(57)【要約】  本発明は、ヒトなどの哺乳動物においてハウスダストダニアレルギーの処置で使用する精製された天然Ｄｅｒ  ｐ１アレルゲンと、精製された天然Ｄｅｒ  ｐ２アレルゲンとを含む組成物に関する。本発明は、さらに、アレルギー特異的免疫療法のための医薬組成物に関する。具体的には、本発明は、精製された天然Ｄｅｒ  ｐ１と精製された天然Ｄｅｒ  ｐ２とを含む医薬組成物による処置後、Ｔｈ２細胞活性の低下とＣＣＬ２０放出の減少とによって特徴づけられるそれ以降のハウスダストダニアレルゲン曝露への応答性の減少を開示する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
ハウスダストダニアレルギーに罹患した哺乳動物の処置に使用するための、薬学的に許容される希釈剤または賦形剤中の精製された天然Ｄｅｒ  ｐ１と精製された天然Ｄｅｒ  ｐ２または精製された天然Ｄｅｒ  ｆ１と精製された天然Ｄｅｒ  ｆ２を含む組成物であって、精製された天然Ｄｅｒ  ｐ１と精製された天然Ｄｅｒ  ｐ２または精製された天然Ｄｅｒ  ｆ１と精製された天然Ｄｅｒ  ｆ２による処置がハウスダストダニへの患者のアレルギー応答を脱感作する、組成物。
【請求項２】
哺乳動物がヒトである、請求項１に記載の使用のための組成物。
【請求項３】
ハウスダストダニアレルギーに罹患した哺乳動物が、ハウスダストダニアレルゲンへの以下のアレルギー応答：
鼻炎、喘息およびアトピー性皮膚炎
のうちの少なくとも１つに罹患している、請求項１または２に記載の使用のための組成物。
【請求項４】
脱感作が、ハウスダストダニへの曝露時のＴｈ２細胞および／またはＩＬＣ２細胞の活性の抑制によって特徴づけられる、請求項１〜３のいずれか１項に記載の使用のための組成物。
【請求項５】
Ｔｈ２細胞および／またはＩＬＣ２細胞の活性の抑制が、ＩＬ−４およびＩＬ−５のサイトカイン産生の減少によって特徴づけられる、請求項１〜４のいずれか１項に記載の使用のための組成物。
【請求項６】
脱感作が、ハウスダストダニへの曝露時のＣＣＬ２０の放出の抑制によって特徴づけられ、好ましくはＣＣＬ２０の放出が処置前の放出と比較して少なくとも１倍抑制される、請求項１〜５のいずれか１項に記載の使用のための組成物。
【請求項７】
脱感作が、ハウスダストダニへの曝露によって誘発される好酸球性気道炎症または気道過敏の低減によって特徴づけられる、請求項１〜６のいずれか１項に記載の使用のための組成物。
【請求項８】
前記組成物が、精製された天然Ｄｅｒ  ｐ１と精製された天然Ｄｅｒ  Ｐ２または精製された天然Ｄｅｒ  ｆ１と精製された天然Ｄｅｒ  ｆ２を含み、
前記アレルゲンの各々が、少なくとも約８０重量％の純度を有する、
請求項１〜７のいずれか１項に記載の使用のための組成物。
【請求項９】
前記組成物が、精製された天然Ｄｅｒ  ｐ１と精製された天然Ｄｅｒ  ｐ２または精製された天然Ｄｅｒ  ｆ１と精製された天然Ｄｅｒ  ｆ２を約２０：８０〜９９：１の比率で含む、請求項１〜８のいずれか１項に記載の使用のための組成物。
【請求項１０】
前記組成物中のアレルゲンが本質的に、精製された天然Ｄｅｒ  ｐ１と精製された天然Ｄｅｒ  ｐ２または精製された天然Ｄｅｒ  ｆ１と精製された天然Ｄｅｒ  ｆ２からなり、好ましくは前記組成物が、アレルゲンとして約５０重量％以上の前記アレルゲンを含む、請求項１〜９のいずれか１項に記載の使用のための組成物。
【請求項１１】
前記組成物が、約０．００１〜１０００マイクログラムの精製された天然Ｄｅｒ  ｐ１と精製された天然Ｄｅｒ  ｐ２または精製された天然Ｄｅｒ  ｆ１および精製された天然Ｄｅｒ  ｆ２を含む、請求項１〜１０のいずれか１項に記載の使用のための組成物。
【請求項１２】
精製された天然Ｄｅｒ  ｐ１と精製された天然Ｄｅｒ  ｐ２または精製された天然Ｄｅｒ  ｆ１と精製された天然Ｄｅｒ  ｆ２を含む前記組成物が、皮下、舌下、皮内、経皮、皮膚上、経口、リンパ内またはそれらの組み合わせからなる群から選択される様式で投与される、請求項１〜１１のいずれか１項に記載の使用のための組成物。
【請求項１３】
精製された天然Ｄｅｒ  ｐ１と精製された天然Ｄｅｒ  ｐ２または精製された天然Ｄｅｒ  ｆ１と精製された天然Ｄｅｒ  ｆ２が、皮下投与、経口投与または舌下投与される、請求項１〜１２のいずれか１項に記載の使用のための組成物。
【請求項１４】
前記組成物が、処置の初期段階の間は投与量を増加させて、毎日、毎週、毎月および／または毎年、１〜数回、特異的免疫療法レジメンに従って繰り返し投与される、請求項１〜１３のいずれか１項に記載の使用のための組成物。
【請求項１５】
前記組成物が、精製された天然Ｄｅｒ  ｐ１と精製された天然Ｄｅｒ  ｐ２または精製された天然Ｄｅｒ  ｆ１と精製された天然Ｄｅｒ  ｆ２を同時投与または連続投与のための別々の剤形で含有するキットの形態である、請求項１〜１４のいずれか１項に記載の使用のための組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ハウスダストダニアレルギーの処置における使用のためのハウスダストダニアレルゲンを含む組成物に関する。
【背景技術】
【０００２】
アレルギー疾患、例えばＩ〜ＩＶ型過敏性反応は、先進諸国において人口の２５％から４０％の間に影響を及ぼしていると思われる。アレルギー性鼻炎（枯草熱）、喘息、じんましん（蕁麻疹様）などのアレルギー反応は、アレルギー反応がなければ無害であるそれぞれのアレルゲンに対する、免疫系の過敏症であり、免疫グロブリンＥ（ＩｇＥ）を産生するＢリンパ球の能力の増加、好酸球の存在と活性の増加、および炎症促進性サイトカインＩＬ−４、ＩＬ−５およびＩＬ−１３のレベルの上昇によって特徴づけられる。アレルギー性喘息において、アレルギー反応は、気道過敏の増大によってさらに特徴づけられる。
【０００３】
一般に知られていているように、アレルゲンは、抗原の一種であり、それ以外の場合には身体に無害であるものを免疫系が脅威と認識して撃退する異常に活発な免疫応答を生じさせる。抗原は、宿主生物の一部で免疫応答を誘発することができる分子である。
【０００４】
ハウスダストダニ（ＨＤＭ）は、最も重要なアレルゲン源の１種を代表し、アレルギー患者の５０％超は、ダニアレルゲンに感作されている。ヤケヒョウヒダニ（Ｄｅｒ  ｐ）のアレルゲンは３０を超えるタンパク質と糖タンパク質とを含み、これらのタンパク質は他のダニ種、例えばコナヒョウダニ（Ｄｅｒ  ｆ）からのアレルゲンに対して交差反応性を示す。ＨＤＭアレルゲンの記述されている１９のグループの中でグループ１と２（システインプロテアーゼのＤｅｒ  ｐ１、輸送タンパク質のＤｅｒ  ｐ２）は最も重要なアレルゲンを代表する。アレルギー患者の５０％〜１００％は、これらの２つのアレルゲンに対して特異的なＩｇＥ抗体を有する。コナヒョウヒダニの主要アレルゲンの１つであり、システインプロテアーゼでもあるＤｅｒ  ｆ１は、Ｄｅｒ  ｐ１に対し８２％の相同性を示す（Ｄｅｂ  Ｒ．ら．Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，２００７，２８２，３６８０８−３６８１９）。
【０００５】
アレルゲン特異的免疫療法（ＳＩＴ）はアレルギー患者において長期的効果を有する疾患改変手法を表し、漸増する用量の疾患誘発アレルゲンの投与に基づく。ＳＩＴプロトコルは、通常、増強相の間に週１回の投与、続いて２〜５年間、月１回の維持投与を含む。これらの長期ＳＩＴ処置レジメンの他に、漸増用量のアレルゲンを数時間ごとに投与する、加速的な、すなわち急ぎの免疫療法が、行われる（Ｓｃｈｉａｖｉｎｏら．Ａｎｎ  Ａｌｌｅｒｇｙ  Ａｓｔｈｍａ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．２００４；９２（４）：４０９−１３．）。
【０００６】
ＳＩＴ処置は、アレルゲン特異的ＩｇＧ抗体の誘導を目的としている。この誘導は、アレルギー患者のＩｇＥ結合を防止することによってＩｇＥ媒介エフェクター細胞の脱顆粒を阻害し、そして、アレルギー促進性Ｔｈ−２エフェクター細胞を下方制御することができる１型Ｔヘルパー（Ｔｈ−１）または制御性Ｔ（Ｔｒ）細胞の発現を促進することにより免疫制御を回復させる。ＳＩＴ処置の有効性は、アレルギー障害間で変化し、毒アレルギーと鼻炎に対しては有効性は良好であるが、アレルギー性喘息と食物アレルギーに対しては有効性は不十分である。
【０００７】
現在のＳＩＴ処置レジメンは、通常、皮下注射または舌下製剤用にアレルゲンの粗抽出物を使用する。粗抽出物は、患者が感作され得る主要なアレルゲンの全てを再現するが、様々な量の、キチン、βグルカンならびにエンドトキシンなどの免疫賦活成分をも含み、これは、投与の際に望ましくない効果を誘発し、ならびにＳＩＴの臨床有効性を限定する場合がある。その結果、粗アレルゲン抽出物を高用量で投与することは、安全性に対する懸念、特に、致命的な即時型のＩｇＥ媒介アナフィラキシー反応を引き起こす潜在的リスクに関する懸念を、もたらす。
【０００８】
ＳＩＴの安全性を改善するために、ハウスダストダニアレルギーに対する免疫療法に好適な改良されたアレルゲンを開発する必要がある。
【０００９】
