(57)【要約】  本開示は、安定した長期持続血管作用性小腸ペプチド治療剤を投与することによって、筋ジストロフィーおよび心筋症を含む筋肉ミオパシーを治療する方法を提供する。これらの薬剤には１つまたは複数のエラスチン様ペプチドが含まれ、低用量で投与することができる。
2018509395.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
筋肉ミオパシーを治療するための方法であって、それを必要とする患者に血管作用性小腸ペプチド（ＶＩＰ）および１つまたは複数のエラスチン様ペプチド（ＥＬＰ）を含む医薬組成物を投与することを含む方法。
【請求項２】
それを必要とする患者における筋収縮によって誘導される損傷から保護するための方法であって、血管作用性小腸ペプチド（ＶＩＰ）および１つまたは複数のエラスチン様ペプチド（ＥＬＰ）を含む医薬組成物を投与することを含む方法。
【請求項３】
心筋症の進行を遅らせるための方法であって、それを必要とする患者に血管作用性小腸ペプチド（ＶＩＰ）および１つまたは複数のエラスチン様ペプチド（ＥＬＰ）を含む医薬組成物を投与することを含む方法。
【請求項４】
心筋症を治療するための方法であって、それを必要とする患者に血管作用性小腸ペプチド（ＶＩＰ）および１つまたは複数のエラスチン様ペプチド（ＥＬＰ）を含む医薬組成物を投与することを含む方法。
【請求項５】
前記医薬組成物が筋肉線維症を低減する、請求項１〜４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６】
前記ＥＬＰが配列番号１〜１３のいずれかの反復配列単位またはそれらの組合せを含む、請求項１〜５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７】
前記ＥＬＰがＶＰＧＸＧ（配列番号３）の反復配列単位を含む、請求項１〜６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８】
前記ＥＬＰがＶＰＧＸＧの１２０反復配列単位を含み、ＸがＶａｌ、ＡｌａおよびＧｌｙから独立して選択される、請求項７に記載の方法。
【請求項９】
Ｘが約５：２：３の比でＶａｌ、ＡｌａおよびＧｌｙから独立して選択される、請求項８に記載の方法。
【請求項１０】
前記ＶＩＰペプチドがＶＰＡＣ１と比較してＶＰＡＣ２に相対的結合優先度を有する、請求項１〜４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１１】
前記医薬組成物が皮下、筋肉内または静脈内投与のために製剤化される、請求項１〜４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１２】
前記医薬組成物が皮下投与される、請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
前記医薬組成物が低用量で投与される、請求項１〜４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１４】
前記用量が１日につき０．１ｍｇ／ｋｇから１日につき１０ｍｇ／ｋｇの間にある、請求項１３に記載の方法。
【請求項１５】
前記医薬組成物が日ごとに投与される、請求項１〜４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１６】
前記医薬組成物が週に１〜３回投与される、請求項１〜４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１７】
前記医薬組成物が週ごとに投与される、請求項１〜４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１８】
前記医薬組成物が月に１〜２回投与される、請求項１〜４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１９】
未処置の患者と比較して前記筋肉線維症が約５％、１０％、２０％、３０％、４０％または５０％低減される、請求項５に記載の方法。
【請求項２０】
未処置の患者と比較して前記筋肉線維症が約１カ月、６カ月、１年または５年の間遅延される、請求項５に記載の方法。
【請求項２１】
前記患者の筋肉収縮性が保存される、請求項１〜４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２２】
健康対象と比較して前記患者の前記筋肉収縮性が約９０％、８０％、７０％、６０％または５０％で保存される、請求項２１に記載の方法。
【請求項２３】
前記患者の筋肉強度が保存される、請求項１〜４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２４】
健康対象と比較して前記患者の前記筋肉強度が約９０％、８０％、７０％、６０％または５０％で保存される、請求項２３に記載の方法。
【請求項２５】
前記筋肉が骨格筋である、請求項１９〜２４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２６】
前記筋肉が心筋である、請求項１９〜２４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２７】
前記医薬組成物が未処置筋細胞のそれと比較して筋細胞短縮を保存する、請求項１〜４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２８】
前記医薬組成物が未処置筋細胞のそれと比較して筋細胞再伸長速度を保存する、請求項１〜４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２９】
前記医薬組成物が未処置筋細胞のそれと比較して筋細胞収縮性を保存する、請求項１〜４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３０】
前記医薬組成物が未処置筋細胞のそれと比較して筋細胞弛緩を保存する、請求項１〜４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３１】
前記筋細胞が心筋細胞である、請求項２７〜３０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３２】
前記筋細胞が骨格筋細胞である、請求項２７〜３０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３３】
前記患者が筋ジストロフィーを有する、請求項１〜４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３４】
前記筋ジストロフィーが、筋緊張性筋ジストロフィー、デュシェンヌ筋ジストロフィー、ベッカー筋ジストロフィー、肢帯筋ジストロフィー、顔面肩甲上腕筋ジストロフィー、先天性筋ジストロフィー、眼球咽頭筋ジストロフィー、末梢型筋ジストロフィーおよびエメリー−ドライフス筋ジストロフィーからなる群から選択される、請求項３３に記載の方法。
【請求項３５】
前記患者が炎症性ミオパシーを有する、請求項１〜４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３６】
前記炎症性ミオパシーが、多発筋炎、皮膚筋炎および封入体筋肉炎からなる群から選択される、請求項３５に記載の方法。
【請求項３７】
前記心筋症が筋ジストロフィーから生じる、請求項３または４に記載の方法。
【請求項３８】
前記筋ジストロフィーがデュシェンヌ筋ジストロフィー、ベッカー筋ジストロフィーまたはＸ連鎖拡張型心筋症である、請求項３７に記載の方法。
【請求項３９】
前記医薬組成物が配列番号１５または配列番号２０を含む、請求項１〜４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４０】
前記医薬組成物が対象に皮下投与される、請求項３９に記載の方法。
【請求項４１】
前記医薬組成物が１カ月につき１〜２回対象に投与される、請求項４０に記載の方法。
【請求項４２】
前記医薬組成物が低用量で投与される、請求項４１に記載の方法。
【請求項４３】
前記医薬組成物が１日につき１ｍｇ／ｋｇから１日につき９ｍｇ／ｋｇの間の用量で投与される、請求項４２に記載の方法。
【請求項４４】
前記対象が筋ジストロフィーを有する、請求項４３に記載の方法。
【請求項４５】
前記筋ジストロフィーがデュシェンヌ筋ジストロフィー、ベッカー筋ジストロフィーまたはＸ連鎖拡張型心筋症である、請求項４４に記載の方法。
【請求項４６】
前記対象が心筋症を有する、請求項４５に記載の方法。
【請求項４７】
血管作用性小腸ペプチド（ＶＩＰ）および１つまたは複数のエラスチン様ペプチド（ＥＬＰ）を含む前記医薬組成物が持続的放出のために製剤化される、請求項１〜４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４８】
前記医薬組成物の投与が未処置のミオパシー対象と比較して短縮率を保存する、請求項３または４に記載の方法。
【請求項４９】
未処置のミオパシー対象と比較して前記短縮率が約２０％〜５０％保存される、請求項４８に記載の方法。
【請求項５０】
前記医薬組成物の投与が未処置のミオパシー対象と比較して心室充填速度を増加させる、請求項３または４に記載の方法。
【請求項５１】
未処置のミオパシー対象と比較して前記心室充填速度が約１０〜５０％増加する、請求項５０に記載の方法。
【請求項５２】
前記医薬組成物の投与が未処置のミオパシー対象と比較して圧上昇の最大速度を上昇させる、請求項３または４に記載の方法。
【請求項５３】
未処置のミオパシー対象と比較して圧の前記最大速度が約２０％〜約５０％上昇する、請求項５２に記載の方法。
【請求項５４】
前記医薬組成物の投与が未処置のミオパシー対象と比較して弛緩のタウ定数を増加させる、請求項３または４に記載の方法。
【請求項５５】
未処置のミオパシー対象と比較して弛緩のタウ定数が約１０％〜約５０％増加する、請求項５４に記載の方法。
【請求項５６】
前記医薬組成物の投与が未処置のミオパシー対象と比較して筋肉中のコラーゲン量を低下させる、請求項１〜４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５７】
未処置のミオパシー対象と比較して筋肉中のコラーゲン量が約２０％〜約５０％低下する、請求項５６に記載の方法。
【請求項５８】
前記医薬組成物の投与が未処置のミオパシー対象と比較して筋肉中の免疫細胞数を減少させる、請求項１〜４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５９】
前記免疫細胞がマクロファージである、請求項５８に記載の方法。
【請求項６０】
未処置のミオパシー対象と比較して前記マクロファージ細胞数が筋肉中で約２０〜５０％減少する、請求項５９に記載の方法。
【請求項６１】
前記筋肉が腓腹筋、四頭筋、横隔膜の筋肉、前脛骨筋および／または心筋である、請求項５６〜６０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６２】
筋肉ミオパシーを治療するための方法であって、それを必要とする患者に配列番号１５のアミノ酸配列を含む医薬組成物を投与することを含む方法。
【請求項６３】
筋収縮によって誘導される損傷から保護するための方法であって、それを必要とする患者に配列番号１５のアミノ酸配列を含む医薬組成物を投与することを含む方法。
【請求項６４】
心筋症の進行を遅らせるための方法であって、それを必要とする患者に配列番号１５のアミノ酸配列を含む医薬組成物を投与することを含む方法。
【請求項６５】
心筋症を治療するための方法であって、それを必要とする患者に配列番号１５のアミノ酸配列を含む医薬組成物を投与することを含む方法。
【請求項６６】
前記医薬組成物が筋肉線維症を低減する、請求項６２〜６５のいずれか一項に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願の相互参照
[0001]  本出願は２０１５年２月９日に出願の米国特許仮出願第６２／１１３，９４３号、２０１５年４月１０日に出願の米国特許仮出願第６２／１４５，７７０号および２０１５年４月２１日に出願の米国特許仮出願第６２／１５０，６７９号の権益を主張し、それぞれの内容はここに参照により全体が組み込まれる。
【０００２】
電子的に提出されるテキストファイルの記載
[0002]  これに添えて電子的に提出されるテキストファイルの内容は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる：配列表のコンピュータ可読フォーマットコピー（ファイル名：PHAS_032/04WO_SeqList_ST25.txt、記録日：2016年2月9日、ファイルサイズ32キロバイト）。
【背景技術】
【０００３】
[0003]  デュシェンヌおよびベッカー筋ジストロフィー（ＤＭＤおよびＢＭＤ）はヒトの最も頻度が高い神経筋疾患であり、調査した集団によって３，５００人〜６，０００人の男の生産子につき１人で起こる（Bushby et al.（2010））。ＤＭＤおよびＢＭＤは、ジストロフィン遺伝子の突然変異から生じる対立遺伝子の障害である。ＤＭＤでは機能しているジストロフィンは筋肉に完全に存在しないが、ＢＭＤでは正常な筋肉機能のために十分な量ではないが多少のジストロフィンが存在する。骨格筋力の低下に加えて、心筋でのジストロフィン欠乏は進行性の心筋症をもたらす。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
[0004]  現在、ＤＭＤ／ＢＭＤの治療に特異的な承認療法はない。筋力低下を治療して可能な限り歩行を維持するために、高用量コルチコステロイドがしばしば使用されるが、これらは受け入れがたい副作用および／または最適以下の応答を伴う。これらの治療法が心機能を助けるか妨げるかについても不確実である。筋ジストロフィーの骨格および心臓の異常の両方を治療するために、追加の治療的アプローチが必要である。
【課題を解決するための手段】
【０００５】
[0005]  本開示は、筋肉ミオパシーを治療、遅延、予防または改善するための、持続性血管作用性小腸ペプチド（ＶＩＰ）治療法を提供する。ミオパシー性の筋肉は反復収縮の間の損傷を持続するが、それらは自身を適切に修復する能力を欠いているので、筋肉は線維性病変などの欠陥を起こす。これらの欠陥は、しばしば収縮する筋肉の能力を弱めることによって、筋肉機能を阻害することができる。これらの欠陥の形成を予防、遅延または改善することは、患者における筋肉ミオパシーを治療することができる。本明細書に開示されるＶＩＰ治療法は、筋肉ミオパシーを有する患者の心機能を改善することもできる。
【０００６】
[0006]  一部の態様では、本開示は、筋肉ミオパシーを治療する方法であって、それを必要とする患者に血管作用性小腸ペプチド（ＶＩＰ）および１つまたは複数のエラスチン様ペプチド（ＥＬＰ）を含む医薬組成物を投与することを含む方法を提供する。
【０００７】
[0007]  一部の態様では、本開示は、それを必要とする患者における筋収縮によって誘導された損傷から保護するための方法であって、血管作用性小腸ペプチド（ＶＩＰ）および１つまたは複数のエラスチン様ペプチド（ＥＬＰ）を含む医薬組成物を投与することを含む方法を提供する。
【０００８】
[0008]  一部の態様では、本開示は、心筋症の進行を遅延させる方法であって、それを必要とする患者に血管作用性小腸ペプチド（ＶＩＰ）および１つまたは複数のエラスチン様ペプチド（ＥＬＰ）を含む医薬組成物を投与することを含む方法を提供する。
【０００９】
[0009]  一部の態様では、本開示は、心筋症を治療する方法であって、それを必要とする患者に血管作用性小腸ペプチド（ＶＩＰ）および１つまたは複数のエラスチン様ペプチド（ＥＬＰ）を含む医薬組成物を投与することを含む方法を提供する。
【００１０】
[0010]  一部の態様では、医薬組成物は、配列番号１５のアミノ酸配列を含む。
