(57)【要約】  本発明は、ヒトＩＬ−１７Ｃに結合する抗体または抗体フラグメントを提供する。特に、ホモダイマーＩＬ−１７Ｃに二価結合する抗体または抗体フラグメントに関する。【選択図】図１
2018506296.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ＩＬ−１７Ｃに特異的な抗体または抗体フラグメントにおいて、前記抗体または前記抗体フラグメントは、ＩＬ−１７Ｃホモダイマーに二価結合して、前記抗体または前記抗体フラグメントおよび１つのＩＬ−１７Ｃホモダイマーからなる複合体を形成することを特徴とする、抗体または抗体フラグメント。
【請求項２】
請求項１に記載の抗体または抗体フラグメントにおいて、前記抗体または前記抗体フラグメントは、ヒトＩＬ−１７Ｃ上のエピトープに結合し、前記エピトープは、ヒトＩＬ−１７Ｃのアミノ酸ＰＶＬＲＰＥＥＶＬ（配列番号２７）内の１つまたは複数のアミノ酸残基を含むことを特徴とする、抗体または抗体フラグメント。
【請求項３】
ＩＬ−１７Ｃに特異的な抗体または抗体フラグメントにおいて、前記抗体または前記抗体フラグメントは、ＩＬ−１７Ｃ上のエピトープに結合し、前記エピトープは、ＩＬ−１７Ｃのアミノ酸ＰＶＬＲＰＥＥＶＬ（配列番号２７）内の１つまたは複数のアミノ酸残基を含むことを特徴とする、抗体または抗体フラグメント。
【請求項４】
請求項１乃至３の何れか１項に記載の抗体または抗体フラグメントにおいて、前記抗体または前記抗体フラグメントは、ヒトＩＬ−１７Ｃに特異的であることを特徴とする、抗体または抗体フラグメント。
【請求項５】
請求項１乃至４の何れか１項に記載の抗体または抗体フラグメントにおいて、前記抗体または前記抗体フラグメントは、モノクローナル抗体またはモノクローナル抗体フラグメントであることを特徴とする、抗体または抗体フラグメント。
【請求項６】
請求項１乃至５の何れか１項に記載の抗体または抗体フラグメントにおいて、前記抗体または前記抗体フラグメントは、表１のいずれかの抗体の、Ｋａｂａｔによって定義される６つのＣＤＲを含む抗体または抗体フラグメントと交差競合することを特徴とする、抗体または抗体フラグメント。
【請求項７】
請求項１乃至６の何れか１項に記載の抗体または抗体フラグメントにおいて、前記抗体または前記抗体フラグメントは、表１のいずれかの抗体の、Ｋａｂａｔによって定義される６つのＣＤＲを含む抗体または抗体フラグメントと同じエピトープに結合することを特徴とする、抗体または抗体フラグメント。
【請求項８】
請求項１乃至７の何れか１項に記載の抗体または抗体フラグメントにおいて、前記抗体または前記抗体フラグメントは、単離された抗体または単離された抗体フラグメントであることを特徴とする、抗体または抗体フラグメント。
【請求項９】
請求項１乃至８の何れか１項に記載の抗体または抗体フラグメントにおいて、前記抗体または前記抗体フラグメントは、組換え抗体または組換え抗体フラグメントであることを特徴とする、抗体または抗体フラグメント。
【請求項１０】
請求項１乃至９の何れか１項に記載の抗体または抗体フラグメントにおいて、炎症性障害または癌の処置に用いられることを特徴とする、抗体または抗体フラグメント。
【請求項１１】
請求項１乃至１０の何れか１項に記載の抗体または抗体フラグメントをコードする１つまたは複数の核酸配列を含むことを特徴とする核酸組成物。
【請求項１２】
請求項１１に記載の１つまたは複数の核酸配列を含む１つまたは複数のベクターを含むことを特徴とするベクター組成物。
【請求項１３】
請求項１２に記載のベクター組成物を含むことを特徴とする細胞。
【請求項１４】
請求項１乃至１０の何れか１項に記載の抗体または抗体フラグメントおよび医薬的に許容可能なキャリアまたは賦形剤を含むことを特徴とする医薬組成物。
【請求項１５】
請求項１乃至１１の何れか１項に記載の抗体または抗体フラグメントの選択方法において：
（ａ）ＩＬ−１７Ｃに特異的に結合する抗体または抗体フラグメントを同定するステップと；
（ｂ）抗原、およびステップ（ａ）において同定された抗体または抗体フラグメントを混合するステップと；
（ｃ）ステップ（ｂ）によって得られた混合物を、サイズ排除クロマトグラフィ（ＳＥＣ）にかけて、形成された複合体の分子量を判定するステップと、
（ｄ）前記抗体または前記抗体フラグメントおよび１つのＩＬ−１７Ｃホモダイマーからなる複合体を形成する抗体または抗体フラグメントを選択するステップと、
を含むことを特徴とする方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本出願は、一般に、ＩＬ−１７Ｃと相互作用する抗体または抗体フラグメントに関する。特に、前記抗体または前記抗体フラグメントおよび１つのＩＬ−１７Ｃホモダイマーからなる複合体を形成する抗体または抗体フラグメントに関する。
【背景技術】
【０００２】
ＩＬ−１７Ｃは、ＩＬ１７タンパク質ファミリの、分泌されたホモダイマーである。インビトロで、ＩＬ−１７Ｃは、単球細胞株ＴＨＰ−１からのＴＮＦ−αおよびＩＬ−１βの放出を刺激することが示されている（Ｌｉ  ｅｔ  ａｌ．（２０００）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．  ９７，７７３−８）。ＩＬ−１７Ｃは、腹腔浸出細胞（ＰＥＣＳ）および３Ｔ３細胞株において、炎症性サイトカイン、例えばＩＬ−Ιβ、ＩＬ−６、およびＩＬ−２３のｍＲＮＡ発現を誘導し得る（Ｙａｍａｇｕｃｈｉ  ｅｔ  ａｌ．（２００７）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ  １７９，７１２８−３６）。
【０００３】
ＩＬ−１７Ｃに特異的な機能的受容体として、ＩＬ−１７ＲＥが同定されており、ＩＬ−１７Ｃ−／−マウスが、実験的自己免疫性脳脊髄炎（ＥＡＥ）に耐性であることが見出されたことから、炎症誘発性サイトカインとしてのＩＬ−１７Ｃの役割が示された（Ｃｈａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．（２０１１）Ｉｍｍｕｎｉｔｙ  ３５，６１１−６２１）。ＩＬ−１７Ｃは、腸内病原体によって媒介される宿主粘膜免疫に反抗する抗菌性分子をコードする遺伝子を誘導するために、ＩＬ−１７ＲＥおよびＩＬ−１７ＲＡの受容体複合体を介して、下流シグナル伝達を活性化する（Ｓｏｎｇ  ｅｔ  ａｌ．（２０１１）Ｎａｔｕｒｅ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  １２，１２）。ＩＬ−１７Ｃおよびその受容体はさらに、粘膜細胞および上皮細胞上で顕著に発現されるので、上皮が宿主の防御に関与する機構を付与することが記載された（Ｒａｍｉｒｅｚ−Ｃａｒｒｏｚｚｉ  ｅｔ  ａｌ．（２０１１）Ｎａｔｕｒｅ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  １２，１２）。
【０００４】
国際公開第１９９９／０６０１２７号パンフレットは、ＩＬ−１７Ｃ（ＰＲ０１１２２）のクローニングを記載した初めての開示である。これまで、ＩＬ−１７Ｃは、いくつかの炎症性障害の進行に関与すると仮定されていたが、最近になってやっと、国際公開第２０１３／０５７２４１号パンフレットにおいて、ＩＬ−１７Ｃの阻害が、炎症性障害を処置するのに有望なアプローチであることが実験的に評価された。しかしながら、国際公開第２０１３／０５７２４１号パンフレットにおいて用いられた各抗体は、マウスＩＬ−１７Ｃに特異的な代用物であり、ヒトＩＬ−１７Ｃに対して反応性であることは全く示されなかった。また、最近の開示において、特定の腫瘍および癌組織の進行におけるＩＬ−１７Ｃの関連性が示された（Ｘｉｎｙａｎｇ  Ｓｏｎｇ（２０１４）Ｉｍｍｕｎｉｔｙ  ４０，１４０−１５２）。
【０００５】
一方、免疫化されたマウスに由来するポリクローナル血清またはモノクローナル抗体等のいくつかの抗体が、研究ツールとして入手可能であり、当該抗体として、例えば、Ｒ＆Ｄ  ＳｙｓｔｅｍｓのＭＡＢ２３０６１およびＭＡＢ２３０６、Ａｂｎｏｖａから入手可能な抗ＩＬ−１７Ｃ抗体（Ｗａｌｎｕｔ，ＣＡ，米国；カタログ＃Ｈ０００２７１８９−Ｂ０１Ｐ、＃Ｈ０００２７１８９−Ｄ０１、および＃Ｈ０００２７１８９−Ｄ０１Ｐ）、またはａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ−ｏｎｌｉｎｅ  ＧｍｂＨから入手可能な抗ＩＬ−１７Ｃ抗体（Ａａｃｈｅｎ、独国；カタログ＃ＡＢＩＮ５２５８９２、＃ＡＢＩＮ３２７４１１、＃ＡＢＩＮ５２５８９３、＃ＡＢＩＮ２２１３４０、＃ＡＢＩＮ２２１３４１、＃ＡＢＩＮ２２１３４２、および＃ＡＢＩＮ５２５８９１）が挙げられる。
【０００６】
しかしながら、そのような抗体は、ポリクローナル血清であるか、マウスＩＬ−１７Ｃに特異的に結合する、例えば国際公開第２０１３／０５７２４１号パンフレットにおいて用いられる抗体であり、ヒト療法に用いることはできない。
【発明の概要】
【０００７】
したがって、ヒトにおけるＩＬ−１７Ｃ媒介シグナル伝達を変更して、ＩＬ−１７Ｃ関連疾患またはＩＬ−１７Ｃ関連障害を改善する方法および組成物を研究し、かつ同定する必要がある。
【０００８】
出願人は、初めて、ヒトＩＬ−１７Ｃに結合する抗体または抗体フラグメントを開示する。より詳細には、開示される抗体または抗体フラグメントは、ＩＬ−１７Ｃホモダイマーに二価結合する。さらにより詳細には、抗体または抗体フラグメントは、ＩＬ−１７Ｃホモダイマーに二価結合して、前記抗体または前記抗体フラグメントおよび１つのＩＬ−１７Ｃホモダイマーからなる複合体を形成する。本開示の一実施形態において、抗体またはそのフラグメントは、ＩＬ−１７Ｃアンタゴニストである。本開示の別の実施形態において、抗体または抗体フラグメントは、ＩＬ−１７Ｃの、ＩＬ１７ＲＥへの結合を阻止する。
【０００９】
開示される抗体または抗体フラグメントは、ＶＨ／ＶＬ対由来の双方の抗原結合部位の同時（二価）結合によって、１つのＩＬ−１７Ｃホモダイマーと相互作用する能力がある。したがって、そのような抗体は、ＩＬ−１７Ｃのエピトープに特異的に結合し、当該エピトープは、ホモダイマーＩＬ−１７Ｃ上で二倍にアクセス可能であり、かつ本明細書中に開示される抗体によって二価結合され得る。二価結合の結果としての強い結合力効果により、１つのＩＬ−１７Ｃホモダイマーと、そのような抗体または抗体フラグメントとの間で非常に安定した複合体が形成される。また、開示される抗体または抗体フラグメントは、ＩＬ−１７Ｃの、その受容体との相互作用を阻害し、そして二価結合によって、開示される抗体または抗体フラグメントは同時に、ＩＬ−１７Ｃホモダイマーの双方の受容体相互作用領域を阻止して、ＩＬ−１７Ｃ媒介シグナル伝達の顕著な効率的排除を伴う。結果的に、本明細書中に開示される抗体は、その驚くべき結合特性に基づいて、そのアンタゴニスト活性が顕著となる。
【００１０】
したがって、開示される抗体または抗体フラグメントは、有効性に関して特別である。そして、臨床開発によく適した有望な化合物を提供する。
【００１１】
一態様において、本開示は、ＩＬ−１７Ｃに特異的な抗体または抗体フラグメントに関し、前記抗体または前記抗体フラグメントは、ＩＬ−１７Ｃ上のエピトープに結合し、当該エピトープは、ヒトＩＬ−１７Ｃのアミノ酸ＰＶＬＲＰＥＥＶＬ（配列番号２７）内の１つまたは複数のアミノ酸残基を含む。一実施形態において、エピトープは、ＩＬ−１７Ｃのアミノ酸ＶＬＲＰＥＥＶＬ（配列番号２８）内の１つまたは複数のアミノ酸残基を含む。別の実施形態において、前記抗体または前記抗体フラグメントは、ＩＬ−１７Ｃ上のエピトープに結合し、前記エピトープは、配列番号１のアミノ酸ａａ８９〜９７の領域内の１つまたは複数のアミノ酸残基を含む。更なる実施形態において、前記抗体または前記抗体フラグメントは、ＩＬ−１７Ｃ上のエピトープに結合し、前記エピトープは、配列番号１のアミノ酸ａａ９０〜９７の領域内の１つまたは複数のアミノ酸残基を含む。
【００１２】
本開示はまた、ＩＬ−１７Ｃに特異的な抗体または抗体フラグメントに関し、前記抗体または前記抗体フラグメントは、ＩＬ−１７Ｃホモダイマー上のエピトープに結合して、前記抗体または前記抗体フラグメントおよび１つのＩＬ−１７Ｃホモダイマーからなる複合体を形成する。
【００１３】
