(57)【要約】本開示に係る組成物及びそれを使用する方法は、ＣＡＲ−Ｔ細胞療法を受けている対象におけるサイトカイン放出症候群（ＣＲＳ）またはサイトカインストームの発生を抑制または低減することを含み、前記対象に、アポトーシス細胞またはアポトーシス細胞上清を含む組成物を投与する。または、本開示に係る組成物及びそれを使用する方法は、ＣＡＲ−Ｔ細胞療法の効果を低下させない。また、サイトカイン放出症候群（ＣＲＳ）またはサイトカインストームが発生している対象におけるサイトカイン産生を低減または抑制するための組成物及びそれを使用する方法であって、前記対象に、アポトーシス細胞またはアポトーシス細胞上清を含む組成物を投与することを含む組成物またはそれを使用する方法が開示される。【選択図】図６
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
キメラ抗原受容体発現Ｔ細胞（ＣＡＲ−Ｔ細胞）と、
アポトーシス細胞またはアポトーシス細胞上清と、
薬学的に許容可能な賦形剤とを含むことを特徴とする組成物。
【請求項２】
前記アポトーシス細胞が、初期アポトーシス状態のアポトーシス細胞を含むことを特徴とする請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
前記アポトーシス細胞が、プールされた第三者のドナー細胞を含むことを特徴とする請求項１に記載の組成物。
【請求項４】
前記アポトーシス細胞上清が、
（ａ）アポトーシス細胞を用意するステップと、
（ｂ）前記アポトーシス細胞を培養するステップと、
（ｃ）培養した前記アポトーシス細胞から上清を分離するステップと
を有する方法により得られることを特徴とする請求項１に記載の組成物。
【請求項５】
前記アポトーシス細胞上清が、アポトーシス細胞白血球上清を含み、
前記ステップ（ｂ）の代わりに、
（ｄ）白血球を用意するステップと、
（ｅ）任意選択で、前記アポトーシス細胞及び白血球を洗浄するステップと、
（ｆ）前記アポトーシス細胞及び白血球を共培養するステップと
を有することを特徴とする請求項４に記載の組成物。
【請求項６】
前記白血球が、食細胞、マクロファージ、樹状細胞、単球、Ｂ細胞、Ｔ細胞、及びＮＫ細胞からなる群より選択されることを特徴とする請求項５に記載の組成物。
【請求項７】
前記ＣＡＲ−Ｔ細胞と、前記アポトーシス細胞またはアポトーシス細胞上清とが、互いに別個の組成物に含まれることを特徴とする請求項１に記載の組成物。
【請求項８】
ＣＴＬＡ−４阻害剤、α１−アンチトリプシンまたはその断片若しくは類似体、テルル系化合物、免疫調節剤、またはそれらの任意の組み合わせからなる群より選択される追加的な薬剤をさらに含むことを特徴とする請求項１に記載の組成物。
【請求項９】
前記追加的な薬剤またはそれらの任意の組み合わせが、
前記ＣＡＲ−Ｔ細胞を含む組成物に含まれるか、前記アポトーシス細胞若しくはアポトーシス細胞上清を含む組成物に含まれるか、またはそれらとは別個の組成物に含まれることを特徴とする請求項８に記載の組成物。
【請求項１０】
キメラ抗原受容体発現Ｔ細胞（ＣＡＲ−Ｔ細胞）癌療法を受けている対象におけるサイトカイン放出症候群（ＣＲＳ）またはサイトカインストームの発生を抑制または低減する方法であって、
アポトーシス細胞またはアポトーシス細胞上清を含む組成物を前記対象に投与するステップを有することを特徴とする方法。
【請求項１１】
前記アポトーシス細胞が、初期アポトーシス状態のアポトーシス細胞を含むことを特徴とする請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
前記アポトーシス細胞が、前記対象の自家由来であるか、またはプールされた第三者のドナー細胞を含むことを特徴とする請求項１０に記載の方法。
【請求項１３】
前記組成物を前記対象に投与する前記ステップが、前記ＣＡＲ−Ｔ細胞癌療法の前、同時、または後に実施されることを特徴とする請求項１０に記載の方法。
【請求項１４】
前記アポトーシス細胞上清が、
（ａ）アポトーシス細胞を用意するステップと、
（ｂ）前記アポトーシス細胞を培養するステップと、
（ｃ）培養した前記アポトーシス細胞から上清を分離するステップと
を有する方法により得られることを特徴とする請求項１０に記載の方法。
【請求項１５】
前記アポトーシス細胞上清が、アポトーシス細胞白血球上清を含み、
前記ステップ（ｂ）の代わりに、
（ｄ）白血球を用意するステップと、
（ｅ）任意選択で、前記アポトーシス細胞及び白血球を洗浄するステップと、
（ｆ）前記アポトーシス細胞及び白血球を共培養するステップと
を有することを特徴とする請求項１４に記載の方法。
【請求項１６】
前記白血球が、食細胞、マクロファージ、樹状細胞、単球、Ｂ細胞、Ｔ細胞、及びＮＫ細胞からなる群より選択されることを特徴とする請求項１５に記載の方法。
【請求項１７】
ＣＴＬＡ−４阻害剤、α１−アンチトリプシンまたはその断片若しくは類似体、テルル系化合物、免疫調節剤、またはそれらの任意の組み合わせからなる群より選択される追加的な薬剤を前記対象に投与するステップをさらに有することを特徴とする請求項１０に記載の方法。
【請求項１８】
前記追加的な薬剤を前記対象に投与する前記ステップが、前記ＣＡＲ−Ｔ細胞癌療法の前、同時、または後に実施されることを特徴とする請求項１７に記載の方法。
【請求項１９】
前記ＣＡＲ−Ｔ細胞癌療法を受けているが前記アポトーシス細胞または前記アポトーシス細胞上清が投与されていない対象と比較して、少なくとも１つの炎症誘発性サイトカインの濃度が減少することを特徴とする請求項１０に記載の方法。
【請求項２０】
サイトカイン放出症候群若しくはサイトカインストームが発生しているか、またはサイトカイン放出症候群若しくはサイトカインストームが発生しやすい対象におけるサイトカイン産生を低減または抑制する方法であって、
アポトーシス細胞またはアポトーシス細胞上清を含む組成物を前記対象に投与するステップを有し、
それにより、前記対象のサイトカイン産生を低減または抑制することを特徴とする方法。
【請求項２１】
サイトカイン放出症候群若しくはサイトカインストームが発生しているか、またはサイトカイン放出症候群若しくはサイトカインストームが発生しやすいが、前記アポトーシス細胞または前記アポトーシス細胞上清が投与されていない対象と比較して、少なくとも１つの炎症誘発性サイトカインの産生が低減または抑制されたことを特徴とする請求項２０に記載の方法。
【請求項２２】
前記対象が、ＣＡＲ−Ｔ細胞癌療法を受けており、
当該方法は、前記ＣＡＲ−Ｔ細胞癌療法の効果を低減させないことを特徴とする請求項２０に記載の方法。
【請求項２３】
前記サイトカイン放出症候群またはサイトカインストームの原因が、感染性の刺激、疾病、または症候群を含むことを特徴とする請求項２０に記載の方法。
【請求項２４】
前記感染性の刺激、疾病、または症候群が、インフルエンザ、鳥インフルエンザ、重症急性呼吸器症候群（ＳＡＲＳ）、エプスタイン・バール・ウイルス関連血球貪食症候群（ＨＬＨ）、敗血症、グラム陰性敗血症、マラリア、エボラウイルス、天然痘ウイルス、全身型グラム陰性菌感染症、またはヤーリッシュ・ヘルクスハイマー症候群を含むことを特徴とする請求項２３に記載の方法。
【請求項２５】
前記サイトカイン放出症候群またはサイトカインストームの原因が、非感染性の刺激、疾病、または症候群を含むことを特徴とする請求項２０に記載の方法。
【請求項２６】
前記非感染性の刺激、疾病、または症候群が、血球貪食症候群（ＨＬＨ）、突発性ＨＬＨ、マクロファージ活性化症候群（ＭＡＳ）、慢性関節炎、全身型若年性特発性関節炎（ｓＪＩＡ）、スティル病、クリオピリン関連周期性発熱症候群（ＣＡＰＳ）、家族性寒冷自己炎症症候群（ＦＣＡＳ）、家族性寒冷蕁麻疹（ＦＣＵ）、マックル・ウェルズ症候群（ＭＷＳ）、慢性乳児神経皮膚関節炎症候群（ＣＩＮＣＡ）、ＮＬＲＰ３遺伝子における遺伝的または新生の機能獲得変異を含むクリオピリン関連周期性発熱症候群、遺伝性自己炎症性疾患、急性膵炎、重症熱傷、外傷、急性呼吸窮迫症候群、免疫療法、モノクローナル抗体療法、薬物使用に起因するもの、毒素吸入に起因するもの、リポ多糖（ＬＰＳ）に起因するもの、グラム陽性毒素に起因するもの、真菌毒素に起因するもの、グリコシルホスファチジルイノシトール（ＧＰＩ）に起因するもの、またはＲＩＧ−１遺伝子発現の調節に起因するものを含むことを特徴とする請求項２５に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本開示は、ＣＡＲ−Ｔ細胞癌療法を受けている対象におけるサイトカイン放出症候群（ＣＲＳ）またはサイトカインストームの発生を抑制または低減するための組成物及び方法に関する。さらに、本開示は、サイトカイン放出症候群またはサイトカインストームが発生している対象におけるサイトカイン産生を低減または抑制するための組成物及び方法に関する。本開示に係る方法は、ＣＡＲ−Ｔ細胞療法と組み合わせて、アポトーシス細胞またはアポトーシス細胞上清を含む組成物を前記対象に投与するステップを有する。
【背景技術】
【０００２】
癌の標準的な治療法は、外科手術、化学療法、及び放射線療法であるが、例えば標的免疫療法などの改善された方法が、現在開発され試験されている。１つの有望な技術は、養子細胞移植（ＡＣＴ）を使用し、腫瘍を認識して攻撃するように免疫細胞を改変する。ＡＣＴの一例では、患者自身またはドナーの細胞障害性Ｔ細胞を遺伝子操作し、腫瘍細胞の表面に発現した腫瘍特異性抗原を標的とするキメラ抗原受容体（ＣＡＲ−Ｔ細胞）が発現するようにする。このようなＣＡＲ−Ｔ細胞は、発現後、腫瘍特異性抗原を発現する細胞に対してのみ細胞障害性を有する。ＣＡＲ−Ｔ細胞療法が、とりわけ進行した急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）及びリンパ腫の制御に対して大きな可能性を有していることが、臨床試験により示されている。
【０００３】
しかしながら、ＣＡＲ−Ｔ細胞療法または別の免疫療法を受けている患者の一部には、サイトカイン放出症候群（ＣＲＳ）と呼ばれる、生命を脅かす可能性のある危険な副作用が発生することがある。ＣＲＳでは、患者に投与され活性化されたＴ細胞によって全身性炎症反応が発生し、血流中にサイトカインが急激かつ大量に放出され、危険な低血圧、高熱、震えが生じる。
【０００４】
ＣＲＳの重症例では、サイトカインと白血球との間に正のフィードバックループが存在しサイトカイン濃度（レベル）が大幅に上昇するサイトカインストーム（別名、サイトカインカスケードまたは高サイトカイン血症）が患者に生じる。これにより、例えば、心機能障害、成人呼吸窮迫症候群、神経毒性、腎不全、肝不全、肺水腫、及び播種性血管内凝固症候群などの生命を脅かす可能性のある合併症が発生する恐れがある。
【０００５】
例えば、最新のフェーズＩ試験において、Ｔ細胞表面のＣＤ２８受容体と結合するモノクローナル抗体ＴＧＮ１４１２が投与された６名の患者に、重度のサイトカインストーム及び多臓器不全が生じた。これは、ＴＧＮ１４１２投与量が、動物において安全であることが分かっている量よりも５００倍低いという事実に関わらず起こった（St. Clair EW: The calm after the cytokine storm: Lessons from the TGN1412 trial. J Clin Invest 118: 1344-1347, 2008）。
【０００６】
今日まで、コルチコステロイドを用いた生物学的療法、例えば抗ＩＬ−６療法及び抗炎症薬が、ＣＡＲ−Ｔ細胞療法を受けている患者におけるサイトカイン放出症候群を制御すると考えられえていた。しかしながら、ステロイドは、ＣＡＲ−Ｔ細胞の活性及び／または増殖に影響を与え、患者を敗血症及び日和見感染症の危険に曝す。抗炎症薬は、サイトカイン放出症候群またはサイトカインストームの制御に効果的ではない。サイトカインストームでは非常に多数のサイトカインが放出されるが、患者への抗炎症薬の投与には限界があるためである。したがって、ＣＡＲ−Ｔ細胞療法の可能性を実現するために、サイトカイン放出症候群、特にサイトカインストームを制御するための新規なストラテジーが求められている。
【０００７】
サイトカインストームはまた、他の感染性または非感染性刺激に由来する。サイトカインストームでは、例えば、インターロイキン１（ＩＬ−１）、ＩＬ−６、ガンマインターフェロン（γ−ＩＦＮ）などの様々な炎症誘発性サイトカインが放出され、それにより、低血圧症、出血、そして最終的には多臓器不全が発生する。１９１８年のＨ１Ｎ１インフルエンザ・パンデミック及びつい最近の鳥インフルエンザＨ５Ｎ１の感染における、健康な免疫系を有していると思われる若年層における比較的高い死亡率は、サイトカインストームに起因するものである。この症候群はまた、重症急性呼吸器症候群（ＳＡＲＳ）、エプスタイン・バール・ウイルス関連血球貪食症候群、グラム陰性敗血症、マラリア、及び他の様々な感染症（例えばエボラ感染症）の進行症状または末期症状として起こることも知られている。
【０００８】
サイトカインストームはまた、例えば、急性膵炎、重度の火傷若しくは外傷、または急性呼吸窮迫症候群などの感染以外の原因に由来する。そのため、サイトカイン放出症候群、特にサイトカインストームを制御するための新規なストラテジーが求められている。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００９】
一態様では、ここで開示されるのは、キメラ抗原受容体発現Ｔ細胞（ＣＡＲ−Ｔ細胞）と、アポトーシス細胞またはアポトーシス細胞上清と、薬学的に許容可能な賦形剤とを含む組成物である。関連する一態様では、アポトーシス細胞は、初期アポトーシス状態のアポトーシス細胞を含む。関連する別の態様では、アポトーシス細胞は、プールされた第三者のドナー細胞を含む。関連する一態様では、アポトーシス細胞上清は、（ａ）アポトーシス細胞を用意するステップと、（ｂ）アポトーシス細胞を培養するステップと、（ｃ）培養したアポトーシス細胞から上清を分離するステップとを有する方法により得られる。関連する一態様では、アポトーシス細胞上清はアポトーシス細胞白血球上清であり、ステップ（ｂ）の代わりに、（ｄ）白血球を用意するステップと、（ｅ）任意選択で、アポトーシス細胞及び白血球を洗浄するステップと、（ｆ）アポトーシス細胞及び白血球を共培養するステップとを有する。関連する別の態様では、用意される白血球は、食細胞、マクロファージ、樹状細胞、単球、Ｂ細胞、Ｔ細胞、及びＮＫ細胞からなる群より選択される。
【００１０】
関連する一態様では、ＣＡＲ−Ｔ細胞と、アポトーシス細胞またはアポトーシス細胞上清とは、互いに別個の組成物に含まれる。
【００１１】
関連する一態様では、本発明に係る組成物は、ＣＴＬＡ−４阻害剤、α１−アンチトリプシンまたはその断片若しくは類似体、テルル系化合物、免疫調節剤、またはそれらの任意の組み合わせからなる群より選択される追加的な薬剤をさらに含む。関連する別の態様では、追加的な薬剤またはそれらの任意の組み合わせは、ＣＡＲ−Ｔ細胞を含む組成物に含まれるか、アポトーシス細胞若しくはアポトーシス細胞上清を含む組成物に含まれるか、またはそれらとは別個の組成物に含まれる。
【００１２】
一態様では、ここで開示されるのは、キメラ抗原受容体発現Ｔ細胞（ＣＡＲ−Ｔ細胞）癌療法を受けている対象におけるサイトカイン放出症候群（ＣＲＳ：Cytokine Release Syndrome）またはサイトカインストームの発生を抑制または低減する方法であって、アポトーシス細胞またはアポトーシス細胞上清を含む組成物を前記対象に投与するステップを有し、それにより、前記対象のサイトカインストームの発生を抑制または低減する方法である。関連する一態様では、アポトーシス細胞は、初期アポトーシス状態のアポトーシス細胞を含む。関連する別の態様では、アポトーシス細胞は、前記対象の自家由来であるか、またはプールされた第三者のドナー細胞を含む。関連する別の態様では、前記組成物を前記対象に投与する前記ステップは、ＣＡＲ−Ｔ細胞癌療法の前、同時、または後に実施される。関連する別の態様では、アポトーシス細胞上清は、（ａ）アポトーシス細胞を用意するステップと、（ｂ）アポトーシス細胞を培養するステップと、（ｃ）培養したアポトーシス細胞から上清を分離するステップとを有する方法により得られる。関連する別の態様では、アポトーシス細胞上清はアポトーシス細胞白血球上清であり、ステップ（ｂ）の代わりに、（ｄ）白血球を用意するステップと、（ｅ）任意選択で、アポトーシス細胞及び白血球を洗浄するステップと、（ｆ）アポトーシス細胞及び白血球を共培養するステップとを有する。関連する別の態様では、用意される白血球は、食細胞、マクロファージ、樹状細胞、単球、Ｂ細胞、Ｔ細胞、及びＮＫ細胞からなる群より選択される。
【００１３】
関連する別の態様では、本開示に係る方法は、ＣＴＬＡ−４阻害剤、α１−アンチトリプシンまたはその断片若しくは類似体、テルル系化合物、免疫調節剤、またはそれらの任意の組み合わせからなる群より選択される追加的な薬剤を対象に投与するステップをさらに有する。関連する別の態様では、前記追加的な薬剤を対象に投与する前記ステップは、ＣＡＲ−Ｔ細胞癌療法の前、同時、または後に実施される。関連する別の態様では、ＣＡＲ−Ｔ細胞癌療法を受けているがアポトーシス細胞またはアポトーシス細胞上清が投与されていない対象と比較して、少なくとも１つの炎症誘発性サイトカインの濃度（レベル）が減少する。
【００１４】
一態様では、ここで開示されるのは、サイトカイン放出症候群若しくはサイトカインストームが発生しているか、またはサイトカイン放出症候群若しくはサイトカインストームが発生しやすい対象におけるサイトカイン産生を低減または抑制する方法であって、アポトーシス細胞またはアポトーシス細胞上清を含む組成物を前記対象に投与するステップを有し、それにより、前記対象のサイトカイン産生を低減または抑制する方法である。関連する一態様では、サイトカイン放出症候群若しくはサイトカインストームが発生しているか、またはサイトカイン放出症候群若しくはサイトカインストームが発生しやすいが、前記アポトーシス細胞または前記アポトーシス細胞上清が投与されていない対象と比較して、少なくとも１つの炎症誘発性サイトカインの産生が低減または抑制される。関連する別の態様では、前記対象は、ＣＡＲ−Ｔ細胞癌療法を受けており、当該方法は、ＣＡＲ−Ｔ細胞癌療法の効果を低下させない。
【００１５】
関連する一態様では、サイトカイン放出症候群またはサイトカインストームの原因は、感染性の刺激、疾病、または症候群を含む。関連する別の態様では、感染性の刺激、疾病、または症候群は、インフルエンザ、鳥インフルエンザ、重症急性呼吸器症候群（ＳＡＲＳ）、エプスタイン・バール・ウイルス関連血球貪食症候群（ＨＬＨ）、敗血症、グラム陰性敗血症、マラリア、エボラウイルス、天然痘ウイルス、全身型グラム陰性菌感染症、またはヤーリッシュ・ヘルクスハイマー症候群を含む。
【００１６】
関連する一態様では、サイトカイン放出症候群またはサイトカインストームの原因は、非感染性の刺激、疾病、または症候群を含む。関連する別の態様では、非感染性の刺激、疾病、または症候群は、血球貪食症候群（ＨＬＨ）、突発性ＨＬＨ、マクロファージ活性化症候群（ＭＡＳ）、慢性関節炎、全身型若年性特発性関節炎（ｓＪＩＡ）、スティル病、クリオピリン関連周期性発熱症候群（ＣＡＰＳ）、家族性寒冷自己炎症症候群（ＦＣＡＳ）、家族性寒冷蕁麻疹（ＦＣＵ）、マックル・ウェルズ症候群（ＭＷＳ）、慢性乳児神経皮膚関節炎症候群（ＣＩＮＣＡ）、ＮＬＲＰ３遺伝子における遺伝的または新生の機能獲得変異を含むクリオピリン関連周期性発熱症候群、遺伝性自己炎症性疾患、急性膵炎、重症熱傷、外傷、急性呼吸窮迫症候群、免疫療法に起因するもの、モノクローナル抗体療法、薬物使用に起因するもの、毒素吸入に起因するもの、リポ多糖（ＬＰＳ）に起因するもの、グラム陽性毒素に起因するもの、真菌毒素に起因するもの、グリコシルホスファチジルイノシトール（ＧＰＩ）に起因するもの、またはＲＩＧ−１遺伝子発現の調節に起因するものを含む。
【図面の簡単な説明】
【００１７】
本開示の主題は、本明細書の結論部分に、具体的に指摘されかつ明確に請求記載されている。しかしながら、本開示に係る組成物及び方法は、構成及び操作方法の両方に関して、その目的、特徴、及び利点と共に、添付図面を参照して以下の詳細な説明を読むことにより十分に理解できるであろう。
【００１８】
【図１Ａ】標準的なＣＡＲ−Ｔ細胞療法を示す概略図。
【図１Ｂ】患者自身の細胞（自己由来）を用いてアポトーシス細胞またはアポトーシス細胞上清を産生する患者における、安全かつ有効なＣＡＲ−Ｔ細胞癌療法の実施形態を示す概略図。
【図２】ドナー細胞を用いてアポトーシス細胞またはアポトーシス細胞上清を産生する患者における、安全かつ有効なＣＡＲ−Ｔ細胞癌療法の実施形態を示す概略図。
【図３】形質導入されたＴ４＋ＣＡＲ−Ｔ細胞の抗ＣＤ１２４分析のフローサイトメトリー結果を示すＴ細胞の形質導入の検証を示す図。
【図４】Ｔ４＋ＣＡＲ−Ｔ細胞は、ＳＫＯＶ３−ｌｕｃ卵巣腺癌細胞の増殖を減少させた。ＳＫＯＶ３−ｌｕｃ細胞の単層を非形質導入Ｔ細胞またはＴ４＋ＣＡＲ−Ｔ細胞のいずれかによって培養した細胞障害性アッセイの結果を示すグラフ図。
【図５】アポトーシス細胞は、Ｔ４＋ＣＡＲ−Ｔ細胞の抗腫瘍活性を無効化しない。ＳＫＯＶ３−ｌｕｃ細胞の単層を、ビヒクル（ハルトマン溶液）、アポトーシス細胞（ＡｐｏＣｅｌｌ）、アポトーシス細胞の上清（ＡｐｏＳｕｐ）、または共培養したアポトーシス細胞及び単球／マクロファージの上清（ＡｐｏＭｏｎ  Ｓｕｐ）の存在下で、非形質導入Ｔ細胞またはＴ４＋ＣＡＲ−Ｔ細胞のいずれかと共に培養した、細胞毒性アッセイに基づいた結果のグラフ図。
【図６】細胞毒性作用の間に高レベルで分泌されるＩＬ−６は、アポトーシス細胞によって減少させられる。ＳＫＯＶ３−ｌｕｃ及びヒト単球／マクロファージの共培養物を、アポトーシス細胞（ＡｐｏＣｅｌｌ）、ＡｐｏＣｅｌｌ上清（ＡｐｏＳｕｐ）、またはアポトーシス細胞及び単球／マクロファージ共培養物（ＡｐｏＭｏｎ  Ｓｕｐ）に曝露した結果を示すグラフ図。
【図７】ＣＡＲ−Ｔ細胞療法中のＬＰＳ曝露後のアポトーシス細胞またはアポトーシス細胞上清またはアポトーシス細胞及び単球の共培養物の効果を示すグラフ図。リポ多糖類（ＬＰＳ）を細胞障害アッセイに添加すると、ＩＬ−６の非常に高い分泌が証明された。結果は、アポトーシス細胞（Ａｐｏｃｅｌｌ）、またはアポトーシス細胞の上清（ＡｐｏＳｕｐ）、またはアポトーシス細胞及び単球／マクロファージ（ＡｐｏＭｏｎ  Ｓｕｐ）の共培養物の上清への曝露がＩＬ−６を減少させ、ＩＬ−６は許容レベルまで低下したことを示す。
【発明を実施するための形態】
【００１９】
説明の簡潔さ及び明確さを目的として、図中の要素は、必ずしも正確な縮尺で図示されているとは限らないことを理解されたい。例えば、要素のいくつかの寸法は、明確さを目的として、他の要素に対して誇張されている場合がある。さらに、適切と考えられる場合、対応する要素または類似の要素を示すために、参照符号が複数の図面で繰り返し使用される。
【００２０】
本出願は、米国特許仮出願第６２／１１７，７５２号（２０１５年２月１８日出願）、同第６２／１２７，２１８号（２０１５年３月２日出願）、同第６２／１４８，２２７号（２０１５年４月１６日出願）、及び同第６２／１５９，３６５号（２０１５年５月１１日出願）の利益を主張する。上記出願の開示内容の全体は、この参照により本明細書に援用される。
【００２１】
以下の詳細な説明において、本発明の十分な理解を提供するために、多数の具体的な詳細が示される。しかしながら、本発明が、これらの具体的な詳細を用いることなく実施可能であることは、当業者には理解できるであろう。他の例では、本発明を不明瞭にしないように、よく知られた方法、手順、及び構成要素は、詳細には記載しない。
【００２２】
免疫細胞の遺伝子操作は、癌に対する免疫細胞療法のストラテジーとしてよく知られている。免疫細胞療法は、必要としている対象への、自家由来または同種の免疫細胞の操作及び投与に基づいている。免疫細胞に基づく療法は、ナチュラルキラー細胞療法、枝状細胞療法、並びに、ナイーブＴ細胞、エフェクターＴ細胞（別名、ヘルパーＴ細胞）、細胞傷害性Ｔ細胞、及び制御性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）を使用したＴ細胞免疫療法を含む。
【００２３】
一実施形態では、ここで開示されるのは、遺伝子操作された免疫細胞を含む組成物である。別の実施形態では、遺伝子操作された免疫細胞は、Ｔ細胞である。別の実施形態では、Ｔ細胞は、ナイーブＴ細胞である。別の実施形態では、Ｔ細胞は、ナイーブＣＤ４＋Ｔ細胞である。別の実施形態では、Ｔ細胞は、ナイーブＣＤ８＋Ｔ細胞である。別の実施形態では、遺伝子操作された免疫細胞は、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞である。別の実施形態では、遺伝子操作された免疫細胞は、枝状細胞である。さらに別の実施形態では、遺伝子操作されたＴ細胞は、細胞傷害性Ｔリンパ球（ＣＴＬ細胞）である。別の実施形態では、遺伝子操作されたＴ細胞は、制御性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）である。別の実施形態では、遺伝子操作されたＴ細胞は、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）Ｔ細胞である。別の実施形態では、遺伝子操作されたＴ細胞は、遺伝子操作されたＴ細胞受容体（ＴＣＲ）細胞である。
【００２４】
一実施形態では、ここで開示されるのは、遺伝子操作された免疫細胞と、アポトーシス細胞とを含む組成物である。別の実施形態では、ここで開示されるのは、遺伝子操作された免疫細胞と、アポトーシス細胞上清とを含む組成物である。別の実施形態では、遺伝子操作された免疫細胞は、Ｔ細胞である。別の実施形態では、遺伝子操作された免疫細胞は、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞である。さらに別の実施形態では、遺伝子操作された免疫細胞は、細胞傷害性Ｔリンパ球（ＣＴＬ細胞）である。別の実施形態では、遺伝子操作された免疫細胞は、制御性Ｔリンパ球（Ｔｒｅｇ細胞）である。
【００２５】
一実施形態では、ここで開示されるのは、遺伝子操作されたＴ細胞と、アポトーシス細胞とを含む組成物である。別の実施形態では、ここで開示されるのは、遺伝子操作されたＴ細胞と、アポトーシス細胞上清とを含む組成物である。別の実施形態では、遺伝子操作されたＴ細胞は、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）Ｔ細胞である。別の実施形態では、遺伝子操作されたＴ細胞は、遺伝子操作されたＴ細胞受容体（ＴＣＲ）細胞である。
【００２６】
一実施形態では、ここで開示されるのは、ＣＡＲ−Ｔ細胞と、アポトーシス細胞とを含む組成物である。別の実施形態では、ここで開示されるのは、遺伝子操作されたＴ細胞受容体（ＴＣＲ）細胞と、アポトーシス細胞とを含む組成物である。別の実施形態では、ここで開示されるのは、ＣＡＲ−Ｔ細胞と、アポトーシス細胞上清とを含む組成物である。別の実施形態では、ここで開示されるのは、遺伝子操作されたＴ細胞受容体（ＴＣＲ）細胞と、アポトーシス細胞上清とを含む組成物である。
【００２７】
いくつかの実施形態では、遺伝子操作された免疫細胞と、アポトーシス細胞またはアポトーシス細胞上清とは、単一の組成物に含まれる。別の実施形態では、遺伝子操作された免疫細胞と、アポトーシス細胞またはアポトーシス細胞上清とは、互いに別個の組成物に含まれる。
【００２８】
一実施形態では、ここで開示されるのは、遺伝子操作された免疫細胞と、ＣＴＬＡ−４阻害剤、α１−アンチトリプシンまたはその断片若しくは類似体、テルル系化合物、免疫調節剤、またはそれらの任意の組み合わせからなる群より選択される追加的な薬剤とを含む組成物である。別の実施形態では、ここで開示されるのは、遺伝子操作された免疫細胞と、アポトーシス細胞と、ＣＴＬＡ−４阻害剤、α１−アンチトリプシンまたはその断片若しくは類似体、テルル系化合物、免疫調節剤、またはそれらの任意の組み合わせからなる群より選択される追加的な薬剤とを含む組成物である。別の実施形態では、ここで開示されるのは、遺伝子操作された免疫細胞と、ＣＴＬＡ−４阻害剤、α１−アンチトリプシンまたはその断片若しくは類似体、テルル系化合物、免疫調節剤、またはそれらの任意の組み合わせからなる群より選択される追加的な薬剤とを含む組成物である。別の実施形態では、ここで開示されるのは、遺伝子操作された免疫細胞と、アポトーシス細胞上清と、ＣＴＬＡ−４阻害剤、α１−アンチトリプシンまたはその断片若しくは類似体、テルル系化合物、免疫調節剤、またはそれらの任意の組み合わせからなる群より選択される追加的な薬剤とを含む組成物である。別の実施形態では、遺伝子操作された免疫細胞は、Ｔ細胞である。別の実施形態では、遺伝子操作された免疫細胞は、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞である。さらに別の実施形態では、遺伝子操作された免疫細胞は、細胞傷害性Ｔリンパ球（ＣＴＬ細胞）である。
【００２９】
一実施形態では、ここで開示されるのは、遺伝子操作されたＴ細胞と、ＣＴＬＡ−４阻害剤、α１−アンチトリプシンまたはその断片若しくは類似体、テルル系化合物、免疫調節剤、またはそれらの任意の組み合わせからなる群より選択される追加的な薬剤とを含む組成物である。別の実施形態では、ここで開示されるのは、遺伝子操作されたＴ細胞と、アポトーシス細胞と、ＣＴＬＡ−４阻害剤、α１−アンチトリプシンまたはその断片若しくは類似体、テルル系化合物、免疫調節剤、またはそれらの任意の組み合わせからなる群より選択される追加的な薬剤とを含む組成物である。別の実施形態では、ここで開示されるのは、遺伝子操作されたＴ細胞と、ＣＴＬＡ−４阻害剤、α１−アンチトリプシンまたはその断片若しくは類似体、テルル系化合物、免疫調節剤、またはそれらの任意の組み合わせからなる群より選択される追加的な薬剤とを含む組成物である。別の実施形態では、ここで開示されるのは、遺伝子操作されたＴ細胞と、アポトーシス細胞上清と、ＣＴＬＡ−４阻害剤、α１−アンチトリプシンまたはその断片若しくは類似体、テルル系化合物、免疫調節剤、またはそれらの任意の組み合わせからなる群より選択される追加的な薬剤とを含む組成物である。別の実施形態では、遺伝子操作されたＴ細胞は、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）Ｔ細胞である。別の実施形態では、遺伝子操作されたＴ細胞は、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）細胞である。
【００３０】
一実施形態では、ここで開示されるのは、ＣＡＲ−Ｔ細胞と、ＣＴＬＡ−４阻害剤、α１−アンチトリプシンまたはその断片若しくは類似体、テルル系化合物、免疫調節剤、またはそれらの任意の組み合わせからなる群より選択される追加的な薬剤とを含む組成物である。別の実施形態では、ここで開示されるのは、ＣＡＲ−Ｔ細胞と、アポトーシス細胞と、ＣＴＬＡ−４阻害剤、α１−アンチトリプシンまたはその断片若しくは類似体、テルル系化合物、免疫調節剤、またはそれらの任意の組み合わせからなる群より選択される追加的な薬剤とを含む組成物である。別の実施形態では、ここで開示されるのは、遺伝子操作されたＴ細胞受容体（ＴＣＲ）と、ＣＴＬＡ−４阻害剤、α１−アンチトリプシンまたはその断片若しくは類似体、テルル系化合物、免疫調節剤、またはそれらの任意の組み合わせからなる群より選択される追加的な薬剤とを含む組成物である。別の実施形態では、ここで開示されるのは、遺伝子操作されたＴ細胞受容体（ＴＣＲ）と、アポトーシス細胞と、ＣＴＬＡ−４阻害剤、α１−アンチトリプシンまたはその断片若しくは類似体、テルル系化合物、免疫調節剤、またはそれらの任意の組み合わせからなる群より選択される追加的な薬剤とを含む組成物である。別の実施形態では、ここで開示されるのは、遺伝子操作されたＴ細胞受容体（ＴＣＲ）と、アポトーシス細胞上清と、ＣＴＬＡ−４阻害剤、α１−アンチトリプシンまたはその断片若しくは類似体、テルル系化合物、免疫調節剤、またはそれらの任意の組み合わせからなる群より選択される追加的な薬剤とを含む組成物である。
【００３１】
一実施形態では、アポトーシス細胞を含む組成物の投与は、癌または腫瘍の治療、予防、抑制、発生低減、寛解、または緩和に対するＣＡＲ−Ｔ細胞の効果に影響を与えない。別の実施形態では、アポトーシス細胞を含む組成物の投与は、癌または腫瘍の治療、予防、抑制、発生低減、寛解、または緩和に対するＣＡＲ−Ｔ細胞の効果を約５％以上低下させない。別の実施形態では、アポトーシス細胞を含む組成物の投与は、癌または腫瘍の治療、予防、抑制、発生低減、寛解、または緩和に対するＣＡＲ−Ｔ細胞の効果を約１０％以上低下させない。別の実施形態では、アポトーシス細胞を含む組成物の投与は、癌または腫瘍の治療、予防、抑制、発生低減、寛解、または緩和に対するＣＡＲ−Ｔ細胞の効果を約１５％以上低下させない。別の実施形態では、アポトーシス細胞を含む組成物の投与は、癌または腫瘍の治療、予防、抑制、発生低減、寛解、または緩和に対するＣＡＲ−Ｔ細胞の効果を約２０％以上低下させない。
【００３２】
別の実施形態では、アポトーシス細胞上清を含む組成物の投与は、癌または腫瘍の治療、予防、抑制、発生低減、寛解、または緩和に対するＣＡＲ−Ｔ細胞の効果に影響を約５％以上低下させない。別の実施形態では、アポトーシス細胞上清を含む組成物の投与は、癌または腫瘍の治療、予防、抑制、発生低減、寛解、または緩和に対するＣＡＲ−Ｔ細胞の効果に影響を約１０％以上低下させない。別の実施形態では、アポトーシス細胞上清を含む組成物の投与は、癌または腫瘍の治療、予防、抑制、発生低減、寛解、または緩和に対するＣＡＲ−Ｔ細胞の効果に影響を約１５％以上低下させない。別の実施形態では、アポトーシス細胞上清を含む組成物の投与は、癌または腫瘍の治療、予防、抑制、発生低減、寛解、または緩和に対するＣＡＲ−Ｔ細胞の効果に影響を約２０％以上低下させない。一実施形態では、アポトーシス細胞上清を含む組成物の投与は、癌または腫瘍の治療、予防、抑制、発生低減、寛解、または緩和に対するＣＡＲ−Ｔ細胞の効果に影響を与えない。別の実施形態では、アポトーシス細胞上清を含む組成物の投与は、癌または腫瘍の治療、予防、抑制、発生低減、寛解、または緩和に対するＣＡＲ−Ｔ細胞の効果を低下させない。
【００３３】
別の実施形態では、ここで開示されるのは、ＣＡＲ−Ｔ細胞癌療法を受けている対象におけるサイトカイン放出症候群（ＣＲＳ）またはサイトカインストームの発生を抑制または低減する方法である。別の実施形態では、本開示に係る方法は、ＣＡＲ−Ｔ細胞癌療法を受けている対象におけるサイトカイン産生を低減または阻害し、それにより、サイトカイン放出症候群（ＣＲＳ）またはサイトカインストームの発生を抑制または低減する。別の実施形態では、本開示に係る、ＣＡＲ−Ｔ細胞癌療法を受けている対象におけるサイトカイン放出症候群（ＣＲＳ）またはサイトカインストームの発生を抑制または低減する方法は、前記癌療法を受けている前記対象に、アポトーシス細胞を含む組成物を投与するステップを含む。さらに別の実施形態では、本開示に係る、ＣＡＲ−Ｔ細胞癌療法を受けている対象における産出を低減または抑制する方法は、前記癌療法を受けている前記対象に、アポトーシス細胞を含む組成物を投与するステップを含む。別の実施形態では、アポトーシス細胞を含む組成物の投与は、ＣＡＲ−Ｔ細胞療法の効果に影響を与えない。別の実施形態では、アポトーシス細胞またはアポトーシス細胞上清を含む組成物の投与は、ＣＡＲ−Ｔ細胞療法の効果を低下させない。別の実施形態では、アポトーシス細胞またはアポトーシス細胞上清を含む組成物の投与は、ＣＡＲ−Ｔ細胞療法の効果を約５％以上低下させない。別の実施形態では、アポトーシス細胞またはアポトーシス細胞上清を含む組成物の投与は、ＣＡＲ−Ｔ細胞療法の効果を約１０％以上低下させない。別の実施形態では、アポトーシス細胞またはアポトーシス細胞上清を含む組成物の投与は、ＣＡＲ−Ｔ細胞療法の効果を約１５％以上低下させない。別の実施形態では、アポトーシス細胞またはアポトーシス細胞上清を含む組成物の投与は、ＣＡＲ−Ｔ細胞療法の効果を約２０％以上低下させない。
【００３４】
別の実施形態では、ここで開示されるのは、サイトカイン放出症候群若しくはサイトカインストームが発生しているか、またはサイトカイン放出症候群若しくはサイトカインストームが発生しやすい対象におけるサイトカイン産生を低減または抑制する方法であって、本明細書に開示されたアポトーシス細胞上清または該アポトーシス細胞上清を含む組成物を投与するステップを含む方法である。別の実施形態では、アポトーシス細胞上清は、アポトーシス細胞−食細胞上清を含む。
【００３５】
さらに別の実施形態では、本開示に係る、ＣＡＲ−Ｔ細胞癌療法を受けている対象におけるサイトカイン産生を低減または抑制する方法は、前記癌療法を受けている前記対象に、アポトーシス細胞上清を含む組成物を投与するステップを含む。別の実施形態では、アポトーシス細胞上清を含む組成物の投与は、ＣＡＲ−Ｔ細胞療法の効果に影響を与えない。別の実施形態では、アポトーシス細胞上清を含む組成物の投与は、ＣＡＲ−Ｔ細胞療法の効果を低下させない。
【００３６】
一実施形態では、キメラ抗原受容体発現Ｔ細胞（ＣＡＲ−Ｔ細胞）癌療法を受けている対象におけるサイトカイン放出症候群（ＣＲＳ）またはサイトカインストームの発生を抑制または低減する方法は、前記対象に、アポトーシス細胞またはアポトーシス細胞上清を含む組成物を投与するステップを含む。別の実施形態では、キメラ抗原受容体発現Ｔ細胞（ＣＡＲ−Ｔ細胞）癌療法を受けている対象におけるサイトカイン放出症候群（ＣＲＳ）またはサイトカインストームの発生を抑制または低減する方法は、前記対象における少なくとも１つの炎症誘発性サイトカインの産生を低減または抑制する。
【００３７】
キメラ抗原受容体発現Ｔ細胞（ＣＡＲ−Ｔ細胞）
【００３８】
一実施形態では、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）は、抗原標的受容体（antigen-targeted receptor）の一種であり、細胞外腫瘍結合部分（最も一般的には、モノクローナル抗体由来の一本鎖可変断片（ｓｃＦｖ））と融合した細胞内Ｔ細胞シグナリングドメインから構成される。ＣＡＲは、ＭＨＣ媒介提示から独立して、細胞表面抗原を直接的に認識し、全ての患者における所与の抗原に対して特異的な単一の受容体構築物の使用を許可する。最初のＣＡＲは、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）複合体のＣＤ３ζ活性化鎖に対する抗原認識ドメインと融合する。これらの第１世代のＣＡＲは、Ｔ細胞のエフェクター機能をインビトロで誘導するので、インビボでの抗腫瘍効果が弱いという大きな制約を受けることとなる。その後の世代のＣＡＲは、例えば、ＣＤ２８由来の細胞内ドメイン、または様々なＴＮＦ受容体ファミリー分子（例えば、４−１ＢＢ（ＣＤ１３７）及びＯＸ４０（ＣＤ１３４））などのＣＤ３ζと共に第２の共刺激シグナルを含む。さらに、第３世代の受容体は、最も一般的にはＣＤ２８及び４−１ＢＢ由来のＣＤ３ζに加えて、２つの共刺激シグナルを含む。第２及び第３世代のＣＡＲは、抗腫瘍効果が劇的に向上し、場合によっては、進行癌患者の完全な寛解を誘導する。
【００３９】
一実施形態では、ＣＡＲ−Ｔ細胞は、抗原受容体を含む免疫応答性細胞であり、その抗原受容体がそれに対応する抗原に結合したときに活性化される。
【００４０】
一実施形態では、本開示に係る組成物及び方法に使用されるＣＡＲ−Ｔ細胞は、第１世代のＣＡＲ−Ｔ細胞である。別の実施形態では、本開示に係る組成物及び方法に使用されるＣＡＲ−Ｔ細胞は、第２世代のＣＡＲ−Ｔ細胞である。別の実施形態では、本開示に係る組成物及び方法に使用されるＣＡＲ−Ｔ細胞は、第３世代のＣＡＲ−Ｔ細胞である。別の実施形態では、本開示に係る組成物及び方法に使用されるＣＡＲ−Ｔ細胞は、第４世代のＣＡＲ−Ｔ細胞である。一実施形態では、各世代のＣＡＲ−Ｔ細胞は、その前の世代のＣＡＲ−Ｔ細胞よりも効力が高い。
【００４１】
一実施形態では、第１世代のＣＡＲ−Ｔ細胞は、１つのシグナルドメイン、通常はＣＤ３−ＴＣＲζ鎖の細胞質シグナルドメインを有する。
【００４２】