【図面の簡単な説明】
【００１１】
【図１Ａ】[0011]心エコー検査を通してモニタリングされた心機能を示す図：ｎ＝１０〜１１、＊Ｐ＜０．０５対対照。パネルＡは、ＭＤＸ（ジストロフィン欠損マウス）におけるＦＡＳを示す。ＰＢ１０４６治療は、治療の３２週後にＦＡＳを保存する。心筋症の発症前のＰＢ１０４６の投与は、ｍｄｘおよび二重ノックアウトマウスでＱＲＳ持続時間を保存し、ｍｄｘマウスで心機能（ＦＡＳおよびＥ／Ａ比）の衰退を遅らせた。
【図１Ｂ】心エコー検査を通してモニタリングされた心機能を示す図：ｎ＝１０〜１１、＊Ｐ＜０．０５対対照。パネルＢは、ＭＤＸマウスにおけるＥ／Ａ比を示す。ＰＢ１０４６治療は、治療の３２週後にＦＡＳを保存する。心筋症の発症前のＰＢ１０４６の投与は、ｍｄｘおよび二重ノックアウトマウスでＱＲＳ持続時間を保存し、ｍｄｘマウスで心機能（ＦＡＳおよびＥ／Ａ比）の衰退を遅らせた。
【図２Ａ】[0012]ターミナルプロシージャでのＭＤＸマウスにおける左心室機能のｉｎ  ｖｉｖｏ評価を示す図。ｎ＝４〜５（ＭＤＸ）およびｎ＝２（ＤＫＯ）、＊Ｐ＜０．０５対対照）。ｍｄｘおよび二重ノックアウト処置動物は、保存されたｄＰ／ｄｔｍａｘ（収縮）およびより速いタウ（弛緩）を示した。
【図２Ｂ】ターミナルプロシージャでのＭＤＸマウスにおける左心室機能のｉｎ  ｖｉｖｏ評価を示す図。ｎ＝４〜５（ＭＤＸ）およびｎ＝２（ＤＫＯ）、＊Ｐ＜０．０５対対照）。ｍｄｘおよび二重ノックアウト処置動物は、保存されたｄＰ／ｄｔｍａｘ（収縮）およびより速いタウ（弛緩）を示した。
【図２Ｃ】ターミナルプロシージャでのＭＤＸマウスにおける左心室機能のｉｎ  ｖｉｖｏ評価を示す図。ｎ＝４〜５（ＭＤＸ）およびｎ＝２（ＤＫＯ）、＊Ｐ＜０．０５対対照）。ｍｄｘおよび二重ノックアウト処置動物は、保存されたｄＰ／ｄｔｍａｘ（収縮）およびより速いタウ（弛緩）を示した。
【図２Ｄ】ターミナルプロシージャでのＭＤＸマウスにおける左心室機能のｉｎ  ｖｉｖｏ評価を示す図。ｎ＝４〜５（ＭＤＸ）およびｎ＝２（ＤＫＯ）、＊Ｐ＜０．０５対対照）。ｍｄｘおよび二重ノックアウト処置動物は、保存されたｄＰ／ｄｔｍａｘ（収縮）およびより速いタウ（弛緩）を示した。
【図２Ｅ】ターミナルプロシージャでのＭＤＸマウスにおける左心室機能のｉｎ  ｖｉｖｏ評価を示す図。ｎ＝４〜５（ＭＤＸ）およびｎ＝２（ＤＫＯ）、＊Ｐ＜０．０５対対照）。ｍｄｘおよび二重ノックアウト処置動物は、保存されたｄＰ／ｄｔｍａｘ（収縮）およびより速いタウ（弛緩）を示した。
【図３Ａ】[0013]ＭＤＸマウスからの単離された長指伸筋での骨格筋生理学の評価からの結果を示す図。ｎ＝４〜１６。ＰＢ１０４６による処置は未処置のマウスと比較して伸張性収縮を維持し、処置群での筋肉が収縮によって誘導された損傷に対してより耐性だったことを示した。
【図３Ｂ】ＭＤＸマウスからの単離された長指伸筋での骨格筋生理学の評価からの結果を示す図。ｎ＝４〜１６。ＰＢ１０４６による処置は未処置のマウスと比較して伸張性収縮を維持し、処置群での筋肉が収縮によって誘導された損傷に対してより耐性だったことを示した。
【図４Ａ】[0014]シリウスレッド染色で測定したＭＤＸマウスにおけるコラーゲン含有量（パネルＡ〜Ｂ）を示す図。マクロファージ同定（パネルＣ）は、免疫組織化学によって判定したｎ＝４〜７、＊Ｐ＜０．０５対対照。コラーゲン沈着によって判定した線維症の程度は、骨格筋（腓腹筋）および心筋の両方で低減された。
【図４Ｂ】シリウスレッド染色で測定したＭＤＸマウスにおけるコラーゲン含有量（パネルＡ〜Ｂ）を示す図。マクロファージ同定（パネルＣ）は、免疫組織化学によって判定したｎ＝４〜７、＊Ｐ＜０．０５対対照。コラーゲン沈着によって判定した線維症の程度は、骨格筋（腓腹筋）および心筋の両方で低減された。
【図４Ｃ】シリウスレッド染色で測定したＭＤＸマウスにおけるコラーゲン含有量（パネルＡ〜Ｂ）を示す図。マクロファージ同定（パネルＣ）は、免疫組織化学によって判定したｎ＝４〜７、＊Ｐ＜０．０５対対照。コラーゲン沈着によって判定した線維症の程度は、骨格筋（腓腹筋）および心筋の両方で低減された。
【発明を実施するための形態】
【００１２】
[0015]  骨格または心臓の筋肉に影響することができる筋肉ミオパシーは、筋線維がもはや正しく機能せず、筋肉消耗、麻痺および死にさえつながることがある筋力低下をもたらす障害である。心機能不全は様々な筋肉ミオパシーの頻度が高い発現症状であり、これらの状態をもつ個体の一般的な死因である。
【００１３】
[0016]  しばしば、筋ジストロフィーなどの遺伝性ミオパシーでは、患者はジストロフィン遺伝子の突然変異を示す。ジストロフィン遺伝子は、筋収縮で構造的および調節的役割を演ずる。ジストロフィンはより大きな膜貫通複合体、ジストロフィン糖タンパク質複合体（ＤＧＣ）の一部であり（Lapidos et al.（2004））、その不在は収縮性に直接的に影響を与える。多くの筋肉ミオパシー患者（例えば、デュシェンヌまたはベッカー筋ジストロフィー、またはジストロフィン関連の心筋症）では、ジストロフィンタンパク質は完全に不在であるか、部分的に機能しているだけである可能性がある。ジストロフィンの不在は、細胞内カルシウムを増加させ、一酸化窒素の過剰生産をもたらし、それはタンパク質分解、線維症、壊死、マクロファージの活性化を誘発し、最終的に骨格および心臓のミオパシーをもたらす（Townsend et al.（2011）；Judge et al.（2011））。
【００１４】
[0017]  心筋細胞では、これらの病的な結果は、カルシウム透過性の増加および筋細胞カルシウム濃度の増加によって一部媒介され、それは、筋細胞および筋細胞壊死に応答する炎症性細胞中の炎症性サイトカインの発現を含む事象のカスケードを次に開始する（Zhou et al.（2010）；Klinger et al.（2012））。さらに、細胞内環状グアノシン一リン酸（ｃＧＭＰ）シグナル伝達経路の破壊は、筋肉機能の喪失に直接的に寄与する（Lapidos et al.（2004）；Townsend et al.（2011）；Byers et al.（1991））。
【００１５】
[0018]  筋肉機能への直接的な作用に加えて、ジストロフィンの減少および結果として生じる一酸化窒素合成酵素活性の変化は、サイトカイン生成および細胞アポトーシスを刺激するミトコンドリアおよび代謝のストレスをもたらす。これらの事象は、筋肉質量のさらなる減少、筋肉機能の喪失、および最終的に線維症をもたらす。特に、心筋細胞ストレスはＩＬ−６およびＴＧＦ−βの生成を増加させ、それは線維芽細胞、コラーゲン合成およびマクロファージの浸潤を刺激し、その全ては線維症の増加に寄与する。
【００１６】
[0019]  健康な筋肉では、急性組織損傷の後、浸潤性炎症性細胞および常在幹細胞が組織ホメオスタシスを回復する。しかし、慢性組織損傷の間、例えば筋肉のジストロフィーでは、炎症性細胞浸潤および線維芽細胞活性化が持続するが、幹細胞（例えばサテライト細胞）の修復能力が弱められる。多くのジストロフィーでは、筋肉は慢性炎症に関連した線維変性の恒常的サイクルを経る。ＤＭＤでは、筋肉傷害を修復する役割を担うサテライト細胞集団は、経時的に消耗されるか、または修復を媒介する能力を失い、筋肉組織は脂肪および線維性組織によって次第に置き換えられる。ジストロフィーでの筋肉組織の線維症および減少は、運動および収縮機能を低減する。
【００１７】
[0020]  筋肉の線維症は、筋線維の間の瘢痕組織の線維帯の過剰な形成である。線維症は任意の器官で起こることができるが、骨格筋線維症および心筋線維症が唯一の既知の筋肉線維症である。損傷を受けた筋肉の開放空間を充填するために、筋肉が傷害を受けた後に線維性瘢痕組織が発達し、再生性筋線維が接着するためのより多くの表面積を提供する。瘢痕組織を構成する結合組織細胞は、収縮、弛緩して運動を可能にすることができない。線維性瘢痕組織の過剰生産が始まると、筋肉は次第により弱くなる。
【００１８】
[0021]  血管作用性小腸ペプチド（ＶＩＰ）は、線維症の発達で役割を果たす。ＶＩＰは、活性の中でもｃＡＭＰおよびｃＧＭＰレベルを増加させるために、ＶＰＡＣ１およびＶＰＡＣ２受容体を通して作用する。重要なことに、マウスのマクロファージでは、ＶＩＰはＤＭＤでの心臓線維症の重要な媒介物であるＴＧＦ−βの生成を低下させることが示された（Ameen et al.（2010）；Burks et al.（2011）；Bujak et al.（2007））。ＶＩＰは、筋肉ジストロフィーで筋肉の炎症および損傷を抑制する調節Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）も刺激する（Villata et al.（2014））。
【００１９】
[0022]  本開示は、安定した持続性の血管作用性小腸ペプチド（ＶＩＰ）治療法を投与することによって、ミオパシー患者で症状の発症（筋肉線維症の発達を含む）を予防、遅延または改善する方法を提供する。
【００２０】
血管作用性小腸ペプチド
[0023]  血管作用性小腸ペプチド（ＶＩＰ）は、２つの受容体、ＶＰＡＣ１およびＶＰＡＣ２に結合する神経ペプチドである。ＶＩＰならびにその機能的および構造的に関連した類似体は、平滑筋弛緩（気管支拡張、腸管運動性）および様々な免疫機能のモジュレーション（消炎、免疫細胞保護）を含む、多くの生理機能を有することが知られている（Hinkle et al.（2005））。
【００２１】
[0024]  成熟したＶＩＰは、以下の配列を有する２８アミノ酸残基を有する：ＨＳＤＡＶＦＴＤＮＹＴＲＬＲＫＱＭＡＶＫＫＹＬＮＳＩＬＮ（配列番号１７）。ＶＩＰは、１７０アミノ酸の前駆体分子プレプロ−ＶＩＰのプロセシングからもたらされる。ＶＩＰおよび例示的な類似体の構造は、米国特許第４，８３５，２５２号、第４，９３９，２２４号、第５，１４１，９２４号、第４，７３４，４００号、第４，６０５，６４１号、第６，０８０，８３７号、第６，３１６，５９３号、第５，６７７，４１９号、第５，９７２，８８３号、第６，４８９，２９７号、第７，０９４，７５５号および第６，６０８，１７４号に記載されている。
【００２２】
[0025]  一部の態様では、本開示は、１つまたは複数のＶＩＰペプチド、変異体または類似体を含むことができる治療組成物を提供する。一部の実施形態では、ＶＩＰペプチドは変異体である。一部の実施形態では、ＶＩＰペプチドは類似体である。一部の実施形態では、ＶＩＰペプチドは、成熟したＶＩＰ（例えば配列番号１７）である。一部の実施形態では、ＶＩＰペプチドは、成熟したＶＩＰ（例えば配列番号１７）と比較して改変される。一部の実施形態では、改変されたＶＩＰペプチドは、成熟したＶＩＰ（例えば配列番号１７）と比較して変異体である。一部の実施形態では、改変されたＶＩＰペプチドは、成熟したＶＩＰ（例えば配列番号１７）と比較して機能的変異体である。一部の実施形態では、改変されたＶＩＰペプチドは、成熟したＶＩＰ（例えば配列番号１７）と比較して機能的類似体である。
【００２３】
[0026]  一部の実施形態では、改変されたＶＩＰペプチドは、成熟したＶＩＰ（例えば配列番号１７）のアミノ酸配列と比較して、１つまたは複数のアミノ酸置換を含有する。一部の実施形態では、成熟したＶＩＰ（配列番号１７）のアミノ酸配列と比較して１〜２０アミノ酸が置換される。一部の実施形態では、改変されたＶＩＰペプチドは、成熟したＶＩＰ（配列番号１７）のアミノ酸配列と比較して、約１つ、約２つ、約３つ、約４つ、約５つ、約６つ、約７つ、約８つ、約９つまたは約１０個のアミノ酸置換を含有する。
【００２４】
[0027]  一部の実施形態では、改変されたＶＩＰペプチドは、成熟したＶＩＰ（配列番号１７）のアミノ酸配列と比較して、１つまたは複数のアミノ酸欠失を含有する。一部の実施形態では、成熟したＶＩＰ（配列番号１７）のアミノ酸配列と比較して１〜２０アミノ酸が欠失している。一部の実施形態では、改変されたＶＩＰペプチドは、成熟したＶＩＰ（配列番号１７）のアミノ酸配列と比較して、約１つ、約２つ、約３つ、約４つ、約５つ、約６つ、約７つ、約８つ、約９つまたは約１０個のアミノ酸欠失を有する。一部の実施形態では、成熟したＶＩＰ（配列番号１７）のアミノ酸配列と比較していずれかの末端で１〜１０アミノ酸が欠失している。一部の実施形態では、成熟したＶＩＰ（配列番号１７）のアミノ酸配列と比較して１〜１０アミノ酸が両方の末端から欠失している。一部の実施形態では、改変されたＶＩＰペプチドのアミノ酸配列は、成熟したＶＩＰ（配列番号１７）のアミノ酸配列と少なくとも約７０％同一である。一部の実施形態では、改変されたＶＩＰペプチドのアミノ酸配列は、成熟したＶＩＰ（配列番号１７）のアミノ酸配列と約７０％、約８０％、約８５％、約９０％、約９５％、約９６％または約９７％同一である。百分率同一性は、ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｅｂｉ．ａｃ．ｕｋ／Ｔｏｏｌｓ／ｐｓａ／ｅｍｂｏｓｓ＿ｎｅｅｄｌｅ／で利用可能である、アラインメントプログラムＣｌｕｓｔａｌＷ２を使用して計算することができる。ペアワイズアラインメントのために、以下のデフォルトパラメータを使用することができる：タンパク質重量マトリックス＝ＢＬＯＳＵＭ６２；ギャップオープン＝１０；ギャップエクステンション＝０．１。
【００２５】
[0028]  様々な態様では、本開示は、成熟したＶＩＰ（すなわち、配列番号１７）と比較して、ＶＰＡＣ２またはＶＰＡＣ１への相対的受容体優先度を有する改変されたＶＩＰペプチドを提供する。例えば、改変されたＶＩＰペプチドは、ＶＰＡＣ１と比較して、少なくとも約２：１、約５：１、約１０：１、約２５：１、約５０：１、約１００：１、約５００：１またはそれを超える、ＶＰＡＣ２への相対的結合優先度を有することができる。他の実施形態では、改変されたＶＩＰペプチドは、ＶＰＡＣ２と比較して、少なくとも約２：１、約５：１、約１０：１、約２５：１、約５０：１、約１００：１、約５００：１またはそれを超える、ＶＰＡＣ１への相対的結合優先度を有することができる。例えば、ある特定の実施形態では、改変されたＶＩＰペプチドは、成熟したヒトＶＩＰ（配列番号１７）の約２〜４倍の範囲内のＥＣ５０でＶＰＡＣ２受容体を活性化する。しかし、一部の実施形態では、この同じ改変されたＶＩＰペプチドは、ＶＰＡＣ１受容体の活性化において、成熟した未改変のヒトＶＩＰペプチド（配列番号１７）より５０倍または１００倍またはそれを超えてより強力でない。
【００２６】
[0029]  一部の実施形態では、改変されたＶＩＰペプチドは、成熟したＶＩＰ（配列番号１７）と比較して追加のアミノ酸残基を含有する。一部の実施形態では、改変されたＶＩＰペプチドは、成熟したＶＩＰ（配列番号１７）と比較してＮ末端および／またはＣ末端に追加される１つまたは複数のアミノ酸を含有する。そのような改変されたＶＩＰペプチドは、改変されたＮ末端領域、例えばＶＩＰのＮ末端ヒスチジンへの１〜約５００アミノ酸の付加を含有することができ、それは異種哺乳動物（例えばヒト以外）のアミノ酸配列を含むことができる。ＶＩＰのＮ末端に追加される追加の配列は、１〜約１００、１〜約５０、１〜約２０、１〜約１０および１〜約５アミノ酸の生物学的に活性および生物学的に不活性の配列を含む、任意の配列のものであってよい。例えば、改変されたＶＩＰは、成熟ＶＩＰの天然のＮ末端ヒスチジンのＮ末端に、単一のメチオニンを含有することができる。メチオニンは細菌発現系でメチオニンアミノペプチダーゼ（ＭＡ）によって時には除去することができるが、ヒスチジン（Ｈ）はＭＡにとって２位で最も好ましくない残基の１つである。一部の実施形態では、改変されたＶＩＰペプチドは配列番号１４である。Ｎ末端メチオニンを含有するそのような改変されたＶＩＰペプチドは、隣接したアミノ酸がヒスチジンである場合はメチオニンが大腸菌によって除去されないので、大腸菌または他の細菌もしくは酵母の発現系で調製することができる。あるいは、Ｎ末端アミノ酸は、天然に存在するアミノ酸、すなわち、アラニン、アルギニン、アスパラギン、アスパラギン酸、システイン、グルタミン酸、グルタミン、グリシン、ヒスチジン、イソロイシン、ロイシン、リジン、メチオニン、フェニルアラニン、セリン、トレオニン、トリプトファン、チロシン、バリンおよびプロリンのいずれかであってよい。他の実施形態では、ＶＩＰペプチドは、内因性ペプチダーゼまたはプロテアーゼなどのペプチダーゼまたはプロテアーゼによって活性化される。そのような活性化可能な配列は、例えば、国際出願ＰＣＴ／ＵＳ２００９／０６８６５６に記載されている。本明細書で用いるように、用語「ペプチダーゼ」および「プロテアーゼ」は互換性である。例えば、ＶＩＰペプチドは、ジペプチジルペプチダーゼによって活性化できるように設計することができる。例示的なジペプチジルペプチダーゼには、ジペプチジルペプチダーゼ−１（ＤＰＰ−Ｉ）、ジペプチジルペプチダーゼ−３（ＤＰＰ−ＩＩＩ）、ジペプチジルペプチダーゼ−４（ＤＰＰ−ＩＶ）、ジペプチジルペプチダーゼ−６（ＤＰＰ−ＶＩ）、ジペプチジルペプチダーゼ−７（ＤＰＰ−ＶＩＩ）、ジペプチジルペプチダーゼ−８（ＤＰＰ−ＶＩＩＩ）、ジペプチジルペプチダーゼ−９（ＤＰＰ−ＩＸ）、ジペプチジルペプチダーゼ−１０（ＤＰＰ−Ｘ）が含まれる。そのようなジペプチダーゼの基質配列は、公知である。
