(57)【要約】  免疫不全を治療するための方法は、インドール系化合物を用いて提供される。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
式Ａの化合物、またはその塩、エステル、水和物、ラセミ化合物、鏡像異性体、プロドラッグ若しくは代謝物であり、これを必要とする対象の免疫反応を誘発または刺激するために使用するための化合物であって、
［式Ａ］
2018526440.tif 000004
各Ｘは独立して酸素原子または硫黄原子であり、
Ｒ１は−（ＣＨ２）ｎ−Ａｒであり、ｎは０、１または２であり、ＡｒはＣ５−Ｃ７芳香族基であり、
Ｒ２はＣ１−Ｃ４アルキルであり、
Ｒ３は−（Ｏ）ｍ−（ＣＨ２）ｐ−ＣＯＯＲ４であり、ｍは０または１であり、ｐは０、１、または２であり、Ｒ４は水素原子またはＣ１−Ｃ３アルキルである、化合物。
【請求項２】
請求項１に記載の化合物であって、
各Ｘは酸素であり、および／または
Ｒ１は−（ＣＨ２）−Ａｒであり、ＡｒはＣ５−Ｃ７芳香族基、好ましくはフェニル基であり、および／または
Ｒ２はＣ１−Ｃ３アルキル、好ましくはエチルであり、および／または
Ｒ３は−Ｏ−（ＣＨ２）ｐ−ＣＯＯＲ４であり、ｐは０、１または２、好ましくは１であり、Ｒ４は水素原子またはＣ１−Ｃ３アルキルである化合物。
【請求項３】
請求項１に記載の化合物であって、
各Ｘは酸素であり、
Ｒ１は−（ＣＨ２）−Ａｒであり、Ａｒはフェニル基であり、
Ｒ２はエチルであり、
Ｒ３は−Ｏ−（ＣＨ２）−ＣＯＯＲ４であり、Ｒ４は水素原子またはメチル基である化合物。
【請求項４】
請求項１に記載の化合物であって、
３−（２−アミノ−１，２−ジオキソエチル）−２−エチル−１−（フェニルメチル）−１Ｈ−インドール−４−イル）オキシ）酢酸、またはその塩、エステル、水和物、ラセミ化合物、鏡像異性体、プロドラッグ若しくは代謝物である化合物。
【請求項５】
請求項１から４のいずれか１項に記載の化合物であって、
前記対象のＣＤ４Ｔ細胞を誘発または刺激するために使用する化合物。
【請求項６】
請求項１から５のいずれか１項に記載の化合物であって、
前記対象は免疫不全であるか、または免疫抑制されている化合物。
【請求項７】
請求項１から６のいずれか１項に記載の化合物であって、
前記対象は感染性の疾患を有する化合物。
【請求項８】
請求項７に記載の化合物であって、
前記対象はウイルス性感染症を有する化合物。
【請求項９】
請求項１から８のいずれか１項の化合物であって、
ＨＩＶ感染対象のＡＩＤＳを治療するために使用される化合物。
【請求項１０】
請求項９に記載の化合物であって、
ＨＩＶ−仲介免疫不全を抑制または逆転するための化合物。
【請求項１１】
請求項９または１０に記載の化合物であって、
ＨＩＶ感染対象のＣＤ４Ｔ細胞機能を回復するための化合物。
【請求項１２】
請求項１から６のいずれか１項に記載の化合物であって、
前記対象は癌を有する化合物。
【請求項１３】
請求項１から１２のいずれか１項に記載の使用の化合物であって、
前記化合物は０．０１μｇを上回り１００ｍｇ未満の投与量で前記対象に投与される化合物。
【請求項１４】
請求項１から１３のいずれか１項に記載の化合物であって、
前記化合物は前記対象に繰り返し投与される化合物。
【請求項１５】
請求項１から１４のいずれか１項に記載の化合物であって、
注射、好ましくは筋肉、皮下、経皮、静脈内若しくは動脈内注射、経鼻、経口、粘膜の投与、直腸の投与、または吸入により投与される化合物。
【請求項１６】
請求項１から１５のいずれか１項に記載の化合物であって、
薬学的に許容可能な媒介物または賦形剤を含む医薬組成物において調製される化合物。
【請求項１７】
請求項１から１６のいずれか１項に記載の化合物であり、
前記対象は、ヒト対象である化合物。
【請求項１８】
（ｉ）式Ａの化合物であって、
［式Ａ］
2018526440.tif 000005
ただし、
各Ｘは独立して酸素原子または硫黄原子であり、
Ｒ１は−（ＣＨ２）ｎ−Ａｒであり、ｎは０、１または２であり、ＡｒはＣ５−Ｃ７芳香族基であり、
Ｒ２はＣ１−Ｃ４アルキルであり、
Ｒ３は−（Ｏ）ｍ−（ＣＨ２）ｐ−ＣＯＯＲ４であり、ｍは０または１であり、ｐは０、１、または２であり、
Ｒ４は水素原子またはＣ１−Ｃ３アルキルである化合物、または
その塩、エステル、水和物、ラセミ化合物、鏡像異性体、プロドラッグ若しくは代謝物である化合物と、
（ｉｉ）さらなる抗ウイルス剤とを含み、
それらを組み合わせて、または、個別に投与するための医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、特定のインドール系化合物を用いて対象の免疫反応を誘発または刺激する組成物および方法に関する。本発明は、ＣＤ４Ｔ細胞を刺激するために特に効果があり、ＨＩＶ感染患者を治療するために使用されてもよい。
