(57)【要約】ＤＰ−２アンタゴニストは、ＰＧＤ２が引き起こすアポトーシスを減少させケラチノサイトの増殖を維持することによってインビトロでＰＧＤ２媒介性のヒトの毛髪成長の阻害を用量依存的に逆転させる。脱毛症患者のおよそ半数からの毛包は、インビトロでＰＧＤ２の効果に対する感受性をほぼ示さなかった。ＰＧＤ２による毛髪成長阻害と関連する、ヒトＤＰ−２遺伝子におけるＳＮＰが特定された。これらの発見は、毛髪成長の制御におけるＤＰ−２の役割を強調し、ＤＰ−２が、ＰＧＤ２に対して感受性である患者におけるアンドロゲン性脱毛症の防止および／または処置において有効なアプローチとなり得るということを示す。さらに、本願で特定されたＳＮＰを用いて、処置の恩恵を受けるであろう患者を特定することができる。【選択図】図４
2018530995.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
アンドロゲン性脱毛症、禿頭症または抜け毛を有する対象が毛髪成長を刺激するためのＤＰ−２アンタゴニストの投与に応答する見込みがあるかどうかを特定する方法であって、
（ｉ）前記対象から得られたゲノムＤＮＡサンプルにおいてＤＰ−２遺伝子内の、またはＤＰ−２遺伝子に隣接する、１つ以上の一塩基多型座位を遺伝型決定することと；
（ｉｉ）前記１つ以上の座位の各々において検出された遺伝型に基づいて、前記対象がＤＰ−２アンタゴニストの投与に応答する見込みがあるかどうかを決定することと、
を含む方法。
【請求項２】
前記対象からゲノムＤＮＡサンプルを得るステップをさらに含む、請求項１の方法。
【請求項３】
遺伝型決定が、前記座位を含むゲノムＤＮＡ領域を配列決定するステップを含む、請求項１または請求項２の方法。
【請求項４】
遺伝型決定が、
（ｉ）前記ゲノムＤＮＡを前記座位のアレルに相補的な１つ以上の検出できるように標識されたオリゴヌクレオチドと接触させるステップと；
（ｉｉ）前記座位における前記アレルの有無を検出するステップと、
を含む、請求項１または請求項２の方法。
【請求項５】
ＰＣＲによって前記ゲノムＤＮＡを増幅するステップを含む、請求項２の方法。
【請求項６】
遺伝型決定が、前記座位を含む増幅されたゲノムＤＮＡ領域を配列決定するステップを含む、請求項５の方法。
【請求項７】
遺伝型決定が、
（ｉ）増幅されたゲノムＤＮＡを前記座位のアレルに相補的な１つ以上の検出できるように標識されたオリゴヌクレオチドと接触させるステップと；
（ｉｉ）前記座位における前記アレルの有無を検出するステップと、
を含む、請求項５の方法。
【請求項８】
少なくとも１つの座位が、ｒｓ５４５６５９、ｒｓ６３４６８１およびｒｓ７１６７からなる群より選択される、先行する請求項のいずれか１項の方法。
【請求項９】
前記座位が、ｒｓ５４５６５９、ｒｓ６３４６８１およびｒｓ７１６７を含む、請求項８の方法。
【請求項１０】
前記対象がアンドロゲン性脱毛症を有する、請求項５の方法。
【請求項１１】
前記対象が、円板状エリテマトーデス、先天性貧毛症、毛孔性扁平苔癬または瘢痕性脱毛症と関連する抜け毛を有する、先行する請求項のいずれか１項の方法。
【請求項１２】
前記ＤＰ−２アンタゴニストが、ＤＰ−１に関して選択的であるＤＰ−２アンタゴニストである、先行する請求項のいずれか１項の方法。
【請求項１３】
前記ＤＰ−２アンタゴニストが、ＤＰ−２に対する１００ｎＭ以下のＩＣ５０を有する、請求項１〜１１のいずれか１項の方法。
【請求項１４】
前記ＤＰ−２アンタゴニストがセチピプラントである、請求項１〜１１のいずれか１項の方法。
【請求項１５】
前記ＤＰ−２アンタゴニストがＡＭ２１１である、請求項１〜１１のいずれか１項の方法。
【請求項１６】
前記ＤＰ−２アンタゴニストがラマトロバンまたはその類似体である、請求項１〜１１のいずれか１項の方法。
【請求項１７】
前記ＤＰ−２アンタゴニストがインドール酢酸誘導体である、請求項１〜１１のいずれか１項の方法。
【請求項１８】
前記ＤＰ−２アンタゴニストがフェニル酢酸誘導体である、請求項１〜１１のいずれか１項の方法。
【請求項１９】
前記ＤＰ−２アンタゴニストがテトラヒドロキノリン誘導体である、請求項１〜１１のいずれか１項の方法。
【請求項２０】
アンドロゲン性脱毛症、禿頭症または抜け毛を有する対象を処置する方法であって、
（ｉ）前記対象が毛髪成長を刺激するためのＤＰ−２アンタゴニストの投与に応答する見込みがあるかどうかを請求項１〜１９のいずれか１項の方法に従って特定することと；
（ｉｉ）前記対象が前記ＤＰ−２アンタゴニストに応答する見込みがある場合に、有効量の前記ＤＰ−２アンタゴニストを前記対象に投与することと、
を含む方法。
【請求項２１】
投与するステップが局所投与である、請求項２０の方法。
【請求項２２】
投与するステップが経口投与である、請求項２０の方法。
【請求項２３】
前記対象がアンドロゲン性脱毛症を有する、請求項２０〜２２のいずれか１項の方法。
【請求項２４】
前記対象が、円板状エリテマトーデス、先天性貧毛症、毛孔性扁平苔癬または瘢痕性脱毛症と関連する抜け毛を有する、請求項２０〜２２のいずれか１項の方法。
【請求項２５】
前記方法が、前記対象にフィナステリドまたはミノキシジルを投与することをさらに含む、請求項２０〜２４のいずれか１項の方法。
【請求項２６】
前記方法が、前記対象に毛包を移植するステップをさらに含む、請求項２０〜２４のいずれか１項の方法。
【請求項２７】
前記方法が、前記対象において皮膚から真皮または表皮を除去することをさらに含む、請求項２０〜２４のいずれか１項の方法。
【請求項２８】
前記ＤＰ−２アンタゴニストが、ＤＰ−１に関して選択的であるＤＰ−２アンタゴニストである、請求項２０〜２７のいずれか１項の方法。
【請求項２９】
前記ＤＰ−２アンタゴニストが、ＤＰ−２に対する１００ｎＭ以下のＩＣ５０を有する、請求項２０〜２７のいずれか１項の方法。
【請求項３０】
前記ＤＰ−２アンタゴニストがセチピプラントである、請求項２０〜２７のいずれか１項の方法。
【請求項３１】
前記ＤＰ−２アンタゴニストがＡＭ２１１である、請求項２０〜２７のいずれか１項の方法。
【請求項３２】
前記ＤＰ−２アンタゴニストがラマトロバンまたはその類似体である、請求項２０〜２７のいずれか１項の方法。
【請求項３３】
前記ＤＰ−２アンタゴニストがインドール酢酸誘導体である、請求項２０〜２７のいずれか１項の方法。
【請求項３４】
前記ＤＰ−２アンタゴニストがフェニル酢酸誘導体である、請求項２０〜２７のいずれか１項の方法。
【請求項３５】
前記ＤＰ−２アンタゴニストがテトラヒドロキノリン誘導体である、請求項２０〜２７のいずれか１項の方法。
【請求項３６】
対象において毛髪成長を刺激する非治療的方法であって、
（ｉ）前記対象が毛髪成長を刺激するためのＤＰ−２アンタゴニストの投与に応答する見込みがあるかどうかを請求項１〜１９のいずれか１項の方法に従って特定することと；
（ｉｉ）前記対象が前記ＤＰ−２アンタゴニストに応答する見込みがある場合に、有効量の前記ＤＰ−２アンタゴニストを前記対象に投与することと、
を含む方法。
【請求項３７】
投与するステップが局所投与である、請求項３６の方法。
【請求項３８】
投与するステップが経口投与である、請求項３６の方法。
【請求項３９】
前記対象がアンドロゲン性脱毛症を有する、請求項３６〜３８のいずれか１項の方法。
【請求項４０】
前記対象が、円板状エリテマトーデス、先天性貧毛症、毛孔性扁平苔癬または瘢痕性脱毛症と関連する抜け毛を有する、請求項３６〜３８のいずれか１項の方法。
【請求項４１】
前記方法が、前記対象にフィナステリドまたはミノキシジルを投与することをさらに含む、請求項３６〜４０のいずれか１項の方法。
【請求項４２】
前記方法が、前記対象に毛包を移植するステップをさらに含む、請求項３６〜４０のいずれか１項の方法。
【請求項４３】
前記方法が、前記対象において皮膚から真皮または表皮を除去することをさらに含む、請求項３６〜４０のいずれか１項の方法。
【請求項４４】
前記ＤＰ−２アンタゴニストが、ＤＰ−１に関して選択的であるＤＰ−２アンタゴニストである、請求項３６〜４３のいずれか１項の方法。
【請求項４５】
前記ＤＰ−２アンタゴニストが、ＤＰ−２に対する１００ｎＭ以下のＩＣ５０を有する、請求項３６〜４３のいずれか１項の方法。
【請求項４６】
前記ＤＰ−２アンタゴニストがセチピプラントである、請求項３６〜４３のいずれか１項の方法。
【請求項４７】
前記ＤＰ−２アンタゴニストがＡＭ２１１である、請求項３６〜４３のいずれか１項の方法。
【請求項４８】
前記ＤＰ−２アンタゴニストがラマトロバンまたはその類似体である、請求項３６〜４３のいずれか１項の方法。
【請求項４９】
前記ＤＰ−２アンタゴニストがインドール酢酸誘導体である、請求項３６〜４３のいずれか１項の方法。
【請求項５０】
前記ＤＰ−２アンタゴニストがフェニル酢酸誘導体である、請求項３６〜４３のいずれか１項の方法。
【請求項５１】
前記ＤＰ−２アンタゴニストがテトラヒドロキノリン誘導体である、請求項３６〜４３のいずれか１項の方法。
【請求項５２】
アンドロゲン性脱毛症、禿頭症または抜け毛を有する対象であって前記対象が毛髪成長を刺激するためのＤＰ−２アンタゴニストの投与に応答する見込みがあることを示す１つ以上のアレルを有する対象を処置する方法であって、有効量の前記ＤＰ−２アンタゴニストを前記対象に投与することを含む方法。
【請求項５３】
前記１つ以上のアレルが、ＤＰ−２遺伝子内の、またはＤＰ−２遺伝子に隣接する、１つ以上の一塩基多型座位に位置する、請求項５２の方法。
【請求項５４】
少なくとも１つの座位が、ｒｓ５４５６５９、ｒｓ６３４６８１およびｒｓ７１６７からなる群より選択される、請求項５３の方法。
【請求項５５】
前記座位が、ｒｓ５４５６５９、ｒｓ６３４６８１およびｒｓ７１６７を含む、請求項５４の方法。
【請求項５６】
