(57)【要約】本発明は、ＣＤ４８及びその複合体に特異的に結合するマウス、キメラ、及びヒト化抗体を提供する。一態様では、本開示は、ヒトＣＤ４８タンパク質に特異的に結合するキメラまたはヒト化抗体を提供する。本抗体は、配列番号３〜５の重鎖ＣＤＲ配列と、配列番号６〜８の軽鎖ＣＤＲ配列とを含む。本抗体は、ヒトＣＤ４８タンパク質に特異的に結合するマウス抗体と比較したとき、ヒトＣＤ４８タンパク質に対してより高い結合親和性を呈し、また配列番号３〜５の重鎖ＣＤＲ配列及び配列番号６〜８の軽鎖ＣＤＲ配列も含む。【選択図】図８
2018509908.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ヒトＣＤ４８タンパク質に特異的に結合するキメラまたはヒト化抗体であって、前記抗体が、配列番号３〜５の重鎖ＣＤＲ配列と、配列番号６〜８の軽鎖ＣＤＲ配列とを含み、前記抗体が、前記ヒトＣＤ４８タンパク質に特異的に結合し、かつ配列番号３〜５の重鎖ＣＤＲ配列と、配列番号６〜８の軽鎖ＣＤＲ配列とを含むマウス抗体と比較したとき、前記ヒトＣＤ４８タンパク質に対してより高い結合親和性を呈する、キメラまたはヒト化抗体。
【請求項２】
前記キメラまたはヒト化抗体が、前記マウス抗体と比較したとき、前記ヒトＣＤ４８タンパク質に少なくとも２倍高い結合親和性を呈する、請求項１に記載の抗体。
【請求項３】
前記抗体がヒト化抗体である、請求項１に記載の抗体。
【請求項４】
前記抗体が、配列番号１の重鎖可変領域を含む、請求項１に記載の抗体。
【請求項５】
前記抗体が、配列番号２の軽鎖可変領域を含む、請求項１に記載の抗体。
【請求項６】
前記抗体が、配列番号１の重鎖可変領域を含む、請求項４に記載の抗体。
【請求項７】
前記抗体が、リンカーに結合された細胞傷害性薬物と複合体化される、請求項１〜６のいずれか１項に記載の抗体。
【請求項８】
前記薬物−リンカーが、下式：
【化４１】
2018509908.tif 000048
またはその薬学的に許容される塩を有し、式中、Ｚが、前記抗体上の官能基と反応して、それとの共有結合を形成することが可能な反応性部位を有する有機部分を表し、ｎが、８〜３６の範囲であり、ＲＰＲが、水素または保護基であり、Ｒ２１が、ポリエチレングリコール部分のキャッピング単位である、請求項７に記載の抗体。
【請求項９】
前記ヒトＣＤ４８タンパク質に特異的に結合するヒト化抗体であって、配列番号１の重鎖可変領域と、配列番号２の軽鎖可変領域とを含む、ヒト化抗体。
【請求項１０】
前記抗体が、リンカーに結合された細胞傷害性薬物と複合体化される、請求項９のいずれか１項に記載の抗体。
【請求項１１】
前記薬物−リンカーが、下式：
【化４２】
2018509908.tif 000049
またはその薬学的に許容される塩を有し、式中、Ｚが、前記抗体上の官能基と反応して、それとの共有結合を形成することが可能な反応性部位を有する有機部分を表し、ｎが、８〜３６の範囲であり、ＲＰＲが、水素または保護基であり、Ｒ２１が、ポリエチレングリコール部分のキャッピング単位である、請求項１０に記載の抗体。
【請求項１２】
前記薬物−リンカーが、下式：
【化４３】
2018509908.tif 000050
またはその薬学的に許容される塩を有し、式中、Ｚが、前記抗体上の官能基と反応して、それとの共有結合を形成することが可能な反応性部位を有する有機部分を表し、ｎが、８〜３６の範囲であり、ＲＰＲが、水素または保護基であり、Ｒ２１が、ポリエチレングリコール部分のキャッピング単位である、請求項１０に記載の抗体。
【請求項１３】
薬物−リンカーが、下式：
【化４４】
2018509908.tif 000051
またはその薬学的に許容される塩を有し、式中、ｎが、８〜３６の範囲であり、ＲＰＲが、水素または保護基であり、Ｒ２１が、ポリエチレングリコール部分のキャッピング単位である、請求項１０に記載の抗体。
【請求項１４】
薬物−リンカーが、下式：
【化４５】
2018509908.tif 000052
またはその薬学的に許容される塩を有し、式中、ｎが、８〜３６の範囲であり、ＲＰＲが、水素または保護基であり、Ｒ２１が、ポリエチレングリコール部分のキャッピング単位である、請求項１０に記載の抗体。
【請求項１５】
ｎが、８〜１４の範囲である、請求項１または９に記載の抗体。
【請求項１６】
ｎが、１０〜１２の範囲である、請求項１または９に記載の抗体。
【請求項１７】
ｎが、１２である、請求項１または９に記載の抗体。
【請求項１８】
Ｒ２１が、−ＣＨ３または−ＣＨ２ＣＨ２ＣＯ２Ｈである、請求項１５〜１７のいずれか１項に記載の抗体。
【請求項１９】
下式
【化４６】
2018509908.tif 000053
を有する抗ＣＤ４８抗体−薬物複合体化合物であって、式中、Ａｂが、請求項１または９に記載の抗ＣＤ４８抗体であり、Ｚが、共有結合を介して前記抗体及び前記薬物−リンカーの残部を連結する有機部分を表し、ｎが、８〜３６の範囲であり、Ｒ２１が、ポリエチレングリコール部分のキャッピング単位であり、ｐが、１〜１６である、抗ＣＤ４８抗体−薬物複合体化合物、またはその薬学的に許容される塩。
【請求項２０】
下式
【化４７】
2018509908.tif 000054
を有する請求項１９に記載の抗ＣＤ４８抗体−薬物複合体化合物、またはその薬学的に許容される塩。
【請求項２１】
下式
【化４８】
2018509908.tif 000055
を有する請求項１９に記載の抗ＣＤ４８抗体−薬物複合体化合物であって、式中、ＲＰＲが、水素または保護基である、抗ＣＤ４８抗体−薬物複合体化合物、またはその薬学的に許容される塩。
【請求項２２】
下式
【化４９】
2018509908.tif 000056
を有する請求項１９に記載の抗ＣＤ４８抗体−薬物複合体化合物、またはその薬学的に許容される塩。
【請求項２３】
下式
【化５０】
2018509908.tif 000057
を有する請求項１９に記載の抗ＣＤ４８抗体−薬物複合体化合物、またはその薬学的に許容される塩。
【請求項２４】
下式
【化５１】
2018509908.tif 000058
を有する請求項１９に記載の抗ＣＤ４８抗体−薬物複合体化合物であって、式中、ＲＰＲが、水素または保護基である、抗ＣＤ４８抗体−薬物複合体化合物、またはその薬学的に許容される塩。
【請求項２５】
ｎが、８〜１４の範囲である、請求項１９〜２４のいずれか１項に記載の抗ＣＤ４８抗体−薬物複合体化合物。
【請求項２６】
ｎが、１０〜１２の範囲である、請求項１９〜２４のいずれか１項に記載の抗ＣＤ４８抗体−薬物複合体化合物。
【請求項２７】
ｎが、１２である、請求項１９〜２４のいずれか１項に記載の抗ＣＤ４８抗体−薬物複合体化合物。
【請求項２８】
Ｒ２１が、−ＣＨ３または−ＣＨ２ＣＨ２ＣＯ２Ｈである、請求項１９〜２７のいずれか１項に記載の抗ＣＤ４８抗体−薬物複合体化合物。
【請求項２９】
ｐが、８である、請求項１９〜２８のいずれか１項に記載の抗体−薬物複合体化合物。
【請求項３０】
Ａｂへの結合が、前記抗体の鎖間ジスルフィド結合のシステイン残基を介する、請求項１９〜２９のいずれか１項に記載の抗体−薬物複合体化合物。
【請求項３１】
請求項１９〜３０のいずれか１項に記載の抗ＣＤ４８抗体−薬物複合体分子の集団を含む抗体−薬物複合体組成物であって、前記組成物の平均薬物負荷が８であり、前記組成物における主要薬物負荷が８である、抗体−薬物複合体組成物。
【請求項３２】
薬学的組成物である、請求項３１に記載の組成物。
【請求項３３】
ＣＤ４８発現癌の患者の治療方法であって、請求項３１に記載の組成物を、前記患者に投与するステップを含む、方法。
【請求項３４】
前記ＣＤ４８発現癌が、多発性骨髄腫である、請求項３３に記載の方法。
【請求項３５】
前記ＣＤ４８発現癌が、Ｂ細胞悪性腫瘍及び急性骨髄性白血病からなる群から選択される、請求項３３に記載の方法。
【請求項３６】
ヒトＣＤ４８タンパク質に特異的に結合する抗体の配列番号３〜５のアミノ酸配列を有するＣＤＲを含む重鎖可変領域と、配列番号６〜８のアミノ酸配列を有するＣＤＲを含む軽鎖可変領域とをコードする配列を含む、単離された核酸。
【請求項３７】
請求項３６に記載の核酸を含む、単離されたベクター。
【請求項３８】
請求項３７に記載のベクターを含む、単離された宿主細胞。
【請求項３９】
前記宿主細胞が、哺乳類宿主細胞である、請求項３８に記載の宿主細胞。
【請求項４０】
前記宿主細胞が、ＣＨＯ、ＣＯＳ、ＨｅＬＡ、ＨＥＫ２９３、Ｌ、Ｓｐ２／０、及びＮＳ０からなる群から選択される、請求項３９に記載の宿主細胞。
【請求項４１】
抗ＣＤ４８抗体の作製方法であって、
前記抗体をコードする核酸の発現に適した条件下で、請求項３８に記載の宿主細胞を培養することと、
前記抗体を単離することと、を含む、方法。
【請求項４２】
抗ＣＤ４８抗体薬物複合体の作製方法であって、
前記抗体をコードする核酸の発現に適した条件下で、請求項３８に記載の宿主細胞を培養することと、
前記抗体を単離することと、
リンカーに結合された細胞傷害性薬物を前記抗体と複合体化することと、を含む、方法。
【請求項４３】
前記薬物−リンカーが、下式：
【化５２】
2018509908.tif 000059
またはその薬学的に許容される塩を有し、式中、Ｚが、前記抗体上の官能基と反応して、それとの共有結合を形成することが可能な反応性部位を有する有機部分を表し、ｎが、８〜３６の範囲であり、ＲＰＲが、水素または保護基であり、Ｒ２１が、ポリエチレングリコール部分のキャッピング単位である、請求項４２に記載の方法。
【請求項４４】
配列番号１のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域と、配列番号２のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域とをコードする配列を含む、単離された核酸。
【請求項４５】
請求項４４に記載の核酸を含む、単離されたベクター。
【請求項４６】
請求項４５に記載のベクターを含む、単離された宿主細胞。
【請求項４７】
前記宿主細胞が、哺乳類宿主細胞である、請求項４６に記載の宿主細胞。
【請求項４８】
前記宿主細胞が、ＣＨＯ、ＣＯＳ、ＨｅＬＡ、ＨＥＫ２９３、Ｌ、Ｓｐ２／０、及びＮＳ０からなる群から選択される、請求項４７に記載の宿主細胞。
【請求項４９】
抗ＣＤ４８抗体の作製方法であって
前記抗体をコードする核酸の発現に適した条件下で、請求項４６に記載の宿主細胞を培養することと、
前記抗体を単離することと、を含む、方法。
【請求項５０】
抗ＣＤ４８抗体薬物複合体の作製方法であって、
前記抗体をコードする核酸の発現に適した条件下で、請求項４６に記載の宿主細胞を培養することと、
前記抗体を単離することと、
リンカーに結合された細胞傷害性薬物を前記抗体と複合体化することと、を含む、方法。
【請求項５１】
前記薬物−リンカーが、下式：
【化５３】
2018509908.tif 000060
またはその薬学的に許容される塩を有し、式中、Ｚが、前記抗体上の官能基と反応して、それとの共有結合を形成することが可能な反応性部位を有する有機部分を表し、ｎが、８〜３６の範囲であり、ＲＰＲが、水素または保護基であり、Ｒ２１が、ポリエチレングリコール部分のキャッピング単位である、請求項５０に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願の相互参照
本出願は、３５  ＵＳＣ  １１９（ｅ）の下、２０１５年３月１８日に出願された米国仮特許出願第６２／１３４，９８１号の利益を主張し、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
【０００２】
本発明は、ＣＤ４８及びその複合体に特異的に結合するマウス、キメラ、及びヒト化抗体を提供する。
【背景技術】
【０００３】
ＣＤ４８抗原（表面抗原分類４８）は、Ｂリンパ球活性化マーカー（ＢＬＡＳＴ−１）またはシグナル伝達リンパ球活性化分子２（ＳＬＡＭＦ２）としても知られる。ＣＤ４８は、ＣＤ８４、ＣＤ１５０、ＣＤ２２９及びＣＤ２４４などのＳＬＡＭ（シグナル伝達リンパ球活性化分子）タンパク質を含む、免疫グロブリンスーパーファミリー（ＩｇＳＦ）のＣＤ２サブファミリーのメンバーである。ＣＤ４８は、リンパ球及び他の免疫細胞の表面、ならびに樹状細胞に見られ、これらの細胞における活性化及び分化経路に関与する。ＣＤ４８は、多発性骨髄腫細胞及び他のＢ細胞起源の癌、例えば、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）、意義不明の単クローン性免疫グロブリン血症（ＭＧＵＳ）、ワルデンストーム高ガンマグロブリン血症（ＷＭ）、原発性／全身性アミロイドーシス患者腫瘍細胞、及び濾胞性リンパ腫（ＦＬ）上に発現されることが知られている。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００４】
一態様では、本開示は、ヒトＣＤ４８タンパク質に特異的に結合するキメラまたはヒト化抗体を提供する。本抗体は、配列番号３〜５の重鎖ＣＤＲ配列と、配列番号６〜８の軽鎖ＣＤＲ配列とを含む。本抗体は、ヒトＣＤ４８タンパク質に特異的に結合するマウス抗体と比較したとき、ヒトＣＤ４８タンパク質に対してより高い結合親和性を呈し、また配列番号３〜５の重鎖ＣＤＲ配列及び配列番号６〜８の軽鎖ＣＤＲ配列も含む。一実施形態では、キメラまたはヒト化抗体は、マウス抗体と比較したとき、ヒトＣＤ４８タンパク質に少なくとも２倍高い結合親和性を呈する。別の実施形態では、本抗体は、ヒト化抗体である。更なる実施形態では、本抗体は、配列番号１の重鎖可変領域を含む。別の実施形態では、本抗体は、配列番号２の軽鎖可変領域を含む。更なる実施形態では、本抗体は、配列番号１の重鎖可変領域と、配列番号２の軽鎖可変領域とを含む。一実施形態では、抗体は、リンカーに結合された細胞傷害性薬物と複合体化される。
【０００５】
更なる実施形態では、抗体に結合された薬物−リンカーは、下式：
【化１】
2018509908.tif 000003
またはその薬学的に許容される塩を有し、式中、Ｚは、抗体上の官能基と反応して、それとの共有結合を形成することが可能な反応性部位を有する有機部分を表し、ｎは、８〜３６の範囲であり、ＲＰＲは、水素または保護基であり、Ｒ２１は、ポリエチレングリコール部分のキャッピング単位である。
【０００６】
別の態様では、本開示は、配列番号１の重鎖可変領域と、配列番号２の軽鎖可変領域とを含む、ヒトＣＤ４８タンパク質に特異的に結合するヒト化抗体を提供する。
【０００７】
抗体は、一実施形態では、リンカーに結合された細胞傷害性薬物と複合体化される。例示的な薬物−リンカーは、下式：
【化２】
2018509908.tif 000004
またはその薬学的に許容される塩を有し、式中、Ｚは、抗体上の官能基と反応して、それとの共有結合を形成することが可能な反応性部位を有する有機部分を表し、ｎは、８〜３６の範囲であり、ＲＰＲは、水素または保護基であり、Ｒ２１は、ポリエチレングリコール部分のキャッピング単位である。
【０００８】
本開示の抗体と複合体化するための別の例示的な薬物−リンカーは、下式：
【化３】
2018509908.tif 000005
またはその薬学的に許容される塩を有し、式中、Ｚは、抗体上の官能基と反応して、それとの共有結合を形成することが可能な反応性部位を有する有機部分を表し、ｎは、８〜３６の範囲であり、ＲＰＲは、水素または保護基であり、Ｒ２１は、ポリエチレングリコール部分のキャッピング単位である。
【０００９】
本開示の抗体と複合体化するための別の例示的な薬物−リンカーは、下式：
【化４】
2018509908.tif 000006
またはその薬学的に許容される塩を有し、式中、ｎは、８〜３６の範囲であり、ＲＰＲは、水素または保護基であり、Ｒ２１は、ポリエチレングリコール部分のキャッピング単位である。
本開示の抗体に複合体化するための別の例示的な薬物−リンカーは、下式：
【化５】
2018509908.tif 000007
またはその薬学的に許容される塩を有し、式中、ｎは、８〜３６の範囲であり、ＲＰＲは、水素または保護基であり、Ｒ２１は、ポリエチレングリコール部分のキャッピング単位である。
本開示のいくつかの実施形態では、値ｎは、８〜１４の範囲であり得る。本開示の他の実施形態では、値ｎは、１０〜１２の範囲である。本開示の更なる実施形態では、ｎの値は、１２である。別の実施形態では、Ｒ２１は、−ＣＨ３または−ＣＨ２ＣＨ２ＣＯ２Ｈである。
【００１０】
別の態様では、本開示は、下式
【化６】
2018509908.tif 000008
を有する抗ＣＤ４８抗体−薬物複合体化合物、またはその薬学的に許容される塩であり、式中、Ｚは、共有結合を介して抗体及び薬物−リンカーの残部を連結する有機部分を表し、ｎは、８〜３６の範囲であり、Ｒ２１は、ポリエチレングリコール部分のキャッピング単位であり、ｐは、１〜１６である。本抗体は、開示の抗ＣＤ４８抗体のうちのいずれかであってよい。好ましい実施形態では、本抗体は、配列番号１の重鎖可変領域と、配列番号２の軽鎖可変領域とを有する。
【００１１】
本開示の抗体と複合体化するための別の例示的な薬物−リンカーは、下式：
【化７】
2018509908.tif 000009
またはその薬学的に許容される塩を有する。
【００１２】
本開示の抗体と複合体化するための別の例示的な薬物−リンカーは、下式：
【化８】
2018509908.tif 000010
またはその薬学的に許容される塩を有し、式中、ＲＰＲは、水素または保護基である。
【００１３】
本開示の抗体と複合体化するための別の例示的な薬物−リンカーは、下式：
【化９】
2018509908.tif 000011
またはその薬学的に許容される塩を有する。
【００１４】
本開示の抗体と複合体化するための別の例示的な薬物−リンカーは、下式：
【化１０】
2018509908.tif 000012
またはその薬学的に許容される塩を有する。
【００１５】
本開示の抗体と複合体化するための別の例示的な薬物−リンカーは、下式：
【化１１】
2018509908.tif 000013
またはその薬学的に許容される塩を有し、式中、ＲＰＲは、水素または保護基である。
【００１６】
本開示のいくつかの実施形態では、値ｎは、８〜１４の範囲であり得る。本開示の他の実施形態では、値ｎは、１０〜１２の範囲である。本開示の更なる実施形態では、ｎの値は、１２である。別の実施形態では、Ｒ２１は、−ＣＨ３または−ＣＨ２ＣＨ２ＣＯ２Ｈである。
【００１７】