【背景技術】
【０００２】
ＣＤ４Ｔリンパ球は、免疫系（細胞性反応および液性反応の双方）を制御することにおいて卓越した役割を果たし、癌または感染性の疾患などの様々な疾患状態において重要である。
【０００３】
ＨＩＶ病因に関連する免疫性の疾患の間に、全ＣＤ４Ｔ細胞のうち（末梢血液中で測定される通り）実際に感染されているのは０．５％未満であるが、ＣＤ４Ｔ細胞の大部分が主な調節機能不全を示す。非感染ＣＤ４Ｔリンパ球は、それらの機能を次第に失い、アネルギー状態となり、数が減少してＣＤ４リンパ球減少という結果となる。アネルギーおよびリンパ球減少は、ＨＩＶ感染患者を特徴付ける免疫不全の特質である。これらの現象の背景にあるメカニズムは、完全に解明されているわけではない（１）。免疫活性化および炎症も、ＨＩＶ病因における重要な役割を果たす（２、３）。
【０００４】
発明者らは、ＣＤ４Ｔ細胞活性化のこの異常な状態の原因となるタンパク質、指定されたｓＰＬＡ２Ｇ１Ｂをヒト血漿から同定し、単離し、特性評価することについて既に報告している（ＷＯ２０１５／０９７１４０）。
【０００５】
本発明は、特定のクラスのｓＰＬＡ２Ｇ１Ｂ阻害化合物を、それを必要とする対象の免疫系を刺激するために使用することに関する。より詳細には、発明者らは、適した特異性プロファイルで強いｓＰＬＡ２Ｇ１Ｂ阻害効果を示す特定の群のインドール系化合物を選択した。発明者らは、これら化合物がウイルスＨＩＶ感染患者からの血清の能力を完全に中和して健康供与者から純化されたＣＤ４リンパ球において異常な病原菌の反応を誘発することができるため、ＨＩＶ感染対象におけるＣＤ４Ｔ細胞機能を回復することができる、ということを実証した。
【発明の概要】
【０００６】
本発明の目的は、対象における免疫反応を刺激または誘発する方法に関し、この方法は、対象を式Ａの化合物、またはその塩、エステル、水和物、ラセミ化合物、鏡像異性体、プロドラッグ若しくは代謝物に曝露することを含む。
【０００７】
本発明のさらなる目的は、対象の免疫不全障害の治療方法に関し、この方法は、対象を式Ａの化合物、その塩、エステル、水和物、ラセミ化合物、鏡像異性体、プロドラッグ若しくは代謝物に曝露する工程を含む。
【０００８】
本発明の更なる目的は、式Ａの化合物、またはその塩、エステル、水和物、ラセミ化合物、鏡像異性体、プロドラッグ若しくは代謝物を、対象の免疫反応を誘発もしくは刺激する、または、免疫不全障害を治療する薬剤の製造に使用することに関する。
【０００９】
本発明の更なる目的は、対象の免疫反応を誘発もしくは刺激する、または、免疫不全障害を治療する方法において使用する、式Ａの化合物、またはその塩、エステル、水和物、ラセミ化合物、鏡像異性体、プロドラッグ若しくは代謝物に関する。
【００１０】
本発明は、免疫不全対象、または、刺激された免疫性を必要とする対象（例えば、感染性の疾患または癌を患う対象）の治療に特に適している。これに関し、本発明の特定の目的は、対象に式Ａの化合物またはその塩、エステル、水和物、ラセミ化合物、鏡像異性体、プロドラッグ若しくは代謝物を投与することを含む、対象の感染性の疾患を治療する方法である。
【００１１】
本発明のより特定の形態は、ＨＩＶ感染対象におけるＡＩＤＳを治療する方法に関し、この方法は、対象に式Ａの化合物またはその塩、エステル、水和物、ラセミ化合物、鏡像異性体、プロドラッグ若しくは代謝物を投与することを含む。
【００１２】
別の態様において、本発明は、（ｉ）式Ａの化合物、またはその塩、エーテル、水和物、ラセミ化合物、鏡像異性体、プロドラッグ若しくは代謝物と（ｉｉ）さらなる坑ウイルス性剤または坑癌剤とを含む医薬組成物に関する。
【００１３】
本発明は、ヒトと、家畜化された動物（例えば、ウシ、ヒツジ、ネコ、イヌ、およびウマ）、非ヒト患者（サルなど）、ウサギ、および齧歯類（例えば、マウスおよびラット）などであるがこれらに限定されない非ヒト動物とを含む任意の哺乳類において使用されてもよい。本発明は、ヒト対象における使用に特に適している。本発明は、任意の哺乳類において免疫反応を増加するために使用されてもよく、免疫抑制された対象における強いＣＤ４−Ｔ細胞活性の誘発に特に適合されている。
【図面の簡単な説明】
【００１４】
【図１】図１は、化合物ＢがｓＰＬＡ２Ｇ１Ｂを阻害することを示す。まず、組換え体ＰＬＡ２Ｇ１Ｂ（７５ｎＭ）を指示濃度の化合物Ｂに３０分間曝露した。次に、混合物を「患者および方法」に記載のバイオアッセイに適用した。リン酸化ＳＴＡＴ５のＩＬ−７誘導性核移行の阻害率をＳＴＥＤ顕微鏡によって測定した。
