(57)【要約】本開示は、２０００ｎｍ未満のＤ５０を有し、式Ｉの神経ステロイドを含むナノ粒子及び少なくとも１種の表面安定剤を含む注射可能な神経ステロイドナノ粒子製剤を提供し、変数Ｒ１からＲ９及びＸは本明細書に定義されている。表面安定剤は、ヒドロキシエチルデンプン、デキストラン、又はポビドン等の高分子表面安定剤であってもよい。注射可能な神経ステロイドナノ粒子製剤は、静脈内製剤であってもよい。本開示はまた、投与前に水溶液中で再構成することができる注射可能な神経ステロイドナノ粒子製剤の凍結乾燥粉末を提供する。本開示は、注射可能な神経ステロイドナノ粒子製剤及び電子線照射によって滅菌されたそのような製剤の乾燥粉末を提供する。本開示は、有効量の注射可能な神経ステロイドナノ粒子製剤を投与することを含む、発作障害、脳卒中、又は外傷性脳損傷を有する患者を治療する方法を提供する。本開示はまた、注射可能な神経ステロイドナノ粒子製剤が、少なくとも１つのさらなる活性成分と組み合わせて投与される第１の活性成分である、組み合わせ方法を提供する。2018530585.tif 000026【選択図】図１
2018530585.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
２０００ｎｍ未満のＤ５０を有するナノ粒子を含む注射可能な神経ステロイド製剤であって、前記ナノ粒子が、以下のものを含む、注射可能な神経ステロイド製剤。
ａ）式Ｉの神経ステロイド：
【化１】
2018530585.tif 000025
又はその薬学的に許容される塩であり、ここで：
ＸはＯ、Ｓ、又はＮＲ１０であり；
Ｒ１は、水素、ヒドロキシル、置換されていてもよいアルキル、置換されていてもよいヘテロアルキル、置換されていてもよいアリール、又は置換されていてもよいアリールアルキルであり；
Ｒ４は、水素、ヒドロキシル、オキソ、置換されていてもよいアルキル、又は置換されていてもよいヘテロアルキルであり、
Ｒ２、Ｒ３、Ｒ５、Ｒ６、及びＲ７は、それぞれ独立して、水素、ヒドロキシル、ハロゲン、置換されていてもよいアルキル、又は置換されていてもよいヘテロアルキルであり；
Ｒ８は水素又はアルキルであり、Ｒ９はヒドロキシルであり；又は
Ｒ８及びＲ９は一緒になってオキソ基を形成し；
Ｒ１０は、水素、ヒドロキシル、置換されていてもよいアルキル、置換されていてもよいヘテロアルキル、置換されていてもよいアリール、又は置換されていてもよいアリールアルキルであり、
各アルキルは、Ｃ１−Ｃ１０アルキル、Ｃ３−Ｃ６シクロアルキル、（Ｃ３−Ｃ６シクロアルキル）Ｃ１−Ｃ４アルキルであり、二重結合又は三重結合で置換された単結合を含んでいてもよく；
各ヘテロアルキル基は、１以上のメチル基が独立して選択される−Ｏ−、−Ｓ−、−Ｎ（Ｒ１０）−、−Ｓ（＝Ｏ）−、又はＳ（＝Ｏ）２−によって置換されたアルキル基であり、Ｒ１０は、水素、アルキル基、又は１以上のメチレン基が−Ｏ−、−Ｓ−、−ＮＨ−又は−Ｎ−アルキルで置き換えられたアルキルであり；並びに
ｂ）少なくとも１種の表面安定剤。
【請求項２】
５００ｎｍ未満のＤ５０を有するナノ粒子を含む、注射可能な神経ステロイド製剤であって、
前記製剤が静脈内製剤であり；及び
神経ステロイドがガナキソロンである、請求項１に記載の注射可能な神経ステロイド製剤。
【請求項３】
少なくとも１種の表面安定剤が、高分子表面安定剤であり、高分子表面安定剤がヒドロキシエチルデンプン、デキストラン、ポビドン、又はこれらのいずれかの混合物である、請求項１又は２に記載の注射可能な神経ステロイド製剤。
【請求項４】
追加の表面安定剤、ここで追加の表面安定剤は、イオン性又は非イオン性界面活性剤である；そして
消泡剤を含む、請求項１から３のいずれかに記載の注射可能な神経ステロイド製剤。
【請求項５】
前記高分子表面安定剤がヒドロキシエチルデンプンであり；
前記界面活性剤は、コール酸ナトリウム、デオキシコール酸ナトリウム、硫酸コレステロールナトリウム、又は上記のいずれかの混合物であり；及び
消泡剤はシメチコンである、請求項４に記載の注射可能な神経ステロイド製剤。
【請求項６】
凍結保護剤をさらに含み、
前記凍結保護剤が、スクロース、デキストロース、ラクトース、Ｄ−ソルビトール、又はこれらのいずれかの混合物である、請求項１から５のいずれかに記載の注射可能な神経ステロイド製剤。
【請求項７】
以下の１以上をさらに含む、請求項１から６のいずれかに記載の注射可能な神経ステロイド製剤：
（ａ）０．５％から１．５％の塩化ナトリウム（重量％）；
（ｂ）緩衝剤；
（ｃ）防腐剤、ここで、前記防腐剤は、ベンジルアルコール、クロロブタノール、２−エトキシエタノール、パラベン類（メチル、エチル、プロピル、ブチル、及び組み合わせを含む）、安息香酸、ソルビン酸、クロルヘキシデン、フェノール、３−クレゾール、チメロサール、フェニル水銀塩、又はこれらのいずれかの混合物。
【請求項８】
神経ステロイドが、ガナキソロン又はアロプレグナノロンであり、
少なくとも１種の表面安定剤は、ヒドロキシエチルデンプン、デキストラン、ポビドン、及びこれらのいずれかの混合物から選択される高分子表面安定剤であり、ここで、神経ステロイド対高分子表面安定剤の（重量：重量）比は約４：１から約０．５：１であり、
前記製剤は追加の表面安定剤を含み、追加の表面安定剤は、デオキシコール酸ナトリウム、硫酸コレステロールナトリウム、及びこれらのいずれかの混合物から選択される界面活性剤であり、神経ステロイド対界面活性剤の比（重量：重量）が約１０：１．５から約１０：０．１である、請求項１に記載の注射可能な神経ステロイド製剤。
【請求項９】
前記製剤が凍結乾燥粉末の形態である、請求項１から８のいずれかに記載の製剤。
【請求項１０】
前記製剤が水性懸濁液であり、前記神経ステロイドの濃度が約０．１ｍｇ／ｍＬから約３００ｍｇ／ｍＬである、請求項１から９のいずれかに記載の製剤。
【請求項１１】
前記製剤が、以下を含む水性製剤である、請求項１に記載の注射可能な神経ステロイド製剤：
（ａ）５００ｎｍ未満のＤ５０を有し、ガナキソロンを含むナノ粒子であって、ガナキソロンの重量百分率が１％から１０％であるナノ粒子；
（ｂ）ヒドロキシエチルデンプン、デキストラン、及びポビドンから選択された高分子表面安定剤であって、高分子表面安定剤の重量百分率が２％から２０％である高分子表面安定剤；
（ｃ）コール酸ナトリウム、デオキシコール酸ナトリウム、及び硫酸コレステロールナトリウムから選択されるイオン性又は非イオン性界面活性剤であり、界面活性剤の重量百分率が０．１％から２．０％である追加の表面安定剤；及び
（ｄ）消泡剤。
【請求項１２】
製剤が、以下を含む水性製剤である、請求項１に記載の注射可能な神経ステロイド製剤：
（ａ）５００ｎｍ未満のＤ５０を有し、ガナキソロンを含むナノ粒子であって、ガナキソロンの重量百分率が約５％であるナノ粒子；
（ｂ）ヒドロキシエチルデンプン１３０／０．４及びプラスドンＣ−１２から選択される高分子表面安定剤であって、高分子表面安定剤の重量百分率が約５％から約１０％である、高分子表面安定剤；
（ｃ）付加的な表面安定剤がデオキシコール酸ナトリウムであり、デオキシコール酸ナトリウムの重量百分率が約０．７５％である付加的な表面安定剤；及び
（ｄ）重量％が０．００９％であるシメチコン。
【請求項１３】
前記製剤に電子線照射をすることを含み、方法が、０．２％ｗ／ｗ以下の神経ステロイドの分解物濃度を含む滅菌された神経ステロイドナノ粒子製剤を生じる、請求項１から１２のいずれかに記載の注射可能な神経ステロイドナノ粒子製剤を滅菌する方法。
【請求項１４】
前記製剤が、電子線照射によって滅菌され、前記製剤が０．２％ｗ／ｗ以下の前記神経ステロイドの分解物濃度を含む、請求項１から１２のいずれかに記載の注射可能な神経ステロイド製剤。
【請求項１５】
電子線照射が約２５ｋＧｒａｙの累積線量である、請求項１４に記載の注射可能な神経ステロイド製剤。
【請求項１６】
注射可能なガナキソロンナノ粒子製剤であって：
（ａ）２０００ｎｍ以下のＤ５０を有するガナキソロンナノ粒子、及び（ｂ）少なくとも１種の表面安定剤を含み；
同一の有効成分含量の注射可能な非粒子状のガナキソロン製剤との比較薬物動態試験において、非粒子状のガナキソロン製剤よりも大きなＣｍａｘを示す、注射可能なガナキソロンナノ粒子製剤。
【請求項１７】
注射可能なガナキソロンナノ粒子製剤であって、
（ａ）２０００ｎｍ以下のＤ５０を有するガナキソロンナノ粒子、及び（ｂ）少なくとも１種の表面安定剤を含み；
同一の有効成分含量の注射可能な非粒子状ガナキソロン製剤との比較薬物動態試験において、ナノ粒子製剤が、投与後１５分から１００分のいずれかの時点においても、投与後に同時に現れる非粒子状ガナキソロン製剤よりも大きな脳濃度を示す、注射可能なガナキソロンナノ粒子製剤。
【請求項１８】
発作障害、脳卒中、又は外傷性脳損傷を有する患者を治療する方法であって、前記方法が、請求項１から１７のいずれかに記載の治療上有効量の注射可能な神経ステロイド製剤を静脈内投与することを含み、前記神経ステロイドがガナキソロンである、方法。
【請求項１９】
前記発作障害が、てんかん重積症、難治性てんかん重積症、超難治性てんかん重積症、又はＰＣＤＨ１９女児てんかんである、請求項１８に記載の方法。
【請求項２０】
投与されるガナキソロンの用量が、約１ｍｇ／ｋｇから約２００ｍｇ／ｋｇである、請求項１８に記載の方法。
【請求項２１】
前記製剤の単回のボーラス用量を前記患者に投与することを含み、単回のボーラス用量は、患者において少なくとも１０００ｎｇ／ｍＬのガナキソロンの血漿Ｃｍａｘをもたらすのに十分な量のガナキソロンを提供する、請求項１８又は１９に記載の方法。
【請求項２２】
複数のボーラス用量のガナキソロン製剤を患者に投与することを含み、複数のボーラス用量が１時間から２４時間の間隔で１日間から１０日間与えられ、各ボーラス用量は、患者において、少なくとも１０００ｎｇ／ｍＬのガナキソロンの血漿Ｃｍａｘをもたらすのに十分な量のガナキソロンを提供することを含む、請求項１８又は１９に記載の方法。
【請求項２３】
初回のボーラス用量の有無にかかわらず、患者にガナキソロン製剤の静脈内注入を投与することを含み、１日間から１０日間連続して、１ｍｇ／ｋｇ／時間から１０ｍｇ／ｋｇ／時間の速度で、初回のボーラス用量を伴わない、請求項１８又は１９に記載の方法。
【請求項２４】
約１ｍｇ／ｋｇから約２０ｍｇ／ｋｇの初回のボーラス用量のガナキソロンを投与し、続いて２４時間以内に、ガナキソロン製剤の１日間から１０日間連続する静脈内投与を１ｍｇ／ｋｇ／時間から１０ｍｇ／ｋｇ／時間の速度；患者における少なくとも１０００ｎｇ／ｍＬのガナキソロンの初期血漿Ｃｍａｘをもたらすのに十分な量のガナキソロンで投与し、患者の血漿中のガナキソロンの濃度は、点滴が完了するまで、初期Ｃｍａｘの２５％未満に低下しない、請求項２３に記載の方法。
【請求項２５】
注射可能なガナキソロン製剤は、第１の活性成分であり、少なくとも１つのさらなる活性成分と同時に、又は連続して投与され；及び
少なくとも１つの追加の活性成分は、抗けいれん薬又は麻酔薬／鎮静薬である、請求項１８から２４のいずれか１項に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
＜関連出願への相互参照＞
本出願は、２０１５年１０月１６日に出願された米国仮出願第６２／２４２，６０１号からの優先権を主張し、その内容は、全体が参照により本明細書に組み込まれる。
【背景技術】
【０００２】
プレグナン神経ステロイドは、麻酔薬、鎮静薬、催眠薬、抗不安薬、抗けいれん薬として有用な化合物群である。これらの化合物は、非常に低い水溶性によって特徴付けられ、これがその製剤化における選択肢を制限する。これらの化合物は、麻酔や、特に激しい発作の治療のような、経口投与が排除される臨床適応症のために使用されるので、プレグナン神経ステロイドの注射可能な製剤が特に望ましい。
【０００３】
てんかん重積症（ＳＥ）は、てんかん患者が発作を経験する重度の発作障害であり、この場合、発作は５分以上継続するか、５分以内の発作は、発作間の回復なく、１回よりも多いものとなる。ある場合には、けいれん発作は数日又は数週間続くこともある。てんかん重積症は、従来の抗けいれん剤を用いて救急室で治療される。ベンゾジアゼピン（ＢＺ）等のＧＡＢＡＡ受容体モジュレーターは、第一選択薬である。ＢＺ単独投与に反応しない患者は、通常、ＢＺと組み合わせて麻酔剤又はバルビツール酸塩で治療される。ベンゾジアゼピン及び少なくとも１種の追加の抗てんかん薬で治療されているてんかん重積症患者の約２３％から４３％が治療に応答せず、難治性と考えられている（Ｒｏｓｓｅｔｔｉ，Ａ．Ｏ．ａｎｄ  Ｌｏｗｅｎｓｔｅｉｎ，Ｄ．Ｈ．，Ｌａｎｃｅｔ  Ｎｅｕｒｏｌ．（２０１１）１０（１０）：９２２−９３０）。現在、これらの患者には良好な治療選択肢はない。難治性てんかん重積症（ＲＳＥ）患者の死亡率は高く、ほとんどのＲＳＥ患者は、その前ＲＳＥ臨床状態には戻らない。ＳＥで病院に入院した患者の約１５％が、麻酔治療の開始後２４時間以上継続して発作が持続又は頻発する超難治性ＳＥ（ＳＲＳＥ）といわれるＲＳＥ患者のサブグループに属する。ＳＲＳＥは、高い死亡率及び罹患率と関連している（Ｓｈｏｒｖｏｎ，Ｓ．，ａｎｄ  Ｆｅｒｌｉｓｉ，Ｍ．，Ｂｒａｉｎ，（２０１１）１３４（１０）：２８０２−２８１８）。
【０００４】
もう１つの深刻な発作障害は、ＰＣＤＨ１９の女児てんかんであり、米国において約１５，０００から３０，０００の女性に影響する。この遺伝性疾患は、生後早期に発症する発作と関連しており、主に局限性群発性の発作は数週間続きうる。ＰＣＤＨ１９遺伝子の変異は、低レベルのアロプレグナノロンと関連している。現在、ＰＣＤＨ１９女児てんかんに対する承認された治療法はない。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００５】
【非特許文献１】Ｒｏｓｓｅｔｔｉ，Ａ．Ｏ．ａｎｄ  Ｌｏｗｅｎｓｔｅｉｎ，Ｄ．Ｈ．，Ｌａｎｃｅｔ  Ｎｅｕｒｏｌ．（２０１１）１０（１０）：９２２−９３０
【非特許文献２】Ｓｈｏｒｖｏｎ，Ｓ．，ａｎｄ  Ｆｅｒｌｉｓｉ，Ｍ．，Ｂｒａｉｎ，（２０１１）１３４（１０）：２８０２−２８１８
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
したがって、てんかん重積症、難治性てんかん重積症、超難治性てんかん重積症、及びＰＣＤＨ１９女児てんかんのような発作障害のためのさらなる治療に対する必要性が存在する。本明細書における開示は、注射可能なプレグナン神経ステロイド製剤を提供することによってこの必要性を満たし、本明細書に記載されるさらなる利点を提供する。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本開示は、Ｄ５０（体積加重メジアン径）が２０００ｎｍ（ナノメートル）未満であるナノ粒子を含む、注射可能なナノ粒子プレグナン神経ステロイド製剤を提供し、このナノ粒子が、プレグナン神経ステロイド、少なくとも１種の表面安定剤、例えば、ヒドロキシエチルデンプン、デキストラン、又はポビドン等の高分子表面安定剤、及び一部の実施形態では、界面活性剤等の追加の表面安定剤を含む。製剤の一実施形態は、水性懸濁液中のナノ粒子を含む。本開示はまた、注射のために水中で再構成することができる、プレグナン神経ステロイドナノ粒子製剤の凍結乾燥粉末を提供する。
【０００８】