別の態様において、本開示は、ＩＬ−１７Ｃに特異的な抗体または抗体フラグメントに関し、前記抗体または前記抗体フラグメントは、ＩＬ−１７Ｃホモダイマーに二価結合して、前記抗体または前記抗体フラグメントおよび１つのＩＬ−１７Ｃホモダイマーからなる複合体を形成し、前記抗体または前記抗体フラグメントは、ヒトＩＬ−１７Ｃ上のエピトープに結合し、当該エピトープは、ヒトＩＬ−１７Ｃのアミノ酸ＰＶＬＲＰＥＥＶＬ（配列番号２７）内の１つまたは複数のアミノ酸残基を含む。一実施形態において、エピトープは、ヒトＩＬ−１７Ｃのアミノ酸ＶＬＲＰＥＥＶＬ（配列番号２８）内の１つまたは複数のアミノ酸残基を含む。別の実施形態において、前記抗体または前記抗体フラグメントは、ＩＬ−１７Ｃ上のエピトープに結合し、前記エピトープは、配列番号１のアミノ酸ａａ８９〜９７の領域内の１つまたは複数のアミノ酸残基を含む。別の実施形態において、前記抗体または前記抗体フラグメントは、ＩＬ−１７Ｃ上のエピトープに結合し、前記エピトープは、配列番号１のアミノ酸ａａ９０〜９７の領域内の１つまたは複数のアミノ酸残基を含む。
【００１４】
本開示の特定の実施形態において、エピトープへの結合は、水素／重水素交換によって判定される。
【００１５】
本開示の一実施形態において、抗体またはそのフラグメントは、モノクローナル抗体またはモノクローナル抗体フラグメントである。本開示の一実施形態において、抗体またはそのフラグメントは、ＩｇＧアイソタイプのものである。一実施形態において、抗体フラグメントは、二価抗体フラグメントである。
【００１６】
別の実施形態において、前記抗体または前記抗体フラグメントは、単離された抗体または単離された抗体フラグメントである。
【００１７】
別の態様において、本開示は、開示される抗体の医療用途に関する。別の態様において、本開示は、ヒトにおける炎症性障害または癌の処置のための、開示される抗体の使用に関する。
【００１８】
別の実施形態において、抗体または抗体フラグメントは、ヒト抗体もしくはヒト抗体フラグメント、ヒト化抗体もしくはヒト化抗体フラグメント、またはキメラ抗体もしくはキメラ抗体フラグメントである。別の実施形態において、前記抗体または前記抗体フラグメントは、ヒト重鎖定常領域およびヒト軽鎖定常領域を含む。別の実施形態において、前記抗体または前記抗体フラグメントは、組換え抗体または組換え抗体フラグメントである。別の実施形態において、前記組換え抗体または前記組換え抗体フラグメントは、組換えヒト抗体または組換えヒト抗体フラグメントである。
【００１９】
一実施形態において、ＩＬ−１７Ｃに特異的な抗体または抗体フラグメントは、ＩＬ−１７Ｃホモダイマーと複合体を形成し、前記複合体は、分子量が２００ｋＤａ未満である。一実施形態において、前記抗体または前記抗体フラグメントは、ＩＬ−１７Ｃホモダイマーと複合体を形成し、形成された前記複合体の少なくとも５０％は、分子量が２００ｋＤａ未満である。更なる実施形態において、前記抗体または前記抗体フラグメントは、ＩＬ−１７Ｃホモダイマーと複合体を形成し、形成された前記複合体の少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％は、分子量が２００ｋＤａ未満である。別の実施形態において、前記複合体は、本明細書中において、実施例２、７節（図１）に記載されるクラスＩＩＩ複合体である。別の実施形態において、前記複合体は、溶液中で形成され、抗体および１つのＩＬ−１７Ｃホモダイマーからなる。
【００２０】
別の実施形態において、ＩＬ−１７Ｃに特異的な抗体および１つのＩＬ−１７Ｃホモダイマーによって形成される複合体は、サイズ排除クロマトグラフィによって評価される。
【００２１】
一実施形態において、本開示は、ＩＬ−１７Ｃの不所望の存在と関連する障害または症状の処置のための、ＩＬ−１７Ｃホモダイマーに二価結合する抗体または抗体フラグメントの使用に関する。
【００２２】
一実施形態において、本開示は、前記抗体または前記抗体、および医薬的に許容可能なキャリアまたは賦形剤を含む医薬組成物に関する。
【００２３】
別の実施形態において、本開示は、ＩＬ−１７Ｃの不所望の存在と関連する障害または症状の処置のための、前記医薬組成物の使用に関する。
【００２４】
特許請求される抗体または抗体フラグメントに、有用性がある。さらに、そのような抗体またはフラグメントを同定するための、特許請求される方法に、有用性がある。
【００２５】
特許請求される抗体または抗体フラグメントを利用して、ヒトＩＬ−１７Ｃの生物学的活性を変えることができる。特に、特許請求される抗体または抗体フラグメントは、例えば慢性関節リウマチ、乾癬、肺の炎症、および／またはＣＯＰＤのような炎症性障害の処置等の治療用途を意図している。
【図面の簡単な説明】
【００２６】
【図１】図１は、ＩＬ−１７Ｃ抗体の起こりうる結合モードを示す。抗体の結合モードに応じて、３つの複合体：２つのホモダイマーが１つの抗体と結合する複合体（クラスＩ）、２つのホモダイマーが２つの抗体と結合する複合体（クラスＩＩ）、または１つのホモダイマーが１つの抗体と結合する複合体（クラスＩＩＩ）のうち、主に１つが形成される。形成される複合体は、分子量が異なり、クラスＩ複合体は分子量が約２７０ｋＤａであり、クラスＩＩ複合体は分子量が約３８０ｋＤａであり、そしてクラスＩＩＩ複合体は分子量が約１９０ｋＤａである。
【図２】図２は、ｍａｂ＿１の、ヒトＩＬ−１７ＣおよびカニクイザルＩＬ−１７Ｃとの複合体形成を分析する抗体ｍａｂ＿１のサイズ排除クロマトグラフィである。Ｍａｂ＿１は明らかに、ヒトＩＬ−１７ＣおよびカニクイザルＩＬ−１７Ｃのそれぞれ１つのホモダイマーと、クラスＩＩＩ複合体を形成すると同定され得る。
【図３】図３は、ｍａｂ＿８の、ヒトＩＬ−１７Ｃとの複合体形成を分析する抗体ｍａｂ＿８のサイズ排除クロマトグラフィである。１つのＩＬ−１７Ｃホモダイマーとの複合体形成を観察することができる。
【図４】図４は、サイズ排除クロマトグラフィにおいて、ｍａｂ＿１およびｍａｂ＿８について同定したのと同じ結合モードを共有する５つの更なる抗体を例示する。
【図５】図５は、サイズ排除クロマトグラフィにおいて、ｍａｂ＿１およびｍａｂ＿８について同定したのと同じ結合モードを共有する５つの更なる抗体を例示する。
【図６】図６は、ｍａｂ＿１およびｍａｂ＿８について同定した結合モードを共有しない多くの抗体のうちの２つを例示する。図６の抗体は、ヒトＩＬ−１７Ｃと主にクラスＩＩ複合体（約３６５ｋＤａ）を、そしてカニクイザルＩＬ−１７Ｃと主にクラスＩ複合体（約２５３ｋＤａ）を形成する。
【図７】図７は、ｍａｂ＿１およびｍａｂ＿８について同定した結合モードを共有しない多くの抗体のうちの２つを例示する。図７の抗体は、ヒトＩＬ−１７Ｃと主にクラスＩＩ複合体（約３６６ｋＤａ）を、そしてカニクイザルＩＬ−１７Ｃと主にクラスＩ複合体（約２６４ｋＤａ）を形成する。
【図８Ａ】図８Ａは、抗体ｍａｂ＿１のＨＤＸ  ＭＳエピトープマッピングのカバーマップを示す。領域ＰＶＬＲＰＥＥＶＬ（配列番号２７、配列番号１のａａ８９〜９７）は、双方の抗体について、ヒトＩＬ−１７Ｃ上の主要なエピトープとして同定された。
【図８Ｂ】図８Ｂは、抗体ｍａｂ＿８のＨＤＸ  ＭＳエピトープマッピングのカバーマップを示す。領域ＰＶＬＲＰＥＥＶＬ（配列番号２７、配列番号１のａａ８９〜９７）は、双方の抗体について、ヒトＩＬ−１７Ｃ上の主要なエピトープとして同定された。
【発明を実施するための形態】
【００２７】
本開示は、ＩＬ−１７Ｃの少なくとも特定領域を認識するいくつかの抗体または抗体フラグメントに関する。一態様において、本開示の抗体または抗体フラグメントは、ＩＬ−１７Ｃに結合して、ＩＬ−１７Ｃホモダイマーと複合体を形成する。好ましくは、前記抗体または前記抗体フラグメントは、ＩＬ−１７Ｃホモダイマーに二価結合して、前記抗体または前記抗体フラグメントおよび１つのＩＬ−１７Ｃホモダイマーからなる複合体を形成する。好ましくは、前記抗体または前記抗体フラグメントは、ヒトＩＬ−１７Ｃに結合する。
【００２８】
定義：
用語「ＩＬ−１７Ｃ」は、インターロイキン１７Ｃとして知られているタンパク質を指す。
【００２９】
ヒトＩＬ−１７Ｃは、（ＵｎｉＰｒｏｔ  Ｑ９Ｐ０Ｍ４）のアミノ酸配列を有する：
2018506296.tif 000003
【００３０】
ＰＶＬＲＰＥＥＶＬ（配列番号２７）は、配列番号１のアミノ酸ａａ８９〜９７に対応する。
【００３１】
ＶＬＲＰＥＥＶＬ（配列番号２８）は、配列番号１のアミノ酸ａａ９０〜９７に対応する。
【００３２】
マウスＩＬ−１７Ｃは、（ＵｎｉＰｒｏｔ  Ｑ８Ｋ４Ｃ５）のアミノ酸配列を有する：
2018506296.tif 000004
【００３３】
カニクイザルＩＬ−１７Ｃは、（ＸＰ＿００５５９２８２５．１）のアミノ酸配列を有する：
2018506296.tif 000005
【００３４】
用語「ホモダイマー」は、例えばジスルフィド結合または非共有結合性の相互作用によって相互に結合する２つの同じ分子を指す。
【００３５】
用語「ＩＬ１７ＲＡ」は、インターロイキン１７受容体Ａとして知られるタンパク質を指す。ヒトＩＬ１７ＲＡは、（ＵｎｉＰｒｏｔ  Ｑ９６Ｆ４６）のアミノ酸配列を有する：
2018506296.tif 000006
【００３６】
用語「ＩＬ１７ＲＥ」は、インターロイキン１７受容体Ｅとして知られるタンパク質を指す。ヒトＩＬ１７ＲＥは、（ＵｎｉＰｒｏｔ  Ｑ８ＮＦＲ９）のアミノ酸配列を有する：
2018506296.tif 000007
【００３７】
マウスＩＬ１７ＲＥは、（ＵｎｉＰｒｏｔ  Ｑ８ＢＨ０６）のアミノ酸配列を有する：
2018506296.tif 000008
【００３８】
用語「複合体」は、２つ以上の化合物が互いに結合または接触する場合に生じる実体を意味する。本明細書中で、複合体は、抗体または抗体フラグメントとその抗原との間で形成される。
【００３９】
本明細書中で用いられる「ＩＬ−１７Ｃのアンタゴニスト」および「ＩＬ−１７Ｃアンタゴニスト」は、ＩＬ−１７Ｃの活性または機能を阻害するあらゆる分子を指す。用語ＩＬ−１７Ｃアンタゴニストは、ＩＬ−１７Ｃに特異的に結合する抗体または抗体フラグメントを含むが、これらに限定されない。好ましくは、本開示におけるＩＬ−１７Ｃアンタゴニストは、ヒトＩＬ−１７Ｃに特異的な抗体である。そのような抗体は、あらゆるタイプのものであってよく、例えば、マウス抗体、ラット抗体、キメラ抗体、ヒト化抗体、またはヒト抗体がある。
【００４０】
本明細書中で用いられる用語「抗体」は、（例えば、結合によって、立体障害によって、空間的分布の安定化によって）抗原と相互作用する、ジスルフィド結合によって相互に結合する少なくとも２つの重（Ｈ）鎖および２つの軽（Ｌ）鎖を含むタンパク質を指す。各重鎖は、重鎖可変領域（本明細書中でＶＨと略される）および重鎖定常領域から構成される。重鎖定常領域は、３つのドメイン、ＣＨ１、ＣＨ２、およびＣＨ３から構成される。各軽鎖は、軽鎖可変領域（本明細書中でＶＬと略される）および軽鎖定常領域から構成される。軽鎖定常領域は、１つのドメイン、ＣＬから構成される。ＶＨ領域およびＶＬ領域はさらに、相補性決定領域（ＣＤＲ）と呼ばれる超可変領域に分割され得、フレームワーク領域（ＦＲ）と呼ばれるより保存された領域に散在する。各ＶＨおよび各ＶＬは、３つのＣＤＲおよび４つのＦＲで構成され、以下の順序でアミノ末端からカルボキシ末端に配置される：ＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、およびＦＲ４。重鎖および軽鎖の可変領域は、抗原と相互作用する結合ドメインを含有する。抗体の定常領域は、免疫系の種々の細胞（例えば、エフェクター細胞）および古典的補体系の第１の成分（Ｃ１ｑ）が挙げられる宿主の組織または因子への免疫グロブリンの結合を媒介し得る。用語「抗体」は、例えば、モノクローナル抗体、ヒト抗体、ヒト化抗体、ラクダ化抗体、およびキメラ抗体を含む。抗体は、あらゆるアイソタイプ（例えば、ＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＡ、およびＩｇＹ）、クラス（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１、およびＩｇＡ２）、またはサブクラスであり得る。軽鎖および重鎖は双方とも、構造的相同性および機能的相同性の領域に分割される。
【００４１】
