(57)【要約】  ＵＳＰ７によって媒介されるがん及び炎症などの免疫障害の治療並びにＵＳＰ７の調節に有用である、式Ｉの２−アミノピリジン化合物並びにその立体異性体、互変異性体及び薬学的に許容される塩を含む様々な置換基が提供される。哺乳動物細胞における上記の障害又は関連する病的状態のｉｎ  ｖｉｔｒｏ、ｉｎ  ｓｉｔｕ及びｉｎ  ｖｉｖｏ診断並びに治療のための式Ｉの化合物の使用方法が開示される。2018508563.tif 000043【選択図】なし
2018508563.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式Ｉから選択される化合物：
2018508563.tif 000041
又はその立体異性体、互変異性体若しくは薬学的に許容される塩［上式中、
Ｒ１は、Ｃ６−Ｃ２０アリール、Ｃ３−Ｃ１２カルボシクリル、Ｃ２−Ｃ２０ヘテロシクリル、及びＣ１−Ｃ２０ヘテロアリールから選択され；
Ｒ２は、-ＣＮ、-ＯＣＨ３、Ｃ１-Ｃ３アルキル、Ｃ１-Ｃ３フルオロアルキル、及びシクロプロピルから選択され；
Ｒ３は、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、-ＣＮ、-ＣＨ３、-ＣＨ２ＣＨ３、-ＣＨ（ＣＨ３）２、-ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２、-ＣＨ２ＯＨ、-ＣＨ２ＯＣＨ３、-ＣＨ２ＣＨ２ＯＨ、-Ｃ（ＣＨ３）２ＯＨ、-ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ（ＣＨ３）２、-Ｃ（ＣＨ３）２ＣＨ２ＯＨ、-ＣＨ２ＣＨ２ＳＯ２ＣＨ３、-ＣＨ２ＯＰ（Ｏ）（ＯＨ）２、-ＣＨ２Ｆ、-ＣＨＦ２、-ＣＨ２ＮＨ２、-ＣＨ２ＮＨＳＯ２ＣＨ３、-ＣＨ２ＮＨＣＨ３、-ＣＨ２Ｎ（ＣＨ３）２、-ＣＦ３、-ＣＨ２ＣＦ３、-ＣＨ２ＣＨＦ２、-ＣＨ（ＣＨ３）ＣＮ、-Ｃ（ＣＨ３）２ＣＮ、-ＣＨ２ＣＮ、-ＣＯ２Ｈ、-ＣＯＣＨ３、-ＣＯ２ＣＨ３、-ＣＯ２Ｃ（ＣＨ３）３、-ＣＯＣＨ（ＯＨ）ＣＨ３、-ＣＯＮＨ２、-ＣＯＮＨＣＨ３、-ＣＯＮＨＣＨ２ＣＨ３、-ＣＯＮＨＣＨ（ＣＨ３）２、-ＣＯＮ（ＣＨ３）２、-Ｃ（ＣＨ３）２ＣＯＮＨ２、-ＮＨ２、-ＮＨＣＨ３、-Ｎ（ＣＨ３）２、-ＮＨＣＯＣＨ３、-Ｎ（ＣＨ３）ＣＯＣＨ３、-ＮＨＳ（Ｏ）２ＣＨ３、-Ｎ（ＣＨ３）Ｃ（ＣＨ３）２ＣＯＮＨ２、-Ｎ（ＣＨ３）ＣＨ２ＣＨ２Ｓ（Ｏ）２ＣＨ３、-ＮＯ２、＝Ｏ、-ＯＨ、-ＯＣＨ３、-ＯＣＨ２ＣＨ３、-ＯＣＨ２ＣＨ２ＯＣＨ３、-ＯＣＨ２ＣＨ２ＯＨ、-ＯＣＨ２ＣＨ２Ｎ（ＣＨ３）２、-ＯＰ（Ｏ）（ＯＨ）２、-Ｓ（Ｏ）２Ｎ（ＣＨ３）２、-ＳＣＨ３、-Ｓ（Ｏ）２ＣＨ３、-Ｓ（Ｏ）３Ｈ、シクロプロピル、シクロプロピルアミド、オキセタニル、アゼチジニル、１−メチルアゼチジン−３−イル）オキシ、Ｎ−メチル−Ｎ−オキセタン−３−イルアミノ、アゼチジン−１−イルメチル、ベンジルオキシフェニル、ピロリジン−１−イル、ピロリジン−１−イル−メタノン、ピペラジン−１−イル、モルホリノメチル、モルホリノ−メタノン、及びモルホリノから選択され；
ｎは、０、１、２、及び３から選択され；
Ｒ４は、Ｈ、Ｃ１-Ｃ３アルキル、Ｃ１-Ｃ３フルオロアルキル、シクロプロピル、及びシクロプロピルメチルから選択され；
ここで、アリール、カルボシクリル、ヘテロシクリル、及びヘテロアリールは、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、-ＣＮ、-ＣＨ３、-ＣＨ２ＣＨ３、-ＣＨ（ＣＨ３）２、-ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２、-ＣＨ２ＯＨ、-ＣＨ２ＯＣＨ３、-ＣＨ２ＣＨ２ＯＨ、-Ｃ（ＣＨ３）２ＯＨ、-ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ（ＣＨ３）２、-Ｃ（ＣＨ３）２ＣＨ２ＯＨ、-ＣＨ２ＣＨ２ＳＯ２ＣＨ３、-ＣＨ２ＯＰ（Ｏ）（ＯＨ）２、-ＣＨ２Ｆ、-ＣＨＦ２、-ＣＦ３、-ＣＨ２ＣＦ３、-ＣＨ２ＣＨＦ２、-ＣＨ（ＣＨ３）ＣＮ、-Ｃ（ＣＨ３）２ＣＮ、-ＣＨ２ＣＮ、-ＣＨ２ＮＨ２、-ＣＨ２ＮＨＳＯ２ＣＨ３、-ＣＨ２ＮＨＣＨ３、-ＣＨ２Ｎ（ＣＨ３）２、-ＣＯ２Ｈ、-ＣＯＣＨ３、-ＣＯ２ＣＨ３、-ＣＯ２Ｃ（ＣＨ３）３、-ＣＯＣＨ（ＯＨ）ＣＨ３、-ＣＯＮＨ２、-ＣＯＮＨＣＨ３、-ＣＯＮ（ＣＨ３）２、-Ｃ（ＣＨ３）２ＣＯＮＨ２、-ＮＨ２、-ＮＨＣＨ３、-Ｎ（ＣＨ３）２、-ＮＨＣＯＣＨ３、-Ｎ（ＣＨ３）ＣＯＣＨ３、-ＮＨＳ（Ｏ）２ＣＨ３、-Ｎ（ＣＨ３）Ｃ（ＣＨ３）２ＣＯＮＨ２、-Ｎ（ＣＨ３）ＣＨ２ＣＨ２Ｓ（Ｏ）２ＣＨ３、-ＮＯ２、＝Ｏ、-ＯＨ、-ＯＣＨ３、-ＯＣＨ２ＣＨ３、-ＯＣＨ２ＣＨ２ＯＣＨ３、-ＯＣＨ２ＣＨ２ＯＨ、-ＯＣＨ２ＣＨ２Ｎ（ＣＨ３）２、-ＯＰ（Ｏ）（ＯＨ）２、-Ｓ（Ｏ）２Ｎ（ＣＨ３）２、-ＳＣＨ３、-Ｓ（Ｏ）２ＣＨ３、-Ｓ（Ｏ）３Ｈ、シクロプロピル、シクロプロピルアミド、オキセタニル、アゼチジニル、１−メチルアゼチジン−３−イル）オキシ、Ｎ−メチル−Ｎ−オキセタン−３−イルアミノ、アゼチジン−１−イルメチル、ベンジルオキシフェニル、ピロリジン−１−イル、ピロリジン−１−イル−メタノン、ピペラジン−１−イル、モルホリノメチル、モルホリノ−メタノン、及びモルホリノから独立に選択される１以上の基で任意選択的に置換されている］。
【請求項２】
Ｒ１が任意選択的に置換されているＣ６-Ｃ２０アリールである、請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
Ｒ１が４−フェノールである、請求項２に記載の化合物。
【請求項４】
Ｒ１が任意選択的に置換されているＣ１-Ｃ２０ヘテロアリールである、請求項１に記載の化合物。
【請求項５】
Ｒ１が１Ｈ−インダゾール−５−イル、１Ｈ−インダゾール−６−イル、２−メチルインダゾール−４−イル、１Ｈ−ベンゾイミダゾール−５−イル、２−チエニル、ピリミジン−５−イル、３−ピリジル、４−ピリジル、及び１Ｈ−ピリジン−２−オンから選択される、請求項４に記載の化合物。
【請求項６】
Ｒ２が-ＣＨ２ＣＨ３である、請求項１から５のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項７】
Ｒ３が-ＯＨであり、ｎが１である、請求項１から６のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項８】
Ｒ４がＨである、請求項１から７のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項９】
式Ｉａ〜ｆ：
2018508563.tif 000042
から選択される、請求項１に記載の化合物。
【請求項１０】
４−［６−アミノ−５−（４−ヒドロキシフェニル）−４−メチル−３−ピリジル］フェノール；
４−［６−アミノ−４−エチル−５−（４−ヒドロキシフェニル）−３−ピリジル］フェノール；
４−［６−アミノ−５−（４−ヒドロキシフェニル）−４−イソプロピル−３−ピリジル］フェノール；
４−［６−アミノ−５−（４−ヒドロキシフェニル）−４−メトキシ−３−ピリジル］フェノール；
４−［６−アミノ−５−（４−ヒドロキシフェニル）−４−（トリフルオロメチル）−３−ピリジル］フェノール；
４−［６−アミノ−５−（４−ヒドロキシフェニル）−４−プロピル−３−ピリジル］フェノール；
４−［６−アミノ−４−エチル−５−（４−ヒドロキシフェニル）−３−ピリジル］−３−フルオロ−フェノール；
Ｎ−［３−［６−アミノ−４−エチル−５−（４−ヒドロキシフェニル）−３−ピリジル］フェニル］アセトアミド；
４−［６−アミノ−４−シクロプロピル−５−（４−ヒドロキシフェニル）−３−ピリジル］フェノール；
４−［６−アミノ−４−エチル−５−（２−フルオロ−４−メトキシ−フェニル）−３−ピリジル］フェノール；
４−［２−アミノ−４−エチル−５−（４−ヒドロキシフェニル）−３−ピリジル］−３−フルオロ−フェノール；
４−［２−アミノ−５−［３−［（ジメチルアミノ）メチル］フェニル］−４−エチル−３−ピリジル］フェノール；
Ｎ−［３−［６−アミノ−４−エチル−５−（２−チエニル）−３−ピリジル］フェニル］アセトアミド；
Ｎ−［３−［６−アミノ−４−エチル−５−（１Ｈ−インダゾール−６−イル）−３−ピリジル］フェニル］アセトアミド；
４−［４−エチル−５−（４−ヒドロキシフェニル）−６−（プロピルアミノ）−３−ピリジル］フェノール；
４−（６−アミノ−４−エチル−５−フェニル−３−ピリジル）フェノール；
４−［６−アミノ−４−エチル−５−（ｍ−トリル）−３−ピリジル］フェノール；
４−［６−アミノ−５−（３，４−ジフルオロフェニル）−４−エチル−３−ピリジル］フェノール；
３−［２−アミノ−４−エチル−５−（４−ヒドロキシフェニル）−３−ピリジル］ベンゾニトリル；
４−［６−アミノ−４−エチル−５−（４−メチルスルホニルフェニル）−３−ピリジル］フェノール；
ｔｅｒｔ−ブチル  Ｎ−［４−［２−アミノ−４−エチル−５−（４−ヒドロキシフェニル）−３−ピリジル］フェニル］カルバメート；
４−［６−アミノ−４−エチル−５−（３−モルホリノフェニル）−３−ピリジル］フェノール；
ｔｅｒｔ−ブチル  Ｎ−［［３−［２−アミノ−４−エチル−５−（４−ヒドロキシフェニル）−３−ピリジル］フェニル］メチルカルバメート；
４−［６−アミノ−４−エチル−５−［３−（メトキシメチル）フェニル］−３−ピリジル］フェノール；
４−［６−アミノ−４−エチル−５−［４−（メトキシメチル）フェニル］−３−ピリジル］フェノール；
４−［６−アミノ−４−エチル−５−［３−（モルホリノメチル）フェニル］−３−ピリジル］フェノール；
２−［３−［２−アミノ−４−エチル−５−（４−ヒドロキシフェニル）−３−ピリジル］フェニル］アセトニトリル；
ｔｅｒｔ−ブチル  Ｎ−［４−［２−アミノ−４−エチル−５−（４−ヒドロキシフェニル）−３−ピリジル］フェニル］−Ｎ−メチル−カルバメート；
５−［２−アミノ−４−エチル−５−（４−ヒドロキシフェニル）−３−ピリジル］ピリジン−３−カルボニトリル；
Ｎ−［４−［２−アミノ−４−エチル−５−（４−ヒドロキシフェニル）−３−ピリジル］フェニル］メタンスルホンアミド；
ｔｅｒｔ−ブチル  Ｎ−［３−［２−アミノ−４−エチル−５−（４−ヒドロキシフェニル）−３−ピリジル］フェニル］カルバメート；
４−（２−アミノ−４−エチル−５−ピリミジン−５−イル−３−ピリジル）フェノール；
４−［２−アミノ−４−エチル−５−（ｏ−トリル）−３−ピリジル］フェノール；
４−［２−アミノ−４−エチル−５−（４−フルオロフェニル）−３−ピリジル］フェノール；
４−［２−アミノ−４−エチル−５−（６−メチル−３−ピリジル）−３−ピリジル］フェノール；
４−［２−アミノ−４−エチル−５−（ｐ−トリル）−３−ピリジル］フェノール；
４−（２−アミノ−４−エチル−５−フェニル−３−ピリジル）フェノール；
４−［２−アミノ−４−エチル−５−（４−ピリジル）−３−ピリジル］フェノール；
４−［２−アミノ−４−エチル−５−（３−ピリジル）−３−ピリジル］フェノール；
４−［６−（シクロプロピルメチルアミノ）−４−エチル−５−（４−ヒドロキシフェニル）−３−ピリジル］フェノール；
Ｎ−［３−［２−アミノ−４−エチル−５−（４−ヒドロキシフェニル）−３−ピリジル］フェニル］メタンスルホンアミド；
４−［２−アミノ−４−エチル−５−（３−ピペラジン−１−イルフェニル）−３−ピリジル］フェノール；
４−［４−エチル−５−（４−ヒドロキシフェニル）−６−（メチルアミノ）−３−ピリジル］フェノール；
４−［２−アミノ−５−（４−クロロ−３−メチル−フェニル）−４−エチル−３−ピリジル］フェノール；
４−［６−アミノ−４−エチル−５−（４−ヒドロキシフェニル）−３−ピリジル］ベンズアミド；
３−［６−アミノ−４−エチル−５−（４−ヒドロキシフェニル）−３−ピリジル］ベンズアミド；
４−［２−アミノ−４−エチル−５−（３−イソプロピルフェニル）−３−ピリジル］フェノール；
４−［２−アミノ−５−（３，４−ジフルオロフェニル）−４−エチル−３−ピリジル］フェノール；
３−［６−アミノ−４−エチル−５−（４−ヒドロキシフェニル）−３−ピリジル］ベンゾニトリル；
４−［２−アミノ−４−エチル−５−（２−フルオロフェニル）−３−ピリジル］フェノール；
４−［６−アミノ−４−エチル−５−（４−ヒドロキシフェニル）−３−ピリジル］ベンゾニトリル；
４−［２−アミノ−４−エチル−５−（３−メトキシフェニル）−３−ピリジル］フェノール；
４−［２−アミノ−４−エチル−５−（４−メトキシフェニル）−３−ピリジル］フェノール；
３−［６−アミノ−４−エチル−５−（４−ヒドロキシフェニル）−３−ピリジル］−Ｎ，Ｎ−ジメチル−ベンズアミド；
４−［２−アミノ−４−エチル−５−［４−（ヒドロキシメチル）フェニル］−３−ピリジル］フェノール；
４−［６−アミノ−４−エチル−５−（４−ヒドロキシフェニル）−３−ピリジル］−Ｎ，Ｎ−ジメチル−ベンズアミド；
４−［２−アミノ−４−エチル−５−（ｍ−トリル）−３−ピリジル］フェノール；
５−［６−アミノ−４−エチル−５−（４−ヒドロキシフェニル）−３−ピリジル］−１Ｈ−ピリジン−２−オン；
４−［６−アミノ−４−エチル−５−（３−メチル−１Ｈ−インダゾール−５−イル）−３−ピリジル］フェノール；
［４−［６−アミノ−４−エチル−５−（４−ヒドロキシフェニル）−３−ピリジル］フェニル］−モルホリノ−メタノン；
４−［２−アミノ−５−（３−ベンジルオキシフェニル）−４−エチル−３−ピリジル］フェノール；
５−［６−アミノ−４−エチル−５−（４−ヒドロキシフェニル）−３−ピリジル］ピリジン−２−カルボニトリル；
５−［６−アミノ−４−エチル−５−（４−ヒドロキシフェニル）−３−ピリジル］ピリジン−３−カルボニトリル；
［３−［６−アミノ−４−エチル−５−（４−ヒドロキシフェニル）−３−ピリジル］フェニル］−ピロリジン−１−イル−メタノン；
４−［６−アミノ−４−エチル−５−（４−ヒドロキシフェニル）−３−ピリジル］−Ｎ−シクロプロピル−ベンズアミド；
２−［３−［６−アミノ−４−エチル−５−（４−ヒドロキシフェニル）−３−ピリジル］フェニル］アセトニトリル；
４−［６−アミノ−４−エチル−５−（４−ヒドロキシフェニル）−３−ピリジル］−２−フルオロ−ベンゾニトリル；
４−［２−アミノ−４−エチル−５−（６−メトキシ−３−ピリジル）−３−ピリジル］フェノール；
３−［６−アミノ−４−エチル−５−（４−ヒドロキシフェニル）−３−ピリジル］−Ｎ−イソプロピル−ベンズアミド；
Ｎ−［［４−［６−アミノ−４−エチル−５−（４−ヒドロキシフェニル）−３−ピリジル］フェニル］メチル］メタンスルホンアミド；
４−［２−アミノ−４−エチル−５−（１−イソブチルピラゾール−４−イル）−３−ピリジル］フェノール；
５−［２−アミノ−４−エチル−５−（４−ヒドロキシフェニル）−３−ピリジル］−２−ヒドロキシ−ベンゾニトリル；
４−［２−アミノ−４−エチル−５−（２−メチル−４−ピリジル）−３−ピリジル］フェノール；
４−［２−アミノ−５−［３−（ジフルオロメチル）フェニル］−４−エチル−３−ピリジル］フェノール；
Ｎ−［５−［６−アミノ−４−エチル−５−（４−ヒドロキシフェニル）−３−ピリジル］−２−ピリジル］アセトアミド；
４−［２−アミノ−５−（３，５−ジフルオロフェニル）−４−エチル−３−ピリジル］フェノール；
４−［２−アミノ−５−（３−クロロフェニル）−４−エチル−３−ピリジル］フェノール；
４−［２−アミノ−５−（２−クロロフェニル）−４−エチル−３−ピリジル］フェノール；
４−［２−アミノ−４−エチル−５−（４−フルオロ−３−メチル−フェニル）−３−ピリジル］フェノール；
４−［２−アミノ−５−（４−クロロフェニル）−４−エチル−３−ピリジル］フェノール；
４−［６−アミノ−４−エチル−５−（４−ヒドロキシフェニル）−３−ピリジル］−Ｎ−メチル−ベンズアミド；
４−［２−アミノ−４−エチル−５−［３−（モルホリノメチル）フェニル］−３−ピリジル］フェノール；
４−［２−アミノ−４−エチル−５−（２−メトキシピリミジン−５−イル）−３−ピリジル］フェノール；
４−［２−アミノ−４−エチル−５−（１Ｈ−インダゾール−６−イル）−３−ピリジル］フェノール；
４−［２−アミノ−４−エチル−５−（２−メチルインダゾール−４−イル）−３−ピリジル］フェノール；
４−［２−アミノ−４−エチル−５−（２−メチル−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−５−イル）−３−ピリジル］フェノール；
４−［６−アミノ−４−エチル−５−（１Ｈ−インダゾール−５−イル）−３−ピリジル］フェノール；
４−［２−アミノ−４−エチル−５−（１Ｈ−インダゾール−５−イル）−３−ピリジル］フェノール；
４−［２−アミノ−４−エチル−５−（２−メチルインダゾール−６−イル）−３−ピリジル］フェノール；
４−［２−アミノ−５−（３−アミノフェニル）−４−エチル−３−ピリジル］フェノール；
４−［２−アミノ−５−（４−アミノフェニル）−４−エチル−３−ピリジル］フェノール；
５−［６−アミノ−４−エチル−５−（４−ヒドロキシフェニル）−３−ピリジル］−Ｎ−メチル−ピリジン−２−カルボキサミド；
４−［６−アミノ−４−エチル−５−（１Ｈ−インダゾール−６−イル）−３−ピリジル］フェノール；
５−［６−アミノ−４−エチル−５−（４−ヒドロキシフェニル）−３−ピリジル］−２−ヒドロキシ−ベンゾニトリル；
５−［６−アミノ−４−エチル−５−（４−ヒドロキシフェニル）−３−ピリジル］−２−ヒドロキシ−ベンズアミド；
から選択される、請求項１から９のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項１１】
請求項１から１１のいずれか一項に記載の化合物及び薬学的に許容される担体、滑剤、希釈剤又は賦形剤を含む薬学的組成物。
【請求項１２】
治療剤をさらに含む、請求項１１に記載の薬学的組成物。
【請求項１３】
薬学的に許容される担体、滑剤、希釈剤又は賦形剤と請求項１から１１のいずれか一項に記載の化合物を組み合わせることを含む、薬学的組成物を製造するための方法。
【請求項１４】
疾患又は障害を治療する方法であって、免疫障害、がん、心血管疾患、ウイルス感染、炎症、代謝／内分泌機能障害及び神経障害から選択され、ブルトン型チロシンキナーゼによって媒介される疾患又は障害を有する患者に治療有効量の請求項１１に記載の薬学的組成物を投与することを含む、方法。
【請求項１５】
疾患又は障害が、乳房、卵巣、子宮頸部、前立腺、睾丸、泌尿生殖器、食道、喉頭、膠芽細胞腫、神経芽細胞腫、胃、皮膚、角化棘細胞腫、肺、類表皮癌、大細胞癌、非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）、小細胞癌、肺腺癌、骨、結腸、腺腫、膵臓、腺癌、甲状腺、濾胞腺癌、未分化癌、乳頭癌、セミノーマ、メラノーマ、肉腫、膀胱癌、肝臓癌及び胆汁通路、腎臓癌、膵臓、骨髄性疾患、リンパ腫、ヘアリー細胞、口腔、鼻咽頭、咽頭、唇、舌、口、小腸、結腸直腸、大腸、直腸、脳及び中枢神経系、ホジキン、白血病、気管支、甲状腺、肝臓及び肝内胆管、肝細胞、胃、神経膠腫／神経膠芽腫、子宮内膜癌、メラノーマ、腎臓及び腎盂、膀胱、子宮体、子宮頸部、多発性骨髄腫、急性骨髄性白血病、慢性骨髄性白血病、リンパ球性白血病、慢性リンパ性白血病、（ＣＬＬ）、骨髄性白血病、口腔及び咽頭、非ホジキンリンパ腫、メラノーマ及び絨毛結腸腺腫から選択されるがんである、請求項１４に記載の方法。
【請求項１６】
疾患又は障害が血液悪性腫瘍である、請求項１４に記載の方法。
【請求項１７】
血液悪性腫瘍が白血病又はリンパ腫である、請求項１６に記載の方法。
【請求項１８】
抗炎症剤、免疫調節剤、化学療法剤、アポトーシス促進剤、神経栄養因子、心血管疾患治療剤、肝疾患治療剤、抗ウイルス剤、血液疾患治療剤、糖尿病治療剤、及び免疫不全障害治療剤から選択される追加の治療剤を投与することをさらに含む、請求項１４に記載の方法。
【請求項１９】
ａ）  請求項１１に記載の薬学的組成物；及び
ｂ）  使用説明書
を含む、ＵＳＰ７により媒介される状態を治療するためのキット。
【請求項２０】
治療的活性物質としての使用のための、請求項１から１１のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項２１】
免疫障害、がん、心血管疾患、ウイルス感染、炎症、代謝／内分泌機能障害及び神経障害から選択され、ブルトン型チロシンキナーゼによって媒介される疾患又は障害の治療又は予防のための、請求項１から１１のいずれか一項に記載の化合物の使用。
【請求項２２】
疾患又は障害が、乳房、卵巣、子宮頸部、前立腺、睾丸、泌尿生殖器、食道、喉頭、膠芽細胞腫、神経芽細胞腫、胃、皮膚、角化棘細胞腫、肺、類表皮癌、大細胞癌、非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）、小細胞癌、肺腺癌、骨、結腸、腺腫、膵臓、腺癌、甲状腺、濾胞腺癌、未分化癌、乳頭癌、セミノーマ、メラノーマ、肉腫、膀胱癌、肝臓癌及び胆汁通路、腎臓癌、膵臓、骨髄性疾患、リンパ腫、ヘアリー細胞、口腔、鼻咽頭、咽頭、唇、舌、口、小腸、結腸直腸、大腸、直腸、脳及び中枢神経系、ホジキン、白血病、気管支、甲状腺、肝臓及び肝内胆管、肝細胞、胃、神経膠腫／神経膠芽腫、子宮内膜癌、メラノーマ、腎臓及び腎盂、膀胱、子宮体、子宮頸部、多発性骨髄腫、急性骨髄性白血病、慢性骨髄性白血病、リンパ球性白血病、慢性リンパ性白血病、（ＣＬＬ）、骨髄性白血病、口腔及び咽頭、非ホジキンリンパ腫、メラノーマ及び絨毛結腸腺腫から選択されるがんである、請求項２１に記載の化合物の使用。
【請求項２３】
疾患又は障害が血液悪性腫瘍である、請求項２１に記載の化合物の使用。
【請求項２４】
血液悪性腫瘍が白血病又はリンパ腫である、請求項２３に記載の化合物の使用。
【請求項２５】
免疫障害、がん、心血管疾患、ウイルス感染、炎症、代謝／内分泌機能障害及び神経障害から選択され、ブルトン型チロシンキナーゼによって媒介される疾患又は障害の治療又は予防のための、請求項１から１１のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項２６】
疾患又は障害が、乳房、卵巣、子宮頸部、前立腺、睾丸、泌尿生殖器、食道、喉頭、膠芽細胞腫、神経芽細胞腫、胃、皮膚、角化棘細胞腫、肺、類表皮癌、大細胞癌、非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）、小細胞癌、肺腺癌、骨、結腸、腺腫、膵臓、腺癌、甲状腺、濾胞腺癌、未分化癌、乳頭癌、セミノーマ、メラノーマ、肉腫、膀胱癌、肝臓癌及び胆汁通路、腎臓癌、膵臓、骨髄性疾患、リンパ腫、ヘアリー細胞、口腔、鼻咽頭、咽頭、唇、舌、口、小腸、結腸直腸、大腸、直腸、脳及び中枢神経系、ホジキン、白血病、気管支、甲状腺、肝臓及び肝内胆管、肝細胞、胃、神経膠腫／神経膠芽腫、子宮内膜癌、メラノーマ、腎臓及び腎盂、膀胱、子宮体、子宮頸部、多発性骨髄腫、急性骨髄性白血病、慢性骨髄性白血病、リンパ球性白血病、慢性リンパ性白血病、（ＣＬＬ）、骨髄性白血病、口腔及び咽頭、非ホジキンリンパ腫、メラノーマ及び絨毛結腸腺腫から選択されるがんである、請求項２２に記載の化合物。
【請求項２７】
疾患又は障害が血液悪性腫瘍である、請求項２３に記載の化合物。
【請求項２８】
血液悪性腫瘍が白血病又はリンパ腫である、請求項２４に記載の化合物。
【請求項２９】
免疫障害、がん、心血管疾患、ウイルス感染、炎症、代謝／内分泌機能障害及び神経障害から選択され、ブルトン型チロシンキナーゼによって媒介される疾患又は障害の治療又は予防のための医薬の調製のための、請求項１から１１のいずれか一項に記載の化合物の使用。
【請求項３０】
疾患又は障害が、乳房、卵巣、子宮頸部、前立腺、睾丸、泌尿生殖器、食道、喉頭、膠芽細胞腫、神経芽細胞腫、胃、皮膚、角化棘細胞腫、肺、類表皮癌、大細胞癌、非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）、小細胞癌、肺腺癌、骨、結腸、腺腫、膵臓、腺癌、甲状腺、濾胞腺癌、未分化癌、乳頭癌、セミノーマ、メラノーマ、肉腫、膀胱癌、肝臓癌及び胆汁通路、腎臓癌、膵臓、骨髄性疾患、リンパ腫、ヘアリー細胞、口腔、鼻咽頭、咽頭、唇、舌、口、小腸、結腸直腸、大腸、直腸、脳及び中枢神経系、ホジキン、白血病、気管支、甲状腺、肝臓及び肝内胆管、肝細胞、胃、神経膠腫／神経膠芽腫、子宮内膜癌、メラノーマ、腎臓及び腎盂、膀胱、子宮体、子宮頸部、多発性骨髄腫、急性骨髄性白血病、慢性骨髄性白血病、リンパ球性白血病、慢性リンパ性白血病、（ＣＬＬ）、骨髄性白血病、口腔及び咽頭、非ホジキンリンパ腫、メラノーマ及び絨毛結腸腺腫から選択されるがんである、請求項２６に記載の化合物の使用。
【請求項３１】
疾患又は障害が血液悪性腫瘍である、請求項２６に記載の化合物の使用。
【請求項３２】
血液悪性腫瘍が白血病又はリンパ腫である、請求項２９に記載の化合物の使用。
【請求項３３】
上に記載の発明。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は概して、炎症、免疫学的障害及びがんを含む、ＵＳＰ７によって媒介される障害を治療するための化合物、より具体的にはＵＳＰ７活性又は機能を阻害又は調節する化合物に関する。本発明はまた、哺乳動物細胞のｉｎ  ｖｉｔｒｏ、ｉｎ  ｓｉｔｕ、及びｉｎ  ｖｉｖｏでの診断若しくは治療又は関連する病的状態のための化合物の使用方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
他のタンパク質に翻訳後の標識として作用する小さなタンパク質であるユビキチンは、驚くほどの構造不均一性を有する(Lange, O.F. et al. (2008) Science 320, 1471-1475)。タンパク質ユビキチン化は、細胞周期制御、アポトーシス、エピジェネティクス及び転写調節などの多数の細胞プロセスを媒介する(Clague, M.J. et al (2010) Cell 143:682-685)。ユビキチンのＣ末端は、Ｅ１アクチベーター、Ｅ２コンジュゲーター及びユビキチンリガーゼ（ユビキチンＥ３）の３種類の酵素の協調作用を介して、基質タンパク質のリジン又はＮ末端に共有結合されている(Pickart, C.M. (2001) Annu. Rev. Biochem.70 (503-533)。ユビキチンのＮ末端又は７つのリジンの各々は、さらなるユビキチン化のための基質としても機能し、豊富な情報を伝達する連結を有するユビキチン鎖の重合を可能にする(Pickart, C.M. et al (2004) Curr. Opin. Chem. Biol.8 (610-616)。ユビキチンのβ１−β２ループ内の動きは、パートナータンパク質による認識に関係しているが、アポユビキチンの構造状態が各パートナーによってどのように「読み取られているか」は現在わかっていない。アポユビキチンの多重立体構造は、その単一のタンパク質表面が中程度の親和性を有する広範な無関係のパートナーに結合することを可能にしてしまう恐れがある(Humphris, E.L. et al (2007)PLoS Comput. Biol. 3, e164 (2007); Friedland, G.D., et al (2009) PLoS Comput. Biol. 5 e1000393)。
【０００３】
脱ユビキチン化酵素（ＤＵＢ）は、ユビキチン鎖を分解するか又は基質からモノユビキチン化を除去することにより、ユビキチンを介したシグナル伝達を調節する特殊な種類のプロテアーゼである(Heideker, J. and Wertz, I.E. (2015) Biochem. J. 465:1-26; Lill, J.R. and Wertz, I.E. (2014) Trends in Pharm. Sci. 35(4):187-207; Komander, D., et al (2009) Nat. Rev. Mol. Cell Biol.10 (550-563)。約１００の同定されたヒトＤＵＢがあり、その大部分は詳細な調査を待っている。１つの例外は、Ｍｄｍ２、ｐ５３、ＦＯＸＯ４及びＰＴＥＮに対する作用を介して腫瘍形成において確立された役割を有するユビキチン特異的プロテアーゼ（ＵＳＰ）である、ＵＳＰ７（ＨＡＵＳＰとしても知られている）である(Nicholson, B. et al (2011) Cell Biochem. Biophys. 60:61-68); Hussain, S., et al (2009) Cell Cycle 8:1688-1697)。特定の経路におけるＵＳＰ７の正確な機能の決定は矛盾する報告によって複雑になっていたが(Li, M., et al (2004) Mol. Cell 13:879-886);Li, M. et al. (2002) Nature 416:648-653)、多くのがん関連プロセスへのこの酵素の関与が、これを魅力的な治療標的にしている。
【０００４】
その細胞の重要性にもかかわらず、ＵＳＰ７の触媒コアは、約１０３Ｍ−１ｓ−１の触媒効率（ｋｃａｔ／Ｋｍ）及び数百マイクロモルのユビキチン親和性（ＫＤ）で、意外にも不活性である(Faesen, A.C. et al. (2011) Mol. Cell 44:147-159); Fernandez-Montalvan, A. et al. (2007) FEBS J. 274, 4256-4270)。立体構造的に不均一なβ１−β２ループは、ＵＳＰ７を含むすべてのＤＵＢによって直接接触される。したがって、ユビキチンのβ１−β２領域のＵＳＰ７結合構造を安定化することによって標的ＤＵＢに対して高い親和性を有する変異体が得られるかどうかを決定することが求められている。細胞分裂におけるＵＳＰ７の役割とＵＳＰ７ノックダウンを取り巻く技術的な難しさを考えると、ＵＳＰ７に対する高い親和性及び特異性を有する、立体構造的に最適化されたユビキチンベースの阻害剤は、ＵＳＰ７の細胞機能を理解するための強力なツールとなり得る。関連するアプローチでは、ユビキチンの表面工学を用いてユビキチンシグナル伝達酵素の強力な結合剤を生成させた(Ernst et al, Science doi:10.1126/science. 1230161 (3 January 2013); Zhang, Y., et al (2013) Nature Chemical Biology 9(1):51-58)。
【０００５】
ＵＳＰ７又はＨＡＵＳＰ（ヘルペスウイルス関連ＵＳＰ）は、ユビキチン特異的プロテアーゼ又はその基質からユビキチンを切断する脱ユビキチン化酵素である(Holowaty MN, et al (2003) J. Biol. Chem. 278(48):47753-47756)。ユビキチン化（ポリユビキチン化）は細胞タンパク質の安定性及び分解に最も一般的に関連するため、ＨＡＵＳＰ活性は一般に、その基質タンパク質を安定化させる。ＨＡＵＳＰは、腫瘍抑制タンパク質ｐ５３のＥ３ユビキチンリガーゼであるＭｄｍ２の直接的アンタゴニストとして最も広く知られている(Li M, et al (2002) Nature416 (6881): 648-53)。通常、ｐ５３のレベルは、Ｍｄｍ２媒介性のユビキチン化及びｐ５３の分解のために部分的に低く保たれる。腫瘍侵襲に応答して、ＨＡＵＳＰは、ｐ５３を脱ユビキチン化し、Ｍｄｍ２媒介性分解からｐ５３を保護することができ、ＨＡＵＳＰがストレスに反応してｐ５３の即時安定化のために腫瘍抑制機能を有し得ることを示す。ＨＡＵＳＰ機能のもう一つの重要な役割は、ｐ５３の腫瘍安定化を伴う。Ｍｙｃ及びＥ１Ａなどのがん遺伝子は、いくつかの証拠がＡＲＦはこのプロセスにおいて必須ではないことを示唆しているものの、ｐ１９代替リーディングフレーム（ｐ１９ＡＲＦ、ＡＲＦとも呼ばれる）依存性経路を介してｐ５３を活性化すると考えられている。一つの可能性は、ＨＡＵＳＰが腫瘍傷害から細胞を保護するための代替経路を提供することである。
【０００６】
ＵＳＰ７は、Ｍｄｍ２、ｐ５３、ＰＴＥＮ及びＦＯＸＯ４の安定性を変化させることによって細胞増殖を制御するＤＵＢである。腫瘍関連経路におけるＵＳＰ７の重要性にもかかわらず、その細胞及び生化学的調節については比較的ほとんど知られておらず、Ｍｄｍ２−ｐ５３軸におけるその正確な役割についていくらか混乱があるが、その理由の一部には阻害ツールの欠如がある。ＵＳＰ７の触媒ドメインは、そのユビキチン基質に対してほとんど検出不可能な親和性及び比較的低い触媒効率を有し、ｉｎ  ｖｉｔｒｏでは比較的非効率である。ＵＳＰ７のＣ末端並びに第４及び第５のＵｂｌドメインは、増加したｋｃａｔと減少したＫｍの組み合わせによってその活性を大きく増加させるが、この効果によって得られるメカニズムは現在のところ判明していない。ユビキチンコンフォメーションの工学(Engineering of ubiquitin conformation)は、ＵＳＰ７などの脱ユビキチン化酵素とユビキチンの相互作用を大きく増加させることができる(Zhang, Y., et al (2013) Nature Chemical Biology 9(1):51-58)。
【０００７】
ユビキチン／プロテアソーム系（ＵＰＳ）の調節解除は、がんを含む多くのヒト疾患の病因に関与している(Vucic, D., et al (2011) Nature Reviews Molecular Cell Biology 12:439-452)。ユビキチン特異的プロテアーゼ（ＵＳＰ）は、タンパク質基質の脱ユビキチン化に関与するシステインプロテアーゼである。ｐ５３／Ｍｄｍ２及びホスファチジルイノシトール３−キナーゼ／プロテインキナーゼＢ経路などの必須ウイルスタンパク質経路及び発がん経路とＵＳＰ７との間の機能的結合は、小分子阻害剤によるＵＳＰ７の標的化ががん及びウイルス性疾患の治療に有用であり得ることを強く示唆している。
【０００８】
ユビキチン−プロテアソーム系の一部であるアポトーシス制御タンパク質を標的とする治療薬は、臨床的利益をもたらす可能性がある(Vucic, D., et al (2011) Nature Reviews Molecular Cell Biology 12:439-452)。脱ユビキチン化酵素阻害剤及びアンタゴニストがすでに報告されている(Lill, J.R. and Wertz, I.E. (2014) Trends in Pharm. Sci. 35(4):187-207, see Table 2, page 195, Ndubaku ,C. and Tsui, V. (2015) J. Med. Chem. DOI:10.1021/jm501061a)。がんの治療のためのユビキチン−プロテアソーム系の標的化の論理的根拠は、多発性骨髄腫及びマントル細胞リンパ腫の治療のためのボルテゾミブ（ＶＥＬＣＡＤＥ（登録商標）；Ｍｉｌｌｅｎｎｉｕｍ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）のＦＤＡ承認及び臨床的有効性によって立証される。ＵＳＰ７サイレンシングに関連する表現型は、ＵＳＰ７の小分子阻害剤が抗ウイルス及び抗がん療法の可能性を有し得ることを強く示唆している(Li, M. et al. (2002) Nature 416:648-653; Daviet, L. and Colland, F. (2008) Biochimie 90:270-283)。
【発明の概要】
【０００９】
本発明は概して、ＵＳＰ７調節活性又は機能を持つ、式Ｉの構造を有する２−アミノピリジン化合物：
2018508563.tif 000003
及びその立体異性体、互変異性体又は薬学的に許容される塩に関する。様々な置換基が本明細書において定義される。
【００１０】
本発明の一態様は、式（Ｉ）の化合物及び薬学的に許容される担体、滑剤、希釈剤又は賦形剤からなる薬学的組成物である。薬学的組成物は、第二の治療剤をさらに含んでもよい。
【００１１】
