(57)【要約】本発明は、化学式１で表される化合物、またはその薬学的に許容可能な塩に関し、本発明による化合物は、オートファジー（ａｕｔｏｐｈａｇｙ）関連疾患の予防または治療に有用に使用することができる。【選択図】なし
2018529653.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記化学式１で表される化合物、またはその薬学的に許容可能な塩：
【化１】
2018529653.tif 000026
前記化学式１において、
Ｒ１およびＲ２は、それぞれ独立にＣ１−４アルキルであるか、またはＲ１およびＲ２が共に連結されてＣ１−４アルキレンを形成し、
Ｒ３は、Ｃ１−４アルキル、Ｃ５−１０ヘテロアリールで置換されたＣ１−４アルキル、Ｃ６−１０アリール、またはＣ５−１０ヘテロアリールであり、
Ｘは、ＣＨ、またはＮであり、
Ｙは、ＮＨ、またはＯである。
【請求項２】
Ｒ１およびＲ２は、メチルであるか、またはＲ１およびＲ２が共に連結されてメチレン、またはエチレンを形成することを特徴とする、請求項１に記載の化合物、またはその薬学的に許容可能な塩。
【請求項３】
Ｒ３は、メチル、エチル、イソプロピル、イソブチル、ピリジニルメチル、フェニル、またはピリジンであることを特徴とする、請求項１に記載の化合物、またはその薬学的に許容可能な塩。
【請求項４】
Ｒ１およびＲ２は、それぞれ独立にＣ１−４アルキルであるか、またはＲ１およびＲ２が共に連結されてＣ１−４アルキレンを形成し、
Ｒ３は、Ｃ１−４アルキル、Ｃ５−１０ヘテロアリールで置換されたＣ１−４アルキル、Ｃ６−１０アリール、またはＣ５−１０ヘテロアリールであり、
Ｘは、ＣＨであり、
Ｙは、ＮＨであることを特徴とする、請求項１に記載の化合物、またはその薬学的に許容可能な塩。
【請求項５】
Ｒ１およびＲ２が共に連結されてＣ１−４アルキレンを形成し、
Ｒ３は、Ｃ１−４アルキル、またはＣ６−１０アリールであり、
Ｘは、Ｎであり、
Ｙは、ＮＨであることを特徴とする、請求項１に記載の化合物、またはその薬学的に許容可能な塩。
【請求項６】
Ｒ１およびＲ２は、メチルであるか、またはＲ１およびＲ２が共に連結されてメチレンを形成し、
Ｒ３は、イソプロピル、イソブチル、またはフェニルであり、
Ｘは、ＣＨであり、
Ｙは、ＮＨであることを特徴とする、請求項１に記載の化合物、またはその薬学的に許容可能な塩。
【請求項７】
前記化合物は、
１）５−（３，４−ジメトキシフェニル）−Ｎ−イソプロピルチオフェン−２−カルボキサミド、
２）５−（ベンゾ［ｄ］［１，３］ジオキソール−５−イル）−Ｎ−イソプロピルチオフェン−２−カルボキサミド、
３）５−（２，３−ジヒドロベンゾ［ｂ］［１，４］ジオキシン−６−イル）−Ｎ−イソプロピルチオフェン−２−カルボキサミド、
４）５−（３，４−ジメトキシフェニル）−Ｎ−イソブチルチオフェン−２−カルボキサミド、
５）５−（ベンゾ［ｄ］［１，３］ジオキソール−５−イル）−Ｎ−イソブチルチオフェン−２−カルボキサミド、
６）５−（２，３−ジヒドロベンゾ［ｂ］［１，４］ジオキシン−６−イル）−Ｎ−イソブチルチオフェン−２−カルボキサミド、
７）５−（３，４−ジメトキシフェニル）−Ｎ−フェニルチオフェン−２−カルボキサミド、
８）５−（ベンゾ［ｄ］［１，３］ジオキソール−５−イル）−Ｎ−フェニルチオフェン−２−カルボキサミド、
９）５−（２，３−ジヒドロベンゾ［ｂ］［１，４］ジオキシン−６−イル）−Ｎ−フェニルチオフェン−２−カルボキサミド、
１０）５−（ベンゾ［ｄ］［１，３］ジオキソール−５−イル）−Ｎ−（ピリジン−２−イル）チオフェン−２−カルボキサミド、
１１）５−（ベンゾ［ｄ］［１，３］ジオキソール−５−イル）−Ｎ−（ピリジン−２−イルメチル）チオフェン−２−カルボキサミド、
１２）５−（２，３−ジヒドロベンゾ［ｂ］［１，４］ジオキシン−６−イル）−Ｎ−（ピリジン−２−イルメチル）チオフェン−２−カルボキサミド、
１３）２−（ベンゾ［ｄ］［１，３］ジオキソール−５−イル）−Ｎ−イソプロピルチアゾール−５−カルボキサミド、
１４）２−（２，３−ジヒドロベンゾ［ｂ］［１，４］ジオキシン−６−イル）−Ｎ−イソプロピルチアゾール−５−カルボキサミド、
１５）２−（ベンゾ［ｄ］［１，３］ジオキソール−５−イル）−Ｎ−イソブチルチアゾール−５−カルボキサミド、
１６）２−（２，３−ジヒドロベンゾ［ｂ］［１，４］ジオキシン−６−イル）−Ｎ−イソブチルチアゾール−５−カルボキサミド、
１７）２−（ベンゾ［ｄ］［１，３］ジオキソール−５−イル）−Ｎ−フェニルチアゾール−５−カルボキサミド、
１８）２−（２，３−ジヒドロベンゾ［ｂ］［１，４］ジオキシン−６−イル）−Ｎ−フェニルチアゾール−５−カルボキサミド、
１９）メチル５−（ベンゾ［ｄ］［１，３］ジオキソール−５−イル）チオフェン−２−カルボキシレート、および
２０）エチル２−（ベンゾ［ｄ］［１，３］ジオキソール−５−イル）チアゾール−５−カルボキシレートから構成される群より選択されるいずれか１つであることを特徴とする、請求項１に記載の化合物、またはその薬学的に許容可能な塩。
【請求項８】
下記化学式２で表される化合物と下記化学式３で表される化合物とを反応させて、下記化学式１で表される化合物を製造する段階を含む、下記化学式１で表される化合物の製造方法：
【化２】
2018529653.tif 000027
前記化学式１〜３において、
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、ＸおよびＹは、請求項１で定義した通りであり、
Ｒ４は、ハロゲンである。
【請求項９】
請求項１〜７のいずれか１項に記載の化合物、またはその薬学的に許容可能な塩を含む、オートファジー関連疾患の予防または治療用薬学的組成物。
【請求項１０】
前記オートファジー関連疾患は、肝疾患であることを特徴とする、請求項９に記載の薬学的組成物。
【請求項１１】
前記肝疾患は、肝線維化症、肝硬変症、肝炎、アルコール性肝疾患、脂肪肝、または非アルコール性脂肪肝炎であることを特徴とする、請求項１０に記載の薬学的組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、新規なカテコール誘導体およびこれを含む薬学的組成物に関し、本発明によるカテコール誘導体は、肝疾患の予防または治療に有用に使用することができる。
【背景技術】
【０００２】
肝線維化（Ｌｉｖｅｒ  ｆｉｂｒｏｓｉｓ）は、あらゆる原因の慢性肝損傷に対する一般的な治癒反応である。損傷した組織を治癒するために、肝組織は傷に新しい膠原質を沈着させるが、時間が経過するほど、このような過程は肝の硬化につながる。肝線維化は、一般に、感染、薬物、代謝障害、または自己免疫の不均衡によって発生する慢性肝疾患に関連付けられている。長期間の実質細胞（ｐａｒｅｎｃｈｙｍａｌ  ｃｅｌｌ）の死滅および壊死による肝線維化は炎症反応に関連付けられていて、免疫細胞を呼び起こして線維化細胞（ｆｉｂｒｏｇｅｎｉｃ  ｃｅｌｌｓ）を活性化および蓄積させ、細胞外基質（ｅｘｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ  ｍａｔｒｉｘ）の蓄積を誘発する。持続的な肝損傷による線維化の進行は線維性隔膜（ｆｉｂｒｏｔｉｃ  ｓｅｐｔａ）の膨張に関連し、窮極的に肝硬変（ｃｉｒｒｈｏｓｉｓ）を起こす。
【０００３】
肝線維化は１−１０年の間に肝硬変に発展し、７−１０年以内の肝関連死亡率原因を１２％から２５％に増加させる（Ｆａｒｒｅｌｌ，Ｇ．Ｃ．＆Ｌａｒｔｅｒ，Ｃ．Ｚ．Ｎｏｎａｌｃｏｈｏｌｉｃ  ｆａｔｔｙ  ｌｉｖｅｒ  ｄｉｓｅａｓｅ：ｆｒｏｍ  ｓｔｅａｔｏｓｉｓ  ｔｏ  ｃｉｒｒｈｏｓｉｓ．Ｈｅｐａｔｏｌｏｇｙ４３，Ｓ９９−Ｓ１１２（２００６））。しかし、不幸にも、効果的な臨床治療法は依然として不十分な状態である。したがって、効率的な抗線維化治療方法は、肝疾患治療において良い標的となっている。現在、肝線維化に至らせるいくつかの段階を標的とした抗線維化戦略が認められた。つまり、肝細胞の細胞死滅を抑制したり、肝炎症の抑制、または線維化細胞の細胞死滅を推進したり、表現型（ｐｈｅｎｏｔｙｐｅ）線維化細胞を停止状態（ｑｕｉｅｓｃｅｎｔ  ｓｔａｔｅ）に戻す方法がある。しかし、今のところ、肝線維化の治療に使用される特定薬物は依然として制限されている。
【０００４】
一方、自己消化作用（ａｕｔｏｐｈａｇｙ）は一つの代謝過程で、真核細胞が自らの細胞器官と古い蛋白質を消化させる過程である。その過程は、細胞の成長、分化と恒常性（ｈｏｍｅｏｓｔａｓｉｓ）に密接に関連付けられている。そして、「古い」または「破損した」細胞器官を消化させる唯一の方式である（Ｋｌｉｏｎｓｋｙ，Ｄ．Ｊ．＆Ｅｍｒ，Ｓ．Ｄ．Ａｕｔｏｐｈａｇｙ  ａｓ  ａ  ｒｅｇｕｌａｔｅｄ  ｐａｔｈｗａｙ  ｏｆ  ｃｅｌｌｕｌａｒ  ｄｅｇｒａｄａｔｉｏｎ．Ｓｃｉｅｎｃｅ２９０，１７１７−１７２１（２０００），Ｌｅｖｉｎｅ，Ｂ．＆Ｋｌｉｏｎｓｋｙ，Ｄ．Ｊ．Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  ｂｙ  ｓｅｌｆ−ｄｉｇｅｓｔｉｏｎ：ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ  ａｎｄ  ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  ｆｕｎｃｔｉｏｎｓ  ｏｆ  ａｕｔｏｐｈａｇｙ．Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔａｌ  ｃｅｌｌ６，４６３−４７７（２００４））。自己消化作用は、生理的および病理的条件下の肝恒常性（ｈｏｍｅｏｓｔａｓｉｓ）において重要な調節因子として作用している（Ｃｏｄｏｇｎｏ，Ｐ．＆Ｍｅｉｊｅｒ，Ａ．Ｊ．Ａｕｔｏｐｈａｇｙ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｌｉｖｅｒ．Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  ｈｅｐａｔｏｌｏｇｙ５９，３８９−３９１（２０１３）．Ｒａｕｔｏｕ，Ｐ．−Ｅ．ｅｔ  ａｌ．Ａｕｔｏｐｈａｇｙ  ｉｎ  ｌｉｖｅｒ  ｄｉｓｅａｓｅｓ．Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  ｈｅｐａｔｏｌｏｇｙ５３，１１２３−１１３４（２０１０）．Ｃｚａｊａ，Ｍ．Ｊ．ｅｔ  ａｌ．Ｆｕｎｃｔｉｏｎｓ  ｏｆ  ａｕｔｏｐｈａｇｙ  ｉｎ  ｎｏｒｍａｌ  ａｎｄ  ｄｉｓｅａｓｅｄ  ｌｉｖｅｒ．Ａｕｔｏｐｈａｇｙ９，１１３１−１１５８（２０１３））。現在、ａｕｔｏｐｈａｇｙは、ａｇｇｒｅｇａｔｅｄ  ｐｒｏｔｅｉｎ、ｄａｍａｇｅｄ／ｅｘｃｅｓｓ  ｏｒｇａｎｅｌｌｅｓ、ｌｉｐｉｄなどの細胞内の特定構成要素を選択的にターゲッティングして、ｌｙｓｏｓｏｍａｌ  ｐａｔｈｗａｙを通して分解させることによって、恒常性とエネルギー生産に必要な基質の供給を調節する重要ｐａｔｈｗａｙとして認識されている（Ａｕｔｏｐｈａｇｙ．２０１３Ａｕｇ；９（８）；１１３１−５８）。また、最近の研究結果により、自己消化作用は、肝線維化における一つの新たな調節経路であることが明らかになった。自己消化作用は、肝線維化を誘導するｈｅｐａｔｉｃ  ｓｔｅｌｌａｔｅ  ｃｅｌｌｓ（ＨＳＣｓ）の活性化過程に直接的に寄与したり、または可能に他の線維化細胞に対する間接的な作用で肝線維化を促進させる。
