(57)【要約】本発明は、特に現在使用中の化学療法剤に耐性である場合の、腫瘍の処置のためにヒトおよび獣医薬において用いられる化学療法処置の有効性を増加させる、シクロホスファミドおよび／またはメトトレキサートと組合せた天然または合成起源の少なくとも1のフラボノイドの使用であって；該少なくとも1のフラボノイドがルチン、オキセルチン、ジオスミン、トロキセルチンおよびヘスペリジンを含むかまたはそれらからなる群より選択される、使用に関する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
化学療法耐性の腫瘍の処置における使用のための組成物であって：
(i)ルチン、オキセルチン、ジオスミン、トロキセルチンおよびヘスペリジンを含むかまたはそれらからなる群より選択される少なくとも1のフラボノイド；ならびに
(ii)少なくとも1の化学療法剤
を含むかまたはそれらからなる混合物を含む、組成物。
【請求項２】
少なくとも1の化学療法剤が、シクロホスファミド、5-フルオロウラシル、メトトレキサート、白金錯体類、タキサン類、ドキソルビシン、エピルビシンおよびミトキサントロンより選択され；好ましくは、シクロホスファミドおよび／またはメトトレキサートである、請求項1に記載の使用のための組成物。
【請求項３】
構成要素(i)がルチンであり、構成要素(ii)がシクロホスファミドおよび／またはメトトレキサートである、請求項1〜2のいずれか一項に記載の使用のための組成物。
【請求項４】
混合物が、アルクチゲニン、アルクチイン、ベルベリン、ベルバミン、サンギナリン、ケレリトリンおよびハルパゴフィツム・プロクンベンス（harpagophytum procumbens）を含むかまたはそれらからなる群より選択される少なくとも1の化合物であってそのまままたは該化合物を含む植物抽出物の形態のものをさらに含む、請求項1に記載の使用のための組成物。
【請求項５】
混合物が：
a)アルクティウム・ラッパ（Arctium lappa）、クニカス・ベネディクタス（Cnicus benedictus）およびサウスレア・メデュサ（Saussurea medusa）を含む群から選択されるキク科に属する植物；
b)ベルベリス・ブルガリス（Berberis vulgaris）、ベルベリス・アリスタータ（Berberis aristata）およびマホニア・アキフォリウム（Mahonia aquifolium）を含む群から選択されるメギ科に属する植物；
c)エスコルチア・カリフォルニカ（Eschscholzia californica）、マクレアヤ・コルダータ（Macleaya cordata）またはボッコニア・フルテセンス（Bocconia frutescens）を含む群から選択されるケシ科に属する植物；ならびに
d)ハルパゴフィツム・プロクンベンス（デビルズクロー）
に由来する少なくとも1の抽出物を含む、請求項の1〜4いずれか一項に記載の使用のための組成物。
【請求項６】
混合物が：
a)アルクティウム・ラッパ；
b)ベルベリス・ブルガリス；
c)エスコルチア・カリフォルニカ
に由来する少なくとも1の抽出物をさらに含む、請求項1〜5のいずれか一項に記載の使用のための組成物。
【請求項７】
混合物が、微粉化形態で構成要素および／または物質を含む、請求項1〜6のいずれか一項に記載の使用のための組成物。
【請求項８】
化学療法に耐性である腫瘍の処置のための化学療法剤に対するアジュバントとして用いるための、すなわち、特に現在使用中の化学療法剤に耐性である場合の、腫瘍、好ましくは固形腫瘍の処置のためにヒトおよび獣医薬において用いられる化学療法処置の有効性を増加させる、請求項1〜7のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項９】
新生物の処置における使用ならびに抗生長剤への化学療法耐性および／または放射線療法への放射線耐性の防止／抑制のための組成物であって：
(i)ルチン、オキセルチン、ジオスミン、トロキセルチンおよびヘスペリジンを含むかまたはそれらからなる群より選択される少なくとも1のフラボノイド；
(ii)メトトレキサートおよび／またはシクロホスファミド、および適宜
(iv)アルクチゲニン、アルクチイン、ベルベリン、ベルバミン、サンギナリン、ケレリトリンおよびハルパゴフィツム・プロクンベンス（PGE2の合成を抑制する、デビルズクロー）を含むかまたはそれらからなる群より選択される少なくとも1の化合物であってそのまままたは該化合物を含む植物抽出物の形態のもの
を含むかまたはそれらからなる混合物を含む、組成物。
【請求項１０】
耐性固形腫瘍および女性の乳癌の処置における、請求項1〜9のいずれか一項に記載の使用のための組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
（本発明の概要）
本発明は、特に現在使用中の化学療法剤に耐性である場合の、腫瘍の処置のためにヒトおよび獣医薬において用いられる化学療法処置の有効性を増加させる、シクロホスファミドおよび／またはメトトレキサートと組合せた天然または合成起源の少なくとも1のフラボノイドの使用であって；該少なくとも1のフラボノイドがルチン、オキセルチン、ジオスミン、トロキセルチンおよびヘスペリジンを含むかまたはそれらからなる群より選択される、使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
