(57)【要約】  個人的な時間的ホスファターゼプロファイルを作成することよって初期糖尿病、代謝障害、又はメタボリックシンドロームを予測するための方法が記載され、このホスファターゼプロファイルは、単一の時点又は複数の時点で便中のホスファターゼ濃度を測定することによって作成される。このホスファターゼプロファイルは、他の初期又は顕性疾患、例えば、メタボリックシンドローム、冠動脈心疾患、非アルコール性脂肪肝、癌、他の慢性若しくは急性の疾患又は感染症の診断及びその予後の決定に更に使用することができる。また、初期糖尿病及び他の初期又は顕性疾患における治療的使用のための特定の用量のホスファターゼも記載される。
2018509885.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
便ホスファターゼの時間的プロファイルを作成するための方法であって、対象からの便サンプル中のホスファターゼの濃度を測定することを含み、前記便サンプルが、単一の時点又は複数の時点で収集される、方法。
【請求項２】
前記複数の時点が、毎日、毎週、毎月、又は毎年を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記対象が、ヒト、ウシ、ブタ、ヒツジ、ヤギ、乳牛、ウマ、イヌ、ネコ、サル、ウサギ、ラット、マウス、ニワトリ、又はシチメンチョウであり、好ましくはヒトである、請求項１又は２に記載の方法。
【請求項４】
前記測定することが、
ホスファターゼの基質を固形又は液体の形態で用意すること；
前記ホスファターゼの基質を便サンプルに接触させること；
色が現れるように特定の期間待つこと；
前記現れた色を基準の写真と比較すること；及び
前記便サンプル中の前記ホスファターゼの濃度を定量すること
を含む、請求項１〜３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５】
前記測定することが、
ホスファターゼの基質を固形又は液体の形態で用意すること；
前記ホスファターゼの基質を便サンプルに接触させること；
色が現れるように特定の期間待つこと；
写真の画素をカウントすること；
画素数を基準と比較すること；及び
前記便サンプル中の前記ホスファターゼの濃度を定量すること
を含む、請求項１〜３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６】
前記測定することが、
ホスファターゼの基質を固形又は液体の形態で用意すること；
前記ホスファターゼの基質を便サンプルに接触させること；
酵素反応が起きるように特定の期間待つこと；及び
分光光度計、生化学分析装置、高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）装置、比色計、照度計、又は機械、生化学、電気、若しくは電子装置を用いて前記便サンプル中の前記ホスファターゼの濃度を定量すること
を含む、請求項１〜３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７】
前記測定することが、
固形培地であって、それに付着したホスファターゼの基質を有する固形培地を用意すること；
前記固形培地を便サンプルに接触させること；
色が現れるように特定の期間待つこと；
前記現れた色を基準の写真と比較すること；及び
前記便サンプル中の前記ホスファターゼの濃度を定量すること
を含む、請求項１〜３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８】
前記測定することが、
固形培地であって、それに付着したホスファターゼの基質を有する固形培地を用意すること；
前記固形培地を便サンプルに接触させること；
画素化された色パターンが現れるように特定の期間待つこと；
写真の画素をカウントすること；
画素数を基準と比較すること；及び
前記便サンプル中の前記ホスファターゼの濃度を定量すること
を含む、請求項１〜３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９】
前記測定することが、
固形培地であって、それに便サンプルを付着させるための固形培地を用意すること；
前記便サンプルを前記固形培地に付着させること；
前記固形培地をホスファターゼの基質に接触させること；
色が現れるように特定の期間待つこと；
前記現れた色を基準の写真と比較すること；及び
前記便サンプル中の前記ホスファターゼの濃度を定量すること
を含む、請求項１〜３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０】
前記測定することが、
固形培地であって、それに便サンプルを付着させるための固形培地を用意すること；
前記便サンプルを前記固形培地に付着させること；
前記固形培地をホスファターゼの基質に接触させること；
画素化された色パターンが現れるように特定の期間待つこと；
写真の画素をカウントすること；
画素数を基準と比較すること；及び
前記便サンプル中の前記ホスファターゼの濃度を定量すること
を含む、請求項１〜３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１１】
前記固形培地が、膜、紙、スティック、ガラス、プラスチック、木材、ビーズ、管、瓶、スライド、又はスワブ、好ましくはナイロン膜又はニトロセルロース膜を含む、請求項７〜１０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１２】
前記ホスファターゼの基質が、ｐ−ニトロフェニルホスフェート、５−ブロモ−４−クロロ−３−インドリルホスフェート／ニトロブルーテトラゾリウム基質系、Fast Red TR／ナフトール基質系、ＣＤＰ−スター基質（２−クロロ−５−（４−メトキシスピロ｛１，２−ジオキセタン−３，２’（５’−クロロ）−トリシクロ［３．３．１．１３．７］デカン｝−４−イル）−１−フェニルホスフェート二ナトリウム塩）、又はこれらの組み合わせを含む、請求項４〜１１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１３】
前記ホスファターゼが、アルカリホスファターゼ、腸アルカリホスファターゼ、胎盤アルカリホスファターゼ、組織非特異的アルカリホスファターゼ（肝臓／骨／腎臓アルカリホスファターゼ）、生殖細胞アルカリホスファターゼ、好中球アルカリホスファターゼ、酸性ホスファターゼ、又はホスファターゼ活性を有するペプチド、好ましくは腸アルカリホスファターゼを含む、請求項１〜１２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１４】
前記便サンプルの代わりに、唾液、尿、血液、血漿、血清、涙液、汗、膿汁、胃液、腸液、眼液、腹水、膣液、脳脊髄液、又は体腔液を含む生物学的サンプルが使用される、請求項１〜１３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１５】
初期糖尿病、初期代謝疾患、初期メタボリックシンドローム、糖尿病、代謝疾患、又はメタボリックシンドロームを診断するための方法であって、対象からの生物学的サンプル中のホスファターゼの濃度を測定すること、及び前記濃度を平均正常値の濃度と比較することを含む、方法。
【請求項１６】
平均正常値よりも１％〜１００％低いホスファターゼの濃度が、初期糖尿病、初期代謝疾患、初期メタボリックシンドローム、糖尿病、代謝疾患、又はメタボリックシンドロームを示唆する、請求項１５に記載の方法。
【請求項１７】
対象からの１つ又は２つ以上の生物学的サンプル中の前記ホスファターゼの濃度を測定することを含む、時間的ホスファターゼプロファイルを作成することを更に含み、前記１つ又は２つ以上の生物学的サンプルが、単一の時点又は複数の時点で収集される、請求項１５又は１６に記載の方法。
【請求項１８】
前記複数の時点が、毎日、毎週、毎月、又は毎年を含む、請求項１７に記載の方法。
【請求項１９】
時間経過によるホスファターゼ濃度の持続的な減少を含む前記時間的ホスファターゼプロファイルが、初期糖尿病、初期代謝疾患、初期メタボリックシンドローム、糖尿病、代謝疾患、又はメタボリックシンドロームを示唆する、請求項１７又は１８に記載の方法。
【請求項２０】
前記持続的な減少が、以前に測定された濃度から約５０％の減少である、請求項１９に記載の方法。
【請求項２１】
前記対象が、ヒト、ウシ、ブタ、ヒツジ、ヤギ、乳牛、ウマ、イヌ、ネコ、サル、ウサギ、ラット、マウス、ニワトリ、又はシチメンチョウであり、好ましくはヒトである、請求項１５〜２０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２２】
前記測定することが、
ホスファターゼの基質を固形又は液体の形態で用意すること；
前記ホスファターゼの基質を生物学的サンプルに接触させること；
色が現れるように特定の期間待つこと；
前記現れた色を基準の写真と比較すること；及び
前記生物学的サンプル中の前記ホスファターゼの濃度を定量すること
を含む、請求項１５〜２１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２３】
前記測定することが、
ホスファターゼの基質を固形又は液体の形態で用意すること；
前記ホスファターゼの基質を生物学的サンプルに接触させること；
色が現れるように特定の期間待つこと；
写真の画素をカウントすること；
画素数を基準と比較すること；及び
前記生物学的サンプル中の前記ホスファターゼの濃度を定量すること
を含む、請求項１５〜２１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２４】
前記測定することが、
ホスファターゼの基質を固形又は液体の形態で用意すること；
前記ホスファターゼの基質を生物学的サンプルに接触させること；
酵素反応が起きるように特定の期間待つこと；及び
分光光度計、生化学分析装置、高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）装置、比色計、照度計、又は機械、生化学、電気、若しくは電子装置を用いて前記生物学的サンプル中の前記ホスファターゼの濃度を定量すること
を含む、請求項１５〜２１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２５】
前記測定することが、
固形培地であって、それに付着したホスファターゼの基質を有する固形培地を用意すること；
前記固形培地を生物学的サンプルに接触させること；
色が現れるように特定の期間待つこと；
前記現れた色を基準の写真と比較すること；及び
前記生物学的サンプル中の前記ホスファターゼの濃度を定量すること
を含む、請求項１５〜２１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２６】
前記測定することが、
固形培地であって、それに付着したホスファターゼの基質を有する固形培地を用意すること；
前記固形培地を生物学的サンプルに接触させること；
画素化された色パターンが現れるように特定の期間待つこと；
写真の画素をカウントすること；
画素数を基準と比較すること；及び
前記生物学的サンプル中の前記ホスファターゼの濃度を定量すること
を含む、請求項１５〜２１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２７】
前記測定することが、
固形培地であって、それに生物学的サンプルを付着させるための固形培地を用意すること；
前記生物学的サンプルを前記固形培地に付着させること；
前記固形培地をホスファターゼの基質に接触させること；
色が現れるように特定の期間待つこと；
前記現れた色を基準の写真と比較すること；及び
前記生物学的サンプル中の前記ホスファターゼの濃度を定量すること
を含む、請求項１５〜２１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２８】
前記測定することが、
固形培地であって、それに生物学的サンプルを付着させるための固形培地を用意すること；
前記生物学的サンプルを前記固形培地に付着させること；
前記固形培地をホスファターゼの基質に接触させること；
画素化された色パターンが現れるように特定の期間待つこと；
写真の画素をカウントすること；
画素数を基準と比較すること；及び
前記生物学的サンプル中の前記ホスファターゼの濃度を定量すること
を含む、請求項１５〜２１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２９】
前記固形培地が、膜、紙、スティック、ガラス、プラスチック、木材、ビーズ、管、瓶、スライド、又はスワブ、好ましくはナイロン膜又はニトロセルロース膜を含む、請求項２５〜２８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３０】
前記ホスファターゼの基質が、ｐ−ニトロフェニルホスフェート、５−ブロモ−４−クロロ−３−インドリルホスフェート／ニトロブルーテトラゾリウム基質系、Fast Red TR／ナフトール基質系、ＣＤＰ−スター基質（２−クロロ−５−（４−メトキシスピロ｛１，２−ジオキセタン−３，２’（５’−クロロ）−トリシクロ［３．３．１．１３．７］デカン｝−４−イル）−１−フェニルホスフェート二ナトリウム塩）、又はこれらの組み合わせを含む、請求項２２〜２８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３１】
前記ホスファターゼが、アルカリホスファターゼ、腸アルカリホスファターゼ、胎盤アルカリホスファターゼ、組織非特異的アルカリホスファターゼ（肝臓／骨／腎臓アルカリホスファターゼ）、生殖細胞アルカリホスファターゼ、好中球アルカリホスファターゼ、酸性ホスファターゼ、又はホスファターゼ活性を有するペプチド、好ましくは腸アルカリホスファターゼを含む、請求項１５〜３０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３２】
前記生物学的サンプルが、便、唾液、尿、血液、血漿、血清、涙液、汗、膿汁、胃液、腸液、眼液、腹水、膣液、脳脊髄液、又は体腔液、好ましくは便サンプルを含む、請求項１５〜３０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３３】
対象からの１つ又は２つ以上の生物学的サンプル中の血清エンドトキシン、炎症誘発性ヌクレオチド、サイトカイン、ケモカイン、サイトカイン受容体のアンタゴニスト、又は抗炎症因子の１つ以上の濃度を測定することを更に含み、前記１つ又は２つ以上の生物学的サンプルが、単一の時点又は複数の時点で収集される、請求項１５〜３２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３４】
前記初期糖尿病又は糖尿病が、２型糖尿病、妊娠性糖尿病、又は崩尿症を含む、請求項１５〜３３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３５】
前記初期代謝疾患又は代謝疾患が、心血管疾患、冠動脈心疾患、脳血管疾患、脳卒中、末梢血管疾患、非アルコール性脂肪肝疾患、網膜症、喘息、慢性肺閉塞性疾患、嚢胞性線維症、アルツハイマー病、関節炎、湿疹、又は乾癬を含む、請求項１５〜３３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３６】
前記初期メタボリックシンドローム又はメタボリックシンドロームが、肥満、高血糖、インスリン耐性、高インスリン血症、脂質異常症、高コレステロール血症、高トリグリセリド血症、低高密度リポタンパク質（ＨＤＬ）、高低密度リポタンパク質（ＬＤＬ）、高血圧、脂肪肝、又はこれらの組み合わせを含む、請求項１５〜３３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３７】
対象からの１つ又は２つ以上の生物学的サンプル中のホスファターゼ濃度を測定することを含む、時間的ホスファターゼプロファイルを作成するためのホスファターゼの基質の使用であって、前記１つ又は２つ以上の生物学的サンプルが、単一の時点又は複数の時点で収集される、使用。
【請求項３８】
前記複数の時点が、毎日、毎週、毎月、又は毎年を含む、請求項３７に記載の使用。
【請求項３９】
前記対象が、ヒト、ウシ、ブタ、ヒツジ、ヤギ、乳牛、ウマ、イヌ、ネコ、サル、ウサギ、ラット、マウス、ニワトリ、又はシチメンチョウであり、好ましくはヒトである、請求項３７又は３８に記載の使用。
【請求項４０】
前記測定することが、
ホスファターゼの基質を固形又は液体の形態で用意すること；
前記ホスファターゼの基質を生物学的サンプルに接触させること；
色が現れるように特定の期間待つこと；
前記現れた色を基準の写真と比較すること；及び
前記生物学的サンプル中の前記ホスファターゼの濃度を定量すること
を含む、請求項３７〜３９のいずれか一項に記載の使用。
【請求項４１】
前記測定することが、
ホスファターゼの基質を固形又は液体の形態で用意すること；
前記ホスファターゼの基質を生物学的サンプルに接触させること；
色が現れるように特定の期間待つこと；
写真の画素をカウントすること；
画素数を基準と比較すること；及び
前記生物学的サンプル中の前記ホスファターゼの濃度を定量すること
を含む、請求項３７〜３９のいずれか一項に記載の使用。
【請求項４２】
前記測定することが、
ホスファターゼの基質を固形又は液体の形態で用意すること；
前記ホスファターゼの基質を生物学的サンプルに接触させること；
酵素反応が起きるように特定の期間待つこと；及び
分光光度計、生化学分析装置、高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）装置、比色計、照度計、又は機械、生化学、電気、若しくは電子装置を用いて前記生物学的サンプル中の前記ホスファターゼの濃度を定量すること
を含む、請求項３７〜３９のいずれか一項に記載の使用。
【請求項４３】
前記測定することが、
固形培地であって、それに付着したホスファターゼの基質を有する固形培地を用意すること；
前記固形培地を生物学的サンプルに接触させること；
色が現れるように特定の期間待つこと；
前記現れた色を基準の写真と比較すること；及び
前記生物学的サンプル中の前記ホスファターゼの濃度を定量すること
を含む、請求項３７〜３９のいずれか一項に記載の使用。
【請求項４４】
前記測定することが、
固形培地であって、それに付着したホスファターゼの基質を有する固形培地を用意すること；
前記固形培地を生物学的サンプルに接触させること；
画素化された色パターンが現れるように特定の期間待つこと；
写真の画素をカウントすること；
画素数を基準と比較すること；及び
前記生物学的サンプル中の前記ホスファターゼの濃度を定量すること
を含む、請求項３７〜３９のいずれか一項に記載の使用。
【請求項４５】
前記測定することが、
固形培地であって、それに生物学的サンプルを付着させるための固形培地を用意すること；
前記生物学的サンプルを前記固形培地に付着させること；
前記固形培地をホスファターゼの基質に接触させること；
色が現れるように特定の期間待つこと；
前記現れた色を基準の写真と比較すること；及び
前記生物学的サンプル中の前記ホスファターゼの濃度を定量すること
を含む、請求項３７〜３９のいずれか一項に記載の使用。
【請求項４６】
前記測定することが、
固形培地であって、それに生物学的サンプルを付着させるための固形培地を用意すること；
前記生物学的サンプルを前記固形培地に付着させること；
前記固形培地をホスファターゼの基質に接触させること；
画素化された色パターンが現れるように特定の期間待つこと；
写真の画素をカウントすること；
画素数を基準と比較すること；及び
前記生物学的サンプル中の前記ホスファターゼの濃度を定量すること
を含む、請求項３７〜３９のいずれか一項に記載の使用。
【請求項４７】
前記固形培地が、膜、紙、スティック、ガラス、プラスチック、木材、ビーズ、管、瓶、スライド、又はスワブ、好ましくはナイロン膜又はニトロセルロース膜を含む、請求項４３〜４６のいずれか一項に記載の使用。
【請求項４８】
前記ホスファターゼの基質が、ｐ−ニトロフェニルホスフェート、５−ブロモ−４−クロロ−３−インドリルホスフェート／ニトロブルーテトラゾリウム基質系、Fast Red TR／ナフトール基質系、ＣＤＰ−スター基質（２−クロロ−５−（４−メトキシスピロ｛１，２−ジオキセタン−３，２’（５’−クロロ）−トリシクロ［３．３．１．１３．７］デカン｝−４−イル）−１−フェニルホスフェート二ナトリウム塩）、又はこれらの組み合わせを含む、請求項４０〜４６のいずれか一項に記載の使用。
【請求項４９】
前記ホスファターゼが、アルカリホスファターゼ、腸アルカリホスファターゼ、胎盤アルカリホスファターゼ、組織非特異的アルカリホスファターゼ（肝臓／骨／腎臓アルカリホスファターゼ）、生殖細胞アルカリホスファターゼ、好中球アルカリホスファターゼ、酸性ホスファターゼ、又はホスファターゼ活性を有するペプチド、好ましくは腸アルカリホスファターゼを含む、請求項３７〜４８のいずれか一項に記載の使用。
【請求項５０】
前記生物学的サンプルが、便、唾液、尿、血液、血漿、血清、涙液、汗、膿汁、胃液、腸液、眼液、腹水、膣液、脳脊髄液、又は体腔液、好ましくは便サンプルを含む、請求項３７〜４９のいずれか一項に記載の使用。
【請求項５１】
初期糖尿病、初期代謝疾患、初期メタボリックシンドローム、糖尿病、代謝疾患、又はメタボリックシンドロームを検出するためのホスファターゼの基質の使用であって、対象からの生物学的サンプル中のホスファターゼの濃度を測定すること、及び前記濃度を平均正常値の濃度と比較することを含む、使用。
【請求項５２】
平均正常値よりも１％〜１００％低いホスファターゼの濃度が、初期糖尿病、初期代謝疾患、初期メタボリックシンドローム、糖尿病、代謝疾患、又はメタボリックシンドロームを示唆する、請求項５１に記載の使用。
【請求項５３】
対象からの１つ又は２つ以上の生物学的サンプル中の前記ホスファターゼの濃度を測定することを含む、時間的ホスファターゼプロファイルを作成することを更に含み、前記１つ又は２つ以上の生物学的サンプルが、単一の時点又は複数の時点で収集される、請求項５１又は５２に記載の使用。
【請求項５４】
前記複数の時点が、毎日、毎週、毎月、又は毎年を含む、請求項５３に記載の使用。
【請求項５５】
時間経過によるホスファターゼ濃度の持続的な減少を含む前記時間的ホスファターゼプロファイルが、初期糖尿病、初期代謝疾患、初期メタボリックシンドローム、糖尿病、代謝疾患、又はメタボリックシンドロームを示唆する、請求項５３又は５４に記載の使用。
【請求項５６】
前記持続的な減少が、以前に測定された濃度から約５０％の減少である、請求項５５に記載の使用。
【請求項５７】
前記対象が、ヒト、ウシ、ブタ、ヒツジ、ヤギ、乳牛、ウマ、イヌ、ネコ、サル、ウサギ、ラット、マウス、ニワトリ、又はシチメンチョウであり、好ましくはヒトである、請求項５１〜５６のいずれか一項に記載の使用。
【請求項５８】
前記測定することが、
ホスファターゼの基質を固形又は液体の形態で用意すること；
前記ホスファターゼの基質を生物学的サンプルに接触させること；
色が現れるように特定の期間待つこと；
前記現れた色を基準の写真と比較すること；及び
前記生物学的サンプル中の前記ホスファターゼの濃度を定量すること
を含む、請求項５１〜５７のいずれか一項に記載の使用。
【請求項５９】
前記測定することが、
ホスファターゼの基質を固形又は液体の形態で用意すること；
前記ホスファターゼの基質を生物学的サンプルに接触させること；
色が現れるように特定の期間待つこと；
写真の画素をカウントすること；
画素数を基準と比較すること；及び
前記生物学的サンプル中の前記ホスファターゼの濃度を定量すること
を含む、請求項５１〜５７のいずれか一項に記載の使用。
【請求項６０】
前記測定することが、
ホスファターゼの基質を固形又は液体の形態で用意すること；
前記ホスファターゼの基質を生物学的サンプルに接触させること；
酵素反応が起きるように特定の期間待つこと；及び
分光光度計、生化学分析装置、高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）装置、比色計、照度計、又は機械、生化学、電気、若しくは電子装置を用いて前記生物学的サンプル中の前記ホスファターゼの濃度を定量すること
を含む、請求項５１〜５７のいずれか一項に記載の使用。
【請求項６１】
前記測定することが、
固形培地であって、それに付着したホスファターゼの基質を有する固形培地を用意すること；
前記固形培地を生物学的サンプルに接触させること；
色が現れるように特定の期間待つこと；
前記現れた色を基準の写真と比較すること；及び
前記生物学的サンプル中の前記ホスファターゼの濃度を定量すること
を含む、請求項５１〜５７のいずれか一項に記載の使用。
【請求項６２】
前記測定することが、
固形培地であって、それに付着したホスファターゼの基質を有する固形培地を用意すること；
前記固形培地を生物学的サンプルに接触させること；
画素化された色パターンが現れるように特定の期間待つこと；
写真の画素をカウントすること；
画素数を基準と比較すること；及び
前記生物学的サンプル中の前記ホスファターゼの濃度を定量すること
を含む、請求項５１〜５７のいずれか一項に記載の使用。
【請求項６３】
前記測定することが、
固形培地であって、それに生物学的サンプルを付着させるための固形培地を用意すること；
前記生物学的サンプルを前記固形培地に付着させること；
前記固形培地をホスファターゼの基質に接触させること；
色が現れるように特定の期間待つこと；
前記現れた色を基準の写真と比較すること；及び
前記生物学的サンプル中の前記ホスファターゼの濃度を定量すること
を含む、請求項５１〜５７のいずれか一項に記載の使用。
【請求項６４】
前記測定することが、
固形培地であって、それに生物学的サンプルを付着させるための固形培地を用意すること；
前記生物学的サンプルを前記固形培地に付着させること；
前記固形培地をホスファターゼの基質に接触させること；
画素化された色パターンが現れるように特定の期間待つこと；
写真の画素をカウントすること；
画素数を基準と比較すること；及び
前記生物学的サンプル中の前記ホスファターゼの濃度を定量すること
を含む、請求項５１〜５７のいずれか一項に記載の使用。
【請求項６５】
前記固形培地が、膜、紙、スティック、ガラス、プラスチック、木材、ビーズ、管、瓶、スライド、又はスワブ、好ましくはナイロン膜又はニトロセルロース膜を含む、請求項６１〜６４のいずれか一項に記載の使用。
【請求項６６】
前記ホスファターゼの基質が、ｐ−ニトロフェニルホスフェート、５−ブロモ−４−クロロ−３−インドリルホスフェート／ニトロブルーテトラゾリウム基質系、Fast Red TR／ナフトール基質系、ＣＤＰ−スター基質（２−クロロ−５−（４−メトキシスピロ｛１，２−ジオキセタン−３，２’（５’−クロロ）−トリシクロ［３．３．１．１３．７］デカン｝−４−イル）−１−フェニルホスフェート二ナトリウム塩）、又はこれらの組み合わせを含む、請求項５１〜６５のいずれか一項に記載の使用。
【請求項６７】
前記ホスファターゼが、アルカリホスファターゼ、腸アルカリホスファターゼ、胎盤アルカリホスファターゼ、組織非特異的アルカリホスファターゼ（肝臓／骨／腎臓アルカリホスファターゼ）、生殖細胞アルカリホスファターゼ、好中球アルカリホスファターゼ、酸性ホスファターゼ、又はホスファターゼ活性を有するペプチド、好ましくは腸アルカリホスファターゼを含む、請求項５１〜６６のいずれか一項に記載の使用。
【請求項６８】
前記生物学的サンプルが、便、唾液、尿、血液、血漿、血清、涙液、汗、膿汁、胃液、腸液、眼液、腹水、膣液、脳脊髄液、又は体腔液、好ましくは便サンプルを含む、請求項５１〜６７のいずれか一項に記載の使用。
【請求項６９】
対象からの１つ又は２つ以上の生物学的サンプル中の血清エンドトキシン、炎症誘発性ヌクレオチド、サイトカイン、ケモカイン、サイトカイン受容体のアンタゴニスト、又は抗炎症因子の１つ以上の濃度を測定することを更に含み、前記１つ又は２つ以上の生物学的サンプルが、単一の時点又は複数の時点で収集される、請求項５１〜６８のいずれか一項に記載の使用。
【請求項７０】
前記初期糖尿病又は糖尿病が、２型糖尿病、妊娠性糖尿病、又は崩尿症を含む、請求項５１〜６９のいずれか一項に記載の使用。
【請求項７１】
前記初期代謝疾患又は代謝疾患が、心血管疾患、冠動脈心疾患、脳血管疾患、脳卒中、末梢血管疾患、非アルコール性脂肪肝疾患、網膜症、喘息、慢性肺閉塞性疾患、嚢胞性線維症、アルツハイマー病、関節炎、湿疹、又は乾癬を含む、請求項５１〜６９のいずれか一項に記載の使用。