別の実施形態では、本開示の抗体−薬物複合体のいずれかは、８のｐ値を有する。別の実施形態では、薬物−リンカーは、抗体の鎖間ジスルフィド結合のシステイン残基を介して抗体に結合される。
【００１８】
別の実施形態では、抗体−薬物複合体組成物は、平均薬物負荷が８の抗ＣＤ４８抗体−薬物複合体分子の集団を含み、組成物における主要薬物負荷は８である。
【００１９】
別の態様では、本開示は、本明細書に開示される抗ＣＤ４８抗体−薬物複合体を含む薬学的組成物及び製剤を提供する。
【００２０】
更なる態様では、ＣＤ４８抗体−薬物複合体は、ＣＤ４８を発現する癌を有する患者を治療するために使用される。ＣＤ４８発現癌は、一実施形態では、多発性骨髄腫である。他の実施形態では、ＣＤ４８発現癌は、Ｂ細胞悪性腫瘍、例えば、非ホジキンリンパ腫、濾胞性リンパ腫、マントル細胞リンパ腫、意義不明の単クローン性免疫グロブリン血症（ＭＧＵＳ）、ワルデンストーム高ガンマグロブリン血症（ＷＭ）、原発性／全身性アミロイドーシス患者腫瘍細胞、及び慢性リンパ球性白血病である。本明細書に開示される方法を使用して治療することができるＣＤ４８発現癌の別の例は、急性骨髄性白血病である。
【００２１】
定義
「モノクローナル抗体」という用語は、実質的に均質な抗体、すなわち、集団を含む個々の抗体が微量で存在し得る可能な天然に生じる突然変異を除き同一である集団から得られた抗体を指す。修飾語「モノクローナル」は、実質的に均質な抗体の集団から得られたときの抗体の性質を示し、任意の特定の方法による抗体の産生を必要とすると解釈されないものとする。例えば、本発明に従い使用されるモノクローナル抗体は、最初にＫｏｈｌｅｒ  ｅｔ  ａｌ．（１９７５）Ｎａｔｕｒｅ  ２５６：４９５により記載されたハイブリドーマ法により作製され得るか、または組換えＤＮＡ法により（例えば、米国特許第４８１６５６７号を参照されたい）作製され得る。「モノクローナル抗体」は、例えば、Ｃｌａｃｋｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．（１９９１）Ｎａｔｕｒｅ，３５２：６２４−６２８及びＭａｒｋｓ  ｅｔ  ａｌ．（１９９１）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，２２２：５８１−５９７に記載される技法を使用してファージ抗体ライブラリーからも単離され得るか、または他の方法により作製され得る。本明細書に記載される抗体は、モノクローナル抗体である。
【００２２】
抗体は典型的には、単離された形態で提供される。これは、抗体が典型的には、その産生または精製から生じる妨害タンパク質及び他の汚染物の少なくとも５０％ｗ／ｗ純粋であることを意味するが、その抗体がその使用を容易にすることを意図した過剰の薬学的に許容される担体（複数可）または他のビヒクルと組み合わされる可能性を除外しない。時折、抗体は、産生または精製からの妨害タンパク質及び汚染物から少なくとも６０％、７０％、８０％、９０％、９５、または９９％ｗ／ｗ純粋である。単離された抗体を含む抗体は、細胞傷害性薬と複合体化され、抗体薬物複合体として提供され得る。
【００２３】
「単離された」ポリヌクレオチドは、特定され、その天然の構成成分から分離及び／または回収されたポリヌクレオチドを指す。
【００２４】
モノクローナル抗体の、その標的抗原への特異的結合は、少なくとも１０６、１０７、１０８、１０９、または１０１０Ｍ−１の親和性を意味する。特異的結合は、検出可能に規模が高く、少なくとも１つの無関係の標的に生じる非特異的結合から区別可能である。特異的結合は、特定の官能基間の結合の形成または特定の空間的適合（例えば、ロック・アンド・キータイプ）の結果であり得るが、非特異的結合は通常、ファンデルワース力の結果である。ＣＤ４８指向抗体−薬物複合体及び抗ＣＤ４８抗体は、ＣＤ４８に特異的に結合する。
【００２５】
基本的な抗体構造単位は、サブユニットの四量体である。各四量体は、２つの同一のポリペプチド鎖の対を含み、各対は、１つの「軽」鎖（約２５ｋＤａ）及び１つの「重」鎖（約５０〜７０ｋＤａ）を有する。各鎖のアミノ末端部分は、主に抗原認識に関与する約１００〜１１０個以上のアミノ酸の可変領域を含む。切断可能なシグナルペプチドに連結されたこの可変領域が最初に発現される。シグナルペプチドを有しない可変領域は、時折、成熟可変領域と称される。よって、例えば、軽鎖成熟可変領域は、軽鎖シグナルペプチドを有しない軽鎖可領域を意味する。軽鎖は、カッパまたはラムダのいずれかに分類される。重鎖は、ガンマ、ミュー、アルファ、デルタ、またはエプシロンに分類され、それぞれ、ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＤ、及びＩｇＥとして抗体のアイソタイプを定義する。軽鎖及び重鎖内で、添字及び定常領域は、約１２個以上のアミノ酸の「Ｊ」領域により結合され、重鎖も約１０個以上のアミノ酸の「Ｄ」領域を含む。（一般的に、Ｆｕｎｄａｍｅｎｔａｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（Ｐａｕｌ，Ｗ．，ｅｄ．，２ｎｄ  ｅｄ．Ｒａｖｅｎ  Ｐｒｅｓｓ，Ｎ．Ｙ．，１９８９，Ｃｈ．７を参照されたい、全ての目的に関して参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）。各軽／重鎖対の成熟可変領域は、抗体結合部位を形成する。よって、無傷抗体は２つの結合部位を有する。鎖は全て、相補性決定領域またはＣＤＲとも呼ばれる３つの超可変領域により結合された、比較的保存されたフレームワーク領域（ＦＲ）の同じ一般構造を呈する。各対の２本の鎖からのＣＤＲは、フレームワーク領域により整合され、特定のエピトープへの結合を可能にする。Ｎ末端からＣ末端まで、軽鎖及び重鎖両方は、ドメインＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、及びＦＲ４を含む。各ドメインへのアミノ酸の割当は、Ｋａｂａｔ，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ  （Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ，１９８７  ａｎｄ  １９９１）またはＣｈｏｔｈｉａ＆Ｌｅｓｋ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１−９１７（１９８７）；Ｃｈｏｔｈｉａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  ３４２：８７８−８８３（１９８９）の定義に従う。Ｋａｂａｔは、異なる重鎖可変領域間または異なる軽鎖可変領域間の対応する残基が同じ番号を割り当てられる、広く使用されている番付規則（Ｋａｂａｔ番付システム）も提供する。重鎖定常領域の番付は、Ｋａｂａｔ（Ｋａｂａｔ，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ（Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ，１９８７  ａｎｄ  １９９１）に記載されるＥＵインデックスによる。
【００２６】
「抗体」という用語は、無傷抗体及びその抗原結合断片を含む。「無傷抗体」は、抗原結合可変領域ならびに抗体クラスに適した軽鎖定常ドメイン（ＣＬ）及び重鎖定常ドメインＣＨ１、ＣＨ２、ＣＨ３及びＣＨ４を含むものである。定常ドメインは、天然の配列定常ドメイン（例えば、ヒト天然配列定常ドメイン）またはそのアミノ酸配列変異型であり得る。抗体断片は、それらが別個の重鎖、軽鎖Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆ（ａｂ）ｃ、ダイアボディ、Ｄａｂｓ、ナノボディ、及びＦｖを含む標的への特異的結合について得られた無傷抗体と競合する。断片は、組換えＤＮＡ技術により、または無傷免疫グロブリンの酵素もしくは化学分離により産生され得る。「抗体」という用語は、二重特異性抗体または同様のものであるダイアボディ（ホモ二量体Ｆｖ断片）またはミニボディ（ＶＬ−ＶＨ−ＣＨ３）も含む。二重特異性または二重機能性抗体は、２つの異なる重／軽鎖対、及び２つの異なる結合部位を有する人工ハイブリッド抗体である（例えば、Ｓｏｎｇｓｉｖｉｌａｉ  ａｎｄ  Ｌａｃｈｍａｎｎ，Ｃｌｉｎ．Ｅｘｐ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，７９：３１５−３２１（１９９０）、Ｋｏｓｔｅｌｎｙ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１４８：１５４７−５３（１９９２）を参照されたい）。
【００２７】
「患者」という用語は、予防的または治療的処置のいずれかを受けるヒト及び他の哺乳類対象を含む。
【００２８】
アミノ酸置換を保存または非保存に分類する目的に関して、アミノ酸は、以下のようにグループ分けされる：グループＩ（疎水性側鎖）：ｍｅｔ、ａｌａ、ｖａｌ、ｌｅｕ、ｉｌｅ；グループＩＩ（中性親水性側鎖）：ｃｙｓ、ｓｅｒ、ｔｈｒ；グループＩＩＩ（酸性側鎖）：ａｓｐ、ｇｌｕ；グループＩＶ（塩基性側鎖）：ａｓｎ、ｇｌｎ、ｈｉｓ、ｌｙｓ、ａｒｇ；グループＶ（鎖配向に影響を及ぼす残基）：ｇｌｙ、ｐｒｏ；及びグループＶＩ（芳香族側鎖）：ｔｒｐ、ｔｙｒ、ｐｈｅ。保存的置換は、同じクラスのアミノ酸間の置換を伴う。非保存的置換は、これらのクラスのうちの１つのメンバーを別のメンバーと交換することに相当する。
【００２９】
パーセント配列同一性は、Ｋａｂａｔ番付規則により最大限に整合された抗体配列により決定される。整合後、対象抗体領域（例えば、重鎖または軽鎖の成熟可変領域全体）が参照抗体の同じ領域と比較される場合、対象と参照抗体領域との間のパーセント配列同一性は、対象及び参照抗体領域の両方において同じアミノ酸により占められる位置の数を、２つの領域の整合された位置の総数で除し（ギャップは数えられない）、１００を乗じてパーセントに変換する。
【００３０】
１つ以上の列挙される要素を「含む」組成物または方法は、具体的に列挙されない他の要素を含み得る。例えば、抗体を含む組成物は、抗体のみを含むか、または他の成分との組み合わせであり得る。
【００３１】
「治療有効量」または「有効量」という用語は、哺乳動物における疾患または障害を治療するのに有効である抗体−薬物複合体の量を指す。癌の場合、複合体の治療有効量は、癌細胞の数を低減し得る、腫瘍サイズを低減し得る、末梢器官への癌細胞浸潤を阻害し得る（すなわち、ある程度緩徐化し、好ましくは停止させる）、腫瘍転移を阻害し得る（すなわち、ある程度緩徐化し、好ましくは停止させる）、腫瘍成長を阻害し得る、及び／または癌に関連する症状のうちの１つ以上を軽減し得る。癌療法に関して、有効性は、例えば、疾患進行までの時間（ＴＴＰ）を評価し、かつ／または奏功率（ＲＲ）を決定することにより測定され得る。「有効なレジメン」という用語は、投与される複合体の量と障害の治療を達成するのに適切な投薬頻度との組み合わせを指す。
【００３２】
「治療する（ｔｒｅａｔ）」または「治療（ｔｒｅａｔｍｅｎｔ）」という用語は、文脈により別途記載のない限り、目的が癌の発生もしくは広がりなど、望ましくない生理学的変化または障害を阻害もしくは緩徐化する（軽減する）ことである、治療的処置を指す。有益または所望の臨床結果は、限定されないが、検出可能または検出不能にかかわらず、症状の緩和、疾患の程度の縮小、疾患の安定した（すなわち、悪化しない）状態、疾患進行の遅延もしくは緩徐化、疾患状態の改善もしくは緩和、及び寛解（部分的または完全にかかわらず）を含む。「治療」は、治療を受けない場合の予想生存期間と比較したときの生存期間の延長も意味し得る。治療を必要とするものは検出可能な疾患を有するものを含む。治療を必要とするものは、検出不能な疾患を有するもの、例えば、ＣＤ４８発現障害の治療後に完全な奏功を達成したが、再発を防止するために療法を必要とする患者も含み得る。
【００３３】
「薬学的に許容される」という用語は、米国の連邦もしくは州政府の規制機関により承認されたもしくは承認可能である、または動物、より具体的にはヒトにおいて使用するための米国薬局方もしくは他の一般的に認識されている薬局方に列記されていることを意味する。「薬学的に相溶性の成分」という用語は、抗ＣＤ４８抗体または抗体−薬物複合体と共に対象に投与される薬学的に許容される希釈剤、アジュバント、賦形剤、またはビヒクルを指す。
【００３４】
「薬学的に許容される塩」という句は、薬学的に許容される有機塩または無機塩を指す。例示的な塩には、硫酸塩、クエン酸塩、酢酸塩、シュウ酸塩、塩化物、臭化物、ヨウ化物、硝酸塩、重硫酸塩、リン酸塩、酸リン酸塩、イソニコチン酸塩、乳酸塩、サリチル酸塩、酸クエン酸塩、酒石酸塩、オレイン酸塩、タンニン酸塩、パントテン酸塩、酒石酸水素塩、アスコルビン酸塩、コハク酸塩、マレイン酸塩、ゲンチシン酸塩（ｇｅｎｔｉｓｉｎａｔｅ）、フマル酸塩、グルコン酸塩、グルクロン酸塩、糖酸塩（ｓａｃｃｈａｒａｔｅ）、ギ酸塩、安息香酸塩、グルタミン酸塩、メタンスルホン酸塩、エタンスルホン酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、ｐトルエンスルホン酸塩、及びパモ酸塩（すなわち、１，１’メチレンビス−（２ヒドロキシ３ナフトエート））が含まれる。薬学的に許容される塩は、酢酸イオン、コハク酸イオンまたは他の対イオンなどの別の分子の包含を伴ってもよい。対イオンは、親化合物上の電荷を安定させる任意の有機または無機の部分であり得る。更に、薬学的に許容される塩は、その構造内に２つ以上の荷電原子を有し得る。複数の荷電原子が薬学的に許容される塩の一部である場合は、複数の対イオンを有し得る。したがって、薬学的に許容される塩は、１つ以上の荷電原子及び／または１つ以上の対イオンを有し得る。
【００３５】
本発明の文脈における溶媒和物は、溶媒分子との調整を通して固体または液体状態において複合体を形成する本発明の化合物のそれらの形態である。水和物は、溶媒和物の１つの特定の形態であり、調整は水と行われる。本発明の文脈における好ましい溶媒和物は、水和物である。
【００３６】
文脈から別途明らかでない限り、「約」という用語は、規定値の標準偏差内の値を包含する。
【図面の簡単な説明】
【００３７】
【図１】マウスＭＥＭ１０２抗体の重鎖可変領域ならびにヒト化ｖＨＡ、ｖＨＢ、及びｖＨＣ重鎖のアミノ酸配列、ならびに選択されたヒト生殖系列アクセプター可変領域配列を示す。
【図２】マウスＭＥＭ１０２抗体の軽鎖可変領域ならびにヒト化ｖＬＡ、ｖＬＢ、及びｖＬＣ軽鎖のアミノ酸配列、ならびに選択されたヒト生殖系列アクセプター可変領域配列を示す。
【図３】ヒトＵ−２６６多発性骨髄腫細胞上のＭＥＭ１０２抗体の飽和結合曲線を示す。
【図４】カニクイザル（ｃｙｎｏｍｏｌｇｏｕｓ  ｍｏｎｋｅｙ）ＣＤ４８をトランスフェクトされたＣＨＯ細胞上のＭＥＭ１０２抗体の飽和結合曲線を示す。
【図５】ＭＥＭ−１０２  ＡＤＣで処置した後のヒトＮＣＩ−Ｈ９２９多発性骨髄腫細胞におけるカスパーゼ３／７活性化（アポトーシスによる細胞死）を示す。
【図６】ＭＥＭ−１０２  ＡＤＣで処置した後のヒトＵ−２６６多発性骨髄腫細胞におけるカスパーゼ３／７活性化を示す。
【図７】ＮＣＩ−Ｈ９２９細胞を移植したマウス異種移植片モデルにおけるｈＭＥＭ１０２  ＡＤＣのインビボ活性を示す。これは、多発性骨髄腫の播種性モデルである。
【図８】ＮＣＩ−Ｈ９２９細胞を移植したマウス異種移植片モデルにおけるｈＭＥＭ１０２  ＡＤＣのインビボ活性を示す。これは、多発性骨髄腫の皮下モデルである。
【図９】ＭＭ．１Ｒ細胞を移植したマウス異種移植片モデルにおけるｈＭＥＭ１０２  ＡＤＣのインビボ活性を示す。これは、多発性骨髄腫の播種性モデルである。
【図１０】ＭＭ．１Ｒ細胞を移植したマウス異種移植片モデルにおけるｈＭＥＭ１０２  ＡＤＣのインビボ活性を示す。これは、多発性骨髄腫の皮下モデルである。
【図１１】ＥＪＭ細胞を移植したマウス異種移植片モデルにおけるｈＭＥＭ１０２  ＡＤＣのインビボ活性を示す。これは、多発性骨髄腫の播種性モデルである。
【発明を実施するための形態】
【００３８】
本発明は一部、ＣＤ４８を標的とするペグ化ＭＭＡＥ抗体−薬物複合体を含む抗体−薬物複合体がＣＤ４８＋発現細胞の死滅に特に有効であるという発見に基づく。特に、高親和性ＭＥＭ１０２ヒト化抗体が重鎖可変領域アクセプター配列としてｈＩｇＧ  ＶＨ７−４−１／ｈＩｇＧ−ＪＨ５重鎖可変領域ヒト生殖系列を使用して構築され得ることが分かった。軽鎖可変領域に関して、好ましアクセプター配列は、ｈＩｇＧ−ＶＫ６−２１／ｈＩｇＧ−ＪＫ４軽鎖可変領域ヒト生殖系列である。特に、高親和性ＭＥＭ１０２ヒト化抗体は、親和性成熟を行う必要がなく、またマウス抗体のＣＤＲの同一性を維持しながら構築された。高親和性ＭＥＭ１０２ヒト化抗体は、抗体薬物複合体の一部としての薬物送達にも有効であった。ＳＧＤ−５０８８ペグ化ＭＭＡＥ薬物−リンカーと複合体化されたとき、得られるｈＭＥＭ１０２−ＭＤｐｒ−ＰＥＧ（１２）−ｇｌｕｃ−ＭＭＡＥ  ８−負荷複合体は、多発性骨髄腫細胞系のパネルに対して非常に活性であった。
【００３９】
標的分子
別途記載のない限り、ＣＤ４８は、ヒトＣＤ４８を指す。例示的なヒト配列は、ＧｅｎＢａｎｋ受入番号ＣＡＧ３３２９３．１を割り当てられている。
【００４０】
本発明の抗体
ヒト化抗体は、非ヒト「ドナー」抗体からのＣＤＲがヒト「アクセプター」抗体配列にグラフトされる遺伝子組換えされた抗体である（例えば、Ｑｕｅｅｎ，ＵＳ５，５３０，１０１及び５，５８５，０８９、Ｗｉｎｔｅｒ，ＵＳ５，２２５，５３９、Ｃａｒｔｅｒ，ＵＳ６，４０７，２１３、Ａｄａｉｒ，ＵＳ５，８５９，２０５、ならびにＦｏｏｔｅ，ＵＳ６，８８１，５５７を参照されたい）。アクセプター抗体配列は、例えば、成熟ヒト抗体配列、かかる配列の複合体、ヒト抗体配列のコンセンサス配列、または生殖系列領域配列であり得る。
【００４１】
