(57)【要約】  本願は、癌に罹患している対象を処置するための方法であって、治療有効量のプログラム死−１（ＰＤ−１）またはプログラム死リガンド−１（ＰＤ−Ｌ１）に特異的に結合する抗体またはその抗原結合部分およびＣ−Ｘ−Ｃケモカイン受容体４（ＣＸＣＲ４）またはＣ−Ｘ−Ｃモチーフケモカイン１２（ＣＸＣＬ１２）に特異的に結合する抗体またはその抗原結合部分の組合せを対象に投与することを含む方法を提供する。本願はまた、癌に罹患している対象を処置するためのキット、１つ以上の用量のＰＤ−１またはＰＤ−Ｌ１に特異的に結合する抗体またはその抗原結合部分、１つ以上の用量のＣＸＣＲ４またはＣＸＣＬ１２に特異的に結合する抗体またはその抗原結合部分、および対象を処置するための該抗体またはその部分を使用するための指示書を含むキットを提供する。
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
癌に罹患している対象を処置するための方法であって、治療有効量の、
（ａ）プログラム死−１（ＰＤ−１）またはプログラム死リガンド−１（ＰＤ−Ｌ１）に特異的に結合する抗体またはその抗原結合部分；および
（ｂ）Ｃ−Ｘ−Ｃケモカイン受容体４（ＣＸＣＲ４）またはＣ−Ｘ−Ｃモチーフケモカイン１２（ＣＸＣＬ１２）に特異的に結合する抗体またはその抗原結合部分
の組合せを対象に投与することを含む、方法。
【請求項２】
ＰＤ−１に結合する抗体またはその抗原結合部分が、ＰＤ−１およびＰＤ−Ｌ１間の相互作用を破壊し、ＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１シグナル伝達を阻害する、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
ＰＤ−１に特異的に結合する抗体またはその抗原結合部分が、ヒトＰＤ−１への結合に対してニボルマブと交差競合する、請求項１または２に記載の方法。
【請求項４】
ＰＤ−１に特異的に結合する抗体またはその抗原結合部分が、キメラ、ヒト化またはヒトモノクローナル抗体またはその部分である、請求項１−３のいずれかに記載の方法。
【請求項５】
ＰＤ−１に特異的に結合する抗体またはその抗原結合部分が、ヒトＩｇＧ１またはＩｇＧ４アイソタイプの重鎖定常領域を含む、請求項１−４のいずれかに記載の方法。
【請求項６】
ＰＤ−１に特異的に結合する抗体が、ニボルマブ(nivolumab)である、請求項１−５のいずれかに記載の方法。
【請求項７】
ＰＤ−１に特異的に結合する抗体が、ペムブロリズマブ(pembrolizumab)である、請求項１−５のいずれかに記載の方法。
【請求項８】
ＰＤ−Ｌ１に結合する抗体またはその抗原結合部分が、ＰＤ−１およびＰＤ−Ｌ１間の相互作用を破壊し、ＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１シグナル伝達を阻害する、請求項１に記載の方法。
【請求項９】
ＰＤ−Ｌ１に特異的に結合する抗体またはその抗原結合部分が、ヒトＰＤ−Ｌ１への結合に対してＢＭＳ−９３６５５９と指定された抗体と交差競合する、請求項１または８に記載の方法。
【請求項１０】
ＰＤ−Ｌ１に特異的に結合する抗体またはその抗原結合部分が、キメラ、ヒト化またはヒトモノクローナル抗体またはその部分である、請求項１、８および９のいずれかに記載の方法。
【請求項１１】
ＰＤ−Ｌ１に特異的に結合する抗体またはその抗原結合部分が、ヒトＩｇＧ１またはＩｇＧ４アイソタイプの重鎖定常領域を含む、請求項１および８−１０のいずれかに記載の方法。
【請求項１２】
ＰＤ−１に特異的に結合する抗体が、ＢＭＳ−９３６５５９と指定された抗体である、請求項１および８−１１のいずれかに記載の方法。
【請求項１３】
ＰＤ−Ｌ１に特異的に結合する抗体が、アテゾリズマブ(atezolizumab)、デュルバルマブ(durvalumab)、アベルマブ(avelumab)、またはＳＴＩ−Ａ１０１４と指定された抗体である、請求項１および８−１１のいずれかに記載の方法。
【請求項１４】
ＣＸＣＲ４に結合する抗体またはその抗原結合部分が、ＣＸＣＲ４およびＣＸＣＬ１２間の相互作用を破壊し、ＣＸＣＲ４／ＣＸＣＬ１２シグナル伝達を阻害する、請求項１に記載の方法。
【請求項１５】
ＣＸＣＲ４に特異的に結合する抗体またはその抗原結合部分が、ヒトＣＸＣＲ４への結合に対してウロクプルマブ(ulocuplumab)と交差競合する、請求項１または１４に記載の方法。
【請求項１６】
ＣＸＣＲ４に特異的に結合する抗体またはその抗原結合部分が、キメラ、ヒト化またはヒトモノクローナル抗体またはその部分である、請求項１、１４および１５のいずれかに記載の方法。
【請求項１７】
ＣＸＣＲ４に特異的に結合する抗体またはその抗原結合部分が、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４アイソタイプの重鎖定常領域を含む、請求項１および１４−１６のいずれかに記載の方法。
【請求項１８】
ＣＸＣＲ４に特異的に結合する抗体またはその抗原結合部分が、ヒトＩｇＧ１アイソタイプの重鎖定常領域を含む、請求項１７に記載の方法。
【請求項１９】
ＣＸＣＲ４に特異的に結合する抗体またはその抗原結合部分が、ヒトＩｇＧ３アイソタイプの重鎖定常領域を含む、請求項１７に記載の方法。
【請求項２０】
ＣＸＣＲ４に特異的に結合する抗体が、ウロクプルマブである、請求項１および１４−１７のいずれかに記載の方法。
【請求項２１】
ＣＸＣＲ４に特異的に結合する抗体が、ウロクプルマブのヒトＩｇＧ１変異体である、請求項１および１４−１７のいずれかに記載の方法。
【請求項２２】
ＣＸＣＲ４に特異的に結合する抗体が、ウロクプルマブのヒトＩｇＧ３変異体である、請求項１および１４−１７のいずれかに記載の方法。
【請求項２３】
ＣＸＣＲ４に特異的に結合する抗体が、ｃ４１４Ｈ５、ｃ５１５Ｈ７、Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｉ、６Ｃ７、およびｈ３Ｇ１  ０．Ａ５７．Ａ５８と指定された抗体から選択される、請求項１および１４−１７のいずれかに記載の方法。
【請求項２４】
ＣＸＣＬ１２に結合する抗体またはその抗原結合部分が、ＣＸＣＲ４およびＣＸＣＬ１２間の相互作用を破壊し、ＣＸＣＲ４／ＣＸＣＬ１２シグナル伝達を阻害する、請求項１に記載の方法。
【請求項２５】
ＣＸＣＬ１２に結合する抗−ＣＸＣＬ１２抗体またはその抗原結合部分が、２Ａ５と指定された抗体または１Ｈ２と指定された抗体と同じＣＸＣＬ１２ａのエピトープ領域に結合する、請求項１または２４に記載の方法。
【請求項２６】
ＣＸＣＬ１２に結合する抗体またはその抗原結合部分が、キメラ、ヒト化またはヒトモノクローナル抗体またはその部分である、請求項１、２４および２５のいずれかに記載の方法。
【請求項２７】
ＣＸＣＬ１２に結合する抗体またはその抗原結合部分が、ヒトＩｇＧ１またはＩｇＧ４アイソタイプの重鎖定常領域を含む、請求項１および２４−２６のいずれかに記載の方法。
【請求項２８】
ＣＸＣＬ１２に結合する抗体が、２Ａ５と指定された抗体である、請求項１および２４−２７のいずれかに記載の方法。
【請求項２９】
ＣＸＣＬ１２に結合する抗体が、１Ｈ２と指定された抗体である、請求項１および２４−２６のいずれかに記載の方法。
【請求項３０】
癌が、固形腫瘍である、請求項１−２９のいずれかに記載の方法。
【請求項３１】
固形腫瘍が、膵臓癌（ＰＡＣ）、小細胞肺癌（ＳＣＬＣ）または肝細胞癌腫（ＨＣＣ）である、請求項３０に記載の方法。
【請求項３２】
固形腫瘍が、扁平上皮癌、非小細胞性肺癌、扁平上皮非小細胞性肺癌（ＮＳＣＬＣ）、非扁平上皮ＮＳＣＬＣ、神経膠腫、消化器癌、腎臓癌、卵巣癌、肝臓癌、結腸直腸癌、子宮内膜癌、腎臓癌、前立腺癌、甲状腺癌、神経芽腫、グリア芽腫、胃癌、膀胱癌、肝臓癌、乳癌、大腸癌腫、頭頸部癌、胃癌、胚細胞腫瘍、小児肉腫、副鼻腔ナチュラルキラー、黒色腫、皮膚癌、骨癌、子宮頸癌、子宮癌、卵管の癌腫、子宮内膜の癌腫、頸部の癌腫、膣の癌腫、外陰の癌腫、肛門領域の癌、精巣癌、食道癌、小腸の癌、内分泌系の癌、副甲状腺の癌、副腎の癌、軟組織の肉腫、尿道の癌、尿管の癌、陰茎の癌、腎盂の癌腫、中枢神経系（ＣＮＳ）の新生物、原発性ＣＮＳリンパ腫、腫瘍の血管形成、脊髄の腫瘍、脳の癌、脳幹神経膠腫、下垂体腺腫、カポジ肉腫、類表皮癌、扁平上皮癌、小児固形腫瘍、環境誘発性の癌、ウイルス関連の癌、およびウイルス起源の癌から選択される癌である、請求項３０に記載の方法。
【請求項３３】
癌が、血液悪性腫瘍である、請求項１−２９のいずれかに記載の方法。
【請求項３４】
血液悪性腫瘍が、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、ホジキンリンパ腫（ＨＬ）、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、多発性骨髄腫、くすぶり型骨髄腫、意義不明の単クローン性ガンマグロブリン血症（ＭＧＵＳ）、進行性、転移性、難治性および／または再発性血液悪性腫瘍、および該血液悪性腫瘍の任意の組合せから選択される、請求項３３に記載の方法。
【請求項３５】
ＰＤ−１に特異的に結合する抗体またはその抗原結合部分が、２、３または４週毎に１回、約０．１から約２０．０ｍｇ／ｋｇ体重の範囲である用量で投与される、請求項１−３４のいずれかに記載の方法。
【請求項３６】
ＰＤ−１に特異的に結合する抗体またはその抗原結合部分が、２または３週毎に１回、約２または約３ｍｇ／ｋｇ体重の用量で投与される、請求項３５に記載の方法。
【請求項３７】
ＰＤ−Ｌ１に特異的に結合する抗体またはその抗原結合部分が、２、３または４週毎に１回、約０．１から約２０．０ｍｇ／ｋｇ体重の範囲である用量で投与される、請求項１−３４のいずれかに記載の方法。
【請求項３８】
ＰＤ−Ｌ１に特異的に結合する抗体またはその抗原結合部分が、２または３週毎に１回、約３、約１０または約１５ｍｇ／ｋｇ体重の用量で投与される、請求項３７に記載の方法。
【請求項３９】
ＣＸＣＲ４に特異的に結合する抗体またはその抗原結合部分が、１週または２週毎に１回、約１００から約２０００ｍｇの均一用量で投与される、請求項１−３８のいずれかに記載の方法。
【請求項４０】
ＣＸＣＲ４に特異的に結合する抗体またはその抗原結合部分が、１週毎に１回、約２００、約４００、約８００、または約１６００ｍｇの均一用量で投与される、請求項３９に記載の方法。
【請求項４１】
ＣＸＣＲ４に特異的に結合する抗体またはその抗原結合部分が、１週毎に１回、約２００または約４００ｍｇの均一用量で投与される、請求項４０に記載の方法。
【請求項４２】
ＣＸＣＲ４に特異的に結合する抗体またはその抗原結合部分が、２週毎に１回、約８００または約１６００ｍｇの均一用量で投与される、請求項３９に記載の方法。
【請求項４３】
ＣＸＣＬ１２に特異的に結合する抗体またはその抗原結合部分が、１週毎に１回、約１００から約２０００ｍｇの均一用量で投与される、請求項１−３８のいずれかに記載の方法。
【請求項４４】
ＣＸＣＬ１２に特異的に結合する抗体またはその抗原結合部分が、１週毎に１回、約２００、約４００、約８００、または約１６００ｍｇの均一用量で投与される、請求項４３に記載の方法。
【請求項４５】
ＣＸＣＬ１２に特異的に結合する抗体またはその抗原結合部分が、２週毎に１回、約１６００ｍｇの均一用量で投与される、請求項４３に記載の方法。
【請求項４６】
ＣＸＣＬ１２に特異的に結合する抗体またはその抗原結合部分が、２、３または４週毎に１回、約０．１から約２０．０ｍｇ／ｋｇ体重の範囲である用量で投与される、請求項１−３８のいずれかに記載の方法。
【請求項４７】
ＣＸＣＬ１２に特異的に結合する抗体またはその抗原結合部分が、２または３週毎に１回、約３または約１０ｍｇ／ｋｇ体重の用量で投与される、請求項４６に記載の方法。
【請求項４８】
（ａ）ＰＤ−１に特異的に結合し、ＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１シグナル伝達を阻害する抗体またはその抗原結合部分、ここで、抗ＰＤ−１抗体またはその部分が、２または３週毎に１回、約２または約３ｍｇ／ｋｇ体重の用量で投与される；および
（ｂ）ＣＸＣＲ４に特異的に結合し、ＣＸＣＲ４／ＣＸＣＬ１２シグナル伝達を阻害する抗体またはその抗原結合部分、ここで、抗−ＣＸＣＲ４抗体またはその部分が、１週毎に１回、約２００、約４００または約８００ｍｇの均一用量で投与される
の組合せを対象に投与することを含む、請求項１−３４のいずれかに記載の方法。
【請求項４９】
ＣＸＣＲ４に特異的に結合する抗体が、エフェクター機能を媒介するＦｃ領域を含む抗体である、請求項４８に記載の方法。
【請求項５０】
エフェクター機能が、抗体依存性細胞毒性（ＡＤＣＣ）、抗体依存性細胞食作用（ＡＤＣＰ）および／または補体依存性細胞毒性（ＣＤＣ）を含む、請求項４９に記載の方法。
【請求項５１】
ＰＤ−１に特異的に結合する抗体が、２週毎に１回、約３ｍｇ／ｋｇ体重の用量で投与されるニボルマブであり、ＣＸＣＲ４に特異的に結合する抗体が、１週毎に１回、約２００から約８００ｍｇの均一用量で投与されるウロクプルマブである、請求項４８に記載の方法。
【請求項５２】
ＰＤ−１に特異的に結合する抗体が、３週毎に１回、約２ｍｇ／ｋｇ体重の用量で投与されるペムブロリズマブであり、ＣＸＣＲ４に特異的に結合する抗体が、１週毎に１回、約２００から約８００ｍｇの均一用量で投与されるウロクプルマブである、請求項４８に記載の方法。
【請求項５３】
ＣＸＣＲ４に特異的に結合する抗体が、ウロクプルマブのヒトＩｇＧ１変異体である、請求項５１または５２に記載の方法。
【請求項５４】
ＣＸＣＲ４に特異的に結合する抗体が、ウロクプルマブのヒトＩｇＧ３変異体である、請求項５１または５２に記載の方法。
【請求項５５】
ＰＤ−１に特異的に結合する抗体またはその抗原結合部分およびＣＸＣＲ４に特異的に結合する抗体またはその抗原結合部分が、静脈内投与のために製剤化される、請求項４８に記載の方法。
【請求項５６】
ＰＤ−１に特異的に結合する抗体またはその抗原結合部分およびＣＸＣＲ４に特異的に結合する抗体またはその抗原結合部分が、連続して対象に投与される、請求項４８に記載の方法。
【請求項５７】
ＰＤ−１に特異的に結合する抗体またはその抗原結合部分およびＣＸＣＲ４に特異的に結合する抗体またはその抗原結合部分が、互いに３０分以内に投与される、請求項５６に記載の方法。
【請求項５８】
（ａ）ＣＸＣＲ４に特異的に結合する抗体またはその抗原結合部分の前に、ＰＤ−１に特異的に結合する抗体またはその抗原結合部分が投与されるか；または
（ｂ）ＰＤ−１に特異的に結合する抗体またはその抗原結合部分の前に、ＣＸＣＲ４に特異的に結合する抗体またはその抗原結合部分が投与される
請求項５６に記載の方法。
【請求項５９】
ＰＤ−１に特異的に結合する抗体またはその抗原結合部分およびＣＸＣＲ４に特異的に結合する抗体またはその抗原結合部分が、別々の組成物において同時に投与される、請求項４８に記載の方法。
【請求項６０】
ＰＤ−１に特異的に結合する抗体またはその抗原結合部分およびＣＸＣＲ４に特異的に結合する抗体またはその抗原結合部分が、同時投与のために単一の組成物として混合される、請求項４８に記載の方法。
【請求項６１】
ＰＤ−１に特異的に結合する抗体またはその抗原結合部分および／またはＣＸＣＲ４に特異的に結合する抗体またはその抗原結合部分が、治療量以下の用量で投与される、請求項４８に記載の方法。
【請求項６２】
（ａ）プログラム死−１（ＰＤ−１）またはプログラム死リガンド−１（ＰＤ−Ｌ１）に特異的に結合する抗体またはその抗原結合部分；および
（ｂ）Ｃ−Ｘ−Ｃケモカイン受容体４（ＣＸＣＲ４）またはＣ−Ｘ−Ｃモチーフケモカイン１２（ＣＸＣＬ１２）に特異的に結合する抗体またはその抗原結合部分
の組合せを対象に投与することを含む癌に罹患している対象を処置するための方法であって、少なくとも１つの抗体またはその部分が、治療量以下の用量で投与され、治療量以下の用量（単数）または用量（複数）が、対象における有害事象を低下させる、方法。
【請求項６３】
（ａ）プログラム死−１（ＰＤ−１）またはプログラム死リガンド−１（ＰＤ−Ｌ１）に特異的に結合する抗体またはその抗原結合部分；および
（ｂ）Ｃ−Ｘ−Ｃケモカイン受容体４（ＣＸＣＲ４）またはＣ−Ｘ−Ｃモチーフケモカイン１２（ＣＸＣＬ１２）に特異的に結合する抗体またはその抗原結合部分
の組合せを対象に投与することを含む癌に対する処置を受けている対象における有害事象を低下させるための方法であって、少なくとも１つの抗体またはその部分が、治療量以下の用量で投与される、方法。
【請求項６４】
抗体の組合せの投与が、臨床的利益が観察される限り、または管理し難い毒性または疾患進行が起こるまで、継続される、請求項１−６３のいずれかに記載の方法。
【請求項６５】
対象が、ヒトである、請求項１−６４のいずれかに記載の方法。
【請求項６６】
癌に罹患している対象を処置するためのキットであって、
（ａ）約０．１から約２０ｍｇ／ｋｇ体重の範囲である１つ以上の用量のＰＤ−１またはＰＤ−Ｌ１に特異的に結合する抗体またはその抗原結合部分；
（ｂ）約２００から約１６００ｍｇの範囲である１つ以上の用量のＣＸＣＲ４またはＣＸＣＬ１２に特異的に結合する抗体またはその抗原結合部分；および
（ｃ）請求項１−３４のいずれかに記載の方法において、ＰＤ−１またはＰＤ−Ｌ１に特異的に結合する抗体またはその部分およびＣＸＣＲ４またはＣＸＣＬ１２に特異的に結合する抗体またはその部分を使用するための指示書
を含む、キット。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本願を通じて、種々の文献が、括弧書きで著者名および日付によって、または特許番号または特許公報番号によって引用される。これらの文献の全引用は、特許請求の範囲の直前の明細書の最後に見出すことができる。これらの文献の開示は、本願に記載されている、および本願に請求されている本願発明の日付の時点で、当業者に知られている最先端をより完全に記載するために、出典明示により本願明細書にそれらの全体を包含させる。しかしながら、出典の引用は、かかる出典が本願発明の先行技術である認識として解釈されるべきではない。
【０００２】
関連出願に対する相互参照
本願は、３５  Ｕ．Ｓ．Ｃ．  §１１９（ｅ）の下に、２０１５年６月１２日に出願された米国仮出願第６２／１７４，９３１号について優先権を有し、その全体が本願明細書に包含される。
【０００３】
技術分野
本願発明は、プログラム死−１（ＰＤ−１）／プログラム死リガンド−１（ＰＤ−Ｌ１）シグナル伝達経路を遮断する抗体およびＣ−Ｘ−Ｃケモカイン受容体４（ＣＸＣＲ４）／Ｃ−Ｘ−Ｃモチーフケモカイン１２（ＣＸＣＬ１２）シグナル伝達経路を遮断する抗体の組合せを対象に投与することを含む対象において癌を処置するための方法に関する。
【背景技術】
【０００４】
発明の背景
ヒトの癌は、免疫系によって認識できる可能性のある新抗原を産生する多数のジェネティックおよびエピジェネティックな変化を有する（Sjoblom et al., 2006）。ＴおよびＢリンパ球で構成される適応免疫系は、種々の腫瘍抗原に応答する広範な能力および精巧な特異性で強力な抗癌能力を有する。さらに、免疫系は、かなりの可塑性および記憶成分を示す。適応免疫系のこれらの全ての特性の上手な利用は、全ての癌処置様式の中で、免疫療法をユニークにさせる。
【０００５】
最近まで、癌免疫療法は、活性化エフェクター細胞の養子免疫伝達、関連抗原に対する免疫化、またはサイトカインのような非特異的免疫刺激剤を提供することによって、抗腫瘍免疫応答を増強するアプローチに対して実質的な努力を集中させていた。しかしながら、過去１０年間に、特異的な免疫チェックポイント経路インヒビターを開発するための徹底した努力により、進行性黒色腫を有する患者の処置のための細胞毒性Ｔリンパ球抗原−４（ＣＴＬＡ−４）に結合し、阻害する抗体（Ａｂ）であるイピリムマブ（ＹＥＲＶＯＹ（登録商標））の開発（Hodi et al., 2010）、および、活性化ＴおよびＢリンパ球によって発現される細胞表面の負の調節分子であるＰＤ−１受容体に特異的に結合し、阻害性ＰＤ−１／ＰＤ−１リガンド経路をブロックするＡｂ、例えばニボルマブ(nivolumab)（ＯＰＤＩＶＯ（登録商標））およびペムブロリズマブ(pembrolizumab)（ＫＥＹＴＲＵＤＡ（登録商標））の開発を含む癌を処置するための新規な免疫治療アプローチを提供された（Topalian et al., 2012a, b; Topalian et al., 2014; Hamid et al., 2013; Hamid and Carvajal, 2013; McDermott and Atkins, 2013）。この経路はまた、ＢＭＳ−９３６５５９（ＰＣＴ公開ＷＯ  ２０１３／１７３２２３）およびアテゾリズマブ(atezolizumab)（ＴＥＣＥＮＴＲＩＱ（登録商標）；Fehrenbacher et al., 2016）を含むＰＤ−Ｌ１に特異的に結合するＡｂによって破壊することができる。
【０００６】
（以前にＢＭＳ−９３６５５８、ＭＤＸ−１１０６またはＯＮＯ−４５３８と指定され、米国特許第８，００８，４４９号で５Ｃ４と指定された）ニボルマブは、ＰＤ−１リガンドであるＰＤ−Ｌ１およびＰＤ−Ｌ２との相互作用を選択的に防止し（米国特許第８，００８，４４９号；Wang et al., 2014）、それにより（腫瘍を含む）外来および自己抗原の両方に対する抗原特異的Ｔ細胞応答の下方制御をブロックし、これらの抗原に対する免疫応答を増強する（McDermott and Atkins, 2013）完全ヒト免疫グロブリン（Ｉｇ）Ｇ４（Ｓ２２８Ｐ）モノクローナル抗体（ｍＡｂ）である。ニボルマブは、転移性黒色腫、扁平上皮非小細胞性肺癌（ＮＳＣＬＣ）、腎細胞癌腫（ＲＣＣ）および古典的なホジキンリンパ腫（ｃＨＬ）に対して最近承認を受けており、単剤療法として、またはイピリムマブまたは他の抗癌剤と組み合わせて、膵臓癌（ＰＡＣ）、小細胞肺癌（ＳＣＬＣ）、頭頸部癌、膀胱癌および血液悪性腫瘍を含む種々の腫瘍型における有効性について現在臨床的に評価されている（例えば、Topalian et al., 2012b; WO 2013/173223; Ansell et al., 2015;および臨床試験ウェブサイト、http://www.clinicaltrials.gov上のNCT02309177、NCT01928394、NCT02105636、NCT02387996およびNCT02329847参照）。しかしながら、ニボルマブと他の標的療法との組合せは、応答率をさらに改善し、より高いパーセントの患者において生存を延長し得る。具体的には、例えば、ニボルマブと腫瘍を取り囲む保護的間質微小環境を標的とする治療との組合せは、活性化免疫細胞の腫瘍部位への浸潤を増強し、それにより腫瘍細胞死滅を増加させ、当該治療から利益を得ることができる患者の範囲を広げることができる。
【０００７】
（以前にＢＭＳ−９３６５６４またはＭＤＸ−１３３８と指定された、およびＷＯ  ２００８／０６０３６７においてＦ７と指定された）ウロクプルマブ(ulocuplumab)は、白血球、血小板および他の非造血細胞（腫瘍間質微小環境を含む）上に発現されるＣＸＣＲ４に特異的な完全ヒトＩｇＧ４（Ｓ２２４Ｐ）ｍＡｂである（Balkwill, 2004）。ＣＸＣＲ４はまた、大多数のヒト癌において内因性リガンドであるＣＸＣＬ１２とともに過剰発現され、増殖、接着、転移、血管形成および生存を含む癌の病因において基本的な役割を果たす（Domanska et al., 2013; Duda et al., 2011; Balkwill, 2004; Pitt et al., 2015; Passoro et al., 2015; ＷＯ  ２００８／０６０３６７）。ウロクプルマブは、安全および許容プロフィールで、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、多発性骨髄腫（ＭＭ）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、濾胞性リンパ腫（ＦＬ）およびびまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）を含む種々の血液悪性腫瘍を有する対象において２つのフェーズ１臨床試験において評価されている。ＡＭＬおよびＭＭコホートからの有効性データが、示されており、標準治療へのウロクプルマブの追加についての有望な結果を示している（Becker et al., 2014; Ghobrial et al., 2014）。
【０００８】
証拠は、ＣＸＣＬ１２が免疫抑制性であり得、腫瘍を取り囲む間質を支持し得、他の点では腫瘍細胞死滅をもたらす免疫メカニズムから腫瘍を保護することを示唆することが示されている（Domanska et al., 2013; Duda et al., 2011; Burger and Kipps, 2006）。ＰＡＣおよびＳＣＬＣを含む多数の転移性腫瘍の難治性は、活性化リンパ球が腫瘍部位に接近することを妨げる腫瘍を取り囲む免疫抑制性環境から生じ得る。したがって、抗−ＣＸＣＲ４  ＡｂでのＣＸＣＲ４遮断を介する間質微小環境の破壊が免疫標的療法に対する腫瘍の感受性を増加させ、免疫細胞の腫瘍部位への浸透を可能にすることができるか否かを決定することは興味深い。さらに、ウロクプルマブは、ＣＸＣＲ４を発現する腫瘍細胞の直接的なインビトロでの細胞死滅活性が証明されているため（Kuhne et al., 2013; ＷＯ  ２０１３／０７１０６８）、腫瘍に対する直接的な細胞毒性に関与し得る。ＣＸＣＲ４はまた、癌患者において免疫抑制性制御性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）および骨髄由来抑制細胞（ＭＤＳＣ）上で過剰発現され（Wang et al., 2012; Obermajer et al., 2011; Katoh and Watanabe, 2015）、Ｔｒｅｇおよび／またはＭＤＳＣの抗−ＣＸＣＲ４介在枯渇は抗腫瘍効果の増強に寄与し得る。
