(57)【要約】  本発明は、マラリアを予防または治療する薬剤の製造における、トリアゾロピリミジン誘導体の使用に関する。特に本発明は、マラリア寄生虫の増殖を阻害する医薬製剤の調製に有用な、トリアゾロピリミジン誘導体に関する。
2018509437.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（Ｉ）で表されるトリアゾロピリミジン誘導体：
【化１】
2018509437.tif 000015
（式中、Ｒ１はハロゲンおよびＨから選択され、Ｒ２はＦおよびＣ１〜Ｃ４アルキルから選択される）
およびそのいずれかの薬剤的に許容される塩、水和物、溶媒和物、多形体、互変異性体、幾何異性体、または光学活性異性体。
【請求項２】
Ｒ１がＨである、請求項１に記載のトリアゾロピリミジン誘導体。
【請求項３】
Ｒ１がＦである、請求項１に記載のトリアゾロピリミジン誘導体。
【請求項４】
Ｒ２がＣＨ３である、請求項１〜３のいずれか一項に記載のトリアゾロピリミジン誘導体。
【請求項５】
Ｒ２がＦである、請求項１〜３のいずれか一項に記載のトリアゾロピリミジン誘導体。
【請求項６】
以下の群：
２−（１，１−ジフルオロエチル）−５−メチル−Ｎ−（６−（トリフルオロメチル）ピリジン−３−イル）−［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−７−アミン；
２−（１，１−ジフルオロエチル）−６−フルオロ−５−メチル−Ｎ−（６−（トリフルオロメチル）ピリジン−３−イル）−［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−７−アミン；および
５−メチル−２−（トリフルオロメチル）−Ｎ−（６−（トリフルオロメチル）ピリジン−３−イル）−［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−７−アミン、
その薬剤的に許容される塩、水和物、溶媒和物、多形体、互変異性体、幾何異性体、または光学活性異性体から選択される、請求項１〜５のいずれか一項に記載のトリアゾロピリミジン誘導体。
【請求項７】
２−（１，１−ジフルオロエチル）−５−メチル−Ｎ−（６−（トリフルオロメチル）ピリジン−３−イル）−［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−７−アミン、その薬剤的に許容される塩、水和物、溶媒和物、多形体、互変異性体、幾何異性体、または光学活性異性体である、請求項１に記載のトリアゾロピリミジン誘導体。
【請求項８】
薬剤として使用するための、請求項１〜６のいずれか一項に記載のトリアゾロピリミジン誘導体。
【請求項９】
少なくとも１つの、請求項１〜６のいずれか一項に記載のトリアゾロピリミジン誘導体またはその薬剤的に許容される塩、およびその薬剤的に許容される担体、希釈剤、または賦形剤を含む医薬組成物。
【請求項１０】
抗マラリア性の共薬剤をさらに含む、請求項９に記載の医薬組成物。
【請求項１１】
前記共薬剤が、アルテミシニン、すなわちアルテミシニンおよびその誘導体（例えばアーテメータまたはジヒドロアルテミシニン）、クロロキン、キニーネ、メフロキン、アモジアキン、アトバコン／プログアニル、ドキシサイクリン、ルメファントリン、ピペラキン、ピロナリジン、ハロファントリン、ピリメタミン−スルファドキシン、プリマキン、キナクリン、ドキシサイクリン、アトバコン、プログアニル塩酸塩、ピペラキン、フェロキン、タフェノキン、アーテロレーン、スピロ［３Ｈ−インドール−３，１’−［１Ｈ］ピリド［３，４−ｂ］インドール］−２（１Ｈ）−オン、５，７’−ジクロロ−６’−フルオロ−２’，３’，４’，９’−テトラヒドロ−３’−メチル−（１’Ｒ，３’Ｓ）−］（ＣＡＳ登録番号：１１９３３１４−２３−６）、硫黄、［４−［［２−（１，１−ジフルオロエチル）−５−メチル［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−７−イル］アミノ］フェニル］ペンタフルオロ−］（ＣＡＳ登録番号：１２８２０４１−９４−４）、モルホリン、４−［２−（４−シス−ジスピロ［シクロヘキサン−１，３’−［１，２，４］トリオキソラン−５’，２’’−トリシクロ［３．３．１．１３，７］デカン］−４−イルフェノキシ）エチル］−］（ＣＡＳ登録番号：１０２９９３９−８６−３）、［３，３’−ビピリジン］−２−アミン、５−［４−（メチルスルホニル）フェニル］−６’−（トリフルオロメチル）−（ＣＡＳ登録番号：１３１４８８３−１１−８）、エタノン、２−アミノ−１−［２−（４−フルオロフェニル）−３−［（４−フルオロフェニル）アミノ］−５，６−ジヒドロイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−７（８Ｈ）−イル］−（ＣＡＳ登録番号：１２６１１０９−９０−３）から選択される、請求項１０に記載の医薬組成物。
【請求項１２】
マラリアの予防または治療に使用するための、請求項１〜６のいずれか一項に記載のトリアゾロピリミジン誘導体。
【請求項１３】
以下のとおり、式（５ｂ）のトリアゾロピリミジンを、５−アミノ−２−トリフルオロメチルピリジンの存在下に反応させる工程を含んでなる、Ｒ１がＦで、Ｒ２がＣＨ３である式（Ｉ）の化合物を調製するための方法。
【化２】
2018509437.tif 000016
【請求項１４】
以下のとおり、式（４ｂ）のトリアゾロピリミジンを、ＰＯＣｌ３の存在下に反応させて式（５ｂ）の中間体を導く工程を含んでなる、Ｒ１がＦで、Ｒ２がＣＨ３である式（Ｉ）の化合物を調製するための方法。
【化３】
2018509437.tif 000017
【請求項１５】
２−（１，１−ジフルオロエチル）−６−フルオロ−５−メチル−［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−７−オールである中間体。
【請求項１６】
７−クロロ−２−（１，１−ジフルオロエチル）−６−フルオロ−５−メチル−［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリミジンである中間体。
【請求項１７】
患者におけるマラリアを予防および／または治療するための方法であって、請求項１〜６のいずれか一項に記載の誘導体またはその医薬製剤を、それを必要とする患者に投与することを含んでなる、方法。
【請求項１８】
前記誘導体が抗マラリア性の共薬剤と組み合わせて投与される、請求項１７に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、新規抗マラリア薬に関する。本発明は特に、マラリアを予防または治療する医薬製剤の調製に有用な薬剤、ならびにそれを使用および製造するための方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
マラリアは、赤血球に感染してこれを破壊するプラスモジウム属の寄生原虫類により引き起こされる。マラリアによって発熱、重度の貧血、および脳マラリアが誘導され、治療しない場合には死に至る。サハラ以南のアフリカでは熱帯熱マラリア原虫が主要な種であり、これによって毎年約６０万人が死亡している。アフリカではこの疾病のために５歳未満の子供や妊婦が最も重篤な被害を受けている。全世界におけるマラリアの影響のうちの２５〜４０％は三日熱マラリア原虫が原因であり、特に南アジアおよび東南アジア、ならびに中央アメリカおよび南アメリカで顕著である。ヒトへの感染が知られているその他の主要な種としては、卵形マラリア原虫、二日熱マラリア原虫および四日熱マラリア原虫の３種が挙げられる。
【０００３】
マラリアは多くの発展途上国で流行する疾病である。全世界の人口のおおよそ４０％はこの疾病が風土病とされる国に在住しており、毎年おおよそ２億４７００万人がこれに罹患している。
【０００４】
今日、マラリアの治療にはさまざまな薬物が用いられているが、これらの多くは高価であり、幾つかはヒトに対して著しい毒性および望ましくない副作用を呈する。マラリアの治療に使用される薬物としては、アルテミシニンおよびその誘導体（例えばアーテメータまたはジヒドロアルテミシニン）、クロロキン、キニーネ、メフロキン、アモジアキン、アトバコン／プログアニル、ドキシサイクリン、ルメファントリン、ピペラキン、ピロナリジン、ハロファントリン、ピリメタミン−スルファドキシン、プリマキン、キナクリン、ドキシサイクリン、アトバコン、プログアニル塩酸塩、ピペラキン、フェロキン、タフェノキン、アーテロレーン、スピロ［３Ｈ−インドール−３，１’−［１Ｈ］ピリド［３，４−ｂ］インドール］−２（１Ｈ）−オン、５，７’−ジクロロ−６’−フルオロ−２’，３’，４’，９’−テトラヒドロ−３’−メチル−（１’Ｒ，３’Ｓ）−］（ＣＡＳ登録番号：１１９３３１４−２３−６）、硫黄、［４−［［２−（１，１−ジフルオロエチル）−５−メチル［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−７−イル］アミノ］フェニル］ペンタフルオロ−］（ＣＡＳ登録番号：１２８２０４１−９４−４）、モルホリン、および４−［２−（４−シス−ジスピロ［シクロヘキサン−１，３’−［１，２，４］トリオキソラン−５’，２’’−トリシクロ［３．３．１．１３，７］デカン］−４−イルフェノキシ）エチル］−］（ＣＡＳ登録番号：１０２９９３９−８６−３）が挙げられる。
【０００５】
しかし、多くの熱帯国では薬剤耐性のマラリア寄生虫が広範に出現しており、今日用いられている多くの化学療法の効果が損なわれていることから、新規な化学療法によるアプローチが必要とされている。
【０００６】