本開示は、２０００ｎｍ未満のＤ５０を有するナノ粒子を含む神経ステロイド製剤を提供し、前記ナノ粒子は、
ａ）式Ｉの神経ステロイド：
【０００９】
【化１】
2018530585.tif 000003
【００１０】
又はその薬学的に許容される塩であって、ここで：
ＸはＯ、Ｓ、又はＮＲ１０であり；
Ｒ１は、水素、ヒドロキシル、置換されていてもよいアルキル、置換されていてもよいヘテロアルキル、置換されていてもよいアリール、又は置換されていてもよいアリールアルキルであり；
Ｒ４は、水素、ヒドロキシル、オキソ、置換されていてもよいアルキル、又は置換されていてもよいヘテロアルキルであり、
Ｒ２、Ｒ３、Ｒ５、Ｒ６、及びＲ７は、それぞれ独立して、水素、ヒドロキシル、ハロゲン、置換されていてもよいアルキル、又は置換されていてもよいヘテロアルキルであり；
Ｒ８は水素又はアルキルであり、Ｒ９はヒドロキシルであり；又は
Ｒ８及びＲ９は一緒になってオキソ基を形成し；
Ｒ１０は、水素、ヒドロキシル、置換されていてもよいアルキル、置換されていてもよいヘテロアルキル、置換されていてもよいアリール、又は置換されていてもよいアリールアルキルであり、ここで
各アルキルは、Ｃ１−Ｃ１０アルキル、Ｃ３−Ｃ６シクロアルキル、（Ｃ３−Ｃ６シクロアルキル）Ｃ１−Ｃ４アルキルであり、その単結合が二重結合又は三重結合で置換されていてもよく；
各ヘテロアルキル基は、１つ以上のメチル基が、独立して選択される−Ｏ−、−Ｓ−、−Ｎ（Ｒ１０）−、−Ｓ（＝Ｏ）−、又はＳ（＝Ｏ）２−で置換されたアルキル基であり、ここで、Ｒ１０は、水素、アルキル、又は１つ以上のメチレン基が−Ｏ−、−Ｓ−、−ＮＨ、又はＮ−アルキルで置換されたアルキルであり；並びに
ｂ）少なくとも１種の表面安定剤、を含む。
【００１１】
本開示はまた、付加的な表面安定剤として界面活性剤を含有し、ナノ粒子が５００未満のＤ５０を有する上記注射可能な神経ステロイドナノ粒子製剤の実施形態を含む。この開示はまた、５００ｎｍ未満のＤ５０を有する神経ステロイドナノ粒子を含み、ナノ粒子は、以下のものを含む。
ａ）式Ｉの化合物又は塩；
ｂ）高分子表面安定剤；及び
ｃ）少なくとも１種の追加の表面安定剤を含み、追加の表面安定剤は界面活性剤である。
【００１２】
特定の実施形態において、神経ステロイドは、ガナキソロン（ＧＮＸ）又はアロプレグナノロン（ＡＬＬＯ）である。特定の実施形態では、神経ステロイドはガナキソロンである。
【００１３】
本開示はまた、ナノ粒子の形態の、式Ｉの神経ステロイド（例えば、ガナキソロン又はアロプレグナノロン）、ヒドロキシエチルデンプン、デキストラン、又はポビドンのいずれか、及び界面活性剤；と水を含む、有効量の注射可能な神経ステロイドナノ粒子製剤を投与することを含む、発作障害、脳卒中、又は外傷性脳損傷を有する患者を治療する方法をも提供する。
【００１４】
本開示は、神経ステロイドが唯一の活性成分である治療方法、及び神経ステロイドナノ粒子製剤の神経ステロイドが第１の活性成分であり、さらなる活性成分と組み合わせて投与される方法を含む。
【００１５】
本開示は、神経ステロイドが唯一の活性成分であるか、又はこの方法が、少なくとも１種のさらなる活性成分による治療を含む、神経ステロイドナノ粒子製剤の投与スケジュールを含む治療方法を含む。
【図面の簡単な説明】
【００１６】
【図１】ヒドロキシエチルデンプン及びデオキシコール酸ナトリウムによって安定化されたガナキソロンのナノ懸濁液のＤ５０値を１７日間にわたってモニターした。ナノ懸濁液は、ガナキソロン（２０％）、ヒドロキシエチルデンプン（６％）、デオキシコール酸ナトリウム（１．２％）、及びシメチコン（０．０６％）を含有していた。粒子の大きさは、モニターした期間にわたって実質的に変化しなかった。
【図２】ポロキサマー１８８及びデオキシコール酸ナトリウムにより安定化されたガナキソロンのナノ懸濁液のＤ５０値を６日間にわたってモニターした。ナノ懸濁液は、ガナキソロン（１０％）、ポロキサマー１８８（１２．５％）、デキストラン（４０Ｋ  ＭＷ）（５％）、デオキシコール酸ナトリウム（０．２５％）を含有していた。
【図３Ａ】９ｍｇ／ｋｇの用量での、単回静脈注射後のラットにおけるガナキソロンヒドロキシエチルデンプン製剤、及び陽性対照ガナキソロンカプチソール製剤の２時間の平均血漿ガナキソロン濃度（ｎｇ／ｍＬ）である。
【図３Ｂ】１２ｍｇ／ｋｇの用量での、単回静脈注射後のラットにおけるガナキソロンヒドロキシエチルデンプン製剤、及び陽性対照ガナキソロンカプチソール製剤の２時間の平均血漿ガナキソロン濃度（ｎｇ／ｍＬ）である。
【図３Ｃ】１５ｍｇ／ｋｇの用量での、単回静脈注射後のラットにおけるガナキソロンヒドロキシエチルデンプン製剤、及び陽性対照ガナキソロンカプチソール製剤の２時間の平均血漿ガナキソロン濃度（ｎｇ／ｍＬ）である。
【図４Ａ】９ｍｇ／ｋｇの用量での、単回静脈注射後のラットにおけるガナキソロンヒドロキシエチルデンプン製剤、及び陽性対照のガナキソロンカプチソール製剤の２時間の平均脳ガナキソロン濃度（ｎｇ／ｍＬ）である。
【図４Ｂ】１２ｍｇ／ｋｇの用量での、単回静脈注射後のラットにおけるガナキソロンヒドロキシエチルデンプン製剤、及び陽性対照のガナキソロンカプチソール製剤の２時間の平均脳ガナキソロン濃度（ｎｇ／ｍＬ）である。
【図４Ｃ】１５ｍｇ／ｋｇの用量での、単回静脈注射後のラットにおけるガナキソロンヒドロキシエチルデンプン製剤、及び陽性対照のガナキソロンカプチソール製剤の２時間の平均脳ガナキソロン濃度（ｎｇ／ｍＬ）である。
【図５Ａ】カプチソール溶液又はナノ懸濁液としての、静脈内ガナキソロンを投与したラットのガナキソロンの脳内レベル及び血漿レベル。
【図５Ｂ】ラットにおけるアロプレグナノロンの脳内レベル。実験はガナキソロンと同じように行った。
【図６Ａ】ガナキソロン及びヒドロキシエチルデンプン（Ｄ５０＝１０６ｎｍ）を含む粒子の粒度分布曲線である。
【図６Ｂ】ガナキソロン及びデキストラン７０（Ｄ５０＝１１１ｎｍ）を含む粒子の粒度分布曲線である。
【図６Ｃ】ガナキソロン及びポビドン（Ｄ５０＝１０９ｎｍ）を含む粒子の粒度分布曲線である。
【図６Ｄ】アロプレグナノロン及びヒドロキシエチルデンプン（Ｄ５０＝９６ｎｍ）を含む粒子の粒度分布曲線である。
【図７Ａ】９ｍｇ／ｋｇの用量のラットにおけるガナキソロンのナノ粒子ヒドロキシエチルデンプン製剤、及び陽性対照ガナキソロンカプチソール製剤についての４時間の行動スコアである。
【図７Ｂ】１２ｍｇ／ｋｇの用量のラットにおけるガナキソロンのナノ粒子ヒドロキシエチルデンプン製剤、及び陽性対照ガナキソロンカプチソール製剤についての４時間の行動スコアである。
【図７Ｃ】１５ｍｇ／ｋｇの用量のラットにおけるガナキソロンのナノ粒子ヒドロキシエチルデンプン製剤、及び陽性対照ガナキソロンカプチソール製剤についての４時間の行動スコアである。
【発明を実施するための形態】
【００１７】
＜定義＞
数値範囲の記述は、本明細書中に別段の指示がない限り、当該範囲内の別個のそれぞれの値を個別に参照する簡略方法として機能することを意図しており、それぞれの別個の値は本明細書に個別に列挙されている場合と同様に、明細書に組み込まれる。全ての範囲の終点は当該範囲内に含まれており、独立して組み合わせることが可能である。本明細書中に記載される全ての方法は、本明細書中で別段の指示がなされない限り、又は文脈により明らかに矛盾しない限り、適切な順序で実施されうる。任意の及び全ての例、又は例示的な表現（例えば「・・・のような」）の使用は、単に説明のためのものであり、別段の主張がない限り、本発明の範囲の限定をもたらすものではない。本明細書中のいかなる表現も、特許請求の範囲に記載されていない要素が、本発明の実施に不可欠であると示していると解釈されるべきではない。
【００１８】
用語「ａ」及び「ａｎ」は、量の限定を意味するのではなく、むしろ、参照された項目の少なくとも１の存在を示す。
【００１９】
「約」という用語は、用語「概ね」と同義で用いられる。当業者が理解するように、「約」の正確な境界は、当該組成物の成分に依存する。例示的に、用語「約」の使用は、引用された値のわずかに外側の値、すなわち、プラス又はマイナス０．１％から１０％の、有効かつ安全な値を示す。したがって、引用した範囲のわずかに外側の組成物も、本願の請求項の範囲に包含される。
【００２０】
「活性成分」は、患者に単独で、又は別の薬剤と組み合わせて投与された場合、患者に生理学的効果を直接的又は間接的に付与する任意の化合物、成分、又は混合物である。活性成分が化合物である場合、塩、遊離の化合物又は塩の溶媒和物（水和物を含む）、結晶及び非結晶形態、並びに化合物の種々の多形が含まれる。化合物は、立体中心、立体中心軸等、例えば、非対称炭素原子のような、１つ以上の非対称元素を含んでいてもよく、これにより、化合物は異なる立体異性体として存在してもよい。これらの化合物は、例えば、ラセミ体、又は光学活性体であってもよい。２つ以上の不斉元素を有する化合物について、これらの化合物は、さらに、ジアステレオマーの混合物であってもよい。不斉中心を有する化合物については、純粋な形態の光学異性体及びそれらの混合物の全てが包含されることを理解すべきである。さらに、炭素−炭素二重結合を有する化合物は、Ｚ型及びＥ型で存在してもよく、化合物のすべての異性体形態が本発明に含まれる。これらの状況では、単一のエナンチオマー、すなわち光学活性体は、不斉合成、光学的に純粋な前駆体からの合成、又はラセミ体の分割によって得ることができる。ラセミ体の分割は、例えば、分割剤の存在下での結晶化、又は例えばキラルＨＰＬＣカラムを用いたクロマトグラフィーのような従来の方法によっても達成することができる。
【００２１】
用語「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」、「含む（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」、及び「含有する（ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ）」は非限定的である。これらの移行句によって請求される実施形態には、他の非引用の要素が存在していてもよい。「含む」、「含有する」、又は「含む」が移行句として使用される場合、他の要素が含まれてもよく、それが依然として請求項の範囲内の実施形態を構成してもよい。開放的な移行句「含む」は、中間的な遷移句「から本質的になる」、及び閉鎖句「からなる」を包含する。
【００２２】
「アルキル」は、特定の数の炭素原子、一般には、１個から約８個の炭素原子を有する、分枝又は直鎖の飽和脂肪族炭化水素基である。本明細書で使用される用語Ｃ１−Ｃ６−アルキルは、１個、２個、３個、４個、５個、又は６個からの炭素原子を有するアルキル基を示す。他の実施形態には、１個から６個の炭素原子、１個から４個の炭素原子、又は１個から２個の炭素原子を有するアルキル基、例えば、Ｃ１−Ｃ８−アルキル、Ｃ１−Ｃ４−アルキル、及びＣ１−Ｃ２−アルキルが含まれる。アルキルの例には、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、３−メチルブチル、ｔ−ブチル、ｎ−ペンチル、及びｓｅｃ−ペンチルが含まれるが、これらに限定されない。
【００２３】
「アリール」は、芳香環又は複数の芳香環に炭素のみを含む芳香族基を示す。典型的なアリール基は、１個から３個の別個の環、縮合環、又はペンダント環を含むとともに、６個から約１８個の環原子を含み、環原子としてヘテロ原子を有さない。指示されている場合、そのようなアリール基は、炭素又は非炭素の原子又は基でさらに置換されていてもよい。アリール基には、例えば、フェニル、ナフチルが含まれ、これらには、１−ナフチル、２−ナフチル、及びビフェニルが含まれる。「アリールアルキル」置換基は、本明細書で定義されているようなアリール基であり、アルキレン連結基を介して置換している基に結合する。アルキレンは、それが２価であることを除いて、本明細書に記載のアルキル基である。
【００２４】
「ボーラス用量」は、短期間、例えば１分から３０分以内に投与される、比較的大用量の薬剤の用量である。
【００２５】
Ｃｍａｘは、最大濃度の点における血漿中の活性濃度の測定濃度である。
【００２６】
「シクロアルキル」は、特定の数の炭素原子を有する飽和炭化水素環基である。単環式シクロアルキル基は、典型的には３個から約８個の炭素環原子、又は３個から６個（３個、４個、５個、又は６個）の炭素環原子を有する。シクロアルキル置換基は、置換された窒素、酸素、又は炭素原子からのペンダントであってもよく、又は２つの置換基を有していてもよい置換炭素原子は、スピロ基として結合したシクロアルキル基を有していてもよい。シクロアルキル基の例には、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、及びシクロヘキシルが含まれる。
【００２７】
「ヘテロアルキル」基は、ヘテロ原子によって置換された少なくとも１の炭素で記載されるようなアルキル基であり、例えば、Ｎ、Ｏ、又はＳである。
【００２８】
「点滴」投与は非経口投与であり、典型的には静脈内投与であるが、一部の実施形態には、硬膜外投与等の他の非経口投与が含まれる。点滴投与は、ボーラス投与よりも長い期間、例えば少なくとも１５分間、少なくとも３０分間、少なくとも１時間、少なくとも２時間、少なくとも３時間、又は少なくとも４時間にわたって生じる。
【００２９】
「患者」は、医学的処置を必要とするヒト又は非ヒト動物である。医学的処置には、障害又は傷害等の既存の状態の処置が含まれる。特定の実施形態では、治療はまた、予防的処置、又は診断的処置を含む。
【００３０】
「医薬組成物」は、式（Ｉ）の化合物又は塩、溶媒和物又は水和物等の、少なくとも１種の活性成分と、担体等の少なくとも１種の他の物質とを含む組成物である。医薬組成物は、１つ以上のさらなる活性成分を含有していてもよい。特定される場合、医薬組成物は、ヒト薬物又は非ヒト薬物の、米国ＦＤＡのＧＭＰ（医薬品適性製造基準）基準を満たす。「薬学的組み合わせ」は、少なくとも２つの活性成分の組み合わせであり、単一投与形態の中で組み合わされてもよいし、発作障害等の障害を治療するために活性成分を一緒に使用するべきとの指示書と共に、別々の投与形態で一緒に提供されてもよい。
【００３１】
ポリビドン及びポリビニルピロリドン（ＰＶＰ）としても知られる「ポビドン」は、モノマーであるＮ−ビニルピロリドンから作られた水溶性ポリマーである。プラスドンＣ−１２及びＣ−１７は、Ｎ−ビニルピロリドンの医薬グレードのホモポリマーである。プラスドンＣ−１２は、１０．２から１３．８のＫ値、及び４０００ｄの公称分子量を有する。プラスドンＣ−１７は、１５．５から１７．５のＫ値、及び１０，０００ｄの公称分子量を有する。
【００３２】
本明細書で使用される「置換された」という用語は、指定された原子又は基上の任意の１以上の水素が、指定された原子の通常の原子価を超えない範囲で、示された基から選択されて置き換えられることを意味する。置換基がオキソ（すなわち＝  Ｏ）である場合、当該原子上の２個の水素が置換される。オキソ基がヘテロ芳香族部分を置換する場合、得られる分子は場合により互変異性体を採用することができる。例えば、２−位又は４−位でオキソにより置換されたピリジル基は、ピリジン又はヒドロキシピリジンとして記載されることもある。置換基及び／又は類似体の組み合わせは、そのような組合せが安定な化合物又は有用な合成中間体をもたらす場合にのみ許容される。安定な化合物又は安定な構造は、反応混合物からの単離及びその後の有効な治療剤への処方に耐えるのに十分に頑強な化合物であることが示唆されることを意味する。特に明記しない限り、置換基はコア構造に向けて命名される。例えば、アミノアルキルは、この置換基のコア構造への結合点がアルキル部分にあることを意味し、アルキルアミノは、結合点がアミノ基の窒素への結合であることを意味する。