【図２】図２は、化合物ＢのＩＣ５０の計算結果を示す。ＩＣ５０を正確に計算するために、プリズムソフトウェアによって実験データを解析した。
【図３】図３は、化合物ＢがＣＤ４リンパ球の活性を回復することを示す。健康供与者から浄化したＣＤ４リンパ球を３％の希釈度でウイルスＨＩＶ感染患者からの血清に曝露した。このような曝露の結果、ｐＳＴＡＴ５のＩＬ−７誘導性核移行が完全に阻害された。５０μＭで、化合物Ｂはこの阻害を完全に逆転し、それゆえ、ＣＤ４機能を回復した。５つの血清を試験し、結果を中央値＋／−ＳＤとして与える。
【図４】図４は、化合物ＢがＣＤ４リンパ球の活性を回復することを示す。健康供与者から浄化されたＣＤ４リンパ球を、１％または３％希釈度でウイルスＨＩＶ感染患者からの血清に曝露した。このような曝露の結果、ｐＳＴＡＴ５のＩＬ−７誘導性核移行が完全に阻害された。５０μＭで、化合物Ｂはこの阻害を完全に逆転し、それゆえ、ＣＤ４機能を回復した。
【発明を実施するための形態】
【００１５】
本発明は、免疫系の調節を必要とする対象において免疫系を調節する組成物および方法に関する。本発明は、より詳細には、特に、免疫抑制された、または、免疫不全の対象の免疫反応または免疫系を刺激する組成物および方法を提供することである。
【００１６】
本発明は、ｓＰＬＡ２Ｇ１Ｂにより仲介された異常なおよび病原菌のＣＤ４Ｔリンパ球を完全に中和するための特定のインドール系化合物の顕著な能力を開示する。意外なことに、これらの化合物の効果は、無血清緩衝液に含まれる組換型酵素においてよりも患者の血漿に存在するｓＰＬＡ２Ｇ１Ｂにおいて強いことが見出された。したがって、このような化合物は、ヒト対象における免疫系を刺激するため、より具体的には、ＨＩＶ感染患者を治療するための新規の強い作用物質を表している。化合物は、感染プロセスの早期に投与される場合、免疫疾患への進行を防止でき、免疫不全の発現を防止することができる。化合物は、後期に投与される場合、例えば、高活性抗レトロウイルス性治療（ＨＡＡＲＴ）に関連した場合、免疫系によるＨＩＶ感染症の制御につながる機能免疫系の回復を簡単化する。
【００１７】
したがって、本発明の目的は、対象における免疫反応を刺激または誘発する方法に関し、この方法は、対象を式Ａの化合物、またはその塩、エステル、水和物、ラセミ化合物、鏡像異性体、プロドラッグ若しくは代謝物に曝露することを含む。
【００１８】
本発明のさらなる目的は、対象の免疫不全障害の治療方法に関し、この方法は、対象を式Ａの化合物、またはその塩、エステル、水和物、ラセミ化合物、鏡像異性体、プロドラッグもしくは代謝物に曝露する工程を含む。
【００１９】
本発明の更なる目的は、式Ａの化合物、またはその塩、エステル、水和物、ラセミ化合物、鏡像異性体、プロドラッグ若しくは代謝物を、対象の免疫反応を誘発もしくは刺激する、または、免疫不全障害を治療する薬剤の製造に使用することに関する。
【００２０】
また、本発明は、対象のＣＤ４Ｔ細胞を刺激または回復するための式Ａの化合物の使用に関する。
【００２１】
式Ａの化合物
式Ａの化合物は、以下の構造Ａを有する化合物を指定する。
2018526440.tif 000002
ただし、
各Ｘは独立して酸素原子または硫黄原子、好ましくは酸素原子であり、
Ｒ１は−（ＣＨ２）ｎ−Ａｒであり、ｎは０、１または２であり、ＡｒはＣ５−Ｃ７芳香族基、好ましくはフェニル基であり、
Ｒ２はＣ１−Ｃ４アルキル、好ましくはエチルであり、
Ｒ３は−（Ｏ）ｍ−（ＣＨ２）ｐ−ＣＯＯＲ４であり、ｍは０または１、好ましくは１であり、ｐは０、１、または２、好ましくは１であり、Ｒ４は水素原子またはＣ１−Ｃ３アルキルである。
【００２２】
式Ａの化合物は、代謝性障害および冠状動脈疾患の治療についての文献に提案されている（例えばＷＯ２０１０／０８１０２２またはＷＯ２０１２／０２７５２９参照）。しかしながら、免疫系、特にＣＤ４Ｔリンパ球に対する式Ａの化合物の効果は、決して示唆されておらず、ＨＩＶ感染対象におけるｓＰＬＡ２ＧＩＢ−仲介ＣＤ４アネルギーを完全に中和する式Ａの化合物の能力については全く知られていない。
【００２３】
好ましい実施形態では、本発明において使用する化合物は、式Ａの化合物であり、
各Ｘは酸素であり、および／または
Ｒ１は−（ＣＨ２）−Ａｒであり、ＡｒはＣ５−Ｃ７芳香族基、好ましくはフェニル基であり、および／または、
Ｒ２はＣ１−Ｃ３アルキル、好ましくはエチルであり、および／または、
Ｒ３は−Ｏ−（ＣＨ２）ｐ−ＣＯＯＲ４であり、ｐは０、１または２、好ましくは１であり、Ｒ４は水素原子またはＣ１−Ｃ３アルキルである。
【００２４】