（背景技術）
現在、化学療法処置への腫瘍細胞の耐性は、莫大な割合の問題および連続的な進化における問題を表す。薬物耐性は、固形腫瘍およびリンパ系の腫瘍両方においてそれ自体現れ、処置の当初から生じ得るか、または処置への最初の陽性な応答の後に生じ得る。極めて頻繁に、例えば、化学療法耐性は再発性腫瘍の処置中にそれ自体現れる。さらにより重大な問題は、複合的な化学療法耐性、すなわち所与の化学療法剤での処置後の他の化学療法剤に対する耐性の発生である。
【０００３】
初期に化学療法処置に応答する大多数の腫瘍においてそれ自体現れる、化学療法耐性の起源に関する最も信用されている仮説は、薬物耐性は、腫瘍細胞のレベルにおける一連の変異の結果であり、化学療法剤を代謝する、DNAへの化学療法誘導損傷を修復する、かつ化学療法誘導アポトーシスを防止することを「学習する」腫瘍細胞の能力であると示唆する。
【０００４】
化学療法耐性の問題を克服しようとするための1つのアプローチが、異なるタイプの化学療法剤を組合せる治療である：しかしながら、この場合もまた、結果は満足ではなく、実際、様々な化学療法剤に対する複合的耐性が、増え続けかつ憂慮すべき頻度で生じる。組合せにおいても使われる、新規薬物の研究および継続的開発にもかかわらず癌細胞の順応性性質を考慮すると、化学療法耐性の問題は存続し、明らかに不可避である（非特許文献1）。
【０００５】
したがって、この問題を克服する必要性が非常に大きい。
【０００６】
フラボノイド類は、ポリフェノール性化合物であって、植物の二次代謝物である。それらは、通常グリコシドとして植物に存在し、同じ植物においてアグリコンは種々の糖類と組合せて存在し得る。好ましくは、本発明のフラボノイド類は、ルチン、オキセルチン、ジオスミン、トロキセルチンおよびヘスペリジンを含むかまたはそれらからなる群より選択される。
【０００７】
オキセルチンは、弾性を助長し、毛細管透過性を低下させ、それ故に微小循環の生理学的改善および浮腫の形成の軽減を助長するのに有用であると示している。
【０００８】
ヘスペリジンは、グリコシル化フラバノンであって、とりわけ柑橘類の果実において見られるフラボノイドのタイプである。それは特に、該果実の皮および果肉で豊富である。そのアグリコンは、ヘスペリチンと呼ばれる。ヘスペリジンは、有効な血管保護剤であり、コラーゲンおよび結合組織の性能を増加させることが示されている。
【０００９】
ジオスミンは、半合成分子であり（ヘスペリジンから開始し修飾される）、フラボノイド類のファミリーに属する。それは、血管の構造に欠損を示すすべての病理、例えば慢性静脈機能不全ならびに急性および慢性痔疾患において血管保護剤として、および痔核切除後のアジュバント治療として用いられるフレボトロピック（phlebotropic）薬である。
【００１０】
トロキセルチン（C33H42O19、分子量742,68 g/モル）は、フラボノール（ビタミンP4としても知られる）であり、特にそれは、例えばエンジュ（Styphnolobium japonicum）から抽出され、茶、コーヒー、穀類ならびに多くの種類の果実および野菜にも存在するヒドロキシエチルルトシドである。それは、静脈不全によって引き起こされる浮腫の処置に用いられる分子群、ルトシドに属する。トロキセルチンは、毛細血管レベルでろ過能力を低下させる特性を有する。トロキセルチンは、毛細血管脆弱症を伴う病理において血管保護剤として用いられる。
【００１１】
ルチン（一般にルトシドとしても知られる）は、その化学名が2-(3,4-ジヒドロキシフェニル)-4,5-ジヒドロキシ-3-{3,4,5-トリヒドロキシ-6-[(3,4,5-トリヒドロキシ-6-メチル-オキサン-2-イル)オキシメチル}オキサン-2-イル]オキシ-クロメン-7-オンであり、二糖類ルチノースと結合したアグリコンケルセチン（フラボノール）からなるフラボノイドグリコシドである。
【化１】
2018507237.tif 000002
【００１２】
ルチンは、多数の植物、特にシトラス（Citrus）およびレウム（Rheum）（ダイオウ）属の植物、ソバ、赤ワイン、アスパラガス、ペパーミント、ユーカリならびに多くのベリー、例えばクランベリー（バシニウム・マクロカルポン（Vaccinium macrocarpon））およびマルベリーにおいて天然に見られる。
【００１３】
毛細血管の壁に対するルチンの補強効果、およびより一般的には微小循環に対するその有益な作用は、痔核および血腫の処置のために利用される。
【００１４】
最近の研究により、ルチンの薬理特性、特に血小板におけるその抗凝集活性（非特許文献2）；その抗炎症活性（非特許文献3、4）；および抗酸化活性（非特許文献5）が強調されている。
【００１５】
インビトロの研究により、ルチンが血管内皮細胞増殖因子を阻害でき、それ故に血管新生阻害剤として作用できると実証されている（非特許文献6）。
【００１６】
