏアッセイは、被験体の外側で実行される任意のアッセイを包含する。ｉｎ  ｖｉｔｒｏアッセイは、生細胞または死細胞が用いられる、細胞ベースのアッセイを包含する。ｉｎ  ｖｉｔｒｏアッセイは、インタクトな細胞が用いられない無細胞アッセイもまた包含する。
【００７３】
ある特定の実施形態では、本明細書に開示されるタンパク質または化合物は、同位体的に標識される。同位体的に標識されたタンパク質または化合物（例えば、アイソトポログ（ｉｓｏｔｏｐｏｌｏｇｕｅ））は、異なる原子質量または質量数を有する原子によって置き換えられた１個または複数の原子を有し得る。開示された化合物中に取り込まれ得る同位体の非限定的な例には、水素、炭素、窒素、酸素、リン（ｐｈｏｓｐｈｏｒｏｕｓ）、硫黄、フッ素、塩素およびヨウ素の同位体、例えば、それぞれ、２Ｈ、３Ｈ、１１Ｃ、１３Ｃ、１４Ｃ、１３Ｎ、１５Ｎ、１５Ｏ、１７Ｏ、１８Ｏ、３１Ｐ、３２Ｐ、３５Ｓ、１８Ｆ、３６Ｃｌ、１２３Ｉおよび１２５Ｉが含まれる。ある特定の同位体的に標識された化合物、例えば、安定な同位体を取り込んでいる化合物は、質量分析研究において有用である。例えば、安定な同位体的タンパク質は、質量分析ベースのアッセイにおいて参照標準として使用され得る。ある特定の同位体的に標識された化合物、例えば、放射性同位体を取り込んでいる化合物は、薬物および／または基質の組織分布研究において有用である。放射性同位体トリチウム（３Ｈ）および炭素−１４（１４Ｃ）は、それらの取込みの容易さおよび検出の即座の手段を考慮して、この目的のために特に有用である。これらの放射能標識された化合物は、例えば、作用の部位もしくは様式、または薬理学的に重要な作用部位に対する結合親和性を特徴付けることによって、化合物の有効性を決定または測定するのを助けるために有用であり得る。より重い同位体、例えば、重水素（２Ｈ）による置換は、より高い代謝安定性から生じるある特定の治療的利点、例えば、増加したｉｎ  ｖｉｖｏ半減期または低減された投薬量要件を提供し得、従って、一部の状況において好ましい。ポジトロン放出同位体、例えば、１１Ｃ、１８Ｆ、１５Ｏおよび１３Ｎによる置換は、基質受容体占有率を試験するためのポジトロン放出断層撮影（ＰＥＴ）研究において有用であり得る。同位体的に標識された化合物は、一般に、当業者に公知の従来の技術によって、または非標識試薬の代わりに適切な同位体的に標識された試薬を使用して、本明細書に記載されるものと類似のプロセスによって、調製され得る。
【００７４】
「任意選択の」および「任意選択で」とは、引き続いて記載される事象または状況が生じても生じなくてもよいこと、ならびに記述が、事象または状況が生じる場合およびそれが生じない場合を含むことを意味する。例えば、「任意選択で置換されたアリール」とは、アリール基が置換されていてもいなくてもよいこと、および記述が、置換されたアリール基および置換を有さないアリール基の両方を含むことを意味する。
【００７５】
本明細書で使用する場合、用語「消費可能な製品」とは、単離された組換え卵白タンパク質または卵白タンパク質組成物および他の成分を含み、（例えば、摂食すること、咀嚼すること、飲用すること、味わうこと、摂取すること、または嚥下することによって）消費され得る、製品を指す。消費可能な製品には、非限定的な例として、食品製品、飲料製品、栄養補助食品、食品添加物、医薬品製品および衛生製品が含まれる。食品製品には、焼き菓子（例えば、ケーキ、マフィン、クッキー、パン、ベーグル、ペストリー、ドーナツ）、スクランブル、オムレツ、キッシュ、パスタ、麺類、クレープ、ワッフル、生地、バター、クッキー生地、ミートローフ、ミートボール、ハンバーガー、動物飼料、果物、野菜、豆腐、ビーンカード（ｂｅａｎ  ｃｕｒｄ）、チーズ、シーフード、肉、アイスクリーム、マヨネーズ、カスタード、プディング、スフレ、エマルジョン、泡、メレンゲ、糖衣、菓子類、マシュマロ、マジパン、スープ、薬味、ソース、スパイス、乳製品およびドレッシングが含まれるがこれらに限定されない。飲料製品には、ソフトドリンク、フレーバーウォーター、ジュース、スポーツドリンク、栄養ドリンク、スムージー、シェイク、アルコール飲料（例えば、ワイン、酒、ビール、蒸留酒）、カクテル、リキュール、炭酸飲料、カフェイン含有飲料、コーヒー、ココア、茶、エッグノッグおよび乳飲料が含まれるがこれらに限定されない。栄養補助食品には、マルチビタミン剤、自然食品サプリメント、節食サプリメント（ｄｉｅｔ  ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔ）、ハーブ系サプリメント、プロテインブレンド、マスゲイナー（ｍａｓｓ  ｇａｉｎｅｒ）、飲用する用意のできたプロテイン、プロテインバー、プロテインシェイク、プロテイン粉末、プロテインショット、タンパク質分離物、エネルギーバー（ｅｎｅｒｇｙ  ｂａｒ）、エネルギーゲル（ｅｎｅｒｇｙ  ｇｅｌ）、エネルギーチュー（ｅｎｅｒｇｙ  ｃｈｅｗ）、エネルギー処方物（ｅｎｅｒｇｙ  ｆｏｒｍｕｌａ）、持久力処方物（ｅｎｄｕｒａｎｃｅ  ｆｏｒｍｕｌａ）、エネルギーサプリメント、栄養補給剤、スポーツ栄養補給剤、乳児用調合乳（ｉｎｆａｎｔ  ｆｏｒｍｕｌａ）（例えば、粉末または液体）および食事代用品が含まれる。医薬品製品には、咳シロップ、カプセル剤および錠剤が含まれるがこれらに限定されない。衛生製品には、化粧品、スキンケア、美容製品、シャンプー、コンディショナー、ローション、クリーム、洗顔料、歯磨き粉、チューインガムおよびマウスウォッシュが含まれるがこれらに限定されない。
【００７６】
加工された消費可能な製品を形成するための消費可能な製品の加工には、凍結させること、冷却すること、加熱すること、焼くこと、ローストすること、直火焼きすること、ゆでること、湯通しすること、包装すること、缶詰にすること、漂白すること、強化すること、乾燥させること、プレスすること、すりつぶすこと、混合すること、部分的に調理すること（ｐａｒｃｏｏｋｉｎｇ）、調理すること、発酵させること（ｐｒｏｏｆｉｎｇ）、マリネすること、カットすること、スライスすること、賽の目切りにすること、粉砕すること、細かく切ること、切り刻むこと、シェイクすること、芯抜きすること、らせん状に切ること（ｓｐｉｒａｌｉｚｉｎｇ）、巻くこと／ローラーで延ばすこと、汁を搾ること、裏漉しすること、濾過すること、練ること、泡立てること（ｗｈｉｓｋｉｎｇ）、強くかき混ぜること、泡立てること（ｗｈｉｐｐｉｎｇ）、すりおろすこと、詰め物をすること、皮をむくこと、種を取り除くこと、燻すこと、保存処理すること、塩漬けにすること／塩を加えること（ｓａｌｔｉｎｇ）、保存すること、ピクルスにすること、発酵させること（ｆｅｒｍｅｎｔｉｎｇ）、均質化すること、低温殺菌すること、滅菌すること、安定化すること、ブレンドすること、ピューレにすること、栄養価を高めること、精錬すること、水素化すること、熟成させること、保存期間を延長させること、または酵素を添加することが含まれ得るがこれらに限定されない。
【００７７】
本明細書で使用する場合、用語「溶媒」とは、組成物または組成物の１つもしくは複数の要素、例えばタンパク質と混合され得る、あるいはそれらを溶解するために使用され得る、液体を指す。溶媒の非限定的な例には、水、エタノールおよびイソプロパノールが含まれる。この溶媒は、飲用であり得る。溶媒は、水であり得る。水の非限定的な例には、精製水、蒸留水、二重蒸留水、脱イオン水、蒸留脱イオン水、飲用水、井戸水、水道水、湧水、瓶詰め飲用水、炭酸水、ミネラルウォーター、フレーバーウォーター、またはそれらの任意の組合せが含まれる。溶媒は、２種またはそれ超の別個の溶媒の組合せであり得る。
【００７８】
動物を使用しない卵白産生系の概要
【００７９】
宿主細胞（例えば、酵母）における組換え発現を介して卵白のタンパク質要素を産生するため、および／またはｉｎ  ｖｉｔｒｏ培養された卵管細胞の分泌物から卵白タンパク質を精製するための方法が、本明細書で提供される。精製されたタンパク質は、確立された方法（例えば、噴霧乾燥）を使用して貯蔵され、粉末化製品として包装され、またはコンシステンシー、味、機能的特性および／もしくは外観が動物由来の卵白と類似する卵白タンパク質組成物として再構成された形態で販売され得る。個々の構成成分の非存在または存在量は、独立して調整できるので、卵白タンパク質組成物のタンパク質構成成分の異なる製剤が達成され得る。一実施形態では、小児において即時型の食物過敏症を引き起こし得る卵白中の主要な食物アレルゲン、オボムコイドは、低減されたアレルゲン性の卵白製品を生産するために、最終的な製剤において排除され、または遺伝子改変および／もしくはグリコシル化され得る。
【００８０】
鳥類の卵は、一般的な食物供給源であり、調理における多用途の成分である。卵は一般に、卵殻、膜、卵白および卵黄を含有する。卵白または卵白アルブミンは、およそ１０％のタンパク質、８８％の水、および１〜２％の炭水化物、ミネラルおよび脂質を含有する。卵白タンパク質には、オボアルブミン（約５４％）、オボトランスフェリンまたはコンアルブミン（約１２％）、オボムコイド（約１１％）、オボグロブリンＧ２（約４％）、オボグロブリンＧ３（約４％）、オボムチン（約３．５％）、リゾチーム（約３．４％）、オボインヒビター（約１．５％）、オボ糖タンパク質（約１．０％）、フラボタンパク質またはオボフラボタンパク質（ｏｖｏｆｌａｖｏｐｒｏｔｅｉｎ）（約０．８％）、オボマクログロブリン（約０．５％）、シスタチン（約０．０５％）、アビジン（約０．０５％）、オボスタチン、オボアルブミン関連タンパク質Ｘ、オボアルブミン関連タンパク質Ｙ、テンプ、クラスタリン、ＣＨ２１、ＶＭＯ−１、ビテロゲニン、透明帯Ｃタンパク質、オボトランスフェリンＢＣ型、オボインヒビター前駆体、オボムコイド前駆体、クラスタリン前駆体、Ｈｅｐ２１タンパク質前駆体、オボ糖タンパク質前駆体、細胞外脂肪酸結合タンパク質、細胞外脂肪酸結合タンパク質前駆体、プロスタグランジンＤ２シンターゼ脳前駆体、マーカータンパク質、ビテロゲニン−１、ビテロゲニン−２、ビテロゲニン−２前駆体、ビテロゲニン−３、リボフラビン結合タンパク質、ヘモペキシン、血清アルブミン前駆体、アポリポタンパク質Ｄ、オボセクレトグロブリン、Ｈｅｐ２１、グルタチオンペルオキシダーゼ３、リポカリン型プロスタグランジンＤシンターゼ／軟骨形成関連リポカリン、アポビテレニン−１、ｄｉｃｋｋｏｐｆ関連タンパク質３、ガリナシン−１１（ＶＭＯ−ＩＩ、β−デフェンシン−１１）、血清アルブミン（α−リベチン）、ガリン、分泌型トリプシン阻害剤、リンパ球抗原８６、アクチン、Ｉｇμ鎖Ｃ領域、スルフヒドリルオキシダーゼ１、ヒストンＨ４、アンギオポエチン様タンパク質３、ユビキチン、オボカリキシン−３２、多量体免疫グロブリン受容体、ペプチジル−プロリル−シス／トランスイソメラーゼＢ、アミノペプチダーゼＥｙ、プレイオトロフィン、ミッドカイン、レニン／プロレニン受容体、ＴＩＭＰ−２、ＴＩＭＰ−３、ヒストンＨ２Ｂバリアント、Ｉｇλ鎖、ＦＡＭＣ３タンパク質、α−エノラーゼ、６０Ｓ酸性リボソームタンパク質Ｐ１、サイトタクチン／テネイシン、ＣＥＰＵ−１、セレノプロテイン、伸長因子１−α１、精巣上体分泌タンパク質、Ｅ１、１４−３−３タンパク質ζ（ゼータ）、オルファクトメジン様タンパク質３、グルタチオンＳ−トランスフェラーゼ２、β−２−ミクログロブリン、ＲＧＤ−ＣＡＰ、アポリポタンパク質Ｂ、ゴルジ体タンパク質１、コクリン、プロテアソームサブユニットα型−７、アポリポタンパク質Ａ−Ｉ、真核生物開始因子４Ａ−ＩＩ、ＡＳＰＩＣ／軟骨酸性タンパク質１、トリオースリン酸イソメラーゼ、プロテアソームサブユニットα−型、Ｉｇλ鎖Ｃ−領域、プロコラーゲン−リシン２−オキソグルタル酸５−ジオキシゲナーゼ１、ＡＤＰ−リボシル化因子５、カルモジュリン、タンパク質ジスルフィドイソメ��ーゼ、アネキシンＩ、伸長因子２、ペルオキシレドキシン−１、ＨＳＰ７０、タンパク質ジスルフィドイソメラーゼＡ３、カルレティキュリン、４０Ｓリボソームタンパク質ＳＡ／ラミニン受容体１、α−アクチニン−４、腫瘍壊死因子関連アポトーシス誘導リガンド、ビタミンＤ結合タンパク質、セマフォリン−３Ｃ、エンドプラスミン、カタラーゼ、肝α−アミラーゼ、移行型ＥＲ  ＡＴＰａｓｅ、カドヘリン−１、アンギオテンシン変換酵素、骨形成タンパク質１、グアニンヌクレオチド結合タンパク質サブユニットβ２様１、ヒスチジンアンモニアリアーゼ、アネキシンＡ２、β−カテニン、ＲＡＢ−ＧＤＰ解離阻害剤、ラミン−Ａ、オボクレイジン−１１６、アミノペプチダーゼ、ＨＳＰ９０−α、低酸素上方調節タンパク質１、ヒートショック同族タンパク質ＨＳＰ９０β、ＡＴＰ−クエン酸シンターゼおよびミオシン−９が含まれ得るがこれらに限定されない。
【００８１】