【０００５】
Ａｕｔｏｐｈａｇｙ研究の代表的なモデルでもある肝は、１）再生能力が非常に優れた属性を有しており、２）重要な代謝器官であり、３）ｌｉｖｅｒ  ｔｒｏｐｈｉｃ  ｖｉｒｕｓによる感染に露出した器官である。したがって、このような再生、代謝、免疫などの器官の核心機能がａｕｔｏｐｈａｇｙに密接に関連している（Ａｕｔｏｐｈａｇｙ．２０１３Ａｕｇ；９（８）：１１３１−５８）。Ｌｉｖｅｒ  ｉｓｃｈｅｍｉａ−ｒｅｐｅｒｆｕｓｉｏｎは、臨床的にｌｉｖｅｒ  ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ、ｔｒａｕｍａ、ｃｈｏｃｋ、ｅｌｅｃｔｉｖｅ  ｌｉｖｅｒ  ｒｅｓｅｃｔｉｏｎ時に発生する。虚血再酸素化（Ｉｓｃｈｅｍｉａ−ｒｅｏｘｙｇｅｎａｔｉｏｎ）時には、ミトコンドリアの内部には活性酸素種（ｒｅａｃｔｉｖｅ  ｏｘｙｇｅｎ  ｓｐｅｃｉｅｓ）とＣａ２＋の量が増加し、ミトコンドリア膜遷移（ｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａ  ｐｅｒｍｅａｂｉｌｉｔｙ  ｔｒａｎｓｉｔｉｏｎ）して酸化的リン酸化（ｏｘｉｄａｔｉｖｅ  ｐｈｏｓｐｈｏｒｙｌａｔｉｏｎ）がｕｎｃｏｕｐｌｉｎｇされ、窮極的にエネルギーおよびＡＴＰの枯渇と共に細胞死滅が誘導される。Ａｎｏｘｉａ／ｒｅｏｘｙｇｅｎａｔｉｏｎ時にａｕｔｏｐｈａｇｙ  ｐｒｏｔｅｉｎが低下しているため、損傷したミトコンドリアが除去できない。したがって、ａｕｔｏｐｈａｇｙを活性化させてｉｓｃｈｅｍｉａ−ｒｅｐｅｒｆｕｓｉｏｎに対するｔｏｌｅｒａｎｃｅを高めようとする戦略が前臨床モデルで試みられている。一方、急性肝損傷（ａｃｕｔｅ  ｌｉｖｅｒ  ｉｎｊｕｒｙ）モデルにおいて、ａｕｔｏｐｈａｇｙはストレス状況で細胞の生存を増加させるために活性化されている。
【０００６】
ＰＩ３Ｋ／ＡＫＴ／ｍＴＯＲ信号伝達経路は、細胞の成長や増殖、運動性（ｍｏｔｉｌｉｔｙ）、生存（ｓｕｒｖｉｖａｌ）、細胞死滅、蛋白質合成および転写といった多様な細胞過程を調節する（Ｈａｙ，Ｎ．＆Ｓｏｎｅｎｂｅｒｇ，Ｎ．Ｕｐｓｔｒｅａｍ  ａｎｄ  ｄｏｗｎｓｔｒｅａｍ  ｏｆ  ｍＴＯＲ．Ｇｅｎｅｓ＆ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ１８，１９２６−１９４５（２００４）．Ｙａｎｇ，Ｑ．＆Ｇｕａｎ，Ｋ．−Ｌ．Ｅｘｐａｎｄｉｎｇ  ｍＴＯＲ  ｓｉｇｎａｌｉｎｇ．Ｃｅｌｌ  ｒｅｓｅａｒｃｈ１７，６６６−６８１（２００７）．Ｓｃｈｍｅｌｚｌｅ，Ｔ．＆Ｈａｌｌ，Ｍ．Ｎ．ＴＯＲ，ａ  ｃｅｎｔｒａｌ  ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｒ  ｏｆ  ｃｅｌｌ  ｇｒｏｗｔｈ．Ｃｅｌｌ１０３，２５３−２６２（２０００）．Ｓａｒｂａｓｓｏｖ，Ｄ．Ｄ．，Ａｌｉ，Ｓ．Ｍ．＆Ｓａｂａｔｉｎｉ，Ｄ．Ｍ．Ｇｒｏｗｉｎｇ  ｒｏｌｅｓ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  ｍＴＯＲ  ｐａｔｈｗａｙ．Ｃｕｒｒｅｎｔ  ｏｐｉｎｉｏｎ  ｉｎ  ｃｅｌｌ  ｂｉｏｌｏｇｙ１７，５９６−６０３（２００５））。そして、自己消化作用において、ＰＩ３Ｋ／ＡＫＴ／ｍＴＯＲ信号伝達経路は主な経路としてよく知られている。栄養または成長因子の欠乏でｍＴＯＲ信号伝達が抑制されると、自己消化作用が誘導される。逆に、栄養または成長因子が豊富であれば、ｍＴＯＲＣ１が活性化されながらＵＬＫ１  ｃｏｍｐｌｅｘによる自己消化作用を抑制させ、細胞の成長と新陳代謝活動を促進する。多くの実験データにおいて、ＡＫＴ／ｍＴＯＲ信号伝達経路はＨＳＣｓ活性化の中心にあると報告された（Ｒｅｉｆ，Ｓ．ｅｔ  ａｌ．Ｔｈｅ  ｒｏｌｅ  ｏｆ  ｆｏｃａｌ  ａｄｈｅｓｉｏｎ  ｋｉｎａｓｅ−ｐｈｏｓｐｈａｔｉｄｙｌｉｎｏｓｉｔｏｌ  ３−ｋｉｎａｓｅ−ａｋｔ  ｓｉｇｎａｌｉｎｇ  ｉｎ  ｈｅｐａｔｉｃ  ｓｔｅｌｌａｔｅ  ｃｅｌｌ  ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｔｙｐｅ  Ｉ  ｃｏｌｌａｇｅｎ  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ．Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ２７８，８０８３−８０９０（２００３）．Ｇａｂｅｌｅ，Ｅ．ｅｔ  ａｌ．Ｔｈｅ  ｒｏｌｅ  ｏｆ  ｐ７０Ｓ６Ｋ  ｉｎ  ｈｅｐａｔｉｃ  ｓｔｅｌｌａｔｅ  ｃｅｌｌ  ｃｏｌｌａｇｅｎ  ｇｅｎｅ  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ａｎｄ  ｃｅｌｌ  ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ．Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ２８０，１３３７４−１３３８２（２００５）．Ｇａｂｅｌｅ，Ｅ．，Ｂｒｅｎｎｅｒ，Ｄ．Ａ．＆Ｒｉｐｐｅ，Ｒ．Ａ．Ｌｉｖｅｒ  ｆｉｂｒｏｓｉｓ：ｓｉｇｎａｌｓ  ｌｅａｄｉｎｇ  ｔｏ  ｔｈｅ  ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｆｉｂｒｏｇｅｎｉｃ  ｈｅｐａｔｉｃ  ｓｔｅｌｌａｔｅ  ｃｅｌｌ．Ｆｒｏｎｔ  Ｂｉｏｓｃｉ８，６９−ｄ７７（２００３））。そして、ｍＴＯＲ抑制剤のＲａｐａｍｙｃｉｎによるｍＴＯＲ信号伝達経路の阻害は、肝硬変動物モデルで線維組織の成長を減少させ、肝機能を改善し、門脈圧（ｐｏｒｔａｌ  ｐｒｅｓｓｕｒｅ）を低下させたと報告された（Ｂｉｅｃｋｅｒ，Ｅ．ｅｔ  ａｌ．Ｌｏｎｇ−ｔｅｒｍ  ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｏｆ  ｂｉｌｅ  ｄｕｃｔ−ｌｉｇａｔｅｄ  ｒａｔｓ  ｗｉｔｈ  ｒａｐａｍｙｃｉｎ（ｓｉｒｏｌｉｍｕｓ）ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ  ａｔｔｅｎｕａｔｅｓ  ｌｉｖｅｒ  ｆｉｂｒｏｓｉｓ：ａｎａｌｙｓｉｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｕｎｄｅｒｌｙｉｎｇ  ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ．Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ  ａｎｄ  Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ３１３，９５２−９６１（２００５）．Ｎｅｅｆ，Ｍ．，Ｌｅｄｅｒｍａｎｎ，Ｍ．，Ｓａｅｇｅｓｓｅｒ，Ｈ．，Ｓｃｈｎｅｉｄｅｒ，Ｖ．＆Ｒｅｉｃｈｅｎ，Ｊ．Ｌｏｗ−ｄｏｓｅ  ｏｒａｌ  ｒａｐａｍｙｃｉｎ  ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｒｅｄｕｃｅｓ  ｆｉｂｒｏｇｅｎｅｓｉｓ，ｉｍｐｒｏｖｅｓ  ｌｉｖｅｒ  ｆｕｎｃｔｉｏｎ，ａｎｄ  ｐｒｏｌｏｎｇｓ  ｓｕｒｖｉｖａｌ  ｉｎ  ｒａｔｓ  ｗｉｔｈ  ｅｓｔａｂｌｉｓｈｅｄ  ｌｉｖｅｒ  ｃｉｒｒｈｏｓｉｓ．Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  ｈｅｐａｔｏｌｏｇｙ４５，７８６−７９６（２００６）．Ｐａｔｓｅｎｋｅｒ，Ｅ．ｅｔ  ａｌ．Ｐｏｔｅｎｔ  ａｎｔｉｆｉｂｒｏｔｉｃ  ａｃｔｉｖｉｔｙ  ｏｆ  ｍＴＯＲ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ  ｓｉｒｏｌｉｍｕｓ  ａｎｄ  ｅｖｅｒｏｌｉｍｕｓ  ｂｕｔ  ｎｏｔ  ｏｆ  ｃｙｃｌｏｓｐｏｒｉｎｅ  Ａ  ａｎｄ  ｔａｃｒｏｌｉｍｕｓ  ｉｎ  ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  ｌｉｖｅｒ  ｆｉｂｒｏｓｉｓ．Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  ｈｅｐａｔｏｌｏｇｙ５５，３８８−３９８（２０１１））。また、Ｒａｐａｍｙｃｉｎは、肝移植患者にとって重要な免疫抑制剤として使用されている。その他にも、ｍＴＯＲ抑制剤のＳｉｒｏｌｉｍｕｓとＥｖｅｒｏｌｉｍｕｓは、実験的条件下で肝線維化の進行およびｐｏｒｔａｌ  ｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｏｎを減少させると報告された。
【０００７】
そこで、本発明者らは、このような先行研究によってａｕｔｏｐｈａｇｙが肝疾患に決定的な役割を果たすという事実を知り、これに基づいてａｕｔｏｐｈａｇｙの活性を誘導する化合物を開発するために鋭意研究した結果、後述のような新規なカテコール誘導体が優れたａｕｔｏｐｈａｇｙ活性化効果および肝疾患を抑制する活性を有することを確認して、本発明を完成した。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
本発明は、新規なカテコール誘導体およびこれを含む薬学的組成物を提供する。また、本発明は、前記カテコール誘導体の製造方法を提供する。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
上記の課題を解決するために、本発明は、下記化学式１で表される化合物、またはその薬学的に許容可能な塩を提供する：
【化１】
2018529653.tif 000003
前記化学式１において、
Ｒ１およびＲ２は、それぞれ独立にＣ１−４アルキルであるか、またはＲ１およびＲ２が共に連結されてＣ１−４アルキレンを形成し、
Ｒ３は、Ｃ１−４アルキル、Ｃ５−１０ヘテロアリールで置換されたＣ１−４アルキル、Ｃ６−１０アリール、またはＣ５−１０ヘテロアリールであり、
Ｘは、ＣＨ、またはＮであり、
Ｙは、ＮＨ、またはＯである。
好ましくは、Ｒ１およびＲ２は、メチルであるか、またはＲ１およびＲ２が共に連結されてメチレン（−ＣＨ２−）、またはエチレン（−ＣＨ２−ＣＨ２−）を形成する。
また、好ましくは、Ｒ３の定義に含まれるＣ６−１０アリールは、フェニルであり、Ｃ５−１０ヘテロアリールは、ピリジンである。より好ましくは、Ｒ３は、メチル、エチル、イソプロピル、イソブチル、ピリジニルメチル、フェニル、またはピリジンである。