本発明の別の態様は、式Ｉの化合物を薬学的に許容される担体と組み合わせることを含む、薬学的組成物の製造方法である。
【００１２】
本発明は、疾患又は障害を治療する方法であって、免疫障害、がん、心血管疾患、ウイルス感染、炎症、代謝／内分泌機能障害及び神経障害から選択され、ＵＳＰ７によって媒介される疾患又は障害を有する患者に治療有効量の式Ｉの化合物を投与することを含む、方法を含む。
【００１３】
本発明は、ａ）式Ｉの化合物を含む第１の薬学的組成物；及びｂ）使用説明書を備える、ＵＳＰ７によって媒介される状態を治療するためのキットを含む。
【００１４】
本発明は、医薬としての使用のための、並びに免疫障害、がん、心血管疾患、ウイルス感染、炎症、代謝／内分泌機能障害及び神経障害から選択され、ＵＳＰ７によって媒介される疾患又は障害の治療おける使用のための式Ｉ化合物を含む。
【００１５】
本発明は、追加の治療剤と組み合わせた、疾患又は障害の治療における使用のための式Ｉの化合物を含む。
【００１６】
本発明は、免疫障害、がん、心血管疾患、ウイルス感染、炎症、代謝／内分泌機能障害及び神経障害の治療のための医薬であって、ＵＳＰ７を調節する医薬の製造における式Ｉの化合物の使用を含む。
【００１７】
本発明は、式Ｉの化合物を製造する方法を含む。
【図面の簡単な説明】
【００１８】
【図１Ａ】ＨＣＴ１１６結腸がん細胞における化合物２５、８９及び４５の細胞増殖及びカスパーゼ活性（Ｉｎｃｕｃｙｔｅ（登録商標）、Ｅｓｓｅｎ  ＢｉｏＳｃｉｅｎｃｅ）データを示す。
【図１Ｂ】ＨＣＴ１１６結腸がん細胞における化合物８８及び９２の細胞増殖及びカスパーゼ活性（Ｉｎｃｕｃｙｔｅ（登録商標）、Ｅｓｓｅｎ  ＢｉｏＳｃｉｅｎｃｅ）データを示す。
【図２Ａ】同種同系ＨＣＴ１１６結腸がん細胞株（それぞれ、野生型（ＷＴ）、ＵＳＰ７−ｎｕｌｌ及びｐ５３−ｎｕｌｌ）において、活性パーム化合物（active Palm compound）２５、８８、９２はｐ５３依存的及びＵＳＰ７依存的にｐ５３及びｐ２１を安定化するが、化合物４５及び８９はそうではないことを表すウェスタンブロットデータを示す。
【図２Ｂ】化合物４５、２５、８８、９２、８９で処理したＨＣＴ１１６結腸がん細胞株（野生型及びＵＳＰ７−ｎｕｌｌ）におけるｐ５３／チューブリン変化のプロットを示す。
【図２Ｃ】化合物４５、２５、８８、９２、８９で処理したＨＣＴ１１６結腸がん細胞株（野生型及びＵＳＰ７−ｎｕｌｌ）におけるｐ２１／チューブリン変化のプロットを示す。
【図３Ａ】シクロヘキシミド（ＣＨＸ）の存在下でのＭＣＦ７乳がん細胞におけるＭＤＭ２、チューブリン、ＵＳＰ７、ｐ５３及びｐ２１に対する化合物８８の不安定化効果を、より活性の低い化合物８９（１５μＭ）との比較で表したウェスタンブロットデータを示す。
【図３Ｂ】シクロヘキシミド（ＣＨＸ）の存在下で化合物８８及び８９で処理した細胞中の定量化されたＭＤＭ２／チューブリンのプロットを示す。
【図４】ＨＣＴ１１６細胞（野生型及びＵＳＰ７−ｎｕｌｌ）に対する化合物８８及び８９によるＵＳＰ７依存的な細胞生存率への影響のプロットであるが、ＵＳＰ７依存的な生存率の低下を示している。
【図５】活性に基づくプロファイリングのウェスタンブロットデータであるが、これは、ＵＳＰ７に対応するＨＡ−プローブコンジュゲートバンド(HA-probe-conjugated band）（矢印で示す）の化合物８８で処理した溶解物中での減少を表し、８８による選択的ＤＵＢ阻害を示している。アスタリスクは、内因性のＨＡ−プローブコンジュゲートＤＵＢを示す。
【図６】活性に基づくプロファイリングのウェスタンブロットデータであるが、これは、化合物８９ではなくパーム結合化合物(Palm-binding compound)８８のみがウェスタンブロッティングによって評価された他のＤＵＢよりも内因性ＵＳＰ７に選択的に拮抗することを表し、８８による選択的ＤＵＢ阻害を示している。
【図７】活性に基づくプロファイリングのプロットであるが、これは、活性パーム結合化合物が質量分析によって評価された他のＤＵＢよりも内因性ＵＳＰ７に選択的に拮抗することを表し、活性化合物による選択的ＤＵＢ阻害を示している。
【図８Ａ】多発性骨髄腫標本における、正常骨髄標本と比較して上昇したＵＳＰ７発現の免疫組織化学分析を示す。コア１Ｂ；  １＋、コア１Ｅ；  ２＋、コア２Ａ；  ３＋、及び正常骨髄；０〜１＋。
【図８Ｂ】乳がん標本における、正常乳房標本と比較して上昇したＵＳＰ７発現の免疫組織化学分析を示す。コア１０Ｅ；リンパ節転移、３＋、コア１０Ｆ；転移、３＋、コア１０Ｊ；リンパ節転移、３＋、及び正常乳房：管腔細胞２＋；基底細胞０。
【図９】ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏ（登録商標）（Ｐｒｏｍｅｇａ  Ｃｏｒｐ．）のデータであるが、これは、野生型ｐ５３含有腫瘍細胞株ＭＣＦ−７及びＵ２Ｏｓが化合物８８で処理された場合、化合物８９と比較して生存率が低下しているが、同じ組織由来の対応する正常骨芽細胞株並びに対応するｐ５３−ｎｕｌｌ細胞株ＭＤＡ−ＭＢ１５７及びＳａＯｓでは細胞生存率の同様な低下がないことを表し、正常細胞対腫瘍細胞の見込まれる治療指数と、腫瘍細胞生存率の低下に対するｐ５３依存性とを示す。
【図１０】活性パーム部位化合物８８が８９と比較して、ＭＤＡ−ＭＢ１５７  ｐ５３−ｎｕｌｌ細胞と比べＭＣＦ−７  ｐ５３  ＷＴ乳がん細胞の細胞生存率を低下させることを表す、実施例９０６の細胞増殖及びカスパーゼ活性データ（Ｉｎｃｕｃｙｔｅ（登録商標）、Ｅｓｓｅｎ  ＢｉｏＳｃｉｅｎｃｅ）である。
【図１１】活性パーム部位化合物８８が８９と比較して、ＳａＯｓ  ｐ５３−ｎｕｌｌ細胞と比べＵ２Ｏｓ  ｐ５３  ＷＴ骨肉腫細胞の細胞生存率を低下させることを表す、実施例９０６の細胞増殖及びカスパーゼ活性データ（Ｉｎｃｕｃｙｔｅ（登録商標）、Ｅｓｓｅｎ  ＢｉｏＳｃｉｅｎｃｅ）である。
【図１２Ａ】活性化合物８８が８９と比較して、ｐ５３野生型乳がん及び骨肉腫細胞においてｐ５３及びｐ２１レベルを増加させるが、正常細胞においてはそうではないことを示すウェスタンブロットデータである。細胞は、低血清中で２４時間未満、１５μＭの化合物８８及び８９で処理した。
【図１２Ｂ】化合物８８及び８９で処理したｐ５３野生型乳がん及び骨肉腫細胞においてｐ５３／チューブリンが変化しているが、化合物８８及び８９で処理した正常細胞においてはそうではないことを表すプロットである。
【図１２Ｃ】化合物８８及び８９で処理したｐ５３野生型乳がん及び骨肉腫細胞においてｐ２１／チューブリンが変化しているが、化合物８８及び８９で処理した正常細胞においてはそうではないことを表すプロットである。
【図１２Ｄ】化合物８８及び８９で処理したｐ５３野生型乳がんＭＣＦ７及びＭＤＡ−ＭＢ１５７並びに骨肉腫細胞Ｕ２Ｏｓ及びＳａＯｓにおいてＭＤＭ２／チューブリンが変化しているが、化合物８８及び８９で処理した正常細胞においてはそうではないことを表すプロットである。
【図１３Ａ】活性化合物８８が８９と比較して、Ｃｅｌｌ  Ｔｉｔｅｒ  Ｇｌｏシグナルを減少させることを表す細胞生存率データであるが、これは、ＫＭＳ−２１ＢＭ及びＫＭＳ−２８ＰＥ多発性骨髄腫細胞の細胞生存率の低下を示している。
【図１３Ｂ】活性化合物８８が８９と比較して、ＫＭＳ−２１ＢＭ及びＫＭＳ−２８ＰＥ多発性骨髄腫細胞のｐ２１レベルを増加させることを示すウェスタンブロットデータである。
【図１３Ｃ】化合物８８及び８９で処理したＫＭＳ−２１ＢＭ及びＫＭＳ−２８ＰＥ多発性骨髄腫細胞のｐ５３／チューブリンが変化していることを表すプロットである。
【図１３Ｄ】化合物８８及び８９で処理したＫＭＳ−２１ＢＭ及びＫＭＳ−２８ＰＥ多発性骨髄腫細胞のｐ２１／チューブリンが変化していることを表すプロットである。
【図１４Ａ】パーム結合化合物８８及び８９が、結腸がん細胞株ＲＫＯ及びＲＫＯ−Ｅ６並びに子宮頸がん細胞株Ｖｉｂｏ及びＳｉＨＡのｐ５３、ｐ２１を安定化させ、ＭＤＭ２とＥ６ＡＰを不安定化することを示すウェスタンブロットデータである。
【図１４Ｂ】化合物８８及び８９で処理した結腸がん細胞株ＲＫＯ、ＲＫＯ−Ｅ６及び子宮頸がん細胞株Ｖｉｂｏ及びＳｉＨＡのＥ６ＡＰ／チューブリン変化を表すプロットである。
【図１４Ｃ】化合物８８及び８９で処理した結腸がん細胞株ＲＫＯ及びＲＫＯ−Ｅ６及並びに子宮頸がん細胞株Ｖｉｂｏ及びＳｉＨＡのＭＤＭ２／チューブリン変化を表すプロットである。
【図１５】化合物８９ではなく活性化合物８８が、結腸がん細胞株ＲＫＯ及びＲＫＯ−Ｅ６並びに子宮頸がん細胞株Ｖｉｂｏ及びＳｉＨＡの細胞生存率を低下させることを示す細胞増殖（Ｉｎｃｕｃｙｔｅ（登録商標）、Ｅｓｓｅｎ  ＢｉｏＳｃｉｅｎｃｅ）データである。
【図１６】シスプラチン（１μＭ）、化合物８８及び８９（１５μＭ）又は８８＋シスプラチン及び８９＋シスプラチンの組み合わせのいずれかを用いた、Ｕ２Ｏｓ（骨肉腫）細胞での細胞増殖（Ｉｎｃｕｃｙｔｅ（登録商標）、Ｅｓｓｅｎ  ＢｉｏＳｃｉｅｎｃｅ）及びカスパーゼ活性データである。８８＋シスプラチンの併用処理が、最も強力に細胞増殖を減少させ、カスパーゼ活性を向上させる。
【図１７】ドキソルビシン（０．１μＭ）、化合物８８及び８９（１５μＭ）又は８８＋ドキソルビシン及び８９＋ドキソルビシンの組み合わせのいずれかを用いた、ＭＣＦ７（乳がん）細胞での細胞増殖（Ｉｎｃｕｃｙｔｅ（登録商標）、Ｅｓｓｅｎ  ＢｉｏＳｃｉｅｎｃｅ）及びカスパーゼ活性データである。８８＋ドキソルビシンの併用処理が、最も強力に細胞増殖を減少させ、カスパーゼ活性を向上させる。
【発明を実施するための形態】
【００１９】
本発明の特定の実施態様に関する言及がここで詳細になされる。その実施態様の例は、添付の構造及び式において示される。本発明は、列挙された実施態様と併せて記載されるが、本発明をそれらの実施態様に限定することは意図されない。むしろ、本発明は、すべての代替形、改変形、等価物を網羅することが意図され、これらは特許請求の範囲によって定義される本発明の範囲内に包含され得る。当業者は、本明細書に記載の方法及び物質と類似若しくは等価である多くの方法及び物質を認識するであろうし、それらは本発明の実施に使用可能であろう。本発明は、記載されている方法及び物質に決して限定されない。援用された文献、特許及び同種資料の一又は複数が、限定しないが、定義されている用語、用語の用法、記載された技術等を含めて本願と相違又は矛盾がある場合、本願が優先される。特に定義がない限り、本明細書で使用されるすべての技術用語及び科学用語は、本発明が属する技術分野の当業者によって一般に理解されるものと同一の意味を持つ。本明細書に記載された方法及び物質と類似又は等価である方法及び物質を本発明の実施又は試験に使用することができるが、適切な方法及び物質を以下に記載する。本明細書で言及されるすべての刊行物、特許出願、特許及び他の参考文献は、その全体が参照により援用される。本願で使用されている命名法は、特に断りのない限り、ＩＵＰＡＣの体系的な命名法に基づく。
【００２０】
定義
置換基の数を示す場合、「１以上の」という用語は、１つの置換基から可能な限りの数の置換まで、すなわち置換基による水素１個の置換からすべての水素の置換までの範囲をいう。「置換基」という用語は、親分子上の水素原子を置換する原子又は原子群を意味する。「置換されている（substituted）」という用語は、特定の基が１以上の置換基を有することをいう。任意の基が複数の置換基を有することができ、かつ、種々の可能な置換基が提供される場合、置換基は独立に選択され、同じである必要はない。用語「無置換の（unsubstituted）」は、特定の基が置換基を有しないことを意味する。「任意選択的に置換され（optionally substituted）」という用語は、特定の基が無置換であるか又は可能な置換基の群から独立に選択される１以上の置換基で置換されていることを意味する。置換基の数を示す場合、「１以上の」という用語は、１つの置換基から可能な限りの数の置換まで、すなわち置換基による水素１個の置換からすべての水素の置換までを意味する。
【００２１】
本明細書で使用される「アルキル」という用語は、１から１２個の炭素原子（Ｃ１-Ｃ１２）の飽和直鎖又は分岐鎖の一価炭化水素基を指し、アルキル基は独立に、以下に記載の１以上の置換基で任意選択的に置換されていてもよい。別の実施態様では、アルキル基は、１から８個の炭素原子（Ｃ１-Ｃ８）又は１から６個の炭素原子（Ｃ１-Ｃ６）である。アルキル基の例は、限定されないが、メチル（Ｍｅ、−ＣＨ３）、エチル（Ｅｔ、−ＣＨ２ＣＨ３）、１−プロピル（ｎ−Ｐｒ、ｎ−プロピル、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ３）、２−プロピル（ｉ−Ｐｒ、ｉ−プロピル、−ＣＨ（ＣＨ３）２）、１−ブチル（ｎ−Ｂｕ、ｎ−ブチル、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ３）、２−メチル−１−プロピル（ｉ−Ｂｕ、ｉ−ブチル、−ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２）、２−ブチル（ｓ−Ｂｕ、ｓ−ブチル、−ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２ＣＨ３）、２−メチル−２−プロピル（ｔ−Ｂｕ、ｔ−ブチル、−Ｃ（ＣＨ３）３）、１−ペンチル（ｎ−ペンチル、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ３）、２−ペンチル（−ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ３）、３−ペンチル（−ＣＨ（ＣＨ２ＣＨ３）２）、２−メチル−２−ブチル（−Ｃ（ＣＨ３）２ＣＨ２ＣＨ３）、３−メチル−２−ブチル（−ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ（ＣＨ３）２）、３−メチル−１−ブチル（−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２）、２−メチル−１−ブチル（−ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２ＣＨ３）、１−ヘキシル（−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ３）、２−ヘキシル（−ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ３）、３−ヘキシル（−ＣＨ（ＣＨ２ＣＨ３）（ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ３））、２−メチル−２−ペンチル（−Ｃ（ＣＨ３）２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ３）、３−メチル−２−ペンチル（−ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２ＣＨ３）、４−メチル−２−ペンチル（−ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２）、３−メチル−３−ペンチル（−Ｃ（ＣＨ３）（ＣＨ２ＣＨ３）２）、２−メチル−３−ペンチル（−ＣＨ（ＣＨ２ＣＨ３）ＣＨ（ＣＨ３）２）、２，３−ジメチル−２−ブチル（−Ｃ（ＣＨ３）２ＣＨ（ＣＨ３）２）、３，３−ジメチル−２−ブチル（−ＣＨ（ＣＨ３）Ｃ（ＣＨ３）３、１−ヘプチル、１−オクチル等を含む。
【００２２】
本明細書で使用される「アルキレン」という用語は、約１から１２個の炭素原子（Ｃ１-Ｃ１２）の飽和直鎖又は分岐鎖の二価炭化水素基を指し、アルキレン基は独立に、以下に記載される１以上の置換基で任意選択的に置換されていてもよい。別の実施態様では、アルキレン基は、１から８個の炭素原子（Ｃ１-Ｃ８）又は１から６個の炭素原子（Ｃ１-Ｃ６）である。アルキレン基の例は、限定されないが、メチレン（−ＣＨ２−）、エチレン（−ＣＨ２ＣＨ２−）、プロピレン（−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−）等を含む。
【００２３】
「アルケニル」という用語は、少なくとも１つの不飽和部位、すなわち炭素−炭素のｓｐ２二重結合を有する、２から８個の炭素原子（Ｃ２-Ｃ８）の直鎖又は分岐鎖の一価炭化水素基を指し、ここでアルケニル基は独立に、本明細書に記載の１以上の置換基で任意選択的に置換されていてもよく、「シス」及び「トランス」配向、あるいは「Ｅ」及び「Ｚ」配向を有する基を含む。例は、限定されないが、エチレニル又はビニル（−ＣＨ=ＣＨ２）、アリル（−ＣＨ２ＣＨ=ＣＨ２）等を含む。
【００２４】
「アルケニレン」という用語は、少なくとも１つの不飽和部位、すなわち炭素−炭素のｓｐ２二重結合を有する、２から８個の炭素原子（Ｃ２-Ｃ８）の直鎖又は分岐鎖の二価炭化水素基を指し、ここでアルケニレン基は独立に、本明細書に記載の１以上の置換基で任意選択的に置換されていてもよく、「シス」及び「トランス」配向、あるいは「Ｅ」及び「Ｚ」配向を有する基を含む。例は、限定されないが、エチレニレン又はビニレン（−ＣＨ=ＣＨ−）、アリル（−ＣＨ２ＣＨ=ＣＨ−）等を含む。
【００２５】
「アルキニル」という用語は、少なくとも１つの不飽和部位、すなわち炭素−炭素のｓｐ三重結合を有する、２から８個の炭素原子（Ｃ２-Ｃ８）の直鎖又は分岐の一価炭化水素基を指し、ここでアルキニル基は独立に、本明細書に記載の１以上の置換基で任意選択的に置換されていてもよい。例は、限定されないが、エチニル（−Ｃ≡ＣＨ）、プロピニル（プロパルギル、−ＣＨ２Ｃ≡ＣＨ）等を含む。
【００２６】
「アルキニレン」という用語は、少なくとも１つの不飽和部位、すなわち炭素−炭素のｓｐ三重結合を有する、２から８個の炭素原子（Ｃ２-Ｃ８）の直鎖又は分岐の二価炭化水素基を指し、ここでアルキニレン基は独立に、本明細書に記載の１以上の置換基で任意選択的に置換されていてもよい。例は、限定されないが、エチニレン（−Ｃ≡Ｃ−）、プロピニレン（プロパルギレン、−ＣＨ２Ｃ≡Ｃ−）等を含む。
【００２７】
「炭素環」（carbocycle）、「カルボシクリル」（carbocyclyl）、「炭素環式環」（carbocyclic ring）及び「シクロアルキル」（cycloalkyl）という用語は、単環式環として３から１２個の炭素原子（Ｃ３-Ｃ１２）、又は二環式環として７から１２個の炭素原子を有する一価の非芳香族の飽和又は部分不飽和環をいう。７から１２個の原子を有する二環式炭素環は、例えばビシクロ［４，５］、［５，５］、［５，６］又は［６，６］系として配置され得、９又は１０個の環原子を有する二環式炭素環は、ビシクロ［５，６］又は［６，６］系として、あるいは架橋系、例えばビシクロ［２．２．１］ヘプタン、ビシクロ［２．２．２］オクタン及びビシクロ［３．２．２］ノナンとして配置され得る。スピロカルボシクリル部分もこの定義の範囲内に含まれる。スピロカルボシクリル部分の例は、限定されないが、［２．２］ペンタニル、［２．３］ヘキサニル及び［２．４］ヘプタニルを含む。単環式炭素環の例は、限定されないが、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、１−シクロペンタ−１−エニル、１−シクロペンタ−２−エニル、１−シクロペンタ−３−エニル、シクロヘキシル、１−シクロヘキサ−１−エニル、１−シクロヘキサ−２−エニル、１−シクロヘキサ−３−エニル、シクロヘキサジエニル、シクロヘプチル、シクロオクチル、シクロノニル、シクロデシル、シクロウンデシル、シクロドデシル等を含む。カルボシクリル基は独立に、本明細書に記載の１以上の置換基で任意選択的に置換されている。
【００２８】
「アリール」とは、親芳香族環系の単一の炭素原子から１個の水素原子を除去することによって誘導される、６−２０個の炭素原子（Ｃ６-Ｃ２０）からなる一価の芳香族炭化水素基を意味する。一部のアリール基は、「Ａｒ」として例示的な構造で表される。アリールには、飽和、一部不飽和の環、又は芳香族環状炭素に融合した芳香族環を含む二環式ラジカルが含まれる。典型的なアリール基には、限定されないが、ベンゼン（フェニル）、置換ベンゼン、ナフタレン、アントラセン、ビフェニル、インデニル、インダニル、１，２−ジヒドロナフタレン、１，２，３，４−テトラヒドロナフチルなどから誘導されるラジカルが含まれる。アリール基は独立に、本明細書に記載の１以上の置換基で任意選択的に置換されている。
【００２９】
「アリーレン」という用語は、親芳香族環系の２個の炭素原子から２個の水素原子を除去することによって誘導される、６−２０個の炭素原子（Ｃ６-Ｃ２０）からなる二価の芳香族炭化水素基を意味する。一部のアリーレン基は、例示的な構造では、「Ａｒ」と表される。アリーレンは、飽和、部分不飽和環又は芳香族炭素環式環に縮合している芳香族環を含む二環式基を含む。典型的なアリーレン基には、限定されないが、ベンゼン（フェニレン）、置換ベンゼン、ナフタレン、アントラセン、ビフェニレン、インデニレン、インダニレン、１，２−ジヒドロナフタレン、１，２，３，４−テトラヒドロナフチル等から誘導されるラジカルが含まれる。アリーレン基は、本明細書に記載の１以上の置換基で任意選択的に置換されている。
【００３０】
「複素環」（heterocycle）、「ヘテロシクリル」（heterocyclyl）及び「複素環式環」（heterocyclic ring）という用語は、本明細書においては互換的に使用され、３から約２０個の環原子からなる飽和又は部分不飽和（すなわち環内に１以上の二重結合及び／又は三重結合を有する）の炭素環式基を指し、ここで、少なくとも１つの環原子が窒素、酸素、リン及び硫黄から選択されるヘテロ原子であり、残りの環原子がＣであり、ここで、１以上の環原子は独立に、以下に記載の１以上の置換基で任意選択的に置換されていてもよい。複素環は、３から７環員（２から６個の炭素原子と、Ｎ、Ｏ、Ｐ及びＳから選択される１から４個のヘテロ原子）を有する単環、又は７から１０環員（４から９個の炭素原子と、Ｎ、Ｏ、Ｐ及びＳから選択される１から６個のヘテロ原子）を有する二環、例えばビシクロ［４，５］、［５，５］、［５，６］又は［６，６］系）であってもよい。複素環については、Paquette, Leo A.; 「Principles of Modern Heterocyclic Chemistry」 (W.A. Benjamin, New York, 1968)、特に１、３、４、６、７及び９章；「The Chemistry of Heterocyclic Compounds, A series of Monographs」(John Wiley & Sons, New York, 1950から現在）、特に１３、１４、１６、１９及び２８巻；並びにJ. Am. Chem. Soc. (1960) 82:5566に記載がある。ヘテロシクリル」はまた、複素環基が飽和若しくは部分不飽和環又は芳香族の炭素環式若しくは複素環式環に縮合している基も含む。複素環式環の例は、限定されないが、モルホリン−４−イル、ピペリジン−１−イル、ピペラジニル、ピペラジン−４−イル−２−オン、ピペラジン−４−イル−３−オン、ピロリジン−１−イル、チオモルホリン−４−イル、Ｓ−ジオキソチオモルホリン−４−イル、アゾカン−１−イル、アゼチジン−１−イル、オクタヒドロピリド［１，２−ａ］ピラジン−２−イル、［１，４］ジアゼパン−１−イル、ピロリジニル、テトラヒドロフラニル、ジヒドロフラニル、テトラヒドロチエニル、テトラヒドロピラニル、ジヒドロピラニル、テトラヒドロチオピラニル、ピペリジノ、モルホリニノ、チオモルホリノ、チオキサニル、ピペラジニル、ホモピペラジニル、アゼチジニル、オキセタニル、チエタニル、ホモピペリジニル、オキセパニル、チエパニル、オキサゼピニル、ジアゼピニル、チアゼピニル、２−ピロリニル、３−ピロリニル、インドリニル、２Ｈ−ピラニル、４Ｈ−ピラニル、ジオキサニル、１，３−ジオキソラニル、ピラゾリニル、ジチアニル、ジチオラニル、ジヒドロピラニル、ジヒドロチエニル、ジヒドロフラニル、ピラゾリジニルイミダゾリニル、イミダゾリジニル、３−アザビシクロ［３．１．０］ヘキサニル、３−アザビシクロ［４．１．０］ヘプタニル、アザビシクロ［２．２．２］ヘキサニル、３Ｈ−インドリルキノリジニル及びＮ−ピリジルウレアを含む。スピロヘテロシクリル部分もこの定義の範囲内に含まれる。スピロヘテロシクリル部分の例は、限定されないが、［２．５］オクタニル及びアザスピロ［２．４］ヘプタニルを含む。２個の環原子がオキソ（＝Ｏ）部分で置換されている複素環式基の例は、ピリミジノニル及び１，１−ジオキソ−チオモルホリニルである。本明細書における複素環基は、独立に、本明細書に記載の１以上の置換基で任意選択的に置換されていても��い。
【００３１】
「ヘテロアリール」という用語は、５員、６員又は７員環の一価の芳香族基を指し、窒素、酸素及び硫黄から独立に選択される１以上のヘテロ原子を含有する、５−２０個の原子の縮合環系（そのうちの少なくとも１つは芳香族）を含む。ヘテロアリール基の例は、ピリジニル（例えば２−ヒドロキシピリジニルを含む）、イミダゾリル、イミダゾピリジニル、ピリミジニル（例えば４−ヒドロキシピリミジニルを含む）、ピラゾリル、トリアゾリル、ピラジニル、テトラゾリル、フリル、チエニル、イソキサゾリル、チアゾリル、オキサジアゾリル、オキサゾリル、イソチアゾリル、ピロリル、キノリニル、イソキノリニル、テトラヒドロイソキノリニル、インドリル、ベンズイミダゾリル、ベンゾフラニル、シンノリニル、インダゾリル、インドリジニル、フタラジニル、ピリダジニル、トリアジニル、イソインドリル、プテリジニル、プリニル、オキサジアゾリル、トリアゾリル、チアジアゾリル、チアジアゾリル、フラザニル、ベンゾフラザニル、ベンゾチオフェニル、ベンゾチアゾリル、ベンゾキサゾリル、キナゾリニル、キノキサリニル、ナフチリジニル及びフロピリジニルである。ヘテロアリール基は独立に、本明細書に記載の１以上の置換基で任意選択的に置換されている。
【００３２】
複素環又はヘテロアリール基は、可能な場合には、炭素（炭素連結）又は窒素（窒素連結）結合型であってもよい。例を挙げると、限定ではないが、炭素結合複素環又はヘテロアリールは、ピリジンの２、３、４、５又は６位、ピリダジンの３、４、５又は６位、ピリミジンの２、４、５又は６位、ピラジンの２、３、５又は６位、フラン、テトラヒドロフラン、チオフラン、チオフェン、ピロール又はテトラヒドロピロールの２、３、４又は５位、オキサゾール、イミダゾール又はチアゾールの２、４又は５位、イソオキサゾール、ピラゾール又はイソチアゾールの３、４又は５位、アジリジンの２又は３位、アゼチジンの２、３又は４位、キノリンの２、３、４、５、６、７又は８位、あるいはイソキノリンの１、３、４、５、６、７又は８位で結合される。
【００３３】
例を挙げると、限定的ではないが、窒素結合複素環又はヘテロアリールは、アジリジン、アゼチジン、ピロール、ピロリジン、２−ピロリン、３−ピロリン、イミダゾール、イミダゾリジン、２−イミダゾリン、３−イミダゾリン、ピラゾール、ピラゾリン、２−ピラゾリン、３−ピラゾリン、ピペリジン、ピペラジン、インドール、インドリン、１Ｈ−インダゾールの１位、イソインドール又はイソインドリンの２位、モルホリンの４位及びカルバゾール又はβ−カルボリンの９位で結合される。
【００３４】
「治療（処置）する」及び「治療（処置）」という用語は、治療的処置を指し、その目的は、関節炎又はがんの発症又は広がりのような望ましくない生理的変化又は障害を遅延させる（少なくする）ことである。本発明において、有益な又は所望の臨床結果は、検出可能か検出不可能かに関わらず、症状の軽減、疾患の程度の低減、疾患状態の安定化（つまり悪化しない）、疾患進行の遅延又は緩徐化、病態の改善又は緩和、（部分的又は完全な）寛解を含むが、これらに限定されない。「治療」とは、治療を受けない場合の予想生存期間と比較して、生存期間を延長することも意味し得る。治療を必要とする者には、状態又は障害がある者が含まれる。
【００３５】
「治療的有効量」という表現は、（ｉ）特定の疾患、状態又は障害を治療する、（ｉｉ）特定の疾患、状態又は障害の１つ以上の症状を軽減、寛解又は排除するか、又は（ｉｉｉ）本明細書に記載の特定の疾患、状態又は障害の１以上の症状の発生を予防又は遅延させる、本発明の化合物の量を意味する。がんの場合、薬物の治療的有効量は、がん細胞数を減少させ；腫瘍サイズを縮小させ；末梢器官へのがん細胞の浸潤を阻害し（つまり、ある程度まで遅らせ、好ましくは停止させ）；腫瘍転移を阻害し（つまり、ある程度まで遅らせ、好ましくは停止させ）；腫瘍増殖をある程度まで阻害し；及び／又はがんに関連する１以上の症状をある程度軽減し得る。薬物は、増殖を防止し、及び／又は既存のがん細胞を死滅させることができる程度にまで、細胞分裂抑制性及び／又は細胞傷害性であってもよい。がん治療については、例えば無増悪期間（ＴＴＰ）を評価すること及び／又は奏効率（ＲＲ）を決定することにより、有効性を測定することができる。
【００３６】
「がん」という用語は、制御されない細胞増殖により典型的に特徴付けられる、哺乳動物における生理学的状態をいう。「腫瘍」とは、１以上の癌細胞を含む。がんの例は、限定されないが、癌腫、リンパ腫、芽細胞腫、肉腫及び白血病又はリンパ性腫瘍を含む。このようながんのより具体的な例には、扁平上皮細胞がん（例えば上皮性扁平上皮細胞がん）、小細胞肺がん、非小細胞肺がん（「ＮＳＣＬＣ」）、肺の腺癌及び肺の扁平上皮癌を含む肺がん、腹膜のがん、肝細胞がん、胃腸がんを含む胃（gastric又はstomach）がん、膵がん、神経膠芽腫、子宮頸がん、卵巣がん、肝がん、膀胱がん、ヘパトーマ、乳がん、結腸がん、直腸がん、結腸直腸がん、子宮内膜又は子宮癌、唾液腺癌腫、腎臓（kidney又はrenal)がん、前立腺がん、外陰部がん、甲状腺がん、肝細胞癌、肛門癌、陰茎癌及び頭頸部がんが含まれる。
【００３７】
「血液悪性腫瘍」（「Hematological malignancies」）（英国のスペルでは「Haematological」malignancies）は、血液、骨髄及びリンパ節に影響を与えるがんの種類である。この３つは免疫システムを介して密接に結びついているため、３つのうちの１つに影響を及ぼすであろう疾患は通常、他の２つにも同様に影響を及ぼす。すなわち、リンパ腫はリンパ節の病気であるが、通常は骨髄に広がり、血液に影響を及ぼす。血液悪性腫瘍は、悪性新生物（「がん」）であり、一般に血液学及び／又は腫瘍学の専門家によって治療される。いくつかの拠点では、「血液学／腫瘍学」は内科の一つの下部専門領域であるが、他所では独立した部門（外科医及び放射線腫瘍医もいる）とみなされている。すべての血液疾患が悪性（「がん性」）ではなく、このような他の血液状態も血液病専門医によって管理され得る。血液悪性腫瘍は、２つの主要な血液細胞系列、すなわち骨髄及びリンパ細胞株のいずれかに由来し得る。骨髄細胞株は通常、顆粒球、赤血球、血小板、マクロファージ及びマスト細胞を産生し、リンパ細胞株は、Ｂ、Ｔ、ＮＫ及び形質細胞を産生する。急性及び慢性の骨髄性白血病、骨髄異形成症候群並びに骨髄増殖性疾患は骨髄起源であるが、リンパ腫、リンパ性白血病及び骨髄腫は、リンパ株由来である。白血病には、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、急性単球性白血病（ＡＭＯＬ）及び小リンパ球性リンパ腫（ＳＬＬ）が含まれる。リンパ腫には、ホジキンリンパ腫（４つのサブタイプすべて）及び非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ、全サブタイプ）が含まれる。
【００３８】
「化学療法剤」は、作用機序にかかわらず、がんの治療に有用な化学化合物である。化学療法剤の種類には、限定されないが、アルキル化剤、代謝拮抗剤、紡錘体毒である植物アルカロイド、細胞傷害性／抗腫瘍性抗生物質、トポイソメラーゼ阻害剤、抗体、光増感剤及びキナーゼ阻害剤が含まれる。化学療法剤には、「標的療法」及び従来の化学療法で使用される化合物が含まれる。化学療法剤の例には、イブルチニブ（イムブルビカＴＭ、ＡＰＣＩ−３２７６５、Ｐｈａｒｍａｃｙｃｌｉｃｓ  Ｉｎｃ．／Ｊａｎｓｓｅｎ  Ｂｉｏｔｅｃｈ  Ｉｎｃ．；ＣＡＳ登録番号９３６５６３−９６−１、ＵＳ  ７５１４４４４）、イデラリシブ（以前のＣＡＬ−１０１，ＧＳ  １１０１，ＧＳ−１１０１，Ｇｉｌｅａｄ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ  Ｉｎｃ．；ＣＡＳ登録番号１１４６７０２−５４−６）、エルロチニブ（タルセバ（登録商標）、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ／ＯＳＩ  Ｐｈａｒｍ．）、ドセタキセル（タキソテール（登録商標）、Ｓａｎｏｆｉ−Ａｖｅｎｔｉｓ）、５−ＦＵ（フルオロウラシル、５−フルオロウラシル、ＣＡＳ登録番号５１−２１−８）、ゲムシタビン（ジェムザール（登録商標）、Ｌｉｌｌｙ）、ＰＤ−０３２５９０１（ＣＡＳ番号３９１２１０−１０−９、Ｐｆｉｚｅｒ）、シスプラチン（プラチノール（登録商標）、（ＳＰ−４−２）−ジアミンジクロロ白金（ＩＩ）、シス−ジアミン、ジクロロ白金（ＩＩ）、ＣＡＳ番号１５６６３−２７−１）、カルボプラチン（ＣＡＳ番号４１５７５−９４−４）、パクリタキセル（タキソール（登録商標）、ニュージャージー州プリンストンのＢｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ  Ｓｑｕｉｂｂ  Ｏｎｃｏｌｏｇｙ）、トラスツズマブ（ハーセプチン（登録商標）、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ）、テモゾロミド（４−メチル−５−オキソ−２，３，４，６，８−ペンタザビシクロ［４．３．０］ノナ−２，７，９−トリエン−９−カルボキサミド、ＣＡＳ番号８５６２２−９３−１、テモダール（ＴＥＭＯＤＡＲ（登録商標））、テモダール（ＴＥＭＯＤＡＬ（登録商標））、Ｓｃｈｅｒｉｎｇ  Ｐｌｏｕｇｈ）、タモキシフェン（（Ｚ）−２−［４−（１，２−ジフェニルブタ−１−エニル）フェノキシ］−Ｎ，Ｎ−ジメチルエタンアミン、ノルバデックス（登録商標）、イスツバル（ＩＳＴＵＢＡＬ）（登録商標）、バロデックス（ＶＡＬＯＤＥＸ）（登録商標）及びドキソルビシン（アドリアマイシン（登録商標）、ＣＡＳ番号２３２１４−９２−８）、Ａｋｔｉ−１／２、ＨＰＰＤ及びラパマイシンが含まれる。
【００３９】
化学療法剤には、ＢＴＫ、Ｂｃｌ−２及びＪＡＫ阻害剤等のＢ細胞受容体標的の阻害剤が含まれる。
【００４０】