【０００９】
本願は、ＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１およびＣＸＣＲ４／ＣＸＣＬ１２シグナル伝達経路のＡｂ介在デュアル遮断を評価する試験であって、これらの経路の組合せ阻害が標準治療によってあまり処置されない癌に対して利益をもたらすか否かを決定する試験に関する。抗−ＣＸＣＲ４／抗−ＣＸＣＬ１２および抗−ＰＤ−１／抗−ＰＤ−Ｌ１の作用のメカニズムの組合せは、免疫抑制性腫瘍内微小環境およびＴ細胞活性化を同時に標的化し、したがって腫瘍細胞死滅を増加させるユニークな機会を提供する。
【発明の概要】
【００１０】
発明の概要
本願は、癌に罹患している対象を処置するための方法であって、治療有効量の、（ａ）ＰＤ−１またはＰＤ−Ｌ１に特異的に結合するＡｂまたはその抗原結合部分；および（ｂ）ＣＸＣＲ４またはＣＸＣＬ２に特異的に結合するＡｂまたはその抗原結合部分の組合せを対象に投与することを含む、方法を提供する。１つの態様において、ＰＤ−１またはＰＤ−Ｌ１に特異的に結合するＡｂは、ＰＤ−１およびＰＤ−Ｌ１間の相互作用を破壊し、ＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１シグナル伝達を阻害する。他の態様において、ＣＸＣＲ４またはＣＸＣＬ２に結合するＡｂは、ＣＸＣＲ４およびＣＸＣＬ１２間の相互作用を破壊し、ＣＸＣＲ４／ＣＸＣＬ１２シグナル伝達を阻害する。さらなる態様において、癌は固形腫瘍、例えばＰＡＣ、ＳＣＬＣまたは肝細胞癌腫（ＨＣＣ）である。本願明細書に記載されている治療方法のいずれかの１つの態様において、ＰＤ−１に結合するＡｂは、ニボルマブまたはペムブロリズマブである。他の１つの態様において、ＰＤ−Ｌ１に特異的に結合するＡｂは、ＢＭＳ−９３６５５９、アテゾリズマブ、デュルバルマブ(durvalumab)、ＳＴＩ−Ａ１０１４またはアベルマブ(avelumab)である。さらに他の態様において、ＣＸＣＲ４に特異的に結合するＡｂは、ウロクプルマブ、または好ましくは、エフェクター機能を有するＦｃ領域、例えばヒトＩｇＧ１またはヒトＩｇＧ３アイソタイプのＦｃ領域を含むように修飾されたウロクプルマブである。さらなる態様において、ＣＸＣＬ２に特異的に結合するＡｂは、米国特許第８，４９６，９３１号において２Ａ５と指定されたｍＡｂである。
【００１１】
抗−ＣＸＣＲ４  Ａｂと組み合わせての抗−ＰＤ−１  Ａｂの使用を含む方法の１つの態様において、治療有効用量の抗−ＰＤ−１  Ａｂまたはその抗原結合部分は、約２、３または４週毎に１回、静脈内注入によって投与される約０．１から約２０ｍｇ／ｋｇ体重の範囲である。１つの好ましい態様において、抗−ＰＤ−１  Ａｂは、２または３週毎に１回、約２ｍｇ／ｋｇまたは約３ｍｇ／ｋｇの用量で投与される。これらの方法の他の１つの態様において、治療有効用量の抗−ＣＸＣＲ４  Ａｂまたはその抗原結合部分は、静脈内注入によって１週毎に１回投与される約５０から約２０００ｍｇの均一用量の範囲である。１つの好ましい態様において、抗−ＣＸＣＲ４  Ａｂは、１週毎に１回、約４００または約８００ｍｇの均一用量で投与される。
【００１２】
本願はまた、癌に罹患している対象を処置するためのキットであって、（ａ）約０．１から約２０ｍｇ／ｋｇ体重の範囲である１つ以上の用量のＰＤ−１またはＰＤ−Ｌ１に特異的に結合するＡｂまたはその抗原結合部分；（ｂ）約５０から約２０００ｍｇの範囲である１つ以上の用量のＣＸＣＲ４またはＣＸＣＬ１２に特異的に結合するＡｂまたはその抗原結合部分；および（ｃ）ＰＤ−１またはＰＤ−Ｌ１に特異的に結合するＡｂまたはその部分およびＣＸＣＲ４またはＣＸＣＬ１２に特異的に結合するＡｂまたはその部分を使用するための指示書を含む、キットを提供する。
【００１３】
本願発明の他の特徴および利点は、以下の詳細な説明および限定として解釈すべきではない実施例から明らかになる。本願を通じて引用された科学論文、ＧｅｎＢａｎｋエントリー、特許および特許出願を含む全ての引用文献の内容は、出典明示により明白に本願明細書に包含させる。
【図面の簡単な説明】
【００１４】
【図１】図１は、フローサイトメトリーによるマウスＫｐ１およびＫｐ３  ＳＣＬＣ細胞系におけるＣＸＣＲ４発現の評価を示す。
【００１５】
【図２】図２は、フローサイトメトリーによるＭＣ３８マウス結腸腺癌細胞系におけるＣＸＣＲ４発現の評価を示す。
【００１６】
【図３】図３は、フローサイトメトリーによるＣＤ８＋Ｔ細胞、Ｔエフェクター細胞および制御性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）におけるＣＸＣＲ４発現の評価を示す。
【００１７】
【図４】図４は、ＫＰ１腫瘍細胞系（ｐ５３；Ｒｂ１；ｐ１３０  ｎｕｌｌ；Ｂ６１２９Ｓ１／Ｊ  Ｆ１  マウス）由来の同系内因性ＣＸＣＲ４を発現するマウスＳＣＬＰモデルにおいて、単独でまたは組合せて使用される抗−ｍＣＸＣＲ４および抗−マウスＰＤ−１  Ａｂの腫瘍増殖に対する効果を示す。Ａ、コントロールと比較して、単一のＡｂでの処置からの腫瘍容積の中央変化。Ｂ、コントロールと比較して、Ａｂの組合せでの処置からの腫瘍容積の中央変化。ビヒクル：生理食塩水；ＫＬＨ  ｍＩｇＧ１（またはｍＩｇＧ１  ＫＬＨ）：マウスＩｇＧ１アイソタイプを有する抗−キーホールリンペットヘモシアニン（ＫＬＨ）ｍＡｂ；ｍＩｇＧ２ａ  ＫＬＨ：マウスＩｇＧ２ａアイソタイプを有する抗−ＫＬＨ  ｍＡｂ；ｍＣＸＣＲ４  ｍＩｇＧ１（４．８）：マウスＩｇＧ１アイソタイプを有する抗−マウスＣＸＣＲ４  Ａｂ（クローン４．８）；ｍＣＸＣＲ４  ｍＩｇＧ２ａ：マウスＩｇＧ２ａアイソタイプを有する抗−マウスＣＸＣＲ４  Ａｂ（クローン４．８）；ｍＰＤ−１  ｍＩｇＧ１（または簡潔に「ＰＤ−１」）：マウスＩｇＧ１アイソタイプを有する抗−ＰＤ−１  ｍＡｂ  ４Ｈ２。同様の略語が、マウス腫瘍モデルにおいて抗腫瘍有効性試験に関する他の図において使用される。
【００１８】
【図５】図５は、Ｋｐ３腫瘍細胞系（Ｐ５３；Ｒｂ１；ｐ１３０  ｎｕｌｌ；Ｂ６１２９Ｓ１／Ｊ  Ｆ１  マウス）由来の同系内因性ＣＸＣＲ４を発現しないマウスＳＣＬＰモデルにおいて、単独でまたは組合せて使用される抗−ｍＣＸＣＲ４  ＩｇＧ２ａおよび抗−マウスＰＤ−１  Ａｂの腫瘍増殖に対する効果を示す。Ａ、コントロールと比較して、単一のＡｂでの処置からの腫瘍容積の中央変化。Ｂ、コントロールと比較して、Ａｂの組合せでの処置からの腫瘍容積の中央変化。
【００１９】
【図６】図６は、ＭＣ３８腫瘍細胞系（ＢＣ５７ＢＩ／６マウス）由来のＣＸＣＲ４を発現しないマウス大腸癌腫モデルにおいて、単独でまたは組合せて使用される抗−ｍＣＸＣＲ４および抗−マウスＰＤ−１  Ａｂの効果を示す。Ａ、コントロールと比較して、単一のＡｂでの処置からの腫瘍容積の中央変化。Ｂ、コントロールと比較して、Ａｂの組合せでの処置からの腫瘍容積の中央変化。
【００２０】
【図７】図７は、ＣＸＣＲ４を発現しないＨ２２肝臓癌マウスモデルの増殖を阻害することにおける抗−ｍＣＸＣＲ４  ｍＩｇＧ２ａおよび抗−ｍＰＤ−１  ｍＩｇＧ１Ｄ２６５Ａ  Ａｂの組合せの効果を示す。Ａ、抗−ｍＣＸＣＲ４  プラス  抗−ｍＰＤ−１での処置からの８匹の個々のマウスの腫瘍容積の変化。Ｂ、抗−ｍＰＤ−１での処置からの８匹の個々のマウスの腫瘍容積の変化。Ｃ、アイソタイプコントロールの組合せでの処置からの８匹の個々のマウスの腫瘍容積の変化。Ｄ、（Ａ）から（Ｃ）において示される処置に対する腫瘍容積の中央変化。
【００２１】
【図８】図８は、ＳＣＬＣおよびＰＡＣを有する対象において治療Ａｂの組合せの安全性および有効性を評価するためのニボルマブと組み合わせてのウロクプルマブのフェーズ１／２試験の設計を要約する概略を示す。
【００２２】
【図９】図９は、１週毎に１回、２００ｍｇのウロクプルマブおよび２週毎に１回、３ｍｇ／ｋｇのニボルマブの組合せで投与される患者コホートにおいて循環ＣＤ３＋細胞（Ｔ細胞）に対する受容体占有（ＲＯ）を示す。データは、循環ＣＤ３＋細胞に対するウロクプルマブによる絶対％ＲＯとして示される。灰色の水平線は中央値を示す。各ドットは対象サンプルを表す。
【発明を実施するための形態】
【００２３】
発明の詳細な説明
本願発明は、対象において固形腫瘍を処置するための方法であって、抗−ＰＤ−１または抗−ＰＤ−Ｌ１  Ａｂおよび抗−ＣＸＣＲ４または抗−ＣＸＣＬ１２  Ａｂの組合せを対象に投与することを含む、方法に関する。
【００２４】
用語
本願明細書がより容易に理解され得るために、特定の用語を最初に定義する。本願において使用されるとき、本願明細書において明示的に別段提供される場合を除き、以下の用語のそれぞれは、以下に説明されている意味を有する。さらなる定義は、本願中に説明されている。
【００２５】
「投与」は、当業者に知られている種々の方法および送達系のいずれかを使用して、治療剤を含む組成物の対象への物理的導入を示す。治療Ａｂ、例えば抗−ＰＤ−１および抗−ＣＸＣＲ４  Ａｂの好ましい投与経路は、静脈内投与である。他の投与経路は、例えば注射または注入による、筋肉内、皮下、腹腔内、または他の非経口投与経路を含む。本願明細書において使用される「非経口投与」なるフレーズは、腸内および局所投与以外の投与様式を意味する。投与はまた、例えば、１回、複数回および／または長期間にわたって１回以上で行われ得る。
【００２６】
「有害事象」（ＡＥ）は、試験薬を投与された臨床的研究対象におけるあらゆる新たな不都合な医学的発生または既存の医学的状態の悪化であり、この処置と因果関係を有する必要はない。したがって、ＡＥは、試験薬に関連すると考えられるか否かにかかわらず、試験薬の使用と一時的に関連するあらゆる好ましくないおよび望ましくない徴候（例えば検査所見異常）、症状、または疾患であってよい。試験薬に対する因果関係は、医師によって決定され、全てのＡＥを評価するために使用される。因果関係は、「関連している」（すなわち、試験薬投与およびＡＥ間に合理的な因果関係がある）、または「関連していない」（すなわち、試験薬投与およびＡＥ間に合理的な因果関係がない）のいずれかであってよい。「合理的な因果関係」なる用語は、因果関係を示唆する証拠があることを意味する。「有害事象を低下させる」ための方法または用量の言及は、異なる処置レジメン、例えば、抗−ＰＤ−１／抗−ＰＤ−Ｌ１または抗−ＣＸＣＲ４／抗−ＣＸＣＬ１２  Ａｂでの単剤療法の使用と関連する１つ以上のＡＥの発生率および／または重症度を減少させる、処置レジメン、例えば、抗−ＰＤ−１／抗−ＰＤ−Ｌ１  Ａｂおよび抗−ＣＸＣＲ４／抗−ＣＸＣＬ１２  Ａｂの組合せを意味する。
【００２７】
「重篤な有害事象」（ＳＡＥ）は、任意の用量で死に至るあらゆる不都合な医学的発生である、生命に関わる（事象の時点で対象が死亡する危険性がある事象として定義される；より深刻であった場合、死を仮説的に引き起こしたかもしれない事象を言及しない）、入院患者の入院を必要とするかまたは現在の入院の延長を引き起こす、持続的または重大な能力障害／無能をもたらす、先天異常／出生異常である、および／または重要な医学的事象である（直ちに生命に関わらないか、死または入院をもたらさないかもしれないが、適当な医学的および科学的判断に基づいて、対象を危険にさらし得るか、またはより重大な結果を防ぐために介入を必要とし得る、医学的事象として定義される）。かかる重要な医学的事象の例は、限定はしないが、アレルギー性気管支けいれんに対する緊急治療室または在宅での集中治療、入院に至らない血液疾患または痙攣、および起こり得る薬物性肝傷害（ＤＩＬＩ）を含む。
【００２８】
「抗体」（Ａｂ）は、限定はしないが、抗原に特異的に結合し、ジスルフィド結合により相互連結された少なくとも２つの重（Ｈ）鎖および２つの軽（Ｌ）鎖を含む糖タンパク質免疫グロブリンまたはその抗原結合部分を含む。それぞれのＨ鎖は、重鎖可変領域（本明細書においてＶＨと省略される）および重鎖定常領域を含む。ＩｇＧ  Ａｂの重鎖定常領域は、３つの定常ドメイン、ＣＨ１、ＣＨ２およびＣＨ３を含む。それぞれの軽鎖は、軽鎖可変領域（本明細書においてＶＬと省略される）および軽鎖定常領域を含む。ＩｇＧ  Ａｂの軽鎖定常領域は１つの定常ドメイン、ＣＬを含む。ＶＨおよびＶＬ領域は、フレームワーク領域（ＦＲ）と称されるより保存されている領域が組み入れられている相補性決定領域（ＣＤＲ）と称される超可変領域にさらに分類することができる。それぞれのＶＨおよびＶＬは、以下の順番でアミノ末端からカルボキシ末端に配置されている、３つのＣＤＲおよび４つのＦＲを含む：ＦＲ１−ＣＤＲ１−ＦＲ２−ＣＤＲ２−ＦＲ３−ＣＤＲ３−ＦＲ４。重鎖および軽鎖の可変領域は、抗原と相互作用する結合ドメインを含む。Ａｂの定常領域は、免疫系の種々の細胞（例えば、エフェクター細胞）および古典的補体系の第１の成分（Ｃ１ｑ）を含む、宿主組織または因子への免疫グロブリンの結合を介在し得る。
【００２９】
Ｉｇは、一般的に知られているアイソタイプのいずれか由来であってよく、限定はしないが、ＩｇＡ、分泌型ＩｇＡ、ＩｇＧおよびＩｇＭを含む。ＩｇＧサブクラスはまた、当業者によく知られており、限定はしないが、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３およびＩｇＧ４を含む。「アイソタイプ」は、重鎖定常領域遺伝子によってコードされるＡｂクラスまたはサブクラス（例えば、ＩｇＭ、ＩｇＧ１またはＩｇＧ４）を示す。「抗体」なる用語は、一例として、天然および非天然Ａｂの両方；モノクローナルおよびポリクローナルＡｂ；キメラおよびヒト化Ａｂ；ヒトまたは非ヒトＡｂ；完全合成Ａｂ；および一本鎖Ａｂを含む。非ヒトＡｂは、ヒトにおけるその免疫原性を減少させるために、組換え方法により部分的または完全にヒト化され得る。明示的に記載されている場合を除き、文脈上他の意味を示す場合を除き、「抗体」なる用語はまた、前記免疫グロブリンのいずれかの抗原結合フラグメントまたは抗原結合部分を含み、一価および二価のフラグメントまたは部分、および一本鎖Ａｂを含む。
【００３０】
「単離された」Ａｂは、異なる抗原特異性を有する他のＡｂを実質的に含まないＡｂを示す（例えば、ＰＤ−１に特異的に結合する単離されたＡｂは、ＰＤ−１以外の抗原に特異的に結合するＡｂを実質的に含まない）。しかしながら、ＰＤ−１に特異的に結合する単離されたＡｂは、他の抗原、例えば、異なる種由来のＰＤ−１分子に対する交差反応性を有し得る。さらに、単離されたＡｂは、他の細胞物質および／または化学物質を実質的に含まないように精製され得る。
【００３１】
「モノクローナル」Ａｂ（ｍＡｂ）なる用語は、単一の分子組成のＡｂ分子、すなわち、一次配列が本質的に同一であるＡｂ分子の非天然調製物を示し、特定のエピトープに対する単一の結合特異性および親和性を示す。ｍＡｂは単離されたＡｂの例である。ＭＡｂは、ハイブリドーマ、組換え、トランスジェニックまたは当業者に知られている他の技術により生産され得る。
【００３２】
「キメラ」Ａｂは、可変領域がある種に由来であり、定常領域が別の種に由来であるＡｂ、例えば、可変領域がマウスＡｂに由来であり、定常領域がヒトＡｂに由来であるＡｂを示す。
【００３３】
「ヒト」ｍＡｂ（ＨｕＭＡｂ）は、フレームワークおよびＣＤＲ領域の両方がヒト生殖細胞系列免疫グロブリン配列由来である可変領域を有するｍＡｂを示す。さらに、Ａｂが定常領域を含むとき、定常領域もまた、ヒト生殖細胞系列免疫グロブリン配列に由来する。本願発明のヒトＡｂは、ヒト生殖細胞系列免疫グロブリン配列によってコードされないアミノ酸残基（例えば、インビトロでのランダムまたは部位特異的突然変異誘発またはインビボでの体細胞突然変異により導入される突然変異）を含み得る。しかしながら、本願明細書において使用される「ヒト」Ａｂなる用語は、別の哺乳動物種、例えば、マウスの生殖細胞系列由来のＣＤＲ配列が、ヒトフレームワーク配列上にグラフトされているＡｂを含むことを意図しない。「ヒト」Ａｂおよび「完全ヒト」Ａｂなる用語は同義的に使用される。
【００３４】
「ヒト化」ｍＡｂは、非ヒトｍＡｂのＣＤＲドメイン外のいくつか、ほとんど、または全てのアミノ酸がヒト免疫グロブリン由来の対応するアミノ酸で置換されているｍＡｂを示す。Ａｂのヒト化形態の１つの態様において、ＣＤＲドメイン外のいくつか、ほとんど、または全てのアミノ酸は、ヒト免疫グロブリン由来のアミノ酸で置換されているが、１つ以上のＣＤＲ領域内のいくつか、ほとんど、または全てのアミノ酸は変化していない。Ａｂが特定の抗原に結合する能力を破棄しない限り、アミノ酸のいくつかの付加、欠失、挿入、置換または修飾は許容される。「ヒト化」Ａｂは、元のＡｂと同様の抗原特異性を保持する。
【００３５】
「抗−抗原」Ａｂは、抗原に特異的に結合するＡｂを示す。例えば、抗−ＰＤ−１  Ａｂは、ＰＤ−１に特異的に結合するＡｂであり、抗−ＣＸＣＲ４  Ａｂは、ＣＸＣＲ４に特異的に結合するＡｂである。本願明細書において使用される、「抗−ＰＤ−１／抗−ＰＤ−Ｌ１」Ａｂは、ＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１シグナル伝達経路を破壊するために使用されるＡｂであり、抗−ＰＤ−１  Ａｂまたは抗−ＰＤ−Ｌ１  Ａｂである。同様に、「抗−ＣＸＣＲ４／抗−ＣＸＣＬ１２」Ａｂは、ＣＸＣＲ４／ＣＸＣＬ１２シグナル伝達経路を破壊するために使用されるＡｂであり、抗−ＣＸＣＲ４  Ａｂまたは抗−ＣＸＣＬ１２  Ａｂである。
【００３６】
Ａｂの「抗原結合部分」（「抗原結合フラグメント」とも称される）は、完全Ａｂにより結合される抗原に特異的に結合する能力を保持するＡｂの１つ以上のフラグメントを示す。
【００３７】
「癌」は、身体における異常細胞のコントロールされない増殖により特徴付けられる種々の疾患の広範なグループを示す。制御されていない細胞分裂および増殖分裂および増殖は、隣接組織に浸潤し、リンパ系または血流を介して身体の遠隔部分に転移もし得る悪性腫瘍の形成を引き起こす。
【００３８】
「Ｃ−Ｘ−Ｃケモカイン受容体４」（ＣＸＣＲ４；例えば、ＬＥＳＴＲ、ＦｕｓｉｎまたはＣＤ１８４とも当分野で知られている）は、白血球、血小板および他の非造血細胞（腫瘍間質微小環境を含む）上に発現される７回膜貫通Ｇ−タンパク質共役受容体を示す。それはまた、大多数のヒト癌において、およびＴｒｅｇおよびＭＤＳＣ上で過剰発現される。ＣＸＣＲ４は、単一のリガンドであるＣＸＣＬ１２に結合する。本願明細書において使用される「ＣＸＣＲ４」なる用語は、ヒトＣＸＣＲ４（ｈＣＸＣＲ４）、ｈＣＸＣＲ４の変異体、アイソフォームおよび種ホモログ、およびｈＣＸＣＲ４と少なくとも１つの共通のエピトープを有するアナログを含む。完全ｈＣＸＣＲ４アミノ酸配列は、ＧＥＮＢＡＮＫ（登録商標）受入番号ＣＡＡ１２１６６の下に見ることができる。
【００３９】
「Ｃ−Ｘ−Ｃモチーフケモカイン１２」（ＣＸＣＬ１２；間質細胞誘導因子１またはＳＤＦ−１としても知られている）は、ＣＸＣＲ４受容体に対する唯一公知のリガンドであるケモカインであるが、第２の受容体であるＣＸＣＲ７（ＲＤＣ１）に対するリガンドとしても役割を果たし得る。ＣＸＣＬ１２は、リンパ球に対して強い走化性であり、ＣＸＣＲ４−依存性メカニズムを介して骨髄から内皮前駆細胞を補充することにより、血管形成に重要な役割を果たす。ＣＸＣＬ１２を高度に発現する臓器、例えばリンパ節、肺、肝臓および骨へのＣＸＣＲ４＋腫瘍細胞の転移を指向することに関与するとも考えられる。本願明細書において使用される「ＣＸＣＬ１２」なる用語は、ヒトＣＸＣＬ１２（ｈＣＸＣＬ１２）、ｈＣＸＣＬ１２の変異体、アイソフォームおよび種ホモログ、およびｈＣＸＣＬ１２と少なくとも１つの共通のエピトープを有するアナログを含む。ヒトＣＸＣＬ１２は、同じ遺伝子の選択的スプライシングによって３つの形態ＣＸＣＬ１２ａ、ＣＸＣＬ１２ｂおよびＣＸＣＬ１２ｃで生産される。典型的なＣＸＣＬ１２ａ、ＣＸＣＬ１２ｂおよびＣＸＣＬ１２ｃアイソフォームの完全アミノ酸配列は、それぞれ、ＧＥＮＢＡＮＫ（登録商標）受託番号ＮＰ＿９５４６３７、ＮＰ＿０００６００およびＮＰ＿００１０２９０５８の下に見ることができる。
【００４０】
「免疫療法」なる用語は、免疫応答を誘導、増強、抑制または修飾することを含む方法による、疾患に罹患している、または疾患に罹患する危険性を有する、または疾患の再発を有する対象の処置を示す。対象の「処置」または「療法」は、疾患と関連する症状、合併症、状態または生化学的徴候の発症、進行、発達、重症度または再発を逆転、緩和、改善、阻害、遅延または予防する目的を有する対象に対して、対象への活性剤の投与を含む実施されるあらゆる型の介入またはプロセスを示す。
【００４１】
「プログラム死−１」（ＰＤ−１）は、インビボで以前に活性化されたＴ細胞上で主に発現され、２つのリガンドＰＤ−Ｌ１およびＰＤ−Ｌ２に結合する、ＣＤ２８ファミリーに属する免疫抑制性受容体を示す。本願明細書において使用される「ＰＤ−１」なる用語は、ヒトＰＤ−１（ｈＰＤ−１）、ｈＰＤ−１の変異体、アイソフォームおよび種ホモログ、およびｈＰＤ−１と少なくとも１つの共通のエピトープを有するアナログを含む。完全ｈＰＤ−１アミノ酸配列は、ＧＥＮＢＡＮＫ（登録商標）受入番号Ｕ６４８６３の下に見ることができる。
【００４２】
「プログラム死リガンド−１」（ＰＤ−Ｌ１）は、ＰＤ−１に対する２つの細胞表面糖タンパク質リガンドの１つ（もう１つはＰＤ−Ｌ２）であり、ＰＤ−１に結合するとＴ細胞活性化およびサイトカイン分泌を下方調節する。本願明細書において使用される「ＰＤ−Ｌ１」なる用語は、ヒトＰＤ−Ｌ１（ｈＰＤ−Ｌ１）、ｈＰＤ−Ｌ１の変異体、アイソフォームおよび種ホモログ、およびｈＰＤ−Ｌ１と少なくとも１つの共通のエピトープを有するアナログを含む。完全ｈＰＤ−Ｌ１配列は、ＧＥＮＢＡＮＫ（登録商標）受入番号Ｑ９ＮＺＱ７の下に見ることができる。
【００４３】
「対象」は、あらゆるヒトまたは非ヒト動物を含む。「非ヒト動物」なる用語は、限定はしないが、脊椎動物、例えば、非ヒト霊長類、ヒツジ、イヌ、および、齧歯動物、例えば、マウス、ラットおよびモルモットを含む。好ましい態様において、対象はヒトである。「対象」および「患者」なる用語は、本願明細書において互換的に使用される。
【００４４】
薬物または治療剤の「治療有効量」または「治療有効用量」は、単独または別の治療剤と組み合わせて使用されるとき、疾患症状の重症度における減少、疾患症状のない期間の頻度および期間における増加、または疾患苦痛による損傷または能力障害の予防または低下により証明される、疾患の発症に対して対象を保護するか、または疾患の退縮を促進する、薬物または剤のあらゆる量である。加えて、処置に関して「有効」および「有効性」なる用語は、薬理学的有効性および生理学的安全性の両方を含む。薬理学的有効性は、薬物が患者における疾患の退縮、例えば癌の退縮を促進する能力を示す。生理学的安全性は、薬物の投与による細胞、臓器および／または生物体レベルでの許容されるレベルの毒性または他の有害な生理学的効果（副作用）を示す。治療剤の有効性は、例えば、臨床試験中でヒト対象において、ヒトにおける有効性を予測する動物モデルシステムにおいて、当業者に知られた種々の方法を使用して、または、インビトロアッセイにおいて薬剤の活性をアッセイすることにより評価することができる。
【００４５】
腫瘍の処置のための一例として、治療有効量の抗癌剤は、好ましくは、未処置対象と比較して、少なくとも約２０％、さらに好ましくは少なくとも約４０％、よりさらに好ましくは少なくとも約６０％、なおさらさらに好ましくは少なくとも約８０％、細胞増殖または腫瘍増殖を阻害する。本願発明の他の好ましい態様において、腫瘍退縮は、少なくとも約２０日間、さらに好ましくは少なくとも約４０日間、またはよりさらに好ましくは少なくとも約６０日間の期間、観察および持続され得る。治療効果のこれらの最終的な測定にもかかわらず、免疫治療薬物の評価はまた、「免疫関連」応答パターンを考慮に入れなければならない。
【００４６】
「免疫関連」応答パターンは、癌特異的免疫応答を誘導すること、または天然の免疫プロセスを修飾することによる抗腫瘍効果を生じる免疫療法剤で処置された癌患者においてしばしば観察される臨床反応パターンを示す。この応答パターンは、従来の化学療法剤の評価において、疾患進行に分類され、薬物障害と同義である、腫瘍組織量の初期増加または新規の病変の出現に続く有益な治療効果により特徴付けられる。したがって、免疫療法剤の適切な評価は、標的疾患に対するこれらの薬剤の効果の長期モニタリングを必要とし得る。
【００４７】
薬物の治療有効量は、疾患を発症するまたは疾患を再発する危険性がある対象（例えば、癌を発症する危険性がある前悪性状態を有する対象）に単独または別の治療剤と組み合わせて投与されたとき、疾患（例えば癌）の発生または再発を阻害する、薬物のあらゆる量である「予防有効量」を含む。好ましい態様において、予防有効量は、完全に疾患の発生または再発を予防する。疾患の発生または再発を「阻害」は、疾患の発生または再発の可能性を減少させる、または完全に疾患の発生または再発を予防するのいずれかを意味する。
【００４８】
代替（例えば、「または」）の使用は、代替の１つ、両方またはそれらの任意の組合せのいずれかを意味すると理解されるべきである。本願明細書において使用される不定冠詞「ａ」または「ａｎ」は、「１つ以上の」の任意の記載または列挙された要素を示すと理解されるべきである。
【００４９】
「約」なる用語は、当業者によって決定されるとき、数値、組成(composition)または数字が測定または決定される方法、すなわち測定システムの限界に部分的に依存する、特定の数値、組成または数字に対する許容される誤差範囲内である数値、組成または数字を示す。例えば、「約」は、当分野での実施ごとに１以内または１以上の標準偏差を意味することができる。あるいは、それは、プラスまたはマイナス２０％の範囲、より通常プラスまたはマイナス１０％の範囲を意味することができる。特定の数値、組成または数字が本願および特許請求の範囲において提供されるとき、特に明記されていない限り、「約」の意味は、特定の数値、組成または数字に対して許容される誤差の範囲内であると考えるべきである。