さらに、好ましくは、Ｒ１およびＲ２は、それぞれ独立にＣ１−４アルキルであるか、またはＲ１およびＲ２が共に連結されてＣ１−４アルキレンを形成し；Ｒ３は、Ｃ１−４アルキル、Ｃ５−１０ヘテロアリールで置換されたＣ１−４アルキル、Ｃ６−１０アリール、またはＣ５−１０ヘテロアリールであり；Ｘは、ＣＨであり；Ｙは、ＮＨである。
さらに、好ましくは、Ｒ１およびＲ２が共に連結されてＣ１−４アルキレンを形成し；Ｒ３は、Ｃ１−４アルキル、またはＣ６−１０アリールであり；Ｘは、Ｎであり；Ｙは、ＮＨである。
さらに、好ましくは、Ｒ１およびＲ２は、メチルであるか、またはＲ１およびＲ２が共に連結されてメチレンを形成し；Ｒ３は、イソプロピル、イソブチル、またはフェニルであり；Ｘは、ＣＨであり；Ｙは、ＮＨである。
前記化学式１で表される化合物の代表例は、次の通りである：
１）５−（３，４−ジメトキシフェニル）−Ｎ−イソプロピルチオフェン−２−カルボキサミド、
２）５−（ベンゾ［ｄ］［１，３］ジオキソール−５−イル）−Ｎ−イソプロピルチオフェン−２−カルボキサミド、
３）５−（２，３−ジヒドロベンゾ［ｂ］［１，４］ジオキシン−６−イル）−Ｎ−イソプロピルチオフェン−２−カルボキサミド、
４）５−（３，４−ジメトキシフェニル）−Ｎ−イソブチルチオフェン−２−カルボキサミド、
５）５−（ベンゾ［ｄ］［１，３］ジオキソール−５−イル）−Ｎ−イソブチルチオフェン−２−カルボキサミド、
６）５−（２，３−ジヒドロベンゾ［ｂ］［１，４］ジオキシン−６−イル）−Ｎ−イソブチルチオフェン−２−カルボキサミド、
７）５−（３，４−ジメトキシフェニル）−Ｎ−フェニルチオフェン−２−カルボキサミド、
８）５−（ベンゾ［ｄ］［１，３］ジオキソール−５−イル）−Ｎ−フェニルチオフェン−２−カルボキサミド、
９）５−（２，３−ジヒドロベンゾ［ｂ］［１，４］ジオキシン−６−イル）−Ｎ−フェニルチオフェン−２−カルボキサミド、
１０）５−（ベンゾ［ｄ］［１，３］ジオキソール−５−イル）−Ｎ−（ピリジン−２−イル）チオフェン−２−カルボキサミド、
１１）５−（ベンゾ［ｄ］［１，３］ジオキソール−５−イル）−Ｎ−（ピリジン−２−イルメチル）チオフェン−２−カルボキサミド、
１２）５−（２，３−ジヒドロベンゾ［ｂ］［１，４］ジオキシン−６−イル）−Ｎ−（ピリジン−２−イルメチル）チオフェン−２−カルボキサミド、
１３）２−（ベンゾ［ｄ］［１，３］ジオキソール−５−イル）−Ｎ−イソプロピルチアゾール−５−カルボキサミド、
１４）２−（２，３−ジヒドロベンゾ［ｂ］［１，４］ジオキシン−６−イル）−Ｎ−イソプロピルチアゾール−５−カルボキサミド、
１５）２−（ベンゾ［ｄ］［１，３］ジオキソール−５−イル）−Ｎ−イソブチルチアゾール−５−カルボキサミド、
１６）２−（２，３−ジヒドロベンゾ［ｂ］［１，４］ジオキシン−６−イル）−Ｎ−イソブチルチアゾール−５−カルボキサミド、
１７）２−（ベンゾ［ｄ］［１，３］ジオキソール−５−イル）−Ｎ−フェニルチアゾール−５−カルボキサミド、
１８）２−（２，３−ジヒドロベンゾ［ｂ］［１，４］ジオキシン−６−イル）−Ｎ−フェニルチアゾール−５−カルボキサミド、
１９）メチル５−（ベンゾ［ｄ］［１，３］ジオキソール−５−イル）チオフェン−２−カルボキシレート、および
２０）エチル２−（ベンゾ［ｄ］［１，３］ジオキソール−５−イル）チアゾール−５−カルボキシレート。
【００１０】
また、前記化学式１で表される化合物は、必要に応じて、本発明の属する分野における通常の方法を用いて薬学的に許容可能な塩として製造することができる。一例として、塩基を用いて通常の方法で薬学的に許容可能な金属塩を得ることができ、前記金属塩の例として、ナトリウム塩、カリウム塩、またはカルシウム塩が挙げられる。他の例として、薬学的に許容可能な遊離酸（ｆｒｅｅ  ａｃｉｄ）によって形成された酸付加塩が有用である。遊離酸としては、無機酸と有機酸を使用することができる。無機酸としては、塩酸、臭素酸、硫酸、リン酸などを使用することができ、有機酸としては、クエン酸、酢酸、乳酸、マレイン酸、グルコン酸、メタンスルホン酸、コハク酸、４−トルエンスルホン酸、グルタミン酸、またはアスパラギン酸などを使用することができる。
【００１１】
本発明の前記化学式１で表される化合物は、その薬学的に許容可能な塩だけでなく、これから製造可能な溶媒和物および水和物をすべて含む。前記化学式１で表される化合物の溶媒和物および水和物は、本発明の属する分野における通常の方法を用いて、化学式１で表される化合物から製造して使用することができる。
【００１２】
また、本発明による化学式１で表される化合物は、結晶形態または非結晶形態で製造され、化学式１で表される化合物が結晶形態で製造される場合、任意に水和されたり溶媒和されてもよい。本発明では、化学式１で表される化合物の化学量論的水和物だけでなく、多様な量の水を含有する化合物が含まれる。本発明による化学式１で表される化合物の溶媒和物は、化学量論的溶媒和物および非化学量論的溶媒和物をすべて含む。
【００１３】
さらに、本発明は、下記反応式１のように、下記化学式２で表される化合物と下記化学式３で表される化合物とを反応させて、本発明による化学式１で表される化合物を製造する段階を含む、前記化学式１で表される化合物の製造方法を提供する：
【化２】
2018529653.tif 000004
前記反応式１において、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、ＸおよびＹは、先に定義した通りであり、Ｒ４は、ハロゲンである。好ましくは、Ｒ４は、クロロ、またはブロモである。
【００１４】
前記反応は、炭酸ナトリウム、そしてパラジウム（ＩＩ）アセテートの存在下で行うことが好ましい。また、前記化学式２で表される化合物と前記化学式３で表される化合物との反応モル比は、１０：１〜１０：１が好ましい。さらに、前記反応の溶媒としては、１，２−ジメトキシエタン、水、またはその混合溶媒を使用することが好ましい。さらに、前記反応は、２０〜２００℃で行うことが好ましく、反応時、超音波処理を共に併行することが好ましい。また、前記反応は、１０分〜１０時間行うことが好ましい。前記反応後、必要に応じて、精製過程が含まれる。
【００１５】
また、本発明は、前記化学式１で表される化合物、またはその薬学的に許容可能な塩を含む、オートファジー（ａｕｔｏｐｈａｇｙ）関連疾患の予防または治療用薬学的組成物を提供する。さらに、本発明は、オートファジー（ａｕｔｏｐｈａｇｙ）関連疾患の予防または治療用途のための、前記化学式１で表される化合物、またはその薬学的に許容可能な塩を提供する。また、本発明は、前記化学式１で表される化合物、またはその薬学的に許容可能な塩を、オートファジー（ａｕｔｏｐｈａｇｙ）関連疾患がある個体、または疑われる個体に投与する段階を含む、オートファジー（ａｕｔｏｐｈａｇｙ）関連疾患を有する個体の予防または治療方法を提供する。
【００１６】
本発明による化学式１で表される化合物、またはその薬学的に許容可能な塩は、オートファジー（ａｕｔｏｐｈａｇｙ）活性を高めることができ、これにより、オートファジー関連疾患の予防または治療に有用に使用することができる。前記オートファジー関連疾患の例として、肝疾患が挙げられる。また、前記肝疾患の例として、肝線維化症、肝硬変症、肝炎、アルコール性肝疾患、脂肪肝、または非アルコール性脂肪肝炎（ｎｏｎ−ａｌｃｈｏｌｉｃ  ｓｔｅａｔｏｈｅｐａｔｉｔｉｓ、ＮＡＳＨ）が挙げられる。
【００１７】
本発明の用語「予防」は、本発明の薬学的組成物の投与でオートファジー関連疾患の発生、拡散および再発を抑制させたり遅延させるすべての行為を意味し、「治療」は、本発明の薬学的組成物の投与で前記疾患の症状が好転したり有意に変更されるすべての行為を意味する。
【００１８】
本発明による薬学的組成物は、標準薬学的実施により経口または非経口投与形態に剤形化することができる。これらの剤形は、有効成分のほか、薬学的に許容可能な担体、補助剤、または希釈液などの添加物を含有することができる。適当な担体としては、例えば、生理食塩水、ポリエチレングリコール、エタノール、植物性オイル、およびイソプロピルミリステートなどがあり、希釈液としては、例えば、ラクトース、デキストロース、スクロース、マンニトール、ソルビトール、セルロース、および／またはグリシンなどがあるが、これらに限定されるものではない。また、本発明の化合物は、注射溶液の製造に通常使用されるオイル、プロピレングリコール、または他の溶媒に溶解させることができる。さらに、局所作用のために、本発明の化合物を軟膏やクリームに剤形化することができる。
【００１９】
本発明による化学式１で表される化合物の好ましい投与量は、患者の状態および体重、疾病の程度、薬物の形態、投与経路および期間に応じて異なるが、当業者によって適宜選択可能である。しかし、好ましい効果のために、本発明による化学式１で表される化合物を、１日０．０００１〜１００ｍｇ／ｋｇ（体重）、好ましくは０．００１〜１００ｍｇ／ｋｇ（体重）で投与するのが良い。投与は、１日１回または分割して、経口または非経口的経路を通して投与される。
【００２０】
投与方法により、本発明による薬学的組成物は、本発明による化学式１で表される化合物またはその薬学的に許容可能な塩を、０．００１〜９９重量％、好ましくは０．０１〜６０重量％含有することができる。
【００２１】
本発明の薬学的組成物は、ネズミ、ハツカネズミ、家畜およびヒトなどをはじめとする哺乳動物に多様な経路で投与される。投与のすべての方式は予想できるが、例えば、経口、直腸または静脈、筋肉、皮下、子宮内硬膜または脳血管（ｉｎｔｒａｃｅｒｂｒｏｖｅｎｔｒｉｃｕｌａｒ）注射によって投与される。
【発明の効果】
【００２２】
本発明による化合物、またはその薬学的に許容可能な塩は、優れたａｕｔｏｐｈａｇｙ活性化効果および肝疾患を抑制する活性を示して、オートファジー（ａｕｔｏｐｈａｇｙ）関連疾患の予防または治療に有用に使用することができる。
【図面の簡単な説明】
【００２３】
【図１】Ｐｒｉｍａｒｙ  ｈｅｐａｔｏｃｙｔｅを用いたＩｓｃｈｅｍｉａとｒｅｐｅｒｆｕｓｉｏｎモデルにおいて、本発明の一実施例で製造した化合物処理によってａｕｔｏｐｈａｇｙが顕著に増加することを、ＬＣ３−ＩＩの増加から確認した結果を示すものである。
【図２】Ｐｒｉｍａｒｙ  ｈｅｐａｔｏｃｙｔｅを用いたＩｓｃｈｅｍｉａとｒｅｐｅｒｆｕｓｉｏｎモデルにおいて、本発明の一実施例で製造した化合物処理によってａｕｔｏｐｈａｇｙが顕著に増加することを、ＬＣ３−ＩＩの増加から確認した結果を示すものである。
【図３】Ｈｅｐａｔｏｃｙｔｅは、ｉｓｃｈｅｍｉａとｒｅｐｅｒｆｕｓｉｏｎモデルにおいて、本発明の一実施例で製造した化合物処理によってｍＴＯＲの活性化抑制されることを示すもので、ｍＴＯＲの２４４８番目の位置にリン酸化が顕著に抑制されることを確認することにより現れた結果を示すものである。
【図４】四塩化炭素による急性肝損傷および本発明の一実施例で製造した化合物の治療効能をＨ＆Ｅ染色により組織学的に確認した結果を示すものである。矢印は肝門脈を表す。
【図５】急性肝損傷誘導後、解剖検査時、肝の形態学的異常を観察した結果を示すものである。