投与するステップが局所投与である、請求項５２〜５５のいずれか１項の方法。
【請求項５７】
投与するステップが経口投与である、請求項５２〜５５のいずれか１項の方法。
【請求項５８】
前記対象がアンドロゲン性脱毛症を有する、請求項５２〜５７のいずれか１項の方法。
【請求項５９】
前記対象が、円板状エリテマトーデス、先天性貧毛症、毛孔性扁平苔癬または瘢痕性脱毛症と関連する抜け毛を有する、請求項５２〜５７のいずれか１項の方法。
【請求項６０】
前記方法が、前記対象にフィナステリドまたはミノキシジルを投与することをさらに含む、請求項５２〜５９のいずれか１項の方法。
【請求項６１】
前記方法が、前記対象に毛包を移植するステップをさらに含む、請求項５２〜５９のいずれか１項の方法。
【請求項６２】
前記方法が、前記対象において皮膚から真皮または表皮を除去することをさらに含む、請求項５２〜５９のいずれか１項の方法。
【請求項６３】
前記ＤＰ−２アンタゴニストが、ＤＰ−１に関して選択的であるＤＰ−２アンタゴニストである、請求項５２〜６２のいずれか１項の方法。
【請求項６４】
前記ＤＰ−２アンタゴニストが、ＤＰ−２に対する１００ｎＭ以下のＩＣ５０を有する、請求項５２〜６２のいずれか１項の方法。
【請求項６５】
前記ＤＰ−２アンタゴニストがセチピプラントである、請求項５２〜６２のいずれか１項の方法。
【請求項６６】
前記ＤＰ−２アンタゴニストがＡＭ２１１である、請求項５２〜６２のいずれか１項の方法。
【請求項６７】
前記ＤＰ−２アンタゴニストがラマトロバンまたはその類似体である、請求項５２〜６２のいずれか１項の方法。
【請求項６８】
前記ＤＰ−２アンタゴニストがインドール酢酸誘導体である、請求項５２〜６２のいずれか１項の方法。
【請求項６９】
前記ＤＰ−２アンタゴニストがフェニル酢酸誘導体である、請求項５２〜６２のいずれか１項の方法。
【請求項７０】
前記ＤＰ−２アンタゴニストがテトラヒドロキノリン誘導体である、請求項５２〜６２のいずれか１項の方法。
【請求項７１】
対象が毛髪成長を刺激するためのＤＰ−２アンタゴニストの投与に応答する見込みがあることを示す１つ以上のアレルを有する対象において毛髪成長を刺激する非治療的方法であって、有効量の前記ＤＰ−２アンタゴニストを前記対象に投与することを含む方法。
【請求項７２】
前記１つ以上のアレルが、ＤＰ−２遺伝子内の、またはＤＰ−２遺伝子に隣接する、１つ以上の一塩基多型座位に位置する、請求項７１の方法。
【請求項７３】
少なくとも１つの座位が、ｒｓ５４５６５９、ｒｓ６３４６８１およびｒｓ７１６７からなる群より選択される、請求項７２の方法。
【請求項７４】
前記座位が、ｒｓ５４５６５９、ｒｓ６３４６８１およびｒｓ７１６７を含む、請求項７３の方法。
【請求項７５】
投与するステップが局所投与である、請求項７１〜７４のいずれか１項の方法。
【請求項７６】
投与するステップが経口投与である、請求項７１〜７４のいずれか１項の方法。
【請求項７７】
前記対象がアンドロゲン性脱毛症を有する、請求項７１〜７６のいずれか１項の方法。
【請求項７８】
前記対象が、円板状エリテマトーデス、先天性貧毛症、毛孔性扁平苔癬または瘢痕性脱毛症と関連する抜け毛を有する、請求項７１〜７６のいずれか１項の方法。
【請求項７９】
前記方法が、前記対象にフィナステリドまたはミノキシジルを投与することをさらに含む、請求項７１〜７８のいずれか１項の方法。
【請求項８０】
前記方法が、前記対象に毛包を移植するステップをさらに含む、請求項７１〜７８のいずれか１項の方法。
【請求項８１】
前記方法が、前記対象において皮膚から真皮または表皮を除去することをさらに含む、請求項７１〜７８のいずれか１項の方法。
【請求項８２】
前記ＤＰ−２アンタゴニストが、ＤＰ−１に関して選択的であるＤＰ−２アンタゴニストである、請求項７１〜８１のいずれか１項の方法。
【請求項８３】
前記ＤＰ−２アンタゴニストが、ＤＰ−２に対する１００ｎＭ以下のＩＣ５０を有する、請求項７１〜８１のいずれか１項の方法。
【請求項８４】
前記ＤＰ−２アンタゴニストがセチピプラントである、請求項７１〜８１のいずれか１項の方法。
【請求項８５】
前記ＤＰ−２アンタゴニストがＡＭ２１１である、請求項７１〜８１のいずれか１項の方法。
【請求項８６】
前記ＤＰ−２アンタゴニストがラマトロバンまたはその類似体である、請求項７１〜８１のいずれか１項の方法。
【請求項８７】
前記ＤＰ−２アンタゴニストがインドール酢酸誘導体である、請求項７１〜８１のいずれか１項の方法。
【請求項８８】
前記ＤＰ−２アンタゴニストがフェニル酢酸誘導体である、請求項７１〜８１のいずれか１項の方法。
【請求項８９】
前記ＤＰ−２アンタゴニストがテトラヒドロキノリン誘導体である、請求項７１〜８１のいずれか１項の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
発明の分野
本発明は、毛髪成長を制御するための組成物および方法に関する。詳細には、本発明は、プロスタグランジンＤ２（ＰＧＤ２）による毛髪成長阻害を受けやすい対象であって毛髪成長を刺激するためのＰＧＤ２受容体ＤＰ−２（ａｋａ  ＣＲＴＨ２またはＧＰＲ４４）のアンタゴニストに応答性である対象（アンドロゲン性脱毛症または禿頭症または抜け毛を有する対象など）を特定することに関する。
【背景技術】
【０００２】
発明の背景
白人男性の８０％は、ある程度のアンドロゲン性脱毛症（ＡＧＡ）を７０歳前に経験する。ＡＧＡが発症するにはテストステロンが必要であり、ＡＧＡを有する男性の少数では、アンドロゲン受容体に遺伝的感受性座位が存在する。しかし、この障害に寄与するさらなる因子は未知のままである。ＡＧＡについての研究は、良性前立腺肥大および前立腺癌など、アンドロゲンによって媒介される他の疾患への洞察をもたらす可能性がある。ＡＧＡに対する現在の正規の処置としては、フィナステリド、ミノキシジルおよび植毛が挙げられる。フィナステリドは、テストステロンをより強力なアンドロゲンであるジヒドロテストステロンに変換する５−αレダクターゼ２（ＳＲＤ５Ａ２）を阻害する。ＡＧＡの治療におけるミノキシジルの有効標的は、確定的には同定されていない。
【０００３】
ＡＧＡにおいて、太い毛幹を形成する大きな「末端の」毛包（"terminal"  hair  follicle）は時間とともに、微視的で軟弱な毛髪を生じさせる小さな毛包へと小型化する。毛包の小型化は、毛包の成長段階（成長期）の持続期間の減少を伴い、この持続期間は、通常は数年続いて１ｍ超の長さの毛髪を産生するが、ＡＧＡでは僅か数日または数週に減少する。これは、禿げた頭皮において微視的な毛髪を含む静止期（休止期）毛包のパーセンテージの増加をもたらす。
【０００４】
毛包に対するこれらの内因的変化に加えて、浸潤性のリンパ球およびマスト細胞が、特に幹細胞が豊富なバルジ領域の領域において、小型化した毛包の周囲に確認されている。各毛包に付随する皮脂腺は、禿げた頭皮では肥大する。禿げている頭皮では、毛包幹細胞の数はそのままであるのに対し、より活発に増殖する前駆細胞の数は著しく減少する。これは、禿げている頭皮が、毛包の成長を活性化する因子を欠いているか、あるいは毛包の成長を阻害する因子を有する、ということを示す。
【０００５】
プロスタグランジンＤ２（ＰＧＤ２）およびその合成酵素であるＰＧＤ２シンターゼは、アンドロゲン性脱毛症を有する男性において、禿げている頭皮では禿げていない頭皮よりも高いレベルで存在する。マウスモデルにおいて、ＰＧＤ２は、２種のＰＧＤ２受容体のうちの一方であるＣＲＴＨ２／ＤＰ−２を介して毛髪成長を阻害したが、これは、ＤＰ−２が、ヒトの毛包においてＰＧＤ２の毛髪成長阻害活性を媒介する重要な受容体であるということを示す（Ｇａｒｚａ  ｅｔ  ａｌ．（２０１２）  Ｓｃｉ．Ｔｒａｎｓｌ．Ｍｅｄ．  ４，  １２６ｒａ３４）。
従って、毛髪成長を刺激するための組成物および方法ならびにそれらに応答する見込みがあるであろう者を特定することの必要性が存在する。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００６】
【非特許文献１】Ｇａｒｚａ  ｅｔ  ａｌ．（２０１２）  Ｓｃｉ．Ｔｒａｎｓｌ．Ｍｅｄ．  ４，  １２６ｒａ３４
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００７】
一態様では、対象において毛髪成長を刺激するための方法であって有効量のＤＰ−２アンタゴニストを前記対象に投与することを含む方法が本明細書で提供される。
【０００８】
別の態様では、アンドロゲン性脱毛症、禿頭症または抜け毛を有する対象が毛髪成長を刺激するためのＤＰ−２アンタゴニストの投与に応答する見込みがあるかどうかを特定する方法が本明細書で提供される。一部の実施形態において、方法は、（ｉ）対象から得られたゲノムＤＮＡサンプルにおいてＤＰ−２遺伝子内の、またはＤＰ−２遺伝子に隣接する、一塩基多型座位を遺伝型決定することと；（ｉｉ）上記座位において検出された遺伝型に基づいて、対象がＤＰ−２アンタゴニストの投与に応答する見込みがあるかどうかを決定することと、を含む。一部の実施形態において、方法は、対象からゲノムＤＮＡを得るステップをさらに含む。一部の実施形態において、方法は、（例えば、ＰＣＲによって）ゲノムＤＮＡを増幅するステップを含む。一部の実施形態において、ゲノムＤＮＡまたは増幅されたゲノムＤＮＡは、上記座位を含むＤＮＡ領域を配列決定することによって遺伝型決定される。一部の実施形態において、ゲノムＤＮＡまたは増幅されたゲノムＤＮＡは、（ｉ）それを、上記座位のアレルに相補的な、検出できるように標識されたオリゴヌクレオチドと接触させることと、（ｉｉ）上記座位における（一塩基多型）ＳＮＰの有無を検出することと、によって遺伝型決定される。一部の実施形態において、上記座位は、ｒｓ５４５６５９、ｒｓ６３４６８１およびｒｓ７１６７からのＳＮＰを１つ以上、好ましくは全て、含む。
