(57)【要約】  本開示は、抗ＣＴＬＡ４抗体に関連する組成物および方法およびキットを提供する。より具体的には、ＣＴＬＡ４に結合する完全ヒト抗体、このような抗体のＣＴＬＡ４抗体結合断片および誘導体、ならびにこのような断片を含むＣＴＬＡ４結合ポリペプチドが提供される。さらになお、このような抗体、抗体断片および誘導体ならびにポリペプチドをコードする核酸、このようなポリヌクレオチドを含む細胞、このような抗体、抗体断片および誘導体ならびにポリペプチドの作製方法、ならびに免疫応答または免疫抑制のいずれかの刺激を必要とする疾患を治療する方法を含む、このような抗体、抗体断片および誘導体ならびにポリペプチドの使用方法が開示される。一態様において、本開示は、少なくとも１０Ａ−６Ｍの結合親和性でＣＴＬＡ４エピトープに結合するＩｇＧクラスの単離された完全ヒト抗ＣＴＬＡ４抗体を提供する。
2018508573.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ＩｇＧクラスの単離された完全ヒト抗ＣＴＬＡ４抗体であって、配列番号１、配列番号３、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号９、配列番号１１、配列番号１３、配列番号１５、配列番号１７、配列番号１９、配列番号２１、配列番号２３、配列番号２５、配列番号２７、配列番号２９、配列番号３１、配列番号３３、配列番号３５、配列番号３７、配列番号３９、および配列番号４３からなる群から選択されるアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン；ならびに配列番号２、配列番号４、配列番号６、配列番号８、配列番号１０、配列番号１２、配列番号１４、配列番号１６、配列番号１８、配列番号２０、配列番号２２、配列番号２４、配列番号２６、配列番号２８、配列番号３０、配列番号３２、配列番号３４、配列番号３６、配列番号３８、配列番号４０、および配列番号４４からなる群から選択されるアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン
を含む完全ヒト抗ＣＴＬＡ４抗体。
【請求項２】
配列番号１／配列番号２（本明細書においてＡ１と称する。）、配列番号３／配列番号４（本明細書においてＡ２と称する。）、配列番号５／配列番号６（本明細書においてＡ４と称する。）、配列番号７／配列番号８（本明細書においてＡ７と称する。）、配列番号９／配列番号１０（本明細書においてＡ１２と称する。）、配列番号１１／配列番号１２（本明細書においてＢ６と称する。）、配列番号１３／配列番号１４（本明細書においてＣ２と称する。）、配列番号１５／配列番号１６（本明細書においてＤ６と称する。）、配列番号１７／配列番号１８（本明細書においてＦ１と称する。）、配列番号１９／配列番号２０（本明細書においてＦ３と称する。）、配列番号２１／配列番号２２（本明細書においてＦ５と称する。）、配列番号２３／配列番号２４（本明細書においてＦ６と称する。）、配列番号２５／配列番号２６（本明細書においてＦ７と称する。）、配列番号２７／配列番号２８（本明細書においてＧ１と称する。）、配列番号２９／配列番号３０（本明細書においてＧ２と称する。）、配列番号３１／配列番号３２（本明細書においてＧ３と称する。）、配列番号３３／配列番号３４（本明細書においてＧ５と称する。）、配列番号３５／配列番号３６（本明細書においてＧ１２と称する。）、配列番号３７／配列番号３８（本明細書においてＤ５と称する。）、配列番号３９／配列番号４０（本明細書においてＥ７と称する。）および配列番号４３／配列番号４４（本明細書においてＣＴ１Ｅ１と称する。）からなる群から選択される重鎖／軽鎖可変ドメイン配列を有する、請求項１に記載の完全ヒト抗体。
【請求項３】
抗体が少なくとも１×１０−６ＭのＫＤを有する、請求項１または２に記載の完全ヒト抗体。
【請求項４】
抗体が、配列番号１、配列番号３、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号９、配列番号１１、配列番号１３、配列番号１５、配列番号１７、配列番号１９、配列番号２１、配列番号２３、配列番号２５、配列番号２７、配列番号２９、配列番号３１、配列番号３３、配列番号３５、配列番号３７、配列番号３９、および配列番号４３からなる群から選択されるアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン；ならびに配列番号２、配列番号４、配列番号６、配列番号８、配列番号１０、配列番号１２、配列番号１４、配列番号１６、配列番号１８、配列番号２０、配列番号２２、配列番号２４、配列番号２６、配列番号２８、配列番号３０、配列番号３２、配列番号３４、配列番号３６、配列番号３８、配列番号４０、および配列番号４４からなる群から選択されるアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン
を含む抗ＣＴＬＡ４完全ヒト抗体Ｆａｂ断片。
【請求項５】
抗体断片が、配列番号１／配列番号２、配列番号３／配列番号４、配列番号５／配列番号６、配列番号７／配列番号８、配列番号９／配列番号１０、配列番号１１／配列番号１２、配列番号１３／配列番号１４、配列番号１５／配列番号１６、配列番号１７／配列番号１８、配列番号１９／配列番号２０、配列番号２１／配列番号２２、配列番号２３／配列番号２４、配列番号２５／配列番号２６、配列番号２７／配列番号２８、配列番号２９／配列番号３０、配列番号３１／配列番号３２、配列番号３３／配列番号３４、配列番号３５／配列番号３６、配列番号３７／配列番号３８、配列番号３９／配列番号４０、および配列番号４３／配列番号４４からなる群から選択される重鎖／軽鎖可変ドメイン配列を有する、請求項４に記載の完全ヒト抗体Ｆａｂ断片。
【請求項６】
抗体が少なくとも１×１０−６ＭのＫＤを有する、請求項４または５に記載の完全ヒト抗体Ｆａｂ断片。
【請求項７】
ペプチドリンカーによって連結された重鎖可変ドメインおよび軽鎖可変ドメインを含む抗ＣＴＬＡ４一本鎖ヒト抗体であって、重鎖可変ドメインが、配列番号１、配列番号３、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号９、配列番号１１、配列番号１３、配列番号１５、配列番号１７、配列番号１９、配列番号２１、配列番号２３、配列番号２５、配列番号２７、配列番号２９、配列番号３１、配列番号３３、配列番号３５、配列番号３７、配列番号３９、および配列番号４３からなる群から選択されるアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；軽鎖可変ドメインが、配列番号２、配列番号４、配列番号６、配列番号８、配列番号１０、配列番号１２、配列番号１４、配列番号１６、配列番号１８、配列番号２０、配列番号２２、配列番号２４、配列番号２６、配列番号２８、配列番号３０、配列番号３２、配列番号３４、配列番号３６、配列番号３８、配列番号４０、および配列番号４４からなる群から選択されるアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む、抗ＣＴＬＡ４一本鎖ヒト抗体。
【請求項８】
一本鎖完全ヒト抗体が、配列番号１／配列番号２、配列番号３／配列番号４、配列番号５／配列番号６、配列番号７／配列番号８、配列番号９／配列番号１０、配列番号１１／配列番号１２、配列番号１３／配列番号１４、配列番号１５／配列番号１６、配列番号１７／配列番号１８、配列番号１９／配列番号２０、配列番号２１／配列番号２２、配列番号２３／配列番号２４、配列番号２５／配列番号２６、配列番号２７／配列番号２８、配列番号２９／配列番号３０、配列番号３１／配列番号３２、配列番号３３／配列番号３４、配列番号３５／配列番号３６、配列番号３７／配列番号３８、配列番号３９／配列番号４０、配列番号４１／配列番号４２および配列番号４３／配列番号４４からなる群から選択される重鎖／軽鎖可変ドメイン配列を有する、請求項７に記載の一本鎖ヒト抗体。
【請求項９】
抗体が少なくとも１×１０−６ＭのＫＤを有する、請求項７または８に記載の一本鎖完全ヒト抗体。
【請求項１０】
請求項１から９のいずれか一項に記載の有効量の抗体または抗体断片を投与し、それによりがんを治療することを含む、それを必要とする対象におけるがんを治療する方法。
【請求項１１】
がんが、膀胱がん、血液がん、脳がん、乳がん、結腸がん、線維肉腫、肺がん、卵巣がん、前立腺がん、黒色腫、リンパ腫、中皮腫および形質細胞腫からなる群から選択される、請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
有効量の抗ＣＴＬＡ４ポリペプチドを投与することを含む、免疫応答または免疫抑制のいずれかの刺激を必要とする疾患を治療する方法であって、抗ＣＴＬＡ４ポリペプチドが、
重鎖可変ドメインおよび軽鎖可変ドメインを含むＩｇＧクラスの単離された抗ＣＴＬＡ４完全ヒト抗体、
重鎖可変ドメインおよび軽鎖可変ドメインを含む抗ＣＴＬＡ４完全ヒト抗体Ｆａｂ断片、ならびに
重鎖可変ドメインおよび軽鎖可変ドメインがペプチドリンカーを介して連結されている、重鎖可変ドメインおよび軽鎖可変ドメインを有する一本鎖ヒト抗体
からなる群から選択され、
重鎖可変ドメインが、配列番号１、配列番号３、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号９、配列番号１１、配列番号１３、配列番号１５、配列番号１７、配列番号１９、配列番号２１、配列番号２３、配列番号２５、配列番号２７、配列番号２９、配列番号３１、配列番号３３、配列番号３５、配列番号３７、配列番号３９、および配列番号４３からなる群から選択されるアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；
軽鎖可変ドメインが、配列番号２、配列番号４、配列番号６、配列番号８、配列番号１０、配列番号１２、配列番号１４、配列番号１６、配列番号１８、配列番号２０、配列番号２２、配列番号２４、配列番号２６、配列番号２８、配列番号３０、配列番号３２、配列番号３４、配列番号３６、配列番号３８、配列番号４０、および配列番号４４からなる群から選択されるアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む、方法。
【請求項１３】
抗体または抗体断片が、配列番号１／配列番号２、配列番号３／配列番号４、配列番号５／配列番号６、配列番号７／配列番号８、配列番号９／配列番号１０、配列番号１１／配列番号１２、配列番号１３／配列番号１４、配列番号１５／配列番号１６、配列番号１７／配列番号１８、配列番号１９／配列番号２０、配列番号２１／配列番号２２、配列番号２３／配列番号２４、配列番号２５／配列番号２６、配列番号２７／配列番号２８、配列番号２９／配列番号３０、配列番号３１／配列番号３２、配列番号３３／配列番号３４、配列番号３５／配列番号３６、配列番号３７／配列番号３８、配列番号３９／配列番号４０および配列番号４３／配列番号４４からなる群から選択される重鎖／軽鎖可変ドメイン配列を有する、請求項１２に記載の方法。
【請求項１４】
疾患が、前立腺、腎臓がん、結腸がん、肺がんもしくは乳がん；病原性の感染症；ＣＮＳに関連する疾患、アミロイド形成性アルツハイマー病；ならびに炎症性またはアレルギー性の成分を伴う疾患、移植片対宿主病、宿主対移植片病、アレルギー、自己免疫疾患および他の炎症性疾患からなる群から選択される、請求項１２または１３に記載の方法。
【請求項１５】
配列番号１、配列番号３、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号９、配列番号１１、配列番号１３、配列番号１５、配列番号１７、配列番号１９、配列番号２１、配列番号２３、配列番号２５、配列番号２７、配列番号２９、配列番号３１、配列番号３３、配列番号３５、配列番号３７、配列番号３９、および配列番号４３からなる群から選択される重鎖可変領域アミノ酸配列に記載される相補性決定領域（ＣＤＲ）を含む重鎖可変ドメイン；ならびに配列番号２、配列番号４、配列番号６、配列番号８、配列番号１０、配列番号１２、配列番号１４、配列番号１６、配列番号１８、配列番号２０、配列番号２２、配列番号２４、配列番号２６、配列番号２８、配列番号３０、配列番号３２、配列番号３４、配列番号３６、配列番号３８、配列番号４０、および配列番号４４からなる群から選択される軽鎖可変領域アミノ酸配列に記載されるＣＤＲを含む軽鎖可変領域を含む、単離された抗ＣＴＬＡ４抗体またはその抗原結合断片。
【請求項１６】
少なくとも１×１０−６ＭのＫＤを有する、請求項１５に記載の抗体またはその抗原結合断片。
【請求項１７】
請求項１５または１６に記載の抗ＣＴＬＡ４抗体またはその抗原結合断片、および医薬として許容される担体を含む医薬組成物。
【請求項１８】
請求項１５または１６に記載の有効量の抗ＣＴＬＡ４抗体またはその抗原結合断片を投与し、それによりがんを治療することを含む、それを必要とするヒト対象におけるがんを治療する方法。
【請求項１９】
がんが、膀胱がん、血液がん、脳がん、乳がん、結腸がん、線維肉腫、肺がん、卵巣がん、前立腺がん、黒色腫、リンパ腫、中皮腫および形質細胞腫からなる群から選択される、請求項１８に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本出願は、２０１５年２月１３日に出願された米国仮特許出願第６２／１１６３５３号に対する優先権を主張し、その全内容はその全体が参照により本明細書に組み込まれる。
【０００２】
本開示は、抗ＣＴＬＡ４抗体に関するまたはこれらに由来する組成物および方法を提供する。より具体的には、本開示は、ＣＴＬＡ４に結合する完全ヒト抗体、ＣＴＬＡ４−抗体結合断片およびこのような抗体の誘導体、ならびにこのような断片を含むＣＴＬＡ４結合ポリペプチドを提供する。さらになお、本開示は、このような抗体、抗体断片および誘導体ならびにポリペプチドをコードする核酸、このようなポリヌクレオチドを含む細胞、このような抗体、抗体断片および誘導体ならびにポリペプチドの作製方法、ならびに免疫応答または免疫抑制のいずれかの刺激を必要とする疾患を治療する方法を含む、このような抗体、抗体断片および誘導体ならびにポリペプチドの使用方法を提供する。刺激は、ヒトＣＴＬＡ４のヒトＢ７への結合を遮断する抗体を使用して達成され、免疫応答の延長の刺激および増進による治療に適した疾患には、前立腺がん、腎臓がん、結腸がん、肺がんまたは乳がんが含まれ；病原性の感染症；ＣＮＳに関連する疾患、例えば、アルツハイマー病を含むアミロイド形成性疾患；および炎症性またはアレルギー性の成分を伴う疾患が含まれる。治療に適した疾患には、移植片対宿主病、宿主対移植片病、アレルギー、自己免疫疾患および他の炎症性疾患が含まれる。
【背景技術】
【０００３】
脊椎動物免疫系は、最適な免疫活性化を達成するために複数のシグナルを必要とする；例えば、Ｊａｎｅｗａｙ、Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｓｙｍｐ．Ｑｕａｎｔ．Ｂｉｏｌ．，５４巻：１−１４頁（１９８９年）；Ｐａｕｌ  Ｗｉｌｌｉａｍ  Ｅ．、編集、Ｒａｖｅｎ  Ｐｒｅｓｓ、Ｎ．Ｙ．、Ｆｕｎｄａｍｅｎｔａｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、第４版（１９９８年）、特に１２章および１３章、４１１−４７８頁を参照されたい。Ｔリンパ球（Ｔ細胞）と抗原提示細胞（ＡＰＣ）との間の相互作用は、免疫応答に必須である。Ｔ細胞およびＡＰＣに見られる多数の凝集分子のレベルが免疫応答中に増加する（Ｓｐｒｉｎｇｅｒら、Ａ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．５巻：２２３−２５２頁（１９８７年）；ＳｈａｗおよびＳｈｉｍｕｚｕ、Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｏｐｉｎｉｏｎ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、編集、ＫｉｎｄｔおよびＬｏｎｇ、１巻：９２−９７頁（１９８８年）；ならびにＨｅｍｌｅｒ、Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  Ｔｏｄａｙ  ９巻：１０９−１１３頁（１９８８年））。これらの分子のレベルの増加は、活性化されたＡＰＣがＡＰＣを休止しているよりも抗原特異的Ｔ細胞増殖を刺激する上でより効果的である理由を説明するのに役立ち得る（Ｋａｉｕｃｈｉら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３１巻：１０９−１１４頁（１９８３年）；Ｋｒｅｉｇｅｒら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３５巻：２９３７−２９４５頁（１９８５年）；ＭｃＫｅｎｚｉｅ、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４１巻：２９０７−２９１１頁（１９８８年）；ＨａｗｒｙｌｏｗｉｃｚおよびＵｎａｎｕｅ、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４１巻：４０８３−４０８８頁（１９８８年））。
【０００４】
Ｔ細胞免疫応答は、特にＴ細胞とＡＰＣのようなアクセサリー細胞との間の細胞間相互作用（Ｓｐｒｉｎｇｅｒら、Ａ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．５巻：２２３−２５２頁（１９８７年））、可溶性免疫メディエータ（サイトカインまたはリンホカイン）の産生（Ｄｉｎａｒｅｌｌｏ（１９８７年）Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌ．Ｊｏｕｒ．Ｍｅｄ．３１７巻：９４０−９４５頁；Ｓａｌｌｕｓｔｏ（１９９７年）Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１７９巻：１１０９−１１１８頁）を伴う複雑なプロセスである。この応答は、Ｔ細胞受容体複合体（Ｗｅｉｓｓ（１９８６年）Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．４巻：５９３−６１９頁）および他の「アクセサリー」表面分子（Ａｌｌｉｓｏｎ（１９９４年）Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．６巻：４１４−４１９頁；Ｓｐｒｉｎｇｅｒ（１９８７年）前掲）を含むいくつかのＴ細胞表面受容体によって制御される。これらのアクセサリー分子の多くは、細胞表面上のモノクローナル抗体の反応性によって定義される、天然に存在する細胞表面分化（ＣＤ）抗原である（ＭｃＭｉｃｈａｅｌ、編集、Ｌｅｕｋｏｃｙｔｅ  Ｔｙｐｉｎｇ  ＩＩＩ、Ｏｘｆｏｒｄ  Ｕｎｉｖ．Ｐｒｅｓｓ、Ｏｘｆｏｒｄ、Ｎ．Ｙ．（１９８７年））。
【０００５】
ＣＤ２８は、単一の細胞外可変領域（Ｖ）様ドメインを有する（ＡｒｕｆｆｏおよびＳｅｅｄ、前掲）。同種の分子であるＣＴＬＡ４は、マウス細胞溶解性Ｔ細胞ｃＤＮＡライブラリー（Ｂｒｕｎｅｔ（１９８７年）Ｎａｔｕｒｅ  ３２８巻：２６７−２７０頁）のディフェレンシャルスクリーニングによって同定されている。
【０００６】
ＣＴＬＡ４は、マウス細胞溶解性Ｔ細胞ｃＤＮＡライブラリー（Ｂｒｕｎｅｔら、Ｎａｔｕｒｅ  ３２８巻：２６７−２７０頁（１９８７年））のディフェレンシャルスクリーニングによって、最初に同定されたＴ細胞表面分子である。ＣＴＬＡ４はまた、免疫グロブリン（Ｉｇ）スーパーファミリーのメンバーである；ＣＴＬＡ４は、単一の細胞外Ｉｇドメインを含む。ＣＴＬＡ４転写物が、細胞傷害活性を有するＴ細胞集団において見出され、これは、ＣＴＬＡ４が細胞溶解応答において機能し得ることを示唆している（Ｂｒｕｎｅｔら、前掲；Ｂｒｕｎｅｔら、Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｒｅｖ．１０３−２１−３６（１９８８年））。研究者らは、ＣＴＬＡ４のヒト対応物の遺伝子（Ｄａｒｉａｖａｃｈら、Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１８巻：１９０１−１９０５頁（１９８８年））をクローニングし、ＣＤ２８と同じ染色体領域（２ｑ３３−３４）に対するマッピングについて報告している（Ｌａｆａｇｅ−Ｐｏｃｈｉｔａｌｏｆｆら、Ｉｍｍｕｎｏｇｅｎｅｔｉｃｓ  ３１巻：１９８−２０１頁（１９９０年））。このヒトＣＴＬＡ４  ＤＮＡとＣＤ２８タンパク質をコードするＤＮＡとの間の配列比較から、配列の有意な相同性が明らかであり、膜近傍領域および細胞質領域において相同性が最大である（Ｂｒｕｎｅｔら、１９８８年、前掲；Ｄａｒｉａｖａｃｈら、１９８８年、前掲）。
【０００７】
いくつかの研究は、ＣＴＬＡ４が二次共刺激因子と類似する機能を有することを示唆している（Ｌｉｎｓｌｅｙら、Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１７６巻：１５９５−１６０４頁（１９９２年）；Ｗｕら、Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１８５巻：１３２７−１３３５頁（１９９７年）、ならびに米国特許第５，９７７，３１８号明細書、同第５，９６８，５１０号明細書、同第５，８８５，７９６号明細書および同第５，８８５，５７９号明細書）。しかしながら、他の研究者は、ＣＴＬＡ４がＴ細胞活性化のダンピング因子として反対の役割を有することを報告している（Ｋｒｕｍｍｅｌ（１９９５年）Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１８２巻：４５９−４６５頁）；Ｋｒｕｍｍｅｌら、Ｉｎｔ’ｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．８巻：５１９−５２３頁（１９９６年）；Ｃｈａｍｂｅｒｓら、Ｉｍｍｕｎｉｔｙ．７巻：８８５−８９５頁（１９９７年））。ＣＴＬＡ４欠損マウスは、巨大なリンパ増殖に罹患していることが報告されている（Ｃｈａｍｂｅｒｓら、前掲）。ＣＴＬＡ４遮断は、インビトロ（Ｗａｌｕｎａｓら、Ｉｍｍｕｎｉｔｙ．１巻：４０５−４１３頁（１９９４年））およびインビボ（Ｋｅａｒｎｅｙ（１９９５年）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５５巻：１０３２−１０３６頁）において、抗腫瘍免疫を増進させ（Ｌｅｈａｃｈ（１９９６年）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２７１巻：１７３４−１７３６頁）、誘導された自己免疫疾患を増強することが報告されている（Ｌｕｈｄｅｒ（１９９８年）Ｊ  Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１８７巻：４２７−４３２頁）。また、ＣＴＬＡ４は、Ｔ細胞免疫応答の初期の特徴に代替または追加の影響を有することが報告されている（Ｃｈａｍｂｅｒｓ（１９９７年）Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．９巻：３９６−４０４頁；Ｂｌｕｅｓｔｏｎｅ（１９９７年）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５８：１９８９−１９９３頁；Ｔｈｏｍｐｓｏｎ（１９９７年）Ｉｍｍｕｎｉｔｙ  ７巻：４４５−４５０頁）。これは、いくつかの自己免疫患者がＣＴＬＡ４に対して自己抗体を有するという観察と一致する。ＣＴＬＡ４遮断抗体は、これらの患者において病原性の役割を有する可能性がある（Ｍａｔｓｕｉ（１９９９年）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６２巻：４３２８−４３３５頁）。
【０００８】
非ヒトＣＴＬＡ４抗体は、様々な試験において使用されている。しかしながら、ヒトにおける抗体のインビボでの治療的および診断的適用の開発に直面する主要な障害の１つは、非ヒト免疫グロブリンに元々備わっている免疫原性である。例えば、免疫担当ヒト患者に治療用量のげっ歯類モノクローナル抗体を投与する場合、患者は、げっ歯類免疫グロブリン配列に対する抗体を産生する；これらのヒト抗マウス抗体（ＨＡＭＡ）は、治療抗体を中和し、急性毒性を引き起こし得る。以前の抗体におけるこれらの欠点および他の欠点は、本開示によってＣＴＬＡ４に対する完全ヒト抗体の提供によって克服される。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００９】
【特許文献１】米国特許第５，９７７，３１８号明細書
【特許文献２】米国特許第５，９６８，５１０号明細書
【特許文献３】米国特許第５，８８５，７９６号明細書
【特許文献４】米国特許第５，８８５，５７９号明細書
【非特許文献】
【００１０】
【非特許文献１】Ｊａｎｅｗａｙ、Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｓｙｍｐ．Ｑｕａｎｔ．Ｂｉｏｌ．，５４巻：１−１４頁（１９８９年）
