(57)【要約】  アミノグリコシド類、例えばアミカシンを含むコクリエート化された抗生物質を経口投与することによって、マイコバクテリア感染症、例えば治療不応性肺疾患を含む非結核性マイコバクテリア（ＮＴＭ）肺疾患及び肺結核を治療する方法が開示されている。経口投与される抗生物質のコクリエートは、静脈内投与される抗生物質と比較してかなり低減された毒性を有する。【選択図】図１
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
マイコバクテリア肺疾患を伴う被験体を治療する方法であって、該被験体に治療的有効量の、抗生物質を含むコクリエートを含む製剤を経口投与することを含む、方法。
【請求項２】
前記マイコバクテリア肺疾患は、肺結核である、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記肺結核は、マイコバクテリウム・ツベルクローシス、マイコバクテリウム・ボビス、マイコバクテリウム・アフリカヌム、マイコバクテリウム・ミクロティ及びマイコバクテリウム・カネッティによって引き起こされる、請求項２に記載の方法。
【請求項４】
前記マイコバクテリア肺疾患は、非結核性マイコバクテリア（ＮＴＭ）肺疾患である、請求項１に記載の方法。
【請求項５】
前記ＮＴＭは、マイコバクテリウム・アビウム、マイコバクテリウム・カンサシイ、マイコバクテリウム・アブセサス、マイコバクテリウム・キセノピ、マイコバクテリウム・アビウム、マイコバクテリウム・イントラセルラーエ及びマイコバクテリウム・アビウムコンプレックスからなる群から選択される、請求項４に記載の方法。
【請求項６】
前記被験体における細菌負荷を、治療後に少なくとも９０％、９５％又は９８％減少させる、前記請求項のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７】
前記被験体における細菌負荷を、少なくとも４週間の治療後に少なくとも９０％、９５％又は９８％減少させる、前記請求項のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８】
前記被験体は、標準的な治療過程の後で、かつ前記抗生物質を含むコクリエートを投与する前に治療不応性肺疾患を有する、前記請求項のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９】
前記被験体は、少なくとも６ヶ月の先行する治療過程の後で、かつ前記抗生物質を含むコクリエートを投与する前に治療不応性肺疾患を有する、請求項８に記載の方法。
【請求項１０】
前記抗生物質を含むコクリエートを単剤療法として投与する、前記請求項のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１１】
前記抗生物質を含むコクリエートを多剤療法の一部として投与する、前記請求項のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１２】
前記多剤療法は、エタンブトール及びマクロライド、例えばクラリスロマイシン又はアジスロマイシンを含む、前記請求項のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１３】
前記多剤療法は、リファマイシン又はリファンピンを更に含む、請求項１２に記載の方法。
【請求項１４】
アミノグリコシドの無有害作用量（ＮＯＡＥＬ）は、１００ｍｇ／ｋｇ、１２５ｍｇ／ｋｇ、１５０ｍｇ／ｋｇ、１７５ｍｇ／ｋｇ、２００ｍｇ／ｋｇ、２５０ｍｇ／ｋｇ、３００ｍｇ／ｋｇ、４００ｍｇ／ｋｇ、５００ｍｇ／ｋｇ、７５０ｍｇ／ｋｇ、１０００ｍｇ／ｋｇ、又は１５００ｍｇ／ｋｇより大きい、前記請求項のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１５】
前記抗生物質は、アミノグリコシド系抗生物質である、前記請求項のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１６】
前記アミノグリコシド系抗生物質は、アミカシン、ゲンタマイシン、パロモマイシン、カプレオマイシン、トブラマイシン、カナマイシン及びネオマイシンからなる群から選択される、請求項１５に記載の方法。
【請求項１７】
前記アミノグリコシド系抗生物質は、アミカシンである、請求項１５に記載の方法。
【請求項１８】
前記抗生物質を、５ｍｇ／ｋｇから２０ｍｇ／ｋｇの間、５ｍｇ／ｋｇから１５ｍｇ／ｋｇの間、５ｍｇ／ｋｇから１０ｍｇ／ｋｇの間、１０ｍｇ／ｋｇから１５ｍｇ／ｋｇの間、１０ｍｇ／ｋｇから２０ｍｇ／ｋｇの間、５ｍｇ／ｋｇから１０ｍｇ／ｋｇの間、５ｍｇ／ｋｇから２５ｍｇ／ｋｇの間、又は１ｍｇ／ｋｇから３０ｍｇ／ｋｇの間の投与量で投与する、前記請求項のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１９】
前記抗生物質を、約４００ｍｇ／日〜１０００ｍｇ／日、２００ｍｇ／日〜２０００ｍｇ／日、１００ｍｇ／日〜４０００ｍｇ／日、３００ｍｇ／日〜８００ｍｇ／日、４００ｍｇ／日〜８００ｍｇ／日、２００ｍｇ／日〜８００ｍｇ／日、１００ｍｇ／日〜６００ｍｇ／日、２００ｍｇ／日〜６００ｍｇ／日、４００ｍｇ／日〜６００ｍｇ／日、又は３００ｍｇ／日〜７００ｍｇ／日の投与量で投与する、前記請求項のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２０】
前記コクリエート製剤は、塩化ナトリウムを更に含む、前記請求項のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２１】
前記コクリエート製剤は、１ｍＭ〜１Ｍの、又は０．５Ｍ〜１Ｍの塩化ナトリウムを含む、請求項１９に記載の方法。
【請求項２２】
前記コクリエート製剤は、胆汁酸塩を更に含む、前記請求項のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２３】
前記コクリエート製剤は、０．１ｍＭ〜１００ｍＭの、又は０．１ｍＭ〜０．５ｍＭの胆汁酸塩を含む、請求項２２に記載の方法。
【請求項２４】
前記胆汁酸塩は、以下の、コール酸塩、ケノデオキシコール酸塩、タウロコール酸塩、グリココール酸塩、タウロケノデオキシコール酸塩、グリコケノデオキシコール酸塩、デオキシコール酸塩又はリトコール酸塩の１つ以上である、前記請求項のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２５】
前記コクリエート製剤を、１日につき１回、１日につき２回、１日につき３回、又は１日につき４回投与する、前記請求項のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２６】
前記コクリエート製剤を、少なくとも１ヶ月、少なくとも２ヶ月、少なくとも３ヶ月、少なくとも４ヶ月、又は少なくとも６ヶ月にわたって毎日投与する、前記請求項のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２７】
前記被験体は、哺乳動物である、前記請求項のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２８】
前記被験体は、ヒトである、前記請求項のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２９】
前記コクリエートは、１種以上の負に帯電した脂質を含み、該１種以上の負に帯電した脂質が、前記コクリエート中の全脂質の４０％〜７０％を構成する、前記請求項のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３０】
前記１種以上の負に帯電した脂質は、前記コクリエート中の全脂質の４５％〜６０％構成する、請求項２６に記載の方法。
【請求項３１】
前記１種以上の負に帯電した脂質は、ホスファチジルセリンを含む、請求項３０に記載の方法。
【請求項３２】
前記ホスファチジルセリンは、ダイズホスファチジルセリンである、請求項３１に記載の方法。
【請求項３３】
前記コクリエートは、１種以上の中性又はカチオン性の脂質又はステロールを更に含む、請求項２９〜３２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３４】
前記１種以上の中性又はカチオン性の脂質又はステロールは、ホスファチジルコリン及びスフィンゴミエリンからなる群から選択される、請求項３３に記載の方法。
【請求項３５】
非結核性マイコバクテリア（ＮＴＭ）疾患を伴う被験体を治療する方法であって、該被験体に治療的有効量の、抗生物質、例えばアミノグリコシド系抗生物質（例えば、アミカシン）を含むコクリエートを含む製剤を経口投与することを含み、該治療方法が、該被験体における細菌負荷を、少なくとも９０％、９５％、又は９８％減少させる、方法。
【請求項３６】
細菌負荷を、少なくとも４週間の治療後に、少なくとも９０％、９５％又は９８％減少させる、請求項３５に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
［関連出願の相互参照］
本願は、２０１５年４月２２日付で出願された米国仮特許出願第６２／１５１，２１８号の利益を主張し、その出願日に依拠し、その開示全体が引用することにより本明細書の一部をなす。
【０００２】
本願は、概してコクリエート化された抗生物質を投与することでマイコバクテリア感染症を治療する方法に関する。
【背景技術】
【０００３】
