(57)【要約】ＩＬ−１５薬剤と組み合わせたＰＥＧ−ＩＬ−１０薬剤の投与による、癌関連の疾患、障害、または病態を有する対象の治療方法、またはそのような疾患、障害、または病態の発症の予防方法を提供する。【選択図】図４
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
対象における癌関連の疾患、障害、または病態を治療または予防する方法であって、
ａ）少なくとも６．０ｎｇ／ｍＬの平均ＩＬ−１０血清トラフ濃度を達成するのに十分な量である、治療有効量のＰＥＧ−ＩＬ−１０、及び
ｂ）治療有効量のＩＬ−１５薬剤を前記対象に投与することを含む、前記方法。
【請求項２】
前記ＰＥＧ−ＩＬ−１０の量が、少なくとも８．０ｎｇ／ｍＬの平均ＩＬ−１０血清トラフ濃度を達成するのに十分である、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記ＰＥＧ−ＩＬ−１０の量が、少なくとも１０．０ｎｇ／ｍＬの平均ＩＬ−１０血清トラフ濃度を達成するのに十分である、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
前記ＰＥＧ−ＩＬ−１０が少なくとも毎日２回、対象に投与される、請求項１に記載の方法。
【請求項５】
前記ＰＥＧ−ＩＬ−１０が少なくとも毎日１回、対象に投与される、請求項１に記載の方法。
【請求項６】
対象における癌関連の疾患、障害、または病態を治療または予防する方法であって、
ａ）治療有効量のＰＥＧ−ＩＬ−１０であって、前記量がある期間にわたって平均ＩＬ−１０血清トラフ濃度を維持するのに十分な量であり、
前記平均ＩＬ−１０血清トラフ濃度が少なくとも６．０ｎｇ／ｍＬであり、
前記平均ＩＬ−１０血清トラフ濃度が前記期間の少なくとも９０％の間維持される、前記治療有効量のＰＥＧ−ＩＬ−１０；及び
ｂ）治療有効量のＩＬ−１５薬剤を前記対象に投与することを含む、前記方法。
【請求項７】
前記平均ＩＬ−１０血清トラフ濃度が少なくとも８．０ｎｇ／ｍＬである、請求項６に記載の方法。
【請求項８】
前記平均ＩＬ−１０血清トラフ濃度が少なくとも１０．０ｎｇ／ｍＬである、請求項６に記載の方法。
【請求項９】
前記期間が少なくとも１２時間である、請求項６に記載の方法。
【請求項１０】
前記期間が少なくとも２４時間である、請求項６に記載の方法。
【請求項１１】
前記平均ＩＬ−１０血清トラフ濃度が前記期間の少なくとも９５％の間維持される、請求項６〜１０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１２】
前記平均ＩＬ−１０血清トラフ濃度が前記期間の少なくとも９８％の間維持される、請求項６〜１０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１３】
前記平均ＩＬ−１０血清トラフ濃度が前記期間の１００％の間維持される、請求項６〜１０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１４】
前記ＰＥＧ−ＩＬ−１０が成熟ヒトＰＥＧ−ＩＬ−１０である、請求項１〜１３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１５】
前記ＰＥＧ−ＩＬ−１０が成熟ヒトＰＥＧ−ＩＬ−１０の変異体であり、前記変異体が成熟ヒトＰＥＧ−ＩＬ−１０の活性と同等の活性を示す、請求項１〜１３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１６】
前記ＰＥＧ−ＩＬ−１０が、ＩＬ−１０の少なくとも１つのサブユニットの少なくとも１つのアミノ酸残基に共有結合した少なくとも１つのＰＥＧ分子を含む、請求項１４または請求項１５に記載の方法。
【請求項１７】
前記ＰＥＧ−ＩＬ−１０がモノＰＥＧ化とジＰＥＧ化ＩＬ−１０との混合物を含む、請求項１６に記載の方法。
【請求項１８】
前記ＰＥＧ−ＩＬ−１０の前記ＰＥＧ成分が約５ｋＤａ〜約２０ｋＤａの分子質量を有する、請求項１６に記載の方法。
【請求項１９】
前記ＰＥＧ−ＩＬ−１０の前記ＰＥＧ成分が約２０ｋＤａ超の分子質量を有する、請求項１６に記載の方法。
【請求項２０】
前記ＰＥＧ−ＩＬ−１０の前記ＰＥＧ成分が少なくとも約３０ｋＤの分子質量を有する、請求項１６に記載の方法。
【請求項２１】
前記ＩＬ−１５薬剤が成熟ヒトＩＬ−１５である、請求項１〜１５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２２】
前記ＩＬ−１５薬剤が成熟ヒトＩＬ−１５の変異体であり、前記変異体が成熟ヒトＩＬ−１５の活性と同等の活性を示す、請求項１〜１５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２３】
前記投与が非経口注射によるものである、請求項１〜２２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２４】
前記非経口注射が、皮下注射または静脈内注射である、請求項２３に記載の方法。
【請求項２５】
前記ＰＥＧ−ＩＬ−１０の量が１０．０μｇ／ｋｇ／日〜２０．０μｇ／ｋｇ／日である、請求項１〜２４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２６】
前記ＰＥＧ−ＩＬ−１０の量が１２．０μｇ／ｋｇ／日〜１８．０μｇ／ｋｇ／日である、請求項２５に記載の方法。
【請求項２７】
前記ＩＬ−１５薬剤の量が０．０１μｇ／ｋｇ／日〜１０．０μｇ／ｋｇ／日である、請求項１〜２４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２８】
前記ＩＬ−１５薬剤の量が０．１μｇ／ｋｇ／日〜１０．０μｇ／ｋｇ／日である、請求項２７に記載の方法。
【請求項２９】
前記ＩＬ−１５薬剤の量が１．０μｇ／ｋｇ／日〜１０．０μｇ／ｋｇ／日である、請求項２７に記載の方法。
【請求項３０】
前記癌が固形腫瘍である、請求項１〜２９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３１】
前記固形腫瘍が、乳癌、前立腺癌、肺癌、肝臓癌、膵臓癌、脳腫瘍、胃癌、卵巣癌、腎臓癌、精巣癌、及び黒色腫からなる群から選択される、請求項３０に記載の方法。
【請求項３２】
前記癌がリンパ腫である、請求項１〜２９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３３】
前記リンパ腫がＢ細胞リンパ腫である、請求項３２に記載の方法。
【請求項３４】
前記対象がヒトである、請求項１〜３３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３５】
前記ＰＥＧ−ＩＬ−１０及び前記ＩＬ−１５薬剤の効果が相加的である、請求項１〜３４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３６】
前記ＰＥＧ−ＩＬ−１０及び前記ＩＬ−１５薬剤の効果が相乗的である、請求項１〜３４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３７】
少なくとも１種の追加の予防薬または治療薬を投与することをさらに含む、請求項１〜３６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３８】
追加の予防薬または治療薬が化学療法剤である、請求項３７に記載の方法。
【請求項３９】
前記化学療法剤が白金系抗腫瘍剤である、請求項３８に記載の方法。
【請求項４０】
ある量の請求項１〜３９のいずれか１項に記載のＰＥＧ−ＩＬ−１０及びＩＬ−１５薬剤、ならびに薬学的に許容される希釈剤、担体または賦形剤を含む、医薬組成物。
【請求項４１】
前記賦形剤が等張注射溶液である、請求項４０に記載の医薬組成物。
【請求項４２】
前記組成物がヒト投与に適している、請求項４０に記載の医薬組成物。
【請求項４３】
少なくとも１種の追加の予防薬または治療薬をさらに含む、請求項４０〜４２のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項４４】
請求項４０〜４３のいずれか１項に記載の医薬組成物を含む、滅菌容器。
【請求項４５】
前記滅菌容器が注射器である、請求項４４に記載の滅菌容器。
【請求項４６】
請求項４４または請求項４５に記載の滅菌容器を含むキット。
【請求項４７】
少なくとも１種の追加の予防薬または治療薬を含む第２の滅菌容器をさらに含む、請求項４６に記載のキット。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願の相互参照
本出願は、２０１５年８月２５日出願の米国仮特許出願第６２／２０９，５００号の優先利益を主張するものであり、その出願の全体が参照により本明細書に組み込まれる。
【０００２】
本発明は、癌及び免疫関連障害を含む一連の多様な疾患及び障害の治療または予防に、他の薬剤と組み合わせてＰＥＧ−ＩＬ−１０を使用する方法に関する。
【背景技術】
【０００３】
緒言
サイトカインインターロイキン１０（ＩＬ−１０）は、Ｔ細胞、Ｂ細胞、マクロファージ、及び抗原提示細胞（ＡＰＣ）に作用して複数の免疫応答を調節する多面発現性サイトカインである。ＩＬ−１０は、活性化単球及び活性化マクロファージにおけるＩＬ−１α、ＩＬ−１β、ＩＬ−６、ＩＬ−８、ＴＮＦα、ＧＭ−ＣＳＦ、及びＧ−ＣＳＦの発現を阻害することによって免疫応答を抑制することができ、またＮＫ細胞によるＩＦＮ−γ細胞の産生を抑制する。ＩＬ−１０は主にマクロファージで発現するが、活性化Ｔ細胞、Ｂ細胞、マスト細胞、及び単球においても発現が検出されている。ＩＬ−１０は、免疫応答の抑制に加え、ＩＬ−２及びＩＬ−４処理胸腺細胞の増殖を刺激すること、Ｂ細胞の生存率を増加させること、ならびにＭＨＣクラスＩＩ発現を刺激することを含む免疫刺激特性を示す。
【０００４】
ヒトＩＬ−１０は、２つの単量体サブユニット間の非共有結合性の相互作用が破壊されると生物学的に不活性になるホモ二量体である。公開されたＩＬ−１０の結晶構造から得たデータによると、この機能性二量体はＩＦＮ−γと一定の類似性を示していることがわかる（Ｚｄａｎｏｖ  ｅｔ  ａｌ，（１９９５）Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ（Ｌｏｎｄ）３：５９１−６０１）。
【０００５】
その多面発現活性の結果として、ＩＬ−１０は、炎症病態、免疫関連障害、線維性障害、代謝障害、及び癌を含む広範囲の疾患、障害、及び病態と関連付けられている。複数のそのような疾患、障害、及び病態に対するＩＬ−１０の臨床的及び前臨床的評価は、ＩＬ−１０の治療的有効性を強固なものにしている。さらに、ＰＥＧ化ＩＬ−１０は、ある種の治療環境において非ＰＥＧ化ＩＬ−１０よりも有効であることが示されている。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００６】
本開示は、癌関連の疾患、障害、及び病態、及び／またはその症状の治療及び／または予防のために、ＩＬ−１５薬剤（例えば、ｒＨｕＩＬ−１５）及びその組成物と組み合わせて、ＰＥＧ−ＩＬ−１０（例えば、ｒＨｕＰＥＧ−ＩＬ−１０）及びその組成物を使用する方法を企図する。この方法には特定の投与レジメンを含み、本明細書に記載する癌関連の疾患、障害、及び病態の治療及び／または予防において相加的または相乗的効果をもたらすことが見込まれる。さらに、そのような併用療法は、ＰＥＧ−ＩＬ−１０及び／またはそれと組み合わされるＩＬ−１５薬剤の投与量及び／または投与頻度を減少させる場合が多く、その結果として有害作用を最小化または防止することができる。併用療法には、ＰＥＧ−ＩＬ−１０及びＩＬ−１５薬剤を個別に（例えば２つの異なった医薬組成物）または一緒に（例えば、ＰＥＧ−ＩＬ−１０とＩＬ−１５薬剤の両方を含む１つの医薬組成物）投与する場合の共投与を包含する。
【０００７】
ＩＬ−１０は、ＩＦＮγ、ＩＬ−１２、及びＴＮＦαの分泌を阻害する抗炎症性及び免疫抑制性サイトカインであると考えられている。これはまた、抗原提示及びその後のＣＤ４＋  Ｔ細胞の活性化を阻害することから、強力な免疫抑制性サイトカインであると一般的に考えられている。対照的に、ＩＬ−１５は、細胞溶解活性の刺激、サイトカイン分泌、ならびにＮＫ細胞、ＣＤ８＋記憶Ｔ細胞、及びナイーブＣＤ８＋細胞の生存性に関与する炎症誘発性サイトカインである。ＩＬ−１５は、ナイーブ及び記憶ＣＤ４及びＣＤ８＋  Ｔ細胞、ならびにＮＫ細胞の増殖を誘導し、ＩＦＮγ、ＴＮＦα、ＩＬ−１β、及びＩＬ−６の分泌を誘導し、ＣＤ８＋  Ｔ細胞とＮＫ細胞両方の細胞傷害性機能を増強する。ＩＬ−１５は多面発現性サイトカインとして、自然免疫及び適応免疫に重要な役割を果たす。適応免疫系及び自然免疫系に対するその刺激効果を考慮すると、ＩＬ−１５は免疫腫瘍学での使用に有望な候補である。
【０００８】
ＩＬ−１０はＩＬ−１５媒介性のＴ細胞活性化を阻害することが以前に報告されており、その抑制的役割と合致する。しかしながら、以下に記載するように、活性化ＣＤ８＋  Ｔ細胞へのＰＥＧ−ＩＬ−１０及びＩＬ−１５の曝露は、ＩＦＮγの分泌の少なくとも相加的な増加と関連していた。これらのデータは、ＩＬ−１５と組み合わせたＰＥＧ−ＩＬ−１０による治療が、Ｔ細胞のＩＬ−１５媒介性の活性化を阻害するよりもむしろ活性化を増強することを示唆している。したがって、本明細書に記載されるように、特定の条件下でのＩＬ−１５薬剤と組み合わせたＰＥＧ−ＩＬ−１０の投与は、これまで認識されていなかった潜在的な治療的影響を有する。癌関連の病態の治療を目的としたそのような併用療法は、本開示の具体的な一態様である。
【０００９】
ヒトＩＬ−１０はホモ二量体であり、各単量体は１７８個のアミノ酸を含み、その最初の１８個にシグナルペプチドを含む。特に記載のない限り、本明細書で参照するヒトＩＬ−１０とは、シグナルペプチドを欠失し、各単量体が１６０個のアミノ酸を含む成熟形態を指す（例えば、米国特許第６，２１７，８５７号を参照）。本明細書で使用される場合、用語「ＰＥＧ−ＩＬ−１０」とは、成熟ヒトＰＥＧ−ＩＬ−１０の活性と同等の活性を示すＰＥＧ化ヒトＩＬ−１０及びその変異体、例えばＰＥＧ化マウスＩＬ−１０及びＰＥＧ化形態の他のＩＬ−１０オルソログを指す。
【００１０】
本明細書で使用される場合、用語「ＩＬ−１５」、「ＩＬ−１５ポリペプチド（複数可）」、「ＩＬ−１５薬剤（複数可）」、「ＩＬ−１５分子（複数可）」などは広義に解釈されるものとし、例えばホモログ、変異体（変異タンパク質を含む）、及びそれらの断片を含むヒト及び非ヒトＩＬ−１５関連ポリペプチド、ならびに例えばリーダー配列（例えばシグナルペプチド）を有するＩＬ−１５ポリペプチドを含む。成熟ヒトＩＬ−１５は、１１４アミノ酸の単量体ポリペプチドである。２つの転写物が報告されており、１つは４８アミノ酸のシグナルペプチド（Ｌｏｎｇ  Ｓｉｇｎａｌ  Ｐｅｐｔｉｄｅ；ＬＳＰ）（図１Ａ；配列番号１）、もう１つは２１アミノ酸のシグナルペプチド（Ｓｈｏｒｔ  Ｓｉｇｎａｌ  Ｐｅｐｔｉｄｅ；ＳＳＰ）（図１Ｂ；配列番号２）であり、いずれも同じ成熟タンパク質（図１Ｃ；配列番号３）を産生する。いくつかの実施形態では、本開示は、成熟ヒトＩＬ−１５ポリペプチド（配列番号３）の使用を企図しているが、他の実施形態では、本開示は配列番号３のアミノ酸配列を含むＩＬ−１５ポリペプチドであって、少なくとも１つのアミノ酸置換、欠失、または付加を含むポリペプチドを企図する。
【００１１】
特定の実施形態では、本開示は、対象における癌関連の疾患、障害、または病態を治療または予防する方法を企図し、これには、ａ）少なくとも６．０ｎｇ／ｍＬの平均ＩＬ−１０血清トラフ濃度を達成するのに十分な量である、治療有効量のＰＥＧ−ＩＬ−１０、及びｂ）治療有効量のＩＬ−１５薬剤を対象に投与することを含む。他の実施形態では、本開示は、対象における癌関連の疾患、障害、または病態を治療または予防する方法を企図し、これには、ａ）治療有効量のＰＥＧ−ＩＬ−１０であって、前記量がある期間にわたって平均ＩＬ−１０血清トラフ濃度を維持するのに十分な量であり、この平均ＩＬ−１０血清トラフ濃度が少なくとも６．０ｎｇ／ｍＬであり、平均ＩＬ−１０血清トラフ濃度がある期間の少なくとも９０％の間維持される、治療有効量のＰＥＧ−ＩＬ−１０、及びｂ）治療有効量のＩＬ−１５薬剤を対象に投与することを含む。癌関連病態の治療または予防方法は、ＣＤ８＋  Ｔ細胞によって媒介され得る。
【００１２】
望ましいＩＬ−１０血清トラフ濃度は、疾患、障害、または病態の性質（例えば、局在化腫瘍または転移性疾患）、対象が疾患に罹患している度合い（例えば、早期疾患対後期疾患）、併用療法が実施されているかどうか、及び患者固有のパラメーター（例えば、肝臓機能及び腎臓機能）を含む、複数の要因に応じて決定することができる。例として、ＰＥＧ−ＩＬ−１０と化学療法剤との共投与は、臨床的利益を観察するのに約１〜２ｎｇ／ｍＬ範囲の血清トラフしか必要としないが、転移性癌の場合、同等の臨床的利益を達成するには６〜１０ｎｇ以上を必要とする場合がある（例えば、ＷＯ２０１４／１７２３９２を参照）。
【００１３】
したがって、本開示の特定の実施形態では、平均ＩＬ−１０血清トラフ濃度は、少なくとも６．０ｎｇ／ｍＬ、少なくとも７．０ｎｇ／ｍＬ、少なくとも８．０ｎｇ／ｍＬ、少なくとも９．０ｎｇ／ｍＬ、少なくとも１０．０ｎｇ／ｍＬ、少なくとも１１．０ｎｇ／ｍＬ、少なくとも１２．０ｎｇ／ｍＬ、少なくとも１３．０ｎｇ／ｍＬ、少なくとも１４．０ｎｇ／ｍＬ、少なくとも１５．０ｎｇ／ｍＬ、少なくとも１６．０ｎｇ／ｍＬ、少なくとも１７．０ｎｇ／ｍＬ、少なくとも１８．０ｎｇ／ｍＬ、少なくとも１９．０ｎｇ／ｍＬ、少なくとも２０．０ｎｇ／ｍＬ、少なくとも２１．０ｎｇ／ｍＬ、少なくとも２２．０ｎｇ／ｍＬ、または２２．０ｎｇ／ｍＬ超である。
【００１４】
他の特定の実施形態では、平均ＩＬ−１０血清トラフ濃度は、少なくとも１．０ｎｇ／ｍＬ、少なくとも１．５ｎｇ／ｍＬ、少なくとも２．０ｎｇ／ｍＬ、少なくとも２．５ｎｇ／ｍＬ、少なくとも３．０ｎｇ／ｍＬ、少なくとも３．５ｎｇ／ｍＬ、少なくとも４．０ｎｇ／ｍＬ、少なくとも４．５ｎｇ／ｍＬ、少なくとも５．０ｎｇ／ｍＬ、少なくとも５．５ｎｇ／ｍＬ、少なくとも６．０ｎｇ／ｍＬ、少なくとも６．５ｎｇ／ｍＬ、または７ｎｇ／ｍＬ超である。
【００１５】
さらなる実施形態では、期間は、少なくとも１２時間、少なくとも２４時間、少なくとも４８時間、少なくとも７２時間、少なくとも１週間、少なくとも２週間、少なくとも３週間、少なくとも１か月、少なくとも６週間、少なくとも２か月、少なくとも３か月、または３か月超である。
【００１６】
本開示の特定の実施形態では、平均ＩＬ−１０血清トラフ濃度は、期間の少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または期間の１００％の間維持される。
【００１７】
特定の定常状態の血清トラフ濃度（例えば、２．０ｎｇ／ｍＬ）を維持するのに十分な投与レジメンは、望ましい定常状態の血清トラフ濃度よりも高い初期の血清トラフ濃度をもたらし得ると想定される。哺乳動物の対象におけるＩＬ−１０の薬力学的及び薬物動態的な特徴のために、投与パラメーター（量及び頻度）が一定に維持される場合でも、初期のトラフ濃度（例えば、一連の維持投与の前に１種以上の負荷用量を投与することによって達成される）はある期間にわたって段階的ではあるが継続的に減少する。その期間以降、段階的ではあるが継続的な減少は停止し、定常状態の血清トラフ濃度が維持される。
【００１８】
例として、マウス（例えば、Ｃ５７ＢＬ／６マウス）への約０．１ｍｇ／ｋｇ／日のＩＬ−１０薬剤（例えば、ｍＩＬ−１０）の非経口投与（例えば、ＳＣ及びＩＶ）が、例えば２．０ｎｇ／ｍＬの定常状態の血清トラフ濃度を維持するために必要とされる。しかしながら、そうした定常状態の血清トラフ濃度は、０．１ｍｇ／ｋｇ／日での投与開始後（さらにまた任意の用量（複数可）の負荷後）約３０日まで達成できない場合がある。むしろ、初期の血清トラフ濃度（例えば、２．５ｎｇ／ｍＬ）が達成された後、その濃度は、例えば約３０日間にわたって、段階的ではあるが継続的に濃度は減少し、それ以降に望ましい定常状態の血清トラフ濃度（２．０ｎｇ／ｍＬ）が維持される。当業者は、例えば、ＡＤＭＥ及び患者固有のパラメーターを用いて、望ましい定常状態のトラフ濃度を維持するために必要な用量を決定できることになる。
【００１９】
対象における癌関連の疾患、障害、または病態を治療または予防する方法を企図し、これには、少なくともＰＥＧ−ＩＬ−１０のＥＣ５０の平均ＩＬ−１０血清トラフ濃度を達成するのに十分な量である、治療有効量のＰＥＧ−ＩＬ−１０を対象に投与することを含む。他の実施形態では、この量は、少なくともＰＥＧ−ＩＬ−１０のＥＣ６０、少なくともＥＣ７０、少なくともＥＣ８０、または少なくともＥＣ９０の平均ＩＬ−１０血清トラフ濃度を達成するのに十分である。
【００２０】
本明細書で使用される場合、用語「ＥＣ５０」及び語句「最大半量有効濃度」は、それらの一般に許容された意味を有する。すなわち、ＥＣ５０は、特定の曝露時間後にベースラインと最大値との中間の応答を誘発する治療薬（例えば、ＰＥＧ−ＩＬ−１０）の濃度である。当業者は、治療薬のＥＣ５０を決定する手段を熟知している。例えば、細胞を用いたアッセイにおいて、治療薬の濃度に関連したある種のパラメーターを測定した後、市販のソフトウェア（例えば、Ｇｒａｐｈｐａｄ  Ｓｏｆｔｗａｒｅ，Ｉｎｃ；Ｌａ  Ｊｏｌｌａ，ＣＡ）を使用して、ＥＣ５０を決定することができる。
【００２１】
本開示のＰＥＧ−ＩＬ−１０は、ＩＬ−１０の少なくとも１つのサブユニットの少なくとも１つのアミノ酸残基に共有結合した少なくとも１つのＰＥＧ分子を含むか、または他の実施形態ではモノＰＥＧ化ＩＬ−１０とジＰＥＧ化ＩＬ−１０との混合物を含み得る。ＰＥＧ−ＩＬ−１０のＰＥＧ成分は、約５ｋＤａ超、約１０ｋＤａ超、約１５ｋＤａ超、約２０ｋＤａ超、約３０ｋＤａ超、約４０ｋＤａ超、または約５０ｋＤａ超の分子質量を有し得る。いくつかの実施形態では、分子質量は、約５ｋＤａ〜約１０ｋＤａ、約５ｋＤａ〜約１５ｋＤａ、約５ｋＤａ〜約２０ｋＤａ、約１０ｋＤａ〜約１５ｋＤａ、約１０ｋＤａ〜約２０ｋＤａ、約１０ｋＤａ〜約２５ｋＤａ、または約１０ｋＤａ〜約３０ｋＤａである。
【００２２】
本明細書に示すように、いくつかの実施形態では、ＰＥＧ−ＩＬ−１０は成熟ヒトＰＥＧ−ＩＬ−１０であり、他の実施形態では成熟ヒトＰＥＧ−ＩＬ−１０の活性と同等の活性を示す成熟ヒトＰＥＧ−ＩＬ−１０の変異体を含む。
【００２３】
本開示は、癌関連の疾患、障害、または病態を治療または予防するために対象に投与される、併用療法のＰＥＧ−ＩＬ−１０成分の量が、１０．０μｇ／ｋｇ／日〜２０．０μｇ／ｋｇ／日である実施形態を企図する。いくつかの実施形態では、投与されるＰＥＧ−ＩＬ−１０の量は、１２．０μｇ／ｋｇ／日〜１８．０μｇ／ｋｇ／日である。
【００２４】
本開示によれば、ＰＥＧ−ＩＬ−１０は、対象における癌関連の疾患、障害、または病態を治療するために、ＩＬ−１５薬剤と組み合わせて投与することができる。いくつかの実施形態では、癌は、乳癌、前立腺癌、肺癌、肝臓癌、膵臓癌、脳腫瘍、胃癌、卵巣癌、腎臓癌、精巣癌、及び黒色腫に関連する腫瘍などの固形腫瘍である。他の実施形態では、癌はＢ細胞リンパ腫などのリンパ腫である。
【００２５】
実施例のセクションに示されるように、ＰＥＧ−ＩＬ−１０及びＩＬ−１５薬剤の治療効果は、いくつかの実施形態では相加的であるが、他の実施形態では相乗的である。
【００２６】
ＰＥＧ−ＩＬ−１０及びＩＬ−１５薬剤は、任意の有効な経路によって投与することができる。いくつかの実施形態では、それらは皮下注射を含む非経口注射によって投与される。特定の実施形態では、ＰＥＧ−ＩＬ−１０をＩＬ−１５薬剤とは別に投与し、他の実施形態ではＰＥＧ−ＩＬ−１０とＩＬ−１５薬剤を一緒に投与する。
【００２７】
上記のように、本開示の併用療法に使用される様々な種類のＩＬ−１５薬剤には、ホモログ、変異体（変異タンパク質を含む）、及びその断片を含むヒト及び非ヒトＩＬ−１５関連ポリペプチドが含まれる。いくつかの実施形態では、ＩＬ−１５ペプチドは、少なくとも６０、少なくとも７０、少なくとも８０、少なくとも９０、少なくとも９５、少なくとも１００、少なくとも１０１、少なくとも１０２、少なくとも１０３、少なくとも１０４、少なくとも１０５、少なくとも１０６、少なくとも１０７、少なくとも１０８、少なくとも１０９、少なくとも１１０、少なくとも１１１、少なくとも１１２、または少なくとも１１３のアミノ酸残基を有する。他の実施形態では、ＩＬ−１５ペプチドは、配列番号３のアミノ酸配列に対して、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％の配列同一性を有する。