【００５０】
「実質的に同じ」または「本質的に同じ」なる用語は、当業者が、測定される特性の文脈において、ほとんどあるいは全く生物学的および／または統計学的有意性がないと数値、組成または数字間の差を考える、２つ以上の数値、組成または数字間の十分に高い程度の類似性を示す。測定される数値間の差は、例えば、約５０％未満、好ましくは約３０％未満、さらに好ましくは約１０％未満であり得る。
【００５１】
本願明細書に記載されているとき、あらゆる濃度範囲、パーセンテージ範囲、比率範囲または整数範囲は、他に記載のない限り、記載の範囲内のあらゆる整数の値、および、適当なとき、その分数（例えば、整数の十分の一および百分の一）を含むと理解すべきである。
【００５２】
本願発明の様々な局面は、以下のサブセクションでさらに詳細に記載されている。
【００５３】
治療方法
本願は、癌に罹患している対象を処置するための方法であって、治療有効量の、（ａ）ＰＤ−１またはＰＤ−Ｌ１に特異的に結合するＡｂまたはその抗原結合部分；および（ｂ）ＣＸＣＲ４またはＣＸＣＬ２に特異的に結合するＡｂまたはその抗原結合部分の組合せを対象に投与することを含む、方法を提供する。本願発明の方法のいずれかの好ましい態様において、対象はヒト患者である。
【００５４】
本願は、癌に罹患している対象を処置するための方法であって、治療有効量の、（ａ）ＰＤ−１またはＰＤ−Ｌ１に特異的に結合するＡｂまたはその抗原結合部分；および（ｂ）ＣＸＣＲ４またはＣＸＣＬ２に特異的に結合するＡｂまたはその抗原結合部分の組合せを対象に投与することを含む、方法を提供する。１つの態様において、ＰＤ−１またはＰＤ−Ｌ１に結合するＡｂは、ＰＤ−１間の相互作用を破壊し、ＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１シグナル伝達を阻害する。他の態様において、ＣＸＣＲ４またはＣＸＣＬ２に結合するＡｂは、ＣＸＣＲ４およびＣＸＣＬ１２間の相互作用を破壊し、ＣＸＣＲ４／ＣＸＣＬ１２シグナル伝達を阻害する。
【００５５】
本願発明の方法の１つの態様において、ＰＤ−１またはＰＤ−Ｌ１に結合するＡｂまたはその抗原結合部分は、ＰＤ−１およびＰＤ−Ｌ１間の相互作用を破壊し、それによりＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１シグナル伝達を阻害する。
【００５６】
他の１つの態様において、ＣＸＣＲ４またはＣＸＣＬ１２に結合するＡｂまたはその抗原結合部分は、ＣＸＣＲ４およびＣＸＣＬ１２間の相互作用を破壊し、それによりＣＸＣＲ４／ＣＸＣＬ１２シグナル伝達を阻害する。他の態様において、免疫抑制性Ｔｒｅｇおよび／またはＭＤＳＣ上で発現されるＣＸＣＲ４および腫瘍細胞上で発現されるＣＸＬ１２間の相互作用の遮断は、これらの免疫抑制性細胞の腫瘍環境への輸送を減少させ、腫瘍増殖の低下を引き起こす。さらに他の態様において、ＣＸＣＲ４に特異的に結合するＡｂは、インビボでＣＸＣＲ４＋腫瘍細胞のアポトーシスを誘導する、および／または増殖を阻害する（ＷＯ  ２０１３／０７１０６８に記載されている）。さらなる態様において、抗−ＣＸＣＲ４  Ａｂは、Ａｂ−依存性細胞毒性（ＡＤＣＣ）、Ａｂ−依存性細胞食作用（ＡＤＣＰ）および補体依存性細胞毒性（ＣＤＣ）のようなエフェクター機能を媒介し（例えば、ＡｂはヒトＩｇＧ１またはＩｇＧ３アイソトープのものである）、Ｔｒｅｇおよび／またはＭＤＳＣ上のＣＸＣＲ４に結合し、これらの免疫抑制性Ｔｒｅｇおよび／またはＭＤＳＣの枯渇を媒介し、それにより抗腫瘍応答を増強する、Ｆｃ領域を含む。Ｆｃ領域によって介在されるエフェクター機能はまた、特定の変異によって増加させることができる。多数の変異は、ＩｇＧのＣＨ２ドメインにおいて作製され、ＡＤＣＣおよびＣＤＣについてのそれらの効果がインビトロで試験された。例えば、Ｅ３３３ＡまたはＥ３３３Ｓ変異は、ＡＤＣＣおよびＣＤＣの両方を増加させることが報告された（Idusogie et al., 2001）。
【００５７】
記載された方法における使用のために適当な抗−ＰＤ−１および抗−ＰＤ−Ｌ１  Ａｂ
本願方法における使用のために適当な抗−ＰＤ−１  Ａｂは、高い特異性およびアフィニティーでＰＤ−１に結合し、ＰＤ−１へのＰＤ−Ｌ１および／またはＰＤ−Ｌ２の結合をブロックし、ＰＤ−１シグナル伝達経路の免疫抑制効果を阻害するＡｂを含む。同様に、これらの方法における使用のために適当な抗−ＰＤ−Ｌ１  Ａｂは、高い特異性およびアフィニティーでＰＤ−Ｌ１に結合し、ＰＤ−１へのＰＤ−Ｌ１の結合をブロックし、ＰＤ−１シグナル伝達経路の免疫抑制効果を阻害するＡｂである。本願明細書に記載されている治療方法のいずれかにおいて、抗−ＰＤ−１または抗−ＰＤ−Ｌ１  Ａｂはそれぞれ、ＰＤ−１受容体またはＰＤ−Ｌ１リガンドに結合し、受容体−リガンド結合を阻害するおよびＴ細胞活性の阻害を逆転することにおいて全Ａｂと同様の機能特性を示し、それにより免疫応答を上方制御する、抗原結合部分またはフラグメントを含む。
【００５８】
抗−ＰＤ−１  Ａｂ
高親和性でＰＤ−１に特異的に結合するＭＡｂは、米国特許第８，００８，４４９号に記載されている。他の抗−ＰＤ−１  ｍＡｂは、例えば、米国特許第７，４８８，８０２、８，１６８，７５７および８，３５４，５０９号、およびＰＣＴ公開第ＷＯ  ２０１２／１４５４９３号に記載されている。米国特許第８，００８，４４９号に記載されている抗−ＰＤ−１  ｍＡｂは、いくつかの、または全ての以下の特性：（ａ）表面プラズモン共鳴（Ｂｉａｃｏｒｅ）バイオセンサーシステムによって決定されるとき、約５ｘ１０−９Ｍ以下のＫＤでヒトＰＤ−１に結合する；（ｂ）ヒトＣＤ２８、ＣＴＬＡ−４またはＩＣＯＳに実質的に結合しない；（ｃ）混合リンパ球反応（ＭＬＲ）アッセイにおいてＴ−細胞増殖、インターフェロン−γ生産およびＩＬ−２分泌を増加させる；（ｄ）ヒトＰＤ−１およびカニクイザルＰＤ−１に結合する；（ｅ）ＰＤ−Ｌ１およびＰＤ−Ｌ２のＰＤ−１への結合を阻害する；（ｆ）ＣＤ４＋ＣＤ２５−  Ｔ細胞の増殖およびインターフェロン−γ生産に対するＴｒｅｇ細胞による阻害を放出する（ｇ）抗原特異的メモリー応答を刺激する；（ｈ）Ａｂ応答を刺激する；および（ｉ）インビボで腫瘍細胞増殖を阻害する、を示すことが証明されている。記載された処置方法で使用できる抗−ＰＤ−１  Ａｂは、高親和性でヒトＰＤ−１に特異的に結合し、少なくとも５つの、および好ましくは全ての前記特性を示すｍＡｂを含む。例えば、本願明細書に記載されている治療方法における使用のために適当な抗−ＰＤ−１  Ａｂは、（ａ）表面プラズモン共鳴（Ｂｉａｃｏｒｅ）によって決定されるとき、約５ｘ１０−９から１ｘ１０−１０ＭのＫＤでヒトＰＤ−１に結合する；（ｂ）ＭＬＲアッセイにおいてＴ−細胞増殖、インターフェロン−γ生産およびＩＬ−２分泌を増加させる；（ｃ）ＰＤ−Ｌ１およびＰＤ−Ｌ２のＰＤ−１への結合を阻害する；（ｄ）ＣＤ４＋ＣＤ２５−  Ｔ細胞の増殖およびインターフェロン−γ生産に対するＴｒｅｇによる阻害を逆転させる；（ｅ）抗原特異的メモリー応答を刺激する；および（ｆ）インビボで腫瘍細胞増殖を阻害する。
【００５９】
記載された方法で使用できる抗−ＰＤ−１  Ａｂはまた、ヒトＰＤ−１に特異的に結合し、ヒトＰＤ−１への結合に対して以下の抗−ＰＤ−１参照Ａｂのいずれか１つと交差競合する単離されたＡｂを含む：ニボルマブ（５Ｃ４）、１７Ｄ８、２Ｄ３、４Ｈ１、４Ａ１１、７Ｄ３および５Ｆ４と指定されたｍＡｂ（例えば、米国特許第８，００８，４４９号；ＷＯ  ２０１３／１７３２２３参照）、およびペムブロリズマブ（米国特許第８，３５４，５０９号においてｈ４０９Ａ１１と指定された）。Ａｂが抗原、例えばＰＤ−１への結合に対して交差競合する能力は、これらのＡｂが、抗原の同じエピトープ領域に結合し、他の交差競合するＡｂの特定のエピトープ領域への結合を立体的に妨害することを示す。これらの交差競合するＡｂは、ＰＤ−１の同じエピトープ領域に実質的に結合する理由で、参照Ａｂの特性と非常に類似の機能特性を有することが予期される。抗原への結合に対して参照Ａｂ、例えば、ニボルマブまたはペムブロリズマブと交差競合するＡｂは、ヒトＰＤ−１の場合、標準ＰＤ−１結合アッセイ、例えば、Ｂｉａｃｏｒｅ分析、ＥＬＩＳＡアッセイまたはフローサイトメトリー（例えば、ＷＯ  ２０１３／１７３２２３参照）において容易に同定することができる。
【００６０】
記載されている発明の方法で使用できる抗−ＰＤ−１  Ａｂはまた、上記Ａｂの抗原結合部分を含む。Ａｂの抗原結合機能が全長Ａｂのフラグメントにより実行することができることが詳細に証明されている。Ａｂの「抗原結合部分」なる用語内に含まれる結合フラグメントの例は、（ｉ）ＶＬ、ＶＨ、ＣＬおよびＣＨ１ドメインからなる一価のフラグメントであるＦａｂフラグメント；（ｉｉ）ヒンジ領域でジスルフィド架橋により連結された２つのＦａｂフラグメントを含む二価フラグメントであるＦ（ａｂ’）２フラグメント；（ｉｉｉ）ＶＨおよびＣＨ１ドメインからなるＦｄフラグメント；および（ｉｖ）Ａｂの単一のアームのＶＬおよびＶＨドメインからなるＦｖフラグメントを含む。
【００６１】
酵素、例えばパパインおよびペプシンでのタンパク質分解を介して最初に得られるこれらのフラグメントは、次に、一価および多価の抗原結合フラグメントに操作されている。例えば、Ｆｖフラグメントの２つのドメインのＶＬおよびＶＨが別々の遺伝子でコードされるが、それらは、ＶＬおよびＶＨ領域が対となり、一本鎖可変フラグメント（ｓｃＦｖ）として知られる一価の分子を形成する単一のタンパク質鎖として作製することを可能にする合成リンカーペプチドにより、組換え方法を使用して連結され得る。二価(divalent)または二価(bivalent)ｓｃＦｖ（ｄｉ−ｓｃＦｖまたはｂｉ−ｓｃＦｖ）は、２つのＶＨおよび２つのＶＬ領域を含むタンデムｓｃＦｖとして知られる単一のペプチド鎖内で２つのｓｃＦｖを連結することにより、操作することができる。ｓｃＦｖをダイマー化し、ダイアボディを生産するか、または他のマルチマーを形成するようにさせるように、２つの可変領域に関して一緒に折り畳むためには短すぎる１０個未満のアミノ酸のリンカーペプチドを使用して、ｓｃＦｖダイマーおよびそれ以上のマルチマーも作製することができる。ダイアボディは、ｓｃＦｖに対するＫＤ値よりも最大４０倍低い解離定数を有する、対応するｓｃＦｖよりもはるかに高いアフィニティーで同種抗原に結合することが示されている。非常に短いリンカー（＜３つのアミノ酸）は、ダイアボディよりも抗原に対してさらに高いアフィニティーを示す三価のトリアボディまたは四価のテトラボディの形成を生じた。他の変異体は、ｓｃＦｖ−ＣＨ３ダイマーであるミニボディ、およびより大きなｓｃＦｖ−Ｆｃフラグメント（ｓｃＦｖ−ＣＨ２−ＣＨ３ダイマー）を含み、さらに、単離されたＣＤＲは抗原結合機能を示し得る。これらのＡｂフラグメントは、当業者に知られている慣用の組換え技術を使用して操作され、該フラグメントは、無傷なＡｂと同じ方法において有用性についてスクリーニングされる。Ａｂおよび関連変異体の上記タンパク質分解フラグメントおよび操作されたフラグメントの全て（さらなる詳細のために、Hollinger and Hudson, 2005; Olafsen and Wu, 2010参照）は、Ａｂの「抗原結合部分」なる用語内に包含されることを意図する。
【００６２】
１つの態様において、抗−ＰＤ−１  Ａｂまたはその抗原結合部分は、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３またはＩｇＧ４アイソタイプのものである重鎖定常領域を含む。１つの好ましい態様において、抗−ＰＤ−１  Ａｂまたはその抗原結合部分は、ヒトＩｇＧ４アイソタイプのものである重鎖定常領域を含む。他の態様において、抗−ＰＤ−１  Ａｂまたはその抗原結合部分は、ヒトＩｇＧ１アイソタイプのものである。他の１つの態様において、抗−ＰＤ−１  Ａｂまたはその抗原結合部分のＩｇＧ４重鎖定常領域は、ＩｇＧ１アイソタイプＡｂにおいて対応する位置で通常見られるヒンジ領域におけるセリン残基のプロリン残基で置換されるＳ２２８Ｐ変異（Ｋａｂａｔシステムを使用して番号付けされる；Kabat et al., 1991）を含む。ニボルマブに存在するこの変異は、野生型ＩｇＧ４  Ａｂと関連するＦｃ受容体を活性化させるための低い親和性を保持するが、内因性ＩｇＧ４  ＡｂでのＦａｂアーム交換を妨げる（Wang et al., 2014）。さらに他の態様において、Ａｂは、ヒトカッパまたはラムダ定常領域である軽鎖定常領域を含む。
【００６３】
本願方法の他の態様において、抗−ＰＤ−１  Ａｂまたはその抗原結合部分は、ｍＡｂまたはその抗原結合部分である。ヒト対象への投与において、抗−ＰＤ−１  Ａｂは、好ましくはキメラＡｂ、またはさらに好ましくはヒト化またはヒトＡｂである。かかるキメラ、ヒト化またはヒトｍＡｂは、例えば、米国特許第８，００８，４４９号に記載されている、当分野でよく知られている方法によって製造し、単離することができる。
【００６４】
抗−ＰＤ−１  Ａｂの投与を含む本願明細書に記載されている治療方法のいずれかの１つの好ましい態様において、抗−ＰＤ−１  Ａｂはニボルマブである。ニボルマブのＶＨアミノ酸配列は配列番号１として本願明細書において提供され、ＶＬアミノ酸配列は配列番号２として本願明細書において提供される。ニボルマブの重鎖および軽鎖のアミノ酸配列は、それぞれ配列番号３および４において示される。（ニボルマブ重鎖について示される配列はコードされるカルボキシ−末端リジン残基を含まない。このリジンは宿主細胞および培養条件に依存して様々な程度で切断され、Ａｂ生産のために使用されるチャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞系において本質的に完全に切断されるためである。同じことが、抗−ＰＤ−Ｌ１  ｍＡｂであるＢＭＳ−９３６５５９、抗−ＣＸＣＲ４  ｍＡｂであるウロクプルマブ、および抗−ＣＸＣＬ１２  ｍＡｂである２Ａ５について本願明細書に記載されている重鎖配列に適用される。）他の好ましい態様において、抗−ＰＤ−１  Ａｂはペムブロリズマブ（米国特許第８，３５４，５０９号においてｈ４０９Ａ１１）である。他の態様において、抗−ＰＤ−１  Ａｂは、米国特許第８，００８，４４９号に記載されているヒトＡｂ  １７Ｄ８、２Ｄ３、４Ｈ１、４Ａ１１、７Ｄ３および５Ｆ４から選択される。
【００６５】
ニボルマブまたは上記抗−ＰＤ−１  Ａｂのいずれかのアミノ酸配列と高度に類似または相同であり、これらのＡｂの機能特性を保持するアミノ酸配列を有するＶＨおよびＶＬ領域を含む抗−ＰＤ−１  Ａｂはまた、本願方法における使用のために適当である。例えば、適当なＡｂは、配列番号１および／または配列番号２に示されている配列とそれぞれ少なくとも８０％同一性である配列を有する連続的に連結されたアミノ酸をそれぞれ含むＶＨおよびＶＬ領域を含むｍＡｂを含む。１つの態様において、ＶＨおよび／またはＶＬアミノ酸配列は、それぞれ配列番号１および／または配列番号２に示されている配列と少なくとも８５％、９０％、９５％または９９％同一性を示す。本願明細書において使用されるとき、２つのアミノ酸配列間のパーセント配列同一性は、ギャップの数および各ギャップの長さを考慮して、２つの配列間の配列同一性の程度を最大化するように導入される、比較される配列の長さに対する配列で共有される同一位置の数の関数（すなわち、％同一性＝同一位置の数／比較される位置の総数ｘ１００）である。配列の比較および２つの配列間の同一性パーセントの決定は、当業者によく知られている数学アルゴリズムを使用して成し遂げることができる（例えば、米国特許第８，００８，４４９号参照）。
【００６６】
抗−ＰＤ−Ｌ１  Ａｂ
抗−ＰＤ−１および抗−ＰＤ−Ｌ１が、同じシグナル伝達経路を標的とし、種々の癌において匹敵できるレベルの有効性を臨床試験にて示すことが示されているため（例えば、Brahmer et al., 2012; Topalian et al., 2012b；ＷＯ  ２０１３／１７３２２３参照）、抗−ＰＤ−Ｌ１  Ａｂは、本願明細書に記載されている併用療法において抗−ＰＤ−１  Ａｂと置き換えてもよい。
【００６７】
高親和性でＰＤ−Ｌ１に特異的に結合するＭＡｂは、米国特許第７，９４３，７４３号に記載されている。他の抗−ＰＤ−Ｌ１  ｍＡｂは、例えば、米国特許第８，２１７，１４９号およびＰＣＴ公開第ＷＯ  ２０１１／０６６３８９、ＷＯ  ２０１２／１４５４９３、ＷＯ  ２０１３／０７９１７４およびＷＯ  ２０１３／１８１６３４号に記載されている。米国特許第７，９４３，７４３号に記載されている抗−ＰＤ−１  ＨｕＭＡｂは、１つ以上の以下の特性：（ａ）表面プラズモン共鳴によって決定されるとき、約５ｘ１０−９Ｍ以下のＫＤでヒトＰＤ−Ｌ１に結合する；（ｂ）ＭＬＲアッセイにおいてＴ−細胞増殖、インターフェロン−γ生産およびＩＬ−２分泌を増加させる；（ｃ）Ａｂ応答を刺激する；（ｄ）ＰＤ−１へのＰＤ−Ｌ１の結合を阻害する；および（ｅ）Ｔ細胞エフェクター細胞および／または樹状細胞上のＴｒｅｇの抑制効果を逆転させる、を示すことが証明されている。本願明細書に記載されている治療方法における使用のための抗−ＰＤ−Ｌ１  Ａｂは、高親和性でヒトＰＤ−Ｌ１に特異的に結合し、少なくとも３つ、および好ましくは全ての前記特性を示すＡｂを含む。例えば、これらの方法における使用のために適当な抗−ＰＤ−Ｌ１  Ａｂは、（ａ）表面プラズモン共鳴（Ｂｉａｃｏｒｅ）によって決定されるとき、約５ｘ１０−９から１ｘ１０−１０ＭのＫＤでヒトＰＤ−１に結合する；（ｂ）ＭＬＲアッセイにおいてＴ−細胞増殖、インターフェロン−γ生産およびＩＬ−２分泌を増加させる；（ｃ）ＰＤ−１へのＰＤ−Ｌ１の結合を阻害する；および（ｄ）Ｔ細胞エフェクター細胞および／または樹状細胞上のＴｒｅｇの抑制効果を逆転させる。
【００６８】
本願方法における使用のための好ましい抗−ＰＤ−Ｌ１  Ａｂは、ＢＭＳ−９３６５５９（以前はＭＤＸ−１１０５；米国特許第７，９４３，７４３号において１２Ａ４と指定された）である。ＢＭＳ−９３６５５９のＶＨおよびＶＬアミノ酸配列はそれぞれ配列番号５および６に示され、ＢＭＳ−９３６５５９の重鎖および軽鎖の配列はそれぞれ配列番号７および８に示される。本願方法における使用のために適当な他の抗−ＰＤ−Ｌ１  Ａｂは、それぞれ配列番号５および／または６に示されているアミノ酸配列と少なくとも８０％同一であり、ＢＭＳ−９３６５５９の機能特性を保持するアミノ酸配列を有するＶＨおよびＶＬ領域をそれぞれ含むｍＡｂを含む。１つの態様において、ＶＨおよび／またはＶＬアミノ酸配列は、それぞれ配列番号５および／または６に示されている配列と少なくとも８５％、９０％、９５％または９９％同一性を示す。さらに他の適当な抗−ＰＤ−Ｌ１  Ａｂは、アテゾリズマブ（以前はＭＰＤＬ３２８０Ａ；Herbst et al., 2014；米国特許第８，２１７，１４９号においてＹＷ２４３．５５Ｓ７０と指定された）、デュルバルマブ（以前はＭＥＤＩ４７３６；Segal et al., 2014；ＷＯ  ２０１１／０６６３８９において２．１４Ｈ９ＯＰＴと指定された）、ＳＴＩ−Ａ１０１４（ＷＯ  ２０１３／１８１６３４においてＨ６と指定された）、およびアベルマブ（ＷＯ  ２０１３／０７９１７４においてＡ０９−２４６−２と指定された）を含む。
【００６９】
記載された方法における使用のために適当な抗−ＰＤ−Ｌ１  Ａｂはまた、ヒトＰＤ−Ｌ１に特異的に結合し、ヒトＰＤ−Ｌ１への結合に対して以下の参照Ａｂのいずれか１つと交差競合する単離されたＡｂを含む：ＢＭＳ−９３６５５９（１２Ａ４）、３Ｇ１０、１０Ａ５、５Ｆ８、１０Ｈ１０、１Ｂ１２、７Ｈ１、１１Ｅ６、１２Ｂ７および１３Ｇ４と指定されたＡｂ（例えば、米国特許第７，９４３，７４３号；ＷＯ  ２０１３／１７３２２３参照）、アテゾリズマブ（米国特許第８，２１７，１４９号においてＹＷ２４３．５５Ｓ７０）、デュルバルマブ（ＷＯ  ２０１１／０６６３８９において２．１４Ｈ９ＯＰＴ）、ＳＴＩ−Ａ１０１４（ＷＯ  ２０１３／１８１６３４においてＨ６）、およびアベルマブ（ＷＯ  ２０１３／０７９１７４においてＡ０９−２４６−２）。ＡｂがヒトＰＤ−Ｌ１への結合に対して参照Ａｂと交差競合する能力は、これらのＡｂが、参照Ａｂと同じＰＤ−Ｌ１のエピトープ領域に結合し、同じＰＤ−Ｌ１のエピトープ領域に実質的に結合する理由で、参照Ａｂの特性と非常に類似の機能特性を有することが予期されるということを証明する。例えば、交差競合する抗−ＰＤ−Ｌ１  ｍＡｂ  ３Ｇ１０、１Ｂ１２、１３Ｇ４、１２Ａ４（ＢＭＳ−９３６５５９）、１０Ａ５、１２Ｂ７、１１Ｅ６および５Ｆ８（ＷＯ  ２０１３／１７３２２３参照）は、類似の機能特性を有することが示され（米国特許第７，９４３，７４３号の実施例３−１１）、異なるエピトープ領域に結合するｍＡｂ  １０Ｈ１０は（ＷＯ  ２０１３／１７３２２３参照）異なって機能する（米国特許第７，９４３，７４３号の実施例１１）。交差競合するＡｂは、当業者によく知られた標準ＰＤ−Ｌ１結合アッセイにおいて同定することができる。
【００７０】
１つの好ましい態様において、本願方法における使用のための抗−ＰＤ−Ｌ１  Ａｂは、ｍＡｂである。他の好ましい態様において、これらの交差競合するＡｂは、キメラＡｂ、ヒト化またはヒトＡｂである。キメラ、ヒト化およびヒトＡｂは、例えば、米国特許第７，９４３，７４３号に記載されている、当分野でよく知られている方法によって製造し、単離することができる。
【００７１】
１つの態様において、抗−ＰＤ−Ｌ１  Ａｂまたはその抗原結合部分は、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３またはＩｇＧ４アイソタイプのものである重鎖定常領域を含む。他の１つの態様において、抗−ＰＤ−Ｌ１  Ａｂまたはその抗原結合部分は、ＩｇＧ４アイソタイプのヒトＩｇＧ１のものである。さらなる態様において、抗−ＰＤ−Ｌ１  Ａｂまたはその抗原結合部分のＩｇＧ４重鎖定常領域の配列は、Ｓ２２８Ｐ変異を含む。他の態様において、Ａｂは、ヒトカッパまたはラムダ定常領域である軽鎖定常領域を含む。
【００７２】
本願発明の抗−ＰＤ−Ｌ１  Ａｂはまた、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｄ、Ｆｖ、およびｓｃＦｖ、ｄｉ−ｓｃＦｖまたはｂｉ−ｓｃＦｖ、およびｓｃＦｖ−Ｆｃフラグメント、ダイアボディ、トリアボディ、テトラボディ、および単離されたＣＤＲを含む、上記Ａｂの抗原結合部分を含む。
【００７３】
記載された方法における使用のために適当な抗−ＣＸＣＲ４および抗−ＣＸＣＬ１２  Ａｂ
記載された方法における使用のために適当な抗−ＣＸＣＲ４および抗−ＣＸＣＬ１２  Ａｂは、それぞれ高い特異性およびアフィニティーでＣＸＣＲ４およびＣＸＣＬ１２に特異的に結合するＡｂである。１つの態様において、かかる抗−ＣＸＣＲ４  Ａｂは、ＣＸＣＲ４およびＣＸＣＬ１２の結合をブロックし、ＣＸＣＲ４の活性を阻害する。他の１つの態様において、抗−ＣＸＣＲ４  Ａｂは、インビボでＣＸＣＲ４＋腫瘍細胞のアポトーシスを誘導する、および／または増殖を阻害する。さらに他の態様において、抗−ＣＸＣＲ４  Ａｂは、Ｔｒｅｇおよび／またはＭＤＳＣ上のＣＸＣＲ４に結合し、ＡＤＣＣ、ＡＤＣＰおよび／またはＣＤＣメカニズムを介して、直接的なアポトーシスまたは枯渇のいずれかによってこれらの免疫抑制性細胞の破壊を媒介する。
【００７４】
これらの方法で使用できる抗−ＣＸＣＬ１２  Ａｂは、高い特異性およびアフィニティーでＣＸＣＬ１２リガンドに結合する。抗−ＣＸＣＲ４と同様に、かかる抗−ＣＸＣＬ１２  Ａｂは、ＣＸＣＲ４およびＣＸＣＬ１２の結合をブロックし、ＣＸＣＲ４受容体の活性を阻害する。
【００７５】
抗−ＣＸＣＲ４  Ａｂ
高親和性でＣＸＣＲ４に特異的に結合する抗−ＣＸＣＲ４  ｍＡｂ、具体的にはｍＡｂ  Ｆ７（ウロクプルマブ；以前にＢＭＳ−９３６５６４およびＭＤＸ−１３３８とも指定された）、Ｆ９、Ｄ１およびＥ２は、ＷＯ  ２００８／０６０３６７において例示されている。血液悪性腫瘍を処置するためにこれらのＡｂを使用する方法はまた、ＷＯ  ２００８／０６０３６７およびＷＯ  ２０１３／０７１０６８に記載されている。他の抗−ＣＸＣＲ４  ｍＡｂは、例えば、ＷＯ  ２００８／１４２３０３、ＷＯ  ２０１０／０３７８３１、ＷＯ  ２００９／１４０１２４、ＷＯ  ２０１３／０１３０２５、および米国公開第２０１５／００３７３２８号に記載されている。
【００７６】
ＷＯ  ２００８／０６０３６７に記載されている抗−ＣＸＣＲ４  ｍＡｂは、１つ以上の以下の特性：（ａ）約１００ｎＭ未満（例えば、約２０−８０ｎＭ）のＥＣ５０で細胞の表面上のヒトＣＸＣＲ４に結合する；（ｂ）約３０ｎＭ未満（例えば、約２−２９ｎＭ）のＥＣ５０でＣＸＣＲ４へのＣＸＣＬ１２の結合を阻害する；（ｃ）約１ｎＭ未満（例えば、約０．３−０．９ｎＭ）のＥＣ５０でＣＸＣＲ４を発現する細胞においてＣＸＣＬ１２誘導カルシウム流出を阻害する；（ｄ）約２０ｎＭ未満（例えば、約１２−１９ｎＭ）のＥＣ５０でＣＸＣＲ４を発現する細胞のＣＸＣＬ１２誘導移動を阻害する；（ｅ）ヒト臍帯静脈内皮細胞による毛細血管形成を阻害する；（ｆ）ＣＸＣＲ４を発現する細胞においてアポトーシスを誘導する；（ｇ）インビボでＣＸＣＲ４＋腫瘍細胞の増殖を阻害する；（ｈ）インビボでＣＸＣＲ４＋腫瘍細胞増殖を阻害するおよび／またはＣＸＣＲ４＋腫瘍細胞アポトーシスを誘導する；（ｉ）ＣＸＣＲ４＋腫瘍細胞の転移を阻害する；および（ｊ）ＣＸＣＲ４＋腫瘍を有する対象の生存時間を増加させる、を示すことが証明されている。本願発明の方法で使用できる抗−ＣＸＣＲ４  Ａｂは、高親和性で、例えば、１ｘ１０−８Ｍ以下のＫＤで、好ましくは５ｘ１０−９Ｍ以下のＫＤで、細胞表面上で発現されるヒトＣＸＣＲ４に特異的に結合し、少なくとも５つの、好ましくは全ての他の前記特性を示すｍＡｂを含む。