【００３３】
「置換された」又は「置換されていてもよい」位置に存在していてもよい適切な基としては、特に限定されないが、例えば、ハロゲン；シアノ；−ＯＨ；オキソ；−ＮＨ２；ニトロ；アジド；アルカノイル（例えば、Ｃ２−Ｃ６アルカノイル基）；Ｃ（Ｏ）ＮＨ２；１個から約８個の炭素原子、又は１個から約６個の炭素原子を有するアルキル基（シクロアルキル及び（シクロアルキル）アルキル基を含む）；１個以上の不飽和結合及び２個から約８個、又は２個から約６個の炭素原子を有する基を含むアルケニル及びアルキニル基；１個以上の酸素連結基及び１個から約８個、又は１個から約６個の炭素原子を有するアルコキシ基；フェノキシのようなアリールオキシ；１個以上のチオエーテル連結基及び１個から約８個の炭素原子、又は１個から約６個の炭素原子を有するものを含むアルキルチオ基；１個以上のスルフィニル連結基及び１個から約８個の炭素原子、又は１個から約６個の炭素原子を有するものを含むアルキルスルフィニル基；１以上のスルホニル連結基及び１個から約８個の炭素原子、又は１個から約６個の炭素原子を有するものを含むアルキルスルホニル基；１個以上のＮ原子及び１個から約８個、又は１個から約６個の炭素原子を有する基を含むアミノアルキル基；１個から約６個の炭素原子を有するアルキル基を有する基を含むモノ−又はジアルキルアミノ基；約１個から約６個の炭素原子のアルキル基を有するモノ−又はジアルキルアミノカルボニル基（すなわち、アルキルＮＨＣＯ−又は（アルキル１）（アルキル２）ＮＣＯ−）；６個以上の炭素を有するアリールである。
【００３４】
「滅菌」とは、試料、製剤、又は製品中の実質的にすべての生物学的汚染物質を不活性化することを意味する。バイオバーデン１００万倍の減少もまた、大部分の医薬用途において「滅菌」と考えられている。
【００３５】
「治療有効量」又は「有効量」は、薬理学的効果を達成するための医薬の量である。「治療有効量」という用語は、例えば、予防有効量を含む。神経ステロイドの「有効量」は、過度の有害な副作用なしに所望の薬理学的効果又は治療的改善を達成するために必要な量である。神経ステロイドの有効量は、特定の患者及び疾患に応じて、当業者によって選択される。「有効量」又は「治療有効量」は、神経ステロイドの代謝の変化、年齢、体重、患者の全身状態、治療される状態、治療される状態の重症度、処方する医師の判断等により、患者によって変化しうるものである。
【００３６】
「治療する」又は「治療」は、障害又は疾患の抑制、例えば障害又は疾患の発症の停止、障害又は疾患の緩和、障害又は疾患の減退の誘起、疾患又は障害によって引き起こされる状態の緩和、又は疾患又は障害の症状の軽減等の、疾患又は障害の任意の治療を意味する。
【００３７】
＜化学的記述＞
本開示は、注射可能なナノ粒子の神経ステロイド製剤を含む。神経ステロイドは、式Ｉの化合物であってもよい。式Ｉは、アロプレグナノロン、ガナキソロン、アルファキサロン、アルファドロン、ヒドロキシジオン、ミナキソロン、プレグナノロン、アセブロコール、又はテトラヒドロコルチコステロンを含む。
【００３８】
ガナキソロン（ＣＡＳ登録番号３８３９８−３２−２、３α−ヒドロキシ，３β−メチル−５α−プレグナン−２０−オン）は、てんかん及び他の中枢神経系の疾患の治療に有用な抗けいれん活性を有する合成ステロイドである。
【００３９】
【化２】
2018530585.tif 000004
【００４０】
ガナキソロンは、経口投与後にヒト血漿中で約２０時間という比較的長い半減期を有する（Ｎｏｈｒｉａ，Ｖ．ａｎｄ  Ｇｉｌｌｅｒ，Ｅ．，Ｎｅｕｒｏｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ，（２００７）４（１）：１０２−１０５）。さらに、ガナキソロンは短いＴｍａｘを有し、これは治療的血中濃度に迅速に到達することを意味する。したがって、初回のボーラス用量（負荷用量）は必要ではない可能性があり、これは他の治療よりも有利な点である。ガナキソロンは、成人及び小児のてんかん患者における発作の治療に有用である。
【００４１】
アロプレグナノロン（ＣＡＳ登録番号５１６−５４−１、３α，５α−テトラヒドロプロゲステロン）は、抗けいれん活性を有する内因性プロゲステロン誘導体である。
【００４２】
【化３】
2018530585.tif 000005
【００４３】
アロプレグナロノンは、ヒト血漿中で約４５分という比較的短い半減期を有する。発作の治療効果に加えて、アロプレグナノロンは、アルツハイマー病、パーキンソン病、ハンチントン病、筋萎縮性側索硬化症等の神経変性疾患の治療、及びニーマン・ピック病Ａ、Ｂ、及びＣ、ゴーシェ病、及びタイ・サックス病のようなコレステロール合成の異常を特徴とするリソソーム蓄積障害の治療について評価されている（米国特許第８６０４０１１号参照。なお、神経障害を処置するためのアロプレグナノロンの使用に関するその教示については参照により本明細書に組み込まれる）。
【００４４】
アルファキサロン（ＣＡＳ登録番号２３９３０−１９−０、３α−ヒドロキシ−５α−プレグナン−１１，２０−ジオン）は、麻酔作用を有する神経ステロイドとして知られている。それは獣医学診療では全身麻酔薬として使用される。麻酔薬は、難治性発作の治療のための抗けいれん薬と組み合わせて頻繁に投与される。アルファキサロンを単独で、又はガナキソロン又はアロプレグナノロンと組み合わせて含む注射可能なナノ粒子神経ステロイド剤形は、本開示の範囲内である。
【００４５】
【化４】
2018530585.tif 000006
【００４６】
アルファドロン（ＣＡＳ登録番号１４１０７−３７−０、３α、２１−ジヒドロキシ−５α−プレグナン−１１，２０−ジオン）は、麻酔性を有する神経ステロイドである。その塩であるアルファドロン酢酸塩は、アルファキサロンと組み合わせて獣医学の麻酔薬として使用される。
【００４７】
【化５】
2018530585.tif 000007
【００４８】
本開示の注射可能なナノ粒子神経ステロイド製剤に使用することができる追加の神経ステロイドには、ヒドロキシジオン（ＣＡＳ登録番号３０３−０１−５、（５β）−２１−ヒドロキシプレグナン−３，２０−ジオン）、ミナキソロン（ＣＡＳ登録番号６２５７１−８７−３、（２β，３α，５α，１１α）−１１−（ジメチルアミノ）−２−エトキシ−３−ヒドロキシプレグナン−２０−オン）、プレグナノロン（ＣＡＳ登録番号１２８−２０−１、（３α，５β）−ｄ−ヒドロキシプレグナン−２０−オン）、レナノロン（ＣＡＳ登録番号５６５−９９−１，３α−ヒドロキシ−５β−プレグナン−１１，２０−ジオン）、又はテトラヒドロコルチコステロン（ＣＡＳ登録番号６８−４２−８、３α，５α−プレグナン−２０−ジオン）が含まれる。
【００４９】
＜ニューロステロイドナノ粒子＞
本開示は、静脈内投与に適した製剤を含む注射可能なナノ粒子製剤に関する。神経ステロイドナノ粒子は、式Ｉの神経ステロイド、表面安定剤、及び界面活性剤を含有する。特定の実施形態において、神経ステロイドは、ガナキソロン又はアロプレグナノロンであり得る。
【００５０】
この開示はまた、神経ステロイドナノ粒子、式Ｉの神経ステロイド、表面安定剤、及び界面活性剤に関する。
【００５１】
本開示は、式Ｉの神経ステロイド、少なくとも１種の表面安定剤、例えばヒドロキシエチルデンプン、デキストラン又はポビドン及び界面活性剤を含む、ナノ粒子を含有する製剤を含む注射可能な神経ステロイドナノ粒子製剤を提供する。特定の実施形態では、ナノ粒子は、ガナキソロン又はアロプレグナノロン、ヒドロキシエチルデンプン、及び界面活性剤を含む。本明細書に開示される注射可能な神経ステロイドナノ粒子製剤は、筋肉内、静脈内、動脈内、髄腔内、皮下及びクモ膜下の注射に適した製剤を含む。注射可能な製剤には、静脈内点滴に適した非経口製剤が含まれる。
【００５２】
多くの神経ステロイドは水に非常に難溶性であり、水性注射剤形として製剤化することは困難である。例えば、ガナキソロンは水にほとんど溶けない（＜０．００１ｍｇ／ｍＬ）。本発明者らは、神経ステロイドを、ナノ粒子として調製することにより（ここでナノ粒子は、ヒドロキシエチルデンプン、デキストラン、又はポビドンのような高分子表面安定剤、及び追加の表面安定剤を含有するものであり、追加の表面安定剤は界面活性剤である）、水性の注射可能懸濁液として製剤化できることを見出した。
【００５３】
注射可能な神経ステロイドナノ粒子製剤は、表面安定剤を含む。特定の実施形態において、表面安定剤は、血液増量剤等の血液代替物である。特定の実施形態において、表面安定剤は、ヒドロキシエチルデンプン、デキストラン、又はポビドンのいずれかである。ヒドロキシエチルデンプンは、重度の失血に苦しむ患者の血液増量剤として使用される。神経ステロイドナノ粒子における使用に適したヒドロキシエチルデンプンの等級には、１３０／０．４（ＣＡＳ登録番号９００５−２７−０）が含まれる。特定の実施形態において、表面安定剤はデキストランである。デキストランは、様々な長さの鎖を有する一本鎖分枝グルカンである。デキストランは、ヒドロキシエチルデンプンと同様に、血液増量剤としても使用される。デキストランは分子量に従って分類される。４０ｋＤから７５ｋＤの分子量を有するデキストランが、血液増量剤として使用されている。静脈内使用に適したデキストランは、デキストラン４０、デキストラン６０、デキストラン７０及びデキストラン７５を含む。特定の実施形態において、表面安定剤は、約４０ｋＤから約７５ｋＤの分子量を有するデキストランである。特定の実施形態において、表面安定剤はデキストラン７０である。ポリビニルピロリドンとしても知られているポビドンは、別の承認された血漿増量剤である。ポビドンには、Ａｓｈｌａｎｄ、Ｉｎｃ．のＰＬＡＳＤＯＮＥ  Ｃ−１２及びＣ−１７が含まれる。
【００５４】
注射可能な神経ステロイドナノ粒子製剤の表面安定剤として有用な他の賦形剤には、ヒト血清アルブミン、加水分解ゼラチン、ポリオキシエチレンヒマシ油、及びポリオキシエチレン水素化ヒマシ油が含まれる。注射可能な神経ステロイドナノ粒子の注射可能な製剤は、界面活性剤を含む。
【００５５】
界面活性剤には、レシチン（リン脂質類）、トリオレイン酸ソルビタン及び他のソルビタンエステル、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル（例えば、モノラウリン酸ポリオキシエチレンソルビタン（ＴＷＥＥＮ  ２０）及びモノオレイン酸ポリオキシエチレンソルビタン（ＴＷＥＥＮ  ８０）（ＩＣＩ  Ｓｐｅｃｉａｌｔｙ  Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ）のような商業的に入手可能なＴＷＥＥＮ）；ポロキサマー（例えば、エチレンオキシドとプロピレンオキシドのブロックコポリマーであるポロキサマー１８８  ＰＬＵＲＯＮＩＣ  Ｆ６８及びポロキサマー３３８（ＰＬＵＲＯＮＩＣ  Ｆ１０８））、レシチン、硫酸コレステロールナトリウム又は他のコレステロール塩、及びデオキシコール酸ナトリウム等の胆汁塩等の化合物を含む。界面活性剤として使用することができる追加の胆汁塩には、コール酸ナトリウム、グリコラートナトリウム、デオキシコール酸の塩、グリコリック酸の塩、ケノデオキシコール酸の塩、及びリトコール酸の塩が含まれる。
【００５６】
本開示は、約５０ｎｍから約２０００ｎｍ、約５０ｎｍから約５００ｎｍ、約１０ｎｍから約３５０ｎｍの重量加重メディアン径を有するか、又は約５０ｎｍから約３００ｎｍのＤ５０を有するか、又は約１００ｎｍから約２５０ｎｍのＤ５０を有するか、又は約１５０ｎｍから約２２０ｎｍのＤ５０を有するか、又は２０００ｎｍ未満、５００ｎｍ未満、３５０ｎｍ未満、３００ｎｍ未満、２５０ｎｍ未満、又は２００ｎｍ未満のＤ５０を有する、神経ステロイドナノ粒子を含む。一態様では、神経ステロイドナノ粒子は、以下の特性の少なくとも１を有する：（ａ）重量で神経ステロイドの９０％超が、約５０ｎｍから約２５０ｎｍの有効サイズを有するサブミクロン粒子の形態であり；（ｂ）神経ステロイドの少なくとも約２０重量％が非晶質粉末の形態であり；（ｃ）少なくとも約５０重量％の神経ステロイドが、単一の多形の結晶性粉末の形態であり；（ｄ）神経ステロイドの少なくとも約５０％が半結晶性粉末の形態であり；（ｅ）神経ステロイドが、粒子の形態であり、ここで、重量で粒子の少なくとも約５０％、又は少なくとも６０％、又は少なくとも７０％、又は少なくとも８０％、又は少なくとも９０％が有効サイズ３００ｎｍ未満であり；（ｆ）神経ステロイドは、粒子の形態であり、重量で粒子の少なくとも約５０％が２５０ｎｍ未満の有効サイズを有し；（ｇ）神経ステロイドは、約５０ｎｍから約２００ｎｍのＤ５０を有する粒子の形態であり、ここで粒径分布は、３スライスモデルによって記載され、ここで、ある百分率は、約１０ｎｍと約１００ｎｍとの間の重量による有効粒径を有し、ある百分率は、約１００ｎｍと約２００ｎｍの間の重量による有効粒径を有し、ある百分率は、２００ｎｍを超える重量による有効粒径を有し、さらに、３スライスモデルはそれぞれｘ％／ｙ％／ｚ％と同定され（例えば、４０％／３０％／３０％）；（ｐ）神経ステロイドは、４０％／３０％／３０％、５０％／３０％／２０％、６０％／３０％／１０％、４０％／４０％／２０％、５０％／４０％／１０％、７０％／２０％／１０％、５０％／４５％／５％、７０％／２５％／５％、６０％／３５％／５％、８０％／１５％／５％、７０％／３０％／０％、６０％／４０％／０％、９０％／１０％／０％及び１００％／０％／０％の群から選択される３スライス分布を有し；（ｈ）神経ステロイドが粒子の形態であり、粒度分布の標準偏差を重量加重平均直径で除算した分布が、約３０％未満、約２５％未満、約２０％未満、約未満１５％、又は約１０％未満である。別の実施形態では、組成物中の神経ステロイドは、前述の特性の少なくとも２つ；前述の特性の少なくとも約３つ；前述の特性の少なくとも約４つ；又は前述の特性の少なくとも５つを有する。
【００５７】
神経ステロイドナノ粒子は、粉砕することによって調製することができる。粉砕は、任意の適切な粉砕ミルで行うことができる。好適なミルには、エアジェットミル、ローラーミル、ボールミル、磨砕ミル、振動ミル、遊星ミル、サンドミル、及びビーズミルが含まれる。小さな粒子が望まれる場合、高エネルギー媒体ミルが好ましい。ミルは回転軸を含んでいてもよい。
【００５８】
粉砕媒体、神経ステロイド、任意の液体分散媒、及び粉砕容器中に存在する分散剤、湿潤剤、又は他の粒子安定化剤の好ましい割合は、広い範囲で変化しうるものであり、例えば、粉砕媒体の大きさ及び密度、選択されたミルのタイプ、粉砕時間等に依存する。このプロセスは、連続、バッチ又はセミバッチモードで実施することができる。高エネルギー媒体ミルでは、粉砕チャンバの体積の８０％から９５％を粉砕媒体で満たすことが望ましい場合がある。一方、ローラーミルでは、粉砕容器を半分まで空気で充填したままにすることがしばしば望ましく、残りの容積は、存在する場合には、粉砕媒体及び液体分散媒体を含む。これは、効率的な研削を可能にするローラ上の容器内のカスケード効果を可能にする。しかしながら、湿式粉砕中に発泡が問題となる場合には、容器に液体分散媒体を完全に充填するか、又は消泡剤を液体分散液に添加してもよい。