【００２８】
さらなる実施形態では、本開示は、配列番号３のアミノ酸残基１３〜１５、１７〜２９、３６〜３９、５１〜５８、７１〜８４、または８９〜９８の領域の少なくとも１つに少なくとも１つのアミノ酸置換を有するＩＬ−１５ペプチドを企図する。他の実施形態では、本明細書に企図されるＩＬ−１５ペプチドが、配列番号３のアミノ酸残基１７〜２８、３６〜３８、５１〜５７、７１〜８４、または８９〜９８の領域の少なくとも１つに少なくとも１つのアミノ酸置換を有することを企図する。さらに別の実施形態では、ＩＬ−１５ペプチドは、配列番号３の１、３、１３〜１５、１７〜２９、３３、３４、３６〜３９、４１、４５、４６、４８、４９、５１〜５８、６０、６７、７１〜８４、８６、８７、８９〜９８、１０１、１０２、１０４、１１３、または１１４の位置の少なくとも１箇所に少なくとも１つのアミノ酸置換を有し、他の実施形態では、ＩＬ−１５ペプチドは、配列番号３の１、１７〜２８、３６〜３８、４１、４５、４６、４８、４９、５１〜５７、６０、６７、７１〜８４、８６、８７、８９〜９８、１０１、１１３、または１１４の位置の少なくとも１箇所に少なくとも１つのアミノ酸置換を有する。
【００２９】
本明細書に示すように、いくつかの実施形態では、ＩＬ−１５薬剤は成熟ヒトＩＬ−１５であるが、他の実施形態ではＩＬ−１５薬剤は成熟ヒトＩＬ−１５の活性と同等の活性を示す成熟ヒトＩＬ−１５の変異体である。
【００３０】
本開示は、癌関連の疾患、障害、または病態を治療または予防するために対象に投与される、併用療法のＩＬ−１５成分の量が、０．０３μｇ／ｋｇ／日〜３．０μｇ／ｋｇ／日である実施形態を企図する。他の実施形態では、ＩＬ−１５薬剤の量は０．０３μｇ／ｋｇ／日〜０．３μｇ／ｋｇ／日であり、さらに他の実施形態では、ＩＬ−１５薬剤の量は１．０μｇ／ｋｇ／日〜３．０μｇ／ｋｇ／日である。
【００３１】
特定の実施形態では、本開示は、血清濃度がピークに達するようにＩＬ−１５薬剤を投与し、その後、薬剤がクリアランスされ、再投与される前には実質的に測定不能となることを企図する。一例として、ＰＥＧ−ＩＬ−１０を２４時間ごとに投与して血清トラフ濃度を約１０ｎｇ／ｍＬに維持する場合、約１５ｎｇ／ｍＬをピークとして、その後１２時間以内に代謝され、投与サイクルの少なくとも半分にわたり測定可能なトラフレベルを示さない量でＩＬ−１５薬剤を共投与することができる。毒性の潜在的な危険性を回避するために、ＩＬ−１５のレベルが２０ｎｇ／ｍＬを超えないように投与を調整する必要がある。ＰＥＧ−ＩＬ−１０の投与と同様に、ＩＬ−１５薬剤の用量は、疾患、障害、または病態の性質（例えば、局在化腫瘍または転移性疾患）、対象が疾患に罹患している度合い（例えば、早期疾患対後期疾患）、併用療法が実施されているかどうか、及び患者固有のパラメーター（例えば、肝臓機能及び腎臓機能）を含む、複数の要因に応じて決定することができる。
【００３２】
本開示は、本明細書に記載するＰＥＧ−ＩＬ−１０及びＩＬ−１５薬剤、ならびに薬学的に許容される希釈剤、担体、または賦形剤を含んでいる医薬組成物を含む。いくつかの実施形態では、ＰＥＧ−ＩＬ−１０及びＩＬ−１５薬剤は、薬学的に許容される希釈剤、担体、または賦形剤をそれぞれに含む個別の医薬組成物に存在する。いくつかの実施形態では、賦形剤は等張注射溶液である。医薬組成物は、対象（例えば、ヒト）への投与に適するものであってよく、１つ以上の追加の予防薬または治療薬を含んでいてもよい。ある特定の実施形態では、医薬組成物は、１つ以上の滅菌容器（例えば、単回または複数回使用のバイアルまたは注射器）に収容されている。滅菌容器（複数可）はキットに含まれていてもよく、キットにはまた、少なくとも１つの追加の予防薬もしくは治療薬または薬理学的療法に使用できる任意の他の薬剤が含まれた１つ以上の追加の滅菌容器が含まれていてもよい。ＰＥＧ−ＩＬ−１０及びＩＬ−１５薬剤の前、それと同時、またはその後に、１つ以上の追加の予防薬または治療薬を投与してもよい。
【００３３】
癌関連の疾患、障害、または病態を治療及び／または予防する方法と共に使用できる追加の予防薬または治療薬（本明細書で補助的薬剤などとも称する）として、ある程度の治療的利益を提供し得る任意の薬剤が挙げられる。例として、予防薬または治療薬は、化学療法剤、免疫もしくは炎症関連薬剤、代謝薬、抗ウイルス薬、または抗血栓薬であり得るが、これらに限定されない。本開示の方法は、非薬理学的薬剤（例えば、放射線医学）と組み合わせて使用することもできる。
【００３４】
特定の実施形態では、追加の予防薬または治療薬は化学療法剤であり、その例は本明細書に記載されている。いくつかの実施形態では、化学療法剤は白金系抗腫瘍剤であり、白金配位錯体とも呼ばれる。これらの白金系抗腫瘍剤はＤＮＡを架橋し、それにより癌細胞のＤＮＡ修復及び／またはＤＮＡ合成を阻害する。そのような薬剤の例としては、シスプラチン、カルボプラチン、オキサリプラチン、サトラプラチン、ピコプラチン、ネダプラチン、及びトリプラチンが挙げられる。
【００３５】
本明細書に記載のＰＥＧ−ＩＬ−１０及びＩＬ−１５薬剤に合わせて投与レジメンを最適化するための方法及びモデルもまた、本開示の実施形態によって企図される。他の実施形態では、本開示は、本明細書に記載の併用療法に最も適する具体的な患者集団の特定方法を企図する。いくつかの実施形態では、そのような方法において、ある特定のバイオマーカーの存在及び／または程度が有用であるかを見出すことができる。
【００３６】
他の態様及び実施形態は、当業者が本開示を検討すれば明白となるであろう。
【図面の簡単な説明】
【００３７】
【図１Ａ】ＩＬ−１５のＬｏｎｇ  Ｓｉｇｎａｌ  Ｐｅｐｔｉｄｅ（ＬＳＰ）タンパク質（１６２アミノ酸残基；配列番号１）を示す。シグナルペプチド（下線）には残基１〜４８が含まれる。
【図１Ｂ】ＩＬ−１５のＳｈｏｒｔ  Ｓｉｇｎａｌ  Ｐｅｐｔｉｄｅ（ＳＳＰ）タンパク質（１３５アミノ酸残基；配列番号２）を示す。シグナルペプチド（下線）には残基１〜２１が含まれる。
【図１Ｃ】成熟ヒトＩＬ−１５タンパク質（１１４アミノ酸残基）（配列番号３）を示す。
【図２Ａ】Ｌｏｎｇ  Ｓｉｇｎａｌ  Ｐｅｐｔｉｄｅ（ＬＳＰ）ｃＤＮＡオープンリーディングフレーム（ＯＲＦ）（４８９塩基対（配列番号４）、１６２アミノ酸残基をコードする）を示す。シグナルペプチド（下線）には、最初の４８個のアミノ酸をコードする塩基対１〜１４４が含まれる。
【図２Ｂ】Ｓｈｏｒｔ  Ｓｉｇｎａｌ  Ｐｅｐｔｉｄｅ（ＳＳＰ）ｃＤＮＡオープンリーディングフレーム（ＯＲＦ）（４０８塩基対（配列番号５）、１３５アミノ酸残基をコードする）を示す。シグナルペプチド（下線）には、最初の２１個のアミノ酸をコードする塩基対１〜６３が含まれる。
【図２Ｃ】成熟ヒトＩＬ−１５タンパク質をコードする核酸配列（３４５塩基対（配列番号６）、１１４アミノ酸残基をコードする）を示す。
【図３】活性化時のＣＤ８＋  Ｔ細胞に抗ＣＤ３／２８及びＰＥＧ−ｒＨｕＩＬ−１０＋ｒＨｕＩＬ−１５を曝露すると、ＩＮＦγの分泌が適度に増強されることを示す。
【図４】活性化時のＣＤ８＋  Ｔ細胞に抗ＣＤ３及びＰＥＧ−ｈＩＬ−１０＋ｒＨｕＩＬ−１５を曝露すると、ＩＮＦγの分泌が相加的に増強されることを示す。
【図５】活性化時のＣＤ８＋  Ｔ細胞に抗ＣＤ３＋ｒＨｕＩＬ−１５を曝露し、次いで休眠段階でＰＥＧ−ｈＩＬ−１０＋ｒＨｕＩＬ−１５を曝露すると、ＩＮＦγの分泌が少なくとも相加的に増強されることを示す。括弧内の数字は、ｎｇ／ｍＬによる濃度を示す。
【図６】活性化時のＣＤ８＋  Ｔ細胞に抗ＣＤ３＋ｒＨｕＩＬ−１５を曝露し、次いで休眠段階でＰＥＧ−ｈＩＬ−１０＋ｒＨｕＩＬ−１５を曝露すると、グランザイムＢの分泌が相乗的に増強されることを示す。括弧内の数字は、ｎｇ／ｍＬによる濃度を示す。
【図７】活性時のＣＤ８＋  Ｔ細胞に抗ＣＤ３＋ｒＨｕＩＬ−１５を曝露し、次いで休眠段階でＰＥＧ−ｒｈｕＩＬ−１０＋ｒＨｕＩＬ−１５を曝露すると、パーフォリンの分泌が最大限に誘導されることを示す。括弧内の数字は、ｎｇ／ｍＬによる濃度を示す。
【図８】ＰＥＧ−ｒＭｕＩＬ−１０及びｒＨｕＩＬ−１５の併用が少なくとも相加的であり、マウスの４Ｔ１腫瘍の成長を制御することを示す。
【発明を実施するための形態】
【００３８】
本開示を詳細に説明するに先立ち、本開示は本明細書に記載の特定の実施形態に限定されないものと理解すべきであり、また本明細書で使用される用語は、特定の実施形態を記載する目的にのみ使用され、限定することを意図していないことも理解されるべきである。
【００３９】
ある範囲の数値が与えられるとき、文脈から特に明示されない限り、この範囲の上限と下限との間の各中間値、ならびにこの記載された範囲内の他のいずれの記載値または中間値も下限の単位の１０分の１まで本発明に包含されるものと理解されるべきである。これよりも狭い範囲の上限と下限は、その狭い範囲に独立して包含されてもよく、また記載された範囲から何ら明確に除外されていないことを条件として本発明内に包含される。記載された範囲が上限と下限の一方または両方を含む場合、その一方または両方を除外した範囲もまた本発明の範囲内に包含される。特に定義しない限り、本明細書で使用される技術用語及び科学用語はすべて、本発明が属する技術分野の当業者に共通して理解されているものと同じ意味を有する。
【００４０】
本明細書及び添付の特許請求の範囲で使用される場合、単数形「ａ」、「ａｎ」、及び「ｔｈｅ」は、文脈によって特に明示されない限り、複数の指示対象物を包含することに留意されたい。さらに、任意の構成要素を除外するように特許請求の範囲を起草できることにも留意されたい。そのため、本記載は、特許請求の範囲の構成要素の列挙に関連して、「単独で（ｓｏｌｅｌｙ）」、「のみ（ｏｎｌｙ）」などのような排他的用語を使用する際、または「否定的」限定を使用する際の前提基準としての役割を果たすことを意図とする。
【００４１】
本明細書で述べる刊行物は、本出願の出願日に先立つ開示に関してのみ提供される。さらに、提示された刊行物の日付は実際の出版日と異なる場合があり、それぞれ確認を要する場合がある。
【００４２】
概要
ＩＬ−１０はＩＬ−１５媒介性のＴ細胞活性化を阻害することが以前に報告されており、その抑制的役割と一致する。しかしながら、実施例のセクションに記載され、本明細書で詳細に説明されるように、活性化ＣＤ８＋  Ｔ細胞へのＰＥＧ−ＩＬ−１０及びＩＬ−１５の曝露は、ＩＦＮγの分泌の少なくとも相加的な増加と関連していた。これらのデータは、ＩＬ−１５と組み合わせたＰＥＧ−ＩＬ−１０による治療が、Ｔ細胞のＩＬ−１５媒介性の活性化を阻害するよりもむしろ活性化を増強することを示唆している。
【００４３】
その知見を考慮して、本開示は、癌関連の疾患、障害、及び病態、ならびに／またはその症状の治療及び／または予防のために、ＩＬ−１５薬剤（例えば、ｒＨｕＩＬ−１５）及びその組成物と組み合わせて、ＰＥＧ−ＩＬ−１０（例えば、ｒＨｕＰＥＧ−ＩＬ−１０）及びその組成物を使用する方法を企図する。この方法には特定の投与レジメンを含み、本明細書に記載する障害の治療及び／または予防において相加的または相乗的効果をもたらすことが見込まれる。
【００４４】
本開示のポリペプチド及び核酸分子と関連して参照される「ヒト」は、ポリペプチドまたは核酸分子が得られる方法または起源に関する限定を意味するものではなく、天然のヒトポリペプチドまたは核酸分子の配列に対応するような配列を参照しているにすぎないことに留意されたい。本開示は、ヒトポリペプチド及びそれをコードする核酸分子に加えて、他の種由来のＩＬ−１０に関連したポリペプチド及び対応する核酸分子を企図する。
【００４５】
定義
特に記載のない限り、以下の用語は、下記に記載する意味を有することを意図する。それ以外の用語は、本明細書中の別の箇所で定義する。
【００４６】
用語「患者」または「対象」は、ヒトまたは非ヒト動物（例えば、哺乳動物）を指す場合に同義に使用される。
【００４７】
例えば、対象、細胞、組織、器官、または体液などに適用される場合、用語「投与」、「投与する」などは、例えば、ＩＬ−１０またはＰＥＧ−ＩＬ−１０、核酸（例えば、天然ヒトＩＬ−１０をコードする核酸）、前述のものを含む医薬組成物、または診断薬の、対象、細胞、組織、器官、または体液への接触を意味する。細胞との関連において、投与は、細胞への試薬の接触（例えば、ｉｎ  ｖｉｔｒｏまたはｅｘ  ｖｉｖｏ）、ならびに体液への試薬の接触を含み、この場合に体液は細胞と接触した状態である。
【００４８】
用語「治療する」、「治療すること」、「治療」などは、疾患、障害、もしくは病態、またはそれらの症状の診断、観察などがされた後に、対象を悩ます疾患、障害、もしくは病態の根本原因の少なくとも１つ、または対象を悩ます疾患、障害、もしくは病態に関連する症状の少なくとも１つを、一時的にまたは恒常的に、消失、低減、抑制、緩和、または改善するために開始される、一連の措置（ＩＬ−１０、またはＩＬ−１０を含む医薬組成物を投与することなど）を指す。したがって、治療には、進行中の疾患を阻害すること（例えば、疾患、障害、もしくは病態、またはそれに関連した臨床症状の進行またはさらなる進行の停止）を含む。この用語はまた、ＩＬ−１０またはＰＥＧ−ＩＬ−１０が、例えば、液相またはコロイド相においてＩＬ−１０受容体に接触する場合などの、他の文脈でも使用される場合がある。
【００４９】
本明細書で使用される場合、用語「治療を必要とする」とは、対象が治療を必要とする、または将来的に治療から利益を得るという、医師またはその他の介護者によってなされる判断を指す。この判断は、医師または介護者の専門知識の範囲である様々な要因に基づいてなされる。
【００５０】
用語「予防する」、「予防すること」、「予防」などは、（例えば、疾患、障害、病態、またはそれらの症状の発現前に）対象が疾患、障害、病態などを発症するリスクを、一時的にまたは恒常的に（例えば、臨床症状の欠如によって決定されるように）予防、抑制、阻害、または低減する、あるいは一般に特定の疾患、障害、または病態を有すると事前に診断された対象との関連において、その発現を遅延させるような方法で開始される一連の措置（ＩＬ−１０、またはＩＬ−１０を含む医薬組成物を投与することなど）を指す。場合によって、これらの用語はまた、疾患、障害、または病態の進行を緩徐化させる、あるいは有害な状態、またはそれ以外の望ましくない状態にまで進行させないことを意味する。
【００５１】
本明細書で使用される場合、用語「予防を必要とする」とは、対象が予防治療を必要とする、または将来的に予防治療から利益を得るという、医師またはその他の介護者によってなされる判断を指す。この判断は、医師または介護者の専門知識の範囲である様々な要因に基づいてなされる。
【００５２】
「治療有効量」という表現は、対象に投与する場合に、疾患、障害、または病態の任意の症状、態様、または性質に、任意の検出可能な正の効果を及ぼすことができる量で、単独でまたは医薬組成物の一部として、及び単回投与または一連の投与の一部として、薬剤を対象に投与することに関する。治療有効量は、関連する生理学的効果を測定することによって確認することができ、投与レジメン及び対象の病態などの診断分析と関連して調整することができる。一例として、投与後に産生される炎症性サイトカイン量の測定値を、治療有効量が使用されているかどうかの指標にすることができる。
【００５３】
「変化をもたらすのに十分な量で」という表現は、特定の療法を実施する前に測定された指標のレベル（例えば、ベースラインレベル）と、特定の療法を実施する後に測定された指標のレベルとの間に検出可能な差が存在することを意味する。指標には、任意の客観的なパラメーター（例えば、ＩＬ−１０の血清濃度）または主観的なパラメーター（例えば、対象による健康状態の印象）を含む。
【００５４】
用語「小分子」とは、約１０ｋＤａ未満、約２ｋＤａ未満、または約１ｋＤａ未満である分子量を有する化学化合物を指す。小分子には、無機分子、有機分子、無機成分を含む有機分子、放射性原子を含む分子、及び合成分子を含むが、これらに限定されない。治療上、小分子は、大分子よりも、細胞透過性が高く、分解されにくく、かつ免疫応答を誘発しにくい可能性がある。
【００５５】
用語「リガンド」とは、例えば、受容体のアゴニストまたはアンタゴニストとして作用することができるペプチド、ポリペプチド、膜会合性もしくは膜結合性の分子、またはそれらの複合体を指す。「リガンド」には、天然及び合成リガンド、例えば、サイトカイン、サイトカイン変異体、類似体、変異タンパク質、及び抗体由来の結合組成物を包含する。「リガンド」にはまた、例えば、サイトカインのペプチド模倣体及び抗体のペプチド模倣体といった小分子を包含する。この用語にはまた、アゴニストでもアンタゴニストでもないが、例えばシグナル伝達または接着といった生物学的特性に著しく影響を与えることなく、受容体と結合することができる薬剤を包含する。さらに、この用語には、例えば化学的または組換え方法によって、可溶型の膜結合リガンドに改変された膜結合型リガンドを含む。リガンドまたは受容体は完全に細胞内性であり得る、すなわちサイトゾル、核、または他の何らかの細胞内区画に存在することができる。リガンドと受容体の複合体を「リガンド−受容体複合体」と称する。
【００５６】
用語「阻害剤」及び「アンタゴニスト」、または「活性化剤」及び「アゴニスト」とは、それぞれ阻害分子または活性化分子を指し、例えば活性化する対象には、例えばリガンド、受容体、補因子、遺伝子、細胞、組織、または器官がある。阻害剤は、例えば、遺伝子、タンパク質、リガンド、受容体、または細胞を減少、遮断、阻止、活性化遅延、不活性化、脱感作、または下方調節させる分子である。活性化剤は、例えば、遺伝子、タンパク質、リガンド、受容体、または細胞を増加、活性化、促進、活性化増強、感作、または上方調節させる分子である。阻害剤はまた、構造的活性化を低減、遮断、または不活性化する分子であると定義することができる。「アゴニスト」は、標的と相互作用して、標的の活性化の増加を引き起こすまたは促進する分子である。「アンタゴニスト」は、アゴニストの作用（複数可）に拮抗する分子である。アンタゴニストは、アゴニストの活性を阻止、低減、阻害、または中和し、またアンタゴニストは、同定されたアゴニストが存在しない場合でも、標的、例えば標的受容体の構造的活性を阻止、阻害、または低減することができる。
【００５７】
用語「調節する」、「調節」などは、ＰＥＧ−ＩＬ−１０（またはそれをコードする核酸分子）の機能または活性を直接的にまたは間接的に増減する、あるいはＰＥＧ−ＩＬ−１０と同等の効果を生む分子の能力を増強する分子（例えば、活性化剤または阻害剤）の能力を指す。用語「モジュレーター」は、上記の活性をもたらすことができる分子を広義に指すことを意図する。例としては、例えば、遺伝子、受容体、リガンド、または細胞のモジュレーターは、遺伝子、受容体、リガンド、または細胞の作用を変える分子であり、その調節する特性の作用を活性化、阻害、または変更することができる。モジュレーターは単独で作用することも、例えばタンパク質、金属イオン、または小分子といった補因子を使用することもできる。用語「モジュレーター」は、ＩＬ−１０と同じ作用機序によって作動し（すなわち、ＩＬ−１０と同じシグナル伝達経路をそれに類似した方法で調節する薬剤）、ＩＬ−１０と同等の（またはそれを超える）生物学的反応を誘発することができる薬剤を含む。
【００５８】
モジュレーターの例としては、小分子化合物及びその他の生物有機分子が挙げられる。小分子化合物の多数のライブラリ（例えば、コンビナトリアルライブラリ）が市販されており、モジュレーターを同定する出発点として役立てることができる。当業者は１つ以上のアッセイ（例えば、生化学的アッセイまたは細胞によるアッセイ）を開発することが可能であり、そのような化合物ライブラリをスクリーニングして、所望の特性を有する１つ以上の化合物を同定することができ、その後、医薬品化学分野の当業者が、例えば、類似体及びその誘導体を合成して評価することにより、こうした１つ以上の化合物を最適化することが可能である。合成及び／または分子モデリング試験を活性化剤の同定に利用することもできる。
【００５９】
分子の「活性」とは、リガンドまたは受容体への分子の結合；触媒活性；遺伝子発現、または細胞のシグナル伝達、分化、もしくは成熟化を刺激する能力；抗原活性；その他の分子の活性の調節などを表すか、または意味することができる。この用語はまた、細胞間相互作用（例えば、接着）の調節または維持に関する活性、あるいは細胞の構造体（例えば、細胞膜）の維持に関する活性を意味することができる。「活性」はまた、例えば［触媒活性］／［ｍｇタンパク質］、または［免疫学的活性］／［ｍｇタンパク質］といった平均比活性、生物学的区画における濃度などを意味することができる。用語「増殖活性」には、例えば、正常な細胞分割、ならびに癌、腫瘍、異形成、細胞形質転換、転移、及び血管形成を促進する、すなわちこれらに必要である、あるいはこれらに特に関連する活性を包含する。
【００６０】
本明細書で使用される場合、「同等の」、「同等の活性」、「と同等の活性」、「同等の効果」、「と同等の効果」などは、定量的かつ／または定性的にみなされ得る相対的な用語である。これらの用語の意味は、使用される文脈に依存する場合が多い。例として、技術的に認められたアッセイ（例えば、用量反応アッセイ）または技術的に認められた動物モデルにおいて決定したときに、一方の薬剤が他方の薬剤の活性の２０％しか達成できない場合、どちらもある１つの受容体を活性化させる２つの薬剤は、定性的観点からは同等の効果を有するとみなされ得るが、定量的観点からは２つの薬剤には同等の効果がないとみなされ得る。ある結果を別の結果と（例えば、ある結果を参照標準と）比較する場合、「同等の」とは、多くの場合、ある結果が参照標準から３５％未満、３０％未満、２５％未満、２０％未満、１５％未満、１０％未満、７％未満、５％未満、４％未満、３％未満、２％未満、または１％未満しか外れていないことを意味する。特定の実施形態では、ある結果が参照標準から１５％未満、１０％未満、または５％未満しか外れていない場合、ある結果は参照標準と同等である。例として、限定するものではないが、活性または効果は、有効性、安定性、可溶性、または免疫原性を意味し得る。
【００６１】
例えば、細胞、組織、器官、または生物の「応答」という用語は、例えば、生物学的区画内における濃度、密度、接着、もしくは遊走、遺伝子発現率、または分化の状態といった生化学的または生理学的挙動の変化を包含し、この場合の変化は、活性化、刺激、もしくは治療、または遺伝的プログラミングなどの内部機構と相関する。特定の文脈において、用語「活性化」、「刺激」などは、内部機構によって、ならびに外的または環境的要因によって調節される細胞活性化を指し、一方、用語「阻害」、「下方調節」などは、その逆の効果を指す。
【００６２】
本明細書で同義に使用される用語「ポリペプチド」、「ペプチド」、及び「タンパク質」は、任意の長さのアミノ酸の重合形態を指し、これには、遺伝的にコードされたアミノ酸及び非遺伝的にコードされたアミノ酸、化学的にまたは生化学的に修飾または誘導体化されたアミノ酸、ならびに修飾ポリペプチド骨格を有するポリペプチドを含み得る。こうした用語には、限定されるものではないが、異種アミノ酸配列を有する融合タンパク質；異種及び同種のリーダー配列を有する融合タンパク質；Ｎ末端メチオニン残基を有するまたは有しない融合タンパク質；免疫標識されたタンパク質を有する融合タンパク質などを含む、融合タンパク質が含まれる。
【００６３】
本開示を通して、１文字または３文字のコードによりアミノ酸が参照されることは理解されるであろう。読者の便宜のために、１文字及び３文字のアミノ酸コードを以下に示す。
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【００６４】