【０００９】
別の態様では、アンドロゲン性脱毛症、禿頭症または抜け毛を有する対象であって毛髪成長を刺激するためのＤＰ−２アンタゴニストの投与に応答する見込みがある対象を特定して処置する方法が本明細書で提供される。一部の実施形態において、方法は、（ｉ）対象が毛髪成長を刺激するためのＤＰ−２アンタゴニストの投与に応答する見込みがあるかどうかを本明細書で説明されるように特定することと、（ｉｉ）対象がＤＰ−２アンタゴニストに応答する見込みがあると決定された場合に、治療有効量のＤＰ−２アンタゴニストを対象に投与することと、を含む。一部の実施形態において、ＤＰ−２アンタゴニストは局所投与される。一部の実施形態において、ＤＰ−２アンタゴニストは経口投与される。一部の実施形態において、方法は、フィナステリドまたはミノキシジルを対象に投与することをさらに含む。一部の実施形態において、方法は、毛包を対象に移植することをさらに含む。一部の実施形態において、方法は、対象において皮膚から真皮または表皮を除去することをさらに含む。
【００１０】
別の態様では、毛髪成長を刺激するためのＤＰ−２アンタゴニストの投与に応答する見込みがある対象を特定してその毛髪成長を刺激する非治療的（すなわち、美容的）方法が本明細書で提供される。一部の実施形態において、方法は、（ｉ）対象が毛髪成長を刺激するためのＤＰ−２アンタゴニストの投与に応答する見込みがあるかどうかを本明細書で説明されるように特定することと、（ｉｉ）対象がＤＰ−２アンタゴニストに応答する見込みがあると決定された場合に、有効量のＤＰ−２アンタゴニストを対象に投与することと、を含む。一部の実施形態において、ＤＰ−２アンタゴニストは局所投与される。一部の実施形態において、ＤＰ−２アンタゴニストは経口投与される。一部の実施形態において、方法は、フィナステリドまたはミノキシジルを対象に投与することをさらに含む。一部の実施形態において、方法は、毛包を対象に移植することをさらに含む。一部の実施形態において、方法は、対象において皮膚から真皮または表皮を除去することをさらに含む。
【００１１】
別の態様では、アンドロゲン性脱毛症、禿頭症または抜け毛を有する対象であってその対象が毛髪成長を刺激するためのＤＰ−２アンタゴニストの投与に応答する見込みがあることを示す１つ以上のアレルを有する対象を処置する方法が本明細書で提供される。一部の実施形態において、方法は、治療有効量のＤＰ−２アンタゴニストを対象に投与することを含む。一部の実施形態において、ｒｓ５４５６５９、ｒｓ６３４６８１およびｒｓ７１６７からのＳＮＰの１つ以上の、好ましくは全ての、アレル。一部の実施形態において、ＤＰ−２アンタゴニストは局所投与される。一部の実施形態において、ＤＰ−２アンタゴニストは経口投与される。一部の実施形態において、方法は、フィナステリドまたはミノキシジルを対象に投与することをさらに含む。一部の実施形態において、方法は、毛包を対象に移植することをさらに含む。一部の実施形態において、方法は、対象において皮膚から真皮または表皮を除去することをさらに含む。
【００１２】
別の態様では、その対象が毛髪成長を刺激するためのＤＰ−２アンタゴニストの投与に応答する見込みがあることを示す１つ以上のアレルを有する対象において毛髪成長を刺激する非治療的（すなわち、美容的）方法が本明細書で提供される。一部の実施形態において、方法は、有効量のＤＰ−２アンタゴニストを対象に投与することを含む。一部の実施形態において、ｒｓ５４５６５９、ｒｓ６３４６８１およびｒｓ７１６７からのＳＮＰの１つ以上の、好ましくは全ての、アレル。一部の実施形態において、ＤＰ−２アンタゴニストは局所投与される。一部の実施形態において、ＤＰ−２アンタゴニストは経口投与される。一部の実施形態において、方法は、フィナステリドまたはミノキシジルを対象に投与することをさらに含む。一部の実施形態において、方法は、毛包を対象に移植することをさらに含む。一部の実施形態において、方法は、対象において皮膚から真皮または表皮を除去することをさらに含む。
【００１３】
別の態様では、本明細書で説明される方法において使用するためのＤＰ−２アンタゴニストおよびその組成物が本明細書で提供される。
【００１４】
本発明の他の特徴および利点は、以下の詳細な説明、実施例および図面から明らかになるであろう。しかし、本発明の趣旨および範囲に属する様々な変更および改変が、この詳細な説明から当業者には明らかになるため、詳細な説明および特定の実施例は、本発明の好ましい実施形態を示すものの、単に例示を目的として提示されるに過ぎないということが理解されるべきである。
【００１５】
本特許出願のファイルは、カラーで表される図面を少なくとも１つ含む。カラーの図面（単数または複数）が付属する本特許出願公開の複製物は、要求すれば、および必要な料金を支払えば、官庁によって提供されるであろう。
【図面の簡単な説明】
【００１６】
【図１】ＰＧＤ２は、外植片培養においてヒトの毛包の成長を用量依存的に阻害する。Ａ．成長培地において７日間培養した毛包は、顕著な成長を示した。この成長は、培地へのＰＧＤ２の添加（１０μＭ）によって著しく阻害された。１０ｎＭのＤＰ−２アンタゴニストＡＭ２１１の存在は、毛包をＰＧＤ２による阻害からレスキューした。Ｂ．ＰＧＤ２は、毛髪成長に対して用量依存的にその阻害効果を発揮する。Ｃ．７日間の培養の後に回収した毛包の代表的な組織画像。Ｄ．ヒトの頭皮において、ＰＧＤ２およびアンタゴニストの効果を媒介する受容体であるＣＲＴＨ２／ＤＰ−２は、表皮、毛包ケラチノサイトおよび皮脂腺（ＳＧ）で発現しているが、真皮乳頭（ＤＰ）では発現していない。その発現レベルは、禿げた頭皮（左側）では正常な頭皮（右側）と比較して上昇している。
【図２】ＣＲＴＨ２／ＤＰ−２のアンタゴニストは、成長期（マウスの毛周期の成長段階）を延長し、毛幹の長さを増加させる。Ａ．インビボでの毛髪成長に対するＤＰ−２アンタゴニストの効果を試験するために、脱毛から８日後の６〜７週齢のマウスの背中の皮膚にＡＭ２１１を２週間にわたって１日に１回、示される用量で局所適用した。処置されたマウスの毛幹および皮膚を、それぞれ長さの測定および毛周期のステージの解析のために脱毛後２２日目に採取した。Ｂ．処置されたマウスからの皮膚の組織切片の代表的画像。形態学的評価に基づいて、切片中の毛包を、毛周期のステージのうちの１つに分類し、計数した。Ｃ．対照群（ビヒクルのみで処置）では、ほぼ全ての毛包が退行期および休止期に入っていたが、ＡＭ２１１で処置した群は、毛包の退行期への移行の用量依存的な遅延を示した。ＤおよびＥ．成長期が延長した結果、ＡＭ２１１で処置したマウスの皮膚は、成長し続ける毛包を有する領域がより広く、より長い毛幹を産生した。
【図３】ＣＲＴＨ２／ＤＰ−２のアンタゴニストは、ＰＧＤ２による毛包成長阻害を逆転させる。Ａ．外植片培養において、ヒトの男性および女性の毛包は、ＰＧＤ２の阻害活性ならびにＤＰ−２アンタゴニストの抗ＰＧＤ２活性に対して同様に応答した。高用量のＡＭ２１１で観察された抗ＰＧＤ２効果の減少は、おそらく、９５％の均質性に精製されたＡＭ２１１調製物中の未確認の混入物に起因するものであった。なぜならば、９９．５％純粋なＡＭ２１１の調製物を高用量で使用すると抗ＰＧＤ２活性が維持されたためである（Ｂを参照のこと）。＊ｐ＜０．００１。Ｃ．培養した毛包の、増殖のマーカー（Ｋｉ６７、赤で示される）およびアポトーシスのマーカー（活性型カスパーゼ３、緑で示される）についての免疫蛍光染色は、ＰＧＤ２が毛包ケラチノサイトの増殖を抑制しアポトーシスを促進するということを明らかにした。ＤＰ−２アンタゴニストは、毛包におけるこれら２つのＰＧＤ２により引き起こされる細胞的事象を逆転させた。
【図４】外植片培養でのＰＧＤ２による毛髪成長阻害と相関するヒトＣＲＴＨ２／ＤＰ−２遺伝子におけるＳＮＰの同定。Ａ．ＰＧＤ２活性に対する感受性のマーカーの有力候補として最初に同定されたヒトＣＲＴＨ２／ＤＰ−２のＳＮＰの位置。ヒトＣＲＴＨ２／ＤＰ−２遺伝子は１１番染色体上に位置する。Ｂ．試験した３５人の患者のうち、２１人の患者からの毛包がＰＧＤ２媒介性の成長阻害を示したが、残りの１４人からの毛包の成長は、ＰＧＤ２による影響を受けなかった。ＣＲＴＨ２／ＤＰ−２遺伝子のＤＮＡ配列決定ならびにＳＮＰのＰＣＲは、ＰＧＤ２感受性の個体の約７０％が３つのＳＮＰ：ｒｓ５４５６５９、ｒｓ６３４６８１およびｒｓ７１６７（赤で示される）を全て保持するということを示した。Ｃ．フィッシャーの正確確率検定は、これら３つのＳＮＰが、これらの患者のＰＧＤ２阻害に対する感受性に関連する可能性が非常に高いということを示した。
【発明を実施するための形態】
【００１７】
発明の詳細な説明
本発明は、毛髪成長を制御するための組成物および方法に関する。詳細には、本発明は、プロスタグランジンＤ２（ＰＧＤ２）による毛髪成長阻害を受けやすい対象であって毛髪成長を刺激するためのＰＧＤ２受容体ＤＰ−２（ａｋａ  ＣＲＴＨ２またはＧＰＲ４４）のアンタゴニストに応答性である対象（アンドロゲン性脱毛症または禿頭症または抜け毛を有する対象など）を特定することに関する。
【００１８】
ＡＧＡを有する男性からの禿げている頭皮では、毛の生えた頭皮と比較して、メッセージレベルおよびタンパク質レベルでのプロスタグランジンＤ２シンターゼ（ＰＴＧＤＳ）のレベルの上昇が見出された。ＰＴＧＤＳの酵素生成物であるプロスタグランジンＤ２（ＰＧＤ２）も、禿げたヒトの頭皮組織で上昇していることが見出された。正常な毛包サイクル中の毛包の退行を伴うマウスにおいてＰｔｇｄｓのｍＲＮＡおよびＰＧＤ２のレベルの両方の上昇の間に密接な時間的関連性が示された。さらに、機能的データはまた、ＰＧＤ２およびその非酵素的代謝産物である１５−デオキシ−Ｄ１２，１４−プロスタグランジンＪ２（１５−ｄＰＧＪ２）がマウスの毛包およびヒトの毛包の両方において毛髪成長を阻害するということも示した。マウスおよびヒトにおいて、ＰＧＤ２媒介性の毛髪成長阻害は、Ｇタンパク質（ヘテロ三量体グアニンヌクレオチド結合タンパク質）共役型受容体４４（ＧＰＲ４４またはＤＰ−２）を必要としたが、プロスタグランジンＤ２受容体１（ＰｔｇｄｒまたはＤＰ−１）を必要としなかった。さらに、皮膚においてＰＧＤ２レベルが上昇しているマウスモデル（Ｋ１４−Ｐｔｇｓ２）は、ヒトのＡＧＡを表現型模写する。これらの結果は、とりわけ、毛髪の処置のためのＡＧＡの病態形成におけるＰＧＤ２およびＤＰ−２の役割を実証する。