本明細書中で用いられるフレーズ「抗体フラグメント」は、抗原と（例えば、結合、立体障害、空間的分布の安定化によって）特異的に相互作用する能力を保持する抗体の１つまたは複数の部分を指す。結合フラグメントの例として、ＶＬドメイン、ＶＨドメイン、ＣＬドメイン、およびＣＨ１ドメインからなる一価のフラグメント、Ｆａｂフラグメント；ヒンジ領域にてジスルフィド架橋によって結合する２つのＦａｂフラグメントを含む二価のフラグメント、Ｆ（ａｂ）２フラグメント；ＶＨドメインおよびＣＨ１ドメインからなるＦｄフラグメント；抗体の単腕のＶＬドメインおよびＶＨドメインからなるＦｖフラグメント；ＶＨドメインからなるｄＡｂフラグメント（Ｗａｒｄ  ｅｔ  ａｌ．，（１９８９）Ｎａｔｕｒｅ  ３４１：５４４−５４６）；ならびに単離される相補性決定領域（ＣＤＲ）が挙げられるが、これらに限定されない。さらに、Ｆｖフラグメントの２つのドメイン、ＶＬおよびＶＨは、別々の遺伝子によってコードされるが、組換え法を用いて、合成リンカーによって結合することができ、これにより、ＶＬ領域およびＶＨ領域が一価の分子を形成するように対形成している単一のタンパク質鎖として形成され得る（単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）として知られている；例えば、Ｂｉｒｄ  ｅｔ  ａｌ．，（１９８８）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４２：４２３−４２６；およびＨｕｓｔｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，（１９８８）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．８５：５８７９−５８８３）参照）。そのような単鎖抗体もまた、用語「抗体フラグメント」内に包含されることが意図される。これらの抗体フラグメントは、当業者に知られている従来の技術を用いて得られ、フラグメントは、無傷抗体と同様にして、有用性の有無に関してスクリーニングされる。抗体フラグメントはまた、単一のドメイン抗体、マキシボディ、ミニボディ、イントラボディ、ダイアボディ、トリアボディ、テトラボディ、ｖ−ＮＡＲ、およびｂｉｓ−ｓｃＦｖ中に組み込まれてもよい（例えばＨｏｌｌｉｎｇｅｒ  ａｎｄ  Ｈｕｄｓｏｎ，（２００５）Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ２３：１１２６−１１３６参照）。抗体フラグメントは、ポリペプチド、例えばフィブロネクチンＩＩＩ型（Ｆｎ３）（フィブロネクチンポリペプチドモノボディを記載する米国特許第６７０３１９９号明細書参照）に基づいて、スカフォールド中に融合されてよい。抗体フラグメントは、補足的な軽鎖ポリペプチドと共に一対の抗原−結合部位を形成する一対のタンデムＦｖセグメント（ＶＨ−ＣＨ１−ＶＨ−ＣＨ１）を含む単鎖分子中に組み込まれてよい（Ｚａｐａｔａ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９５）Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｎｇ．８：１０５７−１０６２；および米国特許第５６４１８７０号明細書）。
【００４２】
用語「抗原結合部位」は、抗原に特異的に結合する領域を含む抗体または抗体フラグメントの部分を指す。抗原結合部位は、１つまたは複数の抗体可変ドメインによって提供され得る。好ましくは、抗原結合部位は、抗体または抗体フラグメントの関連するＶＨおよびＶＬ内に含まれる。
【００４３】
本明細書中で用いられる「ヒト抗体」または「ヒト抗体フラグメント」は、フレームワーク領域およびＣＤＲ領域の双方がヒト起源の配列に由来する可変領域を有する抗体および抗体フラグメントを含む。さらに、抗体が定常領域を含有するならば、定常領域もまた、そのようなヒト配列、例えば、ヒト生殖細胞系配列もしくはヒト生殖細胞系配列の突然変異バージョン、または、例えば、Ｋｎａｐｐｉｋ  ｅｔ  ａｌ．，（２０００）Ｊ  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ  ２９６：５７−８６に記載されるヒトフレームワーク配列分析に由来する抗体含有コンセンサスフレームワーク配列に由来する。免疫グロブリン可変ドメイン、例えばＣＤＲの構造および位置は、周知のナンバリングスキーム、例えば、Ｋａｂａｔナンバリングスキーム、Ｃｈｏｔｈｉａナンバリングスキーム、またはＫａｂａｔおよびＣｈｏｔｈｉａの組合せを用いて定義されてよい（例えば、Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，Ｕ．Ｓ．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ  ａｎｄ  Ｈｕｍａｎ  Ｓｅｒｖｉｃｅｓ（１９９１），ｅｄｓ．Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．；Ｌａｚｉｋａｎｉ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９７）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏ．２７３：９２７−９４８）；Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９１）Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈ  ｅｄｉｔ．，ＮＩＨ  Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ  ｎｏ．９１−３２４２  Ｕ．Ｓ．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ  ａｎｄ  Ｈｕｍａｎ  Ｓｅｒｖｉｃｅｓ；Ｃｈｏｔｈｉａ  ｅｔ  ａｌ．，（１９８７）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１−９１７；Ｃｈｏｔｈｉａ  ｅｔ  ａｌ．，（１９８９）Ｎａｔｕｒｅ  ３４２：８７７−８８３；およびＡｌ−Ｌａｚｉｋａｎｉ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９７）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２７３：９２７−９４８参照）。
【００４４】
「ヒト化抗体」または機能的ヒト化抗体フラグメントは、本明細書中で、（ｉ）抗体がヒト生殖細胞系配列に基づく、非ヒト源（例えば、異種免疫系を有する遺伝子導入マウス）に由来するもの、または（ｉｉ）可変ドメインのＣＤＲが非ヒト起源である一方、可変ドメインの１つもしくは複数のフレームワークがヒト起源であり、定常ドメイン（もしあれば）がヒト起源である、ＣＤＲ融合されているものと定義される。
【００４５】
用語「キメラ抗体」または機能的キメラ抗体フラグメントは、本明細書中で、ある種において見出される配列に由来する、またはこれに相当する定常抗体領域、および別の種に由来する可変抗体領域を有する抗体分子と定義される。好ましくは、定常抗体領域は、ヒト、例えばヒト生殖系列もしくはヒト体細胞において見出される配列に由来し、またはこれに相当し、可変抗体領域（例えばＶＨ、ＶＬ、ＣＤＲ、またはＦＲ領域）は、非ヒト動物、例えばマウス、ラット、ウサギ、またはハムスターにおいて見出される配列に由来する。
【００４６】
用語「単離された」は、例えば、抗原特異性が異なる他の抗体または抗体フラグメントを実質的に含まない抗体または抗体フラグメントであり得る化合物を指す。さらに、単離された抗体または単離された抗体フラグメントは、他の細胞の物質および／または化学物質を実質的に含み得ない。ゆえに、一部の態様において、提供される抗体は、特異性が異なる抗体から分離された、単離された抗体である。単離された抗体は、モノクローナル抗体であってよい。単離された抗体は、組換えモノクローナル抗体であってよい。しかしながら、標的のエピトープ、アイソフォーム、または変異体に特異的に結合する単離された抗体は、例えば他の種由来の、他の関連抗原に対する交差反応性を有し得る（例えば種ホモログ）。
【００４７】
本明細書中で用いられる用語「組換え抗体」は、組換え手段によって調製、発現、生成、または分離される全ての抗体、例えば、ヒト免疫グロブリン遺伝子について遺伝子導入もしくは染色体導入された動物（例えばマウス）またはそれから調製されたハイブリドーマから単離される抗体、抗体を発現するように形質転換された宿主細胞から単離される抗体、組換え体から選択かつ単離される抗体、組合せヒト抗体ライブラリ、および、全てまたは一部のヒト免疫グロブリン遺伝子配列の、他のＤＮＡ配列へのスプライジングを伴う他のあらゆる手段によって調製、発現、生成、または分離される抗体を含む。好ましくは、そのような組換え抗体は、フレームワーク領域およびＣＤＲ領域がヒト生殖細胞系免疫グロブリン配列に由来する可変領域を有する。しかしながら、ある実施形態において、そのような組換えヒト抗体は、インビトロ突然変異誘発（または、ヒトＩｇ配列について遺伝子導入した動物が用いられる場合、インビボ体細胞突然変異誘発）を受けてよいので、組換え抗体のＶＨ領域およびＶＬ領域のアミノ酸配列は、ヒト生殖細胞系ＶＨおよびＶＬ配列に由来し、かつこれに関連する一方で、ヒト抗体生殖細胞系レパートリ内にインビボで本来存在し得ない配列である。組換え抗体は、モノクローナル抗体であってよい。ある実施形態において、本明細書中に開示される抗体および抗体フラグメントは、米国特許出願第１３／３２１５６４号明細書または米国特許出願第１３／２９９３６７号明細書に開示されるＹｌａｎｔｈｉａ（登録商標）抗体ライブラリから単離され、これらの出願は双方とも、参照によって本明細書中に組み込まれる。
【００４８】
本明細書中で用いられる用語「モノクローナル抗体」は、単一の分子組成の抗体分子の製剤を指す。モノクローナル抗体組成物は、特定のエピトープに対して固有の結合特異性および親和性を有する固有の結合部位を示す。
【００４９】
本明細書中で用いられる抗体は、当該抗体が、抗原と１つまたは複数の参照抗原とを識別することができる場合において、そのような抗原「に特異的に結合する」、抗原「に特異的である」、または抗原「を特異的に認識する」。というのも、結合特異性が絶対不変の性質でなく、相対的な特性であるからである。参照抗原は、１つまたは複数の密接に関連した抗原であり得、これ（ら）は、参照点、例えばＩＬ１７ＡまたはＩＬ１７Ｂとして用いられる。その最も一般的な形態において（そして、明確に言及されない場合）、「特異的な結合」は、例えば、以下の方法の１つに従って判定される、注目する抗原と無関係な抗原とを識別する抗体の能力を指すことになる。そのような方法は、ウェスタンブロット、ＥＬＩＳＡ試験、ＲＩＡ試験、ＥＣＬ試験、ＩＲＭＡ試験、およびペプチドスキャンを含むが、これらに限定されない。例えば、標準的なＥＬＩＳＡアッセイが実行されてよい。スコアリングは、標準的な発色（例えば、セイヨウワサビ過酸化水素を有する二次抗体、および過酸化水素とテトラメチルベンジジン）によって実行されてよい。あるウェル内の反応は、光学密度によって、例えば４５０ｎｍにてスコアされる。典型的なバックグラウンド（＝ネガティブ反応）は、０．１ＯＤであり得る；典型的なポジティブ反応は、１ＯＤであり得る。これは、ポジティブ／ネガティブの差が１０倍を超え得ることを意味する。典型的には、結合特異性の判定は、単一の参照抗原ではなく、約３〜５個の無関係な抗原、例えばミルクパウダー、ＢＳＡ、トランスフェリン等の一組を用いることによって、実行される。加えて、「特異的な結合」は、その標的抗原の様々な部分、例えばＩＬ−１７Ｃ、もしくはＩＬ−１７Ｃの受容体の様々なドメインもしくは領域、またはＩＬ−１７ＣもしくはＩＬ−１７Ｃの受容体の１つもしくは複数の重要なアミノ酸残基もしくはアミノ酸残基のストレッチを識別する抗体の能力に関係し得る。
【００５０】