培養されたハウスダストダニの粗抽出物は、ダニ本体もしくはその排泄物、またはそれらの両方のいずれが主に収集されるかによって、大きく変動する組成を示し得ることに、さらに留意されたい。
【００１０】
喘息に対するハウスダストダニアレルギーおよび関連する免疫療法についての概説は、Ｌｉｕら．Ｉｍｍｕｎｏｍｅ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ２０１４；１１：１−６に発表されており、同報告では、研究は数十年にわたるが新規のアプローチが依然として必要とされると結論づけられている。
【００１１】
Ｄｅｒ  ｐ１タンパク質およびＤｅｒ  ｐ２タンパク質は、ハウスダストダニによって産生される主要アレルゲンである。Ｄｅｒ  ｐ１は、１９８０年（Ｃｈａｐｍａｎら．Ｊ．ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  １９８０；１２５：５８７−５９２）に単離されている。Ｄｅｒ  ｐ２は、少なくとも、１９８６年（Ｙａｓｕｅｄａら．Ｉｎｔ．Ａｒｃｈｓ．Ａｌｌｅｒｇｙ  ａｐｐｌ．Ｉｍｍｕｎ．１９８６；８１：２１４−２２３）には記述されている。その他は、例えば、欧州特許出願第ＥＰ１６１２２１９号に記載されており、アレルゲンに基づく少なくとも２０のタンパク質が、ハウスダストダニ内に存在すると考えられている。
【００１２】
多くの努力により、組換え型のＤｅｒ  ｐ１タンパク質およびＤｅｒ  ｐ２タンパク質の操作がなされた。Ｄｅｒ  ｐ１はシステインプロテアーゼであり、そのＩｇＥ誘発活性とＩｇＧ誘発活性は、そのシステインプロテアーゼ活性に依存する。ＳＩＴで成功している組換え型Ｄｅｒ  ｐ１は、例えば国際公開第ＷＯ９２／０４４４５号または米国特許出願第２００７／１２２４２３号にもかかわらず、いまだに報告されていない。構造的にも免疫学的にも天然のアレルゲンに似ている組換え型Ｄｅｒ  ｐ２アレルゲンは生成され、実験で使用されている。
【００１３】
Ｃｈｅｎら．ｉｎ  Ｊ．Ａｌｌｅｒｇｙ  Ｃｌｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌ（２０１２）１３０：４３５−４４３に、再構成したＤｅｒ  ｐ１フラグメントおよびＤｅｒ  ｐ２フラグメントからなる組換え型混合ワクチンが記載されている。
【００１４】
Ｋｉｍら．ｉｎ  Ｃｌｉｎ  ＆  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ａｌｌｅｒｇｙ（２００６）  ４：１−９に、ＤＮＡワクチンの使用が記載されており、ＢＡＬＢ／ｃマウスにおいて保護効果を達成するために、そのＤＮＡは主要なハウスダスダニアレルゲンをコードすると思われる。国際公開第ＷＯ００／５００４４号はハウスダストダニＤｅｒ  ｐに対するＴ細胞エピトープをコードするＤＮＡを用いる遺伝子療法に適用することを示唆している。
【００１５】
Ａｓｔｕｒｉａｓら．Ｃｌｉｎｉｃａｌ  ＆  Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  Ａｌｌｅｒｇｙ  ２００９；３９：１０８８−１０９８に開示されているハイブリッド分子は、切断型Ｄｅｒ  ｐ２およびＤｅｒ  ｐ１からなり、患者のＩｇＥによって反応性の減少を示すことが認められているが、この分子がＤｅｒ  ｐ１特異的ＩｇＧ抗体をｉｎ  ｖｉｖｏで誘導することができることは明白に示されていない。国際公開第ＷＯ２００９／１１８６４２号に、類似している開示を見いだすことができる。同国際公開は、アレルゲン活性、したがって療法誘発性副作用を低減させるように操作されたアレルゲンＤｅｒ  ｐ１およびＤｅｒ  ｐ２のフラグメントから構成されているハイブリッドタンパク質を記載している。全体として、組換え型のＤｅｒ  ｐ１およびＤｅｒ  ｐ２の混合に応答するＩｇＧ抗体によるＨＤＭアレルギー患者のＩｇＥ抗体の平均阻害は、２０％の平均抑制より高くなかった。
【００１６】
アレルゲンを含む適切な組成物を見いだす他のアプローチは、欧州特許第２７２７９３４号、国際公開第ＷＯ２００７／１２３４８８号、国際公開第ＷＯ２０１４／１９５８０３号、および国際公開第ＷＯ２００８／０９２９０２号に記載されている。
【００１７】
国際公開第ＷＯ２０１１／１５１４４９号は、全ダニ抽出物の変動性を低減するために、本体全体の抽出物および糞便の抽出物の使用、ならびに、例えば、これらの抽出物を混合してＤｅｒ  ｐ１とＤｅｒ  ｐ２とを所定の比率にすることによってＤｅｒ  ｐ１とＤｅｒ  ｐ２との比率を調整することを、記載している。ダニ本体抽出物が、ダニ本体または糞便に由来する３０種以上のタンパク質と相当量の非タンパク質物質とを含むことに、留意されたい。
【００１８】
これらのすべての努力にもかかわらず、ＨＤＭアレルギーを処置するための一般的に用いられている唯一のアレルゲンは、ＨＤＭ抽出物である。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１９】
【特許文献１】欧州特許出願第１６１２２１９号
【特許文献２】国際公開第９２／０４４４５号
【特許文献３】米国特許出願公開第２００７／１２２４２３号明細書
【特許文献４】国際公開第２０００／５００４４号
【特許文献５】国際公開第２００９／１１８６４２号
【特許文献６】欧州特許第２７２７９３４号明細書
【特許文献７】国際公開第２００７／１２３４８８号
【特許文献８】国際公開第２０１４／１９５８０３号
【特許文献９】国際公開第２００８／０９２９０２号
【特許文献１０】国際公開第２０１１／１５１４４９号
【非特許文献】
【００２０】
【非特許文献１】Ｄｅｂ  Ｒ．ら．Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，２００７，２８２，３６８０８−３６８１９
【非特許文献２】Ｓｃｈｉａｖｉｎｏら．Ａｎｎ  Ａｌｌｅｒｇｙ  Ａｓｔｈｍａ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．２００４；９２（４）：４０９−１３．
【非特許文献３】Ｌｉｕら．Ｉｍｍｕｎｏｍｅ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ２０１４；１１：１−６
【非特許文献４】Ｃｈａｐｍａｎら．Ｊ．ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  １９８０；１２５：５８７−５９２
【非特許文献５】Ｙａｓｕｅｄａら．Ｉｎｔ．Ａｒｃｈｓ．Ａｌｌｅｒｇｙ  ａｐｐｌ．Ｉｍｍｕｎ．１９８６；８１：２１４−２２３
【非特許文献６】Ｃｈｅｎら．ｉｎ  Ｊ．Ａｌｌｅｒｇｙ  Ｃｌｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌ（２０１２）１３０：４３５−４４３
【非特許文献７】Ｋｉｍら．ｉｎ  Ｃｌｉｎ  ＆  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ａｌｌｅｒｇｙ（２００６）  ４：１−９
【非特許文献８】Ａｓｔｕｒｉａｓら．Ｃｌｉｎｉｃａｌ  ＆  Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  Ａｌｌｅｒｇｙ  ２００９；３９：１０８８−１０９８
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００２１】
本発明の目的は、ＨＤＭアレルギーを処置するために、現在用いられているＨＤＭ抽出物よりも効果的であり、好適なアレルゲン組成物を提供することである。
【課題を解決するための手段】
【００２２】
本発明は、ハウスダストダニ（ＨＤＭ）アレルギーの処置で用いる、単離、精製された天然Ｄｅｒ  ｐ１および精製された天然Ｄｅｒ  ｐ２（以下、ｎＤｅｒｐ１およびｎＤｅｒｐ２と呼ぶ）、または精製された天然Ｄｅｒ  ｆ１および精製された天然Ｄｅｒ  ｆ２（以下、ｎＤｅｒｆ１およびｎＤｅｒｆ２と呼ぶ）を含む、組成物、好ましくは医薬組成物を提供し、精製された天然Ｄｅｒ  ｐ１および精製された天然Ｄｅｒ  ｐ２による前述の処置がハウスダストダニへの哺乳動物のアレルギー反応を脱感作する。
【００２３】
精製されたｎＤｅｒｐ１とｎＤｅｒｐ２または精製されたｎＤｅｒｆ１とｎＤｅｒｆ２は、ＨＤＭアレルギーに対するアレルゲン特異的免疫療法の方法で用いられることが可能であり、アナフィラキシーショックを誘発することなくＨＤＭアレルゲンで感作された哺乳動物に投与されることができる。既知の高い交差反応性を考慮すれば、ＨＤＭはＤｅｒ  ｐに限定されず、Ｄｅｒ  ｆまたは他のタイプのＨＤＭであり得る。
【００２４】
より具体的には、本発明は、身体をＨＤＭアレルゲンに慣らすために、本発明の組成物を投与し、それによって特異的長期耐性を誘導してアレルギー症状を軽減することを含むＳＩＴ方法に関する。
【００２５】
哺乳動物は、好ましくはヒトである。アレルギー反応は、哺乳動物にとって脱感作されることが最も重要であり、喘息、鼻炎または皮膚炎の症状を示す。
【００２６】