一態様では、本開示は、卵白タンパク質組成物を産生する方法であって、２種またはそれ超の卵白タンパク質を組換え発現させるステップ；および２種またはそれ超の卵白タンパク質を混合するステップを含む、方法を提供する。一部の場合には、卵白タンパク質は、オボアルブミン、オボトランスフェリン、オボムコイド、Ｇ１６２Ｍ  Ｆ１６７Ａオボムコイド、オボグロブリンＧ２、オボグロブリンＧ３、α−オボムチン、β−オボムチン、リゾチーム、オボインヒビター、オボ糖タンパク質、フラボタンパク質、オボマクログロブリン、オボスタチン、シスタチン、アビジン、オボアルブミン関連タンパク質Ｘ、オボアルブミン関連タンパク質Ｙ、およびそれらの任意の組合せからなる群から、例えば、オボアルブミン、オボトランスフェリン、オボムコイド、Ｇ１６２Ｍ  Ｆ１６７Ａオボムコイド、オボグロブリンＧ２、オボグロブリンＧ３、リゾチーム、オボインヒビター、オボ糖タンパク質、フラボタンパク質、オボマクログロブリン、オボスタチン、シスタチン、アビジン、オボアルブミン関連タンパク質Ｘ、オボアルブミン関連タンパク質Ｙ、およびそれらの任意の組合せからなる群から、選択される。２種またはそれ超の卵白タンパク質を組換え発現させるステップは、１つまたは複数の宿主細胞において生じ得る。方法は、１つまたは複数の宿主細胞から、２種またはそれ超の卵白タンパク質を分泌させるステップをさらに含み得る。２種またはそれ超の卵白タンパク質を組換え発現させるステップは、無細胞タンパク質合成を使用して生じ得る。方法は、食品添加物を卵白タンパク質組成物に添加するステップをさらに含み得る。方法は、卵白タンパク質組成物を脱糖するステップ、卵白タンパク質組成物を安定化するステップ、または卵白タンパク質組成物からグルコースを除去するステップをさらに含み得る。方法は、卵白タンパク質組成物を低温殺菌するステップまたは超低温殺菌するステップをさらに含み得る。方法は、卵白タンパク質組成物を乾燥させるステップをさらに含み得る。方法は、２種またはそれ超の卵白タンパク質のうち１種または複数を、酵素的に、化学的にまたは機械的に消化するステップをさらに含み得る。卵白タンパク質のうち１種または複数の処理は、組成物の機能的特性を改善し得る、例えば、増強された発泡または溶解度を提供する。
【００８２】
一態様では、本開示は、１種もしくは複数の組換え卵白タンパク質またはそれらの断片を含む、加工された消費可能な製品を提供する。一部の場合には、１種または複数の卵白タンパク質は、オボアルブミン、オボトランスフェリン、オボムコイド、Ｇ１６２Ｍ  Ｆ１６７Ａオボムコイド、オボグロブリンＧ２、オボグロブリンＧ３、α−オボムチン、β−オボムチン、リゾチーム、オボインヒビター、オボ糖タンパク質、フラボタンパク質、オボマクログロブリン、オボスタチン、シスタチン、アビジン、オボアルブミン関連タンパク質Ｘ、オボアルブミン関連タンパク質Ｙ、およびそれらの任意の組合せからなる群から、例えば、オボアルブミン、オボトランスフェリン、オボムコイド、Ｇ１６２Ｍ  Ｆ１６７Ａオボムコイド、オボグロブリンＧ２、オボグロブリンＧ３、リゾチーム、オボインヒビター、オボ糖タンパク質、フラボタンパク質、オボマクログロブリン、オボスタチン、シスタチン、アビジン、オボアルブミン関連タンパク質Ｘ、オボアルブミン関連タンパク質Ｙ、およびそれらの任意の組合せからなる群から、選択される。一部の場合には、加工された消費可能な製品は、２種もしくはそれ超、３種もしくはそれ超、４種もしくはそれ超、５種もしくはそれ超、または６種もしくはそれ超の、卵白タンパク質またはその断片を含む。一部の場合には、加工された消費可能な製品は、１種もしくは複数、２種もしくはそれ超、３種もしくはそれ超、５種もしくはそれ超、１０種もしくはそれ超、２０種もしくはそれ超、または５０種もしくはそれ超の卵白タンパク質を欠く。加工された消費可能な製品は、オボムコイドを欠き得る。一部の場合には、加工された消費可能な製品は、１種もしくは複数、２種もしくはそれ超、３種もしくはそれ超、５種もしくはそれ超、１０種もしくはそれ超、または２０種もしくはそれ超の卵黄タンパク質を欠き得る。一部の場合には、加工された消費可能な製品は、食品製品、飲料製品、栄養補助食品、食品添加物、医薬品製品、衛生製品、およびそれらの任意の組合せからなる群から、例えば、食品製品、飲料製品、およびそれらの任意の組合せからなる群から、選択される。
【００８３】
一態様では、本開示は、消費可能な製品を生産する方法であって、１種または複数の卵白タンパク質を組換え発現させるステップ；およびこの１種または複数の卵白タンパク質を、１種または複数の成分と混合して、消費可能な製品を生産するステップを含む、方法を提供する。一部の場合には、１種または複数の成分は、食品添加物、卵白タンパク質または組換え卵白タンパク質を含む。一部の場合には、１種または複数の成分は、卵白タンパク質を含まない。一部の場合には、１種または複数の卵白タンパク質は、２種もしくはそれ超、３種もしくはそれ超、４種もしくはそれ超、または５種もしくはそれ超の卵白タンパク質を含み得る。
【００８４】
一態様では、本開示は、卵白タンパク質またはその断片を産生するための方法であって、卵白タンパク質またはその断片を宿主細胞において組換え発現させるステップを含み、宿主細胞が、卵白タンパク質またはその断片をコードするポリヌクレオチドを含み、卵白タンパク質が、オボグロブリンＧ２、オボグロブリンＧ３、α−オボムチン、β−オボムチン、オボ糖タンパク質、フラボタンパク質、オボマクログロブリン、シスタチン、およびそれらの任意の組合せからなる群から、例えば、オボグロブリンＧ２、オボグロブリンＧ３、オボ糖タンパク質、フラボタンパク質、オボマクログロブリン、シスタチン、およびそれらの任意の組合せからなる群から、選択される、方法を提供する。方法は、宿主細胞から、卵白タンパク質またはその断片を分泌させるステップをさらに含み得る。方法は、卵白タンパク質またはその断片を精製するステップをさらに含み得る。方法は、第２の卵白タンパク質またはその断片を宿主細胞において組換え発現させるステップをさらに含み得る。一部の場合には、断片は、卵白タンパク質の少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％または５０％を構成する。
【００８５】
一部の場合には、タンパク質の断片は、約または少なくとも１０、５０、１００、２００、３００、４００、５００、６００、７００、８００、９００、１０００、１１００、１２００、１３００、１４００、１５００、１６００、１７００、１８００、１９００または２０００アミノ酸長であり得る。一部の場合には、タンパク質の断片は、最大で１０、５０、１００、２００、３００、４００、５００、６００、７００、８００、９００、１０００、１１００、１２００、１３００、１４００、１５００、１６００、１７００、１８００、１９００または２０００アミノ酸長であり得る。
【００８６】
一部の場合には、タンパク質の断片は、タンパク質の約または少なくとも１％、５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％または１００％であり得る。一部の場合には、タンパク質の断片は、タンパク質の最大で１％、５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％または１００％であり得る。
【００８７】
一部の場合には、タンパク質の断片は、約または少なくとも１０、５０、１００、２００、３００、４００、５００、６００、７００、８００、９００または１０００ｋＤａであり得る。一部の場合には、タンパク質の断片は、最大で１０、５０、１００、２００、３００、４００、５００、６００、７００、８００、９００または１０００ｋＤａであり得る。
【００８８】
一態様では、本開示は、２種もしくはそれ超の卵白タンパク質またはそれらの断片を産生するための方法であって、２種もしくはそれ超の卵白タンパク質またはそれらの断片を宿主細胞において組換え発現させるステップを含む、方法を提供する。宿主細胞は、２種もしくはそれ超の卵白タンパク質またはそれらの断片をコードする１つまたは複数のポリヌクレオチドを含み得る。方法は、宿主細胞から、２種もしくはそれ超の卵白タンパク質またはそれらの断片を分泌させるステップをさらに含み得る。方法は、２種もしくはそれ超の卵白タンパク質またはそれらの断片を精製するステップをさらに含み得る。一部の場合には、２種またはそれ超の卵白タンパク質は、オボアルブミン、オボトランスフェリン、オボムコイド、Ｇ１６２Ｍ  Ｆ１６７Ａオボムコイド、オボグロブリンＧ２、オボグロブリンＧ３、α−オボムチン、β−オボムチン、リゾチーム、オボインヒビター、オボ糖タンパク質、フラボタンパク質、オボマクログロブリン、オボスタチン、シスタチン、アビジン、オボアルブミン関連タンパク質Ｘ、オボアルブミン関連タンパク質Ｙ、およびそれらの任意の組合せからなる群から、例えば、オボアルブミン、オボトランスフェリン、オボムコイド、Ｇ１６２Ｍ  Ｆ１６７Ａオボムコイド、オボグロブリンＧ２、オボグロブリンＧ３、リゾチーム、オボインヒビター、オボ糖タンパク質、フラボタンパク質、オボマクログロブリン、オボスタチン、シスタチン、アビジン、オボアルブミン関連タンパク質Ｘ、オボアルブミン関連タンパク質Ｙ、およびそれらの任意の組合せからなる群から、選択される。
【００８９】
一態様では、本開示は、オボグロブリンＧ２、オボグロブリンＧ３、α−オボムチン、β−オボムチン、オボ糖タンパク質、フラボタンパク質、オボマクログロブリン、シスタチン、およびそれらの任意の組合せからなる群から、例えば、オボグロブリンＧ２、オボグロブリンＧ３、オボ糖タンパク質、フラボタンパク質、オボマクログロブリン、シスタチン、およびそれらの任意の組合せからなる群から選択される、単離された組換え卵白タンパク質を提供する。単離された組換え卵白タンパク質は、卵白中の卵白タンパク質とは異なる、グリコシル化、アセチル化またはリン酸化パターンを有し得る。単離された組換え卵白タンパク質は、卵白中の卵白タンパク質とは異なる融解温度、例えば、卵白中の卵白タンパク質と比較してより高いまたはより低い融解温度を有し得る。一部の場合には、単離された組換え卵白タンパク質は、約または少なくとも６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４または９５℃の融解温度を有する。一部の場合には、単離された組換え卵白タンパク質は、最大で６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４または９５℃の融解温度を有する。一部の場合には、単離された組換え卵白タンパク質は、卵白中の卵白タンパク質と比較して、１つまたは複数のアミノ酸挿入、欠失または置換を含み得る。一部の場合には、単離された組換え卵白タンパク質は、卵白中の卵白タンパク質と比較して、約または少なくとも０、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、２０、２５、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１５０、２００、２５０、３００、３５０、４００、４５０、５００、６００、７００、８００、９００または１０００のアミノ酸挿入、欠失および／または置換を有し得る。一部の場合には、単離された組換え卵白タンパク質は、卵白中の卵白タンパク質と比較して、最大で０、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、２０、２５、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１５０、２００、２５０、３００、３５０、４００、４５０、５００、６００、７００、８００、９００または１０００のアミノ酸挿入、欠失および／または置換を有し得る。一部の場合には、単離された組換え卵白タンパク質は、配列番号１、配列番号２、配列番号３、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、配列番号９、配列番号１０、配列番号１１、配列番号１２、配列番号１３、およびそれらの任意の組合せからなる群から選択される。
【００９０】
一態様では、本開示は、トリプトファンを含む、単離された変異体オボムコイドを提供する。単離された変異体オボムコイドは、組換え発現され得る。単離された変異体オボムコイドは、完全タンパク質であり得る。一部の場合には、単離された変異体オボムコイドは、最適にアラインさせた場合、配列番号３と比較して、１つもしくは複数、２つもしくはそれ超、３つもしくはそれ超、４つもしくはそれ超、５つもしくはそれ超、または６つもしくはそれ超の、アミノ酸挿入または置換を含む。一部の場合には、単離された変異体オボムコイドは、１つまたは複数のアミノ酸置換を含み、アミノ酸置換は、１つもしくは複数、２つもしくはそれ超、３つもしくはそれ超、４つもしくはそれ超、５つもしくはそれ超、または６つもしくはそれ超の、（例えば、最適にアラインさせた場合、配列番号３または配列番号４と比較して、３７位、４６位、７３位、１０２位、１４１位または１６１位における）チロシンからトリプトファンへの置換を含む。一部の場合には、単離された変異体オボムコイドは、最適にアラインさせた場合、配列番号３と比較して、最大で４、５、６または１０個の、アミノ酸挿入または置換を含む。一部の場合には、単離された変異体オボムコイドは、１つもしくは複数、２つもしくはそれ超、３つもしくはそれ超、または４つもしくはそれ超のトリプトファン残基を含む。一部の場合には、単離された変異体オボムコイドは、Ｎ末端またはＣ末端において、１つもしくは複数、２つもしくはそれ超、３つもしくはそれ超、または４つもしくはそれ超のトリプトファン残基を含む。単離された変異体オボムコイドは、最適にアラインさせた場合、配列番号３と比較して、１６２位におけるメチオニンおよび１６７位におけるアラニンを含み得る。
【００９１】
単離された変異体オボムコイドは、野生型オボムコイドと比較して、低減されたアレルゲン性を有し得る。一部の場合には、単離された変異体オボムコイドは、野生型オボムコイドと比較して、約または少なくとも０％、１％、５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％または９５％のアレルゲン性を有する。一部の場合には、単離された変異体オボムコイドは、野生型オボムコイドと比較して、最大で０％、１％、５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％または９５％のアレルゲン性を有する。一部の場合には、低減されたアレルゲン性は、皮膚プリックテスト、血液検査または食物経口負荷を使用して測定され得る。