用語「結合力」は、タンパク質間の複数の結合相互作用の組合せ強度を説明するのに用いられる。結合力は、単一の結合の強度を説明する親和性とは異なる。したがって、結合力は、結合の合計ではなく結合親和性の組合せ相乗強度（機能的親和性）である。本開示の抗体により、ＶＨ／ＶＬ対由来の双方の抗原結合部位は同時に、１つのＩＬ−１７Ｃホモダイマーと相互作用する。多くの結合相互作用が同時に存在するので、単一の各結合相互作用が（相対的親和性に応じて）容易に壊れ得る一方で、単一部位の結合が一時的に解かれても、分子は拡散し得ず、当該部位の結合は回復する可能性がある。全体的な効果は、抗体への抗原の相乗的な、強い結合である。
【００５１】
本明細書中で用いられる用語「親和性」は、ポリペプチドとその標的との、単一部位での相互作用の強度を指す。各部位内で、ポリペプチドの結合領域は、弱い非共有結合力を介して、その標的と多数の部位にて相互作用する；相互作用が多いほど、親和性は強い。
【００５２】
本明細書中で用いられる用語「ＫＤ」は、解離定数を指し、Ｋｄの、Ｋａに対する比（すなわちＫｄ／Ｋａ）から得られ、かつモル濃度（Ｍ）として表される。例えばモノクローナル抗体のような抗原結合部分についてのＫＤ値は、当該技術において十分に確立された方法を用いて、判定され得る。例えばモノクローナル抗体のような抗原結合部分のＫＤを判定する方法は、バイオセンサー系、例えばＢｉａｃｏｒｅ（登録商標）系を用いた、ＳＥＴ（可溶性の平衡滴定）または表面プラスモン共鳴である。本開示において、ＩＬ−１７Ｃに特異的な抗体は典型的に、解離速度定数（ＫＤ）（ｋＯｆｆ／ｋｏｎ）が５×１０−２Ｍ未満、１０−２Ｍ未満、５×１０−３Ｍ未満、１０−３Ｍ未満、５×１０−４Ｍ未満、１０−４Ｍ未満、５×１０−５Ｍ未満、１０−５Ｍ未満、５×１０−６Ｍ未満、１０−６Ｍ未満、５×１０−７Ｍ未満、１０−７Ｍ未満、５×１０−８Ｍ未満、１０−８Ｍ未満、５×１０−９Ｍ未満、１０−９Ｍ未満、５×１０−１０Ｍ未満、１０−１０Ｍ未満、５×１０−１１Ｍ未満、１０−１１Ｍ未満、５×１０−１２Ｍ未満、１０−１２Ｍ未満、５×１０−１３Ｍ未満、１０−１３Ｍ未満、５×１０−１４Ｍ未満、１０−１４Ｍ未満、５×１０−１５Ｍ未満、もしくは１０−１５Ｍ未満または以下である。
【００５３】
本明細書中で用いられる用語「二価分子」は、２つの抗原結合部位を有する分子を指す。一部の実施形態において、本発明の二価分子は、二価抗体またはその二価フラグメントである。一部の実施形態において、本発明の二価分子は、二価抗体である。一部の実施形態において、本発明の二価分子は、ＩｇＧである。一般に、モノクローナル抗体は、二価基本構造を有する。ＩｇＧおよびＩｇＥは、二価単位を１つのみ有する一方、ＩｇＡおよびＩｇＭは、複数の二価単位（それぞれ４および１０）からなるので、より高次の価数を有する。この二価により、抗原に対する抗体の結合力が増大する。
【００５４】
本明細書中で用いられる用語「二価結合」または「に二価結合する」は、二価分子の双方の抗原結合部位の、その抗原への結合を指す。好ましくは、二価分子の抗原結合部位は双方とも、同じ抗原特異性を共有する。
【００５５】
「交差競合」は、標準的な競合結合アッセイにおける、他の抗体、抗体フラグメント、または抗原結合部分の、特定の抗原への結合に干渉する、抗体、抗体フラグメント、または他の抗原結合部分の能力を意味する。抗体、抗体フラグメント、または他の抗原結合部分が、別の抗体、抗体フラグメント、または抗原結合部分の、特定の抗原への結合に干渉することができるので、本発明に従って交差競合すると言えるかどうかの能力または程度は、標準的な競合結合アッセイを用いて判定され得る。適切な一アッセイは、Ｂｉａｃｏｒｅ技術の使用（例えば、ＢＩＡｃｏｒｅ  ３０００機器（Ｂｉａｃｏｒｅ，Ｕｐｐｓａｌａ，スウェーデン）を用いる）を伴うものであり、これは、表面プラスモン共鳴技術を用いて、相互作用の程度を測定することができる。交差競合を測定する別のアッセイが、ＥＬＩＳＡベースのアプローチを用いるものである。交差競合に基づく「エピトープビニング」抗体の高スループットプロセスが、国際特許出願国際公開第２００３／４８７３１号パンフレットに記載されている。調査中の抗体または抗体フラグメントが、表１に記載される抗体の１つの、ＩＬ−１７Ｃへの結合を６０％以上、特定すると７０％以上、さらに特定すると８０％以上引き下げるならば、そして表１に記載される抗体の１つが、ＩＬ−１７Ｃへの前記抗体または前記抗体フラグメントの結合を６０％以上、特定すると７０％以上、さらに特定すると８０％以上引き下げるならば、交差競合は存在する。
【００５６】
用語「エピトープ」は、本来なら分子と相互作用するが、抗体もしくはそのフラグメント、またはＴ細胞受容体によって特異的に認識されるあらゆるタンパク質領域を含む。一般に、エピトープは、アミノ酸、炭水化物、または糖側鎖等の分子の、化学的に活性がある表面グルーピングであり、一般に、特定の立体構造特性、および特定の電荷特性を有し得る。当業者によって理解されるように、抗体が特異的に結合し得る実質的に全てのものがエピトープであり得る。エピトープは、抗体が結合する残基を含み得、かつ「線状」または「立体構造」であり得る。用語「線状エピトープ」は、タンパク質と、相互作用する分子（例えば抗体）との相互作用の点の全てが、タンパク質の一次アミノ酸配列（連続する）に沿って直線的に存在するエピトープを指す。用語「立体構造エピトープ」は、非連続的なアミノ酸が立体的な構造で協働するエピトープを指す。立体構造エピトープにおいて、相互作用の点は、互いに分離される、タンパク質上のアミノ酸残基の全体にわたって存在する。例えば、エピトープは、ペプチドマッピングまたはＨＤＸによって示されるように、アミノ酸のストレッチ内の１つまたは複数のアミノ酸でもあり得るし、Ｘ線結晶解析によって示されるように、１つまたは複数の個々のアミノ酸でもあり得る。
【００５７】
「と同じエピトープに結合する」は、抗体、抗体フラグメント、または他の抗原結合部分の、特定の、そして例示される抗体とエピトープが同じ抗原に結合する能力を意味する。例示される抗体および他の抗体のエピトープは、エピトープマッピング技術を用いて決定され得る。エピトープマッピング技術は、当該技術において周知である。例えば、立体構造エピトープは、例えば水素／重水素交換、Ｘ線結晶解析、および二次元核磁気共鳴によって、アミノ酸の空間立体構造を判定することによって、容易に同定される。
【００５８】
本発明の組成物は、治療用途に用いられても予防用途に用いられてもよい。したがって、本発明は、本発明の抗体（または機能的抗体フラグメント）、およびそれ用の医薬的に許容可能なキャリアまたは賦形剤を含有する医薬組成物を含む。関連する態様において、本発明は、炎症性障害を処置する方法を提供する。そのような方法は、それを必要とする対象に、本明細書において記載され、または意図される本発明の抗体を含有する医薬組成物の有効量を投与するステップを含有する。
【００５９】
本開示は、処置を必要とする対象に対する、開示されるＩＬ−１７Ｃ抗体の治療的に有効な量の投与を含む治療法を提供する。本明細書中で用いられる「治療的に有効な量」または「有効量」は、所望される生物学的応答を誘発するのに必要なＩＬ−１７Ｃ抗体の量を指す。本発明に従えば、治療的に有効な量は、疾患を処置かつ／または予防するのに必要なＩＬ−１７Ｃ抗体の量である。
【００６０】
用語「炎症性障害」または「炎症性疾患」は、互換的に用いられ、本明細書中で用いられる際、炎症と関連するあらゆる異常を指す。炎症性障害は、慢性的であっても急性的であってもよく、自己免疫疾患が挙げられ得る。
【００６１】
本文脈において用いられる「対象」は、あらゆる哺乳類を指し、齧歯類、例えばマウスまたはラット、および霊長類、例えばカニクイザル（Ｍａｃａｃａ  ｆａｓｃｉｃｕｌａｒｉｓ）、アカゲザル（Ｍａｃａｃａ  ｍｕｌａｔｔａ）、またはヒト（Ｈｏｍｏ  ｓａｐｉｅｎｓ）が挙げられる。好ましくは、対象は、霊長類、最も好ましくはヒトである。
【００６２】
実施形態：
一実施形態において、本開示は、ＩＬ−１７Ｃに特異的な抗体または抗体フラグメントに言及し、前記抗体または前記抗体フラグメントは、ＩＬ−１７Ｃホモダイマーに二価結合して、前記抗体または前記抗体フラグメントおよび１つのＩＬ−１７Ｃホモダイマーからなる複合体を形成する。
【００６３】
一実施形態において、本開示は、ＩＬ−１７Ｃに特異的な抗体または抗体フラグメントに言及し、前記抗体または前記抗体フラグメントは、ヒトＩＬ−１７Ｃ上のエピトープに結合し、当該エピトープは、ヒトＩＬ−１７Ｃのアミノ酸ＰＶＬＲＰＥＥＶＬ（配列番号２７）内の１つまたは複数のアミノ酸残基を含む。一実施形態において、当該エピトープは、ヒトＩＬ−１７Ｃのアミノ酸ＶＬＲＰＥＥＶＬ（配列番号２８）内の１つまたは複数のアミノ酸残基を含む。別の実施形態において、本開示は、ＩＬ−１７Ｃに特異的な抗体または抗体フラグメントに言及し、前記抗体または前記抗体フラグメントは、ヒトＩＬ−１７Ｃ上のエピトープに結合し、当該エピトープは、ヒトＩＬ−１７Ｃのアミノ酸ＰＶＬＲＰＥＥＶＬ（配列番号２７）を含む。別の実施形態において、本開示は、ＩＬ−１７Ｃに特異的な抗体または抗体フラグメントに言及し、前記抗体または前記抗体フラグメントは、ヒトＩＬ−１７Ｃ上のエピトープに結合し、当該エピトープは、ヒトＩＬ−１７Ｃのアミノ酸ＶＬＲＰＥＥＶＬ（配列番号２８）を含む。別の実施形態において、本開示は、ＩＬ−１７Ｃに特異的な抗体または抗体フラグメントに言及し、前記抗体または前記抗体フラグメントは、ヒトＩＬ−１７Ｃ上の領域に結合し、当該領域は、ヒトＩＬ−１７Ｃのアミノ酸ＰＶＬＲＰＥＥＶＬ（配列番号２７）を含む。別の実施形態において、本開示は、ＩＬ−１７Ｃに特異的な抗体または抗体フラグメントに言及し、前記抗体または前記抗体フラグメントは、ヒトＩＬ−１７Ｃ上の領域に結合し、当該領域は、ヒトＩＬ−１７Ｃのアミノ酸ＶＬＲＰＥＥＶＬ（配列番号２８）を含む。別の実施形態において、本開示は、ＩＬ−１７Ｃに特異的な抗体または抗体フラグメントに言及し、前記抗体または前記抗体フラグメントは、ペプチドに結合し、当該ペプチドは、アミノ酸ＰＶＬＲＰＥＥＶＬ（配列番号２７）を含む。別の実施形態において、本開示は、ＩＬ−１７Ｃに特異的な抗体または抗体フラグメントに言及し、前記抗体または前記抗体フラグメントは、ペプチドに結合し、当該ペプチドは、ヒトＩＬ−１７Ｃのアミノ酸ＶＬＲＰＥＥＶＬ（配列番号２８）を含む。更なる実施形態において、ペプチドは、アミノ酸ＰＶＬＲＰＥＥＶＬ（配列番号２７）から本質的になる。別の実施形態において、ペプチドは、アミノ酸ＰＶＬＲＰＥＥＶＬ（配列番号２７）からなる。更なる実施形態において、ペプチドは、アミノ酸ＶＬＲＰＥＥＶＬ（配列番号２８）から本質的になる。別の実施形態において、ペプチドは、アミノ酸ＶＬＲＰＥＥＶＬ（配列番号２８）からなる。
【００６４】
別の実施形態において、本開示は、ＩＬ−１７Ｃに特異的な抗体または抗体フラグメントに言及し、前記抗体または前記抗体フラグメントは、配列番号１のアミノ酸ａａ８９〜９７の領域に結合する。更なる実施形態において、前記抗体または前記抗体フラグメントは、配列番号１のアミノ酸ａａ９０〜９７の領域に結合する。
【００６５】
一実施形態において、本開示は、ＩＬ−１７Ｃに特異的な抗体または抗体フラグメントに言及し、前記抗体または前記抗体フラグメントは、ヒトＩＬ−１７Ｃ上のエピトープに結合し、当該エピトープは、ヒトＩＬ−１７Ｃのアミノ酸ＰＶＬＲＰＥＥＶＬ（配列番号２７）内の１つまたは複数のアミノ酸残基、ならびにヒトＩＬ−１７Ｃの１つまたは複数の領域ａａ９８〜１１１（ＡＤＴＨＱＲＳＩＳＰＷＲＹ；配列番号２９）、ａａ１３２〜１４６（ＣＲＧＣＩＤＡＲＴＧＲＥＴＡＡＬ；配列番号３０）およびａａ１９２〜１９７（ＴＣＶＬＰＲＳＶ；配列番号３１）内の１つまたは複数のアミノ酸残基を含む。
【００６６】
別の実施形態において、本開示は、ＩＬ−１７Ｃに特異的な抗体または抗体フラグメントに言及し、前記抗体または前記抗体フラグメントは、ヒトＩＬ−１７Ｃ上のエピトープに結合し、当該エピトープは、ヒトＩＬ−１７Ｃのアミノ酸ＶＬＲＰＥＥＶＬ（配列番号２８）内の１つまたは複数のアミノ酸残基、ならびにヒトＩＬ−１７Ｃの１つまたは複数の領域ａａ９８〜１１１（ＡＤＴＨＱＲＳＩＳＰＷＲＹ；配列番号２９）、ａａ１３２〜１４６（ＣＲＧＣＩＤＡＲＴＧＲＥＴＡＡＬ；配列番号３０）、およびａａ１９２〜１９７（ＴＣＶＬＰＲＳＶ；配列番号３１）内の１つまたは複数のアミノ酸残基を含む。
【００６７】