本明細書で使用される場合、用語「変異体」は、天然の変異体及び非天然の変異体を包含する。天然の変異体には、相同体（種ごとに、それぞれアミノ酸またはヌクレオチド配列が異なるポリペプチド及び核酸）、ならびにアレル変異体（ある種の中で個体ごとに、それぞれアミノ酸またはヌクレオチド配列が異なるポリペプチド及び核酸）を含む。非天然の変異体には、それぞれアミノ酸またはヌクレオチド配列内に変化を含むポリペプチド及び核酸を含み、配列の変化が人為的に導入される場合（例えば、変異タンパク質）と、例えば変化が実験室において人間の介入（「人間の手」）によって生じる場合とがある。したがって、本明細書で「変異タンパク質」とは、広義には、通常は単一のまたは複数のアミノ酸置換を有し、部位特異的もしくは不規則な変異誘発を受けたクローン遺伝子、または完全な合成遺伝子に多くが由来する、変異した組換えタンパク質を指す。
【００６５】
用語「ＤＮＡ」、「核酸」、「核酸分子」、「ポリヌクレオチド」などは本明細書で同義に使用され、重合形態の、任意の長さのヌクレオチド、すなわちデオキシリボヌクレオチドもしくはリボヌクレオチド、またはその類似体を指す。ポリヌクレオチドの非限定的な例としては、線状及び環状の核酸、メッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）、相補ＤＮＡ（ｃＤＮＡ）、組換えポリヌクレオチド、ベクター、プローブ、プライマーなどが挙げられる。
【００６６】
ポリペプチドの構造と関連して本明細書で使用される場合、「Ｎ末端（Ｎ−ｔｅｒｍｉｎｕｓ）」（または「アミノ末端」）及び「Ｃ末端（Ｃ−ｔｅｒｍｉｎｕｓ）」（または「カルボキシル末端」）は、それぞれポリペプチドの最端のアミノ末端及びカルボキシル末端を指すが、用語「Ｎ末端（Ｎ−ｔｅｒｍｉｎａｌ）」及び「Ｃ末端（Ｃ−ｔｅｒｍｉｎａｌ）」は、それぞれポリペプチドのアミノ酸配列におけるＮ末端側及びＣ末端側の相対位置を指し、それぞれＮ末端及びＣ末端に残基を含み得る。「直接Ｎ末端」または「直接Ｃ末端」とは、第１及び第２のアミノ酸残基が共有結合されて隣接するアミノ酸配列となる、第２のアミノ酸残基に対する第１のアミノ酸残基の位置を指す。
【００６７】
アミノ酸配列またはポリヌクレオチド配列に関連して、「に由来する」（例えば、ＩＬ−１０ポリペプチド「に由来する」アミノ酸配列）とは、ポリペプチドまたは核酸が、標準ポリペプチドまたは核酸（例えば、天然のＩＬ−１０ポリペプチドまたはＩＬ−１０をコードする核酸）の配列に基づく配列を有することを示すことを意図し、タンパク質または核酸が作製される供給源または方法に関する限定を意味するものではない。例としては、用語「に由来する」には、標準アミノ酸またはＤＮＡ配列の相同体または変異体を含む。
【００６８】
ポリペプチドとの関連において、用語「単離された」とは、天然のものである場合、天然で生じ得るものと異なる環境にある目的のポリペプチドを指す。「単離された」とは、目的とするポリペプチドを得るために実質的に濃縮されるサンプル内のポリペプチド、及び／またはその中の目的のポリペプチドが部分的にまたは実質的に精製されるポリペプチドを含むことを意味する。ポリペプチドが天然でない場合、「単離された」とは、ポリペプチドが合成手段または組換え手段によって作製された環境から分離されたことを示す。
【００６９】
「濃縮された」とは、目的のポリペプチドが、ａ）生体サンプル（例えば、ポリペプチドが天然に存在する、または投与後に存在するサンプル）などの、出発サンプルのポリペプチド濃度よりも高い濃度（例えば、少なくとも３倍超、少なくとも４倍超、少なくとも８倍超、少なくとも６４倍超、またはそれ以上）で、またはｂ）ポリペプチドが作製された環境（例えば、細菌細胞内の環境）よりも高い濃度で存在するように、サンプルが（例えば、科学者によって）人工的に操作されることを意味する。
【００７０】
「実質的に純粋な」とは、成分（例えば、ポリペプチド）が、組成物総量の約５０％超、一般に総ポリペプチド含有量の約６０％超を占めることを示す。より一般には、「実質的に純粋な」とは、組成物において総組成物の少なくとも７５％、少なくとも８５％、少なくとも９０％以上が目的成分であることを指す。場合によって、ポリペプチドは、組成物総量の約９０％超、または約９５％超を占めることになる。
【００７１】
リガンド／受容体、抗体／抗原、またはその他の結合対を指す場合、用語「特異的に結合する」または「選択的に結合する」とは、タンパク質及びその他の生物製剤の異種集団においてタンパク質の存在を決定する結合反応を示す。したがって、指定された条件下で、特異的リガンドは特定の受容体と結合し、サンプルに存在する他のタンパク質に有意な量で結合することはない。企図された方法の抗体、または抗体の抗原結合部位に由来する結合組成物は、その抗原、またはその変異体もしくは変異タンパク質に、任意の他の抗体、またはそれに由来する結合組成物との親和性よりも少なくとも２倍超、少なくとも１０倍超、少なくとも２０倍超、または少なくとも１００倍超の親和性で結合する。特定の実施形態では、抗体は、例えばスキャッチャード分析（Ｍｕｎｓｅｎ，ｅｔ  ａｌ．１９８０  Ａｎａｌｙｔ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．１０７：２２０−２３９）により測定したとき、約１０９リットル／モルを超える親和性を有することになる。
【００７２】
ＩＬ−１０及びＰＥＧ−ＩＬ−１０
ヒトサイトカイン合成阻害因子（ＣＳＩＦ）としても知られる、抗炎症サイトカインＩＬ−１０は、ＩＬ−１９、ＩＬ−２０、ＩＬ−２２、ＩＬ−２４（Ｍｄａ−７）、及びＩＬ−２６、インターフェロン（ＩＦＮ−α、−β、−γ、−δ、−ε、−κ、−Ω、及び−τ）、ならびにインターフェロン様分子（リミチン、ＩＬ−２８Ａ、ＩＬ−２８Ｂ、及びＩＬ−２９）を含む、一連のサイトカインである、タイプ（クラス）２サイトカインに分類される。
【００７３】
ＩＬ−１０は、免疫調節及び炎症において多面発現効果を有するサイトカインである。これはマスト細胞によって産生され、アレルギー反応部位でマスト細胞が有する炎症効果を中和する。ＩＬ−１０は、ＩＦＮ−γ、ＩＬ−２、ＩＬ−３、ＴＮＦα、及びＧＭ−ＣＳＦなどの炎症性サイトカインの合成を阻害できると同時に、特定のＴ細胞及びマスト細胞に対して刺激性であり、Ｂ細胞の成熟、増殖、及び抗体産生を刺激する。ＩＬ−１０はＮＦ−κＢ活性を遮断することができ、ＪＡＫ−ＳＴＡＴシグナル伝達経路の調節に関与する。また、ＣＤ８＋  Ｔ細胞の細胞傷害活性及びＢ細胞の抗体産生を誘発し、マクロファージ活性及び腫瘍促進性の炎症を抑制する。ＣＤ８＋  Ｔ細胞の調節は用量依存的であり、用量が高いほど、強い細胞傷害性反応を誘発する。
【００７４】
ヒトＩＬ−１０は、３７ｋＤａの分子質量をもつホモ二量体であり、それぞれ１８．５ｋＤａの単量体が１７８のアミノ酸を含み、その最初の１８個にシグナルペプチド、及び２つの分子内ジスルフィド結合を形成する２つのシステイン残基を含む。ＩＬ−１０二量体は、２つの単量体サブユニット間の非共有結合性の相互作用が破壊されると生物学的に不活性になる。
【００７５】
上述のように、用語「ＩＬ−１０」、「ＩＬ−１０ポリペプチド（複数可）」、「ＩＬ−１０分子（複数可）」、「ＩＬ−１０薬剤（複数可）」などは広義に解釈されるものとし、例えばホモログ、変異体（変異タンパク質を含む）、及びそれらの断片を含むヒト及び非ヒトＩＬ−１０関連ポリペプチド、ならびに例えばリーダー配列（例えばシグナルペプチド）を有するＩＬ−１０ポリペプチド及び前述の修飾型を含む。本開示は、８０％の相同性を示す、ＰＥＧ化形態のヒトＩＬ−１０（ＮＰ＿０００５６３）及びマウスＩＬ−１０（ＮＰ＿０３４６７８））及びそれらの使用を企図する。加えて、本開示の範囲には、他の哺乳動物種由来のＰＥＧ化ＩＬ−１０オーソログ及びその修飾型を含み、これには、ラット（アクセッション番号ＮＰ＿０３６９８６．２；ＧＩ  １４８７４７３８２）；ウシ（アクセッション番号ＮＰ＿７７６５１３．１；ＧＩ  ４１３８６７７２）；ヒツジ（アクセッション番号ＮＰ＿００１００９３２７．１；ＧＩ  ５７１６４３４７）；イヌ（アクセッション番号ＡＢＹ８６６１９．１；ＧＩ  １６６２４４５９８）；及びウサギ（アクセッション番号ＡＡＣ２３８３９．１；ＧＩ  ３２４２８９６）由来のものが含まれる。
【００７６】
ＩＩ型サイトカイン受容体であるＩＬ−１０受容体は、それぞれＲ１及びＲ２とも呼ばれるアルファ及びベータサブユニットからなる。受容体の活性化には、アルファとベータ両方への結合が必要である。ＩＬ−１０ポリペプチドのホモ二量体の一方はアルファと結合し、同じＩＬ−１０ポリペプチドのホモ二量体の他方はベータと結合する。
【００７７】
本明細書で使用される場合、用語「ＰＥＧ化ＩＬ−１０」、「ＰＥＧ−ＩＬ−１０」などは、一般にリンカーを介して、ＩＬ−１０タンパク質の少なくとも１つのアミノ酸残基に結合が安定であるように共有結合した１つ以上のポリエチレングリコール分子を有するＩＬ−１０分子を指す。用語「モノＰＥＧ化ＩＬ−１０」及び「モノＰＥＧ−ＩＬ−１０」は、１つのポリエチレングリコール分子が、一般にリンカーを介して、ＩＬ−１０二量体の１つのサブユニット上の単一アミノ酸残基に共有結合していることを示す。本明細書で使用される場合、用語「ジＰＥＧ化ＩＬ−１０」及び「ジＰＥＧ−ＩＬ−１０」は、少なくとも１つのポリエチレングリコール分子が、一般にリンカーを介して、ＩＬ−１０二量体の各サブユニット上の単一残基に結合していることを示す。
【００７８】
ある特定の実施形態では、本開示で使用されるＰＥＧ−ＩＬ−１０はモノＰＥＧ−ＩＬ−１０であり、これは１〜９個のＰＥＧ分子がリンカーを介してＩＬ−１０二量体の１つのサブユニットのＮ末端にあるアミノ酸残基のアルファアミノ基に共有結合している。１つのＩＬ−１０サブユニットに対するモノＰＥＧ化では、一般に、サブユニットの再構成により、非ＰＥＧ化ＩＬ−１０と、モノＰＥＧ化ＩＬ−１０と、ジＰＥＧ化ＩＬ−１０との不均一混合物が生じる。さらに、ＰＥＧ化反応を完了まで進行させると、一般に、非特異的及び多重ＰＥＧ化ＩＬ−１０が生じ、その生物活性が低下することになる。したがって、本開示の特定の実施形態は、本明細書に記載の方法によって作製されたモノＩＬ−１０とジＰＥＧ化ＩＬ−１０との混合物の投与を含む。
【００７９】
特定の実施形態では、ＰＥＧ部位の平均分子量は、約５ｋＤａ〜約５０ｋＤａである。ＩＬ−１０に対するＰＥＧ結合の方法または部位は重要ではないが、ある特定の実施形態では、ＰＥＧ化がＩＬ−１０ペプチドの活性を変化させないか、または最小限にしか変化させない。ある特定の実施形態では、半減期の増加が、生物学的活性の任意の減少よりも大きい。ＰＥＧ−ＩＬ−１０の生物学的活性は通常、米国特許第７，０５２，６８６号に記載のように、細菌抗原（リポ多糖（ＬＰＳ））を投与し、ＰＥＧ−ＩＬ−１０で処置した対象の血清中での炎症性サイトカイン（例えば、ＴＮＦαまたはＩＦＮγ）レベルの評価により測定される。
【００８０】
ＩＬ−１０変異体は、血清半減期の増加、ＩＬ−１０に対する免疫応答の低下、精製または調製の促進、ＩＬ−１０の単量体サブユニットへの変換の減少、治療有効性の向上、及び治療使用中の副作用の重篤度または発生の軽減を含む、様々な目的を考慮して調製することができる。アミノ酸配列変異体は通常、天然には見られない所定の変異体であるが、場合によって翻訳後変異体、例えばグリコシル化変異体でもあり得る。本開示は、それが適切なレベルのＩＬ−１０活性を保持する限り、ＩＬ−１０の任意のＰＥＧ化変異体の使用を企図する。
【００８１】
語句「保存的アミノ酸置換」とは、タンパク質中のアミノ酸（複数可）を、側鎖の酸性、塩基性、電荷、極性、または大きさが類似する側鎖を有するアミノ酸で置換することによってタンパク質の活性が保持されている置換を指す。保存的アミノ酸置換は一般に、以下の群のアミノ酸残基内での置換を伴う：１）Ｌ、Ｉ、Ｍ、Ｖ、Ｆ；２）Ｒ、Ｋ；３）Ｆ、Ｙ、Ｈ、Ｗ、Ｒ；４）Ｇ、Ａ、Ｔ、Ｓ；５）Ｑ、Ｎ；及び６）Ｄ、Ｅ。置換、挿入、または欠失の指針は、異なる変異タンパク質または異なる種のタンパク質のアミノ酸配列のアラインメントに基づくことができる。したがって、任意の天然のＩＬ−１０ポリペプチドに加えて、本開示は、１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０個、通常は２０、１０、または５個以下のアミノ酸置換を有し、その置換は通常、保存的アミノ酸置換であることを企図する。
【００８２】
本開示はまた、成熟ＩＬ−１０に由来した隣接するアミノ酸残基を含む成熟ＩＬ−１０の活性断片（例えば、部分配列）のＰＥＧ化形態を企図する。ペプチドまたはポリペプチド部分配列の隣接アミノ酸残基の長さは、部分配列が由来する特定の天然アミノ酸配列に応じて変化する。一般に、ペプチド及びポリペプチドは、約２０アミノ酸〜約４０アミノ酸、約４０アミノ酸〜約６０アミノ酸、約６０アミノ酸〜約８０アミノ酸、約８０アミノ酸〜約１００アミノ酸、約１００アミノ酸〜約１２０アミノ酸、約１２０アミノ酸〜約１４０アミノ酸、約１４０アミノ酸〜約１５０アミノ酸、約１５０アミノ酸〜約１５５アミノ酸、約１５５アミノ酸〜最大全長ペプチドまたはポリペプチドであり得る。
【００８３】
さらに、ＩＬ−１０ポリペプチドは、標準配列と比較して、規定の長さの隣接アミノ酸（例えば、「比較枠」）にわたって、規定の配列同一性を有し得る。比較するための配列アラインメント方法は当技術分野で周知である。配列比較に最適なアラインメントは、例えば、Ｓｍｉｔｈ  ＆  Ｗａｔｅｒｍａｎ，Ａｄｖ．Ａｐｐｌ．Ｍａｔｈ．２：４８２（１９８１）の局所相同性アルゴリズムによって、Ｎｅｅｄｌｅｍａｎ  ＆  Ｗｕｎｓｃｈ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．４８：４４３（１９７０）の相同性アラインメントアルゴリズムによって、Ｐｅａｒｓｏｎ  ＆  Ｌｉｐｍａｎ，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８５：２４４４（１９８８）の類似性検索法によって、これらのアルゴリズムのコンピューター実装（Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ  Ｓｏｆｔｗａｒｅ  Ｐａｃｋａｇｅ，Ｍａｄｉｓｏｎ，Ｗｉｓ．のＧＡＰ、ＢＥＳＴＦＩＴ、ＦＡＳＴＡ、及びＴＦＡＳＴＡ）によって、または手動アラインメント及び目視検査（例えば、Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ（Ａｕｓｕｂｅｌ  ｅｔ  ａｌ．，ｅｄｓ．１９９５  ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔ）を参照）によって実施することができる。
【００８４】
一例として、ＰＥＧ化され得る適切なＩＬ−１０ポリペプチドは、約２０アミノ酸〜約４０アミノ酸、約４０アミノ酸〜約６０アミノ酸、約６０アミノ酸〜約８０アミノ酸、約８０アミノ酸〜約１００アミノ酸、約１００アミノ酸〜約１２０アミノ酸、約１２０アミノ酸〜約１４０アミノ酸、約１４０アミノ酸〜約１５０アミノ酸、約１５０アミノ酸〜約１５５アミノ酸、約１５５アミノ酸〜最大全長ＩＬ−１０ペプチドまたはポリペプチドの隣接するストレッチに対して、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含み得る。
【００８５】
以下でさらに述べるように、ＩＬ−１０ポリペプチドは、天然源（例えば、天然に存在する環境以外の環境）から単離することも、（例えば、細菌、酵母、ピキア属、昆虫細胞などの、遺伝子改変された宿主細胞における）組換えにより作製することもでき、この場合の遺伝子改変された宿主細胞は、ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む核酸によって修飾される。ＩＬ−１０ポリペプチドはまた、（例えば、無細胞化学合成によって）合成的に産生することができる。
【００８６】
天然または非天然のアイソフォーム、アレル変異体、及びスプライスバリアントを含む、ＩＬ−１０分子をコードする核酸分子が、本開示によって企図される。本開示はまた、天然のＤＮＡ配列から１つ以上の塩基が変化しているが、それでもなお、遺伝コードの縮重によりＩＬ−１０ポリペプチドに対応するアミノ酸配列に翻訳される核酸配列を包含する。
【００８７】
ＩＬ−１５
ＭＧＣ９７２１とも称されるインターロイキン１５（ＩＬ−１５）は、ＮＫ細胞、ＣＤ８  ＋記憶Ｔ細胞、及びナイーブＣＤ８  ＋細胞の細胞溶解活性の刺激、サイトカイン分泌、及び生存性に関与する炎症誘発性サイトカインである（Ｆｅｈｎｉｇｅｒ，ｅｔ  ａｌ．（１９９９）Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １６２：４５１１−２０を参照）。ＩＬ−１５は、ナイーブ及び記憶ＣＤ４及びＣＤ８＋  Ｔ細胞、ならびにＮＫ細胞の増殖を誘導する（Ｓｎｅｌｌｅｒ，Ｍ．Ｃ．，ｅｔ  ａｌ．（２０１１）Ｂｌｏｏｄ  １１８（２６）：６８４５−４８；Ｗａｌｄｍａｎｎ，Ｔ．Ａ．，ｅｔ  ａｌ．（２０１１）Ｂｌｏｏｄ  １１７（１８）：４７８７−９５）。加えて、ＩＬ−１５はＩＦＮ−γ、ＴＮＦα、ＩＬ−１β、及びＩＬ−６の分泌を誘導し（Ｃｏｎｌｏｎ，Ｋ．Ｃ．，ｅｔ  ａｌ．（２０１５）Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｏｎｃｏｌ  ３３（１）：７４−８２；  Ｂｅｒｇｅｒ，Ｃ．，ｅｔ  ａｌ．（２００９）Ｂｌｏｏｄ  １１４（１２）：２４１７−２６）、ＣＤ８＋  Ｔ細胞（Ｌｉｕ，Ｋ．，ｅｔ  ａｌ．（２００２）Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ  ９９（９）：６１９２−９７；Ｗａｎｇ，Ｎ．Ｐ．，ｅｔ  ａｌ．（２００２）Ａｎｎ  Ｎ  Ｙ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ９７５：４６−５６）及びＮＫ細胞（Ｈｕｎｔｉｎｇｔｏｎ，Ｎ．Ｄ．，ｅｔ  ａｌ．（２００９）Ｊ  Ｅｘｐ  Ｍｅｄ  ２０６（１）：２５−３４））両方の細胞傷害性機能を増強する。
【００８８】
ＩＬ−１５は多面発現性サイトカインとして、自然免疫及び適応免疫に重要な役割を果たす（Ｌｏｄｏｌｃｅ，  ｅｔ  ａｌ．（Ｄｅｃ  ２００２）Ｃｙｔｏｋｉｎｅ  Ｇｒｏｗｔｈ  Ｆａｃｔｏｒ  Ｒｅｖ  １３（６）：４２９−３９）及びＡｌｖｅｓ，ｅｔ  ａｌ．（２００３）Ｂｌｏｏｄ  １０２：２５４１−４６を参照）。適応免疫系及び自然免疫系に対するその刺激効果を考慮すると、ＩＬ−１５は免疫腫瘍学での使用に有望な候補である。
【００８９】
ＩＬ−１５は、マクロファージ、単球、樹状細胞、及び線維芽細胞を含む多数の細胞型によって構成的に発現される（Ｇｒａｂｓｔｅｉｎ，ｅｔ  ａｌ．（Ｍａｙ  １９９４）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２６４（５１６１）：９６５−６８）。ＩＬ−１５の発現は、例えば、サイトカイン（例えば、ＧＭ−ＣＳＦ）、二本鎖ｍＲＮＡ、非メチル化ＣｐＧオリゴヌクレオチド、Ｔｏｌｌ様受容体を介したリポ多糖、及びインターフェロン（例えば、ＩＦＮ−γ）によって、または例えば、ヘルペスウイルス、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ、及びＣａｎｄｉｄａ  ａｌｂｉｃａｎｓによる単球の感染後に刺激され得る（Ｂａｍｆｏｒｄ，ｅｔ  ａｌ．（Ｍａｙ  １９９８）Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １６０（９）：４４１８−２６）。
【００９０】
以下でさらに述べるように、ＩＬ−１５はＴ細胞及びＮＫ細胞の特異的受容体複合体に結合する。ＩＬ−１５及びＩＬ−１５Ｒαは、活性化樹状細胞及び単球で共発現され、ＩＬ−１５はＩＬ−１５Ｒαとの複合体で機能する（Ｂｅｒｇａｍａｓｃｈｉ，ｅｔ  ａｌ．（２００８）Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ  ２８３：４１８９−９９）。ＩＬ−１５／ＩＬ−１５αはヘテロ二量体として、Ｔ細胞及びＮＫ細胞の２本の鎖、ＩＬ−２Ｒβ（ＩＬ−１５Ｒβ；ＣＤ１２２とも称される）分子及びγｃ（ＩＬ−２ＲＧ；ＣＤ１３２；γ−ｃ；共通γ鎖とも称される）分子に結合する。β鎖及びγｃ鎖は、ＩＬ−２とＩＬ−１５との間で共有され、これらのサイトカインのシグナル伝達に必須である（Ｇｉｒｉ  ｅｔ  ａｌ．（１９９４）ＥＭＢＯ  Ｊ．１３：２８２２−３０及びＧｉｒｉ  ｅｔ  ａｌ．（１９９５）ＥＭＢＯ  Ｊ．１４：３６５４−６３）。
【００９１】
ＩＬ−１５は、Ｉｎ  ｖｉｔｒｏでＩＬ−２の機能に類似する多くの機能を媒介することが示されおり、これはＩＬ−２／ＩＬ−１５βγｃ受容体複合体の共有と符合する。両サイトカインは生物学的活性が数多く共通しており、Ｔリンパ球の生存に対して類似した寄与を示す（Ｗａｌｄｍａｎｎ，ｅｔ  ａｌ．（１９９９）Ａｎｎ  Ｒｅｖ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １７：１９−４９を参照）。ＩＬ−２とＩＬ−１５との間の生物学的差は、例えば、産生部位の相違、それぞれＩＬ−２α及びＩＬ−１５Ｒαと称される膜受容体タンパク質との会合強度、及びこれらの余分な受容体分子の調節に起因する可能性が高いと考えられている。ＩＬ−２及びＩＬ−１５は、ＣＤ８＋記憶細胞の数の調節で役割を果たす。
【００９２】
ＩＬ−１５は、染色体４ｑ３１上の３４ｋｂ領域によってコードされる１２．８ｋＤａ単量体糖タンパク質であると予測される。ＩＬ−１５は４αヘリックスバンドルファミリーに属し、これには他のメンバーとしてＩＬ−２、ＩＬ−４、ＩＬ−７、ＩＬ−９、顆粒球コロニー刺激因子（Ｇ−ＣＳＦ）、及び顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ）が含まれる。ヒトＩＬ−１５のゲノム構造は、９個のエクソン（１〜８及び４Ａ）及び８個のイントロンを含む。ヒト及びマウスは、類似のイントロン／エクソン構造を共有する。成熟タンパク質をコードするＩＬ−１５遺伝子部分の全体的なイントロン／エクソン構造は、ＩＬ−２遺伝子及び他の４αヘリックスバンドルサイトカインのものと類似する。
【００９３】
当業者は、ＩＬ−１５の核酸配列及びアミノ酸配列が遺伝子データベース（例えば、ＧｅｎＢａｎｋ）に公開されていることを理解することになる。図１Ｃ（配列番号３）に示すように、成熟ヒトＩＬ−１５タンパク質は１１４のアミノ酸残基（１２．８ｋＤＡ）を含む。Ｅ．ｃｏｌｉで産生された組換えヒトＩＬ−１５は、単一の非グリコシル化ポリペプチド鎖（Ｎ末端メチオニンを含み、１２．９ｋＤの分子質量を有する１１５のアミノ酸残基）である。２つの転写物が報告されており、報告によればいずれも同じ成熟タンパク質を産生する。図１Ａ（配列番号１）を参照すると、ＩＬ−１５のＬｏｎｇ  Ｓｉｇｎａｌ  Ｐｅｐｔｉｄｅ（ＬＳＰ）タンパク質（アクセッション番号ＢＣ０１８１４９．２）は、４８残基のシグナルペプチド（下線）を含む１６２のアミノ酸残基を含む。図１Ｂ（配列番号２）を参照すると、ＩＬ−１５のＳｈｏｒｔ  Ｓｉｇｎａｌ  ｐｅｐｔｉｄｅ  （ＳＳＰ）タンパク質（アクセッション番号ＢＣ１００９６２．１）は、２１残基のシグナルペプチド（下線）を含む１３５のアミノ酸残基を含む。ＬＳＰは分泌タンパク質として記載されており、ＳＳＰは細胞内に残存するタンパク質として記載されている。
【００９４】
図２Ａは、Ｌｏｎｇ  Ｓｉｇｎａｌ  Ｐｅｐｔｉｄｅ（ＬＳＰ）ｃＤＮＡ  ＯＲＦ（４８９塩基対（配列番号４）、１６２のアミノ酸残基をコードする）（アクセッション番号ＢＣ０１８１４９．２）を示し、シグナルペプチド（下線）は、最初の４８個のアミノ酸をコードする塩基対１〜１４４を含む。図２Ｂには、Ｓｈｏｒｔ  Ｓｉｇｎａｌ  ｐｅｐｔｉｄｅ（ＳＳＰ）ｃＤＮＡ  ＯＲＦ（４０８塩基対（配列番号５）、１３５のアミノ酸残基をコードする）（アクセッション番号ＢＣ１００９６２．１）を示し、シグナルペプチド（下線）は、最初の２１個のアミノ酸をコードする塩基対１〜６３を含む。図２Ｃは、成熟ヒトＩＬ−１５タンパク質をコードする核酸配列（３４５塩基対（配列番号６）、１１４のアミノ酸残基をコードする）を示す。
【００９５】