【請求項７２】
前記初期メタボリックシンドローム又はメタボリックシンドロームが、肥満、高血糖、インスリン耐性、高インスリン血症、脂質異常症、高コレステロール血症、高トリグリセリド血症、低高密度リポタンパク質（ＨＤＬ）、高低密度リポタンパク質（ＬＤＬ）、高血圧、脂肪肝、又はこれらの組み合わせを含む、請求項５１〜６９のいずれか一項に記載の使用。
【請求項７３】
初期糖尿病、初期代謝疾患、初期メタボリックシンドローム、糖尿病、代謝疾患、又はメタボリックシンドロームのリスクを低減する方法又はそれを処置する方法であって、薬学的に有効量のホスファターゼを、それを必要する対象に投与することを含む、方法。
【請求項７４】
前記それを必要とする対象が、平均正常値よりも１％〜１００％低いホスファターゼの濃度を有する、請求項７３に記載の方法。
【請求項７５】
前記それを必要とする対象が、時間経過によるホスファターゼ濃度の持続的な減少を含む時間的ホスファターゼプロファイルを有する、請求項７３に記載の方法。
【請求項７６】
前記持続的な減少が、以前に測定された濃度から約５０％の減少である、請求項７５に記載の方法。
【請求項７７】
前記対象が、ヒト、ウシ、ブタ、ヒツジ、ヤギ、乳牛、ウマ、イヌ、ネコ、サル、ウサギ、ラット、マウス、ニワトリ、又はシチメンチョウであり、好ましくはヒトである、請求項７３〜７６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７８】
前記ホスファターゼが、アルカリホスファターゼ、腸アルカリホスファターゼ、胎盤アルカリホスファターゼ、組織非特異的アルカリホスファターゼ（肝臓／骨／腎臓アルカリホスファターゼ）、生殖細胞アルカリホスファターゼ、好中球アルカリホスファターゼ、哺乳動物アルカリホスファターゼ、細菌アルカリホスファターゼ、真菌アルカリホスファターゼ、酸性ホスファターゼ、又はホスファターゼ活性を有するペプチド、好ましくは腸アルカリホスファターゼを含む、請求項７３〜７７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７９】
前記ホスファターゼが、天然腸アルカリホスファターゼ、組換え腸アルカリホスファターゼ、突然変異腸アルカリホスファターゼ、腸アルカリホスファターゼ活性を有するペプチド、腸アルカリホスファターゼ活性を有する組換えペプチド、天然ヒト腸アルカリホスファターゼ、組換えヒト腸アルカリホスファターゼ、天然仔ウシ腸アルカリホスファターゼ、又は組換え仔ウシ腸アルカリホスファターゼを含む、請求項７３〜７８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８０】
前記ホスファターゼが、経口投与、局所投与、皮下投与、皮内投与、筋内投与、静脈内投与、経膣投与、又は直腸投与される、請求項７３〜７９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８１】
前記ホスファターゼが、食前、食中、又は食後に投与される、請求項７３〜８０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８２】
前記ホスファターゼが、６５〜６５０Ｕ／グラム便の正常範囲内にホスファターゼの定常状態レベルを維持するのに有効な量で投与される、請求項７３〜８１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８３】
前記ホスファターゼが、便１グラム当たり６５〜６５０単位のホスファターゼの定常状態レベルを維持するのに有効な量で投与される、請求項７３〜８２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８４】
前記ホスファターゼが、便１グラム当たり６５単位以上のホスファターゼの定常状態レベルを維持するのに有効な量で投与される、請求項７３〜８３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８５】
前記ホスファターゼが、１投与当たり１〜６，５００単位のホスファターゼの量で投与される、請求項７３〜８４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８６】
前記ホスファターゼが、タブレット、ゲル、カプセル、液体、又は半固体のチューインガムの形態で投薬される、請求項７３〜８５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８７】
前記ホスファターゼが、食物又は飲料に入れて投薬され、前記飲料が、好ましくは乳である、請求項７３〜８６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８８】
前記ホスファターゼが、抗糖尿病薬、抗高血圧薬、抗コレステロール薬、抗うつ病薬、抗生物質、プロバイオティクス、酪酸ナトリウム、甲状腺ホルモン、クルクミン、オメガ−３脂肪酸、β−ラクタマーゼ、タンパク質、ペプチド、又はこれらの組み合わせを含む１つ以上の薬剤と共に投薬される、請求項７３〜８７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８９】
前記初期糖尿病又は糖尿病が、２型糖尿病、妊娠性糖尿病、又は崩尿症を含む、請求項７３〜８８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９０】
前記初期代謝疾患又は代謝疾患が、心血管疾患、冠動脈心疾患、脳血管疾患、脳卒中、末梢血管疾患、非アルコール性脂肪肝疾患、網膜症、喘息、慢性肺閉塞性疾患、嚢胞性線維症、アルツハイマー病、関節炎、湿疹、又は乾癬を含む、請求項７３〜８８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９１】
前記初期メタボリックシンドローム又はメタボリックシンドロームが、肥満、高血糖、インスリン耐性、高インスリン血症、脂質異常症、高コレステロール血症、高トリグリセリド血症、低高密度リポタンパク質（ＨＤＬ）、高低密度リポタンパク質（ＬＤＬ）、高血圧、脂肪肝、又はこれらの組み合わせを含む、請求項７３〜８８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９２】
初期糖尿病、初期代謝疾患、初期メタボリックシンドローム、糖尿病、代謝疾患、又はメタボリックシンドロームのリスクを低減するため又はそれを処置するためのホスファターゼの使用。
【請求項９３】
前記初期糖尿病、初期代謝疾患、初期メタボリックシンドローム、糖尿病、代謝疾患、又はメタボリックシンドロームが、平均正常値よりも１％〜１００％低いホスファターゼの濃度を有する対象によって特徴付けられる、請求項９２に記載の使用。
【請求項９４】
前記初期糖尿病、初期代謝疾患、初期メタボリックシンドローム、糖尿病、代謝疾患、又はメタボリックシンドロームが、時間経過によるホスファターゼ濃度の持続的な減少を含む時間的ホスファターゼプロファイルを有する対象によって特徴付けられる、請求項９２に記載の使用。
【請求項９５】
前記持続的な減少が、以前に測定された濃度から約５０％の減少である、請求項９４に記載の使用。
【請求項９６】
前記対象が、ヒト、ウシ、ブタ、ヒツジ、ヤギ、乳牛、ウマ、イヌ、ネコ、サル、ウサギ、ラット、マウス、ニワトリ、又はシチメンチョウであり、好ましくはヒトである、請求項９３〜９５のいずれか一項に記載の使用。
【請求項９７】
前記ホスファターゼが、アルカリホスファターゼ、腸アルカリホスファターゼ、胎盤アルカリホスファターゼ、組織非特異的アルカリホスファターゼ（肝臓／骨／腎臓アルカリホスファターゼ）、生殖細胞アルカリホスファターゼ、好中球アルカリホスファターゼ、哺乳動物アルカリホスファターゼ、細菌アルカリホスファターゼ、真菌アルカリホスファターゼ、酸性ホスファターゼ、又はホスファターゼ活性を有するペプチド、好ましくは腸アルカリホスファターゼを含む、請求項９２〜９６のいずれか一項に記載の使用。
【請求項９８】
前記ホスファターゼが、天然腸アルカリホスファターゼ、組換え腸アルカリホスファターゼ、突然変異腸アルカリホスファターゼ、腸アルカリホスファターゼ活性を有するペプチド、腸アルカリホスファターゼ活性を有する組換えペプチド、天然ヒト腸アルカリホスファターゼ、組換えヒト腸アルカリホスファターゼ、天然仔ウシ腸アルカリホスファターゼ、又は組換え仔ウシ腸アルカリホスファターゼを含む、請求項９２〜９７のいずれか一項に記載の使用。
【請求項９９】
前記ホスファターゼが、経口投与、局所投与、皮下投与、皮内投与、筋内投与、静脈内投与、経膣投与、又は直腸投与用である、請求項９２〜９８のいずれか一項に記載の使用。
【請求項１００】
前記投与が、食前、食中、又は食後である、請求項９９に記載の使用。
【請求項１０１】
前記投与が、６５〜６５０Ｕ／グラム便の正常範囲内にホスファターゼの定常状態レベルを維持するのに有効な量である、請求項９９又は１００に記載の使用。
【請求項１０２】
前記投与が、便１グラム当たり６５〜６５０単位のホスファターゼの定常状態レベルを維持するのに有効な量である、請求項９９〜１０１のいずれか一項に記載の使用。
【請求項１０３】
前記投与が、便１グラム当たり約６５単位以上のホスファターゼの定常状態レベルを維持するのに有効な量である、請求項９９〜１０２のいずれか一項に記載の使用。
【請求項１０４】
前記投与が、１投与当たり１〜６，５００単位のホスファターゼの量である、請求項９９〜１０３のいずれか一項に記載の使用。
【請求項１０５】
前記ホスファターゼが、タブレット、ゲル、カプセル、液体、又は半固体のチューインガムの形態で投薬される、請求項９２〜１０４のいずれか一項に記載の使用。
【請求項１０６】
前記ホスファターゼが、食物又は飲料に入れて投薬され、前記飲料が、好ましくは乳である、請求項９２〜１０５のいずれか一項に記載の使用。
【請求項１０７】
前記ホスファターゼが、抗糖尿病薬、抗高血圧薬、抗コレステロール薬、抗うつ病薬、抗生物質、プロバイオティクス、酪酸ナトリウム、甲状腺ホルモン、クルクミン、オメガ−３脂肪酸、β−ラクタマーゼ、タンパク質、ペプチド、又はこれらの組み合わせを含む１つ以上の薬剤と共に投薬される、請求項９２〜１０６のいずれか一項に記載の使用。
【請求項１０８】
前記初期糖尿病又は糖尿病が、２型糖尿病、妊娠性糖尿病、又は崩尿症を含む、請求項９２〜１０７のいずれか一項に記載の使用。
【請求項１０９】
前記初期代謝疾患又は代謝疾患が、心血管疾患、冠動脈心疾患、脳血管疾患、脳卒中、末梢血管疾患、非アルコール性脂肪肝疾患、網膜症、喘息、慢性肺閉塞性疾患、嚢胞性線維症、アルツハイマー病、関節炎、湿疹、又は乾癬を含む、請求項９２〜１０７のいずれか一項に記載の使用。
【請求項１１０】
前記初期メタボリックシンドローム又はメタボリックシンドロームが、肥満、高血糖、インスリン耐性、高インスリン血症、脂質異常症、高コレステロール血症、高トリグリセリド血症、低高密度リポタンパク質（ＨＤＬ）、高低密度リポタンパク質（ＬＤＬ）、高血圧、脂肪肝、又はこれらの組み合わせを含む、請求項９２〜１０７のいずれか一項に記載の使用。
【請求項１１１】
初期糖尿病、初期代謝疾患、初期メタボリックシンドローム、糖尿病、代謝疾患、又はメタボリックシンドロームのリスクの低減に使用される又はその処置に使用されるホスファターゼを含む医薬組成物。
【請求項１１２】
前記初期糖尿病、初期代謝疾患、初期メタボリックシンドローム、糖尿病、代謝疾患、又はメタボリックシンドロームが、平均正常値よりも１％〜１００％低いホスファターゼの濃度を有する対象によって特徴付けられる、請求項１１１に記載の医薬組成物。
【請求項１１３】
前記初期糖尿病、初期代謝疾患、初期メタボリックシンドローム、糖尿病、代謝疾患、又はメタボリックシンドロームが、時間経過によるホスファターゼ濃度の持続的な減少を含む時間的ホスファターゼプロファイルを有する対象によって特徴付けられる、請求項１１１に記載の医薬組成物。
【請求項１１４】
前記持続的な減少が、以前に測定された濃度から約５０％の減少である、請求項１１３に記載の医薬組成物。
【請求項１１５】
前記対象が、ヒト、ウシ、ブタ、ヒツジ、ヤギ、乳牛、ウマ、イヌ、ネコ、サル、ウサギ、ラット、マウス、ニワトリ、又はシチメンチョウであり、好ましくはヒトである、請求項１１２〜１１４のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項１１６】
前記ホスファターゼが、アルカリホスファターゼ、腸アルカリホスファターゼ、胎盤アルカリホスファターゼ、組織非特異的アルカリホスファターゼ（肝臓／骨／腎臓アルカリホスファターゼ）、生殖細胞アルカリホスファターゼ、好中球アルカリホスファターゼ、哺乳動物アルカリホスファターゼ、細菌アルカリホスファターゼ、真菌アルカリホスファターゼ、酸性ホスファターゼ、又はホスファターゼ活性を有するペプチド、好ましくは腸アルカリホスファターゼを含む、請求項１１１〜１１５のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項１１７】
前記ホスファターゼが、天然腸アルカリホスファターゼ、組換え腸アルカリホスファターゼ、突然変異腸アルカリホスファターゼ、腸アルカリホスファターゼ活性を有するペプチド、腸アルカリホスファターゼ活性を有する組換えペプチド、天然ヒト腸アルカリホスファターゼ、組換えヒト腸アルカリホスファターゼ、天然仔ウシ腸アルカリホスファターゼ、又は組換え仔ウシ腸アルカリホスファターゼを含む、請求項１１１〜１１６のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項１１８】
前記ホスファターゼが、経口投与、局所投与、皮下投与、皮内投与、筋内投与、静脈内投与、経膣投与、又は直腸投与用である、請求項１１１〜１１７のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項１１９】
前記投与が、食前、食中、又は食後である、請求項１１８に記載の医薬組成物。
【請求項１２０】
前記投与が、６５〜６５０Ｕ／グラム便の正常範囲内にホスファターゼの定常状態レベルを維持するのに有効な量である、請求項１１８又は１１９に記載の医薬組成物。
【請求項１２１】
前記投与が、便１グラム当たり６５〜６５０単位のホスファターゼの定常状態レベルを維持するのに有効な量である、請求項１１８〜１２０のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項１２２】
前記投与が、便１グラム当たり約６５単位以上のホスファターゼの定常状態レベルを維持するのに有効な量である、請求項１１８〜１２１のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項１２３】
前記投与が、１投与当たり１〜６，５００単位のホスファターゼの量である、請求項１１８〜１２２のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項１２４】
前記ホスファターゼが、タブレット、ゲル、カプセル、液体、又は半固体のチューインガムの形態で投薬される、請求項１２１〜１２３のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項１２５】
前記ホスファターゼが、食物又は飲料に入れて投薬され、前記飲料が、好ましくは乳である、請求項１２１〜１２４のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項１２６】
前記ホスファターゼが、抗糖尿病薬、抗高血圧薬、抗コレステロール薬、抗うつ病薬、抗生物質、プロバイオティクス、酪酸ナトリウム、甲状腺ホルモン、クルクミン、オメガ−３脂肪酸、β−ラクタマーゼ、タンパク質、ペプチド、又はこれらの組み合わせを含む１つ以上の薬剤と共に投薬される、請求項１２１〜１２５のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項１２７】
前記初期糖尿病又は糖尿病が、２型糖尿病、妊娠性糖尿病、又は崩尿症を含む、請求項１２１〜１２６のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項１２８】
前記初期代謝疾患又は代謝疾患が、心血管疾患、冠動脈心疾患、脳血管疾患、脳卒中、末梢血管疾患、非アルコール性脂肪肝疾患、網膜症、喘息、慢性肺閉塞性疾患、嚢胞性線維症、アルツハイマー病、関節炎、湿疹、又は乾癬を含む、請求項１２１〜１２６のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項１２９】
前記初期メタボリックシンドローム又はメタボリックシンドロームが、肥満、高血糖、インスリン耐性、高インスリン血症、脂質異常症、高コレステロール血症、高トリグリセリド血症、低高密度リポタンパク質（ＨＤＬ）、高低密度リポタンパク質（ＬＤＬ）、高血圧、脂肪肝、又はこれらの組み合わせを含む、請求項１２１〜１２６のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項１３０】
初期糖尿病、初期代謝疾患、初期メタボリックシンドローム、糖尿病、代謝疾患、又はメタボリックシンドロームのリスクを低減するため又はそれを処置するための薬剤の調製におけるホスファターゼの使用。
【請求項１３１】
前記初期糖尿病、初期代謝疾患、初期メタボリックシンドローム、糖尿病、代謝疾患、又はメタボリックシンドロームが、平均正常値よりも１％〜１００％低いホスファターゼの濃度を有する対象によって特徴付けられる、請求項１３０に記載の使用。
【請求項１３２】
前記初期糖尿病、初期代謝疾患、初期メタボリックシンドローム、糖尿病、代謝疾患、又はメタボリックシンドロームが、時間経過によるホスファターゼ濃度の持続的な減少を含む時間的ホスファターゼプロファイルを有する対象によって特徴付けられる、請求項１３０に記載の使用。
【請求項１３３】
前記持続的な減少が、以前に測定された濃度から約５０％の減少である、請求項１３２に記載の使用。
【請求項１３４】
前記対象が、ヒト、ウシ、ブタ、ヒツジ、ヤギ、乳牛、ウマ、イヌ、ネコ、サル、ウサギ、ラット、マウス、ニワトリ、又はシチメンチョウであり、好ましくはヒトである、請求項１３１〜１３３のいずれか一項に記載の使用。
【請求項１３５】
前記ホスファターゼが、アルカリホスファターゼ、腸アルカリホスファターゼ、胎盤アルカリホスファターゼ、組織非特異的アルカリホスファターゼ（肝臓／骨／腎臓アルカリホスファターゼ）、生殖細胞アルカリホスファターゼ、好中球アルカリホスファターゼ、哺乳動物アルカリホスファターゼ、細菌アルカリホスファターゼ、真菌アルカリホスファターゼ、酸性ホスファターゼ、又はホスファターゼ活性を有するペプチド、好ましくは腸アルカリホスファターゼを含む、請求項１３０〜１３４のいずれか一項に記載の使用。
【請求項１３６】
前記ホスファターゼが、天然腸アルカリホスファターゼ、組換え腸アルカリホスファターゼ、突然変異腸アルカリホスファターゼ、腸アルカリホスファターゼ活性を有するペプチド、腸アルカリホスファターゼ活性を有する組換えペプチド、天然ヒト腸アルカリホスファターゼ、組換えヒト腸アルカリホスファターゼ、天然仔ウシ腸アルカリホスファターゼ、又は組換え仔ウシ腸アルカリホスファターゼを含む、請求項１３０〜１３５のいずれか一項に記載の使用。
【請求項１３７】
前記ホスファターゼが、経口投与、局所投与、皮下投与、皮内投与、筋内投与、静脈内投与、経膣投与、又は直腸投与用である、請求項１３０〜１３６のいずれか一項に記載の使用。
【請求項１３８】
前記投与が、食前、食中、又は食後である、請求項１３７に記載の使用。
【請求項１３９】
前記投与が、６５〜６５０Ｕ／グラム便の正常範囲内にホスファターゼの定常状態レベルを維持するのに有効な量である、請求項１３７又は１３８に記載の使用。
【請求項１４０】
前記投与が、便１グラム当たり６５〜６５０単位のホスファターゼの定常状態レベルを維持するのに有効な量である、請求項１３７〜１３９のいずれか一項に記載の使用。
【請求項１４１】
前記投与が、便１グラム当たり約６５単位以上のホスファターゼの定常状態レベルを維持するのに有効な量である、請求項１３７〜１４０のいずれか一項に記載の使用。
【請求項１４２】
前記投与が、１投与当たり１〜６，５００単位のホスファターゼの量である、請求項１３７〜１４１のいずれか一項に記載の使用。
【請求項１４３】
前記ホスファターゼが、タブレット、ゲル、カプセル、液体、又は半固体のチューインガムの形態で投薬される、請求項１３０〜１４２のいずれか一項に記載の使用。
【請求項１４４】
前記ホスファターゼが、食物又は飲料に入れて投薬され、前記飲料が、好ましくは乳である、請求項１３０〜１４３のいずれか一項に記載の使用。
【請求項１４５】
前記ホスファターゼが、抗糖尿病薬、抗高血圧薬、抗コレステロール薬、抗うつ病薬、抗生物質、プロバイオティクス、酪酸ナトリウム、甲状腺ホルモン、クルクミン、オメガ−３脂肪酸、β−ラクタマーゼ、タンパク質、ペプチド、又はこれらの組み合わせを含む１つ以上の薬剤と共に投薬される、請求項１３０〜１４４のいずれか一項に記載の使用。
【請求項１４６】
前記初期糖尿病又は糖尿病が、２型糖尿病、妊娠性糖尿病、又は崩尿症を含む、請求項１３０〜１４５のいずれか一項に記載の使用。
【請求項１４７】
前記初期代謝疾患又は代謝疾患が、心血管疾患、冠動脈心疾患、脳血管疾患、脳卒中、末梢血管疾患、非アルコール性脂肪肝疾患、網膜症、喘息、慢性肺閉塞性疾患、嚢胞性線維症、アルツハイマー病、関節炎、湿疹、又は乾癬を含む、請求項１３０〜１４５のいずれか一項に記載の使用。
【請求項１４８】
前記初期メタボリックシンドローム又はメタボリックシンドロームが、肥満、高血糖、インスリン耐性、高インスリン血症、脂質異常症、高コレステロール血症、高トリグリセリド血症、低高密度リポタンパク質（ＨＤＬ）、高低密度リポタンパク質（ＬＤＬ）、高血圧、脂肪肝、又はこれらの組み合わせを含む、請求項１３０〜１４５のいずれか一項に記載の使用。
【請求項１４９】
便中のホスファターゼの濃度を決定するためのキットであって、規定量の便を測定するための器具、便希釈緩衝液又は水、ホスファターゼの基質、及びホスファターゼアッセイ緩衝液を含む、キット。
【請求項１５０】
前記ホスファターゼの基質が、ｐ−ニトロフェニルホスフェート、５−ブロモ−４−クロロ−３−インドリルホスフェート／ニトロブルーテトラゾリウム基質系、Fast Red TR／ナフトール基質系、ＣＤＰ−スター基質（２−クロロ−５−（４−メトキシスピロ｛１，２−ジオキセタン−３，２’（５’−クロロ）−トリシクロ［３．３．１．１３．７］デカン｝−４−イル）−１−フェニルホスフェート二ナトリウム塩）、又はこれらの組み合わせを含む、請求項１４９に記載のキット。
【請求項１５１】
前記ホスファターゼの基質が、固形若しくは液体の形態で用意されるか、又は固形培地に付着され、前記固形培地が、膜、紙、スティック、ガラス、プラスチック、木材、ビーズ、管、瓶、スライド、若しくはスワブ、好ましくは紙又は管を含む、請求項１４９又は１５０に記載のキット。
【請求項１５２】
前記便サンプルが固形培地に付着され、前記固形培地が、膜、紙、スティック、ガラス、プラスチック、木材、ビーズ、管、瓶、スライド、又はスワブ、好ましくはナイロン膜又はニトロセルロース膜を含む、請求項１４９〜１５１のいずれか一項に記載のキット。
【請求項１５３】
規定量の便を測定するための器具、濾過装置に装着される瓶又は管、及びホスファターゼアッセイ緩衝液と混合されたホスファターゼの基質を含む管を含む、請求項１４９〜１５２のいずれか一項に記載のキット。
【請求項１５４】
前記ホスファターゼが、アルカリホスファターゼ、腸アルカリホスファターゼ、胎盤アルカリホスファターゼ、組織非特異的アルカリホスファターゼ（肝臓／骨／腎臓アルカリホスファターゼ）、生殖細胞アルカリホスファターゼ、好中球アルカリホスファターゼ、酸性ホスファターゼ、又はホスファターゼ活性を有するペプチド、好ましくは腸アルカリホスファターゼを含む、請求項１４９〜１５３のいずれか一項に記載のキット。
【請求項１５５】
便の代わりに、唾液、尿、血液、血漿、血清、胃液、腸液、眼液、腹水、膣液、又は体腔液を含む生物学的サンプルが使用される、請求項１４９〜１５４のいずれか一項に記載のキット。
【請求項１５６】
便サンプル中のホスファターゼの濃度を決定するためのキットの使用であって、前記キットが、規定量の便を測定するための器具、便サンプル希釈緩衝液、ホスファターゼの基質、及びホスファターゼアッセイ緩衝液を含む、使用。
【請求項１５７】
前記ホスファターゼの基質が、ｐ−ニトロフェニルホスフェート、５−ブロモ−４−クロロ−３−インドリルホスフェート／ニトロブルーテトラゾリウム基質系、Fast Red TR／ナフトール基質系、ＣＤＰ−スター基質（２−クロロ−５−（４−メトキシスピロ｛１，２−ジオキセタン−３，２’（５’−クロロ）−トリシクロ［３．３．１．１３．７］デカン｝−４−イル）−１−フェニルホスフェート二ナトリウム塩）、又はこれらの組み合わせを含む、請求項１５６に記載の使用。
【請求項１５８】
前記ホスファターゼの基質が、固形若しくは液体の形態で用意されるか、又は固形培地に付着され、前記固形培地が、膜、紙、スティック、ガラス、プラスチック、木材、ビーズ、管、瓶、スライド、若しくはスワブ、好ましくは紙又は管を含む、請求項１５６又は１５７に記載の使用。
【請求項１５９】
前記便サンプルが固形培地に付着され、前記固形培地が、膜、紙、スティック、ガラス、プラスチック、木材、ビーズ、管、瓶、スライド、又はスワブ、好ましくはナイロン膜又はニトロセルロース膜を含む、請求項１５６〜１５８のいずれか一項に記載の使用。
【請求項１６０】
前記キットが、規定量の便を測定するための器具、濾過装置に装着される瓶又は管、及びホスファターゼアッセイ緩衝液と混合されたホスファターゼの基質を含む管を含む、請求項１５６〜１５９のいずれか一項に記載の使用。
【請求項１６１】
前記ホスファターゼが、アルカリホスファターゼ、腸アルカリホスファターゼ、胎盤アルカリホスファターゼ、組織非特異的アルカリホスファターゼ（肝臓／骨／腎臓アルカリホスファターゼ）、生殖細胞アルカリホスファターゼ、好中球アルカリホスファターゼ、酸性ホスファターゼ、又はホスファターゼ活性を有するペプチド、好ましくは腸アルカリホスファターゼを含む、請求項１５６〜１６０のいずれか一項に記載の使用。
【請求項１６２】
前記便の代わりに、唾液、尿、血液、血漿、血清、胃液、腸液、眼液、腹水、膣液、又は体腔液を含む生物学的サンプルが使用される、請求項１５６〜１６１のいずれか一項に記載の使用。
【請求項１６３】
初期糖尿病、初期代謝疾患、初期メタボリックシンドローム、糖尿病、代謝疾患、又はメタボリックシンドロームを検出するためのキットであって、規定量の便を測定するための器具、便希釈緩衝液、ホスファターゼの基質、及びホスファターゼアッセイ緩衝液を含む、キット。
【請求項１６４】
前記初期糖尿病、初期代謝疾患、初期メタボリックシンドローム、糖尿病、代謝疾患、又はメタボリックシンドロームが、平均正常値よりも１％〜１００％低いホスファターゼの濃度を有する対象によって特徴付けられる、請求項１６３に記載のキット。
【請求項１６５】
前記初期糖尿病、初期代謝疾患、初期メタボリックシンドローム、糖尿病、代謝疾患、又はメタボリックシンドロームが、時間経過によるホスファターゼ濃度の持続的な減少を含む時間的ホスファターゼプロファイルを有する対象によって特徴付けられる、請求項１６３に記載のキット。
【請求項１６６】
前記持続的な減少が、以前に測定された濃度から約５０％の減少である、請求項１６５に記載のキット。
【請求項１６７】
前記対象が、ヒト、ウシ、ブタ、ヒツジ、ヤギ、乳牛、ウマ、イヌ、ネコ、サル、ウサギ、ラット、マウス、ニワトリ、又はシチメンチョウであり、好ましくはヒトである、請求項１６３〜１６６のいずれか一項に記載のキット。
【請求項１６８】
前記ホスファターゼの基質が、ｐ−ニトロフェニルホスフェート、５−ブロモ−４−クロロ−３−インドリルホスフェート／ニトロブルーテトラゾリウム基質系、Fast Red TR／ナフトール基質系、ＣＤＰ−スター基質（２−クロロ−５−（４−メトキシスピロ｛１，２−ジオキセタン−３，２’（５’−クロロ）−トリシクロ［３．３．１．１３．７］デカン｝−４−イル）−１−フェニルホスフェート二ナトリウム塩）、又はこれらの組み合わせを含む、請求項１６３〜１６７のいずれか一項に記載のキット。
【請求項１６９】
前記ホスファターゼの基質が、固形若しくは液体の形態で用意されるか、又は固形培地に付着され、前記固形培地が、膜、紙、スティック、ガラス、プラスチック、木材、ビーズ、管、瓶、スライド、若しくはスワブ、好ましくは紙又は管を含む、請求項１６３〜１６８のいずれか一項に記載のキット。
