(57)【要約】  本発明は、アトラクチレノリド（ａｔｒａｃｔｙｌｅｎｏｌｉｄｅ）系化合物またはその誘導体を含み、前記アトラクチレノリド（ａｔｒａｃｔｙｌｅｎｏｌｉｄｅ）系化合物は以下の式（Ｉ）に示されている構造式を有し、Ｒ１は、ＨまたはＣ１-Ｃ１０の直鎖または分枝を有するアルキル基を表し、Ｒ２は、ＨまたはＣ１-Ｃ１０の直鎖または分枝を有するアルキル基を表し、Ｒ３は、Ｈまたはヒドロキシル基である血小板凝集抑制薬を開示している。本発明は、式（Ｉ）に示されているアトラクチレノリド（ａｔｒａｃｔｙｌｅｎｏｌｉｄｅ）系化合物またはその誘導体の血小板凝集抑制薬の製造への応用をさらに開示している。本発明の血小板凝集抑制薬は、治療効果が良く、毒性、副作用がなく、耐薬性を生じしにくく、服用が簡単であることで、血小板凝集率が高すぎて起こされた関連病気に適している。2018507907.tif 000013 【選択図】図１
2018507907.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
アトラクチレノリド（ａｔｒａｃｔｙｌｅｎｏｌｉｄｅ）系化合物またはその誘導体を含み、前記アトラクチレノリド（ａｔｒａｃｔｙｌｅｎｏｌｉｄｅ）系化合物は以下の式（Ｉ）に示されている構造式を有し、
2018507907.tif 000008
Ｒ１は、ＨまたはＣ１-Ｃ１０の直鎖または分枝を有するアルキル基を表し、Ｒ２は、ＨまたはＣ１-Ｃ１０の直鎖または分枝を有するアルキル基を表し、Ｒ３は、Ｈまたはヒドロキシル基であることを特徴とする血小板凝集抑制薬。
【請求項２】
前記Ｒ１がメチルであることを特徴とする請求項１に記載の血小板凝集抑制薬。
【請求項３】
前記Ｒ２がメチルであることを特徴とする請求項１または２に記載の血小板凝集抑制薬。
【請求項４】
前記アトラクチレノリド（ａｔｒａｃｔｙｌｅｎｏｌｉｄｅ）系化合物が、以下の式（ＩＩ）に示されている構造式を有することを特徴とする請求項３に記載の血小板凝集抑制薬。
2018507907.tif 000009
【請求項５】
前記アトラクチレノリド（ａｔｒａｃｔｙｌｅｎｏｌｉｄｅ）系化合物が、以下の式（ＩＩＩ）に示されている構造式を有することを特徴とする請求項３に記載の血小板凝集抑制薬。
2018507907.tif 000010
【請求項６】
前記アトラクチレノリド（ａｔｒａｃｔｙｌｅｎｏｌｉｄｅ）系化合物の誘導体が、以下の式（ＩＶ）に示されている構造式を有することを特徴とする請求項４に記載の血小板凝集抑制薬。
2018507907.tif 000011
【請求項７】
前記薬物の剤形が、錠剤、顆粒剤、カプセル剤、パッチ剤または注射剤を含むことを特徴とする請求項１に記載の血小板凝集抑制薬。
【請求項８】
薬学的に許容される賦形剤をさらに含むことを特徴とする請求項１に記載の血小板凝集抑制薬。
【請求項９】
前記賦形剤が、溶媒、噴射剤、可溶化剤、共溶媒、乳化剤、着色剤、結合剤、崩壊剤、充填剤、潤滑剤、湿潤剤、浸透圧調整剤、安定剤、流動促進剤、矯正薬、防腐剤、懸濁化剤、コーティング材料（ｃｏａｔｉｎｇ  ｍａｔｅｒｉａｌ）、香味剤、抗接着剤、キレート剤（ｃｈｅｌａｔｉｎｇ  ａｇｅｎｔ）、浸透促進剤、ｐＨ調整剤、緩衝剤、可塑剤、界面活性剤、発泡剤、消泡剤、増粘剤、包接剤、湿潤剤、吸収剤、希釈剤、凝集剤及び抗凝固剤、濾過助剤、または放出遅延剤のいずれか一つまたはそれ以上を含むことを特徴とする請求項８に記載の血小板凝集抑制薬。
【請求項１０】
2018507907.tif 000012
Ｒ１は、ＨまたはＣ１-Ｃ１０の直鎖または分枝を有するアルキル基を表し、Ｒ２は、ＨまたはＣ１-Ｃ１０の直鎖または分枝を有するアルキル基を表し、Ｒ３は、Ｈまたはヒドロキシル基を表すことを特徴とする式（Ｉ）に示されているアトラクチレノリド（ａｔｒａｃｔｙｌｅｎｏｌｉｄｅ）系化合物またはその誘導体の血小板凝集抑制薬を製造するための使用。