【非特許文献２】Ｐａｕｌ  Ｗｉｌｌｉａｍ  Ｅ．、編集、Ｒａｖｅｎ  Ｐｒｅｓｓ、Ｎ．Ｙ．、Ｆｕｎｄａｍｅｎｔａｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、第４版（１９９８年）
【非特許文献３】Ｓｐｒｉｎｇｅｒら、Ａ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．５巻：２２３−２５２頁（１９８７年）
【非特許文献４】ＳｈａｗおよびＳｈｉｍｕｚｕ、Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｏｐｉｎｉｏｎ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、編集、ＫｉｎｄｔおよびＬｏｎｇ、１巻：９２−９７頁（１９８８年）
【非特許文献５】Ｈｅｍｌｅｒ、Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  Ｔｏｄａｙ  ９巻：１０９−１１３頁（１９８８年）
【非特許文献６】Ｋａｉｕｃｈｉら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３１巻：１０９−１１４頁（１９８３年）
【非特許文献７】Ｋｒｅｉｇｅｒら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３５巻：２９３７−２９４５頁（１９８５年）
【非特許文献８】ＭｃＫｅｎｚｉｅ、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４１巻：２９０７−２９１１頁（１９８８年）
【非特許文献９】ＨａｗｒｙｌｏｗｉｃｚおよびＵｎａｎｕｅ、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４１巻：４０８３−４０８８頁（１９８８年）
【非特許文献１０】Ｄｉｎａｒｅｌｌｏ（１９８７年）Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌ．Ｊｏｕｒ．Ｍｅｄ．３１７巻：９４０−９４５頁
【非特許文献１１】Ｓａｌｌｕｓｔｏ（１９９７年）Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１７９巻：１１０９−１１１８頁
【非特許文献１２】Ｗｅｉｓｓ（１９８６年）Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．４巻：５９３−６１９頁
【非特許文献１３】Ａｌｌｉｓｏｎ（１９９４年）Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．６巻：４１４−４１９頁
【非特許文献１４】ＭｃＭｉｃｈａｅｌ、編集、Ｌｅｕｋｏｃｙｔｅ  Ｔｙｐｉｎｇ  ＩＩＩ、Ｏｘｆｏｒｄ  Ｕｎｉｖ．Ｐｒｅｓｓ、Ｏｘｆｏｒｄ、Ｎ．Ｙ．（１９８７年）
【非特許文献１５】Ｂｒｕｎｅｔ（１９８７年）Ｎａｔｕｒｅ  ３２８巻：２６７−２７０頁
【非特許文献１６】Ｂｒｕｎｅｔら、Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｒｅｖ．１０３巻、２１−３６頁（１９８８年）
【非特許文献１７】Ｄａｒｉａｖａｃｈら、Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１８巻：１９０１−１９０５頁（１９８８年）
【非特許文献１８】Ｌａｆａｇｅ−Ｐｏｃｈｉｔａｌｏｆｆら、Ｉｍｍｕｎｏｇｅｎｅｔｉｃｓ  ３１巻：１９８−２０１頁（１９９０年）
【非特許文献１９】Ｌｉｎｓｌｅｙら、Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１７６巻：１５９５−１６０４頁（１９９２年）
【非特許文献２０】Ｗｕら、Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１８５巻：１３２７−１３３５頁（１９９７年）
【非特許文献２１】Ｋｒｕｍｍｅｌ（１９９５年）Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１８２巻：４５９−４６５頁
【非特許文献２２】Ｋｒｕｍｍｅｌら、Ｉｎｔ’ｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．８巻：５１９−５２３頁（１９９６年）
【非特許文献２３】Ｃｈａｍｂｅｒｓら、Ｉｍｍｕｎｉｔｙ．７巻：８８５−８９５頁（１９９７年）
【非特許文献２４】Ｗａｌｕｎａｓら、Ｉｍｍｕｎｉｔｙ．１巻：４０５−４１３頁（１９９４年）
【非特許文献２５】Ｋｅａｒｎｅｙ（１９９５年）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５５巻：１０３２−１０３６頁
【非特許文献２６】Ｌｅｈａｃｈ（１９９６年）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２７１巻：１７３４−１７３６頁
【非特許文献２７】Ｌｕｈｄｅｒ（１９９８年）Ｊ  Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１８７巻：４２７−４３２頁
【非特許文献２８】Ｃｈａｍｂｅｒｓ（１９９７年）Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．９巻：３９６−４０４頁
【非特許文献２９】Ｂｌｕｅｓｔｏｎｅ（１９９７年）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５８：１９８９−１９９３頁
【非特許文献３０】Ｔｈｏｍｐｓｏｎ（１９９７年）Ｉｍｍｕｎｉｔｙ  ７巻：４４５−４５０頁
【非特許文献３１】Ｍａｔｓｕｉ（１９９９年）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６２巻：４３２８−４３３５頁
【発明の概要】
【００１１】
（要旨）
本発明は、ＣＴＬＡ４に結合することができる結合タンパク質に関し、抗ＣＴＬＡ４抗体およびそれらの抗原結合断片を含む。
【００１２】
一態様において、本開示は、少なくとも１０−６Ｍの結合親和性でＣＴＬＡ４エピトープに結合するＩｇＧクラスの単離された完全ヒト抗ＣＴＬＡ４抗体であって、配列番号１、配列番号３、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号９、配列番号１１、配列番号１３、配列番号１５、配列番号１７、配列番号１９、配列番号２１、配列番号２３、配列番号２５、配列番号２７、配列番号２９、配列番号３１、配列番号３３、配列番号３５、配列番号３７、配列番号３９、配列番号４１および配列番号４３からなる群から選択されるアミノ酸配列と少なくとも９５％同一である重鎖可変ドメイン配列を有し、配列番号２、配列番号４、配列番号６、配列番号８、配列番号１０、配列番号１２、配列番号１４、配列番号１６、配列番号１８、配列番号２０、配列番号２２、配列番号２４、配列番号２６、配列番号２８、配列番号３０、配列番号３２、配列番号３４、配列番号３６、配列番号３８、配列番号４０、配列番号４２および配列番号４４からなるアミノ酸配列と少なくとも９５％同一である軽鎖可変ドメイン配列を有する完全ヒト抗体を提供する。一実施形態において、完全ヒト抗体は、重鎖と軽鎖の両方を有し、ここで、抗体は、配列番号１／配列番号２（本明細書においてＡ１と称する。）、配列番号３／配列番号４（本明細書においてＡ２と称する。）、配列番号５／配列番号６（本明細書においてＡ４と称する。）、配列番号７／配列番号８（本明細書においてＡ７と称する。）、配列番号９／配列番号１０（本明細書においてＡ１２と称する。）、配列番号１１／配列番号１２（本明細書においてＢ６と称する。）、配列番号１３／配列番号１４（本明細書においてＣ２と称する。）、配列番号１５／配列番号１６（本明細書においてＤ６と称する。）、配列番号１７／配列番号１８（本明細書においてＦ１と称する。）、配列番号１９／配列番号２０（本明細書においてＦ３と称する。）、配列番号２１／配列番号２２（本明細書においてＦ５と称する。）、配列番号２３／配列番号２４（本明細書においてＦ６と称する。）、配列番号２５／配列番号２６（本明細書においてＦ７と称する。）、配列番号２７／配列番号２８（本明細書においてＧ１と称する。）、配列番号２９／配列番号３０（本明細書においてＧ２と称する。）、配列番号３１／配列番号３２（本明細書においてＧ３と称する。）、配列番号３３／配列番号３４（本明細書においてＧ５と称する。）、配列番号３５／配列番号３６（本明細書においてＧ１２と称する。）、配列番号３７／配列番号３８（本明細書においてＤ５と称する。）、配列番号３９／配列番号４０（本明細書においてＥ７と称する。）、配列番号４１／配列番号４２（本明細書においてＥ８と称する。）および配列番号４３／配列番号４４（本明細書においてＣＴ１Ｅ１と称する。）からなる群から選択される重鎖／軽鎖可変ドメイン配列を有する。
【００１３】
別の態様において、本開示は、配列番号１、配列番号３、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号９、配列番号１１、配列番号１３、配列番号１５、配列番号１７、配列番号１９、配列番号２１、配列番号２３、配列番号２５、配列番号２７、配列番号２９、配列番号３１、配列番号３３、配列番号３５、配列番号３７、配列番号３９、配列番号４１、および配列番号４３からなる群から選択されるアミノ酸配列と少なくとも９５％同一である配列を含む重鎖可変ドメイン、ならびに配列番号２、配列番号４、配列番号６、配列番号８、配列番号１０、配列番号１２、配列番号１４、配列番号１６、配列番号１８、配列番号２０、配列番号２２、配列番号２４、配列番号２６、配列番号２８、配列番号３０、配列番号３２、配列番号３４、配列番号３６、配列番号３８、配列番号４０、配列番号４２、および配列番号４４からなる群から選択されるアミノ酸配列と少なくとも９５％同一である配列を含む軽鎖可変ドメインを含む抗ＣＴＬＡ４  完全ヒト抗体Ｆａｂ断片を提供する。一実施形態において、完全ヒト抗体Ｆａｂ断片は、重鎖可変ドメイン領域と軽鎖可変ドメイン領域の両方を有し、ここで、抗体は、配列番号１／配列番号２、配列番号３／配列番号４、配列番号５／配列番号６、配列番号７／配列番号８、配列番号９／配列番号１０、配列番号１１／配列番号１２、配列番号１３／配列番号１４、配列番号１５／配列番号１６、配列番号１７／配列番号１８、配列番号１９／配列番号２０、配列番号２１／配列番号２２、配列番号２３／配列番号２４、配列番号２５／配列番号２６、配列番号２７／配列番号２８、配列番号２９／配列番号３０、配列番号３１／配列番号３２、配列番号３３／配列番号３４、配列番号３５／配列番号３６、配列番号３７／配列番号３８、配列番号３９／配列番号４０、配列番号４１／配列番号４２および配列番号４３／配列番号４４からなる群から選択される重鎖／軽鎖可変ドメイン配列を有する。
【００１４】
本開示はさらに、ペプチドリンカーによって連結された重鎖可変ドメインおよび軽鎖可変ドメインを有する一本鎖ヒト抗体を提供し、重鎖可変ドメインは、配列番号１、配列番号３、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号９、配列番号１１、配列番号１３、配列番号１５、配列番号１７、配列番号１９、配列番号２１、配列番号２３、配列番号２５、配列番号２７、配列番号２９、配列番号３１、配列番号３３、配列番号３５、配列番号３７、配列番号３９、配列番号４１、および配列番号４３からなる群から選択されるアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み、軽鎖可変ドメインは、配列番号２、配列番号４、配列番号６、配列番号８、配列番号１０、配列番号１２、配列番号１４、配列番号１６、配列番号１８、配列番号２０、配列番号２２、配列番号２４、配列番号２６、配列番号２８、配列番号３０、配列番号３２、配列番号３４、配列番号３６、配列番号３８、配列番号４０、配列番号４２、および配列番号４４からなる群から選択されるアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む。ある特定の実施形態において、一本鎖完全ヒト抗体は、重鎖可変ドメイン領域と軽鎖可変ドメイン領域の両方を有し、ここで、一本鎖完全ヒト抗体は、配列番号１／配列番号２、配列番号３／配列番号４、配列番号５／配列番号６、配列番号７／配列番号８、配列番号９／配列番号１０、配列番号１１／配列番号１２、配列番号１３／配列番号１４、配列番号１５／配列番号１６、配列番号１７／配列番号１８、配列番号１９／配列番号２０、配列番号２１／配列番号２２、配列番号２３／配列番号２４、配列番号２５／配列番号２６、配列番号２７／配列番号２８、配列番号２９／配列番号３０、配列番号３１／配列番号３２、配列番号３３／配列番号３４、配列番号３５／配列番号３６、配列番号３７／配列番号３８、配列番号３９／配列番号４０、配列番号４１／配列番号４２および配列番号４３／配列番号４４からなる群から選択される重鎖／軽鎖可変ドメイン配列を有する。
【００１５】
また、本発明には、配列番号１、配列番号３、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号９、配列番号１１、配列番号１３、配列番号１５、配列番号１７、配列番号１９、配列番号２１、配列番号２３、配列番号２５、配列番号２７、配列番号２９、配列番号３１、配列番号３３、配列番号３５、配列番号３７、配列番号３９、および配列番号４３からなる群から選択される重鎖可変領域アミノ酸配列に記載される相補性決定領域（ＣＤＲ）を含む重鎖可変ドメイン；ならびに配列番号２、配列番号４、配列番号６、配列番号８、配列番号１０、配列番号１２、配列番号１４、配列番号１６、配列番号１８、配列番号２０、配列番号２２、配列番号２４、配列番号２６、配列番号２８、配列番号３０、配列番号３２、配列番号３４、配列番号３６、配列番号３８、配列番号４０、および配列番号４４からなる群から選択される軽鎖可変領域アミノ酸配列に記載されるＣＤＲを含む軽鎖可変領域を含む、単離された抗ＣＴＬＡ４抗体またはその抗原結合断片が含まれる。
【００１６】
本開示はさらに、免疫応答または免疫抑制のいずれかの刺激を必要とする疾患を治療する方法を提供し、該方法は、ＣＴＬＡ４に結合し、重鎖可変ドメインおよび軽鎖可変ドメインを含む、ＩｇＧクラスの単離された完全ヒト抗体；重鎖可変ドメインおよび軽鎖可変ドメインを含む抗ＣＴＬＡ４完全ヒト抗体Ｆａｂ断片；ならびに重鎖可変ドメインおよび軽鎖可変ドメインを含む一本鎖ヒト抗体からなる群から選択される抗ＣＴＬＡ４ポリペプチドを投与することを含み、重鎖可変ドメインおよび軽鎖可変ドメインは、ペプチドリンカーを介して連結され、重鎖可変ドメインは、配列番号１、配列番号３、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号９、配列番号１１、配列番号１３、配列番号１５、配列番号１７、配列番号１９、配列番号２１、配列番号２３、配列番号２５、配列番号２７、配列番号２９、配列番号３１、配列番号３３、配列番号３５、配列番号３７、配列番号３９、配列番号４１、および配列番号４３からなる群から選択されるアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み、軽鎖可変ドメインは、配列番号２、配列番号４、配列番号６、配列番号８、配列番号１０、配列番号１２、配列番号１４、配列番号１６、配列番号１８、配列番号２０、配列番号２２、配列番号２４、配列番号２６、配列番号２８、配列番号３０、配列番号３２、配列番号３４、配列番号３６、配列番号３８、配列番号４０、配列番号４２、および配列番号４４からなる群から選択されるアミノ酸と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む。
【００１７】
ある特定の実施形態において、完全ヒト抗体または抗体断片は、重鎖と軽鎖の両方を有し、ここで、抗体または抗体断片は、配列番号１／配列番号２（本明細書においてＡ１と称する。）、配列番号３／配列番号４（本明細書においてＡ２と称する。）、配列番号５／配列番号６（本明細書においてＡ４と称する。）、配列番号７／配列番号８（本明細書においてＡ７と称する。）、配列番号９／配列番号１０（本明細書においてＡ１２と称する。）、配列番号１１／配列番号１２（本明細書においてＢ６と称する。）、配列番号１３／配列番号１４（本明細書においてＣ２と称する。）、配列番号１５／配列番号１６（本明細書においてＤ６と称する。）、配列番号１７／配列番号１８（本明細書においてＦ１と称する。）、配列番号１９／配列番号２０（本明細書においてＦ３と称する。）、配列番号２１／配列番号２２（本明細書においてＦ５と称する。）、配列番号２３／配列番号２４（本明細書においてＦ６と称する。）、配列番号２５／配列番号２６（本明細書においてＦ７と称する。）、配列番号２７／配列番号２８（本明細書においてＧ１と称する。）、配列番号２９／配列番号３０（本明細書においてＧ２と称する。）、配列番号３１／配列番号３２（本明細書においてＧ３と称する。）、配列番号３３／配列番号３４（本明細書においてＧ５と称する。）、配列番号３５／配列番号３６（本明細書においてＧ１２と称する。）、配列番号３７／配列番号３８（本明細書においてＤ５と称する。）、配列番号３９／配列番号４０（本明細書においてＥ７と称する。）、配列番号４１／配列番号４２（本明細書においてＥ８と称する。）および配列番号４３／配列番号４４（本明細書においてＣＴ１Ｅ１と称する。）からなる群から選択される重鎖／軽鎖可変ドメイン配列を含む。
【００１８】
ある特定の実施形態において、本発明の抗体またはその抗原結合断片は、少なくとも１×１０−６ＭのＫＤを有する。他の実施形態において、本発明の抗体またはその抗原結合断片は、少なくとも１×１０−７ＭのＫＤを有する。他の実施形態において、本発明の抗体またはその抗原結合断片は、少なくとも１×１０−８ＭのＫＤを有する。
【００１９】
ある特定の実施形態において、抗体はＩｇＧ１アイソタイプである。他の実施形態において、抗体はＩｇＧ４アイソタイプである。
【００２０】
ある特定の実施形態において、本明細書に記載される抗体または抗原結合断片は組換え体である。
【００２１】
本発明はまた、本明細書に開示されている、有効量の抗ＣＴＬＡ４抗体または断片、および医薬として許容される担体を含む医薬組成物を提供する。
【００２２】
ある特定の実施形態において、本発明は、本明細書に開示されている、有効量の抗ＣＴＬＡ４抗体またはその抗原結合断片を対象に投与し、それによりがんを治療することを含む、それを必要とするヒト対象においてがんを治療する方法を特徴とする。
【００２３】
好ましい実施形態において、がんは、有害なＣＴＬＡ４活性に関連する。このようなタイプのがんの例としては、限定されないが、膀胱がん、血液がん、脳がん、乳がん、結腸がん、線維肉腫、肺がん、卵巣がん、前立腺がん、黒色腫、リンパ腫、中皮腫および形質細胞腫が挙げられる。
【００２４】
他の実施形態において、疾患は、前立腺がん、腎臓がん、結腸がん、肺がんまたは乳がん；病原性の感染症；ＣＮＳに関連する疾患、アミロイド形成性アルツハイマー病；ならびに炎症性またはアレルギー性の成分を伴う疾患、移植片対宿主病、宿主対移植片病、アレルギー、自己免疫疾患および他の炎症性疾患からなる群から選択される。
【図面の簡単な説明】
【００２５】
【図１】列挙された抗ＣＴＬＡ４抗体のＴ細胞活性化を増進する能力によるこれらの機能活性を示す図である。ＣＤ２５の発現レベルは、抗ＣＴＬＡ４抗体が添加されていた培養物においてより高かった。使用される対照抗体（対照Ｉｇ）は、アイソタイプが合致した非特異的（すなわち、ＣＴＬＡ４に結合しない。）抗体である。
【図２】培地対照に関してデータを標準化することにより、抗ＣＴＬＡ４抗体を受けた培養物において顕著なレベルの増進が検出されたことを示す図である。使用される対照抗体（対照Ｉｇ）は、アイソタイプが合致した非特異的（すなわち、ＣＴＬＡ４に結合しない。）抗体である。
【図３Ａ】抗ＣＴＬＡ４抗体であるイピリムマブ（ヤーボイ）と比較した、ＣＤ８０（図３Ａ）に基づくアッセイを使用した抗体ＣＴ１Ｅ１のＩＣ５０特性のグラフを示す図である。
【図３Ｂ】抗ＣＴＬＡ４抗体であるイピリムマブ（ヤーボイ）と比較した、ＣＤ８６（図３Ｂ）に基づくアッセイを使用した抗体ＣＴ１Ｅ１のＩＣ５０特性のグラフを示す図である。
【図４】低用量のスーパー抗原ブドウ球菌エンテロトキシンＢ（ＳＥＢ）に対する応答における抗ＣＴＬＡ４抗体Ｆ７の効果を決定する実験からの結果のグラフを示す図である。対照抗体（ｃＩｇ）は、アイソタイプが合致した非特異的（すなわち、ＣＴＬＡ４に結合しない。）抗体である。
【図５】抗ＣＴＬＡ４抗体Ｅ８の機能活性およびＴ細胞活性化を増進するその能力を示す図である。ＣＤ２５の発現レベルは、Ｅ８が添加されていた培養物においてより高かった。使用される対照抗体（対照Ｉｇ）は、アイソタイプが合致した非特異的（すなわち、ＣＴＬＡ４に結合しない。）抗体である。標準化されたデータは右側にある。
【発明を実施するための形態】
【００２６】
定義
用語「ペプチド」、「ポリペプチド」および「タンパク質」はそれぞれ、ペプチド結合により互いに繋がれている２つ以上のアミノ酸残基を含む分子を意味する。これらの用語は、例えば、タンパク質配列の天然および人工のタンパク質、タンパク質断片およびポリペプチド類似体（例えば、突然変異体、改変体および融合タンパク質）、ならびに翻訳後修飾、または他には共有結合もしくは非共有結合的に修飾されたタンパク質を包含する。ペプチド、ポリペプチドまたはタンパク質は、単量体または重合体であってもよい。
【００２７】
ポリペプチドの「改変体」（例えば、抗体の改変体）は、１つ以上のアミノ酸残基が、別のポリペプチド配列と比較してアミノ酸配列に挿入され、アミノ酸配列から欠失されおよび／または置換されるアミノ酸配列を含む。開示される改変体には、例えば、融合タンパク質が含まれる。
【００２８】
ポリペプチドの「誘導体」は、例えば、別の化学的部分（例えば、ポリエチレングリコールまたはアルブミン、例えば、ヒト血清アルブミンのような）へのコンジュゲーション、リン酸化およびグリコシル化を介して化学的に修飾されているポリペプチド（例えば、抗体）である。他に指示がない限り、用語「抗体」には、２つの全長重鎖および２つの全長軽鎖を含む抗体に加えて、それらの誘導体、改変体、断片および突然変異タンパク質が含まれ、それらの例を以下に記載する。
【００２９】
「抗原結合タンパク質」は、抗原に結合する部分を含むタンパク質であり、任意選択的に、抗原結合部分が、抗原結合タンパク質の抗原への結合を促進する構造を取ることを可能にする、骨格またはフレームワーク部分を含むタンパク質である。抗原結合タンパク質の例としては、抗体、抗体断片（例えば、抗体の抗原結合部分）、抗体誘導体および抗体類似体が含まれる。抗原結合タンパク質は、例えば、ＣＤＲまたはＣＤＲ誘導体が移植された、代替のタンパク質骨格または人工骨格を含んでいてもよい。このような骨格には、限定されないが、例えば、抗原結合タンパク質の３次元構造を安定化させるために導入される、突然変異を含む抗体由来の骨格、ならびに、例えば、生体適合性ポリマーを含む全合成骨格が含まれる。例えば、Ｋｏｒｎｄｏｒｆｅｒら、２００３年、Ｐｒｏｔｅｉｎｓ：Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ，Ｆｕｎｃｔｉｏｎ，ａｎｄ  Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ、Ｖｏｌｕｍｅ  ５３、Ｉｓｓｕｅ  １：１２１−１２９頁；Ｒｏｑｕｅら、２００４年、Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．Ｐｒｏｇ．２０巻：６３９−６５４頁を参照されたい。さらに、ペプチド抗体模倣体（「ＰＡＭ」）、ならびにフィブロネクチン成分を骨格として利用する抗体模倣物に基づく骨格を、使用することができる。
【００３０】
抗原結合タンパク質は、例えば、免疫グロブリンの構造を有することができる。「免疫グロブリン」は、２つの同一対のポリペプチド鎖で構成される四量体分子であり、各対は１つの「軽」鎖（約２５ｋＤａ）および１つの「重」鎖（約５０−７０ｋＤａ）を有する。各鎖のアミノ末端部分は、抗原認識に最初に関与する約１００から１１０個以上のアミノ酸の可変領域を含む。各鎖のカルボキシ末端部分は、エフェクター機能に最初に関与する定常領域を画定する。ヒトの軽鎖は、カッパまたはラムダ軽鎖として分類される。重鎖は、ミュー、デルタ、ガンマ、アルファまたはイプシロンとして分類され、抗体のアイソタイプをそれぞれＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＧ、ＩｇＡおよびＩｇＥと定義する。好ましくは、一実施形態において、本明細書に開示される抗ＣＴＬＡ４抗体は、重（ＶＨ）および軽（ＶＬ）アミノ酸配列におけるこれらの可変ドメイン領域配列によって特徴付けられる。一実施形態において、好ましい抗体は、カッパＩｇＧ抗体であるＡ６である。軽鎖および重鎖内において、可変領域および定常領域は、約１２個以上のアミノ酸の「Ｊ」領域によって結合し、重鎖はまた約１０個以上のアミノ酸の「Ｄ」領域も含む。一般的には、Ｆｕｎｄａｍｅｎｔａｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  Ｃｈ．７（Ｐａｕｌ，Ｗ．、編集、２ｎｄ  ｅｄ．Ｒａｖｅｎ  Ｐｒｅｓｓ、Ｎ．Ｙ．（１９８９年））を参照されたい。各々の軽鎖／重鎖の対の可変領域は、インタクトな免疫グロブリンが２つの結合部位を有するように抗体結合部位を形成する。
