(57)【要約】部位特異的な抗体−薬物複合体について記載され、具体的には、リンカーの形態において切断性の保護基を有するピロロベンゾジアゼピン（ＰＢＤ）を含む複合体について記載される。抗体部分の改変に加えて、複合化部位が、ＡＤＣの安全性及び有効性の改善を可能にしている。【選択図】図１
2018516243.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式Ｌ−（ＤＬ）ｐの複合体であって、ここで、ＤＬが、式Ｉまたは式ＩＩ：：
【化１】
2018516243.tif 000242
を有し、
式中：
Ｌが、ＣＤ２２に結合する抗体（Ａｂ）であり、前記抗体が、システインではないアミノ酸による鎖間システイン残基のアミノ酸置換を含み；
Ｃ２’とＣ３’との間に二重結合が存在するとき、Ｒ１２が、
（ｉａ）ハロ、ニトロ、シアノ、エーテル、カルボキシ、エステル、Ｃ１−７アルキル、Ｃ３−７ヘテロシクリル、及びビス−オキシ−Ｃ１−３アルキレンを含む群から選択される１つまたは複数の置換基によって任意選択で置換されたＣ５−１０アリール基；
（ｉｂ）Ｃ１−５飽和脂肪族アルキル；
（ｉｃ）Ｃ３−６飽和シクロアルキル；
（ｉｄ）Ｒ２１、Ｒ２２、及びＲ２３が、Ｈ、Ｃ１−３飽和アルキル、Ｃ２−３アルケニル、Ｃ２−３アルキニル、及びシクロプロピルからそれぞれ独立して選択され、前記Ｒ１２基における炭素原子の総数が５以下である、
【化２】
2018516243.tif 000243
（ｉｅ）Ｒ２５ａ及びＲ２５ｂの一方がＨであり、もう一方が、ハロ、メチル、メトキシから選択される基によって任意選択で置換されたフェニルと、ピリジルと、チオフェニルと、から選択される、
【化３】
2018516243.tif 000244
ならびに
（ｉｆ）Ｒ２４が、Ｈと、Ｃ１−３飽和アルキルと、Ｃ２−３アルケニルと、Ｃ２−３アルキニルと、シクロプロピルと、ハロ、メチル、メトキシから選択される基によって任意選択で置換されたフェニルと、ピリジルと、チオフェニルと、から選択される、
【化４】
2018516243.tif 000245
からなる群からから選択され、
Ｃ２’とＣ３’との間に単結合が存在するとき、
Ｒ１２が、
【化５】
2018516243.tif 000246
であり、ここで、Ｒ２６ａ及びＲ２６ｂが、Ｈ、Ｆ、Ｃ１−４飽和アルキル、Ｃ２−３アルケニルから独立して選択され、前記アルキル基及びアルケニル基が、Ｃ１−４アルキルアミド及びＣ１−４アルキルエステルから選択される基によって任意選択で置換され、またはＲ２６ａ及びＲ２６ｂの一方がＨであるとき、もう一方が、ニトリル及びＣ１−４アルキルエステルから選択され；
Ｒ６及びＲ９が、Ｈ、Ｒ、ＯＨ、ＯＲ、ＳＨ、ＳＲ、ＮＨ２、ＮＨＲ、ＮＲＲ’、ニトロ、Ｍｅ３Ｓｎ、及びハロから独立して選択され；
ここで、Ｒ及びＲ’が、任意選択で置換されたＣ１−１２アルキル基、Ｃ３−２０ヘテロシクリル基、及びＣ５−２０アリール基から独立して選択され；
Ｒ７が、Ｈ、Ｒ、ＯＨ、ＯＲ、ＳＨ、ＳＲ、ＮＨ２、ＮＨＲ、ＮＨＲＲ’、ニトロ、Ｍｅ３Ｓｎ、及びハロから選択され；
Ｒ’’が、Ｃ３−１２アルキレン基であり、前記Ｃ３−１２アルキレン基の鎖が、例えば、Ｏ、Ｓ、ＮＲＮ２（ＲＮ２が、ＨもしくはＣ１−４アルキル）といった、１つもしくは複数のヘテロ原子、及び／または例えば、ベンゼンもしくはピリジンといった、１つもしくは複数の芳香族環によって分断され得るものであり；
Ｙ及びＹ’が、Ｏ、Ｓ、またはＮＨから選択され；
Ｒ６’、Ｒ７’、Ｒ９’が、それぞれＲ６、Ｒ７、及びＲ９と同一の群から選択され；
［式Ｉ］
ＲＬ１’が、前記抗体（Ａｂ）への連結のためのリンカーであり；
Ｒ１１ａが、ＯＨ、ＯＲＡ（ＲＡは、Ｃ１−４アルキルである）、及びＳＯｚＭ（ｚは、２または３である）から選択され、かつＭが、医薬的に許容可能な一価の陽イオンであり；
Ｒ２０及びＲ２１が、共に一緒になって、それらが結合している窒素原子と炭素原子との間に二重結合を形成するか、または；
Ｒ２０が、Ｈ及びＲＣから選択され、ここで、ＲＣが、キャッピング基であり；
Ｒ２１が、ＯＨ、ＯＲＡ、及びＳＯｚＭから選択され；
Ｃ２とＣ３との間に二重結合が存在するとき、Ｒ２が、
（ｉａ）ハロ、ニトロ、シアノ、エーテル、カルボキシ、エステル、Ｃ１−７アルキル、Ｃ３−７ヘテロシクリル、及びビス−オキシ−Ｃ１−３アルキレンを含む群から選択される１つまたは複数の置換基によって任意選択で置換されたＣ５−１０アリール基；
（ｉｂ）Ｃ１−５飽和脂肪族アルキル；
（ｉｃ）Ｃ３−６飽和シクロアルキル；
（ｉｄ）Ｒ１１、Ｒ１２、及びＲ１３が、Ｈ、Ｃ１−３飽和アルキル、Ｃ２−３アルケニル、Ｃ２−３アルキニル、及びシクロプロピルからそれぞれ独立して選択され、前記Ｒ２基における炭素原子の総数が５以下である、
【化６】
2018516243.tif 000247
（ｉｅ）Ｒ１５ａ及びＲ１５ｂの一方がＨであり、もう一方が、ハロ、メチル、メトキシから選択される基によって任意選択で置換されたフェニルと、ピリジルと、チオフェニルと、から選択される、
【化７】
2018516243.tif 000248
ならびに
（ｉｆ）Ｒ１４が、Ｈと、Ｃ１−３飽和アルキルと、Ｃ２−３アルケニルと、Ｃ２−３アルキニルと、シクロプロピルと、ハロ、メチル、メトキシから選択される基によって任意選択で置換されたフェニルと、ピリジルと、チオフェニルと、から選択される、
【化８】
2018516243.tif 000249
からなる群から選択され、
Ｃ２とＣ３との間に単結合が存在するとき、
Ｒ２が、
【化９】
2018516243.tif 000250
であり、ここで、Ｒ１６ａ及びＲ１６ｂが、Ｈ、Ｆ、Ｃ１−４飽和アルキル、Ｃ２−３アルケニルから独立して選択され、前記アルキル基及びアルケニル基が、Ｃ１−４アルキルアミド及びＣ１−４アルキルエステルから選択される基によって任意選択で置換され、またはＲ１６ａ及びＲ１６ｂの一方がＨであるとき、もう一方が、ニトリル及びＣ１−４アルキルエステルから選択され；
［式ＩＩ］
Ｒ２２が、式ＩＩＩａ、式ＩＩＩｂ、または式ＩＩＩｃ：
（ａ）Ａが、Ｃ５−７アリール基であり、
（ｉ）Ｑ１が、単結合であり、Ｑ２が、単結合及び−Ｚ−（ＣＨ２）ｎ−から選択され、ここで、Ｚが、単結合、Ｏ、Ｓ、及びＮＨから選択され、ｎが、１〜３であるか；または
（ｉｉ）Ｑ１が、−ＣＨ＝ＣＨ−であり、Ｑ２が、単結合である、
【化１０】
2018516243.tif 000251
（ｂ）ＲＣ１、ＲＣ２、及びＲＣ３が、Ｈ及び未置換のＣ１−２アルキルから独立して選択される、
【化１１】
2018516243.tif 000252
（ｃ）Ｑが、Ｏ−ＲＬ２’、Ｓ−ＲＬ２’、及びＮＲＮ−ＲＬ２’から選択され、ＲＮが、Ｈ、メチル、及びエチルから選択される、
【化１２】
2018516243.tif 000253
を有し、
Ｘが、Ｏ−ＲＬ２’、Ｓ−ＲＬ２’、ＣＯ２−ＲＬ２’、ＣＯ−ＲＬ２’、ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−ＲＬ２’、ＮＨＮＨ−ＲＬ２’、ＣＯＮＨＮＨ−ＲＬ２’、
【化１３】
2018516243.tif 000254
ＮＲＮＲＬ２’を含む群から選択され、ここで、ＲＮが、Ｈ及びＣ１−４アルキルを含む群から選択され；
ＲＬ２’が、前記抗体（Ａｂ）への連結のためのリンカーであり；
Ｒ１０及びＲ１１が、共に一緒になって、それらが結合している窒素原子と炭素原子との間に二重結合を形成するか、または；
Ｒ１０が、Ｈであり、Ｒ１１が、ＯＨ、ＯＲＡ、及びＳＯｚＭから選択され；
Ｒ３０及びＲ３１が、共に一緒になって、それらが結合している窒素原子と炭素原子との間に二重結合を形成するか、または；
Ｒ３０が、Ｈであり、Ｒ３１が、ＯＨ、ＯＲＡ、及びＳＯｚＭから選択され；
［式Ｉ及び式ＩＩ］
前記抗体に対する薬物部分の複合化が、鎖間システイン残基で生じる、前記複合体。
【請求項２】
【化１４】
2018516243.tif 000255
または
【化１５】
2018516243.tif 000256
ではない、請求項１に記載の複合体。
【請求項３】
Ｒ７が、Ｈ、ＯＨ、及びＯＲから選択される、請求項１または請求項２のいずれかに記載の複合体。
【請求項４】
Ｒ７が、Ｃ１−４アルキルオキシ基である、請求項３に記載の複合体。
【請求項５】
Ｙが、Ｏである、請求項１〜４のいずれか１項に記載の複合体。
【請求項６】
Ｒ’’が、Ｃ３−７アルキレンである、先行請求項のいずれか１項に記載の複合体。
【請求項７】
Ｒ９が、Ｈである、請求項１〜６のいずれか１項に記載の複合体。
【請求項８】
Ｒ６が、Ｈ及びハロから選択される、請求項１〜７のいずれか１項に記載の複合体。
【請求項９】
Ｃ２’とＣ３’との間に二重結合が存在し、Ｒ１２が、Ｃ５−７アリール基である、請求項１〜８のいずれか１項に記載の複合体。
【請求項１０】
Ｒ１２が、フェニルである、請求項９に記載の複合体。
【請求項１１】
Ｃ２’とＣ３’との間に二重結合が存在し、Ｒ１２が、Ｃ８−１０アリール基である、請求項１〜８のいずれか１項に記載の複合体。
【請求項１２】
Ｒ１２が、１〜３つの置換基を有する、請求項９〜１１のいずれか１項に記載の複合体。
【請求項１３】
前記置換基が、メトキシ、エトキシ、フルオロ、クロロ、シアノ、ビス−オキシ−メチレン、メチル−ピペラジニル、モルホリノ、及びメチル−チオフェニルから選択される、請求項９〜１２のいずれか１項に記載の複合体。
【請求項１４】
Ｃ２’とＣ３’との間に二重結合が存在し、Ｒ１２が、Ｃ１−５飽和脂肪族アルキル基である、請求項１〜８のいずれか１項に記載の複合体。
【請求項１５】
Ｒ１２が、メチル、エチル、またはプロピルである、請求項１４に記載の化合物。
【請求項１６】
Ｃ２’とＣ３’との間に二重結合が存在し、Ｒ１２が、Ｃ３−６飽和シクロアルキル基である、請求項１〜８のいずれか１項に記載の複合体。
【請求項１７】
Ｒ１２が、シクロプロピルである、請求項１６に記載の複合体。
【請求項１８】
Ｃ２’とＣ３’との間に二重結合が存在し、Ｒ１２が、式：
【化１６】
2018516243.tif 000257
の基である、請求項１〜８のいずれか１項に記載の複合体。
【請求項１９】
前記Ｒ１２基における炭素原子の総数が４以下である、請求項１８に記載の複合体。
【請求項２０】
前記Ｒ１２基における炭素原子の総数が３以下である、請求項１９に記載の複合体。
【請求項２１】
Ｒ２１、Ｒ２２、及びＲ２３のうちの１つが、Ｈであり、残りの２つの基が、Ｈ、Ｃ１−３飽和アルキル、Ｃ２−３アルケニル、Ｃ２−３アルキニル、及びシクロプロピルから選択される、請求項１８〜２０のいずれか１項に記載の複合体。
【請求項２２】
Ｒ２１、Ｒ２２、及びＲ２３のうちの２つが、Ｈであり、残りの基が、Ｈ、Ｃ１−３飽和アルキル、Ｃ２−３アルケニル、Ｃ２−３アルキニル、及びシクロプロピルから選択される、請求項１８〜２０のいずれか１項に記載の複合体。
【請求項２３】
Ｃ２’とＣ３’との間に二重結合が存在し、Ｒ１２が、式：
【化１７】
2018516243.tif 000258
の基である、請求項１〜８のいずれか１項に記載の複合体。
【請求項２４】
Ｒ１２が、基：
【化１８】
2018516243.tif 000259
である、請求項２３に記載の複合体。
【請求項２５】
Ｃ２’とＣ３’との間に二重結合が存在し、Ｒ１２が、式：
【化１９】
2018516243.tif 000260
の基である、請求項１〜８のいずれか１項に記載の複合体。
【請求項２６】
Ｒ２４が、Ｈ、メチル、エチル、エテニル、及びエチニルから選択される、請求項２５に記載の複合体。
【請求項２７】
Ｒ２４が、Ｈ及びメチルから選択される、請求項２６に記載の複合体。
【請求項２８】
Ｃ２’とＣ３’との間に単結合が存在し、Ｒ１２が、
【化２０】
2018516243.tif 000261
であり、Ｒ２６ａ及びＲ２６ｂが両方共、Ｈである、請求項１〜８のいずれか１項に記載の複合体。
【請求項２９】
Ｃ２’とＣ３’との間に単結合が存在し、Ｒ１２が、
【化２１】
2018516243.tif 000262
であり、Ｒ２６ａ及びＲ２６ｂが両方共、メチルである、請求項１〜８のいずれか１項に記載の複合体。
【請求項３０】
Ｃ２’とＣ３’との間に単結合が存在し、Ｒ１２が、
【化２２】
2018516243.tif 000263
であり、Ｒ２６ａ及びＲ２６ｂの一方がＨであり、もう一方が、Ｃ１−４飽和アルキル、Ｃ２−３アルケニルから選択され、前記アルキル基及びアルケニル基が、任意選択で置換される、請求項１〜８のいずれか１項に記載の複合体。
［式Ｉ］
【請求項３１】
Ｃ２とＣ３との間に二重結合が存在し、Ｒ２が、Ｃ５−７アリール基である、請求項１〜３０のいずれか１項に記載の複合体。
【請求項３２】
Ｒ２が、フェニルである、請求項３１に記載の複合体。
【請求項３３】
Ｃ２とＣ３との間に二重結合が存在し、Ｒ１が、Ｃ８−１０アリール基である、請求項１〜３０のいずれか１項に記載の複合体。
【請求項３４】
Ｒ２が、１〜３つの置換基を有する、請求項３１〜３３のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項３５】
前記置換基が、メトキシ、エトキシ、フルオロ、クロロ、シアノ、ビス−オキシ−メチレン、メチル−ピペラジニル、モルホリノ、及びメチル−チオフェニルから選択される、請求項３１〜３４のいずれか１項に記載の複合体。
【請求項３６】
Ｃ２とＣ３との間に二重結合が存在し、Ｒ２が、Ｃ１−５飽和脂肪族アルキル基である、請求項１〜３０のいずれか１項に記載の複合体。
【請求項３７】
Ｒ２が、メチル、エチル、またはプロピルである、請求項３６に記載の複合体。
【請求項３８】
Ｃ２とＣ３との間に二重結合が存在し、Ｒ２が、Ｃ３−６飽和シクロアルキル基である、請求項１〜３０のいずれか１項に記載の複合体。
【請求項３９】
Ｒ２が、シクロプロピルである、請求項３８に記載の複合体。
【請求項４０】
Ｃ２とＣ３との間に二重結合が存在し、Ｒ２が、式：
【化２３】
2018516243.tif 000264
の基である、請求項１〜３０のいずれか１項に記載の複合体。
【請求項４１】
前記Ｒ２基における炭素原子の総数が４以下である、請求項４０に記載の複合体。
【請求項４２】
前記Ｒ２基における炭素原子の総数が３以下である、請求項４１に記載の複合体。
【請求項４３】
Ｒ１１、Ｒ１２、及びＲ１３のうちの１つが、Ｈであり、残りの２つの基が、Ｈ、Ｃ１−３飽和アルキル、Ｃ２−３アルケニル、Ｃ２−３アルキニル、及びシクロプロピルから選択される、請求項４０〜４２のいずれか１項に記載の複合体。
【請求項４４】
Ｒ１１、Ｒ１２、及びＲ１３のうちの２つが、Ｈであり、残りの基が、Ｈ、Ｃ１−３飽和アルキル、Ｃ２−３アルケニル、Ｃ２−３アルキニル、及びシクロプロピルから選択される、請求項４０〜４２のいずれか１項に記載の複合体。
【請求項４５】
Ｃ２とＣ３との間に二重結合が存在し、Ｒ２が、式：
【化２４】
2018516243.tif 000265
の基である、請求項１〜３０のいずれか１項に記載の複合体。
【請求項４６】
Ｒ２が、基：
【化２５】
2018516243.tif 000266
である、請求項４５に記載の複合体。
【請求項４７】
Ｃ２とＣ３との間に二重結合が存在し、Ｒ２が、式：
【化２６】
2018516243.tif 000267
の基である、請求項１〜３０のいずれか１項に記載の複合体。
【請求項４８】
Ｒ１４が、Ｈ、メチル、エチル、エテニル、及びエチニルから選択される、請求項４７に記載の複合体。
【請求項４９】
Ｒ１４が、Ｈ及びメチルから選択される、請求項４７に記載の複合体。
【請求項５０】
Ｃ２とＣ３との間に単結合が存在し、Ｒ２が、
【化２７】
2018516243.tif 000268
であり、Ｒ１６ａ及びＲ１６ｂが両方共、Ｈである、請求項１〜３０のいずれか１項に記載の複合体。
【請求項５１】
Ｃ２とＣ３との間に単結合が存在し、Ｒ２が、
【化２８】
2018516243.tif 000269
であり、Ｒ１６ａ及びＲ１６ｂが両方共、メチルである、請求項１〜３０のいずれか１項に記載の複合体。
【請求項５２】
Ｃ２とＣ３との間に単結合が存在し、Ｒ２が、
【化２９】
2018516243.tif 000270
であり、Ｒ１６ａ及びＲ１６ｂの一方がＨであり、もう一方が、Ｃ１−４飽和アルキル、Ｃ２−３アルケニルから選択され、前記アルキル基及びアルケニル基が、任意選択で置換される、請求項１〜３０のいずれか１項に記載の複合体。
【請求項５３】
Ｒ１１ａが、ＯＨである、請求項１〜５２のいずれか１項に記載の複合体。
【請求項５４】
Ｒ２１が、ＯＨである、請求項１〜５３のいずれか１項に記載の複合体。
【請求項５５】
Ｒ２１が、ＯＭｅである、請求項１〜５３のいずれか１項に記載の複合体。
【請求項５６】
Ｒ２０が、Ｈである、請求項１〜５５のいずれか１項に記載の複合体。
【請求項５７】
Ｒ２０が、ＲＣである、請求項１〜５５のいずれか１項に記載の複合体。
【請求項５８】
ＲＣが、Ａｌｌｏｃ、Ｆｍｏｃ、Ｂｏｃ、及びＴｒｏｃからなる群から選択される、請求項５７に記載の複合体。
【請求項５９】
ＲＣが、Ｔｅｏｃ、Ｐｓｅｃ、Ｃｂｚ、及びＰＮＺからなる群から選択される、請求項５７に記載の複合体。
【請求項６０】
ＲＣが、基：
【化３０】
2018516243.tif 000271
であり、
式中、アスタリスクが、Ｎ１０位への結合点を示し、Ｇ２が、終結基であり、Ｌ３が、共有結合であるか、または切断可能なリンカーＬ１であり、Ｌ２が、共有結合であるか、またはＯＣ（＝Ｏ）と一緒になって自壊性リンカーを形成する、請求項５７に記載の複合体。
【請求項６１】
Ｇ２が、ＡｃもしくはＭｏｃであるか、またはＡｌｌｏｃ、Ｆｍｏｃ、Ｂｏｃ、Ｔｒｏｃ、Ｔｅｏｃ、Ｐｓｅｃ、Ｃｂｚ、及びＰＮＺからなる群から選択される、請求項６０に記載の複合体。
【請求項６２】
Ｒ２０及びＲ２１が一緒になって、それらが結合している窒素原子と炭素原子との間に二重結合を形成する、請求項１〜５３のいずれか１項に記載の複合体。
［式ＩＩ］
【請求項６３】
Ｒ２２が、式ＩＩＩａを有し、Ａが、フェニルである、請求項１〜３０のいずれか１項に記載の複合体。
【請求項６４】
Ｒ２２が、式ＩＩａを有し、Ｑ１が、単結合である、請求項１〜３０及び請求項６３のいずれか１項に記載の複合体。
【請求項６５】
Ｑ２が、単結合である、請求項６３に記載の複合体。
【請求項６６】
Ｑ２が、−Ｚ−（ＣＨ２）ｎ−であり、Ｚが、ＯまたはＳであり、かつｎが、１または２である、請求項６３に記載の複合体。
【請求項６７】
Ｒ２２が、式ＩＩＩａを有し、Ｑ１が、−ＣＨ＝ＣＨ−である、請求項１〜３０及び請求項６３のいずれか１項に記載の複合体。
【請求項６８】
Ｒ２２が、式ＩＩＩｂを有し、ＲＣ１、ＲＣ２、及びＲＣ３が、Ｈ及びメチルから独立して選択される、請求項１〜３０のいずれか１項に記載の複合体。
【請求項６９】
ＲＣ１、ＲＣ２、及びＲＣ３がすべて、Ｈである、請求項６８に記載の複合体。
【請求項７０】
ＲＣ１、ＲＣ２、及びＲＣ３がすべて、メチルである、請求項６８に記載の複合体。
【請求項７１】
Ｒ２２が、式ＩＩＩａまたは式ＩＩＩｂを有し、Ｘが、Ｏ−ＲＬ２’、Ｓ−ＲＬ２’、ＣＯ２−ＲＬ２’、−Ｎ−Ｃ（＝Ｏ）−ＲＬ２’、及びＮＨ−ＲＬ２’から選択される、請求項１〜３０及び請求項６３〜７０のいずれか１項に記載の複合体。
【請求項７２】
Ｘが、ＮＨ−ＲＬ２’である、請求項７１に記載の複合体。
【請求項７３】
Ｒ２２が、式ＩＩＩｃを有し、Ｑが、ＮＲＮ−ＲＬ２’である、請求項１〜３０のいずれか１項に記載の複合体。
【請求項７４】
ＲＮが、Ｈまたはメチルである、請求項７３に記載の複合体。
【請求項７５】
Ｒ２２が、式ＩＩＩｃを有し、Ｑが、Ｏ−ＲＬ２’またはＳ−ＲＬ２’である、請求項１〜３０のいずれか１項に記載の複合体。
【請求項７６】
Ｒ１１が、ＯＨである、請求項１〜３０及び請求項６３〜７５のいずれか１項に記載の複合体。
【請求項７７】
Ｒ１１が、ＯＭｅである、請求項１〜３０及び請求項６３〜７５のいずれか１項に記載の複合体。
【請求項７８】
Ｒ１０が、Ｈである、請求項１〜３０及び請求項６３〜７７のいずれか１項に記載の複合体。
【請求項７９】
Ｒ１０及びＲ１１が一緒になって、それらが結合している窒素原子と炭素原子との間に二重結合を形成する、請求項１〜３０及び請求項６３〜７５のいずれか１項に記載の複合体。
【請求項８０】
Ｒ３１が、ＯＨである、請求項１〜３０及び請求項６３〜７９のいずれか１項に記載の複合体。
【請求項８１】
Ｒ３１が、ＯＭｅである、請求項１〜３０及び請求項６３〜７９のいずれか１項に記載の複合体。
【請求項８２】
Ｒ３０が、Ｈである、請求項１〜３０及び請求項６３〜８１のいずれか１項に記載の複合体。
【請求項８３】
Ｒ３０及びＲ３１が一緒になって、それらが結合している窒素原子と炭素原子との間に二重結合を形成する、請求項１〜３０及び請求項６３〜７９のいずれか１項に記載の複合体。
【請求項８４】
Ｒ６’、Ｒ７’、Ｒ９’、及びＹ’が、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ９、及びＹと同一である、請求項１〜８３のいずれか１項に記載の複合体。
【請求項８５】
Ｌ−ＲＬ１’またはＬ−ＲＬ２’が、基：
【化３１】
2018516243.tif 000272
であり、
式中、アスタリスクが、ＰＢＤへの結合点を示し、Ａｂが、前記抗体であり、Ｌ１が、切断可能なリンカーであり、Ａが、Ｌ１を前記抗体に連結する連結基であり、Ｌ２が、共有結合であるか、または−ＯＣ（＝Ｏ）−と一緒になって自壊性リンカーを形成する、請求項１〜８４のいずれか１項に記載の複合体。
【請求項８６】
Ｌ１が、酵素的に切断可能である、請求項８５に記載の複合体。
【請求項８７】
Ｌ１が、アミノ酸の連続配列を含む、請求項８５または請求項８６に記載の複合体。
【請求項８８】
Ｌ１が、ジペプチドを含み、ジペプチドである−ＮＨ−Ｘ１−Ｘ２−ＣＯ−における−Ｘ１−Ｘ２−基が、
−Ｐｈｅ−Ｌｙｓ−、
−Ｖａｌ−Ａｌａ−、
−Ｖａｌ−Ｌｙｓ−、
−Ａｌａ−Ｌｙｓ−、
−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−、
−Ｐｈｅ−Ｃｉｔ−、
−Ｌｅｕ−Ｃｉｔ−、
−Ｉｌｅ−Ｃｉｔ−、
−Ｐｈｅ−Ａｒｇ−、
−Ｔｒｐ−Ｃｉｔ−
から選択される、請求項８７に記載の複合体。
【請求項８９】
ジペプチドである−ＮＨ−Ｘ１−Ｘ２−ＣＯ−における−Ｘ１−Ｘ２−基が、
−Ｐｈｅ−Ｌｙｓ−、
−Ｖａｌ−Ａｌａ−、
−Ｖａｌ−Ｌｙｓ−、
−Ａｌａ−Ｌｙｓ−、
−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−
から選択される、請求項８８に記載の複合体。
【請求項９０】
ジペプチドである−ＮＨ−Ｘ１−Ｘ２−ＣＯ−における−Ｘ１−Ｘ２−基が、−Ｐｈｅ−Ｌｙｓ−、−Ｖａｌ−Ａｌａ−、または−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−である、請求項８９に記載の複合体。
【請求項９１】
前記Ｘ２−ＣＯ−基が、Ｌ２に連結される、請求項８８〜９０のいずれか１項に記載の複合体。
【請求項９２】
前記ＮＨ−Ｘ１−基が、Ａに連結される、請求項８８〜９１のいずれか１項に記載の複合体。
【請求項９３】
Ｌ２が、ＯＣ（＝Ｏ）と一緒になって、自壊性リンカーを形成する、請求項８８〜９２のいずれか１項に記載の複合体。
【請求項９４】
Ｃ（＝Ｏ）Ｏ及びＬ２が一緒になって、基：
【化３２】
2018516243.tif 000273
を形成し、
式中、アスタリスクが、ＰＢＤへの結合点を示し、波線が、リンカーＬ１への結合点を示し、Ｙが、ＮＨ、Ｏ、Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ、またはＣ（＝Ｏ）Ｏであり、かつｎが、０〜３である、請求項９３に記載の複合体。
【請求項９５】
Ｙが、ＮＨである、請求項９４に記載の複合体。
【請求項９６】
ｎが、０である、請求項９４または請求項９５に記載の複合体。
【請求項９７】
Ｌ１及びＬ２が、−ＯＣ（＝Ｏ）−と一緒になって、
【化３３】
2018516243.tif 000274
から選択される基を構成し、
式中、アスタリスクが、ＰＢＤへの結合点を示し、波線が、リンカーＬ１の残部への結合点またはＡへの結合点を示す、請求項９５に記載の複合体。
【請求項９８】
前記波線が、Ａへの結合点を示す、請求項９７に記載の複合体。
【請求項９９】
Ａが、
（ｉ）アスタリスクが、Ｌ１への結合点を示し、波線が、前記抗体への結合点を示し、かつｎが、０〜６である、
【化３４】
2018516243.tif 000275
または
（ｉｉ）アスタリスクが、Ｌ１への結合点を示し、波線が、前記抗体への結合点を示し、ｎが、０または１であり、かつｍが、０〜３０である、
【化３５】
2018516243.tif 000276
である、請求項８５〜９８のいずれか１項に記載の複合体。
【請求項１００】
【化３６】
2018516243.tif 000277
2018516243.tif 000278
または
【化３７】
2018516243.tif 000279
を有する、請求項１に記載の複合体。
【請求項１０１】
前記抗体が、
配列番号１１０のアミノ酸配列もしくはその断片を含む重鎖であって、配列番号１１０の位置１０９及び位置１１２におけるシステインがそれぞれ、存在するのであれば、システインではないアミノ酸によって置換される前記重鎖；
配列番号１２０のアミノ酸配列もしくはその断片を含む重鎖であって、配列番号１２０の位置１０３、位置１０６、及び位置１０９におけるシステインがそれぞれ、存在するのであれば、システインではないアミノ酸によって置換される前記重鎖；
配列番号１２０のアミノ酸配列もしくはその断片を含む重鎖であって、配列番号１２０の位置１４、位置１０６、及び位置１１２におけるシステインがそれぞれ、存在するのであれば、システインではないアミノ酸によって置換される前記重鎖；
配列番号１３０のアミノ酸配列もしくはその断片を含む重鎖であって、配列番号１３０の位置１１１、位置１１４、位置１２０、位置１２６、位置１２９、位置１３５、位置１４１、位置１４４、位置１５０、位置１５６、及び位置１５９におけるシステインがそれぞれ、存在するのであれば、システインではないアミノ酸によって置換される前記重鎖；または
配列番号１４０のアミノ酸配列もしくはその断片を含む重鎖であって、配列番号１４０の位置１０６及び位置１０９におけるシステインがそれぞれ、存在するのであれば、システインではないアミノ酸によって置換される前記重鎖
を含む、請求項１〜１００のいずれか１項に記載の複合体。
【請求項１０２】
配列番号１２０の位置１０２におけるシステインも、存在するのであれば、システインではないアミノ酸によって置換される、請求項１０１に記載の複合体。
【請求項１０３】
前記薬物部分が、配列番号１１０の位置１０３におけるシステイン、配列番号１２０の位置１４におけるシステイン、配列番号１２０の位置１０３におけるシステイン、配列番号１３０の位置１４におけるシステイン、または配列番号１４０の位置１４におけるシステインに複合化される、請求項１０１または請求項１０２のいずれか１項に記載の複合体。
【請求項１０４】
前記抗体が、
配列番号１５０のアミノ酸配列もしくはその断片を含む軽鎖であって、位置１０５におけるシステインが、存在するのであれば、システインではないアミノ酸によって置換される前記軽鎖；または
配列番号１６０のアミノ酸配列もしくはその断片を含む軽鎖であって、位置１０２におけるシステインが、存在するのであれば、システインではないアミノ酸によって置換される前記軽鎖
を含む、請求項１０１〜１０３のいずれか１項に記載の複合体。
【請求項１０５】
前記抗体が、
配列番号１１３のアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号１５１、配列番号１５２、配列番号１５３、配列番号１６１、配列番号１６２、または配列番号１６３のアミノ酸配列を含む軽鎖を含み；
任意選択で、前記薬物部分が、配列番号１１３の位置１０３におけるシステインに複合化される、請求項１〜１００のいずれか１項に記載の複合体。
【請求項１０６】
前記抗体が、
配列番号１１４のアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号１５１、配列番号１５２、配列番号１５３、配列番号１６１、配列番号１６２、または配列番号１６３のアミノ酸配列を含む軽鎖を含み；
任意選択で、前記薬物部分が、配列番号１１４の位置１０３におけるシステインに複合化される、請求項１〜１００のいずれか１項に記載の複合体。
【請求項１０７】
前記抗体が、配列番号１１０のアミノ酸配列もしくはその断片、配列番号１２０のアミノ酸配列もしくはその断片、配列番号１３０のアミノ酸配列もしくはその断片、または配列番号１４０のアミノ酸配列もしくはその断片を含む重鎖を含む、請求項１〜１００のいずれか１項に記載の複合体。
【請求項１０８】
前記薬物部分が、配列番号１１０の位置１０３におけるシステイン、配列番号１２０の位置１４におけるシステイン、配列番号１２０の位置１０３におけるシステイン、配列番号１３０の位置１４におけるシステイン、または配列番号１４０の位置１４におけるシステインに複合化される、請求項１０７に記載の複合体。
【請求項１０９】
前記抗体が、
配列番号１５０のアミノ酸配列もしくはその断片を含む軽鎖であって、位置１０５におけるシステインが、存在するのであれば、システインではないアミノ酸によって置換される前記軽鎖；または
配列番号１６０のアミノ酸配列もしくはその断片を含む軽鎖であって、位置１０２におけるシステインが、存在するのであれば、システインではないアミノ酸によって置換される前記軽鎖
を含む、請求項１０７または請求項１０８のいずれか１項に記載の複合体。
【請求項１１０】
前記抗体が、
配列番号１１０のアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号１５１、配列番号１５２、配列番号１５３、配列番号１６１、配列番号１６２、または配列番号１６３のアミノ酸配列を含む軽鎖を含み、
任意選択で、前記薬物部分が、配列番号１１０の位置１０３におけるシステインに複合化される、請求項１〜１００のいずれか１項に記載の複合体。
【請求項１１１】
前記抗体が、
配列番号１１０のアミノ酸配列もしくはその断片を含む重鎖であって、配列番号１１０の位置１０３におけるシステインが、存在するのであれば、システインではないアミノ酸によって置換される前記重鎖；
配列番号１２０のアミノ酸配列もしくはその断片を含む重鎖であって、配列番号１２０の位置１４及び位置１０３におけるシステインがそれぞれ、存在するのであれば、システインではないアミノ酸によって置換される前記重鎖；
配列番号１３０のアミノ酸配列もしくはその断片を含む重鎖であって、配列番号１３０の位置１４におけるシステインが、存在するのであれば、システインではないアミノ酸によって置換される前記重鎖；または
配列番号１４０のアミノ酸配列もしくはその断片を含む重鎖であって、配列番号１４０の位置１４におけるシステインが、存在するのであれば、システインではないアミノ酸によって置換される前記重鎖
を含む、請求項１〜１００のいずれか１項に記載の複合体。
【請求項１１２】
前記抗体が、配列番号１５０または配列番号１６０のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む、請求項１１１に記載の複合体。
【請求項１１３】
前記抗体が、
配列番号１１１のアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号１５０または配列番号１６０のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む、請求項１〜１００のいずれか１項に記載の複合体。
【請求項１１４】
前記抗体が、
配列番号１１２のアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号１５０または配列番号１６０のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む、請求項１〜１００のいずれか１項に記載の複合体。
【請求項１１５】
前記薬物部分が、配列番号１５０の位置１０５におけるシステイン、または配列番号１６０の位置１０２におけるシステインに複合化される、請求項１１２〜１１４のいずれか１項に記載の複合体。
【請求項１１６】
前記抗体が、
配列番号１１０のアミノ酸配列もしくはその断片を含む重鎖であって、配列番号１１０の位置１０３、位置１０９、及び位置１１２におけるシステインがそれぞれ、存在するのであれば、システインではないアミノ酸によって置換される前記重鎖；
配列番号１２０のアミノ酸配列もしくはその断片を含む重鎖であって、配列番号１２０の位置１４、位置１０３、位置１０６、及び位置１０９におけるシステインがそれぞれ、存在するのであれば、システインではないアミノ酸によって置換される前記重鎖；
配列番号１３０のアミノ酸配列もしくはその断片を含む重鎖であって、配列番号１３０の位置１４、位置１１１、位置１１４、位置１２０、位置１２６、位置１２９、位置１３５、位置１４１、位置１４４、位置１５０、位置１５６、及び位置１５９におけるシステインがそれぞれ、存在するのであれば、システインではないアミノ酸によって置換される前記重鎖；または
配列番号１４０のアミノ酸配列もしくはその断片を含む重鎖であって、配列番号１４０の位置１４、位置１０６、及び位置１０９におけるシステインがそれぞれ、存在するのであれば、システインではないアミノ酸によって置換される前記重鎖
を含む、請求項１〜１００のいずれか１項に記載の複合体。
【請求項１１７】
前記抗体が、配列番号１５０または配列番号１６０のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む、請求項１１６に記載の複合体。
【請求項１１８】
前記抗体が、配列番号１１５のアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号１５０または配列番号１６０のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む、請求項１〜１００のいずれか１項に記載の複合体。
【請求項１１９】
前記抗体が、配列番号１１６のアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号１５０または配列番号１６０のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む、請求項１〜１００のいずれか１項に記載の複合体。
【請求項１２０】
前記薬物部分が、配列番号１５０の位置１０５におけるシステイン、配列番号１６０の位置１０２におけるシステインに複合化される、請求項１１７に記載の複合体。
【請求項１２１】
前記抗体が、Ｋａｂａｔに示されるＥＵインデックスの位置２３４におけるアミノ酸の置換、及び／またはＫａｂａｔに示されるＥＵインデックスの位置２３５における残基の置換を有する重鎖を含む、請求項１〜１２０のいずれか１項に記載の複合体。
【請求項１２２】
前記抗体が、Ｋａｂａｔに示されるＥＵインデックスの位置２３４におけるアミノ酸の置換、及びＫａｂａｔに示されるＥＵインデックスの位置２３５における残基の置換を有する重鎖を含む、請求項１２１に記載の複合体。
【請求項１２３】
前記抗体が、配列番号１１０のアミノ酸配列を含む重鎖を含み、位置１１７におけるロイシン、及び／または位置１１８におけるロイシンが、ロイシンではないアミノ酸によって置換される、請求項１２１〜１２２のいずれか１項に記載の複合体。
【請求項１２４】
前記抗体が、配列番号１１０のアミノ酸配列を含む重鎖を含み、位置１１７におけるロイシン、及び位置１１８におけるロイシンが、ロイシンではないアミノ酸によって置換される、請求項１２３に記載の複合体。
【請求項１２５】
前記抗体が、配列番号１３０のアミノ酸配列を含む重鎖を含み、位置１６４におけるロイシン、及び／または位置１６５におけるロイシンが、ロイシンではないアミノ酸によって置換される、請求項１２１〜１２２のいずれか１項に記載の複合体。
【請求項１２６】
前記抗体が、配列番号１３０のアミノ酸配列を含む重鎖を含み、位置１６４におけるロイシン、及び位置１６５におけるロイシンが、ロイシンではないアミノ酸によって置換される、請求項１２５に記載の複合体。
【請求項１２７】
前記抗体が、配列番号１４０のアミノ酸配列を含む重鎖を含み、位置１１５におけるロイシンが、ロイシンではないアミノ酸によって置換される、請求項１２１に記載の複合体。
【請求項１２８】
前記置換アミノ酸が、アラニン、グリシン、バリン、またはイソロイシンによって交換される、請求項１〜１２７のいずれか１項に記載の複合体。
【請求項１２９】
前記置換アミノ酸が、アラニンによって交換される、請求項１２８に記載の複合体。
【請求項１３０】
前記抗体が、配列番号１のアミノ酸配列を有するＶＨドメインを含む、請求項１〜１２９のいずれか１項に記載の複合体。
【請求項１３１】
前記抗体が、配列番号２のアミノ酸配列を有するＶＬドメインをさらに含む、請求項１３０に記載の複合体。
【請求項１３２】
前記抗体が、未変化の抗体である、先行請求項のいずれか１項に記載の複合体。
【請求項１３３】
前記抗体が、ヒト化、脱免疫化（ｄｅｉｍｍｕｎｉｓｅｄ）、または表面再構成（ｒｅｓｕｒｆａｃｅｄ）される、先行請求項のいずれか１項に記載の複合体。
【請求項１３４】
前記複合体が、ラットにおいて単回用量として送達されると、少なくとも２．０ｍｇ／ｋｇの最大耐用量を有する、先行請求項のいずれか１項に記載の複合体。
【請求項１３５】
抗体（Ａｂ）に対する薬物（Ｄ）の薬物負荷（ｐ）が、２または４である、先行請求項のいずれか１項に記載の複合体。
【請求項１３６】
治療における使用を目的とする、請求項１〜１３５のいずれか１項に記載の複合体。
【請求項１３７】
対象における増殖性疾患の治療における使用を目的とする、請求項１〜１３５のいずれか１項に記載の複合体。
【請求項１３８】
前記疾患が、癌である、請求項１３７に記載の複合体。
【請求項１３９】
請求項１〜１３５のいずれか１項に記載の複合体、及び医薬的に許容可能な希釈剤、担体、または賦形剤を含む、医薬組成物。
【請求項１４０】
治療上有効な量の化学療法剤をさらに含む、請求項１３９に記載の医薬組成物。
【請求項１４１】
対象における増殖性疾患の治療における使用を目的とする薬剤の調製における、請求項１〜１３５のいずれか１項に記載の複合体の使用。
【請求項１４２】
患者に対する、請求項１３９に記載の医薬組成物の投与を含む、癌の治療方法。
【請求項１４３】
前記複合体と組み合わせて、化学療法剤が前記患者に投与される、請求項１４２に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本開示は、部位特異的な抗体−薬物複合体に関する。ＣＤ２２に結合する抗体へのリンカーの形態において切断性（ｌａｂｉｌｅ）の保護基を有するピロロベンゾジアゼピン（ＰＢＤ）を含む複合体について記載される。
【背景技術】
【０００２】
抗体−薬物複合体
抗体治療は、癌、免疫学的障害、及び血管新生障害を有する患者の標的化治療を目的として確立されてきた（Ｃａｒｔｅｒ，Ｐ．（２００６）Ｎａｔｕｒｅ  Ｒｅｖｉｅｗｓ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  ６：３４３−３５７）。癌治療において腫瘍細胞を殺傷または抑制するための細胞傷害性または細胞分裂阻害性の薬剤、すなわち薬物の局所送達を目的とする抗体−薬物複合体（ＡＤＣ）、すなわち免疫複合体は、薬物部分を腫瘍に送達し、そこで細胞内に薬物部分を蓄積させることを狙って使用される（Ｊｕｎｕｔｕｌａ，ｅｔ  ａｌ．，２００８ｂ  Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈ．，２６（８）：９２５−９３２；Ｄｏｒｎａｎ  ｅｔ  ａｌ（２００９）Ｂｌｏｏｄ  １１４（１３）：２７２１−２７２９；ＵＳ７５２１５４１；ＵＳ７７２３４８５；ＷＯ２００９／０５２２４９；ＭｃＤｏｎａｇｈ（２００６）Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｎｇ．Ｄｅｓｉｇｎ  ＆  Ｓｅｌ．１９（７）：２９９−３０７；Ｄｏｒｏｎｉｎａ  ｅｔ  ａｌ（２００６）Ｂｉｏｃｏｎｊ．Ｃｈｅｍ．１７：１１４−１２４；Ｅｒｉｃｋｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ（２００６）Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．６６（８）：１−８；Ｓａｎｄｅｒｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ（２００５）Ｃｌｉｎ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．１１：８４３−８５２；Ｊｅｆｆｒｅｙ  ｅｔ  ａｌ（２００５）Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．４８：１３４４−１３５８；Ｈａｍｂｌｅｔｔ  ｅｔ  ａｌ（２００４）Ｃｌｉｎ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．１０：７０６３−７０７０）。
【０００３】
本発明者らは、ＡＤＣの安全性及び有効性が向上するように抗体部分が改変された特定の抗体−薬物複合体を開発した。
【０００４】
部位特異的複合化
ＡＤＣでは、細胞傷害性薬物は抗体に対して、典型的には、部位非特異的様式でリジンの側鎖を介して複合化されるか、または抗体に存在する鎖間ジスルフィド結合を還元して活性化した元々のシステインスルフヒドリル基とすることによって複合化されてきた。
【０００５】
抗体に対する薬物の部位特異的複合化は、抗体に対する薬物の比（ＤＡＲ）及び結合部位に関して、ＡＤＣ集団の均一性を高め、バッチ間の一貫性を得るという視点においても検討されてきた。部位特異的結合は、典型的には、抗体において元々存在するアミノ酸を、薬物部分の複合化が可能な、システインなどのアミノ酸で置換することによって達成されてきた（Ｓｔｉｍｍｅｌ  ｅｔ  ａｌ．，ＪＢＣ，Ｖｏｌ．２７５，Ｎｏ．３９，Ｉｓｓｕｅ  ｏｆ  Ｓｅｐｔｅｍｂｅｒ  ２９，ｐｐ．３０４４５−３０４５０  −  ｃｏｎｊｕｇａｔｉｏｎ  ｏｆ  ａｎ  ＩｇＧ  Ｓ４４２Ｃ  ｖａｒｉａｎｔ  ｗｉｔｈ  ｂｒｏｍｏａｃｅｔｙｌ−ＴＭＴ）に加えて、Ｊｕｎｕｔｕｌａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，ｖｏｌ．２６，ｎｏ．８，ｐｐ．９２５−９３２も参照のこと）。Ｊｕｊｕｎｔｕｌａらは、非特異的に複合化したＡＤＣと比較すると、抗体配列に操作導入された特定のシステイン残基に薬物部分が結合した部位特異的ＡＤＣでは、有効性は同等であり、全身毒性は減少したと報告している。
【０００６】
他の試験では、抗体に対して特定部位で複合化した細胞傷害性薬物部分を含むＡＤＣの生物学的特性について検討されている。例えば、ＷＯ２０１３／０９３８０９では、多くの操作された抗体定常領域について考察されており、そうしたものの一部は、モノメチルオーリスタチンＤ（ＭＭＡＤ）などの細胞傷害性薬物との複合体の一部として例示されている。ＷＯ２０１１／００５４８１では、部位特異的複合化を目的として操作された抗体Ｆｃ領域について説明されており、こうした部位特異的複合化には、多くの操作された抗体に対してビオチン−ＰＥＧ２−マレイミドを複合化した例が含まれる。ＷＯ２００６−０６５５３３では、重鎖及び／または軽鎖に存在する「元々の（ｎａｔｉｖｅ）」鎖間ジスルフィド形成性システインの１つまたは複数が、薬物部分への複合化に利用可能な相補性システインスルフヒドリルが残るように別のアミノ酸で置換された抗体Ｆｃ領域について説明されている。
【０００７】
Ｓｔｒｏｐ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ＆  Ｂｉｏｌｏｇｙ  ２０，１６１−１６７，Ｆｅｂｒｕａｒｙ  ２１，２０１３では、抗体に対する薬物の複合化に使用された部位の位置のみが互いに異なる多くの部位特異的ＡＤＣについて、安定性及び薬物動態が評価された。著者らは、試験したＡＤＣについて、複合化部位が、種依存的様式でＡＤＣの安定性及び薬物動態に影響することを報告している。
【０００８】
本発明者らは、部位特異的様式において薬物部分が複合化した特定の抗体−薬物複合体を開発した。
【発明の概要】
【０００９】
本発明者らは、薬物単位（ＤＬ）が特定の鎖間システイン残基に複合化した抗体−薬物複合体が、予想外かつ有利な特性を有することを見出した。具体的には、こうした新たに開発されたＡＤＣは、本明細書に記載の有利な製造特性及び薬理学的特性を有する。
【００１０】
したがって、第１の態様は、所望の鎖間システイン残基（複数可）に対する薬物単位（ＤＬ）の複合化の有効性及び効率を向上させるためのものであり、第１の態様では、本明細書に記載の複合体の抗体は、システインではないアミノ酸による鎖間システイン残基の置換を１つまたは複数含む。
【００１１】
本明細書に記載の複合体の抗体は、抗体に対する薬物部分の複合化を目的とする未置換の鎖間システイン残基を少なくとも１つ保持する。抗体において保持される鎖間システイン残基の数は、１つ以上であるが、親（天然）抗体における鎖間システイン残基の総数には満たない。したがって、いくつかの実施形態では、抗体は、鎖間システイン残基を少なくとも１つ、少なくとも２つ、少なくとも３つ、少なくとも４つ、少なくとも５つ、少なくとも６つ、または少なくとも７つ有する。典型的な実施形態では、抗体は、偶数の鎖間システイン残基を有する（例えば、少なくとも２つ、少なくとも４つ、少なくとも６つ、または少なくとも８つ）。いくつかの実施形態では、抗体が有する鎖間システイン残基は、８つ未満である。
【００１２】
ＡｂＬＪ
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の複合体の抗体は、（ｉ）ヒンジ領域に未置換の鎖間システインを保持し、（ｉｉ）ＣＬドメインに位置する鎖間システイン残基のアミノ酸置換をそれぞれに有する軽鎖を含み、及び（ｉｉｉ）ＣＨ１ドメインに位置する未置換の鎖間システインをそれぞれに保持する重鎖を含む。例えば、いくつかの実施形態では、本明細書に記載の複合体の抗体は、（ｉ）Ｋａｂａｔに示されるＥＵインデックスによるＨＣ２２６及びＨＣ２２９を未置換で保持し、（ｉｉ）Ｋａｂａｔに示されるＥＵインデックスによる鎖間システイン残基κＬＣ２１４または鎖間システイン残基λＬＣ２１３のアミノ酸置換をそれぞれに有する軽鎖を含み、かつ（ｉｉｉ）Ｋａｂａｔに示されるＥＵインデックスによる鎖間システインＨＣ２２０をそれぞれに未置換で保持する重鎖を含む。好ましくは、薬物部分は、ＣＨ１ドメインに位置する未置換の鎖間システインに複合化され、例えば、Ｋａｂａｔに示されるＥＵインデックスによるＨＣ２２０に複合化される。
【００１３】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の複合体の抗体は、配列番号１１０のアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号１５０または配列番号１６０のアミノ酸配列を含む軽鎖を含み；
配列番号１５０の位置１０５におけるシステイン、または配列番号１６０の位置１０２におけるシステインは、システインではないアミノ酸によって置換される。好ましくは、薬物部分は、配列番号１１０の位置１０３におけるシステインに複合化される。
【００１４】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の複合体の抗体は、配列番号１２０のアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号１５０または配列番号１６０のアミノ酸配列を含む軽鎖を含み；
配列番号１５０の位置１０５におけるシステイン、または配列番号１６０の位置１０２におけるシステインは、システインではないアミノ酸によって置換される。好ましくは、薬物部分は、配列番号１２０の位置１４におけるシステインに複合化される。
【００１５】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の複合体の抗体は、配列番号１３０のアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号１５０または配列番号１６０のアミノ酸配列を含む軽鎖を含み；
配列番号１５０の位置１０５におけるシステイン、または配列番号１６０の位置１０２におけるシステインは、システインではないアミノ酸によって置換される。好ましくは、薬物部分は、配列番号１３０の位置１４におけるシステインに複合化される。
【００１６】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の複合体の抗体は、配列番号１４０のアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号１５０または配列番号１６０のアミノ酸配列を含む軽鎖を含み；
配列番号１５０の位置１０５におけるシステイン、または配列番号１６０の位置１０２におけるシステインは、システインではないアミノ酸によって置換される。好ましくは、薬物部分は、配列番号１４０の位置１４におけるシステインに複合化される。
【００１７】
ＡｂＨＪ
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の複合体の抗体は、（ｉ）ヒンジ領域に未置換の鎖間システインを保持し、（ｉｉ）ＣＬドメインに位置する未置換の鎖間システインをそれぞれに保持する軽鎖を含み、かつ（ｉｉｉ）ＣＨ１ドメインに位置する鎖間システイン残基のアミノ酸置換をそれぞれに有する重鎖を含む。例えば、いくつかの実施形態では、本明細書に記載の複合体の抗体は、（ｉ）Ｋａｂａｔに示されるＥＵインデックスによるＨＣ２２６及びＨＣ２２９を未置換で保持し、（ｉｉ）Ｋａｂａｔに示されるＥＵインデックスによる鎖間システインκＬＣ２１４または鎖間システインλＬＣ２１３をそれぞれに未置換で保持する軽鎖を含み、かつ（ｉｉｉ）Ｋａｂａｔに示されるＥＵインデックスによる鎖間システインＨＣ２２０のアミノ酸置換をそれぞれに有する重鎖を含む。好ましくは、薬物部分は、ＣＬドメインに位置する未置換の鎖間システインに複合化され、例えば、Ｋａｂａｔに示されるＥＵインデックスによるκＬＣ２１４またはλＬＣ２１３に複合化される。
【００１８】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の複合体の抗体は、配列番号１１０のアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号１５０または配列番号１６０のアミノ酸配列を含む軽鎖を含み；
配列番号１１０の位置１０３におけるシステインは、システインではないアミノ酸によって置換される。好ましくは、薬物部分は、配列番号１５０の位置１０５におけるシステイン、配列番号１６０の位置１０２におけるシステインに複合化される。
【００１９】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の複合体の抗体は、配列番号１２０のアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号１５０または配列番号１６０のアミノ酸配列を含む軽鎖を含み；
配列番号１２０の位置１４及び位置１０３におけるシステインはそれぞれ、システインではないアミノ酸によって置換される。好ましくは、薬物部分は、配列番号１５０の位置１０５におけるシステイン、配列番号１６０の位置１０２におけるシステインに複合化される。
【００２０】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の複合体の抗体は、配列番号１３０のアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号１５０または配列番号１６０のアミノ酸配列を含む軽鎖を含み；
配列番号１３０の位置１４におけるシステインは、システインではないアミノ酸によって置換される。好ましくは、薬物部分は、配列番号１５０の位置１０５におけるシステイン、配列番号１６０の位置１０２におけるシステインに複合化される。
【００２１】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の複合体の抗体は、配列番号１４０のアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号１５０または配列番号１６０のアミノ酸配列を含む軽鎖を含み；
配列番号１４０の位置１４におけるシステインは、システインではないアミノ酸によって置換される。好ましくは、薬物部分は、配列番号１５０の位置１０５におけるシステイン、配列番号１６０の位置１０２におけるシステインに複合化される。
【００２２】
ＡｂＢＪ
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の複合体の抗体は、（ｉ）ヒンジ領域において鎖間システインのそれぞれのアミノ酸置換を有し、（ｉｉ）ＣＬドメインに位置する鎖間システイン残基のアミノ酸置換をそれぞれに有する軽鎖を含み、かつ（ｉｉｉ）ＣＨ１ドメインに位置する未置換の鎖間システインをそれぞれに保持する重鎖を含む。例えば、いくつかの実施形態では、本明細書に記載の複合体の抗体は、（ｉ）Ｋａｂａｔに示されるＥＵインデックスによるＨＣ２２６及びＨＣ２２９のそれぞれのアミノ酸置換を有し、（ｉｉ）Ｋａｂａｔに示されるＥＵインデックスによる鎖間システイン残基κＬＣ２１４または鎖間システイン残基λＬＣ２１３のアミノ酸置換をそれぞれに有する軽鎖を含み、かつ（ｉｉｉ）Ｋａｂａｔに示されるＥＵインデックスによる鎖間システインＨＣ２２０をそれぞれに未置換で保持する重鎖を含む。好ましくは、薬物部分は、ＣＨ１ドメインに位置する未置換の鎖間システインに複合化され、例えば、Ｋａｂａｔに示されるＥＵインデックスによるＨＣ２２０に複合化される。
【００２３】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の複合体の抗体は、配列番号１１０のアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号１５０または配列番号１６０のアミノ酸配列を含む軽鎖を含み；
配列番号１１０の位置１０９及び位置１１２におけるシステインはそれぞれ、システインではないアミノ酸によって置換され；
かつ配列番号１５０の位置１０５におけるシステイン、または配列番号１６０の位置１０２におけるシステインは、システインではないアミノ酸によって置換される。好ましくは、薬物部分は、配列番号１１０の位置１０３におけるシステインに複合化される。
【００２４】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の複合体の抗体は、配列番号１２０のアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号１５０または配列番号１６０のアミノ酸配列を含む軽鎖を含み；
配列番号１２０の位置１０３、位置１０６、及び位置１０９におけるシステインはそれぞれ、システインではないアミノ酸によって置換され；
かつ配列番号１５０の位置１０５におけるシステイン、または配列番号１６０の位置１０２におけるシステインは、システインではないアミノ酸によって置換される。いくつかの実施形態では、配列番号１２０の位置１０２におけるシステインもまた、システインではないアミノ酸によって置換される。好ましくは、薬物部分は、配列番号１２０の位置１４におけるシステインに複合化される。
【００２５】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の複合体の抗体は、配列番号１２０のアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号１５０または配列番号１６０のアミノ酸配列を含む軽鎖を含み；
配列番号１２０の位置１４、位置１０６、及び位置１０９におけるシステインはそれぞれ、システインではないアミノ酸によって置換され；
かつ配列番号１５０の位置１０５におけるシステイン、または配列番号１６０の位置１０２におけるシステインは、システインではないアミノ酸によって置換される。いくつかの実施形態では、配列番号１２０の位置１０２におけるシステインもまた、システインではないアミノ酸によって置換される。好ましくは、薬物部分は、配列番号１２０の位置１０３におけるシステインに複合化される。
【００２６】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の複合体の抗体は、配列番号１３０のアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号１５０または配列番号１６０のアミノ酸配列を含む軽鎖を含み；
配列番号１３０の位置１１１、位置１１４、位置１２０、位置１２６、位置１２９、位置１３５、位置１４１、位置１４４、位置１５０、位置１５６、及び位置１５９におけるシステインはそれぞれ、システインではないアミノ酸によって置換され；
かつ配列番号１５０の位置１０５におけるシステイン、または配列番号１６０の位置１０２におけるシステインは、システインではないアミノ酸によって置換される。好ましくは、薬物部分は、配列番号１３０の位置１４におけるシステインに複合化される。
【００２７】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の複合体の抗体は、配列番号１４０のアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号１５０または配列番号１６０のアミノ酸配列を含む軽鎖を含み；
配列番号１４０の位置１０６及び位置１０９におけるシステインはそれぞれ、システインではないアミノ酸によって置換され；
かつ配列番号１５０の位置１０５におけるシステイン、または配列番号１６０の位置１０２におけるシステインは、システインではないアミノ酸によって置換される。好ましくは、薬物部分は、配列番号１４０の位置１４におけるシステインに複合化される。
【００２８】
ＡｂＤＪ
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の複合体の抗体は、（ｉ）ヒンジ領域において鎖間システインのそれぞれのアミノ酸置換を有し、（ｉｉ）ＣＬドメインに位置する未置換の鎖間システインをそれぞれに保持する軽鎖を含み、かつ（ｉｉｉ）ＣＨ１ドメインに位置する鎖間システイン残基のアミノ酸置換をそれぞれに有する重鎖を含む。例えば、いくつかの実施形態では、本明細書に記載の複合体の抗体は、（ｉ）Ｋａｂａｔに示されるＥＵインデックスによるＨＣ２２６及びＨＣ２２９のそれぞれのアミノ酸置換を有し、（ｉｉ）Ｋａｂａｔに示されるＥＵインデックスによる鎖間システインκＬＣ２１４または鎖間システインλＬＣ２１３をそれぞれに未置換で保持する軽鎖を含み、かつ（ｉｉｉ）Ｋａｂａｔに示されるＥＵインデックスによる鎖間システインＨＣ２２０のアミノ酸置換をそれぞれに有する重鎖を含む。好ましくは、薬物部分は、ＣＬドメインに位置する未置換の鎖間システインに複合化され、例えば、Ｋａｂａｔに示されるＥＵインデックスによるκＬＣ２１４またはλＬＣ２１３に複合化される。
【００２９】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の複合体の抗体は、配列番号１１０のアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号１５０または配列番号１６０のアミノ酸配列を含む軽鎖を含み；
配列番号１１０の位置１０３、位置１０９、及び位置１１２におけるシステインはそれぞれ、システインではないアミノ酸によって置換される。好ましくは、薬物部分は、配列番号１５０の位置１０５におけるシステイン、配列番号１６０の位置１０２におけるシステインに複合化される。
【００３０】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の複合体の抗体は、配列番号１２０のアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号１５０または配列番号１６０のアミノ酸配列を含む軽鎖を含み；
配列番号１２０の位置１４、位置１０３、位置１０６、及び位置１０９におけるシステインはそれぞれ、システインではないアミノ酸によって置換される。好ましくは、薬物部分は、配列番号１５０の位置１０５におけるシステイン、配列番号１６０の位置１０２におけるシステインに複合化される。
【００３１】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の複合体の抗体は、配列番号１３０のアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号１５０または配列番号１６０のアミノ酸配列を含む軽鎖を含み；
配列番号１３０の位置１４、位置１１１、位置１１４、位置１２０、位置１２６、位置１２９、位置１３５、位置１４１、位置１４４、位置１５０、位置１５６、及び位置１５９におけるシステインはそれぞれ、システインではないアミノ酸によって置換される。好ましくは、薬物部分は、配列番号１５０の位置１０５におけるシステイン、配列番号１６０の位置１０２におけるシステインに複合化される。
【００３２】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の複合体の抗体は、配列番号１４０のアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号１５０または配列番号１６０のアミノ酸配列を含む軽鎖を含み；
配列番号１４０の位置１４、位置１０６、及び位置１０９におけるシステインはそれぞれ、システインではないアミノ酸によって置換される。好ましくは、薬物部分は、配列番号１５０の位置１０５におけるシステイン、配列番号１６０の位置１０２におけるシステインに複合化される。
【００３３】
本発明者らは、抗体が重鎖において特定の変異、または変異の組み合わせを含む抗体−薬物複合体が予想外かつ有利な特性を有することをさらに見出した。具体的には、本発明者らは、抗体の変異を重鎖において同定し、当該変異は、こうした特定の変異を欠いた抗体を含み、それ以外は同一のＡＤＣと比較すると、こうした変異が組み込まれたＡＤＣの毒性を低減し、血中半減期を増加させるものである。
【００３４】
例えば、本発明者らは、Ｋａｂａｔに示されるＥＵインデックスの位置２３４及び位置２３５におけるロイシン残基（配列番号１１０における残基Ｌ１１７及び残基Ｌ１１８）が、ロイシンではないアミノ酸によって置換されると、ＡＤＣに有利な特性を付与する残基であるということをＩｇＧ１アイソタイプにおいて同定した。
【００３５】
したがって、第２の態様では、本明細書に記載の複合体の抗体は、Ｋａｂａｔに示されるＥＵインデックスの位置２３４における残基の置換、及び／またはＫａｂａｔに示されるＥＵインデックスの位置２３５における残基の置換を有する重鎖を含み、こうした置換は、任意の他のアミノ酸（すなわち、「野生型」配列に見られるものと同一ではないアミノ酸）によるものである。好ましくは、Ｋａｂａｔに示されるＥＵインデックスの位置２３４及び位置２３５における残基は両方共、任意の他のアミノ酸によって置換される。
【００３６】
いくつかの実施形態では、抗体は、ＩｇＧ１アイソタイプであり、Ｋａｂａｔに示されるＥＵインデックスの位置２３４におけるロイシン、及び／またはＫａｂａｔに示されるＥＵインデックスの位置２３５におけるロイシンは、ロイシンではないアミノ酸によって置換される。好ましくは、Ｋａｂａｔに示されるＥＵインデックスの位置２３４及び位置２３５におけるロイシンは両方共、アラニンなどの、ロイシンではないアミノ酸によって置換される。一方または両方のロイシンを、グリシン、バリン、またはイソロイシンなどの、ロイシンではない他のアミノ酸によって置換してもよい。
【００３７】
例えば、いくつかの実施形態では、本明細書に記載の複合体の抗体は、配列番号１１０のアミノ酸配列を含む重鎖を含み、位置１１７におけるロイシン、及び／または位置１１８におけるロイシンは、アラニンなどの、ロイシンではないアミノ酸によって置換される。好ましくは、位置１１７及び位置１１８におけるロイシンは両方共、アラニンなどの、ロイシンではないアミノ酸によって置換される。一方または両方のロイシンを、グリシン、バリン、またはイソロイシンなどの、ロイシンではない他のアミノ酸によって置換してもよい。
【００３８】
いくつかの実施形態では、抗体は、ＩｇＧ３アイソタイプであり、Ｋａｂａｔに示されるＥＵインデックスの位置２３４におけるロイシン、及び／またはＫａｂａｔに示されるＥＵインデックスの位置２３５におけるロイシンは、ロイシンではないアミノ酸によって置換される。好ましくは、Ｋａｂａｔに示されるＥＵインデックスの位置２３４及び位置２３５におけるロイシンは両方共、アラニンなどの、ロイシンではないアミノ酸によって置換される。一方または両方のロイシンを、グリシン、バリン、またはイソロイシンなどの、ロイシンではない他のアミノ酸によって置換してもよい。
【００３９】
例えば、いくつかの実施形態では、本明細書に記載の複合体の抗体は、配列番号１３０のアミノ酸配列を含む重鎖を含み、位置１６４におけるロイシン、及び／または位置１６５におけるロイシンは、アラニンなどの、ロイシンではないアミノ酸によって置換される。好ましくは、位置１６４及び位置１６５におけるロイシンは両方共、アラニンなどの、ロイシンではないアミノ酸によって置換される。一方または両方のロイシンを、グリシン、バリン、またはイソロイシンなどの、ロイシンではない他のアミノ酸によって置換してもよい。
【００４０】
いくつかの実施形態では、抗体は、ＩｇＧ４アイソタイプであり、Ｋａｂａｔに示されるＥＵインデックスの位置２３５におけるロイシンは、アラニンなどの、ロイシンではないアミノ酸によって置換される。ロイシンは、グリシン、バリン、またはイソロイシンなどの、ロイシンではない他のアミノ酸によって置換してもよい。
【００４１】
例えば、いくつかの実施形態では、本明細書に記載の複合体の抗体は、配列番号１４０のアミノ酸配列を含む重鎖を含み、位置１１５におけるロイシンは、アラニンなどの、ロイシンではないアミノ酸によって置換される。ロイシンは、グリシン、バリン、またはイソロイシンなどの、ロイシンではない他のアミノ酸によって置換してもよい。
【００４２】
第１の態様に記載の改変と、第２の態様に記載の改変と、を同一の抗体において有利に組み合わせることができる。
【００４３】
したがって、第３の態様では、本明細書に記載の複合体の抗体は、
（１）システインではないアミノ酸による鎖間システイン残基の置換を１つまたは複数含み、抗体に対する薬物部分の複合化を目的とする未置換の鎖間システイン残基を少なくとも１つ保持し；かつ（２）Ｋａｂａｔに示されるＥＵインデックスの位置２３４における残基の置換、及び／またはＫａｂａｔに示されるＥＵインデックスの位置２３５における残基の置換を有する重鎖を含み、こうした置換は、任意の他のアミノ酸（すなわち、「野生型」配列に見られるものと同一ではないアミノ酸）によるものである。
【００４４】
ＡｂＬＪ（ＬＡＬＡ）
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の複合体の抗体は、（ｉ）ヒンジ領域に未置換の鎖間システインを保持し、（ｉｉ）ＣＬドメインに位置する鎖間システイン残基のアミノ酸置換をそれぞれに有する軽鎖を含み、（ｉｉｉ）ＣＨ１ドメインに位置する未置換の鎖間システインをそれぞれに保持する重鎖を含み、かつ（ｉｖ）Ｋａｂａｔに示されるＥＵインデックスの位置２３４における残基のアミノ酸置換、及び／またはＫａｂａｔに示されるＥＵインデックスの位置２３５における残基の置換をそれぞれに有する重鎖を含む。
【００４５】
例えば、いくつかの実施形態では、本明細書に記載の複合体の抗体は、（ｉ）Ｋａｂａｔに示されるＥＵインデックスによるＨＣ２２６及びＨＣ２２９を未置換で保持し、（ｉｉ）Ｋａｂａｔに示されるＥＵインデックスによる鎖間システイン残基κＬＣ２１４または鎖間システイン残基λＬＣ２１３のアミノ酸置換をそれぞれに有する軽鎖を含み、（ｉｉｉ）Ｋａｂａｔに示されるＥＵインデックスによる鎖間システインＨＣ２２０をそれぞれに未置換で保持する重鎖を含み、かつ（ｉｖ）Ｋａｂａｔに示されるＥＵインデックスの位置２３４における残基のアミノ酸置換、及び／またはＫａｂａｔに示されるＥＵインデックスの位置２３５における残基の置換をそれぞれに有する重鎖を含み、こうした置換は、任意の他のアミノ酸によるものである。好ましくは、Ｋａｂａｔに示されるＥＵインデックスの位置２３４及び位置２３５における残基は両方共置換される。好ましくは、薬物部分は、ＣＨ１ドメインに位置する未置換の鎖間システインに複合化され、例えば、Ｋａｂａｔに示されるＥＵインデックスによるＨＣ２２０に複合化される。
【００４６】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の複合体の抗体は、配列番号１１０のアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号１５０または配列番号１６０のアミノ酸配列を含む軽鎖を含み；
配列番号１５０の位置１０５におけるシステイン、または配列番号１６０の位置１０２におけるシステインは、システインではないアミノ酸によって置換され；
かつ配列番号１１０の位置１１７におけるロイシン、及び／または配列番号１１０の位置１１８におけるロイシンは、アラニンなどの、ロイシンではないアミノ酸によって置換される。好ましくは、薬物部分は、配列番号１１０の位置１０３におけるシステインに複合化される。好ましくは、配列番号１１０の位置１１７及び位置１１８におけるロイシンは両方共、アラニンなどの、ロイシンではないアミノ酸によって置換される。一方または両方のロイシンを、グリシン、バリン、またはイソロイシンなどの、ロイシンではない他のアミノ酸によって置換してもよい。
【００４７】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の複合体の抗体は、配列番号１３０のアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号１５０または配列番号１６０のアミノ酸配列を含む軽鎖を含み；
配列番号１５０の位置１０５におけるシステイン、または配列番号１６０の位置１０２におけるシステインは、システインではないアミノ酸によって置換され；
かつ配列番号１３０の位置１６４におけるロイシン、及び／または配列番号１３０の位置１６５におけるロイシンは、アラニンなどの、ロイシンではないアミノ酸によって置換される。好ましくは、薬物部分は、配列番号１３０の位置１４におけるシステインに複合化される。好ましくは、配列番号１３０の位置１６４及び位置１６５におけるロイシンは両方共、アラニンなどの、ロイシンではないアミノ酸によって置換される。一方または両方のロイシンを、グリシン、バリン、またはイソロイシンなどの、ロイシンではない他のアミノ酸によって置換してもよい。
【００４８】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の複合体の抗体は、配列番号１４０のアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号１５０または配列番号１６０のアミノ酸配列を含む軽鎖を含み；
配列番号１５０の位置１０５におけるシステイン、または配列番号１６０の位置１０２におけるシステインは、システインではないアミノ酸によって置換され；
かつ配列番号１４０の位置１１５におけるロイシンは、アラニンなどの、ロイシンではないアミノ酸によって置換される。好ましくは、薬物部分は、配列番号１４０の位置１４におけるシステインに複合化される。ロイシンは、グリシン、バリン、またはイソロイシンなどの、ロイシンではない他のアミノ酸によって置換してもよい。
【００４９】
ＡｂＨＪ（ＬＡＬＡ）
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の複合体の抗体は、（ｉ）ヒンジ領域に未置換の鎖間システインを保持し、（ｉｉ）ＣＬドメインに位置する未置換の鎖間システインをそれぞれに保持する軽鎖を含み、（ｉｉｉ）ＣＨ１ドメインに位置する鎖間システイン残基のアミノ酸置換をそれぞれに有する重鎖を含み、かつ（ｉｖ）Ｋａｂａｔに示されるＥＵインデックスの位置２３４における残基のアミノ酸置換、及び／またはＫａｂａｔに示されるＥＵインデックスの位置２３５における残基の置換をそれぞれに有する重鎖を含む。
【００５０】
例えば、いくつかの実施形態では、本明細書に記載の複合体の抗体は、（ｉ）Ｋａｂａｔに示されるＥＵインデックスによるＨＣ２２６及びＨＣ２２９を未置換で保持し、（ｉｉ）Ｋａｂａｔに示されるＥＵインデックスによる鎖間システインκＬＣ２１４または鎖間システインλＬＣ２１３をそれぞれに未置換で保持する軽鎖を含み、（ｉｉｉ）Ｋａｂａｔに示されるＥＵインデックスによる鎖間システインＨＣ２２０のアミノ酸置換をそれぞれに有する重鎖を含み、かつ（ｉｖ）Ｋａｂａｔに示されるＥＵインデックスの位置２３４における残基のアミノ酸置換、及び／またはＫａｂａｔに示されるＥＵインデックスの位置２３５における残基の置換をそれぞれに有する重鎖を含み、こうした置換は、任意の他のアミノ酸によるものである。好ましくは、Ｋａｂａｔに示されるＥＵインデックスの位置２３４及び位置２３５における残基は両方共置換される。好ましくは、薬物部分は、ＣＬドメインに位置する未置換の鎖間システインに複合化され、例えば、Ｋａｂａｔに示されるＥＵインデックスによるκＬＣ２１４またはλＬＣ２１３に複合化される。
【００５１】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の複合体の抗体は、配列番号１１０のアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号１５０または配列番号１６０のアミノ酸配列を含む軽鎖を含み；
配列番号１１０の位置１０３におけるシステインは、システインではないアミノ酸によって置換され；
かつ配列番号１１０の位置１１７におけるロイシン、及び／または配列番号１１０の位置１１８におけるロイシンは、アラニンなどの、ロイシンではないアミノ酸によって置換される。好ましくは、薬物部分は、配列番号１５０の位置１０５におけるシステイン、配列番号１６０の位置１０２におけるシステインに複合化される。好ましくは、配列番号１１０の位置１１７及び位置１１８におけるロイシンは両方共、アラニンなどの、ロイシンではないアミノ酸によって置換される。一方または両方のロイシンを、グリシン、バリン、またはイソロイシンなどの、ロイシンではない他のアミノ酸によって置換してもよい。
【００５２】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の複合体の抗体は、配列番号１３０のアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号１５０または配列番号１６０のアミノ酸配列を含む軽鎖を含み；
配列番号１３０の位置１４におけるシステインは、システインではないアミノ酸によって置換され；
かつ配列番号１３０の位置１６４におけるロイシン、及び／または配列番号１３０の位置１６５におけるロイシンは、アラニンなどの、ロイシンではないアミノ酸によって置換される。好ましくは、薬物部分は、配列番号１５０の位置１０５におけるシステイン、配列番号１６０の位置１０２におけるシステインに複合化される。好ましくは、配列番号１３０の位置１６４及び位置１６５におけるロイシンは両方共、アラニンなどの、ロイシンではないアミノ酸によって置換される。一方または両方のロイシンを、グリシン、バリン、またはイソロイシンなどの、ロイシンではない他のアミノ酸によって置換してもよい。
【００５３】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の複合体の抗体は、配列番号１４０のアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号１５０または配列番号１６０のアミノ酸配列を含む軽鎖を含み；
配列番号１４０の位置１４におけるシステインは、システインではないアミノ酸によって置換され；
かつ配列番号１４０の位置１１５におけるロイシンは、アラニンなどの、ロイシンではないアミノ酸によって置換される。好ましくは、薬物部分は、配列番号１５０の位置１０５におけるシステイン、配列番号１６０の位置１０２におけるシステインに複合化される。ロイシンは、グリシン、バリン、またはイソロイシンなどの、ロイシンではない他のアミノ酸によって置換してもよい。