化学療法剤のさらなる例には、オキサリプラチン（ＥＬＯＸＡＴＩＮ（登録商標）、Ｓａｎｏｆｉ）、ボルテゾミブ（ベルケイド（登録商標）、Ｍｉｌｌｅｎｎｉｕｍ  Ｐｈａｒｍ．）、スーテント（スニチニブ（登録商標）、ＳＵ１１２４８、Ｐｆｉｚｅｒ）、レトロゾール（ＦＥＭＡＲＡ（登録商標）、Ｎｏｖａｒｔｉｓ）、イマチニブメシル酸塩（グリベック（登録商標）、Ｎｏｖａｒｔｉｓ）、ＸＬ−５１８（Ｍｅｋ阻害剤、Ｅｘｅｌｉｘｉｓ、国際公開第２００７／０４４５１５号）、ＡＲＲＹ−８８６（Ｍｅｋ阻害剤、ＡＺＤ６２４４、Ａｒｒａｙ  ＢｉｏＰｈａｒｍａ、Ａｓｔｒａ  Ｚｅｎｅｃａ）、ＳＦ−１１２６（ＰＩ３Ｋ阻害剤、Ｓｅｍａｆｏｒｅ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）、ＢＥＺ−２３５（ＰＩ３Ｋ阻害剤  Ｎｏｖａｒｔｉｓ）、ＸＬ−１４７（ＰＩ３Ｋ阻害剤、Ｅｘｅｌｉｘｉｓ）、ＰＴＫ７８７／ＺＫ  ２２２５８４（Ｎｏｖａｒｔｉｓ）、フルベストラント（ＦＡＳＬＯＤＥＸ（登録商標）、ＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａ）、ロイコボリン（フォリン酸）、ラパマイシン（シロリムス、ラパミューン（登録商標）、Ｗｙｅｔｈ）、ラパチニブ（ＴＹＫＥＲＢ（登録商標）、ＧＳＫ５７２０１６、Ｇｌａｘｏ  Ｓｍｉｔｈ  Ｋｌｉｎｅ）、ロナファルニブ（サラサールＴＭ、ＳＣＨ  ６６３３６、Ｓｃｈｅｒｉｎｇ  Ｐｌｏｕｇｈ）、ソラフェニブ（ネクサバール（登録商標）、ＢＡＹ４３−９００６、Ｂａｙｅｒ  Ｌａｂｓ）、ゲフィチニブ（イレッサ（登録商標）、ＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａ）、イリノテカン（カンプトサール（登録商標）、ＣＰＴ−１１、Ｐｆｉｚｅｒ）、ティピファニブ（ザーネストラＴＭ、Ｊｏｈｎｓｏｎ  ＆  Ｊｏｈｎｓｏｎ）、アブラキサンＴＭ（Ｃｒｅｍｏｐｈｏｒフリー）、パクリタキセルのアルブミン操作ナノ粒子製剤（イリノイ州ショウンバーグのＡｍｅｒｉｃａｎ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｐａｒｔｎｅｒｓ）、バンデタニブ（ｒＩＮＮ、ＺＤ６４７４、ＺＡＣＴＩＭＡ（登録商標）、ＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａ）、クロラムブシル、ＡＧ１４７８、ＡＧ１５７１（ＳＵ  ５２７１；Ｓｕｇｅｎ）、テムシロリムス（トーリセル（登録商標）、Ｗｙｅｔｈ）、パゾパニブ（ＧｌａｘｏＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅ）、カンホスファミド（テルシタ（登録商標）、Ｔｅｌｉｋ）、チオテパ及びシクロホスファミド、（シトキサン（登録商標）、ネオサール（登録商標））；ブスルファン、インプロスルファン、及びピポスルファン等のスルホン酸アルキル；ベンゾデパ（benzodopa）、カルボコン、メツレデパ（meturedopa）、及びウレデパ（uredopa）等のアジリジリン；アルトレタミン、トリエチレンメラミン、トリエチレンホスホルアミド、トリエチレンチオホスホルアミド及びトリメチロールメラミン（trimetylomelamine）等のエチレンイミン及びメチルメラミン（methylamelamine）；アセトゲニン（特にブラタシン及びブラタシノン）；カンプトテシン（合成類似体トポテカンを含む）；ブリオスタチン；カリスタチン（callystatin）；ＣＣ−１０６５（そのアドゼレシン、カルゼルシン及びビセレシン合成類似体を含む）；クリプトフィシン（特にクリプトフィシン１及びクリプトフィシン８）；ドラスタチン；デュオカルマイシン（合成類似体ＫＷ−２１８９及びＣＢ１−ＴＭ���を含む）；エリュテロビン；パンクレアスタチン（pancratistatin）；サルコジクチン；スポンジスタチン；クロラムブシル、クロルナファジン、クロロホスファミド（chlorophosphamide）、エストラムスチン、イホスファミド、メクロレタミン、メクロレタミンオキシド塩酸塩、メルファラン、ノベムビチン（novembichin）、フェネステリン（phenesterine）、プレドニムスチン、トロホスファミド、ウラシルマスタードなどのナイトロジェンマスタード；カルムスチン、クロロゾトシン、フォテムスチン、ロムスチン、ニムスチン及びラニムスチン等のニトロソウレア；エンジイン抗生物質（例えばカリケアマイシン、カリケアマイシンガンマ１Ｉ、カリケアマイシンオメガＩ１（Ａｎｇｅｗ  Ｃｈｅｍ．Ｉｎｔｌ．Ｅｄ．Ｅｎｇｌ．（１９９４）３３：１８３−１８６）；ジネマイシン（dynemicin）、ジネマイシンＡ；クロドロネートなどのビスホスホネート；エスペラマイシン；並びにネオカルジノスタチン発色団及び関連色素タンパク質エンジイン抗生物質発色団）、アクラシノマイシン（aclacinomysin）、アクチノマイシン、アントラマイシン（authramycin）、アザセリン、ブレオマイシン、カクチノマイシン、カルビシン（carabicin）、カルミノマイシン、カルジノフィリン、クロモマイシン（chromomycinis）、ダクチノマイシン、ダウノルビシン、デトルビシン（detorubicin）、６−ジアゾ−５−オキソ−Ｌ−ノルロイシン、モルホリノ−ドキソルビシン、シアノモルホリノ−ドキソルビシン、２−ピロリノ−ドキソルビシン及びデオキシドキソルビシン）、エピルビシン、エソルビシン（esorubicin）、イダルビシン、ネモルビシン、マルセロマイシン、マイトマイシンＣなどのマイトマイシン、ミコフェノール酸、ノガラマイシン、オリボマイシン、ペプロマイシン、ポルフィロマイシン、ピューロマイシン、クエラマイシン（quelamycin）、ロドルビシン（rodorubicin）、ストレプトニグリン、ストレプトゾシン、ツベルシジン、ウベニメクス、ジノスタチン、ゾルビシン等の抗生物質；メトトレキサート及び５−フルオロウラシル（５−ＦＵ）などの代謝拮抗剤；デノプテリン、メトトレキサート、プテロプテリン、トリメトレキサート等の葉酸類似体；フルダラビン、６−メルカプトプリン、チアミプリン、チオグアニン等のプリン類似体；アンシタビン、アザシチジン、６−アザウリジン、カルモフール、シタラビン、ジデオキシウリジン、ドキシフルリジン、エノシタビン、フロクスウリジン等のピリミジン類似体；カルステロン、プロピオン酸ドロモスタノロン、エピチオスタノール、メピチオスタン、テストラクトン等のアンドロゲン；アミノグルテチミド、ミトタン、トリロスタン等の抗副腎剤；フォリン酸（frolinic acid）などの葉酸補給剤；アセグラトン、アルドホスファミドグリコシド；アミノレブリン酸；エニルウラシル；アムサクリン；ベストラブシル；ビスアントレン；エダトレキサート；デフォファミン（defofamine）；デメコルチン；ジアジクオン；エフロルニチン（elfornithine）；酢酸エリプチニウム；エポチロン；エトグルシド；ガリウム硝酸塩；ヒドロキシウレア；レンチナン；ロニダミン（lonidainine）；メイタンシン及びアンサミトシンなどのメイタンシノイド；ミトグアゾン；ミトキサントロン；モピダモール（mopidanmol��；ニトラクリン（nitraerine）；ペントスタチン；フェナメット（phenamet）；ピラルビシン；ロソキサントロン；ポドフィリン酸；２−エチルヒドラジド；プロカルバジン；ＰＳＫ（登録商標）多糖複合体（オレゴン州ユージーンのＪＨＳ  Ｎａｔｕｒａｌ  Ｐｒｏｄｕｃｔｓ）；ラゾキサン；リゾキシン；シゾフィラン；スピロゲルマニウム；テヌアゾン酸；トリアジコン；２，２’，２”−トリクロロトリエチルアミン；トリコテセン（特にＴ−２トキシン、ベルカリン（verracurin）Ａ、ロリジンＡ及びアングイジン）；ウレタン；ビンデシン；ダカルバジン；マンノムスチン；ミトブロニトール；ミトラクトール；ピポブロマン；ガシトシン（gacytosine）；アラビノシド（「Ａｒａ−Ｃ」）；シクロホスファミド；チオテパ；６−チオグアニン；メルカプトプリン；メトトレキサート；シスプラチン及びカルボプラチンなどのプラチナ類似体；ビンブラスチン；エトポシド（ＶＰ−１６）；イホスファミド；ミトキサントロン；ビンクリスチン；ビノレルビン（ナベルビン（登録商標））；ノバントロン；テニポシド；エダトレキサート；ダウノマイシン；アミノプテリン；カペシタビン（ゼローダ（登録商標）、Ｒｏｃｈｅ）；イバンドロネート；ＣＰＴ−１１；トポイソメラーゼ阻害剤ＲＦＳ  ２０００；ジフルオロメチルオルニチン（ＤＭＦＯ）；レチノイン酸などのレチノイド；並びに上記のいずれのものの薬学的に許容される塩、酸及び誘導体が含まれる。
【００４１】
「化学療法剤」の定義には、以下も含まれる。（Ｉ）例えばタモキシフェン（ノルバデックス（登録商標）；タモキシフェンクエン酸塩を含む）、ラロキシフェン、ドロロキシフェン、４−ヒドロキシタモキシフェン、トリオキシフェン、ケオキシフェン、ＬＹ１１７０１８、オナプリストン及びフェアストン（登録商標）（トレミフェンクエン酸塩）を含めた、抗エストロゲン及び選択的エストロゲン受容体モジュレーター（ＳＥＲＭ）並びに選択的エストロゲン受容体モジュレーター（ＳＥＲＤ）（例えばフルベストラント（フェソロデックス（登録商標）、Ａｓｔｒａ  Ｚｅｎｅｃａ）といった、腫瘍に対するホルモン作用を調節又は阻害するように働く抗ホルモン剤；（ｉｉ）副腎におけるエストロゲン産生を調節する酵素アロマターゼを阻害する、アロマターゼ阻害剤、例えば４（５）−イミダゾール、アミノグルテチミド、ＭＥＧＡＳＥ（登録商標）（酢酸メゲストロール）、アロマシン（登録商標）（エキセメスタン；Ｐｆｉｚｅｒ）、フォルメスタン（formestanie）、ファドロゾール、ＲＩＶＩＳＯＲ（登録商標）（ボロゾール）、フェマーラ（登録商標）（レトロゾール；Ｎｏｖａｒｔｉｓ）及びアリミデックス（登録商標）（アナストロゾ−ル；ＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａ）；（ｉｉｉ）抗アンドロゲン薬、例えばフルタミド、ニルタミド、ビカルタミド、ロイプロリド及びゴセレリン；並びにトロキサシタビン（１，３−ジオキソランヌクレオシドシトシン類似体）；（ｉｖ）プロテインキナーゼ阻害剤、例えばコビメチニブ（国際公開第２００７／０４４５１５号）などのＭＥＫ阻害剤；（ｖ）脂質キナーゼ阻害剤、例えばタセリシブ（ＧＤＣ−００３２、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ  Ｉｎｃ．）；（ｖｉ）アンチセンスオリゴヌクレオチド、特に異常な細胞増殖に関与するシグナル伝達経路における遺伝子（ＰＫＣ−アルファ、Ｒａｆ及びＨ−Ｒａｓ等）の発現を阻害するもの、例えばオブリメルセン（ＧＥＮＡＳＥＮＳＥ（登録商標）、Ｇｅｎｔａ  Ｉｎｃ．）；（ｖｉｉ）リボザイム、例えばＶＥＧＦ発現阻害剤（例えばＡＮＧＩＯＺＹＭＥ（登録商標））及びＨＥＲ２発現阻害剤；（ｖｉｉｉ）遺伝子治療ワクチンなどのワクチン、例えばアロベクチン（登録商標）、ロイベクチン（登録商標）及びＶＡＸＩＤ（登録商標）；プロロイキン（登録商標）ｒＩＬ−２；トポイソメラーゼ１阻害剤、例えばラルトテカン（登録商標）；アバレリックス（登録商標）ｒｍＲＨ；（ｉｘ）抗血管新生剤、例えばベバシズマブ（アバスチン（登録商標）、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ）；並びに上記のいずれのものの薬学的に許容される塩、酸及び誘導体。
【００４２】
「化学療法剤」の定義にはまた、アレムツズマブ（キャンパス）、ベバシズマブ（アバスチン（登録商標）、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ）；セツキシマブ（アービタックス（登録商標）、Ｉｍｃｌｏｎｅ）；パニツムマブ（ベクティビックス（登録商標）、Ａｍｇｅｎ）、リツキシマブ（リツキサン（登録商標）、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ／Ｂｉｏｇｅｎ  Ｉｄｅｃ）、ペルツズマブ（ＰＥＲＪＥＴＡＴＭ２Ｃ４、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ）、トラスツズマブ（ハーセプチン（登録商標）、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ）、トラスツズマブエムタンシン（ＫＡＤＣＹＬＡ（登録商標）、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ  Ｉｎｃ．）及びトシツモマブ（ベキサール、Ｃｏｒｉｘｉａ）等の治療用抗体も含まれる。
【００４３】
「代謝産物」とは、体内での特定の化合物又はその塩の代謝によって生成される産物である。化合物の代謝産物は、当該技術分野で知られている慣用技術を用いて同定することができ、その活性は、本明細書に記載されているような試験を用いて決定することができる。このような産物は例えば、投与された化合物の酸化、還元、加水分解、アミド化、脱アミド化、エステル化、脱エステル化、酵素的切断等から生じ得る。したがって、本発明は、本発明の式Ｉの化合物を、その代謝産物を得るのに十分な時間にわたって哺乳動物と接触させることを含む方法によって生成される、本発明の化合物の代謝産物を含む。
【００４４】
「添付文書」という用語は、治療製品の商品パッケージに通例含まれる、効能、用法、用量、投与、禁忌、及び／又は使用に関する警告についての情報を含む説明書をいうのに使用される。
【００４５】
用語「キラル」は、重ね合わせることができないという鏡像パートナーの性質を有する分子を指し、用語「アキラル」は、その鏡像パートナーに重ね合わせることができる分子を指す。
【００４６】
用語「立体異性体」は、同一の化学構造を有するが、原子又は基の空間配置の点で異なる化合物を指す。
【００４７】
「ジアステレオマー」とは、２つ以上のキラル中心を持つ立体異性体であって、その分子が互いに鏡像関係にない立体異性体を指す。ジアステレオマーは、異なる物理的性質、例えば融点、沸点、スペクトル的性質及び反応性を有する。ジアステレオマーの混合物は、例えば電気泳動法及びクロマトグラフィーなどの高分解能分析手順の下で分離することができる。
【００４８】
「エナンチオマー」とは、互いに重ね合わせることができない鏡像である化合物の２つの立体異性体を指す。
【００４９】
本明細書で使用する立体化学的な定義及び慣例は一般に、S. P. Parker, Ed., McGraw-Hill Dictionary of Chemical Terms (1984) McGraw-Hill Book Company, New York; 及びEliel, E. and Wilen, S., 「Stereochemistry of Organic Compounds」, John Wiley & Sons, Inc., New York, 1994に従う。本発明の化合物は、不斉中心又はキラル中心を含み得、したがって様々な立体異性体形態で存在する。限定されないが、ジアステレオマー、エナンチオマー及びアトロプ異性体並びにこれらの混合物（例えばラセミ混合物）を含め、本発明の化合物のすべての立体異性体形態が本発明の一部を形成することが意図される。多くの有機化合物は、光学的に活性な形態で存在する。すなわち、平面偏光の平面を回転させることができる。光学的に活性な化合物を記載する際に、接頭語Ｄ及びＬ、又はＲ及びＳを使用して、そのキラル中心の周りでの分子の絶対配置を表す。接頭語ｄ及びｌ、又は（＋）及び（−）は、面偏光された光の、その化合物による回転の符号を表すために使用され、（−）又は１はその化合物が左旋性であることを意味する。（＋）又はｄの接頭語が付いた化合物は、右旋性である。所与の化学構造に関して、これらの立体異性体は、互いの鏡像であることを除いて同一である。特定の立体異性体は、エナンチオマーとも称され、このような異性体の混合物は、しばしばエナンチオマー混合物と呼ばれる。エナンチオマーの５０：５０混合物は、ラセミ混合物又はラセミ体と称され、化学反応又はプロセスにおいて立体選択又は立体特異性がなかった場合に生じ得る。用語「ラセミ混合物」及び「ラセミ体」は、２つのエナンチオマー種の等モル混合物を指し、光学活性がないものをいう。エナンチオマーは、超臨界流体クロマトグラフィー（ＳＦＣ）などのキラル分離法によってラセミ混合物から分離することができる。分離されたエナンチオマーにおけるキラル中心での立体配置の割り当ては暫定的で、例えばＸ線結晶データによって立体化学が最終的に決定される間、説明の目的で表１の構造に示される。
【００５０】
「互変異性体」又は「互変異性形態」という用語は、低エネルギー障壁を介して相互変換可能な、異なるエネルギーの構造異性体を指す。例えば、プロトン互変異性体（プロトン移動互変異性体としても知られている）は、プロトンの移動による相互変換、例えばケト−エノール及びイミン−エナミン異性化を含む。原子価互変異性体は、結合電子のうちのいくつかの再編成による相互変換を含む。
【００５１】
「薬学的に許容される塩」という用語は、生物学的に又はその他の点で望ましくないものではない塩をいう。薬学的に許容される塩は、酸付加塩及び塩基付加塩の両方を含む。「薬学的に許容される」という表現は、物質又は組成物が製剤を構成する他の成分及び／又はそれで処置される哺乳動物と化学的及び／又は毒物学的に適合性でなければならないことを示す。
【００５２】
「薬学的に許容される酸付加塩」という用語は、塩酸、臭化水素酸、硫酸、硝酸、炭酸、リン酸等の無機酸と、有機酸の脂肪族、脂環式、芳香族、アリール脂肪族、複素環式カルボン酸及びスルホン酸類から選択される有機酸、例えばギ酸、酢酸、プロピオン酸、グリコール酸、グルコン酸、乳酸、ピルビン酸、シュウ酸、リンゴ酸、マレイン酸、マロン酸、コハク酸、フマル酸、酒石酸、クエン酸、アスパラギン酸、アスコルビン酸、グルタミン酸、アンスラニル酸、安息香酸、ケイ皮酸、マンデル酸、エンボン酸（embonic acid）、フェニル酢酸、メタンスルホン酸「メシレート」、エタンスルホン酸、ｐ−トルエンスルホン酸及びサリチル酸などで形成された塩で、薬学的に許容されるものを指す。
【００５３】
「薬学的に許容される塩基付加塩」という用語は、有機又は無機塩基で形成された塩で、薬学的に許容されるものを指す。許容される無機塩基の例は、ナトリウム塩、カリウム塩、アンモニウム塩、カルシウム塩、マグネシウム塩、鉄塩、亜鉛塩、銅塩、マンガン塩及びアルミニウム塩を含む。薬学的に許容される有機非毒性塩基から誘導される塩は、第一級、第二級及び第三級アミン、置換アミン（天然の置換アミン、環状アミン及び塩基性イオン交換樹脂を含む）、例えばイソプロピルアミン、トリメチルアミン、ジエチルアミン、トリエチルアミン、トリプロピルアミン、エタノールアミン、２−ジエチルアミノエタノール、トリメタミン、ジシクロヘキシルアミン、リシン、アルギニン、ヒスチジン、カフェイン、プロカイン、ヒドラバミン（hydrabamine）、コリン、ベタイン、エチレンジアミン、グルコサミン、メチルグルカミン、テオブロミン、プリン類、ピペラジン、ピペリジン、Ｎ−エチルピペリジン及びポリアミン樹脂等の塩を含む。
【００５４】
「溶媒和物」とは、１以上の溶媒分子と本発明の化合物との会合又は複合体をいう。溶媒和物を形成する溶媒の例には、限定されないが、水、イソプロパノール、エタノール、メタノール、ＤＭＳＯ、酢酸エチル、酢酸、及びエタノールアミンが含まれる。
【００５５】
用語「ＥＣ５０」とは、半数効果濃度であり、ｉｎ  ｖｉｖｏでの特定の効果の最大値の５０％を得るために必要とされる特定の化合物の血漿濃度を示す。
【００５６】
用語「Ｋｉ」は阻害定数であり、受容体に対する特定の阻害剤の絶対結合親和性を示す。それは、競合結合アッセイを用いて測定され、競合リガンド（例えば放射性リガンド）が存在しない場合に特定の阻害剤が受容体の５０％を占めるであろう濃度に等しい。Ｋｉ値は、ｐＫｉ値へと対数的に変換することができ（−ｌｏｇ  Ｋｉ）、高い値ほど指数関数的により大きな効力を示す。
【００５７】
用語「ＩＣ５０」とは、半数阻害濃度であり、ｉｎ  ｖｉｖｏでの生物学的プロセスの５０％阻害を得るために必要とされる特定の化合物の濃度を示す。ＩＣ５０値は、ｐＩＣ５０値へと対数的に変換することができ（−ｌｏｇ  ＩＣ５０）、高い値ほど指数関数的により大きな効力を示す。ＩＣ５０値は絶対値ではなく、例えば使用濃度などの実験条件に依存するが、Ｃｈｅｎｇ−Ｐｒｕｓｏｆｆ方程式（（Biochem. Pharmacol. (1973) 22:3099）を用いて絶対阻害定数（Ｋｉ）に変換することができる。ＩＣ７０、ＩＣ９０などの他の阻害率パラメーターを計算してもよい。
【００５８】
用語「本発明の化合物」及び「式（Ｉ）の化合物」とは、式（Ｉ）の化合物、本明細書に記載の特定の化合物及びその立体異性体、幾何異性体、互変異性体、溶媒和物、代謝産物、並びに薬学的に許容される塩及びプロドラッグを含む。
【００５９】
また、式（Ｉ）の化合物を含む本明細書に示す任意の式又は構造は、そのような化合物の水和物、溶媒和物及び多形体並びにそれらの混合物を表すことも意図されている。
【００６０】
式（Ｉ）の化合物を含む本明細書に示す任意の式又は構造はまた、化合物の非標識形態及び同位体標識形態を表すことも意図されている。同位体標識化合物は、１個以上の原子が選択された原子質量又は質量数を有する原子によって置換されていることを除いて、本明細書に示される式によって表される構造を有する。本発明の化合物に組み込むことができる同位体の例は、限定されないが、２Ｈ（重水素、Ｄ）、３Ｈ（三重水素）、１１Ｃ、１３Ｃ、１４Ｃ、１５Ｎ、１８Ｆ、３１Ｐ、３２Ｐ、３５Ｓ、３６Ｃｌ及び１２５Ｉなどの水素、炭素、窒素、酸素、リン、フッ素及び塩素の同位体を含む。様々な同位体標識された本発明の化合物は、例えば３Ｈ、１３Ｃ及び１４Ｃ等の放射性同位体が組み込まれているものである。そのような同位体標識化合物は、薬物又は基質組織分布アッセイを含む陽電子放射断層撮影法（ＰＥＴ）又は単光子放出型コンピュータ断層撮影法（ＳＰＥＣＴ）などの代謝研究、反応速度論的研究、検出又はイメージング技術において、又は患者の放射線治療において有用であり得る。重水素で標識化又は置換された本発明の治療化合物は、分布、代謝及び排泄（ＡＤＭＥ）に関して改善されたＤＭＰＫ（薬物代謝及び薬物動態）を有し得る。重水素のような比較的重い同位体による置換は、より高い代謝安定性から生じるある種の治療上の利点、例えばｉｎ  ｖｉｖｏ半減期の延長又は必要投与量の低減をもたらし得る。１８Ｆで標識化された化合物はＰＥＴ又はＳＰＥＣＴ研究に有用である場合がある。本発明の同位体標識化合物及びそのプロドラッグは一般に、容易に入手可能な同位体標識試薬を非同位体標識試薬の代わりに用いることによって下記のスキーム又は実施例及び調製に開示された方法を実施することにより、調製することができる。さらに、比較的重い同位体、特に重水素（つまり２Ｈ又はＤ）での置換は、より高い代謝安定性から生じるある種の治療上の利点、例えばｉｎ  ｖｉｖｏ半減期の延長又は必要投与量の低減又は治療指数の改善等をもたらし得る。この文脈での重水素は、式（Ｉ）の化合物の置換基とみなされる。そのような比較的重い同位体、特に重水素の濃度は、同位体濃縮係数によって定義することができる。本発明の化合物では、特定の同位体として具体的に指定されていない任意の原子は、その原子の任意の安定同位体を表すものとする。特に明記しない限り、ある位置が「Ｈ」又は「水素」と具体的に指定されている場合、その位置は、その天然存在度の同位体組成で水素を有すると解される。したがって、本発明の化合物では、重水素（Ｄ）として具体的に指定された任意の原子は、重水素を表すものとする。
【００６１】
２−アミノピリジン化合物
本発明は、式Ｉａ−Ｉｆを含む式Ｉの２−アミノピリジン化合物及びその医薬製剤を提供するが、これらはＵＳＰ７によって調節される疾患、状態及び／又は障害の治療において有用である可能性がある。ユビキチンプロテアソーム系（ＵＰＳ）の調節不全は、いくつかの種類のがんを含む疾患の病因と関連している。特に、ユビキチン特異的プロテアーゼ７（ＵＳＰ７）は、脱ユビキチン化酵素（ＤＵＢ）ファミリーに属するシステインプロテアーゼであり、ｐ５３の重要な制御因子であることが示されている。
【００６２】
ＵＳＰ７を調節する化合物は、実施例９０７のＮＭＲフラグメントスクリーニング法によって同定及び評価することができる。ＮＭＲによるフラグメントベースのスクリーニングを利用したところ、式Ｉの２−アミノピリジン化合物は酵素活性部位に結合することがＸ線結晶解析によって示された。ＮＭＲ部位マッピングと組み合わせた形状ベースの仮想スクリーニングを使用したところ、式Ｉの化合物がパーム部位として知られる隣接部位に結合しているのが見出された。結晶解析に基づく薬物設計により、他のＤＵＢよりもＵＳＰ７に対して選択的であり、複数の腫瘍細胞株において活性を示し、予想されるｐ５３／Ｍｄｍ２生物学（expected p53/Mdm2 biology）を実証する新規の阻害剤がもたらされた。
【００６３】
式Ｉの化合物は、以下の構造：
2018508563.tif 000004
又はその立体異性体、互変異性体若しくは薬学的に許容される塩を有する［上式中、
Ｒ１は、Ｃ６−Ｃ２０アリール、Ｃ３−Ｃ１２カルボシクリル、Ｃ２−Ｃ２０ヘテロシクリル、及びＣ１−Ｃ２０ヘテロアリールから選択され；
Ｒ２は、-ＣＮ、-ＯＣＨ３、Ｃ１-Ｃ３アルキル、Ｃ１-Ｃ３フルオロアルキル、及びシクロプロピルから選択され；
Ｒ３は、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、-ＣＮ、-ＣＨ３、-ＣＨ２ＣＨ３、-ＣＨ（ＣＨ３）２、-ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２、-ＣＨ２ＯＨ、-ＣＨ２ＯＣＨ３、-ＣＨ２ＣＨ２ＯＨ、-Ｃ（ＣＨ３）２ＯＨ、-ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ（ＣＨ３）２、-Ｃ（ＣＨ３）２ＣＨ２ＯＨ、-ＣＨ２ＣＨ２ＳＯ２ＣＨ３、-ＣＨ２ＯＰ（Ｏ）（ＯＨ）２、-ＣＨ２Ｆ、-ＣＨＦ２、-ＣＨ２ＮＨ２、-ＣＨ２ＮＨＳＯ２ＣＨ３、-ＣＨ２ＮＨＣＨ３、-ＣＨ２Ｎ（ＣＨ３）２、-ＣＦ３、-ＣＨ２ＣＦ３、-ＣＨ２ＣＨＦ２、-ＣＨ（ＣＨ３）ＣＮ、-Ｃ（ＣＨ３）２ＣＮ、-ＣＨ２ＣＮ、-ＣＯ２Ｈ、-ＣＯＣＨ３、-ＣＯ２ＣＨ３、-ＣＯ２Ｃ（ＣＨ３）３、-ＣＯＣＨ（ＯＨ）ＣＨ３、-ＣＯＮＨ２、-ＣＯＮＨＣＨ３、-ＣＯＮＨＣＨ２ＣＨ３、-ＣＯＮＨＣＨ（ＣＨ３）２、-ＣＯＮ（ＣＨ３）２、-Ｃ（ＣＨ３）２ＣＯＮＨ２、-ＮＨ２、-ＮＨＣＨ３、-Ｎ（ＣＨ３）２、-ＮＨＣＯＣＨ３、-Ｎ（ＣＨ３）ＣＯＣＨ３、-ＮＨＳ（Ｏ）２ＣＨ３、-Ｎ（ＣＨ３）Ｃ（ＣＨ３）２ＣＯＮＨ２、-Ｎ（ＣＨ３）ＣＨ２ＣＨ２Ｓ（Ｏ）２ＣＨ３、-ＮＯ２、＝Ｏ、-ＯＨ、-ＯＣＨ３、-ＯＣＨ２ＣＨ３、-ＯＣＨ２ＣＨ２ＯＣＨ３、-ＯＣＨ２ＣＨ２ＯＨ、-ＯＣＨ２ＣＨ２Ｎ（ＣＨ３）２、-ＯＰ（Ｏ）（ＯＨ）２、-Ｓ（Ｏ）２Ｎ（ＣＨ３）２、-ＳＣＨ３、-Ｓ（Ｏ）２ＣＨ３、-Ｓ（Ｏ）３Ｈ、シクロプロピル、シクロプロピルアミド、オキセタニル、アゼチジニル、１−メチルアゼチジン−３−イル）オキシ、Ｎ−メチル−Ｎ−オキセタン−３−イルアミノ、アゼチジン−１−イルメチル、ベンジルオキシフェニル、ピロリジン−１−イル、ピロリジン−１−イル−メタノン、ピペラジン−１−イル、モルホリノメチル、モルホリノ−メタノン、及びモルホリノから選択され；
ｎは、０、１、２、及び３から選択され；
Ｒ４は、Ｈ、Ｃ１-Ｃ３アルキル、Ｃ１-Ｃ３フルオロアルキル、シクロプロピル、及びシクロプロピルメチルから選択され；
ここで、アリール、カルボシクリル、ヘテロシクリル、及びヘテロアリールは、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、-ＣＮ、-ＣＨ３、-ＣＨ２ＣＨ３、-ＣＨ（ＣＨ３）２、-ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２、-ＣＨ２ＯＨ、-ＣＨ２ＯＣＨ３、-ＣＨ２ＣＨ２ＯＨ、-Ｃ（ＣＨ３）２ＯＨ、-ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ（ＣＨ３）２、-Ｃ（ＣＨ３）２ＣＨ２ＯＨ、-ＣＨ２ＣＨ２ＳＯ２ＣＨ３、-ＣＨ２ＯＰ（Ｏ）（ＯＨ）２、-ＣＨ２Ｆ、-ＣＨＦ２、-ＣＦ３、-ＣＨ２ＣＦ３、-ＣＨ２ＣＨＦ２、-ＣＨ（ＣＨ３）ＣＮ、-Ｃ（ＣＨ３）２ＣＮ、-ＣＨ２ＣＮ、-ＣＨ２ＮＨ２、-ＣＨ２ＮＨＳＯ２ＣＨ３、-ＣＨ２ＮＨＣＨ３、-ＣＨ２Ｎ（ＣＨ３）２、-ＣＯ２Ｈ、-ＣＯＣＨ３、-ＣＯ２ＣＨ３、-ＣＯ２Ｃ（ＣＨ３）３、-ＣＯＣＨ（ＯＨ）ＣＨ３、-ＣＯＮＨ２、-ＣＯＮＨＣＨ３、-ＣＯＮ（ＣＨ３）２、-Ｃ（ＣＨ３）２ＣＯＮＨ２、-ＮＨ２、-ＮＨＣＨ３、-Ｎ（ＣＨ３）２、-ＮＨＣＯＣＨ３、-Ｎ（ＣＨ３）ＣＯＣＨ３、-ＮＨＳ（Ｏ）２ＣＨ３、-Ｎ（ＣＨ３）Ｃ（ＣＨ３）２ＣＯＮＨ２、-Ｎ（ＣＨ３）ＣＨ２ＣＨ２Ｓ（Ｏ）２ＣＨ３、-ＮＯ２、＝Ｏ、-ＯＨ、-ＯＣＨ３、-ＯＣＨ２ＣＨ３、-ＯＣＨ２ＣＨ２ＯＣＨ３、-ＯＣＨ２ＣＨ２ＯＨ、-ＯＣＨ２ＣＨ２Ｎ（ＣＨ３）２、-ＯＰ（Ｏ）（ＯＨ）２、-Ｓ（Ｏ）２Ｎ（ＣＨ３）２、-ＳＣＨ３、-Ｓ（Ｏ）２ＣＨ３、-Ｓ（Ｏ）３Ｈ、シクロプロピル、シクロプロピルアミド、オキセタニル、アゼチジニル、１−メチルアゼチジン−３−イル）オキシ、Ｎ−メチル−Ｎ−オキセタン−３−イルアミノ、アゼチジン−１−イルメチル、ベンジルオキシフェニル、ピロリジン−１−イル、ピロリジン−１−イル−メタノン、ピペラジン−１−イル、モルホリノメチル、モルホリノ−メタノン、及びモルホリノから独立に選択される１以上の基で任意選択的に置換されている］。
【００６４】
式Ｉの化合物の例示的な実施態様は、Ｒ１がＣ６-Ｃ２０アリールで任意選択的に置換されているものを含む。
【００６５】
式Ｉの化合物の例示的な実施態様は、Ｒ１が４−フェノールであるものを含む。
【００６６】
式Ｉの化合物の例示的な実施態様は、Ｒ１がＣ１-Ｃ２０ヘテロアリールで任意選択的に置換されているものを含む。
【００６７】
式Ｉの化合物の例示的な実施態様は、Ｒ１が１Ｈ−インダゾール−５−イル、１Ｈ−インダゾール−６−イル、２−メチルインダゾール−４−イル、１Ｈ−ベンゾイミダゾール−５−イル、２−チエニル、ピリミジン−５−イル、３−ピリジル、４−ピリジル、及び１Ｈ−ピリジン−２−オンから選択されるものを含む。
【００６８】
式Ｉの化合物の例示的な実施態様は、Ｒ２が-ＣＨ２ＣＨ３であるものを含む。
【００６９】
式Ｉの化合物の例示的な実施態様は、Ｒ３が-ＯＨであり、ｎが１であるものを含む。
【００７０】
式Ｉの化合物の例示的な実施態様は、Ｒ４がＨであるものを含む。
【００７１】
式Ｉの化合物の例示的な実施態様は、式Ｉａ〜ｆ：
2018508563.tif 000005
の化合物を含む。
【００７２】
式Ｉの化合物の例示的な実施態様は、表１の化合物を含む。
【００７３】
本発明の式Ｉの化合物は、不斉中心又はキラル中心を含み得、したがって異なる立体異性体形態で存在する。限定されないが、ジアステレオマー、エナンチオマー及びアトロプ異性体並びにこれらの混合物（例えばラセミ混合物）を含め、本発明の化合物のすべての立体異性体形態が本発明の一部を形成することが意図される。場合によっては、立体化学が決定されていないか又は一時的に割り当てられている。
【００７４】
さらに、本発明は、シス−トランス（幾何学的）及び構造異性体を含め、すべてのジアステレオマーを包含する。例えば、式Ｉの化合物が二重結合又は縮合環を組み込んでいる場合、シス型及びトランス型並びにそれらの混合物が、本発明の範囲内に包含される。
【００７５】
本明細書に示す構造では、具体的なキラル原子が指定されていない場合、すべての立体異性体が本発明の化合物として考慮され、含まれる。立体化学が、特定の構造を表す実線のくさび形又は点線によって特定される場合、その立体異性体はそのように特定され、定義される。
【００７６】
本発明の化合物は、水、エタノールなどの薬学的に許容される溶媒による溶媒和形態のみならず非溶媒和形態で存在してもよく、本発明は溶媒和形態と非溶媒和形態の両方を包含することが意図される。
【００７７】
本発明の化合物はまた、様々な互変異性体形態で存在することもでき、そのような形態はすべて本発明の範囲内に包含される。「互変異性体」又は「互変異性形態」という用語は、低エネルギー障壁を介して相互変換可能な、異なるエネルギーの構造異性体を指す。例えば、プロトン互変異性体（プロトン移動互変異性体としても知られている）は、プロトンの移動による相互変換、例えばケト−エノール及びイミン−エナミン異性化を含む。原子価互変異性体は、結合電子のうちのいくつかの再編成による相互変換を含む。
【００７８】
生物学的評価
酵素活性（又は他の生物活性）の阻害剤としての式Ｉの化合物の相対的効力は、各化合物が所定の程度まで活性を阻害する濃度を決定し、その結果を比較することにより確定させることが可能である。典型的には、好ましい決定は、生化学アッセイにおいて活性の５０％を阻害する濃度、すなわち５０％阻害濃度又は「ＩＣ５０」である。ＩＣ５０値の決定は、当該技術分野で周知の従来の手法を用いて達成することができる。一般に、ＩＣ５０は、試験濃度範囲の阻害剤の存在下で、所与の酵素の活性を測定することにより決定することができる。その後、使用した阻害剤濃度に対して、酵素活性の実験的に得られた値をプロットする。（任意の阻害剤の非存在下での活性と比較して）５０％酵素活性を示す阻害剤の濃度をＩＣ５０値とする。同様に、他の阻害濃度も、活性の適切な決定により定義することが可能である。例えば、いくつかの状況では、９０％阻害濃度すなわちＩＣ９０などを確立することが望ましい場合がある。
【００７９】
ユビキチン−インテイン−Ｈｉｓ６発現ベクターを実施例９０１の方法に従ってクローニングして、本発明の化合物をスクリーニングするためのユビキチン−ローダミン１１０−グリシンを得た。
【００８０】
標準的な生化学的ＵＳＰ７酵素アッセイ（実施例９０２）により、式Ｉの化合物を試験した。
【００８１】
実施例９０３は、脱ユビキチン化酵素（ＤＵＢ）の活性に基づく濃縮を測定する。
【００８２】
実施例９０４は、ゲル内トリプシン消化及び質量分析を測定する。
【００８３】
実施例９０５は、データ分析及びバイオインフォマティクスのための方法論を提供する。
【００８４】
実施例９０３〜９０５は、活性に基づくプロファイリングアッセイで検出される内因性ＤＵＢの活性に拮抗する化合物の選択性を評価するために、併せて使用される。
【００８５】
実施例９０６は、細胞データ法（cellular data method）を提供する。ＵＳＰ７調節シグナル伝達経路に関与するタンパク質の細胞生存アッセイ（Ｉｎｃｕｃｙｔｅ、Ｃｅｌｌ  Ｔｉｔｅｒ  Ｇｌｏ）、ＭＤＭ２代謝回転及びウェスタンブロットは、ＵＳＰ７アンタゴニスト作用の分子及び細胞機構を評価するために併せて使用される。
【００８６】
この方法は、ＵＳＰ７触媒活性を阻害する独特の機構を解明しており、他の脱ユビキチン化酵素の拮抗に適用できる可能性がある。
【００８７】
ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ質量分析法によって、式Ｉの化合物のＤＵＢ活性及び特異性をスクリーニングすることができる（Ritorto, M.S., et al (2014) Nature Communications 5:4763; doi: 10.1038）。
【００８８】
式Ｉの化合物の細胞増殖、細胞傷害性及び細胞生存率は、ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏ（登録商標）Ｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｔ  Ｃｅｌｌ  Ｖｉａｂｉｌｉｔｙ  Ａｓｓａｙ（Ｐｒｏｍｅｇａ  Ｃｏｒｐ．）によって測定することができる。ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏ（登録商標）Ｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｔ  Ｃｅｌｌ  Ｖｉａｂｉｌｉｔｙ  Ａｓｓａｙは、代謝的に活性な細胞の指標である、存在するＡＴＰの定量に基づく、培養物中の生細胞数を決定する均一法である。ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏ（登録商標）Ａｓｓａｙは、マルチウェルフォーマットでの使用を想定して設計されており、自動ハイスループットスクリーニング（ＨＴＳ）、細胞増殖及び細胞傷害性アッセイに最適である。均一アッセイの手順では、血清補充培地で培養した細胞に単一の試薬（ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏ（登録商標）Ｒｅａｇｅｎｔ）を直接添加する必要がある。細胞の洗浄、培地の除去及び複数のピペッティング工程は、必要ない。該系は、試薬及び混合物の添加後１０分以内に、３８４ウェルフォーマットで１ウェルあたりわずか１５個の細胞しか検出しない。
【００８９】
図１Ａは、ＨＣＴ１１６結腸がん細胞における化合物２５、８９及び４５の細胞増殖及びカスパーゼ活性（Ｉｎｃｕｃｙｔｅ（登録商標）、Ｅｓｓｅｎ  ＢｉｏＳｃｉｅｎｃｅ）データを示す。
【００９０】