【００５９】
磨砕時間は広く変化しうるものであり、第一次的に、薬物、選択された機械的手段及び滞留条件、初期粒径及び所望の最終粒径等に依存する。
【００６０】
磨砕が完了した後、粉砕媒体を、ろ過、メッシュスクリーンによるふるい分け等の従来の分離技術を用いて、（乾燥形態又は液体分散形態のいずれかで）粉砕した神経ステロイド粒状生成物から分離する。
【００６１】
一態様では、粉砕媒体は、０．０５ｍｍから４ｍｍ、好ましくは０．１ｍｍから０．４ｍｍの範囲のサイズを有するビーズを含む。例えば、２５００ＲＰＭでの再循環モードで２５分から１．５時間の粉砕滞留時間のために、イットリウム安定化酸化ジルコニウム０．４ｍｍビーズによる神経ステロイドの高エネルギー粉砕が行われる。別の例では、４２００ＲＰＭの再循環モードで４００分間の粉砕時間の間、プラスチックビーズ（例えば、Ｐｕｒｏｌｉｔｅ（登録商標）Ｐｕｒｏｍｉｌｌ  ３００）を用いた神経ステロイドの高エネルギー粉砕が行われる。別の例では、バッチモードで２時間の粉砕滞留時間の間、０．１ｍｍの酸化ジルコニウムボールを有する神経ステロイドの高エネルギー粉砕が行われる。さらに、懸濁液の粘度が劇的に変化するため、粉砕温度は５０℃を超えるべきではない。粉砕濃度は、約１重量％から約４０重量％の神経ステロイドである。一実施形態では、濃度は２５重量％の神経ステロイドである。一実施形態では、粉砕媒体は、所望の粒子が均一に懸濁するように粘度を調節する少なくとも１種の薬剤と、連続的粉砕モードで均一な供給速度が適用されるように、最初の神経ステロイド懸濁液をコーティングするための湿潤剤及び／又は分散剤を含む。別の実施形態では、粘度を調節するため、及び／又は湿潤効果を提供するために少なくとも１種の薬剤を含む粉砕媒体でバッチ粉砕モードを利用し、これにより神経ステロイドが粉砕媒体中で良好に分散されるようになる。
【００６２】
＜注射可能な神経ステロイドナノ粒子製剤＞
本開示は、約０．２５ｍｇ／ｍＬ、約０．５ｍｇ／ｍＬ、約１．０ｍｇ／ｍＬ、約１．５ｍｇ／ｍＬ、約２．０ｍｇ／ｍＬ、約２．５ｍｇ／ｍＬ、約３．０ｍｇ／ｍＬ、約３．５ｍｇ／ｍＬ、約４．０ｍｇ／ｍＬ、約４．５ｍｇ／ｍＬ、約５．０ｍｇ／ｍＬ、約５．５ｍｇ／ｍＬ、約６．０ｍｇ／ｍＬ、約６．５ｍｇ／ｍＬ、約７．０ｍｇ／ｍＬ、約７．５ｍｇ／ｍＬ、約８．０ｍｇ／ｍＬ、約８．５ｍｇ／ｍＬ、約９．０ｍｇ／ｍＬ、約１０ｍｇ／ｍＬ、約１１ｍｇ／ｍＬ、約１２ｍｇ／ｍＬ、約１３ｍｇ／ｍＬ、又は約１５ｍｇ／ｍＬの濃度の神経ステロイドを含む注射可能な神経ステロイドナノ粒子製剤を提供する。終点としての神経ステロイドの前述の濃度のいずれか２つを含む全ての範囲も本開示に含まれる。例えば、本開示は、約０．５ｍｇ／ｍＬから約１５ｍｇ／ｍＬ、約１．０ｍｇ／ｍＬから約１０ｍｇ／ｍＬ、約２．０ｍｇ／ｍＬから約８．０ｍｇ／ｍＬ、又は約４．０ｍｇ／ｍＬから約８．０ｍｇ／ｍＬの神経ステロイドを含む、神経ステロイドナノ粒子製剤を含む。
【００６３】
ナノ粒子は、神経ステロイド及び表面安定剤、例えばヒドロキシエチルデンプン、ポビドン、又はデキストランのいずれかを含み、表面安定剤に対する神経ステロイドの重量比が約１０：１から０．５：１、又は約５：１から約０．５：１、又は約４：１から約１：１、又は約３．５：１から約３：１、又は約３．３：１である。
【００６４】
本開示は、注射可能な神経ステロイドナノ粒子製剤が緩衝剤をさらに含む実施形態を含む。特定の実施形態では、緩衝液はリン酸緩衝液である。特定の実施形態では、緩衝液はリン酸緩衝食塩水である。
【００６５】
注射可能な神経ステロイドナノ粒子製剤はまた、ｐＨを所望のレベルに調整するための酸性又は塩基性の緩衝剤を含んでいてもよい。いくつかの実施形態では、所望のｐＨは、２．５から１１．０、３．５から９．０、又は５．０から８．０、又は６．０から８．０、又は７．０から７．６、又は約７．４である。注射可能な神経ステロイドナノ粒子製剤に有用な酸緩衝剤の例は、シュウ酸、マレイン酸、フマル酸、乳酸、リンゴ酸、酒石酸、クエン酸、安息香酸、酢酸、メタンスルホン酸、ヒスチジン、コハク酸、トルエンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、エタンスルホン酸等を含む。上記の酸の酸塩も同様に使用することができる。製剤に有用な塩基緩衝剤の例としては、炭酸及び重炭酸塩系（例えば、炭酸ナトリウム及び重炭酸ナトリウム）、及びリン酸緩衝系（例えば、リン酸一水素ナトリウム及びリン酸二水素ナトリウム）を含む。リン酸緩衝系の各成分の濃度は、約１０ｍＭから約２００ｍＭ、又は約２０ｍＭから約１５０ｍＭ、又は約５０ｍＭから約１００ｍＭである。
【００６６】
本開示は、神経ステロイドナノ粒子製剤のｐＨが約７．４である実施形態を含む。
【００６７】
製剤は、ナトリウム又はカリウムのような電解質を含んでもよい。本開示は、製剤が約０．５％から約１．５％の塩化ナトリウム（生理食塩水）である実施形態を含む。
【００６８】
製剤は、ヒト血漿と等張性であるように等張化剤を含有していてもよい。製剤に有用な等張化剤の例としては、デキストロース、マンニトール、塩化ナトリウム、又はグリセリンが挙げられるが、これらに限定されない。特定の実施形態では、等張剤は０．９％塩化ナトリウムである。
【００６９】
注射可能な神経ステロイドナノ粒子製剤は、神経ステロイドと適合性であり、当該剤形のための所望の薬理学的放出プロフィールを提供することができる、任意の医薬的に許容される賦形剤を含んでいてもよい。賦形剤には、例えば、懸濁剤、界面活性剤、可溶化剤、安定剤、潤滑剤、湿潤剤、消泡剤、希釈剤等が含まれる。薬学的に許容される賦形剤は、アカシア、ゼラチン、コロイド状二酸化ケイ素、グリセロリン酸カルシウム、乳酸カルシウム、マルトデキストリン、グリセリン、ケイ酸マグネシウム、ポリビニルピロリドン（ＰＶＰ）、コレステロール、コレステロールエステル、カゼインナトリウム、大豆レシチン、タウロコール酸、ホスファチジルコリン、塩化ナトリウム、リン酸三カルシウム、リン酸二カリウム、セルロース及びセルロース複合体、ステアロイルラクチル酸ナトリウム糖、カラギーナン、モノグリセリド、ジグリセリド、アルファ化デンプン等を含むが、これらに限定されるものではない。
【００７０】
好適な消泡剤としては、ジメチコーン、ミリスチン酸、パルミチン酸、及びシメチコンを挙げることができる。
【００７１】
注射可能な神経ステロイドナノ粒子製剤はまた、エタノール、１以上のポリオール（例えば、グリセロール、プロピレングリコール）、油性担体、又は上記の任意の組み合わせのような非水性希釈剤を含有していてもよい。
【００７２】
注射可能な神経ステロイドナノ粒子製剤は、防腐剤をさらに含んでいてもよい。防腐剤は、細菌の増殖を阻害するために、又は活性成分の劣化を防止するために使用することができる。非傾向の製剤に好適な保存剤は、アスコルビン酸、アセチルシステイン、塩化ベンザルコニウム、塩化ベンゼトニウム、安息香酸、ベンジルアルコール、クロロブタノール、クロルヘキシデン、ｍ−クレゾール、２−エトキシエタノール、ヒト血清アルブミン、モノチオグリセロール、パラベン（メチル、エチル、プロピル、ブチル及び組み合わせ）、フェノール、フェニル水銀塩（酢酸塩、硝酸塩、硼酸塩）、ソルビン酸、亜硫酸塩（重亜硫酸塩及びメタ重亜硫酸塩）、及びチメロサールを含んでいてもよい。特定の実施形態においては、保存剤は、アスコルビン酸、グルタチオン、又はアミノ酸等の抗酸化剤である。抗酸化剤として有用なアミノ酸には、メチオニン、システイン、及びＬ−アルギニンが含まれる。
【００７３】
＜凍結乾燥した神経ステロイドナノ粒子製剤＞
本開示は、本明細書に開示された全ての製剤の凍結乾燥形態を含む。
【００７４】
本開示で提供される注射可能な神経ステロイドナノ粒子製剤は、水性製剤又は凍結乾燥形態を含む粉末製剤であり、これらは水に容易に再懸濁して注射可能な製剤を提供することができる。本開示は、凍結乾燥された神経ステロイド粉末が、神経ステロイド、ヒドロキシエチルデンプン又はデキストラン等の表面安定剤、及び界面活性剤を含む実施形態を含み、注射可能な製剤は、約０．５重量％から約４０重量％の神経ステロイド、約０．５重量％から約２０重量％の神経ステロイド、約０．５重量％から約１０重量％の神経ステロイド、約０．５重量％から約２．０重量％の神経ステロイド、又は約１．０重量％から約１．５重量％の神経ステロイドである。
【００７５】
本開示は、神経ステロイド及び賦形剤、例えばヒドロキシエチルデンプン又はデキストラン、及び場合により界面活性剤を含有する神経ステロイドナノ粒子を含有する注射可能な神経ステロイドナノ粒子製剤を提供する。特定の実施形態において、神経ステロイドナノ粒子製剤は、投与前に水又は水溶液に溶解された凍結乾燥形態である。
【００７６】
凍結乾燥された形態は、さらに、消泡剤、緩衝液（又はｐＨ調整剤）、凍結防止剤、増量剤、等張化剤、又は上記のいずれかの組み合わせを含んでいてもよい。
【００７７】
増量剤は、低濃度の活性成分が存在する、又はこの場合において、低い濃度の包接複合体が存在する、凍結乾燥製剤に有用である。増量剤としては、マンニトール、ラクトース、スクロース、トレハロース、ソルビトール、グルコース、ラフィノース、グリシン、ヒスチジン、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、及びポリビニルピロリドン（ＰＶＰ）を挙げることができる。
【００７８】
凍結乾燥の間の活性成分からの水和シェルの除去は、不安定化を起こす場合がある。特定の実施形態において、凍結乾燥形態は、凍結防止剤として作用する安定剤を含有する。安定剤は、ある時間間隔にわたって製剤の望ましい特性を維持する薬剤を含み、この特性は、実験室環境で試験することができる機械的、化学的、及び温度ストレスを含むが、これに限定されるものではない。そのような特性には、安定した粒径又は均一性が含まれ、その結果、標識された効力と一致した濃度が得られ、純度が維持される。
【００７９】
適切な凍結防止剤安定剤には、スクロース、トレハロース、グルコース、ラフィノース、ラクトース、マンニトール、ソルビトール、ヒスチジン、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、及びポリビニルピロリドン等の糖類、並びに塩化ナトリウムが含まれる。
【００８０】
＜電子線滅菌ナノ粒子製剤＞
電子線滅菌（ｅｂｅａｍ）は、試料の滅菌を行うために、通常は高エネルギーのベータ放射線を使用するプロセスである。驚くべきことに、本開示の注射用ナノ粒子神経ステロイド製剤は、粒度、不純物レベル、又は粘度に影響が及ぶことなく、電子線照射で滅菌することができると決定された。注射可能なナノ粒子神経ステロイド製剤の凍結乾燥粉末はまた、悪影響を受けることなく、電子線照射で滅菌することができる。
【００８１】
本開示のさらなる実施形態は、電子線照射で滅菌された注射可能なナノ粒子神経ステロイド製剤を含む。このような製剤の凍結乾燥粉末又は他の乾燥形態も本開示に含まれる。本開示の注射可能なナノ粒子神経ステロイド製剤は、好ましくは周囲温度で電子線照射を受けることができる。この温度は照射中比較的一定のままである。
【００８２】
電子線放射線は、分散液中の微生物汚染の実質的に全てを破壊するのに十分な量で適用される。分散液が暴露される電子線照射の総量は、（１）電子線照射への暴露後の貯蔵時の粒度のわずかな増加のみを示し、（２）ナノ粒子活性成分の完全性を維持し、（３）電子線照射後の許容可能な不純物濃度を示す、ことが実験的に検証された。電子線放射の適用は、神経ステロイドを有意に劣化させず、又はその効力を低下させない。本開示は、神経ステロイドナノ粒子を傷つけることなく滅菌製品に対するｃＧＭＰ要件を満たす製品を可能にする。
【００８３】
特定の実施形態では、電子線放射は２５ｋＧｒａｙの累積量で照射される。一般に、電子線照射は、通常、５ｋＧｒａｙから５０ｋＧｒａｙ、５ｋＧｒａｙから４０ｋＧｒａｙ、１０ｋＧｒａｙから３０ｋＧｒａｙ、５ｋＧｒａｙから１５ｋＧｒａｙ、又は５ｋＧｒａｙから１０ｋＧｒａｙの範囲で適用される。所望の累積照射量を達成するために、複数回の照射を利用することができる。
【００８４】
破壊されるべき微生物汚染は、一般に、細菌汚染及びマイコプラズマ汚染のものである。
【００８５】
驚くべきことに、滅菌後、注射可能な神経ステロイドナノ粒子製剤は予期せぬ全体的安定性を示し、滅菌前の物理的及び化学的特性を維持しながら、滅菌のｃＧＭＰ要求を満たす。ナノ粒子神経ステロイドの電子線照射された分散液の全体的な安定性は、神経ステロイドナノ粒子の粒度、分解生成物の含有量、及び粘度に関して測定された。注射可能な神経ステロイドナノ粒子製剤の電子線照射が、神経ステロイドナノ粒子の粒度を大きく変化させないことは、特に予期しないことである。これは、滅菌された生成物が凝集物又は大きな結晶を形成する場合には、当該分散液はもはや注射可能な製剤として有用ではないため、重要である。熱滅菌を含む他の滅菌手段は、神経ステロイドナノ粒子の粒度を変えることが分かった。
【００８６】
＜治療方法＞
本開示は、てんかん重積症、難治性てんかん重積症、超難治性てんかん重積症、ＰＣＤＨ１９女児てんかん、及び他の発作障害を治療する方法を含み、当該方法は、有効量の神経ステロイドナノ粒子の注射可能な製剤を、これらの発作障害のいずれかに罹患している患者に投与することを含む。
【００８７】
神経ステロイドナノ粒子の注射可能な製剤で治療できる発作障害には、てんかん重積症、例えば痙攣性のてんかん重積症、例えば、初期てんかん重積症、確立されたてんかん重積症、難治性てんかん重積症、超難治性てんかん重積症、例えば超難治性全身性てんかん重積症；非痙攣性のてんかん重積症、例えば、全身性てんかん重積症、複雑部分てんかん重積症；発作、例えば、急性反復性発作、群発発作、乳児痙攣、レノックス・ガストー症候群、ウエスト症候群、ＰＣＤＨ１９女児てんかん、及び月経てんかんが含まれる。
【００８８】
神経ステロイドナノ粒子の注射可能製剤はまた、低血糖、電解質不均衡、高熱、脳感染（例えば、脳炎、マラリア、髄膜炎、トキソプラズマ症、又はアメーバ感染による脳の感染）、処方薬による有害反応、又はアルコール若しくは薬物の過剰摂取から生じる発作等の誘発性発作を治療するためにも使用され得る。
【００８９】
本開示はまた、生じたばかりの外傷性脳損傷、又は生じたばかりの脳卒中に罹患している患者に有効量の製剤を投与することを含む、外傷性脳損傷及び脳卒中を治療するための神経ステロイドナノ粒子の注射可能な製剤の使用方法をも含む。
【００９０】
本開示は、神経変性障害に起因する発作を治療する方法をさらに含む。そのような神経変性障害には、パーキンソン病、アルツハイマー病、筋萎縮性側索硬化症、及びハンチントン病が含まれる。本開示は、多発性硬化症等の炎症性障害から生じる発作を治療する方法を含む。本開示は、ニーマン・ピック病Ｃ型、テイ・サックス病、バッテン病、サンドホフ及びゴーシェ病を含むリソソーム蓄積障害から生じる発作障害を治療する方法を含む。
【００９１】