【請求項１１】
前記Ｒ１とＲ２は、それぞれメチルであることを特徴とする請求項１０に記載の式（Ｉ）に示されているアトラクチレノリド（ａｔｒａｃｔｙｌｅｎｏｌｉｄｅ）系化合物またはその誘導体の血小板凝集抑制薬を製造するための使用。
【請求項１２】
前記血小板凝集抑制薬が、血液粘稠、脳梗塞、心筋梗塞、肺塞栓症、下肢動脈血栓症、深部静脈血栓症を予防または治療するための薬物を含むことを特徴とする請求項１０に記載の式（Ｉ）に示されているアトラクチレノリド（ａｔｒａｃｔｙｌｅｎｏｌｉｄｅ）系化合物またはその誘導体の血小板凝集抑制薬を製造するための使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、医薬技術分野に関するもので、特に、アトラクチレノリド（ａｔｒａｃｔｙｌｅｎｏｌｉｄｅ）系化合物またはその誘導体の血小板凝集抑制薬の製造への応用及び血小板凝集抑制薬に関する。
【背景技術】
【０００２】
現代医学では、血栓の形成は血小板凝集率が高すぎること一定的な関係があると考えられる。
【０００３】
血栓は、局部の血液凝固のメカニズムから始まり、亢進動脈内膜表面に血栓を形成した後、血栓は、増殖された内皮細胞に覆われることにより、動脈壁血栓の中の血小板と白血球崩壊が放出した脂質及び他の活性物質に合併され、徐々に粥状斑を形成する。其の後の研究者は、この病気は動脈内膜の損傷から始まり、血小板活化因子（ｐｌａｔｅｌｅｔ  ａｃｔｉｖａｔｉｎｇ  ｆａｃｔｏｒ，ＰＡＦ）が増加し、血小板がその部分に接着してから凝集し、続いてフィブリン（ｆｉｂｒｉｎ）沈着が発生されて微小血栓を形成すると考えている。血小板が凝集した後、一部の活性物質を放出し、その中でトロンボキサンＡ２（ｔｈｒｏｍｂｏｘａｎｅ  Ａ２，ＴＸＡ２）は、抗血管壁が合成したプロスタサイクリン（ｐｒｏｓｔａｃｙｃｌｉｎｅ，ＰＧＩ２）が持っているものに対して、血小板凝集と血管拡張の作用があり、血小板がさらに凝集するとともに血管が収縮するように促進させ、血小板由来増殖因子（ｐｌａｔｅｌｅｔ  ｄｅｒｉｖｅｄ  ｇｒｏｗｔｈ  ｆａｃｔｏｒ）は、平滑筋細胞の増殖、収縮を刺激して、内膜へ移動し、５-セロトニン（ｓｅｒｏｔｏｎｉｎ）及び線維芽細胞増殖因子（ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔ  ｇｒｏｗｔｈ  ｆａｃｔｏｒ）は、繊維母細胞の平滑肌細胞と内皮細胞の増殖、アドレナリン（ｅｐｉｎｅｐｈｒｉｎｅ）とアデノシン二リン酸（ａｄｅｎｏｓｉｎｅ  ｄｉｐｈｏｓｐｈａｔｅ，ＡＤＰ）を刺激することができ，血小板がさらに凝集するように促進することができ、具体的に、第ＶＩＩＩ因子は血小板をさらに接着させ、血小板第４因子（ｐｌａｔｅｌｅｔ  ｆａｃｔｏｒ４）は、血管を収縮させることができ、プラスミノゲン活性化因子インヒビター（ｐｌａｓｍｉｎｏｇｅｎ ａｃｔｉｖｔｏｒ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ，ＰＡＩ）は、血栓の溶解が抑制されるようにする。これらの物質は、内皮細胞がさらに損傷されるようにし、ＬＤＬ（低密度リポタンパク）の内膜と内膜下への進入を発生させて、単核細胞を内膜に凝集させて泡沫細胞に発展させ、平滑肌細胞を増殖させて内膜に移入して脂質を食い込んで、内皮細胞の増殖が全部アテローム性動脈硬化の形成に役に立つようにする。
【０００４】