【請求項１７０】
前記便サンプルが固形培地に付着され、前記固形培地が、膜、紙、スティック、ガラス、プラスチック、木材、ビーズ、管、瓶、スライド、又はスワブ、好ましくはナイロン膜又はニトロセルロース膜を含む、請求項１６３〜１６９のいずれか一項に記載のキット。
【請求項１７１】
規定量の便を測定するための器具、濾過装置に装着される瓶又は管、及びホスファターゼアッセイ緩衝液と混合されたホスファターゼの基質を含む管を含む、請求項１６３〜１７０のいずれか一項に記載のキット。
【請求項１７２】
前記ホスファターゼが、アルカリホスファターゼ、腸アルカリホスファターゼ、胎盤アルカリホスファターゼ、組織非特異的アルカリホスファターゼ（肝臓／骨／腎臓アルカリホスファターゼ）、生殖細胞アルカリホスファターゼ、好中球アルカリホスファターゼ、酸性ホスファターゼ、又はホスファターゼ活性を有するペプチド、好ましくは腸アルカリホスファターゼを含む、請求項１６３〜１７１のいずれか一項に記載のキット。
【請求項１７３】
前記対象が生物学的サンプルを提供し、前記生物学的サンプルが、便、唾液、尿、血液、血漿、血清、涙液、汗、膿汁、胃液、腸液、眼液、腹水、膣液、脳脊髄液、又は体腔液、好ましくは便サンプルを含む、請求項１６３〜１７２のいずれか一項に記載のキット。
【請求項１７４】
対象からの１つ又は２つ以上の生物学的サンプル中の血清エンドトキシン、炎症誘発性ヌクレオチド、サイトカイン、ケモカイン、サイトカイン受容体のアンタゴニスト、又は抗炎症因子の１つ以上の濃度を測定するための手段を更に含み、前記１つ又は２つ以上の生物学的サンプルが、単一の時点又は複数の時点で収集される、請求項１６３〜１７３のいずれか一項に記載のキット。
【請求項１７５】
前記初期糖尿病又は糖尿病が、２型糖尿病、妊娠性糖尿病、又は崩尿症を含む、請求項１６３〜１７４のいずれか一項に記載のキット。
【請求項１７６】
前記初期代謝疾患又は代謝疾患が、心血管疾患、冠動脈心疾患、脳血管疾患、脳卒中、末梢血管疾患、非アルコール性脂肪肝疾患、網膜症、喘息、慢性肺閉塞性疾患、嚢胞性線維症、アルツハイマー病、関節炎、湿疹、又は乾癬を含む、請求項１６３〜１７４のいずれか一項に記載のキット。
【請求項１７７】
前記初期メタボリックシンドローム又はメタボリックシンドロームが、肥満、高血糖、インスリン耐性、高インスリン血症、脂質異常症、高コレステロール血症、高トリグリセリド血症、低高密度リポタンパク質（ＨＤＬ）、高低密度リポタンパク質（ＬＤＬ）、高血圧、脂肪肝、又はこれらの組み合わせを含む、請求項１６３〜１７４のいずれか一項に記載のキット。
【請求項１７８】
初期糖尿病、初期代謝疾患、初期メタボリックシンドローム、糖尿病、代謝疾患、又はメタボリックシンドロームを検出するためのキットの使用であって、前記キットが、規定量の便を測定するための器具、便希釈緩衝液、ホスファターゼの基質、及びホスファターゼアッセイ緩衝液を含む、使用。
【請求項１７９】
前記初期糖尿病、初期代謝疾患、初期メタボリックシンドローム、糖尿病、代謝疾患、又はメタボリックシンドロームが、平均正常値よりも１％〜１００％低いホスファターゼの濃度を有する対象によって特徴付けられる、請求項１７８に記載の使用。
【請求項１８０】
前記初期糖尿病、初期代謝疾患、初期メタボリックシンドローム、糖尿病、代謝疾患、又はメタボリックシンドロームが、時間経過によるホスファターゼ濃度の持続的な減少を含む時間的ホスファターゼプロファイルを有する対象によって特徴付けられる、請求項１７８に記載の使用。
【請求項１８１】
前記持続的な減少が、以前に測定された濃度から約５０％の減少である、請求項１８０に記載の使用。
【請求項１８２】
前記対象が、ヒト、ウシ、ブタ、ヒツジ、ヤギ、乳牛、ウマ、イヌ、ネコ、サル、ウサギ、ラット、マウス、ニワトリ、シチメンチョウであり、好ましくはヒトである、請求項１７９〜１８１のいずれか一項に記載の使用。
【請求項１８３】
前記ホスファターゼの基質が、ｐ−ニトロフェニルホスフェート、５−ブロモ−４−クロロ−３−インドリルホスフェート／ニトロブルーテトラゾリウム基質系、Fast Red TR／ナフトール基質系、ＣＤＰ−スター基質（２−クロロ−５−（４−メトキシスピロ｛１，２−ジオキセタン−３，２’（５’−クロロ）−トリシクロ［３．３．１．１３．７］デカン｝−４−イル）−１−フェニルホスフェート二ナトリウム塩）、又はこれらの組み合わせを含む、請求項１７８〜１８２のいずれか一項に記載の使用。
【請求項１８４】
前記ホスファターゼの基質が、固形若しくは液体の形態で用意されるか、又は固形培地に付着され、前記固形培地が、膜、紙、スティック、ガラス、プラスチック、木材、ビーズ、管、瓶、スライド、若しくはスワブ、好ましくは紙又は管を含む、請求項１７８〜１８３のいずれか一項に記載の使用。
【請求項１８５】
前記便サンプルが固形培地に付着され、前記固形培地が、膜、紙、スティック、ガラス、プラスチック、木材、ビーズ、管、瓶、スライド、又はスワブ、好ましくはナイロン膜又はニトロセルロース膜を含む、請求項１７８〜１８４のいずれか一項に記載の使用。
【請求項１８６】
前記キットが、規定量の便を測定するための器具、濾過装置に装着される瓶又は管、及びホスファターゼアッセイ緩衝液と混合されたホスファターゼの基質を含む管を含む、請求項１７８〜１８５のいずれか一項に記載の使用。
【請求項１８７】
前記ホスファターゼが、アルカリホスファターゼ、腸アルカリホスファターゼ、胎盤アルカリホスファターゼ、組織非特異的アルカリホスファターゼ（肝臓／骨／腎臓アルカリホスファターゼ）、生殖細胞アルカリホスファターゼ、好中球アルカリホスファターゼ、酸性ホスファターゼ、又はホスファターゼ活性を有するペプチド、好ましくは腸アルカリホスファターゼを含む、請求項１７８〜１８６のいずれか一項に記載の使用。
【請求項１８８】
前記対象が生物学的サンプルを提供し、前記生物学的サンプルが、便、唾液、尿、血液、血漿、血清、涙液、汗、膿汁、胃液、腸液、眼液、腹水、膣液、脳脊髄液、又は体腔液、好ましくは便サンプルを含む、請求項１７８〜１８７のいずれか一項に記載の使用。
【請求項１８９】
前記キットが、対象からの１つ又は２つ以上の生物学的サンプル中の血清エンドトキシン、炎症誘発性ヌクレオチド、サイトカイン、ケモカイン、サイトカイン受容体のアンタゴニスト、又は抗炎症因子の１つ以上の濃度を測定するための手段を更に含み、前記１つ又は２つ以上の生物学的サンプルが、単一の時点又は複数の時点で収集される、請求項１７８〜１８８のいずれか一項に記載の使用。
【請求項１９０】
前記初期糖尿病又は糖尿病が、２型糖尿病、妊娠性糖尿病、又は崩尿症を含む、請求項１７８〜１８９のいずれか一項に記載の使用。
【請求項１９１】
前記初期代謝疾患又は代謝疾患が、心血管疾患、冠動脈心疾患、脳血管疾患、脳卒中、末梢血管疾患、非アルコール性脂肪肝疾患、網膜症、喘息、慢性肺閉塞性疾患、嚢胞性線維症、アルツハイマー病、関節炎、湿疹、又は乾癬を含む、請求項１７８〜１８９のいずれか一項に記載の使用。
【請求項１９２】
前記初期メタボリックシンドローム又はメタボリックシンドロームが、肥満、高血糖、インスリン耐性、高インスリン血症、脂質異常症、高コレステロール血症、高トリグリセリド血症、低高密度リポタンパク質（ＨＤＬ）、高低密度リポタンパク質（ＬＤＬ）、高血圧、脂肪肝、又はこれらの組み合わせを含む、請求項１７８〜１８９のいずれか一項に記載の使用。
【請求項１９３】
初期糖尿病、初期代謝疾患、初期メタボリックシンドローム、糖尿病、代謝疾患、又はメタボリックシンドロームの予後を決定するための方法であって、対象からの１つ又は２つ以上の生物学的サンプル中のホスファターゼの濃度を測定することを含む、時間的ホスファターゼプロファイルを作成することを含み、前記１つ又は２つ以上の生物学的サンプルが、単一の時点又は複数の時点で収集される、方法。
【請求項１９４】
前記複数の時点が、毎日、毎週、毎月、又は毎年を含む、請求項１９３に記載の方法。
【請求項１９５】
時間経過によるホスファターゼ濃度の増加を含む前記時間的ホスファターゼプロファイルが、初期糖尿病、初期代謝疾患、初期メタボリックシンドローム、糖尿病、代謝疾患、又はメタボリックシンドロームの症状の軽減又はそのリスクの低減についての良好な予後を示唆し、且つ時間経過によるホスファターゼ濃度の減少が、初期糖尿病、初期代謝疾患、初期メタボリックシンドローム、糖尿病、代謝疾患、又はメタボリックシンドロームの症状の軽減又はそのリスクの低減についての不良な予後を示唆する、請求項１９３又は１９４に記載の方法。
【請求項１９６】
前記増加又は減少が、以前に測定された濃度から約５０％の変化である、請求項１９５に記載の方法。
【請求項１９７】
前記増加が、６５〜６５０Ｕ／グラム便のほぼ正常範囲内であるホスファターゼの濃度までである、請求項１９５に記載の方法。
【請求項１９８】
前記減少が、平均正常値よりも１％〜１００％低いホスファターゼの濃度までである、請求項１９５に記載の方法。
【請求項１９９】
前記対象が、ヒト、ウシ、ブタ、ヒツジ、ヤギ、乳牛、ウマ、イヌ、ネコ、サル、ウサギ、ラット、マウス、ニワトリ、又はシチメンチョウであり、好ましくはヒトである、請求項１９３〜１９８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２００】
前記測定することが、
ホスファターゼの基質を固形又は液体の形態で用意すること；
前記ホスファターゼの基質を生物学的サンプルに接触させること；
色が現れるように特定の期間待つこと；
前記現れた色を基準の写真と比較すること；及び
前記生物学的サンプル中の前記ホスファターゼの濃度を定量すること
を含む、請求項１９３〜１９９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２０１】
前記測定することが、
ホスファターゼの基質を固形又は液体の形態で用意すること；
前記ホスファターゼの基質を生物学的サンプルに接触させること；
色が現れるように特定の期間待つこと；
写真の画素をカウントすること；
画素数を基準と比較すること；及び
前記生物学的サンプル中の前記ホスファターゼの濃度を定量すること
を含む、請求項１９３〜１９９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２０２】
前記測定することが、
ホスファターゼの基質を固形又は液体の形態で用意すること；
前記ホスファターゼの基質を生物学的サンプルに接触させること；
酵素反応が起きるように特定の期間待つこと；及び
分光光度計、生化学分析装置、高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）装置、比色計、照度計、又は機械、生化学、電気、若しくは電子装置を用いて前記生物学的サンプル中の前記ホスファターゼの濃度を定量すること
を含む、請求項１９３〜１９９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２０３】
前記測定することが、
固形培地であって、それに付着したホスファターゼの基質を有する固形培地を用意すること；
前記固形培地を生物学的サンプルに接触させること；
色が現れるように特定の期間待つこと；
前記現れた色を基準の写真と比較すること；及び
前記生物学的サンプル中の前記ホスファターゼの濃度を定量すること
を含む、請求項１９３〜１９９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２０４】
前記測定することが、
固形培地であって、それに付着したホスファターゼの基質を有する固形培地を用意すること；
前記固形培地を生物学的サンプルに接触させること；
画素化された色パターンが現れるように特定の期間待つこと；
写真の画素をカウントすること；
画素数を基準と比較すること；及び
前記生物学的サンプル中の前記ホスファターゼの濃度を定量すること
を含む、請求項１９３〜１９９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２０５】
前記測定することが、
固形培地であって、それに生物学的サンプルを付着させるための固形培地を用意すること；
前記生物学的サンプルを前記固形培地に付着させること；
前記固形培地をホスファターゼの基質に接触させること；
色が現れるように特定の期間待つこと；
前記現れた色を基準の写真と比較すること；及び
前記生物学的サンプル中の前記ホスファターゼの濃度を定量すること
を含む、請求項１９３〜１９９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２０６】
前記測定することが、
固形培地であって、それに生物学的サンプルを付着させるための固形培地を用意すること；
前記生物学的サンプルを前記固形培地に付着させること；
前記固形培地をホスファターゼの基質に接触させること；
画素化された色パターンが現れるように特定の期間待つこと；
写真の画素をカウントすること；
画素数を基準と比較すること；及び
前記生物学的サンプル中の前記ホスファターゼの濃度を定量すること
を含む、請求項１９３〜１９９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２０７】
前記固形培地が、膜、紙、スティック、ガラス、プラスチック、木材、ビーズ、管、瓶、スライド、又はスワブ、好ましくはナイロン膜又はニトロセルロース膜を含む、請求項２０３〜２０６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２０８】
前記ホスファターゼの基質が、ｐ−ニトロフェニルホスフェート、５−ブロモ−４−クロロ−３−インドリルホスフェート／ニトロブルーテトラゾリウム基質系、Fast Red TR／ナフトール基質系、ＣＤＰ−スター基質（２−クロロ−５−（４−メトキシスピロ｛１，２−ジオキセタン−３，２’（５’−クロロ）−トリシクロ［３．３．１．１３．７］デカン｝−４−イル）−１−フェニルホスフェート二ナトリウム塩）、又はこれらの組み合わせを含む、請求項２００〜２０７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２０９】
前記ホスファターゼが、アルカリホスファターゼ、腸アルカリホスファターゼ、胎盤アルカリホスファターゼ、組織非特異的アルカリホスファターゼ（肝臓／骨／腎臓アルカリホスファターゼ）、生殖細胞アルカリホスファターゼ、好中球アルカリホスファターゼ、酸性ホスファターゼ、又はホスファターゼ活性を有するペプチド、好ましくは腸アルカリホスファターゼを含む、請求項１９３〜２０８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２１０】
前記生物学的サンプルが、便、唾液、尿、血液、血漿、血清、涙液、汗、膿汁、胃液、腸液、眼液、腹水、膣液、脳脊髄液、又は体腔液、好ましくは便サンプルを含む、請求項１９３〜２０９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２１１】
対象からの１つ又は２つ以上の生物学的サンプル中の血清エンドトキシン、炎症誘発性ヌクレオチド、サイトカイン、ケモカイン、サイトカイン受容体のアンタゴニスト、又は抗炎症因子の濃度を測定することを更に含み、前記１つ又は２つ以上の生物学的サンプルが、単一の時点又は複数の時点で収集される、請求項１９３〜２１０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２１２】
前記初期糖尿病又は糖尿病が、２型糖尿病、妊娠性糖尿病、又は崩尿症を含む、請求項１９３〜２１１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２１３】
前記初期代謝疾患又は代謝疾患が、心血管疾患、冠動脈心疾患、脳血管疾患、脳卒中、末梢血管疾患、非アルコール性脂肪肝疾患、網膜症、喘息、慢性肺閉塞性疾患、嚢胞性線維症、アルツハイマー病、関節炎、湿疹、又は乾癬を含む、請求項１９３〜２１１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２１４】
前記初期メタボリックシンドローム又はメタボリックシンドロームが、肥満、高血糖、インスリン耐性、高インスリン血症、脂質異常症、高コレステロール血症、高トリグリセリド血症、低高密度リポタンパク質（ＨＤＬ）、高低密度リポタンパク質（ＬＤＬ）、高血圧、脂肪肝、又はこれらの組み合わせを含む、請求項１９３〜２１１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２１５】
初期糖尿病、初期代謝疾患、初期メタボリックシンドローム、糖尿病、代謝疾患、又はメタボリックシンドロームの予後を決定するためのホスファターゼの基質の使用であって、対象からの１つ又は２つ以上の生物学的サンプル中のホスファターゼの濃度を測定することを含む、時間的ホスファターゼプロファイルを作成することを含み、前記１つ又は２つ以上の生物学的サンプルが、単一の時点又は複数の時点で収集される、使用。
【請求項２１６】
前記複数の時点が、毎日、毎週、毎月、又は毎年を含む、請求項２１５に記載の使用。
【請求項２１７】
時間経過によるホスファターゼ濃度の増加を含む前記時間的ホスファターゼプロファイルが、初期糖尿病、初期代謝疾患、初期メタボリックシンドローム、糖尿病、代謝疾患、又はメタボリックシンドロームの症状の軽減又はそのリスクの低減についての良好な予後を示唆し、且つ時間経過によるホスファターゼ濃度の減少が、初期糖尿病、初期代謝疾患、初期メタボリックシンドローム、糖尿病、代謝疾患、又はメタボリックシンドロームの症状の軽減又はそのリスクの低減についての不良な予後を示唆する、請求項２１５又は２１６に記載の使用。
【請求項２１８】
前記増加又は減少が、以前に測定された濃度から約５０％の変化である、請求項２１７に記載の使用。
【請求項２１９】
前記増加が、６５〜６５０Ｕ／グラム便のほぼ正常範囲内であるホスファターゼの濃度までである、請求項２１７に記載の使用。
【請求項２２０】
前記減少が、平均正常値よりも１％〜１００％低いホスファターゼの濃度までである、請求項２１７に記載の使用。
【請求項２２１】
前記対象が、ヒト、ウシ、ブタ、ヒツジ、ヤギ、乳牛、ウマ、イヌ、ネコ、サル、ウサギ、ラット、マウス、ニワトリ、又はシチメンチョウであり、好ましくはヒトである、請求項２１５〜２２０のいずれか一項に記載の使用。
【請求項２２２】
前記測定することが、
ホスファターゼの基質を固形又は液体の形態で用意すること；
前記ホスファターゼの基質を生物学的サンプルに接触させること；
色が現れるように特定の期間待つこと；
前記現れた色を基準の写真と比較すること；及び
前記生物学的サンプル中の前記ホスファターゼの濃度を定量すること
を含む、請求項２１５〜２２１のいずれか一項に記載の使用。
【請求項２２３】
前記測定することが、
ホスファターゼの基質を固形又は液体の形態で用意すること；
前記ホスファターゼの基質を生物学的サンプルに接触させること；
色が現れるように特定の期間待つこと；
写真の画素をカウントすること；
画素数を基準と比較すること；及び
前記生物学的サンプル中の前記ホスファターゼの濃度を定量すること
を含む、請求項２１５〜２２１のいずれか一項に記載の使用。
【請求項２２４】
前記測定することが、
ホスファターゼの基質を固形又は液体の形態で用意すること；
前記ホスファターゼの基質を生物学的サンプルに接触させること；
酵素反応が起きるように特定の期間待つこと；及び
分光光度計、生化学分析装置、高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）装置、比色計、照度計、又は機械、生化学、電気、若しくは電子装置を用いて前記生物学的サンプル中の前記ホスファターゼの濃度を定量すること
を含む、請求項２１５〜２２１のいずれか一項に記載の使用。
【請求項２２５】
前記測定することが、
固形培地であって、それに付着したホスファターゼの基質を有する固形培地を用意すること；
前記固形培地を生物学的サンプルに接触させること；
色が現れるように特定の期間待つこと；
前記現れた色を基準の写真と比較すること；及び
前記生物学的サンプル中の前記ホスファターゼの濃度を定量すること
を含む、請求項２１５〜２２１のいずれか一項に記載の使用。
【請求項２２６】
前記測定することが、
固形培地であって、それに付着したホスファターゼの基質を有する固形培地を用意すること；
前記固形培地を生物学的サンプルに接触させること；
画素化された色パターンが現れるように特定の期間待つこと；
写真の画素をカウントすること；
画素数を基準と比較すること；及び
前記生物学的サンプル中の前記ホスファターゼの濃度を定量すること
を含む、請求項２１５〜２２１のいずれか一項に記載の使用。
【請求項２２７】
前記測定することが、
固形培地であって、それに生物学的サンプルを付着させるための固形培地を用意すること；
前記生物学的サンプルを前記固形培地に付着させること；
前記固形培地をホスファターゼの基質に接触させること；
色が現れるように特定の期間待つこと；
前記現れた色を基準の写真と比較すること；及び
前記生物学的サンプル中の前記ホスファターゼの濃度を定量すること
を含む、請求項２１５〜２２１のいずれか一項に記載の使用。
【請求項２２８】
前記測定することが、
固形培地であって、それに生物学的サンプルを付着させるための固形培地を用意すること；
前記生物学的サンプルを前記固形培地に付着させること；
前記固形培地をホスファターゼの基質に接触させること；
画素化された色パターンが現れるように特定の期間待つこと；
写真の画素をカウントすること；
画素数を基準と比較すること；及び
前記生物学的サンプル中の前記ホスファターゼの濃度を定量すること
を含む、請求項２１５〜２２１のいずれか一項に記載の使用。
【請求項２２９】
前記固形培地が、膜、紙、スティック、ガラス、プラスチック、木材、ビーズ、管、瓶、スライド、又はスワブ、好ましくはナイロン膜又はニトロセルロース膜を含む、請求項２２５〜２２８のいずれか一項に記載の使用。
【請求項２３０】
前記ホスファターゼの基質が、ｐ−ニトロフェニルホスフェート、５−ブロモ−４−クロロ−３−インドリルホスフェート／ニトロブルーテトラゾリウム基質系、Fast Red TR／ナフトール基質系、ＣＤＰ−スター基質（２−クロロ−５−（４−メトキシスピロ｛１，２−ジオキセタン−３，２’（５’−クロロ）−トリシクロ［３．３．１．１３．７］デカン｝−４−イル）−１−フェニルホスフェート二ナトリウム塩）、又はこれらの組み合わせを含む、請求項２１５〜２２９のいずれか一項に記載の使用。
【請求項２３１】
前記ホスファターゼが、アルカリホスファターゼ、腸アルカリホスファターゼ、胎盤アルカリホスファターゼ、組織非特異的アルカリホスファターゼ（肝臓／骨／腎臓アルカリホスファターゼ）、生殖細胞アルカリホスファターゼ、好中球アルカリホスファターゼ、酸性ホスファターゼ、又はホスファターゼ活性を有するペプチド、好ましくは腸アルカリホスファターゼを含む、請求項２１５〜２３０のいずれか一項に記載の使用。
【請求項２３２】
前記生物学的サンプルが、便、唾液、尿、血液、血漿、血清、涙液、汗、膿汁、胃液、腸液、眼液、腹水、膣液、脳脊髄液、又は体腔液、好ましくは便サンプルを含む、請求項２１５〜２３１のいずれか一項に記載の使用。
【請求項２３３】
対象からの１つ又は２つ以上の生物学的サンプル中の血清エンドトキシン、炎症誘発性ヌクレオチド、サイトカイン、ケモカイン、サイトカイン受容体のアンタゴニスト、又は抗炎症因子の濃度を測定することを更に含み、前記１つ又は２つ以上の生物学的サンプルが、単一の時点又は複数の時点で収集される、請求項２１５〜２３２のいずれか一項に記載の使用。
【請求項２３４】
前記初期糖尿病又は糖尿病が、２型糖尿病、妊娠性糖尿病、又は崩尿症を含む、請求項２１５〜２３３のいずれか一項に記載の使用。
【請求項２３５】
前記初期代謝疾患又は代謝疾患が、心血管疾患、冠動脈心疾患、脳血管疾患、脳卒中、末梢血管疾患、非アルコール性脂肪肝疾患、網膜症、喘息、慢性肺閉塞性疾患、嚢胞性線維症、アルツハイマー病、関節炎、湿疹、又は乾癬を含む、請求項２１５〜２３３のいずれか一項に記載の使用。
【請求項２３６】
前記初期メタボリックシンドローム又はメタボリックシンドロームが、肥満、高血糖、インスリン耐性、高インスリン血症、脂質異常症、高コレステロール血症、高トリグリセリド血症、低高密度リポタンパク質（ＨＤＬ）、高低密度リポタンパク質（ＬＤＬ）、高血圧、脂肪肝、又はこれらの組み合わせを含む、請求項２１５〜２３３のいずれか一項に記載の使用。
【請求項２３７】
初期糖尿病、初期代謝疾患、初期メタボリックシンドローム、糖尿病、代謝疾患、又はメタボリックシンドロームを検出するための時間的ホスファターゼプロファイルの使用であって、対象からの１つ又は２つ以上の生物学的サンプル中のホスファターゼの濃度を測定することを含み、前記１つ又は２つ以上の生物学的サンプルが、単一の時点又は複数の時点で収集される、使用。
【請求項２３８】
前記複数の時点が、毎日、毎週、毎月、又は毎年を含む、請求項２３７に記載の使用。
【請求項２３９】
平均正常値よりも１％〜１００％低いホスファターゼの濃度が、初期糖尿病、初期代謝疾患、初期メタボリックシンドローム、糖尿病、代謝疾患、又はメタボリックシンドロームを示唆する、請求項２３７又は２３８に記載の使用。
【請求項２４０】
時間経過によるホスファターゼ濃度の持続的な減少を含む前記時間的ホスファターゼプロファイルが、初期糖尿病、初期代謝疾患、初期メタボリックシンドローム、糖尿病、代謝疾患、又はメタボリックシンドロームを示唆する、請求項２３７又は２３８に記載の使用。
【請求項２４１】
前記持続的な減少が、以前に測定された濃度から約５０％の減少である、請求項２４０に記載の使用。
【請求項２４２】
前記対象が、ヒト、ウシ、ブタ、ヒツジ、ヤギ、乳牛、ウマ、イヌ、ネコ、サル、ウサギ、ラット、マウス、ニワトリ、又はシチメンチョウであり、好ましくはヒトである、請求項２３７〜２４１のいずれか一項に記載の使用。
【請求項２４３】
前記測定することが、
ホスファターゼの基質を固形又は液体の形態で用意すること；
前記ホスファターゼの基質を生物学的サンプルに接触させること；
色が現れるように特定の期間待つこと；
前記現れた色を基準の写真と比較すること；及び
前記生物学的サンプル中の前記ホスファターゼの濃度を定量すること
を含む、請求項２３７〜２４２のいずれか一項に記載の使用。
【請求項２４４】
前記測定することが、
ホスファターゼの基質を固形又は液体の形態で用意すること；
前記ホスファターゼの基質を生物学的サンプルに接触させること；
色が現れるように特定の期間待つこと；
写真の画素をカウントすること；
画素数を基準と比較すること；及び
前記生物学的サンプル中の前記ホスファターゼの濃度を定量すること
を含む、請求項２３７〜２４２のいずれか一項に記載の使用。
【請求項２４５】
前記測定することが、
ホスファターゼの基質を固形又は液体の形態で用意すること；
前記ホスファターゼの基質を生物学的サンプルに接触させること；
酵素反応が起きるように特定の期間待つこと；及び
分光光度計、生化学分析装置、高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）装置、比色計、照度計、又は機械、生化学、電気、若しくは電子装置を用いて前記生物学的サンプル中の前記ホスファターゼの濃度を定量すること
を含む、請求項２３７〜２４２のいずれか一項に記載の使用。
【請求項２４６】
前記測定することが、
固形培地であって、それに付着したホスファターゼの基質を有する固形培地を用意すること；
前記固形培地を生物学的サンプルに接触させること；
色が現れるように特定の期間待つこと；
前記現れた色を基準の写真と比較すること；及び
前記生物学的サンプル中の前記ホスファターゼの濃度を定量すること
を含む、請求項２３７〜２４２のいずれか一項に記載の使用。
【請求項２４７】
前記測定することが、
固形培地であって、それに付着したホスファターゼの基質を有する固形培地を用意すること；
前記固形培地を生物学的サンプルに接触させること；
画素化された色パターンが現れるように特定の期間待つこと；
写真の画素をカウントすること；
画素数を基準と比較すること；及び
前記生物学的サンプル中の前記ホスファターゼの濃度を定量すること
を含む、請求項２３７〜２４２のいずれか一項に記載の使用。
【請求項２４８】
前記測定することが、
固形培地であって、それに生物学的サンプルを付着させるための固形培地を用意すること；
前記生物学的サンプルを前記固形培地に付着させること；