図１Ｂは、ＨＣＴ１１６結腸がん細胞における化合物８８及び９２の細胞増殖及びカスパーゼ活性（Ｉｎｃｕｃｙｔｅ（登録商標）、Ｅｓｓｅｎ  ＢｉｏＳｃｉｅｎｃｅ）データを示す。
【００９１】
図２Ａは、同種同系ＨＣＴ１１６結腸がん細胞株（それぞれ、野生型（ＷＴ）、ＵＳＰ７−ｎｕｌｌ及びｐ５３−ｎｕｌｌ）において、活性パーム化合物２５、８８、９２はｐ５３及びＵＳＰ７依存的にｐ５３及びｐ２１を安定化するが、不活性コントロール化合物４５及び４５はそうではないことを表すウェスタンブロットデータを示す。
【００９２】
図２Ｂは、化合物４５、２５、８８、９２、８９で処理したＨＣＴ１１６結腸がん細胞株（野生型及びＵＳＰ７−ｎｕｌｌ）におけるｐ５３／チューブリン変化のプロットを示す。
【００９３】
図２Ｃは、化合物４５、２５、８８、９２、８９で処理したＨＣＴ１１６結腸がん細胞株（野生型及びＵＳＰ７−ｎｕｌｌ）におけるｐ２１／チューブリン変化のプロットを示す。
【００９４】
図３Ａは、ＭＣＦ７乳がん細胞におけるＭＤＭ２、チューブリン、ＵＳＰ７、ｐ５３及びｐ２１に対する活性化合物８８の不安定化効果を、より活性の低い化合物８９（１５μＭ）との比較で表したウェスタンブロットデータを示す。
【００９５】
図３Ｂは、化合物８８及び８９で処理した細胞中のＭＤＭ２／チューブリンのプロットを示す。
【００９６】
図４は、ＨＣＴ１１６細胞（野生型及びＵＳＰ７−ｎｕｌｌ）に対する化合物８８及び８９によるＵＳＰ７依存的な細胞生存率の影響のプロットであるが、生存率のＵＳＰ７依存的な低下を示している。
【００９７】
図５は、活性に基づくプロファイリングのウェスタンブロットデータであるが、これは、ＵＳＰ７に対応するＨＡとプローブがコンジュゲートしたバンドの化合物８８で処理した溶解物中での減少を表し、８８による選択的ＤＵＢ阻害を示している。
【００９８】
図６は、活性に基づくプロファイリングのウェスタンブロットデータであるが、これは、化合物８９ではなくパーム結合化合物８８のみがウェスタンブロッティングによって評価された他のＤＵＢよりも内因性ＵＳＰ７に選択的に拮抗することを表し、８８による選択的ＤＵＢ阻害を示している。
【００９９】
図７は、活性に基づくプロファイリングのプロットであるが、これは、活性パーム結合化合物が質量分析によって評価された他のＤＵＢよりも内因性ＵＳＰ７に選択的に拮抗することを表し、活性化合物による選択的ＤＵＢ阻害を示している。
【０１００】
図８Ａは、正常骨髄標本と比較して、多発性骨髄腫標本において上昇したＵＳＰ７発現の免疫組織化学分析を示す。
【０１０１】
図８Ｂは、正常乳房標本と比較して、乳がん標本において上昇したＵＳＰ７発現の免疫組織化学分析を示す。
【０１０２】
図９は、ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏ（登録商標）（Ｐｒｏｍｅｇａ  Ｃｏｒｐ．）のデータであるが、これは、野生型ｐ５３含有腫瘍細胞株がパーム結合化合物８８で処理された場合、化合物８９と比較して生存率が低下しているが、対応する正常細胞株及び同じ組織由来の対応するｐ５３−ｎｕｌｌ細胞株では細胞生存率の同様な低下がないことを表し、正常細胞と比較した腫瘍細胞の可能性のある治療指数及び腫瘍細胞生存率の低下に対するｐ５３依存を示す。
【０１０３】
図１０は、化合物８９と比較して活性パーム部位化合物８８が、ＭＤＡ−ＭＢ１５７  ｐ５３−ｎｕｌｌ細胞に比べてＭＣＦ−７  ｐ５３  ＷＴ乳がん細胞の細胞生存率を低下させることを表す、実施例９０６の細胞増殖及びカスパーゼ活性データ（Ｉｎｃｕｃｙｔｅ（登録商標）、Ｅｓｓｅｎ  ＢｉｏＳｃｉｅｎｃｅ）である。
【０１０４】
図１１は、活性パーム部位化合物８８が８９と比較して、ＳａＯｓ  ｐ５３−ｎｕｌｌ細胞に比べてＵ２Ｏｓ  ｐ５３  ＷＴ骨肉腫細胞の細胞生存率を低下させることを表す、実施例９０６の細胞増殖及びカスパーゼ活性データ（Ｉｎｃｕｃｙｔｅ（登録商標）、Ｅｓｓｅｎ  ＢｉｏＳｃｉｅｎｃｅ）である。
【０１０５】
図１２Ａは、活性化合物８８が８９と比較して、ｐ５３野生型乳がん及び骨肉腫細胞においてｐ５３及びｐ２１レベルを増加させるが、正常細胞においてはそうではないことを示すウェスタンブロットデータである。
【０１０６】
図１２Ｂは、化合物８８及び８９で処理したｐ５３野生型乳がん及び骨肉腫細胞においてｐ５３／チューブリンが変化しているが、化合物８８及び８９で処理した正常細胞においてはそうではないことを表すプロットである。
【０１０７】
図１２Ｃは、化合物８８及び８９で処理したｐ５３野生型乳がん及び骨肉腫細胞においてｐ２１／チューブリンが変化しているが、化合物８８及び８９で処理した正常細胞においてはそうではないことを表すプロットである。
【０１０８】
図１２Ｄは、化合物８８及び８９で処理したｐ５３野生型乳がん及び骨肉腫細胞においてＭＤＭ２／チューブリンが変化しているが、化合物８８及び８９で処理した正常細胞においてはそうではないことを表すプロットである。
【０１０９】
図１３Ａは、活性化合物８８が８９と比較してＣｅｌｌ  Ｔｉｔｅｒ  Ｇｌｏシグナルを減少させることを表す細胞生存率データであるが、ＫＭＳ−２１ＢＭ及びＫＭＳ−２８ＰＥ多発性骨髄腫細胞の細胞生存率の低下を示している。
【０１１０】
図１３Ｂは、ＫＭＳ−２１ＢＭ及びＫＭＳ−２８ＰＥ多発性骨髄腫細胞において、活性化合物８８が８９と比較して、ｐ５３及びｐ２１レベルを増加させることを示すウェスタンブロットデータである。
【０１１１】
図１３Ｃは、化合物８８及び８９で処理したＫＭＳ−２１ＢＭ及びＫＭＳ−２８ＰＥ多発性骨髄腫細胞においてｐ５３／チューブリンが変化していることを表すプロットである。
【０１１２】
図１３Ｄは、化合物８８及び８９で処理したＫＭＳ−２１ＢＭ及びＫＭＳ−２８ＰＥ多発性骨髄腫細胞においてｐ２１／チューブリンが変化していることを表すプロットである。
【０１１３】
図１４Ａは、パーム結合化合物８８及び８９が、子宮頸がん細胞株ＲＫＯ、ＲＫＯ−Ｅ６、Ｖｉｂｏ及びＳｉＨＡにおいてｐ５３、ｐ２１を安定化させ、ＭＤＭ２とＥ６ＡＰを不安定化することを示すウェスタンブロットデータである。
【０１１４】
図１４Ｂは、化合物８８及び８９で処理した子宮頸がん細胞株ＲＫＯ、ＲＫＯ−Ｅ６、Ｖｉｂｏ及びＳｉＨＡのＥ６ＡＰ／チューブリン変化を表すプロットである。
【０１１５】
図１４Ｃは、化合物８８及び８９で処理した子宮頸がん細胞株ＲＫＯ、ＲＫＯ−Ｅ６、Ｖｉｂｏ及びＳｉＨＡのＭＤＭ２／チューブリン変化を表すプロットである。
【０１１６】
図１５は、化合物８９ではなく活性化合物８８が、子宮頸がん細胞株ＲＫＯ、ＲＫＯ−Ｅ６、Ｖｉｂｏ及びＳｉＨＡの細胞生存率を低下させることを示す細胞増殖（Ｉｎｃｕｃｙｔｅ（登録商標）、Ｅｓｓｅｎ  ＢｉｏＳｃｉｅｎｃｅ）データである。
【０１１７】
図１６は、シスプラチン（１μＭ）、化合物８８及び８９（１５μＭ）又は８８＋シスプラチン及び８９＋シスプラチンの組み合わせのいずれかを用いた、Ｕ２Ｏｓ（骨肉腫）細胞での細胞増殖（Ｉｎｃｕｃｙｔｅ（登録商標）、Ｅｓｓｅｎ  ＢｉｏＳｃｉｅｎｃｅ）及びカスパーゼ活性データである。８８＋シスプラチンの併用処理が、最も強力に細胞増殖を減少させ、カスパーゼ活性を向上させる。
【０１１８】
図１７は、ドキソルビシン（０．１μＭ）、化合物８８及び８９（１５μＭ）又は８８＋ドキソルビシン及び８９＋ドキソルビシンの組み合わせのいずれかを用いた、ＭＣＦ７（乳がん）細胞での細胞増殖（Ｉｎｃｕｃｙｔｅ（登録商標）、Ｅｓｓｅｎ  ＢｉｏＳｃｉｅｎｃｅ）及びカスパーゼ活性データである。８８＋ドキソルビシンの併用処理が、最も強力に細胞増殖を減少させ、カスパーゼ活性を向上させる。
【０１１９】
表１の例示的な式Ｉの化合物を、本発明の方法に従って作製し、特徴付けし、ＵＳＰ７への結合について試験した。また、それらの化合物は、以下の構造、対応する名称（ＣｈｅｍＢｉｏＤｒａｗ、Ｖｅｒｓｉｏｎ  １２．０．２、マサチューセッツ州ケンブリッジのＣａｍｂｒｉｄｇｅＳｏｆｔ  Ｃｏｒｐ．）及び生物学的活性を有する。複数の名称が式Ｉの化合物又は中間体と関連する場合、化学構造が化合物を定義するものとする。
2018508563.tif 000006
2018508563.tif 000007
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【０１２０】
式（Ｉ）の化合物の投与
本発明の化合物は、治療される状態に適切な任意の経路で投与することができる。適切な経路には、経口、非経口（皮下、筋肉内、静脈内、動脈内、皮内、髄腔内及び硬膜外を含む）、経皮、直腸、鼻、局所（口腔及び舌下を含む）、膣内、腹腔内、肺内及び鼻腔内が含まれる。局所免疫抑制治療の場合、化合物は、移植片を移植前に灌流又は他の方法で阻害剤と接触させることを含む、病変内投与で投与され得る。好ましい経路は、例えばレシピエントの状態によって変化し得ることが理解されるであろう。化合物は、経口投与される場合、薬学的に許容される担体又は賦形剤と共に丸剤、カプセル剤、錠剤等として製剤化され得る。化合物は、非経口で投与される場合、以下に詳述するように、薬学的に許容される非経口ビヒクル及び単位用量の注射可能な形態で製剤化され得る。
【０１２１】
ヒト患者を治療するための用量は、式Ｉの化合物が約１０ｍｇから約１０００ｍｇの範囲である。典型的な用量は、該化合物が約１００ｍｇから約３００ｍｇである。用量は、特定の化合物の吸収、分布、代謝、排泄を含む薬物動態及び薬力学的特性に依存して、１日１回（ＱＩＤ）、１日２回（ＢＩＤ）又はそれより頻繁に投与されてもよい。さらに、毒性係数が投薬投与レジメンに影響を及ぼし得る。丸薬、カプセル又は錠剤は、経口的に投与される場合、毎日又はより少ない頻度で指定された期間にわたり服用され得る。前記レジメンは、いくつかの治療サイクルにわたって繰り返されてもよい。
【０１２２】
式Ｉの化合物による治療の方法
本発明の式Ｉの化合物は、免疫障害、心血管疾患、ウイルス感染症、炎症、代謝／内分泌障害又は神経障害のような、ＵＳＰ７に関連する異常な細胞の増殖、機能又は振る舞いに起因する疾患又は障害に罹患しているヒト又は動物の患者を治療するために有用である。したがってそのような患者は、上に記載の本発明の化合物のそれらへの投与を含む方法によって治療され得る。がんに罹患しているヒト又は動物の患者もまた、上に記載の本発明の化合物のそれらへの投与を含む方法によって治療され得る。これにより、患者の状態を改善又は寛解させることができる。
【０１２３】
本発明の方法はまた、乳房、卵巣、子宮頸部、前立腺、睾丸、泌尿生殖器、食道、喉頭、膠芽細胞腫、神経芽細胞腫、胃、皮膚、角化棘細胞腫、肺、類表皮癌、大細胞癌、非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）、小細胞癌、肺腺癌、骨、結腸、腺腫、膵臓、腺癌、甲状腺、濾胞腺癌、未分化癌、乳頭癌、セミノーマ、メラノーマ、肉腫、膀胱癌、肝臓癌及び胆汁通路、腎臓癌、膵臓、骨髄性疾患、リンパ腫、ヘアリー細胞、口腔、鼻咽頭、咽頭、唇、舌、口、小腸、結腸直腸、大腸、直腸、脳及び中枢神経系、ホジキン、白血病、気管支、甲状腺、肝臓及び肝内胆管、肝細胞、胃、神経膠腫／神経膠芽腫、子宮内膜癌、メラノーマ、腎臓及び腎盂、膀胱、子宮体、子宮頸部、多発性骨髄腫、急性骨髄性白血病、慢性骨髄性白血病、リンパ球性白血病、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、骨髄性白血病、口腔及び咽頭、非ホジキンリンパ腫、メラノーマ及び絨毛結腸腺腫から選択されるがんを治療することを含む。
【０１２４】
発現分析、免疫組織化学分析及び細胞株プロファイリングに基づけば、結腸、乳房、子宮頸部、胃、肺及び多発性骨髄腫の悪性腫瘍は、ＵＳＰ７アンタゴニストに応答する可能性が最も高い。
【０１２５】
薬学的製剤
ヒトを含む哺乳動物の治療的処置のために使用するために、本発明の化合物は通常、薬学的組成物として標準的な薬務に従って処方される。本発明のこの態様によれば、薬学的に許容される希釈剤又は担体と共に本発明の化合物を含む薬学的組成物が提供される。
【０１２６】
典型的な製剤は、本発明の化合物と担体、希釈剤又は賦形剤とを混合することによって調製される。適切な担体、希釈剤及び賦形剤は、当業者に周知であり、例えば炭水化物、ワックス、水溶性及び／又は膨潤性ポリマー、親水性又は疎水性材料、ゼラチン、油、溶媒、水等の材料が含まれる。使用される特定の担体、希釈剤又は賦形剤は、本発明の化合物が適用される手段及び目的に依存するであろう。溶媒は、哺乳動物に投与することが安全であると当業者によって認められる（ＧＲＡＳ）溶媒に基づいて通常選択される。一般に、安全な溶媒は、水などの非毒性の水性溶媒及び水に可溶性又は混和性である他の非毒性溶媒である。適切な水性溶媒は、水、エタノール、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール（例えばＰＥＧ４００、ＰＥＧ３００）等及びそれらの混合物を含む。製剤はまた、薬物（すなわち本発明の化合物又はその薬学的組成物）を見栄え良く提供するための、又は薬学的製品（すなわち医薬）の製造を補助するための１以上の緩衝液、安定剤、界面活性剤、湿潤剤、潤滑剤、乳化剤、懸濁化剤、保存料、酸化防止剤、不透明化剤、滑剤、加工助剤、着色料、甘味料、香料、香味料及びその他既知の添加剤も含み得る。
【０１２７】
製剤は、通常の溶解及び混合手法を用いて調製することができる。例えば、バルク原体（すなわち本発明の化合物又は化合物の安定化形態（例えば、シクロデキストリン誘導体又はその他の既知の複合体形成剤との複合体）を、１以上の上記賦形剤の存在下で適切な溶媒に溶解する。本発明の化合物は通常、容易に制御できる用量の薬物を提供するために医薬剤形に製剤化され、患者が処方されたレジメンを遵守することを可能にしている。
【０１２８】
適用のための薬学的組成物（又は製剤）は、薬物の投与に使用される方法に応じた様々な方法で包装することができる。一般に、流通用の物品は、適切な形態で中に薬学的製剤を配置した容器を含む。適切な容器は、当業者には周知であり、瓶（プラスチック及びガラス）、小袋、アンプル、ビニール袋、金属シリンダー等の材料を含む。容器は、パッケージの内容物への不用意な接触を防ぐために、不正開封防止の構成部品（assemblage）を含んでもよい。加えて、容器には、容器の内容物を記したラベルを配してもよい。ラベルはまた、適切な注意書きを含んでもよい。
【０１２９】
本発明の化合物の薬学的製剤は、種々の投与経路及び投与タイプに対応できるように調製することができる。例えば、所望の純度を有する式Ｉの化合物は、凍結乾燥製剤、破砕紛体又は水溶液の形態の、薬学的に許容される希釈剤、担体、賦形剤又は安定剤（Remington’s Pharmaceutical Sciences (1980) 16th edition, Osol, A. Ed．）と任意選択的に混合されてもよい。製剤化は、常温で、適切なｐＨで、及び所望の純度で、生理学的に許容される担体（すなわち用いられる投与量及び濃度でレシピエントに対して非毒性の担体）と混合することにより行われる。製剤のｐＨは主に、化合物の具体的な用途及び濃度に左右されるが、約３〜約８の範囲である。ｐＨ５の酢酸緩衝液中での製剤化が、適切な実施態様である。
【０１３０】
化合物は通常、固体組成物、凍結乾燥製剤又は水溶液として保存可能である。
【０１３１】
本発明の薬学的組成物は、製剤化され、医学行動規範（good medical practice）と一致した様式、すなわち投与の量、濃度、スケジュール、コース、ビヒクル及び経路で、投薬及び投与されることとする。この文脈において考慮すべき因子としては、治療される特定の障害、治療される特定の哺乳動物、個々の患者の臨床状態、障害の原因、薬剤の送達部位、投与方法、投与スケジュール及び医師にとって既知の他の因子が挙げられる。投与される化合物の「治療的有効量」は、このような考慮事項によって決まることとし、過剰増殖性障害を寛解させ又は治療するために必要な最小量である。
【０１３２】
一般命題として、非経口的に投与される阻害剤の１回あたりの初期薬学的有効量は、約０．０１−１００ｍｇ／ｋｇ、つまり１日あたり約０．１から２０ｍｇ／患者の体重ｋｇの範囲、用いられる化合物の典型的な初期範囲は約０．３から約１５ｍｇ／ｋｇ／日とする。
【０１３３】
許容される担体、希釈剤、担体、賦形剤及び安定剤は、用いられる投与量及び濃度でレシピエントに対して非毒性であり、リン酸塩、クエン酸塩及び他の有機酸などの緩衝液；アスコルビン酸及びメチオニンを含む抗酸化剤；防腐剤（例えばオクタデシルジメチオルベンジルアンモニウムクロリド；ヘキサメトニウムクロリド；ベンザルコニウムクロリド、ベンゼトニウムクロリド；フェノール、ブチル又はベンジルアルコール；アルキルパラベン、例えばメチル又はプロピルパラベン；カテコール；レゾルシノール；シクロヘキサノール；３−ペンタノール；及びｍ−クレゾール）；低分子量（約１０残基未満）のポリペプチド；タンパク質、例えば血清アルブミン、ゼラチン又は免疫グロブリン；親水性ポリマー、例えばポリビニルピロリドン；アミノ酸、例えばグリシン、グルタミン、アスパラギン、ヒスチジン、アルギニン又はリジン；グルコース、マンノース又はデキストリンを含む、単糖類、二糖類及び他の炭水化物；キレート剤、例えばＥＤＴＡ；糖類、例えばスクロース、マンニトール、トレハロース又はソルビトール；ナトリウムなどの塩形成対イオン；金属複合体（例えばＺｎ−タンパク質複合体）；及び／又はＴＷＥＥＮＴＭ、ＰＬＵＲＯＮＩＣＳＴＭ若しくはポリエチレングリコール（ＰＥＧ）等の非イオン性界面活性剤を含む。また、活性医薬成分は、コロイド状薬物送達系（例えばリポソーム、アルブミンミクロスフェア、マイクロエマルション、ナノ粒子及びナノカプセル）中で、又はマクロエマルション中で、例えばコアセルベーション技術又は界面重合により調製したマイクロカプセル、例えばそれぞれ、ヒドロキシメチルセルロース又はゼラチン−マイクロカプセル及びポリ−（メチルメタクリレート）マイクロカプセル中に封入されてもよい。これらの技術は、Remington’s Pharmaceutical Sciences 16th edition, Osol, A. Ed. (1980)に開示されている。
【０１３４】
式Ｉの化合物の徐放性調製物を調製することができる。徐放性調製物の適切な例は、式Ｉの化合物を含有する固体疎水性ポリマーの半透性マトリクスを含み、このマトリックスは成形品、例えばフィルム又はマイクロカプセルの形態である。徐放性マトリックスの例は、ポリエステル、ヒドロゲル（例えばポリ（２−ヒドロキシエチル−メタクリレート）又はポリ（ビニルアルコール））、ポリ乳酸（米国特許第３７７３９１９号）、Ｌ−グルタミン酸とガンマ−エチル−Ｌ−グルタメートとのコポリマー、非分解性エチレン−酢酸ビニル、ＬＵＰＲＯＮ  ＤＥＰＯＴＴＭ（乳酸−グリコール酸コポリマー及び酢酸ロイプロリドからなる注射用ミクロスフェア）のような分解性乳酸−グリコール酸コポリマー及びポリ−Ｄ−（−）−３−ヒドロキシ酪酸を含む。
【０１３５】
製剤は、本明細書に詳述される投与経路に適したものを含む。製剤は、好都合には、単位剤形で提供され、薬学分野で周知の任意の方法によって調製することができる。技術及び製剤は、Remington’s Pharmaceutical Sciences（ペンシルベニア州イーストンのＭａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏ．）に広く記載されている。このような方法には、活性成分と、１つ以上の補助成分を構成する担体とを会合させる工程が含まれる。製剤は通常、活性成分を液体担体又は細かく分割された固体担体又はその両方と均一かつ密接に会合させ、その後必要に応じて製品を成形することにより調製される。
【０１３６】
経口投与に適した式Ｉの化合物の製剤は、各々が所定量の式Ｉの化合物を含有する丸薬、カプセル、カシェ剤又は錠剤のような別個の単位として調製されてもよい。圧縮錠剤は、結合剤、潤滑剤、不活性希釈剤、防腐剤、表面活性剤又は分散剤と任意選択的に混合された流動性形態（粉末又は顆粒など）の活性成分を適切な機械で圧縮することにより、調製することができる。成形錠剤は、不活性液体希釈剤で湿らせた粉末状の活性成分の混合物を適切な機械で成形することにより、製造することができる。錠剤は、任意選択的にコーディングされるか又は刻み目を付けられてもよく、また活性成分の徐放又は制御放出をもたらすように製剤化されてもよい。錠剤、トローチ、ロゼンジ剤、水性又は油性懸濁剤、分散性粉末又は顆粒剤、エマルション剤、硬又は軟カプセル剤（例えばゼラチンカプセル剤、シロップ又はエリキシル剤）を経口使用向けに調製してもよい。経口使用が意図される式Ｉの化合物の製剤は、薬学的組成物の製造のための当該技術分野で既知の任意の方法に従って調製することができ、そのような組成物は、口あたりのよい調製物を提供するために、甘味剤、香味剤、着色剤及び保存剤を含む１以上の薬剤を含有することができる。錠剤の製造に適した非毒性の薬学的に許容される賦形剤との混合物中に活性成分を含有する錠剤が許容される。このような賦形剤は、例えば炭酸カルシウム又は炭酸ナトリウム、ラクトース、リン酸カルシウム又はリン酸ナトリウム等の不活性希釈剤；トウモロコシデンプン又はアルギン酸などの造粒剤及び崩壊剤；デンプン、ゼラチン又はアカシア等の結合剤；及びステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸又はタルク等の潤滑剤であってもよい。錠剤は、コーティングされなくてもよく、又は胃腸管における崩壊及び吸着を遅延させ、それによってより長期間にわたる持続作用を提供するために、マイクロカプセル化を含む既知の技術によってコーティングされてもよい。例えば、グリセリルモノステアレート又はグリセリルジステアレートなどの時間遅延物質を、単独で又はワックスと共に用いてもよい。
【０１３７】
眼又は他の外部組織、例えば口及び皮膚の治療の場合、製剤は、好ましくは、活性成分を例えば０．０７５から２０％ｗ／ｗの量で含有する局所用軟膏又はクリームとして適用される。活性成分は、軟膏に製剤化される場合、パラフィン又は水混和性軟膏基剤のいずれかと共に用いられてもよい。あるいは、活性成分は、水中油型クリーム基剤と共にクリーム中に製剤化されてもよい。必要に応じて、クリーム基剤の水性相は、多価アルコール、すなわちプロピレングリコール、ブタン１，３−ジオール、マンニトール、ソルビトール、グリセロール及びポリエチレングリコール（ＰＥＧ４００を含む）のような２つ以上のヒドロキシル基を有するアルコール及びそれらの混合物を含んでもよい。局所製剤は、皮膚又は他の患部を通る活性成分の吸収又は浸透を促進する化合物を望ましくは含む。このような皮膚浸透促進剤の例には、ジメチルスルホキシド及び関連する類似体が含まれる。本発明のエマルションの油相は、周知の方法で周知の成分から構成することができる。この相は、乳化剤のみを含むことができるが、望ましくは、少なくとも１種の乳化剤と、脂肪若しくは油の混合物又は脂肪と油の両方との混合物を含む。好ましくは、親水性乳化剤は、安定剤として働く親油性乳化剤と共に含まれる。また、油と脂肪の両方を含むことが好ましい。まとめると、乳化剤は、安定剤の有無に関わらず、いわゆる乳化ワックスを構成し、該ワックスは油及び脂肪と共にクリーム製剤の油性分散相を形成する、いわゆる乳化軟膏基剤を構成する。本発明の製剤における使用に適した乳化剤及び乳化安定剤としては、Ｔｗｅｅｎ（登録商標）６０、Ｓｐａｎ（登録商標）８０、セトステアリルアルコール、ベンジルアルコール、ミリスチルアルコール、モノステアリン酸グリセリル及びラウリル硫酸ナトリウムが挙げられる。
【０１３８】
式Ｉの化合物の水性懸濁剤は、水性懸濁剤の製造に適した賦形剤と混合した活性材料を含有する。このような賦形剤には、カルボキシメチルセルロースナトリウム、クロスカルメロース、ポビドン、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、アルギン酸ナトリウム、ポリビニルピロリドン、トラガカントゴム及びアカシアゴムなどの懸濁化剤、並びに天然リン脂質（例えばレシチン）、アルキレンオキシドと脂肪酸との縮合生成物（例えばステアリン酸ポリオキシエチレン）、エチレンオキシドと長鎖脂肪族アルコールとの縮合生成物（例えばヘプタデカエチレンオキシセタノール）、エチレンオキシドと、脂肪酸及び無水ヘキシトールから誘導される部分エステルとの縮合生成物（例えばポリオキシエチレンソルビタンモノオレエート）などの分散剤又は湿潤剤が含まれる。水性懸濁液は、エチル又はｎ−プロピル  ｐ−ヒドロキシベンゾエートといった１種以上の防腐剤、１種以上の着色剤、１種以上の香味剤、及びスクロース又はサッカリンといった１種以上の甘味剤も含有できる。
【０１３９】
式Ｉの化合物の薬学的組成物は、滅菌注射用の水性又は油性懸濁液のような滅菌注射用製剤の形態であってもよい。この懸濁液は、上述した好適な分散剤又は湿潤剤及び懸濁化剤を用い、従来技術に従って製剤化することができる。また、滅菌注射用製剤は、例えば１，３−ブタンジオールに入れた溶液など、非経口投与可能な無毒の希釈剤又は溶媒中の滅菌注射液又は懸濁液であってもよく、又は凍結乾燥粉末として調製されてもよい。使用され得る許容可能なビヒクル及び溶媒には、水、リンゲル液及び等張食塩水がある。さらに、滅菌不揮発性油は、溶媒又は懸濁媒として慣習的に用いられ得る。この目的のために、合成モノグリセリド又は合成ジグリセリドを含め、任意の無刺激不揮発性油を用いることができる。さらに、オレイン酸などの脂肪酸も注射剤の調製に同様に使用することができる。
【０１４０】
単一剤形を作るために担体材料と組み合わされ得る活性成分の量は、治療される宿主及び特定の投与方法に応じて変化するものとする。例えば、ヒトへの経口投与を意図した徐放性製剤は、組成物全体の約５から約９５％（重量：重量）の範囲で変化し得る適切で都合のよい量の担体材料と配合された、およそ１から１０００ｍｇの活性物質を含有し得る。薬学的組成物は、容易に測定可能な投与量を提供するように調製することができる。例えば、静脈内注入用の水溶液は、約３０ｍＬ／時の速度で適切な容積の注入を行うことができるように、溶液１ミリリットルあたり約３から５００μｇの活性成分を含有することができる。
【０１４１】
非経口投与に適した製剤は、酸化防止剤、緩衝剤、静菌剤、及び対象レシピエントの血液と製剤を等張にする溶質を含有し得る水性及び非水性滅菌注射液；並びに懸濁化剤及び増粘剤を含み得る水性及び非水性滅菌懸濁剤を含む。
【０１４２】
眼への局所投与に適した製剤としては、適切な担体、特に活性成分に対する水性溶媒に活性成分が溶解又は懸濁している点眼剤も挙げられる。好ましくは、活性成分は、このような製剤中に約０．５から２０％ｗ／ｗ、例えば約０．５から１０％ｗ／ｗ、例えば約１．５％ｗ／ｗの濃度で存在する。
【０１４３】
口内局所投与に適した製剤としては、風味付けした基剤（通常、スクロース及びアカシア又はトラガカント）中に活性成分を含むロゼンジ剤；ゼラチン及びグリセリン、又はスクロース及びアカシアなどの不活性基剤中に活性成分を含む香錠；並びに好適な液体担体中に活性成分を含む洗口液が挙げられる。
【０１４４】
直腸投与用の製剤は、例えばカカオ脂又はサリチレートを含む好適な基剤を用いた坐薬として提供されてもよい。
【０１４５】
肺内投与又は鼻内投与に適した製剤は、例えば０．１から５００ミクロンの範囲の粒径（０．５、１、３０ミクロン、３５ミクロン等のミクロン単位で０．１から５００ミクロンの範囲の粒径を含む）を有し、鼻腔を介した急速吸入によって、又は口腔を介した吸入によって投与され、肺胞嚢に達する。適切な製剤には、活性成分の水性又は油性溶液が含まれる。エアロゾル又は乾燥粉末投与に適した製剤は、従来の方法に従って調製してもよく、後述の障害の治療又は予防において従来使用されている化合物といったその他の治療剤と共に送達されてもよい。
【０１４６】
膣投与に適した製剤は、適切であることが当該技術分野において知られている担体を活性成分に加えて含有する、ペッサリー、タンポン、クリーム、ゲル、ペースト、泡剤又はスプレー剤として提供されてもよい。
【０１４７】
製剤は、単位用量又は複数用量容器、例えば密封アンプル及びバイアルに入れてもよく、注射用の滅菌液体担体（例えば水）を使用直前に加えるだけでよいフリーズドライ（凍結乾燥）状態で保存してもよい。即時注射液及び懸濁剤は、前述の種類の滅菌粉末、顆粒及び錠剤から調製される。好ましい単位用量製剤は、本明細書に上述のように日用量又は単位日副用量（unit daily sub-dose）又はその適切な画分の活性成分を含有するものである。
【０１４８】
本発明は、上記のような少なくとも１の活性成分を、獣医学用担体と共に含む獣医学的組成物をさらに提供する。獣医学用担体は、前記組成物を投与する目的に有用な物質であって、そうでなくても不活性であるか又は獣医学分野において許容され、活性成分と相溶性の固体、液体又は気体物質であり得る。このような獣医学的組成物は、非経口、経口で、又はその他の任意の所望の経路によって投与することができる。
【０１４９】
併用療法
式Ｉの化合物は、炎症又は過剰増殖性障害（例えばがん）などの本明細書に記載の疾患又は障害を治療するために、単独で、又は追加の治療剤と組み合わせて使用することができる。特定の実施態様では、式Ｉの化合物は、組み合わせ医薬製剤中で、又は併用療法の投与レジメンにおいて、抗炎症性若しくは抗過剰増殖性の特性を有するか、又は炎症、免疫応答障害若しくは過剰増殖性障害（例えばがん）を治療するのに有用な、追加の第二の治療用化合物と組み合わされる。追加の治療剤は、Ｂｃｌ−２阻害剤、ＪＡＫ阻害剤、抗炎症剤、免疫調節剤、化学療法剤、アポトーシス促進剤、神経栄養因子、心血管疾患治療剤、肝疾患治療剤、抗ウイルス剤、血液疾患治療剤、糖尿病治療剤、及び免疫不全障害治療剤であり得る。第二の治療剤は、ＮＳＡＩＤ抗炎症剤であってもよい。第二の治療剤は、化学療法剤であってもよい。組み合わせ医薬製剤又は投与レジメンの第二の化合物は、互いに悪影響を与えないように、式Ｉの化合物と相補的な活性を好ましくは有する。このような化合物は、意図した目的に有効な量で組み合わされて、好適に存在する。一実施態様では、本発明の組成物は、式Ｉの化合物又はその立体異性体、互変異性体、溶媒和物、代謝産物、又は薬学的に許容される塩若しくはプロドラッグを含み、ＮＳＡＩＤなどの治療剤と組み合わされる。
【０１５０】
併用療法は、同時又は逐次レジメンとして投与され得る。逐次的に投与される場合、その組み合わせは、２回以上の投与で投与され得る。併用投与には、別個の製剤又は単一の薬学的製剤を使用する共投与、及びいずれかの順序での連続投与が含まれ、好ましくは両方の（又はすべての）活性剤がその生物学的活性を同時に発揮する期間がある。
【０１５１】
上記共投与剤の適切な投与量は、現在使用されているものであり、新たに同定された薬剤と他の治療剤又は治療との複合作用（相乗作用）により減じられる可能性がある。
【０１５２】
併用療法は、「相乗作用」をもたらし、「相乗的」であること、すなわち活性成分を一緒に使用したときに達成される効果が化合物を別々に使用することにより得られる効果の和を上回ることを証明することができる。相乗効果は、活性成分が（１）共製剤化（co-formulated）され、組み合された単位用量製剤として同時に投与又は送達されるか；（２）別個の製剤として交互に又は並行して送達される；又は（３）他の何らかのレジメンによって送達される場合に達成され得る。交互療法（alternation therapy）で送達される場合、例えば別個の注射器での異なる注射、別個の丸薬若しくはカプセル剤又は別々の注入によって化合物が逐次的に投与又は送達される際に、相乗効果が達成され得る。一般に、交互療法中、各活性成分の有効用量は逐次的に、すなわち連続して投与されるが、併用療法では、２つ以上の活性成分の有効用量が一緒に投与される。
【０１５３】
治療の特定の実施態様では、式Ｉの化合物又はその立体異性体、互変異性体、溶媒和物、代謝産物、又は薬学的に許容される塩若しくはプロドラッグは、本明細書に記載されるような他の治療剤、ホルモン又は抗体剤と組み合わせてもよく、同様に外科療法及び放射線療法と組み合わせてもよい。したがって、本発明による併用療法は、少なくとも１の式Ｉの化合物又はその立体異性体、互変異性体、溶媒和物、代謝産物、又は薬学的に許容される塩若しくはプロドラッグの投与と、少なくとも１の他のがん治療方法の使用とを含む。式Ｉの化合物及び他の薬学的に活性な治療剤の量並びに投与の相対的タイミングは、所望の併用治療効果が得られるように選択されることとする。
【０１５４】
式Ｉの化合物の代謝産物
本明細書に記載の式Ｉのｉｎ  ｖｉｖｏ代謝産物も、本発明の範囲内に含まれる。このような産物は例えば、投与された化合物の酸化、還元、加水分解、アミド化、脱アミド化、エステル化、脱エステル化、酵素的切断等から生じ得る。したがって、本発明は、本発明の化合物をその代謝産物を生じるのに十分な時間にわたって哺乳動物と接触させることを含む方法によって製造される化合物を含む、式Ｉの化合物の代謝産物を含む。
【０１５５】
代謝産物は典型的には、本発明の化合物の放射標識（例えば１４Ｃ又は３Ｈ）同位体を調製し、それをラット、マウス、モルモット、サル等の動物に又はヒトに検出可能な（例えば約０．５ｍｇ／ｋｇを超える）用量で非経口投与し、代謝が起こるのに十分な時間（典型的には約３０秒から３０時間）放置して尿、血液又はその他の生物学的試料からその変換産物を単離することによって、同定される。このような産物は、標識されているため容易に単離される（他は、代謝産物中に残存しているエピトープに結合することができる抗体を使用することによって単離される）。代謝産物の構造は、従来の方法、例えばＭＳ、ＬＣ／ＭＳ又はＮＭＲ分析によって決定される。一般に、代謝産物の分析は、当業者に周知の従来の薬物代謝研究と同じ方法で行われる。代謝産物は、それがｉｎ  ｖｉｖｏで他の形で見出されない限り、本発明の化合物の治療的投与のための診断アッセイにおいて有用である。
【０１５６】
製造品
本発明の別の実施態様において、上記の疾患及び障害の治療に有用な材料を含有する製造品又は「キット」が提供される。一実施態様では、キットは、式Ｉの化合物又はその立体異性体、互変異性体、溶媒和物、代謝産物、又は薬学的に許容される塩若しくはプロドラッグを収容する容器を備える。キットは、容器に貼られているか又は付属しているラベル又は添付文書をさらに含み得る。「添付文書」という用語は、治療製品の商品パッケージに通例含まれる、当該治療製品の効能、用法、用量、投与、禁忌及び／又は使用上の注意事項についての情報を含む説明書をいうのに使用される。好適な容器は、例えば瓶、バイアル、シリンジ、ブリスターパッグ等を含む。容器は、ガラス又はプラスチックなどの種々の材料から形成され得る。容器は、前記状態を治療するのに有効な式Ｉの化合物又はその製剤を保持することができ、滅菌アクセスポートを有し得る（例えば、容器は皮下注射針で穿刺可能なストッパーを有するバイアル又は静脈内溶液バッグであってよい）。組成物中の少なくとも１の活性剤が、式Ｉの化合物である。ラベル又は添付文書は、組成物ががんなどの選択した状態を治療するために使用されることを表示する。さらに、ラベル又は添付文書は、治療される患者が過剰増殖性障害、神経変性、心臓肥大、疼痛、片頭痛又は神経外傷性疾患若しくは事象等の障害を有する患者であることを表示してもよい。一実施態様において、ラベル又は添付文書は、式Ｉの化合物を含む組成物を用いて、異常な細胞増殖に起因する障害を治療することができることを表示する。ラベル又は添付文書はまた、組成物が他の障害を治療するのに使用され得ることを表示してもよい。代替的に又は追加的に、製造品は、薬学的に許容される緩衝液、例えば注射用静菌水（ＢＷＦＩ）、リン酸緩衝生理食塩水、リンガー溶液及びデキストロース溶液を含む第二の容器をさらに備えてもよい。それは、他の緩衝液、希釈剤、フィルター、針及びシリンジを含む、商業的及び使用者の観点から望まれる他の材料をさらに含んでもよい。
【０１５７】