【００３１】
免疫グロブリン鎖の可変領域は、相補性決定領域またはＣＤＲとも呼ばれる３つの超可変領域によって繋がれた、比較的保存されたフレームワーク領域（ＦＲ）の同じ一般構造を示す。Ｎ末端からＣ末端へ、軽鎖と重鎖の両方とも、ＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３およびＦＲ４ドメインを含む。各ドメインへのアミノ酸の割り当ては、Ｋａｂａｔら、ｉｎ  Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ、５ｔｈ  Ｅｄ．、ＵＳ  Ｄｅｐｔ．ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ  ａｎｄ  Ｈｕｍａｎ  Ｓｅｒｖｉｃｅｓ、ＰＨＳ、ＮＩＨ、ＮＩＨ  Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ  ｎｏ．９１−３２４２、１９９１年の定義に従って行われる。免疫グロブリン鎖中のアミノ酸の他のナンバリングシステムには、ＩＭＧＴ（商標）（国際ＩｍＭｕｎｏＧｅｎｅＴｉｃｓ情報システム；Ｌｅｆｒａｎｃら、Ｄｅｖ．Ｃｏｍｐ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２９巻：１８５−２０３頁；２００５年）およびＡＨｏ（ＨｏｎｅｇｇｅｒおよびＰｌｕｃｋｔｈｕｎ、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．３０９巻（３号）：６５７−６７０頁；２００１年）が含まれる。
【００３２】
「抗体」とは、他に特記しない限り、インタクトな免疫グロブリン、または特異的結合に関してインタクトな抗体と競合する、インタクトな免疫グロブリンの抗原結合部分を指す。
【００３３】
一実施形態において、抗体は、重鎖可変ドメイン、軽鎖可変ドメイン、軽鎖定常領域（ＣＬ）、ならびに重鎖定常領域ＣＨ１、ＣＨ２およびＣＨ３を含む。重鎖および軽鎖可変ドメイン配列は、配列番号１から４４に本明細書に記載した配列から選択することができる。
【００３４】
抗体の抗原結合部分は、組換えＤＮＡ技術によって、またはインタクトな抗体の酵素的もしくは化学的切断によって生成され得る。抗原結合部分としては、とりわけ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、ドメイン抗体（ｄＡｂ）、および相補性決定領域（ＣＤＲ）断片、一本鎖抗体（ｓｃＦｖ）、キメラ抗体、ダイアボディ、トリアボディ、テトラボディ、およびポリペプチドに特異的抗原結合を与えるのに十分な免疫グロブリンの少なくとも一部分を含有するポリペプチドが挙げられる。
【００３５】
ある特定の実施形態において、抗体は、様々な抗原特異性を有する免疫グロブリンを含む血清または血漿のような供給源から得ることができる。このような抗体をアフィニティー精製に供する場合、それらは特定の抗原特異性に対して富化することができる。このような抗体の富化調製物は、通常、特定の抗原に対して特異的結合活性を有する約１０％未満の抗体で作製される。これらの調製物を数回の親和性精製を行うことにより、抗原に対して特異的結合活性を有する抗体の割合を増加することができる。この方法で製造された抗体は、多くの場合、「単一特異的」抗体と呼ばれる。
【００３６】
本明細書で使用される用語「単一特異的」とは、１つの特定のエピトープに対して親和性を示す抗体を意味する。単一特異的抗体調製物は、特定抗原に対する特異的結合活性を有する、約１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９７％または９９．９％の抗体により作製することができる。
【００３７】
「抗体断片」または「抗体の抗原結合断片」は、インタクトな抗体の一部を含み、好ましくは抗体抗原結合ドメインまたは可変ドメインを含む。抗体断片の例としては、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ断片および直鎖状抗体が挙げられる。
【００３８】
Ｆａｂ断片は、ＶＬ、ＶＨ、ＣＬおよびＣＨ１ドメインを有する一価断片であり；Ｆ（ａｂ’）２断片は、ヒンジ領域でジスルフィド架橋によって連結された２つのＦａｂ断片を有する二価断片であり；Ｆｄ断片は、ＶＨおよびＣＨ１ドメインを有し；Ｆｖ断片は、抗体の単一アームのＶＬおよびＶＨドメインを有し；ｄＡｂ断片は、ＶＨドメイン、ＶＬドメイン、またはＶＨもしくはＶＬドメインの抗原結合断片を有する（米国特許第６，８４６，６３４号、同第６，６９６，２４５号；米国出願公開第２００２／０２５１２号、同第２００４／０２０２９９５号、同第２００４／００３８２９１号、同第２００４／０００９５０７号、同第２００３／００３９９５８号；Ｗａｒｄら、Ｎａｔｕｒｅ  ３４１巻：５４４−５４６頁、１９８９年）。
【００３９】
一本鎖抗体（ｓｃＦｖ）は、ＶＬおよびＶＨ領域がリンカー（例えば、アミノ酸残基の合成配列）を介して連結されて、連続タンパク質鎖を形成する抗体断片であり、ここで、リンカーは、タンパク質鎖がそれ自体に折り重ねられて一価抗原結合部位を形成することを可能にするのに十分に長い（例えば、Ｂｉｒｄら、１９８８年、Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４２巻：４２３−２６頁、およびＨｕｓｔｏｎら、１９８８年、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８５巻：５８７９−８３頁参照）。
【００４０】
ダイアボディは、２つのポリペプチド鎖を含む二価抗体であり、各ポリペプチド鎖は、同じ鎖の２つのドメイン同士を対合させるには短すぎ、故に、各ドメインを別のポリペプチド鎖の相補性ドメインと対合させるのを可能にするリンカーによって繋がれているＶＨおよびＶＬドメインを含む（例えば、Ｈｏｌｌｉｇｅｒら、１９９３年、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９０巻：６４４４−４８頁、およびＰｏｌｊａｋら、１９９４年、Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ  ２巻：１１２１−２３頁参照）。ダイアボディの２つのポリペプチド鎖が同一のとき、それらの対合からもたらされるダイアボディは２つの同一の抗原結合部位を有することになる。異なる配列を有するポリペプチド鎖を使用して、２つの異なる抗原結合部位を有するダイアボディを作製することができる。同様に、トリアボディおよびテトラボディは、それぞれ３つおよび４つのポリペプチド鎖を含み、それぞれ、同じでありまたは異なっていてよい、３つおよび４つの抗原結合部位を形成する、抗体である。
【００４１】
抗原結合タンパク質、例えば、抗体は、１つ以上の結合部位を有し得る。１を超える結合部位があるとき、結合部位は、互いに同一であってもよくまたは異なってもよい。例えば、天然に存在するヒト免疫グロブリンは、典型的には、２つの同一な結合部位を有し、一方で、「二重特異性」または「二機能性」抗体は、２つの異なる結合部位を有する。
【００４２】
用語「ヒト抗体」には、ヒト免疫グロブリン配列に由来する１つ以上の可変領域および定常領域を有する全ての抗体が含まれる。一実施形態において、抗体の可変ドメインおよび定常ドメインの全ては、ヒト免疫グロブリン配列（「完全ヒト抗体」と呼ばれる。）に由来する。これらの抗体は、ヒト重鎖および／または軽鎖をコードする遺伝子に由来する抗体を発現するように遺伝子修飾されたマウスの目的の抗原を用いた免疫化を介することを含む、様々な方法において調製することができ、その例は以下に記載される。好ましい実施形態において、完全ヒト抗体は、抗体のグリコシル化パターンが、天然に存在する場合、同じ配列を有する抗体とは異なるものとなるように組換え法を用いて作製される。
【００４３】
「ヒト化抗体」は、１つ以上のアミノ酸の置換、欠失および／または付加によって非ヒト種に由来する抗体の配列とは異なる配列を有し、そのため、ヒト化抗体は、ヒト対象に投与されるとき、非ヒト種抗体と比較して、免疫応答を誘発する可能性が低く、および／または重篤度がより低い免疫応答を誘導する。一実施形態において、非ヒト種抗体の重鎖および／または軽鎖のフレームワークドメインおよび定常ドメイン内のある種のアミノ酸を突然変異させてヒト化抗体を作製する。別の実施形態において、ヒト抗体に由来する定常ドメインを非ヒト種の可変ドメインに融合する。別の実施形態において、非ヒト抗体の１つ以上のＣＤＲ配列における１つ以上のアミノ酸残基を変更して、それがヒト対象に投与される場合の非ヒト抗体の可能性のある免疫原性を低減させ、ここで、変更されたアミノ酸残基は、その抗原への抗体の免疫特異的結合に重要ではない、または行われるアミノ酸配列への変更は保存的変更であり、そのため、ヒト化抗体の抗原への結合が非ヒト抗体の抗原への結合よりも顕著には悪くならない。ヒト化抗体の作製方法の例は、米国特許第６，０５４，２９７号、第５，８８６，１５２号および第５，８７７，２９３号に見出すことができる。
【００４４】
用語「キメラ抗体」とは、１つの抗体に由来する１つ以上の領域、および１つ以上の他の抗体に由来する１つ以上の領域とを含有する抗体を意味する。一実施形態において、ＣＤＲの１つ以上は、ヒト抗ＣＴＬＡ４抗体に由来する。別の実施形態において、ＣＤＲの全てはヒト抗ＣＴＬＡ４抗体に由来する。別の実施形態において、１を超えるヒト抗ＣＴＬＡ４抗体に由来するＣＤＲを混合し、キメラ抗体に合致させる。例えば、キメラ抗体は、第１のヒト抗ＰＡＲ−２抗体の軽鎖由来のＣＤＲ１、第２のヒト抗ＣＴＬＡ４抗体の軽鎖由来のＣＤＲ２およびＣＤＲ３、ならびに第３の抗ＣＴＬＡ４抗体の重鎖由来のＣＤＲを含み得る。他の組合せも可能である。
【００４５】
さらに、フレームワーク領域は、同じ抗ＣＴＬＡ４抗体の１つに由来し、ヒト抗体のような１つ以上の異なる抗体に由来、またはヒト化抗体に由来してもよい。キメラ抗体の１つの例において、重鎖および／または軽鎖の一部分は、特定の種に由来し、または特定の抗体クラスもしくはサブクラスに属する抗体と、同一であり、相同であり、またはそれに由来するが、一方で、その鎖の残りの部分は、別の種に由来し、または別の抗体クラスもしくはサブクラスに属する抗体と、同一であり、相同であり、またはそれに由来する。所望の生物学的活性（すなわち、ＣＴＬＡ４に特異的に結合する能力）を示す、このような抗体の断片もまた含まれる。
【００４６】
「中和抗体」または「阻害抗体」は、ＣＴＬＡ４活性を阻害する、例えば、ＣＴＬＡ４のタンパク質分解活性化を阻害する、アンタゴニスト抗体である。一実施形態において、ＣＴＬＡ４のタンパク質分解活性は、過剰量の抗ＣＴＬＡ４抗体が、実施例において本明細書に記載されるアッセイのようなアッセイを使用して、活性化の量を少なくとも約２０％減少させる場合に決定される。様々な実施形態において、抗原結合タンパク質は、ＣＴＬＡ４のタンパク質分解活性の量を少なくとも３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９７％、９９％および９９．９％減少させる。
【００４７】
「ＣＤＲ移植抗体」は、特定の種またはアイソタイプの抗体由来の１つ以上のＣＤＲ、および同一でありまたは異なる種またはアイソタイプの別の抗体のフレームワークを含む抗体である。
【００４８】
「多重特異的抗体」は、１つ以上の抗原上に１を超えるエピトープを認識する抗体である。抗体のこのタイプのサブクラスは、同一でありまたは異なる抗原上の２つの異なるエピトープを認識する「二重特異的抗体」である。
【００４９】
抗原結合タンパク質は、１ナノモル以下の解離定数で抗原に結合するとき、抗原（例えば、ヒトＣＴＬＡ４）に「特異的に結合する」。
【００５０】
「抗原結合ドメイン」、「抗原結合領域」または「抗原結合部位」とは、抗原と相互作用し、抗原結合タンパク質の抗原に対する特異性および親和性に貢献するアミノ酸残基（または他の部分）を含む、抗原結合タンパク質の一部である。その抗原に特異的に結合する抗体に関して、これは、そのＣＤＲドメインの少なくとも１つの少なくとも一部を含む。
【００５１】
用語「Ｆｃポリペプチド」には、抗体のＦｃ領域に由来するポリペプチドの天然および突然変異形態が含まれる。二量体化を促進するヒンジ領域を含有するこのようなポリペプチドの切断形態もまた含まれる。Ｆｃ部分を含む融合タンパク質（およびそこから形成されたオリゴマー）は、プロテインＡまたはプロテインＧカラム上の親和性クロマトグラフィーによる容易な精製という利点を提供する。
【００５２】
「エピトープ」は、抗原結合タンパク質によって（例えば、抗体によって。）結合される分子の部分である。エピトープは、分子の接触していない部分（例えば、ポリペプチド中、ポリペプチドの一次配列にて互いに連続しないが、ポリペプチドの三次構造および四次構造に関しては、抗原結合タンパク質によって結合されるのに十分近いアミノ酸残基）を含んでいてもよい。
【００５３】
２つのポリヌクレオチドまたは２つのポリペプチド配列の「同一性パーセント」または「相同性パーセント」は、ＧＡＰコンピュータープログラム（ＧＣＧ  Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ  Ｐａｃｋａｇｅ、ｖｅｒｓｉｏｎ  １０．３（Ａｃｃｅｌｒｙｓ、Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ、Ｃａｌｉｆ．）の一部）を使用して、そのデフォルトパラメーターを使用して配列を比較することにより決定される。
【００５４】
用語「ポリヌクレオチド」、「オリゴヌクレオチド」および「核酸」は、本明細書中、互換的に使用され、ＤＮＡ分子（例えば、ｃＤＮＡまたはゲノムＤＮＡ）、ＲＮＡ分子（例えば、ｍＲＮＡ）、ヌクレオチド類似体（例えば、ペプチド、核酸および天然に存在しないヌクレオチド類似体）を使用して作製されるＤＮＡまたはＲＮＡの類似体、およびそれらのハイブリッドを含む。核酸分子は、一本鎖または二本鎖であり得る。一実施形態において、本発明の核酸分子は、抗体、または断片、その誘導体、突然変異体もしくは変異体をコードする隣接するオープンリーディングフレームを含む。
【００５５】
２つの一本鎖ポリヌクレオチドは、それらの配列が、１つのポリヌクレオチド中の各ヌクレオチドが、ギャップの導入がなく、およびそれぞれの配列の５’末端または３’末端に不対ヌクレオチドがなく、他のポリヌクレオチド中のその相補的ヌクレオチドと反対になるように、逆並行方向に整列され得るとき、互いの「相補体」である。ポリヌクレオチドは、２つのポリヌクレオチドが適度にストリンジェントな条件下で互いにハイブリダイズし得るとき、別のポリヌクレオチドに「相補的」である。したがって、ポリヌクレオチドは、その相補体ではない別のポリヌクレオチドに相補的であってよい。
【００５６】
「ベクター」は、細胞にそれと結合された別の核酸を導入するために使用され得る核酸である。１つのタイプのベクターは、「プラスミド」であり、付加的核酸部分がそこに結合され得る、直線状または環状の二本鎖ＤＮＡ分子を意味する。別のタイプのベクターは、ウイルスベクター（例えば、複製欠損レトロウイルス、アデノウイルスおよびアデノ関連ウイルス）であり、付加的ＤＮＡ部分がウイルスゲノム中に導入され得る。ある種のベクターは、それらが導入される宿主細胞中で自律的に複製可能である（例えば、細菌の複製起点を含む細菌ベクターおよびエピソーム哺乳動物ベクター）。他のベクター（例えば、非エピソーム哺乳動物ベクター）は、宿主細胞への導入時に、宿主細胞のゲノムに組み込まれ、それにより、宿主ゲノムとともに複製される。「発現ベクター」は、目的のポリヌクレオチドを発現させ得るタイプのベクターである。
【００５７】
ヌクレオチド配列は、調節配列がヌクレオチド配列の発現（例えば、発現のレベル、時期または場所）に影響を与えるとき、調節配列に「作動可能に連結されている」。「調節配列」は、それが作動可能に連結されている核酸の発現（例えば、発現のレベル、時期または場所）に影響を与える核酸である。調節配列は、例えば、調節核酸に直接、または１つ以上の他の分子（例えば、調節配列および／または核酸に結合するポリペプチド）の作用を介して、その影響を及ぼし得る。調節配列の例としては、プロモーター、エンハンサーおよび他の発現制御エレメント（例えば、ポリアデニル化シグナル）が挙げられる。調節配列のさらなる例は、例えば、Ｇｏｅｄｄｅｌ、１９９０年、Ｇｅｎｅ  Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ：Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ  １８５，Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，Ｃａｌｉｆ，およびＢａｒｏｎら、１９９５年、Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．２３巻：３６０５−０６頁に記載されている。
【００５８】
「宿主細胞」は、核酸、例えば、本発明の核酸を発現するために使用され得る細胞である。宿主細胞は、原核生物、例えばＥ．コリ（Ｅ．ｃｏｌｉ）であり、または真核生物、例えば、単細胞真核生物（例えば、酵母または他の菌類）、植物細胞（例えば、タバコまたはトマト植物細胞）、動物細胞（例えば、ヒト細胞、サル細胞、ハムスター細胞、ラット細胞、マウス細胞、または昆虫細胞）またはハイブリドーマであり得る。宿主細胞の例としては、サル腎臓細胞のＣＯＳ−７株（ＡＴＣＣ  ＣＲＬ  １６５１）（Ｇｌｕｚｍａｎら、１９８１年、Ｃｅｌｌ  ２３巻：１７５頁参照）、Ｌ細胞、Ｃ１２７細胞、３Ｔ３細胞（ＡＴＣＣ  ＣＣＬ  １６３）、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞もしくはＶｅｇｇｉｅ  ＣＨＯおよび血清不含有培地中で増殖させた関連する細胞株（Ｒａｓｍｕｓｓｅｎら、１９９８年、Ｃｙｔｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ２８巻：３１頁参照）のようなそれらの誘導株、またはＤＨＦＲ中に欠損を有するＣＨＯ株ＤＸ−Ｂ１１（Ｕｒｌａｕｂら、１９８０年、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ７７巻：４２１６−２０頁参照）、ＨｅＬａ細胞、ＢＨＫ（ＡＴＣＣ  ＣＲＬ  １０）細胞株、アフリカミドリザル腎臓細胞株ＣＶ１由来のＣＶ１／ＥＢＮＡ細胞株（ＡＴＣＣ  ＣＣＬ  ７０）（ＭｃＭａｈａｎら、１９９１年、ＥＭＢＯ  Ｊ．１０巻：２８２１頁参照）、２９３、２９３  ＥＢＮＡまたはＭＳＲ  ２９３のようなヒト胎児性腎臓細胞、ヒト上皮Ａ４３１細胞、ヒトＣｏｌｏ２０５細胞、他の形質転換した霊長動物細胞株、正常２倍体細胞、インビトロでの一次組織培養物に由来する細胞株、初代外植片、ＨＬ−６０、Ｕ９３７、ＨａＫまたはＪｕｒｋａｔ細胞が挙げられる。一実施形態において、宿主細胞は、哺乳動物宿主細胞であるが、ヒト宿主細胞ではない。典型的に、宿主細胞は、ポリペプチドをコードする核酸を用いて形質転換またはトランスフェクトされ得て、次に、宿主細胞中で発現され得る培養細胞である。語句「組換え宿主細胞」は、発現されるべき核酸を用いて形質転換またはトランスフェクトされている宿主細胞を示すために用いられ得る。宿主細胞はまた、核酸を含むが、核酸と作動可能に連結されるように、調節配列が宿主細胞中に導入されない限り、所望のレベルでそれを発現しない細胞であり得る。宿主細胞なる用語は、特定の対象細胞のみを意味するのではなく、このような細胞の後代系統または可能性のある後代系統を意味することが理解される。ある種の修飾がその後代において、例えば突然変異または環境の影響により起こり得るため、このような後代系統は、実際に、親細胞と同一ではない場合があるが、それでも本明細書において用いられる用語の範囲内に包含される。
【００５９】
用語「組換え抗体」とは、抗体のコード配列を含む発現ベクター（または場合により１を超える発現ベクター、典型的には２つの発現ベクター）をトランスフェクトされた細胞または細胞株から発現される抗体を意味し、この場合、該コード配列は、天然において細胞と関連していない。一実施形態において、組換え抗体は、天然に存在する場合、同じ配列を有する抗体のグリコシル化パターンとは異なるグリコシル化パターンを有する。一実施形態において、組換え抗体は、ヒト宿主細胞ではない哺乳動物宿主細胞において発現される。特に、個々の哺乳動物宿主細胞は、固有のグリコシル化パターンを有する。
【００６０】
本明細書で使用される用語「有効量」とは、対象に投与される場合、本明細書に記載されるＣＴＬＡ４依存性シグナル伝達に関連する疾患の治療、予後診断または診断を達成するのに十分な、ＣＴＬＡ４に結合する抗体またはその抗原結合部分の量を意味する。本明細書において提供される治療有効量の抗体は、単独でまたは組み合わせて使用される場合、抗体および組合せの相対活性（例えば、細胞増殖の阻害における。）に依存して変化し、処置される対象および疾患状態、対象の体重および年齢、疾患状態の重症度、投与様式などに依存して変化し、これらは当業者によって容易に決定され得る。
【００６１】
用語「単離された」とは、他の細胞物質および／または化学物質を実質的に含まないタンパク質（例えば、抗体）を意味する。一実施形態において、単離された抗体は、同じ種に由来する他のタンパク質を実質的に含まない。一実施形態において、単離された抗体は、異なる種由来の細胞によって発現され、異なる種由来の他のタンパク質を実質的に含まない。タンパク質は、当該技術分野において周知であるタンパク質精製技術を使用して、単離により、天然に会合した成分（または抗体を産生するために使用される細胞発現系に関連する成分）を実質的に含まない状態であってもよい。一実施形態において、本発明の抗体または抗原結合断片が単離される。
【００６２】
ＣＴＬＡ４抗原結合タンパク質
本発明は、ＣＴＬＡ４に結合するＣＴＬＡ４結合タンパク質、特に抗ＣＴＬＡ４抗体またはそれらの抗原結合部分、およびその使用に関する。本発明の様々な態様は、抗体および抗体断片、医薬組成物、核酸、組換え発現ベクター、ならびにこのような抗体および断片を作製するための宿主細胞に関する。ヒトＣＴＬＡ４を検出するため、インビトロまたはインビボのいずれかでＣＴＬＡ４活性を阻害するため、およびがんのような障害を予防または治療するための本発明の抗体の使用方法はまた、本発明により包含される。
【００６３】
以下の表４に記載されるように、本発明には、ＣＴＬＡ４に特異的な新規抗体の重鎖および軽鎖可変領域が含まれる。一実施形態において、本発明は、配列番号１、３、５、７、９、１１、１３、１５、１７、１９、２１、２３、２５、２７、２９、３１、３３、３５、３７、３９、４１または４３のいずれか１つに記載されるアミノ酸配列を含む可変ドメインを有する重鎖を含む抗ＣＴＬＡ４抗体またはその抗原結合断片を提供する。一実施形態において、本発明は、配列番号２、４、６、８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２２、２４、２６、２８、３０、３２、３４、３６、３８、４０、４２および４４のいずれか１つに記載されるアミノ酸配列を含む可変ドメインを有する軽鎖を含む抗ＣＴＬＡ４抗体またはその抗原結合断片を提供する。一実施形態において、本発明は、配列番号１、３、５、７、９、１１、１３、１５、１７、１９、２１、２３、２５、２７、２９、３１、３３、３５、３７、３９、４１および４３のいずれか１つに記載されるアミノ酸配列を含む可変ドメインを有する重鎖を含み；配列番号２、４、６、８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２２、２４、２６、２８、３０、３２、３４、３６、３８、４０、４２および４４のいずれか１つに記載されるアミノ酸配列を含む可変ドメインを有する軽鎖を含む抗ＣＴＬＡ４抗体またはその抗原結合断片を提供する。
【００６４】