マイコバクテリウム（Mycobacterium）属の生物は、自然環境に広く分布しており、送水管及び飲料水タンク内にバイオフィルムを形成することが分かっている。一部のマイコバクテリア（Mycobacteria）種は、高い病原性を有し、咳及び吸入又は直接的な接触によって宿主から宿主へと蔓延し、癩病（マイコバクテリウム・レプレ（M. leprae））又は結核（マイコバクテリウム・ツベルクローシス（M. tuberculosis））を引き起こし得る。その他のマイコバクテリア種は、その病原性がより大幅に低く、総称して非結核性マイコバクテリア（ＮＴＭ）と呼ばれている。ＮＴＭは、比較的病原性が低いとは言え、特定の状況下では、免疫系の弱まった宿主又は特定の生理学的状態（例えば、気管支拡張症）を伴う宿主に感染することがある。そのような宿主の感染は、２つの異なる経路によって生じ得る。一方の経路は、胃腸経路であり、その経路から該細菌は拡散し、及び／又はリンパ節感染症を引き起こすことがある。もう一方の経路は、呼吸器経路であり、その経路によって該細菌は、慢性的肺状態（気管支拡張症、肺気腫、嚢胞性線維症、慢性閉塞性肺疾患）を伴う個体に感染症を引き起こす。後者の感染経路は、肺の基礎疾患を伴う個体においてよくあることであり、肺感染症は、バイオフィルムの形成と関連している（非特許文献１、非特許文献２）。
【０００４】
アミカシン（ＡＭＫ）は、多剤耐性グラム陰性細菌、例えばシュードモナス・エルギノーサ（Pseudomonas aeruginosa）、アシネトバクター（Acinetobacter）及びエンテロバクター（Enterobacter）からの重度の院内感染症を治療するためだけでなく、非結核性マイコバクテリア（ＮＴＭ）肺疾患の治療のために、典型的には、進行した肺疾患に関する治療のために、及び／又は第一選択薬が感染症を制御することができなかった場合に最も頻繁に使用されるアミノグリコシド系抗生物質である。
【０００５】
遊離のアミカシンは経口的には吸収されないので、経口形態を利用することができず、したがってアミカシンは、静脈内（ＩＶ）経路又は筋内（ＩＭ）経路によって投与せねばならない。目下、吸入用のリポソーム性アミカシンは、嚢胞性線維症、シュードモナス・エルギノーサ感染症、非結核性マイコバクテリア感染症及び気管支拡張症等の呼吸器疾患の治療に関する臨床試験の後期段階にある。
【０００６】
アミカシンの有害な副作用は、その他のアミノグリコシド類の副作用と同様である。腎障害及び難聴は、最も重大な副作用である。この可能性のため、該薬剤及び腎機能のマーカー（クレアチニン）の血中レベルが監視される。
【０００７】
したがって、特定の抗生物質、例えばアミカシンのようなアミノグリコシド類を投与するために利用可能な経路は制限され、その投与は、毒性にかかる問題のため厳重に監視せねばならない。アミカシンのような抗生物質のための経口製剤、特に毒性プロファイルが低減された経口製剤の提供は、ＮＴＭ肺疾患を含むマイコバクテリア感染症の治療における大きな進展を意味する。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００８】
【非特許文献１】Carter G, et al, AAC 48:4907, 2004
【非特許文献２】Yamazaki Y, et al Cell Microbio1,8: 808. 2006
【発明の概要】
【０００９】
本出願に開示される実験は、アミノグリコシド（例えば、アミカシン）コクリエートが、バイオフィルム中、及び非結核性マイコバクテリア（ＮＴＭ）肺疾患の動物モデルにおいてマイコバクテリウム・アビウムを死滅させるのに有効であることを実証している。したがって、本開示は部分的に、マイコバクテリウム・アビウム（Mycobacterium avium）感染症を伴う被験体を治療する方法であって、該被験体に治療的有効量の、アミノグリコシド系抗生物質を含むコクリエートを含む製剤を経口投与することを含む、方法に関する。
【００１０】
一実施の形態は、マイコバクテリア肺疾患を伴う被験体を治療する方法であって、該被験体に治療的有効量の、抗生物質、例えばアミノグリコシド系抗生物質を含むコクリエートを含む製剤を経口投与することを含む、方法に関する。
【００１１】
一実施の形態では、マイコバクテリア肺疾患は、肺結核である。典型的には、肺結核は、マイコバクテリウム・ツベルクローシス（M. tuberculosis）、マイコバクテリウム・ボビス（M. bovis）、マイコバクテリウム・アフリカヌム（M. africanum）、マイコバクテリウム・ミクロティ（M. microti）及びマイコバクテリウム・カネッティ（M. canetti）によって引き起こされる。
【００１２】
別の実施の形態では、マイコバクテリア肺疾患は、非結核性マイコバクテリア肺疾患である。一実施の形態では、ＮＴＭは、マイコバクテリウム・アビウム（Mycobacterium avium）、マイコバクテリウム・カンサシイ、マイコバクテリウム・アブセサス（M. abscessus）、マイコバクテリウム・キセノピ（M.xenopi）、マイコバクテリウム・イントラセルラーエ（M. intracellulare）及びマイコバクテリウム・アビウムコンプレックス（Mycobacterium avium complex）からなる群から選択される。
【００１３】
一実施の形態では、上記治療方法は、細菌負荷を、少なくとも９０％、９５％又は９８％減少させる。一実施の形態では、上記治療方法は、細菌負荷を、少なくとも４週間の治療後に、少なくとも９０％、９５％又は９８％減少させる。
【００１４】
一実施の形態では、被験体は、標準的な治療過程の後で、かつ抗生物質を含むコクリエートを投与する前に治療不応性肺疾患を有する。
【００１５】
一実施の形態では、被験体は、少なくとも６ヶ月の先行する治療過程の後で、かつ抗生物質を含むコクリエートを投与する前に治療不応性肺疾患を有する。
【００１６】
一実施の形態では、抗生物質を含むコクリエートは、単剤療法として投与される。別の実施の形態では、抗生物質を含むコクリエートは、多剤療法の一部として投与される。
【００１７】
一実施の形態では、多剤療法は、エタンブトール及びマクロライド、例えばクラリスロマイシン又はアジスロマイシンを含む。一実施の形態では、多剤療法は、リファマイシン又はリファンピンを更に含む。
【００１８】
一実施の形態では、アミノグリコシドの無有害作用量（ＮＯＡＥＬ（no observed adverse effects level））は、１００ｍｇ／ｋｇ、１２５ｍｇ／ｋｇ、１５０ｍｇ／ｋｇ、１７５ｍｇ／ｋｇ、２００ｍｇ／ｋｇ、２５０ｍｇ／ｋｇ、３００ｍｇ／ｋｇ、４００ｍｇ／ｋｇ、５００ｍｇ／ｋｇ、７５０ｍｇ／ｋｇ、１０００ｍｇ／ｋｇ、１５００ｍｇ／ｋｇ、又は２０００ｍｇ／ｋｇより大きい。
【００１９】
一実施の形態では、アミノグリコシド系抗生物質は、アミカシン、ゲンタマイシン、カプレオマイシン、パロモマイシン、トブラマイシン、カナマイシン及びネオマイシンからなる群から選択される。一実施の形態では、アミノグリコシド系抗生物質は、アミカシンである。
【００２０】
一実施の形態では、抗生物質は、５ｍｇ／ｋｇから２０ｍｇ／ｋｇの間、或いは５ｍｇ／ｋｇから１５ｍｇ／ｋｇの間、或いは５ｍｇ／ｋｇから１０ｍｇ／ｋｇの間、或いは１０ｍｇ／ｋｇから１５ｍｇ／ｋｇの間、或いは１０ｍｇ／ｋｇから２０ｍｇ／ｋｇの間、或いは５ｍｇ／ｋｇから１０ｍｇ／ｋｇの間、或いは５ｍｇ／ｋｇから２５ｍｇ／ｋｇの間、又は或いは１ｍｇ／ｋｇから３０ｍｇ／ｋｇの間の投与量で投与される。一実施の形態では、抗生物質は、約４００ｍｇ／日〜１０００ｍｇ／日、或いは２００ｍｇ／日〜２０００ｍｇ／日、或いは１００ｍｇ／日〜４０００ｍｇ／日、或いは３００ｍｇ／日〜８００ｍｇ／日、或いは４００ｍｇ／日〜８００ｍｇ／日、或いは２００ｍｇ／日〜８００ｍｇ／日、或いは１００ｍｇ／日〜６００ｍｇ／日、或いは２００ｍｇ／日〜６００ｍｇ／日、或いは４００ｍｇ／日〜６００ｍｇ／日、或いは３００ｍｇ／日〜７００ｍｇ／日の投与量で投与される。
【００２１】
一実施の形態では、コクリエート製剤は、塩化ナトリウムを更に含む。一実施の形態では、コクリエート製剤は、１ｍＭ〜１Ｍの、又は０．５Ｍ〜１Ｍの塩化ナトリウムを含む。
【００２２】
一実施の形態では、コクリエート製剤は、胆汁酸塩を更に含む。一実施の形態では、コクリエート製剤は、０．１ｍＭ〜１００ｍＭの、又は０．１ｍＭ〜０．５ｍＭの胆汁酸塩を含む。一実施の形態では、胆汁酸塩は、以下の、コール酸塩、ケノデオキシコール酸塩、タウロコール酸塩、グリココール酸塩、タウロケノデオキシコール酸塩、グリコケノデオキシコール酸塩、デオキシコール酸塩又はリトコール酸塩の１つ以上である。
【００２３】
一実施の形態では、コクリエート製剤は、１日につき１回、１日につき２回、１日につき３回、又は１日につき４回投与される。別の実施の形態では、コクリエート製剤は、１週間につき１回、１週間につき２回、１週間につき３回、又は１週間につき４回投与される。一実施の形態では、コクリエート製剤は、少なくとも４週間にわたって毎日投与される。別の実施の形態では、コクリエート製剤は、少なくとも１ヶ月、少なくとも２ヶ月、少なくとも３ヶ月、少なくとも４ヶ月、又は少なくとも６ヶ月にわたって毎日投与される。
【００２４】
一実施の形態では、被験体は、哺乳動物である。一実施の形態では、被験体は、ヒトである。
【００２５】
一実施の形態では、コクリエートは、１種以上の負に帯電した脂質を含み、該１種以上の負に帯電した脂質が、コクリエート中の全脂質の４０％〜７０％を構成する。一実施の形態では、１種以上の負に帯電した脂質は、コクリエート中の全脂質の３０％〜７０％、４０％〜６０％、４５％〜６５％、４５％〜６０％又は４５％〜５５％を構成する。一実施の形態では、１種以上の負に帯電した脂質は、ホスファチジルセリンを含む。一実施の形態では、ホスファチジルセリンは、ダイズホスファチジルセリンである。別の実施の形態では、ホスファチジルセリンは、卵由来又はウシ由来のホスファチジルセリンである。