【００２７】
[0030]  一部の実施形態では、活性化可能なＶＩＰペプチドのＮ末端は、構造Ｚ−Ｎを有することができ、ここで、Ｚはジペプチダーゼの基質であり（例えば、Ｚはジペプチダーゼ曝露によって除去される）、ＮはＶＩＰのＮ末端である。活性化可能なＶＩＰペプチドは、式Ｍ−Ｘ−ＮのＮ末端配列を有することができ、そこで、Ｍはメチオニンであり、ＸはＰｒｏ、ＡｌａまたはＳｅｒであり、ＮはＶＩＰまたはＶＩＰ類似体のＮ末端である。この方法では、ＭおよびＸは、その後、宿主細胞（例えば、大腸菌）および／またはジペプチダーゼ（例えば、ＤＰＰ−ＩＶ）に感受性であり、それによって除去される。あるいは、活性化可能なＶＩＰのＮ末端配列はＸ１−Ｘ２−Ｎであってもよく、そこで、Ｘ１はＧｌｙ、Ａｌａ、Ｓｅｒ、Ｃｙｓ、Ｔｈｒ、ＶａｌまたはＰｒｏであり；Ｘ２はＰｒｏ、ＡｌａまたはＳｅｒであり；ＮはＶＩＰのＮ末端である。Ｘ１−Ｘ２はジペプチダーゼ（例えば、ＤＰＰ−ＩＶ）の基質であり、ジペプチダーゼ消化は、Ｎ、ＶＩＰまたはＶＩＰ類似体の所望のＮ末端を曝露させる。そのような実施形態では、宿主細胞（例えば、大腸菌）で、Ｍ−Ｘ１−Ｘ２−Ｎ（Ｍはメチオニンである）をコードする構築物の発現によってＶＩＰペプチドを生成することができるが、その理由は、２位のＧｌｙ、Ａｌａ、Ｓｅｒ、Ｃｙｓ、Ｔｈｒ、ＶａｌまたはＰｒｏがＭｅｔの除去をシグナル伝達し、それによってＮ末端にＸ１−Ｘ２を残し、それはジペプチダーゼ（例えば、ＤＰＰ−ＩＶ）がｉｎ  ｖｉｖｏで活性化することができるからである。一部の実施形態では、ペプチダーゼは体内に存在することができ、注射の後に活性化可能なＶＩＰペプチドに作用することができる。一部の実施形態では、活性化可能なＶＩＰペプチドは、成熟したＶＩＰ（例えば配列番号１７）と比較してＮ末端に追加されるアミノ酸配列ＭＡＡを含有する。一部の実施形態では、活性化可能なＶＩＰペプチドは、配列番号１８である。
【００２８】
[0031]  他の実施形態では、改変された活性化可能なＶＩＰペプチドのＮ末端は構造Ｍ−Ｚ−Ｎを有し、ここで、Ｍはメチオニンであり、Ｚはジペプチダーゼの基質であり（例えば、Ｚはジペプチダーゼ曝露によって除去される）、Ｎは活性化可能なＶＩＰの非ＨｉｓのＮ末端である。例えば、改変された活性化可能なＶＩＰペプチドは、式Ｍ−Ｘ−ＮのＮ末端配列を有することができ、ここで、Ｍはメチオニンであり、ＸはＰｒｏ、ＡｌａまたはＳｅｒであり、Ｎは活性化可能なＶＩＰの非ＨｉｓのＮ末端である。この方法で、ＭおよびＸは、その後、宿主細胞（例えば、大腸菌）および／またはジペプチダーゼ（例えば、ＤＰＰ−ＩＶ）に感受性になり、それによって除去される。あるいは、活性化可能なＶＩＰペプチドのＮ末端配列はＸ１−Ｘ２−Ｎであってもよく、ここで、Ｘ１はＧｌｙ、Ａｌａ、Ｓｅｒ、Ｃｙｓ、Ｔｈｒ、ＶａｌまたはＰｒｏであり、Ｘ２はＰｒｏ、ＡｌａまたはＳｅｒであり、Ｎは活性化可能なＶＩＰの非ＨｉｓのＮ末端である。Ｘ１−Ｘ２はジペプチダーゼ（例えば、ＤＰＰ−ＩＶ）の基質であり、ジペプチダーゼ消化は、Ｎ、ＶＩＰの所望の非ＨｉｓのＮ末端を曝露させる。
【００２９】
[0032]  さらに他の実施形態では、活性化可能なＶＩＰペプチドのＮ末端は、構造Ｍ−Ｚ−Ｓ−Ｎを有し、ここでＭはメチオニンであり、Ｚはジペプチダーゼの基質であり（例えば、Ｚはジペプチダーゼ曝露によって除去される）、Ｎは、成熟したＶＩＰのＮ末端（Ｈｉｓ）であり、Ｓは、ジペプチダーゼ消化の後に曝露させられ、前述の通り活性化可能なＶＩＰを提供する１つまたは複数のアミノ酸である。例えば、活性化可能なＶＩＰペプチドは、式Ｍ−Ｘ−Ｓ−ＮのＮ末端配列を有することができ、ここで、Ｍはメチオニンであり、Ｘは、Ｐｒｏ、ＡｌａまたはＳｅｒであり、Ｎは、成熟したＶＩＰ（例えば配列番号１７）のＮ末端であり、Ｓは、ジペプチダーゼ消化の後に曝露させられ、受容体優先度を提供する１つまたは複数のアミノ酸である。あるいは、活性化可能なＶＩＰペプチドのＮ末端配列はＸ１−Ｘ２−Ｓ−Ｎであってもよく、ここで、Ｘ１はＧｌｙ、Ａｌａ、Ｓｅｒ、Ｃｙｓ、Ｔｈｒ、ＶａｌまたはＰｒｏであり、Ｘ２はＰｒｏ、ＡｌａまたはＳｅｒであり、ＮはＶＩＰの非Ｈｉｓ  Ｎ末端であり、Ｓは、ジペプチダーゼ消化の後に曝露させられる１つまたは複数のアミノ酸である。Ｘ１−Ｘ２はジペプチダーゼ（例えば、ＤＰＰ−ＩＶ）の基質であり、ジペプチダーゼ消化はＳを曝露させる。
【００３０】
[0033]  さらなる他の実施形態では、ＶＩＰペプチドは、治療的分子の半減期を延長させるのに有効な哺乳動物タンパク質などの、哺乳動物の異種タンパク質との融合によって改変される。そのような配列は、哺乳動物の配列、例えばアルブミン、トランスフェリンまたは抗体Ｆｃ配列であってもよい。そのような配列は、米国特許第７，２３８，６６７号（特にアルブミン融合に関する）、米国特許第７，１７６，２７８号（特にトランスフェリン融合に関する）および米国特許第５，７６６，８８３号に記載される。一部の実施形態では、ＶＩＰペプチドは、Ｎ末端での哺乳動物の異種タンパク質との融合によって改変される。一部の実施形態では、ＶＩＰは、Ｃ末端での哺乳動物の異種タンパク質との融合によって改変される。一部の実施形態では、ＶＩＰは、Ｎ末端およびＣ末端の両方での哺乳動物の異種タンパク質との融合によって改変される。
【００３１】
[0034]  一部の実施形態では、ＶＩＰペプチドのＮ末端へのＮ末端化学的修飾は、受容体優先度を提供する。タンパク質の化学的修飾およびその方法は、当技術分野で周知である。非限定的な例示的化学的修飾は、ペグ化、メチルグリオキサル化、還元アルキル化、過ギ酸酸化、スクシニル化、アミノエチル化およびリピド化である（Clifton、New Protein Techniques、New Jersey: Humana Press、1985。ISBX. 0-89603-126-8. Volume. 3 of. Methods in Molecular Biology）。システイン、メチオニン、ヒスチジン、リジン、アルギニン、トリプトファン、チロシン、カルボキシル基の改変によって結合することができる、ペグ化などの化学基が以前に記載されている（Lundblad、Techniques in Protein Modification、CRC Press、1995を参照）。
【００３２】
[0035]  さらなる他の実施形態では、ＶＩＰペプチドは、プロリン、アラニンおよびセリンを含む配列などの、反復するアミノ酸配列を含むタンパク質との融合によって改変される（例えばＰＡＳｙｌａｔｉｏｎ（Schlapschy, M. et al.（2013））またはＸＴＥＮ配列（Schellenberger, V. et al.（2009）））。
エラスチン様ペプチド
【００３３】
[0036]  一部の態様では、本開示は、血管作用性小腸ペプチドおよび１つまたは複数のエラスチン様ペプチド（ＥＬＰ）を含む治療的組成物を提供する。一部の実施形態では、ＶＩＰペプチドおよび１つまたは複数のＥＬＰは、一緒に融合される。一部の実施形態では、ＶＩＰペプチドおよび１つまたは複数のＥＬＰは、組換え融合ポリペプチドとして生成される。一部の実施形態では、治療的組成物は、血管作用性小腸ペプチドおよび１つまたは複数のＥＬＰを別個の分子として含む。さらに他の実施形態では、組成物はＶＩＰ−ＥＬＰ融合タンパク質およびＥＬＰを別個の分子として含む。一部の実施形態では、組成物は配列番号１５を含む。一部の実施形態では、組成物は配列番号１９を含む。一部の実施形態では、組成物は配列番号１６を含む。
【００３４】
[0037]  ＥＬＰ配列は、エラスチンタンパク質に関係するかまたはその模倣物である構造ペプチド単位または配列を含む。ＥＬＰ配列は、３〜約２０アミノ酸、または一部の実施形態では４〜１０アミノ酸、例えば４、５または６アミノ酸の構造単位から構築される。個々の構造単位の長さは異なることができるか、または均一であってもよい。例えば、構造単位は配列番号１〜１３によって規定される単位を含み、それらはタンデム反復単位を含む反復構造単位として用いることができるか、または何らかの組合せで用いることができる。したがって、ＥＬＰは、配列番号１〜１３から選択される構造単位（複数可）を事実上含む。
【００３５】
[0038]  一部の実施形態では、ＥＬＰ単位のアミノ酸配列は、約１〜約５００の構造単位、またはある特定の実施形態では約９〜約２００の構造単位、またはある特定の実施形態では約１０〜２００の構造単位、またはある特定の実施形態では約５０〜約２００の構造単位、またはある特定の実施形態では約８０〜約２００の構造単位、または約８０〜約１５０の構造単位、例えば配列番号１〜１３によって規定される単位の１つまたは組合せである。したがって、構造単位は、約５０〜約２０００アミノ酸残基、または約１００〜約８００アミノ酸残基、または約２００〜約７００アミノ酸残基、または約４００〜約６００アミノ酸残基の長さを総合的に有することができる。例示的な実施形態では、ＥＬＰ構造単位のアミノ酸配列は、約３構造単位、約７構造単位、約９構造単位、約１０構造単位、約１５構造単位、約２０構造単位、約４０構造単位、約８０構造単位、約９０構造単位、約１００構造単位、約１２０構造単位、約１４０構造単位、約１４４構造単位、約１６０構造単位、約１８０構造単位、約２００構造単位または約５００構造単位を含む。例示的な実施形態では、構造単位は、約４５アミノ酸残基、約９０アミノ酸残基、約１００アミノ酸残基、約２００アミノ酸残基、約３００アミノ酸残基、約４００アミノ酸残基、約５００アミノ酸残基、約６００アミノ酸残基、約７００アミノ酸残基、約７２０アミノ酸残基、約８００アミノ酸残基または約１０００アミノ酸残基の長さを総合的に有する。
【００３６】
[0039]  ＥＬＰアミノ酸配列は、選択される製剤で可視的および可逆的逆相転移を示すことができる。すなわち、ＥＬＰアミノ酸配列は転移温度（Ｔｔ）未満において製剤中で構造的に無秩序および高度に可溶性であることができるが、製剤の温度がＴｔより高いときは急激な（２〜３℃の範囲）無秩序から秩序への相転移を示すことができる。アミノ酸ポリマーの温度、長さに加えて、アミノ酸組成、イオン強度、ｐＨ、圧、温度、選択される溶媒、有機溶質の存在およびタンパク質濃度も転移特性に影響することができ、これらは所望の吸収プロファイルのために製剤で調整することができる。活性薬剤の血漿中濃度または活性を経時的に判定することによって、吸収プロファイルを容易に試験することができる。
【００３７】
[0040]  ある特定の実施形態では、ＥＬＰ成分（複数可）は、以下を非限定的に含む多ペプチド構造単位（例えば、テトラペプチド、ペンタペプチド、ヘキサペプチド、オクタペプチド、またはノナペプチド）で形成することができる：
（ａ）テトラペプチドＶａｌ−Ｐｒｏ−Ｇｌｙ−ＧｌｙまたはＶＰＧＧ（配列番号１）；
（ｂ）テトラペプチドＩｌｅ−Ｐｒｏ−Ｇｌｙ−ＧｌｙまたはＩＰＧＧ（配列番号２）；
（ｃ）ペンタペプチドＶａｌ−Ｐｒｏ−Ｇｌｙ−Ｘ−Ｇｌｙ（配列番号３）またはＶＰＧＸＧ、ここでＸは任意の天然または非天然のアミノ酸残基であり、Ｘはポリマーまたはオリゴマー反復配列の間で任意選択により異なる；
（ｄ）ペンタペプチドＡｌａ−Ｖａｌ−Ｇｌｙ−Ｖａｌ−ＰｒｏまたはＡＶＧＶＰ（配列番号４）；
（ｅ）ペンタペプチドＩｌｅ−Ｐｒｏ−Ｇｌｙ−Ｘ−ＧｌｙまたはＩＰＧＸＧ（配列番号５）、ここでＸは任意の天然または非天然のアミノ酸残基であり、Ｘはポリマーまたはオリゴマー反復配列の間で任意選択により異なる；
（ｅ）ペンタペプチドＩｌｅ−Ｐｒｏ−Ｇｌｙ−Ｖａｌ−ＧｌｙまたはＩＰＧＶＧ（配列番号６）；
（ｆ）ペンタペプチドＬｅｕ−Ｐｒｏ−Ｇｌｙ−Ｘ−ＧｌｙまたはＬＰＧＸＧ（配列番号７）、ここでＸは任意の天然または非天然のアミノ酸残基であり、Ｘはポリマーまたはオリゴマー反復配列の間で任意選択により異なる；
（ｇ）ペンタペプチドＬｅｕ−Ｐｒｏ−Ｇｌｙ−Ｖａｌ−ＧｌｙまたはＬＰＧＶＧ（配列番号８）；
（ｈ）ヘキサペプチドＶａｌ−Ａｌａ−Ｐｒｏ−Ｇｌｙ−Ｖａｌ−ＧｌｙまたはＶＡＰＧＶＧ（配列番号９）；
（ｉ）オクタペプチドＧｌｙ−Ｖａｌ−Ｇｌｙ−Ｖａｌ−Ｐｒｏ−Ｇｌｙ−Ｖａｌ−ＧｌｙまたはＧＶＧＶＰＧＶＧ（配列番号１０）；
（ｊ）ノナペプチドＶａｌ−Ｐｒｏ−Ｇｌｙ−Ｐｈｅ−Ｇｌｙ−Ｖａｌ−Ｇｌｙ−Ａｌａ−ＧｌｙまたはＶＰＧＦＧＶＧＡＧ（配列番号１１）；
（ｋ）ノナペプチドＶａｌ−Ｐｒｏ−Ｇｌｙ−Ｖａｌ−Ｇｌｙ−Ｖａｌ−Ｐｒｏ−Ｇｌｙ−ＧｌｙまたはＶＰＧＶＧＶＰＧＧ（配列番号１２）；および
（ｌ）ペンタペプチドＸａａ−Ｐｒｏ−Ｇｌｙ−Ｖａｌ−ＧｌｙまたはＸＰＧＶＧ（配列番号１３）、ここでＸは任意の天然または非天然のアミノ酸残基であり、Ｘはポリマーまたはオリゴマー反復配列の間で任意選択により異なる。
【００３８】
[0041]  配列番号１〜１３に規定される多ペプチド構造単位はエラスチン様ペプチド成分を形成するか、またはＥＬＰを形成するために組合せで使用することができる。一部の実施形態では、ＥＬＰは１つを超える構造単位を含む。一部の実施形態では、ＥＬＰは配列番号１〜１３のいずれかの２つ以上の構造単位を含み、それらは任意の組合せであってよい。一部の実施形態では、２つ以上の構造単位は同じであり、直列に反復される。一部の実施形態では、２つ以上の構造単位は異なり、交互に反復される。一部の実施形態では、ＥＬＰは、配列の１つまたは複数の部分について直列に反復される構造単位、さらに配列の他の部分について交互に反復される異なる構造単位を含む。一部の実施形態では、ＥＬＰ成分は、配列番号１〜１３から選択される構造単位の１つまたは組合せ（例えば、２、３または４個）から完全に（またはほとんど完全に）形成される。他の実施形態では、ＥＬＰ成分の少なくとも７５％、または少なくとも８０％、または少なくとも９０％は、配列番号１〜１３から選択される構造単位の１つまたは組合せから形成される。ある特定の実施形態では、ＥＬＰはＶａｌ−Ｐｒｏ−Ｇｌｙ−Ｘ−Ｇｌｙ（配列番号３）のタンデム反復単位を含む反復配列単位を含有し、ここでＸは上で規定される通りであり、ＥＬＰ成分全体（ＶＰＧＸＧ以外の構造単位を含むことができる）に関してとられるＶａｌ−Ｐｒｏ−Ｇｌｙ−Ｘ−Ｇｌｙ単位の百分率は、ＥＬＰの約５０％超、または約７５％超、または約８５％超、または約９５％超である。ＥＬＰは配列番号３の５〜１５構造単位（例えば、約１０構造単位）のモチーフを含有することができ、ゲスト残基Ｘはモチーフ中の単位の少なくとも２つまたは少なくとも３つの間で異なる。ゲスト残基は、例えば、無極性または疎水性の残基、例えばアミノ酸Ｖ、Ｉ、Ｌ、Ａ、ＧおよびＷから独立して選択することができる（および、所望の逆相転移特性を保持するように選択することができる）。ある特定の実施形態では、ゲスト残基は、Ｖ、ＧおよびＡから選択される。一部の実施形態では、ＥＬＰはＥＬＰ１シリーズ（ＶＰＧＸＧ：Ｖ５Ａ２Ｇ３）を含む。一部の実施形態では、ＥＬＰは配列番号２１のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＥＬＰはＥＬＰ４シリーズ（ＶＰＧＸＧ：Ｖ−５）を含む。一部の実施形態では、ＥＬＰは、ＥＬＰ１およびＥＬＰ４シリーズの組合せを含む。理論に束縛されることなく、ＥＬＰポリマーの疎水性の差は、ゲスト残基とＥＬＰ１シリーズより疎水性であるＥＬＰ４シリーズとのそれらの比によって判定される。