別の実施形態では、本開示に係るＣＡＲ−Ｔ細胞は、第２世代のＣＡＲ−Ｔ細胞である。別の実施形態では、本開示に係るＣＡＲ−Ｔ細胞は、三者キメラ受容体（ＴＰＣＲ）を含む。一実施形態では、本開示に係るＣＡＲ−Ｔ細胞は、ナイーブＴ細胞を、共刺激から独立した態様で活性化させる１以上のシグナリング部分を含む。別の実施形態では、ＣＡＲ−Ｔ細胞は、腫瘍壊死因子受容体ファミリー（一実施形態では、ＣＤ２７、４−１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＯＸ４０（ＣＤ１３４）、またはそれらの組み合わせ）の１以上のメンバーをさらにコードする。
【００４３】
第３世代のＣＡＲ−Ｔ細胞は、２つの共刺激ドメイン（一実施形態では、ＣＤ２８ドメインと、４−１ＢＢまたはＯＸ−４０シグナリングドメイン）のシグナリングポテンシャル（signaling potential）を利用することを試みる。別の実施形態では、本開示に係る組成物及び方法に使用されるＣＡＲ−Ｔ細胞は、共刺激シグナリングドメイン（一実施形態では、ＣＤ２８ドメイン）をさらにコードする。別の実施形態では、前記シグナリングドメインは、ＣＤ３ζ鎖、ＣＤ９７、ＧＤＩ  ｌａ−ＣＤ１８、ＣＤ２、ＩＣＯＳ、ＣＤ２７、ＣＤ１５４、ＣＤＳ、ＯＸ４０、４−１ＢＢ、ＣＤ２８シグナリングドメイン、またはそれらの組み合わせである。
【００４４】
一実施形態では、テロメア長及び複製能力は、養子移植されたＴ細胞株の生着効率及び抗腫瘍効果と相関する。一実施形態では、ＣＤ２８刺激は、Ｔ細胞のテロメア長を維持する。
【００４５】
一実施形態では、ＣＡＲ改変Ｔ細胞の効力は、追加的な遺伝子（例えば、増殖性サイトカイン（すなわち、ＩＬ−１２）または共刺激リガンド（すなわち、４−１ＢＢＬ）をコードするもの）を導入することによりさらに強化され、それにより、「装甲された」第４世代のＣＡＲ改変Ｔ細胞が生成される。一実施形態では、「装甲された」ＣＡＲ−Ｔ細胞は、抑制性の腫瘍微環境から保護されたＣＡＲ−Ｔ細胞である。別の実施形態では、「装甲された」ＣＡＲ技術は、全身性副作用を最小限に抑える目的で腫瘍微環境内での免疫応答を増幅させるための可溶性シグナルタンパク質の局所分泌を含む。一実施形態では、前記シグナルタンパク質は、Ｔ細胞の活性及び動員を刺激することができるＩＬ−１２である。一実施形態では、「装甲された」ＣＡＲ技術は、微環境及び強力な免疫抑制メカニズムがロバストな抗腫瘍応答をより困難にする可能性を有する固形腫瘍の指標として特に有用である。
【００４６】
一実施形態では、ＣＡＲ−Ｔ細胞は、アポトーシスの防止、腫瘍微環境の再構成、恒常的増殖の誘導、及び直接的なＴ細胞の誘導を促進するケモカイン受容体に関与する分子をコードするために、遺伝子的に操作される。
【００４７】
別の実施形態では、本開示に係る組成物及び方法に用いられるＣＡＲ−Ｔ細胞療法は、サイトカイン導入遺伝子の発現、小分子阻害剤との併用療法、またはモノクローナル抗体の使用により効果が向上する。別の実施形態では、腫瘍細胞をより特異的に標的にするためにＣＡＲとケモカイン受容体との両方を使用するＣＡＲ−Ｔ細胞療法の効果向上を目的とする別のストラテジーは、本明細書に開示されたＣＡＲ−Ｔ細胞及びＣＡＲ−Ｔ細胞療法の一部と見なされるものとする。
【００４８】
本開示に係る組成物及び方法に使用されるＣＡＲ−Ｔ細胞は、正常細胞と比べて癌細胞に対する特異性を高めるために抑制または増幅信号を発生させることができる第２の結合ドメインを含む。例えば、ＣＡＲ−Ｔ細胞は、第１のタンパク質が存在する場合にはトリガーされるが、第２のタンパク質が存在する場合には抑制されるように遺伝子操作され得る。あるいは、ＣＡＲ−Ｔ細胞は、最大活性化のためには、２つの標的タンパク質が必要とされるように遺伝子操作され得る。これらのアプローチは、正常組織と比べて腫瘍に対するＣＡＲの特異性を高める。
【００４９】
一実施形態では、本開示に係る組成物及び方法に使用されるＣＡＲ−Ｔ細胞は、抗体ベースの外部受容体構築物と、免疫受容活性化チロシンモチーフから構成されるシグナル伝達モジュールをコードする細胞質ドメインとをコードする。
【００５０】
一実施形態では、ＣＡＲ−Ｔ細胞は、免疫抑制活性を有するポリペプチドと結合する一本鎖可変断片（ｓｃＦｖ）をさらにコードする。別の実施形態では、免疫抑制活性を有するポリペプチドは、ＣＤ４７、ＰＤ−１、ＣＴＬＡ−４、またはそれらの組み合わせである。
【００５１】
一実施形態では、ＣＡＲ−Ｔ細胞は、免疫刺激活性を有するポリペプチドと結合する一本鎖可変断片（ｓｃＦｖ）をさらにコードする。別の実施形態では、免疫刺激活性を有するポリペプチドは、ＣＤ２８、ＯＸ−４０、４−１  ＢＢ、またはそれらの組み合わせである。別の実施形態では、ＣＡＲ−Ｔ細胞は、ＣＤ４０リガンド（ＣＤ４０Ｌ；一実施形態では、抗原の免疫刺激活性を高める）をさらにコードする。
【００５２】
一実施形態では、免疫細胞は、細胞障害性を有する。別の実施形態では、遺伝子操作のための細胞障害性細胞は、対象またはドナーの骨髄から得られる。他の場合では、細胞障害性細胞は、幹細胞から得られる。例えば、細胞障害性細胞は、ヒト多能性幹細胞、例えばヒト胚性幹細胞またはヒト人工多能性Ｔ細胞などから得られる。人工多能性幹細胞（ＩＰＳＣ）の場合、多能性Ｔ細胞などは、細胞障害性が提供される対象の体細胞を使用して得ることができる。一実施形態では、免疫細胞は、静脈穿刺、アフェレーシス方法、白血球細胞動員とそれに続くアフェレーシス若しくは静脈穿刺、または骨髄穿刺によって、対象またはドナーから細胞を収集することにより得ることができる。
【００５３】
一実施形態では、本開示に係る方法は、対象から免疫細胞を取得するステップと、取得した免疫細胞を遺伝子操作してキメラ抗原受容体を発現させるステップとを有する。別の実施形態では、本開示に係る方法は、対象から免疫細胞を取得するステップと、取得した免疫細胞を遺伝子操作してキメラ抗原受容体を発現させるステップと、発現したキメラ抗原受容体をアポトーシス細胞と組み合わせるステップとを有し、それにより、対象のサイトカイン産生を低減させるが、アポトーシス細胞集団と共に投与されないＣＡＲを発現する免疫細胞に対する細胞障害性には実質的に影響を与えない（図１Ａ−１Ｂ、及び図２）。別の実施形態では、本開示に係る方法は、対象から免疫細胞を取得するステップと、取得した免疫細胞を遺伝子操作してキメラ抗原受容体を発現させるステップと、発現したキメラ抗原受容体をアポトーシス細胞上清またはそれを含む組成物と組み合わせるステップとを有し、それにより、対象のサイトカイン産生を低減させるが、アポトーシス細胞上清と共に投与されないＣＡＲを発現する免疫細胞に対する細胞障害性には実質的に影響を与えない。別の実施形態では、アポトーシス細胞集団またはアポトーシス細胞上清の投与は、免疫細胞の抗原受容体を発現させる効果を低下させない。
【００５４】
したがって、本開示に係る一実施形態は、細胞障害性機能を保持するための抗原受容体（ＣＡＲ）を含む細胞障害性免疫細胞（例えば、ＮＫ細胞またはＴ細胞）に関する。別の実施形態では、キメラ抗原受容体は、Ｔ細胞に対して外因性である。別の実施形態では、ＣＡＲは、組換え技術により発現される。別の実施形態では、ＣＡＲは、ベクターから発現される。
【００５５】
一実施形態では、ＣＡＲ−Ｔ細胞の生成に使用されるＴ細胞は、ナイーブＣＤ４＋Ｔ細胞である。別の実施形態では、ＣＡＲ−Ｔ細胞の生成に使用されるＴ細胞は、ナイーブＣＤ８＋Ｔ細胞である。一実施形態では、ＣＡＲ−Ｔ細胞の生成に使用されるＴ細胞は、エフェクターＴ細胞である。一実施形態では、ＣＡＲ−Ｔ細胞の生成に使用されるＴ細胞は、制御性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）である。別の実施形態では、ＣＡＲ−Ｔ細胞の生成に使用されるＴ細胞は、細胞傷害性Ｔ細胞である。
【００５６】
遺伝子操作された免疫細胞、例えばＴ細胞の供給源は、文献に幅広く記載されている。例えば、「Themelli et al. (2015) New Cell Sources for T cell Engineering and Adoptive Immunotherapy. Cell Stem Cell 16: 357-366」、「Han et al. (2013) Journal of Hematology & Oncology 6:47-53」、「Wilkie et al. (2010) J Bio Chem 285(33):25538-25544」、及び「van der Stegen et al. (2013) J. Immunol 191: 4589-4598」を参照されたい。ＣＡＲ−Ｔ細胞は、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）のカスタム設計及び作製サービス、または、組換えアデノウイルスワクチンによりコードされた防御免疫を誘導することができる予め作製したＣＡＲ構築物のストックを提供する商業的供給源（例えば、クリエイティブ・バイオラブズ社（Creative Biolabs、米国ニューヨーク州所在）など）から入手可能である。カスタムメイドのＣＡＲ−Ｔ細胞は、特別に設計されたＣＡＲ−Ｔ細胞を提供することができるプロマブ・バイオテクノロジー社（Promab Biotechnologies、米国カリフォルニア州所在）からも入手可能である。
【００５７】
標的抗原
【００５８】
一実施形態では、ＣＡＲは、抗原に対応する抗体または抗体断片を介して、抗原のエピトープと結合する。別の実施形態では、抗体は、モノクローナル抗体である。別の実施形態では、抗体は、ポリクローナル抗体である。別の実施形態では、抗体断片は、一本鎖可変断片（ｓｃＦｖ）である。
【００５９】
別の実施形態では、本開示に係る組成物のＣＡＲ−Ｔ細胞は、腫瘍関連抗原（ＴＡＡ）と結合する。別の実施形態では、腫瘍関連抗原は、細胞表面関連ムチン１（ＭＵＣ１）または多型上皮性ムチン（ＰＥＭ）、変異型初期腫瘍内アルギニンリッチ（ＡＲＭＥＴ）、熱ショックタンパク質６０（ＨＳＰ６０）、カルネキシン（ＣＮＸ）、メチレンテトラヒドロ葉酸デヒドロゲナーゼ（ＮＡＤＰ＋  依存性）−２、メテニルテトラヒドロ葉酸シクロヒドロラーゼ（ＭＴＨＦＤ−２）、線維芽細胞活性化タンパク質（ＦＡＰ）、マトリックスメタロプロテアーゼ（ＭＭＰ６）、Ｂメラノーマ抗原−１（ＢＡＧＥ−１）、Ｎ−アセチルグルコサミン転移酵素Ｖの異常転写物（ＧｎＴＶ）、Ｑ５Ｈ９４３、癌胎児性抗原（ＣＥＡ）、Ｐｍｅｌ、カリクレイン−４、ママグロビン−１、ＭＡＲＴ−１、ＧＰＲ１４３−ＯＡ１、前立腺特異抗原（ＰＳＡ）、ＴＲＰ１、チロシナーゼ、ＦＧＰ−５、ＮＥＵ癌原遺伝子、Ａｆｔ、ＭＭＰ−２、前立腺特異的膜抗原（ＰＳＭＡ）、テロメラーゼ関連タンパク質−２、前立腺酸性ホスファターゼ（ＰＡＰ）、ウロプラキンＩＩ、またはプロテイナーゼ３である。
【００６０】
別の実施形態では、ＣＡＲは、例えば白血病などにおいてＢ細胞を破壊したい場合にＢ細胞を標的とするために、ＣＤ１９またはＣＤ２０と結合する。別の実施形態では、ＣＡＲは、ＲＯＲ１、ＣＤ２２、またはＧＤ２と結合する。別の実施形態では、ＣＡＲは、ＮＹ−ＥＳＯ−１と結合する。別の実施形態では、ＣＡＲは、ＭＡＧＥファミリータンパク質と結合する。別の実施形態では、ＣＡＲは、メソセリンと結合する。別の実施形態では、ＣＡＲは、ｃ−ｅｒｂＢ２と結合する。別の実施形態では、ＣＡＲは、例えばＢＲＡＦＶ６００Ｅ変異体及びＢＣＲ−ＡＢＬ転移体などの腫瘍特異的変異抗原と結合する。別の実施形態では、ＣＡＲは、例えばＨＤにおけるＥＢＶ、子宮頸癌におけるＨＰＶ、及びメルケル癌におけるポリオーマウイルスなどの腫瘍特異的なウイルス抗原と結合する。別の実施形態では、ＣＡＲ−Ｔ細胞は、Ｈｅｒ２／ｎｅｕと結合する。別の実施形態では、ＣＡＲ−Ｔ細胞は、ＥＧＦＲｖＩＩＩと結合する。
【００６１】
一実施形態では、キメラ抗原受容体Ｔ細胞（ＣＡＲ−Ｔ細胞）は、ＣＤ１９抗原と結合する。別の実施形態では、ＣＡＲは、ＣＤ２２抗原と結合する。別の実施形態では、ＣＡＲは、葉酸受容体αと結合する。別の実施形態では、ＣＡＲは、ＣＡＩＸと結合する。別の実施形態では、ＣＡＲは、ＣＤ２０と結合する。別の実施形態では、ＣＡＲは、ＣＤ２３と結合する。別の実施形態では、ＣＡＲは、ＣＤ２４と結合する。別の実施形態では、ＣＡＲは、ＣＤ３０と結合する。別の実施形態では、ＣＡＲは、ＣＤ３３と結合する。別の実施形態では、ＣＡＲは、ＣＤ３８と結合する。別の実施形態では、ＣＡＲは、ＣＤ４４ｖ６と結合する。別の実施形態では、ＣＡＲは、ＣＤ４４ｖ７／８と結合する。別の実施形態では、ＣＡＲは、ＣＤ１２３と結合する。別の実施形態では、ＣＡＲは、ＣＤ１７１と結合する。別の実施形態では、ＣＡＲは、癌胎児性抗原（ＣＥＡ）と結合する。別の実施形態では、ＣＡＲは、ＥＧＦＲｖＩＩＩと結合する。別の実施形態では、ＣＡＲは、ＥＧＰ−２と結合する。別の実施形態では、ＣＡＲは、ＥＧＰ−４０と結合する。別の実施形態では、ＣＡＲは、ＥｐｈＡ２と結合する。別の実施形態では、ＣＡＲは、Ｅｒｂ−Ｂ２と結合する。別の実施形態では、ＣＡＲは、Ｅｒｂ−Ｂ２，３，４と結合する。別の実施形態では、ＣＡＲは、Ｅｒｂ−Ｂ３／４と結合する。別の実施形態では、ＣＡＲは、ＦＢＰと結合する。別の実施形態では、ＣＡＲは、胎児アセチルコリン受容体と結合する。別の実施形態では、ＣＡＲは、ＧＤ２と結合する。別の実施形態では、ＣＡＲは、ＧＤ３と結合する。別の実施形態では、ＣＡＲは、ＨＥＲ２と結合する。別の実施形態では、ＣＡＲは、ＨＭＷ−ＭＡＡと結合する。別の実施形態では、ＣＡＲは、ＩＬ−１１Ｒａｌｐｈａと結合する。別の実施形態では、ＣＡＲは、ＩＬ−１３Ｒａｌｐｈａ１と結合する。別の実施形態では、ＣＡＲは、ＫＤＲと結合する。別の実施形態では、ＣＡＲは、κ（カッパ）型軽鎖と結合する。別の実施形態では、ＣＡＲは、ルイスＹ（Ｌｅｗｉｓ  Ｙ）と結合する。別の実施形態では、ＣＡＲは、Ｌ１−細胞接着分子と結合する。別の実施形態では、ＣＡＲは、ＭＡＧＥ−Ａ１と結合する。別の実施形態では、ＣＡＲは、メソセリンと結合する。別の実施形態では、ＣＡＲは、ＣＭＶ感染細胞と結合する。別の実施形態では、ＣＡＲは、ＭＵＣ１と結合する。別の実施形態では、ＣＡＲは、ＭＵＣ１６と結合する。別の実施形態では、ＣＡＲは、ＮＫＧ２Ｄリガンドと結合する。別の実施形態では、ＣＡＲは、ＮＹ−ＥＳＯ−１（アミノ酸１５７−１６５）と結合する。別の実施形態では、ＣＡＲは、癌胎児性抗原（ｈ５Ｔ４）と結合する。別の実施形態では、ＣＡＲは、ＰＳＣＡと結合する。別の実施形態では、ＣＡＲは、ＰＳＭＡと結合する。別の実施形態では、ＣＡＲは、ＲＯＲ１と結合する。別の実施形態では、ＣＡＲは、ＴＡＧ−７２と結合する。別の実施形態では、ＣＡＲは、ＶＥＧＦ−Ｒ２または他のＶＥＧＦ受容体と結合する。別の実施形態では、ＣＡＲは、Ｂ７−Ｈ６と結合する。別の実施形態では、ＣＡＲは、ＣＡ９と結合する。別の実施形態では、ＣＡＲは、αｖβ６インテグリンと結合する。別の実施形態で��、ＣＡＲは、８Ｈ９と結合する。別の実施形態では、ＣＡＲは、ＮＣＡＭと結合する。別の実施形態では、ＣＡＲは、胎児型アセチルコリン受容体と結合する。
【００６２】
別の実施形態では、キメラ抗原受容体Ｔ細胞（ＣＡＲ−Ｔ細胞）は、ＣＤ１９抗原を標的とし、Ｂ細胞悪性腫瘍、ＡＬＬ、濾胞性リンパ腫、ＣＬＬ、またはリンパ腫に罹患している対象に対して治療効果を有する。別の実施形態では、ＣＡＲ−Ｔ細胞は、ＣＤ２２抗原を標的とし、Ｂ細胞悪性腫瘍に罹患している対象に対して治療効果を有する。別の実施形態では、ＣＡＲ−Ｔ細胞は、葉酸受容体αを標的とし、卵巣癌または上皮癌に罹患している対象に対して治療効果を有する。別の実施形態では、ＣＡＲ−Ｔ細胞は、ＣＡＩＸまたはＧ２５０／ＣＡＩＸを標的とし、腎細胞癌に罹患している対象に対して治療効果を有する。別の実施形態では、ＣＡＲ−Ｔ細胞は、ＣＤ２０を標的とし、リンパ腫、Ｂ細胞悪性腫瘍、Ｂ細胞リンパ腫、マントル細胞リンパ腫、または低悪性度Ｂ細胞リンパ腫に罹患している対象に対して治療効果を有する。別の実施形態では、ＣＡＲ−Ｔ細胞は、ＣＤ２３を標的とし、ＣＬＬに罹患している対象に対して治療効果を有する。別の実施形態では、ＣＡＲ−Ｔ細胞は、ＣＤ２４を標的とし、膵臓腺癌に罹患している対象に対して治療効果を有する。別の実施形態では、ＣＡＲ−Ｔ細胞は、ＣＤ３０を標的とし、リンパ腫またはホジキンリンパ腫に罹患している対象に対して治療効果を有する。別の実施形態では、ＣＡＲ−Ｔ細胞は、ＣＤ３３を標的とし、ＡＭＬに罹患している対象に対して治療効果を有する。別の実施形態では、ＣＡＲ−Ｔ細胞は、ＣＤ３８を標的とし、非ホジキンリンパ腫に罹患している対象に対して治療効果を有する。別の実施形態では、ＣＡＲ−Ｔ細胞は、ＣＤ４４ｖ６を標的とし、いくつかの悪性腫瘍に罹患している対象に対して治療効果を有する。別の実施形態では、ＣＡＲ−Ｔ細胞は、ＣＤ４４ｖ７／８を標的とし、子宮頸癌に罹患している対象に対して治療効果を有する。別の実施形態では、ＣＡＲ−Ｔ細胞は、ＣＤ１２３を標的とし、骨髄性悪性腫瘍に罹患している対象に対して治療効果を有する。別の実施形態では、ＣＡＲ−Ｔ細胞は、ＣＥＡを標的とし、結腸直腸癌に罹患している対象に対して治療効果を有する。別の実施形態では、ＣＡＲ−Ｔ細胞は、ＥＧＦＲｖＩＩＩを標的とし、神経膠芽腫に罹患している対象に対して治療効果を有する。別の実施形態では、ＣＡＲ−Ｔ細胞は、ＥＧＰ−２を標的とし、複数の悪性腫瘍に罹患している対象に対して治療効果を有する。別の実施形態では、ＣＡＲ−Ｔ細胞は、ＥＧＰ−４０を標的とし、結腸直腸癌に罹患している対象に対して治療効果を有する。別の実施形態では、ＣＡＲ−Ｔ細胞は、ＥｐｈＡ２を標的とし、神経膠芽腫に罹患している対象に対して治療効果を有する。別の実施形態では、ＣＡＲ−Ｔ細胞は、Ｅｒｂ−Ｂ２またはＥｒｂＢ３／４を標的とし、乳癌、前立腺癌、結腸癌、または他の様々な腫瘍に罹患している対象に対して治療効果を有する。別の実施形態では、ＣＡＲ−Ｔ細胞は、Ｅｒｂ−Ｂ２，３，４を標的とし、乳癌、または他の腫瘍に罹患している対象に対して治療効果を有する。別の実施形態では、ＣＡＲ−Ｔ細胞は、ＦＢＰを標的とし、卵巣癌に罹患している対象に対して治療効果を有する。別の実施形態では、ＣＡＲ−Ｔ細胞は、胎児アセチルコリン受容体を標的とし、横紋筋肉���に罹患している対象に対して治療効果を有する。別の実施形態では、ＣＡＲ−Ｔ細胞は、ＧＤ２を標的とし、神経芽細胞腫、メラノーマ（悪性黒色腫）、またはユーイング肉腫に罹患している対象に対して治療効果を有する。別の実施形態では、ＣＡＲ−Ｔ細胞は、ＧＤ３を標的とし、メラノーマに罹患している対象に対して治療効果を有する。別の実施形態では、ＣＡＲ−Ｔ細胞は、ＨＥＲ２を標的とし、髄芽腫、膵臓腺癌、神経膠芽腫、骨肉腫、または卵巣癌に罹患している対象に対して治療効果を有する。別の実施形態では、ＣＡＲ−Ｔ細胞は、ＨＭＷ−ＭＡＡを標的とし、メラノーマに罹患している対象に対して治療効果を有する。別の実施形態では、ＣＡＲ−Ｔ細胞は、ＩＬ−１１Ｒａｌｐｈａを標的とし、骨肉腫に罹患している対象に対して治療効果を有する。別の実施形態では、ＣＡＲ−Ｔ細胞は、ＩＬ−１３Ｒａｌｐｈａ１を標的とし、神経膠腫（グリオーマ）、神経膠芽腫、または髄芽腫に罹患している対象に対して治療効果を有する。別の実施形態では、ＣＡＲ−Ｔ細胞は、ＩＬ−１３受容体α２を標的とし、いくつかの悪性腫瘍に罹患している対象に対して治療効果を有する。別の実施形態では、ＣＡＲ−Ｔ細胞は、ＫＤＲを標的とし、腫瘍血管新生を標的とすることにより、腫瘍に罹患している対象に対して治療効果を有する。別の実施形態では、ＣＡＲ−Ｔ細胞は、κ（カッパ）型軽鎖を標的とし、Ｂ細胞悪性腫瘍（Ｂ−ＮＨＬ、ＣＬＬ）に罹患している対象に対して治療効果を有する。別の実施形態では、ＣＡＲ−Ｔ細胞は、ルイスＹ（Ｌｅｗｉｓ  Ｙ）を標的とし、様々な細胞腫または上皮由来腫瘍に罹患している対象に対して治療効果を有する。別の実施形態では、ＣＡＲ−Ｔ細胞は、Ｌ１−細胞接着分子を標的とし、神経芽細胞腫に罹患している対象に対して治療効果を有する。別の実施形態では、ＣＡＲ−Ｔ細胞は、ＭＡＧＥ−Ａ１またはＨＬＡ−Ａ１  ＭＡＧＥ−Ａ１を標的とし、メラノーマに罹患している対象に対して治療効果を有する。別の実施形態では、ＣＡＲ−Ｔ細胞は、メソセリンを標的とし、中皮腫に罹患している対象に対して治療効果を有する。別の実施形態では、ＣＡＲ−Ｔ細胞は、ＣＭＶ感染細胞を標的とし、ＣＭＶに罹患している対象に対して治療効果を有する。別の実施形態では、ＣＡＲ−Ｔ細胞は、ＭＵＣ１を標的とし、乳癌または卵巣癌に罹患している対象に対して治療効果を有する。別の実施形態では、ＣＡＲ−Ｔ細胞は、ＭＵＣ１６を標的とし、卵巣癌に罹患している対象に対して治療効果を有する。別の実施形態では、ＣＡＲ−Ｔ細胞は、ＮＫＧ２Ｄリガンドを標的とし、骨髄腫（ミエローマ）、卵巣腫瘍、または他の腫瘍に罹患している対象に対して治療効果を有する。別の実施形態では、ＣＡＲ−Ｔ細胞は、ＮＹ−ＥＳＯ−１（アミノ酸１５７−１６５）を標的とし、複数の骨髄腫に罹患している対象に対して治療効果を有する。別の実施形態では、ＣＡＲ−Ｔ細胞は、癌胎児性抗原（ｈ５Ｔ４）を標的とし、様々な腫瘍に罹患している対象に対して治療効果を有する。別の実施形態では、ＣＡＲ−Ｔ細胞は、ＰＳＣＡを標的とし、前立腺癌に罹患している対象に対して治療効果を有する。別の実施形態では、ＣＡＲ−Ｔ細胞は、ＰＳＭＡを標的とし、��立腺癌／腫瘍血管系に罹患している対象に対して治療効果を有する。別の実施形態では、ＣＡＲ−Ｔ細胞は、ＲＯＲ１を標的とし、Ｂ−ＣＬＬまたはマントル細胞リンパ腫に罹患している対象に対して治療効果を有する。別の実施形態では、ＣＡＲ−Ｔ細胞は、ＴＡＧ−７２を標的とし、腺癌または胃腸癌に罹患している対象に対して治療効果を有する。別の実施形態では、ＣＡＲ−Ｔ細胞は、ＶＥＧＦ−Ｒ２または他のＶＥＧＦ受容体を標的とし、腫瘍血管新生を標的とすることにより、腫瘍に罹患している対象に対して治療効果を有する。別の実施形態では、ＣＡＲ−Ｔ細胞は、ＣＡ９を標的とし、腎細胞癌に罹患している対象に対して治療効果を有する。別の実施形態では、ＣＡＲ−Ｔ細胞は、ＣＤ１７１を標的とし、腎性神経芽細胞腫に罹患している対象に対して治療効果を有する。別の実施形態では、ＣＡＲ−Ｔ細胞は、ＮＣＡＭを標的とし、神経芽細胞腫に罹患している対象に対して治療効果を有する。別の実施形態では、ＣＡＲ−Ｔ細胞は、胎児型アセチルコリン受容体を標的とし、横紋筋肉腫に罹患している対象に対して治療効果を有する。別の実施形態では、ＣＡＲは、この参照によりその全体が本明細書に援用されるＳａｄｅｌａｉｎらの表１（Cancer Discov. 2013 Apr; 3(4): 388-398）に記載された標的抗原のうちの１つと結合する。別の実施形態では、ＣＡＲ−Ｔ細胞は、炭水化物または糖脂質構築物と結合する。
【００６３】
一実施形態では、ＣＡＲは、血管新生因子に結合し、それにより、腫瘍血管を標的とする。一実施形態では、血管新生因子は、ＶＥＧＦＲ２である。別の実施形態では、血管新生因子は、エンドグリンである。別の実施形態では、本明細書で開示される血管新生因子は、アンジオゲニン、アンジオポエチン−１、Ｄｅｌ−１、線維芽細胞増殖因子（酸性（ａＦＧＦ）及び塩基性（ｂＦＧＦ））、フォリスタチン、顆粒球コロニー刺激因子（Ｇ−ＣＳＦ）、肝細胞増殖因子（ＨＧＦ）／散乱因子（ＳＦ）、インターロイキン−８（ＩＬ−８）、レプチン、ミッドカイン、胎盤増殖因子、血小板由来内皮細胞増殖因子（ＰＤ−ＥＣＧＦ）、血小板由来増殖因子ＢＢ（ＰＤＧＦ−ＢＢ）、プレイオトロフィン（ＰＴＮ）、プログラニュリン、プロリフェリン、形質転換増殖因子α（ＴＧＦ−α）、形質転換増殖因子β（ＴＧＦ−β）、腫瘍壊死因子α（ＴＮＦ−α）、または血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）／血管透過性因子（ＶＰＦ）である。別の実施形態では、本明細書で開示される血管新生因子は、血管新生タンパク質である。一実施形態では、増殖因子は、血管新生タンパク質である。一実施形態では、本開示に係る組成物または方法に使用される血管新生タンパク質は、線維芽細胞増殖因子（ＦＧＦ）；ＶＥＧＦ；ＶＥＧＦＲ及びニューロピリン１（ＮＲＰ−１）；アンジオポエチン１（Ａｎｇ１）及びＴｉｅ２；血小板由来増殖因子（ＰＤＧＦ；ＢＢホモ二量体）及びＰＤＧＦＲ；形質転換増殖因子β（ＴＧＦ−β）、エンドグリン、及びＴＧＦ−β受容体；単球走化性タンパク質−１（ＭＣＰ−１）；インテグリンαＶβ３、αＶβ５、及びα５β１；ＶＥ−カドヘリン及びＣＤ３１；エフリン；プラスミノーゲン活性化因子１；一酸化窒素合成酵素（ＮＯＳ）及びＣＯＸ−２；ＡＣ１３３；またはＩｄ１／Ｉｄ３である。一実施形態では、本開示に係る組成物または方法に使用される血管新生タンパク質はアンジオポエチンであり、一実施形態では、アンジオポエチン１、アンジオポエチン３、アンジオポエチン４、またはアンジオポエチン６である。一実施形態では、エンドグリンは、ＣＤ１０５、ＥＤＧ、ＨＨＴ１、ＯＲＷ、またはＯＲＷ１としても知られている。一実施形態では、エンドグリンは、ＴＧＦ−β共受容体である。
【００６４】
別の実施形態では、ＣＡＲ−Ｔ細胞は、感染病原体に関連する抗原と結合する。一実施形態では、感染病原体は、結核菌である。一実施形態では、結核菌に関連する抗原は、抗原８５Ｂ、リポタンパク質ＩｐｑＨ、ＡＴＰ依存性の推定上のヘリカーゼ、特徴付けられていないタンパク質Ｒｖ０４７６／ＭＴＯ４９４１前駆体、または特徴付けられていないタンパク質Ｒｖ１３３４／ＭＴ１３７６前駆体である。
【００６５】
別の実施形態では、ＣＡＲ−Ｔ細胞は、抗体と結合する。一実施形態では、ＣＡＲ−Ｔ細胞は、「抗体結合型Ｔ細胞受容体（ＡＣＴＲ）」である。この実施形態によれば、ＣＡＲ−Ｔ細胞は、普遍的ＣＡＲ−Ｔ細胞である。別の実施形態では、抗体受容体を有するＣＡＲ−Ｔ細胞は、抗体投与の前、後、または同時に投与され、その後、抗体と結合し、Ｔ細胞を腫瘍または癌のごく近傍に位置させる。別の実施形態では、抗体は、腫瘍細胞抗原に対するものである。別の実施形態では、抗体は、ＣＤ２０に対するものである。別の実施形態では、抗体は、リツキシマブに対するものである。
【００６６】
別の実施形態では、抗体は、ＥＲＢＢ２に対するヒト化ＩｇＧ１抗体であるトラスツズマブ（Herceptin；Genentech）を含む。別の実施形態では、抗体は、ＶＥＧＦに対するヒト化ＩｇＧ１抗体であるベバシズマブ（Avastin；Genentech/Roch）を含む。別の実施形態では、抗体は、ＥＧＦＲに対するキメラ型ヒト／マウスＩｇＧ１抗体であるセツキシマブ（Erbitux；Bristol-Myers Squibb）を含む。別の実施形態では、抗体は、ＥＧＦＲに対するＩｇＧ２抗体であるパニツムマブ（Vectibix；Amgen）を含む。別の実施形態では、抗体は、ＣＴＬＡ４に対するＩｇＧ１抗体であるイピリムマブ（Yervoy；Bristol-Myers Squibb）を含む。
【００６７】
別の実施形態では、抗体は、ＣＤ５２に対するヒト化ＩｇＧ１抗体であるアレムツズマブ（Campath；Genzyme）を含む。別の実施形態では、抗体は、ＣＤ２０に対するヒトＩｇＧ１抗体であるオファツムマブ（Arzerra；Genmab）を含む。別の実施形態では、抗体は、ＣＤ３３に対するヒト化ＩｇＧ４抗体であるゲムツズマブオゾガマイシン（Mylotarg；Wyeth）を含む。別の実施形態では、抗体は、ＣＤ３０に対するキメラ化ＩｇＧ１抗体であるブレンツキシマブベドチン（Adcetris；Seattle Genetics）を含む。別の実施形態では、抗体は、ＣＤ２０に対するマウスＩｇＧ１抗体である９０Ｙ標識化イブリツモマブチウキセタン（Zevalin；IDEC Pharmaceuticals）を含む。別の実施形態では、抗体は、ＣＤ２０に対するマウスＩｇＧ２抗体である１３１Ｉ標識化トシツモマブ（Bexxar；GlaxoSmithKline）を含む。
【００６８】
別の実施形態では、抗体は、血管内皮増殖因子受容体２（ＶＥＧＦＲ−２）に対する抗体であるラムシルマブを含む。別の実施形態では、抗体は、ラムシルマブ（Cyramza注射剤；Eli Lilly and Company）、ブリナツモマブ（BLINCYTO； Amgen Inc.）、ペムブロリズマブ（KEYTRUDA；Merck Sharp & Dohme Corp.）、ビヌツズマブ（GAZYVA；Genentech, Inc.；以前はＧＡ１０１と呼ばれていた）、ペルツズマブ注射剤（PERJETA；Genentech, Inc.）、またはデノスマブ（Xgeva；Amgen Inc.）である。別の実施形態では、抗体は、バシリキシマブ（Simulect；Novartis）である。別の実施形態では、抗体は、ダクリズマブ（Zenapax；Roche）である。
【００６９】
別の実施形態では、ＣＡＲ−Ｔ細胞と結合する抗体は、本明細書に開示した及び当分野で既知の腫瘍または癌抗原またはその一部に対するものである。別の実施形態では、ＣＡＲ−Ｔ細胞と結合する抗体は、腫瘍関連抗原に対するものである。別の実施形態では、ＣＡＲ−Ｔ細胞と結合する抗体は、血管新生因子である腫瘍関連抗原またはその一部に対するものである。
【００７０】
別の実施形態では、ＣＡＲ−Ｔ細胞と結合する抗体は、本明細書に開示した及び当分野で既知の腫瘍関連抗原またはその一部に対するものである。
【００７１】
サイトカインストーム及びサイトカイン放出症候群
【００７２】
一実施形態では、本開示に係る方法は、対象における毒性サイトカイン放出、「サイトカイン放出症候群（ＣＲＳ）」、「重度のサイトカイン放出症候群（ｓＣＲＳ）」、または「サイトカインストーム」の発生を低減するために、例えば遺伝子操作されたキメラ抗原受容体を含むＮＫ細胞やＴ細胞などの免疫細胞と、少なくとも１つの追加的な薬剤とを用意するステップを含む。別の実施形態では、ＣＲＳ、ｓＣＲＳ、またはサイトカインストームは、免疫細胞の投与の結果として生じる。別の実施形態では、ＣＲＳ、ｓＣＲＳ、またはサイトカインストームは、免疫細胞以外の刺激、疾病、症候群の結果として生じる（詳細については後述する）。別の実施形態では、サイトカインストーム、サイトカインカスケード、高サイトカイン血症は、サイトカイン放出症候群の重症型である。
【００７３】
一実施形態では、有害なサイトカイン放出を低減させるための追加的な薬剤は、アポトーシス細胞、またはアポトーシス細胞を含有する組成物を含む。別の実施形態では、有害なサイトカイン放出を低減させるための追加的な薬剤は、アポトーシス細胞上清、またはアポトーシス細胞上清を含有する組成物を含む。別の実施形態では、有害なサイトカイン放出を低減させるための追加的な薬剤は、ＣＴＬＡ−４阻害剤を含む。別の実施形態では、有害なサイトカイン放出を低減させるための追加的な薬剤は、アポトーシス細胞若しくはアポトーシス細胞上清またはアポトーシス細胞若しくはアポトーシス細胞上清を含有する組成物と、ＣＴＬＡ−４阻害剤とを含む。別の実施形態では、有害なサイトカイン放出を低減させるための追加的な薬剤は、α１−アンチトリプシンまたはその断片若しくは類似体を含む。別の実施形態では、有害なサイトカイン放出を低減させるための追加的な薬剤は、アポトーシス細胞若しくはアポトーシス細胞上清またはアポトーシス細胞若しくはアポトーシス細胞上清を含有する組成物と、α１−アンチトリプシンまたはその断片若しくは類似体とを含む。別の実施形態では、有害なサイトカイン放出を低減させるための追加的な薬剤は、テルル系化合物を含む。別の実施形態では、有害なサイトカイン放出を低減させるための追加的な薬剤は、アポトーシス細胞若しくはアポトーシス細胞上清またはアポトーシス細胞若しくはアポトーシス細胞上清を含有する組成物と、テルル系化合物とを含む。別の実施形態では、有害なサイトカイン放出を低減させるための追加的な薬剤は、免疫調節剤を含む。別の実施形態では、有害なサイトカイン放出を低減させるための追加的な薬剤は、アポトーシス細胞若しくはアポトーシス細胞上清またはアポトーシス細胞若しくはアポトーシス細胞上清を含有する組成物と、免疫調節剤とを含む。
【００７４】
毒性サイトカイン放出または毒性サイトカイン濃度（レベル）を減少させることは、対象における毒性サイトカインの生成を低減または抑制すること、またはサイトカイン放出症候群またはサイトカインストームの発生を低減または抑制することを含むことは、当業者であれば理解できるであろう。別の実施形態では、ＣＲＳまたはサイトカインストームの発生中に毒性サイトカインの濃度が減少する。別の実施形態では、毒性サイトカイン産生濃度の低減または抑制は、ＣＲＳまたはサイトカインストームの治療を含む。別の実施形態では、毒性サイトカイン産生濃度の低減または抑制は、ＣＲＳまたはサイトカインストームの緩和を含む。別の実施形態では、毒性サイトカイン産生濃度の低減または抑制は、ＣＲＳまたはサイトカインストームの寛解を含む。別の実施形態では、毒性サイトカインは、炎症促進性サイトカインを含む。別の実施形態では、炎症促進性サイトカインは、ＩＬ−６を含む。別の実施形態では、炎症促進性サイトカインは、ＩＬ−１βを含む。別の実施形態では、炎症促進性サイトカインは、ＴＮＦ−αを含む。別の実施形態では、炎症促進性サイトカインは、ＩＬ−６、ＩＬ−１β、ＴＮＦ−α、またはそれらの任意の組み合わせを含む。
【００７５】
一実施形態では、サイトカイン放出症候群（ＣＲＳ）は、対象における、いくつかの炎症性サイトカインの濃度上昇及び有害な身体的反応（例えば、低血圧、高熱、及び震え）によって特徴付けられる。別の実施形態では、炎症性サイトカインは、ＩＬ−６、ＩＬ−１β、及びＴＮＦ−αを含む。別の実施形態では、ＣＲＳは、ＩＬ−６、ＩＬ−１β、またはＴＮＦ−α、またはそれらの任意の組み合わせの濃度上昇によって特徴付けられる。別の実施形態では、ＣＲＳは、ＩＬ−８、ＩＬ−１３、またはそれらの任意の組み合わせの濃度上昇によって特徴付けられる。別の実施形態では、サイトカインストームは、ＴＮＦ−α、ＩＦＮ−γ、ＩＬ−１β、ＩＬ−２、ＩＬ−６、ＩＬ−８、ＩＬ−１０、ＩＬ−１３、ＧＭ−ＣＳＦ、ＩＬ−５、フラクタルカイン、それらの任意の組み合わせ、またはそれらのサブセットによって特徴付けられる。さらに別の実施形態では、ＩＬ−６は、ＣＲＳまたはサイトカインストームのマーカーを含む。別の実施形態では、ＩＦＮ−γは、ＣＲＳまたはサイトカインストームのマーカーを含む。別の実施形態では、大きな腫瘍量を有する患者は、サイトカイン症候群の発生率及び重症度が高い。
【００７６】
別の実施形態では、ヒトまたはマウスにおけるＣＲＳまたはサイトカインストームで増加するサイトカインは、下記の表１及び表２に記載されたサイトカインの任意の組み合わせを含み得る。
【００７７】
【表１】
2018507208.tif 000003
【００７８】
一実施形態では、表１に示したサイトカイン、すなわち、Ｆｌｔ−３Ｌ、フラクタルカイン、ＧＭ−ＣＳＦ、ＩＦＮ−γ、ＩＬ−１β、ＩＬ−２、ＩＬ−２Ｒα、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＩＬ−８、ＩＬ−９、ＩＬ−１０、ＩＬ−１２、及びＩＬ−１３が、ＣＲＳまたはサイトカインストームにおいて有意であると考えられる。別の実施形態では、表１に示したＩＦＮ−α、ＩＦＮ−β、ＩＬ−１、及びＩＬ−１Ｒαが、ＣＲＳまたはサイトカインストームにおいて重要であるように思われる。別の実施形態では、Ｍ−ＣＳＦが、未知の重要性を有している。別の実施形態では、表１に記載した任意のサイトカインまたはそれらの組み合わせを、ＣＲＳまたはサイトカインストームのマーカーとして使用することができる。
【００７９】
【表２】
2018507208.tif 000004
【００８０】
一実施形態では、表２に示したＩＬ−１５、ＩＬ−１７、ＩＬ−１８、ＩＬ−２１、ＩＬ−２２、ＩＰ−１０、ＭＣＰ−１、ＭＩＰ−１α、ＭＩＰ−１β、及びＴＮＦ−αが、ＣＲＳまたはサイトカインストームにおいて有意であると考えられる。別の実施形態では、表２に示したＩＬ−２７、ＭＣＰ−３、ＰＧＥ２、ＲＡＮＴＥＳ、ＴＧＦ−β、ＴＮＦ−αＲ１、及びＭＩＧが、ＣＲＳまたはサイトカインストームにおいて重要であるように思われる。別の実施形態では、ＩＬ−２３及びＩＬ−２５が、未知の重要性を有している。別の実施形態では、表２に記載した任意のサイトカインまたはそれらの組み合わせを、ＣＲＳまたはサイトカインストームのマーカーとして使用することができる。
【００８１】
「サイトカイン」という用語が、サイトカイン（例えば、インターフェロン・ガンマ、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子、腫瘍壊死因子α）、ケモカイン（例えば、ＭＩＰ−１α、ＭＩＰ−１β、ＲＡＮＴＥＳ）、及び他の可溶性の炎症メディエータ（例えば、活性酸素種、一酸化窒素）を包含することは、当業者であれば理解できるであろう。
【００８２】
一実施形態では、特定のサイトカインの放出の増加は、有意であるか、重要であるか、または未知の重要性を有しているか否かに関わらず、特定のサイトカインがサイトカインストームの一部であるという演繹的な意味ではない。一実施形態では、少なくとも１つのサイトカインの増加は、サイトカインストームまたはＣＲＳの結果ではない。別の実施形態では、ＣＡＲ−Ｔ細胞は、特定のサイトカインまたはサイトカイン群の濃度上昇の原因であり得る。
【００８３】
別の実施形態では、サイトカイン放出症候群は、下記の任意のまたは全ての症状により特徴付けられる。寒気を伴うまたは伴わない高熱、不快感、倦怠感、食欲不振、筋肉痛、関節痛、吐き気、嘔吐、頭痛、皮膚発疹、吐き気、嘔吐、下痢、多呼吸、低酸素血症、心臓血管頻拍、脈圧拡大、低血圧、心拍出量の増大（初期）、心拍出量の減少（後期）、Ｄ二量体レベルの上昇、出血を伴うまたは伴わない低フィブリノゲン血症、高窒素血症、肝臓の高トランスアミナーゼ血症、高ビリルビン血症、頭痛、精神状態の変化、精神錯乱、せん妄、喚語困難または明らかな失語症、幻覚、震え、測定障害、歩調失調、痙攣。別の実施形態では、サイトカインストームは、ＩＬ−２放出及びリンパ球増殖によって特徴付けられる。別の実施形態では、サイトカインストームは、ＣＡＲ−Ｔ細胞により放出されるサイトカインの増加によって特徴付けられる。別の実施形態では、サイトカインストームは、ＣＡＲ−Ｔ細胞以外の細胞により放出されるサイトカインの増加によって特徴付けられる。
【００８４】
別の実施形態では、サイトカインストームは、生命を脅かす可能性のある合併症、例えば、心機能障害、成人呼吸窮迫症候群、神経毒性、腎不全、肝不全、播種性血管内凝固症候群などを引き起こす。
【００８５】
サイトカイン放出症候群（ＣＲＳ）またはサイトカインストームは、それがトリガーされてから数日または数週間後に発生すると推定されることは、当業者であれば理解できるであろう。一実施形態では、ＣＡＲ−Ｔ細胞は、ＣＲＳまたはサイトカインストームの原因となる。別の実施形態では、ＣＲＳまたはサイトカインストームの原因は、ＣＡＲ−Ｔ細胞ではない。
【００８６】
一実施形態では、サイトカインストームの指標としてのサイトカイン濃度の測定値は、サイトカイン濃度の倍数増加（fold increase）、パーセント（％）増加、純増加、または変化割合として表される。別の実施形態では、サイトカインの絶対濃度が所定の濃度を超えていることが、対象においてサイトカインストームが発生しているまたは発生しそうであることの指標となる。別の実施形態では、サイトカインの絶対濃度が、所定の濃度、例えばＣＡＲ−Ｔ細胞療法を受けていない対照の対象において通常見られる濃度であることが、ＣＡＲ−Ｔ細胞療法を受けている対象においてサイトカインストームの発生を抑制または低減する方法の指標となる。
【００８７】
「サイトカイン濃度」という用語が、濃度の測定値、倍数変化の大きさ、パーセント（％）変化の大きさ、または変化割合の大きさを包含することは、当業者であれば理解できるであろう。さらに、血液、唾液、血清、尿、及び血漿中のサイトカインを測定する方法は、当分野で周知である。
【００８８】
一実施形態では、サイトカインストームがいくつかの炎症性サイトカインの濃度上昇と関連しているという認識にも関わらず、ＩＬ−６の濃度が、サイトカインストーム及び／またはその治療効果の一般的な指標として用いられている。別のサイトカインもサイトカインストームのマーカーとして使用できることは、当業者であれば理解できるであろう。例えば、ＴＮＦ−α、ＩＢ−１α、ＩＬ−６、ＩＬ−８、ＩＬ−１３、ＩＮＦ−γ、またはそれらの任意の組み合わせを、ＣＲＳまたはサイトカインストームのマーカーとして使用することができる。さらに、サイトカインを測定するための分析方法は、当分野で周知である。サイトカインストームに影響を与える方法は、同様に、サイトカイン放出症候群（ＣＲＳ）にも影響を与えることは、当業者であれば理解できるであろう。