人間の血液には、凝血システム及び抗凝固システムが存在する。通常の状況下では、血液の血管内の正常な流れを保証するように、両方は動的バランスを維持して、即ち、血栓が形成されず、例外的な状況では、例え血管の硬化、狭い等の損傷があって、寒さ、過度の発汗、低血圧、飲水の不足等の場合、血液の流れが遅くなり、血液が濃縮されて粘性が高くなり、凝固機能亢進または抗凝固機能を低下させることにより、これらの平衡が崩れ、人間が「血栓の状態」になるようにする。血栓症は、血管内のどこでも発生する可能性があり、血栓は血液とともに血管内で流動し、脳動脈の血管で止まって脳動脈の正常な血液の流れを妨げた場合は脳血栓であることで、虚血性脳卒中を発生させ、心臓の冠状動脈の血管をブロックした場合、心筋梗塞、また、下肢動脈血栓症、深部静脈血栓症及び肺塞栓症等を誘発する。
【０００５】
血栓が形成すると、大部分は病気の発生とともに、深刻な症状が生じ、例えば、脳梗塞の片麻痺失語症、心筋梗塞の激しい前胸部疝痛、肺梗塞からの激しい胸痛、呼吸困難、喀血等症状、例えば、下肢に血栓が形成すると両足の痛みを引き起こし、またはクールな感覚と間欠性跛行等が発生する。非常に深刻な心臓梗塞、肺梗塞や脳梗塞は突然死につながる可能性もある。しかし、時には血栓の形成は明らかな症状がなく、例えば、一般的な深部静脈血栓症の形成は、ふくらはぎに痛みが生じるだけで、多くの患者は疲労または風邪だと簡単に思って、治療の最適なタイミングを容易に逃すことになる。特に残念であることは、多くの医者もそれに対して容易に誤診することで、典型的な下肢の浮腫が出現した場合は、治療が困難であるだけではなく、後遺症も残すことになる。血栓の形成は、常に上述したこれらの重大な結果を引き起こすが、今まで特に効果的で、毒性、副作用のない血栓の形成を治療または予防するための薬物はなかった。
【０００６】
アトラクチレノリド（ａｔｒａｃｔｙｌｅｎｏｌｉｄｅ）系化合物例えば、アトラクチレノリド（ａｔｒａｃｔｙｌｅｎｏｌｉｄｅ）ＩＩ（アトラクチレノリド（ａｔｒａｃｔｙｌｅｎｏｌｉｄｅ）２）、アトラクチレノリド（ａｔｒａｃｔｙｌｅｎｏｌｉｄｅ）ＩＩＩ（アトラクチレノリド（ａｔｒａｃｔｙｌｅｎｏｌｉｄｅ）３）等は、キク科の植物の白朮（Ａｔｒａｃｔｙｌｏｄｅｓ ｍａｃｒｏｃｅｐｈａｌａ Ｋｏｉｄｚ.）のドライ根の抽出物である。先行技術の研究によると、アトラクチレノリド（ａｔｒａｃｔｙｌｅｎｏｌｉｄｅ）系化合物は、抗炎、抗腫瘍の作用があり、また消化管運動の調節及び栄養物質の吸収を促進する機能を持つ。しかし、今までアトラクチレノリド（ａｔｒａｃｔｙｌｅｎｏｌｉｄｅ）系化合物が血小板凝集抑制の作用を持っている内容は開示されていない。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
本発明は、現在の効率で安全な血栓を予防する薬物が不足である技術問題を解決するために、構成が簡単で、天然の薬用原料の有効成分またはその薬用原料の有効成分の抽出物の組み合わせから構成されて、血小板凝集抑制の作用があるアトラクチレノリド（ａｔｒａｃｔｙｌｅｎｏｌｉｄｅ）系化合物またはその誘導体薬物を提供し、その薬物は治療効果がよく、毒性、副作用がなく、耐薬性を生じしにくく、服用が簡単で、一般的に血小板凝集率が高すぎて起こされた血液粘稠及び血栓等の症状に適している。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
本発明の一技術方案において、アトラクチレノリド（ａｔｒａｃｔｙｌｅｎｏｌｉｄｅ）系化合物またはその誘導体を含み、前記アトラクチレノリド（ａｔｒａｃｔｙｌｅｎｏｌｉｄｅ）系化合物は以下の式（Ｉ）に示されている構造式を有し、
2018507907.tif 000003
Ｒ１は、ＨまたはＣ１-Ｃ１０の直鎖または分枝を有するアルキル基（ａｌｋｙｌ）を表し、Ｒ２は、ＨまたはＣ１-Ｃ１０の直鎖または分枝を有するアルキル基を表し、Ｒ３は、Ｈまたはヒドロキシル基（ｈｙｄｒｏｘｙｌ）である血小板凝集抑制薬を提供する。
【０００９】
前記アトラクチレノリド（ａｔｒａｃｔｙｌｅｎｏｌｉｄｅ）系化合物は、以下の式（ＩＩ）示されている構造式を有することが好ましい。
2018507907.tif 000004