熱帯熱マラリア原虫は、感染した雌ハマダラカの刺咬によってヒトに伝染する。ヒトにおいて、この寄生虫は、肝細胞での無性生殖による増殖を１サイクル行った後、赤血球への感染と数サイクルの増殖を行う。肝細胞ステージで無症状であった場合、赤血球ステージでは宿主赤血球が破壊されて貧血を起こし、治療しなければ死に至る。プリン代謝は、薬剤開発の標的として大いに期待されるものである。
【０００７】
プラスモジウム属の寄生虫は外来性のピリミジンを代謝できず、ｄｅ  ｎｏｖｏのピリミジン生合成に完全に依存することで、ＤＮＡおよびＲＮＡ合成の前駆体を提供して増殖することが、長い間認識されてきた。この寄生虫はピリミジンのヌクレオシドまたは塩基のサルベージ経路をもたないため、寄生虫の生存にはｄｅ  ｎｏｖｏ経路の酵素が必須である。対照的に哺乳類細胞は、これら必須の代謝産物に対する代替ルートを提供するサルベージ経路を有する。
【０００８】
ジヒドロオロト酸脱水素酵素（ＤＨＯＤＨ）は、ピリミジンサルベージ経路に必須の酵素であり、多くの研究によって、マラリアに対する新規化学療法の開発の重要な標的であることが示唆されている。ＤＨＯＤＨは、ｄｅ  ｎｏｖｏでのピリミジン生合成に必須の段階である、ジヒドロオロト酸からオロト酸へのフラビンモノヌクレオチド（ＦＭＮ）依存性の酸化を触媒する、フラビン依存性のミトコンドリア酵素である。ヒトおよびマラリア共に、ＤＨＯＤＨはミトコンドリア酵素であるが、Ｘ線構造解析により、全体的な折りたたみはよく保存されているものの、ＣｏＱの推定結合部位は種の間で変動することが示されている。レフルノミドの活性代謝物である、ヒトＤＨＯＤＨの阻害剤（ＨｓＤＨＯＤＨ）（テリフルノミド（Ａ７７  １７２６）は、関節リウマチおよび多発性硬化症の治療のための使用が承認されており、またヒト酵素へ強力に結合する化合物（例えばブレキナルおよびＣ４１）、または様々な微生物種由来のＤＨＯＤＨを選択的に阻害する化合物など、多くの化合物について記載されていることは、ＤＨＯＤＨが新薬開発の標的であることを示している（Ｍｉｌｌｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，２０１３，Ｎａｔ．Ｍｅｄ．，１９，１５６−６７；Ｍｕｎｉｅｒ−Ｌｅｈｍａｎｎ  ｅｔ  ａｌ．，２０１３，Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．，５６，３１４８−３１６７；Ｐｈｉｌｌｉｐｓ  ｅｔ  ａｌ．，２０１０，Ｉｎｆｅｃｔ．Ｄｉｓｏｒｄ．Ｄｒｕｇ  Ｔａｒｇｅｔｓ，１０，２２６−２３９）。同様の活性によってｉｎ  ｖｉｔｒｏでの寄生虫の増殖を阻害する、トリアゾロピリミジンおよびイミダゾ［１，２−ａ］ピリミジンを基にした、熱帯熱マラリア原虫のジヒドロオロト酸脱水素酵素の阻害剤が開発されてきた（Ｐｈｉｌｉｐｓ  ｅｔ  ａｌ．，２００８，Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．，５１，３６４９−３６５３；Ｍａｒｗａｈａ  ｅｔ  ａｌ．，２０１２，Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．，５５，７４２５−７４３６；国際公開公報第２０１１０４１３０４号；Ｄｅｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，２０１４，Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．，５７，５３８１−５３９４；Ｃｏｔｅｒｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，２０１１，Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．，５４，５５４０−５５６１）。
【０００９】
現行の治療法による、現在の薬剤耐性問題を克服する抗マラリア薬もまた必要とされている。さらに、マラリアＤＨＯＤＨを選択的に阻害するが、哺乳類、特にヒトＤＨＯＤＨに対しては実質的な毒性を示さない抗マラリア薬が必要とされている。
【００１０】
したがって本発明は、新規かつ強力な抗マラリア薬、およびこの新規かつ強力な抗マラリア薬を用いたマラリア治療の方法論を提供する。本発明はまた、熱帯熱マラリア原虫ジヒドロオロト酸脱水素酵素の選択的阻害剤であり、クロロキン感受性および抵抗性のマラリア株に対する活性を有する、強力な抗マラリア薬も提供する。
【発明の概要】
【００１１】
本発明は、トリアゾロピリミジンが、哺乳類のＤＨＯＤＨを超えてプラスモジウム属のＤＨＯＤＨを阻害する改良された選択性、および改良された溶解性を示す一方で、長いｉｎ  ｖｉｖｏ半減期を示すという予想外の知見に関する。
【００１２】
本発明は、マラリアの治療および／または予防に有用な新規トリアゾロピリミジン誘導体、その医薬製剤、使用、および製造に関する。
【００１３】
本発明の第１の態様は、本発明に従った新規トリアゾロピリミジン誘導体またはその薬剤的に許容される塩を提供する。
【００１４】
本発明の第２の態様は、薬剤として使用するための、本発明による新規トリアゾロピリミジン誘導体またはその薬剤的に許容される塩に関する。
【００１５】
本発明の第３の態様は、マラリアを予防および／または治療する医薬組成物を調製するための、本発明による新規トリアゾロピリミジン誘導体またはその薬剤的に許容される塩の使用に関する。
【００１６】
本発明の第４の態様は、少なくとも１つの本発明による新規トリアゾロピリミジン誘導体またはその薬剤的に許容される塩、およびそれらの薬剤的に許容される担体、希釈剤、または賦形剤を含む医薬製剤に帰する。
【００１７】
本発明の第５の態様は、マラリアの予防および／または治療に使用するための、本発明による新規トリアゾロピリミジン誘導体またはその薬剤的に許容される塩に関する。
【００１８】
本発明の第６の態様は、患者のマラリアを予防および／または治療するための方法に帰する。この方法は、本発明による新規トリアゾロピリミジン誘導体またはその薬剤的に許容される塩を、それを必要とする患者に投与することを含む。
【００１９】
本発明の第７の態様は、本発明による新規トリアゾロピリミジン誘導体または本発明に従ったその薬剤的に許容される塩、およびそれらの中間体を調製するための方法を提供する。
【００２０】
本発明の第８の態様は、本発明によるトリアゾロピリミジン誘導体合成の中間体を提供する。
【００２１】
本発明の第９の態様は、細胞の寄生虫感染を不活性化するための方法を提供し、この方法は、細胞と、本発明による少なくとも１つの化合物の有効量とを接触させる工程を含む。
【発明を実施するための形態】
【００２２】
以下の段落では、本発明による化合物を形成する様々な化学成分の定義を説明するが、これらがより広範な意味をもつことが明確に示されない限り、これらの定義は明細書および請求項を通して一律に適用されることが意図される。
【００２３】
用語「薬剤的に許容される塩または錯体」は、本発明による化合物の塩または錯体を指す。このような塩の例としては、本発明のトリアゾロピリミジン誘導体と、例えばアルカリ金属（ナトリウム、カリウム、またはリチウム）およびアルカリ土類金属（例えば、カルシウムまたはマグネシウム）からなる群より選択される金属カチオンの水酸化物、炭酸塩、もしくは炭酸水素塩のような有機または無機塩基との反応によって形成される塩基付加塩が挙げられるが、これらに限定されない。
【００２４】
また、無機酸（例えば塩酸、臭化水素酸、硫酸、リン酸、および硝酸など）から形成される酸付加塩、および酢酸、シュウ酸、酒石酸、コハク酸、リンゴ酸、フマル酸、マレイン酸、アスコルビン酸、安息香酸、ベンゼンスルホン酸、メタンスルホン酸、タンニン酸、パモ酸、アルギン酸、ポリグルタミン酸、ナフタレンスルホン酸、ナフタレンジスルホン酸、およびポリガラクツロン酸などのような有機酸から形成される塩も含まれる。
【００２５】
「薬剤的に活性のある誘導体」は、レシピエントへの投与によって、本明細書に開示する活性を直接的または間接的に提供できるいずれかの化合物を指す。用語「間接的」は、内在性の酵素または代謝によって活性型の薬物に変換され得るプロドラッグも包含する。プロドラッグは、化学的または代謝的に分解可能な基を有し、抗マラリア活性を呈する本発明に従った化合物の誘導体であり、かつ生理的な条件でのｉｎ  ｖｉｖｏにおける加溶媒分解によって、薬学的に活性のある、本発明による化合物に変換され得る化合物である。プロドラッグは、生体内の生理的な条件での酵素や胃酸などとの反応、例えばそれぞれが酵素作用による、酸化、還元、加水分解などによって本発明による化合物に変換される。これらの化合物は、公知の方法によって本発明の化合物から調製できる。
【００２６】
用語「間接的」は、本発明による化合物の代謝物も包含する。
【００２７】
用語「代謝物」は、細胞または生物、好ましくは哺乳類において、本発明によるいずれかの化合物に由来する全ての分子を指す。
【００２８】
用語「マラリア」は、プラスモジウム属による感染に関連する疾病および状態を含む。
【００２９】
本明細書で用いられる「治療」および「治療する」等は、一般に所望の薬理学的および生理的効果を得ることを意味する。この効果は疾病、その症状もしくは状態を阻止するかまたは部分的に阻止する点から予防的であってよく、かつ／または疾病、疾病に起因する状態、症状、もしくは有害作用の部分的または完全な治癒の点から治療的であってもよい。本明細書で用いられる「治療」との用語は、哺乳類、特にヒトの疾病のいずれの治療も網羅し、かつ（ａ）疾病にかかりやすい可能性があるが、まだそうであるとは診断されていない被験体の疾病を発生から予防すること；（ｂ）疾病を阻害すること、すなわちその進行を抑止すること；または疾病を軽減すること、すなわち疾病および／またはその症状もしくは状態を退行させることを包含する。