組成物は、処置の初期段階の間は投与量を増加させて、毎日、毎週、毎月および／または毎年、１〜数回、特異的免疫療法レジメン（ＳＩＴプロトコル）に従って繰り返し投与される。
【００２７】
アレルゲンの投与は、通常、全身的に行なわれ、身体がＩｇＧ抗体を発現することができるようにさせる。
【００２８】
そのような投与は、好ましくは、非経口、経皮、皮内もしくは経口の投与またはその組み合わせを含む。好ましい非経口経路は、皮下注射による。別の好ましい経路は経皮で、好ましくは舌下である。より好ましい実施形態において、アレルゲン組成物は皮下または経皮投与され、最も好ましくは皮下投与である。
【００２９】
本発明は、２つの主要なＨＤＭアレルゲンを精製した天然形態で用いてＨＤＭに対するアレルギーを処置する可能性を提供し、該処置はＨＤＭ全般への効果的な脱感作をもたらす。
【００３０】
本発明はさらに、処置を必要とする哺乳動物のＨＤＭへのアレルギーを処置する方法に関し、該方法はｎＤｅｒｐ１とｎＤｅｒｐ２または精製されたｎＤｅｒｆ１とｎＤｅｒｆ２を含む組成物を前述の哺乳動物に投与すること、好ましくはｎＤｅｒｐ１とｎＤｅｒｐ２または精製されたｎＤｅｒｆ１とｎＤｅｒｆ２を反復投与するステップを含む。
【００３１】
予想外に、精製されたｎＤｅｒｐ１と精製されたｎＤｅｒｐ２を含む組成物を用いる処置は、脱感作を誘発する上で、アレルギー性喘息の動物モデルにおいて粗ＨＤＭ抽出物による処置よりも効果的であった。
【図面の簡単な説明】
【００３２】
【図１】ハウスダストダニ感作マウスにおいて、ＳＣＩＴ処置の前後のＨＤＭ特異的ＩｇＥ、アレルゲン中和ＩｇＧ１およびＩｇＧ２を、１）粗ＨＤＭ抽出物（ＨＤＭ、上向き三角）、２）精製されたｎＤｅｒ  ｐ１と精製されたＤｅｒ  ｐ２（ＤＥＲ１００、下向き三角）、３）ＬＰＳ（四角）および４）ＰＢＳ対照（黒丸）で示す。＊＝ｐ＜０．０５  マン・ホィットニーのＵ検定で。
【図２】ＨＤＭ感作マウスにおいて、皮内ＨＤＭ注射後、初期段階過敏症のマーカーとして耳介厚の倍率変化で発現される耳介膨張反応を示す。ＳＣＩＴ処置は、１）対照としてＰＢＳ（黒丸）、２）精製されたｎＤｅｒｐ１とｎＤｅｒｐ２（ＤＥＲ１００、下向き三角）、３）粗ＨＤＭ抽出物（上向き三角）、４）リポ多糖（ＬＰＳ、四角）を用いて行った。＊＝ｐ＜０．０５  マン・ホィットニーのＵ検定で。
【図３】ＨＤＭ負荷後のＨＤＭ感作マウスにおける、メタコリンの用量範囲に応じた気道抵抗を（ｃｍＨ２Ｏ／ｍＬで）示す。図３は、精製されたｎＤｅｒｐ１とｎＤｅｒｐ２（ＤＥＲ１００、下向き三角）、ＨＤＭ抽出物（上向き三角）、ＬＰＳ（黒四角）、ＳＣＩＴ−ＰＢＳ（喘息の陽性対照、ＰＣ、黒丸）、またはＰＢＳ負荷後（喘息発現の陰性対照、ＮＣ、白丸）による処置後の気道抵抗を示す。＊＝ｐ＜０．０５  ＧＥＥ分析で。
【図４】ＨＤＭ負荷後ＨＤＭ感作マウスにおいて、ＳＣＩＴ処置の後に、３ｃｍＨ２Ｏ／ｍＬ（ＥＤ３）の気道抵抗に必要とされるメタコリンの推定用量（ｋｇ体重当たりμｇのメタコリン）を示す。図４は、ＨＤＭ抽出物（ＨＤＭ、上向き三角）、精製されたｎＤｅｒｐ１とｎＤｅｒｐ２タンパク質（ＤＥＲ１００、下向き三角）、ＬＰＳ（四角）、ＳＣＩＴ−ＰＢＳ（ＰＣ、黒丸）によるＳＣＩＴ処置後のＥＤ３を、ＰＢＳ負荷（ＮＣ、白丸）と比較して示す。＊＝ｐ＜０．０５  マン・ホィットニーのＵ検定で。
【図５】ＨＤＭ負荷後ＨＤＭ感作マウスにおける、ＳＣＩＴ処置の後の、肺コンプライアンスを（ｍＬ／ｃｍＨ２Ｏで）示す。図５は、ＨＤＭ抽出物（ＨＤＭ、上向き三角）、精製されたｎＤｅｒｐ１とｎＤｅｒｐ２タンパク質（ＤＥＲ１００、下向き三角）、ＬＰＳ（四角）、ＳＣＩＴ−ＰＢＳ（ＰＣ、黒丸）によるＳＣＩＴ処置後の肺コンプライアンスを、ＰＢＳ負荷（ＮＣ、白丸）と比較して示す。＊＝ｐ＜０．０５  ＧＥＥ分析で。
【図６】ＨＤＭ抽出物（ＨＤＭ、上向き三角）、精製されたｎＤｅｒｐ１とｎＤｅｒｐ２タンパク質（ＤＥＲ１００、下向き三角）、ＬＰＳ（四角）、ＳＣＩＴ−ＰＢＳ（ＰＣ、黒丸）によるＳＣＩＴ処置後の気管支肺胞洗浄液中の単核細胞（Ｍ）、好酸性顆粒球（Ｅ）、好中性顆粒球（Ｎ）の絶対数を、気道炎症のマーカーとして、ＰＢＳ負荷（ＮＣ、白丸）と比較して示す。＊＝ｐ＜０．０５  マン・ホィットニーのＵ検定で。
【図７】ＨＤＭ抽出物（ＨＤＭ、上向き三角）、精製されたｎＤｅｒｐ１とｎＤｅｒｐ２タンパク質（ＤＥＲ１００、下向き三角）、ＬＰＳ（黒四角）、ＳＣＩＴ−ＰＢＳ（ＰＣ、黒丸）によるＳＣＩＴ処置後の、ＨＤＭ感作マウスの肺組織中のＴ細胞サイトカインＩＬ−４、ＩＬ−５，ＩＬ−１３、ＩＦＮ−γおよびＩＬ−１７のレベル（μｇ肺組織タンパク質当たりのサイトカインｐｇ）を、ＰＢＳ負荷（ＮＣ、白丸）と比較して示す。各サイトカインのレベルは、ｐｇ／μｇ肺組織で示す。＊＝ｐ＜０．０５  マン・ホィットニーのＵ検定で。
【図８】ＨＤＭ抽出物（ＨＤＭ、上向き三角）、精製されたｎＤｅｒｐ１とｎＤｅｒｐ２タンパク質（ＤＥＲ１００、下向き三角）、ＬＰＳ（四角）、ＳＣＩＴ−ＰＢＳ（ＰＣ、黒丸）によるＳＣＩＴ処置後の、ＨＤＭ感作マウスの肺組織中のケモカインならびにアラーミン、エオタキシン、ＴＡＲＣ、ＣＣＬ２０、ＩＬ−３３およびＫＣのレベル（μｇ肺組織タンパク質当たりのサイトカインｐｇ）を、ＰＢＳ負荷（ＮＣ、白丸）と比較して示す。各サイトカインのレベルは、ｐｇ／μｇ肺組織で示す。＊＝ｐ＜０．０５  マン・ホィットニーのＵ検定で。
【発明を実施するための形態】
【００３３】
定義
「Ｄｅｒ  ｐ」という用語は、ヤケヒョウヒダニ（Ｄｅｒｍａｐｈａｇｏｉｄｅｓ  ｐｔｅｒｏｎｙｓｓｉｎｕｓ）と呼ばれるハウスダストダニ種を意味する。「Ｄｅｒ  ｐ１」という用語は、Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｕｎｉｏｎ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  ｓｏｃｉｅｔｉｅｓ（ＩＵＩＳ）およびｔｈｅ  Ｗｏｒｌｄ  Ｈｅａｌｔｈ  Ｏｒｇａｎｉｚａｔｉｏｎ（ＷＨＯ）の後援のもと運営されているＡｌｌｅｒｇｅｎ  Ｎｏｍｅｎｃｌａｔｕｒｅ  Ｓｕｂ−ｃｏｍｍｉｔｔｅｅの命名法によるグループ１に属するＤｅｒ  ｐアレルゲンを意味する。「Ｄｅｒ  ｐ２」という用語は、Ａｌｌｅｒｇｅｎ  Ｎｏｍｅｎｃｌａｔｕｒｅ  Ｓｕｂ−ｃｏｍｍｉｔｔｅｅの命名法によるグループ２に属するＤｅｒ  ｐアレルゲンを意味する。「Ｄｅｒ  ｆ」という用語は、コナヒョウダニ（Ｄｅｒｍａｐｈａｇｏｉｄｅｓ  ｆａｒｉｎａｅ）と呼ばれるハウスダストダニ種を意味する。「Ｄｅｒｆ１」という用語は、グループ１に属するＤｅｒ  ｆアレルゲンを意味し、「Ｄｅｒ  ｆ２」はグループ２に属するＤｅｒ  ｆアレルゲンを意味する。
【００３４】
「天然の」という用語は、タンパク質の化学構造がその一次構造、二次構造および三次構造において天然に存在するタンパク質と同一であることを意味する。天然Ｄｅｒ  ｐ１（ｎＤｅｒｐ１）および天然Ｄｅｒ  ｐ２（ｎＤｅｒｐ２）ならびに天然Ｄｅｒ  ｆ１および天然Ｄｅｒ  ｆ２は、好ましくはハウスダストダニから単離される。しかし、ハウスダストダニから単離されるＤｅｒ  ｐ２を完全に反映するＤｅｒ  ｐ２が組換え技術によって作製されることが可能であることは知られている。「発明を実施するための形態」ならびに実施例で本発明を説明するいくつかの実施形態において、ｎＤｅｒｐ１とｎＤｅｒｐ２は具体的に記述されている。しかし、本発明はそれに限定されず、ｎＤｅｒｆ１とｎＤｅｒｆ２も包含する。しかし、好適な実施形態において、本発明はｎＤｅｒｐ１とｎＤｅｒｐ２に関する。
【００３５】
「処置する」という用語は、症状を部分的もしくは全体的に治癒させる、もしくは軽減する、または症状の原因を阻害することを意味する。
【００３６】
「アレルゲン」という用語は、それ以外の場合には身体に無害であるものを免疫系が脅威と認識して撃退する異常に活発な免疫応答を生じさせる任意の種類の抗原を意味する。「アレルゲン」という用語はまた、そのアレルゲンに感作されている患者においてアレルギー性応答を誘発する可能性があるタンパク質またはタンパク質フラグメントをも意味する。
【００３７】
「アレルギー」という用語は、免疫機構によって媒介される環境アレルゲンに対する任意の種類の過敏反応を意味し、アレルギー性鼻炎、喘息およびアトピー性皮膚炎を含むＩＶ型過敏反応が挙げられる。
【００３８】
「感作された」という用語は、対象が、投与される、または遭遇するアレルゲンに特異的なＩｇＥ応答を示すことを意味する。
【００３９】
「粗」という用語は、ＨＤＭ抽出物が精製されておらず、ハウスダストダニ培養物中に存在する主要なアレルゲンの全てを再現することを意味する。
【００４０】
アレルゲン組成物
本発明のアレルゲン組成物は、天然形態のＤｅｒ  ｐ１とＤｅｒ  ｐ２、またはＤｅｒ  ｆ１とＤｅｒ  ｆ２のアレルゲンを実質的に純粋な形で含む。
【００４１】
一般に、ｎＤｅｒｐ１とｎＤｅｒｐ２の各々は、少なくとも約８０重量％（乾物での重量％）、好ましくは少なくとも約８５重量％、より好ましくは少なくとも約９０重量％、より好ましくは少なくとも約９５重量％、さらに好ましくは少なくとも約９８重量％の純度を有する。ｎＤｅｒｐ１またはｎＤｅｒｐ２は、本来的に、同じアレルゲンの１または複数のイソ型を含む場合がある。同じことが、ｎＤｅｒｆ１とｎＤｅｒｆ２に適用される。