前記固形培地をホスファターゼの基質に接触させること；
色が現れるように特定の期間待つこと；
前記現れた色を基準の写真と比較すること；及び
前記生物学的サンプル中の前記ホスファターゼの濃度を定量すること
を含む、請求項２３７〜２４２のいずれか一項に記載の使用。
【請求項２４９】
前記測定することが、
固形培地であって、それに生物学的サンプルを付着させるための固形培地を用意すること；
前記生物学的サンプルを前記固形培地に付着させること；
前記固形培地をホスファターゼの基質に接触させること；
画素化された色パターンが現れるように特定の期間待つこと；
写真の画素をカウントすること；
画素数を基準と比較すること；及び
前記生物学的サンプル中の前記ホスファターゼの濃度を定量すること
を含む、請求項２３７〜２４２のいずれか一項に記載の使用。
【請求項２５０】
前記固形培地が、膜、紙、スティック、ガラス、プラスチック、木材、ビーズ、管、瓶、スライド、又はスワブ、好ましくはナイロン膜又はニトロセルロース膜を含む、請求項２４６〜２４９に記載の使用。
【請求項２５１】
前記ホスファターゼの基質が、ｐ−ニトロフェニルホスフェート、５−ブロモ−４−クロロ−３−インドリルホスフェート／ニトロブルーテトラゾリウム基質系、Ｆａｓｔ  Ｒｅｄ  ＴＲ／ナフトール基質系、ＣＤＰ−スター基質（２−クロロ−５−（４−メトキシスピロ｛１，２−ジオキセタン−３，２’（５’−クロロ）−トリシクロ［３．３．１．１３．７］デカン｝−４−イル）−１−フェニルホスフェート二ナトリウム塩）、又はこれらの組み合わせを含む、請求項２４３〜２５０のいずれか一項に記載の使用。
【請求項２５２】
前記ホスファターゼが、アルカリホスファターゼ、腸アルカリホスファターゼ、胎盤アルカリホスファターゼ、組織非特異的アルカリホスファターゼ（肝臓／骨／腎臓アルカリホスファターゼ）、生殖細胞アルカリホスファターゼ、好中球アルカリホスファターゼ、酸性ホスファターゼ、又はホスファターゼ活性を有するペプチド、好ましくは腸アルカリホスファターゼを含む、請求項２３７〜２５１のいずれか一項に記載の使用。
【請求項２５３】
前記生物学的サンプルが、便、唾液、尿、血液、血漿、血清、涙液、汗、膿汁、胃液、腸液、眼液、腹水、膣液、脳脊髄液、又は体腔液、好ましくは便サンプルを含む、請求項２３７〜２５２のいずれか一項に記載の使用。
【請求項２５４】
対象からの１つ又は２つ以上の生物学的サンプル中の血清エンドトキシン、炎症誘発性ヌクレオチド、サイトカイン、ケモカイン、サイトカイン受容体のアンタゴニスト、又は抗炎症因子の濃度を測定することを更に含み、前記１つ又は２つ以上の生物学的サンプルが、単一の時点又は複数の時点で収集される、請求項２３７〜２５３のいずれか一項に記載の使用。
【請求項２５５】
前記初期糖尿病又は糖尿病が、２型糖尿病、妊娠性糖尿病、又は崩尿症を含む、請求項２３７〜２５４のいずれか一項に記載の使用。
【請求項２５６】
前記初期代謝疾患又は代謝疾患が、心血管疾患、冠動脈心疾患、脳血管疾患、脳卒中、末梢血管疾患、非アルコール性脂肪肝疾患、網膜症、喘息、慢性肺閉塞性疾患、嚢胞性線維症、アルツハイマー病、関節炎、湿疹、又は乾癬を含む、請求項２３７〜２５４のいずれか一項に記載の使用。
【請求項２５７】
前記初期メタボリックシンドローム又はメタボリックシンドロームが、肥満、高血糖、インスリン耐性、高インスリン血症、脂質異常症、高コレステロール血症、高トリグリセリド血症、低高密度リポタンパク質（ＨＤＬ）、高低密度リポタンパク質（ＬＤＬ）、高血圧、脂肪肝、又はこれらの組み合わせを含む、請求項２３７〜２５４のいずれか一項に記載の使用。
【請求項２５８】
慢性疾患、急性疾患、感染症、障害、又は症候群を診断するため又はその予後を決定するための方法であって、対象からの１つ又は２つ以上の生物学的サンプル中のホスファターゼの濃度を測定することを含む、時間的ホスファターゼプロファイルを作成することを含み、前記１つ又は２つ以上の生物学的サンプルが、単一の時点又は複数の時点で収集される、方法。
【請求項２５９】
前記複数の時点が、毎日、毎週、毎月、又は毎年を含む、請求項２５８に記載の方法。
【請求項２６０】
前記対象が、ヒト、ウシ、ブタ、ヒツジ、ヤギ、乳牛、ウマ、イヌ、ネコ、サル、ウサギ、ラット、マウス、ニワトリ、又はシチメンチョウであり、好ましくはヒトである、請求項２５８又は２５９に記載の方法。
【請求項２６１】
前記測定することが、
ホスファターゼの基質を固形又は液体の形態で用意すること；
前記ホスファターゼの基質を生物学的サンプルに接触させること；
色が現れるように特定の期間待つこと；
前記現れた色を基準の写真と比較すること；及び
前記生物学的サンプル中の前記ホスファターゼの濃度を定量すること
を含む、請求項２５８〜２６０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２６２】
前記測定することが、
ホスファターゼの基質を固形又は液体の形態で用意すること；
前記ホスファターゼの基質を生物学的サンプルに接触させること；
色が現れるように特定の期間待つこと；
写真の画素をカウントすること；
画素数を基準と比較すること；及び
前記生物学的サンプル中の前記ホスファターゼの濃度を定量すること
を含む、請求項２５８〜２６０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２６３】
前記測定することが、
ホスファターゼの基質を固形又は液体の形態で用意すること；
前記ホスファターゼの基質を生物学的サンプルに接触させること；
酵素反応が起きるように特定の期間待つこと；及び
分光光度計、生化学分析装置、高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）装置、比色計、照度計、又は機械、生化学、電気、若しくは電子装置を用いて前記生物学的サンプル中の前記ホスファターゼの濃度を定量すること
を含む、請求項２５８〜２６０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２６４】
前記測定することが、
固形培地であって、それに付着したホスファターゼの基質を有する固形培地を用意すること；
前記固形培地を生物学的サンプルに接触させること；
色が現れるように特定の期間待つこと；
前記現れた色を基準の写真と比較すること；及び
前記生物学的サンプル中の前記ホスファターゼの濃度を定量すること
を含む、請求項２５８〜２６０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２６５】
前記測定することが、
固形培地であって、それに付着したホスファターゼの基質を有する固形培地を用意すること；
前記固形培地を生物学的サンプルに接触させること；
画素化された色パターンが現れるように特定の期間待つこと；
写真の画素をカウントすること；
画素数を基準と比較すること；及び
前記生物学的サンプル中の前記ホスファターゼの濃度を定量すること
を含む、請求項２５８〜２６０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２６６】
前記測定することが、
固形培地であって、それに生物学的サンプルを付着させるための固形培地を用意すること；
前記生物学的サンプルを前記固形培地に付着させること；
前記固形培地をホスファターゼの基質に接触させること；
色が現れるように特定の期間待つこと；
前記現れた色を基準の写真と比較すること；及び
前記生物学的サンプル中の前記ホスファターゼの濃度を定量すること
を含む、請求項２５８〜２６０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２６７】
前記測定することが、
固形培地であって、それに生物学的サンプルを付着させるための固形培地を用意すること；
前記生物学的サンプルを前記固形培地に付着させること；
前記固形培地をホスファターゼの基質に接触させること；
画素化された色パターンが現れるように特定の期間待つこと；
写真の画素をカウントすること；
画素数を基準と比較すること；及び
前記生物学的サンプル中の前記ホスファターゼの濃度を定量すること
を含む、請求項２５８〜２６０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２６８】
前記固形培地が、膜、紙、スティック、ガラス、プラスチック、木材、ビーズ、管、瓶、スライド、又はスワブ、好ましくはナイロン膜又はニトロセルロース膜を含む、請求項２４６〜２６７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２６９】
前記ホスファターゼの基質が、ｐ−ニトロフェニルホスフェート、５−ブロモ−４−クロロ−３−インドリルホスフェート／ニトロブルーテトラゾリウム基質系、Ｆａｓｔ  Ｒｅｄ  ＴＲ／ナフトール基質系、ＣＤＰ−スター基質（２−クロロ−５−（４−メトキシスピロ｛１，２−ジオキセタン−３，２’（５’−クロロ）−トリシクロ［３．３．１．１３．７］デカン｝−４−イル）−１−フェニルホスフェート二ナトリウム塩）、又はこれらの組み合わせを含む、請求項２６１〜２６８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２７０】
前記ホスファターゼが、アルカリホスファターゼ、腸アルカリホスファターゼ、胎盤アルカリホスファターゼ、組織非特異的アルカリホスファターゼ（肝臓／骨／腎臓アルカリホスファターゼ）、生殖細胞アルカリホスファターゼ、好中球アルカリホスファターゼ、酸性ホスファターゼ、又はホスファターゼ活性を有するペプチド、好ましくは腸アルカリホスファターゼを含む、請求項２５８〜２６９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２７１】
前記生物学的サンプルが、便、唾液、尿、血液、血漿、血清、涙液、汗、膿汁、胃液、腸液、眼液、腹水、膣液、脳脊髄液、又は体腔液、好ましくは便サンプルを含む、請求項２５８〜２７０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２７２】
前記慢性疾患が、にきび、後天性免疫不全症候群（ＡＩＤＳ）、強直性脊椎炎、喘息、アジソン病、アレルギー性鼻炎、アルツハイマー病、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ、ルーゲーリック病）、再生不良性貧血、関節炎、アテローム性動脈硬化症、注意欠陥多動性障害（ＡＤＨＤ、ＡＤＤ）、自閉症スペクトラム障害、良性前立腺過形成、双極性気分障害、気管支拡張症、癌、心不全、心筋症、慢性アルコール依存症、慢性貧血、慢性肝炎、慢性アメーバ症、慢性閉塞性肺疾患、慢性胃炎、慢性食道炎、慢性口腔疾患、慢性中毒、慢性腎疾患、コラーゲン病、クローン病、クッシング病、嚢胞性線維症、痴呆、皮膚筋炎、うつ病、リズム障害、摂食障害（神経性食欲不振症、神経性過食症、過食症）、湿疹、子宮内膜症、てんかん、繊維芽細胞腫、胃食道逆流症（ＧＥＲＤ）、緑内障、痛風、グレーブス病、血友病、高脂血症、下垂体機能亢進症、下垂体機能低下症、下垂体腺腫、甲状腺機能低下症、特発性血小板減少性紫斑病、閉経、片頭痛、運動ニューロン疾患、多発性硬化症、筋ジストロフィー、重症筋無力症、筋疾患、神経障害、肥満、強迫性障害、変形性関節症、骨粗鬆症、麻痺（対麻痺、四肢麻痺）、パーキンソン病、パジェット病、結節性多発動脈炎、多嚢胞卵巣、乾癬、乾癬性関節炎、肺間質性線維症、反射性交感神経ジストロフィー（ＲＳＤ）症候群、関節リウマチ、強皮症、統合失調症、シェーグレン症候群、喫煙及びタバコ関連疾患、全身性エリテマトーデス、三叉神経痛、結核、潰瘍性大腸炎、又は尿失禁を含む、請求項２５８〜２７１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２７３】
前記急性疾患が、急性アルコール中毒、急性アメーバ症、急性聴覚疾患、急性脳疾患、急性癌、急性心血管疾患、急性歯科疾患、急性皮膚疾患、急性食道疾患、急性胃腸疾患、急性腎疾患、急性肝疾患、急性筋疾患、急性眼疾患、急性中毒、急性口腔疾患、急性変形性関節症、急性咽頭疾患、急性前立腺疾患、急性傷害（外傷）、急性腹膜疾患、急性呼吸器疾患、又は急性尿生殖器疾患を含む、請求項２５８〜２７１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２７４】
前記感染症が、炭疽菌（Bacillus anthracis）、百日咳菌（Bordetella pertussis）、ライム病ポレリア（Borrelia burgdorferi）、ウシ流産菌（Brucella abortus）、イヌ流産菌（Brucella canis）、マルタ熱菌（Brucella melitensis）、ブタ流産菌（Brucella suis）、カンピロバクター・ジェジュニ（Campylobacter jejuni）、肺炎クラミジア（Chlamydophila pneumoniae）、クラミジア・トラコマチス（Chlamydia trachomatis）、オウム病クラミジア（Chlamydophila psittaci）、ボツリヌス菌（Clostridium botulinum）、クロストリジウム・ディフィシレ（Clostridium difficile）、ウェルシュ菌（Clostridium perfringens）、破傷風菌（Clostridium tetani）、ジフテリア菌（Corynebacterium diphtheriae）、赤痢アメーバ（Entamoeba histolytica）、大便連鎖球菌（Enterococcus faecalis）、エンテロコッカス・フェシウム（Enterococcus faecium）、大腸菌（Escherichia coli）、腸管毒素原性大腸菌（Enterotoxigenic Escherichia coli）、腸管病原性大腸菌（Enteropathogenic E. coli）、腸管出血性大腸菌Ｏ１５７：Ｈ７（Enterohemorrhagic Escherichia coli O157:H7）、野兎病菌（Francisella tularensis）、真菌（カンジダ・アルビカンス（Candida albicans））、インフルエンザ菌（Haemophilus influenza）、ヘリコバクター・ピロリ（Helicobacter pylori）、リーシュマニア属（カラアザール）（Leishmania（Kala Azar））、レジオネラ・ニューモフィラ（Legionella pneumophila）、レプトスピラ・インターロガンス（Leptospira interrogans）、レプトスピラ・インターロガンス（Leptospira interrogans）、リステリア菌（Listeria monocytogenes）、ハンセン菌（Mycobacterium leprae）、ヒト結核菌（Mycobacterium tuberculosis）、肺炎マイコプラズマ（Mycoplasma pneumoniae）、淋菌（Neisseria gonorrhoeae）、髄膜炎菌（Neisseria meningitides）、寄生虫（原虫、寄生蠕虫、外部寄生虫）、変形体（マラリア）、緑膿菌（Pseudomonas aeruginosa）、リケッチア・リケッチイ（Rickettsia）、サルモネラ菌亜種エンテリカ（Salmonella enterica subsp. Enterica）、ネズミチフス菌（Salmonella typhimurium）、ソンネ赤痢菌（Shigella sonnei）、黄色ブドウ球菌（Staphylococcus aureus）、表皮ブドウ球菌（Staphylococcus epidermidis）、スタフィロコッカス・サプロフィティカス（Staphylococcus saprophyticus）、アガラクチア菌（Streptococcus agalactiae）、肺炎連鎖球菌（Streptococcus pneumoniae）、化膿連鎖球菌（Streptococcus pyogenes）、梅毒トレポネーマ（Treponema pallidum）、コレラ菌（Vibrio cholerae）、又はペスト菌（Yersinia pestis）を含む微生物によって引き起こされる、請求項２５８〜２７１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２７５】
前記感染症が、アデノウイルス、コクサッキーウイルス、デングウイルス、エボラウイルス、エプスタインバーウイルス、Ａ型肝炎ウイルス、Ｂ型肝炎ウイルス、Ｃ型肝炎ウイルス、単純ヘルペスウイルス、サイトメガロウイルス、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）、インフルエンザウイルス、麻疹ウイルス、ムンプス・ウイルス、ヒトパピローマウイルス、ヒトパラインフルエンザウイルス、ポリオウイルス、狂犬病ウイルス、ヒトＲＳウイルス、風疹ウイルス、水痘帯状疱疹ウイルス、又は黄熱病ウイルスを含む微生物によって引き起こされる、請求項２５８〜２７１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２７６】
慢性疾患、急性疾患、感染症、障害、又は症候群を検出するためのホスファターゼの基質の使用であって、対象からの１つ又は２つ以上の生物学的サンプル中のホスファターゼの濃度を測定することを含む、時間的ホスファターゼプロファイルを作成することを含み、前記１つ又は２つ以上の生物学的サンプルが、単一の時点又は複数の時点で収集される、使用。
【請求項２７７】
前記複数の時点が、毎日、毎週、毎月、又は毎年を含む、請求項２７６に記載の使用。
【請求項２７８】
前記対象が、ヒト、ウシ、ブタ、ヒツジ、ヤギ、乳牛、ウマ、イヌ、ネコ、サル、ウサギ、ラット、マウス、ニワトリ、又はシチメンチョウであり、好ましくはヒトである、請求項２７６又は２７７に記載の使用。
【請求項２７９】
前記測定することが、
ホスファターゼの基質を固形又は液体の形態で用意すること；
前記ホスファターゼの基質を生物学的サンプルに接触させること；
色が現れるように特定の期間待つこと；
前記現れた色を基準の写真と比較すること；及び
前記生物学的サンプル中の前記ホスファターゼの濃度を定量すること
を含む、請求項２７６〜２７８のいずれか一項に記載の使用。
【請求項２８０】
前記測定することが、
ホスファターゼの基質を固形又は液体の形態で用意すること；
前記ホスファターゼの基質を生物学的サンプルに接触させること；
色が現れるように特定の期間待つこと；
写真の画素をカウントすること；
画素数を基準と比較すること；及び
前記生物学的サンプル中の前記ホスファターゼの濃度を定量すること
を含む、請求項２７６〜２７８のいずれか一項に記載の使用。
【請求項２８１】
前記測定することが、
ホスファターゼの基質を固形又は液体の形態で用意すること；
前記ホスファターゼの基質を生物学的サンプルに接触させること；
酵素反応が起きるように特定の期間待つこと；及び
分光光度計、生化学分析装置、高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）装置、比色計、照度計、又は機械、生化学、電気、若しくは電子装置を用いて前記生物学的サンプル中の前記ホスファターゼの濃度を定量すること
を含む、請求項２７６〜２７８のいずれか一項に記載の使用。
【請求項２８２】
前記測定することが、
固形培地であって、それに付着したホスファターゼの基質を有する固形培地を用意すること；
前記固形培地を生物学的サンプルに接触させること；
色が現れるように特定の期間待つこと；
前記現れた色を基準の写真と比較すること；及び
前記生物学的サンプル中の前記ホスファターゼの濃度を定量すること
を含む、請求項２７６〜２７８のいずれか一項に記載の使用。
【請求項２８３】
前記測定することが、
固形培地であって、それに付着したホスファターゼの基質を有する固形培地を用意すること；
前記固形培地を生物学的サンプルに接触させること；
画素化された色パターンが現れるように特定の期間待つこと；
写真の画素をカウントすること；
画素数を基準と比較すること；及び
前記生物学的サンプル中の前記ホスファターゼの濃度を定量すること
を含む、請求項２７６〜２７８のいずれか一項に記載の使用。
【請求項２８４】
前記測定することが、
固形培地であって、それに生物学的サンプルを付着させるための固形培地を用意すること；
前記生物学的サンプルを前記固形培地に付着させること；
前記固形培地をホスファターゼの基質に接触させること；
色が現れるように特定の期間待つこと；
前記現れた色を基準の写真と比較すること；及び
前記生物学的サンプル中の前記ホスファターゼの濃度を定量すること
を含む、請求項２７６〜２７８のいずれか一項に記載の使用。
【請求項２８５】
前記測定することが、
固形培地であって、それに生物学的サンプルを付着させるための固形培地を用意すること；
前記生物学的サンプルを前記固形培地に付着させること；
前記固形培地をホスファターゼの基質に接触させること；
画素化された色パターンが現れるように特定の期間待つこと；
写真の画素をカウントすること；
画素数を基準と比較すること；及び
前記生物学的サンプル中の前記ホスファターゼの濃度を定量すること
を含む、請求項２７６〜２７８のいずれか一項に記載の使用。
【請求項２８６】
前記固形培地が、膜、紙、スティック、ガラス、プラスチック、木材、ビーズ、管、瓶、スライド、又はスワブ、好ましくはナイロン膜又はニトロセルロース膜を含む、請求項２８２〜２８５に記載の使用。
【請求項２８７】
前記ホスファターゼの基質が、ｐ−ニトロフェニルホスフェート、５−ブロモ−４−クロロ−３−インドリルホスフェート／ニトロブルーテトラゾリウム基質系、Ｆａｓｔ  Ｒｅｄ  ＴＲ／ナフトール基質系、ＣＤＰ−スター基質（２−クロロ−５−（４−メトキシスピロ｛１，２−ジオキセタン−３，２’（５’−クロロ）−トリシクロ［３．３．１．１３．７］デカン｝−４−イル）−１−フェニルホスフェート二ナトリウム塩）、又はこれらの組み合わせを含む、請求項２７９〜２８６のいずれか一項に記載の使用。
【請求項２８８】
前記ホスファターゼが、アルカリホスファターゼ、腸アルカリホスファターゼ、胎盤アルカリホスファターゼ、組織非特異的アルカリホスファターゼ（肝臓／骨／腎臓アルカリホスファターゼ）、生殖細胞アルカリホスファターゼ、好中球アルカリホスファターゼ、酸性ホスファターゼ、又はホスファターゼ活性を有するペプチド、好ましくは腸アルカリホスファターゼを含む、請求項２７６〜２８７のいずれか一項に記載の使用。
【請求項２８９】
前記生物学的サンプルが、便、唾液、尿、血液、血漿、血清、涙液、汗、膿汁、胃液、腸液、眼液、腹水、膣液、脳脊髄液、又は体腔液、好ましくは便サンプルを含む、請求項２７６〜２８８のいずれか一項に記載の使用。
【請求項２９０】
前記慢性疾患が、にきび、後天性免疫不全症候群（ＡＩＤＳ）、強直性脊椎炎、喘息、アジソン病、アレルギー性鼻炎、アルツハイマー病、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ、ルーゲーリック病）、再生不良性貧血、関節炎、アテローム性動脈硬化症、注意欠陥多動性障害（ＡＤＨＤ、ＡＤＤ）、自閉症スペクトラム障害、良性前立腺過形成、双極性気分障害、気管支拡張症、癌、心不全、心筋症、慢性アルコール依存症、慢性貧血、慢性肝炎、慢性アメーバ症、慢性閉塞性肺疾患、慢性胃炎、慢性食道炎、慢性口腔疾患、慢性中毒、慢性腎疾患、コラーゲン病、クローン病、クッシング病、嚢胞性線維症、痴呆、皮膚筋炎、うつ病、リズム障害、摂食障害（神経性食欲不振症、神経性過食症、過食症）、湿疹、子宮内膜症、てんかん、繊維芽細胞腫、胃食道逆流症（ＧＥＲＤ）、緑内障、痛風、グレーブス病、血友病、高脂血症、下垂体機能亢進症、下垂体機能低下症、下垂体腺腫、甲状腺機能低下症、特発性血小板減少性紫斑病、閉経、片頭痛、運動ニューロン疾患、多発性硬化症、筋ジストロフィー、重症筋無力症、筋疾患、神経障害、肥満、強迫性障害、変形性関節症、骨粗鬆症、麻痺（対麻痺、四肢麻痺）、パーキンソン病、パジェット病、結節性多発動脈炎、多嚢胞卵巣、乾癬、乾癬性関節炎、肺間質性線維症、反射性交感神経ジストロフィー（ＲＳＤ）症候群、関節リウマチ、強皮症、統合失調症、シェーグレン症候群、喫煙及びタバコ関連疾患、全身性エリテマトーデス、三叉神経痛、結核、潰瘍性大腸炎、又は尿失禁を含む、請求項２７６〜２８９のいずれか一項に記載の使用。
【請求項２９１】
前記急性疾患が、急性アルコール中毒、急性アメーバ症、急性聴覚疾患、急性脳疾患、急性癌、急性心血管疾患、急性歯科疾患、急性皮膚疾患、急性食道疾患、急性胃腸疾患、急性腎疾患、急性肝疾患、急性筋疾患、急性眼疾患、急性中毒、急性口腔疾患、急性変形性関節症、急性咽頭疾患、急性前立腺疾患、急性傷害（外傷）、急性腹膜疾患、急性呼吸器疾患、又は急性尿生殖器疾患を含む、請求項２７６〜２８９のいずれか一項に記載の使用。
【請求項２９２】
前記感染症が、炭疽菌（Bacillus anthracis）、百日咳菌（Bordetella pertussis）、ライム病ポレリア（Borrelia burgdorferi）、ウシ流産菌（Brucella abortus）、イヌ流産菌（Brucella canis）、マルタ熱菌（Brucella melitensis）、ブタ流産菌（Brucella suis）、カンピロバクター・ジェジュニ（Campylobacter jejuni）、肺炎クラミジア（Chlamydophila pneumoniae）、クラミジア・トラコマチス（Chlamydia trachomatis）、オウム病クラミジア（Chlamydophila psittaci）、ボツリヌス菌（Clostridium botulinum）、クロストリジウム・ディフィシレ（Clostridium difficile）、ウェルシュ菌（Clostridium perfringens）、破傷風菌（Clostridium tetani）、ジフテリア菌（Corynebacterium diphtheriae）、赤痢アメーバ（Entamoeba histolytica）、大便連鎖球菌（Enterococcus faecalis）、エンテロコッカス・フェシウム（Enterococcus faecium）、大腸菌（Escherichia coli）、腸管毒素原性大腸菌（Enterotoxigenic Escherichia coli）、腸管病原性大腸菌（Enteropathogenic E. coli）、腸管出血性大腸菌Ｏ１５７：Ｈ７（Enterohemorrhagic Escherichia coli O157:H7）、野兎病菌（Francisella tularensis）、真菌（カンジダ・アルビカンス（Candida albicans））、インフルエンザ菌（Haemophilus influenza）、ヘリコバクター・ピロリ（Helicobacter pylori）、リーシュマニア属（カラアザール）（Leishmania（Kala Azar））、レジオネラ・ニューモフィラ（Legionella pneumophila）、レプトスピラ・インターロガンス（Leptospira interrogans）、レプトスピラ・インターロガンス（Leptospira interrogans）、リステリア菌（Listeria monocytogenes）、ハンセン菌（Mycobacterium leprae）、ヒト結核菌（Mycobacterium tuberculosis）、肺炎マイコプラズマ（Mycoplasma pneumoniae）、淋菌（Neisseria gonorrhoeae）、髄膜炎菌（Neisseria meningitides）、寄生虫（原虫、寄生蠕虫、外部寄生虫）、変形体（マラリア）、緑膿菌（Pseudomonas aeruginosa）、リケッチア・リケッチイ（Rickettsia）、サルモネラ菌亜種エンテリカ（Salmonella enterica subsp. Enterica）、ネズミチフス菌（Salmonella typhimurium）、ソンネ赤痢菌（Shigella sonnei）、黄色ブドウ球菌（Staphylococcus aureus）、表皮ブドウ球菌（Staphylococcus epidermidis）、スタフィロコッカス・サプロフィティカス（Staphylococcus saprophyticus）、アガラクチア菌（Streptococcus agalactiae）、肺炎連鎖球菌（Streptococcus pneumoniae）、化膿連鎖球菌（Streptococcus pyogenes）、梅毒トレポネーマ（Treponema pallidum）、コレラ菌（Vibrio cholerae）、又はペスト菌（Yersinia pestis）を含む微生物によって引き起こされる、請求項２７６〜２８９のいずれか一項に記載の使用。