【００５４】
ＡｂＢＪ（ＬＡＬＡ）
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の複合体の抗体は、（ｉ）ヒンジ領域において鎖間システインのそれぞれのアミノ酸置換を有し、（ｉｉ）ＣＬドメインに位置する鎖間システイン残基のアミノ酸置換をそれぞれに有する軽鎖を含み、（ｉｉｉ）ＣＨ１ドメインに位置する未置換の鎖間システインをそれぞれに保持する重鎖を含み、かつ（ｉｖ）Ｋａｂａｔに示されるＥＵインデックスの位置２３４における残基のアミノ酸置換、及び／またはＫａｂａｔに示されるＥＵインデックスの位置２３５における残基の置換をそれぞれに有する重鎖を含む。
【００５５】
例えば、いくつかの実施形態では、本明細書に記載の複合体の抗体は、（ｉ）Ｋａｂａｔに示されるＥＵインデックスによるＨＣ２２６及びＨＣ２２９のそれぞれのアミノ酸置換を有し、（ｉｉ）Ｋａｂａｔに示されるＥＵインデックスによる鎖間システイン残基κＬＣ２１４または鎖間システイン残基λＬＣ２１３のアミノ酸置換をそれぞれに有する軽鎖を含み、（ｉｉｉ）Ｋａｂａｔに示されるＥＵインデックスによる鎖間システインＨＣ２２０をそれぞれに未置換で保持する重鎖を含み、かつ（ｉｖ）Ｋａｂａｔに示されるＥＵインデックスの位置２３４における残基のアミノ酸置換、及び／またはＫａｂａｔに示されるＥＵインデックスの位置２３５における残基の置換をそれぞれに有する重鎖を含み、こうした置換は、任意の他のアミノ酸によるものである。好ましくは、Ｋａｂａｔに示されるＥＵインデックスの位置２３４及び位置２３５における残基は両方共置換される。好ましくは、薬物部分は、ＣＨ１ドメインに位置する未置換の鎖間システインに複合化され、例えば、Ｋａｂａｔに示されるＥＵインデックスによるＨＣ２２０に複合化される。
【００５６】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の複合体の抗体は、配列番号１１０のアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号１５０または配列番号１６０のアミノ酸配列を含む軽鎖を含み；
配列番号１１０の位置１０９及び位置１１２におけるシステインはそれぞれ、システインではないアミノ酸によって置換され；
かつ配列番号１５０の位置１０５におけるシステイン、または配列番号１６０の位置１０２におけるシステインは、システインではないアミノ酸によって置換され；
かつ配列番号１１０の位置１１７におけるロイシン、及び／または配列番号１１０の位置１１８におけるロイシンは、アラニンなどの、ロイシンではないアミノ酸によって置換される。好ましくは、薬物部分は、配列番号１１０の位置１０３におけるシステインに複合化される。好ましくは、配列番号１１０の位置１１７及び位置１１８におけるロイシンは両方共、アラニンなどの、ロイシンではないアミノ酸によって置換される。一方または両方のロイシンを、グリシン、バリン、またはイソロイシンなどの、ロイシンではない他のアミノ酸によって置換してもよい。
【００５７】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の複合体の抗体は、配列番号１３０のアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号１５０または配列番号１６０のアミノ酸配列を含む軽鎖を含み；
配列番号１３０の位置１１１、位置１１４、位置１２０、位置１２６、位置１２９、位置１３５、位置１４１、位置１４４、位置１５０、位置１５６、及び位置１５９におけるシステインはそれぞれ、システインではないアミノ酸によって置換され；
かつ配列番号１５０の位置１０５におけるシステイン、または配列番号１６０の位置１０２におけるシステインは、システインではないアミノ酸によって置換され；
かつ配列番号１３０の位置１６４におけるロイシン、及び／または配列番号１３０の位置１６５におけるロイシンは、アラニンなどの、ロイシンではないアミノ酸によって置換される。好ましくは、薬物部分は、配列番号１３０の位置１４におけるシステインに複合化される。好ましくは、配列番号１３０の位置１６４及び位置１６５におけるロイシンは両方共、アラニンなどの、ロイシンではないアミノ酸によって置換される。一方または両方のロイシンを、グリシン、バリン、またはイソロイシンなどの、ロイシンではない他のアミノ酸によって置換してもよい。
【００５８】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の複合体の抗体は、配列番号１４０のアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号１５０または配列番号１６０のアミノ酸配列を含む軽鎖を含み；
配列番号１４０の位置１０６及び位置１０９におけるシステインはそれぞれ、システインではないアミノ酸によって置換され；
ならびに配列番号１５０の位置１０５におけるシステイン、または配列番号１６０の位置１０２におけるシステインは、システインではないアミノ酸によって置換され；
かつ配列番号１４０の位置１１５におけるロイシンは、アラニンなどの、ロイシンではないアミノ酸によって置換される。好ましくは、薬物部分は、配列番号１４０の位置１４におけるシステインに複合化される。ロイシンは、グリシン、バリン、またはイソロイシンなどの、ロイシンではない他のアミノ酸によって置換してもよい。
【００５９】
ＡｂＤＪ（ＬＡＬＡ）
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の複合体の抗体は、（ｉ）ヒンジ領域において鎖間システインのそれぞれのアミノ酸置換を有し、（ｉｉ）ＣＬドメインに位置する未置換の鎖間システインをそれぞれに保持する軽鎖を含み、（ｉｉｉ）ＣＨ１ドメインに位置する鎖間システイン残基のアミノ酸置換をそれぞれに有する重鎖を含み、かつ（ｉｖ）Ｋａｂａｔに示されるＥＵインデックスの位置２３４における残基のアミノ酸置換、及び／またはＫａｂａｔに示されるＥＵインデックスの位置２３５における残基の置換をそれぞれに有する重鎖を含む。
【００６０】
例えば、いくつかの実施形態では、本明細書に記載の複合体の抗体は、（ｉ）Ｋａｂａｔに示されるＥＵインデックスによるＨＣ２２６及びＨＣ２２９のそれぞれのアミノ酸置換を有し、（ｉｉ）Ｋａｂａｔに示されるＥＵインデックスによる鎖間システインκＬＣ２１４または鎖間システインλＬＣ２１３をそれぞれに未置換で保持する軽鎖を含み、（ｉｉｉ）Ｋａｂａｔに示されるＥＵインデックスによる鎖間システインＨＣ２２０のアミノ酸置換をそれぞれに有する重鎖を含み、かつ（ｉｖ）Ｋａｂａｔに示されるＥＵインデックスの位置２３４における残基のアミノ酸置換、及び／またはＫａｂａｔに示されるＥＵインデックスの位置２３５における残基の置換をそれぞれに有する重鎖を含み、こうした置換は、任意の他のアミノ酸によるものである。好ましくは、Ｋａｂａｔに示されるＥＵインデックスの位置２３４及び位置２３５における残基は両方共置換される。好ましくは、薬物部分は、ＣＬドメインに位置する未置換の鎖間システインに複合化され、例えば、Ｋａｂａｔに示されるＥＵインデックスによるκＬＣ２１４またはλＬＣ２１３に複合化される。
【００６１】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の複合体の抗体は、配列番号１１０のアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号１５０または配列番号１６０のアミノ酸配列を含む軽鎖を含み；
配列番号１１０の位置１０３、位置１０９、及び位置１１２におけるシステインはそれぞれ、システインではないアミノ酸によって置換され；
かつ配列番号１１０の位置１１７におけるロイシン、及び／または配列番号１１０の位置１１８におけるロイシンは、アラニンなどの、ロイシンではないアミノ酸によって置換される。好ましくは、薬物部分は、配列番号１５０の位置１０５におけるシステイン、配列番号１６０の位置１０２におけるシステインに複合化される。好ましくは、配列番号１１０の位置１１７及び位置１１８におけるロイシンは両方共、アラニンなどの、ロイシンではないアミノ酸によって置換される。一方または両方のロイシンを、グリシン、バリン、またはイソロイシンなどの、ロイシンではない他のアミノ酸によって置換してもよい。
【００６２】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の複合体の抗体は、配列番号１３０のアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号１５０または配列番号１６０のアミノ酸配列を含む軽鎖を含み；
配列番号１３０の位置１４、位置１１１、位置１１４、位置１２０、位置１２６、位置１２９、位置１３５、位置１４１、位置１４４、位置１５０、位置１５６、及び位置１５９におけるシステインはそれぞれ、システインではないアミノ酸によって置換され；
かつ配列番号１３０の位置１６４におけるロイシン、及び／または配列番号１３０の位置１６５におけるロイシンは、アラニンなどの、ロイシンではないアミノ酸によって置換される。好ましくは、薬物部分は、配列番号１５０の位置１０５におけるシステイン、配列番号１６０の位置１０２におけるシステインに複合化される。好ましくは、配列番号１３０の位置１６４及び位置１６５におけるロイシンは両方共、アラニンなどの、ロイシンではないアミノ酸によって置換される。一方または両方のロイシンを、グリシン、バリン、またはイソロイシンなどの、ロイシンではない他のアミノ酸によって置換してもよい。
【００６３】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の複合体の抗体は、配列番号１４０のアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号１５０または配列番号１６０のアミノ酸配列を含む軽鎖を含み；
配列番号１４０の位置１４、位置１０６、及び位置１０９におけるシステインはそれぞれ、システインではないアミノ酸によって置換され；
かつ配列番号１４０の位置１１５におけるロイシンは、アラニンなどの、ロイシンではないアミノ酸によって置換される。好ましくは、薬物部分は、配列番号１５０の位置１０５におけるシステイン、配列番号１６０の位置１０２におけるシステインに複合化される。ロイシンは、グリシン、バリン、またはイソロイシンなどの、ロイシンではない他のアミノ酸によって置換してもよい。
【図面の簡単な説明】
【００６４】
【図１】実施例７に記載の部位特異的ＡＤＣの全身毒性の比較を示す。
【発明を実施するための形態】
【００６５】
本明細書では、切断性のＣ２位保護基またはＮ１０位保護基を有するピロロベンゾジアゼピン（ＰＢＤ）薬物部分と、ＣＤ２２に結合する抗体と、を含む複合体について記載され、抗体は、システインではないアミノ酸による鎖間システイン残基のアミノ酸置換を含み、かつ薬物部分は、鎖間システイン残基に複合化される。
【００６６】
本明細書では、他の（すなわち、非ＰＢＤ）機能性部分に複合化した本明細書に記載の抗体を含む複合体についても記載される。機能性部分の例には、薬物（ＰＢＤまたは非ＰＢＤ）、レポーター、有機部分（ｏｒｇａｎｉｃ  ｍｏｉｅｔｙ）、及び／または結合性部分が含まれる。
【００６７】
本明細書に記載の抗体断片を含む複合体、及び複合体を含む医薬組成物もまた企図される。抗体または抗体断片の例には、ｓｃＦｖ−Ｆｃ融合体及び低分子化抗体（ｍｉｎｉｂｏｄｙ）が含まれる。複合体の調製方法及び複合体の使用方法、ならびに多くの疾患を治療するための複合体の使用方法について開示される。
【００６８】
ピロロベンゾジアゼピン
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の複合体は、ＰＢＤ薬物部分を含む。ピロロベンゾジアゼピン（ＰＢＤ）のいくつかは、特定のＤＮＡ配列を認識して結合する能力を有しており、この認識結合に好ましい配列は、ＰｕＧＰｕである。最初のＰＢＤ抗腫瘍抗生物質であるアントラマイシンは、１９６５年に発見された（Ｌｅｉｍｇｒｕｂｅｒ，ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．，８７，５７９３−５７９５（１９６５）；Ｌｅｉｍｇｒｕｂｅｒ，ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．，８７，５７９１−５７９３（１９６５））。それ以来、天然起源のＰＢＤが多く報告されており、さまざまな類似体に対する合成経路が開発され、これまでに開発された合成経路の数は１０を超えている（Ｔｈｕｒｓｔｏｎ，ｅｔ  ａｌ．，Ｃｈｅｍ．Ｒｅｖ．１９９４，４３３−４６５（１９９４）；Ａｎｔｏｎｏｗ，Ｄ．ａｎｄ  Ｔｈｕｒｓｔｏｎ，Ｄ．Ｅ．，Ｃｈｅｍ．Ｒｅｖ．２０１１  １１１（４），２８１５−２８６４）。ファミリーのメンバーには、アッベイマイシン（ａｂｂｅｙｍｙｃｉｎ）（Ｈｏｃｈｌｏｗｓｋｉ，ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ，４０，１４５−１４８（１９８７））、チカマイシン（ｃｈｉｃａｍｙｃｉｎ）（Ｋｏｎｉｓｈｉ，ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ，３７，２００−２０６（１９８４））、ＤＣ−８１（日本国特許５８−１８０  ４８７；Ｔｈｕｒｓｔｏｎ，ｅｔ  ａｌ．，Ｃｈｅｍ．Ｂｒｉｔ．，２６，７６７−７７２（１９９０）；Ｂｏｓｅ，ｅｔ  ａｌ．，Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ，４８，７５１−７５８（１９９２））、マゼトラマイシン（ｍａｚｅｔｈｒａｍｙｃｉｎ）（Ｋｕｍｉｎｏｔｏ，ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ，３３，６６５−６６７（１９８０））、ネオトラマイシンＡ（ｎｅｏｔｈｒａｍｙｃｉｎｓ  Ａ）及びネオトラマイシンＢ（ｎｅｏｔｈｒａｍｙｃｉｎ  Ｂ）（Ｔａｋｅｕｃｈｉ，ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ，２９，９３−９６（１９７６））、ポロトラマイシン（ｐｏｒｏｔｈｒａｍｙｃｉｎ）（Ｔｓｕｎａｋａｗａ，ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ，４１，１３６６−１３７３（１９８８））、プロトラカルシン（ｐｒｏｔｈｒａｃａｒｃｉｎ）（Ｓｈｉｍｉｚｕ，ｅｔ  ａｌ，Ｊ．Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ，２９，２４９２−２５０３（１９８２）；Ｌａｎｇｌｅｙ  ａｎｄ  Ｔｈｕｒｓｔｏｎ，Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．，５２，９１−９７（１９８７））、シバノマイシン（ｓｉｂａｎｏｍｉｃｉｎ）（ＤＣ−１０２）（Ｈａｒａ，ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ，４１，７０２−７０４（１９８８）；Ｉｔｏｈ，ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ，４１，１２８１−１２８４（１９８８））、シビロマイシン（ｓｉｂｉｒｏｍｙｃｉｎ）（Ｌｅｂｅｒ，ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．，１１０，２９９２−２９９３（１９８８））、ならびにトママイシン（ｔｏｍａｍｙｃｉｎ）（Ａｒｉｍａ，ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ，２５，４３７−４４４（１９７２））が含まれる。ＰＢＤは、下記の一般構造を有する：
【化１】
2018516243.tif 000003
【００６９】
ＰＢＤは、その芳香族Ａ環及びピロロＣ環の両方における置換基の数、型、及び位置が異なり、Ｃ環においては、飽和度が異なる。Ｂ環には、ＤＮＡのアルキル化を担う求電子中心であるＮ１０位〜Ｃ１１位に、イミン（Ｎ＝Ｃ）、カルビノールアミン（ＮＨ−ＣＨ（ＯＨ））、またはカルビノールアミンメチルエーテル（ＮＨ−ＣＨ（ＯＭｅ））のいずれかが存在する。既知の天然物はすべて、キラルであるＣ１１ａ位が（Ｓ）の配置を有しており、この配置をとることによって、Ｃ環からＡ環の向きで眺めると右回りとなるねじれがＰＢＤに生じる。これによって、Ｂ型ＤＮＡの副溝と螺旋度が等しくなるように適切な三次元形がＰＢＤに生じ、その結果、結合部位にぴったりと適合するようになる（Ｋｏｈｎ，Ｉｎ  Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ  ＩＩＩ．Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，ｐｐ．３−１１（１９７５）；Ｈｕｒｌｅｙ  ａｎｄ  Ｎｅｅｄｈａｍ−ＶａｎＤｅｖａｎｔｅｒ，Ａｃｃ．Ｃｈｅｍ．Ｒｅｓ．，１９，２３０−２３７（１９８６））。ＰＢＤは、副溝に付加物を形成する能力を有していることから、ＤＮＡのプロセシングを妨害することが可能であり、したがって、ＰＢＤは、抗腫瘍剤として使用される。
【００７０】
ピロロベンゾジアゼピン化合物の１つは、化合物１としてＧｒｅｇｓｏｎら（Ｃｈｅｍ．Ｃｏｍｍｕｎ．１９９９，７９７−７９８）によって、かつ化合物４ａとしてＧｒｅｇｓｏｎら（Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．２００１，４４，１１６１−１１７４）によって説明されている。この化合物は、ＳＧ２０００としても知られており、以下に示されるものである：
【化２】
2018516243.tif 000004
【００７１】
ＷＯ２００７／０８５９３０では、抗体などの細胞結合性物質との連結のためのリンカー基を有する二量体ＰＢＤ化合物の調製について説明されている。リンカーは、二量体の単量体ＰＢＤ単位を連結している架橋に存在する。
【００７２】
ＷＯ２０１１／１３０６１３及びＷＯ２０１１／１３０６１６では、抗体などの細胞結合性物質との連結のためのリンカー基を有する二量体ＰＢＤ化合物について説明されている。こうした化合物におけるリンカーは、Ｃ２位を介してＰＢＤコアに結合しており、一般に、リンカー基に酵素が作用することによって切断される。ＷＯ２０１１／１３０５９８では、こうした化合物におけるリンカーは、ＰＢＤコアに存在する利用可能なＮ１０位の１つに結合しており、一般に、リンカー基に酵素が作用することによって切断される。
【００７３】
ＰＢＤ薬物部分を含む複合体
本発明者らは、薬物単位（ＤＬ）が特定の鎖間システイン残基に複合化した複合体が、予想外かつ有利な特性を有することを見出した。こうした特性には、向上した有効性及び安定性、改善した製造容易性、ならびに減少した全身毒性が含まれる。
【００７４】
したがって、本開示の１つの態様では、式Ｌ−（ＤＬ）ｐの複合体が提供され、ここで、ＤＬは、式Ｉまたは式ＩＩ：：
【化３】
2018516243.tif 000005
を有し、
式中：
Ｌは、ＣＤ２２に結合する抗体（Ａｂ）であり；
Ｃ２’とＣ３’との間に二重結合が存在するとき、Ｒ１２は、
（ｉａ）ハロ、ニトロ、シアノ、エーテル、カルボキシ、エステル、Ｃ１−７アルキル、Ｃ３−７ヘテロシクリル、及びビス−オキシ−Ｃ１−３アルキレンを含む群から選択される１つまたは複数の置換基によって任意選択で置換されたＣ５−１０アリール基；
（ｉｂ）Ｃ１−５飽和脂肪族アルキル；
（ｉｃ）Ｃ３−６飽和シクロアルキル；
（ｉｄ）Ｒ２１、Ｒ２２、及びＲ２３が、Ｈ、Ｃ１−３飽和アルキル、Ｃ２−３アルケニル、Ｃ２−３アルキニル、及びシクロプロピルからそれぞれ独立して選択され、Ｒ１２基における炭素原子の総数が５以下である、
【化４】
2018516243.tif 000006
（ｉｅ）Ｒ２５ａ及びＲ２５ｂの一方がＨであり、もう一方が、ハロ、メチル、メトキシから選択される基によって任意選択で置換されたフェニルと、ピリジルと、チオフェニルと、から選択される、
【化５】
2018516243.tif 000007
ならびに
（ｉｆ）Ｒ２４が、Ｈと、Ｃ１−３飽和アルキルと、Ｃ２−３アルケニルと、Ｃ２−３アルキニルと、シクロプロピルと、ハロ、メチル、メトキシから選択される基によって任意選択で置換されたフェニルと、ピリジルと、チオフェニルと、から選択される、
【化６】
2018516243.tif 000008
からなる群から選択され、
Ｃ２’とＣ３’との間に単結合が存在するとき、
Ｒ１２は、
【化７】
2018516243.tif 000009
であり、ここで、Ｒ２６ａ及びＲ２６ｂは、Ｈ、Ｆ、Ｃ１−４飽和アルキル、Ｃ２−３アルケニルから独立して選択され、当該アルキル基及びアルケニル基は、Ｃ１−４アルキルアミド及びＣ１−４アルキルエステルから選択される基によって任意選択で置換され、またはＲ２６ａ及びＲ２６ｂの一方がＨであるとき、もう一方は、ニトリル及びＣ１−４アルキルエステルから選択され；
Ｒ６及びＲ９は、Ｈ、Ｒ、ＯＨ、ＯＲ、ＳＨ、ＳＲ、ＮＨ２、ＮＨＲ、ＮＲＲ’、ニトロ、Ｍｅ３Ｓｎ、及びハロから独立して選択され；
ここで、Ｒ及びＲ’は、任意選択で置換されたＣ１−１２アルキル基、Ｃ３−２０ヘテロシクリル基、及びＣ５−２０アリール基から独立して選択され；
Ｒ７は、Ｈ、Ｒ、ＯＨ、ＯＲ、ＳＨ、ＳＲ、ＮＨ２、ＮＨＲ、ＮＨＲＲ’、ニトロ、Ｍｅ３Ｓｎ、及びハロから選択され；
Ｒ’’は、Ｃ３−１２アルキレン基であり、当該Ｃ３−１２アルキレン基の鎖は、例えば、Ｏ、Ｓ、ＮＲＮ２（ＲＮ２は、ＨもしくはＣ１−４アルキルである）といった、１つもしくは複数のヘテロ原子、及び／または例えば、ベンゼンもしくはピリジンといった、１つもしくは複数の芳香族環によって分断され得るものであり；
Ｙ及びＹ’は、Ｏ、Ｓ、またはＮＨから選択され；
Ｒ６’、Ｒ７’、Ｒ９’は、それぞれＲ６、Ｒ７、及びＲ９と同一の群から選択され；
［式Ｉ］
ＲＬ１’は、抗体（Ａｂ）への連結のためのリンカーであり；
Ｒ１１ａは、ＯＨ、ＯＲＡ（ＲＡは、Ｃ１−４アルキルである）、及びＳＯｚＭ（ｚは、２または３である）から選択され、かつＭは、医薬的に許容可能な一価の陽イオンであり；
Ｒ２０及びＲ２１は、共に一緒になって、それらが結合している窒素原子と炭素原子との間に二重結合を形成するか、または；
Ｒ２０は、Ｈ及びＲＣから選択され、ここで、ＲＣは、キャッピング基（ｃａｐｐｉｎｇ  ｇｒｏｕｐ）であり；
Ｒ２１は、ＯＨ、ＯＲＡ、及びＳＯｚＭから選択され；
Ｃ２とＣ３との間に二重結合が存在するとき、Ｒ２は、
（ｉａ）ハロ、ニトロ、シアノ、エーテル、カルボキシ、エステル、Ｃ１−７アルキル、Ｃ３−７ヘテロシクリル、及びビス−オキシ−Ｃ１−３アルキレンを含む群から選択される１つまたは複数の置換基によって任意選択で置換されたＣ５−１０アリール基；
（ｉｂ）Ｃ１−５飽和脂肪族アルキル；
（ｉｃ）Ｃ３−６飽和シクロアルキル；
（ｉｄ）Ｒ１１、Ｒ１２、及びＲ１３が、Ｈ、Ｃ１−３飽和アルキル、Ｃ２−３アルケニル、Ｃ２−３アルキニル、及びシクロプロピルからそれぞれ独立して選択され、Ｒ２基における炭素原子の総数が５以下である、
【化８】
2018516243.tif 000010
（ｉｅ）Ｒ１５ａ及びＲ１５ｂの一方がＨであり、もう一方が、ハロ、メチル、メトキシから選択される基によって任意選択で置換されたフェニルと、ピリジルと、チオフェニルと、から選択される、
【化９】
2018516243.tif 000011
ならびに
（ｉｆ）Ｒ１４が、Ｈと、Ｃ１−３飽和アルキルと、Ｃ２−３アルケニルと、Ｃ２−３アルキニルと、シクロプロピルと、ハロ、メチル、メトキシから選択される基によって任意選択で置換されたフェニルと、ピリジルと、チオフェニルと、から選択される、
【化１０】
2018516243.tif 000012
からなる群から選択され、
Ｃ２とＣ３との間に単結合が存在するとき、
Ｒ２は、
【化１１】
2018516243.tif 000013
であり、ここで、Ｒ１６ａ及びＲ１６ｂは、Ｈ、Ｆ、Ｃ１−４飽和アルキル、Ｃ２−３アルケニルから独立して選択され、当該アルキル基及びアルケニル基は、Ｃ１−４アルキルアミド及びＣ１−４アルキルエステルから選択される基によって任意選択で置換され、またはＲ１６ａ及びＲ１６ｂの一方がＨであるとき、もう一方は、ニトリル及びＣ１−４アルキルエステルから選択され；
［式ＩＩ］
Ｒ２２は、式ＩＩＩａ、式ＩＩＩｂ、または式ＩＩＩｃ：
（ａ）Ａが、Ｃ５−７アリール基であり、
（ｉ）Ｑ１が、単結合であり、Ｑ２が、単結合及び−Ｚ−（ＣＨ２）ｎ−から選択され、ここで、Ｚが、単結合、Ｏ、Ｓ、及びＮＨから選択され、ｎが、１〜３であるか；または
（ｉｉ）Ｑ１が、−ＣＨ＝ＣＨ−であり、Ｑ２が、単結合である、
【化１２】
2018516243.tif 000014
（ｂ）ＲＣ１、ＲＣ２、及びＲＣ３が、Ｈ及び未置換のＣ１−２アルキルから独立して選択される、
【化１３】
2018516243.tif 000015
（ｃ）Ｑが、Ｏ−ＲＬ２’、Ｓ−ＲＬ２’、及びＮＲＮ−ＲＬ２’から選択され、ＲＮが、Ｈ、メチル、及びエチルから選択される、
【化１４】
2018516243.tif 000016
を有し、
Ｘは、Ｏ−ＲＬ２’、Ｓ−ＲＬ２’、ＣＯ２−ＲＬ２’、ＣＯ−ＲＬ２’、ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−ＲＬ２’、ＮＨＮＨ−ＲＬ２’、ＣＯＮＨＮＨ−ＲＬ２’、
【化１５】
2018516243.tif 000017
ＮＲＮＲＬ２’を含む群から選択され、ここで、ＲＮは、Ｈ及びＣ１−４アルキルを含む群から選択され；
ＲＬ２’は、抗体（Ａｂ）への連結のためのリンカーであり；
Ｒ１０及びＲ１１は、共に一緒になって、それらが結合している窒素原子と炭素原子との間に二重結合を形成するか、または；
Ｒ１０は、Ｈであり、Ｒ１１は、ＯＨ、ＯＲＡ、及びＳＯｚＭから選択され；
Ｒ３０及びＲ３１は、共に一緒になって、それらが結合している窒素原子と炭素原子との間に二重結合を形成するか、または；
Ｒ３０は、Ｈであり、Ｒ３１は、ＯＨ、ＯＲＡ、及びＳＯｚＭから選択される。
［式Ｉ及び式ＩＩ］
式中：
（１）抗体は、システインではないアミノ酸による鎖間システイン残基のアミノ酸置換を含み、抗体に対する薬物部分の複合化は、鎖間システイン残基で生じ；かつ／または
（２）抗体は、Ｋａｂａｔに示されるＥＵインデックスの位置２３４におけるアミノ酸の置換、及び／もしくはＫａｂａｔに示されるＥＵインデックスの位置２３５における残基の置換を有する重鎖を含む。
【００７５】
いくつかの実施形態では、複合体は、式ＣｏｎｊＡ、式ＣｏｎｊＢ、式ＣｏｎｊＣ、式ＣｏｎｊＤ、式ＣｏｎｊＥ、式ＣｏｎｊＦ、式ＣｏｎｊＧ、及び式ＣｏｎｊＨ：
【化１６】
2018516243.tif 000018
2018516243.tif 000019
2018516243.tif 000020
の複合体から選択されることが好ましくあり得る。
【００７６】
示される部分への連結は、細胞結合性物質に存在する鎖間システイン残基の遊離Ｓ（活性チオール）を介するものである。
【００７７】
式Ｉにおける添字ｐは、１〜２０の整数である。したがって、複合体は、リンカー単位によって少なくとも１つの薬物単位に共有結合で連結された本明細書に記載の抗体（Ａｂ）を含む。リガンド単位は、標的部分に結合する標的指向化物質であり、後により完全に説明される。したがって、例えば、さまざまな癌及び自己免疫疾患の治療方法もまた本明細書に記載される。薬物負荷は、ｐによって示され、これは、抗体当たりの薬物分子の数である。薬物負荷の範囲は、抗体当たり１〜２０個の薬物単位（ＤＬ）であり得る。組成物については、ｐは、組成物における複合体の平均薬物負荷を示し、ｐの範囲は、１〜２０である。
【００７８】
本開示の第２の態様は、本開示の第１の態様による複合体の調製方法を提供し、当該調製方法は、式ＩＬまたは式ＩＩＬ：
【化１７】
2018516243.tif 000021
の化合物の、以下に定義される抗体（Ａｂ）への複合化を含み、式中：
ＲＬ１は、抗体（Ａｂ）への複合化に適したリンカーであり；
Ｒ２２Ｌは、式ＩＩＩａＬ、式ＩＩＩｂＬ、または式ＩＩＩｃＬ：
【化１８】
2018516243.tif 000022
（ｃ）ＱＬが、Ｏ−ＲＬ２、Ｓ−ＲＬ２、及びＮＲＮ−ＲＬ２から選択され、ＲＮが、Ｈ、メチル、及びエチルから選択される
【化１９】
2018516243.tif 000023
を有し、
ＸＬは、Ｏ−ＲＬ２、Ｓ−ＲＬ２、ＣＯ２−ＲＬ２、ＣＯ−ＲＬ２、Ｎ＝Ｃ＝Ｏ−ＲＬ２、ＮＨＮＨ−ＲＬ２、ＣＯＮＨＮＨ−ＲＬ２、
【化２０】
2018516243.tif 000024
ＮＲＮＲＬを含む群から選択され、ここで、ＲＮは、Ｈ及びＣ１−４アルキルを含む群から選択され；
ＲＬ２は、抗体（Ａｂ）への複合化に適したリンカーであり；
かつ残りの基はすべて、第１の態様に定義されるものである。
【００７９】
したがって、第２の態様では、本開示は、ＣｏｎｊＡ、ＣｏｎｊＢ、ＣｏｎｊＣ、ＣｏｎｊＤ、ＣｏｎｊＥ、ＣｏｎｊＦ、ＣｏｎｊＧ、及びＣｏｎｊＨからなる群から選択される複合体の調製方法を提供し、当該調製方法は、
【化２１】
2018516243.tif 000025
2018516243.tif 000026
または
【化２２】
2018516243.tif 000027
からそれぞれ選択される化合物と、後に定義される抗体との複合化を含むことが好ましくあり得る。
【００８０】
化合物Ａ〜Ｅは、ＷＯ２０１４／０５７０７３及びＷＯ２０１４／０５７０７４に開示されている。
【００８１】
ＷＯ２０１１／１３０６１３では、化合物５１：
【化２３】
2018516243.tif 000028
が開示されている。
【００８２】
ＷＯ２０１３／０４１６０６では、化合物Ｆ（ＷＯ２０１３／０４１６０６の化合物１３ｅを参照のこと）が開示されている。化合物Ｆは、ＰＢＤ部分の間に（ＣＨ２）５テザー（ｔｅｔｈｅｒ）の代わりに、（ＣＨ２）３テザーを有していることのみが化合物３０と異なっており、これによって、遊離するＰＢＤ二量体の親油性を低減している。化合物Ｆ及び化合物Ｇでは、連結基は、メタ位ではなく、パラ位でＣ２−フェニル基に結合されている。
【００８３】
化合物Ｈは、第２のイミン基に切断可能な保護基を有しており、この保護基によって、その合成の間に生じる交差反応が回避されると共に、最終生成物では、カルビノールアミン及びカルビノールアミンメチルエーテルの形成が回避される。この保護によって、分子において反応性イミン基が生じることも回避される。
【００８４】
化合物Ａ、化合物Ｂ、化合物Ｃ、化合物Ｄ、化合物Ｅ、化合物Ｆ、化合物Ｇ、及び化合物Ｈは、それぞれのＣ環に２つのｓｐ２中心を有しており、これによって、それぞれのＣ環に有するｓｐ２中心が１つのみである化合物と比較して、ＤＮＡの副溝への結合が強化され得る。
【００８５】
ＷＯ２０１０／０４３８８０、ＷＯ２０１１／１３０６１３、ＷＯ２０１１／１３０５９８、ＷＯ２０１３／０４１６０６、及びＷＯ２０１１／１３０６１６に開示の薬物リンカーを本開示において使用してよく、こうした薬物リンカーは、参照によって本明細書に援用される。本明細書に記載の薬物リンカーは、こうした開示において説明されるように合成してよい。
【００８６】
ＰＢＤ化合物の送達
本開示は、対象における好ましい部位へのＰＢＤ化合物の供給における使用に適している。複合体は、リンカーのいかなる部分も保持しない活性ＰＢＤ化合物の遊離を可能にし得る。そのような場合、ＰＢＤ化合物の反応性に影響する可能性がある残部は存在しない。
【００８７】
ＣｏｎｊＡであれば、化合物ＲｅｌＡ：
【化２４】
2018516243.tif 000029
を遊離することになり、
ＣｏｎｊＢ及びＣｏｎｊＦであれば、化合物ＲｅｌＢ：
【化２５】
2018516243.tif 000030
を遊離することになり、
ＣｏｎｊＣであれば、化合物ＲｅｌＣ：
【化２６】
2018516243.tif 000031
を遊離することになり、
ＣｏｎｊＤであれば、化合物ＲｅｌＤ：
【化２７】
2018516243.tif 000032
を遊離することになり、
ＣｏｎｊＥ及びＣｏｎｊＨであれば、化合物ＲｅｌＥ：
【化２８】
2018516243.tif 000033
を遊離することになり、
かつＣｏｎｊＧであれば、化合物ＲｅｌＧ：
【化２９】
2018516243.tif 000034
を遊離することになる。
【００８８】
本開示における、ＰＢＤ二量体と抗体との間の特定の結合は、好ましくは、細胞外で安定である。細胞への輸送または送達の前は、抗体−薬物複合体（ＡＤＣ）は、好ましくは、安定であると共に、未変化のままであり、すなわち抗体は、薬物部分に連結されたままである。リンカーは、標的細胞の外側では安定であり、細胞の内側では、何らかの有効速度で切断され得る。有効なリンカーは、（ｉ）抗体の特異的結合特性を維持し、（ｉｉ）複合体または薬物部分の特異的な細胞内送達を可能にし、（ｉｉｉ）複合体がその標的部位に送達または輸送されるまで安定かつ未変化、すなわち未切断で残存し、かつ（ｉｖ）ＰＢＤ薬物部分の細胞傷害性、細胞殺傷作用、または細胞分裂阻害作用を維持することになる。ＡＤＣの安定性は、インビトロでの細胞傷害性、質量分析、ＨＰＬＣ、及び分離／分析手法であるＬＣ／ＭＳなどの、標準的な分析手法によって測定してよい。
【００８９】
式ＲｅｌＡ、式ＲｅｌＢ、式ＲｅｌＣ、式ＲｅｌＤ、式ＲｅｌＥ、または式ＲｅｌＧの化合物の送達は、連結基、具体的には、バリン−アラニンジペプチド部分に対して、カテプシンなどの酵素が作用することによって、式ＣｏｎｊＡ、式ＣｏｎｊＢ、式ＣｏｎｊＣ、式ＣｏｎｊＤ、式ＣｏｎｊＥ、式ＣｏｎｈＦ、式ＣｏｎｊＧ、または式ＣｏｎｊＨの複合体の所望の活性化部位で達成される。
【００９０】
抗体：鎖間システイン残基の置換
第１の態様では、本明細書に記載の複合体の抗体は、システインではないアミノ酸による鎖間システイン残基のアミノ酸置換を含む。
【００９１】
鎖間システイン残基
天然起源の抗体は、一般に、２つの大型の重鎖、及び２つ小型の軽鎖を含む。天然の全長抗体の場合、こうした鎖は、連結によって一緒になって、「Ｙ型」タンパク質を形成する。重鎖及び軽鎖は、ジスルフィド結合を介してお互いを連結することができるシステインアミノ酸を含む。重鎖は、それぞれの鎖に存在するシステインアミノ酸の間にジスルフィド結合が生じることによって抗体においてお互いが連結される。軽鎖は、鎖に存在するシステインアミノ酸の間にジスルフィド結合が生じることによって同様に重鎖に連結される。そのようなジスルフィド結合は、一般に、遊離システインアミノ酸のチオール側鎖部分の間で形成される。天然起源の抗体において、典型的には、こうした鎖間結合に関与するシステインアミノ酸は、本明細書では、「鎖間システイン残基」または「鎖間システイン」と記載される。例えば、ＩｇＧ１アイソタイプでは、重鎖のそれぞれに特定のシステインアミノ酸が３つ（Ｋａｂａｔに示されるＥＵインデックスの「ＨＣ」−２２０、２２６、及び２２９）、軽鎖のそれぞれに特定のシステインが１つ（「ＬＣ」−κ（カッパー）２１４またはλ（ラムダ）２１３）存在し、こうした特定のシステインは、「鎖間システイン」である。この理由は、そうしたものが、一般に、抗体鎖の間に生じるジスルフィド結合に関与するためである。
【００９２】
鎖間システイン残基は、軽鎖のＣＬドメイン、重鎖のＣＨ１ドメイン、及びヒンジ領域に位置する。抗体における鎖間システイン残基の数は、抗体のアイソタイプに依存する。
【００９３】
置換の性質
上記のとおり、本明細書に記載の複合体の抗体は、システインではないアミノ酸による鎖間システイン残基のアミノ酸置換を含む。鎖間システインと置換されるアミノ酸は、典型的には、チオール部分を含まないものであり、バリン、セリン、スレオニン、アラニン、グリシン、ロイシン、イソロイシン、他の天然起源のアミノ酸、または非天然起源のアミノ酸であることが多い。いくつかの好ましい実施形態では、鎖間システイン残基と置換されるアミノ酸は、バリンである。
【００９４】
いくつかの実施形態では、鎖間システインの１つもしくは複数またはすべてが、アミノ酸と「置換され」ず、すなわち、鎖間システインの１つもしくは複数またはすべてが欠失し、別のアミノ酸によって交換されない。したがって、いくつかの実施形態では、「配列番号ＸＸＸのアミノ酸配列を含む軽鎖．．．、配列番号ＸＸＸの位置ＹＹＹにおけるシステインは、システインではないアミノ酸によって置換される。」という語句は、「配列番号ＸＸＸのアミノ酸配列を含む軽鎖．．．、配列番号ＸＸＸの位置ＹＹＹにおけるシステインは欠失する」という意味と同一の意味を有する。
【００９５】
例えば、本明細書に開示の配列番号１５３は、「配列番号１５０のアミノ酸配列を含む軽鎖であって、配列番号１５０の位置１０５におけるシステインが、システインではないアミノ酸によって置換された軽鎖」の例であるが、この場合、システインは、アミノ酸とは置換されておらず、すなわち欠失している。
【００９６】
「配列番号１６０のアミノ酸配列を含む軽鎖であって、配列番号１６０の位置１０２におけるシステインが欠失した軽鎖」を含む実施形態では、位置１０３におけるセリンもまた、好ましくは、欠失する。例えば、配列番号１６３を参照のこと。
【００９７】
明確な記載がないとしても、本明細書では、アミノ酸に関して本明細書中で使用される「置換された」及び「置換」という用語は、アミノ酸残基と、異なるアミノ酸残基、すなわち同一ではないアミノ酸残基との交換（または上記の説明のとおり、アミノ酸残基と非交換、すなわち、欠失）を意味するために使用される。したがって、同一残基によるアミノ酸残基の名目上の「交換」、例えば、システイン残基とシステイン残基との交換は、「置換された」または「置換」とはみなされない。
【００９８】
本明細書では、「ロイシンではないアミノ酸によるロイシンの置換」は、任意のロイシンではないアミノ酸との特定の交換を意味する。これは、例えば、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ｈｉｓ、Ａｓｎ、Ｇｉｎ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｔｙｒ、Ｃｙｓ、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｉｌｅ、Ｐｈｅ、Ｔｒｐ、Ｐｒｏ、またはＭｅｔであり得るが、好ましくは、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｖａｌ、またはＩｌｅであり、最も好ましくは、Ａｌａである。
【００９９】
この「置換の性質」セクションにおける記載は、本明細書に記載の開示の３つの態様のすべてに適用可能である。
【０１００】
未置換の鎖間システインの保持
本明細書に記載の複合体の抗体は、抗体に対する薬物部分の複合化を目的とする未置換の鎖間システイン残基を少なくとも１つ保持する。抗体において保持される鎖間システイン残基の数は、１つ以上であるが、親（天然）抗体における鎖間システイン残基の総数には満たない。したがって、いくつかの実施形態では、抗体は、鎖間システイン残基を少なくとも１つ、少なくとも２つ、少なくとも３つ、少なくとも４つ、少なくとも５つ、少なくとも６つ、または少なくとも７つ有する。典型的な実施形態では、抗体は、偶数の鎖間システイン残基を有する（例えば、少なくとも２つ、少なくとも４つ、少なくとも６つ、または少なくとも８つ）。いくつかの実施形態では、抗体が有する鎖間システイン残基は、８つ未満である。
【０１０１】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の複合体の抗体は、ヒンジ領域に未置換の鎖間システインを保持する。例えば、いくつかの実施形態では、抗体は、Ｋａｂａｔに示されるＥＵインデックスによるＨＣ２２６及びＨＣ２２９を未置換で保持する。
【０１０２】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の複合体の抗体は、ヒンジ領域において鎖間システインのそれぞれのアミノ酸置換を有する。例えば、いくつかの実施形態では、抗体は、Ｋａｂａｔに示されるＥＵインデックスによるＨＣ２２６及びＨＣ２２９のそれぞれのアミノ酸置換を有する。
【０１０３】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の複合体の抗体は、ヒンジ領域に未置換の鎖間システインを少なくとも１つ保持する。例えば、いくつかの実施形態では、抗体は、Ｋａｂａｔに示されるＥＵインデックスによるＨＣ２２６を未置換で保持する。いくつかの実施形態では、抗体は、Ｋａｂａｔに示されるＥＵインデックスによるＨＣ２２９を未置換で保持する。いくつかの実施形態では、重鎖はそれぞれ、ヒンジ領域に正確に１つ（すなわち、複数ではない）の未置換の鎖間システインを保持する。
【０１０４】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の複合体の抗体は、ヒンジ領域において鎖間システインのそれぞれに対する、バリンによるアミノ酸置換を有する。例えば、いくつかの実施形態では、抗体は、Ｋａｂａｔに示されるＥＵインデックスによるＨＣ２２６及びＨＣ２２９のそれぞれに対する、バリンによるアミノ酸置換を有する。
【０１０５】
ＫａｂａｔのＥＵインデックスを使用して定義される実施形態
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の複合体の抗体は、（ｉ）ＣＬドメインに位置する鎖間システイン残基のアミノ酸置換を有する軽鎖、及び（ｉｉ）ＣＨ１ドメインに位置する未置換の鎖間システインを保持する重鎖を含む。例えば、いくつかの実施形態では、本明細書に記載の複合体の抗体は、（ｉ）Ｋａｂａｔに示されるＥＵインデックスによる鎖間システイン残基κＬＣ２１４または鎖間システイン残基λＬＣ２１３のアミノ酸置換を有する軽鎖、及び（ｉｉ）Ｋａｂａｔに示されるＥＵインデックスによる鎖間システインＨＣ２２０を未置換で保持する重鎖を含む。好ましくは、薬物部分は、ＣＨ１ドメインに位置する未置換の鎖間システインに複合化され、例えば、Ｋａｂａｔに示されるＥＵインデックスによるＨＣ２２０に複合化される。
【０１０６】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の複合体の抗体は、（ｉ）ＣＬドメインに位置する鎖間システイン残基のアミノ酸置換をそれぞれに有する軽鎖、及び（ｉｉ）ＣＨ１ドメインに位置する未置換の鎖間システインをそれぞれに保持する重鎖を含む。例えば、いくつかの実施形態では、本明細書に記載の複合体の抗体は、（ｉ）Ｋａｂａｔに示されるＥＵインデックスによる鎖間システイン残基κＬＣ２１４または鎖間システイン残基λＬＣ２１３のアミノ酸置換をそれぞれに有する軽鎖、及び（ｉｉ）Ｋａｂａｔに示されるＥＵインデックスによる鎖間システインＨＣ２２０をそれぞれに未置換で保持する重鎖を含む。好ましくは、薬物部分は、ＣＨ１ドメインに位置する未置換の鎖間システインに複合化され、例えば、Ｋａｂａｔに示されるＥＵインデックスによるＨＣ２２０に複合化される。
【０１０７】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の複合体の抗体は、（ｉ）ＣＬドメインに位置する未置換の鎖間システインを保持する軽鎖、及び（ｉｉ）ＣＨ１ドメインに位置する鎖間システイン残基のアミノ酸置換を有する重鎖を含む。例えば、いくつかの実施形態では、本明細書に記載の複合体の抗体は、（ｉ）Ｋａｂａｔに示されるＥＵインデックスによる鎖間システインκＬＣ２１４または鎖間システインλＬＣ２１３を未置換で保持する軽鎖、及び（ｉｉ）Ｋａｂａｔに示されるＥＵインデックスによる鎖間システイン残基ＨＣ２２０のアミノ酸置換を有する重鎖を含む。いくつかの実施形態では、薬物部分は、ＣＬドメインに位置する未置換の鎖間システインに複合化され、例えば、Ｋａｂａｔに示されるＥＵインデックスによるκＬＣ２１４またはλＬＣ２１３に複合化される。
【０１０８】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の複合体の抗体は、（ｉ）ＣＬドメインに位置する未置換の鎖間システインをそれぞれに保持する軽鎖、及び（ｉｉ）ＣＨ１ドメインに位置する鎖間システイン残基のアミノ酸置換をそれぞれに有する重鎖を含む。例えば、いくつかの実施形態では、本明細書に記載の複合体の抗体は、（ｉ）Ｋａｂａｔに示されるＥＵインデックスによる鎖間システインκＬＣ２１４または鎖間システインλＬＣ２１３をそれぞれに未置換で保持する軽鎖、及び（ｉｉ）Ｋａｂａｔに示されるＥＵインデックスによる鎖間システイン残基ＨＣ２２０のアミノ酸置換をそれぞれに有する重鎖を含む。いくつかの実施形態では、薬物部分は、ＣＬドメインに位置する未置換の鎖間システインに複合化され、例えば、Ｋａｂａｔに示されるＥＵインデックスによるκＬＣ２１４またはλＬＣ２１３に複合化される。
【０１０９】
ＡｂＬＪ
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の複合体の抗体は、（ｉ）ヒンジ領域に未置換の鎖間システインを保持し、（ｉｉ）ＣＬドメインに位置する鎖間システイン残基のアミノ酸置換を有する軽鎖を含み、かつ（ｉｉｉ）ＣＨ１ドメインに位置する未置換の鎖間システインを保持する重鎖を含む。例えば、いくつかの実施形態では、本明細書に記載の複合体の抗体は、（ｉ）Ｋａｂａｔに示されるＥＵインデックスによるＨＣ２２６及びＨＣ２２９を未置換で保持し、（ｉｉ）Ｋａｂａｔに示されるＥＵインデックスによる鎖間システイン残基κＬＣ２１４または鎖間システイン残基λＬＣ２１３のアミノ酸置換を有する軽鎖を含み、かつ（ｉｉｉ）Ｋａｂａｔに示されるＥＵインデックスによる鎖間システインＨＣ２２０を未置換で保持する重鎖を含む。好ましくは、薬物部分は、ＣＨ１ドメインに位置する未置換の鎖間システインに複合化され、例えば、Ｋａｂａｔに示されるＥＵインデックスによるＨＣ２２０に複合化される。
【０１１０】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の複合体の抗体は、（ｉ）ヒンジ領域に未置換の鎖間システインを保持し、（ｉｉ）ＣＬドメインに位置する鎖間システイン残基のアミノ酸置換をそれぞれに有する軽鎖を含み、かつ（ｉｉｉ）ＣＨ１ドメインに位置する未置換の鎖間システインをそれぞれに保持する重鎖を含む。例えば、いくつかの実施形態では、本明細書に記載の複合体の抗体は、（ｉ）Ｋａｂａｔに示されるＥＵインデックスによるＨＣ２２６及びＨＣ２２９を未置換で保持し、（ｉｉ）Ｋａｂａｔに示されるＥＵインデックスによる鎖間システイン残基κＬＣ２１４または鎖間システイン残基λＬＣ２１３のアミノ酸置換をそれぞれに有する軽鎖を含み、かつ（ｉｉｉ）Ｋａｂａｔに示されるＥＵインデックスによる鎖間システインＨＣ２２０をそれぞれに未置換で保持する重鎖を含む。好ましくは、薬物部分は、ＣＨ１ドメインに位置する未置換の鎖間システインに複合化され、例えば、Ｋａｂａｔに示されるＥＵインデックスによるＨＣ２２０に複合化される。
【０１１１】
ＡｂＨＪ
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の複合体の抗体は、（ｉ）ヒンジ領域に未置換の鎖間システインを保持し、（ｉｉ）ＣＬドメインに位置する未置換の鎖間システインを保持する軽鎖を含み、かつ（ｉｉｉ）ＣＨ１ドメインに位置する鎖間システイン残基のアミノ酸置換を有する重鎖を含む。例えば、いくつかの実施形態では、本明細書に記載の複合体の抗体は、（ｉ）Ｋａｂａｔに示されるＥＵインデックスによるＨＣ２２６及びＨＣ２２９を未置換で保持し、（ｉｉ）Ｋａｂａｔに示されるＥＵインデックスによる鎖間システインκＬＣ２１４または鎖間システインλＬＣ２１３を未置換で保持する軽鎖を含み、かつ（ｉｉｉ）Ｋａｂａｔに示されるＥＵインデックスによる鎖間システインＨＣ２２０のアミノ酸置換を有する重鎖を含む。好ましくは、薬物部分は、ＣＬドメインに位置する未置換の鎖間システインに複合化され、例えば、Ｋａｂａｔに示されるＥＵインデックスによるκＬＣ２１４またはλＬＣ２１３に複合化される。
【０１１２】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の複合体の抗体は、（ｉ）ヒンジ領域に未置換の鎖間システインを保持し、（ｉｉ）ＣＬドメインに位置する未置換の鎖間システインをそれぞれに保持する軽鎖を含み、かつ（ｉｉｉ）ＣＨ１ドメインに位置する鎖間システイン残基のアミノ酸置換をそれぞれに有する重鎖を含む。例えば、いくつかの実施形態では、本明細書に記載の複合体の抗体は、（ｉ）Ｋａｂａｔに示されるＥＵインデックスによるＨＣ２２６及びＨＣ２２９を未置換で保持し、（ｉｉ）Ｋａｂａｔに示されるＥＵインデックスによる鎖間システインκＬＣ２１４または鎖間システインλＬＣ２１３をそれぞれに未置換で保持する軽鎖を含み、かつ（ｉｉｉ）Ｋａｂａｔに示されるＥＵインデックスによる鎖間システインＨＣ２２０のアミノ酸置換をそれぞれに有する重鎖を含む。好ましくは、薬物部分は、ＣＬドメインに位置する未置換の鎖間システインに複合化され、例えば、Ｋａｂａｔに示されるＥＵインデックスによるκＬＣ２１４またはλＬＣ２１３に複合化される。
【０１１３】
ＡｂＢＪ
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の複合体の抗体は、（ｉ）ヒンジ領域において鎖間システインのそれぞれのアミノ酸置換を有し、（ｉｉ）ＣＬドメインに位置する鎖間システイン残基のアミノ酸置換を有する軽鎖を含み、かつ（ｉｉｉ）ＣＨ１ドメインに位置する未置換の鎖間システインを保持する重鎖を含む。例えば、いくつかの実施形態では、本明細書に記載の複合体の抗体は、（ｉ）Ｋａｂａｔに示されるＥＵインデックスによるＨＣ２２６及びＨＣ２２９のそれぞれのアミノ酸置換を有し、（ｉｉ）Ｋａｂａｔに示されるＥＵインデックスによる鎖間システイン残基κＬＣ２１４または鎖間システイン残基λＬＣ２１３のアミノ酸置換を有する軽鎖を含み、かつ（ｉｉｉ）Ｋａｂａｔに示されるＥＵインデックスによる鎖間システインＨＣ２２０を未置換で保持する重鎖を含む。好ましくは、薬物部分は、ＣＨ１ドメインに位置する未置換の鎖間システインに複合化され、例えば、Ｋａｂａｔに示されるＥＵインデックスによるＨＣ２２０に複合化される。
【０１１４】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の複合体の抗体は、（ｉ）ヒンジ領域において鎖間システインのそれぞれのアミノ酸置換を有し、（ｉｉ）ＣＬドメインに位置する鎖間システイン残基のアミノ酸置換をそれぞれに有する軽鎖を含み、かつ（ｉｉｉ）ＣＨ１ドメインに位置する未置換の鎖間システインをそれぞれに保持する重鎖を含む。例えば、いくつかの実施形態では、本明細書に記載の複合体の抗体は、（ｉ）Ｋａｂａｔに示されるＥＵインデックスによるＨＣ２２６及びＨＣ２２９のそれぞれのアミノ酸置換を有し、（ｉｉ）Ｋａｂａｔに示されるＥＵインデックスによる鎖間システイン残基κＬＣ２１４または鎖間システイン残基λＬＣ２１３のアミノ酸置換をそれぞれに有する軽鎖を含み、かつ（ｉｉｉ）Ｋａｂａｔに示されるＥＵインデックスによる鎖間システインＨＣ２２０をそれぞれに未置換で保持する重鎖を含む。好ましくは、薬物部分は、ＣＨ１ドメインに位置する未置換の鎖間システインに複合化され、例えば、Ｋａｂａｔに示されるＥＵインデックスによるＨＣ２２０に複合化される。
【０１１５】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の複合体の抗体は、（ｉ）ヒンジ領域において鎖間システインのそれぞれに対する、バリンによるアミノ酸置換を有し、（ｉｉ）ＣＬドメインに位置する鎖間システイン残基のアミノ酸置換を有する軽鎖を含み、かつ（ｉｉｉ）ＣＨ１ドメインに位置する未置換の鎖間システインを保持する重鎖を含む。例えば、いくつかの実施形態では、本明細書に記載の複合体の抗体は、（ｉ）Ｋａｂａｔに示されるＥＵインデックスによるＨＣ２２６及びＨＣ２２９のそれぞれに対する、バリンによるアミノ酸置換を有し、（ｉｉ）Ｋａｂａｔに示されるＥＵインデックスによる鎖間システイン残基κＬＣ２１４または鎖間システイン残基λＬＣ２１３のアミノ酸置換を有する軽鎖を含み、かつ（ｉｉｉ）Ｋａｂａｔに示されるＥＵインデックスによる鎖間システインＨＣ２２０を未置換で保持する重鎖を含む。好ましくは、薬物部分は、ＣＨ１ドメインに位置する未置換の鎖間システインに複合化され、例えば、Ｋａｂａｔに示されるＥＵインデックスによるＨＣ２２０に複合化される。
【０１１６】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の複合体の抗体は、（ｉ）ヒンジ領域において鎖間システインのそれぞれに対する、バリンによるアミノ酸置換を有し、（ｉｉ）ＣＬドメインに位置する鎖間システイン残基のアミノ酸置換をそれぞれに有する軽鎖を含み、かつ（ｉｉｉ）ＣＨ１ドメインに位置する未置換の鎖間システインをそれぞれに保持する重鎖を含む。例えば、いくつかの実施形態では、本明細書に記載の複合体の抗体は、（ｉ）Ｋａｂａｔに示されるＥＵインデックスによるＨＣ２２６及びＨＣ２２９のそれぞれに対する、バリンによるアミノ酸置換を有し、（ｉｉ）Ｋａｂａｔに示されるＥＵインデックスによる鎖間システイン残基κＬＣ２１４または鎖間システイン残基λＬＣ２１３のアミノ酸置換をそれぞれに有する軽鎖を含み、かつ（ｉｉｉ）Ｋａｂａｔに示されるＥＵインデックスによる鎖間システインＨＣ２２０をそれぞれに未置換で保持する重鎖を含む。好ましくは、薬物部分は、ＣＨ１ドメインに位置する未置換の鎖間システインに複合化され、例えば、Ｋａｂａｔに示されるＥＵインデックスによるＨＣ２２０に複合化される。
【０１１７】
ＡｂＤＪ
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の複合体の抗体は、（ｉ）ヒンジ領域において鎖間システインのそれぞれに対する、バリンによるアミノ酸置換を有し、（ｉｉ）ＣＬドメインに位置する未置換の鎖間システインを保持する軽鎖を含み、かつ（ｉｉｉ）ＣＨ１ドメインに位置する鎖間システイン残基のアミノ酸置換を有する重鎖を含む。例えば、いくつかの実施形態では、本明細書に記載の複合体の抗体は、（ｉ）Ｋａｂａｔに示されるＥＵインデックスによるＨＣ２２６及びＨＣ２２９のそれぞれのアミノ酸置換を有し、（ｉｉ）Ｋａｂａｔに示されるＥＵインデックスによる鎖間システインκＬＣ２１４または鎖間システインλＬＣ２１３を未置換で保持する軽鎖を含み、かつ（ｉｉｉ）Ｋａｂａｔに示されるＥＵインデックスによる鎖間システインＨＣ２２０のアミノ酸置換を有する重鎖を含む。好ましくは、薬物部分は、ＣＬドメインに位置する未置換の鎖間システインに複合化され、例えば、Ｋａｂａｔに示されるＥＵインデックスによるκＬＣ２１４またはλＬＣ２１３に複合化される。
【０１１８】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の複合体の抗体は、（ｉ）ヒンジ領域において鎖間システインのそれぞれのアミノ酸置換を有し、（ｉｉ）ＣＬドメインに位置する未置換の鎖間システインをそれぞれに保持する軽鎖を含み、かつ（ｉｉｉ）ＣＨ１ドメインに位置する鎖間システイン残基のアミノ酸置換をそれぞれに有する重鎖を含む。例えば、いくつかの実施形態では、本明細書に記載の複合体の抗体は、（ｉ）Ｋａｂａｔに示されるＥＵインデックスによるＨＣ２２６及びＨＣ２２９のそれぞれのアミノ酸置換を有し、（ｉｉ）Ｋａｂａｔに示されるＥＵインデックスによる鎖間システインκＬＣ２１４または鎖間システインλＬＣ２１３をそれぞれに未置換で保持する軽鎖を含み、かつ（ｉｉｉ）Ｋａｂａｔに示されるＥＵインデックスによる鎖間システインＨＣ２２０のアミノ酸置換をそれぞれに有する重鎖を含む。好ましくは、薬物部分は、ＣＬドメインに位置する未置換の鎖間システインに複合化され、例えば、Ｋａｂａｔに示されるＥＵインデックスによるκＬＣ２１４またはλＬＣ２１３に複合化される。
【０１１９】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の複合体の抗体は、（ｉ）ヒンジ領域において鎖間システインのそれぞれのアミノ酸置換を有し、（ｉｉ）ＣＬドメインに位置する未置換の鎖間システインを保持する軽鎖を含み、かつ（ｉｉｉ）ＣＨ１ドメインに位置する鎖間システイン残基のアミノ酸置換を有する重鎖を含む。例えば、いくつかの実施形態では、本明細書に記載の複合体の抗体は、（ｉ）Ｋａｂａｔに示されるＥＵインデックスによるＨＣ２２６及びＨＣ２２９のそれぞれに対する、バリンによるアミノ酸置換を有し、（ｉｉ）Ｋａｂａｔに示されるＥＵインデックスによる鎖間システインκＬＣ２１４または鎖間システインλＬＣ２１３を未置換で保持する軽鎖を含み、かつ（ｉｉｉ）Ｋａｂａｔに示されるＥＵインデックスによる鎖間システインＨＣ２２０のアミノ酸置換を有する重鎖を含む。好ましくは、薬物部分は、ＣＬドメインに位置する未置換の鎖間システインに複合化され、例えば、Ｋａｂａｔに示されるＥＵインデックスによるκＬＣ２１４またはλＬＣ２１３に複合化される。
【０１２０】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の複合体の抗体は、（ｉ）ヒンジ領域において鎖間システインのそれぞれに対する、バリンによるアミノ酸置換を有し、（ｉｉ）ＣＬドメインに位置する未置換の鎖間システインをそれぞれに保持する軽鎖を含み、かつ（ｉｉｉ）ＣＨ１ドメインに位置する鎖間システイン残基のアミノ酸置換をそれぞれに有する重鎖を含む。例えば、いくつかの実施形態では、本明細書に記載の複合体の抗体は、（ｉ）Ｋａｂａｔに示されるＥＵインデックスによるＨＣ２２６及びＨＣ２２９のそれぞれに対する、バリンによるアミノ酸置換を有し、（ｉｉ）Ｋａｂａｔに示されるＥＵインデックスによる鎖間システインκＬＣ２１４または鎖間システインλＬＣ２１３をそれぞれに未置換で保持する軽鎖を含み、かつ（ｉｉｉ）Ｋａｂａｔに示されるＥＵインデックスによる鎖間システインＨＣ２２０のアミノ酸置換をそれぞれに有する重鎖を含む。好ましくは、薬物部分は、ＣＬドメインに位置する未置換の鎖間システインに複合化され、例えば、Ｋａｂａｔに示されるＥＵインデックスによるκＬＣ２１４またはλＬＣ２１３に複合化される。
【０１２１】
Ｋａｂａｔシステムと開示の配列との対応関係
下記の表１では、特定の抗体アイソタイプの重鎖定常領域及び軽鎖定常領域における鎖間システインの、Ｋａｂａｔに示されるＥＵインデックスによる位置が、本明細書に開示の配列に対する参照と共に示される。抗体または抗体断片に存在する鎖間システイン位置はそれぞれ、システインではないアミノ酸で置換され得る。
【表１】
2018516243.tif 000035
表１
【０１２２】
開示の配列を使用して定義される、重鎖及び軽鎖の実施形態
ＡｂＬＪ重鎖
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の複合体の抗体は、配列番号１１０のアミノ酸配列もしくはその断片、配列番号１２０のアミノ酸配列もしくはその断片、配列番号１３０のアミノ酸配列もしくはその断片、または配列番号１４０のアミノ酸配列もしくはその断片を含む重鎖を含む。好ましくは、薬物部分は、配列番号１１０の位置１０３におけるシステイン、配列番号１２０の位置１４におけるシステイン、配列番号１３０の位置１４におけるシステイン、または配列番号１４０の位置１４におけるシステインに複合化される。
【０１２３】
ＡｂＨＪ重鎖
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の複合体の抗体は、配列番号１１０のアミノ酸配列またはその断片を含む重鎖を含み、配列番号１１０の位置１０３におけるシステインは、存在するのであれば、システインではないアミノ酸によって置換される。例えば、配列番号１１１では、配列番号１１０のアミノ酸配列を含む重鎖が開示され、配列番号１１０の位置１０３におけるシステインは、セリン残基によって置換されている。配列番号１１２では、配列番号１１０のアミノ酸配列を含む重鎖が開示され、配列番号１１０の位置１０３におけるシステインは、バリン残基によって置換されている。
【０１２４】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の複合体の抗体は、配列番号１２０のアミノ酸配列またはその断片を含む重鎖を含み、配列番号１２０の位置１４におけるシステインは、存在するのであれば、システインではないアミノ酸によって置換される。
【０１２５】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の複合体の抗体は、配列番号１３０のアミノ酸配列またはその断片を含む重鎖を含み、配列番号１３０の位置１４におけるシステインは、存在するのであれば、システインではないアミノ酸によって置換される。
【０１２６】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の複合体の抗体は、配列番号１４０のアミノ酸配列またはその断片を含む重鎖を含み、配列番号１４０の位置１４におけるシステインは、存在するのであれば、システインではないアミノ酸によって置換される。
【０１２７】
ＡｂＢＪ重鎖
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の複合体の抗体は、配列番号１１０のアミノ酸配列またはその断片を含む重鎖を含み、配列番号１１０の位置１０９及び位置１１２におけるシステインはそれぞれ、存在するのであれば、システインではないアミノ酸によって置換される。例えば、配列番号１１３では、配列番号１１０のアミノ酸配列を含む重鎖が開示され、配列番号１１０の位置１０９及び位置１１２におけるシステインはそれぞれ、セリン残基によって置換されている。配列番号１１４では、配列番号１１０のアミノ酸配列を含む重鎖が開示され、配列番号１１０の位置１０９及び位置１１２におけるシステインはそれぞれ、バリン残基によって置換されている。好ましくは、薬物部分は、配列番号１１０の位置１０３におけるシステインに複合化される。いくつかの実施形態では、配列番号１１０の位置１０９におけるシステインは、存在するのであれば、システインではないアミノ酸によって置換され、配列番号１１０の位置１１２におけるシステインは、存在するのであれば、未置換である。いくつかの実施形態では、配列番号１１０の位置１１２におけるシステインは、存在するのであれば、システインではないアミノ酸によって置換され、配列番号１１０の位置１０９におけるシステインは、存在するのであれば、未置換である。
【０１２８】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の複合体の抗体は、配列番号１２０のアミノ酸配列またはその断片を含む重鎖を含み、配列番号１２０の位置１０３、位置１０６、及び位置１０９におけるシステインはそれぞれ、存在するのであれば、システインではないアミノ酸によって置換される。いくつかの実施形態では、配列番号１２０の位置１０２におけるシステインも、存在するのであれば、システインではないアミノ酸によって置換される。いくつかの実施形態では、配列番号１２０の位置１０３、位置１０６、位置１０９、及び位置１０２におけるシステインは１つを除いてすべて、存在するのであれば、システインではないアミノ酸によって置換される。例えば、いくつかの実施形態では、配列番号１２０の位置１０３、位置１０６、位置１０９、または位置１０２におけるシステインは、存在するのであれば、未置換である。好ましくは、薬物部分は、配列番号１２０の位置１４におけるシステインに複合化される。
【０１２９】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の複合体の抗体は、配列番号１３０のアミノ酸配列またはその断片を含む重鎖を含み、配列番号１３０の位置１１１、位置１１４、位置１２０、位置１２６、位置１２９、位置１３５、位置１４１、位置１４４、位置１５０、位置１５６、及び位置１５９におけるシステインはそれぞれ、存在するのであれば、システインではないアミノ酸によって置換される。いくつかの実施形態では、配列番号１３０の位置１１１、位置１１４、位置１２０、位置１２６、位置１２９、位置１３５、位置１４１、位置１４４、位置１５０、位置１５６、及び位置１５９におけるシステインは１つを除いてすべて、存在するのであれば、システインではないアミノ酸によって置換される。例えば、いくつかの実施形態では、配列番号１３０の位置１１１、位置１１４、位置１２０、位置１２６、位置１２９、位置１３５、位置１４１、位置１４４、位置１５０、位置１５６、または位置１５９におけるシステインは、存在するのであれば、未置換である。好ましくは、薬物部分は、配列番号１３０の位置１４におけるシステインに複合化される。
【０１３０】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の複合体の抗体は、配列番号１４０のアミノ酸配列またはその断片を含む重鎖を含み、配列番号１４０の位置１０６及び位置１０９におけるシステインはそれぞれ、存在するのであれば、システインではないアミノ酸によって置換される。いくつかの実施形態では、配列番号１４０の位置１０６におけるシステインは、存在するのであれば、システインではないアミノ酸によって置換され、配列番号１４０の位置１０９におけるシステインは、存在するのであれば、未置換である。いくつかの実施形態では、配列番号１４０の位置１０９におけるシステインは、存在するのであれば、システインではないアミノ酸によって置換され、配列番号１４０の位置１０６におけるシステインは、存在するのであれば、未置換である。好ましくは、薬物部分は、配列番号１４０の位置１４におけるシステインに複合化される。
【０１３１】
ＡｂＤＪ重鎖
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の複合体の抗体は、配列番号１１０のアミノ酸配列またはその断片を含む重鎖を含み、配列番号１１０の位置１０３、位置１０９、及び位置１１２におけるシステインはそれぞれ、存在するのであれば、システインではないアミノ酸によって置換される。例えば、配列番号１１５では、配列番号１１０のアミノ酸配列を含む重鎖が開示され、配列番号１１０の位置１０３、位置１０９、及び位置１１２におけるシステインはそれぞれ、セリン残基によって置換されている。配列番号１１６では、配列番号１１０のアミノ酸配列を含む重鎖が開示され、配列番号１１０の位置１０３、位置１０９、及び位置１１２におけるシステインはそれぞれ、バリン残基によって置換されている。いくつかの実施形態では、配列番号１１０の位置１０９におけるシステインは、存在するのであれば、システインではないアミノ酸によって置換され、配列番号１１０の位置１１２におけるシステインは、存在するのであれば、未置換である。いくつかの実施形態では、配列番号１１０の位置１１２におけるシステインは、存在するのであれば、システインではないアミノ酸によって置換され、配列番号１１０の位置１０９におけるシステインは、存在するのであれば、未置換である。
【０１３２】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の複合体の抗体は、配列番号１２０のアミノ酸配列またはその断片を含む重鎖を含み、配列番号１２０の位置１４、位置１０３、位置１０６、及び位置１０９におけるシステインはそれぞれ、存在するのであれば、システインではないアミノ酸によって置換される。いくつかの実施形態では、配列番号１２０の位置１０３、位置１０６、位置１０９、及び位置１０２におけるシステインは１つを除いてすべて、存在するのであれば、システインではないアミノ酸によって置換される。例えば、いくつかの実施形態では、配列番号１２０の位置１０３、位置１０６、位置１０９、または位置１０２におけるシステインは、存在するのであれば、未置換である。
【０１３３】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の複合体の抗体は、配列番号１３０のアミノ酸配列またはその断片を含む重鎖を含み、配列番号１３０の位置１４、位置１１１、位置１１４、位置１２０、位置１２６、位置１２９、位置１３５、位置１４１、位置１４４、位置１５０、位置１５６、及び位置１５９におけるシステインはそれぞれ、存在するのであれば、システインではないアミノ酸によって置換される。いくつかの実施形態では、配列番号１３０の位置１１１、位置１１４、位置１２０、位置１２６、位置１２９、位置１３５、位置１４１、位置１４４、位置１５０、位置１５６、及び位置１５９におけるシステインは１つを除いてすべて、存在するのであれば、システインではないアミノ酸によって置換される。例えば、いくつかの実施形態では、配列番号１３０の位置１１１、位置１１４、位置１２０、位置１２６、位置１２９、位置１３５、位置１４１、位置１４４、位置１５０、位置１５６、または位置１５９におけるシステインは、存在するのであれば、未置換である。
【０１３４】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の複合体の抗体は、配列番号１４０のアミノ酸配列またはその断片を含む重鎖を含み、配列番号１４０の位置１４、位置１０６、及び位置１０９におけるシステインはそれぞれ、存在するのであれば、システインではないアミノ酸によって置換される。いくつかの実施形態では、配列番号１４０の位置１０６におけるシステインは、存在するのであれば、システインではないアミノ酸によって置換され、配列番号１４０の位置１０９におけるシステインは、存在するのであれば、未置換である。いくつかの実施形態では、配列番号１４０の位置１０９におけるシステインは、存在するのであれば、システインではないアミノ酸によって置換され、配列番号１４０の位置１０６におけるシステインは、存在するのであれば、未置換である。
【０１３５】
軽鎖
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の複合体の抗体は、配列番号１５０のアミノ酸配列もしくはその断片、または配列番号１６０のアミノ酸配列もしくはその断片を含む軽鎖を含む。好ましくは、薬物部分は、配列番号１５０の位置１０５におけるシステイン、配列番号１６０の位置１０２におけるシステインに複合化される。
【０１３６】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の複合体の抗体は、配列番号１５０のアミノ酸配列またはその断片を含む軽鎖を含み、位置１０５におけるシステインは、存在するのであれば、システインではないアミノ酸によって置換される。例えば、配列番号１５１では、配列番号１５０のアミノ酸配列を含む軽鎖が開示され、位置１０５におけるシステインは、セリン残基によって置換されている。配列番号１５２では、配列番号１５０のアミノ酸配列を含む軽鎖が開示され、位置１０５におけるシステインは、バリン残基によって置換されている。配列番号１５３では、配列番号１５０のアミノ酸配列を有する軽鎖が開示され、位置１０５におけるシステインは、欠失している。
【０１３７】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の複合体の抗体は、配列番号１６０のアミノ酸配列またはその断片を含む軽鎖を含み、位置１０２におけるシステインは、存在するのであれば、システインではないアミノ酸によって置換される。例えば、配列番号１６１では、配列番号１６０のアミノ酸配列を含む軽鎖が開示され、位置１０２におけるシステインは、セリン残基によって置換されている。配列番号１６２では、配列番号１６０のアミノ酸配列を含む軽鎖が開示され、位置１０２におけるシステインは、バリン残基によって置換されている。配列番号１６３では、配列番号１６０のアミノ酸配列を有する軽鎖が開示され、位置１０２におけるシステイン及び位置１０３におけるセリンは、欠失している。
【０１３８】
開示の配列を使用して定義される、免疫グロブリンの実施形態  ＡｂＬＪ  ＩｇＧ１
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の複合体の抗体は、配列番号１１０のアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号１５０または配列番号１６０のアミノ酸配列を含む軽鎖を含み；
配列番号１５０の位置１０５におけるシステイン、または配列番号１６０の位置１０２におけるシステインは、システインではないアミノ酸によって置換される。好ましくは、薬物部分は、配列番号１１０の位置１０３におけるシステインに複合化される。
【０１３９】
ＡｂＬＪ  ＩｇＧ２
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の複合体の抗体は、配列番号１２０のアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号１５０または配列番号１６０のアミノ酸配列を含む軽鎖を含み；
配列番号１５０の位置１０５におけるシステイン、または配列番号１６０の位置１０２におけるシステインは、システインではないアミノ酸によって置換される。好ましくは、薬物部分は、配列番号１２０の位置１４におけるシステインに複合化される。
【０１４０】
ＡｂＬＪ  ＩｇＧ３
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の複合体の抗体は、配列番号１３０のアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号１５０または配列番号１６０のアミノ酸配列を含む軽鎖を含み；
配列番号１５０の位置１０５におけるシステイン、または配列番号１６０の位置１０２におけるシステインは、システインではないアミノ酸によって置換される。好ましくは、薬物部分は、配列番号１３０の位置１４におけるシステインに複合化される。
【０１４１】
ＡｂＬＪ  ＩｇＧ４
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の複合体の抗体は、配列番号１４０のアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号１５０または配列番号１６０のアミノ酸配列を含む軽鎖を含み；
配列番号１５０の位置１０５におけるシステイン、または配列番号１６０の位置１０２におけるシステインは、システインではないアミノ酸によって置換される。好ましくは、薬物部分は、配列番号１４０の位置１４におけるシステインに複合化される。
【０１４２】
ＡｂＨＪ  ＩｇＧ１
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の複合体の抗体は、配列番号１１０のアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号１５０または配列番号１６０のアミノ酸配列を含む軽鎖を含み；
配列番号１１０の位置１０３におけるシステインは、システインではないアミノ酸によって置換される。好ましくは、薬物部分は、配列番号１５０の位置１０５におけるシステイン、配列番号１６０の位置１０２におけるシステインに複合化される。
【０１４３】
ＡｂＨＪ  ＩｇＧ２
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の複合体の抗体は、配列番号１２０のアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号１５０または配列番号１６０のアミノ酸配列を含む軽鎖を含み；
配列番号１２０の位置１４及び位置１０３におけるシステインはそれぞれ、システインではないアミノ酸によって置換される。好ましくは、薬物部分は、配列番号１５０の位置１０５におけるシステイン、配列番号１６０の位置１０２におけるシステインに複合化される。
【０１４４】
ＡｂＨＪ  ＩｇＧ３
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の複合体の抗体は、配列番号１３０のアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号１５０または配列番号１６０のアミノ酸配列を含む軽鎖を含み；
配列番号１３０の位置１４におけるシステインは、システインではないアミノ酸によって置換される。好ましくは、薬物部分は、配列番号１５０の位置１０５におけるシステイン、配列番号１６０の位置１０２におけるシステインに複合化される。
【０１４５】
ＡｂＨＪ  ＩｇＧ４
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の複合体の抗体は、配列番号１４０のアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号１５０または配列番号１６０のアミノ酸配列を含む軽鎖を含み；