【００３９】
[0042]  ある特定の実施形態では、ＥＬＰは［ＶＰＧＸＧ］ｍを含むＥＬＰ−１シリーズであり、ここでｍは１〜２００の任意の数であり、各ＸはＶ、ＧおよびＡから選択され、Ｖ：Ｇ：Ａの比は約５：３：２であってよい。ある特定の実施形態では、ＥＬＰは［ＶＰＧＸＧ］９０を含み、ここで各ＸはＶ、ＧおよびＡから選択され、Ｖ：Ｇ：Ａの比は約５：３：２であってよい。ある特定の実施形態では、ＥＬＰは［ＶＰＧＸＧ］１２０を含み、ここで各ＸはＶ、ＧおよびＡから選択され、Ｖ：Ｇ：Ａの比は約５：３：２であってよい。
【００４０】
[0043]  ある特定の実施形態では、ＥＬＰは［ＶＰＧＸＧ］１４４を含み、ここで各ＸはＶ、ＧおよびＡから選択され、Ｖ：Ｇ：Ａの比は約７：２：０である。ある特定の実施形態では、ＥＬＰは［ＶＰＧＸＧ］１４４を含み、ここで各ＸはＶ、ＧおよびＡから選択され、Ｖ：Ｇ：Ａの比は約７：０：２である。ある特定の実施形態では、ＥＬＰは［ＶＰＧＸＧ］１４４を含み、ここで各ＸはＶ、ＧおよびＡから選択され、Ｖ：Ｇ：Ａの比は約６：０：３である。ある特定の実施形態では、ＥＬＰは［ＶＰＧＸＧ］１４４を含み、ここで各ＸはＶ、ＧおよびＡから選択され、Ｖ：Ｇ：Ａの比は約５：２：２である。
【００４１】
[0044]  ある特定の実施形態では、ＥＬＰは［ＸＰＧＶＧ］ｍを含み、ここでｍは１〜２００の任意の数であり、各ＸはＶ、ＧおよびＡから選択される。ある特定の実施形態では、ＥＬＰは［ＸＰＧＶＧ］１４４を含み、ここでｍは１〜２００の任意の数であり、各ＸはＶ、ＧおよびＡから選択され、Ｖ：Ｇ：Ａの比は約５：０：４である。ある特定の実施形態では、ＥＬＰは［ＸＰＧＶＧ］１４４を含み、ここで各ＸはＶ、ＧおよびＡから選択され、Ｖ：Ｇ：Ａの比は約５：０：４である。
【００４２】
[0045]  あるいは、ＥＬＰは、［ＶＰＧＶＧ］９０または［ＶＰＧＶＧ］１２０を含むＥＬＰ−４シリーズである。このＥＬＰの１２０の構造単位は、約０．００５〜約０．０５ｍｇ／ｍｌ（例えば、約０．０１ｍｇ／ｍｌ）のタンパク質で約３７℃の転移温度を提供することができる。あるいは、ＥＬＰは、［ＶＰＧＸＧ］１４４または［ＸＰＧＶＧ］１４４を含む。例えば、これらのＥＬＰのいずれかの１４４構造単位は、約２８℃から３５℃の転移温度を提供することができる。
【００４３】
[0046]  ある特定の実施形態では、ＥＬＰはＸａａ−Ｐｒｏ−Ｇｌｙ−Ｖａｌ−Ｇｌｙ（配列番号１３）のタンデム反復単位を含む反復配列単位を含有し、ここでＸは上で規定される通りであり、ＥＬＰ成分全体（ＸＰＧＶＧ以外の構造単位を含むことができる）に関してとられるＸａａ−Ｐｒｏ−Ｇｌｙ−Ｖａｌ−Ｇｌｙ単位の百分率は、ＥＬＰの約５０％超、または約７５％超、または約８５％超、または約９５％超である。ＥＬＰは配列番号１３の５〜１５構造単位（例えば、約９構造単位）のモチーフを含有することができ、ゲスト残基Ｘはモチーフ中の単位の少なくとも２つまたは少なくとも３つの間で異なる。ゲスト残基は、例えば、無極性または疎水性の残基、例えばアミノ酸Ｖ、Ｉ、Ｌ、Ａ、ＧおよびＷから独立して選択することができる（および、所望の逆相転移特性を保持するように選択することができる）。ある特定の実施形態では、ゲスト残基は、ＶおよびＡから選択される。
【００４４】
[0047]  ある特定の実施形態では、ＥＬＰは、配列番号１〜１３のいずれかのタンデム反復単位を含む反復単位を、単独でまたは組合せで含有する。一実施形態では、ＥＬＰは配列番号１〜１３のいずれかの２つ以上の反復配列を組合せで含有する。ある特定の実施形態では、ＥＬＰは配列番号３および配列番号１３の反復配列を含有する。一部の実施形態では、ＥＬＰは配列番号３および配列番号１３の反復配列を含有し、ここで、ゲスト残基は、例えば、無極性または疎水性の残基、例えばアミノ酸Ｖ、Ｉ、Ｌ、Ａ、ＧおよびＷから独立して選択される（および、所望の逆相転移特性を保持するように選択することができる）。ある特定の実施形態では、ゲスト残基は、ＶおよびＡから選択される。一部の実施形態では、ＥＬＰは、本明細書に開示されるペンタペプチドの５コピーを含む９量体を含む。一部の実施形態では、ＥＬＰは、配列番号３および１３を任意の組合せで含む９量体を含む。一部の実施形態では、ＥＬＰは、配列番号３および１３が交互に並ぶ配列を含む。一部の実施形態では、ＥＬＰは、本明細書に開示される１つまたは複数のＥＬＰ構造単位の９コピーを含む９量体を含む。一部の実施形態では、ＥＬＰは、本明細書に開示されるペンタペプチドの９コピーを含む９量体を含む。一部の実施形態では、ＥＬＰは、配列番号３および１３を任意の組合せで含む９量体を含む。一部の実施形態では、ＥＬＰは、配列番号３および１３が交互に並ぶ配列を含む。例えば、１８、２７、３６、４５、５４、６３、７２、８１、９０、９９、１０８、１１７、１２６、１３５、１４４、１５３、１６２、１７１または１８０コピーの９量体を有するＥＬＰを生成するために、様々な数の９量体のＥＬＰを組み合わせることができる。一部の実施形態では、ＥＬＰは、配列番号２０のアミノ酸配列を含む。
【００４５】
[0048]  ある特定の実施形態では、ＥＬＰは配列番号３を含む９量体を含み、ここで、ゲスト残基はＶ、ＧおよびＡから選択される。ある特定の実施形態では、ＥＬＰは配列番号３を含む９量体を含み、ここで、Ｖ、ＧおよびＡは７：２：０（アルファ）の比である。ある特定の実施形態では、ＥＬＰは配列番号３を含む９量体を含み、ここで、Ｖ、ＧおよびＡは７：０：２（ベータｖ１）の比である。ある特定の実施形態では、ＥＬＰは配列番号３を含む９量体を含み、ここで、Ｖ、ＧおよびＡは６：０：３（ベータｖ２）の比である。ある特定の実施形態では、ＥＬＰは配列番号３を含む９量体を含み、ここで、Ｖ、ＧおよびＡは５：２：２（ガンマ）の比である。ある特定の実施形態では、ＥＬＰは配列番号１３を含む９量体を含み、ここで、ゲスト残基はＶ、ＧおよびＡから選択される。ある特定の実施形態では、ＥＬＰは配列番号１３を含む９量体を含み、ここで、Ｖ、ＧおよびＡは５：０：４（デルタ）の比である。
【００４６】
[0049]  一部の実施形態では、ＥＬＰは、アルファ、ベータｖ１、ベータｖ２および／またはデルタ９量体の組合せを含む。例えば、ガンマＥＬＰは、１４４量体が構築されるまで１６コピーのアルファ９量体およびベータｖ１  ９量体を交互に並べることによって構築される。ある特定の実施形態では、ＥＬＰはアルファおよびベータｖ１  ９量体の組合せを含む。ある特定の実施形態では、ＥＬＰはアルファおよびベータｖ２  ９量体の組合せを含む。ある特定の実施形態では、ＥＬＰはアルファおよびデルタ９量体の組合せを含む。ある特定の実施形態では、ＥＬＰはベータｖ１およびベータｖ２  ９量体の組合せを含む。ある特定の実施形態では、ＥＬＰはベータｖ１およびデルタ９量体の組合せを含む。ある特定の実施形態では、ＥＬＰはベータｖ２およびデルタ９量体の組合せを含む。ある特定の実施形態では、ＥＬＰは、アルファ、ベータｖ１およびベータｖ２  ９量体の組合せを含む。ある特定の実施形態では、ＥＬＰは、アルファ、ベータｖ１およびデルタ９量体の組合せを含む。ある特定の実施形態では、ＥＬＰは、アルファ、ベータｖ２およびデルタ  ９量体の組合せを含む。例えば、特定の配置では、ＥＬＰベータｖ２は、以下の配列で繰り返される構造単位の以下のゲスト残基を含むことができる：Ａ−Ｖ−Ａ−Ｖ−Ｖ−Ａ−Ｖ−Ａ−Ｖ。繰り返される配列は、ＥＬＰ中で約１０回、約１５回、約１６回、約２０回、約２５回、約３０回または約３５回以上連続して繰り返すことができる。一部の態様では、ＥＬＰは、約１０〜約２０個の繰り返された配列を含有する。他の態様では、ＥＬＰは、約１５〜２０個の繰り返された配列を含有する。一部の態様では、ＥＬＰは、約１６個の繰り返された配列を含有する。
【００４７】
[0050]  一部の実施形態では、ＥＬＰは、本明細書に開示される１つまたは複数のＥＬＰ構造単位の１０コピーを含む１０量体を含む。一部の実施形態では、ＥＬＰは、本明細書に開示されるペンタペプチドの１０コピーを含む１０量体を含む。一部の実施形態では、ＥＬＰは、配列番号３および１３を任意の組合せで含む１０量体を含む。一部の実施形態では、ＥＬＰは、配列番号３および１３が交互に並ぶ配列を含む。様々な数の１０量体のＥＬＰを組み合わせて、例えば、２０、３０、４０、６０、９０、１００、１２０、１５０、１６０または２００コピーの１０量体を備えるＥＬＰを生成することができる。
【００４８】
[0051]  一部の実施形態では、ＥＬＰはβターン構造を形成することができる。βターン構造を形成するのに適する例示的なペプチド配列は、国際特許出願ＰＣＴ／ＵＳ９６／０５１８６に記載される。例えば、配列ＶＰＧＸＧの第４の残基（Ｘ）は、βターンの形成を排除することなく変更することができる。
【００４９】
[0052]  例示的なＥＬＰの構造は、表記ＥＬＰｋ［ＸｉＹｊ−ｎ］を使用して記載することができ、ここで、ｋは特定のＥＬＰ反復配列単位を指定し、括弧中の大文字は一文字アミノ酸コードであり、それらの対応する下付き文字は構造単位中の各ゲスト残基Ｘの相対比を指定し（該当する場合）、ｎはＥＬＰの全長を構造反復配列の数で記載する。例えば、ＥＬＰ１［Ｖ５Ａ２Ｇ３−１０］は、ペンタペプチドＶＰＧＸＧの１０反復単位を含有するＥＬＰ成分を指定し、ここでＸは約５：２：３の相対比のバリン、アラニンおよびグリシンであり；ＥＬＰ１［Ｋ１Ｖ２Ｆ１−４］は、ペンタペプチドＶＰＧＸＧの４反復単位を含有するＥＬＰ成分を指定し、ここでＸは約１：２：１の相対比のリジン、バリンおよびフェニルアラニンであり；ＥＬＰ１［Ｋ１Ｖ７Ｆ１−９］は、ペンタペプチドＶＰＧＸＧの９反復単位を含有するポリペプチドを指定し、ここでＸは約１：７:１の相対比のリジン、バリンおよびフェニルアラニンであり；ＥＬＰ１［Ｖ−５］は、ペンタペプチドＶＰＧＸＧの５反復単位を含有するポリペプチドを指定し、ここでＸはバリンであり；ＥＬＰ１［Ｖ−２０］は、ペンタペプチドＶＰＧＸＧの２０反復単位を含有するポリペプチドを指定し、ここでＸはバリンであり；ＥＬＰ２［５］は、ペンタペプチドＡＶＧＶＰ（配列番号４）の５反復単位を含有するポリペプチドを指定し；ＥＬＰ３［Ｖ−５］は、ペンタペプチドＩＰＧＸＧ（配列番号５）の５反復単位を含有するポリペプチドを指定し、ここでＸはバリンであり；ＥＬＰ４［Ｖ−５］は、ペンタペプチドＬＰＧＸＧ（配列番号７）の５反復単位を含有するポリペプチドを指定し、ここでＸはバリンである。
【００５０】
[0053]  ＥＬＰに関して、Ｔｔはゲスト残基の疎水性の関数である。したがって、ゲスト残基（複数可）の同一性およびそれらのモル分率（複数可）を変えることによって、広い範囲にわたって逆転移を示すＥＬＰを合成することができる。したがって、ＥＬＰ配列により大きな分率の疎水性ゲスト残基を組み込むことによって、所与のＥＬＰ長のＴｔを低下させることができる。適する疎水性ゲスト残基の例には、バリン、ロイシン、イソロイシン、フェニルアラニン、トリプトファンおよびメチオニンが含まれる。中程度疎水性であるチロシンを、使用することもできる。反対に、グルタミン酸、システイン、リジン、アスパラギン酸、アラニン、アスパラギン、セリン、トレオニン、グリシン、アルギニンおよびグルタミンから選択されるものなどの残基を組み込むことによって、Ｔｔを増加させることができる。
【００５１】
[0054]  分子量が１００，０００Ｄａを超えるポリペプチドについては、ＰＣＴ／ＵＳ９６／０５１８６に開示される疎水性スケールは、特定のＥＬＰ配列のおよそのＴｔを予測するための１つの手段を提供する。分子量が１００，０００Ｄａ未満のポリペプチドについては、Ｔｔは以下の二次関数：Ｔｔ＝Ｍ０＋Ｍ１Ｘ＋Ｍ２Ｘ２によって予測または判定することができ、ここでＸは融合タンパク質のＭＷであり、Ｍ０＝１１６．２１；Ｍ１＝−１．７４９９；Ｍ２＝０．０１０３４９である。
【００５２】
[0055]  一部の実施形態では、ＥＬＰは、製剤条件で約１０〜約３７℃、例えば約２０〜約３７℃、または約２５〜約３７℃の範囲のＴｔを提供するように選択または設計される。一部の実施形態では、わずかに低い末梢温度を考慮すると、生理的条件（例えば、０．９％食塩水）での転移温度は約３４〜３６℃である。
【００５３】
[0056]  エラスチン様ペプチド（ＥＬＰ）タンパク質ポリマーおよび組換え融合タンパク質は、米国特許出願公開第２０１０／００２２４５５号に記載されている通りに調製することができる。一部の実施形態では、ＥＬＰは、広範囲の分子量にわたる任意の配列および特定の長さの高度に反復性のポリペプチドを急速にクローニングするための、反復ライゲーションを通して構築される。単一のサイクルで、各々オリゴマーのコピーを含有する親プラスミドの２つの半分を一緒にライゲーションし、それによってオリゴマーを二量体化して機能的プラスミドを再構成する。所望の数の反復配列を有するオリゴマー遺伝子を組み立てるために、この過程を反復して実行する。例えば、１つのＥＬＰ構造サブユニット（例えば、ペンタペプチドまたはペンタペプチドの９量体）をベクターに挿入する。ベクターを消化し、別のＥＬＰ構造単位（例えば、ペンタペプチドまたはペンタペプチドの９量体）を挿入する。ＥＬＰポリマーが所望の長さになるまで、以降の各回の消化およびライゲーションは、結果として生じるベクターに含有されるＥＬＰ構造単位の数を倍増する。
【００５４】
[0057]  他の実施形態では、ＥＬＰはランダムコイルまたは非球状の拡張構造を含む。例えば、ＥＬＰは、米国特許出願公開第２００８／０２８６８０８号、ＷＩＰＯ特許出願公開第２００８／１５５１３４号および米国特許出願公開第２０１１／０１２３４８７号に開示されるアミノ酸配列を含む。
【００５５】
[0058]  例えば、一部の実施形態では、ＥＬＰアミノ酸配列は、少なくとも４０アミノ酸の非構造化組換えポリマーを含む。例えば、非構造化ポリマーは、非構造化ポリマーに含有されるグリシン（Ｇ）、アスパラギン酸（Ｄ）、アラニン（Ａ）、セリン（Ｓ）、トレオニン（Ｔ）、グルタミン酸（Ｅ）およびプロリン（Ｐ）残基の合計が全アミノ酸の約８０％を超えて構成する場合と規定することができる。一部の実施形態では、Ｃｈｏｕ−Ｆａｓｍａｎアルゴリズムによって判定したとき、アミノ酸の少なくとも５０％は二次構造が欠けている。非構造化ポリマーは、約１００を超える、１５０、２００またはそれを超える連続したアミノ酸を含む。一部の実施形態では、アミノ酸配列はランダムコイルドメインを形成する。特に、「ランダムコイル立体配座」を有するか形成するポリペプチドまたはアミノ酸ポリマーは、規定された二次および三次構造を実質的に欠く。
【００５６】
[0059]  様々な実施形態では、意図される対象はヒトであり、体温は約３７℃であり、したがって、治療剤はこの温度（例えば約２８℃から約３７℃まで）でまたはその近くで持続的放出を提供するように設計される。水素結合および／または疎水性相互作用の反転による循環への徐放性は、体温が一定であっても、製品が注射部位で拡散するときの濃度の低下によって推進される。他の実施形態では、対象は非ヒト哺乳動物であり、治療剤は、一部の実施形態では、例えばある特定の飼いならされたペット（例えば、イヌまたはネコ）または畜産動物（例えば、ウシ、ウマ、ヒツジまたはブタ）については約３０〜約４０℃であってよい哺乳動物の体温で持続的放出を示すように設計される。一般的に、治療剤が注射のために溶液のままであるように、Ｔｔは、製剤の保存条件（約２℃〜約３０℃、または約１０℃〜約２５℃、または約１５℃〜約２２℃、または約２℃〜約８℃であってよい）よりも高い。あるいは、治療剤は、冷凍して、例えば約−８０℃〜約−２０℃で保存することができる。
【００５７】