【００７７】
例えば、記載された処置方法における使用のために適当な抗−ＣＸＣＲ４  Ａｂは、（ａ）表面プラズモン共鳴（Ｂｉａｃｏｒｅ）によって決定されるとき、約５ｘ１０−９から１ｘ１０−１０ＭのＫＤでヒトＰＤ−１に結合する；（ｂ）約１０ｎＭ未満（例えば、約１−１０ｎＭ）のＥＣ５０でＣＸＣＬ１２のＣＸＣＲ４への結合を阻害する；（ｃ）ＣＸＣＲ４を発現する細胞においてアポトーシスを誘導する；（ｄ）インビトロでＣＸＣＲ４＋腫瘍細胞の増殖を阻害する；（ｅ）インビボでＣＸＣＲ４＋腫瘍細胞増殖を阻害するおよび／またはＣＸＣＲ４＋腫瘍細胞アポトーシスを誘導する；および（ｆ）ＣＸＣＲ４＋腫瘍細胞の転移を阻害する。１つの好ましい態様において、抗−ＣＸＣＲ４  Ａｂは、ＡＤＣＣ、ＡＤＣＰおよび／またはＣＤＣを含むエフェクター機能を有し、免疫抑制性Ｔｒｅｇおよび／またはＭＤＳＣの枯渇を媒介するＦｃ領域（例えば、ヒトＩｇＧ１またはＩｇＧ３）を含む。これらの免疫抑制性細胞は、ＣＸＣＲ４を過剰発現することが知られている（図３参照）。したがって、好ましい抗−ＣＸＣＲ４は、ＣＤ４＋ＣＤ２５−  Ｔ細胞の増殖およびインターフェロン−γ生産に対するＴｒｅｇおよび／またはＭＤＳＣによる阻害を逆転させる。
【００７８】
本願明細書に記載されている方法における使用のための適当な抗−ＣＸＣＲ４  Ａｂは、ＷＯ  ２００８／０６０３６７においてＦ７ＧＬのＶＨおよびＶＬ配列に対応する、それぞれ配列番号９および１０に示されているアミノ酸配列を有するＶＨおよびＶＬ領域を含むウロクプルマブである。（ＷＯ  ２００８／０６０３６７に記載されているとおり、例示された抗−ＣＸＣＲ４  ＡｂであるＦ７、Ｆ９、Ｄ１およびＥ２のＶＨおよびＶＬ領域のＮ−末端（ＦＲ１）領域は、これらの非生殖細胞系列残基がＡｂをコードする遺伝子が単離されたファージディスプレイライブラリーを作製するために使用されるプライマーによってコードされたため、由来した生殖細胞系列配列と比較してアミノ酸置換を含んだ。ＶＨおよびＶＬ領域のＮ−末端領域における置換されたフレームワーク残基は、「復帰突然変異させ(back-mutated)」、生殖細胞系列配列を復元し（生殖細胞系列に関して「ＧＬ」形態と称される）、これらの「復帰突然変異させた」配列はウロクプルマブ中に含まれる。２Ａ５重鎖および軽鎖について本願明細書に記載されている配列は、生殖細胞系列立体配置へのＮ−末端  ＦＲ１領域の「復帰突然変異」を同様に反映する；米国特許第８，４９６，９３１号参照）。ウロクプルマブの完全な重鎖および軽鎖の配列は、それぞれ配列番号１１および１２に示されている。他の適当な抗−ＣＸＣＲ４  Ａｂは、例えば、ｃ４１４Ｈ５およびｃ５１５Ｈ７と指定されたＡｂ（ＷＯ  ２０１０／０３７８３１）、Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｉ、Ａｎｔｉｂｏｄｙ  ＩＩ、Ａｎｔｉｂｏｄｙ  ＩＩＩ、Ａｎｔｉｂｏｄｙ  ＩＶ、およびＡｎｔｉｂｏｄｙ  Ｖと指定されたＡｂ（米国特許第７，８９２，５４６号）、６Ｃ７と指定されたＡｂ（ＷＯ  ２０１３／０１３０２５）、およびヒト化  ３Ｇ１０  Ａｂ、例えば、ｈ３Ｇ１  ０．Ａ５７．Ａ５８、ｈ３Ｇ１０．１．９１．Ａ５８Ａおよびｈ３Ｇ１０．１．９１．Ａ５８Ｂと指定されたＡｂ（米国公開第２０１５／００３７３２８号）を含む。
【００７９】
それぞれ配列番号１１および／または配列番号１２に示されているアミノ酸配列と少なくとも８０％同一であり、ウロクプルマブの機能特性を保持するアミノ酸配列を有するＶＨおよびＶＬ領域を含む関連抗−ＣＸＣＲ４  Ａｂはまた、本願方法における使用のために適当である。１つの態様において、ＶＨおよび／またはＶＬアミノ酸配列は、それぞれ配列番号１１および／または配列番号１２に示されている配列と少なくとも８５％、９０％、９５％または９９％同一性を示す。
【００８０】
本願明細書に記載されているマウス腫瘍モデルからのデータは、エフェクター機能を媒介するＦｃ領域を含む抗−ＣＸＣＲ４  Ａｂが、有意に増強された抗腫瘍効果を生じるように抗−ＰＤ−１  Ａｂと相乗効果を生じることができることを示す（実施例２−５参照）。したがって、１つの好ましい態様において、記載された方法における使用のために適当な抗−ＣＸＣＲ４  Ａｂは、エフェクター機能を有するＦｃ領域（例えば、ヒトＩｇＧ１またはＩｇＧ３）を含む。例えば、ウロクプルマブのヒトＩｇＧ１ｆ変異体の重鎖配列は配列番号１３に示され、ウロクプルマブのヒトＩｇＧ３ｂ０変異体の重鎖配列は配列番号１４に示されている。これらのＩｇＧ１およびＩｇＧ３変異体の対応する軽鎖配列は、ウロクプルマブと同じ、すなわち配列番号１２に示されている配列であろう。
【００８１】
記載された方法で使用できるさらなる抗−ＣＸＣＲ４  Ａｂは、ヒトＣＸＣＲ４に特異的に結合し、ヒトＣＸＣＲ４への結合に対してウロクプルマブ（Ｆ７）またはＦ９、Ｄ１およびＥ２と指定されたＡｂのいずれかである参照Ａｂと交差競合するＡｂを含む（例えば、ＷＯ  ２００８／０６０３６７；ＷＯ  ２０１３／０７１０６８参照）。これらの交差競合するＡｂは、ＣＸＣＲ４の同じエピトープ領域に実質的に結合する理由で、ウロクプルマブ、Ｆ９、Ｄ１またはＥ２のそれぞれの特性と非常に類似の機能特性を有することが予期される。交差競合するＡｂは、参照Ａｂ、例えばウロクプルマブと交差競合する能力に基づいて、標準ＣＸＣＲ４結合アッセイ、例えば、Ｂｉａｃｏｒｅ分析、ＥＬＩＳＡアッセイまたはフローサイトメトリーにおいて容易に同定することができる。
【００８２】
記載された方法における使用のために適当な抗−ＣＸＣＲ４  Ａｂは、好ましくはｍＡｂである。１つの態様において、抗−ＣＸＣＲ４  Ａｂまたはその抗原結合部分は、キメラ、ヒト化またはヒトモノクローナルＡｂまたはその部分である。ヒト対象を処置するための１つの好ましい態様において、Ａｂはヒト化Ａｂである。他の好ましい態様において、ＡｂはヒトＡｂである。かかるキメラ、ヒト化またはヒトｍＡｂは、当分野でよく知られている、例えば、ＷＯ  ２００８／０６０３６７に記載されている方法によって製造し、単離することができる。
【００８３】
１つの態様において、抗−ＣＸＣＲ４  Ａｂまたはその抗原結合部分は、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３またはＩｇＧ４アイソタイプのものである。さらなる態様において、Ａｂまたはその抗原結合部分は、ヒトＩｇＧ１またはＩｇＧ４アイソタイプのものである。１つの態様において、抗−ＣＸＣＲ４  Ａｂまたはその抗原結合部分のＩｇＧ４重鎖定常領域は、Ｓ２２８Ｐ変異を含む。１つの好ましい態様において、Ａｂまたはその抗原結合部分は、エフェクター機能を媒介するＦｃ領域を含む、例えば、それは、ヒトＩｇＧ１またはヒトＩｇＧ３アイソタイプのものであるか、またはエフェクター機能を増加させる変異（例えば、Ｅ３３３ＡまたはＥ３３３Ｓ；Idusogie et al., 2001）を含む。他の態様において、Ａｂは、ヒトカッパまたはラムダ定常領域である軽鎖定常領域を含む。
【００８４】
記載されている発明の方法で使用できる抗−ＣＸＣＲ４  Ａｂはまた、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｄ、Ｆｖ、およびｓｃＦｖ、ｄｉ−ｓｃＦｖまたはｂｉ−ｓｃＦｖ、およびｓｃＦｖ−Ｆｃフラグメント、ダイアボディ、トリアボディ、テトラボディ、および単離されたＣＤＲのような、上記Ａｂの抗原結合部分を含む。
【００８５】
抗−ＣＸＣＬ１２  Ａｂ
高親和性でＣＸＣＬ１２に特異的に結合するＭＡｂは、米国特許第８，４９６，９３１号に記載されている。米国特許第８，４９６，９３１号に記載されているこれらの抗−ＣＸＣＬ１２  ｍＡｂは、１つ以上の以下の特性：（ａ）表面プラズモン共鳴によって決定されるとき、約１．３ｘ１０−９Ｍ以下のＫＤでヒトＣＸＣＬ１２に結合する；（ｂ）ＣＸＣＬ１２のＣＥＭ（ヒトＴ細胞白血病）細胞への結合をブロックする；（ｃ）ＣＥＭ細胞においてＣＸＣＬ１２誘導カルシウム流出をブロックする；（ｄ）ＣＥＭ細胞のＣＸＣＬ１２誘導移動をブロックする；および（ｅ）ＨｕＶＥＣ細胞において毛細血管形成をブロックする、を示すことが証明されている。これは、抗−ＣＸＣＬ１２が、いくつかの抗−ＣＸＣＲ４の特性、例えば、ＣＸＣＬ１２のＣＸＣＲ４への結合をブロックする、ＣＸＣＲ４−発現細胞においてＣＸＣＬ１２誘導カルシウム流出をブロックする、およびＣＸＣＲ４−発現細胞のＣＸＣＬ１２誘導移動をブロックする、を示すことをを示す。しかしながら、抗−ＣＸＣＲ４と異なって、抗−ＣＸＣＬ１２は、腫瘍増殖細胞を阻害しないことが示され、抗腫瘍コントロールがＣＸＣＬ１２／ＣＸＣＲ４軸の遮断に依存しないという結論を導いた（ＷＯ  ２０１３／０７１０６８）。対照的に、Ｐｉｔｔ  ｅｔ  ａｌ．  （２０１５）は、血管内皮細胞からのＣｘｃｌ１２欠失は、Ｔ細胞急性リンパ芽球性白血病（Ｔ−ＡＬＬ）腫瘍細胞の増殖を妨げたことを報告した。あらゆる事象において、本願明細書にて議論されているとおり、ＰＤ−１およびＣＸＣＲ４シグナル伝達経路の遮断を組み合わせるための理論的根拠は、ＣＸＣＲ４ブロッカーの抗腫瘍活性に依存しないが、ＣＸＣＲ４／ＣＸＣＬ１２インヒビターが活性化免疫細胞の腫瘍部位への浸透を増強する能力に多くを依存し得る（Feig et al., 2013；Fearon、2014；ＷＯ  ２０１５／０１９２８４；Chen et al., 2015も参照）。あらゆる特定の理論または作用機序によって拘束されることなく、本願発明で使用できる抗−ＣＸＣＬ１２  Ａｂは、ヒトＣＸＣＬ１２に特異的に結合し、少なくとも３つ、および好ましくは全ての上記抗−ＣＸＣＬ１２  ｍＡｂの特性を示すｍＡｂを含む。本願明細書に記載されている方法における使用のための好ましい抗−ＣＸＣＬ１２  Ａｂは、米国特許第８，４９６，９３１号において２Ａ５と指定されたｍＡｂである。ＭＡｂ  ２Ａ５は、それぞれ配列番号１５および１６に示されている配列を有する連続的に連結されたアミノ酸を含むＶＨおよびＶＬ領域を含む（生殖細胞系列立体配置に「復帰突然変異させた」ＦＲ１において２Ａ５  ＶＨおよびＶＬ配列に対応する；米国特許第８，４９６，９３１号参照）。ｍＡｂ  ２Ａ５の完全な重鎖および軽鎖の配列は、それぞれ配列番号１７および１８に示されている。他の使用できるＡｂは、米国特許第８，４９６，９３１号において１Ｄ３、１Ｈ２および１Ｃ６と指定されたｍＡｂを含む。
【００８６】
それぞれ配列番号１５および／または１６に示されているアミノ酸配列と少なくとも８０％同一であり、２Ａ５  ｍＡｂの機能特性を保持するアミノ酸配列を有するＶＨおよびＶＬ領域を含む抗−ＣＸＣＬ１２  Ａｂはまた、本願方法における使用のために適当である。１つの態様において、ＶＨおよび／またはＶＬアミノ酸配列は、それぞれ配列番号１５および／または１６に示されている配列と少なくとも８５％、９０％、９５％または９９％同一性を示す。
【００８７】
記載された方法における使用のために適当なさらなる抗−ＣＸＣＬ１２  Ａｂは、一方ではｍＡｂ  ２Ａ５および１Ｃ６、または他方ではｍＡｂ  １Ｄ３および１  Ｈ２と、ＣＸＣＬ１２ａのモノマーまたはダイマーのいずれかの実質的に同じエピトープ領域に結合するＡｂを含む。ｍＡｂ  １Ｃ６および２Ａ５は、２つのエピトープペプチドを認識し、１つが公知の受容体結合部位でもあるＮ−末端付近の領域のアミノ酸残基７−１９であり、もう１つが残基３７−５０間の第３のベータストランドであるが、ｍＡｂ  １Ｄ３および１Ｈ２は、ヘパリン結合部位をブロックし、ヘパリンも結合する第１および第２のモノマーの残基２４−３０間のＣＸＣＬ１２ａダイマー接合面結合部位に主に結合するようである（米国特許第８，４９６，９３１号）。Ａｒｇ８残基は、ｍＡｂ  １Ｃ６および２Ａ５によるエピトープ結合において重要である。ＣＸＣＬ１２の同じエピトープ領域に結合するＡｂは、それぞれ１Ｃ６／２Ａ５および１Ｄ３／１２参照Ａｂの特性と非常に類似の機能特性を有することが予期される。
【００８８】
また、記載された方法における使用のために適当なものは、ヒトＣＸＣＬ１２に特異的に結合し、ヒトＣＸＣＬ１２への結合に対して１Ｄ３、１Ｈ２、１Ｃ６および２Ａ５と指定されたＡｂのいずれかと交差競合するＡｂである（米国特許第８，４９６，９３１号参照）。これらの交差競合するＡｂは、ＣＸＣＬ１２の同じエピトープ領域に実質的に結合する理由で、それぞれ１Ｄ３、１Ｈ２、１Ｃ６および２Ａ５の特性と非常に類似の機能特性を有することが予期される。かかる交差競合する抗−ＣＸＣＬ１２  Ａｂは、標準ＣＸＣＬ１２結合アッセイ、例えば、Ｂｉａｃｏｒｅ分析、ＥＬＩＳＡアッセイまたはフローサイトメトリー（米国特許第８，４９６，９３１号参照）において１Ｄ３、１Ｈ２、１Ｃ６または２Ａ５と交差競合する能力に基づいて容易に同定することができる。
【００８９】
好ましい態様において、記載された方法における使用のために適当な抗−ＣＸＣＬ１２  Ａｂは、ｍＡｂである。１つの態様において、これらの抗−ＣＸＣＬ１２  Ａｂは、キメラＡｂ、好ましくはヒト化Ａｂ、またはさらに好ましくはヒトＡｂである。かかるキメラ、ヒト化またはヒトｍＡｂは、例えば、米国特許第８，４９６，９３１号に記載されている、当分野でよく知られている方法によって製造し、単離することができる。
【００９０】
１つの態様において、抗−ＣＸＣＬ１２  Ａｂまたはその抗原結合部分は、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３またはＩｇＧ４アイソタイプのものである重鎖定常領域を含む。他の１つの態様において、抗−ＣＸＣＬ１２  Ａｂまたはその抗原結合部分は、ＩｇＧ４アイソタイプのヒトＩｇＧ１のものである。さらなる態様において、Ａｂまたはその抗原結合部分のＩｇＧ４重鎖定常領域の配列は、Ｓ２２８Ｐ変異を含む。さらに他の態様において、Ａｂは、ヒトカッパまたはラムダ定常領域である軽鎖定常領域を含む。
【００９１】
上記抗−ＣＸＣＬ１２  Ａｂの抗原結合部分はまた、例えば、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｄ、Ｆｖ、およびｓｃＦｖ、ｄｉ−ｓｃＦｖまたはｂｉ−ｓｃＦｖ、およびｓｃＦｖ−Ｆｃフラグメント、ダイアボディ、トリアボディ、テトラボディ、および単離されたＣＤＲを使用してもよい。
【００９２】
交差競合するＡｂ
抗原への結合に対して「交差競合する」Ａｂの対の能力は、第１のＡｂが、特定のエピトープ領域に結合する第２のＡｂと同じ抗原のエピトープ領域に実質的に結合し、特定のエピトープ領域に結合する第２のＡｂの結合を低下させる、逆に、第２のＡｂが、エピトープ領域に結合する第１のＡｂと同じ抗原のエピトープ領域に実質的に結合し、エピトープ領域に結合する第１のＡｂの結合を低下させることを示す。したがって、例えばヒトＰＤ−１へのニボルマブの結合を競合的に阻害する試験Ａｂの能力は、試験Ａｂがニボルマブのものと同じヒトＰＤ−１のエピトープ領域に実質的に結合するということを証明する。
【００９３】
第１のＡｂが抗原への第２のＡｂの結合を少なくとも約４０％低下させるとき、第１のＡｂは、第２のＡｂのものと「同じエピトープに実質的に」または「同じ決定因子に実質的に」結合すると考えられる。好ましくは、第１のＡｂは、抗原への第２のＡｂの結合を約５０％以上（例えば、少なくとも約６０％または少なくとも約７０％）低下させる。さらに好ましい態様において、第１のＡｂは、抗原への第２のＡｂの結合を約７０％以上（例えば、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、または約１００％）低下させる。第１および第２のＡｂの順番は逆転させることができる、すなわち「第２の」Ａｂが表面に第１に結合することができ、「第１の」Ａｂが「第２の」Ａｂの存在下で表面とその後接触させる。Ａｂが固定された抗原に加えられる順番にかかわりなく、抗原への結合における競合的低下が観察されるとき、Ａｂは「交差競合する」と考えられる。
【００９４】
交差競合するＡｂは、ＰＤ−１またはＣＸＣＲ４受容体のような抗原の同じエピトープ領域に実質的に結合する理由で、類似の機能特性を有することが予期される。交差競合の程度が高いほど、機能特性はより類似している。例えば、２つの交差競合するＡｂは、それぞれエピトープへの他のものの結合を少なくとも約８０％阻害するとき、同じ機能特性を本質的に有することが予期される。交差競合するＡｂが、解離定数（ＫＤ）により測定されるとき、エピトープへの結合に対して類似のアフィニティーを示すとき、この機能における類似性はより密接していると予期される。
【００９５】
交差競合する抗−抗原Ａｂは、組み換え抗原分子または抗原分子を発現する細胞表面のいずれかを使用して、表面プラズモン共鳴（ＢＩＡｃｏｒｅ（登録商標））分析、ＥＬＩＳＡアッセイまたはフローサイトメトリーを含む標準抗原結合アッセイにおいて検出可能に競合する能力に基づいて、容易に同定することができる。一例として、ヒトＰＤ−１への結合に対してニボルマブと競合する試験Ａｂが、（１）ヒトＰＤ−１が固定されるＢＩＡｃｏｒｅチップ（または表面プラズモン共鳴分析のための適当な他の媒体）上への飽和濃度で適用されたニボルマブの結合を測定する、および（２）試験Ａｂが以前に結合されているヒトＰＤ−１−被覆ＢＩＡｃｏｒｅチップ（または適当な他の媒体）へのニボルマブの結合を測定する、を含み得るか否かを同定する簡単な競合アッセイ。試験Ａｂの存在および非存在下でのＰＤ−１−被覆表面へのニボルマブの結合を比較する。試験Ａｂの存在下でニボルマブの結合における有意な（例えば、約４０％以上）低下は、両方のＡｂが同じエピトープを実質的に認識し、ＫＩＲ２ＤＬ１標的への結合に対して競合することを示す。抗原への第１のＡｂの結合が第２のＡｂによって阻害されるパーセンテージは、［１−（第２のＡｂの存在下で第１のＡｂの検出される結合）／（第２のＡｂの非存在下で第１のＡｂの検出される結合）］ｘ１００として計算することができる。Ａｂが交差競合するか否かを決定するために、ニボルマブの存在下でＰＤ−１−被覆チップへの試験Ａｂの結合が測定されることを除いて、競合的結合アッセイは繰り返される。
【００９６】
記載された方法による処置に適している癌
癌細胞を攻撃および破壊する免疫系の実質的に無数の柔軟性を使用することに依存する免疫腫瘍学は、非常に広範囲な癌を処置するために適用できる（例えば、Callahan et al., 2016; Vick  and Mahadevan, 2016; Lesokhin et al., 2015; Yao et al., 2013; Chen and Mellman, 2013; Pardoll, 2012参照）。抗−ＰＤ−１  Ａｂであるニボルマブは、多くの様々なタイプの癌を阻害することにおいて有効であることが示されており（例えば、Topalian et al., 2012b；ＷＯ  ２０１３／１７３２２３参照）、多数の固形および血液学的癌において臨床試験が現在行われている。したがって、ＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１およびＣＸＣＲ４／ＣＸＣＬ１２シグナル伝達経路のデュアル遮断を使用する記載された方法は、多種多様の固形および血液腫瘍の両方を処置することにおいて適用できる。しかしながら、これらの方法の最初の焦点は、有効な治療に関して大きな満たされていない要求が存在する２つの固形腫瘍であるＳＣＬＣおよびＰＡＣの処置のためである。
【００９７】
小細胞肺癌（ＳＣＬＣ）における満たされていない医薬的要求
様々なタイプの癌の標準治療が当業者に周知である。例えば、ＵＳＡの２１の主要な癌センターの提携である全米総合癌情報ネットワーク（ＮＣＣＮ）は、腫瘍学においてＮＣＣＮ標準的治療法ガイドラインを発行しており（ＮＣＣＮ  ＧＵＩＤＥＬＩＮＥＳ（登録商標））、これは、多種多様な癌に対する標準処置の詳細な最新の情報を提供する（ＮＣＣＮ  ＧＵＩＤＥＬＩＮＥＳ（登録商標）、２０１５参照）。ＳＣＬＣは肺癌の新たな症例の約１５％を占め、推定３１，０００例が２０１５年に米国において診断されることが予期される（Siegel et al., 2015；ＮＣＣＮ  ＧＵＩＤＥＬＩＮＥＳ（登録商標）、Ｖｅｒｓｉｏｎ  １．２０１６  −  Ｓｍａｌｌ  Ｃｅｌｌ  Ｌｕｎｇ  Ｃａｎｃｅｒ）。ＮＳＣＬＣと比較したとき、ＳＣＬＣは、一般的に、より迅速な倍加時間、より高い増殖率、および広範な転移の早期発生を有する。限局期（ＬＤ）疾患を有する患者において、処置の目標は、化学療法  プラス  胸部放射線治療を使用するケアである（ＮＣＣＮ  ＧＵＩＤＥＬＩＮＥＳ（登録商標）、Ｖｅｒｓｉｏｎ  １．２０１６  −  Ｓｍａｌｌ  Ｃｅｌｌ  Ｌｕｎｇ  Ｃａｎｃｅｒ；Sorensen et al., 2010）。進行期（ＥＤ）疾患を有する患者において、化学療法は、ほとんどの患者において生存を延長することができる。しかしながら、長期生存は希である（ＮＣＣＮ  ＧＵＩＤＥＬＩＮＥＳ（登録商標）、Ｖｅｒｓｉｏｎ  １．２０１６  −  Ｓｍａｌｌ  Ｃｅｌｌ  Ｌｕｎｇ  Ｃａｎｃｅｒ； Sorensen et al., 2010; Janne et al., 2002; Chute et al., 1999）。ＳＣＬＣにおけるいくつかの薬剤の活性にもかかわらず、エトポシドおよびプラチナ（例えば、シスプラチン）含有レジメンは、他の化学療法レジメンと比較して活性が高く、放射線との組み合わせが容易であるため、ＳＣＬＣに対する標準のままである。初期応答率は、ＬＤ−ＳＣＬＣにおいて７０−９０％の応答者およびＥＤ−ＳＣＬＣにおいて５０−７０％の応答者で強力であり得る（Califano et al., 2012）。しかしながら、通常、疾患は迅速に再発し、これはＥＤ−ＳＣＬＣにおいて９から１１月の中央生存率によって反映され、２年生存率が５％未満である（ＮＣＣＮ  ＧＵＩＤＥＬＩＮＥＳ（登録商標）、Ｖｅｒｓｉｏｎ  １．２０１６  −  Ｓｍａｌｌ  Ｃｅｌｌ  Ｌｕｎｇ  Ｃａｎｃｅｒ；Sorensen et al., 2010）。二次（２Ｌ）療法は、一般的に、単剤化学療法を含み、多くの患者において緩和ケアを提供する。ＳＣＬＣにおける臨床的利益を増強させ、生存および生活の質を延長することができる革新的な処置戦略が緊急に必要とされている。
【００９８】
ＳＣＬＣにおいてＰＤ−１およびＣＸＣＲ４シグナル伝達の組合せ遮断の理論的根拠
ニボルマブおよびペムブロリズマブは、ＮＳＣＬＣの処置について承認されており、いくつかのチェックポイントインヒビターがＮＳＣＬＣおよびＳＣＬＣの両方において評価されている。観察される予備的有効性は、両方の肺癌形態におけるさらなる評価を支持している。ＳＣＬＣにおけるランダム化フェーズ２試験は、イピリムマブ（１０ｍｇ／ｋｇ）が、パクリタキセル／カルボプラチンと組み合わせて、最先端の設計において無進行生存（ＰＦＳ）を有意に延長させたことを証明した（Reck et al., 2013）。フェーズ３試験は、ＥＤ−ＳＣＬＣにおいて一次（１Ｌ）処置として、エトポシド／カルボプラチンまたはエトポシド／シスプラチンと組み合わせられたイピリムマブを比較することが継続している（ＮＣＴ０１４５０７６１）。同様に、ニボルマブは扁平上皮および非扁平上皮ＮＳＣＬＣにおいて承認されており、早期試験が以前の化学療法に失敗したＳＣＬＣ患者において評価されている（Topalian et al., 2012b；ＮＣＴ０１９２８３９４）。これらの試験におけるチェックポイントインヒビターの有効性は有望であるが、応答率を最大にする、および／または生存結果を改善するために、他の新規の標的薬剤との組合せが必要とされ得る。
【００９９】
ＳＣＬＣにおいて、腫瘍間質はＳＣＬＣの難治性に寄与し、間質区画を標的とする治療はこの疾患においてで評価されている（Burger and Kipps, 2006; Burger et al., 2011）。ＣＸＣＲ４は、高いパーセントの原発性腫瘍および細胞系で過剰発現される間質細胞マーカーであり、間質細胞によるそのリガンドであるＣＸＣＬ１２の構成性分泌は、ＣＸＣＲ４−依存性経路を介してＳＣＬＣ細胞の移動および接着を誘導する（Burger et al., 2003; Gangadhar et al., 2010）。さらに、間質細胞は、ＣＸＣＲ４インヒビターによってアンタゴナイズされることができる化学療法誘導アポトーシスからＳＣＬＣを保護し得る（Hartmann et al., 2005）。前臨床マウスモデルにおいて、小ペプチド性ＣＸＣＲ４インヒビターは、サイズおよび数においてＣＸＣＲ４を発現するＳＣＬＣの肺転移を抑制し（Otani et al., 2012）、ＳＣＬＣの処置においてＣＸＣＲ４遮断を支持した。しかしながら、対照的に、小分子ＣＸＣＲ４インヒビターは、化学療法と組み合わせたとき、ＥＤ−ＳＣＬＣ患者にて最近のフェーズ２臨床試験において有効性を証明しなかった（Spigal et al., 2014）。全体として、これらのデータは、ＣＸＣＲ４標的剤と組み合わせたさらなる免疫媒介メカニズムが、ＳＣＬＣ患者に対して耐性を克服し、臨床的利益を提供するために必要とされ得ることを示唆する。
【０１００】