配列番号１４０の位置１４におけるシステインは、システインではないアミノ酸によって置換される。好ましくは、薬物部分は、配列番号１５０の位置１０５におけるシステイン、配列番号１６０の位置１０２におけるシステインに複合化される。
【０１４６】
ＡｂＢＪ  ＩｇＧ１
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の複合体の抗体は、配列番号１１０のアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号１５０または配列番号１６０のアミノ酸配列を含む軽鎖を含み；
配列番号１１０の位置１０９及び位置１１２におけるシステインはそれぞれ、システインではないアミノ酸によって置換され；
かつ配列番号１５０の位置１０５におけるシステイン、または配列番号１６０の位置１０２におけるシステインは、システインではないアミノ酸によって置換される。
【０１４７】
好ましくは、薬物部分は、配列番号１１０の位置１０３におけるシステインに複合化される。
【０１４８】
いくつかの実施形態では、配列番号１１０の位置１０９及び位置１１２におけるシステインは、バリンで置換される。いくつかの実施形態では、配列番号１５０の位置１０５におけるシステイン、または配列番号１６０の位置１０２におけるシステインは、セリンによって置換される。
【０１４９】
ＡｂＢＪ  ＩｇＧ２Ａ
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の複合体の抗体は、配列番号１２０のアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号１５０または配列番号１６０のアミノ酸配列を含む軽鎖を含み；
配列番号１２０の位置１０３、位置１０６、及び位置１０９におけるシステインはそれぞれ、システインではないアミノ酸によって置換され；
かつ配列番号１５０の位置１０５におけるシステイン、または配列番号１６０の位置１０２におけるシステインは、システインではないアミノ酸によって置換される。
【０１５０】
いくつかの実施形態では、配列番号１２０の位置１０２におけるシステインもまた、システインではないアミノ酸によって置換される。
【０１５１】
好ましくは、薬物部分は、配列番号１２０の位置１４におけるシステインに複合化される。
【０１５２】
いくつかの実施形態では、配列番号１２０の位置１０３、位置１０６、及び位置１０９におけるシステインは、バリンで置換される。いくつかの実施形態では、配列番号１５０の位置１０５におけるシステイン、または配列番号１６０の位置１０２におけるシステインは、セリンによって置換される。
【０１５３】
ＡｂＢＪ  ＩｇＧ２Ｂ
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の複合体の抗体は、配列番号１２０のアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号１５０または配列番号１６０のアミノ酸配列を含む軽鎖を含み；
配列番号１２０の位置１４、位置１０６、及び位置１０９におけるシステインはそれぞれ、システインではないアミノ酸によって置換され；
かつ配列番号１５０の位置１０５におけるシステイン、または配列番号１６０の位置１０２におけるシステインは、システインではないアミノ酸によって置換される。
【０１５４】
いくつかの実施形態では、配列番号１２０の位置１０２におけるシステインもまた、システインではないアミノ酸によって置換される。
【０１５５】
好ましくは、薬物部分は、配列番号１２０の位置１０３におけるシステインに複合化される。
【０１５６】
いくつかの実施形態では、配列番号１２０の位置１４、位置１０６、及び位置１０９におけるシステインは、バリンで置換される。いくつかの実施形態では、配列番号１５０の位置１０５におけるシステイン、または配列番号１６０の位置１０２におけるシステインは、セリンによって置換される。
【０１５７】
ＡｂＢＪ  ＩｇＧ３
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の複合体の抗体は、配列番号１３０のアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号１５０または配列番号１６０のアミノ酸配列を含む軽鎖を含み；
配列番号１３０の位置１１１、位置１１４、位置１２０、位置１２６、位置１２９、位置１３５、位置１４１、位置１４４、位置１５０、位置１５６、及び位置１５９におけるシステインはそれぞれ、システインではないアミノ酸によって置換され；
かつ配列番号１５０の位置１０５におけるシステイン、または配列番号１６０の位置１０２におけるシステインは、システインではないアミノ酸によって置換される。
【０１５８】
好ましくは、薬物部分は、配列番号１３０の位置１４におけるシステインに複合化される。
【０１５９】
いくつかの実施形態では、配列番号１３０の位置１１１、位置１１４、位置１２０、位置１２６、位置１２９、位置１３５、位置１４１、位置１４４、位置１５０、位置１５６、及び位置１５９におけるシステインはそれぞれ、バリンで置換される。
【０１６０】
いくつかの実施形態では、配列番号１５０の位置１０５におけるシステイン、または配列番号１６０の位置１０２におけるシステインは、セリンによって置換される。
【０１６１】
ＡｂＢＪ  ＩｇＧ４
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の複合体の抗体は、配列番号１４０のアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号１５０または配列番号１６０のアミノ酸配列を含む軽鎖を含み；
配列番号１４０の位置１０６及び位置１０９におけるシステインはそれぞれ、システインではないアミノ酸によって置換され；
かつ配列番号１５０の位置１０５におけるシステイン、または配列番号１６０の位置１０２におけるシステインは、システインではないアミノ酸によって置換される。
【０１６２】
好ましくは、薬物部分は、配列番号１４０の位置１４におけるシステインに複合化される。
【０１６３】
好ましくは、薬物部分は、配列番号１４０の位置１４におけるシステインに複合化される。
【０１６４】
いくつかの実施形態では、配列番号１４０の位置１０６及び位置１０９におけるシステインはそれぞれ、バリンで置換される。いくつかの実施形態では、配列番号１５０の位置１０５におけるシステイン、または配列番号１６０の位置１０２におけるシステインは、セリンによって置換される。
【０１６５】
ＡｂＤＪ  ＩｇＧ１
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の複合体の抗体は、配列番号１１０のアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号１５０または配列番号１６０のアミノ酸配列を含む軽鎖を含み；
配列番号１１０の位置１０３、位置１０９、及び位置１１２におけるシステインはそれぞれ、システインではないアミノ酸によって置換される。
【０１６６】
好ましくは、薬物部分は、配列番号１５０の位置１０５におけるシステイン、配列番号１６０の位置１０２におけるシステインに複合化される。
【０１６７】
ＡｂＤＪ  ＩｇＧ２
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の複合体の抗体は、配列番号１２０のアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号１５０または配列番号１６０のアミノ酸配列を含む軽鎖を含み；
配列番号１２０の位置１４、位置１０３、位置１０６、及び位置１０９におけるシステインはそれぞれ、システインではないアミノ酸によって置換される。
【０１６８】
好ましくは、薬物部分は、配列番号１５０の位置１０５におけるシステイン、配列番号１６０の位置１０２におけるシステインに複合化される。
【０１６９】
ＡｂＤＪ  ＩｇＧ３
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の複合体の抗体は、配列番号１３０のアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号１５０または配列番号１６０のアミノ酸配列を含む軽鎖を含み；
配列番号１３０の位置１４、位置１１１、位置１１４、位置１２０、位置１２６、位置１２９、位置１３５、位置１４１、位置１４４、位置１５０、位置１５６、及び位置１５９におけるシステインはそれぞれ、システインではないアミノ酸によって置換される。
【０１７０】
好ましくは、薬物部分は、配列番号１５０の位置１０５におけるシステイン、配列番号１６０の位置１０２におけるシステインに複合化される。
【０１７１】
ＡｂＤＪ  ＩｇＧ４
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の複合体の抗体は、配列番号１４０のアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号１５０または配列番号１６０のアミノ酸配列を含む軽鎖を含み；
配列番号１４０の位置１４、位置１０６、及び位置１０９におけるシステインはそれぞれ、システインではないアミノ酸によって置換される。
【０１７２】
好ましくは、薬物部分は、配列番号１５０の位置１０５におけるシステイン、配列番号１６０の位置１０２におけるシステインに複合化される。
【０１７３】
抗体：Ｋａｂａｔ  ＥＵによる残基２３４及び／または残基２３５の置換
第２の態様では、本明細書に記載の複合体の抗体は、Ｋａｂａｔに示されるＥＵインデックスの位置２３４における残基の置換、及び／またはＫａｂａｔに示されるＥＵインデックスの位置２３５における残基の置換を有する重鎖を含む。抗体が、こうした置換の一方、または好ましくは両方を有するＡＤＣでは、こうした特定の変異を欠いた抗体を含み、それ以外は同一のＡＤＣと比較すると、忍容性が改善し、血中半減期が増加することが明らかとなり、これは、予想外のことであった。
【０１７４】
Ｋａｂａｔ  ＥＵによる２３４／２３５における置換
Ｈｅｚａｒｅｈ，Ｍ．ｅｔ  ａｌ．，Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｖｉｒｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌ．７５，Ｎｏ．２４，ｐｐ．１２１６１−１２１６８（２００１）では、Ｋａｂａｔ  ＥＵによる２３４におけるロイシン残基と、Ｋａｂａｔ  ＥＵによる２３５におけるロイシン残基と、の両方がアラニンで置換された重鎖を含むＩｇＧ１抗体変異体が開示されており、その抗体は、その参考文献の中で「ＩｇＧ１  ｂ１２（Ｌ２３４Ａ，Ｌ２３５Ａ）」として説明されている。Ｈａｚａｒｅｈらは、ＩｇＧ１  ｂ１２（Ｌ２３４Ａ，Ｌ２３５Ａ）をＡＤＣの一部としては開示していない。
【０１７５】
Ｈａｚａｒｅｈらは、Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａという二重変異を導入すると、Ｆｃ（ガンマ）Ｒタンパク質及びＣ１ｑタンパク質による抗体との結合が完全に失われ、その結果、抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）と補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）との両方が消失したことを報告している。
【０１７６】
Ｗｉｎｅｓ，Ｂ．Ｄ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｉｍｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌ．１６４，ｐｐ．５３１３−５３１８（２０００）は、Ｈａｚａｒｅｈ  ｅｔ  ａｌ．と一部の著者が同一であり、この文献においてもＬ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａという二重変異について説明されている。この文献で著者らは、Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａという二重変異が、ＦｃＲｎ受容体に対する抗体の結合を僅かに減少させる（＜２５％）ことを報告している。ＦｃＲｎ受容体は、抗体の再利用において重要な役割を担っていることが知られており、抗体／ＦｃＲｎの親和性が増加すると、インビボでの抗体半減期が長期化し、抗腫瘍活性が改善すると報告されている（Ｚａｌｅｖｓｋｙ，Ｊ．，Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ２８，１５７−１５９（２０１０）［ｄｏｉ：１０．１０３８／ｎｂｔ．１６０１］を参照のこと）。しかしながら、著者であるＨａｚａｒｅｈらは、ＦｃＲｎへの親和性の減少度の点から見て、Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａという二重変異によって、抗体の血中半減期が顕著に減少するとは予想されないと結論付けている。
【０１７７】
上記の開示による予想とは反対に、Ｋａｂａｔに示されるＥＵインデックスの位置２３４及び位置２３５における残基の置換を有する重鎖を含む本明細書に開示のＡＤＣでは、こうした変異を欠いた抗体を含み、それ以外は同一のＡＤＣと比較すると、実際は血中半減期が増加していることが明らかとなった。さらに、Ｋａｂａｔに示されるＥＵインデックスの位置２３４及び位置２３５における残基の置換を有する重鎖を含むＡＤＣでは、こうした変異を欠いた抗体を含み、それ以外は同一のＡＤＣと比較すると、忍容性の改善／毒性の減少も生じる。
【０１７８】
ＫａｂａｔのＥＵインデックスを使用して定義される実施形態
したがって、第２の態様では、本明細書に記載の複合体の抗体は、Ｋａｂａｔに示されるＥＵインデックスの位置２３４における残基の置換、及び／またはＫａｂａｔに示されるＥＵインデックスの位置２３５における残基の置換を有する重鎖を含む。好ましくは、Ｋａｂａｔに示されるＥＵインデックスの位置２３４及び位置２３５における残基は両方共、任意の他のアミノ酸によって置換される。
【０１７９】
いくつかの実施形態では、抗体は、ＩｇＧ１アイソタイプであり、Ｋａｂａｔに示されるＥＵインデックスの位置２３４におけるロイシン、及び／またはＫａｂａｔに示されるＥＵインデックスの位置２３５におけるロイシンは、ロイシンではないアミノ酸によって置換される。
【０１８０】
いくつかの実施形態では、抗体は、ＩｇＧ３アイソタイプであり、Ｋａｂａｔに示されるＥＵインデックスの位置２３４におけるロイシン、及び／またはＫａｂａｔに示されるＥＵインデックスの位置２３５におけるロイシンは、ロイシンではないアミノ酸によって置換される。
【０１８１】
いくつかの実施形態では、抗体は、ＩｇＧ４アイソタイプであり、Ｋａｂａｔに示されるＥＵインデックスの位置２３５におけるロイシンは、アラニンなどの、ロイシンではないアミノ酸によって置換される。
【０１８２】
Ｋａｂａｔシステムと開示の配列との対応関係．
下記の表２は、特定の抗体アイソタイプの重鎖定常領域おける対応残基の、Ｋａｂａｔに示されるＥＵインデックスによる位置を、本明細書に開示の配列に対する参照と共に示す。
【表２】
2018516243.tif 000036
表２
【０１８３】
開示の配列を使用して定義される、免疫グロブリンの実施形態
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の複合体の抗体は、配列番号１１０のアミノ酸配列を含む重鎖を含み、位置１１７におけるロイシン、及び／または位置１１８におけるロイシンは、アラニンなどの、ロイシンではないアミノ酸によって置換される。好ましくは、位置１１７及び位置１１８におけるロイシンは両方共、アラニンなどの、ロイシンではないアミノ酸によって置換される。
【０１８４】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の複合体の抗体は、配列番号１３０のアミノ酸配列を含む重鎖を含み、位置１６４におけるロイシン、及び／または位置１６５におけるロイシンは、アラニンなどの、ロイシンではないアミノ酸によって置換される。好ましくは、位置１６４及び位置１６５におけるロイシンは両方共、アラニンなどの、ロイシンではないアミノ酸によって置換される。
【０１８５】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の複合体の抗体は、配列番号１４０のアミノ酸配列を含む重鎖を含み、位置１１５におけるロイシンは、アラニンなどの、ロイシンではないアミノ酸によって置換される。
【０１８６】
抗体：鎖間システイン残基の置換とＫａｂａｔ  ＥＵによる残基２３４及び／または残基２３５の置換との組み合わせ
第１の態様に記載の改変と、第２の態様に記載の改変と、を同一の抗体において有利に組み合わせることができる。したがって、第３の態様では、本明細書に記載の複合体の抗体は、
（１）システインではないアミノ酸による鎖間システイン残基の置換を１つまたは複数含み、抗体に対する薬物部分の複合化を目的とする未置換の鎖間システイン残基を少なくとも１つ保持し；かつ
（２）Ｋａｂａｔに示されるＥＵインデックスの位置２３４における残基の置換、及び／またはＫａｂａｔに示されるＥＵインデックスの位置２３５における残基の置換を有する重鎖を含み、こうした置換は、任意の他のアミノ酸（すなわち、「野生型」配列に見られるものと同一ではないアミノ酸）によるものである。
【０１８７】
Ｋａｂａｔ  ＥＵの番号付けを使用して定義される実施形態
ＡｂＬＪ（ＬＡＬＡ）
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の複合体の抗体は、（ｉ）ヒンジ領域に未置換の鎖間システインを保持し、（ｉｉ）ＣＬドメインに位置する鎖間システイン残基のアミノ酸置換をそれぞれに有する軽鎖を含み、（ｉｉｉ）ＣＨ１ドメインに位置する未置換の鎖間システインをそれぞれに保持する重鎖を含み、かつ（ｉｖ）Ｋａｂａｔに示されるＥＵインデックスの位置２３４における残基のアミノ酸置換、及び／またはＫａｂａｔに示されるＥＵインデックスの位置２３５における残基の置換をそれぞれに有する重鎖を含む。
【０１８８】
例えば、いくつかの実施形態では、本明細書に記載の複合体の抗体は、（ｉ）Ｋａｂａｔに示されるＥＵインデックスによるＨＣ２２６及びＨＣ２２９を未置換で保持し、（ｉｉ）Ｋａｂａｔに示されるＥＵインデックスによる鎖間システイン残基κＬＣ２１４または鎖間システイン残基λＬＣ２１３のアミノ酸置換をそれぞれに有する軽鎖を含み、（ｉｉｉ）Ｋａｂａｔに示されるＥＵインデックスによる鎖間システインＨＣ２２０をそれぞれに未置換で保持する重鎖を含み、かつ（ｉｖ）Ｋａｂａｔに示されるＥＵインデックスの位置２３４における残基のアミノ酸置換、及び／またはＫａｂａｔに示されるＥＵインデックスの位置２３５における残基の置換をそれぞれに有する重鎖を含み、こうした置換は、任意の他のアミノ酸によるものである。好ましくは、Ｋａｂａｔに示されるＥＵインデックスの位置２３４及び位置２３５における残基は両方共置換される。好ましくは、薬物部分は、ＣＨ１ドメインに位置する未置換の鎖間システインに複合化され、例えば、Ｋａｂａｔに示されるＥＵインデックスによるＨＣ２２０に複合化される。
【０１８９】
ＡｂＨＪ（ＬＡＬＡ）
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の複合体の抗体は、（ｉ）ヒンジ領域に未置換の鎖間システインを保持し、（ｉｉ）ＣＬドメインに位置する未置換の鎖間システインをそれぞれに保持する軽鎖を含み、（ｉｉｉ）ＣＨ１ドメインに位置する鎖間システイン残基のアミノ酸置換をそれぞれに有する重鎖を含み、かつ（ｉｖ）Ｋａｂａｔに示されるＥＵインデックスの位置２３４における残基のアミノ酸置換、及び／またはＫａｂａｔに示されるＥＵインデックスの位置２３５における残基の置換をそれぞれに有する重鎖を含む。
【０１９０】
例えば、いくつかの実施形態では、本明細書に記載の複合体の抗体は、（ｉ）Ｋａｂａｔに示されるＥＵインデックスによるＨＣ２２６及びＨＣ２２９を未置換で保持し、（ｉｉ）Ｋａｂａｔに示されるＥＵインデックスによる鎖間システインκＬＣ２１４または鎖間システインλＬＣ２１３をそれぞれに未置換で保持する軽鎖を含み、（ｉｉｉ）Ｋａｂａｔに示されるＥＵインデックスによる鎖間システインＨＣ２２０のアミノ酸置換をそれぞれに有する重鎖を含み、かつ（ｉｖ）Ｋａｂａｔに示されるＥＵインデックスの位置２３４における残基のアミノ酸置換、及び／またはＫａｂａｔに示されるＥＵインデックスの位置２３５における残基の置換をそれぞれに有する重鎖を含み、こうした置換は、任意の他のアミノ酸によるものである。好ましくは、Ｋａｂａｔに示されるＥＵインデックスの位置２３４及び位置２３５における残基は両方共置換される。好ましくは、薬物部分は、ＣＬドメインに位置する未置換の鎖間システインに複合化され、例えば、Ｋａｂａｔに示されるＥＵインデックスによるκＬＣ２１４またはλＬＣ２１３に複合化される。
【０１９１】
ＡｂＢＪ（ＬＡＬＡ）
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の複合体の抗体は、（ｉ）ヒンジ領域において鎖間システインのそれぞれのアミノ酸置換を有し、（ｉｉ）ＣＬドメインに位置する鎖間システイン残基のアミノ酸置換をそれぞれに有する軽鎖を含み、（ｉｉｉ）ＣＨ１ドメインに位置する未置換の鎖間システインをそれぞれに保持する重鎖を含み、かつ（ｉｖ）Ｋａｂａｔに示されるＥＵインデックスの位置２３４における残基のアミノ酸置換、及び／またはＫａｂａｔに示されるＥＵインデックスの位置２３５における残基の置換をそれぞれに有する重鎖を含む。
【０１９２】
例えば、いくつかの実施形態では、本明細書に記載の複合体の抗体は、（ｉ）Ｋａｂａｔに示されるＥＵインデックスによるＨＣ２２６及びＨＣ２２９のそれぞれのアミノ酸置換を有し、（ｉｉ）Ｋａｂａｔに示されるＥＵインデックスによる鎖間システイン残基κＬＣ２１４または鎖間システイン残基λＬＣ２１３のアミノ酸置換をそれぞれに有する軽鎖を含み、（ｉｉｉ）Ｋａｂａｔに示されるＥＵインデックスによる鎖間システインＨＣ２２０をそれぞれに未置換で保持する重鎖を含み、かつ（ｉｖ）Ｋａｂａｔに示されるＥＵインデックスの位置２３４における残基のアミノ酸置換、及び／またはＫａｂａｔに示されるＥＵインデックスの位置２３５における残基の置換をそれぞれに有する重鎖を含み、こうした置換は、任意の他のアミノ酸によるものである。好ましくは、Ｋａｂａｔに示されるＥＵインデックスの位置２３４及び位置２３５における残基は両方共置換される。好ましくは、薬物部分は、ＣＨ１ドメインに位置する未置換の鎖間システインに複合化され、例えば、Ｋａｂａｔに示されるＥＵインデックスによるＨＣ２２０に複合化される。
【０１９３】
ＡｂＤＪ（ＬＡＬＡ）
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の複合体の抗体は、（ｉ）ヒンジ領域において鎖間システインのそれぞれのアミノ酸置換を有し、（ｉｉ）ＣＬドメインに位置する未置換の鎖間システインをそれぞれに保持する軽鎖を含み、（ｉｉｉ）ＣＨ１ドメインに位置する鎖間システイン残基のアミノ酸置換をそれぞれに有する重鎖を含み、かつ（ｉｖ）Ｋａｂａｔに示されるＥＵインデックスの位置２３４における残基のアミノ酸置換、及び／またはＫａｂａｔに示されるＥＵインデックスの位置２３５における残基の置換をそれぞれに有する重鎖を含む。
【０１９４】
例えば、いくつかの実施形態では、本明細書に記載の複合体の抗体は、（ｉ）Ｋａｂａｔに示されるＥＵインデックスによるＨＣ２２６及びＨＣ２２９のそれぞれのアミノ酸置換を有し、（ｉｉ）Ｋａｂａｔに示されるＥＵインデックスによる鎖間システインκＬＣ２１４または鎖間システインλＬＣ２１３をそれぞれに未置換で保持する軽鎖を含み、（ｉｉｉ）Ｋａｂａｔに示されるＥＵインデックスによる鎖間システインＨＣ２２０のアミノ酸置換をそれぞれに有する重鎖を含み、かつ（ｉｖ）Ｋａｂａｔに示されるＥＵインデックスの位置２３４における残基のアミノ酸置換、及び／またはＫａｂａｔに示されるＥＵインデックスの位置２３５における残基の置換をそれぞれに有する重鎖を含み、こうした置換は、任意の他のアミノ酸によるものである。好ましくは、Ｋａｂａｔに示されるＥＵインデックスの位置２３４及び位置２３５における残基は両方共置換される。好ましくは、薬物部分は、ＣＬドメインに位置する未置換の鎖間システインに複合化され、例えば、Ｋａｂａｔに示されるＥＵインデックスによるκＬＣ２１４またはλＬＣ２１３に複合化される。
【０１９５】
開示の配列を使用して定義される実施形態
ＡｂＬＪ（ＬＡＬＡ）
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の複合体の抗体は、配列番号１１０のアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号１５０または配列番号１６０のアミノ酸配列を含む軽鎖を含み；
配列番号１５０の位置１０５におけるシステイン、または配列番号１６０の位置１０２におけるシステインは、システインではないアミノ酸によって置換され；
かつ位置１１７におけるロイシン、及び／または位置１１８におけるロイシンは、アラニンなどの、ロイシンではないアミノ酸によって置換される。好ましくは、薬物部分は、配列番号１１０の位置１０３におけるシステインに複合化される。好ましくは、位置１１７及び位置１１８におけるロイシンは両方共、アラニンなどの、ロイシンではないアミノ酸によって置換される。
【０１９６】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の複合体の抗体は、配列番号１３０のアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号１５０または配列番号１６０のアミノ酸配列を含む軽鎖を含み；
配列番号１５０の位置１０５におけるシステイン、または配列番号１６０の位置１０２におけるシステインは、システインではないアミノ酸によって置換され；
かつ位置１６４におけるロイシン、及び／または位置１６５におけるロイシンは、アラニンなどの、ロイシンではないアミノ酸によって置換される。好ましくは、薬物部分は、配列番号１３０の位置１４におけるシステインに複合化される。好ましくは、位置１６４及び位置１６５におけるロイシンは両方共、アラニンなどの、ロイシンではないアミノ酸によって置換される。
【０１９７】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の複合体の抗体は、配列番号１４０のアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号１５０または配列番号１６０のアミノ酸配列を含む軽鎖を含み；
配列番号１５０の位置１０５におけるシステイン、または配列番号１６０の位置１０２におけるシステインは、システインではないアミノ酸によって置換され；
かつ位置１１５におけるロイシンは、アラニンなどの、ロイシンではないアミノ酸によって置換される。好ましくは、薬物部分は、配列番号１４０の位置１４におけるシステインに複合化される。
【０１９８】
ＡｂＨＪ（ＬＡＬＡ）
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の複合体の抗体は、配列番号１１０のアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号１５０または配列番号１６０のアミノ酸配列を含む軽鎖を含み；
配列番号１１０の位置１０３におけるシステインは、システインではないアミノ酸によって置換され；
かつ位置１１７におけるロイシン、及び／または位置１１８におけるロイシンは、アラニンなどの、ロイシンではないアミノ酸によって置換される。好ましくは、薬物部分は、配列番号１５０の位置１０５におけるシステイン、配列番号１６０の位置１０２におけるシステインに複合化される。好ましくは、位置１１７及び位置１１８におけるロイシンは両方共、アラニンなどの、ロイシンではないアミノ酸によって置換される。
【０１９９】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の複合体の抗体は、配列番号１３０のアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号１５０または配列番号１６０のアミノ酸配列を含む軽鎖を含み；
配列番号１３０の位置１４におけるシステインは、システインではないアミノ酸によって置換され；
かつ位置１６４におけるロイシン、及び／または位置１６５におけるロイシンは、アラニンなどの、ロイシンではないアミノ酸によって置換される。好ましくは、薬物部分は、配列番号１５０の位置１０５におけるシステイン、配列番号１６０の位置１０２におけるシステインに複合化される。好ましくは、位置１６４及び位置１６５におけるロイシンは両方共、アラニンなどの、ロイシンではないアミノ酸によって置換される。
【０２００】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の複合体の抗体は、配列番号１４０のアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号１５０または配列番号１６０のアミノ酸配列を含む軽鎖を含み；
配列番号１４０の位置１４におけるシステインは、システインではないアミノ酸によって置換され；
かつ位置１１５におけるロイシンは、アラニンなどの、ロイシンではないアミノ酸によって置換される。好ましくは、薬物部分は、配列番号１５０の位置１０５におけるシステイン、配列番号１６０の位置１０２におけるシステインに複合化される。
【０２０１】
ＡｂＢＪ（ＬＡＬＡ）
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の複合体の抗体は、配列番号１１０のアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号１５０または配列番号１６０のアミノ酸配列を含む軽鎖を含み；
配列番号１１０の位置１０９及び位置１１２におけるシステインはそれぞれ、システインではないアミノ酸によって置換され；
かつ配列番号１５０の位置１０５におけるシステイン、または配列番号１６０の位置１０２におけるシステインは、システインではないアミノ酸によって置換され；
かつ位置１１７におけるロイシン、及び／または位置１１８におけるロイシンは、アラニンなどの、ロイシンではないアミノ酸によって置換される。好ましくは、薬物部分は、配列番号１１０の位置１０３におけるシステインに複合化される。好ましくは、位置１１７及び位置１１８におけるロイシンは両方共、アラニンなどの、ロイシンではないアミノ酸によって置換される。
【０２０２】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の複合体の抗体は、配列番号１３０のアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号１５０または配列番号１６０のアミノ酸配列を含む軽鎖を含み；
配列番号１３０の位置１１１、位置１１４、位置１２０、位置１２６、位置１２９、位置１３５、位置１４１、位置１４４、位置１５０、位置１５６、及び位置１５９におけるシステインはそれぞれ、システインではないアミノ酸によって置換され；
かつ配列番号１５０の位置１０５におけるシステイン、または配列番号１６０の位置１０２におけるシステインは、システインではないアミノ酸によって置換され；
かつ位置１６４におけるロイシン、及び／または位置１６５におけるロイシンは、アラニンなどの、ロイシンではないアミノ酸によって置換される。好ましくは、薬物部分は、配列番号１３０の位置１４におけるシステインに複合化される。好ましくは、位置１６４及び位置１６５におけるロイシンは両方共、アラニンなどの、ロイシンではないアミノ酸によって置換される。
【０２０３】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の複合体の抗体は、配列番号１４０のアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号１５０または配列番号１６０のアミノ酸配列を含む軽鎖を含み；
配列番号１４０の位置１０６及び位置１０９におけるシステインはそれぞれ、システインではないアミノ酸によって置換され；
かつ配列番号１５０の位置１０５におけるシステイン、または配列番号１６０の位置１０２におけるシステインは、システインではないアミノ酸によって置換され；
かつ位置１１５におけるロイシンは、アラニンなどの、ロイシンではないアミノ酸によって置換される。好ましくは、薬物部分は、配列番号１４０の位置１４におけるシステインに複合化される。
【０２０４】
ＡｂＤＪ（ＬＡＬＡ）
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の複合体の抗体は、配列番号１１０のアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号１５０または配列番号１６０のアミノ酸配列を含む軽鎖を含み；
配列番号１１０の位置１０３、位置１０９、及び位置１１２におけるシステインはそれぞれ、システインではないアミノ酸によって置換され；
かつ位置１１７におけるロイシン、及び／または位置１１８におけるロイシンは、アラニンなどの、ロイシンではないアミノ酸によって置換される。好ましくは、薬物部分は、配列番号１５０の位置１０５におけるシステイン、配列番号１６０の位置１０２におけるシステインに複合化される。好ましくは、位置１１７及び位置１１８におけるロイシンは両方共、アラニンなどの、ロイシンではないアミノ酸によって置換される。
【０２０５】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の複合体の抗体は、配列番号１３０のアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号１５０または配列番号１６０のアミノ酸配列を含む軽鎖を含み；
配列番号１３０の位置１４、位置１１１、位置１１４、位置１２０、位置１２６、位置１２９、位置１３５、位置１４１、位置１４４、位置１５０、位置１５６、及び位置１５９におけるシステインはそれぞれ、システインではないアミノ酸によって置換され；
かつ位置１６４におけるロイシン、及び／または位置１６５におけるロイシンは、アラニンなどの、ロイシンではないアミノ酸によって置換される。好ましくは、薬物部分は、配列番号１５０の位置１０５におけるシステイン、配列番号１６０の位置１０２におけるシステインに複合化される。好ましくは、位置１６４及び位置１６５におけるロイシンは両方共、アラニンなどの、ロイシンではないアミノ酸によって置換される。
【０２０６】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の複合体の抗体は、配列番号１４０のアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号１５０または配列番号１６０のアミノ酸配列を含む軽鎖を含み；
配列番号１４０の位置１４、位置１０６、及び位置１０９におけるシステインはそれぞれ、システインではないアミノ酸によって置換され；
かつ位置１１５におけるロイシンは、アラニンなどの、ロイシンではないアミノ酸によって置換される。好ましくは、薬物部分は、配列番号１５０の位置１０５におけるシステイン、配列番号１６０の位置１０２におけるシステインに複合化される。
【０２０７】
複合体／抗体の特性
最大耐用量（ＭＴＤ）
本明細書に記載の複合体は、インビボの疾患モデルにおいて忍容性が良好であり、これによって、複合体を投与される対象における副作用を低減することが明らかになっている。したがって、いくつかの実施形態では、薬物部分が抗体に部位非特異的に結合し、それ以外は同一の複合体と比較すると、本明細書に記載の複合体は高いＭＴＤを有する。ＭＴＤは、典型的には、マウス（例えば、Ｍｕｓ  ｍｕｓｃｕｌｕｓ）、ラット（例えば、Ｒａｔｔｕｓ  ｎｏｒｖｅｇｉｃｕｓ）、またはサル（例えば、Ｍａｃａｃａ  ｆａｓｃｉｃｕｌａｒｉｓ）などの動物において試験される。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の複合体のＭＴＤは、ラットにおいて、単回用量として送達されると、少なくとも１ｍｇ／ｋｇであり、例えば、単回用量として送達されると、少なくとも１．２ｍｇ／ｋｇ、少なくとも１．４ｍｇ／ｋｇ、少なくとも１．６ｍｇ／ｋｇ、少なくとも１．８ｍｇ／ｋｇ、少なくとも２．０ｍｇ／ｋｇ、少なくとも２．２ｍｇ／ｋｇ、少なくとも２．４ｍｇ／ｋｇ、少なくとも２．６ｍｇ／ｋｇ、少なくとも２．８ｍｇ／ｋｇ、少なくとも３．０ｍｇ／ｋｇ、少なくとも４．０ｍｇ／ｋｇ、または少なくとも５．０ｍｇ／ｋｇである。
【０２０８】
治療指数
いくつかの実施形態では、部位非特異的であり、それ以外は同一の複合体と比較して、本明細書に記載の部位特異的複合体は、治療指数が改善している。いくつかの実施形態では、部位非特異的であり、それ以外は同一の複合体と比較して、本明細書に記載の部位特異的複合体の治療指数は、少なくとも２％高い。すなわち、部位非特異的複合体が、１００：１の治療指数を有するのであれば、部位特異的複合体は、少なくとも１０２：１の治療指数を有する。いくつかの実施形態では、部位非特異的であり、それ以外は同一の複合体と比較して、本明細書に記載の部位特異的複合体の治療指数は、部位非特異的であり、それ以外は同一の複合体と比較して、少なくとも５％高く、例えば、少なくとも５％高く、少なくとも７％高く、少なくとも１０％高く、少なくとも１２％高く、少なくとも１５％高く、少なくとも２０％高く、少なくとも２５％高く、少なくとも３０％高く、少なくとも４０％高く、少なくとも５０％高く、少なくとも７０％高く、少なくとも１００％高く、少なくとも１５０％高く、または少なくとも２００％高い。
【０２０９】
全身毒性
Ｓｔｒｏｐ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ＆  Ｂｉｏｌｏｇｙ  ２０，１６１−１６７，Ｆｅｂｒｕａｒｙ  ２１，２０１３では、抗体に薬物部分を複合化する部位は、ＡＤＣの安定性及び薬物動態に影響し得ることが報告された。
【０２１０】
本明細書に新たに記載される部位特異的ＡＤＣの相対的な全身毒性を、既知の型の部位特異的ＡＤＣのものと比較した。これについては、実施例７及び図１を参照のこと。既知の部位特異的ＡＤＣとは対照的に、本明細書に新たに記載される部位特異的ＡＤＣでは、顕著な全身毒性の誘導が観測されることはなかった。
【０２１１】
抗体の親和性
いくつかの実施形態では、部位非特異的であり、それ以外は同一の複合体と比較して、部位特異的複合体の同種抗原（ｃｏｇｎａｔｅ  ａｎｔｉｇｅｎ）に対する親和性は同一である。いくつかの実施形態では、部位非特異的であり、それ以外は同一の複合体と比較して、部位特異的複合体は、同種抗原に対して高い親和性を有する。いくつかの実施形態では、部位特異的複合体が同種抗原に結合する際の解離定数（Ｋｄ）は、少なくとも１０−６Ｍであり、少なくとも５ｘ１０−７Ｍ、少なくとも１０−７Ｍ、少なくとも５ｘ１０−８Ｍ、少なくとも１０−９Ｍなど、少なくとも５ｘ１０−１０Ｍ、少なくとも１０−１０Ｍ、少なくとも５ｘ１０−１１Ｍ、少なくとも１０−１１Ｍ、少なくとも５ｘ１０−１２Ｍ、少なくとも１０−１２Ｍ、少なくとも５ｘ１０−１３Ｍ、少なくとも１０−１３Ｍ、少なくとも５ｘ１０−１４Ｍ、少なくとも１０−１４Ｍ、少なくとも５ｘ１０−１５Ｍ、または少なくとも１０−１５Ｍなどである。１つの実施形態では、部位非特異的であり、それ以外は同一の複合体の同種抗原に対する結合を、部位特異的複合体は、インビボ及び／またはインビトロで競合的に阻害する。
【０２１２】
本明細書では、「［抗原Ｘ］に結合する」は、ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ、Ｇｅｎｂａｎｋ受入番号ＣＡＡ７６８４７、バージョン番号ＣＡＡ７６８４７．１  ＧＩ：３３３６８４２、記録更新日付：２０１１年１月７日午後０２：３０）などの非特異的パートナーと比較して、抗体が［抗原Ｘ］に高い親和性を伴って結合することを意味するために使用される。いくつかの実施形態では、抗体が［抗原Ｘ］に結合する際の結合定数（Ｋａ）は、生理学的条件で測定すると、その抗体のＢＳＡに対する結合定数と比較して、少なくとも２倍高く、少なくとも３倍高く、少なくとも４倍高く、少なくとも５倍高く、少なくとも１０倍高く、少なくとも２０倍高く、少なくとも５０倍高く、少なくとも１００倍高く、少なくとも２００倍高く、少なくとも５００倍高く、少なくとも１０００倍高く、少なくとも２０００倍高く、少なくとも５０００倍高く、少なくとも１０４倍高く、少なくとも１０５倍高く、または１０６倍高い。本開示の抗体は、典型的には、高い親和性を伴って［抗原Ｘ］に結合し得る。例えば、いくつかの実施形態では、抗体が［抗原Ｘ］に結合する際のＫＤは、約１０−６Ｍ以下であり、１ｘ１０−６Ｍ、１ｘ１０−７Ｍ、１ｘ１０−８Ｍ、１ｘ１０−９Ｍ、１ｘ１０−１０Ｍ、１ｘ１０−１１Ｍ、１ｘ１０−１２Ｍ、１ｘ１０−１３Ｍ、または１ｘ１０−１４Ｍなどである。
【０２１３】
有効用量
いくつかの実施形態では、部位特異的複合体のＥＣ５０は、３５ｎｇ／ｍｌ未満であり、３０ｎｇ／ｍｌ未満、２５ｎｇ／ｍｌ未満、２０ｎｇ／ｍｌ未満、または１５ｎｇ／ｍｌ未満などである。いくつかの実施形態では、部位非特異的であり、それ以外は同一の複合体と比較して、部位特異的複合体のＥＣ５０はそれ以下である。いくつかの実施形態では、部位非特異的であり、それ以外は同一の複合体と比較して、部位特異的複合体のＥＣ５０は、少なくとも２ｎｇ／ｍｌ低く、例えば、少なくとも５ｎｇ／ｍｌ低く、少なくとも１０ｎｇ／ｍｌ低く、少なくとも１５ｎｇ／ｍｌ低く、少なくとも２０ｎｇ／ｍｌ低く、少なくとも２５ｎｇ／ｍｌ低く、または少なくとも３０ｎｇ／ｍｌ低い。
【０２１４】
製造の容易性
本明細書に新たに記載される部位特異的ＡＤＣの実施形態は、ＡＤＣの製造手順の単純化を可能にするものである。
【０２１５】
例えば、Ｊｕｎｕｔｕｌａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，ｖｏｌ．２６，ｎｏ．８，ｐｐ．９２５−９３２において説明されるものなどの、システインが操作導入されたＩｇＧバージョンでは、ＩｇＧ１に追加のシステインが操作導入されることで、操作導入されたシステインでの部位特異的複合化が可能となる。システインが操作導入されたそのようなＩｇＧが、哺乳類細胞において組換えで発現されると、操作導入されたシステインは、典型的には、ＧＳＨ、システインなどの他のスルフヒドリル含有分子によってキャップされる。複合化を目的に操作導入されたシステインを遊離させるためには、分子は還元されなくてはならない。この還元を実施すると、典型的には、重鎖と軽鎖との間の鎖間ジスルフィド結合、ならびにヒンジ領域におけるものにもまた還元が生じることになる。元々存在する鎖間システインがこのように還元されることは望ましくないことであるが、この理由は、こうした元々存在するシステインに対しても薬物の複合化が生じ得るためである。したがって、こうした元々存在する鎖間ジスルフィド結合を再度確立するために抗体分子を再度酸化しなくてはならず、そうした後に、抗体に操作導入されたシステインを薬物に複合化することができるようになる。
【０２１６】
対照的に、本開示は、抗体が含む、複合化に適した鎖間システインは２つのみ（例えば、それぞれの重鎖に１つ）であり、天然の抗体に存在する他の鎖間システイン残基がシステインではないアミノ酸で置換された実施形態を特に企図する。この形式では、上記の複雑な還元−再酸化の手順を省くことが可能となる。代わりとして、簡潔な還元−複合化手順を用いることができる。このことが可能な理由は、本明細書に記載の部位特異的抗体形式は、典型的には、最終的に薬物部分への複合化を意図しない鎖間システインを含まないためである。例えば、好ましい実施形態では、部位特異的抗体が含む、複合化に適した鎖間システインは２つのみである（例えば、それぞれの重鎖に１つ）。それ故に、最初の還元段階の後に、抗体分子を再度酸化する必要がない。代わりとして、（２つの）残存する鎖間システイン（その他の鎖間システインは、システインではないアミノ酸で置換されている）を還元するＴＣＥＰなどの還元剤を用いて分子は還元される。その後、還元されたシステインスルフヒドリル部分を、薬物−リンカーに複合化することができる。
【０２１７】
好ましい実施形態では、存在する鎖間システインが２つのみである場合、ＤＡＲが３以上のＩｇＧ種が生成する可能性はない。このことは有利なことであり得るが、この理由は、ＤＡＲが大きな種は、ＡＤＣ毒性に寄与し得るためである。このことについては、Ｊｕｎｕｎｔｕｌａ  ｅｔ  ａｌ．，（Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈ  ２６＿９２５−９３２（２００８））を参照のこと。
【０２１８】
新たに記載される部位特異的ＡＤＣでは、他の潜在的な製造の問題も回避される。例えば、安定的に遺伝子導入されたチャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞が分泌する、システインが操作導入されたＩｇＧを分析する間、三重軽鎖（Ｔｒｉｐｌｅ  Ｌｉｇｈｔ  Ｃｈａｉｎ）抗体（３ＬＣ）の存在が観測されており、３ＬＣ種は、余分な軽鎖と、ＩｇＧに操作導入された追加のシステインとの間でジスルフィド結合が形成されたことによる産物であると見られる（Ｇｏｍｅｚ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．Ｂｉｏｅｎｇ．１０５（４）＿７４８−６０（２０１０）；Ｇｏｍｅｚ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．Ｐｒｏｇ．２６（５）＿１４３８−１４４５（２０１０））。新たに記載される部位特異的ＡＤＣは、軽鎖に挿入されたシステインを有さないため、３ＬＣ種が形成されて混入する可能性はない。
【０２１９】
終末相半減期
いくつかの実施形態では、Ｋａｂａｔに示されるＥＵインデックスの位置２３４における残基の置換、及び／またはＫａｂａｔに示されるＥＵインデックスの位置２３５における残基の置換を有する重鎖を抗体が含む複合体では、２３４／２３５の置換（複数可）を欠いており、それ以外は同一の別の複合体と比較して、終末相半減期が改善している。終末相半減期は、実施例６において本明細書に記載のように測定してよい。したがって、いくつかの実施形態では、Ｋａｂａｔに示されるＥＵインデックスの位置２３４における残基の置換、及び／またはＫａｂａｔに示されるＥＵインデックスの位置２３５における残基の置換を有する重鎖を抗体が含む複合体が有する半減期は、２３４／２３５の置換（複数可）を欠いており、それ以外は同一の複合体の半減期の少なくとも１１０％であり、例えば、２３４／２３５の置換（複数可）を欠いており、それ以外は同一の複合体の半減期の少なくとも１１５％、当該半減期の少なくとも１２０％、当該半減期の少なくとも１２５％、当該半減期の少なくとも１３０％、当該半減期の少なくとも１３５％、当該半減期の少なくとも１４０％、当該半減期の少なくとも１４５％、当該半減期の少なくとも１５０％、当該半減期の少なくとも１６０％、当該半減期の少なくとも１７０％、当該半減期の少なくとも１８０％、当該半減期の少なくとも１９０％、または当該半減期の少なくとも２００％である。
【０２２０】
抗原結合性
本明細書に記載の複合体の抗体は、ＣＤ２２に結合する抗体（Ａｂ）である。すなわち、本明細書に記載の複合体は、ＣＤ２２に特異的に結合する抗体を含む複合体である。
【０２２１】
いくつかの実施形態では、ＣＤ２２ポリペプチドは、Ｇｅｎｂａｎｋ受入番号ＢＡＢ１５４８９、バージョン番号ＢＡＢ１５４８９．１  ＧＩ：１０４３９３３８、記録更新日付：２００６年９月１１日午後１１：２４のものと対応する。１つの実施形態では、ＣＤ２２ポリペプチドをコードする核酸は、Ｇｅｎｂａｎｋ受入番号ＡＫ０２６４６７、バージョン番号ＡＫ０２６４６７．１  ＧＩ：１０４３９３３７、記録更新日付：２００６年９月１１日午後１１：２４のものと対応する。
【０２２２】
１つの態様では、抗体は、ＣＤ２２に結合する抗体であり、抗体は、配列番号１による配列を有するＶＨドメインを含む。
【０２２３】
抗体は、ＶＬドメインをさらに含み得る。いくつかの実施形態では、抗体は、配列番号２よる配列を有するＶＬドメインをさらに含む。
【０２２４】
いくつかの実施形態では、抗体は、ＶＬドメインと対を形成したＶＨドメインを含み、ＶＨドメイン及びＶＬドメインは、配列番号２と対を形成した配列番号１の配列を有する。
【０２２５】
ＶＨドメイン（複数可）及びＶＬドメイン（複数可）は、ＣＤ２２に結合する抗原結合部位を抗体において形成するように対を形成し得る。
【０２２６】
いくつかの実施形態では、抗体は、ＶＬドメインと対を形成したＶＨドメインを含む未変化の抗体であり、ＶＨドメイン及びＶＬドメインは、配列番号２と対を形成した配列番号１の配列を有する。
【０２２７】
１つの態様では、抗体は、本明細書に記載の抗体が、以下に記載のように改変（またはさらに改変）されたものである。いくつかの実施形態では、抗体は、本明細書に開示の抗体のヒト化バージョン、脱免疫化（ｄｅｉｍｍｕｎｉｓｅｄ）バージョン、または表面再構成（ｒｅｓｕｒｆａｃｅｄ）バージョンである。
【０２２８】
いくつかの実施形態
特に企図される実施形態のいくつかが以下に記載される。
【０２２９】
鎖間システイン残基の置換
ＡｂＬＪ−ＣＤ２２  ＩｇＧ１
配列番号１１０のアミノ酸配列を含む重鎖、配列番号１５０または配列番号１６０のアミノ酸配列を含む軽鎖、配列番号１の配列を有するＶＨドメイン、及び配列番号２の配列を有するＶＬドメインを含む、本明細書に記載の複合体の抗体であって；
配列番号１５０の位置１０５におけるシステイン、または配列番号１６０の位置１０２におけるシステインが、システインではないアミノ酸によって置換される、本明細書に記載の複合体の抗体。好ましくは、薬物部分は、配列番号１１０の位置１０３におけるシステインに複合化される。
【０２３０】
配列番号１１０のアミノ酸配列を含む重鎖；
配列番号１５１、配列番号１５２、配列番号１５３、配列番号１６１、配列番号１６２、または配列番号１６３のアミノ酸配列を含む軽鎖；配列番号１の配列を有するＶＨドメイン；及び
配列番号２の配列を有するＶＬドメインを含む、本明細書に記載の複合体の抗体。
【０２３１】
配列番号１１０のアミノ酸配列を含む重鎖；
配列番号１５１のアミノ酸配列を含む軽鎖；
配列番号１の配列を有するＶＨドメイン；及び
配列番号２の配列を有するＶＬドメイン
を含む、本明細書に記載の複合体の抗体。
【０２３２】
配列番号１１０のアミノ酸配列を含む重鎖；
配列番号１５２のアミノ酸配列を含む軽鎖；
配列番号１の配列を有するＶＨドメイン；及び
配列番号２の配列を有するＶＬドメイン
を含む、本明細書に記載の複合体の抗体。
【０２３３】
配列番号１１０のアミノ酸配列を含む重鎖；
配列番号１５３のアミノ酸配列を含む軽鎖；
配列番号１の配列を有するＶＨドメイン；及び
配列番号２の配列を有するＶＬドメイン
を含む、本明細書に記載の複合体の抗体。
【０２３４】
配列番号１１０のアミノ酸配列を含む重鎖；
配列番号１６１のアミノ酸配列を含む軽鎖；
配列番号１の配列を有するＶＨドメイン；及び
配列番号２の配列を有するＶＬドメイン
を含む、本明細書に記載の複合体の抗体。
【０２３５】
配列番号１１０のアミノ酸配列を含む重鎖；
配列番号１６２のアミノ酸配列を含む軽鎖；
配列番号１の配列を有するＶＨドメイン；及び
配列番号２の配列を有するＶＬドメイン
を含む、本明細書に記載の複合体の抗体。
【０２３６】
配列番号１１０のアミノ酸配列を含む重鎖；
配列番号１６３のアミノ酸配列を含む軽鎖；
配列番号１の配列を有するＶＨドメイン；及び
配列番号２の配列を有するＶＬドメイン
を含む、本明細書に記載の複合体の抗体。
【０２３７】
ＡｂＨＪ−ＣＤ２２  ＩｇＧ１
配列番号１１０のアミノ酸配列を含む重鎖、配列番号１５０または配列番号１６０のアミノ酸配列を含む軽鎖、配列番号１の配列を有するＶＨドメイン、及び配列番号２の配列を有するＶＬドメインを含む、本明細書に記載の複合体の抗体であって；
配列番号１１０の位置１０３におけるシステインが、システインではないアミノ酸によって置換される、本明細書に記載の複合体の抗体。好ましくは、薬物部分は、配列番号１５０の位置１０５におけるシステイン、配列番号１６０の位置１０２におけるシステインに複合化される。
【０２３８】
配列番号１１１のアミノ酸配列を含む重鎖；
配列番号１５０または配列番号１６０のアミノ酸配列を含む軽鎖；
配列番号１の配列を有するＶＨドメイン；及び
配列番号２の配列を有するＶＬドメイン
を含む、本明細書に記載の複合体の抗体。
【０２３９】
配列番号１１２のアミノ酸配列を含む重鎖；
配列番号１５０または配列番号１６０のアミノ酸配列を含む軽鎖；
配列番号１の配列を有するＶＨドメイン；及び
配列番号２の配列を有するＶＬドメイン
を含む、本明細書に記載の複合体の抗体。
【０２４０】
ＡｂＢＪ−ＣＤ２２  ＩｇＧ１
配列番号１１０のアミノ酸配列を含む重鎖、配列番号１５０または配列番号１６０のアミノ酸配列を含む軽鎖、配列番号１の配列を有するＶＨドメイン、及び配列番号２の配列を有するＶＬドメインを含む、本明細書に記載の複合体の抗体であって；
配列番号１１０の位置１０９及び位置１１２におけるシステインがそれぞれ、システインではないアミノ酸によって置換され；
かつ配列番号１５０の位置１０５におけるシステイン、または配列番号１６０の位置１０２におけるシステインが、システインではないアミノ酸によって置換される、本明細書に記載の複合体の抗体。好ましくは、薬物部分は、配列番号１１０の位置１０３におけるシステインに複合化される。好ましくは、配列番号１１０の位置１０９及び位置１１２におけるシステインは、バリンによって置換される。
【０２４１】
配列番号１１３のアミノ酸配列を含む重鎖；
配列番号１５１、配列番号１５２、配列番号１５３、配列番号１６１、配列番号１６２、または配列番号１６３のアミノ酸配列を含む軽鎖；
配列番号１の配列を有するＶＨドメイン；及び
配列番号２の配列を有するＶＬドメイン
を含む、本明細書に記載の複合体の抗体。
【０２４２】
配列番号１１３のアミノ酸配列を含む重鎖；
配列番号１５１のアミノ酸配列を含む軽鎖；
配列番号１の配列を有するＶＨドメイン；及び
配列番号２の配列を有するＶＬドメイン
を含む、本明細書に記載の複合体の抗体。
【０２４３】
配列番号１１３のアミノ酸配列を含む重鎖；
配列番号１５２のアミノ酸配列を含む軽鎖；
配列番号１の配列を有するＶＨドメイン；及び
配列番号２の配列を有するＶＬドメイン
を含む、本明細書に記載の複合体の抗体。
【０２４４】
配列番号１１３のアミノ酸配列を含む重鎖；
配列番号１５３のアミノ酸配列を含む軽鎖；
配列番号１の配列を有するＶＨドメイン；及び
配列番号２の配列を有するＶＬドメイン
を含む、本明細書に記載の複合体の抗体。
【０２４５】
配列番号１１３のアミノ酸配列を含む重鎖；
配列番号１６１のアミノ酸配列を含む軽鎖；
配列番号１の配列を有するＶＨドメイン；及び
配列番号２の配列を有するＶＬドメイン
を含む、本明細書に記載の複合体の抗体。
【０２４６】
配列番号１１３のアミノ酸配列を含む重鎖；
配列番号１６２のアミノ酸配列を含む軽鎖；
配列番号１の配列を有するＶＨドメイン；及び
配列番号２の配列を有するＶＬドメイン
を含む、本明細書に記載の複合体の抗体。
【０２４７】
配列番号１１３のアミノ酸配列を含む重鎖；
配列番号１６３のアミノ酸配列を含む軽鎖；
配列番号１の配列を有するＶＨドメイン；及び
配列番号２の配列を有するＶＬドメイン
を含む、本明細書に記載の複合体の抗体。
【０２４８】
配列番号１１４のアミノ酸配列を含む重鎖；
配列番号１５１、配列番号１５２、配列番号１５３、配列番号１６１、配列番号１６２、または配列番号１６３のアミノ酸配列を含む軽鎖；
配列番号１の配列を有するＶＨドメイン；及び
配列番号２の配列を有するＶＬドメイン
を含む、本明細書に記載の複合体の抗体。
【０２４９】
配列番号１１４のアミノ酸配列を含む重鎖；
配列番号１５１のアミノ酸配列を含む軽鎖；
配列番号１の配列を有するＶＨドメイン；及び
配列番号２の配列を有するＶＬドメイン
を含む、本明細書に記載の複合体の抗体。
【０２５０】
配列番号１１４のアミノ酸配列を含む重鎖；
配列番号１５２のアミノ酸配列を含む軽鎖；
配列番号１の配列を有するＶＨドメイン；及び
配列番号２の配列を有するＶＬドメイン
を含む、本明細書に記載の複合体の抗体。
【０２５１】
配列番号１１４のアミノ酸配列を含む重鎖；
配列番号１５３のアミノ酸配列を含む軽鎖；
配列番号１の配列を有するＶＨドメイン；及び
配列番号２の配列を有するＶＬドメイン
を含む、本明細書に記載の複合体の抗体
【０２５２】
配列番号１１４のアミノ酸配列を含む重鎖；
配列番号１６１のアミノ酸配列を含む軽鎖；
配列番号１の配列を有するＶＨドメイン；及び
配列番号２の配列を有するＶＬドメイン
を含む、本明細書に記載の複合体の抗体。
【０２５３】
配列番号１１４のアミノ酸配列を含む重鎖；
配列番号１６２のアミノ酸配列を含む軽鎖；
配列番号１の配列を有するＶＨドメイン；及び
配列番号２の配列を有するＶＬドメイン
を含む、本明細書に記載の複合体の抗体。
【０２５４】
配列番号１１４のアミノ酸配列を含む重鎖；
配列番号１６３のアミノ酸配列を含む軽鎖；
配列番号１の配列を有するＶＨドメイン；及び
配列番号２の配列を有するＶＬドメイン
を含む、本明細書に記載の複合体の抗体。
【０２５５】
配列番号１１０のアミノ酸配列を含む重鎖、配列番号１５０または配列番号１６０のアミノ酸配列を含む軽鎖、配列番号１の配列を有するＶＨドメイン、及び配列番号２の配列を有するＶＬドメインを含む、本明細書に記載の複合体の抗体であって；
配列番号１１０の位置１０９におけるシステインが、システインではないアミノ酸によって置換され、配列番号１１０の位置１１２におけるシステインが未置換であり；
かつ配列番号１５０の位置１０５におけるシステイン、または配列番号１６０の位置１０２におけるシステインが、システインではないアミノ酸によって置換される、本明細書に記載の複合体の抗体。好ましくは、薬物部分は、配列番号１１０の位置１０３及び位置１１２におけるシステインに複合化される。好ましくは、配列番号１１０の位置１０９におけるシステインは、バリンによって置換される。
【０２５６】
配列番号１１０のアミノ酸配列を含む重鎖、配列番号１５０または配列番号１６０のアミノ酸配列を含む軽鎖、配列番号１の配列を有するＶＨドメイン、及び配列番号２の配列を有するＶＬドメインを含む、本明細書に記載の複合体の抗体であって；
配列番号１１０の位置１１２におけるシステインが、システインではないアミノ酸によって置換され、配列番号１１０の位置１０９におけるシステインが未置換であり；
かつ配列番号１５０の位置１０５におけるシステイン、または配列番号１６０の位置１０２におけるシステインが、システインではないアミノ酸によって置換される、本明細書に記載の複合体の抗体。好ましくは、薬物部分は、配列番号１１０の位置１０３及び位置１０９におけるシステインに複合化される。好ましくは、配列番号１１０の位置１１２におけるシステインは、バリンによって置換される。
【０２５７】
ＡｂＤＪ−ＣＤ２２  ＩｇＧ１
配列番号１１０のアミノ酸配列を含む重鎖、配列番号１５０または配列番号１６０のアミノ酸配列を含む軽鎖、配列番号１の配列を有するＶＨドメイン、及び配列番号２の配列を有するＶＬドメインを含む、本明細書に記載の複合体の抗体であって；
配列番号１１０の位置１０３、位置１０９、及び位置１１２におけるシステインがそれぞれ、システインではないアミノ酸によって置換される、本明細書に記載の複合体の抗体。好ましくは、薬物部分は、配列番号１５０の位置１０５におけるシステイン、または配列番号１６０の位置１０２におけるシステインに複合化される。好ましくは、配列番号１１０の位置１０９及び位置１１２におけるシステインは、バリンによって置換される。
【０２５８】
配列番号１１５のアミノ酸配列を含む重鎖；
配列番号１５０または配列番号１６０のアミノ酸配列を含む軽鎖；
配列番号１の配列を有するＶＨドメイン；及び
配列番号２の配列を有するＶＬドメイン
を含む、本明細書に記載の複合体の抗体。
【０２５９】
配列番号１１６のアミノ酸配列を含む重鎖；
配列番号１５０または配列番号１６０のアミノ酸配列を含む軽鎖；
配列番号１の配列を有するＶＨドメイン；及び
配列番号２の配列を有するＶＬドメイン
を含む、本明細書に記載の複合体の抗体。
【０２６０】
配列番号１１０のアミノ酸配列を含む重鎖、配列番号１５０または配列番号１６０のアミノ酸配列を含む軽鎖、配列番号１の配列を有するＶＨドメイン、及び配列番号２の配列を有するＶＬドメインを含む、本明細書に記載の複合体の抗体であって；
配列番号１１０の位置１０９及び位置１１２におけるシステインがそれぞれ、システインではないアミノ酸によって置換され、配列番号１１０の位置１０３におけるシステインが未置換である、本明細書に記載の複合体の抗体。好ましくは、薬物部分は、（ｉ）配列番号１５０の位置１０５におけるシステイン、または配列番号１６０の位置１０２におけるシステイン；及び（ｉｉ）配列番号１１０の位置１０３におけるシステインに複合化される。好ましくは、配列番号１１０の位置１０９及び位置１１２におけるシステインは、バリンによって置換される。
【０２６１】
配列番号１１０のアミノ酸配列を含む重鎖、配列番号１５０または配列番号１６０のアミノ酸配列を含む軽鎖、配列番号１の配列を有するＶＨドメイン、及び配列番号２の配列を有するＶＬドメインを含む、本明細書に記載の複合体の抗体であって；
配列番号１１０の位置１０３及び位置１１２におけるシステインがそれぞれ、システインではないアミノ酸によって置換され、配列番号１１０の位置１０９におけるシステインが未置換である、本明細書に記載の複合体の抗体。好ましくは、薬物部分は、（ｉ）配列番号１５０の位置１０５におけるシステイン、または配列番号１６０の位置１０２におけるシステイン；及び（ｉｉ）配列番号１１０の位置１０９におけるシステインに複合化される。好ましくは、配列番号１１０の位置１１２におけるシステインは、バリンによって置換される。
【０２６２】
配列番号１１０のアミノ酸配列を含む重鎖、配列番号１５０または配列番号１６０のアミノ酸配列を含む軽鎖、配列番号１の配列を有するＶＨドメイン、及び配列番号２の配列を有するＶＬドメインを含む、本明細書に記載の複合体の抗体であって；
配列番号１１０の位置１０３及び位置１０９におけるシステインがそれぞれ、システインではないアミノ酸によって置換され、配列番号１１０の位置１１２におけるシステインが未置換である、本明細書に記載の複合体の抗体。好ましくは、薬物部分は、（ｉ）配列番号１５０の位置１０５におけるシステイン、または配列番号１６０の位置１０２におけるシステイン；及び（ｉｉ）配列番号１１０の位置１１２におけるシステインに複合化される。好ましくは、配列番号１１０の位置１０９におけるシステインは、バリンによって置換される。
【０２６３】
Ｋａｂａｔ  ＥＵによる残基２３４及び／または残基２３５の置換
配列番号１１０のアミノ酸配列を含む重鎖、軽鎖、配列番号１の配列を有するＶＨドメイン、及び配列番号２の配列を有するＶＬドメインを含む、本明細書に記載の複合体の抗体であって、
配列番号１１０の位置１１７におけるロイシン、及び／または配列番号１１０の位置１１８におけるロイシンが、ロイシンではないアミノ酸によって置換される、本明細書に記載の複合体の抗体。
【０２６４】
配列番号１１０１のアミノ酸配列を含む重鎖；
軽鎖；
配列番号１の配列を有するＶＨドメイン；及び
配列番号２の配列を有するＶＬドメイン
を含む、本明細書に記載の複合体の抗体。
【０２６５】
配列番号１１０２のアミノ酸配列を含む重鎖；
軽鎖；
配列番号１の配列を有するＶＨドメイン；及び
配列番号２の配列を有するＶＬドメイン
を含む、本明細書に記載の複合体の抗体。
【０２６６】
配列番号１１０３のアミノ酸配列を含む重鎖；
軽鎖；
配列番号１の配列を有するＶＨドメイン；及び
配列番号２の配列を有するＶＬドメイン
を含む、本明細書に記載の複合体の抗体。
【０２６７】
配列番号１１０４のアミノ酸配列を含む重鎖；
軽鎖；
配列番号１の配列を有するＶＨドメイン；及び
配列番号２の配列を有するＶＬドメイン
を含む、本明細書に記載の複合体の抗体。
【０２６８】
配列番号１１０５のアミノ酸配列を含む重鎖；
軽鎖；
配列番号１の配列を有するＶＨドメイン；及び
配列番号２の配列を有するＶＬドメイン
を含む、本明細書に記載の複合体の抗体。
【０２６９】
配列番号１１０６のアミノ酸配列を含む重鎖；
軽鎖；
配列番号１の配列を有するＶＨドメイン；及び
配列番号２の配列を有するＶＬドメイン
を含む、本明細書に記載の複合体の抗体。
【０２７０】
配列番号１３０のアミノ酸配列を含む重鎖、軽鎖、配列番号１の配列を有するＶＨドメイン、及び配列番号２の配列を有するＶＬドメインを含む、本明細書に記載の複合体の抗体であって、
配列番号１３０の位置１６４におけるロイシン、及び／または配列番号１３０の位置１６５におけるロイシンが、ロイシンではないアミノ酸によって置換される、本明細書に記載の複合体の抗体。
【０２７１】
配列番号１３１のアミノ酸配列を含む重鎖；
軽鎖；
配列番号１の配列を有するＶＨドメイン；及び
配列番号２の配列を有するＶＬドメイン
を含む、本明細書に記載の複合体の抗体。
【０２７２】
配列番号１３２のアミノ酸配列を含む重鎖；
軽鎖；
配列番号１の配列を有するＶＨドメイン；及び
配列番号２の配列を有するＶＬドメイン
を含む、本明細書に記載の複合体の抗体。
【０２７３】
配列番号１３３のアミノ酸配列を含む重鎖；
軽鎖；
配列番号１の配列を有するＶＨドメイン；及び
配列番号２の配列を有するＶＬドメイン
を含む、本明細書に記載の複合体の抗体。
【０２７４】
配列番号１３４のアミノ酸配列を含む重鎖；
軽鎖；
配列番号１の配列を有するＶＨドメイン；及び
配列番号２の配列を有するＶＬドメイン
を含む、本明細書に記載の複合体の抗体。
【０２７５】
配列番号１３５のアミノ酸配列を含む重鎖；
軽鎖；
配列番号１の配列を有するＶＨドメイン；及び
配列番号２の配列を有するＶＬドメイン
を含む、本明細書に記載の複合体の抗体。
【０２７６】
配列番号１３６のアミノ酸配列を含む重鎖；
軽鎖；
配列番号１の配列を有するＶＨドメイン；及び
配列番号２の配列を有するＶＬドメイン
を含む、本明細書に記載の複合体の抗体。
【０２７７】
配列番号１４０のアミノ酸配列を含む重鎖、軽鎖、配列番号１の配列を有するＶＨドメイン、及び配列番号２の配列を有するＶＬドメインを含む、本明細書に記載の複合体の抗体であって、
配列番号１４０の位置１１５におけるロイシンが、ロイシンではないアミノ酸によって置換される、本明細書に記載の複合体の抗体。
【０２７８】
配列番号１４１のアミノ酸配列を含む重鎖；
軽鎖；
配列番号１の配列を有するＶＨドメイン；及び
配列番号２の配列を有するＶＬドメイン
を含む、本明細書に記載の複合体の抗体。
【０２７９】
配列番号１４２のアミノ酸配列を含む重鎖；
軽鎖；
配列番号１の配列を有するＶＨドメイン；及び
配列番号２の配列を有するＶＬドメイン
を含む、本明細書に記載の複合体の抗体。
【０２８０】
配列番号１４３のアミノ酸配列を含む重鎖；
軽鎖；
配列番号１の配列を有するＶＨドメイン；及び
配列番号２の配列を有するＶＬドメイン
を含む、本明細書に記載の複合体の抗体。
【０２８１】
配列番号１４４のアミノ酸配列を含む重鎖；
軽鎖；
配列番号１の配列を有するＶＨドメイン；及び
配列番号２の配列を有するＶＬドメイン
を含む、本明細書に記載の複合体の抗体。
【０２８２】
鎖間システイン残基の置換と、Ｋａｂａｔ  ＥＵによる残基２３４及び／または残基２３５の置換との組み合わせ
ＡｂＬＪ（ＬＡＬＡ）  ＩｇＧ１
配列番号１１０のアミノ酸配列を含む重鎖、配列番号１５０または配列番号１６０のアミノ酸配列を含む軽鎖、配列番号１の配列を有するＶＨドメイン、及び配列番号２の配列を有するＶＬドメインを含む、本明細書に記載の複合体の抗体であって；
配列番号１５０の位置１０５におけるシステイン、または配列番号１６０の位置１０２におけるシステインが、システインではないアミノ酸によって置換され；
かつ配列番号１１０の位置１１７におけるロイシン、及び／または配列番号１１０の位置１１８におけるロイシンが、ロイシンではないアミノ酸によって置換される、本明細書に記載の複合体の抗体。好ましくは、薬物部分は、配列番号１１０の位置１０３におけるシステインに複合化される。
【０２８３】
配列番号１１０１、配列番号１１０２、配列番号１１０３、配列番号１１０４、配列番号１１０５、配列番号１１０６のアミノ酸配列を含む重鎖；
配列番号１５１、配列番号１５２、配列番号１５３、配列番号１６１、配列番号１６２、または配列番号１６３のアミノ酸配列を含む軽鎖；
配列番号１の配列を有するＶＨドメイン；及び
配列番号２の配列を有するＶＬドメイン
を含む、本明細書に記載の複合体の抗体。
【０２８４】
配列番号１１０３のアミノ酸配列を含む重鎖；
配列番号１５１のアミノ酸配列を含む軽鎖；
配列番号１の配列を有するＶＨドメイン；及び
配列番号２の配列を有するＶＬドメイン
を含む、本明細書に記載の複合体の抗体。
【０２８５】
配列番号１１０３のアミノ酸配列を含む重鎖；
配列番号１５２のアミノ酸配列を含む軽鎖；
配列番号１の配列を有するＶＨドメイン；及び
配列番号２の配列を有するＶＬドメイン
を含む、本明細書に記載の複合体の抗体。
【０２８６】
配列番号１１０３のアミノ酸配列を含む重鎖；
配列番号１５３のアミノ酸配列を含む軽鎖；
配列番号１の配列を有するＶＨドメイン；及び
配列番号２の配列を有するＶＬドメイン
を含む、本明細書に記載の複合体の抗体。
【０２８７】
配列番号１１０３のアミノ酸配列を含む重鎖；
配列番号１６１のアミノ酸配列を含む軽鎖；
配列番号１の配列を有するＶＨドメイン；及び
配列番号２の配列を有するＶＬドメイン
を含む、本明細書に記載の複合体の抗体。
【０２８８】
配列番号１１０３のアミノ酸配列を含む重鎖；
配列番号１６２のアミノ酸配列を含む軽鎖；
配列番号１の配列を有するＶＨドメイン；及び
配列番号２の配列を有するＶＬドメイン
を含む、本明細書に記載の複合体の抗体。
【０２８９】
配列番号１１０３のアミノ酸配列を含む重鎖；
配列番号１６３のアミノ酸配列を含む軽鎖；
配列番号１の配列を有するＶＨドメイン；及び
配列番号２の配列を有するＶＬドメイン
を含む、本明細書に記載の複合体の抗体。
【０２９０】
ＡｂＨＪ（ＬＡＬＡ）  ＩｇＧ１
配列番号１１０のアミノ酸配列を含む重鎖、配列番号１５０または配列番号１６０のアミノ酸配列を含む軽鎖、配列番号１の配列を有するＶＨドメイン、及び配列番号２の配列を有するＶＬドメインを含む、本明細書に記載の複合体の抗体であって；
配列番号１１０の位置１０３におけるシステインが、システインではないアミノ酸によって置換され；
かつ配列番号１１０の位置１１７におけるロイシン、及び／または配列番号１１０の位置１１８におけるロイシンが、ロイシンではないアミノ酸によって置換される、本明細書に記載の複合体の抗体。好ましくは、薬物部分は、配列番号１５０の位置１０５におけるシステイン、配列番号１６０の位置１０２におけるシステインに複合化される。
【０２９１】
配列番号１１１１のアミノ酸配列を含む重鎖；
配列番号１５０または配列番号１６０のアミノ酸配列を含む軽鎖；
配列番号１の配列を有するＶＨドメイン；及び
配列番号２の配列を有するＶＬドメイン
を含む、本明細書に記載の複合体の抗体。
【０２９２】
配列番号１１１２のアミノ酸配列を含む重鎖；
配列番号１５０または配列番号１６０のアミノ酸配列を含む軽鎖；
配列番号１の配列を有するＶＨドメイン；及び
配列番号２の配列を有するＶＬドメイン
を含む、本明細書に記載の複合体の抗体。
【０２９３】
配列番号１１１３のアミノ酸配列を含む重鎖；
配列番号１５０または配列番号１６０のアミノ酸配列を含む軽鎖；
配列番号１の配列を有するＶＨドメイン；及び
配列番号２の配列を有するＶＬドメイン
を含む、本明細書に記載の複合体の抗体。
【０２９４】
配列番号１１１４のアミノ酸配列を含む重鎖；
配列番号１５０または配列番号１６０のアミノ酸配列を含む軽鎖；
配列番号１の配列を有するＶＨドメイン；及び
配列番号２の配列を有するＶＬドメイン
を含む、本明細書に記載の複合体の抗体。
【０２９５】
配列番号１１１５のアミノ酸配列を含む重鎖；
配列番号１５０または配列番号１６０のアミノ酸配列を含む軽鎖；
配列番号１の配列を有するＶＨドメイン；及び
配列番号２の配列を有するＶＬドメイン
を含む、本明細書に記載の複合体の抗体。
【０２９６】
配列番号１１１６のアミノ酸配列を含む重鎖；
配列番号１５０または配列番号１６０のアミノ酸配列を含む軽鎖；
配列番号１の配列を有するＶＨドメイン；及び
配列番号２の配列を有するＶＬドメイン
を含む、本明細書に記載の複合体の抗体。
【０２９７】
配列番号１１２１のアミノ酸配列を含む重鎖；
配列番号１５０または配列番号１６０のアミノ酸配列を含む軽鎖；
配列番号１の配列を有するＶＨドメイン；及び
配列番号２の配列を有するＶＬドメイン
を含む、本明細書に記載の複合体の抗体。
【０２９８】
配列番号１１２２のアミノ酸配列を含む重鎖；
配列番号１５０または配列番号１６０のアミノ酸配列を含む軽鎖；
配列番号１の配列を有するＶＨドメイン；及び
配列番号２の配列を有するＶＬドメイン
を含む、本明細書に記載の複合体の抗体。
【０２９９】
配列番号１１２３のアミノ酸配列を含む重鎖；
配列番号１５０または配列番号１６０のアミノ酸配列を含む軽鎖；
配列番号１の配列を有するＶＨドメイン；及び
配列番号２の配列を有するＶＬドメイン
を含む、本明細書に記載の複合体の抗体。
【０３００】
配列番号１１２４のアミノ酸配列を含む重鎖；
配列番号１５０または配列番号１６０のアミノ酸配列を含む軽鎖；
配列番号１の配列を有するＶＨドメイン；及び
配列番号２の配列を有するＶＬドメイン
を含む、本明細書に記載の複合体の抗体。
【０３０１】
配列番号１１２５のアミノ酸配列を含む重鎖；
配列番号１５０または配列番号１６０のアミノ酸配列を含む軽鎖；
配列番号１の配列を有するＶＨドメイン；及び
配列番号２の配列を有するＶＬドメイン
を含む、本明細書に記載の複合体の抗体。
【０３０２】
配列番号１１２６のアミノ酸配列を含む重鎖；
配列番号１５０または配列番号１６０のアミノ酸配列を含む軽鎖；
配列番号１の配列を有するＶＨドメイン；及び
配列番号２の配列を有するＶＬドメイン
を含む、本明細書に記載の複合体の抗体。
【０３０３】
ＡｂＢＪ（ＬＡＬＡ）  ＩｇＧ１
配列番号１１０のアミノ酸配列を含む重鎖、配列番号１５０または配列番号１６０のアミノ酸配列を含む軽鎖、配列番号１の配列を有するＶＨドメイン、及び配列番号２の配列を有するＶＬドメインを含む、本明細書に記載の複合体の抗体であって；
配列番号１１０の位置１０９及び位置１１２におけるシステインがそれぞれ、システインではないアミノ酸によって置換され；
かつ配列番号１５０の位置１０５におけるシステイン、または配列番号１６０の位置１０２におけるシステインが、システインではないアミノ酸によって置換され；
かつ配列番号１１０の位置１１７におけるロイシン、及び／または配列番号１１０の位置１１８におけるロイシンが、ロイシンではないアミノ酸によって置換される、本明細書に記載の複合体の抗体。好ましくは、薬物部分は、配列番号１１０の位置１０３におけるシステインに複合化される。好ましくは、配列番号１１０の位置１０９及び位置１１２におけるシステインは、バリンによって置換される。
【０３０４】
配列番号１１３１、配列番号１１３２、配列番号１１３３、配列番号１１３４、配列番号１１３５、配列番号１１３６のアミノ酸配列を含む重鎖；
配列番号１５１、配列番号１５２、配列番号１５３、配列番号１６１、配列番号１６２、または配列番号１６３のアミノ酸配列を含む軽鎖；
配列番号１の配列を有するＶＨドメイン；及び
配列番号２の配列を有するＶＬドメイン
を含む、本明細書に記載の複合体の抗体。
【０３０５】
配列番号１１３３のアミノ酸配列を含む重鎖；
配列番号１５１のアミノ酸配列を含む軽鎖；
配列番号１の配列を有するＶＨドメイン；及び
配列番号２の配列を有するＶＬドメイン
を含む、本明細書に記載の複合体の抗体。
【０３０６】
配列番号１１３３のアミノ酸配列を含む重鎖；
配列番号１５２のアミノ酸配列を含む軽鎖；
配列番号１の配列を有するＶＨドメイン；及び
配列番号２の配列を有するＶＬドメイン
を含む、本明細書に記載の複合体の抗体。
【０３０７】
配列番号１１３３のアミノ酸配列を含む重鎖；
配列番号１５３のアミノ酸配列を含む軽鎖；
