(57)【要約】本発明は、「ＦＲ１０４」と呼ばれる、ヒト化ペグ化一価抗ＣＤ２８Ｆａｂ’抗体断片の為の新規で並びに有利な投薬管理に属する。この投薬管理は、週に一度、２週間に一度、３週間に一度、４週間に一度、５週間に一度、若しくは６週間に一度、７週間に一度、８週間に一度、又は８週間以上に一度の投薬計画で、０．０５〜１．５ｍｇ／ｋｇ体重の間である、ＦＲ１０４で構成される。【特許請求の範囲】
【請求項１】
（ｉ）Ｃ末端がペグ化された配列番号１の第１のタンパク、及び
（ｉｉ）配列番号２の第２のタンパク
のヘテロ二量体からなり、Ｔ細胞の免疫応答を阻害することによって改善又は予防されやすい病状の治療の為に用いられうる抗ＣＤ２８Ｆａｂ’抗体断片であって、治療有効量の前記抗ＣＤ２８Ｆａｂ’抗体断片が治療を必要とするヒト患者へ投与され、そして抗ＣＤ２８Ｆａｂ’抗体断片の治療有効量が、週に一度、２週間に一度、３週間に一度、４週間に一度、５週間に一度、若しくは６週間に一度、７週間に一度、８週間に一度、又は８週間以上に一度の投薬計画で０．０５から１．５ｍｇ／ｋｇ体重の間である、抗ＣＤ２８Ｆａｂ’抗体断片。
【請求項２】
前記治療有効量が、週に一度、２週間に一度、３週間に一度、４週間に一度、５週間に一度、又は６週間に一度の投薬計画で投与されるときに０．０５から０．５ｍｇ／ｋｇ体重以下の間である、請求項１に記載の使用のための請求項１に記載の抗ＣＤ２８Ｆａｂ’抗体断片。
【請求項３】
前記治療有効量が、投薬計画が週に一度、２週間に一度、３週間に一度、４週間に一度、５週間に一度の投与計画で投与されるときに、０．０５から０．２ｍｇ／ｋｇ体重の間である、請求項１あるいは請求項２に記載の使用のための請求項１に記載の抗ＣＤ２８Ｆａｂ’抗体断片。
【請求項４】
前記治療有効量が、０．５ｍｇ／ｋｇについては少なくとも４週間毎に一度、１ｍｇ／ｋｇについては少なくとも８週間毎に一度、そして１ｍｇ／ｋｇ以上の量については８週間以上に一度の投薬計画で投与されるとき０．５から１．５ｍｇ／ｋｇ体重の間である、請求項１での使用のための請求項１に記載の抗ＣＤ２８Ｆａｂ’抗体断片。
【請求項５】
前記治療有効量の抗ＣＤ２８Ｆａｂ’抗体断片が、二回の投与の間の期間にわたって少なくとも８０％のＣＤ２８受容体占有率を誘導する、請求項１から４のいずれか１項に記載の使用のための請求項１に記載の抗ＣＤ２８  Ｆａｂ’抗体断片。
【請求項６】
Ｔ細胞の免疫応答の阻害によって改善又は予防されやすい前記病状が、前記患者の移植臓器、組織又は細胞の機能不全、Ｔ−リンパ球媒介の自己免疫疾患、アテローム性の動脈硬化、又は炎症性の疾患である、請求項１から５のいずれか１項に記載の使用のための請求項１に記載の抗ＣＤ２８Ｆａｂ’抗体断片。
【請求項７】
Ｔ細胞の免疫応答の阻害によって改善あるいは予防されやすい前記病状が、腎臓移植拒絶反応、慢性同種移植脈管症、移植片対宿主病、自己免疫性脳脊髄炎、乾癬、リューマチ性関節炎、多発性硬化症、クローン病、潰瘍性大腸炎、アテローム性の動脈硬化、タイプ１糖尿病、又はタイプ４過敏症である、請求項１から６のいずれか１項に記載の使用のための請求項１に記載の抗ＣＤ２８  Ｆａｂ’抗体断片。
【請求項８】
前記抗ＣＤ２８Ｆａｂ’抗体断片が前記患者の静脈内、皮下、筋肉内若しくは局所に、又は髄膜内注射により投与される、請求項１から７のいずれか１項に記載の使用のための請求項１に記載の抗ＣＤ２８Ｆａｂ’抗体断片。
【請求項９】
（ｉ）Ｃ末端がペグ化した配列番号１の第１のタンパク、及び
（ｉｉ）配列番号２の第２のタンパク
のヘテロ二量体である抗ＣＤ２８Ｆａｂ’抗体断片を３から１２０ｍｇの間の量で、１つ又はより多くの医薬上許容できる賦形剤とともに含む、必要とするヒト患者のＴ細胞免疫応答を阻害するための医薬組成物。
【請求項１０】
３５ｍｇ以下の、好ましくは３から１４ｍｇの間の前記抗ＣＤ２８  Ｆａｂ’抗体断片を含む、請求項９に記載の医薬組成物。
【請求項１１】
静脈内、皮下、筋肉内、局所又は髄膜内投与へ適している、請求項９または１０に記載の医薬組成物。
【請求項１２】
組換えヒトヒアルロニダーゼを含む、請求項９から１１のいずれかに記載の医薬組成物。
【請求項１３】
３５から１２０ｍｇの間の前記抗ＣＤ２８Ｆａｂ’抗体断片を含む、請求項９、１１、又は１２のいずれかに記載の医薬組成物。
【請求項１４】
（ｉ）Ｃ末端がペグ化した配列番号１の第１のタンパク、及び
（ｉｉ）配列番号２の第２のタンパク
のヘテロ二量体である抗ＣＤ２８Ｆａｂ’抗体断片を
月投薬量で含み、各回の投薬単位が３から１２０ｍｇの前記抗ＣＤ２８Ｆａｂ’抗体断片を含む、キット。
【請求項１５】
請求項９から１３のいずれか１項に記載の医薬組成物を含む注射器。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
発明の分野
本出願は免疫療法の分野に属する。より明確には、本発明は、既に「ＦＲ１０４」（Poirier et al., 2012）と記載されるペグ化されたヒト化抗ＣＤ２８Ｆａｂ’抗体断片のための新規で有利な投薬計画を提供する。
【背景技術】
【０００２】
ＣＤ２８は有力なＴ細胞陽性共刺激分子である。ＦＲ１０４は重鎖のＣ末端がペグ化されたヒト化一価抗ＣＤ２８Ｆａｂ’抗体断片である（WO 2011/101791, US 8,785,604 B2）。ＦＲ１０４はＣＤ２８．３と呼ばれるマウス抗体のヒトに適応させたものから由来する。この抗体はＦａｂ’の形式での、ＣＤ８０のＣＤ２８への結合に対する強いアンタゴニスト活性及び標的エピトープが（スーパーアゴニズムの為に必須である事が示されている（Poirier et al., 2012a））ＣＤ２８のＣ’’Ｄ抗原性ループの外側にあるため抗原非依存性Ｔ細胞活性化（スーパーアゴニストと呼ばれるプロセス）を本来的に誘導できないことを基準として選択された（Vanhove et al., 2003）。
【０００３】
ＦＲ１０４はヒト及びヒトでない霊長類のＣＤ２８と結合し（しかしマウス、ラット、ウサギのＣＤ２８にも、イヌのＣＤ２８にも結合しない）、そしてＣＤ２８とその補受容体であるＣＤ８０／ＣＤ８６との結合に拮抗する。ＣＤ８０／ＣＤ８６補受容体は、それゆえ有力な陰性共刺激である細胞毒性Ｔ−リンパ球抗原４（ＣＴＬＡ−４）とプログラム細胞死１リガンド１（ＰＤＬ−１）（これらは、エフェクターＴ細胞を阻害しＴ細胞調節性の機能抑制機能に必須である）と自由に相互作用し、ＦＲ１０４の作用機序はそれ故二重である：
１）直接様式では、ＦＲ１０４はＴ細胞のＣＤ２８仲介シグナルをブロックし、
２）間接様式では、ＦＲ１０４はＣＴＬＡ−４及びＰＤＬ−１仲介シグナルを促進する。
この作用機序は、ＣＤ８０及びＣＤ８６に結合し、陽性及び陰性両方の共刺激分子の機能をブロックする（ＣＤ２８、ＣＴＬＡ−４若しくはＰＤＬ−１への接近をブロックすることによって）アバタセプト（登録商標オレンシア）若しくはベラタセプト（登録商標ヌロジックス）のような、Ｔ細胞の共刺激のブロックを目的とする既存の治療とは異なる。
【０００４】
一価の性質、Ｆｃドメインの欠如並びにスーパーアゴニスト抗体（例えばＴＧＮ１４１２）の標的エピトープの外側にある標的エピトープのため、ＦＲ１０４は抗薬物抗体の存在下でさえもヒトのＴ細胞を刺激することができないアンタゴニスト抗体である（Poirier et al., 2012）。入手可能な臨床前データは、ヒト化マウスにおいて、インビボ及びトランスビボで、またヒトのようにＴ細胞は抗ＣＤ２８抗体スーパーアゴニストとの相互作用の後、サイトカインを放出する種である（Poirier et al., 2014）ヒヒにおいてインビボでヒトＴ細胞に対するアゴニスト及びスーパーアゴニストの特性の欠如を証明している。
【０００５】
ＦＲ１０４はこれらの全ての状態でアンタゴニストにとどまっていた。たとえＦＲ１０４が二次抗体で覆われ、架橋されても、又は抗ＣＤ３抗体の存在下でも、増殖もサイトカインの分泌も観測されなかった(Poirier et al., 2012)。逆に、ヒトＰＢＭＣが抗ＣＤ３抗体によって刺激された場合、ＦＲ１０４は用量依存的にＴ細胞の増殖を阻害した。これらのアッセイにおいて、ポジティブコントロールとしての抗ＣＤ２８抗体スーパーアゴニストは一貫してヒトＴ細胞の増殖及び／又はサイトカインの放出を誘導した。
【０００６】
エフェクターＴ細胞へ向けられたその選択的な免疫抑制性の活性の為に、ＦＲ１０４は先ずリューマチ性関節炎並びに移植（腎臓移植受容者及び幹細胞移植後の移植片対宿主病［ＧＶＨＤ］）での使用について調べられる。無調節の自己免疫又は同種免疫反応を有する患者についてＦＲ１０４の直接期待される利益が存在し、それは、Ｔ細胞の免疫抑制の効力の改善、及び免疫調節機構の保存に起因するＴ及びＢ細胞の病的応答の長期的な治療の制御から本質的になる。腎臓移植患者ではこれは早期の拒絶事象を減らし、長期転帰を改善するはずである。異質遺伝子型の造血幹細胞移植後の中程度から重度のＧＶＨＤで苦しむ患者のために、これはエフェクターＴ細胞の同種反応性を鈍くするはずである。リューマチ性関節炎で苦しむ患者のために、これは臨床上の症状の早期の改善並びに頻繁な再発の減少へと変えるはずである。有効な臨床前の評価は、霊長類の腎臓移植（Poirier et al., 2015）、並びにヒト化マウス（Poirier et al., 2012）及び霊長類（Kean et al., 2014）のＧＶＨＤ、並びに自己免疫性脳脊髄炎の実験モデル（Haanstra et al, JI 2015）、並びにヒト乾癬の霊長類モデルの皮膚炎症（Poirier et al, JI 2015）（Poirier et al, Experimental Dermatol. 2015）、並びにリューマチ性関節炎のモデルである霊長類のコラーゲン誘導性関節炎（Vierboom et al., 2015）における効力の証明を含む。
【０００７】
機械論的には、ＦＲ１０４がＣＴＬＡ−４依存様式での同種反応性を阻害することが証明され、このことにより理論上の作用機構は実際にインビボで機能しているのが確認されている（Poirier et al., 2012）。
【０００８】
ＦＲ１０４はチャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞中で伝統的な組換え技術によって生産される。
これは、
（ｉ）Ｃ末端がペグ化された配列番号１の第１のタンパク、及び
（ｉｉ）配列番号２の第２のタンパク
からなるヒト化ペグ化Ｆａｂ’抗体断片である。精製後、それは血中濃度半減期を増加させるためにポリエチレングリコール（ＰＥＧ）部分と化学的に結合させる。ＣＨ１ドメインのＣ末端はモノペグ化に適応するために設計された。ＰＥＧ残基はマレイミド環を介してＣ末端のシステインと結合した２×２０ ｋＤａの二つの分岐である。全ての生産、精製そしてガラス瓶に入れる過程はＧＭＰ条件下で行われた。
【０００９】
Poirierら（２０１２）は、プラズモン共鳴分析によって、ＦＲ１０４のＣＤ２８との解離定数がおよそ４．６ｎＭであることを示した。推定最小薬理作用量（ＭＡＢＥＬ）の計算、並びにＦＲ１０４のファーストインヒューマン（ＦＩＨ）臨床試験のための投与量の選択はPoirierら（２０１２）によって公開されたデータに基づいた。
【発明の概要】
【００１０】
下記の実験部分に記載されているように、臨床試験の第一実験によって得られたデータはとても驚くべきもので、発明者は結論として真のＫD値はインビトロで測定された４．６ｎＭの値よりも少なくとも１０倍低いと導いた。
【００１１】
発明者は、これらの調査に従って、得られたＰＫと受容体占有率（ＲＯ）データをとらえるための薬物動態／標的関与（ＰＫ／ＴＥ）モデルを再検討した。この再検討モデルに基づいて：
−０．０５ｍｇ／ｋｇの投与量は２−３週間の間８０％以上の平均ＲＯ％を達し得、
−０．２ｍｇ／ｋｇの投与量は４−５週間の間８０％以上の平均ＲＯ％を達し得る。
【００１２】
したがって本発明は、治療を必要とするヒト患者へのＦＲ１０４の治療有効量の投与によるＴ細胞の免疫応答の阻害により、改善、若しくは予防されやすい病状を治療する為の、前記ＦＲ１０４の治療有効量が週に一度、２週間毎に一度、３週間毎に一度、４週間毎に一度、５週間毎に一度、又は６週間毎に一度の投薬計画で０．０５〜１．５ｍｇ／ｋｇ体重の間である、ＦＲ１０４の使用に関する。これらの投与は長い期間（数ヶ月から数年）の間行うことも、又は１度若しくは２，３度の投与後終了することもできる。それらはしばらくの間（２，３ヶ月から数年）中断し、ヒト患者の状態が新しい治療を正当化するならば再開することもできる。
【００１３】
本発明は、
（ｉ）Ｃ末端がペグ化された配列番号１の第１のタンパク、及び
（ｉｉ）配列番号２の第２のタンパク
のヘテロ二量体からなり、
Ｔ細胞の免疫応答の阻害によって改善あるいは予防されやすい病状の治療に用いられる抗ＣＤ２８Ｆａｂ’抗体断片であって、治療有効量の前記抗ＣＤ２８Ｆａｂ’抗体断片が治療を必要とする患者へ投与され、前記抗ＣＤ２８Ｆａｂ’抗体断片の治療有効量が週に一度、２週間毎に一度、３週間毎に一度、４週間毎に一度、５週間毎に一度、又は６週間毎に一度、７週間毎に一度、８週間毎に一度、又は８週間以上の投薬計画で、０．０５〜１．５ｍｇ／ｋｇ体重の間である、抗ＣＤ２８Ｆａｂ’抗体断片を提供する。いくつかの実施形態では、治療有効量は週に一度、２週間毎に一度、３週間毎に一度、４週間毎に一度、５週間毎に一度、又は６週間毎に一度の投薬計画で０．０５〜０．５ｍｇ／ｋｇ体重以下で投与される。いくつかの実施形態では、治療有効量は週に一度、２週間毎に一度、３週間毎に一度、４週間毎に一度、５週間毎に一度の投薬計画で０．０５〜０．２ｍｇ／ｋｇ体重で投与される。いくつかの実施形態では、治療有効量は０．５ｍｇ／ｋｇについては少なくとも４週間毎に一度、１ｍｇ／ｋｇについては少なくとも８週間毎に一度、そして１ｍｇ／ｋｇ以上の量については８週間以上に一度、０．５〜１．５ｍｇ／ｋｇ体重の間での投薬計画で投与される。いくつかの実施形態では、治療有効量の抗ＣＤ２８Ｆａｂ’抗体断片が前記抗ＣＤ２８Ｆａｂ’抗体断片の二回の投与の間の期間にわたって少なくとも８０％のＣＤ２８受容体占有率を誘導する。いくつかの実施形態では、Ｔ細胞の免疫応答の阻害によって改善あるいは予防されやすい病状は前記患者の移植臓器、組織若しくは細胞の機能不全、Ｔ−リンパ球媒介の自己免疫疾患、アテローム性の動脈硬化若しくは炎症性の疾患である。いくつかの実施形態では、Ｔ細胞の免疫応答の阻害によって改善あるいは予防されやすい病状は腎臓移植拒絶反応、慢性同種移植脈管症、移植片対宿主病、自己免疫性脳脊髄炎、乾癬、リューマチ性関節炎、多発性硬化症、クローン病、潰瘍性大腸炎、アテローム性の動脈硬化、タイプ１糖尿病、又はタイプ４過敏症である。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２８Ｆａｂ’抗体断片は前記患者の静脈内、皮下、筋肉内、若しくは局所に、または髄膜内注射により投与される。