【００１９】
驚くべきことに、一部の脱毛症患者からの毛包はＰＧＤ２による成長阻害を示さず、これは、ＰＧＤ２に応答する個体と応答しない個体が存在することを示す。さらに、ＰＧＤ２による毛髪成長阻害に対する感受性と関連しているＳＮＰがＣＲＴＨ２／ＤＰ−２遺伝子において同定された。ＤＰ−２遺伝子において異なる遺伝型を有する、ＰＧＤ２に応答する個体と応答しない個体が存在することは、前者の群では毛髪成長を刺激するためのＤＰ−２アンタゴニストでの処置に対してより応答性が高いということ、および感受性はＤＰ−２アンタゴニストによって異なる可能性があるということを示す。
【００２０】
別の態様では、アンドロゲン性脱毛症、禿頭症または抜け毛を有する対象が毛髪成長を刺激するためのＤＰ−２アンタゴニストの投与に応答する見込みがあるかどうかを特定する方法が本明細書で提供される。一部の実施形態において、方法は、（ｉ）対象から得られたゲノムＤＮＡサンプルにおいてＤＰ−２遺伝子内の、またはＤＰ−２遺伝子に隣接する、一塩基多型座位を遺伝型決定することと；（ｉｉ）上記座位において検出された遺伝型に基づいて、対象がＤＰ−２アンタゴニストの投与に応答する見込みがあるかどうかを決定することと、を含む。一部の実施形態において、方法は、対象からゲノムＤＮＡを得るステップをさらに含む。一部の実施形態において、方法は、（例えば、ＰＣＲによって）ゲノムＤＮＡを増幅するステップを含む。一部の実施形態において、ゲノムＤＮＡまたは増幅されたゲノムＤＮＡは、上記座位を含むＤＮＡ領域を配列決定することによって遺伝型決定される。一部の実施形態において、ゲノムＤＮＡまたは増幅されたゲノムＤＮＡは、（ｉ）それを、上記座位のアレルに相補的な、検出できるように標識されたオリゴヌクレオチドと接触させることと、（ｉｉ）上記座位における（一塩基多型）ＳＮＰの有無を検出することと、によって遺伝型決定される。一部の実施形態において、上記座位は、ｒｓ５４５６５９、ｒｓ６３４６８１およびｒｓ７１６７からのＳＮＰを１つ以上、好ましくは全て、含む。
【００２１】
別の態様では、アンドロゲン性脱毛症、禿頭症または抜け毛を有する対象であって毛髪成長を刺激するためのＤＰ−２アンタゴニストの投与に応答する見込みがある対象を特定して処置する方法が本明細書で提供される。一部の実施形態において、方法は、（ｉ）対象が毛髪成長を刺激するためのＤＰ−２アンタゴニストの投与に応答する見込みがあるかどうかを本明細書で説明されるように特定することと、（ｉｉ）対象がＤＰ−２アンタゴニストに応答する見込みがあると決定された場合に、治療有効量のＤＰ−２アンタゴニストを対象に投与することと、を含む。一部の実施形態において、ＤＰ−２アンタゴニストは局所投与される。一部の実施形態において、ＤＰ−２アンタゴニストは経口投与される。一部の実施形態において、方法は、フィナステリドまたはミノキシジルを対象に投与することをさらに含む。一部の実施形態において、方法は、毛包を対象に移植することをさらに含む。一部の実施形態において、方法は、対象において皮膚から真皮または表皮を除去することをさらに含む。
【００２２】
別の態様では、毛髪成長を刺激するためのＤＰ−２アンタゴニストの投与に応答する見込みがある対象を特定してその毛髪成長を刺激する非治療的（すなわち、美容的）方法が本明細書で提供される。一部の実施形態において、方法は、（ｉ）対象が毛髪成長を刺激するためのＤＰ−２アンタゴニストの投与に応答する見込みがあるかどうかを本明細書で説明されるように特定することと、（ｉｉ）対象がＤＰ−２アンタゴニストに応答する見込みがあると決定された場合に、有効量のＤＰ−２アンタゴニストを対象に投与することと、を含む。一部の実施形態において、ＤＰ−２アンタゴニストは局所投与される。一部の実施形態において、ＤＰ−２アンタゴニストは経口投与される。一部の実施形態において、方法は、フィナステリドまたはミノキシジルを対象に投与することをさらに含む。一部の実施形態において、方法は、毛包を対象に移植することをさらに含む。一部の実施形態において、方法は、対象において皮膚から真皮または表皮を除去することをさらに含む。
【００２３】
別の態様では、アンドロゲン性脱毛症、禿頭症または抜け毛を有する対象であってその対象が毛髪成長を刺激するためのＤＰ−２アンタゴニストの投与に応答する見込みがあることを示す１つ以上のアレルを有する対象を処置する方法が本明細書で提供される。一部の実施形態において、方法は、治療有効量のＤＰ−２アンタゴニストを対象に投与することを含む。一部の実施形態において、ｒｓ５４５６５９、ｒｓ６３４６８１およびｒｓ７１６７からのＳＮＰの１つ以上の、好ましくは全ての、アレル。一部の実施形態において、ＤＰ−２アンタゴニストは局所投与される。一部の実施形態において、ＤＰ−２アンタゴニストは経口投与される。一部の実施形態において、方法は、フィナステリドまたはミノキシジルを対象に投与することをさらに含む。一部の実施形態において、方法は、毛包を対象に移植することをさらに含む。一部の実施形態において、方法は、対象において皮膚から真皮または表皮を除去することをさらに含む。
【００２４】
別の態様では、その対象が毛髪成長を刺激するためのＤＰ−２アンタゴニストの投与に応答する見込みがあることを示す１つ以上のアレルを有する対象において毛髪成長を刺激する非治療的（すなわち、美容的）方法が本明細書で提供される。一部の実施形態において、方法は、有効量のＤＰ−２アンタゴニストを対象に投与することを含む。一部の実施形態において、ｒｓ５４５６５９、ｒｓ６３４６８１およびｒｓ７１６７からのＳＮＰの１つ以上の、好ましくは全ての、アレル。一部の実施形態において、ＤＰ−２アンタゴニストは局所投与される。一部の実施形態において、ＤＰ−２アンタゴニストは経口投与される。一部の実施形態において、方法は、フィナステリドまたはミノキシジルを対象に投与することをさらに含む。一部の実施形態において、方法は、毛包を対象に移植することをさらに含む。一部の実施形態において、方法は、対象において皮膚から真皮または表皮を除去することをさらに含む。
【００２５】
別の態様では、本明細書で説明される方法において使用するためのＤＰ−２アンタゴニストおよびその組成物が本明細書で提供される。
【００２６】
本明細書で使用される場合、「ＤＰ−２アンタゴニスト」は、細胞内または生理学的系内のいずれかにおいてＤＰ−２の量または活性を減少させることができる分子である。例えば、ＤＰ−２アンタゴニストは、ＤＰ−２受容体に選択的に結合してＤＰ−２受容体の生理学的作用を阻害することができる物質である。
【００２７】
ＤＰ−２アンタゴニストは、当技術分野で公知である。一部のＤＰ−２アンタゴニストの例を表１に示す。
【表１】
2018530995.tif 000003
【００２８】
ＤＰ−２アンタゴニストは、いくつかのクラスに分けることができる。１つのクラスは、ラマトロバンおよびその類似体であり、それらの例が、表１および表２に示されている（ＴＭ３０６４２  ３−｛３−［（４−フルオロ−ベンゼンスルホニル）−メチル−アミノ］−１，２，３，４−テトラヒドロ−カルバゾール−９−イル｝−プロピオン酸；ＴＭ３０６４３  ［３−（４−フルオロ−ベンゼンスルホニルアミノ）−１，２，３，４−テトラヒドロ−カルバゾール−９−イル］−酢酸；ＴＭ３００８９  ｛３−［（４−フルオロ−ベンゼンスルホニル）−メチル−アミノ］−１，２，３，４−テトラヒドロ−カルバゾール−９−イル｝−酢酸）。
【表２】
2018530995.tif 000004
【００２９】
ＤＰ−２アンタゴニストの別のクラスは、インドール酢酸誘導体である。このクラスの化合物の例は、表１の化合物６〜９である。
【００３０】
ＤＰ−２アンタゴニストの別のクラスは、フェニル酢酸誘導体である。フェンクロフェナクに基づく、このクラスの化合物の例は、表１の化合物１１である。
【００３１】
ＤＰ−２アンタゴニストのさらに別のクラスは、テトラヒドロキノリン誘導体である。このクラスの化合物の例は、表１の化合物１２、Ｋ１１７およびＫ−１０４である。
【００３２】
本明細書で提供される方法および組成物において使用するための特定の好ましいＤＰ−２アンタゴニストは、少なくとも１つの臨床試験の対象となっているＤＰ−２アンタゴニストである。少なくとも１つの臨床試験の対象となっているＤＰ−２アンタゴニストの例としては、以下の表３に列挙されるものが挙げられるが、これらに限定されない。
【表３】
2018530995.tif 000005
ａＮＣＴ番号は、ウェブサイトwww.clinicaltrials.govで検索できる。
【００３３】
本明細書で提供される方法および組成物における使用が企図されるＤＰ−２アンタゴニストの１つは、ＤＰ−２アンタゴニストであるセチピプラントである。その構造を以下に提示する。
【化１】
2018530995.tif 000006
【００３４】
本明細書で提供される方法および組成物における使用が企図されるＤＰ−２アンタゴニストの１つは、ＤＰ−２アンタゴニストであるフェビピプラント（ＱＡＷ０３９）である。その構造を以下に提示する。
【化２】
2018530995.tif 000007
【００３５】
本明細書で提供される方法および組成物における使用が企図されるＤＰ−２アンタゴニストの１つは、その構造が以下に提示されるＤＰ−２アンタゴニストＡＭ２１１である。