例示的な非ヒト哺乳動物のＩＬ−１５核酸配列またはアミノ酸配列は、例えば、霊長類、イヌ、ネコ、ブタ、ウマ、ウシ、ヒツジ、齧歯類、マウス、ラット、ハムスター、及びモルモット由来であり得る。例示された非ヒト哺乳動物のＩＬ−１５核酸配列のアクセッション番号としては、Ｕ１９８４３（マカク）；ＤＱ０２１９１２（マカク）；ＡＢ０００５５５（マカク）；ＮＭ＿２１４３９０（ブタ）；ＤＱ１５２９６７（ヒツジ）；ＮＭ＿１７４０９０（ウシ）；ＮＭ＿００８３５７（マウス）；ＮＭ＿０１３１２９（クマネズミ）；ＤＱ０８３５２２（スイギュウ）；ＸＭ＿８４４０５３（イヌ）；ＤＱ１５７４５２（ウサギ目）；及びＮＭ＿００１００９２０７（ネコ）が挙げられる。例示された非ヒト哺乳動物のＩＬ−１５アミノ酸配列のアクセッション番号としては、ＡＡＢ６０３９８（マカク）；ＡＡＹ４５８９５（マカク）；ＮＰ＿９９９５５５（ブタ）；ＮＰ＿７７６５１５（ウシ）；ＡＡＹ８３８３２（スイギュウ）；ＡＢＢ０２３００（ヒツジ）；ＸＰ＿８４９１４６（イヌ）；ＮＰ＿００１００９２０７（ネコ）；ＮＰ＿０３７２６１（クマネズミ）；及びＮＰ＿０３２３８３（マウス）が挙げられる。成熟ヒトＩＬ−１５（「ｈＩＬ−１５」）と比較した成熟カニクイザルＩＬ−１５（「ｃＩＬ−１５」）の同一性は９６％であり、一方、成熟ｈＩＬ−１５と比較した成熟マウスＩＬ−１５（「ｍＩＬ−１５」）の同一性は７５％である。
【００９６】
ヒトＩＬ−１５は、位置Ｃ４２〜Ｃ８８及びＣ３５〜Ｃ８５に２つのジスルフィド結合を含み、前者はＩＬ−２内のＣ−Ｃと相同である。Ｎ７９及びＮ１１２に２つのＮ結合グリコシル化部位がある（使用される分析方法によっては、Ｎ７１が第３のグリコシル化部位であるとみなされる場合がある）。成熟ＩＬ−１５タンパク質は、アミノ酸残基１〜１５、１８〜５７、６５〜７８、及び９７〜１１４に強度のらせん運動を有し、その４αヘリックスバンドル構造を支持していると予測されている（Ｆｅｈｎｉｇｅｒ，ｅｔ  ａｌ．（Ｊａｎ  １，２００１）Ｂｌｏｏｄ  ９７（１））。
【００９７】
先に示したように、ＩＬ−１５とＩＬ−２との間には連鎖が存在する。ＩＬ−１５及びＩＬ−１５Ｒα発現の複雑な調節及び差異のパターンに基づくと、この受容体／リガンド対の重要なｉｎ  ｖｉｖｏ機能はＩＬ−２及びＩＬ−２Ｒαのものとは異なる可能性が高い。ＩＬ−１５は、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、ＮＫ−Ｔ細胞、及び腸管上皮内リンパ球の発現及び機能時における重要性を含め、いくつかの重要な重複しない役割を示す。ＩＬ−１５が自己免疫過程（例えば関節リウマチ）及び悪性腫瘍（例えば、Ｔ細胞白血病）に関して役割を担うことが報告されているように、正常なＩＬ−１５機能の破壊は、対象における不都合な作用と関係している。
【００９８】
ＩＬ−１５及びＩＬ−２は、いずれも受容体サブユニットＩＬ−２Ｒβ及び共通γ鎖（γ（Ｃ））経由でシグナルを伝達するが、まったく同じ生物学的機能を共有しているわけではない。ＩＬ−１５−ＩＬ−１５Ｒα−ＩＬ−２Ｒβ−γ（ｃ）四元複合体の構造において、ＩＬ−１５は、ＩＬ−２−ＩＬ−２Ｒα−ＩＬ−２Ｒβ−γ（ｃ）四元複合体のものと類似するヘテロ二量体のＩＬ−２Ｒβ及びγ（ｃ）に結合する。ＩＬ−１５Ｒαは、ＩＬ−２Ｒβに対するＩＬ−１５の親和性を実質的に増加させ、それがひいてはＩＬ−１５のトランスシグナリングに必要であることが示されている。ＩＬ−１５及びＩＬ−２は類似したシグナルを誘導し、ＩＬ−１５Ｒαに対するＩＬ−２Ｒαの特異性が細胞応答性を決定することが示されている。（Ｒｉｎｇ  ｅｔ  ａｌ．（Ｄｅｃ．  １３  ２０１２）Ｎａｔ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３（１２）：１１８７−９５を参照）。
【００９９】
ＩＬ−１５は主に膜結合形態で存在するが、可溶性分子としても存在し（Ｊａｋｏｂｉｓｉａｋ，  ｅｔ  ａｌ．（Ａｐｒｉｌ  ２０１１）Ｃｙｔｏｋｉｎｅ  Ｇｒｏｗｔｈ  Ｆａｃｔｏｒ  Ｒｅｆ．２２（２）：９９−１０９）、２つの異なったシグナル伝達機構に関連する。一次機構は、膜結合複合体ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒαによって媒介されるトランス提示である。このシグナル伝達機構では、ＩＬ−１５はＩＬ−１５Ｒα受容体に結合し、その後、細胞表面にＩＬ−１５Ｒβγｃ複合体を有する周辺細胞に提示される。二次機構はシス提示であり、この場合ＩＬ−１５は、ＩＬ−１５Ｒαによって同じ細胞上の１５Ｒβγｃシグナル伝達複合体に提示される。一次シグナル伝達機構に関しては、ＩＬ−１５Ｒα受容体へのＩＬ−１５の結合及びそれに続くＩＬ−１５Ｒβγｃ複合体を有する周辺細胞への提示の際、ＩＬ−１５βサブユニットがＪａｎｕｓキナーゼ１（Ｊａｋ１）を活性化し、γｃサブユニットがＪａｎｕｓキナーゼ２を活性化し、それによってシグナル伝達性転写因子、ならびに転写３（ＳＴＡＴ３）及びＳＴＡＴ５の活性化因子のリン酸化及び活性化をもたらす。ＩＬ−１５及びＩＬ−２は受容体サブユニットが共通しているため、Ｂ細胞リンパ腫（Ｂｃｌ−２）；マイトジェン活性化タンパク質キナーゼ（ＭＡＰ）経路の誘導、ならびにリンパ球活性化タンパク質チロシンキナーゼ（Ｌｃｋ）及び脾臓チロシンキナーゼ（Ｓｙｋ）のリン酸化を含め、細胞増殖及び成熟をもたらす類似の下流効果を有する（Ｓｃｈｌｕｎｓ，ｅｔ  ａｌ．（Ａｕｇ  ２００５）Ｉｎｔ．Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ．３７（８）：１５６７−７１）。
【０１００】
対照的に、マスト細胞におけるＩＬ−１５Ｒのシグナル伝達経路は、Ｊａｋ１／３及びＳＴＡＴ３／５の代わりにＪａｋ２及びＳＴＡＴ５を含む。リン酸化されたＳＴＡＴは転写因子を形成し、適切な遺伝子の転写を活性化する。ＩＬ−１５Ｒのβ鎖は、Ｌｃｋ、Ｆｙｎ、及びＬｙｎキナーゼを含むＳｒｃファミリーのタンパク質チロシンキナーゼを動員すると共に、活性化する。β鎖はまた、ホスファチジルイノシトール３−キナーゼ（ＰＩ３Ｋ）及びＡＫＴシグナル伝達経路を活性化し、ｃ−Ｆｏｓ、ｃ−Ｊｕｎ、ｃ−Ｍｙｃ、及びＮＦ−κＢを含む様々な転写因子の発現を誘導する（Ｊａｋｏｂｉｓｉａｋ，  ｅｔ  ａｌ．（Ａｐｒｉｌ  ２０１１）Ｃｙｔｏｋｉｎｅ  Ｇｒｏｗｔｈ  Ｆａｃｔｏｒ  Ｒｅｆ．２２（２）：９９−１０９）。
【０１０１】
ＩＬ−１０とＩＬ−１５の同時投与
上述のように、ＩＬ−１０は、ＩＦＮγ、ＩＬ−１２（Ｄ’Ａｎｄｒｅａ，Ａ．，ｅｔ  ａｌ．（１９９３）Ｊ  Ｅｘｐ  Ｍｅｄ  １７８（３）：１０４１−４８）、及びＴＮＦα（Ａｒｍｓｔｒｏｎｇ，Ｌ．，ｅｔ  ａｌ．（１９９６）Ｔｈｏｒａｘ  ５１（２）：１４３−４９）の分泌を阻害する抗炎症性及び免疫抑制性サイトカインであると考えられている。ＩＬ−１０はまた、抗原提示及びその後のＣＤ４＋  Ｔ細胞の活性化を阻害する（ｄｅ  Ｗａａｌ  Ｍａｌｅｆｙｔ，Ｒ．，ｅｔ  ａｌ．（１９９１）Ｊ  Ｅｘｐ  Ｍｅｄ  １７４（５）：１２０９−２０；ｄｅ  Ｗａａｌ  Ｍａｌｅｆｙｔ，Ｒ．，ｅｔ  ａｌ．（１９９１）Ｊ  Ｅｘｐ  Ｍｅｄ  １７４（４）：９１５−２４）ことから、強力な免疫抑制性サイトカインであると一般的に考えられている。
【０１０２】
ＩＬ−１０はＩＬ−１５媒介性のＴ細胞活性化を阻害することが示されており、これはその抑制的役割と符合する（Ｋｏｒｈｏｌｚ，Ｄ．，ｅｔ  ａｌ．（１９９７）Ｂｌｏｏｄ（９０）１１：４５１３−２１）。しかしながら、実施例のセクションに記載されるように、活性化ＣＤ８＋  Ｔ細胞へのＰＥＧ−ＩＬ−１０及びＩＬ−１５の曝露は、ＩＦＮγの分泌の少なくとも相加的な増加と関連していた。これらのデータは、ＩＬ−１５と組み合わせたＰＥＧ−ＩＬ−１０による治療が、Ｔ細胞のＩＬ−１５媒介性の活性化を阻害するよりもむしろ活性化を増強することを示唆している。したがって、本明細書に記載されるように、特定の条件下でＩＬ−１５と組み合わせたＰＥＧ−ＩＬ−１０の投与は、これまで認識されていなかった潜在的な治療的影響を有する。
【０１０３】
ＩＬ−１５受容体複合体のＩＬ−１５との結合は、ＳＴＡＴ３及びＳＴＡＴ５両方のリン酸化をもたらす（Ｊｏｈｎｓｔｏｎ，Ｊ．Ａ．，ｅｔ  ａｌ．（１９９５）Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ  ９２（１９）：８７０５−０９）。さらなる研究により、ＩＬ−１５シグナル伝達がまたＰＩ３Ｋ経路を活性化することも明らかになった（Ｍａｒｚｅｃ，Ｍ．，ｅｔ  ａｌ．（２００８）Ｂｌｏｏｄ  １１１（４）：２１８１−８９；Ｎａｎｄａｇｏｐａｌ，Ｎ．，ｅｔ  ａｌ．（２０１４）Ｆｒｏｎｔ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ５：１８７）。このシグナル伝達の組み合わせは、記憶ＣＤ８＋  Ｔ細胞の活性化状態の増強及び持続をもたらす。加えて、ＩＬ−１５シグナル伝達は、おそらくＰＩ３Ｋ経路の活性化によってＰＤ１／ＰＤＬ１相互作用に由来する阻害シグナルを遮断する（Ｂｅｎｎｅｔｔ，Ｆ．，Ｄ．ｅｔ  ａｌ．（２００３）Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １７０（２）：７１１−１８；Ｋｉｎｔｅｒ，Ａ．Ｌ．，ｅｔ  ａｌ．（２００８）Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １８１（１０）：６７３８−４６）。
【０１０４】
ＰＥＧ化ｒＨｕＩＬ−１０の臨床研究は、予想外にも、ヒト免疫系のＩＬ−１０の刺激が、以前に考えられていたまたは認められていたよりもはるかに広範かつＴｈ１極性であることを明らかにした。ＰＥＧ化ｒＨｕＩＬ−１０を投与すると、血清ＩＬ−１８、ＩＦＮγ、ＩＬ−４、ＩＬ−７、及びＧＭ−ＣＳＦの増加をもたらす。これらのサイトカインはすべて、ＰＤ１、ＰＤＬ１、またはＰＤＬ２を誘導することが示されている（例えば、Ｌｉ，Ｂ．，Ａ．ｅｔ  ａｌ．（２００９）Ｃｌｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １３３（２）：１８４−９７；Ｔｅｒｍｅ，Ｍ．，ｅｔ  ａｌ．（２０１１）Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ７１（１６）：５３９３−９９を参照）。
【０１０５】
したがって、ＰＥＧ化ｒＨｕＩＬ−１０による治療は、ＰＤ１／ＰＤＬ１−ＰＤＬ２を誘導する可能性のあるＴｈ１血清サイトカインのシグネチャーを示すという予想外の知見、及びＩＬ−１５がＰＤ１／ＰＤＬ１−ＰＤＬ２ライゲーションの阻害効果を克服できることを示す結果は、併用治療が相乗的に腫瘍増殖を阻害できることを示している。
【０１０６】
血清濃度
本明細書に記載の方法におけるＩＬ−１０の血漿レベルは、いくつかの方法で特性決定することができ、これには（１）ある程度の特定のレベルまたはある範囲のレベルを上回る平均ＩＬ−１０血清トラフ濃度；（２）ある程度の期間、ある程度の特定のレベルを上回る平均ＩＬ−１０血清トラフ濃度；（３）ある程度の特定のレベルを上回るもしくは下回る、またはある範囲内のレベルである、定常状態のＩＬ−１０血清濃度レベル；あるいは（４）ある程度の特定のレベルを上回るもしくは下回る、またはある範囲内のレベルである濃度プロファイルのＣｍａｘを含む。本明細書に記載されるように、平均血清トラフＩＬ−１０濃度は、特定の適応症での有効性に特に重要であることが見出されている。本明細書に記載の方法で参照されるＩＬ−１５の血漿レベルを同様に特性決定することができる。
【０１０７】
上述されるように、望ましいＩＬ−１０血清トラフ濃度は、疾患、障害、または病態の性質（例えば、局在化腫瘍または転移性疾患）、対象が疾患に罹患している度合い（例えば、早期疾患対後期疾患）、併用療法が実施されているかどうか、及び患者固有のパラメーター（例えば、肝臓機能及び腎臓機能）を含む、複数の要因に応じて決定することができる。例として、ＰＥＧ−ＩＬ−１０と化学療法剤との共投与は、臨床的利益を観察するのに約１〜２ｎｇ／ｍＬの範囲の血清トラフしか必要としないが、転移性癌の場合、同等の臨床的利益を達成するには６〜１０ｎｇ／ｍＬ以上を必要とする場合がある。
【０１０８】
本開示の特定の実施形態では、平均ＩＬ−１０血清トラフ濃度は、少なくとも６．０ｎｇ／ｍＬ、少なくとも７．０ｎｇ／ｍＬ、少なくとも８．０ｎｇ／ｍＬ、少なくとも９．０ｎｇ／ｍＬ、少なくとも１０．０ｎｇ／ｍＬ、少なくとも１１．０ｎｇ／ｍＬ、少なくとも１２．０ｎｇ／ｍＬ、少なくとも１３．０ｎｇ／ｍＬ、少なくとも１４．０ｎｇ／ｍＬ、少なくとも１５．０ｎｇ／ｍＬ、少なくとも１６．０ｎｇ／ｍＬ、少なくとも１７．０ｎｇ／ｍＬ、少なくとも１８．０ｎｇ／ｍＬ、少なくとも１９．０ｎｇ／ｍＬ、少なくとも２０．０ｎｇ／ｍＬ、少なくとも２１．０ｎｇ／ｍＬ、少なくとも２２．０ｎｇ／ｍＬ、または２２．０ｎｇ／ｍＬ超である。
【０１０９】
他の特定の実施形態では、平均ＩＬ−１０血清トラフ濃度は、少なくとも１．０ｎｇ／ｍＬ、少なくとも１．５ｎｇ／ｍＬ、少なくとも２．０ｎｇ／ｍＬ、少なくとも２．５ｎｇ／ｍＬ、少なくとも３．０ｎｇ／ｍＬ、少なくとも３．５ｎｇ／ｍＬ、少なくとも４．０ｎｇ／ｍＬ、少なくとも４．５ｎｇ／ｍＬ、少なくとも５．０ｎｇ／ｍＬ、少なくとも５．５ｎｇ／ｍＬ、少なくとも６．０ｎｇ／ｍＬ、少なくとも６．５ｎｇ／ｍＬ、または７ｎｇ／ｍＬ超である。
【０１１０】
さらなる実施形態では、期間は、少なくとも１２時間、少なくとも２４時間、少なくとも４８時間、少なくとも７２時間、少なくとも１週間、少なくとも２週間、少なくとも３週間、少なくとも１か月、少なくとも６週間、少なくとも２か月、少なくとも３か月、または３か月超である。
【０１１１】
本開示の特定の実施形態では、平均ＩＬ−１０血清トラフ濃度は、期間の少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または期間の１００％の間維持される。
【０１１２】
本開示のさらに別の実施形態では、産生され得る血漿及び／または血清レベルの濃度プロファイルは、約１．０ｐｇ／ｍＬ超、約１０．０ｐｇ／ｍＬ超、約２０．０ｐｇ／ｍＬ超、約３０ｐｇ／ｍＬ超、約４０ｐｇ／ｍＬ超、約５０．０ｐｇ／ｍＬ超、約６０．０ｐｇ／ｍＬ超、約７０．０ｐｇ／ｍＬ超、約８０．０ｐｇ／ｍＬ超、約９０ｐｇ／ｍＬ、約０．１ｎｇ／ｍＬ超、約０．２ｎｇ／ｍＬ超、約０．３ｎｇ／ｍＬ超、約０．４ｎｇ／ｍＬ超、約０．５ｎｇ／ｍＬ超、約０．６ｎｇ／ｍＬ超、約０．７ｎｇ／ｍＬ超、約０．８ｎｇ／ｍＬ超、約０．９ｎｇ／ｍＬ超、約１．０ｎｇ／ｍＬ超、約１．５ｎｇ／ｍＬ超、約２．０ｎｇ／ｍＬ超、約２．５ｎｇ／ｍＬ超、約３．０ｎｇ／ｍＬ超、約３．５ｎｇ／ｍＬ超、約４．０ｎｇ／ｍＬ超、約４．５ｎｇ／ｍＬ超、約５．０ｎｇ／ｍＬ超、約５．５ｎｇ／ｍＬ超、約６．０ｎｇ／ｍＬ超、約６．５ｎｇ／ｍＬ超、約７．０ｎｇ／ｍＬ超、約７．５ｎｇ／ｍＬ超、約８．０ｎｇ／ｍＬ超、約８．５ｎｇ／ｍＬ超、約９．０ｎｇ／ｍＬ超、約９．５ｎｇ／ｍＬ超、または約１０．０ｎｇ／ｍＬである平均ＩＬ−１０血漿及び／または血清トラフ濃度を含む。
【０１１３】
本開示の特定の実施形態では、平均ＩＬ−１０血清トラフ濃度は１．０ｐｇ／ｍＬ〜１０ｎｇ／ｍＬの範囲である。いくつかの実施形態では、平均ＩＬ−１０血清トラフ濃度は１．０ｐｇ／ｍＬ〜１００ｐｇ／ｍＬの範囲である。他の実施形態では、平均ＩＬ−１０血清トラフ濃度は０．１ｎｇ／ｍＬ〜１．０ｎｇ／ｍＬの範囲である。さらに他の実施形態では、平均ＩＬ−１０血清トラフ濃度は１．０ｎｇ／ｍＬ〜１０ｎｇ／ｍＬの範囲である。本開示は、そのような範囲が明示的に列挙されていなくても、本明細書に記載された濃度に含まれる任意の濃度を包含する範囲を意図するものと理解されるべきである。一例として、一実施形態における平均血清ＩＬ−１０濃度は、０．５ｎｇ／ｍＬ〜５ｎｇ／ｍＬの範囲であり得る。さらなる例として、本開示の特定の実施形態では、約０．５ｎｇ／ｍＬ〜約１０．５ｎｇ／ｍＬ、約１．０ｎｇ／ｍＬ〜約１０．０ｎｇ／ｍＬ、約１．０ｎｇ／ｍＬ〜約９．０ｎｇ／ｍＬ、約１．０ｎｇ／ｍＬ〜約８．０ｎｇ／ｍＬ、約１．０ｎｇ／ｍＬ〜約７．０ｎｇ／ｍＬ、約１．５ｎｇ／ｍＬ〜約１０．０ｎｇ／ｍＬ、約１．５ｎｇ／ｍＬ〜約９．０ｎｇ／ｍＬ、約１．５ｎｇ／ｍＬ〜約８．０ｎｇ／ｍＬ、約１．５ｎｇ／ｍＬ〜約７．０ｎｇ／ｍＬ、約２．０ｎｇ／ｍＬ〜約１０．０ｎｇ／ｍＬ、約２．０ｎｇ／ｍＬ〜約９．０ｎｇ／ｍＬ、約２．０ｎｇ／ｍＬ〜約８．０ｎｇ／ｍＬ、及び約２．０ｎｇ／ｍＬ〜約７．０ｎｇ／ｍＬの範囲の平均ＩＬ−１０血清トラフ濃度を含む。
【０１１４】
特定の実施形態では、１〜２ｎｇ／ｍＬの平均ＩＬ−１０血清トラフ濃度が治療期間にわたって維持される。本開示はまた、平均ＩＬ−１０血清ピーク濃度が治療期間にわたって約１０．０ｎｇ／ｍＬ以下である実施形態を企図する。さらなる実施形態は、約１０．０ｎｇ／ｍＬ以上の平均ＩＬ−１０血清トラフ濃度を企図する。最適な平均血清濃度は一般に、望ましくない有害作用を加えることなく所望の治療効果が達成される平均血清濃度である。
【０１１５】
本開示のある特定の実施形態は、ＩＬ−１０療法を受ける対象をモニターして有害作用を予測し、それによって潜在的に回避する方法を提供し、この方法には、（１）対象のＩＬ−１０のピーク濃度を測定すること；（２）対象のＩＬ−１０のトラフ濃度を測定すること；（３）ピークトラフ変動を算出すること；及び（４）算出したピークトラフ変動を用いて、対象における有害作用の可能性を予測することと、を含む。特定の対象集団においてピークトラフ変動が小さいほど、対象がＩＬ−１０関連の副作用を経験する確率が低くなることを示す。加えて、いくつかの実施形態では、特定の投与パラメーターを使用して特定の疾患、障害、及び病態の治療に応じた特定のピークトラフ変動を決定し、その変動を参照標準として使用する。
【０１１６】
大半の薬物で血漿薬物濃度は、多指数関数的に減少する。静脈内投与の直後、薬物は初期空間にわたり急速に分布し（血漿容積に最小限に限定される）、その後、血管外空間（例えば、特定の組織）への緩徐な平衡分布が生じる。静脈内ＩＬ−１０投与は、このような２区画動態モデルと関連する（Ｒａｃｈｍａｗａｔｉ，Ｈ．  ｅｔ  ａｌ．（２００４）Ｐｈａｒｍ．Ｒｅｓ．２１（１１）：２０７２−７８を参照）。皮下組換えｈＩＬ−１０の薬物動態も研究されている（Ｒａｄｗａｎｓｋｉ，Ｅ．ｅｔ  ａｌ．  （１９９８）Ｐｈａｒｍ．Ｒｅｓ．１５（１２）：１８９５−１９０１）。したがって、適切なＩＬ−１０の投与関連パラメーターを評価する場合、このように分布容積を考慮することが妥当である。さらに、特定の細胞型に対してＩＬ−１０薬剤を標的化する試みが探求されており（例えば、Ｒａｃｈｍａｗａｔｉ，Ｈ．（Ｍａｙ  ２００７）Ｄｒｕｇ  Ｍｅｔ．Ｄｉｓｔ．３５（５）：８１４−２１を参照）、ＩＬ−１０の薬物動態学及び投与原則の活用が、そのような試みの成功にとって非常に重要であると証明できる。
【０１１７】
本開示は、上記のＩＬ−１０血清トラフ濃度のいずれかを維持させる、任意の用量及び投与レジメンによる投与をも企図する。非限定的な例として、対象がヒトである場合、非ＰＥＧ化ｈＩＬ−１０は、０．５μｇ／ｋｇ／日超、１．０μｇ／ｋｇ／日超、２．５μｇ／ｋｇ／日超、５μｇ／ｋｇ／日超、７．５μｇ／ｋｇ超、１０．０μｇ／ｋｇ超、１２．５μｇ／ｋｇ超、１５μｇ／ｋｇ／日超、１７．５μｇ／ｋｇ／日超、２０μｇ／ｋｇ／日超、２２．５μｇ／ｋｇ／日超、２５μｇ／ｋｇ／日超、３０μｇ／ｋｇ／日、または３５μｇ／ｋｇ／日超の用量で投与することができる。さらに、対象がヒトである場合、非限定的な例として、比較的小さなＰＥＧ（例えば、５ｋＤａモノ−ジ−ＰＥＧ−ｈＩＬ−１０）を含むＰＥＧ化ｈＩＬ−１０は、０．５μｇ／ｋｇ／日超、０．７５μｇ／ｋｇ／日超、１．０μｇ／ｋｇ／日超、１．２５μｇ／ｋｇ／日超、１．５μｇ／ｋｇ／日超、１．７５μｇ／ｋｇ／日超、２．０μｇ／ｋｇ／日超、２．２５μｇ／ｋｇ／日超、２．５μｇ／ｋｇ／日超、２．７５μｇ／ｋｇ／日超、３．０μｇ／ｋｇ／日超、３．２５μｇ／ｋｇ／日超、３．５μｇ／ｋｇ／日超、３．７５μｇ／ｋｇ／日超、４．０μｇ／ｋｇ／日超、４．２５μｇ／ｋｇ／日超、４．５μｇ／ｋｇ／日超、４．７５μｇ／ｋｇ／日超、または５．０μｇ／ｋｇ／日超の用量で投与することができる。
【０１１８】
当業者（例えば、薬理学者）は、ＰＥＧ−ＩＬ−１０をＩＬ−１５薬剤と組み合わせて投与する場合の最適な投与レジメン（複数可）を決定することができる。一例として、いくつかの実施形態では、最適なＰＥＧ−ＩＬ−１０の投与レジメンに、用量ごとに投与されるＰＥＧ−ＩＬ−１０量の低減（例えば、１．０μｇ／ｋｇ／日未満、０．７５μｇ／ｋｇ／日未満、０．５μｇ／ｋｇ／日未満、０．２５μｇ／ｋｇ／日未満、または０．１２５μｇ／ｋｇ／日未満）が必要な場合がある。本開示の特定の例示的な実施形態では、平均ＩＬ−１０血清トラフ濃度は、約０．１ｎｇ／ｍＬ〜約９．５ｎｇ／ｍＬ、約０．２５ｎｇ／ｍＬ〜約８．０ｎｇ／ｍＬ、約０．５ｎｇ／ｍＬ〜約７．０ｎｇ／ｍＬ、約０．７５ｎｇ／ｍＬ〜約６．０ｎｇ／ｍＬ、または約１．０ｎｇ／ｍＬ〜約５．０ｎｇ／ｍＬの範囲内であってよい。
【０１１９】
本開示は、血清濃度がピークに達するようにＩＬ−１５薬剤を投与し、その後、薬剤がクリアランスされ、再投与される前には実質的に測定不能となることを企図する。一例として、ＰＥＧ−ＩＬ−１０を２４時間ごとに投与して血清トラフ濃度を約１０ｎｇ／ｍＬに維持する場合、ＩＬ−１５薬剤を、約１５ｎｇ／ｍＬをピークとして、その後１２時間以内に代謝され、投与サイクルの少なくとも半分にわたり測定可能なトラフレベルを示さない量で共投与することができる。毒性の危険性を回避するために、ＩＬ−１５のレベルが２０ｎｇ／ｍＬを超えないように投与を調整する必要がある。ＰＥＧ−ＩＬ−１０の投与と同様に、ＩＬ−１５薬剤の用量は、疾患、障害、または病態の性質（例えば、局在化腫瘍または転移性疾患）、対象が疾患に罹患している度合い（例えば、早期疾患対後期疾患）、併用療法が実施されているかどうか、及び患者固有のパラメーター（例えば、肝臓機能及び腎臓機能）を含む、複数の要因に応じて決定することができる。
【０１２０】
ＰＥＧ−ＩＬ−１０が、本明細書に記載のものなどのＩＬ−１５薬剤と組み合わせて投与される場合、単独療法に適用可能なＰＥＧ−ＩＬ−１０の１つ以上の投与パラメーターを変更することができる一方で、単独療法に適用可能なＩＬ−１５薬剤の投与パラメーターは同じままであってよいか；単独療法に適用可能なＰＥＧ−ＩＬ−１０の１つ以上の投与パラメーターは同じままであってよい一方で、単独療法に適用可能なＩＬ−１５薬剤の１つ以上の投与パラメーターを変更することができるか；単独療法に適用可能なＰＥＧ−ＩＬ−１０及びＩＬ−１５薬剤の１つ以上の投与パラメーターを変更することができるか；またはＰＥＧ−ＩＬ−１０及びＩＬ−１５薬剤の各々の投与パラメーターが同じままであってよい。
【０１２１】
ＩＬ−１０の産生方法
本開示のポリペプチドは、非組換え（例えば、化学合成）及び組換え方法を含む任意の適切な方法によって産生することができる。
【０１２２】
Ａ．化学合成
ポリペプチドが化学的に合成される場合、この合成は液相または固相を介して進行することができる。固相ペプチド合成（ＳＰＰＳ）は、非天然アミノ酸及び／またはペプチド／タンパク質主鎖修飾の組み込みを可能にする。本開示のポリペプチドを合成するには、９−フルオレニルメトキシカルボニル（Ｆｍｏｃ）及びｔ−ブチルオキシカルボニル（Ｂｏｃ）などの様々な形態のＳＰＰＳが利用可能である。化学合成の詳細は当技術分野で既知である（例えばＧａｎｅｓａｎ  Ａ．（２００６）Ｍｉｎｉ  Ｒｅｖ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．６：３−１０；及びＣａｍａｒｅｒｏ  Ｊ．Ａ．ｅｔ  ａｌ．，（２００５）Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｐｅｐｔ  Ｌｅｔｔ．１２：７２３−８））。
【０１２３】
固相ペプチド合成は、以下の記載のように実施することができる。アルファ官能基（Ｎα）及び任意の反応性側鎖を、酸不安定基または塩基不安定基で保護する。保護基は、アミド結合を連結する条件下では安定であるが、形成されたペプチド鎖を損なうことなく容易に開裂することができる。αアミノ官能基に適した保護基としては、これらに限定されないが、Ｂｏｃ、ベンジルオキシカルボニル（Ｚ）、Ｏ−クロロベンジルオキシカルボニル、ビフェニルイソプロピルオキシカルボニル、ｔｅｒｔ−アミルオキシカルボニル（Ａｍｏｃ）、α，α−ジメチル−３，５−ジメトキシベンジルオキシカルボニル、ｏ−ニトロスルフェニル、２−シアノ−ｔ−ブトキシ−カルボニル、Ｆｍｏｃ、１−（４，４−ジメチル−２，６−ジオキソシクロヘキサ（ｄｉｏｘｏｃｙｌｏｈｅｘ）−１−イリデン）エチル（Ｄｄｅ）が挙げられる。