【００１４】
本発明の別の面は、治療を必要とするヒト患者におけるＴ細胞の免疫応答の阻害のための医薬組成物であり、ＦＲ１０４を３から１２０ｍｇの間の量で含み、好ましくは一投薬あたり３５ｍｇ以下であり、１つ又はより多くの医薬上許容できる賦形剤をともに含む。いくつかの実施形態では、医薬組成物は３から１４ｍｇの間の前記抗ＣＤ２８Ｆａｂ’抗体断片を含む。いくつかの実施形態では、医薬組成物は静脈内、皮下、筋肉内、局所又は髄膜内投与に適する。いくつかの実施形態では、医薬組成物はヒト組換えヒアルロニダーゼを含む。
【００１５】
上記医薬組成物を含む注射器もまた本発明の一部である。注射器は皮下使用のために適合できる。
本発明は毎月の投薬量のＦＲ１０４を含み、ＦＲ１０４の各投薬量が３から１２０ｍｇであるキットにもまた属する。
【００１６】
図の説明
図１：ＦＲ１０４の薬物動態の研究とＣＤ２８受容体占有率。Ａ、次に記す異なるＦＲ１０４濃度を受けたボランティアの血清中のＦＲ１０４濃度の時間的経過：グループ１（黒円）は０．００５ｍｇ／ｋｇを受けた。グループ２（黒四角）は０．０５ｍｇ／ｋｇを受けた。グループ３（黒上向きの三角）は０．２ｍｇ／ｋｇを受け、グループ４（黒下向きの三角）０．５ｍｇ／ｋｇを受けた。Ｂ、ＦＲ１０４を受けたそれぞれのグループ（上記参照）のそれぞれのボランティアの受容体占有率の時間的経過。
図２：ＣＤ２８受容体占有率の予測値対観測値。Ａ、インビトロで計算したＫｄを用いて決定した、ＦＲ１０４の各濃度について２０週の時間的経過にわたってあらかじめ予測したＲＯの割合。Ｂ、Ｋｄの再計算に基づいて修正したＲＯの予測した割合とＲＯの観測された濃度との時間的経過の比較。
図３：ＦＲ１０４の注入後の受容体の発現。ＦＲ１０４を受けた各グループの、ボランティアの血清中のＣＤ２８発現は経時的にフローサイトメトリーによって分析された。グループ１（黒円）は０．００５ｍｇ／ｋｇを受けた。グループ２（黒四角）は０．０５ｍｇ／ｋｇを受けた。グループ３（黒上向きの三角）は０．２ｍｇ／ｋｇを受け、グループ４（黒下向きの三角）０．５ｍｇ／ｋｇを受けた。
図４：抗ＫＬＨ（ＩｇＧ）抗体測定。プラセボ、０．０２ｍｇ／ｋｇ、０．２ｍｇ／ｋｇ、０．５ｍｇ／ｋｇ又は１．５ｍｇ／ｋｇのＦＲ１０４を受けた５つの異なるグループの最初の注入から１５日後のボランティアの血清中の抗ＫＬＨ抗体の割合。この割合は血清中の１日目（最初の注入）と１５日との間での血清中の抗体濃度の比を表す。
図５：薬物動態と薬力学のデータ。Ａ、投薬前から実験の終わりまでの平均血清ＦＲ１０４濃度±ＳＥＭ（セミログスケール）。示した治療グループは：上昇量の単回投薬（黒塗り記号）、上昇量の単回投薬＋ＫＬＨ免疫（白抜き記号）、上昇量の複数回投薬（ＭＡＤ、陰付き記号）である。ＬＬＯＱ：定量下限。Ｎ＝治療グループ毎に３−５人の被検者である。Ｂ、投薬前から実験の終わりまでのＡに示したＦＲ１０４治療グループの平均ＣＤ２８受容体占有率±ＳＥＭ。Ｎ＝治療グループ毎に３−５人の被検者である。プラセボを投与した被検者の受容体占有率の評価は０から５％の範囲のバックグラウンドシグナルを生じた。
図６：安定化した全血試料についてのＣＤ２８発現レベル、Ｔリンパ球部分集団の頻度並びに活性化したＴ細胞の頻度のフローサイトメトリー分析。Ｔ細胞の部分集団は次のＣＤ４５＋ＣＤ３＋細胞においてゲーティングストラテジーを使うことによって定義された。：ナチュラルＴｒｅｇ（ｎＴｒｅｇ）：ＣＤ２５＋  ＣＤ１２７ローＣＤ４＋；活性化は：ＣＤ６９＋又はＣＤ２５＋；記憶Ｔ細胞：ＣＤ４５ＲＯ＋；ナイーブ：ＣＤ４５ＲＯ−ＣＣＲ７＋；セントラルメモリ（ＣＭ）：ＣＤ４５ＲＯ＋ＣＣＲ７；エフェクターメモリ（ＥＭ）：ＣＤ４５ＲＯ＋ＣＣＲ７−；ＴＥＭＲＡ：ＣＤ４５ＲＯ−ＣＣＲ７−。記号は図１Ａで定義されたグループを参照。加えて
2018538309.tif 000002
線はプールしたプラセボ被検者（ｎ＝１２）である。データは平均±ＳＥＭである。
図７：投薬前から実験の終わりまでのＦＲ１０４投与被検者及びプラセボ投与被検者中の血清ＩＦＮ−γ、ＴＮＦ−α、ＩＬ−６、ＩＬ−８、ＩＬ−１０サイトカイン。点線：定量下限。データは平均値±ＳＥＭ。ＳＡＤ：上昇量の単回投薬。ＳＡＤ＋ＫＬＨ、ＫＬＨで免疫された上昇量の単回投薬を受けた被検者。ＭＡＤ：上昇量の複数回投薬。記号は図１Ａで定義されたグループを参照。加えて
2018538309.tif 000003
線はＳＡＤ（ｎ＝６）、ＳＡＤ＋ＫＬＨ（ｎ＝８）、ＭＡＤ（ｎ＝４）グループ中のプラセボ被検者である。他の評価されたサイトカイン（ＩＬ  １２ｐ７０  ＩＬ−１β、ＩＬ−２、ＩＬ−４）は全ての標本が陰性だった（データ示さず）。
図８： 全血液培養物（ＴｒｕＣｕｌｔｕｒｅ  登録商標）中でのＳＥＢ＋ＬＰＳによる血液細胞のエキソビボ刺激。Ａ、ベースラインの血液試料はＳＥＢ＋ＬＰＳで刺激されず、又は刺激されて培養状態で２４ｈ維持された。血漿中のサイトカインはその後、ＥＬＩＺＡ法によって評価された。点は個々の被検者を表す。Ｂ、示した投薬レベルのＦＲ１０４を受ける上昇量の単回投薬グループ（ＫＬＨ刺激あり若しくはなし）において示した時点で抜き取ったＳＥＢ＋ＬＰＳ刺激された血液試料のＩＬ−２分泌の測定。本研究で試験され、ベースラインでの刺激への十分な応答（＞１００ｐｇ／ｍｌ）を示した提供者の培養物のみを分析に含ませた：プラセボ（ｎ＝９）、０．０２ｍｇ／ｋｇ（ｎ＝５）、０．２０ｍｇ／ｋｇ（ｎ＝９）、０．５０ｍｇ／ｋｇ（ｎ＝９）及び１．５０ｍｇ／ｋｇ（ｎ＝３）。データはＴ０時点に対して規格化した平均ＩＬ−２濃度、±ＳＥＭである。＊：ｐ＜０．０５；＊＊＊＊：ｐ＜０．０００１である。
図９：治療グループによる経時的な抗ＫＬＨ  ＩｇＧ（ｎｇ／ｍＬ）レベル。血清試料は示された時点で抜き取り、抗ＫＬＨ  ＥＬＩＳＡによって評価した。データは平均±ＳＥＭを意味する。点線：定量下限。
図１０：投薬前から実験の終わりまでのＥＢＶ状態を追跡する。ＥＢＶウイルス量を、示された時点でＰＣＲにより血液中で評価した。ＥＢＶカプシド抗原（ＶＣＡ）に対するＩｇＭ抗体もまた血清中で評価して抗ＥＢＶ免疫反応性を測定した。データは平均±ＳＥＭ。点線：定量下限。
【図面の簡単な説明】
【００１７】
【図１】：ＦＲ１０４の薬物動態の研究とＣＤ２８受容体占有率。
【図２】：ＣＤ２８受容体占有率の予測値対観測値。
【図３】：ＦＲ１０４の注入後の受容体の発現。
【図４】：抗ＫＬＨ（ＩｇＧ）抗体測定。プラセボ、０．０２ｍｇ／ｋｇ、０．２ｍｇ／ｋｇ、０．５ｍｇ／ｋｇ又は１．５ｍｇ／ｋｇのＦＲ１０４を受けた５つの異なるグループの最初の注入から１５日後のボランティアの血清中の抗ＫＬＨ抗体の割合。
【図５】：薬物動態と薬力学のデータ。
【図６】：安定化した全血試料についてのＣＤ２８発現レベル、Ｔリンパ球部分集団の頻度並びに活性化したＴ細胞の頻度のフローサイトメトリー分析。
【図７】：投薬前から実験の終わりまでのＦＲ１０４投与被検者及びプラセボ投与被検者中の血清ＩＦＮ−γ、ＴＮＦ−α、ＩＬ−６、ＩＬ−８、ＩＬ−１０サイトカイン。
【図８】： 全血液培養物（ＴｒｕＣｕｌｔｕｒｅ  登録商標）中でのＳＥＢ＋ＬＰＳによる血液細胞のエキソビボ刺激。
【図９】：治療グループによる経時的な抗ＫＬＨ  ＩｇＧ（ｎｇ／ｍＬ）レベル。
【図１０】：投薬前から実験の終わりまでのＥＢＶ状態を追跡する。
【発明を実施するための形態】
【００１８】
好ましい実施形態の詳細な説明
本文中、次の様に定義した。
ＦＲ１０４
「ＦＲ１０４」は
（ｉ）Ｃ末端がペグ化された配列番号１の第１のタンパク、及び
（ｉｉ）配列番号２の第２のタンパク
のヘテロ二量体からなる抗ＣＤ２８Ｆａｂ’抗体断片を示す。
特定の実施形態によれば、ＦＲ１０４は
（ｉ）Ｃ末端がペグ化された配列番号３の第１のタンパク、及び
（ｉｉ）配列番号４の第２のタンパク
のヘテロ二量体からなる抗ＣＤ２８Ｆａｂ’抗体断片である。例えば、二つに分岐した２×２０ ｋＤａのＰＥＧが、マレイミド環を介してＣＨ１ドメインＣ末端のシステインと結合し得る。
【００１９】
治療
ここで使われる「治療する（ｔｒｅａｔ又はｔｒｅａｔｉｎｇ）」及び、「治療（ｔｒｅａｔｍｅｎｔ又はｔｒｅａｔｉｎｇ）」という用語は、病気の進行、重症度、並びに／又は羅病期間の軽減又は改善をいう。例えば、リューマチ性関節炎のような病理では、１つ又はより多くのリューマチ性関節炎の症状の軽減は治療として考えられる。
他の定義は必要なときに下記に記す。
【００２０】
本発明の第１の面は、Ｔ細胞の免疫応答の阻害によって改善あるいは予防されやすい病状の治療におけるＦＲ１０４の使用であって、治療有効量の前記抗ＣＤ２８Ｆａｂ’抗体断片が治療を必要とするヒト患者へ投与され、そして抗ＣＤ２８Ｆａｂ’抗体断片の治療有効量が、週に一度、２週間毎に一度、３週間毎に一度、４週間毎に一度、５週間毎に一度、又は６週間毎に一度、７週間毎に一度、８週間毎に一度、９週間毎に一度、又は９週間以上に一度の投薬計画で、０．０５〜１．５ｍｇ／ｋｇ体重の間である、ＦＲ１０４の使用である。
【００２１】
治療を必要とするヒト患者におけるＴ細胞免疫応答の阻害方法もまた本発明の一部である。この方法によると、治療有効量のＦＲ１０４が患者に投与され、前記治療有効量は週に一度、２週間毎に一度、３週間毎に一度、４週間毎に一度、５週間毎に一度、又は６週間毎に一度、７週間毎に一度、８週間毎に一度、９週間毎に一度、又は９週間以上に一度の投薬計画で、０．０５〜１．５ｍｇ／ｋｇ体重の間である。
【００２２】
上記のとおり、本発明による治療は、患者の状態に応じて、長期間にわたって投与され（数ヶ月から数年）、又は１度若しくは２、３度の投与後に止められ得る。治療はしばらくの間（２、３月若しくは２、３年）中断し、患者の状態がＦＲ１０４のさらなる投与を正当化するならば再開し得る。本発明の特定の実施形態によると、治療有効量は、週に一度、２週間毎に一度、３週間毎に一度、４週間毎に一度、５週間毎に一度、又は６週間毎に一度の０．０５〜０．５ｍｇ／ｋｇ体重以下の間の投薬計画で投与される。いくつかの実施形態では、治療有効量は０．０５〜０．５ｍｇ／ｋｇ体重の間であり、週に一度の投薬計画で投与され、例えば０．１−０．４５ｍｇ／ｋｇ、０．１５−０．４ｍｇ／ｋｇ、０．２−０．３５ｍｇ／ｋｇ、０．２５−０．３ｍｇ／ｋｇ、０．０５−０．４ｍｇ／ｋｇ、０．０５−０．３ｍｇ／ｋｇ、０．１−０．４ｍｇ／ｋｇ、０．１−０．３ｍｇ／ｋｇ、０．５ｍｇ／ｋｇ（任意に±１０％）、０．４ｍｇ／ｋｇ（任意に±１０％）、０．３ｍｇ／ｋｇ（任意に±１０％）、又は０．２５ｍｇ／ｋｇ（任意に±１０％）である。いくつかの実施形態では、治療有効量は０．０５〜０．５ｍｇ／ｋｇ体重の間であり、２週間毎に一度の投薬計画で投与され、例えば０．１−０．４５ｍｇ／ｋｇ、０．１５−０．４ｍｇ／ｋｇ、０．２−０．３５ｍｇ／ｋｇ、０．２５−０．３ｍｇ／ｋｇ、０．０５−０．４ｍｇ／ｋｇ、０．０５−０．３ｍｇ／ｋｇ、０．１−０．４ｍｇ／ｋｇ、０．１−０．３ｍｇ／ｋｇ、０．５ｍｇ／ｋｇ（任意に±１０％）、０．４ｍｇ／ｋｇ（任意に±１０％）、０．３ｍｇ／ｋｇ（任意に±１０％）、又は０．２５ｍｇ／ｋｇ（任意に±１０％）である。いくつかの実施形態では、治療有効量は０．０５〜０．５ｍｇ／ｋｇ体重の間であり、３週間毎に一度の投薬計画で投与され、例えば０．１−０．４５ｍｇ／ｋｇ、０．１５−０．４ｍｇ／ｋｇ、０．２−０．３５ｍｇ／ｋｇ、０．２５−０．３ｍｇ／ｋｇ、０．０５−０．４ｍｇ／ｋｇ、０．０５−０．３ｍｇ／ｋｇ、０．１−０．４ｍｇ／ｋｇ、０．１−０．３ｍｇ／ｋｇ、０．５ｍｇ／ｋｇ（任意に±１０％）、０．４ｍｇ／ｋｇ（任意に±１０％）、０．３ｍｇ／ｋｇ（任意に±１０％）、又は０．２５ｍｇ／ｋｇ（任意に±１０％）である。いくつかの実施形態では、治療有効量は０．０５〜０．５ｍｇ／ｋｇ体重の間であり、４週間毎に一度の投薬計画で投与され、例えば０．１−０．４５ｍｇ／ｋｇ、０．１５−０．４ｍｇ／ｋｇ、０．２−０．３５ｍｇ／ｋｇ、０．２５−０．３ｍｇ／ｋｇ、０．０５−０．４ｍｇ／ｋｇ、０．０５−０．３ｍｇ／ｋｇ、０．１−０．４ｍｇ／ｋｇ、０．１−０．３ｍｇ／ｋｇ、０．５ｍｇ／ｋｇ（任意に±１０％）、０．４ｍｇ／ｋｇ（任意に±１０％）、０．３ｍｇ／ｋｇ（任意に±１０％）、又は０．２５ｍｇ／ｋｇ（任意に±１０％）である。いくつかの実施形態では、治療有効量は０．０５〜０．５ｍｇ／ｋｇ体重の間であり、５週間毎に一度の投薬計画で投与され、例えば０．１−０．４５ｍｇ／ｋｇ、０．１５−０．４ｍｇ／ｋｇ、０．２−０．３５ｍｇ／ｋｇ、０．２５−０．３ｍｇ／ｋｇ、０．０５−０．４ｍｇ／ｋｇ、０．０５−０．３ｍｇ／ｋｇ、０．１���０．４ｍｇ／ｋｇ、０．１−０．３ｍｇ／ｋｇ、０．５ｍｇ／ｋｇ（任意に±１０％）、０．４ｍｇ／ｋｇ（任意に±１０％）、０．３ｍｇ／ｋｇ（任意に±１０％）、又は０．２５ｍｇ／ｋｇ（任意に±１０％）である。いくつかの実施形態では、治療有効量は０．０５〜０．５ｍｇ／ｋｇ体重の間であり、６週間毎に一度、例えば０．１−０．４５ｍｇ／ｋｇ、０．１５−０．４ｍｇ／ｋｇ、０．２−０．３５ｍｇ／ｋｇ、０．２５−０．３ｍｇ／ｋｇ、０．０５−０．４ｍｇ／ｋｇ、０．０５−０．３ｍｇ／ｋｇ、０．１−０．４ｍｇ／ｋｇ、０．１−０．３ｍｇ／ｋｇ、０．５ｍｇ／ｋｇ（任意に±１０％）、０．４ｍｇ／ｋｇ（任意に±１０％）、０．３ｍｇ／ｋｇ（任意に±１０％）、又は０．２５ｍｇ／ｋｇ（任意に±１０％）である。
【００２３】