更なる実施形態において、本開示は、ＩＬ−１７Ｃに特異的な抗体または抗体フラグメントに言及し、前記抗体または前記抗体フラグメントは、ヒトＩＬ−１７Ｃ上のエピトープに結合し、当該エピトープは、ヒトＩＬ−１７Ｃのアミノ酸ＰＶＬＲＰＥＥＶＬ（配列番号２７）内の１つまたは複数のアミノ酸残基、およびヒトＩＬ−１７Ｃの領域ａａ１９２〜１９７（ＴＣＶＬＰＲＳＶ；配列番号３１）内の１つまたは複数のアミノ酸残基を含む。
【００６８】
更なる実施形態において、本開示は、ＩＬ−１７Ｃに特異的な抗体または抗体フラグメントに言及し、前記抗体または前記抗体フラグメントは、ヒトＩＬ−１７Ｃ上のエピトープに結合し、当該エピトープは、ヒトＩＬ−１７Ｃのアミノ酸領域ＰＶＬＲＰＥＥＶＬ（配列番号２７）、およびヒトＩＬ−１７Ｃのアミノ酸領域ａａ１９２〜１９７（ＴＣＶＬＰＲＳＶ；配列番号３１）を含む。
【００６９】
更なる実施形態において、本開示は、ＩＬ−１７Ｃに特異的な抗体または抗体フラグメントに言及し、前記抗体または前記抗体フラグメントは、ヒトＩＬ−１７Ｃ上のエピトープに結合し、当該エピトープは、ヒトＩＬ−１７Ｃのアミノ酸ＰＶＬＲＰＥＥＶＬ（配列番号２７）内の１つまたは複数のアミノ酸残基、ならびにヒトＩＬ−１７Ｃの領域ａａ９８〜１１１（ＡＤＴＨＱＲＳＩＳＰＷＲＹ；配列番号２９）、ａａ１３２〜１４６（ＣＲＧＣＩＤＡＲＴＧＲＥＴＡＡＬ；配列番号３０）およびａａ１９２〜１９７（ＴＣＶＬＰＲＳＶ；配列番号３１）内の１つまたは複数のアミノ酸残基を含む。
【００７０】
別の実施形態において、本開示は、ＩＬ−１７Ｃに特異的な抗体または抗体フラグメントに言及し、前記抗体または前記抗体フラグメントは、ＩＬ−１７Ｃホモダイマー上のエピトープに結合して、前記抗体または前記抗体フラグメントおよび１つのＩＬ−１７Ｃホモダイマーからなる複合体を形成する。別の実施形態において、エピトープは、ヒトＩＬ−１７Ｃのアミノ酸ＰＶＬＲＰＥＥＶＬ（配列番号２７）内の１つまたは複数のアミノ酸残基を含む。
【００７１】
一実施形態において、ＩＬ−１７Ｃに特異的な前記抗体または前記抗体フラグメントは、ＩＬ−１７Ｃの、ＩＬ−１７Ｃの受容体への結合を阻止する。更なる実施形態において、ＩＬ−１７Ｃに特異的な前記抗体または前記抗体フラグメントは、ＩＬ−１７Ｃの、ＩＬ１７の受容体への結合を阻止し、前記受容体は、ＩＬ１７ＲＥである。別の実施形態において、本開示は、ＩＬ−１７Ｃに特異的な抗体または抗体フラグメントに言及し、前記抗体または前記抗体フラグメントは、ＩＬ−１７Ｃの、ＩＬ１７ＲＥへの結合を阻止する。別の実施形態において、前記抗体または前記抗体フラグメントは、ＩＬ−１７Ｃアンタゴニストである。更なる実施形態において、前記抗体または前記抗体フラグメントは、ヒトＩＬ−１７Ｃ上のエピトープに結合し、前記エピトープは、ヒトＩＬ−１７Ｃのアミノ酸ＰＶＬＲＰＥＥＶＬ（配列番号２７）内の１つまたは複数のアミノ酸残基を含む。
【００７２】
別の実施形態において、本開示は、ＩＬ−１７Ｃに特異的な抗体または抗体フラグメントに言及し、前記抗体または前記抗体フラグメントは、ＩＬ−１７Ｃホモダイマーに二価結合して、前記抗体または前記抗体フラグメントおよび１つのＩＬ−１７Ｃホモダイマーからなる複合体を形成し、前記抗体または前記抗体フラグメントは、ＩＬ−１７Ｃの、ＩＬ１７ＲＥへの結合を阻止する。更なる実施形態において、前記抗体または前記抗体フラグメントは、ヒトＩＬ−１７Ｃ上のエピトープに結合し、当該エピトープは、ヒトＩＬ−１７Ｃのアミノ酸ＰＶＬＲＰＥＥＶＬ（配列番号２７）内の１つまたは複数のアミノ酸残基を含む。
【００７３】
ある実施形態において、ＩＬ−１７Ｃに特異的な前記抗体または前記抗体フラグメントは、ＩＬ−１７Ｃの、ＩＬ−１７Ｃの１つまたは複数の受容体への結合を阻止する。代わりの実施形態において、ＩＬ−１７Ｃの受容体に特異的な前記抗体または前記抗体フラグメントは、ＩＬ−１７Ｃの、ＩＬ−１７Ｃの受容体への結合を阻止し、ＩＬ１７の受容体として、ＩＬ１７ＲＥおよびＩＬ１７ＲＡが挙げられる。代わりの実施形態において、ＩＬ−１７Ｃの受容体に特異的な前記抗体または前記抗体フラグメントは、ＩＬ−１７Ｃの、ＩＬ１７ＲＥおよびＩＬ１７ＲＡへの結合を阻止する。
【００７４】
ある実施形態において、ＩＬ−１７Ｃに特異的な前記抗体または前記抗体フラグメントは、ＩＬ−１７Ｃの、ＩＬ１７ＲＥへの結合を阻止し、ＩＣ５０濃度は、１００ｎＭ、９０ｎＭ、８０ｎＭ、７０ｎＭ、６０ｎＭ、５０ｎＭ、４０ｎＭ、３０ｎＭ、２０ｎＭ、１０ｎＭ、９ｎＭ、８ｎＭ、７ｎＭ、６ｎＭ、５ｎＭ、４ｎＭ、３ｎＭ、２ｎＭ、１ｎＭ、１００ｐＭ、９０ｐＭ、８０ｐＭ、７０ｐＭ、６０ｐＭ、５０ｐＭ、４０ｐＭ、３０ｐＭ、２０ｐＭ、１０ｐＭ、９ｐＭ、８ｐＭ、７ｐＭ、６ｐＭ、５ｐＭ、４ｐＭ、３ｐＭ、２ｐＭ、または１ｐＭ未満である。ある態様において、ＩＣ５０濃度は、ＥＬＩＳＡ；ＳＥＴ、ＦＡＣＳ、またはＭＳＤ（Ｍｅｓｏ  Ｓｃａｌｅ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ）によって判定され得る。
【００７５】
一実施形態において、開示される抗体または抗体フラグメントは、ヒトＩＬ−１７Ｃに特異的である。更なる実施形態において、ＩＬ−１７Ｃに特異的な、開示される抗体または抗体フラグメントは、別の種のＩＬ−１７Ｃ、例えばマウス、ラット、アカゲザル、および／またはカニクイザル由来のＩＬ−１７Ｃと交差反応性である。別の実施形態において、抗体または抗体フラグメントは、ヒトＩＬ−１７Ｃ、カニクイザルＩＬ−１７Ｃ、およびマウスＩＬ−１７Ｃに特異的である。更なる実施形態において、前記抗体または前記抗体フラグメントは、ヒトＩＬ−１７Ｃ上のエピトープに結合し、当該エピトープは、ヒトＩＬ−１７Ｃのアミノ酸ＰＶＬＲＰＥＥＶＬ（配列番号２７）内の１つまたは複数のアミノ酸残基を含む。
【００７６】
一実施形態において、開示される抗体または抗体フラグメントは、配列番号１のアミノ酸配列がコードされるヒトＩＬ−１７Ｃに特異的である。一実施形態において、開示される抗体または抗体フラグメントは、配列番号１のアミノ酸配列を含むポリペプチドに特異的である。更なる実施形態において、前記モノクローナル抗体または前記モノクローナル抗体フラグメントは、配列番号１のアミノ酸配列からなるポリペプチドに特異的なモノクローナル抗体である。別の実施形態において、開示される抗体または抗体フラグメントは、配列番号１のアミノ酸配列がコードされるヒトＩＬ−１７Ｃに特異的であり、かつモノクローナル抗体またはモノクローナル抗体フラグメントである。
【００７７】
一実施形態において、ＩＬ−１７Ｃに特異的な、開示される抗体または抗体フラグメントは、モノクローナル抗体またはモノクローナル抗体フラグメントである。
【００７８】
一実施形態において、ＩＬ−１７Ｃに特異的な、開示される抗体または抗体フラグメントは、ヒト抗体、ヒト化抗体、またはキメラ抗体である。ある実施形態において、ＩＬ−１７Ｃに特異的な前記抗体または前記抗体フラグメントは、単離された抗体または単離された抗体フラグメントである。別の実施形態において、前記抗体または前記抗体フラグメントは、組換え抗体または組換え抗体フラグメントである。更なる実施形態において、前記抗体または前記抗体フラグメントは、組換えヒト抗体または組換えヒト抗体フラグメントである。更なる実施形態において、前記組換えヒト抗体または前記組換えヒト抗体フラグメントは、単離された組換えヒト抗体または単離された組換えヒト抗体フラグメントである。更なる実施形態において、前記組換えヒト抗体もしくは前記組換えヒト抗体フラグメント、または前記単離された組換えヒト抗体または前記単離された組換えヒト抗体フラグメントは、モノクローナルである。
【００７９】
別の実施形態において、本開示は、ヒトＩＬ−１７Ｃに特異的な抗体または抗体フラグメントに言及し、前記抗体または前記抗体フラグメントは、ＩＬ−１７Ｃホモダイマーに二価結合して、前記抗体または前記抗体フラグメントおよび１つのＩＬ−１７Ｃホモダイマーからなる複合体を形成し、前記抗体または前記抗体フラグメントは、ＩＬ−１７Ｃの、ＩＬ１７ＲＥへの結合を阻止し、前記抗体または前記抗体フラグメントは、モノクローナル抗体またはモノクローナル抗体フラグメントである。
【００８０】
別の実施形態において、本開示は、ヒトＩＬ−１７Ｃに特異的な抗体または抗体フラグメントに言及し、前記抗体または前記抗体フラグメントは、ＩＬ−１７Ｃホモダイマーに二価結合して、前記抗体または前記抗体フラグメントおよび１つのＩＬ−１７Ｃホモダイマーからなる複合体を形成し、前記抗体または前記抗体フラグメントは、ＩＬ−１７Ｃの、ＩＬ１７ＲＥへの結合を阻止し、前記抗体または前記抗体フラグメントは、モノクローナル抗体またはモノクローナル抗体フラグメントであり、前記抗体または前記抗体フラグメントは、ヒト抗体もしくはヒト抗体フラグメント、ヒト化抗体もしくはヒト化抗体フラグメント、またはキメラ抗体もしくはキメラ抗体フラグメントである。
【００８１】
一実施形態において、開示される抗体または抗体フラグメントは、ヒト重鎖定常領域およびヒト軽鎖定常領域を含む。
【００８２】
一実施形態において、開示される抗体または抗体フラグメントは、ＩｇＧアイソタイプのものである。別の実施形態において、前記抗体は、ＩｇＧ１である。
【００８３】
一実施形態において、前記抗体フラグメントは、二価抗体フラグメントである。
【００８４】
一実施形態において、本開示は、ＩＬ−１７Ｃに特異的な抗体または抗体フラグメントに言及し、前記抗体または前記抗体フラグメントは、ＩＬ−１７Ｃホモダイマーと複合体を形成し、前記複合体は、分子量が２００ｋＤａ未満である。より詳細には、前記抗体または前記抗体フラグメントは、ＩＬ−１７Ｃホモダイマーと複合体を形成し、形成された前記複合体の少なくとも５０％は、分子量が２００ｋＤａ未満である。更なる実施形態において、前記抗体または前記抗体フラグメントは、ＩＬ−１７Ｃホモダイマーと複合体を形成し、形成された前記複合体の少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、または少なくとも９５％は、分子量が２００ｋＤａ未満である。更なる実施形態において、前記抗体または前記抗体フラグメントは、ヒトＩＬ−１７Ｃ上のエピトープに結合し、当該エピトープは、ヒトＩＬ−１７Ｃのアミノ酸ＰＶＬＲＰＥＥＶＬ（配列番号２７）内の１つまたは複数のアミノ酸残基を含む。
【００８５】
別の実施形態において、本開示は、表１に記載される抗体と交差競合する抗体または抗体フラグメントに言及する。一実施形態において、本開示は、抗体または抗体フラグメントに言及し、前記抗体または前記抗体フラグメントは、表１の抗体の１つの、Ｋａｂａｔによって定義される６つのＣＤＲを含む抗体または抗体フラグメントと交差競合する。別の実施形態において、本開示は、ヒトＩＬ−１７Ｃに特異的な抗体または抗体フラグメントに言及し、前記抗体または前記抗体フラグメントは、ＩＬ−１７Ｃホモダイマーに二価結合して、前記抗体または前記抗体フラグメントおよび１つのＩＬ−１７Ｃホモダイマーからなる複合体を形成し、前記抗体または前記抗体フラグメントは、表１の抗体の１つの、Ｋａｂａｔによって定義される６つのＣＤＲを含む抗体または抗体フラグメントと、交差競合する。
【００８６】
別の実施形態において、本開示は、抗体または抗体フラグメントに言及し、前記抗体または前記抗体フラグメントは、６つのＣＤＲを含む抗体または抗体フラグメントと交差競合し、ＨＣＤＲ１は、配列番号７のアミノ酸配列であり、ＨＣＤＲ２は、配列番号８のアミノ酸配列であり、ＨＣＤＲ３は、配列番号９のアミノ酸配列であり、ＬＣＤＲ１は、配列番号１０のアミノ酸配列であり、ＬＣＤＲ２は、配列番号１１のアミノ酸配列であり、ＬＣＤＲ３は、配列番号１２のアミノ酸配列である。別の実施形態において、本開示は、抗体または抗体フラグメントに言及し、前記抗体または前記抗体フラグメントは、配列番号１４に従うＶＨおよび配列番号１３に従うＶＬを含む抗体または抗体フラグメントと交差競合する。
【００８７】
別の実施形態において、本開示は、抗体または抗体フラグメントに言及し、前記抗体または前記抗体フラグメントは、６つのＣＤＲを含む抗体または抗体フラグメントと交差競合し、ＨＣＤＲ１は、配列番号１７のアミノ酸配列であり、ＨＣＤＲ２は、配列番号１８のアミノ酸配列であり、ＨＣＤＲ３は、配列番号１９のアミノ酸配列であり、ＬＣＤＲ１は、配列番号２０のアミノ酸配列であり、ＬＣＤＲ２は、配列番号２１のアミノ酸配列であり、ＬＣＤＲ３は、配列番号２２のアミノ酸配列である。別の実施形態において、本開示は、抗体または抗体フラグメントに言及し、前記抗体または前記抗体フラグメントは、配列番号２４に従うＶＨおよび配列番号２３に従うＶＬを含む抗体または抗体フラグメントと交差競合する。