【００８９】
一実施形態では、ここで開示されるのは、サイトカイン放出症候群またはサイトカインストームが発生している対象においてサイトカイン産生を低減または抑制する方法である。別の実施形態では、本開示に係る方法は、サイトカイン放出症候群またはサイトカインストームが発生しやすい対象においてサイトカイン産生を低減または抑制する方法である。別の実施形態では、本開示に係る方法は、サイトカイン放出症候群またはサイトカインストームが発生している対象においてサイトカイン産生を低減または抑制する方法であって、表１及び／または表２に記載されている任意のサイトカインまたはサイトカイン群の産生を低減または抑制する方法である。別の実施形態では、サイトカインＩＬ−６の産生が低減または抑制される。別の実施形態では、サイトカインＩＬ−β１の産生が低減または抑制される。別の実施形態では、サイトカインＩＬ−８の産生が低減または抑制される。別の実施形態では、サイトカインＩＬ−１３の産生が低減または抑制される。別の実施形態では、サイトカインＴＮＦ−αの産生が低減または抑制される。別の実施形態では、サイトカインＩＬ−６、サイトカインＩＬ−β１、サイトカインＴＮＦ−α、またはそれらの任意の組み合わせの産生が低減または抑制される。
【００９０】
一実施形態では、サイトカイン放出症候群は、グレード化されている。別の実施形態では、グレード１のサイトカイン放出症候群は、命に別条はなく、対処療法のみを必要とする症状（例えば、熱、吐き気、倦怠感、頭痛、筋肉痛、不快感）を示す。別の実施形態では、グレード２の症状は、例えば低血圧のための酸素、流体、昇圧剤などの中程度の医療介入を必要とする。別の実施形態では、グレード３の症状は、積極的な医療介入を必要とする。別の実施形態では、グレード４の症状は、生命を脅かす症状であり、人工呼吸器を必要とし、患者に臓器毒性が見られる。
【００９１】
別の実施形態では、サイトカインストームは、ＩＬ−６及びインターフェロン・ガンマの放出によって特徴付けられる。別の実施形態では、サイトカインストームは、ＩＬ−６の放出によって特徴付けられる。別の実施形態では、サイトカインストームは、インターフェロン・ガンマの放出によって特徴付けられる。別の実施形態では、サイトカインストームは、表１及び表２に記載された任意のサイトカインまたはその組み合わせの放出によって特徴付けられる。別の実施形態では、サイトカインストームは、当分野で既知の任意のサイトカインまたはその組み合わせの放出によって特徴付けられる。
【００９２】
一実施形態では、症状の発生は、投与開始後の数分後または数時間後に始まる。別の実施形態では、症状は、サイトカインのピーク濃度と一致する。
【００９３】
一実施形態では、ＣＡＲ−Ｔ細胞癌療法を受けている対象におけるサイトカイン放出症候群（ＣＲＳ）またはサイトカインストームの発生を抑制または低減する方法は、前記対象にアポトーシス細胞集団またはアポトーシス細胞上清、あるいはそれらの組成物を投与するステップを含む。別の実施形態では、アポトーシス細胞集団またはアポトーシス細胞上清、あるいはそれらの組成物は、ＣＡＲ−Ｔ細胞癌療法を助ける。別の実施形態では、アポトーシス細胞集団またはアポトーシス細胞上清、あるいはそれらの組成物は、ＣＲＳまたはサイトカインストームの発生の抑制または低減を助ける。別の実施形態では、アポトーシス細胞集団またはアポトーシス細胞上清、あるいはそれらの組成物は、ＣＲＳまたはサイトカインストームの治療を助ける。別の実施形態では、アポトーシス細胞集団またはアポトーシス細胞上清、あるいはそれらの組成物は、ＣＲＳまたはサイトカインストームの予防を助ける。別の実施形態では、アポトーシス細胞集団またはアポトーシス細胞上清、あるいはそれらの組成物は、ＣＲＳまたはサイトカインストームの寛解を助ける。別の実施形態では、アポトーシス細胞集団またはアポトーシス細胞上清、あるいはそれらの組成物は、ＣＲＳまたはサイトカインストームの緩和を助ける。
【００９４】
一実施形態では、ＣＡＲ−Ｔ細胞癌療法を受けている対象におけるサイトカイン放出症候群（ＣＲＳ）またはサイトカインストームの発生を抑制または低減する方法は、前記対象に追加的な薬剤を投与するステップを含む。別の実施形態では、前記追加的な薬剤は、ＣＡＲ−Ｔ細胞癌療法を助ける。一実施形態では、ＴＣＲ−Ｔ細胞癌療法を受けている対象におけるサイトカイン放出症候群（ＣＲＳ）またはサイトカインストームの発生を抑制または低減する方法は、前記対象に追加的な薬剤を投与するステップを含む。別の実施形態では、前記追加的な薬剤は、ＴＣＲ−Ｔ細胞癌療法を助ける。一実施形態では、樹状細胞療法を受けている対象におけるサイトカイン放出症候群（ＣＲＳ）またはサイトカインストームの発生を抑制または低減する方法は、前記対象に追加的な薬剤を投与するステップを含む。別の実施形態では、前記追加的な薬剤は、樹状細胞療法を助ける。一実施形態では、ＮＫ細胞療法を受けている対象におけるサイトカイン放出症候群（ＣＲＳ）またはサイトカインストームの発生を抑制または低減する方法は、前記対象に追加的な薬剤を投与するステップを含む。別の実施形態では、前記追加的な薬剤は、ＮＫ細胞療法を助ける。
【００９５】
一実施形態では、ＣＡＲ−Ｔ細胞癌療法を受けており、かつアポトーシス細胞集団またはアポトーシス細胞上清、あるいはそれらの組成物が投与されている対象におけるサイトカイン放出症候群（ＣＲＳ）またはサイトカインストームの発生を抑制または低減する方法は、前記対象に追加的な薬剤を投与するステップを含む。別の実施形態では、前記追加的な薬剤は、ＣＡＲ−Ｔ細胞癌療法を助ける。別の実施形態では、前記追加的な薬剤は、ＣＲＳまたはサイトカインストームの発生の抑制または低減を助ける。別の実施形態では、前記追加的な薬剤は、ＣＲＳまたはサイトカインストームの治療を助ける。別の実施形態では、前記追加的な薬剤は、ＣＲＳまたはサイトカインストームの予防を助ける。別の実施形態では、前記追加的な薬剤は、ＣＲＳまたはサイトカインストームの寛解を助ける。別の実施形態では、前記追加的な薬剤は、ＣＲＳまたはサイトカインストームの緩和を助ける。
【００９６】
一実施形態では、ＣＡＲ−Ｔ細胞癌療法を受けている対象におけるサイトカイン放出症候群（ＣＲＳ）またはサイトカインストームの発生を抑制または低減する方法は、前記対象に追加的な薬剤を投与するステップを含む。別の実施形態では、前記追加的な薬剤は、ＣＡＲ−Ｔ細胞療法を助ける。別の実施形態では、前記追加的な薬剤は、ＣＲＳまたはサイトカインストームの発生の抑制または低減を助ける。別の実施形態では、前記追加的な薬剤は、ＣＲＳまたはサイトカインストームの治療を助ける。別の実施形態では、前記追加的な薬剤は、ＣＲＳまたはサイトカインストームの予防を助ける。別の実施形態では、前記追加的な薬剤は、ＣＲＳまたはサイトカインストームの寛解を助ける。別の実施形態では、前記追加的な薬剤は、ＣＲＳまたはサイトカインストームの緩和を助ける。
【００９７】
一実施形態では、有害なサイトカイン放出を低減させるための追加的な薬剤は、アポトーシス細胞、またはアポトーシス細胞を含有する組成物を含む。別の実施形態では、有害なサイトカイン放出を低減させるための追加的な薬剤は、アポトーシス細胞上清、またはアポトーシス細胞上清を含有する組成物を含む。別の実施形態では、有害なサイトカイン放出を低減させるための追加的な薬剤は、ＣＴＬＡ−４阻害剤を含む。別の実施形態では、有害なサイトカイン放出を低減させるための追加的な薬剤は、アポトーシス細胞若しくはアポトーシス細胞上清またはアポトーシス細胞若しくはアポトーシス細胞上清を含有する組成物と、ＣＴＬＡ−４阻害剤とを含む。別の実施形態では、有害なサイトカイン放出を低減させるための追加的な薬剤は、α１−アンチトリプシンまたはその断片若しくは類似体を含む。別の実施形態では、有害なサイトカイン放出を低減させるための追加的な薬剤は、アポトーシス細胞若しくはアポトーシス細胞上清またはアポトーシス細胞若しくはアポトーシス細胞上清を含有する組成物と、α１−アンチトリプシンまたはその断片若しくは類似体とを含む。別の実施形態では、有害なサイトカイン放出を低減させるための追加的な薬剤は、テルル系化合物を含む。別の実施形態では、有害なサイトカイン放出を低減させるための追加的な薬剤は、アポトーシス細胞若しくはアポトーシス細胞上清またはアポトーシス細胞若しくはアポトーシス細胞上清を含有する組成物と、テルル系化合物とを含む。別の実施形態では、有害なサイトカイン放出を低減させるための追加的な薬剤は、免疫調節剤を含む。別の実施形態では、有害なサイトカイン放出を低減させるための追加的な薬剤は、アポトーシス細胞若しくはアポトーシス細胞上清またはアポトーシス細胞若しくはアポトーシス細胞上清を含有する組成物と、免疫調節剤とを含む。別の実施形態では、有害なサイトカイン放出を低減させるための追加的な薬剤は、Ｔｒｅｇ細胞を含む。別の実施形態では、有害なサイトカイン放出を低減させるための追加的な薬剤は、アポトーシス細胞若しくはアポトーシス細胞上清またはアポトーシス細胞若しくはアポトーシス細胞上清を含有する組成物と、Ｔｒｅｇ細胞とを含む。
【００９８】
別の実施形態では、本開示に係る組成物及び方法は、ＣＡＲ−Ｔ細胞と１以上のＣＴＬＡ−４阻害剤（例えば、イピリムマブ）との併用療法を用いる。別の実施形態では、ＣＴＬＡ−４は、Ｔ細胞活性化の強力な阻害剤であり、自己免疫寛容の維持を助ける。別の実施形態では、抗ＣＴＬＡ−４阻害剤（別の実施形態では抗体）の投与によりＴ細胞活性化の正味の影響を生成する。別の実施形態では、本開示に係る組成物及び方法は、アポトーシス細胞と、ＣＡＲ−Ｔ細胞と、１以上のＣＴＬＡ−４阻害剤（例えば、イピリムマブ）との併用療法を用いる。
【００９９】
別の実施形態では、本開示に係る組成物または方法により治療、予防、抑制、寛解、発生率低減、または緩和することができる、ＣＡＲ−Ｔ細胞またはＮＫ細胞の投与の結果として生じる他の毒性は、Ｂ細胞形成不全または腫瘍崩壊症候群（ＴＬＳ）を含む。
【０１００】
一実施形態では、ＣＡＲ−Ｔ細胞癌療法を受けている対象におけるサイトカイン放出症候群（ＣＲＳ）またはサイトカインストームの発生を抑制または低減する方法は、ＣＡＲ−Ｔ細胞療法の効果に影響を与えない。別の実施形態では、ＣＡＲ−Ｔ細胞癌療法を受けている対象におけるサイトカイン放出症候群（ＣＲＳ）またはサイトカインストームの発生を抑制または低減する方法は、ＣＡＲ−Ｔ細胞療法の効果を約５％以上低下させない。別の実施形態では、ＣＡＲ−Ｔ細胞癌療法を受けている対象におけるサイトカイン放出症候群（ＣＲＳ）またはサイトカインストームの発生を抑制または低減する方法は、ＣＡＲ−Ｔ細胞療法の効果を約１０％以上低下させない。別の実施形態では、ＣＡＲ−Ｔ細胞癌療法を受けている対象におけるサイトカイン放出症候群（ＣＲＳ）またはサイトカインストームの発生を抑制または低減する方法は、ＣＡＲ−Ｔ細胞療法の効果を約１５％以上低下させない。別の実施形態では、ＣＡＲ−Ｔ細胞癌療法を受けている対象におけるサイトカイン放出症候群（ＣＲＳ）またはサイトカインストームの発生を抑制または低減する方法は、ＣＡＲ−Ｔ細胞療法の効果を約２０％以上低下させない。
【０１０１】
ＣＡＲを発現するように改変された免疫細胞の活性が実質的に変化しないか否かを判断するのに、任意の適切な細胞障害性の定量化方法を用いることができる。例えば、細胞障害性は、細胞培養に基づく分析法、例えば実施例において説明する細胞障害性分析法などを用いて定量化することができる。細胞障害性分析法は、死細胞のＤＮＡを優先的に染色する色素を使用することができる。別の場合では、細胞集団中の生細胞及び死細胞の相対数を測定する蛍光及び発光分析法を用いることができる。そのような分析法では、プロテアーゼの活性が、細胞生存率及び細胞毒性のマーカーとしての役割を果たし、標識化された細胞透過性ペプチドが、サンプル中の生細胞数に比例する蛍光シグナルを生成する。様々な細胞障害性分析法のためのキットが、例えばプロメガ・アンド・ライフテクノロジーズ社（Promega and Life Technologies）などの製造業者から市販されている。別の実施形態では、細胞障害性の指標は、定性的であり得る。別の実施形態では、細胞障害性の指標は、定量的であり得る。さらなる実施形態では、細胞障害性の指標は、細胞障害性サイトカインの発現の変化に関連し得る。
【０１０２】
一実施形態では、本開示に係る方法は、同種ドナー細胞の拒絶反応の克服に有用な追加的なステップを有する。一実施形態では、本開示に係る方法は、ＣＡＲ−Ｔ細胞（一実施形態では、同種ＣＡＲ−Ｔ細胞）の投与前に、完全または部分的にリンパ球を枯渇させるステップを有する。別の実施形態では、リンパ球枯渇（lymphodepletion）は、宿主対移植片反応を、同種ＣＡＲ−Ｔ細胞が、標的の腫瘍を攻撃するのには十分であるが、骨髄移植による宿主免疫系のレスキュー（rescue）を要求するのには不十分な期間（時間）だけ遅延させるように調節される。別の実施形態では、宿主対移植片反応の有効性を有するが開始因子を欠いている同種ＣＡＲ−Ｔ細胞の使用を可能にするために、リンパ節からの同種Ｔ細胞の放出を遅延させる薬剤、例えば、２−アミノ−２−［２−（４−オクチルフェニル）エチル］プロパン−１、３−ジオール（ＦＴＹ７２０）、５−［４−フェニル−５−（トリフルオロメチル）チオフェン−２−イル］−３−［３−（トリフルオロメチル）フェニル］１，２，４−オキサジアゾール（ＳＥＷ２８７１）、３−（２−（−ヘキシルフェニルアミノ）−２−オキソエチルアミノ）プロピオン酸（Ｗ１２３）、２−アミノ−４−（２−クロロ−４−（３−フェノキシフェニルチオ）フェニル）−２−（ヒドロキシメチル）リン酸水素ブチル（ＫＲＰ−２０３リン酸）、または当分野で既知の別の薬剤が、本開示に係る組成物及び方法の一部として使用され得る。一実施形態では、同種細胞の拒絶を減少させるために、同種ＣＡＲ−Ｔ細胞によるＭＨＣ発現が抑制される。別の実施形態では、アポトーシス細胞が、同種細胞の拒絶を防止する。
【０１０３】
ＣＡＲ−Ｔ細胞療法に関連したサイトカイン放出
【０１０４】
一実施形態では、サイトカイン放出は、ＣＡＲ−Ｔ細胞療法のような免疫療法の投与の数日後から２週間後の間に起こる。一実施形態では、低血圧及び他の症状は、サイトカイン放出の後にすなわち数日から数週間続く。したがって、一実施形態において、アポトーシス細胞またはアポトーシス細胞上清は、予防としての免疫療法と同時に対象に投与される。別の実施形態においては、アポトーシス細胞または上清が、免疫療法の投与の２〜３日後に対象に投与される。別の実施形態においては、アポトーシス細胞または上清が、免疫療法の投与の７日後に対象に投与される。別の実施形態においては、アポトーシス細胞または上清が、免疫療法の投与の１０日後に対象に投与される。別の実施形態においては、アポトーシス細胞または上清が、免疫療法の投与の１４日後に対象に投与される。別の実施形態においては、アポトーシス細胞または上清が、免疫療法の投与の２〜１４日後に対象に投与される。
【０１０５】
別の実施形態において、アポトーシス細胞またはアポトーシス細胞上清は、免疫療法の投与の２〜３時間後に被験者に投与される。別の実施形態において、アポトーシス細胞またはアポトーシス細胞上清は、免疫療法の投与の７時間後に被験者に投与される。別の実施形態において、アポトーシス細胞またはアポトーシス細胞上清は、免疫療法の投与の１０時間後に被験者に投与される。別の実施形態において、アポトーシス細胞またはアポトーシス細胞上清は、免疫療法の投与の１４時間後に被験者に投与される。別の実施形態において、アポトーシス細胞またはアポトーシス細胞上清は、免疫療法の投与の２〜１４時間後に被験者に投与される。
【０１０６】
代替的な実施形態では、アポトーシス細胞またはアポトーシス細胞上清は、予防としての免疫療法の前に対象に投与される。別の実施形態では、アポトーシス細胞またはアポトーシス細胞上清は、免疫療法の投与の１日前に対象に投与される。別の実施形態では、アポトーシス細胞またはアポトーシス細胞上清は、免疫療法の投与の２〜３日前に対象に投与される。別の実施形態では、アポトーシス細胞またはアポトーシス細胞上清は、免疫療法の投与の７日前に対象に投与される。別の実施形態では、アポトーシス細胞またはアポトーシス細胞上清は、免疫療法の投与の１０日前に対象に投与される。別の実施形態では、アポトーシス細胞またはアポトーシス細胞上清は、免疫療法の投与の１４日前に対象に投与される。別の実施形態では、アポトーシス細胞またはアポトーシス細胞上清は、免疫療法の投与の２〜１４日前に対象に投与される。
【０１０７】
別の実施形態では、アポトーシス細胞またはアポトーシス細胞上清は、免疫療法の投与の２〜３時間前に対象に投与される。別の実施形態では、アポトーシス細胞またはアポトーシス細胞上清は、免疫療法の投与の７時間前に対象に投与される。別の実施形態では、アポトーシス細胞またはアポトーシス細胞上清は、免疫療法の投与の１０時間前に対象に投与される。別の実施形態では、アポトーシス細胞またはアポトーシス細胞上清は、免疫療法の投与の１４時間前に対象に投与される。別の実施形態では、アポトーシス細胞またはアポトーシス細胞上清は、免疫療法の投与の２〜１４時間前に対象に投与される。
【０１０８】
別の実施形態において、アポトーシス細胞またはアポトーシス細胞上清は、サイトカイン放出症候群が起こると、治療的に投与され得る。一実施形態では、サイトカイン放出症候群の開始につながるか、またはサイトカイン放出症候群の開始の証拠となるサイトカイン放出が検出されると、アポトーシス細胞または上清を投与され得る。一実施形態では、アポトーシス細胞または上清は、増加したサイトカインレベルまたはサイトカイン放出症候群を終結させ、その後遺症を回避することができる。
【０１０９】
別の実施形態において、アポトーシス細胞またはアポトーシス細胞上清は、複数の時点で治療的に投与され得る。別の実施形態では、アポトーシス細胞またはアポトーシス細胞上清の投与は、少なくとも本明細書に記載される２つの時点である。別の実施形態では、アポトーシス細胞またはアポトーシス細胞上清の投与は、少なくとも本明細書に記載される３つの時点である。別の実施形態では、アポトーシス細胞またはアポトーシス細胞上清の投与は、ＣＲＳかまたはサイトカインストームの前でかつサイトカイン放出症候群が起こっているときか、それらの任意の組み合わせである。
【０１１０】
一実施形態では、キメラ抗原受容体発現Ｔ細胞（ＣＡＲ−Ｔ細胞）療法及びアポトーシス細胞療法または上清を一緒に投与する。別の実施形態において、ＣＡＲ−Ｔ細胞療法は、アポトーシス細胞療法または上清の後に投与される。別の実施形態において、ＣＡＲ−Ｔ細胞療法は、アポトーシス細胞療法または上清の前に投与される。この態様によれば、一実施形態において、アポトーシス細胞療法または上清は、ＣＡＲ−Ｔ細胞治療の約２〜３週間後に投与される。別の実施形態において、アポトーシス細胞療法または上清は、ＣＡＲ−Ｔ細胞治療の約６〜７週間後に投与される。別の実施形態において、アポトーシス細胞療法または上清は、ＣＡＲ−Ｔ細胞治療の約９週間後に投与される。別の実施形態において、アポトーシス細胞療法または上清は、ＣＡＲ−Ｔ細胞治療の数ヶ月後に投与される。
【０１１１】
したがって、一実施形態において、アポトーシス細胞またはアポトーシス細胞上清は、予防としての免疫療法と同時に対象に投与される。別の実施形態においては、アポトーシス細胞または上清が、免疫療法の投与の２〜３日後に対象に投与される。別の実施形態においては、アポトーシス細胞または上清が、免疫療法の投与の７日後に対象に投与される。別の実施形態においては、アポトーシス細胞または上清が、免疫療法の投与の１０日後に対象に投与される。別の実施形態においては、アポトーシス細胞または上清が、免疫療法の投与の１４日後に対象に投与される。別の実施形態においては、アポトーシス細胞または上清が、免疫療法の投与の２〜１４日後に対象に投与される。
【０１１２】
別の実施形態においては、アポトーシス細胞またはアポトーシス細胞上清が、免疫療法の投与の２〜３時間後に対象に投与される。別の実施形態においては、アポトーシス細胞または上清が、免疫療法の投与の７時間後に対象に投与される。別の実施形態においては、アポトーシス細胞または上清が、免疫療法の投与の１０時間後に対象に投与される。別の実施形態においては、アポトーシス細胞または上清が、免疫療法の投与の１４時間後に対象に投与される。別の実施形態においては、アポトーシス細胞または上清が、免疫療法の投与の２〜１４時間後に対象に投与される。
【０１１３】
代替的な実施形態においては、アポトーシス細胞またはアポトーシス細胞上清が、予防として免疫療法の前に対象に投与される。別の実施形態においては、アポトーシス細胞または上清が、免疫療法の１日前に対象に投与される。別の実施形態においては、アポトーシス細胞または上清が、免疫療法の２〜３日前に対象に投与される。別の実施形態においては、アポトーシス細胞または上清が、免疫療法の７日前に対象に投与される。別の実施形態においては、アポトーシス細胞または上清が、免疫療法の１０日前に対象に投与される。別の実施形態においては、アポトーシス細胞または上清が、免疫療法の１４日前に対象に投与される。別の実施形態においては、アポトーシス細胞または上清が、免疫療法の２〜１４日前に対象に投与される。
【０１１４】
別の実施形態においては、アポトーシス細胞またはアポトーシス細胞上清が、免疫療法の２〜３時間前に対象に投与される。別の実施形態においては、アポトーシス細胞または上清が、免疫療法の７時間前に対象に投与される。別の実施形態においては、アポトーシス細胞または上清が、免疫療法の１０時間前に対象に投与される。別の実施形態においては、アポトーシス細胞または上清が、免疫療法の１４時間前に対象に投与される。別の実施形態においては、アポトーシス細胞または上清が、免疫療法の２〜１４時間前に対象に投与される。
【０１１５】
別の実施形態においては、アポトーシス細胞またはアポトーシス細胞上清は、サイトカイン放出症候群が起こると、治療的に投与され得る。一実施形態では、サイトカイン放出症候群の開始につながるか、またはサイトカイン放出症候群の開始の証拠となるサイトカイン放出が検出されると、アポトーシス細胞または上清が投与され得る。一実施形態では、アポトーシス細胞または上清は、増加したサイトカインレベルまたはサイトカイン放出症候群を終結させ、その後遺症を回避することができる。
【０１１６】
別の実施形態において、アポトーシス細胞またはアポトーシス細胞上清は、複数の時点で治療的に投与され得る。別の実施形態では、アポトーシス細胞またはアポトーシス細胞上清の投与は、少なくとも本明細書に記載される２つの時点である。別の実施形態では、アポトーシス細胞またはアポトーシス細胞上清の投与は、少なくとも本明細書に記載される３つの時点である。別の実施形態では、アポトーシス細胞またはアポトーシス細胞上清の投与は、ＣＲＳかまたはサイトカインストームの前であり、かつサイトカイン放出症候群が起こっているとき、及びそれらの任意の組み合わせである。
【０１１７】
一実施形態では、キメラ抗原受容体発現Ｔ細胞（ＣＡＲ−Ｔ細胞）療法及びアポトーシス細胞療法または上清を一緒に投与する。別の実施形態においては、ＣＡＲ−Ｔ細胞療法は、アポトーシス細胞療法または上清の後に投与される。別の実施形態においては、ＣＡＲ−Ｔ細胞療法は、アポトーシス細胞療法または上清の前に投与される。この態様によれば、一実施形態において、アポトーシス細胞療法または上清は、ＣＡＲ−Ｔ細胞治療の約２〜３週間後に投与される。別の実施形態において、アポトーシス細胞療法または上清は、ＣＡＲ−Ｔ細胞治療の約６〜７週間後に投与される。別の実施形態において、アポトーシス細胞療法または上清は、ＣＡＲ−Ｔ細胞治療の約９週間後に投与される。別の実施形態において、アポトーシス細胞療法または上清は、ＣＡＲ−Ｔ細胞治療の数ヶ月後に投与される。
【０１１８】
他の実施形態では、予防としての免疫療法と同時に、追加的な薬剤を対象に投与する。一実施形態では、追加的な薬剤は、アポトーシス細胞、アポトーシス上清、ＣＴＬＡ−４阻止剤、α１−アンチトリプシンまたはその断片またはその類似体、細胞系化合物、テルル系化合物、または免疫調節化合物、またはそれらの任意の組み合わせを含む。別の実施形態では、追加的な薬剤は、免疫療法の投与後２〜３日の対象に投与される。別の実施形態では、追加的な薬剤は、免疫療法の投与後７日の対象に投与される。別の実施形態では、追加的な薬剤は、免疫療法の投与後１０日の対象に投与される。別の実施形態では、追加的な薬剤は、免疫療法の投与後１４日の対象に投与される。別の実施形態では、追加的な薬剤は、免疫療法の投与後２〜１４日の対象に投与される。
【０１１９】
別の実施形態では、追加的な薬剤は、免疫療法の投与の２〜３時間後に対象に投与される。別の実施形態では、追加的な薬剤は、免疫療法の投与の７時間後に対象に投与される。別の実施形態では、追加的な薬剤は、免疫療法の投与の１０時間後に対象に投与される。別の実施形態では、追加的な薬剤は、免疫療法の投与の１４時間後に対象に投与される。別の実施形態では、追加的な薬剤は、免疫療法の投与の２〜１４時間後に対象に投与される。
【０１２０】
代替的な実施形態では、追加的な薬剤は、予防として免疫療法の前に対象に投与される。別の実施形態では、追加的な薬剤は、免疫療法の投与の１日前に対象に投与される。別の実施形態では、追加的な薬剤は、免疫療法の投与の２〜３日前に対象に投与される。別の実施形態では、追加的な薬剤は、免疫療法の投与の７日前に対象に投与される。別の実施形態では、追加的な薬剤は、免疫療法の投与の１０日前に対象に投与される。別の実施形態では、追加的な薬剤は、免疫療法の投与の１４日前に対象に投与される。別の実施形態では、追加的な薬剤は、免疫療法の投与の２〜１４日前に対象に投与される。
【０１２１】
別の実施形態では、追加的な薬剤は、免疫療法の投与の７時間前に対象に投与される。別の実施形態では、追加的な薬剤は、免疫療法の投与の１０時間前に対象に投与される。別の実施形態では、追加的な薬剤は、免疫療法の投与の１４時間前に対象に投与される。別の実施形態では、追加的な薬剤は、免疫療法の投与の２〜１４時間前に対象に投与される。
【０１２２】
別の実施形態においては、追加的な薬剤は、サイトカイン放出症候群が起こると、治療的に投与される。一実施形態では、サイトカイン放出症候群の開始につながるか、またはサイトカイン放出症候群の開始の証拠となるサイトカイン放出が検出されると、追加的な薬剤が投与される。一実施形態では、追加的な薬剤は、増加したサイトカインレベル、またはサイトカイン放出症候群を終了させ、その後遺症を回避することができる。
【０１２３】
別の実施形態では、追加の薬剤は、複数の時点で治療的に投与される。別の実施形態では、追加の薬剤の投与は、少なくとも本明細書に記載される２つの時点である。別の実施形態では、追加の薬剤の投与は、少なくとも本明細書に記載される３つの時点である。別の実施形態において、追加的な薬剤の投与は、ＣＲＳかまたはサイトカインストームの前、サイトカイン放出症候群が起きたとき、及びそれらの任意の組み合わせである。
【０１２４】
一実施形態では、キメラ抗原受容体発現Ｔ細胞（ＣＡＲ−Ｔ細胞）療法及び追加的な薬剤を一緒に投与する。別の実施形態では、ＣＡＲ−Ｔ細胞療法は、追加的な薬剤を投与される。別の実施形態では、ＣＡＲ−Ｔ細胞療法は、追加的な薬剤の前に投与される。この態様によれば、一実施形態では、ＣＡＲ−Ｔ細胞治療の約２〜３週間後に追加的な薬剤が投与される。別の実施形態では、ＣＡＲ−Ｔ細胞治療の約６〜７週間後に追加的な薬剤が投与される。別の実施形態では、ＣＡＲ−Ｔ細胞治療の約９週間後に追加的な薬剤が投与される。別の実施形態では、ＣＡＲ−Ｔ細胞治療の数ヶ月後に追加的な薬剤が投与される。
【０１２５】
一実施形態では、ＣＡＲ−Ｔ細胞は、対象に対して異種である。一実施形態では、ＣＡＲ−Ｔ細胞は、１以上のドナーに由来する。一実施形態では、ＣＡＲ−Ｔ細胞は、１以上の骨髄ドナーに由来する。別の実施形態では、ＣＡＲ−Ｔ細胞は、１以上の血液バンク献血に由来する。一実施形態では、ドナーは適合ドナー（マッチドナー）である。一実施形態では、ＣＡＲ−Ｔ細胞は、ユニバーサル同種異系ＣＡＲ−別の実施形態では、ＣＡＲ−Ｔ細胞は、非適合の（アンマッチの）第三者のドナーからのものである。別の実施形態では、ＣＡＲ−Ｔ細胞は、プールされた第三者のドナーからのものである。一実施形態では、ドナーは骨髄ドナーである。別の実施形態において、ドナーは、血液バンクドナーである。一実施形態では、本明細書に開示される組成物及び方法のＣＡＲ−Ｔ細胞は、１以上のＭＨＣ非制限腫瘍指向性キメラ受容体を含む。一実施形態では、非自己Ｔ細胞は、例えば引用により本明細書に組み入れられる米国特許出願第２０１３／０１５６７９４号明細書に記載されているように、自己免疫反応を予防または最小限に抑えるために、当該分野で公知のプロトコールにしたがって改変または投与され得る。
【０１２６】
他の実施形態では、ＣＡＲ−Ｔ細胞は、自己由来である。一実施形態では、患者自身の細胞が使用される。この実施形態において、患者自身の細胞が使用される場合、ＣＡＲ−Ｔ細胞療法は、アポトーシス細胞療法の後に投与される。
【０１２７】
一実施形態では、アポトーシス細胞は対象に対して異種である。一実施形態では、アポトーシス細胞は、１以上のドナーに由来する。一実施形態では、アポトーシス細胞は、１以上の骨髄ドナーに由来する。別の実施形態では、アポトーシス細胞は、１以上の血液バンク献血に由来する。一実施形態では、ドナーはマッチドナーである。別の実施形態において、アポトーシス細胞は、アンマッチの第三者のドナー由来である。一実施形態では、アポトーシス細胞はユニバーサル同種異系アポトーシス細胞である。別の実施形態では、アポトーシス細胞は同系ドナーからのものである。別の実施形態では、ＣＡＲ−Ｔ細胞は、プールされた第三者のドナーからのものである。一実施形態では、ドナーは骨髄ドナーである。別の実施形態において、ドナーは、血液バンクドナーである。別の実施形態において、アポトーシス細胞は対象の自家由来である。この実施形態では、患者自身の細胞が使用される。
【０１２８】
いくつかの実施形態によれば、本明細書中に開示される治療用単核豊富細胞調製物またはアポトーシス細胞上清は、全身的に対象に投与される。別の実施形態において、投与は、静脈内経路による。あるいは、治療用単核豊富細胞または上清を、これに限定されないが、非経口、腹腔内、関節内、筋肉内及び皮下経路を含む様々な他の経路によって対象に投与することができる。各可能性は、本明細書に開示されるそれぞれ別の実施形態を表す。
【０１２９】
いくつかの実施形態によれば、本明細書中に開示される治療用単核豊富細胞調製物または追加的な薬剤は、全身的に対象に投与される。別の実施形態において、投与は、静脈内経路による。あるいは、治療用単核豊富細胞または追加の薬剤は、これに限定されないが、非経口、腹腔内、関節内、筋肉内及び皮下経路を含む様々な他の経路にしたがって対象に投与することができる。各可能性は、本明細書に開示されるそれぞれ別の実施形態を表す。
【０１３０】
一実施形態では、製剤は、全身的ではなく局所的な方法で、例えば患者体内の特定の領域に直接製剤を注射することによって投与される。別の実施形態において、特定の領域は、腫瘍または癌を含む。
【０１３１】
別の実施形態では、治療用単核豊富細胞または上清を、これらに限定しないが、生理学的溶液（生理食塩水等）、ＰＢＳ、ＨＢＳＳなどの適切な生理学的緩衝液中に懸濁させて対象に投与する。さらに、懸濁媒体は、細胞の生存能力を維持するのに役立つサプリメントをさらに含んでもよい。別の実施形態では、例えば、生理学的溶液、ＰＢＳ、ＨＢＳＳなどの生理学的緩衝液に懸濁された追加的な薬剤を対象に投与する。
【０１３２】
いくつかの実施形態によれば、医薬組成物が静脈内投与される。別の実施形態によれば、医薬組成物は単回投与で投与される。別の実施形態によれば、医薬組成物は複数回投与で投与される。別の実施形態によれば、医薬組成物は、２回投与で投与される。別の実施形態によれば、医薬組成物は、３回投与で投与される。別の実施形態によれば、医薬組成物は、４回投与で投与される。別の実施形態によれば、医薬組成物は、５回投与またはそれ以上の回数の投与で投与される。いくつかの実施形態によれば、医薬組成物は、静脈注射用に製剤化される。
【０１３３】
一実施形態では、改変ＣＡＲ発現免疫細胞を対象に与える任意の適切な方法を、本明細書に記載の方法のために使用することができる。一実施形態では、対象に細胞を与える方法は、造血細胞移植（ＨＣＴ）、癌患者へのドナー由来ＮＫ細胞の注入、またはそれらの組み合わせを含む。
【０１３４】
別の実施形態では、本明細書に記載されるのは、キメラ抗原受容体発現Ｔ細胞（ＣＡＲ−Ｔ細胞）療法を受けている対象におけるサイトカイン放出症候群またはサイトカインストームの発生を阻害または低減させる方法であって、アポトーシス細胞を含む組成物を前記対象に投与するステップを含む、該方法である。
【０１３５】
別の実施形態では、本明細書に記載されるのは、キメラ抗原受容体発現Ｔ細胞（ＣＡＲ−Ｔ細胞）療法を受けている対象におけるサイトカイン放出症候群またはサイトカインストームの発生を阻害または低減させる方法であって、アポトーシス細胞・食細胞上清などのアポトーシス細胞上清を前記対象に投与するステップを含む、該方法である。
【０１３６】
別の実施形態では、本明細書に記載されるのは、キメラ抗原受容体発現Ｔ細胞（ＣＡＲ−Ｔ細胞）療法を受けている対象におけるサイトカイン放出症候群またはサイトカインストームの発生を阻害または低減させる方法であって、少なくとも１つの追加的な薬剤を前記対象に投与するステップを含む、該方法である。
【０１３７】
特定の実施形態では、ＣＡＲ−Ｔ細胞療法は、本明細書に開示されるＣＡＲ−Ｔ細胞及びアポトーシス細胞またはアポトーシス細胞上清、またはその他の追加の薬剤あるいは追加の薬剤の組み合わせを含む、本明細書に開示される組成物を投与することを含む。代替的な実施形態では、ＣＡＲ−Ｔ細胞療法は、本明細書に開示されるＣＡＲ−Ｔ細胞を含む組成物及びアポトーシス細胞またはアポトーシス細胞上清、または追加の薬剤またはそれらの組み合わせのいずれかを含む組成物投与することを含む。
【０１３８】
非ＣＡＲ−Ｔ細胞適用に関連するサイトカイン放出
【０１３９】
一実施形態では、本明細書に記載されているのは、サイトカン放出症候群またはサイトカインストームに罹患している対象またはサイトカン放出症候群またはサイトカインストームを発症しやすい対象におけるサイトカイン産生を低減または阻害する方法であって、アポトーシス細胞またはアポトーシス上清を含む組成物を前記対象に投与するステップを含み、前記投与は、前記対象におけるサイトカイン産生を低減させるかまたは阻害する、該方法である。別の実施形態では、サイトカイン産生の減少または阻害を、サイトカン放出症候群またはサイトカインストームに罹患している、またはサイトカン放出症候群またはサイトカインストームを発症しやすく、かつアポトーシス細胞またはアポトーシス上清を投与されていない対象と比較する。別の実施形態では、サイトカイン産生を減少または阻害する方法は、炎症誘発性サイトカイン産生を減少または抑制する。別の実施形態において、サイトカイン産生を減少または阻害する方法は、少なくとも１つの炎症誘発性サイトカインの産生を減少または抑制する。別の実施形態において、サイトカイン産生を減少または阻害する方法は、少なくともサイトカインＩＬ−６の産生を減少または抑制する。別の実施形態において、サイトカイン産生を減少または阻害する方法は、少なくともサイトカインＩＬ−１βの産生を減少または抑制する。別の実施形態において、サイトカイン産生を減少または阻害する方法は、少なくともサイトカインＴＮＦ−αの産生を減少または抑制する。別の実施形態において、サイトカイン産生を減少または阻害するための本明細書に開示される方法は、サイトカイン放出症候群またはサイトカインストームに罹患しているか、またはサイトカイン放出症候群またはサイトカインストームに発症しやすく、かつアポトーシス細胞またはアポトーシス上清を投与されていない対象と比較して、前記対象にサイトカインＩＬ−６、ＩＬ−１β、またはＴＮＦ−αの産生の低減または阻害をもたらす。
【０１４０】
癌または腫瘍はまた、炎症誘発性サイトカインを含むサイトカインの絶対レベルに影響を与え得る。対象における腫瘍負荷のレベルは、サイトカインレベル、特に前炎症性サイトカインレベルに影響を及ぼし得る。当業者は、語句「減少または抑制する」またはその文法的変形が、サイトカイン産生の大幅な減少または阻害、またはサイトカイン産生の正味の減少または阻害またはパーセント（％）の減少または阻害を包含し得るものであり、またはサイトカイン産生の減少または阻害の変化率を包含し得るものであることを理解されよう。
【０１４１】
別の実施形態において、サイトカイン放出症候群またはサイトカインストームに罹患しているか、またはサイトカイン放出症候群またはサイトカインストームに発症しやすい対象におけるサイトカイン産生を減少または阻害するための本明細書に開示される方法は、アポトーシス細胞またはアポトーシス細胞を含む組成物を前記対象に投与するステップを含む。
【０１４２】
別の実施形態において、サイトカイン放出症候群またはサイトカインストームに罹患しているか、またはサイトカイン放出症候群またはサイトカインストームに発症しやすい対象におけるサイトカイン産生を減少または阻害するための本明細書に開示される方法は、アポトーシス細胞上清などのアポトーシス細胞・食細胞上清、または前記上清を含む組成物を前記対象に投与するステップを含む。
【０１４３】
別の実施形態において、サイトカイン放出症候群またはサイトカインストームに罹患しているか、またはサイトカイン放出症候群またはサイトカインストームに発症しやすい対象におけるサイトカイン産生を減少または阻害するための本明細書に開示される方法は、アポトーシス細胞、アポトーシス細胞上清、ＣＴＬＡ−４阻害剤、α１−アンチトリプシンまたはその断片またはその類似体、テルル系化合物、免疫調節剤またはその任意の組み合わせを含む群から選択される追加的の薬剤のようなアポトーシス細胞上清、あるいは前記上清を含む組成物を前記対象に投与するステップを含む。
【０１４４】
一実施形態では、感染により、前記対象におけるサイトカイン放出症候群またはサイトカインストームが引き起こされる。一実施形態では、感染はインフルエンザ感染である。一実施形態では、インフルエンザ感染はＨ１Ｎ１である。別の実施形態において、インフルエンザ感染はＨ５Ｎ１鳥インフルエンザである。別の実施形態において、感染症は重症急性呼吸器症候群（ＳＡＲＳ）である。別の実施形態において、前記対象はエプスタイン・バール・ウイルス関連血球貪食症候群（ＨＬＨ）を有する。別の実施形態において、感染は敗血症である。一実施形態では、その敗血症はグラム陰性である。別の実施形態において、感染はマラリアである。別の実施形態において、感染はエボラウイルス感染である。別の実施形態において、感染は天然痘ウイルスである。別の実施形態において、感染は全身型グラム陰性菌感染症である。別の実施形態において、感染はヤーリッシュ・ヘルクスハイマー症候群である。
【０１４５】
一実施形態では、対象におけるカイン放出症候群またはサイトカインストームの原因は、血球貪食症候群（ＨＬＨ）である。別の実施形態において、ＨＬＨは突発性ＨＬＨである。別の実施形態において、ＨＬＨはマクロファージ活性化症候群（ＭＡＳ）である。別の実施形態では、対象におけるサイトカイン放出症候群またはサイトカインストームの原因はＭＡＳである。
【０１４６】
一実施形態では、対象におけるサイトカイン放出症候群またはサイトカインストームの原因は慢性関節炎である。別の実施形態では、対象におけるサイトカイン放出症候群またはサイトカインストームの原因は、スティル病としても知られている全身型若年性発作関節炎（ｓＪＩＡ）である。
【０１４７】