【請求項２９３】
前記感染症が、アデノウイルス、ＳＡＲＳコロナウイルス、コクサッキーウイルス、デングウイルス、エボラウイルス、エプスタインバーウイルス、Ａ型肝炎ウイルス、Ｂ型肝炎ウイルス、Ｃ型肝炎ウイルス、単純ヘルペスウイルス、サイトメガロウイルス、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）、インフルエンザウイルス、麻疹ウイルス、ムンプス・ウイルス、ヒトパピローマウイルス、ヒトパラインフルエンザウイルス、ポリオウイルス、狂犬病ウイルス、ヒトＲＳウイルス、風疹ウイルス、水痘帯状疱疹ウイルス、又は黄熱病ウイルスを含む微生物によって引き起こされる、請求項２７６〜２８９のいずれか一項に記載の使用。
【請求項２９４】
慢性疾患、急性疾患、感染症、障害、又は症候群を検出するためのキットの使用であって、前記キットが、規定量の便を測定するための器具、便サンプル希釈緩衝液、ホスファターゼの基質、及びホスファターゼアッセイ緩衝液を含む、使用。
【請求項２９５】
前記ホスファターゼの基質が、ｐ−ニトロフェニルホスフェート、５−ブロモ−４−クロロ−３−インドリルホスフェート／ニトロブルーテトラゾリウム基質系、Ｆａｓｔ  Ｒｅｄ  ＴＲ／ナフトール基質系、ＣＤＰ−スター基質（２−クロロ−５−（４−メトキシスピロ｛１，２−ジオキセタン−３，２’（５’−クロロ）−トリシクロ［３．３．１．１３．７］デカン｝−４−イル）−１−フェニルホスフェート二ナトリウム塩）、又はこれらの組み合わせを含む、請求項２９４に記載の使用。
【請求項２９６】
前記ホスファターゼの基質が、固形培地に付着され、前記固形培地が、膜、紙、スティック、ガラス、プラスチック、木材、ビーズ、管、瓶、スライド、若しくはスワブ、好ましくはナイロン膜又はニトロセルロース膜を含む、請求項２９４又は２９５に記載の使用。
【請求項２９７】
前記検出することが、対象からの生物学的サンプル中のホスファターゼの濃度を測定することを含む、請求項２９４〜２９６のいずれか一項に記載の使用。
【請求項２９８】
前記ホスファターゼが、アルカリホスファターゼ、腸アルカリホスファターゼ、胎盤アルカリホスファターゼ、組織非特異的アルカリホスファターゼ（肝臓／骨／腎臓アルカリホスファターゼ）、生殖細胞アルカリホスファターゼ、好中球アルカリホスファターゼ、酸性ホスファターゼ、又はホスファターゼ活性を有するペプチド、好ましくは腸アルカリホスファターゼを含む、請求項２９７に記載の使用。
【請求項２９９】
前記対象が、ヒト、ウシ、ブタ、ヒツジ、ヤギ、乳牛、ウマ、イヌ、ネコ、サル、ウサギ、ラット、マウス、ニワトリ、シチメンチョウであり、好ましくはヒトである、請求項２９７又は２９８に記載の使用。
【請求項３００】
前記生物学的サンプルが、便、唾液、尿、血液、血漿、血清、涙液、汗、膿汁、胃液、腸液、眼液、腹水、膣液、脳脊髄液、又は体腔液、好ましくは便サンプルを含む、請求項２９７〜２９９のいずれか一項に記載の使用。
【請求項３０１】
前記慢性疾患が、にきび、後天性免疫不全症候群（ＡＩＤＳ）、強直性脊椎炎、喘息、アジソン病、アレルギー性鼻炎、アルツハイマー病、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ、ルーゲーリック病）、再生不良性貧血、関節炎、アテローム性動脈硬化症、注意欠陥多動性障害（ＡＤＨＤ、ＡＤＤ）、自閉症スペクトラム障害、良性前立腺過形成、双極性気分障害、気管支拡張症、癌、心不全、心筋症、慢性アルコール依存症、慢性貧血、慢性肝炎、慢性アメーバ症、慢性閉塞性肺疾患、慢性胃炎、慢性食道炎、慢性口腔疾患、慢性中毒、慢性腎疾患、コラーゲン病、クローン病、クッシング病、嚢胞性線維症、痴呆、皮膚筋炎、うつ病、リズム障害、摂食障害（神経性食欲不振症、神経性過食症、過食症）、湿疹、子宮内膜症、てんかん、繊維芽細胞腫、胃食道逆流症（ＧＥＲＤ）、緑内障、痛風、グレーブス病、血友病、高脂血症、下垂体機能亢進症、下垂体機能低下症、下垂体腺腫、甲状腺機能低下症、特発性血小板減少性紫斑病、閉経、片頭痛、運動ニューロン疾患、多発性硬化症、筋ジストロフィー、重症筋無力症、筋疾患、神経障害、肥満、強迫性障害、変形性関節症、骨粗鬆症、麻痺（対麻痺、四肢麻痺）、パーキンソン病、パジェット病、結節性多発動脈炎、多嚢胞卵巣、乾癬、乾癬性関節炎、肺間質性線維症、反射性交感神経ジストロフィー（ＲＳＤ）症候群、関節リウマチ、強皮症、統合失調症、シェーグレン症候群、喫煙及びタバコ関連疾患、全身性エリテマトーデス、三叉神経痛、結核、潰瘍性大腸炎、又は尿失禁を含む、請求項２９４〜３００のいずれか一項に記載の使用。
【請求項３０２】
前記急性疾患が、急性アルコール中毒、急性アメーバ症、急性聴覚疾患、急性脳疾患、急性癌、急性心血管疾患、急性歯科疾患、急性皮膚疾患、急性食道疾患、急性胃腸疾患、急性腎疾患、急性肝疾患、急性筋疾患、急性眼疾患、急性中毒、急性口腔疾患、急性変形性関節症、急性咽頭疾患、急性前立腺疾患、急性傷害（外傷）、急性腹膜疾患、急性呼吸器疾患、又は急性尿生殖器疾患を含む、請求項２９４〜３００のいずれか一項に記載の使用。
【請求項３０３】
前記感染症が、炭疽菌（Bacillus anthracis）、百日咳菌（Bordetella pertussis）、ライム病ポレリア（Borrelia burgdorferi）、ウシ流産菌（Brucella abortus）、イヌ流産菌（Brucella canis）、マルタ熱菌（Brucella melitensis）、ブタ流産菌（Brucella suis）、カンピロバクター・ジェジュニ（Campylobacter jejuni）、肺炎クラミジア（Chlamydophila pneumoniae）、クラミジア・トラコマチス（Chlamydia trachomatis）、オウム病クラミジア（Chlamydophila psittaci）、ボツリヌス菌（Clostridium botulinum）、クロストリジウム・ディフィシレ（Clostridium difficile）、ウェルシュ菌（Clostridium perfringens）、破傷風菌（Clostridium tetani）、ジフテリア菌（Corynebacterium diphtheriae）、赤痢アメーバ（Entamoeba histolytica）、大便連鎖球菌（Enterococcus faecalis）、エンテロコッカス・フェシウム（Enterococcus faecium）、大腸菌（Escherichia coli）、腸管毒素原性大腸菌（Enterotoxigenic Escherichia coli）、腸管病原性大腸菌（Enteropathogenic E. coli）、腸管出血性大腸菌Ｏ１５７：Ｈ７（Enterohemorrhagic Escherichia coli O157:H7）、野兎病菌（Francisella tularensis）、真菌（カンジダ・アルビカンス（Candida albicans））、インフルエンザ菌（Haemophilus influenza）、ヘリコバクター・ピロリ（Helicobacter pylori）、リーシュマニア属（カラアザール）（Leishmania（Kala Azar））、レジオネラ・ニューモフィラ（Legionella pneumophila）、レプトスピラ・インターロガンス（Leptospira interrogans）、レプトスピラ・インターロガンス（Leptospira interrogans）、リステリア菌（Listeria monocytogenes）、ハンセン菌（Mycobacterium leprae）、ヒト結核菌（Mycobacterium tuberculosis）、肺炎マイコプラズマ（Mycoplasma pneumoniae）、淋菌（Neisseria gonorrhoeae）、髄膜炎菌（Neisseria meningitides）、寄生虫（原虫、寄生蠕虫、外部寄生虫）、変形体（マラリア）、緑膿菌（Pseudomonas aeruginosa）、リケッチア・リケッチイ（Rickettsia）、サルモネラ菌亜種エンテリカ（Salmonella enterica subsp. Enterica）、ネズミチフス菌（Salmonella typhimurium）、ソンネ赤痢菌（Shigella sonnei）、黄色ブドウ球菌（Staphylococcus aureus）、表皮ブドウ球菌（Staphylococcus epidermidis）、スタフィロコッカス・サプロフィティカス（Staphylococcus saprophyticus）、アガラクチア菌（Streptococcus agalactiae）、肺炎連鎖球菌（Streptococcus pneumoniae）、化膿連鎖球菌（Streptococcus pyogenes）、梅毒トレポネーマ（Treponema pallidum）、コレラ菌（Vibrio cholerae）、又はペスト菌（Yersinia pestis）を含む微生物によって引き起こされる、請求項２９４〜３００のいずれか一項に記載の使用。
【請求項３０４】
前記感染症が、アデノウイルス、ＳＡＲＳコロナウイル、コクサッキーウイルス、デングウイルス、エボラウイルス、エプスタインバーウイルス、Ａ型肝炎ウイルス、Ｂ型肝炎ウイルス、Ｃ型肝炎ウイルス、単純ヘルペスウイルス、サイトメガロウイルス、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）、インフルエンザウイルス、麻疹ウイルス、ムンプス・ウイルス、ヒトパピローマウイルス、ヒトパラインフルエンザウイルス、ポリオウイルス、狂犬病ウイルス、ヒトＲＳウイルス、風疹ウイルス、水痘帯状疱疹ウイルス、又は黄熱病ウイルスを含む微生物によって引き起こされる、請求項２９４〜３００のいずれか一項に記載の使用。
【請求項３０５】
対象からの１つ又は２つ以上の生物学的サンプル中のホスファターゼの濃度を測定することを含む、慢性疾患、急性疾患、感染症、障害、又は症候群を検出するための時間的ホスファターゼプロファイルの使用であって、前記１つ又は２つ以上の生物学的サンプルが、単一の時点又は複数の時点で収集される、使用。
【請求項３０６】
前記複数の時点が、毎日、毎週、毎月、又は毎年を含む、請求項３０５に記載の使用。
【請求項３０７】
前記対象が、ヒト、ウシ、ブタ、ヒツジ、ヤギ、乳牛、ウマ、イヌ、ネコ、サル、ウサギ、ラット、マウス、ニワトリ、又はシチメンチョウであり、好ましくはヒトである、請求項３０５又は３０６に記載の使用。
【請求項３０８】
前記測定することが、
ホスファターゼの基質を固形又は液体の形態で用意すること；
前記ホスファターゼの基質を生物学的サンプルに接触させること；
色が現れるように特定の期間待つこと；
前記現れた色を基準の写真と比較すること；及び
前記生物学的サンプル中の前記ホスファターゼの濃度を定量すること
を含む、請求項３０５〜３０７のいずれか一項に記載の使用。
【請求項３０９】
前記測定することが、
ホスファターゼの基質を固形又は液体の形態で用意すること；
前記ホスファターゼの基質を生物学的サンプルに接触させること；
色が現れるように特定の期間待つこと；
写真の画素をカウントすること；
画素数を基準と比較すること；及び
前記生物学的サンプル中の前記ホスファターゼの濃度を定量すること
を含む、請求項３０５〜３０７のいずれか一項に記載の使用。
【請求項３１０】
前記測定することが、
ホスファターゼの基質を固形又は液体の形態で用意すること；
前記ホスファターゼの基質を生物学的サンプルに接触させること；
酵素反応が起きるように特定の期間待つこと；及び
分光光度計、生化学分析装置、高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）装置、比色計、照度計、又は機械、生化学、電気、若しくは電子装置を用いて前記生物学的サンプル中の前記ホスファターゼの濃度を定量すること
を含む、請求項３０５〜３０７のいずれか一項に記載の使用。
【請求項３１１】
前記測定することが、
固形培地であって、それに付着したホスファターゼの基質を有する固形培地を用意すること；
前記固形培地を生物学的サンプルに接触させること；
色が現れるように特定の期間待つこと；
前記現れた色を基準の写真と比較すること；及び
前記生物学的サンプル中の前記ホスファターゼの濃度を定量すること
を含む、請求項３０５〜３０７のいずれか一項に記載の使用。
【請求項３１２】
前記測定することが、
固形培地であって、それに付着したホスファターゼの基質を有する固形培地を用意すること；
前記固形培地を生物学的サンプルに接触させること；
画素化された色パターンが現れるように特定の期間待つこと；
写真の画素をカウントすること；
画素数を基準と比較すること；及び
前記生物学的サンプル中の前記ホスファターゼの濃度を定量すること
を含む、請求項３０５〜３０７のいずれか一項に記載の使用。
【請求項３１３】
前記測定することが、
固形培地であって、それに生物学的サンプルを付着させるための固形培地を用意すること；
前記生物学的サンプルを前記固形培地に付着させること；
前記固形培地をホスファターゼの基質に接触させること；
色が現れるように特定の期間待つこと；
前記現れた色を基準の写真と比較すること；及び
前記生物学的サンプル中の前記ホスファターゼの濃度を定量すること
を含む、請求項３０５〜３０７のいずれか一項に記載の使用。
【請求項３１４】
前記測定することが、
固形培地であって、それに生物学的サンプルを付着させるための固形培地を用意すること；
前記生物学的サンプルを前記固形培地に付着させること；
前記固形培地をホスファターゼの基質に接触させること；
画素化された色パターンが現れるように特定の期間待つこと；
写真の画素をカウントすること；
画素数を基準と比較すること；及び
前記生物学的サンプル中の前記ホスファターゼの濃度を定量すること
を含む、請求項３０５〜３０７のいずれか一項に記載の使用。
【請求項３１５】
前記固形培地が、膜、紙、スティック、ガラス、プラスチック、木材、ビーズ、管、瓶、スライド、又はスワブ、好ましくはナイロン膜又はニトロセルロース膜を含む、請求項３１１〜３１４のいずれか一項に記載の使用。
【請求項３１６】
前記ホスファターゼの基質が、ｐ−ニトロフェニルホスフェート、５−ブロモ−４−クロロ−３−インドリルホスフェート／ニトロブルーテトラゾリウム基質系、Ｆａｓｔ  Ｒｅｄ  ＴＲ／ナフトール基質系、ＣＤＰ−スター基質（２−クロロ−５−（４−メトキシスピロ｛１，２−ジオキセタン−３，２’（５’−クロロ）−トリシクロ［３．３．１．１３．７］デカン｝−４−イル）−１−フェニルホスフェート二ナトリウム塩）、又はこれらの組み合わせを含む、請求項３０８〜３１５のいずれか一項に記載の使用。
【請求項３１７】
前記ホスファターゼが、アルカリホスファターゼ、腸アルカリホスファターゼ、胎盤アルカリホスファターゼ、組織非特異的アルカリホスファターゼ（肝臓／骨／腎臓アルカリホスファターゼ）、生殖細胞アルカリホスファターゼ、好中球アルカリホスファターゼ、酸性ホスファターゼ、又はホスファターゼ活性を有するペプチド、好ましくは腸アルカリホスファターゼを含む、請求項３０５〜３１６のいずれか一項に記載の使用。
【請求項３１８】
前記生物学的サンプルが、便、唾液、尿、血液、血漿、血清、涙液、汗、膿汁、胃液、腸液、眼液、腹水、膣液、脳脊髄液、又は体腔液、好ましくは便サンプルを含む、請求項３０５〜３１７のいずれか一項に記載の使用。
【請求項３１９】
前記慢性疾患が、にきび、後天性免疫不全症候群（ＡＩＤＳ）、強直性脊椎炎、喘息、アジソン病、アレルギー性鼻炎、アルツハイマー病、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ、ルーゲーリック病）、再生不良性貧血、関節炎、アテローム性動脈硬化症、注意欠陥多動性障害（ＡＤＨＤ、ＡＤＤ）、自閉症スペクトラム障害、良性前立腺過形成、双極性気分障害、気管支拡張症、癌、心不全、心筋症、慢性アルコール依存症、慢性貧血、慢性肝炎、慢性アメーバ症、慢性閉塞性肺疾患、慢性胃炎、慢性食道炎、慢性口腔疾患、慢性中毒、慢性腎疾患、コラーゲン病、クローン病、クッシング病、嚢胞性線維症、痴呆、皮膚筋炎、うつ病、リズム障害、摂食障害（神経性食欲不振症、神経性過食症、過食症）、湿疹、子宮内膜症、てんかん、繊維芽細胞腫、胃食道逆流症（ＧＥＲＤ）、緑内障、痛風、グレーブス病、血友病、高脂血症、下垂体機能亢進症、下垂体機能低下症、下垂体腺腫、甲状腺機能低下症、特発性血小板減少性紫斑病、閉経、片頭痛、運動ニューロン疾患、多発性硬化症、筋ジストロフィー、重症筋無力症、筋疾患、神経障害、肥満、強迫性障害、変形性関節症、骨粗鬆症、麻痺（対麻痺、四肢麻痺）、パーキンソン病、パジェット病、結節性多発動脈炎、多嚢胞卵巣、乾癬、乾癬性関節炎、肺間質性線維症、反射性交感神経ジストロフィー（ＲＳＤ）症候群、関節リウマチ、強皮症、統合失調症、シェーグレン症候群、喫煙及びタバコ関連疾患、全身性エリテマトーデス、三叉神経痛、結核、潰瘍性大腸炎、又は尿失禁を含む、請求項３０５〜３１８のいずれか一項に記載の使用。
【請求項３２０】
前記急性疾患が、急性アルコール中毒、急性アメーバ症、急性聴覚疾患、急性脳疾患、急性癌、急性心血管疾患、急性歯科疾患、急性皮膚疾患、急性食道疾患、急性胃腸疾患、急性腎疾患、急性肝疾患、急性筋疾患、急性眼疾患、急性中毒、急性口腔疾患、急性変形性関節症、急性咽頭疾患、急性前立腺疾患、急性傷害（外傷）、急性腹膜疾患、急性呼吸器疾患、又は急性尿生殖器疾患を含む、請求項３０５〜３１８のいずれか一項に記載の使用。
【請求項３２１】
前記感染症が、炭疽菌（Bacillus anthracis）、百日咳菌（Bordetella pertussis）、ライム病ポレリア（Borrelia burgdorferi）、ウシ流産菌（Brucella abortus）、イヌ流産菌（Brucella canis）、マルタ熱菌（Brucella melitensis）、ブタ流産菌（Brucella suis）、カンピロバクター・ジェジュニ（Campylobacter jejuni）、肺炎クラミジア（Chlamydophila pneumoniae）、クラミジア・トラコマチス（Chlamydia trachomatis）、オウム病クラミジア（Chlamydophila psittaci）、ボツリヌス菌（Clostridium botulinum）、クロストリジウム・ディフィシレ（Clostridium difficile）、ウェルシュ菌（Clostridium perfringens）、破傷風菌（Clostridium tetani）、ジフテリア菌（Corynebacterium diphtheriae）、赤痢アメーバ（Entamoeba histolytica）、大便連鎖球菌（Enterococcus faecalis）、エンテロコッカス・フェシウム（Enterococcus faecium）、大腸菌（Escherichia coli）、腸管毒素原性大腸菌（Enterotoxigenic Escherichia coli）、腸管病原性大腸菌（Enteropathogenic E. coli）、腸管出血性大腸菌Ｏ１５７：Ｈ７（Enterohemorrhagic Escherichia coli O157:H7）、野兎病菌（Francisella tularensis）、真菌（カンジダ・アルビカンス（Candida albicans））、インフルエンザ菌（Haemophilus influenza）、ヘリコバクター・ピロリ（Helicobacter pylori）、リーシュマニア属（カラアザール）（Leishmania（Kala Azar））、レジオネラ・ニューモフィラ（Legionella pneumophila）、レプトスピラ・インターロガンス（Leptospira interrogans）、レプトスピラ・インターロガンス（Leptospira interrogans）、リステリア菌（Listeria monocytogenes）、ハンセン菌（Mycobacterium leprae）、ヒト結核菌（Mycobacterium tuberculosis）、肺炎マイコプラズマ（Mycoplasma pneumoniae）、淋菌（Neisseria gonorrhoeae）、髄膜炎菌（Neisseria meningitides）、寄生虫（原虫、寄生蠕虫、外部寄生虫）、変形体（マラリア）、緑膿菌（Pseudomonas aeruginosa）、リケッチア・リケッチイ（Rickettsia）、サルモネラ菌亜種エンテリカ（Salmonella enterica subsp. Enterica）、ネズミチフス菌（Salmonella typhimurium）、ソンネ赤痢菌（Shigella sonnei）、黄色ブドウ球菌（Staphylococcus aureus）、表皮ブドウ球菌（Staphylococcus epidermidis）、スタフィロコッカス・サプロフィティカス（Staphylococcus saprophyticus）、アガラクチア菌（Streptococcus agalactiae）、肺炎連鎖球菌（Streptococcus pneumoniae）、化膿連鎖球菌（Streptococcus pyogenes）、梅毒トレポネーマ（Treponema pallidum）、コレラ菌（Vibrio cholerae）、又はペスト菌（Yersinia pestis）を含む微生物によって引き起こされる、請求項３０５〜３１８のいずれか一項に記載の使用。
【請求項３２２】
前記感染症が、アデノウイルス、ＳＡＲＳコロナウイル、スコクサッキーウイルス、デングウイルス、エボラウイルス、エプスタインバーウイルス、Ａ型肝炎ウイルス、Ｂ型肝炎ウイルス、Ｃ型肝炎ウイルス、単純ヘルペスウイルス、サイトメガロウイルス、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）、インフルエンザウイルス、麻疹ウイルス、ムンプス・ウイルス、ヒトパピローマウイルス、ヒトパラインフルエンザウイルス、ポリオウイルス、狂犬病ウイルス、ヒトＲＳウイルス、風疹ウイルス、水痘帯状疱疹ウイルス、又は黄熱病ウイルスを含む微生物によって引き起こされる、請求項３０５〜３１８のいずれか一項に記載の使用。
【請求項３２３】
生物学的サンプル中のホスファターゼの濃度を決定するための酵素結合免疫吸着検定（ＥＬＩＳＡ）システムであって、固相支持系、ホスファターゼに特異的に結合する一次抗体及び／又は二次抗体、前記一次抗体及び／又は二次抗体に特異的に結合する西洋ワサビペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）又はアルカリホスファターゼ（ＡＰ）コンジュゲート抗体、並びにＨＲＰ又はＡＰの発色基質を含む、酵素結合免疫吸着検定（ＥＬＩＳＡ）システム。
【請求項３２４】
前記生物学的サンプルが、便、唾液、尿、血液、血漿、血清、涙液、汗、膿汁、胃液、腸液、眼液、腹水、膣液、脳脊髄液、又は体腔液、好ましくは便サンプルを含む、請求項３２３に記載のシステム。
【請求項３２５】
生物学的サンプル中のホスファターゼの濃度を決定するための酵素結合免疫吸着検定（ＥＬＩＳＡ）システムの使用であって、前記システムが、固相支持系、ホスファターゼに特異的に結合する一次抗体及び／又は二次抗体、前記一次抗体及び／又は二次抗体に特異的に結合する西洋ワサビペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）又はアルカリホスファターゼ（ＡＰ）コンジュゲート抗体、並びにＨＲＰ又はＡＰの発色基質を含む、使用。
【請求項３２６】
前記生物学的サンプルが、便、唾液、尿、血液、血漿、血清、涙液、汗、膿汁、胃液、腸液、眼液、腹水、膣液、脳脊髄液、又は体腔液、好ましくは便サンプルを含む、請求項３２５に記載の使用。
【請求項３２７】
初期糖尿病、初期代謝疾患、初期メタボリックシンドローム、糖尿病、代謝疾患、又はメタボリックシンドロームを検出するための酵素結合免疫吸着検定（ＥＬＩＳＡ）システムであって、固相支持系、ホスファターゼに特異的に結合する一次抗体及び／又は二次抗体、前記一次抗体及び／又は二次抗体に特異的に結合する西洋ワサビペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）又はアルカリホスファターゼ（ＡＰ）コンジュゲート抗体、並びにＨＲＰ又はＡＰの発色基質を含む、酵素結合免疫吸着検定（ＥＬＩＳＡ）システム。
【請求項３２８】
前記初期糖尿病、初期代謝疾患、初期メタボリックシンドローム、糖尿病、代謝疾患、又はメタボリックシンドロームが、平均正常値よりも１％〜１００％低いホスファターゼの濃度を有する対象によって特徴付けられる、請求項３２７に記載のシステム。
【請求項３２９】
前記初期糖尿病、初期代謝疾患、初期メタボリックシンドローム、糖尿病、代謝疾患、又はメタボリックシンドロームが、時間経過によるホスファターゼ濃度の持続的な減少を含む時間的ホスファターゼプロファイルを有する対象によって特徴付けられる、請求項３２７に記載のシステム。
【請求項３３０】
前記持続的な減少が、以前に測定された濃度から約５０％の減少である、請求項３２９に記載のシステム。
【請求項３３１】
前記対象が、ヒト、ウシ、ブタ、ヒツジ、ヤギ、乳牛、ウマ、イヌ、ネコ、サル、ウサギ、ラット、マウス、ニワトリ、シチメンチョウであり、好ましくはヒトである、請求項３２８〜３３０のいずれか一項に記載のシステム。
【請求項３３２】
前記ホスファターゼが、アルカリホスファターゼ、腸アルカリホスファターゼ、胎盤アルカリホスファターゼ、組織非特異的アルカリホスファターゼ（肝臓／骨／腎臓アルカリホスファターゼ）、生殖細胞アルカリホスファターゼ、好中球アルカリホスファターゼ、酸性ホスファターゼ、又はホスファターゼ活性を有するペプチド、好ましくは腸アルカリホスファターゼを含む、請求項３２７〜３３１のいずれか一項に記載のシステム。
【請求項３３３】
前記対象が生物学的サンプルを提供し、前記生物学的サンプルが、便、唾液、尿、血液、血漿、血清、涙液、汗、膿汁、胃液、腸液、眼液、腹水、膣液、脳脊髄液、又は体腔液、好ましくは便サンプルを含む、請求項３２８〜３３２のいずれか一項に記載のシステム。
【請求項３３４】
対象からの１つ又は２つ以上の生物学的サンプル中の血清エンドトキシン、炎症誘発性ヌクレオチド、サイトカイン、ケモカイン、サイトカイン受容体のアンタゴニスト、又は抗炎症因子の１つ以上の濃度を測定するための手段を更に含み、前記１つ又は２つ以上の生物学的サンプルが、単一の時点又は複数の時点で収集される、請求項３２７〜３３３のいずれか一項に記載のシステム。
【請求項３３５】
前記初期糖尿病又は糖尿病が、２型糖尿病、妊娠性糖尿病、又は崩尿症を含む、請求項３２７〜３３４のいずれか一項に記載のシステム。
【請求項３３６】
前記初期代謝疾患又は代謝疾患が、心血管疾患、冠動脈心疾患、脳血管疾患、脳卒中、末梢血管疾患、非アルコール性脂肪肝疾患、網膜症、喘息、慢性肺閉塞性疾患、嚢胞性線維症、アルツハイマー病、関節炎、湿疹、又は乾癬を含む、請求項３２７〜３３４のいずれか一項に記載のシステム。
【請求項３３７】
前記初期メタボリックシンドローム又はメタボリックシンドロームが、肥満、高血糖、インスリン耐性、高インスリン血症、脂質異常症、高コレステロール血症、高トリグリセリド血症、低高密度リポタンパク質（ＨＤＬ）、高低密度リポタンパク質（ＬＤＬ）、高血圧、脂肪肝、又はこれらの組み合わせを含む、請求項３２７〜３３４のいずれか一項に記載のシステム。
【請求項３３８】
初期糖尿病、初期代謝疾患、初期メタボリックシンドローム、糖尿病、代謝疾患、又はメタボリックシンドロームを検出するための酵素結合免疫吸着検定（ＥＬＩＳＡ）システムの使用であって、前記システムが、固相支持系、ホスファターゼに特異的に結合する一次抗体及び／又は二次抗体、前記一次抗体及び／又は二次抗体に特異的に結合する西洋ワサビペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）又はアルカリホスファターゼ（ＡＰ）コンジュゲート抗体、並びにＨＲＰ又はＡＰの発色基質を含む、使用。
【請求項３３９】
前記初期糖尿病、初期代謝疾患、初期メタボリックシンドローム、糖尿病、代謝疾患、又はメタボリックシンドロームが、平均正常値よりも１％〜１００％低いホスファターゼの濃度を有する対象によって特徴付けられる、請求項３３８に記載の使用。
【請求項３４０】
前記初期糖尿病、初期代謝疾患、初期メタボリックシンドローム、糖尿病、代謝疾患、又はメタボリックシンドロームが、時間経過によるホスファターゼ濃度の持続的な減少を含む時間的ホスファターゼプロファイルを有する対象によって特徴付けられる、請求項３３８に記載の使用。