【００８８】
更なる実施形態において、本開示は、抗体または抗体フラグメントに言及し、前記抗体または前記抗体フラグメントは、配列番号１４に従うＶＨおよび配列番号１３に従うＶＬを含む抗体もしくは抗体フラグメントと、または配列番号２４に従うＶＨおよび配列番号２３に従うＶＬを含む抗体または抗体フラグメントと交差競合する。
【００８９】
ある実施形態において、本開示は、表１に記載される抗体と交差競合して、表１に記載される抗体の１つの特異的な結合を、ＥＬＩＳＡベースの交差競合アッセイにおいて少なくとも７０％、８０％、または９０％引き下げる抗体または抗体フラグメントに言及する。ある実施形態において、本開示は、表１に記載される抗体と交差競合して、表１に記載される抗体の１つの、ＩＬ−１７Ｃへの特異的な結合を、ＥＬＩＳＡベースの交差競合アッセイで少なくとも７０％、８０％、または９０％引き下げるモノクローナル抗体またはモノクローナル抗体フラグメントに言及する。代表的なアッセイセットアップが、本開示において実施例６に説明されている。
【００９０】
別の実施形態において、本開示は、表１の抗体の１つと同じエピトープに（例えば、結合、安定化、空間的分布によって）結合する抗体または抗体フラグメントに言及する。更なる実施形態において、前記抗体または前記抗体フラグメントは、表１の抗体の１つの、Ｋａｂａｔによって定義される６つのＣＤＲを含む抗体または抗体フラグメントと同じエピトープに（例えば、結合、安定化、空間的分布によって）結合する。更なる実施形態において、前記抗体または前記抗体フラグメントは、表１の抗体の１つの、Ｋａｂａｔによって定義される６つのＣＤＲを含む抗体または抗体フラグメントと同じエピトープに（例えば、結合、安定化、空間的分布によって）結合し、当該エピトープは、ヒトＩＬ−１７Ｃのアミノ酸ＰＶＬＲＰＥＥＶＬ（配列番号２７）内に１つまたは複数のアミノ酸残基を含む。更なる実施形態において、前記抗体または前記抗体フラグメントは、表１の抗体の１つの、Ｋａｂａｔによって定義される６つのＣＤＲを含む抗体または抗体フラグメントと同じエピトープに（例えば、結合、安定化、空間的分布によって）結合し、当該エピトープは、ヒトＩＬ−１７Ｃのアミノ酸ＶＬＲＰＥＥＶＬ（配列番号２８）内の１つまたは複数のアミノ酸残基を含む。
【００９１】
エピトープを含む所与のポリペプチドの領域は、当該技術において周知のいくつものエピトープマッピング技術を用いて同定され得る。例えば、Ｅｐｉｔｏｐｅ  Ｍａｐｐｉｎｇ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌ．６６（Ｇｌｅｎｎ  Ｅ．Ｍｏｒｒｉｓ，Ｅｄ．，１９９６）Ｈｕｍａｎａ  Ｐｒｅｓｓ，Ｔｏｔｏｗａ，Ｎｅｗ  Ｊｅｒｓｅｙ参照。例えば、線状エピトープは、例えば、タンパク質分子の部分に対応する多数のペプチドを固体支持体上に同時に合成し、かつ、支持体に依然として付着しているペプチドを抗体と反応させることによって、判定され得る。そのような技術は、当該技術において知られており、例えば、米国特許第４７０８８７１号明細書；Ｇｅｙｓｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，（１９８４）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８：３９９８−４００２；Ｇｅｙｓｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，（１９８５）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８２：７８−１８２；Ｇｅｙｓｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，（１９８６）Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．  ２３：７０９−７１５に記載されている。同様に、立体構造エピトープは、アミノ酸の空間立体構造を判定することによって、例えば水素／重水素交換、Ｘ線結晶解析、および二次元核磁気共鳴によって、容易に同定される。例えば、前掲のＥｐｉｔｏｐｅ  Ｍａｐｐｉｎｇ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ参照。また、タンパク質の抗原性領域は、例えば、Ｏｘｆｏｒｄ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｇｒｏｕｐから入手可能なＯｍｉｇａバージョン１．０ソフトウェアプログラムを用いて算出されるような、標準的な抗原性および疎水性のプロットを用いて、同定され得る。このコンピュータプログラムは、Ｈｏｐｐ／Ｗｏｏｄｓ法、Ｈｏｐｐ  ｅｔ  ａｌ．，（１９８１）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ  ＵＳＡ  ７８：３８２４−３８２８；を、抗原性プロファイルを判定するために、そしてＫｙｔｅ−Ｄｏｏｌｉｔｔｌｅ技術、Ｋｙｔｅ  ｅｔ  ａｌ．，（１９８２）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．  １５７：１０５−１３２を、疎水性プロットのために使用する。
【００９２】
さらに、エピトープ判定は、本開示の実施例８に記載される方法に従う質量分析によって実行され得る。
【００９３】
特に、本開示は、特定のエピトープに結合する抗体または抗体フラグメントに言及し、前記エピトープへの前記結合は、水素／重水素交換によって判定される。
【００９４】
一実施形態において、本開示は、表１のいずれかの抗体の、Ｋａｂａｔによって定義される６つのＣＤＲを含む抗体または抗体フラグメントに言及する。別の態様において、本開示は、表１の各抗体の、Ｋａｂａｔによって定義される６つのＣＤＲを含む、単離されたモノクローナル抗体またはそのフラグメントに関する。
【００９５】
ある実施形態において、本開示は、ＩＬ−１７Ｃに特異的な抗体または抗体フラグメントに言及し、前記抗体または前記抗体フラグメントは、ＩＬ−１７Ｃに、約１００ｎＭ未満、より好ましくは約６０ｎＭ未満、さらにより好ましくは約３０ｎＭ未満の親和性で結合することができる。さらに好ましいのは、約１０ｎＭ未満、より好ましくは約３ｎＭ未満の親和性でＩＬ−１７Ｃに結合する抗体または抗体フラグメントである。
【００９６】
ある実施形態において、本開示は、ＩＬ−１７Ｃに特異的な抗体または抗体フラグメントに言及し、前記抗体または前記抗体フラグメントは、ＩＬ−１７Ｃに、約１００ｎＭ未満、より好ましくは約６０ｎＭ未満、さらにより好ましくは約３０ｎＭ未満の一価親和性で結合することができる。さらに好ましいのは、約１０ｎＭ未満、より好ましくは約３ｎＭ未満の一価親和性でＩＬ−１７Ｃに結合する抗体または抗体フラグメントである。
【００９７】
別の実施形態において、本開示は、ＩＬ−１７Ｃに特異的な抗体または抗体フラグメントに言及し、前記抗体または前記抗体フラグメントは、ＩＬ−１７Ｃに対する二価親和性が、ＩＬ−１７Ｃに対する一価親和性よりも少なくとも２倍、少なくとも５倍、少なくとも１０倍、少なくとも１００倍、少なくとも１０００倍、少なくとも１００００倍、少なくとも１０００００倍高い。更なる実施形態において、前記抗体または前記抗体フラグメントの二価親和性は、ＩｇＧフォーマットで判定され、前記抗体または前記抗体フラグメントの一価親和性は、Ｆａｂフォーマットで判定される。
【００９８】
別の実施形態において、本開示は、ＩＬ−１７Ｃに特異的な抗体または抗体フラグメントに言及し、前記抗体または前記抗体フラグメントは、ＩＬ−１７Ｃに対する一価親和性を有し、解離速度定数（ＫＤ）が、５×１０−２Ｍ未満、１０−２Ｍ未満、５×１０−３Ｍ未満、１０−３Ｍ未満、５×１０−４Ｍ未満、１０−４Ｍ未満、５×１０−５Ｍ未満、１０−５Ｍ未満、５×１０−６Ｍ未満、１０−６Ｍ未満、５×１０−７Ｍ未満、１０−７Ｍ未満、５×１０−８Ｍ未満、１０−８Ｍ未満、５×１０−９Ｍ未満、１０−９Ｍ未満、５×１０−１０Ｍ未満、１０−１０Ｍ未満、５×１０−１１Ｍ未満、１０−１１Ｍ未満、５×１０−１２Ｍ未満、１０−１２Ｍ未満、５×１０−１３Ｍ未満、１０−１３Ｍ未満、５×１０−１４Ｍ未満、１０−１４Ｍ未満、５×１０−１５Ｍ未満、または１０−１５Ｍ未満であり、二価フォーマットの前記抗体または前記抗体フラグメントは、ＩＬ−１７Ｃに対する親和性を有し、解離速度定数（ＫＤ）が、一価フォーマットの解離速度定数（ＫＤ）よりも少なくとも２倍、５倍、１０倍、１００倍、１０００倍、１００００倍、１０００００倍低い。更なる実施形態において、前記抗体または前記抗体フラグメントの二価親和性は、ＩｇＧフォーマットで判定され、前記抗体または前記抗体フラグメントの一価親和性は、Ｆａｂフォーマットで判定される。
【００９９】
一実施形態において、本開示は、ＩＬ−１７Ｃホモダイマーに二価結合して、前記抗体または前記抗体フラグメントおよび１つのＩＬ−１７Ｃホモダイマーからなる複合体を形成する抗体または抗体フラグメントをコードする核酸配列または複数の核酸配列を含む核酸組成物に言及する。別の実施形態において、本開示は、ＩＬ−１７Ｃホモダイマーに二価結合して、前記抗体または前記抗体フラグメントおよび１つのＩＬ−１７Ｃホモダイマーからなる複合体を形成する抗体または抗体フラグメントをコードする前記核酸配列または前記複数の核酸配列を含むベクターまたは複数のベクターを含むベクター組成物に言及する。別の実施形態において、本開示は、前記ベクター組成物を含む細胞に言及する。更なる実施形態において、前記細胞は、細菌細胞または哺乳類細胞である。
【０１００】
一実施形態において、本開示は、ＩＬ−１７Ｃの不所望の存在と関連する障害または症状の処置のための、ＩＬ−１７Ｃに特異的な抗体または抗体フラグメントの使用に言及し、前記抗体または前記抗体フラグメントは、ＩＬ−１７Ｃホモダイマーに二価結合して、前記抗体または前記抗体フラグメントおよび１つのＩＬ−１７Ｃホモダイマーからなる複合体を形成する。別の実施形態において、ＩＬ−１７Ｃの不所望の存在と関連する前記症状は、炎症性障害または癌である。
【０１０１】
一実施形態において、本開示は、炎症性障害の処置のための、ＩＬ−１７Ｃに特異的な抗体または抗体フラグメントの使用に言及し、前記抗体または前記抗体フラグメントは、ＩＬ−１７Ｃホモダイマーに二価結合して、前記抗体または前記抗体フラグメントおよび１つのＩＬ−１７Ｃホモダイマーからなる複合体を形成する。他の態様において、本開示は、炎症性障害の処置のための、医薬の調製時の、ＩＬ−１７Ｃに特異的な抗体または抗体フラグメントの使用に言及する。更なる実施形態において、本開示は、対象における炎症性障害の処置方法であって、ＩＬ−１７Ｃホモダイマーに二価結合して、前記抗体または前記抗体フラグメントおよび１つのＩＬ−１７Ｃホモダイマーからなる複合体を形成する抗体または抗体フラグメントを含む医薬組成物を対象に投与することを含む処置方法に言及する。
【０１０２】
一実施形態において、本開示は、癌の処置のための、ＩＬ−１７Ｃに特異的な抗体または抗体フラグメントの使用に言及し、前記抗体または前記抗体フラグメントは、ＩＬ−１７Ｃホモダイマーに二価結合して、前記抗体または前記抗体フラグメントおよび１つのＩＬ−１７Ｃホモダイマーからなる複合体を形成する。他の態様において、本開示は、癌の処置のための、医薬の調製時の、ＩＬ−１７Ｃに特異的な抗体または抗体フラグメントの使用に言及する。更なる実施形態において、本開示は、対象における癌の処置方法であって、ＩＬ−１７Ｃホモダイマーに二価結合して、前記抗体または前記抗体フラグメントおよび１つのＩＬ−１７Ｃホモダイマーからなる複合体を形成する抗体または抗体フラグメントを含む医薬組成物を対象に投与することを含む方法に言及する。
【０１０３】