【００４２】
アレルゲンの純度は、古典的な生化学精製法によって確立され得る。
【００４３】
本発明の好適な実施形態において、アレルゲン組成物はハウスダストダニ由来の精製されたアレルゲン抽出物であり、精製されたｎＤｅｒｐ１と精製されたｎＤｅｒ２の混合物を含む。同じことが、ｎＤｅｒｆ１とｎＤｅｒｆ２に適用される。
【００４４】
より望ましくは、アレルゲン組成物は、実質的に、精製されたｎＤｅｒｐ１と精製されたｎＤｅｒｐ２の混合物を含む精製されたアレルゲン抽出物からなる。本明細書で「本質的にからなる」という用語は、本発明の組成物がアレルゲンとして約５０重量％以上のｎＤｅｒｐ１とｎＤｅｒｐ２を、好ましくは約８０重量％以上、さらに好ましくは約９０重量％以上含有することを意味する。アレルゲン組成物は、ＨＤＭから残存量の他のタンパク質を含み得る。アレルゲン組成物は、他のアレルゲン、好ましくは明確に定義されたアレルゲンも含み得る。同じことが、ｎＤｅｒｆ１とｎＤｅｒｆ２に適用される。
【００４５】
粗ハウスダストダニ抽出物において、Ｄｅｒ  ｐ１タンパク質は、通常、組成物の約０．２〜２重量％を占める。供給源によって、Ｄｅｒ  ｐ２は、通常、Ｄｅｒ  ｐ１量の約０．１〜１．５倍を占める。同じことが、ｎＤｅｒｆ１とｎＤｅｒｆ２に適用される。
【００４６】
ｎＤｅｒｐ１アレルゲンおよびｎＤｅｒｐ２アレルゲンは、組成物中に等モル量で存在してもよく、または存在するアレルゲンの比率は変化してもよい。同じことが、ｎＤｅｒｆ１とｎＤｅｒｆ２に適用される。
【００４７】
好ましくは、ｎＤｅｒｐ１とｎＤｅｒｐ２は、約９９：１と約１０：９０との間の重量比で、より好ましくは約９９：１と約２０：８０との間、より好ましくは約９５：５と約２５：７５との間の重量比で存在する。同じことが、ｎＤｅｒｆ１とｎＤｅｒｆ２に適用される。
【００４８】
好適な一実施形態において、ｎＤｅｒｐ１とｎＤｅｒｐ２の定量は、ハウスダストダニ排泄物中の比率を反映させるように、約９５：５と約８０：２０との間である。組成物は、例えば、約９０：１０の重量比でｎＤｅｒｐ１とｎＤｅｒｐ２を含む。同じことが、ｎＤｅｒｆ１とｎＤｅｒｆ２に適用される。
【００４９】
別の実施形態において、ｎＤｅｒｐ１とｎＤｅｒｐ２との間の比率は、約２０：８０と５０：５０との間にあり、ダニ本体におけるこれらのタンパク質の比率に似ている。組成物は、例えば約３５：６５の重量比でｎＤｅｒｐ１とｎＤｅｒｐ２を含む。同じことが、ｎＤｅｒｆ１とｎＤｅｒｆ２に適用される。
【００５０】
最も好適な一実施形態において、ｎＤｅｒｐ１はｎＤｅｒｐ２よりも大きい量で存在する。同じことが、ｎＤｅｒｆ１とｎＤｅｒｆ２に適用される。
【００５１】
タンパク質を用いる医薬組成物の調製は、一般に当技術分野で知られており、当業者はｎＤｅｒｐ１とｎＤｅｒｐ２を含む適切な組成物を調製することが可能である。同じことが、ｎＤｅｒｆ１とｎＤｅｒｆ２に適用される。
【００５２】
投与の前に、精製されたｎＤｅｒｐ１とｎＤｅｒｐ２は、薬学的に許容され、さらに活性成分と適合する希釈剤および賦形剤と適切に混合されることができる。適切な希釈剤または賦形剤の例としては、水、生理食塩水、グリセロール、エタノール、デキストロース、ラクトースなど、ならびにその組み合わせが挙げられる。同じことが、ｎＤｅｒｆ１とｎＤｅｒｆ２に適用される。
【００５３】
組成物は、他の物質、例えば湿潤剤、乳化剤、緩衝剤または組成物に対する免疫反応を高めるアジュバントをさらに含んでもよい。本発明の一実施形態において、ｎＤｅｒｐ１とｎＤｅｒｐ２は、アレルゲンが例えばグルタルアルデヒドまたはホルムアルデヒドによって複合化されるアレルゴイドであり得る。同じことが、ｎＤｅｒｆ１とｎＤｅｒｆ２に適用される。
【００５４】
本発明の一実施形態において、精製されたｎＤｅｒｐ１と精製されたｎＤｅｒｐ２は、生理食塩水またはＰＢＳ中に溶解する。
【００５５】
投与
本発明の一実施形態において、精製されたｎＤｅｒｐ１とｎＤｅｒｐ２を含む組成物は、皮下投与、舌下投与、内皮投与、経皮投与、皮膚上投与、リンパ節投与、経口投与またはその組み合わせからなる群から選択される方法で投与される。同じことが、ｎＤｅｒｆ１とｎＤｅｒｆ２に適用され、以下、ｎＤｅｒｐ１とｎＤｅｒｐ２という語は、ｎＤｅｒｆ１とｎＤｅｒｆ２を含むが、Ｄｅｒｐを使用することが好ましい。
【００５６】
好適な一実施形態において、精製されたｎＤｅｒｐ１とｎＤｅｒｐ２を含む組成物は、皮下的に、経皮的に、またはその組み合わせで投与される。
【００５７】
好適な一実施形態において、精製されたｎＤｅｒｐ１とｎＤｅｒｐ２を含む組成物は、皮下的に投与される。
【００５８】
精製されたｎＤｅｒｐ１とｎＤｅｒｐ２を含む組成物は、投与製剤と適合する方法で、かつ治療効果があり、かつ免疫原性がある量で投与される。
【００５９】
投与形態で組成物中に含有されるｎＤｅｒｐ１とｎＤｅｒｐ２の量は、一般に約０．００１μｇと約１０００μｇとの間、好ましくは約０．０１μｇと約５００μｇとの間である。
【００６０】
量は、いくつかの要因によって、大きく変わることがあり得る。これらの要因としては、（ｉ）ＨＤＭに対して感受性が非常に高い者もあり、または感受性が低い者もある、異なる投薬量を必要とする患者群、（ｉｉ）かなり希釈されたものから濃縮されたものまで、１００〜１０００倍にわたり投薬の増加を必要とする場合がある、投与計画、（ｉｉｉ）組成物が投与される方法が含まれるが、それらに限定されるものではない。一般に、これは経験則にすぎないが、舌下投与は、非経口よりも１０〜１００倍高い用量を使用する。
【００６１】
好適な一実施形態において、投与されるＳＣＩＴまたはＳＬＩＴの組成物投与量は、約１０００μｇ  ｎＤｅｒｐ１、約５００μｇ  ｎＤｅｒｐ１、約４００μｇ  ｎＤｅｒｐ１、約３００μｇ  ｎＤｅｒｐ１、約２００μｇ  ｎＤｅｒｐ１、約１５０μｇ  ｎＤｅｒｐ１、約１００μｇ  ｎＤｅｒｐ１、約８０μｇ  ｎＤｅｒｐ１、約６０μｇ  ｎＤｅｒｐ１、約４０μｇ  ｎＤｅｒｐ１、約３５μｇ  ｎＤｅｒｐ１、約３０μｇ  ｎＤｅｒｐ１、約２８μｇ  ｎＤｅｒｐ１、約２６μｇ  ｎＤｅｒｐ１、約２４μｇ  ｎＤｅｒｐ１、約２２μｇ  ｎＤｅｒｐ１、約２０μｇ  ｎＤｅｒｐ１、約１８μｇ  ｎＤｅｒｐ１、約１７μｇ  ｎＤｅｒｐ１、約１６μｇ  ｎＤｅｒｐ１、約１５μｇ  ｎＤｅｒｐ１、約１４μｇ  ｎＤｅｒｐ１、約１３μｇ  ｎＤｅｒｐ１、約１２μｇ  ｎＤｅｒｐ１、約１１μｇ  ｎＤｅｒｐ１、約１０μｇ  ｎＤｅｒｐ１、約９．５μｇ  ｎＤｅｒｐ１、約９．０μｇ  ｎＤｅｒｐ１、約８．５μｇ  ｎＤｅｒｐ１、約８．０μｇ  ｎＤｅｒｐ１、約７．５μｇ  ｎＤｅｒｐ１、約７．０μｇ  ｎＤｅｒｐ１、約６．５μｇ  ｎＤｅｒｐ１、約６．０μｇ  ｎＤｅｒｐ１、約５．５μｇ  ｎＤｅｒｐ１、約５．０μｇ  ｎＤｅｒｐ１、約４，５μｇ  ｎＤｅｒｐ１、約４．０μｇ  ｎＤｅｒｐ１、約３．５μｇ  ｎＤｅｒｐ１、約３．０μｇ  ｎＤｅｒｐ１、約２．５μｇ  ｎＤｅｒｐ１、約２．０μｇ  ｎＤｅｒｐ１、約１．５μｇ  ｎＤｅｒｐ１、約１．０μｇ  ｎＤｅｒｐ１、約０．７５μｇ  ｎＤｅｒｐ１、約０．５μｇ  ｎＤｅｒｐ１、約０．４μｇ  ｎＤｅｒｐ１、約０．３μｇ  ｎＤｅｒｐ１、約０．２μｇ  ｎＤｅｒｐ１または約０．１μｇ  ｎＤｅｒｐ１を含む。
【００６２】
別の好適な実施形態において、投与されるＳＣＩＴまたはＳＬＩＴ組成物投与量は、約５００μｇ  ｎＤｅｒｐ２、約４００μｇ  ｎＤｅｒｐ２、約３００μｇ  ｎＤｅｒｐ２、約２００μｇ  ｎＤｅｒｐ２、約１５０μｇ  ｎＤｅｒｐ２、約１００μｇ  ｎＤｅｒｐ２、約８０μｇ  ｎＤｅｒｐ２、約６０μｇ  ｎＤｅｒｐ２、約４０μｇ  ｎＤｅｒｐ２、約３５μｇ  ｎＤｅｒｐ２、約３０μｇ  ｎＤｅｒｐ２、約２８μｇ  ｎＤｅｒｐ２、約２６μｇ  ｎＤｅｒｐ２、約２４μｇ  ｎＤｅｒｐ２、約２２μｇ  ｎＤｅｒｐ２、約２０μｇ  ｎＤｅｒｐ２、約１８μｇ  ｎＤｅｒｐ２、約１７μｇ  ｎＤｅｒｐ２、約１６μｇ  ｎＤｅｒｐ２、約１５μｇ  ｎＤｅｒｐ２、約１４μｇ  ｎＤｅｒｐ２、約１３μｇ  ｎＤｅｒｐ２、約１２μｇ  ｎＤｅｒｐ２、約１１μｇ  ｎＤｅｒｐ２、約１０μｇ  ｎＤｅｒｐ２、約９．５μｇ  ｎＤｅｒｐ２、約９．０μｇ  ｎＤｅｒｐ２、約８．５μｇ  ｎＤｅｒｐ２、約８．０μｇ  ｎＤｅｒｐ２、約７．５μｇ  ｎＤｅｒｐ２、約７．０μｇ  ｎＤｅｒｐ２、約６．５μｇ  ｎＤｅｒｐ２、約６．０μｇ  ｎＤｅｒｐ２、約５．５μｇ  ｎＤｅｒｐ２、約５．０μｇ  ｎＤｅｒｐ２、約４．５μｇ  ｎＤｅｒｐ２、約４．０μｇ  ｎＤｅｒｐ２、約３．５μｇ  ｎＤｅｒｐ２、約３．０μｇ  ｎＤｅｒｐ２、約２．５μｇ  ｎＤｅｒｐ２、約２．０μｇ  ｎＤｅｒｐ２、約１．５μｇ  ｎＤｅｒｐ２、約１．０μｇ  ｎＤｅｒｐ２、約０．７５μｇ  ｎＤｅｒｐ２、約０．５μｇ  ｎＤｅｒｐ２、約０．４μｇ  ｎＤｅｒｐ２、約０．３μｇ  ｎＤｅｒｐ２、約０．２μｇ  ｎＤｅｒｐ２または約０．１μｇ  ｎＤｅｒｐ２を含む。
