(57)【要約】  本発明は、式（Ｉ）：Ｓ−Ｌ−Ａ（Ｉ）で示される新規なコンジュゲート、又はそれらの塩（式中、Ａは、ガンマ−セクレターゼ阻害剤であり、Ｌは、リンカーであり、そして、Ｓは、ペプチターゼ特異的な基質である）、並びにそれらを製造するためのプロセス、それらを含む医薬組成物、及び医薬（特に、腎臓疾患及び腎臓における組織損傷を処置するための）としてのそれらの使用に関する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（Ｉ）
Ｓ−Ｌ−Ａ      （Ｉ）
で示されるコンジュゲート、又はその薬学的に許容し得る塩
［式中、Ａは、ヒドロキシ部分を有するγ−セクレターゼ阻害剤であり、Ｌは、切断可能なリンカーであり、そして、Ｓは、ペプチダーゼ特異的な基質である］。
【請求項２】
Ｌが、アミノエチル−カルバマートリンカーである、請求項１に記載の式（Ｉ）で示されるコンジュゲート。
【請求項３】
Ｓが、γ−グルタミルトランスペプチダーゼ特異的な基質及び／又は（グルタミル）アミノペプチダーゼＡ特異的な基質である、請求項１又は２のいずれかに記載の式（Ｉ）で示されるコンジュゲート。
【請求項４】
Ａが、式（Ａ１）
【化１】
2018516957.tif 000046
［式中、
Ｘは、−ＣＲ４Ｒ４’−又は−ＣＲ４Ｒ４’−Ｏ−であり；
Ｒは、ハロゲン、Ｃ１−７アルキル、又はハロゲンによって置換されているＣ１−７アルキルであり；
Ｒ１は、水素、Ｃ１−７アルキル、ハロゲン若しくはヒドロキシによって置換されているＣ１−７アルキル、Ｃ１−７アルケニル、−（ＣＨ２）ｍ−Ｃ３−８シクロアルキル、−（ＣＨ２）ｍ−ＣＯＲ’、−（ＣＨ２）ｍ−モルホリニル、ベンジル、又はハロゲンによって置換されているベンジルであり；
Ｒ’は、Ｃ１−７アルコキシ、ヒドロキシ又はアミノであり；
Ｒ２は、水素、Ｃ１−７アルキル、ハロゲン若しくはヒドロキシによって置換されているＣ１−７アルキルであるか、又はベンジル若しくはＣ３−８シクロアルキルであり；
Ｒ３は、Ｃ１−７アルキル、ハロゲンによって置換されているＣ１−７アルキルであり、ベンジル、２個のハロゲンによって置換されているベンジルであり、−（ＣＨ２）ｍ−Ｃ３−８シクロアルキル又は−（ＣＨ２）ｍ−ピリジニルであり；
Ｒ４及びＲ４’は、互いに独立して、水素、ハロゲン、Ｃ１−７アルキル、ヒドロキシによって置換されているＣ１−７アルキル、Ｃ１−７アルコキシ、又はヒドロキシであり；
ｎは、０、１又は２であり；
ｍは、０、１又は２であり；
但し、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ４又はＲ４’のうちの少なくとも１つは、ヒドロキシ、又はヒドロキシによって置換されているＣ１−７アルキルである］
で示される部分であり、Ｌが、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ４又はＲ４’のヒドロキシ基でＡに結合している、請求項１〜３のいずれかに記載の式（Ｉ）で示されるコンジュゲート。
【請求項５】
Ｌが、Ｒ１のヒドロキシ基でＡに結合している、請求項４に記載の式（Ｉ）で示されるコンジュゲート。
【請求項６】
Ｘが、−ＣＨ２−、−ＣＨＣＨ３−、−ＣＨ（ＣＨ２ＣＨ３）−、−Ｃ（ＣＨ３）２−、−Ｃ（ＣＨ３）（ＯＨ）−、−Ｃ（ＣＨ２ＣＨ３）（ＯＨ）−、−ＣＨ（ＯＣＨ３）−又は−Ｃ（ＣＨ３）２−Ｏ−である、請求項４又は５のいずれかに記載の式（Ｉ）で示されるコンジュゲート。
【請求項７】
Ｘが、−Ｃ（ＣＨ３）２−、−Ｃ（ＣＨ３）（ＯＨ）−、又は−Ｃ（ＣＨ２ＣＨ３）（ＯＨ）−である、請求項４〜６のいずれかに記載の式（Ｉ）で示されるコンジュゲート。
【請求項８】
Ｒが、ハロゲンである、請求項４〜７のいずれかに記載の式（Ｉ）で示されるコンジュゲート。
【請求項９】
Ｒが、フルオロである、請求項４〜８のいずれかに記載の式（Ｉ）で示されるコンジュゲート。
【請求項１０】
Ｒ１が、水素、ハロゲンによって置換されているＣ１−７アルキル、又はヒドロキシによって置換されているＣ１−７アルキルである、請求項４〜９のいずれかに記載の式（Ｉ）で示されるコンジュゲート。
【請求項１１】
Ｒ１が、ヒドロキシによって置換されているＣ１−７アルキルである、請求項４〜１０のいずれかに記載の式（Ｉ）で示されるコンジュゲート。
【請求項１２】
Ｒ２が、Ｃ１−７アルキル、ヒドロキシによって置換されているＣ１−７アルキル、又はＣ３−８シクロアルキルである、請求項４〜１１のいずれかに記載の式（Ｉ）で示されるコンジュゲート。
【請求項１３】
Ｒ２が、Ｃ１−７アルキルである、請求項４〜１２のいずれかに記載の式（Ｉ）で示されるコンジュゲート。
【請求項１４】
Ｒ３が、ハロゲンによって置換されているＣ１−７アルキルである、請求項４〜１３のいずれかに記載の式（Ｉ）で示されるコンジュゲート。
【請求項１５】
Ｒ３が、３個又は５個のフルオロによって置換されているＣ１−７アルキルである、請求項４〜１４のいずれかに記載の式（Ｉ）で示されるコンジュゲート。
【請求項１６】
Ａが、式（Ａ２）
【化２】
2018516957.tif 000047
［式中、Ｘ、Ｒ、ｎ、Ｒ２及びＲ３は、請求項１〜１５のいずれかに記載されるとおりである］
で示される部分である、請求項１〜１５のいずれかに記載の式（Ｉ）で示されるコンジュゲート。
【請求項１７】
Ａが、式（Ａ４）
【化３】
2018516957.tif 000048
で示される部分である、請求項１〜１６のいずれかに記載の式（Ｉ）で示されるコンジュゲート。
【請求項１８】
部分Ａが、以下のリスト：
Ｎ−［（６Ｒ，７Ｓ）−２−フルオロ−９−（２−ヒドロキシ−エチル）−６−メチル−８−オキソ−６，７，８，９−テトラヒドロ−５−オキサ−９−アザ−ベンゾシクロヘプテン−７−イル］−２，２−ジメチル−Ｎ’−（２，２，３，３，３−ペンタフルオロ−プロピル）−マロンアミド；
Ｎ−（（６Ｒ，７Ｓ）−６−シクロプロピル−２−フルオロ−８−オキソ−６，７，８，９−テトラヒドロ−５−オキサ−９−アザ−ベンゾシクロヘプテン−７−イル）−２−ヒドロキシ−２−メチル−Ｎ’−（２，２，３，３，３−ペンタフルオロ−プロピル）−マロンアミド；
Ｎ−（（６Ｒ，７Ｓ）−６−シクロプロピル−２−フルオロ−８−オキソ−６，７，８，９−テトラヒドロ−５−オキサ−９−アザ−ベンゾシクロヘプテン−７−イル）−２−ヒドロキシ−２−メチル−Ｎ’−（２，２，３，３，３−ペンタフルオロ−プロピル）−マロンアミド；
（Ｓ）−Ｎ−［（６Ｒ，７Ｓ）−２−フルオロ−９−（２−ヒドロキシ−エチル）−６−メチル−８−オキソ−６，７，８，９−テトラヒドロ−５−オキサ−９−アザ−ベンゾシクロヘプテン−７−イル］−２−ヒドロキシ−２−メチル−Ｎ’−（２，２，３，３，３−ペンタフルオロ−プロピル）−マロンアミド；
（Ｒ）−Ｎ−［（６Ｒ，７Ｓ）−２−フルオロ−９−（２−ヒドロキシ−エチル）−６−メチル−８−オキソ−６，７，８，９−テトラヒドロ−５−オキサ−９−アザ−ベンゾシクロヘプテン−７−イル］−２−ヒドロキシ−２−メチル−Ｎ’−（２，２，３，３，３−ペンタフルオロ−プロピル）−マロンアミド；
（Ｒ又はＳ）Ｎ−［（６Ｒ，７Ｓ）−２−フルオロ−６−メチル−８−オキソ−９−（２，２，２−トリフルオロ−エチル）−６，７，８，９−テトラヒドロ−５−オキサ−９−アザ−ベンゾシクロヘプテン−７−イル］−２−ヒドロキシ−２−メチル−Ｎ’−（２，２，３，３，３−ペンタフルオロ−プロピル）−マロンアミド；
（Ｒ又はＳ）Ｎ−［（６Ｒ，７Ｓ）−２−フルオロ−６−メチル−８−オキソ−９−（２，２，２−トリフルオロ−エチル）−６，７，８，９−テトラヒドロ−５−オキサ−９−アザ−ベンゾシクロヘプテン−７−イル］−２−ヒドロキシ−２−メチル−Ｎ’−（２，２，３，３，３−ペンタフルオロ−プロピル）−マロンアミド；
（Ｓ）−Ｎ−［（６Ｒ，７Ｓ）−２−フルオロ−６−メチル−８−オキソ−９−（２，２，２−トリフルオロ−エチル）−６，７，８，９−テトラヒドロ−５−オキサ−９−アザ−ベンゾシクロヘプテン−７−イル］−２−ヒドロキシ−２−メチル−Ｎ’−（２，２，２−トリフルオロ−エチル）−マロンアミド；
（Ｒ）−Ｎ−［（６Ｒ，７Ｓ）−２−フルオロ−６−メチル−８−オキソ−９−（２，２，２−トリフルオロ−エチル）−６，７，８，９−テトラヒドロ−５−オキサ−９−アザ−ベンゾシクロヘプテン−７−イル］−２−ヒドロキシ−２−メチル−Ｎ’−（２，２，２−トリフルオロ−エチル）−マロンアミド；
（Ｒ又はＳ）Ｎ−［（６Ｒ，７Ｓ）−２−フルオロ−６−メチル−８−オキソ−９−（２，２，２−トリフルオロ−エチル）−６，７，８，９−テトラヒドロ−５−オキサ−９−アザ−ベンゾシクロヘプテン−７−イル］−２−ヒドロキシ−２−メチル−Ｎ’−（３，３，３−トリフルオロ−プロピル）−マロンアミド；
（Ｒ又はＳ）Ｎ−［（６Ｒ，７Ｓ）−２−フルオロ−６−メチル−８−オキソ−９−（２，２，２−トリフルオロ−エチル）−６，７，８，９−テトラヒドロ−５−オキサ−９−アザ−ベンゾシクロヘプテン−７−イル］−２−ヒドロキシ−２−メチル−Ｎ’−（３，３，３−トリフルオロ−プロピル）−マロンアミド；
Ｎ−［（６Ｓ，７Ｒ）−６−エチル−２−フルオロ−８−オキソ−９−（２，２，２−トリフルオロ−エチル）−６，７，８，９−テトラヒドロ−５−オキサ−９−アザ−ベンゾシクロヘプテン−７−イル］−２，２−ジメチル−Ｎ−（２，２，３，３，３−ペンタフルオロ−プロピル）−マロンアミド；
（Ｒ又はＳ）−２−エチル−Ｎ−（（６Ｒ，７Ｓ）−６−エチル−２−フルオロ−８−オキソ−６，７，８，９−テトラヒドロ−５−オキサ−９−アザ−ベンゾシクロヘプテン−７−イル）−２−ヒドロキシ−Ｎ−（２，２，２−トリフルオロ−エチル）−マロンアミド；
（Ｓ又はＲ）−２−エチル−Ｎ−（（６Ｒ，７Ｓ）−６−エチル−２−フルオロ−８−オキソ−６，７，８，９−テトラヒドロ−５−オキサ−９−アザ−ベンゾシクロヘプテン−７−イル）−２−ヒドロキシ−Ｎ−（２，２，２−トリフルオロ−エチル）−マロンアミド；
（Ｒ又はＳ）−２−エチル−Ｎ−（（６Ｒ，７Ｓ）−６−エチル−２−フルオロ−８−オキソ−６，７，８，９−テトラヒドロ−５−オキサ−９−アザ−ベンゾシクロヘプテン−７−イル）−２−ヒドロキシ−Ｎ−（２，２，３，３，３−ペンタフルオロ−プロピル）−マロンアミド；
（Ｓ又はＲ）−２−エチル−Ｎ−（（６Ｒ，７Ｓ）−６−エチル−２−フルオロ−８−オキソ−６，７，８，９−テトラヒドロ−５−オキサ−９−アザ−ベンゾシクロヘプテン−７−イル）−２−ヒドロキシ−Ｎ−（２，２，３，３，３−ペンタフルオロ−プロピル）−マロンアミド；
（Ｒ又はＳ）−２−エチル−Ｎ−（（６Ｒ，７Ｓ）−６−エチル−２−フルオロ−８−オキソ−６，７，８，９−テトラヒドロ−５−オキサ−９−アザ−ベンゾシクロヘプテン−７−イル）−２−ヒドロキシ−Ｎ−（３，３，３−トリフルオロ−プロピル）−マロンアミド；
（Ｓ又はＲ）−２−エチル−Ｎ−（（６Ｒ，７Ｓ）−６−エチル−２−フルオロ−８−オキソ−６，７，８，９−テトラヒドロ−５−オキサ−９−アザ−ベンゾシクロヘプテン−７−イル）−２−ヒドロキシ−Ｎ−（３，３，３−トリフルオロ−プロピル）−マロンアミド；
（Ｒ又はＳ）−２−エチル−Ｎ−［（６Ｒ，７Ｓ）−６−エチル−２−フルオロ−８−オキソ−９−（２，２，２−トリフルオロ−エチル）−６，７，８，９−テトラヒドロ−５−オキサ−９−アザ−ベンゾシクロヘプテン−７−イル］−２−ヒドロキシ−Ｎ−（２，２，２−トリフルオロ−エチル）−マロンアミド；
（Ｓ又はＲ）−２−エチル−Ｎ−［（６Ｒ，７Ｓ）−６−エチル−２−フルオロ−８−オキソ−９−（２，２，２−トリフルオロ−エチル）−６，７，８，９−テトラヒドロ−５−オキサ−９−アザ−ベンゾシクロヘプテン−７−イル］−２−ヒドロキシ−Ｎ−（２，２，２−トリフルオロ−エチル）−マロンアミド；
（Ｒ又はＳ）−２−エチル−Ｎ−［（６Ｒ，７Ｓ）−６−エチル−２−フルオロ−８−オキソ−９−（２，２，２−トリフルオロ−エチル）−６，７，８，９−テトラヒドロ−５−オキサ−９−アザ−ベンゾシクロヘプテン−７−イル］−２−ヒドロキシ−Ｎ−（２，２，３，３，３−ペンタフルオロ−プロピル）−マロンアミド；
（Ｓ又はＲ）−２−エチル−Ｎ−［（６Ｒ，７Ｓ）−６−エチル−２−フルオロ−８−オキソ−９−（２，２，２−トリフルオロ−エチル）−６，７，８，９−テトラヒドロ−５−オキサ−９−アザ−ベンゾシクロヘプテン−７−イル］−２−ヒドロキシ−Ｎ−（２，２，３，３，３−ペンタフルオロ−プロピル）−マロンアミド；
Ｎ−［（６Ｒ，７Ｓ）−２−フルオロ−６−（２−ヒドロキシ−エチル）−８−オキソ−６，７，８，９−テトラヒドロ−５−オキサ−９−アザ−ベンゾシクロヘプテン−７−イル］−２，２−ジメチル−Ｎ’−（２，２，３，３，３−ペンタフルオロ−プロピル）−マロンアミド；
Ｎ−［（６Ｓ，７Ｒ）−２−フルオロ−６−（２−ヒドロキシ−エチル）−８−オキソ−６，７，８，９−テトラヒドロ−５−オキサ−９−アザ−ベンゾシクロヘプテン−７−イル］−２，２−ジメチル−Ｎ’−（２，２，３，３，３−ペンタフルオロ−プロピル）−マロンアミド；
（Ｓ）−Ｎ−［（６Ｓ，７Ｒ）−２−フルオロ−６−（２−ヒドロキシ−エチル）−８−オキソ−６，７，８，９−テトラヒドロ−５−オキサ−９−アザ−ベンゾシクロヘプテン−７−イル］−２−ヒドロキシ−２−メチル−Ｎ’−（２，２，２−トリフルオロ−エチル）−マロンアミド；
（Ｒ）−Ｎ−［（６Ｓ，７Ｒ）−２−フルオロ−６−（２−ヒドロキシ−エチル）−８−オキソ−６，７，８，９−テトラヒドロ−５−オキサ−９−アザ−ベンゾシクロヘプテン−７−イル］−２−ヒドロキシ−２−メチル−Ｎ’−（２，２，２−トリフルオロ−エチル）−マロンアミド；
（Ｓ）−Ｎ−［（６Ｒ，７Ｓ）−２−フルオロ−６−（２−ヒドロキシ−エチル）−８−オキソ−６，７，８，９−テトラヒドロ−５−オキサ−９−アザ−ベンゾシクロヘプテン−７−イル］−２−ヒドロキシ−２−メチル−Ｎ’−（２，２，２−トリフルオロ−エチル）−マロンアミド；
（Ｒ）−Ｎ−［（６Ｒ，７Ｓ）−２−フルオロ−６−（２−ヒドロキシ−エチル）−８−オキソ−６，７，８，９−テトラヒドロ−５−オキサ−９−アザ−ベンゾシクロヘプテン−７−イル］−２−ヒドロキシ−２−メチル−Ｎ’−（２，２，２−トリフルオロ−エチル）−マロンアミド；
Ｎ−［（６Ｒ，７Ｒ）又は（６Ｓ，７Ｓ）−２−フルオロ−６−（２−ヒドロキシ−エチル）−８−オキソ−６，７，８，９−テトラヒドロ−５−オキサ−９−アザ−ベンゾシクロヘプテン−７−イル］−２，２−ジメチル−Ｎ’−（２，２，３，３，３−ペンタフルオロ−プロピル）−マロンアミド；
Ｎ−［（６Ｓ，７Ｓ）又は（６Ｒ，７Ｒ）−２−フルオロ−６−（２−ヒドロキシ−エチル）−８−オキソ−６，７，８，９−テトラヒドロ−５−オキサ−９−アザ−ベンゾシクロヘプテン−７−イル］−２，２−ジメチル−Ｎ’−（２，２，３，３，３−ペンタフルオロ−プロピル）−マロンアミド；
（Ｓ）−Ｎ−［（６Ｒ，７Ｓ）−６−エチル−２−フルオロ−８−オキソ−９−（２，２，２−トリフルオロ−エチル）−６，７，８，９−テトラヒドロ−５−オキサ−９−アザ−ベンゾシクロヘプテン−７−イル］−２−ヒドロキシ−２−メチル−Ｎ’−（２，２，２−トリフルオロ−エチル）−マロンアミド；及び
（Ｒ）−Ｎ−［（６Ｒ，７Ｓ）−６−エチル−２−フルオロ−８−オキソ−９−（２，２，２−トリフルオロ−エチル）−６，７，８，９−テトラヒドロ−５−オキサ−９−アザ−ベンゾシクロヘプテン−７−イル］−２−ヒドロキシ−２−メチル−Ｎ’−（２，２，２−トリフルオロ−エチル）−マロンアミド；
から選択され、Ｌが、ヒドロキシ基でＡに結合しており、そして、Ｌ及びＳが、特許請求の範囲に記載されるとおりである、請求項１〜１６のいずれかに記載の式（Ｉ）で示されるコンジュゲート。
【請求項１９】
Ｌが、式（Ｌ１）
【化４】
2018516957.tif 000049
［式中、
Ｙは、なし、Ｏ又はＮＨであり；
Ｒ５は、水素、ハロゲン、Ｃ１−７アルキル、又はＣ１−７アルコキシであり；
ｑは、１、２、３又は４である］
で示される部分である、請求項１〜１８のいずれかに記載の式（Ｉ）で示されるコンジュゲート。
【請求項２０】
Ｙが、ＮＨである、請求項１９に記載の式（Ｉ）で示されるコンジュゲート。
【請求項２１】
Ｒ５が、水素である、請求項１９又は２０のいずれかに記載の式（Ｉ）で示されるコンジュゲート。
【請求項２２】
ｑが、２である、請求項１９〜２１のいずれかに記載の式（Ｉ）で示されるコンジュゲート。
【請求項２３】
Ｌが、式（Ｌ１）（式中、Ｙは、ＮＨであり、Ｒ５は、水素であり、そして、ｑは、２である）で示される部分である、請求項１９〜２２のいずれかに記載の式（Ｉ）で示されるコンジュゲート。
【請求項２４】
Ｓが、式（Ｓ１）
【化５】
2018516957.tif 000050
［式中、
Ｒ６は、水素、Ｃ１−７アルキル、−ＮＨ２又は−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−Ｃ１−７アルキルであり；
各Ｒ７は、独立して、水素、ハロゲン、Ｃ１−７アルキル、又はＣ１−７アルコキシから選択され；
Ｒ８は、水素、Ｃ１−７アルキル、−ＮＨ２又は−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−Ｃ１−７アルキルであり；
ｒは、０、１、２又は３であり；
但し、Ｒ６又はＲ８のうちの少なくとも１つは、−ＮＨ２又は−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−Ｃ１−７アルキルである］
で示される部分である、請求項１〜２３のいずれかに記載の式（Ｉ）で示されるコンジュゲート。
【請求項２５】
Ｒ６又はＲ８のうちの１つが、−ＮＨ２又は−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−Ｃ１−７アルキルであり、そして、Ｒ６又はＲ８のうちのその他の１つが、水素又はＣ１−７アルキルである、請求項２４に記載の式（Ｉ）で示されるコンジュゲート。
【請求項２６】
Ｒ７が水素であり、そして、ｒがである、請求項２４又は２５のいずれかに記載の式（Ｉ）で示されるコンジュゲート。
【請求項２７】
Ｓが、式（Ｓ１）（式中、Ｒ６は、水素であり、Ｒ７は、水素であり、Ｒ８は、−ＮＨ２又は−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−Ｃ１−７アルキルであり、そして、ｒは、１である）で示される部分である、請求項２４〜２６のいずれかに記載の式（Ｉ）で示されるコンジュゲート。
【請求項２８】
Ｓが、式（Ｓ１）（式中、Ｒ６は、−ＮＨ２又は−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−Ｃ１−７アルキルであり、Ｒ７は、水素であり、Ｒ８は、水素であり、そして、ｒは、１である）で示される部分である、請求項２４〜２６のいずれかに記載の式（Ｉ）で示されるコンジュゲート。
【請求項２９】
式（Ｉａ）
【化６】
2018516957.tif 000051
を有する請求項１〜２８のいずれかに記載のコンジュゲート、又はその薬学的に許容し得る塩
［式中、Ｓは、特許請求の範囲に記載されるとおりのペプチダーゼ特異的な基質である］。
【請求項３０】
式（Ｉｂ）
【化７】
2018516957.tif 000052
［式中、Ｒ６又はＲ８のうちの１つは、−ＮＨ２又は−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−Ｃ１−７アルキルであり、そして、Ｒ６又はＲ８のうちのその他の１つは、水素である］
を有する請求項１〜２９のいずれかに記載のコンジュゲート。
【請求項３１】
以下のリスト
（Ｓ）−２−アセトアミド−５−（２−（（２−（（２Ｒ，３Ｓ）−７−フルオロ−３−（（Ｓ）−２−ヒドロキシ−２−メチル−３−オキソ−３−（２，２，３，３，３−ペンタフルオロプロピルアミノ）プロパンアミド）−２−メチル−４−オキソ−３，４−ジヒドロベンゾ［ｂ］［１，４］オキサゼピン−５（２Ｈ）−イル）エトキシ）カルボニルアミノ）エチルアミノ）−５−オキソペンタン酸；
（Ｓ）−２−アミノ−５−（２−（（２−（（２Ｒ，３Ｓ）−７−フルオロ−３−（（Ｓ）−２−ヒドロキシ−２−メチル−３−オキソ−３−（２，２，３，３，３−ペンタフルオロプロピルアミノ）プロパンアミド）−２−メチル−４−オキソ−３，４−ジヒドロベンゾ［ｂ］［１，４］オキサゼピン−５（２Ｈ）−イル）エトキシ）カルボニルアミノ）エチルアミノ）−５−オキソペンタン酸；
（Ｓ）−４−アセトアミド−５−（２−（（２−（（２Ｒ，３Ｓ）−７−フルオロ−３−（（Ｓ）−２−ヒドロキシ−２−メチル−３−オキソ−３−（２，２，３，３，３−ペンタフルオロプロピルアミノ）プロパンアミド）−２−メチル−４−オキソ−３，４−ジヒドロベンゾ［ｂ］［１，４］オキサゼピン−５（２Ｈ）−イル）エトキシ）カルボニルアミノ）エチルアミノ）−５−オキソペンタン酸；
（Ｓ）−４−アミノ−５−（２−（（２−（（２Ｒ，３Ｓ）−７−フルオロ−３−（（Ｓ）−２−ヒドロキシ−２−メチル−３−オキソ−３−（２，２，３，３，３−ペンタフルオロプロピルアミノ）プロパンアミド）−２−メチル−４−オキソ−３，４−ジヒドロベンゾ［ｂ］［１，４］オキサゼピン−５（２Ｈ）−イル）エトキシ）カルボニルアミノ）エチルアミノ）−５−オキソペンタン酸；
（Ｓ）−２−アセトアミド−５−（２−（（２−（（２Ｒ，３Ｓ）−７−フルオロ−３−（（Ｓ）−２−ヒドロキシ−２−メチル−３−オキソ−３−（２，２，３，３，３−ペンタフルオロプロピルアミノ）プロパンアミド）−２−メチル−４−オキソ−３，４−ジヒドロベンゾ［ｂ］［１，４］オキサゼピン−５（２Ｈ）−イル）エトキシ）カルボニルオキシ）エチルアミノ）−５−オキソペンタン酸；
及びそれらの薬学的に許容し得る塩
から選択される請求項１〜３０のいずれかに記載の式（Ｉ）で示されるコンジュゲート。
【請求項３２】
式（ＩＩ）
Ｈ−Ｌ−Ａ      （ＩＩ）
で示されるコンジュゲート、又はその薬学的に許容し得る塩
［式中、Ａは、請求項１〜３１のいずれかに記載のとおりのγ−セクレターゼ阻害剤であり、Ｌは、請求項１〜３１のいずれかに記載のとおりのリンカーであり、そして、Ｈは、水素である］。
【請求項３３】
式（ＩＩａ）
【化８】
2018516957.tif 000053
を有する請求項３２に記載のコンジュゲート、又はその薬学的に許容し得る塩。
【請求項３４】
請求項１〜３３のいずれかに記載のコンジュゲートと薬学的に許容し得る賦形剤とを含む医薬組成物。
【請求項３５】
治療活性物質として使用するための、請求項１〜３３のいずれかに記載のコンジュゲート。
【請求項３６】
γ−セクレターゼ活性又はＮｏｔｃｈタンパク質の活性化に関連する疾患の処置又は予防において使用するための、請求項１〜３３のいずれかに記載のコンジュゲート。
【請求項３７】
γ−セクレターゼ活性又はＮｏｔｃｈタンパク質の活性化に関連する疾患を処置又は予防するための方法であって、請求項１〜３３のいずれかに記載のコンジュゲートをヒト又は動物に投与することを含む、方法。
【請求項３８】
γ−セクレターゼ活性又はＮｏｔｃｈタンパク質の活性化に関連する疾患を処置又は予防するための、請求項１〜３３のいずれかに記載のコンジュゲートの使用。
【請求項３９】
γ−セクレターゼ活性又はＮｏｔｃｈタンパク質の活性化に関連する疾患の処置又は予防に有用な医薬を調製するための、請求項１〜３３のいずれかに記載のコンジュゲートの使用。
【請求項４０】