配列番号１の配列を有するＶＨドメイン；及び
配列番号２の配列を有するＶＬドメイン
を含む、本明細書に記載の複合体の抗体。
【０３０８】
配列番号１１３３のアミノ酸配列を含む重鎖；
配列番号１６１のアミノ酸配列を含む軽鎖；
配列番号１の配列を有するＶＨドメイン；及び
配列番号２の配列を有するＶＬドメイン
を含む、本明細書に記載の複合体の抗体。
【０３０９】
配列番号１１３３のアミノ酸配列を含む重鎖；
配列番号１６２のアミノ酸配列を含む軽鎖；
配列番号１の配列を有するＶＨドメイン；及び
配列番号２の配列を有するＶＬドメイン
を含む、本明細書に記載の複合体の抗体。
【０３１０】
配列番号１１３３のアミノ酸配列を含む重鎖；
配列番号１６３のアミノ酸配列を含む軽鎖；
配列番号１の配列を有するＶＨドメイン；及び
配列番号２の配列を有するＶＬドメイン
を含む、本明細書に記載の複合体の抗体。
【０３１１】
配列番号１１４１、配列番号１１４２、配列番号１１４３、配列番号１１４４、配列番号１１４５、配列番号１１４６のアミノ酸配列を含む重鎖；
配列番号１５１、配列番号１５２、配列番号１５３、配列番号１６１、配列番号１６２、または配列番号１６３のアミノ酸配列を含む軽鎖；
配列番号１の配列を有するＶＨドメイン；及び
配列番号２の配列を有するＶＬドメイン
を含む、本明細書に記載の複合体の抗体。
【０３１２】
配列番号１１４３のアミノ酸配列を含む重鎖；
配列番号１５１のアミノ酸配列を含む軽鎖；
配列番号１の配列を有するＶＨドメイン；及び
配列番号２の配列を有するＶＬドメイン
を含む、本明細書に記載の複合体の抗体。
【０３１３】
配列番号１１４３のアミノ酸配列を含む重鎖；
配列番号１５２のアミノ酸配列を含む軽鎖；
配列番号１の配列を有するＶＨドメイン；及び
配列番号２の配列を有するＶＬドメイン
を含む、本明細書に記載の複合体の抗体。
【０３１４】
配列番号１１４３のアミノ酸配列を含む重鎖；
配列番号１５３のアミノ酸配列を含む軽鎖；
配列番号１の配列を有するＶＨドメイン；及び
配列番号２の配列を有するＶＬドメイン
を含む、本明細書に記載の複合体の抗体。
【０３１５】
配列番号１１４３のアミノ酸配列を含む重鎖；
配列番号１６１のアミノ酸配列を含む軽鎖；
配列番号１の配列を有するＶＨドメイン；及び
配列番号２の配列を有するＶＬドメイン
を含む、本明細書に記載の複合体の抗体。
【０３１６】
配列番号１１４３のアミノ酸配列を含む重鎖；
配列番号１６２のアミノ酸配列を含む軽鎖；
配列番号１の配列を有するＶＨドメイン；及び
配列番号２の配列を有するＶＬドメイン
を含む、本明細書に記載の複合体の抗体。
【０３１７】
配列番号１１４３のアミノ酸配列を含む重鎖；
配列番号１６３のアミノ酸配列を含む軽鎖；
配列番号１の配列を有するＶＨドメイン；及び
配列番号２の配列を有するＶＬドメイン
を含む、本明細書に記載の複合体の抗体。
【０３１８】
ＡｂＤＪ５９１  ＩｇＧ１
配列番号１１０のアミノ酸配列を含む重鎖、配列番号１５０または配列番号１６０のアミノ酸配列を含む軽鎖、配列番号１の配列を有するＶＨドメイン、及び配列番号２の配列を有するＶＬドメインを含む、本明細書に記載の複合体の抗体であって；
配列番号１１０の位置１０３、位置１０９、及び位置１１２におけるシステインがそれぞれ、システインではないアミノ酸によって置換され；
かつ配列番号１１０の位置１１７におけるロイシン、及び／または配列番号１１０の位置１１８におけるロイシンが、ロイシンではないアミノ酸によって置換される、本明細書に記載の複合体の抗体。好ましくは、薬物部分は、配列番号１５０の位置１０５におけるシステイン、または配列番号１６０の位置１０２におけるシステインに複合化される。好ましくは、配列番号１１０の位置１０９及び位置１１２におけるシステインは、バリンによって置換される。
【０３１９】
配列番号１１５１のアミノ酸配列を含む重鎖；
配列番号１５０または配列番号１６０のアミノ酸配列を含む軽鎖；
配列番号１の配列を有するＶＨドメイン；及び
配列番号２の配列を有するＶＬドメイン
を含む、本明細書に記載の複合体の抗体。
【０３２０】
配列番号１１５２のアミノ酸配列を含む重鎖；
配列番号１５０または配列番号１６０のアミノ酸配列を含む軽鎖；
配列番号１の配列を有するＶＨドメイン；及び
配列番号２の配列を有するＶＬドメイン
を含む、本明細書に記載の複合体の抗体。
【０３２１】
配列番号１１５３のアミノ酸配列を含む重鎖；
配列番号１５０または配列番号１６０のアミノ酸配列を含む軽鎖；
配列番号１の配列を有するＶＨドメイン；及び
配列番号２の配列を有するＶＬドメイン
を含む、本明細書に記載の複合体の抗体。
【０３２２】
配列番号１１５４のアミノ酸配列を含む重鎖；
配列番号１５０または配列番号１６０のアミノ酸配列を含む軽鎖；
配列番号１の配列を有するＶＨドメイン；及び
配列番号２の配列を有するＶＬドメイン
を含む、本明細書に記載の複合体の抗体。
【０３２３】
配列番号１１５５のアミノ酸配列を含む重鎖；
配列番号１５０または配列番号１６０のアミノ酸配列を含む軽鎖；
配列番号１の配列を有するＶＨドメイン；及び
配列番号２の配列を有するＶＬドメイン
を含む、本明細書に記載の複合体の抗体。
【０３２４】
配列番号１１５６のアミノ酸配列を含む重鎖；
配列番号１５０または配列番号１６０のアミノ酸配列を含む軽鎖；
配列番号１の配列を有するＶＨドメイン；及び
配列番号２の配列を有するＶＬドメイン
を含む、本明細書に記載の複合体の抗体。
【０３２５】
配列番号１１６のアミノ酸配列を含む重鎖；
配列番号１５０または配列番号１６０のアミノ酸配列を含む軽鎖；
配列番号１の配列を有するＶＨドメイン；及び
配列番号２の配列を有するＶＬドメイン
を含む、本明細書に記載の複合体の抗体。
【０３２６】
配列番号１１６１のアミノ酸配列を含む重鎖；
配列番号１５０または配列番号１６０のアミノ酸配列を含む軽鎖；
配列番号１の配列を有するＶＨドメイン；及び
配列番号２の配列を有するＶＬドメイン
を含む、本明細書に記載の複合体の抗体。
【０３２７】
配列番号１１６２のアミノ酸配列を含む重鎖；
配列番号１５０または配列番号１６０のアミノ酸配列を含む軽鎖；
配列番号１の配列を有するＶＨドメイン；及び
配列番号２の配列を有するＶＬドメイン
を含む、本明細書に記載の複合体の抗体。
【０３２８】
配列番号１１６３のアミノ酸配列を含む重鎖；
配列番号１５０または配列番号１６０のアミノ酸配列を含む軽鎖；
配列番号１の配列を有するＶＨドメイン；及び
配列番号２の配列を有するＶＬドメイン
を含む、本明細書に記載の複合体の抗体。
【０３２９】
配列番号１１６４のアミノ酸配列を含む重鎖；
配列番号１５０または配列番号１６０のアミノ酸配列を含む軽鎖；
配列番号１の配列を有するＶＨドメイン；及び
配列番号２の配列を有するＶＬドメイン
を含む、本明細書に記載の複合体の抗体。
【０３３０】
配列番号１１６５のアミノ酸配列を含む重鎖；
配列番号１５０または配列番号１６０のアミノ酸配列を含む軽鎖；
配列番号１の配列を有するＶＨドメイン；及び
配列番号２の配列を有するＶＬドメイン
を含む、本明細書に記載の複合体の抗体。
【０３３１】
配列番号１１６６のアミノ酸配列を含む重鎖；
配列番号１５０または配列番号１６０のアミノ酸配列を含む軽鎖；
配列番号１の配列を有するＶＨドメイン；及び
配列番号２の配列を有するＶＬドメイン
を含む、本明細書に記載の複合体の抗体。
【０３３２】
定義
免疫グロブリン（Ｉｇ）分子におけるアミノ酸位置の番号付け
本明細書で使用されるアミノ酸の番号付けは、Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．（１９９１，ＮＩＨ  Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ  ９１−３２４２，Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｔｅｃｈｎｉｃａｌ  Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ  Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｓｐｒｉｎｇｆｉｅｌｄ，ＶＡ、これ以後は「Ｋａｂａｔ」と称される）に示されるＥＵインデックスの番号付けシステムによるものである。「Ｋａｂａｔに示されるＥＵインデックス」は、前出のＫａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．において説明されるヒトＩｇＧ１  ＥＵ抗体（ｈｕｍａｎ  ＩｇＧ  １  ＥＵ  ａｎｔｉｂｏｄｙ）の残基番号付けを指す。
【０３３３】
例えば、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、及びＩｇＧ４（またはＩｇＡ１、ＩｇＡ２、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＭなど）における置換の場合、当業者であれば、本明細書に記載のＫａｂａｔ位置に対応する所望のアイソフォームの残基を決定するために、ＩｇＧ１との配列アライメントを実施するＮＣＢＩ  ＢＬＡＳＴ（登録商標）（ｈｔｔｐ：／／ｂｌａｓｔ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／Ｂｌａｓｔ．ｃｇｉ）などの配列アライメントプログラムを容易に使用することができる。
【０３３４】
抗体
本明細書では、「抗体」という用語は、抗体の抗原結合部位（例えば、ＶＨドメインとＶＬドメインとが対になることによって形成されるもの）を含む任意の分子を包含する。したがって、例えば、「抗体」という用語には、モノクローナル抗体（未変化のモノクローナル抗体を含む）、ポリクローナル抗体、少なくとも２つの異なるエピトープ結合断片から形成される多特異性抗体（例えば、二重特異性抗体）、ヒト抗体、ヒト化抗体、ラクダ化（ｃａｍｅｌｉｓｅｄ）抗体、キメラ抗体、単鎖抗体（ＣＨ３と融合したｓｃＦｖなど）、所望の生物学的活性を示す抗体断片（例えば、抗原結合部分であり、例えば、低分子化抗体）、及び抗イディオタイプ（抗Ｉｄ）抗体、細胞内抗体、ならびに上記のいずれかのエピトープ結合断片が、例えば、同種抗原に結合する能力といった、所望の生物学的活性を示す限り、包含される。抗体は、マウスのもの、ヒトのもの、ヒト化されたもの、キメラであるもの、または他の種に由来するものであり得る。１つの実施形態では、抗体は、ＣＨ３ドメインと融合した単鎖Ｆｖ抗体（ｓｃＦｖ−ＣＨ３）である。１つの実施形態では、抗体は、Ｆｃ領域と融合した単鎖Ｆｖ抗体（ｓｃＦｖ−Ｆｃ）である。１つの実施形態では、抗体は、低分子化抗体である。
【０３３５】
抗体は、免疫系が産生し、特定の抗原を認識して結合する能力を有するタンパク質である（Ｊａｎｅｗａｙ，Ｃ．，Ｔｒａｖｅｒｓ，Ｐ．，Ｗａｌｐｏｒｔ，Ｍ．，Ｓｈｌｏｍｃｈｉｋ（２００１）Ｉｍｍｕｎｏ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，５ｔｈ  Ｅｄ．，Ｇａｒｌａｎｄ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ）。標的抗原は、一般に、多数の結合部位を有しており、こうした結合部位は、エピトープとも呼ばれ、複数の抗体に存在するＣＤＲによって認識される。異なるエピトープに特異的に結合する抗体はそれぞれ、異なる構造を有している。したがって、１つの抗原は、対応する抗体を複数有し得る。抗体には、未変化の免疫グロブリン分子、または未変化の免疫グロブリン分子の免疫学的に活性な部分、すなわち対象標的の抗原またはその一部に免疫特異的に結合する抗原結合部位を含む分子が含まれる。そのような標的には、限定はされないが、癌細胞、または自己免疫疾患と関連する自己免疫性抗体を産生する細胞が含まれる。
【０３３６】
具体的には、抗体には、免疫グロブリン分子、及び免疫グロブリンの免疫学的に活性な断片、すなわち少なくとも１つの抗原結合部位を含む分子が含まれる。抗体は、任意のアイソタイプ（例えば、ＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、及びＩｇＡ）、クラス（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１、及びＩｇＡ２）もしくはサブクラス、またはアロタイプ（例えば、ヒトのＧ１ｍ１、Ｇ１ｍ２、Ｇ１ｍ３、非Ｇ１ｍ１［すなわち、Ｇ１ｍ１以外の任意のアロタイプ］、Ｇ１ｍ１７、Ｇ２ｍ２３、Ｇ３ｍ２１、Ｇ３ｍ２８、Ｇ３ｍ１１、Ｇ３ｍ５、Ｇ３ｍ１３、Ｇ３ｍ１４、Ｇ３ｍ１０、Ｇ３ｍ１５、Ｇ３ｍ１６、Ｇ３ｍ６、Ｇ３ｍ２４、Ｇ３ｍ２６、Ｇ３ｍ２７、Ａ２ｍ１、Ａ２ｍ２、Ｋｍ１、Ｋｍ２、及びＫｍ３）の抗体分子であり得る。免疫グロブリンは、ヒト起源、マウス起源、またはウサギ起源のものを含む、任意の種に由来するものであり得る。
【０３３７】
本明細書では、「未変化の抗体」は、ＶＬドメイン及びＶＨドメイン、ならびに軽鎖定常ドメイン（ＣＬ）、ならびに重鎖定常ドメインであるＣＨ１、ＣＨ２、及びＣＨ３を含むものである。定常ドメインは、天然の配列を有する定常ドメイン（例えば、ヒトの天然の配列を有する定常ドメイン）、またはそのアミノ酸配列変異体であり得る。未変化の抗体は、１つまたは複数の「エフェクター機能」を有し得、エフェクター機能は、抗体のＦｃ領域（天然の配列を有するＦｃ領域またはアミノ酸配列が変異したＦｃ領域）に起因する生物学的活性を指す。抗体のエフェクター機能の例には、Ｃ１ｑ結合性、補体依存性細胞傷害、Ｆｃ受容体結合性、抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）、食作用、ならびにＢ細胞受容体及びＢＣＲなどの細胞表面受容体の下方制御が含まれる。
【０３３８】
抗体重鎖定常領域またはその一部
本明細書では、「抗体重鎖定常領域」、「Ｆｃ領域」、「Ｆｃドメイン」、及び「Ｆｃ」という用語は、ＩｇＧ分子のパパイン消化によって得られる結晶性断片と関連する、抗体分子の一部を指す。
【０３３９】
本明細書では、「Ｆｃ領域」、「Ｆｃドメイン」、及び「Ｆｃ」という用語は、第１の定常領域免疫グロブリンドメインを除外した、抗体の定常領域に関すると共に、さらにその領域の一部に関する。したがって、Ｆｃは、ＩｇＡ、ＩｇＤ、及びＩｇＧの最後の２つの定常領域免疫グロブリンドメイン、ならびにＩｇＥ及びＩｇＭの最後の３つの定常領域免疫グロブリンドメイン、ならびにこうしたドメインのＮ末端側に位置する可動性ヒンジ、またはそれらの一部を指す。ＩｇＡ及びＩｇＭについては、Ｆｃは、Ｊ鎖を含み得る。
【０３４０】
ＩｇＧについては、Ｆｃは、免疫グロブリンドメインＣｙ２及び免疫グロブリンドメインＣｙ３（Ｃガンマ２及びＣガンマ３）、ならびにＣｙ１（Ｃガンマ１）とＣｙ２（Ｃガンマ２）との間のヒンジを含む。Ｆｃ領域の境界は変わり得るものの、ヒトＩｇＧ重鎖Ｆｃ領域は、通常、そのカルボキシ末端側に残基Ｃ２２６または残基Ｐ２３０を含むと定義され、こうした残基は、前出のＫａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．に示されるＥＵインデックスの番号付けシステムによって付番されるものである。典型的には、Ｆｃドメインは、ヒトＩｇＧ１定常ドメインのアミノ酸残基２３６近辺〜４４７近辺を含む。
【０３４１】
Ｆｃポリペプチドは、単離されたこの領域を指し得るか、または抗体もしくはその抗原結合部分もしくはＦｃ融合タンパク質との関連におけるこの領域を指し得る。
【０３４２】
「未変化の重鎖定常領域」は、Ｆｃ領域を含み、ＩｇＧ重鎖のＣＨ２ドメイン及びＣＨ３ドメイン（ならびに任意選択でＩｇＡ及びＩｇＥのＣＨ４）に加えて、ＣＨ１ドメイン及びヒンジをさらに含む。
【０３４３】
本明細書では、「ヒンジ領域」は、一般に、ヒトＩｇＧ１のＧｌｕ２１６〜Ｐｒｏ２３０にまたがるものであると定義され（Ｂｕｒｔｏｎ，１９８５，Ｍａｌｅｃ．ｌｍｍｕｎｏｌ．２２：１６１−２０６）、ＩｇＧ分子においてＣＨ１ドメインのＣ末端部分及びＣＨ２ドメインのＮ末端部分を含む部分を指す。ヒトのＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ２、及びＩｇＧ４、ならびにマウスのＩｇＧ１及びＩｇＧ２Ａのヒンジ領域の例は、米国特許第６，１６５，４７６号の４列目５４行目〜５列目１５行目に示される表において提供されており、例えば、Ｊａｎｅｗａｙ  ｅｔ  ａｌ．，１９９９，Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ：Ｔｈｅ  Ｉｍｍｕｎｅ  Ｓｙｓｔｅｍ  ｉｎ  Ｈｅａｌｔｈ  ａｎｄ  Ｄｉｓｅａｓｅ，４ｔｈ  ｅｄ．（Ｅｌｓｅｖｉｅｒ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  Ｌｔｄ．）；Ｂｌｏｏｍ  ｅｔ  ａｌ．，１９９７，Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ６：４０７−４１５；Ｈｕｍｐｈｒｅｙｓ  ｅｔ  ａｌ．，１９９７，Ｊ．ｌｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ  ２０９：１９３−２０２においても示されている。他のＩｇＧアイソタイプのヒンジ領域は、同一位置において重鎖間にＳ−−Ｓ結合が形成されるように最初と最後のシステイン残基を配置することによって、ＩｇＧ１配列とアライメントされ得る。
【０３４４】
Ｆｃ領域の「下流ヒンジ領域（ｌｏｗｅｒ  ｈｉｎｇｅ  ｒｅｇｉｏｎ）」は、通常、ヒンジ領域のＣ末端側から直ぐの残基区間、すなわちＦｅ領域の残基２３３〜２３９であると定義される。本明細書では、「ＩｇＧヒンジ−Ｆｃ領域」または「ヒンジ−Ｆｃ断片」という用語は、ヒンジ領域（残基２１６〜２３０近辺）及びそのＣ末端側のＦｃ領域（残基２３１〜４４７）を指す。
【０３４５】
本明細書では、「断片」という用語は、本明細書に開示の全長配列と比較して短い配列部分を説明するために使用される。好ましくは、本明細書に開示の「断片」を含む抗体は、標的抗原に結合する能力を保持し、最も好ましくは、本明細書に開示の全長配列を含むがそれ以外は同一の抗体のものと比較して、約７０％以上の特異的結合活性（例えば、約１０％以上、約５０％以上、約７５％以上、約８０％以上、約８５％以上、約９０％以上、約９５％の結合活性）を有する。ある特定の実施形態では、特異的結合活性はインビトロでのものである。特異的結合活性は、インビトロの均一アッセイまたはインビトロの不均一アッセイによって定量化されることもある。いくつかの実施形態では、特異的結合活性は、インビボにおけるものであり、場合によっては、特異的結合活性は、インサイチュで決定される。いくつかの実施形態では、「断片」は、少なくとも５０のアミノ酸長であり、少なくとも７５のアミノ酸長、少なくとも１００のアミノ酸長、少なくとも１５０のアミノ酸長、少なくとも２００のアミノ酸長、少なくとも２５０のアミノ酸長、または少なくとも３００のアミノ酸長などである。
【０３４６】
配列の改変
本明細書に開示の抗体重鎖可変領域及び／または抗体軽鎖可変領域の配列は、置換、挿入、または欠失によって改変され得る。本明細書の記載の配列と実質的に同一のアミノ酸配列は、アミノ酸の欠失及び／または挿入に加えて、保存的アミノ酸置換を含む配列を含む。保存的アミノ酸置換は、第１のアミノ酸を、第１のアミノ酸のものと類似の化学的特性及び／または物理的特性（例えば、電荷、構造、極性、疎水性／親水性）を有する第２のアミノ酸によって交換することを指す。好ましい保存的置換は、１つのアミノ酸が、本明細書の以下に示されるアミノ酸群に含まれる別のアミノ酸で置換される置換である：
【０３４７】
・極性側鎖を有するアミノ酸（Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ｈｉｓ、Ａｓｎ、Ｇｉｎ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｔｙｒ、及びＣｙｓ）
・非極性側鎖を有するアミノ酸（Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｈｅ、Ｔｒｐ、Ｐｒｏ、及びＭｅｔ）
・脂肪族側鎖を有するアミノ酸（Ｇｌｙ、Ａｌａ  Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ）
・環式側鎖を有するアミノ酸（Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｈｉｓ、Ｐｒｏ）
・芳香族側鎖を有するアミノ酸（Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ）
・酸性側鎖を有するアミノ酸（Ａｓｐ、Ｇｌｕ）
・塩基性側鎖を有するアミノ酸（Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ｈｉｓ）
・アミド側鎖を有するアミノ酸（Ａｓｎ、Ｇｌｎ）
・ヒドロキシ側鎖を有するアミノ酸（Ｓｅｒ、Ｔｈｒ）
・含硫側鎖を有するアミノ酸（Ｃｙｓ、Ｍｅｔ）
・中性の弱疎水性アミノ酸（Ｐｒｏ、Ａｌａ、Ｇｌｙ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ）
・親水性の酸性アミノ酸（Ｇｉｎ、Ａｓｎ、Ｇｌｕ、Ａｓｐ）、ならびに
・疎水性アミノ酸（Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｖａｌ）
【０３４８】
特に好ましい保存的アミノ酸置換群は、Ｖａｌ−Ｌｅｕ−Ｉｌｅ、Ｐｈｅ−Ｔｙｒ、Ｌｙｓ−Ａｒｇ、Ａｌａ−Ｖａｌ、及びＡｓｎ−Ｇｌｎである。
【０３４９】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の複合体の抗体は、本明細書に記載の重鎖に対して８０％以上のアミノ酸配列相同性（例えば、約８５％以上、約８６％以上、約８７％以上、約８８％以上、約８９％以上、約９０％以上、約９１％以上、約９２％以上、約９３％以上、約９４％以上、約９５％以上、約９６％以上、約９７％以上、約９８％以上、約９９％以上の配列相同性）を有するアミノ酸配列を有する重鎖を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の複合体の抗体は、本明細書に記載の軽鎖に対して８０％以上のアミノ酸配列相同性（例えば、約８５％以上、約８６％以上、約８７％以上、約８８％以上、約８９％以上、約９０％以上、約９１％以上、約９２％以上、約９３％以上、約９４％以上、約９５％以上、約９６％以上、約９７％以上、約９８％以上、約９９％以上の配列相同性）を有するアミノ酸配列を有する軽鎖を含む。
【０３５０】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の複合体の抗体は、本明細書に記載の重鎖のアミノ酸配列とのアミノ酸配列相同性を有する重鎖であって、本明細書に記載の重鎖のアミノ酸配列に対する１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０のアミノ酸改変（例えば、置換、挿入、及び／または欠失）を含むことが異なる重鎖を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の複合体の抗体は、本明細書に記載の軽鎖のアミノ酸配列とのアミノ酸配列相同性を有する軽鎖であって、本明細書に記載の軽鎖のアミノ酸配列に対する１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０のアミノ酸改変（例えば、置換、挿入、及び／または欠失）を含むことが異なる軽鎖を含む。
【０３５１】
免疫原性の低減
本明細書に開示の抗体は改変され得る。これは、例えば、ヒト対象に対するその免疫原性を低減するためである。このことは、当業者に知られる多くの手法のいずれかを使用して達成してよい。こうした手法のいくつかは、以下により詳細に記載される。
【０３５２】
ヒト化
非ヒトの抗体または抗体断片のインビボでの免疫原性を低減する手法には、「ヒト化」と呼ばれるものが含まれる。
【０３５３】
「ヒト化抗体」は、ヒト抗体の改変された可変領域の少なくとも一部分を含むポリペプチドであって、可変領域の一部分、好ましくは、未変化のヒト可変ドメインと比較して実質的にそれに満たない一部分が、非ヒト種に由来する対応配列によって置換されており、改変された可変領域が、別のタンパク質の少なくとも別の一部分、好ましくは、ヒト抗体の定常領域に連結されたポリペプチドを指す。「ヒト化抗体」という表現は、相補性決定領域（「ＣＤＲ」）のアミノ酸残基の１つもしくは複数、及び／またはフレームワーク領域（「ＦＷ」もしくは「ＦＲ」）のアミノ酸残基の１つもしくは複数が、げっ歯類抗体または他の非ヒト抗体における類似部位に由来するアミノ酸残基によって置換されたヒト抗体を含む。「ヒト化抗体」という表現は、ヒト免疫グロブリンのアミノ酸配列を実質的に有するＦＲと、非ヒト免疫グロブリンのアミノ酸配列を実質的に有するＣＤＲと、を含む免疫グロブリンアミノ酸配列変異体またはその断片も含む。
【０３５４】
非ヒト（例えば、マウス）抗体の「ヒト化」形態は、非ヒト免疫グロブリンに由来する配列の含有度が最小限のキメラ抗体である。あるいは、別の見方をすると、ヒト化抗体は、ヒト配列の代わりに、非ヒト（例えば、マウス）抗体から選択された配列も含むヒト抗体である。ヒト化抗体は、保存的アミノ酸置換を含み得るか、または同一もしくは異なる種に由来し、その結合性及び／もしくは生物学的活性を顕著に変えることのない元々は存在しない残基を含み得る。そのような抗体は、非ヒト免疫グロブリンに由来する配列の含有度が最小限のキメラ抗体である。
【０３５５】
さまざまなヒト化手法が存在しており、こうした手法には、「ＣＤＲ移植（ＣＤＲ  ｇｒａｆｔｉｎｇ）」、「選択誘導」、「脱免疫化（ｄｅｉｍｍｕｎｉｚａｔｉｏｎ）」、「表面再構成（ｒｅｓｕｒｆａｃｉｎｇ）」（「ベニヤリング」（ｖｅｎｅｅｒｉｎｇ）」としても知られる）、「複合抗体（ｃｏｍｐｏｓｉｔｅ  ａｎｔｉｂｏｄｙ）」、「ヒトストリング含量最適化（Ｈｕｍａｎ  Ｓｔｒｉｎｇ  Ｃｏｎｔｅｎｔ  Ｏｐｔｉｍｉｓａｔｉｏｎ）」、及びフレームワークシャッフリングが含まれる。
【０３５６】
ＣＤＲ移植
この手法では、ヒト化抗体は、レシピエント抗体の相補性決定領域（ＣＤＲ）に由来する残基が、所望の特性を有する、マウス、ラット、ラクダ、ウシ、ヤギ、またはウサギなどの非ヒト種（ドナー抗体）のＣＤＲに由来する残基によって交換されたヒト免疫グロブリン（レシピエント抗体）である（事実上、非ヒトＣＤＲが、ヒトフレームワークに「移植されている」）。いくつかの実例では、ヒト免疫グロブリンのフレームワーク領域（ＦＲ）の残基は、対応する非ヒト残基によって交換される（これは、例えば、抗原結合性に対して特定のＦＲ残基が顕著に影響するときに起こり得る）。
【０３５７】
さらに、ヒト化抗体は、レシピエント抗体にも、組み込まれたＣＤＲ配列またはフレームワーク配列にも見られない残基を含み得る。こうした改変は、抗体の能力をさらに洗練及び最大化するために実施される。したがって、一般に、ヒト化抗体は、少なくとも１つの可変ドメインをすべて含むことなり、１つ態様では、２つの可変ドメインをすべて含むことになり、こうした可変ドメインでは、すべてまたは超可変ループのすべてが非ヒト免疫グロブリンのものと対応し、ＦＲ領域のすべてまたは実質的にすべてがヒト免疫グロブリン配列のものである。ヒト化抗体は、任意選択で、免疫グロブリン定常領域（Ｆｃ）の少なくとも一部、またはヒト免疫グロブリンの免疫グロブリン定常領域（Ｆｃ）の少なくとも一部も含むことになる。
【０３５８】
選択誘導
方法は、特定のエピトープに特異的な所与の非ヒト抗体のＶＨドメインまたはＶＬドメインと、ヒトのＶＨライブラリーまたはＶＬライブラリーとを組み合わせることからなるものであり、対象抗原を標的として特異的なヒトＶドメインが選択される。こうして選択されたヒトＶＨを、次に、ＶＬライブラリーと組み合わせることで、完全なヒトのＶＨｘＶＬという組み合わせが得られる。この方法は、Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ（Ｎ．Ｙ．）１２，（１９９４）８９９−９０３において説明されている。
【０３５９】
複合抗体
この方法では、ヒト抗体に由来するアミノ酸配列の２つ以上のセグメントが、最終的な抗体分子内に統合される。複合抗体は、最終的な複合抗体のＶ領域に、ヒトのＴ細胞エピトープを限定または回避する組み合わせにおいて、複数のヒトＶＨ配列セグメントとヒトＶＬ配列セグメントとを組わせることによって構築される。必要な場合は、Ｔ細胞エピトープに寄与またはそれをコードするＶ領域セグメントと、Ｔ細胞エピトープを回避する代替セグメントと、を交換することによって、Ｔ細胞エピトープは限定または回避される。この方法は、ＵＳ２００８／０２０６２３９Ａ１において説明されている。
【０３６０】
脱免疫化
この方法は、治療抗体（または他の分子）のＶ領域からヒト（または他の第２の種）のＴ細胞エピトープを除去するものである。治療抗体のＶ領域配列は、例えば、ＭＨＣ結合モチーフのデータベース（ｗｗｗ．ｗｅｈｉ．ｅｄｕ．ａｕにおいて提供される「モチーフ」データベースなど）との比較によって、ＭＨＣクラスＩＩ−結合モチーフの存在が分析される。あるいは、ＭＨＣクラスＩＩ−結合モチーフは、Ａｌｔｕｖｉａ  ｅｔ  ａｌ．（Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２４９  ２４４−２５０（１９９５））によって考案されたものなどの計算スレッディング法を使用して同定してよい。こうした方法では、Ｖ領域配列に由来する連続的な重複ペプチドのＭＨＣクラスＩＩタンパク質に対する結合エネルギーが試験される。その後、このデータは、成功裏に示されたペプチドに関する他の配列特徴に関する情報と組み合わせることができる。こうした情報は、両親媒性、ロスバード（Ｒｏｔｈｂａｒｄ）モチーフ、ならびにカテプシンＢ及び他のプロセシング酵素の切断部位などである。
【０３６１】
第２の種（例えば、ヒト）の潜在的なＴ細胞エピトープが同定されると、こうしたエピトープは、１つまたは複数のアミノ酸を変更することによって除去される。改変されるアミノ酸は、通常、Ｔ細胞エピトープ自体に存在するものであるが、タンパク質の一次構造または二次構造という点においてエピトープに隣接するものであり得る（それ故に、一次構造において隣接していなくてよい）。最も典型的には、変更は置換の手法によるものであるが、状況によっては、アミノ酸の追加または欠失の方が適することになる。
【０３６２】
変更はすべて、組換えＤＮＡ技術によって達成することができ、したがって、最終的な分子は、部位特異的変異誘発などの、よく確立された方法を使用して組換え宿主から発現させることによって調製してよい。しかしながら、タンパク質化学または任意の他の分子変更手段を使用することも可能である。
【０３６３】
表面再構成
この方法は、
（ａ）非ヒト抗体の可変領域の三次元モデルを構築することによる、非ヒト（例えば、げっ歯類）抗体（またはその断片）の可変領域の立体構造の決定と、
（ｂ）重鎖及び軽鎖のフレームワーク位置のセットが得られるように、十分な数の非ヒト及びヒトの抗体可変領域重鎖及び抗体可変領域軽鎖のｘ線結晶構造に由来する相対露出度分布（ｒｅｌａｔｉｖｅ  ａｃｃｅｓｓｉｂｉｌｉｔｙ  ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ）を使用した配列アライメントの取得であって、十分な数の非ヒト抗体重鎖及び非ヒト抗体軽鎖の９８％でアライメント位置が同一となる配列アライメントの取得と、
（ｃ）ヒト化されることになる非ヒト抗体を対象とした定義であって、段階（ｂ）において取得したフレームワーク位置のセットを使用した、重鎖及び軽鎖の表面に露出するアミノ酸残基のセットの定義と、
（ｄ）段階（ｃ）において定義される表面露出アミノ酸残基のセットと最も密接に同一である、重鎖及び軽鎖の表面に露出するアミノ酸残基のセットの、ヒト抗体アミノ酸配列からの同定であって、ヒト抗体に由来する重鎖及び軽鎖が、自然に対を形成するか、または自然に対を形成しない同定と、
（ｅ）ヒト化されることになる非ヒト抗体のアミノ酸配列における、段階（ｃ）で定義される、重鎖及び軽鎖の表面に露出するアミノ酸残基のセットと、段階（ｄ）で同定される、重鎖及び軽鎖の表面に露出するアミノ酸残基のセットとの置換と、
（ｆ）段階（ｅ）で特定される置換から生じる非ヒト抗体の可変領域の三次元モデルの構築と、
（ｇ）段階（ａ）及び段階（ｆ）において構築される三次元モデルの比較による同定であって、段階（ｃ）または段階（ｄ）において同定されるセットに由来し、ヒト化されることになる非ヒト抗体の相補性決定領域の任意の残基の任意の原子の５オングストローム以内に入る任意のアミノ酸残基の同定と、
（ｈ）ヒトのアミノ酸残基から元々の非ヒトのアミノ酸残基への、段階（ｇ）において同定される任意の残基の変更であって、それによって、表面露出アミノ酸残基の非ヒト抗体ヒト化セットが定義される変更と、を含む。但し、段階（ａ）は、最初に実施される必要はないが、段階（ｇ）に先んじて実施されなくてはならない。
【０３６４】
超ヒト化（Ｓｕｐｅｒｈｕｍａｎｉｚａｔｉｏｎ）
この方法は、非ヒト配列と、機能性のヒト生殖系列遺伝子レパートリーとを比較するものである。非ヒト配列と同一または密接に関連する基準構造をコードするヒト遺伝子が選択される。選択されるヒト遺伝子は、ＣＤＲ内の相同性が最も高いものであり、ＦＲドナーとして選択される。最終的に、非ヒトＣＤＲは、こうしたヒトＦＲに移植される。この方法は、特許ＷＯ２００５／０７９４７９Ａ２において説明されている。
【０３６５】
ヒトストリング含量最適化
この方法は、非ヒト（例えば、マウス）の配列と、ヒトの生殖系列遺伝子レパートリーとを比較するものであり、差異は、潜在的なＭＨＣ／Ｔ細胞エピトープのレベルにおいて配列を定量化するヒトストリング含量（ＨＳＣ）としてスコア化される。その後、標的配列は、網羅的な相同性尺度を使用するのではなく、そのＨＳＣを最大化することによってヒト化され、その結果、複数の多用なヒト化変異体が得られる（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，４４，（２００７）１９８６−１９９８において説明されている）。
【０３６６】
フレームワークシャッフリング
非ヒト抗体のＣＤＲは、重鎖及び軽鎖のヒト生殖系列遺伝子フレームワークとして知られるものをすべて包含するｃＤＮＡプールとインフレームで融合される。その後、ヒト化抗体は、例えば、ファージディスプレイされた抗体ライブラリーのパニングによって選択される。これについては、Ｍｅｔｈｏｄｓ  ３６，４３−６０（２００５）において説明されている。
【０３６７】
エピトープ結合ドメイン
本明細書では、エピトープ結合ドメインという用語は、抗原エピトープを特異的に認識して結合することが可能なドメインを指す。エピトープ結合ドメインの古典的な例を挙げるとすれば、抗原結合部位を形成するＶＨドメイン及びＶＬドメインを含む抗体パラトープであろう。
【０３６８】
本明細書に開示の抗体重鎖可変領域及び／または抗体軽鎖可変領域の配列は、エピトープ結合ドメインが同種抗原に結合する能力を維持する範囲内で、例えば、挿入、置換、及び／または欠失によって改変され得る。当業者であれば、本明細書に記載されるか、または当該技術分野において知られる機能性アッセイを実施することによって、この活性が維持されているかを確認することができる。したがって、いくつかの実施形態では、重鎖可変領域が含む挿入、置換、及び／または欠失の数は、２０以下であり、挿入、置換、及び／または欠失の数は、１５以下、１０以下、９以下、８以下、７以下、６以下、５以下、４以下、３以下、２以下、または１以下などである。いくつかの実施形態では、軽鎖可変領域が含む挿入、置換、及び／または欠失の数は、２０以下であり、挿入、置換、及び／または欠失の数は、１５以下、１０以下、９以下、８以下、７以下、６以下、５以下、４以下、３以下、２以下、または１以下などである。いくつかの実施形態では、本開示の抗体には、本明細書に記載の配列と同一のアミノ酸配列を有するＶＨドメイン及びＶＬドメインを含むものが含まれる。
【０３６９】
治療指数
本明細書では、「治療指数」という用語は、治療作用を引き起こす治療薬剤の量と、死（動物試験におけるもの）または毒性（ヒト試験におけるもの）を引き起こす量との比較として使用される。
【０３７０】
治療指数＝ＬＤ５０／ＥＤ５０（動物試験）、または＝ＴＤ５０／ＥＤ５０（ヒト試験）であり、ここで、ＬＤ＝集団の５０％致死用量、ＴＤ＝集団の５０％毒性用量、及びＥＤ＝集団の５０％最小有効用量である。「有効」及び「毒性」の用量レベルは、医師または当業者が容易に決定することができる。部位特異的複合体と部位非特異的複合体との治療指数が比較されるとき、「有効」及び「毒性」のレベルは、同一の様式において決定される。
【０３７１】
それ以外は同一（Ｏｔｈｅｒｗｉｓｅ  ｉｄｅｎｔｉｃａｌ）
本明細書では、「部位非特異的であり、それ以外は同一の複合体」という用語は、薬物単位（ＤＬ）が抗体重鎖の定常領域またはその一部に複合化した位置（複数可）以外のすべての点において、定義または請求される部位特異的複合体と同一の複合体を指す。具体的には、定義または請求される部位特異的複合体では、薬物単位（ＤＬ）は、特定の残基（複数可）に一律かつ一貫して複合化される一方で、部位非特異的であり、それ以外は同一のものでは、薬物単位（ＤＬ）が抗体に複合化される程度及び位置は、バッチ間で可変である。
【０３７２】
例えば、本開示の部位特異的な抗体−薬物複合体の実施形態の１つでは、薬物単位（ＤＬ）は２つ存在し、２つの抗体重鎖定常領域またはその一部の位置４２２の残基（ｋａｂａｔの番号付け）のそれぞれに１つの薬物単位（ＤＬ）が複合化される。この例について、「部位非特異的であり、それ以外は同一の複合体」であれば、抗体のアミノ酸配列及びポリペプチド構造は同一であり、抗体に複合化される薬物単位（ＤＬ）も２つであることになるが、薬物単位（ＤＬ）は、それぞれの位置４４２に一律かつ一貫して複合化されることにはならず、異なって選択された位置に複合化されることになり、こうした位置の正確な組み合わせは集団内で複合体ごとに異なる（例えば、複合化は、リジンの側鎖を介すものであり得るか、または還元された鎖間ジスルフィド結合によるものであり得る）。
【０３７３】
本明細書では、親和性、治療指数、及び安定性などの特性は、分子レベルで測定されるものとは反対に、集団レベルで測定されるバルク特性である。したがって、本明細書では、部位特異的複合体の特性と、「部位非特異的であり、それ以外は同一の複合体」の特性との間で実施される比較は、そうした分子の集団が示す特性の比較である。
【０３７４】
機能性部分
本開示のヒト化抗体は、機能性部分に複合化され得る。機能性部分の例には、アミノ酸、ペプチド、タンパク質、多糖、ヌクレオシド、ヌクレオチド、オリゴヌクレオチド、核酸、薬物、ホルモン、脂質、脂質会合体（ｌｉｐｉｄ  ａｓｓｅｍｂｌｙ）、合成ポリマー、ポリマー微粒子、生体細胞、ウイルス、レポーター（フルオロフォア、発色団、もしくは色素）、毒素、ハプテン、酵素、結合性メンバー（抗体もしくは抗体断片など）、放射性同位体、固体マトリックス、半固体マトリックス、及びそれらの組み合わせ、または有機部分が含まれる。
【０３７５】
薬物の例には、細胞傷害性薬剤、化学療法剤、ペプチド、ペプチド模倣物、タンパク質骨格、ＤＮＡ、ＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ、マイクロＲＮＡ、及びペプチド核酸が含まれる。好ましい実施形態では、機能性部分は、ＰＢＤ薬物部分である。他の実施形態では、ヒト化抗体は、所与の生物学的応答を改変する治療薬剤または薬物部分に複合化される。治療薬剤または薬物部分の構築は、古典的な化学的治療薬剤に限定されることにはならない。例えば、薬物部分は、所望の生物学的活性を有するタンパク質またはポリペプチドであり得る。そのようなタンパク質には、例えば、アブリン、リシンＡ、シュードモナス（ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）の菌体外毒素、コレラ毒素、もしくはジフテリア毒素などの毒素；腫瘍壊死因子、α−インターフェロン、β−インターフェロン、神経成長因子、血小板由来増殖因子、組織プラスミノーゲン活性化因子、例えば、ＴＮＦ−α、ＴＮＦ−β、ＡＩＭ  Ｉ（国際公開第ＷＯ９７／３３８９９号を参照のこと）、ＡＩＭ  ＩＩ（国際公開第ＷＯ９７／３４９１１号を参照のこと）、Ｆａｓリガンド（Ｔａｋａｈａｓｈｉ  ｅｔ  ａｌ．，１９９４，Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．，６：１５６７）、及びＶＥＧｆ（国際公開第ＷＯ９９／２３１０５号を参照のこと）といったアポトーシス剤、血栓剤（ｔｈｒｏｍｂｏｔｉｃ  ａｇｅｎｔ）、例えば、アンジオスタチンもしくはエンドスタチンといった抗血管新生剤などのタンパク質；または例えば、リンホカイン（例えば、インターロイキン−１（「ＩＬ−１」）、インターロイキン−２（「ＩＬ−２」）、インターロイキン−４（「ＩＬ−４」）、インターロイキン−６（「ＩＬ−６」）、インターロイキン−７（「ＩＬ−７」）、インターロイキン−９（「ＩＬ−９」）、インターロイキン−１５（「ＩＬ−１５」）、インターロイキン−１２（「ＩＬ−１２」）、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（「ＧＭＣＳＦ」）、及び顆粒球コロニー刺激因子（「Ｇ−ＣＳＦ」））、もしくは成長因子（例えば、成長ホルモン（「ＧＨ」））などの生物学的応答の変更因子（ｍｏｄｉｆｉｅｒ）が含まれ得る。
【０３７６】
レポーターの例には、フルオロフォア、発色団、放射性核種、及び酵素が含まれる。そのような抗体−レポーター複合体は、特定の治療の有効性の決定などの、臨床試験手順の一部として、障害（限定はされないが、癌など）の発症または進行の監視または予後予測に有効であり得る。そのような診断及び検出は、検出可能な物質に対する抗体の融合または複合化によって達成することができる。こうした検出可能な物質には、限定はされないが、西洋ワサビペルオキシダーゼ、アルカリホスファターゼ、ベータ−ガラクトシダーゼ、またはアセチルコリンエステラーゼなどのさまざまな酵素；限定はされないが、ストレプトアビジン／ビオチン及びアビジン／ビオチンなどの補欠分子族；限定はされないが、ウンベリフェロン、フルオレセイン、フルオレセインイソチオシネート（ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｉｎ  ｉｓｏｔｈｉｏｃｙｎａｔｅ）、ローダミン、ジクロロトリアジニルアミンフルオレセイン、ダンシルクロリド、またはフィコエリトリンなどの蛍光材料；限定はされないが、ルシフェラーゼ、ルシフェリン、及びエクオリンなどの、限定はされないが、生物発光材料などの発光材料；限定はされないが、ビスマス（２１３Ｂｉ）、炭素（１４Ｃ）、クロム（５１Ｃｒ）、コバルト（５７Ｃｏ）、フッ素（１８Ｆ）、ガドリニウム（１５３Ｇｄ、１５９Ｇｄ）、ガリウム（６８Ｇａ、６７Ｇａ）、ゲルマニウム（６８Ｇｅ）、ホルミウム（１６６Ｈｏ）、インジウム（１１５Ｉｎ、１１３Ｉｎ、１１２Ｉｎ、１１１Ｉｎ）、ヨウ素（１３１Ｉ、１２５Ｉ、１２３Ｉ、１２１Ｉ）、ランタン（ｌａｎｔｈａｎｉｕｍ）（１４０Ｌａ）、ルテチウム（１７７Ｌｕ）、マンガン（５４Ｍｎ）、モリブデン（９９Ｍｏ）、パラジウム（１０３Ｐｄ）、亜リン酸（３２Ｐ）、プラセオジム（１４２Ｐｒ）、プロメチウム（１４９Ｐｍ）、レニウム（１８６Ｒｅ、１８８Ｒｅ）、ロジウム（１０５Ｒｈ）、ルテミウム（ｒｕｔｈｅｍｉｕｍ）（９７Ｒｕ）、サマリウム（１５３Ｓｍ）、スカンジウム（４７Ｓｃ）、セレン（７５Ｓｅ）、ストロンチウム（８５Ｓｒ）、イオウ（３５Ｓ）、テクネチウム（９９Ｔｃ）、タリウム（２０１Ｔｉ）、スズ（１１３Ｓｎ、１１７Ｓｎ）、トリチウム（３Ｈ）、キセノン（１３３Ｘｅ）、イッテルビウム（１６９Ｙｂ、１７５Ｙｂ）、イットリウム（９０Ｙ）、亜鉛（６５Ｚｎ）などの放射性材料；さまざまなポジトロン放出トモグラフィーで使用されるポジトロン放出金属、ならびに非放射性の常磁性金属イオンが含まれるが、これらに限定はされない。
【０３７７】
結合性メンバーの例には、抗体または抗体断片、ならびにビオチン及び／またはストレプトアビジンが含まれる。
【０３７８】
毒素、細胞毒素、または細胞傷害性薬剤には、細胞に有害な任意の薬剤が含まれる。毒素の例には、１３１Ｉなどの放射性同位体、シュードモナスの菌体外毒素（ＰＥ３８断片）などのリボソーム不活性化タンパク質、リシン、リシンのα−鎖、サポリン、ヤマゴボウ抗ウイルスタンパク質、ジフテリア毒素、またはシュードモナスの菌体外毒素Ａなどの植物毒素または細菌毒素が含まれる（Ｋｒｅｉｔｍａｎ  ａｎｄ  Ｐａｓｔａｎ（１９９８）Ａｄｖ．Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｒｅｖ．３１：５３．）。他の毒素及び細胞毒素には、例えば、細胞分裂阻害剤もしくは細胞破壊剤、または例えば、アルファ−放射体といった放射性金属イオンが含まれる。例には、パクリタキセル、サイトカラシンＢ、グラミシジンＤ、臭化エチジウム、エメチン、マイトマイシン、エトポシド、テノポシド（ｔｅｎｏｐｏｓｉｄｅ）、ビンクリスチン、ビンブラスチン、コルヒチン、ドキソルビシン、ダウノルビシン、ジヒドロキシアントラシンジオン（ｄｉｈｙｄｒｏｘｙ  ａｎｔｈｒａｃｉｎ  ｄｉｏｎｅ）、ミトキサントロン、ミスラマイシン、アクチノマイシンＤ、１−デヒドロエストステロン（１−ｄｅｈｙｄｒｏｔｅｓｔｏｓｔｅｒｏｎｅ）、糖質コルチコイド、プロカイン、テトラカイン、リドカイン、プロプラノロール、ピューロマイシン、エピルビシン、ならびにシクロホスファミド及びその類似体または同族体、代謝拮抗剤（例えば、メトトレキサート、６−メルカプトプリン、６−チオグアニン、シタラビン、５−フルオロウラシルデカルバジン（５−ｆｌｕｏｒｏｕｒａｃｉｌ  ｄｅｃａｒｂａｚｉｎｅ））、アルキル化剤（例えば、メクロレタミン、チオエパクロラムブシル（ｔｈｉｏｅｐａ  ｃｈｌｏｒａｍｂｕｃｉｌ）、メルファラン、カルムスチン（ＢＣＮＵ）及びロムスチン（ＣＣＮＵ）、シクロソスファミド（ｃｙｃｌｏｔｈｏｓｐｈａｍｉｄｅ）、ブスルファン、ジブロモマンニトール、ストレプトゾトシン、マイトマイシンＣ、ならびにシスジクロロジアミン白金（ＩＩ）（ｃｉｓｄｉｃｈｌｏｒｏｄｉａｍｉｎｅ  ｐｌａｔｉｎｕｍ（ＩＩ））（ＤＤＰ）シスプラチン）、アントラサイクリン（例えば、ダウノルビシン（旧名はダウノマイシン）及びドキソルビシン）、抗生物質（例えば、ダクチノマイシン（旧名はアクチノマイシン）、ブレオマイシン、ミスラマイシン、及びアントラマイシン（ＡＭＣ））、ならびに有糸分裂阻害剤（例えば、ビンクリスチン及びビンブラスチン）が含まれる。化学的な毒素は、デュオカルマイシン（米国特許第５，７０３，０８０号；第４，９２３，９９０号）、メトトレキサート、ドキソルビシン、メルファラン、クロラムブシル、ＡＲＡ−Ｃ、ビンデシン、マイトマイシンＣ、シスプラチン、エトポシド、ブレオマイシン、及び５−フルオロウラシルから選択される群から選ぶこともできる。化学療法剤の例には、アドリアマイシン（Ａｄｒｉａｍｙｃｉｎ）、ドキソルビシン、５−フルオロウラシル、シトシンアラビノシド（Ａｒａ−Ｃ）、シクロホスファミド、チオテパ、タキソテール（Ｔａｘｏｔｅｒｅ）（ドセタキセル）、ブスルファン、シトキシン（Ｃｙｔｏｘｉｎ）、タキソール（Ｔａｘｏｌ）、メトトレキサートも含まれる。１つの実施形態���は、細胞傷害性薬剤は、エンジイン、レキシトロプシン、デュオカルマイシン、タキサン、ピューロマイシン、ドラスタチン、マイタンシノイド、及びビンカアルカロイドから選択される。他の実施形態では、細胞傷害性薬剤は、パクリタキセル、ドセタキセル、ＣＣ−Ｉ  ０６５、ＳＮ−３８、トポテカン、モルホリノ−ドキソルビシン、リゾキシン、シアノモルホリノ−ドキソルビシン、ドラスタチン−１０、エキノマイシン、コンブレタスタチン、カリチアマイシン、マイタンシン、ＤＭ−Ｉ、アウリスタチン、またはアウリスタチンＥもしくはアウリスタチンＦ、ＡＥＢ、ＡＥＶＢ、ＡＥＦＰ、ＭＭＡＥ（モノメチルアウリスタチンＥ）、ＭＭＡＦ（モノメチルアウリスタチンＦ）、エリュテロビンもしくはネトロプシンなどの他のドラスタチン誘導体である。ある特定の実施形態では、細胞傷害性薬剤は、マイタンシンまたはマイタンシノイド、及びその誘導体であり、本開示の抗体（全長または断片）は、１つまたは複数のマイタンシノイド分子に複合化される。マイタンシノイドは、チューブリン重合を阻害することによって作用する有糸分裂阻害剤である。他の実施形態では、毒素は、限定はされないが、アブリン、ブルシン、シクトキシン、ジフテリア毒素、バトラコトキシン、ボツリヌス毒素、志賀毒素、菌体内毒素、シュードモナスの菌体外毒素、シュードモナスの菌体内毒素、破傷風毒素、百日咳毒素、炭疽毒素、コレラ毒素、ファルカリノール、フモニシンＢＩ、フモニシンＢ２、アフラトキシン、マウロトキシン（ｍａｕｒｏｔｏｘｉｎ）、アジトキシン（ａｇｉｔｏｘｉｎ）、カリブドトキシン、マルガトキシン、スロトキシン（ｓｌｏｔｏｘｉｎ）、スキラトキシン（ｓｃｙｌｌａｔｏｘｉｎ）、ヘフトキシン（ｈｅｆｕｔｏｘｉｎ）、カルシセプチン、タイカトキシン（ｔａｉｃａｔｏｘｉｎ）、カルシクルジン、ゲルダナマイシン、ゲロニン、ロタウストラリン、オクラトキシンＡ（ｏｃｒａｔｏｘｉｎ  Ａ）、パツリン、リシン、ストリキニーネ、トリコテシン、ゼアラレノン（ｚｅａｒｌｅｎｏｎｅ）、及びテトラドトキシン（ｔｅｔｒａｄｏｔｏｘｉｎ）などの小分子またはタンパク質毒素である。酵素的に活性な毒素及びその断片で使用できるものには、ジフテリアＡ鎖、ジフテリア毒素の非結合性活性断片、菌体外毒素Ａ鎖（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ由来）、リシンＡ鎖、アブリンＡ鎖、モデシンＡ鎖、アルファ−サルシン、Ａｌｅｕｒｉｔｅｓ  ｆｏｒｄｉｉ由来のタンパク質、ジアンチンタンパク質、Ｐｈｙｔｏｌａｃａ  ａｍｅｒｉｃａｎａ由来のタンパク質（ＰＡＰＩ、ＰＡＰＩＩ、及びＰＡＰ−Ｓ）、Ｍｏｍｏｒｄｉｃａ  ｃｈａｒａｎｔｉａ由来の阻害剤、クルシン（ｃｕｒｃｉｎ）、クロチン（ｃｒｏｔｉｎ）、Ｓａｐａｏｎａｒｉａ  ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓ由来の阻害剤、ゲロニン、マイトゲリン（ｍｉｔｏｇｅｌｌｉｎ）、レストリクトシン、フェノマイシン（ｐｈｅｎｏｍｙｃｉｎ）、エノマイシン（ｅｎｏｍｙｃｉｎ）、ならびにトリコテセン（ｔｒｉｃｏｔｈｅｃｅｎｅ）が含まれる。
【０３７９】
ヒト化抗体は、有機部分に複合化されることによって改変され得る。そのような改変によって、薬物動態特性が改善（例えば、インビボでの血中半減期の増加）した抗体または抗原結合断片を得ることができる。有機部分は、直鎖または分岐鎖の親水性ポリマー基、脂肪酸基、または脂肪酸エステル基であり得る。特定の実施形態では、親水性ポリマー基は、約８００〜約１２０，０００ダルトンの分子量を有し得、ポリアルカングリコール（例えば、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、ポリプロピレングリコール（ＰＰＧ））、糖質ポリマー、アミノ酸ポリマー、またはポリビニルピロリドン（ｐｏｌｙｖｉｎｙｌ  ｐｙｒｏｌｉｄｏｎｅ）であり得る。脂肪酸基または脂肪酸エステル基は、約８〜約４０個の炭素原子を含み得る。ある特定の実施形態では、細胞傷害性薬剤または細胞分裂阻害剤は、ドラスタチンである。より特定の実施形態では、ドラスタチンは、アウリスタチンクラスのものである。本開示の特定の実施形態では、細胞傷害性薬剤または細胞分裂阻害剤は、ＭＭＡＥである。本開示の別の特定の実施形態では、細胞傷害性薬剤または細胞分裂阻害剤は、ＡＥＦＰである。本開示の別の特定の実施形態では、細胞傷害性薬剤または細胞分裂阻害剤は、ＭＭＡＦである。
【０３８０】
ヒト化された抗体及び抗原結合断片は、抗体に直接的または間接的に共有結合で結合した１つまたは複数の有機部分を含み得る。本明細書に記載の抗体または抗原結合断片に結合した有機部分はそれぞれ独立して、親水性ポリマー基、脂肪酸基、または脂肪酸エステル基であり得る。本明細書では、「脂肪酸」という用語は、モノ−カルボン酸及びジ−カルボン酸を包含する。本明細書では、「親水性ポリマー基」という用語は、オクタンへの溶解性と比較して水への溶解性の方が高い有機ポリマーを指す。例えば、ポリリジンは、オクタンへの溶解性と比較して水への溶解性の方が高い。したがって、本開示には、ポリリジンが共有結合することによって改変された抗体を包含する。本明細書に記載の抗体の改変に適した親水性ポリマーは、直鎖または分岐鎖であり得、例えば、ポリアルカングリコール（例えば、ＰＥＧ、モノメトキシ−ポリエチレングリコール（ｍＰＥＧ）、ＰＰＧなど）、糖質（例えば、デキストラン、セルロース、オリゴ糖、多糖など）、親水性アミノ酸のポリマー（例えば、ポリリジン、ポリアルギニン、ポリアスパラギン酸（ｐｏｌｙａｓｐａｒｔａｔｅ）など）、ポリアルカンオキシド（例えば、ポリエチレノキシド、ポリプピレンオキシドなど）、ならびにポリビニルピロリドン（ｐｏｌｙｖｉｎｙｌ  ｐｙｒｏｌｉｄｏｎｅ）が含まれる。好ましくは、本明細書に記載の抗体を改変する親水性ポリマーは、別々の分子実体として、約８００〜約１５０，０００ダルトンの分子量を有する。例えば、ＰＥＧ５０００及びＰＥＧ２０，０００を使用することができ、名称中の数の記載はポリマーの平均分子量をダルトンで示している。親水性ポリマー基は、１〜約６つのアルキル基、脂肪酸基、または脂肪酸エステル基で置換することができる。脂肪酸基または脂肪酸エステル基で置換された親水性ポリマーは、適した方法を用いることによって調製できる。例えば、アミン基を含むポリマーは、脂肪酸または脂肪酸エステルのカルボキシレートとカップリングさせることができると共に、脂肪酸または脂肪酸エステルに存在する活性化カルボキシレート（例えば、Ｎ，Ｎ−カルボニルジイミダゾールで活性化）をポリマーに存在するヒドロキシル基とカップリングさせることができる。
【０３８１】
本明細書に記載の抗体の改変に適した脂肪酸及び脂肪酸エステルは、飽和であり得るか、または１つもしくは複数の不飽和単位を含み得る。本明細書に記載の抗体の改変に適した脂肪酸には、例えば、ｎ−ドデカノエート（Ｃ１２、ラウレート）、ｎ−テトラデカノエート（Ｃ１４、ミリステート）、ｎ−オクタデカノエート（Ｃ１８、ステアレート）、ｎ−エイコサノエート（Ｃ２０、アラキデート）、ｎ−ドコサノエート（Ｃ２２、ベヘネート（ｂｅｈｅｎａｔｅ））、ｎ−トリアコンタノエート（ｎ−ｔｒｉａｃｏｎｔａｎｏａｔｅ）（Ｃ３０）、ｎ−テトラコンタノエート（ｎ−ｔｅｔｒａｃｏｎｔａｎｏａｔｅ）（Ｃ４０）、シス−δ  ９−オクタデカノエート（Ｃ１８、オレエート）、全シス−δ  ５，８，１１，１４−エイコサテトラエノエート（Ｃ２０、アラキドネート）、オクタン二酸、テトラデカン二酸、オクタデカン二酸、ドコサン二酸、及び類似の脂肪酸が含まれる。適した脂肪酸エステルには、直鎖または分岐鎖の低級アルキル基を含むジカルボン酸モノエステルが含まれる。低級アルキル基は、１〜約１２個、好ましくは、１〜約６個の炭素原子を含み得る。
【０３８２】
上記の複合体は、適した方法を使用して、１つまたは複数の改変剤との反応などによって調製することができる。本明細書では、「改変剤」という用語は、活性化基を含む、適した有機基（例えば、親水性ポリマー、脂肪酸、脂肪酸エステル）を指す。「ａｃｔｉｖａｔｉｎｇ  ｇｒｏｕｐ（活性化基）」は、適切な条件下で第２の化学基と反応することによって、改変剤と第２の化学基との間に共有結合を形成することができる化学部分または官能基である。
【０３８３】
例えば、アミン反応性の活性化基には、トシレート、メシレート、ハロ（クロロ、ブロモ、フルオロ、ヨード）、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミジルエステル（ＮＨＳ）などの求電子基が含まれる。チオールと反応し得る活性化基には、例えば、マレイミド、ヨードアセチル、アクリロリル（ａｃｒｙｌｏｌｙｌ）、ピリジルジスルフィド、５−チオール−２−ニトロ安息香酸チオール（ＴＮＢ−チオール）などが含まれる。アルデヒド官能基は、アミン含有分子またはヒドラジド含有分子とカップリングさせることができ、アジド基は、三価亜リン酸基と反応してホスホアミデート結合またはホスホリミド（ｐｈｏｓｐｈｏｒｉｍｉｄｅ）結合を形成させることができる。分子への活性化基の導入に適した方法は、当該技術分野において知られている（例えば、Ｈｅｒｎａｎｓｏｎ，Ｇ．Ｔ．，Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ  Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ，Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ：Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，Ｃａｌｉｆ．（１９９６）を参照のこと）。活性化基は、有機基（例えば、親水性ポリマー、脂肪酸、脂肪酸エステル）に直接的に結合させるか、またはリンカー部分を介して結合させることができる。こうしたリンカー部分は、例えば、１つまたは複数の炭素原子が酸素、窒素、または硫黄などのヘテロ原子によって交換され得る二価のＣ１〜Ｃ１２基である。適したリンカー部分には、例えば、テトラエチレングリコール、−−（ＣＨ２）３−−、−−ＮＨ−−（ＣＨ２）６−−ＮＨ−−、−−（ＣＨ２）２−−ＮＨ−−、及び−−ＣＨ２−−Ｏ−−ＣＨ２−−ＣＨ２−−Ｏ−−ＣＨ２−−ＣＨ２−−Ｏ−−ＣＨ−−ＮＨ−−が含まれる。リンカー部分を含む改変剤は、例えば、１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド（ＥＤＣ）の存在下で、モノ−Ｂｏｃ−アルキルジアミン（例えば、モノ−Ｂｏｃ−エチレンジアミン、モノ−Ｂｏｃ−ジアミノヘキサン）と、脂肪酸とを反応させて、遊離アミンと、脂肪酸のカルボキシレートとの間にアミド結合を形成させることによって得ることができる。Ｂｏｃ保護基は、トリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）で処理することによって生成物から除去して一級アミンを露出させることができる。こうして露出した一級アミンは、本明細書に記載の別のカルボキシレートとカップリングさせるか、または無水マレイン酸と反応させて得られる生成物の環化によって脂肪酸の活性化マレイミド誘導体を得ることができる。（例えば、Ｔｈｏｍｐｓｏｎ，ｅｔ  ａｌ．，ＷＯ９２／１６２２１を参照のこと。当該文献の教示内容の全体が、参照によって本明細書に援用される。）
【０３８４】
上記の複合体は、ヒト抗体または抗原結合断片と改変剤との反応によって得ることができる。例えば、有機部分は、例えば、ＰＥＧのＮＨＳエステルといった、アミン反応性の改変剤を用いることによって、部位非特異的様式において抗体に結合させることができる。改変されたヒト抗体または抗原結合断片は、抗体または抗原結合断片のジスルフィド結合（例えば、鎖間ジスルフィド結合）の還元によって調製することもできる。その後、還元された抗体または抗原結合断片は、チオール反応性の改変剤と反応させて、本明細書に記載の抗体を改変することができる。本明細書に記載の抗体の特定の部位に結合した有機部分を含む改変されたヒト抗体及び抗原結合断片は、適した方法を使用して調製することができる。こうした調製方法は、タンパク質分解の逆反応（ｒｅｖｅｒｓｅ  ｐｒｏｔｅｏｌｙｓｉｓ）（Ｆｉｓｃｈ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ  Ｃｈｅｍ．，３：１４７−１５３（１９９２）；Ｗｅｒｌｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ  Ｃｈｅｍ．，５：４１１−４１７（１９９４）；Ｋｕｍａｒａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｓｃｉ．６（１０）：２２３３−２２４１（１９９７）；Ｉｔｏｈ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．，２４（１）：５９−６８（１９９６）；Ｃａｐｅｌｌａｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．Ｂｉｏｅｎｇ．，５６（４）：４５６−４６３（１９９７））、及びＨｅｒｍａｎｓｏｎ，Ｇ．Ｔ．，Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ  Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ，Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ：Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，Ｃａｌｉｆ．（１９９６）において説明されている方法などである。
【０３８５】
医薬的に許容可能な陽イオン
医薬的に許容可能な一価及び二価の陽イオンの例は、Ｂｅｒｇｅ，ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｓｃｉ．，６６，１−１９（１９７７）において考察されており、当該文献は、参照によって本明細書に援用される。
【０３８６】
医薬的に許容可能な陽イオンは、無機または有機のものであり得る。
【０３８７】
医薬的に許容可能な一価の無機陽イオンの例には、限定はされないが、Ｎａ＋及びＫ＋などのアルカリ金属イオンが含まれる。医薬的に許容可能な二価の無機陽イオンの例には、限定はされないが、Ｃａ２＋及びＭｇ２＋などのアルカリ土類金属陽イオンが含まれる。医薬的に許容可能な有機陽イオンの例には、限定はされないが、アンモニウムイオン（すなわち、ＮＨ４＋）及び置換アンモニウムイオン（例えば、ＮＨ３Ｒ＋、ＮＨ２Ｒ２＋、ＮＨＲ３＋、ＮＲ４＋）が含まれる。適した置換アンモニウムイオンのいくつかの例は、エチルアミン、ジエチルアミン、ジシクロヘキシルアミン、トリエチルアミン、ブチルアミン、エチレンジアミン、エタノールアミン、ジエタノールアミン、ピペラジン、ベンジルアミン、フェニルベンジルアミン、コリン、メグルミン、及びトロメタミン、ならびにリジン及びアルギニンなどのアミノ酸に由来するものである。一般的な四級アンモニウムイオンの例は、Ｎ（ＣＨ３）４＋である。
【０３８８】
置換基
本明細書では、「任意選択で置換された」という語句は、未置換であり得るか、または置換され得る親基に関する。
【０３８９】
別段の記載がない限り、本明細書では、「置換された」という用語は、１つまたは複数の置換基を有する親基に関する。本明細書では、「置換基」という用語は、通常の意味において使用され、親基に共有結合で結合するか、または適切であるならば、親基に融合する化学部分を指す。さまざまな置換基が知られており、そうした置換基を形成し、さまざまな親基に導入する方法もよく知られている。
【０３９０】
置換基の例は、以下により詳細に記載される。
【０３９１】
Ｃ１−１２アルキル：本明細書では、「Ｃ１−１２アルキル」という用語は、１〜１２個の炭素原子を有する炭化水素化合物の１個の炭素原子から１個の水素原子を除去することによって得られる一価の部分に関し、当該炭化水素化合物は、脂肪族または脂環式であり得ると共に、飽和または不飽和（例えば、部分不飽和、完全不飽和）であり得る。本明細書では、「Ｃ１−４アルキル」という用語は、１〜４個の炭素原子を有する炭化水素化合物の１個の炭素原子から１個の水素原子を除去することによって得られる一価の部分に関し、当該炭化水素化合物は、脂肪族または脂環式であり得ると共に、飽和または不飽和（例えば、部分不飽和、完全不飽和）であり得る。したがって、「アルキル」という用語には、サブクラスであるアルケニル、アルキニル、シクロアルキルなどが含まれ、こうしたものは、以下で考察される。
【０３９２】
飽和のアルキル基の例には、限定はされないが、メチル（Ｃ１）、エチル（Ｃ２）、プロピル（Ｃ３）、ブチル（Ｃ４）、ペンチル（Ｃ５）、ヘキシル（Ｃ６）、及びヘプチル（Ｃ７）が含まれる。
【０３９３】
飽和の直鎖アルキル基の例には、限定はされないが、メチル（Ｃ１）、エチル（Ｃ２）、ｎ−プロピル（Ｃ３）、ｎ−ブチル（Ｃ４）、ｎ−ペンチル（アミル）（Ｃ５）、ｎ−ヘキシル（Ｃ６）、及びｎ−ヘプチル（Ｃ７）が含まれる。
【０３９４】
飽和の分岐鎖アルキル基の例には、イソ−プロピル（Ｃ３）、イソ−ブチル（Ｃ４）、ｓｅｃ−ブチル（Ｃ４）、ｔｅｒｔ−ブチル（Ｃ４）、イソ−ペンチル（Ｃ５）、及びネオ−ペンチル（Ｃ５）が含まれる。
【０３９５】
Ｃ２−１２アルケニル：本明細書では、「Ｃ２−１２アルケニル」という用語は、１つまたは複数の炭素−炭素二重結合を有するアルキル基に関する。
【０３９６】
不飽和のアルケニル基の例には、限定はされないが、エテニル（ビニル、−ＣＨ＝ＣＨ２）、１−プロペニル（−ＣＨ＝ＣＨ−ＣＨ３）、２−プロペニル（アリル、−ＣＨ−ＣＨ＝ＣＨ２）、イソプロペニル（１−メチルビニル、−Ｃ（ＣＨ３）＝ＣＨ２）、ブテニル（Ｃ４）、ペンテニル（Ｃ５）、及びヘキセニル（Ｃ６）が含まれる。
【０３９７】
Ｃ２−１２アルキニル：本明細書では、「Ｃ２−１２アルキニル」という用語は、１つまたは複数の炭素−炭素三重結合を有するアルキル基に関する。
【０３９８】
不飽和のアルキニル基の例には、限定はされないが、エチニル（−Ｃ≡ＣＨ）及び２−プロピニル（プロパルギル、−ＣＨ２−Ｃ≡ＣＨ）が含まれる。
【０３９９】
Ｃ３−１２シクロアルキル：本明細書では、「Ｃ３−１２シクロアルキル」という用語は、シクリル基でもあるアルキル基に関する。これは、すなわち環式炭化水素（炭素環式）化合物の脂環式環原子から１個の水素原子を除去することによって得られる一価の部分であり、当該部分は、３〜７個の環原子を含む３〜７個の炭素原子を有する。
【０４００】
シクロアルキル基の例には、限定はされないが、
飽和の単環式炭化水素化合物：
シクロプロパン（Ｃ３）、シクロブタン（Ｃ４）、シクロペンタン（Ｃ５）、シクロヘキサン（Ｃ６）、シクロヘプタン（Ｃ７）、メチルシクロプロパン（Ｃ４）、ジメチルシクロプロパン（Ｃ５）、メチルシクロブタン（Ｃ５）、ジメチルシクロブタン（Ｃ６）、メチルシクロペンタン（Ｃ６）、ジメチルシクロペンタン（Ｃ７）、及びメチルシクロヘキサン（Ｃ７）；
不飽和の単環式炭化水素化合物：
シクロプロペン（Ｃ３）、シクロブテン（Ｃ４）、シクロペンテン（Ｃ５）、シクロヘキセン（Ｃ６）、メチルシクロプロペン（Ｃ４）、ジメチルシクロプロペン（Ｃ５）、メチルシクロブテン（Ｃ５）、ジメチルシクロブテン（Ｃ６）、メチルシクロペンテン（Ｃ６）、ジメチルシクロペンテン（Ｃ７）、及びメチルシクロヘキセン（Ｃ７）；ならびに
飽和の多環式炭化水素化合物：
ノルカラン（Ｃ７）、ノルピナン（Ｃ７）、ノルボルナン（Ｃ７）
に由来するものが含まれる。
【０４０１】
Ｃ３−２０ヘテロシクリル：本明細書では、「Ｃ３−２０ヘテロシクリル」という用語は、ヘテロ環式化合物の１個の環原子から１個の水素原子を除去することによって得られる一価の部分に関し、当該部分は、３〜２０個の環原子を有し、そのうちの１〜１０個は環ヘテロ原子である。好ましくは、環はそれぞれ３〜７個の環原子を有し、そのうちの１〜４個は環ヘテロ原子である。
【０４０２】
これに関連して、接頭語（例えば、Ｃ３−２０、Ｃ３−７、Ｃ５−６など）は、炭素原子またはヘテロ原子を問わず、環原子数または環原子数の範囲を示す。例えば、本明細書では、「Ｃ５−６ヘテロシクリル」という用語は、５個または６個の環原子を有するヘテロシクリル基に関する。
【０４０３】
単環式ヘテロシクリル基の例には、限定はされないが、
Ｎ１：アジリジン（Ｃ３）、アゼチジン（Ｃ４）、ピロリジン（テトラヒドロピロール）（Ｃ５）、ピロリン（例えば、３−ピロリン、２，５−ジヒドロピロール）（Ｃ５）、２Ｈ−ピロールまたは３Ｈ−ピロール（イソピロール、イソアゾール）（Ｃ５）、ピペリジン（Ｃ６）、ジヒドロピリジン（Ｃ６）、テトラヒドロピリジン（Ｃ６）、アゼピン（Ｃ７）；
Ｏ１：オキシラン（Ｃ３）、オキセタン（Ｃ４）、オキソラン（テトラヒドロフラン）（Ｃ５）、オキソール（ジヒドロフラン）（Ｃ５）、オキサン（テトラヒドロピラン）（Ｃ６）、ジヒドロピラン（Ｃ６）、ピラン（Ｃ６）、オキセピン（Ｃ７）；
Ｓ１：チイラン（Ｃ３）、チエタン（Ｃ４）、チオラン（テトラヒドロチオフェン）（Ｃ５）、チアン（テトラヒドロチオピラン）（Ｃ６）、チエパン（Ｃ７）；
Ｏ２：ジオキソラン（Ｃ５）、ジオキサン（Ｃ６）、及びジオキセパン（Ｃ７）；
Ｏ３：トリオキサン（Ｃ６）；
Ｎ２：イミダゾリジン（Ｃ５）、ピラゾリジン（ジアゾリジン）（Ｃ５）、イミダゾリン（Ｃ５）、ピラゾリン（ジヒドロピラゾール）（Ｃ５）、ピペラジン（Ｃ６）；
Ｎ１Ｏ１：テトラヒドロオキサゾール（Ｃ５）、ジヒドロオキサゾール（Ｃ５）、テトラヒドロイソオキサゾール（Ｃ５）、ジヒドロイソオキサゾール（Ｃ５）、モルホリン（Ｃ６）、テトラヒドロオキサジン（Ｃ６）、ジヒドロオキサジン（Ｃ６）、オキサジン（Ｃ６）；
Ｎ１Ｓ１：チアゾリン（Ｃ５）、チアゾリジン（Ｃ５）、チオモルホリン（Ｃ６）；
Ｎ２Ｏ１：オキサジアジン（Ｃ６）；
Ｏ１Ｓ１：キサチオール（Ｃ５）及びオキサチアン（チオキサン）（Ｃ６）；ならびに
Ｎ１Ｏ１Ｓ１：オキサチアジン（Ｃ６）
に由来するものが含まれる。
【０４０４】
置換された単環式ヘテロシクリル基の例には、例えば、アラビノフラノース、リキソフラノース、リボフラノース、及びキシロフラノースなどのフラノース（Ｃ５）、ならびにアロピラノース、アルトロピラノース、グルコピラノース、マンノピラノース、グロピラノース、イドピラノース、ガラクトピラノース、及びタロピラノースなどのピラノース（Ｃ６）といった、環式形態の糖類に由来するものが含まれる。
【０４０５】
Ｃ５−２０アリール：本明細書では、「Ｃ５−２０アリール」という用語は、芳香族化合物の１個の芳香族環原子から１個の水素原子を除去することによって得られる一価の部分に関し、当該部分は、３〜２０個の環原子を有する。本明細書では、「Ｃ５−７アリール」という用語は、芳香族化合物の１個の芳香族環原子から１個の水素原子を除去することによって得られる一価の部分に関し、当該部分は、５〜７個の環原子を有する。本明細書では、「Ｃ５−１０アリール」という用語は、芳香族化合物の１個の芳香族環原子から１個の水素原子を除去することによって得られる一価の部分に関し、当該部分は、５〜１０個の環原子を有する。好ましくは、環はそれぞれ５〜７個の環原子を有する。
【０４０６】
これに関連して、接頭語（例えば、Ｃ３−２０、Ｃ５−７、Ｃ５−６、Ｃ５−１０など）は、炭素原子またはヘテロ原子を問わず、環原子数または環原子数の範囲を示す。例えば、本明細書では、「Ｃ５−６アリール」という用語は、５個または６個の環原子を有するアリール基に関する。
【０４０７】
「ｃａｒｂｏａｒｙｌ  ｇｒｏｕｐ（炭素アリール基）」に見られるように、環原子はすべて炭素原子であり得る。炭素アリール基の例には、限定はされないが、ベンゼン（すなわち、フェニル）（Ｃ６）、ナフタレン（Ｃ１０）、アズレン（Ｃ１０）、アントラセン（Ｃ１４）、フェナントレン（Ｃ１４）、ナフタセン（Ｃ１８）、及びピレン（Ｃ１６）に由来するものが含まれる。
【０４０８】
融合環を含み、そのうちの少なくとも１つが芳香族環であるアリール基の例には、限定はされないが、インダン（例えば、２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インデン）（Ｃ９）、インデン（Ｃ９）、イソインデン（Ｃ９）、テトラリン（１，２，３，４−テトラヒドロナフタレン（Ｃ１０）、アセナフテン（Ｃ１２）、フルオレン（Ｃ１３）、フェナレン（Ｃ１３）、アセフェナントレン（Ｃ１５）、及びアセアントレン（Ｃ１６）に由来する基が含まれる。
【０４０９】
あるいは、「ヘテロアリール基」に見られるように、環原子は、１つまたは複数のヘテロ原子を含み得る。単環式ヘテロアリール基の例には、限定はされないが、
Ｎ１：ピロール（アゾール）（Ｃ５）、ピリジン（アジン）（Ｃ６）；
Ｏ１：フラン（オキソール）（Ｃ５）；
Ｓ１：チオフェン（チオール）（Ｃ５）；
Ｎ１Ｏ１：オキサゾール（Ｃ５）、イソキサゾール（Ｃ５）、イソオキサジン（Ｃ６）；
Ｎ２Ｏ１：オキサジアゾール（フラザン）（Ｃ５）；
Ｎ３Ｏ１：オキサトリアゾール（Ｃ５）；
Ｎ１Ｓ１：チアゾール（Ｃ５）、イソチアゾール（Ｃ５）；
Ｎ２：イミダゾール（１，３−ジアゾール）（Ｃ５）、ピラゾール（１，２−ジアゾール）（Ｃ５）、ピリダジン（１，２−ジアジン）（Ｃ６）、ピリミジン（１，３−ジアジン）（Ｃ６）（例えば、シトシン、チミン、ウラシル）、ピラジン（１，４−ジアジン）（Ｃ６）；
Ｎ３：トリアゾール（Ｃ５）、トリアジン（Ｃ６）；及び
Ｎ４：テトラゾール（Ｃ５）
に由来するものが含まれる。
【０４１０】
融合環を含むヘテロアリールの例には、限定はされないが、
ベンゾフラン（Ｏ１）、イソベンゾフラン（Ｏ１）、インドール（Ｎ１）、イソインドール（Ｎ１）、インドリジン（Ｎ１）、インドリン（Ｎ１）、イソインドリン（Ｎ１）、プリン（Ｎ４）（例えば、アデニン、グアニン）、ベンゾイミダゾール（Ｎ２）、インダゾール（Ｎ２）、ベンゾキサゾール（Ｎ１Ｏ１）、ベンゾイソオキサゾール（Ｎ１Ｏ１）、ベンゾジオキソール（Ｏ２）、ベンゾフラザン（Ｎ２Ｏ１）、ベンゾトリアゾール（Ｎ３）、ベンゾチオフラン（Ｓ１）、ベンゾチアゾール（Ｎ１Ｓ１）、ベンゾチアジアゾール（Ｎ２Ｓ）に由来するＣ９（２つの融合環を有する）；
クロメン（Ｏ１）、イソクロメン（Ｏ１）、クロマン（Ｏ１）、イソクロマン（Ｏ１）、ベンゾジオキサン（Ｏ２）、キノリン（Ｎ１）、イソキノリン（Ｎ１）、キノリジン（Ｎ１）、ベンゾキサジン（Ｎ１Ｏ１）、ベンゾジアジン（Ｎ２）、ピリドピリジン（ｐｙｒｉｄｏｐｙｒｉｄｉｎｅ）（Ｎ２）、キノキサリン（Ｎ２）、キナゾリン（Ｎ２）、シンノリン（Ｎ２）、フタラジン（Ｎ２）、ナフチリジン（Ｎ２）、プテリジン（Ｎ４）に由来するＣ１０（２つの融合環を有する）；
ベンゾジアゼピン（Ｎ２）に由来するＣ１１（２つの融合環を有する）；
カルバゾール（Ｎ１）、ジベンゾフラン（Ｏ１）、ジベンゾチオフェン（Ｓ１）、カルボリン（Ｎ２）、ペリミジン（Ｎ２）、ピリドインドール（Ｎ２）に由来するＣ１３（３つの融合環を有する）；及び
アクリジン（Ｎ１）、キサンテン（Ｏ１）、チオキサンテン（Ｓ１）、オキサントレン（Ｏ２）、フェノキサチイン（Ｏ１Ｓ１）、フェナジン（Ｎ２）、フェノキサジン（Ｎ１Ｏ１）、フェノチアジン（Ｎ１Ｓ１）、チアントレン（Ｓ２）、フェナントリジン（Ｎ１）、フェナントロリン（Ｎ２）、フェナジン（Ｎ２）に由来するＣ１４（３つの融合環を有する）
が含まれる。
【０４１１】
単独であるか、または別の置換基の一部であるかを問わず、上記の基は、それら自体から選択される１つまたは複数の基でそれら自体が任意選択で置換され得るものであり、以下には追加の置換基が記載される。
【０４１２】
ハロ：−Ｆ、−Ｃｌ、−Ｂｒ、及び−Ｉ。
【０４１３】
ヒドロキシ：−ＯＨ。
【０４１４】
エーテル：−ＯＲ、ここで、Ｒは、エーテル置換基であり、例えば、Ｃ１−７アルキル基（Ｃ１−７アルコキシ基とも称され、以下で考察される）、Ｃ３−２０ヘテロシクリル基（Ｃ３−２０ヘテロシクリルオキシ基とも称される）、またはＣ５−２０アリール基（Ｃ５−２０アリールオキシ基とも称される）であり、好ましくは、Ｃ１−７アルキル基である。
【０４１５】
アルコキシ：−ＯＲ、ここで、Ｒは、アルキル基であり、例えば、Ｃ１−７アルキル基である。Ｃ１−７アルコキシ基の例には、限定はされないが、−ＯＭｅ（メトキシ）、−ＯＥｔ（エトキシ）、−Ｏ（ｎＰｒ）（ｎ−プロポキシ）、−Ｏ（ｉＰｒ）（イソプロポキシ）、−Ｏ（ｎＢｕ）（ｎ−ブトキシ）、−Ｏ（ｓＢｕ）（ｓｅｃ−ブトキシ）、−Ｏ（ｉＢｕ）（イソブトキシ）、及び−Ｏ（ｔＢｕ）（ｔｅｒｔ−ブトキシ）が含まれる。
【０４１６】
アセタール：−ＣＨ（ＯＲ１）（ＯＲ２）、ここで、Ｒ１及びＲ２は、独立してアセタール置換基であり、例えば、Ｃ１−７アルキル基、Ｃ３−２０ヘテロシクリル基、またはＣ５−２０アリール基であり、好ましくは、Ｃ１−７アルキル基である。あるいは、「環式」アセタール基の場合は、Ｒ１及びＲ２は、それらが結合している２個の酸素原子、及びそれらが結合している炭素原子と一緒になって、４〜８個の環原子を有するヘテロ環式環を形成する。アセタール基の例には、限定はされないが、−ＣＨ（ＯＭｅ）２、−ＣＨ（ＯＥｔ）２、及び−ＣＨ（ＯＭｅ）（ＯＥｔ）が含まれる。
【０４１７】
ヘミアセタール：−ＣＨ（ＯＨ）（ＯＲ１）、ここで、Ｒ１は、ヘミアセタール置換基であり、例えば、Ｃ１−７アルキル基、Ｃ３−２０ヘテロシクリル基、またはＣ５−２０アリール基であり、好ましくは、Ｃ１−７アルキル基である。ヘミアセタール基の例には、限定はされないが、−ＣＨ（ＯＨ）（ＯＭｅ）及び−ＣＨ（ＯＨ）（ＯＥｔ）が含まれる。