【００３０】
用語「有効量」は、「予防に有効な量」および「治療に有効な量」を含み、併用の場合には用いられる部分量を指してもよい。
【００３１】
用語「予防に有効な量」は、感染前、すなわちマラリア寄生虫への曝露前、曝露中、および／または曝露直後に投与することで、マラリア寄生虫による疾病を阻害するかもしくはこの疾病へのかかりやすさを減少させるか、またはマラリア感染を予防するかもしくはマラリア寄生虫による疾病の遅延した発症を予防するために有効な、本発明の化合物の濃度を指す。
【００３２】
用語「予防」は、原因の予防、すなわち寄生虫による前赤血球期の進行の予防を含む抗マラリア活性、抑制的予防、すなわち血中期における感染の進行を抑制することを含む抗マラリア活性、および最終的予防、すなわち、肝内期における感染の進行を抑制することを含む抗マラリア活性を含む。この用語は、マラリア寄生虫への曝露前、曝露中、および／または曝露期間の後に抗マラリア化合物が投与される初期予防（すなわち、初期感染を予防すること）、およびマラリア寄生虫への曝露の終了時まで、および／または曝露期間の少し後ではあるが、臨床症状の出現前に抗マラリア化合物を投与した際の最終的予防（すなわち、マラリアの臨床症状の再発または遅延した発生を予防するため）を含む。典型的には、熱帯熱マラリア原虫感染に対しては抑制的予防が用いられるが、三日熱マラリア原虫に対して、または熱帯熱マラリア原虫と三日熱マラリア原虫の組み合わせに対しては最終的予防が用いられる。一実施形態において、マラリア寄生虫は熱帯熱マラリア原虫および三日熱マラリア原虫である。
【００３３】
同様に、用語「治療に有効な量」は、マラリア感染の治療に有効な化合物の濃度を指し、例えば感染発生後にこの量を投与すると、顕微鏡試験で血中の寄生虫数の減少が観察される。
【００３４】
本明細書で用いられる用語「被験体」は哺乳類を指す。例えば、本発明が意図する哺乳類にはヒトなどが含まれる。
【００３５】
化合物
一つの実施形態において、式（Ｉ）：
【化１】
2018509437.tif 000003
（式中、Ｒ１はＦのようなハロゲンおよびＨから選択され、Ｒ２はＦおよびメチルのようなＣ１〜Ｃ４アルキルから選択される）
により表されるトリアゾロピリミジン誘導体、およびそのいずれかの薬剤的に許容される塩、水和物、溶媒和物、多形体、互変異性体、幾何異性体、または光学活性異性体が提供される。
【００３６】
特定の実施形態において、本発明は、Ｒ１がＨである、本発明によるトリアゾロピリミジン誘導体を提供する。
【００３７】
特定の実施形態において、本発明は、Ｒ１がＦである、本発明によるトリアゾロピリミジン誘導体を提供する。
【００３８】
特定の実施形態において、本発明は、Ｒ２がＣＨ３である、本発明によるトリアゾロピリミジン誘導体を提供する。
【００３９】
特定の実施形態において、本発明は、Ｒ２がＦである、本発明によるトリアゾロピリミジン誘導体を提供する。
【００４０】
特定の実施形態において、以下の群：
２−（１，１−ジフルオロエチル）−５−メチル−Ｎ−（６−（トリフルオロメチル）ピリジン−３−イル）−［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−７−アミン；
２−（１，１−ジフルオロエチル）−６−フルオロ−５−メチル−Ｎ−（６−（トリフルオロメチル）ピリジン−３−イル）−［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−７−アミン；および
５−メチル−２−（トリフルオロメチル）−Ｎ−（６−（トリフルオロメチル）ピリジン−３−イル）−［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−７−アミンから選択されるトリアゾロピリミジン誘導体；ならびにその薬剤的に許容される塩、水和物、溶媒和物、多形体、互変異性体、幾何異性体、または光学活性異性体が提供される。
【００４１】
マラリアを予防または治療する薬剤の製造に用いられるトリアゾロピリミジン誘導体は、マラリア寄生虫を死滅させるか、および／またはマラリア寄生虫の複製を阻害できるか、および／または伝染を遮断できる。
【００４２】
組成物
本発明は、マラリアの予防および／または治療に有用な医薬組成物を提供する。本発明はさらに、マラリアを患う哺乳類患者、最も好ましくはヒト患者を治療する方法を提供する。
【００４３】
別の特定の実施形態において、本発明による少なくとも１つの誘導体、およびその薬剤的に許容される担体、希釈剤、または賦形剤を含有する医薬製剤が提供される。
【００４４】
別の特定の実施形態において、式（Ｉ）で表されるトリアゾロピリミジン、および詳細な説明において定義された抗マラリア薬を含む医薬製剤が提供される。
【００４５】
本発明の医薬組成物は、本発明の１以上の化合物を、本明細書に記載されるいずれかの形態で含有してよい。本発明の組成物は、１以上の薬剤的に許容される追加成分、例えばミョウバン、安定剤、抗菌剤、緩衝液、着色料、香味料、補助剤などをさらに含有してよい。
【００４６】
本発明の化合物は、従来用いられる補助剤、担体、希釈剤、または賦形剤と共に医薬組成物の形態およびその単位剤形へと調製してよく、そのような形態としては、経口用として錠剤もしくは充填したカプセルのような固形剤、または溶液、懸濁液、エマルション、エリキシル剤のような液剤、もしくはそれらを充填したカプセルが用いられてよく、または非経口（皮下を含む）用として注射用無菌溶液が用いられてよい。このような医薬組成物およびその単位剤形は、成分を従来の比率で、追加の有効化合物または成分と共に、またはそれらなしで含んでよく、このような単位剤形は、使用が意図された投与量に相応の範囲内にあるいずれかの適切な有効量の有効成分を含有してよい。本発明による組成物は、好ましくは経口用である。
【００４７】
本発明の組成物は、限定はされないが、水性または油性懸濁液、溶液、エマルション、シロップ、およびエリキシル剤のような液体製剤であってよい。経口投与に適した液体剤形には、緩衝液、懸濁剤および調剤、着色剤、香味料などを含む適切な水性または非水性ビヒクルが含まれてよい。組成物はまた、使用前に水またはその他の適切なビヒクルで再構成する乾燥製剤として処方されてもよい。このような液体製剤は、限定はされないが、懸濁剤、乳化剤、非水性ビヒクル、および保存料のような添加物を含有してもよい。懸濁剤としては、ソルビトールシロップ、メチルセルロース、グルコース／糖シロップ、ゼラチン、ヒドロキシエチルセルロース、カルボキシメチルセルロース、ステアリン酸アルミニウムゲル、および食用水素化油脂が挙げられるが、これらに限定されない。乳化剤としては、レシチン、ソルビタンモノオレエート、およびアカシアが挙げられるが、これらに限定されない。非水性ビヒクルとしては、食用油、アーモンド油、分留ココナッツ油、油状エステル、プロピレングリコール、およびエチルアルコールが挙げられるが、これらに限定されない。保存料としては、ｐ−ヒドロキシ安息香酸メチルまたはプロピル、およびソルビン酸が挙げられるが、これらに限定されない。さらなる材料および加工技術などについては、参照により本明細書に組み込まれるＴｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ（Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ＆  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ），２２ｎｄ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，２０１２，Ｌｌｏｙｄ，Ｅｄ．Ａｌｌｅｎ，Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｐｒｅｓｓに記載されている。
【００４８】
本発明の固形組成物は、従来の方法で処方された錠剤または舐剤の形態であってよい。例えば経口投与のための錠剤およびカプセルは、限定はされないが、結合剤、注入剤、潤滑剤、崩壊剤、および湿潤剤のような従来の賦形剤を含有してよい。結合剤としては、シロップ、アカシア、ゼラチン、ソルビトール、トラガカント、デンプン糊、およびポリビニルピロリドンが挙げられるが、これらに限定されない。注入剤としては、ラクトース、糖、結晶セルロース、トウモロコシデンプン、リン酸カルシウム、およびソルビトールが挙げられるが、これらに限定されない。潤滑剤としては、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸、タルク、ポリエチレングリコール、およびシリカが挙げられるが、これらに限定されない。崩壊剤としては、ジャガイモデンプンおよびデンプングリコール酸ナトリウムが挙げられるが、これらに限定されない。湿潤剤としてはラウリル硫酸ナトリウムが挙げられるが、これに限定されない。錠剤は、当該技術分野において公知の方法によってコーティングされてよい。
【００４９】
注射用組成物は、典型的には注射用の無菌生理食塩水もしくはリン酸緩衝食塩水、または当該技術分野において公知であるその他の注射用担体に基づくものである。
【００５０】
本発明の組成物は坐薬として処方されてもよく、この坐薬は、限定はされないがココアバターまたはグリセリドのような坐薬用基剤を含有してよい。また本発明の組成物は吸入用に処方されてもよく、この場合には溶液、懸濁液、もしくは乾燥粉末として投与されてもよいエマルションの形態、またはジクロロジフルオロメタンもしくはトリクロロフルオロメタンのような噴霧剤を用いたエアロゾルの形態であってよいが、これらに限定されない。さらに本発明の組成物は、限定はされないがクリーム、軟膏、ローション、ペースト、薬用硬膏、パッチ、または膜のような、水性もしくは非水性のビヒクルを含む経皮製剤として処方されてもよい。