よって、ヒト化抗体は、完全にまたは実質的に非ヒトドナー抗体ならびに可変領域フレームワーク配列及び定常領域から、存在する場合、完全にまたは実質的にヒト抗体配列からの一部または全てのＣＤＲを有する抗体である。同様に、ヒト化重鎖は、完全にまたは実質的にドナー抗体重鎖ならびに重鎖可変領域フレームワーク配列及び重鎖定常領域から、存在する場合、実質的にヒト重鎖可変領域フレームワーク及び定常領域配列からの少なくとも１つ、２つ、及び通常３つ全てのＣＤＲを有する。同様に、ヒト化軽鎖は、完全にまたは実質的にドナー抗体軽鎖ならびに軽鎖可変領域フレームワーク配列及び軽鎖定常領域から、存在する場合、実質的にヒト軽鎖可変領域フレームワーク及び定常領域配列からの少なくとも１つ、２つ、及び通常３つ全てのＣＤＲを有する。ナノボディ及びダイアボディ以外、ヒト化抗体は典型的には、ヒト化重鎖及びヒト化軽鎖を含む。ヒト化またはヒト抗体におけるＣＤＲは、対応する残基（Ｋａｂａｔにより定義されるように）の少なくとも６０％、８５％、９０％、９５％、または１００％がそれぞれのＣＤＲ間で同一であるとき、実質的に非ヒト抗体において対応するＣＤＲからであるか、またはそれに実質的に同一である。いくつかの実施形態では、ヒト化抗体またはヒト抗体におけるＣＤＲは、各ＣＤＲにおいて３つ以下の保存アミノ酸置換があるとき、実質的に非ヒト抗体において対応するＣＤＲからであるか、またはそれに実質的に同一である。抗体鎖の可変領域フレームワーク配列または抗体鎖の定常領域は、Ｋａｂａｔにより定義される対応する残基の少なくとも７０％、８０％、８５％、９０％、９５％、または１００％が同一であるとき、それぞれ、実質的にヒト可変領域フレームワーク配列またはヒト定常領域からである。本発明のいくつかのヒト化抗体において、本抗体の重鎖可変フレームワーク領域において逆突然変異はなく、また本抗体の軽鎖可変領域において逆突然変異はない。
【００４２】
ヒト化抗体は、マウス抗体からの６つ全てのＣＤＲ（好ましくはＫａｂａｔにより定義されるように）を組み込むことが多いが、それらは、マウス抗体からの全てより少ないＣＤＲ（例えば、少なくとも３つ、４つ、または５つ）とでも作製され得る（例えば、Ｐａｓｃａｌｉｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６９：３０７６，２００２、Ｖａｊｄｏｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，３２０：４１５−４２８，２００２、Ｉｗａｈａｓｈｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．３６：１０７９−１０９１，１９９９、Ｔａｍｕｒａ  ｅｔ  ａｌ，Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，１６４：１４３２−１４４１，２０００）。
【００４３】
ヒト可変領域フレームワーク残基からのある特定のアミノ酸は、ＣＤＲ構造及び／または抗原への結合に対するそれらの可能な影響に基づく置換に関して選択され得る。かかる可能な影響の研究は、モデル化、特定の位置でのアミノ酸の特性の検査、または特定のアミノ酸の置換もしくは突然変異誘発の作用の経験的観察によるものである。
【００４４】
本発明は、ＣＤ４８抗原に対して指向された抗体を提供する。好ましい抗体は、マウスＭＥＭ１０２抗体に由来するキメラまたはヒト化抗体である。
重鎖可変領域の好ましいアクセプター配列は、ｈＩｇＧ  ＶＨ７−４−１／ｈＩｇＧ−ＪＨ５重鎖可変領域ヒト生殖系列である。軽鎖可変領域に関して、好ましいアクセプター配列は、ｈＩｇＧ−ＶＫ６−２１／ｈＩｇＧ−ＪＫ４軽鎖可変領域ヒト生殖系列である。
【００４５】
例示的な抗ＣＤ４８抗体は、配列番号１に記載される重鎖ＣＤＲと、配列番号２に記載される軽鎖ＣＤＲとを含み、加えて、配列番号１に少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、または９５％同一性を有する成熟重鎖可変領域、及び配列番号２に少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、または９５％同一性を有する成熟軽鎖可変領域を有するヒト化抗体である。ＣＤＲは、Ｋａｂａｔに定義される通りである。
【００４６】
マウスＭＥＭ１０２抗体のヒト化形態は、３つの例示されたヒト化重鎖成熟可変領域（ＨＡ−ＨＣ）と、３つの例示されたヒト化軽鎖成熟可変領域（ＬＡ−ＬＣ）とを含む。これらの鎖の順列は、ＨＡＬＡ、ＨＡＬＢ、ＨＡＬＣ、ＨＢＬＡ、ＨＢＬＢ、ＨＢＬＣ、ＨＣＬＡ、ＨＣＬＢ、及びＨＣＬＣを含む。これらの順列のうち、ＨＡＬＡが好ましい。ＨＡＬＡは、配列番号１に記載される重鎖と、配列番号２に記載される軽鎖とを含む。しかしながら、ＨＡＬＡの代わりに、ＨＡＬＢ、ＨＡＬＣ、ＨＢＬＡ、ＨＢＬＢ、ＨＢＬＣ、ＨＣＬＡ、ＨＣＬＢ、及びＨＣＬＣのうちのいずれか１つを使用することができる。
【００４７】
いくつかの態様では、ヒトＣＤ４８に対するヒト化ＭＥＭ１０２抗体の見かけ解離定数（ｋｄ）は、好ましくは、０．１ｎＭ〜１０ｎＭの範囲内、更により好ましくは０．１ｎＭ〜５ｎＭの範囲内、更に好ましくは１ｎＭ〜３ｎＭまたは２ｎＭ〜約３ｎＭの範囲内である。いくつかの態様では、本発明の抗体は、ヒトＣＤ４８に対するマウスＭＥＭ１０２抗体の見かけ解離定数の０．１〜２．０倍、または更には０．５〜４倍の範囲内の見かけ解離定数を有する。いくつかの態様では、ヒトＣＤ４８に対する本抗体の見かけ解離定数（ｋｄ）は、５．０である。
【００４８】
定常領域の選択
ヒト化ＭＥＭ１０２抗体の重鎖及び軽鎖可変領域は、ヒト定常領域の少なくとも一部に連結され得る。定常領域の選択は、一部、抗体依存性細胞媒介細胞傷害性、抗体依存性細胞食作用、及び／または補体依存性細胞傷害性が所望されるかどうかに依存し得る。例えば、ヒトアイソタイプＩｇＧ１及びＩｇＧ３は強い補体依存性細胞傷害性を有し、ヒトアイソタイプＩｇＧ２は弱い補体依存性細胞傷害性を有し、ヒトＩｇＧ４は補体依存性細胞傷害性を欠く。ヒトＩｇＧ１及びＩｇＧ３は、ヒトＩｇＧ２及びＩｇＧ４よりも強い細胞媒介エフェクター機能も誘導する。軽鎖定常領域は、ラムダまたはカッパであり得る。抗体は、２つの軽鎖及び２つの重鎖を含有する四量体として、別個の重鎖、軽鎖として、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、及びＦｖとして、または重鎖及び軽鎖添字ドメインがスペーサーを通して連結される単鎖抗体として発現され得る。
【００４９】
ヒト定常領域は、異なる個体間でアロタイプ多様性及びイソアロタイプ多様性を示す、つまり、定常領域は１つ以上の多型位置で異なる個体において異なり得る。イソアロタイプは、イソアロタイプを認識する血清が１つ以上の他のアイソタイプの非多型領域に結合するという点でアロタイプとは異なる。
【００５０】
重鎖のＣ末端リジンなどの軽鎖及び／もしくは重鎖のアミノまたはカルボキシ末端の１個またはいくつかのアミノ酸は、ある比率で、もしくは分子の全てを欠損するか、または誘導体化され得る。置換は、補体媒介細胞傷害性もしくはＡＤＣＣなどのエフェクター機能を低減または増加させるために（例えば、Ｗｉｎｔｅｒら、米国特許第５，６２４，８２１号；Ｔｓｏら、米国特許第５，８３４，５９７号；及びＬａｚａｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  １０３：４００５，２００６を参照されたい）、あるいはヒトにおける半減期を延長するために（例えば、Ｈｉｎｔｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７９：６２１３，２００４を参照されたい）定常領域において行われ得る。
【００５１】
定常領域は、薬物−リンカーの部位特異的複合体化を可能にするように修飾され得る。かかる技法は、天然に生じるまたは改変システイン残基、ジスルフィド架橋、ポリ−ヒスチジン配列、糖鎖改変タグ、及びトランスグルタミナーゼ認識配列の使用を含む。細菌性トランスグルタミナーゼを使用する部位特異的複合体化の例示的な置換は、Ｎ２９７ＳまたはＮ２９７Ｑである。改変システミンを使用する部位特異的複合体化の例示的な置換は、Ｓ２３９Ｃである。抗体断片も薬物−リンカーの部位特異的複合体化のために修飾されてもよく、例えば、Ｋｉｍ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｌ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｈｅｒ  ２００８；７（８）を参照されたい。
【００５２】
組換え抗体の発現
ヒト化またはキメラＭＥＭ１０２抗体は、組換え発現により産生され得る。組換えポリヌクレオチド構築物は典型的には、自然に会合した、または異種プロモーター領域を含む、抗体鎖のコード配列に動作可能に連結された発現制御配列を含む。好ましくは、発現制御配列は、真核宿主細胞を形質転換またはトランスフェクトすることが可能なベクターにおける真核プロモーター系である。ベクターが適切な宿主内に組み込まれたら、宿主は高レベルのヌクレオチド配列の発現、ならびに交差反応抗体の回収及び精製に適した条件下で維持される。
【００５３】
哺乳類細胞は、免疫グロブリンまたはその断片をコードするヌクレオチドセグメントを発現するための好ましい宿主である。Ｗｉｎｎａｃｋｅｒ，Ｆｒｏｍ  Ｇｅｎｅｓ  ｔｏ  Ｃｌｏｎｅｓ，（ＶＣＨ  Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ，ＮＹ，１９８７）を参照されたい。無傷異種タンパク質をスクリーニングすることが可能ないくつかの好適な宿主細胞系が当該技術分野において開発されており、ＣＨＯ細胞系（例えば、ＤＧ４４）、様々なＣＯＳ細胞系、ＨｅＬａ細胞、ＨＥＫ２９３細胞、Ｌ細胞、及び非抗体産生骨髄腫（Ｓｐ２／０及びＮＳ０を含む）を含む。好ましくは、細胞は非ヒトである。これらの細胞の発現ベクターは、複製起点、プロモーター、エンハンサー（Ｑｕｅｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｒｅｖ．８９：４９（１９８６））などの発現制御配列、及びリボソーム結合部位、ＲＮＡスプライス部位、ポリアデニル化部位などの必要なプロセシング情報部位、ならびに転写終結配列を含み得る。好ましい発現制御配列は、内因性遺伝子、サイトメガロウイルス、ＳＶ４０、アデノウイルス、ウシパピローマウイルスなどに由来するプロモーターである。Ｃｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４８：１１４９（１９９２）を参照されたい。
【００５４】
発現されたら、抗体は、ＨＰＬＣ精製、カラムクロマトグラフィー、ゲル電気泳動などを含む、当該技術分野の標準的な手順に従い精製され得る（一般的に、Ｓｃｏｐｅｓ，Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ（Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ，ＮＹ，１９８２）を参照されたい）。
【００５５】
核酸
本発明は、本明細書に記載されるヒト化重鎖及び軽鎖のうちのいずれかをコードする核酸を更に提供する。典型的には、核酸は、成熟重鎖及び軽鎖可変領域に融合した単一ペプチドもコードする。核酸上のコード配列は、プロモーター、エンハンサー、リボソーム結合部位、転写終結シグナルなど、コード配列の発現を確実にするために、調節配列と動作可能な連結にあってもよい。重鎖及び軽鎖をコードする核酸は単離された形態で生じるか、または１つ以上のベクターにクローニングされ得る。核酸は、例えば、固体状態の合成または重複オリゴヌクレオチドのＰＣＲにより合成され得る。重鎖及び軽鎖をコードする核酸は、例えば発現ベクター内で１つの隣接核酸として結合され得るか、または例えば、各々がそれ自体の発現ベクター内にクローニングされる、別個であり得る。
【００５６】
一実施形態では、本開示は、ＨＡ、ＨＢ、またはＨＣに記載されるアミノ酸配列を含む抗体重鎖可変領域をコードする単離されたポリヌクレオチドを提供する。例えば、単離されたポリヌクレオチドは、配列番号１のアミノ酸配列を含む抗体重鎖可変領域をコードし得る。この単離されたポリヌクレオチドは、ヒトＩｇＧ重鎖定常領域を更にコードし得る。ＩｇＧ定常領域のアイソタイプは、例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４である。一実施形態では、ＩｇＧ定常領域のアイソタイプは、ＩｇＧ１である。別の実施形態では、コードされたＩｇＧ１定常領域は、Ｋａｂａｔシステムに記載されるＥＵインデックスに従い、残基２３９、すなわち、Ｓ２３９Ｃに置換を含むアミノ酸配列を有する。本開示は、ＨＡ、ＨＢ、またはＨＣに記載されるアミノ酸配列（例えば、配列番号１またはその変異型）を含む抗体重鎖可変領域をコードする単離されたポリヌクレオチドを含む発現ベクター、及び更にその発現ベクターを含む宿主細胞も提供する。いくつかの実施形態では、宿主細胞は、哺乳類宿主細胞、例えば、ＣＨＯ細胞である。
【００５７】
別の実施形態では、本開示は、ＬＡ、ＬＢ、またはＬＣに記載されるアミノ酸配列を含む抗体軽鎖可変領域をコードする単離されたポリヌクレオチドを提供する。例えば、単離されたポリヌクレオチドは、配列番号２のアミノ酸配列を含む抗体軽鎖可変領域をコードする。この単離されたポリヌクレオチドは、ヒトＩｇＧ軽鎖定常領域を更にコードし得る。ＩｇＧ軽鎖定常領域のアイソタイプは、例えば、カッパ定常領域である。本開示は、ＬＡ、ＬＢ、またはＬＣに記載されるアミノ酸配列（例えば、配列番号２またはその変異型）を含む抗体軽鎖可変領域をコードする単離されたポリヌクレオチドを含む発現ベクター、及び更にその発現ベクターを含む宿主細胞も提供する。いくつかの実施形態では、宿主細胞は、哺乳類宿主細胞、例えば、ＣＨＯ細胞である。
【００５８】
別の実施形態では、本開示は、配列番号１のアミノ酸配列を含む抗体重鎖可変領域と、配列番号２のアミノ酸配列を含む抗体軽鎖可変領域とをコードする単離されたポリヌクレオチドまたはポリヌクレオチドを提供し、重鎖可変ドメイン及び軽鎖可変ドメインは、ヒトＣＤ４８に特異的に結合する抗体または抗原結合断片を形成する。本開示は、配列番号１のアミノ酸配列を含む抗体重鎖可変領域、及び配列番号２のアミノ酸配列を含む抗体軽鎖可変領域をコードする単離されたポリヌクレオチドまたはポリヌクレオチドを含む、発現ベクターも提供する。発現ベクターまたはベクターを含む宿主細胞も提供される。宿主細胞は、好ましくは、哺乳類細胞、例えば、ＣＨＯ細胞である。
【００５９】
別の実施形態では、本開示は、配列番号１のアミノ酸配列を含む抗体重鎖可変領域をコードするポリヌクレオチドと、配列番号２のアミノ酸配列を含む抗体軽鎖可変領域とをコードするポリヌクレオチドを含む第１及び第２のベクターを提供し、重鎖可変ドメイン及び軽鎖可変ドメインは、ヒトＣＤ４８に特異的に結合する抗体または抗原結合断片を形成する。ベクターを含む宿主細胞、好ましくは、ＣＨＯ細胞などの哺乳類宿主細胞が提供される。
【００６０】
抗体−薬物複合体
抗ＣＤ４８抗体は、治療薬、診断薬、または安定剤に複合体化されて、抗体複合体を形成し得る。治療薬に複合体化された抗ＣＤ４８抗体は、本明細書において、抗体−薬物複合体（ＡＤＣ）と称される。例示的な治療薬は、細胞増殖抑制または細胞傷害作用を有し、細胞傷害性薬または細胞増殖抑制薬とも称され得る。例示的な細胞傷害性薬としては、例えば、アウリスタチン、カンプトテシン、カリチアマイシン、デュオカルマイシン、エトポシド、マイタンシノイド（例えば、ＤＭ１、ＤＭ２、ＤＭ３、ＤＭ４）、タキサン、ベンゾジアゼピン（例えば、ピロロ［１，４］ベンゾジアゼピン二量体、インドリノベンゾジアゼピン二量体、及びオキサゾリジノベンゾジアゼピン二量体を含む、ピロロ［１，４］ベンゾジアゼピン、インドリノベンゾジアゼピン、及びオキサゾリジノベンゾジアゼピン）、及びビンカアルカロイドが挙げられる。
【００６１】
治療薬をタンパク質、特に抗体と複合体化するための技法は周知である。（例えば、Ａｌｌｅｙ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｏｐｉｎｉｏｎ  ｉｎ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  ２０１０  １４：１−９、Ｓｅｎｔｅｒ，Ｃａｎｃｅｒ  Ｊ．，２００８，１４（３）：１５４−１６９を参照されたい。）典型的には、治療薬は、リンカー単位を介して抗体に複合体化される。リンカー単位は、切断可能または切断不可能であり得る。例えば、治療薬は、複合体が、ＣＤ４８発現癌細胞によって内在化されるときに抗体から切断されるように（例えば、エンドソーム、リソソーム環境において、またはカベオラ（ｃａｖｅｏｌｅａｒ）環境において）、ＣＤ４８発現癌細胞の細胞内環境における切断に感受性であるが、細胞外環境に実質的に感受性ではない切断可能なリンカーを有する抗体に結合され得る。別の例では、治療薬は、切断不可能なリンカーを介して抗体と複合体化され得、薬物放出はＣＤ４８発現癌細胞による内在化後の完全な抗体分解による。
【００６２】
典型的には、ＡＤＣは、細胞傷害性薬または細胞増殖抑制薬と抗ＣＤ４８抗体との間にリンカー領域を含む。上記のように、典型的には、リンカーは、リンカーの切断が細胞内環境（例えば、リソソームまたはエンドソームまたはカベオラ（ｃａｖｅｏｌｅａ）内）において抗体から治療薬を放出するように、細胞内条件下で切断可能であり得る。リンカーは、例えば、リソソームまたはエンドソームプロテアーゼを含む、細胞内ペプチダーゼまたはプロテアーゼ酵素により切断されるペプチジルリンカーであり得る。切断剤は、カテプシンＢ及びＤ、ならびにプラスミンを含み得る（例えば、Ｄｕｂｏｗｃｈｉｋ  ａｎｄ  Ｗａｌｋｅｒ，Ｐｈａｒｍ．Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ  ８３：６７−１２３，１９９９を参照されたい）。最も典型的なのは、ＣＤ４８発現細胞に存在する酵素により切断可能であるペプチジルリンカーである。例えば、癌性組織において高度に発現されるチオール依存性プロテアーゼカテプシンＢにより切断可能であるペプチジルリンカー（例えば、Ｐｈｅ−ＬｅｕまたはＶａｌ−Ｃｉｔペプチドを含むリンカー）を使用することができる。リンカーは、細胞内グリコシダーゼにより切断される糖リンカー（例えば、グルクロニダーゼにより切断可能なグルクロニドリンカー）を含む炭水化物リンカーでもあり得る。
【００６３】
リンカーは、治療薬に直接結合され、抗体のタンパク質分解により解放されるマレイミド−アルキレンまたはマレイミド−アリールリンカーなどの切断不可能なリンカーでもあり得る。
【００６４】