【００２６】
一実施の形態では、コクリエートは、１種以上の中性又はカチオン性の脂質又はステロールを更に含む。一実施の形態では、１種以上の中性又はカチオン性の脂質又はステロールは、ホスファチジルコリン及びスフィンゴミエリンからなる群から選択される。
【００２７】
或る特定の実施の形態において、本方法は、マイコバクテリウム・アビウムコンプレックス（ＭＡＣ）肺疾患を伴う被験体を治療する方法であって、該被験体に治療的有効量の、アミノグリコシド系抗生物質（例えば、アミカシン）を含むコクリエートを含む製剤を経口投与することを含む、方法に関する。
【００２８】
別の態様は、非結核性マイコバクテリア（ＮＴＭ）肺疾患を伴う被験体を治療する方法であって、該被験体に治療的有効量の、抗生物質、例えばアミノグリコシド系抗生物質（例えば、アミカシン）を含むコクリエートを含む製剤を経口投与することを含む、方法に関する。
【００２９】
別の態様は、肺結核を伴う被験体を治療する方法であって、該被験体に治療的有効量の、抗生物質、例えばアミノグリコシド系抗生物質（例えば、アミカシン）を含むコクリエートを含む製剤を経口投与することを含む、方法に関する。
【００３０】
別の態様は、播種性の非結核性マイコバクテリア（ＮＴＭ）疾患を伴う被験体を治療する方法であって、該被験体に治療的有効量の、抗生物質、例えばアミノグリコシド系抗生物質（例えば、アミカシン）を含むコクリエートを含む製剤を経口投与することを含む、方法に関する。
【００３１】
別の態様は、マイコバクテリウム・レプレ（M. leprae）感染症及びマイコバクテリウム・レプロマトシス（M. lepromatosis）感染症を伴う被験体を治療する方法であって、該被験体に治療的有効量の、抗生物質、例えばアミノグリコシド系抗生物質（例えば、アミカシン）を含むコクリエートを含む製剤を経口投与することを含む、方法に関する。
【００３２】
更に別の態様は、非結核性マイコバクテリア（ＮＴＭ）疾患を伴う被験体を治療する方法であって、該被験体に治療的有効量の、抗生物質、例えばアミノグリコシド系抗生物質（例えば、アミカシン）を含むコクリエートを含む製剤を経口投与することを含み、該治療方法が、細菌負荷を、少なくとも９０％、９５％、又は９８％減少させる、方法に関する。一実施の形態では、前記方法は、細菌負荷を、少なくとも４週間の治療後に、少なくとも９０％、９５％又は９８％減少させる。或る特定の実施の形態では、ＮＴＭ疾患は、ＮＴＭ肺疾患である。他の実施の形態では、ＮＴＭ疾患は、播種性ＮＴＭ疾患である。
【００３３】
引用することにより本明細書の一部をなす添付の図面は、幾つかの実施の形態を解説し、本明細書と共に本明細書に開示される組成物及び方法の幾つかの原理を説明するのに役立つ。
【図面の簡単な説明】
【００３４】
【図１】アミカシンのコクリエートを使用する、培養中のマイコバクテリウム・アビウムコンプレックス（ＭＡＣ）バイオフィルムの効果的な処置を示す図である。
【図２】アミカシンのコクリエートで毎日４週間にわたって処置されたマウスにおける、非結核性マイコバクテリア肺疾患の効果的な治療を示す図である。
【図３】ラットにおけるコクリエート化されたアミカシンの無有害作用量（ＮＯＡＥＬ）が、注射されたアミカシンのＮＯＡＥＬの２倍の高さであることを示す図である。
【図４Ａ】雄ラットにおける、コクリエート化されたアミカシンの薬物動態を示す図である。ヒトにおいて、ピーク（Ｃｍａｘ）血漿レベルは、３５ｍｃｇ／ｍＬを超えるべきではなく、トラフ血漿レベルは、１０ｍｃｇ／ｍＬを超えるべきではなく、それらのレベルは、図４Ａ中の上方の水平線によって示されている。
【図４Ｂ】雌ラットにおける、コクリエート化されたアミカシンの薬物動態を示す図である。ヒトにおいて、ピーク（Ｃｍａｘ）血漿レベルは、３５ｍｃｇ／ｍＬを超えるべきではなく、トラフ血漿レベルは、１０ｍｃｇ／ｍＬを超えるべきではなく、それらのレベルは、図４Ｂ中の上方の水平線によって示されている。
【発明を実施するための形態】
【００３５】
ここで、様々な例示的な実施形態を詳細に参照し、実施形態の例を、添付の図面において図示するとともに、以下の発明を実施するための形態において論じる。以下の発明を実施するための形態は読者に本発明の幾つかの実施形態、特徴及び態様の詳細のより十分な理解をもたらすために提示され、本発明の範囲を限定するものと解釈すべきではないことを理解されたい。
【００３６】
１．  マイコバクテリア
マイコバクテリアは、小桿形の桿菌の一つの科であり、診断及び治療の目的について３つの主要なグループに分類することができる。１つ目のグループは、肺結核を引き起こし得るマイコバクテリウム・ツベルクローシスコンプレックス（Mycobacterium tuberculosis complex）であり、マイコバクテリウム・ツベルクローシス（M. tuberculosis）、マイコバクテリウム・ボビス（M. bovis）、マイコバクテリウム・アフリカヌム（M. africanum）、マイコバクテリウム・ミクロティ（M. microti）及びマイコバクテリウム・カネッティ（M. canetti）を含む。２つ目のグループは、ハンセン病又は癩病を引き起こすマイコバクテリウム・レプレ（M. leprae）及びマイコバクテリウム・レプロマトシス（M. lepromatosis）である。３つ目のグループは、結核類似肺疾患、リンパ節炎、皮膚疾患又は播種性疾患を引き起こし得るその他の全てのマイコバクテリアを含む非結核性マイコバクテリア（ＮＴＭ）である。ＮＴＭには、限定されるものではないが、マイコバクテリウム・アビウムコンプレックス（M. avium Complex）（ＭＡＣ）、マイコバクテリウム・アビウム（M. avium）、マイコバクテリウム・カンサシイ（M. kansasii）、マイコバクテリウム・アブセサス（M. abscessus）、マイコバクテリウム・ケロネー（M. chelonae）、マイコバクテリウム・フォーチュイタム（M. fortuitum）、マイコバクテリウム・ジェナベンセ（M. genavense）、マイコバクテリウム・ゴルドナエ（M. gordonae）、マイコバクテリウム・ヘモフィルム（M. haemophilum）、マイコバクテリウム・イムノゲヌム（M. immunogenum）、マイコバクテリウム・イントラセルラーエ（M. intracellulare）、マイコバクテリウム・マルモエンセ（M. malmoense）、マイコバクテリウム・マリヌム（M. marinum）、マイコバクテリウム・ムコゲニクム（M. mucogenicum）、マイコバクテリウム・ノンクロモゲニクム（M. nonchromogenicum）、マイコバクテリウム・スクロフラセウム（M. scrofulaceum）、マイコバクテリウム・シミアエ（M. simiae）、マイコバクテリウム・スメグマティス（M. smegmatis）、マイコバクテリウム・ツルガイ（M. szulgai）、マイコバクテリウム・テラエ（M. terrae）、マイコバクテリウム・テラエコンプレックス（M. terrae complex）、マイコバクテリウム・ウルセランス（M. ulcerans）及びマイコバクテリウム・キセノピ（M. xenopi）が含まれる。ＭＡＣには、マイコバクテリウム・アビウム及びマイコバクテリウム・イントラセルラーエの少なくとも２つのマイコバクテリア種が含まれる。これらの２つの種は、旧来の物理的試験又は生化学的試験に基づき識別することができないが、該２種間を特定し、識別するために使用することができる核酸プローブが存在する。
【００３７】
ＮＴＭ肺疾患には、空洞型の疾患及び結節／気管支拡張型の疾患という２つの主要な型が存在する。空洞型の疾患は一般に、喫煙歴を有すると共に、しばしば過剰なアルコール摂取を伴う４０歳代の終わり及び５０歳代の始めの男性に起こる。治療をせずに放置すると、この型のＮＴＭ肺疾患は一般に、１年〜２年以内に進行して、広範囲な空洞型の肺破壊及び呼吸不全を引き起こすことがある。結節／気管支拡張型の疾患は一般に、しばしば右中葉又は小舌にかかる結節性浸潤及び間質結節性浸潤を伴って、典型的には、閉経後の非喫煙の白人女性に起こる。この型の疾患は、空洞型よりもゆっくりと進行する傾向にある。
【００３８】
ＮＴＭ肺疾患の他に、ＮＴＭは、播種性疾患を引き起こすこともある。ＮＴＭによる播種性疾患は、進行性ＨＩＶ感染症を患う個体に見られる最もよくある重度の感染症の一つである。ＮＴＭ播種性疾患の大部分（９０％超）は、ＭＡＣによって引き起こされ、これらの症例の圧倒的多数がマイコバクテリウム・アビウムによって引き起こされる。ＨＩＶに感染した個体におけるＮＴＭによる播種性疾患は一般に、重度の免疫無防備状態にある非常に低いＣＤ４陽性Ｔ細胞数を有する患者でしか起こらない。また、ＮＴＭによる播種性疾患は、免疫無防備状態にある臓器移植（例えば、腎臓若しくは心臓）患者又は長期的なコルチコステロイドの使用においても認められている。
【００３９】
肺結核は、マイコバクテリウム・ツベルクローシス又は時々その他のマイコバクテリア菌株（マイコバクテリウム・ボビス、マイコバクテリウム・アフリカヌム、マイコバクテリウム・ミクロティ及びマイコバクテリウム・カネッティ）によって引き起こされる急性又は慢性の感染症であり、肺浸潤、乾酪化を伴う肉芽腫の形成、線維症及び空洞化によって特徴付けられる。
【００４０】
癩病は、皮膚組織及び末梢神経を冒し、皮膚病変、感染及び変形をもたらす抗酸菌であるマイコバクテリウム・レプレによって引き起こされる進行性皮膚病変によって特徴付けられる慢性の全身性感染症である。癩病は、マイコバクテリウム・レプロマトシスによって引き起こされることもある。癩病には、３種の異なる形態が存在する。癩腫性癩病は、最も深刻な種類であり、上気道、眼及び睾丸並びに神経及び皮膚に損傷をもたらす。類結核癩病は、末梢神経を冒し、時として周囲の皮膚、特に顔面、腕、脚及び臀部の皮膚を冒す。境界群（二形性）癩病は、癩腫性癩病及び類結核癩病の両方の特徴を有する。この種類の癩病における皮膚病変は、瀰漫性であり、境界が十分に定められない。