【００５１】
本発明の組成物は、限定はされないが、注射または持続点滴のような非経口投与用に処方されてもよい。注射用製剤は、油性もしくは水性ビヒクル中の懸濁液、溶液、またはエマルションの形態であってよく、限定はされないが、懸濁剤、安定剤、および分散剤のような製剤用の薬剤を含有してよい。組成物は、限定はされないが、発熱物質を含まない無菌水のような適切なビヒクルによって再構成される散剤の形態で提供されてもよい。
【００５２】
本発明の組成物は、移植または筋肉内注射によって投与され得るデポ製剤として処方されてもよい。組成物は、適切な高分子材料もしくは疎水性材料（例えば許容される油中のエマルションとして）、イオン交換樹脂、または難溶性の誘導体（例えば難溶性の塩として）と共に処方されてよい。
【００５３】
本発明の組成物は、リポソーム製剤として処方されてもよい。リポソーム製剤はリポソームを含んでよく、このリポソームは対象の細胞または角質層を貫通して細胞膜と融合し、リポソームの内容物を細胞内へ送達する。その他の適切な製剤としては、ニオソームを用いることができる。ニオソームは、大部分が非イオン性脂質から構成される膜を有するリポソームに類似した脂質小胞であり、その幾つかの形態は、角質層を通した化合物の輸送に有効である。
【００５４】
本発明の化合物は、持続放出剤形として、または持続放出薬物送達系から投与されてよい。代表的な持続放出材料は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ内に組み込まれた資料にも記載されている。
【００５５】
投与方法
本発明の組成物は、限定はされないが、経口、非経口、経直腸、またはそれらの組み合わせのようないずれの方法によって投与されてもよい。非経口投与としては、静脈内、動脈内、腹腔内、皮下、筋肉内、包膜内、および関節内投与が挙げられるが、これらに限定されない。本発明の組成物は、滴下速度を遅く調節した静脈内点滴と同様に組成物の徐放を可能にする、植込錠の形態によって投与されてもよい。好ましい実施形態において、本発明によるトリアゾロピリミジン誘導体は経口的に投与される。
【００５６】
特定の実施形態において、本発明の化合物は、約１ｍｇないし１５００ｍｇ、例えば約２５〜７５０ｍｇ、例えば約８０ないし約１７０ｍｇ、例えば約５０ｍｇの用量としてヒトに投与される。さらなる特定の実施形態において、本発明の化合物は、５００ｍｇ未満の用量として投与される。
【００５７】
本発明を以下の実施例によりさらに説明するが、この実施例は本発明の範囲をどのようにも限定することを意図したものではない。
【００５８】
単回または複数回用量で個体に投与される投与量は、薬物動態特性、患者の状態および特性（性別、年齢、体重、健康状態、および大きさ）、症状の程度、併用の治療法、治療頻度、および所望の効果のような様々な因子によって異なり得る。
【００５９】
本発明の組成物は、細胞の寄生虫感染を不活性化するための方法であって、細胞と、本発明による少なくとも１つの化合物の有効量とを接触させる工程を含む方法に用いられてもよい。特定の態様によれば、細胞は赤血球のような霊長類の細胞であり、例えばヒト細胞である。
【００６０】
併用
本発明によれば、本発明のトリアゾロピリミジン誘導体およびその医薬製剤は、単独で、またはマラリアの治療に有用な共薬剤、例えば限定はされないが、アルテミシニン、すなわちアルテミシニンおよびその誘導体（例えばアーテメータまたはジヒドロアルテミシニン）、クロロキン、キニーネ、メフロキン、アモジアキン、アトバコン／プログアニル、ドキシサイクリン、ルメファントリン、ピペラキン、ピロナリジン、ハロファントリン、ピリメタミン−スルファドキシン、プリマキン、キナクリン、ドキシサイクリン、アトバコン、プログアニル塩酸塩、ピペラキン、フェロキン、タフェノキン、アーテロレーン、スピロ［３Ｈ−インドール−３，１’−［１Ｈ］ピリド［３，４−ｂ］インドール］−２（１Ｈ）−オン、５，７’−ジクロロ−６’−フルオロ−２’，３’，４’，９’−テトラヒドロ−３’−メチル−（１’Ｒ，３’Ｓ）−］（ＣＡＳ登録番号：１１９３３１４−２３−６）、硫黄、［４−［［２−（１，１−ジフルオロエチル）−５−メチル［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−７−イル］アミノ］フェニル］ペンタフルオロ−］（ＣＡＳ登録番号：１２８２０４１−９４−４）、モルホリン、４−［２−（４−シス−ジスピロ［シクロヘキサン−１，３’−［１，２，４］トリオキソラン−５’，２’’−トリシクロ［３．３．１．１３，７］デカン］−４−イルフェノキシ）エチル］−］（ＣＡＳ登録番号：１０２９９３９−８６−３）、［３，３’−ビピリジン］−２−アミン、５−［４−（メチルスルホニル）フェニル］−６’−（トリフルオロメチル）−（ＣＡＳ登録番号：１３１４８８３−１１−８）、エタノン、２−アミノ−１−［２−（４−フルオロフェニル）−３−［（４−フルオロフェニル）アミノ］−５，６−ジヒドロイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−７（８Ｈ）−イル］−（ＣＡＳ登録番号：１２６１１０９−９０−３）を含む共薬剤のような、マラリアの治療および／または予防に有用な物質と組み合わせて投与できる。
【００６１】
本発明は、本発明によるトリアゾロピリミジン誘導体またはその医薬製剤の投与を包含し、ここで有効量のトリアゾロピリミジン誘導体またはその医薬製剤は、その他の治療法またはマラリアの治療に有用な共薬剤に先立ち、それらと同時に、またはそれらと連続的に個体へ投与される（例えば複数の薬物による治療法）。前記共薬剤と同時に投与されるトリアゾロピリミジン誘導体またはその医薬製剤は、同一かまたは異なる組成物として、同一かまたは異なる投与経路によって投与できる。
【００６２】
患者
一つの実施形態において、本発明にあって患者はマラリア患者である。
【００６３】
別の実施形態において、本発明にあって患者はプラスモジウム属に感染する危険性の高い患者である。
【００６４】
別の実施形態において、本発明にあって患者は熱帯熱マラリア原虫に感染する危険性の高い患者である。
【００６５】
別の実施形態において、本発明にあって患者は三日熱マラリア原虫に感染する危険性の高い患者である。
【００６６】
調製方法
本発明における一つの実施形態において、Ｒ１がＦで、Ｒ２がＣＨ３である式（Ｉ）の化合物を調製するための方法が提供され、この方法は、以下に示すように、式（５ｂ）のトリアゾロピリミジンを、５−アミノ−２−トリフルオロメチルピリジンの存在下に反応させる工程を含む。
【化２】
2018509437.tif 000004
【００６７】
本発明における別の実施形態において、Ｒ１がＦで、Ｒ２がＣＨ３である式（Ｉ）の化合物を調製するための方法が提供され、この方法は、以下に示すように、式（４ｂ）のトリアゾロピリミジンを、ＰＯＣｌ３の存在下に反応させて式（５ｂ）の中間体を導く工程を含む。
【化３】
2018509437.tif 000005
【００６８】
別の実施形態において、式（Ｉ）の化合物を調製するための中間体が提供され、この中間体は２−（１，１−ジフルオロエチル）−６−フルオロ−５−メチル−［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−７−オールである。
【００６９】
別の実施形態において、式（Ｉ）の化合物を調製するための中間体が提供され、この中間体は７−クロロ−２−（１，１−ジフルオロエチル）−６−フルオロ−５−メチル−［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリミジンである。
【００７０】
本発明による使用
一実施形態において、本発明は、マラリアを治療または予防する医薬組成物を調製するための、本明細書に記載する式（Ｉ）により表されるトリアゾロピリミジン誘導体、およびその薬剤的に許容される塩、水和物、溶媒和物、多形体、互変異性体、幾何異性体、または光学活性体の使用を提供する。
【００７１】
別の実施形態において、本発明は、患者におけるマラリアを予防または治療するための方法を提供する。この方法は、本発明によるトリアゾロピリミジン誘導体、またはその薬剤的に許容される塩もしくは薬剤的に活性のある誘導体、またはそれらの医薬製剤の有効量を、それを必要とする患者に投与することを含む。
【００７２】
別の実施形態において、本発明は、マラリアの治療または予防に用いるための、本発明によるトリアゾロピリミジン誘導体、同様にその薬剤的に許容される塩もしくは薬剤的に活性のある誘導体、またはそれらの医薬製剤を提供する。
【００７３】
別の実施形態において、本発明は、本発明によるトリアゾロピリミジン誘導体または方法の使用を提供し、この方法では、トリアゾロピリミジン誘導体がマラリアの治療に有用な共薬剤と組み合わせて投与される。
【００７４】
別の実施形態において、本発明は、本発明によるトリアゾロピリミジン誘導体をマラリアの治療に有用な共薬剤と組み合わせて含む医薬組成物を提供する。
【００７５】