【請求項３４１】
前記持続的な減少が、以前に測定された濃度から約５０％の減少である、請求項３４０に記載の使用。
【請求項３４２】
前記対象が、ヒト、ウシ、ブタ、ヒツジ、ヤギ、乳牛、ウマ、イヌ、ネコ、サル、ウサギ、ラット、マウス、ニワトリ、又はシチメンチョウであり、好ましくはヒトである、請求項３３９〜３４１のいずれか一項に記載の使用。
【請求項３４３】
前記ホスファターゼが、アルカリホスファターゼ、腸アルカリホスファターゼ、胎盤アルカリホスファターゼ、組織非特異的アルカリホスファターゼ（肝臓／骨／腎臓アルカリホスファターゼ）、生殖細胞アルカリホスファターゼ、好中球アルカリホスファターゼ、酸性ホスファターゼ、又はホスファターゼ活性を有するペプチド、好ましくは腸アルカリホスファターゼを含む、請求項３３８〜３４２のいずれか一項に記載の使用。
【請求項３４４】
前記対象が生物学的サンプルを提供し、前記生物学的サンプルが、便、唾液、尿、血液、血漿、血清、涙液、汗、膿汁、胃液、腸液、眼液、腹水、膣液、脳脊髄液、又は体腔液、好ましくは便サンプルを含む、請求項３３９〜３４３のいずれか一項に記載の使用。
【請求項３４５】
前記システムが、対象からの１つ又は２つ以上の生物学的サンプル中の血清エンドトキシン、炎症誘発性ヌクレオチド、サイトカイン、ケモカイン、サイトカイン受容体のアンタゴニスト、又は抗炎症因子の１つ以上の濃度を測定するための手段を更に含み、前記１つ又は２つ以上の生物学的サンプルが、単一の時点又は複数の時点で収集される、請求項３３８〜３４４のいずれか一項に記載の使用。
【請求項３４６】
前記初期糖尿病又は糖尿病が、２型糖尿病、妊娠性糖尿病、又は崩尿症を含む、請求項３３８〜３４５のいずれか一項に記載の使用。
【請求項３４７】
前記初期代謝疾患又は代謝疾患が、心血管疾患、冠動脈心疾患、脳血管疾患、脳卒中、末梢血管疾患、非アルコール性脂肪肝疾患、網膜症、喘息、慢性肺閉塞性疾患、嚢胞性線維症、アルツハイマー病、関節炎、湿疹、又は乾癬を含む、請求項３３８〜３４５のいずれか一項に記載の使用。
【請求項３４８】
前記初期メタボリックシンドローム又はメタボリックシンドロームが、肥満、高血糖、インスリン耐性、高インスリン血症、脂質異常症、高コレステロール血症、高トリグリセリド血症、低高密度リポタンパク質（ＨＤＬ）、高低密度リポタンパク質（ＬＤＬ）、高血圧、脂肪肝、又はこれらの組み合わせを含む、請求項３３８〜３４５のいずれか一項に記載の使用。
【請求項３４９】
便サンプル中のアルカリホスファターゼを定量する方法であって、
前記便サンプルをホスファターゼ基質に接触させること；
前記便サンプル内に含まれるアルカリホスファターゼが前記ホスファターゼ基質を加水分解して無機リン酸塩が放出されるようにすること；
前記無機リン酸塩をマラカイトグリーンモリブデン酸塩で処置してグリーンリンモリブデン酸複合体を形成すること；及び
前記複合体の濃度を定量すること
を含み、
前記複合体の濃度が、前記便サンプル中のアルカリホスファターゼの濃度に比例する、方法。
【請求項３５０】
マラカイトグリーンベースのリン酸塩定量アッセイの使用であって、前記アッセイが、
便サンプルをホスファターゼ基質に接触させること；
前記便サンプル内に含まれるアルカリホスファターゼが前記ホスファターゼ基質を加水分解して無機リン酸塩が放出されるようにすること；
前記無機リン酸塩をマラカイトグリーンモリブデン酸塩で処置してグリーンリンモリブデン酸複合体を形成すること；及び
前記複合体の濃度を定量すること
を含み、
前記複合体の濃度が、前記便サンプル中のアルカリホスファターゼの濃度に比例する、使用。
【発明の詳細な説明】
【背景技術】
【０００１】
背景
２型糖尿病（Ｔ２ＤＭ）は、高血糖によって特徴付けられ、世界の人口の約５．３％に影響を与える重要な世界的健康問題であり、医療費、罹患率、及び死亡率に関して深刻な結果をもたらしている（American Diabetes Association. Diagnosis and classification of diabetes mellitus. Diabetes Care. 2014 Jan;37 Suppl 1 :S81-90; Abdullah et al. Int J Endocrinol.2014:593982; International Diabetes Federation, IDF Diabetes Atlas, 2012, http://www.idf.org/diabetesatlas. http://www.idf.org/diabetesatlas/update-2014; http://www.idf.org/diabetesatlas; http://www.idf.org/diabetesatlas/update-2014; American Diabetes Association. Economic costs of diabetes in the U.S. in 2012. Diabetes Care 2013;36: 1033-1046）。
【０００２】
Ｔ２ＤＭは、血漿グルコース値を測定することによって診断され、空腹時の血漿グルコース（ＦＰＧ）値＞７．０ｍｍｏｌｅ／Ｌ（１２６ｍｇ／ｄｌ）が、Ｔ２ＤＭの診断と見なされる。高血糖は、すでに発症しているＴ２ＤＭ、又はＴ２ＤＭの発症の最終段階に関連する。従って、ＦＰＧの測定は、個人が初期糖尿病であるか否かをかなり前（数年前）から予測するために使用することができず、これは、個人が、現在のＦＰＧ値が正常であっても将来糖尿病を発症する可能性があることを意味する。従って、初期糖尿病及び／又は他の疾患を予測する診断プロトコルが必要である。また、これらの初期段階又は顕性疾患の治療的介入及び疾患の予後の決定は極めて重要である。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００３】
発明の概要
本開示によると、２型糖尿病（Ｔ２ＤＭ）患者は、対照である非糖尿病の健康な対象と比較して、患者の便中の刷子縁酵素腸アルカリホスファターゼ（ＩＡＰ）の量が少ない。ヒト及び他の動物、例えば、ウシ、ブタ、ヒツジ、ヤギ、乳牛、ウマ、イヌ、ネコ、サル、ウサギ、ラット、マウス、ニワトリ、シチメンチョウなどの便のＩＡＰレベルの時間的プロファイルを作成することによって初期糖尿病、並びに他の代謝障害（例えば、心血管疾患（冠動脈心疾患）、脳血管疾患（脳卒中）、末梢血管疾患、非アルコール性脂肪肝疾患など）及びメタボリックシンドローム（例えば、肥満、高血糖、インスリン耐性、高インスリン血症、脂質異常症、高コレステロール血症、高トリグリセリド血症、低高密度リポタンパク質（ＨＤＬ）、高低密度リポタンパク質（ＬＤＬ）、高血圧、脂肪肝など）を診断するためのプロトコルが本明細書に開示される。ＩＡＰの時間的プロファイルは、単一の時点又は複数の時点で決定されるＩＡＰ濃度からなる。健康な対象の以前の高いＩＡＰレベルに対する低いＩＡＰレベル又は持続的な減少は、初期糖尿病、他の代謝障害、又はメタボリックシンドロームを示唆する。また、限定されるものではないが、心筋梗塞、癌、結核、サルモネラ症、ＡＩＤＳ、肝炎、急性又は慢性腎障害を含む代謝疾患、急性若しくは慢性疾患、又は感染症の診断又は予後のためのＩＡＰの時間的プロファイリングの使用も開示される。また、正常で健康な対象の個人的な便ＩＡＰプロファイルを、将来の使用のために基準ＩＡＰプロファイルとして使用できることも開示される。
【０００４】
また、特定の用量のＩＡＰを、経口サプリメントとして哺乳動物に投与して、初期糖尿病、他の代謝障害、又はメタボリックシンドロームのリスクを低減し得ることも開示される。便中のＩＡＰのレベルは個人間で大きく異なる。対照である健康な人の平均ＩＡＰレベル（本明細書で開示されるアッセイ条件を用いて約６５Ｕ／ｇｍ便）よりも低い個人は、即座にＩＡＰサプリメントを提供することができるが、ＩＡＰのレベルが高い個人は、複数の時点を含むＩＡＰレベルの時間的プロファイルを作成できるように更に調べることができる。限定されるものではないが、心筋梗塞、癌、結核、サルモネラ症、ＡＩＤＳ、肝炎、急性又は慢性腎障害を含む代謝疾患、急性若しくは慢性疾患、又は感染症の処置のためにＩＡＰを哺乳動物に投与できることが更に開示される。
【０００５】
例示的な一実施形態では、初期糖尿病、初期代謝疾患、初期メタボリックシンドローム、糖尿病、代謝疾患、又はメタボリックシンドロームを診断するため又はその予後を決定するための方法は、哺乳動物の便中のホスファターゼの濃度を測定すること、及びこの濃度を正常な濃度範囲と比較することを含む。
【０００６】
別の例示的な実施形態では、この方法は、単一の時点又は複数の時点でホスファターゼの濃度を測定することによって時間的プロファイルを作成することを更に含む。
【０００７】
別の例示的な実施形態では、ホスファターゼは、腸アルカリホスファターゼ、胎盤アルカリホスファターゼ、組織非特異的アルカリホスファターゼ（肝臓／骨／腎臓アルカリホスファターゼ）、生殖細胞アルカリホスファターゼ、好中球アルカリホスファターゼ、哺乳動物アルカリホスファターゼ、細菌アルカリホスファターゼ、真菌アルカリホスファターゼ、アルカリホスファターゼ、酸性ホスファターゼ、又はホスファターゼ活性を有するペプチドである。
【０００８】
なお更なる例示的な一実施形態では、便サンプル中のホスファターゼの濃度の測定に加えて、唾液、尿、血液、血漿、血清、胃液、腸液、眼液、腹水、膣液、又は体腔液のサンプルも分析される。
【０００９】
別の例示的な実施形態では、初期糖尿病又は糖尿病は、２型糖尿病、妊娠性糖尿病、尿崩症、又は１型糖尿病である。
【００１０】
別の例示的な実施形態では、初期代謝疾患又は代謝疾患は、心血管疾患、冠動脈心疾患、脳血管疾患、脳卒中、末梢血管疾患、非アルコール性脂肪肝疾患、網膜症、喘息、慢性肺閉塞性疾患、嚢胞性線維症、アルツハイマー病、関節炎、湿疹、又は乾癬である。
【００１１】
別の例示的な実施形態では、初期メタボリックシンドローム又はメタボリックシンドロームは、肥満、高血糖、インスリン耐性、高インスリン血症、脂質異常症、高コレステロール血症、高トリグリセリド血症、低高密度リポタンパク質（ＨＤＬ）、高低密度リポタンパク質（ＬＤＬ）、高血圧、又は脂肪肝である。
【００１２】
例示的な一実施形態では、初期糖尿病、初期代謝疾患、初期メタボリックシンドローム、糖尿病、代謝疾患、又はメタボリックシンドロームのリスクを低減するため又はそれを処置するための方法は、有効量のホスファターゼを、それを必要とする哺乳動物に投与することを含む。
【００１３】
別の例示的な実施形態では、ホスファターゼは、腸アルカリホスファターゼ、胎盤アルカリホスファターゼ、組織非特異的アルカリホスファターゼ（肝臓／骨／腎臓アルカリホスファターゼ）、生殖細胞アルカリホスファターゼ、好中球アルカリホスファターゼ、アルカリホスファターゼ、哺乳動物アルカリホスファターゼ、細菌アルカリホスファターゼ、真菌アルカリホスファターゼ、アルカリホスファターゼ、酸性ホスファターゼ、又はホスファターゼ活性を有するペプチドである。
【００１４】
なお別の例示的な実施形態では、ホスファターゼは、天然又は組換えイソ型である腸アルカリホスファターゼである。
【００１５】
なお別の例示的な実施形態では、ホスファターゼは、変異イソ型である腸アルカリホスファターゼである。
【００１６】
なお更なる例示的な実施形態では、ホスファターゼは、天然ヒト腸アルカリホスファターゼである腸アルカリホスファターゼである。
【００１７】
なお別の例示的な実施形態では、ホスファターゼは、組換えヒト腸アルカリホスファターゼである腸アルカリホスファターゼである。
【００１８】
なお別の例示的な実施形態では、ホスファターゼは、天然仔ウシ又はウシ腸アルカリホスファターゼである腸アルカリホスファターゼである。
【００１９】
なお別の例示的な実施形態では、ホスファターゼは、組換え仔ウシ又はウシ腸アルカリホスファターゼである腸アルカリホスファターゼである。
【００２０】
なお更なる例示的な一実施形態では、ホスファターゼは、経口投与、局所投与、皮下投与、皮内投与、筋内投与、静脈内投与、経膣投与、又は直腸投与される。
【００２１】
なお更なる例示的な一実施形態では、ホスファターゼは、口噴霧、鼻噴霧、皮膚噴霧、膣噴霧、又は直腸噴霧によって投与される。
【００２２】
なお更なる例示的な一実施形態では、ホスファターゼは、食前、食中、又は食後に投与される。
【００２３】
別の例示的な実施形態では、ホスファターゼは、予防的（即ち、リスクの低減）、姑息的、又は治療的エンドポイントの治療目標を達成するのに有効な量で投与される。
【００２４】
更なる例示的な一実施形態では、ホスファターゼは、便中の腸アルカリホスファターゼの定常状態レベルを維持するのに有効な量で投与される。
【００２５】
なお更なる例示的な一実施形態では、ホスファターゼは、本明細書に記載のアルカリホスファターゼアッセイを用いて測定される、便１グラム当たり１〜６５０単位の腸アルカリホスファターゼの定常状態レベルに維持するのに有効な量、好ましくは便１グラム当たり６５単位の腸アルカリホスファターゼの定常状態レベルを維持するのに有効な量で投与される。
【００２６】
別の例示的な実施形態では、ホスファターゼは、１投与当たり１〜６，５００単位のホスファターゼの量である。
【００２７】
別の例示的な実施形態では、ホスファターゼは、タブレット、ゲル、カプセル、液体、又は半固体のチューインガムで投薬される。
【００２８】
別の例示的な実施形態では、ホスファターゼは、乳、食物、又は飲料に入れて投薬される。
【００２９】
別の例示的な実施形態では、ホスファターゼは、抗糖尿病薬、抗高血圧薬、抗コレステロール薬、抗うつ病薬、又は抗生物質からなる群からの他の薬剤と共に投薬される。
【００３０】
別の例示的な実施形態では、ホスファターゼは、限定されるものではないが、酪酸ナトリウム、甲状腺ホルモン、クルクミン、オメガ−３脂肪酸、又はこれらの組み合わせを含むＩＡＰの上方制御剤からなる群からの他の薬剤と共に投薬される。
【００３１】
別の例示的な実施形態では、ホスファターゼは、限定されるものではないが、タンパク質又はペプチド、好ましくはβ−ラクタマーゼを含む抗腸内毒素因子からなる群からの他の薬剤と共に投薬される。
【００３２】
別の例示的な実施形態では、ホスファターゼは、プロバイオティクス細菌からなる群からの他の薬剤と共に投薬される。
【００３３】
別の例示的な実施形態では、ホスファターゼは、高度に精製された、部分的に精製された、又は精製されていない腸アルカリホスファターゼである。
【００３４】
なお別の例示的な実施形態では、ホスファターゼは対象に投与され、この対象はヒトである。
【００３５】
なお更なる例示的な実施形態では、ホスファターゼは対象に投与され、この対象は、乳牛、ブタ、ヒツジ、イヌ、ネコ、ウマ、サル、ウシ、ニワトリ、シチメンチョウ、ラット、マウス、トリ、又は哺乳動物である。
【００３６】
例示的な一実施形態では、慢性疾患、急性疾患、感染症、障害、若しくは症候群を診断するため又はその予後を決定するための方法は、哺乳動物の便中のホスファターゼの濃度を測定すること、及びこの濃度を正常な濃度範囲と比較することを含む。
【００３７】
更なる例示的な一実施形態では、慢性疾患、急性疾患、感染症、障害、又は症候群のリスクを低減するため又はそれを処置するための方法は有効量のホスファターゼを、、それを必要とする哺乳動物に投与することを含む。
【００３８】
別の例示的な実施形態では、慢性疾患は、にきび、後天性免疫不全症候群（ＡＩＤＳ）、強直性脊椎炎、喘息、アジソン病、アレルギー性鼻炎、アルツハイマー病、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ、ルーゲーリック病）、再生不良性貧血、関節炎、アテローム性動脈硬化症、注意欠陥多動性障害（ＡＤＨＤ、ＡＤＤ）、自閉症スペクトラム障害、良性前立腺過形成、双極性気分障害、気管支拡張症、癌、心不全、心筋症、慢性アルコール依存症、慢性貧血、慢性肝炎、慢性アメーバ症、慢性閉塞性肺疾患、慢性胃炎、慢性食道炎、慢性口腔疾患、慢性中毒、慢性腎疾患、コラーゲン病、クローン病、クッシング病、嚢胞性線維症、痴呆、皮膚筋炎、うつ病、リズム障害、摂食障害（神経性食欲不振症、神経性過食症、過食症）、湿疹、子宮内膜症、てんかん、繊維芽細胞腫、胃食道逆流症（ＧＥＲＤ）、緑内障、痛風、グレーブス病、血友病、高脂血症、下垂体機能亢進症、下垂体機能低下症、下垂体腺腫、甲状腺機能低下症、特発性血小板減少性紫斑病、閉経、片頭痛、運動ニューロン疾患、多発性硬化症、筋ジストロフィー、重症筋無力症、筋疾患、神経障害、肥満、強迫性障害、変形性関節症、骨粗鬆症、麻痺（対麻痺、四肢麻痺）、パーキンソン病、パジェット病、結節性多発動脈炎、多嚢胞卵巣、乾癬、乾癬性関節炎、肺間質性線維症、反射性交感神経ジストロフィー（ＲＳＤ）症候群、関節リウマチ、強皮症、統合失調症、シェーグレン症候群、喫煙及びタバコ関連疾患、全身性エリテマトーデス、三叉神経痛、結核、潰瘍性大腸炎、又は尿失禁である。
【００３９】
別の例示的な実施形態では、急性疾患は、急性アルコール中毒、急性アメーバ症、急性聴覚疾患、急性脳疾患、急性癌、急性心血管疾患、急性歯科疾患、急性皮膚疾患、急性食道疾患、急性胃腸疾患、急性腎疾患、急性肝疾患、急性筋疾患、急性眼疾患、急性中毒、急性口腔疾患、急性変形性関節症、急性咽頭疾患、急性前立腺疾患、急性傷害（外傷）、急性腹膜疾患、急性呼吸器疾患、又は急性尿生殖器疾患である。
【００４０】
別の例示的な実施形態では、感染症は、炭疽菌（Bacillus anthracis）、百日咳菌（Bordetella pertussis）、ライム病ポレリア（Borrelia burgdorferi）、ウシ流産菌（Brucella abortus）、イヌ流産菌（Brucella canis）、マルタ熱菌（Brucella melitensis）、ブタ流産菌（Brucella suis）、カンピロバクター・ジェジュニ（Campylobacter jejuni）、肺炎クラミジア（Chlamydophila pneumoniae）、クラミジア・トラコマチス（Chlamydia trachomatis）、オウム病クラミジア（Chlamydophila psittaci）、ボツリヌス菌（Clostridium botulinum）、クロストリジウム・ディフィシレ（Clostridium difficile）、ウェルシュ菌（Clostridium perfringens）、破傷風菌（Clostridium tetani）、ジフテリア菌（Corynebacterium diphtheriae）、赤痢アメーバ（Entamoeba histolytica）、大便連鎖球菌（Enterococcus faecalis）、エンテロコッカス・フェシウム（Enterococcus faecium）、大腸菌（Escherichia coli）、腸管毒素原性大腸菌（Enterotoxigenic Escherichia coli）、腸管病原性大腸菌（Enteropathogenic E. coli）、腸管出血性大腸菌Ｏ１５７：Ｈ７（Enterohemorrhagic Escherichia coli O157:H7）、野兎病菌（Francisella tularensis）、真菌（カンジダ・アルビカンス（Candida albicans））、インフルエンザ菌（Haemophilus influenza）、ヘリコバクター・ピロリ（Helicobacter pylori）、リーシュマニア属（カラアザール）（Leishmania（Kala Azar））、レジオネラ・ニューモフィラ（Legionella pneumophila）、レプトスピラ・インターロガンス（Leptospira interrogans）、レプトスピラ・インターロガンス（Leptospira interrogans）、リステリア菌（Listeria monocytogenes）、ハンセン菌（Mycobacterium leprae）、ヒト結核菌（Mycobacterium tuberculosis）、肺炎マイコプラズマ（Mycoplasma pneumoniae）、淋菌（Neisseria gonorrhoeae）、髄膜炎菌（Neisseria meningitides）、寄生虫（原虫、寄生蠕虫、外部寄生虫）、変形体（マラリア）、緑膿菌（Pseudomonas aeruginosa）、リケッチア・リケッチイ（Rickettsia）、サルモネラ菌亜種エンテリカ（Salmonella enterica subsp. Enterica）、ネズミチフス菌（Salmonella typhimurium）、ソンネ赤痢菌（Shigella sonnei）、黄色ブドウ球菌（Staphylococcus aureus）、表皮ブドウ球菌（Staphylococcus epidermidis）、スタフィロコッカス・サプロフィティカス（Staphylococcus saprophyticus）、アガラクチア菌（Streptococcus agalactiae）、肺炎連鎖球菌（Streptococcus pneumoniae）、化膿連鎖球菌（Streptococcus pyogenes）、梅毒トレポネーマ（Treponema pallidum）、コレラ菌（Vibrio cholerae）、又はペスト菌（Yersinia pestis）によって引き起こされる。
【００４１】
なお別の例示的な実施形態では、感染症は、アデノウイルス、コクサッキーウイルス、デングウイルス、エボラウイルス、エプスタインバーウイルス、Ａ型肝炎ウイルス、Ｂ型肝炎ウイルス、Ｃ型肝炎ウイルス、単純ヘルペスウイルス、サイトメガロウイルス、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）、インフルエンザウイルス、麻疹ウイルス、ムンプス・ウイルス、ヒトパピローマウイルス、ヒトパラインフルエンザウイルス、ポリオウイルス、狂犬病ウイルス、ヒトＲＳウイルス、風疹ウイルス、重症急性呼吸器症候群（ＳＡＲＳ）コロナウイルス、水痘帯状疱疹ウイルス、又は黄熱病ウイルスによって引き起こされる。
【００４２】
例示的な一実施形態では、便中のホスファターゼの濃度を決定するためのキットが提供され、このキットは、規定量の便を測定するための器具、便希釈緩衝液又は水、ホスファターゼの基質、及びホスファターゼアッセイ緩衝液から構成される。規定量の便を測定するための器具は、例えば、所定の容積のスプーン又はスコップであり得る。ホスファターゼの濃度は、分光光度計、生化学分析装置、高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）装置、比色計、照度計、又は機械、生化学、電気、若しくは電子装置を用いて測定される。
【００４３】
例示的な一実施形態では、便中のホスファターゼの濃度を決定するためのキットが提供され、このキットは、規定量の便を測定するための器具（所定の容積のスプーン又はスコップ）、ホスファターゼの基質、及びホスファターゼアッセイ緩衝液から構成される。便サンプルが、便希釈緩衝液又は水に溶解される。次いで、濾過又は無濾過の便懸濁液が、ホスファターゼの基質と混合され、色が現れるように特定の期間待ち、現れた色を基準の写真と比較し、及び生物学的サンプル中のアルカリホスファターゼの量を定量する。現れた色を基準の写真と比較することによってアルカリホスファターゼの量を定量する代わりして、写真の画素をカウントすることによって定量することができる。
【００４４】
別の例示的な実施形態では、ホスファターゼは、腸アルカリホスファターゼ、胎盤アルカリホスファターゼ、組織非特異的アルカリホスファターゼ（肝臓／骨／腎臓アルカリホスファターゼ）、生殖細胞アルカリホスファターゼ、好中球アルカリホスファターゼ、アルカリホスファターゼ、哺乳動物アルカリホスファターゼ、細菌アルカリホスファターゼ、真菌アルカリホスファターゼ、アルカリホスファターゼ、酸性ホスファターゼ、又はホスファターゼ活性を有するペプチドである。
【００４５】
別の例示的な実施形態では、ホスファターゼの基質は、液体又は固形で提供される。
【００４６】
別の例示的な実施形態では、ホスファターゼの基質は、膜、紙、スティック、ガラス、プラスチック、ビーズ、又はスライドを含む固形培地に付着される。
【００４７】
なお更なる例示的な一実施形態では、便中の腸アルカリホスファターゼを定量するための酵素結合免疫吸着検定（ＥＬＩＳＡ）システムが提供される。
【００４８】
なお更なる例示的な一実施形態では、便中の腸アルカリホスファターゼを定量するための、ＣＤＰ−スター基質（CDP-star substrate）（２−クロロ−５−（４−メトキシスピロ［１，２−ジオキセタン−３，２’（５’−クロロ）−トリシクロ［３．３．１．１３．７］デカン］−４−イル）−１−フェニルホスフェート二ナトリウム塩）をベースとする発光ホスファターゼアッセイシステムが提供される。
【００４９】
なお更なる例示的な一実施形態では、便中の腸アルカリホスファターゼを定量するためのマラカイトグリーンベースのリン酸塩検出システムが提供される。
【００５０】
別の例示的な実施形態では、初期糖尿病、初期代謝疾患、初期メタボリックシンドローム、糖尿病、代謝疾患、又はメタボリックシンドロームを診断するため又はその予後を決定するための方法は、ホスファターゼの基質を含む固形又は液体培地を用意すること、生物学的サンプル、好ましくは便サンプルをこの固形又は液体培地に接触させること、色が現れるように特定の期間待つこと、現れた色を基準の写真と比較すること、及び生物学的サンプル中のアルカリホスファターゼの量を定量することを含む。現れた色を基準の写真と比較することによってアルカリホスファターゼの量を定量する代わりとして、写真の画素をカウントすることによって定量を行うことができる。
【００５１】
別の例示的な実施形態では、初期糖尿病、初期代謝疾患、初期メタボリックシンドローム、糖尿病、代謝疾患、又はメタボリックシンドロームを診断するため又はその予後を決定するための方法は、生物学的サンプル、好ましくは便サンプルを付着させるための固形培地を用意すること、ホスファターゼの基質をこの固形培地に接触させること、色が現れるように特定の期間待つこと、現れた色を基準の写真と比較すること、及び生物学的サンプル中のアルカリホスファターゼの量を定量することを含む。現れた色を基準の写真と比較することによってアルカリホスファターゼの量を定量する代わりとして、写真の画素をカウントすることによって定量を行うことができる。
【００５２】
なお別の例示的な実施形態では、初期糖尿病、初期代謝疾患、初期メタボリックシンドローム、糖尿病、代謝疾患、又はメタボリックシンドロームを診断するため又はその予後を決定するための方法は、生物学的サンプル、好ましくは便サンプルをホスファターゼの基質と混合すること、色が現れるように特定の期間待つこと、現れた色を基準の写真と比較すること、及び生物学的サンプル中のアルカリホスファターゼの量を定量することを含む。現れた色を基準の写真と比較することによってアルカリホスファターゼの量を定量する代わりとして、写真の画素をカウントすることによって定量を行うことができる。
【００５３】
別の例示的な実施形態では、ＩＡＰの欠乏は、血清エンドトキシン（ＬＰＳ、ＬＴＡなど）、炎症誘発性ヌクレオチド（ＵＤＰ、ＡＴＰなど）、サイトカイン（インターロイキンＩＬ−１〜ＩＬ−３６；腫瘍壊死因子ＴＮＦ−α、β、及びγ；インターフェロンＩＮＦ−α、β、及びγ；形質転換成長因子ＴＧＦ−β；ＩＦＮ−ｇ誘導因子（ＩＧＩＦ）など）、サイトカイン（ＣＸＣＬ−８、ＣＣＬ２、ＣＣＬ３、ＣＣＬ４、ＣＣＬ５、ＣＣＬ１１、ＣＸＣＬ１０、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子ＧＭ−ＣＳＦ）、顆粒球コロニー刺激因子（Ｇ−ＣＳＦ）など）、及びサイトカイン受容体のアンタゴニストの増加に関連し得ると予想される。更に、ＩＡＰの欠乏は、抗炎症性因子、例えば、インターロイキンの受容体、ＴＮＦ及びＩＮＦ、並びに炎症誘発性及び抗炎症性の二重機能を有する一部のインターロイキン（ＩＬ−４、ＩＬ−６、ＩＬ−１０、ＩＬ−１１、ＩＬ−１３など）の減少にも関連し得ると予想される。
【図面の簡単な説明】
【００５４】
【図１】便中の腸アルカリホスファターゼ（ＩＡＰ）の濃度を決定するためのステップを示すフローチャートである。
【図２Ａ】便アルカリホスファターゼ活性が、殆ど腸アルカリホスファターゼ（ＩＡＰ）によることを示すグラフである。
【図２Ｂ】便アルカリホスファターゼ活性が、殆ど腸アルカリホスファターゼ（ＩＡＰ）によることを示すグラフである。
【図２Ｃ】便アルカリホスファターゼ活性が、殆ど腸アルカリホスファターゼ（ＩＡＰ）によることを示すグラフである。
【図３Ａ】２型糖尿病（Ｔ２ＤＭ）患者が、便中に低いレベルの腸アルカリホスファターゼ（ＩＡＰ）を有することを示すグラフである。