本願明細書（実施例２−５）に記載されているマウスＳＣＬＣ、大腸および肝臓癌モデルにおいて抗−ＰＤ−１および抗−ＣＸＣＲ４の組合せを評価する実験の結果は、ＳＣＬＣを処置するためのこの組合せの有効性を支持する。これらの実験は、抗−ＰＤ−１および抗−ＣＸＣＲ４が相乗的に相互作用し、いずれかの抗体単独よりもより強力である抗腫瘍効果を生じることを示す。最も顕著な相乗作用は、ＣＸＣＲ４を発現する同系ＫＰ１腫瘍モデルにおいて抗−ＰＤ−１と組み合わせての枯渇させるｍＩｇＧ２ａ  抗−ＣＸＣＲ４  Ａｂの組合せで観察された（図４Ｂ）。複数の作用メカニズムは、この強力な相乗的相互作用に寄与し得る。例えば、抗−ＣＸＣＲ４は、ＷＯ  ２０１３／０７１０６８に示されるとおり腫瘍細胞のアポトーシスを直接的に誘導し得る。抗−ＣＸＣＲ４−ｍＩｇＧ２ａはまた、ＡＤＣＣ、ＡＤＣＰおよび／またはＣＤＣによる腫瘍細胞の枯渇を媒介し得る。抗−ＰＤ−１と組み合わせての枯渇させない抗−ＣＸＣＲ４−ｍＩｇＧ１  Ａｂで見られる非常に弱い抗腫瘍効果（図４Ｂ）は、ＳＣＬＣ細胞のアポトーシスがこのモデル系において主要な要因ではない可能性があるということを示唆する。
【０１０１】
Ｋｐ３  ＣＸＣＲ４を発現しないＳＣＬＣマウスモデルにおいて、より低いレベルの相乗作用が観察された（図５Ｂ）。しかし、抗−ＣＸＣＲ４−ｍＩｇＧ２ａが単剤療法として活性（図５Ａ）および抗−ＰＤ−１と組み合わせて活性（図５Ｂ）を示すということを見いだしたことは、抗−ＣＸＣＲ４が腫瘍細胞それ自体以外のＣＸＣＲ４−発現細胞に作用し得るということを示唆する。免疫抑制性Ｔｒｅｇ（図３；Wang et al., 2012; Obermajer et al., 2011; Katoh and Watanabe, 2015）およびＭＤＳＣが、ＣＸＣＲ４上で高レベルで発現することが知られているため、Ｔｒｅｇおよび／またはＭＤＳＣの抗−ＣＸＣＲ４介在枯渇は、これらの細胞型による免疫抑制を逆転させ、抗腫瘍効果に寄与し得る。さらに、ＴｒｅｇおよびＭＤＳＣがＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１シグナル伝達経路を含むメカニズムを介してＴ細胞機能を鈍化させ得るいくつかの証拠がある。抗−ＣＸＣＲ４  ＩｇＧ２ａのような枯渇させる抗−ＣＸＣＲ４抗体でのＴｒｅｇおよび／またはＭＤＳＣの枯渇は、ＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１の免疫阻害効果を緩和し、それにより抗−ＰＤ−１または抗−ＰＤ−Ｌ１  Ａｂの効果を増強することに間接的に寄与し得る。
【０１０２】
ＣＸＣＲ４を発現しないＭＣ３８マウスモデルにおいて、抗−ＣＸＣＲ４  ＩｇＧ１または抗−ＣＸＣＲ４  ＩｇＧ２ａのいずれかで低い抗腫瘍活性が観察されたが（図６Ａ）、抗−ＰＤ−１と抗−ＣＸＣＲ４アイソタイプの両方（ＩｇＧ１またはＩｇＧ２ａ）の組合せで強力な活性が観察され（図６Ｂ）、抗−ＣＸＣＲ４  ＩｇＧ２ａ  プラス  抗−ＰＤ１は、抗−ＣＸＣＲ４  ＩｇＧ１  プラス  抗−ＰＤ−１よりもわずかにより顕著であった。抗−ＣＸＣＲ４  ＩｇＧ２ａ  プラス  抗−ＰＤ１の組合せはまた、Ｈ２２肝臓癌モデルにおいて強力な抗腫瘍効果を生じた（実施例５；図７）。ＣＸＣＲ４−腫瘍モデルにおいて抗−ＰＤ−１との枯渇させない抗ＣＸＣＲ４  ＩｇＧ１によって示される高レベルの相乗作用は、さらに別の起こり得る作用機序を示唆する。一方でＴｒｅｇおよび／またはＭＤＳＣ上で発現されるＣＸＣＲ４および他方で腫瘍において発現されるＣＸＣＬ１２間の相互作用の遮断は、腫瘍内微小環境へのＴｒｅｇまたはＭＤＳＣの輸送を減少させ、それにより免疫抑制のレベルを低下させ得る。
【０１０３】
特定の作用機序によって拘束されることなく、これらのマウスデータは、抗−ＰＤ−１および抗−ＣＸＣＲ４の組合せが、ＳＣＬＣ、大腸癌および肝臓癌を含む種々の癌を処置することに対して有効であり得ることを示す。これらのデータは、枯渇させる抗−ＣＸＣＲ４  Ａｂ、例えばウロクプルマブのヒトＩｇＧ１またはヒトＩｇＧ３変異体のようなエフェクター機能を有するＡｂが、この組合せにおいて高度に有効であり得ることを示唆する。
【０１０４】
ＰＡＣで満たされていない医療ニーズ
膵臓癌は、過去数十年の間に発生率が上昇している米国における癌関連死の第４の最も一般的な原因である。推定４８，９６０人がＰＡＣと診断され、約４０，５６０人がこれらの疾患で死亡する（Siegel et al., 2015)。新たに診断された患者の１年生存率および５年生存率は、それぞれ１５％と５％未満とである。疾患が早期（ステージＩ、ステージＩＩ）に診断されるとき、治癒意図で根治手術が処置目標である（NCCN GUIDELINES（登録商標）, Version 2.2015 - Pancreatic Adenocarcinoma; Tempero et al., 2012）。局所進行性または転移性疾患を有する患者のために、以下の全身治療は臨床的利益が証明されている：ＦＯＬＦＩＲＩＮＯＸ（フォリン酸［ＦＯＬ］、フルオロウラシル［Ｆ］、イリノテカン［ＩＲＩＮ］およびオキサリプラチン［ＯＸ］の組合せ）、ゲムシタビンおよびゲムシタビン  プラス  アルブミン結合パクリタキセルの組合せ。ゲムシタビンでのフェーズ３試験は、６．２月の中央生存、２０％の１年生存率を証明した。良い一般状態を有する転移性患者においてＦＯＬＦＩＲＩＮＯＸとゲムシタビンを比較するフェーズ３ＰＲＯＤＩＧＥ試験は、ゲムシタビンと比較してＦＯＬＦＩＲＩＮＯＸで、中央ＰＦＳ（６．４  対  ３．３月）および中央ＯＳ（１１．１  対  ６．８月）の有意な改善を示した(Conroy et al., 2011)。フェーズ３ＩＭＰＡＣＴ試験は、ゲムシタビン／アルブミン結合パクリタキセルの組合せ  対  ゲムシタビン単剤療法で改善したＰＦＳを証明した（５．５  対  ３．７月）（Von Hoff et al., 2013）。ＰＡＣにおいて二次選択肢は、１ＬにおいてＦＯＬＦＩＲＩＮＯＸを受けた患者に対してゲムシタビンおよび１Ｌにおいてゲムシタビンベースのレジメンを受けた患者に対してフルオロピリミジンを含む選択肢を含む。しかしながら、進行性または転移性疾患設定において１Ｌ療法後に進行する対象に対して確立された標準治療は存在しない。
【０１０５】
ＰＡＣにおいてＰＤ−１およびＣＸＣＲ４シグナル伝達の組合せ遮断の理論的根拠
証拠は、膵臓腫瘍生検におけるＰＤ−１経路の上方調節およびＰＤ−Ｌ１発現と予後不良との相関関係のために、ＰＡＣにおいて免疫チェックポイントを標的化することを支持する（Nomi et al., 2007）。ＳＣＬＣと同様に、前臨床的な証拠は、標的薬剤との組合せ戦略が疾患の難治性を克服するために必要とされ得ることを示唆する。例えば、チェックポイントインヒビターと腫瘍内微小環境を標的化する治療との組合せは、活性化免疫細胞の腫瘍部位への浸透を増強し、それにより腫瘍細胞死滅を増加させ、生存を延長させるができる可能性がある。膵臓腫瘍生検は高レベルのＣＸＣＲ４を発現し、この発現は予後不良と関連する（Wang et al., 2013; Gao et al., 2010）。ＣＸＣＬ１２は、膵臓腫瘍細胞の増殖を促進し、間質微小環境の免疫抑制成分でもあることも報告されている（Gao et al., 2010; Feig et al., 2013)。ＰＡＣの前臨床マウスモデルにおいて、ＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１経路を標的化することは、ＣＸＣＲ４／ＣＸＣＬ１２経路の同時阻害の存在下でのみ有効であり、この仮説をさらに支持した（Feig et al., 2013；ＷＯ  ２０１５／０１９２８４）。したがって、ウロクプルマブのような抗−ＣＸＣＲ４／抗−ＣＸＣＬ１２  Ａｂと組み合わせたニボルマブのような抗−ＰＤ−１／抗−ＰＤ−Ｌ１  Ａｂが、革新的な組合せレジメンを提供しｍＰＡＣ患者において応答率を改善するか否かを決定することに興味がある。特に、ＳＣＬＣ、大腸癌および肝臓癌のマウスモデルにおいて得られたデータ（実施例２−５）は、エフェクター機能を有する抗−ＣＸＣＲ４  Ａｂ、例えばウロクプルマブのＩｇＧ１またはＩｇＧ３変異体が、腫瘍増殖を阻害することにおいて抗ＰＤ−１  Ａｂと相乗作用を与えることにおいてより有効であり得ることを示す。
【０１０６】
ＣＸＣＲ４およびＰＤ−１シグナル伝達のデュアル阻害の前臨床的理論的根拠
前臨床異種移植片腫瘍モデル試験は、ＣＬＬ、ＦＬ、ＤＬＢＣＬおよびバーキットリンパ腫のようなＡＭＬ、ＭＭおよび非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）を含む多くの血液学的悪性腫瘍を示すヒト癌細胞系で行われ、ウロクプルマブで処置された。腫瘍増殖阻害は、ウロクプルマブがこれらのモデルにおいて単一薬剤として投与されたときに観察された（Kuhne et al., 2013；ＷＯ  ２０１３／０７１０６８）。対照的に、グリア芽腫、黒色腫、中皮腫、膵臓癌、乳房癌腫およびＳＣＬＣを含む固形腫瘍異種移植モデルにおいてウロクプルマブ単剤療法で弱い有効性が観察された（データは示していない）。これらの固形腫瘍試験において、腫瘍増殖阻害は、ＳＣＬＣおよび３重のネガティブ乳房癌腫モデルで見られる最も説得力のある活性で、約０−４０％の範囲であった。
【０１０７】
いくつかの悪性腫瘍は、腫瘍内微小環境の主成分である線維芽細胞活性化タンパク質陽性（ＦＡＰ＋）癌腫関連線維芽細胞を含む腫瘍を示す。これらの悪性腫瘍は腫瘍上にＣＸＣＬ１２を発現し、腫瘍巣中にＴ細胞を欠く（Fearon, 2014）。標準処置に対して難治性である傾向があるこれらの腫瘍は、ＰＡＣ、卵巣および結腸直腸癌を含む。ＰＡＣモデルに基づいて、ＦＡＰ＋間質細胞によるＣＸＣＬ１２の分泌が、腫瘍細胞へのＣＸＣＬ１２結合をもたらし、その相互作用がＴ細胞の補充を阻害することにより免疫抑制性環境を提供すると仮定した。この免疫抑制は、小分子ＣＸＣＲ４アンタゴニストおよび抗ＰＤ−Ｌ１  Ａｂの組合せを使用することによって克服され、ＣＤ３＋  Ｔ細胞の補充および有意な腫瘍増殖コントロールを引き起こした（Feig et al., 2013；ＷＯ  ２０１５／０１９２８４）。
【０１０８】
免疫監視においてＣＸＣＬ１２／ＣＸＣＲ４経路に関しての重要な役割についての同様の見いだしたことおよび証拠はまた最近、ＨＣＣの同所性モデルを使用して報告された（Chen et al., 2015）。ＨＣＣに対する標準治療であるソラフェニブが、低酸素を誘導し、腫瘍細胞によるＣＸＣＬ１２およびＰＤ−Ｌ１発現の上方調節を引き起こすことを示した。ソラフェニブでの処置後、小分子ＣＸＣＲ４インヒビターおよび抗−ＰＤ−１  ｍＡｂは、腫瘍増殖および肺転移の減少および腫瘍におけるＣＤ８＋  Ｔ細胞補充の増加をもたらした。ＣＸＣＲ４およびＰＤ−１経路の遮断が、免疫細胞機能の抑制を防止し、免疫細胞の腫瘍への補充を増加させ、最後にＨＣＣの進行を遅延させると結論された（Chen et al., 2015）。
【０１０９】
集合的に、固形腫瘍動物モデルにおいて抗−ＣＸＣＲ４で観察された弱い単剤療法活性および支持インビボ有効性データでの免疫監視におけるＣＸＣＲ４／ＣＸＣＬ１２の役割の表示は、抗−ＰＤ−１  Ａｂ（例えば、ニボルマブ）と組み合わせての抗−ＣＸＣＲ４  Ａｂ（例えば、ウロクプルマブ）の試験の理論的根拠を提供する。マウスデータは、ウロクプルマブのＩｇＧ１またはＩｇＧ３変異体がこの試験のためのより良い選択肢であり得るが、かかる変異体がまだ臨床試験のために利用できないことを示唆する。しかしながら、免疫治療が他の抗癌剤と組み合わせられたとき、驚くべき予期せぬ合併症がときどき観察されている。例えば、抗−ＰＤ−１剤（それぞれニボルマブおよびペムブロリズマブ）でのＢＲＡＦ  Ｖ６００Ｅ突然変異を有する２人の黒色腫患者の１Ｌ療法は有意な毒性を引き起こさなかったが、疾患進行時にベムラフェニブ（ＺＥＬＢＯＲＡＦ（登録商標））での処置はそれらのベムラフェニブ処置過程において早期に多臓器傷害と共に重度の過敏性薬疹を生じた（Johnson et al., 2013）。次に、１人の患者は急性炎症性脱髄性多発ニューロパシーを発症し、もう１人は低用量のベムラフェニブ再チャレンジ時にアナフィラキシーを発症した。
【０１１０】
同様に、スニチニブ、抗血管形成チロシンキナーゼインヒビターおよび抗−ＣＴＬＡ−４  Ａｂ（Ribas, 2010；米国特許第６，６８２，７３６号）であるトレメリムマブの組合せのフェーズ１用量漸増試験において、転移性ＲＣＣを有する２８人の対象において、予期せぬ毒性の急激な腎不全がトレメリムマブを１２週間に１回で１０ｍｇ／ｋｇまたは１５ｍｇ／ｋｇと組み合わせてスニチニブを毎日３７．５ｍｇを受けた１３人の対象のうち４人の対象において観察され、これらの患者の１人が突然死を受けた（Rini et al., 2011）。４３％の部分的応答率が観察されたが、最大耐量（ＭＴＤ；スニチニブ  ３７．５ｍｇ  毎日  プラス  トレメリムマブ  １０ｍｇ／ｋｇ  ｑ  １２週）での組合せの毒性は許容できないと考えられた。
【０１１１】
したがって、抗−ＰＤ−１／抗−ＰＤ−Ｌ１  Ａｂのような免疫チェックポイントインヒビター薬物と抗−ＣＸＣＲ４／抗−ＣＸＣＬ１２  Ａｂのような別の抗癌療法との組合せは予測不可能である。このような薬物を組み合わせるための適切な根拠にもかかわらず、抗−ＰＤ−１／抗−ＰＤ−Ｌ１  ＡｂおよびＣＸＣＲ４／ＣＸＣＬ１２  Ａｂの組合せが個々の薬剤でのこれらの癌の処置よりも、ヒト対象において難治性癌を処置することにおいて有意により有効であるか否かは、本願明細書に記載されている試験の前に知られていなかった。
【０１１２】
全体的なリスク／利益評価
１Ｌ化学療法に失敗したＰＡＣ患者の処置はほとんど成功していない。二次処置選択肢は、生存利益を証明していないカペシタビンおよび他の化学療法ベースの選択肢を含む。さらに、標的薬剤は、この疾患に対して、新たに診断されたまたは難治性患者集団のいずれにおいても承認されていない。新たに診断されたＳＣＬＣ患者に対して、白金ベースの化学療法は有意な応答率で有効であるが、しかしながら、ほとんどの応答は永続性ではない。白金ベースの薬剤に対する一次応答後の再発までの時間は、後の処置選択肢に対する成功率を決定するときに有益である。進行している白金感受性患者において、いくつかの応答は２Ｌ化学療法後に見ることができるが、全ての患者が結局は再発する。しかしながら、白金難治性患者において、この患者集団において有意な満たされていない要求を示す、２Ｌ化学療法剤を使用したときほとんど成功しないと考えられる。ＰＡＣおよびＳＣＬＣの難治性は、一つには、活性化リンパ球が腫瘍部位に浸潤することを防止する免疫抑制性間質微小環境の結果であり得る。抗−ＰＤ−１／抗−ＰＤ−Ｌ１  Ａｂと抗−ＣＸＣＲ４／抗−ＣＸＣＬ１２  Ａｂとの組合せは、本願明細書に記載されているとおり、間質微小環境おとび腫瘍を殺すＴ細胞の活性化の両方を標的化するユニークな機会を提供する。抗−ＰＤ−１／抗−ＰＤ−Ｌ１  Ａｂでのチェックポイント阻害に対するこれらの腫瘍型の感受性を増加させる抗−ＣＸＣＲ４／抗−ＣＸＣＬ１２  Ａｂの能力は、これらの難治性患者集団において処置選択肢を増加させ得る。
【０１１３】
ウロクプルマブは、血液悪性腫瘍において２つのフェーズ１臨床試験における管理可能な安全性プロフィールを証明している（Becker et al., 2014; Ghobrial et al., 2014）。承認された薬物プレリキサフォル（ＡＭＤ３１００；ＭＯＺＯＢＩＬ（登録商標））を含むＣＸＣＲ４／ＣＸＣＬ１２経路を標的とする他の治療剤は、同様の患者集団においてバックグラウンドＳＯＣと組み合わせて許容される毒性プロフィールを証明している。ＳＣＬＣにおいて、小ペプチドＣＸＣＲ４インヒビターは、大規模なランダム化フェーズ２ＳＣＬＣ試験において、安全および許容であることが最近見いだされた（Spigal et al., 2014）。ＣＸＣＲ４阻害の安全性は複数の薬剤で繰り返し証明されているが、限定された臨床活性が証明されている。血液学的適応における両方のウロクプルマブ試験において、全身性化学療法またはＳＯＣと組み合わせたとき、適度の予備的臨床活性が観察された。他のＣＸＣＲ４インヒビターは、ランダム化比較試験において主要評価項目を満たさず、プレリキサフォルは、主要な適応以外の非常に限られた有効性データを報告している。しかしながら、他のクラスの標的薬剤との組合せがＣＸＣＲ４アンタゴニストの活性を増強し得る可能性が存在する。本願は、免疫チェックポイントインヒビター、具体的にはニボルマブのような抗−ＰＤ−１  ＡｂまたはＢＭＳ−９３６５５９のような抗−ＰＤ−Ｌ１  Ａｂ（ＷＯ  ２０１３／１７３２２３）の活性を増加させ、腫瘍細胞死滅を増加させる手段として、固形腫瘍を取り囲む免疫抑制性間質微小環境をブロックするための、ウロクプルマブのような抗−ＣＸＣＲ４  Ａｂまたは２Ａ５のような抗−ＣＸＣＬ１２  Ａｂ（米国特許第８，４９６，９３１号）での癌患者の処置に関する。
【０１１４】
ニボルマブは、数多くの早期および後期の臨床試験において４０００人以上の患者に管理可能な安全性安全性プロフィールを証明している。ＳＣＬＣおよびＰＡＣにおけるニボルマブ単剤療法のフェーズ２試験からの予備的データは、他の固形腫瘍型と比較して同様の毒性プロフィールを示す。多数の癌患者においてニボルマブの明らかな利点があるが、かなりの割合の患者が単剤療法に応答しない。さらに、チェックポイント阻害に対する有意な応答をまだ示していないいくつかの腫瘍型が存在する。免疫抑制性微小環境を標的とする薬剤とニボルマブとの組合せは、ニボルマブ単剤療法に対する低い応答を示す腫瘍を有する対象に有益である可能性がある。
【０１１５】
処置に適している広範囲の癌
本願はＰＤ−１およびＣＸＣＲ４シグナル伝達経路のデュアル遮断によるＳＣＬＡおよびＰＡＣの処置を例示しているが、他の癌がこの併用療法に適している可能性がある。例えば、Chen et al. (2015)によって報告されたデータは、ＨＣＣもまた処置に適している可能性があることを示唆する。加えて、広範囲の癌におけるニボルマブの証明された有効性を考慮して、多くの他の癌が本願のＡｂの組合せを使用して治療可能であり得る。したがって、１つの態様において、記載されている併用療法方法は、固形腫瘍である癌を処置するために使用され得る。１つの好ましい態様において、固形腫瘍はＳＣＬＣまたはＰＡＣである。他の好ましい態様において、固形腫瘍はＨＣＣである。さらなる態様において、固形腫瘍は、扁平上皮癌、非小細胞性肺癌、扁平上皮非小細胞性肺癌（ＮＳＣＬＣ）、非扁平上皮ＮＳＣＬＣ、神経膠腫、消化器癌、腎臓癌、卵巣癌、肝臓癌、結腸直腸癌、子宮内膜癌、腎臓癌、前立腺癌、甲状腺癌、神経芽腫、グリア芽腫、胃癌、膀胱癌、肝臓癌、乳癌、大腸癌腫、頭頸部癌、胃癌、胚細胞腫瘍、小児肉腫、副鼻腔ナチュラルキラー、黒色腫、皮膚癌、骨癌、子宮頸癌、子宮癌、卵管の癌腫ｓ、子宮内膜の癌腫、頸部の癌腫、膣の癌腫、外陰の癌腫、肛門領域の癌、精巣癌、食道癌、小腸の癌、内分泌系の癌、副甲状腺の癌、副腎の癌、軟組織の肉腫、尿道の癌、尿管の癌、陰茎の癌、腎盂の癌腫、中枢神経系（ＣＮＳ）の新生物、原発性ＣＮＳリンパ腫、腫瘍の血管形成、脊髄の腫瘍、脳の癌、脳幹神経膠腫、下垂体腺腫、カポジ肉腫、類表皮癌、扁平上皮癌、小児固形腫瘍、環境誘発性の癌、ウイルス関連の癌、ウイルス起源の癌、およびこれらの癌の任意の組合せから選択される癌である。１つの態様において、癌は、進行性、切除不能、転移性、難治性癌および／または再発性癌である。
【０１１６】
ニボルマブおよびウロクプルマブの両方は、血液悪性腫瘍に罹患している患者における早期臨床試験において有効性を示している（Ansell et al., 2015; Becker et al., 2014; Ghobrial et al., 2014）。最近、骨髄間質、内皮または骨芽細胞からのＣＸＣＬ１２がＴ細胞急性リンパ芽球性白血病（Ｔ−ＡＬＬ）生存を促進するが、ＣＸＣＲ４はＴ−ＡＬＬホーミングのために必要であり、マウスモデルにおけるＣｘｃｒ４またはＣｘｃｌ１２遺伝子の欠失または小分子アンタゴニストでのＣＸＣＲ４の阻害がＴ−ＡＬＬ進行を阻害したことを証明した（Pitt et al., 2015; Passaro et al., 2015）。したがって、あらゆる特定の理論または作用機序によって拘束されることなく、ＰＤ−１およびＣＸＣＲ４シグナル伝達経路の遮断を組み合わせる本願明細書に記載されている治療方法はまた、血液悪性腫瘍を処置するために使用され得る。
【０１１７】
血液悪性腫瘍は、全ての型の白血病、リンパ腫および骨髄腫を含む、２つの主な血球系統、すなわち（顆粒球、赤血球、血小板、マクロファージおよび肥満細胞を産生する）骨髄細胞系または（Ｂ、Ｔ、ＮＫおよび形質細胞を産生する）リンパ球細胞系、のいずれかに由来する液性腫瘍を含む。したがって、本願方法を使用して処置され得る血液悪性腫瘍は、例えば、急性、慢性、リンパ球（リンパ芽球）および／または骨髄性白血病、例えば、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）および慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）；リンパ腫、例えば、ホジキンリンパ腫（ＨＬ；ホジキン病）、約８５％がＢ細胞リンパ腫である非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、例えば、びまん性大Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）、濾胞性リンパ腫（ＦＬ）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）／小リンパ球性リンパ腫（ＳＬＬ）、マントル細胞リンパ腫、辺縁帯Ｂ細胞リンパ腫（粘膜関連リンパ球組織（ＭＡＬＴ）リンパ腫、節性辺縁帯Ｂ細胞リンパ腫および脾臓辺縁帯Ｂ細胞リンパ腫）、バーキットリンパ腫、リンパ形質細胞性リンパ腫（ＬＰＬ；ワルデンシュトレームマクログロブリン血症（ＷＭ）としても知られている）、ヘアリー細胞リンパ腫、および原発性中枢神経系（ＣＮＳ）リンパ腫、Ｔ細胞リンパ腫であるＮＨＬ、例えば、前駆Ｔ−リンパ芽球性リンパ腫／白血病、Ｔ−リンパ芽球性リンパ腫／白血病（Ｔ−Ｌｂｌｙ／Ｔ−ＡＬＬ）、末梢Ｔ細胞リンパ腫、例えば、皮膚Ｔ細胞リンパ腫（ＣＴＬＣ、すなわち、菌状息肉腫、セザリー症候群など）、成人Ｔ細胞リンパ腫／白血病、血管免疫芽球性Ｔ細胞リンパ腫、節外ナチュラルキラー／Ｔ細胞リンパ腫鼻型、腸症関連腸管Ｔ細胞リンパ腫（ＥＡＴＬ）、未分化大細胞リンパ腫（ＡＬＣＬ）および非特定型末梢Ｔ細胞リンパ腫、急性骨髄性リンパ腫、リンパ形質細胞性リンパ腫、単球性Ｂ細胞リンパ腫、血管中心性リンパ腫、腸管Ｔ細胞リンパ腫、原発性縦隔Ｂ細胞リンパ腫、移植後のリンパ増殖性疾患、真性組織球性リンパ腫、原発性滲出性リンパ腫、びまん性組織球性リンパ腫（ＤＨＬ）、免疫芽球性大細胞リンパ腫および前駆Ｂリンパ芽球性リンパ腫；骨髄腫、例えば、多発性骨髄腫、くすぶり型骨髄腫（無症候性骨髄腫とも称される）、意義不明の単クローン性ガンマグロブリン血症（ＭＧＵＳ）、孤立性形質細胞腫、ＩｇＧ骨髄腫、軽鎖骨髄腫、非分泌性骨髄腫、およびアミロイドーシス；および該血液悪性腫瘍の任意の組合せから選択される癌を含む。本願方法はまた、進行性、転移性、難治性および／または再発性血液悪性腫瘍の処置に適用できる。
【０１１８】
試験設計の理論的根拠
本願明細書に記載されている臨床試験は、ＳＣＬＣおよびＰＡＣを有する対象における安全性および有効性を評価するためのニボルマブと組み合わせられたウロクプルマブのフェーズ１／２オープンラベル試験である。固形腫瘍においてウロクプルマブを評価することが初めてであるため、用量制限毒性（ＤＬＴ）評価期間は、最初に３−６人の対象についてそれぞれの用量（４００ｍｇ、８００ｍｇおよび１６００ｍｇ、１週毎に１回、ニボルマブと組み合わせられたウロクプルマブ）で実施される。センチネル用量レベル（４００ｍｇ、１週毎に１回、ウロクプルマブ）について、両方の腫瘍型を安全性評価のために組み合わせる。８００ｍｇおよび１６００ｍｇ、１週毎に１回、ウロクプルマブ用量レベルについて、腫瘍特異的ＡＥが出現する可能性がある場合には、それぞれの腫瘍型を独立して安全性について評価する。Ｒｏｌｌｉｎｇ−６設計は、ＤＬＴ評価期間に利用され、様々な３−６人の評価できる対象が、どのくらいの対象が登録され、ＤＬＴ期間中にまだ評価されているかに依存して、ＤＬＴ評価に寄与することを可能にする（Skolnik et al., 2007）。この設計は、対象がＤＬＴ期間の完了前に疾患進行のためにしばしば中止するＳＣＬＣおよびＰＡＣにおいて特に有用である。
【０１１９】
ＤＬＴ期間の完了後、用量評価段階は、２つの異なるウロクプルマブ用量（８００および１６００ｍｇ）および１６００ｍｇについて２つの異なるウロクプルマブスケジュール（１週毎および２週毎に１回）を同時に評価する。推奨用量およびスケジュールは、用量拡張段階に選択され、それぞれの腫瘍型内で３つのコホートにわたる安全性および有効性データの全体に基づく。推奨用量での有効性のレベルはまた、用量拡張段階について選択される試験設計の型に影響する。わずかな有効性が用量評価段階中に観察されるとき、１つの選択肢は、推奨用量レベルでの単一アーム試験を続ける。しかしながら、実質的な有効性が観察されるとき、比較アームを有するランダム化フェーズ２設計を開始する。この適応アプローチは、これらの進行性腫瘍型についてこの組合せレジメンでの、確証的有効性試験の迅速な実施および最も有益である試験を実施する計画を積極的に立てることを可能にする。
【０１２０】
医薬組成物および投与レジメン
本願明細書に記載されている方法において使用されるＡｂは、組成物、例えば、Ａｂおよび薬学的に許容される担体を含む医薬組成物中に構成され得る。本願明細書において使用される「薬学的に許容される担体」は、生理学的に適合性である、あらゆるおよび全ての溶媒、分散媒体、コーティング剤、抗菌および抗真菌剤、等張剤および吸収遅延剤などを含む。好ましくは、Ａｂを含む組成物についての担体は、（例えば、注射または注入による）静脈内、筋肉内、皮下、非経口、脊髄または表皮投与のために適当である。本願発明の医薬組成物は、１つ以上の薬学的に許容される塩、酸化防止剤、水性および非水性担体、および／またはアジュバント、例えば、防腐剤、湿潤剤、乳化剤および分散剤を含み得る。
【０１２１】