最近、非特許文献7には、ルチンを含むハマダ・スコパリア（Hammada scoparia）の抽出物は白血病細胞の接着においてアポトーシスを誘導できると記載された。特許文献1には、急性骨髄性白血病の処置、腫瘍再発の防止および／または固形腫瘍転移の発症の防止のためのルチンの使用が記載されている。化学療法剤に耐性である腫瘍細胞に対するルチンの影響は報告されていない。
【００１７】
特許文献2には、ケルセチンを含む抗腫瘍組成物および薬用植物の多数の抽出物が記載されているが、化学療法耐性の細胞に対する活性に言及はなされていない。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１８】
【特許文献１】EP 2 119 434
【特許文献２】WO 2001/78783
【非特許文献】
【００１９】
【非特許文献１】Fojo T. and Bates S., Cancer Discov; 3(1); 20-3, 2012
【非特許文献２】Navarro-Nunez et al. (2008); J. Agric. Food Chem. 56 (9): 2970-6
【非特許文献３】Guardia et al. (2001); II Farmaco 56 (9): 683-7
【非特許文献４】Chan Hun Jung et al. (2007); Arch. Pharmacal Research 30 (12): 1599-1607
【非特許文献５】Metodiewa et al. (1997); IUBMB Life 41 (5); 1067
【非特許文献６】Luo et al. (2008); Nutrition and Cancer 60 (6); 800-9
【非特許文献７】Boutogaa et al. Leukemia Research 35(2011) 1093-1101
【発明の概要】
【００２０】
（発明の説明）
化合物ルチン、オキセルチン、ジオスミン、トロキセルチンおよびヘスペリジンは、耐性の腫瘍細胞株、好ましくは女性の乳癌の細胞株の化学療法処置への感受性を再確立することが実際に見出された。
【００２１】
本発明は、ルチン、オキセルチン、ジオスミン、トロキセルチンおよびヘスペリジンならびに少なくとも1の化学療法剤を含むかまたはそれらからなる群より選択される少なくとも1のフラボノイドおよび少なくとも1の化学療法剤を含むかまたはそれらからなる混合物を含む、化学療法への耐性の処置における使用のための組成物に関する。
【００２２】
好ましい実施態様において、該化学療法剤は、シクロホスファミド、5-フルオロウラシル、メトトレキサート、白金錯体類（シスプラチン、オキサリプラチン、カルボプラチンなど）、タキサン類、ドキソルビシン、エピルビシンおよびミトキサントロンを含むかまたはそれらからなる群より選択される。
有利には、該フラボノイドはルチンであり、該化学療法剤はシクロホスファミドおよび／またはメトトレキサートである。
【００２３】
したがって、本発明の対象物は、ルチン、シクロホスファミドおよび／またはメトトレキサートを含むかまたはそれらからなる混合物を含む、化学療法に耐性である腫瘍の処置における使用のための組成物である。
【００２４】
本発明はまた、ルチン、オキセルチン、ジオスミン、トロキセルチンおよびヘスペリジンを含むかまたはそれらからなる群より選択される少なくとも1のフラボノイド、好ましくはルチン；および化学療法剤、好ましくはシクロホスファミドおよび／またはメトトレキサートを含むかまたはそれらからなる混合物を含む組成物であって、化学療法に耐性である腫瘍の処置のための化学療法剤に対するアジュバントとして用いるための、すなわち、特に現在使用中の化学療法剤に耐性である場合の、腫瘍、好ましくは固形腫瘍の処置のためにヒトおよび獣医薬において用いられる化学療法処置の有効性を増加させる、組成物に関する。有利には、アジュバントとしての該組成物の使用は、用いられる1日用量および投与される化学療法剤の1日量を減少させることを可能にする。
【００２５】
固形腫瘍は、浮遊した細胞からなる液性腫瘍から増殖し、異なる組織のコンパクトな塊からなる。固形腫瘍は、健常な組織のものと似ている特定構造を有し、2つの相互に依存する部分である実質と間質を含む。いくつかの固形腫瘍（上皮細胞が起源であるものを含む）には間質からの腫瘍細胞の塊を分離している基底膜がある；しかしながら、この基底膜は不完全であることが多い。固形腫瘍が大多数のヒト腫瘍を表すが、それらを特徴付ける遺伝子および染色体の変異についてほとんど知られておらず；これは、第一に、悪性組織から満足のいく染色体調製物を得ることが極めて困難であるため、第二に、これらの腫瘍細胞の核型がしばしば珍しい染色体を多数示すためである。このことは、腫瘍表現型が完全に変化しているとき、原発性遺伝子変化を後で生じるものから区別することを困難にする。しかしながら、これらの困難にもかかわらず、細胞培養、染色体分染法およびハイブリダイゼーション、例えばCGH（比較ゲノムハイブリダイゼーション）、FISH（蛍光インサイチュハイブリダイゼーション）およびSKY（スペクトル核型決定）の新規な技術は、固形腫瘍において遭遇する細胞遺伝学的異常の分子特性評価の顕著な増加に寄与している。これらの技術は、腫瘍細胞における実質的な染色体の転位、および特異的な染色体の変化と特定のタイプの固形腫瘍（とりわけ間葉性腫瘍）との間の親密な関連を明らかにした。我々の知識がまだ限られていても、関連する遺伝子の多くは、クローンを作られ、分析された。新生物細胞は、良性および悪性に分けられ；両方のタイプの細胞は、さらに起源の組織に従って、間葉性、上皮性、神経系、胎児性（embryonal）および胚性（germinal）腫瘍細胞に分けられる。これらの腫瘍と並んで、細胞学的な起源が未知のものもある。