【００４１】
２．  コクリエート及びコクリエートの製造方法
コクリエートは、負に帯電した脂質、例えばホスファチジルセリン及びカルシウムの相互作用により自発形成する無水の安定な多層脂質結晶である（例えば、米国特許第４，０７８，０５２号、同第５，６４３，５７４号、同第５，８４０，７０７号、同第５，９９４，３１８号、同第６，１５３，２１７号、同第６，５９２，８９４号、並びに国際公開第２００４０４／０９１５７２号、国際公開第２００４／０９１５７８号、国際公開第２００５／１１０３６１号、国際公開第２０１２／１５１５１７号、及び国際公開第２０１４／０２２４１４号のＰＣＴ公報、並びに米国特許出願公開第２０１０／０１７８３２５号を参照（それぞれ引用することにより本明細書の一部を完全になす））。コクリエートは、内部に水性空間を有さずに、螺旋状に又は積層シートとして巻かれた、大きく連続的で中実の脂質二重膜シートからなる独特な多層構造を有する。この独特な構造は、「コクリエート化された」会合分子に分解からの保護を与える。コクリエート構造全体は、一続きの中実の層であるので、コクリエート構造内部にある成分は、コクリエートの外層が過酷な環境条件又は酵素に曝され得るとしても無傷のままである。血清中及び粘膜分泌液中のｉｎ  ｖｉｖｏでの二価カチオンの濃度は、コクリエート構造が維持されるような濃度である。したがって、コクリエート会合分子の大部分は、中実の安定な不透性の構造の内側層中に存在する。しかしながら、細胞内部では、カルシウム濃度が低いことにより、コクリエート結晶の開放が引き起こされ、コクリエートに製剤化された分子が放出される。したがって、コクリエート製剤は、粘膜分泌液、血漿及び胃腸液を含む生理学的流体中では無傷のままであり、それにより、経口、粘膜内及び静脈内を含む多くの投与経路による生物学的に活性な化合物の送達が媒介される。
【００４２】
コクリエートは、米国特許第５，９９４，３１８号及び同第６，１５３，２１７号（これらの開示全体が引用することにより本明細書の一部をなす）に記載のものを含むが、これらに限定されない既知の方法を用いて作製することができる。一実施形態では、この方法は概して、薬理活性物質（例えば、アミノグリコシド等の抗生物質）と脂質（好ましくは、ホスファチジルセリン等の負に帯電したリン脂質）とを溶媒の存在下で合わせることと、水溶液を添加してリポソームを形成することと、多価カチオンを用いて沈殿させてコクリエートを形成することとを含む。別の実施形態では、この方法は概して、薬理活性物質（例えば、アミノグリコシド等の抗生物質）がリポソームと会合するように薬理活性物質（例えば、アミノグリコシド等の抗生物質）とリポソームとを溶媒の存在下で合わせることと、多価カチオンを用いて沈殿させて薬理活性物質含有コクリエートを形成することとを含む。
【００４３】
好ましい実施形態では、多価カチオンはカルシウム、亜鉛、マグネシウム及びバリウム等の二価金属カチオンである。好ましい実施形態では、二価金属カチオンはカルシウムである。
【００４４】
薬理活性物質（例えば、アミノグリコシド等の抗生物質）をリポソームに溶媒の存在下で導入する工程は、様々な方法で達成することができる。一実施形態では、溶媒と薬理活性物質（例えば、アミノグリコシド等の抗生物質）との溶液をリポソームに導入することによって薬理活性物質（例えば、アミノグリコシド等の抗生物質）を導入する。好ましくは、リポソームはリポソーム懸濁液、好ましくは水性リポソーム懸濁液である。好ましい実施形態では、溶液の滴加によって抗生物質を含む溶液をリポソームに導入する。他の実施形態では、溶液は連続流によって又はボーラスとして添加することができる。加えて、溶液は水を溶液の前、溶液の後又は溶液と共に添加しながら乾燥脂質に導入することができる。
【００４５】
別の実施形態では、薬理活性物質（例えば、アミノグリコシド等の抗生物質）を溶媒の前又は溶媒の後にリポソームに導入する。例えば、薬理活性物質（例えば、アミノグリコシド等の抗生物質）は溶媒を含むリポソーム懸濁液に導入することができる。次いで、混合物の撹拌、混合、ボルテックス等によって、薬理活性物質（例えば、アミノグリコシド等の抗生物質）とリポソームとの会合を促進することができる。導入される薬理活性物質（例えば、アミノグリコシド等の抗生物質）は、粉末形態又は液体形態とすることができる。
【００４６】
酸化防止剤（例えばビタミンＥ）をコクリエートの作製に使用してもよい。酸化防止剤は、薬理活性物質（例えば、アミノグリコシド等の抗生物質）又はリポソームと共に導入することができる。酸化防止剤をリポソーム懸濁液又は薬理活性物質（例えば、アミノグリコシド等の抗生物質）と溶媒との溶液に組み込むのが好ましい。
【００４７】
リポソームは、リポソームを調製する任意の既知の方法によって調製することができる。このため、リポソームは例えば溶媒注入、脂質水和、逆蒸発、反復凍結融解による凍結乾燥によって調製することができる。リポソームは、小単層ベシクル（small unilamellar vesicles）（ＳＵＶ）を含む多重膜（ＭＬＶ）又は単層（ＵＬＶ）とすることができる。これらのリポソーム溶液中の脂質の濃度は、約０．１ｍｇ／ｍｌ〜５００ｍｇ／ｍｌとすることができる。好ましくは、脂質の濃度は約０．５ｍｇ／ｍｌ〜約５０ｍｇ／ｍｌ、より好ましくは約１ｍｇ／ｍｌ〜約２５ｍｇ／ｍｌである。
【００４８】
リポソームは、例えば透析、カラムクロマトグラフィー、バイオビーズＳＭ−２を用いた界面活性剤除去によって、逆相蒸発（ＲＥＶ）によって、又は高圧押出による中間サイズ単層ベシクルの形成によって調製される大単層ベシクル（large unilamellar vesicles）（ＬＵＶ）、安定プルリラメラベシクル（stable plurilamellar vesicles）（ＳＰＬＶ）又はオリゴラメラベシクル（oligolamellar vesicles）（ＯＬＶ）であってもよい。Methods in Biochemical Analysis, 33:337 (1988)を参照されたい。
【００４９】
任意の好適な溶媒をこれらの方法に使用することができる。当業者は所与の用途に好適な溶媒を容易に特定することができる。溶媒はＦＤＡに認可され得る溶媒であるのが好ましい。溶媒は有機溶媒又は無機溶媒とすることができる。一実施形態では、溶媒は水混和性溶媒である。別の実施形態では、溶媒は水又は水性緩衝液である。他の好適な溶媒としては、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）、メチルピロリドン、Ｎ−メチルピロリドン（ＮＭＰ）、アセトニトリル、アルコール、例えばエタノール（ＥｔＯＨ）、ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）、テトラヒドロフラン（ＴＨＦ）及びそれらの組合せが挙げられるが、これらに限定されない。概して、溶媒における薬理活性物質（例えば、アミノグリコシド等の抗生物質）濃度は約０．０１ｍｇ／ｍｌ〜２００ｍｇ／ｍｌである。好ましくは、薬理活性物質（例えば、アミノグリコシド等の抗生物質）濃度は約０．０５ｍｇ／ｍｌ〜約１００ｍｇ／ｍｌ、より好ましくは約０．１ｍｇ／ｍｌ〜２０ｍｇ／ｍｌである。
【００５０】
溶媒は、例えばリポソーム段階のリポソームの形成前及び／又はコクリエートの形成後に任意に除去することができる。任意の既知の溶媒除去法を用いることができる。例えば、溶媒はリポソーム懸濁液からタンジェンシャルフロー及び／又は濾過及び／又は透析によって、又はコクリエートから洗浄、濾過、遠心分離及び／又は透析によって除去することができる。コクリエートは、例えば最適にはカルシウム又は別のカチオンを含む緩衝液又は水を用いて洗浄することができる。
【００５１】
サイズ調整剤は、コクリエートの製造方法の間に導入することができる。本明細書で使用されるサイズ調整剤とは、コクリエートの粒子サイズを減少させる作用物質を指す。本明細書で使用される場合に、「粒子サイズ」という用語は、粒子の直径を指すか、又は粒子が球形ではない場合には、粒子の一方向の最長範囲を指す。コクリエートの粒子サイズは、サブミクロン領域の粒子サイズ分析器のような従来の方法を使用して測定することができる。或る特定の実施形態では、サイズ調整剤は、脂質アンカー型ポリヌクレオチド、脂質アンカー型糖（糖脂質）又は脂質アンカー型ポリペプチドである。他の実施形態では、サイズ調整剤は、胆汁酸塩、例えばオキシコール酸塩、コール酸塩、ケノデオキシコール酸塩、タウロコール酸塩、グリココール酸塩、タウロケノデオキシコール酸塩、グリコケノデオキシコール酸塩、デオキシコール酸塩又はリトコール酸塩である。胆汁酸塩は、胆汁酸とカチオン、通常はナトリウムとが化合したものである。胆汁酸は、主として哺乳動物の胆汁中に見られるステロイド酸であり、市販されている。
【００５２】
或る特定の実施形態では、サイズ調整剤を沈殿コクリエートの形成前に脂質又はリポソームに添加する。例えば、一実施形態では、サイズ調整剤をリポソーム懸濁液に導入し、続いてコクリエートをそれから形成する（例えば、カチオンの添加又は透析による）。代替的には、サイズ調整剤を薬理活性物質の添加前又は添加後に脂質溶液に導入することができる。
【００５３】
任意の好適な脂質をコクリエートの作製に使用することができる。一実施形態では、脂質は１つ以上の負に帯電した脂質を含む。本明細書で使用される場合、「負に帯電した脂質」という用語には、酸性、塩基性又は生理的ｐＨの水溶液中で形式負電荷を有する頭部基を有する脂質が含まれ、双性イオン頭部基を有する脂質も含まれる。