投与レジメンは、最適な所望の応答、例えば、最大の治療応答および／または最小の副作用を提供するように調整される。組合せ使用を含む抗−ＰＤ−１、抗−ＰＤ−Ｌ１、抗−ＣＸＣＲ４  Ａｂまたは抗−ＣＸＣＬ１２の投与において、用量は、約０．０１から約２０ｍｇ／ｋｇ、好ましくは約０．１から約１５ｍｇ／ｋｇ対象の体重の範囲であり得る。例えば、用量は、約０．１、０．３、１、２、３、５、１０または１５ｍｇ／ｋｇ体重、さらに好ましくは、約０．３、１、３または１０ｍｇ／ｋｇ体重であり得る。あるいは、固定または均一用量、例えば、約５０−２０００ｍｇのＡｂは、体重に基づく用量の代わりに、１週毎に１回または２週間に１回投与され得る。投与スケジュールは、一般的に、Ａｂの典型的な薬物動態学的特性に基づく持続的受容体占有（ＲＯ）を引き起こす暴露をなし遂げるように設計される。典型的な処置レジメンは、１週間に１回、２週間に１回、３週間に１回、４週間に１回、１月に１回、３月から６月に１回またはそれ以上で１回の投与を必要とする。１つの好ましい態様において、抗−ＰＤ−１または抗−ＰＤ−Ｌ１  Ａｂは、２週間に１回対象に投与される。他の好ましい態様において、該Ａｂは、３週間に１回投与される。用量およびスケジュールは、処置経過中に変化され得る。
【０１２２】
組み合わせて使用されるとき、１つまたは両方のＡｂの治療量以下の用量、例えば、典型的なまたは承認された単剤療法用量よりも低い抗−ＰＤ−１、抗−ＰＤ−Ｌ１、抗−ＣＸＣＲ４および／または抗−ＣＸＣＬ１２  Ａｂの用量が、使用され得る。例えば、承認された２週間ごとに３ｍｇ／ｋｇ、例えば３または４週間ごとに１．０ｍｇ／ｋｇ以下よりも有意に低いニボルマブの用量が、治療量以下の用量と見なされる。ニボルマブを０．３ｍｇ／ｋｇから１０ｍｇ／ｋｇ用量で受けた１５人の対象からのＲＯデータは、ＰＤ−１占有がこの用量範囲において用量非依存的であるようであることを示す。全ての用量にわたって、平均占有率は８５％（範囲、７０％から９７％）であり、平均プラトー占有は７２％（範囲、５９％から８１％）であった（Brahmer et al., 2010）。したがって、０．３ｍｇ／ｋｇ用量は、有意な生物学的活性をもたらすのに十分な暴露を可能にし得る。
【０１２３】
抗−ＰＤ−１／抗−ＰＤ−Ｌ１および抗−ＣＸＣＲ４／抗−ＣＸＣＬ１２  Ａｂ間の相乗的相互作用は、治療量以下の用量、すなわち、癌の処置のために単剤療法として投与されるときに典型的なまたは承認された用量よりも有意に低い治療剤の用量で患者にこれらの治療剤の１つまたは両方の投与に都合が良い。記載されている併用療法方法の１つの態様において、抗−ＰＤ−１／抗−ＰＤ−Ｌ１  Ａｂまたはそれらの抗原結合部分は、治療量以下の用量で癌患者に投与される。他の態様において、抗−ＣＸＣＲ４／抗−ＣＸＣＬ１２  Ａｂは、治療量以下の用量で投与される。さらなる態様において、抗−ＰＤ−１／抗−ＰＤ−Ｌ１および抗−ＣＸＣＲ４／抗−ＣＸＣＬ１２  Ａｂまたはそれらの抗原結合部分は、それぞれ治療量以下の用量で患者に投与される。
【０１２４】
１つまたは両方のＡｂのかかる治療量以下の用量の投与は、単剤療法における個々のＡｂのより高い用量の使用と比較して有害事象を低下させ得る。したがって、併用療法の記載された方法の成功は、これらのＡｂでの単剤療法と比較してＡｂの組合せの改善された有効性だけでなく、単剤療法用量と比較して組合せにおいて薬物のより低い用量の使用からの増加した安全性、すなわち、有害事象の低下した発生率を評価され得る。
【０１２５】
ニボルマブの用量選択
ニボルマブについて、２週間ごとに３ｍｇ／ｋｇの用量は、複数の固形腫瘍プログラムにおいて単剤療法として安全および許容であると決定されており、黒色腫およびＮＳＣＬＣにおいて承認された用量である。この用量は、種々の血液悪性腫瘍およびＰＡＣおよびＳＣＬＣを含む他の固形腫瘍において複数の臨床試験にて評価されているところであり、何ら用量依存的毒性を証明されていない。ニボルマブはまた、この用量で種々の組合せパートナーで評価されており、予期しない安全性の懸念を示していない。したがって、２週間ごとに３ｍｇ／ｋｇの用量は、抗−ＣＸＣＲ４または抗−ＣＸＣＬ１２  Ａｂとの組合せパートナーとして許容されると予期される。
【０１２６】
ウロクプルマブの用量選択
ウロクプルマブは、安全および許容プロフィールにて０．３ｍｇ／ｋｇから１０ｍｇ／ｋｇの範囲である用量レベルで種々の血液悪性腫瘍にわたって１４０を超える対象において評価されている。大多数の対象は１０ｍｇ／ｋｇ用量を受け、暴露関連ＡＥは観察されていない。ＭＴＤは同定されなかった。予備的母集団ＰＫ分析からの結果は、ウロクプルマブの性質に対して体重がわずかな効果を与えたことを示唆している。ウロクプルマブクリアランス（ＣＬ）および中央分布容積（Ｖｃ）に対するベースライン体重の相対係数は、それぞれ０．３３および０．４１であると推定された。母集団ＰＫモデルにおけるＣＬおよびＶｃの体重の推定相対指数が０．５未満であるとき、均一な投与レジメンはより一様な暴露を提供し得ることが報告されている（Bai et al., 2012）。この情報は、体重正規化用量と対照的に均一な用量スケジュールを支持する。母集団ＰＫモデルに基づくシミュレーションは、１週毎に１回８００ｍｇの用量（８０ｋｇ対象に対して１週毎に１回１０ｍｇ／ｋｇに相当）が、２つのフェーズ１試験において１０ｍｇ／ｋｇウロクプルマブを受けた対象において観察される濃度範囲内で暴露を広く提供するであろうことを示した（Becker et al., 2014; Ghobrial et al., 2014）。
【０１２７】
末梢ウロクプルマブＣＸＣＲ４  ＲＯはＡＭＬを有する対象において測定され、暴露ＲＯ分析は、高いＲＯが１０ｍｇ／ｋｇ用量に続く多量の濃度にわたってなし遂げられたことを示した。これに対応して、母集団ＰＫおよび暴露ＲＯモデルに基づくシミュレーションは、１週毎に１回８００ｍｇ用量に続くウロクプルマブ暴露がまた、投与期間を通して腫瘍組織において高い中央ＲＯ（９０％以上）を提供し、したがって有効な用量であると予期されることを示唆している。
【０１２８】
本願方法において使用される投与レジメン
記載された方法の１つの態様において、抗−ＰＤ−１または抗−ＰＤ−Ｌ１  Ａｂまたはその抗原結合部分は、２、３または４週毎に１回約０．１から約２０．０ｍｇ／ｋｇ体重の範囲である用量で対象に投与される。１つの好ましい態様において、抗−ＰＤ−１  Ａｂまたはその抗原結合部分は２または３週毎に１回約２または約３ｍｇ／ｋｇ体重の用量で投与されるが、抗−ＰＤ−Ｌ１  Ａｂまたはその抗原結合部分は２または３週毎に１回約１０または約１５ｍｇ／ｋｇ体重の用量で投与される。ニボルマブを使用する方法の１つの態様において、このＡｂは、２週毎に１回３ｍｇ／ｋｇの承認された用量で投与される。同様に、ペムブロリズマブを使用する１つの態様において、このＡｂは、３週毎に１回２ｍｇ／ｋｇの承認された用量で投与される。
【０１２９】
本願方法の１つの態様において、抗−ＣＸＣＲ４または抗−ＣＸＣＬ１２  Ａｂまたはその抗原結合部分は、１週毎に１回約５０−２０００ｍｇの均一用量で対象に投与される。他の１つの態様において、抗−ＣＸＣＲ４  Ａｂまたは抗−ＣＸＣＬ１２またはその抗原結合部分は、１週毎に１回約２００、約４００、約８００または約１６００ｍｇの均一用量で投与される。１つの好ましい態様において、抗−ＣＸＣＲ４  Ａｂまたは抗−ＣＸＣＬ１２またはその抗原結合部分は、１週毎に１回約４００または約８００ｍｇの均一用量で投与される。他の１つの態様において、抗−ＣＸＣＲ４  Ａｂまたは抗−ＣＸＣＬ１２またはその抗原結合部分は、２週毎に１回約１６００ｍｇの均一用量で投与される。
【０１３０】
さらなる態様において、抗−ＣＸＣＲ４／抗−ＣＸＣＬ１２  Ａｂまたはその抗原結合部分は、２、３または４週毎に１回約０．１から約２０．０ｍｇ／ｋｇ体重の範囲である用量で投与される。１つの好ましい態様において、抗−ＣＸＣＲ４／抗−ＣＸＣＬ１２  Ａｂまたはその抗原結合部分は、２または３週毎に１回約３または約１０ｍｇ／ｋｇ体重の用量で投与される。
【０１３１】
本願明細書に記載されている組合せ臨床試験におけるニボルマブおよびウロクプルマブの組合せが重複または相乗的毒性をもたらすことを示唆する証拠は存在しないが、この組合せのヒトにおいて初回であることを考慮すると、投与はウロクプルマブについて１週毎に１回４００ｍｇで開始される（すなわち、今までの１週毎に１回８００ｍｇの最高耐性用量の半分）。現在の試験において、１週毎に１回４００ｍｇ開始用量についての安全性評価期間の後に、用量制限毒性（ＤＬＴ）の事象において、１週毎に１回２００ｍｇのより小さい用量がまた評価される。逆に、１週毎に１回４００ｍｇ用量が安全および許容であると考えられる事象において、１週毎に１回８００ｍｇおよび１週毎に１回１６００ｍｇのより高い用量レベルがまた連続して評価される。１週毎に１回１６００ｍｇ用量は、現在のモデルおよび感度分析に基づいて、対象の大多数において持続的なほぼ最大のＲＯを提供することが予期される。加えて、１週毎に１回１６００ｍｇ用量がＤＬＴ期間後に安全であると決定される事象において、２週毎に１回１６００ｍｇ投与されることを含むレジメンが評価される。２週毎に１回ウロクプルマブの投与は、ニボルマブに対する投与スケジュールと一致し、患者の便宜性を改善させる。
【０１３２】
したがって、本願の併用療法方法の特定の態様は、（ａ）ＰＤ−１に結合し、ＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１シグナル伝達を阻害するＡｂまたはその抗原結合部分、ここで、抗−ＰＤ−１  Ａｂまたはその部分が、２または３週毎に１回、約２または約３ｍｇ／ｋｇ体重の用量で投与される；および（ｂ）ＣＸＣＲ４に結合し、ＣＸＣＲ４／ＣＸＣＬ１２シグナル伝達を阻害するＡｂまたはその抗原結合部分、ここで、抗−ＣＸＣＲ４  Ａｂまたはその部分が、１週毎に１回、約４００または約８００ｍｇの均一用量で投与される、の組合せを対象に投与することを含む。１つの好ましい態様において、抗−ＰＤ−１  Ａｂは２週毎に１回約３ｍｇ／ｋｇ体重の用量で投与されるニボルマブであり、抗−ＣＸＣＲ４  Ａｂは１週毎に１回約４００−８００ｍｇの均一用量で投与されるウロクプルマブである。他の１つの態様において、抗−ＰＤ−１  Ａｂは３週毎に１回約２ｍｇ／ｋｇ体重の用量で投与されるペムブロリズマブであり、抗−ＣＸＣＲ４  Ａｂは１週毎に１回約４００−８００ｍｇの均一用量で投与されるウロクプルマブである。
【０１３３】
本願明細書に記載されている方法のいずれかの１つの態様において、抗−ＰＤ−１、抗−ＰＤ−Ｌ１、抗−ＣＸＣＲ４および／または抗−ＣＸＣＬ１２  Ａｂは、静脈内投与のために製剤化される。１つの態様において、抗−ＰＤ−１／抗−ＰＤ−Ｌ１  Ａｂまたはその抗原結合部分および抗−ＣＸＣＲ４／抗−ＣＸＣＬ１２  Ａｂまたはその抗原結合部分は連続して対象に投与される。「連続的な」投与は、抗−ＰＤ−１／抗−ＰＤ−Ｌ１および抗−ＣＸＣＲ４／抗−ＣＸＣＬ１２  Ａｂの一方が他方の前に投与されることを意味する。一般的に、第１に投与されたＡｂの活性は対象において継続している間に、第２に投与されるＡｂは投与される。いずれのＡｂも第１に投与され得る。すなわち、１つの態様において、抗−ＰＤ−１／抗−ＰＤ−Ｌ１  Ａｂが抗−ＣＸＣＲ４／抗−ＣＸＣＬ１２  Ａｂの前に投与され、他の態様において、抗−ＣＸＣＲ４／抗−ＣＸＣＬ１２が抗−ＰＤ−１／抗−ＰＤ−Ｌ１  Ａｂの前に投与される。一般的に、それぞれのＡｂは約６０分間にわたって静脈内注入によって投与される。
【０１３４】
患者の便宜性のために連続的な投与の１つの態様において、抗−ＰＤ−１／抗−ＰＤ−Ｌ１および抗−ＣＸＣＲ４／抗−ＣＸＣＬ１２  Ａｂまたはそれらの部分は互いに３０分以内に投与される。一般的に、抗−ＰＤ−１／抗−ＰＤ−Ｌ１および抗−ＣＸＣＲ４／抗−ＣＸＣＬ１２  Ａｂの両方が同じ日に投与されるとき、別々の輸液バッグおよびフィルターがそれぞれののために使用される。第１のＡｂ、例えばウロクプルマブの投与後、ウロクプルマブ注入は、第２のＡｂ、例えばニボルマブの注入を開始する前に、ウロクプルマブのラインをクリアにするために生理食塩水洗浄を即座に行う。他の態様において、２つのＡｂは、互いに１、２、４、８、２４または４８時間以内に投与される。
【０１３５】
チェックポイントインヒビターＡｂが、一つには免疫系の記憶成分によって、非常に永続性の応答を生じることが示されているため（例えば、ＷＯ  ２０１３／１７３２２３；Lipson et al., 2013; Wolchok et al., 2013）、投与される抗−ＰＤ−１／抗−ＰＤ−Ｌ１  Ａｂの活性は数週間、数ヶ月またはさらに数年間継続し得る。１つの態様において、連続的な投与を含む本願の併用療法方法は、抗−ＰＤ−１／抗−ＰＤ−Ｌ１  Ａｂで以前に処置されている患者への抗−ＣＸＣＲ４／抗−ＣＸＣＬ１２  Ａｂの投与を必要とする。さらなる態様において、抗−ＣＸＣＲ４／抗−ＣＸＣＬ１２  Ａｂは、抗−ＰＤ−１／抗−ＰＤ−Ｌ１  Ａｂで以前に処置され、進行している患者に投与される。他の態様において、連続的な投与を含む本願併用療法方法は、抗−ＣＸＣＲ４／抗−ＣＸＣＬ１２  Ａｂで以前に処置されている患者、所望により癌が抗−ＣＸＣＲ４／抗−ＣＸＣＬ１２  Ａｂでの処置後に進行している患者への抗−ＰＤ−１／抗−ＰＤ−Ｌ１  Ａｂの投与を必要とする。
【０１３６】
他の１つの態様において、抗−ＰＤ−１／抗−ＰＤ−Ｌ１およｂ抗−ＣＸＣＲ４／抗−ＣＸＣＬ１２  Ａｂは、同時投与のための薬学的に許容される製剤において単一の組成物として混合されて、または薬学的に許容される組成物において製剤されているそれぞれのＡｂを有する別々の組成物として同時にのいずれかで、同時に投与される。
【０１３７】
投与レジメンに影響を及ぼす要因
用量および頻度は、対象においてＡｂの半減期に依存して変化する。一般的に、ヒトＡｂは最も長い半減期を示し、次にヒト化Ａｂ、キメラＡｂ、および非ヒトＡｂが続く。投与の用量および頻度は、処置が予防または治療であるか否かに依存して変化し得る。予防適用において、比較的低用量が、長期間にわたって比較的まれな間隔で一般的に投与される。いくつかの患者は、余生のために処置を受け続ける。治療的適応において、比較的短い間隔で比較的高用量が、疾患の進行が低下または終了するまで、好ましくは患者が疾患の症状の部分的または完全な改善を示すまで、ときどき必要とされる。その後、患者は予防レジメンを投与され得る。
【０１３８】
本願発明の医薬組成物における活性成分の実際の用量レベルは、患者に過度の毒性を与えることなく、特定の患者、組成物および投与様式に対して所望の治療応答をなし遂げるために有効である活性成分の量を得るように変化され得る。選択される用量レベルは、種々の薬物動態学因子、例えば、使用される本願発明の特定の組成物の活性、投与経路、投与時間、使用される特定の化合物の排出速度、処置期間、使用される特定の組成物と組み合わせて使用される他の薬物、化合物および／または物質、処置される患者の年齢、性別、体重、状態、一般健康および過去の病歴、および医薬分野においてよく知られた因子などに依存する。
【０１３９】
有害事象を低下させる方法
本願方法の１つの態様において、抗−ＰＤ−１／抗−ＰＤ−Ｌ１  Ａｂまたはその抗原結合部分は治療量以下の用量で投与される。他の１つの態様において、抗−ＣＸＣＲ４／抗−ＣＸＣＬ１２  Ａｂまたは抗原結合部分は治療量以下の用量で投与される。さらなる態様において、抗−ＰＤ−１／抗−ＰＤ−Ｌ１  Ａｂまたはその抗原結合部分および抗−ＣＸＣＲ４／抗−ＣＸＣＬ１２  Ａｂまたはその抗原結合部分は、治療量以下の用量でそれぞれ投与される。治療量以下の用量での少なくとも１つのＡｂの投与は、例えばＡｂが単剤療法におけるその典型的なまたは承認された用量で投与されるときの有害事象の発生率と比較して、対象における有害事象を低下させ得る。したがって、本願は、（ａ）ＰＤ−１およびＰＤ−Ｌ１間の相互作用を破壊し、ＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１シグナル伝達を阻害するＡｂまたはその抗原結合部分；および（ｂ）ＣＸＣＲ４およびＣＸＣＬ１２間の相互作用を破壊し、ＣＸＣＲ４／ＣＸＣＬ１２シグナル伝達を阻害するＡｂまたはその抗原結合部分の組合せを対象に投与することを含む癌に罹患している対象を処置するための方法であって、少なくとも１つのＡｂまたはその部分が、治療量以下の用量で投与され、治療量以下の用量が、対象における有害事象を低下させる、方法を提供する。
【０１４０】
本願はまた、（ａ）ＰＤ−１およびＰＤ−Ｌ１間の相互作用を破壊し、ＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１シグナル伝達を阻害するＡｂまたはその抗原結合部分；および（ｂ）ＣＸＣＲ４およびＣＸＣＬ１２間の相互作用を破壊し、ＣＸＣＲ４／ＣＸＣＬ１２シグナル伝達を阻害するＡｂまたはその抗原結合部分の組合せを対象に投与することを含む癌に対する処置を受けている対象における有害事象を低下させるための方法であって、少なくとも１つのＡｂまたはその部分が、治療量以下の用量で投与される、方法を提供する。
【０１４１】
本願明細書に記載されている治療方法のいずれかの１つの態様において、Ａｂの組合せの投与は、臨床的利益が観察される限り、または管理し難い毒性または疾患進行が起こるまで、継続される。
【０１４２】
抗−ＰＤ−１／抗−ＰＤ−Ｌ１および抗−ＣＸＣＲ４／抗−ＣＸＣＬ１２  Ａｂの医学的使用
本願はまた、ＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１およびＣＸＣＲ４／ＣＸＣＬ１２シグナル伝達経路のデュアル阻害を含む、癌に罹患している対象において組合せにおける使用のための抗−ＰＤ−１／抗−ＰＤ−Ｌ１  Ａｂまたはその抗原結合部分および抗−ＣＸＣＲ４／抗−ＣＸＣＬ１２  Ａｂまたはその抗原結合部分を提供する。これらのＡｂは、本願明細書に記載されている癌のすべての範囲の併用療法において使用され得る。１つの好ましい態様において、癌はＳＣＬＣである。他の好ましい態様において、癌はＰＡＣである。さらに他の好ましい態様において、癌はＨＣＣである。
【０１４３】
記載されている発明の１つの局面は、癌に罹患している対象を処置するための医薬の製造のための抗−ＰＤ−１／抗−ＰＤ−Ｌ１  Ａｂまたはその抗原結合部分および抗−ＣＸＣＲ４／抗−ＣＸＣＬ１２  Ａｂまたはその抗原結合部分の組合せ使用である。医薬の製造のための組合せにおけるかかる抗−ＰＤ−１／抗−ＰＤ−Ｌ１  Ａｂおよび抗−ＣＸＣＲ４／抗−ＣＸＣＬ１２  Ａｂの使用は、本願明細書に記載されている癌のすべての範囲に広範に適用できる。これらの使用の特定の好ましい態様、癌はＳＣＬＣ、ＰＡＣおよびＨＣＣである。
【０１４４】
本願はまた、本願明細書に記載されているこのＡｂの組合せを使用する処置の方法の全ての態様に対応する抗−ＣＸＣＲ４／抗−ＣＸＣＬ１２  Ａｂと組み合わせて抗−ＰＤ−１／抗−ＰＤ−Ｌ１  Ａｂの医学的使用を提供する。
【０１４５】
キット
治療的使用のための、抗−ＰＤ−１／抗−ＰＤ−Ｌ１  Ａｂおよび抗−ＣＸＣＲ４／抗−ＣＸＣＬ１２  Ａｂを含むキットもまた、本願発明の範囲内である。キットは、一般的に、キットの内容物の意図される使用を支持するラベルおよび使用のための指示書を含む。ラベルなる用語は、あらゆる文書、またはキット上またはキットと共に提供される記録物質、またはキットに付されている他のものを含む。したがって、本願は、癌に罹患している対象を処置するためのキットであって、（ａ）約０．１から約２０ｍｇ／ｋｇ体重の範囲である１つ以上の用量のＰＤ−１およびＰＤ−Ｌ１間の相互作用を破壊し、ＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１シグナル伝達を阻害するＡｂまたはその抗原結合部分；（ｂ）約４００から約８００ｍｇの範囲である１つ以上の用量のＣＸＣＲ４およびＣＸＣＬ１２間の相互作用を破壊し、ＣＸＣＲ４／ＣＸＣＬ１２シグナル伝達を阻害するＡｂまたはその抗原結合部分；および（ｃ）本願明細書に記載されている併用療法方法のいずれかにおいて、ＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１シグナル伝達を阻害するＡｂまたはその部分およびＣＸＣＲ４／ＣＸＣＬ１２シグナル伝達を阻害するＡｂまたはその部分を使用するための指示書を含む、キットを提供する。１つの態様において、Ａｂは単位投与形態において共にパッケージされ得る。ヒト患者を処置するための特定の好ましい態様において、キットは、本願明細書に記載されている抗−ヒトＰＤ−１  Ａｂ、例えば、ニボルマブまたはペムブロリズマブを含む。他の好ましい態様において、キットは、本願明細書に記載されている抗−ヒトＣＸＣＲ４  Ａｂ、例えば、ウロクプルマブを含む。
【０１４６】
本願発明は以下の実施例によりさらに例示されるが、さらに限定するものとして解釈されるべきでない。本願を通して言及される全ての文献の内容は、出典明示により本願明細書に包含させる。
【実施例】
【０１４７】
実施例１
抗体の抗腫瘍活性を試験するための同系マウス腫瘍モデルの使用
Ｋｐ１、Ｋｐ３およびＭＣ３８マウスにおける腫瘍有効性試験
Ｋｐ１およびＫｐ３細胞系は、３つの癌遺伝子、ｐ５３、Ｒｂおよびｐ１３０が不活性化されたトランスジェニックマウスのＳＣＬＣ様肺腫瘍由来であった（Schaffer et al., 2010; Jahchan et al., 2013）。Ｋｐ１およびＫｐ３マウスＳＣＬＣ細胞系（Jahchan et al., 2013）は、Ｓｔａｎｆｏｒｄ  ＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙのＤｒ．  Ｊｕｌｉｅｎ  Ｓａｇｅによって親切に提供された。
【０１４８】
マウス細胞系Ｋｐ１（ＳＣＬＣ）、Ｋｐ３（ＳＣＬＣ）またはＭＣ３８（Ｃ５７ＢＬ６／Ｊマウス由来マウス大腸癌腫細胞）は、１０％ウシ胎児血清を補ったダルベッコ改変イーグル培地（ＤＭＥＭ）（Ｃｏｒｎｉｎｇ  Ｌｉｆｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、Ｍａｎａｓｓａｓ、ＶＡ）において培養された。細胞を３７℃、５％ＣＯ２の加湿雰囲気において維持した。全ての細胞系を指数関数的増殖期に回収し、細胞数および生存能力をＣｅｄｅｘ自動細胞計数器（Ｒｏｃｈｅ  Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ、Ｉｎｄｉａｎａｐｏｌｉｓ、ＩＮ）を使用して評価した。インビボ試験のための全ての細胞系は、マイコプラズマおよび齧歯動物ウイルス病原体を含まないことを確認した（ＩＭＰＡＣＴ試験）。
【０１４９】
腫瘍試験のために、５ｘ１０６個の細胞を、Ｂ６１２９Ｓ１／Ｊ  Ｆ１（Ｋｐ１またはＫｐ３）またはＣ５７Ｂｌ６マウス（ＭＣ３８）のいずれかの側面に、５０％  ＭＡＴＲＩＧＥＬ（登録商標）（Ｂｅｃｔｏｎ  Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ、Ｓａｎ  Ｊｏｓｅ、ＣＡ）で皮下に（ｓ．ｃ．）移植した。腫瘍が約２５−５０ｍｍ３の中央サイズに達したときに、マウスをコホート（一般的に６−１０匹マウス／群）にランダム化した。全ての試験薬剤（単一薬剤または組合せ）を、図に示される用量およびスケジュールで腹腔内に（ｉ．ｐ．）投与した。腫瘍容積、体重および臨床観察を、試験薬剤の有効性および忍容性を確立するために注目した。腫瘍キャリパー測定を、式：容量＝１／２（長さ×幅×高さ）を使用して腫瘍容積に変換した。腫瘍増殖および体重を最初の投薬後最大４７日間モニターした。
【０１５０】
試験において、マウスに滅菌齧歯動物飼料および水を自由に与え、１２時間の明／暗サイクルで滅菌フィルタートップケージに収容した。全ての実験をＡｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ  ｆｏｒ  Ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ  ａｎｄ  Ａｃｃｒｅｄｉｔａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ａｎｉｍａｌ  Ｃａｒｅ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌのガイドラインにしたがって実施した。
【０１５１】
Ｈ２２マウスにおける腫瘍有効性試験
Ｈ２２（肝臓癌）マウス細胞系を、１０％ウシ胎児血清を補ったＲＰＭＩ−１６４０培地（Ｃｏｒｎｉｎｇ  Ｌｉｆｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）においてインビトロで維持した。腫瘍細胞を、１週毎に２回定期的に継代培養した。細胞を、指数増殖期において回収し、腫瘍接種のために数えた。それぞれのマウスを腫瘍発達のために０．１ｍｌのＰＢＳ中で２×１０６個のＨ２２腫瘍細胞で右下側面領域に皮下接種した。腫瘍が約１６９ｍｍ３の平均サイズに達したとき、マウスを８匹マウス／群のコホートにランダム化し、試験薬剤（単一の薬剤または組合せ）を、０日として示される最初の投与日として５回投与のために１週間に二回、腫瘍を有するマウスに腹腔内投与した。アイソタイプコントロール群を、マウスＩｇＧ２ａ  プラス  マウスＩｇＧ１Ｄ２６５Ａ（Ｄ２６５Ａ変異を含むＦｃγＲに結合しない変異ＩｇＧ１アイソタイプ; Clynes et al., 2000）でそれぞれ１０ｍｇ／ｋｇで処理した。ＰＤ−１群を、抗−マウスＰＤ−１  マウス  ＩｇＧ１Ｄ２６５Ａで１０ｍｇ／ｋｇで処理した。ＣＸＣＲ４およびＰＤ−１組合せ群を、抗−マウスＣＸＣＲ４  ｍＩｇＧ２ａおよび抗−マウスＰＤ−１  ＩｇＧ１Ｄ２６５Ａでそれぞれ１０ｍｇ／ｋｇで処理した。最初の投与後、腫瘍増殖および体重を４２日間モニタリングした。