相補性決定領域（ＣＤＲ）は、軽鎖可変ドメインと重鎖可変ドメインの両方の超可変領域として知られている。可変ドメインのより高度に保存された部分は、フレームワーク（ＦＲ）と呼ばれる。所定の抗体の相補性決定領域（ＣＤＲ）およびフレームワーク領域（ＦＲ）は、上記のＫａｂａｔら；上記のＬｅｆｒａｎｃらおよび／または上記のＨｏｎｅｇｇｅｒおよびＰｌｕｃｋｔｈｕｎに記載のシステムを使用して、同定することができる。また、当業者が親しいのは、Ｋａｂａｔら（１９９１年、ＮＩＨ  Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ  ９１−３２４２、Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｔｅｃｈｎｉｃａｌ  Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ  Ｓｅｒｖｉｃｅ、Ｓｐｒｉｎｇｆｉｅｌｄ、Ｖａ）に記載される番号付けシステムである。これに関して、Ｋａｂａｔらは、任意の抗体に適用可能な可変ドメイン配列のための番号付けシステムを定義した。当業者は、配列自体を超えたいずれの実験データに依存することなく、この「カバット番号付け」システムを任意の可変ドメインのアミノ酸配列に明白に割り当てることができる。代替の番号付けは、Ｃｈｏｔｈｉａら、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６巻：９０１−９１７頁（１９８７年）およびＭａｃＣａｌｌｕｍら、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２６２巻：７３２−７４５頁（１９９６年）に記載されているが、Ｋａｂａｔの場合と同様に、ＦＲ境界は、上記のようにそれぞれのＣＤＲ末端によって分離されている。また、Ｃｈｏｔｈｉａら、Ｎａｔｕｒｅ  ３４２巻、８７７−８８３頁（１９８９年）およびＳ．Ｄｕｂｅｌ、編集、Ｈａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ、第３版、ＷＩＬＥＹ−ＶＣＨ  Ｖｅｒｌａｇ  ＧｍｂＨ  ａｎｄ  Ｃｏ．（２００７年）を参照されたい。この場合、定義は、互いに比較したときにアミノ酸残基の重複またはサブセットを含む。
【００６５】
ある特定の実施形態において、本発明は、表４に記載の重鎖および軽鎖可変領域のＣＤＲを含む抗ＣＴＬＡ４抗体を提供する（配列番号１−４４）。例えば、本発明は、配列番号１、３、５、７、９、１１、１３、１５、１７、１９、２１、２３、２５、２７、２９、３１、３３、３５、３７、３９、４１または４３のいずれか１つに記載されるアミノ酸配列に記載されるＣＤＲを有する重鎖可変領域を含む抗ＣＴＬＡ４抗体またはその抗原結合断片を提供する。一実施形態において、本発明は、配列番号２、４、６、８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２２、２４、２６、２８、３０、３２、３４、３６、３８、４０、４２および４４のいずれか１つに記載されるアミノ酸配列に記載されるＣＤＲを有する軽鎖可変領域を含む抗ＣＴＬＡ４抗体またはその抗原結合断片を提供する。一実施形態において、本発明は、配列番号２、４、６、８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２２、２４、２６、２８、３０、３２、３４、３６、３８、４０、４２および４４のいずれか１つに記載されるアミノ酸配列に記載されるＣＤＲを有する軽鎖可変領域を含み；配列番号１、３、５、７、９、１１、１３、１５、１７、１９、２１、２３、２５、２７、２９、３１、３３、３５、３７、３９、４１または４３のいずれか１つに記載されるアミノ酸配列に記載されるＣＤＲを有する重鎖可変領域を含む抗ＣＴＬＡ４抗体またはその抗原結合断片を提供する。
【００６６】
１つ以上のＣＤＲは、共有結合または非共有結合のいずれかで分子に組み込まれて、それを抗原結合タンパク質にすることができる。
【００６７】
抗原結合タンパク質は、ＣＤＲをより大きなポリペプチド鎖の一部として組み込むことができ、ＣＤＲを別のポリペプチド鎖に共有結合させることができ、またはＣＤＲを非共有結合的に組み込むことができる。ＣＤＲは、抗原結合タンパク質が、目的とされる特定の抗原に特異的に結合することを可能にする。
【００６８】
一実施形態において、本開示は、配列番号１、配列番号３、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号９、配列番号１１、配列番号１３、配列番号１５、配列番号１７、配列番号１９、配列番号２１、配列番号２３、配列番号２５、配列番号２７、配列番号２９、配列番号３１、配列番号３３、配列番号３５、配列番号３７、配列番号３９、配列番号４１、配列番号４３からなる群から選択されるアミノ酸配列と少なくとも９５％同一である重鎖可変ドメイン配列を有し、および配列番号２、配列番号４、配列番号６、配列番号８、配列番号１０、配列番号１２、配列番号１４、配列番号１６、配列番号１８、配列番号２０、配列番号２２、配列番号２４、配列番号２６、配列番号２８、配列番号３０、配列番号３２、配列番号３４、配列番号３６、配列番号３８、配列番号４０、配列番号４２、配列番号４４からなるアミノ酸配列と少なくとも９５％同一である軽鎖可変ドメイン配列を有する、ＣＴＬＡ４エピトープに結合するＩｇＧクラスの単離された完全ヒト抗体を提供する。
【００６９】
一実施形態において、単離された完全ヒト抗体は、重鎖と軽鎖の両方を有し、ここで、抗体は、配列番号１／配列番号２（本明細書においてＡ１と呼ばれる。）、配列番号３／配列番号４（本明細書においてＡ２と呼ばれる。）、配列番号５／配列番号６（本明細書においてＡ４と呼ばれる。）、配列番号７／配列番号８（本明細書においてＡ７と呼ばれる。）、配列番号９／配列番号１０（本明細書においてＡ１２と呼ばれる。）、配列番号１１／配列番号１２（本明細書においてＢ６呼ばれる。）、配列番号１３／配列番号１４（本明細書においてＣ２と呼ばれる。）、配列番号１５／配列番号１６（本明細書においてＤ６と呼ばれる。）、配列番号１７／配列番号１８（本明細書においてＦ１と呼ばれる。）、配列番号１９／配列番号２０（本明細書においてＦ３と呼ばれる。）、配列番号２１／配列番号２２（本明細書においてＦ５と呼ばれる。）、配列番号２３／配列番号２４（本明細書においてＦ６と呼ばれる。）、配列番号２５／配列番号２６（本明細書においてＦ７と呼ばれる。）、配列番号２７／配列番号２８（本明細書においてＧ１と呼ばれる。）、配列番号２９／配列番号３０（本明細書においてＧ２と呼ばれる。）、配列番号３１／配列番号３２（本明細書においてＧ３と呼ばれる。）、配列番号３３／配列番号３４（本明細書においてＧ５と呼ばれる。）、配列番号３５／配列番号３６（本明細書においてＧ１２と呼ばれる。）、配列番号３７／配列番号３８（本明細書においてＤ５と呼ばれる。）、配列番号３９／配列番号４０（本明細書においてＥ７と呼ばれる。）、配列番号４１／配列番号４２（本明細書においてＥ８と呼ばれる。）、配列番号４３／配列番号４４（本明細書においてＣＴ１Ｅ１と呼ばれる。）、およびこれらの組合せからなる群から選択される重鎖／軽鎖可変ドメイン配列を有する。
【００７０】
一実施形態では、本発明は、配列番号１、３、５、７、９、１１、１３、１５、１７、１９、２１、２３、２５、２７、２９、３１、３３、３５、３７、３９、４１および４３のいずれか１つに記載されるＣＤＲ３ドメインを含み、配列番号１、３、５、７、９、１１、１３、１５、１７、１９、２１、２３、２５、２７、２９、３１、３３、３５、３７、３９、４１および４３のいずれか１つに記載される配列と少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％または少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含む可変ドメインを含む重鎖を含む抗ＣＴＬＡ４抗体またはその抗原結合断片を提供する。一実施形態では、本発明は、配列番号２、４、６、８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２２、２４、２６、２８、３０、３２、３４、３６、３８、４０、４２および４４のいずれか１つに記載されるＣＤＲ３ドメインを含み、配列番号２、４、６、８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２２、２４、２６、２８、３０、３２、３４、３６、３８、４０、４２および４４のいずれか１つに記載される配列と少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％または少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを有する軽鎖を含む抗ＣＴＬＡ４抗体またはその抗原結合断片を提供する。したがって、ある特定の実施形態において、抗体またはその抗原結合断片が、ＣＴＬＡ４に結合する能力を保持し、親の機能的特徴、例えば結合親和性を保持する一方で、重鎖および／または軽鎖の残りのＣＤＲおよび／またはフレームワーク領域に可変性を導入することができるが、ＣＤＲ３ドメインは一定に保つ。
【００７１】
一実施形態において、少なくとも９５％同一（または少なくとも９６％同一、または少なくとも９７％同一、または少なくとも９８％同一、または少なくとも９９％同一）である重鎖または軽鎖内でなされる置換は、保存的アミノ酸置換である。「保存的アミノ酸置換」は、アミノ酸残基が、類似の化学的特性（例えば、電荷または疎水性）を有する側鎖（Ｒ基）を有する別のアミノ酸残基によって置換されているものである。一般的に、保存的アミノ酸置換は、タンパク質の機能的特性を実質的に変化させない。２つ以上のアミノ酸配列が保存的置換によって互いに異なる場合、置換の保存的性質を正すために、配列同一性パーセントまたは類似性の程度を上方に調整することがある。この調節を行うための手段は、当業者に周知である。例えば、参照により本明細書に組み込む、Ｐｅａｒｓｏｎ（１９９４年）Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２４巻：３０７−３３１頁を参照されたい。類似の化学的特性を有する側鎖を有するアミノ酸の群の例には、以下が含まれる。（１）脂肪族側鎖：グリシン、アラニン、バリン、ロイシンおよびイソロイシン；（２）脂肪族−ヒドロキシル側鎖：セリンおよびスレオニン；（３）アミド含有側鎖：アスパラギンおよびグルタミン；（４）芳香族側鎖：フェニルアラニン、チロシン、およびトリプトファン；（５）塩基性側鎖：リジン、アルギニン、およびヒスチジン；（６）酸性側鎖：アスパラギン酸およびグルタミン酸、ならびに（７）硫黄含有側鎖はシステインおよびメチオニンである。
【００７２】
一実施形態において、本発明は、抗体Ａ１の抗原結合領域を有する、抗体またはその抗原結合断片に関する。一実施形態において、本発明は、配列番号１に記載される重鎖可変ドメイン配列、および配列番号２に記載される軽鎖可変ドメイン配列を含む抗体またはその抗原結合断片を提供する。一実施形態において、本発明は、配列番号１のＣＤＲを含む重鎖可変ドメイン、および配列番号２のＣＤＲを含む軽鎖可変ドメインを有する抗体に関する。一実施形態において、本発明は、配列番号１に記載される配列と少なくとも９５％同一、少なくとも９６％同一、少なくとも９７％同一、少なくとも９８％同一、または少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を有する重鎖可変領域を含み、配列番号２に記載される配列と少なくとも９５％同一、少なくとも９６％同一、少なくとも９７％同一、少なくとも９８％同一、または少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を含む、単離されたヒト抗体またはその抗原結合断片を特徴とする。さらに、抗体は、ＩｇＧ１アイソタイプまたはＩｇＧ４アイソタイプであってもよい。
【００７３】
一実施形態において、本発明は、抗体Ａ２の抗原結合領域を有する抗体またはその抗原結合断片に関する。一実施形態において、本発明は、配列番号３に記載される重鎖可変ドメイン配列、および配列番号４に記載される軽鎖可変ドメイン配列を含む抗体またはその抗原結合断片を提供する。一実施形態において、本発明は、配列番号３のＣＤＲを含む重鎖可変ドメイン、および配列番号４のＣＤＲを含む軽鎖可変ドメインを有する抗体に関する。一実施形態において、本発明は、配列番号３に記載される配列と少なくとも９５％同一、少なくとも９６％同一、少なくとも９７％同一、少なくとも９８％同一、または少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を有する重鎖可変領域を含み、配列番号４に記載される配列と少なくとも９５％同一、少なくとも９６％同一、少なくとも９７％同一、少なくとも９８％同一、または少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を含む、単離されたヒト抗体またはその抗原結合断片を特徴とする。さらに、抗体は、ＩｇＧ１アイソタイプまたはＩｇＧ４アイソタイプであってもよい。
【００７４】
一実施形態において、本発明は、抗体Ａ４の抗原結合領域を有する抗体またはその抗原結合断片に関する。一実施形態において、本発明は、配列番号５に記載される重鎖可変ドメイン配列、および配列番号６に記載される軽鎖可変ドメイン配列を含む抗体またはその抗原結合断片を提供する。一実施形態において、本発明は、配列番号５のＣＤＲを含む重鎖可変ドメイン、および配列番号６のＣＤＲを含む軽鎖可変ドメインを有する抗体に関する。一実施形態において、本発明は、配列番号５に記載される配列と少なくとも９５％同一、少なくとも９６％同一、少なくとも９７％同一、少なくとも９８％同一、または少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を有する重鎖可変領域を含み、配列番号６に記載される配列と少なくとも９５％同一、少なくとも９６％同一、少なくとも９７％同一、少なくとも９８％同一、または少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を含む、単離されたヒト抗体またはその抗原結合断片を特徴とする。さらに、抗体は、ＩｇＧ１アイソタイプまたはＩｇＧ４アイソタイプであってもよい。
【００７５】
一実施形態において、本発明は、抗体Ａ７の抗原結合領域を有する抗体またはその抗原結合断片に関する。一実施形態において、本発明は、配列番号７に記載される重鎖可変ドメイン配列、および配列番号８に記載される軽鎖可変ドメイン配列を含む抗体またはその抗原結合断片を提供する。一実施形態において、本発明は、配列番号７のＣＤＲを含む重鎖可変ドメイン、および配列番号８のＣＤＲを含む軽鎖可変ドメインを有する抗体に関する。一実施形態において、本発明は、配列番号７に記載される配列と少なくとも９５％同一、少なくとも９６％同一、少なくとも９７％同一、少なくとも９８％同一、または少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を有する重鎖可変領域を含み、配列番号８に記載される配列と少なくとも９５％同一、少なくとも９６％同一、少なくとも９７％同一、少なくとも９８％同一、または少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を含む、単離されたヒト抗体またはその抗原結合断片を特徴とする。さらに、抗体は、ＩｇＧ１アイソタイプまたはＩｇＧ４アイソタイプであってもよい。
【００７６】
一実施形態において、本発明は、抗体Ａ１２の抗原結合領域を有する抗体またはその抗原結合断片に関する。一実施形態において、本発明は、配列番号９に記載される重鎖可変ドメイン配列、および配列番号１０に記載される軽鎖可変ドメイン配列を含む抗体またはその抗原結合断片を提供する。一実施形態において、本発明は、配列番号９のＣＤＲを含む重鎖可変ドメイン、および配列番号１０のＣＤＲを含む軽鎖可変ドメインを有する抗体に関する。一実施形態において、本発明は、配列番号９に記載される配列と少なくとも９５％同一、少なくとも９６％同一、少なくとも９７％同一、少なくとも９８％同一、または少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を有する重鎖可変領域を含み、配列番号１０に記載される配列と少なくとも９５％同一、少なくとも９６％同一、少なくとも９７％同一、少なくとも９８％同一、または少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を含む、単離されたヒト抗体またはその抗原結合断片を特徴とする。さらに、抗体は、ＩｇＧ１アイソタイプまたはＩｇＧ４アイソタイプであってもよい。
【００７７】
一実施形態において、本発明は、抗体Ｂ６の抗原結合領域を有する抗体またはその抗原結合断片に関する。一実施形態において、本発明は、配列番号１１に記載される重鎖可変ドメイン配列、および配列番号１２に記載される軽鎖可変ドメイン配列を含む抗体またはその抗原結合断片を提供する。一実施形態において、本発明は、配列番号１１のＣＤＲを含む重鎖可変ドメイン、および配列番号１２のＣＤＲを含む軽鎖可変ドメインを有する抗体に関する。一実施形態において、本発明は、配列番号１１に記載される配列と少なくとも９５％同一、少なくとも９６％同一、少なくとも９７％同一、少なくとも９８％同一、または少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を有する重鎖可変領域を含み、配列番号１２に記載される配列と少なくとも９５％同一、少なくとも９６％同一、少なくとも９７％同一、少なくとも９８％同一、または少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を含む、単離されたヒト抗体またはその抗原結合断片を特徴とする。さらに、抗体は、ＩｇＧ１アイソタイプまたはＩｇＧ４アイソタイプであってもよい。
【００７８】
一実施形態において、本発明は、抗体Ｃ２の抗原結合領域を有する抗体またはその抗原結合断片に関する。一実施形態において、本発明は、配列番号１３に記載される重鎖可変ドメイン配列、および配列番号１４に記載される軽鎖可変ドメイン配列を含む抗体またはその抗原結合断片を提供する。一実施形態において、本発明は、配列番号１３のＣＤＲを含む重鎖可変ドメイン、および配列番号１４のＣＤＲを含む軽鎖可変ドメインを有する抗体に関する。一実施形態において、本発明は、配列番号１３に記載される配列と少なくとも９５％同一、少なくとも９６％同一、少なくとも９７％同一、少なくとも９８％同一、または少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を有する重鎖可変領域を含み、配列番号１４に記載される配列と少なくとも９５％同一、少なくとも９６％同一、少なくとも９７％同一、少なくとも９８％同一、または少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を含む、単離されたヒト抗体またはその抗原結合断片を特徴とする。さらに、抗体は、ＩｇＧ１アイソタイプまたはＩｇＧ４アイソタイプであってもよい。
【００７９】
一実施形態において、本発明は、抗体Ｄ６の抗原結合領域を有する抗体またはその抗原結合断片に関する。一実施形態において、本発明は、配列番号１５に記載される重鎖可変ドメイン配列、および配列番号１６に記載される軽鎖可変ドメイン配列を含む抗体またはその抗原結合断片を提供する。一実施形態において、本発明は、配列番号１５のＣＤＲを含む重鎖可変ドメイン、および配列番号１６のＣＤＲを含む軽鎖可変ドメインを有する抗体に関する。Ｄ６抗体およびＡ１抗体は同一の重鎖および軽鎖可変配列を含むことに留意されたい。一実施形態において、本発明は、配列番号１５に記載される配列と少なくとも９５％同一、少なくとも９６％同一、少なくとも９７％同一、少なくとも９８％同一、または少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を有する重鎖可変領域を含み、配列番号１６に記載される配列と少なくとも９５％同一、少なくとも９６％同一、少なくとも９７％同一、少なくとも９８％同一、または少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を含む、単離されたヒト抗体またはその抗原結合断片を特徴とする。さらに、抗体は、ＩｇＧ１アイソタイプまたはＩｇＧ４アイソタイプであってもよい。
【００８０】
一実施形態において、本発明は、抗体Ｆ１の抗原結合領域を有する抗体またはその抗原結合断片に関する。一実施形態において、本発明は、配列番号１７に記載される重鎖可変ドメイン配列、および配列番号１８に記載される軽鎖可変ドメイン配列を含む抗体またはその抗原結合断片を提供する。一実施形態において、本発明は、配列番号１７のＣＤＲを含む重鎖可変ドメイン、および配列番号１８のＣＤＲを含む軽鎖可変ドメインを有する抗体に関する。一実施形態において、本発明は、配列番号１７に記載される配列と少なくとも９５％同一、少なくとも９６％同一、少なくとも９７％同一、少なくとも９８％同一、または少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を有する重鎖可変領域を含み、配列番号１８に記載される配列と少なくとも９５％同一、少なくとも９６％同一、少なくとも９７％同一、少なくとも９８％同一、または少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を含む、単離されたヒト抗体またはその抗原結合断片を特徴とする。さらに、抗体は、ＩｇＧ１アイソタイプまたはＩｇＧ４アイソタイプであってもよい。
【００８１】
一実施形態において、本発明は、抗体Ｆ３の抗原結合領域を有する抗体またはその抗原結合断片に関する。一実施形態において、本発明は、配列番号１９に記載される重鎖可変ドメイン配列、および配列番号２０に記載される軽鎖可変ドメイン配列を含む抗体またはその抗原結合断片を提供する。一実施形態において、本発明は、配列番号１９のＣＤＲを含む重鎖可変ドメイン、および配列番号２０のＣＤＲを含む軽鎖可変ドメインを有する抗体に関する。一実施形態において、本発明は、配列番号１９に記載される配列と少なくとも９５％同一、少なくとも９６％同一、少なくとも９７％同一、少なくとも９８％同一、または少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を有する重鎖可変領域を含み、配列番号２０に記載される配列と少なくとも９５％同一、少なくとも９６％同一、少なくとも９７％同一、少なくとも９８％同一、または少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を含む、単離されたヒト抗体またはその抗原結合断片を特徴とする。さらに、抗体は、ＩｇＧ１アイソタイプまたはＩｇＧ４アイソタイプであってもよい。
【００８２】
一実施形態において、本発明は、抗体Ｆ５の抗原結合領域を有する抗体またはその抗原結合断片に関する。一実施形態において、本発明は、配列番号２１に記載される重鎖可変ドメイン配列、および配列番号２２に記載される軽鎖可変ドメイン配列を含む抗体またはその抗原結合断片を提供する。一実施形態において、本発明は、配列番号２１のＣＤＲを含む重鎖可変ドメイン、および配列番号２２のＣＤＲを含む軽鎖可変ドメインを有する抗体に関する。一実施形態において、本発明は、配列番号２１に記載される配列と少なくとも９５％同一、少なくとも９６％同一、少なくとも９７％同一、少なくとも９８％同一、または少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を有する重鎖可変領域を含み、配列番２２に記載される配列と少なくとも９５％同一、少なくとも９６％同一、少なくとも９７％同一、少なくとも９８％同一、または少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を含む、単離されたヒト抗体またはその抗原結合断片を特徴とする。さらに、抗体は、ＩｇＧ１アイソタイプまたはＩｇＧ４アイソタイプであってもよい。
【００８３】
一実施形態において、本発明は、抗体Ｆ６の抗原結合領域を有する抗体またはその抗原結合断片に関する。一実施形態において、本発明は、配列番号２３に記載される重鎖可変ドメイン配列、および配列番号２４に記載される軽鎖可変ドメイン配列を含む抗体またはその抗原結合断片を提供する。一実施形態において、本発明は、配列番号２３のＣＤＲを含む重鎖可変ドメイン、および配列番号２４のＣＤＲを含む軽鎖可変ドメインを有する抗体に関する。一実施形態において、本発明は、配列番号２３に記載される配列と少なくとも９５％同一、少なくとも９６％同一、少なくとも９７％同一、少なくとも９８％同一、または少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を有する重鎖可変領域を含み、配列番号２４に記載される配列と少なくとも９５％同一、少なくとも９６％同一、少なくとも９７％同一、少なくとも９８％同一、または少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を含む、単離されたヒト抗体またはその抗原結合断片を特徴とする。さらに、抗体は、ＩｇＧ１アイソタイプまたはＩｇＧ４アイソタイプであってもよい。
【００８４】