【００５４】
コクリエートは、負に帯電していない脂質（例えば、陽性及び／又は中性脂質）を含んでいてもよい。コクリエートは相当量の負に帯電した脂質を含むのが好ましい。或る特定の実施形態では、脂質の大部分が負に帯電している。一実施形態では、脂質は少なくとも５０％の負に帯電した脂質を含む脂質の混合物である。別の実施形態では、脂質は少なくとも７５％の負に帯電した脂質を含む。他の実施形態では、脂質は少なくとも８５％、９０％、９５％又は９８％の負に帯電した脂質を含む。更に他の実施形態では、負に帯電した脂質は、コクリエート中の全脂質の３０％〜７０％、３５％〜７０％、４０％〜７０％、４５％〜６５％、４５％〜７０％、４０％〜６０％、５０％〜６０％、４５％〜５５％、４５％〜６５％又は４５％〜５０％を構成する。
【００５５】
負に帯電した脂質として、ダイズ由来の脂質、他のマメ科植物由来の脂質、卵由来の脂質、ウシ由来の脂質又はブタ由来の脂質を挙げることができる。脂質がダイズ由来のリン脂質等のリン脂質を含むのが好ましい。負に帯電した脂質として、ホスファチジルセリン（ＰＳ）、ジオレオイルホスファチジルセリン（ＤＯＰＳ）、ホスファチジン酸（ＰＡ）、ホスファチジルイノシトール（ＰＩ）及び／又はホスファチジルグリセロール（ＰＧ）、及び／又はこれらの脂質の１つ以上と他の脂質との混合物を挙げることができる。付加的又は代替的には、脂質として、ホスファチジルコリン（ＰＣ）、ホスファチジルエタノールアミン（ＰＥ）、ジホスファチジルグリセロール（正：diphosphatidylglycerol）（ＤＰＧ）、ジオレオイルホスファチジン酸（ＤＯＰＡ）、ジステアロイルホスファチジルセリン（ＤＳＰＳ）、ジミリストイルホスファチジルセリン（ＤＭＰＳ）、ジパルミトイルホスファチジルグリセロール（ＤＰＰＧ）等を挙げることができる。一実施形態では、ホスファチジルセリンは、ダイズホスファチジルセリンである。別の実施形態では、ホスファチジルセリンは、卵由来又はウシ由来のホスファチジルセリンである。
【００５６】
３．  抗菌剤
本明細書に記載される方法で使用するためのコクリエートは、抗菌剤（本明細書では、抗生物質とも呼ばれる）と会合するか、又は抗菌剤を負荷するものである。例えば、抗菌剤として下記の１つ以上を挙げることができるが、これらに限定されない：タンパク質合成阻害剤；３０Ｓ開始阻害剤、例えばアミノグリコシド系抗生物質（ストレプトマイシン、ジヒドロストレプトマイシン、ネオマイシン、フラミセチン、パロモマイシン、リボスタマイシン、カナマイシン、アミカシン、アルベカシン、ベカナマイシン、ジベカシン、トブラマイシン、スペクチノマイシン、ヒグロマイシンＢ、パロモマイシン、カプレオマイシン、ゲンタマイシン、ネチルマイシン、シソマイシン、イセパマイシン、ベルダマイシン、及びアストロマイシンを含む）；３０Ｓ  ｔＲＮＡ結合抗生物質、例えばテトラサイクリン、グリシルサイクリン、又はフルオロサイクリン（ドキシサイクリン、クロルテトラサイクリン、クロモサイクリン、デメクロサイクリン、リメサイクリン、メクロサイクリン、メタサイクリン、ミノサイクリン、オキシテトラサイクリン、ペニメピサイクリン、ロリテトラサイクリン、テトラサイクリン、チゲサイクリン、又はエラバサイクリンを含む）；５０Ｓ開始阻害剤、例えばオキサゾリジノン系抗生物質（エペレゾリド、リネゾリド、ポシゾリド、ラデゾリド、ランベゾリド、ステゾリド、及びテジゾリドを含む）；ペプチジルトランスフェラーゼ、例えばアンフェニコール又はプロイロムチリン（クロラムフェニコール、アジダムフェニコール、チアムフェニコール、フロルフェニコール、レタパムリン、チアムリン、及びバルネムリンを含む）；ペプチド転移／転位抗生物質、例えばマイクライド、ケトライド、フルオロケトライド、リンコサミド又はストレプトグラミン（アジスロマイシン、クラリスロマイシン、ジリスロマイシン、エリスロマイシン、フルリスロマイシン、ジョサマイシン、ミデカマイシン、ミオカマイシン、オレアンドマイシン、ロキタマイシン、ロキシスロマイシン、スピラマイシン、トロレアンドマイシン、タイロシン、テリスロマイシン、セスロマイシン、ソリスロマイシン、フィダキソマイシン、カルボマイシンＡ、キタサマイシン、クリンダマイシン、リンコマイシン、ピルリマイシン、プリスチナマイシン、キヌプリスチン、ダルホプリスチン、及びバージニアマイシンを含む）；伸長因子阻害剤、例えばステロイド系抗菌薬（フシジン酸を含む）；ペプチドグリカン合成／トランスペプチダーゼ阻害剤、例えばペニシリン（天然ペニシリンであるペニシリンＧ及びペニシリンＶ；β−ラクタマーゼ耐性ペニシリンであるメチシリン、ナフシリン、オキサシリン、クロキサシリン及びジクロキサシリン；アミノペニシリンであるアンピシリン、アモキシシリン、ピバンピシリン、ヘタシリン、バカンピシリン、メタンピシリン、タランピシリン及びエピシリン；カルボキシペニシリンであるカルベニシリン及びチカルシリン；ウレイドペニシリンであるメズロシリン及びピペラシリンを含む）、又はセファロスポリン（セファセトリル、セファドロキシル、セファレキシン、セファログリシン、セファロニウム、セファロリジン、セファロチン、セファピリン、セファトリジ��、セファザフルール、セファゼドン、セファゾリン、セフラジン、セフロキサジン、セフテゾール、セファクロル、セフォニシド、セフプロジル、セフロキシム、セフゾナム、セフメタゾール、セフォテタン、セフォキシチン、ロラカルベフ、セフブペラゾン、セフメタゾール、セフミノックス、セフォテタン、セフォキシチン、セフォチアム、セフカペン、セフダロキシム、セフジニル、セフジトレン、セフェタメット、セフィキシム、セフメノキシム、セフォジジム、セフォタキシム、セフォベシン、セフピミゾール、セフポドキシム、セフテラム、セフタメレ（ceftamere）、セフチブテン、セフチオフル、セフチオレン、セフチゾキシム、セフトリアキソン、セフォペラゾン、セフタジジム、ラタモキセフ、セフクリジン、セフェピム、セフルプレナム、セフォセリス、セフォゾプラン、セフピロム、セフキノム、フロモキセフ、セフトビプロール、セフタロリン、セフトロザン、セファロラム、セファパロール、セフカネル、セフェドロロール、セフェムピドン、セフェトリゾール、セフィビトリル、セフマチレン、セフメピジウム、セフォキサゾール、セフロチル、セフスミド、セフチオキシド、セフラセチム、及びニトロセフィンを含む）；ペネム又はカルバペネム（ファロペネム、エルタペネム、ドリペネム、イミペネム、メロペネム、ビアペネム、及びパニペネムを含む）；モノバクタム（アズトレオナム、チゲモナム、カルモナム、ノカルジシンＡを含む）；糖ペプチド系抗生物質（バンコマイシン、オリタバンシン、テラバンシン、テイコプラニン、ダルババンシン、及びラモプラニンを含む）；β−ラクタマーゼ阻害剤（クラブラン酸塩、スルバクタム、タゾバクタム、及びアビバクタムを含む）、他の抗生物質（ホスホマイシン、シクロセリン、バシトラシン、コリスチン、ポリミキシンＢ、ダプトマイシン、リゾチーム、グラミシジン、イソニアジド、又はテイクソバクチンを含む）。
【００５７】
或る特定の実施形態では、抗菌剤は、アミノグリコシドであり、限定されるものではないが、ストレプトマイシン、ジヒドロストレプトマイシン、ネオマイシン、フラミセチン、パロモマイシン、リボスタマイシン、カナマイシン、アミカシン、アルベカシン、ベカナマイシン、ジベカシン、トブラマイシン、スペクチノマイシン、ヒグロマイシンＢ、パロモマイシン、カプレオマイシン、ゲンタマイシン、ネチルマイシン、シソマイシン、イセパマイシン、ベルダマイシン及びアストロマイシンを含むアミノグリコシドである。一実施形態では、アミノグリコシドは、アミカシンである。
【００５８】
４．  医薬組成物
本明細書に記載のコクリエートは、医薬組成物として調製することができる。本明細書に開示される医薬組成物の好適な調製形態としては、例えば錠剤、カプセル、軟カプセル、顆粒、粉末、懸濁液、エマルション、マイクロエマルション、ナノエマルション、単位投薬形態、リング、フィルム、坐剤、溶液、クリーム、シロップ、経皮パッチ、軟膏及びゲルが挙げられる。
【００５９】
医薬組成物は他の薬学的に許容可能な賦形剤、例えば様々なｐＨ及びイオン強度の緩衝液（例えばトリス−ＨＣｌ、酢酸、リン酸）、表面への吸収を阻止するアルブミン又はゼラチン等の添加剤、プロテアーゼ阻害剤、透過促進剤、可溶化剤（例えばグリセロール、ポリエチレングリセロール）、酸化防止剤（例えばアスコルビン酸、メタ重亜硫酸ナトリウム、ブチルヒドロキシアニソール）、安定剤（例えばヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース）、増粘剤（例えばカルボマー、コロイド状二酸化ケイ素、エチルセルロース、グアーガム）、甘味料（例えばアスパルテーム、クエン酸）、保存料（例えばチメロサール、ベンジルアルコール、パラベン）、流動助剤（例えばコロイド状二酸化ケイ素）、可塑剤（例えばフタル酸ジエチル、クエン酸トリエチル）、乳化剤（例えばカルボマー、ヒドロキシプロピルセルロース、ラウリル硫酸ナトリウム）、ポリマーコーティング（例えば、ポロキサマー又はポロキサミン、ヒプロメロース酢酸エステルコハク酸エステル）、コーティング及びフィルム形成剤（例えば、エチルセルロース、アクリレート、ポリメタクリレート、ヒプロメロース酢酸エステルコハク酸エステル）、アジュバント、液体配合物の薬学的に許容可能な担体、例えば水性（生理食塩水及び緩衝媒体を含む水、アルコール溶液／水溶液、エマルション又は懸濁液）又は非水性（例えばプロピレングリコール、ポリエチレングリコール、及びオレイン酸エチル等の注射用有機エステル）溶液、懸濁液、エマルション又は油、並びに塩化ナトリウム溶液、リンガーデキストロース、デキストロース及び塩化ナトリウム、乳酸加リンガー液及び固定油を含むが、これらに限定されない非経口ビヒクル（皮下注射、静脈内注射、動脈内注射又は筋肉内注射用）を含み得る。