【００６３】
一実施形態において、投与されるＳＣＩＴまたはＳＬＩＴ組成物投与量は、ｎＤｅｒｐ１とｎＤｅｒｐ２を約９０：１０の比率で約１０００μｇ  ｎＤｅｒｐ１と約１１１μｇ  ｎＤｅｒｐ２の投与量で、もしくはｎＤｅｒｐ１とｎＤｅｒｐ２を約９０：１０の比率で約３００μｇ  ｎＤｅｒｐ１と約３３μｇ  ｎＤｅｒｐ２の投与量で、もしくはｎＤｅｒｐ１とｎＤｅｒｐ２を約９０：１０の比率で約２０μｇ  ｎＤｅｒｐ１と約２μｇ  ｎＤｅｒｐ２の投与量で、もしくはｎＤｅｒｐ１とｎＤｅｒｐ２を約２０：８０の比率で約２００μｇ  ｎＤｅｒｐ１と約８００μｇ  ｎＤｅｒｐ２の投与量で、もしくはｎＤｅｒｐ１とｎＤｅｒｐ２を約２０：８０の比率で約２０μｇ  ｎＤｅｒｐ１と約８０μｇ  ｎＤｅｒｐ２の投与量で、もしくはｎＤｅｒｐ１とｎＤｅｒｐ２を約２０：８０の比率で約１００μｇ  ｎＤｅｒｐ１と約４００μｇ  ｎＤｅｒｐ２の投与量で、もしくはｎＤｅｒｐ１とｎＤｅｒｐ２を約９９：１の比率で約１００μｇ  ｎＤｅｒｐ１と約１μｇ  ｎＤｅｒｐ２の投与量で、もしくはｎＤｅｒｐ１とｎＤｅｒｐ２を約９９：１の比率で約１０００μｇ  ｎＤｅｒｐ１と約１０μｇ  ｎＤｅｒｐ２の投与量で、もしくはｎＤｅｒｐ１とｎＤｅｒｐ２を約９９：１の比率で約１０μｇ  ｎＤｅｒｐ１と約０．１μｇ  ｎＤｅｒｐ２の投与量で含む。
【００６４】
好適な一実施形態において、精製されたｎＤｅｒｐ１と精製されたｎＤｅｒｐ２を含む組成物は、ＨＤＭアレルギーを患っている哺乳動物の処置で使用される。
【００６５】
好適な一実施形態において、哺乳動物の処置は、アレルゲン特異的免疫療法（ＳＩＴ）である。ＳＩＴは、一般に、無害である物質（ハウスダストダニ）に身体を慣らすために、アレルゲンの用量を投与し、それによって特異的長期耐性を誘導することを含む。
【００６６】
例えば、ＳＩＴ投与レジメンは、本組成物の複数回投与をＨＤＭアレルギーを患っている対象に１日当たり約複数回、１日１回、２日に１回、３日に１回、４日に１回、５日に１回、６日に１回、１週間に１回、２週間に１回、３週間に１回、４週間に１回、１ヵ月に１回、２ヵ月に１回、３ヵ月に１回、４ヵ月に１回の頻度で、またはより少ない頻度で投与することを含み得る。処置スケジュールは、例えば、まず低用量のアレルゲン（例えば１０μｇ）で週１回、、毎週用量を徐々に上げて（例えば２０μｇから１００μｇに）皮下投与し、続いて毎月の注射を例えば１００μｇを１年間、次いで６ヵ月に１回投与することを含む。
【００６７】
本発明の一実施形態において、処置スケジュールは、まず１日当たり最高６回までの皮下注射、続いて最高約５回までの毎週注射、次いで週１回の皮下注射、２週間に１回、続いて月１回の注射を含んでもよい。本発明のさらに別の実施形態において、処置スケジュールは毎日舌下への滴下投与を含んでもよい。
【００６８】
組成物は、精製されたｎＤｅｒｐ１と精製されたｎＤｅｒｐ２を同時投与または連続投与するための別々の剤形で含有するキットの形態で提供されてもよい。
【００６９】
本明細書で用いる場合、「アレルゲン特異的免疫療法」および「ＳＩＴ」などの表現は、アレルギーおよびアレルギー反応を処置もしくは予防するための手段として、またはアレルギー応答を軽減もしくは除去する手段として、精製されたｎＤｅｒｐ１とｎＤｅｒｐ２を含む組成物の対象への経時的反復投与を指す。一般的なＳＩＴレジメンでは、最初に少量のアレルゲンがアレルギー患者に投与され、続いてアレルゲンの量を増やして投与される。
【００７０】
特定の例において、ＳＩＴ処置は、少なくとも２つの連続した段階、（１）投与量増加段階と（２）維持段階とを含むことができる。投与量増加段階では、有効で安全な投与量が達成されるまで、精製されたｎＤｅｒｐ１とｎＤｅｒｐ２は用量を増加して投与される。投与量増加段階の終わりに確立される投与量は、次いで、維持段階の全期間にわたり対象に投与される。投与量増加段階の継続期間は、数週間または数ヵ月になることもあり得る。しかし、特定の実施形態において、投与量増加段階は、実質的により短い継続期間（例えば、１週間未満、６日未満、５日未満、４日未満、３日未満または２日未満）である。ＳＩＴレジメンの維持段階は、数週間、数ヵ月、数年または無期限に続くこともあり得る。
【００７１】
好適な一実施形態において、精製されたｎＤｅｒｐ１と精製されたｎＤｅｒｐ２を含む本発明による組成物は、ＨＤＭアレルギーを患っている患者に、ＩｇＥ産生を低下または抑制する、および／またはハウスダストダニアレルゲン、特にＤｅｒｐ１とＤｅｒｐ２に特異的な血清ＩｇＥレベルを低下または除去するのに十分な量で投与される。
【００７２】
本明細書で用いる場合、血清ＩｇＥレベルの低下とは、アレルゲンに曝されていた対象、および精製されたｎＤｅｒｐ１と精製されたｎＤｅｒｐ２により処置されている対象の血清中で測定されたＩｇＥの量が、精製されたｎＤｅｒｐ１と精製されたｎＤｅｒｐ２を含む組成物により処置されていない同じ対象または同等の対象で測定された血清ＩｇＥレベルよりも少なくとも５％、１０％、２０％、５０％、８０％または９０％低いことを意味する。
【００７３】
処置される対象
本発明の好適な一実施形態において、哺乳動物は通常ヒトまたは家畜などである。処置を受けることができる家畜としては、ネコ、イヌまたはウマが挙げられる。好ましい哺乳類動物は、ヒトである。
【００７４】
一般に、ヒトは、ＨＤＭに対してアレルギー反応を示すヒト患者である。
【００７５】
本発明の好適な一実施形態において、ＨＤＭアレルギーを患っているヒト患者は、ＨＤＭアレルゲンに対して以下アレルギー応答：鼻炎、喘息、およびアトピー性皮膚炎のうちの少なくとも１つを患っている。
【００７６】
ＨＤＭアレルギーを患っているヒトは、一般にＨＤＭに曝されると、アレルゲン特異的ＩｇＥ抗体とのＨＤＭアレルゲンの反応、好塩基球および肥満細胞からのヒスタミンおよび他のメディエーター（これに限定されないが例えば、プロスタグランジンとロイコトリエン）ならびにトリプターゼの放出、好酸球性下気道および／または上気道炎症ならびに他の粘膜組織および他の任意の組織全般、ならびに気道過敏、２型自然リンパ球（ＩＬＣ２）、Ｔｈ−２細胞、好塩基球、肥満細胞および他の任意の自然免疫細胞または適応免疫細胞からの炎症促進性サイトカインおよびケモカインの放出、またはそれらの組み合わせに苦しむ。
【００７７】
ハウスダストダニアレルギーは、喘息とアレルギー性鼻炎において重要な役割を果たし、これらの群の処置は最も好ましい。
【００７８】
本発明の一実施形態において、ＨＤＭアレルギーを患っている対象の精製されたｎＤｅｒｐ１とｎＤｅｒｐ２を含む組成物による処置は、ハウスダストダニへの曝露に対する反応を軽減または解消する、すなわち対象はアレルギー応答に対して脱感作する。
【００７９】
好適な一実施形態において、精製されたｎＤｅｒｐ１と精製されたｎＤｅｒｐ２による処置は、好酸球性気道炎症を抑制する。精製されたｎＤｅｒｐ１と精製されたｎＤｅｒｐ２で処置されるＨＤＭアレルギーを患っている患者の気管支肺胞洗浄（ＢＡＬ）液中に存在する好酸球の細胞数は、減少し得る。
【００８０】
好適な一実施形態において、精製されたｎＤｅｒｐ１と精製されたｎＤｅｒｐ２による処置は、ＢＡＬ中の好酸球の数を少なくとも約３倍、より好ましくは約５倍、さらに好ましくは約７倍減少させる。
【００８１】
本発明の別の実施形態において、精製されたｎＤｅｒｐ１と精製されたｎＤｅｒｐ２を含む組成物による処置は、ハウスダストダニ曝露により誘発される気道過敏を少なくとも約２０％、好ましくは約３０％、より好ましくは約４０％、さらに好ましくは約５０％軽減または解消する。
【００８２】
さらに別の実施形態において、肺コンプライアンスは、精製された天然Ｄｅｒ  ｐ１とＤｅｒ  ｐ２による処置後、上昇し得る。好ましくは、肺コンプライアンスは約５％、より好ましくは約１５％、さらに好ましくは約２５％上昇する。
【００８３】
本発明の一実施形態において、ＨＤＭアレルギーを患っている患者の精製されたｎＤｅｒｐ１と精製されたｎＤｅｒｐ２を含む組成物によるＳＩＴ処置は、Ｔｈ−２細胞活性を抑制し、Ｔｒ細胞媒介耐性を誘発する。本発明の一実施形態において、Ｔｈ２細胞活性の抑制は、ＩＬ−４およびＩＬ−５サイトカインの産生の減少によって特徴づけられるが、これに限定されるものではない。さらなる好適な一実施形態において、ｎＤｅｒｐ１とｎＤｅｒｐ２によるＳＩＴ処置は、ＨＤＭアレルゲンへの曝露の際、ＣＣＬ−２０、ＣＣＬ１７および／またはエオタキシンケモカイン産生の抑制によって特徴づけられるが、これに限定されない自然免疫活性を抑制する。好適な一実施形態において、ｎＤｅｒｐ１とｎＤｅｒｐ２によるＳＩＴ処置は、適応性免疫反応を抑制する。さらに別の好適な実施形態において、ｎＤｅｒｐ１とｎＤｅｒｐ２によるＳＩＴ処置は、適応免疫応答と自然免疫応答の両方の活性を抑制する。
【００８４】
本発明の別の実施形態において、ＩＬ−１３，エオタキシン、ＣＣＬ１７およびＩＬ−３３は、精製されたｎＤｅｒｐ１と精製されたｎＤｅｒｐ２を含む組成物による処置後、抑制され得る。
【００８５】
本発明のさらに別の実施形態において、精製されたｎＤｅｒｐと精製されたｎＤｅｒｐ２を含む組成物による処置後、肺樹状細胞表現型は変化することがある。