治療方法には、神経ステロイドナノ粒子の注射可能な製剤の単回注射を投与すること（ボーラス投与）により、発作、外傷性脳損傷、又は脳卒中を患う患者を治療することが含まれる。単回注射は、筋肉内又は静脈内投与されてもよい。単回注射の用量は、約０．５ｍｇ／ｋｇから約２０ｍｇ／ｋｇ、約２ｍｇ／ｋｇから約１５ｍｇ／ｋｇ、約２ｍｇ／ｋｇから約１０ｍｇ／ｋｇ、又は約２ｍｇ／ｋｇから約８ｍｇ／ｋｇであってもよい。治療方法にはまた、１日から１０日間にわたる神経ステロイドナノ粒子の注射可能な製剤の複数回の注射を投与することも含まれる。注射は１時間から２４時間の間隔で行うことができる。注射可能な神経ステロイドのナノ粒子製剤が、１時間、２時間、４時間、６時間、８時間、１２時間、又は２４時間ごとに注射される投与スケジュールは、本明細書に含まれる。神経ステロイドのナノ粒子注射可能な製剤が１日間、２日間、３日間、４日間、５日間、６日間、７日間、８日間、９日間、又は１０日間注射される投薬スケジュールは、本明細書に含まれる。
【００９２】
治療の方法には、神経ステロイドナノ粒子の注射可能な製剤を上記段落に記載されているように、１日間から１０日間にわたって、１つ以上のボーラス用量で投与し、次いで、神経ステロイドナノ粒子の注射可能な製剤を静脈内点滴することによって、発作、外傷性脳損傷、又は脳卒中に苦しむ患者を治療することが含まれる。特定の実施形態において、ボーラス用量は、約１分から約３０分、約１分から約１５分、約１分から約１０分、又は約１分から約５分、又は約５分の期間にわたって投与され、その後、１時間以内、２時間以内、３時間以内、４時間以内、又は５時間以内に静脈内点滴が開始される。
【００９３】
一部の実施形態において、神経ステロイドナノ粒子の注射可能な製剤は、１日間、２日間、３日間、４日間、５日間、６日間、７日間、８日間、９日間、又は１０日間連続して、上記のボーラス用量の有無にかかわらず、静脈内点滴投与として投与される。点滴投与は、１ｍｇ／ｋｇ／時間、２ｍｇ／ｋｇ／時間、３ｍｇ／ｋｇ／時間、４ｍｇ／ｋｇ／時間、５ｍｇ／ｋｇ／時間、６ｍｇ／ｋｇ／時間、７ｍｇ／ｋｇ／時間、８ｍｇ／ｋｇ／時間、９ｍｇ／ｋｇ／時間、又は１０ｍｇ／ｋｇ／時間の速度で、又は約１ｍｇ／ｋｇ／時間から約１０ｍｇ／ｋｇ／時間、又は２ｍｇ／ｋｇ／時間から約８ｍｇ／ｋｇ／時間の範囲で投与することができる。
【００９４】
いくつかの実施形態では、点滴投与（ボーラス用量を伴うか伴わずに投与される）に、第１のステップのダウン用量、及び場合により第２のステップのダウン用量、場合により第３のステップのダウン点滴用量が続く。一部の実施形態では、第１のステップの用量は、点滴用量の９５％、９０％、８５％、８０％、７５％、７０％、６５％、６０％、５５％、５０％、４５％、４０％、３５％、３０％、２５％、２０％、１５％、１０％、又は５％である。一部の実施形態では、第１のステップの用量は、点滴用量の９５％から５０％、７５％から５０％、８５％から５０％、９０％から５０％、８０％から５０％、又は７５％から１００％である。一実施形態では、第１のステップの用量は、点滴用量の７５％である。一部の実施形態では、第２のステップの用量は、第１のステップのダウン用量の９５％、９０％、８５％、８０％、７５％、７０％、６５％、６０％、５５％、５０％、４５％、４０％、３５％、３０％、２５％、２０％、１５％、１０％、又は５％である。一部の実施形態では、第２のステップの用量は、第１のステップのダウン用量の９５％から３０％、７５％から３０％、８５％から３０％、６０％から３０％、７０％から３０％、５０％から３０％、又は５０％から４０％である。一実施形態では、第２のステップの用量は、点滴用量の５０％である。一部の実施形態では、第３のステップの用量は、９５％、９０％、８５％、８０％、７５％、７０％、６５％、６０％、５５％、５０％、４５％、４０％、３５％、３０％、２５％、２０％、１５％、１０％、又は５％である。一部の実施形態では、第３のステップの用量は、第２のステップのダウン用量の５０％から５％、４０％から５％、３０％から５％、２５％から５％、２５％から１０％、２５％から２０％、又は２５％から４０％である。一実施形態では、第３のステップダウン用量は、点滴用量の２５％である。
【００９５】
本開示は、発作障害を治療する方法を含み、発作障害が、てんかん重積症、難治性てんかん重積症、超難治性てんかん重積症、又はＰＣＤＨ１９女児てんかんであり、有効量の神経ステロイドナノ粒子の注射可能な製剤を患者に投与することを含む発作障害を治療する方法である。
【００９６】
本開示は、有効量の神経ステロイドナノ粒子の注射可能な製剤を患者に投与することを含み、投与される神経ステロイドの量が約１ｍｇ／ｋｇから約２００ｍｇ／ｋｇである、発作障害、脳卒中、又は外傷性脳損傷を治療する方法を含む。
【００９７】
特定の実施形態において、神経ステロイドナノ粒子の注射可能な製剤は、筋肉内又は静脈内に投与される。
【００９８】
本開示は、神経ステロイドナノ粒子の注射可能な製剤が、神経ステロイド製剤の単回ボーラス用量として患者に投与される実施形態を含む。特定の実施形態において、単回ボーラス用量は、患者において約１００ｎｇ／ｍＬから約１０００ｎｇ／ｍＬの神経ステロイドの血漿Ｃｍａｘをもたらすのに十分な量の神経ステロイドを提供する。
【００９９】
本開示は、神経ステロイドナノ粒子の注射可能な製剤がボーラス用量として投与され、ボーラス用量が、患者において約１００ｎｇ／ｍＬから約８００ｎｇ／ｍＬの神経ステロイドの血漿Ｃｍａｘをもたらすのに十分な量の神経ステロイドを提供する実施形態を含む。
【０１００】
本開示は、神経ステロイドナノ粒子製剤がボーラス用量として投与され、ボーラス用量が１０分未満で投与され、Ｃｍａｘが投与完了後１時間以内に生じる実施形態を含む。
【０１０１】
本開示は、神経ステロイドナノ粒子製剤が単回ボーラス用量として投与され、単回ボーラス用量が約０．５ｍｇ／ｋｇから約２０ｍｇ／ｋｇの神経ステロイドを含む実施形態を含む。また、場合により、単回ボーラス用量は、約２ｍｇ／ｋｇから約１５ｍｇ／ｋｇの神経ステロイド、又は約４ｍｇ／ｋｇから約１０ｍｇ／ｋｇの神経ステロイド、又は約１ｍｇ／ｋｇから約３０ｍｇ／ｋｇの神経ステロイドを含む。
【０１０２】
本開示は、神経ステロイドナノ粒子製剤の複数回のボーラス用量を患者に投与する実施形態を含む。特定の実施形態において、複数回のボーラス用量は、１時間から２４時間の間隔で１日間から１０日間にわたってもたらされる。特定の実施形態では、各ボーラス用量は、患者において、約１００ｎｇ／ｍＬから約８０００ｎｇ／ｍＬの神経ステロイドの血漿Ｃｍａｘをもたらすのに十分な量の神経ステロイドを提供する。特定の実施形態では、ボーラス用量の間隔は約１０時間から約２４時間であり、初期Ｃｍａｘに達すると、ボーラス用量の間の任意の時点で、神経ステロイドの血漿濃度は１００ｎｇ／ｍＬを下回らない。特定の実施形態では、ボーラス用量の間隔は２０時間から２４時間であり、一度、初期Ｃｍａｘに到達すると、患者の血漿中の神経ステロイドの濃度が初期Ｃｍａｘの２５％を下回らない。特定の実施形態では、各ボーラス用量は、約１ｍｇ／ｋｇから約２０ｍｇ／ｋｇの神経ステロイドを含む。また、場合により、単回のボーラス用量は、約２ｍｇ／ｋｇから約１５ｍｇ／ｋｇの神経ステロイド、又は約４ｍｇ／ｋｇから約１０ｍｇ／ｋｇの神経ステロイド、又は約１ｍｇ／ｋｇから約３０ｍｇ／ｋｇの神経ステロイドを含む。
【０１０３】
特定の実施形態において、この方法は、初回ボーラス用量の有無にかかわらず、神経ステロイドナノ粒子製剤の患者への点滴投与をすることを含む。特定の実施形態では、点滴は、初回のボーラス用量なしに１ｍｇ／ｋｇ／時間から１０ｍｇ／ｋｇ／時間の速度で１日間から１０日間連続して投与される。
【０１０４】
特定の実施形態では、この方法は、約１ｍｇ／ｋｇから約２０ｍｇ／ｋｇの神経ステロイドを含む神経ステロイドナノ粒子の注射可能な製剤の初回のボーラス用量を投与し、その後２４時間のうちに、１日間から１０日間連続して、１ｍｇ／ｋｇ／時間から１０ｍｇ／ｋｇ／時間の速度で、神経ステロイド製剤の点滴投与をすることを含む。
【０１０５】
特定の実施形態では、本方法は、神経ステロイドナノ粒子の注射可能な製剤の初回ボーラス用量に続いて点滴投与を行うことを含み、初回ボーラス用量は、患者において、約１００ｎｇ／ｍＬから約１０００ｎｇ／ｍＬの神経ステロイドの初期血漿Ｃｍａｘをもたらすのに十分な量の神経ステロイドを提供し、患者の血漿中の神経ステロイドの濃度は、その後の点滴投与が終了するまで、初期Ｃｍａｘの２５％を下回らない。
【０１０６】
特定の実施形態において、この方法は、神経ステロイドナノ粒子の注射可能な製剤の初回ボーラス用量を行うことを含み、初期ボーラス用量は、患者において、約１００ｎｇ／ｍＬから約８０００ｎｇ／ｍＬの神経ステロイドの初期血漿Ｃｍａｘをもたらすのに十分な量の神経ステロイドを提供し、患者は、次いで、患者の血漿中に、Ｃｍａｘの少なくとも４０％の神経ステロイドの濃度をもたらすのに十分な一定の用量で神経ステロイド製剤の点滴を行い、続いて徐々に減少する用量の神経ステロイドの点滴を行うことにより、点滴が完了したときに患者の血漿中の神経ステロイドの濃度がＣｍａｘの２０％未満になるようにする。
【０１０７】
＜併用治療＞
本開示は、神経ステロイドが唯一の活性成分である実施形態、及び神経ステロイドが、１つ又は複数のさらなる活性成分と組み合わせて投与される実施形態を含む。追加の活性成分と組み合わせて使用される場合、神経ステロイド及び追加の活性成分は、同じ製剤中で組み合わせてもよく、又は別々に投与されてもよい。神経ステロイドは、追加の活性成分が投与されている間（同時投与）、又は追加の活性成分が投与される前又は後に投与されてもよい（逐次投与）。
【０１０８】
本開示は、追加の活性成分が抗けいれん剤である実施形態を含む。抗けいれん剤は、ＧＡＢＡＡ受容体モジュレーター、ナトリウムチャネル遮断薬、ＧＡＴ−１  ＧＡＢＡトランスポーターモジュレーター、ＧＡＢＡトランスアミナーゼモジュレーター、電位依存性カルシウムチャネル遮断薬、及びペルオキシソーム増殖因子活性化αモジュレーターを含む。
【０１０９】
本開示は、患者が神経ステロイドと組み合わせて麻酔薬又は鎮静薬を投与される実施形態を含む。麻酔薬又は鎮静薬は、医学的に昏睡を誘発するのに十分な濃度又は全身麻酔を誘導するのに効果的な濃度等、患者に意識を失わせるのに十分な濃度で投与されてもよい。また、麻酔薬又は鎮静薬は、鎮静に有効であるが、意識消失を誘発するには十分ではない、低用量で投与されてもよい。
【０１１０】
医学的に誘発される昏睡は、患者がプロポフォール、ペントバルビタール、又はチオペンタールのような麻酔薬の用量を投与されたときに生じ、一時的な昏睡又は深い無意識の状態を引き起こす。全身麻酔は、手術中の痛みに気づかないようにするために十分な無意識を引き起こす特定の医薬による治療である。医学的に誘導される昏睡又は全身麻酔に使用される薬物には、バルビツール酸塩及び非バルビツール酸塩麻酔薬を含む、吸入麻酔薬及び静脈内麻酔薬が含まれる。
【０１１１】
吸入麻酔薬には、デスフルラン、エンフルラン、塩化エチル、ハロタン、イソフルラン、メトキシフルラン、セボフルラン、及びトリクロロエチレンが含まれる。
【０１１２】
静脈内、非バルビツール酸麻酔薬には、アトラキュリウム、シサトラクリウム、エトジミデート、ケタミン、プロポフォール、及びロクロニウムが含まれる。
【０１１３】
バルビツール酸塩には、アモバルビタール、メトヘキシタール、ペントバルビタール、フェノバルビタール、セコバルビタール、チアミラール、及びチオペンタールが含まれる。
【０１１４】
ベンゾジアゼピン類は抗けいれん薬と麻酔薬の両方として使用されている。麻酔薬として有用なベンゾジアゼピン類には、ジアゼパム、フルニトラゼパム、ロラゼパム、及びミダゾラムが含まれる。
【０１１５】
本開示は、プロポフォールを投与し、神経ステロイドと組み合わせて麻酔を誘発することを含む。プロポフォールは、０．５ｍｇ／ｋｇから５０ｍｇ／ｋｇの用量範囲で投与される。麻酔は、１０ｍｇ／ｋｇから５０ｍｇ／ｋｇの初回のボーラスと、これに続く、麻酔を維持するための追加の断続的ボーラス、又は１０ｍｇ／ｋｇから５０ｍｇ／ｋｇの投与により誘導される。麻酔は、３ｍｇ／ｋｇ／分から１８ｍｇ／ｋｇ／分のプロポフォールの点滴によって維持することもできる。
【０１１６】
本開示は、ペントバルビタールナトリウムを静脈内又は筋肉内注射によって投与して、神経ステロイドと組み合わせて麻酔を誘発することを含む。ペントバルビタールは成人に対して単独の１００ｍｇから５００ｍｇ、又は１００ｍｇから２００ｍｇの筋肉内又は静脈内注射として、又は小児患者に対して単独の２ｍｇ／ｋｇから６ｍｇ／ｋｇの筋肉内又は静脈内注射として投与することができる。てんかん重積症患者において昏睡を誘発するために高用量でペントバルビタールを投与することができ、次いで、難治性発作を治療するためにペントバルビタールと組み合わせて神経ステロイドを投与することができる。昏睡を誘発するために使用されるペントバルビタール用量には、１時間から２時間にわたって投与される５ｍｇ／ｋｇから１５ｍｇ／ｋｇ又は１０ｍｇ／ｋｇから３５ｍｇ／ｋｇの負荷用量、続いて１ｍｇ／ｋｇ／時間から５ｍｇ／ｋｇ／時間で１２時間から４８時間の維持用量、発作が止まった場合には、１２時間ごとの０．２５ｍｇ／ｋｇ／時間から０．５ｍｇ／ｋｇ／時間ずつの漸減が含まれる。
【０１１７】
本開示は、神経ステロイドと組み合わせてチオペンタールナトリウムを投与することを含む。チオペンタールは３ｍｇ／ｋｇから５ｍｇ／ｋｇのボーラスとして投与され、続いて発作が止まるまで３分から５分ごとに１ｍｇ／ｋｇから２ｍｇ／ｋｇの追加ボーラスが最大総用量１０ｍｇ／ｋｇまで投与されてもよい。チオペンタールの最大ボーラス用量１０ｍｇ／ｋｇに達した後、チオペンタールを３ｍｇ／ｋｇ／時間から５ｍｇ／ｋｇ／時間で点滴してもよい。
【０１１８】
本開示は、ミダゾラムを神経ステロイドと組み合わせて投与することを含む。ミダゾラムは、０．５ｍｇ／ｋｇから５ｍｇ／ｋｇの負荷用量、続いて１μｇ／ｋｇ／時間から５μｇ／ｋｇ／時間の点滴として投与することができる。
【０１１９】
昏睡、麻酔又は鎮静を誘発するために追加の活性成分が投与される各実施形態において、神経ステロイドは、神経ステロイドナノ粒子の注射可能な製剤として投与され、追加の活性成分と同時又は逐次的に投与され、神経ステロイドの投与のための本明細書に記載の投薬計画のうちのいずれかにしたがって投与される。
【０１２０】
本開示の神経ステロイドナノ粒子の注射可能な製剤は、別の抗けいれん薬とともに投与されてもよい。抗けいれん薬は、いくつかの薬物クラスを含み、神経ステロイドと組み合わせて使用することができる、昏睡導入薬、麻酔薬、及び鎮静薬と、ある程度重複する。本開示の神経ステロイドナノ粒子の注射可能な製剤と組み合わせて使用できる抗けいれん薬には、アルデヒド、例えばパラアルデヒド；芳香族アリルアルコール、例えば、スチリペントール；上記のものを含むバルビツール酸塩、並びにメチルフェノバルビタール及びバルベキサクロン；ベンゾジアゼピン類は、アルプラゾラム、ブレタゼニル、ブロマゼパム、ブロティゾラム、クロルジアゼポキシド、シノラゼパム、クロナゼパム、クロラゼプ酸、クロパザム、クロチアゼパム、クロキサゾラム、デロラゼパム、ジアゼパム、エスタゾラム、エチゾラム、エチルロフラゼパート、フルニトラゼパム、フルラゼパム、フルトパラセパム、ハラゼパム、ケタゾラム、ロプラゾラム、ロラゼパム、ロルメタゼパム、メダゼパム、ミダゾラム、ニメタゼパム、ニトラゼパム、ノルダゼパム、オキサゼパム、フェナゼアパム、ピナゼパム、プラゼパム、プレマゼパム、ピラゾラム、クアゼパム、テマゼパム、タトラゼパム、及びトリアゾラムを含み；臭化カリウムのような臭化物；カルバマゼピン、オキシカルバゼピン、及び酢酸エスリカルバゼピン等のカルボキサミド；バルプロ酸、バルプロ酸ナトリウム及びジバルプロエックスナトリウムのような脂肪酸；トピラマートのようなフルクトース誘導体；ガバペンチン及びプレガバリン等のＧＡＢＡ類似体、エトトイン、フェニトイン、メフェニトイン、及びフォスフェニトイン等のヒダントイン；アロプレグナノロン等の他の神経ステロイド、パラメタジオン、トリメタジオン及びエタジオン等のオキサソリジンジオン、ベクルアミド等のプロピオン酸塩、ピリミドン等のピリミジンジオン類、ブリバラセタム、レベチラセタム及びセレトラセタム等のピロリジン類、エトスクシミド、ペンズキシミド及びメスキシミド等のスクシンイミド類；アセトアゾロアミド、スルタイム、メタゾラミド及びゾニサミド等のスルホンアミド類；ラモトリジンのようなトリアジン類、フェネトウリド及びフェナセミドのような尿素；フェルバメート等のＮＭＤＡアンタゴニスト、及びバルプロミド及びバルノクタミド等のバルプロイルアミド；並びにペラムパネルが含まれる。