キットは、式Ｉの化合物及び（存在する場合には）第二の薬学的製剤の投与のための指示書をさらに備えてもよい。例えば、キットは、式Ｉの化合物及び第２の薬学的製剤を含む第１の組成物を備える場合、第１及び第２の薬学的組成物を必要とする患者に同時、逐次又は個別投与するための指示書をさらに備えてもよい。
【０１５８】
別の実施態様において、キットは、錠剤又はカプセル剤のような式Ｉの化合物の固体経口形態の送達に適している。このようなキットは、複数の単位用量を含むことが好ましい。このようなキットは、その意図された使用の順序で配された投与量を記したカードを含むことができる。このようなキットの例は、「ブリスターパック」である。ブリスターパックは、包装産業において周知であり、薬学的単位剤形を包装するために広く使用されている。必要であれば、記憶の助けとなるものを、例えば数字、文字若しくは他のマークで、又は用量が投与され得る治療スケジュール中の日にちを示すカレンダー挿入物と共に提供することができる。
【０１５９】
一実施態様によれば、キットは、（ａ）式Ｉの化合物を中に収容する第１の容器；及び任意選択的に（ｂ）第２の薬学的製剤を中に収容する第２の容器を備えてもよく、ここで第２の薬学的製剤は、抗過剰増殖活性を有する第２の化合物を含む。代替的に又は追加的に、キットは、薬学的に許容される緩衝液、例えば注射用静菌水（ＢＷＦＩ）、リン酸緩衝生理食塩水、リンゲル液及びデキストロース溶液を含む第３の容器をさらに備えてもよい。それは、他の緩衝液、希釈剤、フィルター、針及びシリンジを含む、商業的及び使用者の観点から望まれる他の材料をさらに含んでもよい。
【０１６０】
キットが式Ｉの組成物及び第二の治療剤を含む特定の他の実施態様において、キットは、例えば別々の瓶又は別々のホイル小包のような、個々の組成物を収容するための容器を備えることができるが、個々の組成物もまた、分かれていない一つの容器の中に収容されていてもよい。一般的に、キットは、個々の成分を投与するための指示書を備える。キット形態は、個々の成分を異なる投与形態（例えば経口と非経口）で投与することが好ましい場合、異なる投与間隔で投与する場合、又は組み合わせの個々の成分の滴定が処方する医師により望まれる場合、特に有利である。
【０１６１】
式Ｉの化合物の調製
式Ｉの化合物は、特に本明細書に含まれる説明に照らして、化学の技術分野で周知のものと類似の過程及びComprehensive Heterocyclic Chemistry II, Editors Katritzky and Rees, Elsevier, 1997, 例えば第３巻； Liebigs Annalen der Chemie, (9):1910-16, (1985); Helvetica Chimica Acta, 41:1052-60, (1958); Arzneimittel-Forschung, 40(12):1328-31, (1990)（それぞれ出典明示により援用される）に記載されている他の複素環のものと類似の過程を含む合成経路によって、合成することができる。出発物質は一般に、Ａｌｄｒｉｃｈ  Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ（ウィスコンシン州ミルウォーキー）などの商業的供給源から入手可能であるか、又は当業者に周知の方法を使用して容易に調製される（例えば、Louis F. Fieser and Mary Fieser, Reagents for Organic Synthesis, v. 1-23, Wiley, N.Y. (1967-2006 ed.)又はBeilsteins Handbuch der organischen Chemie, 4, Aufl. ed. Springer-Verlag, Berlin,付録含む（Ｂｅｉｌｓｔｅｉｎオンラインデータベースを介しても入手可能）に概要が記載された方法により調製される）。
【０１６２】
式Ｉの化合物を合成するのに有用な合成化学変換及び保護基の方法論（保護及び脱保護）、並びに必要な試薬及び中間体は、当該技術分野で知られており、例えば、R.Larock,Comprehensive Organic Transformations,VCH Publishers(1989);T.W.Greene and P.G.M.Wuts,Protective Groups in Organic Synthesis,第３版,John Wiley and Sons(1999);及びL.Paquette編,Encyclopedia of Reagents for Organic Synthesis,John Wiley and Sons(1995)及びそれらの後続版に記載されているものが挙げられる。
【０１６３】
式Ｉの化合物は、単独に、又は少なくとも２、例えば５から１０００の化合物若しくは１０から１００の化合物を含む化合物ライブラリーとして調製することができる。式Ｉの化合物のライブラリーは、コンビナトリアル「スプリット・アンド・ミックス(split and mix)」法によって、又は溶液相若しくは固相化学のいずれかを用いたマルチプルパラレル合成によって、当業者に既知の手法により調製することができる。したがって、本発明のさらなる態様によれば、少なくとも２の化合物又はそれらの薬学的に許容される塩を含む化合物ライブラリーが提供される。
【０１６４】
実施例は、式Ｉの化合物を調製するための例示的な方法を提供する。当業者であれば、他の合成経路を用いて式Ｉの化合物を合成することができることを理解するであろう。特定の出発物質及び試薬が図及び実施例に示され、議論されているが、種々の誘導体及び／又は反応条件をもたらすために他の出発物質及び試薬で容易に代用され得る。加えて、記載した方法によって調製される例示的な化合物の多くは、当業者に周知の従来の化学を用い、本開示に照らしてさらに修飾することができる。
【０１６５】
式Ｉの化合物を調製する際、中間体の遠隔官能基（remote functionality）（例えば第一級又は第二級アミン）の保護が必要なことがある。そのような保護の必要性は、遠隔官能基の性質及び調製方法の条件に応じて異なってくる。適切なアミノ保護基には、アセチル、トリフルオロアセチル、ｔ−ブトキシカルボニル（ＢＯＣ）、ベンジルオキシカルボニル（ＣＢｚ）及び９−フルオレニルメチレンオキシカルボニル（Ｆｍｏｃ）が含まれる。そのような保護の必要性は、当業者によって容易に決定できる。保護基及びその使用についての一般的な説明は、T. W. Greene, Protective Groups in Organic Synthesis, John Wiley & Sons, New York, 1991を参照されたい。
【０１６６】
式Ｉの化合物を調製する方法では、反応生成物を互いから及び／又は出発物質から分離することが有利であり得る。各工程又は一連の工程の所望の生成物は、当該技術分野で一般的な技術によって所望の程度の均質性まで分離及び／又は精製される。典型的には、このような分離は、多相抽出、溶媒若しくは溶媒混合物からの結晶化、蒸留、昇華又はクロマトグラフィーを含む。クロマトグラフィーは、例えば逆相及び順相；サイズ排除；イオン交換；高、中、低圧液体クロマトグラフィー法及び装置；小規模な分析；疑似移動床（ＳＭＢ）、分取薄又は厚層クロマトグラフィー並びに小規模薄層及びフラッシュクロマトグラフィーを含む任意の数の方法を含み得る。
【０１６７】
別の種類の分離方法は、所望の生成物、未反応出発物質、反応副生成物等に結合するか又はそれらを他の分離可能な状態にするように選択された試薬による混合物の処理を含む。そのような試薬は、吸着剤又は吸収剤、例えば活性炭、分子篩、イオン交換媒体等を含む。あるいは、試薬は、塩基性物質の場合には酸、酸性物質の場合には塩基、結合試薬（例えば抗体）、結合タンパク質、選択的キレート（例えばクラウンエーテル）、液体／液体イオン抽出試薬（ＬＩＸ）等であり得る。適切な分離方法の選択は、関係する物質の性質、例えば蒸留及び昇華における沸点及び分子量、クロマトグラフィーにおける極性官能基の有無、多相抽出における酸性及び塩基性媒体中の物質の安定性によって決まる。
【０１６８】
ジアステレオマー混合物は、クロマトグラフィー及び／又は分別結晶などの当業者に周知の方法により、それらの物理的化学的相違に基づいて、個々のジアステレオマーに分離することができる。エナンチオマーは、適切な光学活性化合物（例えばキラルアルコール又はＭｏｓｈｅｒ酸塩化物などのキラル補助剤）との反応によりエナンチオマー混合物をジアステレオマー混合物に変換し、ジアステレオマーを分離し、個々のジアステレオマーを対応する純粋なエナンチオマーに変換（例えば加水分解）することにより分離することができる。また、本発明の化合物のいくつかは、アトロプ異性体（例えば置換ビアリール）であり得、本発明の一部であると考えられる。エナンチオマーは、キラルＨＰＬＣカラムの使用によっても分離することができる。
【０１６９】
その立体異性体を実質的に含まない単一の立体異性体、例えばエナンチオマーは、光学活性な分割剤を使用するジアステレオマーの形成などの方法を用いるラセミ混合物の分割により得ることができる(Eliel, E. and Wilen, S. 「Stereochemistry of Organic Compounds,」 John Wiley & Sons, Inc., New York, 1994; Lochmuller, C. H., (1975) J. Chromatogr., 113(3):283-302)。本発明のキラル化合物のラセミ混合物は、（１）キラル化合物によるイオン性ジアステレオマー塩の形成及び分別結晶又は他の方法による分離、（２）キラル誘導体化試薬によるジアステレオマー化合物の形成、ジアステレオマーの分離、及び純粋な立体異性体への変換、並びに（３）キラル条件下での実質的に純粋な又は濃縮された立体異性体の直接的分離を含む任意の適切な方法により分離及び単離することができる。「Drug Stereochemistry, Analytical Methods and Pharmacology」, Irving W. Wainer編., Marcel Dekker, Inc., New York (1993)を参照のこと。
【０１７０】
方法（１）の下で、ジアステレオマー塩は、ブルシン、キニーネ、エフェドリン、ストリキニーネ、a−メチル−b−フェニルエチルアミン（アンフェタミン）等の鏡像異性的に純粋なキラル塩基と、カルボン酸及びスルホン酸などの酸性官能基を有する不斉化合物との反応により形成され得る。ジアステレオマー塩は、分別結晶又はイオンクロマトグラフィーにより分離するよう誘導することができる。アミノ化合物の光学異性体の分離の場合、カンファースルホン酸、酒石酸、マンデル酸又は乳酸のようなキラルなカルボン酸又はスルホン酸の添加が、ジアステレオマー塩の形成をもたらし得る。
【０１７１】
別法として、方法（２）により、分割されるべき基質をキラル化合物の１つのエナンチオマーと反応させて、ジアステレオマーの対を形成する(E. and Wilen, S. 「Stereochemistry of Organic Compounds」, John Wiley & Sons, Inc., 1994, p. 322)。ジアステレオマー化合物は、不斉化合物を鏡像異性的に純粋なキラル誘導体化試薬、例えばメンチル誘導体と反応させることによって形成することができ、その後、ジアステレオマーを分離し、加水分解して、純粋な又は濃縮されたエナンチオマーを得ることができる。光学純度の決定方法は、ラセミ混合物のキラルエステル、例えばメンチルエステル（塩基の存在下での（−）クロロギ酸メンチル等）、又はＭｏｓｈｅｒエステルであるa−メトキシ−a−（トリフルオロメチル）フェニルアセテート(Jacob III.Chem., (1982) 47:4165）を作製すること、及び２つのアトロプ異性エナンチオマー又はジアステレオマーの存在に関して１Ｈ  ＮＭＲスペクトルを分析することを含む。アトロプ異性化合物の安定ジアステレオマーは、アトロプ異性ナフチル−イソキノリンの分離方法に従って、順相及び逆相クロマトグラフィーにより分離し、単離することができる（国際公開第９６／１５１１１号）。方法（３）により、２つのエナンチオマーのラセミ混合物は、キラル固定相を用いるクロマトグラフィーにより分離することができる(「Chiral Liquid Chromatography」 (1989) W. J. Lough, Ed., Chapman and Hall, New York; Okamoto, J. Chromatogr., (1990) 513:375-378)。濃縮又は精製されたエナンチオマーは、旋光及び円二色性など、不斉炭素原子を有する他のキラル分子を識別するために用いられる方法により識別することができる。
【実施例】
【０１７２】
実施例１  ４−［６−アミノ−５−（４−ヒドロキシフェニル）−４−メチル−３−ピリジル］フェノール  １
実施例５〜７の手順に従い、１を調製した。LCMS:(0-60, AB, 2 min), 0.927 min, MS = 293.1 [M + 1].  1H NMR (400 MHz, MeOD-d4) δ 9.55-9.37 (br, 2H), 8.14 (s, 1H), 7.08 (d, J = 8.4 Hz, 4H), 7.03(d, J = 8.8 Hz, 2H), 6.88 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 6.78 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 4.96 (br, 2H), 1.80(s, 3H).
【０１７３】
実施例２  ４−［６−アミノ−４−エチル−５−（４−ヒドロキシフェニル）−３−ピリジル］フェノール  ２
実施例５−７及び１５の手順に従い、２を調製した。LCMS:(5-95, AB, 1.5 min), 0.694 min, MS = 306.9 [M + 1].  1H NMR (400 MHz, MeOD-d4) δ 8.27 (s, 1H), 7.62 (s, 1H), 7.15-7.09 (m, 4H), 6.95 (d, J = 9.2 Hz,2H), 6.83 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 2.39 (q, 2H), 0.70 (t, J = 7.2 Hz, 3H)
【０１７４】
実施例３  ４−［６−アミノ−５−（４−ヒドロキシフェニル）−４−イソプロピル−３−ピリジル］フェノール  ３
実施例５〜７の手順に従い、３を調製した。LCMS:(10-80, AB, 2 min), 0.923 min, MS = 321.1 [M + 1].  1H NMR (400 MHz, MeOD-d4) δ 9.54-9.41 (br, 2H), 8.14 (s, 1H), 7.58 (s, 1H), 7.05-7.00 (m, 4H), 6.87 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 6.76 (d, J = 8.4 Hz,2H), 4.78 (s, 2H), 2.90-2.82 (m, 1 H), 0.78 (t, J = 7.2 Hz, 6H).
【０１７５】
実施例４  ４−［６−アミノ−５−（４−ヒドロキシフェニル）−４−メトキシ−３−ピリジル］フェノール  ４
実施例５〜７の手順に従い、４を調製した。1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9.50 (s, 1H), 9.39 (d, J = 13.4 Hz, 1H), 7.82 (s, 1H), 7.29 - 7.21 (m, 2H), 7.17 - 7.08 (m, 2H), 6.90 - 6.75 (m, 4H), 5.18 (s, 2H), 3.09 (s, 3H). M+H (m/z) 309
【０１７６】
実施例５  ４−［６−アミノ−５−（４−ヒドロキシフェニル）−４−（トリフルオロメチル）−３−ピリジル］フェノール  ５
2018508563.tif 000021
４−（トリフルオロメチル）ピリジン−２−アミン  ５ａ（１．０ｇ、６．１７ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（２０ｍＬ）溶液に、ＮＢＳ（２．３１ｇ、１２．９５ｍｍｏｌ）を室温で添加した。混合物を５５℃で一晩撹拌した後、水（５０ｍＬ）に注ぎ、ＤＣＭ（５０ｍＬ×３）で抽出した。合わせた有機層をブライン（５０ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、濃縮し、カラム（ＰＥ：ＥｔＯＡｃ＝５：１〜３：１）で精製し、３，５−ジブロモ−４−（トリフルオロメチル）ピリジン−２−アミン  ５ｂ（１．２ｇ、収率６１％）を得た。
【０１７７】
５ｂ（１００ｍｇ、０．３２ｍｍｏｌ）のジオキサン（１０ｍＬ）／Ｈ２Ｏ（２ｍＬ）溶液に、（４−ヒドロキシフェニル）ボロン酸（１０８ｍｇ、０．７８ｍｍｏｌ）、Ｎａ２ＣＯ３（３３１ｍｇ、３．１３ｍｍｏｌ）及びＰｄ（ＰＰｈ３）２Ｃｌ２（３２．９ｍｇ、０．０４７ｍｍｏｌ）を添加した。混合物を９０〜１００℃で３時間撹拌し、水（１０ｍＬ）に注いだ。得られた混合物をＥｔＯＡｃ（１０ｍＬ×２）で抽出した。合わせた有機層をブライン（１０ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、濃縮し、分取ＨＰＬＣで精製し、５（５８．４８ｍｇ、５４％）を得た。LCMS: (5-95, AB, 1.5 min), 0.718 min, MS = 346.8 [M + 1]; 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9.82-9.55 (br, 2H), 7.96(s, 1H), 7.13-7.10 (m, 4H), 6.91 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 6.81 (d, J = 8.8 Hz, 2H).
【０１７８】
実施例  ６  ４−［６−アミノ−５−（４−ヒドロキシフェニル）−４−プロピル−３−ピリジル］フェノール  ６
2018508563.tif 000022
４−プロピルピリジン−２−アミン  ６ａ（５００ｍｇ、３．６７ｍｍｏｌ）のＣＣｌ４（１０ｍＬ）溶液に、ＮＢＳ（１．３７ｇ、７．７１ｍｍｏｌ）を室温で添加した。混合物を室温で一晩撹拌した後、水（２０ｍＬ）に注ぎ、ＤＣＭ（２０ｍＬ×３）で抽出した。合わせた有機層をブライン（１０ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、濃縮し、カラム（ＰＥ：ＥｔＯＡｃ＝５：１〜３：１）で精製し、３，５−ジブロモ
−４−プロピルピリジン−２−アミン  ６ｂ（８００ｍｇ、収率７４％）を得た。
【０１７９】
６ｂ（１００ｍｇ、０．３４ｍｍｏｌ）のジオキサン（１０ｍＬ）／Ｈ２Ｏ（２ｍＬ）溶液に、（４−ヒドロキシフェニル）ボロン酸（１０３ｍｇ、０．７５ｍｍｏｌ）、Ｎａ２ＣＯ３（３６０ｍｇ、３．４ｍｍｏｌ）及びＰｄ（ＰＰｈ３）２Ｃｌ２（３５．８ｍｇ、０．０５１ｍｍｏｌ）を添加した。混合物を９０〜１００℃で３時間撹拌した後、水（１０ｍＬ）に注いだ。得られた混合物をＥｔＯＡｃ（１０ｍＬ×２）で抽出した。合わせた有機層を飽和ＮａＣｌ（１０ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、濃縮し、分取ＨＰＬＣで精製し、６（２２．７ｍｇ、２１％）を得た。LCMS:(5-95, AB, 1.5 min), 0.716 min, MS = 320.9 [M + 1].  1H NMR (400 MHz, MeOD-d4) δ 7.60 (s, 1H), 7.18-7.12 (m, 4H), 6.99-6.97 (m, 2H), 6.87-6.85 (m, 2H), 2.40-2.36 (m, 2H), 1.17-1.11 (m, 2H), 0.53-0.49 (t, J = 7.4Hz, 3H).
【０１８０】
実施例７  ４−［６−アミノ−４−エチル−５−（４−ヒドロキシフェニル）−３−ピリジル］−３−フルオロ−フェノール  ７
2018508563.tif 000023
４−エチルピリジン−２−アミン  ７ａ（１．０ｇ、８．１９ｍｍｏｌ）のＣＣｌ４（２０ｍＬ）溶液に、Ｎ−ブロモコハク酸イミド（ＮＢＳ、３．０６ｇ、１７．１９ｍｍｏｌ）を室温（ｒ．ｔ．）で添加した。混合物を一晩撹拌した後、水（５０ｍＬ）に注ぎ、ＤＣＭ（５０ｍＬ×３）で抽出した。合わせた有機層をブライン（５０ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、濃縮し、カラム（ＰＥ：ＥｔＯＡｃ＝５：１〜３：１）で精製し、３，５−ジブロモ−４−エチルピリジン−２−アミン  ７ｂ（１．５ｇ、収率６５．５％）を得た。
【０１８１】
７ｂ（６００ｍｇ、２．１４ｍｍｏｌ）のジオキサン（１０ｍＬ）／Ｈ２Ｏ（２ｍＬ），溶液に、（２−フルオロ−４−メトキシフェニル）ボロン酸（３２７．８ｍｇ、１．９３ｍｍｏｌ）、Ｎａ２ＣＯ３（６８１．４５ｍｇ、６．４３ｍｍｏｌ）及びＰｄ（ＰＰｈ３）２Ｃｌ２（１５０．４３ｍｇ、０．２１４ｍｍｏｌ）を添加した。その後、混合物を９０〜１００℃で３時間撹拌し、水（２０ｍＬ）に注いだ。混合物をＥｔＯＡｃ（５０ｍＬ×２）で抽出した。合わせた有機層を飽和ＮａＣｌ（３０ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、濃縮し、カラム（ＰＥ：ＥｔＯＡｃ＝３：１〜１：１）で精製し、３−ブロモ−４−エチル−５−（２−フルオロ−４−メトキシフェニル）ピリジン−２−アミン  ７ｃ（３００ｍｇ、収率６３％）を得た。
【０１８２】
７ｃ（３００ｍｇ、０．９２ｍｍｏｌ）のジオキサン（１０ｍＬ）／Ｈ２Ｏ（２ｍＬ）溶液に、（４−ヒドロキシフェニル）ボロン酸（１９１ｍｇ、１．３８ｍｍｏｌ）、Ｎａ２ＣＯ３（２９３ｍｇ、２．７７ｍｍｏｌ）及びＰｄ（ＰＰｈ３）２Ｃｌ２（６５ｍｇ、０．０９２ｍｍｏｌ）を添加した。混合物を９０〜１００℃で３時間撹拌した後、水（２０ｍＬ）に注いだ。混合物をＥｔＯＡｃ（５０ｍＬ×２）で抽出した。合わせた有機層をブライン（３０ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、濃縮し、カラム（ＰＥ：ＥｔＯＡｃ＝３：１〜１：１）で精製し、４−（２−アミノ−４−エチル−５−（２−フルオロ−４−メトキシフェニル）ピリジン−３−イル）フェノール  ７ｄ（２００ｍｇ、収率６４％）を得た。
【０１８３】
７ｄ（２００ｍｇ、０．５９ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（１０ｍＬ）溶液に、撹拌しながら０℃でＢＢｒ３（０．５ｍＬ）を滴下した。混合物を室温で２時間撹拌した後、メタノール（１０ｍＬ）の添加によりクエンチした。水酸化アンモニウムでｐＨを約７に調整した。残留物を分取ＨＰＬＣにより精製し、７（６４．２ｍｇ、３４％）を得た。LCMS: (5-95, AB, 1.5 min), 0.709 min, MS = 324.9 [M + 1]; 1H NMR (400 MHz, MeOD-d4) δ 7.66 (s, 1H), 7.17-7.12 (m, 3H), 7.00-6.97 (m, 2H), 6.72-6.70 (m, 1H), 6.65-6.61 (m, 1H), 2.35 (q, 2H), 0.73-0.70 (t, J = 7.6 Hz, 3H).
【０１８４】
実施例８  Ｎ−［３−［６−アミノ−４−エチル−５−（４−ヒドロキシフェニル）−３−ピリジル］フェニル］アセトアミド  ８
実施例５〜７の手順に従い、８を調製した。M+H (m/z) 348.
【０１８５】
実施例９  ４−［６−アミノ−４−シクロプロピル−５−（４−ヒドロキシフェニル）−３−ピリジル］フェノール  ９
2018508563.tif 000024
ジオキサン／水（２０ｍＬ／４ｍＬ）に４−ブロモピリジン−２−アミン  ９ａ（２．０ｇ、１１．６ｍｍｏｌ）、シクロプロピルボロン酸（１．５ｇ、１７．４ｍｍｏｌ）、Ｐｄ（ｄｐｐｆ）２Ｃｌ２（８５ｍｇ、０．１２ｍｍｏｌ）及びＫ２ＣＯ３（３．２ｇ、２３．２ｍｍｏｌ）を入れた混合物をＮ２下、９０℃で４時間撹拌した。室温に冷ました後、混合物をＥｔＯＡｃ（２００ｍＬ×３）で抽出し、ブライン（２００ｍＬ）で洗浄し、乾燥させ、濃縮し、カラムで精製して４−シクロプロピルピリジン−２−アミン  ９ｂを固体（６５０ｍｇ、収率４２％）として得た。LCMS: (0-60, AB, 2.0 min), 0.810 min, MS = 135.2 [M + 1]
【０１８６】
９ｂ（６５０ｍｇ、４．８ｍｍｏｌ）のＭｅＣＮ（２０ｍＬ）溶液に、ＮＢＳ（１．７１ｇ、９．６ｍｍｏｌ）を添加した。Ｎ２下、室温で４時間撹拌した後、混合物をＥｔＯＡｃ（１００ｍＬ×３）で抽出し、ブライン（２００ｍＬ）で洗浄し、乾燥させ、濃縮し、カラムで精製して３，５−ジブロモ−４−シクロプロピルピリジン−２−アミン  ９ｃを固体（１．０ｇ、収率７１％）として得た。LCMS: (0-60, AB, 2.0 min), 0.810 min, MS = 290.9 [M + 1]
【０１８７】
ジオキサン／水（５ｍＬ／１ｍＬ）に９ｃ（１００ｍｇ、０．３４ｍｍｏｌ）の溶液に、（４−ヒドロキシフェニル）ボロン酸（１００ｍｇ、０．６８ｍｍｏｌ）、Ｐｄ（ｄｐｐｆ）２Ｃｌ２（４０ｍｇ、０．０５ｍｍｏｌ）及びＫ２ＣＯ３（１４５ｍｇ、１．０３ｍｍｏｌ）を入れた溶液に。混合物をＮ２下で４時間、１００℃で撹拌した後、室温まで冷ました。混合物をＥｔＯＡｃ（２０ｍＬ×３）で抽出し、ブライン（２０ｍＬ）で洗浄し、乾燥させ、濃縮し、分取ＨＰＬＣで精製して９（３．３ｍｇ、収率：３％）を得た。LCMS: (5-95, AB, 1.5 min), 0.810 min, MS = 318.9 [M + 1].  1H NMR (400 MHz, Methanol-d4) δ 7.68 (s, 1H), 7.29 - 7.22 (m, 4H), 7.00 (d, J = 8.8, 2H), 6.88 (d, J = 8.8, 2H), 1.91 - 1.84 (m, 1H), 0.48 - 0.43 (m, 2H), 0.04 - 0.00 (m, 2H)
【０１８８】
実施例１０  ４−［６−アミノ−４−エチル−５−（２−フルオロ−４−メトキシ−フェニル）−３−ピリジル］フェノール  １０
実施例１１の手順に従い、１０を調製した。LCMS: (5-95, AB, 1.5 min), 0.744 min, MS = 338.8 [M + 1].  1H NMR (400 MHz, MeOD-d4) δ 7.67 (s, 1H), 7.28-7.18 (m, 3H), 6.99-6.87 (m, 4H), 3.88 (s, 3H), 2.50-2.38 (m, 2H), 0.74-0.71 (t, J = 7.4 Hz, 3H)
【０１８９】
実施例１１  ４−［６−アミノ−４−エチル−５−（２−フルオロ−４−メトキシ−フェニル）−３−ピリジル］フェノール  １１
2018508563.tif 000025
実施例７に従い、４−エチルピリジン−２−アミン  ７ａ（１．０ｇ、８．１９ｍｍｏｌ）のＣＣｌ４（２０ｍＬ）溶液に、ＮＢＳ（３．０６ｇ、１７．１９ｍｍｏｌ）を室温で添加した。混合物を一晩撹拌した後、水（５０ｍＬ）に注ぎ、ＤＣＭ（５０ｍＬ×３）で抽出した。合わせた有機層をブライン（５０ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、濃縮し、カラム（ＰＥ：ＥｔＯＡｃ＝５：１〜３：１）で精製し、３，５−ジブロモ−４−エチルピリジン−２−アミン  ７ｂ（１．６ｇ、収率７０％）を得た。
【０１９０】
７ｂ（１．６ｇ、５．７６ｍｍｏｌ）のジオキサン（１５ｍＬ）／Ｈ２Ｏ（３ｍＬ）溶液に、（４−ヒドロキシフェニル）ボロン酸（７０９ｍｇ、５．１４ｍｍｏｌ）、Ｎａ３ＣＯ３（１．８２ｇ、１７．０５ｍｍｏｌ）及びＰｄ（ＰＰｈ３）２Ｃｌ２（４０１ｍｇ、０．５７ｍｍｏｌ）を添加した。混合物を９０〜１００℃で３時間撹拌した後、水（２０ｍＬ）に注いだ。得られた混合物をＥｔＯＡｃ（５０ｍＬ×２）で抽出した。合わせた有機層を飽和ＮａＣｌ（３０ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、濃縮し、分取ＨＰＬＣで精製し、４−（６−アミノ−５−ブロモ−４−エチルピリジン−３−イル）フェノール  １１ａ（３８０ｍｇ、収率２２％）を得た。
【０１９１】
１１ａ（３８０ｍｇ、１．３ｍｍｏｌ）のジオキサン（４ｍＬ）／Ｈ２Ｏ（０．５ｍＬ），溶液に、（２−フルオロ−４−メトキシフェニル）ボロン酸（３３０ｍｇ、１．９４ｍｍｏｌ）、Ｎａ２ＣＯ３（４１２ｍｇ、３．８９ｍｍｏｌ）及びＰｄ（ＰＰｈ３）２Ｃｌ２（９１ｍｇ、０．０６１ｍｍｏｌ）を添加した。混合物をパージし、１２０℃で３０分間マイクロ波照射下で加熱した後、水（２０ｍＬ）に注いだ。得られた混合物をＥｔＯＡｃ（３０ｍＬ×２）で抽出した。合わせた有機層をブライン（２０ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、濃縮し、カラム（ＰＥ：ＥｔＯＡｃ＝３：１〜１：１）で精製し、４−［２−アミノ−４−エチル−５−（４−ヒドロキシフェニル）−３−ピリジル］−３−フルオロ−フェノール  １０（１５０ｍｇ、収率３４％）を得た。LCMS: (5-95, AB, 1.5 min), 0.744 min, MS = 338.8 [M + 1].  1H NMR (400 MHz, MeOD-d4) δ 7.67 (s, 1H), 7.28-7.18 (m, 3H), 6.99-6.87 (m, 4H), 3.88 (s, 3H), 2.50-2.38 (m, 2H), 0.74-0.71 (t, J = 7.4 Hz, 3H)
【０１９２】
１０（５０ｍｇ、０．１５ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（６ｍＬ）溶液に、撹拌しながら０℃でＢＢｒ３（０．３ｍＬ）を滴下した。混合物を室温で２時間撹拌した後、メタノール（１０ｍＬ）でクエンチした。ＮＨ３／Ｈ２Ｏ（水酸化アンモニウム）でｐＨを約７に調整した。残留物を分取ＨＰＬＣにより精製し、１１（２８ｍｇ、収率６０％）を得た。LCMS: (5-95, AB, 1.5 min), 0.702 min, MS = 324.8 [M + 1].  1H NMR (400 MHz, MeOD-d4) δ 7.65 (s, 1H), 7.20-7.12 (m, 3H), 6.89-6.71(m, 4H), 2.50-2.38 (m, 2H), 0.74-0.70 (t, J = 7.6 Hz, 3H)
【０１９３】
実施例１２  ４−［２−アミノ−５−［３−［（ジメチルアミノ）メチル］フェニル］−４−エチル−３−ピリジル］フェノール  １２
実施例５〜７の手順に従い、１２を調製した。1H NMR (400 MHz, DMSO-d6)  9.57 (s, 1H), 7.74 (s, 1H), 7.49 (d, J = 5.6 Hz, 3H),  7.08 - 7.01 (m, 2H), 6.94 - 6.86 (m, 2H), 5.07 (s, 2H), 4.21 (s, 2H), 2.64 (s, 6H), 0.62 (t, J = 7.4 Hz, 3H). M+H (m/z) 348
【０１９４】
実施例１３  Ｎ−［３−［６−アミノ−４−エチル−５−（２−チエニル）−３−ピリジル］フェニル］アセトアミド  １３
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実施例７に従い、４−エチルピリジン−２−アミン  ７ａ（４．０ｇ、３２．７ｍｍｏｌ）のＣＣｌ４（１００ｍＬ）溶液に、ＮＢＳ（１２．２ｇ、６８．８ｍｍｏｌ）を室温で添加した。混合物を室温で一晩撹拌した後、水（５０ｍＬ）に注ぎ、ＤＣＭ（１００ｍＬ×３）で抽出した。合わせた有機層をブライン（５０ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、濃縮し、カラム（ＰＥ：ＥｔＯＡｃ＝５：１〜３：１）で精製し、３，５−ジブロモ−４−エチルピリジン−２−アミン  ７ｂ（７．６ｇ、収率８３％）を得た。
【０１９５】
７ｂ（６．９ｇ、２４．７ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（１００ｍＬ）溶液に、ＤＭＡＰ（３．０１ｇ、２４．７ｍｍｏｌ）及び（Ｂｏｃ）２Ｏ（１６．１ｇ、７３．９ｍｍｏｌ）を添加した。混合物を室温で５時間撹拌した後、水（１００ｍＬ）に注いだ。それをＥｔＯＡｃ（１００ｍＬ×２）で抽出し、合わせた有機層をブライン（３０ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、濃縮し、カラム（ＰＥ：ＥｔＯＡｃ＝５０：１〜１０：１）で精製し、３，５−ジブロモ−４−エチルピリジン−２−（ビス−ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニルｌ）アミン  １３ａ（１０ｇ、収率８５％）を得た。
【０１９６】
１３ａ（６００ｍｇ、１．２５ｍｍｏｌ）のジオキサン（１０ｍＬ）／Ｈ２Ｏ（２ｍＬ）溶液に、（３−アセトアミドフェニル）ボロン酸１３ｂ（２２４ｍｇ、１．２５ｍｍｏｌ）、Ｎａ２ＣＯ３（３９７ｍｇ、３．７５ｍｍｏｌ）及びＰｄ（ＰＰｈ３）２Ｃｌ２（８７．７ｍｇ、０．１２ｍｍｏｌ）を添加した。混合液をＮ２下で３時間、９０〜１００℃で撹拌し、水（１０ｍＬ）に注ぎ、ＥｔＯＡｃ（２０ｍＬ×２）で抽出した。合わせた有機層をブライン（１０ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、濃縮し、カラム（ＰＥ：ＥｔＯＡｃ＝３：１〜１：１）で精製し、Ｎ−（３−（６−（ビス−ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニル）アミノ−５−ブロモ−４−エチルピリジン−３−イル）フェニル）アセトアミド  １３ｃ（３７０ｍｇ、収率５５％）を得た。
【０１９７】
１３ｃ（３７０ｍｇ、０．６９ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（１０ｍＬ）溶液に、ＨＣｌ−ＥｔＯＡｃ（５ｍＬ）を室温で添加した。混合物を室温で１時間撹拌した後、濃縮し、粗Ｎ−（３−（６−アミノ−５−ブロモ−４−エチルピリジン−３−イル）フェニル）アセトアミド  １３ｄを得、それを次の工程でそのまま使用した（２００ｍｇ、８７％）。
【０１９８】
１３ｄ（１００ｍｇ、０．３ｍｍｏｌ）のジオキサン／Ｈ２Ｏ（３ｍＬ）溶液に、チオフェン−２−イルボロン酸  １３ｅ（７６．６ｍｇ、０．６ｍｍｏｌ）、Ｎａ２ＣＯ３（１５９、１．５ｍｍｏｌ）、ＰｄＣｌ２（ＰＰｈ３）２（２１ｍｇ、０．０３ｍｍｏｌ）を室温で添加した。それをパージし、マイクロ波照射下、１２０℃で３０分間加熱した。反応混合物を水（１０ｍＬ）に注ぎ、ＥｔＯＡｃ（１５ｍＬ×３）で抽出した。合わせた有機層をブライン（１０ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、濃縮し、分取ＨＰＬＣで精製し、１３（２３ｍｇ、収率２４％）を得た。LCMS: (5-95, AB, 1.5 min), 0.735 min, MS = 337.8 [M + 1].  1H NMR (400 MHz, MeOD-d4) δ 7.75-7.73 (m, 3H), 7.53-7.50 (m, 1H), 7.44-7.40(m, 1H), 7.28-7.26 (m, 1H), 7.20-7.19 (m, 1H), 7.12-7.10 (m, 1H), 2.56-2.51 (m, 2H), 2.13 (s, 3H), 0.82 (t, J = 7.6 Hz, 3H).