【図６】肝線維化を誘導するチオアセトアミドおよび本発明の一実施例で製造した化合物の投与後、解剖検査時、肝の形態学的異常を観察した結果を示すものである。
【図７】チオアセトアミドおよび本発明の一実施例で製造した化合物の投与後に摘出した肝組織切片において、Ｍａｓｓｏｎ’ｓ  Ｔｒｉｃｈｒｏｍｅ染色によりコラーゲンの沈着を確認した結果を示すものである。
【図８】チオアセトアミドによって損傷した肝組織内炎症細胞の浸潤をＨ＆Ｅ染色により組織学的に確認した結果を示すものである。
【図９】肝線維化を誘導する四塩化炭素および本発明の一実施例で製造した化合物の投与後、解剖検査時、肝の形態学的異常を観察した結果を示すものである。
【図１０】四塩化炭素および本発明の一実施例で製造した化合物の投与後に摘出した肝組織切片において、Ｍａｓｓｏｎ’ｓ  Ｔｒｉｃｈｒｏｍｅ染色によりコラーゲンの沈着を確認した結果を示すものである。
【図１１】胆管結さつを施術して肝線維化誘導後、解剖検査時、肝の形態学的異常を観察した結果を示すものである。
【図１２】胆管結さつを施術後に摘出した肝組織切片において、Ｍａｓｓｏｎ’ｓ  Ｔｒｉｃｈｒｏｍｅ染色によりコラーゲンの沈着を確認した結果を示すものである。
【図１３】胆管結さつを施術後に摘出した肝組織を用いてヒドロキシプロリン定量実験を行った結果を示すものである。
【発明を実施するための形態】
【００２４】
以下、下記の実施例によって本発明をより詳細に説明する。ただし、下記の実施例は本発明を例示するためのものに過ぎず、本発明の範囲がこれらにのみ限定されるものではない。
【００２５】
実施例１：５−（３，４−ジメトキシフェニル）−Ｎ−イソプロピルチオフェン−２−カルボキサミドの製造
【化３】
2018529653.tif 000005
１，２−ジメトキシエタン（８ｍＬ）、２次蒸留水（２ｍＬ）に、５−クロロ−Ｎ−イソプロピルチオフェン−２−カルボキサミド（２．０１５ｍｍｏｌ）、３，４−ジメトキシフェニルボロン酸（３．０２２ｍｍｏｌ）、炭酸ナトリウム（１２８１．４ｍｇ、１２．０９ｍｍｏｌ）、およびパラジウム（ＩＩ）アセテート（２７．５６ｍｇ、０．０５ｍｍｏｌ）を添加後、超音波と共に、１２０℃で２００分間撹拌した。ジクロロメタンで３回にわたって抽出した。抽出した溶液を無水硫酸マグネシウムで脱水して有機溶媒を減圧濃縮し、フラッシュカラムクロマトグラフィー（ｎ−Ｈｘ：ＥｔＯＡｃ＝３：１）で精製した後、真空ポンプで乾燥させて、表題化合物を白色固体で得た（収率６６．７０％）。
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ８．１８（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝７．８Ｈｚ），７．７３（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝３．９Ｈｚ），７．４２（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝３．９Ｈｚ），７．２４−７．１７（ｍ，２Ｈ），６．９８（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．３Ｈｚ），４．１０−３．９７（ｍ，１Ｈ），３．８２（ｓ，３Ｈ），３．７７（ｓ，３Ｈ），１．１５（ｄ，６Ｈ，Ｊ＝６．６Ｈｚ）；１３Ｃ  ＮＭＲ（１００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１６０．５，１４９．６，１４９．５，１４７．９，１３８．６，１２９．２，１２６．５，１２３．５，１１８．６，１１２．６，１０９．６，５６．０，５６．０，４１．４，２２．８，２２．８；ＥＳＩ（ｍ／ｚ）３０６（ＭＨ＋）
実施例２：５−（ベンゾ［ｄ］［１，３］ジオキソール−５−イル）−Ｎ−イソプロピルチオフェン−２−カルボキサミドの製造
【化４】
2018529653.tif 000006
１，２−ジメトキシエタン（８ｍＬ）、２次蒸留水（２ｍＬ）に、５−クロロ−Ｎ−イソプロピルチオフェン−２−カルボキサミド（２．０１５ｍｍｏｌ）、ベンゾ［ｄ］［１，３］ジオキソール−５−イルボロン酸（３．０２２ｍｍｏｌ）、炭酸ナトリウム（１２８１．４ｍｇ、１２．０９ｍｍｏｌ）、およびパラジウム（ＩＩ）アセテート（２７．５６ｍｇ、０．０５ｍｍｏｌ）を添加後、超音波と共に、１２０℃で２００分間撹拌した。ジクロロメタンで３回にわたって抽出した。抽出した溶液を無水硫酸マグネシウムで脱水して有機溶媒を減圧濃縮し、フラッシュカラムクロマトグラフィー（ｎ−Ｈｘ：ＥｔＯＡｃ＝３：１）で精製した後、真空ポンプで乾燥させて、表題化合物を褐色固体で得た（収率６４．４１％）。
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ８．１９（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝７．７Ｈｚ），７．７０（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝３．９Ｈｚ），７．３８（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝３．９Ｈｚ，１Ｈ），７．２７（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１．７Ｈｚ），７．１６（ｄｄ，１Ｈ，ＪＡ＝８．１Ｈｚ，ＪＢ＝１．７Ｈｚ），６．９４（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．１Ｈｚ），６．０５（ｓ，２Ｈ），４．０７−３．９９（ｍ，１Ｈ），１．１４（ｄ，６Ｈ，Ｊ＝６．６Ｈｚ）；１３Ｃ  ＮＭＲ（１００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１６０．５，１４８．５，１４７．９，１４７．５，１３８．９，１２９．１，１２７．９，１２３．８，１２０．０，１０９．２，１０６．４，１０１．８，４１．４，２２．８，２２．８；ＥＳＩ（ｍ／ｚ）２９０（ＭＨ＋）
実施例３：５−（２，３−ジヒドロベンゾ［ｂ］［１，４］ジオキシン−６−イル）−Ｎ−イソプロピルチオフェン−２−カルボキサミドの製造
【化５】
2018529653.tif 000007
１，２−ジメトキシエタン（８ｍＬ）、２次蒸留水（２ｍＬ）に、５−クロロ−Ｎ−イソプロピルチオフェン−２−カルボキサミド（２．０１５ｍｍｏｌ）、２，３−ジヒドロベンゾ［ｂ］［１，４］ジオキシン−６−イルボロン酸（３．０２２ｍｍｏｌ）、炭酸ナトリウム（１２８１．４ｍｇ、１２．０９ｍｍｏｌ）、およびパラジウム（ＩＩ）アセテート（２７．５６ｍｇ、０．０５ｍｍｏｌ）を添加後、超音波と共に、１２０℃で２００分間撹拌した。ジクロロメタンで３回にわたって抽出した。抽出した溶液を無水硫酸マグネシウムで脱水して有機溶媒を減圧濃縮し、フラッシュカラムクロマトグラフィー（ｎ−Ｈｘ：ＥｔＯＡｃ＝３：１）で精製した後、真空ポンプで乾燥させて、表題化合物を白色固体で得た（収率４５．５２％）。
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ８．１８（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝７．７Ｈｚ），７．７０（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝３．９Ｈｚ），７．３６（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝３．９Ｈｚ），７．１８−７．０９（ｍ，２Ｈ），６．８９（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．３Ｈｚ），４．２５（ｓ，４Ｈ），４．１０−３．９７（ｍ，１Ｈ），１．１４（ｄ，５Ｈ，Ｊ＝６．６Ｈｚ）；１３Ｃ  ＮＭＲ（１００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１６０．５，１４７．３，１４４．２，１４４．１，１３８．８，１２９．２，１２７．１，１２３．６，１１９．２，１１８．１，１１４．５，６４．６，６４．５，４１．４７，２２．８，２２．８；ＥＳＩ（ｍ／ｚ）３０４（ＭＨ＋）
実施例４：５−（３，４−ジメトキシフェニル）−Ｎ−イソブチルチオフェン−２−カルボキサミドの製造
【化６】
2018529653.tif 000008
５−クロロ−Ｎ−イソプロピルチオフェン−２−カルボキサミドの代わりに５−クロロ−Ｎ−イソブチルチオフェン−２−カルボキサミドを用いることを除けば、実施例１と同様の方法を用いて、表題化合物を黄色固体で得た（収率５５．０１％）。
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ８．４２（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝５．８Ｈｚ），７．７２（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝３．９Ｈｚ），７．４２（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝３．９Ｈｚ），７．２３−７．１７（ｍ，２Ｈ），６．９８（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．１Ｈｚ），３．８２（ｓ，３Ｈ），３．７７（ｓ，３Ｈ），３．０４（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝６．４Ｈｚ），１．８７−１．７３（ｍ，１Ｈ），０．８７（ｄ，６Ｈ，Ｊ＝６．７Ｈｚ）；１３Ｃ  ＮＭＲ（１００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１６１．４，１４９．６，１４９．５，１４７．９，１３８．５，１２９．２，１２６．５，１２３．６，１１８．７，１１２．６，１０９．７，５６．０，５６．０，４７．０，２８．６，２０．６，２０．６；ＥＳＩ（ｍ／ｚ）３２０（ＭＨ＋）
実施例５：５−（ベンゾ［ｄ］［１，３］ジオキソール−５−イル）−Ｎ−イソブチルチオフェン−２−カルボキサミドの製造
【化７】
2018529653.tif 000009
５−クロロ−Ｎ−イソプロピルチオフェン−２−カルボキサミドの代わりに５−クロロ−Ｎ−イソブチルチオフェン−２−カルボキサミドを用いることを除けば、実施例２と同様の方法を用いて、表題化合物を白色固体で得た（収率３７．６８％）。