【００１０】
前記式（ＩＩ）に示されている構造式は、アトラクチレノリド（ａｔｒａｃｔｙｌｅｎｏｌｉｄｅ）ＩＩＩの化学構造式である。
【００１１】
前記アトラクチレノリド（ａｔｒａｃｔｙｌｅｎｏｌｉｄｅ）系化合物は、以下の式（ＩＩＩ）に示されている構造式を有することが好ましい。
2018507907.tif 000005
【００１２】
前記式（ＩＩＩ）に示されている構造式は、アトラクチレノリド（ａｔｒａｃｔｙｌｅｎｏｌｉｄｅ）Ｉの化学構造式である。
【００１３】
前記アトラクチレノリド（ａｔｒａｃｔｙｌｅｎｏｌｉｄｅ）系化合物の誘導体は、以下の式（ＩＶ）に示されている構造式を有することが好ましい。
2018507907.tif 000006
【００１４】
前記式（ＩＶ）に示されている構造式は、アトラクチレノリド（ａｔｒａｃｔｙｌｅｎｏｌｉｄｅ）ＩＩの化学構造式である。
【００１５】
前記薬物の剤形は、錠剤、顆粒剤、カプセル剤、パッチ剤または注射剤を含む。
【００１６】
前記Ｃ１-Ｃ１０のアルキル基は、好ましくはＣ１-Ｃ８のアルキル基（ａｌｋｙｌ）であり、さらに好ましくはＣ１-Ｃ６のアルキル基（ａｌｋｙｌ）、例えばメチル（ｍｅｔｈｙｌ）、エチル（ｅｔｈｙｌ）、ｎ-プロピル（ｎ-ｐｒｏｐｙｌ）、イソプロピル（ｉｓｏ-ｐｒｏｐｙｌ）、ｎ-ブチル（ｎ-ｂｕｔｙｌ）、イソブチル（ｉｓｏ-ｂｕｔｙｌ）、ｔｅｒｔ-ブチル（ｔｅｒｔ-ｂｕｔｙｌ）、ｎ-ペンチル（ｎ-ｐｅｎｔｙｌ）、イソペンチル（ｉｓｏ-ｐｅｎｔｙｌ）、ｎ-ヘキシル（ｎ-ｈｅｘｙｌ）、イソヘキシル（ｉｓｏ-ｈｅｘｙｌ）である。
【００１７】
ここで、前記アルキル基は、直鎖アルキル基または分岐アルキル基であってもよく、さらに好ましくは直鎖アルキルである。
【００１８】
本発明のアトラクチレノリド（ａｔｒａｃｔｙｌｅｎｏｌｉｄｅ）系化合物の誘導体は、アトラクチレノリド（ａｔｒａｃｔｙｌｅｎｏｌｉｄｅ）化学構造式に含まれているエステル結合（ｅｓｔｅｒ  ｂｏｎｄ）、エポキシ環（ｅｐｏｘｙ  ｒｉｎｇ）、炭素-炭素二重結合等の官能基に誘導体化の修正を行って得られたものとアトラクチレノリド（ａｔｒａｃｔｙｌｅｎｏｌｉｄｅ）とが類似している化学構造の物質である。例えばアトラクチレノリド（ａｔｒａｃｔｙｌｅｎｏｌｉｄｅ）は、酸性または塩基性条件下で、エステル加水分解反応を行い、エステル結合（ｅｓｔｅｒ  ｂｏｎｄ）の修正を行うために、エポキシ環（ｅｐｏｘｙ  ｒｉｎｇ）も酸性または塩基性条件下で加水分解反応を行う。
【００１９】
本発明に係る血小板凝集抑制薬は、さらに薬学的に許容される賦形剤を含む。
【００２０】
前記賦形剤は、溶媒、噴射剤、可溶化剤、共溶媒、乳化剤、着色剤、結合剤、崩壊剤、充填剤、潤滑剤、湿潤剤、浸透圧調整剤、安定剤、流動促進剤、矯正薬、防腐剤、懸濁化剤、コーティング材料（ｃｏａｔｉｎｇ  ｍａｔｅｒｉａｌ）、香味剤、抗接着剤、キレート剤（ｃｈｅｌａｔｉｎｇ  ａｇｅｎｔ）、浸透促進剤、ｐＨ調整剤、緩衝剤、可塑剤、界面活性剤、発泡剤、消泡剤、増粘剤、包接剤、湿潤剤、吸収剤、希釈剤、凝集剤及び抗凝固剤、濾過助剤、または放出遅延剤のいずれか一つまたはそれ以上を含むことが好ましい。
【００２１】
本発明の他の技術方案において、
2018507907.tif 000007
Ｒ１は、ＨまたはＣ１-Ｃ１０の直鎖または分枝を有するアルキル基を表し、Ｒ２は、ＨまたはＣ１-Ｃ１０の直鎖または分枝を有するアルキル基を表し、Ｒ３は、Ｈまたはヒドロキシル基を表す式（Ｉ）に示されているアトラクチレノリド（ａｔｒａｃｔｙｌｅｎｏｌｉｄｅ）系化合物またはその誘導体の血小板凝集抑制薬の製造への応用を提供する。
【００２２】
前記血小板凝集抑制薬は、血液粘稠、脳梗塞、心筋梗塞、肺塞栓症、下肢動脈血栓症、深部静脈血栓症を予防または治療するための薬物を含む。 
【発明の効果】