【０１５２】
フローサイトメトリー
細胞系（ＫＰ  ｃｅｌｌｓ、ＭＣ３８）を指数増殖期に回収し、細胞数および生存能力をＣｅｄｅｘ自動細胞計数器を使用して評価した。ＦＡＣＳ分析のために、細胞（ウェルあたり１０６個）をＵ底プレート（ポリスチレン９６−ウェルプレート、Ｆａｌｃｏｎ  ＲＥＦ＃  ３５１１７７）に移した。細胞を２００μｌのＦＡＣＳバッファー（ＰＢＳ、２％  ＦＢＳ、０．１％ＮａＮ３）で洗浄し、２，０００ｒｐｍで１分間遠心分離した。細胞を、精製ラット抗−マウスＣＤ１６／ＣＤ３２（Ｍｏｕｓｅ  ＢＤ  Ｆｃ  ｂｌｏｃｋ；  ＢＤ  Ｃａｔ．  Ｎｏ．  ５５３１４２（１０ｕｇ／ｍｌ））で氷上で１０分間Ｆｃ−ブロックした。ＣＸＣＲ４免疫染色を、マウスＣＸＣＲ４に対するＡｂ（抗−マウスＣＸＣＲ４  ＰＥ、Ｒ＆Ｄ  Ｃａｔ．  Ｎｏ．  ＦＡＢ２１６５１Ｐ）またはアイソタイプ（ラットＩｇＧ２ｂアイソタイプコントロール  ＰＥ、Ｒ＆Ｄ  Ｃａｔ．  Ｎｏ．  １Ｃ０１３Ｐ）および生／死滅染色剤（Ａｑｕａ蛍光反応色素、Ｌｉｆｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  Ｃａｔ．  Ｎｏ．  Ｌ３４９５７）（１：５００）で行った。染色を暗所で氷上で（ウェル当たり１００μｌにて）３０分間行った。次に、細胞を以前に記載されているとおりＦＡＣＳバッファーで２回洗浄した。細胞を、４％  ＰＦＡで氷上で３０分間固定し、次に２００μｌのＦＡＣＳバッファーでさらに洗浄した（２，０００ｒｐｍで１分間）。次に、ＦＡＣＳ  ＡｒｒａｙまたはＢＤ  Ｃａｎｔｏ  ＩＩ分析の前に、細胞を１５０μｌのＦＡＣＳバッファーに再懸濁した。ｆｌｏｗｊｏソフトウェアを使用してデータ分析を行った。
【０１５３】
Ｋｐ１、Ｋｐ３およびＭＣ３８細胞系におけるＣＸＣＲ４の発現をフローサイトメトリーにより評価した。図１に示されるとおり、Ｋｐ１細胞系は細胞表面上でＣＸＣＲ４を発現するが、Ｋｐ３は表面上でＣＸＣＲ４の発現を示さない。図２は、ＭＣ３８細胞系がまた細胞表面上にＣＸＣＲ４を発現しないことを示す。種々の型のヒトＴ細胞上でのＣＸＣＲ４の発現がまた、フローサイトメトリーにより測定された。図３に示されるとおり、ヒトＴｒｅｇは、ＣＤ８＋Ｔ細胞およびＴエフェクター細胞よりもかなり高いレベルのＣＸＣＲ４を発現する。
【０１５４】
実施例２
ＣＸＣＲ４発現するマウスＫＰ１腫瘍モデルにおいて抗−ＰＤ−１と組み合わせての抗−ＣＸＣＲ４の抗腫瘍活性
抗−マウスＣＸＣＲ４  Ａｂの抗腫瘍活性を、実施例１に記載されているＫｐ１  ＣＸＣＲ４＋マウスＳＣＬＣモデルにおいて、単独または抗−マウスＰＤ−１  Ａｂと組み合わせて評価した。
【０１５５】
この実施例および後の実施例において使用されるＣＸＣＲ４  Ａｂは、Ｆｃ部分がマウスＩｇＧ１またはマウスＩｇＧ２ａアイソタイプ由来のＦｃ部分で置換された、ラットＩｇＧ２ｂ抗−マウスＣＸＣＲ４  ｍＡｂから構築されたマウス抗−マウスＣＸＣＲ４ｍＡｂ、クローン４．８であった（Ｃｌｏｎｅ  ＃  ２４７５０６；  Ｃａｔ．  Ｎｏ．  ＭＡＢ２１６５１；  Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ、Ｍｉｎｎｅａｐｏｌｉｓ、ＭＮ）。抗−ｍＣＸＣＲ４  ｍＡｂのｍＩｇＧ１フォーマットは、ヒトＩｇＧ４アイソタイプを有するウロクプルマブの枯渇させない生物学的特性を模倣することを意図しており、（ヒトＩｇＧ１に対応する）ｍＩｇＧ２ａフォーマットは、ｍＡｂが結合する細胞の枯渇を媒介する可能性があるように設計された。
【０１５６】
実施例において使用されたＰＤ−１  Ａｂは、操作されたＩｇＧ１Ｄ２６５Ａアイソタイプを有するｍＡｂ  ４Ｈ２であった。Ｍａｂ  ４Ｈ２は、Ｆｃ部分がマウスＩｇＧ１アイソタイプ由来のＦｃ部分で置換された、ラットＩｇＧ２ａ抗−マウスＰＤ−１  Ａｂから構築されたキメララット−マウス抗−ｍＰＤ−１  ｍＡｂである（ＷＯ  ２００６／１２１１６８）。抗−マウスＰＤ１を使用した本願明細書に記載されているマウス腫瘍実験において、ｍＩｇＧ１Ｄ２６５Ａ  Ｆｃ部分を含むｍＡｂ  ４Ｈ２を使用した。４Ｈ２−ｍＩｇＧ１Ｄ２６５Ａは、ｍＰＤ−１へのｍＰＤ−Ｌ１およびｍＰＤ−Ｌ２の結合をブロックし、Ｔ細胞応答刺激し、他のマウスアイソタイプと比較してＭＣ３８腫瘍増殖に対して最も強い阻害効果を示すことが示されている（ＷＯ  ２００６／１２１１６８）。
【０１５７】
マウスの中央腫瘍容積における変化を図４Ａおよび４Ｂにプロットした。抗−ＣＸＣＲ４  ｍＩｇＧ１アイソタイプはこのモデル系において腫瘍増殖の阻害を実質的に示さず、この中央腫瘍容積はマウス抗−キーホールリンペットヘモシアニン（ＫＬＨ）ＩｇＧ１  ｍＡｂおよびビヒクル（生理食塩水）ネガティブコントロールで処置されたマウスのものと類似しているが（図４Ａ）、抗−ＣＸＣＲ４  ＡｂのｍＩｇＧ２ａアイソタイプはＫＰ１腫瘍増殖に対して最も強力な阻害効果を示す（図４Ａ）。抗−ＰＤ１（ｍＡｂ  ４Ｈ２  ｍＩｇＧ１）は低レベルの抗腫瘍活性を示す（図４Ａ）。
【０１５８】
抗−ＰＤ−１と組み合わせたとき、抗−ＣＸＣＲ４  ＩｇＧ１  Ａｂは、コントロールと比較して低い程度の腫瘍阻害を示した（図４Ｂ）。対照的に、抗−ＣＸＣＲ４  ＩｇＧ２ａ  ｍＡｂと抗−ＰＤ−１との組合せは、モニタリング期間を通して腫瘍増殖の本質的に完全な阻害を生じた（図４Ｂ）。したがって、このＫｐ１  ＣＸＣＲ４を発現するモデルにおいて、抗−ＣＸＣＲ４−ＩｇＧ２ａおよび抗−ＰＤ１の組合せは、マウスＳＣＬＳ腫瘍細胞の増殖を阻害することにおいて強い相乗効果を示すが、抗−ＣＸＣＲ４−ＩｇＧ１および抗−ＰＤ１の組合せは、このマウスモデルにおいて抗−ＰＤ−１の低いレベルの抗腫瘍活性を有意に増強しなかった（図４Ａおよび４Ｂ）。Ａｂの組合せの抗腫瘍効果が、より有効なＡｂでの単剤療法で観察される効果よりも高いか、またはそれぞれのＡｂによって個々に示される阻害のレベルの合計よりも高いとき、Ａｂの組合せは相乗的であると考えられる。
【０１５９】
実施例３
ＣＸＣＲ４を発現しないマウスＫＰ３腫瘍モデルにおいて抗−ＰＤ−１と組み合わせての抗−ＣＸＣＲ４の抗腫瘍活性
抗−マウスＣＸＣＲ４  Ａｂの種々のアイソタイプの抗腫瘍活性を、単独または抗−マウスＰＤ−１と組み合わせて実施例１に記載されているＣＸＣＲ４−  Ｋｐ３マウスＳＣＬＣ腫瘍モデルにおいて評価した。ヒトＩｇＧ１  Ｆｃ領域を有する非フコシル化（ｎｆ）抗−ジフテリア毒素（ＤＴ）Ａｂ、抗−ＫＬＨ  ＩｇＧ１および抗−ＫＬＨ  ＩｇＧ２ａ  ｍＡｂ（図５において「ＩｇＧ１」または「ＩｇＧ２ａ」と単に指定されている）を、結合しないコントロールＡｂとして使用した。ｎｆ修飾は、一般的に、ＡＤＣＣ活性を増強する。
【０１６０】
この実験において、低いレベルの腫瘍増殖阻害を、生理食塩水「ビヒクル」と比較して複数の結合しないコントロールＡｂで観察した。図５参照。コントロールＡｂおよび単一の薬剤（抗−ＣＸＣＲ４または抗−ＰＤ−１）に対する結果が図５Ａに示される。この図は、単一の薬剤として投与された抗−ＣＸＣＲ４  ｍＩｇＧ２ａが、Ｋｐ３細胞上のＣＸＣＲ４の発現の欠如にもかかわらず、抗−ＰＤ−１で見られるレベルを超える顕著な抗腫瘍活性を示すことを示している。図５Ｂは、同じ実験において抗−ＣＸＣＲ４および抗−ＰＤ−１の組合せでの処置の効果を示す。抗−ＰＤ１処置に対して比較的難治性であるこのＫｐ３腫瘍細胞モデルにおいて、抗−ＣＸＣＲ４  ＩｇＧ２ａまたは抗−ＰＤ−１単独での処置と比較して抗−ＣＸＣＲ４  ＩｇＧ２ａ  プラス  抗−ＰＤ１併用療法での抗腫瘍活性のレベルにおいてそれでもなお適度の増強があることが明らかである（図５Ｂ）。このＫｐ３モデルにおいて腫瘍細胞によるＣＸＣＲ４発現の欠如は、抗−ＣＸＣＲ４が腫瘍自体以外のＣＸＣＲ４を発現する標的、例えばＴｒｅｇおよび／またはＭＤＳＣに作用し得ることを示唆する。ＴｒｅｇまたはＭＤＳＣ上で発現されるＣＸＣＲ４および腫瘍において発現されるＣＸＣＬ１２間の相互作用の遮断は、腫瘍へのＴｒｅｇまたはＭＤＳＣの補充を減少させ、免疫抑制のレベルを低下させ得る。Ｔｒｅｇおよび／またはＭＤＳＣ上のＣＸＣＲ４への抗−ＣＸＣＲ４  ＩｇＧ２ａの結合はまた、これらの免疫抑制剤細胞のアポトーシスおよびＡＤＣＣ−、ＡＤＣＰ−および／またはＣＤＣ−媒介枯渇をもたらし、それにより抗−ＰＤ−１の抗腫瘍応答を増強し得る。
【０１６１】
現在の結果は、抗腫瘍活性の大規模な増強によって証明される強い相乗的相互作用がＣＸＣＲ４＋  ＫＰ１腫瘍モデルにおいて抗−ＣＸＣＲ４  ＩｇＧ２ａおよび抗−ＰＤ１間で見られた図４Ｂにおいて示されるデータと対照的である。これは、Ｋｐ１モデルにおいて、抗−ＣＸＣＲ４作用のさらなるメカニズムが関与し得ることを示唆する。例えば、ＣＸＣＲ４を発現する腫瘍細胞は、抗−ＣＸＣＲ４  ＩｇＧ２ａによって、アポトーシスによって直接的におよび／またはＡＤＣＣ−および／またはＣＤＣ−媒介メカニズムによって破壊され得る。
【０１６２】
実施例４
ＣＸＣＲ４を発現しないマウスＭＣ３８腫瘍モデルにおいて抗−ＰＤ−１と組み合わせての抗−ＣＸＣＲ４の抗腫瘍活性
抗−マウスＣＸＣＲ４  Ａｂの種々のアイソタイプの抗腫瘍活性を、単独または抗−マウスＰＤ−１と組み合わせて実施例１に記載されているＣＸＣＲ４−  ＭＣ３８マウス結腸腺癌モデルにおいて評価した。ｍＩｇＧ１およびｍＩｇＧ２ａ  ｍＡｂフォーマットにおいて抗−ＫＬＨを、結合しないコントロールＡｂとして単独または組み合わせて使用した。
【０１６３】
コントロールＡｂおよび単一の薬剤（抗−ＣＸＣＲ４または抗−ＰＤ−１）に対する結果が図６Ａに示されており、併用療法に対する結果が図６Ｂに示されている。一方、Ｋｐ３腫瘍モデルと同様に、ＭＣ３８細胞は細胞表面上でＣＸＣＲ４を発現せず（実施例１参照）、ＭＣ３８腫瘍は、Ｋｐ３モデルとは異なり、ＷＯ  ２０１４／０８９１１３に記載されており、図６Ａにおいて確認されているとおり抗−ＰＤ１  ＩｇＧ１処置に対してかなり感受性である（図５Ａ参照）。低いレベルの単剤活性がＣＸＣＲ４  ＩｇＧ１およびＣＸＣＲ４  ＩｇＧ２ａで観察された（図６Ａ）。対照的に、抗−ＰＤ−１は、抗−ＣＸＣＲ４  Ａｂ  アイソタイプのいずれか（ＩｇＧ１またはＩｇＧ２ａ）と相乗的に相互作用し、このＭＣ３８腫瘍モデルにおいて、抗−ＣＸＣＲ４  ＩｇＧ１組合せよりも抗−ＣＸＣＲ４  ＩｇＧ２ａ組合せでより有効である強力な抗腫瘍活性を生じた（図６Ｂ）。この結果は、抗−ＣＸＣＲ４が、例えばＴｒｅｇおよび／またはＭＤＳＣを含む、腫瘍細胞以外のＣＸＣＲ４−発現細胞を標的とし得ることを実施例３からの兆候を強化する。抗−ＣＸＣＲ４のｍＩｇＧ２ａアイソタイプは、ＣＸＣＬ１２を発現する腫瘍へのＴｒｅｇおよび／またはＭＤＳＣの輸送を減少させるアポトーシスによる直接的な死滅を含む、ＩｇＧ１アイソタイプによって使用されるメカニズムに加えて、マウスにおいてＡＤＣＣ、ＡＤＣＰおよび／またはＣＤＣによってＣＸＣＲ４＋  Ｔｒｅｇおよび／またはＭＤＳＣを殺し得る。
【０１６４】
実施例５
ＣＸＣＲ４を発現しないマウスＨ２２腫瘍モデルにおいて抗−ＰＤ−１と組み合わせての抗−ＣＸＣＲ４  ＩｇＧ２Ａの抗腫瘍活性
抗−マウスＣＸＣＲ４  ｍＩｇＧ２ａ  Ａｂの抗腫瘍活性を、抗−マウスＰＤ−１  ｍＩｇＧ１Ｄ２６５Ａと組み合わせて実施例１に記載されているＣＸＣＲ４−  Ｈ２２マウス肝臓癌モデルにおいて評価した。組合せアームにおいて使用される抗−ＣＸＣＲ４および抗−ＰＤ１  Ａｂのアイソタイプに対応するｍＩｇＧ１Ｄ２６５ＡおよびｍＩｇＧ２ａフォーマットにおいて抗−ＫＬＨを、アイソタイプ効果（二次Ｆｃ−媒介相互作用）に対するコントロールとして含めた。
【０１６５】
図７は、抗−ＰＤ−１および抗−ＣＸＣＲ４  ＩｇＧ２ａの組合せ（Ａ）、抗−ＰＤ−１単剤療法（Ｂ）および抗−ＫＬＨアイソタイプコントロールの組合せ（Ｃ）で処置された個々のマウスに対する腫瘍増殖曲線を示し、中央腫瘍増殖曲線は、図７Ｄに示される。抗−ＰＤ−１は、腫瘍増殖の最小阻害を示したコントロール（図７Ｃ）と比較して腫瘍増殖の強い阻害（図７Ｂ）を生じ、８匹のうち３匹の抗−ＰＤ−１−処置マウスが３８日目までに腫瘍なし（ＴＦ）であった。抗−ｍＣＸＣＲ４  ｍＩｇＧ２ａとの組合せについて３１日目までに８匹のうち７匹のマウスＴＦ  対  ＰＤ−１単独について３８日目までに８匹のうち３匹のＴＦマウス（図７Ｂ）で、抗−ｍＣＸＣＲ４  ｍＩｇＧ２ａとの組合せはＨ２２モデルにおいて抗−ＰＤ１の有効性を増強する（図７Ａ）。この増強は、図７Ｄに示される中央腫瘍増殖曲線に明確に記載されている。これらのデータは、恐らく免疫抑制性ＭＤＳＣおよび／またはＴｒｅｇの直接的なアポトーシスまたは枯渇を引き起こすことによって、抗−ＣＸＣＲ４が、ＣＸＣＲ４を発現しない腫瘍のものでさえ腫瘍増殖の阻害を増強させることにおいて抗−ＰＤ−１と相乗効果を与えることができる証拠を実証している、ＣＸＣＲ４−Ｋｐ３（実施例３）およびＭＣ３８（実施例４）腫瘍で得られたデータと一致している。
【０１６６】
実施例６
ＳＣＬＣおよびＰＡＣを処置するためのニボルマブと組み合わせられたウロクプルマブのフェーズ１／２臨床試験の設計
試験設計および期間
これは、ＳＣＬＣおよびＰＡＣを有する対象において安全性および有効性を独立して評価するために設計されたニボルマブと組み合わせてのウロクプルマブのオープンラベル、多施設フェーズ１／２試験である。試験設計は、１週毎に１回４００、８００ｍｇおよび１６００ｍｇの用量レベルに対するＤＬＴ評価、次に２つの用量レベル（１週毎に１回８００ｍｇおよび１６００ｍｇ）および１６００ｍｇに対するさらなるスケジュール（２週毎）を評価するために３つのコホートの並行評価を含む用量評価フェーズ（段階１）からなる。２つ以上のＤＬＴがＤＬＴ評価期間中に何らかの用量で見られるとき、より低い用量が単一アームとして評価される。推奨用量は、段階１からの安全性および有効性データに基づいて選択され、高い有効性が観察されるとき、Ｓｉｍｏｎ最適２段階様設計または比較アームを有するランダム化フェーズ２試験の形態（Ｓｉｍｏｎ、１９８９）において用量拡張を行う。
【０１６７】
この試験は、スクリーニング、処置および追跡からなる。全ての対象は、最初の投与前の２８日以内で適格性を決定するためにスクリーニング期間を受ける。処置フェーズ中、ウロクプルマブは１週毎に１回または２週毎に１回（１６００ｍｇ用量のみ）投与され、ニボルマブは２週毎に１回投与される。処置期間は疾患進行または許容されない毒性の発生まで続く。追跡中、対象は疾患活動性および安全性についてモニタリングされる。試験期間は約２年と予測される。
【０１６８】
試験設計概略は図８に示されている。
【０１６９】
用量評価フェーズ（段階１）
用量評価フェーズは、ニボルマブと組み合わせてのウロクプルマブの種々の用量およびスケジュールでのＤＬＴ評価期間、次に最大３つのコホートの評価からなる（表１参照）。ＤＬＴ評価期間は、最初に３−６人の対象に用量レベル１（ＤＬ１；４００ｍｇ、１週毎に１回、ニボルマブと組み合わせてウロクプルマブ）でＰＡＣまたはＳＣＬＣのいずれかで、次に３−６人の対象それぞれにＤＬ２（８００ｍｇ、１週毎に１回、ニボルマブと組み合わせてウロクプルマブ）でＰＡＣおよびＳＣＬＣで、次に３−６人の対象それぞれにＤＬ３Ａ（１６００ｍｇ、１週毎に１回、ニボルマブと組み合わせてウロクプルマブ）で６週間ＰＡＣおよびＳＣＬＣでそれぞれ処理される。ＤＬ１について、両方の腫瘍型が安全性評価のために混合される。ＤＬ２およびＤＬ３Ａについて、それぞれの腫瘍型が、万一腫瘍特異的ＡＥが現れる場合には、安全性について独立して評価される。ＤＬＴ評価フェーズ中の登録は、それぞれの用量／腫瘍コホートにおいて最大６人の対象の同時発生を可能にする（すなわち、Ｒｏｌｌｉｎｇ  Ｓｉｘ設計）（Skolnik et al., 2007）。この設計は、３−６人の評価できる対象がＤＬＴ期間中に登録され、まだ評価されている人数に依存してＤＬＴ評価に寄与することを可能にする。新規参加者を現在の用量レベルまたは次に高い用量レベルに登録するか否かの決定は、新規参加者登録時に利用できるデータに基づく。ＤＬＴ評価期間の試験停止規則および用量評価フェーズを行う決定は、以下を含む：
【０１７０】
アクティブなコホートにおける登録は、登録されている３人未満の対象、最大の６人の対象まで；および毒性に対して評価できる２人または最大５人の対象において１のＤＬＴであるとき行う。
【０１７１】
アクティブなコホートにおける登録は、（評価できる、および評価できないを含む）登録されている最大の６人の対象であるとき停止する。
【０１７２】
毒性に対して評価できる最大６人の対象において２以上のＤＬＴであるとき、アクティブなコホートは許容でないとみなし、登録は永久的に停止される。
【０１７３】
毒性に対して評価できる３人または最大６人の対象において０のＤＬＴ；および毒性に対して評価できる６人の対象において１のＤＬＴであるとき、アクティブなコホートは許容とみなし、登録は次の工程に進む。
【０１７４】
ＤＬＴに対して評価できない対象（すなわち、疾患進行による中止）は、同時に登録された対象と置き換えられる。
【０１７５】
【表１】
2018516969.tif 000003
【０１７６】
ＤＬＴ評価期間中に観察されるＤＬＴの数に依存して、ウロクプルマブの段階的漸増または段階的縮小が保証され得る。１週毎に１回、８００ｍｇおよび１週毎に１回、１６００ｍｇのウロクプルマブ用量レベルでの用量段階的漸増／段階的縮小は、それぞれの腫瘍型に対して独立して起こる。ニボルマブの用量修飾は、この試験において認められない。
【０１７７】
ＤＬ１およびＤＬ２およびＤＬ３Ａでの毒性が許容されるとき、登録は３つのランダム化コホート（ＤＬ２、ＤＬ３ＡおよびＤＬ３Ｂ）で行い、段階１を完了する。
【０１７８】
ＤＬ３Ａでの毒性が許容されないとき、登録はＤＬ２で行い、段階１を完了する。
【０１７９】
ＤＬ２での毒性が許容されないとき、登録はＤＬ１で行い、段階１を完了する。
【０１８０】
ＤＬ１での毒性が許容されないとき、新規ＤＬＴ評価期間がＤＬ−１で開始される。
【０１８１】
ＤＬ−１の毒性が許容されないとき、登録はその腫瘍型に対して停止される。
【０１８２】
ＤＬ−１での毒性が許容されるとき、登録はＤＬ−１で行い、単回投与レベルで段階１を完了する。
【０１８３】
用量拡張フェーズに進む決定ルール
個々の腫瘍型において用量評価フェーズにおける全ての対象が、少なくとも３月の処置を有するとき、または時期尚早に中止されるとき、中間分析（ＩＡ）を行う。このＩＡは、それぞれの腫瘍型に対して独立して実施される。治験担当医評価客観的応答率（ＯＲＲ）は、試験の段階２部分の意思決定を導くために使用される。しかしながら、全ての利用できる有効性および安全性データは、用量拡張フェーズにおいてさらに評価される推奨用量を選択するために使用される。さらに、用量評価フェーズにおいて推奨用量で観察される有効性のレベルがその腫瘍型の評価を停止することを保証しないとき、Ｓｉｍｏｎ２段階様設計を進めるか、または比較アームを有するランダム化フェーズ２試験を実施する、適当な拡張フェーズ試験設計を選択するために使用する。ＩＡ分析のために使用される有効性閾値（表２参照）は、ＳＣＬＣおよびＰＡＣにおいてニボルマブ単剤療法を評価する継続フェーズ１／２試験からの予備的有効性データおよび２Ｌ選択肢に関して報告された活性のレベルに基づく（NCT01928394; Hurwitz et al., 2015）。低い、中程度の、または高い有効性の決定は、ウロクプルマブおよびニボルマブで観察される応答率に主に基づくが、利用できる安全性および有効性データの全体が考慮される。
【０１８４】
推奨用量レベルでの腫瘍型あたりの応答者の数が低い有効性と一致するとき、その腫瘍型の評価はデータの最終検討まで保留される。
【０１８５】
推奨用量レベルでの腫瘍型あたりの応答者の数が中程度の有効性と一致するとき、用量拡張フェーズは単一アーム評価を続ける。
【０１８６】
推奨用量レベルでの腫瘍型あたりの応答者の数が高い有効性と一致するとき、用量拡張フェーズは比較アームを有するランダム化フェーズ２試験を続ける。
【０１８７】
表２．それぞれの腫瘍型に対する段階１有効性閾値
【表２】
2018516969.tif 000004
【０１８８】
用量拡張フェーズ（段階２）
ＩＡの結果に基づいて、用量拡張フェーズは、Ｓｉｍｏｎ２段階様単一アーム試験（適度の有効性）または比較アームを有するランダム化フェーズ２試験（高い有効性）の第２の段階からなる。
【０１８９】
Ｓｉｍｏｎ２段階様設計の第２の段階は、単一アーム試験において推奨用量レベルでの登録を拡張する。さらなる２５人のＳＣＬＣ対象および２０人のＰＡＣ対象を登録し、この評価を完了する。主要エンドポイントは両方の腫瘍型に対する治験担当医評価ＯＲＲであり、ＰＦＳは二次エンドポイントと考慮される。
【０１９０】
ランダム化フェーズ２試験は、推奨用量レベルでの併用療法  対  腫瘍型に適当な比較アームを比較する。この試験の主要エンドポイントは腫瘍型によって決まり、ＯＲＲがＳＣＬＣにおいてランダム化フェーズ２試験に対するエンドポイントであり、全生存（ＯＳ）がＰＡＣにおいてランダム化フェーズ２試験に対するエンドポイントである。ＯＲＲについて、独立放射線審査委員会（ＩＲＲＣ）は、固形腫瘍（ＲＥＣＩＳＴ  １．１）基準の応答評価基準ごとに画像の盲目的な独立したレビューを行う。
【０１９１】
ＳＣＬＣ
ＳＣＬＣにおいて比較アームを有するランダム化フェーズ２試験は、ニボルマブと組み合わせられる推奨用量のウロクプルマブ  対  ニボルマブ単剤療法を比較する。この比較の主な目的は、併用療法がニボルマブ単剤療法よりも優れているか否かを決定することである。この試験の主要エンドポイントは、ＩＲＲＣ評価ＯＲＲの評価である。安全性、忍容性およびＰＦＳは、二次エンドポイントとして考慮される。ランダム化フェーズ２試験は、アームあたりさらなる５０人の対象（すなわち、２つのアームに対して１００）を必要とする。用量評価フェーズに含まれるＳＣＬＣ対象は、ランダム化フェーズ２試験の有効性分析の一部ではない。層別因子は、補充のバランスをとるために試験のこの部分のために使用され、一般状態を含む（ＥＣＯＧ  ０  対  １）。
【０１９２】
ＰＡＣ
ＰＡＣにおいて比較アームを有するランダム化フェーズ２試験は、ニボルマブと組み合わせられる推奨用量のウロクプルマブ  対  治験担当医の選択２Ｌ化学療法を比較する。この比較の主な目的は、ウロクプルマブ  プラス  ニボルマブ併用療法が２Ｌ化学療法よりも優れているか否かを決定することである。この試験の主要エンドポイントはＯＳである。安全性、忍容性およびＰＦＳは、二次エンドポイントとして考慮される。ＰＡＣにおいて、ランダム化フェーズ２試験は、アームあたりさらなる１２５人の対象（すなわち、２つのアームのために２５０）を必要とする。ＩＲＲＣ評価ＯＲＲは、探索的エンドポイントとして考慮される。用量評価フェーズに含まれるＰＡＣ対象は、ランダム化フェーズ２試験の分析において考慮されない。この試験において治験担当医の選択化学療法選択肢は、ＰＡＣに対するＮＣＣＮガイドラインに基づき、以下のものを含む（NCCN GUIDELINES(登録商標), Version 2.2015 - Pancreatic Adenocarcinoma; Tempero et al., 2012）：
【０１９３】
ＦＯＬＦＩＲＩＮＯＸまたは他のフルオロピリミジンベースのレジメンに失敗する対象は、この試験のためのゲムシタビンベースの治療を考慮することができる；そして
【０１９４】
ゲムシタビンベースのレジメンに失敗する対象は、この試験のためのフルオロピリミジンベースのレジメンを考慮することができる。
【０１９５】
層別因子は、試験のこの部分のために使用され、一般状態（ＥＣＯＧ  ０  対  １）および１Ｌ設定において使用される化学療法のタイプ（フルオロピリミジン含有  対  ゲムシタビン含有  レジメン）を含む。
【０１９６】
用量制限毒性
最初の６週間の間に腫瘍型（適用できるとき）あたり最初の３−６の評価できる対象において評価されるＤＬＴの発生率は、用量レベルが許容されるか否かを最初に決定するために使用される。対象は、６週投与期間中に６回のウロクプルマブ投与のうち少なくとも５回および３回のニボルマブ投与のうち少なくとも２回受けるとき、または、ＤＬＴを経験するとき、ＤＬＴについて評価可能であると考えられる。ＤＬＴは、疾患関連であると治験担当医によって考慮されるＡＥではない。以下の薬物関連ＡＥ（１つまたは両方の薬剤に関連するいずれか）は、ＤＬＴと考慮される：
【０１９７】
研究室異常を含む、グレード＞３の任意の薬物関連非血液学的ＡＥ。対象がグレード２毒性範囲内のベースラインＡＳＴまたはＡＬＴを有するとき、ＤＬＴはＡＳＴおよび／またはＡＬＴ＞２ｘベースラインまたは＞８ｘＵＬＮにおいて薬物関連上昇として考慮される；
【０１９８】
グレード＞４のあらゆる薬物関連血液学的ＡＥ；
ウロクプルマブの中止により管理されるあらゆる毒性；
ニボルマブの中止により管理されるあらゆる毒性
【０１９９】
ＤＬＴ期間中、対象の離脱が、１４日以上のあらゆるウロクプルマブの投与遅延のために必要とされる。
【０２００】
疾患進行を超える処置
蓄積する証拠は、免疫療法で治療される対象が進行性疾患（ＰＤ）の証拠にもかかわらず臨床的利益を導き得ることを示す。したがって、対象が治験担当医評価臨床的利益を示し、対象が試験薬を許容している限り、対象は最初のＲＥＣＩＳＴ  １．１−規定のＰＤを超える処置を継続することが許される。臨床的利益の評価は、対象が臨床的に悪化しており、継続処置からさらなる利益を受ける可能性がないか否かを考慮に入れる。
【０２０１】