【００９２】
単離された変異体オボムコイドは、野生型オボムコイドと比較して、増強された消化性を有し得る。一部の場合には、単離された変異体オボムコイドは、野生型オボムコイドと比較して、約または少なくとも１００％、１０５％、１１０％、１１５％、１２０％、１２５％、１３０％、１３５％、１４０％、１４５％、１５０％、１６０％、１７０％、１８０％、１９０％、２００％、２１０％、２２０％、２３０％、２４０％、２５０％、２６０％、２７０％、２８０％、２９０％、３００％、３５０％、４００％、４５０％または５００％の消化性を有する。一部の場合には、単離された変異体オボムコイドは、野生型オボムコイドと比較して、最大で１００％、１０５％、１１０％、１１５％、１２０％、１２５％、１３０％、１３５％、１４０％、１４５％、１５０％、１６０％、１７０％、１８０％、１９０％、２００％、２１０％、２２０％、２３０％、２４０％、２５０％、２６０％、２７０％、２８０％、２９０％、３００％、３５０％、４００％、４５０％または５００％の消化性を有する。一部の場合には、増強された消化性は、タンパク質代謝の速度、またはプロテアーゼもしくは酸による分解もしくは消化の速度として、ｉｎ  ｖｉｖｏまたはｉｎ  ｖｉｔｒｏで測定され得る。
【００９３】
単離された変異体オボムコイドは、野生型オボムコイドとは異なる、グリコシル化、アセチル化またはリン酸化パターンを有し得る。単離された変異体オボムコイドは、野生型オボムコイドとは異なる融解温度を有し得る。単離された変異体オボムコイドは、野生型オボムコイドと比較して、１つまたは複数のアミノ酸挿入、欠失または置換を含み得る。一部の場合には、単離された変異体オボムコイドは、野生型オボムコイドと比較して、約または少なくとも０、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２５、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０または１００のアミノ酸挿入、欠失および／または置換を有し得る。一部の場合には、単離された変異体オボムコイドは、野生型オボムコイドと比較して、最大で０、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２５、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０または１００のアミノ酸挿入、欠失および／または置換を有し得る。
【００９４】
一態様では、本開示は、本明細書に記載される単離された組換え卵白タンパク質または単離された変異体オボムコイド；および１種または複数の卵白タンパク質を含む、卵白タンパク質組成物を提供する。１種または複数の卵白タンパク質は、組換え発現され得る。
【００９５】
一態様では、本開示は、２種またはそれ超の組換え卵白タンパク質を含む卵白タンパク質組成物を提供する。一部の場合には、２種またはそれ超の組換え卵白タンパク質は、オボアルブミン、オボトランスフェリン、オボムコイド、Ｇ１６２Ｍ  Ｆ１６７Ａオボムコイド、オボグロブリンＧ２、オボグロブリンＧ３、α−オボムチン、β−オボムチン、リゾチーム、オボインヒビター、オボ糖タンパク質、フラボタンパク質、オボマクログロブリン、オボスタチン、シスタチン、アビジン、オボアルブミン関連タンパク質Ｘ、オボアルブミン関連タンパク質Ｙ、およびそれらの任意の組合せからなる群から、例えば、オボアルブミン、オボトランスフェリン、オボムコイド、Ｇ１６２Ｍ  Ｆ１６７Ａオボムコイド、オボグロブリンＧ２、オボグロブリンＧ３、リゾチーム、オボインヒビター、オボ糖タンパク質、フラボタンパク質、オボマクログロブリン、オボスタチン、シスタチン、アビジン、オボアルブミン関連タンパク質Ｘ、オボアルブミン関連タンパク質Ｙ、およびそれらの任意の組合せからなる群から、選択される。卵白タンパク質組成物は、オボアルブミンを含み得る。卵白タンパク質組成物は、本明細書に記載される単離された組換え卵白タンパク質を含み得る。卵白タンパク質組成物は、本明細書に記載される単離された変異体オボムコイドを含み得る。
【００９６】
卵白タンパク質は、単一の種、例えば、Ｇａｌｌｕｓ  ｇａｌｌｕｓ  ｄｏｍｅｓｔｉｃｕｓに由来する配列を有し得る。一部の場合には、単一の種は、Ｇａｌｌｕｓ  ｇａｌｌｕｓ  ｄｏｍｅｓｔｉｃｕｓではない。卵白タンパク質は、１つよりも多い種に由来する配列を有し得る。一部の場合には、卵白タンパク質は、飼鳥類、家禽、水鳥、猟鳥、ニワトリ、ウズラ、シチメンチョウ、アヒル、ダチョウ、ガチョウ、カモメ、ホロホロチョウ、キジ、エミュー、およびそれらの任意の組合せからなる群から選択される鳥類に由来する配列を有する。一部の場合には、卵白タンパク質組成物は、３種もしくはそれ超、４種もしくはそれ超、または５種もしくはそれ超の卵白タンパク質を含む。一部の場合には、卵白タンパク質組成物は、最大で５、１０、１５または２０種の卵白タンパク質を含む。卵白タンパク質組成物は、本明細書に開示される単離された変異体オボムコイドを含み得る。
【００９７】
一部の場合には、組換え卵白タンパク質は、卵白中の卵白タンパク質と比較して、１つまたは複数のアミノ酸挿入、欠失または置換を含み得る。一部の場合には、組換え卵白タンパク質は、卵白中の卵白タンパク質と比較して、約または少なくとも０、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、２０、２５、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１５０、２００、２５０、３００、３５０、４００、４５０、５００、６００、７００、８００、９００または１０００のアミノ酸挿入、欠失および／または置換を有し得る。一部の場合には、組換え卵白タンパク質は、卵白中の卵白タンパク質と比較して、最大で０、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、２０、２５、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１５０、２００、２５０、３００、３５０、４００、４５０、５００、６００、７００、８００、９００または１０００のアミノ酸挿入、欠失および／または置換を有し得る。例えば、組換えリゾチームは、最適にアラインさせた場合、配列番号９と比較して、６２位においてアミノ酸置換（例えば、チロシンによるトリプトファンの置き換え）を有し得る。
【００９８】
卵白タンパク質組成物は、水をさらに含み得る。一部の場合には、卵白タンパク質組成物は、最大で５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％または９５％の水の百分率を有する。一部の場合には、卵白タンパク質組成物は、８０％から９５％までの範囲内の水の百分率を有する。一部の場合には、卵白タンパク質組成物は、乾燥重量で、少なくとも５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％または９９％のタンパク質を含む。卵白タンパク質組成物は、食品添加物をさらに含み得る。一部の場合には、食品添加物は、甘味料、塩、炭水化物、およびそれらの任意の組合せからなる群から選択される。
【００９９】
卵白タンパク質組成物は、コレステロールを欠き得る。一部の場合には、卵白タンパク質組成物は、乾燥重量で、１０％、５％、４％、３％、２％、１％または０．５％未満の脂肪を含む。卵白タンパク質組成物は、脂肪、飽和脂肪またはトランス脂肪を欠き得る。卵白タンパク質組成物は、グルコースを欠き得る。卵白タンパク質組成物は、１種または複数の卵白タンパク質、例えば、オボムコイドまたはフラボタンパク質を欠き得る。例えば、オボムコイドは、卵白アレルゲンであり、卵白タンパク質組成物におけるその非存在は、卵白タンパク質組成物のアレルゲン性を低減させ得る。別の一例として、フラボタンパク質は、卵白に黄みがかった色を提供し得、卵白タンパク質組成物におけるその非存在は、天然卵白と比較して、卵白タンパク質組成物を白くし、または卵白タンパク質組成物で作製された製品、例えばメレンゲにおいて、より明るい白色を生じ得る。一部の場合には、卵白タンパク質組成物は、２種もしくはそれ超、３種もしくはそれ超、５種もしくはそれ超、１０種もしくはそれ超、２０種もしくはそれ超、または５０種もしくはそれ超の卵白タンパク質を欠く。一部の場合には、卵白タンパク質組成物は、卵でも卵白でも卵黄でもない。
【０１００】
一部の場合には、卵白タンパク質組成物は、酸性、中性または塩基性である。一部の場合には、ｐＨは、約または少なくとも６、６．１、６．２、６．３、６．４、６．５、６．６、６．７、６．８、６．９、７、７．１、７．２、７．３、７．４、７．５、７．６、７．７、７．８、７．９、８、８．１、８．２、８．３、８．４、８．５、８．６、８．７、８．８、８．９、９、９．１、９．２、９．３、９．４、９．５、９．６、９．７、９．８、９．９または１０である。一部の場合には、ｐＨは、最大で６、６．１、６．２、６．３、６．４、６．５、６．６、６．７、６．８、６．９、７、７．１、７．２、７．３、７．４、７．５、７．６、７．７、７．８、７．９、８、８．１、８．２、８．３、８．４、８．５、８．６、８．７、８．８、８．９、９、９．１、９．２、９．３、９．４、９．５、９．６、９．７、９．８、９．９または１０である。一部の場合には、卵白タンパク質組成物は、６から１０までの範囲内のｐＨを有し得る。
【０１０１】
卵白タンパク質組成物は、卵白の泡高よりも高い泡高を有し得る。一部の場合には、卵白タンパク質組成物は、１０ｍｍから６０ｍｍまでの、例えば、３０ｍｍから６０ｍｍまでの範囲内の泡高を有する。一部の場合には、卵白タンパク質組成物は、約または少なくとも１、５、１０、１５、２０、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、５０、５５または６０ｍｍの泡高を有する。一部の場合には、卵白タンパク質組成物は、最大で１、５、１０、１５、２０、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、５０、５５または６０ｍｍの泡高を有する。一部の場合には、卵白タンパク質組成物は、卵白と比較して、約または少なくとも０％、１％、５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、１００％、１０５％、１１０％、１１５％、１２０％、１２５％、１３０％、１３５％、１４０％、１４５％、１５０％、１６０％、１７０％、１８０％、１９０％、２００％、２１０％、２２０％、２３０％、２４０％、２５０％、２６０％、２７０％、２８０％、２９０％、３００％、３５０％、４００％、４５０％または５００％の泡高を有する。一部の場合には、卵白タンパク質組成物は、卵白と比較して、最大で０％、１％、５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、１００％、１０５％、１１０％、１１５％、１２０％、１２５％、１３０％、１３５％、１４０％、１４５％、１５０％、１６０％、１７０％、１８０％、１９０％、２００％、２１０％、２２０％、２３０％、２４０％、２５０％、２６０％、２７０％、２８０％、２９０％、３００％、３５０％、４００％、４５０％または５００％の泡高を有する。
【０１０２】
卵白タンパク質組成物は、（例えば、泡立ての３０分後の時点で）卵白の泡浸出未満の泡浸出を有し得る。一部の場合には、卵白タンパク質組成物は、（例えば、泡立ての３０分後の時点で）最大で１０ｍｍまたは最大で５ｍｍの泡浸出を有し得る。一部の場合には、卵白タンパク質組成物は、約または少なくとも０、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、２０、２５または３０ｍｍの泡浸出を有する。一部の場合には、卵白タンパク質組成物は、最大で０、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、２０、２５または３０ｍｍの泡浸出を有する。一部の場合には、泡浸出は、泡立ての１分後、５分後、１０分後、１５分後、２０分後、３０分後、４０分後、５０分後、１時間後、２時間後、３時間後、４時間後、５時間後、６時間後、７時間後、８時間後、９時間後、１０時間後、１５時間後、２０時間後、２４時間後、２５時間後、３０時間後、または３０時間よりも長い時間後に、測定される。一部の場合には、卵白タンパク質組成物は、卵白と比較して、約または少なくとも０％、１％、５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、１００％、１０５％、１１０％、１１５％、１２０％、１２５％、１３０％、１３５％、１４０％、１４５％、１５０％、１６０％、１７０％、１８０％、１９０％、２００％、２１０％、２２０％、２３０％、２４０％、２５０％、２６０％、２７０％、２８０％、２９０％、３００％、３５０％、４００％、４５０％または５００％の泡浸出を有する。一部の場合には、卵白タンパク質組成物は、卵白と比較して、最大で０％、１％、５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、１００％、１０５％、１１０％、１１５％、１２０％、１２５％、１３０％、１３５％、１４０％、１４５％、１５０％、１６０％、１７０％、１８０％、１９０％、２００％、２１０％、２２０％、２３０％、２４０％、２５０％、２６０％、２７０％、２８０％、２９０％、３００％、３５０％、４００％、４５０％または５００％の泡浸出を有する。