本明細書に引用される参考文献は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。本明細書に記載した特定の実施形態は本発明の個別の態様の一例として意図されたものであり、本発明はこれらの実施形態の範囲に限定されるものではなく、機能的に等価な方法および構成要素も本発明の範囲内にある。実際に本明細書の提示および記載に加え、本発明の様々な改変が、前述の記述から当業者には明らかとなるであろう。このような改変は、添付の請求項の範囲内にあることが意図される。以下、本発明を幾つかの実施例によって説明するが、これらの実施例によって本発明の範囲が限定されると考えてはならない。
【実施例】
【００７６】
次の略語はそれぞれ以下のように定義される：
ＡＣＮ（アセトニトリル）、ＣｏＱ（補酵素Ｑ）、ＤＣＩＰ（２，６−ジクロロインドフェノール）、ＤＭＳＯ（ジメチルスルホキシド）、ＨＣＴ（ヘマトクリット）、ＨＥＰＥＳ（４−（２−ヒドロキシエチル）−１−ピペラジンエタンスルホン酸）、ＮＭＲ（核磁気共鳴）、ＮＯＤ（非肥満糖尿病性）、ＰＢＳ（リン酸緩衝液硫酸塩）、ＲＰＭＩ（ロズウェルパーク記念研究所）、ＳＣＩＤ（重症易感染性免疫不全）、ＵＶ（紫外線）。
【００７７】
本発明の化合物は、ＣｈｅｍＤｒａｗ（登録商標）７．０プログラムにおいて用いられるＩＵＰＡＣ標準に従って命名された。以下の実施例において示すＭＳおよびＮＭＲのデータは下記のようにして得た。その合成について記載していないすべての試薬および中間体は、一般的な販売元から購入した。
【００７８】
化学的一般方法
すべての試薬および出発物質は販売業者から購入し、さらに精製することなく使用した。アセト酢酸エチル（１ａ）および２−フルオロアセト酢酸エチル（１ｂ）は、Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ、ミズーリ州、米国、から購入した。塩酸アミノグアニジン（２）は、ＴＣＩ  ｃｈｅｍｉｃａｌｓ、オレゴン州、米国、から購入した。２，２−ジフルオロプロピオン酸エチルは、Ｏａｋｗｏｏｄ  Ｐｒｏｄｕｃｔｓ，Ｉｎｃ．，サウスカロライナ州、米国、から購入した。５−アミノ−２−トリフルオロメチルピリジンは、Ｃｏｍｂｉ−Ｂｌｏｃｋｓ，Ｉｎｃ．，カリフォルニア州、米国、から購入した。化合物１および化合物２については、プレロードしたシリカゲル６０  Ｆ２５４プレート上で行った薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）によって、反応の進行をモニターした。ＵＶ光およびヨウ素蒸気によって可視化を行った。他に記載の無い限り、フラッシュクロマトグラフィーは、固定相として予め充填されたＴｅｌｅｄｙｎｅ  Ｉｓｃｏ  Ｒｅｄｉｓｅｐ（商標）Ｒｆシリカゲルカラム、および溶離液として分析グレードの溶媒を用いて行った。１Ｈ核磁気共鳴（ＮＭＲ）スペクトルは、Ａｖａｎｃｅ（商標）３０１  Ｂｒｕｋｅｒ装置を、周囲温度で３００．１０ＭＨｚにて操作することによって記録した。化学シフトは百万分率（δ）で表し、結合定数はＨｚで表した。１Ｈ  ＮＭＲスペクトルは、残存溶媒のピークを内部標準として参照した（ＣＤＣｌ３については７．２６ｐｐｍ、ＤＭＳＯ−ｄ６については２．５０ｐｐｍ、およびＣＤ３ＯＤについては３．３４ｐｐｍ）。スピン多重度は、ｓ（一重項）、ｂｒｓ（ブロード一重項）、ｄ（二重項）、ｔ（三重項）およびｍ（多重項）として記載する。エレクトロスプレー陽性および陰性イオン化（ＥＳ＋／ＥＳ−）についての全イオン流記録を、Ｂｒｕｋｅｒ  Ｅｓｑｕｉｒｅ液体クロマトグラフ−イオントラップ質量分析計によって取得した。ＬＣ／ＭＳ分析に用いた分析クロマトグラフの条件は以下のとおりである：カラム、Ａｇｉｌｅｎｔ  ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓから購入したＺｏｒｂａｘ（商標）Ｅｘｔｅｎｄ  Ｃ１８、２．１×１００ｍｍ。固定相の粒径は３．５μＭ。溶媒は、Ａ、水性溶媒＝水＋５％アセトニトリル＋１％酢酸；Ｂ、有機溶媒＝アセトニトリル＋１％酢酸；方法、ランタイム１４分（０〜１０分  ２０〜１００％  Ｂ、流速−０．２７５ｍＬ／分；１０〜１２分  １００％  Ｂ、流速−０．３５０ｍＬ／分；１２〜１２．５０分  １００〜２０％  Ｂ、流速−０．３５０ｍＬ／分；１２．５０〜１４．０分  ２０％  Ｂ、流速−０．３５０ｍＬ／分）。以下の追加パラメータを用いた：注入量（１０μＬ）、カラム温度（３０℃）、ＵＶ波長範囲（２５４〜３３０ｎｍ）。他に記載の無い限り、上記の分析方法によって試験したすべての化合物の純度は＞９５％であった。分析ＨＰＬＣによる分析は、ＳｕｐｅｌｃｏＳＩＬ（商標）ＬＣ１８カラム（５μｍ、４．６ｍｍ×２５ｃｍ）を用い、流速１ｍＬ／分にて、０〜１００％の範囲のＡＣＮを用いた２７分にわたる直線勾配溶出によって、Ｓｕｐｅｌｃｏ  ＳｕｐｅｌｃｏＳＩＬ（商標）ＬＣ１８カラム（５μｍ、４．６ｍｍ×２５ｃｍ）において行った。試験したすべての化合物の純度は＞９５％であった。
【００７９】
化合物３についても、試薬および出発物質は同様に市販品を購入し、同様の分析法および基準を用いた。化合物１の別の最終工程、および化合物３について、１Ｈ  ＮＭＲに用いたＮＭＲ分光計は、４００．３１ＭＨｚにおいて操作するＡｖａｎｃｅ（商標）ＩＩＩ  Ｂｒｕｋｅｒ装置であり、液体クロマトグラフィーマススペクトロメトリーには、質量検出器を備えたＡｇｉｌｅｎｔ  ＬＣＭＳシステムを用いた。
【００８０】
実施例１：本発明による化合物の合成
トリアゾロピリミジン誘導体は、容易に入手可能な出発物質から、当業者に公知の方法および手順を用いて調製できる。典型的であるか、または好ましい実験条件（すなわち反応温度、時間、試薬のモル数、溶媒など）の説明については、他に記載のない限り、その他の実験条件も用いてよいことが理解されるであろう。至適な反応条件は特定の反応物または使用する溶媒によって異なり得るが、当業者はこのような条件を日常的な最適化手順を用いて決定できる。本発明の表題化合物を、一般的な合成経路である以下のスキーム１の記載に従って合成した。
【化４】
2018509437.tif 000006
試薬および条件：ｉ）ａ）ＮａＯＨ、ＥｔＯＨ、室温にて３時間；（または）ｂ）ＮａＯＥｔ、ＥｔＯＨ、還流５時間、室温にて一晩；ｉｉ）適切なジフルオロエステル、例えば２，２−ジフルオロプロピオン酸エチル、ＮａＯＥｔ、還流４時間；ｉｉｉ）ＰＯＣｌ３中で還流、１時間；ｉｖ）５−アミノ−２−トリフルオロメチルピリジン、ＥｔＯＨ、５〜８時間、室温または５０℃。
【００８１】
２−（１，１−ジフルオロエチル）−５−メチル−Ｎ−（６−（トリフルオロメチル）ピリジン−３−イル）−［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−７−アミン（化合物（１））
【化５】
2018509437.tif 000007
本発明の表題化合物を、上記のスキーム１の記載に従って合成した。同じ反応条件下で、中間体１ではＲ１がＨ（１ａ）、中間体３ではＲ１がＨ（３ａ）、中間体４ではＲ１がＨ、およびＲ２がＣＨ３（４ａ）、中間体５でも同様である（５ａ）。
【００８２】
化合物（３ａ）
水４０ｍｌ中の塩酸アミノグアニジン（２）溶液（１１．０５ｇ、９９．９５ｍｍｏｌ）に、水１０ｍｌ中の水酸化ナトリウム溶液（８ｇ、２００ｍｍｏｌ）と、エタノール１５ｍｌ中のアセト酢酸エチル（１ａ）溶液（１８．９ｍｌ、１５０ｍｍｏｌ）を、激しく撹拌しながら連続的に滴下添加した。この混合液を３時間撹拌した。得られた沈殿物を濾過し、減圧下で乾燥させて、中間体３ａである２，３−ジアミノ−６−メチル−４（３Ｈ）−ピリミジノンを得た後、これを精製することなく次の工程で用いた。あるいは、化合物３ａは次のように取得することもできる。ナトリウム（９．１９ｇ、４００ｍｍｏｌ）およびエタノール（３５０ｍＬ）から調製したＮａＯＥｔ溶液中に塩酸アミノグアニジン（２）（４４．２ｇ、４００ｍｍｏｌ）を加え、反応物を５０℃で３０分間加熱した。次に、反応物を濾過してＮａＣｌを除去し、濾液にアセト酢酸エチル（１ａ）（２５．２９ｍｌ、２００ｍｍｏｌ）を加えて、反応混合物を５時間加熱還流した後、室温にて一晩撹拌した。得られた沈殿物を濾過し、減圧下で乾燥させて、中間体３ａである２，３−ジアミノ−６−メチル−４（３Ｈ）−ピリミジノンを得た。
【００８３】
化合物（４ａ）
ナトリウム（３．３ｇ、１４３ｍｍｏｌ）およびエタノール（１５０ｍＬ）から調製したＮａＯＥｔ溶液中に、中間体３ａ（１０．０ｇ、７１．４ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を８０℃にて３０分間加熱した。次に、反応混合物を室温まで冷却し、２，２−ジフルオロプロパン酸エチル（１０．８ｍｌ、８５．６８ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を室温にて３０分間撹拌した後、８０℃に３時間加熱した。反応混合物を濃縮乾固させた後、水（２００ｍＬ）を加えた。反応混合物に２Ｎ  ＨＣｌ水溶液を加えてｐＨを４に調整すると、白色の固体が沈殿した。この固体を濾別して、水で洗浄した後、減圧下で乾燥させて２−（１，１−ジフルオロエチル）−５−メチル−［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−７−オール（４ａ）を得た：１ＨＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）：δｐｐｍ：１３．４３（ｂｒｓ，１Ｈ），５．９２（ｓ，１Ｈ），２．３３（ｓ，３Ｈ），２．０８（ｔ，Ｊ＝１９．２Ｈｚ，３Ｈ）．ＥＳＩＭＳｍ／ｚ：２１５（ＭＨ）＋。
【００８４】
化合物（５ａ）