【０１９９】
実施例１４  Ｎ−［３−［６−アミノ−４−エチル−５−（１Ｈ−インダゾール−６−イル）−３−ピリジル］フェニル］アセトアミド  １４
実施例１３の手順に従い、１４を調製した。LCMS: (5-95, AB, 1.5 min), 0.731 min, MS = 371.9 [M + 1].  1H NMR (400 MHz, MeOD-d4) δ 8.21 (s, 1H), 8.02 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.83(s, 1H), 7.76 (s, 1H), 7.61 (s, 1H), 7.48-7.41 (m, 2H), 7.15-7.10 (m, 2H), 2.51-2.44 (m, 2H), 2.14 (s, 3H), 0.75 (t, J = 7.6 Hz, 3H)
【０２００】
実施例１５  ４−［４−エチル−５−（４−ヒドロキシフェニル）−６−（プロピルアミノ）−３−ピリジル］フェノール  １５
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３，５−ジブロモ−４−エチルピリジン−２−アミン  ７ｂ（６００ｍｇ、２．１４ｍｍｏｌ）のジオキサン／Ｈ２Ｏ（１５ｍＬ／５ｍＬ）溶液に、（４−ヒドロキシフェニル）ボロン酸（６２１ｍｇ、４．５０ｍｍｏｌ）、Ｎａ１５ＣＯ３（１．８０ｇ、１７．２ｍｍｏｌ）及びＰｄ（ＰＰｈ３）２Ｃｌ２（１５０ｍｇ、０．２１ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を１００℃で５時間、Ｎ２下で撹拌した後、濃縮し、水に注いだ。それをＥｔＯＡｃ（２０ｍＬ×３）で抽出した。有機層をエバポレートし、シリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製し（ＰＥ：ＥｔＯＡｃ＝３：１）、４−［６−アミノ−４−エチル−５−（４−ヒドロキシフェニル）−３−ピリジル］フェノール  ２（４５０ｍｇ、収率：６９％）を得た。
【０２０１】
３（５０ｍｇ、０．１６ｍｍｏｌ）のＤＣＥ（３．０ｍＬ）溶液に、プロピオンアルデヒド（１０．４ｍｇ、０．１７９ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を４０℃で１６時間撹拌し、ＮａＢＨ（ＯＡｃ）３（６９．１８ｍｇ、０．３２６ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を４０℃で０．５時間撹拌し、濃縮し、分取ＨＰＬＣで精製し、１５（３．０ｍｇ、収率：５％）を得た。LCMS: (5-95, AB, 1.5 min), 0.753 min, MS = 348.9 [M + 1].1H NMR (400 MHz, Methanol-d4) δ 7.53 (s, 1H),7.20 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 7.19 (d, J = 8.4Hz, 2H), 7.01 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 6.89 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 3.31-3.29 (m, 2H), 2.45-2.39 (m, 2H), 1.64-1.59 (m, 2H), 0.96-0.92 (t, J = 5.2 Hz, 3H), 0.74-0.70 (t, J = 7.6Hz, 3H)
【０２０２】
実施例１６  ４−（６−アミノ−４−エチル−５−フェニル−３−ピリジル）フェノール  １６
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４−エチル−ピリジン−２−アミン  ７ａ（１０ｇ、８２ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（３００ｍｌ）溶液を０℃に冷却し、Ｎ−ブロモコハク酸イミド（１４．７ｇ、８２ｍｍｏｌ）を入れた。その後、混合物を０℃でさらに１５分間撹拌した。その後、混合物を濃縮し、残留物をシリカゲルクロマトグラフィー（ＤＣＭ中０〜５％ＭｅＯＨ）で精製し、５−ブロモ−４−エチルピリジン−２−アミン  １６ａ（１２ｇ、収率７２％）を得た。M+H(m/z) = 201
【０２０３】
１６ａ（１．０ｇ、５．０ｍｍｏｌ）のアセトニトリル（１２ｍｌ）溶液に、４−メトキシ−ボロン酸（９０７ｍｇ、６．０ｍｍｏｌ）、ビス（ジフェニルホスフィノ）フェロセン］ジクロロパラジウム（ＩＩ）（３６４ｍｇ、０．５ｍｍｏｌ）及び炭酸カリウム（１Ｍ、１２ｍｌ）を入れた。その後、混合物を１２０℃で５分間加熱した。その後、混合物を酢酸エチルと水で希釈した。層を水層と有機層に分離し、水で一度洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、濾過し、減圧中で濃縮した。その後、残留物をシリカゲルクロマトグラフィー（ＤＣＭ中１〜１５％ＭｅＯＨ）で精製し、４−エチル−５−（４−メトキシフェニル）ピリジン−２−アミン  １６ｂ（９００ｍｇ、３．９ｍｍｏｌ）を得た。M+H (m/z) = 229
【０２０４】
１６ｂ（９．５ｇ、４２ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（１００ｍｌ）溶液に、Ｎ−ブロモコハク酸イミド（７．５ｇ、４２ｍｍｏｌ）を入れ、室温で１５分間撹拌した。その後、混合物を減圧中で濃縮し、残留物をシリカゲルクロマトグラフィー（ＤＣＭ中０〜５％ＭｅＯＨ）で精製し、３−ブロモ−２−エチル−４’−メトキシビフェニル−４−アミン  １６ｃ（８．６ｇ、収率６７％）を得た。M+H (m/z) = 306
【０２０５】
１６ｃ（６．６ｇ、２１ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（４０ｍｌ）溶液に、三臭化ホウ素のＤＣＭ溶液（１Ｍ、６４ｍｌ）を入れた。室温で１５分間撹拌後、混合物を０℃に冷却し、飽和炭酸ナトリウム（１００ｍｌ）を入れた。層を分離し、有機層をＭｇ２ＳＯ４上で乾燥させ、濾過し、減圧中で濃縮し、４−（６−アミノ−５−ブロモ−４−エチルピリジン−３−イル）フェノール  １６ｄ（５．７ｇ、収率９０％）を得た。M+H (m/z) = 293
【０２０６】
１６ｄ（５９ｍｇ、０．２ｍｍｏｌ）の１，４−ジオキサン（０．５ｍｌ）溶液に、フェニルボロン酸
（３６ｍｇ、０．３ｍｍｏｌ）、ビス（ジフェニルホスフィノ）フェロセン］ジクロロパラジウム（ＩＩ）（１４ｍｇ、０．０２ｍｍｏｌ）及びＫ２ＣＯ３（１Ｍ、０．５ｍｌ）を入れた。その後、混合物を１２０℃で５分間加熱した。その後、混合物を酢酸エチルと水で希釈した。層を分離し、有機層を水で一度洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、濾過し、減圧中で濃縮した。その後、残留物を精製し、逆相分取ＨＰＬＣで精製し、１６（２９ｍｇ、収率５０％）を得た。1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9.39 (s, 1H), 7.70 (s, 1H), 7.56 - 7.46 (m, 2H), 7.46 - 7.35 (m, 1H), 7.30 - 7.22 (m, 2H), 7.14 - 7.06 (m, 2H), 6.84 - 6.75 (m, 2H), 4.90 (s, 2H), 2.22 (q, J = 7.5 Hz, 2H), 0.61 (t, J = 7.4 Hz, 3H).M+H (m/z) = 291.
【０２０７】
実施例１７  ４−［６−アミノ−４−エチル−５−（ｍ−トリル）−３−ピリジル］フェノール  １７
実施例１６の手順に従い、１７を調製した。1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9.39 (s, 1H), 7.69 (s, 1H), 7.39 (t, J = 7.6 Hz, 1H), 7.26 - 7.18 (m, 1H), 7.14 - 7.01 (m, 4H), 6.84 - 6.75 (m, 2H), 4.89 (s, 2H), 2.36 (s, 3H), 2.28 - 2.17 (m, 2H), 0.62 (t, J= 7.5 Hz, 3H).M+H (m/z) 305
【０２０８】
実施例１８  ４−［６−アミノ−５−（３，４−ジフルオロフェニル）−４−エチル−３−ピリジル］フェノール  １８
実施例１６の手順に従い、１８を調製した。1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9.40 (s, 1H), 7.70 (s, 1H), 7.53 (dt, J = 10.9, 8.5 Hz, 1H), 7.36 (ddd, J = 11.4, 7.9, 2.1 Hz, 1H), 7.14 - 7.04 (m, 3H), 6.84 - 6.75 (m, 2H), 5.17 (s, 2H), 2.22 (q, J = 7.5 Hz, 2H), 0.63 (t, J = 7.4 Hz, 3H).M+H (m/z) 327
【０２０９】
実施例１９  ３−［２−アミノ−４−エチル−５−（４−ヒドロキシフェニル）−３−ピリジル］ベンゾニトリル  １９
実施例１６の手順に従い、１９を調製した。1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9.40 (s, 1H), 7.87 (dt, J = 7.8, 1.4 Hz, 1H), 7.77 - 7.63 (m, 3H), 7.60 (dt, J = 7.8, 1.5 Hz, 1H), 7.14 - 7.05 (m, 2H), 6.85 - 6.76 (m, 2H), 5.16 (s, 2H), 2.18 (q, J = 7.5 Hz, 2H), 0.60 (t, J = 7.4 Hz, 3H).M+H (m/z) 316
【０２１０】
実施例２０  ４−［６−アミノ−４−エチル−５−（４−メチルスルホニルフェニル）−３−ピリジル］フェノール  ２０
実施例１６の手順に従い、２０を調製した。1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9.41 (s, 1H), 8.03 (d, J = 8.3 Hz, 2H), 7.74 (s, 1H), 7.55 (d, J = 8.3 Hz, 2H), 7.10 (d, J = 8.5 Hz, 2H), 6.84 - 6.77 (m, 2H), 5.11 (d, J = 5.3 Hz, 2H), 2.21 (q, J = 7.5 Hz, 2H), 0.62 (t, J = 7.5 Hz, 3H).M+H (m/z) 369
【０２１１】
実施例２１  ｔｅｒｔ−ブチル  Ｎ−［４−［２−アミノ−４−エチル−５−（４−ヒドロキシフェニル）−３−ピリジル］フェニル］カルバメート  ２１
実施例１６の手順に従い、２１を調製した。1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9.44 (s, 1H), 9.38 (s, 1H), 7.67 (s, 1H), 7.61 - 7.41 (m, 3H), 7.17 - 7.04 (m, 4H), 6.79 (d, J = 8.5 Hz, 2H), 4.90 (s, 2H), 3.27 (s, 1H), 2.23 (q, J = 7.4 Hz, 2H), 1.48 (d, J = 8.3 Hz, 9H), 0.61 (t, J = 7.4 Hz, 3H).M+H (m/z) 406
【０２１２】
実施例２２  ４−［６−アミノ−４−エチル−５−（３−モルホリノフェニル）−３−ピリジル］フェノール  ２２
実施例１６の手順に従い、２２を調製した。1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9.38 (s, 1H), 7.68 (s, 1H), 7.35 (dd, J = 8.4, 7.4 Hz, 1H), 7.13 - 7.06 (m, 2H), 6.97 (dd, J = 8.4, 2.2 Hz, 1H), 6.85 - 6.75 (m, 3H), 6.68 (dt, J = 7.4, 1.1 Hz, 1H), 4.89 (s, 2H), 3.73 (t, J = 4.8 Hz, 5H), 3.21 - 3.05 (m, 3H), 2.32 - 2.18 (m, 2H), 0.64 (t, J = 7.4 Hz, 3H).M+H (m/z) 376
【０２１３】
実施例２３  ｔｅｒｔ−ブチル  Ｎ−［［３−［２−アミノ−４−エチル−５−（４−ヒドロキシフェニル）−３−ピリジル］フェニル］メチル］カルバメート  ２３
実施例１６の手順に従い、２３を調製した。1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9.39 (s, 1H), 7.69 (s, 1H), 7.45 (t, J = 7.5 Hz, 1H), 7.36 (s, 1H), 7.33 - 7.19 (m, 1H), 7.16 - 7.05 (m, 4H), 6.80 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 4.91 (s, 2H), 4.18 (d, J = 6.0 Hz, 2H), 2.22 (q, J = 7.3 Hz, 2H), 1.37 (s, 9H), 0.61 (t, J = 7.4 Hz, 3H).M+H (m/z) 421
【０２１４】
実施例２４  ４−［６−アミノ−４−エチル−５−［３−（メトキシメチル）フェニル］−３−ピリジル］フェノール  ２４
実施例１６の手順に従い、２４を調製した。1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9.39 (s, 1H), 7.70 (s, 1H), 7.49 (t, J = 7.9 Hz, 1H), 7.36 (dt, J = 7.6, 1.4 Hz, 1H), 7.19 (s, 1H), 7.22 - 7.15 (m, 1H), 7.14 - 7.06 (m, 2H), 6.84 - 6.75 (m, 2H), 4.90 (s, 2H), 4.47 (s, 2H), 3.29 (d, J = 13.5 Hz, 3H), 2.22 (qd, J = 7.5, 1.9 Hz, 2H), 0.61 (t, J = 7.5 Hz, 3H).M+H (m/z) 335
【０２１５】
実施例２５  ４−［６−アミノ−４−エチル−５−［４−（メトキシメチル）フェニル］−３−ピリジル］フェノール  ２５
実施例１６の手順に従い、２５を調製した。1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9.39 (s, 1H), 7.69 (s, 1H), 7.44 (d, J = 8.1 Hz, 2H), 7.24 (d, J = 8.0 Hz, 2H), 7.10 (d, J = 8.5 Hz, 2H), 6.83 - 6.76 (m, 2H), 4.90 (s, 2H), 4.48 (s, 2H), 3.31 (d, J = 27.5 Hz, 3H), 2.22 (q, J = 7.4 Hz, 2H), 0.61 (t, J = 7.5 Hz, 3H).M+H (m/z) 335
【０２１６】
実施例２６  ４−［６−アミノ−４−エチル−５−［３−（モルホリノメチル）フェニル］−３−ピリジル］フェノール  ２６
実施例１６の手順に従い、２６を調製した。1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9.39 (s, 1H), 7.70 (s, 1H), 7.46 (t, J = 7.5 Hz, 1H), 7.34 (dt, J = 7.7, 1.4 Hz, 1H), 7.22 - 7.05 (m, 4H), 6.83 - 6.76 (m, 2H), 4.91 (s, 2H), 3.60 - 3.46 (m, 6H),2.37 (t, J = 4.5 Hz, 2H), 2.21 (dt, J = 8.2, 6.4 Hz, 2H), 0.60 (t, J = 7.4 Hz, 3H).M+H (m/z) 390
【０２１７】
実施例２７  ２−［３−［２−アミノ−４−エチル−５−（４−ヒドロキシフェニル）−３−ピリジル］フェニル］アセトニトリル  ２７
実施例１６の手順に従い、２７を調製した。1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9.40 (s, 1H), 7.71 (s, 1H), 7.54 (t, J = 7.8 Hz, 1H), 7.40 (dt, J = 7.6, 1.3 Hz, 1H), 7.23 (dq, J = 4.2, 1.5 Hz, 2H), 7.14 - 7.07 (m, 2H), 6.84 - 6.76 (m, 2H), 4.97 (s, 2H), 4.10 (s, 2H), 2.21 (q, J = 7.5 Hz, 2H), 0.62 (t, J = 7.4 Hz, 3H).M+H (m/z) 330
【０２１８】
実施例２８  ｔｅｒｔ−ブチル  Ｎ−［４−［２−アミノ−４−エチル−５−（４−ヒドロキシフェニル）−３−ピリジル］フェニル］−Ｎ−メチル−カルバメート  ２８
実施例１６の手順に従い、２８を調製した。1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9.39 (s, 1H), 7.70 (s, 1H), 7.53 (s, 2H), 7.41 (d, J = 8.0 Hz, 2H), 7.10 (d, J = 8.0 Hz, 2H), 6.80 (d, J = 8.0 Hz, 2H), 4.92 (s, 2H), 3.26 (d, J = 12.4 Hz, 3H), 2.27 - 2.19 (m, 2H), 1.41 (s, 9H), 0.62 (t, J = 7.4 Hz, 3H).M+H (m/z) 421
【０２１９】
実施例２９  ５−［２−アミノ−４−エチル−５−（４−ヒドロキシフェニル）−３−ピリジル］ピリジン−３−カルボニトリル  ２９
実施例１６の手順に従い、２９を調製した。1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9.42 (s, 1H), 9.04 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 8.73 (d, J = 2.1 Hz, 1H), 8.33 - 8.27 (m, 1H), 7.76 (s, 1H), 7.14 - 7.05 (m, 2H), 6.85 - 6.76 (m, 2H), 5.43 (s, 2H), 2.17 (q, J = 7.5 Hz, 2H), 0.61 (t, J = 7.5 Hz, 3H).M+H (m/z) 317
【０２２０】
実施例３０  Ｎ−［４−［２−アミノ−４−エチル−５−（４−ヒドロキシフェニル）−３−ピリジル］フェニル］メタンスルホンアミド  ３０
実施例１６の手順に従い、３０を調製した。1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9.81 (s, 1H), 9.39 (s, 1H), 7.68 (s, 1H), 7.32 (d, J = 8.6 Hz, 2H), 7.26 - 7.18 (m, 2H), 7.12 - 7.05 (m, 2H), 6.83 - 6.76 (m, 2H), 4.99 (s, 2H), 3.04 (s, 3H), 2.23 (q, J = 7.3 Hz, 2H), 0.62 (t, J = 7.5 Hz, 3H).M+H (m/z) 384
【０２２１】
実施例３１  ｔｅｒｔ−ブチル  Ｎ−［３−［２−アミノ−４−エチル−５−（４−ヒドロキシフェニル）−３−ピリジル］フェニル］カルバメート  ３１
実施例１６の手順に従い、３１を調製した。1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9.41 (d, J = 17.0 Hz, 2H), 7.69 (s, 1H), 7.60 - 7.44 (m, 2H), 7.50 (s, 2H), 7.10 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 6.82 (dd, J = 18.5, 8.0 Hz, 2H), 4.92 (s, 2H), 2.22 (q, J = 7.4 Hz, 2H), 1.47 (s, 9H), 0.64 (t, J = 7.5 Hz, 3H).M+H (m/z) 406
【０２２２】
実施例３２  ４−（２−アミノ−４−エチル−５−ピリミジン−５−イル−３−ピリジル）フェノール  ３２
実施例８９の手順に従い、３２を調製した。1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9.51 (s, 1H), 7.59 (s, 1H), 7.33 - 7.17 (m, 3H), 7.18 - 7.05 (m, 2H), 7.05 (dt, J = 9.2, 2.0 Hz, 2H), 6.92 - 6.85 (m, 2H), 4.93 (s, 2H), 3.27 (s, 3H), 2.07 (s, 3H), 1.99 - 1.85 (m, 1H), 0.55 (t, J = 7.5 Hz, 3H).M+H (m/z) 293
【０２２３】
実施例３３  ４−［２−アミノ−４−エチル−５−（ｏ−トリル）−３−ピリジル］フェノール  ３３
実施例８９の手順に従い、３３を調製した。1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9.51 (s, 1H), 7.59 (s, 1H), 7.33 - 7.17 (m, 3H), 7.18 - 7.05 (m, 2H), 7.05 (dt, J = 9.2, 2.0 Hz, 2H), 6.92 - 6.85 (m, 2H), 4.93 (s, 2H), 3.27 (s, 3H), 2.07 (s, 3H), 0.55 (t, J = 7.5 Hz, 3H).M+H (m/z) 305
【０２２４】
実施例３４  ４−［２−アミノ−４−エチル−５−（４−フルオロフェニル）−３−ピリジル］フェノール  ３４
実施例８９の手順に従い、３４を調製した。1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9.52 (s, 1H), 7.69 (s, 1H), 7.39 - 7.30 (m, 2H), 7.28 - 7.18 (m, 2H), 7.09 - 7.01 (m, 2H), 6.92 - 6.85 (m, 2H), 4.99 (s, 2H), 3.27 (s, 2H), 2.23 (q, J = 7.4 Hz, 2H), 0.61 (t, J = 7.5 Hz, 3H).M+H (m/z) 309
【０２２５】
実施例３５  ４−［２−アミノ−４−エチル−５−（６−メチル−３−ピリジル）−３−ピリジル］フェノール  ３５
実施例８９の手順に従い、３５を調製した。1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9.52 (s, 1H), 8.38 (d, J = 2.2 Hz, 1H), 7.70 (s, 1H), 7.64 (dd, J = 7.9, 2.4 Hz, 1H), 7.29 (d, J = 7.9 Hz, 1H), 7.11 - 7.01 (m, 2H), 6.93 - 6.84 (m, 2H), 5.05 (s, 2H), 3.27 (s, 3H), 2.23 (q, J = 7.4 Hz, 2H), 0.61 (t, J = 7.4 Hz, 3H).M+H (m/z) 306
【０２２６】
実施例３６  ４−［２−アミノ−４−エチル−５−（ｐ−トリル）−３−ピリジル］フェノール  ３６
実施例８９の手順に従い、３６を調製した。1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9.51 (s, 1H), 7.67 (s, 1H), 7.26 - 7.11 (m, 4H), 7.13 - 7.01 (m, 2H), 6.92 - 6.84 (m, 2H), 4.97 (s, 2H), 3.27 (s, 1H), 2.34 (s, 3H), 2.25 (q, J = 7.4 Hz, 2H), 0.61 (t, J = 7.4 Hz, 3H).M+H (m/z) 305
【０２２７】
実施例３７  ４−（２−アミノ−４−エチル−５−フェニル−３−ピリジル）フェノール  ３７
実施例８９の手順に従い、３７を調製した。1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9.52 (s, 1H), 7.70 (s, 1H), 7.46 - 7.27 (m, 5H), 7.06 (d, J = 8.5 Hz, 2H), 6.92 - 6.85 (m, 2H), 5.01 (s, 2H), 3.27 (s, 2H), 2.26 (q, J = 7.5 Hz, 2H), 0.61 (t, J = 7.4 Hz, 3H).M+H (m/z) 291
【０２２８】
実施例３８  ４−［２−アミノ−４−エチル−５−（４−ピリジル）−３−ピリジル］フェノール  ３８
実施例８９の手順に従い、３８を調製した。1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9.52 (d, J = 12.2 Hz, 1H), 8.62 - 8.56 (m, 1H), 7.75 (s, 1H), 7.40 - 7.33 (m, 1H), 7.13 - 6.95 (m, 2H), 6.93 - 6.77 (m, 2H), 5.16 (s, 2H), 2.25 (dq, J = 32.3, 7.5 Hz, 2H), 0.95 (t, J = 7.5 Hz, 1H), 0.63 (t, J = 7.5 Hz, 3H).M+H (m/z) 292
【０２２９】
実施例３９  ４−［２−アミノ−４−エチル−５−（３−ピリジル）−３−ピリジル］フェノール  ３９
実施例８９の手順に従い、３９を調製した。M+H (m/z) 292
【０２３０】
実施例４０  ４−［６−（シクロプロピルメチルアミノ）−４−エチル−５−（４−ヒドロキシフェニル）−３−ピリジル］フェノール  ４０
2018508563.tif 000029
４−［６−アミノ−４−エチル−５−（４−ヒドロキシフェニル）−３−ピリジル］フェノール  ２（５０ｍｇ、０．１６３ｍｍｏｌ）のＤＣＥ（３．０ｍＬ）撹拌溶液に、シクロプロパンカルバルデヒド（２２．９ｍｇ、０．３６ｍｍｏｌ）を添加した。混合物を４０℃で１６時間撹拌した後、ＮａＢＨ（ＯＡｃ）３（６９．２ｍｇ、０．３３ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を４０℃で０．５時間撹拌した後、濃縮し、分取ＨＰＬＣで精製し、４０（７．１ｍｇ、収率：１２％）を得た。LCMS: (5-95, AB, 1.5 min), 0.747 min, MS = 360.9 [M + 1].1H NMR (400 MHz, Methanol-d4) δ 7.54 (s, 1H), 7.20-7.13 (m, 4H), 7.01 (d, J = 8.4Hz, 2H), 6.88 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 3.24 (d, J = 6.8 Hz, 2H), 2.46-2.40 (m, 2H), 1.14-1.11 (m, 1H), 0.74-0.70 (t, J = 7.6Hz, 3H), 0.57-0.52 (m, 2H), 0.27-0.25 (m, 2H)
【０２３１】
実施例４１  Ｎ−［３−［２−アミノ−４−エチル−５−（４−ヒドロキシフェニル）−３−ピリジル］フェニル］メタンスルホンアミド  ４１
実施例１６の手順に従い、４１を調製した。1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9.80 (s, 1H), 9.37 (d, J = 13.9 Hz, 1H), 7.70 (s, 1H), 7.46 (t, J = 7.9 Hz, 2H), 7.25 (ddd, J = 8.2, 2.4, 1.0 Hz, 2H), 7.18 - 6.95 (m, 2H), 6.79 (dd, J = 8.5, 6.5 Hz, 2H), 5.73 (d, J = 14.3 Hz, 1H), 3.00 (d, J = 4.6 Hz, 3H), 2.22 (q, J = 7.5 Hz, 2H), 0.73 - 0.59 (m, 3H).M+H (m/z) 384
【０２３２】
実施例４２  ４−［２−アミノ−４−エチル−５−（３−ピペラジン−１−イルフェニル）−３−ピリジル］フェノール  ４２
2018508563.tif 000030
ｎ−ＢｕＯＨ（６０ｍＬ）に３−ブロモアニリン  ４２ａ（５．０ｇ、２８．０ｍｍｏｌ）及びビス（クロロメチル）アミン塩酸塩（４．８２ｇ、２８．０１ｍｍｏｌ）を入れた混合物を１１８℃で４８時間加熱した。２５℃に冷ました後、１−（３−ブロモフェニル）ピペラジン  ４２ｂを含む反応混合物を次の工程でそのまま使用した。LCMS: (5-95, AB, 1.5 min), 0.608 min, MS = 240.7 [M + 1]
【０２３３】
４２ｂ（６．２５ｇ、２５．９ｍｍｏｌ）のＴＨＦ−Ｈ２Ｏ（１：１、４０ｍＬ）溶液に、Ｎａ２ＣＯ３を塩基性になるまで添加した。Ｂｏｃ２Ｏ（６．７９ｇ、３１．１ｍｍｏｌ）を添加し、反応混合物を２５℃で１０時間撹拌した。水（１５ｍＬ）を反応混合物に加え、ＥｔＯＡｃ（３×２０ｍＬ）で抽出し、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、カラム（ＰＥ：ＥｔＯＡｃ＝３０：１）で精製し、ｔｅｒｔ−ブチル  ４−（３−ブロモフェニル）ピペラジン−１−カルボキシレート  ４２ｃ（１．９４ｇ、収率：２１．９％）を得た。
【０２３４】
４２ｃ（０．９４ｇ、２．７５ｍｍｏｌ）のジオキサン（３０ｍＬ）溶液に、４，４，４’，４’，５，５，５’，５’−オクタメチル−２，２’−ビ（１，３，２−ジオキサボロラン）（１．４０ｇ、５．５１ｍｍｏｌ）、ＫＯＡｃ（８１１ｍｇ、８．２６ｍｍｏｌ）、Ｐｄ（ｄｐｐｆ）Ｃｌ２（０．２７ｍｍｏｌ）及びジオキサン（１５ｍＬ）を加えた。反応系をパージし、１１０℃で５時間撹拌した。反応混合物を２５℃に冷まし、水（１５ｍＬ）に注ぎ、ＥｔＯＡｃ（２０ｍＬ×３）で抽出した。有機層をＮａ２ＳＯ４上で乾燥させ、濃縮し、カラム（ＰＥ：ＥｔＯＡｃ＝１５：１〜１０：１）で精製し、ｔｅｒｔ−ブチル  ４−（３−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラン−２−イル）フェニル）ピペラジン−１−カルボキシレート  ４２ｄ（０．８９ｇ、収率：８３．２％）を得た。LCMS: (5-95, AB, 1.5 min), 1.015 min, MS = 388.8 [M + 1]
【０２３５】
４２ｄ（４００ｍｇ、１．０３ｍｍｏｌ）のジオキサン−Ｈ２Ｏ（５ｍＬ）溶液に、ｔｅｒｔ−ブチル  （３，５−ジブロモ−４−エチルピリジン−２−イル）カルバメート  ４２ｅ（３９１ｍｇ、１．０ｍｍｏｌ）、Ｋ２ＣＯ３（４２７ｍｇ、３．０９ｍｍｏｌ）及びＰｄ（ｄｐｐｆ）Ｃｌ２（４５ｍｇ）を加えた。反応混合物をＮ２でパージし、マイクロ波照射下、１２０℃で５０分間加熱した。反応混合物を２５℃に冷まし、その後水（１５ｍＬ）に注いだ。それをＥｔＯＡｃ（３×２０ｍＬ）で抽出し、有機層をＮａ２ＳＯ４上で乾燥させ、それを濃縮し、カラム（ＰＥ：ＥｔＯＡｃ＝２０：１〜５：１）で精製し、ｔｅｒｔ−ブチル  ４−（３−（５−ブロモ−６−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）−４−エチルピリジン−３−イル）フェニル）ピペラジン−１−カルボキシレート  ４２ｆ（２５０ｍｇ、収率：４３．２％）を得た。
【０２３６】
ＥｔＯＡｃ（５ｍＬ）に４２ｆ（２５０ｍｇ、０．４４５ｍｍｏｌ）を入れた混合物に、ＨＣｌ／ＥｔＯＡｃ（１０ｍＬ）を加え、２５℃で３時間撹拌した。それを濃縮し、３−ブロモ−４−エチル−５−（３−（ピペラジン−１−イル）フェニル）ピリジン−２−アミン４２ｇを得、それを次の工程でそのまま使用した。LCMS: (5-95, AB, 1.5 min), 0.673 min, MS = 362.7 [M + 1]
【０２３７】
４２ｇ（１４０ｍｇ、０．３８７ｍｏｌ）のジオキサン−Ｈ２Ｏ（５：１、２．５ｍＬ）溶液に、（４−ヒドロキシフェニル）ボロン酸（５３ｍｇ、０．３８７ｍｍｏｌ）、Ｎａ２ＣＯ３（２０５ｍｇ、１．９４ｍｍｏｌ）及びＰｄ（ｄｐｐｆ）Ｃｌ２（３５ｍｇ）を加えた。混合物を窒素でパージし、マイクロ波照射下、１２０℃で５０分間加熱した。混合物を２５℃に冷まし、水（２０ｍＬ）に添加した。それをＥｔＯＡｃ（３０ｍＬ×３）で抽出し、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、分取ＨＰＬＣで精製し、４２（４８ｍｇ、収率：３３．１％）を白色固体として得た。LCMS: (5-95, AB, 1.5 min), 0.669 min, MS = 374.9 [M + 1].1H NMR (400 MHz, CD3OD): δ 7.67 (s, 1H), 7.39 - 7.36 (m, 2H), 7.12 - 7.10 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 6.97 - 6.96 (m, 1H), 6.96 - 6.94 (m, 3H), 6.91 - 6.90 (d, J = 4.0 Hz, 1H), 3.45 - 3.36 (m, 4H), 3.31 (s, 4H), 2.42 - 2.36 (m, 2H), 0.73 - 0.70 (t, J = 7.2 Hz, 3H)
【０２３８】
実施例４３  ４−［４−エチル−５−（４−ヒドロキシフェニル）−６−（メチルアミノ）−３−ピリジル］フェノール  ４３
2018508563.tif 000031
４−エチルピリジン−２−アミン  ７ａ（６００ｍｇ、４．９２ｍｍｏｌ）と、ホルムアルデヒド（ＨＣＨＯ）（５９０ｍｇ、１９．６７ｍｍｏｌ）と、ナトリウムメトキシド（ＮａＯＭｅ）（１．３ｇ、２４．６ｍｍｏｌ）のメタノール（ＭｅＯＨ）（３０ｍｌ）溶液を、２時間加熱還流した。混合物を氷浴で０℃に冷却し、ＮａＢＨ４（７４７ｍｇ、１９．７ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を２時間加熱還流し、砕いた氷に注いだ。混合物をＥｔＯＡｃ（２０ｍＬ×３）で抽出し、水で洗浄した。合わせた抽出物をブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、減圧中で濃縮し、４−エチル−Ｎ−メチルピリジン−２−アミン  ４３ａを固体として得、それを次の工程でそのまま使用した（４２０  ｍｇ、収率６３％）。
【０２３９】
４３ａ（３２０ｍｇ、２．３６ｍｍｏｌ）のＭｅＣＮ（２０ｍＬ）溶液に、ＮＢＳ（１．６ｇ、９．４ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を室温で４時間、Ｎ２下で撹拌した。混合物をＥｔＯＡｃ（３０ｍＬ×３）で抽出した。合わせた抽出物をブライン（３０ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、濃縮し、カラムで精製し、３，５−ジブロモ−４−エチル−Ｎ−メチルピリジン−２−アミン  ４３ｂを得た。（ＥｔＯＡｃ／ＰＥ＝１：４０）（４２０ｍｇ、４４％）
【０２４０】
ジオキサン／Ｈ２Ｏ（１０ｍｌ／１ｍＬ）に４３ｂ（１００ｍｇ、０．３４ｍｍｏｌ）、（４−ヒドロキシフェニル）ボロン酸（５７ｍｇ、０．４１ｍｍｏｌ）、Ｐｄ（ｄｐｐｆ）Ｃｌ２（５ｍｇ、０．００６８ｍｍｏｌ）及びＫ２ＣＯ３（９５ｍｇ、０．６８ｍｍｏｌ）を入れた溶液に。混合物を９０℃で５時間、Ｎ２下で撹拌した。混合物をＥｔＯＡｃ（１５ｍＬ×３）で抽出し、ブライン（２０ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、濃縮し、分取ＨＰＬＣで精製して４３（５２．１ｍｇ、収率：４７％）を得た。LCMS: (5-95, AB, 1.5 min), 0.724 min, MS = 320.9 [M + 1].1H NMR (400 MHz, Methanol-d4) δ 7.56 (s, 1H), 7.19 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 7.13 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 7.01 (d, J = 8.4 Hz,2H), 6.90 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 2.97 (s, 3H), 2.46 - 2.40 (m, 2H), 0.72 (t, J = 7.6 Hz, 3H)
【０２４１】
実施例４４  ４−［２−アミノ−５−（４−クロロ−３−メチル−フェニル）−４−エチル−３−ピリジル］フェノール  ４４
実施例８９の手順に従い、４４を調製した。1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9.53 (s, 1H), 7.69 (s, 1H), 7.43 (d, J = 8.2 Hz, 1H), 7.30 (d, J = 2.5 Hz, 1H), 7.16 (dd, J = 8.1, 2.2 Hz, 1H), 7.09 - 7.00 (m, 2H), 6.93 - 6.85 (m, 2H), 5.01 (s, 2H), 2.36 (s, 3H), 2.24 (q, J = 7.4 Hz, 2H), 0.62 (t, J = 7.4 Hz, 3H).M+H (m/z) 340
【０２４２】
実施例４５  ４−［６−アミノ−４−エチル−５−（４−ヒドロキシフェニル）−３−ピリジル］ベンズアミド  ４５
実施例８９の手順に従い、４５を調製した。1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9.53 (s, 1H), 7.97 (s, 1H), 7.91 (d, J = 8.3 Hz, 2H), 7.72 (s, 1H), 7.39 (d, J = 8.3 Hz, 2H), 7.33 (s, 1H), 7.10 - 7.02 (m, 2H), 6.93 - 6.85 (m, 2H), 5.04 (s, 2H), 2.27 (q, J = 7.4 Hz, 2H), 0.61 (t, J = 7.4 Hz, 3H).M+H (m/z) 334
【０２４３】
実施例４６  ３−［６−アミノ−４−エチル−５−（４−ヒドロキシフェニル）−３−ピリジル］ベンズアミド  ４６
実施例８９の手順に従い、４６を調製した。1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9.53 (s, 1H), 7.99 (s, 1H), 7.84 (dtd, J = 7.1, 3.6, 1.9 Hz, 2H), 7.73 (s, 1H), 7.54 - 7.45 (m, 2H), 7.35 (s, 1H), 7.13 - 6.94 (m, 2H), 6.93 - 6.74 (m, 2H), 5.02 (s, 2H), 2.23 (dq, J = 20.9, 7.4 Hz, 2H),0.61 (t, J = 7.5 Hz, 3H).M+H (m/z) 334
【０２４４】
実施例４７  ４−［２−アミノ−４−エチル−５−（３−イソプロピルフェニル）−３−ピリジル］フェノール  ４７
実施例８９の手順に従い、４７を調製した。1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9.51 (s, 1H), 7.70 (s, 1H), 7.32 (t, J = 7.6 Hz, 1H), 7.25 - 7.13 (m, 2H), 7.14 - 7.01 (m, 3H), 6.93 - 6.84 (m, 2H), 4.94 (s, 2H), 2.92 (hept, J = 6.9 Hz, 1H), 2.24 (q, J = 7.4 Hz, 2H), 1.22 (d, J = 6.9 Hz, 6H), 0.63 (t, J = 7.4 Hz, 3H).M+H (m/z) 333
【０２４５】
実施例４８  ４−［２−アミノ−５−（３，４−ジフルオロフェニル）−４−エチル−３−ピリジル］フェノール  ４８
実施例８９の手順に従い、４８を調製した。1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9.53 (s, 1H), 7.71 (s, 1H), 7.57 - 7.42 (m, 1H), 7.46 - 7.36 (m, 1H), 7.21 - 7.12 (m, 1H), 7.12 - 7.00 (m, 2H), 6.93 - 6.85 (m, 2H), 5.06 (s, 2H), 2.25 (q, J = 7.4 Hz, 2H), 0.62 (t, J = 7.4 Hz, 3H).M+H (m/z) 327
【０２４６】
実施例４９  ３−［６−アミノ−４−エチル−５−（４−ヒドロキシフェニル）−３−ピリジル］ベンゾニトリル  ４９
実施例８９の手順に従い、４９を調製した。M+H (m/z) 316
【０２４７】
実施例５０  ４−［２−アミノ−４−エチル−５−（２−フルオロフェニル）−３−ピリジル］フェノール  ５０
実施例８９の手順に従い、５０を調製した。1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9.53 (s, 1H), 7.69 (s, 1H), 7.47 - 7.22 (m, 4H), 7.10 - 7.02 (m, 2H), 6.93 - 6.85 (m, 2H), 5.06 (s, 2H), 2.14 (q, J = 7.4 Hz, 2H), 0.59 (t, J = 7.5 Hz, 3H).M+H (m/z) 333
【０２４８】
実施例５１  ４−［６−アミノ−４−エチル−５−（４−ヒドロキシフェニル）−３−ピリジル］ベンゾニトリル  ５１
実施例８９の手順に従い、５１を調製した。1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9.54 (s, 1H), 7.87 (d, J = 8.2 Hz, 2H), 7.73 (s, 1H), 7.58 - 7.51 (m, 2H), 7.11 - 7.02 (m, 2H), 6.93 - 6.85 (m, 2H), 5.14 (s, 2H), 2.26 (q, J = 7.5 Hz, 2H), 0.61 (t, J = 7.5 Hz, 3H).M+H (m/z) 316
【０２４９】
実施例５２  ４−［２−アミノ−４−エチル−５−（３−メトキシフェニル）−３−ピリジル］フェノール  ５２
実施例８９の手順に従い、５２を調製した。1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9.52 (s, 1H), 7.73 - 7.52 (m, 1H), 7.37 - 7.28 (m, 1H), 7.09 - 7.02 (m, 2H), 6.95 - 6.76 (m, 5H), 4.96 (s, 2H), 3.77 (s, 3H), 2.27 (q, J = 7.5 Hz, 2H), 0.64 (t, J = 7.4 Hz, 3H).M+H (m/z) 321
【０２５０】
実施例５３  ４−［２−アミノ−４−エチル−５−（４−メトキシフェニル）−３−ピリジル］フェノール  ５３
実施例８９の手順に従い、５３を調製した。1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9.51 (s, 1H), 7.67 (s, 1H), 7.25 - 7.18 (m, 2H), 7.09 - 7.01 (m, 2H), 7.01 - 6.93 (m, 2H), 6.92 - 6.84 (m, 2H), 4.91 (s, 2H), 3.78 (s, 3H), 2.24 (q, J = 7.4 Hz, 2H), 0.62 (t, J = 7.5 Hz, 3H).M+H (m/z) 321
【０２５１】
実施例５４  ３−［６−アミノ−４−エチル−５−（４−ヒドロキシフェニル）−３−ピリジル］−Ｎ，Ｎ−ジメチル−ベンズアミド  ５４
実施例８９の手順に従い、５４を調製した。M+H (m/z) 362
【０２５２】
実施例５５  ４−［２−アミノ−４−エチル−５−［４−（ヒドロキシメチル）フェニル］−３−ピリジル］フェノール  ５５
実施例８９の手順に従い、５５を調製した。1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9.51 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 7.68 (s, 1H), 7.48 - 7.32 (m, 2H), 7.29 - 7.18 (m, 2H), 7.13 - 6.76 (m, 3H), 5.17 (t, J = 5.7 Hz, 2H), 4.95 (s, 1H), 4.53 (d, J = 5.7 Hz, 2H), 2.23 (dq, J = 20.9, 7.5 Hz, 2H), 0.61 (t, J = 7.4 Hz, 3H).M+H (m/z) 321
【０２５３】
実施例５６  ４−［６−アミノ−４−エチル−５−（４−ヒドロキシフェニル）−３−ピリジル］−Ｎ，Ｎ−ジメチル−ベンズアミド  ５６
実施例８９の手順に従い、５６を調製した。M+H (m/z) 362
【０２５４】
実施例５７  ４−［２−アミノ−４−エチル−５−（ｍ−トリル）−３−ピリジル］フェノール  ５７
実施例８９の手順に従い、５７を調製した。M+H (m/z) 305
【０２５５】
実施例５８  ５−［６−アミノ−４−エチル−５−（４−ヒドロキシフェニル）−３−ピリジル］−１Ｈ−ピリジン−２−オン  ５８
2018508563.tif 000032
３，５−ジブロモ−４−エチルピリジン−２−アミン  ７ｂ（１．０ｇ、３．５７ｍｍｏｌ）、Ｂｏｃ２Ｏ（１．６ｇ、７．１４ｍｍｏｌ）、ＤＭＡＰ（１．１ｇ、８．９３ｍｍｏｌ）、ＴＥＡ（１ｇ、１０．７１ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（３０ｍＬ）溶液を室温で５時間撹拌した。混合物を水で希釈し、ＥｔＯＡｃ（３０ｍＬ×３）で抽出した。合わせた抽出物をブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、濃縮し、カラム（ＥＴＯＡｃ／ＰＥ＝１：５０）で精製し、３，５−ジブロモ−４−エチルピリジン−２−（ビス−ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニル）アミン  １３ａを固体（１．５ｇ、収率６３％）として得た。1H NMR (400 MHz, Methanol-d4) δ 8.50 (s, 1H), 3.10 - 3.04 (m, 2H), 18 (s, 18H), 1.19 (t, 3H).