【０１０３】
卵白タンパク質組成物は、卵白の泡強度よりも高い泡強度を有し得る。一部の場合には、卵白タンパク質組成物は、３０ｇから１００ｇまでの範囲内、例えば、４０ｇから１００ｇまでの範囲内の泡強度を有し得る。一部の場合には、卵白タンパク質組成物は、約または少なくとも５、１０、２０、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、９０、１００、１１０、１２０、１３０、１４０、１５０または２００ｇの泡強度を有する。一部の場合には、卵白タンパク質組成物は、最大で５、１０、２０、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、９０、１００、１１０、１２０、１３０、１４０、１５０または２００ｇの泡強度を有する。一部の場合には、卵白タンパク質組成物は、卵白と比較して、約または少なくとも０％、１％、５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、１００％、１０５％、１１０％、１１５％、１２０％、１２５％、１３０％、１３５％、１４０％、１４５％、１５０％、１６０％、１７０％、１８０％、１９０％、２００％、２１０％、２２０％、２３０％、２４０％、２５０％、２６０％、２７０％、２８０％、２９０％、３００％、３５０％、４００％、４５０％または５００％の泡強度を有する。一部の場合には、卵白タンパク質組成物は、卵白と比較して、最大で０％、１％、５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、１００％、１０５％、１１０％、１１５％、１２０％、１２５％、１３０％、１３５％、１４０％、１４５％、１５０％、１６０％、１７０％、１８０％、１９０％、２００％、２１０％、２２０％、２３０％、２４０％、２５０％、２６０％、２７０％、２８０％、２９０％、３００％、３５０％、４００％、４５０％または５００％の泡強度を有する。
【０１０４】
卵白タンパク質組成物は、卵白のゲル強度よりも高いゲル強度を有し得る。一部の場合には、卵白タンパク質組成物は、１００ｇから１５００ｇまで、５００ｇから１５００ｇまで、または７００ｇから１５００ｇまでの範囲内のゲル強度を有し得る。一部の場合には、卵白タンパク質組成物は、約または少なくとも１０、５０、１００、１５０、２００、２５０、３００、３５０、４００、４５０、５００、５５０、６００、６５０、７００、７５０、８００、８５０、９００、９５０、１０００、１０５０、１１００、１１５０、１２００、１２５０、１３００、１３５０、１４００、１４５０または１５００ｇのゲル強度を有する。一部の場合には、卵白タンパク質組成物は、最大で１０、５０、１００、１５０、２００、２５０、３００、３５０、４００、４５０、５００、５５０、６００、６５０、７００、７５０、８００、８５０、９００、９５０、１０００、１０５０、１１００、１１５０、１２００、１２５０、１３００、１３５０、１４００、１４５０または１５００ｇのゲル強度を有する。一部の場合には、卵白タンパク質組成物は、卵白と比較して、約または少なくとも０％、１％、５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、１００％、１０５％、１１０％、１１５％、１２０％、１２５％、１３０％、１３５％、１４０％、１４５％、１５０％、１６０％、１７０％、１８０％、１９０％、２００％、２１０％、２２０％、２３０％、２４０％、２５０％、２６０％、２７０％、２８０％、２９０％、３００％、３５０％、４００％、４５０％または５００％のゲル強度を有する。一部の場合には、卵白タンパク質組成物は、卵白と比較して、最大で０％、１％、５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、１００％、１０５％、１１０％、１１５％、１２０％、１２５％、１３０％、１３５％、１４０％、１４５％、１５０％、１６０％、１７０％、１８０％、１９０％、２００％、２１０％、２２０％、２３０％、２４０％、２５０％、２６０％、２７０％、２８０％、２９０％、３００％、３５０％、４００％、４５０％または５００％のゲル強度を有する。
【０１０５】
一部の場合には、卵白タンパク質組成物は、少なくとも１、２、３または６ヵ月間の保存期間を有し得る。
【０１０６】
卵白タンパク質組成物は、卵白と比較して低減されたアレルゲン性を有し得る。低減されたアレルゲン性は、例えば、１種もしくは複数の卵白タンパク質（例えば、オボムコイド、オボアルブミン、オボトランスフェリン、リゾチーム）の除去、または卵白タンパク質内の１つもしくは複数のアレルゲン性部位もしくはドメインの除去もしくは変異（例えば、１つまたは複数のアミノ酸挿入、欠失および／または置換）を介して、達成され得る。一部の場合には、卵白タンパク質組成物は、卵白と比較して、約または少なくとも０％、１％、５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％または９５％のアレルゲン性を有する。一部の場合には、卵白タンパク質組成物は、卵白と比較して、最大で０％、１％、５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％または９５％のアレルゲン性を有する。一部の場合には、低減されたアレルゲン性は、皮膚プリックテスト、血液検査または食物経口負荷を使用して測定され得る。
【０１０７】
卵白タンパク質組成物は、液体、固体または粉末として製剤化され得る。卵白タンパク質組成物は、冷蔵または凍結され得る。
【０１０８】
一態様では、本開示は、本明細書に記載される単離された組換え卵白タンパク質または単離された変異体オボムコイドをコードするポリヌクレオチドを提供する。ポリヌクレオチドは、コドン最適化され得る。ポリヌクレオチドは、ＤＮＡまたはＲＮＡであり得る。
【０１０９】
本明細書に記載されるポリヌクレオチドは、化学合成、分子クローニングもしくは組換え方法、ＤＮＡもしくは遺伝子アセンブリ方法、人工遺伝子合成、ＰＣＲ、またはそれらの任意の組合せを使用して取得され得る。化学的ポリヌクレオチド合成の方法は、当該分野で周知であり、本明細書で詳細に記載する必要はない。当業者は、所望のＤＮＡ配列を産生するために、本明細書で提供される配列、および市販のＤＮＡ合成機を使用できる。組換え方法を使用してポリヌクレオチドを調製するために、所望の配列を含むポリヌクレオチドが、適切なクローニングベクターまたは発現ベクター中に挿入され得、クローニングベクターまたは発現ベクターは、次に、本明細書でさらに議論するように、複製および増幅のために適切な宿主細胞中に導入され得る。ポリヌクレオチドは、当該分野で公知の任意の手段によって、宿主細胞中に挿入され得る。細胞は、例えば、直接的取込み、エンドサイトーシス、トランスフェクション、Ｆ接合、ＰＥＧ媒介性プロトプラスト融合、Ａｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｔｕｍｅｆａｃｉｅｎｓ媒介性形質転換、微粒子銃形質転換、化学的形質転換またはエレクトロポレーションによって外因性ポリヌクレオチドを導入することによって、形質転換され得る。一旦導入されると、外因性ポリヌクレオチドは、非組込み発現ベクター（例えば、プラスミド）として細胞内に維持され、または宿主細胞ゲノム中に組み込まれ得る。こうして増幅されたポリヌクレオチドは、当該分野内で周知の方法によって、宿主細胞から単離され得る。あるいは、核酸増幅方法（例えば、ＰＣＲ）が、ＤＮＡ配列の複製を可能にする。
【０１１０】
ＲＮＡは、適切な発現ベクター中の単離されたＤＮＡを使用し、適切な宿主細胞中にそれを挿入することによって、取得され得る。細胞が複製し、ＤＮＡがＲＮＡに転写される場合、ＲＮＡは、当業者に周知の方法を使用して単離され得る。あるいは、ＲＮＡは、例えば、ＲＮＡポリメラーゼを使用するｉｎ  ｖｉｔｒｏ転写反応によって、単離されたＤＮＡを転写することによって取得され得る。あるいは、ＲＮＡは、化学合成を使用して取得され得る。
【０１１１】
適切なクローニングベクターは、標準的な技術に従って構築され得るか、または当該分野で入手可能な多数のクローニングベクターから選択され得る。選択されるクローニングベクターは、使用が意図される宿主細胞に従って変動し得るが、有用なクローニングベクターは、自己複製する能力を一般に有し、特定の制限エンドヌクレアーゼに対する単一の標的を有し得、および／または発現ベクターを含有するクローンを選択する際に使用され得るマーカーについての遺伝子を運搬し得る。適切な例には、プラスミドおよび細菌ウイルス、例えば、ｐＵＣ１８、ｐＵＣ１９、Ｂｌｕｅｓｃｒｉｐｔ（例えば、ｐＢＳ  ＳＫ＋）およびその誘導体、ｍｐ１８、ｍｐ１９、ｐＢＲ３２２、ｐＭＢ９、ＣｏｌＥ１、ｐＣＲ１、ＲＰ４、ファージＤＮＡ、ならびにシャトルベクター、例えば、ｐＳＡ３およびｐＡＴ２８が含まれる。これらおよび多数の他のクローニングベクターは、ＢｉｏＲａｄ、ＳｔｒａｔｅｇｅｎｅおよびＩｎｖｉｔｒｏｇｅｎなどの供給業者から入手可能である。
【０１１２】
本明細書に記載されるポリヌクレオチドは、シグナルペプチドをさらにコードし得る。シグナル配列、標的化シグナル、局在化シグナル、局在化配列、分泌シグナル、輸送ペプチド、リーダー配列またはリーダーペプチドとしても公知のシグナルペプチドは、タンパク質またはポリヌクレオチドの分泌を支持し得る。宿主細胞からの、組換えタンパク質または異種的に発現されたタンパク質の細胞外分泌は、タンパク質の精製を促進し得る。例えば、細胞培養物上清からの組換えタンパク質の回収は、宿主細胞の細胞内タンパク質を含むタンパク質の複雑な混合物を放出するために宿主細胞を溶解させることよりも好ましい場合がある。分泌は、異種タンパク質の細胞内過剰発現が宿主細胞に対して有し得る有害効果、例えば、毒性または減少した増殖速度を、低減させ得る。分泌は、合成されたタンパク質を貯蔵するための限定的な体積の宿主細胞中での細胞内発現と比較して、増加したタンパク質産生を可能にし得る。タンパク質の分泌性の産生は、翻訳後修飾またはプロセシング（例えば、タンパク質フォールディング、ジスルフィド結合の形成、グリコシル化）を促進し得る。
【０１１３】
分泌型タンパク質は、Ｎ末端シグナルペプチドを有する前駆体として最初に発現され得る。シグナルペプチドは、１〜５残基の正に荷電したＮ末端（ｎ−領域）、６〜１６アミノ酸の中央の疎水性コア（ｈ−領域）、およびシグナルペプチダーゼの認識部位である３〜７アミノ酸の極性領域（ｃ−領域）を含有し得る。シグナルペプチドは、細胞からの分泌の運命にあるプレタンパク質のＮ末端に位置し得る。一部の場合、例えば、ニワトリオボアルブミンおよびヒトプラスミノーゲンアクチベーターでは、シグナルペプチドは、内部にある。シグナルペプチドは、１５から５０アミノ酸長であり得る。
【０１１４】
シグナルペプチドは、小胞体の膜を横切って、発現された前駆体プレタンパク質を指向させ得る。シグナルペプチドは、例えば、トランスロケーションの間またはトランスロケーションの完了の直後に、シグナルペプチダーゼによって、タンパク質の残部から切断され得る。タンパク質は、ゴルジ体に輸送され、細胞内区画における保持のためのシグナルを保有しない限り、分泌され得る。
【０１１５】
シグナルペプチドは、卵白タンパク質または変異体オボムコイドのＮ末端に位置し得る。
【０１１６】