【０４１８】
ケタール：−ＣＲ（ＯＲ１）（ＯＲ２）、ここで、Ｒ１及びＲ２は、アセタール向けに定義されるものと同一であり、Ｒは、水素以外のケタール置換基であり、例えば、Ｃ１−７アルキル基、Ｃ３−２０ヘテロシクリル基、またはＣ５−２０アリール基であり、好ましくは、Ｃ１−７アルキル基である。ケタール基の例には、限定はされないが、−Ｃ（Ｍｅ）（ＯＭｅ）２、−Ｃ（Ｍｅ）（ＯＥｔ）２、−Ｃ（Ｍｅ）（ＯＭｅ）（ＯＥｔ）、−Ｃ（Ｅｔ）（ＯＭｅ）２、−Ｃ（Ｅｔ）（ＯＥｔ）２、及び−Ｃ（Ｅｔ）（ＯＭｅ）（ＯＥｔ）が含まれる。
【０４１９】
ヘミケタール：−ＣＲ（ＯＨ）（ＯＲ１）、ここで、Ｒ１は、ヘミアセタール向けに定義されるものと同一であり、Ｒは、水素以外のヘミケタール置換基であり、例えば、Ｃ１−７アルキル基、Ｃ３−２０ヘテロシクリル基、またはＣ５−２０アリール基であり、好ましくは、Ｃ１−７アルキル基である。ヘミアセタール基の例には、限定はされないが、−Ｃ（Ｍｅ）（ＯＨ）（ＯＭｅ）、−Ｃ（Ｅｔ）（ＯＨ）（ＯＭｅ）、−Ｃ（Ｍｅ）（ＯＨ）（ＯＥｔ）、及び−Ｃ（Ｅｔ）（ＯＨ）（ＯＥｔ）が含まれる。
【０４２０】
オキソ（ケト、−オン）：＝Ｏ。
【０４２１】
チオン（チオケトン）：＝Ｓ。
【０４２２】
イミノ（イミン）：＝ＮＲ、ここで、Ｒは、イミノ置換基であり、例えば、水素、Ｃ１−７アルキル基、Ｃ３−２０ヘテロシクリル基、またはＣ５−２０アリール基であり、好ましくは、水素またはＣ１−７アルキル基である。エステル基の例には、限定はされないが、＝ＮＨ、＝ＮＭｅ、＝ＮＥｔ、及び＝ＮＰｈが含まれる。
【０４２３】
ホルミル（カルバルデヒド、カルボキシアルデヒド）：−Ｃ（＝Ｏ）Ｈ。
【０４２４】
アシル（ケト）：−Ｃ（＝Ｏ）Ｒ、ここで、Ｒは、アシル置換基であり、例えば、Ｃ１−７アルキル基（Ｃ１−７アルキルアシルまたはＣ１−７アルカノイルとも称される）、Ｃ３−２０ヘテロシクリル基（Ｃ３−２０ヘテロシクリルアシルとも称される）、またはＣ５−２０アリール基（Ｃ５−２０アリールアシルとも称される）であり、好ましくは、Ｃ１−７アルキル基である。アシル基の例には、限定はされないが、−Ｃ（＝Ｏ）ＣＨ３（アセチル）、−Ｃ（＝Ｏ）ＣＨ２ＣＨ３（プロピオニル）、−Ｃ（＝Ｏ）Ｃ（ＣＨ３）３（ｔ−ブチリル）、及び−Ｃ（＝Ｏ）Ｐｈ（ベンゾイル、フェノン）が含まれる。
【０４２５】
カルボキシ（カルボン酸）：−Ｃ（＝Ｏ）ＯＨ。
【０４２６】
チオカルボキシ（チオカルボン酸）：−Ｃ（＝Ｓ）ＳＨ。
【０４２７】
チオロカルボキシ（Ｔｈｉｏｌｏｃａｒｂｏｘｙ）（チオロカルボン酸（ｔｈｉｏｌｏｃａｒｂｏｘｙｌｉｃ  ａｃｉｄ））：−Ｃ（＝Ｏ）ＳＨ。
【０４２８】
チオノカルボキシ（Ｔｈｉｏｎｏｃａｒｂｏｘｙ）（チオノカルボン酸（ｔｈｉｏｎｏｃａｒｂｏｘｙｌｉｃ  ａｃｉｄ））：−Ｃ（＝Ｓ）ＯＨ。
【０４２９】
イミド酸：−Ｃ（＝ＮＨ）ＯＨ。
【０４３０】
ヒドロキサム酸：−Ｃ（＝ＮＯＨ）ＯＨ。
【０４３１】
エステル（カルボキシレート、カルボン酸エステル、オキシカルボニル）：−Ｃ（＝Ｏ）ＯＲ、ここで、Ｒは、エステル置換基であり、例えば、Ｃ１−７アルキル基、Ｃ３−２０ヘテロシクリル基、またはＣ５−２０アリール基であり、好ましくは、Ｃ１−７アルキル基である。エステル基の例には、限定はされないが、−Ｃ（＝Ｏ）ＯＣＨ３、−Ｃ（＝Ｏ）ＯＣＨ２ＣＨ３、−Ｃ（＝Ｏ）ＯＣ（ＣＨ３）３、及び−Ｃ（＝Ｏ）ＯＰｈが含まれる。
【０４３２】
アシルオキシ（逆エステル）：−ＯＣ（＝Ｏ）Ｒ、ここで、Ｒは、アシルオキシ置換基であり、例えば、Ｃ１−７アルキル基、Ｃ３−２０ヘテロシクリル基、またはＣ５−２０アリール基であり、好ましくは、Ｃ１−７アルキル基である。アシルオキシ基の例には、限定はされないが、−ＯＣ（＝Ｏ）ＣＨ３（アセトキシ）、−ＯＣ（＝Ｏ）ＣＨ２ＣＨ３、−ＯＣ（＝Ｏ）Ｃ（ＣＨ３）３、−ＯＣ（＝Ｏ）Ｐｈ、及び−ＯＣ（＝Ｏ）ＣＨ２Ｐｈが含まれる。
【０４３３】
オキシカルボイルオキシ（Ｏｘｙｃａｒｂｏｙｌｏｘｙ）：−ＯＣ（＝Ｏ）ＯＲ、ここで、Ｒは、エステル置換基であり、例えば、Ｃ１−７アルキル基、Ｃ３−２０ヘテロシクリル基、またはＣ５−２０アリール基であり、好ましくは、Ｃ１−７アルキル基である。エステル基の例には、限定はされないが、−ＯＣ（＝Ｏ）ＯＣＨ３、−ＯＣ（＝Ｏ）ＯＣＨ２ＣＨ３、−ＯＣ（＝Ｏ）ＯＣ（ＣＨ３）３、及び−ＯＣ（＝Ｏ）ＯＰｈが含まれる。
【０４３４】
アミノ：−ＮＲ１Ｒ２、ここで、Ｒ１及びＲ２は、独立してアミノ置換基であり、例えば、水素、Ｃ１−７アルキル基（Ｃ１−７アルキルアミノまたはジ−Ｃ１−７アルキルアミノとも称される）、Ｃ３−２０ヘテロシクリル基、またはＣ５−２０アリール基であり、好ましくは、ＨまたはＣ１−７アルキル基である。あるいは、「環式」アミノ基の場合は、Ｒ１及びＲ２は、それらが結合している窒素原子と一緒になって、４〜８個の環原子を有するヘテロ環式環を形成する。アミノ基は、一級（−ＮＨ２）、二級（−ＮＨＲ１）、または三級（−ＮＨＲ１Ｒ２）であり得、陽イオン形態においては、四級（−＋ＮＲ１Ｒ２Ｒ３）であり得る。アミノ基の例には、限定はされないが、−ＮＨ２、−ＮＨＣＨ３、−ＮＨＣ（ＣＨ３）２、−Ｎ（ＣＨ３）２、−Ｎ（ＣＨ２ＣＨ３）２、及び−ＮＨＰｈが含まれる。環式アミノ基の例には、限定はされないが、アジリジノ、アゼチジノ、ピロリジノ、ピペリジノ、ピペラジノ、モルホリノ、及びチオモルホリノが含まれる。
【０４３５】
アミド（カルバモイル、カルバミル、アミノカルボニル、カルボキサミド）：−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ１Ｒ２、ここで、Ｒ１及びＲ２は、独立してアミノ置換基であり、アミノ基向けに定義されるものと同一である。アミド基の例には、限定はされないが、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ２、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨＣＨ３、−Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（ＣＨ３）２、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨＣＨ２ＣＨ３、及び−Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（ＣＨ２ＣＨ３）２、ならびにＲ１及びＲ２が、それらが結合している窒素原子と一緒になってヘテロ環式構造を形成するアミド基が含まれ、当該ヘテロ環式構造は、例えば、ピペリジノカルボニル、モルホリノカルボニル、チオモルホリノカルボニル、及びピペラジノカルボニルに見られるものである。
【０４３６】
チオアミド（チオカルバミル）：−Ｃ（＝Ｓ）ＮＲ１Ｒ２、ここで、Ｒ１及びＲ２は、独立してアミノ置換基であり、アミノ基向けに定義されるものと同一である。アミド基の例には、限定はされないが、−Ｃ（＝Ｓ）ＮＨ２、−Ｃ（＝Ｓ）ＮＨＣＨ３、−Ｃ（＝Ｓ）Ｎ（ＣＨ３）２、及び−Ｃ（＝Ｓ）ＮＨＣＨ２ＣＨ３が含まれる。
【０４３７】
アシルアミド（アシルアミノ）：−ＮＲ１Ｃ（＝Ｏ）Ｒ２、ここで、Ｒ１は、アミド置換基であり、例えば、水素、Ｃ１−７アルキル基、Ｃ３−２０ヘテロシクリル基、またはＣ５−２０アリール基であり、好ましくは、水素またはＣ１−７アルキル基であり、かつＲ２は、アシル置換基であり、例えば、Ｃ１−７アルキル基、Ｃ３−２０ヘテロシクリル基、またはＣ５−２０アリール基であり、好ましくは、水素またはＣ１−７アルキル基である。アシルアミド基の例には、限定はされないが、−ＮＨＣ（＝Ｏ）ＣＨ３、−ＮＨＣ（＝Ｏ）ＣＨ２ＣＨ３、及び−ＮＨＣ（＝Ｏ）Ｐｈが含まれる。Ｒ１及びＲ２は一緒になって、環式構造を形成し得、当該環式構造は、例えば、スクシンイミジル、マレイミジル、及びフタルイミジル：
【化３０】
2018516243.tif 000037
に見られるものである。
【０４３８】
アミノカルボニルオキシ：−ＯＣ（＝Ｏ）ＮＲ１Ｒ２、ここで、Ｒ１及びＲ２は、独立してアミノ置換基であり、アミノ基向けに定義されるものと同一である。アミノカルボニルオキシ基の例には、限定はされないが、−ＯＣ（＝Ｏ）ＮＨ２、−ＯＣ（＝Ｏ）ＮＨＭｅ、−ＯＣ（＝Ｏ）ＮＭｅ２、及び−ＯＣ（＝Ｏ）ＮＥｔ２が含まれる。
【０４３９】
ウレイド：−Ｎ（Ｒ１）ＣＯＮＲ２Ｒ３、ここで、Ｒ２及びＲ３は、独立してアミノ置換基であり、アミノ基向けに定義されるものと同一であり、かつＲ１は、ウレイド置換基であり、例えば、水素、Ｃ１−７アルキル基、Ｃ３−２０ヘテロシクリル基、またはＣ５−２０アリール基であり、好ましくは、水素またはＣ１−７アルキル基である。ウレイド基の例には、限定はされないが、−ＮＨＣＯＮＨ２、−ＮＨＣＯＮＨＭｅ、−ＮＨＣＯＮＨＥｔ、−ＮＨＣＯＮＭｅ２、−ＮＨＣＯＮＥｔ２、−ＮＭｅＣＯＮＨ２、−ＮＭｅＣＯＮＨＭｅ、−ＮＭｅＣＯＮＨＥｔ、−ＮＭｅＣＯＮＭｅ２、及び−ＮＭｅＣＯＮＥｔ２が含まれる。
【０４４０】
グアニジノ：−ＮＨ−Ｃ（＝ＮＨ）ＮＨ２。
【０４４１】
テトラゾリル：４個の窒素原子及び１個の炭素原子を有する５員芳香族環、
【化３１】
2018516243.tif 000038
である。
【０４４２】
イミノ：＝ＮＲ、ここで、Ｒは、イミノ置換基であり、例えば、水素、Ｃ１−７アルキル基、Ｃ３−２０ヘテロシクリル基、またはＣ５−２０アリール基であり、好ましくは、ＨまたはＣ１−７アルキル基である。イミノ基の例には、限定はされないが、＝ＮＨ、＝ＮＭｅ、及び＝ＮＥｔが含まれる。
【０４４３】
アミジン（アミジノ）：−Ｃ（＝ＮＲ）ＮＲ２、ここで、Ｒはそれぞれアミジン置換基であり、例えば、水素、Ｃ１−７アルキル基、Ｃ３−２０ヘテロシクリル基、またはＣ５−２０アリール基であり、好ましくは、ＨまたはＣ１−７アルキル基である。アミジン基の例には、限定はされないが、−Ｃ（＝ＮＨ）ＮＨ２、−Ｃ（＝ＮＨ）ＮＭｅ２、及び−Ｃ（＝ＮＭｅ）ＮＭｅ２が含まれる。
【０４４４】
ニトロ：−ＮＯ２。
【０４４５】
ニトロソ：−ＮＯ。
【０４４６】
アジド：−Ｎ３。
【０４４７】
シアノ（ニトリル、カルボニトリル）：−ＣＮ。
【０４４８】
イソシアノ：−ＮＣ。
【０４４９】
シアナト：−ＯＣＮ。
【０４５０】
イソシアナト：−ＮＣＯ。
【０４５１】
チオシアノ（チオシアナト）：−ＳＣＮ。
【０４５２】
イソチオシアノ（イソチオシアナト）：−ＮＣＳ。
【０４５３】
スルフヒドリル（チオール、メルカプト）：−ＳＨ。
【０４５４】
チオエーテル（スルフィド）：−ＳＲ、ここで、Ｒは、チオエーテル置換基であり、例えば、Ｃ１−７アルキル基（Ｃ１−７アルキルチオ基とも称される）、Ｃ３−２０ヘテロシクリル基、またはＣ５−２０アリール基であり、好ましくは、Ｃ１−７アルキル基である。Ｃ１−７アルキルチオ基には、限定はされないが、−ＳＣＨ３及び−ＳＣＨ２ＣＨ３が含まれる。
【０４５５】
ジスルフィド：−ＳＳ−Ｒ、ここで、Ｒは、ジスルフィド置換基であり、例えば、Ｃ１−７アルキル基、Ｃ３−２０ヘテロシクリル基、またはＣ５−２０アリール基であり、好ましくは、Ｃ１−７アルキル基（本明細書では、Ｃ１−７アルキルジスルフィドとも称される）である。Ｃ１−７アルキルジスルフィド基の例には、限定はされないが、−ＳＳＣＨ３及び−ＳＳＣＨ２ＣＨ３が含まれる。
【０４５６】
スルフィン（スルフィニル、スルホキシド）：−Ｓ（＝Ｏ）Ｒ、ここで、Ｒは、スルフィン置換基であり、例えば、Ｃ１−７アルキル基、Ｃ３−２０ヘテロシクリル基、またはＣ５−２０アリール基であり、好ましくは、Ｃ１−７アルキル基である。スルフィン基の例には、限定はされないが、−Ｓ（＝Ｏ）ＣＨ３及び−Ｓ（＝Ｏ）ＣＨ２ＣＨ３が含まれる。
【０４５７】
スルホン（スルホニル）：−Ｓ（＝Ｏ）２Ｒ、ここで、Ｒは、スルホン置換基であり、例えば、Ｃ１−７アルキル基、Ｃ３−２０ヘテロシクリル基、またはＣ５−２０アリール基であり、好ましくは、Ｃ１−７アルキル基である。当該Ｃ１−７アルキル基には、例えば、フッ素化または過フッ素化されたＣ１−７アルキル基が含まれる。スルホン基の例には、限定はされないが、−Ｓ（＝Ｏ）２ＣＨ３（メタンスルホニル、メシル）、−Ｓ（＝Ｏ）２ＣＦ３（トリフリル）、−Ｓ（＝Ｏ）２ＣＨ２ＣＨ３（エシル（ｅｓｙｌ））、−Ｓ（＝Ｏ）２Ｃ４Ｆ９（ノナフリル（ｎｏｎａｆｌｙｌ））、−Ｓ（＝Ｏ）２ＣＨ２ＣＦ３（トレシル）、−Ｓ（＝Ｏ）２ＣＨ２ＣＨ２ＮＨ２（タウリル（ｔａｕｒｙｌ））、−Ｓ（＝Ｏ）２Ｐｈ（フェニルスルホニル、ベシル（ｂｅｓｙｌ））、４−メチルフェニルスルホニル（トシル）、４−クロロフェニルスルホニル（クロシル（ｃｌｏｓｙｌ））、４−ブロモフェニルスルホニル（ブロシル（ｂｒｏｓｙｌ））、４−ニトロフェニル（ノシル）、２−ナフタレンスルホネート（ナプシル（ｎａｐｓｙｌ））、及び５−ジメチルアミノ−ナフタレン−１−イルスルホネート（ダンシル）が含まれる。
【０４５８】
スルフィン酸（スルフィノ）：−Ｓ（＝Ｏ）ＯＨ、−ＳＯ２Ｈ。
【０４５９】
スルホン酸（スルホ）：−Ｓ（＝Ｏ）２ＯＨ、−ＳＯ３Ｈ。
【０４６０】
スルフィネート（スルフィン酸エステル）：−Ｓ（＝Ｏ）ＯＲ；ここで、Ｒは、スルフィネート置換基であり、例えば、Ｃ１−７アルキル基、Ｃ３−２０ヘテロシクリル基、またはＣ５−２０アリール基であり、好ましくは、Ｃ１−７アルキル基である。スルフィネート基の例には、限定はされないが、−Ｓ（＝Ｏ）ＯＣＨ３（メトキシスルフィニル；メチルスルフィネート）及び−Ｓ（＝Ｏ）ＯＣＨ２ＣＨ３（エトキシスルフィニル；エチルスルフィネート）が含まれる。
【０４６１】
スルホネート（スルホン酸エステル）：−Ｓ（＝Ｏ）２ＯＲ、ここで、Ｒは、スルホネート置換基であり、例えば、Ｃ１−７アルキル基、Ｃ３−２０ヘテロシクリル基、またはＣ５−２０アリール基であり、好ましくは、Ｃ１−７アルキル基である。スルホネート基の例には、限定はされないが、−Ｓ（＝Ｏ）２ＯＣＨ３（メトキシスルホニル；メチルスルホネート）、及び−Ｓ（＝Ｏ）２ＯＣＨ２ＣＨ３（エトキシスルホニル；エチルスルホネート）が含まれる。
【０４６２】
スルフィニルオキシ：−ＯＳ（＝Ｏ）Ｒ、ここで、Ｒは、スルフィニルオキシ置換基であり、例えば、Ｃ１−７アルキル基、Ｃ３−２０ヘテロシクリル基、またはＣ５−２０アリール基であり、好ましくは、Ｃ１−７アルキル基である。スルフィニルオキシ基の例には、限定はされないが、−ＯＳ（＝Ｏ）ＣＨ３及び−ＯＳ（＝Ｏ）ＣＨ２ＣＨ３が含まれる。
【０４６３】
スルホニルオキシ：−ＯＳ（＝Ｏ）２Ｒ、ここで、Ｒは、スルホニルオキシ置換基であり、例えば、Ｃ１−７アルキル基、Ｃ３−２０ヘテロシクリル基、またはＣ５−２０アリール基であり、好ましくは、Ｃ１−７アルキル基である。スルホニルオキシ基の例には、限定はされないが、−ＯＳ（＝Ｏ）２ＣＨ３（メシレート）及び−ＯＳ（＝Ｏ）２ＣＨ２ＣＨ３（エシレート）が含まれる。
【０４６４】
スルフェート：−ＯＳ（＝Ｏ）２ＯＲ；ここで、Ｒは、スルフェート置換基であり、例えば、Ｃ１−７アルキル基、Ｃ３−２０ヘテロシクリル基、またはＣ５−２０アリール基であり、好ましくはＣ１−７アルキル基である。スルフェート基の例には、限定はされないが、−ＯＳ（＝Ｏ）２ＯＣＨ３及び−ＳＯ（＝Ｏ）２ＯＣＨ２ＣＨ３が含まれる。
【０４６５】
スルファミル（スルファモイル；スルフィン酸アミド；スルフィンアミド）：−Ｓ（＝Ｏ）ＮＲ１Ｒ２、ここで、Ｒ１及びＲ２は、独立してアミノ置換基であり、アミノ基向けに定義されるものと同一である。スルファミル基の例には、限定はされないが、−Ｓ（＝Ｏ）ＮＨ２、−Ｓ（＝Ｏ）ＮＨ（ＣＨ３）、−Ｓ（＝Ｏ）Ｎ（ＣＨ３）２、−Ｓ（＝Ｏ）ＮＨ（ＣＨ２ＣＨ３）、−Ｓ（＝Ｏ）Ｎ（ＣＨ２ＣＨ３）２、及び−Ｓ（＝Ｏ）ＮＨＰｈが含まれる。
【０４６６】
スルホンアミド（スルフィンアモイル（ｓｕｌｆｉｎａｍｏｙｌ）；スルホン酸アミド；スルホンアミド）：−Ｓ（＝Ｏ）２ＮＲ１Ｒ２、ここで、Ｒ１及びＲ２は、独立してアミノ置換基であり、アミノ基向けに定義されるものと同一である。スルホンアミド基の例には、限定はされないが、−Ｓ（＝Ｏ）２ＮＨ２、−Ｓ（＝Ｏ）２ＮＨ（ＣＨ３）、−Ｓ（＝Ｏ）２Ｎ（ＣＨ３）２、−Ｓ（＝Ｏ）２ＮＨ（ＣＨ２ＣＨ３）、−Ｓ（＝Ｏ）２Ｎ（ＣＨ２ＣＨ３）２、及び−Ｓ（＝Ｏ）２ＮＨＰｈが含まれる。
【０４６７】
スルファミノ：−ＮＲ１Ｓ（＝Ｏ）２ＯＨ、ここで、Ｒ１は、アミノ置換基であり、アミノ基向けに定義されるものと同一である。スルファミノ基の例には、限定はされないが、−ＮＨＳ（＝Ｏ）２ＯＨ及び−Ｎ（ＣＨ３）Ｓ（＝Ｏ）２ＯＨが含まれる。
【０４６８】
スルホンアミノ：−ＮＲ１Ｓ（＝Ｏ）２Ｒ、ここで、Ｒ１は、アミノ置換基であり、アミノ基向けに定義されるものと同一であり、かつＲは、スルホンアミノ置換基であり、例えば、Ｃ１−７アルキル基、Ｃ３−２０ヘテロシクリル基、またはＣ５−２０アリール基であり、好ましくは、Ｃ１−７アルキル基である。スルホンアミノ基の例には、限定はされないが、−ＮＨＳ（＝Ｏ）２ＣＨ３及び−Ｎ（ＣＨ３）Ｓ（＝Ｏ）２Ｃ６Ｈ５が含まれる。
【０４６９】
スルフィンアミノ：−ＮＲ１Ｓ（＝Ｏ）Ｒ、ここで、Ｒ１は、アミノ置換基であり、アミノ基向けに定義されるものと同一であり、かつＲは、スルフィンアミノ置換基であり、例えば、Ｃ１−７アルキル基、Ｃ３−２０ヘテロシクリル基、またはＣ５−２０アリール基であり、好ましくは、Ｃ１−７アルキル基である。スルフィンアミノ基の例には、限定はされないが、−ＮＨＳ（＝Ｏ）ＣＨ３及び−Ｎ（ＣＨ３）Ｓ（＝Ｏ）Ｃ６Ｈ５が含まれる。
【０４７０】
ホスフィノ（ホスフィン）：−ＰＲ２、ここで、Ｒは、ホスフィノ置換基であり、例えば、−Ｈ、Ｃ１−７アルキル基、Ｃ３−２０ヘテロシクリル基、またはＣ５−２０アリール基であり、好ましくは、−Ｈ、Ｃ１−７アルキル基、またはＣ５−２０アリール基である。ホスフィノ基の例には、限定はされないが、−ＰＨ２、−Ｐ（ＣＨ３）２、−Ｐ（ＣＨ２ＣＨ３）２、−Ｐ（ｔ−Ｂｕ）２、及び−Ｐ（Ｐｈ）２が含まれる。
【０４７１】
ホスホ：−Ｐ（＝Ｏ）２。
【０４７２】
ホスフィニル（ホスフィンオキシド）：−Ｐ（＝Ｏ）Ｒ２、ここで、Ｒは、ホスフィニル置換基であり、例えば、Ｃ１−７アルキル基、Ｃ３−２０ヘテロシクリル基、またはＣ５−２０アリール基であり、好ましくは、Ｃ１−７アルキル基またはＣ５−２０アリール基である。ホスフィニル基の例には、限定はされないが、−Ｐ（＝Ｏ）（ＣＨ３）２、−Ｐ（＝Ｏ）（ＣＨ２ＣＨ３）２、−Ｐ（＝Ｏ）（ｔ−Ｂｕ）２、及び−Ｐ（＝Ｏ）（Ｐｈ）２が含まれる。
【０４７３】
ホスホン酸（ホスホノ）：−Ｐ（＝Ｏ）（ＯＨ）２。
【０４７４】
ホスホネート（ホスホノエステル）：−Ｐ（＝Ｏ）（ＯＲ）２、ここで、Ｒは、ホスホネート置換基であり、例えば、−Ｈ、Ｃ１−７アルキル基、Ｃ３−２０ヘテロシクリル基、またはＣ５−２０アリール基であり、好ましくは、−Ｈ、Ｃ１−７アルキル基、またはＣ５−２０アリール基である。ホスホネート基の例には、限定はされないが、−Ｐ（＝Ｏ）（ＯＣＨ３）２、−Ｐ（＝Ｏ）（ＯＣＨ２ＣＨ３）２、−Ｐ（＝Ｏ）（Ｏ−ｔ−Ｂｕ）２、及び−Ｐ（＝Ｏ）（ＯＰｈ）２が含まれる。
【０４７５】
リン酸（ホスホノオキシ）：−ＯＰ（＝Ｏ）（ＯＨ）２。
【０４７６】
ホスフェート（ホスホノオキシエステル）：−ＯＰ（＝Ｏ）（ＯＲ）２、ここで、Ｒは、ホスフェート置換基であり、例えば、−Ｈ、Ｃ１−７アルキル基、Ｃ３−２０ヘテロシクリル基、またはＣ５−２０アリール基であり、好ましくは、−Ｈ、Ｃ１−７アルキル基、またはＣ５−２０アリール基である。ホスフェート基の例には、限定はされないが、−ＯＰ（＝Ｏ）（ＯＣＨ３）２、−ＯＰ（＝Ｏ）（ＯＣＨ２ＣＨ３）２、−ＯＰ（＝Ｏ）（Ｏ−ｔ−Ｂｕ）２、及び−ＯＰ（＝Ｏ）（ＯＰｈ）２が含まれる。
【０４７７】
亜リン酸：−ＯＰ（ＯＨ）２。
【０４７８】
ホスファイト：−ＯＰ（ＯＲ）２、ここで、Ｒは、ホスファイト置換基であり、例えば、−Ｈ、Ｃ１−７アルキル基、Ｃ３−２０ヘテロシクリル基、またはＣ５−２０アリール基であり、好ましくは−Ｈ、Ｃ１−７アルキル基、またはＣ５−２０アリール基である。ホスファイト基の例には、限定はされないが、−ＯＰ（ＯＣＨ３）２、−ＯＰ（ＯＣＨ２ＣＨ３）２、−ＯＰ（Ｏ−ｔ−Ｂｕ）２、及び−ＯＰ（ＯＰｈ）２が含まれる。
【０４７９】
ホスホロアミダイト：−ＯＰ（ＯＲ１）−ＮＲ２２、ここで、Ｒ１及びＲ２は、ホスホロアミダイト置換基であり、例えば、−Ｈ、（任意選択で置換された）Ｃ１−７アルキル基、Ｃ３−２０ヘテロシクリル基、またはＣ５−２０アリール基であり、好ましくは、−Ｈ、Ｃ１−７アルキル基、またはＣ５−２０アリール基である。ホスホロアミダイト基の例には、限定はされないが、−ＯＰ（ＯＣＨ２ＣＨ３）−Ｎ（ＣＨ３）２、−ＯＰ（ＯＣＨ２ＣＨ３）−Ｎ（ｉ−Ｐｒ）２、及び−ＯＰ（ＯＣＨ２ＣＨ２ＣＮ）−Ｎ（ｉ−Ｐｒ）２が含まれる。
【０４８０】
ホスホロアミデート：−ＯＰ（＝Ｏ）（ＯＲ１）−ＮＲ２２、ここで、Ｒ１及びＲ２は、ホスホロアミデート置換基であり、例えば、−Ｈ、（任意選択で置換された）Ｃ１−７アルキル基、Ｃ３−２０ヘテロシクリル基、またはＣ５−２０アリール基であり、好ましくは、−Ｈ、Ｃ１−７アルキル基、またはＣ５−２０アリール基である。ホスホロアミデート基の例には、限定はされないが、−ＯＰ（＝Ｏ）（ＯＣＨ２ＣＨ３）−Ｎ（ＣＨ３）２、−ＯＰ（＝Ｏ）（ＯＣＨ２ＣＨ３）−Ｎ（ｉ−Ｐｒ）２、及び−ＯＰ（＝Ｏ）（ＯＣＨ２ＣＨ２ＣＮ）−Ｎ（ｉ−Ｐｒ）２が含まれる。
【０４８１】
アルキレン
Ｃ３−１２アルキレン：本明細書では、「Ｃ３−１２アルキレン」という用語は、（別段の記載がない限り）３〜１２個の炭素原子を有する炭化水素化合物の炭素原子から２個の水素原子を除去する（同一の炭素原子から２個の水素原子を除去するか、または２個の異なる炭素原子のそれぞれから水素原子を１個ずつ除去する）ことによって得られる二座部分（ｂｉｄｅｎｔａｔｅ  ｍｏｉｅｔｙ）に関する。当該炭化水素化合物は、脂肪族または脂環式であり得ると共に、飽和、部分不飽和、または完全不飽和であり得る。したがって、「アルキレン」という用語には、サブクラスであるアルケニレン、アルキニレン、シクロアルキレンなどが含まれ、こうしたものは、以下で考察される。
【０４８２】
直鎖の飽和Ｃ３−１２アルキレン基の例には、限定はされないが、ｎが３〜１２の整数である−（ＣＨ２）ｎ−、例えば、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−（プロピレン）、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−（ブチレン）、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−（ペンチレン）、及び−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ−２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−（ヘプチレン）が含まれる。
【０４８３】
分岐鎖の飽和Ｃ３−１２アルキレン基の例には、限定はされないが、−ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２−、−ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２ＣＨ２−、−ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−、−ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２−、−ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２ＣＨ２−、−ＣＨ（ＣＨ２ＣＨ３）−、−ＣＨ（ＣＨ２ＣＨ３）ＣＨ２−、及び−ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ２ＣＨ３）ＣＨ２−が含まれる。
【０４８４】
直鎖の部分不飽和Ｃ３−１２アルキレン基（Ｃ３−１２のアルケニレン基、及びアルキニレン基）の例には、限定はされないが、−ＣＨ＝ＣＨ−ＣＨ２−、−ＣＨ２−ＣＨ＝ＣＨ２−、−ＣＨ＝ＣＨ−ＣＨ２−ＣＨ２−、−ＣＨ＝ＣＨ−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＨ２−、−ＣＨ＝ＣＨ−ＣＨ＝ＣＨ−、−ＣＨ＝ＣＨ−ＣＨ＝ＣＨ−ＣＨ２−、−ＣＨ＝ＣＨ−ＣＨ＝ＣＨ−ＣＨ２−ＣＨ２−、−ＣＨ＝ＣＨ−ＣＨ２−ＣＨ＝ＣＨ−、−ＣＨ＝ＣＨ−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＨ＝ＣＨ−、及び−ＣＨ２−Ｃ≡Ｃ−ＣＨ２−が含まれる。
【０４８５】
分岐の部分不飽和Ｃ３−１２アルキレン基（Ｃ３−１２のアルケニレン基、及びアルキニレン基）の例には、限定はされないが、−Ｃ（ＣＨ３）＝ＣＨ−、−Ｃ（ＣＨ３）＝ＣＨ−ＣＨ２−、−ＣＨ＝ＣＨ−ＣＨ（ＣＨ３）−、及び−Ｃ≡Ｃ−ＣＨ（ＣＨ３）−が含まれる。
【０４８６】
脂環式の飽和Ｃ３−１２アルキレン基（Ｃ３−１２シクロアルキレン）の例には、限定はされないが、シクロペンチレン（例えば、シクロペンタ−１，３−イルエン）、及びシクロヘキシレン（例えば、シクロヘキサ−１，４−イルエン）が含まれる。
【０４８７】
脂環式の部分不飽和Ｃ３−１２アルキレン基（Ｃ３−１２シクロアルキレン）の例には、限定はされないが、シクロペンテニレン（例えば、４−シクロペンテン−１，３−イルエン）、シクロヘキセニレン（例えば、２−シクロヘキセン−１，４−イルエン；３−シクロヘキセン−１，２−イルエン；２，５−シクロヘキサジエン−１，４−イルエン）が含まれる。
【０４８８】
カルバメート窒素保護基：「カルバメート窒素保護基」という用語は、イミン結合における窒素を遮蔽する部分に関し、こうしたものは、当該技術分野においてよく知られている。こうした基は、下記式：
【化３２】
2018516243.tif 000039
を有し、式中、Ｒ’１０は、上に定義されるＲである。Ｇｒｅｅｎｅ，Ｔ．Ｗ．ａｎｄ  Ｗｕｔｓ，Ｇ．Ｍ．，Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ  Ｇｒｏｕｐｓ  ｉｎ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，３ｒｄ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．，１９９９の５０３〜５４９ページに多くの適した基が説明されており、当該文献は、参照によって本明細書に援用される。
【０４８９】
ヘミアミナール窒素保護基：「ヘミアミナール窒素保護基」という用語は、下記式：
【化３３】
2018516243.tif 000040
を有する基に関し、式中、Ｒ’１０は、上に定義されるＲである。Ｇｒｅｅｎｅ，Ｔ．Ｗ．ａｎｄ  Ｗｕｔｓ，Ｇ．Ｍ．，Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ  Ｇｒｏｕｐｓ  ｉｎ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，３ｒｄ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．，１９９９の６３３〜６４７ページに、アミド保護基として多くの適した基が説明されており、当該文献は、参照によって本明細書に援用される。
【０４９０】
カルバメート窒素保護基及びヘミアミナール窒素保護基という基は、まとめて「合成のための窒素保護基」と呼ばれ得る。
【０４９１】
複合体
本開示は、リンカー単位を介して抗体に連結されたＰＢＤ化合物を含む複合体を提供する。
【０４９２】
１つの実施形態では、複合体は、スペーサー連結基に連結された抗体、トリガーに連結されたスペーサー、自壊性リンカー（ｓｅｌｆ−ｉｍｍｏｌａｔｉｖｅ  ｌｉｎｋｅｒ）に連結されたトリガー、及びＰＢＤ化合物のＮ１０位に連結された自壊性リンカーを含む。そのような複合体は、以下に示されるものであり：
【化３４】
2018516243.tif 000041
（Ａｂは、上に定義される抗体であり、ＰＢＤは、本明細書に記載のピロロベンゾジアゼピン化合物（Ｄ）である）。これは、本開示のある特定の実施形態におけるＲＬ’、Ａ、Ｌ１、及びＬ２に対応する部分を示す。ＲＬ’は、ＲＬ１’またはＲＬ２’のいずれかであり得る。Ｄは、ＤＬからＲＬ１’またはＲＬ２’を除いたものである。
【０４９３】
本開示は、対象における好ましい部位へのＰＢＤ化合物の供給における使用に適している。好ましい実施形態では、複合体は、リンカーのいかなる部分も保持しない活性ＰＢＤ化合物の遊離を可能にする。ＰＢＤ化合物の反応性に影響する可能性を有する残部は存在しない。
【０４９４】
リンカーは、共有結合（複数可）を介して、抗体をＰＢＤ薬物部分Ｄに結合する。リンカーは、１つまたは複数の薬物部分（Ｄ）と、抗体単位（Ａｂ）とを連結して抗体−薬物複合体（ＡＤＣ）を形成するために使用できる二官能性部分または多官能性部分である。リンカー（ＲＬ’）は、細胞の外側、すなわち細胞外で安定であり得るか、または酵素活性、加水分解、もしくは他の代謝条件によって切断可能であり得る。抗体−薬物複合体（ＡＤＣ）は、薬物部分への結合及び抗体への結合のための反応官能性を有するリンカーを使用して好都合に調製することができる。抗体（Ａｂ）のシステインチオール、または例えば、Ｎ末端のものもしくはリジンなどのアミノ酸側鎖といった、抗体（Ａｂ）のアミンによって、リンカー試薬もしくはスペーサー試薬、ＰＢＤ薬物部分（Ｄ）、または薬物−リンカー試薬（ＤＬ、Ｄ−ＲＬ）（ＲＬは、ＲＬ１またはＲＬ２であり得る）の官能基との結合を形成させることができる。
【０４９５】
ＡＤＣのリンカーは、好ましくは、ＡＤＣ分子の凝集を防ぎ、ＡＤＣが水性媒体に単量体の状態で自由に溶解するように保つものである。
【０４９６】
ＡＤＣのリンカーは、好ましくは、細胞外で安定である。細胞への輸送または送達の前は、抗体−薬物複合体（ＡＤＣ）は、好ましくは、安定であると共に、未変化のままであり、すなわち抗体は、薬物部分に連結されたままである。リンカーは、標的細胞の外側では安定であり、細胞の内側では、何らかの有効速度で切断され得る。有効なリンカーは、（ｉ）抗体の特異的結合特性を維持し、（ｉｉ）複合体または薬物部分の細胞内送達を可能にし、（ｉｉｉ）複合体がその標的部位に送達または輸送されるまで安定かつ未変化、すなわち未切断で残存し、かつ（ｉｖ）ＰＢＤ薬物部分の細胞傷害性、細胞殺傷作用、または細胞分裂阻害作用を維持することになる。ＡＤＣの安定性は、質量分析、ＨＰＬＣ、及び分離／分析手法であるＬＣ／ＭＳなどの、標準的な分析手法によって測定してよい。
【０４９７】
抗体と薬物部分との共有結合には、２つの反応性官能基、すなわち反応性という意味において二価性を有するリンカーが必要である。ペプチド、核酸、薬物、毒素、抗体、ハプテン、及びレポーター基などの機能性部分または生物学的に活性な部分を２つ以上結合するために有用な二価性のリンカー試薬は知られており、それを用いて複合体を得る方法が説明されている（Ｈｅｒｍａｎｓｏｎ，Ｇ．Ｔ．（１９９６）Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ  Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ；Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ：Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，ｐ２３４−２４２）。
【０４９８】
別の実施形態では、リンカーは、凝集、溶解性、または反応性を調節する基で置換され得る。例えば、スルホネート置換基を用いることで、その試薬の水への溶解性が増加し得、そのリンカー試薬と抗体もしくは薬物部分とのカップリング反応が容易になるか、またはＡＤＣの調製に用いる合成経路に応じてＡｂ−ＬとＤＬ、もしくはＤＬ−ＬとＡｂとのカップリング反応が容易になる。
【０４９９】
１つの実施形態では、Ｌ−ＲＬ’は、基：
【化３５】
2018516243.tif 000042
であり、式中、アスタリスクは、薬物単位（Ｄ）への結合点を示し、Ａｂは、抗体（Ｌ）であり、Ｌ１は、リンカーであり、Ａは、Ｌ１を抗体に連結する連結基であり、Ｌ２は、共有結合であるか、または−ＯＣ（＝Ｏ）−と一緒になって自壊性リンカーを形成し、かつＬ１またはＬ２は切断可能なリンカーである。
【０５００】
Ｌ１は、好ましくは、切断可能なリンカーであり、切断のためにリンカーを活性化するためのトリガーと称され得る。
【０５０１】
Ｌ１及びＬ２は、存在する場合、それらの性質は大きく異なり得る。こうした基は、その切断特性に基づいて選択され、こうした切断特性は、複合体が送達される部位での条件によって決まり得る。酵素作用によって切断されるリンカーが好ましいが、ｐＨ変化（例えば、酸または塩基による切断性）、温度変化、または照射（例えば、光切断性（ｐｈｏｔｏｌａｂｉｌｅ））によって切断可能なリンカーを使用してもよい。還元条件下または酸化条件下で切断可能なリンカーもまた、本開示における使用に役立ち得る。
【０５０２】
Ｌ１は、アミノ酸の連続配列を含み得る。アミノ酸配列は、酵素で切断するための標的基質であり得、それによってＮ１０位からのＬ−ＲＬ’の遊離が可能となる。
【０５０３】
１つの実施形態では、Ｌ１は、酵素作用によって切断可能である。１つの実施形態では、酵素は、エステラーゼまたはペプチダーゼである。
【０５０４】
１つの実施形態では、Ｌ２は存在し、−Ｃ（＝Ｏ）Ｏ−と一緒になって自壊性リンカーを形成する。１つの実施形態では、Ｌ２は、酵素活性の基質であり、それによってＮ１０位からのＬ−ＲＬ’の遊離が可能となる。
【０５０５】
Ｌ１が酵素作用によって切断可能であり、Ｌ２が存在する実施形態の１つでは、酵素は、Ｌ１とＬ２との間の結合を切断する。
【０５０６】
Ｌ１とＬ２とは、存在する場合、
−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ−、
−Ｃ（＝Ｏ）Ｏ−、
−ＮＨＣ（＝Ｏ）−、
−ＯＣ（＝Ｏ）−、
−ＯＣ（＝Ｏ）Ｏ−、
−ＮＨＣ（＝Ｏ）Ｏ−、
−ＯＣ（＝Ｏ）ＮＨ−、及び
−ＮＨＣ（＝Ｏ）ＮＨ−
から選択される結合によって連結され得る。
【０５０７】
Ｌ２に連結されるＬ１のアミノ基は、アミノ酸のＮ末端であり得るか、または例えば、リジンのアミノ酸側鎖といったアミノ酸側鎖のアミノ基に由来し得る。
【０５０８】
Ｌ２に連結されるＬ１のカルボキシル基は、アミノ酸のＣ末端であり得るか、または例えば、グルタミン酸のアミノ酸側鎖といったアミノ酸側鎖のカルボキシル基に由来し得る。
【０５０９】
Ｌ２に連結されるＬ１のヒドロキシル基は、例えば、セリンのアミノ酸側鎖といったアミノ酸側鎖のヒドロキシル基に由来し得る。
【０５１０】
「アミノ酸側鎖」という用語には、（ｉ）アラニン、アルギニン、アスパラギン、アスパラギン酸、システイン、グルタミン、グルタミン酸、グリシン、ヒスチジン、イソロイシン、ロイシン、リジン、メチオニン、フェニルアラニン、プロリン、セリン、スレオニン、トリプトファン、チロシン、及びバリンなどの天然起源のアミノ酸、（ｉｉ）オルニチン及びシトルリンなどの非主要アミノ酸、（ｉｉｉ）非天然アミノ酸、ベータ−アミノ酸、天然起源のアミノ酸の合成の類似体及び誘導体、ならびに（ｉｖ）エナンチオマー、ジアステレオマー、異性体的に濃縮された形態、同位体（例えば、２Ｈ、３Ｈ、１４Ｃ、１５Ｎ）で標識された形態、保護形態、及びそれらのラセミ混合物のすべて、において見られる基が含まれる。
【０５１１】
１つの実施形態では、−Ｃ（＝Ｏ）Ｏ−及びＬ２は一緒になって、基：
【化３６】
2018516243.tif 000043
を形成し、
式中、アスタリスクは、Ｎ１０位への結合点を示し、波線は、リンカーＬ１への結合点を示し、Ｙは、−Ｎ（Ｈ）−、−Ｏ−、−Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｈ）−、または−Ｃ（＝Ｏ）Ｏ−であり、ｎは、０〜３である。フェニレン環は、本明細書に記載の置換基のうちの１つ、２つ、または３つで、任意選択で置換される。１つの実施形態では、フェニレン基は、ハロ、ＮＯ２、Ｒ、またはＯＲで、任意選択で置換される。
【０５１２】
１つの実施形態では、Ｙは、ＮＨである。
１つの実施形態では、ｎは、０または１である。好ましくは、ｎは、０である。
【０５１３】
Ｙが、ＮＨであり、ｎが、０である場合、自壊性リンカーは、ｐ−アミノベンジルカルボニルリンカー（ＰＡＢＣ）と称され得る。
【０５１４】
遠隔部位が活性化すると、自壊性リンカーは、保護化合物の遊離を引き起こすことになり、この遊離は、以下に示される線（ｎ＝０の場合）：
【化３７】
2018516243.tif 000044
に沿って進行するものであり、
式中、Ｌ＊は、リンカーの残部の活性化形態である。こうした基は、活性化部位と、保護されている化合物とが分離されているという利点を有する。上記のとおり、フェニレン基は、任意選択で置換され得る。
【０５１５】
本明細書に記載の実施形態の１つでは、Ｌ＊基は、本明細書に記載のリンカーＬ１であり、ジペプチド基を含み得る。
【０５１６】
別の実施形態では、−Ｃ（＝Ｏ）Ｏ−及びＬ２は一緒になって、
【化３８】
2018516243.tif 000045
から選択される基を形成し、
式中、アスタリスク、波線、Ｙ、及びｎは、上に定義されるとおりである。フェニレン環はそれぞれ、本明細書に記載の置換基のうちの１つ、２つ、または３つで、任意選択で置換される。１つの実施形態では、置換基Ｙを有するフェニレン環は、任意選択で置換され、置換基Ｙを有さないフェニレン環は、未置換である。１つの実施形態では、置換基Ｙを有するフェニレン環は、未置換であり、置換基Ｙを有さないフェニレン環は、任意選択で置換される。
【０５１７】
別の実施形態では、−Ｃ（＝Ｏ）Ｏ−及びＬ２は一緒になって、
【化３９】
2018516243.tif 000046
から選択される基を形成し、
式中、アスタリスク、波線、Ｙ、及びｎは、上に定義されるとおりであり、Ｅは、Ｏ、Ｓ、またはＮＲであり、Ｄは、Ｎ、ＣＨ、またはＣＲであり、かつＦは、Ｎ、ＣＨ、またはＣＲである。
【０５１８】
１つの実施形態では、Ｄは、Ｎである。
１つの実施形態では、Ｄは、ＣＨである。
１つの実施形態では、Ｅは、ＯまたはＳである。
１つの実施形態では、Ｆは、ＣＨである。
【０５１９】
好ましい実施形態では、リンカーは、カテプシン切断性リンカーである。
【０５２０】
１つの実施形態では、Ｌ１は、ジペプチドを含む。ジペプチドは、−ＮＨ−Ｘ１−Ｘ２−ＣＯ−として示され得るものであり、ここで、−ＮＨ−及び−ＣＯ−は、それぞれアミノ酸基Ｘ１のＮ末端及びアミノ酸基Ｘ２のＣ末端を示す。ジペプチドにおけるアミノ酸は、天然アミノ酸の任意の組み合わせであり得る。リンカーがカテプシン切断性リンカーである場合、ジペプチドは、カテプシン媒介性の切断のための作用部位であり得る。
【０５２１】
さらに、カルボキシル側鎖官能性またはアミノ側鎖官能性を有するアミノ酸基、例えば、それぞれＧｌｕ及びＬｙｓについては、ＣＯ及びＮＨは、側鎖官能性を示し得る。
【０５２２】
１つの実施形態では、ジペプチドである−ＮＨ−Ｘ１−Ｘ２−ＣＯ−における−Ｘ１−Ｘ２−基は、
−Ｐｈｅ−Ｌｙｓ−、
−Ｖａｌ−Ａｌａ−、
−Ｖａｌ−Ｌｙｓ−、
−Ａｌａ−Ｌｙｓ−、
−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−、
−Ｐｈｅ−Ｃｉｔ−、
−Ｌｅｕ−Ｃｉｔ−、
−Ｉｌｅ−Ｃｉｔ−、
−Ｐｈｅ−Ａｒｇ−、
−Ｔｒｐ−Ｃｉｔ−
から選択され、
ここで、Ｃｉｔは、シトルリンである。
【０５２３】
好ましくは、ジペプチドである−ＮＨ−Ｘ１−Ｘ２−ＣＯ−における−Ｘ１−Ｘ２−基は、
−Ｐｈｅ−Ｌｙｓ−、
−Ｖａｌ−Ａｌａ−、
−Ｖａｌ−Ｌｙｓ−、
−Ａｌａ−Ｌｙｓ−、
−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−
から選択される。
【０５２４】
最も好ましくは、ジペプチドである−ＮＨ−Ｘ１−Ｘ２−ＣＯ−における−Ｘ１−Ｘ２−基は、−Ｐｈｅ−Ｌｙｓ−または−Ｖａｌ−Ａｌａ−である。
【０５２５】
ジペプチドにおいて使用してよい他の組み合わせには、Ｄｕｂｏｗｃｈｉｋ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，２００２，１３，８５５−８６９によって説明されるものが含まれ、当該文献は、参照によって本明細書に援用される。
【０５２６】
１つの実施形態では、アミノ酸側鎖は、適切な場合、誘導体化される。例えば、アミノ酸側鎖のアミノ基またはカルボキシ基は、誘導体化され得る。１つの実施形態では、リジンなどの側鎖アミノ酸（ｓｉｄｅ  ｃｈａｉｎ  ａｍｉｎｏ  ａｃｉｄ）のアミノ基ＮＨ２は、ＮＨＲ及びＮＲＲ’からなる群から選択される誘導体化形態である。
１つの実施形態では、アスパラギン酸などの側鎖アミノ酸（ｓｉｄｅ  ｃｈａｉｎ  ａｍｉｎｏ  ａｃｉｄ）のカルボキシ基ＣＯＯＨは、ＣＯＯＲ、ＣＯＮＨ２、ＣＯＮＨＲ、及びＣＯＮＲＲ’からなる群から選択される誘導体化形態である。
【０５２７】
１つの実施形態では、アミノ酸側鎖は、適切な場合、化学的に保護される。側鎖の保護基は、ＲＬ基に関して以下で考察される基であり得る。本発明者らは、保護アミノ酸の配列が酵素により分解可能であることを証明している。例えば、Ｂｏｃで側鎖が保護されたＬｙｓ残基を含むジペプチド配列が、カテプシンにより分解可能であることを証明している。
【０５２８】
アミノ酸側鎖の保護基は、当該技術分野においてよく知られており、Ｎｏｖａｂｉｏｃｈｅｍ  Ｃａｔａｌｏｇにおいて説明されている。保護基を用いる追加方針については、Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ  Ｇｒｏｕｐｓ  ｉｎ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，Ｇｒｅｅｎｅ  ａｎｄ  Ｗｕｔｓにおいて示されている。
【０５２９】
反応性の側鎖官能性を有するアミノ酸を対象とする、想定される側鎖保護基は、以下に示されるものである：
Ａｒｇ：Ｚ、Ｍｔｒ、Ｔｏｓ；
Ａｓｎ：Ｔｒｔ、Ｘａｎ；
Ａｓｐ：Ｂｚｌ、ｔ−Ｂｕ；
Ｃｙｓ：Ａｃｍ、Ｂｚｌ、Ｂｚｌ−ＯＭｅ、Ｂｚｌ−Ｍｅ、Ｔｒｔ；
Ｇｌｕ：Ｂｚｌ、ｔ−Ｂｕ；
Ｇｌｎ：Ｔｒｔ、Ｘａｎ；
Ｈｉｓ：Ｂｏｃ、Ｄｎｐ、Ｔｏｓ、Ｔｒｔ；
Ｌｙｓ：Ｂｏｃ、Ｚ−Ｃｌ、Ｆｍｏｃ、Ｚ、Ａｌｌｏｃ；
Ｓｅｒ：Ｂｚｌ、ＴＢＤＭＳ、ＴＢＤＰＳ；
Ｔｈｒ：Ｂｚ；
Ｔｒｐ：Ｂｏｃ；
Ｔｙｒ：Ｂｚｌ、Ｚ、Ｚ−Ｂｒ。
【０５３０】
１つの実施形態では、側鎖の保護は、キャッピング基またはその一部として提供される基が存在する場合、それに対してオルトゴナルとなるように選択される。したがって、側鎖の保護基が除去されても、キャッピング基、またはキャッピング基の一部である任意の保護基官能性は除去されない。
【０５３１】
本開示の他の実施形態では、選択されるアミノ酸は、反応性の側鎖官能性を有さないものである。例えば、アミノ酸は、Ａｌａ、Ｇｌｙ、Ｉｌｅ、Ｌｅｕ、Ｍｅｔ、Ｐｈｅ、Ｐｒｏ、及びＶａｌから選択され得る。
１つの実施形態では、ジペプチドは、自壊性リンカーと組み合わせて使用される。自壊性リンカーは、−Ｘ２−に連結され得る。
【０５３２】
自壊性リンカーが存在する場合、−Ｘ２−は、自壊性リンカーに直接的に連結される。好ましくは、−Ｘ２−ＣＯ−基は、Ｙに連結され、ＹがＮＨである場合、それによって−Ｘ２−ＣＯ−ＮＨ−基が形成される。
【０５３３】
−ＮＨ−Ｘ１−は、Ａに直接的に連結される。Ａは、−ＣＯ−の官能性を含み得、それによって−Ｘ１−とのアミド結合が形成される。
【０５３４】
１つの実施形態では、Ｌ１及びＬ２は、−ＯＣ（＝Ｏ）−と一緒になってＮＨ−Ｘ１−Ｘ２−ＣＯ−ＰＡＢＣ−基を構成する。ＰＡＢＣ基は、Ｎ１０位に直接的に連結される。好ましくは、自壊性リンカー及びジペプチドは一緒になって、以下に示される−ＮＨ−Ｐｈｅ−Ｌｙｓ−ＣＯ−ＮＨ−ＰＡＢＣ−基：
【化４０】
2018516243.tif 000047
を形成し、
式中、アスタリスクは、Ｎ１０位への結合点を示し、波線は、リンカーＬ１の残部への結合点またはＡへの結合点を示す。好ましくは、波線は、Ａへの結合点を示す。Ｌｙｓアミノ酸の側鎖は、例えば、上記のＢｏｃ、Ｆｍｏｃ、または、Ａｌｌｏｃで保護され得る。
【０５３５】
あるいは、自壊性リンカー及びジペプチドは一緒になって、以下に示される−ＮＨ−Ｖａｌ−Ａｌａ−ＣＯ−ＮＨ−ＰＡＢＣ−基：
【化４１】
2018516243.tif 000048
を形成し、
式中、アスタリスク及び波線は、上に定義されるとおりである。
【０５３６】
あるいは、自壊性リンカー及びジペプチドは一緒になって、以下に示される−ＮＨ−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＣＯ−ＮＨ−ＰＡＢＣ−基：
【化４２】
2018516243.tif 000049
を形成し、
式中、アスタリスク及び波線は、上に定義されるとおりである。
【０５３７】
１つの実施形態では、Ａは、共有結合である。したがって、Ｌ１及び抗体は、直接的に連結される。例えば、Ｌ１が連続したアミノ酸配列を含む場合、配列のＮ末端は、抗体に直接的に連結され得る。
【０５３８】
したがって、Ａが共有結合である場合、抗体とＬ１との結合は、
−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ−、
−Ｃ（＝Ｏ）Ｏ−、
−ＮＨＣ（＝Ｏ）−、
−ＯＣ（＝Ｏ）−、
−ＯＣ（＝Ｏ）Ｏ−、
−ＮＨＣ（＝Ｏ）Ｏ−、
−ＯＣ（＝Ｏ）ＮＨ−、
−ＮＨＣ（＝Ｏ）ＮＨ−、
−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨＣ（＝Ｏ）−、
−Ｓ−、
−Ｓ−Ｓ−、
−ＣＨ２Ｃ（＝Ｏ）−、及び
＝Ｎ−ＮＨ−
から選択され得る。
【０５３９】
抗体に連結されるＬ１のアミノ基は、アミノ酸のＮ末端であり得るか、または例えば、リジンのアミノ酸側鎖といったアミノ酸側鎖のアミノ基に由来し得る。
抗体に連結されるＬ１のカルボキシル基は、アミノ酸のＣ末端であり得るか、または例えば、グルタミン酸のアミノ酸側鎖といったアミノ酸側鎖のカルボキシル基に由来し得る。
抗体に連結されるＬ１のヒドロキシル基は、例えば、セリンのアミノ酸側鎖といったアミノ酸側鎖のヒドロキシル基に由来し得る。
抗体に連結されるＬ１のチオール基は、例えば、セリンのアミノ酸側鎖といったアミノ酸側鎖のチオール基に由来し得る。
【０５４０】
Ｌ１のアミノ基、カルボキシル基、ヒドロキシル基、及びチオール基に関する上記の記載は、抗体にも適用される。
【０５４１】
１つの実施形態では、Ｌ２は、−ＯＣ（＝Ｏ）−と一緒になって、
【化４３】
2018516243.tif 000050
を形成し、
式中、アスタリスクは、Ｎ１０位への結合点を示し、波線は、Ｌ１への結合点を示し、ｎは、０〜３であり、Ｙは、共有結合または官能基であり、かつＥは、例えば、酵素作用または光によって活性化可能な基であり、それによって自壊性単位が得られる。フェニレン環は、本明細書に記載の置換基のうちの１つ、２つ、または３つで、任意選択でさらに置換される。１つの実施形態では、フェニレン基は、ハロ、ＮＯ２、Ｒ、またはＯＲで、任意選択でさらに置換される。好ましくは、ｎは、０または１であり、最も好ましくは、０である。
【０５４２】
Ｅは、基が例えば、光または酵素作用による活性化に感受性となるように選択される。Ｅは、−ＮＯ２またはグルコロン酸（ｇｌｕｃｏｒｏｎｉｃ  ａｃｉｄ）であり得る。前者は、ニトロ還元酵素の作用に感受性であり得、後者は、β−グルコロニダーゼ（β−ｇｌｕｃｏｒｏｎｉｄａｓｅ）の作用に感受性であり得る。
【０５４３】
この実施形態では、Ｅが活性化すると、自壊性リンカーは、保護化合物の遊離を引き起こすことになり、この遊離は、以下に示される線（ｎ＝０の場合）：
【化４４】
2018516243.tif 000051
に沿って進行するものであり、
式中、アスタリスクは、Ｎ１０位への結合点を示し、Ｅ＊は、Ｅの活性化形態であり、Ｙは、上記のとおりである。こうした基は、活性化部位と、保護されている化合物とが分離されているという利点を有する。上記のとおり、フェニレン基は、任意選択でさらに置換され得る。
【０５４４】
Ｙ基は、Ｌ１への共有結合であり得る。
Ｙ基は、
−Ｃ（＝Ｏ）−
−ＮＨ−
−Ｏ−
−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ−、
−Ｃ（＝Ｏ）Ｏ−、
−ＮＨＣ（＝Ｏ）−、
−ＯＣ（＝Ｏ）−、
−ＯＣ（＝Ｏ）Ｏ−、
−ＮＨＣ（＝Ｏ）Ｏ−、
−ＯＣ（＝Ｏ）ＮＨ−、
−ＮＨＣ（＝Ｏ）ＮＨ−、
−ＮＨＣ（＝Ｏ）ＮＨ、
−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨＣ（＝Ｏ）−、及び
−Ｓ−
から選択される官能基であり得、
ここで、Ｌ１は、ジペプチドであり、Ｙは、−ＮＨ−または−Ｃ（＝Ｏ）−であることが好ましく、それによってＬ１とＹとの間にアミド結合が形成される。この実施形態では、ジペプチド配列は、酵素活性の基質である必要はない。
【０５４５】
別の実施形態では、Ａは、スペーサー基である。したがって、Ｌ１と抗体とは、間接的に連結される。
【０５４６】
Ｌ１とＡとは、
−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ−、
−Ｃ（＝Ｏ）Ｏ−、
−ＮＨＣ（＝Ｏ）−、
−ＯＣ（＝Ｏ）−、
−ＯＣ（＝Ｏ）Ｏ−、
−ＮＨＣ（＝Ｏ）Ｏ−、
−ＯＣ（＝Ｏ）ＮＨ−、及び
−ＮＨＣ（＝Ｏ）ＮＨ−
から選択される結合によって連結され得る。
【０５４７】
１つの実施形態では、Ａ基は、
【化４５】
2018516243.tif 000052
であり、
式中、アスタリスクは、Ｌ１への結合点を示し、波線は、抗体への結合点を示し、かつｎは、０〜６である。１つの実施形態では、ｎは、５である。
【０５４８】
１つの実施形態では、Ａ基は、
【化４６】
2018516243.tif 000053
であり、
式中、アスタリスクは、Ｌ１への結合点を示し、波線は、抗体への結合点を示し、かつｎは、０〜６である。１つの実施形態では、ｎは、５である。
【０５４９】
１つの実施形態では、Ａ基は、
【化４７】
2018516243.tif 000054
であり、
式中、アスタリスクは、Ｌ１への結合点を示し、波線は、抗体への結合点を示し、ｎは、０または１であり、かつｍは、０〜３０である。好ましい実施形態では、ｎは、１であり、かつｍは、０〜１０、１〜８、好ましくは、４〜８であり、最も好ましくは、４または８である。別の実施形態では、ｍは、１０〜３０であり、好ましくは、２０〜３０である。あるいは、ｍは、０〜５０である。この実施形態では、ｍは、好ましくは、１０〜４０であり、ｎは、１である。
【０５５０】
１つの実施形態では、Ａ基は、
【化４８】
2018516243.tif 000055
であり、
式中、アスタリスクは、Ｌ１への結合点を示し、波線は、抗体への結合点を示し、ｎは、０または１であり、かつｍは、０〜３０である。好ましい実施形態では、ｎは、１であり、かつｍは、０〜１０、１〜８、好ましくは、４〜８であり、最も好ましくは、４または８である。別の実施形態では、ｍは、１０〜３０であり、好ましくは、２０〜３０である。あるいは、ｍは、０〜５０である。この実施形態では、ｍは、好ましくは、１０〜４０であり、ｎは、１である。
【０５５１】
１つの実施形態では、抗体とＡとの間の結合は、抗体のチオール残基と、Ａのマレイミド基を介するものである。
【０５５２】
１つの実施形態では、抗体とＡとの結合は、
【化４９】
2018516243.tif 000056
であり、
式中、アスタリスクは、Ａの残部への結合点を示し、波線は、抗体の残部への結合点を示す。この実施形態では、Ｓ原子は、典型的には、抗体に由来する。
【０５５３】
上記の実施形態のそれぞれにおいて、以下に示される、マレイミド由来の基：
【化５０】
2018516243.tif 000057
の代わりに代替の官能性を使用してよく、
式中、波線は、前述のように抗体への結合点を示し、アスタリスクは、Ａ基の残部への結合を示す。
【０５５４】
１つの実施形態では、マレイミド由来の基は、基：
【化５１】
2018516243.tif 000058
と交換され、
式中、波線は、抗体への結合点を示し、アスタリスクは、Ａ基の残部への結合を示す。
【０５５５】
１つの実施形態では、マレイミド由来の基は、任意選択で抗体と一緒に、
−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ−、
−Ｃ（＝Ｏ）Ｏ−、
−ＮＨＣ（＝Ｏ）−、
−ＯＣ（＝Ｏ）−、
−ＯＣ（＝Ｏ）Ｏ−、
−ＮＨＣ（＝Ｏ）Ｏ−、
−ＯＣ（＝Ｏ）ＮＨ−、
−ＮＨＣ（＝Ｏ）ＮＨ−、
−ＮＨＣ（＝Ｏ）ＮＨ、
−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨＣ（＝Ｏ）−、
−Ｓ−、
−Ｓ−Ｓ−、
−ＣＨ２Ｃ（＝Ｏ）−、
−Ｃ（＝Ｏ）ＣＨ２−、
＝Ｎ−ＮＨ−、及び
−ＮＨ−Ｎ＝
から選択される基と交換される。
【０５５６】
１つの実施形態では、マレイミド由来の基は、任意選択で抗体と一緒に、
【化５２】
2018516243.tif 000059
から選択される基と交換され、
式中、波線は、抗体への結合点、またはＡ基の残部への結合のいずれかを示し、アスタリスクは、抗体へのもう１つの結合点またはＡ基の残部へのもう１つの結合を示す。
【０５５７】
Ｌ１と抗体との連結に適した他の基については、ＷＯ２００５／０８２０２３において説明されている。
【０５５８】
１つの実施形態では、連結基Ａは存在し、トリガーＬ１は存在し、自壊性リンカーＬ２は存在しない。したがって、Ｌ１と薬物単位とは、結合を介して直接的に連結される。この実施形態では、Ｌ２は結合であることと同等である。このことは、ＤＬが式ＩＩを有するときに特に関係し得る。
【０５５９】
Ｌ１とＤとは、
−Ｃ（＝Ｏ）Ｎ＜、
−Ｃ（＝Ｏ）Ｏ−、
−ＮＨＣ（＝Ｏ）−、
−ＯＣ（＝Ｏ）−、
−ＯＣ（＝Ｏ）Ｏ−、
−ＮＨＣ（＝Ｏ）Ｏ−、
−ＯＣ（＝Ｏ）Ｎ＜、及び
−ＮＨＣ（＝Ｏ）Ｎ＜、
から選択される結合によって連結され得、
ここで、Ｎ＜またはＯ−は、Ｄの一部である。
【０５６０】
１つの実施形態では、好ましくは、Ｌ１とＤとは、
−Ｃ（＝Ｏ）Ｎ＜、及び
−ＮＨＣ（＝Ｏ）−
から選択される結合によって連結される。
【０５６１】
１つの実施形態では、Ｌ１は、ジペプチドを含み、ジペプチドの１つの末端は、Ｄに連結される。上記のとおり、ジペプチドにおけるアミノ酸は、天然アミノ酸と非天然アミノ酸との任意の組み合わせであり得る。いくつかの実施形態では、ジペプチドは、天然アミノ酸を含む。リンカーが、カテプシン切断性リンカーである場合、ジペプチドは、カテプシン媒介性の切断の作用部位である。したがって、ジペプチドは、カテプシンの認識部位である。
【０５６２】
１つの実施形態では、ジペプチドである−ＮＨ−Ｘ１−Ｘ２−ＣＯ−における−Ｘ１−Ｘ２−基は、
−Ｐｈｅ−Ｌｙｓ−、
−Ｖａｌ−Ａｌａ−、
−Ｖａｌ−Ｌｙｓ−、
−Ａｌａ−Ｌｙｓ−、
−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−、
−Ｐｈｅ−Ｃｉｔ−、
−Ｌｅｕ−Ｃｉｔ−、
−Ｉｌｅ−Ｃｉｔ−、
−Ｐｈｅ−Ａｒｇ−、及び
−Ｔｒｐ−Ｃｉｔ−；
から選択され、
ここで、Ｃｉｔは、シトルリンである。そのようなジペプチドでは、−ＮＨ−は、Ｘ１のアミノ基であり、ＣＯは、Ｘ２のカルボニル基である。
【０５６３】
好ましくは、ジペプチドである−ＮＨ−Ｘ１−Ｘ２−ＣＯ−における−Ｘ１−Ｘ２−基は、
−Ｐｈｅ−Ｌｙｓ−、
−Ｖａｌ−Ａｌａ−、
−Ｖａｌ−Ｌｙｓ−、
−Ａｌａ−Ｌｙｓ−、及び
−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−
から選択される。
【０５６４】
最も好ましくは、ジペプチドである−ＮＨ−Ｘ１−Ｘ２−ＣＯ−における−Ｘ１−Ｘ２−基は、−Ｐｈｅ−Ｌｙｓ−または−Ｖａｌ−Ａｌａ−である。
【０５６５】
ジペプチドの他の対象の組み合わせには、
−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−、
−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−、及び
−Ｖａｌ−Ｇｌｕ−
が含まれる。
【０５６６】
ジペプチドにおいて他の組み合わせを使用してよく、こうした組み合わせには、上記のものが含まれる。
【０５６７】
１つの実施形態では、Ｌ１−Ｄは、
【化５３】
2018516243.tif 000060
であり、
式中、−ＮＨ−Ｘ１−Ｘ２−ＣＯは、ジペプチドであり、−Ｎ＜は、薬物単位の一部であり、アスタリスクは、薬物単位の残部への結合点を示し、かつ波線は、Ｌ１の残部への結合点またはＡへの結合点を示す。好ましくは、波線は、Ａへの結合点を示す。
【０５６８】
１つの実施形態では、ジペプチドは、バリン−アラニンであり、Ｌ１−Ｄは、
【化５４】
2018516243.tif 000061
であり、
式中、アスタリスク、−Ｎ＜、及び波線は、上に定義されるとおりである。
【０５６９】
１つの実施形態では、ジペプチドは、フェニルアラニン−リジンであり、Ｌ１−Ｄは、
【化５５】
2018516243.tif 000062
であり、
式中、アスタリスク、−Ｎ＜、及び波線は、上に定義されるとおりである。
【０５７０】
１つの実施形態では、ジペプチドは、バリン−シトルリンである。
【０５７１】
１つの実施形態では、Ａ−Ｌ１基は、
【化５６】
2018516243.tif 000063
であり、
式中、アスタリスクは、Ｌ２またはＤへの結合点を示し、波線は、リガンド単位への結合点を示し、かつｎは、０〜６である。１つの実施形態では、ｎは、５である。
【０５７２】
１つの実施形態では、Ａ−Ｌ１基は、
【化５７】
2018516243.tif 000064
であり、
式中、アスタリスクは、Ｌ２またはＤへの結合点を示し、波線は、リガンド単位への結合点を示し、かつｎは、０〜６である。１つの実施形態では、ｎは、５である。
【０５７３】
１つの実施形態では、Ａ−Ｌ１基は、
【化５８】
2018516243.tif 000065
であり、
式中、アスタリスクは、Ｌ２またはＤへの結合点を示し、波線は、リガンド単位への結合点を示し、ｎは、０または１であり、及びｍは、０〜３０である。好ましい実施形態では、ｎは、１であり、及びｍは、０〜１０、１〜８、好ましくは、４〜８であり、最も好ましくは、４または８である。
【０５７４】
１つの実施形態では、Ａ−Ｌ１基は、
【化５９】
2018516243.tif 000066
であり、
式中、アスタリスクは、Ｌ２またはＤへの結合点を示し、波線は、リガンド単位への結合点を示し、ｎは、０または１であり、かつｍは、０〜３０である。好ましい実施形態では、ｎは、１であり、かつｍは、０〜１０、１〜７、好ましくは、３〜７、最も好ましくは、３または７である。
【０５７５】
１つの実施形態では、Ａ−Ｌ１基は、
【化６０】
2018516243.tif 000067
であり、
式中、アスタリスクは、Ｌ２またはＤへの結合点を示し、波線は、リガンド単位への結合点を示し、かつｎは、０〜６である。１つの実施形態では、ｎは、５である。
【０５７６】
１つの実施形態では、Ａ−Ｌ１基は、
【化６１】
2018516243.tif 000068
であり、
式中、アスタリスクは、Ｌ２またはＤへの結合点を示し、波線は、リガンド単位への結合点を示し、かつｎは、０〜６である。１つの実施形態では、ｎは、５である。
【０５７７】
１つの実施形態では、Ａ−Ｌ１基は、
【化６２】
2018516243.tif 000069
であり、
式中、アスタリスクは、Ｌ２またはＤへの結合点を示し、波線は、リガンド単位への結合点を示し、ｎは、０または１であり、かつｍは、０〜３０である。好ましい実施形態では、ｎは、１であり、及びｍは、０〜１０、１〜８、好ましくは、４〜８であり、最も好ましくは、４または８である。
【０５７８】
１つの実施形態では、Ａ−Ｌ１基は、
【化６３】
2018516243.tif 000070
であり、
式中、アスタリスクは、Ｌ２またはＤへの結合点を示し、波線は、リガンド単位への結合点を示し、ｎは、０または１であり、かつｍは、０〜３０である。好ましい実施形態では、ｎは、１であり、かつｍは、０〜１０、１〜８、好ましくは、４〜８であり、最も好ましくは、４または８である。
【０５７９】
１つの実施形態では、Ａ−Ｌ１基は、
【化６４】
2018516243.tif 000071
であり、
式中、アスタリスクは、Ｌ２またはＤへの結合点を示し、Ｓは、リガンド単位の硫黄基（ｓｕｌｆｕｒ  ｇｒｏｕｐ）であり、波線は、リガンド単位の残部への結合点を示し、かつｎは、０〜６である。１つの実施形態では、ｎは、５である。
【０５８０】
１つの実施形態では、Ａ−Ｌ１基は、
【化６５】
2018516243.tif 000072
であり、
式中、アスタリスクは、Ｌ２またはＤへの結合点を示し、Ｓは、リガンド単位の硫黄基であり、波線は、リガンド単位の残部への結合点を示し、かつｎは、０〜６である。１つの実施形態では、ｎは、５である。
【０５８１】
１つの実施形態では、Ａ１−Ｌ１基は、
【化６６】
2018516243.tif 000073
であり、
式中、アスタリスクは、Ｌ２またはＤへの結合点を示し、Ｓは、リガンド単位の硫黄基であり、波線は、リガンド単位の残部への結合点を示し、ｎは、０または１であり、かつｍは、０〜３０である。好ましい実施形態では、ｎは、１であり、かつｍは、０〜１０、１〜８、好ましくは、４〜８であり、最も好ましくは、４または８である。
【０５８２】
１つの実施形態では、Ａ１−Ｌ１基は、
【化６７】
2018516243.tif 000074
であり、
式中、アスタリスクは、Ｌ２またはＤへの結合点を示し、波線は、リガンド単位への結合点を示し、ｎは、０または１であり、かつｍは、０〜３０である。好ましい実施形態では、ｎは、１であり、かつｍは、０〜１０、１〜７、好ましくは、４〜８であり、最も好ましくは、４または８である。
【０５８３】
１つの実施形態では、Ａ１−Ｌ１基は、
【化６８】
2018516243.tif 000075
であり、
式中、アスタリスクは、Ｌ２またはＤへの結合点を示し、波線は、リガンド単位の残部への結合点を示し、かつｎは、０〜６である。１つの実施形態では、ｎは、５である。
【０５８４】
１つの実施形態では、Ａ１−Ｌ１基は、
【化６９】
2018516243.tif 000076
であり、
式中、アスタリスクは、Ｌ２またはＤへの結合点を示し、波線は、リガンド単位の残部への結合点を示し、かつｎは、０〜６である。１つの実施形態では、ｎは、５である。
【０５８５】
１つの実施形態では、Ａ１−Ｌ１基は、
【化７０】
2018516243.tif 000077
であり、
式中、アスタリスクは、Ｌ２またはＤへの結合点を示し、波線は、リガンド単位の残部への結合点を示し、ｎは、０または１であり、かつｍは、０〜３０である。好ましい実施形態では、ｎは、１であり、かつｍは、０〜１０、１〜８、好ましくは、４〜８であり、最も好ましくは、４または８である。
【０５８６】
１つの実施形態では、Ａ１−Ｌ１基は、
【化７１】
2018516243.tif 000078
であり、
式中、アスタリスクは、Ｌ２またはＤへの結合点を示し、波線は、リガンド単位の残部への結合点を示し、ｎは、０または１であり、かつｍは、０〜３０である。好ましい実施形態では、ｎは、１であり、かつｍは、０〜１０、１〜８、好ましくは、４〜８であり、最も好ましくは、４または８である。
【０５８７】
ＲＬ’基は、ＲＬ基に由来し得る。ＲＬ基は、抗体をＲＬの官能基に連結することによって、ＲＬ’基へと変換され得る。ＲＬからＲＬ’への変換には他の段階を用いてもよい。こうした段階には、保護基が存在する場合は、保護基の除去、または適切な官能基の導入が含まれ得る。
【０５８８】
ＲＬ
リンカーは、１つまたは複数のアミノ酸単位を含んだ、プロテアーゼによる切断が可能なペプチド部分を含み得る。ペプチドリンカー試薬は、ペプチド化学の分野においてよく知られる固相または液相の合成方法（Ｅ．Ｓｃｈｒｏｄｅｒ  ａｎｄ  Ｋ．Ｌｕｂｋｅ，Ｔｈｅ  Ｐｅｐｔｉｄｅｓ，ｖｏｌｕｍｅ  １，ｐｐ  ７６−１３６（１９６５）Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ）によって調製してよい。こうしたペプチド化学には、Ｒａｉｎｉｎ  Ｓｙｍｐｈｏｎｙペプチド合成機（Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｉｎｃ．，Ｔｕｃｓｏｎ，ＡＺ）、またはモデル４３３（Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ，Ｆｏｓｔｅｒ  Ｃｉｔｙ，ＣＡ）などの自動合成機でのｔ−ＢＯＣ化学（Ｇｅｉｓｅｒ  ｅｔ  ａｌ  “Ａｕｔｏｍａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｓｏｌｉｄ−ｐｈａｓｅ  ｐｅｐｔｉｄｅ  ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ”  ｉｎ  Ｍａｃｒｏｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇ  ａｎｄ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，Ａｌａｎ  Ｒ．Ｌｉｓｓ，Ｉｎｃ．，１９８８，ｐｐ．１９９−２１８）、及びＦｍｏｃ／ＨＢＴＵ  ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ（Ｆｉｅｌｄｓ，Ｇ．ａｎｄ  Ｎｏｂｌｅ，Ｒ．（１９９０）“Ｓｏｌｉｄ  ｐｈａｓｅ  ｐｅｐｔｉｄｅ  ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ  ｕｔｉｌｉｚｉｎｇ  ９−ｆｌｕｏｒｏｅｎｙｌｍｅｔｈｏｘｙｃａｒｂｏｎｙｌ  ａｍｉｎｏ  ａｃｉｄｓ”，Ｉｎｔ．Ｊ．Ｐｅｐｔｉｄｅ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｒｅｓ．３５：１６１−２１４）が含まれる。
【０５８９】
アミノ酸リンカーの例には、ジペプチド、トリペプチド、テトラペプチド、またはペンタペプチドが含まれる。ジペプチドの例には、バリン−シトルリン（ｖｃまたはｖａｌ−ｃｉｔ）、アラニン−フェニルアラニン（ａｆまたはａｌａ−ｐｈｅ）が含まれる。トリペプチドの例には、グリシン−バリン−シトルリン（ｇｌｙ−ｖａｌ−ｃｉｔ）、及びグリシン−グリシン−グリシン（ｇｌｙ−ｇｌｙ−ｇｌｙ）が含まれる。アミノ酸リンカー成分を構成するアミノ酸残基には、天然起源のアミノ酸、ならびに非主要アミノ酸、及びシトルリンなどの非天然起源のアミノ酸類似体が含まれる。アミノ酸リンカー成分は、特定の酵素による酵素的な切断に対して選択性が生じるように設計及び最適化され得る。こうした酵素は、例えば、腫瘍関連プロテアーゼ、カテプシンＢ、カテプシンＣ、及びカテプシンＤ、またはプラスミンプロテアーゼである。
【０５９０】
アミノ酸側鎖には、天然起源のアミノ酸、ならびに非主要アミノ酸、及びシトルリンなどの非天然起源のアミノ酸類似体のものが含まれる。アミノ酸側鎖には、水素、メチル、イソプロピル、イソブチル、ｓｅｃ−ブチル、ベンジル、ｐ−ヒドロキシベンジル、−ＣＨ２ＯＨ、−ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ３、−ＣＨ２ＣＨ２ＳＣＨ３、−ＣＨ２ＣＯＮＨ２、−ＣＨ２ＣＯＯＨ、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＯＮＨ２、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＯＯＨ、−（ＣＨ２）３ＮＨＣ（＝ＮＨ）ＮＨ２、−（ＣＨ２）３ＮＨ２、−（ＣＨ２）３ＮＨＣＯＣＨ３、−（ＣＨ２）３ＮＨＣＨＯ、−（ＣＨ２）４ＮＨＣ（＝ＮＨ）ＮＨ２、−（ＣＨ２）４ＮＨ２、−（ＣＨ２）４ＮＨＣＯＣＨ３、−（ＣＨ２）４ＮＨＣＨＯ、−（ＣＨ２）３ＮＨＣＯＮＨ２、−（ＣＨ２）４ＮＨＣＯＮＨ２、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ２ＮＨ２、２−ピリジルメチル−、３−ピリジルメチル−、４−ピリジルメチル−、フェニル、シクロヘキシル、ならびに下記の構造：
【化７２】
2018516243.tif 000079
または
【化７３】
2018516243.tif 000080
が含まれる。
アミノ酸側鎖が、水素（グリシン）以外を含むとき、アミノ酸側鎖が結合する炭素原子は、キラルである。アミノ酸側鎖が結合する炭素原子はそれぞれ独立して、（Ｓ）または（Ｒ）の立体配置をとるか、またはラセミ混合物である。したがって、薬物−リンカー試薬は、エナンチオマー的に純粋、ラセミ性、またはジアステレオマー性である。
【０５９１】
例示の実施形態では、アミノ酸側鎖は、天然アミノ酸及び非天然アミノ酸のものから選択され、こうしたアミノ酸には、アラニン、２−アミノ−２−シクロヘキシル酢酸、２−アミノ−２−フェニル酢酸、アルギニン、アスパラギン、アスパラギン酸、システイン、グルタミン、グルタミン酸、グリシン、ヒスチジン、イソロイシン、ロイシン、リジン、メチオニン、ノルロイシン、フェニルアラニン、プロリン、セリン、スレオニン、トリプトファン、チロシン、バリン、γ−アミノ酪酸、α，α−ジメチルγ−アミノ酪酸、β，β−ジメチルγ−アミノ酪酸、オルニチン、及びシトルリン（Ｃｉｔ）が含まれる。
【０５９２】
抗体への複合化を目的とするリンカー−ＰＢＤ薬物部分中間体の構築に有用であり、パラ−アミノベンジルカルバモイル（ＰＡＢ）自壊性スペーサーを有する、例示のバリン−シトルリン（ｖａｌ−ｃｉｔまたはｖｃ）ジペプチドリンカー試薬は、構造：
【化７４】
2018516243.tif 000081
を有し、
式中、Ｑは、Ｃ１−Ｃ８アルキル、−Ｏ−（Ｃ１−Ｃ８アルキル）、−ハロゲン、−ＮＯ２、または−ＣＮであり；かつｍは、０〜４の範囲の整数である。
【０５９３】
ｐ−アミノベンジル基を有する例示のｐｈｅ−ｌｙｓ（Ｍｔｒ）ジペプチドリンカー試薬は、Ｄｕｂｏｗｃｈｉｋ，ｅｔ  ａｌ．（１９９７）Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ  Ｌｅｔｔｅｒｓ，３８：５２５７−６０に従って調製することができ、構造：
【化７５】
2018516243.tif 000082
を有し、
式中、Ｍｔｒは、モノ−４−メトキシトリチルであり、Ｑは、Ｃ１−Ｃ８アルキル、−Ｏ−（Ｃ１−Ｃ８アルキル）、−ハロゲン、−ＮＯ２、または−ＣＮであり；かつｍは、０〜４の範囲の整数である。
【０５９４】
「自壊性リンカー」であるＰＡＢ（パラ−アミノベンジルオキシカルボニル）は、抗体薬物複合体において、薬物部分を抗体に結合するものである（Ｃａｒｌ  ｅｔ  ａｌ（１９８１）Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．２４：４７９−４８０；Ｃｈａｋｒａｖａｒｔｙ  ｅｔ  ａｌ（１９８３）Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．２６：６３８−６４４；ＵＳ６２１４３４５；ＵＳ２００３０１３０１８９；ＵＳ２００３００９６７４３；ＵＳ６７５９５０９；ＵＳ２００４００５２７９３；ＵＳ６２１８５１９；ＵＳ６８３５８０７；ＵＳ６２６８４８８；ＵＳ２００４００１８１９４；ＷＯ９８／１３０５９；ＵＳ２００４００５２７９３；ＵＳ６６７７４３５；ＵＳ５６２１００２；ＵＳ２００４０１２１９４０；ＷＯ２００４／０３２８２８）。ＰＡＢに加えて、自壊性スペーサーの他の例には、限定はされないが、（ｉ）２−アミノイミダゾール−５−メタノール誘導体などの、ＰＡＢ基と電子的に類似した芳香族化合物（Ｈａｙ  ｅｔ  ａｌ．（１９９９）Ｂｉｏｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔ．９：２２３７）、チアゾール（ＵＳ７３７５０７８）、ＰＡＢ単位が複数回繰り返して伸長したもの（ｄｅ  Ｇｒｏｏｔ  ｅｔ  ａｌ（２００１）Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．６６：８８１５−８８３０）；及びオルト−アミノベンジルアセタールまたはパラ−アミノベンジルアセタール；ならびに（ｉｉ）同族体化されたスチリルＰＡＢ類似体（ＵＳ７２２３８３７）が含まれる。置換及び未置換の４−アミノ酪酸アミド（Ｒｏｄｒｉｇｕｅｓ  ｅｔ  ａｌ（１９９５）Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  ２：２２３）、適切に置換されたビシクロ［２．２．１］環系及びビシクロ［２．２．２］環系（Ｓｔｏｒｍ  ｅｔ  ａｌ（１９７２）Ｊ．Ａｍｅｒ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．９４：５８１５）、ならびに２−アミノフェニルプロピオン酸アミド（Ａｍｓｂｅｒｒｙ，ｅｔ  ａｌ（１９９０）Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．５５：５８６７）などの、アミド結合が加水分解されると環化するスペーサーを使用することができる。グリシン上を置換しており、脱離が生じるアミン含有薬物（Ｋｉｎｇｓｂｕｒｙ  ｅｔ  ａｌ（１９８４）Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．２７：１４４７）もまた、ＡＤＣにおいて有用な自壊性スペーサーの例である。
【０５９５】
１つの実施形態では、バリン−シトルリンジペプチドＰＡＢ類似体試薬は、２，６ジメチルフェニル基を有し、構造：
【化７６】
2018516243.tif 000083
を有する。
【０５９６】
本開示の抗体薬物複合体に有用なリンカー試薬には、限定はされないが、ＢＭＰＥＯ、ＢＭＰＳ、ＥＭＣＳ、ＧＭＢＳ、ＨＢＶＳ、ＬＣ−ＳＭＣＣ、ＭＢＳ、ＭＰＢＨ、ＳＢＡＰ、ＳＩＡ、ＳＩＡＢ、ＳＭＣＣ、ＳＭＰＢ、ＳＭＰＨ、スルホ−ＥＭＣＳ、スルホ−ＧＭＢＳ、スルホ−ＫＭＵＳ、スルホ−ＭＢＳ、スルホ−ＳＩＡＢ、スルホ−ＳＭＣＣ、及びスルホ−ＳＭＰＢ、ならびにＳＶＳＢ（スクシンイミジル−（４−ビニルスルホン）ベンゾエート）、ならびにビス−マレイミド試薬：ＤＴＭＥ、ＢＭＢ、ＢＭＤＢ、ＢＭＨ、ＢＭＯＥ、１，８−ビス−マレイミドジエチレングリコール（ＢＭ（ＰＥＯ）２）、及び１，１１−ビス−マレイミドトリエチレングリコール（ＢＭ（ＰＥＯ）３）が含まれ、こうした試薬は、Ｐｉｅｒｃｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｉｎｃ．、ＴｈｅｒｍｏＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、Ｒｏｃｋｆｏｒｄ，ＩＬ、及び他の試薬サプライヤーから商業的に入手可能である。ビス−マレイミド試薬を用いることで、逐次的または同時発生的な様式において、抗体のシステイン残基の遊離チオール基と、チオールを含有する薬物部分、標識、またはリンカー中間体との結合が可能となる。マレイミド以外の他の官能基で、抗体、ＰＢＤ薬物部分、またはリンカー中間体のチオール基と反応するものの例には、ヨードアセトアミド、ブロモアセトアミド、ビニルピリジン、ジスルフィド、ピリジルジスルフィド、イソシアネート、及びイソチオシアネートが含まれる。
【化７７】
2018516243.tif 000084
リンカー試薬の他の実施形態は、Ｎ−スクシンイミジル−４−（２−ピリジルチオ）ペンタノエート（ＳＰＰ）、Ｎ−スクシンイミジル−３−（２−ピリジルジチオ）プロピオネート（ＳＰＤＰ、Ｃａｒｌｓｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ（１９７８）Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｊ．１７３：７２３−７３７）、スクシンイミジル−４−（Ｎ−マレイミドメチル）シクロヘキサン−１−カルボキシレート（ＳＭＣＣ）、イミノチオラン（ＩＴ）、イミドエステルの二官能性誘導体（アジプイミド酸ジメチルＨＣｌなど）、活性エステル（スベリン酸ジスクシンイミジルなど）、アルデヒド（グルタルアルデヒドなど）、ビス−アジド化合物（ビス（ｐ−アジドベンゾイル）ヘキサンジアミンなど）、ビス−ジアゾニウム誘導体（ビス−（ｐ−ジアゾニウムベンゾイル）−エチレンジアミンなど）、ジイソシアネート（トルエン２，６−ジイソシアネートなど）、及びビス−活性フッ素化合物（１，５−ジフルオロ  −２，４−ジニトロベンゼンなど）である。有用なリンカー試薬は、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ  Ｉｎｃ．（Ｂｏｕｌｄｅｒ，ＣＯ）などの、他の商業的な供給元を介して入手することもでき、またはＴｏｋｉ  ｅｔ  ａｌ（２００２）Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．６７：１８６６−１８７２；ＵＳ６２１４３４５；ＷＯ０２／０８８１７２；ＵＳ２００３１３０１８９；ＵＳ２００３０９６７４３；ＷＯ０３／０２６５７７；ＷＯ０３／０４３５８３；及びＷＯ０４／０３２８２８において説明される手順に従って合成することもできる。