抗ＣＤ４８抗体は、抗体のヘテロ原子を介してリンカーと複合体化され得る。これらのヘテロ原子は、その天然の状態で抗体上に存在し得るか、または抗体に導入され得る。いくつかの態様では、抗ＣＤ４８抗体は、リジン残基の窒素原子を介してリンカーと複合体化される。他の態様では、抗ＣＤ４８抗体は、システイン残基の硫黄原子を介してリンカーと複合体化される。システイン残基は、天然に生じるか、または抗体内に操作されるものであり得る。リジン及びシステイン残基を介して抗体とリンカー及び薬物−リンカーを複合体化する方法は、当該技術分野において既知である。
【００６５】
例示的な抗体−薬物複合体は、アウリスタチン系抗体−薬物複合体を含む（すなわち、薬物構成成分がアウリスタチン薬物である）。アウリスタチンは、チューブリンに結合し、微小管の動態ならびに核及び細胞分裂に干渉することが示されており、抗癌活性を有する。典型的に、アウリスタチン系抗体−薬物複合体は、アウリスタチン薬物と抗ＣＤ４８抗体との間のリンカーを含む。リンカーは、例えば、切断可能なリンカー（例えば、ペプチジルリンカー、炭水化物リンカー）または切断不可能なリンカー（例えば、抗体の分解により解放されるリンカー）であり得る。アウリスタチンは、ＭＭＡＦ及びＭＭＡＥを含む。例示的なアウリスタチンの合成及び構造は、米国公開第７，６５９，２４１号、第７，４９８，２９８号、第２００９−０１１１７５６号、第２００９−００１８０８６号、及び第７，９６８，６８７号に記載されており、それらの各々は、その全体が参照により、及び全ての目的に関して、本明細書に組み込まれる。
【００６６】
他の例示的な抗体−薬物複合体は、メイタンシノイド抗体−薬物複合体（すなわち、薬物構成成分がメイタンシノイド薬物である）、及びベンゾジアゼピン抗体薬物複合体（すなわち、薬物構成成分がベンゾジアゼピン（例えば、ピロロ［１，４］ベンゾジアゼピン二量体（ＰＢＤ二量体）、インドリノベンゾジアゼピン二量体、及びオキサゾリジノベンゾジアゼピン二量体）である）を含む。
【００６７】
本発明に使用するための好ましいＰＢＤ二量体は、式Ｉにより表される。ＰＢＤ二量体の好ましい立体化学は、式Ｉａ：
【化１２】
2018509908.tif 000014
【化１３】
2018509908.tif 000015
に示される通りであるか、または薬学的な塩、溶媒和物、もしくは塩の溶媒和物であり、式中、添字ｎは、１または３である。
【００６８】
式（Ｉ）及び（Ｉａ）の溶媒和物は、典型的には、１つのまたは両方のＰＢＤ単量体のイミン官能基にわたって水またはアルコール溶媒を添加して、カルビノールアミン（複数可）及び／またはカルビノールアミンエーテルを形成することから形成される。例えば、Ｎ１０−Ｃ１１位置で、下式Ｉ’及びＩａ’により表されるように、イミン（Ｎ＝Ｃ）、カルビノールアミン（ＮＨ−ＣＨ（ＯＨ））、またはカルビノールアミンエーテル（ＮＨ−ＣＨ（ＯＭｅ））であり得、
【化１４】
2018509908.tif 000016
【化１５】
2018509908.tif 000017
式中、
（ａ）Ｒ１０がＨであり、Ｒ１１が、ＯＨもしくはＯＲＡであり、式中、ＲＡが、飽和Ｃ１−４アルキル（好ましくはメチル）であるか、または
（ｂ）Ｒ１０及びＲ１１が、それらが結合される窒素と炭素原子との間に窒素−炭素２重結合を形成するか、または
（ｃ）Ｒ１０の一方がＨであり、Ｒ１１が、ＯＨもしくはＯＲＡであり、式中、ＲＡが、飽和Ｃ１−４アルキル（好ましくはメチル）であり、Ｒ１０の他方及びＲ１１が、それらが結合される窒素と炭素原子との間に窒素−炭素２重結合を形成するかのいずれかである。
【００６９】
式ＩまたはＩａ（またはその薬学的な塩、溶媒和物、塩の溶媒和物）のＰＢＤ二量体は、典型的には、リンカー単位ＬＵを介して抗体に連結される。リンカー単位は、式ＩまたはＩａ（またはその薬学的な塩、溶媒和物、塩の溶媒和物）のＰＢＤ二量体を標的部位（例えば、癌細胞内部）で放出するように作用する。本発明において使用するためのＰＢＤ薬物−リンカー化合物は、式ＩＩにより以下に表され（好ましい立体化学はＩＩａに示される）、式中、ＬＵは、リンカー単位である。リンカー単位は、例えば、切断可能なペプチドリンカー単位（例えば、バリン−アラニンペプチドを含むリンカー）または切断可能なジスルフィドリンカー単位
【化１６】
2018509908.tif 000018
【化１７】
2018509908.tif 000019
であるか、または薬学的な塩、溶媒和物、もしくは塩の溶媒和物であり得、式中、添字ｎは、１または３である。
【００７０】
本発明に使用するための好ましいＰＢＤ薬物−リンカー化合物は、下式ＩＩＩ：
【化１８】
2018509908.tif 000020
により表されるか、または薬学的な塩、溶媒和物、もしくは塩の溶媒和物であり得、式中、添字ｎは、１または３であり、添字ｍは、２〜５の整数である。
【００７１】
薬物−リンカーのＰＢＤ薬物構成成分の好ましい立体化学は、下式ＩＩＩａに示される通りである。
【化１９】
2018509908.tif 000021
【００７２】
ＰＢＤ薬物及びリンカーの構成成分の好ましい立体化学は、下式ＩＩＩｂに示される通りである。
【化２０】
2018509908.tif 000022
【００７３】
ＰＢＤ薬物−リンカーは、抗ＣＤ４８抗体と複合体化されて、ＣＤ４８標的抗体−薬物複合体を産生する。例えば、本抗体は、式ＩＩまたは式ＩＩＩの薬物−リンカーと複合体化され得る。例示的なＣＤ４８標的抗体−薬物複合体は、以下に、式ＩＶ、ＩＶａ、及びＩＶｂ：
【化２１】
2018509908.tif 000023
【化２２】
2018509908.tif 000024
【化２３】
2018509908.tif 000025
により示されるか、または薬学的な塩、溶媒和物、もしくは塩の溶媒和物であり得、式中、添字ｎは、１または３であり、添字ｍは、２〜５の整数であり、添字ｐは、１〜４である。
【００７４】
例示的な薬物−リンカーは、ＭＭＡＥ薬物−リンカーを含む。本発明者は、側鎖としてポリエチレングリコールポリマーを切断可能なβ−グルクロニドＭＭＡＥ薬物−リンカーに組み込むことにより、非ＰＥＧ化対照と比較したとき、異種移植片モデルにおいて、減少した血漿クリアランス及び増加した抗腫瘍活性を有する抗体薬物複合体が得られることを発見した。したがって、本発明の抗体を結合するための特に有益な薬物−リンカーは、以下：
【化２４】
2018509908.tif 000026
の通りであるか、またはその薬学的に許容される塩である。
【００７５】
かかる薬物−リンカーのための好ましい立体化学は、以下：
【化２５】
2018509908.tif 000027
またはその薬学的に許容される塩に示され、式中、式Ｖ及びＶａに関して、Ｚは、抗体上の官能基と反応して、それと共有結合を形成することが可能な反応性部位を有する有機部分を表し、ｎは、８〜３６の範囲、最も好ましくは８〜１４の範囲であり（最も好ましくは１２）、Ｒ２１は、ポリエチレングリコール部分のキャッピング単位、好ましくは−ＣＨ３または−ＣＨ２ＣＨ２ＣＯ２Ｈである。
【００７６】
好ましいＺ部分は、マレイミド含有部分である。特に好ましいＺ部分は、以下の薬物−リンカー：
【化２６】
2018509908.tif 000028
【化２７】
2018509908.tif 000029
またはその薬学的に許容される塩に示される。
【００７７】
かかる薬物−リンカーのための好ましい立体化学は、以下：
【化２８】
2018509908.tif 000030
【化２９】
2018509908.tif 000031
またはその薬学的に許容される塩に示され、式中、式ＶＩ、ＶＩａ、ＶＩＩ、及びＶＩＩａに関して、ｎは、８〜３６の範囲、最も好ましくは８〜１４の範囲であり（最も好ましくは１２）、ＲＰＲは、水素または保護基、例えば、酸不安定性保護基、例えば、ＢＯＣであり、Ｒ２１は、ポリエチレングリコール部分のキャッピング単位、好ましくは−ＣＨ３または−ＣＨ２ＣＨ２ＣＯ２Ｈである。
【００７８】
上述のように、ＲＰＲは、水素または保護基であり得る。本明細書で使用される場合、保護基は、一時的または永久的のいずれかで、多官能化合物の反応性部位を選択的に遮断する基を指す。保護基は、分子の他の箇所で所望の化学変換をもたらすのに必要な反応条件下で、及び所望される場合、新しく形成された分子の精製中に望ましくない副反応または保護基の早期喪失を阻止または回避することが可能であり、その新しく形成された分子の構造または立体化学の一体性に悪影響を及ぼさない条件下で除去され得る場合、好適な保護基である。好適なアミン保護基は、Ｉｓｉｄｒｏ−Ｌｌｏｂｅｌ  ｅｔ  ａｌ．“Ａｍｉｎｏ  ａｃｉｄ−ｐｒｏｔｅｃｔｉｎｇ  ｇｒｏｕｐｓ”Ｃｈｅｍ．Ｒｅｖ．（２００９）１０９：２４５５−２５０４により提供されるものを含む、酸不安定性窒素保護基を含む。典型的には、酸不安定性窒素保護基は、一級または二級アミノ基をその対応するカルバメートに変換し、ｔ−ブチル、アリル、及びベンジルカルバメートを含む。
【００７９】
上述のように、Ｒ２１は、ポリエチレングリコール部分のキャッピング単位である。当業者に理解されるように、ポリエチレングリコール単位は、多種多様の有機部分、典型的には比較的非反応性であるもので末端キャップされ得る。アルキル及び置換アルキル基が好ましく、例えば、−Ｃ１−１０アルキル、−Ｃ２−１０アルキル−ＣＯ２Ｈ、−Ｃ２−１０アルキル−ＯＨ、−Ｃ２−１０アルキル−ＮＨ２、Ｃ２−１０アルキル−ＮＨ（Ｃ１−３アルキル）、またはＣ２−１０アルキル−Ｎ（Ｃ１−３アルキル）２を含む。
【００８０】
一般に、各抗体に１〜１６の薬物−リンカーが結合される。
【００８１】
薬物負荷−「ｐ」
ＣＤ４８標的抗体−薬物複合体を参照すると、添字ｐは薬物負荷を表し、文脈により、個々の抗体分子に結合された薬物−リンカー分子の分子数を表し得るため整数値であるか、または平均薬物負荷を表し得るため、整数値または非整数値であってもよいが、典型的には非整数値である。平均薬物負荷は、集団における抗体当たりの薬物−リンカー分子の平均数を表す。必ずではないが、多くの場合、抗体、例えばモノクローナル抗体を指すとき、抗体分子の集団を指す。抗体−薬物複合体分子の集団を含む組成物において、平均薬物負荷は、標的細胞に送達され得る薬物の量を決定するため、重要な品質特性である。組成物における非複合体化抗体分子のパーセントは、平均薬物負荷値に含まれる。
【００８２】
本発明の好ましい態様では、抗体−薬物複合体化合物の集団を含む組成物を指すとき、平均薬物負荷は、１〜約１６、好ましくは約２〜約１４、より好ましくは約２〜約１０である。本明細書に例示されるものなど、ＰＢＤ抗体薬物複合体に関して、特に好ましい平均薬物負荷は、約２である。いくつかの態様では、抗体−薬物複合体化合物の集団における個々の抗体分子の実際の薬物負荷は、１〜４、１〜３、または１〜２であり、主要薬物負荷は２である。好ましい態様では、２の平均薬物負荷は、部位特異的複合体化技法（例えば、ＥＵインデックス番付システムに従う位置２３９を含む抗体に導入された改変システミン）を介して得られる。
【００８３】
本明細書に例示されるものなど、ＭＭＡＥ  ＰＥＧ化ＡＤＣに関して、特に好ましい平均薬物負荷は、約８である。例示的な実施形態では、薬物−リンカーは、還元鎖間ジスルフィドのシステミン残基と複合体化される。いくつかの態様では、抗体−薬物複合体化合物の集団における個々の抗体分子の実際の薬物負荷は、１〜１０（または６〜１０、または６〜８）であり、主要薬物負荷は８である。例えば、鎖間ジスルフィドに加えて、薬物−リンカーが導入されたシステイン残基（ＥＵインデックスに従う位置２３９に導入されたシステイン残基など）と複合体化される場合、より高い薬物負荷を得ることができる。
【００８４】
例示的なＡＤＣは、以下：
【化３０】
2018509908.tif 000032
【化３１】
2018509908.tif 000033
【化３２】
2018509908.tif 000034
【化３３】
2018509908.tif 000035
【化３４】
2018509908.tif 000036
【化３５】
2018509908.tif 000037
またはその薬学的に許容される塩を含み、式中、ｎは、８〜３６の範囲、最も好ましくは８〜１４の範囲（最も好ましくは１２）であり、ＲＰＲは、水素または保護基、例えば、酸不安定性保護基、例えば、ＢＯＣであり、Ｒ２１は、ポリエチレングリコール部分のキャッピング単位、好ましくは−ＣＨ３または−ＣＨ２ＣＨ２ＣＯ２Ｈであり、Ａｂは、抗ＣＤ４８抗体を表し、ｐは、個々の抗体分子を指す場合、１〜１６、好ましくは１〜１４、６〜１２、６〜１０、または８〜１０の範囲の整数を表し、抗体分子の集団を指す場合、約４または約６〜約１４、好ましくは約８の平均薬物負荷を表す。
【００８５】
上述のように、薬物リンカーのＰＥＧ（ポリエチレングリコール）部分は、８〜３６の範囲であり得るが、１２エチレンオキシド単位のＰＥＧが特に好ましいことが分かった。より長いＰＥＧ鎖は、より緩徐なクリアランスをもたらし得る一方で、より短いＰＥＧ鎖は縮小した活性をもたらし得ることが分かった。したがって、上記の実施形態の全てにおいて、添字ｎは、好ましくは８〜１４、８〜１２、１０〜１２、または１０〜１４であり、最も好ましくは１２である。
【００８６】
多分散ＰＥＧＳ、単分散ＰＥＧＳ、及び個別のＰＥＧは、本発明のＰＥＧ化抗体薬物複合体を作製するために使用され得る。多分散ＰＥＧは、不均質なサイズ及び分子量の混合物である一方で、単分散ＰＥＧは、典型的には、不均質な混合物から精製され、したがって、単一の鎖長及び分子量を提供する。好ましいＰＥＧ単位は、段階的に合成され、重合プロセスを介さない化合物である、個別のＰＥＧである。個別のＰＥＧは、規定の及び特定の鎖長を有する単一分子を提供する。添字「ｐ」と同様に、抗体−薬物複合体の集団を指す場合、添字「ｎ」の値は平均数であってもよく、整数または非整数であってもよい。
【００８７】
好ましい実施形態では、抗体の薬物−リンカーへの共有結合は、薬物リンカーのマレイミド官能基と相互作用して、チオ置換スクシンイミドを形成する抗体のスルフヒドリル官能基を通して達成される。スルフヒドリル官能基は、リガンドの天然状態、例えば、天然に生じる残基（鎖間ジスルフィド残基）におけるリガンド単位上に存在し得るか、または化学修飾を介して、もしくは生物学的改変により、もしくはその２つの組み合わせでリガンドに導入され得る。抗体置換スクシンイミドが加水分解形態（複数可）で存在し得ることが理解される。例えば、好ましい実施形態では、ＡＤＣは、抗体に結合されたとき、
【化３６】
2018509908.tif 000038
の構造により表されるスクシンイミド部分で構成されるか、または抗体に結合されたとき、
【化３７】
2018509908.tif 000039
の構造により表されるその対応する酸−アミド部分で構成される。
波線は、薬物−リンカーの残部への連結を示す。
【００８８】
治療の適用
本明細書に記載されるＣＤ４８標的抗体−薬物複合体は、ＣＤ４８発現癌などのＣＤ４８発現障害を治療するために使用され得る。典型的には、かかる癌は、タンパク質（例えば、免疫アッセイにより）またはＲＮＡレベルで測定された検出可能レベルのＣＤ４８を示す。いくつかのかかる癌は、同じ種類、好ましくは同じ患者からの非癌性組織に対して上昇したレベルのＣＤ４８を示す。任意選択で、癌におけるＣＤ４８のレベルは、治療を行う前に測定される。
【００８９】
ＣＤ４８発現に関連する癌の例としては、多発性骨髄腫、ならびにホジキン病、非ホジキンリンパ腫、濾胞性リンパ腫、慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）、マントル細胞リンパ腫、ワルデンストーム高ガンマグロブリン血症、原発性／全身性アミロイドーシス患者腫瘍細胞、ＭＧＵＳ、及びアミロイドーシスを含む、他のＢ細胞悪性腫瘍が挙げられる。いくつかの急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）細胞系（例えば、ＡＭＬ患者の白血病性芽球細胞）は、ＣＤ４８を発現することが観察され、よって、ＣＤ４８を発現するＡＭＬ癌を有する患者は、開示のＣＤ４８  ＡＤＣを使用して治療され得る。
【００９０】
本発明の方法は、患者に本発明の抗体−薬物複合体を投与することを含む、ＣＤ４８を発現する癌を有する患者を治療することを含む。癌は、例えば、多発性骨髄腫を含む、任意のＣＤ４８発現癌であり得る。
【００９１】
ＣＤ４８指向抗体−薬物複合体は、有効なレジメン、つまり、癌の少なくとも１つの徴候または症状の発症を遅延する、その重症度を低減する、その更なる悪化を阻害する、及び／またはそれを寛解する投薬量、投与経路、及び投与頻度で投与される。
【００９２】
ＣＤ４８指向ペグ化ＭＭＡＥ複合体の例示的な投薬量は、一般的に、約１．０μｇ／ｋｇ〜１０．０ｍｇ／ｋｇ、または約０．１ｍｇ／ｋｇ〜５．０ｍｇ／ｋｇ、または約０．５ｍｇ／ｋｇ〜１．０、２．０、もしくは４．０μｇ／ｋｇであるが、代替の投薬量が想定される。好ましい用量範囲は、約０．３ｍｇ／ｋｇ〜約２．０ｍｇ／ｋｇである。
【００９３】
投与は、様々な投与経路によるものであってよい。ある特定の実施形態では、複合体は、静脈内、筋肉内、または皮下など、非経口投与される。癌の治療のためのＡＤＣの投与に関して、静脈内または皮下投与による全身循環への送達であり得る。特定の実施形態では、投与は、静脈内送達を介したものである。静脈内投与は、例えば、３０〜９０分などの期間にわたる注入により、または単一ボーラス注射によるものであり得る。いくつかの態様では、投与は、末梢挿入中心カテーテルにおける緩徐なＩＶプッシュ（すなわち、３０〜６０秒にわたって）を介したものである。
【００９４】
投与頻度は、患者がヒトまたは動物にかかわらず、投与手段、標的部位、患者の生理学的状態、及び投与される他の薬剤を含む、多くの異なる要因に依存する。頻度は、患者の状態または治療される癌の進行の変化に応じて、毎日、毎週、毎月、３ヶ月ごと、または不規則な間隔であり得る。静脈内投与の例示的な頻度は、継続的な治療過程にわたって週に２回〜３ヶ月ごとであるが、より頻繁な、またはより少ない頻度の投薬も可能である。静脈内投与の他の例示的な頻度は、継続的な治療過程にわたって３週間ごと、または毎週もしくは毎月の間であるが、より頻繁な、またはより少ない頻度の投薬も可能である。別の例示的な頻度は、６週間ごとの投与である。皮下投与に関して、例示的な投薬頻度は、毎日〜毎月であるが、より頻繁な、またはより少ない頻度の投薬も可能である。