一実施形態において、本発明は、抗体Ｆ７の抗原結合領域を有する抗体またはその抗原結合断片に関する。一実施形態において、本発明は、配列番号２５に記載される重鎖可変ドメイン配列、および配列番号２６に記載される軽鎖可変ドメイン配列を含む抗体またはその抗原結合断片を提供する。一実施形態において、本発明は、配列番号２５のＣＤＲを含む重鎖可変ドメイン、および配列番号２６のＣＤＲを含む軽鎖可変ドメインを有する抗体に関する。一実施形態において、本発明は、配列番号２５に記載される配列と少なくとも９５％同一、少なくとも９６％同一、少なくとも９７％同一、少なくとも９８％同一、または少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を有する重鎖可変領域を含み、配列番号２６に記載される配列と少なくとも９５％同一、少なくとも９６％同一、少なくとも９７％同一、少なくとも９８％同一、または少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を含む、単離されたヒト抗体またはその抗原結合断片を特徴とする。さらに、抗体は、ＩｇＧ１アイソタイプまたはＩｇＧ４アイソタイプであってもよい。
【００８５】
一実施形態において、本発明は、抗体Ｇ１の抗原結合領域を有する抗体またはその抗原結合断片に関する。一実施形態において、本発明は、配列番号２７に記載される重鎖可変ドメイン配列、および配列番号２８に記載される軽鎖可変ドメイン配列を含む抗体またはその抗原結合断片を提供する。一実施形態において、本発明は、配列番号２７のＣＤＲを含む重鎖可変ドメイン、および配列番号２８のＣＤＲを含む軽鎖可変ドメインを有する抗体に関する。一実施形態において、本発明は、配列番号２７に記載される配列と少なくとも９５％同一、少なくとも９６％同一、少なくとも９７％同一、少なくとも９８％同一、または少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を有する重鎖可変領域を含み、配列番号２８に記載される配列と少なくとも９５％同一、少なくとも９６％同一、少なくとも９７％同一、少なくとも９８％同一、または少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を含む、単離されたヒト抗体またはその抗原結合断片を特徴とする。さらに、抗体は、ＩｇＧ１アイソタイプまたはＩｇＧ４アイソタイプであってもよい。
【００８６】
一実施形態において、本発明は、抗体Ｇ２の抗原結合領域を有する抗体またはその抗原結合断片に関する。一実施形態において、本発明は、配列番号２９に記載される重鎖可変ドメイン配列、および配列番号３０に記載される軽鎖可変ドメイン配列を含む抗体またはその抗原結合断片を提供する。一実施形態において、本発明は、配列番号２９のＣＤＲを含む重鎖可変ドメイン、および配列番号３０のＣＤＲを含む軽鎖可変ドメインを有する抗体に関する。一実施形態において、本発明は、配列番号２９に記載される配列と少なくとも９５％同一、少なくとも９６％同一、少なくとも９７％同一、少なくとも９８％同一、または少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を有する重鎖可変領域を含み、配列番３０に記載される配列と少なくとも９５％同一、少なくとも９６％同一、少なくとも９７％同一、少なくとも９８％同一、または少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を含む、単離されたヒト抗体またはその抗原結合断片を特徴とする。さらに、抗体は、ＩｇＧ１アイソタイプまたはＩｇＧ４アイソタイプであってもよい。
【００８７】
一実施形態において、本発明は、抗体Ｇ３の抗原結合領域を有する抗体またはその抗原結合断片に関する。一実施形態において、本発明は、配列番号３１に記載される重鎖可変ドメイン配列、および配列番号３２に記載される軽鎖可変ドメイン配列を含む抗体またはその抗原結合断片を提供する。一実施形態において、本発明は、配列番号３１のＣＤＲを含む重鎖可変ドメイン、および配列番号３２のＣＤＲを含む軽鎖可変ドメインを有する抗体に関する。一実施形態において、本発明は、配列番号３１に記載される配列と少なくとも９５％同一、少なくとも９６％同一、少なくとも９７％同一、少なくとも９８％同一、または少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を有する重鎖可変領域を含み、配列番号３２に記載される配列と少なくとも９５％同一、少なくとも９６％同一、少なくとも９７％同一、少なくとも９８％同一、または少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を含む、単離されたヒト抗体またはその抗原結合断片を特徴とする。さらに、抗体は、ＩｇＧ１アイソタイプまたはＩｇＧ４アイソタイプであってもよい。
【００８８】
一実施形態において、本発明は、抗体Ｇ５の抗原結合領域を有する抗体またはその抗原結合断片に関する。一実施形態において、本発明は、配列番号３３に記載される重鎖可変ドメイン配列、および配列番号３４に記載される軽鎖可変ドメイン配列を含む抗体またはその抗原結合断片を提供する。一実施形態において、本発明は、配列番号３３のＣＤＲを含む重鎖可変ドメイン、および配列番号３４のＣＤＲを含む軽鎖可変ドメインを有する抗体に関する。一実施形態において、本発明は、配列番号３３に記載される配列と少なくとも９５％同一、少なくとも９６％同一、少なくとも９７％同一、少なくとも９８％同一、または少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を有する重鎖可変領域を含み、配列番号３４に記載される配列と少なくとも９５％同一、少なくとも９６％同一、少なくとも９７％同一、少なくとも９８％同一、または少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を含む、単離されたヒト抗体またはその抗原結合断片を特徴とする。さらに、抗体は、ＩｇＧ１アイソタイプまたはＩｇＧ４アイソタイプであってもよい。
【００８９】
一実施形態において、本発明は、抗体Ｇ１２の抗原結合領域を有する抗体またはその抗原結合断片に関する。一実施形態において、本発明は、配列番号３５に記載される重鎖可変ドメイン配列、および配列番号３６に記載される軽鎖可変ドメイン配列を含む抗体またはその抗原結合断片を提供する。一実施形態において、本発明は、配列番号３５のＣＤＲを含む重鎖可変ドメイン、および配列番号３６のＣＤＲを含む軽鎖可変ドメインを有する抗体に関する。一実施形態において、本発明は、配列番号３５に記載される配列と少なくとも９５％同一、少なくとも９６％同一、少なくとも９７％同一、少なくとも９８％同一、または少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を有する重鎖可変領域を含み、配列番号３６に記載される配列と少なくとも９５％同一、少なくとも９６％同一、少なくとも９７％同一、少なくとも９８％同一、または少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を含む、単離されたヒト抗体またはその抗原結合断片を特徴とする。さらに、抗体は、ＩｇＧ１アイソタイプまたはＩｇＧ４アイソタイプであってもよい。
【００９０】
一実施形態において、本発明は、抗体Ｄ５の抗原結合領域を有する抗体またはその抗原結合断片に関する。一実施形態において、本発明は、配列番号３７に記載される重鎖可変ドメイン配列、および配列番号３８に記載される軽鎖可変ドメイン配列を含む抗体またはその抗原結合断片を提供する。一実施形態において、本発明は、配列番号３７のＣＤＲを含む重鎖可変ドメイン、および配列番号３８のＣＤＲを含む軽鎖可変ドメインを有する抗体に関する。一実施形態において、本発明は、配列番号３７に記載される配列と少なくとも９５％同一、少なくとも９６％同一、少なくとも９７％同一、少なくとも９８％同一、または少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を有する重鎖可変領域を含み、配列番３８に記載される配列と少なくとも９５％同一、少なくとも９６％同一、少なくとも９７％同一、少なくとも９８％同一、または少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を含む、単離されたヒト抗体またはその抗原結合断片を特徴とする。さらに、抗体は、ＩｇＧ１アイソタイプまたはＩｇＧ４アイソタイプであってもよい。
【００９１】
一実施形態において、本発明は、抗体Ｅ７の抗原結合領域を有する抗体またはその抗原結合断片に関する。実施形態において、本発明は、配列番号３９に記載される重鎖可変ドメイン配列、および配列番号４０に記載される軽鎖可変ドメイン配列を含む抗体またはその抗原結合断片を提供する。一実施形態において、本発明は、配列番号３９のＣＤＲを含む重鎖可変ドメイン、および配列番号４０のＣＤＲを含む軽鎖可変ドメインを有する抗体に関する。一実施形態において、本発明は、配列番号３９に記載される配列と少なくとも９５％同一、少なくとも９６％同一、少なくとも９７％同一、少なくとも９８％同一、または少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を有する重鎖可変領域を含み、配列番号４０に記載される配列と少なくとも９５％同一、少なくとも９６％同一、少なくとも９７％同一、少なくとも９８％同一、または少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を含む、単離されたヒト抗体またはその抗原結合断片を特徴とする。さらに、抗体は、ＩｇＧ１アイソタイプまたはＩｇＧ４アイソタイプであってもよい。
【００９２】
一実施形態において、本発明は、抗体Ｅ８の抗原結合領域を有する抗体またはその抗原結合断片に関する。一実施形態において、本発明は、配列番号４１に記載される重鎖可変ドメイン配列、および配列番号４２に記載される軽鎖可変ドメイン配列を含む抗体またはその抗原結合断片を提供する。一実施形態において、本発明は、配列番号４１のＣＤＲを含む重鎖可変ドメイン、および配列番号４２のＣＤＲを含む軽鎖可変ドメインを有する抗体に関する。一実施形態において、本発明は、配列番号４１に記載される配列と少なくとも９５％同一、少なくとも９６％同一、少なくとも９７％同一、少なくとも９８％同一、または少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を有する重鎖可変領域を含み、配列番号４２に記載される配列と少なくとも９５％同一、少なくとも９６％同一、少なくとも９７％同一、少なくとも９８％同一、または少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を含む、単離されたヒト抗体またはその抗原結合断片を特徴とする。さらに、抗体は、ＩｇＧ１アイソタイプまたはＩｇＧ４アイソタイプであってもよい。
【００９３】
一実施形態において、本発明は、抗体ＣＴ１Ｅ１の抗原結合領域を有する抗体またはその抗原結合断片に関する。一実施形態において、本発明は、配列番号４３に記載される重鎖可変ドメイン配列、および配列番号４４に記載される軽鎖可変ドメイン配列を含む抗体またはその抗原結合断片を提供する。一実施形態において、本発明は、配列番号４３のＣＤＲを含む重鎖可変ドメイン、および配列番号４４のＣＤＲを含む軽鎖可変ドメインを有する抗体に関する。一実施形態において、本発明は、配列番号４３に記載される配列と少なくとも９５％同一、少なくとも９６％同一、少なくとも９７％同一、少なくとも９８％同一、または少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を有する重鎖可変領域を含み、配列番号４４に記載される配列と少なくとも９５％同一、少なくとも９６％同一、少なくとも９７％同一、少なくとも９８％同一、または少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を含む、単離されたヒト抗体またはその抗原結合断片を特徴とする。さらに、抗体は、ＩｇＧ１アイソタイプまたはＩｇＧ４アイソタイプであってもよい。
【００９４】
抗原結合タンパク質（例えば、抗体、抗体断片、抗体誘導体、抗体突然変異タンパク質および抗体改変体）は、ＣＴＬＡ４に結合するポリペプチドである。
【００９５】
本発明の抗原結合タンパク質の抗原結合断片は、従来技術によって製造することができる。このような断片の例としては、限定されないが、ＦａｂおよびＦ（ａｂ’）２断片が挙げられる。
【００９６】
一本鎖抗体は、一本のポリペプチド鎖を得るように、アミノ酸架橋（短いペプチドリンカー）を介して、重鎖および軽鎖可変ドメイン（Ｆｖ領域）断片の結合により形成することができる。このような一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）は、２つの可変ドメインポリペプチド（ＶＬおよびＶＨ）をコードするＤＮＡ間のペプチドリンカーをコードするＤＮＡを融合することにより生成されている。得られたポリペプチドは、２つの可変ドメインの間の可動性リンカーの長さに応じて、折り畳まれて抗原結合モノマーを形成することができ、または多量体（例えば、二量体、三量体もしくは四量体）を形成することができる（Ｋｏｒｔｔら、１９９７年、Ｐｒｏｔ．Ｅｎｇ．１０巻：４２３頁；Ｋｏｒｔｔら、２００１年、Ｂｉｏｍｏｌ．Ｅｎｇ．１８巻：９５−１０８頁）。異なるＶＬおよびＶＨ含有ポリペプチドを組み合わせることによって、異なるエピトープに結合する多量体ｓｃＦｖを形成することができる（Ｋｒｉａｎｇｋｕｍら、２００１年、Ｂｉｏｍｏｌ．Ｅｎｇ．１８巻：３１−４０頁）。一本鎖抗体の生成のために開発された技術は、米国特許第４，９４６，７７８号；Ｂｉｒｄ、１９８８年、Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４２巻：４２３頁；Ｈｕｓｔｏｎら、１９８８年、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８５巻：５８７９頁；Ｗａｒｄら、１９８９年、Ｎａｔｕｒｅ  ３３４巻：５４４頁、ｄｅ  Ｇｒａａｆら、２００２年、Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１７８巻：３７９−８７頁に記載のものを含む。
【００９７】
ある特定の実施形態において、本開示は、重鎖由来の可変ドメイン領域および軽鎖由来の可変ドメイン領域を有する完全ヒト抗体Ｆａｂ断片を提供し、ここで、重鎖可変ドメイン配列は、配列番号１、配列番号３、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号９、配列番号１１、配列番号１３、配列番号１５、配列番号１７、配列番号１９、配列番号２１、配列番号２３、配列番号２５、配列番号２７、配列番号２９、配列番号３１、配列番号３３、配列番号３５、配列番号３７、配列番号３９、配列番号４１、配列番号４３、およびこれらの組合せからなる群から選択されるアミノ酸配列と少なくとも９５％同一、少なくとも９６％同一、少なくとも９７％同一、少なくとも９８％同一または少なくとも９９％同一であり、軽鎖可変ドメイン配列は、配列番号２、配列番号４、配列番号６、配列番号８、配列番号１０、配列番号１２、配列番号１４、配列番号１６、配列番号１８、配列番号２０、配列番号２２、配列番号２４、配列番号２６、配列番号２８、配列番号３０、配列番号３２、配列番号３４、配列番号３６、配列番号３８、配列番号４０、配列番号４２、配列番号４４、およびこれらの組合せからなるアミノ酸配列と少なくとも９５％同一、少なくとも９６％同一、少なくとも９７％同一、少なくとも９８％同一または少なくとも９９％同一である。好ましくは、完全ヒト抗体Ｆａｂ断片は、重鎖可変ドメイン領域と軽鎖可変ドメイン領域の両方を有し、ここで、抗体は、配列番号１／配列番号２、配列番号３／配列番号４、配列番号５／配列番号６、配列番号７／配列番号８、配列番号９／配列番号１０、配列番号１１／配列番号１２、配列番号１３／配列番号１４、配列番号１５／配列番号１６、配列番号１７／配列番号１８、配列番号１９／配列番号２０、配列番号２１／配列番号２２、配列番号２３／配列番号２４、配列番号２５／配列番号２６、配列番号２７／配列番号２８、配列番号２９／配列番号３０、配列番号３１／配列番号３２、配列番号３３／配列番号３４、配列番号３５／配列番号３６、配列番号３７／配列番号３８、配列番号３９／配列番号４０、配列番号４１／配列番号４２、配列番号４３／配列番号４４、およびこれらの組合せからなる群から選択される重鎖／軽鎖可変ドメイン配列を有する。
【００９８】
一実施形態において、本開示は、重鎖由来の可変ドメイン領域および軽鎖由来の可変ドメイン領域、ならびに重鎖可変ドメイン領域と軽鎖可変ドメイン領域を連結するペプチドリンカーを有する一本鎖ヒト抗体であって、重鎖可変ドメイン配列が、配列番号１、配列番号３、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号９、配列番号１１、配列番号１３、配列番号１５、配列番号１７、配列番号１９、配列番号２１、配列番号２３、配列番号２５、配列番号２７、配列番号２９、配列番号３１、配列番号３３、配列番号３５、配列番号３７、配列番号３９、配列番号４１、配列番号４３およびこれらの組み合わせからなる群から選択されるアミノ酸配列と少なくとも９５％同一、少なくとも９６％同一、少なくとも９７％同一、少なくとも９８％同一または少なくとも９９％同一であり、軽鎖可変ドメイン配列が、配列番号２、配列番号４、配列番号６、配列番号８、配列番号１０、配列番号１２、配列番号１４、配列番号１６、配列番号１８、配列番号２０、配列番号２２、配列番号２４、配列番号２６、配列番号２８、配列番号３０、配列番号３２、配列番号３４、配列番号３６、配列番号３８、配列番号４０、配列番号４２、配列番号４４およびこれらの組み合わせからなるアミノ酸配列と少なくとも９５％同一である、一本鎖ヒト抗体を提供する。好ましくは、一本鎖完全ヒト抗体は、重鎖可変ドメイン領域と軽鎖可変ドメイン領域の両方を有し、ここで、一本鎖完全ヒト抗体は、配列番号１／配列番号２、配列番号３／配列番号４、配列番号５／配列番号６、配列番号７／配列番号８、配列番号９／配列番号１０、配列番号１１／配列番号１２、配列番号１３／配列番号１４、配列番号１５／配列番号１６、配列番号１７／配列番号１８、配列番号１９／配列番号２０、配列番号２１／配列番号２２、配列番号２３／配列番号２４、配列番号２５／配列番号２６、配列番号２７／配列番号２８、配列番号２９／配列番号３０、配列番号３１／配列番号３２、配列番号３３／配列番号３４、配列番号３５／配列番号３６、配列番号３７／配列番号３８、配列番号３９／配列番号４０、配列番号４１／配列番号４２、配列番号４３／配列番号４４およびこれらの組み合わせからなる群から選択される重鎖／軽鎖可変ドメイン配列を有する。
【００９９】
目的とする抗体から異なるサブクラスまたはアイソタイプの抗体を導く技術、すなわち、サブクラススイッチングが知られている。したがって、例えば、ＩｇＧ抗体をＩｇＭ抗体から誘導することができ、その逆も可能である。このような技術は、所与の抗体（親抗体）の抗原結合特性を有するが、さらに、親抗体のものとは異なる抗体アイソタイプまたはサブクラスに関連する生物学的特性を示す新規な抗体の調製を可能にする。組換えＤＮＡ技術を用いることができる。特定の抗体ポリペプチドをコードするクローニングされたＤＮＡは、このような手順、例えば、所望のアイソタイプの抗体の定常ドメインをコードするＤＮＡ（Ｌａｎｔｔｏら、２００２年、Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１７８巻：３０３−１６頁）において用いることができる。さらに、ＩｇＧ４が所望される場合、ヒンジ領域において点突然変異（ＣＰＳＣ−＞ＣＰＰＣ）を導入して（Ｂｌｏｏｍら、１９９７年、Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ６巻：４０７頁）、ＩｇＧ４抗体において異種性をもたらし得るＨ鎖内ジスルフィド結合を形成する傾向を緩和することを望むこともまた可能である。したがって、一実施形態において、本発明の抗体はヒトＩｇＧ１抗体である。したがって、一実施形態において、本発明の抗体はヒトＩｇＧ４抗体である。
【０１００】
本開示は、可変ドメイン領域のアミノ酸配列によって構造的に特徴付けられる多数の抗体を提供する。しかしながら、アミノ酸配列は、それらの特定の標的へのそれらの高度の結合を保持しながらいくらかの変化を受け得る。より具体的には、可変ドメイン領域における多数のアミノ酸は保存的置換により変更させることができ、得られた抗体の結合特性は野生型抗体配列の結合特性と異ならないことが予測し得る。抗体可変ドメインには、抗原と直接的に相互作用せずまたは抗原結合に影響を及ぼさず、抗体構造を決定するために重要ではない多数のアミノ酸がある。例えば、開示された抗体のいずれかにおける予測された非必須アミノ酸残基は、好ましくは、同じクラス由来の別のアミノ酸残基で置換される。抗原結合を排除しないアミノ酸保存的置換を同定するための方法は、当該技術分野において周知である（例えば、Ｂｒｕｍｍｅｌｌら、Ｂｉｏｃｈｅｍ．３２：１１８０−１１８７頁（１９９３年）；Ｋｏｂａｙａｓｈｉら、Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｎｇ．１２（１０）：８７９−８８４頁（１９９９年）；Ｂｕｒｋｓら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｅｔ  ＵＳＡ  ９４：４１２−４１７頁（１９９７年）を参照されたい。）。Ｎｅａｒら、Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．３０：３６９−３７７頁、１９９３年は、部位特異的突然変異誘発による結合にどのように影響を及ぼすまたは影響を及ぼさないかを説明している。Ｎｅａｒらは、抗原結合を変化させる可能性が高いと考えた残基だけを突然変異させた。大部分は、結合親和性（Ｎｅａｒら、表３）および種々の形態のジゴキシンへの結合（Ｎｅａｒら、表２）への適度または負の効果を有した。したがって、本発明はまた、ある特定の実施形態において、本明細書に開示される配列と少なくとも９５％の同一性を有する可変配列を含む。
【０１０１】
ある特定の実施形態において、本明細書に提供される抗体またはその抗原結合断片は、１×１０−６Ｍ以下；５×１０−７Ｍ以下；１×１０−７Ｍ以下；５×１０−８Ｍ以下；１×１０−８Ｍ以下；５×１０−９Ｍ以下；または１×１０−９Ｍ以下の解離定数（ＫＤ）を有する。一実施形態において、本発明の抗体またはその抗原結合断片は、１×１０−７Ｍから１×１０−１０ＭのＫＤを有する。一実施形態において、本発明の抗体またはその抗原結合断片は、１×１０−８Ｍから１×１０−１０ＭのＫＤを有する。
【０１０２】
当業者は、抗体またはその断片のＫｄを決定するための公知の標準的方法を理解している。例えば、一実施形態において、Ｋｄは、放射性標識抗原結合アッセイ（ＲＩＡ）によって測定される。一実施形態において、ＲＩＡは、目的とする抗体のＦａｂバージョンおよびその抗原を用いてＲＩＡが行われる。例えば、抗原に対するＦａｂの溶液結合親和性は、滴定系列の非標識抗原の存在下でＦａｂを最小濃度の（１２５Ｉ）標識抗原で平衡化し、次に結合した抗原を抗Ｆａｂ抗体被覆プレートで捕捉することによって測定される（例えば、Ｃｈｅｎら、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２９３巻：８６５−８８１頁（１９９９年）を参照されたい。）。
【０１０３】
別の実施形態によれば、Ｋｄは、ＢＩＡＣＯＲＥ（商標）表面プラズモン共鳴アッセイを使用して測定される。本明細書で使用される用語「表面プラズモン共鳴」とは、例えば、ＢＩＡｃｏｒｅ（商標）システム（ＧＥ  ＨｅａｌｔｈｃａｒｅのＢｉａｃｏｒｅ  Ｌｉｆｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ部門、Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ、Ｎ．Ｊ．）を使用して、バイオセンサーマトリックス内のタンパク質濃度の変化を検出することにより、リアルタイム相互作用の分析を可能にする光学現象を意味する。
【０１０４】
特定の実施形態において、本発明の抗原結合タンパク質は、少なくとも１０６のＣＴＬＡ４に対する結合親和性（Ｋａ）を有する。他の実施形態において、抗原結合タンパク質は、少なくとも１０７、少なくとも１０８、少なくとも１０９、または少なくとも１０１０のＫａを示す。別の実施形態において、抗原結合タンパク質は、実施例において本明細書に記載される抗体のものと実質的に同じＫａを示す。
【０１０５】
別の実施形態において、本開示は、ＣＴＬＡ４からの低い解離速度を有する抗原結合タンパク質を提供する。一実施形態において、抗原結合タンパク質は、Ｋｏｆｆが１×１０−４から１×１０−１以下である。別の実施形態において、Ｋｏｆｆは５×１０−５から−１以下である。別の実施形態において、Ｋｏｆｆは、本明細書に記載される抗体と実質的に同じである。別の実施形態において、抗原結合タンパク質は、本明細書に記載される抗体と実質的に同じＫｏｆｆでＣＴＬＡ４に結合する。
【０１０６】