【００２６】
本発明の別の対象物は、化学療法耐性の腫瘍の処置、好ましくは女性の乳癌の処置における使用のための組成物であって：(i)ルチン、オキセルチン、ジオスミン、トロキセルチンおよびヘスペリジンを含むかまたはそれらからなる群より選択される少なくとも1のフラボノイド；(ii)少なくとも1の化学療法剤；および(iii)アルクチゲニン、アルクチイン、ベルベリン、ベルバミン、サンギナリンおよびケレリトリンを含むかまたはそれらからなる群より選択される少なくとも1の化合物であってそのまままたは該化合物を含む植物抽出物の形態のものを、含むかまたはそれらからなる混合物を含む、組成物である。有利には、該混合物は、シクロホスファミドおよび／またはメトトレキサート、ならびにアルクチゲニン、アルクチイン、ベルベリン、ベルバミン、サンギナリンおよびケレリトリンの抽出物を含む。
【００２７】
それ故に、本発明はまた、好ましくはルチン、オキセルチン、ジオスミン、トロキセルチンおよびヘスペリジンを含むかまたはそれらからなる群より選択される少なくとも1のフラボノイドの、抗腫瘍活性を有する物質との組合せであって、フラボノイドおよび化学療法剤の個別または連続投与にも適した形態である、組合せに関する。
【００２８】
該少なくとも1のフラボノイドは、ルチン、オキセルチン、ジオスミン、トロキセルチンおよびヘスペリジンを含むかまたはそれらからなる群より選択され、すべての公知化学療法剤と組合せて、本発明に従い用いられ得て、該化学療法剤は、単独、または化学療法プロトコール（特に固形腫瘍の治療のためのもの）と組合せのいずれかで用いられる。該化学療法剤の例は、シクロホスファミド、5-フルオロウラシル、メトトレキサート、白金錯体類（シスプラチン、オキサリプラチン、カルボプラチンなど）、タキサン類、ドキソルビシン、エピルビシンおよびミトキサントロン含むかまたはそれらからなる。一実施態様において、ルチン、オキセルチン、ジオスミン、トロキセルチンおよびヘスペリジンを含むかまたはそれらからなる群より選択される少なくとも1の化合物は、耐性の腫瘍細胞株の化学療法処置への感受性を回復もしくは増加させるため、または腫瘍の処置、好ましくは固形腫瘍の処置のために、シクロホスファミドを含むかまたはそれらからなる化学療法剤と組合される。好ましい一実施態様において、ルチン、オキセルチン、ジオスミン、トロキセルチンおよびヘスペリジンを含むかまたはそれらからなる群より選択される少なくとも1の化合物は、耐性の腫瘍細胞株の化学療法処置への感受性を回復もしくは増加させるため、または腫瘍の処置、好ましくは固形腫瘍の処置のために、シクロホスファミドおよびメトトレキサートを含むかまたはそれらからなる化学療法剤と組合される。好ましくは、ルチンは、シクロホスファミドおよびメトトレキサートと組合せて用いられる。
【００２９】
本発明の別の一態様によれば、本発明は：(i)好ましくはルチン、オキセルチン、ジオスミン、トロキセルチンおよびヘスペリジンを含むかまたはそれらからなる群より選択される少なくとも1のフラボノイド；(ii)シクロホスファミド、5-フルオロウラシル、メトトレキサート、白金錯体類（シスプラチン、オキサリプラチン、カルボプラチンなど）、タキサン類、ドキソルビシン、エピルビシンおよびミトキサントロンを含むかまたはそれらからなる群より選択される少なくとも1の化学療法剤；および／または(iv)メギ科（Berberidaceae）および／またはケシ科（Papaveraceae）から選択される少なくとも1のアルカロイドおよび／またはキク科（Asteraceae）由来のリグナン類を含む組成物に関する。
本発明の別の一態様によれば、本発明は、メギ科および／またはケシ科から選択される少なくとも1のアルカロイドおよび／またはキク科由来のリグナン類と組合せて、好ましくはルチン、オキセルチン、ジオスミン、トロキセルチンおよびヘスペリジンを含むかまたはそれらからなる群より選択される少なくとも1のフラボノイドを含む組成物に関する。
【００３０】
本発明の組成物は、天然または合成物質を含むかまたはそれらからなる群より選択される化合物であって、これらの物質がアピゲニン、アスパラガス（ウルソール酸）、クルクミン、リコピン、唐辛子（カプサイシン）、レスベラトロール、緑茶（Camellin B）およびウンカリア属（Uncaria sspp.）を含むかまたはそれらからなる群より選択され；および／またはメラトニンである、化合物；好ましくはメラトニンをさらに含む。
【００３１】