【０１２１】
＜特定の実施形態＞
本開示は、以下の実施例によりさらに説明される以下の特定の実施形態を提供する。
【０１２２】
（１）２０００ｎｍ未満のＤ５０を有するナノ粒子を含む注射可能な神経ステロイド製剤であって、前記ナノ粒子が以下のものを含む、神経ステロイド製剤。
ａ）式Ｉの神経ステロイド：
【０１２３】
【化６】
2018530585.tif 000008
【０１２４】
又はその薬学的に許容可能な塩であり、ここで：
ＸはＯ、Ｓ、又はＮＲ１０であり；
Ｒ１は、水素、ヒドロキシル、置換されていてもよいアルキル、置換されていてもよいヘテロアルキル、置換されていてもよいアリール、又は置換されていてもよいアリールアルキルであり；
Ｒ４は、水素、ヒドロキシル、オキソ、置換されていてもよいアルキル、又は置換されていてもよいヘテロアルキルであり、
Ｒ２、Ｒ３、Ｒ５、Ｒ６及びＲ７は、それぞれ独立して、水素、ヒドロキシル、ハロゲン、置換されていてもよいアルキル、又は置換されていてもよいヘテロアルキルであり；
Ｒ８は水素又はアルキルであり、Ｒ９はヒドロキシルであり；又は
Ｒ８及びＲ９は一緒になってオキソ基を形成し；
Ｒ１０は、水素、ヒドロキシル、置換されていてもよいアルキル、置換されていてもよいヘテロアルキル、置換されていてもよいアリール、又は置換されていてもよいアリールアルキルであり、
各アルキルは、Ｃ１−Ｃ１０アルキル、Ｃ３−Ｃ６シクロアルキル、（Ｃ３−Ｃ６シクロアルキル）Ｃ１−Ｃ４アルキルであり、二重結合又は三重結合で置換された単結合を含んでいてもよく；
各ヘテロアルキル基は、１以上のメチル基が独立して選択される−Ｏ−、−Ｓ−、−Ｎ（Ｒ１０）−、−Ｓ（＝Ｏ）−、又はＳ（＝Ｏ）２−で置換されたアルキル基であり、Ｒ１０は、１以上のメチレン基が−Ｏ−、−Ｓ−、−ＮＨ−又はＮ−アルキルで置換されたアルキルであり；並びに（ｂ）少なくとも１種の表面安定剤。
【０１２５】
（２）ＸはＯであり；
Ｒ１はヒドロキシルで置換されていてもよいＣ１−Ｃ２アルキルであり；
Ｒ２及びＲ５はメチルであり；
Ｒ３及びＲ６は水素であり；
Ｒ４は、水素、Ｃ１−Ｃ２アルキル、モノ又はジ−Ｃ１−Ｃ２アルキルアミノ、又はオキソであり；
Ｒ７は、水素、Ｃ１−Ｃ２アルキル、又はＣ１−Ｃ２アルコキシであり；及び
Ｒ８は、水素又はメチルであり、Ｒ９はヒドロキシルであり；又はＲ８及びＲ９は一緒になってオキソ基を形成する、特定の実施形態１に記載の注射可能な神経ステロイド製剤。
【０１２６】
（３）Ｒ４は水素又はオキソであり；並びにＲ８は水素又はメチルであり、及びＲ９はヒドロキシルである、特定の実施形態２に記載の注射可能な神経ステロイド製剤。
【０１２７】
（４）上記製剤が静脈内製剤である、特定の実施形態１から３のいずれかに記載の注射可能な神経ステロイド製剤。上記製剤が筋肉内製剤である、特定の実施形態１から３のいずれかに記載の注射可能な神経ステロイド製剤。上記製剤が皮下製剤である、特定の実施形態１から３のいずれかに記載の注射可能な神経ステロイド製剤。
【０１２８】
（５）神経ステロイドがアロプレグナノロン、ガナキソロン、アルファキサロン、アルファドロン、ヒドロキシジオン、ミナキソロン、プレグナノロン、又はテトラヒドロコルチコステロンである、特定の実施形態１から４の注射可能な神経ステロイド製剤。
【０１２９】
（６）神経ステロイドがガナキソロン又はアロプレグナノロンである、特定の実施形態５に記載の注射可能な神経ステロイド製剤。
【０１３０】
（７）神経ステロイドがガナキソロンである、特定の実施形態６に記載の注射可能な神経ステロイド製剤。
【０１３１】
（８）神経ステロイドがアロプレグナロロンである、特定の実施形態６に記載の注射可能な神経ステロイド製剤。
【０１３２】
（９）ナノ粒子が５００ｎｍ未満のＤ５０を有する、特定の実施形態１から８のいずれかに記載の注射可能な神経ステロイド製剤。
【０１３３】
（１０）ナノ粒子が５００ｎｍ未満のＤ９０を有する、特定の実施形態９に記載の注射可能な神経ステロイド製剤。
【０１３４】
（１１）ナノ粒子が１０ｎｍから３００ｎｍのＤ５０を有する、特定の実施形態９に記載の注射可能な神経ステロイド製剤。
【０１３５】
（１２）少なくとも１種の表面安定剤が高分子表面安定剤である、特定の実施形態１から１１のいずれかに記載の注射可能な神経ステロイド製剤。
【０１３６】
（１３）高分子表面安定剤が、ヒドロキシエチルデンプン、デキストラン、ポビドン、又は上記のいずれかの混合物である、特定の実施形態１２に記載の注射可能な神経ステロイド製剤。
【０１３７】
（１４）表面安定剤がヒドロキシエチルデンプンである、特定の実施形態１３に記載の注射可能な神経ステロイド製剤（例えば、ヒドロキシエチルデンプン１３０／０．４）。
【０１３８】
（１５）表面安定剤が、４０ｋＤから７５ｋＤの平均分子量を有するデキストランである、特定の実施形態１３に記載の注射可能な神経ステロイド製剤。
【０１３９】
（１６）デキストランがデキストラン７０である、特定の実施形態１５に記載の注射可能な神経ステロイド製剤。
【０１４０】
（１７）表面安定剤がポビドンである、特定の実施形態１３に記載の注射可能な神経ステロイド製剤（例えば、プラスドンＣ−１２又はプラスドンＣ−１７）。
【０１４１】
（１８）製剤が追加の表面安定剤を含み、追加の表面安定剤がイオン性界面活性剤又は非イオン性界面活性剤である、特定の実施形態１から１７のいずれかに記載の注射可能な神経ステロイド製剤。
【０１４２】
（１９）界面活性剤が、コール酸ナトリウム、デオキシコール酸ナトリウム、硫酸コレステロールナトリウム、又は上記のいずれかの混合物である、特定の実施形態１８に記載の注射可能な神経ステロイド製剤。
【０１４３】
（２０）界面活性剤がデオキシコール酸ナトリウムである、特定の実施形態１９に記載の注射可能な神経ステロイド製剤。
【０１４４】
（２１）製剤が消泡剤をさらに含む、特定の実施形態１から２０のいずれかに記載の注射可能な神経ステロイド製剤。
【０１４５】
（２２）消泡剤がシメチコンである、特定の実施形態２１に記載の注射可能な神経ステロイド製剤。
【０１４６】
（２３）凍結防止剤をさらに含む、特定の実施形態１から２２のいずれかに記載の注射可能な神経ステロイド製剤。
【０１４７】
（２４）凍結防止剤が、ショ糖、デキストロース、ラクトース、Ｄ−ソルビトール、又は上記のいずれかの混合物である、特定の実施形態２３に記載の注射可能な神経ステロイド製剤。
【０１４８】
（２５）凍結防止剤がスクロースである、特定の実施形態２４に記載の注射可能な神経ステロイド製剤。
【０１４９】
（２６）製剤が０．５％から１．５％の塩化ナトリウム（重量％）をさらに含む、特定の実施形態１から２５のいずれかに記載の注射可能な神経ステロイド製剤。
【０１５０】
（２７）製剤が約０．９％の塩化ナトリウムを含む、特定の実施形態２７に記載の注射可能な神経ステロイド製剤。
【０１５１】
（２８）緩衝剤をさらに含む、特定の実施形態１から２７のいずれかに記載の注射可能な神経ステロイド製剤。
【０１５２】
（２９）緩衝液がリン酸緩衝液である、特定の実施態様２８に記載の注射可能な神経ステロイド製剤。
【０１５３】
（３０）緩衝液がリン酸緩衝生理食塩水である、特定の実施形態２９に記載の注射可能な神経ステロイド製剤。
【０１５４】
（３１）保存剤をさらに含む、特定の実施形態１から３０のいずれかに記載の注射可能な神経ステロイド製剤。
【０１５５】
（３２）防腐剤がベンジルアルコール、クロロブタノール、２−エトキシエタノール、パラベン（メチル、エチル、プロピル、ブチル、及び組み合わせを含む）、安息香酸、ソルビン酸、クロルヘキシデン、フェノール、３−クレゾール、チメロサール、フェニル水銀塩、又は上記のいずれかの混合物である、特定の実施形態３１に記載の注射可能な神経ステロイド製剤。
【０１５６】
（３３）上記実施形態のいずれかに記載の注射可能な神経ステロイド製剤であって、
神経ステロイドは、ガナキソロン又はアロプレグナノロンであり、
少なくとも１種の表面安定剤は、ヒドロキシエチルデンプン、デキストラン、ポビドン、又は上記の混合物から選択される高分子表面安定剤であり、及び
上記製剤は追加の表面安定剤を含み、上記追加の表面安定剤は、デオキシコール酸ナトリウム又は硫酸コレステロールナトリウムから選択される界面活性剤であり、表面安定剤に対する神経ステロイドの（重量：重量）比が約１０：１から約１：１である、特定の実施形態１３に記載の注射可能な神経ステロイド製剤。
【０１５７】
（３４）神経ステロイド対高分子表面安定剤の（重量：重量）比が約４：１から約３：１である、特定の実施形態３３に記載の注射可能な神経ステロイド製剤。
【０１５８】
（３５）神経ステロイド対高分子表面安定剤の（重量：重量）比が約３．３：１である、特定の実施形態３４に記載の注射可能な神経ステロイド製剤。
【０１５９】
（３６）神経ステロイド対界面活性剤の比（重量：重量）が約１０：１．５から約１０：０．１である、特定の実施形態１から３５のいずれかに記載の注射可能な神経ステロイド製剤。
【０１６０】
（３７）神経ステロイド対凍結防止剤の比（重量：重量）が４：１から１：４である、特定の実施形態２３から３６のいずれかに記載の注射可能な神経ステロイド製剤。
【０１６１】
（３８）製剤が凍結乾燥粉末の形態である、特定の実施形態１から３７のいずれかに記載の注射可能な神経ステロイド製剤。
【０１６２】
（３９）製剤が水性懸濁液であり、神経ステロイドの濃度が約０．１ｍｇ／ｍＬから約３００ｍｇ／ｍＬである、特定の実施形態１から３７のいずれかに記載の注射可能な神経ステロイド製剤。
【０１６３】
（４０）神経ステロイドの重量百分率が約０．１％から約３０％であり、神経ステロイドがガナキソロン又はアロプレグナノロンである、特定の実施形態１から３７又は３９のいずれかに記載の注射可能な神経ステロイド製剤。
【０１６４】
（４１）ガナキソロン又はアロプレグナノロンの重量百分率が約０．５％から約２．０％である、特定の実施形態４０に記載の注射可能な神経ステロイド製剤。
【０１６５】
（４２）製剤中の凍結防止剤の重量百分率が約５％から約６０％である、特定の実施形態２３から４２のいずれかに記載の注射可能な神経ステロイド製剤。
【０１６６】
（４３）製剤中の凍結防止剤の重量百分率が約１０％から約４０％である、特定の実施形態４２の注射可能な神経ステロイド製剤。
【０１６７】
（４４）約２．５から１１．０の範囲のｐＨを有する、特定の実施形態１から４３のいずれかに記載の注射可能な神経ステロイド製剤。
【０１６８】
（４５）約７．０から約７．６のｐＨを有する、特定の実施形態４４に記載の注射可能な神経ステロイド製剤。
【０１６９】
（４６）製剤が以下を含む水性製剤である、特定の実施形態１に記載の注射可能な神経ステロイド製剤。
（ａ）５００ｎｍ未満のＤ５０を有するナノ粒子であって、ナノ粒子ガナキソロンを含み、ここで、ガナキソロンの重量百分率が１％から１０％である、ナノ粒子；
（ｂ）高分子表面安定剤が、ヒドロキシエチルデンプン、デキストラン、ポビドン、又は上記のいずれかの混合物であり、ここで、高分子表面安定剤の重量百分率は２％から２０％である、
（ｃ）付加的な表面安定剤であって、ここで、上記付加的な表面安定剤は、コール酸ナトリウム、デオキシコール酸ナトリウム、コレステロール硫酸ナトリウムから選択されるイオン性界面活性剤又は非イオン性界面活性剤であり、界面活性剤の重量百分率は０．１％から２．０％である、及び
（ｄ）消泡剤。
【０１７０】
（４７）製剤が以下を含む水性製剤である、特定の実施形態１に記載の注射可能な神経ステロイド製剤。
（ａ）５００ｎｍ未満のＤ５０を有するナノ粒子であって、ナノ粒子がガナキソロンを含み、ガナキソロンの重量百分率が約５％であるナノ粒子；
（ｂ）ヒドロキシエチルデンプン１３０／０．４又はプラスドンＣ−１２から選択される高分子表面安定剤であって、高分子表面安定剤の重量百分率が約１０％である高分子表面安定剤；
（ｃ）付加的な表面安定剤がデオキシコール酸ナトリウムであり、デオキシコール酸ナトリウムの重量百分率が約０．７５％である付加的な表面安定剤；そして
（ｄ）メチチシコンの重量百分率が０．００９％であるシメチコン。
【０１７１】
（４８）特定の実施形態１から４７のいずれかに記載の注射可能な神経ステロイドナノ粒子製剤を滅菌する方法であって、製剤を電子線照射に曝す工程を含み、方法が、０．２ｗ／ｗ％以下の神経ステロイドの分解濃度を含む、滅菌済み神経ステロイドナノ粒子製剤を製造する、注射可能な神経ステロイドナノ粒子製剤を滅菌する方法。
【０１７２】
（４９）上記製剤が、電子線照射によって滅菌され、上記製剤が上記神経ステロイドの０．２％ｗ／ｗ以下の分解物濃度を含む、特定の実施形態１から４７のいずれかに記載の注射可能な神経ステロイド製剤。
【０１７３】
（５０）上記電子線照射は、約２５ｋＧｒａｙの累積線量である、特定の実施形態４９に記載の注射可能な神経ステロイド製剤。
【０１７４】
（５１）上記電子線照射は、５ｋＧｒａｙから５０ｋＧｒａｙ、５ｋＧｒａｙから３０ｋＧｒａｙ、５ｋＧｒａｙから２５ｋＧｒａｙ、５ｋＧｒａｙから２０ｋＧｒａｙ、５ｋＧｒａｙから１５ｋＧｒａｙ、及び５ｋＧｒａｙから１５ｋＧｒａｙの中から選択される線量である、特定の実施形態５０に記載の注射可能な神経ステロイド製剤。
【０１７５】
（５２）注射可能なガナキソロンナノ粒子製剤であって、
（ａ）２０００ｎｍ以下のＤ５０を有するガナキソロンナノ粒子、及び（ｂ）少なくとも１種の表面安定剤を含み；
同一の有効成分含量の注射可能な非粒子状のガナキソロン製剤との比較薬物動態試験において、ナノ粒子製剤が、非粒子状のガナキソロン製剤よりも大きなＣｍａｘを示す、注射可能なガナキソロンナノ粒子製剤。
【０１７６】
（５３）以下を含む注射可能なガナキソロンナノ粒子製剤であって、
（ａ）２０００ｎｍ以下のＤ５０を有するガナキソロンナノ粒子、及び（ｂ）少なくとも１種の表面安定剤；
ここで、同一の有効成分含量の注射可能な非粒子状ガナキソロン製剤との比較薬物動態試験において、ナノ粒子製剤が、非粒子状ガナキソロン製剤よりも大きな脳ＡＵＣ６時間を示す、注射可能なガナキソロンナノ粒子製剤。
【０１７７】
（５４）以下を含む、注射可能なガナキソロンナノ粒子製剤：
（ａ）２０００ｎｍ以下のＤ５０を有するガナキソロンナノ粒子、及び（ｂ）少なくとも１種の表面安定剤；
同一の有効成分含量の注射可能な非粒子状ガナキソロン製剤との比較薬物動態試験において、ナノ粒子製剤は、投与後１５分から１００分のいずれの時点においても、投与後に同時に現れる非粒子状ガナキソロン製剤よりも大きな脳濃度を示す、注射可能なガナキソロンナノ粒子製剤。