本明細書中に上記される発明。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、式（Ｉ）：
Ｓ−Ｌ−Ａ      （Ｉ）
で示されるコンジュゲート、又はその薬学的に許容し得る塩（式中、Ａは、γ−セクレターゼ阻害剤であり、Ｌは、リンカーであり、そして、Ｓは、ペプチダーゼ特異的な基質である）、並びにそれらを製造するためのプロセス、それらを含む医薬組成物、及び医薬としてのそれらの使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
発明の背景
改善された効力及び低減された毒性を提供する標的化された治療薬が注目を集めている。臓器を特異的に標的化するためには２つの可能性がある（１つ目は、標的臓器において特異的に発現される受容体を介すること、又は、２つ目は、この臓器においてより高い発現若しくはより高い活性を有する酵素を介すること）。これらの概念を、更に良好な標的化のために組み合わせることができる。
【０００３】
組織標的化は、毒性副作用を最小限に抑えながら所望の治療効果を最大限に高めるための（即ち、治療指数を改善するための）、薬学的研究の重大なテーマである。腎特異的な薬物の標的化は、以下のために魅力的な選択肢であり得る：
・非所望の腎臓外の効果を回避する
・薬物の腎臓内輸送は、臓器内の標的細胞に関して最適ではないかもしれない
・幾らかの薬物は、それらが腎臓中の作用部位に達する前に、大部分が不活性化される
・糸球体濾過、尿細管分泌の異常、又はタンパク尿の発生などの病的状態は、薬物の正常な腎臓内分布に影響を与え得る。
【０００４】
更に、腎臓内での細胞特異的な薬物の標的化は、ある薬物作用の機序を理解する上での、そしてまた、このようにして腎臓生理学を操るための、ツールを提供し得る。
【０００５】
腎臓内での有足細胞への傷害は、末期腎不全へ進行する可能性のあるタンパク尿へと導く、多くの腎疾患の初期要因である。有足細胞は、糸球体の濾過障壁の維持において及び糸球体構造の完全性においての両方に重要な役割を果たしている。有足細胞への薬物標的化は、２つの重要な課題が課されている：（１）正しい細胞を標的化すること（ここでは、有足細胞の解剖学の理解、並びにそれがどのように周囲の細胞及び構造と相互作用するかが重要である）、そして（２）正しい薬理学的経路を選択し、取り組むこと、及びどの事象が有足細胞の損傷へと導くかということ。
【０００６】
糸球体硬化へと導く有足細胞の傷害と並行して、尿細管間質の線維化は、急性腎傷害（ＡＫＩ）のその他の特徴であり、この場合も、近位尿細管細胞への薬物標的化は、望まない副作用を発揮する薬物の毒性を低減することによって、及び／又は抗線維化薬の腎臓有効性を増加させることによって、それを処置するための新しいツールを提供し得る。
【０００７】
近年の腎疾患に対する高度な知識は、Ｎｏｔｃｈ経路を含む、細胞を標的化した治療薬を設計するための幾つかの候補経路をもたらした。腎臓内での糸球体細胞又は尿細管細胞への傷害は、進行性機能障害及び末期腎不全へと導く、多くの急性及び慢性疾患の初期要因である。糸球体は、腎機能全体を決定する主要な濾過障壁である。炎症性及び非炎症性ストレスは、糸球体に影響を及ぼし、その構造の（したがって、その透過性及び機能の）変化をもたらし、慢性腎疾患（ＣＫＤ）へと導く。尿細管間質組織への傷害は、特に衰弱した入院患者における急性腎傷害（ＡＫＩ）の主要因である。
【０００８】
急性腎傷害（ＡＫＩ）は、患者の高い罹患率（心血管系及び代謝系の合併症を含む）と関連し、有効な処置のない深刻な臨床状態である慢性腎疾患（ＣＫＤ）への進行についてのリスク因子である。腎疾患は、原発性であるか又は多臓器性、遺伝性、炎症性、自己免疫性、毒性若しくは代謝性障害の一部として生じ得る。腎臓において３つの主要な構造（糸球体、尿細管間質組織又は血管）が影響を受け、疾患の初期段階で別個の臨床症候群へと導き得る。しかしながら、初期損傷とは関係なく、疾患の進行は、不可逆的な糸球体硬化及び尿細管間質の線維化（したがって、透析又は腎移植を必要とする最終的な末期腎不全）へと導く。現行の治療は、ＣＫＤ進行を制限する原発性疾患を処置することを主に目的としている。過去の研究は、Ｎｏｔｃｈ経路に属する遺伝子が患者由来の腎臓試料及び腎疾患の動物モデルにおいてアップレギュレーションされたことを見出した。
【０００９】
Ｎｏｔｃｈは、膜挿入タンパク質であり、その活性部分は細胞内空間に向いている。γ−セクレターゼ酵素は、２つのアスパルチルプロテアーゼ触媒サブユニット（プレセニリン−１及び−２）と３つのサポートサブユニット（Ｐｅｎ−２、Ａｐｈ−１及びニカストリン）（全て膜タンパク質である）とからなる大きなプロテアーゼコンプレックスである。γ−セクレターゼの基質は、最初にニカストリンに結合し、次いで、膜内の加水分解を行うγ−セクレターゼへ向かって２つのプレセニリンサブユニット間で輸送される。γ−セクレターゼコンプレックスは、膜内部位でＮｏｔｃｈタンパク質のペプチド結合を加水分解して、切断化Ｎｏｔｃｈ細胞内ドメインを核へ移動させることを可能とし、そこでは、それが応答遺伝子を活性化することによって、Ｎｏｔｃｈを活性化することが可能である。γ−セクレターゼの膜内活性はまた、インスリン様成長因子又は選別受容体（sorting receptor）を含む、正常及び病理学的プロセスに関与する他の生物学的に関連した膜タンパク質の膜からの放出にも関与している。それ故、選択的な治療のために、この活性の限局的な阻害だけを達成し、その結果として、この酵素の（特に、Ｎｏｔｃｈ経路の）他の機能を保護することが必須である。
【００１０】
Ｎｏｔｃｈ経路は、腎疾患及び腎臓における組織損傷に関与すると報告されており、したがって、腎疾患を処置するための有望な候補である。しかしながら、γ−セクレターゼ及びＮｏｔｃｈ経路はまた、他の細胞（正常細胞を含む）の機能を制御する上でも重要であるため、Ｎｏｔｃｈアンタゴニストを病変腎臓細胞へ特異的に標的化するツールを開発する必要がある。
【００１１】
活性なＮｏｔｃｈ１タンパク質のコンディショナル発現を伴うマウスで行われた遺伝学的研究は、重度の糸球体硬化を示し、最終的に動物の腎不全及び死をもたらした。Ｎｏｔｃｈ転写結合パートナーの遺伝子欠失だけでなく、γ−セクレターゼ阻害剤を用いた処置（したがってγ−セクレターゼ媒介性のＮｏｔｃｈ活性化及び核への転移を阻害する）も、動物をネフローゼ症候群から保護した。したがって、Ｎｏｔｃｈ経路シグナル伝達の標的化された薬理学的阻害は、様々な疾患における腎臓損傷を防止し得る。Ｎｏｔｃｈ経路シグナル伝達のレギュレーションは、リガンド結合のレベル及びγ−セクレターゼコンプレックス媒介性の切断のレベルで主に生じる。次いで、切断化Ｎｏｔｃｈは核へ移動し、そこでは、それが応答遺伝子（Ｎｏｔｃｈ１それ自体を含む）を活性化する。
【００１２】
γ−セクレターゼを阻害する化合物及びその調製は、例えば、特許文献１に記載されている。その中に開示されている（６，７，８，９−テトラヒドロ−５−オキサ−９−アザ−ベンゾシクロヘプテン−７−イル）−マロンアミド誘導体は、アルツハイマー病又は一般的なガン（限定されるものではないが、子宮頸ガン及び乳ガン、並びに造血系の悪性腫瘍）の処置において有用であると報告されている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１３】
【特許文献１】国際公開第２００６／０６１１３６号
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１４】
薬物−担体コンジュゲートを調製するために一般的に適用されているアプローチは、薬物を担体に共有結合させることである。薬物と担体系との間の結合の特性は、薬物−担体コンジュゲートのインビボ挙動に大いに影響を及ぼす。コンジュゲートは、遊離薬物の早期喪失（即ち、担体が意図する標的細胞中に蓄積される前）を防止するために、循環中で安定である必要がある。しかし、その蓄積後、担体からの薬物の定量的放出及び親薬物の再生が望まれる。
【課題を解決するための手段】
【００１５】
本明細書中において、本発明者は、Ｎｏｔｃｈアンタゴニストとしてのγ−セクレターゼ阻害剤の腎臓中の濃度を局所的に増加させることを目的とした新規な治療戦略であって、傷害を受けた腎臓中の特定の細胞によって高レベルで発現される特異的な加水分解酵素−活性の基質に連結されたγ−セクレターゼ阻害剤のプロドラッグを調製することによる、治療戦略を記載する。理想的なプロドラッグは、ｉ）γ−セクレターゼに対して不活性であり、かつｉｉ）安全（マージン）ウィンドウ（window）を改善するために、腎臓においてのみ遊離され、血漿中及び例えば肝臓中の、親の非曝露又は非常に少ない曝露を有するであろう。
【００１６】
本明細書中においてインビトロアッセイだけでなく急性腎尿細管間質性疾患のマウスモデルによっても証明されるとおり、腎臓中でγ−セクレターゼ阻害ペイロード（pay-load）がプロドラッグから選択的に遊離され、Ｎｏｔｃｈ経路に対して調節効果を発揮する。本発明者のアプローチは、腎疾患という状況でＮｏｔｃｈ経路の活性化を選択的に制御するために、腎臓中のγ−グルタミルトランスペプチダーゼ（γ−ＧＴ）及び／又は特異的トランスポーター、並びに細胞内Ｎ−アシルアミン酸デアシラーゼ（ＡＣＹ１）及びγ−グルタミルシクロトランスフェラーゼ（γ−ＧＣＴ）を標的化する、γ−セクレターゼ阻害剤のＡｃ−γ−Ｇｌｕプロドラッグを包含する。本発明者は、そのようなアプローチが治療薬の安定性及び設計されたプロドラッグの病変腎臓に対する選択性を改善することが可能であったことを示すことができ、急性及び慢性腎障害を有する患者のためのＮｏｔｃｈ経路を制御することを目的とした、処置の改善及び治療の副作用の減少の道を切り開く可能性がある。
【図面の簡単な説明】
【００１７】
【図１Ａ】ヒトの病変腎臓におけるＡＰＡ及びγ−ＧＴの酵素活性のヒストエンザイモグラフィー。凍結させたＯＣＴ包埋したヒトの病変腎臓の切片（７μm）を、３７℃で、β−メトキシナフチルアミド（β−ＮＡ）特異的な基質のＡＰＡ（α−Ｇｌｕ−βＮＡ）又はγ−ＧＴ（γ−Ｇｌｕ−βＮＡ）、及びファストブルーＢ（Fast Blue B）に曝露させ、次いで、明ヘマトキシリン（light hematoxylin）試薬で切片を対比染色した。酵素活性を赤色の沈殿物として可視化する。
【図１Ｂ】ヒトの病変腎臓におけるＡＰＡ及びγ−ＧＴの酵素活性のヒストエンザイモグラフィー。凍結させたＯＣＴ包埋したヒトの病変腎臓の切片（７μm）を、３７℃で、β−メトキシナフチルアミド（β−ＮＡ）特異的な基質のＡＰＡ（α−Ｇｌｕ−βＮＡ）又はγ−ＧＴ（γ−Ｇｌｕ−βＮＡ）、及びファストブルーＢ（Fast Blue B）に曝露させ、次いで、明ヘマトキシリン（light hematoxylin）試薬で切片を対比染色した。酵素活性を赤色の沈殿物として可視化する。
【図２Ａ】α−Ｇｌｕ−及びγ−Ｇｌｕ−セクレターゼ阻害剤プロドラッグについてのアミン−ＳｅｃｒＩ（１１ａ）代謝物の細胞外放出。プロドラッグを細胞に１９時間加え、次いで、上清を回収し、ＳｅｃｒＩ（８）、アミン−ＳｅｃｒＩ（１１ａ）、プロドラッグ１３ａ、１３ｂ、１５ａ、１５ｂについて、及び（１３ａ、１５ａについて）対応する脱アセチル代謝物についても分析した。白色：ＨＥＫ２９３細胞；明灰色：２１５／Ｆ２細胞；暗灰色：ＨＫ２細胞；黒色：ＥＣ２１９細胞  加えたＣｐｄ：ＰＢＳ中 ２０μM、１９時間のインキュベーション。ＳｅｃｒＩ（８）は、細胞に加えた場合、１９時間安定である；遊離ＳｅｃｒＩ（８）は、どのプロドラッグからも全く検出されなかった。
【図２Ｂ】未病変ＢＡＬＢ／ｃマウスの腎臓におけるヒストエンザイモグラフィーによって決定された、γ−セクレターゼ類似体によるＡＰＡ及びγＧＴの酵素活性の選択的阻害。
【図３】アリストロキア酸（ＡＡ）に曝露された、並びにアミン−ＳｅｃｒＩ（１１ａ）で又はＡｃ−γ−Ｇｌｕ−ＳｅｃｒＩ（１３ａ）でのいずれかで処置されたマウスの腎臓の免疫組織化学よって決定された、Ｎｏｔｃｈ１及び活性な切断化Ｎｏｔｃｈ１の発現。急速凍結された腎臓の切片（７μm）を、抗γ−セクレターゼ−切断化Ｎｏｔｃｈ（ｃＮｏｔｃｈ）抗体に曝露させ、続いて、アルカリホスファターゼファストレッド色素原で染色した。免疫染色を暗色の沈殿物として可視化する。
【発明を実施するための形態】
【００１８】
発明の詳細な説明
別段の定義のない限り、本明細書中で使用される全ての技術用語及び科学用語は、本発明が属する技術分野の当業者によって一般的に理解されているものと同じ意味を有する。本明細書中に記載されるものと類似又は等価の方法及び材料を、本発明の実施又は試験に使用することができるが、好適な方法及び材料を後述する。
【００１９】
本明細書中で言及する全ての刊行物、特許出願、特許及び他の参考文献は、参照によってそれらの全体が援用されるものである。
【００２０】
本出願において使用される命名法は、そうではないと指示されない限り、ＩＵＰＡＣ体系の命名法に基づくものである。
【００２１】
本明細書中における構造中の炭素、酸素、イオウ又は窒素原子上に現れる任意の空の原子価（open valency）は、そうではないと指示されない限り、水素の存在を示す。
【００２２】
用語「部分」は、別の原子又は分子に１以上の化学結合によって連結し、それによって分子の一部を形成する、原子又は化学的に結合された原子群を指す。例えば、式（Ｉ）の可変部Ｒ１、Ｒ２及びＲ３は、式（Ｉ）の核構造に共有結合によって連結された部分を指す。
【００２３】
置換基の数を示す場合、用語「１以上」は、１個の置換基から最大限可能な数の置換（即ち、置換基による、１個の水素の置き換えから全ての水素の置き換えまで）の範囲を指す。
【００２４】
用語「場合による」又は「場合により」は、続いて記載される事象又は状況が起こってもよいが起こる必要もないこと、そして、該記載が該事象又は状況が起こる場合とそれが起こらない場合とを含むことを表す。
【００２５】
用語「置換基」は、親分子上の水素原子を置き換える原子又は原子群を表す。
【００２６】
用語「本発明の化合物（compound(s) of this invention）」及び「本発明の化合物（compound(s) of the present invention）」は、本明細書中に開示されるとおりの化合物、並びにその立体異性体、互変異性体、溶媒和物及び塩（例えば、薬学的に許容し得る塩）を指す。
【００２７】
本発明の化合物が固体である場合、これらの化合物、並びにそれらの溶媒和物及び塩が、様々な固体形態（特には、様々な結晶形態）で存在してもよく、その全てが、本発明の範囲内及び具体的な式の範囲内であることが意図されていることが、当業者によって理解される。
【００２８】
用語「薬学的に許容し得る塩」は、生物学的にもその他の面でも非所望ではない塩を表す。薬学的に許容し得る塩は、酸付加塩及び塩基付加塩の両方を含む。
【００２９】
用語「薬学的に許容し得る酸付加塩」は、無機酸（塩酸、臭化水素酸、硫酸、硝酸、炭酸、リン酸など）、並びに有機酸の脂肪族、脂環式、芳香族、芳香族脂肪族（araliphatic）、複素環式、カルボン酸及びスルホン酸のクラスから選択される有機酸（ギ酸、酢酸、プロピオン酸、グリコール酸、グルコン酸、乳酸、ピルビン酸、シュウ酸、リンゴ酸、マレイン酸、マロン酸、コハク酸、フマル酸、酒石酸、クエン酸、アスパラギン酸、アスコルビン酸、グルタミン酸、アントラニル酸、安息香酸、ケイ皮酸、マンデル酸、エンボン酸、フェニル酢酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、ｐ−トルエンスルホン酸及びサリチル酸など）と形成されるそれらの薬学的に許容し得る塩を表す。
【００３０】
用語「薬学的に許容し得る塩基付加塩」は、有機塩基又は無機塩基と形成されるそれらの薬学的に許容し得る塩を表す。許容し得る無機塩基の例は、ナトリウムの、カリウムの、アンモニウムの、カルシウムの、マグネシウムの、鉄の、亜鉛の、銅の、マンガンの及びアルミニウムの塩を含む。薬学的に許容し得る有機の無毒の塩基から誘導される塩は、第一級、第二級及び第三級アミン、天然の置換アミンを含む置換アミン、環式アミン、並びに塩基性イオン交換樹脂（例えば、イソプロピルアミン、トリメチルアミン、ジエチルアミン、トリエチルアミン、トリプロピルアミン、エタノールアミン、２−ジエチルアミノエタノール、トリメタミン、ジシクロへキシルアミン、リジン、アルギニン、ヒスチジン、カフェイン、プロカイン、ヒドラバミン、コリン、ベタイン、エチレンジアミン、グルコサミン、メチルグルカミン、テオブロミン、プリン類、ピペラジン、ピペリジン、Ｎ−エチルピペリジン及びポリアミン樹脂）の塩を含む。
【００３１】
本明細書中で使用される立体化学の定義及び規則は、一般に、S. P. Parker, Ed., McGraw-Hill Dictionary of Chemical Terms (1984) McGraw-Hill Book Company, New York; 及び Eliel, E. and Wilen, S., “Stereochemistry of Organic Compounds”, John Wiley & Sons, Inc., New York, 1994 に従う。光学活性な化合物を記載する際に、接頭文字のＤ及びＬ、又はＲ及びＳが、そのキラル中心についての分子の絶対配置を表するために使用される。考慮されるキラル中心に連結している置換基は、Ｃａｈｎ、Ｉｎｇｏｌｄ及びＰｒｅｌｏｇの順位則により順位付けされる。（Cahn et al. Angew. Chem. Inter. Edit. 1966, 5, 385; errata 511）。接頭文字のＤ及びＬ、又は（＋）及び（−）は、化合物による平面偏光の回転の符号を指すために用いられ、（−）又はＬは、その化合物が左旋性であることを示す。接頭文字（＋）又はＤが付けられた化合物は右旋性である。
【００３２】
用語「立体異性体」は、同一の分子の連結性及び結合多重性を有するが、その原子の空間における配置が異なる化合物を表す。
【００３３】
用語「キラル中心」は、４つの同一でない置換基に結合している炭素原子を表す。用語「キラル」は、鏡像と重ね合わせることができない機能を表し、一方で、用語「アキラル」は、それらの鏡像と重ね合わせることができる実施態様を指す。キラル分子は、光学活性であり、即ち、これらは平面偏光面を回転させる能力を有する。
【００３４】
本発明の化合物は、１以上のキラル中心を有することができ、光学的に純粋なエナンチオマー、エナンチオマーの混合物（例えば、ラセミ体等）、光学的に純粋なジアステレオ異性体、ジアステレオ異性体の混合物、ジアステレオ異性体のラセミ体、又はジアステレオ異性体のラセミ体の混合物の形態で存在することができる。化学構造内にキラル中心が存在する場合はいつでも、そのキラル中心と関連する全ての立体異性体が、本発明に包含されることが意図される。
【００３５】
用語「ハロ」、「ハロゲン」及び「ハライド」は、本明細書中で互換可能に使用され、そして、これは、フルオロ、クロロ、ブロモ又はヨードを表す。ハロゲンの特定の例は、フルオロである。
【００３６】
用語「アルキル」は、１〜１２個の炭素原子の一価の直鎖の又は分岐の飽和炭化水素基を表す。特定の実施態様において、アルキルは、１〜７個の炭素原子（より特定の実施態様において、１〜４個の炭素原子）を有する。アルキルの例は、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、イソ−ブチル、sec−ブチル、又はtert−ブチルを含む。アルキルの特定の例は、メチルである。
【００３７】
用語「アルケニル」は、少なくとも１個の二重結合を有する、２〜７個の炭素原子の一価の直鎖の又は分岐の炭化水素基を表す。特定の実施態様において、アルケニルは、少なくとも１個の二重結合を有する、２〜４個の炭素原子を有する。アルケニルの例は、エテニル、プロペニル、プロパ−２−エニル、イソプロペニル、ｎ−ブテニル、及びイソ−ブテニルを含む。
【００３８】
用語「アルコキシ」は、式−Ｏ−Ｒ’（式中、Ｒ’は、アルキル基である）で示される基を表す。アルコキシ部分の例は、メトキシ、エトキシ、イソプロポキシ、及びtert−ブトキシを含む。
【００３９】
用語「ハロアルキル」は、アルキル基の水素原子のうちの少なくとも１個が同じか又は異なるハロゲン原子（特に、フルオロ原子）によって置き換わっている、アルキル基を表す。ハロアルキルの例は、モノフルオロ−、ジフルオロ−若しくはトリフルオロ−のメチル、−エチル又は−プロピル（例えば、３，３，３−トリフルオロプロピル、２−フルオロエチル、２，２，２−トリフルオロエチル、フルオロメチル、又はトリフルオロメチル）を含む。用語「パーハロアルキル」は、アルキル基の全ての水素原子が同じか又は異なるハロゲン原子によって置き換わっている、アルキル基を表す。ハロアルキルの特定の例は、−ＣＨ２−ＣＦ３、−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＦ３又は−ＣＨ２−ＣＦ２−ＣＦ３（最も特定すると−ＣＨ２−ＣＦ２−ＣＦ３）である。
【００４０】
用語「ヒドロキシアルキル」は、アルキル基の水素原子のうちの少なくとも１個がヒドロキシ基に置き換わっている、アルキル基を表す。ヒドロキシアルキルの例は、ヒドロキシメチル、２−ヒドロキシエチル、２−ヒドロキシプロピル、３−ヒドロキシプロピル、１−（ヒドロキシメチル）−２−メチルプロピル、２−ヒドロキシブチル、３−ヒドロキシブチル、４−ヒドロキシブチル、２，３−ジヒドロキシプロピル、２−ヒドロキシ−１−ヒドロキシメチルエチル、２，３−ジヒドロキシブチル、３，４−ジヒドロキシブチル又は２−（ヒドロキシメチル）−３−ヒドロキシプロピルを含む。ヒドロキシアルキルの特定の例は、−ＣＨ２−ＣＨ２−ＯＨである。
【００４１】
用語「シクロアルキル」は、３〜１０個の環炭素原子の一価の飽和の単環式又は二環式炭化水素基を表す。特定の実施態様において、シクロアルキルは、３〜８個の環炭素原子の一価の飽和単環式炭化水素基を表す。二環式は、１以上の炭素原子を共有する２個の飽和炭素環からなることを意味する。特定のシクロアルキル基は、単環式である。単環式シクロアルキルについての例は、シクロプロピル、シクロブタニル、シクロペンチル、シクロヘキシル又はシクロヘプチルである。二環式シクロアルキルについての例は、ビシクロ［２．２．１］ヘプタニル、又はビシクロ［２．２．２］オクタニルである。
【００４２】
用語「アミノ」は、式−ＮＲ’Ｒ’’（式中、Ｒ’及びＲ’’は、独立して、水素、アルキル、アルコキシ、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール又はヘテロアリールである）で示される基を表す。或いは、Ｒ’及びＲ’’は、それらが連結している窒素と一緒になって、ヘテロシクロアルキルを形成することができる。用語「第一級アミノ」は、Ｒ’とＲ’’の両方が水素である基を表す。用語「第二級アミノ」は、Ｒ’が水素であり、かつＲ’’が水素ではない基を表す。用語「第三級アミノ」は、Ｒ’とＲ’’の両方が水素ではない基を表す。特定の第二級及び第三級アミンは、メチルアミン、エチルアミン、プロピルアミン、イソプロピルアミン、フェニルアミン、ベンジルアミン、ジメチルアミン、ジエチルアミン、ジプロピルアミン及びジイソプロピルアミンである。
【００４３】
用語「活性な薬学的成分」（又は「ＡＰＩ」）は、特定の生物学的活性を有する医薬組成物中の化合物又は分子を表す。
【００４４】