[0060]  一部の実施形態では、ＥＬＰは、両端を含む２７℃〜３６℃の範囲で、転移温度を提供することができる。一部の実施形態では、ＥＬＰは、両端を含む２８℃〜３５℃の範囲で、転移温度を提供することができる。一部の実施形態では、ＥＬＰは、両端を含む２９℃〜３４℃の範囲で、転移温度を提供することができる。一部の実施形態では、ＥＬＰは、両端を含む２７℃〜３３℃の範囲で、転移温度を提供することができる。一部の実施形態では、ＥＬＰは、両端を含む３０℃〜３３℃の範囲で、転移温度を提供することができる。一部の実施形態では、ＥＬＰは、両端を含む３１℃〜３１℃の範囲で、転移温度を提供することができる。一部の実施形態では、ＥＬＰは、２７℃、２８℃、２９℃、３０℃、３１℃、３２℃、３３℃、３４℃、３５℃または３６℃の転移温度を提供することができる。一部の実施形態では、ＥＬＰは、１１０ｍＭのＮａＣｌ中に１０ｍｇ／ｍＬのタンパク質濃度で、両端を含む２８℃〜３５℃の範囲で転移温度を提供することができる。
【００５８】
[0061]  一部の実施形態では、ＥＬＰタンパク質ポリマーは、任意の配列および広範囲の分子量にわたる特定の長さの高度に反復性のポリペプチドをコードするＤＮＡを急速にクローニングするために、反復ライゲーションを通して構築される。単一のサイクルでは、各々オリゴマーのコピーを含有する親プラスミドの２つの半分を一緒にライゲーションし、それによってオリゴマーを二量体化して機能的プラスミドを再構成する。所望の数の反復配列を有するオリゴマー遺伝子を組み立てるために、この過程を反復して実行する。例えば、１つのＥＬＰ構造サブユニット（例えば、ペンタペプチドまたはペンタペプチドの９量体）がベクターに挿入される。ベクターを消化し、別のＥＬＰ構造単位（例えば、ペンタペプチドまたはペンタペプチドの９量体）を挿入する。ＥＬＰポリマーが所望の長さになるまで、以降の各回の消化およびライゲーションは、結果として生じるベクターに含有されるＥＬＰ構造単位の数を倍増する。最初の構造単位中のペンタペプチドの数を変えることによって、様々な長さのＥＬＰを容易に構築することができる。ＥＬＰの代替の長さを生成するために、構築の代替手段（すなわち、反復ライゲーション以外の）を使用することができる。
【００５９】
[0062]  一部の実施形態では、ベクターは１つまたは複数の追加のアミノ酸またはＥＬＰ構造単位反復配列を含有する。例えば、ベクターは、ゲスト位置にバリンを有するＥＬＰのＮ末端に追加の五量体反復配列を、およびゲスト残基にトリプトファンを有するＣ末端に追加の五量体を追加することができる。分子の吸光係数を増加させ、例えば２８０ｎｍで吸光度のより優れた測定を可能にする手段としてトリプトファンを使用することができ、そのことはタンパク濃度の判定のためにまたは精製中のタンパク含有量のモニタリングのために有益である可能性がある。いずれかの末端に追加される五量体は、コードするＤＮＡがＥＬＰコード配列のいずれかの末端への融合パートナーのクローニングのための制限酵素認識部位を含有するように、設計することもできる。
【００６０】
[0063]  一部の実施形態では、治療組成物は活性薬剤および１つまたは複数のＥＬＰを含む。一部の実施形態では、治療組成物は、Ｎ末端またはＣ末端のいずれかに１つまたは複数のＥＬＰを有する活性薬剤を含む。一部の実施形態では、治療組成物は、Ｎ末端またはＣ末端の両方に１つまたは複数のＥＬＰを有する活性薬剤を含む。一部の実施形態では、ＥＬＰは概ね同じサイズである。一部の実施形態では、ＥＬＰはサイズが異なる。一部の実施形態では、一方の末端のＥＬＰは、他方の末端のＥＬＰより大きい。一部の実施形態では、Ｎ末端のＥＬＰはＣ末端のＥＬＰより大きい。一部の実施形態では、Ｃ末端のＥＬＰはＮ末端のＥＬＰより大きい。
【００６１】
ミオパシーおよび治療方法
[0064]  ミオパシーは、筋線維が多くの理由のいずれか１つのために機能しないで筋肉の脱力をもたらす、神経筋疾患である。表現型的に、これらの疾患は、筋肉組織の炎症、骨格筋の消耗、筋肉の減少、ならびに呼吸および心臓不全を通して早発の死を引き起こすことがある線維症によって特徴付けられる。筋肉ミオパシーは、骨格筋、心筋および／または平滑筋を含む任意のタイプの筋肉に影響することができる。一部の実施形態では、ミオパシーは筋肉線維症の増加によって特徴付けられる。一部の実施形態では、ミオパシーは、低下した筋力および／または力収縮性によって特徴付けられる。一部の実施形態では、ミオパシーは減少した筋細胞短縮によって特徴付けられる。一部の実施形態では、ミオパシーは減少した筋細胞再伸長速度によって特徴付けられる。一部の実施形態では、ミオパシーは減少した筋細胞弛緩によって特徴付けられる。一部の実施形態では、筋細胞は骨格筋の筋細胞である。一部の実施形態では、筋細胞は心筋細胞である。
【００６２】
[0065]  一部の態様では、本開示は、筋肉ミオパシーを治療する方法であって、血管作用性小腸ペプチドおよび１つまたは複数のＥＬＰの医薬組成物を必要とする対象に投与することを含む方法を提供する。一部の態様では、本開示は、筋肉ミオパシーを予防する方法であって、血管作用性小腸ペプチドおよび１つまたは複数のＥＬＰの医薬組成物を必要とする対象に投与することを含む方法を提供する。一部の態様では、本開示は、筋肉ミオパシーを遅延させる方法であって、血管作用性小腸ペプチドおよび１つまたは複数のＥＬＰの医薬組成物を必要とする対象に投与することを含む方法を提供する。一部の態様では、本開示は、筋肉ミオパシーの進行を遅くする方法であって、血管作用性小腸ペプチドおよび１つまたは複数のＥＬＰの医薬組成物を必要とする対象に投与することを含む方法を提供する。一部の態様では、本開示は、筋肉ミオパシーを改善する方法であって、血管作用性小腸ペプチドおよび１つまたは複数のＥＬＰの医薬組成物を必要とする対象に投与することを含む方法を提供する。
【００６３】
[0066]  本明細書に開示される医薬組成物によって治療、予防、遅延または改善することができるミオパシーのタイプには、限定されずに、筋ジストロフィー、ミオトニー、神経ミオトニー、先天性ミオパシー（例えばネマリンミオパシー、マルチ／ミニコアミオパシー、中心核ミオパシー）、ミトコンドリアのミオパシー、家族性周期性四肢麻痺、炎症性ミオパシー、代謝ミオパシー（例えば糖原病、脂質保存障害）；後天性ミオパシー（例えば、薬物性ミオパシー、グルココルチコイドミオパシー、アルコール性ミオパシー）、皮膚筋炎、多発筋炎、封入体筋炎、骨化性筋炎、横紋筋融解およびミオグロビン尿症が含まれる。
【００６４】
[0067]  本明細書に開示される医薬組成物によって治療、予防、遅延または改善することができる筋ジストロフィーのタイプには、限定されずに、ＢＭＤ（ベッカー筋ジストロフィー）、ＤＭＤ（デュシェンヌ筋ジストロフィー）、筋強直性ジストロフィー、ＬＧＭＤ（肢帯筋ジストロフィー）、眼球咽頭筋ジストロフィー、先天性筋ジストロフィー、末梢型筋ジストロフィー、ランドジー−デジェリーヌ筋ジストロフィー、エメリー−ドライフス筋ジストロフィーおよび顔面肩甲上腕筋ジストロフィーが含まれる。
【００６５】
[0068]  心筋症は、心不全につながる、心筋の収縮する能力のかなりの衰退である。疾患は、不整脈および心室機能不全の様々な開始に伴って経時的に進行する。疾患の初期に心電図異常を見出すことができ、年齢と共に進行する。心筋症の発達は、初期の拡張期機能不全と、続く偏心性肥大によって特徴付けられる。
【００６６】
[0069]  一部の態様では、本開示は、心筋症を治療する方法であって、血管作用性小腸ペプチドおよび１つまたは複数のＥＬＰの医薬組成物を必要とする対象に投与することを含む方法を提供する。一部の態様では、本開示は、心筋症を予防する方法であって、血管作用性小腸ペプチドおよび１つまたは複数のＥＬＰの医薬組成物を必要とする対象に投与することを含む方法を提供する。一部の態様では、本開示は、心筋症を遅延させる方法であって、血管作用性小腸ペプチドおよび１つまたは複数のＥＬＰの医薬組成物を必要とする対象に投与することを含む方法を提供する。一部の態様では、本開示は、心筋症の進行を遅くする方法であって、血管作用性小腸ペプチドおよび１つまたは複数のＥＬＰの医薬組成物を必要とする対象に投与することを含む方法を提供する。一部の態様では、本開示は、心筋症を改善する方法であって、血管作用性小腸ペプチドおよび１つまたは複数のＥＬＰの医薬組成物を必要とする対象に投与することを含む方法を提供する。
【００６７】
[0070]  本明細書に開示される医薬組成物によって治療、予防、遅延または改善することができる心筋症のタイプには、限定されずに、遺伝的心筋症（例えば、肥大型心筋症（ＨＣＭまたはＨＯＣＭ）；催不整脈性右心室心筋症（ＡＲＶＣ）；孤立性心室非圧縮；ミトコンドリアのミオパシー）、拡張型心筋症（ＤＣＭ）、収縮性心筋症（ＲＣＭ））、後天性心筋症（例えば産褥性心筋症；タコツボ心筋症；レフラー心内膜炎）、代謝性／貯蔵心筋症（例えば、アミロイド症、ヘモクロマトーシス）、炎症性心筋症（例えば「ウイルス性心筋炎」；シャガス病によって引き起こされる心筋症）、内分泌の心筋症（例えば糖尿病性心筋症；甲状腺機能亢進症によって引き起こされる心筋症；先端巨大）、毒性によって引き起こされる心筋症（例えば、化学療法心筋症、アルコール性心筋症）、Ｘ連鎖拡張型心筋症および／または神経筋心筋症（例えば筋ジストロフィー）が含まれる。一部の好ましい実施形態では、心筋症は筋ジストロフィーから生じる。一部の実施形態では、心筋症はデュシェンヌ筋ジストロフィーから生じる。一部の実施形態では、心筋症はベッカー筋ジストロフィーから生じる。
【００６８】
[0071]  心筋症症状の治療、予防、遅延または改善は、当技術分野で公知である任意の手段によって測定することができる。例えば、評価は、心エコー評価、噴門磁気共鳴画像（ＭＲＩ）、後期ガドリニウム増強による心臓ＭＲＩを含むことができる。特に、ＬＶのサイズ、厚さ、容量、ＥＦおよび心筋の瘢痕／炎症性負荷ならびに緊張を評価することができる。緊張、ＬＶの径および容量の変化ならびに瘢痕負荷が鍵となる尺度である。
【００６９】
[0072]  ミオパシー症状の治療、予防、遅延または改善は、当技術分野で公知である任意の手段によって測定することができる。例えば、ミオパシー患者を評価するために使用される検査には、限定されずに、イソ酵素によるクレアチンキナーゼ（ＣＫ）レベル、電解質、カルシウムおよびマグネシウムのレベル、血清中ミオグロビンレベル、血清クレアチニンおよび血中尿素窒素レベル、尿検査（例えば、顕微鏡評価での赤血球減少の陽性尿検査によって示されるミオグロビン尿症、完全血球算定、赤血球沈降速度、甲状腺機能検査法、アスパラギン酸アミノ基転移酵素レベル、心電図記録、抗核抗体レベル、筋電図記録法、磁気共鳴画像化および／または筋生検が含まれる。本明細書に開示される医薬組成物の投与の効果は、骨格筋、心筋、腓腹筋、四頭筋、横隔膜筋および／または前脛骨筋を非限定的に含む、任意の関連する筋肉で測定することができる。
【００７０】
[0073]  一部の態様では、本開示は、心臓衰退を予防する方法であって、血管作用性小腸ペプチドおよび１つまたは複数のＥＬＰの医薬組成物を必要とする対象に投与することを含む方法を提供する。一部の態様では、本開示は、心臓衰退を遅延させる方法であって、血管作用性小腸ペプチドおよび１つまたは複数のＥＬＰの医薬組成物を必要とする対象に投与することを含む方法を提供する。一部の態様では、本開示は、心臓衰退の進行を遅くする方法であって、血管作用性小腸ペプチドおよび１つまたは複数のＥＬＰの医薬組成物を必要とする対象に投与することを含む方法を提供する。一部の態様では、本開示は、心臓衰退を改善する方法であって、血管作用性小腸ペプチドおよび１つまたは複数のＥＬＰの医薬組成物を必要とする対象に投与することを含む方法を提供する。一部の実施形態では、心臓衰退は、未処置のミオパシー対象での心臓衰退と比較して、約１週、約１カ月、約２カ月、約３カ月、約４カ月、約５カ月、約６カ月、約８カ月、約１年、約２年、約５年および／または約１０年の間、予防、遅延または改善される。一部の実施形態では、心臓衰退は、未処置のミオパシー対象での心臓衰退と比較して、約１％、約５％、約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、または約９０％予防、遅延または改善される。一部の実施形態では、心臓衰退のこの予防、遅延または改善は、本明細書に開示される時点で観察される。例えば、心臓衰退は、３２週後に約２０％遅延させることができる。一部の実施形態では、心臓衰退は、変力性の低下である。一部の実施形態では、心臓衰退は、拡張機能の低下である。一部の実施形態では、心臓衰退は、心筋の肥厚である。一部の実施形態では、心臓衰退は、心臓肥大である。
【００７１】
[0074]  一部の実施形態では、本明細書に開示される医薬組成物の投与は、未処置のミオパシー対象と比較して対象で心機能を改善する。一部の実施形態では、心機能は、未処置のミオパシー対象の心機能と比較して、約１週、約１カ月、約２カ月、約３カ月、約４カ月、約５カ月、約６カ月、約８カ月、約１年、約２年、約５年および／または約１０年の間改善される。一部の実施形態では、心機能は、未処置のミオパシー対象の心機能と比較して、約１％、約５％、約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、または約９０％改善される。一部の実施形態では、心機能のこの改善は、本明細書に開示される時点で観察される。一部の実施形態では、心臓の改善は、変力性の増加である。一部の実施形態では、心臓の改善は、拡張機能の増加である。一部の実施形態では、心臓の改善は、心筋症対象と比較して心筋のより少ない肥厚である。一部の実施形態では、心臓の改善は、心筋症対象と比較してより少ない心肥大である。
【００７２】
[0075]  一部の態様では、本開示は、線維症の発達を予防する方法であって、血管作用性小腸ペプチドおよび１つまたは複数のＥＬＰの医薬組成物を必要とする対象に投与することを含む方法を提供する。一部の態様では、本開示は、線維症の発達を遅延させる方法であって、血管作用性小腸ペプチドおよび１つまたは複数のＥＬＰの医薬組成物を必要とする対象に投与することを含む方法を提供する。一部の態様では、本開示は、線維症の進行を遅くする方法であって、血管作用性小腸ペプチドおよび１つまたは複数のＥＬＰの医薬組成物を必要とする対象に投与することを含む方法を提供する。一部の態様では、本開示は、線維症の発達を改善する方法であって、血管作用性小腸ペプチドおよび１つまたは複数のＥＬＰの医薬組成物を必要とする対象に投与することを含む方法を提供する。一部の実施形態では、線維症の発達は、未処置のミオパシー対象での線維症の発達と比較して、約１週、約１カ月、約２カ月、約３カ月、約４カ月、約５カ月、約６カ月、約８カ月、約１年、約２年、約５年および／または約１０年の間、予防、遅延または改善される。一部の実施形態では、線維症の発達は、未処置のミオパシー対象での線維症の発達と比較して、約１％、約５％、約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、または約９０％予防、遅延または改善される。一部の実施形態では、線維症のこの予防、遅延または改善は、本明細書に開示される時点で観察される。一部の実施形態では、線維症は、生検での組織学的技術（例えばヘマトキシリンおよびエオシン（ＨＥ）およびトリクローム染色）を使用して測定され、そこでは、線維症は全組織面積に対する存在するコラーゲンの百分率を判定することによって評価することができる。
【００７３】
[0076]  一部の態様では、本開示は、コラーゲンの生成を低減する方法であって、血管作用性小腸ペプチドおよび１つまたは複数のＥＬＰの医薬組成物を必要とする対象に投与することを含む方法を提供する。一部の態様では、本開示は、コラーゲンの生成を遅延させる方法であって、血管作用性小腸ペプチドおよび１つまたは複数のＥＬＰの医薬組成物を必要とする対象に投与することを含む方法を提供する。一部の態様では、本開示は、コラーゲンの生成を改善する方法であって、血管作用性小腸ペプチドおよび１つまたは複数のＥＬＰの医薬組成物を必要とする対象に投与することを含む方法を提供する。一部の実施形態では、コラーゲンの生成は、未処置のミオパシー対象でのコラーゲンの生成と比較して、約１週、約１カ月、約２カ月、約３カ月、約４カ月、約５カ月、約６カ月、約８カ月、約１年、約２年、約５年または約１０年の間、低減、遅延または改善される。一部の実施形態では、コラーゲンの生成は、未処置のミオパシー対象でのコラーゲンの生成と比較して、約１％、約５％、約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、または約９０％低減、遅延または改善される。一部の実施形態では、コラーゲン生成のこの低減、遅延または改善は、本明細書に開示される時点で観察される。例えば、ミオパシー患者で生成されるコラーゲンの量は、３２週後に約２５％減少することができる。