【００２３】
本発明の血小板凝集抑制薬は、治療効果がよく、毒性、副作用がなく、現在の血小板凝集を抑制する薬物であるアセチルサリチル酸（ａｃｅｔｙｌｓａｌｉｃｙｌｉｃ  ａｃｉｄ）との比較実験に示されたように、本発明のアトラクチレノリド（ａｔｒａｃｔｙｌｅｎｏｌｉｄｅ）系化合物またはその誘導体薬物は、非常に顕著な血小板凝集抑制の作用を有することで、血小板凝集率が高すぎることに関する疾病を予防または治療するために適応されることができ、応用の未来は明るい。
【図面の簡単な説明】
【００２４】
以下、図面と具体的な実施形態を結合しながら、本発明についてさらに詳しく説明する。
【００２５】
【図１】実施例１に係るアトラクチレノリド（ａｔｒａｃｔｙｌｅｎｏｌｉｄｅ）ＩＩの体外血小板凝集抑制実験の結果図である。
【図２】実施例２に係るアトラクチレノリド（ａｔｒａｃｔｙｌｅｎｏｌｉｄｅ）ＩＩＩの体外血小板凝集抑制実験の結果図である。
【図３】実施例３に係るアトラクチレノリド（ａｔｒａｃｔｙｌｅｎｏｌｉｄｅ）ＩＩが血小板の拡散に影響を及ぼしたことを油浸レンズで観察した図である。
【図４】実施例４に係るアトラクチレノリド（ａｔｒａｃｔｙｌｅｎｏｌｉｄｅ）ＩＩＩが血小板の拡散に影響を及ぼしたことを油浸レンズで観察した図である。
【図５】実施例５に係るウエスタンブロッティング（Ｗｅｓｔｅｒｎ  ｂｌｏｔｔｉｎｇ）で検出した結果図である。
【図６】実施例６に係るウエスタンブロッティング（Ｗｅｓｔｅｒｎ  ｂｌｏｔｔｉｎｇ）で検出した結果図である。
【図７】実施例７に係る体外血小板凝集抑制に対するアトラクチレノリド（ａｔｒａｃｔｙｌｅｎｏｌｉｄｅ）ＩＩとアセチルサリチル酸（ａｃｅｔｙｌｓａｌｉｃｙｌｉｃ  ａｃｉｄ）との対照実験の結果図である。
【図８】実施例８に係る体外血小板凝集抑制に対するアトラクチレノリド（ａｔｒａｃｔｙｌｅｎｏｌｉｄｅ）ＩＩＩとアセチルサリチル酸（ａｃｅｔｙｌｓａｌｉｃｙｌｉｃ  ａｃｉｄ）との対照実験の結果図である。
【発明を実施するための形態】
【００２６】
以下、アトラクチレノリド（ａｔｒａｃｔｙｌｅｎｏｌｉｄｅ）ＩＩ、アトラクチレノリド（ａｔｒａｃｔｙｌｅｎｏｌｉｄｅ）ＩＩＩを例として、本発明のアトラクチレノリド（ａｔｒａｃｔｙｌｅｎｏｌｉｄｅ）系化合物またはその誘導体が有する血小板凝集抑制の作用について詳しく説明する。
【００２７】
実施例１ アトラクチレノリド（ａｔｒａｃｔｙｌｅｎｏｌｉｄｅ）ＩＩが血小板凝集を抑制する実験
【００２８】
一、試験材料の準備
アトラクチレノリド（ａｔｒａｃｔｙｌｅｎｏｌｉｄｅ）ＩＩをジメチルスルホキシド（Ｄｉｍｅｔｈｙｌ  ｓｕｌｆｏｘｉｄｅ，ＤＭＳＯ）に溶解する。
【００２９】
二、実験検証の過程
【００３０】
血小板凝集の実験
【００３１】
（１）血小板の準備：人から由来した高濃度の血小板血漿を準備し、製造する血小板のバイト数は３×１０８/ｍＬであり、３７℃の水浴に入れる。
【００３２】
(２)アトラクチレノリド（ａｔｒａｃｔｙｌｅｎｏｌｉｄｅ）ＩＩ化合物の濃度勾配：３００ｕＬの血小板の中で、化合物の最終濃度はそれぞれ０.１μｍ、０.５μｍ、１μｍ、５μｍ、１０μｍである。
【００３３】
実験を始める前に、化合物は血小板の中で３分間（ｍｉｎ）インキュベートし、実験で休眠（ｒｅｓｔｉｎｇ）を設置し、ＤＭＳＯと対照する。刺激剤として、トロンビン（ｔｈｒｏｍｂｉｎ）を使用する。血小板凝集能測定装置を利用して、凝集曲線と凝集率とを獲得する。
【００３４】
実験技術文献：
Ｗｅｎｇ Ｚ, ＬｉＤ,Ｚｈａｎｇ Ｌ,ｅｔａｌ. ＰＴＥＮ ｒｅｇｕｌａｔｅｓ  ｃｏｌｌａｇｅｎ-ｉｎｄｕｃｅｄ ｐｌａｔｅｌｅｔ ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ. Ｂｌｏｏｄ. ２０１０; １１６(１４): ２５７９-２５８１.