特に、本発明の組成物は、好ましくは、リグナン類のアルクチゲニンおよび／またはアルクチイン、アルカロイド類のベルベリン、および／またはベルバミン、および／またはサンギナリン、および／またはケレリトリンを含むか；または本発明の組成物は、好ましくは、リグナン類のアルクチゲニンおよび／またはアルクチイン、アルカロイド類のベルベリン、および／またはベルバミン、および／またはサンギナリン、および／またはケレリトリン、および／または天然または合成物質を含むかまたはそれらからなる群より選択される化合物であって、これらの物質がアピゲニン、アスパラガス（ウルソール酸）、クルクミン、リコピン、唐辛子（カプサイシン）、レスベラトロール、緑茶（Camellin B）およびウンカリア属を含むかまたはそれらからなる群より選択され；および／またはメラトニンである、化合物；好ましくはメラトニンを含む。
【００３２】
本発明の別の一態様によれば、本発明は：(i)好ましくはルチン、オキセルチン、ジオスミン、トロキセルチンおよびヘスペリジンを含むかまたはそれらからなる群より選択される少なくとも1のフラボノイド；ならびにアルクチゲニン、アルクチイン、ベルベリン、ベルバミン、サンギナリン、ケレリトリンおよびハルパゴフィツム・プロクンベンス（デビルズクロー、これはPGE2の増加を抑制する）を含むかまたはそれらからなる群より選択される少なくとも1のアルカロイドであってそのまままたは該化合物を含む植物抽出物の形態のものを含むかまたはそれらからなる組成物に関する。
【００３３】
別の一実施態様によれば、本発明は：(i)好ましくはルチン、オキセルチン、ジオスミン、トロキセルチンおよびヘスペリジンを含むかまたはそれらからなる群より選択される少なくとも1のフラボノイド；(ii)シクロホスファミド、5-フルオロウラシル、メトトレキサート、白金錯体類（シスプラチン、オキサリプラチン、カルボプラチンなど）、タキサン類、ドキソルビシン、エピルビシンおよびミトキサントロンを含むかまたはそれらからなる群より選択される少なくとも1の化学療法剤；ならびに(iv)アルクチゲニン、アルクチイン、ベルベリン、ベルバミン、サンギナリンおよびケレリトリンを含むかまたはそれらからなる群より選択される少なくとも1の化合物であってそのまままたは該化合物を含む植物抽出物の形態のものを含むかまたはそれらからなる組成物に関する。好ましくは、組成物は、ルチン、シクロホスファミド、メトトレキサート、アルクチゲニン、アルクチイン、ベルベリン、ベルバミン、サンギナリンおよびケレリトリンを含む。
【００３４】
好ましくは、本発明の組成物は、アピゲニン、アスパラガス（ウルソール酸）、クルクミン、リコピン、唐辛子（カプサイシン）、レスベラトロール、緑茶（Camellin B）、ウンカリア属およびメラトニンを含むかまたはそれらからなる群より選択される少なくとも1の化合物をさらに含む。
【００３５】
本発明の組成物は、新生物の防止および／または処置、ならびに抗生長剤（antiblastics）への化学療法耐性および／または放射線療法への放射線耐性の防止／抑制に特に有用である。
【００３６】
本発明の組成物は、化学療法に耐性である腫瘍、好ましくは固形腫瘍の処置のための化学療法剤へのアジュバントとして特に有用である。
【００３７】
本発明の組成物は、特に現在使用中の化学療法剤に耐性の場合の、腫瘍の処置のためのヒトおよび獣医薬において使用される化学療法処置の有効性を増大させるのに特に有用である。
【００３８】
本願出願人は、驚くべきことに、本発明のフラボノイドが従来の化学療法剤の抗腫瘍活性を増加させ、薬物への腫瘍細胞の耐性を低下させることを見出した。したがって、本発明の目的は、腫瘍の処置における使用のための組成物であって、従来の化学療法剤の効果を最大にして、それらの投与量を減少させ、結果として患者に対するそれらの副作用を低下させることを可能にする、組成物を提供することにある。
【００３９】
本発明の組成物は、驚くべきことに、化学療法耐性のヒト腫瘍細胞の細胞生存率を顕著に低下させる。
【００４０】
上記の理由で、本発明の組成物は、すでに化学療法耐性を生じた腫瘍を処置するだけでなく、腫瘍細胞による化学療法耐性の発生および転移の形成を防ぐのにも有効に用いられ得る。
【００４１】
したがって、本願の一目的は、医薬において一般に用いられる処置よりも化学療法耐性の腫瘍の処置に効果的である化学療法処置であって、特に化学療法耐性の腫瘍の場合、腫瘍の処置において必要な化学療法薬の量を低下させることを可能にし、そして化学療法耐性の発生および転移の形成を防ぐのに有用であり得る、処置を提供することである。
【００４２】
キク科（アルクティウム・ラッパ（Arctium lappa）、クニカス・ベネディクタス（Cnicus benedictus）およびサウスレア・メデュサ（Saussurea medusa）またはサウスレア（Saussurea）の他の種）に属する植物は、アルクチゲニンおよびアルクチイン（それらの抗腫瘍作用が既に知られている分子）の含量により特徴付けられる。癌治療および予防におけるアルクティウム・ラッパの抽出物の使用は、例えば、CN 1560265に記載されている。抗腫瘍剤としてのサウスレアの使用は、例えば特許出願WO 2006 032380に記載されている。サウスレア・メデュサの空中部分から抽出されたリグナンの抗腫瘍活性は、Cancer Letters, New York, USA, vol. 158, No 1, 1.1.2000, pages 53-59に記載されている。
【００４３】