【０２５６】
ジオキサン／水（４０ｍＬ／８ｍＬ）に１３ａ（５００ｍｇ、１．０４ｍｍｏｌ）、（６−メトキシピリジン−３−イル）ボロン酸  ５８ａ（１８５ｍｇ、１．２５ｍｍｏｌ）、Ｐｄ（ｄｐｐｆ）Ｃｌ２（１５ｍｇ、０．０２ｍｍｏｌ）及びＫ２ＣＯ３（２９０ｍｇ、２．０８ｍｍｏｌ）を入れた溶液をＮ２下、９０℃で５時間撹拌した。混合物を室温に冷まし、ＥｔＯＡｃ（３０ｍＬｘ３）で抽出し、ブライン（２０ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、減圧中で濃縮し、粗生成物を得、それをカラム（ＥｔＯＡｃ／ＰＥ＝１：１０）で精製し、５−ブロモ−４−エチル−６’−メトキシ−［３，３’−ビピリジン］−６−（ビス−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミン  ５８ｂを固体（４５０ｍｇ、収率８５％）として得た。
【０２５７】
５８ｂ（４００ｍｇ、０．７９ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（１０ｍＬ）溶液に、０℃でＢＢｒ３（０．６ｍＬ）を滴下した。混合物を１５℃〜１８℃で２時間撹拌した。５−ブロモ−４−エチル−６’−メトキシ−［３，３’−ビピリジン］−６−アミン  ５８ｃを含む混合物を濃縮し、次の工程で用いた（４００ｍｇ、１００％）。
【０２５８】
ジオキサン／水（２０ｍＬ／４ｍＬ）に５８ｃ（２５０ｍｇ、０．８１ｍｍｏｌ）、（４−ヒドロキシフェニル）ボロン酸（１３５ｍｇ、０．９８ｍｍｏｌ）、Ｐｄ（ｄｐｐｆ）Ｃｌ２（１２ｍｇ、０．０２ｍｍｏｌ）及びＫ２ＣＯ３（２２５ｍｇ、１．６２ｍｍｏｌ）を入れた溶液をＮ２下、９０℃で５時間撹拌した。混合物を室温に冷まし、ＥｔＯＡｃ（３０ｍＬｘ３）で抽出し、ブライン（２０ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、濃縮し、カラム（ＥｔＯＡｃ／ＰＥ＝１：１）で精製し、４−（６−アミノ−４−エチル−６’−メトキシ−［３，３’−ビピリジン］−５−イル）フェノール  ５８ｄ（１００ｍｇ、４２％）を得た。
【０２５９】
ＨＢｒ／ＨＯＡｃ（５ｍＬ）に５８ｄ（１００ｍｇ、３１ｍｍｏｌ）を入れた溶液を７０℃で８時間撹拌した。反応混合物を減圧下で濃縮し、分取ＨＰＬＣで精製し、５８（３９．２ｍｇ、収率：４１％）を得た。1H NMR (400 MHz, Methanol-d4) δ 8.10 - 8.02 (m, 2H), 7.83 (s, 1H), 7.17 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 7.07 - 7.00 (m, 3H), 2.47 - 2.42 (m, 2H), 0.80 (t, 3H)
【０２６０】
実施例５９  ４−［６−アミノ−４−エチル−５−（３−メチル−１Ｈ−インダゾール−５−イル）−３−ピリジル］フェノール  ５９
2018508563.tif 000033
４−（６−ビス（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ−５−ブロモ−４−エチルピリジン−３−イル）フェノール  ５９ａ（１．４５ｇ、２．９４ｍｍｏｌ）のＥｔＯＡｃ（１５ｍＬ）溶液に、ＨＣｌ／ＥｔＯＡｃ（１５ｍＬ）を加え、混合物を２５℃で３時間撹拌した。溶媒を除去し、水（１０ｍＬ）を添加した。ＮａＨＣＯ３でｐＨを９に調整し、ＥｔＯＡｃ（１５ｍＬ×３）で抽出し、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、濾過し、濃縮し、４−（６−アミノ−５−ブロモ−４−エチルピリジン−３−イル）フェノール  １１ａ（１．０２ｇ）を得た。
【０２６１】
１１ａ（８０．０ｍｇ、０．２７２ｍｍｏｌ）、（３−メチル−１Ｈ−インダゾール−５−イル）ボロン酸  ５９ｂ（４８．０ｍｇ、０．２７ｍｍｏｌ）、Ｋ２ＣＯ３（１８８ｍｇ、１．３６ｍｍｏｌ）、ジオキサン−Ｈ２Ｏ（５：１、２．５ｍＬ）及びＰｄ（ｄｐｐｆ）Ｃｌ２（２５．００ｍｇ）を含むマイクロ波反応チューブを窒素でパージし、マイクロ波照射下１２０℃で５０分間加熱した。それを２５℃に冷まし、水（５ｍＬ）を加えた。それをＥｔＯＡｃ（１５ｍＬｘ３）で抽出し、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させた。それを濃縮し、分取ＨＰＬＣで精製し、５９（４２．５ｍｇ、収率：４５％）を白色固体として得た。LCMS: (5-95, AB, 1.5 min), 0.713 min, MS = 344.9 [M + 1].1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 8.30 (br, 1H), 7.69 (s, 2H), 7.66 - 7.64 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.30 - 7.27 (m, 1H), 7.18 - 7.16 (d, J = 8.0 Hz, 2H), 6.87 - 6.86 (d, J = 8.0 Hz, 2H), 2.59 (s, 3H), 2.46 - 2.37 (m, 2H), 0.73 - 0.69 (t, J = 7.6 Hz, 3H)
【０２６２】
実施例６０  ［４−［６−アミノ−４−エチル−５−（４−ヒドロキシフェニル）−３−ピリジル］フェニル］−モルホリノ−メタノン  ６０
実施例８９の手順に従い、６０を調製した。1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9.50 (s, 1H), 7.72 (s, 1H), 7.45 (d, J = 8.3 Hz, 2H), 7.42 - 7.31 (m, 2H), 7.12 - 7.02 (m, 2H), 6.93 - 6.85 (m, 2H), 5.03 (s, 2H), 3.62 (s, 4H), 2.27 (q, J = 7.5 Hz, 2H), 0.63 (t, J = 7.4 Hz, 3H).M+H (m/z) 404
【０２６３】
実施例６１  ４−［２−アミノ−５−（３−ベンジルオキシフェニル）−４−エチル−３−ピリジル］フェノール  ６１
実施例８９の手順に従い、６１を調製した。1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9.50 (s, 1H), 7.69 (s, 1H), 7.52 - 7.37 (m, 4H), 7.41 - 7.27 (m, 4H), 7.10 - 6.93 (m, 3H), 6.95 - 6.84 (m, 4H), 5.14 (s, 2H), 4.96 (s, 2H), 2.24 (q, J = 7.4 Hz, 2H), 0.59 (t, J = 7.4 Hz, 3H).M+H (m/z) 397
【０２６４】
実施例６２  ５−［６−アミノ−４−エチル−５−（４−ヒドロキシフェニル）−３−ピリジル］ピリジン−２−カルボニトリル  ６２
実施例８９の手順に従い、６２を調製した。1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9.56 (s, 1H), 8.75 (dd, J = 2.1, 1.1 Hz, 1H), 8.14 - 8.02 (m, 2H), 7.79 (s, 1H), 7.13 - 7.01 (m, 2H), 6.94 - 6.86 (m, 2H), 5.26 (s, 2H), 2.26 (q, J = 7.5 Hz, 2H), 0.61 (t, J = 7.4 Hz, 3H).M+H (m/z) 317
【０２６５】
実施例６３  ５−［６−アミノ−４−エチル−５−（４−ヒドロキシフェニル）−３−ピリジル］ピリジン−３−カルボニトリル  ６３
実施例８９の手順に従い、６３を調製した。1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9.56 (s, 1H), 8.84 (d, J = 2.2 Hz, 1H), 8.35 (t, J = 2.1 Hz, 1H), 7.78 (s, 1H), 7.11 - 6.95 (m, 2H), 6.94 - 6.83 (m, 2H), 5.22 (s, 2H),  2.22 (dq, J = 15.3, 7.5 Hz, 2H), 0.61 (t, J = 7.5 Hz, 3H).M+H (m/z) 317
【０２６６】
実施例６４  ［３−［６−アミノ−４−エチル−５−（４−ヒドロキシフェニル）−３−ピリジル］フェニル］−ピロリジン−１−イル−メタノン  ６４
実施例８９の手順に従い、６４を調製した。M+H (m/z) 388
【０２６７】
実施例６５  ４−［６−アミノ−４−エチル−５−（４−ヒドロキシフェニル）−３−ピリジル］−Ｎ−シクロプロピル−ベンズアミド  ６５
実施例８９の手順に従い、６５を調製した。M+H (m/z) 374
【０２６８】
実施例６６  ２−［３−［６−アミノ−４−エチル−５−（４−ヒドロキシフェニル）−３−ピリジル］フェニル］アセトニトリル  ６６
実施例８９の手順に従い、６６を調製した。M+H (m/z) 330
【０２６９】
実施例６７  ４−［６−アミノ−４−エチル−５−（４−ヒドロキシフェニル）−３−ピリジル］−２−フルオロ−ベンゾニトリル  ６７
実施例８９の手順に従い、６７を調製した。1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9.55 (s, 1H), 7.99 - 7.91 (m, 1H), 7.76 (s, 1H), 7.55 (dd, J = 10.6, 1.5 Hz, 1H), 7.40 (dd, J = 8.0, 1.5 Hz, 1H), 7.10 - 7.00 (m, 2H), 6.93 - 6.85 (m, 2H), 5.21 (s, 2H), 3.27 (s, 2H), 2.29 (q, J = 7.7 Hz, 2H), 0.62 (t, J = 7.5 Hz, 3H).M+H (m/z) 334
【０２７０】
実施例６８  ４−［２−アミノ−４−エチル−５−（６−メトキシ−３−ピリジル）−３−ピリジル］フェノール  ６８
実施例８９の手順に従い、６８を調製した。1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9.53 (s, 1H), 8.10 (d, J = 1.8 Hz, 1H), 7.73 - 7.64 (m, 2H), 7.08 - 7.01 (m, 2H), 6.95 - 6.76 (m, 2H), 5.02 (s, 2H), 3.88 (s, 3H),  2.22 (q, J = 7.5 Hz, 2H), 0.63 (t, J = 7.5 Hz, 3H).M+H (m/z) 322
【０２７１】
実施例６９  ３−［６−アミノ−４−エチル−５−（４−ヒドロキシフェニル）−３−ピリジル］−Ｎ−イソプロピル−ベンズアミド  ６９
実施例８９の手順に従い、６９を調製した。1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9.53 (s, 1H), 8.23 (d, J = 7.8 Hz, 1H), 7.86 - 7.77 (m, 2H), 7.74 (s, 1H), 7.53 - 7.42 (m, 2H), 7.09 - 7.02 (m, 2H), 6.93 - 6.86 (m, 2H), 5.02 (s, 2H), 4.18 - 4.04 (m, 1H),  2.25 (q, J = 7.4 Hz, 2H), 1.17 (d, J = 6.6 Hz, 6H), 0.62 (t, J = 7.5 Hz, 3H).M+H (m/z) 376
【０２７２】
実施例７０  Ｎ−［［４−［６−アミノ−４−エチル−５−（４−ヒドロキシフェニル）−３−ピリジル］フェニル］メチル］メタンスルホンアミド  ７０
実施例８９の手順に従い、７０を調製した。1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9.52 (s, 1H), 7.68 (s, 1H), 7.56 (s, 2H), 7.47 - 7.35 (m, 3H), 7.09 - 7.02 (m, 2H), 6.92 - 6.85 (m, 2H), 4.97 (s, 2H), 4.20 (d, J = 5.8 Hz, 2H), 2.88 (d, J = 3.1 Hz, 3H), 2.25 (q, J = 7.4 Hz, 2H), 0.61 (t, J = 7.5 Hz, 3H).M+H (m/z) 398
【０２７３】
実施例７１  ４−［２−アミノ−４−エチル−５−（１−イソブチルピラゾール−４−イル）−３−ピリジル］フェノール  ７１
実施例８９の手順に従い、７１を調製した。1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9.51 (s, 1H), 7.82 - 7.74 (m, 2H), 7.08 - 6.96 (m, 2H), 6.92 - 6.84 (m, 2H), 4.88 (s, 2H), 3.93 (d, J = 7.2 Hz, 2H), 2.13 (hept, J = 6.9 Hz, 1H), 0.84 (d, J = 6.7 Hz, 6H), 0.74 (t, J = 7.4 Hz, 3H).M+H (m/z) 337
【０２７４】
実施例７２  ５−［２−アミノ−４−エチル−５−（４−ヒドロキシフェニル）−３−ピリジル］−２−ヒドロキシ−ベンゾニトリル  ７２
実施例１６の手順に従い、７２を調製した。1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 11.11 (s, 1H), 9.39 (s, 1H), 7.68 (s, 1H), 7.46 (d, J = 2.2 Hz, 1H), 7.35 (dd, J = 8.5, 2.2 Hz, 1H), 7.15 - 7.04 (m, 2H), 6.84 - 6.75 (m, 2H), 5.11 (s, 2H), 2.21 (q, J = 7.4 Hz, 2H), 0.62 (t, J = 7.4 Hz, 3H).M+H (m/z) 332
【０２７５】
実施例７３  ４−［２−アミノ−４−エチル−５−（２−メチル−４−ピリジル）−３−ピリジル］フェノール  ７３
実施例８９の手順に従い、７３を調製した。1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9.54 (s, 1H), 8.45 (d, J = 5.0 Hz, 1H), 7.72 (s, 1H), 7.25 - 7.19 (m, 1H), 7.15 (dd, J = 5.0, 1.8 Hz, 1H), 7.12 - 7.01 (m, 2H), 6.93 - 6.83 (m, 2H), 5.12 (s, 2H), 3.27 (s, 3H), 2.28 (q, J = 7.5 Hz, 2H), 0.63 (t, J = 7.5 Hz, 3H).M+H (m/z) 306
【０２７６】
実施例７４  ４−［２−アミノ−５−［３−（ジフルオロメチル）フェニル］−４−エチル−３−ピリジル］フェノール  ７４
実施例８９の手順に従い、７４を調製した。1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9.53 (s, 1H), 7.72 (s, 1H), 7.68 - 7.52 (m, 2H), 7.50 (dd, J = 4.6, 3.1 Hz, 2H), 7.14 - 7.02 (m, 3H), 6.95 - 6.85 (m, 2H), 5.04 (s, 2H),  2.24 (q, J = 7.4 Hz, 2H), 0.61 (t, J = 7.4 Hz, 3H).M+H (m/z) 341
【０２７７】
実施例７５  Ｎ−［５−［６−アミノ−４−エチル−５−（４−ヒドロキシフェニル）−３−ピリジル］−２−ピリジル］アセトアミド  ７５
実施例８９の手順に従い、７５を調製した。1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 10.50 (s, 1H), 9.51 (d, J = 15.1 Hz, 1H), 8.23 (dd, J = 2.5, 0.9 Hz, 1H), 8.10 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 7.78 - 7.68 (m, 1H), 7.13 - 7.01 (m, 2H), 6.93 - 6.74 (m, 2H), 5.05 (s, 2H), 2.22 (dq, J = 15.1, 7.4 Hz, 2H), 2.11 (s, 3H), 0.63 (t, J = 7.5 Hz, 3H).M+H (m/z) 349
【０２７８】
実施例７６  ４−［２−アミノ−５−（３，５−ジフルオロフェニル）−４−エチル−３−ピリジル］フェノール  ７６
実施例８９の手順に従い、７６を調製した。1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9.55 (s, 1H), 7.74 (s, 1H), 7.21 (tt, J = 9.4, 2.4 Hz, 1H), 7.13 - 7.00 (m, 4H), 6.93 - 6.85 (m, 2H), 5.11 (s, 2H), 2.28 (q, J = 7.5 Hz, 2H), 0.63 (t, J = 7.5 Hz, 3H).M+H (m/z) 327
【０２７９】
実施例７７  ４−［２−アミノ−５−（３−クロロフェニル）−４−エチル−３−ピリジル］フェノール  ７７
実施例８９の手順に従い、７７を調製した。1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9.53 (s, 1H), 7.72 (s, 1H), 7.51 - 7.33 (m, 3H), 7.29 (dt, J = 7.1, 1.6 Hz, 1H), 7.13 - 7.01 (m, 2H), 6.93 - 6.85 (m, 2H), 5.09 (s, 2H), 2.25 (q, J = 7.5 Hz, 2H), 0.62 (t, J = 7.5 Hz, 3H).M+H (m/z) 326
【０２８０】
実施例７８  ４−［２−アミノ−５−（２−クロロフェニル）−４−エチル−３−ピリジル］フェノール  ７８
実施例８９の手順に従い、７８を調製した。1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9.56 (s, 1H), 7.62 (s, 1H), 7.60 - 7.51 (m, 1H), 7.45 - 7.33 (m, 3H), 7.10 - 7.00 (m, 2H), 6.93 - 6.85 (m, 2H), 5.05 (s, 2H), 2.10 - 1.95 (m, 2H), 0.58 (t, J = 7.5 Hz, 3H).M+H (m/z) 326
【０２８１】
実施例７９  ４−［２−アミノ−４−エチル−５−（４−フルオロ−３−メチル−フェニル）−３−ピリジル］フェノール  ７９
実施例８９の手順に従い、７９を調製した。1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9.52 (s, 1H), 8.13 (s, 1H), 7.68 (s, 1H), 7.22 (dd, J = 7.7, 1.9 Hz, 1H), 7.21 - 7.11 (m, 2H), 7.15 - 7.00 (m, 2H), 6.93 - 6.84 (m, 2H), 4.97 (s, 2H), 2.31 - 2.18 (m, 5H), 0.62 (t, J = 7.5 Hz, 3H).M+H (m/z) 323
【０２８２】
実施例８０  ４−［２−アミノ−５−（４−クロロフェニル）−４−エチル−３−ピリジル］フェノール  ８０
実施例８９の手順に従い、８０を調製した。1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9.53 (s, 1H), 8.15 (s, 1H), 7.70 (s, 1H), 7.51 - 7.42 (m, 2H), 7.13 - 7.01 (m, 2H), 6.93 - 6.84 (m, 2H), 5.02 (s, 2H), 2.24 (q, J = 7.4 Hz, 2H), 0.61 (t, J = 7.5 Hz, 3H).M+H (m/z) 326
【０２８３】
実施例８１  ４−［６−アミノ−４−エチル−５−（４−ヒドロキシフェニル）−３−ピリジル］−Ｎ−メチル−ベンズアミド  ８１
実施例８９の手順に従い、８１を調製した。M+H (m/z) 348
【０２８４】
実施例８２  ４−［２−アミノ−４−エチル−５−［３−（モルホリノメチル）フェニル］−３−ピリジル］フェノール  ８２
実施例８９の手順に従い、８２を調製した。1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9.51 (s, 1H), 7.70 (s, 1H), 7.37 (t, J = 7.5 Hz, 1H), 7.30 - 7.13 (m, 3H), 7.09 - 7.02 (m, 2H), 6.88 (d, J = 8.5 Hz, 2H), 4.96 (s, 2H), 3.60 - 3.48 (m, 6H), 2.36 (s, 3H), 2.36 (d, J = 9.5 Hz, 1H), 2.24 (q, J = 7.4 Hz, 2H), 0.61 (t, J = 7.5 Hz, 3H).M+H (m/z) 390
【０２８５】
実施例８３  ４−［２−アミノ−４−エチル−５−（２−メトキシピリミジン−５−イル）−３−ピリジル］フェノール  ８３
実施例８９の手順に従い、８３を調製した。M+H (m/z) 323
【０２８６】
実施例８４  ４−［２−アミノ−４−エチル−５−（１Ｈ−インダゾール−６−イル）−３−ピリジル］フェノール  ８４
実施例８９の手順に従い、８４を調製した。M+H (m/z) 331
【０２８７】
実施例８５  ４−［２−アミノ−４−エチル−５−（２−メチルインダゾール−４−イル）−３−ピリジル］フェノール  ８５
実施例８９の手順に従い、８５を調製した。1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9.52 (s, 1H), 8.10 (d, J = 16.8 Hz, 1H), 7.81 - 7.73 (m, 2H), 7.55 (d, J = 8.7 Hz, 1H), 7.43 - 7.23 (m, 3H), 7.14 - 7.02 (m, 2H), 6.93 - 6.86 (m, 2H), 5.01 (d, J = 14.3 Hz, 2H), 4.15 (d, J = 15.6 Hz, 3H), 2.32 - 2.17 (m, 2H), 0.54 (t, J = 7.5 Hz, 3H).M+H (m/z) 345
【０２８８】
実施例８６  ４−［２−アミノ−４−エチル−５−（２−メチル−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−５−イル）−３−ピリジル］フェノール  ８６
2018508563.tif 000034
５−ブロモ−２−メチル−１Ｈ−ベンゾ［ｄ］イミダゾール  ８６ａ（２００ｍｇ、０．９５ｍｍｏｌ）、Ｂｏｃ２Ｏ（４１５ｍｇ、１．９０ｍｍｏｌ）、ＤＭＡＰ（２３２ｍｇ、１．９０ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（２０ｍＬ）溶液を室温で５時間撹拌した。混合物を水で希釈し、ＤＣＭ（３０ｍＬ×２）で抽出した。合わせた抽出物をブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、濃縮し、カラム（ＥｔＯＡｃ／ＰＥ＝１：２０）で精製し、ｔｅｒｔ−ブチル  ５−ブロモ−２−メチル−１Ｈ−ベンゾ［ｄ］イミダゾール−１−カルボキシレート  ８６ｂを固体（３００ｍｇ、収率９７％）として得た。
【０２８９】
ジオキサン（２０ｍＬ）に８６ｂ（３００ｍｇ、０．９７ｍｍｏｌ）、４，４，４’，４’，５，５，５’，５’−オクタメチル−２，２’−ビ（１，３，２−ジオキサボロラン）（４６５ｍｇ、１．９４ｍｍｏｌ）、Ｐｄ（ｄｐｐｆ）Ｃｌ２（６８ｍｇ、０．１ｍｍｏｌ）及びＫＯＡｃ（１９０ｍｇ、１．９４ｍｍｏｌ）を入れた混合物をパージし、９０℃で５時間、Ｎ２下で撹拌した。混合物を室温に冷まし、ＥｔＯＡｃ（２０ｍＬ×２）で抽出し、ブライン（２０ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、濃縮し、カラム（ＥｔＯＡｃ／ＰＥ＝１：８）で精製し、ｔｅｒｔ−ブチル  ２−メチル−５−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラン−２−イル）−１Ｈ−ベンゾ［ｄ］イミダゾール−１−カルボキシレート  ８６ｃを固体（２００ｍｇ、収率６２％）として得た。
【０２９０】
３，５−ジブロモ−４−エチルピリジン−２−アミン  ７ｂ（３２０ｍｇ、１．１４ｍｍｏｌ）、（Ｂｏｃ）２Ｏ（５００ｍｇ、２．２９ｍｍｏｌ）、ＤＭＡＰ（２８６ｍｇ、２．８６ｍｍｏｌ）、ＴＥＡ（４２０ｍｇ、３．４３ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（３０ｍＬ）溶液を室温で５時間撹拌した。混合物を水で希釈し、ＥｔＯＡｃ（２０ｍＬ×３）で抽出した。合わせた抽出物をブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、濃縮し、カラム（ＥｔＯＡｃ／ＰＥ＝１：４０）で精製し、３，５−ジブロモ−４−エチルピリジン−２−（ビス−ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニル）アミン  １３ａを固体（５８０ｍｇ、収率１００％）として得た。
【０２９１】
ジオキサン／水（１５ｍＬ／３ｍＬ）に１３ａ（１４０ｍｇ、０．２９ｍｍｏｌ）、８６ｃ（１２５ｍｇ、０．３５ｍｍｏｌ）、Ｐｄ（ｄｐｐｆ）Ｃｌ２（５ｍｇ、０．００６ｍｍｏｌ）及びＫ２ＣＯ３（８５ｍｇ、０．５８ｍｍｏｌ）を入れた混合物をパージし、９０℃で５時間、Ｎ２下で撹拌した。混合物を室温に冷まし、ＥｔＯＡｃ（１５ｍＬＸ３）で抽出し、ブライン（１５ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４，上で乾燥させ、濃縮し、粗３−ブロモ−４−エチル−５−（２−メチル−１Ｈ−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）ベンゾ［ｄ］イミダゾール−５−イル）ピリジン−２−（ビス−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミン  ８６ｄ（１２０ｍｇ、収率６５％）を得、それを次の工程に用いた。
【０２９２】
８６ｄ（１２０ｍｇ、０．１９ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（２０ｍＬ）撹拌溶液に、ＨＣｌ−ＥｔＯＡｃ（３ｍＬ）を０℃で添加した。反応混合物を室温で３時間撹拌した後、濃縮し、カラム（ＥｔＯＡｃ／ＰＥ＝１：１０）で精製し、３−ブロモ−４−エチル−５−（２−メチル−１Ｈ−ベンゾ［ｄ］イミダゾール−５−イル）ピリジン−２−アミン  ８６ｅを固体（６０ｍｇ、収率８５％）として得た。
【０２９３】
ジオキサン／水（１０ｍＬ／２ｍＬ）に８６ｅ（６０ｍｇ、０．１８ｍｍｏｌ）、（４−ヒドロキシフェニル）ボロン酸（３０ｍｇ、０．２２ｍｍｏｌ）、Ｐｄ（ｄｐｐｆ）Ｃｌ２（２ｍｇ、０．００４ｍｍｏｌ）及びＫ２ＣＯ３（５０ｍｇ、０．２６ｍｍｏｌ）を入れた混合物をパージし、９０℃で５時間、Ｎ２下で撹拌した。混合物を室温に冷まし、ＥｔＯＡｃ（１０ｍＬ×３）で抽出した。それをブライン（１０ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、濃縮し、分取ＨＰＬＣで精製し、８６（１４．１ｍｇ、収率：２３％）を得た。LCMS: (5-95, AB, 1.5 min), 0.628 min, MS = 344.9 [M + 1].1H NMR (400 MHz, Methanol-d4) δ 7.87 - 7.79 (m, 3H), 7.61 (d, J = 8.4 Hz,1H), 7.19 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 7.01 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 2.87 (s, 3H), 2.49 - 2.43 (m, 2H), 0.700 (t, J = 7.6 Hz, 3H)
【０２９４】
実施例８７  ４−［６−アミノ−４−エチル−５−（１Ｈ−インダゾール−５−イル）−３−ピリジル］フェノール  ８７
2018508563.tif 000035
４−（６−ビス（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ−５−ブロモ−４−エチルピリジン−３−イル）フェノール  ５９ａ（１．４５ｇ、２．９４ｍｍｏｌ）のＥｔＯＡｃ（１５ｍＬ）溶液に、ＨＣｌ／ＥｔＯＡｃ（１５ｍＬ）を加えた。反応混合物を２５℃で３時間撹拌した。それを濃縮し、水（１０ｍＬ）。ＮａＨＣＯ３でｐＨを９に調整した。それをＥｔＯＡｃ（３×２０ｍＬ）で抽出し、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、濃縮し、粗４−（６−アミノ−５−ブロモ−４−エチルピリジン−３−イル）フェノール  １１ａを得た。
【０２９５】
１１ａ（８０ｍｇ、０．２７３ｍｍｏｌ）、ｔｅｒｔ−ブチル  ５−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラン−２−イル）−１Ｈ−インダゾール−１−カルボキシレート  ８７ａ（９４ｍｇ、０．２７３ｍｍｏｌ）、Ｋ２ＣＯ３（１８９ｍｇ、１．３６ｍｍｏｌ）、ジオキサン−Ｈ２Ｏ（５：１、２．３ｍＬ）及びＰｄ（ｄｐｐｆ）Ｃｌ２（２５．００ｍｇ）を含むマイクロ波チューブをＮ２でパージし、マイクロ波照射下１２０℃で４５分間加熱した。混合物を２５℃に冷まし、水（１５ｍＬ）を加えた。それをＥｔＯＡｃ（２０ｍＬ×３）で抽出し、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、濃縮し、ｔｅｒｔ−ブチル  ５−（２−アミノ−４−エチル−５−（４−ヒドロキシフェニル）ピリジン−３−イル）−１Ｈ−インダゾール−１−カルボキシレート  ８７ｂ（１５５ｍｇ）を褐色固体として得た。LCMS: (5-95, AB, 1.5 min), 0.695 min, MS = 330.9 [M - 100]; 0.786 min, MS = 431.0 [M + 1].
【０２９６】
ＥｔＯＡｃ（５ｍＬ）に８７ｂ（１００ｍｇ、０．２３９ｍｍｏｌ）を入れた混合物に、ＨＣｌ／ＥｔＯＡｃ（７ｍＬ）を添加し、反応混合物を２５℃で２時間撹拌した。溶媒を除去し、分取ＨＰＬＣで精製し、８７（２０ｍｇ、収率：２６．１％）を白色固体として得た。LCMS: (5-95, AB, 1.5 min), 0.702 min, MS = 330.9 [M+1].1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 8.28 (s, 1H), 8.13 (s, 1H), 7.76 - 7.72 (m, 2H), 7.69 (s, 1H), 7.32 - 7.29 (d, J = 12.0 Hz, 1H ), 7.18 - 7.16 (m, 2H), 6.87 - 6.85 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 2.46 - 2.35 (m, 2H), 0.73 - 0.69 (t, J = 7.6 Hz, 3H).