本発明の別の特定の実施形態によると、治療有効量は、週に一度、２週間毎に一度、３週間毎に一度、４週間毎に一度、５週間毎に一度、０．０５〜０．２ｇ／ｋｇ体重の間の投薬計画で投与される。いくつかの実施形態では、治療有効量は０．０５〜０．２ｍｇ／ｋｇ体重の間であり、週に一度の投薬計画で投与され、例えば０．０５−０．１５ｍｇ／ｋｇ、０．１−０．２ｍｇ／ｋｇ、０．１−０．１５ｍｇ／ｋｇ、０．０５ｍｇ／ｋｇ（任意に±１０％）、０．１ｍｇ／ｋｇ（任意に±１０％）、０．１５ｍｇ／ｋｇ（任意に±１０％）、又は０．２ｍｇ／ｋｇ（任意に±１０％）である。いくつかの実施形態では、治療有効量は０．０５〜０．２ｍｇ／ｋｇ体重の間であり、２週間毎に一度の投薬計画で投与され、例えば０．０５−０．１５ｍｇ／ｋｇ、０．１−０．２ｍｇ／ｋｇ、０．１−０．１５ｍｇ／ｋｇ、０．０５ｍｇ／ｋｇ（任意に±１０％）、０．１ｍｇ／ｋｇ（任意に±１０％）、０．１５ｍｇ／ｋｇ（任意に±１０％）、又は０．２ｍｇ／ｋｇ（任意に±１０％）である。いくつかの実施形態では、治療有効量は０．０５〜０．２ｍｇ／ｋｇ体重の間であり、３週間毎に一度の投薬計画で投与され、例えば０．０５−０．１５ｍｇ／ｋｇ、０．１−０．２ｍｇ／ｋｇ、０．１−０．１５ｍｇ／ｋｇ、０．０５ｍｇ／ｋｇ（任意に±１０％）、０．１ｍｇ／ｋｇ（任意に±１０％）、０．１５ｍｇ／ｋｇ（任意に±１０％）、又は０．２ｍｇ／ｋｇ（任意に±１０％）である。いくつかの実施形態では、治療有効量は０．０５〜０．２ｍｇ／ｋｇ体重の間であり、４週間毎に一度の投薬計画で投与され、例えば０．０５−０．１５ｍｇ／ｋｇ、０．１−０．２ｍｇ／ｋｇ、０．１−０．１５ｍｇ／ｋｇ、０．０５ｍｇ／ｋｇ（任意に±１０％）、０．１ｍｇ／ｋｇ（任意に±１０％）、０．１５ｍｇ／ｋｇ（任意に±１０％）、又は０．２ｍｇ／ｋｇ（任意に±１０％）である。いくつかの実施形態では、治療有効量は０．０５〜０．２ｍｇ／ｋｇ体重の間であり、５週間毎に一度の投薬計画で投与され、例えば０．０５−０．１５ｍｇ／ｋｇ、０．１−０．２ｍｇ／ｋｇ、０．１−０．１５ｍｇ／ｋｇ、０．０５ｍｇ／ｋｇ（任意に±１０％）、０．１ｍｇ／ｋｇ（任意に±１０％）、０．１５ｍｇ／ｋｇ（任意に±１０％）、又は０．２ｍｇ／ｋｇ（任意に±１０％）である。
【００２４】
０．５〜１．５ｍｇ／ｋｇ体重の間の量が投与されるとき、薬物摂取の頻度は好ましく減少する。これらの投薬量では、月に一度の投薬又はそれ以下の頻度の投薬で有利に規定される。本発明の更に別の特定の実施形態によると、治療有効量は、３週間毎に一度、４週間毎に一度、５週間毎に一度、又は６週間毎に一度、７週間毎に一度、８週間毎に一度、９週間毎に一度、又は９週間以上に一度、０．５〜１．５ｍｇ／ｋｇ体重の間の投薬計画で投与される。いくつかの実施形態では、治療有効量は０．５〜１．５ｍｇ／ｋｇ体重の間であり、４週間毎に一度の投薬計画で投与され、例えば０．６−１．４ｍｇ／ｋｇ、０．７−１．３ｍｇ／ｋｇ、０．８−１．２ｍｇ／ｋｇ、０．９−１．１ｍｇ／ｋｇ、０．５−１．４ｍｇ／ｋｇ、０．５−１．３ｍｇ／ｋｇ、０．５−１．２ｍｇ／ｋｇ、０．５−１．１ｍｇ／ｋｇ、０．５−１．０ｍｇ／ｋｇ、０．５−０．９ｍｇ／ｋｇ、０．５−０．８ｍｇ／ｋｇ、０．５−０．７ｍｇ／ｋｇ、０．５−０．６ｍｇ／ｋｇ、０．５ｍｇ／ｋｇ（任意に±１０％）、０．６ｍｇ／ｋｇ（任意に±１０％）、０．７ｍｇ／ｋｇ（任意に±１０％）、０．８ｍｇ／ｋｇ（任意に±１０％）、０．９ｍｇ／ｋｇ（任意に±１０％）、１．０ｍｇ／ｋｇ（任意に±１０％）、１．１ｍｇ／ｋｇ（任意に±１０％）、１．２ｍｇ／ｋｇ（任意に±１０％）、１．３ｍｇ／ｋｇ（任意に±１０％）、１．４ｍｇ／ｋｇ（任意に±１０％）又は１．５ｍｇ／ｋｇ（任意に±１０％）である。いくつかの実施形態では、治療有効量は５週間毎に一度、０．５〜１．５ｍｇ／ｋｇ体重の間での投薬計画で投与され、例えば０．６−１．４ｍｇ／ｋｇ、０．７−１．３ｍｇ／ｋｇ、０．８−１．２ｍｇ／ｋｇ、０．９−１．１ｍｇ／ｋｇ、０．５−１．４ｍｇ／ｋｇ、０．５−１．３ｍｇ／ｋｇ、０．５−１．２ｍｇ／ｋｇ、０．５−１．１ｍｇ／ｋｇ、０．５−１．０ｍｇ／ｋｇ、０．５−０．９ｍｇ／ｋｇ、０．５−０．８ｍｇ／ｋｇ、０．５−０．７ｍｇ／ｋｇ、０．５−０．６ｍｇ／ｋｇ、０．５ｍｇ／ｋｇ（任意に±１０％）、０．６ｍｇ／ｋｇ（任意に±１０％）、０．７ｍｇ／ｋｇ（任意に±１０％）、０．８ｍｇ／ｋｇ（任意に±１０％）、０．９ｍｇ／ｋｇ（任意に±１０％）、１．０ｍｇ／ｋｇ（任意に±１０％）、１．１ｍｇ／ｋｇ（任意に±１０％）、１．２ｍｇ／ｋｇ（任意に±１０％）、１．３ｍｇ／ｋｇ（任意に±１０％）、１．４ｍｇ／ｋｇ（任意に±１０％）又は１．５ｍｇ／ｋｇ（任意に±１０％）である。いくつかの実施形態では、治療有効量は６週間毎に一度、０．５〜１．５ｍｇ／ｋｇ体重の間での投薬計画で投与され、例えば０．６−１．４ｍｇ／ｋｇ、０．７−１．３ｍｇ／ｋｇ、０．８−１．２ｍｇ／ｋｇ、０．９−１．１ｍｇ／ｋｇ、０．５−１．４ｍｇ／ｋｇ、０．５−１．３ｍｇ／ｋｇ、０．５−１．２ｍｇ／ｋｇ、０．５−１．１ｍｇ／ｋｇ、０．５−１．０ｍｇ／ｋｇ、０．５−０．９ｍｇ／ｋｇ、０．５−０．８ｍｇ／ｋｇ、０．５−０．７ｍｇ／ｋｇ、０．５−０．６ｍｇ／ｋｇ、０．５ｍｇ／ｋｇ（任意に±１０％）、０．６ｍｇ／ｋｇ（任意に±１０％）、０．７ｍｇ／ｋｇ（任意に±１０％）、０．８ｍｇ／ｋｇ（任意に±１０％）、０．９ｍｇ／ｋｇ（任��に±１０％）、１．０ｍｇ／ｋｇ（任意に±１０％）、１．１ｍｇ／ｋｇ（任意に±１０％）、１．２ｍｇ／ｋｇ（任意に±１０％）、１．３ｍｇ／ｋｇ（任意に±１０％）、１．４ｍｇ／ｋｇ（任意に±１０％）又は１．５ｍｇ／ｋｇ（任意に±１０％）である。いくつかの実施形態では、治療有効量は７週間毎に一度、０．５〜１．５ｍｇ／ｋｇ体重の間での投薬計画で投与され、例えば０．６−１．４ｍｇ／ｋｇ、０．７−１．３ｍｇ／ｋｇ、０．８−１．２ｍｇ／ｋｇ、０．９−１．１ｍｇ／ｋｇ、０．５−１．４ｍｇ／ｋｇ、０．５−１．３ｍｇ／ｋｇ、０．５−１．２ｍｇ／ｋｇ、０．５−１．１ｍｇ／ｋｇ、０．５−１．０ｍｇ／ｋｇ、０．５−０．９ｍｇ／ｋｇ、０．５−０．８ｍｇ／ｋｇ、０．５−０．７ｍｇ／ｋｇ、０．５−０．６ｍｇ／ｋｇ、０．５ｍｇ／ｋｇ（任意に±１０％）、０．６ｍｇ／ｋｇ（任意に±１０％）、０．７ｍｇ／ｋｇ（任意に±１０％）、０．８ｍｇ／ｋｇ（任意に±１０％）、０．９ｍｇ／ｋｇ（任意に±１０％）、１．０ｍｇ／ｋｇ（任意に±１０％）、１．１ｍｇ／ｋｇ（任意に±１０％）、１．２ｍｇ／ｋｇ（任意に±１０％）、１．３ｍｇ／ｋｇ（任意に±１０％）、１．４ｍｇ／ｋｇ（任意に±１０％）又は１．５ｍｇ／ｋｇ（任意に±１０％）である。いくつかの実施形態では、治療有効量は８週間毎に一度、０．５〜１．５ｍｇ／ｋｇ体重の間での投薬計画で投与され、例えば０．６−１．４ｍｇ／ｋｇ、０．７−１．３ｍｇ／ｋｇ、０．８−１．２ｍｇ／ｋｇ、０．９−１．１ｍｇ／ｋｇ、０．５−１．４ｍｇ／ｋｇ、０．５−１．３ｍｇ／ｋｇ、０．５−１．２ｍｇ／ｋｇ、０．５−１．１ｍｇ／ｋｇ、０．５−１．０ｍｇ／ｋｇ、０．５−０．９ｍｇ／ｋｇ、０．５−０．８ｍｇ／ｋｇ、０．５−０．７ｍｇ／ｋｇ、０．５−０．６ｍｇ／ｋｇ、０．５ｍｇ／ｋｇ（任意に±１０％）、０．６ｍｇ／ｋｇ（任意に±１０％）、０．７ｍｇ／ｋｇ（任意に±１０％）、０．８ｍｇ／ｋｇ（任意に±１０％）、０．９ｍｇ／ｋｇ（任意に±１０％）、１．０ｍｇ／ｋｇ（任意に±１０％）、１．１ｍｇ／ｋｇ（任意に±１０％）、１．２ｍｇ／ｋｇ（任意に±１０％）、１．３ｍｇ／ｋｇ（任意に±１０％）、１．４ｍｇ／ｋｇ（任意に±１０％）又は１．５ｍｇ／ｋｇ（任意に±１０％）である。いくつかの実施形態では、治療有効量は９週間毎に一度、０．５〜１．５ｍｇ／ｋｇ体重の間での投薬計画で投与され、例えば０．６−１．４ｍｇ／ｋｇ、０．７−１．３ｍｇ／ｋｇ、０．８−１．２ｍｇ／ｋｇ、０．９−１．１ｍｇ／ｋｇ、０．５−１．４ｍｇ／ｋｇ、０．５−１．３ｍｇ／ｋｇ、０．５−１．２ｍｇ／ｋｇ、０．５−１．１ｍｇ／ｋｇ、０．５−１．０ｍｇ／ｋｇ、０．５−０．９ｍｇ／ｋｇ、０．５−０．８ｍｇ／ｋｇ、０．５−０．７ｍｇ／ｋｇ、０．５−０．６ｍｇ／ｋｇ、０．５ｍｇ／ｋｇ（任意に±１０％）、０．６ｍｇ／ｋｇ（任意に±１０％）、０．７ｍｇ／ｋｇ（任意に±１０％）、０．８ｍｇ／ｋｇ（任意に±１０％）、０．９ｍｇ／ｋｇ（任意に±１０％）、１．０ｍｇ／ｋｇ（任意に±１０％）、１．１ｍｇ／ｋｇ（任意に±１０％）、１．２ｍｇ／ｋｇ（任意に±１０％）、１．３ｍｇ／ｋｇ（任意に±１０％）、１．４ｍｇ／ｋｇ（任意に±１��％）又は１．５ｍｇ／ｋｇ（任意に±１０％）である。いくつかの実施形態では、治療有効量は９週間以上毎に一度、０．５〜１．５ｍｇ／ｋｇ体重の間での投薬計画で投与され、例えば０．６−１．４ｍｇ／ｋｇ、０．７−１．３ｍｇ／ｋｇ、０．８−１．２ｍｇ／ｋｇ、０．９−１．１ｍｇ／ｋｇ、０．５−１．４ｍｇ／ｋｇ、０．５−１．３ｍｇ／ｋｇ、０．５−１．２ｍｇ／ｋｇ、０．５−１．１ｍｇ／ｋｇ、０．５−１．０ｍｇ／ｋｇ、０．５−０．９ｍｇ／ｋｇ、０．５−０．８ｍｇ／ｋｇ、０．５−０．７ｍｇ／ｋｇ、０．５−０．６ｍｇ／ｋｇ、０．５ｍｇ／ｋｇ（任意に±１０％）、０．６ｍｇ／ｋｇ（任意に±１０％）、０．７ｍｇ／ｋｇ（任意に±１０％）、０．８ｍｇ／ｋｇ（任意に±１０％）、０．９ｍｇ／ｋｇ（任意に±１０％）、１．０ｍｇ／ｋｇ（任意に±１０％）、１．１ｍｇ／ｋｇ（任意に±１０％）、１．２ｍｇ／ｋｇ（任意に±１０％）、１．３ｍｇ／ｋｇ（任意に±１０％）、１．４ｍｇ／ｋｇ（任意に±１０％）又は１．５ｍｇ／ｋｇ（任意に±１０％）である。
【００２５】
インビトロデータから想定する治療投与量が、０．５ｍｇ／ｋｇ〜８．０ｍｇ／ｋｇの間であったことに留意することが重要である。下記実験部分に開示されているように、ファーストインヒューマンフェーズ１研究の第１の実験から得られたデータは、このファーストインヒューマン研究の開始の前に入手可能であったデータに基づいて計算した薬物動態／標的関与（ＰＫ／ＴＥ）モデルと一致しなかった。インビボのデータは、効果が０．０５ｍｇ／ｋｇ程度の低い投与量で観測されることを示し、このことは全く予期しないものであった。このことが発明者に薬物動態／標的関与（ＰＫ／ＴＥ）モデルを修正させ、ヒトＣＤ２８に関するＦＲ１０４の親和性を再考（ＫD値は４．６ｎＭではなく約０．３ｎＭである）させる。結果として、現在考えられるＦＲ１０４の最大投与量は１．５ｍｇ／ｋｇであり、０．０５ｍｇ／ｋｇ程度の低い投与量は治療的に効果的であると考えられる。
【００２６】
いくつかの実施形態では、ＦＲ１０４投与量は１２０〜２４０時間の間の、例えば１３０〜２３０時間、１４０〜２２０時間の間の、又は１５０〜２１０時間の間のヒトにおける半減期を持つ。
【００２７】
いくつかの実施形態では、ヒト患者へのＦＲ１０４の投与後のＩＦＮｇ、ＴＮＦａ並びにＩＬ−８血清レベルは５０００ｐｇ／ｍｌより下であり、例えば４０００ｐｇ／ｍｌより下であり、３０００ｐｇ／ｍｌより下であり、２０００ｐｇ／ｍｌより下であり、１０００ｐｇ／ｍｌより下であり、８００ｐｇ／ｍｌより下であり、６００ｐｇ／ｍｌより下であり、４００ｐｇ／ｍｌより下であり、又は２００ｐｇ／ｍｌより下である。
【００２８】
よって、本発明に従う投薬計画は、以下に開示されたファーストインヒューマン研究の前に利用できたデータから予期されたものとは、大幅に異なる。投薬計画のこの変化は、例えば治療費の減少、副作用の減少、投与頻度の減少並びに有効成分としてＦＲ１０４を含む医薬組成物を製剤化するための難度の低下などいくつかの利点を有する。実際、多量の医薬溶液（２ｍｌ以上）を被検者に、特に皮下経路を通して投与することは、常には可能又は好都合ではない。
【００２９】
現在、ＦＲ１０４で医薬上効果的な治療を得るためには少なくとも８０％の受容体占有率が必要であると考えられている。本発明の好ましい実施形態によると、被検者に投与されるＦＲ１０４量は二度の前記抗ＣＤ２８Ｆａｂ’抗体断片の投与の間の期間にわたって、少なくとも８０％のＣＤ２８受容体占有率を誘導する。本発明による高い投与量（すなわち投与毎に０．５から１．５ｍｇ／ｋｇ）の投与は下記に開示されたフェーズＩ研究の開始前に入手できたインビトロデータから予想され得た。しかし、８０％のＣＤ２８受容体占有率を得るためには、当業者は２週間毎に一度の頻度で０．５ｍｇ／ｋｇを投与するが（表２を参照）、本発明によると、同じ投与量は４週間毎に一度又はそれ以下の頻度で投与し得る。さらに下記の表２を参照すると、１ｍｇ／ｋｇの投与量を使用すると月毎の投与を必要とすることは明白であるが、本発明の枠組みでは、８週間毎の１ｍｇ／ｋｇの投与で十分である。同じ事が１．５ｍｇ／ｋｇの投与量についてもいえ、最小頻度は５週間毎に一度から２ヶ月又はそれ以上に一度の頻度に変化する。もちろん、当業者は、過度の高い投与量を投与することなしに、二回の投与の間にわたって少なくとも８０％のＣＤ２８受容体占有率を得るために、投与頻度を投与する薬物量に適応させる。単位投与量を高い量で投与すればするほど、投与の頻度は低くなる。０．５から１ｍｇ／ｋｇの投与量が、一月に一度から二月に一度の頻度で投与される。
【００３０】
本発明に従うＦＲ１０４での治療によるＴ細胞免疫応答の阻害によって改善あるいは予防されやすい病状の例は、移植臓器、組織又は細胞の機能不全（移植臓器の拒絶反応、特に腎臓移植拒絶反応、慢性同種移植脈管症、及び移植片対宿主病を含む）、Ｔ−リンパ球媒介の自己免疫疾患、アテローム性の動脈硬化、炎症性の疾患（潰瘍性大腸炎、クローン病のような炎症性の腸疾患を含む）、並びにタイプ４過敏症である。本発明によって治療し得る自己免疫疾患は、特に自己免疫性脳脊髄炎、リューマチ性関節炎、乾癬、タイプ１糖尿病、並びに多発性硬化症を挙げることができる。さらなる病状は、乾癬性関節炎である。他の自己免疫疾患も本発明によって有利に治療し得る；これは、水疱性類天疱瘡、急性散在性脳脊髄炎（ＡＤＥＭ）、強直性脊椎症、抗リン脂質抗体症候群（ＡＰＳ）、自己免疫性卵巣炎、セリアック病、妊娠性類天疱瘡、グッドパスチャー症候群、グレーブス病、ギランバレー症候群（ＧＢＳ、急性炎症性脱髄性多発神経障害、急性特発性多発性神経根炎、急性特発性多発性神経炎若しくはランドリー上行性麻痺とも呼ばれる）、橋本病、特発性血小板減少性紫斑病、川崎病、エリテマトーデス、重症筋無力症、オプソクローヌス・ミオクローヌス症候群（ＯＭＳ）、視神経炎、オード甲状腺炎、天疱瘡、ライター症候群、シェーグレン症候群、高安動脈炎、側頭動脈炎（巨細胞性動脈炎としても知られる）、並びにウェゲナー肉芽腫症についてもそうである。自己免疫性ぶどう膜炎並びに円形脱毛症はさらに治療し得る自己免疫疾患である。
【００３１】