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ８．４３（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝５．７Ｈｚ），７．７０（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝３．８Ｈｚ），７．３８（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝３．８Ｈｚ），７．２７（ｓ，１Ｈ），７．１５（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．０Ｈｚ），６．９５（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．１Ｈｚ），６．０５（ｓ，２Ｈ），３．０４（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝６．４Ｈｚ），１．９１−１．７４（ｍ，１Ｈ），０．８７（ｄ，６Ｈ，Ｊ＝６．７Ｈｚ）；１３Ｃ  ＮＭＲ（１００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１６１．４，１４８．５，１４７．９，１４７．５，１３８．７，１２９．１，１２７．９，１２３．９，１２０．１，１０９．２，１０６．４，１０１．８，４７．０，２８．６，２０．６，２０．６；ＥＳＩ（ｍ／ｚ）３０４（ＭＨ＋）
実施例６：５−（２，３−ジヒドロベンゾ［ｂ］［１，４］ジオキシン−６−イル）−Ｎ−イソブチルチオフェン−２−カルボキサミドの製造
【化８】
2018529653.tif 000010
５−クロロ−Ｎ−イソプロピルチオフェン−２−カルボキサミドの代わりに５−クロロ−Ｎ−イソブチルチオフェン−２−カルボキサミドを用いることを除けば、実施例３と同様の方法を用いて、表題化合物を白色固体で得た（収率３７．１１％）。
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ８．４２（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝５．６Ｈｚ），７．７０（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝３．８Ｈｚ），７．３６（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝３．８Ｈｚ），７．１６（ｓ，１Ｈ），７．１３（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．４Ｈｚ），６．８９（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．３Ｈｚ），４．２５（ｓ，４Ｈ），３．０４（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝６．３Ｈｚ），１．８９−１．７２（ｍ，１Ｈ），０．８７（ｄ，６Ｈ，Ｊ＝６．６Ｈｚ）；１３Ｃ  ＮＭＲ（１００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１６１．４，１４７．３，１４４．２，１４４．１，１３８．７，１２９．２，１２７．１，１２３．７，１１９．３，１１８．１，１１４．５，６４．６，６４．５，４７．０，２８．６，２０．６，２０．６；ＥＳＩ（ｍ／ｚ）３１８（ＭＨ＋）
実施例７：５−（３，４−ジメトキシフェニル）−Ｎ−フェニルチオフェン−２−カルボキサミドの製造
【化９】
2018529653.tif 000011
５−クロロ−Ｎ−イソプロピルチオフェン−２−カルボキサミドの代わりに５−クロロ−Ｎ−フェニルチオフェン−２−カルボキサミドを用いることを除けば、実施例１と同様の方法を用いて、表題化合物を黄色固体で得た（収率６６．５３％）。
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１０．１８（ｓ，１Ｈ），７．９９（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝３．９Ｈｚ），７．７３（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝８．０Ｈｚ），７．５３（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝３．９Ｈｚ），７．３４（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝７．８Ｈｚ），７．２８−７．２２（ｍ，２Ｈ），７．０８（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝７．３Ｈｚ），７．００（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．３Ｈｚ），３．８４（ｓ，３Ｈ），３．７８（ｓ，３Ｈ）；１３Ｃ  ＮＭＲ（１００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１６０．１，１４９．８，１４９．５，１４９．３，１３９．２，１３８．１，１３０．６，１２９．１，１２９．１，１２６．３，１２４．１，１２３．８，１２０．７，１２０．７，１１８．８，１１２．５，１０９．７，５６．０，５６．０；ＥＳＩ（ｍ／ｚ）３４０（ＭＨ＋），３６２（ＭＮａ＋）
実施例８：５−（ベンゾ［ｄ］［１，３］ジオキソール−５−イル）−Ｎ−フェニルチオフェン−２−カルボキサミドの製造
【化１０】
2018529653.tif 000012
５−クロロ−Ｎ−イソプロピルチオフェン−２−カルボキサミドの代わりに５−クロロ−Ｎ−フェニルチオフェン−２−カルボキサミドを用いることを除けば、実施例２と同様の方法を用いて、表題化合物を白色固体で得た（収率１５．６６％）。
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１０．１８（ｓ，１Ｈ），７．９７（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝３．９Ｈｚ），７．７２（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝７．８Ｈｚ），７．４９（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝３．９Ｈｚ），７．４０−７．２８（ｍ，３Ｈ），７．２２（ｄｄ，１Ｈ，ＪＡ＝８．１Ｈｚ，ＪＢ＝１．６Ｈｚ），７．０９（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝７．３Ｈｚ），６．９７（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．１Ｈｚ），６．０７（ｓ，２Ｈ）；ＥＳＩ（ｍ／ｚ）３４６（ＭＮａ＋）
実施例９：５−（２，３−ジヒドロベンゾ［ｂ］［１，４］ジオキシン−６−イル）−Ｎ−フェニルチオフェン−２−カルボキサミドの製造
【化１１】
2018529653.tif 000013
５−クロロ−Ｎ−イソプロピルチオフェン−２−カルボキサミドの代わりに５−クロロ−Ｎ−フェニルチオフェン−２−カルボキサミドを用いることを除けば、実施例３と同様の方法を用いて、表題化合物を白色固体で得た（収率４４．５３％）。
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１０．１８（ｓ，１Ｈ），７．９７（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝３．７Ｈｚ），７．７２（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝８．０Ｈｚ），７．４７（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝３．７Ｈｚ），７．３４（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝７．７Ｈｚ），７．２２（ｓ，１Ｈ），７．１９（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．４Ｈｚ），７．０８（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝７．２Ｈｚ），６．９１（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．３Ｈｚ），４．２６（ｓ，４Ｈ）；１３Ｃ  ＮＭＲ（１００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１６０．１，１４８．７，１４４．４，１４４．１，１３９．１，１３８．３，１３０．６，１２９．１，１２９．１，１２６．８，１２４．１，１２３．９，１２０．７，１２０．７，１１９．４，１１８．２，１１４．７，６４．６，６４．５；ＥＳＩ（ｍ／ｚ）３３８（ＭＨ＋），３６０（ＭＮａ＋）
実施例１０：５−（ベンゾ［ｄ］［１，３］ジオキソール−５−イル）−Ｎ−（ピリジン−２−イル）チオフェン−２−カルボキサミドの製造
【化１２】
2018529653.tif 000014
５−クロロ−Ｎ−イソプロピルチオフェン−２−カルボキサミドの代わりに５−クロロ−Ｎ−（ピリジン−２−イル）チオフェン−２−カルボキサミドを用いることを除けば、実施例２と同様の方法を用いて、表題化合物を黄色固体で得た（収率１３．５４％）。
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１０．８６（ｓ，１Ｈ），８．３７（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝４．６Ｈｚ），８．１８（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝４．０Ｈｚ），８．１３（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．４Ｈｚ），７．８１（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝７．８Ｈｚ），７．４７（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝３．９Ｈｚ），７．３４（ｓ，１Ｈ），７．２２（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．１Ｈｚ），７．１４（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝７．６Ｈｚ），６．９７（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．１Ｈｚ），６．０７（ｓ，２Ｈ）；１３Ｃ  ＮＭＲ（１００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１６０．６，１５２．３，１４９．６，１４８．５，１４８．３，１４８．２，１３８．６，１３７．７，１３１．６，１２７．６，１２４．４，１２０．４，１２０．１，１１５．０，１０９．３，１０６．５，１０１．９；ＥＳＩ（ｍ／ｚ）３２５（ＭＨ＋），３４７（ＭＮａ＋）
実施例１１：５−（ベンゾ［ｄ］［１，３］ジオキソール−５−イル）−Ｎ−（ピリジン−２−イルメチル）チオフェン−２−カルボキサミドの製造