シグナルペプチドは、タンパク質の前駆体（例えば、プレプロペプチド、プレタンパク質）に由来し得る。シグナルペプチドは、酸性ホスファターゼ（例えば、Ｐｉｃｈｉａ  ｐａｓｔｏｒｉｓ  ＰＨＯ１）、アルブミン（例えば、ニワトリ）、細胞外アルカリプロテアーゼ（例えば、Ｙａｒｒｏｗｉａ  ｌｉｐｏｌｙｔｉｃａ  ＸＲＰ２）、α−接合因子（α−ＭＦ、ＭＡＴα）（例えば、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）、アミラーゼ（例えば、α−アミラーゼ、Ｒｈｉｚｏｐｕｓ  ｏｒｙｚａｅ、Ｓｃｈｉｚｏｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｐｏｍｂｅ推定アミラーゼＳＰＣＣ６３．０２ｃ（Ａｍｙ１））、β−カゼイン（例えば、ウシ）、炭水化物結合モジュールファミリー２１（ＣＢＭ２１）−デンプン結合ドメイン、カルボキシペプチダーゼＹ（例えば、Ｓｃｈｉｚｏｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｐｏｍｂｅ  Ｃｐｙ１）、セロビオヒドロラーゼＩ（例えば、Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ  ｒｅｅｓｅｉ  ＣＢＨ１）、ジペプチジルプロテアーゼ（例えば、Ｓｃｈｉｚｏｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｐｏｍｂｅ推定ジペプチジルプロテアーゼＳＰＢＣ１７１１．１２（Ｄｐｐ１））、グルコアミラーゼ（例えば、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ａｗａｍｏｒｉ）、ヒートショックタンパク質（例えば、細菌Ｈｓｐ７０）、ヒドロホビン（例えば、Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ  ｒｅｅｓｅｉ  ＨＢＦＩ、Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ  ｒｅｅｓｅｉ  ＨＢＦＩＩ）、イヌラーゼ、インベルターゼ（例えば、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ  ＳＵＣ２）、キラータンパク質またはキラー毒素（例えば、１２８ｋＤａ  ｐＧＫＬキラータンパク質、Ｋ１キラー毒素のα−サブユニット（例えば、Ｋｌｕｙｖｅｒｏｍｙｃｅｓ  ｌａｃｔｉｓ）、Ｋ１毒素ＫＩＬＭ１、Ｋ２８プレプロ毒素、Ｐｉｃｈｉａ  ａｃａｃｉａｅ）、ロイシン−リッチ人工シグナルペプチドＣＬＹ−Ｌ８、リゾチーム（例えば、ニワトリＣＬＹ）、フィトヘマグルチニン（ＰＨＡ−Ｅ）（例えば、Ｐｈａｓｅｏｌｕｓ  ｖｕｌｇａｒｉｓ）、マルトース結合タンパク質（ＭＢＰ）（例えば、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ）、Ｐ因子（例えば、Ｓｃｈｉｚｏｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｐｏｍｂｅ  Ｐ３）、Ｐｉｃｈｉａ  ｐａｓｔｏｒｉｓ  Ｄｓｅ、Ｐｉｃｈｉａ  ｐａｓｔｏｒｉｓ  Ｅｘｇ、Ｐｉｃｈｉａ  ｐａｓｔｏｒｉｓ  Ｐｉｒ１、Ｐｉｃｈｉａ  ｐａｓｔｏｒｉｓ  Ｓｃｗおよび細胞壁タンパク質Ｐｉｒ４（内部リピートを有するタンパク質）が含まれるがこれらに限定されないタンパク質の前駆体に由来し得る。シグナルペプチドは、表１中の配列を含み得る。一部の場合には、シグナルペプチドは、配列番号１４、配列番号１５、配列番号１６、配列番号１７、配列番号１８、配列番号１９、配列番号２０、配列番号２１、配列番号２２、配列番号２３、配列番号２４、配列番号２５、配列番号２６、配列番号２７、配列番号２８、配列番号２９、配列番号３０、配列番号３１、配列番号３２、配列番号３３、配列番号３４、配列番号３５、配列番号３６、配列番号３７、配列番号３８、配列番号３９、配列番号４０、配列番号４１、配列番号４２、配列番号４３、配列番号４４、配列番号４５、配列番号４６、配列番号４７���配列番号４８、配列番号４９、配列番号５０、配列番号５１、配列番号５２、配列番号５３、配列番号５４、配列番号５５、配列番号５６、配列番号５７、配列番号５８、配列番号５９、配列番号６０、配列番号６１、配列番号６２、配列番号６３、配列番号６４、配列番号６５、配列番号６６、配列番号６７、配列番号６８、配列番号６９、配列番号７０、配列番号７１、およびそれらの任意の組合せからなる群から選択され得る。
【０１１７】
一部の場合には、シグナルペプチドは、約または少なくとも５、１０、１５、２０、２５、３０、５０または１００アミノ酸長である。一部の場合には、シグナルペプチドは、最大で５、１０、１５、２０、２５、３０、５０または１００アミノ酸長である。一部の場合には、シグナルペプチドは、５から５０アミノ酸長までの範囲内、または５から３０アミノ酸長までの範囲内であり得る。
【０１１８】
シグナルペプチドは、例えば、コドン最適化、定向進化（ｄｉｒｅｃｔｅｄ  ｅｖｏｌｕｔｉｏｎ）、スペーサーの挿入および／または欠失変異誘発を使用して、改変され、または１つもしくは複数のアミノ酸挿入、欠失および／もしくは置換を含み得る。
【０１１９】
ポリヌクレオチドは、シグナルペプチダーゼの切断部位または認識部位をさらにコードし得る。シグナルペプチダーゼには、ＫＥＸ２、Ｋｒｐ１、エンテロキナーゼ（ＥＫＴ）、トロンビン、第Ｘａ因子（ＦＸａ）、タバコエッチ病ウイルス（ＴＥＶ）および３Ｃ  Ｐｒｅｓｃｉｓｓｉｏｎが含まれるがこれらに限定されない。
【０１２０】
【表１−１】
2018501814.tif 000003
【表１−２】
2018501814.tif 000004
【０１２１】
一態様では、本開示は、本明細書に記載したポリヌクレオチドのいずれかを含む発現ベクターを提供する。ポリヌクレオチドは発現ベクターの中に位置してよい。発現ベクターは宿主細胞中に１つまたは複数の目的の遺伝子または配列を送達し、好ましくは発現することができる構築物であってよい。発現ベクターの例には、これだけに限らないが、ウイルスベクター（例えば、アデノウイルス、アデノ随伴ウイルス、およびレトロウイルス）、ネイキッドＤＮＡまたはＲＮＡ発現ベクター、プラスミド、コスミド、ファージベクター、カチオン性縮合剤に随伴するＤＮＡまたはＲＮＡ発現ベクター、リポソーム中にカプセル化されたＤＮＡまたはＲＮＡ発現ベクター、およびプロデューサー細胞等のある種の真核細胞が含まれる。発現ベクターによって複製、クローニング、および／または選択が容易かつ効率的になり得る。したがって、発現ベクターには、発現ベクターが宿主細胞中で複製することを可能にする核酸配列、例えば、複製起点、１つまたは複数の治療遺伝子および／または選択可能なマーカー遺伝子、ならびにコードされたタンパク質の転写、翻訳および／または分泌を指令する調節エレメント等の当技術分野で公知のその他の遺伝子エレメントが追加的に含まれ得る。発現ベクター成分には一般に、これだけに限らないが、シグナル配列、複製起点、１つまたは複数のマーカー遺伝子、および好適な転写制御エレメント（プロモーター、エンハンサーおよびターミネーター等）の１つまたは複数が含まれ得る。発現（例えば、翻訳）のため、リボソーム結合部位、翻訳開始部位、内部リボソーム進入部位（ｉｎｔｅｒｎａｌ  ｒｉｂｏｓｏｍｅ  ｅｎｔｒｙ  ｓｉｔｅ）、および停止コドン等の１つまたは複数の翻訳制御エレメントも通常必要である。発現ベクターは、細胞に形質導入し、形質変換し、または感染して、それにより細胞に本来あるもの以外の核酸および／またはタンパク質を細胞に発現させるために使用される。発現ベクターは細胞中への核酸の導入を補助するウイルス粒子、リポソーム、タンパク質コーティング等の材料を任意選択で含む。当技術においてタンパク質発現のための多くの種類の適当な発現ベクターが、標準的な分子生物学的手法によって公知になっている。そのような発現ベクターは、昆虫、例えばバキュロウイルス発現系、または酵母、真菌、細菌もしくはウイルス発現系を含む従来のベクタータイプから選択される。当技術分野で多くの種類が公知であるその他の適当な発現ベクターも、この目的のために使用することができる。クローニングおよび発現ベクターを得るための方法は周知である（例えば、ＧｒｅｅｎおよびＳａｍｂｒｏｏｋ、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：  Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ、第４版、Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ（２０１２年）を参照）。
【０１２２】
発現ベクターはプロモーターをさらに含んでよい。プロモーターには、これだけに限らないが、構成的プロモーター、誘導プロモーター、およびハイブリッドプロモーターが含まれる。プロモーターには、これだけに限らないが、ａｃｕ−５、ａｄｈ１＋、アルコール脱水素酵素（ＡＤＨ１、ＡＤＨ２、ＡＤＨ４）、ＡＨＳＢ４ｍ、ＡＩＮＶ、ａｌｃＡ、α−アミラーゼ、オルターナティブ酸化酵素（ＡＯＤ）、アルコール酸化酵素Ｉ（ＡＯＸ１）、アルコール酸化酵素２（ＡＯＸ２）、ＡＸＤＨ、Ｂ２、ＣａＭＶ、セロビオヒドロラーゼＩ（ｃｂｈ１）、ｃｃｇ−１、ｃＤＮＡ１、細胞フィラメントポリペプチド（ｃｆｐ）、ｃｐｃ−２、ｃｔｒ４＋、ＣＵＰ１、ジヒドロキシアセトンシンターゼ（ＤＡＳ）、エノラーゼ（ＥＮＯ、ＥＮＯ１）、ホルムアルデヒド脱水素酵素（ＦＬＤ１）、ＦＭＤ、ギ酸脱水素酵素（ＦＭＤＨ）、Ｇ１、Ｇ６、ＧＡＡ、ＧＡＬ１、ＧＡＬ２、ＧＡＬ３、ＧＡＬ４、ＧＡＬ５、ＧＡＬ６、ＧＡＬ７、ＧＡＬ８、ＧＡＬ９、ＧＡＬ１０、ＧＣＷ１４、ｇｄｈＡ、ｇｌａ−１、α−グルコアミラーゼ（ｇｌａＡ）、グリセルアルデヒド−３−ホスフェート脱水素酵素（ｇｐｄＡ、ＧＡＰ、ＧＡＰＤＨ）、ホスホグリセレートムターゼ（ＧＰＭ１）、グリセロールキナーゼ（ＧＵＴ１）、ＨＳＰ８２、ｉｎｖｌ＋、イソシトレートリアーゼ（ＩＣＬ１）、アセトヒドロキシ酸イソメロレダクターゼ（ＩＬＶ５）、ＫＡＲ２、ＫＥＸ２、β−ガラクトシダーゼ（ｌａｃ４）、ＬＥＵ２、ｍｅｌＯ、ＭＥＴ３、メタノール酸化酵素（ＭＯＸ）、ｎｍｔ１、ＮＳＰ、ｐｃｂＣ、ＰＥＴ９、ペロキシン８（ＰＥＸ８）、ホスホグリセレートキナーゼ（ＰＧＫ、ＰＧＫ１）、ｐｈｏ１、ＰＨＯ５、ＰＨＯ８９、ホスファチジルイノシトールシンターゼ（ＰＩＳ１）、ＰＹＫ１、ピルベートキナーゼ（ｐｋｉ１）、ＲＰＳ７、ソルビトール脱水素酵素（ＳＤＨ）、３−ホスホセリンアミノトランスフェラーゼ（ＳＥＲ１）、ＳＳＡ４、ＳＶ４０、ＴＥＦ、翻訳延長因子１アルファ（ＴＥＦ１）、ＴＨＩ１１、ホモセリンキナーゼ（ＴＨＲ１）、ｔｐｉ、ＴＰＳ１、トリオースホスフェートイソメラーゼ（ＴＰＩ１）、ＸＲＰ２、およびＹＰＴ１が含まれる。
【０１２３】
発現ベクターは栄養要求性マーカー（例えば、ａｄｅ１、ａｒｇ４、ｈｉｓ４、ｕｒａ３、ｍｅｔ２）をさらに含んでよい。発現ベクターは選択可能なマーカー（例えば、耐性遺伝子）をさらに含んでよい。いくつかの場合には、耐性遺伝子はゼオシン、アンピシリン、ブラスチシジン、カナマイシン、ノーセオスリシン、クロラムフェニコール、テトラサイクリン、トリクロサン、またはガンシクロビルに対する耐性を付与することがある。発現ベクターはプラスミドを含んでよい。
【０１２４】
一態様では、本開示は１つまたは複数の異種卵白タンパク質を発現するように形質変換された宿主細胞であって、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ、Ｐｉｃｈｉａ  ｐａｓｔｏｒｉｓ、コメ、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｎｉｇｅｒ、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｏｒｙｚａｅ、Ａｃｒｅｍｏｎｉｕｍ  ｃｈｒｙｓｏｇｅｎｕｍ、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ、昆虫、マウス、トウモロコシ、Ｐｓｅｕｄｏｚｙｍａ、タバコ、ゼブラフィッシュ、およびそれらの任意の組合せからなる群から選択されない、宿主細胞を提供する。
【０１２５】
一態様では、本開示は１つまたは複数の異種卵白タンパク質を発現するように形質変換された宿主細胞であって、１つまたは複数の卵白タンパク質は、オボアルブミン、オボトランスフェリン、リゾチーム、オボスタチン、オボムコイド、オボインヒビター、アビジン、およびそれらの任意の組合せからなる群から選択されない、宿主細胞を提供する。
【０１２６】
一態様では、本開示は、本明細書に記載したポリヌクレオチドまたは発現ベクターを含む宿主細胞を提供する。異種ＤＮＡを発現することができる任意の宿主細胞は、タンパク質またはタンパク質をコードするポリヌクレオチドを単離する目的のために使用することができる。好適な宿主細胞には、これだけに限らないが、哺乳類（例えば、ＨＥＫまたはＨｅＬａ等のヒト、３Ｔ３またはＳｗｉｓｓ、ＢＡＬＢ／ｃもしくはＮＩＨマウスから誘導された細胞等のマウス、ＣＨＯ等のハムスター、ＣＯＳ等のサル）、細菌（例えば、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ、Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｕｂｔｉｌｉｓ、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ、Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ）、真菌（例えば、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ、Ｓｃｈｉｚｏｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｐｏｍｂｅ、Ｋｌｕｙｖｅｒｏｍｙｃｅｓ  ｌａｃｔｉｓ）、または昆虫（例えば、Ｄｒｏｓｏｐｈｉｌａ  ｍｅｌａｎｏｇａｓｔｅｒ、Ｈｉｇｈ  Ｆｉｖｅ、Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ  ｆｒｕｇｉｐｅｄｅｒａ  Ｓｆ９）の宿主細胞が含まれる。宿主細胞は、例えば少なくとも１つの本開示の発現ベクターを用いるエレクトロポレーション等の従来の手段によってトランスフェクトすることができる。目的のポリヌクレオチドを含有する発現ベクターは、エレクトロポレーション、化学的形質変換、塩化カルシウム、塩化ルビジウム、リン酸カルシウム、ＤＥＡＥ−デキストラン、もしくはその他の物質を用いたトランスフェクション、微粒子銃、リポフェクション、ＰＥＧ媒介原形質融合、ａｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｔｕｍｅｆａｃｉｅｎｓ媒介形質変換、微粒子衝撃形質変換、および感染（例えば、ベクターがワクシニアウイルス等の感染因子である場合）を含むいくつかの適当な手段のいずれかによって、宿主細胞に導入することができる。発現ベクターまたはポリヌクレオチドの導入の選択は、宿主細胞の特徴による場合が多い。トランスフェクトされたまたは形質変換された宿主細胞は、次にタンパク質の発現を可能にする条件下で培養され得る。一部の実施形態では、タンパク質は宿主細胞から精製される。