さらなる好ましい実施形態では、本発明において使用する化合物は、式Ａの化合物であり、
各Ｘは酸素であり、
Ｒ１は−（ＣＨ２）−Ａｒであり、Ａｒはフェニル基であり、
Ｒ２はエチルであり、
Ｒ３は−Ｏ−（ＣＨ２）−ＣＯＯＲ４であり、Ｒ４は水素原子またはメチル基である。
【００２５】
最も好ましい実施形態では、化合物は、３−（２−アミノ−１，２−ジオキソエチル）−２−エチル−１−（フェニルメチル）−１Ｈ−インドール−４−イル）オキシ）酢酸（化合物Ｂ）またはその薬学的に許容可能な塩、水和物若しくはプロドラッグである。化合物Ｂの構造は、以下のように表される。
化合物Ｂ
2018526440.tif 000003
【００２６】
式Ａの化合物は、例えばＷＯ２０１０／０８１０２２またはＷＯ２０１２／０２７５２９に記載のように、当該分野でそれ自体知られている方法によって製造されてもよい。「塩」という用語は、任意の薬学的に許容可能な本発明の化合物の無機または有機酸／塩基性添加塩を指す。本発明の薬学的に許容可能な酸塩類は、酢酸、硝酸、酒石酸、塩酸、硫酸、リン酸、メタンスルホン酸、カンファースルホン酸、シュウ酸、マレイン酸、琥珀酸またはクエン酸の塩類を含むがこれに限定されない。本発明の薬学的に許容可能な塩基性塩類は、ナトリウム、カリウム、カルシウム、マグネシウム、アンモニウム、またはコリンの塩類を含むがこれに限定されない。
【００２７】
ここでは「プロドラッグ」という用語は、構造Ａの化合物の任意の機能性前駆体を指し、該機能性前駆体は、生物系に投与された場合、例えば、突発性の化学的、酵素的、生物学的および／または代謝性の一つまたは複数の反応結果として上記化合物を生成する。代表的なプロドラッグは、構造Ｙ−Ａを有し、Ｙは保護基であり、プロドラッグからインビボで切断されて化合物Ａを放出する。プロドラッグは、通常、不活性であるか、または、結果として生じる薬よりは活性ではなく、例えば、化合物の心理化学的または薬動学的な特性を向上させるために使用することができる。
【００２８】
「代謝物」という用語は、有機体への投与後、化合物Ａのインビボの修飾または処理の結果として生じる分子を指す。このような修飾は、化合物の生物活性を維持する分子となる固有酵素系を通して生じてもよい。
【００２９】
「鏡像異性体」という用語は、異性体の混合物（任意の相対比）の反対として、単離された光学的に純粋な鏡像異性体を指す。したがって、本発明において使用する化合物は、光学的に純粋な鏡像異性体またはその任意の混合物（例えば、ラセミ化合物）でもよい。
【００３０】
成分
本発明において使用する化合物は、任意の薬学的に許容可能な賦形剤、ビヒクルまたは媒介物によって調製されてもよい。化合物は、軟膏、ゲル、ペースト、液体溶液、懸濁液、タブレット、ゼラチンカプセル、カプセル、座薬、粉末、経鼻の滴剤、またはエアロゾルの形態、好ましくは注射可能な溶液または懸濁液の形態でもよい。注射のためには、化合物は、一般的に、液体懸濁液の形態でパッケージ化されており、例えば、シリンジまたは灌流を介して注射されてもよい。この点に関し、化合物は、一般的には、食塩水、生理溶液、等張溶液または緩衝溶液に溶解され、薬学的使用と互換性があり、当業者に知られている。したがって、組成物は、分散剤、可溶化剤、安定剤、防腐剤などから選択される１つまたは複数の薬または賦形剤を含んでいてもよい。液体および／または注射用の製剤において使用され得る薬または賦形剤は、とりわけ、メチルセルロース、ヒドロキシメチルセルロース、カルボキシメチルセルロース、ポリソルベート８０、マンニトール、ゼラチン、乳糖、植物油、アカシアなどである。媒介物も、例えば、メチル−ベータ−シクロデキストリン、アクリル酸のポリマー（カーボポールなど）、ポリエチレングリコールおよびポリプロピレングリコールの混合物、モノエタノールアミンおよびヒドロキシメチルセルロースから選択され得る。
【００３１】
組成物は、一般的に、有効量、例えば、ｓＰＬＡ２Ｇ１Ｂを阻害するために効果的な量の式Ａの化合物を含有する。一般的に、本発明の組成物は、約０．０１μｇから１０００ｍｇ、例えば０．０５μｇを上回り６００ｍｇ未満、好ましくは０．０５μｇを上回り５００ｍｇ未満、例えば５ｍｇを上回り５００ｍｇ未満の式Ａの化合物を含有する。用量は、疾患および対象に応じて当業者によって調節されてもよい。成分Ｂについての特定の用量は、５０ｍｇを上回り５００ｍｇ未満である。
【００３２】
本発明の組成物は、同時または順次使用するために、１つまたは複数の追加の活性体をさらに含有し得る。特に、化合物Ａは、抗レトロウイルス性剤などの更なる坑ウイルス剤と組み合わせて使用されてもよい。
【００３３】