用語「医薬組成物」及び「医薬製剤」（又は「製剤」）は、互換可能に使用され、そして、それを必要とする哺乳動物（例えば、ヒト）に投与されるべき、薬学的に許容し得る賦形剤と一緒に治療有効量の活性な薬学的成分を含む、混合物又は溶液を表す。
【００４５】
用語「薬学的に許容し得る」は、一般に、安全で、無毒で、生物学的にも又はその他の点でも非所望ではなく、かつ、獣医学的な並びにヒトの薬学的な使用に許容し得る、医薬組成物の調製に有用な材料の特性を表す。
【００４６】
用語「薬学的に許容し得る賦形剤」、「薬学的に許容し得る担体」及び「治療上不活性な賦形剤」は、互換可能に使用され得、そして、医薬品の製剤化において使用される、治療活性を有さず、かつ投与される被験体に対して無毒である医薬組成物中の任意の薬学的に許容し得る成分（例えば、崩壊剤、結合剤、充填剤、溶解剤、緩衝剤、等張化剤、安定化剤、酸化防止剤、界面活性剤、担体、希釈剤又は潤滑剤）を表す。
【００４７】
「個体」又は「被験体」は、哺乳動物である。哺乳動物は、限定されるものではないが、家畜（例えば、ウシ、ヒツジ、ネコ、イヌ及びウマ）、霊長類（例えば、ヒト及びヒト以外の霊長類（例えば、サル））、ウサギ、及びげっ歯類（例えば、マウス及びラット）を含む。ある実施態様において、個体又は被験体は、ヒトである。
【００４８】
本明細書中において使用される場合の用語「動物」は、ヒト及びヒト以外の動物を含む。一実施態様において、「ヒト以外の動物」は、哺乳動物、例えば、げっ歯類（ラット又はマウスなど）である。一実施態様において、ヒト以外の動物は、マウスである。
【００４９】
用語「半最大阻害濃度」（ＩＣ５０）は、インビトロで生物学的プロセスの５０％阻害を得るために必要な特定の化合物又は分子の濃度を表す。ＩＣ５０値は、ｐＩＣ５０値（−ｌｏｇＩＣ５０）に対数変換することができ、それは、より高い値が指数関数的により大きい効力を指す。ＩＣ５０値は絶対値ではないが、実験条件（例えば、用いられる濃度）に依存する。ＩＣ５０値は、Ｃｈｅｎｇ−Ｐｒｕｓｏｆｆ方程式を使用して、絶対阻害定数（Ｋｉ）に変換することができる（Biochem. Pharmacol. (1973) 22:3099）。
【００５０】
用語「治療有効量」は、被験体に投与された場合、（ｉ）特定の疾患、病態若しくは障害を処置又は予防する、（ｉｉ）特定の疾患、病態若しくは障害の１以上の症状を減弱、改善又は解消する、或いは（ｉｉｉ）本明細書中に記載される特定の疾患、病態若しくは障害の１以上の症状の発症を予防又は遅延させる、本発明の化合物又は分子の量を表す。治療有効量は、化合物、処置される疾患状態、処置される疾患の重症度、被験体の年齢及び相対的な健康度、投与の経路及び形態、担当する医師又は獣医師の判断、並びに他の要因に応じて変化するだろう。
【００５１】
疾患状態を「処置する」又は疾患状態の「処置」という用語は、疾患状態を抑制すること（即ち、疾患状態若しくはその臨床症状の発生を抑止すること）、又は疾患状態を緩和すること（即ち、疾患状態若しくはその臨床症状の一時的若しくは永久的な後退を引き起こすこと）を含む。
【００５２】
疾患状態を疾患状態の「予防（preventing）」又は「予防（prevention）」という用語は、疾患状態に曝されているか又は罹り易くなっているがまだ疾患状態の症状を経験又は呈していない被験体において、疾患状態の臨床症状の発症を生じさせないことを表す。
【００５３】
詳細には、本発明は、式（Ｉ）
Ｓ−Ｌ−Ａ      （Ｉ）
で示されるコンジュゲート、又はその薬学的に許容し得る塩
［式中、Ａは、ヒドロキシ部分を有するγ−セクレターゼ阻害剤であり、Ｌは、切断可能なリンカーであり、そして、Ｓは、ペプチダーゼ特異的な基質である］
に関する。
【００５４】
本発明の特定の実施態様において、Ａは、ヒドロキシ部分を有するγ−セクレターゼ阻害剤である。
【００５５】
本発明の特定の実施態様において、Ｌは、切断可能なリンカー（特に、アミノエチル−カルバマートリンカー）である。
【００５６】
本発明の特定の実施態様において、Ｓは、認識モチーフ／標的化ベクター／ペプチダーゼ特異的な基質（特に、トランスポーターに対する、γ−グルタミルトランスペプチダーゼ特異的な基質（γ−ＧＴ、ＥＣ２．３．２．２）、γ−グルタミルシクロトランスフェラーゼ（γ−ＧＣＴ、ＥＣ２．３．２．４）及び／又は（グルタミル）アミノペプチダーゼＡ特異的な基質（ＡＰＡ、ＥＣ３．４．１１．７）に対する）である。
【００５７】
本発明の一実施態様において、Ａは、式（Ａ１）
【化１】
2018516957.tif 000002
［式中、
Ｘは、−ＣＲ４Ｒ４’−又は−ＣＲ４Ｒ４’−Ｏ−であり；
Ｒは、ハロゲン、Ｃ１−７アルキル、又はハロゲンによって置換されているＣ１−７アルキルであり；
Ｒ１は、水素、Ｃ１−７アルキル、ハロゲン若しくはヒドロキシによって置換されているＣ１−７アルキル、Ｃ１−７アルケニル、−（ＣＨ２）ｍ−Ｃ３−８シクロアルキル、−（ＣＨ２）ｍ−ＣＯＲ’、−（ＣＨ２）ｍ−モルホリニル、ベンジル、又はハロゲンによって置換されているベンジルであり；
Ｒ’は、Ｃ１−７アルコキシ、ヒドロキシ又はアミノであり；
Ｒ２は、水素、Ｃ１−７アルキル、ハロゲン若しくはヒドロキシによって置換されているＣ１−７アルキルであるか、又はベンジル若しくはＣ３−８シクロアルキルであり；
Ｒ３は、Ｃ１−７アルキル、ハロゲンによって置換されているＣ１−７アルキルであり、ベンジル、２個のハロゲンによって置換されているベンジルであり、−（ＣＨ２）ｍ−Ｃ３−８シクロアルキル又は−（ＣＨ２）ｍ−ピリジニルであり；
Ｒ４及びＲ４’は、互いに独立して、水素、ハロゲン、Ｃ１−７アルキル、ヒドロキシによって置換されているＣ１−７アルキル、Ｃ１−７アルコキシ、又はヒドロキシであり；
ｎは、０、１又は２であり；
ｍは、０、１又は２であり；
但し、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ４又はＲ４’のうちの少なくとも１つは、ヒドロキシ、又はヒドロキシによって置換されているＣ１−７アルキルである］
で示される部分であり、Ｌは、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ４又はＲ４’のヒドロキシ基でＡに結合している。
【００５８】
式（Ａ１）で示される化合物及びその調製は、特許文献１に記載されており、それは、参照により本明細書中に援用されるものである。式（Ａ１）で示される化合物は、特許文献１において、１７〜１８ページのインビトロＩＣ５０データによって証明されているとおりγ−セクレターゼ阻害剤であると記載されている。式（Ａ１）で示される化合物は、特許文献１にアルツハイマー病又は一般的なガンの処置に有用であると開示されている。
【００５９】
本発明の特定の実施態様において、Ｌは、Ｒ１のヒドロキシ基でＡに結合している。
【００６０】
本発明の一実施態様において、Ｘは、−ＣＨ２−、−ＣＨＣＨ３−、−ＣＨ（ＣＨ２ＣＨ３）−、−Ｃ（ＣＨ３）２−、−Ｃ（ＣＨ３）（ＯＨ）−、−Ｃ（ＣＨ２ＣＨ３）（ＯＨ）−、−ＣＨ（ＯＣＨ３）−又は−Ｃ（ＣＨ３）２−Ｏ−である。
【００６１】
本発明の一実施態様において、Ｘは、−Ｃ（ＣＨ３）２−、−Ｃ（ＣＨ３）（ＯＨ）−、又は−Ｃ（ＣＨ２ＣＨ３）（ＯＨ）−である。
【００６２】
本発明の特定の実施態様において、Ｘは、−Ｃ（ＣＨ３）（ＯＨ）−である。
【００６３】
本発明の一実施態様において、Ｒは、ハロゲン（特に、フルオロ）である。
【００６４】
本発明の一実施態様において、ｎは、１である。
【００６５】
本発明の一実施態様において、Ｒ１は、水素、ハロゲンによって置換されているＣ１−７アルキル、又はヒドロキシによって置換されているＣ１−７アルキル（特に、ヒドロキシによって置換されているＣ１−７アルキル）である。
【００６６】
本発明の一実施態様において、Ｒ１は、水素、−ＣＨ２−ＣＦ３又は−ＣＨ２−ＣＨ２−ＯＨであり、特に、Ｒ１は、−ＣＨ２−ＣＨ２−ＯＨである。
【００６７】
本発明の一実施態様において、Ｒ２は、Ｃ１−７アルキル、ヒドロキシによって置換されているＣ１−７アルキル、又はＣ３−８シクロアルキルであり、特に、Ｒ２は、Ｃ１−７アルキルである。
【００６８】
本発明の一実施態様において、Ｒ２は、メチル、エチル、ヒドロキシ−エチル又はシクロプロピルであり、特に、Ｒ２は、メチルである。
【００６９】
本発明の一実施態様において、Ｒ３は、ハロゲンによって置換されているＣ１−７アルキルであり、特に、Ｒ３は、３個又は５個のフルオロによって置換されているＣ１−７アルキルである。
【００７０】
本発明の一実施態様において、Ｒ３は、−ＣＨ２−ＣＦ３、−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＦ３又は−ＣＨ２−ＣＦ２−ＣＦ３であり、特に、Ｒ３は、−ＣＨ２−ＣＦ２−ＣＦ３である。
【００７１】
本発明の一実施態様において、Ａは、式（Ａ２）
【化２】
2018516957.tif 000003
［式中、Ｘ、Ｒ、ｎ、Ｒ２及びＲ３は、本明細書中に記載されるとおりである］
で示される部分である。
【００７２】
本発明の一実施態様において、Ａは、式（Ａ３）
【化３】
2018516957.tif 000004
［式中、Ｘ、Ｒ、Ｒ２及びＲ３は、本明細書中に記載されるとおりである］
で示される部分である。
【００７３】
本発明の一実施態様において、Ａは、式（Ａ４）
【化４】
2018516957.tif 000005
で示される部分である。
【００７４】
本発明の一実施態様において、Ａは、式（Ａ５）
【化５】
2018516957.tif 000006
で示される部分である。
【００７５】
本発明の特定の実施態様は、部分Ａが、以下のリスト：
Ｎ−［（６Ｒ，７Ｓ）−２−フルオロ−９−（２−ヒドロキシ−エチル）−６−メチル−８−オキソ−６，７，８，９−テトラヒドロ−５−オキサ−９−アザ−ベンゾシクロヘプテン−７−イル］−２，２−ジメチル−Ｎ’−（２，２，３，３，３−ペンタフルオロ−プロピル）−マロンアミド；
Ｎ−（（６Ｒ，７Ｓ）−６−シクロプロピル−２−フルオロ−８−オキソ−６，７，８，９−テトラヒドロ−５−オキサ−９−アザ−ベンゾシクロヘプテン−７−イル）−２−ヒドロキシ−２−メチル−Ｎ’−（２，２，３，３，３−ペンタフルオロ−プロピル）−マロンアミド；
Ｎ−（（６Ｒ，７Ｓ）−６−シクロプロピル−２−フルオロ−８−オキソ−６，７，８，９−テトラヒドロ−５−オキサ−９−アザ−ベンゾシクロヘプテン−７−イル）−２−ヒドロキシ−２−メチル−Ｎ’−（２，２，３，３，３−ペンタフルオロ−プロピル）−マロンアミド；
（Ｓ）−Ｎ−［（６Ｒ，７Ｓ）−２−フルオロ−９−（２−ヒドロキシ−エチル）−６−メチル−８−オキソ−６，７，８，９−テトラヒドロ−５−オキサ−９−アザ−ベンゾシクロヘプテン−７−イル］−２−ヒドロキシ−２−メチル−Ｎ’−（２，２，３，３，３−ペンタフルオロ−プロピル）−マロンアミド；
（Ｒ）−Ｎ−［（６Ｒ，７Ｓ）−２−フルオロ−９−（２−ヒドロキシ−エチル）−６−メチル−８−オキソ−６，７，８，９−テトラヒドロ−５−オキサ−９−アザ−ベンゾシクロヘプテン−７−イル］−２−ヒドロキシ−２−メチル−Ｎ’−（２，２，３，３，３−ペンタフルオロ−プロピル）−マロンアミド；
（Ｒ又はＳ）Ｎ−［（６Ｒ，７Ｓ）−２−フルオロ−６−メチル−８−オキソ−９−（２，２，２−トリフルオロ−エチル）−６，７，８，９−テトラヒドロ−５−オキサ−９−アザ−ベンゾシクロヘプテン−７−イル］−２−ヒドロキシ−２−メチル−Ｎ’−（２，２，３，３，３−ペンタフルオロ−プロピル）−マロンアミド；
（Ｒ又はＳ）Ｎ−［（６Ｒ，７Ｓ）−２−フルオロ−６−メチル−８−オキソ−９−（２，２，２−トリフルオロ−エチル）−６，７，８，９−テトラヒドロ−５−オキサ−９−アザ−ベンゾシクロヘプテン−７−イル］−２−ヒドロキシ−２−メチル−Ｎ’−（２，２，３，３，３−ペンタフルオロ−プロピル）−マロンアミド；
（Ｓ）−Ｎ−［（６Ｒ，７Ｓ）−２−フルオロ−６−メチル−８−オキソ−９−（２，２，２−トリフルオロ−エチル）−６，７，８，９−テトラヒドロ−５−オキサ−９−アザ−ベンゾシクロヘプテン−７−イル］−２−ヒドロキシ−２−メチル−Ｎ’−（２，２，２−トリフルオロ−エチル）−マロンアミド；
（Ｒ）−Ｎ−［（６Ｒ，７Ｓ）−２−フルオロ−６−メチル−８−オキソ−９−（２，２，２−トリフルオロ−エチル）−６，７，８，９−テトラヒドロ−５−オキサ−９−アザ−ベンゾシクロヘプテン−７−イル］−２−ヒドロキシ−２−メチル−Ｎ’−（２，２，２−トリフルオロ−エチル）−マロンアミド；
（Ｒ又はＳ）Ｎ−［（６Ｒ，７Ｓ）−２−フルオロ−６−メチル−８−オキソ−９−（２，２，２−トリフルオロ−エチル）−６，７，８，９−テトラヒドロ−５−オキサ−９−アザ−ベンゾシクロヘプテン−７−イル］−２−ヒドロキシ−２−メチル−Ｎ’−（３，３，３−トリフルオロ−プロピル）−マロンアミド；
（Ｒ又はＳ）Ｎ−［（６Ｒ，７Ｓ）−２−フルオロ−６−メチル−８−オキソ−９−（２，２，２−トリフルオロ−エチル）−６，７，８，９−テトラヒドロ−５−オキサ−９−アザ−ベンゾシクロヘプテン−７−イル］−２−ヒドロキシ−２−メチル−Ｎ’−（３，３，３−トリフルオロ−プロピル）−マロンアミド；
Ｎ−［（６Ｓ，７Ｒ）−６−エチル−２−フルオロ−８−オキソ−９−（２，２，２−トリフルオロ−エチル）−６，７，８，９−テトラヒドロ−５−オキサ−９−アザ−ベンゾシクロヘプテン−７−イル］−２，２−ジメチル−Ｎ−（２，２，３，３，３−ペンタフルオロ−プロピル）−マロンアミド；
（Ｒ又はＳ）−２−エチル−Ｎ−（（６Ｒ，７Ｓ）−６−エチル−２−フルオロ−８−オキソ−６，７，８，９−テトラヒドロ−５−オキサ−９−アザ−ベンゾシクロヘプテン−７−イル）−２−ヒドロキシ−Ｎ−（２，２，２−トリフルオロ−エチル）−マロンアミド；
（Ｓ又はＲ）−２−エチル−Ｎ−（（６Ｒ，７Ｓ）−６−エチル−２−フルオロ−８−オキソ−６，７，８，９−テトラヒドロ−５−オキサ−９−アザ−ベンゾシクロヘプテン−７−イル）−２−ヒドロキシ−Ｎ−（２，２，２−トリフルオロ−エチル）−マロンアミド；
（Ｒ又はＳ）−２−エチル−Ｎ−（（６Ｒ，７Ｓ）−６−エチル−２−フルオロ−８−オキソ−６，７，８，９−テトラヒドロ−５−オキサ−９−アザ−ベンゾシクロヘプテン−７−イル）−２−ヒドロキシ−Ｎ−（２，２，３，３，３−ペンタフルオロ−プロピル）−マロンアミド；
（Ｓ又はＲ）−２−エチル−Ｎ−（（６Ｒ，７Ｓ）−６−エチル−２−フルオロ−８−オキソ−６，７，８，９−テトラヒドロ−５−オキサ−９−アザ−ベンゾシクロヘプテン−７−イル）−２−ヒドロキシ−Ｎ−（２，２，３，３，３−ペンタフルオロ−プロピル）−マロンアミド；
（Ｒ又はＳ）−２−エチル−Ｎ−（（６Ｒ，７Ｓ）−６−エチル−２−フルオロ−８−オキソ−６，７，８，９−テトラヒドロ−５−オキサ−９−アザ−ベンゾシクロヘプテン−７−イル）−２−ヒドロキシ−Ｎ−（３，３，３−トリフルオロ−プロピル）−マロンアミド；
（Ｓ又はＲ）−２−エチル−Ｎ−（（６Ｒ，７Ｓ）−６−エチル−２−フルオロ−８−オキソ−６，７，８，９−テトラヒドロ−５−オキサ−９−アザ−ベンゾシクロヘプテン−７−イル）−２−ヒドロキシ−Ｎ−（３，３，３−トリフルオロ−プロピル）−マロンアミド；
（Ｒ又はＳ）−２−エチル−Ｎ−［（６Ｒ，７Ｓ）−６−エチル−２−フルオロ−８−オキソ−９−（２，２，２−トリフルオロ−エチル）−６，７，８，９−テトラヒドロ−５−オキサ−９−アザ−ベンゾシクロヘプテン−７−イル］−２−ヒドロキシ−Ｎ−（２，２，２−トリフルオロ−エチル）−マロンアミド；
（Ｓ又はＲ）−２−エチル−Ｎ−［（６Ｒ，７Ｓ）−６−エチル−２−フルオロ−８−オキソ−９−（２，２，２−トリフルオロ−エチル）−６，７，８，９−テトラヒドロ−５−オキサ−９−アザ−ベンゾシクロヘプテン−７−イル］−２−ヒドロキシ−Ｎ−（２，２，２−トリフルオロ−エチル）−マロンアミド；
（Ｒ又はＳ）−２−エチル−Ｎ−［（６Ｒ，７Ｓ）−６−エチル−２−フルオロ−８−オキソ−９−（２，２，２−トリフルオロ−エチル）−６，７，８，９−テトラヒドロ−５−オキサ−９−アザ−ベンゾシクロヘプテン−７−イル］−２−ヒドロキシ−Ｎ−（２，２，３，３，３−ペンタフルオロ−プロピル）−マロンアミド；
（Ｓ又はＲ）−２−エチル−Ｎ−［（６Ｒ，７Ｓ）−６−エチル−２−フルオロ−８−オキソ−９−（２，２，２−トリフルオロ−エチル）−６，７，８，９−テトラヒドロ−５−オキサ−９−アザ−ベンゾシクロヘプテン−７−イル］−２−ヒドロキシ−Ｎ−（２，２，３，３，３−ペンタフルオロ−プロピル）−マロンアミド；
Ｎ−［（６Ｒ，７Ｓ）−２−フルオロ−６−（２−ヒドロキシ−エチル）−８−オキソ−６，７，８，９−テトラヒドロ−５−オキサ−９−アザ−ベンゾシクロヘプテン−７−イル］−２，２−ジメチル−Ｎ’−（２，２，３，３，３−ペンタフルオロ−プロピル）−マロンアミド；
Ｎ−［（６Ｓ，７Ｒ）−２−フルオロ−６−（２−ヒドロキシ−エチル）−８−オキソ−６，７，８，９−テトラヒドロ−５−オキサ−９−アザ−ベンゾシクロヘプテン−７−イル］−２，２−ジメチル−Ｎ’−（２，２，３，３，３−ペンタフルオロ−プロピル）−マロンアミド；
（Ｓ）−Ｎ−［（６Ｓ，７Ｒ）−２−フルオロ−６−（２−ヒドロキシ−エチル）−８−オキソ−６，７，８，９−テトラヒドロ−５−オキサ−９−アザ−ベンゾシクロヘプテン−７−イル］−２−ヒドロキシ−２−メチル−Ｎ’−（２，２，２−トリフルオロ−エチル）−マロンアミド；
（Ｒ）−Ｎ−［（６Ｓ，７Ｒ）−２−フルオロ−６−（２−ヒドロキシ−エチル）−８−オキソ−６，７，８，９−テトラヒドロ−５−オキサ−９−アザ−ベンゾシクロヘプテン−７−イル］−２−ヒドロキシ−２−メチル−Ｎ’−（２，２，２−トリフルオロ−エチル）−マロンアミド；
（Ｓ）−Ｎ−［（６Ｒ，７Ｓ）−２−フルオロ−６−（２−ヒドロキシ−エチル）−８−オキソ−６，７，８，９−テトラヒドロ−５−オキサ−９−アザ−ベンゾシクロヘプテン−７−イル］−２−ヒドロキシ−２−メチル−Ｎ’−（２，２，２−トリフルオロ−エチル）−マロンアミド；
（Ｒ）−Ｎ−［（６Ｒ，７Ｓ）−２−フルオロ−６−（２−ヒドロキシ−エチル）−８−オキソ−６，７，８，９−テトラヒドロ−５−オキサ−９−アザ−ベンゾシクロヘプテン−７−イル］−２−ヒドロキシ−２−メチル−Ｎ’−（２，２，２−トリフルオロ−エチル）−マロンアミド；
Ｎ−［（６Ｒ，７Ｒ）又は（６Ｓ，７Ｓ）−２−フルオロ−６−（２−ヒドロキシ−エチル）−８−オキソ−６，７，８，９−テトラヒドロ−５−オキサ−９−アザ−ベンゾシクロヘプテン−７−イル］−２，２−ジメチル−Ｎ’−（２，２，３，３，３−ペンタフルオロ−プロピル）−マロンアミド；
Ｎ−［（６Ｓ，７Ｓ）又は（６Ｒ，７Ｒ）−２−フルオロ−６−（２−ヒドロキシ−エチル）−８−オキソ−６，７，８，９−テトラヒドロ−５−オキサ−９−アザ−ベンゾシクロヘプテン−７−イル］−２，２−ジメチル−Ｎ’−（２，２，３，３，３−ペンタフルオロ−プロピル）−マロンアミド；
（Ｓ）−Ｎ−［（６Ｒ，７Ｓ）−６−エチル−２−フルオロ−８−オキソ−９−（２，２，２−トリフルオロ−エチル）−６，７，８，９−テトラヒドロ−５−オキサ−９−アザ−ベンゾシクロヘプテン−７−イル］−２−ヒドロキシ−２−メチル−Ｎ’−（２，２，２−トリフルオロ−エチル）−マロンアミド；及び
（Ｒ）−Ｎ−［（６Ｒ，７Ｓ）−６−エチル−２−フルオロ−８−オキソ−９−（２，２，２−トリフルオロ−エチル）−６，７，８，９−テトラヒドロ−５−オキサ−９−アザ−ベンゾシクロヘプテン−７−イル］−２−ヒドロキシ−２−メチル−Ｎ’−（２，２，２−トリフルオロ−エチル）−マロンアミド；
から選択され、Ｌが、ヒドロキシ基でＡに結合しており、そして、Ｌ及びＳが、本明細書中に記載されるとおりである、式（Ｉ）で示されるコンジュゲート、又はその薬学的に許容し得る塩に関する。
【００７６】
本発明の一実施態様において、Ｌは、式（Ｌ１）
【化６】
2018516957.tif 000007
［式中、
Ｙは、なし、Ｏ又はＮＨであり；
Ｒ５は、水素、ハロゲン、Ｃ１−７アルキル、又はＣ１−７アルコキシであり；
ｑは、１、２、３又は４である］
で示される部分である。
【００７７】
本発明の一実施態様において、Ｙは、ＮＨである。
【００７８】
本発明の一実施態様において、Ｒ５は、水素である。
【００７９】
本発明の一実施態様において、ｑは、２である。
【００８０】
本発明の特定の実施態様において、Ｌは、式（Ｌ１）（式中、Ｙは、ＮＨであり、Ｒ５は、水素であり、そして、ｑは、２である）で示される部分である。
【００８１】
本発明の特定の実施態様において、Ｌは、式（Ｌ２）
【化７】
2018516957.tif 000008
［式中、ｑは、１、２又は３である（特に、ｑは、２である）］
で示される部分である。
【００８２】
本発明の一実施態様において、Ｓは、式（Ｓ１）
【化８】
2018516957.tif 000009
［式中、
Ｒ６は、水素、Ｃ１−７アルキル、−ＮＨ２又は−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−Ｃ１−７アルキルであり；
各Ｒ７は、独立して、水素、ハロゲン、Ｃ１−７アルキル、又はＣ１−７アルコキシから選択され；
Ｒ８は、水素、Ｃ１−７アルキル、−ＮＨ２又は−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−Ｃ１−７アルキルであり；
ｒは、０、１、２又は３であり；
但し、Ｒ６又はＲ８のうちの少なくとも１つは、−ＮＨ２又は−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−Ｃ１−７アルキルである］
で示される部分である。
【００８３】
本発明の一実施態様において、Ｒ６又はＲ８のうちの１つは、−ＮＨ２又は−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−Ｃ１−７アルキルであり、そして、Ｒ６又はＲ８のうちのその他の１つは、水素又はＣ１−７アルキルである。
【００８４】
本発明の一実施態様において、Ｒ６又はＲ８のうちの１つは、−ＮＨ２又は−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−ＣＨ３であり、そして、Ｒ６又はＲ８のうちのその他の１つは、水素である。
【００８５】
本発明の一実施態様において、Ｒ７は、水素である。
【００８６】
本発明の一実施態様において、ｒは、０又は１（特に、１）である。
【００８７】
本発明の特定の実施態様において、Ｒ７は、水素であり、そして、ｒは、１である。
【００８８】
本発明の特定の実施態様において、Ｓは、式（Ｓ１）（式中、Ｒ６は、水素であり、Ｒ７は、水素であり、Ｒ８は、−ＮＨ２又は−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−Ｃ１−７アルキルであり、そして、ｒは、１である）で示される部分である。
【００８９】
本発明の特定の実施態様において、Ｓは、式（Ｓ１）（式中、Ｒ６は、水素であり、Ｒ７は、水素であり、Ｒ８は、−ＮＨ２又は−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−ＣＨ３であり、そして、ｒは、１である）で示される部分である。
【００９０】
本発明の特定の実施態様において、Ｓは、式（Ｓ１）（式中、Ｒ６は、水素であり、Ｒ７は、水素であり、Ｒ８は、−ＮＨ２であり、そして、ｒは、１である）で示される部分である。
【００９１】