【０１２７】
発現ベクターはゲノムに組み込まれてもよい。宿主細胞は発現ベクターの複数のコピーを含んでよい。いくつかの場合には、宿主細胞は細菌、真菌、植物、昆虫、哺乳類、およびそれらの任意の組合せからなる群から選択される。いくつかの場合には、真菌は酵母または糸状菌であってよい。酵母には、これだけに限らないが、Ａｒｘｕｌａ  ｓｐｐ．、Ａｒｘｕｌａ  ａｄｅｎｉｎｉｖｏｒａｎｓ、Ｋｌｕｙｖｅｒｏｍｙｃｅｓ  ｓｐｐ．、Ｋｌｕｙｖｅｒｏｍｙｃｅｓ  ｌａｃｔｉｓ、Ｐｉｃｈｉａ  ｓｐｐ．、Ｐｉｃｈｉａ  ａｎｇｕｓｔａ、Ｐｉｃｈｉａ  ｐａｓｔｏｒｉｓ、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｓｐｐ．、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ、Ｓｃｈｉｚｏｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｓｐｐ．、Ｓｃｈｉｚｏｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｐｏｍｂｅ、Ｙａｒｒｏｗｉａ  ｓｐｐ．、およびＹａｒｒｏｗｉａ  ｌｉｐｏｌｙｔｉｃａが含まれる。真菌には、これだけに限らないが、Ａｇａｒｉｃｕｓ  ｓｐｐ．、Ａｇａｒｉｃｕｓ  ｂｉｓｐｏｒｕｓ、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｓｐｐ．、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ａｗａｍｏｒｉ、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｆｕｍｉｇａｔｕｓ、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｎｉｄｕｌａｎｓ、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｎｉｇｅｒ、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｏｒｙｚａｅ、Ｃｏｌｌｅｔｏｔｒｉｃｈｕｍ  ｓｐｐ．、Ｃｏｌｌｅｔｏｔｒｉｃｈｕｍ  ｇｌｏｅｏｓｐｏｒｉｏｄｅｓ、Ｅｎｄｏｔｈｉａ  ｓｐｐ．、Ｅｎｄｏｔｈｉａ  ｐａｒａｓｉｔｉｃａ、Ｆｕｓａｒｉｕｍ  ｓｐｐ．、Ｆｕｓａｒｉｕｍ  ｇｒａｍｉｎｅａｒｕｍ、Ｆｕｓａｒｉｕｍ  ｓｏｌａｎｉ、Ｍｕｃｏｒ  ｓｐｐ．、Ｍｕｃｏｒ  ｍｉｅｈｅｉ、Ｍｕｃｏｒ  ｐｕｓｉｌｌｕｓ、Ｍｙｃｅｌｉｏｐｈｔｈｏｒａ  ｓｐｐ．、Ｍｙｃｅｌｉｏｐｈｔｈｏｒａ  ｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌａ、Ｎｅｕｒｏｓｐｏｒａ  ｓｐｐ．、Ｎｅｕｒｏｓｐｏｒａ  ｃｒａｓｓａ、Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ  ｓｐｐ．、Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ  ｃａｍｅｍｂｅｒｔｉ、Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ  ｃａｎｅｓｃｅｎｓ、Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ  ｃｈｒｙｓｏｇｅｎｕｍ、Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ（Ｔａｌａｒｏｍｙｃｅｓ）ｅｍｅｒｓｏｎｉｉ、Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ  ｆｕｎｉｃｕｌｏｓｕｍ、Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ  ｐｕｒｐｕｒｏｇｅｎｕｍ、Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ  ｒｏｑｕｅｆｏｒｔｉ、Ｐｌｅｕｒｏｔｕｓ  ｓｐｐ．、Ｐｌｅｕｒｏｔｕｓ  ｏｓｔｒｅａｔｕｓ、Ｒｈｉｚｏｍｕｃｏｒ  ｓｐｐ．、Ｒｈｉｚｏｍｕｃｏｒ  ｍｉｅｈｅｉ、Ｒｈｉｚｏｍｕｃｏｒ  ｐｕｓｉｌｌｕｓ、Ｒｈｉｚｏｐｕｓ  ｓｐｐ．、Ｒｈｉｚｏｐｕｓ  ａｒｒｈｉｚｕｓ、Ｒｈｉｚｏｐｕｓ  ｏｌｉｇｏｓｐｏｒｕｓ、Ｒｈｉｚｏｐｕｓ  ｏｒｙｚａｅ、Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ  ｓｐｐ．、Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ  ａｌｔｒｏｖｉｒｉｄｅ、Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ  ｒｅｅｓｅｉ、およびＴｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ  ｖｉｒｅｕｓが含まれる。いくつかの場合には、宿主細胞はＡｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｏｒｙｚａｅ、Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｕｂｔｉｌｉｓ、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ、Ｍｙｃｅｌｉｏｐｈｔｈｏｒａ  ｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌａ、Ｎｅｕｒｏｓｐｏｒａ  ｃｒａｓｓａ、Ｐｉｃｈｉａ  ｐａｓｔｏｒｉ���、およびそれらの任意の組合せからなる群から選択され得る。宿主細胞は米国食品医薬品局によって一般に安全であるとして承認されていてよい。宿主細胞は栄養要求性であってよい。宿主細胞は、例えばそのグリコシル化経路をヒト化し、または別の生命体（例えば、鳥またはニワトリ）と酷似するように操作することによって糖鎖工学操作（ｇｌｙｃｏｅｎｇｉｎｅｅｒ）されていてよい。
【０１２８】
一態様では、本開示は、本明細書に記載した宿主細胞を含む細胞培養物を提供する。
【０１２９】
一部の実施形態では、ポリペプチドまたはタンパク質が、例えばＥｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ細胞抽出物、ウサギ網状赤血球細胞抽出物、コムギ胚芽細胞抽出物、または昆虫細胞抽出物等の細胞抽出物を含む無細胞翻訳システムを使用するｉｎ  ｖｉｔｒｏまたは無細胞タンパク質合成によって産生される。発現したタンパク質は、当業者には公知の適当な手段で、細胞、細胞抽出物から、または培養培地から回収され、単離され、および／または任意選択で精製され得る。例えば、タンパク質は細胞溶解の後、可溶性の形態で単離され、または公知の手法、例えば塩化グアニジンによって抽出される。タンパク質は、これだけに限らないが、ＨＰＬＣ、ＦＰＬＣ等を使用する順相または逆相等の液体クロマトグラフィー、無機リガンドまたはモノクローナル抗体等によるアフィニティクロマトグラフィー、サイズ排除クロマトグラフィー、固定化金属キレートクロマトグラフィー、ゲル電気泳動等を含む種々の従来方法のいずれかを使用してさらに精製することができる。当業者であれば最も適当な単離および精製の手法を選択することができる。さらに他の好適な宿主細胞、ならびにトランスフェクション、培養、増幅、スクリーニング、産生、および精製のための方法は、当技術分野で公知である。
【０１３０】
一態様では、本開示は消費可能な製品の製造のための方法を提供し、方法は卵に基づく成分の一部を、本明細書に記載される単離された組換え卵白タンパク質、単離された変異体オボムコイド、または卵白タンパク質組成物によって置換するステップを含む。
【０１３１】
一態様では、本開示は消費可能な製品の製造のための方法を提供し、方法は本明細書に記載される単離された組換え卵白タンパク質、単離された変異体オボムコイド、または卵白タンパク質組成物を添加するステップを含む。
【０１３２】
一態様では、本開示は、組換え卵白タンパク質を、加工された消費可能な製品を製造するための加工剤として使用する方法を提供する。いくつかの場合には、方法は組換え卵白タンパク質を取り出すステップをさらに含む。組換え卵白タンパク質は、加工された消費可能な製品において消費されても消費されなくてもよい。加工された消費可能な製品は、微量の組換え卵白タンパク質を含有してよい。いくつかの場合には、加工された消費可能な製品は組換え卵白タンパク質を含有しない。
【０１３３】
一態様では、本開示は、本明細書に記載される単離された組換え卵白タンパク質、単離された変異体オボムコイド、または卵白タンパク質組成物を、加工された消費可能な製品を製造するための加工剤として使用する方法を提供する。いくつかの場合には、方法は単離された組換え卵白タンパク質、単離された変異体オボムコイド、または卵白タンパク質組成物を取り出すステップをさらに含む。いくつかの場合には、加工剤は乳化剤、結合剤、膨張剤、増粘剤、保湿剤、接着剤、褐色化剤、清澄化剤、ゲル化剤、結晶化制御剤、湿潤剤、食肉軟化剤、エアレーション剤、構造改善剤、凝固剤、コーティング剤、着色剤、光沢剤、矯味矯臭剤、凍結剤、遮蔽剤、食感改善剤、ｐＨ緩衝剤、保存期間延長剤、防腐剤、抗微生物剤（例えば、抗細菌剤、抗真菌剤、抗ウイルス剤、抗寄生生物剤）、食品品質低下抑制剤、マロラクティック発酵阻害剤、テクスチャー改善剤、卵代用品、またはそれらの任意の組合せとして作用する。
【０１３４】
一態様では、本開示は、本明細書に記載される単離された組換え卵白タンパク質、単離された変異体オボムコイド、または卵白タンパク質組成物を含む消費可能な製品を提供する。消費可能な製品には、これだけに限らないが、食品製品、飲料製品、医薬品製品、および衛生製品が含まれる。
【０１３５】
一態様では、本開示は、組換え卵白タンパク質を乳化剤、結合剤、膨張剤、増粘剤、保湿剤、接着剤、褐色化剤、清澄化剤、ゲル化剤、結晶化制御剤、湿潤剤、食肉軟化剤、エアレーション剤、構造改善剤、凝固剤、コーティング剤、着色剤、光沢剤、矯味矯臭剤、凍結剤、遮蔽剤、食感改善剤、ｐＨ緩衝剤、保存期間延長剤、防腐剤、抗微生物剤（例えば、抗細菌剤、抗真菌剤、抗ウイルス剤、抗寄生生物剤）、食品品質低下抑制剤、マロラクティック発酵阻害剤、テクスチャー改善剤、卵代用品、またはそれらの任意の組合せとして使用する方法を提供する。
【０１３６】
一態様では、本開示は、本明細書に記載される単離された組換え卵白タンパク質、単離された変異体オボムコイド、または卵白タンパク質組成物を乳化剤、結合剤、膨張剤、増粘剤、保湿剤、接着剤、褐色化剤、清澄化剤、ゲル化剤、結晶化制御剤、湿潤剤、食肉軟化剤、エアレーション剤、構造改善剤、凝固剤、コーティング剤、着色剤、光沢剤、矯味矯臭剤、凍結剤、遮蔽剤、食感改善剤、ｐＨ緩衝剤、保存期間延長剤、防腐剤、抗微生物剤（例えば、抗細菌剤、抗真菌剤、抗ウイルス剤、抗寄生生物剤）、食品品質低下抑制剤、マロラクティック発酵阻害剤、テクスチャー改善剤、卵代用品、またはそれらの任意の組合せとして使用する方法を提供する。
【０１３７】
一態様では、本開示は食品アレルギーを診断するための方法を提供し、方法は、本明細書に記載される単離された組換え卵白タンパク質、単離された変異体オボムコイド、または卵白タンパク質組成物を被験体に導入するステップを含む。いくつかの場合には、導入するステップは、皮膚プリックテスト、血液検査または食物経口負荷を使用して実施される。
【０１３８】
一態様では、本開示は食品アレルギーを処置するための方法を提供し、方法は、卵白アレルゲンを、本明細書に記載される単離された組換え卵白タンパク質、単離された変異体オボムコイド、もしくは卵白タンパク質組成物によって置換するステップ、または本明細書に記載される単離された組換え卵白タンパク質、単離された変異体オボムコイド、もしくは卵白タンパク質組成物を消費することによって被験体の卵白アレルゲンに対する寛容を増大させるステップを含む。
【０１３９】
一態様では、本開示は消費可能な製品（例えば、ワイン）においてマロラクティック発酵を阻害するための方法であって、消費可能な製品に卵白リゾチームを提供するステップを含む、方法を提供する。卵白リゾチームは組換えにより発現されてよい。
【０１４０】
一態様では、本開示は、例えば食品、動物飼料、果物、野菜、医薬品、豆腐、ビーンカード、チーズ、シーフード、肉、ワイン、酒、またはビール（例えば、生ビール）において抗微生物剤、抗ウイルス剤、防腐剤、またはそれらの任意の組合せとしてリゾチーム（例えば、卵白リゾチーム）を使用するための方法を提供する。一態様では、本開示は食品腐敗生命体の増殖を阻害し、（例えば、チーズにおける）後期ガス膨張を阻害し、保存期間を延長し、消化性を補助し、胃腸疾患を処置し、食品の安全性を改善し、免疫系を増強し、亜硫酸塩を置き換えもしくは低減させ、皮膚医療においてざ瘡にきびもしくは褥瘡を治癒させるかもしくは予防し、眼の状態、歯の状態、口の状態において、頭痛を処置し、風邪を処置し、咽喉感染症を処置するため、またはそれらの任意の組合せにおいてリゾチーム（例えば、卵白リゾチーム）を使用するための方法を提供する。リゾチームは組換えにより発現されてよい。