【化３】
2018530995.tif 000008
【００３６】
本明細書で提供される方法および組成物における使用が企図されるＤＰ−２アンタゴニストの１つは、ＤＰ−２アンタゴニストＢＩ６７１８００である。その構造を以下に提示する。
【化４】
2018530995.tif 000009
【００３７】
本明細書で提供される方法および組成物における使用が企図されるＤＰ−２アンタゴニストの１つは、ＤＰ−２アンタゴニストであるラマトロバンである。その構造を以下に提示する。
【化５】
2018530995.tif 000010
【００３８】
本明細書で提供される方法および組成物における使用が企図されるＤＰ−２アンタゴニストの１つは、その構造が以下に提示されるＤＰ−２アンタゴニストである。
【化６】
2018530995.tif 000011
【００３９】
本明細書で提供される方法および組成物における使用が企図されるＤＰ−２アンタゴニストの１つは、ＤＰ−２アンタゴニストＡＺＤ１９８１である。その構造を以下に提示する。
【化７】
2018530995.tif 000012
【００４０】
本明細書で提供される方法および組成物における使用が企図されるＤＰ−２アンタゴニストの１つは、その構造が以下に提示されるＤＰ−２アンタゴニストである。
【化８】
2018530995.tif 000013
【００４１】
本明細書で提供される方法および組成物における使用が企図されるＤＰ−２アンタゴニストの１つは、その構造が以下に提示されるＤＰ−２アンタゴニストである。
【化９】
2018530995.tif 000014
【００４２】
本明細書で提供される方法および組成物における使用が企図されるＤＰ−２アンタゴニストの１つは、ＤＰ−２アンタゴニストＡＭＧ８５３である。その構造を以下に提示する。
【化１０】
2018530995.tif 000015
【００４３】
さらなるＤＰ−２アンタゴニストは、以下の刊行物：ＥＰ１，１７０，５９４、ＥＰ１，４３５，３５６、ＷＯ２００３／０６６０４６、ＷＯ２００３／０６６０４７、ＷＯ２００３／０９７０４２、ＷＯ２００３／１０１９６１、ＷＯ２００３／１０１９８１、ＷＯ２００４／００７４５１、ＷＯ２００４／０３２８４８、ＷＯ２００４／０３５５４３、ＷＯ２００４／１０６３０２、ＷＯ２００５／０１９１７１、ＷＯ２００５／０５４２３２、ＷＯ２００５／０１８５２９、ＷＯ２００５／０４０１１２、ＧＢ２，４０７，３１８、ＷＯ２００５／０４０１１４、ＷＯ２００５／０４４２６０、ＷＯ２００５／０９５３９７、ＷＯ２００５／１００３２１、ＷＯ２００５／１０２３３８、ＷＯ２００６／０９５１８３、ＷＯ２００７／１０７７７２、ＵＳ７，４０５，２１５において見出すことができ、これらの刊行物の各々は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。
【００４４】
本明細書で説明される組成物は、「有効量」を含んでよい。「有効量」は、所望の結果を達成するのに有効な量、必要な投与量および必要な期間のための量を指す。分子の有効量は、個体の状態、年齢、性別および体重ならびに個体において所望の応答を誘発する分子の能力などの要因に応じて変動する可能性がある。有効量はまた、有益な効果が分子の任意の毒性効果または有害効果を上回る量でもある。
【００４５】
ＤＰ−２アンタゴニストを含む組成物が本明細書で提供される。例えば、対象において毛髪成長を刺激するための組成物であって対象において毛髪成長を増強するのに有効な量でＤＰ−２アンタゴニストを含む組成物が本明細書で提供される。別の例では、対象においてアンドロゲン性脱毛症または禿頭症または抜け毛を処置するための組成物であって前記対象において前記アンドロゲン性脱毛症または禿頭症または抜け毛を処置するのに有効な量でＤＰ−２アンタゴニストを含む組成物が本明細書で提供される。別の例では、ＤＰ−２アンタゴニストと少なくとも１種の医薬的に許容される賦形剤または担体とを含む医薬組成物が本明細書で提供される。
【００４６】
「医薬的に許容される担体」には、使用される投与量および濃度においてそれに曝される細胞または対象に対して非毒性である任意の賦形剤が包含される。医薬組成物はまた、１種以上の追加的な治療薬を含んでもよい。医薬的に許容される担体には、溶媒、分散媒、緩衝剤、コーティング、抗細菌剤および抗真菌剤、湿潤剤、防腐剤、バガー（bugger）、キレート剤、抗酸化剤、等張剤および吸収遅延剤が包含される。医薬的に許容される担体には、水；生理食塩水；リン酸緩衝食塩水；デキストロース；グリセロール；エタノールおよびイソプロパノールなどのアルコール；リン酸、クエン酸および他の有機酸；アスコルビン酸；低分子量（約１０残基未満）のポリペプチド；血清アルブミン、ゼラチンまたは免疫グロブリンなどのタンパク質；ポリビニルピロリドンなどの親水性ポリマー；グリシン、グルタミン、アスパラギン、アルギニンまたはリジンなどのアミノ酸；単糖、二糖および他の炭水化物（グルコース、マンノースまたはデキストリンを含む）；ＥＤＴＡ；対イオンを形成する塩（ナトリウムなど）；および／または非イオン性界面活性剤（ＴＷＥＥＮ、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）およびＰＬＵＲＯＮＩＣＳなど）；糖、ポリアルコール（マンニトールおよびソルビトールなど）および塩化ナトリウムなどの等張剤；ならびにそれらの組み合わせが包含される。抗細菌剤および抗真菌剤には、パラベン、クロロブタノール、フェノール、アスコルビン酸およびチメロサールが包含される。
【００４７】
本明細書で提供される医薬組成物は、様々な方法で製剤化されてよく、これらには例えば、液体溶液（例えば、局所用のローションまたはスプレー）、分散系または懸濁液、錠剤、丸薬、粉末、リポソームおよび坐薬など、固体、半固体（例えば、クリーム、軟膏およびゲル）および液体の剤形が包含される。一部の実施形態において、組成物は、注射用または注入用の溶液の形態である。組成物は、経口投与、静脈内投与、動脈内投与、筋肉内投与、皮下投与、非経口投与、経粘膜投与、経皮投与または局所投与に適した形態であってよい。好ましくは、組成物は、経口投与用または局所投与用に製剤化される。組成物は、即時放出組成物、制御放出組成物、持続放出組成物または遅延放出組成物として製剤化されてよい。
【００４８】
より具体的には、使用に適した医薬組成物には、無菌の水溶液（水溶性の場合）または分散系、および無菌の溶液または分散系を即時に調製するための無菌粉末が包含される。それらは、製造および貯蔵の条件下で安定であるべきであり、好ましくは、細菌および真菌などの微生物の汚染作用に備えて保存されるであろう。担体は、例えば水、エタノール、ポリオール（例えば、グリセロール、プロピレングリコールおよび液体のポリエチレングリコール等）およびそれらの好適な混合物を含む、溶媒または分散媒であってよい。適切な流動性は、例えば、レシチンなどのコーティングの使用によって、分散系の場合には必要とされる粒子サイズの維持によって、および界面活性剤の使用によって、維持することができる。本明細書で開示される治療方法において使用するための好適な製剤は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，  Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏ．，  １６ｔｈ  ｅｄ．（１９８０）で説明されている。
【００４９】
組成物はまた、等張剤（例えば、糖、ポリアルコール（マンニトール、ソルビトールなど）または塩化ナトリウム）を含んでもよい。注射用組成物の持続的吸収は、吸収を遅延させる作用物質（例えば、アルミニウムモノステアレートおよびゼラチン）を組成物中に含めることによってもたらすことができる。
【００５０】
無菌溶液は、必要に応じて本明細書で列挙される成分の１つまたは組み合わせを含む適切な溶媒に、必要とされる量の分子を単独で、または他の活性薬剤と共に、組み込んだ後にフィルター滅菌を行うことによって調製できる。一般的に、分散系は、基礎となる分散媒と上記に列挙されるものからの必要とされる他の成分とを含む無菌のビヒクル中に活性化合物を組み込むことによって調製される。無菌の注射用溶液の調製のための無菌粉末の場合、調製の１つの方法は真空乾燥および凍結乾燥であり、この方法は、活性成分と任意の追加的な所望の成分の粉末を、事前に滅菌濾過されたその溶液から生じさせる。注射のための調製物は、当技術分野で公知の方法に従って無菌条件下で、加工され、容器（アンプル、バッグ、ボトル、シリンジまたはバイアルなど）に充填され、密封される。さらに、調製物は、キット（その全体が参照により本明細書に組み込まれるＵＳ２００２／０１０２２０８で説明されるものなど）の形態で包装および販売されてよい。そのような製品は、好ましくは、付属の組成物が、アンドロゲン性脱毛症または禿頭症または抜け毛に罹患しているか罹患しやすい対象を処置するのに有用であるということを示すラベルまたは添付文書を有するであろう。
【００５１】
本明細書で説明される方法のための、本明細書で説明される組成物の有効用量は、使用される特定のアンタゴニスト、そのアンタゴニストについての対象の感受性、投与の手段、標的部位、患者の生理学的状態、患者がヒトであるか動物であるか、投与される他の医薬、および処置が予防的であるか治療的であるか、を含む多くの異なる要因に応じて変動する。通常、患者はヒトであるが、ヒト以外の哺乳動物（遺伝子組み換えの哺乳動物を含む）も処置することができる。処置の用量は、安全性および有効性を最適化するための当業者に公知の通例の方法を用いて用量決定されてよい。
【００５２】