さらに、本発明は、上記で定義したような式Ａの化合物と、さらなる抗ウイルス剤とを含み、任意で薬学的に許容可能な賦形剤を含む医薬組成物に関する。本発明の組成物は、任意の適した装置、または、シリンジ、アンプル、フラスコ、ボトル、パウチなどの容器に調製されてもよい。
【００３４】
さらに、本発明は、（ｉ）先述のような式Ａの化合物を含む容器と、（ｉｉ）さらなる坑ウイルス剤を含む容器とを備え、任意で（ｉｉｉ）キットを使用するための指示書とを含むキットにも関する。
【００３５】
疾患
本発明の化合物および組成物は、向上した免疫性が対象状態を改善する可能性がある任意の疾患だけではなく不適切な（例えば、欠陥があるか、または、不適当な）免疫反応、特に、不適切なＣＤ４Ｔ細胞活性に関する任意の疾患も治療するために使用されてもよい。これらの疾患は、本願において「免疫性障害」または「免疫不全」と呼ばれることもある。これは、ウイルス性感染症または病原菌の感染症または癌により引き起こされる特に免疫不全の状態、または癌を含む。
【００３６】
本願では、「治療」または「処置」という用語は、例えば、治療される固体の自然経過を変化させようとする任意の臨床介入を指し、予防または治癒のいずれかの目的で行われ得る。治療の望ましい効果は、疾患の発生または再発の防止、症状の緩和、疾患の何らかの直接的または間接的な病的な帰結の減少、転移の防止、疾患進行率の低下、疾患状態の寛解または緩和、および緩解または改善した予後であるがこれらに限らない。本発明の組成物および方法が疾患または障害の発生を遅らせるため、または、疾患または障害の進行を遅らせるために使用される実施形態もある。
【００３７】
このような治療から利益を得られる疾患の例は、ＨＩＶ−仲介免疫不全などの免疫不全を有する全ての疾患である。この点に関し、特定の実施形態では、本発明は、それを必要とする対象の免疫不全または関連障害を治療するため、該対象に式Ａの化合物を投与することを含む方法を対象としている。
【００３８】
別の特定の実施形態では、本発明は、必要とする対象における免疫不全または関連障害を治療するために使用される式Ａの化合物を対象としている。
【００３９】
免疫不全および関連障害は、対象における低減された免疫機能または免役反応により特徴付けられるおよび／または引き起こされる任意の状態または病理を指す。免疫不全は、例えば、ウイルス性感染症（例えば、ＨＩＶ、肝炎Ｂなど）、細菌性感染症、癌、または他の病的な状態によって引き起こされる可能性がある。したがって、「免疫不全関連の障害」という用語は、免疫不全により引き起こされる、または、免疫不全に関連する任意の疾患を指す。本発明は、ＣＤ４−Ｔ細胞に関連する免疫不全および関連疾患を治療するために特に適している。
【００４０】
特定の実施形態において、本発明は、対象のＨＩＶ感染症を該対象に式Ａの化合物を投与することにより治療する方法に関する。いくつかの実施形態では、対象は、初期のＨＩＶ患者であり、本方法により、患者がＨＩＶ制御者である可能性が増大する。いくつかの実施形態では、対象は、抗レトロウイルス性治療後に低い免疫再構成を有する、および／または、重篤な突発性のＣＤ４Ｔリンパ球減少（ＩＣＬ）を有する患者である。
【００４１】
また、本発明は、ＨＩＶ感染対象のＣＤ４−Ｔ細胞活性を該対象に式Ａの化合物を投与することによって増大する方法に関する。本発明は、感染症の早期で対象を治療して、免疫不全の発生、広がり、または、持続を防止または低減するために使用されてもよい。代表的には、化合物を、感染性の疾患が発見されるとすぐに、臨床兆候の発現前に投与することができる。式Ａの化合物は、ＨＩＶによる感染の間の非常に早期に投与されると、患者をＨＩＶ制御者状態に向かわせることができる。また、本発明の化合物は、感染した対象に後期に単独でまたは一または複数の抗ウイルス剤と組み合わせて投与されてもよい。このような療法では、化合物は、ＣＤ４Ｔリンパ球の回復およびその機能の再生を加速させる。したがって、特定の実施形態では、本発明は、（ｉ）抗ウイルス剤と（ｉｉ）式Ａの化合物をウイルス性感染症を有する対象に同時に、個別に、または順次に投与することを含む。このようなプロトコルは、ＨＩＶ感染対象を治療するために特に適しており、化合物Ａは、抗レトロウイルス性治療（例えば、ＨＡＡＲＴ）と組み合わせて使用され、ＨＡＡＲＴを低減でき、または、その重篤な有害な影響によって知られているＨＡＡＲＴ治療を少なくとも一時的に中断することさえできる。
【００４２】
また、本発明は、対象の免疫反応を増大させることにより癌を治療する方法であって、該対象に式Ａの化合物を投与することを含む方法を提供する。また、本発明は、対象の癌に関連するＣＤ４Ｔ細胞連鎖免疫不全を、該対象に式Ａの化合物を投与することにより治療する方法を提供する。