一実施形態では、対象におけるサイトカイン放出症候群またはサイトカインストームの原因は、クリオピリン関連周期性発熱症候群（ＣＡＰＳ）である。別の実施形態では、ＣＡＰＳは、家族性寒冷蕁麻疹（ＦＣＵ）としても知られている家族性寒冷自己炎症症候群（ＦＣＡＳ）を含む。別の実施形態において、ＣＡＰＳはマックル・ウェルズ症候群（ＭＷＳ）を含む。別の実施形態において、ＣＡＰＳは慢性乳児神経皮膚関節炎症候群（ＣＩＮＣＡ）を含む。さらに別の実施形態において、ＣＡＰＳはＦＣＡＳ、ＦＣＵ、ＭＷＳ、またはＣＩＮＣＡ症候群、またはそれらの任意の組み合わせを含む。別の実施形態では、対象におけるサイトカイン放出症候群またはサイトカインストームの原因は、ＦＣＡＳである。別の実施形態では、対象におけるサイトカイン放出症候群またはサイトカインストームの原因は、ＦＣＵである。別の実施形態では、対象におけるサイトカイン放出症候群またはサイトカインストームの原因は、ＭＷＳである。別の実施形態では、対象におけるサイトカイン放出症候群またはサイトカインストームの原因は、ＣＩＮＣＡ症候群である。さらに別の実施形態では、対象におけるサイトカイン放出症候群またはサイトカインストームの原因は、ＦＣＡＳ、ＦＣＵ、ＭＷＳ、またはＣＩＮＣＡ症候群、またはそれらの任意の組み合わせを含む。
【０１４８】
別の実施形態では、対象におけるサイトカイン放出症候群またはサイトカインストームの原因は、ＣＩＡＳＩ遺伝子としても知られるＮＬＲＰ３遺伝子の遺伝的または新生の機能獲得変異を含むクリオピリン関連周期性発熱症候群である。
【０１４９】
一実施形態では、対象におけるサイトカイン放出症候群またはサイトカインストームの原因は、遺伝性自己炎症性疾患である。
【０１５０】
一実施形態では、炎症性サイトカイン放出のトリガーは、リポ多糖（ＬＰＳ）、グラム陽性毒素、真菌毒素、グリコシルホスファチジルイノシトール（ＧＰＩ）またはＲＩＧ−１遺伝子発現の調節である。
【０１５１】
別の実施形態では、サイトカイン放出症候群またはサイトカインストームに罹患している対象は、感染症を有していない。一実施形態では、前記対象は急性膵炎を有する。別の実施形態では、前記対象は一実施形態では重症熱傷または外傷である組織傷害である。別の実施形態では、前記対象は急性呼吸窮迫症候群を有する。別の実施形態では、前記対象は、薬物使用に伴うサイトカイン放出症候群またはサイトカインストームを有する。別の実施形態では、前記対象は、毒素吸入に伴うサイトカイン放出症候群またはサイトカインストームを有する。
【０１５２】
別の実施形態では、前記対象は、免疫療法を受けることに伴うサイトカイン放出症候群またはサイトカインストームを有し、前記免疫療法は、一実施形態では、スーパーアゴニストＣＤ２８特異的モノクローナル抗体（ＣＤ２８ＳＡ）を用いた免疫療法である。一実施形態では、ＣＤ２８ＳＡはＴＧＮ１４１２である。別の実施形態において、免疫療法はＣＡＲ−Ｔ細胞療法である。別の実施形態において、免疫療法は樹状細胞療法である。
【０１５３】
別の実施形態において、医薬組成物の投与から生じるサイトカイン放出症候群またはサイトカインストームを制御するために、アポトーシス細胞または上清またはＣＴＬＡ−４阻害剤、α１−アンチトリプシンまたはその断片、その類似体、テルル系化合物、または免疫調節剤、またはそれらの任意の組み合わせが使用され得る。一実施形態では、医薬組成物は、オキサリプラチン、シタラビン、レナリドマイド、またはそれらの組み合わせである。
【０１５４】
別の実施形態において、抗体の投与から生じるサイトカイン放出症候群またはサイトカインストームを制御するために、アポトーシス細胞または上清またはＣＴＬＡ−４阻害剤、α１−アンチトリプシンまたはその断片、その類似体、テルル系化合物、または免疫調節剤、またはそれらの任意の組み合わせが使用され得る。一実施形態では、抗体はモノクローナル抗体である。別の実施形態では、抗体はポリクローナル抗体である。一実施形態では、抗体はリツキシマブである。別の実施形態では、抗体はオルソクローンＯＫＴ３（ムロモナブ−ＣＤ３）である。別の実施形態では、抗体はアレムツズマブ、トシツズマブ、ＣＰ−８７０、８９３、ＬＯ−ＣＤ２ａ／ＢＴＩ−３２２またはＴＧＮ１４１２である。
【０１５５】
別の実施形態では、炎症性サイトカイン産生の制御が有益であり得る疾患の例として、癌、アレルギー、あらゆるタイプの感染症、毒素ショック症候群、敗血症、あらゆるタイプの自己免疫疾患、関節炎、クローン病、狼瘡、乾癬、その他、顕著な特徴が対象において有害な作用を引き起こす毒性サイトカイン放出であるあらゆる他の病気などが挙げられる。
【０１５６】
Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）
【０１５７】
別の実施形態において、本明細書に開示される組成物及び方法は、ＣＡＲ−Ｔ細胞に加えてまたはその代わりに、アポトーシス細胞、アポトーシス細胞上清、ＣＴＬＡ−４阻害剤、α１−アンチトリプシンまたはその断片またはその類似体、テルル系化合物、免疫調節剤またはその任意の組み合わせ、及びデザイナーＴ細胞受容体による組み合わせ療法を利用する。一実施形態では、ＴＣＲ療法は、目的のタンパク質のエピトープに特異的なＴ細胞受容体（ＴＣＲ）をＴ細胞に導入することを含む。別の実施形態では、目的のタンパク質は腫瘍関連抗原である。別の実施形態において、遺伝子操作されたＴＣＲは、Ｔ細胞活性化ドメインと共に腫瘍細胞上の主要組織適合複合体（ＭＨＣ）によって提示される腫瘍抗原エピトープを認識する。別の実施形態では、Ｔ細胞受容体は、それらの細胞内または膜の局在とは無関係に抗原を認識する。別の実施形態では、ＴＣＲは、腫瘍関連抗原を細胞内で発現する腫瘍細胞を認識する。一実施形態では、ＴＣＲは内部抗原を認識する。様々な遺伝子改変Ｔ細胞受容体及びそれらの製造方法は当該分野で公知である。
【０１５８】
一実施形態では、血液学的疾患（リンパ腫及び白血病）及び固形腫瘍（難治性メラノーマ、肉腫）を含む進行性転移性疾患またはその発生を治療、予防、抑制、改善、低減、または緩和するためにＴＣＲ療法が使用される。別の実施形態において、Ｔ細胞受容体は、ＮＹ−ＥＳＯ−１エピトープに結合するように遺伝子改変され、ＴＣＲ改変Ｔ細胞は、抗ＮＹ−ＥＳＯ−１である。別の実施形態において、Ｔ細胞受容体は、ＨＰＶ−１６  Ｅ６エピトープに結合するように遺伝子改変され、ＴＣＲ改変Ｔ細胞は、抗ＨＰＶ−１６  Ｅ６である。別の実施形態において、Ｔ細胞受容体は、ＨＰＶ−１６  Ｅ７エピトープに結合するように遺伝子改変され、ＴＣＲ改変Ｔ細胞は、抗ＨＰＶ−１６  Ｅ７である。別の実施形態において、Ｔ細胞受容体は、ＭＡＧＥ  Ａ３／Ａ６エピトープに結合するように遺伝子改変され、ＴＣＲ改変Ｔ細胞は、抗ＭＡＧＥ  Ａ３／Ａ６である。別の実施形態において、Ｔ細胞受容体は、ＭＡＧＥ  Ａ３エピトープに結合するように遺伝子改変され、ＴＣＲ改変Ｔ細胞は、抗ＭＡＧＥ  Ａ３である。別の実施形態において、Ｔ細胞受容体は、ＳＳＸ２エピトープに結合するように遺伝子改変され、ＴＣＲ改変Ｔ細胞は、抗ＳＳＸ２である。
【０１５９】
本明細書に開示される組成物及び方法において使用されるＴＣＲ療法は、Sadelainら（ibid）の表１に記載された悪性腫瘍を治療する。
【０１６０】
樹状細胞
【０１６１】
別の実施形態において、樹状細胞を用いた免疫療法の安全性を高めるために、アポトーシス細胞または上清またはＣＴＬＡ−４阻害剤、α１−アンチトリプシンまたはその断片、その類似体、テルル系化合物、または免疫調節剤、またはそれらの任意の組み合わせが使用され得る。一実施形態では、樹状細胞（ＤＣ）は、抗原物質を処理し、それを免疫系のＴ細胞に細胞表面上に提示し、それによりＴ細胞を新しい抗原とリコール抗原の両方に感作することができる哺乳動物免疫系の抗原産生及び提示細胞である。別の実施形態では、ＤＣは、最も強力な抗原産生細胞であり、自然免疫系と適応免疫系との間のメッセンジャーとして作用する。ＤＣ細胞は、一実施形態では、腫瘍を攻撃及び溶解するエフェクター細胞の生成を介して特異的な抗腫瘍免疫を開始するために使用され得る。
【０１６２】
樹状細胞は、皮膚（ランゲルハンス細胞と呼ばれる特殊な樹状細胞型がある）及び鼻、肺、胃及び腸の内層のような外部環境と接触している組織に存在する。それらはまた、血中で未成熟状態で見出すことができる。活性化されるとそれらはリンパ節に移動し、そこでＴ細胞及びＢ細胞と相互作用して適応免疫応答を開始及び形成する。一定の開発段階では、樹状突起細胞の名前が由来する樹状の突起を成長させる。樹状細胞は、特定の腫瘍抗原を発現するように改変することができる。
【０１６３】
Ｔ細胞活性化に必要な３つのシグナルは、（ｉ）自己ＭＨＣ分子における同族抗原の提示、（ｉｉ）膜結合受容体−リガンド対による同時刺激、及び（ｉｉｉ）続く免疫応答の分化を誘導する可溶性因子である。樹状細胞（ＤＣ）は、Ｔ細胞活性化に必要な３つのシグナルの全てを提供することができ、優れた癌ワクチンプラットフォームとなる。
【０１６４】
したがって、別の実施形態では、本明細書に開示されるものは、樹状細胞及びアポトーシス細胞、アポトーシス上清、またはＣＴＬＡ−４阻止剤、α１−アンチトリプシンまたはその断片またはその類似体、テルル系化合物、または免疫調節化合物、またはそれらの任意の組み合わせを含む組成物である。
【０１６５】
別の実施形態では、本明細書に記載されるのは、樹状細胞療法を受けている対象におけるサイトカイン放出症候群またはサイトカインストームの発生を阻害または低減させる方法であって、アポトーシス細胞、アポトーシス細胞上清、またはＣＴＬＡ−４阻止剤、α１−アンチトリプシンまたはその断片またはその類似体、テルル系化合物、または免疫調節化合物、またはそれらの任意の組み合わせを含む組成物を前記対象に投与するステップを含む、該方法である。別の実施形態では、本明細書に記載されるのは、樹状細胞療法を受けている対象におけるサイトカイン放出症候群またはサイトカインストームを治療する方法であって、アポトーシス細胞、アポトーシス細胞上清、またはＣＴＬＡ−４阻止剤、α１−アンチトリプシンまたはその断片またはその類似体、テルル系化合物、または免疫調節化合物、またはそれらの任意の組み合わせを含む組成物を前記対象に投与するステップを含む、該方法である。別の実施形態では、樹状細胞療法を受けている対象におけるサイトカイン放出症候群またはサイトカインストームを予防する方法が、アポトーシス細胞、アポトーシス細胞上清、またはＣＴＬＡ−４阻止剤、α１−アンチトリプシンまたはその断片またはその類似体、テルル系化合物、または免疫調節化合物、またはそれらの任意の組み合わせを含む組成物を前記対象に投与するステップを含む。別の実施形態では、樹状細胞療法を受けている対象におけるサイトカイン放出症候群またはサイトカインストームを改善する方法が、アポトーシス細胞、アポトーシス細胞上清、またはＣＴＬＡ−４阻止剤、α１−アンチトリプシンまたはその断片またはその類似体、テルル系化合物、または免疫調節化合物、またはそれらの任意の組み合わせを含む組成物を前記対象に投与するステップを含む。別の実施形態では、樹状細胞療法を受けている対象におけるサイトカイン放出症候群またはサイトカインストームを緩和する方法が、アポトーシス細胞、アポトーシス細胞上清、またはＣＴＬＡ−４阻止剤、α１−アンチトリプシンまたはその断片またはその類似体、テルル系化合物、または免疫調節化合物、またはそれらの任意の組み合わせを含む組成物を前記対象に投与するステップを含む。
【０１６６】
一実施形態では、本明細書に記載されるのは、樹状細胞及び追加的な薬剤を含む組成物であって、前記追加的な薬剤が、アポトーシス細胞、アポトーシス上清、またはＣＴＬＡ−４阻止剤、α１−アンチトリプシンまたはその断片またはその類似体、テルル系化合物、または免疫調節化合物、またはそれらの任意の組み合わせを含む、該組成物である。
【０１６７】
別の実施形態では、本明細書に記載されるのは、サイトカイン放出症候群または樹状細胞療法を受けている対象においてサイトカイン産生を低減または阻害する方法であって、アポトーシス細胞、アポトーシス細胞上清、またはＣＴＬＡ−４阻止剤、α１−アンチトリプシンまたはその断片またはその類似体、テルル系化合物、または免疫調節化合物、またはそれらの任意の組み合わせを含む組成物を前記対象に投与するステップを含む、該方法である。
【０１６８】
別の実施形態では、本明細書に記載されるのは、自己免疫毒性の発生を阻害または低減する方法であって、アポトーシス細胞、アポトーシス細胞集団、アポトーシス細胞上清、またはＣＴＬＡ−４阻止剤、α１−アンチトリプシンまたはその断片またはその類似体、テルル系化合物、または免疫調節化合物、またはそれらの任意の組み合わせを含む組成物を前記対象に投与するステップを含む、該方法である。
【０１６９】
α−１−アンチトリプシン（ＡＡＴ）
【０１７０】
α−１−アンチトリプシン（ＡＡＴ）は、主に肝臓によって産生される循環５２ｋＤａ糖タンパク質である。ＡＡＴは主としてセリンプロテアーゼ阻害剤として知られており、遺伝子ＳＥＲＰＩＮＡ１によってコードされている。ＡＡＴは好中球エラスターゼを阻害し、循環ＡＡＴの遺伝的欠損は、肺組織の劣化及び肝臓疾患をもたらす。炎症の間に、血清ＡＡＴ濃度は健康な個体における濃度の２倍に増加する。
【０１７１】
ＡＡＴレベルといくつかの炎症性疾患の重症度との間には負の相関関係がある。例えば、ＨＩＶ感染、真性糖尿病、Ｃ型肝炎感染誘発慢性肝疾患、及びいくつかのタイプの血管炎を有する患者において、ＡＡＴのレベルまたは活性の低下が文献に記載されている。
【０１７２】
ヒト血清由来のα−１−抗トリプシン（ＡＡＴ）は、炎症誘発性サイトカインの産生を減少させ、抗炎症性サイトカインを誘導し、樹状細胞の成熟を妨げることが立証されている。
【０１７３】
実際、ヒト末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）へのＡＡＴの添加により、ＬＰＳ誘発ＴＮＦ−α及びＩＬ−１β放出が阻害されるが、ＩＬ−１受容体拮抗薬（ＩＬ−１Ｒａ）及びＩＬ−１０産生が増加する。
【０１７４】
ＡＡＴは、インビトロでＩＬ−１β媒介膵島毒性を低下させ、ＡＡＴ単独療法は膵島同種移植生存期間を延ばし、マウスでは抗原特異的免疫寛容を促進し、非肥満糖尿病（ＮＯＤ）マウスでは糖尿病の進行を遅らせる。ＡＡＴは、実験モデルにおいてＬＰＳ誘発急性肺傷害を抑制することが示された。近年、ＡＡＴは、急性心筋虚血−再灌流傷害のマウスモデルにおいて、梗塞のサイズ及び心不全の重篤度を低下させることが示された。
【０１７５】
臨床グレードのヒトＡＡＴ（ｈＡＡＴ）による単剤療法は、実験的同種骨髄移植後の循環炎症誘発性サイトカインの減少、移植片対宿主病（ＧｖＨＤ）の重症度の低下、及び動物の生存の延長をもたらしたことが文献（Tawaraら、Proc Natl Acad Sci U S A. 2012 Jan 10; 109(2): 564-9）に記載されており、この文献の内容は引用により本明細書の一部とする。ＡＡＴ処置は、アロ反応性Ｔエフェクター細胞の増殖を低減させたが、Ｔ調節性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇｓ）の回復を増やし、病理学的過程を減少させるようにＴ調節細胞に対するドナーＴエフェクターの比率を変化させた。インビトロで、ＡＡＴは、ＴＮＦ−α及びＩＬ−１βなどの前炎症性サイトカインのインビトロでのＬＰＳ誘発分泌を抑制し、抗炎症性サイトカインＩＬ−１０の産生を増やし、宿主樹状細胞におけるＮＦ−κＢ転座を減少させた。Marcondes, Blood. 2014 (Oct 30; 124(18): 2881-91)（引用によりその内容を本明細書の一部とする）には、ＡＡＴによる処置はＧｖＨＤを改善するだけでなく、移植片対白血病（ＧＶＬ）効果を維持し、おそらくその効果をさらに高めることが示されている。
【０１７６】
一実施形態では、本明細書に開示される組成物は、キメラ抗原受容体発現Ｔ細胞（ＣＡＲ−Ｔ細胞）及びα−１−抗トリプシン（ＡＡＴ）を含む組成物である。別の実施形態では、ＣＡＲ−Ｔ細胞及びα−１−抗トリプシン（ＡＡＴ）は別個の組成物である。別の実施形態では、ＡＡＴは、完全長ＡＡＴまたはその機能的断片を含む。別の実施形態では、ＡＡＴは、完全長ＡＡＴの類似体またはその機能的断片を含む。別の実施形態では、ＡＡＴを含む組成物は、アポトーシス細胞またはアポトーシス細胞上清をさらに含む。
【０１７７】
別の実施形態では、本明細書に記載されるのは、キメラ抗原受容体発現Ｔ細胞（ＣＡＲ−Ｔ細胞）療法を受けている対象におけるサイトカイン放出症候群またはサイトカインストームの発生を阻害または低減させる方法であって、α−１−アンチトリプシン（ＡＡＴ）を含む組成物を前記対象に投与するステップを含む、該方法である。別の実施形態では、キメラ抗原受容体発現Ｔ細胞（ＣＡＲ−Ｔ細胞）療法を受けている対象におけるサイトカイン放出症候群またはサイトカインストームを治療する方法が、α−１−アンチトリプシン（ＡＡＴ）を含む組成物を前記対象に投与するステップを含む。別の実施形態では、キメラ抗原受容体発現Ｔ細胞（ＣＡＲ−Ｔ細胞）療法を受けている対象におけるサイトカイン放出症候群またはサイトカインストームを予防する方法が、α−１−アンチトリプシン（ＡＡＴ）を含む組成物を前記対象に投与するステップを含む。別の実施形態では、キメラ抗原受容体発現Ｔ細胞（ＣＡＲ−Ｔ細胞）療法を受けている対象におけるサイトカイン放出症候群またはサイトカインストームを改善する方法が、α−１−アンチトリプシン（ＡＡＴ）を含む組成物を前記対象に投与するステップを含む。別の実施形態では、キメラ抗原受容体発現Ｔ細胞（ＣＡＲ−Ｔ細胞）療法を受けている対象におけるサイトカイン放出症候群またはサイトカインストームを緩和する方法が、α−１−アンチトリプシン（ＡＡＴ）を含む組成物を前記対象に投与するステップを含む。
【０１７８】
別の実施形態では、本明細書に記載されるのは、サイトカイン放出症候群またはサイトカインストームに罹患している、またはサイトカイン放出症候群またはサイトカインストームを発症しやすい対象においてサイトカイン産生を減少または阻害させる方法であって、α−１−アンチトリプシン（ＡＡＴ）を含む組成物を前記対象に投与するステップを含む、該方法である。
【０１７９】
一実施形態では、ＡＡＴを単独で投与してサイトカイン放出を制御する。別の実施形態では、サイトカイン放出を制御するために、ＡＡＴ及びアポトーシス細胞またはその組成物、またはアポトーシス細胞上清またはその組成物を投与する。
【０１８０】
免疫調節剤
【０１８１】
当業者であれば、免疫調節剤が細胞外メディエータ、受容体、細胞内シグナル伝達経路のメディエータ、及び翻訳及び転写のレギュレータを包含し得ることを理解されよう。一実施形態では、本明細書に開示される追加的な薬剤は、当該分野で公知の免疫調節剤である。別の実施形態では、本明細書に開示される方法における免疫調節剤の使用は、少なくとも１つのサイトカインのレベルを低下させる。別の実施形態では、本明細書に開示される方法における免疫調節剤の使用は、ＣＲＳまたはサイトカインストームを低減または阻害する。
【０１８２】
一実施形態では、免疫調節剤は、サイトカインまたはケモカインの放出をブロック、抑制または低減する化合物を含む。別の実施形態では、免疫調節剤は、ＩＬ−２１またはＩＬ−２３、またはそれらの組み合わせの放出をブロック、抑制または低減する化合物を含む。別の実施形態では、免疫調節剤は、ケモカイン受容体−５（ＣＣＲ５）受容体アンタゴニストクラスにおける抗レトロウイルス薬、例えばマラビロクに含む。別の実施形態において、免疫調節剤は、抗ＤＮＡＭ−１抗体を含む。別の実施形態では、免疫調節剤は、ヘパリン硫酸、ＡＴＰ、及び尿酸、またはそれらの任意の組み合わせを含む群から選択される損傷／病原体関連分子（ＤＡＭＰ／ＰＡＭＰ）を含む。別の実施形態では、免疫調節剤は、シアル酸結合Ｉｇ様レクチン（Ｓｉｇｌｅｃｓ）を含む。別の実施形態では、免疫調節剤は、例えば調節ＣＤ４＋  ＣＤ２５＋  Ｔ細胞（Ｔｒｅｇｓ）または不変ナチュラルキラーＴ細胞（ｉＮＫ  Ｔ細胞）のような免疫トレランスの細胞メディエータを含む。別の実施形態では、免疫調節剤は、ルキソリチニブ及びトファシチニブを含む群から選択されるＪＡＫ２またはＪＡＫ３阻害剤を含む。別の実施形態において、免疫調節剤は、脾臓チロシンキナーゼ（Ｓｙｋ）の阻害剤、例えば、フォスタマチニブを含む。別の実施形態では、免疫調節剤は、ヒストンデアセチラーゼ阻害剤ボリノスタットアセチル化ＳＴＡＴ３を含む。別の実施形態では、免疫調節剤は、ＮＥＤＤ化阻害剤、例えばＭＬＮ４９２４を含む。別の実施形態において、免疫調節剤は、ｍｉＲ−１４２アンタゴニストを含む。別の実施形態では、免疫調節剤は、シチジンの化学的類似体、例えばアザシチジンを含む。別の実施形態では、免疫調節剤は、ヒストンデアセチラーゼの阻害剤、例えばボリノスタットを含む。別の実施形態において、免疫調節剤は、ヒストンメチル化の阻害剤を含む。
【０１８３】
テルル系化合物
【０１８４】
テルルは、人体にみられる微量元素である。種々のテルル化合物は、免疫調節特性を有し、種々の前臨床及び臨床研究において有益な効果を有することが示されている。一実施形態では、本明細書に開示される方法は、追加的な薬剤としてのテルル系化合物の投与を含む。
【０１８５】
一実施形態において、テルル系化合物は、少なくとも１つのサイトカインの分泌を阻害する。別の実施形態において、テルル系化合物は、少なくとも１つのサイトカインの分泌を低減させる。別の実施形態では、テルル化合物は、サイトカインストームのサイトカン放出症候群（ＣＲＳ）を阻害または低減する。
【０１８６】
一実施形態では、本明細書に開示されるのは、キメラ受容体発現Ｔ細胞（ＣＡＲ−Ｔ細胞）及びテルル系化合物を含む組成物である。別の実施形態では、ＣＡＲ−Ｔ細胞及びテルル系化合物は別個の組成物である。別の実施形態では、ＡＡＴは、完全長ＡＡＴまたはその機能的断片を含む。別の実施形態では、ＡＡＴは、完全長ＡＡＴの類似体またはその機能的断片を含む。
【０１８７】
別の実施形態では、本明細書に記載されるのは、キメラ抗原受容体発現Ｔ細胞（ＣＡＲ−Ｔ細胞）療法を受けている対象におけるサイトカイン放出症候群またはサイトカインストームの発生を阻害または低減させる方法であって、テルル系化合物を含む組成物を前記対象に投与するステップを含む、該方法である。別の実施形態では、キメラ抗原受容体発現Ｔ細胞（ＣＡＲ−Ｔ細胞）療法を受けている対象におけるサイトカイン放出症候群またはサイトカインストームを治療する方法が、テルル系化合物を含む組成物を前記対象に投与するステップを含む。別の実施形態では、キメラ抗原受容体発現Ｔ細胞（ＣＡＲ−Ｔ細胞）療法を受けている対象におけるサイトカイン放出症候群またはサイトカインストームを予防する方法が、テルル系化合物を含む組成物を前記対象に投与するステップを含む。別の実施形態では、キメラ抗原受容体発現Ｔ細胞（ＣＡＲ−Ｔ細胞）療法を受けている対象におけるサイトカイン放出症候群またはサイトカインストームを改善する方法が、テルル系化合物を含む組成物を前記対象に投与するステップを含む。別の実施形態では、キメラ抗原受容体発現Ｔ細胞（ＣＡＲ−Ｔ細胞）療法を受けている対象におけるサイトカイン放出症候群またはサイトカインストームを緩和する方法が、テルル系化合物を含む組成物を前記対象に投与するステップを含む。
【０１８８】
別の実施形態では、本明細書に記載されるのは、サイトカイン放出症候群またはサイトカインストームに罹患しているか、またはサイトカイン放出症候群またはサイトカインストームを発症しやすい対象においてサイトカイン産生を減少または阻害または低減させる方法であって、テルル系化合物を含む組成物を前記対象に投与するステップを含む、該方法である。
【０１８９】
一実施形態において、テルル系化合物は、サイトカイン放出を制御するために単独で投与される。別の実施形態では、サイトカイン放出を制御するために、テルル系化合物及びアポトーシス細胞またはその組成物、またはアポトーシス細胞上清またはその組成物を投与する。
【０１９０】
遺伝的改変
【０１９１】
一実施形態では、Ｔ細胞、樹状細胞及び／またはアポトーシス細胞の遺伝子改変は、ＲＮＡ、ＤＮＡ、組換えウイルス、またはそれらの組み合わせを用いて達成され得る。一実施形態において、ガンマレトロウイルスまたはレンチウイルス由来のベクターは、本明細書に開示される組成物及び方法において使用される。別の実施形態では、これらのベクターは、導入遺伝子の永久発現の可能性をもって宿主ゲノムに組み込まれることができ、固有の免疫原性が低いものである。別の実施形態では、ホストゲノムに組み込まれ、及び／または固有の免疫原性が低い別のベクターが、本明細書に開示される組成物及び方法において使用され得る。別の実施形態では、非ウイルスベクター媒介スリーピングビューティ（Sleeping Beauty）トランスポゾンシステムを使用して、ＣＡＲ及び他の遺伝子をＴ細胞に挿入する。別の実施形態において、「自殺遺伝子」は、Ｔ細胞に組み込まれ、プロアポトーシス遺伝子の発現は、全身的に送達された薬物に応答する誘導性プロモータの制御下にある。
【０１９２】
一実施形態において、遺伝子改変は一時的であり得る。別の実施形態において、遺伝子改変は、メッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）を利用し得る。別の実施形態においては、多数の細胞が、ｍＲＮＡをトランスフェクトされたＴ細胞などの一時的に改変されたＴ細胞において複数回注入され得る。別の実施形態では、インビトロで転写されたｍＲＮＡを使用するリンパ球のＲＮＡをベースにした電気穿孔が、タンパク質の一時的発現を約１週間にわたって媒介し、ウイルスベクターを組み込むリスクを回避する。別の実施形態では、ｍＲＮＡ形質導入された樹状細胞またはｍＲＮＡ電気穿孔されたＴ細胞及びＮＫリンパ球が用いられる。
【０１９３】
遺伝子改変Ｔ細胞は、養子免疫伝達後も有害な影響を伴わずに１０年以上維持され、遺伝子改変ヒトＴ細胞は基本的に安全であることが示されている。
【０１９４】
別の実施形態では、本明細書中に開示される組成物及び方法における遺伝子改変は、当技術分野で公知の任意の方法であり得る。
【０１９５】
アポトーシス細胞
【０１９６】
一実施形態では、本明細書に開示される組成物及び方法における使用のためのアポトーシス細胞（「Ａｐｏｃｅｌｌｓ」）は、国際公開第２０１４／０８７４０８号に記載されるとおりである。この特許文献は引用によりその全内容を本明細書の一部とする。別の実施形態では、本明細書に開示される組成物及び方法における使用のためのアポトーシス細胞は、当該分野で公知の任意の方法で製造される。別の実施形態では、本明細書に開示される組成物及び方法における使用のためのアポトーシス細胞は、治療を受けている対象の自己細胞である。別の実施形態では、本明細書に開示される組成物及び方法における使用のためのアポトーシス細胞は、治療を受けている対象の同種異系細胞である。別の実施形態では、アポトーシス細胞を含む組成物は、本明細書中に開示されるような、または当技術分野で公知のアポトーシス細胞を含む。
【０１９７】
一実施形態では、アポトーシス細胞は単核豊富細胞を含む細胞調製物を含み、前記細胞調製物は少なくとも８５％の単核細胞を含み、前記細胞調製物中の細胞の少なくとも４０％は初期アポトーシス状態にあり、前記細胞調製物中の細胞の少なくとも８５％は生細胞であり、前記細胞調製物は１５％以下のＣＤ１５高発現細胞を含む。
【０１９８】
当業者であれば、「早期アポトーシス状態」という用語が、アポトーシスの後期兆候がなくアポトーシスの早期兆候を示す細胞を包含し得ることを理解するであろう。細胞におけるアポトーシスの早期兆候の例としては、ホスファチジルセリン（ＰＳ）の曝露及びミトコンドリア膜電位の喪失などが挙げられる。後期事象の例としてはヨウ化プロピジウム（ＰＩ）の細胞への導入及び最終的なＤＮＡ切断などが挙げられる。一実施形態では、細胞が「初期アポトーシス」状態にあることを記録するために、アネキシンＶによるＰＩ曝露検出及びＰＩ染色が用いられ、アネキシンＶで染色されるがＰＩでは染色されない細胞は、「早期アポトーシス」状態にあると考えられる。別の実施形態では、アネキシン−Ｖ  ＦＩＴＣ及びＰＩの両方によって染色される細胞は、「後期アポトーシス細胞」であると考えられる。別の実施形態では、アネキシン−ＶまたはＰＩのいずれかに染色されない細胞は、非アポトーシス生存細胞と考えられる。
【０１９９】
一実施形態では、アポトーシス細胞は初期アポトーシス状態の細胞を含む。別の実施形態では、アポトーシス細胞は、前記細胞の少なくとも９０％が初期アポトーシス状態にある細胞を含む。別の実施形態では、アポトーシス細胞は、前記細胞の少なくとも８０％が初期アポトーシス状態にある細胞を含む。別の実施形態では、アポトーシス細胞は、前記細胞の少なくとも７０％が初期アポトーシス状態にある細胞を含む。別の実施形態では、アポトーシス細胞は、前記細胞の少なくとも６０％が初期アポトーシス状態にある細胞を含む。別の実施形態では、アポトーシス細胞は、前記細胞の少なくとも５０％が初期アポトーシス状態にある細胞を含む。
【０２００】
一実施形態では、アポトーシス細胞を含む組成物は、抗凝固剤をさらに含む。
【０２０１】
一実施形態では、抗凝固剤は、ヘパリン、酸クエン酸デキストロース（ＡＣＤ）剤Ａ及びそれらの組み合わせからなる群から選択される。
【０２０２】
一実施形態では、組成物はメチルプレドニゾロンをさらに含む。一実施形態では、メチルプレドニゾロンの濃度は３０μｇ／ｍｌを超えない。一実施形態では、約１４０×１０６〜２１０×１０６個のアポトーシス細胞が投与される。
【０２０３】
一実施形態では、アポトーシス細胞は高用量で使用される。一実施形態では、アポトーシス細胞は高濃度で使用される。一実施形態では、ヒトアポトーシス多形核好中球（ＰＭＮ）が使用される。一実施形態では、５０％がアポトーシス細胞である細胞群が使用される。一実施形態では、アポトーシス細胞は、メイギムザ染色細胞標本によって確認される。一実施形態では、細胞の生存能力は、トリパンブルー色素排除によって評価される。一実施形態において、細胞のアポトーシス及び壊死状態は、ＦＡＣＳで検出されるアネキシンＶ／ヨウ化プロピジウム染色によって確認される。
【０２０４】
一実施形態では、１０×１０６個の用量のアポトーシス細胞が投与される。別の実施形態では、１０×１０７個の用量のアポトーシス細胞が投与される。別の実施形態では、１０×１０８個の用量のアポトーシス細胞が投与される。別の実施形態では、１０×１０９個の用量のアポトーシス細胞が投与される。別の実施形態では、１０×１０１０個の用量のアポトーシス細胞が投与される。別の実施形態では１０×１０１１個の用量のアポトーシス細胞が投与される。別の実施形態では、１０×１０１２個の用量のアポトーシス細胞が投与される。別の実施形態では、１０×１０５個の用量のアポトーシス細胞が投与される。別の実施形態では、１０×１０４個の用量のアポトーシス細胞が投与される。別の実施形態では、１０×１０３個の用量のアポトーシス細胞が投与される。別の実施形態では、１０×１０２個の用量のアポトーシス細胞が投与される。
【０２０５】
一実施形態では、高用量のアポトーシス細胞が投与される。一実施形態では、３５×１０６個の用量のアポトーシス細胞が投与される。別の実施形態では、２１０×１０６個の用量のアポトーシス細胞が投与される。別の実施形態では、７０×１０６個の用量のアポトーシス細胞が投与される。別の実施形態では、１４０×１０６個の用量のアポトーシス細胞が投与される。別の実施形態では、３５〜２１０×１０６個の用量のアポトーシス細胞が投与される。
【０２０６】
いくつかの実施形態によれば、本明細書に開示される製造方法による単核豊富細胞組成物を得ることは、白血球除去輸血によって達成される。当業者であれば、「白血球除去輸血」という用語が、白血球がドナーの血液から分離されるアフェレーシス手順（血液成分分離手順）を包含し得ることは理解されよう。いくつかの実施形態によれば、ドナーの血液は白血球除去輸血を受け、したがって本明細書に開示される製造方法にしたがって単核豊富細胞組成物が得られる。回収された細胞の凝固を防止するために、当該技術分野で知られているように、白血球除去輸血中に少なくとも１つの抗凝固剤の使用が必要であることに留意されたい。
【０２０７】
いくつかの実施形態によれば、白血球除去輸血手順は、本明細書中に開示される製造方法による単核豊富細胞組成物の収集を可能にするように構成される。いくつかの実施形態によれば、白血球除去輸血によって得られる細胞収集物は、少なくとも６５％を構成する。他の実施形態では、少なくとも７０％、または少なくとも８０％の単核細胞である。各可能性は、本明細書に開示される別個の実施形態を表す。いくつかの実施形態によれば、細胞ドナーからの血漿は、本明細書に開示される製造方法による単核豊富細胞組成物の取得と並行して収集される。いくつかの実施形態によれば、細胞ドナーからの約３００〜６００ｍｌの血漿が、本明細書に開示される製造方法による単核豊富細胞組成物の取得と並行して収集される。いくつかの実施形態によれば、本明細書に開示される製造方法による単核豊富細胞組成物の取得と並行して収集される血漿は、凍結及び／または培養媒質の一部として使用される。各可能性は、本明細書に開示される別個の実施形態を表す。本明細書中に開示される組成物及び方法における使用のためのアポトーシス細胞の豊富な集団を取得するさらなる詳細な方法は、その全内容が引用により本明細書の一部とする国際公開第２０１４／０８７４０８号に記載されている。
【０２０８】
いくつかの実施形態によれば、最初の単核豊富細胞調製物は、少なくとも６５％の単核細胞、少なくとも７０％、または少なくとも８０％の単核細胞を含むが、本明細書に開示される製造方法による本明細書に開示される最終医薬組成物は、少なくとも８５％を含む。別の実施形態では、少なくとも９０％、または少なくとも９５％の単核細胞を含む。各可能性は、本明細書に開示される別個の実施形態を表す。
【０２０９】
一実施形態では、アポトーシス細胞は、限定しないが、静脈内、皮下、結節内、腫瘍内、髄腔内、胸腔内、腹腔内、及び胸腺への直接的投与を含む任意の方法によって投与することができる。
【０２１０】
一実施形態では、アポトーシス細胞は同種異系である。一実施形態において、アポトーシス細胞は、プールされた第三者のドナー由来である。一実施形態では、本明細書中に開示される方法は、例えば引用により本明細書に組み入れられる米国特許出願第２０１３／０１５６７９４号明細書に記載されている１つ以上のステップを含む、同種異系細胞の拒絶を克服するために有用なさらなる工程を含む。一実施形態では、前記方法は、一実施形態では同種異系アポトーシス細胞であるアポトーシス細胞の投与前の完全または部分的なリンパ枯渇のステップを含む。一実施形態では、同種異系アポトーシス細胞がサイトカイン放出を制御するのに十分な期間、ホスト対移植片反応を遅延させるように、リンパ球枯渇を調整する。別の実施形態では、前記方法は、リンパ節からの同種異系アポトーシス性Ｔ細胞の放出を遅延させる薬剤の投与するステップを含み、そのような薬剤としては例えば、２−アミノ−２−［２−（４−オクチルフェニル）エチル］プロパン−１，３−ジオール（ＦＴＹ７２０）、５−［４−フェニル−５−（トリフルオロメチル）チオフェン−２−イル］−３−［３−（トリフルオロメチル）フェニル］１，２，４−オキサジアゾール（ＳＥＷ２８７１）、３−（２−（−ヘキシルフェニルアミノ）−２−オキソエチルアミノ）プロパン酸（Ｗ１２３）、（２−クロロ−４−（３−フェノキシフェニルチオ）フェニル）−２−（ヒドロキシメチル）ブチリルリン酸水素塩（ＫＲＰ−２０３リン酸）または当該分野で公知の他の薬剤が挙げられ、前記方法は、有効で、かつ移植片対宿主病の開始がない同種異型アポトーシス細胞の使用を可能にするべく本明細書に開示される組成物及び方法の一部として使用され得る。別の実施形態では、同種間アポトーシス性Ｔ細胞によるＭＨＣ発現を抑制して、同種異系細胞の拒絶を低減する。
【０２１１】
別の実施形態において、前記方法は、投与前にレシピエントに提供されるＷＢＣ由来のアポトーシス細胞に放射線照射するステップを含む。一実施形態において、細胞は、アポトーシス細胞集団内の残存生存細胞の増殖及び／または活性化を回避するように放射線照射される。別の実施形態では、放射線照射されたアポトーシス細胞は、それらの早期のアポトーシス、免疫調節、及び安定性に関する特性をすべて保存する。別の実施形態では、放射線照射ステップはＵＶ放射線を使用する。別の実施形態では、放射線照射ステップはガンマ線を使用する。別の実施形態では、アポトーシス細胞は、減少した割合の生存非アポトーシス細胞を含むか、アポトーシス細胞調製物中に存在するあらゆる生存非アポトーシス細胞の細胞活性化が抑制された調製物を含むか、またはアポトーシス細胞調製物中に存在するあらゆる生存非アポトーシス細胞を含むか、またはそれらの任意の組み合わせを含む。
【０２１２】
一実施形態では、初期アポトーシス状態の単核細胞を含むプールされた単核アポトーシス細胞調製物を使用し、該プールされた単核アポトーシス細胞は、少ない割合の生存非アポトーシス細胞、あらゆる生存非アポトーシス細胞の細胞活性化が抑制された調製物、または、生存非アポトーシス細胞の増殖が減少した調製物、またはそれらの任意の組み合わせを含む。別の実施形態では、プールされた単核アポトーシス細胞は放射線照射されたものである。別の実施形態では、本明細書中に開示されているのは、いくつかの実施形態において、献血された血液から得られる白血球分画（ＷＢＣ）に由来する、プールされた単核アポトーシス細胞調製物である。
【０２１３】
一実施形態では、アポトーシス細胞調製物が放射線照射される。別の実施形態において、前記放射線照射はガンマ線照射またはＵＶ照射を含む。さらに別の実施形態においては、放射線照射された調製物は、非放射線照射のアポトーシス細胞調製物と比較して少ない数の非アポトーシス細胞を有する。別の実施形態において、放射線照射された調製物は、非放射線照射のアポトーシス細胞調製物と比較して少ない数の増殖細胞を有する。別の実施形態では、放射線照射された調製物は、非放射線照射アポトーシス細胞集団と比較して少ない数の潜在的に免疫学的に活性な細胞を有する。
【０２１４】
一実施形態において、プールされた血液は、ドナーとレシピエントとの間でマッチしない第三者の血液を含む。
【０２１５】
当業者であれば、「プールされた」という表現は、複数のドナーから採取され、後の使用のために調製され、保存されたものであり得る血液を包含し得ることを理解されよう。次いで、この結合した血液プールを処理して、プールされた単核アポトーシス細胞調製物を生成することができる。別の実施形態では、プールされた単核アポトーシス細胞調製物は、単核アポトーシス細胞の容易に利用可能な供給が利用可能であることを保証する。別の実施形態において、細胞は、アポトーシスが誘発される培養ステップの直前にプールされる。別の実施形態では、細胞は、再懸濁のステップでの培養ステップの後に、プールされる。別の実施形態では、細胞は、放射線照射ステップの直前にプールされる。別の実施形態では、細胞は、放射線照射ステップの後にプールされる。別の実施形態では、細胞は、調節方法のなかの任意のステップにおいてプールされる。
【０２１６】
一実施形態において、プールされたアポトーシス細胞調製物は、約２〜２５単位の血液中に存在する細胞に由来する。別の実施形態では、プールされたアポトーシス細胞調製物は、約２〜５、２〜１０、２〜１５、２〜２０、５〜１０、５〜１５、５〜２０、５〜２５、１０〜１５、１０〜２０、１０〜２５、６〜１３、または６〜２５単位の血液中に存在する細胞から構成される。別の実施形態では、プールされたアポトーシス細胞調製物は、約２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４または２５単位の血液中に存在する細胞から構成される。必要な血液の単位数もまた、血液からのＷＢＣ回収の効率に左右される。例えば、ＷＢＣ回収の効率が低いと、追加の単位の血液が必要となり、ＷＢＣ回収の効率が高いと、必要な血液の単位数が少なくなる。いくつかの実施形態では、各単には血液バッグである。別の実施形態では、プールされたアポトーシス細胞調製物は、少なくとも２５単位の血液、少なくとも５０単位の血液、または少なくとも１００単位の血液中に存在する細胞を含む。各可能性は、本明細書に開示される別個の実施形態を表す。
【０２１７】
一実施形態では、血液の単位は、献血由来の白血球（ＷＢＣ）画分を含む。別の実施形態では、献血は、血液センターまたは血液バンクからのものであり得る。別の実施形態では、献血は、プールされたアポトーシス細胞調製物の調製時に収集された病院のドナーからのものであり得る。別の実施形態において、複数のドナーからのＷＢＣを含む血液の単位は、本明細書に開示される組成物及び方法の目的のために作られた独立した血液バンクに保存され、維持される。別の実施形態では、本明細書に開示される組成物及びその方法の目的のために設立された血液バンクは、複数のドナーからのＷＢＣを含む血液の単位を供給することができ、白血球除去輸血を含む。