本発明の医薬組成物は、「治療有効量」を包含してよい。「治療有効量」は、所望の治療結果を達成するのに有効な量、必要な投与量および必要な期間のための量を指す。分子の治療有効量は、個体の疾患状態、年齢、性別および体重ならびに個体において所望の応答を誘発する分子の能力などの要因に応じて変動する可能性がある。治療有効量はまた、治療上有益な効果が分子の毒性効果または有害効果を上回る量でもある。
【００５３】
治療有効量のＤＰ−２アンタゴニストを含むキットが本明細書でさらに提供される。また、疾患または状態を処置する方法であってそれを必要とする対象に治療有効量のＤＰ−２アンタゴニストを投与することを含む方法も本明細書で提供される。
【００５４】
本明細書で使用される場合、阻害または刺激に関しての「選択的」なる用語は、第１の活性の、第２の活性に対して優先的な阻害または刺激（例えば、ある経路の、別の経路に対して優先的な阻害；他の受容体に対して優先的な阻害；または変異型の、野生型に対して優先的な阻害もしくはその逆）をそれぞれ意味する。一部の実施形態において、阻害剤は、所望の分子標的または経路に関して、望ましくない分子標的または経路よりも５倍超選択的、１０倍超選択的、５０倍超選択的、１００倍超選択的、または１０００倍超選択的である。一部の実施形態において、アンタゴニストまたはアゴニストは、分子標的または経路の第１の活性を、同じ条件下の第２の活性と比較して少なくとも２倍、少なくとも５倍、少なくとも１０倍、少なくとも２０倍、少なくとも５０倍、少なくとも１００倍、それぞれ阻害または刺激するであろう。好ましい実施形態ではＤＰ−２アンタゴニストが上記の量のいずれかでＤＰ−１に関して選択的であるということが理解されるであろう。分子標的または経路の活性は、任意の再現可能な手段によって測定されてよく、インビトロまたはインビボで測定されてよい。
【００５５】
本明細書で使用される場合、「調節する」は、分子標的または経路の活性を「刺激する」または「阻害する」を指す。例えば、組成物は、それが分子標的または経路の活性を、組成物の存在を欠いている以外は同じである条件の下での分子標的または経路の活性と比較して少なくとも１０％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９８％、または約９９％超、刺激または阻害すれば、分子標的または経路の活性を調節する。別の例では、組成物は、それが分子標的または経路の活性を、組成物の存在を欠いている以外は同じである条件の下での分子標的または経路の活性と比較して少なくとも２倍、少なくとも５倍、少なくとも１０倍、少なくとも２０倍、少なくとも５０倍、少なくとも１００倍、刺激または阻害すれば、分子標的または経路の活性を調節する。分子標的または経路の活性は、任意の再現可能な手段によって測定されてよい。分子標的または経路の活性は、当技術分野で公知の適切なアッセイによってインビトロまたはインビボで測定されてよい。（組成物で処置されない）対照サンプルに１００％の相対活性値を割り当てることができる。組成物によって引き起こされる活性の変化をアッセイにおいて測定できる。
【００５６】
本明細書で説明されるアンタゴニストの多くが、それらの標的の強力な阻害剤であるということが理解されるであろう。例えば、アンタゴニストは、１０００μＭ以下、１０００ｎＭ以下、１００ｎＭ以下、１０ｎＭ以下、または特に１ｎＭ以下の、その所望の分子標的（すなわち、ＤＰ−２）に対する結合阻害活性（ＩＣ５０値）を有する可能性がある。別の例では、阻害剤は、１０００μＭ〜１ｎＭ、１０００μＭ〜１０ｎＭ、１０００μＭ〜１００ｎＭ、１０００μＭ〜１０００ｎＭ、１０００ｎＭ〜１ｎＭ、１０００ｎＭ〜１０ｎＭ、１０００ｎＭ〜１００ｎＭ、１００ｎＭ〜１０ｎＭ、１００ｎＭ〜１ｎＭ、または１０ｎＭ〜１ｎＭの、その所望の分子標的に対する結合阻害活性（ＩＣ５０値）を有する。
【００５７】
一部の実施形態において、本明細書で開示されるアンタゴニストは、それらの分子標的または経路を少なくとも約１０％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９８％、または約９９％超、阻害する。
【００５８】
様々な投与量範囲が企図され、使用されるアンタゴニストおよびそのアンタゴニストに対する対象の感受性に基づいて変動する可能性がある。例えば、アンタゴニストの用量は、約０．１〜１０００ｍｇ／日、約１〜１０００ｍｇ／日、約５〜５００ｍｇ／日、約１０〜３００ｍｇ／日、約２０〜２００ｍｇ／日、約４０〜１５０ｍｇ／日、約６０〜１００ｍｇ／日、約０．１〜１００ｍｇ／日、約０．１〜５０ｍｇ／日、約０．１〜２０ｍｇ／日、約０．１〜１０ｍｇ／日、約０．１〜５ｍｇ／日、または約０．５〜５ｍｇ／日である。
【００５９】
本明細書で使用される場合、「処置する」および「処置」なる用語は、疾患または状態に関連する望ましくない生理学的変化を防止するか鈍化（減少）させることが目的である予防的手段または防止的手段を含む、治療的処置を指す。有益な、または望ましい、臨床結果には、検出可能であるか検出不能であるかにかかわらず、症状の軽減、疾患または状態の程度の減少、疾患または状態の安定化（すなわち、疾患または状態が悪化しない場合）、疾患または状態の進行の遅延または鈍化、疾患または状態の改善または緩和、および疾患または状態の（部分的または完全な）寛解が包含されるが、これらに限定されない。「処置」はまた、処置を受けない場合に予想される生存と比較して生存を延長することを意味してもよい。処置を必要とする者には、既に疾患または状態を有する者ならびに疾患または状態を有する傾向がある者あるいは疾患または状態が防止されるべき者が包含される。
【００６０】
本明細書で使用される場合、「多型座位」は、２種以上のアレルが同定されているゲノム座位である。本明細書で使用される場合、「アレル」は、特定の多型ゲノム座位の２種以上の既存の遺伝的バリアントのうちの１つである。本明細書で使用される場合、「一塩基多型」または「ＳＮＰ」は、別の塩基が知られているゲノム中の特定の塩基位置である。
【００６１】
本明細書で使用される場合、「遺伝型」は、所与の細胞または生物における、所与の遺伝子座または関連する座位のセットにおけるアレルの複相の組み合わせを指す。ホモ接合型の対象は、同じアレルを２コピー保持し、ヘテロ接合型の対象は、２つの異なるアレルを保持する。２種のアレル「Ａ」および「ａ」を有する座位という最も単純な場合には、３種の遺伝型が形成され得る：Ａ／Ａ、Ａ／ａおよびａ／ａ。本明細書で使用される場合、「遺伝型決定」は、１つ以上の明確に定義された座位における個体の遺伝型を識別するための実験、計算または観察によるプロトコルを指す。
【００６２】
一実施形態において、抜け毛を処置するとは、禿げることを含む疾患または障害を処置することを指す。別の実施形態では、抜け毛を処置するとは、アンドロゲン性脱毛症（ＡＧＡ）を処置することを指す。別の実施形態では、抜け毛を処置するとは、男性型脱毛症である疾患または障害を処置することを指す。別の実施形態では、抜け毛を処置するとは、女性型脱毛症である疾患または障害を処置することを指す。一実施形態において、抜け毛を処置するとは、限定されるものではないが頭皮および眉を含む、身体の任意の領域における任意のタイプの抜け毛を処置または防止することを指す。
【００６３】
別の実施形態では、抜け毛を処置するとは、抜け毛に関連する疾患または障害を処置することを指す。別の実施形態では、抜け毛を処置するとは、円板状エリテマトーデス（discoid  lupus  erythematosis）に関連する毛の抜ける疾患または障害を処置することを指す。別の実施形態では、抜け毛を処置するとは、先天性貧毛症に関連する毛の抜ける疾患または障害を処置することを指す。別の実施形態では、抜け毛を処置するとは、毛孔性扁平苔癬（lichen  planopilaris）に関連する毛の抜ける疾患または障害を処置することを指す。別の実施形態では、抜け毛を処置するとは、瘢痕性脱毛症を処置することを指す。
【００６４】
ＤＰ−２アンタゴニストは単独で、または１種以上の他の治療上有効な薬剤（例えば、フィナステリド、ミノキシジル、またはその両方）または処置と組み合わせて、投与されてよい。他の治療上有効な薬剤は、ＤＰ−２アンタゴニストにコンジュゲートされてよいか、ＤＰ−２アンタゴニストと同じ組成物中に組み込まれてよいか、または別個の組成物として投与されてよい。他の治療上有効な薬剤または処置は、ＤＰ−２アンタゴニストの投与より前に、ＤＰ−２アンタゴニストの投与中に、および／またはＤＰ−２アンタゴニストの投与の後に、投与されてよい。別の実施形態では、ＤＰ−２アンタゴニストは、毛髪促進剤の投与とは独立して投与される。一実施形態では、まずＤＰ−２アンタゴニストが投与された後に、毛髪促進剤が投与される。別の実施形態では、まず毛髪促進剤が投与された後に、ＤＰ−２アンタゴニストが投与される。
【００６５】
毛髪成長を増強するための併用療法のための他の治療上有効な薬剤／処置には、例えば、移植手術および真皮または表皮の除去が包含されるが、これらに限定されない。
【００６６】
他の薬剤および／または処置を伴うＤＰ−２アンタゴニストの投与は、同じ時期または異なる時期に同じ経路または異なる経路を介して同時に、または別々に、行われてよい。投与計画は、最適な所望の応答（例えば、治療的応答または予防的応答）をもたらすように調整されてよい。
【００６７】
一例では、単回ボーラスが投与されてよい。別の例では、いくつかに分けられた用量が、時間をかけて投与されてよい。さらに別の例では、治療状況の緊急性によって示される場合に用量を比例的に減少または増加させてよい。本明細書で使用される場合、投与単位形態は、哺乳動物対象を処置するのに単位用量として適している物理的に別々の単位を指す。各単位は、所望の治療効果をもたらすように計算された所定量の活性化合物を含んでよい。一部の実施形態において、本発明の投薬単位形態は、活性化合物の固有の特性および達成されるべき特定の治療効果または予防効果によって決定され、それらに直接依存する。