メギ科（ベルベリス・ブルガリス（Berberis vulgaris）、ベルベリス・アリスタータ（Berberis aristata）、ベルベリス（Berberis）の他の種、およびマホニア・アキフォリウム（Mahonia aquifolium））に属する植物は、活性物質、例えばベルベリンおよびベルバミンを含む。前者は、化学療法耐性および放射線耐性、血管新生およびテロメラーゼを阻害し；それは、抗高コレステロール血症、抗糖尿病および心臓保護効果を有する。しかしながら、それは、MDR（多剤耐性）を誘導し得るという点で重大な欠点を有する。この望ましくない効果に対抗するために、ベルベリンについて既に上述した心臓保護効果に加えて、MDRへの特異的な抗腫瘍効果および抗不整脈効果を示すベルバミンを用いることが可能である。MDRに対抗するためのベルバミンを含む植物の使用についての知識が要約されている、Alternative and Complementary Therapies, Mary Ann Liebert, Larchmont, New York, USA. Vol 8, No 6, 1.12.2002, pages 336-340で発表された論文も参照。ベルベリス・ブルガリスの果実の細胞毒性効果は、Int. J. Cancer Res. (Vol 2, No 1, 2006, pages 1-9) に記載されている。
【００４４】
ケシ科（エスコルチア・カリフォルニカ（Eschscholzia californica）、マクレアヤ・コルダータ（Macleaya cordata）またはボッコニア・フルテセンス（Bocconia frutescens））に属する植物は、ケレリトリンおよびサンギナリンを含む。植物またはそれらの抽出物はまた、ハルパゴフィツム・プロクンベンスであり得る。ケレリトリンは、TNF-αの産生への阻害効果を有し：この効果は、早期の段階における腫瘍には不適切であるが、しかしながら、死期直前および終期の段階の腫瘍患者において典型的である摂食障害、カヘキシーおよび痛覚過敏を抑制するため、死期直前および終期の段階において有益である。さらに、ケレリトリンは、腫瘍細胞のミトコンドリアにおいてすでに不十分であると知られている、ミトコンドリアの呼吸を低下させる。サンギナリンは、NF-kBおよびAP-1の両方を阻害し（Biochem. Pharmacol. 2004 Sep 15; 68(6): 1101-11）：両方が通常、抗腫瘍性の抗生長剤または電離放射線への曝露の結果として活性化される静止因子である。ケレリトリンを含むマクレアヤ・コルダータまたはケリドニウム・マジュス（Chelidonium majus）（フードサプリメントとして許可されていない植物）の抗腫瘍性抽出物の製造が、CN 1470513に記載されている。ベンゾフェナントリジンアルカロイド類、例えばケレリトリンおよびサンギナリン、ならびにプロトベルベリンアルカロイド類、例えばベルベリンの抗腫瘍活性もまた、Planta Medica, Vol 69(2), 1.2.2003, pages 97-108に記載されている。
【００４５】
活性成分は、実質的に純粋で単離された形態または植物（1つがキク科に属し、1つがメギ科に属し、1つがケシ科に属する）の少なくとも3つの異なる抽出物の形態で存在し得る。
【００４６】
キク科に属する植物は、好ましくはアルクティウム・ラッパ、クニカス・ベネディクタスおよびサウスレア・メデュサである。
【００４７】
メギ科に属する植物は、好ましくはベルベリス・ブルガリス、ベルベリス・アリスタータおよびマホニア・アキフォリウムである。
【００４８】
ケシ科に属する植物は、好ましくはエスコルチア・カリフォルニカ、マクレアヤ・コルダータおよびボッコニア・フルテセンスを含む群から選択される。
【００４９】
本発明の対象物は、新生物の処置ならびに抗生長剤への化学療法耐性および／または放射線療法への放射線耐性の防止／抑制における使用のための：(i)ルチン、オキセルチン、ジオスミン、トロキセルチンおよびヘスペリジンを含むかまたはそれらからなる群より選択される少なくとも1の化合物；および／または(ii)メラトニン；および／または(iii)化学療法剤；および／または(iv)アルクチゲニン、アルクチイン、ベルベリン、ベルバミン、サンギナリンおよびケレリトリンを含むかまたはそれらからなる群より選択される少なくとも1の化合物であってそのまままたは該化合物を含む植物抽出物の形態のものを含むかまたはそれらからなる組合せである。好ましくは、組合せは：(i)ルチン、オキセルチン、ジオスミン、トロキセルチンおよびヘスペリジンを含むかまたはそれらからなる群より選択される少なくとも1の化合物；(ii)メラトニン；(iii)シクロホスファミドおよびメトトレキサート；および／または(iv)アルクチゲニン、アルクチイン、ベルベリン、ベルバミン、サンギナリンおよびケレリトリンを含むかまたはそれらからなる群より選択される少なくとも1の化合物であってそのまままたは該化合物を含む植物抽出物の形態のものを含むかまたはそれらからなる。
【００５０】