中間体４ａ（０．２５ｇ、１．１７ｍｍｏｌ）のオキシ塩化リン（０．３３ｍｌ、３．５ｍｍｏｌ）懸濁液を、１時間加熱還流した。反応混合液を氷水中に滴下添加し、固体Ｎａ２ＣＯ３によって中和した後、産物をＤＣＭによって抽出した。合わせた有機層をブラインによって洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させた。真空中で溶媒を除去して褐色の油状物を得た後、シリカゲルを用いたフラッシュクロマトグラフィーによってこれを精製し、ヘキサン：ＥｔＯＡｃの混合液によって溶出して、７−クロロ−２−（１，１−ジフルオロエチル）−５−メチル［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリミジン（５ａ）を得た。１ＨＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ（ｐｐｍ）：７．１７（ｓ，１Ｈ），２．７５（ｓ，３Ｈ），２．１８（ｔ，Ｊ＝１８．７Ｈｚ，３Ｈ）．ＥＳＩＭＳｍ／ｚ２３３（ＭＨ）＋。
【００８５】
化合物１
中間体５ａ（０．２３ｇ、１ｍｍｏｌ）のエタノール（５ｍＬ）懸濁液に、５−アミノ−２−トリフルオロメチルピリジン（０．１６ｇ、１ｍｍｏｌ）を加え、混合物を室温または５０℃にて反応が完了するまで撹拌した。７Ｎアンモニアメタノール溶液（５０μｌ）を加え、真空中で溶媒を除去して、未精製の混合物をフラッシュクロマトグラフィー（シリカゲル、７５：２５から２５：７５％のヘキサン：ＥｔＯＡｃ混合液を用いて溶出）によって精製して、表題化合物１である２−（１，１−ジフルオロエチル）−５−メチル−Ｎ−（６−（トリフルオロメチル）ピリジン−３−イル）−［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−７−アミンを得た。１ＨＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）δ（ｐｐｍ）：８．８６（ｓ，１Ｈ），８．１７（ｄ，Ｊ＝８．２Ｈｚ，１Ｈ），７．９６（ｄ，Ｊ＝８．５Ｈｚ，１Ｈ），６．７５（ｓ，１Ｈ），２．５７（ｓ，３Ｈ），２．１６（ｔ，Ｊ＝１８．８５Ｈｚ，３Ｈ）．ＥＳＩＭＳｍ／ｚ：３５９．４（ＭＨ）＋。
【００８６】
化合物１の別の最終工程を、以下のスキーム２に詳述する。
【化６】
2018509437.tif 000008
上記に従って得た７−クロロ−２−（１，１−ジフルオロエチル）−５−メチル−［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリミジン（３．０ｇ、０．０１３ｍｏｌ）の１，４−ジオキサン溶液（３０ｍＬ）を撹拌し、６−（トリフルオロメチル）ピリジン−３−アミン（２．１ｇ、０．１３ｍｏｌ）を加え、それに続いてＫＩ（０．４２ｇ、０．００２ｍｏｌ）を加えた。反応混合物を８０℃に１２時間加熱した。反応完了後、反応混合物を減圧下で濃縮し、未精製の産物を酢酸エチルに溶解させ、１０％  ＮａＨＣＯ３溶液、水、ブラインによって洗浄した後、無水Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させた。減圧下で溶媒を除去して未精製産物を得た後、これをカラムクロマトグラフィーによって精製して、純粋な２−（１，１−ジフルオロエチル）−５−メチル−Ｎ−（６−（トリフルオロメチル）ピリジン−３−イル）−［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−７−アミン（化合物１）を得た（３．２ｇ、収率６９％）。ＬＣＭＳ（ｍ／ｚ）：３５９．２（Ｍ＋）。１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）：δ８．８４（ｓ，１Ｈ），８．１６（ｄ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，１Ｈ），７．９４（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，１Ｈ），６．７４（ｓ，１Ｈ，ＮＨ），２．５５（ｓ，３Ｈ），２．１５（ｔ，Ｊ＝１８．８Ｈｚ，３Ｈ）。
【００８７】
２−（１，１−ジフルオロエチル）−６−フルオロ−５−メチル−Ｎ−（６−（トリフルオロメチル）ピリジン−３−イル）−［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−７−アミン（化合物（２））
【化７】
2018509437.tif 000009
本発明の表題化合物を、上記のスキーム１の記載に従って合成した。同じ反応条件下で、中間体１ではＲ１がＦ（１ｂ）、中間体３ではＲ１がＦ（３ｂ）、中間体４ではＲ１がＦ、およびＲ２がＣＨ３（４ｂ）、中間体５でも同様である（５ａ）。
【００８８】
化合物（３ｂ）
水４０ｍｌ中の塩酸アミノグアニジン（２）溶液（１１．０５ｇ、９９．９５ｍｍｏｌ）に、水１０ｍｌ中の水酸化ナトリウム溶液（８ｇ、２００ｍｍｏｌ）と、エタノール１５ｍｌ中の２−フルオロアセト酢酸エチル（１ｂ）溶液（１８．８ｍｌ、１５０ｍｍｏｌ）を、激しく撹拌しながら連続的に滴下添加した。この混合液を３時間撹拌した。得られた沈殿物を濾過し、減圧下で乾燥させて、中間体である２，３−ジアミノ−５−フルオロ−６−メチル−４（３Ｈ）−ピリミジノン（３ｂ）を得た後、これを精製することなく次の工程で用いた。あるいは、化合物３ｂは次のように作製した。ナトリウム（９．１９ｇ、４００ｍｍｏｌ）およびエタノール（３５０ｍＬ）から調製したＮａＯＥｔ溶液中に塩酸アミノグアニジン（２）（４４．２ｇ、４００ｍｍｏｌ）を加え、反応物を５０℃で３０分間加熱した。次に、反応物を濾過してＮａＣｌを除去し、濾液に２−フルオロアセト酢酸エチル（１ｂ）（２５ｍｌ、２００ｍｍｏｌ）を加えて、反応混合物を５時間加熱還流した後、室温にて一晩撹拌した。得られた沈殿物を濾過し、減圧下で乾燥させて、中間体である２，３−ジアミノ−５−フルオロ−６−メチル−４（３Ｈ）−ピリミジノン（３ｂ）を得た。
【００８９】
化合物（４ｂ）
ナトリウム（３．３ｇ、１４３ｍｍｏｌ）およびエタノール（１５０ｍＬ）から調製したＮａＯＥｔ溶液中に、中間体３ｂ（１１．２８ｇ、７１．４ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を８０℃にて３０分間加熱した。次に、反応混合物を室温まで冷却し、２，２−ジフルオロプロパン酸エチル（１０．８ｍｌ、８５．６８ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を室温にて３０分間撹拌した後、８０℃にて３時間加熱した。反応混合物を濃縮乾固させた後、水（２００ｍＬ）を加えた。反応混合物に２Ｎ  ＨＣｌ水溶液を加えてｐＨを４に調整すると、白色の固体が沈殿した。この固体を濾別して、水で洗浄した後、減圧下で乾燥させて、中間体である２−（１，１−ジフルオロエチル）−６−フルオロ−５−メチル−［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−７−オール（４ｂ）を得た：１ＨＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）δ（ｐｐｍ）：２．６３（ｄ，Ｊ＝３．７２Ｈｚ，３Ｈ），２．２６（ｔ，Ｊ＝１９．０７Ｈｚ，３Ｈ）．ＥＳＩＭＳｍ／ｚ：２３３．４（ＭＨ）＋。
【００９０】
化合物５ｂ
中間体４ｂ（０．２７ｇ、１．１７ｍｍｏｌ）のオキシ塩化リン（０．３３ｍｌ、３．５ｍｍｏｌ）懸濁液を、１時間加熱還流した。反応混合液を氷水中に滴下添加し、固体Ｎａ２ＣＯ３によって中和した後、産物をＤＣＭによって抽出した。合わせた有機層をブラインによって洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させた。真空中で溶媒を除去して褐色の油状物を得た後、シリカゲルを用いたフラッシュクロマトグラフィーによってこれを精製し、ヘキサン：ＥｔＯＡｃの混合液によって溶出して、７−クロロ−２−（１，１−ジフルオロエチル）−６−フルオロ−５−メチル−［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリミジン（５ｂ）を得た。１ＨＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δｐｐｍ：２．６０（ｄ，Ｊ＝３．８Ｈｚ，３Ｈ），２．１０（ｔ，Ｊ＝１９Ｈｚ，３Ｈ），ＥＳＩＭＳｍ／ｚ：２５１．３（ＭＨ）＋。
【００９１】
化合物２
中間体５ｂ（０．２５ｇ、１ｍｍｏｌ）のエタノール（５ｍＬ）懸濁液に、５−アミノ−２−トリフルオロメチルピリジン（０．１６ｇ、１ｍｍｏｌ）を加え、混合物を室温または５０℃にて反応が完了するまで撹拌した。７Ｎアンモニアメタノール溶液（５０μｌ）を加え、真空中で溶媒を除去して、未精製の混合物をフラッシュクロマトグラフィー（シリカゲル、７５：２５から２５：７５％のヘキサン：ＥｔＯＡｃ混合液を用いて溶出）によって精製して、化合物２である６−フルオロ−２−（１，１−ジフルオロエチル）−Ｎ−（６−（トリフルオロメチル）ピリジン−３−イル）−５−メチル−［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−７−アミンを得た。１ＨＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ（ｐｐｍ）：８．６９（ｓ，１Ｈ），７．８３（ｂｒｓ，１Ｈ），７．８−７．６６（ｍ，２Ｈ），２．６５（ｄ，Ｊ＝３．８４Ｈｚ，３Ｈ），２．１４（ｔ，Ｊ＝１８．６８Ｈｚ，３Ｈ）．ＥＳＩＭＳｍ／ｚ：３７７．１（ＭＨ）＋。
【００９２】
５−メチル−２−（トリフルオロメチル）−Ｎ−（６−（トリフルオロメチル）ピリジン−３−イル）−［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−７−アミン（化合物（３））