本発明の特定の実施態様において、Ｓは、式（Ｓ１）（式中、Ｒ６は、水素であり、Ｒ７は、水素であり、Ｒ８は、−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−ＣＨ３であり、そして、ｒは、１である）で示される部分である。
【００９２】
本発明の特定の実施態様において、Ｓは、式（Ｓ１）（式中、Ｒ６は、−ＮＨ２又は−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−Ｃ１−７アルキルであり、Ｒ７は、水素であり、Ｒ８は、水素であり、そして、ｒは、１である）で示される部分である。
【００９３】
本発明の特定の実施態様において、Ｓは、式（Ｓ１）（式中、Ｒ６は、−ＮＨ２又は−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−ＣＨ３であり、Ｒ７は、水素であり、Ｒ８は、水素であり、そして、ｒは、１である）で示される部分である。
【００９４】
本発明の特定の実施態様において、Ｓは、式（Ｓ１）（式中、Ｒ６は、−ＮＨ２であり、Ｒ７は、水素であり、Ｒ８は、水素であり、そして、ｒは、１である）で示される部分である。
【００９５】
本発明の特定の実施態様において、Ｓは、式（Ｓ１）（式中、Ｒ６は、−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−ＣＨ３であり、Ｒ７は、水素であり、Ｒ８は、水素であり、そして、ｒは、１である）で示される部分である。
【００９６】
本発明の特定の一実施態様は、式（Ｉａ）
【化９】
2018516957.tif 000010
で示されるコンジュゲート、又はその薬学的に許容し得る塩
［式中、Ｓは、本明細書中に記載されるとおりのペプチダーゼ特異的な基質である］
に関する。
【００９７】
本発明の特定の一実施態様は、式（Ｉｂ）
【化１０】
2018516957.tif 000011
［式中、Ｒ６又はＲ８のうちの１つは、−ＮＨ２又は−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−Ｃ１−７アルキルであり、そして、Ｒ６又はＲ８のうちのその他の１つは、水素である］
で示されるコンジュゲートに関する。
【００９８】
本発明の特定の実施態様において、Ｒ６又はＲ８のうちの１つは、−ＮＨ２又は−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−ＣＨ３であり、そして、Ｒ６又はＲ８のうちのその他の１つは、水素である。
【００９９】
本発明の特定の実施態様において、Ｒ６は、−ＮＨ２又は−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−ＣＨ３であり、そして、Ｒ８は、水素である。
【０１００】
本発明の特定の実施態様において、Ｒ８は、−ＮＨ２又は−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−ＣＨ３であり、そして、Ｒ６は、水素である。
【０１０１】
本発明の特定の実施態様において、Ｒ６は、−ＮＨ２であり、そして、Ｒ８は、水素である。
【０１０２】
本発明の特定の実施態様において、Ｒ６は、−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−ＣＨ３であり、そして、Ｒ８は、水素である。
【０１０３】
本発明の特定の実施態様において、Ｒ８は、−ＮＨ２であり、そして、Ｒ６は、水素である。
【０１０４】
本発明の特定の実施態様において、Ｒ８は、−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−ＣＨ３であり、そして、Ｒ６は、水素である。
【０１０５】
本発明の特定の実施態様において、式（Ｉ）で示されるコンジュゲートは、以下のリスト：
（Ｓ）−２−アセトアミド−５−（２−（（２−（（２Ｒ，３Ｓ）−７−フルオロ−３−（（Ｓ）−２−ヒドロキシ−２−メチル−３−オキソ−３−（２，２，３，３，３−ペンタフルオロプロピルアミノ）プロパンアミド）−２−メチル−４−オキソ−３，４−ジヒドロベンゾ［ｂ］［１，４］オキサゼピン−５（２Ｈ）−イル）エトキシ）カルボニルアミノ）エチルアミノ）−５−オキソペンタン酸；
（Ｓ）−２−アミノ−５−（２−（（２−（（２Ｒ，３Ｓ）−７−フルオロ−３−（（Ｓ）−２−ヒドロキシ−２−メチル−３−オキソ−３−（２，２，３，３，３−ペンタフルオロプロピルアミノ）プロパンアミド）−２−メチル−４−オキソ−３，４−ジヒドロベンゾ［ｂ］［１，４］オキサゼピン−５（２Ｈ）−イル）エトキシ）カルボニルアミノ）エチルアミノ）−５−オキソペンタン酸；
（Ｓ）−４−アセトアミド−５−（２−（（２−（（２Ｒ，３Ｓ）−７−フルオロ−３−（（Ｓ）−２−ヒドロキシ−２−メチル−３−オキソ−３−（２，２，３，３，３−ペンタフルオロプロピルアミノ）プロパンアミド）−２−メチル−４−オキソ−３，４−ジヒドロベンゾ［ｂ］［１，４］オキサゼピン−５（２Ｈ）−イル）エトキシ）カルボニルアミノ）エチルアミノ）−５−オキソペンタン酸；
（Ｓ）−４−アミノ−５−（２−（（２−（（２Ｒ，３Ｓ）−７−フルオロ−３−（（Ｓ）−２−ヒドロキシ−２−メチル−３−オキソ−３−（２，２，３，３，３−ペンタフルオロプロピルアミノ）プロパンアミド）−２−メチル−４−オキソ−３，４−ジヒドロベンゾ［ｂ］［１，４］オキサゼピン−５（２Ｈ）−イル）エトキシ）カルボニルアミノ）エチルアミノ）−５−オキソペンタン酸；
（Ｓ）−２−アセトアミド−５−（２−（（２−（（２Ｒ，３Ｓ）−７−フルオロ−３−（（Ｓ）−２−ヒドロキシ−２−メチル−３−オキソ−３−（２，２，３，３，３−ペンタフルオロプロピルアミノ）プロパンアミド）−２−メチル−４−オキソ−３，４−ジヒドロベンゾ［ｂ］［１，４］オキサゼピン−５（２Ｈ）−イル）エトキシ）カルボニルオキシ）エチルアミノ）−５−オキソペンタン酸；
及びそれらの薬学的に許容し得る塩
から選択される。
【０１０６】
本発明の別の実施態様は、式（ＩＩ）
Ｈ−Ｌ−Ａ      （ＩＩ）
で示されるコンジュゲート、又はその薬学的に許容し得る塩
［式中、Ａは、本明細書中に記載されるとおりのγ−セクレターゼ阻害剤であり、Ｌは、本明細書中に記載されるとおりのリンカーであり、そして、Ｈは、水素である］
に関する。
【０１０７】
本発明の特定の一実施態様は、式（ＩＩａ）
【化１１】
2018516957.tif 000012
で示される化合物、又はその薬学的に許容し得る塩に関する。
【０１０８】
式（ＩＩ）で示される化合物は、式（Ｉ）で示される化合物を製造するための中間体として好適である。更に、式（ＩＩ）で示される化合物は、それ自体、高いｎｏｔｃｈ阻害活性を示す。
【０１０９】
合成
式（Ａ）で示される化合物は、特許文献１に記載されているとおり（例えば、９〜１６ページの一般合成スキームにより）調製され得る。式（Ａ）で示される化合物及びそれらの薬学的に許容し得る塩は、当技術分野において公知の方法によって、例えば、以下に記載されるプロセスであって、
ａ）式
【化１２】
2018516957.tif 000013
で示される化合物を、式
【化１３】
2018516957.tif 000014
で示される化合物と反応させて、式
【化１４】
2018516957.tif 000015
［式中、Ｒ、Ｒ１、Ｒ２  Ｒ３及びＲ４／Ｒ４’、並びにｎは、本明細書中に記載されるとおりである］
で示される化合物にすること；又は
ｂ）式
【化１５】
2018516957.tif 000016
で示される化合物を、式ＮＨ２Ｒ３（Ａ−Ｖ）で示される化合物と反応させて、式
【化１６】
2018516957.tif 000017
［式中、Ｒ、Ｒ１、Ｒ２  Ｒ３及びＲ４／Ｒ４’、並びにｎは、上記のとおりである］
で示される化合物にすること；或いは
ｃ）式
【化１７】
2018516957.tif 000018
で示される化合物を、式ＮＨ２Ｒ３（Ａ−Ｖ）で示される化合物と反応させて、式
【化１８】
2018516957.tif 000019
［式中、Ｒ、Ｒ１、Ｒ２  Ｒ３及びＲ４／Ｒ４’、並びにｎは、上記のとおりである］
で示される化合物にすること
を含む、プロセスによって調製され得る。
【０１１０】
或いは、式（Ａ）で示される化合物を、スキーム１に従って調製することができる：式８で示される化合物を、公知のキラルマロン酸ハーフエステル１から開始して調製することができる。標準的なペプチドカップリング、続く、接触水素化及び水酸化リチウムを用いた鹸化で、４を得た。オキサゼピン７は、ベンジル２−ブロモエチルエーテルを用いたアルキル化、続く、ＴＦＡを用いたＢｏｃ除去を介して、５から調製されている。７を用いた４のペプチドカップリング、及びその後の接触水素化で、マロンアミド中心が（Ｓ）−配置である８を単一の異性体として得る。
【０１１１】
【化１９】
2018516957.tif 000020
【０１１２】
スキーム１．γ−セクレターゼ阻害剤８の合成
試薬及び条件：（ａ）２，２，３，３，３−ペンタフルオロプロピルアミン、ＨＯＢｔ、ＥＤＣＩ、ｉ−Ｐｒ２ＮＥｔ ＴＨＦ中、ｒ．ｔ．、５９％；（ｂ）Ｈ２／Ｐｄ−Ｃ １０％、ＭｅＯＨ／触媒ＨＣｌ水溶液中、ｒ．ｔ．、定量的；（ｃ）水酸化リチウム、ＴＨＦ／水中、ｒ．ｔ．、８３％；（ｄ）水素化ナトリウム、ベンジル２−ブロモエチルエーテル ＤＭＦ中、ｒ．ｔ．、８１％；（ｅ）トリフルオロ酢酸、ＣＨ２Ｃｌ２中、ｒ．ｔ．、９８％；（ｆ）４、ＨＯＢｔ、ＥＤＣＩ、ｉ−Ｐｒ２ＮＥｔ ＴＨＦ中、ｒ．ｔ．、６１％；（ｇ）Ｈ２／Ｐｄ−Ｃ １０％、ＭｅＯＨ／触媒ＨＣｌ水溶液中、ｒ．ｔ．、定量的。
【０１１３】
式（Ｉ）で示されるコンジュゲートを、スキーム２及びスキーム３に後述するように調製することができる。γ−セクレターゼ阻害剤８を、炭酸ビス（４−ニトロフェニル）と反応させて、カルボナート９を収率９０％で得、次いで、モノＢＯＣ保護されたエチレンジアミンを収率９３％で連結させて１０ａを得ることができた。ＤＭＡＰの存在下でのＮ−ＢＯＣ−グリシノールとの反応で、１０ｂを収率７７％で得た。ジオキサン中のＨＣｌを用いた脱保護で、Ｎ−保護された及び遊離のα−及びγ−グルタミル基質の連結を可能にする、リンカーで官能化されたγ−セクレターゼ阻害剤１１ａ又は１１ｂを得た。
【０１１４】
式（Ｓ）で示される部分としてＡｃ−γ−Ｇｌｕを有し、かつＹ＝ＮＨであるコンジュゲート１３ａを、カルバマート１１ａから、Ａｃ−Ｇｌｕ（ＯＳＵ）−ＯＢｚｌを用いること、続く、ベンジルエステルを水素化することの２工程で合成した（スキーム２）。未保護のコンジュゲート１３ｂ（Ｈ−γ−Ｇｌｕを有する）を、ＢＯＣ−Ｇｌｕ−ＯｔＢｕ及びＥＤＣＩカップリング、続く、ＨＣｌによる脱保護の２工程で、総収率８２％で合成した（スキーム２）。式（Ｓ）で示される部分としてＡｃ−γ−Ｇｌｕを有し、かつＹ＝Ｏであるコンジュゲート１３ｃを、カルボナート１１ｃから、Ａｃ−Ｇｌｕ−ＯＭｅを用いること、続く、メチルエステルの水酸化リチウムによる加水分解の２工程で合成した（スキーム２）。
【０１１５】
同じアミンビルディングブロック１１ａをコンジュゲート１５ａ（Ａｃ−α−Ｇｌｕ）及び１５ｂ（Ｈ−α−Ｇｌｕ）の合成に使用した。１−ヒドロキシ−７−アザベンゾトリアゾールの存在下、Ａｃ−Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）−ＯＨを用いたアミン１１ａのＥＤＣＩカップリングで、アミド１４ａを定量的な収率で得た。ジオキサン中のＨＣｌを用いたエステル脱保護で、コンジュゲート１５ａを収率８１％で得た。コンジュゲート１５ｂを、定量的な収率のＢＯＣ−Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）−ＯＨカップリング、続く、二重脱保護で同様に合成し、１５ｂを収率８０％で得た（スキーム３）。
【０１１６】
【化２０】
2018516957.tif 000021
【０１１７】
スキーム２．アミン−ＳｅｃｒＩ １１ａ及びアミン−Ｏ−ＳｅｃｒＩ １１ｂ、Ａｃ−γ−Ｇｌｕ−ＳｅｃｒＩ １３ａ、Ｈ−γ−Ｇｌｕ−ＳｅｃｒＩ １３ｂ及びＡｃ−γ−Ｇｌｕ−Ｏ−ＳｅｃｒＩ１３ｃの合成。
試薬及び条件：（ａ）炭酸ビス（４−ニトロフェニル）、ｉ−Ｐｒ２ＮＥｔ、ＣＨ２Ｃｌ２中、ｒ．ｔ．、９０％；（ｂ）１０ａについて：Ｎ−ＢＯＣ−エチレンジアミン、Ｅｔ３Ｎ、ＣＨ２Ｃｌ２中、０℃〜ｒ．ｔ．、９３％；１０ｂについて：Ｎ−ＢＯＣ−グリシノール、Ｅｔ３Ｎ／ＤＭＡＰ ＣＨ２Ｃｌ２中、０℃〜ｒ．ｔ．、７７％；（ｃ）ジオキサン中 ４M ＨＣｌ、ＣＨ２Ｃｌ２中、０℃〜ｒ．ｔ．、（１１ａ：７７％；１１ｂ：９１％）；（ｄ）１２ａについて：Ａｃ−Ｇｌｕ（ＯＳＵ）−ＯＢｚｌ、Ｅｔ３Ｎ ＤＭＦ中、０℃〜ｒ．ｔ．、８３％；１２ｂについて：ＢＯＣ−Ｇｌｕ−ＯｔＢｕ、１−ヒドロキシ−７−アザベンゾトリアゾール、Ｅｔ３Ｎ及びＥＤＣＩ ＤＭＦ中、０℃〜ｒ．ｔ．、定量的；１２ｃについて：ＢＯＣ−Ｇｌｕ−ＯＭｅ、１−ヒドロキシ−７−アザベンゾトリアゾール、Ｅｔ３Ｎ及びＥＤＣＩ ＤＭＦ中、０℃〜ｒ．ｔ．、５２％；（ｅ）１３ａについて：Ｈ２／Ｐｄ−Ｃ １０％、ジオキサン及びＭｅＯＨ中、ｒ．ｔ．、８２％；１３ｂについて：ジオキサン中４M ＨＣｌ、ＣＨ２Ｃｌ２中、０℃〜ｒ．ｔ．、８２％；１３ｃについて：０．９当量のＬｉＯＨ水溶液、ＴＨＦ中、０℃、３６％。
【０１１８】
【化２１】
2018516957.tif 000022
【０１１９】
スキーム３．Ａｃ−α−Ｇｌｕ−ＳｅｃｒＩ（１５ａ）及びＨ−α−Ｇｌｕ−ＳｅｃｒＩ（１５ｂ）の合成
試薬及び条件：（ａ）１４ａについて：Ａｃ−Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）−ＯＨ、１−ヒドロキシ−７−アザベンゾトリアゾール、Ｅｔ３Ｎ及びＥＤＣＩ ＤＭＦ中、０℃〜ｒ．ｔ．、定量的；１４ｂについて：ＢＯＣ−Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）−ＯＨ、１−ヒドロキシ−７−アザベンゾトリアゾール、Ｅｔ３Ｎ及びＥＤＣＩ、ＤＭＦ中、０℃〜ｒ．ｔ．、定量的；（ｂ）ジオキサン中 ４M ＨＣｌ、ＣＨ２Ｃｌ２中、０℃〜ｒ．ｔ．；１５ａについて：８１％；１５ｂについて：８０％。
【０１２０】
活性薬物を放出するために必要な化学構造及び酵素活性をスキーム４にまとめる。
【表１】
2018516957.tif 000023
【０１２１】
スキーム４．γ−セクレターゼ阻害剤の類似体の化学構造及び標的酵素活性。
プロドラッグは、３つの別個の部分から構成される：活性化合物（γ−セクレターゼ阻害剤、ＳｅｃｒＩ）、リンカー（アミノエチル−カルバマート）及び放出ペプチダーゼに対する標的化された基質（矢印）。
【０１２２】
医薬組成物
別の実施態様は、本発明の化合物と治療上不活性な担体、希釈剤若しくは薬学的に許容し得る賦形剤とを含む医薬組成物又は医薬、並びにそのような組成物及び医薬を調製するための本発明の化合物を使用する方法を提供する。
【０１２３】
組成物は、適正な医療行為（good medical practice）に合致するように製剤化、調薬及び投与される。この状況において考慮される要因は、処置される特定の障害、処置される特定の哺乳動物、個々の患者の臨床状態、障害の原因、薬剤の送達部位、投与方法、投与計画、及び医師に公知の他の要因を含む。
【０１２４】
本発明の化合物は、経口、局所（口腔及び舌下を含む）、直腸、膣内、経皮、非経口、皮下、腹腔内、肺内、皮内、髄腔内及び硬膜外、並びに鼻腔内、そして、病巣内（局部処置が望まれる場合）投与を含む、任意の好適な手段によって投与され得る。非経口注入は、筋肉内、静脈内、動脈内、腹腔内、又は皮下投与を含む。
【０１２５】
本発明の化合物は、任意の簡便な投与形態（例えば、錠剤、粉末剤、カプセル剤、溶液剤、分散剤、懸濁剤、シロップ剤、スプレー剤、坐剤、ゲル剤、乳剤、パッチ剤など）で投与され得る。そのような組成物は、医薬調製物の従来成分（例えば、希釈剤、担体、ｐＨ改変剤、保存剤、可溶化剤、安定化剤、湿潤剤、乳化剤、甘味料、着色剤、香味料、浸透圧を変化させるための塩、緩衝剤、マスキング剤、酸化防止剤、及び更なる活性剤を含み得る。これらはまた、更に他の治療上有益な物質を含むことができる。
【０１２６】
典型的な製剤は、本発明の化合物と担体又は賦形剤とを混合することによって調製される。好適な担体及び賦形剤は当業者に周知であり、例えば、Ansel H.C. et al., Ansel’s Pharmaceutical Dosage Forms and Drug Delivery Systems (2004) Lippincott, Williams & Wilkins, Philadelphia; Gennaro A.R. et al., Remington: The Science and Practice of Pharmacy (2000) Lippincott, Williams & Wilkins, Philadelphia; 及び Rowe R.C, Handbook of Pharmaceutical Excipients (2005) Pharmaceutical Press, Chicago に詳述されている。製剤はまた、見栄えの良い薬物（即ち、本発明の化合物又はその医薬組成物）を提供するために、又は医薬品（即ち、医薬）の製造を補助するために、１以上の緩衝剤、安定化剤、界面活性剤、湿潤剤、潤滑剤、乳化剤、懸濁化剤、保存剤、酸化防止剤、不透明化剤（opaquing agents）、流動促進剤、加工助剤、着色剤、甘味料、芳香剤、香味剤、希釈剤及び他の公知の添加物を含み得る。
【０１２７】
本発明の化合物が投与され得る投与量は広範囲で変更可能であり、当然のことながら、それぞれ特定の症例において個々の要求に適合される。一般に、経口投与の場合、一人当たり一般式（Ｉ）で示される化合物 約０．０１〜１０００mgの１日投与量が適切であるべきだが、必要な場合、上記の上限を超えてもよい。
【０１２８】
好適な経口の用量形態の例は、約３０〜９０mgの乳糖無水物、約５〜４０mgのクロスカルメロースナトリウム、約５〜３０mgのポリビニルピロリドン（ＰＶＰ）Ｋ３０、及び約１〜１０mgのステアリン酸マグネシウムを配合した、約１００mg〜５００mgの本発明の化合物を含む錠剤である。最初に、粉末成分を一緒に混合し、そして、次にＰＶＰの溶液と混合する。得られた組成物を、乾燥し、顆粒化し、ステアリン酸マグネシウムと混合し、そして、従来装置を使用して錠剤形態に圧縮することができる。
【０１２９】
エアロゾル製剤の一例は、例えば１０〜１００mgの本発明の化合物を、好適な緩衝液（例えば、リン酸緩衝液）中に溶解させ、所望であれば、等張化剤（tonicifier）（例えば、塩化ナトリウムなどの塩）を加えることによって調製され得る。該溶液は、不純物及び混入物を除去するために、例えば、０．２μmのフィルターを使用して濾過され得る。
【０１３０】
治療用途
上記のとおり、式（Ｉ）で示される化合物及びそれらの薬学的に許容し得る塩は、有益な薬理学的特性を有し、選択的な腎ｎｏｔｃｈ経路阻害剤又はγ−セクレターゼ阻害剤であることが見出された。
【０１３１】
本発明の化合物は、γ−セクレターゼ活性又はＮｏｔｃｈタンパク質の活性化によって引き起こされる疾患の処置又は予防のために、単独で又は他の薬物と組み合わせてのいずれかで使用され得る。これらの疾患は、限定されるものではないが、腎疾患及び腎臓における組織損傷（特に、急性腎傷害、慢性腎疾患、有足細胞傷害、糸球体硬化、尿細管間質の線維化、タンパク尿、末期腎不全）を含む。
【０１３２】
本発明の特定の実施態様はまた、本明細書中に記載されるとおりの式（Ｉ）で示される化合物と少なくとも１つの薬学的に許容し得る賦形剤とを含む医薬組成物に関する。
【０１３３】
本発明の特定の実施態様はまた、治療活性物質として使用するための、本明細書中に記載されるとおりの式（Ｉ）で示される化合物に関する。
【０１３４】
本発明の特定の実施態様はまた、γ−セクレターゼ活性又はＮｏｔｃｈタンパク質の活性化に関連する疾患の処置又は予防において使用するための、本明細書中に記載されるとおりの式（Ｉ）で示される化合物に関する。
【０１３５】
本発明の特定の実施態様はまた、腎疾患及び腎臓における組織損傷の（特に、急性腎傷害、慢性腎疾患、有足細胞傷害、糸球体硬化、尿細管間質の線維化、タンパク尿、末期腎不全の）処置又は予防において使用するための、本明細書中に記載されるとおりの式（Ｉ）で示される化合物に関する。
【０１３６】
別の実施態様において、本発明は、γ−セクレターゼ活性又はＮｏｔｃｈタンパク質の活性化に関連する疾患を処置又は予防するための方法であって、本明細書中に記載されるとおりの式（Ｉ）で示される化合物をヒト又は動物に投与することを含む、方法に関する。
【０１３７】
別の実施態様において、本発明は、腎疾患及び腎臓における組織損傷を（特に、急性腎傷害、慢性腎疾患、有足細胞傷害、糸球体硬化、尿細管間質の線維化、タンパク尿、末期腎不全を）治療又は予防するための方法であって、本明細書中に記載されるとおりの式（Ｉ）で示される化合物をヒト又は動物に投与することを含む、方法に関する。
【０１３８】
本発明はまた、γ−セクレターゼ活性又はＮｏｔｃｈタンパク質の活性化に関連する疾患を処置又は予防するための、本明細書中に記載されるとおりの式（Ｉ）で示される化合物の使用を包含する。
【０１３９】
本発明はまた、腎疾患及び腎臓における組織損傷を（特に、急性腎傷害、慢性腎疾患、有足細胞傷害、糸球体硬化、尿細管間質の線維化、タンパク尿、末期腎不全を）治療又は予防するための、本明細書中に記載されるとおりの式（Ｉ）で示される化合物の使用を包含する。
【０１４０】
本発明はまた、γ−セクレターゼ活性又はＮｏｔｃｈタンパク質の活性化に関連する疾患を処置又は予防するための医薬を調製するための、本明細書中に記載されるとおりの式（Ｉ）で示される化合物の使用に関する。
【０１４１】
本発明はまた、腎疾患及び腎臓における組織損傷を（特に、急性腎傷害、慢性腎疾患、有足細胞傷害、糸球体硬化、尿細管間質の線維化、タンパク尿、末期腎不全を）処置又は予防するための医薬を調製するための、本明細書中に記載されるとおりの式（Ｉ）で示される化合物の使用に関する。そのような医薬は、上記のとおりの式（Ｉ）で示される化合物を含む。
【０１４２】
実施例
以下の実施例１〜１６は、本発明の説明のために提供される。これらは、本発明の範囲を限定するものと考慮されるべきではなく、単にその代表例として考慮されるべきである。
【０１４３】
使用される略称
Ａｃ：アセチル
ＡＡ：アリストロキア酸；８−メトキシ−６−ニトロフェナントロ［３，４−ｄ］［１，３］ジオキソール−５−カルボン酸
ＡＰＡ：グルタミルアミノペプチダーゼ（ＥＣ３．４．１１．７）
γ−ＧＴ：γ−グルタミルトランスペプチダーゼ（ＥＣ２．３．２．２）
γ−ＧＣＴ：γ−グルタミルシクロトランスフェラーゼ（ＥＣ２．３．２．４）
ＡＣＹ１：Ｎ−アシル−Ｌ−アミノ酸アミドヒドラーゼ（３．５．１．１４）
ＡｃＯＨ：酢酸
Ａｃ−Ｇｌｕ（ＯＳＵ）−ＯＢｚｌ：アセチル−Ｌ−グルタミン酸γ−Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドエステルα−ベンジルエステル
ＢＯＣ：tert−ブチルオキシカルボニル
ＢＯＣ−Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）−ＯＨ：Ｎ−Ｂｏｃ−Ｌ−グルタミン酸γ−tert−ブチルエステル