【００７４】
[0077]  一部の実施形態では、本明細書に開示される医薬組成物の投与は、対象で筋肉収縮性および／または収縮力を維持する。一部の実施形態では、筋肉収縮性および／または収縮力は、健康対象の筋肉収縮性および／または収縮力の約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、約９５％または約９９％で維持される。一部の実施形態では、本明細書に開示される医薬組成物の投与は、健康対象の筋肉収縮性および／または収縮力と比較して、約１週、約１カ月、約２カ月、約３カ月、約４カ月、約５カ月、約６カ月、約８カ月、約１年、約２年、約５年および／または約１０年の間、対象で筋肉収縮性および／または収縮力を維持する。一部の実施形態では、筋肉収縮性および／または収縮力の程度は、本明細書に開示される時点で、対象で維持される。健康対象は、筋ジストロフィーまたは他の筋肉消耗疾患もしくは障害を患っていない対象と規定される。
【００７５】
[0078]  一部の実施形態では、本明細書に開示される医薬組成物の投与は、対象で筋力を維持する。一部の実施形態では、筋力は、健康対象の筋力の約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、約９５％または約９９％で維持される。一部の実施形態では、本明細書に開示される医薬組成物の投与は、健康対象の筋力と比較して、約１週、約１カ月、約２カ月、約３カ月、約４カ月、約５カ月、約６カ月、約８カ月、約１年、約２年、約５年および／または約１０年の間、対象で筋力を維持する。一部の実施形態では、筋力の程度は、本明細書に開示される時点で、対象で維持される。筋肉機能は、全体対象レベルで、器官レベルおよび／または筋細胞レベルで測定することができる。骨格の筋力は、当技術分野で公知である任意の手段によって、例えば手動筋肉検査および／またはダイナモメーターの使用によって測定することができる。心筋強度は、当技術分野で公知である任意の手段によって、例えば、心電図、心エコー検査、磁気共鳴画像化（ＭＲＩ）、圧力容積評価（例えば、拍出率、短縮率、拡張終期容積（ＥＤＶ）、収縮終期容積（ＥＳＶ）、拍出量（ＳＶ）、心筋緊張、拡張終期圧（ＥＤＰ）、収縮終期圧（ＥＳＰ））を用いることによって測定することができる。例えば、一部の実施形態では、医薬組成物の投与は、未処置のミオパシー対象と比較してＦＡＳ（fractional area shortening）を保存する。一部の実施形態では、医薬組成物の投与は、未処置のミオパシー対象と比較して拍出率を保存する。一部の実施形態では、医薬組成物の投与は、未処置のミオパシー対象と比較して心室充填速度を増加する。一部の実施形態では、医薬組成物の投与は、未処置のミオパシー対象と比較して圧上昇の最大速度を上昇させる。さらに他の実施形態では、医薬組成物の投与は、未処置のミオパシー対象と比較して弛緩のタウ定数を増加する。
【００７６】
[0079]  一部の実施形態では、本明細書に開示される医薬組成物の投与は、対象で収縮によって誘導される筋肉損傷を予防、遅延または改善する。一部の実施形態では、本明細書に開示される医薬組成物の投与は、未処置のミオパシー対象と比較して、収縮によって誘導される筋肉損傷を約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％および／または約９５％予防、遅延または改善する。一部の実施形態では、本明細書に開示される医薬組成物の投与は、未処置のミオパシー対象と比較して、対象で収縮によって誘導される筋肉損傷を約１週、約１カ月、約２カ月、約３カ月、約４カ月、約５カ月、約６カ月、約８カ月、約１年、約２年、約５年および／または約１０年の間予防、遅延または改善する。一部の実施形態では、収縮によって誘導される筋肉損傷の予防、遅延または改善の程度は、本明細書に開示される時点で、対象で観察される。例えば、本明細書に開示される医薬組成物の投与は、収縮によって誘導される筋肉損傷を１０週後に２５％低減することができる。一部の実施形態では、本明細書に開示される医薬組成物の投与は、比筋力を変化させずに対象で収縮によって誘導される筋肉損傷を予防、遅延または改善する。一部の実施形態では、本明細書に開示される医薬組成物の投与は、対象で収縮によって誘導される筋肉損傷の予防、遅延、進行の減速または改善を実行し、比筋力を向上させる。
【００７７】
[0080]  一部の実施形態では、本明細書に開示される医薬組成物の投与は、筋細胞機能を維持する。一部の実施形態では、本明細書に開示される医薬組成物の投与は、筋細胞短縮、筋細胞再伸長、弛緩および／または筋細胞収縮性を維持する。一部の実施形態では、筋細胞短縮、筋細胞再伸長、弛緩および／または筋細胞収縮性は、健康対象での筋細胞短縮、筋細胞再伸長、弛緩および／または筋細胞収縮性の約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、約９５％または約９９％で維持される。一部の実施形態では、本明細書に開示される医薬組成物の投与は、健康対象での筋細胞短縮、筋細胞再伸長、弛緩および／または筋細胞収縮性と比較して、対象で筋細胞短縮、筋細胞再伸長、弛緩および／または筋細胞収縮性を約１週、約１カ月、約２カ月、約３カ月、約４カ月、約５カ月、約６カ月、約８カ月、約１年、約２年、約５年および／または約１０年の間維持する。一部の実施形態では、筋細胞短縮、筋細胞再伸長、弛緩および／または筋細胞収縮性の程度の維持は、本明細書に開示される時点で、対象で観察される。筋細胞機能は、例えば機能および／もしくは傷害に関連したバイオマーカーの測定、ならびに／または筋細胞の直接検査を含む、当技術分野で公知である任意の手段を通して検査することができる。一部の実施形態では、筋細胞は骨格の筋細胞である。一部の実施形態では、筋細胞は心筋細胞である。
【００７８】
[0081]  一部の実施形態では、本明細書に開示される医薬組成物の投与は、筋肉中の免疫細胞数に影響する。一部の実施形態では、本明細書に開示される医薬組成物の投与は、筋肉中の免疫細胞数を減少させる。一部の実施形態では、本明細書に開示される医薬組成物の投与は、筋肉中のマクロファージ数を減少させる。一部の実施形態では、免疫細胞数は、未処置のミオパシー対象の筋肉中の免疫細胞数の約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、約９５％または約９９％減少する。一部の実施形態では、本明細書に開示される医薬組成物の投与は、未処置のミオパシー対象の筋肉中の免疫細胞数と比較して、対象の筋肉中の免疫細胞数を約１週、約１カ月、約２カ月、約３カ月、約４カ月、約５カ月、約６カ月、約８カ月、約１年、約２年、約５年および／または約１０年の間減少させる。一部の実施形態では、筋肉中の免疫細胞数のこの減少は、本明細書に開示される時点で、対象で観察される。例えば、本明細書に開示される医薬組成物の投与は、筋肉中の免疫細胞数を３２週後に約２５％減少させることができる。
【００７９】
[0082]  一部の態様では、本開示は、炎症を予防する方法であって、血管作用性小腸ペプチドおよび１つまたは複数のＥＬＰの医薬組成物を必要とする対象に投与することを含む方法を提供する。一部の態様では、本開示は、炎症を遅延させる方法であって、血管作用性小腸ペプチドおよび１つまたは複数のＥＬＰの医薬組成物を必要とする対象に投与することを含む方法を提供する。一部の態様では、本開示は、炎症の発達を遅くする方法であって、血管作用性小腸ペプチドおよび１つまたは複数のＥＬＰの医薬組成物を必要とする対象に投与することを含む方法を提供する。一部の態様では、本開示は、炎症を改善する方法であって、血管作用性小腸ペプチドおよび１つまたは複数のＥＬＰの医薬組成物を必要とする対象に投与することを含む方法を提供する。一部の態様では、本開示は、炎症を低減する方法であって、血管作用性小腸ペプチドおよび１つまたは複数のＥＬＰの医薬組成物を必要とする対象に投与することを含む方法を提供する。一部の実施形態では、炎症は、未処置のミオパシー対象での炎症と比較して、約１週、約１カ月、約２カ月、約３カ月、約４カ月、約５カ月、約６カ月、約８カ月、約１年、約２年、約５年および／または約１０年の間、予防、遅延、低減または改善される。一部の実施形態では、炎症は、未処置のミオパシー対象での炎症と比較して、約１％、約５％、約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、または約９０％予防、遅延、低減または改善される。一部の実施形態では、炎症のこの予防、遅延、低減または改善は、本明細書に開示される時点で観察される。一部の実施形態では、本明細書に開示される医薬組成物の投与は、炎症誘発性サイトカインの発現または活性を阻害することによって、炎症を予防、遅延、低減または改善する。一部の実施形態では、炎症誘発性サイトカインは、限定されずにＯＰＮ、ＬＴβ４、ＴＮＦ−アルファ、インターロイキン−６（ＩＬ−６）および可溶性腫瘍壊死因子−アルファ受容体（ｓＴＮＦＲ）を含む、任意の炎症誘発性サイトカインである。
医薬組成物および投与
【００８０】
[0083]  本開示は、血管作用性小腸ペプチドおよび１つまたは複数のＥＬＰを、１つまたは複数の薬学的に許容される賦形剤および／または希釈剤と一緒に含む医薬組成物を提供する。
【００８１】
[0084]  本開示は、本明細書に開示される治療剤ならびに１つまたは複数の薬学的に許容される賦形剤および／または希釈剤を含む持続的放出製剤を提供する。例えば、そのような賦形剤には、塩および水素結合を安定させる作用をすることができる他の賦形剤が含まれる。当技術分野で公知である任意の適当な賦形剤を使用することができる。例示的な賦形剤には、限定されずに、ヒスチジン、グリシンまたはアルギニンなどのアミノ酸；グリセロール；スクロースなどの糖；ポリソルベート２０およびポリソルベート８０などの界面活性剤；クエン酸；クエン酸ナトリウム；抗酸化剤；ナトリウム、カリウムおよびカルシウムなどのアルカリ土類金属塩を含む塩；塩化物およびリン酸塩などの対イオン；保存剤；糖アルコール（例えばマンニトール、ソルビトール）；ならびに緩衝剤が含まれる。例示的な塩には、塩化ナトリウム、塩化カリウム、塩化マグネシウム、塩化カルシウム、二塩基性リン酸ナトリウム、塩基性リン酸ナトリウム、塩基性リン酸カリウムおよび二塩基性リン酸カリウムが含まれる。ある特定の実施形態では、本明細書に開示される医薬組成物は、増強された効能、生物学的利用能、治療半減期、持続性、分解抵抗性などを有する。
【００８２】
[0085]  ある特定の実施形態では、製剤は、約５ｍＭヒスチジン〜約１００ｍＭヒスチジンを含むことができる。一部の実施形態では、製剤は、約５０ｍＭヒスチジン、約４０ｍＭヒスチジン、約３０ｍＭヒスチジン、約２５ｍＭヒスチジン、約２０ｍＭヒスチジンまたは約１５ｍＭヒスチジンを含む。ある特定の実施形態では、製剤は、約１０ｍＭ塩化ナトリウム〜約２００ｍＭ塩化ナトリウムを含むことができる。一部の実施形態では、製剤は、約２０ｍＭ塩化ナトリウム、約４０ｍＭ塩化ナトリウム、約６０ｍＭ塩化ナトリウム、約７５ｍＭ塩化ナトリウム、約１００ｍＭ塩化ナトリウム、約１２０ｍＭ塩化ナトリウムまたは約１５０ｍＭ塩化ナトリウムを含む。ある特定の実施形態では、製剤は、約１０ｍＭヒスチジン〜約３０ｍＭヒスチジン、および約６０ｍＭ塩化ナトリウム〜約８０ｍＭ塩化ナトリウムを含むことができる。ある特定の実施形態では、製剤は、約２０ｍＭヒスチジンおよび約７５ｍＭ塩化ナトリウムを含むことができる。
【００８３】
[0086]  医薬組成物は、体温（例えば３７℃、または一部の実施形態では３４〜３６℃）でマトリックスの形成を可能にするのに十分であるｐＨ、イオン強度で、および一般的に賦形剤で製剤化される。医薬組成物は、それが貯蔵条件でマトリックスを形成しないように一般的に調製される。製剤は、冷凍、冷蔵または室温で保存することができる。保存条件は、約−１０℃未満、または約−２０℃未満、または約−４０℃未満、または約−７０℃未満などの凍結未満であってよい。貯蔵条件は、一般的に製剤の転移温度未満、例えば約３２℃未満、または約３０℃未満、または約２７℃未満、または約２５℃未満、または約２０℃未満、または約１５℃未満である。一部の実施形態では、製剤は２〜８℃で保存される。例えば、製剤は血液と等張性であるか、または生理的条件を模倣するイオン強度を有することができる。例えば、製剤は、少なくとも２５ｍＭ塩化ナトリウムのそれ、または少なくとも３０ｍＭ塩化ナトリウムのそれ、または少なくとも４０ｍＭ塩化ナトリウムのそれ、または少なくとも５０ｍＭ塩化ナトリウムのそれ、または少なくとも７５ｍＭ塩化ナトリウムのそれ、または少なくとも１００ｍＭ塩化ナトリウムのそれ、または少なくとも１５０ｍＭ塩化ナトリウムのそれのイオン強度を有することができる。ある特定の実施形態では、製剤は、０．９％食塩水（１５４ｍＭ塩化ナトリウム）のそれに等しいイオン強度を有する。
【００８４】
[0087]  一部の実施形態では、製剤は生理的ｐＨで製剤化される。一部の実施形態では、製剤は、約５．５〜約８．５の範囲内のｐＨで製剤化される。一部の実施形態では、製剤は、約６．０〜約８．０の範囲内のｐＨで製剤化される。一部の実施形態では、製剤は、約６．５〜約７．５の範囲内のｐＨで製剤化される。一部の実施形態では、製剤は７．５のｐＨで製剤化される。一部の実施形態では、より低いｐＨの製剤は、より高いｐＨの製剤と比較して改善された製剤安定性を実証する。一部の実施形態では、より高いｐＨの製剤は、より低いｐＨの製剤と比較して改善された製剤安定性を実証する。
【００８５】
[0088]  一部の実施形態では、製剤は保存条件で安定している。安定性は、当技術分野の任意の適当な手段を使用して測定することができる。一般的に、安定した製剤とは、分解生成物または不純物の５％未満の増加を示すものである。一部の実施形態では、製剤は、貯蔵条件で少なくとも約１カ月間、少なくとも約２カ月間、少なくとも約３カ月間、少なくとも約４カ月間、少なくとも約５カ月間、少なくとも約６カ月間、少なくとも約１年または少なくとも約２年以上の間安定している。一部の実施形態では、製剤は、２５℃において少なくとも約１カ月間、少なくとも約２カ月間、少なくとも約３カ月間、少なくとも約４カ月間、少なくとも約５カ月間、少なくとも約６カ月間、または少なくとも約１年以上の間安定している。
【００８６】
[0089]  製剤中のタンパク質濃度は、投与の温度でコアセルベートの形成を可能にするように調整される。例えば、より高いタンパク質濃度はコアセルベート形成の推進を助け、この目的のために必要なタンパク質濃度は使用されるＥＬＰシリーズによって異なる。例えば、ＥＬＰ１−１２０または同等の転移温度を有するＥＬＰを使用する一部の実施形態では、タンパク質は約１ｍｇ／ｍＬ〜約２００ｍｇ／ｍＬの範囲内で存在するか、または約５ｍｇ／ｍＬ〜約１２５ｍｇ／ｍＬの範囲内で存在する。ＥＬＰ４−１２０または同等の転移温度を有するアミノ酸配列を使用する実施形態では、タンパク質は約０．００５ｍｇ／ｍＬ〜約１０ｍｇ／ｍＬの範囲内で存在するか、または約０．０１ｍｇ／ｍＬ〜約５ｍｇ／ｍＬの範囲内で存在する。
【００８７】