【０２１８】
一実施形態において、プールされたＷＢＣの単位は、ＨＬＡマッチングによって制限されない。したがって、結果として得られたアポトーシス細胞調製物は、ＨＬＡマッチングによって制限されない細胞集団を含む。したがって、特定の実施形態では、プールされた単核アポトーシス細胞調製物は、同種異系細胞を含む。
【０２１９】
ＨＬＡのマッチングに制限されない、プールされたＷＢＣに由来するプールされた単核球アポトーシス細胞調製物の利点は、容易に入手できるＷＢＣの供給源であり、ＷＢＣの取得コストを低減させることである。
【０２２０】
一実施形態において、プールされた血液は、ＨＬＡマッチングとは無関係に複数のドナーからの血液を含む。別の実施形態において、プールされた血液は、複数のドナーからの血液を含み、ここで、レシピエントとマッチするＨＬＡが考慮されている。例えば、１個のＨＬＡ対立遺伝子、２個のＨＬＡ対立遺伝子、３個のＨＬＡ対立遺伝子、４個のＨＬＡ対立遺伝子、５個のＨＬＡ対立遺伝子、６個のＨＬＡ対立遺伝子、または７個のＨＬＡ対立遺伝子が、ドナーとレシピエントの間でマッチングされている。別の実施形態では、複数のドナーが部分的にマッチングされ、例えば、ドナーのうちのいくつかが、ＨＬＡマッチされたもので、１個のＨＬＡ対立遺伝子、２個のＨＬＡ対立遺伝子、３個のＨＬＡ対立遺伝子、４個のＨＬＡ対立遺伝子、５個のＨＬＡ対立遺伝子、６個のＨＬＡ対立遺伝子、または７個のＨＬＡ対立遺伝子が、いくつかのドナーとレシピエントの間でマッチングされている。各可能性は、本明細書に開示される実施形態を含む。
【０２２１】
特定の実施形態において、いくつかの生存可能な非アポトーシス細胞（耐アポトーシス）は、以下に記載されるアポトーシスステップの誘導後に残存し得る。これらの生存可能な非アポトーシス細胞の存在は、一実施形態では、放射線照射ステップの前に観察される。これらの生存可能な非アポトーシス細胞は、増殖し得るか、または活性化され得る。一実施形態では、複数のドナーに由来するプールされた単核球アポトーシス細胞調製物は、ホストに対して活性化されるか、相互に活性化されるか、またはその両方で活性化され得る。
【０２２２】
一実施形態では、本明細書に開示されるような放射線照射された細胞調製物は、非放射線照射細胞調製物と比較して、細胞活性化が抑制され、増殖が少なくなっていた。別の実施形態において、放射線照射はガンマ線照射またはＵＶ照射を含む。別の実施形態では、放射線照射された細胞調製物は、非放射線照射細胞調製物と比較して非アポトーシス細胞の数が減少する。別の実施形態では、放射線照射は約１５グレイ単位（Ｇｙ）を含む。別の実施形態では、放射線照射は約２０グレイ単位（Ｇｙ）を含む。別の実施形態では、放射線照射は約２５グレイ単位（Ｇｙ）を含む。別の実施形態では、放射線照射は約３０グレイ単位（Ｇｙ）を含む。別の実施形態では、放射線照射は約３５グレイ単位（Ｇｙ）を含む。別の実施形態では、放射線照射は約４０グレイ単位（Ｇｙ）を含む。別の実施形態では、放射線照射は約４５グレイ単位（Ｇｙ）を含む。別の実施形態では、放射線照射は約５０グレイ単位（Ｇｙ）を含む。別の実施形態では、放射線照射は約５５グレイ単位（Ｇｙ）を含む。別の実施形態では、放射線照射は約６０グレイ単位（Ｇｙ）を含む。別の実施形態では、放射線照射は最大２５００グレイ単位（Ｇｙ）を含む。別の実施形態では、放射線照射されたプールされたアポトーシス細胞調製物は、非放射線照射のプールされたアポトーシス細胞調製物と同じまたは類似のアポトーシスプロファイル、安定性及び有効性を維持する。
【０２２３】
一実施形態では、本明細書に開示されるようなプールされた単核球アポトーシス細胞調製物は、２４時間まで安定である。別の実施形態では、プールされた単核アポトーシス細胞調製物は、少なくとも２４時間安定である。別の実施形態では、プールされた単核アポトーシス細胞調製物は、２４時間以上安定である。さらに別の実施形態では、プールされた単核アポトーシス細胞調製物は、３６時間まで安定である。さらに別の実施形態では、プールされた単核アポトーシス細胞調製物は、少なくとも３６時間安定である。さらに別の実施形態では、プールされた単核アポトーシス細胞調製物は、３６時間以上安定である。さらに別の実施形態では、プールされた単核アポトーシス細胞調製物は、４８時間まで安定である。さらに別の実施形態では、プールされた単核アポトーシス細胞調製物は、少なくとも４８時間安定である。さらに別の実施形態では、プールされた単核アポトーシス細胞調製物は、４８時間以上安定である。
【０２２４】
一実施形態では、放射線照射ステップを含むプールされた細胞調製物を製造する方法は、単一のマッチドナー由来のアポトーシス調製物において観察される初期アポトーシス、免疫調節及び安定性を保存し、細胞調製物が放射線照射ステップを含まなくてもよい。別の実施形態では、本明細書に開示されるように、プールされた単核球アポトーシス細胞調製物は、移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）反応を誘発しない。
【０２２５】
細胞調製物の放射線照射は、当技術分野において安全であると考えられる。放射線照射手順は、ＷＢＣに対する反応を防ぐために、現在、定期的に輸血血液に対して実施されている。
【０２２６】
別の実施形態では、本明細書に開示されたようなプールされた単核球アポトーシス細胞調製物中のアポトーシス細胞の画分は１００％に近く、それにより細胞調製物中の生存非アポトーシス細胞の画分が減少する。一実施形態では、アポトーシス細胞のパーセントは少なくとも４０％である。別の実施形態では、アポトーシス細胞のパーセントは少なくとも５０％である。別の実施形態では、アポトーシス細胞のパーセントは少なくとも６０％である。別の実施形態では、アポトーシス細胞のパーセントは少なくとも７０％である。別の実施形態では、アポトーシス細胞のパーセントは少なくとも８０％である。別の実施形態では、アポトーシス細胞のパーセントは少なくとも９０％である。別の実施形態では、アポトーシス細胞のパーセントは少なくとも９９％である。したがって、生存非アポトーシス細胞の減少した画分を含むまたはそのような画分が存在しない細胞調製物は、一実施形態では、レシピエントにおいてＧＶＨＤを誘発しない、プールされた単核球アポトーシス細胞調製物を提供し得る。各可能性は、本明細書に開示される実施形態を表す。
【０２２７】
あるいは、別の実施形態では、生存非アポトーシスＷＢＣのパーセンテージは、例えば標的化沈殿によって、生存細胞集団を特異的に除去することによって減少する。別の実施形態では、生存している非アポトーシス細胞のパーセントは、ホスファチジルセリンに結合する磁気ビーズを用いて減少させることができる。別の実施形態では、非アポトーシス細胞の細胞表面上のマーカーに結合するが、アポトーシス細胞には結合しない磁気ビーズを使用して、生存非アポトーシス細胞のパーセントを減少させることができる。別の実施形態では、アポトーシス細胞の細胞表面上のマーカーに結合するが、非アポトーシス細胞には結合しない磁気ビーズを使用して、アポトーシス細胞がさらなる調製のために選択され得る。さらに別の実施形態では、生存非アポトーシス性ＷＢＣのパーセンテージは、超音波の使用によって低減される。
【０２２８】
一実施形態において、アポトーシス細胞は、プールされた第三者のドナー由来である。
【０２２９】
一実施形態において、プールされた細胞調製物は、リンパ球、単球及びナチュラルキラー細胞からなる群から選択される少なくとも１つの細胞の種類を含む。別の実施形態では、プールされた細胞調製物は、単核豊富細胞集団を含む。一実施形態では、プールされた単核球は、リンパ球、単球及びナチュラルキラー細胞からなる群から選択される種類の細胞を含む単核豊富細胞調製物である。別の実施形態において、単核豊富細胞調製物は、顆粒球（すなわち、好中球、好塩基球及び好酸球）としても知られている多形核白血球を１５％以下、あるいは１０％以下、典型的には５％以下しか含まない。別の実施形態では、プールされた単核細胞調製物は顆粒球を欠いている。各可能性は、本明細書に開示される別個の実施形態を表す。
【０２３０】
他の実施形態では、プールされた単核豊富細胞調製物は、１５％以下、あるいは１０％以下、典型的には５％以下のＣＤ１５高発現細胞を含む。一実施形態では、プールされたアポトーシス細胞調製物は、１５％未満のＣＤ１５高発現細胞を含む。各可能性は、本明細書に開示される別個の実施形態を表す。
【０２３１】
一実施形態では、本明細書に開示されるプールされた単核細胞豊富調製物は、少なくとも８０％の単核細胞、少なくとも８５％の単核細胞、あるいは少なくとも９０％の単核細胞、または少なくとも９５％の単核細胞を含み、各可能性は、本明細書に開示される別個の実施形態である。いくつかの実施形態によれば、本明細書に開示されたプールされた単核豊富細胞調製物は、少なくとも８５％の単核細胞を含む。
【０２３２】
別の実施形態では、最終的なプールされたパーセントが少なくとも８０％である任意のプールされた細胞調製物が、本明細書に開示されるようなプールされた単核細胞豊富細胞集団であると考えられる。したがって、少なくとも８０％単核細胞の得られた「プール」を有する高単核細胞を有する細胞調製物を用いて多形核細胞（ＰＭＮ）の増加した細胞調製物をプールすることは、本明細書に開示される調製物を含む。いくつかの実施形態によれば、単核細胞は、リンパ球及び単球を含む。
【０２３３】
当業者であれば、「単核細胞」という用語が、１つの分葉核を有する白血球を包含し得ることを理解されよう。別の実施形態では、本明細書で開示されるように、プールされたアポトーシス細胞調製物は、５％未満の多形核白血球を含む。
【０２３４】
一実施形態では、アポトーシス細胞はＴ細胞である。別の実施形態では、アポトーシス細胞は、ＣＡＲ−Ｔ細胞と同じプールされた第三者のドナーＴ細胞由来である。別の実施形態では、アポトーシス細胞はＣＡＲ−Ｔ細胞集団に由来する。
【０２３５】
驚くべきことに、アポトーシス細胞は、ＩＬ−６などのサイトカインストームに関連するサイトカインの産生を減少させる。一実施形態では、アポトーシス細胞は、マクロファージ及びＤＣにおけるサイトカイン発現レベルに影響を及ぼすが、Ｔ細胞自体におけるサイトカイン発現レベルに影響しない。したがって、アポトーシス細胞がＣＡＲ−Ｔ細胞療法または樹状細胞療法の有効性向上に有用であることは予想外であった。
【０２３６】
別の実施形態では、アポトーシス細胞はＴ細胞の細胞死を誘発するが、サイトカイン発現レベルの変化を介するものではない。
【０２３７】
別の実施形態において、アポトーシス細胞は、アポトーシス細胞がなければサイトカインストームを増幅するであろう、マクロファージ及び樹状細胞のサイトカイン分泌のプライミングに拮抗する。別の実施形態において、アポトーシス細胞は、炎症応答を抑制し、及び／またはサイトカインの過剰放出を防止する制御性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）を増加させる。
【０２３８】
一実施形態では、アポトーシス細胞の投与は、１つ以上の炎症誘発サイトカインを阻害する。一実施形態では、炎症誘発サイトカインは、ＩＬ−１β、ＩＬ−６、ＴＮＦ−α、またはＩＦＮ−γ、またはそれらの任意の組み合わせを含む。別の実施形態において、アポトーシス細胞の投与は、１つ以上の抗炎症性サイトカインの分泌を促進する。一実施形態では、抗炎症性サイトカインは、ＴＧＦ−β、ＩＬ−１０、またはＰＧＥ２、またはそれらの任意の組み合わせを含む。
【０２３９】
別の実施形態において、アポトーシス細胞の投与は、ＴＬＲリガンドへの曝露後の樹状細胞の成熟を阻害する。別の実施形態では、アポトーシス細胞の投与は、潜在的に寛容原性の樹状細胞を生成し、これは一実施形態では移動可能であり、一実施形態では、移動はＣＣＲ７によるものである。別の実施形態では、アポトーシス細胞の投与は、一実施形態ではＴＡＭ受容体シグナル伝達（Ｔｙｒｏ３、Ａｘｌ及びＭｅｒ）である様々なシグナル伝達事象を誘発するし、このＴＡＭ受容体シグナル伝達は、一実施形態では、抗原提示細胞における炎症を阻害する。
【０２４０】
一実施形態では、Ｔｙｒｏ−３、Ａｘｌ及びＭｅｒは、キナーゼドメイン及び接着分子様細胞外ドメイン内の保存された配列によって特徴付けられる受容体チロシンキナーゼ（ＲＴＫ）のＴＡＭファミリーを構成する。別の実施形態では、アポトーシス細胞の投与は、ＭｅｒＴＫを介したシグナル伝達を活性化する。別の実施形態において、アポトーシス細胞の投与は、一実施形態ではＮＦ−κＢを負に調節する、ホスファチジルイノシトール３−キナーゼ（ＰＩ３Ｋ）／ＡＫＴ経路を活性化する。別の実施形態において、アポトーシス細胞の投与は、一実施形態では、炎症誘発サイトカイン分泌、ＤＣ成熟、またはそれらの組み合わせの阻害をもたらす、インフラマソームを負に調節する。別の実施形態では、アポトーシス細胞の投与は、Ｎｒ４ａ、Ｔｈｂｓ１、またはその組み合わせなどの抗炎症性遺伝子の発現をアップレギュレートする。別の実施形態では、アポトーシス細胞の投与は、一実施形態では、パネキシン１依存的に蓄積される高レベルのＡＭＰを誘導する。別の実施形態において、アポトーシス細胞の投与は、炎症を抑制する。
【０２４１】
アポトーシス細胞上清（ＡｐｏＳｕｐ及びＡｐｏＳｕｐ  Ｍｏｎ）
【０２４２】
一実施形態では、本明細書に開示されるような方法及び治療で使用するための組成物は、本明細書に開示されるアポトーシス細胞上清を含む。
【０２４３】
一実施形態では、アポトーシス細胞上清は、（ａ）アポトーシス細胞を提供するステップ、（ｂ）ステップ（ａ）のアポトーシス細胞を培養するステップ、及び（ｃ）細胞から上清を分離するステップを含む方法によって得られる。
【０２４４】
一実施形態では、本明細書に開示されるアポトーシス細胞上清を作製するためのアポトーシス細胞は、治療を受けている対象の自己細胞である。別の実施形態では、本明細書で開示されるアポトーシス細胞上清を作製するのに使用するためのアポトーシス細胞は、治療を受けている対象の同種異系である。
【０２４５】
アポトーシス細胞上清の取得元の「アポトーシス細胞」は、当業者に知られているアポトーシスを誘導する方法で用いられる、任意の種類の細胞または任意の市販の細胞株から選択された細胞であり得る。アポトーシスを誘導する方法は、低酸素、オゾン、熱、放射線、化学物質、浸透圧、ｐＨシフト、Ｘ線照射、ガンマ線照射、ＵＶ照射、血清枯渇、コルチコイドまたはそれらの組み合わせを利用する方法か、または本明細書に記載されている方法か当該分野で公知である他の方法である。別の実施形態において、アポトーシスを誘導する方法は、初期アポトーシス状態においてアポトーシス細胞を製造する方法である。
【０２４６】
一実施形態では、アポトーシス細胞は白血球である。
【０２４７】
一実施形態では、前記アポトーシス性白血球は、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）に由来する。別の実施形態では、前記白血球は、プールされた第三者のドナー由来である。別の実施形態において、前記白血球は同種異系である。
【０２４８】
一実施形態によれば、アポトーシス細胞は、非接着性白血球を選択し、それらをアポトーシス誘導させ、その後のステップで培養培地中の細胞培養することよって提供される。アポトーシス細胞−食細胞上清を作製するために使用される「白血球」は、免疫系の有核細胞及び／または造血系の任意の系列またはサブ系列に由来したものであり得、限定しないが、樹状細胞、マクロファージ、好塩基球、造血幹細胞、骨髄細胞、ナチュラルキラー細胞などが挙げられる。白血球は、用途及び目的、所望の白血球系統などに応じて、様々な適切な解剖学的区画のいずれかから、任意の様々な適切な方法で誘導または取得することができる。一実施形態では、ソースの白血球は原発性白血球である。一実施形態では、ソースの白血球は初代末梢血白血球である。
【０２４９】
初代リンパ球及び単球は、好都合に末梢血に由来し得る。末梢血白血球には、７０〜９５％のリンパ球及び５〜２５％の単球が含まれる。
【０２５０】
血液から特定の種類のソース白血球を得る方法は、日常的に実施されている。ソースリンパ球及び／または単球の取得は、例えば、ヘパリンまたはクエン酸などの抗凝固剤の存在下で血液を採取することによって達成することができる。採取された血液は、その後、フィコールクッション上で遠心分離され、勾配界面でリンパ球及び単球、ならびにペレット中の好中球及び赤血球が単離される。
【０２５１】
白血球は、標準的な免疫磁気選択または免疫蛍光フローサイトメトリー技術によって、それらの特異的な表面マーカーにしたがって、または遠心分離による溶離によって、互いに分離され得る。例えば、単球はＣＤ１４＋画分として選択することができ、Ｔリンパ球はＣＤ３＋画分として、Ｂリンパ球はＣＤ１９＋画分として、マクロファージはＣＤ２０６＋画分として選択することができる。
【０２５２】
リンパ球及び単球は、例えば、組織培養処理された培養レシピエントにおける静的培養（その結果、リンパ球ではなく単球の細胞接着性基質への選択的接着が生じる）などによる基質接着条件に供することによって互いに単離することができる。
【０２５３】
白血球はまた、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）から得ることができ、本明細書に記載のように単離することができる。
【０２５４】
当業者であれば、本明細書中に開示されるような培養されたソース白血球の所望の量を生成するために初代白血球を適切に培養するために必要な専門知識を有しており、そのような培養方法を実施するための十分な指針が当該技術分野の文献から得られよう。
【０２５５】
当業者であれば、アポトーシス性白血球を誘導するための適切な樹立された白血球細胞株を構築、購入、または取得するために必要な専門知識をさらに有している。適切な白血球細胞株は、ＡＴＴＣ（American Tissue Type Collection）社のような商業的供給者から取得できる。ソース白血球は、アポトーシス性白血球を産生する能力を有意に妨げる技術によっては得られないことは、当業者には明らかであろう。
【０２５６】
一実施形態では、アポトーシス細胞は、調製物中の細胞の少なくとも４０％が早期アポトーシス状態にある、少なくとも８５％の単核細胞を含む単核豊富細胞を含む細胞調製物を含み、調製物中の細胞の少なくとも８５％が生存可能な細胞であり、調製物は１５％以下のＣＤ１５高発現細胞を含む。
【０２５７】
別の実施形態では、アポトーシス細胞はアポトーシス性リンパ球であり得る。一次リンパ球などのリンパ球のアポトーシスは、初代リンパ球を血清欠乏、コルチコステロイドまたは放射線照射で処置することによって誘導することができる。別の実施形態においては、コルチコステロイドによる処置を介して原発性リンパ球のアポトーシスを誘導することは、初代リンパ球をデキサメタゾンで処理することによって達成される。別の実施形態では、約１マイクロモルの濃度のデキサメタゾンで処理する。別の実施形態では、放射線照射による初代リンパ球のアポトーシスの誘導は、初代リンパ球をガンマ線照射で処置することによって実施される。別の実施形態では、放射線照射は約６６ラドの線量で行われる。そのような処理は、貪食細胞との共培養ステップに適したアポトーシス性リンパ球の生成をもたらす。
【０２５８】
さらなる実施形態では、アポトーシス細胞は、アポトーシス性単球、例えば原発性単球であり得る。アポトーシス性単球を生成するために、単球を、血清枯渇の条件下で基質／表面接着のインビトロ条件の下におく。このような処置は、食細胞との共培養ステップに適した非炎症性アポトーシス単球の生成をもたらす。
【０２５９】
他の実施形態では、アポトーシス細胞は、同種異系アポトーシス細胞、第三者のアポトーシス細胞、及びアポトーシス細胞のプールを含む本明細書中に記載される任意のアポトーシス細胞であり得る。
【０２６０】
他の実施形態においては、アポトーシス細胞上清は、他の細胞とのアポトーシス細胞の共培養によって得ることができる。
【０２６１】
したがって、一実施形態において、アポトーシス細胞上清は、以下のステップ、すなわち、（ａ）アポトーシス細胞を提供するステップ、（ｂ）他の細胞を提供するステップ、（ｃ）任意選択で、ステップ（ａ）及び（ｂ）からの細胞を洗浄するステップ、（ｄ）ステップ（ａ）及び（ｂ）の細胞を共培養するステップ、及び任意選択で、（ｅ）上清を細胞から分離するステップを含む方法によって得られるアポトーシス細胞上清である。
【０２６２】
一実施形態では、アポトーシス細胞と共培養される他の細胞は白血球である。
【０２６３】
したがって、一実施形態において、アポトーシス細胞上清は、以下のステップ、すなわち、（ａ）アポトーシス細胞を提供するステップ、（ｂ）白血球を提供するステップ、（ｃ）任意選択で、ステップ（ａ）及び（ｂ）からの細胞を洗浄するステップ、（ｄ）ステップ（ａ）及び（ｂ）の細胞を共培養するステップ、及び任意選択で、（ｅ）上清を細胞から分離するステップを含む方法によって得られるアポトーシス細胞上清である。
【０２６４】
一実施形態では、白血球は、マクロファージ、単球または樹状細胞などの食細胞であり得る。
【０２６５】
一実施形態では、白血球はＢ細胞、Ｔ細胞、またはナチュラルキラー（ＮＫ細胞）であり得る。
【０２６６】
したがって、一実施形態では、本明細書中に開示されるような方法及び治療で使用するための組成物は、引用によりその全体が本明細書に組み込まれる国際公開第２０１４／１０６６６６号に記載されたアポトーシス細胞−食細胞上清を含む。別の実施形態では、本明細書に開示される組成物及び方法における使用のためのアポトーシス細胞−食細胞上清は、当技術分野で公知の任意の方法で製造される。
【０２６７】
一実施形態では、アポトーシス細胞−食細胞上清は、アポトーシス細胞と食細胞の共培養から得られる。
【０２６８】
したがって、一実施形態において、アポトーシス細胞−食細胞上清は、以下のステップ、すなわち、（ａ）食細胞を提供するステップ、（ｂ）アポトーシス細胞を提供するステップ、（ｃ）任意選択で、ステップ（ａ）及び（ｂ）からの細胞を洗浄するステップ、（ｄ）ステップ（ａ）及び（ｂ）の細胞を共培養するステップ、及び任意選択で、（ｅ）上清を細胞から分離するステップを含む方法によって得られる。
【０２６９】
「食細胞（貪食細胞）」という用語は、有害な異物、細菌、及び死んだ細胞または死んでいる細胞を摂取（貪食）することによって身体を保護する細胞を指す。食細胞としては、例えば、好中球、単球、マクロファージ、樹状細胞、及びマストＴ細胞（好ましくは樹状細胞及び単球／マクロファージ）が挙げられる。食細胞は、樹状細胞（ＣＤ４＋ＨＬＡ−ＤＲ＋系統−ＢＤＣＡ１／ＢＤＣＡ３＋）、マクロファージ（ＣＤ１４＋ＣＤ２０６＋ＨＬＡ−ＤＲ＋）、または単球（ＣＤ１４＋）由来であり得る。これらの異なる食細胞を区別する技術は、当業者に公知である。
【０２７０】
一実施形態において、単球は、プラスチック付着ステップによって得られる。前記単球は、マーカーＣＤ１４＋を有するＢ及びＴ細胞から区別することができ、一方、望ましくないＢ細胞はＣＤ１９＋及びＴ細胞のＣＤ３＋を発現する。マクロファージコロニー刺激因子（Ｍ−ＣＳＦ）誘導成熟後、得られたマクロファージは、一実施形態では、マーカーＣＤ１４＋、ＣＤ２０６＋、ＨＬＡ−ＤＲ＋に対して陽性である。
【０２７１】
一実施形態では、前記食細胞は、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）に由来する。
【０２７２】
食細胞は、食細胞を得るための当該分野で公知の任意の方法によって提供され得る。一実施形態では、マクロファージまたは樹状細胞のような食細胞は、成熟ステップによって、前駆細胞から対象から直接単離され得るか、または前駆細胞から誘導され得る。
【０２７３】
一実施形態では、マクロファージを対象の腹腔から直接単離し、完全なＲＲＰＭＩ培地で培養することができる。マクロファージはまた、脾臓から単離することもできる。
【０２７４】
食細胞は、末梢血単球からも得ることができる。この実施例では、培養した単球は、マクロファージコロニー刺激因子（Ｍ−ＣＳＦ）を細胞培養培地に添加することにより単球由来マクロファージに分化する。
【０２７５】
例えば、食細胞は、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）に由来し得る。例えば、ＰＢＭＣは、個体からの細胞抽出バッグから、細胞接着ステップにおいて完全ＲＰＭＩ培地（１０％ＦＢＳ、１％ペニシリン／ストレプトマイシン）中に９０分間プレーティングされ、フィコール勾配遠心分離を介して単離され得る。非接着性Ｔ細胞は、プラスチック接着ステップによって除去され、付着したＴ細胞は、組換えヒトＭ−ＣＳＦを補充した完全ＲＰＭＩ環境で培養される。培養期間後、単球由来のマクロファージが得られる。
【０２７６】
食細胞は、細胞接着ステップによって選択することができる。前記「細胞接着ステップ」とは、食細胞または食細胞に成熟し得る細胞が、培養された細胞の表面への接着を可能にする培養条件を介して、細胞接着表面（例えば、組織培養皿、マトリックス、適切なタイプのナイロンまたはプラスチックを有するサックまたはバッグ）で選択されることを意味する。当業者であれば、「細胞接着表面」という用語が、親水性及び負電荷を包含することができ、当技術分野で公知の様々な方法のいずれかで得ることができることを理解されよう。別の実施形態では、例えば、コロナ放電またはガスプラズマを使用してポリスチレン表面を改質する。これらのプロセスは、表面が親水性で負に帯電するように表面ポリスチレン鎖にグラフト重合する高エネルギー酸素イオンを生成する。細胞接着を促進するために設計された培養レシピエントは、様々なサプライヤ（例えば、コーニング社（Corning）、パーキン・エルマー社（Perkin-Elmer）、フィッシャー・サイエンティフィック社（Fisher Scientific）、エバーグリーン・サイエンティフィック社（Evergreen Scientific）、ヌンク社（Nunc）など）から入手可能である。
【０２７７】
Ｂ細胞、Ｔ細胞及びＮＫ細胞は、そのような細胞を得るための当該分野で公知の任意の方法によって提供され得る。一実施形態では、Ｂ細胞、Ｔ細胞またはＮＫ細胞は、対象から直接単離され得るか、または成熟ステップによって前駆細胞から誘導され得る。別の実施形態において、Ｂ細胞、Ｔ細胞またはＮＫ細胞は、Ｂ細胞株、Ｔ細胞株またはＮＫ細胞株由来であり得る。当業者であれば、適切な構築されたＢ細胞株、Ｔ細胞株及びＮＫ細胞株を構築、購入、または他の方法で入手するために必要な専門知識を有するであろう。適切な細胞株は、ＡＴＣＣのようなサプライヤから入手することができる。
【０２７８】
一実施形態では、前記アポトーシス細胞及び前記白血球、例えば食細胞、Ｂ細胞、Ｔ細胞またはＮＫ細胞は、共培養ステップ（ｄ）の前に個々に培養される。
【０２７９】
食細胞の細胞成熟は、例えば培地への成熟因子の添加に起因して細胞培養中に起こる。一実施形態では、前記成熟因子はＭ−ＣＳＦであり、これは例えば単球由来のマクロファージを得るために使用することができる。
【０２８０】
食細胞の成熟または選択のために使用される培養ステップは、数時間から数日かかることがある。別の実施形態では、前記前成熟貪食細胞は、適切な培地で２、４、６、８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２２、２４、２６、２８、３０、３２、３４、３６、３８、４０、４２、４４、４６、４８、５０、５２、５４、５６、または５８時間培養する。
【０２８１】
食細胞の培養培地は、当業者に公知であり、例えば、限定しないがＲＰＭＩ、ＤＭＥＭ、Ｘ−ｖｉｖｏ（登録商標）及びＵｌｔｒａｃｕｌｔｕｒｅ（登録商標）培地であり得る。
【０２８２】
一実施形態では、アポトーシス細胞及び食細胞の共培養は生理学的溶液中で起こる。
【０２８３】
この「共培養」の前に、細胞を洗浄ステップに供することができる。一実施形態において、白血球（例えば、食細胞）及びアポトーシス細胞は、共培養ステップの前に洗浄される。別の実施形態では、細胞をＰＢＳで洗浄する。
【０２８４】
共培養中には、白血球（例えば、マクロファージ、単球または食細胞またはＢ細胞、Ｔ細胞またはＮＫ細胞などの食細胞）とアポトーシス細胞を、１０：１、９：１、８：１、７：１、６：１、５：１、４：１、３：１、２：１または１：１の比率で、または１：２、１：３、１：４、１：５、１：６、１：７、１：８、１：９または１：１０の（白血球：アポトーシス細胞）比率で混合し得る。一例では、白血球対アポトーシス細胞の比は１：５である。
【０２８５】
細胞の共培養は数時間から数日間であり得る。いくつかの実施形態では、前記アポトーシス細胞は２、４、６、８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２２、２４、２６、２８、３０、３２、３４、３６、３８、４０、４２、４４、４６、４８、５０、５２時間培養される。当業者であれば、抗炎症性化合物の存在、白血球の生存量及びこれまでに除去されていないアポトーシス細胞の量を測定することにより、共培養の最適時間を評価することができる。
【０２８６】
食細胞によるアポトーシス細胞の排除は、アポトーシス細胞の消失のために光学顕微鏡で観察可能である。
【０２８７】
一実施形態では、アポトーシス細胞の培養、例えば白血球（例えば、マクロファージ、単球または食細胞などの食細胞、またはＢ細胞、Ｔ細胞またはＮＫ細胞）の培養液との共共培養は、培養培地及び／または対象への注射等による投与に適合する生理学的溶液内で起こる。
【０２８８】
当業者であれば、「生理学的溶液」は、培養時間内に白血球の死に至らない溶液を包含し得ることを理解されよう。いくつかの実施形態では、生理学的溶液は２、４、６、８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２２、２４、２６、２８、３０、３２、３４、３６、３８、４０、４２、４４、４６、４８、５０、５２時間にわたって死に至らない。他の実施形態では、４８時間または３０時間である。
【０２８９】
一実施形態では、白血球（例えばマクロファージ、単球または食細胞またはＢ細胞、Ｔ細胞またはＮＫ細胞などの食細胞）及びアポトーシス細胞を少なくとも３０分間生理学的溶液中で培養する。この培養時間により、サイトカイン及び他の有益な物質の貪食開始及び分泌が可能となる。
【０２９０】
一実施形態では、そのような生理学的溶液は、白血球由来マクロファージによるアポトーシス性白血球除去を抑制しない。
【０２９１】
培養または共培養ステップの終わりに、上清は、任意選択で、培養されたアポトーシス細胞または共培養細胞から分離される。上清を細胞から分離する技術は、当技術分野で公知である。例えば、細胞及び残屑を除去するために、上清を収集及び／またはろ過及び／または遠心分離することができる。例えば、前記上清を室温において１５分間３０００ｒｐｍで遠心分離して細胞から分離することができる。
【０２９２】
上清は、使用前に、例えば放射線照射によって「不活性化」され得る。したがって、アポトーシス細胞上清を作製するための方法は、任意選択の追加の放射線照射ステップ（ｆ）を含み得る。前記「放射線照射」ステップは、血液製剤を不活性化するために日常的に行われるように、微生物を殺すのに十分な速度でＸ線照射（２５〜４５グレイ）を用いる殺菌方法と考えることができる。
【０２９３】
上清の放射線照射は当該技術分野において安全であると考えられる。放射線照射手順は、ＷＢＣとの反応を防ぐために、現在、輸血された血液に対して定期的に実施されている。
【０２９４】
一実施形態において、アポトーシス細胞上清は、本明細書に詳細に記載されるように、対象への投与に適した医薬組成物に製剤化される。
【０２９５】
一実施形態では、最終生成物を＋４℃で保存する。別の実施形態では、最終生成物は次の４８時間で使用するためのものである。
【０２９６】
一実施形態では、アポトーシス細胞食細胞上清などのアポトーシス細胞上清を含む医薬組成物を、例えば−８０℃での保存のために凍結乾燥することができる。
【０２９７】
１つの特定の実施形態では、国際公開第２０１４／１０６６６６号の実施例１に記載されているように、アポトーシス細胞−食細胞上清は、アポトーシス細胞として胸腺細胞を用いて作製され得る。単離後、胸腺細胞を放射線照射し（例えば、３５Ｘ−グレイ照射で）、完全ＤＭＥＭ培地中で、例えば６時間培養し、アポトーシスを起こさせる。並行して、マクロファージを腹膜腔から単離し、完全ＲＰＭＩ（１０％ＦＢＳ、Ｐｅｎｉ−Ｓｔｒｅｐｔｏ、ＥＡＡ、Ｈｅｐｅｓ、ＮａＰ及び２−メルカプトエタノール）中で洗浄及び培養する。次いで、マクロファージ及びアポトーシス細胞を洗浄し、１／５のマクロファージ／アポトーシス細胞比でフェノールを含まないＸ−ｖｉｖｏ（登録商標）培地中でさらに４８時間共培養する。次いで、上清を回収し、遠心分離して残屑を除去し、保存のために凍結または凍結乾燥することができる。マクロファージの濃縮は、ＦＡＣＳによるＦ４／８０の陽性染色を用いて確認することができる。アポトーシスは、アネキシンＶ及び７ＡＡＤ排除について陽性染色を用いてＦＡＣＳによって確認することができる。
【０２９８】
一実施形態では、アポトーシス細胞上清は、別々に培養されたマクロファージまたはアポトーシス細胞のいずれかから得られた上清と比較して、ＴＧＦ−βの活性型及び潜在型の両方におけるＴＧＦ−βレベルが高くなるように濃縮されている。一実施形態では、単独で培養されたマクロファージと比較してＩＬ−１０レベルも上昇し、単独で培養されたアポトーシス細胞と比較して劇的に増加する。別の実施形態では、ＩＬ−６などの炎症性サイトカインは検出できず、ＩＬ−１β及びＴＮＦは検出できないか、または非常に低いレベルである。
【０２９９】
一実施形態では、単独で培養されたマクロファージまたは単独で培養されたアポトーシス細胞からの上清と比較して、アポトーシス細胞上清は、ＴＧＦ−β及びＩＬ−１０に加えて、炎症を制御するための上清の寛容原性の役割に関与している可能性があるＩＬ−１ｒａ、ＴＩＭＰ−１、ＣＸＣＬ１／ＫＣ及びＣＣＬ２／ＪＥ／ＭＣＰ１のレベルを上昇している。
【０３００】
別の特定の実施形態では、国際公開第２０１４／１０６６６６号の実施例３に記載されているように、ヒトアポトーシス細胞−食細胞上清は、アポトーシスＰＢＭＣで培養された末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）由来のマクロファージの共培養から作製され得る。したがって、ＰＢＭＣは、健康な志願者からの細胞分離バッグから、例えばフィコール勾配遠心分離によって単離される。次いで、ＰＢＭＣを完全ＲＰＭＩ培地（１０％ＦＢＳ、１％ペニシリン／ストレプトマイシン）に９０分間播種する。次いで、非接着細胞を除去し、アポトーシスを起こさせるが、これは、例えば３５グレイの線量のＸ線照射を使用し、アポトーシスを起こさせるべく完全ＲＰＭＩ環境で４日間（培養の最初の４８時間後の細胞洗浄を含む）培養することよってなされる。並行して、接着性Ｔ細胞を、５０μｇ／ｍＬの組換えヒトＭ−ＣＳＦを補充した完全ＲＰＭＩ培地で、最初の４８時間後の細胞洗浄を含めて４日間培養する。４日間の培養期間の終わりに、単球由来のマクロファージ及びアポトーシス細胞を洗浄し、５アポトーシスに対して１マクロファージの細胞数比で４８時間、Ｘ−ｖｉｖｏ（登録商標）培地で一緒に培養する。その後、後者の培養物からの上清を回収し、遠心分離して細胞及び残屑を除去し、保存及びその後の使用のために凍結または凍結乾燥することができる。
【０３０１】
ある実施形態では、国際公開第２０１４／１０６６６６号に記載されているように、ヒトアポトーシス細胞−食細胞上清は、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）から６日間で得ることができる。培養物へのＭ−ＣＳＦ添加を用いてＰＢＭＣ由来マクロファージを得るために４日間かかり、初日に単離された非接着性ＰＢＭＣに対応する、アポトーシス細胞を伴うＰＢＭＣ由来マクロファージの共培養についてさらに２日間かかる。
【０３０２】
一実施形態では、国際公開第２０１４／１０６６６６号に記載されているように、標準化されたヒトアポトーシス細胞−食細胞上清は、ＰＢＭＣのドナーまたはソース（血球分離またはバフィーコート）とは独立して得ることができる。プラスチック接着ステップは、豊富な単球（プラスチック培養皿上での接着後の２０〜９３％のＣＤ１４＋細胞）の重要な開始集団を得るために十分である。さらに、そのような接着性Ｔ細胞は、Ｂ細胞及びＴ細胞（ＣＤ１９＋Ｂ細胞の１．０％及びＣＤ３＋Ｔ細胞の１２．８％）の非常に低い存在量を示す。Ｍ−ＣＳＦの存在下で接着Ｔ細胞を４日間培養した後、単球誘導マクロファージの割合は、ＣＤ１４＋ＣＤ２０６＋ＨＬＡ−ＤＲ＋マクロファージの０．１％から７７．７％に有意に増加する。その際、４８時間の間にアポトーシス細胞−食細胞上清を製造するために、単球由来マクロファージをアポトーシス非接着性ＰＢＭＣ（アネキシンＶ染色及び７ＡＡＤ排除によって示されるように４７．６％アポトーシス）と共培養することができる。
【０３０３】
ある実施形態では、収集されたアポトーシス細胞−食細胞上清は、単球由来マクロファージ単独の培養上清または炎症状態（＋ＬＰＳ）で処理された単球由来マクロファージよりも有意に多くの潜在性ＴＧＦを含み、炎症性サイトカイン、例えばＩＬ−１βまたはＴＮＦは僅かなまたは非常に低いレベルしか産生しない。
【０３０４】
一実施形態では、アポトーシス細胞上清を含む組成物は、抗凝固剤をさらに含む。一実施形態では、抗凝固剤は、ヘパリン、酸クエン酸デキストロース（ＡＣＤ）剤Ａ及びそれらの組み合わせからなる群から選択される。
【０３０５】
一実施形態では、アポトーシス細胞上清を含む組成物は、メチルプレドニゾロンをさらに含む。一実施形態では、メチルプレドニゾロンの濃度は３０μｇ／ｍｌを超えない。
【０３０６】
一実施形態では、その組成物は、体重１ｋｇあたり約２億の細胞に相当する（７０ｋｇの対象）、細胞分離によって得られた約１４×１０９のＣＤ４５＋細胞の共培養から誘導されたアポトーシス細胞上清の全量またはアリコートで使用することができる。一実施形態では、そのような総用量は、体重１ｋｇあたり約１億個の細胞に由来する単位用量の上清として投与され、及び／または毎週の間隔で単位用量として投与される。別の実施形態では、この実施形態による適切な総用量の両方には、体重１ｋｇ当たり約１千万〜約４０億個の細胞に由来する上清の総用量が含まれる。別の実施形態では、上清は、体重１キログラムあたり約４千万〜約１０億個の細胞に由来する。別の実施形態では、上清は、体重１キログラムあたり約８千万〜約５億個の細胞に由来する。別の実施形態では、上清は、体重１キログラムあたり約１．６億〜約２．５億個の細胞に由来する。別の実施形態では、上清は、体重１キログラムあたり約４００万〜約４億個の細胞に由来する。別の実施形態では、上清は、体重１キログラムあたり約８００万〜約２億個の細胞に由来する。別の実施形態では、上清は、体重１キログラムあたり約１６００万〜約１億個の細胞に由来する。別の実施形態では、上清は、体重１キログラムあたり約３２００万〜約５０００万個の細胞に由来する。
【０３０７】
別の実施形態においては、約１０×１０６個のアポトーシス細胞の共培養から誘導されるアポトーシス細胞上清の用量が投与される。別の実施形態において、１０×１０７個のアポトーシス細胞に由来する用量が投与される。別の実施形態において、１０×１０８個のアポトーシス細胞に由来する用量が投与される。別の実施形態において、１０×１０９個のアポトーシス細胞に由来する用量が投与される。別の実施形態において、１０×１０１０個のアポトーシス細胞に由来する用量が投与される。別の実施形態において、１０×１０１１個のアポトーシス細胞に由来する用量が投与される。別の実施形態において、１０×１０１２個のアポトーシス細胞に由来する用量が投与される。別の実施形態において、１０×１０１５個のアポトーシス細胞に由来する用量が投与される。別の実施形態において、１０×１０１４個のアポトーシス細胞に由来する用量が投与される。別の実施形態において、１０×１０１３個のアポトーシス細胞に由来する用量が投与される。別の実施形態において、１０×１０１２個のアポトーシス細胞に由来する用量が投与される。
【０３０８】