好ましい実施態様によれば、本発明の組合せは：(i)ルチン；(ii)メラトニン；(iii)シクロホスファミドおよびメトトレキサートならびに適宜(iv)化合物アルクチゲニン、アルクチイン、ベルベリン、ベルバミン、サンギナリンおよびケレリトリンであってそのまままたは該化合物を含む植物抽出物の形態のものを含むかまたはそれらからなる。
【００５１】
好ましくは、本発明の組合せは、アピゲニン、アスパラガス（ウルソール酸）、クルクミン、リコピン、唐辛子（カプサイシン）、レスベラトロール、緑茶（Camellin B）およびウンカリア属を含むかまたはそれらからなる群より選択される少なくとも1の化合物をさらに含む。
【００５２】
好ましい態様によれば、本発明の組成物は、好ましくはオキセルチン、ジオスミン、ヘスペリジン、トロキセルチンおよびルチンを含むかまたはそれらからなる群より選択される少なくとも1のフラボノイドに加えて、好ましくはシクロホスファミドおよびメトトレキサートを含む化学療法剤と組合せて：
a)アルクティウム・ラッパ（特に種子由来のもの）；
b)ベルベリス・ブルガリス；
c)エスコルチア・カリフォルニカ。
に由来する抽出物を含む。
【００５３】
好ましい態様によれば、種々の科に属する各植物由来の抽出物は、20％〜60％の間に含まれる割合で存在する。
【００５４】
抽出物から単離された化合物の1日用量は、通常、以下の範囲に含まれる：
アルクチゲニンおよびアルクチイン：0.1〜1.0 g/日
ベルベリンおよびベルバミン：0.1〜1.0 g/日
サンギナリンおよびケレリトリン：0.01〜0.250 g/日、好ましくは0.020〜0.150 g/日
ルチン：0.1〜0.2 g/日。
【００５５】
本発明によれば、用いられる植物の抽出物は、油冷浸物（oily macerate）、アルコール抽出物、乾燥抽出物（エタノールもしくはメタノールまたは超臨界CO2での抽出により得られる）、液体抽出物、またはマザーチンクチャー（mother tincture）の形態であり得る。
【００５６】
本発明の組成物は、経口投与のために適切に製剤化されたフードサプリメントとして用いられ得て、それらの最終的な用途に許容される添加剤、希釈剤、賦形剤および固化防止剤を用いて、医薬分野で周知な従来の方法（例えば、"Remington's Pharmaceutical Handbook", Mack Publishing Co., N.Y., USAに記載）に従って製造される。フードサプリメントの製剤の例は、軟カプセル剤（密閉された液体含有カプセル剤）、半固形または硬カプセル剤（粉末または顆粒を含む二部外被を有する）、トローチ剤、錠剤、ワッフル（waffles）、顆粒剤、粉末の単回用量サシェ剤、シロップ剤、およびバイアルである。
【００５７】
バイオアベイラビリティを向上させるために、組成物の構成要素の少なくとも1つは微粉化形態であることが好ましい。微粉化化合物は、医薬分野で周知な従来の方法を用いて製造される。微粉化化合物において、好ましくは、粒子の平均直径は10μm未満であり；より好ましくは、粒子の平均直径は5μm未満であり、さらにより好ましくは、それは1μm未満である。
【００５８】
合成化学療法剤（シクロホスファミド/メトトレキサート）および／またはアルクチゲニン、アルクチイン、ベルベリン、ベルバミン、サンギナリンおよびケレリトリン（表中、用語「抽出物」で示される）と、少なくとも1のフラボノイドの組合せの活性を腺癌および癌腫の耐性細胞株において、化学療法感受性腫瘍細胞株および同系細胞と比較して研究した。
【００５９】
本発明の対象物は：好ましくは10μM〜100μM、例えば20、30、40および50μMの濃度の、ルチン；好ましくは500〜1500 ng/ml、好ましくは850 ng/ml、1000 ng/mlまたは1300 ng/mlの濃度の、シクロホスファミドおよび／またはメトトレキサートを含むかまたはそれらからなる混合物を含む組成物である。
【実施例】
【００６０】
特に、化学療法耐性のヒト腫瘍細胞MDA-MB-231（乳腺癌）、ECV-304（膀胱癌腫）、HuH-7（肝細胞癌腫）およびHTB-43（咽頭の扁平上皮細胞癌腫）、化学療法感受性腫瘍細胞MCF-7（乳腺癌）および非腫瘍性健常ヒト哺乳類線維芽細胞（HMF）を用いた。
【００６１】
表1〜3に示す結果は、化学療法剤への腫瘍細胞の耐性と、抽出物および／またはルチンと組合せた化学療法剤の有効性との間の、直線関係ではないが正比例関係を実証する。
【表１】
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【表２】
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【表３】
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【００６２】
下記の表4は、ケルセチン（ルチンのアグリコン）単独でまたはシクロホスファミドと組合せた、MDA-MB-231細胞についての得られたデータを示す。ルチンで見られたものと異なり、相乗効果が生じていないことは明らかである。
【表４】
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【００６３】