【０５９７】
リンカーは、分岐した多官能性リンカー部分を介して、複数の薬物部分を抗体に共有結合で結合するための樹状型のリンカーであり得る（ＵＳ２００６／１１６４２２；ＵＳ２００５／２７１６１５；ｄｅ  Ｇｒｏｏｔ  ｅｔ  ａｌ（２００３）Ａｎｇｅｗ．Ｃｈｅｍ．Ｉｎｔ．Ｅｄ．４２：４４９０−４４９４；Ａｍｉｒ  ｅｔ  ａｌ（２００３）Ａｎｇｅｗ．Ｃｈｅｍ．Ｉｎｔ．Ｅｄ．４２：４４９４−４４９９；Ｓｈａｍｉｓ  ｅｔ  ａｌ（２００４）Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．１２６：１７２６−１７３１；Ｓｕｎ  ｅｔ  ａｌ（２００２）Ｂｉｏｏｒｇａｎｉｃ  ＆  Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  Ｌｅｔｔｅｒｓ  １２：２２１３−２２１５；Ｓｕｎ  ｅｔ  ａｌ（２００３）Ｂｉｏｏｒｇａｎｉｃ  ＆  Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  １１：１７６１−１７６８；Ｋｉｎｇ  ｅｔ  ａｌ（２００２）Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ  Ｌｅｔｔｅｒｓ  ４３：１９８７−１９９０）。樹状リンカーは、抗体に対する薬物のモル比、すなわち負荷を増加させ得るものであり、負荷は、ＡＤＣの効力と関連する。したがって、抗体が有する反応性のシステインチオール基が１つのみである場合、複数の薬物部分は、樹状リンカーまたは分岐リンカーを介して結合され得る。
【０５９８】
樹状型のリンカーの実施形態例の１つは、構造：
【化７８】
2018516243.tif 000085
を有し、
式中、アスタリスクは、ＰＢＤ部分のＮ１０位への結合点を示す。
【０５９９】
Ｒｃ、キャッピング基
本開示の第１の態様の複合体は、Ｎ１０位にキャッピング基であるＲＣを有し得る。
【０６００】
ＲＣ基は、Ｎ１０−Ｃ１１のイミン結合、カルビノールアミン、置換されたカルビノールアミン、ＱＲ１１がＯＳＯ３Ｍの場合は、亜硫酸水素塩付加物（ｂｉｓｕｌｆｉｔｅ  ａｄｄｕｃｔ）、チオカルビノールアミン、置換されたチオカルビノールアミン、または置換されたカルビナールアミン（ｃａｒｂｉｎａｌａｍｉｎｅ）が残るように、ＰＢＤ部分のＮ１０位から除去可能である。
【０６０１】
１つの実施形態では、ＲＣは、Ｎ１０−Ｃ１１のイミン結合、カルビノールアミン、置換されたカビノールアミン（ｃａｂｉｎｏｌａｍｉｎｅ）、またはＱＲ１１がＯＳＯ３Ｍの場合は、亜硫酸水素塩付加物が残るように除去可能な保護基であり得る。１つの実施形態では、ＲＣは、Ｎ１０−Ｃ１１のイミン結合が残るように除去可能な保護基である。
【０６０２】
ＲＣ基は、Ｒ１０基の除去に必要となるものと同一の条件下で、例えば、Ｎ１０−Ｃ１１のイミン結合、カルビノールアミンなどが得られるように除去可能であることが意図される。キャッピング基は、Ｎ１０位において意図される官能性の保護基として働く。キャッピング基は、抗体に対して非反応性であることが意図される。例えば、ＲＣは、ＲＬと同一ではない。
【０６０３】
キャッピング基を有する化合物は、イミン単量体を有する二量体の合成における中間体として使用してよい。あるいは、キャッピング基を有する化合物は、複合体として使用してよく、その場合、キャッピング基は標的位置で除去され、その結果、イミン、カルビノールアミン、置換されたカビノールアミン（ｃａｂｉｎｏｌａｍｉｎｅ）などが得られる。したがって、この実施形態では、キャッピング基は、治療的に除去可能な窒素保護基と称され得、これは、本発明者らの以前の出願であるＷＯ００／１２５０７において定義されるとおりである。
【０６０４】
１つの実施形態では、ＲＣ基は、Ｒ１０基のリンカーＲＬの切断条件下で除去可能である。したがって、１つの実施形態では、キャッピング基は、酵素作用によって切断可能である。
【０６０５】
代替の実施形態では、キャッピング基は、リンカーＲＬを抗体に連結する前に除去可能である。この実施形態では、キャッピング基は、リンカーＲＬが切断されない条件下で除去可能である。
【０６０６】
化合物が、抗体への結合を形成するための官能基Ｇ１を含む場合、キャッピング基は、Ｇ１の付加または非遮蔽化（ｕｎｍａｓｋｉｎｇ）の前に除去可能である。
【０６０７】
キャッピング基は、二量体における単量体単位の１つのみを確実に抗体に連結するという保護基方針の一部として使用してよい。
【０６０８】
キャッピング基は、Ｎ１０−Ｃ１１のイミン結合を遮蔽するものとして使用してよい。キャッピング基は、イミン官能性が化合物において必要なときに除去してよい。キャッピング基は、上記のように、カルビノールアミン、置換されたカビノールアミン（ｃａｂｉｎｏｌａｍｉｎｅ）、及び亜硫酸水素塩付加物を遮蔽するものでもある。
【０６０９】
ＲＣは、本発明者らの以前の出願であるＷＯ００／１２５０７において説明される基などのＮ１０保護基であり得る。１つの実施形態では、ＲＣは、本発明者らの以前の出願であるＷＯ００／１２５０７において定義される治療的に除去可能な窒素保護基である。
【０６１０】
１つの実施形態では、ＲＣは、カルバメート保護基である。
【０６１１】
１つの実施形態では、カルバメート保護基は、
Ａｌｌｏｃ、Ｆｍｏｃ、Ｂｏｃ、Ｔｒｏｃ、Ｔｅｏｃ、Ｐｓｅｃ、Ｃｂｚ、及びＰＮＺ
から選択される。
任意選択で、カルバメート保護基は、Ｍｏｃからさらに選択される。
【０６１２】
１つの実施形態では、ＲＣは、抗体への連結のための官能基を欠いたリンカー基ＲＬである。
【０６１３】
本出願は、カルバメートであるＲＣ基と特に関連する。
【０６１４】
１つの実施形態では、ＲＣは、基：
【化７９】
2018516243.tif 000086
であり、
式中、アスタリスクは、Ｎ１０位への結合点を示し、Ｇ２は、終結基であり、Ｌ３は、共有結合であるか、または切断可能なリンカーＬ１であり、Ｌ２は、共有結合であるか、またはＯＣ（＝Ｏ）と一緒になって自壊性リンカーを形成する。
【０６１５】
Ｌ３及びＬ２の両方が共有結合である場合、Ｇ２及びＯＣ（＝Ｏ）は一緒になって、上に定義されるカルバメート保護基を形成する。
【０６１６】
Ｌ１は、Ｒ１０に関して上に定義されるとおりである。
Ｌ２は、Ｒ１０に関して上に定義されるとおりである。
【０６１７】
よく知られる保護基に基づくものを含む、さまざまな終結基が以下に記載される。
【０６１８】
１つの実施形態では、Ｌ３は、切断可能なリンカーＬ１であり、Ｌ２は、ＯＣ（＝Ｏ）と一緒になって、自壊性リンカーを形成する。この実施形態では、Ｇ２は、Ａｃ（アセチル）もしくはＭｏｃであるか、または
Ａｌｌｏｃ、Ｆｍｏｃ、Ｂｏｃ、Ｔｒｏｃ、Ｔｅｏｃ、Ｐｓｅｃ、Ｃｂｚ、及びＰＮＺ
から選択されるカルバメート保護基である。
任意選択で、カルバメート保護基は、Ｍｏｃからさらに選択される。
【０６１９】
別の実施形態では、Ｇ２は、アシル基−Ｃ（＝Ｏ）Ｇ３であり、ここで、Ｇ３は、アルキル（シクロアルキル、アルケニル、及びアルキニルを含む）、ヘテロアルキル、ヘテロシクリル、ならびにアリール（ヘテロアリール及び炭素アリールを含む）から選択される。こうした基は、任意選択で置換され得る。アシル基は、適切な場合、Ｌ３またはＬ２のアミノ基と一緒になって、アミド結合を形成し得る。アシル基は、適切な場合、Ｌ３またはＬ２のヒドロキシ基と一緒になって、エステル基を形成し得る。
【０６２０】
１つの実施形態では、Ｇ３は、ヘテロアルキルである。ヘテロアルキル基は、ポリエチレングリコールを含み得る。ヘテロアルキル基は、アシル基に隣接するＯまたはＮなどのヘテロ原子を有し得、それによって、適切な場合、Ｌ３基またはＬ２基に存在するヘテロ原子と共に、適切な場合、カルバメート基またはカーボネート基が形成される。
【０６２１】
１つの実施形態では、Ｇ３は、ＮＨ２、ＮＨＲ、及びＮＲＲ’から選択される。好ましくは、Ｇ３は、ＮＲＲ’である。
【０６２２】
１つの実施形態では、Ｇ２は、基：
【化８０】
2018516243.tif 000087
であり、
式中、アスタリスクは、Ｌ３への結合点を示し、ｎは、０〜６であり、かつＧ４は、ＯＨ、ＯＲ、ＳＨ、ＳＲ、ＣＯＯＲ、ＣＯＮＨ２、ＣＯＮＨＲ、ＣＯＮＲＲ’、ＮＨ２、ＮＨＲ、ＮＲＲ’、ＮＯ２、及びハロから選択される。ＯＨ基、ＳＨ基、ＮＨ２基、及びＮＨＲ基は、保護される。１つの実施形態では、ｎは、１〜６であり、好ましくは、ｎは、５である。１つの実施形態では、Ｇ４は、ＯＲ、ＳＲ、ＣＯＯＲ、ＣＯＮＨ２、ＣＯＮＨＲ、ＣＯＮＲＲ’、及びＮＲＲ’である。１つの実施形態では、Ｇ４は、ＯＲ、ＳＲ、及びＮＲＲ’である。好ましくは、Ｇ４は、ＯＲ及びＮＲＲ’から選択され、最も好ましくは、Ｇ４は、ＯＲである。最も好ましくは、Ｇ４は、ＯＭｅである。
【０６２３】
１つの実施形態では、Ｇ２基は、
【化８１】
2018516243.tif 000088
であり、
式中、アスタリスクは、Ｌ３への結合点を示し、ｎ及びＧ４は、上に定義されるとおりである。
【０６２４】
１つの実施形態では、Ｇ２基は、
【化８２】
2018516243.tif 000089
であり、
式中、アスタリスクは、Ｌ３への結合点を示し、ｎは、０または１であり、ｍは、０〜５０であり、かつＧ４は、ＯＨ、ＯＲ、ＳＨ、ＳＲ、ＣＯＯＲ、ＣＯＮＨ２、ＣＯＮＨＲ、ＣＯＮＲＲ’、ＮＨ２、ＮＨＲ、ＮＲＲ’、ＮＯ２、及びハロから選択される。好ましい実施形態では、ｎは、１であり、ｍは、０〜１０、１〜２、好ましくは、４〜８であり、最も好ましくは、４または８である。別の実施形態では、ｎは、１であり、ｍは、１０〜５０、好ましくは、２０〜４０である。ＯＨ基、ＳＨ基、ＮＨ２基、及びＮＨＲ基は、保護される。１つの実施形態では、Ｇ４は、ＯＲ、ＳＲ、ＣＯＯＲ、ＣＯＮＨ２、ＣＯＮＨＲ、ＣＯＮＲＲ’、及びＮＲＲ’である。１つの実施形態では、Ｇ４は、ＯＲ、ＳＲ、及びＮＲＲ’である。好ましくは、Ｇ４は、ＯＲ及びＮＲＲ’から選択され、最も好ましくは、Ｇ４は、ＯＲである。好ましくは、Ｇ４は、ＯＭｅである。
【０６２５】
１つの実施形態では、Ｇ２基は、
【化８３】
2018516243.tif 000090
であり、
式中、アスタリスクは、Ｌ３への結合点を示し、ｎ、ｍ、及びＧ４は、上に定義されるとおりである。
【０６２６】
１つの実施形態では、Ｇ２基は、
【化８４】
2018516243.tif 000091
であり、
式中、ｎは、１〜２０であり、ｍは、０〜６であり、かつＧ４は、ＯＨ、ＯＲ、ＳＨ、ＳＲ、ＣＯＯＲ、ＣＯＮＨ２、ＣＯＮＨＲ、ＣＯＮＲＲ’、ＮＨ２、ＮＨＲ、ＮＲＲ’、ＮＯ２、及びハロから選択される。１つの実施形態では、ｎは、１〜１０である。別の実施形態では、ｎは、１０〜５０、好ましくは、２０〜４０である。１つの実施形態では、ｎは、１である。１つの実施形態では、ｍは、１である。ＯＨ基、ＳＨ基、ＮＨ２基、及びＮＨＲ基は、保護される。１つの実施形態では、Ｇ４は、ＯＲ、ＳＲ、ＣＯＯＲ、ＣＯＮＨ２、ＣＯＮＨＲ、ＣＯＮＲＲ’、及びＮＲＲ’である。１つの実施形態では、Ｇ４は、ＯＲ、ＳＲ、及びＮＲＲ’である。好ましくは、Ｇ４は、ＯＲ及びＮＲＲ’から選択され、最も好ましくは、Ｇ４は、ＯＲである。好ましくは、Ｇ４は、ＯＭｅである。
【０６２７】
１つの実施形態では、Ｇ２基は、
【化８５】
2018516243.tif 000092
であり、
式中、アスタリスクは、Ｌ３への結合点を示し、ｎ、ｍ、及びＧ４は、上に定義されるとおりである。
【０６２８】
上記の実施形態のそれぞれにおいて、Ｇ４は、ＯＨ、ＳＨ、ＮＨ２、及びＮＨＲであり得る。こうした基は、好ましくは、保護される。
１つの実施形態では、ＯＨは、Ｂｚｌ、ＴＢＤＭＳ、またはＴＢＤＰＳで保護される。
１つの実施形態では、ＳＨは、Ａｃｍ、Ｂｚｌ、Ｂｚｌ−ＯＭｅ、Ｂｚｌ−Ｍｅ、またはＴｒｔで保護される
１つの実施形態では、ＮＨ２またはＮＨＲは、Ｂｏｃ、Ｍｏｃ、Ｚ−Ｃｌ、Ｆｍｏｃ、Ｚ、またはＡｌｌｏｃで保護される。
【０６２９】
１つの実施形態では、Ｇ２基は、ジペプチドであるＬ３基との組み合わせで存在する。
【０６３０】
キャッピング基は、抗体への結合を意図するものではない。したがって、二量体に存在するもう一方の単量体が、リンカーを介した抗体への結合点として働く。したがって、キャッピング基に存在する官能性は、抗体との反応には利用不可能であることが好ましい。したがって、ＯＨ、ＳＨ、ＮＨ２、ＣＯＯＨなどの反応性官能基は避けることが好ましい。しかしながら、そのような官能性は、上記のように、保護されるのであれば、キャッピング基に存在し得る。
【０６３１】
実施形態
本開示の実施形態では、ＣｏｎｊＡを含み、抗体は、上に定義されるとおりである。
【０６３２】
本開示の実施形態では、ＣｏｎｊＢを含み、抗体は、上に定義されるとおりである。
【０６３３】
本開示の実施形態では、ＣｏｎｊＣを含み、抗体は、上に定義されるとおりである。
【０６３４】
本開示の実施形態では、ＣｏｎｊＤを含み、抗体は、上に定義されるとおりである。
【０６３５】
本開示の実施形態では、ＣｏｎｊＥを含み、抗体は、上に定義されるとおりである。
【０６３６】
本開示の実施形態では、ＣｏｎｊＦを含み、抗体は、上に定義されるとおりである。
【０６３７】
本開示の実施形態では、ＣｏｎｊＧを含み、抗体は、上に定義されるとおりである。
【０６３８】
本開示の実施形態では、ＣｏｎｊＨを含み、抗体は、上に定義されるとおりである。
【０６３９】
薬物負荷（Ｄｒｕｇ  ｌｏａｄｉｎｇ）
薬物負荷は、例えば、抗体といった抗体当たりのＰＢＤ薬物の平均数である。本開示の化合物を、元々存在するシステインに結合する場合、薬物負荷の範囲は、抗体当たりの薬物（ＤＬ）の数として１〜８であり得、すなわち薬物部分が抗体に共有結合で結合する数は、１、２、３、４、５、６、７、及び８である。複合体の組成物は、１〜８の数の範囲の薬物と複合化した抗体の集団を含む。本開示の化合物が、リジンに結合する場合、薬物負荷の範囲は、抗体当たりの薬物（ＤＬ）の数として１〜８０であり得るが、上限数は、４０、２０、１０、または８であることが好ましくあり得る。複合体の組成物は、１〜８０、１〜４０、１〜２０、１〜１０、または１〜８の数の範囲の薬物と複合化した抗体の集団を含む。
【０６４０】
複合化反応に由来するＡＤＣ調製物における、抗体当たりの平均薬物数は、ＵＶ、逆相ＨＰＬＣ、ＨＩＣ、質量分析、ＥＬＩＳＡアッセイ、及び電気泳動などの通常の手段によって特徴付けしてよい。ＡＤＣのｐに関する定量的な分布を決定してもよい。特定のＡＤＣ調製物におけるｐの平均値をＥＬＩＳＡによって決定してよい（Ｈａｍｂｌｅｔｔ  ｅｔ  ａｌ（２００４）Ｃｌｉｎ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．１０：７０６３−７０７０；Ｓａｎｄｅｒｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ（２００５）Ｃｌｉｎ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．１１：８４３−８５２）。しかしながら、ＥＬＩＳＡでは抗体と抗原との結合及び検出に限界が存在することから、ｐ（薬物）値の分布を識別することは不可能である。また、抗体−薬物複合体を検出するためのＥＬＩＳＡアッセイでは、重鎖もしくは軽鎖の断片、または特定のアミノ酸残基などの、薬物部分が抗体に結合した場所は決定されない。いくつかの実例では、異なる薬物負荷を有するＡＤＣからの、ある特定のｐ値を有する均一なＡＤＣの分離、精製、及び特徴付けは、逆相ＨＰＬＣまたは電気泳動などの手段によって達成してよい。そのような手法は、他の型の複合体にも適用可能である。
【０６４１】
いくつかの抗体−薬物複合体については、ｐは、抗体に存在する結合部位の数によって限定され得る。例えば、システインチオール基は、抗体に１つもしくはいくつかのみしか存在し得ないか、またはそれを介してリンカーが結合し得る反応性を十分に有するチオール基は、抗体に１つもしくはいくつかのみしか存在し得ない。例えば、ｐ＞５のように薬物負荷が高いと、ある特定の抗体−薬物複合体では、凝集、不溶性、毒性、または細胞透過性の消失、が生じ得る。
【０６４２】
典型的には、複合化反応の間に抗体に複合化される薬物部分の数は、論理的な最大数と比較して少なくなる。例えば、抗体は、薬物−リンカー中間体（Ｄ−Ｌ）またはリンカー試薬と反応しないリジン残基を多く含み得る。アミン反応性のリンカー試薬と反応し得るのは、最も反応性を有するリジン基のみである。同様に、チオール反応性のリンカー試薬と反応し得るのは、最も反応性を有するシステインチオール基のみである。一般に、抗体は、薬物部分に連結し得る遊離かつ反応性のシステインチオール基を、例え含むとしても、多くを含むことはない。化合物の抗体においてシステインチオール残基の大部分は、ジスルフィド架橋として存在することから、ジチオスレイトール（ＤＴＴ）またはＴＣＥＰなどの還元剤を用いて、部分的または完全な還元条件下で還元しなくてはならない。ＡＤＣの負荷（薬物／抗体比）は、いくつかの異なる様式において制御し得るものであり、こうした様式には、（ｉ）抗体に対する薬物−リンカー中間体（Ｄ−Ｌ）またはリンカー試薬のモル過剰の限定、（ｉｉ）複合化反応の時間または温度の限定、及び（ｉｉｉ）システインチオール改変の還元条件の部分化または限定が含まれる。
【０６４３】
ある特定の抗体は、還元可能な鎖間ジスルフィド、すなわちシステイン架橋を有する。ＤＴＴ（ジチオスレイトール）などの還元剤で処理することによって、リンカー試薬との複合化に対して抗体を反応性とし得る。したがって、システイン架橋のそれぞれが、反応性チオール求核基を理論的には２つ形成することになる。リジンと２−イミノチオラン（トラウト（Ｔｒａｕｔ）試薬）とを反応させてアミンをチオールへと変換することによって、求核基を抗体に追加導入することができる。反応性チオール基は、１つ、２つ、３つ、４つ、またはそれより多い数のシステイン残基の操作導入（例えば、１つまたは複数の元々は存在しなかったシステインアミノ酸残基を含む変異体抗体の調製）によって抗体（またはその断片）に導入してよい。ＵＳ７５２１５４１では、反応性システインアミノ酸の導入による抗体の操作について教示されている。
【０６４４】
鎖内または分子間のジスルフィド結合を形成しない反応性の抗体部位にシステインアミノ酸を操作導入してよい（Ｊｕｎｕｔｕｌａ，ｅｔ  ａｌ．，２００８ｂ  Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈ．，２６（８）：９２５−９３２；Ｄｏｒｎａｎ  ｅｔ  ａｌ（２００９）Ｂｌｏｏｄ  １１４（１３）：２７２１−２７２９；ＵＳ７５２１５４１；ＵＳ７７２３４８５；ＷＯ２００９／０５２２４９）。操作導入されたシステインチオールは、マレイミドまたはアルファ−ハロアミドなどの、チオール反応性の求電子基を有する本開示のリンカー試薬または薬物−リンカー試薬と反応し得、その結果、システインが操作導入された抗体とＰＢＤ薬物部分とを有するＡＤＣが形成される。したがって、薬物部分の位置は、設計、制御、及び把握し得るものである。操作導入されたシステインチオール基は、典型的には、チオール反応性のリンカー試薬または薬物−リンカー試薬と高収率で反応するため、薬物負荷を制御することができる。重鎖または軽鎖の単一部位に置換によってシステインアミノ酸が導入されるようにＩｇＧ抗体を操作すると、当該対称抗体には、システインが新たに２つ導入される。薬物負荷を２付近にすることで、複合化生成物であるＡＤＣをほぼ均一なものとすることができる。
【０６４５】
あるいは、部位特異的複合化は、Ａｘｕｐ  ｅｔ  ａｌ．（（２０１２），Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  Ｕ  Ｓ  Ａ．１０９（４０）：１６１０１−１６１１６）によって説明されるように、抗体の重鎖及び／または軽鎖に非天然アミノ酸が含まれるように抗体を操作することによって達成することができる。非天然アミノ酸を用いることで、リンカー試薬と薬物とが結合するようにオルトゴナル化学を設計できるという追加の利点が得られる。
【０６４６】
薬物−リンカー中間体、またはリンカー試薬、続いて薬物部分試薬と反応する求核基または求電子基が抗体に複数存在する場合、得られる生成物は、ＡＤＣ化合物の混合物となり、抗体に結合する薬物部分の数は例えば、１、２、３などの分布を有する。ポリマー逆相（ＰＬＲＰ）及び疎水性相互作用（ＨＩＣ）などの液体クロマトグラフィー法によって、混合物中の化合物を薬物負荷値によって分離してよい。単一の薬物負荷値（ｐ）を有するＡＤＣ調製物を単離し得るが、単一負荷値を有するこうしたＡＤＣは、依然として不均一な混合物であり得る。この理由は、リンカーを介して抗体の異なる部位に薬物部分が結合し得るためである。
【０６４７】
したがって、本開示の抗体−薬物複合体組成物は、抗体−薬物複合体化合物の混合物を含み、当該抗体−薬物複合体化合物では、抗体は、１つまたは複数のＰＢＤ薬物部分を含み、薬物部分は、さまざまなアミノ酸残基において抗体に結合し得る。
【０６４８】
１つの実施形態では、抗体当たりの二量体ピロロベンゾジアゼピン基の平均数は、１〜２０の範囲である。いくつかの実施形態では、範囲は、１〜８、２〜８、２〜６、２〜４、及び４〜８から選択される。
【０６４９】
いくつかの実施形態では、抗体当たりに存在する二量体ピロロベンゾジアゼピン基は１つである。
【０６５０】
含まれる他の形態
別段の記載がない限り、前述のものには、こうした置換基のよく知られるイオン性形態、塩形態、溶媒和物形態、及び保護形態が含まれる。例えば、カルボン酸（−ＣＯＯＨ）に対する参照には、その陰イオン性（カルボキシレート）形態（−ＣＯＯ−）、塩、または溶媒和物、ならびに通常の保護形態も含まれる。同様に、アミノ基に対する参照には、そのアミノ基のプロトン化形態（−Ｎ＋ＨＲ１Ｒ２）、塩、または溶媒和物、例えば、塩酸塩、ならびにアミノ基の通常の保護形態が含まれる。同様に、ヒドロキシル基に対する参照には、その陰イオン性形態（−Ｏ−）、塩、または溶媒和物、ならびに通常の保護形態も含まれる。
【０６５１】
塩
例えば、医薬的に許容可能な塩といった、活性化合物の対応する塩を調製する、精製する、かつ／または取り扱うことが簡便または望ましくあり得る。医薬的に許容可能な塩の例は、Ｂｅｒｇｅ，ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｓｃｉ．，６６，１−１９（１９７７）において考察されている。
【０６５２】
例えば、化合物が、陰イオン性であるか、または陰イオン性となり得る官能基（例えば、−ＣＯＯＨは、−ＣＯＯ−となり得る）を有するのであれば、適した陽イオンと塩を形成し得る。適した無機陽イオンの例には、限定はされないが、Ｎａ＋及びＫ＋などのアルカリ金属イオン、Ｃａ２＋及びＭｇ２＋などのアルカリ土類陽イオン、ならびにＡｌ＋３などの他の陽イオンが含まれる。適した有機陽イオンの例には、限定はされないが、アンモニウムイオン（すなわち、ＮＨ４＋）及び置換アンモニウムイオン（例えば、ＮＨ３Ｒ＋、ＮＨ２Ｒ２＋、ＮＨＲ３＋、ＮＲ４＋）が含まれる。適した置換アンモニウムイオンのいくつかの例は、下記のものから得られるものである：エチルアミン、ジエチルアミン、ジシクロヘキシルアミン、トリエチルアミン、ブチルアミン、エチレンジアミン、エタノールアミン、ジエタノールアミン、ピペラジン、ベンジルアミン、フェニルベンジルアミン、コリン、メグルミン、及びトロメタミン、ならびにリジン及びアルギニンなどのアミノ酸。一般的な四級アンモニウムイオンの例は、Ｎ（ＣＨ３）４＋である。
【０６５３】
化合物が、陽イオン性であるか、または陽イオン性となり得る官能基（例えば、−ＮＨ２は、−ＮＨ３＋となり得る）を有するのであれば、適した陰イオンと塩を形成し得る。適した無機陰イオンの例には、限定はされないが、下記の無機酸から得られるものが含まれる：塩酸、臭化水素酸、ヨウ化水素酸、硫酸、亜硫酸、硝酸、亜硝酸、リン酸、及び亜リン酸。
【０６５４】
適した有機陰イオンの例には、限定はされないが、下記の有機酸に由来するものが含まれる：２−アセトキシ安息香酸、酢酸、アスコルビン酸、アスパラギン酸、安息香酸、カンファースルホン酸、桂皮酸、クエン酸、エデト酸、エタンジスルホン酸、エタンスルホン酸、フマル酸、グルコヘプトン酸、グルコン酸、グルタミン酸、グリコール酸、ヒドロキシマレイン酸、ヒドロキシナフタレンカルボン酸、イセチオン酸、乳酸、ラクトビオン酸、ラウリン酸、マレイン酸、リンゴ酸、メタンスルホン酸、ムチン酸、オレイン酸、シュウ酸、パルミチン酸、パモ酸、パントテン酸、フェニル酢酸、フェニルスルホン酸、プロピオン酸、ピルビン酸、サリチル酸、ステアリン酸、コハク酸、スルファニル酸、酒石酸、トルエンスルホン酸、トリフルオロ酢酸、及び吉草酸。適したポリマー有機陰イオンの例には、限定はされないが、下記のポリマー酸に由来するものが含まれる：タンニン酸、カルボキシメチルセルロース。
【０６５５】
溶媒和物
活性化合物の対応する溶媒和物を調製、精製、及び／または取り扱うことが簡便または望ましくあり得る。本明細書では、「溶媒和物」という用語は、通常の意味において使用され、溶質（例えば、活性化合物、活性化合物の塩）と溶媒との複合体を指す。溶媒が水であるならば、溶媒和物は、便宜上、水和物と称され得、例えば、一水和物、二水和物、三水和物などと称され得る。
【０６５６】
本開示は、溶媒がＰＢＤ部分のイミン結合にまたがって付加した化合物を含み、このことは、以下に示され、式中、溶媒は水またはアルコール（ＲＡＯＨ、ここで、ＲＡは、Ｃ１−４アルキル）である：
【化８６】
2018516243.tif 000093
こうした形態は、ＰＢＤのカルビノールアミン形態及びカルビノールアミンエーテル形態と呼ぶことができる（前述のＲ１０に関するセクションにおいて説明されるとおりである）。こうした平衡のバランスは、化合物が見出される条件、ならびにその部分自体の性質に依存する。
【０６５７】
こうした特定の化合物は、例えば、凍結乾燥によって固体形態で単離してよい。
【０６５８】
異性体
本開示のある特定の化合物は、１つまたは複数の特定の幾何学形態、光学形態、エナンチオマー形態、ジアステレオマー形態、エピマー形態、アトロプ異性形態、立体異性形態、互変異性形態、立体構造形態、またはアノマー形態で存在し得、こうした形態には、限定はされないが、シス−形態及びトランス−形態；Ｅ−形態及びＺ−形態；ｃ−形態、ｔ−形態、及びｒ−形態；エンド−形態及びエキソ−形態；Ｒ−形態、Ｓ−形態、及びメソ−形態；Ｄ−形態及びＬ−形態；ｄ−形態及びｌ−形態；（＋）形態及び（−）形態；ケト−形態、エノール−形態、及びエノラート−形態；シン−形態及びアンチ−形態；シンクリナル−形態及びアンチクリナル−形態；α−形態及びβ−形態；アキシャル形態及びエクアトリアル形態；舟形、いす形、ねじれ型、エンベロープ型、及び半椅子型の形態；ならびにそれらの組み合わせが含まれ、本明細書ではこれ以後、これらはまとめて「異性体」（または「異性形態」）と称される。
【０６５９】
「キラル」という用語は、その鏡像パートナーと重ね合わせることができない特性を有する分子を指し、一方、「アキラル」という用語は、その鏡像パートナーと重ね合わせることができる分子を指す。
【０６６０】
「立体異性体」という用語は、化学的な構成は同一であるが、原子または基の空間配置に関して異なる化合物を指す。
【０６６１】
「ジアステレオマー」は、２つ以上のキラル中心を有し、そうした分子がお互いに鏡像ではない立体異性体を指す。ジアステレオマーは、物理的性質が異なり、例えば、融点、沸点、スペクトル特性、及び反応性が異なる。ジアステレオマーの混合物は、電気泳動及びクロマトグラフィーなどの高分解能を有する分析手順で分離してよい。
【０６６２】
「エナンチオマー」は、化合物の２つの立体異性体であって、お互いに重ね合わせることができない鏡像である２つの立体異性体を指す。
【０６６３】
本明細書で使用される立体化学的な定義及び慣習は、一般に、Ｓ．Ｐ．Ｐａｒｋｅｒ，Ｅｄ．，ＭｃＧｒａｗ−Ｈｉｌｌ  Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ  ｏｆ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｔｅｒｍｓ（１９８４）ＭｃＧｒａｗ−Ｈｉｌｌ  Ｂｏｏｋ  Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ；及びＥｌｉｅｌ，Ｅ．ａｎｄ  Ｗｉｌｅｎ，Ｓ．，“Ｓｔｅｒｅｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ｏｆ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ”，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，１９９４に従う。本開示の化合物は、不斉中心またはキラル中心を含み得、それ故に、異なる立体異性形態で存在し得る。限定はされないが、ジアステレオマー、エナンチオマー、及びアトロプ異性体、ならびにラセミ混合物などの、それらの混合物を含む、本開示の化合物の立体異性形態はすべて、本開示の一部を形成すると意図される。有機化合物の多くは、光学的に活性な形態で存在し、すなわちそうしたものは、平面偏光面を回転させる能力を有する。光学的に活性な化合物についての記載では、分子の絶対的な立体配置をそのキラル中心（複数可）について示すために、Ｄ及びＬ、またはＲ及びＳという接頭語が使用される。ｄ及びｌまたは（＋）及び（−）という接頭語は、化合物による平面偏光の回転徴候を示すために用いられ、（−）またはｌは、化合物が左旋性を有することを意味する。（＋）またはｄという接頭語のついた化合物は、右旋性を有する。所与の化学構造について、こうした立体異性体は、それらがお互いに鏡像であることを除いて同一である。特定の立体異性体は、エナンチオマーとも称され得、そのような異性体の混合物は、エナンチオマー混合物と呼ばれることが多い。エナンチオマーを５０：５０で含む混合物は、ラセミ混合物またはラセミ体と称され、こうしたものは、化学的な反応またはプロセスにおいて立体選択性または立体特異性が存在しない場合に生じ得る。「ラセミ混合物」及び「ラセミ体」という用語は、２つのエナンチオマー種の等モル混合物であって、光学活性を欠いた混合物を指す。
【０６６４】
互変異性形態を対象として以下で考察されるものは例外として、本明細書では、構造（または構成）異性体（すなわち、空間における原子の位置が単に異なるということではなく、むしろ原子間の結合が異なる異性体）は、「異性体」という用語から明確に除外されることに留意されるべきである。例えば、メトキシ基、すなわち−ＯＣＨ３に対する参照は、その構造異性体であるヒドロキシメチル基、すなわち−ＣＨ２ＯＨに対する参照として構成されることにはならない。同様に、オルト−クロロフェニルに対する参照は、その構造異性体であるメタ−クロロフェニルに対する参照として構成されることにはならない。しかしながら、一定クラスの構造に対する参照は、そのクラスに属する構造的な異性形態を当然含み得る（例えば、Ｃ１−７アルキルは、ｎ−プロピル及びイソプロピルを含み、ブチルは、ｎ−ブチル、イソ−ブチル、ｓｅｃ−ブチル、及びｔｅｒｔ−ブチルを含み、メトキシフェニルは、オルト−メトキシフェニル、メタ−メトキシフェニル、及びパラ−メトキシフェニルを含む）。
【０６６５】
除外されるものとして上に記載したものは、互変異性形態とは関係せず、互変異性形態は、例えば、ケト、エノール、及びエノラートの形態であり、例えば、下記の互変異性ペアのようなものである：ケト／エノール（以下に例示される）、イミン／エナミン、アミド／イミドアルコール、アミジン／アミジン、ニトロソ／オキシム、チオケトン／エンチオール、Ｎ−ニトロソ／ヒドロキシアゾ、及びニトロ／アシニトロ。
【化８７】
2018516243.tif 000094
【０６６６】
「互変異性体」または「互変異性形態」という用語は、異なるエネルギーを有し、低エネルギー障壁を介して相互変換可能な構造異性体を指す。例えば、プロトン互変異性体（プロトトロピー互変異性体としても知られる）では、ケト−エノール異性化及びイミン−エナミン異性化などの、プロトン転移を介する相互変換が生じる。原子価互変異性体では、結合電子のいくつかの再編成による相互変換が生じる。
【０６６７】
「異性体」という用語は、１つまたは複数の同位体置換を有する化合物を明確に含むことに留意されるべきである。例えば、Ｈは、１Ｈ、２Ｈ（Ｄ）、及び３Ｈ（Ｔ）を含む、任意の同位体形態であり得、Ｃは、１２Ｃ、１３Ｃ、及び１４Ｃを含む、任意の同位体形態であり得、Ｏは、１６Ｏ及び１８Ｏを含む、任意の同位体形態であり得る。
【０６６８】
本開示の化合物に組み込むことができる同位体の例には、限定はされないが、２Ｈ（重水素、Ｄ）、３Ｈ（三重水素）、１１Ｃ、１３Ｃ、１４Ｃ、１５Ｎ、１８Ｆ、３１Ｐ、３２Ｐ、３５Ｓ、３６Ｃｌ、及び１２５Ｉなどの、水素、炭素、窒素、酸素、リン、フッ素、及び塩素の同位体が含まれる。さまざまな同位体標識された本開示の化合物は、例えば、３Ｈ、１３Ｃ、及び１４Ｃなどの放射性同位体が組み込まれたものである。そのような同位体標識された化合物は、代謝試験、反応動力学的試験、薬物もしくは基質の組織分布アッセイ含む、ポジトロン断層撮影（ＰＥＴ）もしくは単一光子放射断層撮影（ＳＰＥＣＴ）などの検出手法もしくはイメージング手法、または患者の放射性治療において有用であり得る。重水素で標識または置換された本開示の治療化合物は、分布、代謝、及び排出（ＡＤＭＥ）に関して、改善されたＤＭＰＫ（薬物代謝及び薬物動態）特性を有し得る。重水素などの、重い同位体で置換することで、例えば、インビボでの半減期の増加または必要投与量の低減といった、代謝安定性の向上に起因するある特定の治療利点が生じ得る。１８Ｆで標識された化合物は、ＰＥＴ試験またはＳＰＥＣＴ試験に有用であり得る。同位体標識された本開示の化合物及びそのプロドラッグは、一般に、容易に利用可能な同位体標識試薬で同位体未標識試薬を置換し、後述のスキームまたは実施例及び調製において開示される手順を実施することによって調製できる。さらに、重い同位体、具体的には重水素（すなわち、２ＨまたはＤ）で置換することで、例えば、インビボでの半減期の増加または必要投与量の低減または治療指数の改善といった、代謝安定性の向上に起因するある特定の治療利点が生じ得る。この関連における重水素は、置換基とみなされると理解される。そのような重い同位体、具体的には重水素の濃度は、同位体濃縮係数によって定義してよい。本開示の化合物では、特定の同位体として具体的に指定されない原子はいずれも、その原子の任意の安定同位体に相当すると意図される。
【０６６９】
別段の記載がない限り、特定の化合物に対する参照は、そのような異性形態のすべてを含み、こうした異性形態には、その（完全または部分的）ラセミ混合物及び他の混合物が含まれる。そのような異性形態の調製方法（例えば、不斉合成）ならびに分離方法（例えば、分画結晶化及びクロマトグラフィー手段）は、当該技術分野において知られているか、または本明細書に教示される方法もしくは既知の方法を既知の様式において適応させることによって容易に得られる。
【０６７０】
生物学的活性
インビトロでの細胞増殖アッセイ
一般に、抗体−薬物複合体（ＡＤＣ）の細胞傷害活性または細胞分裂阻害活性は、細胞培養培地における、ＡＤＣの抗体に対する、受容体タンパク質を有する哺乳類細胞の曝露と、約６時間〜約５〜７日の期間の細胞の培養と、細胞生存率の測定と、によって測定される。細胞に基づくインビトロアッセイは、本開示のＡＤＣによる生存率（増殖）、細胞傷害性、及びアポトーシス誘導（カスパーゼ活性化）を測定するために使用される。
【０６７１】
抗体−薬物複合体のインビトロでの効力は、細胞増殖アッセイによって測定することができる。ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏ（登録商標）発光細胞生存率アッセイは、商業的に利用可能（Ｐｒｏｍｅｇａ  Ｃｏｒｐ．，Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩ）な均一性のアッセイ方法であり、甲虫目（Ｃｏｌｅｏｐｔｅｒａ）のルシフェラーゼの組換え発現に基づくものである（米国特許第５５８３０２４号、第５６７４７１３号、及び第５７００６７０号）。この細胞増殖アッセイは、存在するＡＴＰを代謝的に活性な細胞の指標として定量化することに基づいて、培養物における生存細胞数を決定するものである（Ｃｒｏｕｃｈ  ｅｔ  ａｌ（１９９３）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈ．１６０：８１−８８；ＵＳ６６０２６７７）。ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏ（登録商標）アッセイは、９６ウェル形式において実施されることから、自動化ハイスループットスクリーニング（ＨＴＳ）に適している（Ｃｒｅｅ  ｅｔ  ａｌ（１９９５）ＡｎｔｉＣａｎｃｅｒ  Ｄｒｕｇｓ  ６：３９８−４０４）。均一性のアッセイ手順は、血清添加培地において培養された細胞に単一試薬（ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏ（登録商標）試薬）を直接的に添加するというものである。細胞の洗浄、培地の除去、及び複数回のピペット操作という段階は不必要である。３８４ウェル形式では、試薬を添加及び混合してから１０分で、ウェル当たりの細胞がわずか１５個であってもシステムによって検出される。細胞は、ＡＤＣで連続的に処理してよく、または細胞を処理してからＡＤＣから分離してよい。一般に、短時間、すなわち３時間処理した細胞は、連続的に処理した細胞と同一の効力作用を示した。
【０６７２】
均一性の「添加−混合−測定」形式では、細胞が溶解し、存在するＡＴＰの量に比例して発光シグナルが生じる。ＡＴＰの量は、培養物に存在する細胞の数に直接的に比例する。ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏ（登録商標）アッセイでは、ルシフェラーゼ反応によって生成する「増殖型」の発光シグナルが生じ、このシグナルは、使用される細胞型及び培地に依存するものであり、その半減期は、一般に、５時間を超える。生存細胞は、相対発光単位（ＲＬＵ）に反映される。基質である甲虫ルシフェリン（Ｂｅｅｔｌｅ  Ｌｕｃｉｆｅｒｉｎ）は、組換えホタルルシフェラーゼによって酸化的に脱炭酸され、それと同時に、ＡＴＰからＡＭＰへの変換、及び光子発生が起こる。
【０６７３】
抗体−薬物複合体のインビトロでの効力は、細胞傷害性アッセイによっても測定することができる。培養した接着細胞に対し、ＰＢＳでの洗浄、トリプシンによる剥離、１０％ＦＣＳ含有完全培地での希釈、遠心分離、新鮮培地での再懸濁、及び血球計算盤を用いた計数を実施する。浮遊培養物の直接的な計数を実施する。計数に適した単分散細胞浮遊物とするには、吸引を繰り返し行うことによって浮遊物を撹拌して細胞の凝集塊を壊す必要があり得る。
【０６７４】
細胞浮遊物は、所望の播種密度まで希釈し、黒色９６ウェルプレートに分注（ウェル当たり１００μｌ）する。接着細胞株のプレートは、接着を生じさせるために一晩インキュベートする。浮遊細胞培養物は、播種した日に使用することができる。
ＡＤＣ（２０μｇ／ｍｌ）の保存溶液（１ｍｌ）は、適切な細胞培養培地で調製する。
１５ｍｌの遠心管において、１００μｌを９００μｌの細胞培養培地に連続的に移すことによって、保存ＡＤＣの１０倍の段階希釈系列を調製する。
予め細胞浮遊液（１００μｌ）を播種した９６ウェルの黒色プレートにＡＤＣ希釈液（１００μｌ）をそれぞれ分注して、最終体積を２００μｌとし、ウェルを４連にする。対照ウェルには、細胞培養培地（１００μｌ）を添加する。
細胞株の倍加時間が３０時間を超えるのであれば、ＡＤＣと共に５日間インキュベートし、そうでなければ、４日間のインキュベートを実施する。
インキュベート期間の終了時点で、細胞生存率をＡｌａｍａｒ  ｂｌｕｅアッセイで評価する。全プレートにＡｌａｍａｒＢｌｕｅ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を分注（ウェル当たり２０μｌ）し、４時間インキュベートする。励起波長を５７０ｎｍ、蛍光波長を５８５ｎｍとし、Ａｌａｍａｒ  ｂｌｕｅの蛍光をＶａｒｉｏｓｋａｎ  ｆｌａｓｈプレートリーダーで測定する。対称ウェルの平均蛍光と比較して、ＡＤＣ処理したウェルの平均蛍光から細胞生存率を計算する。
【０６７５】
使用
本開示の複合体は、ＰＢＤ化合物を標的位置に供給するために使用してよい。
【０６７６】
標的位置は、好ましくは、増殖性癌細胞の集団などの、増殖性細胞の集団である。他の標的位置には、静止癌細胞の集団などの、静止細胞の集団、または癌幹細胞の集団が含まれる。抗体は、増殖性細胞の集団に存在する抗原を標的とする抗体である。
【０６７７】
１つの実施形態では、抗原は、例えば、腫瘍細胞の集団といった増殖性細胞の集団に存在する抗原量と比較して、非増殖性細胞の集団では、存在しないか、または減少レベルで存在するものである。
【０６７８】
標的位置では、リンカーは、化合物ＲｅｌＡ、化合物ＲｅｌＢ、化合物ＲｅｌＣ、化合物ＲｅｌＤ、化合物ＲｅｌＥ、または化合物ＲｅｌＧが遊離するように切断され得る。したがって、複合体は、化合物ＲｅｌＡ、化合物ＲｅｌＢ、化合物ＲｅｌＣ、化合物ＲｅｌＤ、化合物ＲｅｌＥ、または化合物ＲｅｌＧを標的位置に選択的に供給するために使用してよい。
【０６７９】
リンカーは、標的位置に存在する酵素によって切断され得る。
【０６８０】
標的位置は、インビトロ、インビボ、またはエクスビボに存在し得る。
【０６８１】
本開示の抗体−薬物複合体（ＡＤＣ）化合物は、抗癌活性に有用なものを含む。具体的には、化合物は、複合化した抗体、すなわちリンカーによってＰＢＤ薬物部分、すなわち毒素に共有結合で結合した抗体を含む。薬物が抗体に複合化されていないとき、ＰＢＤ薬物は、細胞傷害性作用を有する。したがって、ＰＢＤ薬物部分の生物学的活性は、抗体への複合化によって調節される。本開示の抗体−薬物複合体（ＡＤＣ）は、腫瘍組織に有効用量の細胞傷害性薬剤を選択的に送達し、それによって、選択性の向上、すなわち有効量用の低減が達成され得る。
【０６８２】
したがって、１つの態様では、本開示は、治療における使用を目的とする、本明細書に記載の複合体化合物を提供する。
【０６８３】
さらなる態様では、増殖性疾患の治療における使用を目的とする、本明細書に記載の複合体化合物も提供される。本開示の第２の態様は、増殖性疾患の治療を目的とする薬剤の製造における複合体化合物の使用を提供する。
【０６８４】
任意の特定の細胞型の増殖性の病状を候補複合体が治療するかどうかを当業者であれば容易に決定することができる。例えば、特定の化合物によって得られる活性を評価するために好都合に使用し得るアッセイが、後述の実施例に記載される。
【０６８５】
「増殖性疾患」という用語は、インビトロまたはインビボを問わず、新生物性または過形成性の増殖などの、望まない過剰または異常な細胞の不必要または無制御の細胞増殖に関する。
【０６８６】
増殖性の病状の例には、限定はされないが、良性、前悪性、及び悪性の細胞増殖が含まれ、こうしたものには、限定はされないが、新生物及び腫瘍（例えば、組織球腫、神経膠腫、星状細胞腫、骨腫）、癌（例えば、肺癌、小細胞肺癌、胃腸癌、腸癌、結腸癌、乳癌、卵巣癌、前立腺癌、精巣癌、肝癌、腎癌、膀胱癌、膵癌、脳癌、肉腫、骨肉腫、カポジ肉腫、メラノーマ）、リンパ腫、白血病、乾癬、骨疾患、線維増殖性障害（例えば、結合組織のもの）、ならびに粥状動脈硬化が含まれる。特定の対象の癌には、限定はされないが、前立腺癌、白血病、及び卵巣癌が含まれる。
【０６８７】
任意の型の細胞を治療してよく、こうした細胞には、限定はされないが、肺、胃腸（例えば、腸、大腸が含まれる）、乳房（乳腺）、卵巣、前立腺、肝臓（ｌｉｖｅｒ）（肝臓（ｈｅｐａｔｉｃ））、腎臓（ｋｉｄｎｅｙ）（腎臓（ｒｅｎａｌ））、膀胱、膵臓、脳、及び皮膚のものが含まれる。
【０６８８】
特定の対象障害には、限定はされないが、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）、濾胞性リンパ腫（ＦＬ）、マントル細胞リンパ腫（ＭＣＬ）、慢性リンパ性リンパ腫（ｃｈｒｏｎｉｃ  ｌｙｍｐｈａｔｉｃ  ｌｙｍｐｈｏｍａ）（ＣＬＬ）含む非ホジキンリンパ腫、ならびにヘアリー細胞白血病（ＨＣＬ）、ヘアリー細胞白血病変異体（ＨＣＬ−ｖ）、及び急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）などの白血病が含まれる。
【０６８９】
本開示の抗体−薬物複合体（ＡＤＣ）は、例えば、腫瘍抗原の過剰発現によって特徴付けられるさまざまな疾患または障害の治療に使用してよいと企図される。病状または過剰増殖性障害の例には、良性腫瘍または悪性腫瘍、白血病、血液系腫瘍、及びリンパ系腫瘍が含まれる。他のものには、神経細胞、膠細胞、星状膠細胞、視床下部、腺性、マクロファージ、上皮性、間質性、胞胚腔、炎症性、血管新生性、及び自己免疫性を含む免疫性の障害が含まれる。
【０６９０】
一般に、治療されることになる疾患または障害は、癌などの過剰増殖性疾患である。本明細書では、治療されることになる癌の例には、限定はされないが、細胞腫、リンパ腫、芽細胞腫、肉腫、及び白血病またはリンパ系腫瘍が含まれる。そのような癌のより具体的な例には、扁平上皮癌（ｓｑｕａｍｏｕｓ  ｃｅｌｌ  ｃａｎｃｅｒ）（例えば、上皮性扁平上皮癌（ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ  ｓｑｕａｍｏｕｓ  ｃｅｌｌ  ｃａｎｃｅｒ））、小細胞肺癌、非小細胞肺癌、肺の腺癌、及び肺の扁平上皮癌を含む肺癌、腹膜の癌、肝細胞癌、胃腸癌を含む胃癌（ｇａｓｔｒｉｃ  ｃａｎｃｅｒ）または胃癌（ｓｔｏｍａｃｈ  ｃａｎｃｅｒ）、膵癌、神経膠芽腫、子宮頸癌、卵巣癌、肝癌（ｌｉｖｅｒ  ｃａｎｃｅｒ）、膀胱癌、肝細胞腫、乳癌、結腸癌、直腸癌、結腸直腸癌、子宮内膜癌または子宮癌、唾液腺癌、腎癌（ｋｉｄｎｅｙ  ｃａｎｃｅｒ）または腎癌（ｒｅｎａｌ  ｃａｎｃｅｒ）、前立腺癌、外陰癌、甲状腺癌、肝癌（ｈｅｐａｔｉｃ  ｃａｒｃｉｎｏｍａ）、肛門癌、陰茎癌、ならびに頭頸部癌が含まれる。
【０６９１】
治療においてＡＤＣ化合物を使用してよい自己免疫疾患には、リウマチ障害（例えば、関節リウマチ、シェーグレン症候群、強皮症、ＳＬＥ及びループス腎炎などのループス、多発性筋炎／皮膚筋炎、クリオグロブリン血症、抗リン脂質抗体症候群、及び乾癬性関節炎など）、変形性関節症、自己免疫性の胃腸障害及び肝臓障害（例えば、炎症性腸疾患（例えば、潰瘍性大腸炎及びクローン病）、自己免疫性の胃炎及び悪性貧血、自己免疫性の肝炎、原発性胆汁性肝硬変、原発性硬化性胆管炎、及びセリアック病など）、血管炎（例えば、チャーグ・ストラウス血管炎、ウェゲナー肉芽腫症、及び多発動脈炎を含むＡＮＣＡ関連血管炎など）、自己免疫性の神経障害（例えば、多発性硬化症、オプソクローヌス・ミオクローヌス症候群、重症筋無力症、視神経脊髄炎、パーキンソン病、アルツハイマー病、及び自己免疫性の多発ニューロパチーなど）、腎障害（例えば、糸球体腎炎、グッドパスチャー症候群、及びベルガー（Ｂｅｒｇｅｒ）病など）、自己免疫性の皮膚科学的障害（例えば、乾癬、蕁麻疹（ｕｒｔｉｃａｒｉａ）、蕁麻疹（ｈｉｖｅｓ）、尋常性天疱瘡、水疱性類天疱瘡、及び皮膚エリテマトーデスなど）、血液学的障害（例えば、血小板減少性紫斑病、血栓性血小板減少性紫斑病、輸血後紫斑病、及び自己免疫性の溶血性貧血など）、粥状動脈硬化、ぶどう膜炎、自己免疫性の聴覚疾患（例えば、内耳疾患及び難聴など）、ベーチェット病、レイノー病、臓器移植、ならびに自己免疫性の内分泌障害（例えば、インスリン依存性糖尿病（ＩＤＤＭ）などの糖尿病関連自己免疫疾患、アジソン病、及び自己免疫性の甲状腺疾患（例えば、グレーブス病及び甲状腺炎）など）が含まれる。そのような疾患でより好ましいものには、例えば、関節リウマチ、潰瘍性大腸炎、ＡＮＣＡ関連血管炎、ループス、多発性硬化症、シェーグレン症候群、グレーブス病、ＩＤＤＭ、悪性貧血、甲状腺炎、及び糸球体腎炎が含まれる。
【０６９２】
治療方法
本開示の複合体は、治療方法において使用してよい。治療方法も提供され、当該方法は、治療上有効な量の本開示の複合体化合物の、治療を必要とする対象への投与を含む。「治療上有効な量」という用語は、患者に対する利益供与に十分な量である。そのような利益は、少なくとも１つの症状が多少なりとも寛解することであり得る。実際の投与量、ならび投与の速度及び過程は、治療されているものの性質及び重症度に依存することになる。例えば、投与量の決定といった、治療の処方は、一般医及び他の医師の責任の範囲内である。
【０６９３】
本開示の化合物は、治療されることになる病状に応じて同時または逐次的のいずれかで、単独または他の治療と組み合わせて投与してよい。治療（ｔｒｅａｔｍｅｎｔ）または治療（ｔｈｅｒａｐｙ）の例には、限定はされないが、化学療法（例えば、化学療法剤などの薬剤を含む活性薬剤の投与）、手術、及び放射線療法が含まれる。
【０６９４】
「化学療法剤」は、作用機構を問わず、癌治療において有用な化学的化合物である。化学療法剤のクラスには、限定はされないが、アルキル化剤、代謝拮抗剤、紡錘体毒である植物性アルカロイド、細胞傷害性／抗腫瘍性抗生物質、トポイソメラーゼ阻害剤、抗体、光感受性物質（ｐｈｏｔｏｓｅｎｓｉｔｉｚｅｒ）、及びキナーゼ阻害剤が含まれる。化学療法剤には、「標的化治療」及び通常の化学療法において使用される化合物が含まれる。
【０６９５】
化学療法剤の例には、エルロチニブ（ＴＡＲＣＥＶＡ（登録商標）、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ／ＯＳＩ  Ｐｈａｒｍ．）、ドセタキセル（ＴＡＸＯＴＥＲＥ（登録商標）、Ｓａｎｏｆｉ−Ａｖｅｎｔｉｓ）、５−ＦＵ（フルオロウラシル、５−フルオロウラシル、ＣＡＳ番号５１−２１−８）、ゲムシタビン（ＧＥＭＺＡＲ（登録商標）、Ｌｉｌｌｙ）、ＰＤ−０３２５９０１（ＣＡＳ番号３９１２１０−１０−９、Ｐｆｉｚｅｒ）、シスプラチン（シス−ジアミンジクロロジクロロ白金（ＩＩ）、ＣＡＳ番号１５６６３−２７−１）、カルボプラチン（ＣＡＳ番号４１５７５−９４−４）、パクリタキセル（ＴＡＸＯＬ（登録商標）、Ｂｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ  Ｓｑｕｉｂｂ  Ｏｎｃｏｌｏｇｙ，Ｐｒｉｎｃｅｔｏｎ，Ｎ．Ｊ．）、トラスツズマブ（ＨＥＲＣＥＰＴＩＮ（登録商標）、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ）、テモゾロミド（４−メチル−５−オキソ−２，３，４，６，８−ペンタアザビシクロ［４．３．０］ノナ−２，７，９−トリエン−９−カルボキサミド、ＣＡＳ番号８５６２２−９３−１、ＴＥＭＯＤＡＲ（登録商標）、ＴＥＭＯＤＡＬ（登録商標）、Ｓｃｈｅｒｉｎｇ  Ｐｌｏｕｇｈ）、タモキシフェン（（Ｚ）−２−［４−（１，２−ジフェニルブタ−１−エニル）フェノキシ］−Ｎ，Ｎ−ジメチルエタンアミン、ＮＯＬＶＡＤＥＸ（登録商標）、ＩＳＴＵＢＡＬ（登録商標）、ＶＡＬＯＤＥＸ（登録商標））、ならびにドキソルビシン（ＡＤＲＩＡＭＹＣＩＮ（登録商標））、Ａｋｔｉ−１／２、ＨＰＰＤ、及びラパマイシンが含まれる。
化学療法剤の追加の例には、オキサリプラチン（ＥＬＯＸＡＴＩＮ（登録商標）、Ｓａｎｏｆｉ）、ボルテゾミブ（ＶＥＬＣＡＤＥ（登録商標）、Ｍｉｌｌｅｎｎｉｕｍ  Ｐｈａｒｍ．）、スーテント（ｓｕｔｅｎｔ）（ＳＵＮＩＴＩＮＩＢ（登録商標）、ＳＵ１１２４８、Ｐｆｉｚｅｒ）、レトロゾール（ＦＥＭＡＲＡ（登録商標）、Ｎｏｖａｒｔｉｓ）、メシル酸イマチニブ（ＧＬＥＥＶＥＣ（登録商標）、Ｎｏｖａｒｔｉｓ）、ＸＬ−５１８（Ｍｅｋ阻害剤、Ｅｘｅｌｉｘｉｓ、ＷＯ２００７／０４４５１５）、ＡＲＲＹ−８８６（Ｍｅｋ阻害剤、ＡＺＤ６２４４、Ａｒｒａｙ  ＢｉｏＰｈａｒｍａ、Ａｓｔｒａ  Ｚｅｎｅｃａ）、ＳＦ−１１２６（ＰＩ３Ｋ阻害剤、Ｓｅｍａｆｏｒｅ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）、ＢＥＺ−２３５（ＰＩ３Ｋ阻害剤、Ｎｏｖａｒｔｉｓ）、ＸＬ−１４７（ＰＩ３Ｋ阻害剤、Ｅｘｅｌｉｘｉｓ）、ＰＴＫ７８７／ＺＫ  ２２２５８４（Ｎｏｖａｒｔｉｓ）、フルベストラント（ＦＡＳＬＯＤＥＸ（登録商標）、ＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａ）、ロイコボリン（フォリン酸）、ラパマイシン（シロリムス、ＲＡＰＡＭＵＮＥ（登録商標）、Ｗｙｅｔｈ）、ラパチニブ（ＴＹＫＥＲＢ（登録商標）、ＧＳＫ５７２０１６、Ｇｌａｘｏ  Ｓｍｉｔｈ  Ｋｌｉｎｅ）、ロナファーニブ（ＳＡＲＡＳＡＲ（商標）、ＳＣＨ６６３３６、Ｓｃｈｅｒｉｎｇ  Ｐｌｏｕｇｈ）、ソラフェニブ（ＮＥＸＡＶＡＲ（登録商標）、ＢＡＹ４３−９００６、Ｂａｙｅｒ  Ｌａｂｓ）、ゲフィチニブ（ＩＲＥＳＳＡ（登録商標）、ＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａ）、イリノテカン（ＣＡＭＰＴＯＳＡＲ（登録商標）、ＣＰＴ−１１、Ｐｆｉｚｅｒ）、ティピファニブ（ＺＡＲＮＥＳＴＲＡ（商標）、Ｊｏｈｎｓｏｎ  ＆  Ｊｏｈｎｓｏｎ）、ＡＢＲＡＸＡＮＥ（商標）（Ｃｒｅｍｏｐｈｏｒ非含有）、パクリタキセルのアルブミン結合ナノ粒子製剤（Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｐａｒｔｎｅｒｓ，Ｓｃｈａｕｍｂｅｒｇ，ＩＩ）、バンデタニブ（ｒＩＮＮ、ＺＤ６４７４、ＺＡＣＴＩＭＡ（登録商標）、ＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａ）、クロラムブシル（ｃｈｌｏｒａｎｍｂｕｃｉｌ）、ＡＧ１４７８、ＡＧ１５７１（ＳＵ５２７１；Ｓｕｇｅｎ）、テムシロリムス（ＴＯＲＩＳＥＬ（登録商標）、Ｗｙｅｔｈ）、パゾパニブ（ＧｌａｘｏＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅ）、カンホスファミド（ＴＥＬＣＹＴＡ（登録商標）、Ｔｅｌｉｋ）、チオテパ、及びシクロスホスファミド（ｃｙｃｌｏｓｐｈｏｓｐｈａｍｉｄｅ）（ＣＹＴＯＸＡＮ（登録商標）、ＮＥＯＳＡＲ（登録商標））；ブスルファン、インプロスルファン、及びピポスルファンなどのアルキルスルホネート；ベンゾドーパ（ｂｅｎｚｏｄｏｐａ）、カルボコン、メツレドーパ（ｍｅｔｕｒｅｄｏｐａ）、及びウレドーパ（ｕｒｅｄｏｐａ）などのアジリジン；アルトレタミン、トリエチレンメラミン、トリエチレンホスホラミド、トリエチレンチオホスホラミド、及びトリメチロメラミンを含むエチレンイミン及びメチルアメラミン（ｍｅｔｈｙｌａｍｅｌａｍｉｎｅ）；アセトゲニン（特に、ブラタシン及びブラタシノン）；カンプトテシン（合成類似体のトポテカンを含む）；ブリオスタチン；カリスタチン（ｃａｌｌｙｓｔａｔｉｎ）；ＣＣ−１���６５（そのアドゼレシン合成類似体、カルゼレシン（ｃａｒｚｅｌｅｓｉｎ）合成類似体、及びビセレシン合成類似体を含む）；クリプトフィシン（具体的には、クリプトフィシン１及びクリプトフィシン８）；ドラスタチン；デュオカルマイシン（合成類似体であるＫＷ−２１８９及びＣＢ１−ＴＭ１を含む）；エリュテロビン；パンクラチスタチン（ｐａｎｃｒａｔｉｓｔａｔｉｎ）；サルコジクチン（ｓａｒｃｏｄｉｃｔｙｉｎ）；スポンジスタチン（ｓｐｏｎｇｉｓｔａｔｉｎ）；クロラムブシル、クロルナファジン、クロロホスファミド（ｃｈｌｏｒｏｐｈｏｓｐｈａｍｉｄｅ）、エストラムスチン、イホスファミド、メクロレタミン、メクロレタミンオキシド塩酸塩、メルファラン、ノベンビキン（ｎｏｖｅｍｂｉｃｈｉｎ）、フェネステリン（ｐｈｅｎｅｓｔｅｒｉｎｅ）、プレドニムスチン、トロホスファミド、ウラシルマスタードなどのナイトロジェンマスタード；カルムスチン、クロロゾトシン、ホテムスチン、ロムスチン、ニムスチン、及びラニムヌスチン（ｒａｎｉｍｎｕｓｔｉｎｅ）などのニトロソウレア；エンジイン抗生物質（例えば、カリチアマイシン、カリチアマイシンガンマ１Ｉ、カリチアマイシンオメガＩ１（Ａｎｇｅｗ  Ｃｈｅｍ．Ｉｎｔｌ．Ｅｄ．Ｅｎｇｌ．（１９９４）３３：１８３−１８６）などの抗生物質；ジネマイシン、ジネマイシンＡ；クロドロネートなどのビスホスホネート；エスペラミシン；ならびにネオカルチノスタチン発色団及び関連色素タンパク質のエンジイン抗生物質発色団）、アクラシノマイシン（ａｃｌａｃｉｎｏｍｙｓｉｎ）、アクチノマイシン、オウトラマイシン（ａｕｔｈｒａｍｙｃｉｎ）、アザセリン、ブレオマイシン、カクチノマイシン、カラビシン、カルミノマイシン、カルジノフィリン（ｃａｒｚｉｎｏｐｈｉｌｉｎ）、クロモミシニス（ｃｈｒｏｍｏｍｙｃｉｎｉｓ）、ダクチノマイシン、ダウノルビシン、デトルビシン（ｄｅｔｏｒｕｂｉｃｉｎ）、６−ジアゾ−５−オキソ−Ｌ−ノルロイシン、モルホリノ−ドキソルビシン、シアノモルホリノ−ドキソルビシン、２−ピロリノ−ドキソルビシン、及びデオキシドキソルビシン）、エピルビシン、エソルビシン（ｅｓｏｒｕｂｉｃｉｎ）、イダルビシン、ネモルビシン（ｎｅｍｏｒｕｂｉｃｉｎ）、マルセロマイシン（ｍａｒｃｅｌｌｏｍｙｃｉｎ）、マイトマイシンＣなどのマイトマイシン、ミコフェノール酸、ノガラマイシン、オリボマイシン、ペプロマイシン、ポルフィロマイシン、ピューロマイシン、クエラマイシン（ｑｕｅｌａｍｙｃｉｎ）、ロドルビシン（ｒｏｄｏｒｕｂｉｃｉｎ）、ストレプトニグリン、ストレプトゾシン、ツベルシジン、ウベニメクス、ジノスタチン、ゾルビシン；メトトレキサート及び５−フルオロウラシル（５−ＦＵ）などの代謝拮抗剤；デノプテリン、メトトレキサート、プテロプテリン（ｐｔｅｒｏｐｔｅｒｉｎ）、トリメトレキサートなどの葉酸類似体；フルダラビン、６−メルカプトプリン、チアミプリン、チオグアニンなどのプリン類似体；アンシタビン、アザシチジン、６−アザウリジン、カルモフール、シタラビン、ジデオキシウリジン、ドキシフルリジン、エノシタビン、フロクスウリジンなどのピリミジン類似体；カルステロン��プロピオン酸ドロモスタノロン、エピチオスタノール、メピチオスタン、テストラクトンなどのアンドロゲン；アミノグルテチミド、ミトタン、トリロスタンなどの抗副腎剤（ａｎｔｉ−ａｄｒｅｎａｌ）；フロリン酸（ｆｒｏｌｉｎｉｃ  ａｃｉｄ）などの葉酸補充剤；アセグラトン；アルドホスファミドグリコシド（ａｌｄｏｐｈｏｓｐｈａｍｉｄｅ  ｇｌｙｃｏｓｉｄｅ）；アミノレブリン酸；エニルウラシル；アムサクリン；ベストラブシル（ｂｅｓｔｒａｂｕｃｉｌ）；ビサントレン（ｂｉｓａｎｔｒｅｎｅ）；エダトラキセート（ｅｄａｔｒａｘａｔｅ）；デホファミン（ｄｅｆｏｆａｍｉｎｅ）；デメコルチン；ジアジクオン；エルホルニチン；酢酸エリプチニウム；エポチロン；エトグルシド；硝酸ガリウム；ヒドロキシ尿素；レンチナン；ロニダイニン（ｌｏｎｉｄａｉｎｉｎｅ）；マイタンシン及びアンサミトシン（ａｎｓａｍｉｔｏｃｉｎ）などのマイタンシノイド；ミトグアゾン；ミトキサントロン；モピダンモール（ｍｏｐｉｄａｎｍｏｌ）；ニトラエリン（ｎｉｔｒａｅｒｉｎｅ）；ペントスタチン；フェナメット（ｐｈｅｎａｍｅｔ）；ピラルビシン；ロソキサントロン（ｌｏｓｏｘａｎｔｒｏｎｅ）；ポドフィリン酸；２−エチルヒドラジド；プロカルバジン；ＰＳＫ（登録商標）多糖複合体（ＪＨＳ  Ｎａｔｕｒａｌ  Ｐｒｏｄｕｃｔｓ，Ｅｕｇｅｎｅ，ＯＲ）；ラゾキサン；リゾキシン；シゾフィラン；スピロゲルマニウム；テヌアゾン酸；トリアジコン；２，２’，２”−トリクロロトリエチルアミン；トリコテシン（特に、Ｔ−２毒素、ベルラクリンＡ（ｖｅｒｒａｃｕｒｉｎ  Ａ）、ロリジンＡ（ｒｏｒｉｄｉｎ  Ａ）、及びアングイジン（ａｎｇｕｉｄｉｎｅ））；ウレタン；ビンデシン；ダカルバジン；マンノムスチン；ミトブロニトール；ミトラクトール；ピポブロマン；ガシトシン；アラビノシド（「Ａｒａ−Ｃ」）；シクロホスファミド；チオテパ；６−チオグアニン；メルカプトプリン；メトトレキサート；シスプラチン及びカルボプラチンなどの白金類似体；ビンブラスチン；エトポシド（ＶＰ−１６）；イホスファミド；ミトキサントロン；ビンクリスチン；ビノレルビン（ＮＡＶＥＬＢＩＮＥ（登録商標））；ノバントロン；テニポシド；エダトレキセート；ダウノマイシン；アミノプテリン；カペシタビン（ＸＥＬＯＤＡ（登録商標）、Ｒｏｃｈｅ）；イバンドロネート；ＣＰＴ−１１；トポイソメラーゼ阻害剤であるＲＦＳ２０００；ジフルオロメチルオルニチン（ＤＭＦＯ）；レチノイン酸などのレチノイド；ならびに上記のいずれかの医薬的に許容可能な塩、酸、及び誘導体が含まれる。
【０６９６】
「化学療法剤」の定義には、（ｉ）例えば、タモキシフェン（ＮＯＬＶＡＤＥＸ（登録商標）；クエン酸タモキシフェンを含む）、ラロキシフェン、ドロロキシフェン、４−ヒドロキシタモキシフェン、トリオキシフェン、ケオキシフェン、ＬＹ１１７０１８、オナプリストン（ｏｎａｐｒｉｓｔｏｎｅ）、及びＦＡＲＥＳＴＯＮ（登録商標）（クエン酸トレミフィン（ｔｏｒｅｍｉｆｉｎｅ  ｃｉｔｒａｔｅ））を含む、抗エストロゲン物質及び選択的エストロゲン受容体モジュレーター（ＳＥＲＭ）などの、腫瘍に対するホルモン作用の制御または阻害に働く抗ホルモン剤；（ｉｉ）例えば、４（５）−イミダゾール、アミノグルテチミド、ＭＥＧＡＳＥ（登録商標）（酢酸メゲストロール）、ＡＲＯＭＡＳＩＮ（登録商標）（エキセメスタン；Ｐｆｉｚｅｒ）、ホルメスタニエ（ｆｏｒｍｅｓｔａｎｉｅ）、ファドロゾール、ＲＩＶＩＳＯＲ（登録商標）（ボロゾール）、ＦＥＭＡＲＡ（登録商標）（レトロゾール；Ｎｏｖａｒｔｉｓ）、及びＡＲＩＭＩＤＥＸ（登録商標）（アナストロゾール；ＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａ）などの、副腎におけるエストロゲン産生を制御する酵素であるアロマターゼを阻害するアロマターゼ阻害剤；（ｉｉｉ）フルタミド、ニルタミド、ビカルタミド、リュープロリド、及びゴセレリンなどの抗アンドロゲン剤；ならびにトロキサシタビン（１，３−ジオキソランヌクレオシドシトシン類似体）；（ｉｖ）ＭＥＫ阻害剤（ＷＯ２００７／０４４５１５）などのタンパク質キナーゼ阻害剤；（ｖ）脂質キナーゼ阻害剤；（ｖｉ）アンチセンスオリゴヌクレオチド、具体的には、例えば、オブリメルセン（ＧＥＮＡＳＥＮＳＥ（登録商標）、Ｇｅｎｔａ  Ｉｎｃ．）などのＰＫＣ−アルファ、Ｒａｆ、及びＨ−Ｒａｓといった、異常な細胞増殖と関連付けられるシグナル伝達経路における遺伝子の発現を阻害するもの；（ｖｉｉ）ＶＥＧＦの発現阻害剤（例えば、ＡＮＧＩＯＺＹＭＥ（登録商標））などのリボザイム；（ｖｉｉｉ）例えば、ＡＬＬＯＶＥＣＴＩＮ（登録商標）、ＬＥＵＶＥＣＴＩＮ（登録商標）、及びＶＡＸＩＤ（登録商標）といった遺伝子治療ワクチンなどのワクチン；ＰＲＯＬＥＵＫＩＮ（登録商標）ｒＩＬ−２；ＬＵＲＴＯＴＥＣＡＮ（登録商標）などのトポイソメラーゼ１阻害剤；ＡＢＡＲＥＬＩＸ（登録商標）ｒｍＲＨ；（ｉｘ）ベバシズマブ（ＡＶＡＳＴＩＮ（登録商標）、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ）などの抗血管新生剤；ならびに上記のいずれかの医薬的に許容可能な塩、酸、及び誘導体も含まれる。
【０６９７】
「化学療法剤」の定義には、アレムツズマブ（Ｃａｍｐａｔｈ）、ベバシズマブ（ＡＶＡＳＴＩＮ（登録商標）、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ）；セツキシマブ（ＥＲＢＩＴＵＸ（登録商標）、Ｉｍｃｌｏｎｅ）；パニツムマブ（ＶＥＣＴＩＢＩＸ（登録商標）、Ａｍｇｅｎ）、リツキシマブ（ＲＩＴＵＸＡＮ（登録商標）、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ／Ｂｉｏｇｅｎ  Ｉｄｅｃ）、オファツムマブ（ＡＲＺＥＲＲＡ（登録商標）、ＧＳＫ）、ペルツズマブ（ＰＥＲＪＥＴＡ（商標）、ＯＭＮＩＴＡＲＧ（商標）、２Ｃ４、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ）、トラスツズマブ（ＨＥＲＣＥＰＴＩＮ（登録商標）、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ）、トシツモマブ（Ｂｅｘｘａｒ、Ｃｏｒｉｘｉａ）などの治療抗体、及び抗体薬物複合体であるゲムツズマブ・オゾガマイシン（ＭＹＬＯＴＡＲＧ（登録商標）、Ｗｙｅｔｈ）が含まれる。
【０６９８】
本開示の複合体と組み合わせる化学療法剤としての治療可能性を有するヒト化モノクローナル抗体には、アレムツズマブ、アポリズマブ、アセリズマブ（ａｓｅｌｉｚｕｍａｂ）、アトリズマブ、バピネオズマブ、ベバシズマブ、ビバツズマブ・メルタンシン（ｂｉｖａｔｕｚｕｍａｂ  ｍｅｒｔａｎｓｉｎｅ）、カンツズマブ・メルタンシン、セデリズマブ（ｃｅｄｅｌｉｚｕｍａｂ）、セルトリズマブペゴル、シドフシツズマブ（ｃｉｄｆｕｓｉｔｕｚｕｍａｂ）、シドツズマブ（ｃｉｄｔｕｚｕｍａｂ）、ダクリズマブ、エクリズマブ、エファリズマブ、エプラツズマブ、エルリズマブ（ｅｒｌｉｚｕｍａｂ）、フェルビズマブ（ｆｅｌｖｉｚｕｍａｂ）、フォントリズマブ、ゲムツズマブ・オゾガマイシン、イノツズマブ・オゾガマイシン、イピリムマブ、ラベツズマブ、リンツズマブ、マツズマブ、メポリズマブ、モタビズマブ、モトビズマブ、ナタリズマブ、ニモツズマブ、ノロビズマブ（ｎｏｌｏｖｉｚｕｍａｂ）、ヌマビズマブ（ｎｕｍａｖｉｚｕｍａｂ）、オクレリズマブ、オマリズマブ、パリビズマブ、パソコリズマブ（ｐａｓｃｏｌｉｚｕｍａｂ）、ペクフシツズマブ（ｐｅｃｆｕｓｉｔｕｚｕｍａｂ）、ペクツズマブ（ｐｅｃｔｕｚｕｍａｂ）、ペルツズマブ、パキセリズマブ、ラリビズマブ（ｒａｌｉｖｉｚｕｍａｂ）、ラニビズマブ、レスリビズマブ（ｒｅｓｌｉｖｉｚｕｍａｂ）、レスリズマブ、レシビズマブ（ｒｅｓｙｖｉｚｕｍａｂ）、ロベリズマブ（ｒｏｖｅｌｉｚｕｍａｂ）、ルプリズマブ（ｒｕｐｌｉｚｕｍａｂ）、シブロツズマブ（ｓｉｂｒｏｔｕｚｕｍａｂ）、シプリズマブ、ソンツズマブ（ｓｏｎｔｕｚｕｍａｂ）、タカツズマブテトラキセタン（ｔａｃａｔｕｚｕｍａｂ  ｔｅｔｒａｘｅｔａｎ）、タドシズマブ（ｔａｄｏｃｉｚｕｍａｂ）、タリズマブ、テフィバズマブ（ｔｅｆｉｂａｚｕｍａｂ）、トシリズマブ、トラリズマブ（ｔｏｒａｌｉｚｕｍａｂ）、トラスツズマブ、ツコツズマブ・セルモロイキン（ｔｕｃｏｔｕｚｕｍａｂ  ｃｅｌｍｏｌｅｕｋｉｎ）、ツクシツズマブ（ｔｕｃｕｓｉｔｕｚｕｍａｂ）、ウマビズマブ（ｕｍａｖｉｚｕｍａｂ）、ウルトキサズマブ（ｕｒｔｏｘａｚｕｍａｂ）、及びビジリズマブが含まれる。
【０６９９】
本開示による医薬組成物、及び本開示に従って使用するための医薬組成物は、活性成分、すなわち複合体化合物に加えて、医薬的に許容可能な賦形剤、担体、緩衝剤、安定剤、または当業者に知られる他の材料を含み得る。そのような材料は、非毒性であるべきであり、活性成分の有効性を妨害しないものであるべきである。担体または他の材料の正確な性質は、投与経路に依存することになり、こうした投与経路は、経口、または例えば、皮膚、皮下、もしくは静脈内へのものといった、注射によるものであり得る。
【０７００】
経口投与を目的とする医薬組成物は、錠剤、カプセル、粉末、または液体の形態であり得る。錠剤は、固体の担体または補助剤を含み得る。液体医薬組成物は、一般に、水、石油、動物油もしくは植物油、鉱物油、または合成油などの液体担体を含む。生理食塩水、デキストロースもしくは他の糖類の溶液、またはエチレングリコール、プロピレングリコール、もしくはポリエチレングリコールなどのグリコールが含まれ得る。カプセルは、ゼラチンなどの固体担体を含み得る。
【０７０１】
静脈内、皮膚、もしくは皮下への注射、または苦痛部位へ注射については、活性成分は、発熱物質を含まず、適したｐＨ、等張性、及び安定性を有する、非経口的に許容可能な水性溶液の形態をとることになる。当業者であれば、例えば、塩化ナトリウム注射液、リンゲル注射液、乳酸リンゲル注射液などの等張性媒体を使用して、適した溶液を調製する能力を十分に有する。必要に応じて、保存剤、安定剤、緩衝剤、抗酸化剤、及び／または他の添加剤を含み得る。
【０７０２】
製剤
複合体化合物を単独で使用（例えば、投与）することは可能である一方で、複合体化合物は、組成物または製剤とすることが好ましいことが多い。
【０７０３】
１つの実施形態では、組成物は、本明細書に記載の複合体化合物、及び医薬的に許容可能な担体、希釈剤、または賦形剤を含む医薬組成物（例えば、製剤、調製物、薬剤）である。
【０７０４】
１つの実施形態では、組成物は、当業者によく知られる他の医薬的に許容可能な成分の１つまたは複数と共に、本明細書に記載の複合体化合物を少なくとも１つ含む医薬組成物である。こうした他の医薬的に許容可能な成分には、限定はされないが、医薬的に許容可能な担体、希釈剤、賦形剤、補助剤、増量剤、緩衝剤、保存剤、抗酸化剤、潤滑剤、安定剤、可溶化剤、界面活性剤（例えば、湿潤剤）、マスキング剤、着色剤、香味剤、及び甘味剤が含まれる。
【０７０５】
１つの実施形態では、組成物は、例えば、他の治療薬剤または予防薬剤といった、他の活性薬剤をさらに含む。
【０７０６】
適した担体、希釈剤、賦形剤などは、標準的な医薬の教科書において見つけることができる。例えば、Ｈａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ａｄｄｉｔｉｖｅｓ，２ｎｄ  Ｅｄｉｔｉｏｎ（ｅｄｓ．Ｍ．Ａｓｈ  ａｎｄ  Ｉ．Ａｓｈ），２００１（Ｓｙｎａｐｓｅ  Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ  Ｒｅｓｏｕｒｃｅｓ，Ｉｎｃ．，Ｅｎｄｉｃｏｔｔ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，ＵＳＡ）、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，２０ｔｈ  ｅｄｉｔｉｏｎ，ｐｕｂ．Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ，Ｗｉｌｌｉａｍｓ  ＆  Ｗｉｌｋｉｎｓ，２０００；及びＨａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｅｘｃｉｐｉｅｎｔｓ，２ｎｄ  ｅｄｉｔｉｏｎ，１９９４を参照のこと。
【０７０７】
本開示の別の態様は、医薬組成物の調製方法に関し、当該調製方法は、［１１Ｃ］で放射標識された、本明細書に記載の複合体または複合体様化合物の少なくとも１つと、例えば、担体、希釈剤、賦形剤などの、当業者によく知られる他の医薬的に許容可能な成分の１つまたは複数との混合を含む。別々の単位（例えば、錠剤など）として製剤化されるのであれば、それぞれの単位が所定量（投与量）の活性化合物を含む。
【０７０８】
本明細書では、「医薬的に許容可能な」という用語は、合理的な利益／危険比に見合い、過剰な毒性、刺激作用、アレルギー応答、または他の問題もしくは合併症を伴うことなく、健全な医学的判断の範囲内で、問題の対象（例えば、ヒト）の組織との接触使用に適した化合物、成分、材料、組成物、投与量形態などに関する。担体、希釈剤、賦形剤などはそれぞれ、製剤の他の成分との適合性を有するという意味においても、「許容可能」でなくてはならない。
【０７０９】
製剤は、薬学分野においてよく知られる任意の方法によって調製してよい。そのような方法は、活性化合物と、１つまたは複数の付属成分を構成する担体と、を結びつける段階を含む。一般に、製剤は、活性化合物と、担体（例えば、液体担体、精密に分割された固体担体など）と、を均一かつ密接に結びつけた後、必要であれば、産物を成形することによって調製される。
【０７１０】
製剤は、迅速放出もしくは徐放；即時放出、遅延放出、時限放出、もしくは持続放出；またはそれらの組み合わせを提供するために調製してよい。
【０７１１】
非経口投与（例えば、注射によるもの）に適した製剤には、水性または非水性で、等張性であり、発熱物質を含まない無菌の液体（例えば、溶液、懸濁液）であり、その中に、化合物が溶解、懸濁、またはそうでなければ供給されているもの（例えば、リポソームまたは他の微粒子において）が含まれる。そのような液体は、抗酸化剤、緩衝剤、保存剤、安定剤、静菌剤、懸濁剤、増粘剤、及び製剤と、意図するレシピエントの血液（または他の関連体液）との浸透圧を等しくする溶質などの、他の医薬的に許容可能な成分を追加で含んでよい。賦形剤の例には、例えば、水、アルコール、ポリオール、グリセロール、植物油、などが含まれる。そのような製剤における使用に適した等張性担体の例には、塩化ナトリウム注射液、リンゲル液、または乳酸リンゲル注射液が含まれる。典型的には、液体における活性成分の濃度は、約１ｎｇ／ｍｌ〜約１０μｇ／ｍｌであり、例えば、約１０ｎｇ／ｍｌ〜約１μｇ／ｍｌである。製剤は、例えば、アンプル及びバイアルといった、単位用量または複数用量を含む密封容器において存在してよく、使用直前に、例えば、注射用水といった無菌液体担体の添加のみが必要な凍結乾燥（ｆｒｅｅｚｅ−ｄｒｉｅｄ）（凍結乾燥（ｌｙｏｐｈｉｌｉｓｅｄ））状態で保存してよい。即時注射用の溶液及び懸濁液は、無菌の粉末、顆粒、及び錠剤から調製してよい。
【０７１２】
投与量
複合体化合物、及び複合体化合物を含む組成物の適切な投与量は、患者ごとに変わり得ることを、当業者であれば理解するであろう。最適な投与量の決定には、一般に、任意の危険または有害な副作用に対する治療利益レベルのバランスを保つことが必要となる。選択される投与量レベルは、限定はされないが、特定の化合物の活性、投与経路、投与時期、化合物の排出速度、治療期間、組み合わせて使用される他の薬物、化合物、及び／または材料、病状の重症度、ならびに患者の種、性別、年齢、体重、病状、総体的な健康、及び既往歴を含む、さまざまな因子に依存することになる。一般に、投与量は、実質的に有害（ｈａｒｍｆｕｌ）または有害（ｄｅｌｅｔｅｒｉｏｕｓ）な副作用を誘起することなく、所望の作用が達成される局所濃度が作用部位で達成されるように選択されることになるものの、化合物の量、及び投与経路は、最終的には、医師、獣医、または臨床医の裁量に委ねられることになる。
【０７１３】
投与は、１つの用量で、継続的または断続的に（例えば、適切な間隔をとる分割用量で）治療過程全体を通して有効であり得る。最も有効な投与手段及び投与量の決定方法は、当業者によく知られており、治療に使用される製剤、治療の目的、治療中の標的細胞（複数可）、及び治療中の対象に応じて変わることになる。治療を行う医師、獣医、または臨床医が選択する用量のレベル及びパターンを用いて、単回または複数回の投与を実施することができる。
【０７１４】
一般に、活性化合物の適した用量範囲は、１日当たり、対象の体重キログラム当たり約１００ｎｇ〜約２５ｍｇ（より典型的には、約１μｇ〜約１０ｍｇ）である。活性化合物が、塩、エステル、アミド、プロドラッグなどである場合、投与量は、親化合物に基づいて計算されるため、使用されることになる実際の重量は、比例して増加する。
【０７１５】
１つの実施形態では、活性化合物は、下記の投与量レジメンに従ってヒト患者に投与される：約１００ｍｇを１日に３回。
【０７１６】
１つの実施形態では、活性化合物は、下記の投与量レジメンに従ってヒト患者に投与される：約１５０ｍｇを１日に２回。
【０７１７】
１つの実施形態では、活性化合物は、下記の投与量レジメンに従ってヒト患者に投与される：約２００ｍｇを１日に２回。
【０７１８】
しかしながら、１つの実施形態では、複合体化合物は、下記の投与量レジメンに従ってヒト患者に投与される：約５０ｍｇまたは約７５ｍｇを１日に３回または４回。
【０７１９】
１つの実施形態では、複合体化合物は、下記の投与量レジメンに従ってヒト患者に投与される：約１００ｍｇまたは約１２５ｍｇを１日に２回。
【０７２０】
上記の投与量は、複合体（ＰＢＤ部分と、抗体へのリンカーとを含む）に適用され得るか、または例えば、リンカーの切断後に遊離可能な化合物の量といった、提供されるＰＢＤ化合物の有効量に適用され得る。
【０７２１】
疾患の予防または治療については、本開示のＡＤＣの適切な投与量は、分子の投与目的が予防であるか、または治療であるかを問わず、治療されることになる上に定義される疾患の型、疾患の重症度及び過程、治療歴、患者の既往歴及び抗体に対する応答、ならびに担当医の裁量に依存することになる。分子は、１回または一連の治療にわたって患者に適切に投与される。疾患の型及び重症度に応じて、例えば、１回の投与もしくは複数回の別々の投与よるものであるか、または連続注入によるものであるかを問わず、約１μｇ／ｋｇ〜１５ｍｇ／ｋｇ（例えば、０．１〜２０ｍｇ／ｋｇ）の分子が、患者に対する投与のための最初の候補投与量である。典型的な１日の投与量は、前述の因子に応じて、約１μｇ／ｋｇ〜１００ｍｇ／ｋｇの範囲であるか、またはそれより多い可能性がある。患者に投与されることになるＡＤＣの投与量の例は、患者の体重ｋｇ当たり約０．１〜約１０ｍｇの範囲内である。数日またはそれより長期にわたる反復投与については、病状に応じて、疾患症状に所望の抑制が生じるまで治療が維持される。投薬レジメンの例は、最初の負荷用量を約４ｍｇ／ｋｇとして投与した後、１週間ごと、２週間後ごと、または３週間後ごとに追加用量のＡＤＣを投与する過程を含むものである。他の投与量レジメンも有用であり得る。この治療の進捗は、通常の手法及びアッセイによって容易に監視される。