【００６８】
本明細書で説明される組成物は、１回だけ投与されてよいか、または複数回投与されてよい。複数回の投与の場合、組成物は、例えば、１日に３回、１日に２回、１日に１回、２日に１回、１週間に２回、毎週、２週間に１回、または毎月、投与されてよい。
【００６９】
軽減されるべき状態のタイプおよび重症度によって投与量の値が変動する可能性があることに留意すべきである。さらに、任意の特定の対象について、個々の必要性と組成物を投与する者または組成物の投与を監督する者の専門的判断とに従って特定の投与計画を経時的に調整すべきであるということ、および本明細書に記載される投与量範囲は例示に過ぎず、特許請求される組成物の範囲または実施を限定することは意図されないということが理解されるべきである。
【００７０】
対象への「投与」は、いかなる特定の送達系にも限定されず、限定されるものではないが局所投与、経皮投与、（例えば、カプセル、懸濁液または錠剤での）経口投与、非経口投与（皮下注射、静脈内注射、髄内注射、関節内注射、筋肉内注射または腹腔内注射を含む）または直腸投与を包含し得る。対象への投与は、単回投与または反復投与で、様々な生理学的に許容される塩の形態のいずれかで、ならびに／または（前述される）医薬組成物の一部としての許容される医薬担体および／もしくは添加剤と共に、行われてよい。繰り返しになるが、生理学的に許容される塩の形態および標準的な医薬の製剤技術は、当業者に周知である（例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，  Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏ．を参照のこと）。
【００７１】
「対象」なる用語には、哺乳動物（例えば、ヒト）、コンパニオンアニマル（例えば、イヌ、ネコ、鳥類等）、家畜（例えば、ウシ、ヒツジ、ブタ、ウマ、家禽等）および実験動物（例えば、ラット、マウス、モルモット、鳥類等）が包含される。一部の実施形態において、対象は、男性のヒトまたは女性のヒトである。
【００７２】
本明細書で使用される場合、「医薬的に許容される」なる表現は、妥当な恩恵／リスクの比に釣り合った、過剰な毒性、刺激、アレルギー反応または他の問題もしくは合併症を伴うことのないヒトおよび動物の組織と接触させる使用に、正当な医学的判断の範囲内で、適している化合物、材料、組成物、担体および／または剤形を指す。
【００７３】
「医薬的に許容される賦形剤」は、概して安全であり非毒性であり生物学的にもそれ以外の点でも望ましくないことのない医薬組成物の調製において有用である賦形剤を意味し、獣医学用途ならびにヒトの医薬用途に許容される賦形剤を包含する。本明細書で使用される場合、「医薬的に許容される賦形剤」は、１種のそのような賦形剤および２種以上のそのような賦形剤の両方を包含する。
【００７４】
本明細書で説明される化合物はまた、プロドラッグ（例えば、医薬的に許容されるプロドラッグ）として調製されてもよい。「プロ−ドラッグ」および「プロドラッグ」なる用語は、本明細書において互換的に使用され、活性のある親薬物をインビボで放出する任意の化合物を指す可能性がある。プロドラッグは、医薬品の数多くの所望の性質（例えば、溶解性、バイオアベイラビリティ、製造等）を向上させることが知られているため、本明細書で説明される化合物は、プロドラッグの形態で送達されてよい。
【００７５】
「約」または「およそ」なる用語は、当業者によって決定されるような特定の値についての許容される誤差範囲内を意味し、これは、その値を測定または決定する方法に部分的に依存するであろう。
【００７６】
一部の実施形態において、方法は、対象からゲノムＤＮＡサンプルを取得することを含む。例えば、個体からの生体サンプルが最初に取得されてよい。そのような生体サンプルには、体液（尿、唾液、血漿または血清など）または組織サンプル（頬の内側の組織のサンプルまたは頬の内側の細胞など）が包含されるが、これらに限定されない。生体サンプルは、その後、公知の方法を用いてゲノムＤＮＡを取得または増幅するために使用されてよい。
【００７７】
核酸の変異は、いくつかの公知の手順のうちのいずれかによって決定できる。一部の実施形態では、ＤＮＡアレイを使用して個体のゲノム配列の少なくとも一部を解析できる。例示的なＤＮＡアレイには、ＧｅｎｅＣｈｉｐアレイ、ＧｅｎＦｌｅｘ  ＴａｇアレイおよびＧｅｎｏｍｅ−Ｗｉｄｅ  Ｈｕｍａｎ  ＳＮＰ  Ａｒｒａｙ  ６．０（Ａｆｆｙｍｅｔｒｉｘ（Ｓａｎｔａ  Ｃｌａｒａ，  ＣＡ）から入手可能）が包含される。
【００７８】
特定の実施形態では、全ゲノム配列情報または部分的なゲノム配列情報が。そのような配列は、鎖終結（サンガーのジデオキシヌクレオチド）法、ダイターミネーターシークエンシング法およびＳＯＬｉＤ（商標）シークエンシング法（Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）を含む標準的なシークエンシング法を用いて決定できる。ゲノム配列はシークエンシングのために、制限酵素によって切断できるか、またはより短い断片に（機械的に）剪断できる。ＤＮＡ配列はまた、ＰＣＲおよびベクターを利用したクローニング法（例えば、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ）などの公知の方法を用いて増幅されてもよい。
【００７９】
一部の実施形態において、個体の遺伝物質（例えば、ＤＮＡ、ＲＮＡ、ｍＲＮＡ、ｃＤＮＡ、他のヌクレオチド塩基またはそれらの派生物）の少なくとも一部が、１つ以上のＳＮＰおよびそれらの対応するアレルの有無を特定するために、例えば従来のＤＮＡシーケンサーまたはチップを利用した技術を用いてスキャンまたは配列決定される。
【００８０】
本明細書で引用される特許、特許出願公開または科学的刊行物はいずれも、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。
【００８１】
以下の実施例は、本発明の好ましい実施形態をより完全に説明するために提示される。しかし、それらは決して、本発明の広い範囲を限定するものとして解釈されるべきではない。
【実施例】
【００８２】
ＣＲＴＨ２／ＤＰ−２アンタゴニストは、ＰＧＤ２によって引き起こされる毛髪成長阻害を逆転させる。
アンドロゲン性脱毛症（ＡＧＡ）は、最も一般的なタイプの抜け毛であり、５０歳までに男性の約５０％および女性の３０％を冒す。男性におけるＡＧＡの発症に必要な因子であるテストステロン以外の要因は未知のままである。薬理作用物質であるフィナステリド（プロペシア）の投与によるテストステロンの、そのより強力な形態であるジヒドロテストステロンへの変換の遮断は、早期のＡＧＡを有する患者には恩恵を与えるが、毛髪の小型化を完全に逆転させることはできない。これは、より効果的な処置の開発は、ＡＧＡの発症にも寄与するさらなる因子の特定に依存するということを示唆する。
【００８３】
この目的のために、我々は以前に、網羅的遺伝子発現アプローチを用いて、同じ個体からの禿げている頭皮対禿げていない頭皮で差次的に発現する遺伝子を見出した（Ｇａｒｚａ  ｅｔ  ａｌ．（２０１２）  Ｓｃｉ．Ｔｒａｎｓｌ．Ｍｅｄ．  ４，  １２６ｒａ３４）。我々は、男性からの禿げている頭皮におけるプロスタグランジンＤ２シンターゼ（ＰＴＧＤＳ）およびその触媒生成物ＰＧＤ２のレベルの上昇を見出した。さらに、我々は、Ｇｐｒ４４ノックアウトマウスにおいてＰＧＤ２が毛髪成長を阻害し、この阻害がＤＰ−２受容体（ａｋａ  ＧＰＲ４４，  ＣＲＴＨ２）を介して媒介されるということを示す機能的データを提供した。ＰＧＤ２のレベルの上昇が抜け毛を引き起こすということは、皮膚におけるＰＧＤ２のレベルの増加をもたらすように操作されたマウスモデル（Ｋ１４−Ｐｔｇｓ２）においてさらに確認された。これらのマウスは、両方ともヒトのＡＧＡの特徴である進行性の毛包の小型化および皮脂腺の過形成を患う。これらの結果は、ＰＧＤ２がＡＧＡにおいて原因となる役割を果たすことを意味し、抜け毛の防止および毛髪成長の促進を目的とする薬理学的介入のための新規の標的を提供する。
【００８４】
この実施例では、複数のＤＰ−２アンタゴニストを器官培養系におけるヒト毛包の成長について試験し、マウスにおけるインビボでの毛周期に対するＤＰ−２アンタゴニストの効果を調査した。
【００８５】
材料および方法
組織：頭皮は、ＣＨＴＮからの正規に廃棄されたヒトの皮膚サンプルおよび毛髪移植を受けている男性および女性から取得した（ＩＲＢ適用除外研究プロトコル＃８１８０５３）。
【００８６】
使用されたＤＰ−２アンタゴニスト：ＡＭ２１１（Ａｍｉｒａ）、セチピプラント（Setipirant）（Ａｃｔｅｌｉｏｎ；データは示さない）。
【００８７】
毛包の器官培養：毛髪移植患者からの廃棄組織から毛包を顕微解剖し、２日ごとに培地を交換しながらＰＧＤ２および／またはＤＰ−２アンタゴニストの存在下または非存在下で、Ｐｈｉｌｐｏｔｔら（Ｊ．Ｄｅｒｍａｔｏｌ．Ｓｃｉ．Ｓｕｐｐｌ：Ｓ５５−７２．（１９９４））によって説明されるように７日間培養した。培養期間の開始時と終了時に毛包を撮影した。Ｉｍａｇｅ  Ｊソフトウェアを用いて写真から毛包の成長を測定した。
【００８８】
免疫染色：培養した毛包の凍結切片または４％のＰＦＡ中で固定した全載毛包に対して、抗Ｋｉ６７および抗カスパーゼ−３を用いた免疫蛍光分析を行った。画像はＬｅｉｃａの蛍光顕微鏡で撮影した。
【００８９】
動物試験：６〜７週齢のＣ５７ＢＬマウスの背中の皮膚を脱毛した。９５％ＥｔＯＨ／２％グリセロール／３％ＰＥＧにＤＰ−２アンタゴニストを溶解させた。剃毛した背中の皮膚に、脱毛後８日目から開始して２週間にわたり、毎日１回、各化合物を１００μＬ塗布した。脱毛後２２日目に、毛の長さの測定のために毛幹を引き抜き、毛周期のステージの組織学的評価のために皮膚を採取した。