既に言及しているとおり、発明による新規投薬計画は治療施術を容易にするために特に有利である。モノクローナル抗体は通常、数年にわたる長期の治療期間にわたって静脈内へ投与される。薬の皮下投与は、例えば真性糖尿病のようないくつかの慢性病に確立された選択療法であり、リューマチ性関節炎のための新たな投与経路である（Weinblatt et al., 2013）（Melichar et al., 2014）。モノクローナル抗体の皮下アプローチの主な障害は、投与量の制限である。痛みなく注入できる量の上限はおよそ２ｍｌだけである。より多い量の注入は患者への痛みと不快感を引き起こし得る。患者に注入される溶液量の制限のため、高濃度のモノクローナル抗体溶液を調整しうる。しかし、これは医薬製剤化に特定の要求を課す（Bowen et al., 2012）。
【００３２】
インビトロデータに基づいて前もって規定した治療投薬量では皮下注入は可能ではなかった。本発明によるＦＲ１０４の治療投薬量は、この投薬経路、例えば、乾癬又はリューマチ性関節炎のような病状を治療するための投薬経路を考えることで十分に小さな液量（およそ２ｍｌ）に含ませ得る。
【００３３】
本発明の特定の実施形態によると、ＦＲ１０４の治療有効量は投与を必要とする被検者に、静脈内、皮下、筋肉内、局所又は髄膜内注射を経て投与される。
注入部位からの抗体の拡散は、特に、抗体が皮下注入を経て投与されるときに問題となり得る。主な進歩はヒアルロニダーゼの導入物と関連づけられている。ヒアルロナン分子は、容積が細胞外マトリックスに広がるのを防ぐ重要な機能的バリアの構成要素である。ヒアルロナンは常に更新されるので、一過性の撹乱は深刻な機能の問題をもたらさない。組換えヒトヒアルロニダーゼは免疫原性の問題を回避する（Shpilberg and Jackisch, 2013）。組換えヒトヒアルロニダーゼ（ｒＨｕＰＨ２０、Ｈｙｌｅｎｅｘ登録商標）は他の物質の皮下投与を促すアジュバントとしてＦＤＡによって認可されている。本発明の特定の実施形態によると、投与を必要とするヒト患者に投与される組成物は、ＦＲ１０４に加えて、組換えヒトヒアルロニダーゼを含む。
【００３４】
本発明は、それを必要とするヒト患者のＴ細胞の免疫応答を阻害するための医薬組成物に関し、該組成物はＦＲ１０４を３〜１２０ｍｇ、例えば３〜１００ｍｇ、３〜８０ｍｇ、３〜６０ｍｇ、又は３〜４０ｍｇ、好ましくは３５ｍｇ以下、例えば３０ｍｇ以下、２５ｍｇ以下、２０ｍｇ以下、例えば３〜１４ｍｇの間の量で、１つ又はより多くの医薬上許容できる賦形剤と共に含む。本発明による医薬組成物は、医者によって決められた頻度（しかし、１週間に一度より高くはない）でそれを必要とする被検者へ投与しうる単位投薬量としての使用が予定されている。例えば、本発明による医薬組成物は月に一度の単位投薬量である。正確な投与量並びに臨床的状況（患者の体重及び全身の状態、疾患の性質など）に依存して、本発明による医薬組成物は週に一度、又は２，３，４，５若しくは６週毎に一度投与され得る。本発明による医薬組成物はＦＲ１０４を３５ｍｇ若しくはそれ以上、すなわち、３５ｍｇ〜１２０ｍｇ、例えば３５〜６０ｍｇ、３５〜８０ｍｇ、３５ｍｇ〜１００ｍｇ、４０〜１２０ｍｇ、６０〜１２０ｍｇ、８０〜１２０ｍｇ、又は１００〜１２０ｍｇ含むとき、それは好ましくは３，４，５若しくは６週毎に一度投与される。
【００３５】
本発明による医薬組成物は静脈内、皮下、筋肉内、局所又は髄膜内投与に適するように製剤化され得る。上記に言及されているように、本発明による医薬組成物は組換えヒトヒアルロニダーゼを、特に皮下投与用に製剤化されているときに含み得る。
本発明の別の対象は、複数回の投薬量、例えば、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５回又はより多くの回の投薬量のＦＲ１０４を含むキットであり、前記各投薬量が３〜１２０ｍｇのＦＲ１０４量、例えば３〜１００ｍｇ、３〜８０ｍｇ、３〜６０ｍｇ、又は３〜４０ｍｇ、好ましくは３５ｍｇ以下、例えば３０ｍｇ以下、２５ｍｇ以下、２０ｍｇ以下、例えば３〜１４ｍｇの間である。キットにおいてこれらの投薬量は週に一度の投薬量として、又は２、３、４、５、又は６週間毎に摂取する投薬量として記載されうる。本発明の特定の実施形態によると、それらは月に一度の投薬量である。
上記に記載されたキットと医薬組成物の特定の実施形態によると、医薬組成物又はキット中に存在する各投薬量は、注射器中、または静脈内、皮下、筋肉内、若しくは髄膜内経路を通しての投与を可能にする他の任意のデバイス中に含まれる。
【００３６】
本発明のその他の特徴もまた、本発明の枠組み内で実行され、必要な実験的サポートを提供する（が、本発明の範囲を制限しない）生物学的アッセイ及びファーストインヒューマン研究に従う説明の間で明白になる。
【実施例】
【００３７】
実施例１：ヒトにおけるＦＲ１０４の薬物動力学、薬力学、並びに生成物代謝
この研究を始める前は、ヒトにおけるＦＲ１０４の薬物動力学、薬力学、並びに生成物代謝について利用可能なデータはなかった。
けれども、ならびに推定最小薬理作用量（ＭＡＢＥＬ）を決定するために、カニクイザル及びヒヒのＰＫ及びＰＤの研究データを集めてプールし、ポピュレーション  ＰＫ／ＰＤによって分析しヒトのための非比例的にスケーリングした。ヒヒ及びカニクイザルのＰＫ及びＲＯデータは一貫しており、それゆえ一緒にモデル化した。
【００３８】
ＭＡＢＥＬと臨床上の投薬レベルの評価
推定最小薬理作用量（ＭＡＢＥＬ）はＦＲ１０４のファーストインヒューマン試験における最初の投薬レベルとして選ばれた（EMA 2007: Guideline on strategies to identify and mitigate risks for first-in-humans clinical trials with investigational medicinal products, EMEA/CHMP/SWP/28367/07; FDA 2005: Guidance for Industry Estimating the Maximum Safe Starting Dose in Initial Clinical Trials for Therapeutics in Adult Healthy Volunteers）。
推定最小薬理作用量（ＭＡＢＥＬ）は最大薬理学活性のおよそ１０から２０％を生じる投薬量として通常見積られ、通常インビトロデータに基づいて見積られる。ヒヒで観測された非常に明確なインビボ用量応答を示したＦＲ１０４のインビボデータが用いられた。
【００３９】
モデルの開発
ＦＲ１０４の異なる量を与えられたヒトについてＣＤ２８受容体占有率を経時的にシミュレートするために、これまでにカニクイザルとヒヒの研究で得られた全てのＰＫ並びにＰＤデータ（ヒヒ：０．１、１、１０並びに２０ｍｇ／ｋｇの単回投薬ＩＶ；カニクイザル：１、２、７ｍｇ／ｋｇの単回投薬ＩＶ；カニクイザル：２０、５０、１００ｍｇ／ｋｇの複数回投薬ＩＶ）とポピュレーションアプローチを用いて分析した。
【００４０】
以下の面が考慮された：
構成的な薬物動態／標的関与（ＰＫ／ＴＥ）モデルはヒトへの効果的な投薬計画を予測するために使われる。
○  インビボで１０％のＲＯを生じる、薬物濃度の信頼できる換算を可能にするには不十分な、低量レベル及び低い薬物濃度でのＰＫ及びＲＯデータ。
○  より高い信頼モデリング及びシミュレーションを可能にするに十分な、より高い薬濃度についてのＰＫ及びＲＯデータ。
【００４１】
ｍＡｂ―標的相互作用のＫｄに基づいた最大受容体占有率を計算するための式はＭＡＢＥＬを評価するために使われた（Duff, 2006）。ｍＡｂ―ターゲット相互作用のＫｄに基づいた最大受容体占有率を計算するために使われた次の式はＭＡＢＥＬを評価するために使われた（Duff, 2006）。
【００４２】
【数１】
2018538309.tif 000004
【００４３】
異なる投薬レベルで計算したＲＯと下記表に示す。
【表１】
2018538309.tif 000005
表１：推定の初期ＣＤ２８  ＲＯ％
【００４４】
従来のインビトロＫｄ値（４．６ｎＭ）並びにヒト血漿量（Ｖ１、０．０４Ｌ／ｋｇ）が使われた。しかし、インビボＫｄはインビトロＫｄよりも低くなり得る。標的介在性の薬物動態（ＴＭＤＤ）モデルはＦＲ１０４についてのＶ１＝０．０４５Ｌ／ｋｇと見積もった（下記参照）。
次の主要モデル仮説はこのＰＫ／ＴＥ  ＴＭＤＤ分析のために用いられた：
・準平衡近似はＦＲ１０４とＣＤ２８の間の相互作用の記述に適している。
・ＦＲ１０４治療はＣＤ２８の合成及び分解の速度を変化させず、ＣＤ２８発現細胞の消耗ももたらさず、ＦＲ１０４の結合はＣＤ２８の内在化速度を変えない（ｋｄｅｇ＝ｋｉｎｔ）。
○  最大フローサイトメトリーシグナルはＦＲ１０４の注入後変化しなかった。
○  ＦＲ１０４投与後に末梢のリンパ球又はＣＤ４＋Ｔ細胞は低下しなかった。
・ＣＤ２８受容体レベルは、提供され、その後モデルフィッティングにおいて固定された（Ｒ０）情報に基づいて計算された。
・ＣＤ２８はＣＤ３＋ＣＤ４＋Ｔ細胞中でのみ発現すると仮定され、他の細胞タイプでの発現は考えない。
・標的に関連したパラメータ（Ｋｄ、Ｋｄｅｇ、Ｒ０）はヒヒとカニサルの間で同じであると仮定した。
・動物の個々の体重は、また関連パラメータについて、０．７５（ＣＬ及びＱについて）及び１（Ｖ１及びＶ２について）の指数を有する共変量として扱われる。
【００４５】
血液量に対して標準化した時のサルにおけるＣＤ２８受容体濃度の理論上の計算値は次のデータに基づいた。
・研究報告中、ＣＤ３＋ＣＤ４＋細胞の細胞毎の受容体数は２００００から６００００の範囲である。
・モデルフィッティングでは、受容体濃度は０．４ｎＭに固定した。
・その他の受容体濃度（例えば０．２ｎＭ）は固定され、Ｋｄｅｇ推定には逆比例で影響する一方、特定の範囲でモデルフィッティングに対する影響は少なかった。
【００４６】
次の式が用いられ、受容体占有率についての正確なフィッティングをもたらした（図２Ａ）。
（式２）
抗原濃度（ｎＭ）＝（細胞毎の受容体数×血液細胞密度×１０9）／（６．０２３×１０23）
ヒトにおけるＦＲ１０４  ＲＯの予測
ＰＫにおける関連パラメータはアロメトリックスケーリングを用いてサルからヒトへスケーリングした（下記参照）。指数は分配量のためには１に等しいと仮定した。指数は全身ＣＬ並びに分配ＣＬのためには０．７５に等しいと仮定した（Ｑ）。ヒトの平均体重７０ｋｇ、並びにカニクイザルの平均体重２．９ｋｇは単回及び複数回の投薬研究におけるサルの平均体重に基づいて使われた。
・ＣＤ２８のＫｄｅｇ並びにＫｄ（Ｋｏｎ及びＫｏｆｆに影響される）はヒトと動物種間で同じであると仮定した。
・ＣＤ３＋ＣＤ４＋Ｔ細胞数（体重での規格化後）はヒトとサルとの間で同程度であった。
・ＣＤ２８受容体密度はカニクイザル／ヒヒと比較して１．６５倍高いと仮定した。
【００４７】
より詳細な単回投薬シミュレーションは、次のとおりの異なる投薬量のＦＲ１０４についてヒトにおいて予測される最大受容体占有率プロフィールを示す。：
【表２】
2018538309.tif 000006
表２：ＦＲ１０４の種々の単回ｉ．ｖ．投与（０．００５から８ｍｇ／ｋｇ）後の種々の観察期間（週）後のヒトにおけるＣＤ２８占有％のシミュレーション
【００４８】
結論
ＰＫ／ＴＥモデリングアプローチを使用して、図２Ａに示すように選択された、ＭＡＢＥＬ投与量である０．００５ｍｇ／ｋｇの投与量がヒトにおいて１３％のＣＤ２８受容体占有率を導くはずであることが決定された。
【００４９】
実施例２：研究計画
２．１原理
【００５０】
例１に記載されているように、ＭＡＢＥＬとして選択された投薬量はおよそ１３％のＣＤ２８受容体占有率に相当する５μｇ／ｋｇである。
単回投与研究の投薬上昇セグメントを行うことを決定した。ＦＲ１０４の投与後の循環血液Ｔリンパ球上でのＣＤ２８受容体占有率持続期間は投薬量に依存する。カニクイザルの毒性研究では、感染／リンパ腫が主に発症し、循環血液Ｔリンパ球上での１００％のＣＤ２８受容体占有率はそれぞれ少なくとも８／１１週間であった。
【００５１】
危険性を減らすために、出願人は、まずヒトのために非比例的に適応させた非臨床データのＰＫ／ＰＤポピュレーションモデリングに基づいて、低い投与量で血液Ｔリンパ球上での４週間未満の１００％ＣＤ２８受容体占有率（ＲＯ）を、並びに８週間で最大約５０％のＲＯを誘導する非常に低い投与量を試験することを決めた（表２を参照）。
安全策として、より高い投与量並びに繰り返し投与へ移行する前に、０．５ｍｇ／ｋｇの投薬量が研究の持続並びにＰＫ／ＰＤの実行若しくは安全な分析を行うために選択された。
このシミュレーションによると、投与後８週間でおよそ５０％のＲＯの規定に従うために、次の投与量として、１並びに２ｍｇ／ｋｇが適していた。任意の更なる投与量も試験され得る。その投与量も投与後８週間でおよそ５０％のＲＯの規則に従うものである。
【００５２】
２．２  材料と方法
試験品、投与量、投与の形態
ＦＲ１０４は全ての投与量レベルについて、リンガー乳酸液中の正確な濃度に希釈後、１００ｍｌを少なくとも３０分かけた注入により、静脈内に投与された。
６つの投薬グループが、パート１、コホートＡで計画された（増加する６つの単回投薬量、このうちの４つのみが最終的に行われた）。次の上昇スケールは、推定最小薬理作用量（ＭＡＢＥＬアプローチ）に基づく：０．００５，０．０５０、０．２００、０．５００、１．０、２．０ｍｇ／ｋｇ（最後の２つのものはグループ１−４から得られたＰＫ／ＰＤの結果の分析後に中止した）。
パート１、コホートＢについて２回投薬グループは、当初は０．５及び１．０ｍｇ／ｋｇで計画され、下記に説明しているように、０．５及び０．２ｍｇ／ｋｇに変更された。
【００５３】
研究薬物の物性的記述
ＧＭＰ  ＦＲ１０４は４％マンニトール＋０．０２％Ｔｗｅｅｎ８０中に１００ｍｇのＦＲ１０４を含む、５ｍＬの抽出可能容量のバイアル（２０ｍｇ／ｍＬ）内で現場に供給された。
全ての研究対象品は、現行のＧＣＰにより要求されているとおりに、求められるＧＭＰに従って製造した。
【００５４】
本研究の他に投与された医薬品
適合したプラセボの注射はビヒクル（リンガー乳酸溶液）を含む。プラセボの投与には、１００ｍＬのビヒクルが投与された。
【００５５】
薬物動態の計算
薬物動態の計算はフェニックス  ウィンノンリン  ６．２又は上位版（ファーサイト社、パロ  アルト、  カリフォルニア、  アメリカ）を使うことで行われた。