【０２９７】
実施例８８  ４−［２−アミノ−４−エチル−５−（１Ｈ−インダゾール−５−イル）−３−ピリジル］フェノール  ８８
2018508563.tif 000036
窒素の不活性雰囲気でパージし、維持した２５０ｍＬの３つ口丸底フラスコに、４−（２−アミノ−５−ブロモ−４−エチルピリジン−３−イル）フェノール  ８９ｄ（１．０ｇ、３．４１ｍｍｏｌ、１．００当量）、（２Ｈ−インダゾール−６−イル）ボロン酸  ８８ａ（６６３ｍｇ、４．０９ｍｍｏｌ、１．２０当量）、Ｋ２ＣＯ３（３．３ｇ、２３．７０ｍｍｏｌ、６．９５当量）、水（２５ｍＬ）、１，４−ジオキサン（２５ｍＬ）及びＰｄ（ｄｐｐｆ）Ｃｌ２（０．２ｇ、０．１当量）を入れた。得られた溶液を８０℃で８時間撹拌し、その後３ｘ３０ｍＬの酢酸エチルで抽出した。有機層を合わせ、減圧下で濃縮した。ＤＣＭ／ＣＨ３ＯＨ（２０／１〜１０／１）で溶離するシリカゲルカラムで残留物を精製した。粗生成物を１：１の比のＥｔＯＨ／Ｈ２Ｏから再結晶化させ、２５１ｍｇ（２２％）の８８を白色固体として得た。LC-MS: (ES, m/z): 331 [M+H]+.H-NMR: (300 MHz, DMSO, ppm):  δ 13.05 (s, 1H), 9.56 (s, 1H), 8.09 (s, 1H), 7.76-7.79 (m, 2H), 7.41 (s, 1H), 7.04-7.09 (m, 3H), 6.88-6.91 (d, J = 8.7 Hz, 2H), 5.12 (s, 2H), 2.27-2.30 (q, 2H), 0.59-0.64 (t, 3H)
【０２９８】
実施例８９  ４−［２−アミノ−４−エチル−５−（２−メチルインダゾール−６−イル）−３−ピリジル］フェノール  ８９
2018508563.tif 000037
窒素の不活性雰囲気でパージし、維持した５００ｍＬの３つ口丸底フラスコに、４−エチルピリジン−２−アミン  ７ａ（１０ｇ、８１．８５ｍｍｏｌ、１．００当量）、テトラヒドロフラン（２００ｍＬ）及びＮＢＳ（２９ｇ、１６２．９４ｍｍｏｌ、２．００当量）を０℃で入れた。得られた溶液を室温で１５分間撹拌し、その後減圧下で濃縮した。残留物をＤＣＭ／ＭｅＯＨ（１００：１〜２０：１）で溶離するシリカゲルカラムで精製し、１８ｇ（７９％）の３，５−ジブロモ−４−エチルピリジン−２−アミン  ７ｂを白色固体として得た。
【０２９９】
窒素の不活性雰囲気でパージし、維持した５００ｍＬの３つ口丸底フラスコに、７ｂ（１８ｇ、６４．２９ｍｍｏｌ、１．００当量）を含むテトラヒドロフラン（３６０ｍＬ）を入れた。これに、ｎ−ＢｕＬｉのヘキサン溶液（５８ｍＬ、２．００当量、２．２ｍｏｌ／Ｌ）を−７８℃で添加した。得られた溶液を−７８℃で１時間撹拌し、４５０ｍＬのＮＨ４Ｃｌの添加によりクエンチし、その後２Ｘ５００ｍＬの酢酸エチルで抽出した。合わせた有機層を、２Ｘ５００ｍＬのブラインで洗浄し、無水硫酸ナトリウム上で乾燥させ、減圧下で濃縮した。粗生成物をフラッシュ分取ＨＰＬＣで精製し、１２ｇ（９３％）の３−ブロモ−４−エチルピリジン−２−アミン  ８９ａを白色固体として得た。
【０３００】
窒素の不活性雰囲気でパージし、維持した５００ｍＬの３つ口丸底フラスコに、８９ａ（１２ｇ、５９．６８ｍｍｏｌ、１．００当量）のＣＨ３ＣＮ（１００ｍＬ）溶液、（４−メトキシフェニル）ボロン酸（１１ｇ、７２．３９ｍｍｏｌ、１．２０当量）、Ｎａ２ＣＯ３（１２０ｍＬ、飽和）及びＰｄ（ｄｐｐｆ）Ｃｌ２（１．２ｇ、１．６４ｍｍｏｌ、０．０３当量）を入れた。得られた溶液を１１０℃で１時間撹拌し、５００ｍＬのＥＡで希釈し、その後２Ｘ５００ｍＬの酢酸エチルで抽出した。合わせた有機層を、３×２００ｍＬのブラインで洗浄し、無水硫酸ナトリウム上で乾燥させ、減圧下で濃縮した。残留物を酢酸エチル／石油エーテル（１：１００〜１：１０）で溶離するシリカゲルカラムで精製し、１０ｇ（７３％）の４−エチル−３−（４−メトキシフェニル）ピリジン−２−アミン  ８９ｂを白色固体として得た。
【０３０１】
窒素の不活性雰囲気でパージし、維持した２５０ｍＬの３つ口丸底フラスコに、８９ｂ（１０ｇ、４３．８０ｍｍｏｌ、１．００当量）、テトラヒドロフラン（１００ｍＬ）、続いてＮＢＳ（７．８ｇ、４３．８３ｍｍｏｌ、１．００当量）を０℃で入れた。得られた溶液を室温で１５分間撹拌し、５００ｍＬのＥｔＯＡｃと５００ｍＬのＨ２Ｏで希釈した。得られた溶液を２ｘ５００ｍＬの酢酸エチルで抽出した。有機層を合わせ、２ｘ５００ｍＬのブラインで洗浄し、減圧下で濃縮した。残留物を酢酸エチル／石油エーテル（１：２０〜１：１０）で溶離するシリカゲルカラムで精製し、８ｇ（５９％）の５−ブロモ−４−エチル−３−（４−メトキシフェニル）ピリジン−２−アミン  ８９ｃを白色固体として得た。
【０３０２】
窒素の不活性雰囲気でパージし、維持した２５０ｍＬの３つ口丸底フラスコに、８９ｃ（８ｇ、２６．０４ｍｍｏｌ、１．００当量）、ジクロロメタン（１００ｍＬ）、続いてトリブロモボラン（１９．６ｇ、７８．２４ｍｍｏｌ、３．００当量）を０℃で入れた。得られた溶液を室温で１時間撹拌し、その後０℃のＮａＨＣＯ３（１Ｍ）１００ｍＬの添加によりグエンチした。固体を濾過により収集し、その後１ｘ１００ｍＬのＨ２Ｏと１ｘ３００ｍＬのＥＡ／ＰＥ（１：１）で洗浄し、６．３ｇ（８３％）の４−（２−アミノ−５−ブロモ−４−エチルピリジン−３−イル）フェノール  ８９ｄを白色固体として得た。
【０３０３】
窒素の不活性雰囲気でパージし、維持した２５０ｍＬの３つ口丸底フラスコに、８９ｄ（１．０ｇ、３．４１ｍｍｏｌ、１．００当量）、２−メチル−６−（テトラメチルｌ−１，３，２−ジオキサボロラン−２−イル）−２Ｈ−インダゾール  ８９ｅ（８８０ｍｇ、３．４１ｍｍｏｌ、１．００当量）、炭酸カリウム（３．３ｇ、２３．８８ｍｍｏｌ、７．００当量）、水（３０ｍＬ）、１，４−ジオキサン（２５ｍＬ）及びＰｄ（ｄｐｐｆ）Ｃｌ２（２００ｍｇ、０．３ｍｍｏｌ、０．１当量）を入れた。得られた溶液を８０℃で１６時間撹拌し、５００ｍＬのＨ２Ｏと５００ｍＬの酢酸エチルで希釈した。有機層を２ｘ５００ｍＬのブラインで洗浄し、減圧下で濃縮した。ＤＣＭ／ＣＨ３ＯＨ（２０：１〜１０：１）で溶離するシリカゲルカラムで残留物を精製した。粗生成物を１：１の比のＭｅＯＨ／Ｈ２Ｏから再結晶化させ、３２７ｍｇ（２８％）の８９を白色固体として得た。LC-MS: (ES, m/z): 345 [M+H]+.H-NMR: (300 MHz, DMSO, ppm): δ 9.54 (s, 1H), 8.34 (s, 1H), 7.76 (s, 1H), 7.68-7.71 (d, J = 9.0 Hz, 1H), 7.44-7.45 (d, J = 0.9 Hz, 1H), 7.06-7.09 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 6.95-6.99 (m, 1H), 6.87-6.90 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 4.99 (s, 2H), 4.17 (s, 3H), 2.25-2.32 (m, 2H), 0.59-0.64 (m, 3H).
【０３０４】
実施例９０  ４−［２−アミノ−５−（３−アミノフェニル）−４−エチル−３−ピリジル］フェノール  ９０
実施例８９の手順に従い、９０を調製した。1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9.50 (s, 1H), 7.65 (s, 1H), 7.09 - 6.98 (m, 3H), 6.92 - 6.83 (m, 2H), 6.56 - 6.46 (m, 2H), 6.41 (dt, J = 7.4, 1.3 Hz, 1H), 5.06 (s, 2H), 4.87 (d, J = 6.4 Hz, 2H), 2.27 (q, J = 7.4 Hz, 2H), 0.65 (t, J = 7.4 Hz, 3H).M+H (m/z) 306
【０３０５】
実施例９１  ４−［２−アミノ−５−（４−アミノフェニル）−４−エチル−３−ピリジル］フェノール  ９１
実施例８９の手順に従い、９１を調製した。M+H (m/z) 306
【０３０６】
実施例９２  ５−［６−アミノ−４−エチル−５−（４−ヒドロキシフェニル）−３−ピリジル］−Ｎ−メチル−ピリジン−２−カルボキサミド  ９２
2018508563.tif 000038
窒素の不活性雰囲気でパージし、維持した１００ｍＬの３つ口丸底フラスコに、４−（２−アミノ−５−ブロモ−４−エチルピリジン−３−イル）フェノール  ８９ｄ（８００ｍｇ、２．７３ｍｍｏｌ、１．００当量）、［６−（メチルカルバモイル）ピリジン−３−イル］ボロン酸  ９２ａ（５４０ｍｇ、３．００ｍｍｏｌ、１．１０当量）、炭酸カリウム（２．９ｇ、２０．８３ｍｍｏｌ、７．００当量）、１，４−ジオキサン（２１ｍＬ）、水（２１ｍＬ）及びＰｄ（ｄｐｐｆ）Ｃｌ２（１６０ｍｇ）を入れた。得られた溶液を８０℃で１６時間撹拌し、冷まし、その後３ｘ２０ｍＬの酢酸エチルで抽出した。有機層を合わせ、減圧下で濃縮した。ＤＣＭ／ＣＨ３ＯＨ（２０／１〜１０／１）で溶離するシリカゲルカラムで残留物を精製した。粗生成物を１：１の比のＭｅＯＨ／Ｈ２Ｏから再結晶化させ、２７０ｍｇ（２８％）の９２をオフホワイトの固体として得た。LC-MS: (ES, m/z):  349 [M+H]+.H-NMR (300MHz, DMSO, ppm): δ  9.56 (s, 1H), 8.78-8.81 (m, 1H), 8.58-8.59 (d, J = 3.0 Hz, 1H), 8.04-8.07 (m, 1H), 7.94-7.98 (m, 1H), 7.78 (s, 1H), 7.04-7.07 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 6.87-6.90 (d, J = 8.7 Hz, 2H), 5.20 (s, 2H), 2.83-2.84 (d, J =3.0 Hz, 3H), 2.22-2.29 (m, 2H), 0.58-0.63 (m, 3H)
【０３０７】
実施例９３  ４−［６−アミノ−４−エチル−５−（１Ｈ−インダゾール−６−イル）−３−ピリジル］フェノール  ９３
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ジオキサン／水（１０ｍＬ／２ｍＬ）に４−（６−アミノ−５−ブロモ−４−エチルピリジン−３−イル）フェノール  １１ａ（６０ｍｇ、０．２０ｍｍｏｌ）、（１Ｈ−インダゾール−６−イル）ボロン酸  ９３ａ（４０ｍｇ、０．２４ｍｍｏｌ）、Ｐｄ（ｄｐｐｆ）Ｃｌ２（４ｍｇ、０．００４ｍｍｏｌ）及びＫ２ＣＯ３（５７ｍｇ、０．４０ｍｍｏｌ）を入れた溶液をＮ２でパージし、９０℃で５時間、Ｎ２下で撹拌した。混合物を室温に冷まし、ＥｔＯＡｃ（１０ｍＬＸ３）で抽出しブライン（１０ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、濃縮し、分取ＨＰＬＣで精製し、９３（５．８ｍｇ、収率１０％）を得た。1H NMR (400 MHz, Methanol-d4) δ 8.24 (s, 1H), 8.03 (m, 1H), 7.70 (s, 1H), 7.13 (d, J = 6.0 Hz, 1H), 7.23 (d, J = 8.8 Hz,2H), 6.91 - 6.87 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 6.91 - 6.87 (m, 2H), 2.47 (t, 2H), 0.77 - 0.70 (m, 3H).
【０３０８】
実施例９４  ５−［６−アミノ−４−エチル−５−（４−ヒドロキシフェニル）−３−ピリジル］−２−ヒドロキシ−ベンゾニトリル  ９４
実施例８９の手順に従い、９４を調製した：M+H (m/z) 332
【０３０９】
実施例９５  ５−［６−アミノ−４−エチル−５−（４−ヒドロキシフェニル）−３−ピリジル］−２−ヒドロキシ−ベンズアミド  ９５
実施例８９の手順に従い、９５を調製した：1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 13.04 (s, 1H), 9.52 (s, 1H), 8.38 (s, 1H), 7.89 - 7.78 (m, 2H), 7.71 (s, 1H), 7.35 (dd, J = 8.4, 2.1 Hz, 1H), 7.09 - 6.99 (m, 2H), 6.95 - 6.85 (m, 3H), 4.96 (s, 2H), 2.24 (q, J = 7.4 Hz, 2H), 0.62 (t, J = 7.4 Hz, 3H).M+H (m/z) 350
【０３１０】
実施例９０１  ユビキチン−ローダミン１１０−グリシン発現、精製及び調製。
ユビキチン−インテイン−Ｈｉｓ６発現ベクターのクローニングのために、ヒトユビキチンのアミノ酸１〜７５のコード化領域を、発現ベクターｐＴＹＢ２へのその後のクローニングに適したプライマーでのＰＣＲによって増幅した。ユビキチン−インテイン−Ｈｉｓ６を、下記の例外を除いて（Hassiepen, U. et al (2007) Anal. Biochem. 371:138-143に）記載されているとおりに発現させ、精製した。ユビキチンインテインをニッケルキレート化親和性媒体（Ａｍｅｒｓｈａｍ）でバッチ精製し、１００ｍＭのＮａ−メルカプトエタンスルホネート（ＭＥＳ）を２２℃で５時間添加することにより、ユビキチン−ＭＥＳを放出させた。ユビキチン−ＭＥＳを、４カラム容量の２０ｍＭ  ２−（Ｎ−モルホリノ）エタンスルホン酸（ｐＨ６．５）、１００ｍＭ  ＮａＣｌで溶出した。溶出物質を限界濾過（Ｖｉｖａｓｐｉｎ  ６、５−ｋＤａ  カットオフ）により５ｍｌ未満に濃縮し、１０当量のＮ−ヒドロキシスクシンイミド（Ｆｌｕｋａ  ５６４８０）、１０当量のｓｙｍ−コリジン（Ｆｌｕｋａ  ２７６９０）及び１５当量のビスグリシル−ローダミン１０を２４時間３７℃で補充した。精製のために、反応混合物をＨｉＰｒｅｐ  Ｓｅｐｈａｄｅｘ  Ｇ−２５  ２６／１０カラム（ＧＥヘルスケア）で２０ｍＭの２−（Ｎ−モルホリノ）エタンスルホン酸（ｐＨ６．５）に脱塩し、その後Ｓｏｕｒｃｅ  １５  Ｓ  ＨＲ  １０／１０カラム（ＧＥヘルスケア）に適用し、ＮａＣｌの勾配０〜１で展開した。ユビキチン−ローダミン１１０−Ｇｌｙの最終画分をプールし、５０ｍＭのＴｒｉｓ（ｐＨ７．５）に透析分離し、その後１ｍｌあたり１ｍｇに濃縮した。Ｕｂ−Ｒｈｏ１１０−Ｇｌｙは、Ｂｏｓｔｏｎ  Ｂｉｏｃｈｅｍから市販されている。
【０３１１】
蛍光アッセイにおいて、４０ｍＭのＴｒｉｓ−ＨＣｌ緩衝液（ｐＨ７．６）、５ｍＭのＤＴＴ及び０．０５ｍｇ／ｍｌのＢＳＡ中で０．５ｍＭのユビキチン−ローダミン１１０−Ｇｌｙを０．０５〜５ｎｇ／ｍｌの各ＤＵＢと共に３０℃で６０分間インキュベートした。試料を三重に調製し、Ｅｎｖｉｓｉｏｎ（登録商標）２１０４マルチラベルリーダー（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ）を使用し、励起／発光４８５／５３５ｎｍ（Hassiepen, U. et al (2007) Anal. Biochem. 371:138-143; Ritorto, M.S., et al (2014) Nature Communications 5:4763; doi: 10.1038）で、９６ウェルプレート中で分析した。
【０３１２】
実施例９０２  Ｕｂ−Ｒｈｏ１１０（ＵＳＰ７＿Ｕｂ−Ｒｈｏ  ｐｒｅＩｎｃ（ＩＣ５０）μｍｏｌ及びＵＳＰ７＿Ｕｂ−Ｒｈｏ１１０  Ｆｌｕｏｒ（ＩＣ５０）μｍｏｌ）
ユビキチン−Ｒｈｏ１１０を基質として使用する生化学的ＵＳＰ７アッセイ：最終的なアッセイ条件は次の通りであった：Ｒｅａｃｔｉｏｎ  Ｂｕｆｆｅｒは５０ｍＭ  Ｔｒｉｓ（ｐＨ７．５）、０．０１％（ｖ／ｖ）Ｔｒｉｔｏｎ  Ｘ−１００、２．５ｍＭ  ジチオスレイトール、０．１％（ｗ／ｖ）ウシガンマグロブリン（Ｓｉｇｍａ  カタログ＃Ｇ５００９−２５Ｇ）から構成された；ＵＳＰ７、完全長ネイティブＣ末端、０．２ｎＭ；基質、ユビキチン−Ｒｈｏ１１０（Ｂｏｓｔｏｎ  Ｂｉｏｃｈｅｍ  カタログ＃Ｕ−５５５）、１ｕＭ。室温で１時間、容量２０μＬの黒色ポリスチレンのＰｒｏｘｉＰｌａｔｅ  ３８４Ｆ  Ｐｌｕｓ（登録商標）（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ  カタログ＃６００８２６０）中で反応を行った。
【０３１３】
対照ＵＳＰ７阻害剤（Ｕｂ−アルデヒド、Ｂｏｓｔｏｎ  Ｂｉｏｃｈｅｍ  カタログ＃Ｕ−２０１）を含む試験化合物を、３８４ウェルの透明なＶ底ポリプロピレンプレート（Ｇｒｅｉｎｅｒ  カタログ＃７８１２８０）に入れたＤＭＳＯ中で連続希釈した。ＤＭＳＯ中の化合物をＲｅａｃｔｉｏｎ  Ｂｕｆｆｅｒに１０倍希釈し、最終所望濃度の３倍を達成した。基質であるユビキチン−Ｒｈｏ１１０（Ｂｏｓｔｏｎ  Ｂｉｏｃｈｅｍ  カタログ＃Ｕ−５５５）を３μＭ（最終濃度の３倍）で調製し、５μｌを反応プレートに分注した。５μｌの化合物（最終濃度の３倍でＲｅａｃｔｉｏｎ  Ｂｕｆｆｅｒに希釈）を反応プレートに移した。５μｌの０．６ｎＭ  ＵＳＰ７（最終濃度の３倍でＲｅａｃｔｉｏｎ  Ｂｕｆｆｅｒに希釈）を反応プレートに移し、反応を開始した。室温で１時間インキュベートした後、５μｌの４００ｍＭ酢酸を添加し、反応をクエンチした。４８５ｎｍでの励起及び５３５ｎｍでの発光を使用して、切断されたローダミン−１１０の蛍光シグナルを定量することによって、酵素生成物を測定した。ＵＳＰ７と化合物とのプレインキュベーションが必要な場合には、基質の添加及び反応時間の開始の前に、化合物をＵＳＰ７（インキュベーション時間１時間）とプレミックスするように試薬の添加順序を変更した。無酵素対照及び阻害されていない酵素対照と比較して、阻害率値を算出した。カーブフィッティング及びＩＣ５０算出は、Ｇｅｎｅｄａｔａ  Ｓｃｒｅｅｎｅｒソフトウェアを使用して行った。
【０３１４】
パーム結合部位（パーム部位）は、パームリガンドから０．５ｎｍ以内の距離にあるＵＳＰ７触媒ドメイン内の残基によって画定される領域である。これは、残基Ｖ２９６、Ｑ２９７、Ｃ３００、Ｒ３０１、Ｌ３０４、Ｄ３０５、Ｅ３０８、Ｉ３２０、Ｐ３２１、Ｆ３２４、Ｙ３４８、Ｄ３４９、Ｈ４０３、Ｑ４０５及びＭ５１５を包含する。
【０３１５】
表２は、パーム部位フラグメント化合物の化学的最適化が生化学的効力を増強し、ＵＳＰ７選択性を保持することを示す。ＵＳＰ７の阻害及びＵＳＰ７触媒ドメインを測定することにより、効力が測定される。ＵＳＰ４７及びＵＳＰ５の阻害を測定することは、選択性を反映する。したがって、これらのデータは、ＵＳＰ７アンタゴニスト化合物８８、４５及び８１がＵＳＰ７触媒活性の選択的アンタゴニストであるが、不活性対照化合物８９及び２５は評価されたＤＵＢの活性に拮抗するのに効果的でないことを示す。
2018508563.tif 000040
【０３１６】
実施例９０３  活性に基づくユビキチン化酵素の濃縮：
８０％コンフルエンシーの２９３Ｔ細胞を、プレートを１０ｍｌのＰＢＳで１回すすいだ後、スクレーピングにより採取する。細胞を４℃で３５０ｇで３分間回転させることにより除去し、ペレットを液体窒素中で急速凍結し、溶解まで−８０℃で保存する。凍結した細胞を、Ｂｕｆｆｅｒ  Ａ（５０ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ７．５）、２５０ｍＭ  スクロース、５ｍＭ  ＴＣＥＰ、２ｍＭ  ＡＴＰ、５０μＭ  フェニルメチルスルホニルフルオライド（ＰＭＳＦ）、１２０ｍＭ  ＮａＣｌ、５ｍＭ  ＭｇＣｌ２）中に再び急速解凍することによって溶解させ、４℃、１８０００ｇでの回転による遠心分離で溶解物を除去する。タンパク質濃度を５ｍｇ／ｍｌに調整し、１．２５ｍｇ、２．５ｍｇ又は５ｍｇの本細胞溶解物を、１５μＭの化合物８８（合計２つの別個のＵＳＰ７アンタゴニスト処理試料）又は１５μＭの化合物８９（合計２つの対照化合物処理試料）のいずれかと共にＴｈｅｒｍｏｍｉｘｅｒ（ニューヨーク州ホーポージのＥｐｐｅｎｄｏｒｆ）で９００ｒｐｍ、２５℃で２０分間、２連でインキュベートする。続いて、４つの試料すべてを、活性に基づく次のＤＵＢプローブ（４つの試料の各々について同じプローブ）：ＨＡタグ付きユビキチンビニルスルホン（マサチューセッツ州ケンブリッジのＢｏｓｔｏｎ  Ｂｉｏｃｈｅｍ）、ＨＡタグ付きユビキチンプロパルギルアミン（オランダ、アムステルダムのＵｂｉＱ  Ｂｉｏ  ＢＶ）又はＨＡタグ付きユビキチンビニルメチルエステル（オランダ、アムステルダムのＵｂｉＱ  Ｂｉｏ  ＢＶ）のいずれか１つ（６．６μｇ／ｍｌ）と共に、１２００ｒｐｍ、２５℃で１時間インキュベートする。室温で少なくとも３０分間、回転させながら０．４％の最終濃度まで２０％ＳＤＳ溶液を添加することにより反応を停止させる。その後、反応した溶解物を、Ｂｕｆｆｅｒ  Ｂ（５０ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ７．５）、１５０ｍＭ  ＮａＣｌ、５ｍＭ  ＥＤＴＡ、ＥＤＴＡ不含プロテアーゼ阻害剤カクテル（ドイツ、マンハイムのＲｏｃｈｅ）、５０μＭ  ＰＭＳＦ、０．５％ＮＰ−４０）で１０倍希釈する。予め平衡化された抗ＨＡ親和性マトリックス（ドイツ、マンハイムのＲｏｃｈｅ）の入力タンパク量に応じて６０〜１００μｌのスラリーを添加し、試料を４℃で一晩回転させることによりＨＡタグ付きタンパク質を本マトリックスで免疫精製する。翌日、次の緩衝液：氷冷Ｂｕｆｆｅｒ  Ｂ  ３回、ＮＰ−４０不含氷冷Ｂｕｆｆｅｒ  Ｂ  １回、及び氷冷１５ｍＭ  ＴＥＡＢ（ｐＨ８．５）３回をこの順で用いてビーズを洗浄する。洗浄間のスピンは、２０００ｇ、４℃で実施する。
【０３１７】
免疫精製された物質を溶出するために、３５μｌのＢｕｆｆｅｒ  Ｃ（１ｍｇ／ｍｌのＨＡペプチド（マサチューセッツ州ウォルサムのＴｈｅｒｍｏＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）、１５ｍＭ  ＴＥＡＢ（ｐＨ８）、０．０２％Ｒａｐｉｇｅｓｔ（登録商標）（マサチューセッツ州ミルフォードのＷａｔｅｒｓ）を加え、３７℃で３０分間、１０００ｒｐｍで振とうさせながらＥｐｐｅｎｄｏｒｆ  Ｔｈｅｒｍｏｍｉｘｅｒ（登録商標）（Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆ  ＡＧ）内でインキュベートする。溶出物質は、３００μｌの１５ｍＭ  ＴＥＡＢを添加し、２６００ｇでスピンすることによりビーズから除去される。除去した物質は、次の処理まで−８０℃で保存する。
【０３１８】
実施例９０４  ゲル内トリプシン消化及び質量分析：
溶出した試料を４〜１２％Ｂｉｓ．Ｔｒｉｓゲル（カリフォルニア州カールズバッドのＬｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）で、３０分間１６０Ｖで分離した。Ｓｉｍｐｌｙ  Ｂｌｕｅ（登録商標）染色溶液（カールズバッドのＬｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を用いてタンパク質バンドを１時間視覚化し、Ｍｉｌｌｉ−Ｑ水中で一晩脱染色した。バンドをゲルの上から下に切り出し、１０個のゲル領域にした。ゲルバンドを、５０ｍＭ重炭酸アンモニウム／５０％アセトニトリル（ＡＣＮ）溶液中で３０分間さらに脱色し、続いて１００％ＡＣＮ中で１０分間脱水した。０．０２μｇ／μＬのＴｒｙｐｓｉｎ（ウィスコンシン州マディソンのＰｒｏｍｅｇａ）溶液をゲルに加え、氷上で１時間冷却した。過剰のトリプシン溶液を除去し、３７℃で一晩、２５ｍＭ重炭酸アンモニウム中でトリプシン消化を行った。ペプチドを１０％ＡＣＮ／０．１％トリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）で抽出し、ＳｐｅｅｄＶａｃ（登録商標）真空エバポレーターで完全に乾燥させた。ペプチドを２％ＡＣＮ／０．１％ギ酸（ＦＡ）中で再構成し、質量分析法により分析した。
【０３１９】
ＮａｎｏＡｃｑｕｉｔｙ（登録商標）ＵＰＬＣシステム（カリフォルニア州ダブリン（Ｗａｔｅｒｓ）での逆相クロマトグラフィーによる分離のために、オートサンプラーを介して試料を注入した。毎分１μＬの流速及び２％のＳｏｌｖｅｎｔ  Ｂから２５％のＳｏｌｖｅｎｔ  Ｂ（Ｓｏｌｖｅｎｔ  Ａは０．１％ギ酸／２％ＡＣＮ／水であり、Ｓｏｌｖｅｎｔ  Ｂは０．１％ＦＡ／２％水／ＡＣＮである）の３５分勾配で、ペプチドをＣ１８カラム（１．７μｍのＢＥＨ−１３０、０．１ｘ１００ｍｍ、カリフォルニア州ダブリンのＷａｔｅｒｓ製）に入れた。ペプチドは、ＬＴＱ  Ｏｒｂｉｔｒａｐ  Ｅｌｉｔｅ（登録商標）質量分析計（カリフォルニア州サンホセのＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ）に直接溶離された。前駆体イオンは、ＦＴＭＳで、６００００の分解能で分析された。ＭＳ／ＭＳは、データ依存モードで操作される機器を用いてイオントラップ内で実施され、それにより最も豊富なイオンの上位１５個がフラグメンテーションにかけられた。
【０３２０】
実施例９０５  データ解析とバイオインフォマティクス：
Ｍａｓｃｏｔ（登録商標）Ｓｅａｒｃｈ  Ａｌｇｏｒｉｔｈｍ（英国ロンドンのＭａｔｒｉｘ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）を用いてＭＳ／ＭＳデータを検索した。検索基準には、２回までの断片切断を伴う可変修飾としてのメチオニン酸化を伴い、５０ｐｐｍの最大ＭＳ許容誤差（full MS tolerance）、０．８ＤａのＭＳ／ＭＳ許容誤差を含めた。逆タンパク質配列からなるＵｎｉｐｒｏｔデータベースのヒト及び不純物のサブセットに対してデータを検索した。その後、５％ＦＤＲ速度でペプチドレベルで線形判別分析（ＬＤＡ）を使用してデータをフィルターにかけ、５％ＦＤＲでＰｒｏｔｅｉｎ  ＦＤＲツールを用いてさらにフィルターにかけた（Huttlin et al. (2010) Cell 143(7):1174-1189）。続いて、すべてのペプチドをＶｉｓｔａでピークの曲線下面積（ＡＵＣ）の定量に供した（Bakalarski et al. (2008) J Proteome Res 7(11):4756-4765）。
【０３２１】
実施例９０６  細胞データ方法（data method）
細胞株：すべての細胞は、特に明記しない限り、郵便番号２０１１０  米国バージニア州マナサス、ユニバーシティ通り１０８１０番地のアメリカンタイプカルチャーコレクション（ＡＴＣＣ）から入手した。ＨＣＴ  ＷＴ（ヒト結腸直腸癌、野生型）親、ＨＣＴ  ＵＳＰ７ｎｕｌｌ（Ｈｏｒｉｚｏｎ；ＨＤ  Ｒ０２−０２８）、ＨＣＴ  ｐ５３ｎｕｌｌ（Ｈｏｒｉｚｏｎ；ＨＤ  １０４−００１）。ＭＣＦ−７。ＭＤＡ−ＭＢ１５７、Ｕ２Ｏｓ、ＳａＯｓ、正常乳房細胞（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ；ＨＭＥＣ  Ａ１０５６５）、正常骨芽細胞（Ｌｏｎｚａ；ＣＣ−２５３８）、ＫＭＳ−２１ＢＭ、ＫＭＳ−２８ＰＥ（日本リサーチバイオリソースコレクション細胞バンク(Japanese Collection of Research Bioresources Cell Bank)）、ＲＫＯ、ＲＫＯ−Ｅ６、Ｖｉｂｏ、ＳｉＨＡ。
抗体：ＵＳＰ７（Ａｂｃａｍ；ａｂ８４０９８）、ＭＤＭ２（Ｓａｎｔａ  Ｃｒｕｚ；ｓｃ−９６５）、チューブリン（Ｌｉｃｏｒ；９２６−４２２１１）、ｐ５３（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ；ＭＳ７３８−Ｐ１）、ｐ２１（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ；０５−６５５）、Ｅ６ＡＰ（Ｓａｎｔａ  Ｃｒｕｚ；ｓｃ−２５５０９）。
化合物：式Ｉの化合物、シスプラチン、ドキソルビシン。
細胞生存率アッセイ：
２５００〜５０００個の細胞を９６ウェルプレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ；３９０４）の１つのウェルに播種した。翌日、培地を正常血清（１０％）含有ビヒクル（ＤＭＳＯ）又は化合物から低血清（０．５％）含有のものに交換した。１６〜２４時間後、ＦＢＳを各ウェルに加えて、血清レベルを正常（１０％）に戻した。その後、細胞を２日間増殖させた。すべての処理を三重に行った。
ａ）  ＩｎｃｕＣｙｔｅＴＭ（細胞密度及びカスパーゼ活性）
細胞を播種した翌日、培地を２μＭ  ＣｅｌｌＥｖｅｎｔ  Ｃａｓｐａｓｅ  ３／７試薬（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ；Ｃ１０４２３）と化合物とを含む低血清培地に交換した。プレートをＩｎｃｕＣｙｔｅ（Ｅｓｓｅｎ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ、Ｉｎｃ．）生存細胞イメージャーに入れ、１５〜２０分後にスキャンを開始した。ＩｎｃｕＣｙｔｅＴＭＺＯＯＭは、カスタマイズされたイメージングプロトコルによって生細胞モニタリングを容易にする。１０倍の対物レンズを用い、少なくとも３日間２時間ごとに画像を撮影した。細胞コンフルエンシー／密度を測定するのに位相差を用い、一方、カスパーゼ活性を測定するのに緑色蛍光を使用した。ＩｎｃｕＣｙｔｅソフトウェア（Ｂａｓｉｃ  Ａｎａｌｙｓｉｓパラメーター）を用いて画像を分析し、細胞密度に対するカスパーゼ活性の比を決定した。
ｂ）  ＣｅｌｌＴｉｔｒｅ−Ｇｌｏ（Ｐｒｏｍｅｇａ；Ｇ７５７０）
化合物を添加してから７２時間後に、ＣｅｌｌＴｉｔｒｅ  Ｇｌｏ（ＣＴＧ）試薬を、製造業者（Ｐｒｏｍｅｇａ）が提供するプロトコルに従って添加した。ＵＳＰ７に対する化合物依存性を試験する実験では、ＵＳＰ７−ｎｕｌｌ細胞の増殖がより遅い場合、ウェルあたり３倍多くのＵＳＰ７−ｎｕｌｌ細胞をプレートした（野生型（ＷＴ）細胞の２５００個に対し７５００個）。多発性骨髄腫の実験では、細胞を低血清に播種し、すぐに化合物で処理した。２４時間後、血清を加えて正常レベルに戻した。２４時間後、すなわち付着細胞の場合の７２時間後の代わりに、化合物を添加した４８時間後にＣＴＧアッセイを行った。
ＭＤＭ２代謝回転：２４ウェルプレート中で、０．１５ｘ１０６個のＭＣＦ−７細胞をＤＭＳＯ又は化合物（１５μＭ）で合計８時間処理した。その８時間の間に、シクロヘキシミド（ＣＨＸ）を収集前に指定された時間添加した。
ウェスタンブロット：２４ウェルプレートで、ウェスタンブロット分析のための溶解の前に、低血清中で２４時間、０．１０〜０．１５ｘ１０６（付着）又は０．５ｘ１０６（懸濁）の細胞をそれぞれ１５μＭ又は２．５μＭの化合物で処理した。
細胞ユビキチン化ＭＤＭ２アッセイ（Cellular Ubiquityl-MDM2 Assay）プロトコル：ＨＣＴ１１６結腸がん細胞又はＳＪＳＡ−１骨肉腫細胞を、ＴＣ処理した９６ウェル黒色透明底（Ｇｒｅｉｎｅｒ、カタログ＃６５５０９０）に入れた９０ｍｌ（ＲＰＭＩ１６４０培地、１０％ＦＢＳ、１ＸＧｌｕｔａＭＡＸＴＭ、Ｇｉｂｃｏ）にウェルあたり１５００００個の密度で播種し、組織培養インキュベーター中３７℃、５％ＣＯ２で２時間インキュベートした。９６ウェルポリプロピレンＶ底（Ｇｒｅｉｎｅｒ、カタログ＃６５１２６１）内で、最終所望濃度の２００倍までＤＭＳＯ中で連続希釈して化合物を調製し、その後ＲＰＭＩ組織培養培地で１：２０に希釈し、細胞プレートの各ウェルに１０ｍｌずつ移した。細胞プレートを一晩２０時間、３７℃、５％ＣＯ２でインキュベートした。プロテアソーム阻害剤ＭＧ１３２（Ｃａｙｍａｎ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ、カタログ＃１００１２６２８）の１２０ｍＭストック（ＲＰＭＩ中）２０ｍｌを各ウェルに加えた。細胞を３７℃、５％ＣＯ２で１時間インキュベートした。ユビキチン化ＭＤＭ２の定量を、Ｕｂ／トータルＭＤＭ２全細胞溶解物キット（ＭＳＤ、カタログ＃Ｋ１５１６８Ｄ−２）を用いて実施した。細胞を、５ｘＭＳＤ溶解緩衝液（含有添加物：１０ｍＭ  ＮａＦ、１０ｍＭ  β−グリセロホスフェート、１．５ｍＭ  Ｎａ３ＶＯ４、プロテアーゼ阻害剤カクテル（Ｓｉｇｍａ、Ｐ８３４０））１５ｍｌを各ウェルに加えることにより溶解し、４℃で３０分間振とうしながらインキュベートした。１００ｍｌの溶解物をＭＳＤ  ９６ウェルプレートの各ウェルに移し、暗所で振とう（６５０ＲＰＭ）しながら室温で１時間インキュベートした。ＭＳＤプレートを、Ｂｉｏｔｅｋ  ＥＬ４０５プレート洗浄器を用いてＴｒｉｓ緩衝生理食塩水（５０ｍＭ  Ｔｒｉｓ−Ｃｌ、ｐＨ７．５、１５０ｍＭ  ＮａＣｌ）中で３回洗浄した。プレートあたり３ｍｌの検出抗体溶液を調製した（１ｍｌのブロック緩衝液Ａ、１．８２ｍｌの１ＸＴｒｉｓ洗浄緩衝液、１５０μｌの２％Ｂｌｏｃｋｅｒ  Ｄ−Ｍ、３０μｌの１０％Ｂｌｏｃｋｅｒ  Ｄ−Ｒ、６０μｌの５０Ｘ抗トータルＭＤＭ２抗体）。ウェルあたり２５ｍｌの検出抗体溶液を添加し、暗所で室温で１時間インキュベート（６５０ＲＰＭ）した。Ｂｉｏｔｅｋ  ＥＬ４０５プレート洗浄器を用いて、プレートをＴｒｉｓ緩衝生理食塩水中で３回洗浄した。ＭＳＤ読み取り緩衝液を製造業者の説明書に従って調製し、１ウェルにつき１５０ｍｌを添加した。ＭＳＤ  Ｓｅｃｔｏｒ  Ｒｅａｄｅｒを用いてプレートを読み取った。最終的な測定は、ユビキチン化ＭＤＭ２／トータルＭＤＭ２の比であった。ユビキチン化ＭＤＭ２の増加率は、Ｇｅｎｅｄａｔａ  Ｓｃｒｅｅｎｅｒソフトウェアを用い、ＤＭＳＯ対照との比較で算出された。
【０３２２】
化合物８８は、低血清条件（ＥＣ５０＝２マイクロモル）でＳＪＳＡ−１細胞におけるユビキチン化ＭＤＭ２の増加を引き起こした。ｐ５３の発現は、ＨＣＴ１１６結腸がん細胞、乳がん細胞及び骨肉腫細胞における完全なパーム部位３化合物活性のために必要とされる。ＵＳＰ７発現は、式Ｉの化合物活性に必要である。低いＭＤＭ２発現は、パーム部位３の化合物活性を損なう。
【０３２３】
式Ｉの化合物は、ＭＤＭ２を安定化させることなくｐ５３及びｐ２１を増加させ、化学療法の標準治療と組み合わせることができる。式Ｉの化合物は、ＭＤＭ２を不安定化し、内因性ＵＳＰ７  ＤＵＢ活性を選択的に阻害する。
【０３２４】
実施例９０７  １次ＮＭＲスクリーン
直接結合検出のためにＮＭＲを用い、１次フラグメントスクリーンを行った。標的タンパク質と相互作用するライブラリー中の化合物を同定するために、飽和差分光法（saturation difference spectroscopy method）（Mayer, M.; Meyer B. Angew. Chem., Int. Ed., 38, 1784-1788 (1999)）を適用した。スクリーニングライブラリーは、平均約２５０ダルトンの分子量の４８６２個の「フラグメント」から構成された。第１の工程では、ＵＳＰ７触媒ドメインの存在下で５つのフラグメントの混合物を測定し、結合を示した化合物を単結合として反復した。混合物のＳＴＤスペクトルにおける＞５のＳＩＮＯ（信号‐雑音比）及び確認測定からの＞１０のＳＩＮＯに基づいて、一次結合剤として化合物を選択した。フラグメント結合剤を同定し、一次スクリーンで確認し、２Ｈ／１３Ｃ／１５Ｎ同位体標識ＵＳＰ７タンパク質への一次結合剤の添加並びにＴＲＯＳＹ−ＨＳＱＣスペクトルにおける１５Ｎシフト摂動の観察及び分類がそれに続いた（Pervushin, K., Riek, R., Wider, G. & Wuthrich, K. (1997) Proc Natl Acad Sci USA 94:12366-1237）。シフト摂動は、関与するアミノ酸及びＵＳＰ７結晶構造に基づいて特異的結合部位への足場を分類することを可能にした。１５Ｎ  ＴＲＯＳＹオーバーレイは、ＵＳＰ７の「パーム部位」に結合するフラグメントに特有の化学シフト摂動を示す。
【０３２５】
前述の発明は明確な理解のために例示及び実施例によって幾分詳細に説明されているが、説明及び実施例は、本発明の範囲を限定するものと解釈されるべきではない。したがって、すべての適切な改変及び等価物は、以下の特許請求の範囲によって定義される本発明の範囲内にあると考えることができる。本明細書に引用されるすべての特許及び科学文献の開示内容は、その全体が出典明示により本明細書に援用される。
【図１Ａ】
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【図１Ｂ】
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【図２Ａ】
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【図２Ｂ】
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【図２Ｃ】
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【図３Ａ】
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【図３Ｂ】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８Ａ】
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【図８Ｂ】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２Ａ】
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【図１２Ｂ】
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【図１２Ｃ】
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【図１２Ｄ】
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【図１３Ａ】
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【図１３Ｂ】
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【図１３Ｃ】
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【図１３Ｄ】
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【図１４Ａ】
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【図１４Ｂ】
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【図１４Ｃ】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７】
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【国際調査報告】
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