【００６０】
或る特定の実施形態では、上記医薬組成物は、塩、例えばＮａＣｌ又は胆汁酸塩、例えばオキシコール酸塩、コール酸塩、ケノデオキシコール酸塩、タウロコール酸塩、グリココール酸塩、タウロケノデオキシコール酸塩、グリコケノデオキシコール酸塩、デオキシコール酸塩又はリトコール酸塩を含む。胆汁酸塩は、胆汁酸とカチオン、通常はナトリウムとが化合したものである。胆汁酸は、主として哺乳動物の胆汁中に見られるステロイド酸であり、市販されている。一実施形態では、胆汁酸塩は、コール酸塩を含む。別の実施形態では、胆汁酸塩は、デオキシコール酸塩を含む。更に別の実施形態では、胆汁酸塩は、コール酸塩及びデオキシコール酸塩を含む。別の実施形態では、胆汁酸塩は、コール酸塩及びデオキシコール酸塩からなる。
【００６１】
或る特定の実施形態では、ＮａＣｌの濃度は、１ｍＭ〜１Ｍ、１ｍＭ〜０．５Ｍ、１ｍＭ〜０．１Ｍ、１ｍＭ〜５０ｍＭ、１０ｍＭ〜１００ｍＭ、１０ｍＭ〜５０ｍＭ、０．１Ｍ〜１Ｍ、０．１Ｍ〜０．５Ｍ、又は０．５Ｍ〜１Ｍである。或る特定の実施形態では、胆汁酸塩の濃度は、１ｍＭ〜１００ｍＭ、１ｍＭ〜５０ｍＭ、１ｍＭ〜２５ｍＭ、１ｍＭ〜１０ｍＭ、１ｍＭ〜５ｍＭ、０．１ｍＭ〜５ｍＭ、０．１ｍＭ〜１ｍＭ、又は０．１ｍＭ〜０．５ｍＭの胆汁酸塩である。
【００６２】
これらの賦形剤は例として提示され、本明細書に挙げられるものと同じ化学的特徴をもたらし得る他の又は異なる賦形剤が存在することが当業者には既知である。
【００６３】
５．  投与量及び投与
本明細書に開示されるコクリエートを含む医薬組成物は、その意図する投与経路に適合するように配合される。投与を達成する方法は当業者に既知である。この方法としては、例えば静脈内、血管内、動脈内、皮下、筋肉内、腹腔内、脳室内、硬膜外（intraepidural）等の非経口経路による注射、及び経口、経鼻、眼、直腸又は局所経路が挙げられる。典型的には、コクリエートを例えば懸濁液、錠剤、カプセル、ソフトジェル又は他の経口投薬形態を投与することによって経口投与する。
【００６４】
或る特定の実施形態では、抗生物質（例えば、アミノグリコシド、例えばアミカシン）は、５ｍｇ／ｋｇから２０ｍｇ／ｋｇの間、５ｍｇ／ｋｇから１０ｍｇ／ｋｇの間、５ｍｇ／ｋｇから１５ｍｇ／ｋｇの間、１０ｍｇ／ｋｇから１５ｍｇ／ｋｇの間、１０ｍｇ／ｋｇから１３ｍｇ／ｋｇの間、１０ｍｇ／ｋｇから２０ｍｇ／ｋｇの間、５ｍｇ／ｋｇから２５ｍｇ／ｋｇの間、又は１ｍｇ／ｋｇから３０ｍｇ／ｋｇの間の投与量で投与される。代替的に、抗生物質（例えば、アミノグリコシド、例えばアミカシン）は、約２００ｍｇ／日〜１０００ｍｇ／日、４００ｍｇ／日〜１０００ｍｇ／日、２００ｍｇ／日〜８００ｍｇ／日、３００ｍｇ／日〜８００ｍｇ／日、４００ｍｇ／日〜８００ｍｇ／日、５００ｍｇ／日〜７００ｍｇ／日、２００ｍｇ／日〜２０００ｍｇ／日、１００ｍｇ／日〜４０００ｍｇ／日、１００ｍｇ／日〜６００ｍｇ／日、２００ｍｇ／日〜６００ｍｇ／日、４００ｍｇ／日〜６００ｍｇ／日、又は３００ｍｇ／日〜７００ｍｇ／日（これには、限定されるものではないが、約４００ｍｇ、５００ｍｇ、６００ｍｇ、７００ｍｇ、８００ｍｇ、９００ｍｇ、１０００ｍｇ、１５００ｍｇ、２０００ｍｇ、２５００ｍｇ、３０００ｍｇ、３５００ｍｇ、又は４０００ｍｇが含まれる）の固定投与量で投与することができる。
【００６５】
毒性がより低いため、コクリエート化された抗生物質は、静脈内抗生物質と比較して、より高い頻度で、又はより長い期間にわたって投与することができる。或る特定の実施形態では、コクリエート化された抗生物質は、１日につき１回、１日につき２回、１日につき３回、又は１日につき４回投与され得る。別の実施形態では、コクリエート製剤は、１週間につき１回、１週間につき２回、１週間につき３回、又は１週間につき４回投与される。一実施形態では、コクリエート化された抗生物質は、１週間に２回〜３回投与され得る。他の実施形態では、コクリエート製剤は、少なくとも１週間、２週間、３週間、４週間、５週間、６週間、７週間、８週間、９週間、１０週間、１１週間、又は１２週間にわたって毎日投与される。別の実施形態では、コクリエート製剤は、少なくとも３ヶ月、少なくとも４ヶ月、又は少なくとも６ヶ月にわたって毎日投与される。
【００６６】
６．  治療方法
本明細書に記載されるコクリエートは、マイコバクテリア感染症を伴う被験体を治療する方法で使用することができる。一実施形態は、マイコバクテリウム・アビウム感染症を伴う被験体を治療する方法であって、該被験体に治療的有効量の、抗生物質、例えばアミノグリコシド、例えばアミカシンを含むアミノグリコシドを含むコクリエートを含む製剤を経口投与することを含む、方法に関する。或る特定の実施形態では、被験体は、肺疾患を有する。また、該方法は、その他のマイコバクテリア感染症を治療するために使用することもできる。
【００６７】
一態様は、播種性の非結核性マイコバクテリア（ＮＴＭ）疾患を伴う被験体を治療する方法であって、該被験体に治療的有効量の、抗生物質、例えばアミノグリコシド系抗生物質（例えば、アミカシン）を含むコクリエートを含む製剤を経口投与することを含む、方法に関する。典型的には、播種性ＮＴＭ疾患を伴う被験体は、免疫無防備状態にある患者、例えばＨＩＶに感染した患者である。
【００６８】
別の態様は、マイコバクテリウム・レプレ感染症又はマイコバクテリウム・レプロマトシス感染症を伴う被験体を治療する方法であって、該被験体に治療的有効量の、抗生物質、例えばアミノグリコシド系抗生物質（例えば、アミカシン）を含むコクリエートを含む製剤を経口投与することを含む、方法に関する。
【００６９】
別の態様は、マイコバクテリア肺疾患を伴う被験体を治療する方法であって、該被験体に治療的有効量の、抗生物質、例えばアミノグリコシド系抗生物質（例えば、アミカシン）を含むコクリエートを含む製剤を経口投与することを含む、方法に関する。一実施形態では、マイコバクテリア肺疾患は、肺結核である。別の実施形態では、マイコバクテリア肺疾患は、非結核性マイコバクテリア（ＮＴＭ）肺疾患である。
【００７０】
それ故、一実施形態は、肺結核を伴う被験体を治療する方法であって、該被験体に治療的有効量の、抗生物質、例えばアミノグリコシド系抗生物質（例えば、アミカシン）を含むコクリエートを含む製剤を経口投与することを含む、方法に関する。典型的には、肺結核は、マイコバクテリウム・ツベルクローシス、マイコバクテリウム・ボビス、マイコバクテリウム・アフリカヌム、マイコバクテリウム・ミクロティ又はマイコバクテリウム・カネッティによって引き起こされる。
【００７１】
別の実施形態は、非結核性マイコバクテリア（ＮＴＭ）肺疾患を伴う被験体を治療する方法であって、該被験体に治療的有効量の、抗生物質、例えばアミノグリコシド、例えばアミカシンを含むアミノグリコシドを含むコクリエートを含む製剤を経口投与することを含む、方法に関する。或る特定の実施形態では、ＮＴＭは、マイコバクテリウム・アビウムコンプレックス、マイコバクテリウム・カンサシイ、マイコバクテリウム・アブセサス、マイコバクテリウム・キセノピ、マイコバクテリウム・アビウム及びマイコバクテリウム・イントラセルラーエからなる群から選択される。典型的には、ＮＴＭは、マイコバクテリウム・アビウムコンプレックスを少なくとも含む。
【００７２】
或る特定の実施形態では、上記治療方法は、細菌負荷を、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％減少させる。或る特定の実施形態では、該方法は、細菌負荷を、少なくとも９５％減少させる。或る特定の実施形態では、該方法は、細菌負荷を、少なくとも９８％減少させる。一実施形態では、該方法は、細菌負荷を、少なくとも４週間の治療後に、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％減少させる。或る特定の実施形態では、該方法は、細菌負荷を、少なくとも４週間の治療後に、少なくとも９５％減少させる。或る特定の実施形態では、該方法は、細菌負荷を、少なくとも４週間の治療後に、少なくとも９８％減少させる。
【００７３】
更に別の態様は、非結核性マイコバクテリア（ＮＴＭ）疾患を伴う被験体を治療する方法であって、該被験体に治療的有効量の、抗生物質、例えばアミノグリコシド系抗生物質（例えば、アミカシン）を含むコクリエートを含む製剤を経口投与することを含み、該治療方法が、細菌負荷を、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％減少させる、方法に関する。或る特定の実施形態では、該方法は、細菌負荷を、少なくとも９５％減少させる。或る特定の実施形態では、該方法は、細菌負荷を、少なくとも９８％減少させる。一実施形態では、該方法は、細菌負荷を、少なくとも４週間の治療後に、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％減少させる。或る特定の実施形態では、該方法は、細菌負荷を、少なくとも４週間の治療後に、少なくとも９５％減少させる。或る特定の実施形態では、該方法は、細菌負荷を、少なくとも４週間の治療後に、少なくとも９８％減少させる。或る特定の実施形態では、ＮＴＭ疾患は、ＮＴＭ肺疾患である。他の実施形態では、ＮＴＭ疾患は、播種性ＮＴＭ疾患である。
【００７４】