【化１３】
2018529653.tif 000015
５−クロロ−Ｎ−イソプロピルチオフェン−２−カルボキサミドの代わりに５−クロロ−Ｎ−（ピリジン−２−イルメチル）チオフェン−２−カルボキサミドを用いることを除けば、実施例２と同様の方法を用いて、表題化合物を白色固体で得た（収率２４．１２％）。
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ９．１２（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝５．９Ｈｚ），８．５０（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝４．２Ｈｚ），７．７８（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝３．９Ｈｚ），７．７５（ｔｄ，１Ｈ，，ＪＡ＝７．８Ｈｚ，ＪＢ＝１．７Ｈｚ），７．４２（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝３．９Ｈｚ），７．３５−７．２９（ｍ，２Ｈ），７．２５（ｄｄ，１Ｈ，ＪＡ＝７．０Ｈｚ，ＪＢ＝５．２Ｈｚ），７．１８（ｄｄ，１Ｈ，ＪＡ＝８．１Ｈｚ，ＪＢ＝１．７Ｈｚ），６．９６（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．１Ｈｚ），６．０６（ｓ，２Ｈ），４．５３（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝６．０Ｈｚ）；１３Ｃ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１６１．６，１５９．０，１４９．３，１４８．５，１４８．０，１４８．０，１３８．０，１３７．２，１２９．７，１２７．８，１２４．１，１２２．６，１２１．５，１２０．２，１０９．３，１０６．５，１０１．９，４４．９；ＥＳＩ（ｍ／ｚ）３３９（ＭＨ＋）
実施例１２：５−（２，３−ジヒドロベンゾ［ｂ］［１，４］ジオキシン−６−イル）−Ｎ−（ピリジン−２−イルメチル）チオフェン−２−カルボキサミドの製造
【化１４】
2018529653.tif 000016
５−クロロ−Ｎ−イソプロピルチオフェン−２−カルボキサミドの代わりに５−クロロ−Ｎ−（ピリジン−２−イルメチル）チオフェン−２−カルボキサミドを用いることを除けば、実施例３と同様の方法を用いて、表題化合物を白色固体で得た（収率５９．０９％）。
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ９．１１（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝６．０Ｈｚ），８．５０（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝４．２Ｈｚ），７．７８（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝３．９Ｈｚ），７．７５（ｔｄ，１Ｈ，，ＪＡ＝７．８Ｈｚ，ＪＢ＝１．７Ｈｚ），７．４０（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝３．９Ｈｚ），７．３１（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝７．８Ｈｚ），７．２５（ｄｄ，１Ｈ，ＪＡ＝７．１Ｈｚ，ＪＢ＝５．１Ｈｚ），７．１９（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝２．１Ｈｚ），７．１５（ｄｄ，１Ｈ，ＪＡ＝８．４Ｈｚ，ＪＢ＝２．２Ｈｚ），６．９０（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．４Ｈｚ），４．５３（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝６．０Ｈｚ），４．２６（ｓ，４Ｈ）；１３Ｃ  ＮＭＲ（１００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１６１．６，１５９．０，１４９．３，１４７．８，１４４．３，１４４．１，１３８．０，１３７．２，１２９．７，１２７．０，１２３．９，１２２．６，１２１．５，１１９．３，１１８．２，１１４．６，６４．６，６４．５，４４．９；ＥＳＩ（ｍ／ｚ）３５３（ＭＨ＋）
実施例１３：２−（ベンゾ［ｄ］［１，３］ジオキソール−５−イル）−Ｎ−イソプロピルチアゾール−５−カルボキサミドの製造
【化１５】
2018529653.tif 000017
５−クロロ−Ｎ−イソプロピルチオフェン−２−カルボキサミドの代わりに２−クロロ−Ｎ−イソプロピルチアゾール−５−カルボキサミドを用いることを除けば、実施例２と同様の方法を用いて、表題化合物を黄色固体で得た（収率６６．３３％）。
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ８．４１（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝７．６Ｈｚ），８．３５（ｓ，１Ｈ），７．５１−７．４４（ｍ，２Ｈ），７．０１（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．１Ｈｚ），６．１０（ｓ，２Ｈ），４．１０−３．９６（ｍ，１Ｈ），１．１５（ｄ，６Ｈ，Ｊ＝６．６Ｈｚ）；１３Ｃ  ＮＭＲ（１００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１６９．９，１５９．２，１５０．０，１４８．５，１４３．８，１３５．５，１２７．４，１２１．８，１０９．３，１０６．５，１０２．３，４１．６，２２．７，２２．７；ＥＳＩ（ｍ／ｚ）２９１（ＭＨ＋）
実施例１４：２−（２，３−ジヒドロベンゾ［ｂ］［１，４］ジオキシン−６−イル）−Ｎ−イソプロピルチアゾール−５−カルボキサミドの製造
【化１６】
2018529653.tif 000018
５−クロロ−Ｎ−イソプロピルチオフェン−２−カルボキサミドの代わりに２−クロロ−Ｎ−イソプロピルチアゾール−５−カルボキサミドを用いることを除けば、実施例３と同様の方法を用いて、表題化合物を白色固体で得た（収率６５．４０％）。
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ８．４１（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝７．６Ｈｚ），８．３５（ｓ，１Ｈ），７．４４−７．４０（ｍ，２Ｈ），６．９５（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝７．９Ｈｚ），４．２８（ｓ，４Ｈ），４．１３−３．９４（ｍ，１Ｈ），１．１５（ｄ，６Ｈ，Ｊ＝６．６Ｈｚ）；１３Ｃ  ＮＭＲ（１００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１６９．８，１５９．３，１４６．３，１４４．１，１４３．９，１３５．５，１２６．５，１２０．３，１１８．２，１１５．２，６４．８，６４．５，４１．６，２２．７，２２．７；ＥＳＩ（ｍ／ｚ）３０５（ＭＨ＋）
実施例１５：２−（ベンゾ［ｄ］［１，３］ジオキソール−５−イル）−Ｎ−イソブチルチアゾール−５−カルボキサミドの製造
【化１７】
2018529653.tif 000019
５−クロロ−Ｎ−イソプロピルチオフェン−２−カルボキサミドの代わりに２−クロロ−Ｎ−イソブチルチアゾール−５−カルボキサミドを用いることを除けば、実施例２と同様の方法を用いて、表題化合物を白色固体で得た（収率５８．９２％）。
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ８．６４（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝５．８Ｈｚ），８．３６（ｓ，１Ｈ），７．５３−７．４５（ｍ，２Ｈ），７．０１（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．１Ｈｚ），６．１０（ｓ，２Ｈ），３．０５（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝６．４Ｈｚ），１．８８−１．７０（ｍ，１Ｈ），０．８７（ｄ，６Ｈ，Ｊ＝６．７Ｈｚ）；１３Ｃ  ＮＭＲ（１００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１７０．０，１６０．１，１５０．０，１４８．５，１４３．８，１３５．３，１２７．４，１２１．８，１０９．３，１０６．５，１０２．３，４７．０，２８．６，２０．６，２０．６；ＥＳＩ（ｍ／ｚ）３０５（ＭＨ＋）
実施例１６：２−（２，３−ジヒドロベンゾ［ｂ］［１，４］ジオキシン−６−イル）−Ｎ−イソブチルチアゾール−５−カルボキサミドの製造
【化１８】
2018529653.tif 000020
５−クロロ−Ｎ−イソプロピルチオフェン−２−カルボキサミドの代わりに２−クロロ−Ｎ−イソブチルチアゾール−５−カルボキサミドを用いることを除けば、実施例３と同様の方法を用いて、表題化合物を白色固体で得た（収率６５．８７％）。
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ８．６３（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝５．８Ｈｚ），８．３６（ｓ，１Ｈ），７．４５−７．３８（ｍ，２Ｈ），６．９５（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．６Ｈｚ），４．２８（ｓ，４Ｈ），３．０５（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝６．４Ｈｚ），１．８６−１．７３（ｍ，１Ｈ），０．８７（ｄ，６Ｈ，Ｊ＝６．７Ｈｚ）；１３Ｃ  ＮＭＲ（１００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１６９．９，１６０．１，１４６．３，１４４．１，１４３．９，１３５．３，１２６．５，１２０．３，１１８．３，１１５．２，６４．８，６４．５，４７．０，２８．６，２０．６，２０．６；ＥＳＩ（ｍ／ｚ）３１９（ＭＨ＋）
実施例１７：２−（ベンゾ［ｄ］［１，３］ジオキソール−５−イル）−Ｎ−フェニルチアゾール−５−カルボキサミドの製造
【化１９】
2018529653.tif 000021
５−クロロ−Ｎ−イソプロピルチオフェン−２−カルボキサミドの代わりに２−クロロ−Ｎ−フェニルチアゾール−５−カルボキサミドを用いることを除けば、実施例２と同様の方法を用いて、表題化合物を黄色固体で得た（収率７５．８２％）。