別の態様において、本開示は、ＣＴＬＡ４の活性を阻害する抗原結合タンパク質、例えば、抗ＣＴＬＡ４抗体またはその抗原結合断片を提供する。一実施形態において、抗原結合タンパク質は、１０００ｎＭ以下のＩＣ５０を有する。別の実施形態において、ＩＣ５０は１００ｎＭ以下であり；別の実施形態において、ＩＣ５０は１０ｎＭ以下である。別の実施形態において、ＩＣ５０は、実施例において本明細書に記載される抗体のＩＣ５０と実質的に同じである。別の実施形態において、抗原結合タンパク質、例えば、抗ＣＴＬＡ４抗体またはその抗原結合部分は、本明細書に記載される抗体と実質的に同じＩＣ５０でＣＴＬＡ４の活性を阻害する。一実施形態において、本明細書に開示される抗体またはその抗原結合断片によって阻害されるＣＴＬＡ４の活性は、ＣＤ８０および／またはＣＤ８６に対するＣＴＬＡ４の結合である。一実施形態において、本発明の抗ＣＴＬＡ４抗体またはその抗原結合断片は、１×１０−９以下のＩＣ５０でＣＤ８０のＣＴＬＡ４結合を阻害する。一実施形態において、本発明の抗ＣＴＬＡ４抗体またはその抗原結合断片は、５×１０−１０以下のＩＣ５０でＣＤ８０のＣＴＬＡ４結合を阻害する。一実施形態において、本発明の抗ＣＴＬＡ４抗体またはその抗原結合断片は、１×１０−１０以下のＩＣ５０でＣＤ８０のＣＴＬＡ４結合を阻害する。一実施形態において、本発明の抗ＣＴＬＡ４抗体またはその抗原結合断片は、１×１０−９以下のＩＣ５０でＣＤ８６のＣＴＬＡ４結合を阻害する。一実施形態において、本発明の抗ＣＴＬＡ４抗体またはその抗原結合断片は、５×１０−１０以下のＩＣ５０でＣＤ８６のＣＴＬＡ４結合を阻害する。一実施形態において、本発明の抗ＣＴＬＡ４抗体またはその抗原結合断片は、１×１０−１０以下のＩＣ５０でＣＤ８６のＣＴＬＡ４結合を阻害する。ＣＤ８０またはＣＤ８６のＣＴＬＡ４結合を阻害する抗ＣＴＬＡ４抗体の能力を試験するために使用することができるアッセイの例は、当該技術分野において公知であり、また、本明細書において提供される実施例に記載される。
【０１０７】
別の態様において、本開示は、細胞の表面上に発現したＣＴＬＡ４に結合する抗原結合タンパク質を提供し、このように結合した場合、細胞の表面上のＣＴＬＡ４の量を有意に減少させることなく、細胞内のＣＴＬＡ４シグナル伝達活性を阻害する。細胞の表面上および／または細胞の内部のＣＴＬＡ４の量を決定または推定するための任意の方法を使用することができる。他の実施形態において、抗原結合タンパク質のＣＴＬＡ４発現細胞への結合は、約７５％、５０％、４０％、３０％、２０％、１５％、１０％、５％、１％または０．１％未満の細胞−表面ＣＴＬＡ４を内在化させる。
【０１０８】
別の態様において、本開示は、インビトロまたはインビボで（例えば、ヒト対象に投与する場合）少なくとも１日の半減期を有する抗原結合タンパク質を提供する。一実施形態において、抗原結合タンパク質は、少なくとも３日の半減期を有する。別の実施形態において、抗原結合タンパク質は、４日以上の半減期を有する。別の実施形態において、抗原結合タンパク質は、８日以上の半減期を有する。別の実施形態において、抗原結合タンパク質は、非誘導体化または非修飾の抗原結合タンパク質と比較して半減期が長くなるように、誘導体化または修飾される。別の実施形態において、抗原結合タンパク質は、本明細書において参照により組み込まれる国際公開第ＷＯ００／０９５６０号に記載されるように、血清半減期を延長させる、１つ以上の点突然変異を含有する。
【０１０９】
本開示はさらに、多重特異的抗原結合タンパク質を提供し、例えば、二重特異的抗原結合タンパク質、例えば、ＣＴＬＡ４の２つの異なるエピトープに結合し、または２つの異なる抗原結合部位もしくは領域を介して、ＣＴＬＡ４のエピトープおよび別の分子のエピトープに結合する抗原結合タンパク質を提供する。さらに、本明細書に開示される二重特異的抗原結合タンパク質は、本明細書に記載される抗体の１つに由来するＣＴＬＡ４結合部位、および本明細書に記載される抗体の別のものに由来する第２のＣＴＬＡ４結合領域を含み得、他の刊行物を参照して本明細書に記載されるものが含まれる。代替的に、二重特異的抗原結合タンパク質は、本明細書に記載される抗体の１つに由来する抗原結合部位、および当該技術分野において公知である別のＣＴＬＡ４抗体由来の第２の抗原結合部位、または公知の方法もしくは本明細書に記載される方法によって調製される抗体由来のものを含んでもよい。
【０１１０】
二重特異的抗体を調製するための多数の方法が当該技術分野において知られている。このような方法は、Ｍｉｌｓｔｅｉｎら、１９８３年、Ｎａｔｕｒｅ  ３０５巻：５３７頁に記載されるハイブリッド−ハイブリドーマ、および抗体断片の化学的カップリング（Ｂｒｅｎｎａｎら、１９８５年、Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２２９巻：８１頁；Ｇｌｅｎｎｉｅら、１９８７年、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３９巻：２３６７頁；米国特許第６，０１０，９０２号）の使用を含む。さらに、二重特異的抗体は、組換え手段により、例えば、ロイシンジッパー部分（すなわち、優勢にヘテロ二量体を形成するＦｏｓおよびＪｕｎタンパク質由来；Ｋｏｓｔｅｌｎｙら、１９９２年、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４８巻：１５４７頁）または米国特許第５，５８２，９９６号に記載される他の鍵孔と鍵の相互作用的ドメイン構造の使用により生成され得る。さらに有用な技術は、米国特許第５，９５９，０８３号および同第５，８０７，７０６号に記載されるものを含む。
【０１１１】
別の態様において、抗原結合タンパク質は、抗体の誘導体を含む。誘導体化された抗体は、特定の使用における半減期の増加のような所望の特性を抗体に与える任意の分子または物質を含み得る。誘導体化された抗体は、例えば、検出可能（または標識）部分（例えば、放射性、比色、抗原性または酵素分子、検出可能ビーズ（例えば、磁気または電極（例えば、金）ビーズ）、または別の分子と結合する分子（例えば、ビオチンまたはストレプトアビジン）、治療的もしくは診断的な部分（例えば、放射性、細胞毒性または医薬として活性な部分）、または特定の使用（例えば、対象、例えばヒト対象への投与または他のインビボまたはインビトロ使用）のための抗体の適性を増加させる分子を含み得る。
【０１１２】
抗体を誘導体化させるために使用することができる分子の例としては、アルブミン（例えば、ヒト血清アルブミン）およびポリエチレングリコール（ＰＥＧ）が挙げられる。抗体のアルブミン結合およびペグ化誘導体は、当該技術分野において周知の技術を用いて生成され得る。一実施形態において、抗体は、トランスサイレチン（ＴＴＲ）またはＴＴＲ改変体にコンジュゲートされ、または他には結合させる。ＴＴＲまたはＴＴＲ改変体は、例えば、デキストラン、ポリ（ｎ−ビニルピロリドン）、ポリエチレングリコール、プロプロピレングリコールホモポリマー、ポリプロピレンオキシド／エチレンオキシドコポリマー、ポリオキシエチル化されたポリオールおよびポリビニルアルコールからなる群から選択される化学物質で化学修飾され得る。
【０１１３】
１つ以上の抗原結合タンパク質を含有するオリゴマーはＣＴＬＡ４アンタゴニストとして用いられてもよい。オリゴマーは、共有的に結合したもしくは非共有的に結合した、二量体、三量体またはそれ以上のオリゴマーの形態であってもよい。２つ以上の抗原結合タンパク質を含むオリゴマーは、用途が企図され、一例としては、ホモ二量体である。他のオリゴマーには、ヘテロ二量体、ホモ三量体、ヘテロ三量体、ホモ四量体、ヘテロ四量体などが含まれる。
【０１１４】
一実施形態は、抗原結合タンパク質に融合されたペプチド部分間の共有的または非共有的相互作用を介して繋がれている複数の抗原結合タンパク質を含むオリゴマーを対象とする。このようなペプチドは、ペプチドリンカー（スペーサー）、またはオリゴマー化を促進する特性を有するペプチドであってもよい。ロイシンジッパー、および抗体に由来するある種のポリペプチドは、以下により詳細に記載される通り、それに結合された抗原結合タンパク質のオリゴマー化を促進し得るペプチドに含まれる。
【０１１５】
特定の実施形態において、オリゴマーは、２から４個の抗原結合タンパク質を含む。オリゴマーの抗原結合タンパク質は、上記の形態のうちの任意のもの、例えば、改変体または断片であってもよい。好ましくは、オリゴマーは、ＣＴＬＡ４結合活性を有する抗原結合タンパク質を含む。
【０１１６】
一実施形態において、オリゴマーは、免疫グロブリンに由来するポリペプチドを使用して調製される。抗体由来のポリペプチドの種々の部分（Ｆｃドメインを含む。）に融合された、ある種の異種ポリペプチドを含む融合タンパク質の調製は、例えば、Ａｓｈｋｅｎａｚｉら、１９９１年、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８８巻：１０５３５頁；Ｂｙｒｎら、１９９０年、Ｎａｔｕｒｅ  ３４４巻：６７７頁；およびＨｏｌｌｅｎｂａｕｇｈら、１９９２年「Ｃｏｎｓｔｒｕｃｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎ  Ｆｕｓｉｏｎ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ」、ｉｎ  Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、補遺４、１０．１９．１−１０．１９．１１頁に記載されている。
【０１１７】
一実施形態は、抗ＣＴＬＡ４抗体のＣＴＬＡ４結合断片を抗体のＦｃ領域に融合させることによって作製された２つの融合タンパク質を含む二量体に関する。二量体は、例えば、融合タンパク質をコードする遺伝子融合体を、適切な発現ベクターに挿入し、組換え発現ベクターを用いて形質転換した宿主細胞において遺伝子融合体を発現させ、発現した融合タンパク質を抗体分子に酷似するように構築することによって作製することができ、その後、鎖間ジスルフィド結合がＦｃ部分間に形成されて、二量体が得られる。
【０１１８】
オリゴマー抗原結合タンパク質を調製するための別の方法は、ロイシンジッパーの使用を伴う。ロイシンジッパードメインは、それらが見出されるタンパク質のオリゴマー化を促進するペプチドである。ロイシンジッパーは、元々は、いくつかのＤＮＡ結合タンパク質において同定されたものであり（Ｌａｎｄｓｃｈｕｌｚら、１９８８年、Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４０巻：１７５９頁）、種々の異なるタンパク質においてそれ以来発見されている。公知のロイシンジッパーには、天然に存在するペプチドおよび二量体化または三量体化するこれらの誘導体がある。可溶性オリゴマータンパク質の生成に適したロイシンジッパードメインの例は、国際公開第ＷＯ９４／１０３０８号に記載され、肺サーファクタントタンパク質Ｄ（ＳＰＤ）に由来するロイシンジッパーは、Ｈｏｐｐｅら、１９９４年、ＦＥＢＳ  Ｌｅｔｔｅｒｓ  ３４４巻：１９１頁に記載されている。それに融合された異種タンパク質の安定な三量体化を可能にする、修飾されたロイシンジッパーの使用は、Ｆａｎｓｌｏｗら、１９９４年、Ｓｅｍｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．６巻：２６７−７８頁に記載されている。１つのアプローチにおいて、ロイシンジッパーペプチドに融合された、抗ＣＴＬＡ４抗体断片または誘導体を含む組換え融合タンパク質は、適切な宿主細胞において発現され、形成される可溶性オリゴマー抗ＣＴＬＡ４抗体断片または誘導体が、培養上清から回収される。
【０１１９】
ＣＴＬＡ４に対して指向される抗原結合タンパク質は、例えば、インビトロまたはインビボのいずれかでＣＴＬＡ４ポリペプチドの存在を検出するアッセイにおいて使用することができる。抗原結合タンパク質はまた、イムノアフィニティークロマトグラフィーによるＣＴＬＡ４タンパク質の精製において用いることができる。抗原結合タンパク質をブロッキングは、本明細書に開示される方法において使用され得る。ＣＴＬＡ４アンタゴニストとして機能するこのような抗原結合タンパク質は、限定されないが、様々ながんを含む任意のＣＴＬＡ４誘導状態の治療に用いることができる。
【０１２０】
抗原結合タンパク質は、ＣＴＬＡ４誘導による生物学的活性を阻害するために、インビトロ手法において用いられ、またはインビボにおいて投与されてもよい。例を本明細書に記載するＣＴＬＡ４のタンパク分解性活性化（直接的または間接的）によって引き起こされるまたはそれが増悪させる障害は、それゆえに治療され得る。一実施形態において、本発明は、ＣＴＬＡ４誘導による生物学的活性の減少に有効な量でＣＴＬＡ４遮断抗原結合タンパク質を、それを必要とする哺乳動物にインビボで投与することを含む治療法を提供する。
【０１２１】
特定の実施形態において、本発明の抗原結合タンパク質は、ＣＴＬＡ４の生物学的活性を阻害する完全ヒトモノクローナル抗体を含む。
【０１２２】
抗原結合タンパク質は、多数の従来技術のいずれかにより調製され得る。例えば、それらを天然に発現する細胞から精製することができ（例えば、抗体を、それを産生するハイブリドーマから精製することができる。）、または組換え発現系において、当該技術分野において公知の任意の技術を使用して生成することができる。例えば、Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，Ｈｙｂｒｉｄｏｍａｓ：Ａ  Ｎｅｗ  Ｄｉｍｅｎｓｉｏｎ  ｉｎ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ａｎａｌｙｓｅｓ、Ｋｅｎｎｅｔら（編集）、Ｐｌｅｎｕｍ  Ｐｒｅｓｓ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ（１９８０年）；およびＡｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ、ＨａｒｌｏｗおよびＬａｎｄ（編集）、Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ、Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ、Ｎ．Ｙ．（１９８８年）を参照されたい。
【０１２３】
当該技術分野において公知である任意の発現系を用いて、本発明の組換えポリペプチドを作製することができる。一般に、宿主細胞は、所望のポリペプチドをコードするＤＮＡを含む組換え発現ベクターで形質転換される。用いることができる宿主細胞の中には、原核生物、酵母または高等真核細胞が含まれる。原核生物は、グラム陰性生物またはグラム陽性生物、例えば、Ｅ．コリまたはバチリ（ｂａｃｉｌｌｉ）を含む。高等真核細胞は、昆虫細胞および哺乳動物起源の確立された細胞株を含む。適切な哺乳動物宿主細胞株の例としては、サル腎臓細胞のＣＯＳ−７株（ＡＴＣＣ  ＣＲＬ  １６５１）（Ｇｌｕｚｍａｎら、１９８１年、Ｃｅｌｌ  ２３巻：１７５頁）、Ｌ細胞、２９３細胞、Ｃ１２７細胞、３Ｔ３細胞（ＡＴＣＣ  ＣＣＬ  １６３）、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞、ＨｅＬａ細胞、ＢＨＫ（ＡＴＣＣ  ＣＲＬ  １０）細胞株、およびＭｃＭａｈａｎら、１９９１年、ＥＭＢＯ  Ｊ．１０巻：２８２１頁に記載されているアフリカミドリザル腎臓細胞株ＣＶ１由来のＣＶ１／ＥＢＮＡ細胞株（ＡＴＣＣ  ＣＣＬ  ７０）が挙げられる。細菌、真菌、酵母および哺乳動物細胞宿主とともに使用するのに適したクローニングベクターおよび発現ベクターは、Ｐｏｕｗｅｌｓら（Ｃｌｏｎｉｎｇ  Ｖｅｃｔｏｒｓ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ、Ｅｌｓｅｖｉｅｒ、Ｎ．Ｙ．、１９８５年）に記載されている。
【０１２４】
形質転換細胞は、ポリペプチドの発現を促進する条件下で培養され、ポリペプチドを慣用のタンパク質精製手法により回収することができる。このような精製手法の１つは、例えば、それに結合したＣＴＬＡ４の全てまたは一部（例えば、細胞外ドメイン）を含むマトリックス上の親和性クロマトグラフィーの使用を含む。本明細書において使用が企図されるポリペプチドには、混入している内因性物質を実質的に含まない、実質的に均一な組換え哺乳動物の抗ＣＴＬＡ４抗体ポリペプチドが含まれる。
【０１２５】
抗原結合タンパク質は、多数の公知技術のいずれかにより調製され、所望の特性についてスクリーニングすることができる。これらの技術のいくつかは、目的とする抗原結合タンパク質（例えば、抗ＣＴＬＡ４抗体）のポリペプチド鎖（またはその一部）をコードする核酸を単離し、組換えＤＮＡ技術を介して核酸を操作することを伴う。核酸を、対象とする別の核酸と融合させ、または、例えば１つ以上のアミノ酸残基を付加、欠失または置換するように（例えば、突然変異誘発または他の従来技術により）改変してもよい。
【０１２６】
本開示のポリペプチドは、当該技術分野において公知の任意の標準的な方法を用いて生成することができる。一例において、ポリペプチドは、ポリペプチドをコードする核酸配列（例えば、ｃＤＮＡ）を組換え発現ベクターに挿入し、発現を促進させる条件下でＤＮＡ配列を発現させることにより、組換えＤＮＡ法によって生成される。
【０１２７】
本明細書に開示される種々のポリペプチドのいずれかをコードする核酸を化学的に合成することができる。細胞における発現を向上させるようにコドン使用頻度を選択することができる。このようなコドン使用頻度は、選択される細胞型に依存する。特殊なコドン使用頻度パターンは、Ｅ．コリおよび他の細菌、ならびに哺乳動物細胞、植物細胞、酵母細胞および昆虫細胞用に開発されている。例えば、Ｍａｙｆｉｅｌｄら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ．２００３年、１００（２）：４３８−４２頁；Ｓｉｎｃｌａｉｒら、Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｘｐｒ．Ｐｕｒｉｆ．２００２年（１）：９６−１０５頁；Ｃｏｎｎｅｌｌ  Ｎ  Ｄ．Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２００１年、１２（５）：４４６−９頁；Ｍａｋｒｉｄｅｓら、Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．Ｒｅｖ．１９９６年、６０（３）：５１２−３８頁；およびＳｈａｒｐら、Ｙｅａｓｔ．１９９１年、７（７）：６５７−７８頁を参照されたい。
【０１２８】
核酸操作のための一般的技術は、例えば、参照により本明細書に組み込まれる、Ｓａｍｂｒｏｏｋら、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ．Ｖｏｌｓ．１−３，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ、２ｅｄ．、１９８９年、またはＦ．Ａｕｓｕｂｅｌら、Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  （Ｇｒｅｅｎ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  ａｎｄ  Ｗｉｌｅｙ−Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ：Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ、１９８７年）および定期的な更新版に記載されている。ポリペプチドをコードするＤＮＡは、哺乳動物遺伝子、ウイルス遺伝子または昆虫遺伝子に由来する適切な転写または翻訳の調節エレメントに作動可能に連結される。このような調節エレメントには、転写プロモーター、転写を制御する任意のオペレーター配列、適切なｍＲＮＡリボソーム結合部位をコードする配列、ならびに転写および翻訳の終結を制御する配列が含まれる。宿主において複製する能力は、通常、複製起源により付与され、形質転換体の認識を容易にする選択遺伝子をさらに組み込む。
【０１２９】
組換えＤＮＡはまた、タンパク質を精製するために有用であり得る、任意のタイプのタンパク質タグ配列を含むことができる。タンパク質タグの例としては、限定されないが、ヒスチジンタグ、ＦＬＡＧタグ、ｍｙｃタグ、ＨＡタグまたはＧＳＴタグが挙げられる。細菌、真菌、酵母および哺乳動物細胞の宿主を用いた使用に適したクローニングベクターおよび発現ベクターは、Ｃｌｏｎｉｎｇ  Ｖｅｃｔｏｒｓ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ（Ｅｌｓｅｖｉｅｒ、Ｎ．Ｙ．、１９８５年）に見出すことができる。
【０１３０】
発現構築物は、宿主細胞に適した方法を使用して宿主細胞に導入される。核酸を宿主細胞に導入するための種々の方法は、当該技術分野において公知であり、限定されないが、エレクトロポレーション；塩化カルシウム、塩化ルビジウム、リン酸カルシウム、ＤＥＡＥ−デキストランまたは他の物質を用いるトランスフェクション；微粒子銃（ｍｉｃｒｏｐｒｏｊｅｃｔｉｌｅ  ｂｏｍｂａｒｄｍｅｎｔ）；リポフェクション；および感染（ベクターが感染性因子である。）が挙げられる。適切な宿主細胞には、原核生物、酵母、哺乳動物細胞または細菌細胞が含まれる。
【０１３１】
適切な細菌には、グラム陰性生物またはグラム陽性生物、例えば、Ｅ．コリまたはバチラス属種（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｐｐ．）が含まれる。好ましくはサッカロミセス・セレビシエ（Ｓ．ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）のようなサッカロミセス属種由来の酵母はまた、ポリペプチドの生成に使用され得る。また、種々の哺乳動物細胞または昆虫細胞の培養システムを用いて、組換えタンパク質を発現させることができる。昆虫細胞における異種タンパク質の生成のためのバキュロウイルス系は、ＬｕｃｋｏｗおよびＳｕｍｍｅｒｓ（Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、６：４７、１９８８年）に概説される。適切な哺乳動物の宿主細胞株の例としては、内皮細胞、ＣＯＳ−７サル腎臓細胞、ＣＶ−１、Ｌ細胞、Ｃ１２７、３Ｔ３、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）、ヒト胎児性腎臓細胞、ＨｅＬａ、２９３、２９３ＴおよびＢＨＫ細胞株が含まれる。精製ポリペプチドは、適切な宿主／ベクター系を培養して、組換えタンパク質を発現させることにより調製される。多くの適用に関して、少量の本明細書に開示されるポリペプチドの多くが、好ましい発現方法としてＥ．コリ（Ｅ．ｃｏｌｉ）において発現される。次に、タンパク質を培養培地または細胞抽出物から精製する。
【０１３２】
本明細書に開示されるタンパク質はまた、細胞翻訳システムを使用して生成され得る。このような目的に関して、ポリペプチドをコードする核酸は、インビトロで転写され、ｍＲＮＡを生成するために、および利用される特定の無細胞系（哺乳動物細胞もしくは酵母のような真核生物の無細胞翻訳系または細菌のような原核生物の無細胞翻訳系）においてｍＲＮＡの無細胞翻訳を可能にするために修飾される必要がある。また、ＣＴＬＡ４結合ポリペプチドは、化学合成（例えば、Ｓｏｌｉｄ  Ｐｈａｓｅ  Ｐｅｐｔｉｄｅ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ、第２版、１９８４年、Ｔｈｅ  Ｐｉｅｒｃｅ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏ．、Ｒｏｃｋｆｏｒｄ、ＩＩＩに記載される方法によって。）により生成され得る。タンパク質への修飾はまた、化学合成により生成され得る。本開示のポリペプチドは、タンパク質化学の分野において一般的に公知であるタンパク質の単離／精製法により精製され得る。限定されない例としては、抽出、再結晶、塩析（例えば、硫酸アンモニウムまたは硫酸ナトリウムを用いる。）、遠心分離、透析、限外濾過、吸着クロマトグラフィー、イオン交換クロマトグラフィー、疎水性クロマトグラフィー、順相クロマトグラフィー、逆相クロマトグラフィー、ゲル濾過、ゲル浸透クロマトグラフィー、親和性クロマトグラフィー、電気泳動、向流分配またはこれらの任意の組合せが挙げられる。精製後、ポリペプチドは、異なる緩衝液に交換され、および／または、限定されないが、濾過および透析を含むが、当該技術分野において公知である種々の方法のいずれかにより富化され得る。
【０１３３】
精製されたポリペプチドは、好ましくは、少なくとも８５％純度、より好ましくは少なくとも９５％純度、最も好ましくは少なくとも９８％純度である。純度の正確な数値に関わらず、ポリペプチドは、医薬品として使用するために十分に純粋である。
【０１３４】