【００４３】
本発明の化合物または組成物の投与の期間、用量、および頻度は、対象および疾患に応じて適合されてもよい。治療は、単独で使用されてもよいし、他の活性成分と組み合わせて、同時に、または個別に、または順次に使用されてもよい。
【００４４】
本発明の化合物または組成物は、全身の注射、筋肉、静脈、腹腔内、皮膚、皮下、真皮、経皮、髄腔内、眼球（例えば角膜の）または直腸の経路、または、炎症部位における局所投与、好ましくは筋肉注射または静脈注射などであるがこれらに限定されない様々な方法および経路で投与されてもよい。
【００４５】
代表的な療法は、有効量の式Ａの化合物を、単回または繰り返し１日または数日、最長１年の期間に亘って投与すること、および１週間〜約６か月を含む。インビボで投与される本発明の医薬的化合物または組成物の用量は、受容者（対象）の年齢、健康、性別、および体重、並行する治療の種類、必要であれば、治療の頻度、および所望の医薬的効果の特性に応じているものと理解される。ここで提供される有効量の範囲は、限定を意図するものではなく、好ましい用量範囲を示している。しかしながら、最も好ましい用量は、当業者により理解されており決定されるように個々の対象に適合される（例えば、Berkowet et al., eds., The Merck Manual, 16th edition, Merck andCo., Rahway, N.J., 1992; Goodmanetna., eds., Goodman and Cilman’s Thepharmacological Basis of Therapeutics, 10th edition, Pergamon Press, Inc.,Elmsford, N.Y., (2001)を参照）。
【００４６】
本発明のさらなる観点および利点は、説明を目的とする下記の実験の項目に開示されている。
【実施例】
【００４７】
Ａ．患者および方法
Ａ１．血漿の起源
研究に含まれるウイルス患者（ＶＰ）は、１年を上回ってＨＩＶ陽性であった。患者は、何らかの抗レトロウイルス性剤は受けておらず、採血の時点でウイルス負荷が１００００ＲＮＡコピー／ｍｌを上回り、ＣＤ４カウントが２００／ｍｌを上回っていた（ＡＮＲＳＥＰ３３およびＥＰ２０の研究）。ＶＰからの全ての血液サンプルは、ビセートル病院（Hopital Bicetre）またはゴネス総合病院（CentreHospitalier de Gonesse）で採られた。
【００４８】
Ａ２．組換型ＰＬＡ２Ｇ１Ｂ酵素の製造
ｓＰＬＡ２Ｇ１Ｂは大腸菌において製造された。封入体を尿素において可溶化し、その後、復元した。ｓＰＬＡ２Ｇ１ＢをＨＰＬＣによってさらに浄化した。製剤の均一性を質量分析法（Ｍａｌｄｉｔｏｆｆ）によって確認した。酵素の特定の活性を常時測定し、標準的な製剤と比較した。
【００４９】
Ａ３．バイオアッセイ
ＩＬ−７誘導性リン酸化ＳＴＡＴ５核移行（ＮＴｐＳＴＡＴ）の阻害を以下のように測定した。まず、ＶＰ血漿（５％または１０％）を、ＩＬ−７（２ｎＭ、１５分）による刺激の前に、浄化ＨＤＣＤ４Ｔ細胞と共にインキュベートした（２０分）。次に、細胞を、ＰＦＡ（１．５％）による固定およびメタノール（−２０°Ｃで９０％）による透過化処理の前に、ポリリジン被覆されたガラススライドにめっきした。次に、ｐＳＴＡＴ５をウサギ抗ＳＴＡＴ５によって染色し、ヤギ抗ウサギＡｔｔｏ６４２によりラベル付けした。細胞をパルスＳＴＥＤ顕微鏡によって解析し、ｐＳＴＡＴ５を発現する核の数を数えた。
【００５０】
Ａ４．化合物
化合物ＢをＳｅｌｌｅｃｋ社から購入した。
【００５１】
Ｂ．結果
Ｂ１．式Ａの活性体の選択
ｓＰＬＡ２Ｇ１Ｂに対する式Ａの化合物の活性を試験し、以下で説明する大腸菌膜アッセイを用いて確認した。
【００５２】
ホスホリパーゼＡ２（ＰＬＡ２ｓ）ＥＣ３．１．１．４は、リン脂質のグリセロール部分の第２炭素基から脂肪酸を放出する酵素である。アッセイは、オレイン酸（ＯＡ）などの外因的に加えられる脂肪酸を組み込むための大腸菌膜の能力に基づく。放射能標識ＯＡを使用することで、大腸菌の膜リン脂質へのこの脂肪酸の組み込み、および、これら膜のＰＬＡ２仲介加水分解時のその放出を追跡することができる。任意のｓＰＬＡ２に対抗する特定の阻害剤または中和用の特定の抗体による、アッセイ前の、サンプルのプレインキュベーションは、どのｓＰＬＡ２タイプが検出されたかを示すことができる。
【００５３】