【０１２４】
好適な側鎖保護基としては、これらに限定されないが、アセチル、アリル（Ａｌｌ）、アリルオキシカルボニル（Ａｌｌｏｃ）、ベンジル（Ｂｚｌ）、ベンジルオキシカルボニル（Ｚ）、ｔ−ブチルオキシカルボニル（Ｂｏｃ）、ベンジルオキシメチル（Ｂｏｍ）、ｏ−ブロモベンジルオキシカルボニル、ｔ−ブチル（ｔＢｕ）、ｔ−ブチルジメチルシリル、２−クロロベンジル、２−クロロベンジルオキシカルボニル、２，６−ジクロロベンジル、シクロヘキシル、シクロペンチル、１−（４，４−ジメチル−２，６−ジオキソシクロヘキサ−１−イリデン）エチル（Ｄｄｅ）、イソプロピル、４−メトキシ−２，３−６−トリメチルベンジルスルホニル（Ｍｔｒ）、２，３，５，７，８−ペンタメチルクロマン−６−スルホニル（Ｐｍｃ）、ピバリル、テトラヒドロピラン−２−イル、トシル（Ｔｏｓ）、２，４，６−トリメトキシベンジル、トリメチルシリル、及びトリチル（Ｔｒｔ）が挙げられる。
【０１２５】
固相合成では、Ｃ末端アミノ酸が好適な支持物質に連結される。好適な支持物質は、合成プロセスの段階的な縮合及び開裂反応のための試薬及び反応条件に対して不活性であり、使用される反応媒に溶解しないものである。市販の支持物質の例としては、反応性基及び／またはポリエチレングリコールで改質されたスチレン／ジビニルベンゼンコポリマー；クロロメチル化スチレン／ジビニルベンゼンコポリマー；ヒドロキシメチル化またはアミノメチル化スチレン／ジビニルベンゼンコポリマーなどが挙げられる。ペプチド酸の調製が望まれる場合、４−ベンジルオキシベンジル−アルコール（Ｗａｎｇアンカー）または２−クロロトリチルクロリドで誘導体化した、ポリスチレン（１％）−ジビニルベンゼンまたはＴｅｎｔａＧｅｌ（登録商標）を使用することができる。ペプチドアミドの場合、５−（４’−アミノメチル）−３’，５’−ジメトキシフェノキシ）吉草酸（ＰＡＬアンカー）またはｐ−（２，４−ジメトキシフェニル−アミノメチル）−フェノキシ基（Ｒｉｎｋアミドアンカー）で誘導体化した、ポリスチレン（１％）ジビニルベンゼンまたはＴｅｎｔａＧｅｌ（登録商標）を使用することができる。
【０１２６】
ポリマー支持体への結合は、エタノール、アセトニトリル、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）、ジクロロメタン、テトラヒドロフラン、Ｎ−メチルピロリドン、または類似の溶媒に活性化試薬を添加し、室温または高温（例えば、４０℃〜６０℃）にて、例えば２〜７２時間の反応時間で、Ｃ末端Ｆｍｏｃ保護アミノ酸を支持物質と反応させることにより達成することができる。
【０１２７】
Ｎα−保護アミノ酸（例えば、Ｆｍｏｃアミノ酸）のＰＡＬ、Ｗａｎｇ、またはＲｉｎｋアンカーへの結合は、例えば、Ｎ，Ｎ’−ジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）、Ｎ，Ｎ’−ジイソプロピルカルボジイミド（ＤＩＣ）またはその他のカルボジイミド、２−（１Ｈ−ベンゾトリアゾール−１−イル）−１，１，３，３−テトラメチルウロニウムテトラフルオロボレート（ＴＢＴＵ）またはその他のウロニウム塩、Ｏ−アシル尿素、ベンゾトリアゾール−１−イル−トリス−ピロリジノ−ホスホニウムヘキサフルオロホスフェート（ＰｙＢＯＰ）またはその他のホスホニウム塩、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド、その他のＮ−ヒドロキシイミドまたはオキシムなどのカップリング試薬を使用して、１−ヒドロキシベンゾトリアゾールまたは１−ヒドロキシ−７−アザベンゾトリアゾールの存在下または不在下において、例えば、ＨＯＢｔを添加したＴＢＴＵを使用して、例えば、ジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＥＡ）、トリエチルアミン、またはＮ−メチルモルホリン、例えばジイソプロピルエチルアミンなどの塩基を添加してまたは添加せずに、２〜７２時間の反応時間で（例えば、１．５〜３倍過剰、例えば２倍過剰のアミノ酸及びカップリング試薬で３時間、約１０℃〜５０℃の温度、例えば２５℃で、ジメチルホルムアミド、Ｎ−メチルピロリドン、またはジクロロメタンなどの溶媒、例えばジメチルホルムアミド中にて）実施することができる。
【０１２８】
カップリング試薬の代わりに、上記条件下において、活性エステル（例えば、ペンタフルオロフェニル、ｐ−ニトロフェニルなど）、Ｎα−Ｆｍｏｃ−アミノ酸の対称無水物、その酸塩化物または酸フッ化物を使用することも可能である。
【０１２９】
Ｎα−保護アミノ酸（例えば、Ｆｍｏｃアミノ酸）を、ＤＩＥＡを添加して１０〜１２０分、例えば２０分の反応時間をかけて、ジクロロメタン中で２−クロロトリチル樹脂に結合させることができるが、使用するのはこの溶媒及びこの塩基に限定されない。
【０１３０】
保護アミノ酸の連続カップリングは、ペプチド合成の従来法に従って、通常は自動化ペプチドシンセサイザーで実施することができる。例えば、ジメチルホルムアミド中でのピペリジン（１０％〜５０％）による５〜２０分間の処理、例えば、ＤＭＦ中での５０％ピペリジンによる２分２回の処理、及びＤＭＦ中での２０％ピペリジンによる１５分１回の処理によって、固相に結合されたアミノ酸のＮα−Ｆｍｏｃ保護基を切断後、３〜１０倍過剰、例えば１０倍過剰の次の保護アミノ酸を、ジクロロメタン、ＤＭＦ、またはその２つの混合物などの不活性な非水溶性の極性溶媒中で、約１０℃〜５０℃の温度、例えば２５℃で先のアミノ酸と結合させる。最初のＮα−Ｆｍｏｃアミノ酸をＰＡＬ、Ｗａｎｇ、またはＲｉｎｋアンカーに結合するには前述の試薬がカップリング試薬として好適である。また保護アミノ酸の活性エステル、またはその塩化物もしくはフッ化物もしくは対称無水物を代わりに使用することもできる。
【０１３１】
固相合成の終了時に、ペプチドを支持物質から切断すると同時に側鎖保護基が切断される。ジメチルスルフィド、エチルメチルスルフィド、チオアニソール、チオクレゾール、ｍ−クレゾール、アニソールエタンジチオール、フェノール、または水などの、５％〜２０％Ｖ／Ｖのスカベンジャー、例えば１５％ｖ／ｖのジメチルスルフィド／エタンジチオール／ｍ−クレゾール１：１：１を添加した、トリフルオロ酢酸またはその他の強い酸性溶媒により、０．５〜３時間、例えば２時間以内で切断を実施することができる。氷酢酸／トリフルオロエタノール／ジクロロメタン２：２：６で２−クロロトリチルアンカーを切断することにより、完全に保護された側鎖を有するペプチドが得られる。保護ペプチドは、シリカゲルクロマトグラフィーによって精製することができる。ペプチドがＷａｎｇアンカーを介して固相に結合されている場合、かつＣ末端アルキルアミド化によりペプチドを得ることを目的とする場合、アルキルアミンまたはフルオロアルキルアミンによるアミノ分解によって切断を実施することができる。アミノ分解は、約−１０℃〜５０℃（例えば、約２５℃）の温度、約１２〜２４時間（例えば、約１８時間）の反応時間で実施される。加えて、例えばメタノールによる再エステル化によって、ペプチドを支持体から切断することができる。
【０１３２】
得られる酸性溶液を、３〜２０倍量の冷却エーテルまたはｎ−ヘキサン、例えば１０倍過剰のジエチルエーテルと混合すると、ペプチドが沈殿し、それによりエーテルに残存するスカベンジャー及び切断された保護基を分離することができる。氷酢酸から数回ペプチドを再沈殿させることによって、さらに精製を実施することができる。得られる沈殿物を、水もしくはｔｅｒｔ−ブタノール、またはこの２つの溶媒の混合物、例えばｔｅｒｔ−ブタノール／水の１：１の混合物中に溶解し、凍結乾燥することができる。
【０１３３】
得られたペプチドは、種々のクロマトグラフ法により精製することができ、この方法として、酢酸塩形態の弱塩基性樹脂でのイオン交換；非誘導体化ポリスチレン／ジビニルベンゼンコポリマー（例えば、Ａｍｂｅｒｌｉｔｅ（登録商標）ＸＡＤ）での疎水性吸着クロマトグラフィー；シリカゲルでの吸着クロマトグラフィー；例えばカルボキシメチルセルロースでのイオン交換クロマトグラフィー；例えばＳｅｐｈａｄｅｘ（登録商標）Ｇ−２５での分配クロマトグラフィー；向流分配クロマトグラフィー；または高圧液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）、例えばオクチルもしくはオクタデシルシリルシリカ（ＯＤＳ）相での逆相ＨＰＬＣが挙げられる。
【０１３４】
Ｂ．組換え産生
ヒト及びマウスＩＬ−１０の調製を示した方法は、例えば、米国特許第５，２３１，０１２号で参照することができ、これには、組換え及びその他の合成技術を含む、ＩＬ−１０活性を有するタンパク質の産生方法が教示されている。ＩＬ−１０はウイルス起源であってもよく、エプスタインバーウイルス（ＢＣＲＦ１タンパク質）からのウイルスＩＬ−１０のクローニング及び発現が、Ｍｏｏｒｅ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９０）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４８：１２３０に開示されている。ＩＬ−１０は、本明細書に記載されたものなどの当技術分野で既知の標準技術を使用した複数の方法で得ることができる。また、組換えヒトＩＬ−１０が、例えばＰｅｐｒｏＴｅｃｈ，Ｉｎｃ．，Ｒｏｃｋｙ  Ｈｉｌｌ，Ｎ．Ｊ．から市販されている。
【０１３５】
組換え技術を使用してポリペプチドを産生する場合、任意の好適な構築物及び任意の好適な宿主細胞を使用して、細胞内タンパク質または分泌タンパク質としてポリペプチドを産生することができ、この場合の宿主細胞は原核細胞または真核細胞であってよく、それぞれ細菌（例えば、Ｅ．ｃｏｌｉ）または酵母宿主細胞などであり得る。宿主細胞として使用することができる他の真核細胞の例としては、昆虫細胞、哺乳動物細胞、及び／または植物細胞が挙げられる。哺乳動物宿主細胞を使用する場合、宿主細胞には、ヒト細胞（例えば、ＨｅＬａ、２９３、Ｈ９、及びＪｕｒｋａｔ細胞）、マウス細胞（例えば、ＮＩＨ３Ｔ３、Ｌ細胞、及びＣ１２７細胞）、霊長類細胞（例えば、Ｃｏｓ１、Ｃｏｓ７、及びＣＶ１）、及びハムスター細胞（例えば、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞）を含み得る。
【０１３６】
ポリペプチドの発現に適した様々な宿主−ベクター系を、当技術分野で既知の標準的手順に従って使用することができる。例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋ  ｅｔ  ａｌ．，１９８９  Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ；及びＡｕｓｕｂｅｌ  ｅｔ  ａｌ．１９９５  Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｅｄｓ．Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓを参照のこと。宿主細胞への遺伝物質の導入方法としては、例えば形質転換、エレクトロポレーション、コンジュゲート、リン酸カルシウム法などが挙げられる。導入されたポリペプチドをコードする核酸の安定的な発現が得られるように、転写方法を選択することができる。ポリペプチドをコードする核酸は、遺伝性エピソーム成分（例えばプラスミド）として得ることも、またはゲノムに組み込むこともできる。目的のポリペプチドの産生に使用される種々の適切なベクターが市販されている。
【０１３７】
ベクターは、宿主細胞における染色体外での維持を提供することも、または宿主細胞ゲノムへの組み込みを提供することもできる。発現ベクターは転写及び翻訳調節配列を提供し、誘導的または構成的発現を提供することができ、そのコード領域は、転写開始領域ならびに転写及び翻訳終結領域の転写制御下で機能的に連結される。一般に、転写及び翻訳調節配列には、限定するものではないが、プロモーター配列、リボソーム結合部位、転写開始及び終止配列、翻訳開始及び終止配列、ならびにエンハンサーまたはアクチベーター配列を含み得る。プロモーターは構成的であっても誘導的であってもよく、強力な構成的プロモーターであってもよい（例えば、Ｔ７）。
【０１３８】
発現構築物は一般に、プロモーター配列の近くに位置する利便な制限部位を有しており、これを利用して目的のタンパク質をコードする核酸配列が挿入される。ベクターを含む細胞の選択を容易にするために、発現宿主中で機能する選択マーカーが存在する場合もある。さらに、発現構築物は追加要素を含むことができる。例えば、発現ベクターは１つまたは２つの複製系を有することができ、これにより例えば発現には哺乳動物または昆虫細胞、クローニング及び増幅には原核生物宿主といった、複数の生物体でベクターを維持することが可能となる。加えて、発現構築物には、形質転換された宿主細胞を選別できるように、選択マーカー遺伝子を含むことができる。選択遺伝子は当技術分野おいて周知であり、使用する宿主細胞によって決定する。
【０１３９】
タンパク質の単離及び精製は、当技術分野で既知の方法によって達成することができる。例えば、構成的にかつ／または誘導時にタンパク質を発現するように遺伝子改変した細胞溶解物から、またはイムノアフィニティー精製による合成反応混合物から、タンパク質を単離することができるが、イムノアフィニティー精製には一般に、サンプルを抗タンパク質抗体に接触させること、洗浄して非特異的結合物質を除去すること、及び特異的結合タンパク質を溶出させることを伴う。単離したタンパク質をさらに、透析、及びタンパク質精製に通常使用されるその他の方法によって精製することができる。一実施形態では、タンパク質は、金属キレートクロマトグラフィー法を用いて単離することができる。タンパク質は、単離を促進するために修飾を含むことができる。
【０１４０】
ポリペプチドは、実質的に純粋なまたは単離された形態（例えば、他のポリペプチドを含まない）で調製することができる。存在し得る他の成分（例えば、他のポリペプチドまたは他の宿主細胞成分）と比較して、そのポリペプチドが濃縮された組成物にポリペプチドが存在する場合もある。例えば、他の発現タンパク質が実質的に含まれない、例えば、約９０％未満、約６０％未満、約５０％未満、約４０％未満、約３０％未満、約２０％未満、約１０％未満、約５％未満、または約１％未満である組成物中にポリペプチドが存在するように精製されたポリペプチドを得ることができる。
【０１４１】
当技術分野で既知の異なるＩＬ−１０関連核酸を操作する組換え技術を使用して、ＩＬ−１０ポリペプチドを生成し、ＩＬ−１０ポリペプチドをコードすることができる構築物を提供することができる。特定のアミノ酸配列を提供する場合に、当業者は、例えば分子生物学に関する背景知識及び経験から判断して、そのようなアミノ酸配列をコードする様々な異なる核酸分子を認識することが理解されるであろう。
【０１４２】
アミド結合置換
場合によって、ＩＬ−１０には、ペプチド結合以外の１つ以上の結合が含まれ、例えば少なくとも２つの隣接するアミノ酸がアミド結合以外の結合を介して連結される。例えば、望ましくないタンパク質分解またはその他の手段による分解を減少または消失させるため、かつ／または血清安定性を増加させるため、かつ／または立体配座の柔軟性を制限するまたは増加させるために、ＩＬ−１０の骨格内の１つ以上のアミド結合を置換することができる。
【０１４３】
別の例では、ＩＬ−１０の１つ以上のアミド結合（−ＣＯ−ＮＨ−）を、−ＣＨ２ＮＨ−、−ＣＨ２Ｓ−、−ＣＨ２ＣＨ２−、−ＣＨ＝ＣＨ−（シス及びトランス）、−ＣＯＣＨ２−、−ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ２−、または−ＣＨ２ＳＯ−などの、アミド結合の等価体である結合で置換することができる。ＩＬ−１０の１つ以上のアミド結合を、例えば還元等価体の偽ペプチド結合で置換することができる。Ｃｏｕｄｅｒ  ｅｔ  ａｌ．（１９９３）Ｉｎｔ．Ｊ．Ｐｅｐｔｉｄｅ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｒｅｓ．４１：１８１−１８４を参照。そのような置換及びそれを生じさせる方法は、当業者に既知である。
【０１４４】
アミノ酸置換
ＩＬ−１０ポリペプチドに１つ以上のアミノ酸置換を施すことができる。以下は非限定的な例である。
【０１４５】
ａ）分枝鎖、環式、及び直鎖のアルキル、アルケニル、またはアルキニル置換を含むＣ１〜Ｃ１０炭素の脂肪族側鎖によって置換された、アラニン、ロイシン、イソロイシン、バリン、ノルロイシン、（Ｓ）−２−アミノ酪酸、（Ｓ）−シクロヘキシルアラニン、またはその他の基本アルファアミノ酸を含む、アルキル置換疎水性アミノ酸の置換。
【０１４６】
ｂ）フェニルアラニン、トリプトファン、チロシン、スルホチロシン、ビフェニルアラニン、１−ナフチルアラニン、２−ナフチルアラニン、２−ベンゾチエニルアラニン、３−ベンゾチエニルアラニン、ヒスチジンを含む、上記の芳香族アミノ酸のアミノ、アルキルアミノ、ジアルキルアミノ、アザ、ハロゲン化（フルオロ、クロル、ブロモ、またはヨード）、またはアルコキシ（Ｃ１〜Ｃ４由来）−置換形態を含む、芳香族置換疎水性アミノ酸の置換。その例示的な例は、２−、３−、または４−アミノフェニルアラニン、２−、３−、または４−クロロフェニルアラニン、２−、３−、または４−メチルフェニルアラニン、２−、３−、または４−メトキシフェニルアラニン、５−アミノ−、５−クロロ−、５−メチル−、または５−メトキシトリプトファン、２’−、３’−、もしくは４’−アミノ−、２’−、３’−、もしくは４’−クロロ−、２、３、または４−ビフェニルアラニン、２’−、３’−、もしくは４’−メチル−、２−、３−、または４−ビフェニルアラニン、及び２−または３−ピリジルアラニンである。
【０１４７】
ｃ）アルギニン、リジン、ヒスチジン、オルニチン、２，３−ジアミノプロピオン酸、ホモアルギニンを含む、先のアミノ酸のアルキル、アルケニル、またはアリール置換（Ｃ１〜Ｃ１０分枝鎖、直鎖、または環式）誘導体を含む、塩基性側鎖をもつアミノ酸の置換。この場合の置換基は、例えばｐｒｏ−Ｒ配置において、ヘテロ原子（アルファ窒素、または遠位の窒素（複数可）など）にあるかアルファ炭素にあるかを問わない。例示的な例として提供される化合物として、Ｎ−イプシロン−イソプロピル−リジン、３−（４−テトラヒドロピリジル）−グリシン、３−（４−テトラヒドロピリジル）−アラニン、Ｎ，Ｎ−ガンマ、ガンマ’−ジエチル−ホモアルギニンが挙げられる。また、アルファ−メチル−アルギニン、アルファ−メチル−２，３−ジアミノプロピオン酸、アルファ−メチル−ヒスチジン、アルファ−メチル−オルニチンなどの化合物が挙げられ、この場合のアルキル基は、ｐｒｏ−Ｒ配置のアルファ炭素を占有する。また以下に示す、アルキル、芳香族、複素環式芳香族（この場合の複素環式芳香族基は、１つ以上の窒素、酸素、または硫黄原子を単独でまたは組み合わせて有する）、カルボン酸、または酸塩化物、活性エステル、活性アゾリド、及び関連する誘導体などの多くの周知の活性誘導体のいずれか、ならびにリジン、オルニチン、または２，３−ジアミノプロピオン酸から形成されるアミドが挙げられる。
【０１４８】
ｄ）アスパラギン酸、グルタミン酸、ホモグルタミン酸、チロシン、２，４−ジアミノプリオピオン酸のアルキル、アリール、アリールアルキル、及びヘテロアリールスルホンアミド、オルニチンまたはリジン、ならびにテトラゾール置換アルキルアミノ酸を含む、酸性アミノ酸の置換。
【０１４９】
ｅ）アスパラギン、グルタミン、及びアスパラギンまたはグルタミンのアルキルまたは芳香族置換誘導体を含む、側鎖アミド残基の置換。
【０１５０】
ｆ）セリン、スレオニン、ホモセリン、２，３−ジアミノプロピオン酸、及びセリンまたはスレオニンのアルキルまたは芳香族置換誘導体を含む、ヒドロキシル含有アミノ酸の置換。
【０１５１】
場合によって、ＩＬ−１０は、１つ以上の天然の非遺伝的にコードされたＬ−アミノ酸、合成Ｌ−アミノ酸、またはアミノ酸のＤ−エナンチオマーを含む。例えば、ＩＬ−１０はＤ−アミノ酸のみを含み得る。例えば、ＩＬ−１０ポリペプチドは、以下の１つ以上の残基を含み得る：ヒドロキシプロリン、β−アラニン、ｏ−アミノ安息香酸、ｍ−アミノ安息香酸、ｐ−アミノ安息香酸、ｍ−アミノメチル安息香酸、２，３−ジアミノプロピオン酸、α−アミノイソ酪酸、Ｎ−メチルグリシン（サルコシン）、オルニチン、シトルリン、ｔ−ブチルアラニン、ｔ−ブチルグリシン、Ｎ−メチルイソロイシン、フェニルグリシン、シクロヘキシルアラニン、ノルロイシン、ナフチルアラニン、ピリジルアラニン、３−ベンゾチエニルアラニン、４−クロロフェニルアラニン、２−フルオロフェニルアラニン、３−フルオロフェニルアラニン、４−フルオロフェニルアラニン、ペニシラミン、１，２，３，４−テトラヒドロイソキノリン−３−カルボン酸、β−２−チエニルアラニン、メチオニンスルホキシド、ホモアルギニン、Ｎ−アセチルリジン、２，４−ジアミノ酪酸、ρ−アミノフェニルアラニン、Ｎ−メチルバリン、ホモシステイン、ホモセリン、ε−アミノヘキサン酸、ω−アミノヘキサン酸、ω−アミノヘプタン酸、ω−アミノオクタン酸、ω−アミノデカン酸、ω−アミノテトラデカン酸、シクロヘキシルアラニン、α，γ−ジアミノ酪酸、α，β−ジアミノプロピオン酸、δ−アミノ吉草酸、及び２，３−ジアミノ酪酸。
【０１５２】
付加修飾
システイン残基またはシステイン類似体をＩＬ−１０ポリペプチドに導入し、ジスルフィド結合により別のペプチドとの結合を生じさせること、またはＩＬ−１０ポリペプチドの環化を生じさせることができる。システインまたはシステイン類似体の導入方法は、当技術分野で既知である。例えば米国特許第８，０６７，５３２号を参照のこと。
【０１５３】
ＩＬ−１０ポリペプチドは環化することができる。１つ以上のシステインまたはシステイン類似体をＩＬ−１０ポリペプチドに導入することができ、導入されたシステインまたはシステイン類似体は、第２の導入されたシステインまたはシステイン類似体とジスルフィド結合を形成することができる。その他の環化手段として、オキシムリンカーまたはランチオニンリンカーの導入が挙げられる。例えば、米国特許第８，０４４，１７５号を参照のこと。環化結合を形成することができるアミノ酸（または非アミノ酸部分）の任意の組み合わせを使用及び／または導入することができる。環化結合は、架橋の導入を可能にする官能基をもつアミノ酸の任意の組み合わせ（またはアミノ酸と−（ＣＨ２）ｎ−ＣＯ−または−（ＣＨ２）ｎ−Ｃ６Ｈ４−ＣＯ−）によって形成することができる。いくつかの例は、ジスルフィド、ジスルフィド模倣体、例えば−（ＣＨ２）ｎ−カルバ架橋、チオアセタール、チオエーテル架橋（シスタチオニンまたはランチオニン）、ならびにエステル及びエーテルを含む架橋などである。これらの例において、ｎは任意の整数であり得るが、多くの場合１０未満である。
【０１５４】
その他の修飾として、例えば、Ｎ−アルキル（またはアリール）置換（ψ［ＣＯＮＲ］）、またはラクタム及び他の環状構造を構成する骨格架橋が挙げられる。他の誘導体として、Ｃ末端ヒドロキシメチル誘導体、ｏ−修飾誘導体（例えば、Ｃ末端ヒドロキシメチルベンジルエーテル）、アルキルアミド及びヒドラジドなどの置換アミドを含む、Ｎ末端修飾誘導体が挙げられる。
【０１５５】
場合によって、ＩＬ−１０ポリペプチドの１つ以上のＬ−アミノ酸が１つ以上のＤ−アミノ酸で置換される。
【０１５６】
場合によって、ＩＬ−１０ポリペプチドはレトロインベルソ類似体である（例えば、Ｓｅｌａ  ａｎｄ  Ｚｉｓｍａｎ（１９９７）ＦＡＳＥＢ  Ｊ．１１：４４９を参照）。レトロインベルソペプチド類似体は、直鎖ポリペプチドの異性体であり、ポリペプチド内のアミノ酸配列の方向が逆転しており（レトロ型）、その中の１つ以上のアミノ酸のキラリティー、すなわちＤ−またはＬ−が反転しており（インベルソ型）、例えばＬ−アミノ酸ではなくＤ−アミノ酸が使用される。［例えば、Ｊａｍｅｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．（１９９４）Ｎａｔｕｒｅ  ３６８：７４４；及びＢｒａｄｙ  ｅｔ  ａｌ．（１９９４）Ｎａｔｕｒｅ  ３６８：６９２を参照］。
【０１５７】