或る特定の実施形態では、被験体は、先行する治療過程の後で、かつ抗生物質を含むコクリエートを投与する前に治療不応性肺疾患を有する。本明細書で使用される場合、「治療不応性肺疾患」とは、適切な療法に（微生物学的に、臨床的に、又はＸ線撮影により測定される）応答を示さない肺疾患を指す。或る特定の実施形態では、該被験体は、少なくとも１ヶ月、２ヶ月、３ヶ月、４ヶ月、５ヶ月、６ヶ月、７ヶ月、８ヶ月、９ヶ月、１０ヶ月、１１ヶ月、又は１２ヶ月の先行する治療過程の後で、かつ抗生物質を含むコクリエートを投与する前に治療不応性肺疾患を有する。典型的には、該被験体は、少なくとも６ヶ月の先行する治療過程の後で、かつ抗生物質を含むコクリエートを投与する前に治療不応性肺疾患を有する。先行する治療過程は、マイコバクテリア感染症又はＮＴＭ肺疾患を治療するために使用されるあらゆる療法であってよい。また、治療不応性肺疾患は、痰が１２ヶ月の適切な療法の後で抗酸菌培養陰性に変わる肺疾患を指すこともある。
【００７５】
典型的には、ＮＴＭ肺疾患のための第一選択の又は標準的な治療過程は、エタンブトール及びマクロライド、例えばクラリスロマイシン又はアジスロマイシンによる多剤療法を含む。該多剤療法は、リファマイシン又はリファンピンを更に含んでよい。より進行した疾患又は治療不応性疾患のためには、その多剤レジメンに、静脈内のストレプトマイシン又はアミカシンを加えてよい。
【００７６】
典型的には、結節／気管支拡張型の疾患のための第一選択の又は標準的な治療過程は、典型的には、マクロライド（例えば、クラリスロマイシン１０００ｍｇを１週間に３回又はアジスロマイシン５００ｍｇ〜６００ｍｇを１週間に３回）、エタンブトール（２５ｍｇ／ｋｇを１週間に３回）及びリファンピン（６００ｍｇを１週間に３回）を含む。
【００７７】
典型的には、空洞型の疾患のための第一選択の又は標準的な治療過程は、典型的には、マクロライド（例えば、クラリスロマイシンを毎日５００ｍｇ〜１０００ｍｇ、又はアジスロマイシンを毎日２５０ｍｇ〜３００ｍｇ）、エタンブトール（毎日１５ｍｇ／ｋｇ）、リファンピン（毎日４５０ｍｇ〜６００ｍｇ）を含み、任意に、典型的には治療の最初の２ヶ月から３ヶ月にわたって静脈内ストレプトマイシン又はアミカシン（例えば、２５ｍｇ／ｋｇを１週間に２回〜３回）を含む。
【００７８】
典型的には、進行型若しくは重度の又は先行して治療した疾患のための第一選択の又は標準的な治療過程は、典型的には、マクロライド（例えば、クラリスロマイシンを毎日５００ｍｇ〜１０００ｍｇ、又はアジスロマイシンを毎日２５０ｍｇ〜３００ｍｇ）、エタンブトール（毎日１５ｍｇ／ｋｇ）、リファブチン（毎日１５０ｍｇ〜３００ｍｇ）又はリファンピン（毎日４５０ｍｇ〜６００ｍｇ）、及び典型的には治療の最初の２ヶ月から３ヶ月にわたって静脈内ストレプトマイシン又はアミカシン（例えば、２５ｍｇ／ｋｇを１週間に２回〜３回）を含む。
【００７９】
典型的には、肺結核のための第一選択の又は標準的な治療過程は、イソニアジド、リファンピン、リファブチン、リファペンチン、ピラジナミド及びエタンブトールの１つ以上を含み、そこに、静脈内又は筋内のストレプトマイシン、アミカシン、カナマイシン及びカプレオマイシンを補ってよい。
【００８０】
或る特定の実施形態では、抗生物質（例えば、アミノグリコシド、例えばアミカシン）を含むコクリエートは、単剤療法として投与される。他の実施形態では、抗生物質（例えば、アミノグリコシド、例えばアミカシン）を含むコクリエートは、多剤療法、例えばＮＴＭ肺疾患又は肺結核を治療するための標準的な治療過程、例えば本明細書に記載される標準的な治療過程を含む多剤療法の一部として投与される。
【００８１】
或る特定の実施形態では、被験体は、先行する治療過程の後で、かつ抗生物質を含むコクリエートを投与する前に再発している。本明細書で使用される場合、「再発」とは、肺疾患の再発生を指す。或る特定の実施形態では、該被験体は、少なくとも１ヶ月、２ヶ月、３ヶ月、４ヶ月、５ヶ月、６ヶ月、７ヶ月、８ヶ月、９ヶ月、１０ヶ月、１１ヶ月、又は１２ヶ月の先行する治療過程の後で、かつ抗生物質を含むコクリエートを投与する前に再発している。先行する治療過程は、マイコバクテリア感染症、ＮＴＭ肺疾患、ＮＴＭ播種性疾患、肺結核又は癩病を治療するために使用される、上記の標準的な治療過程及び当該技術分野で既知の治療過程を含むあらゆる療法であってよい。
【００８２】
被験体は、ヒト又は非ヒト哺乳動物、例えばイヌ、ネコ又は家畜である。典型的には、被験体は、ヒトである。
【００８３】
７．  低減された毒性
コクリエート化されたアミノグリコシド類、例えばアミカシンの経口投与は、コクリエート化されていないアミノグリコシド類の非経口投与と比べて低減された毒性を示す。非経口のコクリエート化されていないアミノグリコシド類で処置された患者は、それらの使用に付随する潜在的な耳毒性及び腎毒性のため緻密な臨床観察下に置かなければならない。１４日より長い治療期間にわたるコクリエート化されていないアミノグリコシド類の非経口投与の安全性は確立されていない。
【００８４】
コクリエート化されていないアミノグリコシド類の非経口投与の場合には、前庭毒性及び永続的な両側聴器毒性として顕れる神経毒性は、腎障害が既に存在する患者並びに推奨されるよりも高い用量で及び／又は長い期間にわたって処置された正常な腎機能を有する患者において生じ得る。アミノグリコシド誘発性の耳毒性の危険性は、腎障害を有する患者ではより大きい。高音域難聴は、通常は最初に生じ、聴力測定試験によってしか見つけることができない。めまいが生ずることがあり、それは前庭損傷の徴候である場合がある。神経毒性のその他の兆候には、しびれ、皮膚刺痛、筋攣縮及び痙攣が含まれ得る。アミノグリコシド類による難聴の危険性は、高いピーク血清濃度又は高いトラフ血清濃度のいずれかへの曝露の程度に伴って増加する。蝸牛障害を発症している患者は、療法の間に、第八神経毒性の発生を知らせる症候を有さないことがあり、薬剤が中断された後に全体的又は部分的な不可逆的な両側性難聴が生ずることがある。アミノグリコシド誘発性の耳毒性は、通常は不可逆的である。アミノグリコシド類はまた、潜在的に腎毒性でもある。腎毒性の危険性は、腎機能障害を有する患者及び高用量又は長期療法を受けた患者ではより大きい。静脈内アミカシンの無有害作用量（ＮＯＡＥＬ）は、１００ｍｇ／ｋｇである。
【００８５】
コクリエート製剤の一部としてのアミノグリコシド類の投与は、アミノグリコシド類に付随する毒性を低減し、より高い用量のアミノグリコシド類の投与を可能にする。ラットにおけるコクリエート化されたアミカシンによる７日間の治療レジメンのＮＯＡＥＬは、２００ｍｇ／ｋｇ以上であり、静脈内アミカシンの水準の２倍である（図３）。或る特定の実施形態では、投与されたコクリエート化された抗生物質（例えば、アミノグリコシド、例えばアミカシン）のＮＯＡＥＬは、１００ｍｇ／ｋｇ、１２５ｍｇ／ｋｇ、１５０ｍｇ／ｋｇ、１７５ｍｇ／ｋｇ、２００ｍｇ／ｋｇ、２５０ｍｇ／ｋｇ、３００ｍｇ／ｋｇ、４００ｍｇ／ｋｇ、又は５００ｍｇ／ｋｇより高い。
【００８６】
毒性にかかる問題のため、ヒトにおいては、アミカシンのピーク（Ｃｍａｘ）血漿レベルは、３５μｇ／ｍＬを超過すべきではなく、トラフ血漿レベルは、１０μｇ／ｍＬを超過すべきではない。或る特定の実施形態では、投与されたコクリエート化された抗生物質（例えば、アミノグリコシド、例えばアミカシン）のＣｍａｘは、約１００ｎｇ／ｍＬから５００ｎｇ／ｍＬの間（０．１μｇ／ｍＬから０．５μｇ／ｍＬの間）又は約１００ｎｇ／ｍＬから４００ｎｇ／ｍＬの間（０．１μｇ／ｍＬから０．４μｇ／ｍＬの間）である。コクリエート化された抗生物質、例えばアミカシンについてのより低い毒性及びより低いＣｍａｘ値により、該抗生物質を、より低い用量で改善された効力及び低減された毒性でもって経口的に送達することが可能となる。その一方で、より低い毒性のため、コクリエート化された抗生物質は、より高頻度に、及び／又はより高い用量で、有害な予後の危険性を殆ど伴わずに投与することができる。
【実施例】
【００８７】
以下に提示した例は単に例示を目的とするものである。当業者は、本明細書に記載の好適な固体分散体形態を生成するために適切な方法及び装置を容易に決定することが可能である。
【００８８】
実施例１：マイコバクテリアのバイオフィルムのコクリエート処置
システム：Ａ５４９肺胞上皮細胞を、トランスウェルシステム中で培養した。Ａ５４９細胞は６日後に極性化され、完全性を備えた。細菌をその細胞の上部（頂端面）に接種した。バイオフィルムを７日間形成させた。
【００８９】
細菌：マイコバクテリウム・アビウムコンプレックス（ＭＡＣ）１０４（１０５個の細菌）感染接種物
【００９０】
処置：０．１ｍｌの種々の処置剤をボトムウェルに毎日加えた。細胞の側底面（底部）を、ボトムウェル中に存在する組織培養培地中に浸した。２つの異なる実験で、１実験群当たりに３つのレプリカを試験した。
【００９１】
回収：バイオフィルム及び上皮細胞を溶解させ、希釈し、７Ｈ１０上にプレーティングした。
【００９２】
【表１】
2018516866.tif 000003
【００９３】
結論：マイコバクテリウム・アビウムのバイオフィルムは、肺感染症において生じる。空のコクリエートは、バイオフィルム中のマイコバクテリウム・アビウムに対して活性を示さなかったが、コクリエートの２つの調製物（ナトリウム塩及び胆汁酸塩）は、そのモデルにおいてマイコバクテリウム・アビウムに対してかなりの活性を示した（図１）。コクリエートの抗菌活性は、遊離のアミカシンの活性と同等であり（図１）、これは、感染した細胞が存在しない（全体の感染の割合が低い）場合に、２つの調製物が、同等の効果を発揮することを示唆している。コクリエート化されたアミカシンの経口投与は、バイオフィルム中で抗マイコバクテリウム・アビウム活性を示す。
【００９４】
実施例２：肺疾患を伴うマウスにおけるコクリエート処置
実験モデル：Ｃ５７  ＢＬ／６マウスを、８．３×１０６個のマイコバクテリウム・アビウムコンプレックス（ＭＡＣ）で鼻腔内感染させ、７日間にわたって感染を確立させた。次いで、基準の細菌負荷を１０匹のマウスで測定し、処置プロトコルを開始した。マウスを、４週間にわたって毎日処置した（経口的に、又は遊離のアミカシンの腹腔内注射により）。マウスを回収し、肺及び脾臓を取り出し、ホモジナイズし、そしてプレーティングすることで、細菌負荷を測定した。実験群にはそれぞれ１２匹のマウスが含まれていた。