ｎ−ＢｕＬｉ：ｎ−ブチルリチウム
ＣＨ２Ｃｌ２：ジクロロメタン
ＤＭＡＰ：４−ジメチルアミノピリジン
ＥＤＣＩ：Ｎ−（３−ジメチルアミノプロピル）−Ｎ’−エチルカルボジイミド塩酸塩
ＥｔＯＡｃ：酢酸エチル
ＥｔＯＨ：エタノール
Ｅｔ２Ｏ：ジエチルエーテル
Ｅｔ３Ｎ：トリエチルアミン
ＨＯＢＴ：１−ヒドロキシベンゾトリアゾール水和物
ＭｅＯＨ：メタノール
ｉ−Ｐｒ２ＮＥｔ：Ｎ−エチルジイソプロピルアミン
ＴＦＡ：トリフルオロ酢酸
ＴＨＦ：テトラヒドロフラン
ＳｅｃｒＩ：γ−セクレターゼ阻害剤
ＢＱＬ：定量可能な限度未満
【０１４４】
一般情報及び分析化合物の特性
反応は、アルゴン雰囲気下で行った。溶媒及び試薬は、販売元から得て、入手したものをそのまま使用した。全ての反応は、ＴＬＣ（ＴＬＣプレートF254、Merck）によって追跡した。プロトン及びカーボンＮＭＲスペクトルは、Ｂｒｕｋｅｒ ３００、４００又は６００MHz装置で得た。それぞれのカーボンＮＭＲスペクトルは、１５０MHzであった。化学シフト（δ、ppm）は、内部標準としてのテトラメチルシランと比較して報告する。ＮＭＲの略称は、以下のとおりである：ｓ、シングレット；ｄ、ダブレット；ｔ、トリプレット；ｑ、クアドラプレット；ｍ、マルチプレット；ｂｒ、ブロード。純度は、１Ｈ ＮＭＲによって分析した。１Ｈ ＮＭＲスペクトルでは、ＨＣｌ塩及び酸（ＣＯＯＨ）の酸性プロトンが見られなかった。ＬＣ−ＭＳは、Ｗａｔｅｒｓ Ａｃｑｕｉｔｙ、ＣＴＣ ＰＡＬオートサンプラー及びＷａｔｅｒｓ ＳＱＤ シングル四重極質量分析計を備えたＷａｔｅｒｓ ＵＰＬＣ−ＭＳ Ｓｙｓｔｅｍで記録した。分離は、Ｚｏｒｂａｘ Ｅｃｌｉｐｓｅ Ｐｌｕｓ Ｃ１８ １，７μm ２．１*３０mmカラムにて５０℃で達成した；Ａ＝水中の０．０１％ギ酸；Ｂ＝アセトニトリル  流速１。勾配：０分 ３％Ｂ、０．２分 ３％Ｂ、２分 ９７％Ｂ、１．７分 ９７％Ｂ、２．０分 ９７％Ｂ。注入容量は、２μLであった。ＬＣ−ＭＳ高分解能スペクトルは、Ａｇｉｌｅｎｔ １２９０高圧勾配システム、ＣＴＣ ＰＡＬオートサンプラー及びＡｇｉｌｅｎｔ ６５２０ ＱＴＯＦシステムからなるＡｇｉｌｅｎｔ ＬＣ−システムで記録した。分離は、Ｚｏｒｂａｘ Ｅｃｌｉｐｓｅ Ｐｌｕｓ Ｃ１８ １，７μm ２．１*５０mmカラムにて５５℃で達成した；Ａ＝水中の０．０１％ギ酸；アセトニトリル中のＢ＝０．０１％ギ酸  流速１mL／分。勾配：０分 ５％Ｂ、０．３分 ５％Ｂ、４．５分 ９９％Ｂ、５分 ９９％Ｂ。注入容量は、２μLであった。イオン化は、Ａｇｉｌｅｎｔｓ Ｍｕｌｔｉｍｏｄｅ源で実施した。質量分析計は、m/z＝９２２で約１００００の分解能を生じる「２GHz拡張ダイナミックレンジ」モードで実行した。質量精度は、内部ドリフト補正によって保証した。
【実施例】
【０１４５】
実施例１−γ−セクレターゼ阻害剤（ＳｅｃｒＩ）８
Ｎ−［（６Ｒ，７Ｓ）−２−フルオロ−９−（２−ヒドロキシ−エチル）−６−メチル−８−オキソ−６，７，８，９−テトラヒドロ−５−オキサ−９−アザ−ベンゾシクロヘプテン−７−イル］−２−（Ｓ）−ヒドロキシ−２−メチル−Ｎ’−（２，２，３，３，３−ペンタフルオロ−プロピル）−マロンアミド
【化２２】
2018516957.tif 000024
標題化合物を、実施例７０ａ（ｐ．９５〜９７）について特許文献１に記載されているように調製した。
【０１４６】
工程ａ）Ｎ−（（６Ｒ，７Ｓ）−９−アリル−２−フルオロ−６−メチル−８−オキソ−６，７，８，９−テトラヒドロ−５−オキサ−９−アザ−ベンゾシクロヘプテン−７−イル）−２−ヒドロキシ−２−メチル−Ｎ’−（２，２，３，３，３−ペンタフルオロ−プロピル）−マロンアミド
（６Ｒ，７Ｓ）−９−アリル−７−アミノ−２−フルオロ−６−メチル−６，７−ジヒドロ−９Ｈ−５−オキサ−９−アザ−ベンゾシクロヘプテン−８−オン（０．０６ｇ（０．３１mmol））のテトラヒドロフラン（５ml）中溶液に、２−ヒドロキシ−２−メチル−Ｎ−（２，２，３，３，３−ペンタフルオロ−プロピル）−マロンアミド酸（０．０７ｇ（０．３１mmol））、１−ヒドロキシベンゾトリアゾール水和物（０．０４ｇ（０．３１mmol））、Ｎ−（３−ジメチルアミノプロピル）−Ｎ’−エチル−カルボジイミド−塩酸塩（０．０６ｇ（０．３１mmol））及びジイソプロピルエチルアミン（０．１ml（０．６２mmol））を加えた。室温で一晩撹拌した後、混合物を１N 塩酸水溶液に加えた。ジクロロメタンで抽出し、続いて飽和重炭酸ナトリウム水溶液で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥して、酢酸エチル／ヘプタンを用いるシリカゲルのクロマトグラフィーにより、標題化合物を白色の固体として得た、ＭＳ  ｍ／ｅ（％）：４９８．５（Ｍ＋Ｈ＋、１００）。
【０１４７】
工程ｂ）Ｎ−［（６Ｒ，７Ｓ）−２−フルオロ−６−メチル−８−オキソ−９−（２−オキソ−エチル）−６，７，８，９−テトラヒドロ−５−オキサ−９−アザ−ベンゾシクロヘプテン−７−イル］−２−ヒドロキシ−２−メチル−Ｎ−（２，２，３，３，３−ペンタフルオロ−プロピル）−マロンアミド
（６Ｒ，７Ｓ）−９−アリル−７−アミノ−２−フルオロ−６−メチル−６，７−ジヒドロ−９Ｈ−５−オキサ−９−アザ−ベンゾシクロヘプテン−８−オン（１．３０ｇ（３mmol））のジクロロメタン（６０ml）中溶液を、−７５℃で６０分間、オゾンで処理した。メチルスルフィド（０．８１ｇ（１３mmol））を加え、溶液を室温で１６時間撹拌した。溶媒を減圧下で留去し、残留物をｎ−ヘプタン／酢酸エチル １００：０〜０：１００を用いるシリカゲルのクロマトグラフィーに付して、Ｎ−［（６Ｒ，７Ｓ）−２−フルオロ−６−メチル−８−オキソ−９−（２−オキソ−エチル）−６，７，８，９−テトラヒドロ−５−オキサ−９−アザ−ベンゾシクロヘプテン−７−イル］−２−ヒドロキシ−２−メチル−Ｎ−（２，２，３，３，３−ペンタフルオロ−プロピル）−マロンアミド（１．０７ｇ（８２％））を得た、ＭＳ  ｍ／ｅ（％）：５００．３（Ｍ＋Ｈ＋、１００）。
【０１４８】
工程ｃ）Ｎ−［（６Ｒ，７Ｓ）−２−フルオロ−９−（２−ヒドロキシ−エチル）−６−メチル−８−オキソ−６，７，８，９−テトラヒドロ−５−オキサ−９−アザ−ベンゾシクロヘプテン−７−イル］−２−ヒドロキシ−２−メチル−Ｎ−（２，２，３，３，３−ペンタフルオロ−プロピル）−マロンアミド
テトラヒドロフラン（３０ml）中のＮ−［（６Ｒ，７Ｓ）−２−フルオロ−６−メチル−８−オキソ−９−（２−オキソ−エチル）−６，７，８，９−テトラヒドロ−５−オキサ−９−アザ−ベンゾシクロヘプテン−７−イル］−２−ヒドロキシ−２−メチル−Ｎ−（２，２，３，３，３−ペンタフルオロ−プロピル）−マロンアミド（１．００ｇ（２．０mmol））を、水素化ホウ素ナトリウム（０．０９ｇ（２．０mmol））で還元した。酢酸エチル／ヘプタン ０：１００〜１００：０を用いるシリカゲルのクロマトグラフィーにより、Ｎ−［（６Ｒ，７Ｓ）−２−フルオロ−９−（２−ヒドロキシ−エチル）−６−メチル−８−オキソ−６，７，８，９−テトラヒドロ−５−オキサ−９−アザ−ベンゾシクロヘプテン−７−イル］−２−ヒドロキシ−２−メチル−Ｎ−（２，２，３，３，３−ペンタフルオロ−プロピル）−マロンアミド（０．３３ｇ（３４％））を得た、ＭＳ  ｍ／ｅ（％）：５０２．０（Ｍ＋Ｈ＋、１００）。
【０１４９】
工程ｄ）Ｎ−［（６Ｒ，７Ｓ）−２−フルオロ−９−（２−ヒドロキシ−エチル）−６−メチル−８−オキソ−６，７，８，９−テトラヒドロ−５−オキサ−９−アザ−ベンゾシクロヘプテン−７−イル］−２−（Ｓ）−ヒドロキシ−２−メチル−Ｎ−（２，２，３，３，３−ペンタフルオロ−プロピル）−マロンアミド
Ｎ−［（６Ｒ，７Ｓ）−２−フルオロ−９−（２−ヒドロキシ−エチル）−６−メチル−８−オキソ−６，７，８，９−テトラヒドロ−５−オキサ−９−アザ−ベンゾシクロヘプテン−７−イル］−２−ヒドロキシ−２−メチル−Ｎ−（２，２，３，３，３−ペンタフルオロ−プロピル）−マロンアミド エピマー（０．３１ｇ（１．０mmol））を、イソプロパノール／ヘプタン １５：８５を用いるＣｈｉｒａｌｐａｋ ＡＤのクロマトグラフィーで分離して、Ｎ−［（６Ｒ，７Ｓ）−２−フルオロ−９−（２−ヒドロキシ−エチル）−６−メチル−８−オキソ−６，７，８，９−テトラヒドロ−５−オキサ−９−アザ−ベンゾシクロヘプテン−７−イル］−２−（Ｓ）−ヒドロキシ−２−メチル−Ｎ−（２，２，３，３，３−ペンタフルオロ−プロピル）−マロンアミド（０．１１ｇ）を得た、ＭＳ  ｍ／ｅ（％）：５０２．３（Ｍ＋Ｈ＋、１００）。
【０１５０】
実施例２−γ−セクレターゼ阻害剤（ＳｅｃｒＩ）８
（２Ｓ）−Ｎ−［（２Ｒ，３Ｓ）−７−フルオロ−５−（２−ヒドロキシエチル）−２−メチル−４−オキソ−２，３−ジヒドロ−１，５−ベンゾオキサゼピン−３−イル］−２−ヒドロキシ−２−メチル−Ｎ’−（２，２，３，３，３−ペンタフルオロプロピル）プロパンジアミド
【化２３】
2018516957.tif 000025
【０１５１】
工程ａ）（２Ｓ）−２−ベンジルオキシ−２−メチル−３−オキソ−３−（２，２，３，３，３−ペンタフルオロプロピルアミノ）プロパン酸エチル（２）。
（２Ｓ）−２−ベンジルオキシ−３−エトキシ−２−メチル−３−オキソ−プロパン酸１（１）（１．２ｇ、４．７５mmol）、２，２，３，３，３−ペンタフルオロプロピルアミン（７２２mg、４．７５mmol）、ＨＯＢｔ（６５４mg、４．７５mmol）、ＥＤＣＩ（９２８mg、４．７５mmol）及びｉ−Ｐｒ２ＮＥｔ（２．１ml、１１．９mmol）のＴＨＦ（２０mL）中混合物を、周囲温度で１８時間撹拌した。揮発性物質を減圧下でエバポレートした。得られた粗物質を、フラッシュクロマトグラフィー（５０ｇのシリカカートリッジ、ｎ−ヘプタン／ＥｔＯＡｃ ０〜３０％）で精製して、標題化合物（１．０８ｇ、５９．４％）を無色の液体として得た。1H NMR (300MHz, CDCl3): δ = 7.37 (m, 5H), 7.26 (m, 1H), 4.60 (d, J=36 Hz, 1H), 4.42 (d, J=36 Hz, 1H), 4.25 (q, 24 Hz, 2H), 4.25 (m, 2H), 1.75 (s, 3H), 1.28 (t, J=24 Hz, 3H)。ＬＣ−ＭＳ：３８２．３（Ｍ−Ｈ）−。
【０１５２】
工程ｂ）（２Ｓ）−２−ヒドロキシ−２−メチル−３−オキソ−３−（２，２，３，３，３−ペンタフルオロプロピルアミノ）プロパン酸エチル（３）。
アルゴン下、撹拌している（２Ｓ）−２−ベンジルオキシ−２−メチル−３−オキソ−３−（２，２，３，３，３−ペンタフルオロプロピルアミノ）プロパン酸エチル（２）（１．０ｇ、２．６１mmol）を、ＨＣｌ水溶液（３７％、３滴）を含むＭｅＯＨ（７０mL）中に溶解し、Ｐｄ−Ｃ １０％（２７８mg、０．２６mmol）を加えた。排気後、Ｈ２に代え（５回）、混合物を１８時間水素化し、次に濾過し、ＭｅＯＨで洗浄し、エバポレートして、標題化合物（７６６mg、＞９９％）を白色の固体として得た。1H NMR (300MHz, CDCl3): δ = 4.32 (m, 2H), 4.10 (s, 1H), 3.97 (m, 2H), 1.67 (m, 3H), 1.33 (t, J=24 Hz, 3H)。ＬＣ−ＭＳ：２９４．０（Ｍ＋Ｈ）＋。融点：４１〜４２℃。
【０１５３】
工程ｃ）（２Ｓ）−２−ヒドロキシ−２−メチル−３−オキソ−３−（２，２，３，３，３−ペンタフルオロプロピルアミノ）プロパン酸（４）。
（２Ｓ）−２−ヒドロキシ−２−メチル−３−オキソ−３−（２，２，３，３，３−ペンタフルオロプロピルアミノ）プロパン酸エチル（３）（７１６mg、２．４４mmol）とＬｉＯＨ（２３９mg、９．７７mmol）とのＴＨＦ（１０mL）及び水（２mL）中混合物を、周囲温度で１８時間撹拌した。混合物を水で希釈し、ＥｔＯＡｃで抽出した。水相を、ＨＣｌ水溶液（３７％）でｐＨ０まで酸性化し、ＥｔＯＡｃで２回抽出した。合わせた有機層をブラインで洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥し、エバポレートして乾固し、標題化合物（５３７mg、８３％）を白色の固体として得た。1H NMR (300MHz, CDCl3): δ = 7.42 (s, broad, 1H), 4.40 (s, broad, 1H), 4.05 (m, 2H) 1.72 (s, 3H)。ＬＣ−ＭＳ：２６４．３（Ｍ−Ｈ）−。融点：６７〜６９℃。
【０１５４】
工程ｄ）Ｎ−［（２Ｒ，３Ｓ）−５−（２−ベンジルオキシエチル）−７−フルオロ−２−メチル−４−オキソ−２，３−ジヒドロ−１，５−ベンゾオキサゼピン−３−イル］カルバミン酸tert−ブチル（６）。
Ｎ−［（２Ｒ，３Ｓ）−７−フルオロ−２−メチル−４−オキソ−３，５−ジヒドロ−２Ｈ−１，５−ベンゾオキサゼピン−３−イル］カルバミン酸tert−ブチル（５００mg、１．６１mmol）のＤＭＦ（３０mL）中溶液に、水素化ナトリウム（鉱油中 ６０％、９７mg。２．４２mmol）を窒素雰囲気下、室温で加えた。得られた混合物を３０分間撹拌し、次にベンジル２−ブロモエチルエーテル（１０７mg、０．４８mmol）を加え、撹拌を更に１８時間続けた。反応混合物を水でクエンチし、ＥｔＯＡｃで２回抽出し、合わせた有機層をクエン酸水溶液及びブラインで洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥して、エバポレートして乾固した。得られた粗物質をフラッシュクロマトグラフィー（２０ｇのシリカカートリッジ、ｎ−ヘプタン／ＥｔＯＡｃ ０〜２０％）で精製し、標題化合物（５７７mg、８１％）を黄色の油状物として得た。1H NMR (300MHz, CDCl3): δ = 7.27 (m, 6H), 7.09 (m, 1H), 6.88 (m, 1H), 5.50 (br. d, 1H), 4.72 (m, 2H), 4.51 (s, 2H), 3.99 (m, 2H), 3.78 (m, 1H), 3.63 (m, 1H), 1.41 (d, J=20 Hz, 9H), 1.35 d, J=21 Hz, 3H)。ＬＣ−ＭＳ：４４５．４（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０１５５】
工程ｅ）（２Ｒ，３Ｓ）−３−アミノ−５−（２−ベンジルオキシエチル）−７−フルオロ−２−メチル−２，３−ジヒドロ−１，５−ベンゾオキサゼピン−４−オン（７）。
Ｎ−［（２Ｒ，３Ｓ）−５−（２−ベンジルオキシエチル）−７−フルオロ−２−メチル−４−オキソ−２，３−ジヒドロ−１，５−ベンゾオキサゼピン−３−イル］カルバミン酸tert−ブチル（６）（５４０mg、１．２２mmol）及びＴＦＡ（２．３４mL、３０．４mmol）のＣＨ２Ｃｌ２（３０mL）中混合物を、窒素雰囲気下、周囲温度で１８時間撹拌した。混合物を過剰量の飽和ＮａＨＣＯ３水溶液で塩基性にし、次に水で希釈して、ＥｔＯＡｃで２回抽出した。合わせた有機層をＭｇＳＯ４で乾燥し、エバポレートして乾固し、標題化合物（４１１mg、９８％）を黄色の油状物として得た。1H NMR (300MHz, CDCl3): δ = 7.27 (m, 6H), 7.08 (m, 1H), 6.88 (m, 1H), 4.54 (m, 3H), 4.07 (m, 1H), 3.85 (m, 3H), 3.67 (m, 1H), 1.35 (d, J=22 Hz, 3H)。ＬＣ−ＭＳ：３４５．０（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０１５６】
工程ｆ）（２Ｓ）−Ｎ−［（２Ｒ，３Ｓ）−７−フルオロ−５−（２−ヒドロキシエチル）−２−メチル−４−オキソ−２，３−ジヒドロ−１，５−ベンゾオキサゼピン−３−イル］−２−ヒドロキシ−２−メチル−Ｎ’−（２，２，３，３，３−ペンタフルオロプロピル）プロパンジアミド（８）。
（２Ｒ，３Ｓ）−３−アミノ−５−（２−ベンジルオキシエチル）−７−フルオロ−２−メチル−２，３−ジヒドロ−１，５−ベンゾオキサゼピン−４−オン（７）（２０７mg、０．６０mmol）、（２Ｓ）−２−ヒドロキシ−２−メチル−３−オキソ−３−（２，２，３，３，３−ペンタフルオロプロピルアミノ）プロパン酸（４）（１９１mg、０．７２mmol）、ＨＯＢｔ（９１．２mg、０．６６mmol）、ＥＤＣＩ（１４１mg、０．７２mmol）及びｉ−Ｐｒ２ＮＥｔ（２６３μL、１．５０mmol）を、ＴＨＦ（１０mL）中に溶解し、窒素雰囲気下、周囲温度で６０時間撹拌した。エバポレートして乾固した後、粗物質をフラッシュクロマトグラフィー（２０ｇのシリカカートリッジ、ｎ−ヘプタン／ＥｔＯＡｃ ０〜３０％）で精製し、（２Ｓ）−Ｎ−［（２Ｒ，３Ｓ）−５−（２−ベンジルオキシエチル）−７−フルオロ−２−メチル−４−オキソ−２，３−ジヒドロ−１，５−ベンゾオキサゼピン−３−イル］−２−ヒドロキシ−２−メチル−Ｎ’−（２，２，３，３，３−ペンタフルオロプロピル）プロパンジアミド（８ａ）（２１８mg、６１％）を、無色の粘性の油状物として得た。ＬＣ−ＭＳ：５９２．３（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０１５７】
（２Ｓ）−Ｎ−［（２Ｒ，３Ｓ）−５−（２−ベンジルオキシエチル）−７−フルオロ−２−メチル−４−オキソ−２，３−ジヒドロ−１，５−ベンゾオキサゼピン−３−イル］−２−ヒドロキシ−２−メチル−Ｎ’−（２，２，３，３，３−ペンタフルオロプロピル）プロパンジアミド（８ａ）（２０９mg、０．３５mmol）を、ＨＣｌ水溶液（３７％、２滴）を含むＭｅＯＨ（２０mL）中に溶解し、Ｐｄ−Ｃ １０％（３８mg、０．３５mmol）を加えた。排気後、Ｈ２に代え（５回）、混合物を１８時間水素化し、次に濾過し、ＭｅＯＨで洗浄し、エバポレートして、標題化合物（１８２mg、＞９９％）を白色の泡状物として得た。ＨＰＬＣ：ｔＲ ２．３７分、９９．３％（２６５nm）；ｔＲ ２．３７分、９９．３％（２２０nm）。1H NMR (600MHz, DMSO-d6): δ = 8.56 (t, J=6.50 Hz, 1H), 7.84 (d, J=6.75 Hz, 1H), 7.57 (dd, J=3.02, 9.87 Hz, 1H), 7.27 (dd, J=5.64, 8.86 Hz, 1H), 7.13 (dt, J=3.02, 8.46 Hz, 1H), 6.74 (s, 1H), 5.00 (br s, 1H), 4.58-4.69 (m, 2H), 3.83-3.97 (m, 3H), 3.76 (ddd, J=5.69, 8.16, 13.95 Hz, 1H), 3.65 (ddd, J=5.19, 8.11, 11.08 Hz, 1H), 3.43-3.49 (m, 1H), 1.40 (s, 3H), 1.19 (d, J=6.04 Hz, 3H)。13C NMR (151 MHz, DMSO-d6): δ = 171.8, 169.9, 167.4, 159.6, 158.0, 145.8, 145.8, 137.4, 137.3, 123.6, 123.5, 113.8, 113.7, 111.5, 111.3, 82.3, 76.5, 57.9, 51.5, 50.9, 38.0, 23.4, 15.5。ＬＣ−ＭＳ：５００．１（Ｍ−Ｈ）＋。ＨＲＭＳ（Ｃ１９Ｈ２１Ｆ６Ｎ３Ｏ６）：計算値５０１．１３３５［Ｍ］；実測値５０１．１３４５。
【０１５８】
実施例３−アミン−γ−セクレターゼ阻害剤（アミン−ＳｅｃｒＩ）１１ａ
２−アミノエチルカルバミン酸２−（（２Ｒ，３Ｓ）−７−フルオロ−３−（（Ｓ）−２−ヒドロキシ−２−メチル−３−オキソ−３−（２，２，３，３，３−ペンタフルオロプロピルアミノ）プロパンアミド）−２−メチル−４−オキソ−３，４−ジヒドロベンゾ［ｂ］［１，４］オキサゼピン−５（２Ｈ）−イル）エチル塩酸塩
【化２４】
2018516957.tif 000026
【０１５９】
工程ａ）炭酸２−（（２Ｒ，３Ｓ）−７−フルオロ−３−（（Ｓ）−２−ヒドロキシ−２−メチル−３−オキソ−３−（２，２，３，３，３−ペンタフルオロプロピルアミノ）プロパンアミド）−２−メチル−４−オキソ−３，４−ジヒドロベンゾ［ｂ］［１，４］オキサゼピン−５（２Ｈ）−イル）エチル４−ニトロフェニル（９）。
（Ｓ）−Ｎ−［（６Ｒ，７Ｓ）−２−フルオロ−９−（２−ヒドロキシ−エチル）−６−メチル−８−オキソ−６，７，８，９−テトラヒドロ−５−オキサ−９−アザ−ベンゾシクロヘプテン−７−イル］−２−ヒドロキシ−２−メチル−Ｎ’−（２，２，３，３，３−ペンタフルオロ−プロピル）−マロンアミド（８）（１ｇ、１．９９mmol）のＣＨ２Ｃｌ２（７５mL）中溶液に、ｉ−Ｐｒ２ＮＥｔ（２．０８mL、１１．９７mmol）及び炭酸ビス（４−ニトロフェニル）（１．８２ｇ、５．９８mmol）を加え、得られた清澄な黄色の溶液をアルゴン雰囲気下、２５℃で１２時間撹拌した。反応混合物を１０％ ＫＨＳＯ４水溶液（４０mL）に注いだ。有機層を分離し、水層をＣＨ２Ｃｌ２（２×４０mL）で再抽出した。合わせた有機層を飽和ＮａＨＣＯ３水溶液（２×３０mL）及びブライン（３０mL）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４無水物で乾燥し、濾過して、減圧下でエバポレートした。得られた粗物質を、通常のシリカゲルでのカラムクロマトグラフィー（２〜８％ ＥｔＯＡｃ／ｎ−ヘキサン）で精製して、標題化合物（１．２ｇ、９０％）を白色の固体として得た。1H NMR (300MHz, DMSO-d6): δ = 7.17 (ddd, J=8.5, 3.2 Hz, 1H), 8.27-8.37 (m, 2H), 7.84 (d, J=6.7 Hz, 1H), 7.42-7.52 (m, 3H), 7.32 (dd, J=8.9, 5.7 Hz, 1H), 7.17 (td, J=8.5, 3.2 Hz, 1H), 6.73 (s, 1H), 4.68-4.74 (m, 1H), 4.62 (dd, J=6.3 Hz, 1H), 4.42-4.56 (m, 2H), 4.20-4.32 (m, 1H), 3.95-4.06 (m, 1H), 3.78-3.94 (m, 2H), 3.29 (s, 3H), 1.39 (s, 3H), 1.21 (d, J=6.3 Hz, 3H)。ＬＣ−ＭＳ：６６７．２（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０１６０】
工程ｂ）Ｎ−［２−［２−［（２Ｒ，３Ｓ）−７−フルオロ−３−［［（２Ｓ）−２−ヒドロキシ−２−メチル−３−オキソ−３−（２，２，３，３，３−ペンタフルオロプロピルアミノ）プロパノイル］アミノ］−２−メチル−４−オキソ−２，３−ジヒドロ−１，５−ベンゾオキサゼピン−５−イル］エトキシカルボニルアミノ］エチル］カルバミン酸tert−ブチル（１０ａ）。