ある特定の実施形態において、本開示は、ＣＴＬＡ４に結合するモノクローナル抗体を提供する。モノクローナル抗体は、当該技術分野において公知の任意の技術を使用して、例えば、免疫化スケジュール終了後のトランスジェニック動物から採取した脾臓細胞を不死化することにより生成することができる。脾臓細胞は、当該技術分野において公知の任意の技術を用いて、例えば、それらを骨髄腫細胞と融合させてハイブリドーマを生成することにより不死化することができる。ハイブリドーマ生成融合手法において使用するための骨髄腫細胞は、好ましくは非抗体産生であり、高融合効率であり、所望の融合細胞（ハイブリドーマ）だけの増殖を支持するある種の選択的培地中での増殖を不可能とさせる酵素欠乏を有する。マウス融合物において使用するための適切な細胞株の例には、Ｓｐ−２０、Ｐ３−Ｘ６３／Ａｇ８、Ｐ３−Ｘ６３−Ａｇ８．６５３、ＮＳ１／１．Ａｇ４１、Ｓｐ２１０−Ａｇ１４、ＦＯ、ＮＳＯ／Ｕ、ＭＰＣ−１１、ＭＰＣ１１−Ｘ４５−ＧＴＧ１．７およびＳ１９４／５ＸＸ０  Ｂｕｌが含まれ；ラット融合物において使用するための細胞株の例には、Ｒ２１０．ＲＣＹ３、Ｙ３−Ａｇ１．２．３、ＩＲ９８３Ｆおよび４８２１０が含まれる。細胞融合物に有用な他の細胞株は、Ｕ−２６６、ＧＭ１５００−ＧＲＧ２、ＬＩＣＲ−ＬＯＮ−ＨＭｙ２およびＵＣ７２９−６である。
【０１３５】
抗体の断片または類似体は、本明細書に記載の教示に従い、当該技術分野において公知の技術を使用して、当業者によって容易に調製することが可能である。断片または類似体の好ましいアミノ末端およびカルボキシ末端は、機能的ドメインの境界近くに存在する。構造的および機能的ドメインは、ヌクレオチドおよび／またはアミノ酸配列データを公のまたは特許の配列データベースと比較することにより同定が可能である。コンピューターによる比較方法が、公知の構造および／または機能をもつ他のタンパク質中に存在する配列モチーフまたは予想されるタンパク質コンフォメーションのドメインを同定するために用いることができる。公知の３次元構造へ折り畳まれているタンパク質配列を同定する方法が知られている。Ｂｏｗｉｅら、１９９１年、Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２５３巻：１６４頁を参照されたい。
【０１３６】
ポリペプチドの翻訳後修飾
ある種の実施形態において、本発明の結合ポリペプチドは、翻訳後修飾をさらに含み得る。タンパク質の翻訳後修飾の例としては、リン酸化、アセチル化、メチル化、ＡＤＰ−リボシル化、ユビキチン化、グリコシル化、カルボニル化、ＳＵＭＯ化（ｓｕｍｏｙｌａｔｉｏｎ）、ビオチン化またはポリペプチド側鎖もしくは疎水性基の付加が挙げられる。結果として、修飾された可溶性ポリペプチドは、脂質、多糖または単糖、およびリン酸塩のような非アミノ酸エレメントを含み得る。グリコシル化の好ましい形態は、１つ以上のシアル酸部分をポリペプチドにコンジュゲートさせるシアリル化である。シアル酸部分は、溶解性および血清半減期を改善し、一方、タンパク質の免疫遺伝学的解析の可能性を減少させる。Ｒａｊｕら、Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ．２００１年、３１；４０（３０）：８８６８−７６頁を参照されたい。
【０１３７】
一実施形態において、目的の可溶性ポリペプチドの修飾形態は、目的の可溶性ポリペプチドを非タンパク質性ポリマーに連結したものを含む。一実施形態において、ポリマーは、ポリエチレングリコール（「ＰＥＧ」）、ポリプロピレングリコールまたはポリオキシアルキレンであり、米国特許第４，６４０，８３５号；第４，４９６，６８９号；第４，３０１，１４４号；第４，６７０，４１７号；第４，７９１，１９２号または第４，１７９，３３７号に記載されているようなものである。
【０１３８】
ＰＥＧは、市販されているまたは当該技術分野において周知である方法（ＳａｎｄｌｅｒおよびＫａｒｏ、Ｐｏｌｙｍｅｒ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ、Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ、Ｖｏｌ．３、１３８−１６１頁）によるエチレングリコールの開環重合により調製することができる、水溶性ポリマーである。用語「ＰＥＧ」は、ＰＥＧのサイズまたは末端での修飾にかかわらず、任意のポリエチレングリコール分子を包含するように広く使用され、式：Ｘ−Ｏ（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎＣＨ２ＣＨ２ＯＨ（１）（式中、ｎは、２０から２３００であり、Ｘは、Ｈまたは末端修飾、例えばＣ１−４アルキルである。）によって表すことができる。一実施形態において、本発明のＰＥＧは、一方の末端がヒドロキシまたはメトキシで終わる、すなわち、ＸがＨまたはＣＨ３である（「メトキシＰＥＧ」）。ＰＥＧは、結合反応に必要なさらなる化学基を含み得る；それは、分子の化学合成の結果生じる；または分子の一部の最適距離のためのスペーサーである。加えて、このようなＰＥＧは、互いに結合した１つ以上のＰＥＧ側鎖で構成され得る。１を超えるＰＥＧ鎖を含むＰＥＧは、多腕型（ｍｕｌｔｉａｒｍｅｄ）または分岐型ＰＥＧと呼ばれる。分岐型ＰＥＧは、例えば、グリセロール、ペンタエリスリトールおよびソルビトールなどの種々のポリオールに酸化ポリエチレンを付加することによって製造することができる。例えば、４アーム型ＰＥＧは、ペンタエリスリトールおよび酸化エチレンから製造され得る。分岐型ＰＥＧは、例えば、欧州特許出願公開第０４７３０８４Ａ号および米国特許第５，９３２，４６２号に記載されている。ＰＥＧの一形態は、リシンの一級アミノ基を介して結合された２つのＰＥＧ側鎖（ＰＥＧ２）を含む（Ｍｏｎｆａｒｄｉｎｉら、Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ  Ｃｈｅｍ．６巻（１９９５年）６２−６９頁）。
【０１３９】
ＰＥＧ修飾ポリペプチドの血清クリアランス率は、非修飾結合ポリペプチドのクリアランス率と比べて、約１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％またはさらには９０％減少し得る。ＰＥＧ修飾ポリペプチドは、非修飾タンパク質の半減期と比べて増大された半減期（ｔ１／２）を有し得る。ＰＥＧ結合ポリペプチドの半減期は、非修飾結合ポリペプチドの半減期と比べて、少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、１００％、１２５％、１５０％、１７５％、２００％、２５０％、３００％、４００％もしくは５００％またはさらには１０００％増大され得る。いくつかの実施形態において、タンパク質の半減期は、インビトロで、例えば、緩衝化生理食塩水または血清中で決定される。他の実施形態において、タンパク質の半減期は、インビボでの半減期であり、例えば、動物の血清または他の体液中のタンパク質の半減期である。
【０１４０】
治療法、製剤および投与様式
本開示はさらに、抗ＣＴＬＡ４ポリペプチドを投与することを含む、免疫応答または免疫抑制のいずれかの刺激を必要とする疾患を治療するための方法を提供する。本明細書に開示される抗体のいずれも、このような方法において使用され得る。例えば、本方法は、少なくとも１０−６Ｍの結合親和性でＣＴＬＡ４エピトープに結合するＩｇＧクラスの完全ヒト抗体、重鎖由来の可変ドメイン領域および軽鎖由来の可変ドメイン領域を有する完全ヒト抗体Ｆａｂ断片、重鎖由来の可変ドメイン領域および軽鎖由来の可変ドメイン領域ならびに重鎖と軽鎖可変ドメイン領域を連結するペプチドリンカーを有する一本鎖ヒト抗体であって、配列番号１−４４（表４）に記載される重鎖および軽鎖可変領域（および該配列内のＣＤＲ）を含む一本鎖抗体からなる群から選択される抗ＣＴＬＡ４ポリペプチドを使用して行われてもよい。
【０１４１】
例えば、一実施形態において、本明細書に開示される方法は、配列番号１、配列番号３、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号９、配列番号１１、配列番号１３、配列番号１５、配列番号１７、配列番号１９、配列番号２１、配列番号２３、配列番号２５、配列番号２７、配列番号２９、配列番号３１、配列番号３３、配列番号３５、配列番号３７、配列番号３９、配列番号４１、および配列番号４３からなる群から選択されるアミノ酸配列と少なくとも９５％同一、少なくとも９６％同一、少なくとも９７％同一、少なくとも９８％同一または少なくとも９９％同一である重鎖可変ドメイン配列を有し、および配列番号２、配列番号４、配列番号６、配列番号８、配列番号１０、配列番号１２、配列番号１４、配列番号１６、配列番号１８、配列番号２０、配列番号２２、配列番号２４、配列番号２６、配列番号２８、配列番号３０、配列番号３２、配列番号３４、配列番号３６、配列番号３８、配列番号４０、配列番号４２、および配列番号４４からなる群から選択されるアミノ酸配列と少なくとも９５％同一、少なくとも９６％同一、少なくとも９７％同一、少なくとも９８％同一または少なくとも９９％同一である軽鎖可変ドメイン配列を有する、完全ヒト抗体の使用を含む。
【０１４２】
一実施形態において、本明細書に記載される方法は、配列番号１、配列番号３、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号９、配列番号１１、配列番号１３、配列番号１５、配列番号１７、配列番号１９、配列番号２１、配列番号２３、配列番号２５、配列番号２７、配列番号２９、配列番号３１、配列番号３３、配列番号３５、配列番号３７、配列番号３９、配列番号４１、および配列番号４３からなる群から選択されるアミノ酸配列と少なくとも９５％同一、少なくとも９６％同一、少なくとも９７％同一、少なくとも９８％同一または少なくとも９９％同一である重鎖可変ドメイン配列を有し、および配列番号２、配列番号４、配列番号６、配列番号８、配列番号１０、配列番号１２、配列番号１４、配列番号１６、配列番号１８、配列番号２０、配列番号２２、配列番号２４、配列番号２６、配列番号２８、配列番号３０、配列番号３２、配列番号３４、配列番号３６、配列番号３８、配列番号４０、配列番号４２、および配列番号４４からなる群から選択されるアミノ酸配列と少なくとも９５％同一、少なくとも９６％同一、少なくとも９７％同一、少なくとも９８％同一または少なくとも９９％同一である軽鎖可変ドメイン配列を有する、完全ヒト抗体Ｆａｂ断片の使用を含む。
【０１４３】
一実施形態において、本明細書に記載される方法は、配列番号１、配列番号３、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号９、配列番号１１、配列番号１３、配列番号１５、配列番号１７、配列番号１９、配列番号２１、配列番号２３、配列番号２５、配列番号２７、配列番号２９、配列番号３１、配列番号３３、配列番号３５、配列番号３７、配列番号３９、配列番号４１、および配列番号４３からなる群から選択されるアミノ酸配列と少なくとも９５％同一、少なくとも９６％同一、少なくとも９７％同一、少なくとも９８％同一または少なくとも９９％同一である重鎖可変ドメイン配列を含み、配列番号２、配列番号４、配列番号６、配列番号８、配列番号１０、配列番号１２、配列番号１４、配列番号１６、配列番号１８、配列番号２０、配列番号２２、配列番号２４、配列番号２６、配列番号２８、配列番号３０、配列番号３２、配列番号３４、配列番号３６、配列番号３８、配列番号４０、配列番号４２、および配列番号４４からなる群から選択されるアミノ酸配列と少なくとも９５％同一、少なくとも９６％同一、少なくとも９７％同一、少なくとも９８％同一または少なくとも９９％同一である軽鎖可変ドメイン配列を含む一本鎖ヒト抗体の使用を含む。
【０１４４】
一実施形態において、完全ヒト抗体は、重鎖と軽鎖の両方を有し、ここで、抗体は、配列番号１／配列番号２、配列番号３／配列番号４、配列番号５／配列番号６、配列番号７／配列番号８、配列番号９／配列番号１０、配列番号１１／配列番号１２、配列番号１３／配列番号１４、配列番号１５／配列番号１６、配列番号１７／配列番号１８、配列番号１９／配列番号２０、配列番号２１／配列番号２２、配列番号２３／配列番号２４、配列番号２５／配列番号２６、配列番号２７／配列番号２８、配列番号２９／配列番号３０、配列番号３１／配列番号３２、配列番号３３／配列番号３４、配列番号３５／配列番号３６、配列番号３７／配列番号３８、配列番号３９／配列番号４０、配列番号４１／配列番号４２および配列番号４３／配列番号４４からなる群から選択される重鎖／軽鎖可変ドメイン配列を有する。
【０１４５】
一実施形態において、完全ヒト抗体Ｆａｂ断片は、重鎖可変ドメイン領域と軽鎖可変ドメイン領域の両方を有し、ここで、抗体は、配列番号１／配列番号２、配列番号３／配列番号４、配列番号５／配列番号６、配列番号７／配列番号８、配列番号９／配列番号１０、配列番号１１／配列番号１２、配列番号１３／配列番号１４、配列番号１５／配列番号１６、配列番号１７／配列番号１８、配列番号１９／配列番号２０、配列番号２１／配列番号２２、配列番号２３／配列番号２４、配列番号２５／配列番号２６、配列番号２７／配列番号２８、配列番号２９／配列番号３０、配列番号３１／配列番号３２、配列番号３３／配列番号３４、配列番号３５／配列番号３６、配列番号３７／配列番号３８、配列番号３９／配列番号４０、配列番号４１／配列番号４２および配列番号４３／配列番号４４からなる群から選択される重鎖／軽鎖可変ドメイン配列を有する。
【０１４６】
一実施形態において、一本鎖完全ヒト抗体は、重鎖可変ドメイン領域と軽鎖可変ドメイン領域の両方を有し、ここで、一本鎖完全ヒト抗体は、配列番号１／配列番号２、配列番号３／配列番号４、配列番号５／配列番号６、配列番号７／配列番号８、配列番号９／配列番号１０、配列番号１１／配列番号１２、配列番号１３／配列番号１４、配列番号１５／配列番号１６、配列番号１７／配列番号１８、配列番号１９／配列番号２０、配列番号２１／配列番号２２、配列番号２３／配列番号２４、配列番号２５／配列番号２６、配列番号２７／配列番号２８、配列番号２９／配列番号３０、配列番号３１／配列番号３２、配列番号３３／配列番号３４、配列番号３５／配列番号３６、配列番号３７／配列番号３８、配列番号３９／配列番号４０、配列番号４１／配列番号４２および配列番号４３／配列番号４４からなる群から選択される重鎖／軽鎖可変ドメイン配列を有する。
【０１４７】
一実施形態において、本発明の抗体および抗体断片は、前立腺がん、腎臓がん、結腸がん、肺がんまたは乳がん；病原性の感染症；ＣＮＳに関連する疾患、アミロイド形成性アルツハイマー病；ならびに炎症性またはアレルギー性の成分を伴う疾患、移植片対宿主病、宿主対移植片病、アレルギー、自己免疫疾患および他の炎症性疾患からなる群から選択される疾患を治療するために使用される。
【０１４８】
本発明の抗体およびその抗原結合断片は、がんのような疾患を治療するために使用され得る。一実施形態において、本発明は、ＣＴＬＡ４関連がんであるがんを治療する方法を特徴とする。語句「ＣＴＬＡ４関連がん」とは、異常なＣＴＬＡ４の発現または活性、例えば、増加したＣＴＬＡ４の発現または活性に関連するがんまたは悪性細胞の形質転換を意味する。ＣＴＬＡ４関連がんの例には、限定されないが、膀胱がん、血液がん、脳がん、乳がん、結腸直腸がん、線維肉腫、肺がん、卵巣がん、前立腺がん、黒色腫、リンパ腫、中皮腫および形質細胞腫が含まれる（例えば、Ｇｒｏｓｓｏら、Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｍｍｕｎ．２０１３年；１３巻：５頁；Ｐｏｓｔｏｗら、ＪＣＯ、２０１５年１月２０日、Ｋｖｉｓｔｂｏｒｇら、Ｓｃｉｅｎｃｅ  Ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎａｌ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ、２０１４年９月１７日：６巻、２５４号、２５４頁；Ｈｅｒｓｈら、Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｏｎｃｏｌ．２００８年；２６巻：要約  ９０２２頁を参照されたい。）。ある特定の実施形態において、ＣＴＬＡ４関連がんは、個体における任意のがんであり、この場合、抗ＣＴＬＡ−４臨床活性と相関するバイオマーカーが検出され、例えば、絶対リンパ球数の上昇、Ｔ細胞上での持続的誘導性Ｔ細胞共刺激因子（ＩＣＯＳ）発現（Ｌｉａｋｏｕら  Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ．２００８年；１０５巻：１４９８７−１４９９２頁）、またはＴ細胞におけるＨＬＡ−ＤＲ／ＣＤ４５ＲＯのアップレギュレーション（Ｃｏｍｉｎ−Ａｎｄｕｉｘ  Ｂら、Ｊ．Ｔｒａｎｓｌ  Ｍｅｄ．２００８年；６巻；２２頁）が挙げられる。
【０１４９】
本明細書に開示されるヒトＣＴＬＡ４に対する完全ヒト抗体は、免疫応答または免疫抑制の刺激のいずれかを必要とする治療法において使用することができる。刺激は、ヒトＣＴＬＡ４のヒトＢ７への結合を遮断する抗体を使用して達成され、免疫応答の延長の刺激および増進による治療に適した疾患には、前立腺がん、腎臓がん、結腸がん、肺がんまたは乳がんが含まれ；病原性の感染症；ＣＮＳに関連する疾患、例えば、アルツハイマー病を含むアミロイド形成性疾患；ならびに炎症性またはアレルギー性の成分を伴う疾患が含まれる。また、免疫抑制は、例えば、制御性Ｔ細胞の誘導を介して、ヒトＣＴＬＡ４に対する抗体を使用して達成することができる（Ｃｏｑｕｅｒｅｌｌｅら、Ｇｕｔ  ２００９年；５８巻：１３６３−１３７３頁）。治療を適用することができる疾患には、移植片対宿主病、宿主対移植片病、アレルギー、自己免疫疾患および他の炎症性疾患が含まれる。
【０１５０】
また、本開示の抗ＣＴＬＡ４抗体（およびその断片）は、自己免疫疾患、および細胞、臓器または組織移植片の拒絶の治療において有用である。ある特定の態様において、抗ＣＴＬＡ４抗体（およびその断片）は、関節リウマチおよび若年性特発性関節炎から選択される自己免疫疾患の治療において有用である。
【０１５１】
本開示は、抗ＣＴＬＡ４ポリペプチドを投与することを含む、Ｓ．アウレウス感染を治療または予防するための方法を特徴とする。投与のための技術および投与量は、特定の種類のポリペプチドおよび処置されるべき特定の病状によって変わるが、当業者により容易に決定することができる。一般的に、監督当局は、治療剤として使用されるタンパク質試薬が、許容される低レベルの発熱物質を有するように製剤化されることを要求する。したがって、治療製剤は、一般的に、それらが実質的に発熱物質を含まない、または少なくとも適切な監督当局（例えば、ＦＤＡ）により決定される、許容されるレベル未満の発熱物質を含む点で、他の製剤と区別される。
【０１５２】
本開示の治療組成物は、医薬として許容される希釈剤、担体または賦形剤とともに、単一の投与量形態で投与され得る。投与は、非限定的な例として、非経腸（例えば、静脈内、皮下）、経口または局所であり得る。さらに、本発明のポリペプチドをコードする核酸を用いる任意の遺伝子治療技術、例えばネイキッドＤＮＡ送達、組換え遺伝子およびベクター、患者の細胞のエクスビボでの操作を含む細胞ベースの送達などを用いることができる。
【０１５３】
組成物は、経口投与用の丸剤、錠剤、カプセル剤、液剤または持続放出錠；または静脈内、皮下もしくは非経腸投与用の液剤；局所投与用のゲル、ローション、軟膏、クリームもしくはポリマーまたは他の持続放出ビヒクルの形態であり得る。
【０１５４】
製剤の製造方法関する当該技術分野において周知の方法は、例えば、「Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ」（２０ｔｈ  ｅｄ．、編集、Ａ．Ｒ．Ｇｅｎｎａｒｏ  Ａ  Ｒ．、２０００年、Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ  Ｗｉｌｌｉａｍｓ  ＆  Ｗｉｌｋｉｎｓ、Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ、Ｐａ）に見出される。非経腸投与用製剤は、例えば、賦形剤、滅菌水、生理食塩水、ポリエチレングリコールのようなポリアルキレングリコール、植物由来のオイルまたは水素化ナフタレンを含むことができる。生体適合性の生分解可能なラクチドポリマー、ラクチド／グリコリドコポリマーまたはポリオキシエチレン−ポリオキシプロピレンコポリマーは、化合物の放出を制御するために使用することができる。ナノ粒子製剤（例えば、生分解可能なナノ粒子、固体脂質ナノ粒子、リポソーム）は、化合物の生体内分布を制御するために使用することができる。他の有用な可能性のある非経腸送達系には、エチレン−酢酸ビニルコポリマー粒子、浸透圧ポンプ、埋め込み式点滴システムおよびリポソームが含まれる。製剤中の化合物の濃度は、投与される薬物の投薬量、および投与経路を含む、多数の因子に応じて変化する。
【０１５５】
ポリペプチドは、任意選択的に、製薬分野で通常使用される非毒性の酸付加塩または金属錯体のような医薬として許容される塩として投与されてもよい。酸付加塩の例としては、酢酸、乳酸、パモ酸、マレイン酸、クエン酸、リンゴ酸、アスコルビン酸、コハク酸、安息香酸、パルミチン酸、スベリン酸、サリチル酸、酒石酸、メタンスルホン酸、トルエンスルホン酸またはトリフルオロ酢酸のような有機酸；タンニン酸、カルボキシメチルセルロースのようなポリマー酸；および、塩酸、臭化水素酸、硫酸、リン酸のような無機酸が含まれる。金属錯体には、亜鉛、鉄などが含まれる。一例において、ポリペプチドは、熱安定性を増加させるために、酢酸ナトリウムの存在下で製剤化される。
【０１５６】
経口使用のための製剤としては、非毒性の医薬として許容される賦形剤との混合物中に有効成分を含有する錠剤が含まれる。これらの賦形剤は、例えば、不活性希釈剤または充填剤（例えば、スクロースおよびソルビトール）、潤滑剤、流動促進剤および抗接着剤（例えば、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸亜鉛、ステアリン酸、シリカ、硬化植物油またはタルク）であり得る。
【０１５７】
経口使用のための製剤はまた、チュアブル錠として、または硬質ゼラチンカプセルとして与えられてもよく、ここで、有効成分は、不活性固体希釈剤とともにまたは軟質ゼラチンカプセルとして混合され、有効成分は水または油媒体とともに混合される。
【０１５８】
好ましくは、ある特定の実施形態において、開示された抗体は、吸入により投与されるが、全長ＩｇＧ抗体のエアロゾル化は、抗体の分子サイズ（約１５０ｋＤａ）に起因して制限させることが判明することがある。市販のエアロゾル化デバイスを最大にするために、より小さなＦａｂ断片が必要とされる場合がある。この場合において、本発明者らはまた、親ＩｇＧ分子からＦａｂ断片を生じさせる必要があり得る。したがって、本発明者らは、Ｆａｂ断片の生成のための標準的な酵素に基づく消化法を使用した初期試験を行い、次に、全長のＩｇＧ分子と並行して特徴付けする。
【０１５９】
治療的に有効な投薬量とは、投与された場合に治療効果を生じる投薬量を意味する。正確な投薬量は、処置される障害に依存し、当業者により公知の技術を用いて確かめられ得る。一般的に、ポリペプチドは、１日あたり約０．０１μｇ／ｋｇから約５０ｍｇ／ｋｇ、好ましくは１日あたり０．０１ｍｇ／ｋｇから約３０ｍｇ／ｋｇ、最も好ましくは１日あたり０．１ｍｇ／ｋｇから約２０ｍｇ／ｋｇで投与される。ポリペプチドは、毎日（例えば、１日１回、２回、３回または４回）、または好ましくは低頻度で（例えば、週に１回、２週間に１回、３週間に１回、月に一回または年に４回）投与され得る。さらに、当該技術分野において公知であるように、年齢ならびに体重、一般的な健康状態、性別、食事、投与時期、薬物相互作用および疾患の重症度による調整が必要であり、当業者により常套実験にて確認され得る。
【０１６０】
本明細書に開示されるように、ＣＴＬＡ４結合ポリペプチドは、単独で投与することができ、または化学療法、放射線療法、免疫療法、外科的処置またはこれらの任意の組み合わせのような１つ以上のさらなる療法と組み合わせて投与することができる。上記の他の治療戦略のもとで、長期治療が同様に可能であり、アジュバント療法もまた可能である。
【０１６１】
このような方法のある種の実施形態において、１つ以上のポリペプチド治療剤は、共に（同時に）または異なる時点において（連続的に）投与され得る。さらに、ポリペプチド治療剤は、がんを治療するためまたは血管新生を阻害するための別のタイプの化合物とともに投与することができる。
【０１６２】
ある種の実施形態において、本発明の目的とする抗ＣＴＬＡ４抗体剤を単独で使用することができる。
【０１６３】
ある種の実施形態において、断片の結合ポリペプチドは、診断目的のために標識されていても標識されていなくてもよい。典型的には、診断アッセイは、結合ポリペプチドがＣＴＬＡ４に結合することによって生ずる複合体の形成を検出することを伴う。結合ポリペプチドまたはその断片は、抗体と同様に、直接標識され得る。様々な標識が使用でき、限定されないが、放射性核種、蛍光剤、酵素、酵素の基質、酵素補助因子、酵素阻害剤およびリガンド（例えば、ビオチン、ハプテン）が挙げられる。多数の適切な免疫アッセイが当業者に公知である（例えば、米国特許第３，８１７，８２７号；第３，８５０，７５２号；第３，９０１，６５４号；および第４，０９８，８７６号を参照されたい。）。標識されない場合、結合ポリペプチドは、凝集アッセイ法などのアッセイにて使用できる。また、標識されていない結合ポリペプチドは、結合ポリペプチドまたは他の適切な試薬（例えば、標識されたプロテインＡ）と反応性のある標識抗体などの、結合ポリペプチドを検出するために使用できる別の（１つ以上の）適切な試薬と併用することもできる。