一実施形態では、３５×１０２６個のアポトーシス細胞に由来するアポトーシス細胞上清の用量を投与する。別の実施形態では、２１０×１０６個のアポトーシス細胞に由来する用量が投与される。別の実施形態では、７０×１０６個のアポトーシス細胞に由来する用量が投与される。別の実施形態では、１４０×１０６個のアポトーシス細胞に由来する用量が投与される。別の実施形態では、３５〜２１０×１０６個のアポトーシス細胞に由来する用量が投与される。
【０３０９】
一実施形態では、アポトーシス細胞上清、または前記アポトーシス細胞上清を含む組成物は、限定しないが静脈内、皮下、結節内、腫瘍内、髄腔内、胸膜内、腹腔内投与を含む任意の既知の投与方法によって、本明細書で詳細に考察されるように、胸腺に直接的に送達される。
【０３１０】
驚くべきことに、アポトーシス細胞−食細胞上清などのアポトーシス細胞上清は、ＩＬ−６などのサイトカインストームに関連するサイトカインの産生を減少させる。別のサイトカイン、ＩＬ−２は、ＤＣ及びマクロファージによって少量で分泌されるが、サイトカイン放出症候群には関与しない。しかし、これはＣＡＲ−Ｔ細胞の生存及び増殖に必要であり、これらのＴ細胞によって大部分が産生される。予期しないことに、アポトーシス細胞−食細胞上清などのアポトーシス細胞上清は、ＣＡＲ−Ｔ細胞の生存に悪影響を与えるほどＩＬ−２レベルを低下させない。
【０３１１】
一実施形態では、アポトーシス細胞−食細胞上清などのアポトーシス細胞上清は、マクロファージ及びＤＣにおけるサイトカイン発現レベルに影響を及ぼすが、Ｔ細胞自身のサイトカイン発現レベルに影響しない。したがって、アポトーシス細胞上清がＣＡＲ−Ｔ細胞療法または樹状細胞療法の増強に有用であるという効果は予想外であった。
【０３１２】
別の実施形態において、アポトーシス細胞上清は、Ｔ細胞の細胞死を引き起こすが、それはサイトカイン発現レベルの変化を介するものではない。
【０３１３】
別の実施形態では、アポトーシス細胞−食細胞上清などのアポトーシス細胞上清は、アポトーシス細胞上清がなければサイトカインストームを増幅するであろう、マクロファージ及び樹状細胞のサイトカイン分泌のプライミングに拮抗する。別の実施形態において、アポトーシス細胞上清は、炎症応答を抑制し、及び／またはサイトカインの過剰放出を防止する制御性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）を増加させる。
【０３１４】
一実施形態では、アポトーシス細胞−食細胞上清などのアポトーシス細胞上清の投与は、１つ以上の炎症誘発サイトカインを阻害する。一実施形態では、炎症誘発サイトカインは、ＩＬ−１β、ＩＬ−６、ＴＮＦ−α、またはＩＦＮ−γ、またはそれらの任意の組み合わせを含む。別の実施形態において、アポトーシス細胞上清の投与は、１つ以上の抗炎症性サイトカインの分泌を促進する。一実施形態では、抗炎症性サイトカインは、ＴＧＦ−β、ＩＬ−１０、またはＰＧＥ２、またはそれらの任意の組み合わせを含む。
【０３１５】
別の実施形態において、アポトーシス細胞上清の投与は、ＴＬＲリガンドへの曝露後の樹状細胞の成熟を阻害する。別の実施形態では、アポトーシス細胞上清の投与は、潜在的に寛容原性の樹状細胞を生成し、これは一実施形態では移動可能であり、一実施形態では、移動はＣＣＲ７によるものである。別の実施形態では、アポトーシス細胞上清の投与は、一実施形態ではＴＡＭ受容体シグナル伝達（Ｔｙｒｏ３、Ａｘｌ及びＭｅｒ）である様々なシグナル伝達事象を誘発するし、このＴＡＭ受容体シグナル伝達は、一実施形態では、抗原提示細胞における炎症を阻害する。一実施形態では、Ｔｙｒｏ−３、Ａｘｌ及びＭｅｒは、キナーゼドメイン及び接着分子様細胞外ドメイン内の保存された配列によって特徴付けられる受容体チロシンキナーゼ（ＲＴＫ）のＴＡＭファミリーを構成する。別の実施形態では、アポトーシス細胞上清の投与は、ＭｅｒＴＫを介したシグナル伝達を活性化する。別の実施形態において、アポトーシス細胞上清の投与は、一実施形態ではＮＦ−κＢを負に調節する、ホスファチジルイノシトール３−キナーゼ（ＰＩ３Ｋ）／ＡＫＴ経路を活性化する。別の実施形態において、アポトーシス細胞上清の投与は、一実施形態では、炎症誘発サイトカイン分泌、ＤＣ成熟、またはそれらの組み合わせの阻害をもたらす、インフラマソームを負に調節する。別の実施形態では、アポトーシス細胞上清の投与は、Ｎｒ４ａ、Ｔｈｂｓ１、またはその組み合わせなどの抗炎症性遺伝子の発現をアップレギュレートする。別の実施形態では、アポトーシス細胞上清の投与は、一実施形態では、パネキシン１依存的に蓄積される高レベルのＡＭＰを誘導する。別の実施形態において、アポトーシス細胞上清の投与は、炎症を抑制する。
【０３１６】
組成物
【０３１７】
一実施形態では、本明細書に記載の状態または疾患を治療するための医薬組成物が、本明細書に開示される。別の実施形態では、医薬組成物は、遺伝子改変免疫細胞またはその遺伝子改変受容体を含む。別の実施形態では、遺伝子改変免疫細胞は、Ｔ細胞を含む。別の実施形態では、遺伝子改変免疫細胞は、キメラ抗原受容体ＣＡＲ−Ｔ細胞を含む。別の実施形態では、遺伝子改変免疫細胞は、細胞傷害性Ｔリンパ球を含む。別の実施形態では、遺伝子改変免疫細胞は、樹状細胞を含む。別の実施形態では、遺伝子改変免疫細胞は、ナチュラルキラー細胞を含む。別の実施形態では、遺伝子改変受容体は、Ｔ細胞受容体を含む。
【０３１８】
さらに別の実施形態では、本明細書に記載の状態または疾患を治療するための医薬組成物は、薬学的に許容される賦形剤中に、本明細書に記載の有効量の遺伝子改変免疫細胞、またはその遺伝子改変受容体を含む。別の実施形態では、本明細書に記載の状態または疾患を治療するための医薬組成物は、本明細書に記載の有効量のＣＡＲ−Ｔ細胞、及び薬学的に許容される賦形剤を含む。別の実施形態では、本明細書に記載の状態または疾患を治療するための医薬組成物は、本明細書に記載の有効量の細胞傷害性ＣＡＲ−Ｔ細胞、及び薬学的に許容される賦形剤を含む。別の実施形態では、本明細書に記載の状態または疾患を治療するための医薬組成物は、本明細書に記載の有効量の遺伝子改変樹状細胞、及び薬学的に許容される賦形剤を含む。別の実施形態では、本明細書に記載の状態または疾患を治療するための医薬組成物は、本明細書に記載の有効量の遺伝子改変ナチュラルキラー細胞、及び薬学的に許容される賦形剤を含む。別の実施形態では、本明細書に記載の状態または疾患を治療するための医薬組成物は、本明細書に記載の有効量の遺伝子改変Ｔ細胞受容体、及び薬学的に許容される賦形剤を含む。
【０３１９】
別の実施形態では、本明細書に記載の状態または疾患は、腫瘍または癌である。別の実施形態では、本明細書に記載される対象のタンパク質またはペプチドに結合する遺伝子改変免疫細胞またはその受容体、例えばＣＡＲ−Ｔ細胞、を含む組成物が、本明細書に開示される。別の実施形態では、対象のタンパク質またはペプチドは、腫瘍抗原またはその断片を含む。
【０３２０】
別の実施形態では、本明細書に開示され、かつ本明細書に開示される方法で使用される組成物は、アポトーシス細胞またはアポトーシス細胞上清、及び薬学的に許容される賦形剤を含む。さらに別の実施形態では、有効量の遺伝子改変免疫細胞またはその遺伝子改変受容体を含む組成物は、アポトーシス細胞集団またはアポトーシス細胞上清を含む組成物と同一であり得る。別の実施形態では、有効量のＣＡＲ−Ｔ細胞、細胞傷害性Ｔ細胞、遺伝子改変樹状細胞、または遺伝子改変ナチュラルキラー細胞を含む組成物は、アポトーシス細胞集団またはアポトーシス細胞上清を含む組成物と同一であり得る。さらに別の実施形態では、有効量の遺伝子改変Ｔ細胞受容体を含む組成物は、アポトーシス細胞集団またはアポトーシス細胞上清を含む組成物と同一であり得る。さらに別の実施形態では、ＣＡＲ−Ｔ細胞、細胞傷害性Ｔ細胞、ナチュラルキラー細胞、または樹状細胞を含む群から選択される、有効量の遺伝子改変免疫細胞を含む組成物は、アポトーシス細胞集団またはアポトーシス細胞上清を含む。別の実施形態では、組成物は、キメラ抗原受容体発現Ｔ細胞（ＣＡＲ−Ｔ細胞）、及びアポトーシス細胞またはアポトーシス細胞上清のいずれか、及び薬学的に許容される賦形剤を含む。別の実施形態では、有効量の遺伝子改変Ｔ細胞受容体を含む組成物は、アポトーシス細胞集団またはアポトーシス細胞上清を含む組成物と同一ではない。
【０３２１】
別の実施形態では、組成物に含まれるアポトーシス細胞は、早期アポトーシス状態のアポトーシス細胞を含む。別の実施形態では、組成物に含まれるアポトーシス細胞は、プールされた第三者ドナー細胞である。別の実施形態では、本明細書に開示される組成物に含まれるアポトーシス細胞上清は、初期アポトーシス細胞から収集される。別の実施形態では、本明細書に開示される組成物に含まれるアポトーシス細胞上清は、プールされた第三者ドナー細胞から収集される。
【０３２２】
一実施形態では、遺伝子改変免疫細胞、例えばＣＡＲ−Ｔ細胞を含む組成物は、サイトカイン放出症候群に罹患している患者においてサイトカイン放出を予防、抑制、または調節するための、またはサイトカインストームを発症するための、追加的な医薬組成物をさらに含む。別の実施形態では、遺伝子改変免疫細胞、例えばＣＡＲ−Ｔ細胞、及びアポトーシス細胞を含む組成物は、サイトカイン放出症候群に罹患している患者、またはサイトカインストームを発症している患者において、サイトカイン放出を予防、抑制、または調節するための、追加的な医薬組成物をさらに含む。別の実施形態では、遺伝子改変免疫細胞、例えばＣＡＲ−Ｔ細胞、及びアポトーシス細胞上清を含む組成物は、サイトカイン放出症候群に罹患している患者、またはサイトカインストームを発症している患者において、サイトカイン放出を予防、抑制、または調節するための、追加的な医薬組成物をさらに含む。
【０３２３】
一実施形態では、遺伝子改変免疫細胞、例えばＴＣＲ−Ｔ細胞を含む組成物は、サイトカイン放出症候群に罹患している患者、またはサイトカインストームを発症している患者においてサイトカイン放出を予防、抑制、または調節するための、追加的な医薬組成物をさらに含む。別の実施形態では、遺伝子改変免疫細胞、例えばＴＣＲ−Ｔ細胞、及びアポトーシス細胞を含む組成物は、サイトカイン放出症候群に罹患している患者、またはサイトカインストームを発症している患者においてサイトカイン放出を予防、抑制、または調節するための、追加的な医薬組成物をさらに含む。別の実施形態では、遺伝子改変免疫細胞、例えばＴＣＲ−Ｔ細胞、及びアポトーシス細胞上清を含む組成物は、サイトカイン放出症候群に罹患している患者、またはサイトカインストームを発症している患者においてサイトカイン放出を予防、抑制、または調節するための、追加的な医薬組成物をさらに含む。
【０３２４】
一実施形態では、遺伝子改変免疫細胞、例えば樹状細胞を含む組成物は、サイトカイン放出症候群に罹患している患者、またはサイトカインストームを発症している患者においてサイトカイン放出を予防、抑制、または調節するためのするための、追加的な医薬組成物をさらに含む。別の実施形態では、遺伝子改変免疫細胞、例えば樹状細胞、及びアポトーシス細胞を含む組成物は、サイトカイン放出症候群に罹患している患者、またはサイトカインストームを発症している患者においてサイトカイン放出を予防、抑制、または調節するための、追加的な医薬組成物をさらに含む。別の実施形態では、遺伝子改変免疫細胞、例えば樹状細胞、及びアポトーシス細胞上清を含む組成物は、サイトカイン放出症候群に罹患している患者、またはサイトカインストームを発症している患者においてサイトカイン放出を予防、抑制、または調節するためのするための、追加的な医薬組成物をさらに含む。
【０３２５】
一実施形態では、遺伝子改変免疫細胞、例えばＮＫ細胞を含む組成物は、サイトカイン放出症候群に罹患している患者、またはサイトカインストームを発症している患者においてサイトカイン放出を予防、抑制、または調節するための、追加的な医薬組成物をさらに含む。別の実施形態では、遺伝子改変免疫細胞、例えばＮＫ細胞、及びアポトーシス細胞を含む組成物は、サイトカイン放出症候群に罹患している患者、またはサイトカインストームを発症している患者においてサイトカイン放出を予防、抑制、または調節するための、追加的な医薬組成物をさらに含む。別の実施形態では、遺伝子改変免疫細胞、例えばＮＫ細胞、及びアポトーシス細胞上清を含む組成物は、サイトカイン放出症候群に罹患している患者、またはサイトカインストームを発症している患者においてサイトカイン放出を予防、抑制、または調節するための、追加的な医薬組成物をさらに含む。
【０３２６】
一実施形態では、追加的な医薬組成物は、ＣＴＬＡ−４阻害剤を含み、一実施形態ではイピリムマブである。別の実施形態では、追加的な医薬組成物は、本明細書に開示されるα１−アンチトリプシン、またはその断片、若しくはその類似体を含む。別の実施形態では、追加的な医薬組成物は、本明細書に開示されるテルル系化合物を含む。別の実施形態では、追加的な医薬組成物は、本明細書に開示される免疫調節剤を含む。別の実施形態では、追加的な医薬組成物は、ＣＴＬＡ−４阻害剤、α１−アンチトリプシン、またはその断片、若しくはその類似体、テルル系化合物、または免疫調節化合物、またはそれらの任意の組み合わせを含む。
【０３２７】
一実施形態では、遺伝子改変免疫細胞、例えばＣＡＲ−Ｔ細胞を含む組成物、及びＣＴＬＡ−４阻害剤、α１−アンチトリプシン、またはその断片、若しくはその類似体のいずれか１つを含む医薬組成物、またはアポトーシス細胞若しくはアポトーシス細胞上清、テルル系化合物、または免疫調節剤は、単一の組成物を含む。別の実施形態では、遺伝子改変免疫細胞、例えばＣＡＲ−Ｔ細胞を含む組成物、及びＣＴＬＡ−４阻害剤、α１−アンチトリプシン、またはその断片、若しくはその類似体のいずれか１つを含む医薬組成物、アポトーシス細胞若しくはアポトーシス細胞上清、テルル系化合物、または免疫調節剤、またはそれらの任意の組み合わせは、複数の組成物を含み、一実施形態ではＣＡＲ−Ｔ細胞である各遺伝子改変免疫細胞、ＣＴＬＡ−４阻害剤、α１−アンチトリプシン、またはその断片、若しくはその類似体、アポトーシス細胞、アポトーシス細胞上清、テルル系化合物、または免疫調節剤、またはそれらの任意の組み合わせは、別個の組成物に含まれる。さらに別の実施形態では、一実施形態ではＣＡＲ−Ｔ細胞である遺伝子改変免疫細胞を含む組成物、及びＣＴＬＡ−４阻害剤、α１−アンチトリプシン、またはその断片、若しくはその類似体のいずれか１つを含む医薬組成物、アポトーシス細胞、アポトーシス細胞上清、テルル系化合物、または免疫調節剤、またはそれらの任意の組み合わせが、複数の組成物を含み、一実施形態ではＣＡＲ−Ｔ細胞である遺伝子改変免疫細胞、ＣＴＬＡ−４阻害剤、またはα１−アンチトリプシン、またはその断片若しくはその類似体、テルル系化合物、または免疫調節剤、またはそれらの任意の組み合わせ、またはそれらの任意の組み合わせが、遺伝子改変免疫細胞、例えばＣＡＲ−Ｔ細胞、組成物中に存在し、及びアポトーシス細胞またはアポトーシス細胞上清は、別個の組成物に含まれる。
【０３２８】
一実施形態では、遺伝子改変免疫細胞、例えばＴＣＲ−Ｔ細胞を含む組成物、及びＣＴＬＡ−４阻害剤、α１−アンチトリプシン、またはその断片、若しくはその類似体のいずれか１つを含む医薬組成物、またはアポトーシス細胞若しくはアポトーシス細胞上清、テルル系化合物、または免疫調節剤は、単一の組成物を含む。別の実施形態では、遺伝子改変免疫細胞、例えばＴＣＲ−Ｔ細胞を含む組成物、及びＣＴＬＡ−４阻害剤、α１−アンチトリプシン、またはその断片、若しくはその類似体のいずれか１つを含む医薬組成物、アポトーシス細胞若しくはアポトーシス細胞上清、テルル系化合物、または免疫調節剤、またはそれらの任意の組み合わせは、複数の組成物を含み、一実施形態ではＴＣＲ−Ｔ細胞である各遺伝子改変免疫細胞、ＣＴＬＡ−４阻害剤、α１−アンチトリプシン、またはその断片、若しくはその類似体、アポトーシス細胞、アポトーシス細胞上清、テルル系化合物、または免疫調節剤、またはそれらの任意の組み合わせは、別個の組成物に含まれる。さらに別の実施形態では、一実施形態ではＴＣＲ−Ｔ細胞である遺伝子改変免疫細胞を含む組成物、及びＣＴＬＡ−４阻害剤、α１−アンチトリプシン、またはその断片、若しくはその類似体のいずれか１つを含む医薬組成物、アポトーシス細胞、アポトーシス細胞上清、テルル系化合物、または免疫調節剤、またはそれらの任意の組み合わせが、複数の組成物を含み、一実施形態ではＴＣＲ−Ｔ細胞である遺伝子改変免疫細胞、ＣＴＬＡ−４阻害剤、またはα１−アンチトリプシン、またはその断片若しくはその類似体、テルル系化合物、または免疫調節剤、またはそれらの任意の組み合わせ、またはそれらの任意の組み合わせが、遺伝子改変免疫細胞、例えばＴＣＲ−Ｔ細胞、組成物中に存在し、及びアポトーシス細胞またはアポトーシス細胞上清は、別個の組成物に含まれる。
【０３２９】
一実施形態では、遺伝子改変免疫細胞、例えば樹状細胞を含む組成物、及びＣＴＬＡ−４阻害剤、α１−アンチトリプシン、またはその断片、若しくはその類似体のいずれか１つを含む医薬組成物、またはアポトーシス細胞若しくはアポトーシス細胞上清、テルル系化合物、または免疫調節剤は、単一の組成物を含む。別の実施形態では、遺伝子改変免疫細胞、例えば樹状細胞を含む組成物、及びＣＴＬＡ−４阻害剤、α１−アンチトリプシン、またはその断片、若しくはその類似体のいずれか１つを含む医薬組成物、アポトーシス細胞若しくはアポトーシス細胞上清、テルル系化合物、または免疫調節剤、またはそれらの任意の組み合わせは、複数の組成物を含み、一実施形態では樹状細胞である各遺伝子改変免疫細胞、ＣＴＬＡ−４阻害剤、α１−アンチトリプシン、またはその断片、若しくはその類似体、アポトーシス細胞、アポトーシス細胞上清、テルル系化合物、または免疫調節剤、またはそれらの任意の組み合わせは、別個の組成物に含まれる。さらに別の実施形態では、一実施形態では樹状細胞である遺伝子改変免疫細胞を含む組成物、及びＣＴＬＡ−４阻害剤、α１−アンチトリプシン、またはその断片、若しくはその類似体のいずれか１つを含む医薬組成物、アポトーシス細胞、アポトーシス細胞上清、テルル系化合物、または免疫調節剤、またはそれらの任意の組み合わせが、複数の組成物を含み、一実施形態では樹状細胞である遺伝子改変免疫細胞、ＣＴＬＡ−４阻害剤、またはα１−アンチトリプシン、またはその断片若しくはその類似体、テルル系化合物、または免疫調節剤、またはそれらの任意の組み合わせ、またはそれらの任意の組み合わせが、遺伝子改変免疫細胞、例えば樹状細胞、組成物中に存在し、及びアポトーシス細胞またはアポトーシス細胞上清は、別個の組成物に含まれる。
【０３３０】
一実施形態では、遺伝子改変免疫細胞、例えばＮＫ細胞を含む組成物、及びＣＴＬＡ−４阻害剤、α１−アンチトリプシン、またはその断片、若しくはその類似体のいずれか１つを含む医薬組成物、またはアポトーシス細胞若しくはアポトーシス細胞上清、テルル系化合物、または免疫調節剤は、単一の組成物を含む。別の実施形態では、遺伝子改変免疫細胞、例えばＮＫ細胞を含む組成物、及びＣＴＬＡ−４阻害剤、α１−アンチトリプシン、またはその断片、若しくはその類似体のいずれか１つを含む医薬組成物、アポトーシス細胞若しくはアポトーシス細胞上清、テルル系化合物、または免疫調節剤、またはそれらの任意の組み合わせは、複数の組成物を含み、一実施形態ではＮＫ細胞である各遺伝子改変免疫細胞、ＣＴＬＡ−４阻害剤、α１−アンチトリプシン、またはその断片、若しくはその類似体、アポトーシス細胞、アポトーシス細胞上清、テルル系化合物、または免疫調節剤、またはそれらの任意の組み合わせは、別個の組成物に含まれる。さらに別の実施形態では、一実施形態ではＮＫ細胞である遺伝子改変免疫細胞を含む組成物、及びＣＴＬＡ−４阻害剤、α１−アンチトリプシン、またはその断片、若しくはその類似体のいずれか１つを含む医薬組成物、アポトーシス細胞、アポトーシス細胞上清、テルル系化合物、または免疫調節剤、またはそれらの任意の組み合わせが、複数の組成物を含み、一実施形態ではＮＫ細胞である遺伝子改変免疫細胞、ＣＴＬＡ−４阻害剤、またはα１−アンチトリプシン、またはその断片若しくはその類似体、テルル系化合物、または免疫調節剤、またはそれらの任意の組み合わせ、またはそれらの任意の組み合わせが、遺伝子改変免疫細胞、例えばＮＫ細胞、組成物中に存在し、及びアポトーシス細胞またはアポトーシス細胞上清は、別個の組成物に含まれる。
【０３３１】
当業者であれば、「医薬組成物」が、生理学的に適切な担体及び賦形剤などの他の化学成分と共に、本明細書に記載される１つ以上の活性成分の調製を包含し得ることを理解するであろう。医薬組成物の目的は、生物への化合物の投与を容易にすることである。
【０３３２】
当業者であれば、「生理学的に許容される担体」、「薬学的に許容される担体」、「生理学的に許容される賦形剤」、及び「薬学的に許容される賦形剤」という表現が互換的に使用されてもよく、担体、賦形剤、または生物に有意な刺激を引き起こさず、投与された活性成分の生物活性及び特性を抑制しない希釈剤を包含し得ることを理解するであろう。
【０３３３】
当業者であれば、「賦形剤」が活性成分の投与をさらに容易にするために医薬組成物に添加される不活性物質を包含し得ることを理解するであろう。一実施形態では、賦形剤は、炭酸カルシウム、リン酸カルシウム、様々な糖及び澱粉のタイプ、セルロース誘導体、ゼラチン、植物油及びポリエチレングリコールを含む。
【０３３４】
薬剤の製剤化及び投与のための技法は、「Remington's Pharmaceutical Sciences」（マック・パブリッシング社（Mack Publishing Co.）、米国ペンシルバニア州イーストン所在）最新版の参照により本明細書に組み込まれる。
【０３３５】
一実施形態では、組成物は同時に投与される。他の実施形態では、組成物は異なる時間に投与される。別の実施形態では、アポトーシス細胞を含む組成物は、遺伝子改変免疫細胞またはその受容体の注射の前に投与される。別の実施形態では、アポトーシス細胞を含む組成物は、ＣＡＲ−Ｔ細胞注射の前に投与される。別の実施形態では、アポトーシス細胞を含む組成物は、細胞侵害性Ｔ細胞注射の前に投与される。別の実施形態では、アポトーシス細胞を含む組成物は、ナチュラルキラー細胞注射の前に投与される。別の実施形態では、アポトーシス細胞を含む組成物は、樹状細胞注射の前に投与される。別の実施形態では、アポトーシス細胞を含む組成物は、遺伝子改変Ｔ細胞受容体注射の前に投与される。
【０３３６】
別の実施形態では、アポトーシス細胞上清を含む組成物は、遺伝子改変免疫細胞またはその受容体の注射の前に投与される。別の実施形態では、アポトーシス細胞上清を含む組成物は、ＣＡＲ−Ｔ細胞注射の前に投与される。別の実施形態では、アポトーシス細胞上清を含む組成物は、細胞傷害性Ｔ細胞注射の前に投与される。別の実施形態では、アポトーシス細胞上清を含む組成物は、ナチュラルキラー細胞注射の前に投与される。別の実施形態では、アポトーシス細胞上清を含む組成物は、樹状細胞注射の前に投与される。別の実施形態では、アポトーシス細胞上清を含む組成物は、遺伝子改変Ｔ細胞受容体注射の前に投与される。
【０３３７】
別の実施形態では、アポトーシス細胞上清を含む組成物は、遺伝子改変免疫細胞またはその受容体の注射の前に投与される。別の実施形態では、アポトーシス細胞を含む組成物は、遺伝子改変免疫細胞またはその受容体の注射の約２４時間前に投与される。別の実施形態では、アポトーシス細胞を含む組成物は、ＣＡＲ−Ｔ細胞、細胞傷害性Ｔ細胞、ナチュラルキラー細胞、樹状細胞、または遺伝子改変Ｔ細胞受容体の注射の約２４時間前に投与される。別の実施形態では、アポトーシス細胞上清を含む組成物は、ＣＡＲ−Ｔ細胞、細胞傷害性Ｔ細胞、ナチュラルキラー細胞、樹状細胞、または遺伝子改変Ｔ細胞受容体の注射の約２４時間前に投与される。別の実施形態では、アポトーシス細胞を含む組成物は、ＣＡＲ−Ｔ細胞、細胞傷害性Ｔ細胞、ナチュラルキラー細胞、樹状細胞、または遺伝子改変Ｔ細胞受容体の注射の約２時間、４時間、６時間、８時間、１０時間、１２時間、１４時間、１６時間、１８時間、２０時間、２２時間、２４時間、３６時間、４８時間、６０時間、または７２時間前に投与される。別の実施形態では、アポトーシス細胞上清を含む組成物は、ＣＡＲ−Ｔ細胞、細胞傷害性Ｔ細胞、ナチュラルキラー細胞、樹状細胞、または遺伝子改変Ｔ細胞受容体の注射の約２時間、４時間、６時間、８時間、１０時間、１２時間、１４時間、１６時間、１８時間、２０時間、２２時間、２４時間、３６時間、４８時間、６０時間、または７２時間前に投与される。各可能性は、本明細書に開示される別個の実施形態を表す。
【０３３８】
別の実施形態では、アポトーシス細胞を含む組成物は、遺伝子改変免疫細胞またはその遺伝子改変受容体の注射後に投与される。別の実施形態では、アポトーシス細胞を含む組成物は、ＣＡＲ−Ｔ細胞、細胞傷害性Ｔ細胞、ナチュラルキラー細胞、樹状細胞、または遺伝子改変Ｔ細胞受容体の注射後に投与される。別の実施形態では、アポトーシス細胞上清を含む組成物は、遺伝子改変免疫細胞またはその遺伝子改変受容体の注射後に投与される。別の実施形態では、アポトーシス細胞上清を含む組成物は、ＣＡＲ−Ｔ細胞、細胞傷害性Ｔ細胞、ナチュラルキラー細胞、樹状細胞、または遺伝子改変Ｔ細胞受容体の注射後に投与される。別の実施形態では、アポトーシス細胞を含む組成物は、ＣＡＲ−Ｔ細胞、細胞傷害性Ｔ細胞、ナチュラルキラー細胞、樹状細胞、または遺伝子改変Ｔ細胞受容体の注射の約２４時間後に投与される。別の実施形態では、アポトーシス細胞を含む組成物は、遺伝子改変免疫細胞またはその遺伝子改変受容体の注射後に投与される。別の実施形態では、アポトーシス細胞上清を含む組成物は、ＣＡＲ−Ｔ細胞、細胞傷害性Ｔ細胞、ナチュラルキラー細胞、樹状細胞、または遺伝子改変Ｔ細胞受容体の注射の約２４時間後に投与される。別の実施形態では、アポトーシス細胞を含む組成物は、ＣＡＲ−Ｔ細胞、細胞傷害性Ｔ細胞、ナチュラルキラー細胞、樹状細胞、または遺伝子改変Ｔ細胞受容体の注射の約２時間、４時間、６時間、８時間、１０時間、１２時間、１４時間、１６時間、１８時間、２０時間、２２時間、２４時間、３６時間、４８時間、６０時間、または７２時間後に投与される。別の実施形態では、アポトーシス細胞上清を含む組成物は、ＣＡＲ−Ｔ細胞、細胞傷害性Ｔ細胞、ナチュラルキラー細胞、樹状細胞、または遺伝子改変Ｔ細胞受容体の注射の約２時間、４時間、６時間、８時間、１０時間、１２時間、１４時間、１６時間、１８時間、２０時間、２２時間、２４時間、３６時間、４８時間、６０時間、または７２時間後に投与される。各可能性は、本明細書に開示される別個の実施形態を表す。
【０３３９】
製剤化
【０３４０】
遺伝子改変免疫応答細胞、アポトーシス細胞、アポトーシス上清、またはそれらの任意の組み合わせを含む本明細書に開示された組成物は、滅菌液体調製物、例えば等張水溶液、懸濁液、乳濁液、分散液、または粘性組成物として都合よく提供されることができ、選択されたｐＨに緩衝化されてもよく、液体調製物は、ゲル、他の粘性組成物、及び固体組成物より調製が通常容易である。加えて、液体調製物は、特に注射によって投与する方が幾分便利である。一方、粘性組成物は、適切な粘度範囲内で製剤することができ、特定の組織とのより長い接触時間を提供する。液体または粘性組成物は、例えば水、生理食塩水、リン酸緩衝食塩水、ポリオール（例えばグリセロール、プロピレングリコール、液体ポリエチレングリコールなど）、及びそれらの適切な混合物を含む溶媒、または分散媒であり得る担体を含んでいてもよい。
【０３４１】
滅菌注射溶液は、必要に応じて、本明細書に開示された方法を実施する際に利用される遺伝子改変免疫応答細胞またはアポトーシス細胞上清を、様々な量の他の成分を含む必要量の適切な溶媒に配合することにより調製され得る。このような組成物は、滅菌水、生理食塩水、グルコース、デキストロースなどの適切な担体、希釈剤、または賦形剤と混合されてもよい。組成物は凍結乾燥されてもよい。組成物は、投与経路及び所望の調製に依存して、湿潤剤、分散剤、または乳化剤（例えばメチルセルロース）、ｐＨ緩衝剤、ゲル化または増粘添加剤、防腐剤、香料、着色料などの補助物質を含むことができる。本明細書に参照として組み入れられる「REMINGTON'S PHARMACEUTICAL SCIENCE」（第１７版、１９８５年）などの標準テキストを、不要な実験をすることなく適切な調製物を調製するために参照することができる。
【０３４２】
抗菌防腐剤、抗酸化剤、キレート剤、及び緩衝剤を含む組成物の安定性及び無菌性を増強する様々な添加剤を添加することができる。微生物の作用の防止を、様々な抗菌剤及び抗真菌剤、例えばパラベン、クロロブタノール、フェノール、ソルビン酸などによって確実にすることができる。注射可能な薬剤形態の長期吸収が、吸収を遅延させる薬剤、例えばモノステアリン酸アルミニウム及びゼラチンの使用によって、もたらされ得る。しかし、本明細書の開示によれば、使用される任意のビヒクル、希釈剤、または添加剤は、遺伝子改変免疫応答細胞またはそれらの前駆細胞と適合しなければならない。
【０３４３】
組成物は等張性であり得る。すなわち、組成物は、血液及び涙液と同じ浸透圧を有し得る。本明細書に開示される組成物の所望の等張性は、塩化ナトリウム、またはデキストロース、ホウ酸、酒石酸ナトリウム、プロピレングリコール、または他の無機若しくは有機溶質などの他の薬学的に許容される薬剤を用いて達成され得る。塩化ナトリウムは、ナトリウムイオンを含む緩衝剤にとって、特に好ましい。
【０３４４】
必要に応じて、薬学的に許容される増粘剤を用いて、組成物の粘度を選択されたレベルに維持することができる。メチルセルロースは、容易かつ経済的に入手可能であり、取り扱いが容易であるため、好ましい。
【０３４５】
他の適切な増粘剤には、例えばキサンタンガム、カルボキシメチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、カルボマーなどが含まれる。増粘剤の好ましい濃度は、選択される薬剤に依存する。重要な点は、選択された粘度を達成する量を使用することである。明らかに、適切な担体及び他の添加剤の選択は、正確な投与経路及び特定の投薬形態の性質、例えば液体投薬形態（例えば、組成物が溶液、懸濁液、ゲル、または時間放出形状若しくは液体充填形状などの他の液体形状に製剤化されるか否か）に依存する。
【０３４６】
当業者であれば、組成物の構成要素が化学的に不活性であるように選択され、本明細書に開示される方法で記載される遺伝子改変免疫応答細胞の生存性または有効性に影響しないことを認識するであろう。これは、化学及び薬学の原則に熟練した者には問題が生じないか、または、本開示及び本明細書に引用される文献からの、標準テキストの参照、または簡単な実験（不要な実験を伴わない）によって、容易に回避し得る問題である。
【０３４７】
本明細書に開示される遺伝子改変免疫応答細胞の治療的使用に関する１つの考察は、最適効果を達成するために必要な細胞の量である。投与される細胞の量は、扱われる対象によって異なる。一実施形態では、本明細書に開示される１０４〜１０１０の間、１０５〜１０９の間、または１０６〜１０８の間の遺伝子改変免疫応答細胞が、ヒト対象に投与される。より効果的な細胞は、より少ない数で投与されてもよい。いくつかの実施形態では、本明細書に開示される少なくとも約１×１０８、２×１０８、３×１０８、４×１０８、及び５×１０８の遺伝子改変免疫応答細胞が、ヒト対象に投与される。有効量と見なされるものの正確な決定は、対象のサイズ、年齢、性別、体重、及び特定の対象の状態を含む、各対象に固有の因子に基づくことができる。投薬量は、本開示及び当技術分野の知識から、当業者によって容易に理解され得る。
【０３４８】
当業者は、組成物中の細胞及び任意の添加物、ビヒクル、及び／または担体の量を容易に決定し、本明細書に開示される方法で投与することができる。一般的には、任意の添加剤（活性細胞（複数可）及び／または薬剤（複数可）に加えて）が、リン酸緩衝生理食塩水中に０．００１〜５０％（重量）の量で存在し、活性成分は、約０．０００１〜約５重量％のように、マイクログラムからミリグラムのオーダーで存在する。別の実施形態では、約０．０００１〜約１重量％である。さらに別の実施形態では、約０．０００１〜約０．０５重量％、または約０．００１〜約２０重量％である。さらなる実施形態では、約０．０１〜約１０重量％である。別の実施形態では、約０．０５〜約５重量％である。当然のことながら、動物またはヒトに投与される任意の組成物、及び任意の特定の投与方法のために、適切な動物モデル、例えばマウスなどの齧歯動物において致死量（ＬＤ）及びＬＤ５０を決定することにより、適切な応答を誘発する毒性、組成物（複数可）の投与量、その中の構成要素の濃度、及び組成物（複数可）の投与のタイミングを決定することが望ましい。そのような決定は、当業者の知識、本開示、及び本明細書に引用された文献からの過度の実験を必要としない。そして、過度の実験を行うことなく連続投与の時間を確認することができる。
【０３４９】
核酸配列、ベクター、細胞
【０３５０】
一実施形態では、本明細書に開示される組成物及び方法における使用のための、本明細書に記載のキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）をコードする単離された核酸配列が、本明細書に開示される。
【０３５１】
別の実施形態では、本明細書に記載のキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）をコードする核酸配列を含むベクターが、本明細書に開示される。
【０３５２】
一実施形態では、本明細書に開示される組成物及び方法における使用のための、本明細書に記載の遺伝子改変Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）をコードする単離された核酸配列が本明細書に開示される。別の実施形態では、本明細書に記載の遺伝子改変Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）をコードする核酸配列を含むベクターが、本明細書に開示される。
【０３５３】
免疫応答細胞（例えばＴ細胞、ＣＴＬ細胞、ＮＫ細胞）の遺伝子改変は、実質的に均質な細胞組成物を、組換えＤＮＡ構築物で形質導入することにより達成することができる。一実施形態では、細胞へのＤＮＡ構築物の導入のために、レトロウイルスベクター（γ−レトロウイルスまたはレンチウイルスのいずれか）を用いる。例えば、抗原（例えば腫瘍抗原、または変異体、若しくはその断片）に結合する受容体をコードするポリヌクレオチドは、レトロウイルスベクターにクローニングされることができ、発現は、その内因性プロモータ、レトロウイルスの末端反復配列、または対象の標的Ｔ細胞に特異的なプロモータから駆動され得る。非ウイルスベクターも同様に使用され得る。
【０３５４】
非ウイルスアプローチはまた、細胞内でのタンパク質の発現のために使用され得る。例えば、リポフェクション（Feigner et al., Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 84:7413, 1987; Ono et al., Neuroscience Letters 17:259, 1990; Brigham et al, Am. J. Med. Sci. 298:278, 1989; Staubinger et al, Methods in Enzymology 101 :512, 1983）、アシアロオロソムコイド−ポリリジン結合（Wu et al., Journal of Biological Chemistry 263: 14621, 1988; Wu et al., Journal of Biological Chemistry 264:16985, 1989）の存在下で核酸を投与することによって、または外科的条件下での微量注射（Wolff et al., Science 247: 1465, 1990）によって、核酸分子を細胞に導入することができる。遺伝子導入のための他の非ウイルス性手段には、リン酸カルシウム、ＤＥＡＥデキストラン、エレクトロポレーション、及びプロトプラスト融合を用いたインビトロでの遺伝子導入が含まれる。リポソームはまた、細胞へのＤＮＡ送達にとって潜在的に有益であり得る。対象の患部組織への正常遺伝子の移植は、通常の核酸をエクスビボで培養可能な細胞型（例えば、自己若しくは異種の一次細胞、またはその子孫）に移植することにより達成することができ、その後、細胞（またはその子孫）は標的組織に注射されるか、または全身に注射される。組換え受容体はまた、トランスポザーゼまたは標的ヌクレアーゼ（例えばジンクフィンガーヌクレアーゼ、メガヌクレアーゼ、またはＴＡＬＥヌクレアーゼ）を用いて送達または獲得され得る。一過性発現は、ＲＮＡエレクトロポレーションによって得られる。ポリヌクレオチド治療法での使用のためのｃＤＮＡ発現は、任意の適切なプロモータ（例えばヒトサイトメガロウイルス（ＣＭＶ）、シミアンウイルス４０（ＳＶ４０）、またはメタロチオネインプロモータ）から導かれ、任意の適切な哺乳動物調節エレメントまたはイントロン（例えば伸長因子ｌａエンハンサ／プロモータ／イントロン構造）によって調節され得る。例えば、必要に応じて、特定の細胞型において遺伝子発現を優先的に導くことが知られているエンハンサを用いて、核酸の発現を導くことができる。使用されるエンハンサには、組織特異的、または細胞特異的エンハンサとして特徴付けられるエンハンサが含まれるが、これに限定されない。あるいは、ゲノムクローンが治療用構築物として使用される場合、調節は、同種の調節配列によって、または必要に応じて、異種供給源から送達される調節配列によって媒介されることができ、上記の任意のプロモータまたは調節エレメントを含む。
【０３５５】
別の実施形態では、本明細書に開示されるキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）をコードする核酸配列を含むベクターを含む細胞が、本明細書に開示される。
【０３５６】
キット
【０３５７】
一実施形態では、キメラ抗原受容体発現Ｔ細胞（ＣＡＲ−Ｔ細胞）の癌治療を受けている対象において、サイトカイン放出症候群（ＣＲＳ）またはサイトカインストームの発生を阻害または減少させるためのキットが本明細書に開示され、前記キットは、本明細書に開示されるＣＡＲ−Ｔ細胞及びアポトーシス細胞を、別個に、または予め混合して含む。
【０３５８】
別の実施形態では、キメラ抗原受容体発現Ｔ細胞（ＣＡＲ−Ｔ細胞）の癌治療を受けている対象において、サイトカイン放出症候群（ＣＲＳ）またはサイトカインストームの発生を阻害または減少させるためのキットが本明細書に開示され、前記キットは、本明細書に開示されるＣＡＲ−Ｔ細胞及びアポトーシス細胞上清を、別個に、または予め混合して含む。
【０３５９】
新生物、病原体感染、免疫異常または同種移植の治療または予防によって、または、癌または腫瘍の治療、予防、阻害、発生の減少、寛解、または改善によって生じるサイトカイン放出症候群（ＣＲＳ）またはサイトカインストームの発生を阻害または予防するためのキットが本明細書に開示される。一実施形態では、キットは、本明細書に開示される有効量の免疫応答性細胞及びアポトーシス細胞を単位剤形で含む、治療用または予防用の組成物を含む。別の実施形態では、キットは、本明細書に開示される有効量の免疫応答性細胞及びアポトーシス細胞上清を単位剤形で含む、治療用または予防用の組成物を含む。特定の実施形態では、細胞は、共刺激リガンドをさらに含む。別の実施形態では、キットは、ＣＴＬＡ−４阻害剤、α１−アンチトリプシン、またはその断片、若しくはその類似体、テルル系化合物、または免疫調節剤、またはそれらの任意の組み合わせを含む群から選択された追加的な薬剤をさらに含む。いくつかの実施形態では、キットは、治療用または予防用ワクチンを含む滅菌容器を含み、そのような容器は、ボックス、アンプル、ボトル、バイアル、チューブ、バッグ、パウチ、ブリスターパック、または当技術分野で公知の他の適切な容器形態であり得る。そのような容器は、プラスチック、ガラス、ラミネート紙、金属箔、または医薬品を保持するのに適した他の材料で作ることができる。
【０３６０】