[0090]  例示的な実施形態では、本開示は、本明細書に開示される（例えばメチオニンなどのＮ末端部分を有する）血管作用性小腸ペプチド、および［ＶＰＧＸＧ］９０、［ＶＰＧＸＧ］１２０、［ＶＰＧＸＧ］１６０または［ＶＰＧＸＧ］１８０を含み、各ＸはＶ、ＧおよびＡから選択される、１つまたは複数のアミノ酸配列を含む持続的放出医薬組成物を提供する。Ｖ、ＧおよびＡは、約５：３：２、約７：２：０、約７：０：２、約６：０：３または約５：２：２の比で存在することができる。あるいは、アミノ酸配列は、［ＶＰＧＶＧ］９０または［ＶＰＧＶＧ］１２０を含む。例示的な実施形態では、本開示は、（例えばメチオニンなどのＮ末端部分を有する）血管作用性小腸ペプチドまたはその誘導体、および［ＸＰＧＶＧ］１４４を含み、各ＸはＶ、ＧおよびＡから選択される、１つまたは複数のアミノ酸配列を含む持続的放出医薬組成物を提供する。Ｖ、ＧおよびＡは、約５：０：４の比で存在することができる。あるいは、アミノ酸配列は、［ＸＰＧＶＧ］１４４を含む。製剤は、ヒト対象への投与に応じた水性形からの可逆的マトリックスの形成のための、１つまたは複数の薬学的に許容される賦形剤および／または希釈剤をさらに含む。ＶＩＰおよびその誘導体は、米国特許出願公開第２０１１／０１７８０１７号に開示される。
【００８８】
[0091]  別の態様では、本開示は、本明細書に開示される血管作用性小腸ペプチドの持続的放出レジメンを送達するための方法を提供する。本方法は、必要とする対象に本明細書に記載される医薬組成物を投与することを含み、ここで、医薬組成物は１カ月につき約１〜約８回投与される。一部の実施形態では、医薬組成物は、１カ月につき約１回、約２回、約３回および／または約４回投与される。一部の実施形態では、医薬組成物は週単位で投与される。一部の実施形態では、医薬組成物は日単位で投与される。一部の実施形態では、医薬組成物は１週につき１〜３回投与される。一部の実施形態では、医薬組成物は２週おきに１回投与される。一部の実施形態では、医薬組成物は１カ月につき１〜２回投与される。特定の実施形態では、医薬組成物は、１カ月につき約１回投与される。一部の実施形態では、医薬組成物は、２カ月おきに約１回、３カ月おきに約１回、４カ月おきに約１回、５カ月おきに約１回および／または６カ月おきに約１回投与される。一部の実施形態では、米国特許出願公開第２０１１／０１７８０１７号に記載の通り、受容体結合性プロファイルを変更するために、ＶＩＰはＮ末端にメチオニンなどの追加の部分を有することができる。一部の実施形態では、ＶＩＰはＥＬＰ１（約９０〜約１８０ＥＬＰ単位を有する）に融合される。一部の実施形態では、ＶＩＰはＥＬＰ４（約９０〜約１８０ＥＬＰ単位を有する）に融合される。一部の実施形態では、ＶＩＰはＥＬＰｂｅｔａ  ｖ２（約９０〜約１８０ＥＬＰ単位を有する）に融合される。医薬組成物は、１週につき１回、１週につき２回または１カ月につき１〜８回の投与のために前充填されたペンまたはシリンジの形で詰め込むことができるか、あるいは従来のバイアルなどに充填することができる。
【００８９】
[0092]  有利には、活性薬剤の持続的放出のために、組成物は長期の薬物動態学的曝露を提供する。特定の態様では、最大曝露レベルは、投与の約１０時間後、約２４時間後、約４８時間後または約７２時間後に達成することができる。一般的に、最大曝露レベルは、投与の約１０時間後〜約４８時間後の間に達成される。最大曝露レベルが達成された後、組成物は持続的放出レベルを達成することができ、それによって最大レベルのかなりの百分率がしばらくの間得られる。例えば、持続的レベルは、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％または約１００％であってよい。持続率を維持するための例示的な期間は、最大曝露率が達成されてから約３日間、約４日間、約５日間、約６日間、約１週間、約２週間、約４週間、約６週間または約８週間である。その後、持続レベルは、低減された曝露レベルに下がってもよい。そのような低減された曝露率は、約５％、約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％または約６０％であってよい。
【００９０】
[0093]  一部の実施形態では、本明細書に開示される医薬組成物は長期投与される。一部の実施形態では、本明細書に開示される医薬組成物は、約６カ月、約７カ月、約８カ月、約９カ月、約１０カ月、約１１カ月、約１年、約２年、約３年、約４年、約５年、約１０年以上の間投与される。医薬組成物は、本明細書に開示される任意の必要な用量および／または頻度で投与することができる。
【００９１】
[0094]  一部の実施形態では、本明細書に開示される医薬組成物は、ミオパシーの症状が改善するまで投与される。一部の実施形態では、本明細書に開示される医薬組成物は、ミオパシーの症状が良くなるまで投与される。一部の実施形態では、本明細書に開示される医薬組成物は、ミオパシーの症状が遅延されるまで投与される。一部の実施形態では、本明細書に開示される医薬組成物は、ミオパシーの症状が治癒するまで投与される。
【００９２】
[0095]  一部の実施形態では、本明細書に開示される医薬組成物は、患者が１つまたは複数のミオパシー症状を示し始める前に投与される。一部の実施形態では、本明細書に開示される医薬組成物は、ミオパシー症状の発症時に投与される。一部の実施形態では、本明細書に開示される医薬組成物は、患者が心筋症を示し始める前に投与される。一部の実施形態では、本明細書に開示される医薬組成物は、心筋症の症状の発症時に投与される。
【００９３】
[0096]  一部の実施形態では、医薬組成物は、筋肉消耗を有すると判定された対象に投与される。一部の実施形態では、医薬組成物は、筋肉ミオパシーを有すると判定された対象に投与される。一部の実施形態では、対象は、非ミオパシー対象と比較して血液中に循環する筋タンパク質のレベルが増加していると判定される。一部の実施形態では、対象は、非ミオパシー対象と比較して血液中に循環するクレアチンキナーゼ（ＣＫ）のレベルが増加していると判定される。一部の実施形態では、対象は、非ミオパシー対象と比較して血液中に循環する乳酸脱水素酵素（ＬＤＨ）のレベルが増加していると判定される。一部の実施形態では、対象は、非ミオパシー対象と比較して血液中に循環するピルビン酸キナーゼ（ＰＫ）のレベルが増加していると判定される。筋タンパク質レベルは、血清酵素検査を使用して判定することができる。
【００９４】
[0097]  一部の実施形態では、対象は、尿中の電解質のレベルが変更されていると判定される。一部の実施形態では、対象は、非ミオパシー対象と比較して尿中のカルシウムのレベルが増加していると判定される。一部の実施形態では、対象は、非ミオパシー対象と比較して尿中のマグネシウムのレベルが増加していると判定される。尿中の電解質のレベルは、尿検査を使用して判定することができる。
【００９５】
[0098]  一部の実施形態では、医薬組成物は、炎症性ミオパシーを有すると判定された対象に投与される。一部の実施形態では、対象は、非ミオパシー対象と比較して血液中に循環する抗体のレベルが増加していると判定される。一部の実施形態では、対象は、非ミオパシー対象と比較して血液中に循環する筋肉炎関連の抗体のレベルが増加していると判定される。一部の実施形態では、筋肉炎関連の抗体には、限定されずに、Ｊｏ−１、ＰＬ−７、Ｐｌ−１２、ＥＫ、ＯＪ、ＫＳ、ＺｏおよびＨａが含まれる。一部の実施形態では、筋肉炎関連の抗体は、限定されずに、抗体Ｊｏ−１、ＰＬ−７、Ｐｌ−１２、ＥＫ、ＯＪ、ＫＳ、ＺｏおよびＨａが結合するものを含む抗原に結合する。一部の実施形態では、抗体には、限定されずに、ＳＲＰ、Ｍｉ−２、ＰＭＳ１、Ｐ１５５、ｐ１４０、ＣＡＤＭ−１４０、ＭＪ（ｐ１４０）、ＭＵ、ＳＡＥ、デコリン、ＫＵ、ＫＪ、ＨＭＧＣＲ、Ｍｕｐ４４、コルタクチン、核孔、ＦＨＬ１、ＰＭ−Ｓｃｌ、５６ｋＤ、ＳＳＡ／ｒｏ、Ｕ１−ｎＲＮＰ、Ｕ２−ＮＲＮＰ、Ｆｅｒ、ＭＡＳおよびミトコンドリアが含まれる。一部の実施形態では、抗体は、限定されずに、ＳＲＰ、Ｍｉ−２、ＰＭＳ１、Ｐ１５５、ｐ１４０、ＣＡＤＭ−１４０、ＭＪ（ｐ１４０）、ＭＵ、ＳＡＥ、デコリン、ＫＵ、ＫＪ、ＨＭＧＣＲ、Ｍｕｐ４４、コルタクチン、核孔、ＦＨＬ１、ＰＭ−Ｓｃｌ、５６ｋＤ、ＳＳＡ／ｒｏ、Ｕ１−ｎＲＮＰ、Ｕ２−ＮＲＮＰ、Ｆｅｒ、ＭＡＳおよびミトコンドリア抗体が結合するものを含む抗原に結合する。
【００９６】
[0099]  一部の実施形態では、対象は、非心筋症対象と比較して異常な心エコー図を有すると判定される。一部の実施形態では、対象は、非心筋症対象と比較して心臓性能の変化を有すると判定される。一部の実施形態では、対象は、非心筋症対象と比較して増加したＰ−Ｒ間隔を有すると判定される。一部の実施形態では、対象は、非心筋症対象と比較して増加したＵ波を有すると判定される。一部の実施形態では、対象は、非心筋症対象と比較して広いＱＲＳを有すると判定される。一部の実施形態では、対象は、非心筋症対象と比較して非特異的ＳＴ−Ｔ変化を有すると判定される。一部の実施形態では、対象は、非心筋症対象と比較して洞不整脈を有すると判定される。一部の実施形態では、対象は、非心筋症対象と比較して、前胸部に深部のＱ波および上昇したＲ波を有すると判定される。一部の実施形態では、対象は、非心筋症対象と比較して異常な強直性収縮（ＴＣ）を有すると判定される。一部の実施形態では、強直性収縮は、心エコーで左心室「充填不足」の出現をもたらす、持続的イオン誘導筋細胞収縮として現れるカルシウム調節不全の期間から生じる（Su et al.（2015）。一部の実施形態では、対象は、非心筋症対象と比較して不整脈を有すると判定される。一部の実施形態では、対象は、非心筋症対象と比較して洞性頻脈を有すると判定される。一部の実施形態では、対象は、非心筋症対象と比較して収縮期機能不全を有すると判定される。一部の実施形態では、対象は、非心筋症対象と比較して拡張期機能不全を有すると判定される。一部の実施形態では、対象は、非心筋症対象と比較して、減少した僧帽弁収縮期波速度を有すると判定される。一部の実施形態では、対象は、非心筋症対象と比較して壁運動異常を有すると判定される。心臓の機能および／または特徴は、心電図を使用して測定することができる。
【００９７】
[00100]  一部の実施形態では、対象は、非心筋症対象と比較して増加した炎症誘発性サイトカイン発現を有すると判定される。一部の実施形態では、対象は、非心筋症対象と比較して増加した炎症誘発性サイトカイン活性を有すると判定される。一部の実施形態では、炎症誘発性サイトカインは、限定されずにＯＰＮ、ＬＴβ４、ＴＮＦ−アルファ、インターロイキン−６（ＩＬ−６）および可溶性腫瘍壊死因子−アルファ受容体（ｓＴＮＦＲ）を含む、任意の炎症誘発性サイトカインである。対象での炎症誘発性サイトカインの発現または活性は、サイトカインアッセイを通して測定することができる。
【００９８】
[00101]  一部の実施形態では、対象は、非心筋症対象と比較して減少したｎＮＯＳタンパク質発現を有すると判定される。一部の実施形態では、対象は、非心筋症対象と比較して減少したｎＮＯＳ活性を有すると判定される。一部の実施形態では、対象は、非心筋症対象と比較して変化したｎＮＯＳタンパク質蓄積を有すると判定される。一部の実施形態では、対象は、非心筋症対象と比較して、骨格筋のサイトゾルに増加したｎＮＯＳタンパク質蓄積を有すると判定される。一部の実施形態では、対象は、非心筋症対象と比較して、骨格筋の筋線維鞘に減少したｎＮＯＳタンパク質蓄積を有すると判定される。タンパク質蓄積は、組織学的技術によって検査することができる。タンパク質発現は、免疫沈降技術によって検査することができる。タンパク質活性は、ＮＯＳ触媒アッセイによって測定することができる。
【００９９】
[00102]  医薬組成物は一般的に「全身性送達」のためであり、これは、薬剤が病的部位または作用部位に局所的に送達されないことを意味する。代わりに、薬剤は注射部位から血流中に吸収され、そこで、薬剤は全身的に作用するか、または循環を通して作用部位に輸送される。治療剤は任意の公知の経路によって、例えば、経口的、静脈内、筋肉内、経鼻的、皮下、膣内におよび直腸内に投与することができる。一実施形態では、製剤は一般的に皮下投与のためのものである。一実施形態では、薬剤が皮下に投与されるとき、薬物動態学的（ＰＫ）パラメータは延長される。一実施形態では、融合タンパク質の半減期が延長される。一実施形態では、他の手段（例えば静脈内）によって投与される薬剤と比較して、薬剤が皮下に投与されるときのＰＫパラメータは延長される。一実施形態では、他の手段（例えば静脈内）によって投与される薬剤と比較して、薬剤が皮下に投与されるときに薬剤の貯蔵所は延長される。
【０１００】
[00103]  一部の実施形態では、製剤は約月１回投与され、皮下または筋肉内に投与することができる。一部の実施形態では、製剤は約週１回投与され、皮下または筋肉内に投与することができる。一部の実施形態では、投与部位は病的部位ではなく、例えば、意図された作用部位でない。
【０１０１】
[00104]  様々な実施形態では、活性薬剤の血漿中濃度は、製剤の複数回の投与、例えば少なくとも２回、少なくとも約５回または少なくとも約１０回の投与の過程で、１０倍、または約５倍、または約３倍を超えて変化することはない。投与は、実質的に等間隔、例えば、約１日ごと、または約１週に１回、または１カ月につき１〜約５回、または約２カ月ごとに１回または約３カ月ごとに１回である。
【０１０２】
[00105]  本明細書に開示される医薬組成物は、未融合であるか非コンジュゲート型の対応物より小さい用量および／または低い頻度で投与することができる。当業者は各場合に望ましい用量を決定することができるが、治療的恩恵の達成のための治療剤の適する用量は、例えば、１日につきレシピエントの１キログラム体重につき約１マイクログラム（μｇ）〜約１００ミリグラム（ｍｇ）の範囲内、好ましくは１日につき１キログラム体重につき約１０μｇ〜約５０ｍｇの範囲内、最も好ましくは１日につき１キログラム体重につき約１００μｇ〜約１０ｍｇの範囲内であってよい。一部の実施形態では、医薬組成物は低用量で投与される。一部の実施形態では、医薬組成物は、１日につき体重１キログラムにつき１ｍｇから１日につき体重１キログラムにつき約９ｍｇまでの間の用量で投与される。一部の実施形態では、医薬組成物は、１日につき体重１キログラムにつき約１ｍｇ、１日につき体重１キログラムにつき約３ｍｇおよび／または１日につき体重１キログラムにつき約９ｍｇで投与される。所望の用量は、１用量または１日に適当な間隔で投与される２つ以上の下位用量として提示することができる。これらの下位用量は、例えば１単位剤形につき約１０μｇ〜約１０００ｍｇ、好ましくは約５０μｇ〜約５００ｍｇ、最も好ましくは約５０μｇ〜約２５０ｍｇの有効成分を含有する単位剤形で投与することができる。あるいは、レシピエントの状態がそれを必要とするならば、用量は連続注入として投与することができる。
【０１０３】
[00106]  ある特定の実施形態では対象はヒトであるが、他の実施形態では非ヒト哺乳動物、例えば家畜化されたペット（例えば、イヌまたはネコ）または家畜もしくは畜産動物（例えば、ウマ、ウシ、ヒツジまたはブタ）であってもよい。
【０１０４】
併用療法
[00107]  本明細書に開示される医薬組成物は、ミオパシー、筋ジストロフィーおよび／または心筋症を治療、予防、遅延または改善するために使用される、物理的療法、呼吸療法、言語療法、作業療法、矯正手術および／または治療剤を限定されずに含む、様々な療法と投与することができる。本明細書に開示される医薬組成物は、単独で、または１つまたは複数の治療剤と組み合わせて使用することができる。１つまたは複数の治療剤は、それを必要とする対象に治療効果を発揮する任意の化合物、分子または物質であってよい。
【０１０５】
[00108]  １つまたは複数の治療剤は、別個の医薬組成物として、または単一の医薬組成物中に混合して、対象に「同時投与すること」、すなわち、協調的な方法で投与することができる。「同時投与する」によって、１つまたは複数の治療剤は、本医薬組成物と同時に投与することもできるか、または別々に、例えば異なる時間でおよび異なる頻度で投与することができる。１つまたは複数の治療剤は、任意の公知の経路によって、例えば、経口的、静脈内、筋肉内、経鼻的、皮下、膣内、直腸内などに投与することができ、治療剤は任意の従来の経路によって投与することもできる。多くの実施形態では、少なくとも１つの治療剤は、皮下に投与されてもよい。
【０１０６】