【００８６】
好適な一実施形態において、肺樹状細胞の表現型は、より免疫寛容原性になる。
【００８７】
本発明の一実施形態において、炎症性または単核細胞由来の樹状細胞（ＤＣ）は、精製されたｎＤｅｒｐ１と精製されたｎＤｅｒｐ２を含む組成物による処置後、抑制され得る一方で、ＣＤ１０３＋または他の任意のクラスの免疫寛容原性ＤＣも増加し得る。
【００８８】
アレルゲンの調製
ｎＤｅｒｐ１とｎＤｅｒｐ２の単離は、Ｃｈａｐｍａｎら，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１９８４；１２５（２）：５８７−５９３からの文献に記載されているが、そのプロセスは厄介であり、精製されたｎＤｅｒｐ１を大量に得ることは容易ではない。
【００８９】
ＨＤＭ（Ｄｅｒ  ｐならびにＤｅｒ  ｆ）からのアレルゲンの精製は、ダニ抽出物からＢｏｒｄａｓ−Ｌｅ  Ｆｌｏｃｈら．Ｉｎｔ．Ａｒｃｈ．Ａｌｌｅｒｇｙ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  ２０１２；１５８：１５７−１６７；Ｙａｓｕｅｄａら．Ｉｎｔ．Ａｒｃｈｓ．Ａｌｌｅｒｇｙ  Ａｐｐｌ．Ｉｍｍｕｎ．１９８６；２１４−２２３およびｄｅ  Ｈａｌｌｅｕｘら．Ｊ．Ａｌｌｅｒｇｙ  ｃｌｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２００６；５７１−５７６に記載の方法に従って、イオン交換クロマトグラフィーによって行うことが可能である。
【００９０】
Ｄｅｒ  ｐ１は、バッファーとして５０ｍＭのＮＨ４ＨＣＯ３を用いるＳＥＣ  ＨｉＰｒｅｐ  ２６／６０Ｓｅｐｈａｃｒｙｌ  Ｓ−３００カラムを用いて精製してもよい。同じ技術はＤｅｒ  ｆ１の単離で用いることができる。
【００９１】
Ｄｅｒ  ｐ２は、２０ｍＭのリン酸ナトリウム、１．８Ｍの硫酸アンモニウム、ｐＨ６．２、ならびに２０ｍＭのリン酸ナトリウム、５％のイソプロパノール、ｐＨ７．５をそれぞれ結合バッファーと溶出バッファーとして用いるフェニルセファロースカラム（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ，Ｆｒａｎｃｅ）を使用して、精製することができる。
【００９２】
Ｄｅｒ  ｐ２は、結合バッファーとして２５ｍＭの酢酸ナトリウムと、溶出バッファーとして１ＭのＮａＣｌまでの０％：１００％直線勾配を用いるＳＰ−セファロースカラム上の陽イオン交換を使用して精製することができる。さらなる精製は、溶出のために１００ｍＭのグリシンバッファー、ｐＨ２．７までの０％：１００％直線勾配を用いて、結合バッファーとして５０ｍＭＴｒｉｓ、０．５ＭのＮａＣｌ、ｐＨ７．５とともにベンズアミジンカラム上の親和性によって行なってもよい。同じ技術はＤｅｒ  ｆ２の単離で用いることができる。
【００９３】
ｎＤｅｒｐ２ならびにｎＤｅｒｆ２は、天然の構造が得られ、維持されるという条件で、組換えで得られてもよい。
【００９４】
いくつかの精製／単離ステップは、好ましくは低温で、好ましくは約１０℃より低い、例えば約４℃のような低温で行われる。理論に拘束されることなく、低温で行われるＤｅｒ  ｐ１とＤｅｒ  ｐ２の単離はＤｅｒ  ｐ１のタンパク質分解活性と自己タンパク質分解を制限すると想定される。
【００９５】
単離され、精製されたｎＤｅｒｐ１とｎＤｅｒｐ２は、好ましい実施形態では、凍結乾燥され、保管される。
【００９６】
本発明の組成物は、例えば注射液の再構成に適したバイアルに乾燥粉末化形態で保管されてもよい。本発明の組成物は、当業者に知られているように、かつ上述したように、適切な剤形に調製されることができる。
【００９７】
本発明を、以下の実験手順および結果を例として参照して、さらに説明する。
【実施例】
【００９８】
要約すると、本出願の発明者らは、ＨＤＭアレルギーのＳＣＩＴのために、精製されたｎＤｅｒｐ１とｎＤｅｒｐ２（純度＞９５重量％）を用いた。精製されたｎＤｅｒｐ１とｎＤｅｒｐ２ならびに粗ＨＤＭ抽出物を、ＨＤＭによるアレルギー性喘息のマウスモデルにおいて皮下免疫療法（ＳＣＩＴ）で用いた。ＨＤＭ−ＳＣＩＴとｎＤｅｒｐ１／ｎＤｅｒｐ２−ＳＣＩＴの両方法は、気道過敏（ＡＨＲ）および好酸球性気道炎症を抑制することが可能であった。
【００９９】
処置で用いたｎＤｅｒｐ１−ＳＣＩＴとｎＤｅｒｐ２−ＳＣＩＴを含む組成物は、肺における２型サイトカイン産生ならびにＣＣＬ２０産生のみを抑制することが見いだされ、Ｔｈ２適応応答ならびに自然（ＩＬＣ２および気道上皮）免疫応答の両方の抑制を示すことが明らかになった。したがって、精製されたｎＤｅｒｐ１とｎＤｅｒｐ２とを含む組成物によるＳＣＩＴ処置は、粗ＨＤＭ抽出物よりも効果的であった。
【０１００】
したがって、一実施形態において、本発明は、特に、ハウスダストダニアレルギーによって引き起こされるＴｈ２サイトカイン産生を抑制するための使用用途の、精製された天然Ｄｅｒ  ｐ１とＤｅｒ  ｐ２に関する。
【０１０１】
したがって、別の実施形態において、本発明は（また）、特に、ハウスダストダニアレルギーによって引き起こされるＣＣＬ２０産生を抑制するための使用用途の、精製された天然Ｄｅｒ  ｐ１とＤｅｒ  ｐ２に関する。
【０１０２】
［実施例１］−ハウスダストダニ中和抗体の誘導の評価
ハウスダストダニによるアレルギー性喘息の以下の例示的実施例で用いたマウスは、Ｃｈａｒｌｅｓ  Ｒｉｖｅｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ  （Ｌ’Ａｒｂｒｅｓｌｅ  Ｃｅｄｅｘ，Ｆｒａｎｃｅ）から購入した雌のＢＡＬＢ／ｃＢｙＪマウス（７〜８週齢）であった。マウスは、個別換気ケージで、１２時間の明暗サイクルで維持し、標準餌と水を自由に与えて飼育した。本実験の間に死亡したマウスはなかった。
【０１０３】
すべてのマウスに、２．２５ｍｇのＡｌｕｍ（Ｐｉｅｒｃｅ，ＵＳＡ）に吸収させた５μｇの粗ハウスダストダニ（ＨＤＭ）抽出物（Ｃｉｔｅｑ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃｓ，Ｇｒｏｎｉｎｇｅｎ，Ｔｈｅ  Ｎｅｔｈｅｒｌａｎｄｓ）を含有するＰＢＳ１００μＬの腹腔内感作注射を２回投与した。
【０１０４】
すべての実験手順は、動物福祉に関する地域の倫理委員会の承認を得て、同委員会のガイドラインに従った。
【０１０５】
ＳＩＴ処置による中和抗体応答の誘導を評価するために、ＨＤＭ感作マウスにＳＣＩＴ処置を施した。ＳＣＩＴは、１００μＬの異なる製剤を含有する皮下注射を１日おきに１週間、３回注射することで行なった。マウスにおいて、ＩｇＧ１およびＩｇＧ２ａは中和抗体応答の特性を明らかにする。ＮＣ群以外のすべてにＨＤＭ負荷を与えた。
【０１０６】
ＨＤＭ感作マウスを、以下のようにＳＣＩＴ処置されるｎ＝８マウスの群に分けた。
１）リン酸緩衝食塩液（ＰＢＳ）、ＰＢＳ−ＳＣＩＴおよびＰＢＳ負荷（ＮＣ、感作のみ）、
２）リン酸緩衝食塩液（ＰＢＳ）、ＰＢＳ−ＳＣＩＴおよびＨＤＭ負荷（ＰＣ、最も悪化したアレルギー性喘息）、
３）リポ多糖群（ＨＤＭ負荷したＬＰＳ−ＳＣＩＴ、ＰＢＳ１００μＬにＬＰＳ１４５μｇを溶解させる）、
４）完全／粗ハウスダストダニ（ＨＤＭ）本体抽出物（ＨＤＭ−ＳＣＩＴ、ＰＢＳ１００μＬにＨＤＭタンパク質２５０μｇを溶解させる）、
５）精製されたｎＤｅｒｐ１とｎＤｅｒｐ２（ＤＥＲ−ＳＣＩＴ）、組成物中のｎＤｅｒｐ１対ｎＤｅｒｐ２の比率は９０：１０（重量／重量）で、ＰＢＳμＬにＤｅｒｐ１／ｐ２タンパク質１００μｇを溶解させる。
【０１０７】
３つの異なる時点で採取した血清（ｐｒｅ１−血清、ｐｒｅ２−血清、ｐｏｓｔ−血清）中のＩｇＧ１（Ｂｅｔｈｙｌ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｉｎｃ．，Ｍｏｎｔｇｏｍｅｒｙ，ＴＸ，ＵＳＡ）、ＩｇＧ２Ａ（Ｂｅｔｈｙｌ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｉｎｃ．，Ｍｏｎｔｇｏｍｅｒｙ，ＴＸ，ＵＳＡ）、およびＩｇＥ（ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ，ＵＳＡ）の濃度を判定するために、ＥＬＩＳＡ法を用いた。ｐｒｅ１−血清とｐｒｅ２−血清は眼窩穿刺により採取したが、ｐｏｓｔ−血清は切開中に静脈穿刺から採取した。すべての血清サンプルは、ＭｉｎｉＣｏｌｌｅｃｔチューブ（Ｇｒｅｉｎｅｒ  Ｂｉｏ−Ｏｎｅ  ＬＴＤ．，Ｇｌｏｕｃｅｓｔｅｒｓｈｉｒｅ，Ｕｎｉｔｅｄ  Ｋｉｎｇｄｏｍ）に採取し、１８０００ｇで１１分間遠心させた。次いで、サンプルはさらなる使用まで−２０℃で保管した。図１に示すように、血清中のＩｇＥ、ＩｇＧ１およびＩｇＧ２ａの免疫グロブリンレベルをＳＣＩＴ処置の前後に測定した。ＳＣＩＴ処置後、ＩｇＧ１およびＩｇＧ２ａの誘導は、ＤＥＲ−ＳＣＩＴ群において著しかった（図１）。
【０１０８】
ｎＤｅｒｐ１とｎＤｅｒｐ２アレルゲンを用いるＳＣＩＴ処置は、ＨＤＭ感作マウスの血清中のＨＤＭ特異的中和ＩｇＧ２ａ抗体を誘導する上で、ＨＤＭ抽出物を用いるＳＣＩＴ処置よりも優れていた。ＨＤＭ−ＳＣＩＴ処置は、ＨＤＭ感作マウスの血清中のＨＤＭ特異的ＩｇＧ２ａ抗体を誘導しなかった。