【０１７８】
（５５）発作障害、脳卒中、又は外傷性脳損傷を有する患者を治療する方法であって、上記特定の実施形態のいずれかの、治療上有効量の注射可能な神経ステロイド製剤を投与することを含む方法。
【０１７９】
（５６）発作障害が、てんかん重積症、難治性てんかん重積症、超難治性てんかん重積症、又はＰＣＤＨ１９女児てんかんである、特定の実施形態５５に記載の方法。
【０１８０】
（５７）神経ステロイドがガナキソロン又はアロプレグナノロンであり、投与される神経ステロイドの用量が約１ｍｇ／ｋｇから約２００ｍｇ／ｋｇである、特定の実施形態５５又は５６に記載の方法。
【０１８１】
（５８）神経ステロイドがガナキソロンである、特定の実施形態５５から５７のいずれかの特定の実施形態の方法。
【０１８２】
（５９）製剤が静脈内投与される特定の実施形態５５から５８のいずれかに記載の方法。製剤が筋肉内投与される、特定の実施形態５５から５８のいずれかに記載の方法。
【０１８３】
（６０）製剤の単回ボーラス用量を患者に投与することを含む、特定の実施形態５９に記載の方法。
【０１８４】
（６１）単回ボーラス用量が、患者において、少なくとも１０００ｎｇ／ｍＬのガナキソロンの血漿Ｃｍａｘをもたらすのに十分な量のガナキソロンを提供する特定の実施形態６０に記載の方法。
【０１８５】
（６２）ボーラス用量が、患者において約１０００ｎｇ／ｍＬから約６０００ｎｇ／ｍＬのガナキソロンの血漿Ｃｍａｘをもたらすのに十分な量のガナキソロンを提供する、特定の実施形態６１に記載の方法。
【０１８６】
（６３）ボーラス用量が１０分未満で投与され、Ｃｍａｘが投与の完了後１時間以内に生じる、特定の実施形態６０又は６１に記載の方法。
【０１８７】
（６４）単回のボーラス用量が、約１ｍｇ／ｋｇから約２０ｍｇ／ｋｇのガナキソロンを含む、特定の実施形態６０から６３のいずれかに記載の方法。
【０１８８】
（６５）ガナキソロン製剤の複数のボーラス用量を患者に投与することを含む、特定の実施形態５５から５９のいずれかに記載の方法。
【０１８９】
（６６）複数のボーラス用量が１時間から２４時間の間隔で１日間から１０日間にわたって与えられる、特定の実施形態６５に記載の方法。
【０１９０】
（６７）各ボーラス用量が、患者において少なくとも１０００ｎｇ／ｍＬのガナキソロン血漿Ｃｍａｘを生成するのに十分な量のガナキソロンを提供する、特定の実施形態６５に記載の方法。
【０１９１】
（６８）ボーラス用量の間隔が約１０時間から約２４時間であり、一旦初期Ｃｍａｘに達すると、ボーラス用量の間の任意の時点で、ガナキソロンの血漿濃度が１００ｎｇ／ｍＬ以上である、特定の実施形態６５に記載の方法。
【０１９２】
（６８）ボーラス用量の間隔が約１０時間から約２４時間であり、一旦初期Ｃｍａｘに達すると、ボーラス用量の間の任意の時点で、ガナキソロンの血漿濃度が１００ｎｇ／ｍＬ以上である、特定の実施形態６５に記載の方法。
【０１９３】
（６９）ボーラス用量の間隔が約２０時間から約２４時間であり、一旦初期Ｃｍａｘに到達すると、患者の血漿中のガナキソロンの濃度が、ボーラス用量の間の任意の時間において、最初のＣｍａｘの２５％未満に低下しない、特定の実施形態６５に記載の方法。
【０１９４】
（７０）各ボーラス用量が、約１ｍｇ／ｋｇから約２０ｍｇ／ｋｇのガナキソロンを含む、特定の実施形態６５から６９のいずれかに記載の方法。
【０１９５】
（７１）初回のボーラス用量の有無にかかわらず、ガナキソロン製剤の静脈内点滴を患者に投与することを含む、特定の実施形態５５から５９のいずれか１つの方法。
【０１９６】
（７２）初回のボーラス用量なしに、１ｍｇ／ｋｇ／時間から１０ｍｇ／ｋｇ／時間の速度で、１日間から１０日間連続して静脈内点滴を投与することを含む、特定の実施形態７１に記載の方法。
【０１９７】
（７３）約１ｍｇ／ｋｇから約２０ｍｇ／ｋｇのガナキソロンの初回ボーラス用量を投与し、続いて２４時間以内にガナキソロン製剤の静脈内点滴を、１ｍｇ／ｋｇ／時間から１０ｍｇ／ｋｇ／時間の速度で１日間から１０日間、連続して投与する、特定の実施形態７２に記載の方法。
【０１９８】
（７４）初回のボーラス用量が、患者において少なくとも１０００ｎｇ／ｍＬのガナキソロンの初期血漿Ｃｍａｘを提供するのに十分な量のガナキソロンを提供し、患者の血漿中のガナキソロンの濃度が、点滴が完了するまで、初期Ｃｍａｘの２５％未満に低下しない、特定の実施形態７３に記載の方法。
【０１９９】
（７５）初回のボーラス用量が、患者において約１００ｎｇ／ｍＬから約８０００ｎｇ／ｍＬのガナキソロンの初期血漿Ｃｍａｘを提供するのに十分な量のガナキソロンを提供し、患者は、次いで、少なくとも４０％のＣｍａｘの患者の血漿中のガナキソロンの濃度を提供するのに十分な一定用量のガナキソロン製剤の静脈内点滴を投与され、続いて徐々に減少する用量でのガナキソロン製剤の静脈内注入により、静脈内点滴が完了したとき、患者の血漿中のガナキソロンの濃度はＣｍａｘの２０％未満である、特定の実施形態７３の方法。
【０２００】
（７６）ガナキソロン製剤が第１の活性成分であり、少なくとも１種のさらなる活性成分と同時に又は連続的に投与される、特定の実施形態５５から７５のいずれかの方法。
【０２０１】
（７７）前記少なくとも１種のさらなる活性成分が、抗けいれん薬又は麻酔薬／鎮静薬である、特定の実施形態７６に記載の方法。
【０２０２】
（７８）前記少なくとも１種のさらなる活性成分が、ＧＡＢＡＡ受容体モジュレーター、ナトリウムチャネル遮断薬、ＧＡＴ−１  ＧＡＢＡトランスポーターモジュレーター、ＧＡＢＡトランスアミナーゼモジュレーター、電位依存性カルシウムチャネル拮抗薬、及びペルオキシソーム増殖因子活性化αモジュレーターから選択される抗けいれん薬である、特定の実施形態７７に記載の方法。
【０２０３】
（７９）前記少なくとも１種の追加の活性成分が、吸入麻酔薬（デスフルラン、エンフルラン、塩化エチル、ハロタン、イソフルラン、メトキシフルラン、セボフルラン、及びトリクロロエチレンを含む）、静脈内投与用の非バルビツール酸塩麻酔薬（アトラキュリウム、シスアトラキュリウム、エトディミテート、ケタミン、プロポフォール、及びロクロニウムを含む）バルビツール酸塩麻酔薬（アモバルビタール、メトヘキシタール、ペントバルビタール、フェノバルビタール、セコバルビタール、チアミラール、及びチオペンタールを含む）、及びベンゾジアゼピン麻酔薬（ジアゼパム、フルニトラゼパム、ロラゼパム、及びミダゾラム）から選ばれる麻酔剤／鎮静剤である、特定の実施形態７７に記載の方法。
【０２０４】
（８０）追加の活性成分が麻酔薬／鎮静薬であり、患者に昏睡を誘発するのに十分な用量の麻酔薬／鎮静薬を投与する、特定の実施態様７９に記載の方法。
【０２０５】
（８１）追加の活性成分がバルビツール酸塩である、特定の実施形態８０に記載の方法。
【０２０６】
（８２）さらなる活性成分がペントバルビタール又はチオペンタールである、特定の実施形態８１に記載の方法。
【０２０７】
（８３）追加の活性成分がプロポフォールである、特定の実施形態７９に記載の方法。
【０２０８】
（８４）第１の追加の活性成分が抗けいれん薬であり、第２の追加の活性成分が麻酔薬／鎮静薬である、特定の実施形態７６に記載の方法。
【０２０９】
（８５）抗けいれん薬が、カルバマゼピン、チアガビン、レベチラセタム、ラモトリジン、プレガバリン、ガバペンチン、又はフェニトインであり、麻酔薬／鎮静薬がペントバルビタール、チオペンタール、又はプロポフォールである、特定の実施形態８４に記載の方法。
【実施例】
【０２１０】
＜略称＞
ＡＬＬＯ  アロプレグナノロン
ＧＮＸ    ガナキソロン
ＨＥＳ    ヒドロキシエチルデンプン
【０２１１】
実施例１：ビーズミル粉砕によるガナキソロンナノ懸濁液（１０％ＷＴ）の調製
０．３ｍｍ  ＹＴＺビーズ（イットリウム安定化粉砕媒体、トーソー株式会社、日本、ＺｒＯ２  ＋  ＨｆＯ２（９５重量％（重量％）、Ｙ２Ｏ２（５重量％））を有するＮｅｔｚｓｃｈミル（ミンサー）を用いて、ガナキソロン（２５ｇ）、ヒドロキシエチルデンプン（７．５ｇ）、デオキシコール酸ナトリウム（０．５ｇ）及び３０％シメチコン（１滴）を含む水性懸濁液２５０ｇを粉砕した。粉砕開始後１００分及び１３０分に固体デオキシコール酸ナトリウム（各０．５ｇ）をさらに２回加えた。粉砕した懸濁液の粒度を、Ｈｏｒｉｂａ  ＬＡ−９１０レーザー回折粒度分析器を用いて測定した。粉砕の１７０分後、Ｄ５０は１９２ｎｍ（１分間の超音波処理後１８８ｎｍ）であった。この時点で粉砕を停止し、粉砕した懸濁液を室温で一晩保持した。翌朝、全粉砕時間が３２０分に達するまで粉砕を再開し、その時点でＤ５０は１６７ｎｍ（１分間の超音波処理後１６９ｎｍ）であった。Ｄ５０粒度は、Ｈｏｒｉｂａ  ９１０  Ｌａｓｅｒ光散乱装置で測定した。
【０２１２】
実施例２：ウェットビーズミルを介したガナキソロンナノ懸濁液（２０％ＷＴ）の調製
０．３ｍｍのＹＴＺビーズを有するＮｅｔｚｓｃｈミル（ミンサー）を使用して、ガナキソロン（５０ｇ）、ヒドロキシエチルデンプン（１５ｇ）、デオキシコール酸ナトリウム（３ｇ）及び３０％シメチコン（０．１５ｇ）を含む水性懸濁液（２５０ｇ）を２４０分間粉砕した。粉砕した懸濁液のＤ５０は、１８９ｎｍ（１分間の超音波処理後１８５ｎｍ）であった。
【０２１３】
実施例３．０．２ｍｍのＹＴＺビーズを用いたビーズミル粉砕によるガナキソロンナノ懸濁液（２０％ＷＴ）の調製
実施例２に記載されたものと同じ組成を有する水性ガナキソロン懸濁液を、０．２ｍｍのＹＴＺビーズを有するＮｅｔｚｓｃｈミル（ミンサー）を用いて２４５分間粉砕した。Ｄ５０は１７２ｎｍ（１分間の超音波処理後１６７ｎｍ）であった。
【０２１４】
実施例４．湿式ビーズミルを介したデキストラン７０を含むガナキソロンナノ懸濁液の調製
ガナキソロン（２５ｇ）、デキストラン７０（７．５ｇ）、デオキシコール酸ナトリウム（１．５ｇ）、及び３０％シメチコン（０．０７５ｇ）を含有する水性ガナキソロン懸濁液２５０ｇを、Ｎｅｔｚｓｃｈミル（ミンサー）を用いて０．２ｍｍのＹＴＺビーズで１９５分間粉砕して、Ｄ５０が１５９ｎｍ（１分間の超音波処理後１５８ｎｍ）のガナキソロンナノ懸濁液を得た。長時間の粉砕により、粒径は２１５ｎｍ（１分間の超音波処理後２１２ｎｍ）に増加した。
【０２１５】
実施例５：１０％ヒドロキシエチルデンプンを含むガナキソロンナノ懸濁液の調製
ガナキソロン（２５ｇ）、ヒドロキシエチルデンプン（２５ｇ）、デオキシコール酸ナトリウム（３ｇ）、及び３０％シメチコン（０．１５ｇ）を含有する水性ガナキソロン懸濁液（２５０ｇ）を、Ｎｅｔｚｓｃｈミル（ミンサー）を用いて０．２ｍｍ  ＹＴＺビーズで１５０分間粉砕し、Ｄ５０値が１３９ｎｍ（１分間の超音波処理後１４０ｎｍ）のガナキソロンナノ懸濁液を得た。
【０２１６】
実施例６．ガナキソロンナノ懸濁液濃縮物の希釈及び０．２ミクロンフィルターを通しての濾過滅菌
実施例５のガナキソロンナノ懸濁液をＨＰＬＣ等級の水で５倍に希釈して、約２０ｍｇ／ｍＬのガナキソロンを含有するナノ懸濁液を得た。この懸濁液を０．２μｍのシリンジフィルター（酢酸セルロース、２５ｍｍ、０．２μｍ、製品番号：１３−２５００２０−２５ＰＫ、Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  Ｓｔｒａｔｅｇｉｅｓ）で濾過した。濾過したガナキソロン懸濁液の粒度を測定した：Ｄ５０、１４３ｎｍ（１分超音波処理後１４３ｎｍ）；Ｄ９０，２１９ｎｍ；Ｄ９５，２８９ｎｍ。
【０２１７】
実施例７．ガナキソロンナノ懸濁液の凍結乾燥の手順
実施例１から５（２ｍＬ）の手順にしたがって調製したガナキソロンナノ懸濁液を２０ｍＬのＨＤＰＥシンチレーションバイアルに入れ、続いて適切な量の固体不活性医薬賦形剤を添加した。固体賦形剤を目視検査で溶解した後、バイアルをバイアル中の内容物が完全に凍結するまでドライアイスアセトン浴に浸漬した。固体賦形剤には、例えば、スクロース、マンニトール、デキストロース、ラクトース、Ｄ−ソルビトール、及びＮａＣｌが含まれる。
【０２１８】
次いで、バイアルを凍結乾燥用の凍結乾燥フラスコに入れ、乾燥固体が得られるまで凍結乾燥させた。凍結乾燥した粉末を粒度測定の前に水又は０．９％生理食塩水のいずれかに再分散させた。表１は、ヒドロキシエチルデンプン（ガナキソロン／ヒドロキシエチルデンプン＝３．３：１）を含有する凍結乾燥ガナキソロン製剤を示す。凍結乾燥前の表１の製剤のＤ５０値は、２１４ｎｍから２３０ｎｍであった。表２は、デキストラン７０（ガナキソロン／デキストラン７０＝３．３：１）を含有する凍結乾燥ガナキソロン製剤を示す。ショ糖を用いたガナキソロンナノ懸濁液の凍結乾燥前のＤ５０値は、凍結乾燥前に０．２１２μｍ（ミクロン）であった。表３は、ヒドロキシエチルデンプン（ガナキソロン／ヒドロキシエチルデンプン＝１：１）を含有する凍結乾燥ガナキソロン製剤を示す。凍結乾燥前のＤ５０値は０．１３９μｍであった。
【０２１９】
【表１】
2018530585.tif 000009
【０２２０】
【表２】
2018530585.tif 000010
【０２２１】
【表３】
2018530585.tif 000011
【０２２２】
実施例８．ガナキソロン２０％、ヒドロキシプロピルデンプン６％、デオキシコール酸ナトリウム１．２％及びシメチコン０．０６％を含むガナキソロンナノ懸濁液（３０％エマルション）の粒度貯蔵安定性
実施例２に記載の手順により、２０％ガナキソロン、６％ヒドロキシエチルデンプン、１．２％デオキシコール酸ナトリウム、及び０．６％シメチコン（３０％エマルジョン）（重量％）を含有するガナキソロンナノ懸濁液を調製した。Ｈｏｒｉｂａ９１０レーザー光散乱計で１７日間にわたってＤ５０粒度を測定した。初期粒度は約１８９ｎｍであった。粒度は当初約１０％増加したが、１７日の残りの期間、最初の増加後は安定したままであった。図１を参照。
【０２２３】
実施例９．ポロキサマー１８８を含むガナキソロンナノ懸濁液
バッチチャンバーアタッチメント（約３５０ｍｌ）及びシャフトに取り付けられた９６ｍｍポリウレタンローターを備えたＫＤＬ  Ｂａｃｈｏｆｅｎミルを構成した。次に、０．３ｍｍのイットリア−ジルコニアビーズ２６５ｍｌをチャンバに乾燥した状態で添加し、続いて１７６．７ｇのガナキソロン（ＧＮＸ）懸濁液を添加した。徐々に、１５分間にわたって、ガナキソロン懸濁液を持続的に攪拌しながらＰｌｕｒｏｎｉｃ  Ｆ−６８（Ｐｏｌｏｘａｍｅｒ  １８８）を含有する粉砕媒体に添加した。混合物を一晩ゆっくりと撹拌した。この懸濁液を、速度１（１５００ｒｐｍ）で断続的に粒度を測定しながら粉砕した。９０分後、Ｄ５０粒度は３７８ｎｍと測定された。Ｄ５０の測定は、Ｈｏｒｉｂａ  ９１０レーザー光散乱装置で測定した。
【０２２４】
【表４】
2018530585.tif 000012
【０２２５】
実施例１０．ポロキサマー１８８、０．１ＭＭビーズを含有するガナキソロンナノ懸濁液
ＫＤＬ  Ｂａｃｈｏｆｅｎミルはバッチチャンバーアタッチメント（約３５０ｍｌ）とシャフトに取り付けられた９６ｍｍポリウレタンローターで構成されていた。次に、３００ｍｌの０．１ｍｍイットリア−ジルコニアビーズをチャンバに乾燥状態で添加し、続いて先の実施例９に示した組成を有する１３４．６ｇのガナキソロン（ＧＮＸ）懸濁液を添加した。懸濁液は６０分間粉砕され、Ｄ５０粒子サイズを２０分、４０分、６０分の粉砕後に測定した。