放射能標識大腸菌膜の調製放射標識大腸菌を、Fransonet al (Franson R, Patriarca P, Elsbach P (1974) Phospholipid metabolism byphagocytic cells: phospholipases A2 associated with rabbit polymorphonuclearleukocyte granules.J Lipid Res 15: 380-388)の方法によって調製した。大腸菌を一晩培養した培養液を１：２０でＬｕｒｉａＢｒｏｔｈ（ＬＢ）媒体において希釈し、１ｍＣｉ／ｍｌの［３Ｈ］ＯＡ（ＮＥＴ２８９、ＮＥＮ、５ｍＣｉ／ｍｌ）の存在下で強い振盪で５時間３７°Ｃでインキュベートした。次に、放射能標識大腸菌を、新鮮ＬＢにおいて３０分インキュベートすることにより洗浄し、その後、１％のウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）で洗浄して組み込まれなかった放射能標識を除去した。洗浄した大腸菌をオートクレーブし、適切な量の０．８５％の食塩水中で再懸濁して約５０００ｃｐｍ／μｌを達成した。放射能標識大腸菌膜懸濁液を使用するまで−２０°Ｃで保管した。代表的には、５０％を上回り９０％未満の追加された［３Ｈ］ＯＡを大腸菌に組み込んだ。
【００５４】
ｓＰＬＡ２活性の測定
ｓＰＬＡ２アッセイを、１０μｌから５０μｌの生物学的サンプルを用いて行った。反応混合物は、５ｍＭのカルシウム塩化物、１２５ｍＭのトリスＨＣｌ（ｐＨ８．５）、２．５ｍｇ／ｍｌのＢＳＡ、および約５００００ｃｐｍの［３Ｈ］ＯＡ標識大腸菌膜懸濁液を含んでいた。インキュベーション期間およびサンプル体積を調整して酵素アッセイの直鎖型範囲内の加水分解率を確保する（代表的には全基体加水分解の１０％〜２０％）。
【００５５】
３７℃の水槽で３０分反応を行い、０．１ＭのＥＤＴＡおよび０．２％の無脂肪酸ＢＳＡを含む停止緩衝液で停止した。その後、チューブを遠心分離して大腸菌膜を沈降させ、上清のアリコートを数えてこれらの膜から放出された［３Ｈ］ＯＡを監視した。上清だけでなくペレットも数えることにより合計数も得られる。
【００５６】
ｓＰＬＡ２活性（Ａ）を以下のとおり計算する。
Ａ＝Ａ１−Ａ２／Ｂ×１００
サンプルの追加の後の大腸菌膜の上清の１ｍｌにおいてＡ１＝ｃｐｍカウント
盲検においてＡ２＝ｃｐｍカウント（サンプルの追加前の大腸菌膜の１ｍｌの上清）
インキュベーション前の１ｍｌ膜においてＢ＝合計初期ｃｐｍカウント
Ａは、大腸菌膜に組み込まれた合計放射能の％加水分解として表される。
【００５７】
試験の結果により、式Ａの化合物の活性を確認することができ、特に、各Ｘは酸素であり、および／またはＲ１は−（ＣＨ２）−Ａｒであり、Ａｒはフェニル基であり、および／または、Ｒ２はエチルであり、および／または、Ｒ３は−Ｏ−（ＣＨ２）−ＣＯＯＲ４であり、Ｒ４は水素原子またはメチル基である。化合物Ｂは、特に強い阻害効果を示す。
【００５８】
Ｂ２．化合物Ｂの特異性
離生ＰＬＡ分子に対する化合物Ｂの特異性を表１にまとめる。分泌ホスホリパーゼＡ２（ｓＰＬＡ２）のパネルについてのＩＣ５０値を示す。化合物Ｂは、顕著なＩＣ５０を有するｓＰＬＡ２ＧＩＩＡ、ｓＰＬＡ２ＧＩＩＤ、ｓＰＬＡ２ＧＩＩＥ、ｓＰＬＡ２ＧＩＩＦ、ｓＰＬＡ２ＧＶおよびｓＰＬＡ２ＧＸだけでなくｓＰＬＡ２Ｇ１Ｂとも結合することができる。化合物Ｂは、ｓＰＬＡ２ＧＩＩＩおよびｓＰＬＡ２ＧＸＩＩＡを認識しないか、またはこれらとは結合しない。
【００５９】
表１は、化合物Ｂが群ＩＩＩＰＬＡ２に対して活性を有さない注目選択性プロファイルを有することを示す。さらに、ＨＩＶ感染患者からの血漿において、ＣＤ４リンパ球において観察された病原菌の活性は、ｓＰＬＡ２ＧＩＢにより支配されており、ウイルス患者の血漿から回復された１５ｋＤａ分画における何らかの他の分泌ＰＬＡ２は見出さなかった。
【００６０】
Ｂ３．化合物Ｂは、ｓＰＬＡ２Ｇ１Ｂ−仲介ＣＤ４Ｔ細胞アネルギーを阻害する。
まず、「患者および方法」に記載されたバイオアッセイにおいて試験したように組換型ｓＰＬＡ２Ｇ１Ｂの生物活性における化合物Ｂの様々な容量の効果を調査した。図１は、化合物Ｂの阻害効果が５μＭで開始し、８μＭの濃度で最大となることを示す。実験を２度繰り返した。実験データから、ＩＣ５０となる対応の理論曲線を導出した。化合物ＢについてＩＣ５０は６．０１μＭである（図２）。
【００６１】
ａＭＭＤの誘発によってウイルス患者の血漿に含まれるｓＰＬＡ２Ｇ１Ｂがリン酸化ＳＴＡＴ５（ＮＴｐＳＴＡＴ５）のＩＬ−７誘導性核移行の封鎖を誘発することは既に説明した。その結果、健康供与者から浄化されたＣＤ４Ｔリンパ球はＩＬ−７に反応しない。ここで、ＩＬ−７誘導性ＮＴｐＳＴＡＴ５をブロックするための、ＶＰからの血清の容量に対する化合物Ｂの効果を試験した。
【００６２】