次の個々のＰＫパラメーターは、適切な場合には、個々の血清中の濃度−時間プロフィールからＦＲ１０４の為にノンコンパートメント法を用いて決められた：
Ｃmax：最大の観測された血清濃度
Ｔmax：Ｃmaxの発生時間
ＡＵＣinf：ＡＵＣ0-t＋（Ｃt／λz）（式中、Ｃtは最後に観察された定量可能な濃度であり、λzは第一次の終端速度定数である）から計算された、時間０から無限大までの血清濃度対時間曲線下の面積
ＡＵＣ0-28d：線形対数台形公式によって計算された、投薬インターバル（すなわち２８日）にわたる血清薬物濃度−時間曲線下面積。
ｔ1/2：（ｌｎ２）／λzから計算された終端半減期。
Ｒac：ＡＵＣ0-28d  Ｄａｙ２９／ＡＵＣ0-28dＤａｙ１として計算された蓄積率（パート２のみ）
ＣＬ：投薬量（ｉ．ｖ．）／ＡＵＣinfとして計算された、全身クリアランス。
Ｖ2：ＣＬ／λzとして計算された分配容量。
投薬量に対して規格化したパラメータ（Ｃmax／投薬量、Ｃavg／投薬量、ＡＵＣ0-28d／投薬量）が評価された。
他のＰＫパラメータは適切と考えられるように計算された。
【００５６】
薬力学
ＣＤ２８受容体占有率
主なＰＤ変数は分化抗原群（ＣＤ）２８の経時的ＲＯであり、目的に向いていると妥当な方法を用いて、研究中の各時点で、集めた血液試料中のＦＲ１０４によるＲＯとして評価されるものである。
【００５７】
キーホールリンペットヘモシアニンチャレンジ
パート１について、コホートＢのみ。
血清中のヒト抗ＫＬＨ  Ａｂは酵素結合免疫収着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）法を用いて検出された。
１．５ｍｌの血液試料が静脈穿刺により又は前腕の留置カニューレを経て標準的な血清チューブ中に集められた。
【００５８】
ＥＬＩＳＡによる抗ＫＬＨ抗体測定
血清研究試料の分析はアルファ  ダイアグノスティック  インターナショナル社の市販キット「ヒト抗ＫＬＨ  ＩｇＧ」カタログ番号７００−１４０−ＫＬＧをもちいることで行われた。定量の下限及び上限は７．２０並びに８６．０ Ｕ／ｍｌであると決められた。このＥＬＩＳＡキットはマイクロウェル上に固定されたＫＬＨ抗原へ試料中のヒト抗ＫＬＨ抗体が結合することに基づき、そして抗ＫＬＨＩｇＧ抗体はＨＲＰ酵素結合抗ヒトＩｇＧ特異的抗体によって決められた。洗浄工程後、発色性基質（ＴＭＢ）は反応を終わらせるために加えられ、その後吸光度４５０ｎｍがＥＬＩＳＡマイクロウェルリーダーを用いて測定される。
【００５９】
血液／血清試験
全血試料は種々の提供者から得られ、ならびにＫ２−ＥＤＴＡ又はＫ３―ＥＤＴＡヴァーキュテイナー血液採集管に集められた。ＦＲ１０４  ＰＫ並びにＣＤ２８受容体占有率を決めるための試料は次の時点で採集された血液から得られた。
一日目、投薬前と、注入開始の０．５、０．７５、１、２、４、そして８時間後
二日目、注入開始の２４時間後
三日目、注入開始の４８時間後
五日目、注入開始の９６時間後
八日目、注入開始の１週間後
十五日目、注入開始の２週間後
二十九日目、注入開始の３週間後
四十三日目、注入開始の６週間後、（０．５ｍｇ／ｋｇ（グループ４  コホートＡについてのみ）
五十七日目、注入開始の８週間後、（投与量＜０．２ｍｇ／ｋｇの場合には行わない）
八十五日目、注入開始の１２週間後、（投与量＜０．２ｍｇ／ｋｇの場合には行わない）
百十三日目、注入開始の１６週間後（投薬量≧１ｍｇ／ｋｇのグループについてのフォローアップ通院）
【００６０】
ＥＬＩＳＡによるＦＲ１０４−ＰＥＧ濃度測定
ＦＲ１０４（抗ＣＤ２８．３Ｆａｂ）分子はＣＤ２８Ｆｃ被覆プレート中でインキュベートした。次いで、結合ＦＲ１０４はＰＥＧ（メトキシ基）に対するウサギモノクローナル抗体で検出され、該ウサギ抗体はペルオキシダーゼで標識された抗ウサギポリクローナル抗体によって明らかにされた。
【００６１】
試薬と緩衝液
−  ＣＤ２８−  Ｉｇ  （ＣＤ２８／Ｆｃ  キメラ、  Ｒ＆Ｄ  システム  ＃  ３４２−ＣＤ−２００、ＰＢＳ中２００μｇ／ｍｌに再構成される）
−  被覆緩衝液：ＮａＨＣＯ3  ０．０５Ｍ  ｐＨ９．２（８０ｍＬＮａ2ＣＯ3  ０．０５Ｍ＋９２０ｍｌＮａＨＣＯ3０．０５Ｍ、ｐＨ９．２）
−  ＢＳＡ（シグマ  ＃  Ａ−７９０６）
−  Ｔｗｅｅｎ２０（シグマ  ＃  Ｐ７９４９）
−  試料
−  標準物：ＦＲ１０４  ＃ＣＡＡ−１（０．５ｍｇ／ｍｌ）
−  ウサギ抗ＰＥＧ（メトキシ基）モノクローナル抗体（エピトミクス  ＃２０６１−１、０．９７ｍｇ／ｍｌ）
−  ヤギ抗ウサギポリクローナル標識ペルオキシダーゼ（ジャクソン  イムノリサーチ  ＃１１１−０３５−１４４、０．８  ｍｇ／ｍｌ）
−  基質：ＴＭＢ（シグマ  ＃  Ｔ８６６５）
−  Ｈ2ＳＯ4（ＶＷＲ  ２０７０４．２９２）
【００６２】
プレートは０．０５Ｍ  ｐＨ９．２炭酸緩衝液（５０μｌ／ウェル）中１μｇ／ｍｌのＣＤ２８―Ｉｇで被覆し、並びに３７℃で２時間若しくは４℃で一夜インキュベートした。ウェルは空にされ、並びに三度連続して２００μＬ  ＰＢＳ−０．０５％  Ｔｗｅｅｎで洗浄した。１００μＬ  ＰＢＳ  ０．１％  Ｔｗｅｅｎ  １％  ＢＳＡが加えられ、並びにプレートは３７℃で１時間インキュベートした。
【００６３】
標準物：ＦＲ１０４  ＃Ｌ２７２２１／Ｇ１／２（１０．０１ｍｇ／ｍｌ）を第１点目については１００μｇ／ｍｌに希釈し、以後の７点については、二重で、五倍に連続希釈した。血清（５０μｌ）はＰＢＳ−０．１％  Ｔｗｅｅｎ中に少なくとも１／１０に希釈し、並びに３７℃で１時間インキュベートした。ウェルは空にされ、及び三度連続して２００μＬ  ＰＢＳ−０．０５％  Ｔｗｅｅｎで洗浄し、並びに希釈した。５０μｌ／ウェルのＰＢＳ−０．１％Ｔｗｅｅｎ中の１／５００ウサギ抗ＰＥＧモノクローナル抗体が加えられ、続けて４℃で１時間インキュベートした。ウェルは空にされ、及び三度連続して２００μＬ  ＰＢＳ−０．０５％  Ｔｗｅｅｎで洗浄した。ＰＢＳ−０．１％  Ｔｗｅｅｎ中の１／２０００ヤギ抗ウサギペルオキシダーゼ（抗Ｒｂ  ＰＯ）（５０μｌ／ウェル）が加えられ、４℃で１時間インキュベートした。（洗浄工程）ＴＭＢ（５０μＬ／ウェル）が加えられ、並びに室温暗所で１０分間インキュベートした。停止緩衝液が加えられた（５０μＬ／ウェル０．５ＭＨ2ＳＯ4）。次いで吸光度４５０ｎｍの測定は、（ｒｅｆ  ６３０ｎｍ）は、マイクロタイタープレート（ヌンク  イムノプレート、ヌンク、＃４４２４０４）を用いて得られた。ソフトマックスプロプログラムを分析に使い、並びに試料中のＦＲ１０４濃度を決めた。
【００６４】
フローサイトメトリーによる受容体発現測定
受容体占有率の測定：
各血液試料は半分に分けられ、並びにＦＲ１０４抗体と混合し、又は混合しなかった。赤血球溶解後直ぐに、ＦＲ１０４のＣＤ２８への結合は、フローサイトメトリーによって、ＦＩＴＣ結合抗ＣＤ３抗体で染色されたリンパ球について、抗ＰＥＧウサギモノクローナル抗体並びにＡｌｅｘａ  ｆｌｕｏｒ４０５結合抗ウサギ二次抗体の連続的な使用により調べられた。このように、ＰＥＧ染色の平均蛍光強度（ＭＦＩ）は、ＦＲ１０４抗体過剰量を補充された、同じ提供者からの第２の血液半量を含む両方のウェルにおいて決められた。次いで、ＦＲ１０４促進ＣＤ２８飽和は、各血液提供者について、両方のウェル（ＦＲ１０４過剰量なし／あり）のＭＤＩの間の比をとることによって算出された。
【００６５】
作業溶液ならびに緩衝液
【表３】
2018538309.tif 000007
【００６６】
試薬と溶液の調製
【表４】
2018538309.tif 000008
【００６７】
希釈抗体溶液の調製
【表５】
2018538309.tif 000009
【００６８】
【表６】
2018538309.tif 000010
【００６９】
【表７】
2018538309.tif 000011
表は２１ｍｇ／ｍＬのＦＲ１０４保存溶液（Ｓ１）について与えられ、その後ＦＲ１０４バッチ貯蔵濃度に応じて調整し得る。
ＣＯ：濃度
【００７０】
ＦＲ１０４飽和用量（５μｇ／ｍｌ）で処理し、又は処理していない試験試料について三連でアッセイを行った。試料は９６ウェルプレートに分注した。
ＦＲ１０４溶液は５０μｇ／ｍｌの適切な量に調整され、ＥＤＴ−処理血液管中で穏やかにホモジナイズした。５０μｌの各ヒト全血試料は９６穴Ｖ底ウェルプレートの６ウェルにプレーティングされた。５．５μｌのＦＲ１０４（Ｄ−ＰＢＳ中の５０μｇ／ｍｌ）が最初の３ウェルに加えられ、並びに５．５μｌのＤ−ＰＢＳが次の３ウェルに加えられた。穏やかにホモジナイズした後、プレートは室温（ＲＴ）で１５分間インキュベートされた。１ウェル毎に１５０μｌの赤血球溶解溶液が加えられ、次に１分間１２００ｇで遠心分離した。上清を捨て、並びに１ウェル毎に１５０μｌの赤血球溶解溶液が加えられた。室温で５分後、プレートは１分間１２００ｇで遠心分離した（三回繰り返した）。次に、１５０μｌのＦＡＣＳ緩衝液が加えられ、そして遠心分離した。１ウェル毎に３０μｌのＦＩＴＣマウス抗ヒトＣＤ３  ＩｇＧ／ウサギ抗ＰＥＧ  ＩｇＧ作業溶液の混合溶液が加えられ、並びに暗所、４℃で１５分間インキュベートした。細胞はＦＡＣＳ緩衝液で洗浄され、そして遠心分離され、この工程を二回繰り返した。１ウェル毎に３０μｌのＡｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ  ４０５ヤギ抗ウサギＩｇＧ作業溶液が加えられ、並びに暗所、４℃で１５分間インキュベートした。細胞はＦＡＣＳ緩衝液で二回洗浄された。細胞は次にＦＡＣＳ分析のために３００μｌのＦＡＣＳ緩衝液に再懸濁された。
【００７１】
２．３  研究計画
このＦＲ１０４フェーズ１研究計画は注意深く設計されたものであり、並びに治験薬を用いるファーストインヒューマン臨床計画の為の欧州ガイドラインに沿っている（ＥＭＥＡ／ＣＨＭＰ／ＳＷＰ／２８３６７／０７）。
この研究は、健康な被検者において、単回及び複数回の静脈内投薬量（漸増量）のＦＲ１０４を評価するファーストインヒューマン、フェーズ１、無作為化，二重盲検、プラセボ制御、単一施設研究である。
７１人までの健康な男性と女性の被検者が参加・排除基準により選択され、すなわち、パート１では５７人の被検者である（ＳＡＤ：それぞれ３６人の被検者［コホートＡ］、１４被検者［コホートＢ］、７被検者［任意選択のコホートＣ］の３コホート）が選択された。予定された総研究期間は９ヶ月（３６週）であった。
すべてのＦＲ１０４の投薬は、少なくとも３０分間の緩徐な注入で静脈内に投与された。時差的アプローチが全ての投薬レベル内で遵守した。全ての投薬レベルの間で少なくとも１４日の間隔（最後の投薬から最初の投薬まで）の観測を遵守した。同一日に投薬する個々の被検者は少なくとも６０分隔てて投薬された。
【００７２】
投薬量選択
計画したファーストインヒューマン研究の第１投薬量は、人に対して非比例的に適合させた非臨床データのＰＫ／ＰＤポピュレーションモデリングによって決めたＭＡＢＥＬに基づいた（詳細については上記実施例１を参照）。選択された投薬量は、推定でおよそ１３％のＣＤ２８受容体占有率（ＲＯ）に相当する５μｇ／ｋｇであった。
研究の投薬量増量セグメントは単回投薬で行われた。危険性を減らすために、１ｍｇ／ｋｇの投薬レベル後、すなわち（ポピュレーションＰＫ／ＰＤモデルによれば）４週間又はそれ以上の期間にわたって１００％のＣＤ２８ＲＯが誘導されると考えられる投薬レベルの開始前におよそ１２週間の休止が計画された。この４週間の期間は、ウイルスの再活性化が何らかの病理をもたらす可能性をヒトにおいて非常に低くするのに十分短いと考えられた。１２週間の休止は、当初計画された１，２ｍｇ／ｋｇの高投薬量に移行する前にＰＫ／ＰＤ及び安全面の評価を可能にした。
シミュレーションによると、１及び２ｍｇ／ｋｇの投薬量はそれぞれ、４週間で８４及び９２％のＲＯ、並びに８週間で１８及びおよそ５０％のＲＯを誘導すると考えられた。安全策として、０．５ｍｇ／ｋｇの投薬量がより高い投薬量に移行する前にこの研究を休止してＰＫ／ＰＤ及び安全性分析を行うために選ばれた。
【００７３】
パート１  単回の増量投薬（ＳＡＤ）パート
代表研究者（若しくは指名された共同研究者）によって判断した病歴並びに健康状態に基づいて被検者を募集した。各処理期間、被検者は投薬前日（−１日目）から５日目まで研究センターに収容された。食事は居住期間の間、標準化した。グループ１−４（０．００５；０．０５；０．２及び０．５ｍｇ／ｋｇ）には、８日目、１５日目、２９日目、並びに５７日目の来診が計画された。グループ４（０．５ｍｇ／ｋｇ）には、４３日目の追加の来診が計画された。最終来診後、８５日目（１２週目）にフォローアップの来診を続けて行った。グループ５及び６は１及び最大２ｍｇ／ｋｇのＦＲ１０４がそれぞれ投薬されるはずであったがより低い投薬量で得られた結果により研究者はこれらの投薬を中止した。
【００７４】
コホートＡ
２２人の被検者がコホートＡの４つの投薬レベルグループの１つに登録された。一連（投薬レベル）の健康な被検者グループは、漸増投薬量のＦＲ１０４のＩＶ投与を受けた。
最初の２つの投薬レベルグループ（グループ１〜２）では、各４人の被検者は、無作為にＦＲ１０４又はプラセボのいずれかに３：１の比で振り分けた。結果として、３人の被検者はＦＲ１０４を、１人の被検者はプラセボを受けた。
時差的投薬アプローチが適用された、すなわち、ある１人の被検者の投薬に続いて４８時間遅れて二番目の被検者に投薬し、その投薬レベルグループの残りの２人被検者は二番目の被検者の４８時間後に投薬された（計５日）：
一日目：ｎ＝１
三日目：ｎ＝１
五日目：ｎ＝２。
【００７５】
グループ３並びに４では、各７人の被検者は、無作為にＦＲ１０４又はプラセボのいずれかを５：２の比で振り分けられ、結果として、５人の被検者はＦＲ１０４を、２人の被検者はプラセボを受けた。無作為化は第１のグループの２人の被検者のうち１人はＦＲ１０４を、ならびに１人はプラセボを受けることを保証した。
時差的な投薬アプローチが適用された、すなわち、二人の被検者の投薬に続いて４８時間後に二人の被検者が投薬され、並びにその投薬レベルグループの残りの三人の被検者は４番目の被検者の４８時間後に投薬された（計５日）：
一日目：ｎ＝２
三日目：ｎ＝２
五日目：ｎ＝３。
【００７６】