【０２２６】
【表５】
2018530585.tif 000013
【０２２７】
実施例１１：１２．５％のポロキサマー１８８及びデキストランを含むガナキソロンナノ懸濁液
ＫＤＬ  Ｂａｃｈｏｆｅｎミルはバッチチャンバーアタッチメント（約３５０ｍｌ）とシャフトに取り付けられた９６ｍｍポリウレタンローターで構成されていた。次に、３００ｍｌの０．１ｍｍイットリア−ジルコニアビーズをチャンバに乾燥状態で添加し、続いて１７６．５ｇのガナキソロン（ＧＮＸ）粉砕懸濁液を添加した。デキストラン、Ｐｌｕｒｏｎｉｃ  Ｆ−６８、デオキシコール酸ナトリウム、及びシメチコンエマルジョン成分を攪拌しながら混合し、最後にガナキソロンを攪拌しながら添加することにより、ガナキソロン粉砕懸濁液を調製した。懸濁液を１．５時間撹拌した。懸濁液（１７６．５ｇｍをバッチチャンバーに加え、ミルを速度設定１で開始した。スラリーを６０分間粉砕し、粉砕の２０分、４０分、５０分、及び６０分後にＤ５０粒度を測定した。
【０２２８】
【表６】
2018530585.tif 000014
【０２２９】
【表７】
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【０２３０】
上記の粉砕懸濁液（６４．４ｇ）をメチルパラベンＮａ（０．０７４ｇ及びクエン酸（０．０２７ｇ）で処理し、粒度を経時的にモニターした。結果を図２にグラフで示す。
【０２３１】
【表８】
2018530585.tif 000016
【０２３２】
実施例１２．ウェットビーズミルによるアレロプレグナノロンナノ懸濁液の調製
アロプレグナノロン（１２．５ｇ）、ヒドロキシエチルデンプン（１２．５ｇ）、デオキシコール酸ナトリウム（１．５ｇ）、及び３０％シメチコンエマルジョン（０．０７５ｇ）を含有する水性懸濁液（１２５ｇ）を、Ｎｅｔｚｓｃｈミル（ミンサー）を用いて０．２ｍｍ  ＹＴＺビーズで２１０分間粉砕した。粉砕したスラリーのＤ５０は９６ｎｍ（１分間の超音波処理後９６ｎｍ）であった。実施例１２から１５に記載されたように調製されたガナキソロン及びアロプレグナノロン製剤の粒度分布プロットを図６に示す。
【０２３３】
実施例１３．ウェットビーズミルによるアロプレグナノロンナノ懸濁液の調製
アロプレグナノロン（２１．５ｇ）、ヒドロキシエチルデンプン１３０／０．４（２６．５ｇ）、デオキシコール酸ナトリウム（２．１ｇ）、及び３０％シメチコンエマルジョン（０．１０ｇ）を含む水性懸濁液（１６９．７ｇ）を、Ｎｅｔｚｓｃｈミル（ミンサー）を用いて、０．２ｍｍのＹＴＺビーズで２４０分間粉砕した。粉砕した懸濁液のＤ５０は９８ｎｍ（１分間の超音波処理後９７ｎｍ）であった。
【０２３４】
実施例１４．ウェットビーズミルによるポビドンを含むガナキソロンナノ懸濁液の調製
ガナキソロン（１７．５ｇ）、ポビドン（１７．５ｇ）、デオキシコール酸ナトリウム（２．１ｇ）、及び３０％シメチコン（０．１０５ｇ）を含有する水性ガナキソロン懸濁液（１７５ｇ）を、Ｎｅｔｚｓｃｈミル（ミンサー）を用いて０．２ｍｍ  ＹＴＺビーズで１８０分間粉砕して、Ｄ５０が１０９ｎｍ（１分間の超音波処理後に１１１ｎｍ）のガナキソロンナノ懸濁液を得た。周囲条件での３日間の保存後、Ｄ５０値は１１４ｎｍ（超音波処理１分後に１１３ｎｍ）であった。
【０２３５】
実施例１５．ウェットビーズ粉砕によるヒドロキシエチルデンプンを含有するガナキソロンナノ懸濁液の調製
ガナキソロン（１７．５ｇ）、ヒドロキシエチルデンプン１３０／０．４（１７．５ｇ）、デオキシコール酸ナトリウム（２．１ｇ）、及び３０％シメチコン（０．１０５ｇ）を含有する水性ガナキソロン懸濁液（１７５ｇ）を、Ｎｅｔｚｓｃｈミル（ミンサー）を使用して、０．２ｍｍのＹＴＺビーズで２４０分間粉砕し、Ｄ５０が１０６ｎｍ（１分間の超音波処理後に１０７ｎｍ）のガナキソロンナノ懸濁液を得た。
【０２３６】
実施例１６．ナノ懸濁物及びカプチソール製剤の生物学的利用能
９ｍｇ／ｋｇ、１２ｍｇ／ｋｇ、又は１５ｍｇ／ｋｇのガナキソロンをカプチソール溶液又はヒドロキシエチルデンプン１３０／０．４ナノ懸濁液として投与した後のラット血漿及びラット脳におけるガナキソロン濃度を測定した。Ｈａｒｌａｎ  Ｌａｂｓからの雄性Ｓｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙラット（８週齢から９週齢）を使用した。動物は研究中一貫して自由に食物と水を摂取し、午前７時に点灯して１２時間／  １２時間明暗スケジュールで維持した。化合物投与の前に動物を秤量した。ガナキソロン溶液を２．５ｍｇ／ｍＬで処方し、容量をより大きな投与量に適応するように調整した。注射はボーラス用量として尾静脈を介して投与した。
【０２３７】
血漿を採取し、投薬の５分、１５分、３０分、６０分、又は１２０分後に採取した。投与の５分、３０分、及び１２０分後に脳を採取した。３匹のラットを各時点で使用し、報告されたガナキソロンレベルは、３匹全てのラットのガナキソロン血漿又は脳レベルの平均値である。血液は、後眼窩出血又は心穿刺によって採取した。血液サンプルをＫ２＋ＥＤＴＡ被覆チューブに集めた。冷蔵遠心機（４℃、１０分間、３０００ｒｐｍ）で血液を回転させることにより、血漿試料を調製した。血漿ＰＫの特性は、ガナキソロンカプチソール及びナノ懸濁製剤（図３参照）と同様であったが、ナノ懸濁液は、有意により高くより長く持続する脳ガナキソロンレベルを生じた（図４参照）。この実験で使用したガナキソロンカプチソール及びナノ懸濁液製剤及び次の実施例に示す実験を表４Ａに示す。
【０２３８】
【表９】
2018530585.tif 000017
【０２３９】
実施例１７．ガナキソロン及びアロプレグナノロンナノ懸濁液及びカプチソール溶液の脳レベル及び血漿レベル
ラットに約１ｍｇ／ｍｌのガナキソロンをナノ懸濁液として、又はカプチソール溶液として投与した。１ｍｇ／ｋｇの用量を使用した。ガナキソロン血漿レベル及び脳レベルを５分、１５分、３０分、及び１２０分に測定した。３匹のラットを各時点で使用し、報告されたガナキソロンレベルは、３匹の全てのラットのガナキソロン血漿レベル又は脳レベルの平均値である。ナノ懸濁液又はカプチソール溶液としてアロプレグナノロンを用いて同じ研究を行った。この実験で使用したガナキソロン及びアロプレグナロロン製剤を表４Ｂに示す。この実験の結果を図５に示す。
【０２４０】
【表１０】
2018530585.tif 000018
【０２４１】
実施例１８．ガナクロンナノ懸濁液及びカプチソール溶液の行動観察及び鎮静レベル
この研究は、カプチソール及びナノ懸濁液製剤中の９ｍｇ／ｍＬ、１２ｍｇ／ｍＬ、又は１５ｍｇ／ｍＬのガナキソロン又はビヒクル（陰性対照）を投与することからなっていた。注射はボーラス用量として尾静脈を介して投与した。動物の行動は、投与後５分、１５分、３０分、６０分、１２０分、１８０分、及び２４０分に記録した。終末血液／血漿及び脳試料を４時間で収集した。
【０２４２】
動物は実施例１６に記載の通りである。４匹の動物を各処置群に使用した。以下の表５は、鎮静実験の実験計画を示す。製剤は、実施例１６の表４Ａに記載されている。表５に列挙された各実験条件について、評価及び終点は、（１）鎮静レベル及び持続時間、並びに（２）実験終了時（投薬後４時間）の血漿及び脳におけるガナキソロンレベルである。
【０２４３】
【表１１】
2018530585.tif 000019
【０２４４】
ラットは、投与後５分、１５分、３０分、６０分、１２０分、１８０分、及び２４０分の行動変化について観察された。観察者は治療を知らされなかった。定性的行動変化は、関連する観察とともに以下のようにスコア付けされた。
０＝覚醒、鎮静作用なし；観察された移動や行動に変化はない
１＝軽度の鎮静；障害がある；遅れた運動、いくつかの刺激に反応しない、完全な正反射
２＝深い鎮静；鎮静状態；横向きに横たわる、正反射の喪失（ＬＲＲ）
３＝麻酔；指先刺激反射の喪失
動物の健康状態、特に体温をモニターした。動物を触って冷たい場合、中心体温を直腸プローブでモニターし、記録した。しかし、体温を維持するためには加熱パッドは不要であった。鎮静行動スコア２を受けた動物を、窒息を防止するために寝具の上に横たわる青いパッドに置き、これらの動物を注意深く監視した。すべての正常ではない又は異常な行動や健康問題が記録された。
【０２４５】
行動は、４点スケール（０、１、２、又は３）を用いて得点付けされ、カテゴリーデータは、Ｐｒｉｓｍ  ＧｒａｐｈＰａｄ（バージョン６）を用いて、個々の時点で非パラメータ的Ｋｒｕｓｋａｌ−Ｗａｌｌｉｓ  ＡＮＯＶＡによって分析された。ポストホック分析は、Ｄｕｎｎの複数の（すべての対ごとの）比較試験からなり、有意差はＰ＜０．０５であった。ＰＫデータを２元ＡＮＯＶＡで分析した。
【０２４６】
カプチソール及びナノ懸濁液ガナキソロン製剤の両方は非常に鎮静作用があり、各用量レベルのすべてのラットは注射後５分で２の鎮静スコアを受けた（図７）。製剤は、用量及び賦形剤の処方に依存して、３０分から１２０分持続する鎮静で、時間の進行するにつれて、鎮静に用量関連効果を示した（図７）。最も鎮静する用量／製剤の組み合わせは、１５ｍｇ／ｋｇナノ懸濁液のガナキソロン製剤であり；この群の４匹のラットのうちの２匹は、注射後１２０分でまだ鎮静状態であった。用量又は処方にかかわらず、動物の全ては、注射の３時間後に目を覚ました。
【０２４７】
一般に、ナノ懸濁液製剤は、カプシソール製剤よりも長い鎮静期間を生じた。個々のＫｒｕｓｋａｌ−Ｗａｌｌｉｓ非パラメータ的ＡＮＯＶＡは、各時点で、カプシソール製剤とナノ懸濁剤製剤との間にいかなる統計的差異も示さなかった。しかしながら、Ｍａｎｎ−Ｗｈｉｔｎｅｙの非パラメメータ的ｔ検定で分析した場合、カプシソールにおける１２ｍｇ／ｋｇのガナキソロン用量は、投与後６０分での比較可能なナノ懸濁液のガナキソロン用量よりも著しく鎮静効果が低かった。
【０２４８】
ナノ懸濁液製剤は、以下により指摘される行動作用の増大を有することが見出された：目覚めまでのより長い待ち時間、溶血／血尿（１２ｍｇ／ｋｇで２匹のラット、１５ｍｇ／ｋｇで１匹のラット）、及び注射直後の呼吸抑制／不規則呼吸（１２ｍｇ／ｋｇで１匹のラット、及び１５ｍｇ／ｋｇで１匹のラット）。
【０２４９】
血漿ＰＫ特性は、２つの製剤間で類似していた。しかし、脳のレベルを検討するとき、ナノ懸濁液製剤は、カプシソール製剤よりも有意に高くかつ長く持続するレベルをもたらした。この脳ＰＫは、行動鎮静反応と並行していた。これらのデータを図３及び図４に示す。
【０２５０】
要約すると、カプチソール製剤及びナノ懸濁液製剤の両方は、非常に鎮静しており、時間の関数として鎮静に用量関連の効果を示した。ナノ懸濁液は、鎮静作用が増強したようであった。この増加した挙動応答は、ナノ懸濁液製剤のより高い神経ステロイド脳吸収によって生成された可能性が最も高い。
【０２５１】
実施例１９．注射可能なナノ粒子製剤の電子線照射
先行する実施例に記載したように調製された注射可能な神経ステロイドナノ粒子製剤を８ｍｌガラスバイアルに充填し、キャップした。バイアルに２５ｋＧｙの線量の電子線照射を行ったが、これは無菌製品を製造するための標準的線量である。電子線の照射前及び照射後の外観、照射前後のＨＰＬＣアッセイ及び不純物プロファイル、照射前後の相対粘度、及び電子照射前後の粒子サイズ（Ｄ５０及びＤ９０）を評価した。試験された神経ステロイドナノ懸濁液のいずれにおいても、電子線照射後の外観の変化は観察されなかった。神経ステロイドアッセイ及び不純物プロファイルを、標準的なＨＰＬＣの手順によって決定した。オストワルド粘度計を用いて粘度測定値を得た。相対粘度は、ナノ懸濁液と脱イオン水との間の流出時間比として計算した。Ｄ５０及びＤ９０粒度測定は、Ｈｏｒｉｂａ  ９１０  レーザー光散乱装置を用いて得た。
【０２５２】
表６は、以下の電子線実験で使用される製剤ＩからＶＩの組成物を示す。製剤ＩからＶＩに使用されるポリマーは、Ｉ、プラスドンＣ−１７であり；ＩＩ、Ｖ及びＶＩ、ヒドロキシエチルデンプン１３０／０．４；ＩＩＩ、デキストラン７０；ＩＶ、プラスドンＣ−１２である；ＡＰＩは、製剤ＶＩを除く全ての製剤について、ガナキソロンである。ＡＰＩは製剤ＶＩについてアロプレグナロロンである。
【０２５３】
【表１２】
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【０２５４】
表７は、２５ＫＧｙ（キログレイ）での電子線照射後の様々な注射可能な神経ステロイドナノ粒子製剤（ＩからＶＩ）の神経ステロイドのＨＰＬＣアッセイ及び不純物プロファイルを示す。任意の試験された製剤について、不純物プロファイルの有意な変化は観察されなかった。
【０２５５】
【表１３】
2018530585.tif 000021
【０２５６】
表８は、電子線照射前後の上記注入可能な神経ステロイドナノ粒子製剤（ＩからＶＩ）のＤ５０及びＤ９０値を示す。試料は、スクロースを神経ステロイドの重量百分率の２倍含有した。
【０２５７】
【表１４】
2018530585.tif 000022
【０２５８】
表９は、電子線照射の前後の、表６に列挙されたガナキソロン製剤ＩからＶの相対的粘度を示す。
【０２５９】
【表１５】
2018530585.tif 000023
【０２６０】
実施例２０．ガナキソロンナノ粒子製剤の凍結乾燥粉末の電子線照射
スクロース（２５０ｍｇ）を８ｍｌガラスバイアル中の液体ガナキソロンナノ粒子製剤（２ｍｌ）に加え、溶解した。混合物をドライアイス上で約２時間凍結し、凍結乾燥して白色ケーキを得た。凍結乾燥粉末の組成を表１０に示す。凍結乾燥粉末を２５ＫＧｙの電子線照射に付した。粒径データは、凍結乾燥製剤を脱イオン水で再構成した後に得られた。
【０２６１】
【表１６】
2018530585.tif 000024
【図１】
2018530585.tif 000027
【図２】
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【図３Ａ】
2018530585.tif 000029
【図３Ｂ】
2018530585.tif 000030
【図３Ｃ】
2018530585.tif 000031
【図４Ａ】
2018530585.tif 000032
【図４Ｂ】
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【図４Ｃ】
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【図５Ａ】
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【図５Ｂ】
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【図６Ａ】
2018530585.tif 000037
【図６Ｂ】
2018530585.tif 000038
【図６Ｃ】
2018530585.tif 000039
【図６Ｄ】
2018530585.tif 000040
【図７Ａ】
2018530585.tif 000041
【図７Ｂ】
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【図７Ｃ】
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【国際調査報告】
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