ＩＬ−１０ポリペプチドは、脂質二重層、ミセル、細胞膜、オルガネラ膜、または小胞膜の透過を促進するポリペプチド、ポリヌクレオチド、炭水化物、または有機もしくは無機分子を指す、「タンパク質形質導入ドメイン」（ＰＴＤ）を含み得る。別の分子に結合したＰＴＤは、例えば、細胞外空間から細胞内空間への、またはサイトゾルからオルガネラ内への移動といった、分子の膜透過を促進する。いくつかの実施形態では、ＰＴＤはＩＬ−１０ポリペプチドのアミノ末端に共有結合し、他の実施形態では、ＰＴＤはＩＬ−１０ポリペプチドのカルボキシル末端に共有結合される。例示的なタンパク質形質導入ドメインとしては、限定するものではないが、最小のウンデカペプチドタンパク質形質導入ドメイン（ＹＧＲＫＫＲＲＱＲＲＲ：配列番号７を含むＨＩＶ−１ＴＡＴの残基４７−５７に対応する）；細胞への直接導入に十分な複数のアルギニン残基を含むポリアルギニン配列（例えば、３、４、５、６、７、８、９、１０、または１０〜５０のアルギニン）；ＶＰ２２ドメイン（Ｚｅｎｄｅｒ  ｅｔ  ａｌ．（２００２）Ｃａｎｃｅｒ  Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒ．９（６）：４８９−９６）；Ｄｒｏｓｏｐｈｉｌａ  Ａｎｔｅｎｎａｐｅｄｉａタンパク質形質導入ドメイン（Ｎｏｇｕｃｈｉ  ｅｔ  ａｌ．（２００３）Ｄｉａｂｅｔｅｓ  ５２（７）：１７３２−１７３７）；短縮ヒトカルシトニンペプチド（Ｔｒｅｈｉｎ  ｅｔ  ａｌ．（２００４）Ｐｈａｒｍ．Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ２１：１２４８−１２５６）；ポリリジン（Ｗｅｎｄｅｒ  ｅｔ  ａｌ．（２０００）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９７：１３００３−１３００８）；ＲＲＱＲＲＴＳＫＬＭＫＲ（配列番号８）；トランスポータンＧＷＴＬＮＳＡＧＹＬＬＧＫＩＮＬＫＡＬＡＡＬＡＫＫＩＬ（配列番号９）；ＫＡＬＡＷＥＡＫＬＡＫＡＬＡＫＡＬＡＫＨＬＡＫＡＬＡＫＡＬＫＣＥＡ（配列番号１０）；及びＲＱＩＫＩＷＦＱＮＲＲＭＫＷＫＫ（配列番号１１）が挙げられる。例示的なＰＴＤとしては、限定するものではないが、ＹＧＲＫＫＲＲＱＲＲＲ（配列番号７）、ＲＫＫＲＲＱＲＲＲ（配列番号１２）；３アルギニン残基〜５０アルギニン残基のアルギニンホモポリマーが挙げられ、例示的なＰＴＤドメインアミノ酸配列には、限定するものではないが、以下のいずれかが含まれる：ＹＧＲＫＫＲＲＱＲＲＲ（配列番号７）；ＲＫＫＲＲＱＲＲ（配列番号１３）；ＹＡＲＡＡＡＲＱＡＲＡ（配列番号１４）；ＴＨＲＬＰＲＲＲＲＲＲ（配列番号１５）；及びＧＧＲＲＡＲＲＲＲＲＲ（配列番号１６）。
【０１５８】
ＩＬ−１０ポリペプチドのＣ末端部のアミノ酸のカルボキシル基ＣＯＲ３は、遊離形態（Ｒ３＝ＯＨ）、または、例えばナトリウム、カリウム、もしくはカルシウム塩などの、生理学的に許容されるアルカリ塩もしくはアルカリ土類塩の形態で存在し得る。またカルボキシル基は、例えば、メタノール、分枝または非分枝のＣ１〜Ｃ６アルキルアルコール、例えば、エチルアルコールまたはｔｅｒｔ−ブタノールなどの、一級、二級、または三級アルコールでエステル化することもできる。またカルボキシル基は、アンモニア、分枝もしくは非分枝のＣ１〜Ｃ６アルキルアミン、またはＣ１〜Ｃ６ジアルキルアミン、例えばメチルアミンまたはジメチルアミンなどの、一級または二級アミンでアミド化することもできる。
【０１５９】
ＩＬ−１０ポリペプチドのＮ末端にあるアミノ酸ＮＲ１Ｒ２のアミノ基は、遊離形態（Ｒ１＝Ｈ及びＲ２＝Ｈ）で、または、例えば塩化物もしくは酢酸塩などの生理学的に許容される塩の形態で存在し得る。またアミノ基は、Ｒ１＝Ｈ及びＲ２＝アセチルとなるような酸、トリフルオロアセチル、またはアダマンチルでアセチル化することもできる。アミノ基は、上記に示したもの（例えば、Ｆｍｏｃ、ベンジルオキシ−カルボニル（Ｚ）、Ｂｏｃ、及びＡｌｌｏｃ）などの、ペプチド化学において従来使用されるアミノ保護基によって保護された形態で存在し得る。アミノ基をＮ−アルキル化することができ、この場合、Ｒ１及び／またはＲ２＝Ｃ１〜Ｃ６アルキルまたはＣ２〜Ｃ８アルケニルまたはＣ７〜Ｃ９アラルキルである。アルキル残基は、直鎖、分枝鎖、または環式（例えば、それぞれエチル、イソプロピル、及びシクロヘキシル）であり得る。
【０１６０】
ＩＬ−１０のＰＥＧ化
ＩＬ−１０のＰＥＧ化には、ＩＬ−１０ポリペプチド配列を様々な非タンパク質性ポリマー、例えばポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、ポリプロピレングリコール、またはポリオキシアルキレンのいずれかにコンジュゲートまたは連結することを含む。これは多くの場合、タンパク質と非タンパク質性ポリマー（例えばＰＥＧ）の両方に共有結合する連結部分によって生じる。このようなＰＥＧコンジュゲート生体分子は、良好な物理的及び熱的安定性、酵素分解による影響からの保護、溶解性の増加、ｉｎ  ｖｉｖｏ血中半減期の延長及びクリアランスの低下、免疫原性及び抗原性の緩和、ならびに毒性の緩和を含む、臨床的に有用な特性を有することが示されている。ＰＥＧ化が薬物動態パラメーターに及ぼす有益な効果に加えて、ＰＥＧ化自体が活性を増強することができる。例えば、ＰＥＧ−ＩＬ−１０は、非ＰＥＧ化ＩＬ−１０よりもある種の癌に対してより有効であることが示されている（例えば、ＥＰ２０６６３６Ａ２を参照）。
【０１６１】
ポリペプチド配列へのコンジュゲートに適したＰＥＧは一般に、室温で水に可溶性であり、一般式Ｒ（Ｏ−ＣＨ２−ＣＨ２）ｎＯ−Ｒ（式中、Ｒは水素、またはアルキルもしくはアルカノール基などの保護基であり、ｎは１〜１０００の整数である）を有する。Ｒが保護基である場合、一般にそれは１〜８個の炭素を有する。ポリペプチド配列にコンジュゲートされたＰＥＧは、直鎖状であっても分枝状であってもよい。分枝状のＰＥＧ誘導体、「スターＰＥＧ」及びマルチアームＰＥＧは、本開示によって企図される。本開示で使用されるＰＥＧの分子量は、任意の特定の範囲に限定されない。例を本明細書で別記する。例として、ある特定の実施形態は５ｋＤａ〜２０ｋＤａの分子量を有する一方、他の実施形態は４ｋＤａ〜１０ｋＤａの分子量を有する。
【０１６２】
本開示はまた、ＰＥＧが異なるｎ値を有し、その結果、様々な異なるＰＥＧが特定の比で存在するコンジュゲートの組成物を企図する。例えば、一部の組成物は、ｎ＝１、２、３、及び４であるコンジュゲートの混合物を含む。いくつかの組成物では、ｎ＝１であるコンジュゲートのパーセント比は１８〜２５％であり、ｎ＝２であるコンジュゲートのパーセント比は５０〜６６％であり、ｎ＝３であるコンジュゲートのパーセント比は１２〜１６％であり、ｎ＝４であるコンジュゲートのパーセント比は最大５％である。このような組成物は、当技術分野で既知の反応条件及び精製方法によって作製することができる。例示的な反応条件は、本明細書を通して説明される。カチオン交換クロマトグラフィーを使用してコンジュゲートを分離し、次に、例えば、目的の数のＰＥＧ結合を有するコンジュゲートを含有し、未修飾タンパク質配列、及び目的以外の数のＰＥＧ結合を有するコンジュゲートを含まないように精製されている画分が同定される。
【０１６３】
ＰＥＧ化は、ポリペプチドのＮ末端のアルファアミノ基、リジン残基の側鎖のイプシロンアミノ基、及びヒスチジン残基の側鎖のイミダゾール基で最も頻繁に生じる。大部分の組換えポリペプチドは単一のアルファ基、ならびに複数のイプシロンアミノ基及びイミダゾール基を有するので、リンカーの化学的性質に依存して多数の位置異性体が生成される可能性がある。当技術分野で既知の一般的なＰＥＧ化手法を本明細書に応用することができる。
【０１６４】
広く使用されている２つの第１世代活性化モノメトキシＰＥＧ（ｍＰＥＧ）は、スクシンイミジルカルボネートＰＥＧ（ＳＣ−ＰＥＧ；例えば、Ｚａｌｉｐｓｋｙ，ｅｔ  ａｌ．（１９９２）Ｂｉｏｔｅｈｎｏｌ．Ａｐｐｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ  １５：１００−１１４；及びＭｉｒｏｎ  ａｎｄ  Ｗｉｌｃｈｅｃｋ（１９９３）Ｂｉｏ−ｃｏｎｊｕｇ．Ｃｈｅｍ．４：５６８−５６９を参照）、及びベンゾトリアゾールカルボネートＰＥＧ（ＢＴＣ−ＰＥＧ；例えばＤｏｌｅｎｃｅ，ｅｔ  ａｌ．米国特許第５，６５０，２３４号を参照）であり、これらはリジン残基と優先的に反応してカルバメート結合を形成するが、ヒスチジン残基及びチロシン残基と反応することも知られている。ある特定の分子（例えば、ＩＦＮ−α）上のヒスチジン残基への結合は、加水分解に対して不安定なイミダゾールカルバメート結合であることが示されている（例えば、Ｌｅｅ  ａｎｄ  ＭｃＮｅｍａｒ，米国特許第５，９８５，２６３号を参照）。第２世代ＰＥＧ化技術は、これらの不安定な結合ならびに残基反応性に関する選択性の欠如を回避するように設計されている。ＰＥＧ−アルデヒドリンカーを使用すると、還元的アミノ化によって、ポリペプチドのＮ末端にある単一部位が標的化される。
【０１６５】
１つ以上のポリペプチド配列の遊離アミノ基またはカルボキシル基とポリエチレングリコールとの間の結合を仲介する末端反応基（「スペーサー」）を介して、本開示のポリペプチドにＰＥＧを結合することができる。遊離アミノ基に結合することができるスペーサーを有するＰＥＧとして、Ｎ−ヒドロキシスクシニルイミドポリエチレングリコールがあり、これは、ポリエチレングリコールのコハク酸エステルをＮ−ヒドロキシスクシニルイミドで活性化することにより調製することができる。遊離アミノ基に結合することができる別の活性化ポリエチレングリコールは、２，４−ビス（Ｏ−メトキシポリエチレングリコール）−６−クロロ−ｓ−トリアジンであり、これはポリエチレングリコールモノメチルエーテルを塩化シアヌルと反応させることにより調製することができる。遊離カルボキシル基に結合する活性化ポリエチレングリコールにはポリオキシエチレンジアミンを含む。
【０１６６】
本開示の１つ以上のポリペプチド配列と、スペーサーを有するＰＥＧとのコンジュゲートは、様々な従来の方法によって実施することができる。例えば、コンジュゲート反応は、試薬対タンパク質を４：１〜３０：１のモル比で使用して、ｐＨ５〜１０の溶液中にて温度４℃〜室温で３０分〜２０時間かけて実施することができる。所望の置換度が優位にもたらされるように反応が進む反応条件を選択することができる。一般に、低温、低ｐＨ（例えば、ｐＨ＝５）で、反応時間が短い場合、結合するＰＥＧの数が減少する傾向にあり、対して、高温、中性〜高ｐＨ（例えば、ｐＨ≧７）で、反応時間が長い場合、結合するＰＥＧの数が増加する傾向にある。当技術分野で既知の様々な手段を使用して、反応を停止させることができる。いくつかの実施形態では、反応混合物を酸性化し、例えば−２０℃で凍結させることにより反応を終了させる。種々の分子のＰＥＧ化は、例えば、米国特許第５，２５２，７１４号；同第５，６４３，５７５号；同第５，９１９，４５５号；同第５，９３２，４６２号；及び同第５，９８５，２６３号に記載されている。ＰＥＧ−ＩＬ−１０については、例えば米国特許第７，０５２，６８６号に記載されている。本明細書での使用が企図される具体的な反応条件を実施例のセクションに記載する。
【０１６７】
本開示はまた、ＰＥＧ模倣体の使用も企図する。ＰＥＧの属性（例えば、血清半減期の延長）を保持しつつ、いくつかの有利な特性を追加で付与する組換えＰＥＧ模倣体が開発されている。例として、目的のペプチドまたはタンパク質薬剤にあらかじめ融合された、ＰＥＧと同様の伸長配座を形成することができる単純なポリペプチド鎖（例えば、Ａｌａ、Ｇｌｕ、Ｇｌｙ、Ｐｒｏ、Ｓｅｒ、及びＴｈｒを含む）を組換えで産生することができる（例えば、Ａｍｕｎｉｘ’ＸＴＥＮ技術；Ｍｏｕｎｔａｉｎ  Ｖｉｅｗ，ＣＡ）。これは、製造工程中の追加のコンジュゲートステップを不要にする。さらに、分子生物学技術の確立により、ポリペプチド鎖の側鎖組成の制御が可能になり、免疫原性及び製造特性の最適化が可能になっている。
【０１６８】
リンカー：リンカー及びその使用については上記されている。好適なリンカーには、一般に、修飾ポリペプチド配列と、結合される成分及び分子との間のいくつかの移動を可能にするのに十分な長さがある「可動性リンカー」を含む。リンカー分子は一般に、約６〜５０原子長である。リンカー分子はまた、例えば、アリールアセチレン、２〜１０単量体単位を含むエチレングリコールオリゴマー、ジアミン、二塩基酸、アミノ酸、またはそれらの組み合わせであってもよい。好適なリンカーは容易に選択することができ、１アミノ酸（例えば、Ｇｌｙ）、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１０〜２０、２０〜３０、３０〜５０、または５０超のアミノ酸などの任意の好適な長さであり得る。
【０１６９】
例示的な可動性リンカーとしては、グリシンポリマー（Ｇ）ｎ、グリシン−アラニンポリマー、アラニン−セリンポリマー、グリシン−セリンポリマー（例えば、（ＧｍＳｏ）ｎ、（ＧＳＧＧＳ）ｎ（配列番号２６）、（ＧｍＳｏＧｍ）ｎ、（ＧｍＳｏＧｍＳｏＧｍ）ｎ（配列番号１７）、（ＧＳＧＧＳｍ）ｎ（配列番号１８）、（ＧＳＧＳｍＧ）ｎ（配列番号１９）、及び（ＧＧＧＳｍ）ｎ（配列番号２０）、及びこれらの組み合わせ（式中、ｍ、ｎ、及びｏはそれぞれ独立して少なくとも１〜２０、例えば１〜１８、２〜１６、３〜１４、４〜１２、５〜１０、１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０の整数から選択される）、ならびに他の可動性リンカーが挙げられる。グリシン及びグリシン−セリンポリマーは比較的構造化されておらず、そのため成分間のニュートラルなテザーとして機能することができる。例示的な可動性リンカーとしては、ＧＧＳＧ（配列番号２１）、ＧＧＳＧＧ（配列番号２２）、ＧＳＧＳＧ（配列番号１７）、ＧＳＧＧＧ（配列番号２３）、ＧＧＧＳＧ（配列番号２４）、及びＧＳＳＳＧ（配列番号２５）が挙げられるが、これらに限定されない。
【０１７０】
追加の可動性リンカーとしては、グリシンポリマー（Ｇ）ｎまたはグリシン−セリンポリマー（例えば、（ＧＳ）ｎ、（ＧＳＧＧＳ）ｎ（配列番号２６）、（ＧＧＧＳ）ｎ（配列番号２７）、及び（ＧＧＧＧＳ）ｎ（配列番号２８）（式中、ｎ＝１〜５０、例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１０〜２０、２０〜３０、３０〜５０））が挙げられる。例示的な可動性リンカーとしては、ＧＧＧＳ（配列番号２０）、ＧＧＧＧＳ（配列番号２８）、ＧＧＳＧ（配列番号２１）、ＧＧＳＧＧ（配列番号２２）、ＧＳＧＳＧ（配列番号１７）、ＧＳＧＧＧ（配列番号２３）、ＧＧＧＳＧ（配列番号２４）、及びＧＳＳＳＧ（配列番号２５）が挙げられるが、これらに限定されない。これらのリンカー配列の多量体（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１０〜２０、２０〜３０、または３０〜５０）を一緒に結合させて得られる可動性リンカーを使用して、本明細書に開示されたポリペプチドに異種アミノ酸配列をコンジュゲートしてもよい。
【０１７１】
治療的及び予防的使用
特定の実施形態では、本開示は、癌関連の疾患、障害、または病態の治療及び／または予防にＰＥＧ−ＩＬ−１０及びＩＬ−１５薬剤を使用することを企図する。特定の用途を以下で詳細に記載するが、本開示はそれに限定されないものと理解されるべきである。
【０１７２】
本明細書に開示する併用療法を用いて治療または予防することができる代表的な癌として、子宮、子宮頸部、乳房、前立腺、精巣、消化管（例えば、食道、口腔咽頭、胃、小腸または大腸、結腸または直腸）、腎臓、腎細胞、膀胱、骨、骨髄、皮膚、頭頸部、肝臓、胆嚢、心臓、肺、膵臓、唾液腺、副腎、甲状腺、脳（例えば、神経膠腫）、神経節、中枢神経系（ＣＮＳ）、及び末梢神経系（ＰＮＳ）の癌、ならびに免疫系（例えば、脾臓または胸腺）の癌が挙げられる。
【０１７３】
本開示はまた、例えば、免疫原性腫瘍、非免疫原性腫瘍、休眠腫瘍、ウイルス誘発性癌（例えば、上皮細胞癌、内皮細胞癌、扁平上皮細胞癌、及びパピローマウイルス）、腺癌、リンパ腫、癌腫、黒色腫、骨髄腫、肉腫、悪性奇形腫、化学物質が誘発する癌、及び転移を含む、他の癌関連の疾患、障害、または病態の治療または予防方法も提供する。特定の実施形態では、腫瘍または癌は結腸癌、卵巣癌、乳癌、黒色腫、肺癌、または膠芽腫である。
【０１７４】
本明細書で別記されているように、いくつかの実施形態では、本開示は、ＰＥＧ−ＩＬ−１０及びＩＬ−１５薬剤を、本明細書に例が記載されている少なくとも１種の追加の治療薬または診断薬と併用して癌関連の疾患、障害、または病態を治療する方法を提供する。
【０１７５】
医薬組成物
本開示によって企図されるＰＥＧ−ＩＬ−１０及びＩＬ−１５薬剤は、対象への投与に適した組成物の形態であり得る。一般に、そのような組成物は、ＰＥＧ−ＩＬ−１０及び／またはＩＬ−１５薬剤ならびに１種以上の薬学的に許容されるもしくは生理学的に許容される希釈剤、担体、もしくは賦形剤を含む「医薬組成物」である。ある特定の実施形態では、ＰＥＧ−ＩＬ−１０及びＩＬ−１５薬剤はそれぞれ、治療上許容される量で存在する。本開示の方法に医薬組成物を使用することができる。したがって、例えば、本明細書に記載の治療及び予防方法ならびに使用を実施するために、医薬組成物をｅｘ  ｖｉｖｏまたはｉｎ  ｖｉｖｏで対象に投与することができる。
【０１７６】
以降の医薬組成物及びその態様の記載において、医薬組成物は一般にＰＥＧ−ＩＬ−１０に関連して記載される。しかしながら、この記載はまた、ＰＥＧ−ＩＬ−１０とＩＬ−１５薬剤との組み合わせを含む医薬組成物、または１種の成分のみを含む医薬組成物いずれにおいても、本開示のＩＬ−１５薬剤に適用されるものと理解されるべきである。
【０１７７】
本開示の医薬組成物は、意図された投与方法または投与経路に適合するように製剤化することができる。例示的な投与経路は本明細書に記載する。さらに、医薬組成物は、本開示によって企図される疾患、障害、及び病態を治療または予防するために、本明細書に記載の他の治療的な活性薬剤または化合物と組み合わせて使用することができる。
【０１７８】
医薬組成物は通常、本開示によって企図される治療有効量のＰＥＧ−ＩＬ−１０及び／またはＩＬ−１５薬剤、ならびに１種以上の薬学的及び生理学的に許容される製剤を含む。好適な薬学的に許容されるまたは生理学的に許容される希釈剤、担体、または賦形剤としては、抗酸化剤（例えば、アスコルビン酸及び重硫酸ナトリウム）、防腐剤（例えば、ベンジルアルコール、メチルパラベン、エチルプロピルまたはｎ−プロピル、ｐ−ヒドロキシ安息香酸）、乳化剤、懸濁化剤、分散剤、溶媒、増量剤、充填剤、洗浄剤、緩衝剤、ビヒクル、希釈剤、及び／またはアジュバントが挙げられるが、これらに限定されない。例えば、好適なビヒクルは、生理食塩水またはクエン酸緩衝生理食塩水であり得、場合により非経口投与のための医薬組成物に一般的な他の物質を補充することができる。中性緩衝生理食塩水または血清アルブミンと混合された生理食塩水は、さらなる例示的なビヒクルである。当業者は、本明細書で企図される医薬組成物及び剤形に使用できる様々な緩衝液を容易に判断できるはずである。通常の緩衝剤としては、薬学的に許容される弱酸、弱塩基、またはこれらの混合物が挙げられるが、これらに限定されない。一例として、緩衝剤成分は、リン酸、酒石酸、乳酸、コハク酸、クエン酸、酢酸、アスコルビン酸、アスパラギン酸、グルタミン酸、及びこれらの塩などの水溶性物質であり得る。許容される緩衝剤としては、例えば、Ｔｒｉｓ緩衝液、Ｎ−（２−ヒドロキシエチル）ピペラジン−Ｎ’−（２−エタンスルホン酸）（ＨＥＰＥＳ）、２−（Ｎ−モルホリノ）エタンスルホン酸（ＭＥＳ）、２−（Ｎ−モルホリノ）エタンスルホン酸ナトリウム塩（ＭＥＳ）、３−（Ｎ−モルホリノ）プロパンスルホン酸（ＭＯＰＳ）、及びＮ−トリス［ヒドロキシメチル］メチル−３−アミノプロパンスルホン酸（ＴＡＰＳ）が挙げられる。
【０１７９】
医薬組成物は、製剤化された後、溶液、懸濁液、ゲル、エマルジョン、固体、または脱水粉末もしくは凍結乾燥粉末として、滅菌バイアル中で保存することができる。このような製剤は、すぐ使用できる形態、使用前に再構成が必要な凍結乾燥形態、使用前に希釈が必要な液体形態、またはその他の許容される形態のいずれでも保存することもできる。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、単回使用容器（例えば、単回使用バイアル、アンプル、注射器、または自己注射器（例えば、ＥｐｉＰｅｎ（登録商標））に類するもの））で提供される一方、他の実施形態では、複数回使用容器（例えば、複数回使用バイアル）が提供される。任意の薬物送達装置を使用して、ＰＥＧ−ＩＬ−１０またはＩＬ−１５薬剤を送達することができ、これには移植物（例えば、埋込ポンプ）及びカテーテルシステム、低速注入ポンプ及びデバイスを含み、いずれも当業者に周知されている。また、規定された期間にわたって本明細書に開示されるポリペプチドを放出するために、一般に皮下または筋肉内に投与されるデポ注射を使用してもよい。デポ注射は通常、固体系またはオイル系のいずれかであり、一般に少なくとも１つの本明細書に記載の製剤成分を含む。当業者は、可能なデポ注射の製剤及び使用法を熟知している。
【０１８０】
医薬組成物は、水性または油性の滅菌注射用懸濁液の形態であり得る。この懸濁液は、本明細書で述べた好適な分散剤または湿潤剤及び懸濁化剤を使用して、既知の技術に従って製剤化することができる。滅菌注射用製剤はまた、非毒性の非経口に許容される希釈剤または溶媒中の、例えば１，３−ブタンジオール溶液としての滅菌注射用溶液または懸濁液であってもよい。用いることができる許容される希釈剤、溶媒、及び分散媒としては、水、リンゲル液、等張性塩化ナトリウム溶液、Ｃｒｅｍｏｐｈｏｒ  ＥＬ（商標）（ＢＡＳＦ、Ｐａｒｓｉｐｐａｎｙ，ＮＪ）またはリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）、エタノール、ポリオール（例えば、グリセロール、プロピレングリコール、及び液体ポリエチレングリコール）、及びこれらの好適な混合物が挙げられる。加えて、従来から滅菌不揮発性油が溶媒または懸濁媒として使用されている。この目的では、合成モノグリセリドまたはジグリセリドを含む、任意の無刺激の不揮発性油を使用することができる。さらに、オレイン酸などの脂肪酸も注射液の調製に使用されている。吸収を遅らせる薬剤（例えば、モノステアリン酸アルミニウムまたはゼラチン）を含めることによって、特定の注射用製剤の持続的な吸収を達成することができる。
【０１８１】
活性成分を含有する医薬組成物は、経口使用に好適な形態、例えば、錠剤、カプセル、トローチ剤、口内錠、水性もしくは油性懸濁液、分散性の散剤もしくは顆粒剤、エマルジョン、硬質もしくは軟質カプセル、またはシロップ、溶液、マイクロビーズ、またはエリキシル剤であり得る。特定の実施形態では、本明細書に記載のＰＥＧ−ＩＬ−１０及び／またはＩＬ−１５薬剤と共投与される薬剤の活性成分は、経口使用に適した形態である。経口使用を意図した医薬組成物は、医薬組成物を製造するための当技術分野で既知の任意の方法に従って調製することができ、そのような組成物には、製薬上、上質で口当たりのよい製剤になるように、例えば、甘味剤、矯味剤、着色剤、及び保存剤などの１種以上の薬剤を含有することができる。錠剤、カプセル剤などは、錠剤の製造に適した非毒性の薬学的に許容される賦形剤と混合された活性成分を含有する。これらの賦形剤は、例えば、炭酸カルシウム、炭酸ナトリウム、乳糖、リン酸カルシウム、またはリン酸ナトリウムなどの希釈剤；造粒剤及び崩壊剤、例えばコーンスターチまたはアルギン酸；結合剤、例えばデンプン、ゼラチン、またはアカシア、及び滑沢剤、例えばステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸、またはタルクを含み得る。
【０１８２】