【化８】
2018509437.tif 000010
本発明の表題化合物を、以下のスキーム３に例示する別の一般経路によって合成した。
【化９】
2018509437.tif 000011
【００９３】
工程１：重炭酸アミノグアニジン（６）（２．０ｇ、１５．０ｍｍｏｌ）およびトリフルオロ酢酸（１０ｍＬ）を、２５℃にて泡立ちがおさまるまで撹拌した。反応混合物にトルエンを加え、ディーン・スタークコンデンサーを用いて２０時間還流した。反応混合物を冷却し、固体沈殿物を濾別して乾燥させ、産物７である３−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−５−アミン（１．０ｇ、４５．４％）を得た。
【００９４】
工程２：酢酸（２０ｍＬ）中の産物７のスラリー（１．０ｇ、６．５ｍｍｏｌ）にアセト酢酸エチル（Ｉａ）（３．４ｇ、６．５ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を１２時間加熱還流した。反応混合物を２５℃に冷却し、減圧下で酢酸を除去した。未精製の化合物にジクロロメタンを加えて粉砕し、８である５−メチル−２−（トリフルオロメチル）−［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−７−オール（１．２ｇ、８５．１％）を得た。１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯＤ６＋Ｄ２０）：δ５．９４（ｓ，１Ｈ），２．３２（ｓ，３Ｈ）。
【００９５】
工程３：塩化ホスホリル（５ｍＬ）を８（０．３ｇ、１３．７ｍｍｏｌ）に加え、反応混合物を２時間加熱還流した。反応混合物を２５℃に冷却し、減圧下で塩化ホスホリルを除去した。破砕した氷の上で未精製の産物を急冷し、１０％  ＮａＨＣＯ３溶液によって中和した後、酢酸エチルによって抽出した（２×５ｍＬ）。合わせた有機層をブライン溶液によって洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、減圧下で濃縮した。１５〜２５％の石油エーテルおよび酢酸エチルを用いたカラムクロマトグラフィーによって未精製の産物を精製し、化合物５ｃである７−クロロ−５−メチル−２−（トリフルオロメチル）−［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリミジン（０．１７ｇ、５３．１％）を得た。１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ７．２７（ｓ，１Ｈ），２．７８（ｓ，３Ｈ）。
【００９６】
工程４：エタノール（６ｍＬ）中の５ｃの溶液（０．１ｇ、４．２ｍｍｏｌ）に５−アミノ−２−トリフルオロメチルピリジン（９）（０．０６８ｇ、４．２ｍｍｏｌ）を加え、得られた混合物を５０℃にて１時間加熱した。反応混合物を２５℃に冷却し、減圧下で溶媒を除去した。未精製の産物をジクロロメタンに溶解させ、１０％  ＮａＨＣＯ３溶液およびブライン溶液によって洗浄した。有機層をＮａ２ＳＯ４上で乾燥させ、濾過して濃縮した。２０〜４０％の石油エーテルおよび酢酸エチルを用いたカラムクロマトグラフィーによって未精製の産物を精製し、化合物３である５−メチル−２−（トリフルオロメチル）−Ｎ−（６−（トリフルオロメチル）ピリジン−３−イル）−［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−７−アミン（０．０６４ｇ、４２％）を得た。ＬＣ−ＭＳ  ＡＰＣＩ：Ｃ１３Ｈ８Ｆ６Ｎ６  ３６２．２４に対して算出；観察されたｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋は３６３．２。ＬＣ−ＭＳによる純度：９９．０５％。ＲＴ：２．５７。ＬＣＭＳ（ｍ／ｚ）：３６３．２（Ｍ＋）。１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＭｅＯＤ）：δ８．８６（ｓ，１Ｈ），８．１７（ｄ，Ｊ＝７．００Ｈｚ，１Ｈ），７．９７（ｄ，Ｊ＝８．４８Ｈｚ，１Ｈ），６．８１（ｓ，１Ｈ），２．５９（ｓ，３Ｈ）。
【００９７】
上記の合成方法が、本発明によるトリアゾロピリミジン誘導体および／または必要な中間体を得るために適用できない場合には、当業者に公知の適切な調製方法を用いるべきである。一般に、個々のいずれの誘導体に対する合成経路も、各分子の特異的な置換基および必要な中間体が準備されていることに依存し得るが、ここで再び、このような因子は当業者に理解されるものであることを述べておく。全ての保護および脱保護の方法については、Ｐｈｉｌｉｐ  Ｊ．Ｋｏｃｉｅｎｓｋｉ，“Ｐｒｏｔｅｃｔｉｎｇ  Ｇｒｏｕｐｓ”，Ｇｅｏｒｇ  Ｔｈｉｅｍｅ  Ｖｅｒｌａｇ  Ｓｔｕｔｔｇａｒｔ，２００５、およびＴｈｅｏｄｏｒａ  Ｗ．Ｇｒｅｅｎｅ  ａｎｄ  Ｐｅｔｅｒ  Ｇ．Ｍ．Ｗｕｔｓ“Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ  Ｇｒｏｕｐｓ  ｉｎ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ”，Ｗｉｌｅｙ  Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ，４ｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ  ２００６を参照されたい。本発明の化合物は、適切な溶媒を蒸発させる結晶化により、溶媒分子と結合させて分離できる。トリアゾロピリミジン誘導体の薬剤的に許容される酸付加塩は、従来法によって調製され得る。例えば、遊離塩基の溶液を、無希釈かまたは適切な溶液としての適切な酸で処理し、得られた塩を濾過または真空下での反応溶媒の蒸発によって分離してよい。薬剤的に許容される塩基付加塩は、トリアゾロピリミジン誘導体の溶液を適切な塩基で処理する類似の方法により得てよい。両タイプの塩を形成してよいか、またはイオン交換樹脂技術を用いて相互変換してもよい。
【００９８】
実施例２：本発明の化合物の抗マラリア活性
本発明によるトリアゾロピリミジン誘導体が、熱帯熱マラリア寄生虫を死滅させる能力および／またはその増殖を阻害する能力を、熱帯熱マラリア原虫の増殖を阻害するトリアゾロピリミジン誘導体の能力を通してアッセイする。増殖阻害アッセイは以下のとおりである：熱帯熱マラリア原虫３Ｄ７細胞を、２％（ｗ／ｖ）赤血球（ＲＢＣ）と、２０％ヒトＡ＋型血漿（Ｄｅｓｊａｒｄｉｎｓ  ｅｔ  ａｌ．，１９７９，Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂ  Ａｇｅｎｔｓ  Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ．１６，７１０−７１８）またはＧｉｂｃｏ−Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ  ０．５％  Ａｌｂｕｍａｘ  Ｉ（Ｃｏｔｅｒｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，２０１１，Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．，５４，５５４０−５５６１）のいずれかとを補充した、Ｇｉｂｃｏ−Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ  ＲＰＭＩ−１６４０中で増殖させた。化合物連続希釈のストックを１００％  ＤＭＳＯ中で最終濃度２００×にて調製した後、培地中で２０×ストックを作製した。細胞増殖を、記載に従い、ＳＹＢＲグリーン法によってモニターした（Ｄｅｎｇ，ｅｔ  ａｌ．，２０１４．Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．，５７，５３８１−５３９）。寄生虫（０．５％寄生虫血の０．１９ｍｌ、０．５％  ＨＣＴ）を、１０μＬの化合物またはＤＭＳＯ対照を含む９６ウェルマイクロタイタープレート内にまいた（ＤＭＳＯの最終濃度は０．５％）。寄生していないＲＢＣ（０．５％  ＨＣＴ）を対照として用いて、バックグラウンド蛍光を決定した。７２時間のインキュベーション後、寄生したＲＢＣをＳＹＢＲグリーン法によって定量化した。９６ウェルプレート内で、１×ＰＢＳ中の２×ＳＹＢＲグリーンＩ溶液（２０μＬ）を２０μＬの寄生虫と混合し、２０分間インキュベートした後、１６０μＬの１×ＰＢＳを加えた。ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ  Ａｃｕｒｒｉ  Ｃ６フローサイトメーターを用いて蛍光を検出し、赤血球内生活環にある熱帯熱マラリア原虫の、無性生殖による増殖段階のすべてを包含するゲート内のイベントを記録した。１ウェルあたり、最少で５０，０００の総イベントを記録した。寄生していないＲＢＣ対照から決定したバックグラウンドイベントを、最終カウントから差し引いた。各濃度点のデータを３通りに収集し、Ｇｒａｐｈ  Ｐａｄ  Ｐｒｉｓｍにおけるｌｏｇ［Ｉ］対反応−変数の勾配（４パラメータ）モデルにフィッティングさせて、５０％増殖阻害（ＥＤ５０）をもたらす阻害剤の濃度を決定した。
【００９９】