【０１６４】
一実施形態において、本発明の結合ポリペプチドは、目的とするポリペプチドが酵素にコンジュゲートする酵素免疫アッセイに利用することができる。ＣＴＬＡ４タンパク質を含む生物学的サンプルが目的とする結合ポリペプチドと混合される場合、結合ポリペプチドとＣＴＬＡ４タンパク質の間で結合が生じる。一実施形態において、ＣＴＬＡ４タンパク質を発現する細胞（例えば、内皮細胞）を含むサンプルが、目的とする抗体と混合され、結合ポリペプチドと結合ポリペプチドによって認識されるＣＴＬＡ４タンパク質を有する細胞の間で結合が生じる。これらの結合細胞は、結合しなかった試薬から分離され、細胞に特異的に結合した結合ポリペプチド−酵素コンジュゲートの存在は、例えば、サンプルと、酵素が作用すると色または他の検出可能な変化を生じさせる酵素の基質とを接触させることにより決定される。別の実施形態において、目的とする結合ポリペプチドは、標識されていなくてもよく、目的とする結合ポリペプチドを認識する第２の標識ポリペプチド（例えば、抗体）を加えることができる。
【０１６５】
ある種の態様において、生物学的サンプル中にＣＴＬＡ４タンパク質が存在することを検出する際に使用するためのキットもまた製造することができる。このようなキットは、ＣＴＬＡ４タンパク質または該受容体の部分に結合するＣＴＬＡ４結合ポリペプチド、ならびに結合ポリペプチドと受容体タンパク質またはその部分との間の複合体の存在を検出するのに適切な１つ以上の補助試薬を含む。本発明のポリペプチド組成物は、単独でまたは他のエピトープに特異的なさらなる抗体と組み合わせて、凍結乾燥形態で提供され得る。標識されていてもよくまたは標識されていなくてもよい結合ポリペプチドおよび／または抗体は、補助成分（例えば、Ｔｒｉｓ、リン酸塩および炭酸塩のような緩衝剤、安定化剤、賦形剤、殺生物剤および／または不活性タンパク質、例えば、ウシ血清アルブミン）と共にキットに含み得る。例えば、結合ポリペプチドおよび／または抗体は、補助成分との凍結乾燥された混合物として提供され、または、補助成分は、使用者が組み合わせるために別々に提供され得る。一般に、これらの補助材料は、活性な結合ポリペプチドまたは抗体の量を基準にして約５重量％未満で存在し、通常、ポリペプチドまたは抗体濃度を基準にして少なくとも約０．００１重量％の総量で存在する。結合ポリペプチドに結合することができる二次抗体を使用する場合、このような抗体は、キット中、例えば、別個のバイアルまたは容器中に提供され得る。二次抗体は、存在する場合、典型的には標識され、上記の抗体製剤に類似した方法で製剤することができる。
【０１６６】
ポリペプチド配列は、標準の一文字表記または三文字表記を用いて示される。特記しない限り、各ポリペプチド配列は、左にアミノ末端および右にカルボキシ末端を有する；各々の一本鎖核酸配列、および各々の二本鎖核酸配列の上の鎖は、左に５’末端および右に３’末端を有する。また、特定のポリペプチド配列は、それが参照配列とどの程度異なるかを説明するために記載され得る。
【実施例】
【０１６７】
本発明を詳細に記載してきたが、以下の実施例を参照することにより、本発明はさらに明確に理解される。これらの実施例は説明のみを目的として含めたのであり、本発明を限定することを意図しない。
【０１６８】
［実施例１］
ヒトＣＴＬＡ４に特異的なヒト抗体を同定し、ＣＴＬＡ４に対する特異性およびＣＴＬＡ４に対する高度の親和性（例えば、少なくとも１０−６Ｍ）を含む治療特性について選択した。同定された抗体を表４に記載する。
【０１６９】
抗ＣＴＬＡ４抗体が機能活性を有するかどうかを決定するために、Ｔ細胞活性化を増進するそれらの能力を決定した。末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）は、ビオチン化された抗ＣＤ１４抗体を使用して単球を枯渇させた後、抗ビオチン被覆磁気ビーズと反応させ、磁気カラムを使用して分離した。磁場中に維持されたカラムから溶出された細胞の画分を回収し、１％未満の単球を含有するリンパ球の集団を得た。固定化された抗ＣＤ３（５ｍｇ／ｍｌ）で予め被覆されたウェルにリンパ球を添加した。試験抗体をこれらのウェルに１０ｍｇ／ｍｌで添加した。３日間の培養後、細胞は、ＣＤ２５の発現を測定することによって、細胞活性化についてアッセイされた。具体的には、培養３日後、細胞を採取し、細胞活性化の尺度として抗ヒトＣＤ２５で染色した。ＣＤ２５発現のレベルは、抗ＣＴＬＡ４抗体が添加された培養物においてより高かった（図１）。対照抗体は、アイソタイプが合致した非特異的（すなわち、ＣＴＬＡ４に結合しない。）抗体であった。培地対照に関してデータを標準化することにより、抗ＣＴＬＡ４抗体を加えた培養物において、顕著なレベルの増進が検出された（図２）。
【０１７０】
［実施例２］
この実施例は、本明細書に開示される例示的な抗体（Ｆ７）の親和性動態を決定する。表１は、抗体Ｆ７の親和性動態を示す。
【０１７１】
【表１】
2018508573.tif 000003
【０１７２】
この実施例は、本明細書に開示される例示的な抗ＣＴＬＡ４抗体の結合親和性を例示する。親和性は、表面プラズモン共鳴（Ｂｉａｃｏｒｅ）を使用して決定された。簡単には、抗ヒトＦｃ抗体（ＧＥ、ＢＲ−１００８−３９）は、標準的なＮＨＳ／ＥＤＣカップリング法を使用して、約１０００ＲＵまでＣＭ５センサーチップ上に固定化された。抗体（約１０μｇ／ｍｌ）を流速１０μｌ／分で６０秒間捕捉させた。組換えヒトＣＴＬＡ４／Ｈｉｓをランニングバッファー（ＨＢＳ−ＥＰ）中に連続希釈した。全ての測定を３０μＬ／分の流速で行った。表面を３ＭのＭｇＣｌ２で６０秒間再生した。１：１（ラングミュア）結合モデルを使用してデータへのフィッティングを行った。
【０１７３】
［実施例３］
以下の実施例は、ヒト抗ＣＴＬＡ４抗体ＣＴ１Ｅ１の特徴付けを記載する。ＣＴ１Ｅ１の可変重鎖および軽鎖のアミノ酸配列は、それぞれ配列番号４３および４４に示される。
【０１７４】
抗ＣＴＬＡ４抗体ＣＴ１Ｅ１の交差反応性試験は、ＣＴ１Ｅ１がヒトＣＴＬＡ４に特異的であるだけでなく、カニクイザルとマウスＣＴＬＡ４の両方と交差反応することを明らかにした。９６ウェルＮｉ−ＮＴＡプレートを使用して、組換えヒトＣＴＬＡ４／Ｈｉｓ、カニクイザルＣＴＬＡ４／ＨｉｓまたはマウスＣＴＬＡ４／Ｈｉｓを１μｇ／ｍＬで捕捉させた。プレートを室温で３０分間インキュベートし、ＰＢＳ−Ｔｗｅｅｎ（ＰＢＳＴ）で３回洗浄し、次いでカゼイン中で希釈した抗ＣＴＬＡ４抗体（約１μｇ／ｍＬ）を添加し、３０分間振とうしながらインキュベートした。プレートをＰＢＳＴで３回洗浄し、西洋ワサビペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）コンジュゲートヤギ抗ヒトＦｃ（カゼイン中１：５００）を添加し、次に、３，３’，５，５’−テトラメチルベンジジン（ＴＭＢ）を基質として添加し、約５分間発色させた。２ＭのＨ２ＳＯ４を使用して反応を停止させ、ＯＤを４５０ｎｍで読み取った。
【０１７５】
また、ヒトＣＴＬＡ４に対する抗体ＣＴ１Ｅ１の親和性は、表面プラズモン共鳴（ＢｉａＣｏｒｅ）を使用して決定された。抗ヒトＦｃ抗体（ＧＥ、ＢＲ−１００８−３９）は、標準的なＮＨＳ／ＥＤＣ結合法を使用して、約１０００ＲＵまでＣＭ５センサーチップ上に固定化された。抗体（約１０μｇ／ｍｌ）を流速１０μｌ／分で６０秒間捕捉させた。組換えヒトＰＤ−Ｌ１／Ｈｉｓをランニングバッファー（ＨＢＳ−ＥＰ）中に連続希釈した。全ての測定を３０μＬ／分の流速でＨＢＳ−ＥＰバッファー中で行った。抗体を適切に希釈して一連の濃度を得た。１：１（ラングミュア）結合モデルを使用してデータへのフィッティングを行った。Ｃｈｉ２（カイ二乗）値は、フィッティング質のガイドラインとして使用された。親和性試験の結果を以下の表２に示す。
【０１７６】
【表２】
2018508573.tif 000004
【０１７７】
抗体ＣＴ１Ｅ１がＣＤ８０およびＣＤ８６活性を阻害する能力を決定するためにアッセイを行った。９６ウェルＮｉ−ＮＴＡプレートを室温で１時間、ヘキサヒスチジンタグを有する１μｇ／ｍＬの組換えヒトＣＤ８０またはＣＤ８６を用いて被覆した。３０μＬの連続３倍希釈されたＩｇＧ（２５μｇ／ｍＬから開始）および３０μＬの０．００６μＬ／ｍＬの組換えヒトＣＴＬＡ４（ヒトＦｃ融合物として。）を予混合し、混合物を３０分間インキュベートした後、プレートをＰＢＳ−Ｔｗｅｅｎ（ＰＢＳＴ）で３回洗浄した。混合物の５０μＬをＥＬＩＳＡプレートに移し、振とうしながら３０分間インキュベートした。プレートをＰＢＳＴで３回洗浄し、次に、西洋ワサビペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）コンジュゲートヤギ抗ヒトＦｃ（カゼイン中１：５００）を添加し、その後、３，３’，５，５’−テトラメチルベンジジン（ＴＭＢ）を基質として添加し、３０分間発色させた。２ＭのＨ２ＳＯ４を使用して反応を停止させ、ＯＤを４５０ｎｍで読み取った。
【０１７８】
試験の結果は、図３Ａ（ＣＤ８０）および３Ｂ（ＣＤ８６）に記載される。ＣＤ８０についてはＣＴ１Ｅ１のＩＣ５０値は約０．３１×１０−９であり、ＣＤ８６については約０．３２×１０−９であると決定された。驚くべきことに、抗体ＣＴ１Ｅ１は、対照抗体イピリムマブ（ヤーボイ）の計算されたＩＣ５０に比べ、ＣＤ８０およびＣＤ８６に対してより良好なＩＣ５０値を有する。対照抗体イピリムマブは、細胞傷害性Ｔ細胞が例えばがん細胞を破壊することができるようにＣＴＬＡ４活性を阻害することができるヒト抗ＣＴＬＡ４抗体である。イピリムマブとＣＴ１Ｅ１の両方の、ＣＤ８０およびＣＤ８６に対する計算されたＩＣ５０値は、図３Ａおよび３Ｂに記載される。
【０１７９】
［実施例４］
この実施例は、低用量のスーパー抗原ブドウ球菌エンテロトキシンＢ（ＳＥＢ）に対する応答に対する抗ＣＴＬＡ４抗体Ｆ７の効果を試験する実験を記載する。刺激としてのＳＥＢの使用は、抗原に応答するＴ細胞活性化を試験するための手段を提供する。抗ＣＤ３はポリクローナルＴ細胞活性化因子であるが、ＳＥＢはオリゴクローン活性化因子である。
【０１８０】
抗ヒトＣＤ２５を細胞活性化の尺度として使用する実験を行った。２つの異なる濃度のＦ７抗体（３０μｇおよび１０μｇ）を使用した。また、陰性対照を使用した。これは、ＣＴＬＡ４に結合しなかったアイソタイプが合致した抗体である。３日後、ＣＤ２５細胞の活性化率を測定した。
【０１８１】
図４に示すように、活性化されたＣＤ２５細胞のパーセントは、抗ＣＴＬＡ４  Ｆ７抗体の両方の濃度（３０μｇおよび１０μｇ）で処理された細胞において増加した。培地対照に関してデータを標準化することによって、Ｆ７抗ＣＴＬＡ４抗体を受けた培養物において顕著なレベルの活性化が（ＣＤ２５細胞を介して。）検出された（図４）。
【０１８２】
［実施例５］
抗体Ｅ８は、さらなる親和性および機能試験においてさらに試験された。ヒトＣＴＬＡ４に対する抗体Ｅ８の親和性は、表面プラズモン共鳴（ＢｉａＣｏｒｅ）を使用して決定された。試験の結果は、以下の表３に示されている。
【０１８３】
【表３】
2018508573.tif 000005
【０１８４】
親和性試験に加えて、図５は、抗体Ｅ８の機能活性を示す結果を提供する。図５に記載される機能アッセイは、実施例１のＣＤ２６アッセイにおいて使用された方法と同様である。
【０１８５】
【表４】
2018508573.tif 000006
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2018508573.tif 000008
【図１】
2018508573.tif 000009
【図２】
2018508573.tif 000010
【図３Ａ】
2018508573.tif 000011
【図３Ｂ】
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【図４】
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【図５】
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【配列表】
2018508573000001.app
【手続補正書】
【提出日】平成29年10月17日(2017.10.17)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ＩｇＧクラスの単離された完全ヒト抗ＣＴＬＡ４抗体であって、配列番号１、配列番号３、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号９、配列番号１１、配列番号１３、配列番号１５、配列番号１７、配列番号１９、配列番号２１、配列番号２３、配列番号２５、配列番号２７、配列番号２９、配列番号３１、配列番号３３、配列番号３５、配列番号３７、配列番号３９、配列番号４１、および配列番号４３からなる群から選択されるアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン；ならびに配列番号２、配列番号４、配列番号６、配列番号８、配列番号１０、配列番号１２、配列番号１４、配列番号１６、配列番号１８、配列番号２０、配列番号２２、配列番号２４、配列番号２６、配列番号２８、配列番号３０、配列番号３２、配列番号３４、配列番号３６、配列番号３８、配列番号４０、配列番号４２、および配列番号４４からなる群から選択されるアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン
を含む完全ヒト抗ＣＴＬＡ４抗体。
【請求項２】
配列番号１／配列番号２（本明細書においてＡ１と称する。）、配列番号３／配列番号４（本明細書においてＡ２と称する。）、配列番号５／配列番号６（本明細書においてＡ４と称する。）、配列番号７／配列番号８（本明細書においてＡ７と称する。）、配列番号９／配列番号１０（本明細書においてＡ１２と称する。）、配列番号１１／配列番号１２（本明細書においてＢ６と称する。）、配列番号１３／配列番号１４（本明細書においてＣ２と称する。）、配列番号１５／配列番号１６（本明細書においてＤ６と称する。）、配列番号１７／配列番号１８（本明細書においてＦ１と称する。）、配列番号１９／配列番号２０（本明細書においてＦ３と称する。）、配列番号２１／配列番号２２（本明細書においてＦ５と称する。）、配列番号２３／配列番号２４（本明細書においてＦ６と称する。）、配列番号２５／配列番号２６（本明細書においてＦ７と称する。）、配列番号２７／配列番号２８（本明細書においてＧ１と称する。）、配列番号２９／配列番号３０（本明細書においてＧ２と称する。）、配列番号３１／配列番号３２（本明細書においてＧ３と称する。）、配列番号３３／配列番号３４（本明細書においてＧ５と称する。）、配列番号３５／配列番号３６（本明細書においてＧ１２と称する。）、配列番号３７／配列番号３８（本明細書においてＤ５と称する。）、配列番号３９／配列番号４０（本明細書においてＥ７と称する。）、配列番号４１／配列番号４２（本明細書においてＥ８と称する。）、および配列番号４３／配列番号４４（本明細書においてＣＴ１Ｅ１と称する。）からなる群から選択される重鎖／軽鎖可変ドメイン配列を有する、請求項１に記載の完全ヒト抗体。
【請求項３】
抗体が少なくとも１×１０−６ＭのＫＤを有する、請求項１または２に記載の完全ヒト抗体。
【請求項４】
抗体が、配列番号１、配列番号３、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号９、配列番号１１、配列番号１３、配列番号１５、配列番号１７、配列番号１９、配列番号２１、配列番号２３、配列番号２５、配列番号２７、配列番号２９、配列番号３１、配列番号３３、配列番号３５、配列番号３７、配列番号３９、配列番号４１、および配列番号４３からなる群から選択されるアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン；ならびに配列番号２、配列番号４、配列番号６、配列番号８、配列番号１０、配列番号１２、配列番号１４、配列番号１６、配列番号１８、配列番号２０、配列番号２２、配列番号２４、配列番号２６、配列番号２８、配列番号３０、配列番号３２、配列番号３４、配列番号３６、配列番号３８、配列番号４０、配列番号４２、および配列番号４４からなる群から選択されるアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン
を含む抗ＣＴＬＡ４完全ヒト抗体Ｆａｂ断片。
【請求項５】
抗体断片が、配列番号１／配列番号２、配列番号３／配列番号４、配列番号５／配列番号６、配列番号７／配列番号８、配列番号９／配列番号１０、配列番号１１／配列番号１２、配列番号１３／配列番号１４、配列番号１５／配列番号１６、配列番号１７／配列番号１８、配列番号１９／配列番号２０、配列番号２１／配列番号２２、配列番号２３／配列番号２４、配列番号２５／配列番号２６、配列番号２７／配列番号２８、配列番号２９／配列番号３０、配列番号３１／配列番号３２、配列番号３３／配列番号３４、配列番号３５／配列番号３６、配列番号３７／配列番号３８、配列番号３９／配列番号４０、配列番号４１／配列番号４２、および配列番号４３／配列番号４４からなる群から選択される重鎖／軽鎖可変ドメイン配列を有する、請求項４に記載の完全ヒト抗体Ｆａｂ断片。
【請求項６】
抗体が少なくとも１×１０−６ＭのＫＤを有する、請求項４または５に記載の完全ヒト抗体Ｆａｂ断片。
【請求項７】
ペプチドリンカーによって連結された重鎖可変ドメインおよび軽鎖可変ドメインを含む抗ＣＴＬＡ４一本鎖ヒト抗体であって、重鎖可変ドメインが、配列番号１、配列番号３、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号９、配列番号１１、配列番号１３、配列番号１５、配列番号１７、配列番号１９、配列番号２１、配列番号２３、配列番号２５、配列番号２７、配列番号２９、配列番号３１、配列番号３３、配列番号３５、配列番号３７、配列番号３９、配列番号４１、および配列番号４３からなる群から選択されるアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；軽鎖可変ドメインが、配列番号２、配列番号４、配列番号６、配列番号８、配列番号１０、配列番号１２、配列番号１４、配列番号１６、配列番号１８、配列番号２０、配列番号２２、配列番号２４、配列番号２６、配列番号２８、配列番号３０、配列番号３２、配列番号３４、配列番号３６、配列番号３８、配列番号４０、配列番号４２、および配列番号４４からなる群から選択されるアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む、抗ＣＴＬＡ４一本鎖ヒト抗体。
【請求項８】
一本鎖完全ヒト抗体が、配列番号１／配列番号２、配列番号３／配列番号４、配列番号５／配列番号６、配列番号７／配列番号８、配列番号９／配列番号１０、配列番号１１／配列番号１２、配列番号１３／配列番号１４、配列番号１５／配列番号１６、配列番号１７／配列番号１８、配列番号１９／配列番号２０、配列番号２１／配列番号２２、配列番号２３／配列番号２４、配列番号２５／配列番号２６、配列番号２７／配列番号２８、配列番号２９／配列番号３０、配列番号３１／配列番号３２、配列番号３３／配列番号３４、配列番号３５／配列番号３６、配列番号３７／配列番号３８、配列番号３９／配列番号４０、配列番号４１／配列番号４２および配列番号４３／配列番号４４からなる群から選択される重鎖／軽鎖可変ドメイン配列を有する、請求項７に記載の一本鎖ヒト抗体。
【請求項９】
抗体が少なくとも１×１０−６ＭのＫＤを有する、請求項７または８に記載の一本鎖完全ヒト抗体。
【請求項１０】
請求項１から９のいずれか一項に記載の有効量の抗体または抗体断片を投与し、それによりがんを治療することを含む、それを必要とする対象におけるがんを治療する方法。
【請求項１１】
がんが、膀胱がん、血液がん、脳がん、乳がん、結腸がん、線維肉腫、肺がん、卵巣がん、前立腺がん、黒色腫、リンパ腫、中皮腫および形質細胞腫からなる群から選択される、請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
有効量の抗ＣＴＬＡ４ポリペプチドを投与することを含む、免疫応答または免疫抑制のいずれかの刺激を必要とする疾患を治療する方法であって、抗ＣＴＬＡ４ポリペプチドが、
重鎖可変ドメインおよび軽鎖可変ドメインを含むＩｇＧクラスの単離された抗ＣＴＬＡ４完全ヒト抗体、
重鎖可変ドメインおよび軽鎖可変ドメインを含む抗ＣＴＬＡ４完全ヒト抗体Ｆａｂ断片、ならびに
重鎖可変ドメインおよび軽鎖可変ドメインがペプチドリンカーを介して連結されている、重鎖可変ドメインおよび軽鎖可変ドメインを有する一本鎖ヒト抗体
からなる群から選択され、
重鎖可変ドメインが、配列番号１、配列番号３、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号９、配列番号１１、配列番号１３、配列番号１５、配列番号１７、配列番号１９、配列番号２１、配列番号２３、配列番号２５、配列番号２７、配列番号２９、配列番号３１、配列番号３３、配列番号３５、配列番号３７、配列番号３９、配列番号４１、および配列番号４３からなる群から選択されるアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；
軽鎖可変ドメインが、配列番号２、配列番号４、配列番号６、配列番号８、配列番号１０、配列番号１２、配列番号１４、配列番号１６、配列番号１８、配列番号２０、配列番号２２、配列番号２４、配列番号２６、配列番号２８、配列番号３０、配列番号３２、配列番号３４、配列番号３６、配列番号３８、配列番号４０、配列番号４２、および配列番号４４からなる群から選択されるアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む、方法。
【請求項１３】
抗体または抗体断片が、配列番号１／配列番号２、配列番号３／配列番号４、配列番号５／配列番号６、配列番号７／配列番号８、配列番号９／配列番号１０、配列番号１１／配列番号１２、配列番号１３／配列番号１４、配列番号１５／配列番号１６、配列番号１７／配列番号１８、配列番号１９／配列番号２０、配列番号２１／配列番号２２、配列番号２３／配列番号２４、配列番号２５／配列番号２６、配列番号２７／配列番号２８、配列番号２９／配列番号３０、配列番号３１／配列番号３２、配列番号３３／配列番号３４、配列番号３５／配列番号３６、配列番号３７／配列番号３８、配列番号３９／配列番号４０、配列番号４１／配列番号４２、および配列番号４３／配列番号４４からなる群から選択される重鎖／軽鎖可変ドメイン配列を有する、請求項１２に記載の方法。
【請求項１４】
疾患が、前立腺、腎臓がん、結腸がん、肺がんもしくは乳がん；病原性の感染症；ＣＮＳに関連する疾患、アミロイド形成性アルツハイマー病；ならびに炎症性またはアレルギー性の成分を伴う疾患、移植片対宿主病、宿主対移植片病、アレルギー、自己免疫疾患および他の炎症性疾患からなる群から選択される、請求項１２または１３に記載の方法。
【請求項１５】
配列番号１、配列番号３、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号９、配列番号１１、配列番号１３、配列番号１５、配列番号１７、配列番号１９、配列番号２１、配列番号２３、配列番号２５、配列番号２７、配列番号２９、配列番号３１、配列番号３３、配列番号３５、配列番号３７、配列番号３９、配列番号４１、および配列番号４３からなる群から選択される重鎖可変領域アミノ酸配列に記載される相補性決定領域（ＣＤＲ）を含む重鎖可変ドメイン；ならびに配列番号２、配列番号４、配列番号６、配列番号８、配列番号１０、配列番号１２、配列番号１４、配列番号１６、配列番号１８、配列番号２０、配列番号２２、配列番号２４、配列番号２６、配列番号２８、配列番号３０、配列番号３２、配列番号３４、配列番号３６、配列番号３８、配列番号４０、配列番号４２、および配列番号４４からなる群から選択される軽鎖可変領域アミノ酸配列に記載されるＣＤＲを含む軽鎖可変領域を含む、単離された抗ＣＴＬＡ４抗体またはその抗原結合断片。
【請求項１６】
少なくとも１×１０−６ＭのＫＤを有する、請求項１５に記載の抗体またはその抗原結合断片。
【請求項１７】
請求項１５または１６に記載の抗ＣＴＬＡ４抗体またはその抗原結合断片、および医薬として許容される担体を含む医薬組成物。
【請求項１８】
請求項１５または１６に記載の有効量の抗ＣＴＬＡ４抗体またはその抗原結合断片を投与し、それによりがんを治療することを含む、それを必要とするヒト対象におけるがんを治療する方法。
【請求項１９】
がんが、膀胱がん、血液がん、脳がん、乳がん、結腸がん、線維肉腫、肺がん、卵巣がん、前立腺がん、黒色腫、リンパ腫、中皮腫および形質細胞腫からなる群から選択される、請求項１８に記載の方法。
【国際調査報告】
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2018508573.tif 000016
2018508573.tif 000017
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