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１０．３９（ｓ，１Ｈ），８．５９（ｓ，１Ｈ），７．７０（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝７．８Ｈｚ），７．５５（ｄｄ，１Ｈ，ＪＡ＝８．１，ＪＢ＝１．７Ｈｚ），７．５２（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１．５Ｈｚ），７．３５（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝７．９Ｈｚ），７．１１（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝７．４Ｈｚ），７．０３（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．１Ｈｚ），６．１２（ｓ，２Ｈ）；１３Ｃ  ＮＭＲ（１００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１７０．９，１５８．９，１５０．２，１４８．６，１４４．９，１３８．８，１３５．２，１２９．１，１２９．１，１２７．２，１２４．４，１２２．０，１２０．８，１２０．８，１０９．３，１０６．６，１０２．３；ＥＳＩ（ｍ／ｚ）３２５（ＭＨ＋）
実施例１８：２−（２，３−ジヒドロベンゾ［ｂ］［１，４］ジオキシン−６−イル）−Ｎ−フェニルチアゾール−５−カルボキサミドの製造
【化２０】
2018529653.tif 000022
５−クロロ−Ｎ−イソプロピルチオフェン−２−カルボキサミドの代わりに２−クロロ−Ｎ−フェニルチアゾール−５−カルボキサミドを用いることを除けば、実施例３と同様の方法を用いて、表題化合物を黄色固体で得た（収率４５．１３％）。
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１０．３９（ｓ，１Ｈ），８．５９（ｓ，１Ｈ），７．７０（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝７．９Ｈｚ），７．５１−７．４５（ｍ，２Ｈ），７．３５（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝７．８Ｈｚ），７．１１（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝７．３Ｈｚ），６．９８（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．１Ｈｚ），４．２９（ｓ，４Ｈ）；１３Ｃ  ＮＭＲ（１００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１７０．８，１５８．９，１４６．５，１４５．０，１４４．２，１３８．８，１３５．２，１２９．１，１２９．１，１２６．４，１２４．４，１２０．８，１２０．８，１２０．４，１１８．３，１１５．３，６４．８，６４．５；ＥＳＩ（ｍ／ｚ）３３９（ＭＨ＋），３３７（ＭＨ−）
実施例１９：メチル５−（ベンゾ［ｄ］［１，３］ジオキソール−５−イル）チオフェン−２−カルボキシレートの製造
【化２１】
2018529653.tif 000023
１，２−ジメトキシエタン（４ｍＬ）、２次蒸留水（１ｍＬ）に、メチル５−クロロチオフェン−２−カルボキシレート（１７６ｍｇ、０．９９６ｍｍｏｌ）、ベンゾ［ｄ］［１，３］ジオキソール−５−イルボロン酸（２４８．０３ｍｇ、１．４９５ｍｍｏｌ）、炭酸ナトリウム（６３３．７０ｍｇ、５．９７９ｍｍｏｌ）、およびパラジウム（ＩＩ）アセテート（３４．９７ｍｇ、０．０５ｍｍｏｌ）を添加後、超音波と共に、１２０℃で２００分間撹拌した。ジクロロメタンで３回にわたって抽出した。抽出した溶液を無水硫酸マグネシウムで脱水して有機溶媒を減圧濃縮し、フラッシュカラムクロマトグラフィー（ｎ−Ｈｘ：ＥｔＯＡｃ＝３：１）で精製した後、真空ポンプで乾燥させて、表題化合物を白色固体で得た（収率２７．４７％）。
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ７．７４（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝５．２Ｈｚ），７．４８（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝３．２Ｈｚ），７．３５（ｓ，１Ｈ），７．２３（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．０Ｈｚ），６．９７（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．０Ｈｚ），６．０７（ｓ，２Ｈ），３．８１（ｓ，３Ｈ）
実施例２０：エチル２−（ベンゾ［ｄ］［１，３］ジオキソール−５−イル）チアゾール−５−カルボキシレートの製造
【化２２】
2018529653.tif 000024
１，２−ジメトキシエタン（４ｍＬ）、２次蒸留水（１ｍＬ）に、エチル２−ブロモチアゾール−５−カルボキシレート（２００ｍｇ、０．８４７ｍｍｏｌ）、ベンゾ［ｄ］［１，３］ジオキソール−５−イルボロン酸（２１０．８６ｍｇ、１．２７１ｍｍｏｌ）、炭酸ナトリウム（５３８．７３ｍｇ、５．０８３ｍｍｏｌ）、およびパラジウム（ＩＩ）アセテート（２７．７３ｍｇ、０．０４２ｍｍｏｌ）を添加後、超音波と共に、１２０℃で２００分間撹拌した。ジクロロメタンで３回にわたって抽出した。抽出した溶液を無水硫酸マグネシウムで脱水して有機溶媒を減圧濃縮し、フラッシュカラムクロマトグラフィー（ｎ−Ｈｘ：ＥｔＯＡｃ＝３：１）で精製した後、真空ポンプで乾燥させて、表題化合物を白色固体で得た（収率８．５６％）。
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ８．４０（ｓ，１Ｈ），７．５７（ｄｄ，１Ｈ，ＪＡ＝８．１Ｈｚ，ＪＢ＝１．５Ｈｚ），７．５２（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１．４Ｈｚ），７．０４（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．１Ｈｚ），６．１２（ｓ，２Ｈ），４．３１（ｑ，２Ｈ，Ｊ＝７．１Ｈｚ），１．２９（ｔ，３Ｈ，Ｊ＝７．１Ｈｚ）；ＥＳＩ（ｍ／ｚ）２７８（ＭＨ＋）
【００２６】
実験例１：オートファジー（ａｕｔｏｐｈａｇｙ）活性化効果
１）オートファジー（ａｕｔｏｐｈａｇｙ）活性化方法
Ｐｒｉｍａｒｙ  ｈｅｐａｔｏｃｙｔｅは、公知の方法（Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ２０１１，１４１，２１８８）であるｃｏｌｌａｇｅｎａｓｅ  ｐｅｒｆｕｓｉｏｎ法によってｍａｌｅ  Ｃ５７ＢＬ／６  ｍｉｃｅから分離した。分離された細胞の生存率はｔｒｙｐａｎ  ｂｌｕｅ  ｅｘｃｌｕｓｉｏｎ法で測定した。Ａｕｔｏｐｈａｇｙはｉｓｃｈｅｍｉａとｒｅｐｅｒｆｕｓｉｏｎ方法で誘導された（Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ２０１１，１４１，２１８８）。
具体的に、ｉｓｃｈｅｍｉａを誘導するために、ｈｅｐａｔｏｃｙｔｅを３７℃のＫｒｅｂｓ−Ｒｉｎｇｅｒ−ＨＥＰＥＳ（ＫＲＨ）緩衝液（ｐＨ６．２）でａｎａｅｒｏｂｉｃ  ｃｈａｍｂｅｒにて２時間培養した。各ｈｅｐａｔｏｃｙｔｅは、ＤＭＳＯ、前記実施例で製造した化合物、または対照物質のＲａｐａｍｙｃｉｎで処理した後、ｐＨ７．４のＫＲＨ緩衝液をａｅｒｏｂｉｃ条件で１時間処理して、Ｒｅｐｅｒｆｕｓｉｏｎが誘導された。以降、ｈｅｐａｔｏｃｙｔｅ細胞を蛋白質分解酵素阻害剤カクテル（Ｒｏｃｈｅｓ）を含有する抽出緩衝液（０．５％ｔｒｉｔｏｎ  Ｘ−１００、１ｍＭ  Ｎａ３ＶＯ４などを含有するＰＢＳ溶液）で溶解させた後、ソニケーション（ｓｏｎｉｃａｔｉｏｎ）してＤＮＡを断片化した。蛋白質の量は、ウシ血清アルブミン（ｂｏｖｉｎｅ  ｓｅｒｕｍ  ａｌｂｕｍｉｎ）を標準としてＢｉｏ−Ｒａｄ社のｐｒｏｔｅｉｎ  ａｓｓａｙ  ｋｉｔ（Ｃａｔ  Ｎｏ．５００−０００２）を用いて測定した。細胞総蛋白１０〜５０μｇを０．１％ＳＤＳを含有する８〜１２％（ｗ／ｖ）のポリアクリルアミドゲル（ｐｏｌｙａｃｒｙｌａｍｉｄｅ  ｇｅｌ）で電気泳動した後に、ゲルに存在する蛋白質をエレクトロブロッティング（ｅｌｅｃｔｒｏｂｌｏｔｔｉｎｇ）方法でＰＶＤＦメンブレンに移した後、非特異的な結合を遮断するために、ＰＶＤＦメンブレンを５％脱脂粉乳を含有するＴＢＳ−ｔｗｅｅｎ（ｔｒｉｓ−ｂｕｆｆｅｒｅｄ  ｓａｌｉｎｅ−ｔｗｅｅｎ、Ｓｉｇｍａ社）溶液に入れて、室温で１時間反応させた。フィルタをＬＣ３蛋白質に対する抗体（Ｃｅｌｌ  ｓｉｇｎａｌｉｎｇ）を含有するＴＢＳ−ｔｗｅｅｎ溶液に入れて、４℃で１２時間放置した後に、ＨＲＰ（ｈｏｒｓｅｒａｄｉｓｈ  ｐｅｒｏｘｉｄａｓｅ、Ｓｉｇｍａ社、Ｃａｔ  Ｎｏ．Ｐ０８８９）標識された２次抗体で標識し、ＥＣＬ（Ｅｎｈａｎｃｅｄ  ｃｈｅｍｉｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｃｅ、Ｔｈｅｒｍｏ  ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社、Ｃａｔ  Ｎｏ．３４０８０）を用いてバンドを測定した。
２）オートファジー（ａｕｔｏｐｈａｇｙ）活性化の測定結果
Ａｕｔｏｐｈａｇｙの誘導は特異的なＬＣ３−ＩＩ分子の増加から確認することができる。ＬＣ３前駆体は通常細胞質に分散して存在し、ｐｒｏｔｅｏｌｙｔｉｃ  ｃｌｅａｖａｇｅされてＬＣ３−Ｉの形態で存在する。Ａｕｔｏｐｈａｇｙが活性化されると、Ｃ−ｔｅｒｍｉｎａｌ  ｇｌｙｃｉｎがｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎされてＬＣ３−ＩＩが形成され、ａｕｔｏｐｈａｇｏｓｏｍｅに移動してｐｕｎｃｔａ形態で分布する。
前記測定した結果を下記表１に示した。化合物処理によって増加したＬＣ３−ＩＩの量はｂａｎｄ  ｄｅｎｓｉｔｙを測定して定量化し、対照物質として用いたｒａｐａｍｙｃｉｎ処理によるＬＣ３−ＩＩの増加量と相対比較した値を表に示した。つまり、対照物質として用いたＲａｐａｍｙｃｉｎと同一程度のａｕｔｏｐｈａｇｙ誘導能の場合は１、ｒａｐａｍｙｃｉｎよりａｕｔｏｐｈａｇｙ誘導能に優れた場合に１より大きい値、そして、ｒａｐａｍｙｃｉｎ対比のａｕｔｏｐｈａｇｙ誘導能がわずかな場合は１より小さい値で表示した。
【表１】
2018529653.tif 000025
前記表１に示されているように、ｉｓｃｈｅｍｉａとｒｅｐｅｒｆｕｓｉｏｎモデルにおいて、対照物質として用いたｒａｐａｍｙｃｉｎ処理によってｈｅｐａｔｏｃｙｔｅはａｕｔｏｐｈａｇｙが誘導されることを、ＬＣ３−ＩＩの増加から確認することができた。また、本発明による化合物が、対照物質として用いたｒａｐａｍｙｃｉｎに比べて２倍以上のＬＣ３−ＩＩの増加を示した。したがって、本発明による化合物が、ｒａｐａｍｙｃｉｎより優れたａｕｔｏｐｈａｇｙ誘導能があることが分かる。