【図３Ｂ】２型糖尿病（Ｔ２ＤＭ）患者が、便中に低いレベルの腸アルカリホスファターゼ（ＩＡＰ）を有することを示すグラフである。
【図３Ｃ】２型糖尿病（Ｔ２ＤＭ）患者が、便中に低いレベルの腸アルカリホスファターゼ（ＩＡＰ）を有することを示すグラフである。
【図４】便ＩＡＰレベルが、全てのパーセンタイル点においてＴ２ＤＭ患者で低いことを示すグラフである。
【図５】高レベルの便ＩＡＰが、肥満度指数（ＢＭＩ）にかかわらずＴ２ＤＭを予防することを示すグラフである。
【発明を実施するための形態】
【００５５】
詳細な説明
２型糖尿病：２型糖尿病（Ｔ２ＤＭ）は、インスリンの分泌不足、インスリン作用の低下、又はこれらの両方による高血糖によって特徴付けられる。７５ｇｍのグルコースの摂取及び特定の時間間隔（分）での血漿グルコース値の測定によって行われる経口的ブドウ糖負荷試験（ＯＧＴＴ）の間に７．０ｍｍｏｌ／ｌ（１２６ｍｇ／ｄｌ）又は１１．１ｍｍｏｌ／ｌ（２００ｍｇ／ｄｌ）の血漿グルコースよりも高い空腹時血漿グルコース（ＦＰＧ）値を有すると、Ｔ２ＤＭと診断される。Ｔ２ＤＭは、長期のダメージ、機能不全、様々な器官、特に眼、腎臓、神経、心臓、及び血管の障害を引き起こす（American Diabetes Association. Diagnosis and classification of diabetes mellitus. Diabetes Care. 2014 Jan;37 Suppl 1:S81-90）。Ｔ２ＤＭは、２０１４年に世界の３８，７００万人が罹患し、６，１２０億米ドルの費用がかかった世界的な健康問題である（Abdullah et al. Int J Endocrinol.2014:593982; International Diabetes Federation, IDF Diabetes Atlas, 2012, http://www.idf.org/diabetesatlas; http://www.idf.org/diabetesatlas/update-2014）。米国では、２０１３年に推定２，４４０万人（人口の９．２％）が糖尿病であり、３，０６０億米ドルの費用がかかった（http://www.idf.org/diabetesatlas; http://www.idf.org/diabetesatlas/update-2014; Abdullah et al. Int J Endocrinol. 2014:593982）。米国糖尿病協会は、２０１２年に診断された糖尿病の総費用が２，４５０億米ドルと推定し、このうち１，７６０億米ドルが直接の医療費であり、生産性の低下が６９０億米ドルであった（American Diabetes Association. Economic costs of diabetes in the U.S. in 2012. Diabetes Care 2013;36:1033-1046）。
【００５６】
病因学的に、様々な因子、例えば、自己免疫、メタボリックシンドローム、食事、肥満、感染、民族性、遺伝的多型及び素因、薬物、ストレス、座りがちな生活様式、妊娠などが、Ｔ２ＤＭの発症に関与すると推論された（Kahn et al. Lancet 2014;383(9922): 1068-83; Stumvoll et al. Lancet 2005;365(9467):1333-46; Pietropaolo et al. Diabetes 2007;56(5): 1189-97. Bakker et al. Eur J Endocrinol 2013;169(5):R99-R114; Lin and Sun. J Endocrinol 2009;204(1):1-11; Leahy. Arch Med Res 2005;36(3):197-209; DeFronzo. Med Clin North Am 2004;88(4):787-835; Holt. Br J Psychiatry Suppl. 2004 Apr;47:S55-63）。
【００５７】
近年、血中のエンドトキシンリポ多糖（ＬＰＳ）のレベルの持続的な増加によって誘導される軽度の全身性炎症（代謝性エンドトキシン血症（metabolic endoxemia））は、最終的にＴ２ＤＭをもたらすメタボリックシンドロームの病因的因子として関与している（Cani et al., Diabetes 2007;56(7):1761-72）。本発明者らは、刷子縁酵素腸アルカリホスファターゼ（ＩＡＰ）が欠損したマウスがＴ２ＤＭを発症することを示した（Kaliannan et al. Proc Natl Acad Sci U S A 2013;110(17):7003-8）。本発明者らはまた、ＩＡＰが、ＬＰＳを無毒化して代謝性エンドトキシン血症を軽減し、且つＩＡＰの経口補給が、野生型マウスＴ２ＤＭにおける高脂肪食誘導性メタボリックシンドローム及びＴ２ＤＭを予防するだけではなく、これらを治療することも示した（Kaliannan et al. Proc Natl Acad Sci U S A 2013; 110(17):7003-8）。本発明者らは、腸管腔中の低レベルのＩＡＰが、ヒトのＴ２ＤＭに関連する可能性があると推論され、従って、本発明者らは、糖尿病集団及び健康な非糖尿病集団の便中のＩＡＰのレベルを決定することを決めた。本発明では、本発明者らは、実際、糖尿病患者が、健康な非糖尿病集団と比較して、便中に少ない量のＩＡＰを有することを報告している。この観察に基づいて、本発明者らは、便中のＩＡＰレベルの個人的な時間的プロファイルを作成することを提案し、健康な人のこのプロファイルが、ＩＡＰレベルが低く、且つ／又は急激に低下している場合、本発明者らは、この人が、初期糖尿病を有する可能性が高と予測することができる。本発明者らは、便中のＩＡＰレベルの個人的な時間的プロファイルが診断、処置、及びあらゆる疾患の予後の評価に極めて有用であろうと予測している。
【００５８】
初期糖尿病を有する人は、現在は正常範囲のＦＰＧ値を有するが、低濃度のホスファターゼ又は時間と共に持続的に低下するホスファターゼの濃度、及び他の既知のリスク因子に基づくと、糖尿病を発症するリスクがある。
【００５９】
メタボリックシンドローム：メタボリックシンドロームは、肥満、高血糖、インスリン耐性、高インスリン血症、脂質異常症（異常な脂質プロファイル）、高コレステロール血症、高トリグリセリド血症、低高密度リポタンパク質（ＨＤＬ）、高低密度リポタンパク質（ＬＤＬ）、高血圧、及び脂肪肝を含む関連障害の群からなる（Kaliannan et al. Proc Natl Acad Sci U S A 2013;110(17):7003-8; Grundy et al. Circulation. 2004 Jan 27;109(3):433-8; Hotamisligil. Nature 444(7121):860-867）。「顕性」メタボリックシンドロームは、肥満（肥満度指数（ＢＭＩ）＞３０．０ｋｇ／ｍ２）、高血糖（ＦＰＧ＞５．５ｍｍｏｌ／ｌ）、高血圧（収縮期血圧＞１３０ｍｍＨｇ又は拡張器血圧＞８５ｍｍＨｇ）、高トリグリセリド血症（＞１５０ｍｇ／ｄｌ）、及び低高密度リポタンパク質（ＨＤＬ）（男性が＜４０ｍｇ／ｄｌ、又は女性が＜５０ｍｇ／ｄｌ）を含む５つの基準のうちの少なくとも３つが同時に存在するとして定義された（Huang PL. A comprehensive definition for metabolic syndrome. Dis Model Mech 2009;2(5-6):231-7）。国際糖尿病連合は、世界人口の約２５％がメタボリックシンドロームを有すると推定する（Kaur. Cardiol Res Pract. 2014;2014:943162; http://www.idf.org/metabolic-syndrome）。米国の人口の約４０％がこのシンドロームを有する（Kaliannan et al. Proc Natl Acad Sci U S A 2013;110(17):7003-8; Ford. Diabetes Care.2005 Nov;28(l l):2745-9）。メタボリックシンドロームは、代謝疾患、例えば、Ｔ２ＤＭ、心血管疾患（冠動脈心疾患）、脳血管疾患（脳卒中）、非アルコール性脂肪肝疾患などをもたらす。メタボリックシンドロームは、米国で蔓延し、医療費、死亡率、及び罹患率に関して深刻な結果をもたらしている（Kaliannan et al. Proc Natl Acad Sci U S A 2013;110(17):7003-8; Malik et al. Circulation. 2004 Sep 7;110(10):1245-50）。
【００６０】
メタボリックシンドロームの病因はよく分かっていないが、Caniらによる近年の研究により（Diabetes 2007; 56:1761-1772）、「代謝性エンドトキシン血症」がメタボリックシンドロームの発症において重要な役割を果たすことを立証した。エンドトキシンは、リポ多糖（ＬＰＳ）としても知られ、グラム陰性細菌の細胞壁構成成分である。代謝性エンドトキシン血症は、正常なレベルと比較して、循環中のエンドトキシンレベルが２倍〜３倍の持続的な増加として定義される（Cani et al. Diabetes 2007; 56:1761- 1772; Kaliannan et al. Proc Natl Acad Sci U S A 2013;110(17):7003-8）。
【００６１】
代謝性エンドトキシン血症は、血清中のインターロイキン（ＩＬ）−１、ＩＬ−６、及び腫瘍壊死因子α（ＴＮＦ−α）のレベルの増加から分かるように軽度の全身性炎症を引き起こす（Cani et al. Diabetes 2007; 56:1761-1772; Kaliannan et al. Proc Natl Acad Sci U S A 2013; 110(17):7003-8）。他方、慢性炎症は、膵臓β細胞（Hohmeier et al. Int J Obes Relat Metab Disord 27(Suppl 3):S12-S16）、肝細胞（Gieling et al. Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol 296(6):G1324-G1331）、及び血管内皮細胞（Hansson. N Engl J Med 352( 16): 1685-1695）の機能に悪影響を与えることが十分に証明され、及びこれらの細胞の機能不全が、メタボリックシンドロームに寄与することが認識されている。
【００６２】
抗生物質関連腸内毒素症は、時には、クロストリジウム・ディフィシレ（Clostridium difficile）感染及びメタボリックシンドロームをもたらす（Alam et al. Ann Surg.2014 Apr;259(4):715-22; Kaliannan et al. Proc Natl Acad Sci U S A 2013; 110(17):7003-8; Parekh et al. Clin Transl Gastroenterol.2015 Jun 18;6:e91）。β−ラクタマーゼが、少数の特定の抗生物質に関連した腸内毒素症を予防することが示されている（Goldberg et al. Am J Health Syst Pharm.2015 Jun 15;72(12): 1007-12）。
【００６３】
上記のように、本発明者らは、ＩＡＰノックアウトマウスが、最終的にＴ２ＤＭをもたらすメタボリックシンドロームを発症することを示した。本発明者らはまた、経口ＩＡＰ補給が、高脂肪食誘導性メタボリックシンドロームを予防するだけではなく、治療できることも示した。
【００６４】
初期メタボリックシンドロームを有する人は現在、グルコース、インスリン、コレステロール、脂質、血圧、脂肪肝、ＢＭＩなどの正常値又は異常値を有するが、低濃度のホスファターゼ又は時間と共に持続的に低下するホスファターゼの濃度、及び他の既知のリスク因子に基づくと、メタボリックシンドロームを発症するリスクがある。
【００６５】
初期メタボリックシンドロームを有する人には、上記定義された「顕性」メタボリックシンドロームの少なくとも１つの基準を有するプレメタボリックシンドロームの人も含まれる。
【００６６】
初期代謝疾患を有する人は現在、様々な器官（例えば、肝臓、肺、腎臓、脾臓、脳、筋肉、副腎、心臓、皮膚など）の正常又は異常な代謝機能を有するが、低濃度のホスファターゼ又は時間と共に持続的に低下するホスファターゼの濃度、及び他の既知のリスク因子に基づくと、代謝疾患を発症するリスクがある。
【００６７】
腸アルカリホスファターゼ：腸アルカリホスファターゼ（ＩＡＰ）は、近位小腸の絨毛関連腸細胞で過剰に発現され、従って腸細胞分化マーカーとして認識される膜結合糖タンパク質である（Hodin et al. Am J Physiol. K1995 Aug;269(2 Pt 1):C385-91; Eliakim et al. Biochim Biophys Acta. 1991 Jan 10;1091(l):l-8）。名称が示唆するように、ＩＡＰは、高いｐＨで最適に機能し、及び一リン酸エステルを加水分解するため、脂肪代謝及びリン代謝におけるその重要な役割が示唆される（Malo et al. Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol. 2006 Apr;290(4):G737-46, and references therein）。酵素が腸細胞から腸管腔及び体循環に双方向に分泌される（Eliakim et al. Biochim Biophys Acta. 1991 Jan 10;1091(l):l-8）。腸管腔内のＩＡＰは、近位小腸から遠位大腸に下流に移動し、便と共に排泄される（Malo et al., Gut. 2010;59: 1476-1484）。ＩＡＰは、種の中で厳密に保存されており（Goldstein et al. Proc Natl Acad Sci U S A. 1980 May;77(5):2857-60）、これは、ＩＡＰの必須の生理学的役割を示唆している。アルカリホスファターゼ（ＡＰ）の様々なアイソザイムが存在し、このようなアイソザイムには、ＩＡＰ、胎盤ＡＰ、組織非特異的（肝臓／骨／腎臓／好中球）ＡＰ、及び生殖細胞ＡＰが含まれる。これらの様々なＡＰ酵素は、相当な構造的相同性及び機能的類似性を共有する（Kaliannan et al. Proc Natl Acad Sci U S A 2013;110(17):7003-8; Goldstein et al. Proc Natl Acad Sci U S A. 1980 May;77(5):2857-60）。ＩＡＰタンパク質は、界面活性剤様粒子（ＳＬＰ）、脂肪吸収のプロセスに関連した、腸細胞の頂端表面から分泌される単層分泌膜の構成成分である（Malo et al. Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol. 2006 Apr;290(4):G737-46; Mahmood et al. Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol. 2003 Aug;285(2):G433-41）。
【００６８】
生理学的に、ＩＡＰは、管腔細菌環境におけるその存在に対して２つの非常に重要な機能を果たす；第１に、ＩＡＰは、腸微生物叢の正常な恒常性を維持し、第２に、ＩＡＰは、細菌毒素を無毒化する。本発明者らは、ＩＡＰノックアウトマウスが、その野生型同腹仔と比較すると、より少ない細菌を保持し（Malo et al., Gut. 2010;59:1476-1484）、ＩＡＰは、細菌の成長に対して有毒作用を有する腸管腔ヌクレオチド三リン酸の濃度を低下させることによって腸管細菌の成長を促進することを示した（Malo et al. Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol.2014 May 15;306(10):G826-38）。本発明者ら及び他が、ＩＡＰが、様々な細菌毒素、例えば、リポ多糖（ＬＰＳ）、ＣｐＧ、ＤＮＡ、フラジェリン、及びウリジン二リン酸（ＵＤＰ）を無毒化し、ＩＡＰが、脱リン酸化（リン加水分解）によってこれらの標的を破壊する可能性を示した（Poelstra et al. USPTO patent no. 6,290,952, September 2001; Bentala et al. Shock. 2002 Dec;18(6):561-6; Chen et al. Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol. 2010 Aug;299(2):G467-75; Moss et al. Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol. 2013 Mar 15;304(6):G597-604; Malo et al. Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol. 2014 May 15;306(10):G826-38）。近年、ＩＡＰが欠損したマウス（ＩＡＰノックアウトマウス）を使用することにより、Narisawaらは、ＩＡＰが脂肪の吸収を制限し、及びＩＡＰノックアウトマウスが、高脂肪食が与えられると肥満になることを示した（Mol Cell Biol.2003 Nov;23(21):7525-30）。
【００６９】
薬理学的に、ＩＡＰの様々な治療的使用が様々な動物モデル及びヒトで説明されている。マウスモデルにおいて、本発明者らは、ＩＡＰの経口補給が腸内病原菌、例えば、ネズミチフス菌及びクロストリジウム・ディフィシレに対する抗生物質によって誘発される感受性を防止することを示した（Malo et al., Gut. 2010;59:1476-1484; Alam et al. Ann Surg. 2014 Apr;259(4):715-22）。本発明者らは、経口ＩＡＰ補給が、マウスの高脂肪食誘導性メタボリックシンドロームを予防するだけではなく、これを治療することを示した（Kaliannan et al. Proc Natl Acad Sci U S A 2013;110(17):7003-8）。Ｋｉｓｓは、近年、ＵＳＰＴＯの特許出願で、インスリン耐性、高インスリン血症、及び脂質異常症を修正するためのＩＡＰの使用を特許請求した（Ｋｉｓｓによる２０１３年９月２６日出願の米国特許出願公開第２０１３／０２５１７０１  Ａ１号）。Ｋｉｓｓはまた、肥満、糖尿病、及び癌を処置するためのＩＡＰの使用も以前に特許請求した（米国特許第７，８５８，０８５号、同第８，６０３，４６４号、及び同第７，９４３，６０６号）。 
【００７０】
Lukasらは、ヒトの潰瘍性結腸炎の処置におけるＩＡＰの有効値を示した（Lucas et al. Inflamm Bowel Dis. 2010 Jul; 16(7): 1180-6）。マウスモデルにおいて、本発明者らは、ＩＡＰが、慢性結腸炎の処置に対して有益な効果を有することも示した（Ramasamy et al. Inflamm Bowel Dis.2011 Feb;17(2):532-42）。Whitehouseらは、壊死性腸炎における腸アルカリホスファターゼの防御機能を報告した（Whitehouse et al. J Surg Res. 2010 Sep; 163(1):79-85）。Van Veenらは、ウシ腸アルカリホスファターゼが、マウスの二次性腹膜炎の炎症反応を軽減することを示した（van Veen et al. Infect Immun. 2005 Jul;73(7):4309-14）。本発明者らは、ＩＡＰでの局所腹膜洗浄が、マウスの腹膜炎を防ぐことを実証した（Ebrahimi et al. J Gastrointest Surg. 2011 May;15(5):860-9）。
【００７１】
一般的な方法論
参加者：症例対照研究を使用して、糖尿病患者及び対照の非糖尿病の健康な集団の便中のＩＡＰの濃度の差異を評価した。年齢が３０〜７０歳の参加者を、地方の高官、病院、クリニック、及び診療所による宣伝によってバングラディシュのダッカの郊外の地域から募集した。予備データ（非公表）に基づいて、各群のサンプルのサイズを、８０％以上の統計的検出力（連続したエンドポイント、α＝０．０５）を達成するように計算した。この研究には、同じ民族の２０２人の糖尿病研究症例（男性が６３人で女性が１３９人）及び４４５人の健康な対照者（男性が１１４人で女性が３３１人）が含まれていた。この研究では、単に女性参加者により接触しやすかったため、男性よりも女性が多かった。Ｔ２ＤＭの人は、募集の少なくとも６か月前に医師によって診断され、経口抗血糖治療薬及び／又はインスリン薬を服用していた。高血糖（ＦＰＧ＞７．０ｍｍｏｌ／ｌ）と新たに診断された人も糖尿病群に含めた（以下を参照）。全ての参加者は、食事の制限がされなかった。急性疾患を発症した全ての人をこの研究から排除した。妊婦、１型糖尿病患者、及び癌の既往歴のある人は研究から排除した。全ての参加者を腎疾患、肝疾患、及び心血管疾患について検査し、臨床的に有意な腎疾患、肝疾患、及び心血管疾患の参加者はこの研究から排除した。参加者は、慢性アルコール摂取の既往歴が全くなかった。痩せすぎの人（肥満度指数、ＢＭＩ＜１８．５ｋｇ／ｍ２）も排除した。
【００７２】
研究の承認。この研究の参加者のインフォームドコンセント用紙に各参加者がサインした。Harvard Biotech BD Ltd.（Dhaka, Bangladesh）の施設内倫理委員会（ＩＲＢ）が、この研究を再調査して承認した。
【００７３】
臨床検査、身体検査、及び社会−医療歴：臨床検査を、市販の生化学アッセイキット（Linear Chemicals S.L., Barcelona, Spain）及び自動生化学分析装置（Sinnowa Medical Science & Technology Co., Ltd, Nanjing, Jiangsu, China; Model: Sinnolab MT 5000, Version 5.00）を用いて行った。各参加者（糖尿病患者及び対照）の糖尿病の状態を、空腹時（少なくとも１０時間の絶食）血漿グルコース（ＦＰＧ）の測定によって確認した。ＦＰＧレベル＞７．０ｍｍｏｌ／ｌ（１２６ｍｇ／ｄｌ、ミリグラム／デシリットル）は、糖尿病の診断と見なされた（American Diabetes Association, 2014）。新たに診断された全ての糖尿病患者（ＦＰＧレベル＞７．０ｍｍｏｌ／ｌ）は糖尿病患者群に含められた。全ての参加者に、コレステロール、低密度リポタンパク質（ＬＤＬ）、高密度リポタンパク質（ＨＤＬ）、トリグリセリド、クレアチニン、及びＡＬＴについての血清生化学試験も行った。各参加者の身長及び体重を測定して、体重（ｋｇ）を身長（メートル）の二乗で除した値（ｋｇ／ｍ２）として定義される肥満度指数（ＢＭＩ）を計算した。参加者は、アルコール摂取の既往歴について尋ねられた。医療歴を使用して、腎疾患、肝疾患、及び心疾患の参加者を見つけ出した。心血管疾患の状態も、血圧を測定することによって評価した。
【００７４】
便の均質化：均質化された便の懸濁液の上清をＩＡＰアッセイに使用した。少量の便（ミリグラム）を測定し、既定の比率の「便希釈緩衝液」（１０ｍＭ（ミリモル）Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ、ｐＨ８．０、１ｍＭ塩化マグネシウム、１０μＭ（マイクロモル）塩化亜鉛）を添加した。通常通りに、５０μｌ（マイクロリットル）の便希釈緩衝液を１ｍｇの便に添加した。サンプルを強くボルテックスして、均質化された便懸濁液を調製し、次いでこれを１０，０００×ｇで２０分間、遠心分離器にかけ、及びＩＡＰを含むその上清を収集して、ＩＡＰの濃度についてアッセイした。別法では、便を水中に懸濁することができるが、水中に懸濁された便は、便希釈緩衝液に懸濁された便と比較するとやや低いＩＡＰ活性を示す。
【００７５】
アルカリホスファターゼアッセイ。便上清を、上述の自動生化学分析装置（Nanjing, Jiangsu, China）を用いて確立されたプロトコルに従ってアルカリホスファターゼ（ＡＰ）についてアッセイした。簡単に述べると、２０μｌの上清を、１０ｍＭ  ｐ−ニトロフェニルホスフェート（ｐＮＰＰ）を含む１ｍｌの酵素アッセイ緩衝液（１．２５Ｍ  ジエタノールアミン（ＤＥＡ）緩衝液、ｐＨ１０．２、０．６ｍＭ  塩化マグネシウム）に添加し、及びこの反応混合物を３７℃で１分間インキュベートし、続いて、ＡＰ標準で事前に較正された分析装置によってＡＰの濃度を測定した。便ＡＰ中の主要なイソ型を決定するために、ＡＰ活性についてのアッセイの前に、便サンプルのアリコートをＬ−フェニルアラニン（Ｌ−Ｐｈｅ、１０ｍＭの最終濃度）、ＩＡＰの特異的な阻害剤で１０分間処置し、及び別のアリコートをＬ−ホモアルギニン（Ｌ−Ａｒｇ、１０ｍＭの最終濃度）、組織非特異的アルカリホスファターゼ（ＴＮＡＰ）の阻害剤で処置した。次いで、阻害剤で処置した各アリコートを、等しい濃度（１０ｍＭ）の各阻害剤を含む反応緩衝液と混合し、及び分析装置を用いてＡＰ活性についてアッセイした。便中のＡＰ活性の殆どがＩＡＰによるものであったため、便ＡＰ値を、ＩＡＰ／ｇ便の単位として表した。全てのＡＰアッセイは、参加者の診断について盲検化された一人の検査技師によって行われた。
【００７６】
統計分析：統計分析にＳＡＳシステム（SAS Institute, Cary, North Carolina）を使用した。平均及び標準誤差を、性別によって層別化されたＴ２ＤＭ症例及び非Ｔ２ＤＭ対照について計算した。ＩＡＰレベルとＴ２ＤＭの様々なリスク因子との間の相関性を、性別及びＴ２ＤＭ状態（Ｔ２ＤＭ及び非Ｔ２ＤＭ対照）によって層別化されたピアソン相関係数によって評価した。Ｔ２ＤＭ症例と非Ｔ２ＤＭ対照との間のＩＡＰレベルの平均差異を、ＩＡＰレベル及びＴ２ＤＭ状態に対する年齢、性別、ＦＰＧ、及びＢＭＩの影響を調整した線形回帰モデルによって評価した。独立変数に関連した分散の統計的有意性を、ＳＡＳでＧＬＭ手順を用いるｓｑｕａｒｅ  ＩＩＩの総和から評価した。ＳＡＳでＰｒｏｃ  Ｌｏｇｉｓｔ手順を用いる多重ロジスティック回帰により、ＩＡＰを含む独立リスク因子を有するＴ２ＤＭ症例間の相関性を評価した。回帰係数及びオッズ比を使用して、ＩＡＰのＴ２ＤＭ状態への独立リスク寄与度を評価した。２つの群間の差異の統計的有意性を、独立両側スチューデントｔ−検定を用いて決定した。２つの群間の差異は、ｐ値が＜０．０５のときに有意と見なされた。スチューデントｔ−検定は、マイクロソフトのエクセルのプログラムを用いて行った。２つの独立群の事後統計的検出力分析を、オンラインプログラム（http://clincalc.com/Stats/Power.aspx）を用いて行った。
【実施例】
【００７７】
実施例
以下の実施例は、本発明を更に説明するために示されるが、これらの実施例は、特許請求の範囲に規定される本発明の範囲を限定するものではない。
【００７８】
実施例１：便中の腸アルカリホスファターゼ（ＩＡＰ）の濃度を決定するためのステップを示すフローチャート。
【００７９】
腸アルカリホスファターゼが欠損したマウス（ＩＡＰ−ノックアウト）は、２型糖尿病（Ｔ２ＤＭ）を発症することを示した。この観察に基づいて、本発明者らは、Ｔ２ＤＭ患者が、便中のＩＡＰの量が少ない可能性があるという仮説を立てた。従って、本発明者らは、Ｔ２ＤＭ患者及び対照の健康な参加者の便中のＩＡＰ濃度を測定することを計画した。便中のＩＡＰを決定するためのプロトコルの概略図が図１に示されている。
【００８０】
実施例２：便アルカリホスファターゼ活性は、殆ど腸アルカリホスファターゼによるものである。
【００８１】
ＩＡＰノックアウト（Ａｋｐ３−／−）マウスはＴ２ＤＭを発症し、この観察に基づいて、本発明者らは、Ｔ２ＤＭを有する人が、ＩＡＰが欠乏している可能性があるという仮説を立てた。従って、本発明者らは、糖尿病患者及び対照の非糖尿病の健康な人の便中のＩＡＰ濃度を測定することを決めた。しかしながら、ヒトにおけるＴ２ＤＭとアルカリホスファターゼ（ＡＰ）の様々なイソ型との潜在的な関連性を考慮して、本発明者らはまず、糖尿病患者及び対照の健康な集団の両方の便中の主要なＡＰイソ型の性質を決定することに決めた。非糖尿病の健康な対照及びＴ２ＤＭ患者の便サンプルを便希釈緩衝液で均質化し、続いて遠心分離機にかけ、及び上清を収集した。本発明者らは、Ｌ−フェニルアラニン（Ｌ−Ｐｈｅ、ＩＡＰの特異的な阻害剤）及びＬ−ホモアルギニン（Ｌ−Ａｒｇ、ＴＮＡＰの特異的な阻害剤）の存在下、便サンプル上清の個々のアリコートに対してＡＰアッセイを行った。