経口投与に適した錠剤、カプセル剤などは、胃腸管における崩壊及び吸収を遅延させ、それによって持続作用をもたらすために、既知の技術によってコーティングされていても、コーティングされていなくてもよい。例えば、モノステアリン酸グリセリルまたはジステアリン酸グリセリルなどの時間遅延物質を使用することができる。これらはまた、当技術分野で既知の技術によってコーティングして、制御放出に適した浸透性治療錠剤を形成することもできる。追加の薬剤としては、投与された組成物の送達を制御するための生分解性または生体適合性の粒子またはポリマー物質、例えばポリエステル、ポリアミン酸、ヒドロゲル、ポリビニルピロリドン、ポリ無水物、ポリグリコール酸、エチレン−酢酸ビニル、メチルセルロース、カルボキシメチルセルロース、硫酸プロタミン、またはラクチド／グリコリドコポリマー、ポリラクチド／グリコリドコポリマー、またはエチレン酢酸ビニルコポリマーが挙げられる。例えば、コアセルベーション技術または界面重合によって、それぞれヒドロキシメチルセルロースもしくはゼラチンマイクロカプセル、またはポリ（メチルメタクリレート）マイクロカプセルを使用して作製されたマイクロカプセルに、またはコロイド薬物送達系に経口薬剤を封入することができる。コロイド分散系としては、巨大分子複合体、ナノカプセル、ミクロスフェア、マイクロビーズ、及び脂質ベース系が挙げられ、それには水中油型エマルジョン、ミセル、混合ミセル、及びリポソームを含む。上記の製剤の調製方法は、当業者には明らかであろう。
【０１８３】
経口使用のための製剤はまた、活性成分が不活性固体希釈剤、例えば炭酸カルシウム、リン酸カルシウム、カオリン、または微結晶性セルロースと混合されている硬質ゼラチンカプセルとして、または活性成分が水もしくは油媒体、例えばピーナッツ油、流動パラフィン、もしくはオリーブ油と混合されている軟質ゼラチンカプセルとして提示することができる。
【０１８４】
水性懸濁液は、その製造に適した賦形剤と混合された活性物質を含有する。そのような賦形剤は、懸濁剤、例えばカルボキシメチルセルロースナトリウム、メチルセルロース、ヒドロキシ−プロピルメチルセルロース、アルギン酸ナトリウム、ポリビニルピロリドン、トラガカントゴム、及びアラビアゴム；分散剤または湿潤剤、例えば、天然ホスファチド（例えば、レシチン）、または脂肪酸とアルキレンオキシドの縮合物（例えば、ステアリン酸ポリオキシエチレン）、または長鎖脂肪族アルコールとエチレンオキシドの縮合物（例えば、ヘプタデカエチレンオキシセタノール）、または脂肪酸及びヘキシトール由来の部分エステルとエチレンオキシドの縮合物（例えば、ポリオキシエチレンソルビトールモノオレエート）、または脂肪酸及びヘキシトール無水物由来の部分エステルとエチレンオキシドの縮合物（例えば、ポリエチレンソルビタンモノオエレート）であり得る。水性懸濁液はまた、１種以上の防腐剤を含有することができる。
【０１８５】
油性懸濁液は、植物油、例えばラッカセイ油、オリーブ油、ゴマ油、またはヤシ油に、または流動パラフィンなどの鉱油に活性成分を懸濁させることにより製剤化することができる。油性懸濁液は、増粘剤、例えばミツロウ、硬質パラフィン、またはセチルアルコールを含有することができる。上述のような甘味剤、及び矯味剤を添加して、口当たりのよい経口製剤を提供することができる。
【０１８６】
水を添加して水性懸濁液を調製する場合に適した分散性の散剤及び顆粒剤では、分散剤または湿潤剤、懸濁化剤、及び１種以上の防腐剤と混合して活性成分を提供する。好適な分散剤または湿潤剤及び懸濁化剤は、本明細書に例示されている。
【０１８７】
本開示の医薬組成物はまた、水中油型エマルジョンの形態であってもよい。油相は、植物油、例えばオリーブ油もしくはラッカセイ油、または鉱油、例えば流動パラフィン、またはこれらの混合物であり得る。好適な乳化剤は、天然ゴム、例えば、アラビアゴムまたはトラガントゴム；天然リン脂質、例えば、ダイズ、レシチン、及び脂肪酸由来のエステルまたは部分エステル；ヘキシトール無水物、例えば、ソルビタンモノオレエート；及びエチレンオキシドと部分エステルの縮合物、例えば、ポリオキシエチレンソルビタンモノオレエートであり得る。
【０１８８】
製剤はまた、急速な分解または体外への排出から組成物を保護するために、移植物、リポソーム、ヒドロゲル、プロドラッグ、及びマイクロカプセル化送達系を含む制御放出製剤などの担体を含むことができる。例えば、モノステアリン酸グリセリルまたはステアリン酸グリセリルなどの時間遅延物質を単独で、またはワックスと組み合わせて使用することができる。
【０１８９】
本開示は、直腸投与に適した坐剤形態でのＩＬ−１０ポリペプチドの投与を企図する。常温では固体であるが直腸温度では液体であり、その結果、直腸内で溶解して薬物を放出する好適な非刺激性賦形剤と薬物を混合することによって坐剤を調製することができる。このような物質としては、カカオバター及びポリエチレングリコールが挙げられるが、これらに限定されない。
【０１９０】
本開示によって企図されるＰＥＧ−ＩＬ−１０及びＩＬ−１５薬剤は、現在既知であるかまたは将来開発される任意の他の好適な医薬組成物（例えば、鼻スプレーまたは吸入用スプレー）の形態であり得る。
【０１９１】
製剤中のポリペプチドまたはその断片の濃度は、幅広く（例えば、約０．１重量％未満、通常約２重量％もしくは少なくとも約２重量％から２０重量％〜５０重量％またはそれ以上まで）変更でき、通常は主に液体量、粘度、及び対象に応じた要因に基づいて、例えば選択された特定の投与方式に従って選択される。
【０１９２】
投与経路
本開示は、任意の適切な方法でのＰＥＧ−ＩＬ−１０及びＩＬ−１５薬剤、ならびにその組成物の投与を企図する。好適な投与経路としては、非経口（例えば、筋肉内、静脈内、皮下（例えば、注入または埋込み）、腹腔内、嚢内、関節内、腹腔内、脳内（実質内）、及び脳室内）、経口、経鼻、経腟、舌下、眼内、直腸内、局所（例えば、経皮）、舌下、及び吸入が挙げられる。また、規定された期間にわたって本明細書に開示されるポリペプチドを放出するために、一般に皮下または筋肉内に投与されるデポ注射を使用してもよい。
【０１９３】
本開示の特定の実施形態は、非経口投与を企図する。非経口投与は、いくつかの実施形態では静脈内投与であり、他の実施形態では皮下投与である。
【０１９４】
補助的な併用療法
本開示は、１種以上の活性な治療薬または他の予防法もしくは治療法（例えば、放射線）とさらに組み合わせた、ＰＥＧ−ＩＬ−１０とＩＬ−１５薬剤の併用を企図する。本出願では、そのようなさらなる組み合わせを、「補助的な組み合わせ」、「補助的な併用療法」、「追加の予防薬または治療薬との組み合わせ」などと称する場合があり、ＰＥＧ−ＩＬ−１０及びＩＬ−１５薬剤の組み合わせに追加する薬剤を「補助的薬剤」などと称することがある。そのような補助的な併用療法では、種々の補助活性剤（複数可）がＰＥＧ−ＩＬ−１０及び／またはＩＬ−１５薬剤とは異なる作用機序を有している場合が多い。そのような補助的な併用療法の特に有利な点として、１種以上の薬剤の用量の低減を可能にし、それにより１種以上の薬剤に付随する副作用を緩和または消失させることができる。さらに、そのような補助的な併用療法は、原因となる増殖性の疾患、障害、または病態に対して相乗的な治療または予防効果を有し得る。本開示のいくつかの実施形態では、補助的薬剤（複数可）は診断薬（複数可）である。
【０１９５】
特定の実施形態では、本開示は、ＰＥＧ−ＩＬ−１０及びＩＬ−１５薬剤、ならびに少なくとも１種の追加の治療薬または診断薬を用いて癌関連の疾患、障害、または病態を治療及び／または予防する方法を提供する。
【０１９６】
本開示のいくつかの実施形態では、ＰＥＧ−ＩＬ−１０、ＩＬ−１５薬剤、及び補助的薬剤（複数可）のそれぞれを個別の剤形にすることができる。例として、ＰＥＧ−ＩＬ−１０がＳＣ投与に適した製剤であり、ＩＬ−１５薬剤がＩＶ投与に適した製剤であり、補助的薬剤が経口投与に適した製剤であってもよい。これに関連して、薬剤のそれぞれを個別に収容することも、あるいは２つ以上の薬剤を（例えば、キットの個々の構成要素として）一緒に収容することもできる。本開示の他の実施形態では、２つ以上のＰＥＧ−ＩＬ−１０、ＩＬ−１５薬剤、及び補助的薬剤（複数可）を同じ剤形にすることができる。例えば、ＰＥＧ−ＩＬ−１０、ＩＬ−１５薬剤、及び補助的薬剤（複数可）をＩＶ投与用に製剤化することができる。これに関連して、１種以上の薬剤を（例えば、注射器中の活性な治療薬として）共製剤化することができる。
【０１９７】
ある特定の実施形態では、ＰＥＧ−ＩＬ−１０、ＩＬ−１５薬剤、及び補助的薬剤（複数可）（例えば、化学療法剤）を逐次的に投与または適用し、その場合、例えばＰＥＧ−ＩＬ−１０を最初に投与し、ＩＬ−１５薬剤を次に投与し、補助的薬剤を最後に投与する。他の実施形態では、ＰＥＧ−ＩＬ−１０、ＩＬ−１５薬剤、及び補助的薬剤（複数可）は、同時に投与され、その場合、例えば、それらのうち２つが同時に投与され、３つ目がその前または後に投与される。ＰＥＧ−ＩＬ−１０、ＩＬ−１５剤、及び補助的薬剤（複数可）は、逐次的に、同時に、またはその変形法で投与されるかどうかを問わず、本開示では補助的な併用療法として投与されるものとみなされる。
【０１９８】
本開示は、その状況下で許容できるか、適切または最適であり得る、補助的な併用療法に適した任意の実施可能な投与レジメンの使用を意図する。以降に記載するレジメンは例示的なものであり、排他的ではない。一実施形態では、ＰＥＧ−ＩＬ−１０、ＩＬ−１５薬剤、及び補助的薬剤（複数可）による治療は、ある期間にわたって維持される。別の実施形態では、ＰＥＧ−ＩＬ−１０、ＩＬ−１５薬剤、及び補助的薬剤（複数可）による治療は、ある期間にわたって減少されるか、または継続される（例えば、対象が安定している場合）。別の実施形態では、補助的薬剤（複数可）による治療が減少されるかまたは中止される一方（例えば、対象が安定している場合）、ＰＥＧ−ＩＬ−１０及びＩＬ−１５薬剤による治療は一定の投与レジメンで維持される。さらなる実施形態では、補助的薬剤（複数可）による治療が減少されるかまたは中止され（例えば、対象が安定している場合）、ＰＥＧ−ＩＬ−１０による治療が減少され（例えば、用量の減少、投与頻度の減少、または治療レジメンの短縮）、ＩＬ−１５薬剤による治療が一定の投与レジメンで維持される。さらなる実施形態では、補助的薬剤（複数可）による治療が減少されるかまたは中止され（例えば、対象が安定している場合）、ＰＥＧ−ＩＬ−１０による治療が減少され（例えば、用量の減少、投与頻度の減少、または治療レジメンの短縮）、ＩＬ−１５薬剤による治療が一定の投与レジメンで維持される。
【０１９９】
さらに別の実施形態では、補助的薬剤（複数可）及びＰＥＧ−ＩＬ−１０による治療が一定の投与レジメンで維持される一方、ＩＬ−１５薬剤による治療が減少されるかまたは中止される（例えば、対象が安定している場合）。なおもさらなる実施形態では、補助的薬剤（複数可）及びＩＬ−１５薬剤による治療が一定の投与レジメンで維持される一方、ＰＥＧ−ＩＬ−１０による治療が減少されるかまたは中止される（例えば、用量の減少、投与頻度の減少、または治療レジメンの短縮）。他の投与レジメンの特定及び使用は、当業者に明らかであろう。
【０２００】
本明細書で開示されるＰＥＧ−ＩＬ−１０及びＩＬ−１５薬剤との併用に適した具体的な薬剤を以下に示すが、本開示はそれに限定されないものと理解されるべきである。例として、予防薬または治療薬は、化学療法剤、免疫もしくは炎症関連薬剤、代謝薬、抗ウイルス薬、または抗血栓薬であり得るが、これらに限定されない。本開示の方法は、非薬理学的薬剤（例えば、放射線医学）と組み合わせて使用することもできる。
【０２０１】
特定の実施形態では、本開示は、癌、腫瘍、または前癌症状、または癌関連の疾患、障害、もしくは病態の治療及び／または予防に、化学療法剤（複数可）とＰＥＧ−ＩＬ−１０及びＩＬ−１５薬剤を使用することを企図する。化学療法剤の例としては、チオテパ及びシクロホスファミド（ｃｙｃｌｏｓｐｈｏｓｐｈａｍｉｄｅ）などのアルキル化剤；ブスルファン、インプロスルファン及びピポスルファンなどのアルキルスルホネート；ベンゾドパ（ｂｅｎｚｏｄｏｐａ）、カルボコン、メツレドパ（ｍｅｔｕｒｅｄｏｐａ）、及びウレドパ（ｕｒｅｄｏｐａ）などのアジリジン；アルトレタミン、トリエチレンメラミン、トリエチレンホスホラミド、トリエチレンチオホスホラミド（ｐｈｏｓｐｈａｏｒａｍｉｄｅ）、及びトリメチロールメラミン（ｔｒｉｍｅｔｈｙｌｏｌｏｍｅｌａｍｉｍｅ）を含むエチレンイミン及びメチラメラミン（ｍｅｔｈｙｌａｍｅｌａｍｉｎｅ）；クロラムブシル、クロルナファジン、コロホスファミド（ｃｈｏｌｏｐｈｏｓｐｈａｍｉｄｅ）、エストラムスチン、イホスファミド、メクロレタミン、メクロレタミンオキシド塩酸塩、メルファラン、ノボエンビキン、フェネステリン（ｐｈｅｎｅｓｔｅｒｉｎｅ）、プレドニムスチン、トロホスファミド、ウラシルマスタードなどのナイトロジェンマスタード；カルムスチン、クロロゾトシン、フォテムスチン、ロムスチン、ニムスチン、ラニムスチンなどのニトロソウレア；アクラシノマイシン、アクチノマイシン、オースラマイシン（ａｕｔｈｒａｍｙｃｉｎ）、アザセリン、ブレオマイシン、カクチノマイシン、カリケアマイシン、カラビシン（ｃａｒａｂｉｃｉｎ）、カミノマイシン（ｃａｍｉｎｏｍｙｃｉｎ）、カルジノフィリン、クロモマイシン、ダクチノマイシン、ダウノルビシン、デトルビシン（ｄｅｔｏｒｕｂｉｃｉｎ）、６−ジアゾ−５−オキソ−Ｌ−ノルロイシン、ドキソルビシン、エピルビシン、エソルビシン、イダルビシン、マルセロマイシン、マイトマイシン、ミコフェノール酸、ノガラマイシン、オリボマイシン、ペプロマイシン、ポトフィロマイシン（ｐｏｔｆｉｒｏｍｙｃｉｎ）、ピューロマイシン、ケラマイシン（ｑｕｅｌａｍｙｃｉｎ）、ロドルビシン（ｒｏｄｏｒｕｂｉｃｉｎ）、ストレプトニグリン、ストレプトゾシン、ツベルシジン、ウベニメクス、ジノスタチン、ゾルビシンなどの抗生物質；メトトレキサート及び５−フルオロウラシル（５−ＦＵ）などの代謝拮抗薬；デノプテリン、メトトレキサート、プテロプテリン、トリメトレキサートなどの葉酸類似体；フルダラビン、６−メルカプトプリン、チアミプリン、チオグアニンなどのプリン類似体；アンシタビン、アザシチジン、６−アザウリジン、カルモフール、シタラビン、ジデオキシウリジン、ドキシフルリジン、エノシタビン、フロクスウリジン、５−ＦＵなどのピリミジン類似体；カルステロン、プロピオン酸ドロモスタノロン、エピチオスタノール、メピチオスタン、テストラクトンなどのアンドロゲン；アミノグルテチミド、ミトタン、トリロスタンなどの抗副腎薬；フロリン酸（ｆｒｏｌｉｎｉｃ  ａｃｉｄ）などの葉酸補充薬；アセグラトン；アルドホスファミドグリコシド；アミノレブリン酸；アムサクリン；ベストラ���シル；ビサントレン；エダトラキセート（ｅｄａｔｒａｘａｔｅ）；デフォファミン（ｄｅｆｏｆａｍｉｎｅ）；デメコルシン；ジアジクオン；エルフォルミチン（ｅｌｆｏｒｍｉｔｈｉｎｅ）；酢酸エリプチニウム；エトグルシド；硝酸ガリウム；ヒドロキシウレア；レンチナン；ロニダミン；ミトグアゾン；ミトキサントロン；モピダモール；ニトラクリン；ペントスタチン；フェナメット；ピラルビシン；ポドフィリン酸；２−エチルヒドラジド；プロカルバジン；ラゾキサン；シゾフィラン；スピロゲルマニウム；テヌアゾン酸；トリアジクオン；２，２’，２”−トリクロロトリエチルアミン；ウレタン；ビンデシン；ダカルバジン；マンノムスチン；ミトブロニトール；ミトラクトール；ピポブロマン；ガシトシン（ｇａｃｙｔｏｓｉｎｅ）；アラビノシド（Ａｒａ−Ｃ）；シクロホスファミド；チオテパ；タキソイド、例えば、パクリタキセル及びドセタキセル（ｄｏｘｅｔａｘｅｌ）；クロラムブシル；ゲムシタビン；６−チオグアニン；メルカプトプリン；メトトレキサート；シスプラチン及びカルボプラチンなどの白金及び白金配位錯体；ビンブラスチン；エトポシド（ＶＰ−１６）；イホスファミド；マイトマイシンＣ；ミトキサントロン；ビンクリスチン；ビノレルビン；ナベルビン；ノバントロン（ｎｏｖａｎｔｒｏｎｅ）；テニポシド；ダウノマイシン；アミノプテリン；ゼローダ；イバンドロネート；ＣＰＴ１１；トポイソメラーゼ阻害剤；ジフルオロメチルオルニチン（ＤＭＦＯ）；レチノイン酸；エスペラミシン；カペシタビン；ならびに上記のいずれかの薬学的に許容される塩、酸、または誘導体が挙げられるが、これらに限定されない。
【０２０２】
化学療法剤にはまた、例えば、タモキシフェン、ラロキシフェン、アロマターゼ阻害４（５）−イミダゾール、４−ヒドロキシタモキシフェン、トリオキシフェン、ケオキシフェン、オナプリストン、及びトレミフェンを含む抗エストロゲン薬；及びフルタミド、ニルタミド、ビカルタミド、リュープロリド、及びゴセレリンなどの抗アンドロゲン薬；ならびに上記のいずれかの薬学的に許容される塩、酸、または誘導体など、腫瘍に対するホルモン作用を調節または阻害するように作用する抗ホルモン薬も含まれる。ある特定の実施形態では、併用療法はホルモン剤または関連ホルモン剤の投与を含む。
【０２０３】
ＩＬ−１２、ＩＮＦα、もしくは抗上皮成長因子受容体などのサイトカインもしくはサイトカインアンタゴニスト、放射線療法、別の腫瘍抗原に対するモノクローナル抗体、モノクローナル抗体と毒素の複合体、Ｔ細胞アジュバント、骨髄移植、または抗原提示細胞（例えば、樹状細胞療法）を含むが、これに限定されない、本明細書に記載の癌性病態の治療または予防に有用な任意の他の薬剤が、補助的薬剤として企図される。ワクチン（例えば、可溶性タンパク質、またはタンパク質をコードする核酸の形態）もまた、本明細書で提供される。
【０２０４】
特定の実施形態では、追加の予防薬または治療薬は化学療法剤であり、その例は本明細書に記載されている。いくつかの実施形態では、化学療法剤は白金系抗腫瘍剤であり、白金配位錯体とも呼ばれる。これらの白金系抗腫瘍剤はＤＮＡを架橋し、それにより癌細胞でのＤＮＡ修復及び／またはＤＮＡ合成を阻害する。そのような薬剤の例としては、シスプラチン、カルボプラチン、オキサリプラチン、サトラプラチン、ピコプラチン、ネダプラチン、及びトリプラチンが挙げられる。
【０２０５】
本開示は、上記のいずれかの薬学的に許容される塩、酸、または誘導体を包含する。
【０２０６】
用量
本発明のＰＥＧ−ＩＬ−１０及びＩＬ−１５薬剤は、例えば、投与の目標（例えば、目的とする消散度）；製剤を投与する対象の年齢、体重、性別、健康状態及び体調；投与経路；ならびに疾患、障害、病態、またはその症状の性質に応じた量で対象に投与することができる。または、投与レジメンは、投与する薬剤（複数可）に付随する任意の副作用の存在、性質、及び範囲を考慮することができる。例えば、安全性及び用量漸増試験、ｉｎ  ｖｉｖｏ試験（例えば、動物モデル）、及び当業者に既知の他の方法に基づいて、有効投与量及び用量レジメンを容易に決定することができる。
【０２０７】
本明細書で別記されているように、本開示は、望ましい血清トラフ濃度（例えば、１０ｎｇ／ｍＬ以上）が維持されるような量及び頻度でＰＥＧ−ＩＬ−１０が投与される実施形態を企図する。また、血清濃度がピークに達するようにＩＬ−１５薬剤を投与し、その後、薬剤がクリアランスされ、再投与される前には測定不能なレベルとなる実施形態も企図される。
【０２０８】
一般に、投与パラメーターは、投与量が、対象に不可逆的に有毒であり得る量未満（すなわち、最大耐性用量、「ＭＴＤ」）であり、対象に対して測定可能な効果を生じさせるのに必要な量以上となるように規定する。このような量は、投与経路及び他の因子を考慮して、例えば、ＡＤＭＥと関係する薬物動態パラメーター及び薬力学的パラメーターによって決定する。
【０２０９】
有効量（ＥＤ）は、薬剤を摂取する対象が、ある程度の割合で治療反応または望ましい効果を示す薬剤の用量または量である。薬剤の「５０％有効量」すなわちＥＤ５０は、投与される集団の５０％に治療反応または望ましい作用が生じる薬剤の用量または量である。ＥＤ５０は、薬剤の効果の妥当な期待値として一般的に使用されているが、必ずしも臨床医がすべての関連要因を考慮した上で適切とみなし得た用量であるとは限らない。したがって、状況によっては、有効量は算出されたＥＤ５０を超え、他の状況では、有効量は算出されたＥＤ５０未満であり、さらに他の状況では、有効量は算出されたＥＤ５０と同じである可能性がある。
【０２１０】
加えて、本開示のＰＥＧ−ＩＬ−１０及びＩＬ−１５薬剤の有効量は、１種以上の用量で対象に投与される場合に、健康な対象と比較して望ましい結果を生じる量であり得る。例えば、特定の障害に罹患している対象の場合、有効量は、正常な対象が示す診断パラメーター、測定値、マーカーなどを１００％と定義したとき、その疾患の診断パラメーター、測定値、マーカーなどが、少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、または９０％超改善する量であり得る。
【０２１１】
本明細書に記載の疾患、障害、または病態の治療に必要なＰＥＧ−ＩＬ−１０及びＩＬ−１５薬剤の量は、当技術分野で既知の活性アッセイによって決定することができる。腫瘍の場合を例として、好適なＩＬ−１０活性には、例えば、腫瘍部位へのＣＤ８＋  Ｔ細胞の浸潤、これらの浸潤細胞からのＩＦＮ−γ、ＩＬ−４、ＩＬ−６、ＩＬ−１０、及びＲＡＮＫ−Ｌなどの炎症性サイトカインの発現、及び生物学的サンプル中のＴＮＦαまたはＩＦＮγレベルの増加が挙げられる。
【０２１２】
ＰＥＧ−ＩＬ−１０の治療有効量は、約０．０１〜約１００μｇタンパク質／ｋｇ体重／日、約０．１〜２０μｇタンパク質／ｋｇ体重／日、約０．５〜１０μｇタンパク質／ｋｇ体重／日、または約１〜４μｇタンパク質／ｋｇ体重／日の範囲であり得る。本開示は、併用療法のＰＥＧ−ＩＬ−１０成分の量が、１０．０μｇ／ｋｇ／日〜２０．０μｇ／ｋｇ／日である実施形態を企図する。いくつかの実施形態では、投与されるＰＥＧ−ＩＬ−１０の量は、１２．０μｇ／ｋｇ／日〜１８．０μｇ／ｋｇ／日である。
【０２１３】
いくつかの実施形態では、ＰＥＧ−ＩＬ−１０は、約５０〜８００μｇタンパク質／ｋｇ体重／日（例えば、約１〜１６μｇタンパク質／ｋｇ体重／日のＰＥＧ−ＩＬ−１０）を送達する連続注入により投与される。注入速度は、例えば、有害作用及び血液細胞数の評価に基づいて変更することができる。ＰＥＧ−ＩＬ−１０に関する他の具体的な投与パラメーターは、本明細書に別記されている。本開示は、癌関連の疾患、障害、または病態を治療または予防するために対象に投与される、併用療法のＩＬ−１５成分の量が、０．０１μｇ／ｋｇ／日〜１０．０μｇ／ｋｇ／日である実施形態を企図する。他の実施形態では、ＩＬ−１５薬剤の量は０．１μｇ／ｋｇ／日〜１０．０μｇ／ｋｇ／日であり、さらに他の実施形態では、ＩＬ−１５薬剤の量は１．０μｇ／ｋｇ／日〜１０．０μｇ／ｋｇ／日である。なおさらなる実施形態では、癌関連の疾患、障害、または病態を治療または予防するために対象に投与される、併用療法のＩＬ−１５成分の量は、０．１μｇ／ｋｇ／日〜１５．０μｇ／ｋｇ／日である。他の実施形態では、ＩＬ−１５薬剤の量は１．０μｇ／ｋｇ／日〜１５．０μｇ／ｋｇ／日であり、さらに他の実施形態では、ＩＬ−１５薬剤の量は１０．０μｇ／ｋｇ／日〜１５．０μｇ／ｋｇ／日である。
【０２１４】
経口薬の投与の場合、１．０〜１０００ミリグラムの活性成分、具体的には１．０、３．０、５．０、１０．０、１５．０、２０．０、２５．０、５０．０、７５．０、１００．０、１５０．０、２００．０、２５０．０、３００．０、４００．０、５００．０、６００．０、７５０．０、８００．０、９００．０、及び１０００．０ミリグラムの活性成分を含有する錠剤、カプセル剤などの形態で組成物を提供することができる。
【０２１５】
ある特定の実施形態では、開示されたＰＥＧ−ＩＬ−１０及び／またはＩＬ−１５薬剤の投与量が「単位剤形」に含有される。語句「単位剤形」とは、望ましい効果を生じさせるのに十分な、所定量の本開示のＰＥＧ−ＩＬ−１０及び／またはＩＬ−１５薬剤を単独で、または１種以上の追加薬剤と組み合わせて、それぞれの単位に含有する物理的な個別単位を指す。単位剤形のパラメーターは、特定の薬剤及び達成すべき効果に依存することが理解されるであろう。
【０２１６】
キット
本開示はまた、ＰＥＧ−ＩＬ−１０及び／またはＩＬ−１５薬剤、ならびにその医薬組成物を含むキットを企図する。キットは一般に、以下に記載の様々な成分を収容する物理的構造体の形態であり、例えば、上記の方法を実施するのに利用することができる。キットの１つ以上の成分を滅菌容器（例えば、滅菌バイアル）内に収めることができる。
【０２１７】