Ｌｉｕ Ｊ, Ｊａｃｋｓｏｎ ＣＷ, Ｇｒｕｐｐｏ ＲＡ, Ｊｅｎｎｉｎｇｓ ＬＫ, Ｇａｒｔｎｅｒ ＴＫ. Ｔｈｅ ｂｅｔａ３ ｓｕｕｎｉｔ ｏf ｔｈｅ ｉｎｔｅｇｒｉｎ ａｌｐｈａｌｌｂｂｅｔａ３ ｒｅｇｕｌａｔｅｓ ａｌｐｈａＩＩｂ-ｍｅｄｉａｔｅｄ ｏｕｔｓｉｄｅ-ｉｎ ｓｉｇｎａｌｉｎｇ. Ｂｌｏｏｄ. ２００５;１０５(１１):４３４５-４３５２.
【００３５】
(３)実験結果（図１を参照）：
以上の実験結果から分かるように、アトラクチレノリド（ａｔｒａｃｔｙｌｅｎｏｌｉｄｅ）ＩＩは、血小板凝集に対して抑制作用があり、高濃度のアトラクチレノリド（ａｔｒａｃｔｙｌｅｎｏｌｉｄｅ）ＩＩの抑制作用は、かなり顕著である。
【００３６】
実施例２ アトラクチレノリド（ａｔｒａｃｔｙｌｅｎｏｌｉｄｅ）ＩＩＩが血小板凝集を抑制する実験
【００３７】
一、試験材料の準備
アトラクチレノリド（ａｔｒａｃｔｙｌｅｎｏｌｉｄｅ）ＩＩＩをジメチルスルホキシド（Ｄｉｍｅｔｈｙｌ  ｓｕｌｆｏｘｉｄｅ，ＤＭＳＯ）に溶解する。
【００３８】
二、実験検証の過程
【００３９】
血小板凝集の実験
【００４０】
（１）血小板の準備：人から由来した高濃度の血小板血漿を準備し、製造する血小板のバイト数は３×１０８/ｍＬであり、３７℃の水浴に入れる。
【００４１】
(２)アトラクチレノリド（ａｔｒａｃｔｙｌｅｎｏｌｉｄｅ）ＩＩＩ化合物の濃度勾配：３００ｕＬの血小板の中で、化合物の最終濃度は、それぞれ０.１μｍ、０.５μｍ、１μｍ、５μｍ、１０μｍである。
【００４２】
実験を始める前に、化合物は血小板の中で３分間インキュベートし、実験で休眠を設置し、ジメチルスルホキシド（Ｄｉｍｅｔｈｙｌ  ｓｕｌｆｏｘｉｄｅ，ＤＭＳＯ）と対照する。刺激剤として、トロンビン（ｔｈｒｏｍｂｉｎ）を使用する。血小板凝集能測定装置を利用して、凝集曲線と凝集率とを獲得する。
【００４３】
（３）実験結果（図２を参照）：
以上の実験結果から分かるように、アトラクチレノリド（ａｔｒａｃｔｙｌｅｎｏｌｉｄｅ）ＩＩＩは、血小板凝集に対して抑制作用があり、高濃度のアトラクチレノリド（ａｔｒａｃｔｙｌｅｎｏｌｉｄｅ）ＩＩＩの抑制作用は、かなり顕著である。
【００４４】
実施例３  血小板拡散に対するアトラクチレノリド（ａｔｒａｃｔｙｌｅｎｏｌｉｄｅ）ＩＩの影響の実験
【００４５】
血小板拡散の実験
【００４６】
(１)血小板の準備：以上のように、３×１０７/ｍＬの血小板を製造する。
【００４７】
(２)アトラクチレノリド（ａｔｒａｃｔｙｌｅｎｏｌｉｄｅ）ＩＩ化合物の濃度勾配：１００ｕＬあたりの血小板で、化合物の最終濃度は、それぞれ１μＭ、５μＭ、１０μＭである。化合物は、血小板の中で３分間インキュベートする。薬物処理を行った血小板は、フィブリン（ｆｉｂｒｉｎ）に敷く（４０μｇ/ｍＬ）。蛍光抗体のファロイジン（ｐｈａｌｌｏｉｄｉｎ）で染色し、１００Ｘの油浸レンズで血小板の拡散状況を観察する。
【００４８】
実験技術文献：
Ｃｈｅｎ Ｘ,Ｚｈａｎｇ Ｙ,Ｗａｎｇ Ｙ,ｅｔ ａｌ.ＰＤＫ１ ｒｅｇｕｌａｔｅｓ ｐｌａｔｅｌｅｔ ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ ａｎｄ ａｒｔｅｒｉａｌ ｔｈｒｏｍｂｏｓｉｓ.Ｂｌｏｏｄ.２０１３;１２１(１８):３７１８-３７２６.