【００９０】
ＳＮＰ解析：毛包の器官培養においてＰＧＤ２による阻害に対して感受性である２１人および感受性でない１４人を含む３５人のドナー（群１）からゲノムＤＮＡを抽出した。その後、８８個の新しいサンプルを収集し、これらのうち、６５人のドナー（群２）が、使用可能な培養データを有した。ヒトＤＰ−２遺伝子全体（２つのエキソンおよび１つのイントロンを含む）ならびに４ｋｂの隣接領域を多重ＰＣＲによって増幅し、Ｉｒｏｎ  Ｔｏｒｒｅｎｔシークエンシング法によって配列決定した。ＰＧＤ２感受性に対するＳＮＰの関連性をフィッシャーの正確確率検定によって解析した。
【００９１】
結果および考察
ＰＧＤ２は、外植片培養においてヒトの毛包の成長を用量依存的に阻害する（図１）。成長培地において７日間培養された毛包は、顕著な成長を示した。しかし、この成長は、培地へのＰＧＤ２の添加（１０μＭ）によって著しく阻害された。一方で、１０ｎＭのＤＰ−２アンタゴニストＡＭ２１１の存在は、毛包をＰＧＤ２による阻害からレスキューした（図１Ａ）。Ｂ．ＰＧＤ２は、毛髪成長に対して用量依存的にその阻害効果を発揮する（図１Ｂ）。７日間の培養の後に回収した毛包の代表的な組織画像を図１Ｃに示す。Ｄ．ヒトの頭皮において、ＰＧＤ２およびアンタゴニストの効果を媒介する受容体であるＣＲＴＨ２／ＤＰ−２は、表皮、毛包ケラチノサイトおよび皮脂腺（ＳＧ）で発現しているが、真皮乳頭（ＤＰ）では発現していない（図１Ｄ）。その発現レベルは、禿げた頭皮（図１Ｄ、左側）では正常な頭皮（図１Ｄ、右側）と比較して上昇している。
【００９２】
インビボでの毛髪成長に対するＤＰ−２アンタゴニストの効果を試験するために、脱毛から８日後の６〜７週齢のマウスの背中の皮膚にＡＭ２１１を２週間にわたって１日に１回、示される用量で局所適用した（図２Ａ）。処置されたマウスの毛幹および皮膚を、それぞれ長さの測定および毛周期のステージの解析のために脱毛後２２日目に採取した。処置されたマウスからの皮膚の組織切片の代表的画像を図２Ｂに示す。形態学的評価に基づいて、切片中の毛包を、毛周期のステージのうちの１つに分類し、計数した。対照群（ビヒクルのみで処置）では、ほぼ全ての毛包が退行期および休止期に入っていたが、ＡＭ２１１で処置した群は、毛包の退行期への移行の用量依存的な遅延を示した（図２Ｃ）。成長期が延長した結果、ＡＭ２１１で処置したマウスの皮膚は、成長し続ける毛包を有する領域がより広く、より長い毛幹を産生した（図２Ｄおよび２Ｅ）。
【００９３】
外植片培養において、ヒトの男性および女性の毛包は、ＰＧＤ２の阻害活性ならびにＤＰ−２アンタゴニストの抗ＰＧＤ２活性に対して同様に応答した（図３Ａ）。高用量のＡＭ２１１で観察された抗ＰＧＤ２効果の減少は、おそらく、９５％の均質性に精製されたＡＭ２１１調製物中の未確認の混入物に起因するものであった。なぜならば、９９．５％純粋なＡＭ２１１の調製物を高用量で使用すると抗ＰＧＤ２活性が維持されたためである（図３Ｂを参照のこと）。培養した毛包の、増殖のマーカー（Ｋｉ６７、赤で示される）およびアポトーシスのマーカー（活性型カスパーゼ３、緑で示される）についての免疫蛍光染色は、ＰＧＤ２が毛包ケラチノサイトの増殖を抑制しアポトーシスを促進するということを明らかにした（図３Ｃ）。ＤＰ−２アンタゴニストは、毛包におけるこれら２つのＰＧＤ２により引き起こされる細胞的事象を逆転させた。
【００９４】
１１番染色体上に位置するヒトＣＲＴＨ２／ＤＰ−２遺伝子において、外植片培養でのＰＧＤ２による毛髪成長阻害と相関するＳＮＰを同定した（図４）。図４ＡおよびＣは、ＰＧＤ２活性に対する感受性のマーカーの有力候補として最初に同定された、５つ（６１個中）のヒトＣＲＴＨ２／ＤＰ−２のＳＮＰの位置を示す。これら５つの有力候補は、（１）基準塩基としてＴを有し、０．３３８というマイナーアレル頻度（ＭＡＦ）を有するマイナーアレルとしてＣを有する、ｒｓ５４５６５９；（２）基準塩基としてＧを有し、０．３３５というＭＡＦを有するマイナーアレルとしてＡを有する、ｒｓ６３４６８１；（３）基準塩基としてＡを有し、０．３３８というＭＡＦを有するマイナーアレルとしてＧを有する、ｒｓ７１６７；（４）基準塩基としてＧを有し、０．０８３というＭＡＦを有するマイナーアレルとしてＡを有する、ｒｓ４１４６５６４６；および（５）基準塩基としてＧを有し、０．１０５というＭＡＦを有するマイナーアレルとしてＡを有する、ｒｓ４１３８２８４４であった（表７を参照のこと）。
【００９５】
最初に試験した３５人の患者（群１）のうち、２１人の患者からの毛包がＰＧＤ２媒介性の成長阻害を示したが、残りの１４人からの毛包の成長は、ＰＧＤ２による影響を受けなかった（表４、図４Ｂ）。ＣＲＴＨ２／ＤＰ−２遺伝子のＤＮＡ配列決定ならびにＳＮＰのＰＣＲは、ＰＧＤ２感受性の個体の約７０％が３つのＳＮＰ：ｒｓ５４５６５９、ｒｓ６３４６８１およびｒｓ７１６７（赤で示される）を全て保持するということを示した。フィッシャーの正確確率検定は、これら３つのＳＮＰが、これらの患者のＰＧＤ２阻害に対する感受性と関連している可能性が非常に高いということを示した（図４Ｃ）。
【００９６】
その後、８８個の新しいサンプルを収集し、これらのうち、６５人のドナー（群２）が、使用可能な培養データを有した。群２の試験された６５人の患者のうち、３１人の患者からの毛包がＰＧＤ２媒介性の成長阻害を示したが、残りの３４人からの毛包の成長は、ＰＧＤ２による影響を受けなかった（表５および６）。ＣＲＴＨ２／ＤＰ−２遺伝子のＤＮＡ配列決定ならびにＳＮＰのＰＣＲは、群２ではＰＧＤ２感受性の個体の２２／３１＝７０．９６％（群１では６６．７％）がＳＮＰ：ｒｓ５４５６５９、ｒｓ６３４６８１およびｒｓ７１６７についての３つのマイナーアレルを全て保持するということを示した（表５）。群２では、ＰＧＤ２非感受性の個体の８／３４＝２３．５３％（群１では２８．５７％）がＳＮＰ：ｒｓ５４５６５９、ｒｓ６３４６８１およびｒｓ７１６７についての３つのマイナーアレルを全て保持する（表６）。フィッシャーの正確確率検定は、これら３つのＳＮＰが、群２の患者のＰＧＤ２阻害に対する感受性と関連している可能性が非常に高い（Ｐ＜０．００１）ということを示した。
【００９７】
群１および群２の両方からの１００個のサンプルの結果を合わせた場合、５２人の患者からの毛包がＰＧＤ２媒介性の成長阻害を示したが、残りの４８人からの毛包の成長は、ＰＧＤ２による影響を受けなかった。５２人のＰＧＤ２感受性の個体については、３６／５２（６９．２３％）が、３つのＳＮＰ：ｒｓ５４５６５９、ｒｓ６３４６８１およびｒｓ７１６７についてのマイナーアレルを保持し、残りの１６／５２（３０．７７％）のＰＧＤ２感受性の個体は、これら３つのＳＮＰのメジャーアレルについてホモ接合型である。４８人のＰＧＤ２非感受性の個体については、僅か１２／４８（２５．０％）が、３つのＳＮＰ：ｒｓ５４５６５９、ｒｓ６３４６８１およびｒｓ７１６７についてのマイナーアレルを保持するが、残りの３６／４８（７５．０％）のＰＧＤ２非感受性の個体は、これら３つのＳＮＰのメジャーアレルについてホモ接合型である。フィッシャーの正確確率検定は、これら３つのＳＮＰが、患者の総集団のＰＧＤ２阻害に対する感受性と関連している可能性が非常に高い（Ｐ＜０．００１）ということを示した。表７は、一般集団におけるマイナーアレル頻度をＰＧＤ２感受性の個体およびＰＧＤ２非感受性の個体と比較する。
【表４】
2018530995.tif 000016
【表５】
2018530995.tif 000017
【表６】
2018530995.tif 000018
【表７】
2018530995.tif 000019
【００９８】
本実施例において、我々は、ＰＧＤ２が、毛包上皮細胞の増殖を抑制しアポトーシスを誘発することによって毛包の成長を用量依存的に阻害するということを実証した。ＣＲＴＨ２／ＤＰ−２アンタゴニストは、男性の毛包および女性の毛包の両方に対するＰＧＤ２の阻害を逆転させるのに有効である。本実施例において、我々は、ＰＧＤ２が、毛包上皮細胞の増殖を抑制しアポトーシスを誘発することによって毛包の成長を用量依存的に阻害するということを実証した。さらに、ＣＲＴＨ２／ＤＰ−２アンタゴニストは、男性の毛包および女性の毛包の両方に対するＰＧＤ２の阻害を逆転させるのに有効であった。より具体的には、動物モデルにおいて、ＣＲＴＨ２／ＤＰ−２アンタゴニストは、成長期の間にマウスの皮膚に直接適用されると成長期を延長し、より長い毛幹を促進する。
【００９９】
一部の脱毛症患者からの毛包は、ＰＧＤ２による成長阻害を示さなかったが、これは、ＰＧＤ２に応答する個体と応答しない個体が存在することを示す。ＣＲＴＨ２／ＤＰ−２遺伝子において、ＰＧＤ２による毛髪成長阻害に対する感受性と関連しているＳＮＰが特定された。ＤＰ−２遺伝子において異なる遺伝型を有するＰＧＤ２に応答する個体と応答しない個体が存在することは、前者の群では毛髪成長を刺激するためのＤＰ−２アンタゴニストでの処置に対してより応答性が高いということ、および感受性はＤＰ−２アンタゴニストによって異なる可能性があるということを示す。
【０１００】
当業者であれば、上記で説明される実施形態に、それらの広い発明概念から逸脱することなく変更を加えることができるということを理解するであろう。従って、本発明が、開示される特定の実施形態に限定されることはないと理解され、本発明は、添付の特許請求の範囲によって規定されるように、本発明の趣旨および範囲に属する改変を包含することが意図される。
【図１】
2018530995.tif 000020
【図２】
2018530995.tif 000021
【図３】
2018530995.tif 000022
【図４】
2018530995.tif 000023
【国際調査報告】
2018530995.tif 000024
2018530995.tif 000025