アルゴン雰囲気下、０℃で、炭酸２−（（２Ｒ，３Ｓ）−７−フルオロ−３−（（Ｓ）−２−ヒドロキシ−２−メチル−３−オキソ−３−（２，２，３，３，３−ペンタフルオロプロピルアミノ）プロパンアミド）−２−メチル−４−オキソ−３，４−ジヒドロベンゾ［ｂ］［１，４］オキサゼピン−５（２Ｈ）−イル）エチル４−ニトロフェニル（９）（１２００mg、１．８０mmol）のＣＨ２Ｃｌ２（１５mL）中溶液に、Ｎ−ＢＯＣ−エチレンジアミン（３１７mg、１．９８mmol）のＣＨ２Ｃｌ２（９mL）及びＥｔ３Ｎ（１．０５mL、１．８９mmol）中溶液を滴下して加えた。得られた反応混合物を、０℃で１時間、続いて更に２５℃で１２時間撹拌した。反応混合物を１０％ ＫＨＳＯ４水溶液（１０mL）に注いだ。有機層を分離し、水層をＥｔＯＡｃで再抽出した（２×２０mL）。合わせた有機層を無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、濾過して、減圧下でエバポレートした。得られた粗物質を、フラッシュクロマトグラフィー（５０ｇのSi-Amine、Cilicycleカートリッジ、ＥｔＯＡｃ／ｎ−ヘプタン １：１〜２：１）で精製して、標題化合物（１．１５ｇ、９３％）を白色の粉末として得た。1H NMR (300MHz, DMSO-d6): δ = 8.56 (t, J=6.9 Hz, 1H), 7.82 (d, J=6.1 Hz, 1H), 7.40 (dd, J=9.7, 2.6 Hz, 1H), 7.28 (dd, J=9.0, 5.6 Hz, 1H), 7.15 (td, J=8.3, 2.4 Hz, 1H), 7.02 (br. s., 1H), 6.74 (s, 2H), 4.51-4.73 (m, 2H), 4.14 (d, J=19.8 Hz, 1H), 4.06 (d, J=4.6 Hz, 2H), 3.77-3.98 (m, 3H), 3.29 (s, 3H), 2.93 (br. s., 3H), 1.39 (s, 3H), 1.36 (s, 9H), 1.20 ppm (d, J=5.9 Hz, 3H)。ＬＣ−ＭＳ：６８８．２（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０１６１】
工程ｃ）２−アミノエチルカルバミン酸２−（（２Ｒ，３Ｓ）−７−フルオロ−３−（（Ｓ）−２−ヒドロキシ−２−メチル−３−オキソ−３−（２，２，３，３，３−ペンタフルオロプロピルアミノ）プロパンアミド）−２−メチル−４−オキソ−３，４−ジヒドロベンゾ［ｂ］［１，４］オキサゼピン−５（２Ｈ）−イル）エチル塩酸塩（１１ａ）。
０℃で、Ｎ−［２−［２−［（２Ｒ，３Ｓ）−７−フルオロ−３−［［（２Ｓ）−２−ヒドロキシ−２−メチル−３−オキソ−３−（２，２，３，３，３−ペンタフルオロプロピルアミノ）プロパノイル］アミノ］−２−メチル−４−オキソ−２，３−ジヒドロ−１，５−ベンゾオキサゼピン−５−イル］エトキシカルボニルアミノ］エチル］カルバミン酸tert−ブチル（１０ａ）（１．１５ｇ、１．６７mmol）のＣＨ２Ｃｌ２（５．７mL）中溶液に、４M ＨＣｌのジオキサン（４．２mL）中溶液を滴下して加えた。反応混合物を２５℃で１．７５時間撹拌した。揮発性物質を減圧下でエバポレートした。得られた粗物質をＣＨ２Ｃｌ２／Ｅｔ２Ｏでトリチュレートし、標題化合物（９９７mg、９６％）をオフホワイトの粉末として得た。ＨＰＬＣ：ｔＲ １．６７分、９９．１％（２６５nm）；ｔＲ １．６７分、９８．０％（２２０nm）。1H NMR (600MHz, DMSO-d6): δ = 8.56 (t, J=6.55 Hz, 1H), 7.70-8.01 (m, 4H), 7.42 (dd, J=2.87, 9.62 Hz, 1H), 7.29 (dd, J=5.64, 8.87 Hz, 1H), 7.21 (t, J=5.74 Hz, 1H), 7.16 (dt, J=3.02, 8.46 Hz, 1H), 6.88 (br s, 1H), 6.74 (s, 1H), 4.64-4.68 (m, 1H), 4.57-4.64 (m, 1H), 4.24-4.52 (m, 1H), 4.13-4.23 (m, 1H), 4.05-4.12 (m, 2H), 3.79-3.99 (m, 3H), 3.17 (q, J=6.28 Hz, 2H), 2.86-3.12 (m, 1H), 2.74-2.86 (m, 2H), 2.62-2.74 (m, 1H), 1.39 (s, 3H), 1.21 (d, J=6.25 Hz, 3H)。13C NMR (151 MHz, DMSO-d6): δ = 172.3, 170.4, 168.1, 160.1, 158.5, 156.4, 146.5, 146.5, 136.9, 136.8, 124.3, 124.2, 120.0, 114.7, 114.5, 113.6, 113.4, 111.5, 111.3, 82.7, 76.9, 61.3, 51.8, 47.0, 39.1, 38.7, 38.5, 38.4, 24.0, 15.9。ＬＣ−ＭＳ：５８６．１７（Ｍ−Ｈ）−。ＨＲＭＳ（Ｃ２２Ｈ２７Ｆ６Ｎ５Ｏ７）：計算値５８７．１８１５［Ｍ］；実測値５８７．１８４１。
【０１６２】
実施例４−Ａｃ−γ−Ｇｌｕ−プロドラッグ（Ａｃ−γ−Ｇｌｕ−ＳｅｃｒＩ）１３ａ
（Ｓ）−２−アセトアミド−５−（２−（（２−（（２Ｒ，３Ｓ）−７−フルオロ−３−（（Ｓ）−２−ヒドロキシ−２−メチル−３−オキソ−３−（２，２，３，３，３−ペンタフルオロプロピルアミノ）プロパンアミド）−２−メチル−４−オキソ−３，４−ジヒドロベンゾ［ｂ］［１，４］オキサゼピン−５（２Ｈ）−イル）エトキシ）カルボニルアミノ）エチルアミノ）−５−オキソペンタン酸
【化２５】
2018516957.tif 000027
【０１６３】
工程ａ）（Ｓ）−２−アセトアミド−５−（２−（（２−（（２Ｒ，３Ｓ）−７−フルオロ−３−（（Ｓ）−２−ヒドロキシ−２−メチル−３−オキソ−３−（２，２，３，３，３−ペンタフルオロプロピルアミノ）プロパンアミド）−２−メチル−４−オキソ−３，４−ジヒドロベンゾ［ｂ］［１，４］オキサゼピン−５（２Ｈ）−イル）エトキシ）カルボニルアミノ）エチルアミノ）−５−オキソペンタン酸ベンジル（１２ａ）。
アルゴン下、０℃で、２−アミノエチルカルバミン酸２−（（２Ｒ，３Ｓ）−７−フルオロ−３−（（Ｓ）−２−ヒドロキシ−２−メチル−３−オキソ−３−（２，２，３，３，３−ペンタフルオロプロピルアミノ）プロパンアミド）−２−メチル−４−オキソ−３，４−ジヒドロベンゾ［ｂ］［１，４］オキサゼピン−５（２Ｈ）−イル）エチル塩酸塩（１１ａ）（２２５mg、３６０μmol）及びＡｃ−Ｇｌｕ（ＯＳＵ）−ＯＢｚｌ（１４９mg、３９６μmol）のＤＭＦ（３．９９mL）中のほぼ無色の溶液に、Ｅｔ３Ｎ（４０．１mg、５５．２μl、３９６μmol）のＤＭＦ（２．４０mL）中溶液の１／３を１５分間かけて滴下して加えた（溶液は明黄色になった）。１５分後、第２の１／３の量を１５分かけて加え、そして１５分後、最後の１／３を１５分かけて加えた。反応物を一晩、室温まで温めるにまかせた。ＬＣ／ＭＳで検出された出発アミンは依然として存在した。反応物を再び０℃まで冷却し、ＤＭＦ（１．２０mL）中のＥｔ３Ｎ（４０．１mg、５５．２μl、３９６μmol）を１５分かけて滴下して加え、１時間後Ａｃ−Ｇｌｕ（ＯＳＵ）−ＯＢｚｌ（１３５mg、３６０μmol）を加えた。反応物を４時間かけて室温まで温めるにまかせ、そして室温で一晩撹拌した。エバポレートした後、残留物を１０％ ＫＨＳＯ４水溶液及びＥｔＯＡｃ（３×）で処理した。有機相を１０％ ＫＨＳＯ４水溶液、飽和ＮａＨＣＯ３水溶液で及び１０％ ＮａＣｌ水溶液で１回洗浄し、合わせた有機相をＮａ２ＳＯ４で乾燥し、濾過して、エバポレートした。生成物をＥｔ２Ｏ及びｎ−ペンタンを用いてＣＨ２Ｃｌ２から沈殿させ（２×）、白色の固体（２５３mg（８３％））を得た。1H NMR (300MHz, DMSO-d6): δ = 8.54 (t, J=6.6 Hz, 1H), 8.28 (d, J=7.5 Hz, 1H), 7.81 (t, J=6.2 Hz, 2H), 7.33-7.43 (m, 6H), 7.24-7.32 (m, 1H), 7.09-7.19 (m, 1H), 7.05 (d, J=6.3 Hz, 1H), 6.71 (s, 1H), 5.11 (s, 2H), 4.53-4.70 (m, 2H), 4.23 (d, J=12.3 Hz, 1H), 4.05 (br. s., 2H), 3.79-3.98 (m, 3H), 2.86-3.09 (m, 4H), 2.08-2.19 (m, 2H), 1.89-2.04 (m, 1H), 1.84 (s, 3H), 1.77 (s, 1H), 1.39 (s, 3H), 1.20 (d, J=5.9 Hz, 3H)。ＬＣ−ＭＳ：８４９．７（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０１６４】
工程ｂ）（Ｓ）−２−アセトアミド−５−（２−（（２−（（２Ｒ，３Ｓ）−７−フルオロ−３−（（Ｓ）−２−ヒドロキシ−２−メチル−３−オキソ−３−（２，２，３，３，３−ペンタフルオロプロピルアミノ）プロパンアミド）−２−メチル−４−オキソ−３，４−ジヒドロベンゾ［ｂ］［１，４］オキサゼピン−５（２Ｈ）−イル）エトキシ）カルボニルアミノ）エチルアミノ）−５−オキソペンタン酸（１３ａ）。
アルゴン下、撹拌している（Ｓ）−２−アセトアミド−５−（２−（（２−（（２Ｒ，３Ｓ）−７−フルオロ−３−（（Ｓ）−２−ヒドロキシ−２−メチル−３−オキソ−３−（２，２，３，３，３−ペンタフルオロプロピルアミノ）プロパンアミド）−２−メチル−４−オキソ−３，４−ジヒドロベンゾ［ｂ］［１，４］オキサゼピン−５（２Ｈ）−イル）エトキシ）カルボニルアミノ）エチルアミノ）−５−オキソペンタン酸ベンジル（１２ａ）（２０２mg、２３８μmol）を、ジオキサン（３．８１mL）及びＭｅＯＨ（３．８１ml）中に溶解し、Ｐｄ−Ｃ １０％、Ｔｙｐ Ｅ１０Ｎ（２０．２mg、１９０μmol）を加え、排気し、そしてＨ２に代えた後（５回）、混合物を３．５時間水素化し、次に濾過し、ＭｅＯＨで洗浄し、エバポレートして、Ｅｔ２Ｏと用いてＣＨ２Ｃｌ２から沈殿させた後、標題化合物の化合物（１４８mg、８２％）をオフホワイトの固体として得た。ＨＰＬＣ：ｔＲ  １．０４分、９９．２％（２６５nm）；ｔＲ １．０４分、９８．２％（２２５nm）。1H NMR (300MHz, DMSO-d6): δ = 8.72 (br. s., 1H), 7.86 (d, J=6.9 Hz, 1H), 7.81 (t, J=5.5 Hz, 1H), 7.44-7.52 (m, 1H), 7.42 (dd, J=9.7, 3.0 Hz, 1H), 7.28 (dd, J=8.9, 5.5 Hz, 1H), 7.14 (td, J=8.5, 2.9 Hz, 1H), 7.06 (t, J=5.6 Hz, 1H), 6.80 (br. s., 1H), 4.66 (t, J=6.8 Hz, 1H), 4.58 (quin, J=6.3 Hz, 1H), 4.17-4.25 (m, 1H), 4.02-4.10 (m, 1H), 3.93-4.00 (m, 1H), 3.82-3.93 (m, 4H), 3.01-3.08 (m, 2H), 2.91-3.00 (m, 2H), 2.03-2.09 (m, 2H), 1.85-1.91 (m, 1H), 1.82 (s, 3H), 1.66-1.76 (m, 1H), 1.38 (s, 3H), 1.22 (d, J=6.3 Hz, 3H)。ＬＣ−ＭＳ：７５９．６（Ｍ＋Ｈ）＋。ＨＲＭＳ（Ｃ２９Ｈ３６Ｆ６Ｎ６Ｏ１１）：計算値７５８．２３４６［Ｍ］；実測値７５８．２３４１。
【０１６５】
実施例５−Ｈ−γ−Ｇｌｕ−プロドラッグ（Ｈ−γ−Ｇｌｕ−ＳｅｃｒＩ）１３ｂ
（Ｓ）−２−アミノ−５−（２−（（２−（（２Ｒ，３Ｓ）−７−フルオロ−３−（（Ｓ）−２−ヒドロキシ−２−メチル−３−オキソ−３−（２，２，３，３，３−ペンタフルオロプロピルアミノ）プロパンアミド）−２−メチル−４−オキソ−３，４−ジヒドロベンゾ［ｂ］［１，４］オキサゼピン−５（２Ｈ）−イル）エトキシ）カルボニルアミノ）エチルアミノ）−５−オキソペンタン酸
【化２６】
2018516957.tif 000028
【０１６６】
工程ａ）（Ｓ）−２−（tert−ブトキシカルボニルアミノ）−５−（２−（（２−（（２Ｒ，３Ｓ）−７−フルオロ−３−（（Ｓ）−２−ヒドロキシ−２−メチル−３−オキソ−３−（２，２，３，３，３−ペンタフルオロプロピルアミノ）プロパンアミド）−２−メチル−４−オキソ−３，４−ジヒドロベンゾ［ｂ］［１，４］オキサゼピン−５（２Ｈ）−イル）エトキシ）カルボニルアミノ）エチルアミノ）−５−オキソペンタン酸−tert−ブチル（１２ｂ）。
２−アミノエチルカルバミン酸２−（（２Ｒ，３Ｓ）−７−フルオロ−３−（（Ｓ）−２−ヒドロキシ−２−メチル−３−オキソ−３−（２，２，３，３，３−ペンタフルオロプロピルアミノ）プロパンアミド）−２−メチル−４−オキソ−３，４−ジヒドロベンゾ［ｂ］［１，４］オキサゼピン−５（２Ｈ）−イル）エチル塩酸塩（１１ａ）（２９９mg、４８０μmol）のＤＭＦ（５mL）中溶液を、ＢＯＣ−Ｇｌｕ−ＯｔＢｕ（１６０mg、５２８μmol）、１−ヒドロキシ−７−アザベンゾトリアゾール（６５mg、４８０μmol）で処理し、そしてＥＤＣＩ（１０１mg、５２８μmol）で０℃にて処理した。ＤＭＦ（３．５mL）中のＥｔ３Ｎ（７４μL、５２８μmol）を、２時間かけて（ofer）３回に分けて非常にゆっくりと加えた。反応物を一晩、室温まで温めるにまかせ、１０％ ＫＨＳＯ４水溶液／Ｅｔ２Ｏで抽出した（３×）。有機相を飽和ＮａＨＣＯ３水溶液、１０％ ＮａＣｌで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥して、エバポレートした。残留物をＥｔ２Ｏ及び（an）ｎ−ペンタンを用いてＣＨ２Ｃｌ２から沈殿させて、標題化合物（４２２mg、定量的）を白色の固体として得た。1H NMR (300MHz, DMSO-d6): δ = 8.54 (t, J=6.4 Hz, 1H), 7.73-7.88 (m, 2H), 7.40 (dd, J=10.1, 3.0 Hz, 1H), 7.28 (dd, J=8.9, 5.7 Hz, 1H), 7.14 (td, J=8.3, 2.8 Hz, 1H), 6.99-7.10 (m, 2H), 6.71 (s, 1H), 4.53-4.72 (m, 2H), 4.14 (d, J=8.1 Hz, 1H), 4.02-4.09 (m, 2H), 3.81-3.99 (m, 3H), 3.70 (s, 1H), 2.88-3.09 (m, 4H), 2.11 (t, J=7.2 Hz, 2H), 1.79-1.96 (m, 1H), 1.59-1.77 (m, 1H), 1.36-1.44 (m, 21H), 1.20 (d, J=6.1 Hz, 4H)。ＬＣ−ＭＳ：８７１．６（Ｍ−Ｈ−）。
【０１６７】
工程ｂ）（Ｓ）−２−アミノ−５−（２−（（２−（（２Ｒ，３Ｓ）−７−フルオロ−３−（（Ｓ）−２−ヒドロキシ−２−メチル−３−オキソ−３−（２，２，３，３，３−ペンタフルオロプロピルアミノ）プロパンアミド）−２−メチル−４−オキソ−３，４−ジヒドロベンゾ［ｂ］［１，４］オキサゼピン−５（２Ｈ）−イル）エトキシ）カルボニルアミノ）エチルアミノ）−５−オキソペンタン酸塩酸塩（１３ｂ）。
０℃で、（Ｓ）−２−（tert−ブトキシカルボニルアミノ）−５−（２−（（２−（（２Ｒ，３Ｓ）−７−フルオロ−３−（（Ｓ）−２−ヒドロキシ−２−メチル−３−オキソ−３−（２，２，３，３，３−ペンタフルオロプロピルアミノ）プロパンアミド）−２−メチル−４−オキソ−３，４−ジヒドロベンゾ［ｂ］［１，４］オキサゼピン−５（２Ｈ）−イル）エトキシ）カルボニルアミノ）エチルアミノ）−５−オキソペンタン酸−tert−ブチル（１２ｂ）（３２０mg、３６７μmol）のＣＨ２Ｃｌ２（６．８mL）及びジオキサン（６．８mL）中溶液に、４M ＨＣｌのジオキサン（１．８mL、７．３mmol）中溶液及び１滴の水を滴下して加えた。１０分後、反応混合物を２５℃で２１時間撹拌した。再度、ジオキサン（０．９mL、３．７mmol）中の４M ＨＣｌ及び１滴の水を０℃で、そして３．５時間後に室温で加え、揮発性物物質を減圧下でエバポレートした。得られた粗物質をＣＨ２Ｃｌ２／Ｅｔ２Ｏでトリチュレートし（２×）、標題化合物（２２６mg、８２％；対応するtert−ブチルエステル１７％で純度８３％）を白色の固体として得た。ＨＰＬＣ：ｔＲ １．８６分、８２．９％（２６５nm）；ｔＲ １．８６分、８３．４％（２２０nm）。1H NMR (300MHz, DMSO-d6): δ = 13.80 (br s, 1H), 8.56 (t, J=6.55 Hz, 1H), 8.31 (br s, 3H), 8.00 (br t, J=5.49 Hz, 1H), 7.82 (d, J=6.85 Hz, 1H), 7.40 (dd, J=2.82, 9.67 Hz, 1H), 7.29 (dd, J=5.59, 8.92 Hz, 1H), 7.15 (dt, J=2.92, 8.41 Hz, 1H), 7.09 (br t, J=5.69 Hz, 1H), 6.74 (s, 1H), 4.66 (t, J=6.70 Hz, 1H), 4.56-4.63 (m, 1H), 4.11-4.22 (m, 1H), 4.06 (br t, J=5.69 Hz, 2H), 3.80-3.97 (m, 4H), 3.02-3.11 (m, 2H), 2.92 3.00 (m, 2H), 2.26-2.35 (m, 1H), 2.16-2.24 (m, 1H), 1.90-2.06 (m, 2H), 1.39 (s, 3H), 1.20 (d, J=6.25 Hz, 3H)。13C NMR (151 MHz, DMSO-d6) δ 171.9, 171.0, 170.8, 170.0, 167.6, 159.7, 158.1, 155.8, 146.1, 146.0, 136.4, 136.4, 123.8, 123.7, 114.2, 114.0, 111.0, 110.8, 83.1, 82.2, 76.5, 60.6, 51.6, 51.3, 46.6, 40.2, 40.0, 39.0, 38.6, 38.0, 30.6, 27.5, 25.9, 25.8, 23.5, 15.4。ＬＣ−ＭＳ：７１７．３（Ｍ＋Ｈ）＋。ＨＲＭＳ（Ｃ２７Ｈ３４Ｆ６Ｎ６Ｏ１０）：計算値７１６．２２４１［Ｍ］；実測値７１６．２２５５。
【０１６８】
実施例６−Ａｃ−α−Ｇｌｕ−プロドラッグ（Ａｃ−α−Ｇｌｕ−ＳｅｃｒＩ）１５ａ
（Ｓ）−４−アセトアミド−５−（２−（（２−（（２Ｒ，３Ｓ）−７−フルオロ−３−（（Ｓ）−２−ヒドロキシ−２−メチル−３−オキソ−３−（２，２，３，３，３−ペンタフルオロプロピルアミノ）プロパンアミド）−２−メチル−４−オキソ−３，４−ジヒドロベンゾ［ｂ］［１，４］オキサゼピン−５（２Ｈ）−イル）エトキシ）カルボニルアミノ）エチルアミノ）−５−オキソペンタン酸
【化２７】
2018516957.tif 000029
【０１６９】
工程ａ）（Ｓ）−４−アセトアミド−５−（２−（（２−（（２Ｒ，３Ｓ）−７−フルオロ−３−（（Ｓ）−２−ヒドロキシ−２−メチル−３−オキソ−３−（２，２，３，３，３−ペンタフルオロプロピルアミノ）プロパンアミド）−２−メチル−４−オキソ−３，４−ジヒドロベンゾ［ｂ］［１，４］オキサゼピン−５（２Ｈ）−イル）エトキシ）カルボニルアミノ）エチルアミノ）−５−オキソペンタン酸tert−ブチル（１４ａ）。
２−アミノエチルカルバミン酸２−（（２Ｒ，３Ｓ）−７−フルオロ−３−（（Ｓ）−２−ヒドロキシ−２−メチル−３−オキソ−３−（２，２，３，３，３−ペンタフルオロプロピルアミノ）プロパンアミド）−２−メチル−４−オキソ−３，４−ジヒドロベンゾ［ｂ］［１，４］オキサゼピン−５（２Ｈ）−イル）エチル塩酸塩（１１ａ）（５３０mg、８５０μmol）のＤＭＦ（１６．１mL）中溶液を、Ａｃ−Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）−ＯＨ（２２９mg、９３５μmol）、１−ヒドロキシ−７−アザベンゾトリアゾール（１１６mg、８５０μmol）、Ｅｔ３Ｎ（１３０μL、９３５μmol）で処理し、そしてＥＤＣＩ（１７９mg、９３５μmol）で０℃にて処理した。反応物を一晩、室温まで温めるにまかせ、１０％ ＫＨＳＯ４／ＥｔＯＡｃ水溶液で抽出した（３×）。有機相を飽和ＮａＨＣＯ３水溶液、１０％ ＮａＣｌ水溶液で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥して、エバポレートした。残留物を、Ｅｔ２Ｏを用いてＣＨ２Ｃｌ２から沈殿させて、標題化合物（７００mg、定量的）を得た。1H NMR (300MHz, DMSO-d6): δ = 8.54 (t, J=6.5 Hz, 1H), 7.94 (d, J=8.1 Hz, 1H), 7.87 (t, J=5.7 Hz, 1H), 7.82 (d, J=6.5 Hz, 1H), 7.40 (dd, J=9.6, 2.9 Hz, 1H), 7.28 (dd, J=8.9, 5.7 Hz, 1H), 7.14 (ddd, J=8.6, 3.0 Hz, 1H), 7.03 (t, J=5.3 Hz, 1H), 6.71 (s, 1H), 4.53-4.75 (m, 2H), 4.10-4.23 (m, 2H), 4.06 (t, J=5.1 Hz, 2H), 3.76-3.98 (m, 3H), 2.85-3.16 (m, 4H), 2.10-2.22 (m, 2H), 1.83 (s, 3H), 1.79-1.93 (m, 1H), 1.57-1.75 (m, 1H), 1.39 (s, 3H), 1.38 (s, 9H), 1.20 (d, J=5.9 Hz, 3H)。ＬＣ−ＭＳ：８１５．３（Ｍ＋Ｈ＋）。
【０１７０】
工程ｂ）（Ｓ）−４−アセトアミド−５−（２−（（２−（（２Ｒ，３Ｓ）−７−フルオロ−３−（（Ｓ）−２−ヒドロキシ−２−メチル−３−オキソ−３−（２，２，３，３，３−ペンタフルオロプロピルアミノ）プロパンアミド）−２−メチル−４−オキソ−３，４−ジヒドロベンゾ［ｂ］［１，４］オキサゼピン−５（２Ｈ）−イル）エトキシ）カルボニルアミノ）エチルアミノ）−５−オキソペンタン酸（１５ａ）。