本発明の化合物はまた、表示する種の組換えＤＨＯＤＨに対する抑制活性についても評価した。組換え酵素を産生し、Ｅ．ｃｏｌｉからＨｉｓ６融合タンパク質として精製した後、これを記載に従ってＮｉ＋２−アガロースクロマトグラフィーにより精製した。阻害剤のＩＣ５０を決定するための定常状態速度論アッセイを、記載されるように、６００ｎｍ（ｅ＝１８．８ｍＭ−１ｃｍ−１）にて追跡される、ＣｏＱの最終酸化を２，６−ジクロロインドフェノール（ＤＣＩＰ）の還元に連関させた色素に基づくアッセイによって行った（Ｂａｌｄｗｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，２００２，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２７７，４１８２７−４１８３４およびＤｅｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，２０１４．Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．，５７，５３８１−５３９）。
【０１００】
９６ウェルプレートフォーマットのＳｙｎｅｒｇｙ  Ｈ１ハイブリッドプレートリーダーを用い、２８℃にて、２００μｌの最終アッセイ量によって、データを収集した。ＤＣＩＰのモル吸光係数を用い、速度データ（ｖ）をμモル数／分に変換した。ＤＭＳＯを用いて化合物の原液を調製した。最初に１００ｍＭのストックを調製し、これをＤＭＳＯ中での３倍連続希釈に用いた。アッセイミックス中で最終濃度となるように、アッセイ緩衝液中でＤＭＳＯストックの１：１００希釈を行った。
【０１０１】
アッセイ条件：ＤＨＯＤＨ（ＥＴ＝５〜１０ｎＭ）、基質（０．２ｍＭ  Ｌ−ジヒドロオロト酸および０．０２ｍＭ  ＣｏＱＤ）、ＤＣＩＰ（０．１２ｍＭ）およびアッセイ緩衝液（１００ｍＭ  ＨＥＰＥＳ、ｐＨ８．０、１５０ｍＭ  ＮａＣｌ、１０％グリセロール、０．１％  Ｔｒｉｔｏｎ）、２０℃にて行う。本発明の化合物の濃度を３倍連続希釈によって変化させた（０．０１〜１００μＭ）。すべてのデータは３通りに収集した。
【０１０２】
阻害剤を含まない対照に比較したパーセント阻害を決定し（ｖｉ／ｖｏ×１００）、データはｌｏｇ［Ｉ］対応答（３パラメータ）方程式である（Ｙ＝Ｂｏｔｔｏｍ＋（Ｔｏｐ−Ｂｏｔｔｏｍ）／（１＋１０＾（（Ｘ−ＬｏｇＩＣ５０））））にフィッティングさせるか、またはＩＣ５０＞１０μＭである本発明の化合物のデータについては標準ＩＣ５０方程式である（Ｙ＝Ｙｍａｘ／（１＋（Ｘ／ＩＣ５０）））にフィッティングさせた。フィッティングはＧｒａｐｈ  Ｐａｄ  Ｐｒｉｓｍにおいて行い、ＩＣ５０を決定した。報告したエラーはフィッティングの９５％信頼区間または平均の標準偏差を表す。３Ｄ７、ｐｆＤＨＯＤＨ、ヒトＤＨＯＤＨ（ｈ）、マウスＤＨＯＤＨ（ｍ）、ラットＤＨＯＤＨ（ｒ）およびイヌＤＨＯＤＨ（ｄ）に対する活性を以下の表１に示す。本発明の化合物の抗マラリア活性を、熱帯熱マラリア原虫に対して幾らかの抑制活性を示すと報告されている他のトリアゾロピリミジン（国際公開公報第２０１１／０４１３０４号）および密接に関連する構造をもつ幾つかの化合物と比較した。
【０１０３】
実施例３：本発明の化合物の水溶解度
比濁法によって水溶解度を推定した。ＤＭＳＯ中で濃縮原液を調製し、ｐＨ６．５  リン酸緩衝液または０．０１Ｍ  ＨＣｌ（約ｐＨ２．０）によって希釈して、ＤＭＳＯの最終濃度を１％にした。次に、以前の記載に従い、サンプルを比濁法によって分析して、溶解度の範囲を決定した（Ｂｅｖａｎ，ｅｔ  ａｌ．，２０００，Ａｎａｌ．Ｃｈｅｍ．，７２，１７８１−１７８７）。溶解度の結果を以下の表１に示す。
【０１０４】
【表１】
2018509437.tif 000012
【０１０５】
実施例４：本発明による化合物の、マラリアに対するｉｎ  ｖｉｖｏでの有効性
ＳＣＩＤマウスを用いた熱帯熱マラリア原虫モデルを用いて、本発明によるトリアゾロピリミジン誘導体のマラリアへの有効性をｉｎ  ｖｉｖｏで示した。簡単に述べると、記載に従ってヒト赤血球を移植したＮＯＤ−ｓｃｉｄ  ＩＬ−２Ｒγ欠損（ＮＳＧ）マウス（Ｊａｃｋｓｏｎ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ、米国）（２３〜３６ｇ）を、静脈内注射によって、ＧｌａｘｏＳｍｉｔｈｋｌｉｎｅ  Ｔｒｅｓ  Ｃａｎｔｏｓ（スペイン）において産生した２０×１０６の熱帯熱マラリア原虫  Ｐｆ３Ｄ７００８７／Ｎ９）に感染させた。ビヒクル中の化合物（クロロキンの生理食塩水溶液；トリアゾロピリミジン類似体に対しては、水中の０．５％ｗ／ｖ  カルボキシメチルセルロースナトリウム、０．５％ｖ／ｖ  ベンジルアルコール、０．４％ｖ／ｖ  Ｔｗｅｅｎ８０）を経口投与した。０．５ないし７５ｍｇ／ｋｇ（遊離塩基相当）の範囲である標的用量の化合物を、感染後３日目から投与開始した。処方濃度を測定して、実際の投与用量を得た。Ｊｉｍｅｎｅｚ−Ｄｉａｚ，２００９，Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌ  ａｇｅｎｔｓ  ａｎｄ  ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ，５３，４５３３−４５３６の記載に従い、フローサイトメトリーによって寄生虫血をモニターし、有効用量（ＥＤ９０）を算出した。本発明の幾つかの化合物の結果を以下の表２に示す。
【０１０６】
【表２】
2018509437.tif 000013
【０１０７】
結論としてこれらのデータは、本発明の化合物が、改良されたか、または良好な溶解性を有する一方で、ｉｎ  ｖｉｖｏでの有効性と、プラスモジウム酵素に対する、哺乳類酵素をしのぐ良好な選択性を保持することを示している。
【０１０８】
実施例５：本発明による化合物の、マラリアに対するｅｘ  ｖｉｖｏでの有効性
熱帯熱マラリア原虫および三日熱マラリア原虫株の間での比較的活性を評価するため、ティミカ（パプア、インドネシア）にて診療所に来診した患者から分離したプラスモジウム属を用いた、ｅｘ  ｖｉｖｏ寄生虫アッセイにおいて化合物を試験した。この地域の寄生虫は、クロロキンのような標準的な抗マラリア薬に対して耐性である。三日熱マラリア原虫はｉｎ  ｖｉｔｒｏで培養できないため、ｅｘ  ｖｉｖｏアッセイが、薬物感受性を評価するための唯一の方法である。この試験への動員に適するのは、２０００ないし８０，０００μｌ−１の寄生虫血を有する患者である。静脈穿刺によって血液を採取して、宿主の白血球細胞を除去し、ヘマトクリット血中の感染赤血球をｅｘ  ｖｉｖｏ試験に用いた。以前の記載に従って、薬物感受性を測定した（Ｒｕｓｓｅｌｌ  ｅｔ  ａｌ．，２００８，Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌ  Ａｇｅｎｔｓ  Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ．，５２，１０４０−１０４５；Ｍａｒｆｕｒｔ  ｅｔ  ａｌ．，２０１１，Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌ  Ａｇｅｎｔｓ  Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ．，５５，９６１−９６６；Ｍａｒｆｕｒｔ  ｅｔ  ａｌ．，２０１１，Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌ  Ａｇｅｎｔｓ  Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ．，５５，４４６１−４４６４）。簡単に述べると、ＲＰＭＩ  １６４０培地プラス１０％ＡＢ＋ヒト血清（熱帯熱マラリア原虫）またはマッコイ５Ａ培地プラス２０％ＡＢ＋ヒト血清（三日熱マラリア原虫）からなる、２％ヘマトクリット血混合物の２００μｌを、抗マラリア化合物の２倍連続希釈を含む、薬物を予め添加したプレートの各ウェルに加えた。キャンドルジャーを用い、寄生虫を３７℃にて３５〜５６時間成熟させた。薬物を含まない対照ウェルで、リングステージの寄生虫の４０％が、成熟したシゾントステージに達した時点で、インキュベーションを中止した。各ウェルに形成された厚い血液の膜を５％ギムザ液で３０分間染色した後、顕微鏡検査を行った。無性生殖段階の寄生虫２００あたりのシゾント数を決定し、対照ウェルに対して標準化した。データを非線形回帰（ＷｉｎＮｏｎＬｎ  ４．１）によって解析し、抑制性シグモイドＥｍａｘモデルを用いてＩＣ５０を決定した。このモデルでは、化合物１が、熱帯熱マラリア原虫および三日熱マラリア原虫の両方に対して同等の活性を示したが、参照４の化合物はそうではなかったため、三日熱マラリア原虫の治療には高用量を必要とすることが予想され得る。注記として、このアッセイでは、ＤＨＯＤＨ阻害剤のＩＣ５０が、標準的な７２時間の増殖アッセイよりも高いが、これはアッセイ時間が短いことを反映したものと考えられる。結果を以下の表３に示す。
【０１０９】
【表３】
2018509437.tif 000014
【０１１０】
品質管理（ＱＣ）手順
クロロキン耐性株Ｋ１およびクロロキン感受性株ＦＣ２７を用いたシゾント成熟アッセイ（２つの独立した実験）を行うことによって、薬物プレートの品質を保証した。顕微鏡スライド読み取りのＱＣに関しては、１分離株あたり、無作為に選択した２種の薬物について、第２の顕微鏡検査者が読み取りを行った。２人の顕微鏡検査者による生データが、選択した薬物のＩＣ５０の推定において大きく異なった場合には、第２の読み取り者によるアッセイ全体（すなわちすべての標準薬物および実験化合物）の再読み取りを行い、結果を比較した。必要に応じ、熟練した顕微鏡検査者が行う第３の読み取りによって、相違する結果を解決した。
【国際調査報告】
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