【００８２】
図２は、便アルカリホスファターゼ活性が、殆どが腸アルカリホスファターゼ（ＩＡＰ）によるものであることを示すグラフである。Ｌ−Ｐｈｅは、全ての健康な集団の便中のＡＰ活性の約８０％を阻害し、及びこの阻害は、全糖尿病集団の約７０％であったが、この差異は統計的に有意であった（ｐ＝１．４Ｅ−０．４）（図２Ａ）。他方、Ｌ−Ａｒｇは、いずれの群の便ＡＰ活性に対しても阻害効果を有していなかった。性別が合わせられた分布も、対照群及び糖尿病群の両方の男性（図２Ｂ）及び女性（図２Ｃ）においてＬ−Ｐｈｅの同様のＡＰ阻害効果を示した。この結果は、便ＡＰ活性の殆どがＩＡＰによるものであることを示し、従って、本発明者らは、適用可能である以降のセクションでは、便ＡＰをＩＡＰと呼ぶことにした。
【００８３】
図２：便アルカリホスファターゼ活性は、殆どが腸アルカリホスファターゼ（ＩＡＰ）によるものである。非糖尿病の健康な対照及びＴ２ＤＭ患者の便サンプルを便希釈緩衝液で均質化し、続いて遠心分離機にかけ、及び上清を収集した。この上清を、Ｌ−フェニルアラニン（Ｌ−Ｐｈｅ）、ＩＡＰの特異的な阻害剤の存在下、及びＬ−ホモアルギニン（Ｌ−Ａｒｇ）、組織非特異的アルカリホスファターゼ（ＴＮＡＰ）の特異的な阻害剤の存在下、自動生化学分析装置を用いて、アルカリホスファターゼ（ＡＰ）の濃度についてアッセイした。（Ａ）全対照及び糖尿病集団の便中のＡＰ活性に対するＡＰ阻害剤の影響。（Ｂ）男性対照及び糖尿病集団の便中のＡＰ活性に対するＡＰ阻害剤の影響。（Ｃ）女性対照及び糖尿病集団の便中のＡＰ活性に対するＡＰ阻害剤の影響。統計学：値は、平均±ＳＥＭとして表される。２つのそれぞれの群間の差異の統計的有意性を、独立両側スチューデントｔ−検定を用いて試験した。ｐ＜０．０５が有意と見なされる。＊＊、ｐ＜０．０１；＊＊＊、ｐ＜０．００１。
【００８４】
実施例３：腸アルカリホスファターゼ（ＩＡＰ）のレベルは、健康な対照と比較すると糖尿病患者の便で低い。
【００８５】
表１は、糖尿病集団及び健康な集団のＩＡＰの濃度と共に少数の重要な特徴を示している。この研究には、２０２人の糖尿病患者（Ｔ２ＤＭ）及び４４５人の対照の健康な対象が含まれていた。糖尿病群は、６３人の男性及び１３９人の女性を含み、対照群は、１１４人の男性及び３３１人の女性から構成されていた。参加者の年齢は、３０〜７０歳であった。糖尿病参加者及び健康な参加者のＩＡＰ値の比較分析が行われる。健康な集団全体と比較すると、糖尿病集団全体は、便中に４７．６％低いＩＡＰを有することが明らかになった（平均±ＳＥＭ：それぞれ６７．４±３．２対３５．３±２．５単位／ｇ便；ｐ＝５．６Ｅ−１０）。健康な男性と比較すると、糖尿病男性は、５１．６％低いＩＡＰを有する（それぞれ５７．１＋／−４．５対２７．７＋／−３．２単位／ｇ便；ｐ＝１．１Ｅ−０５）。同様に、健康な女性と比較すると、糖尿病女性は、４５．３％低いＩＡＰを有する（それぞれ７１．０＋／−４．０対３８．８＋／−３．３単位／ｇ便；ｐ＝１．６Ｅ−０６）。健康な対照男性は、健康な女性よりも１９．５％低いＩＡＰレベルを有するが、この差異は有意でない（ｐ＝０．０６１）と考えられる。他方、糖尿病男性は、糖尿病女性と比較すると２８．７％低いＩＡＰレベルを有し、この差異は統計的に有意である（ｐ＝０．０４１）。サンプルのＩＡＰ濃度の数値が、異なるアルカリホスファターゼアッセイ及び／又はアッセイ条件のばらつきによって変化することに注目するべきである。
【００８６】
【表１】
2018509885.tif 000003
【００８７】
注記：参加者は、バングラディシュのダッカの郊外から募集した。全ての参加者が一晩（１０時間）絶食した状態で、全ての参加者に対して、上記の全ての身体検査及び生化学的検査を行った。統計学：値は、平均±ＳＥＭとして表される。２つのそれぞれの群間の差異の統計的有意性を、独立両側スチューデントｔ−検定を用いて試験した。ｐ＜０．０５が有意と見なされる。＊＊＊、ｐ＜０．００１。健康な対照と比較したＴ２ＤＭ患者のＩＡＰの減少率：全体、４７．６％；男性、５１．６％；女性、４５．３％。
【００８８】
表２は、健康な対照集団及び糖尿病集団における便ＩＡＰレベルの年齢群が合わせられた分布及び性別が合わせられた分布を示している。非糖尿病群と比較すると、Ｔ２ＤＭ患者は、約３５〜６０％低い平均便ＩＡＰを有し、２つのそれぞれの群間の差異は統計的に有意であると考えられる。ＩＡＰレベルの最も少ない減少（３６．８％）が、４０〜４９歳の糖尿病女性で観察され、ＩＡＰレベルの最も大きい減少（５９．０％）が、６０〜７０歳の糖尿病男性患者で見られる。しかしながら、同じ集団の若年群と高齢群との間には、ＩＡＰレベルの統計的に有意な差異が存在しない。
【００８９】
【表２】
2018509885.tif 000004
【００９０】
統計学：値は、平均±ＳＥＭとして表される。２つの群間の差異の統計的有意性を、独立両側スチューデントｔ−検定を用いて試験した。ｐ＜０．０５が有意と見なされる。＊、ｐ＜０．０５；＊＊、ｐ＜０．０１；＊＊＊、ｐ＜０．００１。ＮＡ、該当しない。
【００９１】
図３は、ＩＡＰレベルが、健康な対照と比較すると、糖尿病患者の便で低いことを示すグラフである。
【００９２】
対照の健康な集団と糖尿病患者との間のＩＡＰレベルの比較により、平均すると、全（総）糖尿病患者集団が、大幅に低い便中のＩＡＰを有することが示された（図３Ａ）。性別が合わせられた分布は、男性及び女性糖尿病患者の両方が、健康な対応する人と比較すると低い便ＩＡＰを有することを示した（図３Ａ）。また、ＩＡＰの年齢群が合わせられた分布及び性別が合わせられた分布は、非糖尿病集団及び糖尿病集団の男性（図３Ｂ）及び女性（図３Ｃ）の両方で年齢と共に、酵素が明らかに減少することを示した。
【００９３】
図３：２型糖尿病（Ｔ２ＤＭ）患者は、便中に低レベルの腸アルカリホスファターゼ（ＩＡＰ）を有する。健康な参加者及びＴ２ＤＭ患者の便サンプルを、自動生化学分析装置を用いてＩＡＰ濃度についてアッセイした（図２を参照）。（Ａ）非糖尿病の健康な対照及び糖尿病集団の全ての便中のＩＡＰ濃度。（Ｂ）男性対照及び男性糖尿病集団におけるＩＡＰ濃度の年齢依存性分布。（Ｃ）女性対照及び女性糖尿病集団におけるＩＡＰ濃度の年齢依存性分布。統計学：値は、平均±ＳＥＭとして表される。２つの群間の差異の統計的有意性を、独立両側スチューデントｔ−検定を用いて試験した。ｐ＜０．０５が有意と見なされる。＊、ｐ＜０．０５；＊＊、ｐ＜０．０１；＊＊＊、ｐ＜０．００１。事後統計的検出力分析により、それぞれの全群、男性群、及び女性群の検出力がそれぞれ、１００％、１００％、及び１００％であることが明らかになり、それぞれのサンプルサイズについて検出力の妥当性が立証された（従来、α＝０．０５で＞８０％の検出力）。同じ集団（糖尿病又は非糖尿病）の若年群と高齢群との間のＩＡＰ値における差異は、統計的に有意ではない。
【００９４】
図４は、ＩＡＰレベルが、全てのパーセンタイル点においてＴ２ＤＭ患者で低いことを示すグラフである。
【００９５】
上に（図３Ａ）に示されているＩＡＰレベルの平均（average）（平均（mean））値における「異常値」（殆どの値と比較して極端に高い又は低い稀な個々の値）のあらゆる影響を考慮して、本発明者らは、様々なパーセンタイル点における糖尿病群及び非糖尿病群のＩＡＰレベルの差異を更に検証した。本発明者らは、２０２人のＴ２ＤＭ患者及び４４５人の健康な対照におけるＩＡＰ値のパーセンタイル分布を評価した。本発明者らは、最も低い値から最も高い値までの各群（糖尿病又は非糖尿病）の個々のＩＡＰ値をまとめ、次いで、各１０パーセンタイル分割内の平均ＩＡＰ値を計算した。全てのパーセンタイル点で、ＩＡＰ値が、健康な集団と比較してＴ２ＤＭ患者で低く、その差異が、非常に有意であることは明らかである。ＩＡＰレベルのパーセンタイル分布により、Ｔ２ＤＭ患者が、実際、対応する人と比較して低いＩＡＰレベルを有することが確認される。
【００９６】
図４：ＩＡＰレベルは、全てのパーセンタイル点においてＴ２ＤＭ患者で低い。各群（健康な対照又はＴ２ＤＭ患者）からの個々のＩＡＰ値を、最も低い値から最も高い値に並べ、次いで、それぞれの１０番目のパーセンタイルの範囲内の平均ＩＡＰ値を計算した（Ｔ２ＤＭ患者のそれぞれの１０番目のパーセンタイルの範囲内でｎ＝２０、健康な対照のそれぞれの１０番目のパーセンタイルの範囲内でｎ＝４４）。対応するパーセンタイルの平均値がプロットされている。統計学：値は、平均±ＳＥＭとして表される。２つのそれぞれの群間の差異の統計的有意性を、独立両側スチューデントｔ−検定を用いて試験した。ｐ＜０．０５が有意と見なされる。＊＊＊、ｐ＜０．００１。
【００９７】
実施例４：ＩＡＰの欠乏はＴ２ＤＭに関連している。
【００９８】
表３は、ＩＡＰレベルと年齢、性別、ＦＰＧ、ＢＭＩ、ＡＬＴ、血清クレアチニン、血圧、及び脂質パラメーターとの間のピアソン相関係数分析を示している。ＩＡＰと上述のＴ２ＤＭリスク因子との間に相関性がないことは明らかである。
【００９９】
【表３】
2018509885.tif 000005
【０１００】
注記：＋１又は−１に近いピアソン相関係数は、２つの変数が（それぞれ正又は負に）強く相関していることを示す。０〜＋０．３０又は０〜−０．３０の相関係数は、２つの変数間に相関性がないと見なされた。
【０１０１】
表４は、ＩＡＰのＴ２ＤＭとの強い関連性を予測する一般化線形回帰モデルを示している。表４はまた、ＩＡＰが年齢と共に低下する観察を立証するＩＡＰと年齢の弱い関連性も予測している（図３Ｂ及び図３Ｃを参照）。
【０１０２】
【表４】
2018509885.tif 000006
【０１０３】
注記：このモデルは、ＩＡＰとＴ２ＤＭとの強い関連性を予測する。このモデルはまた、ＩＡＰと年齢との弱い関連性も予測する（ＩＡＰレベルは年齢と共に徐々に減少する；図３Ｂ及び図３Ｃを参照）。
【０１０４】
表５は、ＩＡＰレベルと糖尿病の状態との間の独立した反比例関係を予測する多重ロジスティック回帰分析を示している。本発明者らは、年齢、ＦＰＧ、ＢＭＩ、ＡＬＴ、血清クレアチニン、血圧、及び脂質パラメーターを調整した多重ロジスティック回帰分析を行った。データは、ＩＡＰレベルと糖尿病の状態との間の独立した反比例関係を示した（表５）。便ＩＡＰ中の２５Ｕ／ｇの減少ごとに、糖尿病のリスクが３５％上昇する。本発明者らは、ＩＡＰの欠乏が、他の既知の糖尿病リスク因子と無関係に糖尿病に関連すると結論付けた。
【０１０５】
【表５】
2018509885.tif 000007
【０１０６】
注記：便ＩＡＰレベルの１Ｕ／ｇが減少するごとに、糖尿病診断のオッズが１．４％上昇する。例えば、ＩＡＰレベルが２５Ｕ／ｇ減少すると、糖尿病のリスクが３５％上昇する。統計学：Ｐｒｏｃ  Ｌｏｇｉｓｔ法（ＳＡＳ）を、Ｔ２ＤＭとＩＡＰを含む独立リスク因子との間の関連性を決定する多重ロジスティック回帰分析に使用した。
【０１０７】
実施例５：高血糖Ｔ２ＤＭ患者と正常血糖Ｔ２ＤＭ患者が、同様のレベルの便ＩＡＰを有する。
【０１０８】
厳密な抗糖尿病薬で治療中のＴ２ＤＭ患者及び生活様式を変えたＴ２ＤＭ患者は、正常血糖状態（ＦＰＧ＜７．０ｍｍｏｌ／ｌ）を達成することが頻繁にある。本発明者らは、糖尿病患者の血糖状態が、便ＩＡＰレベルに対して何らかの影響を有するか否かを知ることに興味があった。
【０１０９】
表６は、高血糖（ＦＰＧ＞７．０ｍｍｏｌ／ｌ）の糖尿病患者及び正常血糖の糖尿病患者の両方が、便中に同様のレベルのＩＡＰを有し、２つのそれぞれの群間の値の差異は、統計的に有意ではない。
【０１１０】
【表６】
2018509885.tif 000008
【０１１１】
注記：糖尿病患者を、高血糖（ＦＰＧ＞７．０ｍｍｏｌ／ｌ）群及び正常血糖（ＦＰＧ＜７．０ｍｍｏｌ／ｌ）群に分類し、それぞれの便ＩＡＰレベルを比較した。統計学：値は、平均±ＳＥＭとして表される。２つのそれぞれの群間の差異の統計的有意性を、独立両側スチューデントｔ−検定を用いて試験した。ｐ＜０．０５が有意と見なされる。＊＊＊、ｐ＜０．００１。
【０１１２】
実施例６：高レベルのＩＡＰは、肥満度指数（ＢＭＩ）にかかわらず糖尿病を予防する。
【０１１３】
過体重（ＢＭＩ＞２５．０ｋｇ／ｍ２）集団及び肥満（ＢＭＩ＞３０．０ｋｇ／ｍ２）集団は、標準体重（ＢＭＩ＜２５．０〜１８．５ｋｇ／ｍ２）の集団よりもＴ２ＤＭを発症しやすいことが十分に認識されている。本発明者らは、この研究の糖尿病患者及び健康な対照を２つの群に分類し、１つをＢＭＩ＞２５．０ｋｇ／ｍ２、もう１つをＢＭＩ＜２５．０ｋｇ／ｍ２とした。
【０１１４】
表７は、高レベルのＩＡＰが、肥満度指数（ＢＭＩ）にかかわらず糖尿病を予防することを示している。両方の群の糖尿病患者（ＢＭＩ＞２５．０ｋｇ／ｍ２及びＢＭＩ＜２５．０ｋｇ／ｍ２）は、健康な対応する人に対して著しく低い量のＩＡＰを有することが明らかである。これらのデータは、ＩＡＰが、Ｔ２ＤＭの発症を防止する役割を果たすことを示唆している。ＩＡＰが高い肥満又は過体重の人は、Ｔ２ＤＭを発症しない。両方の群の糖尿病患者は、同様のレベルのＩＡＰを有し、その差異は、統計的に有意ではない（ｐ＝０．７７）。本発明者らはまた、両方の群の健康な対照のＩＡＰのレベルが同様であり、その差異が有意ではない（ｐ＝０．２９）ことを観察した。
【０１１５】
【表７】
2018509885.tif 000009
【０１１６】
注記：健康な対照の高ＢＭＩ群と低ＢＭＩ群との間のＩＡＰレベルにおける有意な差異、及び糖尿病患者の高ＢＭＩ群と低ＢＭＩ群との間のＩＡＰレベルにおける有意な差異は存在しなかった。便ＩＡＰが高い肥満の人は、Ｔ２ＤＭを発症しない。統計学：値は、平均±ＳＥＭとして表される。２つの群間の差異の統計的有意性を、独立両側スチューデントｔ−検定を用いて試験した。ｐ＜０．０５が有意と見なされる。＊、ｐ＜０．０５；＊＊、ｐ＜０．０１；＊＊＊、ｐ＜０．００１。ＮＡ、該当しない。
【０１１７】
図５は、表７に示されているように高肥満度指数（ＢＭＩ）及び低肥満度指数（ＢＭＩ）の糖尿病患者及び健康な対照者におけるＩＡＰの分布を示すグラフである。
【０１１８】
図５：高レベルのＩＡＰは、肥満度指数（ＢＭＩ）にかかわらずＴ２ＤＭを防止する。健康な参加者及びＴ２ＤＭ患者の便サンプルを、自動生化学分析装置を用いてＩＡＰ濃度についてアッセイした（図３を参照）。健康な対照及びＴ２ＤＭ患者を２つの群に分類し、１つが高ＢＭＩ（＞２５．０ｋｇ／ｍ２）を有し、もう１つが低ＢＭＩ（＜２５．０ｋｇ／ｍ２）を有する。統計学：値は、平均±ＳＥＭとして表される。２つの群間の差異の統計的有意性を、独立両側スチューデントｔ−検定を用いて試験した。ｐ＜０．０５が有意と見なされる。＊、ｐ＜０．０５；＊＊、ｐ＜０．０１；＊＊＊、ｐ＜０．００１。注記：健康な対照の高ＢＭＩ群と低ＢＭＩ群との間のＩＡＰレベルにおける有意な差異、及び糖尿病患者の高ＢＭＩ群と低ＢＭＩ群との間のＩＡＰレベルにおける有意な差異は存在しなかった。便ＩＡＰが高い肥満の人達は、Ｔ２ＤＭを有していない。
【０１１９】
実施例７：集団の大部分は、初期メタボリックシンドロームを有する。
【０１２０】
ＩＡＰの欠乏は、マウスにメタボリックシンドロームを引き起こす（Kaliannan et al. Proc Natl Acad Sci U S A 2013;110(17):7003-8）。従って、本発明者らは、ＩＡＰの欠乏とヒトのＴ２ＤＭとの関連性が、明らかに健康な人であるが、ＩＡＰの欠乏によって近い将来メタボリックシンドロームを発症しやすい「初期メタボリックシンドローム」の人を分けるのに有用であろうと予測する。「初期メタボリックシンドローム」の罹患者は、「初期」の糖尿病、心血管疾患、非アルコール性脂肪肝、高血圧、及び他の代謝障害の人も含むべきである。本発明者らは、健康な集団の平均ＩＡＰレベルが、約６７．４±３．２Ｕ／ｇ便であることに気付き（表１）、従って、本発明者らは、現在のアッセイ条件を用いて６５．０Ｕ／ｇ便未満のＩＡＰレベルを有する健康な人を「初期メタボリックシンドローム」を有すると見なされるべきであると定義し、「初期メタボリックシンドローム」は、「初期糖尿病」及び「プレメタボリックシンドローム（メタボリックシンドロームの少なくとも１つの基準を示す）」を含むべきである。便１グラム当たりの６５．０Ｕのホスファターゼの濃度の数値が、様々なアルカリホスファターゼ（ＡＰ）アッセイ及びアッセイ条件、例えば、ｐＨの変化、時間、温度、基質濃度などによって異なり得ることに注目するべきである。
【０１２１】
表８は、健康な集団の約６５％が、６５．０Ｕ／ｇ便未満のＩＡＰレベルを有する「初期メタボリックシンドローム」を有することを示している。この罹患率は、「プレメタボリックシンドローム（メタボリックシンドロームの少なくとも１つの基準を示す）」の７１％の罹患率に一致している（Al-Qahtani DA, Imtiaz ML. Prevalence of metabolic syndrome in Saudi adult soldiers. Saudi Med J 2005;26(9): 1360-6）。また、パキスタン人の６８〜８１％が、メタボリックシンドロームの１つの基準である低レベルのＨＤＬコレステロールを有することが報告された（Basit A, Shera AS.2008. Prevalence of metabolic syndrome in Pakistan. Metab Syndr Relat Disord. 6(3):171-5）。本発明者らは、健康な対象の約４０％が、糖尿病群の平均ＩＡＰ値（３５．０Ｕ／ｇ便）未満の量のＩＡＰを有すると推定した。これらの人々は、「重度の初期メタボリックシンドローム」を有し、且つ数年以内にＴ２ＤＭ又は他の代謝障害を非常に発症しやすいと予測される。興味深いことに、「顕性」メタボリックシンドローム（メタボリックシンドロームの３つの基準が同時存在する；Huang PL. A comprehensive definition for metabolic syndrome. Dis Model Mech 2009;2(5-6):231-7）の罹患率も４０％である（Kaliannan et al. Proc Natl Acad Sci U S A 2013;110(17):7003-8; Ford. Diabetes Care. 2005 Nov;28(11):2745-9）。
【０１２２】
また、少数のＴ２ＤＭ患者（約１５％）は、６７．０Ｕ／ｇ（健康な対照の平均値）を超える便ＩＡＰレベルを有し、この観察は、ＩＡＰが、これらの特定の患者のＴ２ＤＭの病因に関連しないか、又はＩＡＰの以前の高レベルからの持続的な低下もＴ２ＤＭを引き起こし得るかを意味する。平均的な糖尿病患者が、健康な対応する人と比較すると約５０％低いＩＡＰを有するため（表１及び図３を参照）、約５０％のＩＡＰ活性の減少は、糖尿病を引き起こすのに重要であろう。従って、初期糖尿病の異なる集団も、より高いＩＡＰレベルを有する可能性があることは明らかである。
【０１２３】
初期糖尿病の人は、本明細書に開示されるアッセイ条件を用いて６５．０Ｕ／ｇｍ便未満の便ＩＡＰレベルを有する、又は以前は高めのＩＡＰレベルを有していたが現在は５０％のＩＡＰ活性の減少が続いている見かけ上健康な人である。
【０１２４】
【表８】
2018509885.tif 000010
【０１２５】
注記：健康な対照の６７．４±３．２Ｕ／ｇ便の平均ＩＡＰ値に基づいて、「初期メタボリックシンドローム」の健康な人は６５．０Ｕ／ｇｍ未満の便ＩＡＰレベルを有すると定義される。初期メタボリックシンドロームは、「初期糖尿病」も含むべきである。
【図１】
2018509885.tif 000011
【図２Ａ】
2018509885.tif 000012
【図２Ｂ】
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【図２Ｃ】
2018509885.tif 000014
【図３Ａ】
2018509885.tif 000015
【図３Ｂ】
2018509885.tif 000016
【図３Ｃ】
2018509885.tif 000017
【図４】
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【図５】
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【手続補正書】
【提出日】平成29年7月11日(2017.7.11)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
初期糖尿病、初期代謝疾患、初期メタボリックシンドローム、糖尿病、代謝疾患、又はメタボリックシンドロームを検出するための方法に使用されるホスファターゼの基質であって、前記方法が、前記基質を対象からの生物学的サンプルに接触させること、前記生物学的サンプル中のホスファターゼの濃度を測定すること、及び前記濃度を平均正常値の濃度と比較することを含み、平均正常値よりも１％〜１００％低いホスファターゼの濃度が、初期糖尿病、初期代謝疾患、初期メタボリックシンドローム、糖尿病、代謝疾患、又はメタボリックシンドロームを示唆する、ホスファターゼの基質。
【請求項２】
前記生物学的サンプルが、便、唾液、尿、血液、血漿、血清、涙液、汗、膿汁、胃液、腸液、眼液、腹水、膣液、脳脊髄液、又は体腔液であり、好ましくは便である、請求項１に記載の使用。
【請求項３】
時間的ホスファターゼプロファイルを作成するための方法に使用されるホスファターゼの基質であって、前記方法が、前記基質を対象からの１つ以上の生物学的サンプルに接触させること、前記１つ以上の生物学的サンプル中のホスファターゼの濃度を測定することを含み、前記１つ以上の生物学的サンプルが、単一の時点又は複数の時点で収集される、ホスファターゼの基質。
【請求項４】
前記１つ以上の生物学的サンプルが、便、唾液、尿、血液、血漿、血清、涙液、汗、膿汁、胃液、腸液、眼液、腹水、膣液、脳脊髄液、又は体腔液であり、好ましくは便である、請求項３に記載の使用。
【請求項５】
前記複数の時点が、毎日、毎週、毎月、又は毎年を含む、請求項３又は４に記載の使用。
【請求項６】
慢性疾患、急性疾患、感染症、障害、又は症候群を検出するための方法に使用されるホスファターゼの基質であって、前記方法が、前記基質を対象からの１つ以上の生物学的サンプルに接触させること、前記１つ以上の生物学的サンプル中のホスファターゼの濃度を測定することを含み、前記１つ以上の生物学的サンプルが、単一の時点又は複数の時点で収集される、ホスファターゼの基質。
【請求項７】
初期糖尿病、初期代謝疾患、初期メタボリックシンドローム、糖尿病、代謝疾患、又はメタボリックシンドロームのリスクの低減又はその処置に使用されるホスファターゼであって、前記初期糖尿病、初期代謝疾患、初期メタボリックシンドローム、糖尿病、代謝疾患、又はメタボリックシンドロームが、平均正常値よりも１％〜１００％低いホスファターゼの濃度を有する対象によって特徴付けられる、ホスファターゼ。
【請求項８】
便中のホスファターゼの濃度を決定する方法に使用される、規定量の便を測定するための器具、便希釈緩衝液又は水、ホスファターゼの基質、及びホスファターゼアッセイ緩衝液を含むキットであって、前記方法が、前記基質を前記便に接触させること、及び前記便中の前記ホスファターゼの濃度を測定することを含み、前記ホスファターゼの基質が、ｐ−ニトロフェニルホスフェート、５−ブロモ−４−クロロ−３−インドリルホスフェート／ニトロブルーテトラゾリウム基質系、Fast Red TR／ナフトール基質系、ＣＤＰ−スター基質（２−クロロ−５−（４−メトキシスピロ｛１，２−ジオキセタン−３，２’（５’−クロロ）−トリシクロ［３．３．１．１３．７］デカン｝−４−イル）−１−フェニルホスフェート二ナトリウム塩）、又はこれらの組み合わせを含む、キット。
【請求項９】
初期糖尿病、初期代謝疾患、初期メタボリックシンドローム、糖尿病、代謝疾患、又はメタボリックシンドロームの検出に使用される、規定量の便を測定するための器具、便希釈緩衝液、ホスファターゼの基質、及びホスファターゼアッセイ緩衝液を含むキットであって、前記方法が、前記基質を前記便に接触させること、前記便中のホスファターゼの濃度を測定すること、及び前記濃度を平均正常値の濃度と比較することを含み、前記初期糖尿病、初期代謝疾患、初期メタボリックシンドローム、糖尿病、代謝疾患、又はメタボリックシンドロームが、平均正常値よりも１％〜１００％低いホスファターゼの濃度を有する対象によって特徴付けられる、キット。
【請求項１０】
前記初期代謝疾患、代謝疾患、初期メタボリックシンドローム、又はメタボリックシンドロームが、心血管疾患、冠動脈心疾患、虚血性心疾患、脳血管疾患、脳卒中、末梢血管疾患、肝疾患、網膜症、喘息、慢性肺閉塞性疾患、嚢胞性線維症、アルツハイマー病、関節炎、湿疹、乾癬、肥満、高血糖、インスリン耐性、高インスリン血症、脂質異常症、高コレステロール血症、高トリグリセリド血症、低高密度リポタンパク質（ＨＤＬ）、高低密度リポタンパク質（ＬＤＬ）、高血圧、脂肪肝、又はこれらの組み合わせを含む、請求項９に記載のキット。
【請求項１１】
時間的ホスファターゼプロファイルを作成することを含む、初期糖尿病、初期代謝疾患、初期メタボリックシンドローム、糖尿病、代謝疾患、又はメタボリックシンドロームの予後の決定に使用されるホスファターゼの基質であって、前記時間的ホスファターゼプロファイルを作成することが、前記基質を対象からの１つ以上の生物学的サンプルに接触させること、前記１つ以上の生物学的サンプル中のホスファターゼの濃度を測定することを含み、前記１つ以上の生物学的サンプルが、単一の時点又は複数の時点で収集される、ホスファターゼの基質。
【請求項１２】
前記１つ以上の生物学的サンプルが、便、唾液、尿、血液、血漿、血清、涙液、汗、膿汁、胃液、腸液、眼液、腹水、膣液、脳脊髄液、又は体腔液であり、好ましくは便である、請求項１１に記載の使用。
【請求項１３】
慢性疾患、急性疾患、感染症、障害、又は症候群を検出する方法に使用される、規定量の便を測定するための器具、便希釈緩衝液、ホスファターゼの基質、及びホスファターゼアッセイ緩衝液を含むキットであって、前記方法が、前記基質を前記便に接触させること、及び前記便中のホスファターゼの濃度を測定することを含み、前記ホスファターゼの基質が、ｐ−ニトロフェニルホスフェート、５−ブロモ−４−クロロ−３−インドリルホスフェート／ニトロブルーテトラゾリウム基質系、Fast Red TR／ナフトール基質系、ＣＤＰ−スター基質（２−クロロ−５−（４−メトキシスピロ｛１，２−ジオキセタン−３，２’（５’−クロロ）−トリシクロ［３．３．１．１３．７］デカン｝−４−イル）−１−フェニルホスフェート二ナトリウム塩）、又はこれらの組み合わせを含む、キット。
【請求項１４】
初期糖尿病、初期代謝疾患、初期メタボリックシンドローム、糖尿病、代謝疾患、又はメタボリックシンドロームを検出する方法に使用される、固相支持系、ホスファターゼに特異的に結合する一次抗体及び／又は二次抗体、前記一次抗体及び／又は二次抗体に特異的に結合する西洋ワサビペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）又はアルカリホスファターゼ（ＡＰ）コンジュゲート抗体、並びにＨＲＰ又はＡＰの発色基質を含む、酵素結合免疫吸着検定（ＥＬＩＳＡ）システムであって、前記方法が、前記支持を対象からの生物学的サンプルに接触させることを含む、システム。
【請求項１５】
前記生物学的サンプルが、便、唾液、尿、血液、血漿、血清、涙液、汗、膿汁、胃液、腸液、眼液、腹水、膣液、脳脊髄液、又は体腔液であり、好ましくは便である、請求項１４に記載の使用。
【請求項１６】
初期糖尿病、初期代謝疾患、初期メタボリックシンドローム、糖尿病、代謝疾患、又はメタボリックシンドロームを検出するための方法に使用されるホスファターゼであって、前記方法が、前記生物学的サンプル中のホスファターゼの濃度を測定すること、及び前記濃度を平均正常値の濃度と比較することを含み、平均正常値よりも１％〜１００％低いホスファターゼの濃度が、初期糖尿病、初期代謝疾患、初期メタボリックシンドローム、糖尿病、代謝疾患、又はメタボリックシンドロームを示唆する、ホスファターゼ。
【請求項１７】
前記測定することが、分光光度計、生化学分析装置、高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）装置、比色計、照度計、又は機械、生化学、電気、若しくは電子装置を用いて前記サンプル中のホスファターゼの濃度を定量することを含む、請求項１６に記載の使用。
【請求項１８】
前記生物学的サンプルが、便、唾液、尿、血液、血漿、血清、涙液、汗、膿汁、胃液、腸液、眼液、腹水、膣液、脳脊髄液、又は体腔液であり、好ましくは便である、請求項１６又は１７に記載の使用。
【国際調査報告】
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