０℃で、（Ｓ）−４−アセトアミド−５−（２−（（２−（（２Ｒ，３Ｓ）−７−フルオロ−３−（（Ｓ）−２−ヒドロキシ−２−メチル−３−オキソ−３−（２，２，３，３，３−ペンタフルオロプロピルアミノ）プロパンアミド）−２−メチル−４−オキソ−３，４−ジヒドロベンゾ［ｂ］［１，４］オキサゼピン−５（２Ｈ）−イル）エトキシ）カルボニルアミノ）エチルアミノ）−５−オキソペンタン酸tert−ブチル（１４ａ）（６００mg、７３６μmol）のＣＨ２Ｃｌ２（１３．７mL）及びジオキサン（１３．７mL）中溶液に、４M ＨＣｌ（３．６８mL、１４．７mmol）のジオキサン中溶液及び１滴の水を滴下して加えた。１０分後、反応混合物を２５℃で２２時間撹拌した。揮発性物質を減圧下でエバポレートした。得られた粗物質をＣＨ２Ｃｌ２／Ｅｔ２Ｏでトリチュレートし、標題化合物（４５５mg、８１％）を白色の固体として得た。ＨＰＬＣ：ｔＲ ２．０９分、９０．７％（２６５nm）；ｔＲ ２．０９分、８６．５％（２２０nm）。1H NMR (600MHz, DMSO-d6): δ = 11.42-12.63 (m, 1H), 8.56 (t, J=6.50 Hz, 1H), 7.97 (d, J=8.06 Hz, 1H), 7.90 (br t, J=5.54 Hz, 1H), 7.82 (d, J=6.85 Hz, 1H), 7.40 (dd, J=2.87, 9.72 Hz, 1H), 7.29 (dd, J=5.59, 8.81 Hz, 1H), 7.14 (dt, J=3.02, 8.41 Hz, 1H), 7.05 (t, J=5.69 Hz, 1H), 6.73 (br s, 1H), 4.65 (t, J=6.75 Hz, 1H), 4.57-4.63 (m, 1H), 4.26-4.46 (m, 1H), 4.15 (dt, J=4.43, 8.81 Hz, 2H), 4.05 (br t, J=5.69 Hz, 2H), 3.84-3.96 (m, 3H), 2.89-3.12 (m, 4H), 2.63-2.76 (m, 1H), 2.13-2.24 (m, 2H), 1.81-1.94 (m, 4H), 1.63-1.72 (m, 1H), 1.39-1.41 (m, 1H), 1.39 (s, 2H), 1.20 (d, J=6.25 Hz, 3H)。13C NMR (151 MHz, DMSO-d6) δ 173.9, 171.8, 171.4, 170.0, 169.3, 167.6, 159.7, 158.1, 155.8, 146.0, 136.4, 136.4, 123.8, 123.7, 119.5, 117.6, 114.2, 114.0, 113.1, 112.9, 111.0, 110.8, 82.2, 76.5, 64.9, 60.6, 51.9, 51.3, 46.6, 38.5, 38.0, 30.2, 27.7, 27.3, 26.0, 23.5, 22.5, 15.4, 15.2。ＬＣ−ＭＳ：７５９．３（Ｍ＋Ｈ）＋。ＨＲＭＳ（Ｃ２９Ｈ３６Ｆ６Ｎ６Ｏ１１）：計算値７５８．２３４６３［Ｍ］；実測値７５８．２３６３６。
【０１７１】
実施例７−Ｈ−α−Ｇｌｕ−プロドラッグ（Ｈ−α−Ｇｌｕ−ＳｅｃｒＩ）１５ｂ
（Ｓ）−４−アミノ−５−（２−（（２−（（２Ｒ，３Ｓ）−７−フルオロ−３−（（Ｓ）−２−ヒドロキシ−２−メチル−３−オキソ−３−（２，２，３，３，３−ペンタフルオロプロピルアミノ）プロパンアミド）−２−メチル−４−オキソ−３，４−ジヒドロベンゾ［ｂ］［１，４］オキサゼピン−５（２Ｈ）−イル）エトキシ）カルボニルアミノ）エチルアミノ）−５−オキソペンタン酸。
【化２８】
2018516957.tif 000030
【０１７２】
工程ａ）（Ｓ）−４−（tert−ブトキシカルボニルアミノ）−５−（２−（（２−（（２Ｒ，３Ｓ）−７−フルオロ−３−（（Ｓ）−２−ヒドロキシ−２−メチル−３−オキソ−３−（２，２，３，３，３−ペンタフルオロプロピルアミノ）プロパンアミド）−２−メチル−４−オキソ−３，４−ジヒドロベンゾ［ｂ］［１，４］オキサゼピン−５（２Ｈ）−イル）エトキシ）カルボニルアミノ）エチルアミノ）−５−オキソペンタン酸−tert−ブチル（１４ｂ）。
２−アミノエチルカルバミン酸２−（（２Ｒ，３Ｓ）−７−フルオロ−３−（（Ｓ）−２−ヒドロキシ−２−メチル−３−オキソ−３−（２，２，３，３，３−ペンタフルオロプロピルアミノ）プロパンアミド）−２−メチル−４−オキソ−３，４−ジヒドロベンゾ［ｂ］［１，４］オキサゼピン−５（２Ｈ）−イル）エチル塩酸塩（１１ａ）（２６５mg、４２５μmol）のＤＭＦ（８mL）中溶液を、ＢＯＣ−Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）−ＯＨ（１４２mg、４６８μmol）、１−ヒドロキシ−７−アザベンゾトリアゾール（５８mg、４２５μmol）、Ｅｔ３Ｎ（６５μL、４６８μmol）で処理し、そしてＥＤＣＩ（９０mg、４６８μmol）で０℃にて処理した。反応物を一晩、室温まで温めるにまかせ、１０％ ＫＨＳＯ４／Ｅｔ２Ｏで抽出した（３×）。有機相を飽和ＮａＨＣＯ３水溶液、１０％ ＮａＣｌ水溶液で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥して、エバポレートした。残留物をＥｔ２Ｏ及びｎ−ペンタンを用いてＣＨ２Ｃｌ２から沈殿させて、標題化合物（３７３mg、定量的）を白色の固体として得た。1H NMR (300MHz, DMSO-d6): δ = 8.55 (t, J=6.6 Hz, 1H), 7.82 (d, J=6.7 Hz, 2H), 7.41 (dd, J=10.7, 2.4 Hz, 1H), 7.28 (dd, J=8.9, 5.7 Hz, 1H), 7.14 (td, J=8.3, 2.8 Hz, 1H), 7.01 (br. s., 1H), 6.80 (d, J=7.5 Hz, 1H), 6.71 (s, 1H), 4.55-4.72 (m, 2H), 4.11-4.23 (m, 1H), 4.07 (d, J=4.8 Hz, 2H), 3.77 3.99 (m, 4H), 2.91-3.16 (m, 3H), 2.18 (t, J=7.4 Hz, 2H), 1.74-1.89 (m, 1H), 1.54-1.72 (m, 1H), 1.35-1.41 (m, 21H), 1.20 (d, J=5.9 Hz, 3H)。ＬＣ−ＭＳ：８７１．６（Ｍ−Ｈ−）。
【０１７３】
工程ｂ）（Ｓ）−４−アミノ−５−（２−（（２−（（２Ｒ，３Ｓ）−７−フルオロ−３−（（Ｓ）−２−ヒドロキシ−２−メチル−３−オキソ−３−（２，２，３，３，３−ペンタフルオロプロピルアミノ）プロパンアミド）−２−メチル−４−オキソ−３，４−ジヒドロベンゾ［ｂ］［１，４］オキサゼピン−５（２Ｈ）−イル）エトキシ）カルボニルアミノ）エチルアミノ）−５−オキソペンタン酸塩酸塩（１５ｂ）。
０℃で、（Ｓ）−４−（tert−ブトキシカルボニルアミノ）−５−（２−（（２−（（２Ｒ，３Ｓ）−７−フルオロ−３−（（Ｓ）−２−ヒドロキシ−２−メチル−３−オキソ−３−（２，２，３，３，３−ペンタフルオロプロピルアミノ）プロパンアミド）−２−メチル−４−オキソ−３，４−ジヒドロベンゾ［ｂ］［１，４］オキサゼピン−５（２Ｈ）−イル）エトキシ）カルボニルアミノ）エチルアミノ）−５−オキソペンタン酸−tert−ブチル（１４ｂ）（３２０mg、３６７μmol）のＣＨ２Ｃｌ２（６．８mL）及びジオキサン（６．８mL）中溶液に、４M ＨＣｌのジオキサン（１．８mL、７．４mmol）中溶液及び１滴の水を滴下して加えた。１０分後、反応混合物を２５℃で１８時間撹拌した。揮発性物質を減圧下でエバポレートした。得られた粗物質をＣＨ２Ｃｌ２／ＥｔＯＡｃでトリチュレートし、標題化合物（２２２mg、８０％；対応するtert−ブチルエステル１２％で純度８８％）を白色の固体として得た。ＨＰＬＣ：ｔＲ １．７６分、８８．０％（２６５nm）；ｔＲ １．７６分、８８．８％（２２０nm）。1H NMR (300MHz, DMSO-d6): δ = 12.31 (br s, 1H), 8.56 (t, J=6.55 Hz, 1H), 8.53 (br t, J=5.59 Hz, 1H), 8.19 (br s, 3H), 7.82 (d, J=6.95 Hz, 1H), 7.40 (dd, J=2.77, 9.72 Hz, 1H), 7.29 (dd, J=5.59, 8.81 Hz, 1H), 7.08-7.19 (m, 2H), 6.74 (s, 1H), 4.66 (t, J=6.75 Hz, 1H), 4.58-4.64 (m, 1H), 4.11-4.20 (m, 1H), 4.00-4.10 (m, 2H), 3.83-3.98 (m, 3H), 3.72 (br d, J=5.44 Hz, 1H), 3.18 (td, J=6.45, 12.89 Hz, 1H), 3.07 (td, J=6.28, 12.92 Hz, 1H), 3.02 (q, J=6.45 Hz, 2H), 2.23-2.34 (m, 2H), 1.93 (q, J=7.35 Hz, 2H), 1.39 (s, 3H), 1.21 (d, J=6.15 Hz, 3H)。13C NMR (151 MHz, DMSO-d6) δ 173.2, 171.9, 170.0, 168.2, 167.6, 159.7, 158.1, 155.8, 146.0, 136.4, 123.8, 123.7, 114.2, 114.0, 110.9, 110.8, 82.2, 76.5, 60.7, 51.7, 51.3, 46.6, 40.0, 38.9, 38.9, 38.6, 38.2, 38.0, 29.1, 27.7, 26.1, 23.5, 15.4。ＬＣ−ＭＳ：７１７．３（Ｍ＋Ｈ）＋。ＨＲＭＳ（Ｃ２７Ｈ３４Ｆ６Ｎ６Ｏ１０）：計算値７１６．２２４１［Ｍ］；実測値７１６．２２５４。
【０１７４】
実施例８−アミン−γ−Ｏ−セクレターゼ阻害剤（アミン−Ｏ−ＳｅｃｒＩ）１１ｂ
炭酸２−アミノエチル２−（（２Ｒ，３Ｓ）−７−フルオロ−３−（（Ｓ）−２−ヒドロキシ−２−メチル−３−オキソ−３−（２，２，３，３，３−ペンタフルオロプロピルアミノ）プロパンアミド）−２−メチル−４−オキソ−３，４−ジヒドロベンゾ［ｂ］［１，４］オキサゼピン−５（２Ｈ）−イル）エチル塩酸塩
【化２９】
2018516957.tif 000031
【０１７５】
工程ａ）tert−ブチル ２−（（２−（（２Ｒ，３Ｓ）−７−フルオロ−３−（（Ｓ）−２−ヒドロキシ−２−メチル−３−オキソ−３−（２，２，３，３，３−ペンタフルオロプロピルアミノ）プロパンアミド）−２−メチル−４−オキソ−３，４−ジヒドロベンゾ［ｂ］［１，４］オキサゼピン−５（２Ｈ）−イル）エトキシ）カルボニルオキシ）（１０ｂ）。
アルゴン雰囲気下、０℃で、炭酸２−（（２Ｒ，３Ｓ）−７−フルオロ−３−（（Ｓ）−２−ヒドロキシ−２−メチル−３−オキソ−３−（２，２，３，３，３−ペンタフルオロプロピルアミノ）プロパンアミド）−２−メチル−４−オキソ−３，４−ジヒドロベンゾ［ｂ］［１，４］オキサゼピン−５（２Ｈ）−イル）エチル４−ニトロフェニル（９）（実施例３；工程ａ）（６６６mg、１．００mmol）のＣＨ２Ｃｌ２（８．３mL）中溶液に、ＤＭＡＰ（１１０mg、０．９０mmol）を加え、Ｎ−ＢＯＣ−グリシノール（１７８μL、１．１０mmol）のＣＨ２Ｃｌ２（５mL）及びＥｔ３Ｎ（１９３μL、１．００mmol）中溶液を滴下して加えた。得られた反応混合物を０℃で１時間、続いて更に２５℃で１２時間撹拌した。再度、ＤＭＡＰ（１２．２mg、０．１０mmol）、及びＮ−ＢＯＣ−グリシノール（３２μL、０．２０mmol）のＣＨ２Ｃｌ２（０．７mL）中溶液を０℃で加え、２５°で５時間撹拌し、次に１０％ ＫＨＳＯ４水溶液（１０mL）に注いだ。有機層を分離し、水層をＥｔＯＡｃで再抽出した（２×２０mL）。合わせた有機層を、Ｎａ２ＳＯ４無水物で乾燥し、濾過して、減圧下でエバポレートした。得られた粗物質をフラッシュクロマトグラフィー（１３０ｇのＳｉＯ２、Cilicycleカートリッジ、ＣＨ２Ｃｌ２／Ｅｔ２Ｏ ６：１）で精製して、標題化合物（５３０ｇ、７７％）を白色の泡状物として得た。ＨＰＬＣ：ｔＲ  １．４３分、１００％（２２５nm）。ＨＲＭＳ（Ｃ２７Ｈ３４Ｆ６Ｎ４Ｏ１０）：計算値６８８．２１７９［Ｍ］；実測値６８８．２１８。
【０１７６】
工程ｃ）炭酸２−アミノエチル２−（（２Ｒ，３Ｓ）−７−フルオロ−３−（（Ｓ）−２−ヒドロキシ−２−メチル−３−オキソ−３−（２，２，３，３，３−ペンタフルオロプロピルアミノ）プロパンアミド）−２−メチル−４−オキソ−３，４−ジヒドロベンゾ［ｂ］［１，４］オキサゼピン−５（２Ｈ）−イル）エチル塩酸塩（１１ｂ）。
０℃で、tert−ブチル ２−（（２−（（２Ｒ，３Ｓ）−７−フルオロ−３−（（Ｓ）−２−ヒドロキシ−２−メチル−３−オキソ−３−（２，２，３，３，３−ペンタフルオロプロピルアミノ）プロパンアミド）−２−メチル−４−オキソ−３，４−ジヒドロベンゾ［ｂ］［１，４］オキサゼピン−５（２Ｈ）−イル）エトキシ）カルボニルオキシ）（１０ｂ）（５１１mg、０．７４mmol）のＣＨ２Ｃｌ２（２．８mL）中溶液に、４M ＨＣｌのジオキサン（１．８６mL）中溶液を滴下して加えた。反応混合物を０℃で３．５時間及び２５℃で０．５時間撹拌した。揮発性物質を減圧下でエバポレートした。得られた粗物質をＣＨ２Ｃｌ２／Ｅｔ２Ｏでトリチュレートし、標題化合物（４２４mg、９１％）を白色の粉末として得た。ＨＰＬＣ：ｔＲ ０．８５分、１００％（２２５nm）。ＨＲＭＳ（Ｃ２２Ｈ２６Ｆ６Ｎ４Ｏ８）：計算値５８８．１６５５［Ｍ］；実測値５８８．１６５２。
【０１７７】
実施例９−Ａｃ−γ−Ｇｌｕ−Ｏ−プロドラッグ（Ａｃ−γ−Ｇｌｕ−Ｏ−ＳｅｃｒＩ）１３ｃ
（Ｓ）−２−アセトアミド−５−（２−（（２−（（２Ｒ，３Ｓ）−７−フルオロ−３−（（Ｓ）−２−ヒドロキシ−２−メチル−３−オキソ−３−（２，２，３，３，３−ペンタフルオロプロピルアミノ）プロパンアミド）−２−メチル−４−オキソ−３，４−ジヒドロベンゾ［ｂ］［１，４］オキサゼピン−５（２Ｈ）−イル）エトキシ）カルボニルオキシ）エチルアミノ）−５−オキソペンタン酸
【化３０】
2018516957.tif 000032
【０１７８】
工程ａ）（Ｓ）−２−アセトアミド−５−（２−（（２−（（２Ｒ，３Ｓ）−７−フルオロ−３−（（Ｓ）−２−ヒドロキシ−２−メチル−３−オキソ−３−（２，２，３，３，３−ペンタフルオロプロピルアミノ）プロパンアミド）−２−メチル−４−オキソ−３，４−ジヒドロベンゾ［ｂ］［１，４］オキサゼピン−５（２Ｈ）−イル）エトキシ）カルボニルオキシ）エチルアミノ）−５−オキソペンタン酸メチル（１２ｃ）。
炭酸２−アミノエチル２−（（２Ｒ，３Ｓ）−７−フルオロ−３−（（Ｓ）−２−ヒドロキシ−２−メチル−３−オキソ−３−（２，２，３，３，３−ペンタフルオロプロピルアミノ）プロパンアミド）−２−メチル−４−オキソ−３，４−ジヒドロベンゾ［ｂ］［１，４］オキサゼピン−５（２Ｈ）−イル）エチル塩酸塩（１１ｂ）（３１３mg、５０１μmol）のＤＭＦ（９．５mL）中溶液を、Ａｃ−Ｇｌｕ−ＯＭｅ（１１２mg、５５１μmol）、１−ヒドロキシ−７−アザベンゾトリアゾール（６８mg、５０１μmol）で処理し、そしてＥＤＣＩ（１１５mg、６０１μmol）を０℃にて処理した。Ｅｔ３Ｎ（７０μL、５０１μmol）を非常にゆっくりと加えた。反応物を一晩、室温まで温めるにまかせ、１０％ ＫＨＳＯ４水溶液／ＥｔＯＡｃで抽出した（３×）。有機相を飽和ＮａＨＣＯ３水溶液、１０％ ＮａＣｌで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥して、エバポレートした。得られた粗物質をフラッシュクロマトグラフィー（ＳｉＯ２１３０ｇ、Cilicycleカートリッジ、ＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ ２〜５％）で精製して、標題化合物（３００mg、５２％）を白色の泡状物として得た。ＨＰＬＣ：ｔＲ １．１３分、１００％（２２５nm）。ＨＲＭＳ（Ｃ３０Ｈ３７Ｆ６Ｎ５Ｏ１２）：計算値７７３．２３４３［Ｍ］；実測値７７３．２３３３。
【０１７９】
工程ｂ）（Ｓ）−２−アセトアミド−５−（２−（（２−（（２Ｒ，３Ｓ）−７−フルオロ−３−（（Ｓ）−２−ヒドロキシ−２−メチル−３−オキソ−３−（２，２，３，３，３−ペンタフルオロプロピルアミノ）プロパンアミド）−２−メチル−４−オキソ−３，４−ジヒドロベンゾ［ｂ］［１，４］オキサゼピン−５（２Ｈ）−イル）エトキシ）カルボニルオキシ）エチルアミノ）−５−オキソペンタン酸（１３ｃ）。
０℃で、（Ｓ）−２−アセトアミド−５−（２−（（２−（（２Ｒ，３Ｓ）−７−フルオロ−３−（（Ｓ）−２−ヒドロキシ−２−メチル−３−オキソ−３−（２，２，３，３，３−ペンタフルオロプロピルアミノ）プロパンアミド）−２−メチル−４−オキソ−３，４−ジヒドロベンゾ［ｂ］［１，４］オキサゼピン−５（２Ｈ）−イル）エトキシ）カルボニルオキシ）エチルアミノ）−５−オキソペンタン酸メチル（１２ｃ）（６２mg、８０．１μmol）のＴＨＦ（０．２mL）中溶液に、１N ＬｉＯＨ水溶液（７２．１μL、７２．１μl）を滴下して加えた。３．７５時間（０℃）後、反応物を１０％ ＫＨＳＯ４水溶液／ＥｔＯＡｃで抽出した（３×）。有機相を１０％ ＮａＣｌ水溶液で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥して、エバポレートした。得られた粗物質をフラッシュクロマトグラフィー（ＳｉＯ２ １０ｇ、Cilicycleカートリッジ、ＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ ５〜２５％）で精製して、標題化合物（１７mg、２８％）を白色の泡状物として得た。ＨＰＬＣ：ｔＲ １．０６分、１００％（２２５nm）。ＨＲＭＳ（Ｃ２９Ｈ３５Ｆ６Ｎ５Ｏ１２）：計算値７５９．２１８６［Ｍ］；実測値７５９．２１８１。
【０１８０】
実施例１０−式（Ａ）で示されるγ−セクレターゼ阻害剤
式（Ａ）で示される代替的なγ−セクレターゼ阻害剤アルコールは、特許文献１に記載のとおり以下の表１により調製されている。
【０１８１】
【表２】
2018516957.tif 000033
2018516957.tif 000034
2018516957.tif 000035
2018516957.tif 000036
2018516957.tif 000037
2018516957.tif 000038
2018516957.tif 000039
【０１８２】
実施例１１−インビトロγ−セクレターゼ活性アッセイ
本発明の式（Ａ）で示されるγ−セクレターゼ阻害アルコールのγ−セクレターゼ活性を無細胞インビトロアッセイで決定し、このアッセイでは、例えば、γ−セクレターゼコンプレックスを含有する細胞ライセートを好適なβ−アミロイド前駆体タンパク質（ＡＰＰ）由来基質（Ａベータペプチドに切断される）とインキュベートする。産生されたペプチドの量を特異的なＥＬＩＳＡアッセイで決定することができる。神経細胞起源の細胞株は、Ａベータペプチドを分泌し、これを特異的なＥＬＩＳＡアッセイで測定することができる。γ−セクレターゼを阻害する化合物を用いた処理は、分泌Ａベータの低下をもたらし、このようにして、阻害の指標を提供する。
【０１８３】
γ−セクレターゼ活性のインビトロアッセイは、γ−セクレターゼ源としてのＨＥＫ２９３膜画分及び組換えＡＰＰ基質を使用する。後者は、制御可能な発現ベクター（例えばｐＥｔ１５）においてＥ.ｃｏｌｉ中で発現させた精製用の６×ヒスチジンテールに融合させたヒトＡＰＰのＣ末端１００アミノ酸からなる。この組換えタンパク質は、細胞外ドメインのγ−セクレターゼ切断後に生じ、かつγ−セクレターゼ基質を構成する、切断化ＡＰＰ断片に対応する。アッセイの原理は、Li YM et al, PNAS 97(11), 6138-6143 (2000) に記載されている。Ｈｅｋ２９３細胞を機械的に破壊し、そして、分画遠心分離によってミクロソーム画分を単離する。膜を界面活性剤（０．２５％ ＣＨＡＰＳＯ）中で可溶化し、ＡＰＰ基質とインキュベートする。基質のγ−セクレターゼ切断によって産生されるＡベータペプチドを、記載のとおり特異的なＥＬＩＳＡアッセイによって検出する（Brockhaus M et al, Neuroreport 9(7), 1481-1486 (1998)。
【０１８４】
本発明の式（Ａ）で示されるγ−セクレターゼ阻害アルコールのＩＣ５０活性値を表２に開示する。
【０１８５】
【表３】
2018516957.tif 000040
【０１８６】
実施例１２−インビトロＮｏｔｃｈシグナル伝達経路活性アッセイ
インビトロ実験用のγ−セクレターゼ阻害剤類似体の調製
化合物をジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）中に、１０mMストック溶液で溶解し、分割し、そして、使用まで−４℃で保存し、次いで、ＰＢＳ中又は細胞培養培地中に希釈した。その実験設定では、希釈化合物のＤＭＳＯの量に相当する漸増濃度のＤＭＳＯを含有する対照を常に含めた。インビボ実験のために、化合物を０．９％ ＮａＣｌ中に溶解し、４０℃で３０分間インキュベートし、そして、５分間ソニケートした。
【０１８７】
インビトロＮｏｔｃｈシグナル伝達経路活性アッセイ
γ−セクレターゼによるＮｏｔｃｈ切断を阻害するための、プロドラッグのタンパク質分解活性の要件を、レポーターアッセイを使用して試験した（表３）。ＤＲ２１５／Ｆ２細胞株は、Ｎｏｔｃｈシグナル伝達経路の活性をモニタリングするように設計されたレポーターコンストラクトを発現する。ＤＲ２１５／Ｆ２細胞株３９は、２個の導入遺伝子を保有する：Ｇａｌ４プロモーターの制御下で発現されるホタルルシフェラーゼレポーター遺伝子及び酵母Ｇａｌ４転写因子と融合させたヒトＮｏｔｃｈ１活性化因子遺伝子。このアッセイで、プロドラッグがγ−セクレターゼ及びＮｏｔｃｈ経路の活性化を阻害できたことを確認した。また、ＤＲ２１５／Ｆ２細胞レポーターアッセイを使用して、設計及び調製された全ての化合物によるＮｏｔｃｈ経路の遮断についてＩＣ５０を決定した。遊離γ−セクレターゼ阻害剤、並びにアミン−γ−ＳｅｃｒＩ及びアミン−Ｏ−γ−ＳｅｃｒＩは、低いナノモル範囲での阻害を示したが、一方で、加水分解されていないプロドラッグは遥かに活性が小さく、Ａｃ−α−Ｇｌｕ−ＳｅｃｒＩ（１５ａ）及びＨ−α−Ｇｌｕ−ＳｅｃｒＩ（１５ｂ）については高いnM範囲のＩＣ５０値、更には、Ｈ−γ−Ｇｌｕ−ＳｅｃｒＩ（１３ｂ）及びＡｃ−γ−Ｇｌｕ−ＳｅｃｒＩ（１３ａ）についてはμM範囲のＩＣ５０値を示した（表３）。
【０１８８】
【表４】
2018516957.tif 000041
【０１８９】
実施例１３−プロドラッグからのγ−セクレターゼ阻害剤の細胞外放出
細胞及びインビトロアッセイ
ラット脳由来ＥＣ２１９内皮細胞の調製及び特性決定は、Juillerat-Jeanneret, L. et al. In Vitro Cell. Dev. Biol. 1992, 28A, 537-543 に記載されている。これらの細胞は、高レベルのＡＰＡ及びγ−ＧＴ活性を発現し、この細胞を生細胞の動態を決定するために使用することができ、ＡＰＡ−及びγ−ＧＴ−陽性の代表的な細胞モデルとして選択した。ＥＣ２１９細胞を、非コート細胞培養プラスチックウェア上、１００U/mL ペニシリン及び１００μg/mＬ ストレプトマイシン（Ｐ／Ｓ）を補充した、１g/l グルコース、１０％熱非働化ウシ胎児血清（FCS, EuroClone, UK）を含有するＤＭＥＭ培地中で成長させた。ＨＥＫ２９３及びＨＫ２ヒト腎臓細胞は、ＡＴＣＣ（American Tissue Culture Collection, Manassas, VA, USA）から入手可能である。ＨＥＫ２９３細胞を、非コート細胞培養プラスチックウェア上、１０％ ＦＣＳ及びＰ／Ｓを含有するイスコフ改変ダルベッコ培地（Iscove modified Dulbecco medium）（ＩＭＤＭ、Life Technologies）中で成長させた。ＨＫ２細胞を、非コート細胞培養プラスチックウェア上、５％ ＦＣＳ、Ｐ／Ｓ、１％ ＩＴＳ（１．０mg/ml ウシインシュリン、０．５５mg/ml ヒトトランスフェリン及び０．５μg/ml亜セレン酸ナトリウム、Sigma-Aldrich）及び５ng/ml ヒドロコルチゾンを含有するＤＭＥＭ／Ｆ−１２ ＧｌｕｔａＭＡＸ培地（Gibco）中で成長させた。特許文献１及びBrockhaus, M. Neuroreport 1998 9, 1481-1486 に記載のとおりのｐＦＲ Ｌｕｃ及びＡＰＰ−Ｎｏｔｃｈ Ｇａｌ（プラスミドＤＲ２１５）が安定的にトランスフェクトされたヒトＨＥＫ２９３由来ＤＲ２１５／Ｆ２胎児腎臓細胞株を、Ｐ／Ｓを補充した１０％ ＦＣＳを含むＩＭＤＭを使用して維持し、コートされた（１：１００ ポリ−Ｌ−リジン）細胞培養プラスチックウェア上で１５０μg/ml Ｇ−４１８及び５０μg/ml ハイグロマイシンＢを用いた二重選択下に維持した。このアッセイでは、Ｎｏｔｃｈ−Ｇａｌ４タンパク質は、その膜貫通ドメインを介して細胞膜に結合する。Ｎｏｔｃｈ細胞内ドメインは、γ−セクレターゼによって媒介されるタンパク質分解的切断によって放出されて細胞核へ移動し、そこで、それはレポータールシフェラーゼ遺伝子転写物を活性化する。したがって、γ−セクレターゼの阻害は、ルシフェラーゼ活性を減少させる。簡潔に述べると、培養物を９６ウェルマイクロプレート中で８０％コンフルエンスまで成長させ；次いで、細胞をＰＢＳ中で洗浄し、レッドフェノール不含の完全ＩＭＤＭ培養培地中、３７℃で１９時間、漸減濃度のγ−セクレターゼ阻害剤類似体に曝露させた。次いで、各ウェルからの上清７５μlを取り出し、Ｓｔｅａｄｙ−Ｇｌｏルシフェラーゼアッセイ試薬（Promega）２５μlを加えることによってルシフェラーゼ活性を決定した。室温でのインキュベーション（ＩＣ５０決定については１８０分、Ｎｏｔｃｈ活性化の評価については２０分）後、個々のマイクロウェルの発光を、ＩＣ５０及びＮｏｔｃｈ活性化についてそれぞれマイクロプレートルミノメーター（SpectraMax Paradigm, Molecular Devices）又はＳｙｎｅｒｇｙ Ｍｘ（Monochromator, Biotek）で測定し、Ｇｒａｐｈｐａｄソフトウェアを使用してその値を分析した。