同じプロトコルがグループ５並びに６（それぞれ１ｍｇ／ｋｇ及び２ｍｇ／ｋｇの投薬レベルで各７人の被検者）に計画された。しかし最初の４グループについてのデータ分析後に中止した。
【００７７】
【表８】
2018538309.tif 000012
【００７８】
コホートＢ
１４人の被検者がコホートＢの２つの投薬レベルグループ（各グループに７人ずつ）の１つに登録された。
被検者は無作為にＦＲ１０４又はプラセボのいずれかに５：２の比で振り分けられた、その結果５人の被検者はＦＲ１０４を受け、並びに二人の被検者はプラセボを受けた。無作為化は第１のグループの２人の被検者のうち１人はＦＲ１０４を、ならびに１人はプラセボを受けることを保証した。
共通の評価項目に加えて、このコホートの被検者はＦＲ１０４注入日にキーホールリンペットヘモシアニン（ＫＬＨ）チャレンジを受けた。
時差的投薬アプローチが適用された。すなわち、二人の被検者の投薬に続いて４８時間後に二人の被検者が投薬され、並びにその投薬レベルグループの残り３人の被験者は四番目の被検者の４８時間後に投薬された（計５日）：
一日目：ｎ＝２
三日目：ｎ＝２
五日目：ｎ＝３。
【００７９】
当初の計画は以下の通りであった：
ＫＬＨチャレンジ、単回投薬。
【表９】
2018538309.tif 000013
【００８０】
この計画はグループ１−４で得られた結果を考慮して改定される：
ＫＬＨチャレンジ、単回投薬。
【表１０】
2018538309.tif 000014
【００８１】
試験対象被検者基準
基準を全て満たしている被検者は次の本研究に参加する資格がある。
１．男性又は女性、１８歳から６０歳（両端を含む）；
２．病歴、バイタルサイン、臨床検査、並びにスクリーニング時に行った総合健康診断に基づいて決められる良好な健康状態［医学上安定］：
注記：臨床検査の値が被検者の適格性を決める領域外の場合、再検査が行われうる。再検査は好ましくは計画外の来院時に行われるべきである。再検査の結果が被検者の適格性についても考慮される。再検査が正常の基準範囲外であれば、被検者は、研究者が当該異常値が臨床上有意でないと判断した場合に限り参加させてもよい。
３．心電図（ＥＣＧ）が正常の範囲内か、又は研究者により判断される臨床上意義のある逸脱がない事を示す；
注記：ＥＣＧ値が、被検者の適格性を判断する範囲の外である場合の再検査が行われ得る。
４．体重は少なくとも５０ｋｇで１００ｋｇ以上を超えず肥満度指数（ＢＭＩ）が正常の範囲内である（１８≦ＢＭＩ＜３０ｋｇ／ｍ2）；
５．スクリーニング時に選択した依存性薬物について陰性尿検査；
６．スクリーニング時に陰性アルコール呼気試験；
７．女性の被検者は閉経後又は外科的不妊（子宮切除、両側卵巣摘出術、若しくは卵管結紮術を受けている）である；
８．女性被検者はスクリーニング時に妊娠検査について陰性である；
９．出産能力のある女性配偶者を持つ非精管切除男性被検者は、被検薬最終投与後９０日までは効果的な避妊法を使うことに同意しなければならない；
１０．男性の被検者は被研究薬の最終投与後９０日までは精子の提供をしないことに同意しなければならない；
１１．このプロトコルに明記した禁止事項並びに制限事項を遵守する意思；
１２．いずれの研究に関連した手順が行われる前に、自由意思で署名したインフォームドコンセント書類（ＩＣＦ）、被検者の目的の理解並びに研究のために必要な手順の理解並びに研究に参加する意思を示す；
１３．被検者はＰＣＲにより．ＥＢＶ陽性であるべきである；
１４．非喫煙者又はたばこを少し吸う人、すなわち一日に最大５本の紙巻きタバコ（若しくは３本の葉巻タバコ若しくは充満状態で３回分のパイプ）の喫煙、並びに臨床研究施設に拘束されている間及び通院している間禁煙する能力、並びに意思；
パート１の為の、コホートＢ限定で；
１５．被検者はＫＬＨチャレンジを経験していなかった。
【００８２】
実施例３：本研究の増量単回投薬（ＳＡＤ）パートの初期結果
ＦＲ１０４濃度はＥＬＩＳＡ法によって被検者の血液中で測定され、並びに受容体占有率のレベルは増量単回投薬量の０、１、２、５、８、１５及び２９日にフローサイトメトリーを用いて測定された。薬物動態の結果は、図１において血漿中のＦＲ１０４がｎｇ／ｍｌ単位で表され、並びに薬力学の結果は標的のＣＤ３＋Ｔ細胞上でのＣＤ２８受容体の占有率（％）として表される。図１Ａは、０．００５、０．０５、０．０２及び０．５ｍｇ／ｋｇのＦＲ１０４を、単回ｉ．ｖ．注射により３０分間にわたって投与した後のＦＲ１０４濃度を示し、測定したピーク血漿濃度は注射後２時間で１１７±１１、１０１２±４８、４９２２±８５３及び１１６２０±１０７６ｎｇ／ｍｌにそれぞれ達した。最初の一ヶ月間に渡って測定された血漿濃度から、半減期は用量依存性であることが示され、０．０５ｍｇ／Ｋｇの投与で３．４日、０．２ｍｇ／Ｋｇの投与で５．７日、並びに０．５ｍｇ／Ｋｇの投与で７．９日の値であった。図１Ｂは、驚くべきことに、０．００５ｍｇ／ｋｇのＦＲ１０４について予想された約１３％のＲＯ以上に、０．００５ｍｇ／ｋｇのＦＲ１０４の単回ｉ．ｖ．注射後に８０％の受容体占有率に達し、並びに０．０５又は０．２ｍｇ／ｋｇのＦＲ１０４の単回ｉ．ｖ．注射後に１００％の受容体占有率に達することを示している。ＣＤ２８受容体は０．００５ｍｇ／ｋｇのｉ．ｖ．注射の１５日後完全に脱飽和し、並びに０．０５、０．２、及び０．５ｍｇ／ｋｇのｉ．ｖ．注射の、２８、５６及び８４日後に完全に脱飽和した。
【００８３】
図２はインビトロの結果を用いて前もって決められた種々のＦＲ１０４濃度での種々のＲＯ率（図２Ａ）を臨床試験後に観測したＲＯ率と比較して示す。図２Ｂは、臨床研究の第１のコホートＡの分析後に修正したＦＲ１０４のＫｄで決めた予測ＲＯ率と、材料と方法中に説明したフローサイトメトリーによって計算された観測ＲＯ率との比較している。この図は、両方の状況の完全な相関関係を示しており、Poirier （２０１２）らがインビトロで測定したＫｄはヒトでの使用のためには、過小に見積もられており、並びにＦＲ１０４の解離定数は４．６ｎＭではなくて約０．３ｎＭ（１０倍低い）であることを確認している。これらの結果はヒトではない霊長類モデルで決めたＲＯ率が予測ととてもよく一致しているため予測できなかった。臨床前研究の為に２０１２年に算出されたＦＲ１０４の治療投薬量は、よい効果を示し、並びに豊富に公開されている（（Haanstra et al, JI 2015）（Poirier et al, JI 2015）（Poirier et al, Experimental Dermatol. 2015）（Vierboom et al, Clinical and experimental immunol 2015））。
【００８４】
次に、Ｔ細胞表面のＣＤ２８の発現は、フローサイトメトリーによってＦＲ１０４注入後一ヶ月の間に分析された。図３は、細胞表面のＣＤ２８受容体の存在を反映するペグ化したＦＲ１０４の蛍光平均値を示す。結果は、ＦＲ１０４を受けたボランティアの４つの異なるグループにおいて、ＣＤ２８がＦＲ１０４の結合後でさえもＴ細胞の表面にまだ存在していることを示しており、このことは、ＦＲ１０４が受容体の内在化を誘導せず、ダウンレギュレーションも誘導しないことの根拠となる。
【００８５】
ＫＬＨチャレンジはヒト中のＫＬＨ抗原への免疫応答のテストのためのＦＲ１０４の単回投薬量注入（０．０２、０．２、０．５及び１．５ｍｇ／ｋｇの改変濃度）について行われた。抗ＫＬＨ抗体濃度は市販キットを使うＥＬＩＳＡによって分析された。図４は抗ＫＬＨ抗体反応を表す。この結果は、プラセボを受けたボランティアと比較して、ＦＲ１０４の用量依存性の抗ＫＬＨ反応阻害を示す。０．２ｍｇ／ｋｇの投薬量から、反応はダウンレギュレートした。０．５ｍｇ／ｋｇのＦＲ１０４を受けた、ボランティアについては１００％の阻害が観測された。新しい治療上のＦＲ１０４の投薬は免疫システムの阻害に０．０２ｍｇ／ｋｇから効果的である。
【００８６】
実施例４：ファーストインマン研究報告
方法
研究計画
この研究は、健康な被検者においての単回及び複数回静脈内投薬量（漸増量）のＦＲ１０４を評価するファーストインヒューマン、フェーズ１、無作為化、二重盲検、プラセボ制御、単一施設研究である。それはズィークンホイスネットワークアントウェルペン独立倫理委員会 (Protocol Number FR104-CT01; EudraCT Number 2015-000302-19; Clinical-Trials.gov identifier: NCT02800811)によって認可された。本研究は、ＳＧＳライフサイエンスサービス、（臨床薬理学ユニット、アントワープ  −アントワープ、ベルギー）、で全薬品臨床試験実施（ＧＣＰ）ガイドライン並びにヘルシンキ宣言の原則に従って行った。
【００８７】
参加者
資格のある男女の被検者は、書面によるインフォームドコンセントを提出し、並びに健康状態にあった。主要な試験対象被検者基準は、全身の健康、１８−６０歳、５０ｋｇ以上で１００ｋｇ以下の体重及び１８−３０ｋｇ／ｍ2のＢＭＩであった。除外基準は重大な過去の病歴又は異常な臨床試験検査結果であった。
【００８８】
介入
試験薬はＦＲ１０４（ＯＳＥイムノセラペウティクスＳＡ、ナント、フランス）で、比較薬（適合するプラセボ）はリンガー乳酸溶液であった。ＦＲ１０４はＦＲ１０４  １００ｍｇを含む５ｍＬ溶液（２０ｍｇ／ｍＬ）で供給され、並びに２−８℃（３６−４６°Ｆ）で遮光保存された。適切な希釈物又はプラセボを含む注射器はＳＧＳファーマシーによって準備され二重盲検様式で研究者に提供された投薬量は、当初は、非ヒト霊長類データ（非比例的に適合した）のポピュレーションＰＫ−ＰＤモデリングに基づいて選択され、ヒトのデータは、その後暫定的な分析後に含ませた。初期投薬量（ＭＡＢＥＬ、０．００５ｍｇ／ｋｇ）はおよそ２０％のＣmaxでモデル化したＣＤ２８のＲＯに相当した。
【００８９】
投薬レベルが≦０．０５ｍｇ／ｋｇでは、ＦＲ１０４は少なくとも３０分間で、希釈後の正確な濃度のリンガー乳酸溶液１０ｍＬのＩＶ注入によって投薬された。他の投薬レベルでは、ＦＲ１０４は少なくとも３０分間で、希釈後の正確な濃度のリンガー乳酸溶液１００ｍＬのＩＶ注入によって投薬された。
【００９０】
処置計画
５０人の被検者がパート１（ＳＡＤ：２２人の被検者［コホートＡ］及び２８人）の［コホートＢ］の２つのコホート）に選ばれ、ならびに１４人がパート２（ＭＡＤ）に選ばれる予定とした。各処置期間の間に、被検者は投薬前日（−１日）から５日目まで研究施設に収容された。時差的な投薬アプローチが適用された、すなわち、１又は２人の被検者の投薬（一日目）に続いて１又は２人の被検者の４８時間後には投薬され（三日目）、並びに３人の残ったその投薬レベルグループの残った３人の被検者は四番目の被検者の４８時間後に投薬された。本研究の総持続期間は最後の反復投薬後の１１週間のフォローアップを含む３６週間であった。少なくとも１４日の間隔（最後の投薬から最初の投薬まで）が全ての投薬レベルの間に与えられた。同じ日に投薬する個々の被検者は少なくとも６０分間離して投薬された。
【００９１】
パート１：増量単回投薬パート（ＳＡＤ）−
２２人の被検者がコホートＡの４つの投薬レベルグループ、：０．００５ｍｇ／ｋｇのグループ１、０．０５０ｍｇ／ｋｇのグループ２、０．２００ｍｇ／ｋｇのグループ３、０．５００ｍｇ／ｋｇのグループ４の１つに登録される予定であった。グループ１及び２では、各４人の被検者はＦＲ１０４又はプラセボのいずれかに３：１の比で振り分けられ、結果として３人の被検者はＦＲ１０４を１人の被検者はプラセボを受けた。グループ３から４では、各７人の被検者が無作為にＦＲ１０４又はプラセボのいずれか１つを５：２の比で振り分けられ、結果として５人の被検者はＦＲ１０４を２人の被検者はプラセボを受けた。無作為化は第１のグループの２人の被検者のうち１人はＦＲ１０４を、ならびに１人はプラセボを受けることを保証した。暫定ＰＫ、ＰＤ並びに安全性評価（これらに基づいて次の投与量レベルの決定が行われた）のために、グループ４に投薬後約１２週間の所定の休止がなされた。２８人の被検者はコホートＢの４つの投薬レベルグループ（各グループに７人）：０．５００ｍｇ／ｋｇのグループ７、０．２００ｍｇ／ｋｇのグループ８、１．５ｍｇ／ｋｇのグループ９、並びに０．０２０ｍｇ／ｋｇのグループ９−２の１つに登録される予定であった。被検者はＦＲ１０４又はプラセボのいずれかに５：２の比で振り分けられた。共通の評価項目に加え、このコホートの被検者はＫＬＨチャレンジをＦＲ１０４注入日に受けた。
【００９２】
パート２：増量多数回投薬パート（ＭＡＤ）−
１４人の被検者はパート２の２つの投薬レベルグループ（各グループに７人）：０．２ｍｇ／ｋｇのグループ１０、並びに０．５ｍｇ／ｋｇのグループ１１の１つに登録される予定であった。各被検者はＦＲ１０４又はプラセボの２回の投薬を２８日間のインターバルで受けた。
【００９３】
サイトカイン評価
血液試料は投薬前並びに投薬後１、２、４、８、２４（二日目）に集められた。試料は１５、４３、５７、８５、１１３日目にもまた集められた。サイトカインはＩＦＮ−γ、ＩＬ−１β、ＩＬ−２、ＩＬ−４、ＩＬ−６、ＩＬ−８、ＩＬ−１０、
ＩＬ  １２ｐ７０並びにＴＮＦ−αは市販キットＰｒｏ  Ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ  Ｐａｎｅｌ  Ｉ  Ｖ−ｐｌｅｘ  ａｓｓａｙ（＃Ｋ１５０４９Ｇ  メソスケールディスカバリー、ロックヴィル、マサチューセッツ）を用いて有効なＥＣＬＩＡ法を用いて血清に投薬された。ＭＵＬＴＩ−ＳＰＯＴ登録商標プレートは捕捉抗体であらかじめ被覆された。試料は、電気化学発光標識（ＭＳＤ  ＳＵＬＦＯ−ＴＡＧTM）と結合した検出抗体を含む溶液とウェルにロードされた。試料中の被分析物は、作用電極表面上に固定された捕捉抗体と結合する；結合した被分析物による検出抗体の補充によってサンドイッチが完了する。ＭＳＤリーディングバッファーの添加後、プレート電極により電圧が与えられ、十分なＳＵＬＦＯ−ＴＡＧTM標識抗体がプレートに結合していれば光の放射が生ずる。この装置は放射された光の強さを測定し試料中の被分析物の量の定量値を捕捉する。
【００９４】
ＰＫ分析
ＰＫ評価の為の連続血液試料は注入開始時間から次の時点で集められた：