【０１４１】
一態様では、本開示は免疫化もしくは生化学的研究のための参照タンパク質として、タンパク質の組成、物理的性質、および／もしくは構造の検討における標準として、（例えば、免疫組織化学またはウェスタンブロットにおける）ブロッキング剤として、（例えば、酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）における）抗ヘモグロビンモノクローナル抗体の検出のため、（例えば、ＳＤＳ−ＰＡＧＥまたはサイズ排除クロマトグラフィーによる）分子量の決定におけるタンパク質標準として、細胞培養系もしくは診断においてそうでなければ機能的完全性を失う酵素およびホルモンを安定化させるため、タンパク質担体もしくは安定化剤として、またはそれらの任意の組合せにおいてオボアルブミン（例えば、卵白オボアルブミン）を使用するための方法を提供する。オボアルブミンは組換えにより発現されてよい。
【０１４２】
一態様では、本開示は（例えば、細菌培養培地中でＳｃｈｉｇｅｌｌａ  ｄｙｓｅｎｔｅｒｉａｅ等の有害な微生物が栄養として鉄を利用できなくするための）鉄結合タンパク質として、細胞の成熟のための培養培地成分として、細胞に鉄を供給するため、（例えば、亜鉛、鉄、およびアルミニウム等の金属イオンを結合することによって）培養培地を無毒化するため、防腐剤として、抗ウイルス剤、抗生剤、もしくは抗微生物剤として、ラクトフェリン代用品として、またはそれらの任意の組合せにおいてオボトランスフェリン（例えば、卵白オボトランスフェリン）を使用するための方法を提供する。オボトランスフェリンは組換えにより発現されてよい。
【０１４３】
一態様では、本開示はビオチン結合剤として、免疫アッセイにおいて、組織化学において、細胞化学において、ビオチンの精製において、染色体の可視化において、タンパク質の精製において、アフィニティクロマトグラフィーにおいて、アフィニティ細胞化学において、細胞表面の分子相互作用の研究において、免疫アッセイにおけるシグナル増幅において、診断において、薬物送達、標的化、もしくは中和において、遺伝子マッピングにおいて、アビジンコンジュゲートプローブ（例えば、酵素、抗原、抗体、レクチン、ホルモン、核酸、細胞、細胞内オルガネラ）において、またはそれらの任意の組合せにおいてアビジン（例えば、卵白アビジン）を使用するための方法を提供する。アビジンは組換えにより発現されてよい。
【０１４４】
一態様では、本開示は、タンパク質補助食品として単離された組換え卵白タンパク質、単離された変異体オボムコイド、または卵白タンパク質組成物を使用するための方法を提供する。一態様では、本開示はタンパク質補助食品として１つまたは複数の卵白タンパク質を使用するための方法を提供する。いくつかの場合には、タンパク質補助食品は固体（例えば、粉末）、液体、ゲル、シェイク、またはプロテインバーとして製剤化される。
【０１４５】
卵白タンパク質組成物は、例えばグルコースを除くため、色を保つため、またはより長い保存のために組成物を安定化させるために処理してよい。長期の保存安定性のため、組成物からグルコースを除いてよい。組成物は清澄化、濾過、脱糖（例えば、安定化、グルコースなし）、噴霧乾燥、および／または低温殺菌してよい。低温殺菌は、「ホットルーム」中で少なくとも１３０°Ｆ（５４℃）の温度で維持して少なくとも７〜１０日間、行う。より高い温度で低温殺菌すればゲル強度が改善され得る。組成物の含水率をおよそ６％に保てば、サルモネラを除去できる。低い水分レベルでホットルーム中に保存すれば、起泡能力が改善され得る。低温殺菌は、高温、短時間（ＨＴＳＴ）の低温殺菌装置を使用して行ってよい。噴霧乾燥は低温殺菌の前または後に行ってよい。組成物は超低温殺菌してよい。組成物は清澄化、濾過、低温殺菌、均質化、および／または−１０〜−４０°Ｆ（−２３．３〜−４０℃）で凍結してよい。組成物は液体、冷蔵した液体、凍結、または乾燥してよい。
【０１４６】
本明細書におけるタンパク質および組成物は、１つまたは複数の食品添加物に添加し、またはこれと混合してよい。食品添加物は、組成物に体積および／または質量を付加することができる。食品添加物は機能的性能および／または物理的特性を改善することができる。例えば、食品添加物によって、凍結−解凍サイクルにおけるリポタンパク質の脂質部分によるゲル化または粘度の増大を防止することができる。自由流動性の組成物を作製するために固結防止剤を加えてもよい。熱による損傷に対する耐性を増大させるため、例えば乾燥中のタンパク質の変性を低減させるため、ならびに乾燥した組成物の安定性および流動性を改善するために、炭水化物を加えてもよい。起泡能力および通気特性を改善するために、乾燥した組成物に起泡添加剤を（例えば、乾燥前の液体の０．１重量％未満のレベルで）加えてもよい。食品添加物には、これだけに限らないが、食品着色料、ｐＨ調整剤、天然矯味矯臭剤、人工矯味矯臭剤、香味増強剤、バッチマーカー、食用酸味剤（ｆｏｏｄ  ａｃｉｄ）、充填剤、固結防止剤（例えば、アルミノケイ酸ナトリウム）、抗グリーニング剤（ａｎｔｉｇｒｅｅｎｉｎｇ  ａｇｅｎｔ）（例えば、クエン酸）、食品安定剤、泡安定剤もしくは結合剤、抗酸化剤、酸性調節剤、バルキング剤、色保持剤、起泡剤（例えば、エステル型起泡剤、クエン酸トリエチル、ラウリル硫酸ナトリウム）、乳化剤（例えば、レシチン）、湿潤剤、シックナ―、医薬品賦形剤、固体希釈剤、塩、栄養素、甘味料、艶出し剤、防腐剤、ビタミン類、食事性元素、炭水化物、ポリオール、ガム、デンプン、小麦粉、油、およびふすまが含まれる。
【０１４７】
食品着色料には、これだけに限らないが、ＦＤ＆Ｃイエロー＃５、ＦＤ＆Ｃイエロー＃６、ＦＤ＆Ｃレッド＃４０、ＦＤ＆Ｃレッド＃３、ＦＤ＆ＣブルーＮｏ．１、ＦＤ＆ＣブルーＮｏ．２、ＦＤ＆ＣグリーンＮｏ．３、カロテノイド（例えば、サフラン、β−カロテン）、アナトー、ベタニン、チョウマメ、カラメル色素、クロロフィリン、エルダベリージュース、リコピン、カルミン、パンダン、パプリカ、ターメリック、クルクミノイド、キノリンイエロー、カルモイシン、ポンソー４Ｒ、パテントブルーＶ、およびグリーンＳが含まれる。
【０１４８】
ｐＨ調整剤には、これだけに限らないが、トリス緩衝液、リン酸カリウム、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、クエン酸、クエン酸ナトリウム、重炭酸ナトリウム、および塩酸が含まれる。
【０１４９】
泡安定剤または結合剤には、これだけに限らないが、カッパカラギーナン、イオタカラギーナン、ラムダカラギーナン、クエン酸トリエチル、キサンタンガム、メチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、ヒドロキシメチルセルロース、およびポリアクリルイミドが含まれる。
【０１５０】
塩には、これだけに限らないが、酸塩、アルカリ塩、有機塩、無機塩、リン酸塩、塩化物塩（ｃｈｌｏｒｉｄｅ  ｓａｌｔ）、塩化ナトリウム、塩化カリウム、塩化マグネシウム、過塩素酸マグネシウム、塩化カルシウム、塩化アンモニウム、塩化鉄、および塩化亜鉛が含まれる。
【０１５１】
栄養素には、これだけに限らないが、多量養素、微量栄養素、必須栄養素、非必須栄養素、食物繊維、アミノ酸、必須脂肪酸、オメガ−３脂肪酸、および共役リノール酸が含まれる。
【０１５２】
甘味料には、これだけに限らないが、糖代用品、人工甘味料、アセサルフェームカリウム、アドバンテーム、アリテーム、アスパルテーム、シクラミン酸ナトリウム、ズルチン、グルシン、ネオヘスペリジンジヒドロカルコン、ネオテーム、Ｐ−４０００、サッカリン、アスパルテーム−アセサルフェーム塩、スクラロース、ブラゼイン、クルクリン、グリシルリジン、グリセロール、イヌリン、モグロシド、マビンリン、マルトオリゴサッカライド、マンニトール、ミラクリン、モナチン、モネリン、オスラジン、ペンタジン、ステビア、トリロバチン、およびタウマチンが含まれる。
【０１５３】
炭水化物には、これだけに限らないが、糖、スクロース、グルコース、フルクトース、ガラクトース、ラクトース、マルトース、マンノース、アルロース、タガトース、キシロース、アラビノース、高フルクトースコーンシラップ、高マルトースコーンシラップ、コーンシラップ（例えば、グルコースを含まないコーンシラップ）、モノサッカライド、ジサッカライド、およびポリサッカライド（例えば、ポリデキストロース、マルトデキストリン）が含まれる。
【０１５４】
ポリオールには、これだけに限らないが、キシリトール、マルチトール、エリスリトール、ソルビトール、スレイトール、アラビトール、水素化デンプン加水分解物、イソマルト、ラクチトール、マンニトール、およびガラクシトール（ズルシトール）が含まれる。
【０１５５】
ガムには、これだけに限らないが、アラビアガム、ジェランガム、グアーガム、ローカストビーンガム、アカシアガム、セルロースガム、およびキサンタンガムが含まれる。
【０１５６】
ビタミン類には、これだけに限らないが、ナイアシン、リボフラビン、パントテン酸、チアミン、葉酸、ビタミンＡ、ビタミンＢ６、ビタミンＢ１２、ビタミンＤ、ビタミンＥ、ルテイン、ゼアキサンチン、コリン、イノシトール、およびビオチンが含まれる。
【０１５７】
食事性元素には、これだけに限らないが、カルシウム、鉄、マグネシウム、リン、カリウム、ナトリウム、亜鉛、銅、マンガン、セレン、塩素、ヨウ素、硫黄、コバルト、モリブデン、および臭素が含まれる。
【０１５８】
組成物を作製する方法は乾燥および／または濃縮するステップを含んでよい。いくつかの場合には、乾燥により、乾燥した、脱水された、濃縮された、および／または固体の組成物が形成される。乾燥方法のいくつかの非制限的な例には、加熱乾燥、蒸発（例えば、真空または空気による）、蒸留、沸騰、オーブン中での加熱、真空乾燥、噴霧乾燥、フリーズドライ、凍結乾燥、およびそれらの任意の組合せが含まれる。乾燥の機構は組成物の水和および分子構造に影響し、異なった物理的性質が生じる可能性がある。組成物は、組成物が約または少なくとも約０．００１、０．００５、０．０１、０．０５、０．１、０．２、０．３、０．４、０．５、０．６、０．７、０．８、０．９、１．０、１．５、２、２．５、３、３．５、４、４．５、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、または９５重量％超の溶媒（例えば、水）を含むまで、乾燥することができる。組成物は、組成物が約０．００１、０．００５、０．０１、０．０５、０．１、０．２、０．３、０．４、０．５、０．６、０．７、０．８、０．９、１．０、１．５、２、２．５、３、３．５、４、４．５、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、または９５重量％までの溶媒（例えば、水）を含むまで、乾燥することができる。例えば、溶媒を除くための任意の標準的な乾燥方法（例えば、工業用送風機を使用してオーブン中、６０℃で１２〜８０時間等）によって組成物を乾燥し、乾燥した、または固体の組成物を形成することができる。別の例においては、組成物は（例えば、８０％の水から２０％の水に）濃縮することができる。
【０１５９】
組成物を作製する方法は希釈および／または水和するステップを含んでよい。いくつかの場合には、希釈するステップには溶媒の添加が含まれる。組成物は、組成物が約または少なくとも約０．０１、０．０５、０．１、０．２、０．３、０．４、０．５、０．６、０．７、０．８、０．９、１、１．５、２、２．５、３、３．５、４、４．５、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９５、９６、９７、９８、９９、９９．５、または９９．９重量％の水を含むまで、希釈することができる。組成物は、組成物が約０．０１、０．０５、０．１、０．２、０．３、０．４、０．５、０．６、０．７、０．８、０．９、１、１．５、２、２．５、３、３．５、４、４．５、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９５、９６、９７、９８、９９、９９．５、または９９．９重量％までの水を含むまで、希釈することができる。例えば、組成物は（例えば、２０％の水から８０％の水に）希釈することができる。別の例においては、乾燥した組成物は（例えば、乾燥固体から８０％の水に）水和することができる。
【実施例】
【０１６０】
実施例
【０１６１】
（実施例１：宿主細胞における卵白タンパク質の組換え発現）
【０１６２】
卵白タンパク質をコードする遺伝子配列を含有するＤＮＡプラスミドまたはＤＮＡオリゴヌクレオチドを、隣接する制限配列部位において遺伝子配列を開裂する制限酵素とともにインキュベートする。アガロースゲル電気泳動およびゲル抽出方法によって遺伝子配列を単離する。精製した遺伝子配列を、ＤＮＡリガーゼ、必要に応じてＤＮＡヌクレオチド、および単離した遺伝子配列の末端と相補的な末端を残して制限部位で開裂した発現プラスミドとともにインキュベートして、発現プラスミドにおけるプロモーター（これは宿主細胞における構成的発現、例えばグリセルアルデヒド−３−ホスフェート脱水素酵素プロモーター、または宿主細胞株がその中で増殖する培地の中の物質の存在による誘導性発現を付与することができる）の下流の遺伝子をライゲーションする。
【０１６３】
例えば、ＥｃｏＲＩおよびＳａｃＩＩ制限部位がそれぞれ５’→３’方向に隣接するオボアルブミンの遺伝子配列を含有するプラスミドを、ＥｃｏＲＩおよびＳａｃＩＩ制限酵素で切断し、アガロースゲル上で単離し、ＥｃｏＲＩおよびＳａｃＩＩで切断したｐＧＡＰＺ発現ベクターにライゲーションすることができる。