【００９５】
非経口投与用の薬学的組成物は、好ましくは、減菌かつ実質的に等張性であり、ＧＭＰ状態下で製造される。薬学的組成物は、単位剤形で（すなわち、単一投与用の投薬量）提供され得る。薬学的組成物は、１つ以上の生理学的に許容される担体、希釈剤、賦形剤、または助剤を使用して製剤化され得る。製剤は、選択される投与経路による。注射に関して、複合体は、水性溶液、好ましくはハンクス液、リンゲル液、もしくは生理学的生理食塩水などの生理学的に適合性の緩衝液、または酢酸緩衝液（注射部位の不快感を低減するため）に製剤化され得る。溶液は、懸濁剤、安定剤、及び／または分散剤などの製剤用作用物質を含有し得る。あるいは、本抗体は、使用前に、好適なビヒクル、例えば、減菌発熱物質不含水で構築するために、凍結乾燥形態であり得る。液体製剤中の複合体の濃度は、広く変動し得る。いくつかの態様では、ＡＤＣは、約０．５ｍｇ／ｍｌ〜約３０ｍｇ／ｍｌ、約０．５ｍｇ／ｍｌ〜約１０ｍｇ／ｍｌ、約１ｍｇ／ｍｌ〜約１０ｍｇ／ｍｌ〜約２ｍｇ／ｍｌ〜約１０ｍｇ／ｍｌ、または約２ｍｇ／ｍｌ〜約５ｍｇ／ｍｌの濃度で存在する。
【００９６】
本発明の複合体を用いた治療は、化学療法、放射線、幹細胞治療、外科手術、及び治療される特定の障害の標準治療を含む、治療される障害に対して有効な他の治療と組み合わせることができる。したがって、本発明は、単独療法としての、または例えば、本明細書に記載される疾患及び障害の標準療法もしくは治験薬との併用療法での、かかる疾患及び障害の治療方法を包含する。癌の治療方法は、それを必要とする患者に、追加の抗癌剤または癌を治療するための他の薬剤と組み合わせて、有効量の本発明のＣＤ４８指向抗体−薬物複合体を投与することを含む。
【００９７】
併用療法の例示的な薬剤は、多発性骨髄腫を治療するために使用されるプロテアーゼ阻害剤であるカルフィルゾミブ（例えば、ＫＹＰＲＯＬＩＳ（登録商標））である（Ｓｉｅｇｅｌ  ＤＳ  ｅｔ  ａｌ．Ａ  ｐｈａｓｅ  ２  ｓｔｕｄｙ  ｏｆ  ｓｉｎｇｌｅ−ａｇｅｎｔ  ｃａｒｆｉｌｚｏｍｉｂ  （ＰＸ−１７１−００３−Ａ１）ｉｎ  ｐａｔｉｅｎｔｓ  ｗｉｔｈ  ｒｅｌａｐｓｅｄ  ａｎｄ  ｒｅｆｒａｃｔｏｒｙ  ｍｕｌｔｉｐｌｅ  ｍｙｅｌｏｍａ．Ｂｌｏｏｄ  ２０１２；１２０：２８１７−２８２５を参照されたい）。カルフィルゾミブは、静脈内／ＩＶ注入として投与され得る。ある実施形態では、カルフィルゾミブは、本発明のＣＤ４８指向抗体−薬物複合体との併用療法で投与される。更なる実施形態では、カルフィルゾミブは、本発明のｈＭＥＭ１０２抗体−薬物複合体との併用療法で投与される。更なる実施形態では、カルフィルゾミブは、本発明のｈＭＥＭ１０２−ＭＤｐｒ−ＰＥＧ（１２）−ｇｌｕｃ−ＭＭＡＥ８−負荷との併用療法で投与される。
【００９８】
カルフィルゾミブは、本発明のＣＤ４８指向抗体−薬物複合体及び追加の薬剤との併用療法でも投与され得る。ルフィルゾミブは、多発性骨髄腫を治療するための様々な追加の薬剤と組み合わされてきた。例えば、カルフィルゾミブは、レナリドミド及びデキサメタゾンと組み合わされてきた（Ｓｔｅｗａｒｔ  ＫＡ  ｅｔ  ａｌ．Ｃａｒｆｉｌｚｏｍｉｂ，ｌｅｎａｌｉｄｏｍｉｄｅ，ａｎｄ  ｄｅｘａｍｅｔｈａｓｏｎｅ  ｆｏｒ  ｒｅｌａｐｓｅｄ  ｍｕｌｔｉｐｌｅ  ｍｙｅｌｏｍａ．Ｎ  Ｅｎｇｌ  Ｊ  Ｍｅｄ．２０１５；３７２：１４２−１５２を参照されたい）。ある実施形態では、カルフィルゾミブは、レナリドミド、デキサメタゾン、及び本発明のＣＤ４８指向抗体−薬物複合体との併用療法で投与される。更なる実施形態では、カルフィルゾミブは、レナリドミド、デキサメタゾン、及び本発明のｈＭＥＭ１０２抗体−薬物複合体との併用療法で投与される。更なる実施形態では、カルフィルゾミブは、レナリドミド、デキサメタゾン、及び本発明のｈＭＥＭ１０２−ＭＤｐｒ−ＰＥＧ（１２）−ｇｌｕｃ−ＭＭＡＥ  ８−負荷との併用療法で投与される。
【００９９】
カルフィルゾミブは、デキサメタゾンとも組み合わされてきた（Ｄｉｍｏｐｏｕｌｏｓ  ＭＤ  ｅｔ  ａｌ．Ｃａｒｆｉｌｚｏｍｉｂ  ａｎｄ  ｄｅｘａｍｅｔｈａｓｏｎｅ  ｖｅｒｓｕｓ  ｂｏｒｔｅｚｏｍｉｂ  ａｎｄ  ｄｅｘａｍｅｔｈａｓｏｎｅ  ｆｏｒ  ｐａｔｉｅｎｔｓ  ｗｉｔｈ  ｒｅｌａｐｓｅｄ  ｏｒ  ｒｅｆｒａｃｔｏｒｙ  ｍｕｌｔｉｐｌｅ  ｍｙｅｌｏｍａ  （ＥＮＤＥＡＶＯＲ）：ａ  ｒａｎｄｏｍｉｓｅｄ，ｐｈａｓｅ  ３，ｏｐｅｎ−ｌａｂｅｌ，ｍｕｌｔｉｃｅｎｔｒｅ  ｓｔｕｄｙ．Ｌａｎｃｅｔ  Ｏｎｃｏｌｏｇｙ  ２０１６；１７：２７−３８を参照されたい）。ある実施形態では、カルフィルゾミブは、デキサメタゾン及び本発明のＣＤ４８指向抗体−薬物複合体との併用療法で投与される。更なる実施形態では、カルフィルゾミブは、デキサメタゾン及び本発明のｈＭＥＭ１０２抗体−薬物複合体との併用療法で投与される。更なる実施形態では、カルフィルゾミブは、デキサメタゾン及び本発明のｈＭＥＭ１０２−ＭＤｐｒ−ＰＥＧ（１２）−ｇｌｕｃ−ＭＭＡＥ  ８−負荷との併用療法で投与される。
【０１００】
カルフィルゾミブは、パノビノスタットとも組み合わされてきた（Ｂｅｒｄｅｊａ  ＪＧ  ｅｔ  ａｌ．Ｐｈａｓｅ  Ｉ／ＩＩ  ｓｔｕｄｙ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｐａｎｏｂｉｎｏｓｔａｔ  ａｎｄ  ｃａｒｆｉｌｚｏｍｉｂ  ｉｎ  ｐａｔｉｅｎｔｓ  ｗｉｔｈ  ｒｅｌａｐｓｅｄ／ｒｅｆｒａｃｔｏｒｙ  ｍｕｌｔｉｐｌｅ  ｍｙｅｌｏｍａ．Ｈａｅｍａｔｏｌｏｇｉｃａ  ２０１５；１００：６７０−６７６を参照されたい）。ある実施形態では、カルフィルゾミブは、パノビノスタット及び本発明のＣＤ４８指向抗体−薬物複合体との併用療法で投与される。更なる実施形態では、カルフィルゾミブは、パノビノスタット及び本発明のｈＭＥＭ１０２抗体−薬物複合体との併用療法で投与される。更なる実施形態では、カルフィルゾミブは、パノビノスタット及び本発明のｈＭＥＭ１０２−ＭＤｐｒ−ＰＥＧ（１２）−ｇｌｕｃ−ＭＭＡＥ  ８−負荷との併用療法で投与される。カルフィルゾミブは、ポマリドミド及びデキサメタゾンとも組み合わされてきた（Ｓｈａｈ  Ｊ  ｅｔ  ａｌ．Ｃａｒｆｉｌｚｏｍｉｂ，ｐｏｍａｌｉｄｏｍｉｄｅ，ａｎｄ  ｄｅｘａｍｅｔｈａｓｏｎｅ（ＣＰＤ）ｉｎ  ｐａｔｉｅｎｔｓ  ｗｉｔｈ  ｒｅｌａｐｓｅｄ  ａｎｄ／ｏｒ  ｒｅｆｒａｃｔｏｒｙ  ｍｕｌｔｉｐｌｅ  ｍｙｅｌｏｍａ．Ｂｌｏｏｄ  ２０１５；１２６：２２８４−２２９０を参照されたい）。ある実施形態では、カルフィルゾミブは、ポマリドミド、デキサメタゾン、及び本発明のＣＤ４８指向抗体−薬物複合体との併用療法で投与される。更なる実施形態では、カルフィルゾミブは、ポマリドミド、デキサメタゾン、及び本発明のｈＭＥＭ１０２抗体−薬物複合体との併用療法で投与される。更なる実施形態では、カルフィルゾミブは、ポマリドミド、デキサメタゾン、及び本発明のｈＭＥＭ１０２−ＭＤｐｒ−ＰＥＧ（１２）−ｇｌｕｃ−ＭＭＡＥ  ８−負荷との併用療法で投与される。
【０１０１】
併用療法の別の例示的な薬剤は、ＣＤ３８（多発性骨髄腫細胞上に高度に発現される糖タンパク質）に結合するヒトモノクローナル抗体であるダラツムマブ（例えば、ＤＡＲＺＡＬＥＸ（商標））である。ダラツムマブは、多発性骨髄腫を治療するために静脈内注入により患者に投与される（Ｌｏｋｈｏｒｓｔ  ＨＭ  ｅｔ  ａｌ．Ｔａｒｇｅｔｉｎｇ  ＣＤ３８  ｗｉｔｈ  ｄａｒａｔｕｍｕｍａｂ  ｍｏｎｏｔｈｅｒａｐｙ  ｉｎ  ｍｕｌｔｉｐｌｅ  ｍｙｅｌｏｍａ．Ｎ  Ｅｎｇｌ  Ｊ  Ｍｅｄ  ２０１５；３７３：１２０７−１２１９を参照されたい）。ある実施形態では、ダラツムマブは、本発明のＣＤ４８指向抗体−薬物複合体との併用療法で投与される。更なる実施形態では、ダラツムマブは、本発明のｈＭＥＭ１０２抗体−薬物複合体との併用療法で投与される。更なる実施形態では、ダラツムマブは、本発明のｈＭＥＭ１０２−ＭＤｐｒ−ＰＥＧ（１２）−ｇｌｕｃ−ＭＭＡＥ  ８−負荷との併用療法で投与される。
【０１０２】
ダラツムマブは、本発明のＣＤ４８指向抗体−薬物複合体及び追加の薬剤との併用療法でも投与され得る。ダラツムマブは、多発性骨髄腫を治療するための様々な追加の薬剤と組み合わされてきた。例えば、ダラツムマブは、ボルテゾミブ及びレナリドミドと組み合わされてきた（Ｐｈｉｐｐｓ  Ｃ  ｅｔ  ａｌ．Ｄａｒａｔｕｍｕｍａｂ  ａｎｄ  ｉｔｓ  ｐｏｔｅｎｔｉａｌ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｏｆ  ｍｕｌｔｉｐｌｅ  ｍｙｅｌｏｍａ：  ｏｖｅｒｖｉｅｗ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｐｒｅｃｌｉｎｉｃａｌ  ａｎｄ  ｃｌｉｎｉｃａｌ  ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ．Ｔｈｅｒ  Ａｄｖ  Ｈｅｍａｔｏｌ  ２０１５；６：１２０−１２７を参照されたい）。ある実施形態では、ダラツムマブは、ボルテゾミブ、レナリドミド、及び本発明のＣＤ４８指向抗体−薬物複合体との併用療法で投与される。更なる実施形態では、ダラツムマブは、ボルテゾミブ、レナリドミド、及び本発明のｈＭＥＭ１０２抗体−薬物複合体との併用療法で投与される。更なる実施形態では、ダラツムマブは、ボルテゾミブ、レナリドミド、及び本発明のｈＭＥＭ１０２−ＭＤｐｒ−ＰＥＧ（１２）−ｇｌｕｃ−ＭＭＡＥ  ８−負荷との併用療法で投与される。
【０１０３】
ダラツムマブは、ボルテゾミブ及びデキサメタゾンとも組み合わされてきた（Ｐｈｉｐｐｓ  Ｃらを参照されたい）。ある実施形態では、ダラツムマブは、ボルテゾミブ、デキサメタゾン、及び本発明のＣＤ４８指向抗体−薬物複合体との併用療法で投与される。更なる実施形態では、ダラツムマブは、ボルテゾミブ、デキサメタゾン、及び本発明のｈＭＥＭ１０２抗体−薬物複合体との併用療法で投与される。更なる実施形態では、ダラツムマブは、ボルテゾミブ、デキサメタゾン、及び本発明のｈＭＥＭ１０２−ＭＤｐｒ−ＰＥＧ（１２）−ｇｌｕｃ−ＭＭＡＥ  ８−負荷との併用療法で投与される。
【０１０４】
併用療法の別の例示的な薬剤は、悪性多発性骨髄腫細胞のマーカーであるＣＤ３１９またはシグナル伝達リンパ球活性化分子Ｆ７（ＳＬＡＭＦ７）に結合するモノクローナル抗体である、エロツズマブ（例えば、ＥＭＰＬＩＣＩＴＩ（商標））である。エロツズマブは、多発性骨髄腫を治療するために静脈内注入により患者に投与され得る（Ｚｏｎｄｅｒ  ＪＡ  ｅｔ  ａｌ．Ａ  ｐｈａｓｅ  １，ｍｕｌｔｉｃｅｎｔｅｒ，ｏｐｅｎ−ｌａｂｅｌ，ｄｏｓｅ  ｅｓｃａｌａｔｉｏｎ  ｓｔｕｄｙ  ｏｆ  ｅｌｏｔｕｚｕｍａｂ  ｉｎ  ｐａｔｉｅｎｔｓ  ｗｉｔｈ  ａｄｖａｎｃｅｄ  ｍｕｌｔｉｐｌｅ  ｍｙｅｌｏｍａ．  Ｂｌｏｏｄ  ２０１２；１２０：５５２−５５９）．を参照されたい）。ある実施形態では、エロツズマブは、本発明のＣＤ４８指向抗体−薬物複合体との併用療法で投与される。更なる実施形態では、エロツズマブは、本発明のｈＭＥＭ１０２抗体−薬物複合体との併用療法で投与される。更なる実施形態では、エロツズマブは、本発明のｈＭＥＭ１０２−ＭＤｐｒ−ＰＥＧ（１２）−ｇｌｕｃ−ＭＭＡＥ  ８−負荷との併用療法で投与される。
【０１０５】
エロツズマブは、本発明のＣＤ４８指向抗体−薬物複合体及び追加の薬剤との併用療法でも投与され得る。エロツズマブは、多発性骨髄腫を治療するための様々な追加の薬剤と組み合わされてきた。例えば、エロツズマブは、レナリドミド及びデキサメタゾンと組み合わされてきた（Ｌｏｎｉａｌ  Ｓ  ｅｔ  ａｌ．Ｅｌｏｔｕｚｕｍａｂ  ｔｈｅｒａｐｙ  ｆｏｒ  ｒｅｌａｐｓｅｄ  ｏｒ  ｒｅｆｒａｃｔｏｒｙ  ｍｕｌｔｉｐｌｅ  ｍｙｅｌｏｍａ．Ｎ  Ｅｎｇｌ  Ｊ  Ｍｅｄ  ２０１５；３７３：６２１−６３１；を参照されたい）。ある実施形態では、エロツズマブは、レナリドミド、デキサメタゾン、及び本発明のＣＤ４８指向抗体−薬物複合体との併用療法で投与される。更なる実施形態では、エロツズマブは、レナリドミド、デキサメタゾン、及び本発明のｈＭＥＭ１０２抗体−薬物複合体との併用療法で投与される。更なる実施形態では、エロツズマブは、レナリドミド、デキサメタゾン、及び本発明のｈＭＥＭ１０２−ＭＤｐｒ−ＰＥＧ（１２）−ｇｌｕｃ−ＭＭＡＥ  ８−負荷との併用療法で投与される。
【０１０６】
併用療法の別の例示的な薬剤は、多発性骨髄腫を治療するために患者に与えられる免疫調節薬であるレナリドミド（例えば、ＲＥＶＬＩＭＩＤ（登録商標））である（Ｒｉｃｈａｒｄｓｏｎ  ＰＧ，Ａ  ｒａｎｄｏｍｉｚｅｄ  ｐｈａｓｅ  ２  ｓｔｕｄｙ  ｏｆ  ｌｅｎａｌｉｄｏｍｉｄｅ  ｔｈｅｒａｐｙ  ｆｏｒ  ｐａｔｉｅｎｔｓ  ｗｉｔｈ  ｒｅｌａｐｓｅｄ  ｏｒ  ｒｅｌａｐｓｅｄ  ａｎｄ  ｒｅｆｒａｃｔｏｒｙ  ｍｕｌｔｉｐｌｅ  ｍｙｅｌｏｍａ．Ｂｌｏｏｄ  ２００６，１０８：３４５８−３４６４を参照されたい）。レナリドミドは、経口投与用にカプセル、ピル、または錠剤としてパッケージ化され得る。ある実施形態では、レナリドミドは、本発明のＣＤ４８指向抗体−薬物複合体との併用療法で投与される。更なる実施形態では、レナリドミドは、本発明のｈＭＥＭ１０２抗体−薬物複合体との併用療法で投与される。更なる実施形態では、レナリドミドは、本発明のｈＭＥＭ１０２−ＭＤｐｒ−ＰＥＧ（１２）−ｇｌｕｃ−ＭＭＡＥ  ８−負荷との併用療法で投与される。
【０１０７】
レナリドミドは、本発明のＣＤ４８指向抗体−薬物複合体及び追加の薬剤との併用療法でも投与され得る。レナリドミドは、多発性骨髄腫を治療する様々な追加の薬剤と組み合わされてきた。例えば、レナリドミドは、ボルテゾミブ及びデキサメタゾンと組み合わされてきた（Ｒｉｃｈａｒｄｓｏｎ  ＰＧ  ｅｔ  ａｌ．Ｌｅｎａｌｉｄｏｍｉｄｅ，ｂｏｒｔｅｚｏｍｉｂ，ａｎｄ  ｄｅｘａｍｅｔｈａｓｏｎｅ  ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ  ｔｈｅｒａｐｙ  ｉｎ  ｐａｔｉｅｎｔｓ  ｗｉｔｈ  ｎｅｗｌｙ  ｄｉａｇｎｏｓｅｄ  ｍｕｌｔｉｐｌｅ  ｍｙｅｌｏｍａ．Ｂｌｏｏｄ  ２０１０；１１６：６７９−６８６を参照されたい）。ある実施形態では、レナリドミドは、ボルテゾミブ、デキサメタゾン、及び本発明のＣＤ４８指向抗体−薬物複合体との併用療法で投与される。更なる実施形態では、レナリドミドは、ボルテゾミブ、デキサメタゾン、及び本発明のｈＭＥＭ１０２抗体−薬物複合体との併用療法で投与される。更なる実施形態では、レナリドミドは、ボルテゾミブ、デキサメタゾン、及び本発明のｈＭＥＭ１０２−ＭＤｐｒ−ＰＥＧ（１２）−ｇｌｕｃ−ＭＭＡＥ  ８−負荷との併用療法で投与される。
【０１０８】
レナリドミドは、カルフィルゾミブ及びデキサメタゾンとも組み合わされてきた（Ｓｔｅｗａｒｔ  ＫＡらを参照されたい）。ある実施形態では、レナリドミドは、カルフィルゾミブ、デキサメタゾン、及び本発明のＣＤ４８指向抗体−薬物複合体との併用療法で投与される。更なる実施形態では、レナリドミドは、カルフィルゾミブ、デキサメタゾン、及び本発明のｈＭＥＭ１０２抗体−薬物複合体との併用療法で投与される。更なる実施形態では、レナリドミドは、カルフィルゾミブ、デキサメタゾン、及び本発明のｈＭＥＭ１０２−ＭＤｐｒ−ＰＥＧ（１２）−ｇｌｕｃ−ＭＭＡＥ  ８−負荷との併用療法で投与される。
【０１０９】
レナリドミドは、ダラツムマブ及びボルテゾミブとも組み合わされてきた（Ｐｈｉｐｐｓ  Ｃらを参照されたい）。ある実施形態では、レナリドミドは、ダラツムマブ、ボルテゾミブ、及び本発明のＣＤ４８指向抗体−薬物複合体との併用療法で投与される。更なる実施形態では、レナリドミドは、ダラツムマブ、ボルテゾミブ、及び本発明のｈＭＥＭ１０２抗体−薬物複合体との併用療法で投与される。更なる実施形態では、レナリドミドは、ダラツムマブ、ボルテゾミブ、及び本発明のｈＭＥＭ１０２−ＭＤｐｒ−ＰＥＧ（１２）−ｇｌｕｃ−ＭＭＡＥ  ８−負荷との併用療法で投与される。
【０１１０】
レナリドミドは、エロツズマブ及びデキサメタゾンとも組み合わされてきた（Ｌｏｎｉａｌ  Ｓ  ｅｔ  ａｌ．Ｅｌｏｔｕｚｕｍａｂ  ｔｈｅｒａｐｙ  ｆｏｒ  ｒｅｌａｐｓｅｄ  ｏｒ  ｒｅｆｒａｃｔｏｒｙ  ｍｕｌｔｉｐｌｅ  ｍｙｅｌｏｍａ．Ｎ  Ｅｎｇｌ  Ｊ  Ｍｅｄ  ２０１５；３７３：６２１−６３１；を参照されたい）。ある実施形態では、レナリドミドは、エロツズマブ、デキサメタゾン、及び本発明のＣＤ４８指向抗体−薬物複合体との併用療法で投与される。更なる実施形態では、レナリドミドは、エロツズマブ、デキサメタゾン、及び本発明のｈＭＥＭ１０２抗体−薬物複合体との併用療法で投与される。更なる実施形態では、レナリドミドは、エロツズマブ、デキサメタゾン、及び本発明のｈＭＥＭ１０２−ＭＤｐｒ−ＰＥＧ（１２）−ｇｌｕｃ−ＭＭＡＥ  ８−負荷との併用療法で投与される。
【０１１１】
併用療法の別の例示的な薬剤は、多発性骨髄腫及びマントル細胞リンパ腫を治療するために患者に与えられるプロテアソーム阻害剤であるボルテゾミブ（例えば、ＶＥＬＣＡＤＥ（登録商標））である（Ｒｉｃｈａｒｄｓｏｎ  ＰＧ  ｅｔ  ａｌ．Ａ  ｐｈａｓｅ  ２  ｓｔｕｄｙ  ｏｆ  ｂｏｒｔｅｚｏｍｉｂ  ｉｎ  ｒｅｌａｐｓｅｄ，ｒｅｆｒａｃｔｏｒｙ  ｍｙｅｌｏｍａ．Ｎ  Ｅｎｇｌ  Ｊ  Ｍｅｄ  ２００３；３４８：２６０９−２６１７を参照されたい）。ボルテゾミブは、静脈内注射により患者に投与され得る。ある実施形態では、ボルテゾミブは、本発明のＣＤ４８指向抗体−薬物複合体との併用療法で投与される。更なる実施形態では、ボルテゾミブは、本発明のｈＭＥＭ１０２抗体−薬物複合体との併用療法で投与される。更なる実施形態では、ボルテゾミブは、本発明のｈＭＥＭ１０２−ＭＤｐｒ−ＰＥＧ（１２）−ｇｌｕｃ−ＭＭＡＥ  ８−負荷との併用療法で投与される。
【０１１２】