必要に応じて、免疫応答性細胞及びアポトーシス細胞またはアポトーシス細胞上清は、新生物、病原体感染、免疫異常または同種移植、または腫瘍若しくは癌を有するか、または発症のリスクがある対象に細胞を投与するための説明書と共に提供される。説明書は一般に、新生物、病原体感染、免疫異常、同種移植、腫瘍または癌の治療または予防のための組成物の使用に関する情報を含む。他の実施形態では、説明書は、以下の、治療薬の説明（新生物、病原体感染、免疫異常または同種移植、癌、腫瘍、またはそれらの症状の治療のための投与計画及び投与）、予防措置、警告、適応症、カウンタ表示、投与量情報、副作用、動物薬理学、臨床研究、及び／またはリファレンス、のうち少なくとも１つを含む。説明書は、容器（存在する場合）に直接印刷されるか、容器に貼られたラベルに印刷されるか、または容器に入れられた別のシート、パンフレット、カード、またはフォルダに印刷されてもよい。
【０３６１】
当業者であれば、「抗原認識受容体」という用語が、抗原結合に応答して免疫細胞（例えばＴ細胞）を活性化することができる受容体を包含し得ることを理解するであろう。例示的な抗原認識受容体は、腫瘍抗原結合ドメインが免疫細胞（例えばＴ細胞）を活性化することができる細胞内シグナル伝達ドメインに融合された、天然または内在性のＴ細胞受容体またはキメラ抗原受容体であり得る。
【０３６２】
当業者であれば、「抗体」という用語が、インタクトな抗体分子だけでなく、免疫原結合能力を保持する抗体分子の断片も意味することを理解するであろう。そのような断片も当技術分野で周知であり、インビトロ及びインビボの両方で常用される。したがって、当業者であれば、「抗体」という用語が、インタクトな免疫グロブリン分子だけでなく、周知の活性断片Ｆ（ａｂ１）２及びＦａｂも意味することを理解するであろう。Ｆ（ａｂ'）２５及びインタクトな抗体のＦｃ断片を欠くＦａｂ断片は、循環からより迅速に透明になり、インタクトな抗体の非特異的組織結合はより少なくなり得る（Wahl et al., J. Nucl. Med. 24:316-325 (1983)）。本明細書に開示される抗体は、完全な天然抗体、二重特異性抗体、キメラ抗体、Ｆａｂ、Ｆａｂ'、一本鎖Ｖ領域断片（ｓｃＦｖ）、融合ポリペプチド、及び非旧来型抗体を含む。
【０３６３】
当業者であれば、「一本鎖可変断片」すなわち「ｓｃＦｖ」という用語が、共有結合で連結してＶＨ：：ＶＬヘテロニ重体を形成する免疫グロブリンの重鎖（ＶＨ）及び軽鎖（ＶＬ）の可変領域の融合タンパク質を包含することを理解するであろう。重鎖（ＶＨ）及び軽鎖（ＶＬ）は、直接結合されるか、またはペプチドをコードするリンカー（例えば、３０、１５、２０、２５アミノ酸）によって結合され、ＶＨのＮ末端をＶＬのＣ末端に、またはＶＨのＣ末端をＶＬのＮ末端に連結するリンカーは、通常、柔軟性を有するためにグリシンが豊富であり、溶解性を有するためにセリンまたはスレオニンも豊富である。定常領域の除去及びリンカーの導入にもかかわらず、ｓｃＦｖタンパク質は、元の免疫グロブリンの特異性を保持する。一本鎖Ｆｖポリペプチド抗体は、Ｈｕｓｔｏｎらによって説明されるように、ＶＨ及びＶＬをコードする配列を含む核酸から発現され得る（Proc. Nat. Acad. Sci. USA, 85:5879-5883, 1988）。米国特許第５０９１５１３号明細書、米国特許第５１３２４０５号明細書、米国特許第４９５６７７８号明細書、及び米国特許出願公開第２００５／０１９６７５４号明細書も参照されたい。阻害活性を有するアンタゴニスト性ｓｃＦｖが説明されている（例えば、Zhao et al., Hyrbidoma (Larchmt) 2008 27(6):455-51、Peter et al., J Cachexia Sarcope ia Muscle 2012 August 12、Shieh et al., J Imunol2009 183(4):2277-85、Giomarelli et al., Thromb Haemost 2007 97(6):955-63、Fife eta., J Clin Invst 2006 1 16(8):2252-61、Brocks et al., Immunotechnology 1997 3(3):173-84、Moosmayer et al., Ther Immunol 1995 2(10:31-40)を参照されたい）。刺激活性を有するアゴニスト性ｓｃＦｖが説明されている（例えば、Peter et al., J Biol Chem 2003 25278(38):36740-7、Xie et al, Nat Biotech 1 97 15(8):768-71、Ledbetter et al., Crit Rev Immunol l997 1 (5-6) -.427-55、Ho et al., BioChim Biophys Acta 2003 1638(3):257-66を参照されたい）。
【０３６４】
「親和性」とは、結合強度の尺度を意味する。いかなる理論に拘束されるものではないが、親和性は、抗体結合部位と抗体決定基との間の立体化学的適合の近さ、それらの接触面積の大きさ、及び、荷電及び疎水性基の分布に依存する。親和性は、可逆的複合体の形成後の抗原−抗体結合の強さを指す「結合力」という用語も含む。抗原に対する抗体の親和性を計算する方法は、当技術分野で公知であり、親和性を計算するための結合実験の使用を含む。機能アッセイ（例えば、フローサイトメトリーアッセイ）における抗体活性はまた、抗体親和性を反映する。抗体及び親和性は、機能アッセイ（例えば、フローサイトメトリーアッセイ）を使用して表現型的に特徴付け、及び比較することができる。
【０３６５】
当業者であれば、「キメラ抗原受容体」すなわち「ＣＡＲ」が、免疫細胞を活性化または刺激することができる細胞内シグナル伝達ドメインに融合された抗原結合ドメインを包含し得ることを理解するであろう。一実施形態では、ＣＡＲの細胞外結合ドメインは、マウスまたはヒト化モノクローナル抗体の可変重鎖及び軽鎖領域の融合に由来する一本鎖可変断片（ｓｃＦｖ）から成る。あるいは、様々な実施形態において、Ｆａｂ'から得られるｓｃＦｖ（抗体の代わりに、例えばＦａｂライブラリから得られる）が使用されてもよく、このｓｃＦｖは、膜貫通ドメインに融合され、その後細胞内シグナル伝達ドメインに融合される。様々な実施形態において、ＣＡＲは、抗原に対する高い親和性または結合活性を有するべく選択される。
【０３６６】
ポリペプチド及び類似体
【０３６７】
本明細書に開示される方法には、アンチＭＵＣ１、ＣＤ２８、ＣＤ３σ、及び、免疫応答細胞において発現される場合にその抗新生物活性（例えばヒト化モノクローナル抗体）を増強するように修飾された様々なｓｃＦｖポリペプチドまたはその断片も含まれる。特定の実施形態では、本明細書に開示される方法は、アミノ酸配列または核酸配列を、配列の改変を生成することによって最適化することを含む。そのような改変は、特定の突然変異、欠失、挿入、または翻訳後修飾を含み得る。本明細書に提供される開示は、本明細書に開示される、天然に存在する任意のポリペプチドの類似体をさらに含む。類似体は、アミノ酸配列の相違、翻訳後修飾、またはその両方によって、本明細書に開示される天然に存在するポリペプチドとは異なっていてもよい。本明細書に開示される類似体は一般的に、本明細書に開示される天然に存在するアミノ酸配列の全てまたは一部と、少なくとも８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上同一であることを明示する。配列比較の長さは、少なくとも５、１０、１５、または２０アミノ酸残基である。別の実施形態では、少なくとも２５、５０、または７５アミノ酸残基である。さらに別の実施形態では、１００を超えるアミノ酸残基である。さらに、同一性の程度を決定するための例示的アプローチでは、ｅ−３とｅ−１００との間の確率スコアが密接に関連する配列を示すＢＬＡＳＴプログラムを使用することができる。修飾にはインビボ及びインビトロでのポリペプチドの化学的誘導体化、例えばアセチル化、カルボキシル化、リン酸化、またはグリコシル化が含まれ、そのような修飾は、ポリペプチド合成またはポリペプチドプロセシング中に、または単離された修飾酵素での処理後に生じ得る。類似体はまた、本明細書に開示される天然に存在するポリペプチドとは、一時配列の改変によって異なる可能性がある。これらは、天然及び誘導の両方の遺伝的変異体を含む（例えば、Sambrook, Fritsch and Maniatis, Molecular Cloning: A Laboratory Manual (2d ed.), CSH Press, 1989、または前述のAusubelらによって説明されているように、照射またはエタンメチル硫酸塩への曝露によるランダム突然変異誘発から、または部位特異的突然変異誘発に起因する）。また、Ｌ−アミノ酸以外の残基、例えばＤ−アミノ酸、天然に存在しないアミノ酸、または合成アミノ酸、例えばβアミノ酸またはγアミノ酸を含む、環化ペプチド、分子、及び類似体も含まれる。
【０３６８】
非タンパク質類似体は、本明細書に開示されるタンパク質の機能活性を模倣すべく設計された化学構造を有する。そのような類似体は、本明細書に開示される方法にしたがって投与される。そのような類似体は、元のポリペプチドの生理活性を超える可能性がある。類似体設計の方法は当技術分野において周知であり、得られた類似体が免疫応答細胞で発現されたときに元のポリペプチドの抗新生物活性を増加させるように化学構造を改変することにより、このような方法にしたがって類似体の合成を行うことができる。これらの化学修飾には、代替のＲ基を置換し、基準ポリペプチドの特定の炭素原子における飽和度を変化させることが含まれるが、これに限定されない。別の実施形態では、タンパク質類似体は、インビボでの分解に対して比較的耐性を有し、投与の際により延長された治療効果をもたらす。機能活性を測定するためのアッセイには、以下の実施例において説明されるアッセイが含まれるが、これに限定されない。
【０３６９】
「免疫抑制活性」という用語は、シグナル伝達の誘導、または免疫反応の低下をもたらす細胞（例えば活性化免疫応答細胞）におけるタンパク質発現の変化を表す。結合を介して免疫応答を抑制または減少させることが知られているポリペプチドには、ＣＤ４７、ＰＤ−１、ＣＴＬＡ−４、及びそれらの対応するリガンドであるＳＩＲＰａ、ＰＤ−Ｌ１、ＰＤ−Ｌ２、Ｂ７−１、及びＢ７−２が含まれる。このようなポリペプチドは、腫瘍の微小環境に存在し、新生細胞に対する免疫応答を阻害する。様々な実施形態において、免疫抑制ポリペプチド、及び／またはそれらのリガンドの相互作用を阻害、遮断、または拮抗することにより、免疫応答細胞の免疫応答が増強される。
【０３７０】
「免疫賦活活性」という用語は、シグナル伝達の誘導、または細胞（例えば、活性化免疫応答細胞）におけるタンパク質発現の変化が、免疫応答の増加をもたらすことを表す。免疫刺激活性には、炎症性活性が含まれ得る。結合を介して免疫応答を刺激または増加させることが知られているポリペプチドには、ＣＤ２８、ＯＸ−４０、４−ＩＢＢ、及びそれらの対応するリガンドであるＢ７−１、Ｂ７−２、ＯＸ−４０Ｌ、及び４−１ＢＢＬが含まれる。このようなポリペプチドは、腫瘍の微小環境に存在し、新生細胞に対する免疫応答を活性化する。様々な実施形態において、炎症誘発ポリペプチド、及び／またはそれらのリガンドを促進、誘発、または刺激することにより、免疫応答細胞の免疫応答が増強される。
【０３７１】
本明細書に開示される方法において有用な核酸分子は、本明細書に開示されるポリペプチドまたはその断片をコードする任意の核酸分子を含む。このような核酸分子は、内因性核酸配列と１００％同一である必要はないが、一般的には実質的同一性を示す。内因性配列との「実質的同一性」を有するポリヌクレオチドは、一般的には、二本鎖核酸分子の少なくとも１つの鎖とハイブリダイズすることができる。「ハイブリダイズ」とは、ストリンジェンシーの様々な条件下で、相補的ポリヌクレオチド配列（例えば、本明細書に記載の遺伝子）またはその一部の間に二本鎖分子を形成する対を意味する（例えば、Wahl, G. M. and S. L. Berger (1987) Methods Enzymol. 152:399、immel, A. R. (1987) Methods Enzymol. 152:507を参照されたい）。
【０３７２】
当業者であれば、「実質的に同一」という用語が、基準アミノ酸配列（例えば、本明細書に記載のアミノ酸配列のうち任意の１つ）、または核酸配列（例えば、本明細書に記載の核酸配列のうち任意の１つ）と少なくとも５０％の同一性を示すポリペプチドまたは核酸分子を含有し得ることを理解するであろう。一実施形態では、そのような配列は、比較のために使用される配列と、アミノ酸レベルまたは核酸レベルにおいて少なくとも６０％、８０％、または８５％、９０％、９５％、さらには９９％同一である。
【０３７３】
配列同一性は、一般的には、配列分析ソフトウェア（例えば、米国ウィスコンシン州マディソン所在のジェネティクス・コンピュータ・グループ社（Genetics Computer Group）、ウィスコンシン大学バイオテクノロジー・センター（Biotechnology Center）による配列分析ソフトウェアパッケージ、ＢＬＡＳＴ、ＢＥＳＴＦＩＴ、ＧＡＰまたはＰＩＬＥＵＰ／ＰＲＥＴＴＹＢＯＸプログラム）を使用して測定される。そのようなソフトウェアは、様々な置換、欠失、及び／または他の修飾に相同性の程度を割り当てることによって、同一または類似の配列を一致させる。保存的置換は、一般的に、以下の群、すなわち、グリシン、アラニン、バリン、イソロイシン、ロイシン、アスパラギン酸、グルタミン酸、アスパラギン、グルタミン、セリン、スレオニン、リジン、アルギニン、フェニルアラニン、チロシン、の中での置換を含む。同一性の程度を決定するための例示的なアプローチでは、ｅ−３とｅ−１００との間の確率スコアが密接に関連する配列を示すＢＬＡＳＴプログラムが使用され得る。
【０３７４】
当業者であれば、「類似体」という用語が、基準ポリペプチドまたは核酸分子の機能を有する、構造的に関連するプリペプチドまたは核酸分子を包含し得ることを理解するであろう。
【０３７５】
当業者であれば、「リガンド」という用語が、受容体に結合する分子を包含し得ることを理解するであろう。特に、リガンドは、細胞間認識及び／または相互作用を可能にする別の細胞の受容体に結合する。
【０３７６】
当業者であれば、「構成的発現」という用語が、全ての生理学的条件下での発現を包含し得ることを理解するであろう。
【０３７７】
当業者であれば、「疾患」という用語が、細胞、組織または器官の正常な機能を損ねるか、または妨害する任意の状態または障害を包含し得ることを理解するであろう。疾患の例には、新生物または細胞の病原体感染が含まれる。
【０３７８】
当業者であれば、「有効量」という用語が、治療効果を有するのに十分な量を包含し得ることを理解するであろう。一実施形態では、「有効量」は、新生物の継続的な増殖、成長、または転移（例えば、侵入または移動）を阻止、改善、または阻害するのに十分な量である。
【０３７９】
当業者であれば、「新生物」という用語が、細胞または組織の病理学的増殖、及びその後の他の組織または器官への移動または侵入を特徴とする疾患を包含し得ることを理解するであろう。新生物の成長は、一般的には制御されず、進行性であり、正常細胞の増殖を誘発しないか、または停止を引き起こす条件化で起きる。新生物は、様々な細胞型、組織、または器官に影響を与える可能性があり、骨、脳、乳房、軟骨、グリア、食道、卵管、胆嚢、心臓、腸、腎臓、肝臓、肺、リンパ節、神経組織、卵巣、膵臓、前立腺、骨格筋、皮膚、脊髄、脾臓、胃、精巣、胸腺、甲状腺、器官、尿生殖路、尿管、尿道、子宮、及び膣、またはそれらの組織若しくは細胞型を含む群から選択される器官を含むが、これに限定されない。新生物には、肉腫、癌腫、または形質細胞腫（形質細胞の悪性腫瘍）などの癌が含まれる。
【０３８０】
当業者であれば、「病原体」という用語が、病気を引き起こすことができるウイルス、バクテリア、真菌、寄生虫または原虫を包含し得ることを理解するであろう。
【０３８１】
当業者であれば、「腫瘍抗原」または「腫瘍関連抗原」という用語が、正常、または非ＩＳ新生物細胞と比較して、腫瘍細胞上で一意に、または差次的に発現される抗原（例えばポリペプチド）を包含し得ることを理解するであろう。本明細書に開示される組成物及び方法に関して、腫瘍抗原は、抗原認識受容体（例えば、ＣＤ１９、ＭＵＣＩ）を介して免疫応答を活性化または誘導することができるか、または受容体−リガンド結合（例えば、ＣＤ４７、ＰＤ−Ｌ１／Ｌ２、Ｂ７．１／２）を介して免疫応答を抑制することができる腫瘍によって発現される任意のポリペプチドを含む。
【０３８２】
当業者であれば、「ウイルス抗原」という用語が、免疫応答を誘導することができるウイルスによって発現されるポリペプチドを包含し得ることを理解するであろう。
【０３８３】
「含む（comprises）」、「含んでいる（comprising）」という用語は、米国特許法においてそれらに帰する広い意味を有することが意図され、「含む（includes）」、「含んでいる（including）」などを意味することができる。同様に、「から成る（consists of）」、「本質的に〜から成っている（consisting essentially of）」という用語は、米国特許法においてそれらに帰する意味を有する。本明細書に開示される組成物及び方法は、活性成分または特定のステップを含むか、活性成分または特定のステップから成るか、または本質的に活性成分または特定のステップから成るかのいずれかのように想起される。
【０３８４】
当業者であれば、「治療」という用語が、治療される固体または細胞の疾患経過を変化させる試みにおける臨床的介入を包含し得、予防のため、または臨床病理の経過の間のいずれかに実施され得ることを理解するであろう。治療の効果には、疾患の発生または再発の予防、症状の緩和、疾患の直接的または間接的な病理学的結果の減少、転移の予防、疾患の進行速度の低下、疾患状態の改善または緩和、及び緩和または改善された予後を含むが、これに限定されない。疾患または障害の進行を予防することにより、治療は、罹患したまたは診断された対象、またはその障害を有すると疑われる対象における障害による悪化を防ぐことができ、治療はまた、障害のリスクのある対象、または障害を有すると疑われる対象における障害の発症または症状を予防することができる。
【０３８５】
当業者であれば、「対象」という用語が脊椎動物を、一実施形態では哺乳動物を、一実施形態ではヒトを包含し得ることを理解するであろう。対象はまた、一実施形態では、ウシ、ヒツジ、ウマ、ネコ、イヌ、及び実験動物であるマウス、ラット、アレチネズミ、ハムスターなどを含む家畜を指していてもよい。
【０３８６】
一実施形態では、ＣＡＲが目的のペプチドに向けられたＣＡＲ−Ｔ細胞が本明細書に開示される。一実施形態では、ＣＡＲは目的のペプチドに結合する。別の実施形態では、ＣＡＲは目的のペプチドを標的とする。別の実施形態では、ＣＡＲは目的のペプチドを活性化する。別の実施形態では、ＣＡＲは目的のペプチドのリガンドである。これらの実施形態の各々は、本明細書に開示される一部と見なされるべきである。
【０３８７】
一実施形態では、本明細書に開示される免疫細胞は、Ｔ細胞ではない。別の実施形態では、本明細書に開示される免疫細胞は、ＮＫ細胞ではない。別の実施形態では、本明細書に開示される免疫細胞は、ＣＴＬではない。別の実施形態では、本明細書に開示される免疫細胞は、制御性Ｔ細胞ではない。別の実施形態では、免疫細胞はヒト胚性幹細胞ではない。別の実施形態では、免疫細胞はリンパ系細胞が分化され得る多能性幹細胞ではない。
【０３８８】
使用方法
【０３８９】
免疫療法に対する１つのアプローチは、患者自身の免疫細胞を操作し、腫瘍を認識して攻撃する遺伝子改変免疫細胞を生み出すことを含む。本明細書に記載のように、免疫細胞は収集、及び遺伝子改変され、例えば免疫細胞、例えばＴ細胞が腫瘍または癌細胞上の特異的タンパク質抗原を認識することを可能にするキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）がその細胞表面上に産生される。その後、遺伝子改変免疫細胞、例えばＣＡＲ−Ｔ細胞の増殖集団を患者に投与する。一実施形態では、投与された細胞は患者の体内で増殖し、その表面上に抗原を有する癌及び腫瘍細胞を認識して死滅させる。別の実施形態では、投与された細胞は患者の体内で増殖し、腫瘍関連抗原を認識して死滅させ、癌及び腫瘍細胞の死をもたらす。
【０３９０】
一実施形態では、ＣＡＲ−Ｔ細胞癌療法を受ける対象におけるサイトカイン放出症候群またはサイトカインストームの発生を阻害または低減する方法、及びサイトカイン放出症候群またはサイトカインストームを発症する対象におけるサイトカイン産生を減少または阻害する方法が開示され、前記方法は、アポトーシス細胞またはアポトーシス細胞の上清を含む組成物を投与するステップを含む。別の実施形態では、ＣＡＲ−Ｔ細胞療法を受ける対象におけるサイトカイン放出症候群またはサイトカインストームを治療する方法が本明細書に開示される。別の実施形態では、ＣＡＲ−Ｔ細胞療法を受ける対象におけるサイトカイン放出症候群またはサイトカインストームを予防する方法が本明細書に開示される。別の実施形態では、ＣＡＲ−Ｔ細胞療法を受ける対象におけるサイトカイン放出症候群またはサイトカインストームを緩和する方法が本明細書に開示される。別の実施形態では、ＣＡＲ−Ｔ細胞療法を受ける対象におけるサイトカイン放出症候群またはサイトカインストームを改善する方法が本明細書に開示される。別の実施形態では、アポトーシス細胞またはアポトーシス細胞上清またはその組成物の投与は、ＣＡＲ−Ｔ細胞療法の有効性を低下させることはない。
【０３９１】
一実施形態では、キメラ抗原受容体発現Ｔ細胞（ＣＡＲ−Ｔ細胞）癌療法を受ける対象におけるサイトカイン放出症候群またはサイトカインストームの発生を阻害または低減する方法が開示され、前記方法は、アポトーシス細胞またはアポトーシス細胞上清またはその組成物を含む組成物を投与するステップを含む。別の実施形態では、サイトカイン放出症候群（ＣＲＳ）またはサイトカインストームの発生を阻害または低減することを、キメラ抗原受容体発現Ｔ細胞癌療法を受けている対象におけるサイトカインレベルを測定し、アポトーシス細胞またはアポトーシス細胞上清を投与することによって決定する。別の実施形態では、測定されたサイトカインのレベルを、ＣＡＲ−Ｔ細胞癌療法を受けていない対象におけるサイトカインレベルと比較する。別の実施形態では、測定されたサイトカインレベルを、アポトーシス細胞またはアポトーシス細胞上清を投与しない対象におけるサイトカインレベルと比較する。さらに別の実施形態では、測定されたサイトカインレベルを、対照の対象と比較する。
【０３９２】
別の実施形態では、炎症性サイトカインのレベルは、ＣＡＲ−Ｔ細胞癌療法を受け、かつ前記アポトーシス細胞または前記アポトーシス細胞上清またはその組成物を投与されていない対象と比較して減少する。別の実施形態では、本明細書に開示される方法は、ＣＡＲ−Ｔ細胞癌療法を受け、かつ前記アポトーシス細胞または前記アポトーシス細胞上清またはその組成物を投与されていない対象と比較して、少なくとも１つの炎症性サイトカインの産生レベルを低下または阻害する。
【０３９３】
別の実施形態では、本明細書に開示される方法は、追加的な薬剤の投与をさらに含み得る。あるいは、本明細書に開示される方法は、アポトーシス細胞またはアポトーシス細胞上清ではない追加的な薬剤の投与を含み得る。さらに別の実施形態では、追加的な薬剤は、ＣＡＲ−Ｔ細胞癌療法を増強または改善する化合物または組成物、またはそれらの任意の組み合わせであり得る。さらに別の実施形態では、ＣＡＲ−Ｔ細胞癌療法を増強または改善する追加的な薬剤は、ＣＴＬＡ−４阻害剤、α１−アンチトリプシンまたはその機能性断片、またはその類似体、テルル系化合物、または免疫調節剤、またはそれらの任意の組み合わせを含む。別の実施形態では、追加的な薬剤は、アポトーシス細胞またはアポトーシス細胞上清を含む。別の実施形態では、本明細書に記載の追加的な薬剤の投与は、前記ＣＡＲ−Ｔ細胞癌療法の前に、同時に、または後に行われる。
【０３９４】
一実施形態では、ＩＬ−６受容体アンタゴニストは、一実施形態ではトシリズマブであり、本明細書に開示される組成物及び方法と共に使用される。
【０３９５】
一実施形態では、養子移入されたＴ細胞は、リンパ球性宿主においてより効率的に移植及び増殖する。したがって、一実施形態では、対象はＣＡＲ−Ｔ細胞または他の改変免疫細胞の移入の前にリンパ球の枯渇に陥る。別の実施形態では、ＣＡＲ−Ｔ細胞を受ける対象にＴ細胞支持性サイトカインが投与される。
【０３９６】
一実施形態では、Ｔ細胞はエフェクターＴ細胞である。別の実施形態では、Ｔ細胞はナイーブＴ細胞である。別の実施形態では、Ｔ細胞はセントラルメモリー（ＴＣＭ）Ｔ細胞である。別の実施形態では、Ｔ細胞はＴｈ１７細胞である。別の実施形態では、Ｔ細胞は幹細胞様メモリーＴ細胞である。別の実施形態では、Ｔ細胞は高い複製能を有する。別の実施形態では、Ｔ細胞増殖が患者において起きる。別の実施形態では、少数の細胞を患者に移入することができる。別の実施形態では、Ｔ細胞増殖はインビトロで起こる。別の実施例では、多数の細胞を患者に移入し、細胞及び／または上清、またはそれらの組み合わせを患者に複数回移入することができる。
【０３９７】
一実施形態では、ＣＡＲ−Ｔ細胞の利点は、ＣＡＲ−Ｔ細胞が細胞表面分子に特異的であるため、ＭＨＣ拘束性ＴＣＲ認識の制約を克服し、抗原提示またはヒト血球抗原発現の障害による腫瘍逃避を回避することである。
【０３９８】
一実施形態では、対象において腫瘍負荷を低減する方法が本明細書に開示され、前記方法は、本明細書に記載の任意の組成物を前記対象に投与するステップを含む。
【０３９９】
一実施形態では、腫瘍負荷を低減することは、対象の腫瘍細胞の数を減少させることを含む。別の実施形態では、腫瘍負荷を低減することは、対象の腫瘍サイズを減少させることを含む。別の実施形態では、腫瘍負荷を低減することは、対象の腫瘍を根絶することを含む。
【０４００】
別の実施形態では、対象において腫瘍細胞死を誘導する方法が本明細書に開示され、前記方法は、本明細書に記載の任意の組成物を前記対象に投与するステップを含む。別の実施形態では、対象において腫瘍細胞死を誘導するための本明細書に記載の方法は、対象において毒性サイトカイン放出、または「サイトカイン放出症候群（ＣＲＳ）」または「サイトカインストーム（ｓＣＲＳ）」を低減させるための少なくとも１つの追加的な薬剤を有する、操作されたキメラ抗原受容体を含む、ＮＫ細胞またはＴ細胞を含む。
【０４０１】
別の実施形態では、新生物を有する対象の生存を増加または延長する方法が本明細書に開示され、本明細書に記載の任意の組成物を前記対象に投与する方法が含まれる。別の実施形態では、対象の生存を増加または延長させる方法は、対象において毒性サイトカイン放出、すなわち「サイトカイン放出症候群（ＣＲＳ）」または「重度のサイトカイン放出症候群（ｓＣＲＳ）」または「サイトカインストーム」を低減させるための少なくとも１つの追加的な薬剤を有する、遺伝子操作されたキメラ抗原受容体を含む、ＮＫ細胞またはＴ細胞を含む。
【０４０２】
別の実施形態では、新生物を有する対象の生存を増加または延長させる方法が本明細書に開示され、本明細書に記載の任意の組成物を前記対象に投与するステップを含む。
【０４０３】
別の実施形態では、対象において新生物を防ぐ方法が本明細書に開示され、前記方法は本明細書に記載の任意の組成物を前記対象に投与するステップを含む。
【０４０４】
一実施形態では、新生物は、血液癌、Ｂ細胞性白血病、多発性骨髄腫、リンパ芽急性白血病（ＡＬＬ）、慢性リンパ球性白血病、非ホジキンリンパ腫、卵巣癌、またはそれらの組み合わせから成る群から選択される。
【０４０５】
別の実施形態では、それらを必要とする対象において血液癌を治療する方法が本明細書に開示され、本明細書に記載の任意の組成物を前記対象に投与するステップを含む。一実施形態では、血液癌は、Ｂ細胞白血病、多発性骨髄腫、急性リンパ芽急性白血病（ＡＬＬ）、慢性リンパ球性白血病、及び非ホジキンリンパ腫から成る群から選択される。
【０４０６】
一実施形態では、サイトカイン放出症候群またはサイトカインストームを発症するか、またはサイトカイン放出症候群またはサイトカインストームを罹患しやすい対象におけるサイトカイン産生を減少または阻害する方法は、本明細書に開示されるように、サイトカイン産生を減少または阻害する。別の実施形態では、この方法は、炎症性サイトカイン産生を減少または阻害する。さらなる実施形態では、この方法は、少なくとも１つの炎症性サイトカインを減少させるか、または阻害する。別の実施形態では、対象はＣＡＲ−Ｔ細胞癌療法を受けており、この方法はＣＡＲ−Ｔ細胞癌療法の有効性を低下させない。
【０４０７】
本明細書で提供される方法は、所望の効果、すなわち既存の状態の緩和、または再発の予防を達成するのに有効な量で、本明細書に開示されるＴ細胞、ＮＫ細胞、またはＣＴＬ細胞を投与することを含む。治療のために投与される量は所望の効果を生じるのに有効な量である。有効量を、１回または一連の投与で提供することができる。ボーラスまたは連続灌流によって有効量を提供することができる。
【０４０８】
当業者であれば、「有効量」（または「治療的有効量」）は、治療の際に有益な、または所望の臨床効果を達成するのに十分な量を包含し得ることを認識するであろう。有効量を、１回以上の用量で対象に投与することができる。治療に関して、有効量は、疾患の進行を緩和、改善、安定化、逆行、または遅らせるか、そうでなければ疾患の病理学的結果を減少させるのに十分な量である。有効量は、一般的に事例ごとに医師によって決定され、当業者の技術範囲内である。有効量を達成するための適切な投薬量を決定する際、いくつかの要因が一般的に考慮される。これらの要因には、対象の年齢、性別及び体重、治療される状態、状態の重症度、及び投与される抗原結合断片の形態及び有効濃度が含まれる。
【０４０９】
抗原特異的Ｔ細胞、例えばＣＡＲ−Ｔ細胞を用いる養子免疫療法では、１０６〜１０１０（例えば１０９）の範囲の細胞が一般的に注射される。遺伝子改変された細胞の宿主への投与、及びその後の分化に際し、特異的抗原に対して特異的に向けられるＴ細胞が誘導される。Ｔ細胞の「誘導」は、欠失またはアネルギーなどによる抗原特異的Ｔ細胞の不活性化を含む。不活性化は、自己免疫異常などにおける耐性を確立または再確立するのに特に有用である。修飾された細胞は、静脈内、皮下、結節内、腫瘍内、髄腔内、胸腔内、腹腔内、及び胸腺に直接的に投与することを含む、当技術分野で周知の任意の方法によって投与されるが、これに限定されない。一実施形態では、Ｔ細胞は腹腔内に投与されない。一実施形態では、Ｔ細胞は腫瘍内に投与される。
【０４１０】
本明細書に開示される遺伝子改変免疫応答細胞（例えばＴ細胞、Ｎ細胞、ＣＴＬ細胞、またはそれらの前駆細胞）を含む組成物は、新生物、病原体感染、または感染症の治療のために、全身的または直接的に対象に提供され得る。一実施形態では、本明細書に開示される細胞は、目的の器官（例えば、新生物によって影響を受ける器官）に直接注射される。あるいは、遺伝子改変された免疫応答細胞を含む組成物は、例えば、循環系（例えば、腫瘍血管系）への投与によって目的の器官へ間接的に提供される。増殖及び分化剤は、インビトロまたはインビボでＴ細胞、ＮＫ細胞、ＣＴＬ細胞の産生を増加させるために細胞の投与前、投与中、または投与後に提供され得る。
【０４１１】
修飾された細胞は、細胞が再生または分化のための適切な部位（例えば、胸腺）を見つけ出すことができる骨または他の都合のよい部位にも導入され得るが、任意の生理学的に許容されるビヒクルで、通常は血管内に投与され得る。通常、少なくとも１×１０５の細胞が投与され、最終的には１×１０１０、またはそれ以上に達する。本明細書に開示された遺伝子改変免疫応答細胞は、精製された細胞手段を含み得る。当業者であれば、蛍光活性化セルソーティング（ＦＡＣＳ）などの様々な周知の方法を用いて、集団における遺伝子改変免疫応答細胞のパーセンテージを容易に決定することが可能であろう。いくつかの実施形態では、遺伝子改変免疫応答細胞を含む集団における純度の範囲は、約５０〜約５５％、約５５〜約６０％、及び約６５％〜約７０％である。他の実施形態では、純度は約７０〜約７５％、約７５〜約８０％、約８０％〜約８５％である。さらなる実施形態では、純度は約８５〜約９０％、約９０〜約９５％、及び約９５％〜約１００％である。投薬量は、当業者によって容易に製剤化され得る（例えば、純度の低下は投薬量の増加を必要とし得る）。細胞は、注射、カテーテルなどによって導入され得る。必要に応じて、インターロイキン、例えばＩＬ−２、ＩＬ−３、ＩＬ−６、ＩＬ−１１、ＩＬ７、ＩＬ１２、ＩＬＩＳ、ＩＬ２１、及び他のインターロイキン、Ｇ−、Ｍ−、及びＧＭ−ＣＳＦなどのコロニー刺激因子、インターフェロン、例えばγインターフェロン及びエリスロポエチンを含む因子が含まれ得るが、これに限定されない。
【０４１２】
組成物には、遺伝子改変免疫応答細胞またはその前駆細胞、及び薬学的に許容される担体を含む医薬組成物が含まれる。投与は、自己または異種であり得る。例えば、免疫応答細胞または前駆細胞は、１つの対象から得られ、同じ対象、または異なる適合性の対象に投与され得る。本明細書に開示される末梢血由来の免疫応答細胞またはその子孫（例えば、インビトロ、エクスビボ、またはインビトロ由来）は、カテーテル投与、全身注射、局所注射、静脈内注射、または非経口投与を含む局所注射を介して投与され得る。
【０４１３】
別の実施形態では、本明細書に開示されるＣＡＲ−Ｔ細胞または他の免疫細胞、及びアポトーシス細胞またはアポトーシス細胞上清を含む組成物の産生方法が本明細書に開示され、前記方法はＴ細胞または免疫細胞に、目的の抗原に結合するＣＡＲをコードする核酸配列を導入することを含む。別の実施形態では、本明細書に開示されるＣＡＲ−Ｔ細胞または他の免疫細胞を含む組成物は、アポトーシス細胞またはアポトーシス細胞上清を含む組成物とは別個である。
【０４１４】
当業者であれば、遺伝子改変免疫細胞、例えばＣＡＲ改変Ｔ細胞によって誘発された抗腫瘍免疫応答が、活性または受動免疫応答であり得ることを理解するであろう。さらに、ＣＡＲ媒介性免疫応答は、ＣＡＲ改変Ｔ細胞がＣＡＲ中の抗原結合部分に特異的な免疫応答を誘導する養子免疫療法アプローチの一部であり得る。
【０４１５】
当業者であれば、免疫療法が、免疫エフェクター細胞及び分子を用いて癌細胞を標的化及び破壊することを包含し得ることを理解するであろう。免疫エフェクターは、例えば、腫瘍細胞の表面上のいくつかのマーカーに特異的な抗体であり得る。抗体は単独では、治療のエフェクターとして働くことができるか、または実際に細胞死をもたらすために他の細胞を補充することができる。抗体はまた、薬物または毒素（化学療法剤、放射性核種、リシンＡ鎖、コレラ毒素、百日咳毒素など）にコンジュゲートされることができ、単に標的剤として役立つこともできる。あるいは、エフェクターは、腫瘍細胞標的と直接的または間接的に相互作用する表面分子を有するリンパ球であってもよい。様々なエフェクター細胞には、細胞傷害性Ｔ細胞及びＮＫ細胞が含まれる。
【０４１６】
悪性腫瘍
【０４１７】
いくつかの実施形態では、ＣＡＲ−Ｔ細胞は、癌または腫瘍の治療、予防、阻害、発症の低減、改善または緩和の方法で利用され、前記方法は、キメラ抗原受容体発現Ｔ細胞（ＣＡＲ−Ｔ細胞）を投与するステップを含む。本明細書に開示されるように、これらの方法は、ＣＲＳまたはサイトカインストームの発症を阻害または減少させるための、追加的な薬剤の投与をさらに含む。
【０４１８】
一実施形態では、癌はＢ細胞悪性腫瘍である。一実施形態では、Ｂ細胞悪性腫瘍は白血病である。別の実施形態では、Ｂ細胞悪性腫瘍は、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）である。別の実施形態では、Ｂ細胞悪性腫瘍は、慢性リンパ球性白血病である。
【０４１９】
一実施形態では、癌は白血病である。一実施形態では、癌はリンパ腫である。一実施形態では、リンパ腫は大細胞型Ｂ細胞リンパ腫である。
【０４２０】
一実施形態では、腫瘍は固形腫瘍である。別の実施形態では、固形腫瘍は、嚢腫または液体領域を欠く異常な組織の塊である。別の実施形態では、固形腫瘍は、血液、骨髄またはリンパ球以外の体細胞組織の異常増殖によって形成される新生物（細胞の新生物）または病変（解剖学的構造の損傷または生理学的機能の障害）である。別の実施形態では、固形腫瘍は、肝臓、結腸、乳房または肺などの異なる組織型に由来する可能性のある、異常な細胞の塊から成り、その細胞起源の器官で最初に増殖する。しかし、このような癌は、疾患の進行したステージで転移性腫瘍の成長により、他の器官に広がる可能性がある。
【０４２１】
一実施形態では、腫瘍は固形腫瘍である。別の実施形態では、固形腫瘍の例は、肉腫、癌腫及びリンパ腫である。
【０４２２】
別の実施形態では、固形腫瘍は、副腎皮質腫瘍（腺腫及び癌腫）、癌腫、直腸結腸癌、類腱腫、線維形成性小円形細胞腫瘍、内分泌腫瘍、ユーイング肉腫、胚細胞腫瘍、肝芽腫、肝細胞癌、黒色腫、神経芽細胞腫、骨肉腫、網膜芽細胞腫、横紋筋肉腫、横紋筋肉腫以外の軟部肉腫、及びウィルムス腫瘍を含む。一実施形態では、固形腫瘍は乳房腫瘍である。別の実施形態では、固形腫瘍は前立腺癌である。別の実施形態では、固形腫瘍は大腸癌である。一実施形態では、腫瘍は脳腫瘍である。別の実施形態では、腫瘍は膵臓腫瘍である。別の実施形態では、腫瘍は直腸結腸腫瘍である。
【０４２３】
別の実施形態において、本明細書に開示される組成物及び方法は、肉腫及び癌腫（例えば、線維肉腫、粘液肉腫、脂肪肉腫、軟骨肉腫、骨肉腫、脊索腫、血管肉腫、内皮肉腫、リンパ管肉腫、リンパ管内皮肉腫、滑膜腫、中皮腫、ユーイング肉腫、平滑筋肉腫、横紋筋肉腫、結腸癌、膵臓癌、乳癌、卵巣癌、前立腺癌、扁平上皮癌、基底細胞癌、腺癌、汗腺癌、脂腺癌、乳頭癌、乳頭腺癌、嚢胞腺癌、髄様癌、気管支原性癌、腎細胞癌、肝癌、胆管癌、絨毛癌、精上皮腫、胎生期癌、ウィルムス腫瘍、子宮頸癌、子宮癌、精巣癌、肺癌、小細胞肺癌、膀胱癌、上皮癌、神経膠腫、星細胞腫、髄芽腫、頭蓋咽頭腫、上衣腫、松果体腫、血管芽腫、聴神経腫、乏突起膠腫、シュワン細胞腫、髄膜腫、黒色腫、神経芽腫、及び網膜芽腫）に対して治療的、及び／または予防的有効性を有する。本明細書に開示される組成物及び方法は、当該分野で周知の任意の固形腫瘍を治療、予防、阻害、改善、発症の減少、または緩和するために使用され得る。
【０４２４】
別の実施形態では、腫瘍は血液腫瘍である。一実施形態では、血液腫瘍は、血液、髄液、及びリンパ節に影響を与える癌のタイプである。血液腫瘍は、２つの主要な血液細胞系、すなわち骨髄系細胞株及びリンパケイ細胞株のいずれかから誘導され得る。骨髄系細胞株は、通常、顆粒球、赤血球、血小板、マイクロファージ、及びｍａｓＴ細胞を産生するが、リンパ球細胞系は、Ｂ細胞、ＮＫ細胞、及び形質細胞を産生する。リンパ腫（例えば、ホジキンリンパ腫）、リンパ球性白血病、及び骨髄腫は、リンパ系統に由来するが、急性及び慢性骨髄白血病（ＡＭＬ、ＣＭＬ）、骨髄異形成症候群、及び骨髄増殖性疾患は、骨髄由来である。
【０４２５】
別の実施形態では、本明細書に開示される組成物及び方法は、白血病（例えば、急性白血病、急性リンパ球性白血病、急性骨髄性白血病、急性骨髄芽球性白血病、急性前骨髄球性白血病、急性骨髄単球性白血病、急性単球性白血病、急性赤白血病、慢性白血病、慢性リンパ球性白血病）、真性多血症、リンパ腫（ホジキン病、非ホジキン病）、ワルデンストレーム高ガンマグロブリン血症、重鎖疾患に対する治療的、及び／または予防的有効性を有する。本明細書に開示される組成物及び方法は、当技術分野で周知の任意の血液学的腫瘍を治療、予防、阻害、改善、発生の減少、または軽減するために使用され得る。
【０４２６】
一実施形態では、本明細書に開示されるポリペプチドまたはペプチドドメインのいずれか１つの活性断片が、本明細書に開示される。当業者であれば、「断片」という用語が、少なくとも５、１０、または１５のアミノ酸を包含し得ることを理解するであろう。他の実施形態では、断片は少なくとも２０の連続したアミノ酸である。本明細書に開示される断片は、当業者に周知の方法で生成され得るか、または正常なタンパク質プロセシング（例えば、生物活性に必要ではない新生プリペプチドからのアミノ酸の除去、または代替のｍＲＮＡスプライシング若しくは代替のタンパク質プロセシング事象によるアミノ酸の除去）からもたらされ得る。
【０４２７】
「抗体」及び「免疫グロブリン」という用語は、最も広い意味で互換的に使用され、具体的には、抗体の結合活性を保持するポリクローナル抗体、モノクローナル抗体、またはその任意の断片を指す。特定の実施形態では、本明細書に開示される方法は、キメラ抗体、ヒト化抗体、またはヒト抗体の使用を含む。