投薬前並びに投薬後０．５、０．７５、１、２、４、８、２４（二日目）、４８（三日目）時間、５、８、１５、２９、４３、５７、８５、１１３日（０．５ｍｇ／ｋｇ以上の投薬量グループのみ）。血清中のＦＲ１０４濃度はＭＳＤＳｅｃｔｏｒ  Ｉｍａｇｅｒ  ６０００（ＭＳＤ、ゲーサーズバーグ、メリーランド、アメリカ）での電気化学発光免疫吸着剤アッセイ（ＥＣＬＩＡ）を含む有効な方法を用いて決められた。薬物動力学計算はフェニックス  ウィンノンリン６．２並びにより高位機種（ファーサイトコーポレーション、パロ  アルト、カリフォルニア、アメリカ）を使うＳＧＳ−ＬＳＳによって行われた。このアッセイについての定量の下限並びに上限（ＬＬＯＱ及びＵＬＯＱ）はそれぞれ１００並びに２０００ｎｇ／ｍＬであった。品質管理及び標準の全体的精度及び正確性はそれぞれ２０％以下および±２０％以内である。フィットさせた曲線からの内挿によって試料濃度を推定することを可能にする標準曲線を構築した。
【００９５】
ＰＤ分析
血液試料は、サイトフルオロメトリーを含む部分的に有効な方法を用いて、ＣＤ２８受容体占有率（ＲＯ）についてＰＫ分析用と同じ時点で集められた。処理すべき各血液試料は半分に分けられ、並びに１つの試料は過剰なＦＲ１０４と混合された。赤血球溶解の際に、ＣＤ２８と結合するＦＲ１０４は、ＦＩＴＣ結合抗ＣＤ３抗体で染色されたリンパ球において、抗ＰＥＧウサギモノクローナル抗体並びにＡｌｅｘａ  ｆｌｕｏｒ４０５結合抗ウサギ二次抗体を順次用いてフローサイトメトリーによって調べられた。このように、ＲＯは過剰なＦＲ１０４が存在しないウェルのＭＦ１と過剰なＦＲ１０４存在下のウェルのＭＦＩとの比をとることで算出された。この方法の感度は０．２５μｇ／ｍＬであった。提供者内再現精度は１％から９％（ＣＶ）の範囲であり、並びに、提供者間精度は１６〜２２％（ＣＶ）の間の範囲であった。ＣＤ２８発現レベルはＦＲ１０４過剰条件のＭＦＩによって測定された。
【００９６】
末梢Ｔリンパ球の亜集団並びに活性化状態はトランスフィックス／ＥＤＴＡ真空血採集管（サイトマーク、バッキンガム、イギリス）を用いて安定化させた全血のフローサイトメトリーによって評価された。ＣＤ４５、ＣＤ３、ＣＤ２８、ＣＤ４５ＲＯ、ＣＤ４、ＣＤ８、ＣＤ２５、ＣＤ１２７、ＣＤ６９並びにＣＣＲ７マーカーはＣＤ４＋及びＣＤ８＋区画において次の亜集団：
ナイーブＴ細胞、活性化Ｔ細胞、メモリＴ細胞、セントラルメモリＴ細胞、エフェクターメモリＴ細胞及びＴＥＭＲＡ
を定義するために測定された。ｎＴｒｅｇもまた記録された。
【００９７】
ＥＢＶ  ＰＣＲ並びにＥＢＶ  ＩｇＧ及びにＩｇＭ抗体を含む全ての他の臨床装置は標準手順を用いて、治験施設の臨床生物学研究部によって行われた。
血液細胞の免疫反応性はエクス−ビボで調べられた。血液試料は、ＳＥＢ＋ＬＰＳ刺激物質含むＴｒｕＣｕｌｔｕｒｅ登録商標血液採集管（ミリアドＲＢＭ、オースティン、テキサス）及びコントロール管中へ、前腕の静脈穿刺により又は留置カニューレを介して集められた。管を３７℃で２４時間維持した後血漿が機械的に抽出され、ＩＬ−２、ＩＦＮｇ及びＩＬ−８サイトカインの分析まで凍結された。サイトカインは血清中のサイトカインを評価するのに使われた同じＥＬＩＳＡ法を用いて分析された。
【００９８】
免疫評価
抗ＦＲ１０４抗体検出のための血液試料はスクリーニング時並びに１日目（投入前）、１５日、２９日、５７日、８５日及び／若しくは１１３日に集められた。血清中の抗ＦＲ１０４抗体の滴定は有効な電気化学発光、架橋免疫原性アッセイを用いて行われた。その方法は血清試料の酸処理を用いて必要なときにＦＲ１０４／ＦＲ１０４−ＡＤＡの解離を可能とし、続いて単工程アッセイブリッジングフォーマットを用い、それによって抗ＦＲ１０４抗体（ＡＤＡ）はビオチン化形態及びスルホ−ＴＡＧ標識形態のＦＲ１０４の組み合わせによって溶液中に捕捉される。複合体形成はその後ＭＳＤプラットフォームに対するＥＣＬによって検出された。このアッセイの感度は３．４６ｎｇ／ｍｌ（３１％のＣＶ）並びに薬物許容量の平均値は１７９μｇ／ｍｌ（２６％のＣＶ）であった。
【００９９】
ＫＬＨ免疫
抗ＫＬＨ抗体検出の為の血液試料はスクリーニング時並びに１５日、２９日、５７日、８５日、及び／若しくは１１３日に集められた。抗ＫＬＨ抗体は市販キット“ヒト抗ＫＬＨＩｇＧ”（＃７００−１４０ＫＬＧアルファダイアグノスティックスインターナショナル、サンアントニオ、テキサス）を用いる血清中での定量ＥＬＩＳＡによって投薬された。
【０１００】
統計学上の方法
この研究のためのサンプルサイズは、計画が類似する他のフェーズ１研究による先例並びに医薬品医療製品規制庁（イギリス）、ドイツ連邦医薬品評価院（ドイツ）、連歩医薬品局（ベルギー）、欧州医薬品局（ＥＭＡ）との協議に基づいて決められた。６４人の健康なボランティアはその手順の目的に合致するに十分であると判断された。全ての統計学上の計算は統計計算のためのＳＡＳ（バージョン９．２）ソフトウェア及び描画目的のためのＳＡＳを用いることで行われた。
【０１０１】
結果
参加者の流れ
本研究は１つの臨床施設で２０１５年３月２７日から２０１６年２月１９日まで行われた。総数６５人の被検者が２つの研究パートに分けられた。パート１では、３７人の被検者が単回ＩＶ投薬量（０．００５から１．５ｍｇ／ｋｇの範囲）のＦＲ１０４を投与され、並びに１４人の被検者が単回ＩＶ投薬量のプラセボを投与された。パート２では、１０人の被検者がＦＲ１０４（０．２００から０．５００ｍｇ／ｋｇの範囲）の二度の投薬並びに４人の被検者は二度のプラセボをＩＶ投薬処置され、投薬間隔は２８日間離された。（パート１、コホートＡ、グループ２の）１人以外の全ての被検者は計画どおり研究薬を受けた（前記参考）。全ての被検者は無作為化されて処置された。全ての被検者は研究を完結し、並びに安全性分析に含まれた。１人の被検者（パート１、コホートＡ、グループ２）は注入ポンプの機能障害に関連したプロトコルの逸脱のためＰＫ並びにＰＤＬ−１分析から除かれた。この不正確な投薬処置のため、１人の追加の被検者がグループ２に含まれた。パート２の１人の被検者は、処置と無関係なＡＥ後に、禁止された規定外の薬物治療を受けたために０．５ｍｇ／ｋｇのＦＲ１０４の二度目の投薬を受けなかった。この被検者はプロトコルに応じた全ての来診を完遂した。この被検者はＰＫ並びにＰＤポピュレーションから除外しなかった。しかし２９日後に得たデータは分析から除外された。研究者又はスポンサーによって盲検性を破られた被検者はいなかった。
【０１０２】
ベースラインデータ
被検者の個体群統計は表１１に示されている。全ての処置グループで白人が最も多い被検者であった。全ての被検者の年齢、体重とＢＭＩはプロトコルに定義された試験対象被検者基準内であった。
【０１０３】
【表１１】
2018538309.tif 000015
【０１０４】
薬物動力学
０．００５、０．０２０並びに０．０５０ｍｇ／ｋｇの低用量のＦＲ１０４は信頼できるＰＫ変数推定の為には不十分な測定可能濃度を生じた。図５Ａに図解しているのは残りの投薬グループのＦＲ１０４濃度−時間データである。コホートＡ（グループ１−４、ＫＬＨ免疫なし、ＦＲ１０４を０．００５から０．５ｍｇ／ｋｇ投薬している）において、ＦＲ１０４の薬物動力学は、０．２００ｍｇ／ｋｇ用量からほぼ線形であり、とＴ1/2が１４６（０．２００ｍｇ／ｋｇ）から１８２時間（０．５００ｍｇ／ｋｇ）であった。コホートＢ（集団７−９の２、ＫＬＨ免疫）においては、コホートＡと同様に、ＦＲ１０４の薬物動力学は０．２００ｍｇ／ｋｇ用量からほぼ線形であり、Ｔ1/が１５０（０．２００ｍｇ／ｋｇ）から２１０時間（１．５００ｍｇ／ｋｇ）であった。ＦＲ１０４のＣmax平均値は０．００４から１．５ｍｇ／ｋｇ投薬後、１１７から３７７００ｎｇ／ｍｌの範囲であり、並びにＡＵＣinfは０．２−１．５ｍｇ／ｋｇ投薬後、０．７０５から７．０１０ｍｇ／ｍｌの範囲であった。
【０１０５】
ＦＲ１０４のＰＫは２８日離し投与された０．２並びに０．５ｍｇ／ｋｇの２つのＦＲ１０４の注入後に評価された（パート２）。薬物動力学はほぼ線形でありＴ1/2が１６９から２０３時間の範囲であった。ＰＫ変数はＦＲ１０４の０．２００ｍｇ／ｋｇの注入後１日目並びに２９日目で似ていた。血清濃度の蓄積は０．５００ｍｇ／ｋｇのＦＲ１０４の注入後観測され、投薬量−標準化ＡＵＣ０−２８ｄ並びにＡＵＣinfがおよそ２０％上昇した。
【０１０６】
薬力学
ＦＲ１０４の注入後、末梢血中のＴ細胞上の用量依存性ＣＤ２８ＲＯが観測された（図５Ｂ）。ＣＤ２８受容体は０．０２０ｍｇ／ｋｇ並びにより高い濃度の投薬量のＦＲ１０４の注入後第１のサンプリング時点（０．５時間）で飽和された。０．５００ｍｇ／ｋｇと１．５００ｍｇ／ｋｇの投薬量のＦＲ１０４の注入後２９日でＲＯはまだ５０％以上であった。ＣＤ２８  ＲＯは、１５日目（０．０２０ｍｇ／ｋｇ）から８５日目（１．５００ｍｇ／ｋｇ）までに、投薬量依存的に５０％に戻った。ＣＤ２８  ＲＯは、ＦＲ１０４血清濃度が定量下限値（＜１００ｎｇ／ｍＬ）をちょうど超える場合に５０％以上であり、２００ｎｇ／ｍｌ以上のＦＲ１０４血清濃度の際に８０％以上であった。このことは、ＦＲ１０４がその受容体に対してインビボで高い親和性を有し低濃度のＦＲ１０４でさえ薬理学的に活性であり得ることを示唆している。０．２００ｍｇ／ｋｇの第２の投薬注入後、受容体は再び飽和になり、６０日以上継続して５０％以上飽和した。２８日間離した０．５００ｍｇ／ｋｇの二度の投薬から６０日以上受容体を１００％飽和する結果を得た。
【０１０７】
総リンパ球数、及びナイーブＴ細胞、記憶Ｔ細胞及びＴｒｅｇ細胞を含むリンパ球サブセットは、ＦＲ１０４のどの投薬量及びどの投薬計画によっても有意な変化が引き起こされず、およびこれらのサブセットのレベルはどのグループでも研究間に有意に変化しなかった。ＭＦＩの測定で評価したリンパ球サブセットによるＣＤ２８の発現レベルも影響がなかった（図６）。
【０１０８】
以前、ヒトへのスーパーアゴニスト又は二価アンタゴニストである抗ＣＤ２８ｍＡｂの投薬後サイトカインの放出が生じていたために、サイトカイン放出の可能性を厳密に追跡調査した。どのボランティアの血清中でもサイトカインの上昇は観測されなかった。背景レベルのみが記録され、それらは臨床的に関係がないと考えられた（図７及び図８Ａ）。このバラツキのため、アッセイは、０．１００ｍｇ／ｋｇ以上の容量でのＦＲ１０４の投与後２並びに９６時間時点でのみＩＬ−２合成誘導の有意な阻害を捉え、しかし他の時点では捉えられなかった（図８Ｂ）。ＳＥＢ＋ＬＰＳ誘導性のＩＮＦγ並びにＩＬ−８（これらは非Ｔ細胞によっても分泌されるサイトカインである）の合成は、どのグループのＦＲ１０４での処理によっても調節されなかった。
【０１０９】
抗ＫＬＨ抗体の抑制
ＫＬＨチャレンジへの応答に対するＦＲ１０４の効果は、抗ＫＬＨ抗体の測定により評価された。抗ＫＬＨ抗体の生成は顕著に遅れ、並びにＦＲ１０４の投薬量を上昇させてもその程度は低かった。０．０２０ｍｇ／ｋｇの単回投薬後、抗ＫＬＨ抗体の生産の減少はＫＬＨ免疫後１５日ですでに可視的であり、２９日目でプラセボグループの平均５０％に達した。抗ＫＬＨ反応は最終観測日（８５日）まで、プラセボグループと比較してそのレベルが維持された。０．２００ｍｇ／ｋｇの単回投薬後、抗ＫＬＨ抗体の生成の平均減少量は、プラセボグループの応答と比較して１５日及び２９日で約８５％、並びに５７日及び８５日でそれぞれ７０％及び６０％であった。０．５００ｍｇ／ｋｇの単回投薬後、抗ＫＬＨ抗体の生成の平均減少量は１５日及び２９日に９０％以上、５７日及び８５日でそれぞれ約８０％及び７５％であった。最も高い投薬レベル（ＦＲ１０４  １．５００ｍｇ／ｋｇ）で、抗ＫＬＨ抗体の生成は実質的に５７日まで抑制された。８５日又は１１３日は、けれども、いくらかの反応（およそ７５％の減少）が記録された（図９）。
【０１１０】
免疫原性
パート１のコホートＡ（ＫＬＨ免疫なし）では、０人（０％）、２人（５０％）、３人（６０％）、及び１人（２０％）の被検者は、それぞれの０．００５ｍｇ／ｋｇ、０．０５０ｍｇ／ｋｇ、０．２００ｍｇ／ｋｇ、及び０．５００ｍｇ／ｋｇでのＦＲ１０４の注入後の最後の試料（８５日）でＦＲ１０４に対する抗体（ＡＤＡ）陽性として報告された。パート１コホートＢ（ＫＬＨ免疫）では、１人（２０％）、３人（６０．０％）、４人（８０．０％）及び２人（４０％）の被検者がＦＲ１０４をそれぞれ０．０２０ｍｇ／ｋｇ、０．２００ｍｇ／ｋｇ、０．５００ｍｇ／ｋｇ（８５日）及び１．５００ｍｇ／ｋｇ（１１３日）注入後の最終試料でＦＲ１０４に対する抗体を持っていた。パート２（繰り返し投薬）では、３被検者（６０％）が、０．２００ｍｇ／ｋｇ、及び０．５００ｍｇ／ｋｇの両方のＦＲ１０４注入後の最終試料（１１３日）でＦＲ１０４に対する抗体を持っていた。最も早い抗ＦＲ１０４抗体はパート１の２９日（コホートＡ及びＢ）並びにパート２の５７日から検出された。およそ半分のＡＤＡ＋被検者（１０／２２）は比較的低い力価（＜３０）であった。彼らはＡＥを誘導せず、サイトカインの放出もまた修飾しなかった。抗ＦＲ１０４抗体が、存在する場合、全ての被検者において血液中のＦＲ１０４の消失後にのみ現れたことを考慮すると、ＰＫに対する潜在的な影響についての結論は得られない。
【０１１１】
安全性
ＦＲ１０４  ０．５００ｍｇ／ｋｇの注入とならびにＫＬＨチャレンジ後に、研究者により研究薬とは関係しないと考えられたＳＡＥ腎結石症が報告された１人の被験者を除いて、死者はなく、そしてまたＳＡＥも研究の間に起きなかった。処置中に発生した有害事象（ＴＥＡＥ）による研究薬又は研究の継続ができなくなる被検者はいなかった。パート２の１人の被検者はＡＥである筋肉痛のための禁止薬物（イブプロフェン、パラセタモール及びトラマドール）を受けたためにＦＲ１０４  ０．５００ｍｇ／ｋｇ、２９日目の二度目の投薬を受けられなかった。被検者は研究から離脱せず、プロトコルどおりの全ての研究来診を完了した。全ての報告されたＴＥＡＥは軽度又は中程度の重症性であった（表１２）。研究者が治験薬に少なくとも関連している可能性があると考えたＴＥＡＥは、ＦＲ１０４注入後のＴＥＡＥを報告した10人の被検者のうちの5人で報告されプラセボ注入後の被検者のうちのいずれにも報告されなかった。ＦＲ１０４注入後に最も頻繁に報告されたＴＥＡＥは、背痛、頭痛、および嘔吐であった。ＦＲ１０４注入後の処置に関連した事象である可能性があるものは頭痛、嘔吐、アフタ性口内炎、口腔ヘルペス、口渇、悪心、鼻咽頭炎、疲労、歯肉炎、味覚不全、下痢、視力ぼけおよびインフルエンザ様の病気であった。