【０７２２】
治療
本明細書では、病状の治療との関連において使用される「治療」という用語は、一般に、ヒトまたは動物（例えば、獣医学的用途において）へのものであるかを問わず、何らかの所望の治療作用が達成される治療（ｔｒｅａｔｍｅｎｔ）及び治療（ｔｈｅｒａｐｙ）に関し、こうした治療作用は、例えば、病状進行の抑制であり、進行速度の低減、進行速度の停止、病状の軽減、病状の寛解、及び病状の治癒が含まれる。予防対策としての治療（すなわち、予防（ｐｒｏｐｈｙｌａｘｉｓ）、予防（ｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎ））も含まれる。
【０７２３】
本明細書では、「治療上有効な量」という用語は、活性化合物そのものの量、または活性化合物を含めて調製される材料、組成物、もしくは投与量そのものの量であって、所望の治療レジメンに従って投与されると、何らかの所望の治療作用の提供に有効であり、合理的な利益／危険比に見合う量に関する。
【０７２４】
同様に、本明細書では、「予防上有効な量」という用語は、活性化合物そのものの量、または活性化合物を含めて調製される材料、組成物、もしくは投与量そのものの量であって、所望の治療レジメンに従って投与されると、何らかの所望の予防作用の提供に有効であり、合理的な利益／危険比に見合う量に関する。
【０７２５】
薬物複合体の調製
抗体薬物複合体は、抗体の求核基と薬物−リンカー試薬との反応を含む、当業者に知られる有機化学の反応、条件、及び試薬を用いて、いくつかの経路によって調製してよい。この方法を、本開示の抗体−薬物複合体の調製に用いてよい。
【０７２６】
抗体に存在する求核基には、限定はされないが、例えば、システインといった側鎖チオール基が含まれる。チオール基は求核性であり、本開示のものなどのリンカー部分に存在する求電子基との共有結合を形成するように反応することが可能である。ある特定の抗体は、還元可能な鎖間ジスルフィド、すなわちシステイン架橋を有する。ＤＴＴ（クリーランド（Ｃｌｅｌａｎｄ）試薬、ジチオスレイトール）またはＴＣＥＰ（トリス（２−カルボキシエチル）ホスフィン塩酸塩などの還元剤で処理することによって、リンカー試薬との複合化に対して抗体を反応性とし得る；Ｇｅｔｚ  ｅｔ  ａｌ（１９９９）Ａｎａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｖｏｌ２７３：７３−８０；Ｓｏｌｔｅｃ  Ｖｅｎｔｕｒｅｓ，Ｂｅｖｅｒｌｙ，ＭＡ）。したがって、システインジスルフィド架橋のそれぞれが、反応性チオール求核基を理論的には２つ形成することになる。リジンと２−イミノチオラン（トラウト（Ｔｒａｕｔ）試薬）とを反応させてアミンをチオールへと変換することによって、求核基を抗体に追加導入することができる。
【０７２７】
対象／患者
対象／患者は、動物、哺乳類、胎盤哺乳類、有袋類（例えば、カンガルー、ウオンバット）、単孔類（例えば、カモノハシ）、げっ歯類（例えば、モルモット、ハムスター、ラット、マウス）、マウス（ｍｕｒｉｎｅ）（例えば、マウス）、ウサギ（ｌａｇｏｍｏｒｐｈ）（例えば、ウサギ）、トリ（ａｖｉａｎ）（例えば、トリ）、イヌ（ｃａｎｉｎｅ）（例えば、イヌ）、ネコ（ｆｅｌｉｎｅ）（例えば、ネコ）、ウマ（ｅｑｕｉｎｅ）（例えば、ウマ）、ブタ（ｐｏｒｃｉｎｅ）（例えば、ブタ）、ヒツジ（ｏｖｉｎｅ）（例えば、ヒツジ）、ウシ（ｂｏｖｉｎｅ）（例えば、雌ウシ）、霊長類、サル（ｓｉｍｉａｎ）（例えば、サルもしくは類人猿）、サル（ｍｏｎｋｅｙ）（例えば、マーモセット、ヒヒ）、類人猿（例えば、ゴリラ、チンパンジー、オランウータン、テナガザル）、またはヒトであり得る。
【０７２８】
さらに、対象／患者は、その発生形態のいずれかであり得、例えば、胎児である。１つの好ましい実施形態では、対象／患者は、ヒトである。
【０７２９】
追加の好ましい形態
下記の好ましい形態は、上記の本開示の態様のすべてに適用され得るか、または単一の態様に関連し得る。好ましい形態は、任意の組み合わせで共に組み合わせてよい。
【０７３０】
いくつかの実施形態では、Ｒ６’、Ｒ７’、Ｒ９’、及びＹ’は、好ましくは、それぞれＲ６、Ｒ７、Ｒ９、及びＹと同一である。
【０７３１】
二量体の結合
Ｙ及びＹ’は、好ましくは、Ｏである。
【０７３２】
Ｒ’’は、好ましくは、置換基を有さないＣ３−７アルキレン基である。より好ましくは、Ｒ’’は、Ｃ３アルキレン、Ｃ５アルキレン、またはＣ７アルキレンである。最も好ましくは、Ｒ’’は、Ｃ３アルキレンまたはＣ５アルキレンである。
【０７３３】
Ｒ６〜Ｒ９
Ｒ９は、好ましくは、Ｈである。
【０７３４】
Ｒ６は、好ましくは、Ｈ、ＯＨ、ＯＲ、ＳＨ、ＮＨ２、ニトロ、及びハロから選択され、より好ましくは、Ｈまたはハロであり、最も好ましくは、Ｈである。
【０７３５】
Ｒ７は、好ましくは、Ｈ、ＯＨ、ＯＲ、ＳＨ、ＳＲ、ＮＨ２、ＮＨＲ、ＮＲＲ’、及びハロから選択され、より好ましくは、Ｈ、ＯＨ、及びＯＲから独立して選択され、ここで、Ｒは、好ましくは、任意選択で置換されたＣ１−７アルキル基、Ｃ３−１０ヘテロシクリル基、及びＣ５−１０アリール基から選択される。Ｒは、より好ましくは、置換または未置換であり得るＣ１−４アルキル基であり得る。対象となる置換基は、Ｃ５−６アリール基（例えば、フェニル）である。７位に特に好ましい置換基は、ＯＭｅ及びＯＣＨ２Ｐｈである。特に対象となる他の置換基は、ジメチルアミノ（すなわち、−ＮＭｅ２）；−（ＯＣ２Ｈ４）ｑＯＭｅ（ｑは、０〜２）；モルホリノ、ピペリジニル、及びＮ−メチル−ピペラジニルを含む窒素含有Ｃ６ヘテロシクリルである。
【０７３６】
こうした好ましい形態は、それぞれＲ９’、Ｒ６’、及びＲ７’に適用される。
【０７３７】
Ｒ１２
Ｃ２’とＣ３’との間に二重結合が存在するとき、Ｒ１２は、
（ａ）ハロ、ニトロ、シアノ、エーテル、Ｃ１−７アルキル、Ｃ３−７ヘテロシクリル、及びビス−オキシ−Ｃ１−３アルキレンを含む群から選択される１つまたは複数の置換基によって任意選択で置換されたＣ５−１０アリール基；
（ｂ）Ｃ１−５飽和脂肪族アルキル；
（ｃ）Ｃ３−６飽和シクロアルキル；
（ｄ）Ｒ２１、Ｒ２２、及びＲ２３が、Ｈ、Ｃ１−３飽和アルキル、Ｃ２−３アルケニル、Ｃ２−３アルキニル、及びシクロプロピルからそれぞれ独立して選択され、Ｒ１２基における炭素原子の総数が５以下である、
【化８８】
2018516243.tif 000095
（ｅ）Ｒ２５ａ及びＲ２５ｂの一方がＨであり、もう一方が、ハロ、メチル、メトキシから選択される基によって任意選択で置換されたフェニルと、ピリジルと、チオフェニルと、から選択される、
【化８９】
2018516243.tif 000096
ならびに
（ｆ）Ｒ２４が、Ｈと、Ｃ１−３飽和アルキルと、Ｃ２−３アルケニルと、Ｃ２−３アルキニルと、シクロプロピルと、ハロ、メチル、メトキシから選択される基によって任意選択で置換されたフェニルと、ピリジルと、チオフェニルと、から選択される、
【化９０】
2018516243.tif 000097
から選択される。
【０７３８】
Ｒ１２が、Ｃ５−１０アリール基であるとき、Ｃ５−１０アリール基は、Ｃ５−７アリール基であり得る。Ｃ５−７アリール基は、フェニル基またはＣ５−７ヘテロアリール基であり得、例えば、フラニル、チオフェニル、及びピリジルである。いくつかの実施形態では、Ｒ１２は、好ましくは、フェニルである。他の実施形態では、Ｒ１２は、好ましくは、チオフェニルであり、例えば、チオフェニ−２−イル及びチオフェニ−３−イルである。
【０７３９】
Ｒ１２が、Ｃ５−１０アリール基であるとき、Ｃ５−１０アリール基は、Ｃ８−１０アリールであり得、例えば、キノリニル基またはイソキノリニル基である。キノリニル基またはイソキノリニル基は、任意の利用可能な環位置を介してＰＢＤコアに結合し得る。例えば、キノリニルは、キノリン−２−イル、キノリン−３−イル、キノリン−４イル、キノリン−５−イル、キノリン−６−イル、キノリン−７−イル、及びキノリン−８−イルであり得る。こうしたもの中で、キノリン−３−イル、及びキノリン−６−イルが好ましくあり得る。イソキノリニルは、イソキノリン−１−イル、イソキノリン−３−イル、イソキノリン−４イル、イソキノリン−５−イル、イソキノリン−６−イル、イソキノリン−７−イル、及びイソキノリン−８−イルであり得る。こうしたもの中で、イソキノリン−３−イル、及びイソキノリン−６−イルが好ましくあり得る。
【０７４０】
Ｒ１２が、Ｃ５−１０アリール基であるとき、Ｃ５−１０アリール基は、任意の数の置換基を有し得る。Ｃ５−１０アリール基は、好ましくは、１〜３つの置換基を有し、その置換基数は、１及び２であることがより好ましく、単一の置換基で置換された基であることが最も好ましい。置換基の位置は任意であり得る。
【０７４１】
Ｒ１２が、Ｃ５−７アリール基である場合、単一の置換基は、好ましくは、化合物の残部への結合に隣接しない環原子に存在し、すなわち好ましくは、化合物の残部への結合に対してβまたはγである。それ故に、Ｃ５−７アリール基がフェニルである場合、置換基は、好ましくは、メタ−位またはパラ−位に存在し、より好ましくは、パラ−位に存在する。
【０７４２】
Ｒ１２が、Ｃ８−１０アリール基である場合、Ｃ８−１０アリール基は、例えば、キノリニルまたはイソキノリニルであり、キノリン環またはイソキノリン環の任意の位置に任意の数の置換基を有し得る。いくつかの実施形態では、Ｃ８−１０アリール基は、１つ、２つ、または３つの置換基を有し、こうした置換基は、近位の環及び遠位の環のいずれか、または（置換基が複数であれば）両方に存在し得る。
【０７４３】
Ｒ１２がＣ５−１０アリール基であるときのＲ１２の置換基
Ｒ１２がＣ５−１０アリール基であるときのＲ１２に存在する置換基がハロであるならば、ハロは、好ましくは、ＦまたはＣｌであり、より好ましくは、Ｃｌである。
【０７４４】
Ｒ１２がＣ５−１０アリール基であるときのＲ１２に存在する置換基がエーテルであるならば、エーテルは、いくつかの実施形態では、アルコキシ基であり得、例えば、Ｃ１−７アルコキシ基（例えば、メトキシ、エトキシ）であるか、またはエーテルは、いくつかの実施形態では、Ｃ５−７アリールオキシ基（例えば、フェノキシ、ピリジルオキシ、フラニルオキシ）であり得る。アルコキシ基は、それ自体が、例えば、アミノ基（例えば、ジメチルアミノ）によってさらに置換され得る。
【０７４５】
Ｒ１２がＣ５−１０アリール基であるときのＲ１２に存在する置換基がＣ１−７アルキルであるならば、Ｃ１−７アルキルは、好ましくは、Ｃ１−４アルキル基（例えば、メチル、エチル、プロピル、ブチル）であり得る。
【０７４６】
Ｒ１２がＣ５−１０アリール基であるときのＲ１２に存在する置換基がＣ３−７ヘテロシクリルであるならば、Ｃ３−７ヘテロシクリルは、いくつかの実施形態では、Ｃ６窒素含有ヘテロシクリル基であり得、例えば、モルホリノ、チオモルホリノ、ピペリジニル、ピペラジニルである。こうした基は、窒素原子を介してＰＢＤ部分の残部に結合し得る。こうした基は、例えば、Ｃ１−４アルキル基によってさらに置換され得る。Ｃ６窒素含有ヘテロシクリル基がピペラジニルであるならば、上記のさらなる置換基は、第２の窒素環原子に存在し得る。
【０７４７】
Ｒ１２がＣ５−１０アリール基であるときのＲ１２に存在する置換基がビス−オキシ−Ｃ１−３アルキレンであるならば、ビス−オキシ−Ｃ１−３アルキレンは、好ましくは、ビス−オキシ−メチレンまたはビス−オキシ−エチレンである。
【０７４８】
Ｒ１２がＣ５−１０アリール基であるときのＲ１２に存在する置換基がエステルであるならば、エステルは、好ましくは、メチルエステルまたはエチルエステルである。
【０７４９】
Ｒ１２がＣ５−１０アリール基であるときの特に好ましい置換基には、メトキシ、エトキシ、フルオロ、クロロ、シアノ、ビス−オキシ−メチレン、メチル−ピペラジニル、モルホリノ、及びメチル−チオフェニルが含まれる。Ｒ１２の他の特に好ましい置換基は、ジメチルアミノプロピルオキシ及びカルボキシである。
【０７５０】
Ｒ１２がＣ５−１０アリール基であるときの、特に好ましい置換Ｒ１２基には、限定はされないが、４−メトキシ−フェニル、３−メトキシフェニル、４−エトキシ−フェニル、３−エトキシ−フェニル、４−フルオロ−フェニル、４−クロロ−フェニル、３，４−ビスオキシメチレン−フェニル、４−メチルチオフェニル、４−シアノフェニル、４−フェノキシフェニル、キノリン−３−イル及びキノリン−６−イル、イソキノリン−３−イル及びイソキノリン−６−イル、２−チエニル、２−フラニル、メトキシナフチル、ならびにナフチルが含まれる。想定される別の置換Ｒ１２基は、４−ニトロフェニルである。特に対象となるＲ１２基には、４−（４−メチルピペラジン−１−イル）フェニル、及び３，４−ビスオキシメチレン−フェニルが含まれる。
【０７５１】
Ｒ１２が、Ｃ１−５飽和脂肪族アルキルであるとき、Ｃ１−５飽和脂肪族アルキルは、メチル、エチル、プロピル、ブチル、またはペンチルであり得る。いくつかの実施形態では、Ｃ１−５飽和脂肪族アルキルは、メチル、エチル、またはプロピル（ｎ−ペンチルもしくはイソプロピル）であり得る。こうした実施形態のいくつかでは、Ｃ１−５飽和脂肪族アルキルは、メチルであり得る。他の実施形態では、Ｃ１−５飽和脂肪族アルキルは、ブチルまたはペンチルであり得、これらは、直鎖または分岐鎖であり得る。
【０７５２】
Ｒ１２が、Ｃ３−６飽和シクロアルキルであるとき、Ｃ３−６飽和シクロアルキルは、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、またはシクロヘキシルであり得る。いくつかの実施形態では、Ｃ３−６飽和シクロアルキルは、シクロプロピルであり得る。
【０７５３】
Ｒ１２が、
【化９１】
2018516243.tif 000098
であるとき、Ｒ２１、Ｒ２２、及びＲ２３は、Ｈ、Ｃ１−３飽和アルキル、Ｃ２−３アルケニル、Ｃ２−３アルキニル、及びシクロプロピルからそれぞれ独立して選択され、Ｒ１２基における炭素原子の総数は５以下である。いくつかの実施形態では、Ｒ１２基における炭素原子の総数は、４以下また３以下である。
【０７５４】
いくつかの実施形態では、Ｒ２１、Ｒ２２、及びＲ２３のうちの１つは、Ｈであり、残りの２つの基は、Ｈ、Ｃ１−３飽和アルキル、Ｃ２−３アルケニル、Ｃ２−３アルキニル、及びシクロプロピルから選択される。
【０７５５】
他の実施形態では、Ｒ２１、Ｒ２２、及びＲ２３のうちの２つは、Ｈであり、残りの基は、Ｈ、Ｃ１−３飽和アルキル、Ｃ２−３アルケニル、Ｃ２−３アルキニル、及びシクロプロピルから選択される。
【０７５６】
いくつかの実施形態では、Ｈではない基は、メチル及びエチルから選択される。こうした実施形態のいくつかでは、Ｈではない基は、メチルである。
【０７５７】
いくつかの実施形態では、Ｒ２１は、Ｈである。
【０７５８】
いくつかの実施形態では、Ｒ２２は、Ｈである。
【０７５９】
いくつかの実施形態では、Ｒ２３は、Ｈである。
【０７６０】
いくつかの実施形態では、Ｒ２１及びＲ２２は、Ｈである。
【０７６１】
いくつかの実施形態では、Ｒ２１及びＲ２３は、Ｈである。
【０７６２】
いくつかの実施形態では、Ｒ２２及びＲ２３は、Ｈである。
【０７６３】
特に対象となるＲ１２基は、
【化９２】
2018516243.tif 000099
である。
【０７６４】
Ｒ１２が、
【化９３】
2018516243.tif 000100
であるとき、Ｒ２５ａ及びＲ２５ｂの一方は、Ｈであり、もう一方は、ハロ、メチル、メトキシから選択される基によって任意選択で置換されたフェニルと、ピリジルと、チオフェニルと、から選択される。いくつかの実施形態では、Ｈではない基は、任意選択で置換されたフェニルである。フェニルの任意選択の置換基がハロであるならば、ハロは、好ましくは、フルオロである。いくつかの実施形態では、フェニル基は、未置換である。
【０７６５】
Ｒ１２が
【化９４】
2018516243.tif 000101
であるとき、Ｒ２４は、Ｈと、Ｃ１−３飽和アルキルと、Ｃ２−３アルケニルと、Ｃ２−３アルキニルと、シクロプロピルと、ハロ、メチル、メトキシから選択される基によって任意選択で置換されたフェニルと、ピリジルと、チオフェニルと、から選択される。フェニルの任意選択の置換基がハロであるならば、ハロは、好ましくは、フルオロである。いくつかの実施形態では、フェニル基は、未置換である。
いくつかの実施形態では、Ｒ２４は、Ｈ、メチル、エチル、エテニル、及びエチニルから選択される。こうした実施形態のいくつかでは、Ｒ２４は、Ｈ及びメチルから選択される。
【０７６６】
Ｃ２’とＣ３’との間に単結合が存在するとき、
Ｒ１２は、
【化９５】
2018516243.tif 000102
であり、式中、Ｒ２６ａ及びＲ２６ｂは、Ｈ、Ｆ、Ｃ１−４飽和アルキル、Ｃ２−３アルケニルから独立して選択され、当該アルキル基及びアルケニル基は、Ｃ１−４アルキルアミド及びＣ１−４アルキルエステルから選択される基によって任意選択で置換され、またはＲ２６ａ及びＲ２６ｂの一方がＨであるとき、もう一方は、ニトリル及びＣ１−４アルキルエステルから選択される。
【０７６７】
いくつかの実施形態では、Ｒ２６ａ及びＲ２６ｂは両方共、Ｈであることが好ましい。
【０７６８】
いくつかの実施形態では、Ｒ２６ａ及びＲ２６ｂは両方共、メチルであることが好ましい。
【０７６９】
追加の実施形態では、Ｒ２６ａ及びＲ２６ｂの一方は、Ｈであり、もう一方は、Ｃ１−４飽和アルキル、Ｃ２−３アルケニルから選択されることが好ましく、当該アルキル基及びアルケニル基は、任意選択で置換される。こうした追加の実施形態では、Ｈではない基は、メチル及びエチルから選択されることがさらに好ましくあり得る。
【０７７０】
Ｒ２
Ｒ１２を対象とする上記の好ましい形態は、Ｒ２に等しくに適用される。
【０７７１】
Ｒ２２
いくつかの実施形態では、Ｒ２２は、式ＩＩａを有する。
【０７７２】
Ｒ２２が、式ＩＩａを有するとき、Ｒ２２のＡは、フェニル基またはＣ５−７ヘテロアリール基であり得、例えば、フラニル、チオフェニル、及びピリジルであり得る。いくつかの実施形態では、Ａは、好ましくは、フェニルである。
【０７７３】
Ｑ２−Ｘは、Ｃ５−７アリール基の利用可能な還原子のいずれかに存在し得るが、好ましくは、化合物の残部への結合に隣接しない環原子に存在し、すなわち好ましくは、化合物の残部への結合に対してβまたはγである。それ故に、Ｃ５−７アリール基（Ａ）がフェニルである場合、置換基（Ｑ２−Ｘ）は、好ましくは、メタ−位またはパラ−位に存在し、より好ましくは、パラ−位に存在する。
【０７７４】
いくつかの実施形態では、Ｑ１は、単結合である。こうした実施形態では、Ｑ２は、単結合及び−Ｚ−（ＣＨ２）ｎ−から選択され、ここで、Ｚは、単結合、Ｏ、Ｓ、及びＮＨから選択され、ｎは、１〜３である。こうした実施形態のいくつかでは、Ｑ２は、単結合である。他の実施形態では、Ｑ２は、−Ｚ−（ＣＨ２）ｎ−である。こうした実施形態では、Ｚは、ＯまたはＳであり得、ｎは、１であり得るか、またはｎは、２であり得る。こうした実施形態の他のものでは、Ｚは、単結合であり得、ｎは、１であり得る。
【０７７５】
他の実施形態では、Ｑ１は、−ＣＨ＝ＣＨ−である。
【０７７６】
他の実施形態では、Ｒ２２は、式ＩＩｂを有する。こうした実施形態では、ＲＣ１、ＲＣ２、及びＲＣ３は、Ｈ及び未置換のＣ１−２アルキルから独立して選択される。いくつかの好ましい実施形態では、ＲＣ１、ＲＣ２、及びＲＣ３はすべて、Ｈである。他の実施形態では、ＲＣ１、ＲＣ２、及びＲＣ３はすべて、メチルである。ある特定の実施形態では、ＲＣ１、ＲＣ２、及びＲＣ３は、Ｈ及びメチルから独立して選択される。
【０７７７】
Ｘは、Ｏ−ＲＬ２’、Ｓ−ＲＬ２’、ＣＯ２−ＲＬ２’、ＣＯ−ＲＬ２’、ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−ＲＬ２’、ＮＨＮＨ−ＲＬ２’、ＣＯＮＨＮＨ−ＲＬ２’、
【化９６】
2018516243.tif 000103
ＮＲＮＲＬ２’を含むリストから選択される基であり、ここで、ＲＮは、Ｈ及びＣ１−４アルキルを含む群から選択される。Ｘは、好ましくは、ＯＨ、ＳＨ、ＣＯ２Ｈ、−Ｎ＝Ｃ＝Ｏ、またはＮＨＲＮであり得、より好ましくは、Ｏ−ＲＬ２’、Ｓ−ＲＬ２’、ＣＯ２−ＲＬ２’、−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−ＲＬ２’、またはＮＨ−ＲＬ２’であり得る。特に好ましい基には、Ｏ−ＲＬ２’、Ｓ−ＲＬ２’、及びＮＨ−ＲＬ２’が含まれ、ＮＨ−ＲＬ２’が最も好ましい基である。
【０７７８】
いくつかの実施形態では、Ｒ２２は、式ＩＩｃを有する。こうした実施形態では、Ｑは、ＮＲＮ−ＲＬ２’であることが好ましい。他の実施形態では、Ｑは、Ｏ−ＲＬ２’である。追加の実施形態では、Ｑは、Ｓ−ＲＬ２’である。ＲＮは、好ましくは、Ｈ及びメチルから選択される。いくつかの実施形態では、ＲＮは、Ｈである。他の実施形態では、ＲＮは、メチルである。
【０７７９】
いくつかの実施形態では、Ｒ２２は、−Ａ−ＣＨ２−Ｘ及び−Ａ−Ｘであり得る。こうした実施形態では、Ｘは、Ｏ−ＲＬ２’、Ｓ−ＲＬ２’、ＣＯ２−ＲＬ２’、ＣＯ−ＲＬ２’、及びＮＨ−ＲＬ２’であり得る。特に好ましい実施形態では、Ｘは、ＮＨ−ＲＬ２’であり得る。
【０７８０】
Ｒ１０、Ｒ１１
いくつかの実施形態では、Ｒ１０及びＲ１１は一緒になって、それらが結合している窒素原子と炭素原子との間に二重結合を形成する。
【０７８１】
いくつかの実施形態では、Ｒ１１は、ＯＨである。
【０７８２】
いくつかの実施形態では、Ｒ１１は、ＯＭｅである。
【０７８３】
いくつかの実施形態では、Ｒ１１は、ＳＯｚＭであり、ここで、ｚは、２または３であり、Ｍは、医薬的に許容可能な一価の陽イオンである。
【０７８４】
Ｒ１１ａ
いくつかの実施形態では、Ｒ１１ａは、ＯＨである。
【０７８５】
いくつかの実施形態では、Ｒ１１ａは、ＯＭｅである。
【０７８６】
いくつかの実施形態では、Ｒ１１ａは、ＳＯｚＭであり、ここで、ｚは、２または３であり、Ｍは、医薬的に許容可能な一価の陽イオンである。
【０７８７】
Ｒ２０、Ｒ２１
いくつかの実施形態では、Ｒ２０及びＲ２１は一緒になって、それらが結合している窒素原子と炭素原子との間に二重結合を形成する。
【０７８８】
いくつかの実施形態では、Ｒ２０は、Ｈである。
【０７８９】
いくつかの実施形態では、Ｒ２０は、ＲＣである。
【０７９０】
いくつかの実施形態では、Ｒ２１は、ＯＨである。
【０７９１】
いくつかの実施形態では、Ｒ２１は、ＯＭｅである。
【０７９２】
いくつかの実施形態では、Ｒ２１は、ＳＯｚＭであり、ここで、ｚは、２または３であり、Ｍは、医薬的に許容可能な一価の陽イオンである。
【０７９３】
Ｒ３０、Ｒ３１
いくつかの実施形態では、Ｒ３０及びＲ３１は一緒になって、それらが結合している窒素原子と炭素原子との間に二重結合を形成する。
【０７９４】
いくつかの実施形態では、Ｒ３１は、ＯＨである。
【０７９５】
いくつかの実施形態では、Ｒ３１は、ＯＭｅである。
【０７９６】
いくつかの実施形態では、Ｒ３１は、ＳＯｚＭであり、ここで、ｚは、２または３であり、Ｍは、医薬的に許容可能な一価の陽イオンである。
【０７９７】
Ｍ及びｚ
Ｍは、医薬的に許容可能な一価の陽イオンであることが好ましく、より好ましくは、Ｎａ＋である。
【０７９８】
ｚは、好ましくは、３である。
【０７９９】
本開示の第１の態様の好ましい複合体は、式Ｉａ：
【化９７】
2018516243.tif 000104
のＤＬを有し得、
式中、
ＲＬ１’、Ｒ２０、及びＲ２１は、上に定義されるとおりであり；
ｎは、１または３であり；
Ｒ１ａは、メチルまたはフェニルであり；かつ
Ｒ２ａは、
【化９８】
2018516243.tif 000105
及び
【化９９】
2018516243.tif 000106
から選択される。
【０８００】
本開示の第１の態様の好ましい複合体は、式Ｉｂ：
【化１００】
2018516243.tif 000107
のＤＬを有し得、
式中、
ＲＬ１’、Ｒ２０、及びＲ２１は、上に定義されるとおりであり；
ｎは、１または３であり；かつ
Ｒ１ａは、メチルまたはフェニルである。
【０８０１】
本開示の第１の態様の好ましい複合体は、式Ｉｃ：
【化１０１】
2018516243.tif 000108
のＤＬを有し得、
式中、ＲＬ２’、Ｒ１０、Ｒ１１、Ｒ３０、及びＲ３１は、上に定義されるとおりであり、
ｎは、１または３であり；
Ｒ１２ａは、
【化１０２】
2018516243.tif 000109
及び
【化１０３】
2018516243.tif 000110
から選択される。
アミノ基は、フェニル基のメタ位またはパラ位のいずれかに位置する。
【０８０２】
本開示の第１の態様の好ましい複合体は、式Ｉｄ：
【化１０４】
2018516243.tif 000111
のＤＬを有し得、
式中、ＲＬ２’、Ｒ１０、Ｒ１１、Ｒ３０、及びＲ３１は、上に定義されるとおりであり、
ｎは、１または３であり；
Ｒ１ａは、メチルまたはフェニルであり；
Ｒ１２ａは、
【化１０５】
2018516243.tif 000112
及び
【化１０６】
2018516243.tif 000113
から選択される。
【０８０３】
本開示の第１の態様の好ましい複合体は、式Ｉｅ：
【化１０７】
2018516243.tif 000114
のＤＬを有し得、
式中、ＲＬ２’、Ｒ１０、Ｒ１１、Ｒ３０、及びＲ３１は、上に定義されるとおりであり、
ｎは、１または３であり；
Ｒ１ａは、メチルまたはフェニルであり；
Ｒ１２ａは、
【化１０８】
2018516243.tif 000115
及び
【化１０９】
2018516243.tif 000116
から選択される。
【実施例】
【０８０４】
一般的な実験方法
旋光度は、ＡＤＰ２２０旋光計（Ｂｅｌｌｉｎｇｈａｍ  Ｓｔａｎｌｅｙ  Ｌｔｄ．）で測定したものであり、濃度（ｃ）は、ｇ／１００ｍＬで示される。融点は、デジタル融点装置（Ｅｌｅｃｔｒｏｔｈｅｒｍａｌ）を使用して測定した。ＩＲスペクトルは、Ｐｅｒｋｉｎ−Ｅｌｍｅｒ  Ｓｐｅｃｔｒｕｍ  １０００  ＦＴ  ＩＲ分光計で記録した。１Ｈ  ＮＭＲスペクトル及び１３Ｃ  ＮＭＲスペクトルは、Ｂｒｕｋｅｒ  Ａｖａｎｃｅ  ＮＭＲ分光計を３００Ｋで使用して、それぞれ４００ＭＨｚ及び１００ＭＨｚで測定した。化学シフトは、ＴＭＳ（δ＝０．０ｐｐｍ）に対して記録し、シグナルは、ｓ（一重線）、ｄ（二重線）、ｔ（三重線）、ｄｔ（二重の三重線）、ｄｄ（二重線の二重線）、ｄｄｄ（二重線の二重の二重線）、またはｍ（多重線）と記載され、カップリング定数はヘルツ（Ｈｚ）で示される。質量分析（ＭＳ）のデータは、Ｗａｔｅｒｓ  ２９９６  ＰＤＡを備えたＷａｔｅｒｓ  ２６９５  ＨＰＬＣにＷａｔｅｒｓ  Ｍｉｃｒｏｍａｓｓ  ＺＱ機器を組み合わせて使用することで収集した。Ｗａｔｅｒｓ  Ｍｉｃｒｏｍａｓｓ  ＺＱで使用したパラメーターは、下記のとおりである：キャピラリー（ｋＶ）、３．３８；コーン（Ｖ）、３５；引き込み電極（Ｅｘｔｒａｃｔｏｒ）（Ｖ）、３．０；ソース温度（℃）、１００；脱溶媒温度（℃）、２００；コーン流速（Ｌ／ｈ）、５０；脱溶媒流速（Ｌ／ｈ）、２５０。高分解能質量分析（ＨＲＭＳ）のデータは、機器への試料導入に金属被覆されたホウケイ酸ガラスチップを使用し、ポジティブＷ−モードを用いてＷａｔｅｒｓ  Ｍｉｃｒｏｍａｓｓ  ＱＴＯＦ  Ｇｌｏｂａｌで記録した。薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）は、シリカゲルのアルミニウムプレート（Ｍｅｒｃｋ  ６０、Ｆ２５４）で実施し、フラッシュクロマトグラフィーでは、シリカゲル（Ｍｅｒｃｋ  ６０、２３０−４００メッシュＡＳＴＭ）を利用した。ＨＯＢｔ（ＮｏｖａＢｉｏｃｈｅｍ）及び固体担体試薬（Ａｒｇｏｎａｕｔ）を除き、他の化学物質及び溶媒はすべて、Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈから購入し、追加精製せずにそのまま使用した。無水溶媒は、適切な脱水剤の存在下で、乾燥窒素雰囲気下で蒸留することによって調製し、４Åのモレキュラーシーブまたはナトリウムワイヤーを入れて保存した。石油エーテルは、４０〜６０℃で沸騰する画分を指す。
【０８０５】
一般的なＬＣ／ＭＳ条件：
ＨＰＬＣ（Ｗａｔｅｒｓ  Ａｌｌｉａｎｃｅ  ２６９５）は、移動相として水（Ａ）（ギ酸含量０．１％）及びアセトニトリル（Ｂ）（ギ酸含量０．１％）を使用して実施した。グラジエント：Ｂ含量５％の初期組成を１．０分間保持した後、３分かけてＢ含量を５％から９５％へと増加させる。組成をＢ含量９５％として０．１分間保持した後、０．０３分かけてＢ含量を５％に戻し、その組成を０．８７分保持する。グラジエントの総実施時間は、５分に相当する。
【０８０６】
流速は３．０ｍＬ／分とし、デッドボリュームなしのＴ字部品を介して質量分析計に４００μＬを分離導入した。波長検出範囲：２２０〜４００ｎｍ。機能型：ダイオードアレイ（走査回数５３５回）。カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ  Ｏｎｙｘ  Ｍｏｎｏｌｉｔｈｉｃ  Ｃ１８  ５０ｘ４．６０ｍｍ。
【０８０７】
逆相のフラッシュ精製の条件は、下記のとおりである：フラッシュ精製システム（Ｖａｒｉａｎ  ９７１−Ｆｐ）は、移動相として水（Ａ）及びアセトニトリル（Ｂ）を使用して実行した。グラジエント：２０Ｃ．Ｖ．（カラム体積）の通液量となるまでＢ含量５％の初期組成を保持した後、６０Ｃ．Ｖ．の通液の間にＢ含量を５％から７０％に変化させる。Ｂ含量９５％の組成を保持して１５Ｃ．Ｖ．を通液した後、５Ｃ．Ｖ．の通液の間にＢ含量を５％に戻し、Ｂ含量を５％に保持して１０Ｃ．Ｖ．を通液する。グラジエントの総実施時間は、１２０Ｃ．Ｖ．に相当する。流速は、６．０ｍＬ／分とした。波長検出範囲：２５４ｎｍ。カラム：Ａｇｉｌｅｎｔ  ＡＸ１３７２−１  ＳＦ１０−５．５ｇＣ８。
【０８０８】
分取ＨＰＬＣ：逆相超高速液体クロマトグラフィー（ＵＰＬＣ）は、下記の寸法を有するＰｈｅｎｏｍｅｎｅｘ  Ｇｅｍｉｎｉ  ＮＸ  ５μ  Ｃ−１８カラムで実施した：分析用１５０ｘ４．６ｍｍ、及び分取用１５０ｘ２１．２０ｍｍ。ＵＰＬＣの実験はすべて、グラジエント条件を用いて実施した。溶媒Ａ（０．１％ギ酸含有Ｈ２Ｏ）及び溶媒Ｂ（０．１％ギ酸含有ＣＨ３ＣＮ）を溶離液として使用した。分析ＨＰＬＣには、１．０ｍｌ／分、分取ＨＰＬＣには、２０．０ｍｌ／分の流速を使用した。検出は、２５４ｎｍ及び２８０ｎｍで実施した。
【０８０９】
実施例１：複合体の製剤化
ＡｂＨＪ、ＡｂＤＪ、ＡｂＢＪの複合化
還元に向けて、ｐＨ７．４の１ｍＭのＥＤＴＡのＰＢＳを含む緩衝液で抗体ＡｂＨＪ、抗体ＡｂＤＪ、抗体ＡｂＢＪを、抗体濃度１〜１０ｍｇ／ｍｌで調製した。還元剤であるＴＣＥＰをバッチに添加して抗体に対して５０倍のモル過剰とし、インキュベーターにおいてゆっくりと軌道を描いて振とうしながら還元混合物を＋３７℃で３時間加熱した。還元の完了をＲＰ−ＨＰＬＣによって確認した後、抗体を室温まで冷却し、抗体の緩衝液を、１ｍＭのＥＤＴＡを含むＰＢＳ緩衝液に交換して過剰なＴＣＥＰを除去した。抗体に対して５０倍のモル過剰となるように５０ｍＭのデヒドロアスコルビン酸（ＤＨＡＡ）を添加することによって還元抗体を再酸化し、混合物の再酸化をＨＰＬＣで監視しながら合計２時間進行させた。その後、当該混合物を滅菌濾過してＤＨＡＡを除去した。１０ｍＭの薬物リンカー保存液をＤＭＳＯに加えて希釈（最終濃度１０％ｖ／ｖ）したものを添加し、抗体に対して１０倍過剰とすることによって複合化を開始した。複合化反応液は、室温で１６時間インキュベートした。複合化の後、１０倍モル過剰のＮ−アセチルシステインで反応物の反応を停止し、さらに３０分間インキュベートした。最終生成物の緩衝液を交換することで製剤緩衝液（３０ｍＭのヒスチジン、２００ｍＭのソルビトール、０．０２％のＴｗｅｅｎ−２０）に最終生成物を含め、ＳＥＣ、ＨＩＣ、ＲＰ−ＨＰＬＣによって分析した。
【０８１０】
ＡｂＬＪの複合化
ＡｂＬＪの直接的な複合化、または完全還元／再酸化後の複合化を最初に試みた結果、複合化は全く生じず、対を形成しなかった重鎖Ｃｙｓは、一緒になってジスルフィド架橋を形成しており、重鎖−重鎖ジスルフィド結合と同一速度で再酸化されることが確認された。溶液中及び樹脂上の両方で、先行文献に基づく部位特異的還元プロセス（ｍＡｂｓ  １：６，５６３−５７１；Ｎｏｖｅｍｂｅｒ／Ｄｅｃｅｍｂｅｒ，２００９）を試みた。手法は両方共成功したが、固相手法がある特定の実践的な利点を有していた：
・還元の間のタンパク質濃度を増加させるためのプロセス最適化の必要性が回避され、以後の段階の間に濃度が維持されるという点
・還元された抗体が希釈されていない濃度で得られるという点
・溶液に基づくプロセスの場合はＧ２５またはＴＦＦへの複数回の通液が必要となり得る毒素リンカーの除去が、良好かつ確実に実施されるという点
【０８１１】
樹脂の多くが、このプロセスを支持する能力を有することになると予想され、樹脂に必要な条件は下記のものである：
・還元プロセスに由来して潜在性の生じた抗体を捕捉する能力
・Ｃｙｓに対する親和性／結合性を有さないこと
・標的遊離チオールを遮断しないこと
【０８１２】
これに役立つ可能性を有する樹脂の例は、プロテインＡである。
【０８１３】
固相
ＡｂＬＪ（ＰＢＳ中、２５．５ｍｇ、５．１ｍｇ／ｍＬ）を、複数段階のプロセスにおいて化合物Ｅと複合化させた。最初の段階では、Ｇ２５カラムクロマトグラフィー（ＮＡＰ２５、ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を介してＡｂＬＪ抗体の緩衝液を交換することでｐＨ８．０の２０ｍＭのＨＥＰＥＳにＡｂＬＪ抗体を含め、希釈して１ｍｇ／ｍＬとした。その後、脱イオン水において新たに調製した５００ｍＭの保存液を用いてシステインを添加し、最終濃度を５ｍＭとした。３７℃で９０分間、部位特異的な還元プロセスを進行させた。その後、還元ＡｂＬＪを２ｍＬのプロテインＬ模倣樹脂カラムで捕捉して、還元剤の迅速かつ完全な除去を達成した（ＦａｂＳｏｒｂｅｎｔ  Ｆ１Ｐ  ＨＦ、Ｐｒｏｍｅｔｉｃ  ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ  Ｌｔｄ）。２０カラム体積のリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）でカラムを迅速に洗浄した後、ジメチルアセトアミド（ＤＭＡ）５％ｖ／ｖ含有ＰＢＳで洗浄した。抗体に対して５倍モル過剰で化合物Ｅを含めた１０ｍＬのＤＭＡ５％ｖ／ｖ含有ＰＢＳに樹脂を懸濁し、室温で６０分間複合化させた。その後、２０カラム体積のジメチルアセトアミド（ＤＭＡ）５％ｖ／ｖ含有ＰＢＳを用いてカラムを洗浄した後、２０カラム体積のリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）で洗浄した。その後、ｐＨ３．０の０．１Ｍのグリシンを用いて樹脂から精製複合体を溶出させ、Ｇ２５カラムクロマトグラフィー（ＨｉＴｒａｐ  Ｇ２５、ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を介して精製複合体の緩衝液を迅速に交換することで、３０ｍＭのヒスチジン、２００ｍＭのソルビトールを含むｐＨ６の緩衝液に精製複合体を含めた。その後、脱イオン水において新たに調製した１％ｗ／ｖのポリソルベート２０保存液を用いてポリソルベート２０を添加し、０．０１％ｗ／ｖとした。その後、孔径０．２２μｍのポリエーテルスルホン膜（Ｓｔｅｒｉｆｌｉｐ、ＥＭＤ  Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）を介した無菌化グレードの濾過を製剤化複合体に対して行った。
【０８１４】
ＡｂＬＪ−ＣｏｎｊＥ  ＡＤＣは、疎水性相互作用クロマトグラフィー（ＨＩＣ）によって解析し、ＤＡＲ＜２及びＤＡＲ＞２の不要な種に対して、ＤＡＲが２である種の量を決定した。重鎖への特異的複合化割合は、ＲＰ−ＨＰＬＣによって決定し、単量体含量は、サイズ排除クロマトグラフィーによって決定した。
【０８１５】
液相
ＡｂＬＪ（ＰＢＳ中、２５．５ｍｇ、５．１ｍｇ／ｍＬ）を、複数段階のプロセスにおいて化合物Ｅと複合化させた。最初の段階では、Ｇ２５カラムクロマトグラフィー（ＮＡＰ２５、ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を介してＡｂＬＪ抗体の緩衝液を交換することでｐＨ８．０の２０ｍＭのＨＥＰＥＳにＡｂＬＪ抗体を含め、希釈して１ｍｇ／ｍＬとした。その後、脱イオン水において新たに調製した５００ｍＭの保存液を用いてシステインを添加し、最終濃度を５ｍＭとした。３７℃で９０分間、部位特異的な還元プロセスを進行させた。その後、Ｇ２５カラムクロマトグラフィー（ＮＡＰ２５、ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を介して還元ＡｂＬＪの緩衝液を、ＤＭＡ５％ｖ／ｖ含有ＰＢＳに交換し、抗体に対して５倍モル過剰で化合物Ｅを添加し、室温で６０分間複合化させた。その後、Ｇ２５カラムクロマトグラフィー（ＨｉＴｒａｐ  Ｇ２５、ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を介して複合体の緩衝液を交換することで、３０ｍＭのヒスチジン、２００ｍＭのソルビトールを含むｐＨ６の緩衝液に複合体を含めた。その後、脱イオン水において新たに調製した１％ｗ／ｖのポリソルベート２０保存液を用いてポリソルベート２０を添加し、０．０１％ｗ／ｖとした。その後、孔径０．２２μｍのポリエーテルスルホン膜（Ｓｔｅｒｉｆｌｉｐ、ＥＭＤ  Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）を介した無菌化グレードの濾過を製剤化複合体に対して行った。
【０８１６】
ＡｂＬＪ−ＣｏｎｊＥ  ＡＤＣは、疎水性相互作用クロマトグラフィー（ＨＩＣ）によって解析し、ＤＡＲ＜２及びＤＡＲ＞２の不要な種に対して、ＤＡＲが２である種の量を決定した。重鎖への特異的複合化割合は、ＲＰ−ＨＰＬＣによって決定し、単量体含量は、サイズ排除クロマトグラフィーによって決定した。
【０８１７】
ＡｂＬＪの複合化番号２
ＡｂＬＪ−ＣｏｎｊＥ
Ｇ２５精密脱塩カラム（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ  ＨｉＰｒｅｐ  ２６／１０）を使用して、ＡｂＬＪを含む４ｍＬ（約５ｍｇ／ｍＬ）のＰＢＳの緩衝液交換を実施し、２０ｍＭのＴｒｉｓ／Ｃｌ、１Ｍのリジン、５ｍＭのＥＤＴＡを含むｐＨ  ８．０の緩衝液にＡｂＬＪを含めた。
【０８１８】
ＵＶ吸収に基づいて抗体を１ｍｇ／ｍＬまで希釈し（体積で約２０ｍＬ）、Ｎ−アセチルシステイン（５００ｍＭのＮＡＣ含有水、Ｓｉｇｍａ  Ａ７２５０）を添加し、最終濃度を５ｍＭとすることによって還元を開始した。還元プロセスは、７５分間進行させた。還元されたタンパク質をバッチ様式でプロテインＡ模倣樹脂に結合させてＮＡＣを除去することによって、還元プロセスを停止させた。
【０８１９】
２ｍＬのＦａｂｓｏｒｂｅｎｔ（商標）Ｆ１Ｐ  ＨＦ（Ｐｒｏｍｅｔｉｃｓ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）をリン酸緩衝生理食塩水で事前に平衡化し、濾過してＰＢＳを除去した後、還元抗体を含む溶液に懸濁し、ローター上で１５分間穏やかに混合した。２０ｍＭのＴｒｉｓ／Ｃｌ、５ｍＭのＥＤＴＡを含む１０ｍＬの溶液を用いて樹脂を５回洗浄する。その後、２０ｍＭのＴｒｉｓ／Ｃｌ、５ｍＭのＥＤＴＡ、５％ｖ／ｖのジメチルアセトアミド（ＤＭＡ）を含む１０ｍＬ体積量の溶液に、洗浄した樹脂を懸濁した。ＤＭＡにおいて調製した１０ｍＭの保存溶液を用いて化合物Ｅを添加し、総抗体量に対して５当量となるようにした。この複合化反応物を、ローター上で６０分間穏やかに混合した。その後、１０ｍＬのＰＢＳ／５％ｖ／ｖＤＭＡを用いて、樹脂に結合している複合体を３回連続して洗浄した後、１０ｍＬのＰＢＳで３回洗浄した。
【０８２０】
ｐＨ３．０の０．１Ｍのグリシン溶液１０ｍＬに樹脂を５分間懸濁することによって複合体を樹脂から遊離させ、樹脂を濾過して除去することによって、複合体を含む上清を収集した。溶出プロセスを繰り返し、２つの溶出画分を統合してから、Ｇ２５精密脱塩カラム（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ  ＰＤ１０またはＨｉＰｒｅｐ  ２６／１０）を使用して統合溶出画分の緩衝液を、３０Ｍのヒスチジン／Ｃｌ、２００ｍＭのソルビトールを含むｐＨ６．０の緩衝液に交換することによって統合溶出画分を迅速に製剤化した。その後、水において調製した１０％の保存溶液を用いてポリソルベート２０を添加し、０．０２％ｗ／ｖとした。
【０８２１】
最終的な製剤化複合体は、孔径０．２ｕｍのフィルターに通して濾過した（Ｓｔｅｒｉｆｌｉｐ−ＧＰ  ＰＥＳ濾過ユニット、Ｍｅｒｃｋ  Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）。
【０８２２】
重鎖への部位特異的複合化及び平均ＤＡＲは、上記のように、ＲＰ−ＨＰＬＣ（ＰＬＲＰ）によって決定し、単量体含量は、サイズ排除クロマトグラフィーによって決定した。最終的な複合体の平均ＤＡＲは１．８であり、単量体／ＨＭＷ含量は、それぞれ９５．２％及び１．６％であった。
【０８２３】
ＡｂＬＪ（ＬＡＬＡ）の複合化
ＡｂＬＪ（ＬＡＬＡ）−ＣｏｎｊＥ
ＡｂＬＪ（ＬＡＬＡ）抗体は、ＡｂＬＪの複合化番号２を対象として上に記載したとおりに化合物Ｅに複合化させた。
【０８２４】
最終的な複合体の平均ＤＡＲは１．８であり、単量体／ＨＭＷ含量は、それぞれ９５％及び１．８％であった。
【０８２５】
ＤＡＲの決定
１０μＬのホウ酸緩衝液（１００ｍＭ、ｐＨ８．４）及び５μＬのＤＴＴ（水中０．５Ｍ）を添加することによって、抗体またはＡＤＣ（３５μＬ中、約３５μｇ）を還元し、３７℃で１５分間加熱した。１体積量のアセトニトリル：水：ギ酸（４９％：４９％：２％ｖ／ｖ）で試料を希釈し、緩衝液Ａ（トリフルオロ酢酸（０．１％ｖ／ｖ）（ＴＦＡ）含有水）の含量を７５％、緩衝液Ｂ（アセトニトリル：水：ＴＦＡ  ９０％：１０％：０．１％ｖ／ｖ）の含量を２５％として、１ｍｌ／分の流速で平衡化したＵＰＬＣシステム（Ｓｈｉｍａｄｚｕ  Ｎｅｘｅｒａ）におけるＷｉｄｅｐｏｒｅ  ３．６μ  ＸＢ−Ｃ１８  １５０ｘ２．１ｍｍ（Ｐ／Ｎ  ００Ｆ−４４８２−ＡＮ）カラム（Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ  Ａｅｒｉｓ）に８０℃で希釈試料を注入した。緩衝液Ｂの含量を２５％から５５％へと１０分かけて変化させるグラジエントを使用して結合材料を溶出した。２１４ｎｍのＵＶ吸収ピークを積算した。ＡＤＣまたは抗体のそれぞれについて、下記のピークを同定した：未変化の抗体軽鎖（Ｌ０）、未変化の抗体重鎖（Ｈ０）、及びこうした鎖に薬物−リンカーが付加したもののそれぞれ（１つの薬物を有する軽鎖はＬ１、及び薬物−リンカー結合数が１、２、または３である重鎖は、Ｈ１、Ｈ２、Ｈ３と記載）。薬物−リンカーを含む断片（すなわち、Ｌ１、Ｈ１、Ｈ２、Ｈ３）の同定には、３３０ｎｍでのＵＶクロマトグラムを使用した。
【０８２６】
軽鎖及び重鎖の両方についてＰＢＤ／タンパク質のモル比を計算した：
【数１】
2018516243.tif 000117
【数２】
2018516243.tif 000118
【０８２７】
最終的なＤＡＲは、下記のように計算される：
【数３】
2018516243.tif 000119
【０８２８】
ＤＡＲの測定は、２１４ｎｍで実施される。この理由は、薬物−リンカーの吸収に由来する妨害が２１４ｎｍで最小化するためである。
【０８２９】
【表３】
2018516243.tif 000120

＊２つ濃度決定方法を使用した：既知濃度の参照試料との比較によるＳＥＣ（２１４ｎｍ）、または特許に記載のＡ２８０／Ａ３３０。データが利用可能であるとき、濃度はこの式を使用して再計算した。
【０８３０】
実施例２：複合体のインビトロでの細胞傷害性
細胞傷害性アッセイ
浮遊細胞培養物（最大１×１０６個／ｍｌ）の濃度及び生存率は、トリパンブルーと１：１で混合し、血球計算盤を用いて透明（生存）／青色（死滅）細胞の計数を実施することによって決定した。細胞浮遊液を希釈し、必要な播種密度（一般に１０５個／ｍｌ）として、９６ウェルの平底プレートに分注した。Ａｌａｍａｒ  ｂｌｕｅアッセイについては、分注は黒色ウェルプレートに１００μｌ／ウェルで実施した。ＭＴＳアッセイについては、分注は透明ウェルプレートに５０μｌ／ウェルで実施した。ＡＤＣ（２０μｇ／ｍｌ）の保存溶液（１ｍｌ）は、濾過滅菌したＡＤＣを細胞培養培地で希釈することによって調製した。２４ウェルプレートにおいて、１００μｌを９００μｌの細胞培養培地に連続的に移すことによって保存ＡＤＣの一連の８×１０倍の段階希釈系列を調製した。細胞浮遊液を含む９６ウェルプレートのウェルにＡＤＣ希釈液（Ａｌａｍａｒ  ｂｌｕｅについては１００μｌ／ウェル、ＭＴＳについては５０μｌ／ウェル）をそれぞれ分注して４連とした。対照ウェルには、同一体積量の培養培地のみを添加した。４日間インキュベートした後、Ａｌａｍａｒ  ｂｌｕｅアッセイまたはＭＴＳアッセイのいずれかによって細胞生存率を測定した。
【０８３１】
それぞれのウェルにＡｌａｍａｒＢｌｕｅ（登録商標）（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、カタログ番号ＤＡＬ１０２５）を分注し（ウェル当たり２０μｌ）、ＣＯ２雰囲気のインキュベーターにおいて３７℃で４時間インキュベートした。励起波長を５７０ｎｍ、蛍光波長を５８５ｎｍとして、ウェルの蛍光を測定した。細胞生存率（％）は、４つの対照ウェルの平均蛍光（１００％）と比較し、ＡＤＣ処理した４つのウェルにおける平均蛍光の割合から計算した。
【０８３２】
それぞれのウェルにＭＴＳ（Ｐｒｏｍｅｇａ、カタログ番号Ｇ５４２１）を分注し（ウェル当たり２０μｌ）、ＣＯ２雰囲気のインキュベーターにおいて３７℃で４時間インキュベートした。４９０ｎｍにおける吸光度を測定した。細胞生存率（％）は、４つの対照ウェルの平均吸光度（１００％）と比較し、ＡＤＣ処理した４つのウェルにおける平均吸光度の割合から計算した。用量反応曲線は、３連の実験の平均データから作成し、ＥＣ５０は、Ｐｒｉｓｍ（ＧｒａｐｈＰａｄ、Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）を使用し、可変勾配を有するシグモイド用量反応曲線にデータを適合させることによって決定した。
【０８３３】
結果
部位特定的バージョンのＡＤＣを得るために、操作されたバージョンのＡｂＪ抗体を、ＰＢＤ薬物部（ｗａｒｈｅａｄ）リンカーＣｏｎｊＥに複合化した。操作されたＡｂＪ抗体は、ＣＨＯ細胞において一過性に産生させた。部位特異的ＡＤＣのインビトロでの細胞傷害性の効力は、野生型ＡｂＪ−ＡＤＣ複合体（ＡｂＪ−ＣｏｎｊＥ）と比較した。
【０８３４】
ＡｂＪ  →
配列番号１１０のアミノ酸配列を含む重鎖；
配列番号１５０のアミノ酸配列を含む軽鎖；
ＶＨドメイン；及び
ＶＬドメイン
を含む抗体。
【０８３５】
ＡｂＪ−ＣｏｎｊＥ  →確率論的に化合物Ｅに複合化したＡｂＪ
【０８３６】
ＡｂＨＪ−ＣｏｎｊＥ  →
配列番号１１１のアミノ酸配列を含む重鎖；
配列番号１５０のアミノ酸配列を含む軽鎖；
ＶＨドメイン；及び
ＶＬドメイン；
を含み、配列番号１５０のＣ１０５において化合物Ｅに複合化した抗体。
【０８３７】
ＡｂＤＪ−ＣｏｎｊＥ  →
配列番号１１５のアミノ酸配列を含む重鎖；
配列番号１５０のアミノ酸配列を含む軽鎖；
ＶＨドメイン；及び
ＶＬドメイン；
を含み、配列番号１５０のＣ１０５において化合物Ｅに複合化した抗体。
【０８３８】
ＡｂＢＪ−ＣｏｎｊＥ  →
配列番号１１３のアミノ酸配列を含む重鎖；
配列番号１５１のアミノ酸配列を含む軽鎖；
ＶＨドメイン；及び
ＶＬドメイン；
を含み、配列番号１１３のＣ１０３において化合物Ｅに複合化した抗体。
【０８３９】
ＡｂＬＪ−ＣｏｎｊＥ  →
配列番号１１０のアミノ酸配列を含む重鎖；
配列番号１５１のアミノ酸配列を含む軽鎖；
ＶＨドメイン；及び
ＶＬドメイン；
を含み、配列番号１１０のＣ１０３において化合物Ｅに複合化した抗体。
【０８４０】
【表４】
2018516243.tif 000121
部位特異的なＡｂＪ複合体と、対応する野生型複合体とを比較すると、ＥＣ５０値に有意差は報告されなかった。
【０８４１】
実施例３
部位特異的複合体、及び部位非特異的複合体のインビボでの有効性
８〜１２週齢の雄ＣＢ．１７  ＳＣＩＤマウスの側腹部の皮下に、１ｘ１０７個の腫瘍細胞を含む５０％のＭａｔｒｉｇｅｌを移植した。試験の１日目に、確立した異種移植片（平均サイズ１００〜１５０ｍｍ３）を有するマウスを選別して治療群（ｎ＝１０）とし、０．３３ｍｇ／ｋｇまたは１．０ｍｇ／ｋｇのいずれかで投薬を開始した。試験が終了するまで、１週間に２回、腫瘍の測定を実施した。
【０８４２】
結果
異種移植片モデルにおいてさまざまなＡＤＣを試験した。０．３ｍｇ／ｋｇの投与を１日１回実施した場合、ＡｂＨＪ−ＣｏｎｊＥ及びＡｂＢＪ−ＣｏｎｊＥは、腫瘍の進行を３０日間停止させ、同等の有効性を有していた。ＡｂＤＪ−ＣｏｎｊＥは、腫瘍の進行を最大３５日間停止させ、僅かに高い有効性を有していた。１．０ｍｇ／ｋｇの投与を１日１回実施した場合、ＡｂＢＪ−ＣｏｎｊＥ、ＡｂＨＪ−ＣｏｎｊＥ、及びＡｂＤＪ−ＣｏｎｊＥは、腫瘍の進行を５５日間、７０日間、及び９５日超の期間停止させた。
【０８４３】
実施例４
部位特異的複合体及び部位非特異的複合体の血漿／血清中での安定性：
確率論的に複合化したＡＤＣ（ＡｂＪ）、及び部位特異的に複合化したＡＤＣを、６０ｕｇ／ｍｌの濃度でカニクイザル血漿もしくはヒト血漿またはＰＢＳに添加し、３７℃で２４時間、１週間、及び３週間インキュベートした。
【０８４４】
１週間後、試料を回収し、ＡＤＣのインビトロでの細胞傷害性を決定した。ＡＤＣが不安定であれば、ＡＤＣから薬物部（ｗａｒｈｅａｄ）が遊離しているため、細胞に対する効力は失われることになる。
【０８４５】
ＧＩ５０のデータは、ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ  ９６（登録商標）ＡＱｕｅｏｕｓ  Ｏｎｅ  Ｓｏｌｕｔｉｏｎ細胞増殖アッセイ（ＭＴＳ）から得られたＯＤ４９０のデータを、Ｇｒａｐｈ  Ｐａｄ  Ｐｒｉｓｍ  ｖ６．０３を使用して、シグモイドの４ＰＬ（Ｘは、対数（濃度））アルゴリズムに最小二乗法を用いて適合させることによって得た。細胞を、ＡＤＣ−血漿混合物と共に６日間培養した後、本出願に記載のようにＭＴＳアッセイを実施した。
【０８４６】
【表５】
2018516243.tif 000122
確率論的な複合体であるＡｂＪ−ＣｏｎｊＥと比較すると、ＡｂＢＪ−ＣｏｎｊＥ、ＡｂＤＪ−ＣｏｎｊＥ、及びＡｂＨＪ−ＣｏｎｊＥでは、ヒト血漿及びカニクイザル血漿において、３７℃で１日間、７日間、または２１日間インキュベートした際に安定性の改善が見られた。
【０８４７】
実施例５
異なる部位特異的複合体の忍容性
Ｋａｂａｔ  ＥＵによる位置２３４及び位置２３５の残基の変異が、ラットに対するＡＤＣの忍容性に与える影響を検討した。
【０８４８】
雄スプラーグドーリーラットにおいて単回用量試験を実施し、投薬から２１日目に剖検を実施した。体重及び摂食量を高頻度で監視し、生存中に、臨床病理学については、試料採取（８日目及び２１日目の血液）を実施し、薬物動態については、試料採取を反復して実施した。剖検時は、想定される病理組織学向けに計量及び確保した選択臓器を用いて巨視的観察を実施した。
【０８４９】
結果
ＡｂＬＪ−ＣｏｎｊＥ  →
配列番号１１０３のアミノ酸配列を含む重鎖；
配列番号１５１のアミノ酸配列を含む軽鎖；
ＶＨドメイン；及び
ＶＬドメイン；
を含み、配列番号１１０３のＣ１０３において化合物Ｅに複合化した抗体。
【０８５０】
ＡｂＬＪ（ＬＡＬＡ）−ＣｏｎｊＥ  →
配列番号１１０３のアミノ酸配列を含む重鎖；
配列番号１５１のアミノ酸配列を含む軽鎖；
ＶＨドメイン；及び
ＶＬドメイン；
を含み、配列番号１１０３のＣ１０３において化合物Ｅに複合化した抗体。
【０８５１】
ＡｂＬＪ−ＣｏｎｊＥ複合体に存在するＶＨドメイン及びＶＬドメインは、ＡｂＬＪ（ＬＡＬＡ）−ＣｏｎｊＥ複合体に存在するものと同一である。
【０８５２】
【表６】
2018516243.tif 000123
１２１日の試験、１日目に単回用量投与（雄ＳＤラット）
２食物摂取の減少と関連
３８日目の最下点、２１日目まで回復に向かう傾向あり
４臓器の絶対重量
【０８５３】
Ｋａｂａｔ  ＥＵによる位置２３４及び位置２３５における残基の変異は、ＡＤＣの忍容性を実質的に改善することを結果は示している。
【０８５４】
実施例６
異なる部位特異的複合体の薬物動態
Ｋａｂａｔ  ＥＵによる位置２３４及び位置２３５の残基の変異が、薬物動態に与える影響を検討した。実施例５における上記のＡｂＬＪ−ＣｏｎｊＥ及びＡｂＬＪ（ＬＡＬＡ）−ＣｏｎｊＥを使用した。
ラットに２ｍｇ／ｋｇでＡＤＣを投与し、２０日目まで血清試料を高頻度で採取した。複合化した抗体を測定するために、目的に適合したＥＬＩＳＡを開発した。検量線用試料、ＱＣ試料、及び試験試料を低接着性プレートにおいて希釈し、抗ＳＧ３２４９を標的とするマウスモノクローナル抗体で被覆されたプレートに添加した。インキュベート及び洗浄の後、ヒトＦｃを標的とするＨＲＰ複合化マウスモノクローナル抗体を用いてプレートをインキュベートした。
【０８５５】
３，３’，５，５’−テトラメチルベンジジン（ＴＭＢ）を基質として使用し、１ＭのＨＣｌで反応を停止した。Ｖｅｒｓａｍａｘプレートリーダーを用いて、プレートを４５０ｎｍの吸光度で読み取った。ラットの血清における定量下限（ＬＬＯＱ）は、７５０ｎｇ／ｍｌであった。試料はすべて、ＰＢＤ−ＡＤＣ特異的なアッセイを使用して測定し、ＡｂＬＪ（ＬＡＬＡ）−ＣｏｎｊＥ及びＡｂＬＪ−ＣｏｎｊＥについて測定した終末相半減期（３匹の動物の平均値）は、Ｐｈｏｅｎｉｘ  ６４  ＷｉｎＮｏｎｌｉｎ  ６．４（Ｐｈａｒｓｉｇｈｔ）ソフトウェアを使用して計算した。
【０８５６】
【表７】
2018516243.tif 000124
【０８５７】
Ｋａｂａｔ  ＥＵによる位置２３４及び位置２３５における残基の変異は、ＡＤＣの終末相半減期を実質的に改善することを結果は示している。
【０８５８】
実施例７
全身毒性の低減
ヒト抗原Ｘに特異的なＡｂＣＪを、位置４４２においてセリンの代わりにシステインを含むように操作し（ＡｂＣＪＸと記載される）、薬物−リンカーであるＣｏｎｊＨ及びＣｏｎｊＥに複合化した。
【０８５９】
カニクイザルにおけるＡｂＣＪＸ−ＣｏｎｊＨ及びＡｂＣＪＸ−ＣｏｎｊＥの毒性を、ＡｂＢＪＸ−ＣｏｎｊＥ（実施例２において上に記載したＡｂＢＪ−ＣｏｎｊＥ抗体であり、ヒト抗原Ｘに特異的である）のものと比較した。
【０８６０】
試験では、群当たり３匹のカニクイザル（雄または雌）を使用し、投薬時のサルの年齢は、約３歳（４ｋｇ）であった。動物すべてに対して、１日目に投与を１回実施し、生存動物については、最大で２２日目までデータが示される。
【０８６１】
結果
顕著な血小板の枯渇と関連する出血を含む、有害な臨床徴候に起因して、ＡｂＣＪＸ−ＣｏｎｊＨ（１３日目まで）及びＡｂＣＪＸ−ＣｏｎｊＥ（１６日目まで）では、動物は早期に死亡または安楽死のいずれかに至った；図１を参照のこと。ＡｂＢＪＸ−ＣｏｎｊＥは、顕著な血小板涸渇を誘導しなかったため、２１日目に第２の用量をサルに投与した。
【０８６２】
実施例８
【化１１０】
2018516243.tif 000125
【０８６３】
（ａ）（Ｓ）−７−メトキシ−８−（３−（（（Ｓ）−７−メトキシ−２−（４−（４−メチルピペラジン−１−イル）フェニル）−５，１１−ジオキソ−１０−（（２−（トリメチルシリル）エトキシ）メチル）−５，１０，１１，１１ａ−テトラヒドロ−１Ｈ−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−８−イル）オキシ）プロポキシ）−５，１１−ジオキソ−１０−（（２−（トリメチルシリル）エトキシ）メチル）−５，１０，１１，１１ａ−テトラヒドロ−１Ｈ−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−２−イルトリフルオロメタンスルホネート（８２）
ビス−エノールトリフレート１２（５００ｍｇ、０．４４ｍｍｏｌ）（ＷＯ２０１０／０４３８８０に記載の化合物８ａ）、Ｎ−メチルピペラジンボロン酸エステル（１００ｍｇ、０．４ｍｍｏｌ）、Ｎａ２ＣＯ３（２１８ｍｇ、２．０５ｍｍｏｌ）、ＭｅＯＨ（２．５ｍＬ）、トルエン（５ｍＬ）、及び水（２．５ｍＬ）の混合物を撹拌し、当該混合物に対して、Ｐｄ（ＰＰｈ３）４（２０．６ｍｇ、０．０１８ｍｍｏｌ）を添加した。窒素雰囲気下、３０℃で２４時間反応混合物を継続的に撹拌し、その後すべてのボロン酸エステルが消費された。その後、反応混合物を蒸発乾燥させた後、残留物をＥｔＯＡｃ（１００ｍＬ）に取り込み、Ｈ２Ｏ（５０ｍＬで２回）、ブライン（５０ｍＬ）で洗浄し、脱水（ＭｇＳＯ４）してから濾過した後、減圧下で蒸発させることで、粗生成物を得た。フラッシュクロマトグラフィー（８０：２０ｖ／ｖのヘキサン／ＥｔＯＡｃから６０：４０ｖ／ｖのヘキサン／ＥｔＯＡｃとするグラジエント溶出）によって精製することで、黄色がかった泡沫として生成物８２を得た（１２２．６ｍｇ、２５％）。
ＬＣ／ＭＳ ３．１５分
（ＥＳ＋） ｍ／ｚ （相対強度） １１４４ （［Ｍ ＋ Ｈ］＋．， ２０％）。
【０８６４】
（ｂ）（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メチル（（Ｓ）−１−（（（Ｓ）−１−（（４−（（Ｓ）−７−メトキシ−８−（３−（（（Ｓ）−７−メトキシ−２−（４−（４−メチルピペラジン−１−イル）フェニル）−５，１１−ジオキソ−１０−（（２−（トリメチルシリル）エトキシ）メチル）−５，１０，１１，１１ａ−テトラヒドロ−１Ｈ−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−８−イル）オキシ）プロポキシ）−５，１１−ジオキソ−１０−（（２−（トリメチルシリル）エトキシ）メチル）−５，１０，１１，１１ａ−テトラヒドロ−１Ｈ−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−２−イル）フェニル）アミノ）−１−オキソプロパン−２−イル）アミノ）−３−メチル−１−オキソブタン−２−イル）カルバメート（８３）
ＰＢＤ−トリフレート８２（３５９ｍｇ、０．３１４ｍｍｏｌ）、ボロン酸ピナコールエステル２０（ｂｏｒｏｎｉｃ  ｐｉｎａｃｏｌ  ｅｓｔｅｒ  ２０）（２５０ｍｇ、０．４０８ｍｍｏｌ）（ＷＯ２０１４／０５７０７３に記載の化合物２０）、及びトリエチルアミン（０．３５ｍＬ、２．５１ｍｍｏｌ）を、トルエン／ＭｅＯＨ／Ｈ２Ｏを２：１：１で含む混合物（３ｍＬ）に溶解した。マイクロ波用容器にアルゴンの通気充填処理を３回実施した後、テトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（０）（２１．７ｍｇ、０．０１８ｍｍｏｌ）を添加し、反応混合物を８０℃で１０分間マイクロ波に供した。その後、ＣＨ２Ｃｌ２（１００ｍＬ）を添加し、有機物を水（５０ｍＬで２回）及びブライン（５０ｍＬ）で洗浄した後、ＭｇＳＯ４で脱水してから濾過し、減圧下での回転蒸発によって揮発性物質を除去した。粗生成物をシリカゲルクロマトグラフィーカラム（ＣＨＣｌ３／ＭｅＯＨ、１００％から９：１）によって精製することで、純粋な８３を得た（２００ｍｇ、収率４３％）。ＬＣ／ＭＳ
３．２７分 （ＥＳ＋） ｍ／ｚ （相対強度） １４７８ （［Ｍ ＋ Ｈ］＋．， １００％）。
【０８６５】
（ｃ）（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メチル（（Ｓ）−１−（（（Ｓ）−１−（（４−（（Ｓ）−７−メトキシ−８−（３−（（（Ｓ）−７−メトキシ−２−（４−（４−メチルピペラジン−１−イル）フェニル）−５−オキソ−５，１１ａ−ジヒドロ−１Ｈ−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−８−イル）オキシ）プロポキシ）−５−オキソ−５，１１ａ−ジヒドロ−１Ｈ−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−２−イル）フェニル）アミノ）−１−オキソプロパン−２−イル）アミノ）−３−メチル−１−オキソブタン−２−イル）カルバメート（８４）
ＴＨＦ（５ｍＬ）中にＳＥＭ−ジラクタム８３（２００ｍｇ、０．１３５ｍｍｏｌ）を含む溶液に対して、Ｓｕｐｅｒ−Ｈｙｄｒｉｄｅ（登録商標）（０．３４ｍＬ、ＴＨＦ中１Ｍ）の溶液をアルゴン雰囲気下、−７８℃で滴下して添加した。反応混合物の内部温度を一定に維持するために、５分かけて添加を完了させた。２０分後、ＬＣ／ＭＳ分析のために一定分量を取り出して水で反応を停止させた。このＬＣ／ＭＳ分析によって、反応が完了したことを確認した。反応混合物に水（２０ｍＬ）を添加し、反応混合物を冷却浴から取り出した。有機層をＥｔＯＡｃ（３０ｍＬで３回）で抽出し、統合した有機物をブライン（５０ｍＬ）で洗浄し、ＭｇＳＯ４で脱水してから濾過した後、減圧下での回転蒸発によって溶媒を除去した。粗生成物をＭｅＯＨ（６ｍＬ）、ＣＨ２Ｃｌ２（３ｍＬ）、水（１ｍＬ）、及び十分量のシリカゲルに溶解し、撹拌しながら粘性懸濁液を形成させた。５日後、懸濁液を焼結式漏斗に通して濾過し、生成物の溶出が完了するまでＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ（９：１）（１００ｍＬ）で洗浄した。有機層をブライン（５０ｍＬで２回）で洗浄し、ＭｇＳＯ４で脱水してから濾過した後、減圧下での回転蒸発によって溶媒を除去した。シリカゲルカラムクロマトグラフィー（１００％のＣＨＣｌ３から９６％ＣＨＣｌ３／４％ＭｅＯＨ）によって精製することで、黄色の固体として生成物８４を得た（１００ｍｇ、６３％）。ＬＣ／ＭＳ
２．６７分 （ＥＳ＋） ｍ／ｚ （相対強度） １１８６ （［Ｍ ＋ Ｈ］＋．， ５％）。
【０８６６】
（ｄ）（Ｓ）−２−アミノ−Ｎ−（（Ｓ）−１−（（４−（（Ｒ）−７−メトキシ−８−（３−（（（Ｒ）−７−メトキシ−２−（４−（４−メチルピペラジン−１−イル）フェニル）−５−オキソ−５，１１ａ−ジヒドロ−１Ｈ−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−８−イル）オキシ）プロポキシ）−５−オキソ−５，１１ａ−ジヒドロ−１Ｈ−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−２−イル）フェニル）アミノ）−１−オキソプロパン−２−イル）−３−メチルブタンアミド（８５）
ＤＭＦ（０．９ｍＬ）中にＰＢＤ８４（３６．４ｍｇ、０．０３ｍｍｏｌ）を含む溶液に対して、過剰なピペリジン（０．１ｍＬ、１ｍｍｏｌ）を添加した。混合物を室温で２０分間撹拌し、この時点で反応が完了した（ＬＣ／ＭＳによって監視した）。反応混合物をＣＨ２Ｃｌ２（５０ｍＬ）で希釈し、ピペリジンの除去が完了するまで有機相をＨ２Ｏ（５０ｍＬで３回）で洗浄した。有機相をＭｇＳＯ４で脱水してから濾過し、減圧下での回転蒸発によって過剰な溶媒を除去することで粗生成物８５を得て、これをそのまま次の段階に使用した。ＬＣ／ＭＳ
２．２０分 （ＥＳ＋） ｍ／ｚ （相対強度） ９６４ （［Ｍ ＋ Ｈ］＋．， ５％）。
【０８６７】
（ｅ）１−（３−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）プロパンアミド）−Ｎ−（（２Ｓ）−１−（（（２Ｓ）−１−（（４−（７−メトキシ−８−（３−（（７−メトキシ−２−（４−（４−メチルピペラジン−１−イル）フェニル）−５−オキソ−５，１１ａ−ジヒドロ−１Ｈ−ベンゾ［ｅ］ピロロ［１，２−ａ］［１，４］ジアゼピン−８−イル）オキシ）プロポキシ）−５−オキソ−５，１１ａ−ジヒドロ−１Ｈ−ベンゾ［ｅ］ピロロ［１，２−ａ］［１，４］ジアゼピン−２−イル）フェニル）アミノ）−１−オキソプロパン−２−イル）アミノ）−３−メチル−１−オキソブタン−２−イル）−３，６，９，１２，１５，１８，２１，２４−オクタオキサヘプタコサン−２７−アミド（８６）
脱水ＣＨ２Ｃｌ２（４ｍＬ）中にマレイミド−ＰＥＧ８−酸（２５ｍｇ、０．０４２ｍｍｏｌ）を含む懸濁液に対して、ＥＤＣＩ塩酸塩（８ｍｇ、０．０４２ｍｍｏｌ）をアルゴン雰囲気下で添加した。ＰＢＤ８５（４２ｍｇ、未精製物）を迅速に添加し、反応が完了（３時間）するまで撹拌を維持した。反応物をＣＨ２Ｃｌ２で希釈し、有機相をＨ２Ｏ及びブラインで洗浄した後、ＭｇＳＯ４で脱水してから濾過し、減圧下での回転蒸発によって過剰な溶媒を除去した。生成物をシリカゲルクロマトグラフィー（１００％のＣＨＣｌ３から開始し、９：１のＣＨＣｌ３／ＭｅＯＨへと変化させて徐々に溶出）によって慎重に精製した後、逆相ＨＰＬＣを実施することで未反応のマレイミド−ＰＥＧ８−酸を除去した。生成物８６を単離し、２段階の総収率は１０％であった（６．６ｍｇ）。ＬＣ／ＭＳ
１．１６分 （ＥＳ＋） ｍ／ｚ （相対強度） ７７０．２０ （［Ｍ ＋ ２Ｈ］＋．， ４０％）。
【０８６８】
実施例９−化合物８３の代替合成
【化１１１】
2018516243.tif 000126
（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メチル（（Ｓ）−１−（（（Ｓ）−１−（（４−（（Ｓ）−７−メトキシ−８−（３−（（（Ｓ）−７−メトキシ−２−（４−（４−メチルピペラジン−１−イル）フェニル）−５，１１−ジオキソ−１０−（（２−（トリメチルシリル）エトキシ）メチル）−５，１０，１１，１１ａ−テトラヒドロ−１Ｈ−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−８−イル）オキシ）プロポキシ）−５，１１−ジオキソ−１０−（（２−（トリメチルシリル）エトキシ）メチル）−５，１０，１１，１１ａ−テトラヒドロ−１Ｈ−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−２−イル）フェニル）アミノ）−１−オキソプロパン−２−イル）アミノ）−３−メチル−１−オキソブタン−２−イル）カルバメート（８３）
ＰＢＤ−トリフレート２１（４６９ｍｇ、０．３２３ｍｍｏｌ）（ＷＯ２０１４／０５７０７３に記載の化合物２１）、ボロン酸ピナコールエステル（ｂｏｒｏｎｉｃ  ｐｉｎａｃｏｌ  ｅｓｔｅｒ）（１４６．５ｍｇ、０．４８４ｍｍｏｌ）、及びＮａ２ＣＯ３（１５７ｍｇ、１．４８ｍｍｏｌ）を、トルエン／ＭｅＯＨ／Ｈ２Ｏを２：１：１で含む混合物（１０ｍＬ）に溶解した。反応用フラスコにアルゴンを３回通気した後、テトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（０）（７．４１ｍｇ、０．００６４ｍｍｏｌ）を添加し、反応混合物を３０℃に一晩加熱した。減圧下で溶媒を除去し、残留物をＨ２Ｏ（５０ｍＬ）に取り込んでからＥｔＯＡｃ（５０ｍＬで３回）で抽出した。統合した有機物をブライン（１００ｍＬ）で洗浄し、ＭｇＳＯ４で脱水してから濾過した後、減圧下での回転蒸発によって揮発性物質を除去した。粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ＣＨＣｌ３１００％からＣＨＣｌ３／ＭｅＯＨ  ９５％：５％）によって精製することで、純粋な８３を収率３３％で得た（８８５ｍｇ）。ＬＣ／ＭＳ
３．２７分 （ＥＳ＋） ｍ／ｚ （相対強度） １４７８ （［Ｍ ＋ Ｈ］＋．， １００％）。
【０８６９】
実施例１０
【化１１２】
2018516243.tif 000127
【０８７０】
（ａ）（Ｓ）−７−メトキシ−８−（（５−（（（Ｓ）−７−メトキシ−２−（４−（４−メチルピペラジン−１−イル）フェニル）−５，１１−ジオキソ−１０−（（２−（トリメチルシリル）エトキシ）メチル）−５，１０，１１，１１ａ−テトラヒドロ−１Ｈ−ベンゾ［ｅ］ピロロ［１，２−ａ］［１，４］ジアゼピン−８−イル）オキシ）ペンチル）オキシ）−５，１１−ジオキソ−１０−（（２−（トリメチルシリル）エトキシ）メチル）−５，１０，１１，１１ａ−テトラヒドロ−１Ｈ−ベンゾ［ｅ］ピロロ［１，２−ａ］［１，４］ジアゼピン−２−イルトリフルオロメタンスルホネート（８８）
ビス−エノールトリフレート８７（１ｇ、０．８７ｍｍｏｌ）（ＷＯ２０１０／０４３８８０に記載の化合物８ｂ）、４−（４−メチルピペラジン−１−イル）フェニルボロン酸ピナコールエステル（２６４ｍｇ、０．８７ｍｍｏｌ）、Ｎａ２ＣＯ３（１３８ｍｇ、１．３０ｍｍｏｌ）、ＥｔＯＨ（５ｍＬ）、トルエン（１０ｍＬ）、及び水（５ｍＬ）の混合物を撹拌し、当該混合物に対してＰｄ（ＰＰｈ３）４（３０ｍｇ、２６μｍｏｌ）を添加した。反応混合物を窒素雰囲気下、室温で一晩撹拌した後、出発材料が完全に消費されたことをＴＬＣ（ＥｔＯＡｃ）及びＬＣ／ＭＳ（１．５２分
（ＥＳ＋） ｍ／ｚ （相対強度） １１７１．４０ （［Ｍ ＋ Ｈ］＋．， １００））によって確認した。反応混合物をＥｔＯＡｃ（４００ｍＬ）で希釈してから、Ｈ２Ｏ（３００ｍＬで２回）、ブライン（２００ｍＬ）で洗浄し、脱水（ＭｇＳＯ４）してから濾過した後、減圧下で蒸発させることによって粗生成物を得た。フラッシュクロマトグラフィー（１００：０ｖ／ｖのＥｔＯＡｃ／ＭｅＯＨから８５：１５ｖ／ｖのＥｔＯＡｃ／ＭｅＯＨとするグラジエント溶出）によって精製することで、非対称型トリフレート８８を得た（２８５ｍｇ、２８％）。１Ｈ
ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３） δ ７．３９ （ｓ， １Ｈ）， ７．３７ − ７．２９ （ｍ，
４Ｈ）， ７．２３ （ｄ， Ｊ ＝ ２．８ Ｈｚ， ２Ｈ）， ７．１４ （ｔ， Ｊ ＝ ２．０ Ｈｚ， １Ｈ）， ６．８９ （ｄ， Ｊ ＝ ９．０ Ｈｚ， ２Ｈ），
５．５４ （ｄ， Ｊ ＝ １０．０ Ｈｚ， ２Ｈ）， ４．７１ （ｄｄ， Ｊ ＝ １０．０， ２．６ Ｈｚ， ２Ｈ）， ４．６２ （ｔｄ， Ｊ ＝ １０．７，
３．５ Ｈｚ， ２Ｈ）， ４．１３ − ４．０１ （ｍ， ４Ｈ）， ３．９７ − ３．８７ （ｍ， ８Ｈ）， ３．８５ − ３．７５ （ｍ， ２Ｈ）， ３．７４
− ３．６３ （ｍ， ２Ｈ）， ３．３１ − ３．２２ （ｍ， ４Ｈ）， ３．１４ （ｔｄｄ， Ｊ ＝ １６．２， １０．８， ２．２ Ｈｚ， ２Ｈ）， ２．７３
− ２．５６ （ｍ， ４Ｈ）， ２．３８ （ｄ， Ｊ ＝ ２．４ Ｈｚ， ３Ｈ）， ２．０２ − １．９２ （ｍ， ４Ｈ）， １．７３ （ｄｄ， Ｊ ＝ ９．４，
６．０ Ｈｚ， ２Ｈ）， １．０４ − ０．９０ （ｍ， ４Ｈ）， ０．０５ − −０．００ （ｍ， １８Ｈ）。ＭＳ （ＥＳ＋） ｍ／ｚ
（相対強度） １１７１．４０ （［Ｍ ＋ Ｈ］＋．， １００）。
【０８７１】
（ｂ）（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メチル（（Ｓ）−１−（（（Ｓ）−１−（（４−（（Ｓ）−７−メトキシ−８−（（５−（（（Ｓ）−７−メトキシ−２−（４−（４−メチルピペラジン−１−イル）フェニル）−５，１１−ジオキソ−１０−（（２−（トリメチルシリル）エトキシ）メチル）−５，１０，１１，１１ａ−テトラヒドロ−１Ｈ−ベンゾ［ｅ］ピロロ［１，２−ａ］［１，４］ジアゼピン−８−イル）オキシ）ペンチル）オキシ）−５，１１−ジオキソ−１０−（（２−（トリメチルシリル）エトキシ）メチル）−５，１０，１１，１１ａ−テトラヒドロ−１Ｈ−ベンゾ［ｅ］ピロロ［１，２−ａ］［１，４］ジアゼピン−２−イル）フェニル）アミノ）−１−オキソプロパン−２−イル）アミノ）−３−メチル−１−オキソブタン−２−イル）カルバメート（８９）
非対称型トリフレート８８（２６９ｍｇ、０．２３ｍｍｏｌ）、Ｆｍｏｃ−Ｖａｌ−Ａｌａ−４−アミノフェニルボロン酸ピナコールエステル２０（２１０ｍｇ、０．３４ｍｍｏｌ）、Ｎａ２ＣＯ３（３６．５ｍｇ、０．３４ｍｍｏｌ）、ＥｔＯＨ（５ｍＬ）、トルエン（１０ｍＬ）、ＴＨＦ（１ｍＬ）、及び水（５ｍＬ）の混合物を撹拌し、当該混合物に対してＰｄ（ＰＰｈ３）４（８ｍｇ、７μｍｏｌ）を添加した。反応混合物を窒素雰囲気下、３５℃で２時間撹拌した後、ＴＬＣ（８０：２０ｖ／ｖのＥｔＯＡｃ／ＭｅＯＨ）及びＬＣ／ＭＳ
（１．６８分 （ＥＳ＋） ｍ／ｚ （相対強度） １５０８．１０ （［Ｍ ＋ Ｈ］＋．， １００））によって出発材料が完全に消費されたことを確認した。反応混合物をＥｔＯＡｃ（１００ｍＬ）で希釈してから、Ｈ２Ｏ（１００ｍＬで１回）、ブライン（２００ｍＬ）で洗浄し、脱水（ＭｇＳＯ４）してから濾過した後、減圧下で蒸発させることによって粗生成物を得た。フラッシュクロマトグラフィー（１００：０ｖ／ｖのＥｔＯＡｃ／ＭｅＯＨから８０：２０ｖ／ｖのＥｔＯＡｃ／ＭｅＯＨとするグラジエント溶出）によって精製することで、ＳＥＭで保護された二量体８９を得た（２４０ｍｇ、６９％）。１Ｈ
ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３） δ ８．４２ （ｓ，
１Ｈ）， ７．７６ （ｄ， Ｊ ＝ ７．５ Ｈｚ， ２Ｈ）， ７．６３ − ７．４９ （ｍ， ４Ｈ）， ７．４５ − ７．２８ （ｍ， ９Ｈ）， ７．２５ （ｄ，
Ｊ ＝ ２．９ Ｈｚ， １Ｈ）， ６．８７ （ｔ， Ｊ ＝ １４．０ Ｈｚ， ２Ｈ）， ６．４１ （ｓ， １Ｈ）， ５．６３ − ５．４９ （ｍ， ２Ｈ）， ５．２５
（ｓ， １Ｈ）， ４．７１ （ｄ， Ｊ ＝ １０．１ Ｈｚ， ２Ｈ）， ４．６８ − ４．５７ （ｍ， ２Ｈ）， ４．４９ （ｄ， Ｊ ＝ ６．７ Ｈｚ， ２Ｈ），
４．２０ （ｓ， １Ｈ）， ４．１６ − ４．０２ （ｍ， ４Ｈ）， ４．００ − ３．８７ （ｍ， ７Ｈ）， ３．８６ − ３．６１ （ｍ， ７Ｈ）， ３．３０
− ３．２１ （ｍ， ４Ｈ）， ３．１９ − ３．０５ （ｍ， ２Ｈ）， ２．６９ − ２．５４ （ｍ， ４Ｈ）， ２．３７ （ｓ， ３Ｈ）， ２．０４ − １．９２
（ｍ， ４Ｈ）， １．９１ − １．７９ （ｍ， ４Ｈ）， １．７２ （ｓ， ２Ｈ）， １．４６ （ｄ， Ｊ ＝ ６．９ Ｈｚ， ３Ｈ）， １．０４ − ０．８２
（ｍ， ８Ｈ）， ０．０４ − −０．０２ （ｍ， １８Ｈ）。ＭＳ （ＥＳ＋） ｍ／ｚ （相対強度） １５０８．１０ （［Ｍ ＋ Ｈ］＋．，
１００）。
【０８７２】
（ｃ）（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メチル（（Ｓ）−１−（（（Ｓ）−１−（（４−（（Ｓ）−７−メトキシ−８−（（５−（（（Ｓ）−７−メトキシ−２−（４−（４−メチルピペラジン−１−イル）フェニル）−５−オキソ−５，１１ａ−ジヒドロ−１Ｈ−ベンゾ［ｅ］ピロロ［１，２−ａ］［１，４］ジアゼピン−８−イル）オキシ）ペンチル）オキシ）−５−オキソ−５，１１ａ−ジヒドロ−１Ｈ−ベンゾ［ｅ］ピロロ［１，２−ａ］［１，４］ジアゼピン−２−イル）フェニル）アミノ）−１−オキソプロパン−２−イル）アミノ）−３−メチル−１−オキソブタン−２−イル）カルバメート（９０）
無水ＴＨＦ（１０ｍＬ）中にＳＥＭ−テトララクタム８９（２１６ｍｇ、０．１４３ｍｍｏｌ）を含む溶液を撹拌し、当該溶液に対してスーパーヒドリド（Ｓｕｐｅｒ  ｈｙｄｒｉｄｅ）（０．３５８ｍＬ、０．３５８ｍｍｏｌ、ＴＨＦ中１．０Ｍ）を−７８℃で滴下して添加した。反応混合物を３時間撹拌した後、出発材料が完全に変換されたことをＬＣ／ＭＳ
（１．３７分 （ＥＳ＋） ｍ／ｚ （相対強度） ６０８．１５ （（［Ｍ ＋ ２Ｈ］２＋）／２， １００））によって直接的に確認した。反応混合物をＨ２Ｏ（１００ｍＬ）で慎重に希釈し、ＤＣＭ（１００ｍＬ）で抽出した。有機層をブライン（１００ｍＬ）で洗浄し、ＭｇＳＯ４で脱水してから濾過した後、減圧下で蒸発させることによって、中間体であるＳＥＭ−カルビノールアミンを得た。この白色の固体をＭｅＯＨ（１００ｍＬ）、ＤＣＭ（１０ｍＬ）、及びＨ２Ｏ（２０ｍＬ）に迅速に溶解し、フラッシュシリカゲル（５０ｇ）で処理した。粘性懸濁液を室温で４日間撹拌した後、所望の生成物が十分量形成されたことをＴＬＣ（９０：１０ｖ／ｖのＣＨＣｌ３／ＭｅＯＨ）によって確認した。反応混合物を多孔度３の焼結式漏斗に通して濾過し、９０：１０ｖ／ｖのＣＨＣｌ３／ＭｅＯＨを用いて、生成物がもはや溶出されなくなるまで（ＴＬＣによって確認）パッドをゆっくりと完全に洗い込んだ。濾液をブライン（１００ｍＬ）で洗浄し、脱水（ＭｇＳＯ４）してから濾過した後、減圧下での蒸発処理後に高減圧下で乾燥させることで粗生成物を得た。フラッシュクロマトグラフィー（ＨＰＬＣグレードのものを使用し、９８：２ｖ／ｖのＣＨＣｌ３／ＭｅＯＨから８８：１２ｖ／ｖのＣＨＣｌ３／ＭｅＯＨとするグラジエント溶出）によって精製することで、カルビノールアミンエーテル及びイミンの混合物として９０を得た（８０ｍｇ、４６％）。１Ｈ
ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３） δ ８．５２ （ｓ， １Ｈ）， ７．８７ （ｄ， Ｊ ＝ ３．９
Ｈｚ， ２Ｈ）， ７．７５ （ｄ， Ｊ ＝ ７．５ Ｈｚ， ２Ｈ）， ７．６６ − ７．２６ （ｍ， １２Ｈ）， ６．９０ （ｄ， Ｊ ＝ ８．８ Ｈｚ， ２Ｈ），
６．８１ （ｓ， １Ｈ）， ６．６４ （ｄ， Ｊ ＝ ６．０ Ｈｚ， １Ｈ）， ５．３７ （ｄ， Ｊ ＝ ５．７ Ｈｚ， １Ｈ）， ４．７４ − ４．５８ （ｍ，
２Ｈ）， ４．５４ − ４．３１ （ｍ， ４Ｈ）， ４．２６ − ３．９８ （ｍ， ６Ｈ）， ３．９４ （ｓ， ２Ｈ）， ３．８６ （ｄｄ， Ｊ ＝ １３．６，
６．６ Ｈｚ， １Ｈ）， ３．６３ − ３．４８ （ｍ， ２Ｈ）， ３．３７ （ｄｄ， Ｊ ＝ １６．５， ５．６ Ｈｚ， ２Ｈ）， ３．３１ − ３．１７ （ｍ，
４Ｈ）， ２．６６ − ２．５１ （ｍ， ４Ｈ）， ２．３６ （ｓ， ３Ｈ）， ２．１６ （ｄ， Ｊ ＝ ５．１ Ｈｚ， １Ｈ）， ２．０６ − １．８８ （ｍ，
４Ｈ）， １．７８ − １．５５ （ｍ， ６Ｈ）， １．４６ （ｄ， Ｊ ＝ ６．８ Ｈｚ， ３Ｈ）， ０．９４ （ｄ， Ｊ ＝ ６．８ Ｈｚ， ６Ｈ）。ＭＳ
（ＥＳ＋） ｍ／ｚ （相対強度） ６０８．１５ （（［Ｍ ＋ ２Ｈ］ ２＋）／２， １００）。
【０８７３】
（ｄ）１−（３−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）プロパンアミド）−Ｎ−（（Ｓ）−１−（（（Ｓ）−１−（（４−（（Ｓ）−７−メトキシ−８−（（５−（（（Ｓ）−７−メトキシ−２−（４−（４−メチルピペラジン−１−イル）フェニル）−５−オキソ−５，１１ａ−ジヒドロ−１Ｈ−ベンゾ［ｅ］ピロロ［１，２−ａ］［１，４］ジアゼピン−８−イル）オキシ）ペンチル）オキシ）−５−オキソ−５，１１ａ−ジヒドロ−１Ｈ−ベンゾ［ｅ］ピロロ［１，２−ａ］［１，４］ジアゼピン−２−イル）フェニル）アミノ）−１−オキソプロパン−２−イル）アミノ）−３−メチル−１−オキソブタン−２−イル）−３，６，９，１２，１５，１８，２１，２４−オクタオキサヘプタコサン−２７−アミド（９１）
ＤＭＦ（１ｍＬ）中に９０（７７ｍｇ、６３．４μｍｏｌ）を含む溶液に対してピペリジン（０．２ｍＬ）を添加した。反応混合物を２０分間撹拌した。反応混合物をＤＣＭ（５０ｍＬ）で慎重に希釈し、水（５０ｍＬ）で洗浄した。有機層をブライン（１００ｍＬ）で洗浄し、ＭｇＳＯ４で脱水してから濾過した後、減圧下で蒸発させることで、無保護のバリン中間体を得た。粗残留物をクロロホルム（５ｍＬ）に迅速に再溶解させた。Ｍａｌ（Ｐｅｇ）８−酸（５６ｍｇ、９５μｍｏｌ）及びＥＤＣＩ（１８ｍｇ、９５μｍｏｌ）を添加した後、メタノール（０．１ｍＬ）を添加した。反応物を室温で３時間撹拌し、この時点でＴＬＣ及びＬＣ／ＭＳ
（１．１９分 （ＥＳ＋） ｍ／ｚ （相対強度） ７８４．２５ （（［Ｍ ＋ ２Ｈ］ ２＋）／２， １００））によって反応が完了したことを確認した。反応混合物をクロロホルム（５０ｍＬ）で希釈してから水（１００ｍＬ）で洗浄し、脱水（ＭｇＳＯ４）してから濾過した後、減圧下での蒸発処理後に高減圧下で乾燥させることで粗生成物を得た。フラッシュクロマトグラフィー（ＨＰＬＣグレードのものを使用し、９６：４ｖ／ｖのＣＨＣｌ３／ＭｅＯＨから９０：１０ｖ／ｖのＣＨＣｌ３／ＭｅＯＨとするグラジェント溶出）によって精製することで、黄色の固体として９１を得た（４３ｍｇ、４３％）。１Ｈ
ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３） δ ８．７３ （ｓ，
１Ｈ）， ７．８８ （ｄｄ， Ｊ ＝ ７．６， ３．９ Ｈｚ， ２Ｈ）， ７．７５ （ｄ， Ｊ ＝ ８．６ Ｈｚ， ２Ｈ）， ７．５２ （ｄ， Ｊ ＝ ２．０
Ｈｚ， ２Ｈ）， ７．４４ （ｓ， １Ｈ）， ７．４０ − ７．２８ （ｍ， ４Ｈ）， ６．９１ （ｄ， Ｊ ＝ ８．８
Ｈｚ， ２Ｈ）， ６．８１ （ｓ， ２Ｈ）， ６．６９ （ｓ， ２Ｈ）， ６．４８ （ｓ， １Ｈ）， ４．７２ − ４．６３ （ｍ，
１Ｈ）， ４．４６ − ４．３４ （ｍ， ２Ｈ）， ４．２５ − ４．０３ （ｍ，
６Ｈ）， ３．９５ （ｓ， ４Ｈ）， ３．８４ （ｄｄ， Ｊ ＝ １７．２， １０．１ Ｈｚ， ４Ｈ）， ３．７２ − ３．４６ （ｍ，
３０Ｈ）， ３．４４ − ３．３２ （ｍ， ４Ｈ）， ３．３０ − ３．２０ （ｍ，
４Ｈ）， ２．７５ − ２．６３ （ｍ， １Ｈ）， ２．５９ （ｓ， ４Ｈ）， ２．５５ − ２．４３ （ｍ，
３Ｈ）， ２．３７ （ｓ， ３Ｈ）， ２．２９ （ｄｄ， Ｊ ＝ １２．７， ６．７ Ｈｚ， １Ｈ）， ２．０３ − １．８９ （ｍ，
４Ｈ）， １．７２ （ｄ， Ｊ ＝ ２２．７ Ｈｚ， ８Ｈ）， １．４６ （ｄ， Ｊ ＝ ７．２ Ｈｚ， ３Ｈ）， １．０１ （ｄｄ， Ｊ ＝ １１．５， ６．９
Ｈｚ， ６Ｈ）。ＭＳ （ＥＳ＋） ｍ／ｚ （相対強度） ７８４．２５ （（［Ｍ ＋ ２Ｈ］ ２＋）／２， １００）。
【０８７４】
実施例１１
（ｉ）（Ｓ）−（（ペンタン−１，５−ジイルビス（オキシ））ビス（２−アミノ−５−メトキシ−４，１−フェニレン））ビス（（（Ｓ）−２−（（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）メチル）−４−メチル−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）メタノン）（９８）
【化１１３】
2018516243.tif 000128
【０８７５】
（ａ）（Ｓ，Ｒ）−（（ペンタン−１，５−ジイルビス（オキシ））ビス（５−メトキシ−２−ニトロ−４，１−フェニレン））ビス（（（２Ｓ，４Ｒ）−２−（（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）メチル）−４−ヒドロキシピロジリン−１−イル）メタノン）（９４）
無水ＤＣＭ（４５０ｍＬ）中に４，４’−（ペンタン−１，５−ジイルビス（オキシ））ビス（５−メトキシ−２−ニトロ安息香酸）（９２）（３６．６４ｇ、７４．０ｍｍｏｌ）、及び塩化オキサリル（１８．７９ｍＬ、０．２２２ｍｏｌ、３．０当量）を含む懸濁液を撹拌し、当該懸濁液に対して、発泡が活発に生じるまで無水ＤＭＦ（約０．５ｍＬ）を滴下して添加し、反応混合物を一晩撹拌した。反応混合物を蒸発乾燥させ、ジエチルエーテルを用いて粉砕した。得られた黄色の沈殿物を溶液から濾過分離してからジエチルエーテル（１００ｍＬ）で洗浄し、無水ＤＣＭ（４００ｍＬ）中に（３Ｒ，５Ｓ）−５−（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルオキシ）メチル）ピロリジン−３−オール（９３）（３９．４０ｇ、０．１７０ｍｏｌ、２．３当量）及び無水トリエチルアミン（８２．６３ｍＬ、０．５９２ｍｏｌ、８当量）を含む溶液に対して−４０℃で迅速に添加した。反応混合物を室温まで徐々に温めた後（２．５時間かけて実施）、ＬＣＭＳによって分析し、反応が完了したことを確認した。ＤＣＭ（２５０ｍＬ）を添加し、混合物を分液漏斗に移した。有機層を０．１ＭのＨＣｌ（８００ｍＬで２回）、飽和ＮａＨＣＯ３（５００ｍＬ）、及びブライン（３００ｍＬ）で順次洗浄した。ＭｇＳＯ４によって脱水してから濾過した後、溶媒を蒸発させることで、黄色の泡沫として生成物を得た（６２．８ｇ、９２％）。ＬＣ／ＭＳ：
ＲＴ １．９６分；ＭＳ （ＥＳ＋） ｍ／ｚ （相対強度） ９２１．４５ （［Ｍ＋Ｈ］＋， １００）。
【０８７６】
（ｂ）（５Ｓ，５’Ｓ）−１，１’−（４，４’−（ペンタン−１，５−ジイルビス（オキシ））ビス（５−メトキシ−２−ニトロベンゾイル））ビス（５−（（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）メチル）ピロリジン−３−オン）（９５）
無水ＤＣＭ（５００ｍＬ）中にジオール９４（６１．９０ｇ、６７．２０ｍｍｏｌ）及びＴＥＭＰＯ（２．１０ｇ、１３．４４ｍｍｏｌ、０．２当量）を含む溶液に対して、トリクロロイソシアヌル酸（２１．８６ｇ、９４．０７ｍｍｏｌ、１．４当量）をアルゴン雰囲気下、０℃で一度に添加した。反応混合物を０℃で２０分間撹拌した後、反応混合物をＬＣＭＳによって分析し、反応が完了したことを確認した。反応混合物をＤＣＭ（４００ｍＬ）で希釈し、飽和炭酸水素ナトリウム（５００ｍＬ）、０．２Ｍのチオ硫酸ナトリウム溶液（６００ｍＬ）、ブライン（４００ｍＬ）で洗浄してから脱水（ＭｇＳＯ４）した。溶媒を蒸発させて粗生成物を得た。フラッシュクロマトグラフィー［８０％ｎ−ヘキサン／２０％酢酸エチルから１００％酢酸エチルとするグラジエント溶出］を実施することで、黄色の固体として純粋な９５を得た（４９．３０ｇ、８０％）。ＬＣ／ＭＳ：
ＲＴ ２．０３分；ＭＳ （ＥＳ＋） ｍ／ｚ （相対強度） ９１７．５５ （［Ｍ＋Ｈ］＋， １００）。
【０８７７】
（ｃ）（５Ｓ，５’Ｓ）−１，１’−（４，４’−（ペンタン−１，５−ジイルビス（オキシ））ビス（５−メトキシ−２−ニトロベンゾイル））ビス（５−（（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）メチル）−４，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−３，１−ジイル）ビス（トリフルオロメタンスルホネート），（９６）
２，６−ルチジン（２２．３３ｍＬ、０．１９２ｍｏｌ、８．０当量）を含む無水ＤＣＭ（４００ｍＬ）中にビス−ケトン９５（２１．９８ｇ、２３．９６ｍｍｏｌ）を含む溶液を激しく撹拌し、当該溶液に対してトリフルオロメタンスルホン酸無水物（２４．１９ｍＬ、０．１４４ｍｏｌ、６．０当量）を−４０℃で滴下して添加した。反応混合物を−４０℃で３０分間撹拌した後、ＬＣＭＳによって分析し、反応が完了したことを確認した。反応混合物をＤＣＭ（５００ｍＬ）で迅速に希釈してから、氷冷水（６００ｍＬ）、氷冷飽和炭酸水素ナトリウム（４００ｍＬ）、及びブライン（５００ｍＬ）で洗浄し、ＭｇＳＯ４で脱水してから濾過した後、蒸発させることで未精製の茶色の油を得た。フラッシュクロマトグラフィー［８０％ｎ−ヘキサン／２０％酢酸エチルから６６％ｎ−ヘキサン／３３％酢酸エチルとするグラジエント溶出］を実施することで、茶色の泡沫として純粋な９６を得た（１６．４０ｇ、５８％）。ＬＣ／ＭＳ：
ＲＴ ２．２８分；ＭＳ （ＥＳ＋） ｍ／ｚ （相対強度）データなし。
【０８７８】
（ｄ）（Ｓ）−（（ペンタン−１，５−ジイルビス（オキシ））ビス（５−メトキシ−２−ニトロ−４，１−フェニレン））ビス（（（Ｓ）−２−（（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）メチル）−４−メチル−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）メタノン）（９７）
トリフレート９６（５．０６ｇ、４．２９ｍｍｏｌ）、メチルボロン酸（１．８０ｇ、３０．００ｍｍｏｌ、７当量）、及びトリフェニルアルシン（１．０５ｇ、３．４３ｍｍｏｌ、０．８当量）を無水ジオキサンに溶解し、アルゴン雰囲気下で撹拌した。その後、Ｐｄ（ＩＩ）ビスベンゾニトリルクロリドを添加し、反応混合物を２０分間８０℃まで迅速に加熱した。反応混合物を冷却してからセライト（酢酸エチルを通して洗浄済）に通して濾過し、濾液を水（５００ｍＬ）、ブライン（５００ｍＬ）で洗浄し、ＭｇＳＯ４で脱水してから濾過後に蒸発させた。フラッシュクロマトグラフィー［５０％ｎ−ヘキサン／５０％酢酸エチルのグラジエント溶出］を実施することで、茶色の泡沫として純粋な９７を得た（４．３１ｇ、５９％）。ＬＣ／ＭＳ：
ＲＴ ２．２３分；ＭＳ （ＥＳ＋） ｍ／ｚ （相対強度） ９１３．５０ （［Ｍ＋Ｈ］＋， １００）。
【０８７９】
（ｅ）（Ｓ）−（（ペンタン−１，５−ジイルビス（オキシ））ビス（２−アミノ−５−メトキシ−４，１−フェニレン））ビス（（（Ｓ）−２−（（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）メチル）−４−メチル−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）メタノン）（９８）
５％ギ酸／メタノール（２００ｍＬ）中にビス−ニトロ化合物９７（１０．２６ｇ、１１．２４ｍｍｏｌ）を含む溶液に対して、冷却水浴を利用して温度を２５〜３０℃に保ちながら、亜鉛末（２６．４８ｇ、０．４０５ｍｏｌ、３６．０当量）を一度に添加した。反応物を３０℃で２０分間撹拌した後、ＬＣＭＳによって反応が完了したことを確認した。反応混合物をセライトに通して濾過することで過剰な亜鉛を除去し、これを酢酸エチル（６００ｍＬ）で洗浄した。有機画分を水（５００ｍＬ）、飽和炭酸水素ナトリウム（５００ｍＬ）、及びブライン（４００ｍＬ）で洗浄し、ＭｇＳＯ４で脱水してから蒸発させた。フラッシュクロマトグラフィー［１００％クロロホルムから９９％クロロホルム／１％メタノールとするグラジエント溶出］を実施することで、オレンジ色の泡沫として純粋な９８を得た（６．２２ｇ、６５％）。ＬＣ／ＭＳ：
ＲＴ ２．２０分；ＭＳ （ＥＳ＋） ｍ／ｚ （相対強度） ８５３．５０ （［Ｍ＋Ｈ］＋， １００）。
【０８８０】
（ｉｉ）４−（（Ｒ）−２−（（Ｒ）−２−（（（アリルオキシ）カルボニル）アミノ）−３−メチルブタンアミド）プロパンアミド）ベンジル４−（（１０Ｒ，１３Ｒ）−１０−イソプロピル−１３−メチル−８，１１−ジオキソ−２，５−ジオキサ−９，１２−ジアザテトラデカンアミド）ベンジル（（Ｓ）−（ペンタン−１，５−ジイルビス（オキシ））ビス（２−（（Ｓ）−２−（ヒドロキシメチル）−４−メチル−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−カルボニル）−４−メトキシ−５，１−フェニレン））ジカルバメート（１０３）
【化１１４】
2018516243.tif 000129
【０８８１】
（ａ）アリル（５−（（５−（５−アミノ−４−（（Ｓ）−２−（（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）メチル）−４−メチル−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−カルボニル）−２−メトキシフェノキシ）ペンチル）オキシ）−２−（（Ｓ）−２−（（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）メチル）−４−メチル−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−カルボニル）−４−メトキシフェニル）カルバメート（９９）
無水ＤＣＭ（３５０ｍＬ）中にビス−アニリン９８（８．１４ｇ、９．５４ｍｍｏｌ）を含む溶液に対して、ピリジン（１．１５６ｍＬ、１４．３０ｍｍｏｌ、１．５当量）をアルゴン雰囲気下、−７８℃で添加した。５分後、アリルクロロホルメート（０．９１１ｍＬ、８．５８ｍｍｏｌ、０．９当量）を添加し、反応混合物を室温まで温めた。反応混合物をＤＣＭ（２５０ｍＬ）で希釈し、飽和ＣｕＳＯ４溶液（４００ｍＬ）、飽和炭酸水素ナトリウム（４００ｍＬ）、及びブライン（４００ｍＬ）で洗浄してからＭｇＳＯ４で脱水した。フラッシュクロマトグラフィー［６６％ｎ−ヘキサン／３３％酢酸エチルから３３％ｎ−ヘキサン／６６％酢酸エチルとするグラジエント溶出］を実施することでオレンジ色の泡沫として純粋な９９を得た（３．８８ｇ、４３％）。ＬＣ／ＭＳ：
ＲＴ ２．２７分；ＭＳ （ＥＳ＋） ｍ／ｚ （相対強度） ９３７．５５ （［Ｍ＋Ｈ］＋， １００）。
【０８８２】
（ｂ）アリル４−（（１０Ｓ，１３Ｓ）−１０−イソプロピル−１３−メチル−８，１１−ジオキソ−２，５−ジオキサ−９，１２−ジアザテトラデカンアミド）ベンジル（（Ｓ）−（ペンタン−１，５−ジイルビス（オキシ））ビス（２−（（Ｓ）−２−（（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）メチル）−４−メチル−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−カルボニル）−４−メトキシ−５，１−フェニレン））ジカルバメート（１００）
無水ＴＨＦ（５０ｍＬ）中にアニリン９９（２．６２ｇ、２．７９ｍｍｏｌ）及びトリホスゲン（０．３０ｇ、１．００ｍｍｏｌ、０．３６当量）を含む溶液を撹拌し、当該溶液に対してトリエチルアミン（０．８５４ｍＬ、６．１４ｍｍｏｌ，２．２当量）をアルゴン雰囲気下、０℃で添加した。反応混合物を室温で５分間撹拌した。一定分量を取り出してメタノールで反応を停止し、ＬＣＭＳによって分析してイソシアネートが形成されたことを確認した。脱水ＴＨＦ（５０ｍＬ）中にｍＰＥＧ２−Ｖａｌ−Ａｌａ−ＰＡＢ−ＯＨ（１．５４ｇ、３．６３ｍｍｏｌ、１．３当量）及びトリエチルアミン（０．５８３ｍＬ、４．１９ｍｍｏｌ、１．５当量）を含む溶液を一度に添加し、得られた混合物を４０℃で一晩撹拌した。反応混合物の溶媒を蒸発させて粗生成物を得た。フラッシュクロマトグラフィー［１００％クロロホルムから９８％クロロホルム／２％メタノールとするグラジエント溶出］を実施することで、薄オレンジ色の固体として純粋な１００を得た（２．３８ｇ、６２％）。ＬＣ／ＭＳ：
ＲＴ ２．２９分；ＭＳ （ＥＳ＋） ｍ／ｚ （相対強度）データなし。
【０８８３】
（ｃ）４−（（１０Ｓ，１３Ｓ）−１０−イソプロピル−１３−メチル−８，１１−ジオキソ−２，５−ジオキサ−９，１２−ジアザテトラデカンアミド）ベンジル（５−（（５−（５−アミノ−４−（（Ｓ）−２−（（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）メチル）−４−メチル−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−カルボニル）−２−メトキシフェノキシ）ペンチル）オキシ）−２−（（Ｓ）−２−（（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）メチル）−４−メチル−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−カルボニル）−４−メトキシフェニル）カルバメート（１０１）
無水ＤＣＭ（２５ｍＬ）中に１００（２．３５ｇ、１．６９ｍｍｏｌ）及びピロリジン（０．３５ｍＬ、４．２４ｍｍｏｌ、２．５当量）を含む溶液を撹拌し、当該溶液に対してテトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（３９ｍｇ、０．０３４ｍｍｏｌ，０．０２当量）をアルゴン雰囲気下、室温で添加した。反応混合物を４５分間撹拌した後、ＤＣＭ（１００ｍＬ）で希釈し、飽和塩化アンモニウム溶液（１００ｍＬ）、ブライン（１００ｍＬ）で洗浄した後、ＭｇＳＯ４で脱水してから濾過し、蒸発させた。フラッシュクロマトグラフィー［１００％クロロホルムから９５％クロロホルム／５％メタノールとするグラジエント溶出］を実施することで、黄色の固体として純粋な１０１を得た（１．８１ｇ、８２％）。ＬＣ／ＭＳ：
ＲＴ ２．２１分；ＭＳ （ＥＳ＋） ｍ／ｚ （相対強度） １３０３．６５ （［Ｍ＋Ｈ］＋， １００）。
【０８８４】
（ｄ）４−（（Ｒ）−２−（（Ｒ）−２−（（（アリルオキシ）カルボニル）アミノ）−３−メチルブタンアミド）プロパンアミド）ベンジル４−（（１０Ｒ，１３Ｒ）−１０−イソプロピル−１３−メチル−８，１１−ジオキソ−２，５−ジオキサ−９，１２−ジアザテトラデカンアミド）ベンジル（（Ｓ）−（ペンタン−１，５−ジイルビス（オキシ））ビス（２−（（Ｓ）−２−（（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）メチル）−４−メチル−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−カルボニル）−４−メトキシ−５，１−フェニレン））ジカルバメート（１０２）
無水ＴＨＦ（５０ｍＬ）中にアニリン１０１（１．７８ｇ、１．３７ｍｍｏｌ）及びトリホスゲン（０．１５ｇ、０．４９ｍｍｏｌ、０．３６当量）を含む溶液を撹拌し、当該溶液に対してトリエチルアミン（０．４１９ｍＬ、３．０１ｍｍｏｌ、２．２当量）をアルゴン雰囲気下、０℃で添加した。反応混合物を室温で５分間撹拌した。一定分量を取り出してメタノールで反応を停止し、ＬＣＭＳによって分析してイソシアネートが形成されたことを確認した。脱水ＴＨＦ（４５ｍＬ）中にＡｌｌｏｃ−Ｖａｌ−Ａｌａ−ＰＡＢ−ＯＨ（０．６７ｇ、１．７８ｍｍｏｌ、１．３当量）及びトリエチルアミン（０．２９ｍＬ、２．０５ｍｍｏｌ、１．５当量）を含む溶液を一度に添加し、得られた混合物を４０℃で一晩撹拌した。反応混合物の溶媒を蒸発させて粗生成物を得た。フラッシュクロマトグラフィー［１００％酢酸エチルから９７％酢酸エチル／３％メタノールとするグラジエント溶出］を実施することで、淡黄色の固体として純粋な１０２を得た（１．３３ｇ、５７％）。
ＬＣ／ＭＳ：
ＲＴ ２．２１分；ＭＳ （ＥＳ＋） ｍ／ｚ （相対強度）データなし。
【０８８５】
（ｅ）４−（（Ｒ）−２−（（Ｒ）−２−（（（アリルオキシ）カルボニル）アミノ）−３−メチルブタンアミド）プロパンアミド）ベンジル４−（（１０Ｒ，１３Ｒ）−１０−イソプロピル−１３−メチル−８，１１−ジオキソ−２，５−ジオキサ−９，１２−ジアザテトラデカンアミド）ベンジル（（Ｓ）−（ペンタン−１，５−ジイルビス（オキシ））ビス（２−（（Ｓ）−２−（ヒドロキシメチル）−４−メチル−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−カルボニル）−４−メトキシ−５，１−フェニレン））ジカルバメート（１０３）
無水ＴＨＦ（１５ｍＬ）中にＴＢＳで保護された化合物１０２（１．３０ｇ、０．７６ｍｍｏｌ）を含む溶液に対して、テトラ−ｎ−ブチルアンモニウムフルオリド（１Ｍ、１．５２ｍＬ、１．５２ｍｍｏｌ、２．０当量）を添加した。反応混合物を室温で４時間撹拌した。反応混合物をクロロホルム（１００ｍＬ）で希釈し、水（４０ｍＬ）及びブライン（４０ｍＬ）で順次洗浄した。有機相をＭｇＳＯ４で脱水し、蒸発させて黄色の固体を得た。フラッシュクロマトグラフィー［９５％酢酸エチル／５％メタノールから９０％酢酸エチル／１０％メタノールとするグラジエント溶出］を実施することで、淡黄色の固体として純粋な１０３を得た（１．００ｇ、８９％）。ＬＣ／ＭＳ：
ＲＴ １．６０分；ＭＳ （ＥＳ＋） ｍ／ｚ （相対強度） １４７８．４５ （１００）。
【０８８６】
（ｉｉｉ）（１１Ｓ，１１ａＳ）−４−（（２Ｒ，５Ｒ）−３７−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−５−イソプロピル−２−メチル−４，７，３５−トリオキソ−１０，１３，１６，１９，２２，２５，２８，３１−オクタオキサ−３，６，３４−トリアザヘプタトリアコンタンアミド）ベンジル１１−ヒドロキシ−８−（（５−（（（１１Ｓ，１１ａＳ）−１１−ヒドロキシ−１０−（（（４−（（１０Ｒ，１３Ｒ）−１０−イソプロピル−１３−メチル−８，１１−ジオキソ−２，５−ジオキサ−９，１２−ジアザテトラデカンアミド）ベンジル）オキシ）カルボニル）−７−メトキシ−２−メチル−５−オキソ−５，１０，１１，１１ａ−テトラヒドロ−１Ｈ−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−８−イル）オキシ）ペンチル）オキシ）−７−メトキシ−２−メチル−５−オキソ−１１，１１ａ−ジヒドロ−１Ｈ−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−１０（５Ｈ）−カルボキシレート（１０６）
【化１１５】
2018516243.tif 000130
【０８８７】
（ａ）（１１Ｓ，１１ａＳ）−４−（（Ｒ）−２−（（Ｒ）−２−（（（アリルオキシ）カルボニル）アミノ）−３−メチルブタンアミド）プロパンアミド）ベンジル１１−ヒドロキシ−８−（（５−（（（１１Ｓ，１１ａＳ）−１１−ヒドロキシ−１０−（（（４−（（１０Ｒ，１３Ｒ）−１０−イソプロピル−１３−メチル−８，１１−ジオキソ−２，５−ジオキサ−９，１２−ジアザテトラデカンアミド）ベンジル）オキシ）カルボニル）−７−メトキシ−２−メチル−５−オキソ−５，１０，１１，１１ａ−テトラヒドロ−１Ｈ−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−８−イル）オキシ）ペンチル）オキシ）−７−メトキシ−２−メチル−５−オキソ−１１，１１ａ−ジヒドロ−１Ｈ−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−１０（５Ｈ）−カルボキシレート（１０４）
無水ＤＣＭ中に１０３（０．９７ｇ、０．６６ｍｍｏｌ）を含む溶液を撹拌し、当該溶液に対してデス・マーチン（Ｄｅｓｓ−Ｍａｒｔｉｎ）ペルヨージナン（０．５９ｇ、１．３８ｍｍｏｌ、２．１当量）をアルゴン雰囲気下、室温で添加した。反応混合物を４時間撹拌した。反応混合物をＤＣＭ（１００ｍＬ）で希釈してから、飽和炭酸水素ナトリウム溶液（１００ｍＬで３回）、水（１００ｍＬ）、ブライン（１００ｍＬ）で洗浄し、ＭｇＳＯ４で脱水してから濾過した後、蒸発させた。フラッシュクロマトグラフィー［１００％クロロホルムから９５％クロロホルム／５％メタノールとするグラジエント溶出］を実施することで、淡黄色の固体として純粋な１０４を得た（０．８８ｇ、９０％）。ＬＣ／ＭＳ：
ＲＴ １．５７分；ＭＳ （ＥＳ＋） ｍ／ｚ （相対強度） １４７３．３５ （１００）。
【０８８８】
（ｂ）（１１Ｓ，１１ａＳ）−４−（（Ｒ）−２−（（Ｒ）−２−アミノ−３−メチルブタンアミド）プロパンアミド）ベンジル１１−ヒドロキシ−８−（（５−（（（１１Ｓ，１１ａＳ）−１１−ヒドロキシ−１０−（（（４−（（１０Ｒ，１３Ｒ）−１０−イソプロピル−１３−メチル−８，１１−ジオキソ−２，５−ジオキサ−９，１２−ジアザテトラデカンアミド）ベンジル）オキシ）カルボニル）−７−メトキシ−２−メチル−５−オキソ−５，１０，１１，１１ａ−テトラヒドロ−１Ｈ−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−８−イル）オキシ）ペンチル）オキシ）−７−メトキシ−２−メチル−５−オキソ−１１，１１ａ−ジヒドロ−１Ｈ−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−１０（５Ｈ）−カルボキシレート（１０５）
無水ＤＣＭ（５ｍＬ）中に１０４（１０５ｍｇ、０．０７１ｍｍｏｌ）及びピロリジン（７μＬ、０．０８６ｍｍｏｌ、１．２当量）を含む溶液に対して、テトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（５ｍｇ、０．００４ｍｍｏｌ、０．０６当量）を添加した。反応混合物を１５分間撹拌した後、クロロホルム（５０ｍＬ）で希釈し、飽和塩化アンモニウム水溶液（３０ｍＬ）及びブライン（３０ｍＬ）で順次洗浄した。有機相を硫酸マグネシウムで脱水し、濾過してから蒸発させた。フラッシュクロマトグラフィー［１００％クロロホルムから９０％クロロホルム／１０％メタノールとするグラジエント溶出］を実施することで、淡黄色の固体として純粋な１０５を得た（５４ｍｇ、５５％）。ＬＣ／ＭＳ：
ＲＴ １．２１分；ＭＳ （ＥＳ＋） ｍ／ｚ （相対強度） １３８９．５０ （１００）。
【０８８９】
（ｃ）（１１Ｓ，１１ａＳ）−４−（（２Ｒ，５Ｒ）−３７−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−５−イソプロピル−２−メチル−４，７，３５−トリオキソ−１０，１３，１６，１９，２２，２５，２８，３１−オクタオキサ−３，６，３４−トリアザヘプタトリアコンタンアミド）ベンジル１１−ヒドロキシ−８−（（５−（（（１１Ｓ，１１ａＳ）−１１−ヒドロキシ−１０−（（（４−（（１０Ｒ，１３Ｒ）−１０−イソプロピル−１３−メチル−８，１１−ジオキソ−２，５−ジオキサ−９，１２−ジアザテトラデカンアミド）ベンジル）オキシ）カルボニル）−７−メトキシ−２−メチル−５−オキソ−５，１０，１１，１１ａ−テトラヒドロ−１Ｈ−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−８−イル）オキシ）ペンチル）オキシ）−７−メトキシ−２−メチル−５−オキソ−１１，１１ａ−ジヒドロ−１Ｈ−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−１０（５Ｈ）−カルボキシレート（１０６）
クロロホルム（５ｍＬ）中に１０５（２０３ｍｇ、０．１４６ｍｍｏｌ）及びマレイミド−ＰＥＧ８酸（８７ｍｇ、０．１４６ｍｍｏｌ）を含む溶液に対して、Ｎ−（３−ジメチルアミノプロピル）−Ｎ’−エチルカルボジイミド（２８ｍｇ、０．１４６ｍｍｏｌ、１当量）を添加した。反応物を１．５時間撹拌した後、クロロホルム（５０ｍＬ）で希釈してから、水（５０ｍＬ）、ブライン（３０ｍＬ）で洗浄し、硫酸マグネシウムで脱水してから濾過した後、蒸発させた。フラッシュクロマトグラフィー［１００％ＤＣＭから９０％ＤＣＭ／１０％メタノールとするグラジエント溶出］を実施することで、淡黄色の固体として１０６を得た（２０５ｍｇ、７２％）。ＬＣ／ＭＳ：
ＲＴ ５．７５分；ＭＳ （ＥＳ＋） ｍ／ｚ （相対強度） ９８２．９０ （１００）， １９６３．７０ （５）。
【０８９０】
実施例１２：遊離化合物の活性
Ｋ５６２アッセイ
１０％のウシ胎仔血清及び２ｍＭのグルタミンが添加されたＲＰＭ１  １６４０培地において、５％のＣＯ２を含む加湿雰囲気下、３７℃でＫ５６２ヒト慢性骨髄性白血病細胞を維持し、特定用量の薬物と共に３７℃で暗所において１時間または９６時間インキュベートした。遠心分離（５分、３００ｇ）によって培養を終結させ、薬物を含まない培地で細胞を１回洗浄した。この適切な薬物処理の後、９６ウェルマイクロタイタープレートに細胞を移した（ウェル当たり１０４個の細胞、試料当たり８ウェル使用）。５％のＣＯ２を含む加湿雰囲気下、３７℃で暗所においてプレートを保持した。アッセイは、黄色の可溶性テトラゾリウム塩である３−（４，５−ジメチルチアゾール−２−イル）−２，５−ジフェニル−２Ｈ−テトラゾリウムブロミド（ＭＴＴ、Ａｌｄｒｉｃｈ−Ｓｉｇｍａ）を還元して不溶性ホルマザンの紫色沈殿を生じさせるという能力を生存細胞が有していることに基づくものである。プレートを４日間インキュベート（対照細胞数は約１０倍に増加可能）した後、２０μＬのＭＴＴ溶液（リン酸緩衝生理食塩水中５ｍｇ／ｍＬ）をそれぞれのウェルに添加し、プレートをさらに５時間インキュベートした。その後、プレートを３００ｇで５分間遠心してから、細胞のペレットから培地の大部分をピペットで除去し、ウェル当たりの残存量を１０〜２０μＬとした。それぞれのウェルにＤＭＳＯ（２００μＬ）を添加し、試料を撹拌して確実に混合が完了するようにした。その後、Ｔｉｔｅｒｔｅｋ  Ｍｕｌｔｉｓｃａｎ  ＥＬＩＳＡプレートリーダーを用いて波長５５０ｎｍで光学濃度を読み取り、用量反応曲線を作成した。それぞれの曲線について、最終的な光学濃度を対照値の５０％まで低減するために必要な用量としてＩＣ５０値を読み取った。
【０８９１】
【表８】
2018516243.tif 000131
【０８９２】
発明の記述
１．式Ｌ−（ＤＬ）ｐの複合体であって、ここで、ＤＬが、式Ｉまたは式ＩＩ：：
【化１１６】
2018516243.tif 000132
を有し
式中：
Ｌが、ＣＤ２２に結合する抗体（Ａｂ）であり；
Ｃ２’とＣ３’との間に二重結合が存在するとき、Ｒ１２が、
（ｉａ）ハロ、ニトロ、シアノ、エーテル、カルボキシ、エステル、Ｃ１−７アルキル、Ｃ３−７ヘテロシクリル、及びビス−オキシ−Ｃ１−３アルキレンを含む群から選択される１つまたは複数の置換基によって任意選択で置換されたＣ５−１０アリール基；
（ｉｂ）Ｃ１−５飽和脂肪族アルキル；
（ｉｃ）Ｃ３−６飽和シクロアルキル；
（ｉｄ）Ｒ２１、Ｒ２２、及びＲ２３が、Ｈ、Ｃ１−３飽和アルキル、Ｃ２−３アルケニル、Ｃ２−３アルキニル、及びシクロプロピルからそれぞれ独立して選択され、前記Ｒ１２基における炭素原子の総数が５以下である、
【化１１７】
2018516243.tif 000133
（ｉｅ）Ｒ２５ａ及びＲ２５ｂの一方がＨであり、もう一方が、ハロ、メチル、メトキシから選択される基によって任意選択で置換されたフェニルと、ピリジルと、チオフェニルと、から選択される、
【化１１８】
2018516243.tif 000134
ならびに
（ｉｆ）Ｒ２４が、Ｈと、Ｃ１−３飽和アルキルと、Ｃ２−３アルケニルと、Ｃ２−３アルキニルと、シクロプロピルと、ハロ、メチル、メトキシから選択される基によって任意選択で置換されたフェニルと、ピリジルと、チオフェニルと、から選択される、
【化１１９】
2018516243.tif 000135
なる群からから選択され、
Ｃ２’とＣ３’との間に単結合が存在するとき、
Ｒ１２が、
【化１２０】
2018516243.tif 000136
であり、ここで、Ｒ２６ａ及びＲ２６ｂが、Ｈ、Ｆ、Ｃ１−４飽和アルキル、Ｃ２−３アルケニルから独立して選択され、前記アルキル基及びアルケニル基が、Ｃ１−４アルキルアミド及びＣ１−４アルキルエステルから選択される基によって任意選択で置換され、またはＲ２６ａ及びＲ２６ｂの一方がＨであるとき、もう一方が、ニトリル及びＣ１−４アルキルエステルから選択され；
Ｒ６及びＲ９が、Ｈ、Ｒ、ＯＨ、ＯＲ、ＳＨ、ＳＲ、ＮＨ２、ＮＨＲ、ＮＲＲ’、ニトロ、Ｍｅ３Ｓｎ、及びハロから独立して選択され；
ここで、Ｒ及びＲ’が、任意選択で置換されたＣ１−１２アルキル基、Ｃ３−２０ヘテロシクリル基、及びＣ５−２０アリール基から独立して選択され；
Ｒ７が、Ｈ、Ｒ、ＯＨ、ＯＲ、ＳＨ、ＳＲ、ＮＨ２、ＮＨＲ、ＮＨＲＲ’、ニトロ、Ｍｅ３Ｓｎ、及びハロから選択され；
Ｒ’’が、Ｃ３−１２アルキレン基であり、前記Ｃ３−１２アルキレン基の鎖が、例えば、Ｏ、Ｓ、ＮＲＮ２（ＲＮ２が、ＨもしくはＣ１−４アルキル）といった、１つもしくは複数のヘテロ原子、及び／または例えば、ベンゼンもしくはピリジンといった、１つもしくは複数の芳香族環によって分断され得るものであり；
Ｙ及びＹ’が、Ｏ、Ｓ、またはＮＨから選択され；
Ｒ６’、Ｒ７’、Ｒ９’が、それぞれＲ６、Ｒ７、及びＲ９と同一の群から選択され；
［式Ｉ］
ＲＬ１’が、前記抗体（Ａｂ）への連結のためのリンカーであり；
Ｒ１１ａが、ＯＨ、ＯＲＡ（ＲＡは、Ｃ１−４アルキルである）、及びＳＯｚＭ（ｚは、２または３である）から選択され、かつＭが、医薬的に許容可能な一価の陽イオンであり；
Ｒ２０及びＲ２１が、共に一緒になって、それらが結合している窒素原子と炭素原子との間に二重結合を形成するか、または；
Ｒ２０が、Ｈ及びＲＣから選択され、ここで、ＲＣが、キャッピング基であり；
Ｒ２１が、ＯＨ、ＯＲＡ、及びＳＯｚＭから選択され；
Ｃ２とＣ３との間に二重結合が存在するとき、Ｒ２が、
（ｉａ）ハロ、ニトロ、シアノ、エーテル、カルボキシ、エステル、Ｃ１−７アルキル、Ｃ３−７ヘテロシクリル、及びビス−オキシ−Ｃ１−３アルキレンを含む群から選択される１つまたは複数の置換基によって任意選択で置換されたＣ５−１０アリール基；
（ｉｂ）Ｃ１−５飽和脂肪族アルキル；
（ｉｃ）Ｃ３−６飽和シクロアルキル；
（ｉｄ）Ｒ１１、Ｒ１２、及びＲ１３が、Ｈ、Ｃ１−３飽和アルキル、Ｃ２−３アルケニル、Ｃ２−３アルキニル、及びシクロプロピルからそれぞれ独立して選択され、前記Ｒ２基における炭素原子の総数が５以下である、
【化１２１】
2018516243.tif 000137
（ｉｅ）Ｒ１５ａ及びＲ１５ｂの一方がＨであり、もう一方が、ハロ、メチル、メトキシから選択される基によって任意選択で置換されたフェニルと、ピリジルと、チオフェニルと、から選択される、
【化１２２】
2018516243.tif 000138
ならびに
（ｉｆ）Ｒ１４が、Ｈと、Ｃ１−３飽和アルキルと、Ｃ２−３アルケニルと、Ｃ２−３アルキニルと、シクロプロピルと、ハロ、メチル、メトキシから選択される基によって任意選択で置換されたフェニルと、ピリジルと、チオフェニルと、から選択される、
【化１２３】
2018516243.tif 000139
からなる群から選択され、
Ｃ２とＣ３との間に単結合が存在するとき、
Ｒ２が、
【化１２４】
2018516243.tif 000140
であり、ここで、Ｒ１６ａ及びＲ１６ｂが、Ｈ、Ｆ、Ｃ１−４飽和アルキル、Ｃ２−３アルケニルから独立して選択され、前記アルキル基及びアルケニル基が、Ｃ１−４アルキルアミド及びＣ１−４アルキルエステルから選択される基によって任意選択で置換され、またはＲ１６ａ及びＲ１６ｂの一方がＨであるとき、もう一方が、ニトリル及びＣ１−４アルキルエステルから選択され；
［式ＩＩ］
Ｒ２２が、式ＩＩＩａ、式ＩＩＩｂ、または式ＩＩＩｃ：
（ａ）Ａが、Ｃ５−７アリール基であり、
（ｉ）Ｑ１が、単結合であり、Ｑ２が、単結合及び−Ｚ−（ＣＨ２）ｎ−から選択され、ここで、Ｚが、単結合、Ｏ、Ｓ、及びＮＨから選択され、ｎが、１〜３であるか；または
（ｉｉ）Ｑ１が、−ＣＨ＝ＣＨ−であり、Ｑ２が、単結合である、
【化１２５】
2018516243.tif 000141
（ｂ）ＲＣ１、ＲＣ２、及びＲＣ３が、Ｈ及び未置換のＣ１−２アルキルから独立して選択される、
【化１２６】
2018516243.tif 000142
（ｃ）Ｑが、Ｏ−ＲＬ２’、Ｓ−ＲＬ２’、及びＮＲＮ−ＲＬ２’から選択され、ＲＮが、Ｈ、メチル、及びエチルから選択される、
【化１２７】
2018516243.tif 000143
を有し、
Ｘが、Ｏ−ＲＬ２’、Ｓ−ＲＬ２’、ＣＯ２−ＲＬ２’、ＣＯ−ＲＬ２’、ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−ＲＬ２’、ＮＨＮＨ−ＲＬ２’、ＣＯＮＨＮＨ−ＲＬ２’、
【化１２８】
2018516243.tif 000144
ＮＲＮＲＬ２’を含む群から選択され、ここで、ＲＮが、Ｈ及びＣ１−４アルキルを含む群から選択され；
ＲＬ２’が、前記抗体（Ａｂ）への連結のためのリンカーであり；
Ｒ１０及びＲ１１が、共に一緒になって、それらが結合している窒素原子と炭素原子との間に二重結合を形成するか、または；
Ｒ１０が、Ｈであり、Ｒ１１が、ＯＨ、ＯＲＡ、及びＳＯｚＭから選択され；
Ｒ３０及びＲ３１が、共に一緒になって、それらが結合している窒素原子と炭素原子との間に二重結合を形成するか、または；
Ｒ３０が、Ｈであり、Ｒ３１が、ＯＨ、ＯＲＡ、及びＳＯｚＭから選択される、前記複合体
【０８９３】
２．
【化１２９】
2018516243.tif 000145
または
【化１３０】
2018516243.tif 000146
ではない、記述１に記載の複合体。
【０８９４】
３．Ｒ７が、Ｈ、ＯＨ、及びＯＲから選択される、記述１または記述２のいずれかに記載の複合体。
【０８９５】
４．Ｒ７が、Ｃ１−４アルキルオキシ基である、記述３に記載の複合体。
【０８９６】
５．Ｙが、Ｏである、記述１〜４のいずれか１つに記載の複合体。
【０８９７】
６．Ｒ’’が、Ｃ３−７アルキレンである、先行記述のいずれか１つに記載の複合体。
【０８９８】
７．Ｒ９が、Ｈである、記述１〜６のいずれか１つに記載の複合体。
【０８９９】
８．Ｒ６が、Ｈ及びハロから選択される、記述１〜７のいずれか１つに記載の複合体。
【０９００】
９．Ｃ２’とＣ３’との間に二重結合が存在し、Ｒ１２が、Ｃ５−７アリール基である、記述１〜８のいずれか１つに記載の複合体。
【０９０１】
１０．Ｒ１２が、フェニルである、記述９に記載の複合体。
【０９０２】
１１．Ｃ２’とＣ３’との間に二重結合が存在し、Ｒ１２が、Ｃ８−１０アリール基である、記述１〜８のいずれか１つに記載の複合体。
【０９０３】
１２．Ｒ１２が、１〜３つの置換基を有する、記述９〜１１のいずれか１つに記載の複合体。
【０９０４】
１３．前記置換基が、メトキシ、エトキシ、フルオロ、クロロ、シアノ、ビス−オキシ−メチレン、メチル−ピペラジニル、モルホリノ、及びメチル−チオフェニルから選択される、記述９〜１２のいずれか１つに記載の複合体。
【０９０５】
１４．Ｃ２’とＣ３’との間に二重結合が存在し、Ｒ１２が、Ｃ１−５飽和脂肪族アルキル基である、記述１〜８のいずれか１つに記載の複合体。
【０９０６】
１５．Ｒ１２が、メチル、エチル、またはプロピルである、記述１４に記載の化合物。
【０９０７】
１６．Ｃ２’とＣ３’との間に二重結合が存在し、Ｒ１２が、Ｃ３−６飽和シクロアルキル基である、記述１〜８のいずれか１つに記載の複合体。
【０９０８】
１７．Ｒ１２が、シクロプロピルである、記述１６に記載の複合体。
【０９０９】
１８．Ｃ２’とＣ３’との間に二重結合が存在し、Ｒ１２が、式：
【化１３１】
2018516243.tif 000147
の基である、記述１〜８のいずれか１つに記載の複合体。
【０９１０】
１９．前記Ｒ１２基における炭素原子の総数が４以下である、記述１８に記載の複合体。
【０９１１】
２０．前記Ｒ１２基における炭素原子の総数が３以下である、記述１９に記載の複合体。
【０９１２】
２１．Ｒ２１、Ｒ２２、及びＲ２３のうちの１つが、Ｈであり、残りの２つの基が、Ｈ、Ｃ１−３飽和アルキル、Ｃ２−３アルケニル、Ｃ２−３アルキニル、及びシクロプロピルから選択される、記述１８〜２０のいずれか１つに記載の複合体。
【０９１３】
２２．Ｒ２１、Ｒ２２、及びＲ２３のうちの２つが、Ｈであり、残りの基が、Ｈ、Ｃ１−３飽和アルキル、Ｃ２−３アルケニル、Ｃ２−３アルキニル、及びシクロプロピルから選択される、記述１８〜２０のいずれか１つに記載の複合体。
【０９１４】
２３．Ｃ２’とＣ３’との間に二重結合が存在し、Ｒ１２が、式：
【化１３２】
2018516243.tif 000148
の基である、記述１〜８のいずれか１つに記載の複合体。
【０９１５】
２４．Ｒ１２が、基：
【化１３３】
2018516243.tif 000149
である、記述２３に記載の複合体。
【０９１６】
２５．Ｃ２’とＣ３’との間に二重結合が存在し、Ｒ１２が、式：
【化１３４】
2018516243.tif 000150
の基である、記述１〜８のいずれか１つに記載の複合体。
【０９１７】
２６．Ｒ２４が、Ｈ、メチル、エチル、エテニル、及びエチニルから選択される、記述２５に記載の複合体。
【０９１８】
２７．Ｒ２４が、Ｈ及びメチルから選択される、記述２６に記載の複合体。
【０９１９】
２８．Ｃ２’とＣ３’との間に単結合が存在し、Ｒ１２が、
【化１３５】
2018516243.tif 000151
であり、Ｒ２６ａ及びＲ２６ｂが両方共、Ｈである、記述１〜８のいずれか１つに記載の複合体。
【０９２０】
２９．Ｃ２’とＣ３’との間に単結合が存在し、Ｒ１２が、
【化１３６】
2018516243.tif 000152
であり、Ｒ２６ａ及びＲ２６ｂが両方共、メチルである、記述１〜８のいずれか１つに記載の複合体。
【０９２１】
３０．Ｃ２’とＣ３’との間に単結合が存在し、Ｒ１２が、
【化１３７】
2018516243.tif 000153
であり、Ｒ２６ａ及びＲ２６ｂの一方がＨであり、もう一方が、Ｃ１−４飽和アルキル、Ｃ２−３アルケニルから選択され、前記アルキル基及びアルケニル基が、任意選択で置換される、記述１〜８のいずれか１つに記載の複合体。
［式Ｉ］
【０９２２】
３１．Ｃ２とＣ３との間に二重結合が存在し、Ｒ２が、Ｃ５−７アリール基である、記述１〜３０のいずれか１つに記載の複合体。
【０９２３】
３２．Ｒ２が、フェニルである、記述３１に記載の複合体。
【０９２４】
３３．Ｃ２とＣ３との間に二重結合が存在し、Ｒ１が、Ｃ８−１０アリール基である、記述１〜３０の１つに記載の複合体。
【０９２５】
３４．Ｒ２が、１〜３つの置換基を有する、記述３１〜３３のいずれか１つに記載の化合物。
【０９２６】
３５．前記置換基が、メトキシ、エトキシ、フルオロ、クロロ、シアノ、ビス−オキシ−メチレン、メチル−ピペラジニル、モルホリノ、及びメチル−チオフェニルから選択される、記述３１〜３４のいずれか１つに記載の複合体。
【０９２７】
３６．Ｃ２とＣ３との間に二重結合が存在し、Ｒ２が、Ｃ１−５飽和脂肪族アルキル基である、記述１〜３０のいずれか１つに記載の複合体。
【０９２８】
３７．Ｒ２が、メチル、エチル、またはプロピルである、記述３６に記載の複合体。
【０９２９】
３８．Ｃ２とＣ３との間に二重結合が存在し、Ｒ２が、Ｃ３−６飽和シクロアルキル基である、記述１〜３０のいずれか１つに記載の複合体。
【０９３０】
３９．Ｒ２が、シクロプロピルである、記述３８に記載の複合体。
【０９３１】
４０．Ｃ２とＣ３との間に二重結合が存在し、Ｒ２が、式：
【化１３８】
2018516243.tif 000154
の基である、記述１〜３０のいずれか１つに記載の複合体。
【０９３２】
４１．前記Ｒ２基における炭素原子の総数が４以下である、記述４０に記載の複合体。
【０９３３】
４２．前記Ｒ２基における炭素原子の総数が３以下である、記述４１に記載の複合体。
【０９３４】
４３．Ｒ１１、Ｒ１２、及びＲ１３のうちの１つが、Ｈであり、残りの２つの基が、Ｈ、Ｃ１−３飽和アルキル、Ｃ２−３アルケニル、Ｃ２−３アルキニル、及びシクロプロピルから選択される、記述４０〜４２のいずれか１つに記載の複合体。
【０９３５】
４４．Ｒ１１、Ｒ１２、及びＲ１３のうちの２つが、Ｈであり、残りの基が、Ｈ、Ｃ１−３飽和アルキル、Ｃ２−３アルケニル、Ｃ２−３アルキニル、及びシクロプロピルから選択される、記述４０〜４２のいずれか１つに記載の複合体。
【０９３６】
４５．Ｃ２とＣ３との間に二重結合が存在し、Ｒ２が、式：
【化１３９】
2018516243.tif 000155
の基である、記述１〜３０のいずれか１つに記載の複合体。
【０９３７】
４６．Ｒ２が、基：
【化１４０】
2018516243.tif 000156
である、記述４５に記載の複合体。
【０９３８】
４７．Ｃ２とＣ３との間に二重結合が存在し、Ｒ２が、式：
【化１４１】
2018516243.tif 000157
の基である、記述１〜３０のいずれか１つに記載の複合体。
【０９３９】
４８．Ｒ１４が、Ｈ、メチル、エチル、エテニル、及びエチニルから選択される、記述４７に記載の複合体。
【０９４０】
４９．Ｒ１４が、Ｈ及びメチルから選択される、記述４７に記載の複合体。
【０９４１】
５０．Ｃ２とＣ３との間に単結合が存在し、Ｒ２が、
【化１４２】
2018516243.tif 000158
であり、Ｒ１６ａ及びＲ１６ｂが両方共、Ｈである、記述１〜３０のいずれか１つに記載の複合体。
【０９４２】
５１．Ｃ２とＣ３との間に単結合が存在し、Ｒ２が、
【化１４３】
2018516243.tif 000159
であり、Ｒ１６ａ及びＲ１６ｂが両方共、メチルである、記述１〜３０のいずれか１つに記載の複合体。
【０９４３】
５２．Ｃ２とＣ３との間に単結合が存在し、Ｒ２が、
【化１４４】
2018516243.tif 000160
であり、Ｒ１６ａ及びＲ１６ｂの一方がＨであり、もう一方が、Ｃ１−４飽和アルキル、Ｃ２−３アルケニルから選択され、前記アルキル基及びアルケニル基が、任意選択で置換される、記述１〜３０のいずれか１つに記載の複合体。
【０９４４】
５３．Ｒ１１ａが、ＯＨである、記述１〜５２のいずれか１つに記載の複合体。
【０９４５】
５４．Ｒ２１が、ＯＨである、記述１〜５３のいずれか１つに記載の複合体。
【０９４６】
５５．Ｒ２１が、ＯＭｅである、記述１〜５３のいずれか１つに記載の複合体。
【０９４７】
５６．Ｒ２０が、Ｈである、記述１〜５５のいずれか１つに記載の複合体。
【０９４８】
５７．Ｒ２０が、ＲＣである、記述１〜５５のいずれか１つに記載の複合体。
【０９４９】
５８．ＲＣが、Ａｌｌｏｃ、Ｆｍｏｃ、Ｂｏｃ、及びＴｒｏｃからなる群から選択される、記述５７に記載の複合体。
【０９５０】
５９．ＲＣが、Ｔｅｏｃ、Ｐｓｅｃ、Ｃｂｚ、及びＰＮＺからなる群から選択される、記述５７に記載の複合体。
【０９５１】
６０．ＲＣが、基：
【化１４５】
2018516243.tif 000161
であり、
式中、アスタリスクが、Ｎ１０位への結合点を示し、Ｇ２が、終結基であり、Ｌ３が、共有結合であるか、または切断可能なリンカーＬ１であり、Ｌ２が、共有結合であるか、またはＯＣ（＝Ｏ）と一緒になって自壊性リンカーを形成する、記述５７に記載の複合体。
【０９５２】
６１．Ｇ２が、ＡｃもしくはＭｏｃであるか、またはＡｌｌｏｃ、Ｆｍｏｃ、Ｂｏｃ、Ｔｒｏｃ、Ｔｅｏｃ、Ｐｓｅｃ、Ｃｂｚ、及びＰＮＺからなる群から選択される、記述６０に記載の複合体。
【０９５３】
６２．Ｒ２０及びＲ２１が一緒になって、それらが結合している窒素原子と炭素原子との間に二重結合を形成する、記述１〜５３のいずれか１つに記載の複合体。
［式ＩＩ］
【０９５４】
６３．Ｒ２２が、式ＩＩＩａを有し、Ａが、フェニルである、記述１〜３０のいずれか１つに記載の複合体。
【０９５５】
６４．Ｒ２２が、式ＩＩａを有し、Ｑ１が、単結合である、記述１〜３０及び記述６３のいずれか１つに記載の複合体。
【０９５６】
６５．Ｑ２が、単結合である、記述６３に記載の複合体。
【０９５７】
６６．Ｑ２が、−Ｚ−（ＣＨ２）ｎ−であり、Ｚが、ＯまたはＳであり、かつｎが、１または２である、記述６３に記載の複合体。
【０９５８】
６７．Ｒ２２が、式ＩＩＩａを有し、Ｑ１が、−ＣＨ＝ＣＨ−である、記述１〜３０及び記述６３のいずれか１つに記載の複合体。
【０９５９】
６８．Ｒ２２が、式ＩＩＩｂを有し、
ＲＣ１、ＲＣ２、及びＲＣ３が、Ｈ及びメチルから独立して選択される、記述１〜３０のいずれか１つに記載の複合体。
【０９６０】
６９．ＲＣ１、ＲＣ２、及びＲＣ３がすべて、Ｈである、記述６８に記載の複合体。
【０９６１】
７０．ＲＣ１、ＲＣ２、及びＲＣ３がすべて、メチルである、記述６８に記載の複合体。
【０９６２】
７１．Ｒ２２が、式ＩＩＩａまたは式ＩＩＩｂを有し、Ｘが、Ｏ−ＲＬ２’、Ｓ−ＲＬ２’、ＣＯ２−ＲＬ２’、−Ｎ−Ｃ（＝Ｏ）−ＲＬ２’、及びＮＨ−ＲＬ２’から選択される、記述１〜３０及び記述６３〜７０のいずれか１つに記載の複合体。
【０９６３】
７２．Ｘが、ＮＨ−ＲＬ２’である、記述７１に記載の複合体。
【０９６４】
７３．Ｒ２２が、式ＩＩＩｃを有し、Ｑが、ＮＲＮ−ＲＬ２’である、記述１〜３０のいずれか１つに記載の複合体。
【０９６５】
７４．ＲＮが、Ｈまたはメチルである、記述７３に記載の複合体。
【０９６６】
７５．Ｒ２２が、式ＩＩＩｃを有し、Ｑが、Ｏ−ＲＬ２’またはＳ−ＲＬ２’である、記述１〜３０のいずれか１つに記載の複合体。
【０９６７】
７６．Ｒ１１が、ＯＨである、記述１〜３０及び記述６３〜７５のいずれか１つに記載の複合体。
【０９６８】
７７．Ｒ１１が、ＯＭｅである、記述１〜３０及び記述６３〜７５のいずれか１つに記載の複合体。
【０９６９】
７８．Ｒ１０が、Ｈである、記述１〜３０及び記述６３〜７７のいずれか１つに記載の複合体。
【０９７０】
７９．Ｒ１０及びＲ１１が一緒になって、それらが結合している窒素原子と炭素原子との間に二重結合を形成する、記述１〜３０及び記述６３〜７５のいずれか１つに記載の複合体。
【０９７１】
８０．Ｒ３１が、ＯＨである、記述１〜３０及び記述６３〜７９のいずれか１つに記載の複合体。
【０９７２】
８１．Ｒ３１が、ＯＭｅである、記述１〜３０及び記述６３〜７９のいずれか１つに記載の複合体。
【０９７３】
８２．Ｒ３０が、Ｈである、記述１〜３０及び記述６３〜８１のいずれか１つに記載の複合体。
【０９７４】
８３．Ｒ３０及びＲ３１が一緒になって、それらが結合している窒素原子と炭素原子との間に二重結合を形成する、記述１〜３０及び記述６３〜７９のいずれか１つに記載の複合体。
【０９７５】
８４．Ｒ６’、Ｒ７’、Ｒ９’、及びＹ’が、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ９、及びＹと同一である、記述１〜８３のいずれか１つに記載の複合体。
【０９７６】
８５．Ｌ−ＲＬ１’またはＬ−ＲＬ２’が、基：
【化１４６】
2018516243.tif 000162
であり、
式中、アスタリスクが、ＰＢＤへの結合点を示し、Ａｂが、前記抗体であり、Ｌ１が、切断可能なリンカーであり、Ａが、Ｌ１を前記抗体に連結する連結基であり、Ｌ２が、共有結合であるか、または−ＯＣ（＝Ｏ）−と一緒になって自壊性リンカーを形成する、記述１〜８４のいずれか１つに記載の複合体。
【０９７７】
８６．Ｌ１が、酵素的に切断可能である、記述８５に記載の複合体。
【０９７８】
８７．Ｌ１が、アミノ酸の連続配列を含む、記述８５または記述８６に記載の複合体。
【０９７９】
８８．Ｌ１が、ジペプチドを含み、ジペプチドである−ＮＨ−Ｘ１−Ｘ２−ＣＯ−における−Ｘ１−Ｘ２−基が、
−Ｐｈｅ−Ｌｙｓ−、
−Ｖａｌ−Ａｌａ−、
−Ｖａｌ−Ｌｙｓ−、
−Ａｌａ−Ｌｙｓ−、
−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−、
−Ｐｈｅ−Ｃｉｔ−、
−Ｌｅｕ−Ｃｉｔ−、
−Ｉｌｅ−Ｃｉｔ−、
−Ｐｈｅ−Ａｒｇ−、
−Ｔｒｐ−Ｃｉｔ−、
から選択される、記述８７に記載の複合体。
【０９８０】
８９．ジペプチドである−ＮＨ−Ｘ１−Ｘ２−ＣＯ−における−Ｘ１−Ｘ２−基が、
−Ｐｈｅ−Ｌｙｓ−、
−Ｖａｌ−Ａｌａ−、
−Ｖａｌ−Ｌｙｓ−、
−Ａｌａ−Ｌｙｓ−、
−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−、
から選択される、記述８８に記載の複合体。
【０９８１】
９０．ジペプチドである−ＮＨ−Ｘ１−Ｘ２−ＣＯ−における−Ｘ１−Ｘ２−基が、−Ｐｈｅ−Ｌｙｓ−、−Ｖａｌ−Ａｌａ−、または−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−である、記述８９に記載の複合体。
【０９８２】
９１．前記Ｘ２−ＣＯ−基が、Ｌ２に連結される、記述８８〜９０のいずれか１つに記載の複合体。
【０９８３】
９２．前記ＮＨ−Ｘ１−基が、Ａに連結される、記述８８〜９１のいずれか１つに記載の複合体。
【０９８４】
９３．Ｌ２が、ＯＣ（＝Ｏ）と一緒になって、自壊性リンカーを形成する、記述８８〜９２のいずれか１つに記載の複合体。
【０９８５】
９４．Ｃ（＝Ｏ）Ｏ及びＬ２が一緒になって、基：
【化１４７】
2018516243.tif 000163
を形成し、
式中、アスタリスクが、ＰＢＤへの結合点を示し、波線が、リンカーＬ１への結合点を示し、Ｙが、ＮＨ、Ｏ、Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ、またはＣ（＝Ｏ）Ｏであり、かつｎが、０〜３である、記述９３に記載の複合体。
【０９８６】
９５．Ｙが、ＮＨである、記述９４に記載の複合体。
【０９８７】
９６．ｎが、０である、記述９４または記述９５に記載の複合体。
【０９８８】
９７．Ｌ１及びＬ２が、−ＯＣ（＝Ｏ）−と一緒になって、
【化１４８】
2018516243.tif 000164
から選択される基を構成し、
式中、アスタリスクが、ＰＢＤへの結合点を示し、波線が、リンカーＬ１の残部への結合点またはＡへの結合点を示す、記述９５に記載の複合体。
【０９８９】
９８．前記波線が、Ａへの結合点を示す、記述９７に記載の複合体。
【０９９０】
９９．Ａが、
（ｉ）アスタリスクが、Ｌ１への結合点を示し、波線が、前記抗体への結合点を示し、かつｎが、０〜６である、
【化１４９】
2018516243.tif 000165
または
（ｉｉ）アスタリスクが、Ｌ１への結合点を示し、波線が、前記抗体への結合点を示し、ｎが、０または１であり、かつｍが、０〜３０である、
【化１５０】
2018516243.tif 000166
である、記述８５〜９８のいずれか１つに記載の複合体。
【０９９１】
【化１５１】
2018516243.tif 000167
2018516243.tif 000168
または
【化１５２】
2018516243.tif 000169
を有する、記述１に記載の複合体。
【０９９２】
１０１．前記抗体が、システインではないアミノ酸による鎖間システイン残基のアミノ酸置換を含み、前記抗体に対する薬物部分の複合化が、鎖間システイン残基で生じる、記述１〜１００のいずれか１つに記載の複合体。
【０９９３】
１０２．前記抗体が、配列番号１１０のアミノ酸配列もしくはその断片、配列番号１２０のアミノ酸配列もしくはその断片、配列番号１３０のアミノ酸配列もしくはその断片、または配列番号１４０のアミノ酸配列もしくはその断片を含む重鎖を含む、記述１０１に記載の複合体。
【０９９４】
１０３．前記薬物部分が、配列番号１１０の位置１０３におけるシステイン、配列番号１２０の位置１４におけるシステイン、配列番号１２０の位置１０３におけるシステイン、配列番号１３０の位置１４におけるシステイン、または配列番号１４０の位置１４におけるシステインに複合化される、記述１０２に記載の複合体。
【０９９５】
１０４．前記抗体が、
配列番号１５０のアミノ酸配列もしくはその断片を含む軽鎖であって、位置１０５におけるシステインが、存在するのであれば、システインではないアミノ酸によって置換される前記軽鎖；または
配列番号１６０のアミノ酸配列もしくはその断片を含む軽鎖であって、位置１０２におけるシステインが、存在するのであれば、システインではないアミノ酸によって置換される前記軽鎖
を含む、記述１０２または記述１０３のいずれか１つに記載の複合体。
【０９９６】
１０５．前記抗体が、
配列番号１１０のアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号１５１、配列番号１５２、配列番号１５３、配列番号１６１、配列番号１６２、または配列番号１６３のアミノ酸配列を含む軽鎖を含み、
任意選択で、前記薬物部分が、配列番号１１０の位置１０３におけるシステインに複合化される、記述１０１に記載の複合体。
【０９９７】
１０６．前記抗体が、
配列番号１１０のアミノ酸配列もしくはその断片を含む重鎖であって、配列番号１１０の位置１０３におけるシステインが、存在するのであれば、システインではないアミノ酸によって置換される前記重鎖；
配列番号１２０のアミノ酸配列もしくはその断片を含む重鎖であって、配列番号１２０の位置１４及び位置１０３におけるシステインがそれぞれ、存在するのであれば、システインではないアミノ酸によって置換される前記重鎖；
配列番号１３０のアミノ酸配列もしくはその断片を含む重鎖であって、配列番号１３０の位置１４におけるシステインが、存在するのであれば、システインではないアミノ酸によって置換される前記重鎖；または
配列番号１４０のアミノ酸配列もしくはその断片を含む重鎖であって、配列番号１４０の位置１４におけるシステインが、存在するのであれば、システインではないアミノ酸によって置換される前記重鎖
を含む、記述１０１に記載の複合体。
【０９９８】
１０７．前記抗体が、配列番号１５０または配列番号１６０のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む、記述１０６に記載の複合体。
【０９９９】
１０８．前記抗体が、
配列番号１１１のアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号１５０または配列番号１６０のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む、記述１０１に記載の複合体。
【１０００】
１０９．前記抗体が、
配列番号１１２のアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号１５０または配列番号１６０のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む、記述１０１に記載の複合体。
【１００１】
１１０．前記薬物部分が、配列番号１５０の位置１０５におけるシステイン、または配列番号１６０の位置１０２におけるシステインに複合化される、記述１０７〜１０９のいずれか１つに記載の複合体。
【１００２】
１１１．前記抗体が、
配列番号１１０のアミノ酸配列もしくはその断片を含む重鎖であって、配列番号１１０の位置１０９及び位置１１２におけるシステインがそれぞれ、存在するのであれば、システインではないアミノ酸によって置換される前記重鎖；
配列番号１２０のアミノ酸配列もしくはその断片を含む重鎖であって、配列番号１２０の位置１０３、位置１０６、及び位置１０９におけるシステインがそれぞれ、存在するのであれば、システインではないアミノ酸によって置換される前記重鎖；
配列番号１２０のアミノ酸配列もしくはその断片を含む重鎖であって、配列番号１２０の位置１４、位置１０６、及び位置１１２におけるシステインがそれぞれ、存在するのであれば、システインではないアミノ酸によって置換される前記重鎖；
配列番号１３０のアミノ酸配列もしくはその断片を含む重鎖であって、配列番号１３０の位置１１１、位置１１４、位置１２０、位置１２６、位置１２９、位置１３５、位置１４１、位置１４４、位置１５０、位置１５６、及び位置１５９におけるシステインがそれぞれ、存在するのであれば、システインではないアミノ酸によって置換される前記重鎖；または
配列番号１４０のアミノ酸配列もしくはその断片を含む重鎖であって、配列番号１４０の位置１０６及び位置１０９におけるシステインがそれぞれ、存在するのであれば、システインではないアミノ酸によって置換される前記重鎖
を含む、記述１０１に記載の複合体。
【１００３】
１１２．配列番号１２０の位置１０２におけるシステインも、存在するのであれば、システインではないアミノ酸によって置換される、記述１１１に記載の複合体。
【１００４】
１１３．前記薬物部分が、配列番号１１０の位置１０３におけるシステイン、配列番号１２０の位置１４におけるシステイン、配列番号１２０の位置１０３におけるシステイン、配列番号１３０の位置１４におけるシステイン、または配列番号１４０の位置１４におけるシステインに複合化される、記述１１１または記述１１２のいずれか１つに記載の複合体。
【１００５】
１１４．前記抗体が、
配列番号１５０のアミノ酸配列もしくはその断片を含む軽鎖であって、位置１０５におけるシステインが、存在するのであれば、システインではないアミノ酸によって置換される前記軽鎖；または
配列番号１６０のアミノ酸配列もしくはその断片を含む軽鎖であって、位置１０２におけるシステインが、存在するのであれば、システインではないアミノ酸によって置換される前記軽鎖
を含む、記述１１１〜１１３のいずれか１つに記載の複合体。
【１００６】
１１５．前記抗体が、
配列番号１１３のアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号１５１、配列番号１５２、配列番号１５３、配列番号１６１、配列番号１６２、または配列番号１６３のアミノ酸配列を含む軽鎖を含み；
任意選択で、前記薬物部分が、配列番号１１３の位置１０３におけるシステインに複合化される、記述１０１に記載の複合体。
【１００７】
１１６．前記抗体が、
配列番号１１４のアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号１５１、配列番号１５２、配列番号１５３、配列番号１６１、配列番号１６２、または配列番号１６３のアミノ酸配列を含む軽鎖を含み；
任意選択で、前記薬物部分が、配列番号１１４の位置１０３におけるシステインに複合化される、記述１０１に記載の複合体。
【１００８】
１１７．前記抗体が、
配列番号１１０のアミノ酸配列もしくはその断片を含む重鎖であって、配列番号１１０の位置１０３、位置１０９、及び位置１１２におけるシステインがそれぞれ、存在するのであれば、システインではないアミノ酸によって置換される前記重鎖；
配列番号１２０のアミノ酸配列もしくはその断片を含む重鎖であって、配列番号１２０の位置１４、位置１０３、位置１０６、及び位置１０９におけるシステインがそれぞれ、存在するのであれば、システインではないアミノ酸によって置換される前記重鎖；
配列番号１３０のアミノ酸配列もしくはその断片を含む重鎖であって、配列番号１３０の位置１４、位置１１１、位置１１４、位置１２０、位置１２６、位置１２９、位置１３５、位置１４１、位置１４４、位置１５０、位置１５６、及び位置１５９におけるシステインがそれぞれ、存在するのであれば、システインではないアミノ酸によって置換される前記重鎖；または
配列番号１４０のアミノ酸配列もしくはその断片を含む重鎖であって、配列番号１４０の位置１４、位置１０６、及び位置１０９におけるシステインがそれぞれ、存在するのであれば、システインではないアミノ酸によって置換される前記重鎖
を含む、記述１０１に記載の複合体。
【１００９】
１１８．前記抗体が、配列番号１５０または配列番号１６０のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む、記述１１７に記載の複合体。
【１０１０】
１１９．前記抗体が、配列番号１１５のアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号１５０または配列番号１６０のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む、記述１０１に記載の複合体。
【１０１１】
１２０．前記抗体が、配列番号１１６のアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号１５０または配列番号１６０のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む、記述１０１に記載の複合体。
【１０１２】
１２１．前記薬物部分が、配列番号１５０の位置１０５におけるシステイン、配列番号１６０の位置１０２におけるシステインに複合化される、記述１１８に記載の複合体。
【１０１３】
１２２．前記抗体が、Ｋａｂａｔに示されるＥＵインデックスの位置２３４におけるアミノ酸の置換、及び／またはＫａｂａｔに示されるＥＵインデックスの位置２３５における残基の置換を有する重鎖を含む、記述１〜１００のいずれか１つに記載の複合体。
【１０１４】
１２３．前記抗体が、Ｋａｂａｔに示されるＥＵインデックスの位置２３４におけるアミノ酸の置換、及びＫａｂａｔに示されるＥＵインデックスの位置２３５における残基の置換を有する重鎖を含む、記述１２２に記載の複合体。
【１０１５】
１２４．前記抗体が、配列番号１１０のアミノ酸配列を含む重鎖を含み、位置１１７におけるロイシン、及び／または位置１１８におけるロイシンが、ロイシンではないアミノ酸によって置換される、記述１２２に記載の複合体。
【１０１６】
１２５．前記抗体が、配列番号１１０のアミノ酸配列を含む重鎖を含み、位置１１７におけるロイシン、及び位置１１８におけるロイシンが、ロイシンではないアミノ酸によって置換される、記述１２４に記載の複合体。
【１０１７】
１２６．前記抗体が、配列番号１３０のアミノ酸配列を含む重鎖を含み、位置１６４におけるロイシン、及び／または位置１６５におけるロイシンが、ロイシンではないアミノ酸によって置換される、記述１２２に記載の複合体。
【１０１８】
１２７．前記抗体が、配列番号１３０のアミノ酸配列を含む重鎖を含み、位置１６４におけるロイシン、及び位置１６５におけるロイシンが、ロイシンではないアミノ酸によって置換される、記述１２６に記載の複合体。
【１０１９】
１２８．前記抗体が、配列番号１４０のアミノ酸配列を含む重鎖を含み、位置１１５におけるロイシンが、ロイシンではないアミノ酸によって置換される、記述１２２に記載の複合体。
【１０２０】
１２９．配列番号１１０の位置１１７におけるロイシン、及び／もしくは配列番号１１０の位置１１８におけるロイシンが、ロイシンではないアミノ酸によって置換されるか；
配列番号１３０の位置１６４におけるロイシン、及び／もしくは配列番号１３０の位置１６５におけるロイシンが、ロイシンではないアミノ酸によって置換されるか；または
配列番号１４０の位置１１５におけるロイシンが、ロイシンではないアミノ酸によって置換される、記述１０２〜１２１のいずれか１つに記載の複合体。
【１０２１】
１３０．配列番号１１０の位置１１７におけるロイシン、及び配列番号１１０の位置１１８におけるロイシンが、ロイシンではないアミノ酸によって置換されるか；または
配列番号１３０の位置１６４におけるロイシン、及び配列番号１３０の位置１６５におけるロイシンが、ロイシンではないアミノ酸によって置換される、記述１２９に記載の複合体。
【１０２２】
１３１．前記置換アミノ酸が、アラニン、グリシン、バリン、またはイソロイシンによって交換される、記述１２２〜１３０のいずれか１つに記載の複合体。
【１０２３】
１３２．前記置換アミノ酸が、アラニンによって交換される、記述１２２〜１３１のいずれか１つに記載の複合体。
【１０２４】
１３３．前記抗体が、配列番号１のアミノ酸配列を有するＶＨドメインを含む、記述１〜１３２のいずれか１つに記載の複合体。
【１０２５】
１３４．前記抗体が、配列番号２のアミノ酸配列を有するＶＬドメインをさらに含む、記述１３３に記載の複合体。
【１０２６】
１３５．前記抗体が、未変化の抗体である、先行記述のいずれか１つに記載の複合体。
【１０２７】
１３６．前記抗体が、ヒト化、脱免疫化（ｄｅｉｍｍｕｎｉｓｅｄ）、または表面再構成（ｒｅｓｕｒｆａｃｅｄ）される、先行記述のいずれか１つに記載の複合体。
【１０２８】
１３７．前記複合体が、ラットにおいて単回用量として送達されると、少なくとも２．０ｍｇ／ｋｇの最大耐用量を有する、先行記述のいずれか１つに記載の複合体。
【１０２９】
１３８．抗体（Ａｂ）に対する薬物（Ｄ）の薬物負荷（ｐ）が、２または４である、先行記述のいずれか１つに記載の複合体。
【１０３０】
１３９．治療における使用を目的とする、記述１〜１３８のいずれか１つに記載の複合体。
【１０３１】
１４０．対象における増殖性疾患の治療における使用を目的とする、記述１〜１３８のいずれか１つに記載の複合体。
【１０３２】
１４１．前記疾患が、癌である、記述１４０に記載の複合体。
【１０３３】
１４２．記述１〜１３８のいずれか１つに記載の複合体、及び医薬的に許容可能な希釈剤、担体、または賦形剤を含む、医薬組成物。
【１０３４】
１４３．治療上有効な量の化学療法剤をさらに含む、記述１４２に記載の医薬組成物。
【１０３５】
１４４．対象における増殖性疾患の治療における使用を目的とする薬剤の調製における、記述１〜１３８のいずれか１つに記載の複合体の使用。
【１０３６】
１４５．患者に対する、記述１４２に記載の医薬組成物の投与を含む、癌の治療方法。
【１０３７】
１４６．前記複合体と組み合わせて、化学療法剤が前記患者に投与される、記述１４５に記載の方法。
【１０３８】
配列
（外１）
2018516243.tif 000170
【１０３９】
（外２）
2018516243.tif 000171
【１０４０】
（外３）
2018516243.tif 000172
【１０４１】
（外４）
2018516243.tif 000173
【１０４２】
（外５）
2018516243.tif 000174
【１０４３】
（外６）
2018516243.tif 000175
【１０４４】
（外７）
2018516243.tif 000176
【１０４５】
（外８）
2018516243.tif 000177
【１０４６】
（外９）
2018516243.tif 000178
【１０４７】
（外１０）
2018516243.tif 000179
【１０４８】
（外１１）
2018516243.tif 000180
【１０４９】
（外１２）
2018516243.tif 000181
【１０５０】
（外１３）
2018516243.tif 000182
【１０５１】
（外１４）
2018516243.tif 000183
【１０５２】
（外１５）
2018516243.tif 000184
【１０５３】
（外１６）
2018516243.tif 000185
【１０５４】
（外１７）
2018516243.tif 000186
【１０５５】
（外１８）
2018516243.tif 000187
【１０５６】
（外１９）
2018516243.tif 000188
【１０５７】
（外２０）
2018516243.tif 000189
【１０５８】
（外２１）
2018516243.tif 000190
【１０５９】
（外２２）
2018516243.tif 000191
【１０６０】
（外２３）
2018516243.tif 000192
【１０６１】
（外２４）
2018516243.tif 000193
【１０６２】
（外２５）
2018516243.tif 000194
【１０６３】
（外２６）
2018516243.tif 000195
【１０６４】
（外２７）
2018516243.tif 000196
【１０６５】
（外２８）
2018516243.tif 000197
【１０６６】
（外２９）
2018516243.tif 000198
【１０６７】
（外３０）
2018516243.tif 000199
【１０６８】
（外３１）
2018516243.tif 000200
【１０６９】
（外３２）
2018516243.tif 000201
【１０７０】
（外３３）
2018516243.tif 000202
【１０７１】
（外３４）
2018516243.tif 000203
【１０７２】
（外３５）
2018516243.tif 000204
【１０７３】
（外３６）
2018516243.tif 000205
【１０７４】
（外３７）
2018516243.tif 000206
【１０７５】
（外３８）
2018516243.tif 000207
【１０７６】
（外３９）
2018516243.tif 000208
【１０７７】
（外４０）
2018516243.tif 000209
【１０７８】
（外４１）
2018516243.tif 000210
【１０７９】
（外４２）
2018516243.tif 000211
【１０８０】
（外４３）
2018516243.tif 000212
【１０８１】
（外４４）
2018516243.tif 000213
【１０８２】
（外４５）
2018516243.tif 000214
【１０８３】
（外４６）
2018516243.tif 000215
【１０８４】
（外４７）
2018516243.tif 000216
【１０８５】
（外４８）
2018516243.tif 000217
【１０８６】
（外４９）
2018516243.tif 000218
【１０８７】
（外５０）
2018516243.tif 000219
【１０８８】
（外５１）
2018516243.tif 000220
【１０８９】
（外５２）
2018516243.tif 000221
【１０９０】
（外５３）
2018516243.tif 000222
【１０９１】
（外５４）
2018516243.tif 000223
【１０９２】
（外５５）
2018516243.tif 000224
【１０９３】
（外５６）
2018516243.tif 000225
【１０９４】
（外５７）
2018516243.tif 000226
【１０９５】
（外５８）
2018516243.tif 000227
【１０９６】
（外５９）
2018516243.tif 000228
【１０９７】
（外６０）
2018516243.tif 000229
【１０９８】
（外６１）
2018516243.tif 000230
【１０９９】
（外６２）
2018516243.tif 000231
【１１００】
（外６３）
2018516243.tif 000232
【１１０１】
（外６４）
2018516243.tif 000233
【１１０２】
（外６５）
2018516243.tif 000234
【１１０３】
（外６６）
2018516243.tif 000235
【１１０４】
（外６７）
2018516243.tif 000236
【１１０５】
（外６８）
2018516243.tif 000237
【１１０６】
（外６９）
2018516243.tif 000238
【１１０７】
（外７０）
2018516243.tif 000239
【１１０８】
（外７１）
2018516243.tif 000240
【１１０９】
（外７２）
2018516243.tif 000241
【図１】
2018516243.tif 000280
【配列表】
2018516243000001.xml
【国際調査報告】
2018516243.tif 000353
2018516243.tif 000354
2018516243.tif 000355
2018516243.tif 000356