一実施形態において、本開示は、ＩＬ−１７Ｃに特異的な抗体または抗体フラグメントを含む組成物に言及し、前記抗体または前記抗体フラグメントは、ＩＬ−１７Ｃホモダイマーに二価結合して、前記抗体または前記抗体フラグメントおよび１つのＩＬ−１７Ｃホモダイマーからなる複合体を形成し、組成物はさらに、１つまたは複数の医薬的に許容可能なキャリアおよび／または希釈剤を含む。一実施形態において、前記組成物は、医薬組成物である。更なる実施形態において、前記組成物は、それを必要とする対象において、ＩＬ−１７Ｃに拮抗することができる。更なる実施形態において、前記組成物は、医薬組成物であり、それを必要とする対象において、ＩＬ−１７Ｃに拮抗することができる。
【０１０４】
更なる実施形態において、前記医薬組成物はさらに、１つまたは複数の医薬的に許容可能なキャリアおよび／または希釈剤を含む。
【０１０５】
別の実施形態において、本開示は、ＩＬ−１７Ｃの不所望の存在と関連する障害または症状の処置のための、前記医薬組成物の使用に言及する。別の実施形態において、ＩＬ−１７Ｃの不所望の存在と関連する前記症状は、炎症性障害または癌である。
【０１０６】
本開示の組成物は、好ましくは、炎症性障害または癌の処置のための、本明細書中に開示される、ＩＬ−１７Ｃに特異的な抗体または抗体フラグメント、および医薬的に許容可能なキャリア、希釈剤、または賦形剤を含む医薬組成物である。
【０１０７】
別の実施形態において、本開示は、対象における炎症性障害の予防方法に言及し、前記方法は、ＩＬ−１７Ｃアンタゴニストを前記対象に投与することを含む。本文脈において用いられる「予防」は、疾患の発症を予防することを意図し、または疾患の発症を遅延させる方法に言及する。
【０１０８】
更なる実施形態において、本開示は、炎症性障害の処置のための、ＩＬ−１７Ｃに特異的な、単離された抗体または単離された抗体フラグメントを含む組成物の使用に言及し、前記単離された抗体または前記単離された抗体フラグメントは、ＩＬ−１７Ｃホモダイマーに二価結合して、前記単離された抗体または前記単離された抗体フラグメントおよび１つのＩＬ−１７Ｃホモダイマーからなる複合体を形成する。他の態様において、本開示は、炎症性障害の処置のための、医薬の調製時の、ＩＬ−１７Ｃに特異的な抗体または抗体フラグメントの使用に言及する。更なる実施形態において、本開示は、対象における炎症性障害の処置方法であって、ＩＬ−１７Ｃホモダイマーに二価結合して、前記単離された抗体または前記単離された抗体フラグメントおよび１つのＩＬ−１７Ｃホモダイマーからなる複合体を形成する抗体または抗体フラグメントを含む医薬組成物を対象に投与することを含む方法に言及する。
【０１０９】
一部の実施形態において、前記対象は、ヒトである。代わりの態様において、前記対象は、齧歯類、例えばラットまたはマウスである。
【０１１０】
別の実施形態において、本開示は、癌の処置のための、ＩＬ−１７Ｃに特異的な、単離された抗体または単離された抗体フラグメントを含む組成物の使用に言及し、前記単離された抗体または前記単離された抗体フラグメントは、ＩＬ−１７Ｃホモダイマーに二価結合して、前記単離された抗体または前記単離された抗体フラグメントおよび１つのＩＬ−１７Ｃホモダイマーからなる複合体を形成する。更なる実施形態において、本開示は、癌の処置に用いられる、ＩＬ−１７Ｃに特異的な抗体または抗体フラグメントに言及する。別の実施形態において、本開示は、癌の処置のための、医薬の調製時の、ＩＬ−１７Ｃに特異的な抗体または抗体フラグメントの使用に言及する。別の実施形態において、本開示は、対象における癌の処置方法であって、ＩＬ−１７Ｃホモダイマーに二価結合して、前記抗体または前記抗体フラグメントおよび１つのＩＬ−１７Ｃホモダイマーからなる複合体を形成する抗体または抗体フラグメントを含む医薬組成物を対象に投与することを含む方法に言及する。
【０１１１】
一部の実施形態において、本開示の、ＩＬ−１７Ｃに特異的な抗体または抗体フラグメントは、皮下に投与される。他の態様において、本開示の、ＩＬ−１７Ｃに特異的な抗体または抗体フラグメントは、静脈内に、関節内に、または脊髄内に投与される。
【０１１２】
そのようなキャリア、希釈剤、および賦形剤は、当該技術において周知であり、当業者であれば、本開示のＩＬ−１７Ｃ抗体またはＩＬ−１７Ｃ抗体フラグメントにより対象を処置するのに最も適した製剤および投与経路を見出すであろう。
【０１１３】
一実施形態において、本開示は、表１のいずれかの抗体のＶＨおよびＶＬを含む、単離されたモノクローナル抗体またはそのフラグメントに関する。
【０１１４】
別の実施形態において、本開示は、単離されたモノクローナル抗体またはそのフラグメントをコードする核酸に言及し、当該核酸は、表１のいずれかの抗体のＶＨおよびＶＬを含む。
【０１１５】
一実施形態において、本開示は、本明細書中に開示される抗体または抗体フラグメントの生成、同定、または選択のための方法に関し、当該方法は、以下のステップを含む：
（ａ）ＩＬ−１７Ｃに特異的に結合する抗体または抗体フラグメントを同定するステップと；
（ｂ）抗原、およびステップ（ａ）において同定された抗体または抗体フラグメントを混合するステップと；
（ｃ）ステップ（ｂ）によって得られた混合物を、サイズ排除クロマトグラフィ（ＳＥＣ）にかけて、形成された複合体の分子量を判定するステップと、
（ｄ）前記単離された抗体または前記単離された抗体フラグメントおよび１つのＩＬ−１７Ｃホモダイマーからなる複合体を形成する抗体または抗体フラグメントを選択するステップ。
【０１１６】
別の実施形態において、本開示は、抗体または抗体フラグメントの生成、同定、または選択のための方法に関し、前記抗体または前記抗体フラグメントは、ＩＬ−１７Ｃホモダイマーに二価結合して、前記抗体または前記抗体フラグメントおよび１つのＩＬ−１７Ｃホモダイマーからなる複合体を形成し、当該方法は、以下のステップを含む：
（ａ）ＩＬ−１７Ｃに特異的に結合する抗体または抗体フラグメントを同定するステップと；
（ｂ）抗原、およびステップ（ａ）において同定された抗体または抗体フラグメントを混合するステップと；
（ｃ）ステップ（ｂ）によって得られた混合物を、サイズ排除クロマトグラフィ（ＳＥＣ）にかけて、形成された複合体の分子量を判定するステップと、
（ｄ）前記単離された抗体または前記単離された抗体フラグメントおよび１つのＩＬ−１７Ｃホモダイマーからなる複合体を形成する抗体または抗体フラグメントを選択するステップ。
【０１１７】
開示された方法の別の実施形態において、ステップ（ｂ）における前記抗原および前記抗体または前記抗体フラグメントは、等モル量で混合される。
【０１１８】
更なる実施形態において、開示された方法のステップ（ｄ）は、前記抗体または前記抗体フラグメントおよび１つのＩＬ−１７Ｃホモダイマーからなる複合体を形成する抗体または抗体フラグメントを選択し、前記複合体は、分子量が２００ｋＤａ未満である。より詳細には、ステップ（ｄ）は、ＩＬ−１７Ｃホモダイマーと複合体を形成する抗体または抗体フラグメントを選択し、形成された前記複合体の少なくとも５０％は、分子量が２００ｋＤａ未満である。更なる実施形態において、ステップ（ｄ）は、ＩＬ−１７Ｃホモダイマーと複合体を形成する抗体または抗体フラグメントを選択するステップを含み、形成された前記複合体の少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、または少なくとも９５％は、分子量が２００ｋＤａ未満である。
【０１１９】
別の実施形態において、本開示は、ＩＬ−１７Ｃホモダイマーに二価結合する能力がある抗体または抗体フラグメントに言及する。別の態様において、抗体または抗体フラグメントは、ＩＬ−１７Ｃホモダイマーに二価結合して、前記抗体または前記抗体フラグメントおよび１つのＩＬ−１７Ｃホモダイマーからなる複合体を形成する能力がある。
【０１２０】
操作かつ修飾された抗体
本開示の抗体または抗体フラグメントは、修飾された抗体または抗体フラグメントであってよい。本開示の一実施形態において、修飾された抗体または抗体フラグメントは、表１に示される抗体に由来する。これにより、表１に示される抗体は、修飾抗体を操作するための開始材料として用いられ得る。
【０１２１】
抗体は、一方または双方の可変領域（すなわち、ＶＨおよび／またはＶＬ）内の、例えば、１つもしくは複数のＣＤＲ領域内の、かつ／または１つもしくは複数のフレームワーク領域内の１つまたは複数の残基を修飾することによって、操作され得る。加えて、または代わりに、抗体は、定常領域内の残基を修飾することによって、例えば抗体のエフェクタ機能を変えるように、操作され得る。
【０１２２】
抗体を操作または修飾することによって、親クローンの変異体の向上が達成され得る。一方、例えば親和性を向上させ、免疫原性を引き下げ、そして抗体のエフェクタ機能を増大させるための種々の技術が、当該技術において確立されている。
【０１２３】
抗体は主に、６つの重鎖および軽鎖の相補性決定領域（ＣＤＲ）内に位置決めされるアミノ酸残基を介して、標的抗原と相互作用する。ゆえに、親和性成熟は、抗体の結合特性を変えるような特定のＣＤＲの修飾を含む。親和性成熟は、超可変領域内の部位特異的突然変異誘発を含み、アミノ酸の置換、付加、または欠失を含み得る。別のタイプの親和性成熟は、各ＣＤＲのライブラリによる、特定の抗体内の特定のＣＤＲの完全な置換を含む。そこで直ちに、修飾抗体は、標準的な抗原結合アッセイ（例えばＥＬＩＳＡ、ＦＡＣＳ、ＢｉａＣｏｒｅ、ＳＥＴ分析）で、各抗原に対する親和性の向上について分析されてよい（例えば、Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９８）Ｎａｔｕｒｅ  ３３２：３２３−３２７；Ｊｏｎｅｓ  ｅｔ  ａｌ．，（１９８６）Ｎａｔｕｒｅ  ３２１：５２２−５２５；Ｑｕｅｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，（１９８９）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．，Ｕ．Ｓ．Ａ．  ８６：１００２９−１００３３；Ｗｉｎｔｅｒの米国特許第５２２５５３９号明細書、ならびにＱｕｅｅｎ  ｅｔ  ａｌ．の米国特許第５５３０１０１号明細書；米国特許第５５８５０８９号明細書；米国特許第５６９３７６２号明細書および米国特許第６１８０３７０号明細書参照）。
【０１２４】
ＣＤＲ配列がほとんどの抗体−抗原相互作用に関わっているので、異なる特性を有する異なる抗体由来のフレームワーク配列上に融合された、特定の、天然に存在する抗体由来のＣＤＲ配列を含む発現ベクターを構築することによって、特定の、天然に存在する抗体の特性を模倣する組換え抗体を発現することが可能である。そのようなフレームワーク配列は、生殖細胞系の抗体遺伝子配列を含む公開のＤＮＡデータベースまたは公開されている参考文献から得られ得る。例えば、ヒトの重鎖および軽鎖の可変領域遺伝子の生殖細胞系ＤＮＡ配列は、「Ｖａｓｅ」ヒト生殖細胞系配列データベース（インターネット上でｗｗｗ．ｍｒｃ−ｃｐｅ．ｃａｍ．ａｃ．ｕｋ／ｖｂａｓｅにて入手可能）において、そしてＫａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９１）Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，Ｆｉｆｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｕ．Ｓ．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ  ａｎｄ  Ｈｕｍａｎ  Ｓｅｒｖｉｃｅｓ，ＮＩＨ  Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ  Ｎｏ．９１−３２４２；Ｃｈｏｔｈｉａ  ｅｔ  ａｌ．，（１９８７）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．  １９６：９０１−９１７；Ｃｈｏｔｈｉａ  ｅｔ  ａｌ．，（１９８９）Ｎａｔｕｒｅ  ３４２：８７７−８８３；Ａｌ−Ｌａｚｉｋａｎｉ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９７）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２７３：９２７−９４８；Ｔｏｍｌｉｎｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９２）Ｊ．ｆｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２７：７７６−７９８；およびＣｏｘ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９４）Ｅｕｒ．Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．２４：８２７−８３６において見出され得る；それぞれの内容は、参照によって本明細書中に明確に組み込まれる。