【０１９０】
ヒストエンザイモグラフィー
凍結組織でのＡＰＡ及びγ−ＧＴ酵素活性のヒストエンザイモグラフィーによる評価を、Juillerat-Jeanneret, L. et al., Lab. Invest. 2000, 80, 973-980 に記載のとおり実施した。簡潔に述べると、ＯＣＴ包埋した凍結腎臓を、クライオスタットで７μm切片にカットし、冷（−２０℃）アセトン中で５分間固定し、ＲＴで風乾させ、そして、０．９％ ＮａＣｌ中で５分間再水和した。ナフチルアミド基質を販売元から得た（α−Ｇｌｕ−４−メトキシ−β−ナフチルアミド（ＡＰＡ）をBachemから；そして、γ−Ｇｌｕ−４−メトキシ−β−ナフチルアミド（γ−ＧＴ）をServaから）。基質（１mg）をＤＭＦ（１ml）中に溶解し、そして、ファストブルーＢ（Sigma-Aldrich）２mgを、７００mg/l ＣａＣｌ２を含有する０．２M カコジル酸緩衝液（ｐＨ７．４）（２ml）中に溶解し；次いで、両方の溶液を使用直前にゆっくり混合し、ｐＨ６．５〜７．０まで調整した。幾らか沈殿が生じた場合は溶液を濾過し、これをスライドに加え、そして、赤色の着色が視覚可能になるまで加湿雰囲気下、３７℃で１５〜６０分間インキュベートした。スライドを蒸留水中で洗浄し、ヘマトキシリン（Mayer）で１分間対比染色し、水道水下、次いで、Ｓｃｏｔｔ溶液で１分間ですすぎ、水道水下ですすぎ、Ａｑｕａｍｏｕｎｔ（Immu-mount, Thermo Shandon Pittsburgh, PA, USA）中に封入し、そして、Ｎｉｋｏｎ Ｅｃｌｉｐｓｅ Ｅ８００顕微鏡及びデジタルＤＸＭ１２００カメラで、ＡＣＴ−１ソフトウェアを使用して分析した。
【０１９１】
プロドラッグからのγ−セクレターゼ阻害剤の細胞外放出
様々なγ−セクレターゼプロドラッグの第一のスクリーニングを、インビトロで行って及びマウス腎臓組織のエクスビボで行って、各化合物の切断速度を決定した。ヒト腎臓細胞（ＨＥＫ２９３、ＨＥＫ２９３由来Ｎｏｔｃｈレポーター２１５／Ｆ２細胞２８、３９及びＨＫ２細胞）、並びにラット脳由来ＥＣ２１９内皮細胞（極めて高いレベルのＡＰＡ及びγ−ＧＴ活性を発現する）によるプロドラッグからのγ−セクレターゼ阻害剤の細胞外放出を、活性阻害剤ＳｅｃｒＩ（８）又はアミン−ＳｅｃｒＩ（１１ａ）の遊離について評価した（図２Ａ）。ＥＣ２１９及びＨＫ２細胞は、Ｈ−α−Ｇｌｕ−ＳｅｃｒＩ（１５ｂ）から、遊離阻害剤（８）ではなくアミン−ＳｅｃｒＩ（１１ａ）を細胞外空間へ放出できたが（ＡＰＡ活性を伴うパターンで）、ＨＥＫ２９３細胞は放出できなかった。Ａｃ−α−Ｇｌｕ（１５ａ）誘導体は、この酵素の基質ではなく、そして、Ａｃ−γ−Ｇｌｕ−ＳｅｃｒＩ（１３ａ）誘導体はγ−ＧＴによっては加水分解されなかった。しかし、更に驚くべきことに、遊離Ｈ−γ−Ｇｌｕ−ＳｅｃｒＩ（１５ａ）もγ−ＧＴによっては加水分解されなかった。
【０１９２】
Ａｃ−γ−Ｇｌｕ−ＳｅｃｒＩ（１３ａ）が関連する細胞酵素活性の基質であり得るかを確認するために、本発明者は、Ａｃ−γ−Ｇｌｕ−ＳｅｃｒＩ（１３ａ）プロドラッグがα−Ｇｌｕ−ナフチルアミド及びγ−Ｇｌｕ−ナフチルアミド誘導体の加水分解を阻害し得るかを、酵素組織化学（未病変マウスのエクスビボ腎臓で、陰性酵素対照としてのＡＰＡ活性及び陰性対照用の薬物としてのアミン−ＳｅｃｒＩ（１１ａ））により決定した（図２Ｂ）。Ａｃ−γ−Ｇｌｕ−ＳｅｃｒＩ（１３ａ）だけがγ−ＧＴ様活性を阻害できたが、Ａｃ−α−Ｇｌｕ−ＳｅｃｒＩ（１５ａ）又はアミン−ＳｅｃｒＩ（１１ａ）は阻害できず、一方で、ＡＰＡ活性はいずれの化合物によっても阻害されなかった。したがって、これらの結果は、Ａｃ−γ−Ｇｌｕ−ＳｅｃｒＩ（１３ａ）プロドラッグがγ−ＧＴの細胞外活性及び／又は細胞内γ−ＧＣＴ活性を阻害したことを明確に示しており、このことは、活性阻害剤の放出が細胞内で行われることを示唆している。
【０１９３】
実施例１４−Ｃ５７ＢＬ／６健常野生型マウス及び雄のウィスターラットにおける薬物動態評価
細胞における、並びにマウスの又は雄のウィスターラットの血漿、肝臓及び腎臓における、γ−セクレターゼ阻害剤及びその類似体の定量化及び薬物動態（ＰＫ）
タンパク質沈殿、続く、ＬＣ−ＭＳ／ＭＳ分析を使用して、全ての試料を分析した。細胞とのインキュベーション後、細胞外培地を採取して、内部標準（ＩＳＴＤ）として１００ng/mlのオキサゼパムを含有する３容量のアセトニトリルでクエンチした。調製した試料を分析前まで−２０℃で保存した。室温（ＲＴ）で融解後、試料を撹拌し、５６００rpm（６℃、１０分）で遠心分離した。上清１μLをＬＣ／ＭＳによって分析した。使用したＬＣカラム及び条件は以下であった：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ, Ｐｏｌａｒ ＲＰ, ４μm, ５０×１mm、０．１５mL／分の流速で、１００％溶媒Ａ〜１００％溶媒Ｂ（溶媒Ａ：水／メタノール／ＨＣＯＯＨ、９５：５：０．５；溶媒Ｂ：メタノール）の非線形勾配 １分を用いて。質量分析条件は、以下であった：ＡＢＳｃｉｅｘ ＡＰＩ４０００でＭＳ／ＭＳモードの陽性の加熱エレクトロスプレーイオン化を用いた。モニタリングした化合物の質量遷移は、表４に記載のとおりであった：
【０１９４】
【表５】
2018516957.tif 000042
【０１９５】
ＰＫ評価のために、雄のＣ５７ＢＬ／６マウスに、懸濁液（ゼラチン／食塩水７．５％／０．６２％水溶液）の化合物を４mL/kgの投与容量を使用してｉ.ｐ投与した。ＥＤＴＡを含有するチューブに血液試料を採取し、遠心分離によって血漿を分離し、そして、−８０℃で保存した。Ｐｒｅｃｅｌｌｙｓ組織ホモジナイゼーションチューブ（precellys.com）を使用して、肝臓及び腎臓試料（〜１００mgのアリコート）を３容量の水中でホモジナイズした。各組織ホモジネート２５μLをブランク血漿２５μLで更に希釈して、抽出用の最終組織ホモジネートを生成した。タンパク質沈殿、続く、ＬＣ−ＭＳ／ＭＳ分析を使用して、全ての試料を分析した。簡潔に述べると、血漿又は最終組織ホモジナート５０μLを、０．５M ＨＣｌＯ４／アセトニトリル９／１（２００ng/mL 内部標準ボセンタンを含有）５０μLと混合した。試料を撹拌し、水３００μLを加え、続いて、５６００rpm（４℃、１０分）で遠心分離した。上清１０μLをＬＣ／ＭＳ分析によって分析した。血漿中の較正標準を同様に調製した。使用したＬＣカラム及び条件は、以下であった：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ, Ｐｏｌａｒ ＲＰ, ４μm, ５０×２．１mm、０．４mL／分の流速で、９５％溶媒Ａ〜９５％溶媒Ｂ（溶媒Ａ：水／ＡＣＮ／ＨＣＯＯＨ、９０：１０：０．１＋１０mM ギ酸ＮＨ４；溶媒Ｂ：水／ＡＣＮ／ＨＣＯＯＨ、１０：９０：０．１＋１０mM ギ酸ＮＨ４）の勾配を３分。質量分析条件は、以下であった：Ｔｈｅｒｍｏ ＴＳＱ ＶａｎｔａｇｅでＭＳ／ＭＳモードの陽性の加熱エレクトロスプレーイオン化を用いた。モニタリングした化合物の質量遷移は、ｍ／ｚ ３２０．７〜１１９．９であった。全ての研究のＰＫパラメーターは、Ｐｈｏｅｎｉｘ ＷｉｎＮｏｎｌｉｎ Ｓｏｆｔｗａｒｅを使用して計算した。
【０１９６】
Ｃ５７ＢＬ／６健常野生型マウスにおける薬物動態評価
次に、本発明者は、未病変マウスにおける設計されたプロドラッグの血漿、肝臓及び腎臓中の安定性、組織分布及び切断速度を決定した。インビボスクリーニングでは、γ−セクレターゼ阻害剤プロドラッグＡｃ−γ−Ｇｌｕ−ＳｅｃｒＩ（１３ａ）、Ａｃ−α−Ｇｌｕ−ＳｅｃｒＩ（１５ａ）及びＨ−α−Ｇｌｕ−ＳｅｃｒＩ（１５ｂ）の動態及び分布を活性γ−セクレターゼ阻害剤アミン−ＳｅｃｒＩ（１１ａ）と比較した。Ｃ５７ＢＬ／６マウスにおけるｉ.ｐ投与（１０mg/kg）後、プロドラッグの消失及び活性アミン−ＳｅｃｒＩ（１１ａ）の形成を、血漿、肝臓及び腎臓において比較した（表５）。最初に、本発明者は、ｉ.ｐ.投与後のアミン−ＳｅｃｒＩ（１１ａ）の薬物動態（ＰＫ）挙動を決定した（表５Ａ）。予想どおり、アミン−ＳｅｃｒＩ（１１ａ）は、非常に低い血漿曝露を有しており、急速な血漿クリアランスを示している。肝臓及び腎臓曝露は、はるかに高く、肝臓では腎臓に比べ約４．５倍高い。プロドラッグＡｃ−γ−Ｇｌｕ−ＳｅｃｒＩ（１３ａ）について予想のとおり、本発明者は、０．５時間で、実質的に完全に腎臓選択的であるアミン−ＳｅｃｒＩ（１１ａ）への高い変換を認め、血漿中濃度は検出不可能であった（表５Ｂ）。腎臓に対する選択性は、恐らくアミン−ＳｅｃｒＩ（１１ａ）の速いクリアランス及び再平衡に起因して、経時的に減少しているようであった。しかしながら、早い時点での高選択性は、経時的な総曝露が肝臓に比べ腎臓においてはるかに高かったことを確信させた。Ａｃ−α−Ｇｌｕ−ＳｅｃｒＩ（１５ａ）プロドラッグは、Ａｃ−γ−Ｇｌｕ−ＳｅｃｒＩ（１３ａ）よりもはるかに低い程度で、そして、腎臓よりも肝臓（４００％）においてより多く、アミン−ＳｅｃｒＩ（１１ａ）へ変換された（表５Ｃ）。Ｈ−α−Ｇｌｕ−ＳｅｃｒＩ（１５ｂ）は、アミン−ＳｅｃｒＩ（１１ａ）へ全体として最高の変換を示したが、この場合も腎臓よりも肝臓（０．５時間で７００％）においてより更に効率的であった（表５Ｄ）。まとめると、これらの結果は、Ａｃ−γ−Ｇｌｕ−ＳｅｃｒＩ（１３ａ）の低い血漿曝露が、肝臓及び腎臓中への急速な取り込みと、それに続く、血漿中の直接的な加水分解よりもむしろ腎臓選択的な加水分解によってアミン−ＳｅｃｒＩ（１１ａ）を形成すること（アミン−ＳｅｃｒＩ（１１ａ）が全ての時点で血漿中の定量限界未満にとどまっていたので）に起因したことを明確に示した。本発明者は、遊離アンタゴニスト８への１１ａ中のリンカーの有意な量の加水分解を観測できなかった。
【０１９７】
【表６】
2018516957.tif 000043
【０１９８】
投与した化合物（Ａ〜Ｄ）及び形成されたアミン−ＳｅｃｒＩ（１１ａ）（Ｂ〜Ｄ）の血漿及び組織中濃度を、Ｃ５７ｂ／６マウスにおける１０mg/kgのｉ.ｐ.投与後に決定した（スパースサンプリングに起因して、標準偏差は与えられていない；１時点当たりｎ≦３のマウス）。括弧内の数字は、任意に各時点で１００％に設定された腎臓中の１１ａの曝露に対する相対量を表す。遊離γ−セクレターゼ阻害剤８は検出されなかった。ＢＱＬ＝定量可能な限度未満。
【０１９９】
実施例１５−急性腎傷害のマウスモデルにおけるアミン−ＳｅｃｒＩ（１１ａ）及びそのプロドラッグＡｃ−γ−Ｇｌｕ−ＳｅｃｒＩ（１３ａ）の効果
誘発急性腎疾患の動物モデル
動物を用いた全ての実験は、それぞれの研究拠点の連邦の及び地方の法令に準拠して実施された。腎臓傷害を、１０週齢の雄のＢＡＬＢ／ｃマウスにおけるアリストロキア酸（ＡＡ、Sigma-Aldrich、１×５mg/kg）の腹腔内（ｉ.ｐ.）注射によって誘発させた。γ−セクレターゼ阻害剤プロドラッグを０．９％ ＮａＣｌ中で希釈し、これを、ＡＡの注射の１日前（−１日目）から開始して、次いで、６日目の夕方まで１日２回ｉ.ｐ.投与した（ｎ＝５匹のマウス／実験群）。７日目の朝（最後のプロドラッグ注射の１２時間後）、血液を採取し、そして、マウスを供死して肝臓及び両方の腎臓を取り出した。腎臓を４つの断片にカットした。１つの断片を液体窒素中で直ちに凍結し、１つの断片をＯＣＴ（Tissue-Tek, VWR International, Switzerland）中に包含させて凍結し、１つの断片を−８０℃で凍結し、そして、１つの断片を４％パラホルムアルデヒド中で固定してパラフィン中に包含した。
【０２００】
アリストロキア酸及びＡｃ−γ−Ｇｌｕ−ＳｅｃｒＩ（１３ａ）に曝露させたマウスの腎臓中のＮｏｔｃｈ１及び切断化Ｎｏｔｃｈ１の免疫組織化学
ＯＣＴ包埋した凍結腎臓を７μmにカットした。この切片を風乾させ、冷（−２０℃）メタノール中で１０分間固定し、ＰＢＳ ０．１％ Ｔｒｉｔｏｎ ｘ−１００（ＰＢＳ／Ｔｒｉｔｏｎ）中ですすぎ、そして、５％ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）を含有するＰＢＳ／Ｔｒｉｔｏｎで３０分間ブロッキングした。ウサギ抗Ｎｏｔｃｈ１抗体（Ｄ１Ｅ１１、１／５０に希釈）及びウサギ抗切断化Ｎｏｔｃｈ１抗体（Ｖａｌ１７４４、１／５０に希釈）をCell Signalingから購入し、ビオチン化抗ウサギ抗体をVector Laboratories（１／５００に希釈）から、そして、ストレプトアビジン／ＨＲＰ（１／５００に希釈）をDakoから購入した。一次抗体を、５％ ＢＳＡを含有するＰＢＳ中に希釈し、切片と共にＲＴで１時間インキュベートした。内在性ペルオキシダーゼ及びビオチンを、それぞれ３％ Ｈ２Ｏ２及びアビジン／ビオチンブロッキングキット（Vector Laboratories）を使用してブロッキングした。スライドをＰＢＳ／Ｔｒｉｔｏｎで３回すすぎ、一次抗体と同じ緩衝液中で希釈した抗ウサギビオチン二次抗体と共にＲＴで１時間インキュベートした。ＰＢＳで３回洗浄した後、スライドをストレプトアビジン／ＨＲＰ抗体とＲＴで１時間インキュベートし、次いで、３，３’ジアミノベンジジン（ＤＡＢ、Dako）を１５分間加えた。スライドを蒸留水中で洗浄し、Ａｑｕａｍｏｕｎｔ中に封入して、分析した。
【０２０１】
急性腎傷害のマウスモデルにおけるアミン−ＳｅｃｒＩ（１１ａ）及びそのプロドラッグＡｃ−γ−Ｇｌｕ−ＳｅｃｒＩ（１３ａ）の効果
γ−セクレターゼ阻害を使用した、Ｎｏｔｃｈ遮断の有望な腎保護効果を試験するために、並びに、本発明者の酵素標的化プロドラッグ戦略の効果を評価するために、本発明者は、急性腎尿細管損傷のインビボＡＡマウスモデルを使用した。ＡＡは、腎尿細管上皮細胞に毒性である天然の薬草成分であり、近位細管上皮細胞の再生及びオートファジーの障害を伴うアポトーシスを誘発して、進行性の尿細管萎縮及び不可逆的腎不全へと導く。単回用量投与において高い腎臓曝露を示したアミン−ＳｅｃｒＩ（１１ａ）（表５Ａ）を１０mg/kgで１日２回（ｂ.ｉ.ｄ.）投与し、そして、そのプロドラッグＡｃ−γ−Ｇｌｕ−ＳｅｃｒＩ（１３ａ）を３０mg/kgで１日２回投与し、処置をＡＡの単回用量のｉ.ｐ.注射の１日前から開始した。本発明者は、単回用量ＰＫの間に活性アミン−ＳｅｃｒＩ（１１ａ）について達成された腎臓曝露の相対的差異を説明するために、アミン−ＳｅｃｒＩ（１１ａ）に比べてより高い用量でプロドラッグ（１３ａ）を投与することを選択する（表５及び上記）。７日目、最後のプロドラッグ投与の１２時間後に、動物を供死し、そして、曝露の決定（表６）、並びにＮｏｔｃｈ１及び切断化Ｎｏｔｃｈ１の評価のための免疫組織化学（図３）用に血漿、肝臓及び腎臓試料を採取した。本発明者は、投与の１２時間後であってもアミン−ＳｅｃｒＩ（１１ａ）による腎臓及び肝臓の高い曝露（表６Ａ）、並びにＡｃ−γ−Ｇｌｕ−ＳｅｃｒＩ（１３ａ）群ではアミン−ＳｅｃｒＩ（１１ａ）の比較的低い曝露を検出したが（表６Ｂ及び表６Ｃ）、このことは、本発明者の用量選択がＰＫ実験から予測されるとおりであったことを確認させた（表５中の７時間の時点とも比較する）。Ａｃ−γ−Ｇｌｕ−ＳｅｃｒＩ（１３ａ）で処置した動物においてのみ腎臓曝露について有望な選択性があったが（表６Ｂ）、最後の時点のために確認は困難であった。本発明者はまた、ＡＡ−及びＡｃ−γ−Ｇｌｕ−ＳｅｃｒＩ（１３ａ）で処置した動物において小さな選択性を観測し（表６Ｃ）、プロドラッグ切断の効果が病変腎臓において依然として働いていたことを示唆している。免疫組織化学的評価（図３）では、本発明者は、プロドラッグの非存在下、ＡＡ処置マウスの病変腎臓中でＮｏｔｃｈ１及び切断化Ｎｏｔｃｈ１のアップレギュレーションを観測し、これはＡＡ曝露及び（１１ａ）処置又は（１３ａ）処置マウスにおいて低下し（図３）、急性腎傷害におけるＮｏｔｃｈ経路の活性化の制御におけるＮ−アシラーゼ−γ−ＧＴ標的化γ−セクレターゼプロドラッグの有益な効果を示唆している。単独で注射された（１１ａ）と（１３ａ）はいずれも、健常野生型マウスの腎臓においてＮｏｔｃｈ又は切断化Ｎｏｔｃｈレベルのいかなる変更も誘発しなかった（結果を示さず）。全体として、これらの実験は、Ｎ−アセチル−γ−グルタミルプロドラッグ（１３ａ）が、インビボで遊離γ−セクレターゼ阻害剤（８）ではなくアミン−ＳｅｃｒＩ（１１ａ）へと切断されたこと、腎臓特異的であったこと、そして、急性傷害を受けた腎尿細管細胞において発現された酵素によるインビボ切断後も活性でありＮｏｔｃｈ経路の活性化を制御したことを示した。
【０２０２】
【表７】
2018516957.tif 000044
【０２０３】
投与した化合物（表６Ａ〜Ｃ）及び形成された遊離γ−セクレターゼ阻害剤（８）（表６Ａ）又はアミン−ＳｅｃｒＩ（１１ａ）（表６Ｂ〜Ｃ）の血漿及び組織中濃度を、ＡＡ処置Ｃ５７ｂ／６マウス（２日目にＡＡ処置）における１０mg/kgの１日２回（表６Ａ）又は３０mg/kgの１日２回（表６Ｂ〜Ｃ）の８日間の反復ｉ.ｐ.投与後に決定した。括弧内の数字は、任意に各時点で１００％に設定された腎臓中の１１ａの曝露に対する相対量を表す。遊離γ−セクレターゼ阻害剤（８）は、（１３ａ）処置マウスにおいて検出されなかった。ＢＱＬ＝定量可能な限度未満。
【０２０４】
実施例１６−ＳｅｃｒＩ（１１ａ）並びにそのプロドラッグＡｃ−γ−Ｇｌｕ−ＳｅｃｒＩ（１３ａ）及びＡｃ−α−Ｇｌｕ−Ｏ−ＳｅｃｒＩ（１３ｃ）のラットにおける安定性
雄のウィスターラットにおける薬物動態評価
次に、本発明者は、雄のウィスターラットにおける設計されたプロドラッグの血漿、肝臓及び腎臓中の、安定性、組織分布及び切断速度を決定した。インビボスクリーニングでは、プロドラッグＡｃ−γ−Ｇｌｕ−ＳｅｃｒＩ（１３ａ）及びＡｃ−γ−Ｇｌｕ−Ｏ−ＳｅｃｒＩ（１３ｃ）の動態及び分布を、活性γ−セクレターゼ阻害剤ＳｅｃｒＩ（８）と比較した。雄のウィスターラットにおける静脈内（ｉ.ｖ.）投与後、プロドラッグの消失、並びに活性アミン−ＳｅｃｒＩ（１１ａ）、アミン−Ｏ−ＳｅｃｒＩ（１１ｂ）及びＳｅｃｒＩ（８）の形成を、血漿、肝臓及び腎臓において比較した（表７Ａ〜Ｃ）。最初に、本発明者は、ｉ.ｖ.投与後のＳｅｃｒＩ（８）の薬物動態（ＰＫ）挙動を決定した（表７Ａ）。予想どおり、ＳｅｃｒＩ（８）は、良好な血漿曝露及び急速な血漿クリアランスを有していた。肝臓及び腎臓曝露は、はるかに高く、肝臓及び腎臓において同じ曝露であった。プロドラッグＡｃ−γ−Ｇｌｕ−ＳｅｃｒＩ（１３ａ）について予想したとおり、本発明者は、０．２５時間で、実質的に完全に腎臓選択的であるアミン−ＳｅｃｒＩ（１１ａ）への高い変換と、活性γ−セクレターゼ阻害剤１１ａ及び８の血漿中濃度の検出不可能を認めた（表７Ｂ）。腎臓に対する選択性は、経時的に一定なままであった。カルボナート類似体Ａｃ−γ−Ｇｌｕ−Ｏ−ＳｅｃｒＩ（１３ｃ）プロドラッグは、Ａｃ−γ−Ｇｌｕ−ＳｅｃｒＩ（１３ａ）よりも低い程度で、アミン−Ｏ−ＳｅｃｒＩ（１１ｂ）へと変換されたが、より多くがリンカー遊離γ−セクレターゼ阻害剤８へと変換された（表７Ｃ）。アミン−Ｏ−ＳｅｃｒＩ（１１ｂ）は、早い時点で極めて良好な腎臓選択性を有していたが、より優れた遊離γ−セクレターゼ阻害剤８は全ての時点で中程度の腎臓選択性を有していただけであった。活性γ−セクレターゼ阻害剤８及び１１ｂは共に、血漿中で早い時点で検出可能な濃度を示し、カルボナート−リンカーが動物における最適な腎臓選択性にあまり好適でないことが判明した。まとめると、これらの結果は、Ａｃ−γ−Ｇｌｕ−ＳｅｃｒＩ（１３ａ）の低い血漿曝露が、血漿中の良好な安定性、肝臓及び腎臓中への急速な取り込みと、それに続く、血漿中の直接的な加水分解よりもむしろ腎臓選択的な加水分解によってアミン−ＳｅｃｒＩ（１１ａ）を形成することに起因したことを明確に示した。
【０２０５】
Ａｃ−γ−Ｇｌｕ−ＳｅｃｒＩ（１３ａ）について、本発明者は、遊離γ−セクレターゼ阻害剤８への１１ａ中のリンカーの有意な量の加水分解を観測できなかった。対照的に、近縁のＡｃ−γ−Ｇｌｕ−Ｏ−ＳｅｃｒＩ（１３ｃ）プロドラッグは、不運にも血漿においても、リンカー遊離γ−セクレターゼ阻害剤８へと有意に変換された。これは、活性γ−セクレターゼ阻害剤による非所望の血漿及び／又は組織曝露を回避するため、リンカーとプロドラッグ機序の具体的な組み合わせが選択的な輸送及び開裂を達成するのに必要であることを示している。
【０２０６】
【表８】
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【０２０７】
投与した化合物（Ａ〜Ｃ）及び形成されたアミン−ＳｅｃｒＩ（１１ａ）、アミン−Ｏ−ＳｅｃｒＩ（１１ｂ）又はＳｅｃｒＩ（８）（Ｂ〜Ｃ）の血漿及び組織中濃度を、ラットにおけるｉ.ｖ.投与後に決定した（スパースサンプリングに起因して、標準偏差は与えられなかった；１時点当たりｎ≦３のラット）。括弧内の数字は、任意に各時点で１００％に設定された腎臓の曝露に対する相対量を表す。遊離γ−セクレターゼ阻害剤８は、Ａｃ−γ−Ｇｌｕ−ＳｅｃｒＩ（１３ａ）投与後に検出されなかった。ＢＱＬ＝定量可能な限度未満。
【図１Ａ】
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【図１Ｂ】
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【図２Ａ】
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【図２Ｂ】
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【図３】
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【国際調査報告】
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