ボルテゾミブは、本発明のＣＤ４８指向抗体−薬物複合体及び追加の薬剤との併用療法でも投与され得る。ボルテゾミブは、多発性骨髄腫を治療するための様々な追加の薬剤と組み合わされてきた。例えば、ボルテゾミブは、サリドマイド及びデキサメタゾンと組み合わされてきた（Ｋａｐｏｏｒ  Ｐ  ｅｔ  ａｌ．Ｂｏｒｔｅｚｏｍｉｂ  ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ  ｔｈｅｒａｐｙ  ｉｎ  ｍｕｌｔｉｐｌｅ  ｍｙｅｌｏｍａ．Ｓｅｍｉｎ  Ｈｅｍａｔｏｌ  ２０１２；３：２２８−２４２を参照されたい）。ある実施形態では、ボルテゾミブは、サリドマイド、デキサメタゾン、及び本発明のＣＤ４８指向抗体−薬物複合体との併用療法で投与される。更なる実施形態では、ボルテゾミブは、サリドマイド、デキサメタゾン、及び本発明のｈＭＥＭ１０２抗体−薬物複合体との併用療法で投与される。更なる実施形態では、ボルテゾミブは、サリドマイド、デキサメタゾン、及び本発明のｈＭＥＭ１０２−ＭＤｐｒ−ＰＥＧ（１２）−ｇｌｕｃ−ＭＭＡＥ  ８−負荷との併用療法で投与される。
ボルテゾミブは、デキサメタゾン、サリドマイド、シスプラチン、ドキソルビシン、シクロホスファミド、及びエトポシドとも組み合わされてきた（Ｋａｐｏｏｒ  Ｐらを参照されたい）。ある実施形態では、ボルテゾミブは、デキサメタゾン、サリドマイド、シスプラチン、ドキソルビシン、シクロホスファミド、エトポシド、及び本発明のＣＤ４８指向抗体−薬物複合体との併用療法で投与される。更なる実施形態では、ボルテゾミブは、デキサメタゾン、サリドマイド、シスプラチン、ドキソルビシン、シクロホスファミド、エトポシド、及び本発明のｈＭＥＭ１０２抗体−薬物複合体との併用療法で投与される。更なる実施形態では、ボルテゾミブは、デキサメタゾン、サリドマイド、シスプラチン、ドキソルビシン、シクロホスファミド、エトポシド、及び本発明のｈＭＥＭ１０２−ＭＤｐｒ−ＰＥＧ（１２）−ｇｌｕｃ−ＭＭＡＥ  ８−負荷との併用療法で投与される。
【０１１３】
ボルテゾミブは、ダラツムマブ及びレナリドミドとも組み合わされてきた（Ｐｈｉｐｐｓ  Ｃらを参照されたい）。ある実施形態では、ボルテゾミブは、ダラツムマブ、レナリドミド、及び本発明のＣＤ４８指向抗体−薬物複合体との併用療法で投与される。更なる実施形態では、ボルテゾミブは、ダラツムマブ、レナリドミド、及び本発明のｈＭＥＭ１０２抗体−薬物複合体との併用療法で投与される。更なる実施形態では、ボルテゾミブは、ダラツムマブ、レナリドミド、及び本発明のｈＭＥＭ１０２−ＭＤｐｒ−ＰＥＧ（１２）−ｇｌｕｃ−ＭＭＡＥ  ８−負荷との併用療法で投与される。
【０１１４】
ボルテゾミブは、レナリドミド及びデキサメタゾンとも組み合わされてきた（Ｒｉｃｈａｒｄｓｏｎ  ＰＧ  ｅｔ  ａｌ．２０１０を参照されたい）。ある実施形態では、ボルテゾミブは、レナリドミド、デキサメタゾン、及び本発明のＣＤ４８指向抗体−薬物複合体との併用療法で投与される。更なる実施形態では、ボルテゾミブは、レナリドミド、デキサメタゾン、及び本発明のｈＭＥＭ１０２抗体−薬物複合体との併用療法で投与される。更なる実施形態では、ボルテゾミブは、レナリドミド、デキサメタゾン、及び本発明のｈＭＥＭ１０２−ＭＤｐｒ−ＰＥＧ（１２）−ｇｌｕｃ−ＭＭＡＥ  ８−負荷との併用療法で投与される。
【０１１５】
ボルテゾミブは、パノビノスタット及びデキサメタゾンとも組み合わされてきた（Ｒｉｃｈａｒｄｓｏｎ  Ｐ  ｅｔ  ａｌ．ＰＡＮＯＲＡＭＡ  ２：ｐａｎｏｂｉｎｏｓｔａｔ  ｉｎ  ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ  ｗｉｔｈ  ｂｏｒｔｅｚｏｍｉｂ  ａｎｄ  ｄｅｘａｍｅｔｈａｓｏｎｅ  ｉｎ  ｐａｔｉｅｎｔｓ  ｗｉｔｈ  ｒｅｌａｐｓｅｄ  ａｎｄ  ｂｏｒｔｅｚｏｍｉｂ−ｒｅｆｒａｃｔｏｒｙ  ｍｙｅｌｏｍａ．Ｂｌｏｏｄ  ２０１３；１２２：２３３１−２３３７を参照されたい）。ある実施形態では、ボルテゾミブは、パノビノスタット、デキサメタゾン、及び本発明のＣＤ４８指向抗体−薬物複合体との併用療法で投与される。更なる実施形態では、ボルテゾミブは、パノビノスタット、デキサメタゾン、及び本発明のｈＭＥＭ１０２抗体−薬物複合体との併用療法で投与される。更なる実施形態では、ボルテゾミブは、パノビノスタット、デキサメタゾン、及び本発明のｈＭＥＭ１０２−ＭＤｐｒ−ＰＥＧ（１２）−ｇｌｕｃ−ＭＭＡＥ  ８−負荷との併用療法で投与される。
【０１１６】
併用療法の別の例示的な薬剤は、癌（多発性骨髄腫、白血病、及びリンパ腫を含む）、炎症、アレルギー、及び悪心を治療するために使用されるグルココルチコステロイドであるデキサメタゾン（例えば、ＤＥＣＡＤＲＯＮ（登録商標））である。デキサメタゾンは、経口投与用の錠剤、ピル、もしくはカプセルとして、または静脈内注入により投与され得る。ある実施形態では、デキサメタゾンは、本発明のＣＤ４８指向抗体−薬物複合体との併用療法で投与される。更なる実施形態では、デキサメタゾンは、本発明のｈＭＥＭ１０２抗体−薬物複合体との併用療法で投与される。更なる実施形態では、デキサメタゾンは、本発明のｈＭＥＭ１０２−ＭＤｐｒ−ＰＥＧ（１２）−ｇｌｕｃ−ＭＭＡＥ  ８−負荷との併用療法で投与される。デキサメタゾンは、本発明のＣＤ４８指向抗体−薬物複合体及び追加の薬剤との併用療法でも投与され得る。
【０１１７】
併用療法の別の例示的な薬剤は、癌（特に、多発性骨髄腫、急性骨髄性白血病、ホジキン及び非ホジキンリンパ腫、乳癌、ならびに肺癌を含む）を治療するために使用されるアルキル化剤であるシクロホスファミド（例えば、ＣＹＴＯＸＡＮ（登録商標））である。シクロホスファミドは、注射、注入により、経口投与用の錠剤、ピル、もしくはカプセルとして、または筋肉内、腹膜内、もしくは肺膜内への注射により投与され得る。ある実施形態では、シクロホスファミドは、本発明のＣＤ４８指向抗体−薬物複合体との併用療法で投与される。更なる実施形態では、シクロホスファミドは、本発明のｈＭＥＭ１０２抗体−薬物複合体との併用療法で投与される。更なる実施形態では、シクロホスファミドは、本発明のｈＭＥＭ１０２−ＭＤｐｒ−ＰＥＧ（１２）−ｇｌｕｃ−ＭＭＡＥ  ８−負荷との併用療法で投与される。シクロホスファミドは、本発明のＣＤ４８指向抗体−薬物複合体及び追加の薬剤との併用療法でも投与され得る。
【０１１８】
併用療法の別の例示的な薬剤は、癌（多発性骨髄腫及び卵巣癌を含む）を治療するために使用されるアルキル化剤であるメルファランである。メルファランは、経口的に、注射剤または点滴として投与され得る。ある実施形態では、メルファランは、本発明のＣＤ４８指向抗体−薬物複合体との併用療法で投与される。更なる実施形態では、メルファランは、本発明のｈＭＥＭ１０２抗体−薬物複合体との併用療法で投与される。更なる実施形態では、メルファランは、本発明のｈＭＥＭ１０２−ＭＤｐｒ−ＰＥＧ（１２）−ｇｌｕｃ−ＭＭＡＥ  ８−負荷との併用療法で投与される。
【０１１９】
メルファランは、本発明のＣＤ４８指向抗体−薬物複合体及び追加の薬剤との併用療法でも投与され得る。
【０１２０】
併用療法の別の例示的な薬剤は、多発性骨髄腫を治療するために使用される免疫調節薬であるポマリドミド（例えば、ＰＯＭＡＬＹＳＴ（登録商標））である。ポマリドミドは、経口投与用にカプセル、ピル、または錠剤として投与され得る。ある実施形態では、ポマリドミドは、本発明のＣＤ４８指向抗体−薬物複合体との併用療法で投与される。更なる実施形態では、ポマリドミドは、本発明のｈＭＥＭ１０２抗体−薬物複合体との併用療法で投与される。更なる実施形態では、ポマリドミドは、本発明のｈＭＥＭ１０２−ＭＤｐｒ−ＰＥＧ（１２）−ｇｌｕｃ−ＭＭＡＥ  ８−負荷との併用療法で投与される。
【０１２１】
ポマリドミドは、本発明のＣＤ４８指向抗体−薬物複合体及び追加の薬剤との併用療法でも投与され得る。ポマリドミドは、多発性骨髄腫を治療するための様々な追加の薬剤と組み合わされてきた。ポマリドミドは、デキサメタゾンと組み合わされてきた（Ｒｉｃｈａｒｄｓｏｎ  Ｐ  ｅｔ  ａｌ．Ｐｏｍａｌｉｄｏｍｉｄｅ  ａｌｏｎｅ  ｏｒ  ｉｎ  ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ  ｗｉｔｈ  ｌｏｗ−ｄｏｓｅ  ｄｅｘａｍｅｔｈａｓｏｎｅ  ｉｎ  ｒｅｌａｐｓｅｄ  ａｎｄ  ｒｅｆｒａｃｔｏｒｙ  ｍｕｌｔｉｐｌｅ  ｍｙｅｌｏｍａ：ａ  ｒａｎｄｏｍｉｚｅｄ  ｐｈａｓｅ  ２  ｓｔｕｄｙ．Ｂｌｏｏｄ  ２０１４；１２３：１８２６−１８３２を参照されたい）。ある実施形態では、ポマリドミドは、デキサメタゾン及び本発明のＣＤ４８指向抗体−薬物複合体との併用療法で投与される。更なる実施形態では、ポマリドミドは、デキサメタゾン及び本発明のｈＭＥＭ１０２抗体−薬物複合体との併用療法で投与される。更なる実施形態では、ポマリドミドは、デキサメタゾン及び本発明のｈＭＥＭ１０２−ＭＤｐｒ−ＰＥＧ（１２）−ｇｌｕｃ−ＭＭＡＥ  ８−負荷との併用療法で投与される。
【０１２２】
ポマリドミドは、カルフィルゾミブ及びデキサメタゾンとも組み合わされてきた（Ｓｈａｈ  Ｊ  ｅｔ  ａｌ．Ｃａｒｆｉｌｚｏｍｉｂ，ｐｏｍａｌｉｄｏｍｉｄｅ，ａｎｄ  ｄｅｘａｍｅｔｈａｓｏｎｅ（ＣＰＤ）ｉｎ  ｐａｔｉｅｎｔｓ  ｗｉｔｈ  ｒｅｌａｐｓｅｄ  ａｎｄ／ｏｒ  ｒｅｆｒａｃｔｏｒｙ  ｍｕｌｔｉｐｌｅ  ｍｙｅｌｏｍａ．Ｂｌｏｏｄ  ２０１５；１２６：２２８４−２２９０を参照されたい）。ある実施形態では、ポマリドミドは、カルフィルゾミブ、デキサメタゾン、及び本発明のＣＤ４８指向抗体−薬物複合体との併用療法で投与される。更なる実施形態では、ポマリドミドは、カルフィルゾミブ、デキサメタゾン、及び本発明のｈＭＥＭ１０２抗体−薬物複合体との併用療法で投与される。更なる実施形態では、ポマリドミドは、カルフィルゾミブ、デキサメタゾン及び本発明のｈＭＥＭ１０２−ＭＤｐｒ−ＰＥＧ（１２）−ｇｌｕｃ−ＭＭＡＥ  ８−負荷との併用療法で投与される。
【０１２３】
併用療法の別の例示的な薬剤は、癌（多発性骨髄腫を含む）を治療するために使用されるヒストン脱アセチル化（ＨＤＡＣ）阻害剤であるパノビノスタット（例えば、ＦＡＲＹＤＡＫ（登録商標））である（Ｗｏｌｆ  ＪＬ  ｅｔ  ａｌ．Ａ  ｐｈａｓｅ  ＩＩ  ｓｔｕｄｙ  ｏｆ  ｏｒａｌ  ｐａｎｏｂｉｎｏｓｔａｔ（ＬＢＨ５８９）ｉｎ  ａｄｕｌｔ  ｐａｔｉｅｎｔｓ  ｗｉｔｈ  ａｄｖａｎｃｅｄ  ｒｅｆｒａｃｔｏｒｙ  ｍｕｌｔｉｐｌｅ  ｍｙｅｌｏｍａ．ＡＳＨ  Ａｎｎｕａｌ  Ｍｅｅｔｉｎｇ  Ａｂｓｔｒａｃｔｓ，２００８を参照されたい）。パノビノスタットは、経口投与用に、ピル、カプセル、または錠剤として投与され得る。ある実施形態では、パノビノスタットは、本発明のＣＤ４８指向抗体−薬物複合体との併用療法で投与される。更なる実施形態では、パノビノスタットは、本発明のｈＭＥＭ１０２抗体−薬物複合体との併用療法で投与される。更なる実施形態では、パノビノスタットは、本発明のｈＭＥＭ１０２−ＭＤｐｒ−ＰＥＧ（１２）−ｇｌｕｃ−ＭＭＡＥ  ８−負荷との併用療法で投与される。
【０１２４】
パノビノスタットは、本発明のＣＤ４８指向抗体−薬物複合体及び追加の薬剤との併用療法でも投与され得る。パノビノスタットは、多発性骨髄腫を治療するための様々な追加の薬剤と組み合わされてきた。例えば、パノビノスタットは、カルフィルゾミブと組み合わされてきた（Ｂｅｒｄｅｊａ  ＪＧらを参照されたい）。ある実施形態では、パノビノスタットは、カルフィルゾミブ及び本発明のＣＤ４８指向抗体−薬物複合体との併用療法で投与される。更なる実施形態では、パノビノスタットは、カルフィルゾミブ及び本発明のｈＭＥＭ１０２抗体−薬物複合体との併用療法で投与される。更なる実施形態では、パノビノスタットは、カルフィルゾミブ及び本発明のｈＭＥＭ１０２−ＭＤｐｒ−ＰＥＧ（１２）−ｇｌｕｃ−ＭＭＡＥ  ８−負荷との併用療法で投与される。パノビノスタットは、ボルテゾミブ及びデキサメタゾンとも組み合わされてきた（Ｒｉｃｈａｒｄｓｏｎ  Ｐ  ｅｔ  ａｌ．２０１３を参照されたい）。ある実施形態では、パノビノスタットは、ボルテゾミブ、デキサメタゾン、及び本発明のＣＤ４８指向抗体−薬物複合体との併用療法で投与される。更なる実施形態では、パノビノスタットは、ボルテゾミブ、デキサメタゾン、及び本発明のｈＭＥＭ１０２抗体−薬物複合体との併用療法で投与される。更なる実施形態では、パノビノスタットは、ボルテゾミブ、デキサメタゾン、及び本発明のｈＭＥＭ１０２−ＭＤｐｒ−ＰＥＧ（１２）−ｇｌｕｃ−ＭＭＡＥ  ８−負荷との併用療法で投与される。
【０１２５】
併用療法の別の例示的な薬剤は、癌（多発性骨髄腫を含む）を治療するために使用されるプロテアソーム阻害剤であるイキサゾミブ（ＮＩＮＬＡＲＯ（登録商標））である。イキサゾミブは、経口投与され得る。ある実施形態では、イキサゾミブは、本発明のＣＤ４８指向抗体−薬物複合体との併用療法で投与される。更なる実施形態では、イキサゾミブは、本発明のｈＭＥＭ１０２抗体−薬物複合体との併用療法で投与される。更なる実施形態では、イキサゾミブは、本発明のｈＭＥＭ１０２−ＭＤｐｒ−ＰＥＧ（１２）−ｇｌｕｃ−ＭＭＡＥ  ８−負荷との併用療法で投与される。イキサゾミブは、本発明のＣＤ４８指向抗体−薬物複合体及び追加の薬剤との併用療法でも投与され得る。イキサゾミブは、多発性骨髄腫を治療するための様々な追加の薬剤と組み合わされてきた。例えば、イキサゾミブは、レナリドミド及びデキサメタゾンと組み合わされてきた（Ｍｏｒｅａｕ  Ｐ  ｅｔ  ａｌ．Ｉｘａｚｏｍｉｂ，ａｎ  ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎａｌ  ｏｒａｌ  ｐｒｏｔｅａｓｏｍｅ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ，ｉｎ  ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ  ｗｉｔｈ  ｌｅｎａｌｉｄｏｍｉｄｅ  ａｎｄ  ｄｅｘａｍｅｔｈａｓｏｎｅ，ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ  ｅｘｔｅｎｄｓ  ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｏｎ−ｆｒｅｅ  ｓｕｒｖｉｖａｌ  ｆｏｒ  ｐａｔｉｅｎｔｓ  ｗｉｔｈ  ｒｅｌａｐｓｅｄ  ａｎｄ／ｏｒ  ｒｅｆｒａｃｔｏｒｙ  ｍｕｌｔｉｐｌｅ  ｍｙｅｌｏｍａ：ｔｈｅ  ｐｈａｓｅ  ３  ｔｏｕｒｍａｌｉｎｅ−ＭＭ１  ｓｔｕｄｙ．ＡＳＨ  Ａｎｎｕａｌ  Ｍｅｅｔｉｎｇ  Ａｂｓｔｒａｃｔｓ，２０１５を参照されたい）。ある実施形態では、イキサゾミブは、レナリドミド、デキサメタゾン、及び本発明のＣＤ４８指向抗体−薬物複合体との併用療法で投与される。更なる実施形態では、イキサゾミブは、レナリドミド、デキサメタゾン、及び本発明のｈＭＥＭ１０２抗体−薬物複合体との併用療法で投与される。更なる実施形態では、イキサゾミブは、レナリドミド、デキサメタゾン、及び本発明のｈＭＥＭ１０２−ＭＤｐｒ−ＰＥＧ（１２）−ｇｌｕｃ−ＭＭＡＥ  ８−負荷との併用療法で投与される。
【０１２６】
本発明の任意の特徴、工程、要素、実施形態、または態様は、具体的に別途記載のない限り、任意のそのその他と組み合わせて使用され得る。本発明は、明確性及び理解の目的のため、図示及び例によりある程度詳細に記載されてきたが、ある特定の変更及び修正が付属の特許請求の範囲の範囲内で実践され得ることは明らかであろう。
【実施例】
【０１２７】
以下の実施例は、図示のために提供され、特許請求の発明を制限するものではない。
実施例１：抗体の選択及びヒト化
マウスＭＥＭ１０２抗体は、ヒトＣＤ４８タンパク質に結合し、Ｂａｚｉｌ  ｅｔ  ａｌ．，Ｆｏｌｉａ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａ  ３５：２８９−２９７（１９８９）に最初に開示された。マウスＭＥＭ１０２抗体をコードする核酸が配列決定され、コードされた重鎖及び軽鎖ＣＤＲ配列、すなわち、配列番号３〜８が特定された。いくつかのヒト化ＭＥＭ１０２抗体は、ヒトアクセプター配列として、ｈＩｇＧ  ＶＨ７−４−１／ｈＩｇＧ−ＪＨ５重鎖可変領域ヒト生殖系列及びｈＩｇＧ−ＶＫ６−２１／ｈＩｇＧ−ＪＫ４軽鎖可変領域ヒト生殖系列を使用して構築された。本抗体は、マウス抗体に戻して突然変異されるアミノ酸残基の選択またはマウス生殖系列配列において異なった。ＨＡＬＡ（配列番号１に記載される重鎖（ｖＨＡ）及び配列番号２に記載される軽鎖（ｖＬＡ）と命名された抗体は、その（ｉ）結合特性、（ｉｉ）薬物を送達する能力、及び（ｉｉｉ）他の変異型と比較したときの逆突然変異の数に基づいて、リードヒト化ＭＥＭ１０２抗体として選択された。ヒト化ＭＥＭ１０２抗体は、ｈＭＥＭ１０２とも称される。
【０１２８】
ＨＣＬＡ（ｖＨＣと命名された重鎖可変領域と、ｖＬＡと命名された軽鎖可変領域とを有する抗体）、ＨＡＬＢ（ｖＨＡと命名された重鎖可変領域と、ｖＬＢと命名された軽鎖可変領域とを有する抗体）、ＨＢＬＡ（ｖＨＢと命名された重鎖可変領域と、ｖＬＡと命名された軽鎖可変領域とを有する抗体）、ＨＢＬＢ（ｖＨＢと命名された重鎖可変領域と、ｖＬＢと命名された軽鎖可変領域とを有する抗体）、ＨＣＬＢ（ｖＨＣと命名された重鎖可変領域と、ｖＬＢと命名された軽鎖可変領域とを有する抗体）と命名された抗体が、本発明において、ＨＡＬＡ抗体の代わりに使用され得る。ｖＨＡ、ｖＨＢ、ｖＨＣ、ｖＬＡ、ｖＬＢ、及びｖＬＣ配列に関しては図１及び２を参照されたい。ＭＥＭ１０２の様々なヒト化形態の結合親和性は、ヒトまたはｃｙｎｏ  ＣＤ４８を過剰発現する細胞に対して試験されたか否かにかかわらず、類似する。
【０１２９】
実施例２：ｈＭＥＭ１０２結合特性
方法：抗ＣＤ４８抗体の飽和結合を決定するために、ヒトＵ−２６６多発性骨髄腫の腫瘍細胞またはカニクイザルＣＤ４８の安定してトランスフェクトされたＣＨＯ−ＤＧ４４クローン細胞を、抗体当たり約２〜４フルオロフォアを負荷した滴定したＡｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ−６４７複合体化抗体（０．８ｎｇ／ｍｌ〜５０μｇ／ｍＬ）で染色した。氷上で１時間インキュベートした後、細胞を、２％ウシ胎児血清及び０．０２％アジ化ナトリウムを含有するリン酸緩衝生理食塩水で２回洗浄した。蛍光をＬＳＲＩＩフローサイトメトリーで検出し、ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍの１部位結合（双曲線）非線形回帰を使用して、Ｋｄ値を決定した。