キットには、本明細書で開示されるＰＥＧ−ＩＬ−１０及び／またはＩＬ−１５薬剤を含むことができ、これは対象への投与に適した医薬組成物の形態であり得る。ＰＥＧ−ＩＬ−１０及び／またはＩＬ−１５薬剤は、すぐに使用できる形態、または例えば投与前に再構成もしくは希釈が必要な形態で提供することができる。ＰＥＧ−ＩＬ−１０及び／またはＩＬ−１５薬剤が、使用者による再構成が必要な形態である場合、キットにはまた、ＰＥＧ−ＩＬ−１０及び／またはＩＬ−１５薬剤とともに包装された、またはそれらと別に包装された、緩衝液、薬学的に許容される賦形剤なども含み得る。キットにはまた、本明細書に記載のＰＥＧ−ＩＬ−１０とＩＬ−１５薬剤の両方を収容することができる。このキットには複数の製剤が個別に収容されていてもよいか、またはそれら製剤が既にキットに組み合わせられていてもよい。同様に、補助的療法（例えば、ＰＥＧ−ＩＬ−１０、ＩＬ−１５薬剤、及び補助的薬剤）を企図する場合、このキットには複数の製剤が個別に収容されていてもよいか、またはそれらの２つ以上が既にキットに組み合わせられていてもよい。本開示のキットは、その中に収容された成分を適切に維持するために必要な条件（例えば、冷蔵または冷凍）に合わせて設計することができる。
【０２１８】
キットは、その中の成分に関する識別情報及びその使用方法に関する指示を含むラベルまたは添付文書（例えば、投与パラメーター、活性成分（複数可）の臨床薬理、例えば作用機序（複数可）、薬物動態及び薬力学、有害作用、禁忌など）を含み得る。キットの各成分は個別容器内に封入することができ、また種々の容器すべてを単一のパッケージに収めることができる。ラベルまたは添付文書には、ロット番号及び有効期限などの製造業者情報を含み得る。ラベルまたは添付文書は、例えば、成分を収容する物理的構造体と一体化されていても、物理的構造体内に個別に収容されていても、またはキットの構成要素（例えば、アンプル、注射器、またはバイアル）に貼付されていてもよい。
【０２１９】
ラベルまたは添付文書は、ディスクなどのコンピューター読み取り可能媒体（例えば、ハードディスク、カード、メモリーディスク）、ＣＤ−ＲＯＭ／ＲＡＭもしくはＤＶＤ−ＲＯＭ／ＲＡＭなどの光ディスク、ＤＶＤ、ＭＰ３、磁気テープ、もしくはＲＡＭ及びＲＯＭなどの電子記憶媒体、または磁気／光記憶媒体、フラッシュメディア、もしくはメモリー型カードなどのこれらのハイブリッドを追加で含むことも、あるいはこれらに組み込むこともできる。いくつかの実施形態では、キット中に実際の説明書が存在していないが、遠隔の情報源から、例えばインターネットを介して説明書を得る手段が提供される。
【実施例】
【０２２０】
以下の実施例は、本発明の作製及び使用方法の完全な開示及び説明を当業者に提供するために記載し、発明者が発明とみなすものの範囲を限定することを意図せず、また以下の実験が実施されたこと、及び実施できる実験のすべてであることを示すことも意図しない。現在時制で記述された例示的な説明事項は必ずしも実施されなかったわけではなく、むしろその説明事項を実施すれば、実施例に記載するデータなどを生成できると理解されるべきである。使用した数字（例えば、量、温度など）に関しては正確性を確保するよう努めたが、多少の実験誤差及び偏差が考慮されるべきである。
【０２２１】
特に記載のない限り、部は重量部であり、分子量は重量平均分子量であり、温度は摂氏（℃）であり、圧力は大気圧または大気圧付近である。以下を含む標準的な略語を使用する：ｓまたはｓｅｃ＝秒（複数可）；ｍｉｎ＝分（複数可）；ｈまたはｈｒ＝時間（複数可）；ａａ＝アミノ酸（複数可）；ｂｐ＝塩基対（複数可）；ｋｂ＝キロベース（複数可）；ｎｔ＝ヌクレオチド（複数可）；ｎｇ＝ナノグラム；μｇ＝マイクログラム；ｍｇ＝ミリグラム；ｇ＝グラム；ｋｇ＝キログラム；ｄｌまたはｄＬ＝デシリットル；μｌまたはμＬ＝マイクロリットル；ｍｌまたはｍＬ＝ミリリットル；ｌまたはＬ＝リットル；ｎＭ＝ナノモル；μＭ＝マイクロモル；ｍＭ＝ミリモル；Ｍ＝モル；ｋＤａ＝キロダルトン；ｉ．ｍ．＝筋肉内（に）；ｉ．ｐ．＝腹腔内（に）；ＳＣまたはＳＱ＝皮下（に）；ＨＰＬＣ＝高速液体クロマトグラフィー；ＢＷ＝体重；Ｕ＝単位；ｎｓ＝統計的有意差なし；ＰＭＡ＝ホルボール１２−ミリステート１３−アセテート；ＰＢＳ＝リン酸緩衝生理食塩水；ＨＳＡ＝ヒト血清アルブミン；ＤＭＥＭ＝ダルベッコ改変イーグル培地；ＰＢＭＣ＝初代末梢血単核細胞；ＦＢＳ＝ウシ胎児血清；ＦＣＳ＝ウシ胎児血清；ＨＥＰＥＳ＝４−（２−ヒドロキシエチル）−１−ピペラジンエタンスルホン酸；ＬＰＳ＝リポ多糖；ＡＴＣＣ＝Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（アメリカ培養細胞系統保存機関）。
【０２２２】
物質及び方法。
記載した場合、以下の一般的な物質及び方法を使用した、またはこれを以下の実施例で使用することができる。
【０２２３】
分子生物学手順。分子生物学の標準方法は、科学文献に記載されている（例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋ  ａｎｄ  Ｒｕｓｓｅｌｌ（２００１）Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ，３ｒｄ  ｅｄ．，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ，Ｎ．Ｙ．；及びＡｕｓｕｂｅｌ，ｅｔ  ａｌ．（２００１）Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌｓ．１−４，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，Ｎ．Ｙ．（細菌細胞のクローニング及びＤＮＡ変異誘発（Ｖｏｌ．１）、哺乳動物細胞及び酵母のクローニング（Ｖｏｌ．２）、糖複合体及びタンパク質発現（Ｖｏｌ．３）、ならびにバイオインフォマティクス（Ｖｏｌ．４）について記載されている）を参照）。
【０２２４】
抗体関連のプロセス。ポリクローナル及びモノクローナル抗体の産生、精製、断片化について記載されている（例えばＨａｒｌｏｗ  ａｎｄ  Ｌａｎｅ（１９９９）Ｕｓｉｎｇ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ，ＮＹ）；リガンド／受容体相互作用を特性決定するための標準技術を利用可能である（例えば、Ｃｏｌｉｇａｎ  ｅｔ  ａｌ．（２００１）Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌ．４，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ，Ｉｎｃ．，ＮＹを参照）；蛍光活性化細胞選別（ＦＡＣＳ）を含むフローサイトメトリーの方法を利用可能である（例えば、Ｓｈａｐｉｒｏ（２００３）Ｐｒａｃｔｉｃａｌ  Ｆｌｏｗ  Ｃｙｔｏｍｅｔｒｙ，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ，Ｈｏｂｏｋｅｎ，ＮＪを参照）；例えば、診断試薬として使用される、核酸プライマー及びプローブ、ポリペプチド、ならびに抗体を含む、核酸の修飾に適した蛍光試薬を利用可能である（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｒｏｂｅｓ（２００３）Ｃａｔａｌｏｇｕｅ，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｒｏｂｅｓ，Ｉｎｃ．，Ｅｕｇｅｎｅ，ＯＲ．；Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ（２００３）Ｃａｔａｌｏｇｕｅ，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ．）。抗体のさらなる考察については、本明細書に別記する。
【０２２５】
ソフトウェア。例えば、抗原性断片、リーダー配列、タンパク質の折り畳み、機能的ドメイン、グリコシル化部位、及び配列アラインメントを決定するソフトウェアパッケージ及びデータベースを利用可能である（例えば、ＧＣＧ  Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ  Ｐａｃｋａｇｅ（Ａｃｃｅｌｒｙｓ，Ｉｎｃ．，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）；及びＤｅＣｙｐｈｅｒ（商標）（ＴｉｍｅＬｏｇｉｃ  Ｃｏｒｐ．，Ｃｒｙｓｔａｌ  Ｂａｙ，ＮＶを参照）。
【０２２６】
ＰＥＧ化。本明細書に記載のＰＥＧ化ＩＬ−１０は、当業者に既知の任意の手段によっても合成することができる。モノＰＥＧ−ＩＬ−１０及びモノ／ジＰＥＧ−ＩＬ−１０の混合物を作製するための例示的な合成スキームは記載されている（例えば、米国特許第７，０５２，６８６号；米国特許公開２０１１／０２５０１６３；ＷＯ２０１０／０７７８５３を参照）。本開示の特定の実施形態は、選択的にＰＥＧ化されたモノ及びジＰＥＧ−ＩＬ−１０の混合物を含む。当業者は、本開示の実施に適したＰＥＧの作製及び使用（ならびに他の薬物送達技術）に専門知識を活用することに加え、多くの市販業者のＰＥＧ関連技術を熟知している（例えば、ＮＯＦ  Ａｍｅｒｉｃａ  Ｃｏｒｐ（Ｉｒｖｉｎｅ，ＣＡ）及びＰａｒｃｈｅｍ（Ｎｅｗ  Ｒｏｃｈｅｌｌｅ，ＮＹ））。
【０２２７】
マウス。種々のマウス及び他の動物の株を本開示の教示と関連して使用することができる。例えば、免疫適格性のＢａｌｂ／ＣまたはＢ細胞欠損Ｂａｌｂ／ＣマウスをＴｈｅ  Ｊａｃｋｓｏｎ  Ｌａｂ．，Ｂａｒ  Ｈａｒｂｏｒ，ＭＥから入手することができ、これを標準的な手順に従って使用することができる（例えば、Ｍａｒｔｉｎ  ｅｔ  ａｌ（２００１）Ｉｎｆｅｃｔ．Ｉｍｍｕｎ．，６９（１１）：７０６７−７３及びＣｏｍｐｔｏｎ  ｅｔ  ａｌ．（２００４）Ｃｏｍｐ．Ｍｅｄ．５４（６）：６８１−８９を参照）。本開示によって企図される実験作業に適した他のマウス系統は当業者に既知であり、一般にＪａｃｋｓｏｎ  Ｌａｂまたは別の供給者から入手可能である。
【０２２８】
ＩＬ−１０の濃度。血清ＩＬ−１０濃度レベルと曝露レベルは、当技術分野で使用される標準方法によって決定することができる。例えば、血清曝露レベルアッセイは、マウス尾切片からプレーンの毛細管に全血（約５０μＬ／マウス）を採集し、遠心分離により血清細胞と血液細胞を分離し、標準的なＥＬＩＳＡキット及びＥＬＩＳＡ技術によってＩＬ−１０の曝露レベルを決定することにより行われる。
【０２２９】
以降に記載するアッセイは代表的なものであり、排他的ではない。
【０２３０】
ｉｎ  ｖｉｔｒｏサイトカイン分泌アッセイ。活性化された初代ヒトＣＤ８＋  Ｔ細胞は、ＰＥＧ−ＩＬ−１０で、次いで抗ＣＤ３抗体で処理するとＩＦＮ−γを分泌する。以下のプロトコルは、サイトカイン分泌を調べるための例示的アッセイを示している。
【０２３１】
ヒトＰＢＭＣは、任意の標準的なプロトコルに従って単離することができる（例えば、Ｆｕｓｓ  ｅｔ  ａｌ．（２００９）Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，Ｕｎｉｔ  ７．１，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ，Ｉｎｃ．，ＮＹを参照）。ＣＤ８＋  Ｔ細胞は、製造業者のプロトコル（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ  Ｂｉｏｔｅｃ；Ａｕｂｕｒｎ，ＣＡ）に従ってＭｉｌｔｅｎｙｉ  Ｂｉｏｔｅｃ’ｓ  ＭＡＣＳ細胞分離技術を使用して単離することができる。活性化時のアッセイの場合、単離されたＣＤ８＋  Ｔ細胞（２×１０６細胞／ｍＬ、標準的な９６ウェルプレートのウェルあたり５×１０５細胞）を、プレートに結合された抗ＣＤ３及び抗ＣＤ２８（プレートは１０μｇ／ｍＬの抗ＣＤ３及び２μｇ／ｍＬの抗ＣＤ２８でプレコーティングされている；Ａｆｆｙｍｅｔｒｉｘ  ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ；Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）、ならびに適切な濃度のＩＬ−１５またはＰＥＧ−ＩＬ−１０により、ＡＩＭ  Ｖ培地（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ；Ｃａｒｌｓｂａｄ，ＣＡ）中にて３日間で活性化することができる。次いで培地を回収し、製造業者のプロトコル（Ａｆｆｙｍｅｔｒｉｘ  ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ；Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）に従って市販のＥＬＩＳＡキットを使用し、ＩＦＮ−γについてアッセイすることができる。休眠段階時のアッセイの場合、単離されたＣＤ８＋  Ｔ細胞（３×１０６細胞／ｍＬ、標準的な２４ウェルプレートのウェルあたり３×１０６細胞）を、プレートに結合された抗ＣＤ３及び抗ＣＤ２８（プレートは１０μｇ／ｍＬの抗ＣＤ３及び２μｇ／ｍＬの抗ＣＤ２８でプレコーティングされている；Ａｆｆｙｍｅｔｒｉｘ  ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ；Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）により３日間で活性化することができる。活性化後、細胞を採取して再度プレーティングし（２×１０６細胞／ｍＬ、標準的な９６ウェルプレートのウェルあたり５×１０５細胞）、適切な濃度のＩＬ−１５またはＰＥＧ−ｈＩＬ−１０により、ＡＩＭ  Ｖ培地中にて３日間で処理することができる。処理後、細胞を採取して再度プレーティングし（２×１０６細胞／ｍＬ、標準的な９６ウェルプレートのウェルあたり５×１０５細胞）、１μｇ／ｍＬの可溶性抗ＣＤ３により、ＡＩＭ  Ｖ培地中にて４時間処理することができる。次いで培地を回収し、製造業者のプロトコルに従って市販のＥＬＩＳＡキットを使用し、ＩＦＮ−γ（Ａｆｆｙｍｅｔｒｉｘ  ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ；Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）、グランザイムＢ、及びパーフォリン（Ｍａｂｔｅｃｈ；  Ｃｉｎｃｉｎｎａｔｉ，ＯＨ）についてアッセイすることができる。
【０２３２】
ＴＮＦα阻害アッセイ。Ｕ９３７細胞（肺からのリンパ芽球ヒト細胞株、Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ（＃８５０１１４４０）；Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯから入手可能）をＰＭＡで刺激すると、細胞がＴＮＦαを分泌し、このＴＮＦα分泌細胞を引き続きヒトＩＬ−１０で処理すると、ＴＮＦαの分泌が用量依存的に減少する。例示的なＴＮＦα阻害アッセイは、以下のプロトコルを使用して実施することができる。
【０２３３】
１０％ＦＢＳ／ＦＣＳ及び抗生物質を含有するＲＭＰＩ中でＵ９３７細胞を培養した後、９６ウェル平底プレート（任意の血漿処理された組織培養プレート（例えば、Ｎｕｎｃ；Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，ＵＳＡ）を使用可能）に９０％生存Ｕ９３７細胞を１×１０５で条件ごとに３連でプレーティングする。以下の条件となるように細胞をプレーティングする（すべて少なくとも３連；「培地単独」については、ウェルの数を２倍にするが、これは、半分を１０ｎＭのＰＭＡとのインキュベーション後の生存性に使用するためである）：５ｎｇ／ｍＬ  ＬＰＳ単独；５ｎｇ／ｍＬ  ＬＰＳ＋０．１ｎｇ／ｍＬ  ｒｈＩＬ−１０；５ｎｇ／ｍＬ  ＬＰＳ＋１ｎｇ／ｍＬ  ｒｈＩＬ−１０；５ｎｇ／ｍＬ  ＬＰＳ＋１０ｎｇ／ｍＬ  ｒｈＩＬ−１０；５ｎｇ／ｍＬ  ＬＰＳ＋１００ｎｇ／ｍＬ  ｒｈＩＬ−１０；５ｎｇ／ｍＬ  ＬＰＳ＋１０００ｎｇ／ｍＬ  ｒｈＩＬ−１０；５ｎｇ／ｍＬ  ＬＰＳ＋０．１ｎｇ／ｍＬ  ＰＥＧ−ｒｈＩＬ−１０；５ｎｇ／ｍＬ  ＬＰＳ＋１ｎｇ／ｍＬ  ＰＥＧ−ｒｈＩＬ−１０；５ｎｇ／ｍＬ  ＬＰＳ＋１０ｎｇ／ｍＬ  ＰＥＧ−ｒｈＩＬ−１０；５ｎｇ／ｍＬ  ＬＰＳ＋１００ｎｇ／ｍＬ  ＰＥＧ−ｒｈＩＬ−１０；及び５ｎｇ／ｍＬ  ＬＰＳ＋１０００ｎｇ／ｍＬ  ＰＥＧ−ｒｈＩＬ−１０。各ウェルを２００μＬの１０ｎＭ  ＰＭＡに２４時間曝露し、５％  ＣＯ２インキュベーターにて３７℃で培養すると、細胞の約９０％が付着しているはずである。３つの予備のウェルを再懸濁し、細胞を計数して生存性を評価する（９０％超が生存しているはずである）。新鮮なＰＭＡを含有しない培地で、必ずウェル中で細胞が依然として存在するように、緩やかに、しかし完全に３回洗浄する。適切な濃度（容積を１００％希釈し２倍にする）のｒｈＩＬ−１０またはＰＥＧ−ｒｈＩＬ−１０を含有する培地をウェルあたり１００μＬ添加し、５％  ＣＯ２インキュベーターにて３７℃で３０分間インキュベートする。１０ｎｇ／ｍＬのＬＰＳ原液をウェルあたり１００μＬ添加し、各ウェルのＬＰＳの最終濃度を５ｎｇ／ｍＬにし、５％  ＣＯ２インキュベーターにて３７℃で１８〜２４時間インキュベートする。上清を除去し、製造業者の指示に従ってＴＮＦαのＥＬＩＳＡを実施する。ＥＬＩＳＡでは、各コンディショニングした上清を２連で流す。
【０２３４】
ＭＣ／９細胞増殖アッセイ。ＭＣ／９細胞（Ｃｅｌｌ  Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ；Ｄａｎｖｅｒｓ，ＭＡから入手可能なマスト細胞の特性を有するマウス細胞系統）にＩＬ−１０を投与すると、細胞増殖の用量依存的な増加を引き起こす。Ｔｈｏｍｐｓｏｎ−Ｓｎｉｐｅｓ，Ｌ．ｅｔ  ａｌ．（１９９１）Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１７３：５０７−１０）には、ＭＣ／９細胞にＩＬ−３＋ＩＬ−１０及びＩＬ−３＋ＩＬ−４＋ＩＬ−１０を補充する標準アッセイのプロトコルが記載されている。供給業者（例えば、Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ，ＵＳＡ；及びＣｅｌｌ  Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｄａｎｖｅｒｓ，ＭＡ）は、このアッセイをｒｈＩＬ−１０のロット出荷アッセイとして使用している。当業者は、Ｔｈｏｍｐｓｏｎ−Ｓｎｉｐｅｓ，Ｌ．ｅｔ  ａｌに記載されている標準のアッセイプロトコルを、ＩＬ−１０のみを細胞に補充するように変更することができる。
【０２３５】
腫瘍モデル及び腫瘍分析。任意の当技術分野で認められた腫瘍モデル、アッセイなどを使用して、様々な腫瘍に対する本明細書に記載のＩＬ−１０分子の効果を評価することができる。後述する腫瘍モデル及び腫瘍分析は、利用できるものの代表例である。同系マウス腫瘍細胞を腫瘍接種あたり１０４、１０５、または１０６細胞で皮下または皮内に注射する。Ｅｐ２乳癌モデル、ＣＴ２６結腸癌モデル、ＰＤＶ６皮膚扁平上皮癌モデル、及び４Ｔ１乳癌モデルを使用することができる（例えば、Ｌａｎｇｏｗｓｋｉ  ｅｔ  ａｌ．（２００６）Ｎａｔｕｒｅ  ４４２：４６１−４６５を参照）。免疫適格性のＢａｌｂ／ＣまたはＢ細胞欠損Ｂａｌｂ／Ｃマウスを使用することができる。ＰＥＧ１０−ｍＩＬ−１０を免疫適格マウスに投与することができ、対してＰＥＧ−ｈＩＬ−１０でＢ細胞欠損マウスを処置することができる。処置を開始する前、腫瘍は１００〜２５０ｍｍ３の大きさに達している。ＩＬ−１０、ＰＥＧ−ｍＩＬ−１０、ＰＥＧ−ｈＩＬ−１０、または緩衝液対照を、腫瘍移植から離れた部位にＳＣで投与する。腫瘍の成長は通常、電子ノギスを使用して毎週２回モニターする。各種エンドポイントで腫瘍組織及びリンパ器官を採取し、炎症マーカーの数でｍＲＮＡの発現を測定し、複数の炎症性細胞マーカーの免疫組織染色を実施する。組織を液体窒素中で急速凍結し、−８０℃で保存する。原発腫瘍の成長は通常、電子ノギスを使用して毎週２回モニターする。腫瘍体積は、式（幅２×長さ／２）を使用して算出することができる（式中、長さとは長い方の寸法である）。処置を開始する前、腫瘍は９０〜２５０ｍｍ３の大きさに達している。
【０２３６】
実施例１
ＩＬ−１５と組み合わせたＰＥＧ−ＩＬ−１０の効果
活性化された初代ヒトＣＤ８＋  Ｔ細胞は、ＰＥＧ−ＩＬ−１０で、次いで抗ＣＤ３抗体で処理するとＩＦＮ−γを分泌する。樹状細胞による抗原提示の際にＴ細胞が遭遇する条件を模倣するために、ＰＥＧ−ＩＬ−１０、ＩＬ−１５、または両方の組み合わせの存在下で、ＣＤ８＋  Ｔ細胞を抗ＣＤ３／抗ＣＤ２８の同時刺激に曝露した。図３に示すように、抗ＣＤ３／抗ＣＤ２８によって活性化したＰＥＧ−ＩＬ−１０＋ＩＬ−１５をＣＤ８＋  Ｔ細胞に曝露すると、いずれかの薬剤のみにＣＤ８＋  Ｔ細胞を曝露した場合に観察されるＩＮＦγの分泌と比較して、ＩＮＦγの分泌が中等度に増強された。図３に示すデータ、及び図４〜７に示されたデータは、ＰＥＧ−ｒＨｕＩＬ−１０及びｒＨｕＩＬ−１５を使用した場合に生成されたものである。
【０２３７】
同時刺激のない抗原提示の際にＴ細胞が遭遇する条件を模倣するために、ＰＥＧ−ＩＬ−１０、ＩＬ−１５、または両方の組み合わせの存在下で、ＣＤ８＋  Ｔ細胞を抗ＣＤ３に曝露した。図４に示すように、ＰＥＧ−ＩＬ−１０とＩＬ−１５との組み合わせは意外にもＩＮＦγの分泌を少なくとも相加的に、また場合により相乗的に増強させた。
【０２３８】
ＩＬ−１０（例えばＰＥＧ−ＩＬ−１０）は、グランザイムＡ、グランザイムＢ、及びパーフォリンといった細胞毒性酵素の直接的な上方調節により、ヒト及びマウスＣＤ８＋  Ｔ細胞の細胞毒性を直接活性化することが示されている。加えて、適切な条件下で、この細胞をＩＬ−１０に曝露すると、ペプチド抗原を搭載した可溶性抗ＣＤ３または同種ＭＨＣ  ＩによるＴ細胞受容体ライゲーション時に分泌され得るＩＦＮ−γの細胞内蓄積が増強される。先の活性化したＴ細胞が腫瘍内で遭遇する環境を模倣するために、ＣＤ８＋  Ｔ細胞を抗ＣＤ３及びＩＬ−１５に３日間曝露して活性化し、次いでＰＥＧ−ＩＬ−１０及びＩＬ−１５と共に３日間休止させた。この条件下で、ＣＤ８＋  Ｔ細胞は、少なくとも相加的な、潜在的に相乗的なＩＮＦγ分泌の増強（図５）、及びグランザイムＢの相乗的誘導（図６）を示した。さらに、この条件下で、いずれかのサイトカイン単独に曝露すると、パーフォリンの最大誘導をもたらした（図７）。
【０２３９】
４Ｔ１乳癌モデルにおいて、ｉｎ  ｖｉｖｏでのＰＥＧ−ｒＭｕＩＬ−１０とｒＨｕＩＬ−１５との組み合わせを評価した。このモデルは、腫瘍形成性及び侵襲性が高く、乳腺中の原発腫瘍から、リンパ節、血液、肝臓、肺、脳、及び骨を含む複数の遠位部位へ自発的に転移する可能性がある（Ｐｕｌａｓｋｉ，ＶＡ  ａｎｄ  Ｏｓｔｒａｎｄ−Ｒｏｓｅｎｂｅｒｇ，Ｓ（Ｍａｙ  ２００１）Ｃｕｒｒ  Ｐｒｏｔｏｃ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｃｈａｐｔｅｒ  ２０：Ｕｎｉｔ  ２０．２）。図８に示すように、この組み合わせはマウスの４Ｔ１腫瘍の増殖制御に関して少なくとも相加的な治療効果を有した。このモデルの原発腫瘍成長及び転移能の侵襲な性質を考慮して、このデータから他のモデルを推測することができる。これは、この複合的な抗腫瘍有効性を他の乳癌、結腸癌、黒色腫、及び扁平上皮細胞癌に転用できることを示唆している。
【０２４０】
発明者に既知である本発明を実施するための最良の形態を含め、本発明の具体的な実施形態を本明細書に記載する。前述の説明を読めば、開示された実施形態の変形例は当業者に明白であり得、当業者はこのような変形例を適宜用いてよいことが推測される。したがって、本発明が、本明細書で具体的に記載されたものと別の方法で実施されること、及び適用法により許可される通り、本発明が、本明細書に添付された特許請求の範囲に列挙される対象事項のすべての変更及び等価物を含むことを意図する。さらに、本明細書で特に記載のない限り、または文脈上、明らかな矛盾がない限り、上記の要素の想定される変形例すべてにおいて、上記の要素のあらゆる組み合わせが本発明によって包含される。
【０２４１】
本明細書で引用される刊行物、特許出願、アクセッション番号、及びその他の参考文献すべては、個別の刊行物または特許出願がそれぞれ具体的かつ個別に参照により本明細書に組み込まれた場合と同様に、参照により本明細書に組み込まれる。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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