【００４９】
(１)実験結果（図３を参照）：アトラクチレノリド（ａｔｒａｃｔｙｌｅｎｏｌｉｄｅ）ＩＩが血小板拡散に影響を及ぼすことが分かる。
【００５０】
実施例４ 血小板拡散に対するアトラクチレノリド（ａｔｒａｃｔｙｌｅｎｏｌｉｄｅ）ＩＩＩの影響の実験
【００５１】
血小板拡散の実験
【００５２】
(１)血小板の準備：以上のように、３×１０７/ｍＬの血小板を製造する。
【００５３】
(２)アトラクチレノリド（ａｔｒａｃｔｙｌｅｎｏｌｉｄｅ）ＩＩＩ化合物の濃度勾配：１００ｕＬあたりの血小板で、化合物の最終濃度は、それぞれ１μＭ、５μＭ、１０μＭである。化合物は、血小板中で３分間インキュベートする。薬物処理を行った血小板は、フィブリン（ｆｉｂｒｉｎ）に敷く（４０μｇ/ｍＬ）。蛍光抗体のファロイジン（ｐｈａｌｌｏｉｄｉｎ）で染色し、１００Ｘの油浸レンズで血小板の拡散状況を観察する。
【００５４】
(１)実験結果（図４を参照）：アトラクチレノリド（ａｔｒａｃｔｙｌｅｎｏｌｉｄｅ）ＩＩＩが血小板拡散に影響を及ぼすことが分かる。
【００５５】
実施例５ ウェスタンブロッティング（Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔｔｉｎｇ)を用いて、アトラクチレノリド（ａｔｒａｃｔｙｌｅｎｏｌｉｄｅ）ＩＩが血小板凝集を抑制する過程中の関連分子のリン酸化レベルを検出
【００５６】
実施例１から凝集曲線を獲得した後、血小板タンパク質サンプル（２Ｘ ＳＤＳ ｌｏａｄｉｎｇ タンパク質ライセート）を取って、ウェスタンブロッティング（Ｗｅｓｔｅｒｎ  ｂｌｏｔｔｉｎｇ）を用いて関連分子のリン酸化レベルを検出する。
【００５７】
実験結果（図５を参照）は、以下のようである。
ウェスタンブロッティング（Ｗｅｓｔｅｒｎ  ｂｌｏｔｔｉｎｇ）を用いて、シグナル伝達経路の関連分子のリン酸化レベルを検出し、ＰＩ３Ｋ/Ａｋｔシグナル伝達経路が活性化されると、Ａｋｔ分子は、リン酸化活性化を発生して、下流の酵素、キナーゼ、転写因子等（例えば、ＧＳＫ３）を活性化させ、最終的に血小板が活性化され凝集するようにし、Ａｋｔ分子のリン酸化レベルが高ければ高いほど、血小板凝集のレベルは高い。実験結果は次のように示している。アトラクチレノリド（ａｔｒａｃｔｙｌｅｎｏｌｉｄｅ）ＩＩは、Ａｋｔ分子のリン酸化レベルに影響を及ぼし、その濃度変化が、Ａｋｔ分子のリン酸化レベルに対する影響と血小板凝集程度に対する影響は一致している。
【００５８】
実施例６ ウェスタンブロッティングを用いて、アトラクチレノリド（ａｔｒａｃｔｙｌｅｎｏｌｉｄｅ）ＩＩＩが血小板凝集を抑制する過程中の関連分子のリン酸化レベルを検出
【００５９】
実施例２から凝集曲線を獲得した後、血小板タンパク質サンプル（２Ｘ ＳＤＳ ｌｏａｄｉｎｇ タンパク質ライセート）を取って、ウェスタンブロッティングで関連分子のリン酸化レベルを検出する。
【００６０】
実験結果（図６を参照）は、以下のようである。