【０１３０】
結果：表１ならびに図３及び４は、低Ｋｄ値により示されるように、ｈＭＥＭ１０２−ＨＡＬＡ抗体がＵ−２６６細胞におけるｃＭＥＭ１０２と比較して類似する結合親和性を有することを示す。安定してトランスフェクトされたＣＨＯ−ＤＧ４４クローン細胞におけるｈＭＥＭ１０２−ＨＡＬＡ及びｃＭＥＭ１０２の、カニクイザルＣＤ４８に対する結合親和性も比較可能であった。ｈＭＥＭ１０２−ＨＡＬＡ及びｃＭＥＭ１０２の両方は、両細胞系において、ｍＭＥＭ１０２と比較して４倍超低いＫｄを有する。抗ＣＤ４８抗体は、カニクイザルＣＤ４８と比較して、ヒトＣＤ４８に対して約６倍強い結合親和性を有した。
【表１】
2018509908.tif 000040
【０１３１】
実施例３：ＭＤｐｒ−ＰＥＧ（１２）−ｇｌｙｃ−ＭＭＡＥの合成及びｈＭＥＭ１０２との複合体化
一般的な情報全ての市販の無水溶媒は更に精製することなく使用された。ＰＥＧ試薬は、Ｑｕａｎｔａ  ＢｉｏＤｅｓｉｇｎ（Ｐｏｗｅｌｌ，ＯＨ）から得た。分析薄層クロマトグラフィーは、シリカゲル６０  Ｆ２５４アルミニウムシート（ＥＭＤ  Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ，Ｇｉｂｂｓｔｏｗｎ，ＮＪ）で行われた。円形クロマトグラフィーは、クロマトトロン装置（Ｈａｒｒｉｓ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ，Ｐａｌｏ  Ａｌｔｏ，ＣＡ）で行われた。カラムクロマトグラフィーは、Ｂｉｏｔａｇｅ  Ｉｓｏｌｅｒａ  Ｏｎｅフラッシュ精製システム（Ｃｈａｒｌｏｔｔｅ，ＮＣ）で行われた。分析ＨＰＬＣは、  Ｖａｒｉａｎ  ＰｒｏＳｔａｒ  ３３０  ＰＤＡ検出器で構成されたＶａｒｉａｎ  ＰｒｏＳｔａｒ  ２１０溶媒送達系で行われた。Ｃ１２  Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ  Ｓｙｎｅｒｇｉ  ２．０×１５０ｍｍ、４μｍ、８０Å逆相カラム上で試料を溶出した。酸性移動相は、両方とも０．０５％トリフルオロ酢酸または０．１％ギ酸のいずれかを含有するアセトニトリル及び水からなった。化合物は、注射後１分で５％〜１１分で９５％の酸性アセトニトリル、続いて１５分まで均一濃度の９５％アセトニトリルの直線勾配で溶出された（流量＝１．０ｍＬ／分）。ＬＣ−ＭＳは２つの異なるシステムで行われた。ＬＣ−ＭＳシステム１は、Ｃ１２  Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ  Ｓｙｎｅｒｇｉ  ２．０×１５０ｍｍ、４μｍ、８０Å逆相カラムを装備したＨＰ  Ａｇｉｌｅｎｔ  １１００  ＨＰＬＣ機器に接続されたＺＭＤ  Ｍｉｃｒｏｍａｓｓ質量分析計からなった。酸性溶離剤は、１０分にわたって０．１％水性ギ酸中５％〜９５％のアセトニトリル、続いて５分間の均一濃度の９５％アセトニトリルの直線勾配からなった（流量＝０．４ｍＬ／分）。ＬＣ−ＭＳシステム２は、Ｗａｔｅｒｓ  ２９９６  Ｐｈｏｔｏｄｉｏｄｅ  Ａｒｒａｙ  Ｄｅｔｅｃｔｏｒを備えたＷａｔｅｒｓ  ２６９５  Ｓｅｐａｒａｔｉｏｎｓ  Ｍｏｄｕｌｅに接続されたＷａｔｅｒｓ  Ｘｅｖｏ  Ｇ２  Ｔｏｆ質量分析計からなり、カラム、移動相、勾配、及び流量は、ＬＣ−ＭＳのシステム１と同じであった。ＵＰＬＣ−ＭＳは、Ａｃｑｕｉｔｙ  ＵＰＬＣ  ＢＥＨ  Ｃ１８  ２．１×５０ｍｍ、１．７μｍ逆相カラムを装備したＡｃｑｕｉｔｙ  Ｕｌｔｒａ  Ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ  ＬＣに接続された  Ｗａｔｅｒｓ  ＳＱ質量検出器で実行された。酸性移動相（０．１％ギ酸）は、３％アセトニトリル／９７％水〜１００％アセトニトリルの勾配からなった（流量＝０．５ｍＬ／分）。分取ＨＰＬＣは、Ｖａｒｉａｎ  ＰｒｏＳｔａｒ  ３３０  ＰＤＡ検出器で構成されたＶａｒｉａｎ  ＰｒｏＳｔａｒ  ２１０溶媒送達系で実行された。産物は、水中０．１％ギ酸（溶媒Ａ）及びアセトニトリル中０．１％ギ酸（溶媒Ｂ）で溶出する、Ｃ１２  Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ  Ｓｙｎｅｒｇｉ  １０．０ｘ２５０ｍｍ、４μｍ、８０Å逆相カラム上で精製された。精製方法は、以下の溶媒Ａ：溶媒Ｂの勾配からなった：０〜５分間９０：１０、５分〜８０分間９０：１０〜１０：９０、続いて、５分間均一濃度の１０：９０。流量は４．６ｍＬ／分であり、２５４ｎｍで監視した。スキーム３及び４の化合物の分取ＨＰＬＣは、両移動相において、０．１％ギ酸の代わりに、０．１％トリフルオロ酢酸で実行された。
【化３８】
2018509908.tif 000041
【０１３２】
（２Ｓ，３Ｓ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｓ）−６−（２−（３−アミノプロパンアミド）−４−（（５Ｓ，８Ｓ，１１Ｓ，１２Ｒ）−１１−（（Ｓ）−ｓｅｃ−ブチル）−１２−（２−（（Ｓ）−２−（（１Ｒ，２Ｒ）−３−（（（１Ｓ，２Ｒ）−１−ヒドロキシ−１−フェニルプロパン−２−イル）アミノ）−１−メトキシ−２−メチル−３−オキソプロピル）ピロリジン−１−イル）−２−オキソエチル）−５，８−ジイソプロピル−４，１０−ジメチル−３，６，９−トリオキソ−２，１３−ジオキサ−４，７，１０−トリアザテトラデシル）フェノキシ）−３，４，５−トリヒドロキシテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−カルボン酸（２）：既知（ＵＳ２００８／０２４１１２８  Ａ１の化合物８ａ）のグルクロニド−ＭＭＡＥ中間体２（４０ｍｇ、２６．８μｍｏｌ）を入れたフラスコに、０．９ｍＬのメタノール及び０．９ｍＬのテトラヒドロフランを加えた。次いで、溶液を氷浴中で冷却し、水酸化リチウム一水和物（６．８ｍｇ、１６１μｍｏｌ）を、０．９ｍＬの水中の溶液として、滴下して加えた。次いで、反応物を氷上で１．５時間攪拌し、その時点で、ＬＣ／ＭＳは産物への完全な変換を明らかにした。次いで、氷酢酸（９．２μＬ、１６１μｍｏｌ）を加え、乾燥状態に濃縮した。分取ＨＰＬＣにより、油状残留物として完全に脱保護されたグルクロニド−ＭＭＡＥリンカー中間体３（２６ｍｇ、８７％）を得た。分析ＨＰＬＣ（０．１％ギ酸）：ｔＲ９．３分。ＬＣ−ＭＳシステム１：ｔＲ１１．１０分、ｍ／ｚ（ＥＳ＋）実測値１１３０．４８（Ｍ＋Ｈ）＋、ｍ／ｚ（ＥＳ−）実測値１１２８．６３（Ｍ−Ｈ）−。
【化３９】
2018509908.tif 000042
【０１３３】
（Ｓ）−４４−（（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニル）アミノ）−３８−オキソ−２，５，８，１１，１４，１７，２０，２３，２６，２９，３２，３５−ドデカオキサ−３９−アザペンタテトラコンタン−４５−オイック酸（４）：Ｎα−Ｆｍｏｃ−リジン３（５９ｍｇ、１６１μｍｏｌ）を入れたフラスコに、２．９ｍＬの無水ジクロロメタン、続いてメトキシ−ＰＥＧ１２−ＯＳｕ（１００ｍｇ、１４６μｍｏｌ）を加えた。次いで、ＤＩＰＥＡ（１２７μＬ、７３０μｍｏｌ）を加え、反応物を室温の窒素下で攪拌し、続いてＴＬＣ及びＬＣ／ＭＳを行った。２時間後、ＬＣ／ＭＳは産物への変換を明らかにした。反応溶液をジクロロメタンに希釈し、シリカゲルクロマトグラフィーにより精製した。メタノールの量を増加して（０％から２０％）、固定相をジクロロメタンで溶出し、所望の産物４（１５３ｍｇ、１１２％）を得た。ＵＰＬＣ−ＭＳ：ｔＲ１．７７分、ｍ／ｚ（ＥＳ＋）実測値９３９．５８（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０１３４】
（Ｓ）−２，５−ジオキソピロリジン−１−イル４４−（（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニル）アミノ）−３８−オキソ−２，５，８，１１，１４，１７，２０，２３，２６，２９，３２，３５−ドデカオキサ−３９−アザペンタテトラコンタン−４５−オエート（５）：フラスコにＮα−Ｆｍｏｃ−リジン（ＰＥＧ１２）−ＯＨ４（１５３ｍｇ、１６３μｍｏｌ）及び１．６ｍＬの無水テトラヒドロフランを入れた。Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド（２８ｍｇ、２４５μｍｏｌ）、続いてジイソプロピルカルボジイミド（３８μＬ、２４５μｍｏｌ）を加えた。反応物を窒素下で密封し、一晩攪拌した。粗反応物をジクロロメタンに希釈し、メタノールの量を増加して（０％から１０％）、ジクロロメタンで溶出したシリカゲル上で精製し、所望の活性化エステル５（１５５ｍｇ）を得た。更に特徴付けすることなく、材料を次に進めた。ＵＰＬＣ−ＭＳ：ｔＲ１．９２分、ｍ／ｚ（ＥＳ＋）実測値１０３６．４８（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０１３５】
（２Ｓ，３Ｓ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｓ）−６−（２−（（Ｓ）−４４−（（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニル）アミノ）−３８，４５−ジオキソ−２，５，８，１１，１４，１７，２０，２３，２６，２９，３２，３５−ドデカオキサ−３９，４６−ジアザノナテトラコンタンアミド）−４−（（５Ｓ，８Ｓ，１１Ｓ，１２Ｒ）−１１−（（Ｓ）−ｓｅｃ−ブチル）−１２−（２−（（Ｓ）−２−（（１Ｒ，２Ｒ）−３−（（（１Ｓ，２Ｒ）−１−ヒドロキシ−１−フェニルプロパン−２−イル）アミノ）−１−メトキシ−２−メチル−３−オキソプロピル）ピロリジン−１−イル）−２−オキソエチル）−５，８−ジイソプロピル−４，１０−ジメチル−３，６，９−トリオキソ−２，１３−ジオキサ−４，７，１０−トリアザテトラデシル）フェノキシ）−３，４，５−トリヒドロキシテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−カルボン酸（６）：脱保護グルクロニド−ＭＭＡＥリンカー中間体２（９２ｍｇ、８１μｍｏｌ）を無水ジメチルホルムアミド（１．６ｍＬ）に溶解し、Ｎα−Ｆｍｏｃ−リジン（ＰＥＧ１２）−ＯＳｕ５（１０１ｍｇ、９７μｍｏｌ）を入れたフラスコに加えた。次いで、ジイソプロピルエチルアミン（７０μＬ、４０５μｍｏｌ）を加え、次いで、反応物を室温の窒素下で攪拌した。４．５時間後、ＬＣ−ＭＳは産物への変換を明らかにした。分取ＨＰＬＣにより産物を精製し、油状残留物としてＦｍｏｃ−Ｌｙｓ（ＰＥＧ１２）−グルクロニド−ＭＭＡＥ中間体６（２工程にわたって１１１ｍｇ、６２％）を得た。ＵＰＬＣ−ＭＳ：ｔＲ２．０１分、ｍ／ｚ（ＥＳ＋）実測値２０５０．９２（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０１３６】
（２Ｓ，３Ｓ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｓ）−６−（２−（（Ｓ）−４４−アミノ−３８，４５−ジオキソ−２，５，８，１１，１４，１７，２０，２３，２６，２９，３２，３５−ドデカオキサ−３９，４６−ジアザノナテトラコンタンアミド）−４−（（５Ｓ，８Ｓ，１１Ｓ，１２Ｒ）−１１−（（Ｓ）−ｓｅｃ−ブチル）−１２−（２−（（Ｓ）−２−（（１Ｒ，２Ｒ）−３−（（（１Ｓ，２Ｒ）−１−ヒドロキシ−１−フェニルプロパン−２−イル）アミノ）−１−メトキシ−２−メチル−３−オキソプロピル）ピロリジン−１−イル）−２−オキソエチル）−５，８−ジイソプロピル−４，１０−ジメチル−３，６，９−トリオキソ−２，１３−ジオキサ−４，７，１０−トリアザテトラデシル）フェノキシ）−３，４，５−トリヒドロキシテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−カルボン酸（７）：Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（ＰＥＧ１２）−グルクロニド−ＭＭＡＥ中間体６（１１１ｍｇ、５４μｍｏｌ）を２．２ｍＬの無水ジメチルホルムアミドに溶解し、続いて０．５ｍＬのピペリジンを加えた。反応物を窒素下で３時間攪拌し、次いで乾燥状態に濃縮した。分取ＨＰＬＣにより産物を精製し、油状残留物としてＨ−Ｌｙｓ（ＰＥＧ１２）−グルクロニド−ＭＭＡＥ中間体７（８５ｍｇ、８６％）を得た。ＵＰＬＣ−ＭＳ：ｔＲ１．５０分、ｍ／ｚ（ＥＳ＋）実測値１８２９．３１（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０１３７】
（Ｓ）−２，５−ジオキソピロリジン−１−イル３−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）−２−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）プロパノエート（９）：（Ｓ）−Ｎα−マレイミド−Ｎβ−Ｂｏｃ−ジアミノプロパン酸８（Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，２０１４，３２，１０５９−１０６２）（４００ｍｇ、１．４ｍｍｏｌ）を７ｍＬの無水ジメチルホルムアミドに溶解した。Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド（１７８ｍｇ、１．５ｍｍｏｌ）、続いて１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド（２９８ｍｇ、１．５ｍｍｏｌ）を加えた。反応物を窒素下で３時間、室温で攪拌した。水性処理は１２０ｍＬの水への希釈を通して達成され、次いで、水層を、６０ｍＬの酢酸エチルで３回抽出した。次いで、混合有機層を鹹水で洗浄し、硫酸ナトリウム上で乾燥させ、乾燥状態に濃縮した。ヘキサン：酢酸エチル（５０：５０〜０：１００）の溶出混合物のフラッシュカラムクロマトグラフィーにより、産物を精製し、（Ｓ）−Ｎα−マレイミド−Ｎβ−Ｂｏｃ−ジアミノプロパン酸ＮＨＳエステル［ＭＤｐｒ（Ｂｏｃ）−ＯＳｕ］９（２９７ｍｇ、５５％）を得た。ＬＣ−ＭＳシステム１：ｔＲ１２．２３分、ｍ／ｚ（ＥＳ＋）実測値２８２．０５９９（Ｍ＋Ｈ−Ｂｏｃ基）＋。ＬＣ−ＭＳシステム２：ｔＲ１１．３０分、ｍ／ｚ（ＥＳ＋）実測値２５８０．２５１５（Ｍ＋Ｈ）＋。
【化４０】
2018509908.tif 000043
【０１３８】
（２Ｒ／Ｓ，３Ｓ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｓ）−６−（２−（（Ｓ）−４４−（（Ｓ）−３−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）−２−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）プロパンアミド）−３８，４５−ジオキソ−２，５，８，１１，１４，１７，２０，２３，２６，２９，３２，３５−ドデカオキサ−３９，４６−ジアザノナテトラコンタンアミド）−４−（（５Ｓ，８Ｓ，１１Ｓ，１２Ｒ）−１１−（（Ｓ）−ｓｅｃ−ブチル）−１２−（２−（（Ｓ）−２−（（１Ｒ，２Ｒ）−３−（（（１Ｓ，２Ｒ）−１−ヒドロキシ−１−フェニルプロパン−２−イル）アミノ）−１−メトキシ−２−メチル−３−オキソプロピル）ピロリジン−１−イル）−２−オキソエチル）−５，８−ジイソプロピル−４，１０−ジメチル−３，６，９−トリオキソ−２，１３−ジオキサ−４，７，１０−トリアザテトラデシル）フェノキシ）−３，４，５−トリヒドロキシテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−カルボン酸（１０）：ＭＤｐｒ（Ｂｏｃ）−ＯＳｕ９（２０ｍｇ、５３μｍｏｌ）を２．２ｍＬの無水ジメチルホルムアミドに溶解し、Ｈ−Ｌｙｓ（ＰＥＧ１２）−グルクロニド−ＭＭＡＥリンカー中間体７（８６ｍｇ、４４μｍｏｌ）を入れたフラスコに加えた。次いで、ジイソプロピルエチルアミン（１５μＬ、８８μｍｏｌ）を加え、次いで、反応物を室温の窒素下で２．５時間攪拌した。反応物を１５μＬの氷酢酸でクエンチし、分取ＨＰＬＣにより精製し、ジアステレオマーの混合物としてＭＤｐｒ（Ｂｏｃ）−Ｌｙｓ（ＰＥＧ１２）−グルクロニド−ＭＭＡＥ中間体１０（３７ｍｇ、４０％）を得た。ジアステレオマーはキラルクロマトグラフィーにより分離可能であった。ＵＰＬＣ−ＭＳ：ｔＲ１．８４分、ｍ／ｚ（ＥＳ＋）実測値２０９５．４４（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０１３９】
（２Ｒ／Ｓ，３Ｓ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｓ）−６−（２−（（Ｓ）−４４−（（Ｒ）−３−アミノ−２−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）プロパンアミド）−３８，４５−ジオキソ−２，５，８，１１，１４，１７，２０，２３，２６，２９，３２，３５−ドデカオキサ−３９，４６−ジアザノナテトラコンタンアミド）−４−（（５Ｓ，８Ｓ，１１Ｓ，１２Ｒ）−１１−（（Ｓ）−ｓｅｃ−ブチル）−１２−（２−（（Ｓ）−２−（（１Ｒ，２Ｒ）−３−（（（１Ｓ，２Ｒ）−１−ヒドロキシ−１−フェニルプロパン−２−イル）アミノ）−１−メトキシ−２−メチル−３−オキソプロピル）ピロリジン−１−イル）−２−オキソエチル）−５，８−ジイソプロピル−４，１０−ジメチル−３，６，９−トリオキソ−２，１３−ジオキサ−４，７，１０−トリアザテトラデシル）フェノキシ）−３，４，５−トリヒドロキシテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−カルボン酸（１１）：ＭＤｐｒ（Ｂｏｃ）−Ｌｙｓ（ＰＥＧ１２）−グルクロニド−ＭＭＡＥ中間体１０（３４ｍｇ、１６ｕｍｏｌ）を入れたフラスコを、窒素下の氷浴で０℃に冷却した。ジクロロメタン（０．８ｍＬ）中１０％トリフルオロ酢酸の溶液を滴下して加えた。次いで、反応物を０℃で２時間攪拌し、その時点で、ＬＣ−ＭＳは完全なＢｏｃ脱保護を明らかにした。次いで、反応物を粗残留物に濃縮し、分取ＨＰＬＣにより精製し、ＭＤｐｒ−Ｌｙｓ（ＰＥＧ１２）−グルクロニド−ＭＭＡＥリンカー１１（２２ｍｇ、６８％）を得た。ＵＰＬＣ−ＭＳ：ｔＲ１．５０分、ｍ／ｚ（ＥＳ＋）実測値１９９５．１８（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０１４０】