【０１０９】
［実施例２］−ＳＣＩＴ処置後、ＨＤＭ負荷へのＩｇＥ媒介応答に対する保護の評価
実施例１に記載のマウスにおけるハウスダストダニ再負荷の際の初期のＩｇＥ媒介応答に対する保護を評価するために、ＳＩＴ処置の１週間前（ＰｒｅＳＣＩＴ）に、および負荷の２日前（ＰｏｓｔＳＣＩＴ）にマウスにＨＤＭ抽出物の皮内注射することによって耳介腫脹試験（ＥＳＴ）を行った。この試験において、ＰＢＳ１０μＬ中の粗ＨＤＭ抽出物０．５μｇを麻酔下のマウスの右耳に皮内注射し、一方、対照として左耳にＰＢＳ１０μＬを注射した（ＲＥＦ）。２時間後に、耳介厚を、デジマチックフォースマイクロメータを用い０．５Ｎで（±０．１５Ｎ、Ｍｉｔｓｕｔｏｙｏ，Ｊａｐａｎ）測定した。耳介厚の正味の倍率変化（Δ、ｍｍで）は、左耳介厚を右耳介厚で割ることによって算出した。
【０１１０】
ＨＤＭ感作およびＰＢＳ対照処置マウスにおけるアレルゲン抽出物の注射は、図２に示すように著しい耳介腫脹反応が起こり、アレルゲン再負荷へのＩｇＥ媒介初期応答の存在を示した。耳介腫脹反応は、ＨＤＭ−ＳＣＩＴ処置マウスにおいて約５０％有意に減少した（マン・ホイットニーのＵ検定で、ｐ＜０．０５）。耳介腫脹反応は、ＤＥＲ−ＳＣＩＴ処置マウスにおいて（有意ではないが）軽減した。
【０１１１】
［実施例３］−肺機能とアレルギー性気道炎症の評価
実施例１および実施例２からのマウスに、続いてＨＤＭ吸入負荷を施し、肺機能パラメータとアレルギー性気道炎症を評価した。吸入負荷は、ＰＢＳ２５μＬに溶解した粗ＨＤＭ抽出物２５μｇを用いて行い、５日間にわたり３回与えた。それから２日後、メタコリンに対する気道反応性を判定し、血清サンプル、気管支肺胞洗浄液（ＢＡＬＦ）および肺葉をさらなる分析のために保管した。
【０１１２】
気道反応性は、漸増用量のメタコリン（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ，ＭＯ）の静脈投与に対する反応における気道抵抗を、コンピュータ制御小動物用人工呼吸器（ＦｌｅｘｉＶｅｎｔ；ＳＣＩＲＥＱ，Ｍｏｎｔｒｅａｌ，Ｑｕｅｂｅｃ，Ｃａｎａｄａ）を使用して測定することにより、評価した。
【０１１３】
ＨＤＭ感作、ＳＣＩＴ処置に続いてＨＤＭまたはＰＢＳ負荷を施したマウスの群において、０〜８００μｇ／ｋｇ体重のメタコリン用量範囲に反応する気道抵抗ＲをｃｍＨ２Ｏ．ｓ／ｍＬで測定した。手短に言えば、マウスに対し、１００ｍｇ／ｋｇケタミン（Ｐｆｉｚｅｒ，ＮＹ）と１ｍｇ／ｋｇドルミトール（Ｐｆｉｚｅｒ）の混合物を腹腔内に注射し、次いで１．８７５ｍｇ／ｋｇ体重のＲｏｃｕｒｏｎｉｕｍ  Ｂｒｏｍｉｄｅ（本実験の開始時および１００メタコリン投与の後に投与した）を静脈内に注射した。２０ゲージ静脈カニューレ（Ｂｅｃｔｏｎ  Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ，Ｔｈｅ  Ｎｅｔｈｅｒｌａｎｄｓ）を用いる気管切開および頸静脈を介する疎通後、すべてのマウスにＦｌｅｘｉＶｅｎｔを取り付け、次いで１０ｍＬ／ｋｇの一回呼吸量で人工呼吸（２８０呼吸／分）させ、３００ｍｍＨ２Ｏに圧力を限定させた。メタコリン投与量の増加に応じた気道抵抗は、２秒間疑似ランダム圧力波（ＣＯＤ＞０．７５）への圧力応答から算出した。
【０１１４】
図３に示すように、用量反応曲線の右方移動から、およびメタコリン濃度増加による気道抵抗のプラトーレベルの低下からも明らかなように、ＨＤＭ−ＳＣＩＴとＤＥＲ−ＳＣＩＴは両方とも、ＨＤＭ負荷マウスにおいて気道過敏性を著しく軽減させた。メタコリンへの気道過敏性の最も強い抑制は、メタコリン１注射当たり２０および１００マイクログラムの投与量で効果的な抑制を有するＤＥＲ−ＳＣＩＴマウスにおいて観察された。
【０１１５】
ＨＤＭ感作し、かつＰＢＳ対照処置したマウスは、アレルギー性喘息反応を例証する鼻腔内ＨＤＭ負荷後に、気道抵抗が最も高かったが、ＰＢで負荷したマウスは気道抵抗が最も低かった。
【０１１６】
実験群間のメタコリン用量反応曲線を比較することに加えて、気道過敏に必要とされるメタコリン用量を、３ｃｍＨ２Ｏ．ｓ／ｍＬ（有効量、ＥＤ３）と算出した。ＥＤ３は、より低いメタコリン濃度での用量反応曲線の勾配の指標である。ＨＤＭ−ＳＣＩＴ処置マウスおよびＤｅｒ−ＳＣＩＴ処置マウスの双方は、より低い気道過敏性を示す喘息の陽性対照群マウスと比較して、ＥＤ３増加の傾向を示す（０．０５＜ｐ＜０．１）（図４）。
【０１１７】
結論として、ｎＤｅｒｐ１とｎＤｅｒｐ２のアレルゲンによるＳＣＩＴ処置は、メタコリンへの気道過敏を抑制する上でＨＤＭ抽出物を用いるＳＣＩＴ処置よりも優れている。
【０１１８】
［実施例４］−肺コンプライアンスの評価
肺コンプライアンスは、伸びて、膨張する肺の能力の尺度であり、低コンプライアンスは硬い肺を示し、高コンプライアンスは空気を吐き出すのが困難なことを示す。
【０１１９】
ｍＬ／ｃｍＨ２Ｏの肺コンプライアンス（Ｃ）を上記のすべての実験群においてメタコリンの用量増加に応じて評価した。図５に示すように、かなり低下した肺コンプライアンスがすべてのＨＤＭ負荷群で認められた。ＨＤＭ−ＳＣＩＴとＤｅｒ−ＳＣＩＴは、肺コンプライアンスを上昇させなかった。
【０１２０】
［実施例５］−好酸球性気道炎症に関するＳＣＩＴ処置の評価
アレルゲンに対する脱感作は、アレルゲン（再）負荷の際の気道炎症の抑制と関連する。
【０１２１】
前述の実施例に記載のように、好酸球性気道炎症プロファイルは、ＨＤＭ感作マウスにおいて気管支肺胞洗浄液で評価した。５％ＢＳＡと、プロテアーゼ阻害剤の混合物（Ｃｏｍｐｌｅｔｅ  ｍｉｎｉ  ｔａｂｌｅｔ；Ｒｏｃｈｅ，Ｇｅｒｍａｎｙ）とを含有する１ｍＬのＰＢＳで肺を洗浄した。続いて、４ｍＬのＰＢＳを使用して、余分な細胞を収集するために肺を洗浄した。最初のｍＬの気管支肺胞洗浄液（ＢＡＬＦ）を二つ組で、サイトカイン分析（実施例６〜７）のために−８０℃で保管した。すべてのＢＡＬＦサンプルならびに肺単細胞浮遊液を、Ｃｏｕｌｔｅｒ  Ｃｏｕｎｔｅｒを使用して計数した。両サンプル種のサイトスピン調製物をＤｉｆｆ−Ｑｕｉｃｋ（Ｍｅｒｚ  ＆  Ｄａｄｅ，Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ）で染色し、サイトスピン当たり３００細胞を、経験を積んだ技術者が調べ、標準的形態学によって、単核細胞（Ｍ）、好中球（Ｎ）、および好酸球（Ｅ）に識別した。
【０１２２】
ＨＤＭ負荷は、図６に示すように、ＨＤＭ感作マウスにおいて、好中球（Ｎ）が存在する明白な好酸球性気道炎症を誘導した。ＨＤＭ−ＳＣＩＴ処置およびＤＥＲ−ＳＣＩＴ処置は、ＰＢＳ−ＳＣＩＴ処置したＨＤＭ負荷マウスと比較して、ＢＡＬ液中の好酸球（Ｅ）の絶対数を約５倍抑制し、一方ＢＡＬ中の好中球の数も抑制した。
【０１２３】
[実施例６]−Ｔヘルパー２細胞活性に関するＳＣＩＴ処置の効果の評価
アレルゲン免疫療法によるアレルゲンに対する脱感作は、アレルゲン特異的Ｔｈ−２細胞の活性を抑制し、かつアレルゲンへの制御性Ｔ細胞媒介寛容を誘導すると考えられている。
【０１２４】
前述の実施例に記載の、ＨＤＭ感作に続いて対照処置したマウスまたはＳＣＩＴ処置したマウスを屠殺し、肺組織を摘出した。ＬｕｍｉｎｅｘアッセイおよびＥＬＩＳＡで測定したサイトカインの量を総タンパク質含有量と関連させるために、ＢＣＡタンパク質アッセイ（ＴｈｅｒｍｏＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  Ｉｎｃ．，Ｗａｌｔｈａｍ，ＭＡ，ＵＳ；参照番号２３２２７）を行った。各マウスからの１肺葉の重さを量り、Ｌｕｍｉｎｅｘ緩衝液をＰｈｏｔｏｓｔｏｐ（Ｆ．Ｈｏｆｆｍａｎｎ−Ｌａ  Ｒｏｃｈｅ  Ｌｔｄ．，Ｂａｓｅｌ，Ｓｗｉｔｓｅｒｌａｎｄ；参照番号０４９０６８４５００１）を１：５の比率で添加した。肺葉をホモジナイザーで均質化し、均質化した肺を１２，０００ｇで２０分間遠心分離した。上清を収集して、等分量に分け、メーカーのプロトコルに従ってＢＣＡ分析を行うさらなる使用まで−８０℃で保管した。
【０１２５】
ｐｇ／μｇ肺組織中のインターロイキン−４（ＩＬ−４）、ＩＬ−５，ＩＬ−１３，インターフェロン−γ（ＩＦＮ−γ）およびＩＬ−１７Ｔ細胞サイトカインを、メーカーのプロトコルに従って、多重マウスサイトカイン／ケモカイン磁気ビーズパネル（ＭＩＬＬＩＰＬＥＸ  Ｍａｐ  Ｋｉｔ；Ｍｅｒｃｋ  Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ  Ｃｏｒｐ．，Ｍｅｒｃｋ  ＫＧａＡ，Ｄａｒｍｓｔａｄｔ，Ｇｅｒｍａｎｙ；カタログ＃ＭＣＹＴＯＭＡＧ−７０Ｋ−１０）を用いて、異なる処置群について評価した。すべてのプレートを、ＭＡＧＰＸ１０２３  ４００２を用いてＬｕｍｉｎｅｘ  ｘＭＡＰ技術を用いて分析した。
【０１２６】