ウェスタンブロッティング（Ｗｅｓｔｅｒｎ  ｂｌｏｔｔｉｎｇ）を用いて、シグナル伝達経路の関連分子のリン酸化レベル検出し、ＰＩ３Ｋ/Ａｋｔシグナル伝達経路が活性化されると、Ａｋｔ分子は、リン酸化活性化を発生して、下流の酵素、キナーゼ、転写因子等（例えば、ＧＳＫ３）を活性化させ、最終的に血小板が活性化され凝集するようにし、Ａｋｔ分子のリン酸化レベルが高ければ高いほど、血小板凝集レベルは高い。実験結果は次のように示している。アトラクチレノリド（ａｔｒａｃｔｙｌｅｎｏｌｉｄｅ）ＩＩは、Ａｋｔ分子のリン酸化レベルに影響を及ぼし、その濃度変化が、Ａｋｔ分子リン酸化レベルに対する影響と血小板凝集のレベルに対する影響は一致している。
【００６１】
実施例７ 体外の血小板凝集抑制に対するアトラクチレノリド（ａｔｒａｃｔｙｌｅｎｏｌｉｄｅ）ＩＩとアセチルサリチル酸（ａｃｅｔｙｌｓａｌｉｃｙｌｉｃ  ａｃｉｄ）の対照実験
【００６２】
(１)血小板の準備：以上のように、３×１０８/ｍＬの血小板を製造する。
【００６３】
(２)アセチルサリチル酸（ａｃｅｔｙｌｓａｌｉｃｙｌｉｃ  ａｃｉｄ）をエタノールに溶解させ、５０ｍｍｏｌ/Ｌの濃度まで希釈し、トロンビン（ｔｈｒｏｍｂｉｎ）の刺激剤で刺激し、血小板凝集の状態を観察する。
【００６４】
実験結果（図７を参照）は、以下のようである。
同じ条件の体外実験おいて、アセチルサリチル酸（ａｃｅｔｙｌｓａｌｉｃｙｌｉｃ  ａｃｉｄ）は、トロンビン（ｔｈｒｏｍｂｉｎ）の刺激下で濃度が１５０ｕＭに達したとき、抑制作用はなく、アトラクチレノリド（ａｔｒａｃｔｙｌｅｎｏｌｉｄｅ）ＩＩは、体外実験において、低濃度（１０ｕＭ）で、血小板凝集を抑制する作用がある。
【００６５】
実施例８ 体外の血小板凝集抑制に対するアトラクチレノリド（ａｔｒａｃｔｙｌｅｎｏｌｉｄｅ）ＩＩＩとアセチルサリチル酸（ａｃｅｔｙｌｓａｌｉｃｙｌｉｃ  ａｃｉｄ）との対照実験
【００６６】
(１)血小板の準備：以上のように、３×１０８/ｍＬ血小板を製造する。
【００６７】
(２)アセチルサリチル酸（ａｃｅｔｙｌｓａｌｉｃｙｌｉｃ  ａｃｉｄ）をエタノールに溶解させ、５０ ｍｍｏｌ/Ｌの濃度に希釈し、トロンビン（ｔｈｒｏｍｂｉｎ）の刺激剤で刺激し、血小板凝集の状況を観察する。
【００６８】
実験結果（図８を参照）は、以下のようである。
同じ条件の体外実験において、アセチルサリチル酸（ａｃｅｔｙｌｓａｌｉｃｙｌｉｃ  ａｃｉｄ）はトロンビン（ｔｈｒｏｍｂｉｎ）の刺激下で、濃度が１５０ｕＭに達した時、抑制作用はなく、アトラクチレノリド（ａｔｒａｃｔｙｌｅｎｏｌｉｄｅ）ＩＩＩは、体外実験において、低濃度（１０ｕＭ）下で、血小板凝集を抑制する作用がある。
【００６９】
以上の前記実施例は、本発明の実施形態を表しただけで、その説明は結構具体的であるが、それによって、本発明の保護請求の範囲が限定されると解釈してはならない。指摘すべきなものとして、本発明の当業者にとって、本発明の思想を逸脱しない範囲内で、若干の変更と修正を行うことができ、これらはすべて本発明の保護範囲に属する。従って、本発明の保護請求の範囲は、添付された保護請求の範囲に従うべきである。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【国際調査報告】
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