様々なＨＩＶウイルス患者（少なくとも５人）からの血漿の効果を、ＩＬ−７誘導性ＮＴｐＳＴＡＴ５の阻害に対してまず滴定した。阻害は血漿の１％希釈において測定可能であり、効果は血漿の１０％で最大である。結果として、実験では、３０％を上回り７０％未満の最大阻害となる３％希釈で異なる血漿を使用した。これらの実験条件の下で、５０μＭの化合物Ｂ（そのＩＣ５０の１０倍）が血漿の阻害力を復帰させることが示される（図３）。なお、化合物Ｂは、無血清緩衝液に含まれる組換型酵素に対してよりも、患者の血漿に含まれる場合により活性である。組換型酵素で得られる阻害は、約８０％の最大阻害に対応するプラトーに達する。これに対し、血漿が使用される場合に得られるプラトーは、約９０％の阻害であるか、それ以上である（図１および図２のデータを図３のデータと比較）。このことは、高分子量の多分子性複合体の組織化後にｓＰＬＡ２Ｇ１Ｂに干渉し、触媒部位へのアクセスを隠す可能性があり、それゆえ、化合物Ｂの効果を遅らせる可能性がある、高濃度の多数のタンパク質と複数の脂質部分の存在にもかかわらず、化合物Ｂが血漿において高活性であることを示唆する。
【００６３】
さらなる研究において、追加の５人のＨＩＶ感染患者からの血漿を試験した。１％および３％の濃度において、これら血漿の各々は、リン酸化転写因子ＳＴＡＴ５（ｐＳＴＡＴ５）の核移行により測定されるように、インターロイキン−７（ＩＬ−７）の影響を完全に阻害した。ｐＳＴＡＴ５の核移行の１００％阻害が観察される（図４参照）。図４に示すとおり、５０μＭの濃度での化合物Ｂは、この阻害を完全に逆転すること、および、通常ＣＤ４活性を復元することができた。１％血漿において試験した場合、逆転は完全であり、３％血漿で試験した場合、非常に高い逆転（約９０％）も観察された。
【００６４】
Ｂ４．ＨＩＶ感染ヒト対象への化合物Ｂの投与
化合物Ｂを、プラセボ群に対して、それぞれ、１００ｍｇ、２００ｍｇおよび５００ｍｇの１日量で注射または経口で３群のヒト対象に投与する。投与は４か月の間繰り返される。患者は、以下の特定の終点の１つまたは複数について、１、２、４、８および１６週目に検査される。
【００６５】
ＰＬＡ２ＧＩＢの血漿量：量の減少は化合物Ｂの効果を示す。
ＨＩＶ感染症の免疫性パラメータ：ＣＤ４リンパ球／ｍｍ３の上昇、ＣＤ８リンパ球／ｍｍ３のレベル、率ＣＤ４／ＣＤ８、および／またはウイルス性不可（ＨＩＶＲＮＡコピー数／ｍｌ）；
毒性マーカー：肝トランスアミナーゼ。
【００６６】
検討
私たちは事前に、ｓＰＬＡ２Ｇ１ＢがＣＤ４Ｔリンパ球レベルでウイルス患者からのＣＤ４Ｔ細胞を特徴付ける様々な欠陥を誘発することを実証した。私たちはリンパ球減少を説明するＩＬ−７に対する反応の不能性を報告した。私たちはこの観察を延長し、ｓＰＬＡ２Ｇ１Ｂ−治療されたＣＤ４リンパ球のＩＬ−２またはＩＬ−４に対する反応の不能性を実証し、それにより、アネルギーを説明した。
【００６７】
ここで、初めて、私たちは化合物を説明し、この化合物は、ウイルスＨＩＶ感染患者の血漿において見出されたｓＰＬＡ２Ｇ１Ｂの酵素的活性の強い阻害を通して、試験された全てのウイルス患者からの血清の病原菌の活性が完全に中和された。観察された効果は、この治療的試みの全体の、明らかに突出して強い潜在力である。
【００６８】
参考文献
(1) Grossman Z, Meier-Schellersheim M, Sousa AE, VictorinoRMM, Paul WE (2002) CD4+ T-cell depletion in HIV infection: are wecloser to understanding the cause- Nat Med 8(4):319-323
(2) Catalfamo M, et al.(2008) HIV infection-associated immune activation occurs by two distinctpathways that differentially affect CD4 and CD8 T cells. PNAS105(50):19851-19856.
(3) Armah KA, et al.(2012) HIV status, burden of comorbid disease and biomarkers of inflammation,altered coagulation, and monocyte activation. Clin Infec Dis55(1)126-36.
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【国際調査報告】
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