表5. 化学療法耐性のMDA-MB-231ヒト腫瘍細胞（乳腺癌）の生存率を、特定の化合物での処理24、48および72時間後に測定した。表5において、化合物cycloは、シクロホスファミドに対応し、一方、化合物methoはメトトレキサートに対応する。
試験条件：5x103細胞；xCELLigenceアッセイ
【表５】
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【００６４】
表6. 化学療法感受性のMCF-7腫瘍細胞（乳腺癌）の生存率を、特定の化合物での処理24、48および72時間後に測定した。表6において、化合物cycloは、シクロホスファミドに対応し、一方、化合物methoはメトトレキサートに対応する。
試験条件：5x103細胞 xCELLigenceアッセイ
【表６】
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【００６５】
表7は、シクロホスファミド40μM＋メトトレキサート4μMの組合せが、未処理のコントロール群と比較して0.16±0.04％の値に細胞生存率を低下させ；100μMおよび50μMの濃度のルチンの添加が統計学的に有意な差異を誘導しないことを示す。
【００６６】
表7：種々の薬物組合せでの処理7日後におけるMDA-MB-231細胞の細胞生存率；結果は4回の独立した実験で得られた平均値に対応する。
【表７】
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【００６７】
表8は、シクロホスファミド20μM＋メトトレキサート2μMの組合せが、未処理のコントロール群と比較して24.80±0.6％の値に細胞生存率を低下させ、一方20μMのルチンの添加が細胞生存率をさらに低下させることを示す。それぞれ10μMおよび1μMの濃度のシクロホスファミドおよびメトトレキサートで同様の結果が得られた。概して、フラボノイドの存在は、化学療法剤の組合せの抗腫瘍活性の約10％の増加をもたらす。
【００６８】
表8：種々の薬物組合せでの処理7日後におけるMDA-MB-231細胞の細胞生存率；結果は4回の独立した実験で得られた平均値に対応する。
【表８】
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【００６９】
表9：種々の薬物組合せでの処理7日後におけるMDA-MB-231細胞の細胞生存率；結果は4回の独立した実験で得られた平均値に対応する。
【表９】
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【００７０】
表10：種々の薬物組合せでの処理7日後におけるMCF-7細胞の細胞生存率；結果は4回の独立した実験で得られた平均値に対応する。
【表１０】
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【００７１】
得られた結果は、本発明のフラボノイドが、MDA-MB-231細胞に対するメトトレキサートとシクロホスファミドの組合せの活性を効果的に増加させることを実証する。実際、化学療法剤の種々の組合せへのフラボノイドの添加後、細胞生存率の統計学的に有意な低下が観察された。したがって、本発明のフラボノイドが薬物への腫瘍細胞の耐性を低下させると推測され得る。
【００７２】
上記実験において、シクロホスファミド40μMとメトトレキサート4μMの組合せが、細胞生存率の最大の低下をもたらす。これらの濃度は、ヒトにおいて10 mg/kgのシクロホスファミドおよび1.5 mg/kgのメトトレキサートに対応し、これは、乳癌転移の患者に投与される最大用量である。しかしながら、公知とおり、この治療は、患者に重大な副作用を誘発する。したがって、本発明の目的は、フラボノイドとのアジュバント治療によりシクロホスファミドおよびメトトレキサートの濃度を低下させることである。実験データは、シクロホスファミドおよびメトトレキサートの濃度、および結果として、腫瘍を患う患者におけるそれらの副作用が該組合せにフラボノイドを加えることにより低下させることができることを実証する。
【００７３】
本発明において用いられる抽出物の製造の実施例、および本発明の組成物の実施例を以下に示す。
【００７４】
実施例1 - 新鮮な植物からのアルコール抽出物の製造
3つの植物からなる530 g（各々20％〜60％の割合）を1100 mlのエタノール／水混合物（40％〜90％エタノール）に入れ、ミキサーで細かくした。細かくした植物が溶液中に沈んだままであることが確実になるように注意しながら、得られたものを4〜8日間「休息」させる。この期間後、液体部分を取り出し、植物部分を圧縮し、液体を回収し、その後ろ過する。
【００７５】
これにより得られた抽出物は、茶色がかった濃い緑色である。
【００７６】
実施例2 - 乾燥した植物からのアルコール抽出物の製造
370〜450 gを含む乾燥植物の量を1200 mlの含水アルコール溶液（40％〜90％エタノール）に用いる。得られたものを2週間「休息」させる。溶媒の含浸／染色後、液体部分を取り出し、植物部分を圧縮し、液体を回収し、その後ろ過する。
【国際調査報告】
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