[00109]  これらの１つまたは複数の治療剤には、限定されずに、コルチコステロイド；ステロイド、フェニトイン；プロカインアミド；キニーネ；糖質コルチコイド（例えば、デフラザコルト、ＶＢＰ１５、プレドニゾントリアムシノロン、全身性メチルプレドニゾロン、ベタメタゾン、ブデソニド、プレドニゾロン、ヒドロコルチゾン、デキサメタゾンおよび／またはコルチゾン）；抗痙攣薬；免疫抑制薬（例えば、シクロスポリン、タクロリムス、プレドニゾロン、ヒドロコルチゾン、シロリムス、エベロリムス、アザチオプリン、ミコフェノール酸、メトトレキセート、バシリキシマブ、ダクリズマブ、リツキシマブ、抗胸腺細胞グロブリン、抗リンパ球グロブリン）；ペニシリン（例えば、ペニシリンおよびアモキシシリン）；セファロスポリン（例えば、セファレキシン）；マクロライド（例えば、エリスロマイシン、クラリスロマイシンおよびアジスロマイシン）；フルオロキノロン（例えば、オフロキサシン、レボフロキサシンおよびオフロキサシン）；スルホンアミド（例えば、コトリモキサゾールおよびトリメトプリム）；テトラサイクリン（例えば、テトラサイクリンおよびドキシサイクリン）；アミノグリコシド系（例えば、ゲンタマイシンおよびトブラマイシン））；ＡＣＥ阻害剤（例えば、ペリンドプリルおよびエナラプリル）；アンギオテンシンＩＩ受容体ブロッカー；ベータブロッカー；カルシウムチャネル遮断薬；ジゴキシン；抗不整脈薬；抗凝固剤；抗生物質；利尿剤（例えば、スピロノラクトン、エプレレノン）；エクソンスキップ療法（例えば、エテプリルセン、ドリサペルセン）；抗ミオスタチン抗体（例えば、ＰＦ−０６２５２６１６）；抗結合組織増殖因子抗体（例えば、ＦＧ−３０１９）、ＰＤＥ５阻害剤（例えば、タダラフィル、シルデナフィル）；ＰＤＥ９阻害剤；ＮＦ−κＢ阻害剤；終止コドンリードスルー薬物（例えば、アタルレン）；ユートロフィンモジュレータ（例えば、ＳＭＴ  Ｃ１１００、ＳＭＴ０２２３５７）；抗線維症の薬剤（例えば、ハロフギノン、アンギオテンシン［１−７］）；コエンザイムＱ１０の合成類似体（例えば、イデベノン）；同種異系心細胞療法（例えば、ＣＡＰ−１００２；Ｔｏｌｌ様受容体アンタゴニスト（例えば、ＩＭＯ−８４００）；無機質コルチコイド受容体アンタゴニスト；β−アドレナリン受容体アンタゴニスト；レズベラトロル；ＳＩＲＴ１活性化因子を含む。
【０１０７】
[00110]  ２つ以上の治療剤を併用するときは、各治療剤の投薬量は独立して使用するときの薬剤の投薬量と一般的に同一である。しかし、治療剤が他の代謝を妨害するとき、各治療剤の投薬量は適切に調整される。あるいは、２つ以上の治療剤が相乗作用を示す場合、１つまたは複数の用量を低減することができる。各治療剤は、同時に、または適当な間隔で別々に投与することができる。
【０１０８】
[00111]  本出願全体において「ａ」、「ａｎ」および「ｔｈｅ」などの単数形は便宜上使用されるが、文脈または明示的記述が別途示す場合以外は、単数形は複数形を含むこととすることを理解するべきである。全ての数値範囲は、数値範囲の中のいずれの数値地点をも含むと理解するべきで、いずれの数値地点をも個々に列挙するものと解釈するべきである。同じ成分または特性を対象とする全ての範囲の端点は包含的であり、個々に組合せ可能であることとする。
【０１０９】
[00112]  参照される数値表示に関連して使用されるとき、用語「約」は、参照数値表示プラスまたはマイナス参照数値表示の最高１０％を意味する。例えば、語「約５０」は、４５〜５５の範囲を含む。
【０１１０】
[00113]  本明細書で用いるように、単語「含む」およびその変異体は非限定的であることとし、そのため、リスト中のアイテムの列挙は、この技術の材料、組成物、器具および方法で同じく有益であろう他の同様のアイテムを除外するものではない。同様に、用語「することができる」および「してもよい」およびそれらの変異形は非限定的であることとし、そのため、実施形態がある特定の要素または特徴を含むことができるかまたは含んでもよいとの叙述は、それらの要素または特徴を含有しない本技術の他の実施形態を排除しない。含む、含有するまたは有するなどの用語の同義語としてのオープンエンドの用語「含む」は、本開示を記載および請求するために本明細書で使用されるが、本技術またはその実施形態は、列挙された成分「からなる」または「から事実上なる」などのより限定的な用語を使用して代わりに記載することができる。
【０１１１】
[00114]  特に明記されない限り、本明細書の全ての専門用語および科学用語は、この開示が属する分野の当業技術者が通常理解するのと同じ意味を有する。本明細書に記載されるそれらに類似するかまたは同等であるいかなる方法および材料も本開示の実施または試験で用いることができるが、好ましい方法および材料が本明細書に記載される。
【０１１２】
[00115]  この開示は、以下の非限定的実施例でさらに例示される。
【実施例】
【０１１３】
実施例１−筋ジストロフィー患者における心筋症および骨格筋ミオパシーに及ぼすＰＢ１０４６の影響
[00116]  骨格および心臓の症状の発症の遅延に対するＰＢ１０４６治療の効能を試験するために、デュシェンヌ筋ジストロフィーおよびベッカー筋ジストロフィー患者で臨床治験を実行する。
【０１１４】
[00117]  設計：これは、無作為化された（２：１）二重盲検プラセボ比較治験である。最初に、１８才以上の患者を評価するが、試験は１２才以上の青年に開放される。用量応答を評価するために、少なくとも２つの用量レベル、例えば、０．４ｍｇ／ｋｇから３．２ｍｇ／ｋｇの間の用量、例えば０．８ｍｇ／ｋｇおよび１．６ｍｇ／ｋｇが評価される。安全性に関する考慮によって、より高いかより低い用量を評価することもできる。各用量レベルで、少なくとも６人の患者が治療される。
【０１１５】
[00118]  主要な研究エンドポイントは効能であり、それは、１２週間の治療後の全体的な心臓／領域性機能特性におけるベースラインからの変化として測定される。この機能は、２４週後にさらに評価される。心エコー検査および後期ガドリニウム増強による心臓ＭＲＩが、評価のために使用される。左心室円周歪に及ぼす治療の影響が測定される。左心室拡張終期容積（ＬＶＥＤＶ）、右心室拡張終期容積（ＲＶＥＤＶ）、心臓線維症の尺度としての増強の程度、短縮率（ＦＳ）および／または心拍出量（ＣＯ）を測定する。ＬＶのサイズ、厚さ、容積、拍出率および心筋の瘢痕／炎症性負荷、ならびに緊張、ＬＶの径および容積の変化、および瘢痕負荷が鍵となる測定である。
【０１１６】
[00119]  二次の効能エンドポイントは、呼吸機能、定量的筋力、機能および品質の評価である。
【０１１７】
[00120]  試験が終わると、患者はＤａｔａ  Ｓａｆｅｔｙ  Ｍｏｎｉｔｏｒｉｎｇ  Ｂｏａｒｄの推奨に基づいて、連続した非盲検療法を勧められる。
【０１１８】
実施例２−ＰＢ１０４６、安定した持続性の血管作用性小腸ペプチド受容体アゴニスト、による長期治療は、デュシェンヌ筋ジストロフィーのマウスモデルにおいて心臓および骨格の筋肉の機能を改善する
[00121]  材料および方法：ＭＤＸ（Ｃ５７ＢＬ１０／ＳｃＳｎＤＭＤｍｄｘ、ジストロフィン欠損、ｎ＝２１）およびＤＫＯ（二重ノックアウト）ｍｄｘ／ｕｔｒｎ−／−（ジストロフィン／ユートロフィン欠損、ｎ＝１３）マウスに、試験期間（ＭＤＸの場合は３２週、ＤＫＯの場合は最高４週）の間、ＰＢ１０４６（１．５ｍｇ／ｋｇ）または０．９％ＮａＣｌ食塩水（対照）を週に３回皮下に投与した。左心室機能（心エコー検査；ＥＣＨＯを通して）および心電図検査（ＥＣＧ）の変化を、ルーチン検査の間モニタリングした。終末の評価は、全身／左心室血行動態を測定する圧カテーテルを有する機器を取り付けた動物での麻酔をかけた調製物、または長指伸筋（ＥＤＬ）での骨格筋力評価（ＭＤＸだけ）を含んだ。組織試料は、組織学的評価（シリウス染色ならびにマクロファージおよびＣＤの計数）のために、瞬間冷凍したかまたはホルマリンで固定した。
【０１１９】
[00122]  心室性能の最も一般的に使用される心エコーパラメータは短縮率（ＦＳ％）であり、それは、心筋収縮性の推定値として使用され、拡張期終期の左心室の直径と収縮期終期のその直径の間の比である。測定された面積短縮率（ＦＡＳ）および短縮率。ＦＡＳを計算するために、左心室面積を乳頭状レベルにおいて短軸で可視化し、および断面画像を使用して、拡張終期および収縮終期の心内膜辺縁を手動でトレースした。治療クールの前および間に、ＦＡＳを動物で判定した。初期収縮期における左心室（ＬＶ）圧上昇の速度（ｄＰ／ｄｔｍａｘ）は、ＬＶ全体の収縮性を測定する。発揮される収縮力がより大きいほど、左心室圧の増加速度はより大きい。この速度は、侵襲的に、例えばＬＶの中のハイファイ微差圧力計カテーテルを使用して、ならびに非侵襲的に、僧帽弁閉鎖不全症噴流の連続波ドップラー検査から測定することができる。等容性弛緩の間の心室圧の指数関数的減衰を表すタウも、測定した。より長いタウは、心臓の機能不全を示す。
【０１２０】
[00123]  マウスの両脚からの長指伸筋（ＥＤＬ）の筋肉を腱の所で切り裂き、Ｋｒｅｂｓ−Ｈｅｎｓｅｌｅｔ（Ｋ−Ｈ）緩衝液中に置いた。一部適応させて、Ｈｅｌｌｅｒら（２０１３）およびＲｏｄｉｎｏ−Ｋｌａｐａｃら（２００７）に開示されている通り、筋肉を分析した。簡潔には、１つの腱を力変換器のレバーアームに結び、他の腱をリニアサーボモーターに結び付けた。筋肉が安定したら、それを１グラムの最適な長さにセットし、３０秒おきの３つの１Ｈｚ痙攣からなるウォームアップにかけ、その後毎分３つの１５０Ｈｚ痙攣が続いた。３分の休止時間の後、各刺激の間に１分の休止時間を置いてＥＤＬを５０、１００、１５０および２００Ｈｚで刺激して、最大強直力を判定した。刺激の後、筋肉長を測定した。５分の休止の後、収縮誘導傷害へのＥＤＬ筋肉の感受性を評価した。５００ｍｓの刺激の後、筋肉を最適な長さの１０％だけ長くし、１５０Ｈｚで７００ｍｓ刺激した。刺激の後、筋肉を最適な長さに戻した。このサイクルを、合計１０サイクルまで毎分繰り返した。
【０１２１】
[00124]  ＥＤＬの筋肉断面積によって最大強直力を割り算することによって、比力を計算した。比較目的のために、全ての力測定は、収縮材料の単位断面積（ＣＳＡ）あたりで表した（正規化された等尺性の力または緊張、ｍＮ／ｍｍ２）。ＣＳＡは、以下の式を使用して計算した：
【０１２２】
【数１】
2018509395.tif 000003
【０１２３】
[00125]  さらに、線維症のマーカーとしてコラーゲン沈着の程度を判定するために、シリウスレッドで染色することによって組織試料を分析した。
【０１２４】
[00126]  結果：長期ＰＢ１０４６は、ＭＤＸマウスで心臓衰退を遅らせた。ＦＡＳ（収縮期機能の指数）は、試験期間中保存された（Ｐ＜０．０５）（図１Ａ）。心室充填速度（Ｅ／Ａ比−拡張期機能の指数）は、試験期間全体でより速い傾向があったが、統計的有意性に到達しなかった（図１Ｂ）。短縮率（ＦＳ）も、試験期間の間保存された（データ示さず）。
【０１２５】
[00127]  これらの時点で、心電図も評価した。試験全体で、ＰＢ１０４６処置ＭＤＸマウスは、プラセボ処置動物と比較したときより短いＱＲＳ（心室伝導を保存した）を有する傾向があったが、統計的有意性に到達しなかった（データ示さず）。ＤＫＯマウスで類似の傾向が記され、ＰＢ１０４６処置は対照で見られたＱＲＳ延長を鈍化させた（データ示さず）。
【０１２６】
[00128]  ｉｎ  ｖｉｖｏ分析は、ＭＤＸマウスでのＰＢ１０４６処置により、圧上昇の高められた最大速度（ｄＰ／ｄｔｍａｘ−収縮期機能の指数）が有意により大きく（図２Ａ〜Ｂ）、弛緩のタウ定数がより速かった（Ｐ＜０．０５）（図２Ｃ〜Ｅ）ことを示した。
【０１２７】
[00129]  骨格筋機能の評価では、ＰＢ１０４６処置は、ＭＤＸマウスにおいて比力を変化させることなく、孤立性ＥＤＬ筋肉で収縮誘導傷害から保護した（図３Ａ〜Ｂ）。
【０１２８】
[00130]  増加した骨格および心臓の機能と一致して、ＰＢ１０４６はＭＤＸマウスの腓腹筋において線維症の程度（コラーゲン量）を有意に減少させた（四頭筋、横隔膜または前脛骨筋では統計的に有意な効果はなかったが、傾向は明白であった）（図４Ａ）。さらに、ＭＤＸ心筋でコラーゲン量を低減する傾向があった（図４Ｂ）。ｎは小さかったが、ＤＫＯマウス心臓において線維症で類似の傾向が見られた（データ示さず）。
【０１２９】
[00131]  ＰＢ１０４６処置後に、全マクロファージ数の有意な低減が観察された（図４Ｃ）。一方、他の免疫細胞（ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ８；データ示さず）では、差は観察されなかった。
【０１３０】
[00132]  結論：新規ＶＩＰ受容体アゴニストＰＢ１０４６による長期治療は、心臓衰退を遅らせることによってＤＭＤミオパシーを改善し、骨格筋収縮誘導傷害から保護した。心機能に及ぼす正の変力性および変弛緩作用に加えて、線維症（コラーゲン量）の減少が、心臓および骨格の筋肉へのＰＢ１０４６の正の作用に寄与する可能性がある。
【０１３１】
参照による組込み
[00133]  引用される全ての刊行物、特許および公開特許は、全ての目的のためにここに参照により完全に組み込まれる。
【０１３２】
[00134]  本出願は、以下の刊行物を全ての目的のために参照により完全に組み込む：米国特許出願公開２００１／００３４０５０号；米国特許出願公開第２００９／０２２０４５５号；米国特許第８，３３４，２５７号；米国特許出願公開第２０１３／０３１０５３８号；米国特許出願公開第２０１３／０１７２２７４号；米国特許出願公開第２０１１／０２３６３８４号；米国特許第６，５８２，９２６号；米国特許第７，４２９，４５８号；米国特許第７，３６４，８５９号；米国特許第８，１７８，４９５号；米国特許出願公開第２０１３／００７９２７７号；米国特許出願公開第２０１３／００８５０９９号；米国特許出願公開第２０１３／０１４３８０２号；米国特許出願公開第２０１４／００２４６００号；米国特許出願公開第２０１１／０１７８０１７号；米国特許第７，７０９，２２７号；米国特許出願公開第２０１１／０１２３４８７号；米国特許第８，７２９，０１８号；米国特許出願公開第２０１４／０１７１３７０号；米国特許出願公開第２０１３／０１５０２９１号；ＷＯ／２０１４／１１３４３４；米国特許出願公開第２０１４／０２１３５１６号および２０１４年１１月２１日に出願の米国特許出願第６２／０８２９４５号。
【０１３３】
参考文献
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【図１Ａ】
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【図１Ｂ】
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【図２Ａ】
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【図２Ｂ】
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【図２Ｃ】
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【図２Ｄ】
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【図２Ｅ】
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【図３Ａ】
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【図３Ｂ】
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【図４Ａ】
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【図４Ｂ】
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【図４Ｃ】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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