【０１６４】
ライゲーション反応を標準的な方法（例えば、エレクトロポレーション）によってコンピテント細胞株（例えば、Ｄｈ５アルファ細胞株）に形質変換し、発現ベクターによって形質変換されたコンピテント細胞のコロニーを選択するために抗生剤（例えば、ゼオシン）を含有する寒天プレートに播種する。手で選択することができるコロニーの増殖に適した温度および時間（例えば、３７℃で１６時間）でプレートをインキュベートした後、個別のコロニーを採取する。成功した形質変換体からの発現ベクターを単離し、標準的な分子生物学的方法（例えば、シリカゲル膜またはカラム、フェノールクロロホルム抽出）によって精製する。
【０１６５】
発現ベクターを標準的な分子生物学的方法（例えば、エレクトロコンピテントな宿主細胞のエレクトロポレーション、またはポリエチレングリコールもしくはジメチルスルホキシド存在下の宿主細胞の形質変換）を使用して宿主細胞（例えば、Ｐｉｃｈｉａ  ｐａｓｔｏｒｉｓ）に形質変換する。発現ベクターによる宿主細胞の成功した形質変換体を、プレートにした培地（例えば、寒天プレート）の上に形質変換反応溶液をひろげることによって選択することができ、ここで培地は宿主細胞の増殖に適しており、選択剤（例えば、発現ベクターに保持された耐性遺伝子に対応する抗生剤）を含有する。宿主細胞の個別のコロニーがプレートから単離され得るまで（例えば、３０℃で１週間）、適当な温度で適当な時間、プレートにした培地をインキュベートする。得られたクローンを個別に単離し、新たな選択プレートの上に別々に播種し、再びインキュベートする。これらのプレートから得られた個別のコロニーを使用して、最初のラウンドに使用した同じ選択剤とともに、宿主細胞に適した増殖培地を含有する個別の培養容器に接種する。適当な時間（例えば、振盪フラスコ中３０℃で一夜）の後、発現ベクターによる宿主細胞の形質変換の成功は、それぞれの培養容器において、標準的な分子生物学的方法（例えば、ウェスタンブロット）によって決定される、陰性対照プレートからのコロニーを接種した対照容器と比較した遺伝子配列によってコードされたタンパク質の存在によって決定することができる。タンパク質の発現を示す培養容器に対応する選択プレートからのコロニーを使用して、宿主細胞の増殖および培地中へのタンパク質の分泌を促進するための宿主細胞に適した培地を含有する容器に接種することができる。あるいは、タンパク質の発現を示す培養容器に対応するプレートからのコロニーを後日の使用のために（例えば、ＤＭＳＯ溶液中、−８０℃で）保存することができる。
【０１６６】
（実施例２：宿主細胞の選択および組換えタンパク質と天然タンパク質との比較）
【０１６７】
卵白のタンパク質成分をコードするＤＮＡ配列を合成して、宿主細胞（例えば、酵母、糸状菌）中で発現させるために発現ベクターにクローニングすることができる。
【０１６８】
例えば、酵母株Ｐｉｃｈｉａ  ｐａｓｔｏｒｉｓは、特にジスルフィド結合を有するタンパク質の組換え発現およびタンパク質分泌の効率に起因して、組換えベクターの好適な宿主種であり得る。Ｐｉｃｈｉａ  ｐａｓｔｏｒｉｓをグリセロール含有ＢＭＧＹ培地で２日間増殖させ、組換えタンパク質産生を誘導するためにメタノール含有ＢＭＭＹ培地に切り替えて、３０℃で振盪しながらフラスコ中で２日〜１週間増殖させる。
【０１６９】
組換えタンパク質を、例えば、タンパク質のコンフォメーション、活性、アセチル化パターン、リン酸化パターン、グリコシル化パターン、ゲル化特性、または他の機能特性により、天然タンパク質と比較することができる。
【０１７０】
タンパク質の収量／（培養物のＬ）／日を増大して生産能力および生産コストを最適化することができるように、上記のスキームを最適化することになる。
【０１７１】
（実施例３：組換えタンパク質の精製）
【０１７２】
形質変換した細胞株の培養物から精製した組換えタンパク質を得ることができる。所望のタンパク質の収量（例えば、グラムでの）は、適当な大きさの発酵容器および培養時間によって得ることができる。分泌された組換えタンパク質は、培養物の上清から（例えば、遠心分離機によって培養培地から遠心沈降させることによって）精製することができる。例えば、宿主細胞を遠心分離によって細胞培養上清から除く。次いで上清中のタンパク質を中空繊維による透析濾過によって精製する。第２の実施例においては、タンパク質は穏和な塩抽出およびそれに続く遠心分離によって精製してもよい。
【０１７３】
代替の容器設計により、培地の連続的循環、および細胞増殖を妨害することなくタンパク質分泌物を収集するための別個の容器中での濾過が可能になる（例えば、中空繊維バイオリアクター）。
【０１７４】
精製した組換えタンパク質は、湿った卵白タンパク質組成物を得るための加熱によるゲル化または粉末化された卵白タンパク質組成物を得るための下流の凍結乾燥（例えば、噴霧乾燥）に適した適当なｐＨの水性緩衝液によって透析することができる。
【０１７５】
精製された組換えタンパク質は、例えば図１６および図１７に示すクーマシー染色した４〜２０％ドデシル硫酸ナトリウムポリアクリルアミドゲル電気泳動（ＳＤＳ−ＰＡＧＥ）によって特徴付けることができる。
【０１７６】
（実施例４：精製された組換えタンパク質の卵白タンパク質組成物への組合せ）
【０１７７】
組換えベクターの構築および形質変換された細胞株におけるそのタンパク質産物の精製は、卵白タンパク質組成物の最終処方に含まれるべきそれぞれの卵白タンパク質構成成分について別々に行うことができる。組成物中のこれらの精製されたタンパク質の所望の組合せおよび量を１つの体積に添加して、それぞれのタンパク質の特定の最終濃度を得ることができる。例えば、１つの処方には、動物由来の卵白中の対応する濃度に合致する最終濃度で一緒に添加した構成成分の組換えタンパク質が含まれ得る。
【０１７８】
卵白タンパク質組成物は、湿った卵白タンパク質組成物として保存し、冷蔵することができる。あるいは、卵白タンパク質組成物を最初に（例えば、大部分の不安定な構成成分タンパク質の変性を誘導するために十分な温度で）加熱してゲル化を誘導し、次いで冷蔵した製品として保存し、または粉末化卵白タンパク質組成物のために凍結乾燥してもよい。あるいは、卵白タンパク質を凍結乾燥された形態で組み合わせて卵白タンパク質組成物を形成し、次いで溶液に溶解してもよい。溶液中の塩および食品添加物の濃度および成分は、処方によって変わり得る。
【０１７９】
タンパク質成分の量を変えて、動物由来の卵白に見られる割合と一致する割合で混合し、噴霧乾燥して、水の添加によって再構成され得る乾燥した卵白タンパク質として包装され得る。あるいは、卵タンパク質混合物を加熱に供し得、物質の結果として生じるゲル化を、冷蔵した既製の卵白として包装することができる。タンパク質混合物の組成、ｐＨ、水分率、加熱速度等の因子を変化させて、コンシステンシーおよび食味（ｐａｌａｔａｂｉｌｉｔｙ）を変化させることができる。
【０１８０】
（実施例５：卵からの卵白の単離）
【０１８１】
ひびのない卵を屋外に少なくとも３０分間放置することによって、卵を室温（例えば、２５℃）にする。卵白を卵黄から分離する。
【０１８２】
（実施例６：泡立たせた卵白または卵白タンパク質組成物の起泡および泡安定性）
【０１８３】
卵白または卵白タンパク質組成物（１０ｍＬ）を５０ｍＬのＰｙｒｅｘビーカーに添加する。０．５インチのスチール製ブラシアタッチメントを有するＤｒｅｍｅｌ３０００可変速度ロータリーツールを載せたＤｒｅｍｅｌロータリーツールワークステーションのスタンドにビーカーを置く。スタンドを調整してＤｒｅｍｅｌをビーカーの中に下げたときにブラシがビーカーの底に僅かに接し、卵白の中に完全に浸漬されるようにする。この浸漬された開始位置から、Ｄｒｅｍｅｌツールを始動して速度設定を３にする。スチールブラシによって卵白を１分間泡立てる。１分後にＤｒｅｍｅｌツールを止め、アタッチメントを上昇させ、ビーカーを取り出す。
【０１８４】
少なくとも０．５ｍｍの精度を有するカリパスを使用して、液体と泡との界面から泡と空気との界面までの距離として泡高を測定する。液体が見えない場合には、泡高はビーカーの底部から泡と空気との界面の頂部までの距離として測定する。
【０１８５】
浸出および／または泡の安定性を測定するため、液体の量をビーカーの底部から液体と泡との界面までの距離として、Ｄｒｅｍｅｌツールを停止してから１０分後にカリパスを使用して測定する。Ｄｒｅｍｅｌツールを停止してから３０分後に再び液体の量を測定する。
【０１８６】
泡立てた卵白の泡高はおよそ３０ｍｍである。
【０１８７】
泡立てた卵白タンパク質組成物の泡高はおよそ３６．２５ｍｍであり得る。
【０１８８】
泡立てた卵白の泡浸出は１０分後におよそ２．５ｍｍ、３０分後に８ｍｍである。
【０１８９】
泡立てた卵白タンパク質組成物の泡浸出は１０分後におよそ０ｍｍ、３０分後に０．５ｍｍである。
【０１９０】
（実施例７：泡立てた卵白または卵白タンパク質組成物の泡強度およびテクスチャー解析）
【０１９１】
再結晶皿を少なくとも４０ｍｍの泡立てた卵白の泡または泡立てた卵白タンパク質組成物の泡で満たす。Ｂｒｏｏｋｆｉｅｌｄ  ＣＴ３テクスチャーアナライザーのＢｒｏｏｋｆｉｅｌｄ  ＴＡ−ＭＰプローブを使用して、トリガー値３ｇを、変形２０ｍｍとともに設定する。ゼロ高さを卵白の泡または卵白タンパク質組成物の泡の表面の上５ｍｍ未満と設定する。ノーマル設定で少なくとも３連で、卵白または卵白タンパク質組成物を泡立てた直後に試験を行う。浸出による誤差を最小化するため、泡立てた卵白または泡立てた卵白タンパク質組成物は、泡立ててから３０分以内に試験する。以前の試験からの崩壊したいかなる気泡も次の試験に誤差をもたらさないように、試験の間には以前試験しなかった異なる表面の泡の領域を選択する。誤差の測定にはトリガー値の前の初期ノイズを考慮する。試料あたり実施した３回の試行の間のピークロードの差も記録する。
【０１９２】
例えば図１８に示すように、泡立てた卵白の泡強度はおよそ３８ｇである。
【０１９３】
例えば図１８に示すように、泡立てた卵白タンパク質組成物の泡強度はおよそ６２ｇである。
【０１９４】
（実施例８：調理された卵白または卵白タンパク質組成物のゲル強度）
【０１９５】
卵白または卵白タンパク質組成物（１０ｍＬ）を５０ｍＬの円錐形ファルコンチューブに添加する。チューブを水浴中、９５℃で９分間煮沸する。チューブを取り出して室温まで冷却する。チューブをＢｒｏｏｋｆｉｅｌｄ  ＣＴ３テクスチャーアナライザーのチューブホルダーに入れ、調理された卵白または卵白タンパク質組成物の表面上約２ｍｍまでＢｒｏｏｋｆｉｅｌｄ  ＴＡ−１０プローブを下げる。トリガー値３ｇおよび変形２ｍｍでアナライザーを作動させる。調理された卵白または卵白タンパク質組成物のゲル強度を、最初の試行における２ｍｍの変形を超えて見られるピーク硬さとして測定する。
【０１９６】
調理された卵白のゲル強度はおよそ５００〜７００ｇである。
【０１９７】
調理された卵白タンパク質組成物のゲル強度はおよそ１５０〜５００ｇである。
【０１９８】
（実施例９：卵白または卵白タンパク質組成物の乳化能力およびエマルジョン安定性）
【０１９９】
乳化能力を評価するため、卵白または卵白タンパク質組成物を含有する溶液に油を徐々に添加する。水中油エマルジョンから油中水エマルジョンに遷移するために必要な油の量を決定する。
【０２００】
エマルジョンの安定性を評価するため、エマルジョンをある条件に放置した後、エマルジョンから分離した油または水の量を決定する。
【０２０１】
（実施例１０：卵白または卵白タンパク質組成物を含むエンジェルフードケーキ（ａｎｇｅｌ  ｆｏｏｄ  ｃａｋｅ））
【０２０２】
卵白または卵白タンパク質組成物（３０ｇ）を室温にして、泡立て用アタッチメントを備えたＫｉｔｃｈｅｎＡｉｄスタンドミキサーの混合ボウルに入れる。柔らかなピークが形成されるまで、卵白または卵白タンパク質組成物を速度５で強くかき混ぜる。微細に顆粒化した糖（１８ｇ）をゆっくりと加える。硬いピークが形成されるまで混合物を速度８で強くかき混ぜる。別のボウルに糖（１８ｇ）と小麦粉（２４ｇ）をともに篩にかけて入れる。糖と小麦粉の混合物を速度２で混合物中に混ぜ入れる。このこねものを、丸いエンジェルフードケーキ用鍋にスプーンで入れ、予熱したオーブン中、２００°Ｆで３０分焼く。鍋をオーブンから取り出し、直ちに逆さにして冷却し、その後、ケーキを鍋から取り出す。
【０２０３】
本明細書において本発明の好ましい実施形態を示し、説明したが、これらの実施形態は例示のみのために提供していることは当業者には明らかである。今や当業者であれば、本発明から逸脱することなく、多くの変形、変化および置換に気づくことができる。本発明を実施するにあたって、本明細書で説明した本発明の実施形態に種々の選択肢を利用し得ることを理解されたい。以下の特許請求の範囲は本発明の範囲を定義し、これらの特許請求の範囲およびその等価物の範囲内の方法および構造がそれによって網羅されていることが意図されている。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７】
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【図１８】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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