化合物１１は、当該技術分野において既知の方法を使用して、抗体当たり８薬物の平均薬物負荷で、その鎖間チオールを介して抗ＣＤ４８抗体と複合体化された（例えば、米国特許第７，６５９，２４１号を参照されたい）。
【０１４１】
実施例４：多発性骨髄腫癌細胞系に対するｈＭＥＭ−１０２  ＡＤＣの細胞傷害性。
方法：ヒト多発性骨髄腫細胞系ＥＪＭ（ＤＳＭＺ；ＩＭＤＭ＋２０％ＦＢＳ）、Ｌ３６３（ＤＳＭＺ；ＲＰＭＩ１６４０＋１５％ＦＢＳ）、ＭＭ．１Ｒ（ＡＴＣＣ；ＲＰＭＩ１６４０＋１０％ＦＢＳ）、ＮＣＩ−Ｈ９２９（ＡＴＣＣ：ＲＰＭＩ１６４０＋１０％ＦＢＳ）、Ｕ−２６６（ＡＴＣＣ；ＲＰＭＩ１６４０＋１５％ＦＢＳ）、及びＬＰ−１（ＤＳＭＺ；ＩＭＤＭ＋２０％ＦＢＳ）を３７℃、５％ＣＯ２で培養した。抗ＣＤ４８アウリスタチン抗体薬物複合体を、１０ポイント用量曲線（１，０００ｎｇ／ｍＬ〜０．０５０８１ｎｇ／ｍＬ）をもたらすために、培地に３倍に系列希釈し、９６ウェルアッセイプレート（２００μＬの培地のウェル当たり１０，０００〜１５，０００細胞）中で培養された多発性骨髄腫細胞に適用した。ＡＤＣと共に、３７℃、５％ＣＯ２で合計９６時間、細胞をインキュベートした。Ｃｅｌｌ  Ｔｉｔｅｒ  Ｇｌｏ発光細胞傷害性アッセイ（Ｐｒｏｍｅｇａ）を使用して、細胞生存性をアッセイし、ＥｎＶｉｓｉｏｎプレートリーダー（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ）を使用してデータを収集した。全ての細胞傷害性アッセイは４つ組データ点で行われ、２〜３の独立した実験からの平均ＩＣ５０値が報告される。
【０１４２】
アポトーシス細胞死は、上述と同一のアッセイ条件を使用して、Ｃａｓｐａｓｅ−Ｇｌｏ３／７アッセイ（Ｐｒｏｍｅｇａ）を使用して測定された。
【０１４３】
結果：結果を表２に示す。ｈＭＥＭ１０２抗体は、ｖｃＭＭＡＥ（４−負荷）、ｍｃＭＭＡＦ（４−負荷）、及びｈＭＥＭ１０２−５０８８（８）とも称される、８負荷としてＭＤｐｒ−ＰＥＧ（１２）−ｇｌｕｃ−ＭＭＡＥと複合体化された。類似する複合体化が対照抗体の非ＣＤ４８結合抗体で行われた。ｈＭＥＭ１０２−５０８８（８）は、ｖｃＭＭＡＥ（４）及びｍｃＭＭＡＦ（４）と複合体化された同じ抗体と比較したとき、改善された細胞傷害性活性を呈した。陰性対照として、ＣＤ４８、ＬＰ−１を発現しない細胞系も含まれた。
【表２】
2018509908.tif 000044
【０１４４】
アポトーシス細胞死に関して、ＮＣＩ−Ｈ９２９及びＵ−２６６の２つの細胞系を評価した。結果を図５及び６に示す。両細胞系において、ｈＭＥＭ１０２−ＭＤｐｒ−ＰＥＧ（１２）−ｇｌｕｃ−ＭＭＡＥ（８）複合体は、薬物への曝露数時間後にアポトーシス細胞死を誘導した。ＭＤｐｒ−ＰＥＧ（１２）−ｇｌｕｃ−ＭＭＡＥ（８）と複合体化された対照抗体で処置された細胞において、アポトーシス死は見られなかった。図において、薬物リンカーは５０８８として言及され、抗体当たり８つの薬物リンカーが複合体化される。図５及び６の両方において、ｈＭＥＭ１０２−ＭＤｐｒ−ＰＥＧ（１２）−ｇｌｕｃ−ＭＭＡＥ（８）複合体は塗りつぶされた四角で表され、一方対照抗体のＭＤｐｒ−ＰＥＧ（１２）−ｇｌｕｃ−ＭＭＡＥ（８）複合体は白四角で表される。
【０１４５】
実施例５：インビボ多発性骨髄腫異種移植片研究
雌ＮＳＧ（ＮＯＤ  ｓｃｉｄガンマ；ＮＯＤ．Ｃｇ−ＰｒｋｄｃｓｃｉｄＩｌ２ｒｇｔｍ１Ｗｊｌ／ＳｚＪ）マウスに、動物当たり２５０万個のＮＣＩ−Ｈ９２９細胞を静脈内移植し、多発性骨髄腫の播種性モデルを生成した。腫瘍細胞移植５日後に、処置群当たりｎ＝８マウスに、ｈＭＥＭ１０２−ＭＤｐｒ−ＰＥＧ（１２）−ｇｌｕｃ−ＭＭＡＥ（５０８８）ＡＤＣもしくは非結合対照ｈＩｇＧ−ＭＤｐｒ−ＰＥＧ（１２）−ｇｌｕｃ−ＭＭＡＥ（５０８８）ＡＤＣ、またはｈＭＥＭ１０２−アウリスタチンＴ（４８３０）もしくは非結合対照ｈＩｇＧ−アウリスタチンＴ（４８３０）の単一腹腔内注射を行った。検査したＡＤＣ用量レベルは、０．３３ｍｇ／ｋｇ及び１．０ｍｇ／ｋｇであった。進行した腫瘍負荷のマウスは、後肢麻痺、頭蓋腫大、及び／または瀕死の症状を示したときに屠殺した。図７に示されるように、両ＡＤＣは、全ての用量レベル（単一用量）の８／８マウスにおいて持続的な完全奏功をもたらし、一方、非結合対照ＡＤＣ投薬マウスは、研究の６０日目までに、疾患により全て屠殺された。
【０１４６】
雌ＮＳＧ（ＮＯＤ  ｓｃｉｄガンマ；ＮＯＤ．Ｃｇ−ＰｒｋｄｃｓｃｉｄＩｌ２ｒｇｔｍ１Ｗｊｌ／ＳｚＪ）マウスに、動物当たり１００万個のＮＣＩ−Ｈ９２９多発性骨髄腫細胞を皮下移植した。平均腫瘍体積が１００ｍｍ３に達したときに、処置群当たりｎ＝７マウスに、ｈＭＥＭ１０２−ＭＤｐｒ−ＰＥＧ（１２）−ｇｌｕｃ−ＭＭＡＥ（５０８８）ＡＤＣもしくは非結合対照ｈＩｇＧ−ＭＤｐｒ−ＰＥＧ（１２）−ｇｌｕｃ−ＭＭＡＥ（５０８８）ＡＤＣ、またはｈＭＥＭ１０２−アウリスタチンＴ（４８３０）もしくは非結合対照ｈＩｇＧ−アウリスタチンＴ（４８３０）、またはｈＭＥＭ１０２−ｖｃＭＭＡＥ（１００６）ＡＤＣもしくは非結合対照ｈＩｇＧ−ｖｃＭＭＡＥ（１００６）の単一腹腔内注射を行った。検査したＡＤＣ用量レベルは、０．３３ｍｇ／ｋｇ及び１．０ｍｇ／ｋｇであった。個々のマウスは、皮下ＮＣＩ−Ｈ９２９腫瘍体積が１，０００ｍｍ３に達したときに屠殺された。図８に示されるように、ｈＭＥＭ１０２−ＭＤｐｒ−ＰＥＧ（１２）−ｇｌｕｃ−ＭＭＡＥ（５０８８）ＡＤＣのは、１．０ｍｇ／ｋｇ用量レベルの全てのマウスにおいて持続的な完全奏功をもたらした。０．３３ｍｇ／ｋｇの低用量レベルで、ｈＭＥＭ１０２−ＭＤｐｒ−ＰＥＧ（１２）−ｇｌｕｃ−ＭＭＡＥ（５０８８）は腫瘍遅延をもたらした。ｖｃＭＭＡＥ及びアウリスタチンＴ  ＡＤＣは、高用量でのみ腫瘍遅延を誘導した。
【０１４７】
雌ＮＳＧ（ＮＯＤ  ｓｃｉｄガンマ；ＮＯＤ．Ｃｇ−ＰｒｋｄｃｓｃｉｄＩｌ２ｒｇｔｍ１Ｗｊｌ／ＳｚＪ）マウスに、動物当たり１００万個のＭＭ．１Ｒ細胞を静脈内移植し、多発性骨髄腫の播種性モデルを生成した。腫瘍細胞移植５日後に、処置群当たりｎ＝７マウスに、ｈＭＥＭ１０２−ＭＤｐｒ−ＰＥＧ（１２）−ｇｌｕｃ−ＭＭＡＥ（５０８８）ＡＤＣもしくは非結合対照ｈＩｇＧ−ＭＤｐｒ−ＰＥＧ（１２）−ｇｌｕｃ−ＭＭＡＥ（５０８８）ＡＤＣ、またはｈＭＥＭ１０２−アウリスタチンＴ（４８３０）もしくは非結合対照ｈＩｇＧ−アウリスタチンＴ（４８３０）の単一腹腔内注射を行った。検査したＡＤＣ用量レベルは、１．０ｍｇ／ｋｇ及び３．０ｍｇ／ｋｇであった。進行した腫瘍負荷のマウスは、後肢麻痺、頭蓋腫大、及び／または瀕死の症状を示したときに屠殺した。図９に示されるように、両ＡＤＣは、試験した全ての用量レベル（単一用量）のマウスにおいて持続的な完全奏功をもたらし、一方、非結合対照ＡＤＣ投薬マウスは、研究の６０日目までに、疾患により全て屠殺された。
【０１４８】
雌ＮＳＧ（ＮＯＤ  ｓｃｉｄガンマ；ＮＯＤ．Ｃｇ−ＰｒｋｄｃｓｃｉｄＩｌ２ｒｇｔｍ１Ｗｊｌ／ＳｚＪ）マウスに、動物当たり５００万個のＭＭ．１Ｒ多発性骨髄腫細胞を皮下移植した。平均腫瘍体積が１００ｍｍ３に達したときに、処置群当たりｎ＝７マウスに、ｈＭＥＭ１０２−ＭＤｐｒ−ＰＥＧ（１２）−ｇｌｕｃ−ＭＭＡＥ（５０８８）ＡＤＣもしくは非結合対照ｈＩｇＧ−ＭＤｐｒ−ＰＥＧ（１２）−ｇｌｕｃ−ＭＭＡＥ（５０８８）ＡＤＣ、またはｈＭＥＭ１０２−アウリスタチンＴ（４８３０）もしくは非結合対照ｈＩｇＧ−アウリスタチンＴ（４８３０）、またはｈＭＥＭ１０２−ｖｃＭＭＡＥ（１００６）ＡＤＣもしくは非結合対照ｈＩｇＧ−ｖｃＭＭＡＥ（１００６）の単一腹腔内注射を行った。検査したＡＤＣ用量レベルは、０．３３ｍｇ／ｋｇ及び１．０ｍｇ／ｋｇであった。個々のマウスは、皮下ＭＭ．１Ｒ腫瘍体積が１，０００ｍｍ３に達したときに屠殺された。図１０に示されるように、ｈＭＥＭ１０２−ＭＤｐｒ−ＰＥＧ（１２）−ｇｌｕｃ−ＭＭＡＥ（５０８８）ＡＤＣのは、最も強い抗腫瘍応答及び最も長い腫瘍遅延をもたらした。
【０１４９】
雌ＮＳＧ（ＮＯＤ  ｓｃｉｄガンマ；ＮＯＤ．Ｃｇ−ＰｒｋｄｃｓｃｉｄＩｌ２ｒｇｔｍ１Ｗｊｌ／ＳｚＪ）マウスに、動物当たり５００万個のＥＪＭ細胞を静脈内移植し、多発性骨髄腫の播種性モデルを生成した。腫瘍細胞移植５日後に、処置群当たりｎ＝８マウスに、ｈＭＥＭ１０２−ＭＤｐｒ−ＰＥＧ（１２）−ｇｌｕｃ−ＭＭＡＥ（５０８８）ＡＤＣもしくは非結合対照ｈＩｇＧ−ＭＤｐｒ−ＰＥＧ（１２）−ｇｌｕｃ−ＭＭＡＥ（５０８８）ＡＤＣ、またはｈＭＥＭ１０２−アウリスタチンＴ（４８３０）もしくは非結合対照ｈＩｇＧ−アウリスタチンＴ（４８３０）の単一腹腔内注射を行った。検査したＡＤＣ用量レベルは、０．３３ｍｇ／ｋｇ及び１．０ｍｇ／ｋｇであった。進行した腫瘍負荷のマウスは、後肢麻痺、頭蓋腫大、及び／または瀕死の症状を示したときに屠殺した。図１１に示されるように、ｈＭＥＭ１０２−ＭＤｐｒ−ＰＥＧ（１２）−ｇｌｕｃ−ＭＭＡＥ（５０８８）ＡＤＣのは、最も強い抗腫瘍応答、０．３３ｍｇ／ｋｇで６／８の完全奏功、及び１．０ｍｇ／ｋｇで７／８の完全奏功をもたらした。非結合対照ＡＤＣ投薬マウスは、研究の６０日目までに、疾患により全て屠殺された。
【０１５０】
実施例６：エフェクター機能
ＷＩＬ２−Ｓ標的細胞の方法に関して、抗体依存細胞傷害性（ＡＤＣＣ）は、抗体コーティングされたＣＤ４８陽性標的細胞と組み合わされた精製ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞を使用して、クロム−５１放出を通して測定された。ＷＩＬ２−Ｓ腫瘍細胞をクロム−５１で標識し、抗体（０．１ｎｇ／ｍＬ〜１０μｇ／ｍＬ）と共に３０分間予めインキュベートした。次いで、標的細胞をＮＫエフェクター細胞（エフェクター／標的比１０：１）と組み合わせ、３７℃、５％ＣＯ２で更に４時間インキュベートした。次いで、上清中のクロム−５１を、Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ  ＴｏｐＣｏｕｎｔプレートリーダーで定量化した。ＡＤＣＣ活性は、１％トリトンＸ−１００処置対照標的細胞に対する最大溶解のパーセントとして測定される。ＡＤＣＣは、同じＮＫ細胞エフェクター比及び上述の抗ＣＤ４８抗体またはＡＤＣ滴定範囲を使用して、正常なヒト休止Ｔ細胞（Ａｌｌ  Ｃｅｌｌｓ）に関してアッセイされたが、細胞膜を標識するために（クロム−５１ではない）、ＰＫＨ２緑色蛍光細胞リンカーキット（Ｓｉｇｍａ）が使用された。ＬＳＲＩＩフローサイトメトリー（Ｂｅｃｔｏｎ  Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ）を使用して、フローサイトメトリーによりＴ細胞生存性を測定するために、７−ＡＡＤ色素が使用された。
【０１５１】
補体依存性細胞傷害は、正常なヒトＴ細胞またはＷＩＬ２−Ｓ腫瘍細胞を、１０％熱不活性化ヒトＡＢ血清及び５μＭ  Ｓｙｔｏｘ緑色蛍光色素を含有するＲＰＭＩ１６４０培養培地に系列希釈した抗体（０．０２〜５０μｇ／ｍＬ）と共にインキュベートすることにより測定された。次いで、３７℃、５％ＣＯ２で合計２時間、細胞をインキュベートした。溶解細胞からの蛍光がＥｎｖｉｓｉｏｎプレートリーダーで測定された。標的細胞の最大比溶解は、１％トリトンＸ−１００処置対照細胞のパーセントとして計算された。
【０１５２】
抗体依存性細胞食作用は、エフェクター細胞として単球由来マクロファージ及びＰＫＨ２６赤色蛍光色素標識された正常なヒトＴ細胞（Ａｌｌ  Ｃｅｌｌｓ）、ＷＩＬ２−Ｓ、またはラージ腫瘍細胞を使用して、測定された。標的細胞は、系列希釈された抗体（０．２ｎｇ／ｍＬ〜２μｇ／ｍＬ）と共に３０分間予めインキュベートされ、次いでリン酸緩衝生理食塩水で２回洗浄した。１０％低ＩｇＧウシ胎仔血清を含有するＲＰＭＩ  １６４０培養培地中４：１の比率でマクロファージを標的細胞に加え、３７℃、５％ＣＯ２で２時間インキュベートした。次いで、マクロファージをＡｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ（登録商標）−４８８複合体化マウス抗ヒトＣＤ１１ｂ抗体で標識した。ＦＡＣＳＣａｌｉｂｕｒフローサイトメーターで、緑色及び赤色の２重蛍光を示す事象として腫瘍細胞陽性マクロファージを検出した。最大比食作用活性は、非結合アイソタイプ対照背景活性を差し引いた後の腫瘍陽性マクロファージのパーセントとして提示される。
【０１５３】
結果：非複合体化ｈＭＥＭ１０２抗体及びｈＭＥＭ１０２−ＭＤｐｒ−ＰＥＧ（１２）−ｇｌｕｃ−ＭＭＡＥ（５０８８）ＡＤＣのＡＤＣＣ活性が評価され、ＣＡＭＰＡＴＨ（登録商標）（アレムツズマブ、抗ＣＤ５２抗体）及びリツキシマブ（抗ＣＤ２０抗体）のＡＤＣＣ活性と比較された。表３に示されるように、ヒト化ＭＥＭ１０２−ＨＡＬＡ抗体は、正常な休止Ｔ細胞及びＷＩＬ２−Ｓ腫瘍細胞系に対して中程度のＡＤＣＣ活性を有する。ＡＤＣＣ活性は、５０８８複合体化時に大幅に低減され、裸抗体と比較して、Ｔ細胞において２．７倍低いＡＤＣＣ活性をもたらす。
【表３】
2018509908.tif 000045
【０１５４】
ＣＤＣ活性の結果を表４に示す。非複合体化ｈＭＥＭ１０２抗体またはｈＭＥＭ１０２−ＭＤｐｒ−ＰＥＧ（１２）−ｇｌｕｃ−ＭＭＡＥ（５０８８）ＡＤＣのいずれも正常な休止Ｔ細胞及びＷＩＬ２−Ｓ腫瘍細胞に対してＣＤＣ活性を呈さなかった。アレムツズマブ及びリツキシマブの両方が標的細胞に対して実質的なＣＤＣ活性を呈した。
【表４】
2018509908.tif 000046
【０１５５】
ＡＤＣＰの結果を表５に示す。非複合体化ｈＭＥＭ１０２抗体及びｈＭＥＭ１０２−ＭＤｐｒ−ＰＥＧ（１２）−ｇｌｕｃ−ＭＭＡＥ（５０８８）ＡＤＣの両方が正常な休止Ｔ細胞またはＷＩＬ２−Ｓ及びラージ腫瘍細胞系に対して中程度のＡＤＣＰ活性を呈し、キャンパス及びリツキシマブで観察されたレベルと一致した。
【表５】
2018509908.tif 000047
本明細書に記載される実施例及び実施形態は単に図示の目的のためであり、それらの観点から様々な修正または変更が当業者に示唆され、本出願の趣旨及び範囲ならびに付属の特許請求の範囲の範囲内に含まれることを理解する。本明細書に引用される全ての刊行物、特許、及び特許出願は、全ての目的において、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
非公式配列表
配列番号１、ｈＭＥＭ１０２  ＨＡ−重鎖可変領域
ＱＶＱＬＶＱＳＧＳＥＬＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＤＦＧＭＮＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＷＩＮＴＦＴＧＥＰＳＹＧＮＶＦＫＧＲＦＶＦＳＬＤＴＳＶＳＴＡＹＬＱＩＳＳＬＫＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＲＨＧＮＧＮＶＦＤＳＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ
配列番号２、ｈＭＥＭ１０２  ＬＡ−軽鎖可変領域
ＥＩＶＬＴＱＳＰＤＦＱＳＶＴＰＫＥＫＶＴＩＴＣＲＡＳＱＳＩＧＳＮＩＨＷＹＱＱＫＰＤＱＳＰＫＬＬＩＫＹＴＳＥＳＩＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＮＳＬＥＡＥＤＡＡＴＹＹＣＱＱＳＮＳＷＰＬＴＦＧＧＧＴＫＶＥＩＫＲ
配列番号３、重鎖ＣＤＲ１
ＤＦＧＭＮ
配列番号４、重鎖ＣＤＲ２
ＷＩＮＴＦＴＧＥＰＳＹＧＮＶＦＫＧ
配列番号５、重鎖ＣＤＲ３
ＲＨＧＮＧＮＶＦＤＳ
配列番号６、軽鎖ＣＤＲ１
ＲＡＳＱＳＩＧＳＮＩＨ
配列番号７、軽鎖ＣＤＲ２
ＹＴＳＥＳＩＳ
配列番号８、軽鎖ＣＤＲ３
ＱＱＳＮＳＷＰＬＴ
配列番号９、ｈＭＥＭ１０２  ＨＡ  Ｈ鎖Ｇ１
ＱＶＱＬＶＱＳＧＳＥＬＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＤＦＧＭＮＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＷＩＮＴＦＴＧＥＰＳＹＧＮＶＦＫＧＲＦＶＦＳＬＤＴＳＶＳＴＡＹＬＱＩＳＳＬＫＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＲＨＧＮＧＮＶＦＤＳＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＫＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ
配列番号１０、ｈＭＥＭ１０２  ＬＡ  Ｌ鎖
ＥＩＶＬＴＱＳＰＤＦＱＳＶＴＰＫＥＫＶＴＩＴＣＲＡＳＱＳＩＧＳＮＩＨＷＹＱＱＫＰＤＱＳＰＫＬＬＩＫＹＴＳＥＳＩＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＮＳＬＥＡＥＤＡＡＴＹＹＣＱＱＳＮＳＷＰＬＴＦＧＧＧＴＫＶＥＩＫＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ
配列番号１１、天然に生じる重鎖定常領域
ＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＫＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧ
配列番号１２、軽鎖定常領域
ＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ
【図１】
2018509908.tif 000061
【図２】
2018509908.tif 000062
【図３】
2018509908.tif 000063
【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
2018509908.tif 000069
【図１０】
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【図１１】
2018509908.tif 000071
【配列表】
2018509908000001.app
【国際調査報告】
2018509908.tif 000072
2018509908.tif 000073