対象は、（全ての標的病変および新規な測定可能な病変を含む）最初の進行の時点からの腫瘍組織量においてさらなる１０％またはそれ以上の増加として定義される、さらなる進行の証拠に基づいて試験療法を中止する。最長直径が少なくとも１０ｍｍである（少なくとも１５ｍｍの短軸を有さなければならない病理学的リンパ節を除けば）とき、新規な病変は最初の進行の時点で測定可能と考えられる。最初の進行の時点で測定不能であると考えられるあらゆる新規な病変は測定可能となり得、したがって最長直径が少なくとも１０ｍｍに増加したとき（短軸において少なくとも１５ｍｍへの増加を有さなければならない病理学的リンパ節を除けば）、腫瘍組織量測定に含んだ。
【０２０２】
治験担当医評価進行日を含む統計分析について、最初の治験担当医評価ＲＥＣＩＳＴ  １．１−規定の進行を超える処置を継続する対象は、最初の進行事象の時点で治験担当医評価進行性疾患を有すると考えられる。これらの免疫応答が用量拡張フェーズ（段階２）試験設計を選択するための決定ルールにおいて使用され得るため、ＲＥＣＩＳＴ  １．１−規定の進行に続いて腫瘍縮小を有する対象もまた別々に記述的に要約される。
【０２０３】
実施例７
有効性評価
ベースライン腫瘍評価は、造影コンピュータートモグラフィー（ＣＴ）または磁気共鳴画像（ＭＲＩ）スキャンを利用して、最初の投与前の２８日間以内に実施される。胸部、腹部、骨盤および脳に加えて、全ての知られている疾患部位をベースラインで評価する。後の評価は、胸部、腹部および骨盤、および全ての知られている疾患部位を含み、ベースラインで使用されたのと同じ画像方法を使用する。対象は、腫瘍応答について、疾患進行が記録されるまたは処置が中止されるまで（いずれか遅い方）、第１の投与から６週（±１週）で開始し、最初の２４週間６週（±１週）毎およびその後１２週（±１週）毎継続し評価される。継続試験処置決定のための腫瘍評価は、ＲＥＣＩＳＴ  １．１基準を使用して治験担当医によって完了される。
【０２０４】
一次有効性評価
一次有効性エンドポイントは、治験担当医によって決定されるとき、用量評価フェーズのために、Ｓｉｍｏｎ  ２−段階様設計が拡張フェーズのために選択されるとき、ＯＲＲである。比較アームを有するオープンラベルランダム化フェーズ２が拡張フェーズのために選択されるとき、一次有効性エンドポイントはＳＣＬＣに対してＯＲＲおよびＰＡＣに対してＯＳである。ランダム化フェーズ２試験がいずれかの腫瘍型について開始されるとき、全ての画像スキャンの盲目的な独立した審査がＯＲＲ、最良総合効果（ＢＯＲ）および腫瘍容積における低下の大きさを決定するために使用される。ＯＳについて、（あらゆる理由のために処置から離脱する対象を含む）試験に参加するために適格であり、生存データ回収のためにコンセントを撤回していない全てのランダム化対象に対して生存日を回収するために、あらゆる努力がなされる。対象の死が報告されないとき、対象との接触日を表すこの試験において回収されたすべての日を、対象の最後の既知の生存日を決定することにおいて使用する。
【０２０５】
エンドポイント
主要エンドポイント
ＤＬＴの発生率はＤＬＴ評価フェーズ中の主要安全性エンドポイントである。
有効性に関して、ＳＣＬＣに対する主要エンドポイントは、用量評価フェーズおよび単一アーム用量拡張フェーズに対する治験担当医評価ＯＲＲである。ＳＣＬＣ対象においてランダム化フェーズ２試験が誘発されるとき、ＩＲＲＣはＯＲＲの評価のためにＲＥＣＩＳＴ  １．１基準ごとに画像の盲目的な独立したレビューを行う。ＯＲＲは、処置される対象の数（比較アームを有するランダム化フェーズ２試験に対するランダム化対象の数）によって割られた完全応答（ＣＲ）または部分応答（ＰＲ）の最良総合効果（ＢＯＲ）を有する対象の数として定義される。ＢＯＲは、治験担当医によって決定されるとき、最初の投与日（比較アームを有するランダム化フェーズ２試験に対するランダム化日）と（いずれにせよ最初に起こる）ＲＥＣＩＳＴ１．１ごとに客観的に記録された進行日または後の抗癌療法の日の間に記録される最も良い応答指定として定義される。ＢＯＲ評価に含まれるＣＲまたはＰＲ決定は、応答の基準が最初に満たされた４週間以上後に第２のスキャンにより確認される。記録される進行または後の療法がない対象について、全ての利用できる応答指定はＢＯＲ評価に寄与する。進行を過ぎて処置を続ける対象について、ＢＯＲは、最初のＲＥＣＩＳＴ  １．１−定義進行のときまでに記録された応答指定に基づいて決定される。
【０２０６】
ＰＡＣについて、主要エンドポイントは、用量評価フェーズおよび単一アーム用量拡張フェーズに対する治験担当医評価ＯＲＲである。ＯＳは、ランダム化２アームフェーズ２試験に対する主要エンドポイントである。ＯＲＲは上記のように定義され、ＯＳはランダム化日およびあらゆる原因による死の日間の時間として定義される。死亡していない対象は、最後の知られる生存日で打ち切られる。
【０２０７】
二次エンドポイント
安全性および忍容性は、ＤＬＴ、有害事象、重篤な有害事象、および特定の研究室異常（最悪のグレード）の発生率によって分析される。毒性は、ＮＣＩ  ＣＴＣＡＥ  ｖｅｒｓｉｏｎ  ４．０を使用してグレード付けされる。
【０２０８】
ＰＦＳは、治験担当医によって決定されとき（ＲＥＣＩＳＴ  １．１によって）、最初の投与日（比較アームを有するランダム化フェーズ２試験のためのランダム化日）から最初の記録される腫瘍進行の日またはあらゆる原因による死の日のいずれか最初に起こる日までの時間として定義される。報告された以前の進行なしで死亡する対象は、死の日に進行していると考えられる。進行または死亡しなかった対象は、最後の評価できる腫瘍評価の日に打ち切られる。あらゆる試験中の腫瘍評価を有さず、死亡しなかった対象は、最初の投与日（比較アームを有するランダム化フェーズ２試験のためのランダム化日）に打ち切られる。以前の報告された進行なしで抗癌療法を開始した対象は、後の抗癌療法の開始前に最後の評価できる腫瘍評価の日に打ち切られる。
【０２０９】
探索的エンドポイント
応答期間（ＤＯＲ）は、ＰＲまたはＣＲのＢＯＲを有する対象について計算され、測定基準がＣＲまたはＰＲについて最初に満たされるとき（最初に記録されるいずれかの状態）からＲＥＣＩＳＴ  １．１基準を使用して決定されるとき最初の記録される腫瘍進行の日またはあらゆる原因による死の日のいずれか最初に起こる日までの時間として定義される。進行も死亡もしない対象について、ＤＯＲは、最後の評価できる腫瘍評価の日に打ち切られる。
【０２１０】
疾患コントロール率は、処置される対象の数（比較アームを有するランダム化フェーズ２試験が開始されるときランダム化対象の数）によって割られたＰＲまたはＣＲのＢＯＲまたは安定な疾患（第２のスキャンがベースラインから最低１０週間である、２回連続スキャンが存在する少なくとも６週間）を除いて、上記のＯＲＲとして定義される。
【０２１１】
探索的エンドポイントとしてのＯＳは、比較アームを有するランダム化フェーズ２試験のためのランダム化日および他の設計のための投与開始日を考慮して、主要エンドポイントのものとして定義される。
【０２１２】
ＯＲＲは、腫瘍容積における低下の大きさによりさらに特徴付けられる。腫瘍容積における低下の大きさは、ベースラインから最初の記録される腫瘍進行または死のときまでに観察される最下点までの腫瘍容積の減少パーセントとして定義される。ＰＡＣ対象におけるランダム化フェーズ２試験のための探索的目的として、ＩＲＲＣ評価ＯＲＲが使用される。
【０２１３】
分析
全ての分析は、腫瘍型によって別々に示されている。
【０２１４】
有効性分析
用量評価フェーズについて、ランダム化コホートによる全ての用量評価ランダム化処置対象（一次集団）を使用して有効性分析が要約される。さらに、全ての有効性データを含む分析は、全ての処置対象集団を使用するフェーズがレジメンによって提供される間に回収した。分析は、処置されるとき示される。
【０２１５】
拡張フェーズの形態がＳｉｍｏｎ  ２−段階様設計であるとき、有効性分析は、段階１中の全ての用量評価ランダム化処置対象から関連ランダム化コホートからにデータを段階２データ（一次集団）と共に貯めて、用量拡張フェーズのために推奨されるレジメンのために要約される。さらに、全ての処置対象を使用して全ての有効性データを含む分析は、用量評価および拡張フェーズ中のレジメンが提供されるために回収した。分析は、処置されるとき示される。
【０２１６】
比較アームを有するランダム化フェーズ２試験が開始されるとき、有効性分析は、全ての拡張フェーズランダム化対象を使用する処置アームによって別々に示される。分析は、ランダム化されるとき示される。
【０２１７】
主要エンドポイント方法
ＯＲＲは、二項応答率およびＣｌｏｐｐｅｒ  ａｎｄ  Ｐｅａｒｓｏｎ方法を使用する対応する両側９０％正確ＣＩによって要約される。比較アームを有するランダム化フェーズ２試験が開始されるとき、ＯＲＲはそれぞれの腫瘍型に対して定義される層別因子によって階層化されるＣｏｃｈｒａｎ−Ｍａｎｔｅｌ−Ｈａｅｎｓｚｅｌ（ＣＭＨ）試験で０．１０の片側アルファレベルを使用して処置アーム間で比較する。応答率の差に対する両側８０％ＣＩもまた、層別因子に対して調整して計算される。
【０２１８】
ＰＡＣに対する主要エンドポイントとしてのＯＳの主要分析は、それぞれの腫瘍型に対して定義される層別因子によって階層化される０．１０ログランク検定の片側アルファレベルを使用して、ウロクプルマブ  プラス  ニボルマブに対してランダム化される対象のＯＳと治験担当医の選択化学療法に対してランダム化される対象のものとの比較である。ハザード比および関連両側８０％信頼区間は、単一の共変量としての処置で一変量Ｃｏｘ比例ハザードモデルを使用して計算される。ＯＳのさらなる分析は、Ｋａｐｌａｎ−Ｍｅｉｅｒ方法論を使用して記述的に要約される。ＯＳの中央値は、ｌｏｇ−ｌｏｇ変換を考慮するＢｒｏｏｋｍｅｙｅｒ  ａｎｄ  Ｃｒｏｗｌｅｙ方法を使用する両側９５％ＣＩと共に計算される。３、６、９、１２、１８および２４月でのＯＳ率は、推定ならびに関連されるｌｏｇ−ｌｏｇ変換を考慮する両側９５％ＣＩである。
【０２１９】
二次エンドポイント方法
二次エンドポイントとしてのＰＦＳは、ＯＳと同様に記述的に要約される。３、６、９、１２および１８月でのＰＦＳ率は、推定ならびに関連されるｌｏｇ−ｌｏｇ変換を考慮する両側９５％ＣＩである。
【０２２０】
探索的エンドポイント方法
探索的エンドポイントとしてのＯＲＲは、主要エンドポイントと同様に記述的に要約される。ＤＯＲは、Ｋａｐｌａｎ−Ｍｅｉｅｒ（ＫＭ）ｐｒｏｄｕｃｔ−ｌｉｍｉｔ方法を使用して確認されるＰＲまたはＣＲをなし遂げる対象について要約される。中央値もまた、ｌｏｇ−ｌｏｇ変換を考慮するＢｒｏｏｋｍｅｙｅｒ  ａｎｄ  Ｃｒｏｗｌｅｙ方法を使用する両側９５％ＣＩと共に計算される。加えて、異なる時点（３、６、１２および１８月）での応答における応答者のパーセントは、ＫＭプロットに基づいて示される。
【０２２１】
腫瘍組織量における低下の大きさは記述的に要約される。
【０２２２】
疾患コントロール率は、二項応答率およびＣｌｏｐｐｅｒ  ａｎｄ  Ｐｅａｒｓｏｎ方法を使用する対応する両側９０％正確ＣＩによって要約される。
【０２２３】
ＳＣＬＣ対象に対する探索的エンドポイントとしてのＯＳは、ＰＡＣ対象に対する主要エンドポイントと同様に記述的に要約される。
【０２２４】
安全性分析
指示されている場合を除いて、安全性分析は、全ての処置対象集団を使用して実施され、処置されるとき示される。
【０２２５】
ＤＬＴ評価フェーズ中、主要分析はＤＬＴを評価できる対象の中でＤＬＴの発生率からなるが、全ての利用できる安全性および忍容性データはレジメンの安全性を評価するために使用される。
【０２２６】
用量評価フェーズについて、安全性分析はランダム化コホートによって要約される。さらに、フェーズ中に回収される全ての安全性データを含む分析はレジメンによって提供される。
【０２２７】
拡張フェーズの形態がＳｉｍｏｎ  ２−段階様設計であるとき、安全性分析は、試験の両方の段階からのデータを貯めて、用量拡張のために推奨されるレジメンのために要約される。さらに、用量評価および拡張フェーズ中にレジメンに対して回収される全ての安全性データを含む分析が提供される。
【０２２８】
比較アームを有するランダム化フェーズ２試験が開始されるとき、安全性分析は処置アームによって別々に示されている。
【０２２９】
ウロクプルマブの最終投与の１００日以内またはニボルマブの最終投与の１００日以内のいずれか遅いほうに事象（ＡＥまたは研究室）が起こるとき、事象（ＡＥまたは研究室）は試験上として数えられる。全ての試験上のＡＥ、処置関連ＡＥ、ＳＡＥ、処置関連ＳＡＥ、中止に至るＡＥおよび中止に至る処置関連ＡＥは、器官別大分類および好ましい用語によってＮＣＩ  ＣＴＣＡＥ  ｖ  ４．０基準による最悪グレードを使用して一覧にされる（全てのグレードおよびグレード３−４）。血液学、化学、肝臓機能および腎臓機能を含む試験上の研究異常は、最悪グレードＮＣＩ  ＣＴＣＡＥ  ｖ  ４．０基準を使用して要約される（全てのグレードおよびグレード３−４）。
【０２３０】
中間分析
それぞれの腫瘍型内で、用量評価フェーズにおいて全ての対象が最低３月の処置を有するか、または時期尚早に中止されたとき、中間分析（ＩＡ）が行われる。このＩＡの目的は、（１）ニボルマブと組み合わせられるウロクプルマブのさらなる試験が腫瘍型において保証されるか否かを決定するため；（２）さらなる試験が保証されるとき、用量拡張フェーズのための推奨用量を選択するため；および（３）用量拡張フェーズが完了されるとき、Ｓｉｍｏｎ最適２段階様設計の単一アーム第２段階または比較アームを有するオープンラベルランダム化フェーズ２設計を行うか否かを決定するため、である。
【０２３１】
それぞれの腫瘍型においてニボルマブと組み合わせられるウロクプルマブをさらに試験する決定は、用量評価フェーズに対する以前に定義されるＳｉｍｏｎ２−段階設計閾値（ＳＣＬＣに対して少なくとも４応答者およびＰＡＣに対して少なくとも２応答者）に主に基づく。加えて、推奨用量の選択は、両方の腫瘍型からのＩＡに対する全ての利用できる安全性および有効性データに基づく。用量評価フェーズから用量拡張フェーズに進行する決定は、独立してそれぞれの腫瘍型に対して行われる。応答パターンの完全な特性化が評価されることを保証するために、決定が組合せのさらなる試験を止めるように至る前に、最終データを評価することが考慮され得る。
【０２３２】
用量評価フェーズ中に選択される推奨用量において処置される対象中で応答者の「高い」頻度が観察されるとき、拡張フェーズのためのＳｉｍｏｎ最適２−段階様設計の第２段階を完了することよりもむしろオープンラベルランダム化２−アームフェーズ２設計で進行する決定が取られる。ＳＣＬＣについて、この「高い」数は少なくとも９応答者であり、ＰＡＣについて、少なくとも６応答者である。
【０２３３】
この応答者の数は臨床的なインプットを考慮して定義されているが、応答者の関連割合がまたＳＣＬＣについて２５％を超えるまたはＰＡＣについて１２％を超える９０％正確ＣＩの下限を示すことを保証する。これらのパーセンテージは、薬物をさらに評価するためにＳｉｍｏｎ２−段階設計の最後に必要とされるであろう応答者の最小割合に対応する（ＳＣＬＣについて、４４対象中で１１応答者が２５％であり、ＰＡＣについて、４１対象中で５応答者が１２％である）。
【０２３４】
拡張フェーズ中、Ｓｉｍｏｎ  ２−段階様設計の第２段階の全ての対象が最低３月の処置を有するか、または時期尚早に中止されたとき、ＩＡが行われる。比較アームを有するランダム化フェーズ２試験が開始されるとき、ＩＡは、定期的に、ＤＭＣ許可書において特定されているとおりＤＭＣに対して実施される。
【０２３５】
実施例８
薬物動態学および免疫原性評価
ＰＫおよび免疫原性評価の詳細なスケジュールは表３および表４に提供される。投与前サンプルは、その日の最初の注入の開始前３０分以内に取られる。注入サンプルの最後は、それぞれの試験薬の最後の注入の直前、好ましくは２分以内に取られる。全ての他の時点は、それぞれの試験薬に対する注入の開始と比べてである。全ての処置中のＰＫ時点は、試験薬が投与される日と一致するように意図される。投与が小さなスケジュール変更のために異なる日に起こるとき、ＰＫサンプリングがそれに応じて調整される。
【０２３６】
ＳＣＬＣにおける比較アームを有するランダム化フェーズ２試験について、ニボルマブＰＫおよび免疫原性サンプル回収は、ニボルマブ単剤療法比較アームについて表４に従う。ＰＡＣにおける比較アームを有するランダム化フェーズ２試験について、ＰＫおよび免疫原性サンプルは、治験担当医の選択２Ｌ化学療法で比較アームについて回収されない。
【０２３７】
表３．用量評価フェーズ（段階１）においてウロクプルマブおよびニボルマブに対する薬物動態学および免疫原性サンプリングスケジュール
【表３】
2018516969.tif 000005
ａ  免疫原性評価のための血清サンプルは、最初の注入日の開始前３０分以内に回収される。
ｂ  注入（ウロクプルマブ）の最後：このサンプルは、ウロクプルマブ注入を停止する直前に取られる（好ましくは注入の最後の前２分以内）。ウロクプルマブ注入の最後が遅延されると、注入の回収がそれに応じて遅延される。
ｃ  注入（ニボルマブ）の最後：このサンプルは、ニボルマブ注入を停止する直前に取られる（好ましくは注入の最後の前２分以内）。２．５時の時点はウロクプルマブおよびニボルマブ投与間での３０分を考慮に入れる。ニボルマブ注入の最後が遅延されると、このサンプルの回収がそれに応じて遅延される。
ｄ  ウロクプルマブの１週毎に１回の投与について、投与前サンプル（相対時間が００：００である）を回収する；２週間ごとに与えられるウロクプルマブについて、１６８時サンプル（相対時間が１６８：００である）を回収する。
ｅ  最初の２の追跡調査来院（コンセントを離脱する対象を除けば、処置来院の最後から最大１００日間）。
【０２３８】
表４．用量拡張フェーズ（段階２）においてウロクプルマブおよびニボルマブに対する薬物動態学および免疫原性サンプリングスケジュール
【表４】
2018516969.tif 000006
ａ  免疫原性評価のための血清サンプルは、最初の注入日の開始前３０分以内に回収される。
ｂ  注入（ウロクプルマブ）の最後：このサンプルは、ウロクプルマブ注入を停止する直前に取られる（好ましくは注入の最後の前２分以内）。ウロクプルマブ注入の最後が遅延されると、注入の回収がそれに応じて遅延される。
ｃ  注入（ニボルマブ）の最後：このサンプルは、ニボルマブ注入を停止する直前に取られる（好ましくは注入の最後の前２分以内）。２．５時の時点はウロクプルマブおよびニボルマブ投与間での３０分を考慮に入れる。ニボルマブ注入の最後が遅延されると、このサンプルの回収がそれに応じて遅延される。
ｄ  追跡調査来院（コンセントを離脱する対象を除けば、処置来院の最後から最大１００日間）。
【０２３９】
薬物動態学分析
この試験において得られるウロクプルマブおよびニボルマブ濃度データは、集団ＰＫモデルを開発または精密化するために、臨床開発プログラムにおいて他の試験からのデータと組み合わされ得る。このモデルは、ウロクプルマブおよびニボルマブのＰＫに対する内因性および外因性共変量の効果を評価するため、および個々の暴露の規準（例えば、定常状態ピーク、トラフおよび時間平均濃度）を決定するために使用される。加えて、モデル決定暴露は、暴露応答分析のために使用され得る。集団ＰＫおよび暴露応答分析の結果は、別々に報告される。
【０２４０】
実施例９
バイオマーカー評価
末梢血および腫瘍組織は、療法の前および処置の選択された時点で回収される。バイオマーカーサンプリングスケジュールは、表５および表６に提供される。
【０２４１】
可溶性バイオマーカー
炎症性サイトカイン、ケモカインおよび他の予備的血清ベースのバイオマーカーは、潜在的なＰＤマーカーとして、処置前および処置後の選択された時点で特徴付けられ定量される。２つの癌関連バイオマーカーであるＣ反応性タンパク質（ＣＲＰ）および癌抗原１９．９（ＣＡ１９．９）は、疾患活動性の潜在的なマーカーとして、処置前および処置後の選択された時点で評価される。
【０２４２】
免疫表現型検査
末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）調製物において特定のリンパ球サブセットおよびＴ細胞共刺激マーカーの発現レベルの割合は、フローサイトメトリーによって定量される。分析は、Ｔ、ＢおよびＮＫ細胞の割合、骨髄由来抑制細胞（ＭＤＳＣ）の割合、記憶およびエフェクターＴ細胞サブセットの割合、およびＰＤ−１、ＰＤ  Ｌ１、ＩＣＯＳ、およびＫｉ６７の発現レベルを含み得むが、必ずしも限定されない。
【０２４３】
表５．用量評価フェーズ（段階１）のためのバイオマーカーサンプリングスケジュール
【表５】
2018516969.tif 000007
ａ  ウロクプルマブの１週毎に１回の投与について、投与前サンプル（相対時間が００：００である）を回収する；２週間ごとに与えられるウロクプルマブについて、１６８時サンプル（相対時間が１６８：００である）を回収する。
【０２４４】
表６．用量拡張フェーズ（段階２）のためのバイオマーカーサンプリングスケジュール
【表６】
2018516969.tif 000008
【０２４５】
末梢血遺伝子発現
ニボルマブ単剤療法およびニボルマブ／ウロクプルマブ併用療法に対する応答に関連する遺伝子の発現レベルは、全血サンプルを使用して定量される。分析は、免疫関連経路と関連する遺伝子、例えばＴ細胞活性化および抗原プロセシングおよび提示を含み得むが、必ずしも限定されない。
【０２４６】
受容体占有分析
ＣＸＣＲ４  ＲＯ分析は、ウロクプルマブによる標的結合の代理バイオマーカーとして循環Ｔ細胞に対して行われる。これらの分析からのデータはまた、対応するＰＫデータの解釈を容易にするために使用される。絶対Ｔ細胞およびＣＤ３４＋細胞数もまた評価される。投与後の絶対Ｔ細胞およびＣＤ３４＋細胞数の増加は、ＲＯアッセイと共に、ＣＸＣＲ４の関与およびウロクプルマブによる阻害を確認するために使用される。
【０２４７】
予備的ＲＯデータは、２００ｍｇウロクプルマブ用量コホートにおいて８対象に対してこの継続臨床試験において得られた。ウロクプルマブでの投与後４時間以内に、１００％ＲＯ（中央値）が分析される本質的に全ての後の時点でなし遂げられ、維持された（図９）。１対象において、％ＲＯは５週目の１日目に２３％低下したが、これは４週目の１日目に試験薬と関連のないＳＡＥによる投与の遅延によるものであった。
【０２４８】
腫瘍バイオマーカー
腫瘍生検標本（新鮮またはアーカイブの材料）は、免疫細胞集団、選択された腫瘍マーカーの発現および遺伝子発現分析を特徴付けるための処理の前に全ての対象から必要とされる。これらのサンプルはまた、腫瘍および周囲の間質内のＣＸＣＲ４、技術的に実現可能であればＦＡＰおよびＣＸＣＬ１２、の発現および局在化を評価するために使用される。生検サンプルは、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）および腫瘍抗原、Ｔ細胞レパートリーの分析、および遺伝子発現プロファイリングを特徴付けるために使用される。
【０２４９】
ＴＩＬおよび腫瘍抗原の特性化
免疫組織化学（ＩＨＣ）は、療法への暴露前後の腫瘍組織内の免疫細胞サブセットを定義するために、免疫浸潤物の数および組成を評価するために使用される。これらのＩＨＣ分析は、以下のマーカー：ＣＤ４、ＣＤ８、ＦＯＸＰ３、ＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１およびＰＤ−Ｌ２を含み得むが、必ずしも限定されない。
【０２５０】
Ｔ細胞レパートリー分析
種々のＴ細胞レパートリーが療法に対する応答を予測するか否かを調べるために、腫瘍組織から単離されたＤＮＡを、単剤療法および併用療法の前および間にＴ細胞レパートリーの組成を定量するために配列決定する。
【０２５１】
遺伝子発現プロファイリング
腫瘍生検を、処置の前および後に選択された免疫関連遺伝子の発現について調べる。
【０２５２】
ＣＸＣＬ１２、ＣＸＣＲ４およびＦＡＰ発現の特性化
ＣＸＣＬ１２介在Ｔ細胞阻害が固形腫瘍において機能的であるか否かを確認するため、腫瘍組織においてＣＸＣＲ４、技術的に実現可能であればＦＡＰおよびＣＸＣＬ１２、の発現を処置の前および後に評価する。ＣＸＣＲ４およびＦＡＰの発現はＩＨＣにより評価され、ＣＸＣＬ１２発現はＲＮＡｓｃｏｐｅを介して評価される。
【０２５３】
配列表要約
【表７】
2018516969.tif 000009
【０２５４】
参考文献
【表８】
2018516969.tif 000010
【表９】
2018516969.tif 000011
【表１０】
2018516969.tif 000012
【表１１】
2018516969.tif 000013
【表１２】
2018516969.tif 000014
【表１３】
2018516969.tif 000015
【表１４】
2018516969.tif 000016
【図１】
2018516969.tif 000017
【図２】
2018516969.tif 000018
【図３】
2018516969.tif 000019
【図４Ａ】
2018516969.tif 000020
【図４Ｂ】
2018516969.tif 000021
【図５Ａ】
2018516969.tif 000022
【図５Ｂ】
2018516969.tif 000023
【図６Ａ】
2018516969.tif 000024
【図６Ｂ】
2018516969.tif 000025
【図７Ａ】
2018516969.tif 000026
【図７Ｂ】
2018516969.tif 000027
【図７Ｃ】
2018516969.tif 000028
【図７Ｄ】
2018516969.tif 000029
【図８】
2018516969.tif 000030
【図９】
2018516969.tif 000031
【配列表】
2018516969000001.app
【国際調査報告】
2018516969.tif 000032
2018516969.tif 000033
2018516969.tif 000034