【００９５】
細菌：８．３×１０６個のＭＡＣ  １０４／ＨＢＳＳ
【００９６】
結果（細菌負荷）：
【００９７】
【表２】
2018516866.tif 000004
【００９８】
遊離のアミカシン及びコクリエートのアミカシン調製物は、マイコバクテリウム・アビウムコンプレックスによる肺感染症の治療に有効であった（図２）。コクリエートのアミカシン１００ｍｇ／ｋｇ  ０．６６Ｍ  ＮａＣｌ、コクリエートのアミカシン１００ｍｇ／ｋｇ  ２ｍＭ胆汁酸塩（未洗浄）及びコクリエートのアミカシン１００ｍｇ／ｋｇ（洗浄されてＣａ++が加わる）は、４週間で非常に類似した低減されたＣＦＵ負荷（９．１×１０３〜９．８×１０３）を有しており、それらは全て、空のコクリエート及び基準の感染よりも有意に２桁低かった。遊離の１００ｍｇ／ｋｇ  ＩＰ  ＡＭＫ群は、ＣＡＭＫ処置群で観察されるＣＦＵ負荷のほぼ半分（５．６×１０３）の残留ＣＦＵ負荷を有していた。観察された効果は、経口投与されるコクリエート調製物及び腹腔内（ＩＰ）投与される遊離のアミカシンの全てについて殺菌性であった。驚くべきことに、経口のＣＡＭＫを播種性マイコバクテリウム・アビウム感染症を伴うマウスの処置に使用した場合に、経口のＣＡＭＫは細菌負荷を、４週間の毎日の治療後に、わずか７６．３％（肝臓）及び８６．７％（脾臓）の減少と比較して、９８％減少させた（図２）。上記のように、コクリエート化の効力は、ＣＡＭＫ処置群については約７５％であり、それは１００ｍｇ／ｋｇ／日の用量を７５ｍｇ／ｋｇ／日に正規化するものであった。
【００９９】
組織病理学的な結果は、ＣＡＭＫ及び遊離のＩＰ  ＡＭＫ調製物の間で同等の非毒性を示唆するものであった。全体的に、毒性は観察されなかった（腎臓の病理組織診断を含む）。
【０１００】
結論として、Ｃ５７  ＢＬ／６マウス肺感染症モデルにおけるＭＡＣに対するｉｎ  ｖｉｖｏ抗感染性実験は、２ｍＭの胆汁酸塩調製物及び高塩濃度の０．６６のＮａＣｌ製剤の両方が、遊離の１００ｍｇ／ｋｇ  ＩＰ  ＡＭＫ製剤に匹敵する効力を有していたことを示唆している。組織病理学的な結果は、胆汁酸塩又は高塩濃度の０．６６ＭのＮａＣｌで製造されたＣＡＭＫの間で同等の非毒性を示唆するものであった。全体的に、毒性は観察されなかった（腎臓の病理組織診断を含む）。
【０１０１】
実施例３：コクリエート化されたアミカシンのｉｎ  ｖｉｖｏ毒性プロファイル
アミカシン（ＡＭＫ）は、通常は非経口的に投与される広域スペクトルのアミノグリコシドである。ＡＭＫでの処置は、しばしば耳毒性及び腎毒性を伴い、したがって、血中レベルの慎重な監視が必要とされる。ＡＭＫの投与及び毒性に付随する問題を克服するために、経口送達のためにコクリエート製剤（ＣＡＭＫ）が開発された。
【０１０２】
ＣＡＭＫの毒性を評価するために、雄及び雌のスプラーグドーリーラット（５匹／性別／群）に、０．６６ＭのＮａＣｌ中、１ｍＭの胆汁酸塩中、又は２ｍＭの胆汁酸塩中のＣＡＭＫを５０ｍｇ／ｋｇ／日又は２００ｍｇ／ｋｇ／日の経口用量で７日間にわたって投与した。遊離のＡＭＫは、経口的に２００ｍｇ／ｋｇ／日で、そして静脈内（ｉｖ）で５０ｍｇ／ｋｇ／日で投与した。ラットは、８日目に安楽死させた。評価されたパラメータは、死亡率／罹患率、臨床的観察、体重、血漿薬剤レベル、毒物動態学的分析、臨床病理診断、剖検観察、臓器重量及び病理組織診断を含む。
【０１０３】
全ての動物が生き延び、それらは計画屠殺された。糞便の染み及び軟便が主に雄に見られる以外は、治療期間の間に、試験物に関連した有意な臨床的観察は存在しなかった。ＣＡＭＫ処置群においては、有意な体重変化は存在しなかった。
【０１０４】
経口処置群のいずれにおいても、アミカシン製剤での処置を原因とする血液学的パラメータの変化は確認されなかった。さらに、骨髄又は脾臓における微視的な変化は認められなかった。
【０１０５】
一般的なアミカシンによる５０ｍｇ／ｋｇでの静脈内（ｉｖ）処置は、ＲＢＣ及びＨＧＢの減少をもたらし、それに伴ってＭＣＨＣが減少するとともに、雄では、ＲＥＷ、ＲＥＴ及びＲＥＡが増加し、雌では、ＭＣＨ、ＲＤＷ、ＲＥＴ及びＲＥＡが減少した。これらの変化は、代償性赤血球生成の現れかもしれないが、しかしまた、微視的には骨髄に直接的な作用は認められなかった。
【０１０６】
コレステロール、トリグリセリド、総タンパク質及びグロブリンの僅かな増大が、アミカシンで処置された群の幾つかにおいて散発的に観察された。これらの変化は一般に小さく、明らかに用量に関連するものではなかった。これらのレベルの幾つかでの変化は、摂食量の変化と関連するかもしれないが、群間に体重差がないことは、この仮説の反証となる。これらの変化は、肝臓における僅かな変化に関連するものかもしれず、肝臓重量の有意な減少が幾つかの群で観察されたが、これらの変化は、同様に明らかに用量に関連するものではなく、肝臓サイズの減少は、これらのパラメータで見られる増加と矛盾したものである。アミカシン製剤のいずれかが肝臓に及ぼす何らかの有害作用を示唆する肝臓における見られる微視的な変化は存在せず、これらの変化は全て、毒性学的に重要性が低いことが示唆される。
【０１０７】
臓器重量変化は、主にＣＡＭＫ−ＮａＣｌ群及び一般的なアミカシンでの処置群において観察された。心臓、腎臓及び肝臓の重量の１０％〜１６％の減少と、相応する臓器対身体又は臓器対脳の重量比の減少（９．５％〜１５％）は、ＣＡＭＫ−ＮａＣｌにより２００ｍｇ／ｋｇで処置された雌において見られた。一般的なアミカシン（ＡＭＫ）では、腎臓対身体及び脾臓対身体の重量比の増加（１０％〜２２％）が、５０ｍｇ／ｋｇの一般的なアミカシンの静脈内（ｉｖ）群の雄において観察されたが、雌においては観察されなかった。これらの所見は、これらの臓器内に組織病理学的変化が無いため、毒性学的に何らかの重要性があるとみなされるものではなかった。
【０１０８】
３種の異なる輸送用製剤（vehicle formulations）におけるＣＡＭＫ及びビヒクル対照（空のコクリエート）は、５０ｍｇ／ｋｇ及び２００ｍｇ／ｋｇで７日間にわたって、スプラーグドーリーラットによる良好な耐容性を示し、死亡率／罹患率、臨床的観察、体重、摂食量、眼科診断又は臨床病理診断（血液診断、臨床化学診断及び凝固）に対して明らかな作用を示さなかった。投与群全体にわたって、経口のＣＡＭＫにより、静脈内（ｉｖ）投与よりも１００倍低いＡＭＫ血漿レベルがもたらされた。幾つかの投与群において、７日目に１日目よりも低い曝露傾向があった。アミカシン処方情報には、アミカシンのピーク血漿レベル（Ｃｍａｘ）は、３５μｇ／ｍＬを超過すべきではなく、トラフ血漿レベルは、１０μｇ／ｍＬを超過すべきではないことが明記される。全てのＣＡＭＫ製剤のＣｍａｘは、０．５μｇ／ｍＬ（５００ｎｇ／ｍＬ）を超過しなかった（図３）。
【０１０９】
臓器重量の変化に基づき、無有害作用量（ＮＯＡＥＬ）は、ＮａＣｌ中のＣＡＭＫについては５０ｍｇ／ｋｇ未満であり、そして１ｍＭ及び２ｍＭの胆汁酸塩中のＣＡＭＫについては２００ｍｇ／ｋｇ未満であるとみなされる（図４）。これは、１００ｍｇ／ｋｇであるラットにおける注射されたアミカシンについての公表されたＮＯＡＥＬに比べて勝るとも劣らない（図４）。全ての処置群で見られる様々な変化は、毒性学的に重要性が低く、したがって、全ての投与製剤については、最大耐量（ＭＴＤ）は、２００ｍｇ／ｋｇ／日より大きいとみなされる。このＭＴＤは、ＮＴＭ肺疾患を伴う患者について近年推奨されている１週間に３回の２５ｍｇ／ｋｇという静脈内用量よりもかなり高い。
【０１１０】
アミカシンは典型的には、細菌感染に関して１０ｍｇ／ｋｇ／日〜２５ｍｇ／ｋｇ／日で静脈内（ＩＶ）又は筋内で投与されて（典型的な７０ｋｇのヒトについて単回投与として約３００ｍｇ〜５００ｍｇ）、それぞれ３５μｇ／ｍＬ及び１０μｇ／ｍＬ未満の血漿（又は血清）ピーク濃度及びトラフ濃度が目標とされる。ラットにおける２００ｍｇ／ｋｇのＣＡＭＫ胆汁酸塩溶液の７日間の反復投与への曝露の後に、アミカシン全身曝露は、５０ｍｇ／ｋｇの静脈内（ＩＶ）投与後に２％未満の全身曝露に相当するものであった。ＮＯＡＥＬは、ＣＡＭＫについては２００ｍｇ／ｋｇであるとみなされた。したがって、ラット及びヒトにおいてＣＡＭＫの経口生体利用性が同等であると仮定すると、８００ｍｇのＣＡＭＫ用量は、静脈内（ＩＶ）ＡＭＫ後に観察される典型的なトラフ濃度より低い血漿中のピーク濃度をもたらし、トラフＣＡＭＫ濃度がより大幅に低いレベルであると予想されることとなる。ラットとヒトとの間の体重に関する換算０．１６を用いて、ラットで観察されるＮＯＡＥＬのヒト等価用量（ＨＥＤ）は、こうして、３２ｍｇ／ｋｇ／日のＨＥＤと言い換えられることとなる。したがって、典型的な７０ｋｇのヒトについては、ＮＯＡＥＬのＨＥＤは、２２４０ｍｇ／日である。約１０倍の安全係数を適用すると、推奨される最低出発用量は、約２２４ｍｇ／日である。
【０１１１】
当業者は単なる日常実験を用いて、本明細書に記載される本発明の具体的な実施形態の多くの均等物を認識するか又は確認することが可能である。かかる均等物は特許請求の範囲に包含されることを意図するものである。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４Ａ】
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【図４Ｂ】
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【国際調査報告】
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