図７に示すように、ＨＤＭ感作およびＰＢＳ−ＳＣＩＴ処置マウス（ＰＣ）においてＨＤＭ負荷は、ＰＢＳ負荷ＰＢＳ−ＳＣＩＴ対照処置マウスおよびＨＤＭ感作マウス（ＮＣ）と比較すると、肺組織において明らかにＩＬ−４、ＩＬ−１５およびＩＬ−１３ならびにＩＬ−１７を誘導した。ＤＥＲ−ＳＣＩＴ処置はＨＤＭ誘導ＩＬ−４とＩＬ−５の産生をかなり抑制したが、ＨＤＭ−ＳＣＩＴ処置は抑制せず、一方ＩＬ−１３に対する効果は２つの群のいずれかにおいてのように強くなかった。興味深いことに、ＩＦＮ−γは、本モデルにおいてＨＤＭ負荷またはＳＣＩＴ処置によって誘導されず、一方ＩＬ−１７はＨＤＭ負荷によって明らかに誘導されたが、ＨＤＭ−ＳＣＩＴ処置またはＤＥＲ−ＳＣＩＴ処置のいずれかによって大幅に抑制されず、この処置がＴｈ２細胞または自然２型ヘルパー細胞上で優先的に作用したことを示した。
【０１２７】
Ｔ細胞サイトカインを評価することに加えて、肺構造細胞によって放出されるケモカインおよびアラーミンに対するＳＣＩＴ処置の効果もｐｇ／μｇ肺組織で評価した。
【０１２８】
ＴＡＲＣ（ＣＣＬ１７）およびＭＩＰ−３α（ＣＣＬ２０）の濃度は、メーカーのプロトコルに従って、多重マウスサイトカイン／ケモカイン磁気ビーズパネルＩＩ（ＭＩＬＬＩＰＬＥＸ  Ｍａｐ  Ｋｉｔ；Ｍｅｒｃｋ  Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ  Ｃｏｒｐ．，Ｍｅｒｃｋ  ＫＧａＡ，Ｄａｒｍｓｔａｄｔ，Ｇｅｒｍａｎｙ；カタログ＃ＭＣＹＰ２ＭＡＧ−７３Ｋ）を用いて測定した。ＩＬ−３３濃度は、メーカーのプロトコルに従って、多重マウスサイトカイン／ケモカイン磁気ビーズパネルＩＩＩ（ＭＩＬＬＩＰＬＥＸ  Ｍａｐ  Ｋｉｔ；Ｍｅｒｃｋ  Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ  Ｃｏｒｐ．，Ｍｅｒｃｋ  ＫＧａＡ，Ｄａｒｍｓｔａｄｔ，Ｇｅｒｍａｎｙ；  カタログ＃ＭＣＹＰ３ＭＡＧ−７４Ｋ）を用いて測定した。エオタキシンとＫＣの濃度は、メーカーのプロトコルに従って、多重マウスサイトカイン／ケモカイン磁気ビーズパネル（ＭＩＬＬＩＰＬＥＸ  Ｍａｐ  Ｋｉｔ；Ｍｅｒｃｋ  Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ  Ｃｏｒｐ．，Ｍｅｒｃｋ  ＫＧａＡ，Ｄａｒｍｓｔａｄｔ，Ｇｅｒｍａｎｙ；カタログ＃ＭＣＹＴＯＭＡＧ−７０Ｋ−１０）を用いて測定した。すべてのプレートを、ＭＡＧＰＸ１０２３４００２を用いてＬｕｍｉｎｅｘ  ｘＭＡＰ技術で分析した。
【０１２９】
ＨＤＭ感作マウスにおけるＨＤＭ負荷はエオタキシン、ＴＡＲＣ／ＣＣＬ１７、ＭＩＰ３ａ／ＣＣＬ２０、ＩＬ−３３およびＫＣ／ＣＸＣＬ１の放出を明らかに誘導し、図８に示すように自然免疫系および肺構造細胞の炎症促進性活性化を示した。興味深いことに、ＤＥＲ−ＳＣＩＴ処置後、エオタキシン、ＣＣＬ１７およびＩＬ−３３の放出は抑制傾向であったが、ＣＣＬ２０の産生は有意に抑制された。ＤＥＲ−ＳＣＩＴ処置のＫＣ放出に対する有意な効果は認められなかった。
【０１３０】
全体として、ｎＤｅｒｐ１とｎＤｅｒｐ２アレルゲンとを用いるＳＣＩＴ処置は、ＨＤＭ感作マウスおよびＨＤＭ負荷マウスにおいてＩＬ−４、ＩＬ−５、ＣＣＬ１７、ＣＣＬ２０およびエオタキシン−１の産生を抑制する上でＨＤＭ抽出物を用いるＳＣＩＴ処置よりも優れていた。ｎＤｅｒｐ１とｎＤｅｒｐ２を用いるＳＣＩＴ処置は、感作宿主においてハウスダストダニ負荷の際、自然免疫応答および適応免疫応答の両方の活性化を抑制することが判明していた。ＨＤＭ感作マウスおよびＨＤＭ負荷マウスにおいてアレルギー性炎症と気道過敏のｎＤｅｒＰ１／２  ＳＣＩＴ媒介抑制の機構は、適応Ｔｈ２細胞ならびに自然免疫系の活性化の抑制を含む。
【０１３１】
本明細書に開示する寸法および値は、列挙した正確な数値に厳密に限定されると理解されるべきではない。その代わりに、特に明記しない限り、各寸法は、列挙された値と、その値周辺の機能的に同等の範囲との両方を意味することが意図される。例えば、「４０ｍｍ」として開示される寸法は、「約４０ｍｍ」を意味することが意図される。本発明は、上述の特定の実施形態および実施例を参照することによって記述されている。
【０１３２】
これらの実施形態が本発明の範囲から逸脱することなく、当分野の当業者に周知の種々の改変形態および代替形態が容易であることを認識されたい。したがって、具体的な実施形態が記述されているが、これらは例だけであって、添付の特許請求の範囲に定められている本発明の範囲を限定するものではない。
【図１】
2018516985.tif 000002
【図２】
2018516985.tif 000003
【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【手続補正書】
【提出日】平成29年7月27日(2017.7.27)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ハウスダストダニアレルギーに罹患した哺乳動物の処置に使用するための、薬学的に許容される希釈剤または賦形剤中の精製された天然Ｄｅｒ  ｐ（Ｄｅｒｍａｐｈａｇｏｉｄｅｓ  ｐｔｅｒｏｎｙｓｓｉｎｕｓ）１と精製された天然Ｄｅｒ  ｐ２または精製された天然Ｄｅｒ  ｆ（Ｄｅｒｍａｐｈａｇｏｉｄｅｓ  ｆａｒｉｎａｅ）１と精製された天然Ｄｅｒ  ｆ２を含むアレルゲン組成物を含む組成物であって、アレルゲン組成物が、約５０重量％以上の前記アレルゲンを含み、精製された天然Ｄｅｒ  ｐ１と精製された天然Ｄｅｒ  ｐ２または精製された天然Ｄｅｒ  ｆ１と精製された天然Ｄｅｒ  ｆ２による処置がハウスダストダニへの患者のアレルギー応答を脱感作する、組成物。
【請求項２】
哺乳動物がヒトである、請求項１に記載の使用のための組成物。
【請求項３】
ハウスダストダニアレルギーに罹患した哺乳動物が、ハウスダストダニアレルゲンへの以下のアレルギー応答：
鼻炎、喘息およびアトピー性皮膚炎
のうちの少なくとも１つに罹患している、請求項１または２に記載の使用のための組成物。
【請求項４】
脱感作が、ハウスダストダニへの曝露時のＴｈ２細胞および／またはＩＬＣ２細胞の活性の抑制によって特徴づけられる、請求項１〜３のいずれか１項に記載の使用のための組成物。
【請求項５】
Ｔｈ２細胞および／またはＩＬＣ２細胞の活性の抑制が、ＩＬ−４およびＩＬ−５のサイトカイン産生の減少によって特徴づけられる、請求項１〜４のいずれか１項に記載の使用のための組成物。
【請求項６】
脱感作が、ハウスダストダニへの曝露時のＣＣＬ２０の放出の抑制によって特徴づけられ、好ましくはＣＣＬ２０の放出が処置前の放出と比較して少なくとも１倍抑制される、請求項１〜５のいずれか１項に記載の使用のための組成物。
【請求項７】
脱感作が、ハウスダストダニへの曝露によって誘発される好酸球性気道炎症または気道過敏の低減によって特徴づけられる、請求項１〜６のいずれか１項に記載の使用のための組成物。
【請求項８】
前記組成物が、精製された天然Ｄｅｒ  ｐ１と精製された天然Ｄｅｒ  Ｐ２または精製された天然Ｄｅｒ  ｆ１と精製された天然Ｄｅｒ  ｆ２を含み、
前記アレルゲンの各々が、少なくとも約８０重量％、好ましくは少なくとも９０重量％の純度を有する、
請求項１〜７のいずれか１項に記載の使用のための組成物。
【請求項９】
前記組成物が、精製された天然Ｄｅｒ  ｐ１と精製された天然Ｄｅｒ  ｐ２または精製された天然Ｄｅｒ  ｆ１と精製された天然Ｄｅｒ  ｆ２を約２０：８０〜９９：１の比率で含む、請求項１〜８のいずれか１項に記載の使用のための組成物。
【請求項１０】
前記アレルゲン組成物が、アレルゲンとして約８０重量％以上の前記アレルゲンを含む、請求項１〜９のいずれか１項に記載の使用のための組成物。
【請求項１１】
前記組成物が、約０．００１〜１０００マイクログラムの精製された天然Ｄｅｒ  ｐ１と精製された天然Ｄｅｒ  ｐ２または精製された天然Ｄｅｒ  ｆ１および精製された天然Ｄｅｒ  ｆ２を含む、請求項１〜１０のいずれか１項に記載の使用のための組成物。
【請求項１２】
精製された天然Ｄｅｒ  ｐ１と精製された天然Ｄｅｒ  ｐ２または精製された天然Ｄｅｒ  ｆ１と精製された天然Ｄｅｒ  ｆ２を含む前記組成物が、皮下、舌下、皮内、経皮、皮膚上、経口、リンパ内またはそれらの組み合わせからなる群から選択される様式で投与される、請求項１〜１１のいずれか１項に記載の使用のための組成物。
【請求項１３】
精製された天然Ｄｅｒ  ｐ１と精製された天然Ｄｅｒ  ｐ２または精製された天然Ｄｅｒ  ｆ１と精製された天然Ｄｅｒ  ｆ２が、皮下投与、経口投与または舌下投与される、請求項１〜１２のいずれか１項に記載の使用のための組成物。
【請求項１４】
前記組成物が、処置の初期段階の間は投与量を増加させて、毎日、毎週、毎月および／または毎年、１〜数回、特異的免疫療法レジメンに従って繰り返し投与される、請求項１〜１３のいずれか１項に記載の使用のための組成物。
【請求項１５】
前記組成物が、精製された天然Ｄｅｒ  ｐ１と精製された天然Ｄｅｒ  ｐ２または精製された天然Ｄｅｒ  ｆ１と精製された天然Ｄｅｒ  ｆ２を同時投与または連続投与のための別々の剤形で含有するキットの形態である、請求項１〜１４のいずれか１項に記載の使用のための組成物。
【国際調査報告】
2018516985.tif 000010
2018516985.tif 000011
2018516985.tif 000012