【０１１２】
研究臨床検査、ウイルス検査、バイタルサイン、酸素飽和度、並びにＥＣＧパラメータの中央値の臨床上関連する変化も一貫する変化も、いずれのボランティアにおいても、研究薬の投与後に測定されなかった。
【０１１３】
ベースライン後のＥＢＶウイルス量は陰性若しくは弱陽性（１人の被検者を除いて）の結果であり、ならびにベースライン後のＥＢＶカプシドＩｇＭ抗体は陰性若しくは研究中の全ての被検者であいまいな結果であった（図１０）。ＥＢＶカプシド及び核抗原ＩｇＧ抗体は全ての被検者で陽性であり（そのことが試験対象被検者基準に属しているため）、及びその基準線レベルで研究中維持された（データ未掲載）。２回のプラセボのＩＶ投薬をうけた１人の被験者は、１５日目に陽性ＥＢＶウイルス量の結果を示し、ウイルス量はｌｏｇ３．８３ＩＵ／ｍであった。この値は、例えば、移植場面では、臨床的に懸念されるほど高いと考えられる。次の２９日の時点では、試験は陰性であった。その後の評価は、４３日目は陰性で、５７日目では２．７ｌｏｇＩＵ／ｍウイルス量を有する陽性で、８５日は陰性で並びに１１３日は２．５以下のｌｏｇＩＵ／ｍウイルス量の陽性であった。
【０１１４】
研究の間、４５０ｍｓ以上のＱＴｃＦ間隔、及び基準線からの３０ｍｓ以上のＱＴｃＦ変化はプラセボ注入及びＫＬＨチャレンジ後のコホートＢの１人の被検者で報告された。パート２では、１人の被検者は０．２００ｍｇ／ｋｇのＦＲ１０４の注入後４５０ｍｓ以上のＱＴｃＦ間隔が報告され、１人の被検者は０．２００ｍｇ／ｋｇのＦＲ１０４の注入後に基準線からの６０ｍｓ以上のＱＴｃＦ変化を、並びに１人及び３人の被検者はそれぞれ０．２００ｍｇ／ｋｇ及び０．５００ｍｇ／ｋｇのＦＲ１０４の注入後に基準線から３０ｍｓ以上のＱＴｃＦ変化が報告された。臨床上の重大なバイタルサイン、脈動酸素測定又はＥＣＧ異常はパート１（コホートＡ及びＢ）並びにパート２では観測されなかった。
【０１１５】
コホートＡの２被検者並びにパート２の３被検者を除き研究の間に身体検査の異常は報告されなかった。これら５人の被検者について、異常は臨床上重大であると考えられ、コホートＡでは鼻咽頭炎、及び結膜炎が、パート２では上気道感染症、筋肉痛、及び痛風が観察されてＴＥＡＥとして報告された。：
【０１１６】
【表１２】
2018538309.tif 000016
【０１１７】
考察
この試験はＦＲ１０４ヒト化ペグ化Ｆａｂ’ｓ抗体断片であるＣＤ２８のアンタゴニストのヒトに対する初めての投薬である。ＦＲ１０４は全ての投薬量で十分に許容され、最も一般的に処置中に発生したＡＥは頭痛であった。ＦＲ１０４の投薬はサイトカイン放出症候群ともＴ細胞の活性化とも関連しなかった。ＣＤ２８を標的にするための抗ＣＤ２８モノクローナル抗体（ＴＧＮ１４１２（Suntharalingam et al）、ＦＫ７３４（Shiao et al））を用いた以前の試みでは、サイトカインの放出が誘導されることによって臨床開発は困難となった。ＦＲ１０４はこのような困難とは関係ないので、この一価のアンタゴニスト抗体を用いるＣＤ２８の標的化は、共刺激の阻害のための魅力的な治療戦略のままである。
【０１１８】
ヒトの血清中のサイトカインの評価は、反復投薬後でさえ、いずれの用量のＦＲ１０４のアゴニスト活性もスーパーアゴニスト活性も完全に欠失していることを証明した。ベースライン、又はＦＲ１０４の投与後（図７）に記録した何人かの被検者中の背景又は背景に近いレベルのＩＦＮｇ、ＴＮＦａ及びＩＬ−８は、ＴＧＮ１４１２の投与後に測定したレベル（これら２つのサイトカインについて５０００ｐｇ／ｍｌでピークに達するもの（Suntharalingam et al））よりはるかに低い。抗薬物抗体（ＡＤＡ）は、存在する場合、ほとんどの被検者において、血漿からＦＲ１０４の除去後初めて明白になった。それゆえ、ＰＫ及びＰＤパラメーター並びに特にサイトカインに対するＡＤＡの効果を評価することは難しい。１人の被検者では、けれども、ＡＤＡはＣＤ２８  ＲＯがまだ測定できた間に明白になる（パート２、０．２ｍｇ/ｋｇのＭＡＤ）。この被検者ではサイトカイン放出もなかった。このことは、ＦＲ１０４が、ＡＤＡ存在下でＩｇＧ形態の抗ＣＤ２８抗体のアゴニスト特性を再現しないという臨床前の観測を支持する。注目すべきは、比較的高い頻度で発生するＦＲ１０４の免疫原性は、認可された生物製剤のシムジア登録商標（セルトリズマブ  ペゴル）、ペグ化Ｆａｂ’抗体断片並びにレミケード及びヒュミラ；（シムジア  臨床薬理学ＢＬＡ  １２５１６０／０）のようないくつか他の生物製剤で報告された範囲と似ている。ＦＲ１０４は総リンパ球数もリンパ球サブセットを変えなかった。Ｔ細胞表現型もまた改変されなかった。ＣＤ２８がまた標的組織への刺激を受けたＴ細胞の移動を調整し得る事を考えると、これらのデータはサイトカインの放出の欠如並びに標的のＴ細胞の活性化の欠如と合わせてＦＲ１０４の純粋なアンタゴニスト活性を補強する。
【０１１９】
ＦＲ１０４のＰＫは０．２００ｍｇ／ｋｇ以上の投薬でほぼ線形と考えられる。ｔ1/2及びＡＵＣinf並び関連するパラメーターのわずかなばらつきのみが同じ投薬量のグループ（ＳＡＤ及びＭＡＤ）の間で観測された。
【０１２０】
参考文献
【０１２１】
Bowen, M., Armstrong, N., and Maa, Y.-F. (2012). Investigating high-concentration monoclonal antibody powder suspension in nonaqueous suspension vehicles for subcutaneous injection. J. Pharm. Sci. 101, 4433-4443.
Findlay L, Eastwood D, Stebbings R, Sharp G, Mistry Y, Ball C, et al. Improved in vitro methods to predict the in vivo toxicity in man of therapeutic monoclonal antibodies including TGN1412. J Immunol Methods. 2010;352:1-12. 
Haanstra KG., Dijkman K., Bashir N., et al. Selective Blockade of CD28-Mediated T Cell Costimulation Protects Rhesus Monkeys against Acute Fatal Experimental Autoimmune Encephalomyelitis. J Immunol. 2015 Jan 14. pii: 1402563. [Epub ahead of print].
Haley PJ. Small molecule immunomodulatory drugs: challenges and approaches for balancing efficacy with toxicity. Toxicol Pathol. 2012;40(2):261-266.
Jackisch, C., Muller, V., Maintz, C., Hell, S., and Ataseven, B. (2014). Subcutaneous Administration of Monoclonal Antibodies in Oncology. Geburtshilfe Frauenheilkd. 74, 343-349.
Kean L. et al, T cell Costimulation Blockade in Transplantation. Oral communication at the Nantes Actualites Transplantation Meeting, June 5-6, 2014, Nantes, France
Melichar, B., Studentova, H., Kalabova, H., and Vitaskova, D. (2014). Role of subcutaneous formulation of trastuzumab in the treatment of patients with HER2-positive breast cancer. Immunotherapy 6, 811-819.
Ohresser M, Olive D, Vanhove B, Watier H. Risk in drug trials. Lancet. 2006 368(9554):2205-6. 
Poirier, N., Dilek, N., Mary, C., et al. FR104, an Antagonist Anti-CD28 Monovalent Fab' Antibody, Prevents Alloimmunization and Allows Calcineurin Inhibitor Minimization in Nonhuman Primate Renal Allograft. Am J Transplant. 2015 (1):88-100.
Poirier, N., Mary, C., Dilek, N. et al. Preclinical efficacy and immunological safety of FR104, an antagonist anti-CD28 monovalent Fab' antibody. Am J Transplant. 2012 (10):2630-40. 
Poirier, N., Mary, C., Le Bas-Bernadet, S., N. et al. Advantages of Papio anubis for preclinical testing of immunotoxicity of candidate therapeutic antagonist antibodies targeting CD28. MAbs. 2014 (3):697-707. 
Shiao SL, McNiff JM, Masunaga T, Tamura K, Kubo K, and Pober JS. Immunomodulatory properties of FK734, a humanized anti-CD28 monoclonal antibody with agonistic and antagonistic activities. Transplantation. 2007;83(3):304-13.
Shpilberg, O., and Jackisch, C. (2013). Subcutaneous administration of rituximab (MabThera) and trastuzumab (Herceptin) using hyaluronidase. Br. J. Cancer 109, 1556-1561.
Stebbings R, Findlay L, Edwards C, Eastwood D, Bird C, North D, et al. 'Cytokine storm' in the phase I trial of monoclonal antibody TGN1412: better understanding the causes to improve pre-clinical testing of immunotherapeutics. J Immunol. 2007;179:3325-3331. 
Suntharalingam G, Perry MR, Ward S, Brett SJ, Castello-Cortes A, Brunner MD, and Panoskaltsis N. Cytokine storm in a phase 1 trial of the anti-CD28 monoclonal antibody TGN1412. N Engl J Med. 2006;355(10):1018-28.
Vierboom et al., Clinical efficacy of a new CD28-targeting antagonist of T cell co-stimulation in a non-human primate model of collagen-induced arthritis. Clin Exp Immunol. 2015.
Weinblatt, M.E., Schiff, M., Valente, R., van der Heijde, D., Citera, G., Zhao, C., Maldonado, M., and Fleischmann, R. (2013). Head-to-head comparison of subcutaneous abatacept versus adalimumab for rheumatoid arthritis: findings of a phase IIIb, multinational, prospective, randomized study. Arthritis Rheum. 65, 28-38.
【図１Ａ】
2018538309.tif 000017
【図１Ｂ】
2018538309.tif 000018
【図２Ａ】
2018538309.tif 000019
【図２Ｂ】
2018538309.tif 000020
【図３】
2018538309.tif 000021
【図４】
2018538309.tif 000022
【図５Ａ】
2018538309.tif 000023
【図５Ｂ】
2018538309.tif 000024
【図６】
2018538309.tif 000025
【図７】
2018538309.tif 000026
【図８Ａ】
2018538309.tif 000027
【図８Ｂ】
2018538309.tif 000028
【図９】
2018538309.tif 000029
【図１０】
2018538309.tif 000030
【配列表】
2018538309000001.app
【国際調査報告】
2018538309.tif 000031
2018538309.tif 000032
2018538309.tif 000033
2018538309.tif 000034