また、図１および図２は、ａｕｔｏｐｈａｇｙ誘導能に優れたいくつかの化合物のｗｅｓｔｅｒｎ  ｉｍｍｕｎｏｂｌｏｔｔｉｎｇの結果を示すものである。図１および図２のように、ｈｅｐａｔｏｃｙｔｅは、ｉｓｃｈｅｍｉａとｒｅｐｅｒｆｕｓｉｏｎモデルにおいて、実施例１および５の化合物処理によってａｕｔｏｐｈａｇｙ誘導が顕著に増加することを、ＬＣ３−ＩＩの増加から確認することができた。
【００２７】
実験例２：ｍＴＯＲ酵素活性抑制効果
１）ｍＴＯＲ酵素活性の測定方法
前記実験例１で得た細胞破砕液を用いてｗｅｓｔｅｒｎ  ｉｍｍｕｎｏｂｌｏｔｔｉｎｇを行った。電気泳動し、エレクトロブロッティング（ｅｌｅｃｔｒｏｂｌｏｔｔｉｎｇ）方法で得たＰＶＤＦメンブレンを、ｍＴＯＲまたはｐ−ｍＴＯＲ（Ｓｅｒ２４４８）蛋白質に対する抗体（Ｃｅｌｌ  Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ）を含有するＴＢＳ−ｔｗｅｅｎ溶液に入れて、４℃で１２時間放置した後に、ＨＲＰ（ｈｏｒｓｅｒａｄｉｓｈ  ｐｅｒｏｘｉｄａｓｅ、Ｓｉｇｍａ社、Ｃａｔ  Ｎｏ．Ｐ０８８９）標識された２次抗体で標識し、ＥＣＬ（Ｅｎｈａｎｃｅｄ  ｃｈｅｍｉｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｃｅ、Ｔｈｅｒｍｏ  ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社、Ｃａｔ  Ｎｏ．３４０８０）を用いてバンドを測定した。
２）ｍＴＯＲ酵素活性の測定結果
前記測定結果を図３に示した。ｍＴＯＲは、ａｕｔｏｐｈａｇｙを調節する主要蛋白質の一つとして知られている。ｍＴＯＲは、正常状態でａｕｔｏｐｈａｇｙを阻害する作用をしているが、ｓｅｒｉｎｅ２４４８の位置のリン酸化はこのようなｍＴＯＲの機能を阻害して、結果的にａｕｔｏｐｈａｇｙが活性化される。図３に示されているように、ｈｅｐａｔｏｃｙｔｅは、ｉｓｃｈｅｍｉａとｒｅｐｅｒｆｕｓｉｏｎモデルにおいて、実施例１の化合物処理によってｍＴＯＲの２４４８番目の位置へのリン酸化が顕著に抑制されることを確認することができる。
【００２８】
実験例３：急性肝損傷誘導モデルにおける効果
急性肝損傷による肝線維化を誘導した動物モデルにおいて、自己消化作用活性剤（Ａｕｔｏｐｈａｇｙ  ａｃｔｉｖａｔｏｒ）の肝損傷抑制効果を確認しようとした。急性肝損傷抑制効果を確認するために、Ｃ５７ＢＬ／６マウスに四塩化炭素（ｃａｒｂｏｎ  ｔｅｔｒａｃｈｌｏｒａｉｄｅ、ＣＣｌ４）を投与して急性肝損傷誘導後、本発明による化合物を投与して肝損傷を抑制するかを確認した。
１）実験方法
５週齢の雌Ｃ５７ＢＬ／６マウスを導入して１週間馴化後、それぞれ正常対照群、四塩化炭素投与群、本発明による化合物（実施例１、２、５および７）を投与するグループの計６グループに分けた。本発明による化合物それぞれをトウモロコシ油に溶かして、５０ｍｇ／ｋｇ体重の用量で１２時間間隔で計３回口腔投与した。最後に口腔投与した時点から３０分経過後、四塩化炭素を５ｍＬ／ｋｇ体重の用量で腹腔投与して、２４時間後に解剖検査した。解剖検査時、肝を摘出して固定した後、組織標本を作製した。スライド作製後、Ｈ＆Ｅ染色を行って顕微鏡で肝損傷を確認した。
２）実験結果
四塩化炭素によって誘導された急性肝損傷は、肝門脈隣接部位で肝細胞の壊死が特徴的であり、損傷した肝細胞内に脂肪小粒が蓄積されていることを観察することができる。実験動物において、四塩化炭素および本発明による化合物４種の投与後、解剖検査して肝組織標本を作製して、Ｈ＆Ｅ染色により肝損傷および自己消化作用活性剤の肝損傷抑制効能を確認した（図４）。
図４に示されているように、四塩化炭素のみ投与したグループで、肝門脈隣接部位に位置した肝細胞の壊死を確認し、損傷した肝細胞内の脂肪小粒が観察されることから、四塩化炭素によって急性肝損傷が誘導されたことを確認した。本発明による実施例１および５を投与したグループでは、肝損傷が明確に回復することを観察し、実施例２および７を投与したグループでは、肝損傷の回復効果が相対的に少なかった。また、解剖検査時、肝損傷の有無を肉眼で確認し、すべてのグループの肝において形態学的異常が観察されなかった（図５）。
【００２９】
実験例４：肝線維化誘導モデルにおける効果
慢性肝損傷による肝線維化抑制効果を確認するために、チオアセトアミド（ｔｈｉｏａｃｅｔａｍｉｄｅ、ＴＡＡ）をＣ５７ＢＬ／６マウスに投与し、慢性肝損傷を誘発させて肝線維化を誘導後、本発明による化合物を投与して慢性肝損傷を抑制するかを確認した。
１）実験方法
５週齢の雌Ｃ５７ＢＬ／６マウスを導入して１週間馴化後、それぞれ正常対照群、チオアセトアミド投与群、本発明による化合物（実施例２、５および７）を投与するグループの計５グループに分けた。チオアセトアミドをリン酸緩衝食塩水に溶かして、２００ｍｇ／ｋｇ体重で１週に３回、計６週間腹腔投与した。本発明による化合物３種は、最後の６週目にトウモロコシ油に溶かして、５０ｍｇ／ｋｇ体重の用量で１日１回、計８日間口腔投与した。最後の口腔投与時点から２４時間後、解剖検査して肝摘出および固定後、組織標本を作製した。組織標本でスライド作製後、Ｈ＆Ｅ染色を施して、顕微鏡下で肝組織損傷および肝組織内炎症細胞の浸潤を確認した。また、Ｍａｓｓｏｎ’ｓ  Ｔｒｉｃｈｒｏｍｅ染色を施して、顕微鏡で肝組織内コラーゲンの沈着を確認した。
２）実験結果
組織学的に、肝線維化は、肝組織内の毛細血管網にコラーゲンが沈着し、主に肝の中心静脈を囲む小葉の形態に沈着する。これは、Ｍａｓｓｏｎ’ｓ  Ｔｒｉｃｈｒｏｍｅ染色法を用いて観察することができる。チオアセトアミドおよび本発明による化合物を投与した後、解剖検査時、肝損傷の有無を肉眼で確認した。
形態学的に、対照群の肝は、表面が滑らかで異常が観察されなかったのに対し、チオアセトアミドによって肝損傷が誘導されたすべてのグループは、肝の表面で微細結節が観察され、肝の大きさはいずれも類似していた（図６）。６週間のチオアセトアミドの投与によって肝線維化が誘導されたことを、Ｍａｓｓｏｎ’ｓ  Ｔｒｉｃｈｒｏｍｅ染色で顕微鏡観察して確認し、本発明による化合物の投与によって線維化が緩和されたことを確認した（図７）。特に、本発明による実施例２および５によって線維化が明確に緩和されたことを観察した（図７）。また、線維化において重要な役割を果たす炎症細胞の浸潤が、本発明による化合物を処理することによって減少する結果を観察した（図８）。
【００３０】
実験例５：肝線維化誘導モデルにおける効果
慢性肝損傷による肝線維化抑制効果を確認するために、四塩化炭素をＣ５７ＢＬ／６マウスに投与し、慢性肝損傷を誘発させて肝線維化を誘導後、本発明による化合物を投与して慢性肝損傷を抑制するかを確認した。
１）実験方法
５週齢の雌Ｃ５７ＢＬ／６マウスを導入して１週間馴化後、それぞれ正常対照群、四塩化炭素投与群、本発明による化合物（実施例１および５）を投与するグループの計４グループに分けた。四塩化炭素をトウモロコシ油に溶かして、０．８ｍＬ／ｋｇ体重の用量で１週に２回、計８週間腹腔投与した。本発明による化合物を最後の８週目にトウモロコシ油に溶かして、５０ｍｇ／ｋｇ体重の用量で１日１回、計８日間口腔投与した。最後の投与時点から２４時間後、解剖検査して肝摘出および固定後、組織標本を作製した。組織標本でスライド作製後、Ｈ＆Ｅ染色を施して、顕微鏡下で肝組織損傷および肝組織内炎症細胞の浸潤を確認した。また、Ｍａｓｓｏｎ’ｓ  Ｔｒｉｃｈｒｏｍｅ染色を施して、顕微鏡で肝組織内コラーゲンの沈着を確認した。
２）実験結果
四塩化炭素および自己消化作用活性剤の投与後、解剖検査時、肝損傷の有無を肉眼で確認した。形態学的に、対照群の肝は、表面が滑らかで異常が観察されなかったのに対し、四塩化炭素によって肝損傷が誘導されたすべてのグループは、肝の表面で微細結節が観察され、肝の大きさはいずれも類似していた（図９）。８週間の四塩化炭素の処理によって肝線維化が誘導されたことを、肝組織スライド切片においてＭａｓｓｏｎ’ｓ  Ｔｒｉｃｈｒｏｍｅ染色で確認し、本発明による化合物（実施例１および５）の投与によって線維化が緩和されたことを確認した（図１０）。また、実施例１を処理したグループで、実施例５を処理したグループに比べてコラーゲンの沈着がより少ないことから、相対的に実施例１の効果がより大きいことを確認した（図１０）。
【００３１】
実験例６：肝線維化誘導モデルにおける効果
慢性肝損傷による肝線維化抑制効果を確認するために、Ｓｐｒａｇｕｅ  Ｄａｗｌｅｙ（ＳＤ）ラットにおいて、胆管結さつ（ｂｉｌｅ  ｄｕｃｔ  ｌｉｇａｔｉｏｎ、ＢＤＬ）を行い、慢性肝損傷を誘発させて肝線維化を誘導後、本発明による化合物を投与して慢性肝損傷を抑制するかを確認した。
１）実験方法
７週齢の雌ＳＤラットを導入して１週間馴化後、それぞれ対照群、胆管結さつ施術群、胆管結さつ施術および本発明による化合物（実施例１）の３つの用量（１２．５、２５、５０ｍｇ／ｋｇ体重）の投与群の計５グループに分けた。対照群は、開腹後、胆管を露出させるものの結さつはせず、残りのグループは、胆管結さつを施術した。胆管結さつ１週間後、本発明による化合物（実施例１）をトウモロコシ油に溶かして、各用量ごとに１日１回、計１４日間口腔投与した。最後の投与時点から２４時間経過後、解剖検査して肝摘出および固定後、組織標本を作製した。組織標本でスライド作製後、Ｍａｓｓｏｎ’ｓ  Ｔｒｉｃｈｒｏｍｅ染色を施して、顕微鏡で肝組織内コラーゲンの沈着を確認した。また、摘出した肝の一部（１０ｍｇ）を分解して、コラーゲンの主要成分のヒドロキシプロリン定量実験を行い、沈着したコラーゲンの量を定量化して、本発明による化合物の効果を確認した。
２）実験結果
胆管結さつ施術および本発明による化合物の投与後、解剖検査時、肝損傷の有無を肉眼で確認した。形態学的に、対照群の肝は、表面が滑らかで異常が観察されなかったのに対し、胆管結さつによって肝損傷が誘導されたすべてのグループは、肝の表面で微細結節が観察され、対照群に比べて大きさが大きくなったことを確認した（図１１）。胆管結さつのみ施術したグループと、胆管結さつ施術および本発明による化合物を処理したグループとで有意な差はなかった（図１１）。胆管結さつによって肝損傷と線維化が誘導されたことを、肝組織スライド切片においてＭａｓｓｏｎ’ｓ  Ｔｒｉｃｈｒｉｍｅ染色で確認し、本発明による化合物を投与することによって中心静脈周辺で進行した肝線維化が緩和されることを確認した（図１２）。
これと類似に、肝組織内に沈着したコラーゲンの量を定量的に測定するヒドロキシプロリン定量実験を行った結果、本発明による化合物（実施例１）の用量が高いほど、コラーゲンの沈着が減少することを確認した（図１３）。また、本発明による化合物を処理したすべてのグループで、肝門脈隣接の損傷した肝細胞の数が、処理しないグループに比べて顕著に減少したことから、組織学的に肝損傷が緩和されたことを確認した（図１１）。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【国際調査報告】
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