【０４２８】
当業者であれば、「ポリクローナル抗体（複数可）」という用語が、同じ抗原の異なる決定基（エピトープ）に対する異なる抗体の集団を包含し得ることを理解するであろう。
【０４２９】
当業者であれば、「モノクローナル抗体（複数可）」という用語が、実質的に均質な抗体の集団、すなわち、集団を含む個々の抗体が、少量で存在し得る自然発生する可能性のある突然変異を除き同一であること、を包含し得ること理解するであろう。モノクローナル抗体は、単一の抗原部位に対して向けられる。
【０４３０】
本明細書に開示されるモノクローナル抗体は、Kohler et al, Nature, 256: 495 (1975)で最初に説明されたハイブリドーマ法を用いて作製されるか、または組換えＤＮＡ法（例えば、米国特許第４８１６５６７号明細書）によって作製され得る。
【０４３１】
ハイブリドーマ法では、マウス、またはハムスターなどの他の適切な宿主動物を免疫化して、免疫化に使用されるタンパク質に特異的に結合する抗体を産生する、または産生することができるリンパ球を誘発する。目的のタンパク質に対する抗体は、目的の所望のタンパク質及びアジュバントの皮下（ｓｃ）または腹腔内（ｉｐ）注射により、動物において一般的に産生される。一実施形態では、担体タンパク質としてキーホールリンペットヘモシアニン（ＫＬＨ、シグマ・アルドリッチ社（Sigma Aldrich））に結合した対象タンパク質で、動物を免疫化する。
【０４３２】
動物の免疫化に使用される目的のタンパク質は、当技術分野で周知の方法を用いて調製される。例えば、目的のタンパク質は、組換え方法またはペプチド合成方法によって産生され得る。
【０４３３】
あるいは、リンパ球をインビトロで免疫化し、その後ポリエチレングリコールなどの適切な融合剤を用いてミエローマ細胞と融合させ、ハイブリドーマ細胞を形成することができる（Goding, Monoclonal Antibodies: Principles and Practice, pp. 59-103 (Academic Press, 1986)）。
【０４３４】
モノクローナル抗体の結合親和性は、例えば、Munson et al., Anal Biochem., 107: 220 (1980)のスキャチャード解析によって決定され得る。
【０４３５】
本明細書に開示される抗体は、コンビナトリアルライブラリを使用して、所望の活性を有する合成抗体クローンをスクリーニングすることによって産生され得る。原則として、合成抗体クローンは、当技術分野で周知の方法を用いてファージコートタンパク質に融合された抗体可変領域（Ｆｖ）の様々な断片を提示するファージを含むファージライブラリをスクリーニングすることによって選択される。
【０４３６】
当業者であれば、「抗体の結合活性を保持する任意のその断片」という用語が、無傷の抗体の標的抗原に結合することができる抗原結合、またはその可変領域を含み得る抗体の一部を包含し得ることを理解するであろう。抗体断片の例は、Ｆａｂ、Ｆａｂ'、Ｆ（ａｂ'）２、及びＦｖ断片を含む。
【０４３７】
これらの抗体断片は、組換え技術によって、または酵素消化などの伝統的な手段によって産生され得る。６抗体のパパイン分解は、各々が単一の結合部位を有する「Ｆａｂ」断片、及び残りの「Ｆｃ」断片と呼ばれる２つの同一の抗原結合断片を産生する。ペプシン処理は、２つの抗原結合部位を有し、抗原を架橋結合することができるＦ（ａｂ'）２断片を生じる。「Ｆｖ」は、完全な抗原認識及び結合部位を含む最小抗体断片である。
【０４３８】
本明細書に開示されるポリクローナル抗体、及びモノクローナル抗体は、当技術分野で周知の方法を用いて調製される。
【０４３９】
一実施形態では、ＣＡＲがＴ細胞に対して内因性であるＣＡＲ−Ｔ細胞または関連組成物が本明細書に開示される。一実施形態では、「内因性」は、細胞または組織において通常発現される核酸分子（例えば、ｃＤＮＡ、ＤＮＡ、またはＲＮＡ分子）またはプリペプチドを含む。
【０４４０】
別の実施形態では、ＣＡＲがＴ細胞に対して外因性であるＣＡＲ−Ｔ細胞または関連組成物が本明細書に開示される。一実施形態では、「外因性」は、細胞内に内因的に存在しないか、または人為的に過剰発現された場合に得られる機能的効果を達成するために十分なレベルで存在しない核酸分子、またはポリペプチドを含む。したがって、当業者であれば、「外因性」という用語が、外来性、異種性、及び過剰発現核酸分子及びポリペプチドなどの、細胞内で発現される任意の組換え核酸分子またはポリペプチドを包含することを理解するであろう。
【０４４１】
一実施形態では免疫細胞が、一実施形態では、Ｔ細胞が対象に対して事故由来であるＣＡＲ−Ｔ細胞が、本明細書に開示される。別の実施形態では、ＣＡＲ−Ｔ細胞は対象に対して異種である。一実施形態では、ＣＡＲ−Ｔ細胞は同種異系である。一実施形態では、ＣＡＲ−Ｔ細胞は普遍的同種異系ＣＡＲ−Ｔ細胞である。別の実施形態では、Ｔ細胞は、自己由来、同種異系、または操作された前駆細胞または肝細胞からインビトロで誘導され得る。
【０４４２】
別の実施形態では、本明細書に記載のＣＡＲ−Ｔ細胞及びアポトーシス細胞は、両者とも同じ供給源に由来する。さらなる実施形態では、本明細書に記載のＣＡＲ−Ｔ細胞及びアポトーシス細胞は、両者とも対象由来である（図１）。別の実施形態では、本明細書に記載のＣＡＲ−Ｔ細胞及びアポトーシス細胞は、異なる供給源に由来する。さらに別の実施形態では、ＣＡＲ−Ｔ細胞は自己由来であり、本明細書に記載のアポトーシス細胞は同種異系である（図２）。当業者であれば、同様に、アポトーシス細胞上清はＣＡＲ−Ｔ細胞と同じ供給源に由来する細胞から作製されてもよく、一実施形態では自己由来であってもよく、またはアポトーシス細胞上清はＣＡＲ−Ｔ細胞とは異なる供給源に由来する細胞から作製されてもよいことを理解するであろう。
【０４４３】
当業者であれば、「異種」という用語が、異なる生物に由来する組織、細胞、核酸分子、またはポリペプチドを包含し得ることを理解するであろう。一実施形態では、異種タンパク質は、レシピエント由来の異なるＴ細胞型、または異なる種から最初にクローン化されるか、または由来し、細胞または細胞から得られたサンプルに通常は存在しないタンパク質である。
【０４４４】
当業者であれば、「自己」という用語が、ドナーとレシピエントが同じ人間である組織、細胞、核酸分子、またはポリペプチドを包含し得ることを理解するであろう。
【０４４５】
当業者であれば、「同種異系」という用語が、同じ種の別々の固体に由来する組織、細胞、核酸分子、またはポリペプチドを包含し得ることを理解するであろう。一実施形態では、同種異系ドナー細胞は、レシピエントと遺伝的に異なる。
【０４４６】
別の実施形態では、本明細書に開示される組成物及び方法は、本明細書に開示されるアポトーシス細胞またはアポトーシス細胞上清、及び１つ以上のイピリムバムなどのＣＴＬＡ−４阻害剤の併用療法を利用する。一実施形態では、ＣＴＬＡ−４は、自己免疫寛容を維持するために役立つＴ細胞活性化の強力な阻害剤である。一実施形態では、別の実施形態では抗体であるアンチＣＴＬＡ−４阻害剤の投与は、Ｔ細胞活性化の正味の効果を生じる。別の実施形態では、本明細書に開示される組成物及び方法は、アポトーシス細胞、ＣＡＲ−Ｔ細胞、及び１つ以上のＣＴＬＡ−４阻害剤を含む併用療法を利用する。
【０４４７】
いくつかの場合では、本明細書に開示される方法で使用されるポリペプチドは、非修飾アミノ酸配列と比較して、少なくとも１つの保存的アミノ酸置換を含む。他の場合では、ポリペプチドは、非保存的アミノ酸置換を含む。そのような場合、このような修飾を有するポリペプチドは、このようなアミノ酸置換を欠いているポリペプチドと比較して、増大した安定性またはより長い半減期を示す。
【０４４８】
一実施形態では、本明細書に開示される方法は、本明細書に記載の様々な治療及び予防目的のための、本明細書に記載の組成物の使用として、あるいは、本明細書に記載の様々な治療及び予防目的のための、医薬品若しくは治療用組成物、または組成物の調製における本明細書に記載の組成物の使用として表され得る。
【０４４９】
一実施形態では、本明細書に開示される組成物及び方法は、様々な構成要素及びステップを含む。しかし、別の実施形態では、本明細書に開示される組成物及び方法は、本質的に、他の構成要素またはステップが含まれ得る様々な構成要素及びステップから成る。別の実施形態では、本明細書に開示される組成物及び方法は、様々な構成要素またはステップから成る。
【０４５０】
いくつかの実施形態では、「含む（comprise）」という用語は、当技術分野で周知であり得る組成物の有効性に影響を及ぼす組成物の他の構成要素の含有を包含し得る。いくつかの実施形態では、「本質的に〜から成る（consisting essentially of）」という用語は、キメラ抗原受容体発現Ｔ細胞（ＣＡＲ−Ｔ細胞）、及びアポトーシス細胞または任意のアポトーシス細胞上清を有する組成物を含む。しかし、組成物の有用性に直接関与しない他の成分が含まれていてもよい。いくつかの実施形態では、「含んでいる」という用語は、本明細書に記載の任意の形態または実施形態の、キメラ抗原受容体発現Ｔ細胞（ＣＡＲ−Ｔ細胞）及び本明細書に開示されるアポトーシス細胞またはアポトーシス細胞上清を有する組成物を包含する。
【０４５１】
一実施形態では、「治療（treating）」という用語は治療的措置を含み、「防止（preventing）」という用語は予防的、または防止的手段を含み、その目的は、上文に記載の標的病理学的状態または障害を防止または軽減することである。したがって、一実施形態では、治療は、疾患、障害または状態に関連する直接的影響または治癒、抑制、阻害、防止、重症度の軽減、発症の遅延、症状の軽減、またはそれらの組み合わせを含み得る。したがって、一実施形態では、「治療（treating）」、「寛解（ameliorating）」、及び「緩和（alleviating）」は、とりわけ、進行の遅延、寛解の促進、寛解の誘発、寛解の増強、回復の加速、代替治療に対する効力の増加若しくは抵抗の減少、またはそれらの組み合わせを指す。一実施形態では、「防止（preventing）」は、とりわけ、症状の発症の遅延、疾患の再発の防止、再発発症の数または頻度の減少、症状発症間の潜伏時間の増加、またはそれらの組み合わせを指す。一実施形態では、「抑止（suppressing）」または「阻害（inhibiting）」は、とりわけ、症状の重篤度の低下、急性発症の重症度の低下、症状の数の減少、疾患関連症状の発生率の低下、症状の潜伏の減少、症状の改善、二次症状の減少、二次感染の減少、患者の生存の延長、またはそれらの組み合わせを指す。
【０４５２】
一実施形態では、本明細書に開示される組成物は、１回投与される。別の実施形態では、組成物は２回投与される。別の実施形態では、組成物は３回投与される。別の実施形態では、組成物は４回投与される。別の実施形態では、組成物は少なくとも４回投与される。別の実施形態では、組成物は４回より多く投与される。
【０４５３】
一実施形態では、本明細書に開示されるＣＡＲ−Ｔ細胞は１回投与される。別の実施形態では、ＣＡＲ−Ｔ細胞は２回投与される。別の実施形態では、ＣＡＲ−Ｔ細胞は３回投与される。別の実施形態では、ＣＡＲ−Ｔ細胞は４回投与される。別の実施形態では、ＣＡＲ−Ｔ細胞は少なくとも４回投与される。別の実施形態では、組成物は４回より多く投与される。
【０４５４】
一実施形態では、本明細書に開示される組成物は治療用組成物である。別の実施形態では、本明細書に開示される組成物は治療効果を有する。
【０４５５】
一実施形態では、ＣＡＲ−Ｔ細胞のみを含む組成物と比較して、炎症性サイトカインまたはケモカインの放出は減少するが、同等の細胞障害性を有する組成物が本明細書に開示される。
【０４５６】
当業者であれば、「約（about）」という用語が、示された数または数の範囲から０．０００１〜５％の間の逸脱を包含し得ることを理解するであろう。さらに、示された数または数の範囲から１〜１０％の逸脱を包含し得る。さらに、示された数または数の範囲から最大２５％の逸脱を包含し得る。
【０４５７】
当業者であれば、「ａ」、「ａｎ」及び「ｔｈｅ」という単数形が、文脈上他に明確に指示されない限り、複数の言及を含むことを理解するであろう。例えば、「１つの薬剤（an agent）」または「少なくとも１つの薬剤（at least an agent）」は、その混合物を含む複数の薬剤を含み得る。
【０４５８】
本出願を通して、本明細書で開示される様々な実施形態は、範囲形式で提示され得る。範囲形式での記述は、単に便宜上及び簡潔さのためのものであり、本発明の範囲に対する柔軟性のない限定として解釈されるべきでないことを理解されたい。したがって、範囲の説明は、すべての可能な部分範囲、及びその範囲内の個々の数値を具体的に開示したものと見なされるべきである。例えば、１〜６などの範囲の記述は、１〜３、１〜４、１〜５、２〜４、２〜６、３〜５などの部分範囲、及びその範囲内の個々の数字、例えば１、２、３、４、５、及び６を具体的に開示したものと見なされるべきである。これは、範囲の幅に関わらず適用される。
【０４５９】
本明細書で数値範囲が示されるいかなる時においても、示された範囲内に任意の引用数字（分数または整数）を含むことを意味する。第１の指示数及び第２の指示数の「範囲／間の範囲（ranging/ranges between）」という表現、及び第１の指示数の「範囲／範囲から（ranging/ranges from）」第２の指示数「まで（to）」という表現は、本明細書では互換的に使用され、第１及び第２の指示数、並びにすべての小数及び整数の数字を含むことを意味する。
【０４６０】
以下の実施例を、本明細書に開示される実施形態をより完全に説明するために提示する。しかし、それらは本発明の広い範囲を限定するものとして、決して解釈されるべきではない。
【実施例】
【０４６１】
実施例１：アポトーシス細胞療法による、ＣＡＲ−Ｔ細胞療法を受けた患者におけるサイトカインストームの防止
【０４６２】
材料及び方法
【０４６３】
組換えＤＮＡ構築物
【０４６４】
特定の腫瘍関連抗原に対するＴ細胞特異性を再標的化するＣＡＲが開発されている。Ｔ細胞を非関連腫瘍関連抗原に導く、対照となるＣＡＲが開発されている。背景に使用されるＣＡＲは、装甲されたＣＡＲ−Ｔ細胞、すなわち第４世代ＣＡＲ−Ｔ細胞である。一実施形態では、ＩＬ−２及びＩＬ−１５受容体に使用されるβ鎖の膜貫通、及びエンドドメインに結合したＩＬ−４受容体αサブユニットの外部ドメインを発現するよう細胞も操作され、ＩＬ−４の添加によってＴ細胞を拡大させることができる。
【０４６５】
レトロウイルス形質導入及びＴ４＋Ｔ細胞の培養
【０４６６】
血液サンプルを、健康なボランティア及び癌患者から得た。Ｔ細胞は、ＣＤ３／ＣＤ２８でコーティングした常磁性のビーズ（１：１ビーズ／細胞比、ライフ・テクノロジーズ社（Life Technologies））、またはＰＨＡ（５ｍｇ／ｍｌ、シグマ・アルドリッチ社）を用いて遺伝子導入の前に活性化することができた。ＰＧ１３レトロウイルスパッケージング細胞を用いて活性化Ｔ細胞のレトロウイルス形質導入を行った。記載のように、形質導入を、適正製造基準（ＧＭＰ）下で製造されたＳＦＧ  Ｔ４ウイルスベクターを用いて行い、次にガス透過性バッグ中のＧＭＰグレードのＩＬ−４（３０ｍｇ／ｍｌ）を用いてＴ細胞の拡大を行った。
【０４６７】
細胞及び培養細胞
【０４６８】
ホタルルシフェラーゼを発現する腫瘍細胞株を、１０％ＦＢＳ（シグマ・アルドリッチ社）、ＧｌｕｔａＭＡＸ（商標）、及び抗生物質・抗真菌剤溶液（ライフ・テクノロジーズ社）を加えた適切な培地、例えばＤＭＥＭ（ロンザ社（Lonza）、スイス国バーゼル所在）中で増殖させた。
【０４６９】
フローサイトメトリー
【０４７０】
ビチオン化Ａｂ及びストレプトアビジン（streptavidin）−ＰＥ（ライフ・テクノロジーズ社）を用いてＣＡＲの発現を検出した。マウス由来の器官における腫瘍抗原発現を定量化するために、切開した組織を、シリンジプランジャを用いてＰＢＳ内で均質化し、１００ｍｍ細胞ストレーナで濾過した。赤血球溶解溶液（Red Blood Lysis Solution）（ミルテニー・バイオテク社（Miltenyi Biotec）、イギリス国ビスレー所在）で処理後、細胞を４％パラホルムアルデヒド（３７℃で１０分間）を用いて固定し、氷冷メタノールを用いて３０分間透過処理し、４０％Ｄ１０／６０％ＰＢＳで洗浄した。次に、対照としてのラビット抗腫瘍抗原抗体またはラビット血清（ダコ社（Dako）、イギリス国イーリー所在）、続いてブタＦ（ａｂ９）２  抗ラビットＩｇＧ−ＦＩＴＣ（ダコ社）と共に細胞を培養した。あるいは、ヒト腫瘍抗原受容体の発現を、フローサイトメトリーによって実証した。すべての場合において、前方散乱／側方散乱ゲートを、存在するドミナントＴ細胞集団を同定するために使用した。フローサイトメトリーを、ＣｅｌｌＱｕｅｓｔ  Ｐｒｏソフトウェアを用いたＦＡＣＳＣａｌｉｂｕｒフローサイトメータを使用して実施した。
【０４７１】
サイトカイン分析
【０４７２】
上清及び血清を、ＥＬＩＳＡキット、サイトメトリービーズアレイ（Ｔｈ１／Ｔｈ２／Ｔｈ１７、ＢＤバイオサイエンセス社（BD Biosciences））を使用し、製造業者によって記載のように分析した。例えば、分析は炎症性サイトカインの前であってもよく、場合によってはＩＬ−６である。
【０４７３】
細胞毒性アッセイ
【０４７４】
Ｔ細胞による腫瘍細胞単層の破壊を、クリスタルバイオレット染色によって視覚化した。腫瘍細胞の生存率を、ＭＴＴアッセイ（ライフ・テクノロジーズ社）を用いて、製造業者によって記載のように定量化した。
【０４７５】
インビトロルシフェラーゼアッセイ
【０４７６】
形質導入された合計０．５×１０６の細胞（及び同数の対照として形質導入されていない細胞）を、ルシフェラーゼアッセイシステムキット（プロメガ社（Promega）、米国ウィスコンシン州マディソン所在）を用いて製造業者によって記載のように測定した。アッセイを、Ｏｍｅｇａソフトウェアを備えたマイクロプレートリーダを使用して読み取った。
【０４７７】
インビボ研究
【０４７８】
マウスに腫瘍細胞（１×１０６）を、ＰＢＳで腹腔内に、または２００ｍｌマトリゲル（ＢＤバイオサイエンセス社）で皮下に植え付けた。生物発光イメージング（ＢＬＩ）によって腫瘍移植を確認し、マウスをＴ細胞投与の前に同様のシグナル強度を有する群に分類した。ＩＶＩＳ  Ｌｕｍｉｎａ  ＩＩまたはＩＶＩＳ  Ｓｐｅｃｔｒｕｍ（パーキン・エルマー社）を使用して、Ｌｉｖｉｎｇ  Ｉｍａｇｅソフトウェア（パーキン・エルマー社）と共にイメージングを実行し、Ｔ細胞イメージングのために大きなビニングを使用した。Ｔ細胞のインビボ毒性を評価するために器官をマウスから採取し、ホルマリン固定し、組織病理学的分析にかけた。
【０４７９】
結果
【０４８０】
ＣＡＲ−Ｔ細胞は、目標の標的を発現する腫瘍細胞に向けられ、それらを破壊した。
【０４８１】
目的の腫瘍関連抗原は、低レベルで健康なマウス組織に、及びマウスで発現された腫瘍に発現した。
【０４８２】
インビトロでは、ヒトＣＡＲ−Ｔ細胞は、腫瘍細胞単層を急速に破壊したが、対照Ｔ細胞は腫瘍細胞を破壊しなかった。さらに、サイトカイン産生を、腫瘍関連抗原を発現する腫瘍細胞でＴ細胞を刺激した後に観察した。対照として、非形質転換マウス細胞を、ヒトＣＡＲ−Ｔ細胞の活性化のために試験した。非形質転換マウス細胞もまた、ヒトＣＡＲ−Ｔ細胞を刺激し、腫瘍関連抗原も発現することを実証した。非形質転換マウスは、ヒトＣＡＲ−Ｔ細胞を刺激しなかった。
【０４８３】
ＣＡＲ−Ｔ細胞療法は、サイトカイン放出症候群を誘発した。
【０４８４】
３群の腫瘍を有していないマウス及び腫瘍を有するマウスに、徐々に大きな用量のＣＡＲ―Ｔ細胞（３×１０６、１０×１０６、または３０×１０６）を投与した（腹腔内投与、または腫瘍に直接投与）。最も高い用量では、腫瘍を有していないマウス及び腫瘍を有するマウスは、２４時間以内に抑制された行動、立毛、及び移動の現象を示し、４８時間以内に急速な体重減少、及びそれに続く死亡を伴った。ヒトインターフェロンγ及びマウスＩＬ−６は、最も高い用量のＣＡＲ−Ｔ細胞が与えられたマウスからの血液サンプル中で検出可能であった。異なる腫瘍抗原に向けられた高用量のＣＡＲ−Ｔ細胞を受けた動物は、体重減少または行動の変化を示さなかった。
【０４８５】
アポトーシス細胞の投与は、ＣＡＲ−Ｔ細胞療法によって誘発されるサイトカイン放出症候群の発症を阻害または減少させた。
【０４８６】
最も高い容量のＣＡＲ−Ｔ細胞を与えた１群のマウスには、安全で有効な用量であることが予め実証されている２．１０×１０８／ｋｇのアポトーシス細胞を同時に投与した。ヒトＣＡＲ−Ｔ＋アポトーシス細胞を受けたマウスでは、マウスＩＬ−６レベルが有意に低下し、体重減少が低下し、死亡率が減少した。
【０４８７】
実施例２：ＣＡＲ−Ｔ細胞の効力に対しマイナス効果のないサイトカインストームに対するアポトーシス細胞の影響
【０４８８】
目的：アポトーシス細胞またはアポトーシス細胞に由来する上清の、腫瘍または癌細胞に対するサイトカインストームマーカーであるサイトカイン及びＣＡＲ−Ｔ細胞の効力に対する影響を試験した。
【０４８９】
方法
【０４９０】
マウスのサイトカインストームを誘導すると報告された固形腫瘍モデル（van der Stegen et al., 2013、同上所収）を利用した。このモデルでは、頭頚部腫瘍及び卵巣癌などの特定の固形腫瘍においてしばしば高度に増加される特定のＥｒｂＢ二量体（Ｔ４＋ＣＡＲ−Ｔ細胞）を標的とするキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）でＴ細胞を操作した。ＣＤ−３マイクロビーズを用いて末梢血から分離したＰＢＭＣからＴ細胞を単離した。キメラＴ４＋受容体を含むベクターを構築し、単離されたＴ細胞に変換し、Ｔ４＋ＣＡＲ−Ｔ細胞を得た。本明細書で実施された実験のために、Ｔ４＋ＣＡＲ−Ｔ細胞を購入した（クリエイティブ・バイオラブズ社、またはプロマブ・バイオテクノロジー社）。図３は、フローサイトメトリー及び抗ＣＤ１２４モノクローナル抗体（Wilkie et al.、同上所収）を用いて、Ｔ４＋ＣＡＲ−Ｔ細胞上の４αβ（キメラサイトカイン受容体）の細胞表面発現の検証を示す。さらに、ＰＣＲ手順を実施し、形質導入されたＴ細胞におけるベクターの存在を検証した。
【０４９１】
ＳＫＯＶ３−ｌｕｃ卵巣腺癌組織培養細胞を使用した（Wilkie et al.、同上所収）。ＳＫＯＶ３−ｌｕｃは、ＥｒｂＢ受容体を高発現し、Ｔ４＋ＣＡＲ−Ｔ細胞の標的である（van der Stegen et al., 2013、同上所収）。これらのＳＫＯＶ３−ｌｕｃ細胞を操作してホタルルシフェラーゼ遺伝子を構成的に発現させ、インビトロでの細胞増殖の追跡及びインビボでの腫瘍増殖及び後退を可能にした。
【０４９２】
アポトーシス細胞
【０４９３】
富化された単核細胞分画を、健康で適格なドナーからの白血球搬出法により採取した。この手順を、Ｈａｄａｓｓａｈ  Ｅｉｎ  Ｋｅｒｅｍアフェレーシス装置で行った。採取した細胞を処理し、白血球搬出完了直後に液体窒素中で保存した。アポトーシス細胞（ＡｐｏＣｅｌｌ）の調製のために、凍結保存された細胞を解凍し、洗浄し、次いで５０ｍｇ／ｍＬのメチルプレドニゾロン（ファイザー社（Pfizer）、米国ニューヨーク州所在）及び１０％の自己由来血漿の存在下で、３７℃、５％ＣＯ２で６時間培養した。培養の最後に、細胞を収集し、洗浄し、下流の用途にしたがって選択した緩衝液で再懸濁した。ＡｐｏＣｅｌｌのアポトーシス及び生存率を、フローサイトメータを介してＡｎｎｅｘｉｎＶ及びＰＩ（ＭＢＬ社、米国マサチューセッツ州所在）染色（≧４０％及び≦１５％）を用いて測定した。ＦＣＳ  ｅｘｐｒｅｓｓソフトウェアを用いて結果を分析した。
【０４９４】
アポトーシス細胞上清
【０４９５】
１２ウェルプレート中に、１ウェルあたり８００万個のアポトーシス細胞を播種した。２４時間後、細胞を遠心分離した（２９０ｇ、４℃、１０分）。上清を集め、使用まで−８０℃でアリコートで凍結した。異なる数の細胞を使用して上清を作った。いくつかのアリコートには濃縮上清を含ませた。
【０４９６】
単球単離
【０４９７】
健康な適格なドナーから得られた末梢血バフィコートから、Ｆｉｃｏｌｌ（ＧＥヘルスケア社（GE healthcare）、イギリス国所在）を用いてＰＢＭＣを単離した。ＲＰＭＩ１６４０（ギブコ社（Gibco）、サーモ・フィッシャー・サイエンティフィック社（Thermo Fisher Scientific）、米国マサチューセッツ州所在）中で細胞を１５×１０６細胞／ｍｌの濃度にし、３５ｍｍプレート（コーニング社、米国ニューヨーク州所在）の真中に０．９ｍｌ滴下した。次いで、プレートを３７℃、５％ＣＯ２で１時間培養した。培養の最後に、細胞をＰＢＳ（バイオロジカル・インダストリーズ社（Biological industries）、イスラエル国ベイトヘメク所在）で３回洗浄し、光学顕微鏡を用いて接着を測定した。次いで、細胞を完全培地（ＲＰＭＩ１６４０＋１０％熱不活性化ＦＢＳ＋１％Ｇｌｕｔａｍａｘ＋１％ＰｅｎＳｔｒｅｐ（全てギブコ社））で培養した。
【０４９８】
単球単離の別の方法も使用し、密度勾配遠心分離によってヒト単核細胞をヘパリン化末梢血から単離した。次いで、単離された単核細胞を、磁気ビーズ分離（ミルテニー・バイオテック社（Miltenyi Biotec）、米国カリフォルニア州オーバーン所在）によってＣＤ１４＋分画として正の選択をすること、ＣＤ２２＋分画としてＢ細胞を正の選択をすること、及びＣＤ１４−ＣＤ２２−分画としてＴ細胞を負の選択をすることにより、単球をＢ細胞及びＴ細胞集団に分離した。単球の純度は９５％以上であった。
【０４９９】
マクロファージ分化のために、接着の最後に、細胞をＰＢＳで３回洗浄し、次いでＲＰＭＩ１６４０＋１％Ｇｌｕｔａｍａｘ＋１％ＰｅｎＳｔｒｅｐ及び１０％加熱不活性化したヒト血清ＡＢ型（シグマ社（Sigma）、米国ミズーリ州所在）で培養した。
【０５００】
ａｐｏ＋単球からの上清
【０５０１】
ＣＤ１４＋単球を、上述で調製したアポトーシス細胞と１：１６の比率で２４時間培養した。単球の数は、１２ウェルプレート中の１ウェルあたり５０万個であり、アポトーシス細胞の数は、１２ウェルプレート中の１ウェルあたり８００万個であった。２４時間の培養後、細胞を遠心分離した（２９０ｇ、４℃、１０分間）。上清を回収し、使用まで−８０℃でアリコートで凍結した。アポトーシス細胞、及び／または、マクロファージ及び樹状細胞などの他の細胞源を用いて異なる単球の比率で同様の手順を実施することができる。
【０５０２】
結果
【０５０３】
ステップ１：ＳＫＯＶ３−ｌｕｃ腫瘍細胞に対するＴ４＋ＣＡＲ−Ｔ細胞活性の確認
【０５０４】
Ｔ４＋ＣＡＲ−Ｔ細胞活性を確証するために、ＳＫＯＶ３−ｌｕｃの単層を、１００万個のＴ４＋ＣＡＲ−Ｔ細胞、または１００万個の非形質導入Ｔ細胞のいずれかに曝露した。２４時間の培養後、Ｔ４＋ＣＡＲ−Ｔ細胞は、非形質導入Ｔ細胞の対照（図４）と比較してＳＫＯＶ３−ｌｕｃ増殖を３０％減少させ、Ｔ４＋ＣＡＲ−Ｔ細胞の抗腫瘍活性を示した。
【０５０５】
ステップ２：ＳＫＯＶ３−ｌｕｃ腫瘍細胞に対するＴ４＋ＣＡＲ−Ｔ細胞単体の活性を、アポトーシス細胞への曝露後の活性と比較した
【０５０６】
アポトーシス細胞（ＡｐｏＣｅｌｌ）及びアポトーシス細胞上清（ＡｐｏＳｕｐ及びＡｐｏＭｏｎ  Ｓｕｐ）を試験し、それらがＴ４＋ＣＡＲ−Ｔ細胞抗腫瘍活性を妨げるかどうか決定した。ＳＫＯＶ３−ｌｕｃ腫瘍細胞をアポトーシス細胞と共に１時間培養した後、Ｔ４＋ＣＡＲ−Ｔ細胞（５０万個）またはＴ４＋非形質導入Ｔ細胞（５０万個）を添加した（Ｔ４＋ＣＡＲ−Ｔ細胞とアポトーシス細胞は１：２の比率）。次いで、腫瘍細胞／アポトーシス細胞／Ｔ４＋ＣＡＲ−Ｔ細胞を４８時間共培養した。対照のＳＫＯＶ３−ｌｕｃ腫瘍細胞を、４８時間、Ｔ４＋ＣＡＲ−Ｔ細胞及びハルトマン溶液（アポトーシス細胞のビヒクル）と共培養したが、アポトーシス細胞は共存させなかった。
【０５０７】
結果は、４８時間の培養後、Ｔ４＋ＣＡＲ−Ｔ細胞の抗腫瘍活性が、非形質導入Ｔ細胞との培養より優れていることを示した。同様の培養をアポトーシス細胞上清で行った。驚くべきことに、Ｔ４＋ＣＡＲ−Ｔ細胞抗腫瘍活性は、アポトーシス細胞またはアポトーシス細胞上清への曝露の有り無しの場合で類似していた（図５）。
【０５０８】
ステップ３：ＣＡＲ−Ｔ処置から生じるサイトカインストームの改善、減少または阻害に対するアポトーシス細胞の効果
【０５０９】
次に、アポトーシス細胞がサイトカインストームを減少させる効果を調べた。ＩＬ−６は、サイトカインストームにおいて放出される原型炎症性サイトカインであり（Lee DW et al. (2014) Blood 124(2): 188-195）、しばしばサイトカインストーム応答のマーカーとして使用される。
【０５１０】
培養物を確立し、インビボのＣＡＲ−Ｔ細胞療法環境を模倣した。ＳＫＯＶ３−ｌｕｃ腫瘍細胞を、ヒト単球マクロファージ及びＴ４＋ＣＡＲ−Ｔ細胞の存在下で培養した。培養培地中で測定したＩＬ−６の濃度は、約５００?６００ｐｇ／ｍｌであった。ＩＬ−６のこの濃度は、サイトカインストームの典型である。
【０５１１】
予期しないことに、ＳＫＯＶ３−ｌｕｃ腫瘍細胞、ヒト単球−マクロファージ、Ｔ４＋ＣＡＲ−Ｔ細胞の培養培地で測定したＩＬ−６レベルは、アポトーシス細胞と共に予め１時間（Ｔ４＋ＣＡＲ−Ｔ細胞とアポトーシス細胞の比率は１：２）培養した腫瘍細胞が劇的に減少した。同様に、ＳＫＯＶ３−ｌｕｃ腫瘍細胞、ヒト単球−マクロファージ、Ｔ４＋ＣＡＲ−Ｔ細胞の培養培地で測定したＩＬ−６レベルは、アポトーシス細胞上清と共に予め１時間培養した腫瘍細胞もまた劇的に減少した。このＩＬ−６濃度の減少は、サイトカインストームの減少の典型である（図６）。
【０５１２】
予期しないことに、アポトーシス細胞及びアポトーシス上清は、腫瘍細胞増殖に対するＣＡＲ−Ｔ細胞の効果を無効にしないと結論付けられ、同時に、罹患をもたらす主要サイトカインとして説明されるＩＬ−６などの炎症性サイトカインを減少させた。
【０５１３】
ステップ４：広範囲のサイトカインを用いた分析
【０５１４】
実験手順中には生成されないが、ヒトサイトカインストーム中の臨床環境に現れる可能性のある、より広い範囲及びレベルのサイトカインに対する効果をさらに評価するために、上記で概説したＳＫＯＶ３−ｌｕｃ培養条件にＬＰＳ（１０ｎｇ／ｍｌ）を添加した。ＬＰＳの添加は、サイトカインストームレベルを指数関数的に増加させることが予想された。予想通り、ＬＰＳの添加はサイトカインストーム効果を増加させ、結果としてＩＬ−６レベルは約３０，０００ｐｇ／ｍｌまで増加した。サイトカインストーム中に高レベルで発現することが知られているサイトカインは、上昇したレベル、例えばＴＮＦ−α（２５０〜３００ｐｇ／ｍｌ）、ＩＬ−１０（２００〜３００ｐｇ／ｍｌ）、ＩＬ１−α（４０〜５０ｐｇ／ｍｌ）、及びＩＬ−１８（４〜５ｐｇ／ｍｌ）を示した。図７に示されるように、アポトーシス細胞への曝露は、サイトカインストームの指数関数状態の間でさえも、臨床環境で見られる可能性のあるほぼ正常なレベルまでＩＬ−６のレベルを劇的に低下させたが、ＣＡＲ−Ｔ細胞の実験手順において常に見られるわけではない。この効果は、サイトカインＴＮＦ−α、ＩＬ−１０、ＩＬ−１α、ＩＬ−１β、及びＩＬ−１８のレベルの正常化を伴う他の炎症性サイトカインにおいて同様であり、２０〜９０％の低下を示した。アポトーシス細胞の代わりにアポトーシス細胞上清を使用した場合にも同様の結果が見られた。
【０５１５】
結論
【０５１６】
ＣＡＲ−Ｔ細胞療法は、有意の数の患者においてサイトカインストームを引き起こすことが実証されている。本明細書に示したこれらの結果は、驚くべきことに、アポトーシス細胞及びアポトーシス細胞上清は、腫瘍細胞を死滅させるＣＡＲ−Ｔ細胞の有効性に影響を及ぼすことなく、サイトカインストームを低減できることを証明した。
【０５１７】
本明細書に開示された特定の特徴が本明細書に図示及び説明されたが、多くの修正、置換、変更、及び均等物が、当業者に想到されるであろう。したがって、添付の特許請求の範囲は、本明細書に開示された真の精神に該当するすべての改変及び変更を包含すべく意図されていることを理解されたい。
【図１Ａ】
2018507208.tif 000005
【図１Ｂ】
2018507208.tif 000006
【図２】
2018507208.tif 000007
【図３】
2018507208.tif 000008
【図４】
2018507208.tif 000009
【図５】
2018507208.tif 000010
【図６】
2018507208.tif 000011
【図７】
2018507208.tif 000012
【手続補正書】
【提出日】平成29年10月20日(2017.10.20)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
キメラ抗原受容体発現Ｔ細胞（ＣＡＲ−Ｔ細胞）と、
アポトーシス細胞またはアポトーシス細胞上清と、
薬学的に許容可能な賦形剤とを含み、
前記アポトーシス細胞が、初期アポトーシス状態のアポトーシス細胞を含むことを特徴とする組成物。
【請求項２】
前記アポトーシス細胞が、プールされた第三者のドナー細胞を含むことを特徴とする請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
前記アポトーシス細胞上清が、アポトーシス細胞白血球上清を含み、
前記白血球が、食細胞、マクロファージ、樹状細胞、単球、Ｂ細胞、Ｔ細胞、及びＮＫ細胞からなる群より選択されることを特徴とする請求項１または２に記載の組成物。
【請求項４】
前記ＣＡＲ−Ｔ細胞と、前記アポトーシス細胞またはアポトーシス細胞上清とが、互いに別個の組成物に含まれることを特徴とする請求項１ないし３のいずれかに記載の組成物。
【請求項５】
ＣＴＬＡ−４阻害剤、α１−アンチトリプシンまたはその断片若しくは類似体、テルル系化合物、免疫調節剤、またはそれらの任意の組み合わせからなる群より選択される追加的な薬剤をさらに含むことを特徴とする請求項１ないし４のいずれかに記載の組成物。
【請求項６】
前記追加的な薬剤またはそれらの任意の組み合わせが、
前記ＣＡＲ−Ｔ細胞を含む組成物に含まれるか、前記アポトーシス細胞若しくはアポトーシス細胞上清を含む組成物に含まれるか、またはそれらとは別個の組成物に含まれることを特徴とする請求項５に記載の組成物。
【請求項７】
キメラ抗原受容体発現Ｔ細胞（ＣＡＲ−Ｔ細胞）癌療法を受けている対象におけるサイトカイン放出症候群（ＣＲＳ）またはサイトカインストームの発生を抑制または低減する方法であって、
アポトーシス細胞またはアポトーシス細胞上清を含む組成物を前記対象に投与するステップを有し、
前記アポトーシス細胞が、初期アポトーシス状態のアポトーシス細胞を含むことを特徴とする方法。
【請求項８】
前記アポトーシス細胞が、前記対象の自家由来であるか、またはプールされた第三者のドナー細胞を含むことを特徴とする請求項７に記載の方法。
【請求項９】
前記組成物を前記対象に投与する前記ステップが、前記ＣＡＲ−Ｔ細胞癌療法の前、同時、または後に実施されることを特徴とする請求項７または８の方法。
【請求項１０】
前記アポトーシス細胞上清が、アポトーシス細胞白血球上清を含み、
前記白血球が、食細胞、マクロファージ、樹状細胞、単球、Ｂ細胞、Ｔ細胞、及びＮＫ細胞からなる群より選択されることを特徴とする請求項７ないし９のいずれかに記載の方法。
【請求項１１】
ＣＴＬＡ−４阻害剤、α１−アンチトリプシンまたはその断片若しくは類似体、テルル系化合物、免疫調節剤、またはそれらの任意の組み合わせからなる群より選択される追加的な薬剤を前記対象に投与するステップをさらに有することを特徴とする請求項７ないし１０のいずれかに記載の方法。
【請求項１２】
前記追加的な薬剤を前記対象に投与する前記ステップが、前記ＣＡＲ−Ｔ細胞癌療法の前、同時、または後に実施されることを特徴とする請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
前記ＣＡＲ−Ｔ細胞癌療法を受けているが前記アポトーシス細胞または前記アポトーシス細胞上清が投与されていない対象と比較して、少なくとも１つの炎症誘発性サイトカインの濃度が減少することを特徴とする請求項７ないし１２のいずれかに記載の方法。
【請求項１４】
サイトカイン放出症候群若しくはサイトカインストームが発生しているか、またはサイトカイン放出症候群若しくはサイトカインストームが発生しやすい対象におけるサイトカイン産生を低減または抑制する方法であって、
アポトーシス細胞またはアポトーシス細胞上清を含む組成物を前記対象に投与するステップを有し、
それにより、前記対象のサイトカイン産生を低減または抑制し、
前記アポトーシス細胞が、初期アポトーシス状態のアポトーシス細胞を含むことを特徴とする方法。
【請求項１５】
サイトカイン放出症候群若しくはサイトカインストームが発生しているか、またはサイトカイン放出症候群若しくはサイトカインストームが発生しやすいが、前記アポトーシス細胞または前記アポトーシス細胞上清が投与されていない対象と比較して、少なくとも１つの炎症誘発性サイトカインの産生が低減または抑制されたことを特徴とする請求項１４に記載の方法。
【請求項１６】
前記対象が、ＣＡＲ−Ｔ細胞癌療法を受けており、
当該方法は、前記ＣＡＲ−Ｔ細胞癌療法の効果を低減させないことを特徴とする請求項１４または１５に記載の方法。
【請求項１７】
前記サイトカイン放出症候群またはサイトカインストームの原因が、感染性の刺激、疾病、または症候群、あるいは非感染性の刺激、疾病、または症候群を含むことを特徴とする請求項１４ないし１６のいずれかに記載の方法。
【請求項１８】
前記感染性の刺激、疾病、または症候群が、インフルエンザ、鳥インフルエンザ、重症急性呼吸器症候群（ＳＡＲＳ）、エプスタイン・バール・ウイルス関連血球貪食症候群（ＨＬＨ）、敗血症、グラム陰性敗血症、マラリア、エボラウイルス、天然痘ウイルス、全身型グラム陰性菌感染症、またはヤーリッシュ・ヘルクスハイマー症候群を含み、
前記非感染性の刺激、疾病、または症候群が、血球貪食症候群（ＨＬＨ）、突発性ＨＬＨ、マクロファージ活性化症候群（ＭＡＳ）、慢性関節炎、全身型若年性特発性関節炎（ｓＪＩＡ）、スティル病、クリオピリン関連周期性発熱症候群（ＣＡＰＳ）、家族性寒冷自己炎症症候群（ＦＣＡＳ）、家族性寒冷蕁麻疹（ＦＣＵ）、マックル・ウェルズ症候群（ＭＷＳ）、慢性乳児神経皮膚関節炎症候群（ＣＩＮＣＡ）、ＮＬＲＰ３遺伝子における遺伝的または新生の機能獲得変異を含むクリオピリン関連周期性発熱症候群、遺伝性自己炎症性疾患、急性膵炎、重症熱傷、外傷、急性呼吸窮迫症候群、免疫療法、モノクローナル抗体療法、薬物使用に起因するもの、毒素吸入に起因するもの、リポ多糖（ＬＰＳ）に起因するもの、グラム陽性毒素に起因するもの、真菌毒素に起因するもの、グリコシルホスファチジルイノシトール（ＧＰＩ）に起因するもの、またはＲＩＧ−１遺伝子発現の調節に起因するものを含むことを特徴とする請求項１７に記載の方法。
【請求項１９】
前記アポトーシス細胞が、前記対象の自家由来であるか、またはプールされた第三者のドナー細胞を含むことを特徴とする１４ないし１８のいずれかに記載の方法。
【請求項２０】
対象における血液癌または腫瘍の治療、予防、増殖抑制、発生低減、またはそれらの任意の組み合わせのための方法であって、
初期アポトーシス細胞集団、または初期アポトーシス細胞由来のアポトーシス細胞上清を含む組成物を前記対象に投与するステップを有し、
それにより、前記対象における前記血液癌または腫瘍の治療、予防、増殖抑制、発生低減、またはそれらの任意の組み合わせがなされることを特徴とする方法。
【請求項２１】
前記腫瘍または前記血液癌の細胞の死滅を誘導することを特徴とする請求項２０に記載の方法。
【請求項２２】
前記血液癌または腫瘍が、白血病、急性白血病、急性リンパ球性白血病、急性骨髄性白血病、急性骨髄芽球性白血病、急性前骨髄球性白血病、急性骨髄単球性白血病、単球性白血病、急性赤白血病、慢性白血病、慢性骨髄性白血病、慢性リンパ球性白血病、真性多血症、リンパ腫（ホジキン病、非ホジキン病）、ワルデンストレームマクログロブリン血症、及び重鎖病からなる群より選択されることを特徴とする請求項２０または２１に記載の方法。
【国際調査報告】
2018507208.tif 000013
2018507208.tif 000014