【０１２５】
二重特異的分子および多価抗体
別の態様において、本開示は、ＩＬ−１７Ｃに特異的な抗原結合部位を含む二重パラトープ的な、二重特異的な、または多特異的な（ｍｕｌｔｉｓｐｅｃｉｆｉｃ  ｏｒ  ｐｏｌｙｓｐｅｃｉｆｉｃ）分子を特徴とする。
【０１２６】
別の態様において、二重特異的な抗原結合分子は、二重特異的ｓｃＦｖ、四価の二重特異的抗体、架橋Ｆａｂ、または二重特異的ＩｇＧからなる群から選択される。
【０１２７】
別の態様において、本開示は、ＩＬ−１７Ｃ特異的抗体に由来する少なくとも２つの抗原結合部位を含む多価化合物を提供する。別の態様において、前記抗原結合部位は、タンパク質融合、または共有結合もしくは非共有結合を介して相互に結合し得る。
【０１２８】
四価化合物は、例えば、本開示の抗体を、本開示の抗体の定常領域、例えばＦｃまたはヒンジ領域に結合する抗体と架橋結合させることによって、得られ得る。三量体化ドメインは、例えば、Ｂｏｒｅａｎの欧州特許第１０１２２８０Ｂ１号明細書に記載されている。五量体化モジュールは、例えば、国際出願ＰＣＴ／ＥＰ９７／０５８９７号明細書に記載されている。
【０１２９】
本開示の抗体、またはその抗原結合領域は、少なくとも２つの異なる結合部位または標的分子に結合する二重特異的分子を生成するために、別の機能分子、例えば、別のペプチドまたはタンパク質（例えば、別の抗体、または受容体に対するリガンド）に結合してよい。
【０１３０】
本開示の二重特異的分子を生成するために、抗体は、１つまたは複数の他の結合分子、例えば別の抗体、抗体フラグメント、ペプチド、または結合模擬物に（例えば、化学的カップリング、遺伝的融合、非共有結合、またはそれ以外によって）機能的に結合して、二重特異的分子が生じ得る。
【０１３１】
本開示の二重特異的分子は、当該技術において知られている方法を用いて、結合特異性を有する構成成分を結合させることによって、調製され得る。例えば、それぞれ結合特異性を有する二重特異的分子が、別々に生じてから、互いに結合し得る。結合特異性がタンパク質またはペプチドにある場合、種々のカップリング剤または交差結合剤が、共有結合に用いられ得る。架橋結合剤の例として、プロテインＡ、カルボジイミド、Ｎ−スクシンイミジル−Ｓ−アセチル−チオアセテート（ＳＡＴＡ）、５，５’−ジチオビス（２−ニトロ安息香酸）（ＤＴＮＢ）、ｏ−フェニレンジマレイミド（ｏＰＤＭ）、Ｎ−スクシンイミジル−３−（２−ピリジルジチオ）プロピオネート（ＳＰＤＰ）、およびスルホスクシンイミジル４−（Ｎ−マレイミドメチル）シクロヘキサン−１−カルボキシレート（ｓｕｌｆｏ−ＳＭＣＣ）が挙げられる（例えば、Ｋａｒｐｏｖｓｋｙ  ｅｔ  ａｌ．，（１９８４）Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１６０：１６８６；Ｌｉｕ  ｅｔ  ａｌ．（１９８５）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８２：８６４８参照）。他の方法として、Ｐａｕｌｕｓ（１９８５）Ｂｅｈｒｉｎｇ  Ｉｎｓ．Ｍｉｔｔ．Ｎｏ．７８：１１８−１３２；Ｂｒｅｎｎａｎ  ｅｔ  ａｌ．，（１９８５）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２２９：８１−８３）、およびＧｌｅｎｎｉｅ  ｅｔ  ａｌ．，（１９８７）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３９：２３６７−２３７５）に記載されるものが挙げられる。結合剤は、ＳＡＴＡおよびｓｕｌｆｏ−ＳＭＣＣであり、双方ともＰｉｅｒｃｅ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏ．（Ｒｏｃｋｆｏｒｄ，ＩＬ）から入手可能である。
【０１３２】
結合特異性が抗体にある場合、これらは、２つの重鎖のＣ末端ヒンジ領域のスルフヒドリル結合によって結合し得る。特定の実施形態において、ヒンジ領域は、結合前に、奇数、例えば１つのスルフヒドリル残基を含有するように修飾される。
【０１３３】
これ以外にも、双方の結合特異性は、同じベクター内にコードされて、同じ宿主細胞内で発現され、かつ組み立てられ得る。この方法は、二重特異的分子がｍＡｂ×ｍＡｂ、ｍＡｂ×Ｆａｂ、Ｆａｂ×Ｆ（ａｂ’）２、またはリガンド×Ｆａｂの融合タンパク質である場合に、特に有用である。本開示の二重特異的分子は、１つの単鎖抗体および結合決定因子を含む単鎖分子であってもよいし、２つの結合決定因子を含む単鎖二重特異的分子であってもよい。二重特異的分子は、少なくとも２つの単鎖分子を含んでよい。二重特異的分子を調製する方法は、例えば、米国特許第５２６０２０３号明細書；米国特許第５４５５０３０号明細書；米国特許第４８８１１７５号明細書；米国特許第５１３２４０５号明細書；米国特許第５０９１５１３号明細書；米国特許第５４７６７８６号明細書；米国特許第５０１３６５３号明細書；米国特許第５２５８４９８号明細書；および米国特許第５４８２８５８号明細書に記載されている。
【０１３４】
更なる臨床的利益が、２つ以上の抗原の、一抗体内での結合によって与えられ得る（Ｍｏｒｒｉｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９７）Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈ．１５：１５９−１６３；Ａｌｔ  ｅｔ  ａｌ．（１９９９）ＦＥＢＳ  Ｌｅｔｔｅｒｓ  ４５４：９０−９４；Ｚｕｏ  ｅｔ  ａｌ．，（２０００）Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ  １３：３６１−３６７；Ｌｕ  ｅｔ  ａｌ．，（２００４）ＪＢＣ  ２７９：２８５６−２８６５；Ｌｕ  ｅｔ  ａｌ．，（２００５）ＪＢＣ  ２８０：１９６６５−１９６７２；Ｍａｒｖｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，（２００５）Ａｃｔａ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａ  Ｓｉｎｉｃａ  ２６：６４９−６５８；Ｍａｒｖｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，（２００６）Ｃｕｒｒ  Ｏｐｉｎ  Ｄｒｕｇ  Ｄｉｓｃ  Ｄｅｖｅｌｏｐ  ９：１８４−１９３；Ｓｈｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，（２００７）Ｊ  Ｉｍｍｕｎ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ２１８：６５−７４；Ｗｕ  ｅｔ  ａｌ．，（２００７）Ｎａｔ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．１１：１２９０−１２９７；Ｄｉｍａｓｉ  ｅｔ  ａｌ．，（２００９）Ｊ  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ．３９３：６７２−６９２；およびＭｉｃｈａｅｌｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，（２００９）ｍＡｂｓ  １：１２８−１４１）。
【０１３５】
二重特異的分子、または交差反応性分子の、特定の標的への結合は、例えば、酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）、放射免疫アッセイ（ＲＥＡ）、ＦＡＣＳ分析、バイオアッセイ（例えば増殖阻害）、またはウェスタンブロットアッセイによって確認され得る。これらのアッセイはそれぞれ、一般に、注目する複合体に特異的な標識試薬（例えば抗体）を使用することによって、特に注目する抗原−抗体複合体の存在を検出する。
【０１３６】
スカフォールド
「抗原−結合部位」を含む他の抗体／免疫グロブリンフレームワークまたはスカフォールドが、本開示に則して使用され得る。これとして、本開示のＣＤＲが融合し得る非免疫グロブリンベースの抗体およびスカフォールドが挙げられる。
【０１３７】
フィブロネクチンスカフォールドは、フィブロネクチンＩＩＩ型ドメイン（例えば、フィブロネクチンＩＩＩ型（１０個のＦｎ３ドメイン）の第１０のモジュール）に基づく。フィブロネクチンＩＩＩ型ドメインは、７つまたは８つのベータ鎖が２つのβシートの間に分配されており、それら自身は互いに対してパックされてタンパク質のコアを形成し、さらにループ（ＣＤＲに類似）を含有し、これがベータ鎖を互いに連結して、溶媒曝露される。ベータシートサンドイッチの各エッジに少なくとも３つのそのようなループが存在し、エッジは、ベータ鎖の方向に直角をなすタンパク質の境界である（米国特許第６８１８４１８号明細書参照）。これらのフィブロネクチンベースのスカフォールドは、免疫グロブリンではない。しかし、折畳みの全体は、最も小さな機能抗体フラグメントの折畳み、重鎖の可変領域に密接に関係し、これはラクダＩｇＧおよびラマＩｇＧにおける完全な抗原認識単位を含む。この構造のため、非免疫グロブリン抗体は、抗体の抗原結合特性と事実上同様である抗原結合特性、および抗体の抗原結合特性への親和性を模倣する。これらのスカフォールドは、ループランダム化、および抗体のインビボ親和性成熟のプロセスに類似するインビトロシャッフリング戦略に用いられ得る。これらのフィブロネクチンベースの分子は、分子のループ領域が、標準的なクローニング技術を用いて本開示のＣＤＲと置換され得るスカフォールドとして用いられ得る。
【０１３８】
新大陸のメンバー、例えばラマ種（アルパカ（Ｌａｍａ  ｐａｃｃｏｓ）、ラマ（Ｌａｍａ  ｇｌａｍａ）、およびビクーニャ（Ｌａｍａ  ｖｉｃｕｇｎａ））を含むラクダ（ｃａｍｅｌ）およびヒトコブラクダ（ｄｒｏｍｅｄａｒｙ）（フタコブラクダ（Ｃａｍｅｌｕｓ  ｂａｃｔｒｉａｎｕｓ）およびヒトコブラクダ（Ｃａｌｅｌｕｓ  ｄｒｏｍａｄｅｒｉｕｓ））ファミリのメンバーから得られるラクダ科抗体タンパク質が、ヒト対象について、サイズ、構造の複雑性、および抗原性に関して特徴付けられた。自然界で見出される哺乳類のこの科由来のあるＩｇＧ抗体は、軽鎖を欠いているので、他の動物由来の、抗体が２つの重鎖および２つの軽鎖を有する典型的な４つの鎖の四次構造とは、構造的に異なっている。国際公開第１９９４／０４６７８号パンフレット参照。
【０１３９】
アンキリン技術は、様々な標的への結合に用いられ得る、可変領域をもたらすスカフォールドとしての、アンキリン由来繰返しモジュールを有するタンパク質の使用に基づく。アンキリン繰返しモジュールは、２つの逆平行αヘリックスおよびβターンからなる３３個のアミノ酸ポリペプチドである。可変領域の結合は、ほとんどの場合、リボソームディスプレイを用いて最適化される。
【０１４０】
アビマーは、天然のＡ−ドメインに由来する。当該ドメインは、タンパク質−タンパク質相互作用に生来用いられており、ヒトにおいて、２５０を超えるタンパク質は構造的に、Ａドメインに基づく。アビマーは、アミノ酸リンカーを介して結合されるいくつかの異なる「Ａドメイン」モノマー（２〜１０）からなる。例えば、米国特許出願公開第２００４／０１７５７５６号明細書；米国特許出願公開第２００５／００５３９７３号明細書；米国特許出願公開第２００５／００４８５１２号明細書；および米国特許出願公開第２００６／０００８８４４号明細書に記載される方法論を用いて、標的抗原に結合することができるアビマーを生成することができる。
【０１４１】
アフィボディ親和性リガンドは、プロテインＡのＩｇＧ結合ドメインの１つのスカフォールドに基づく３つのヘリックスバンドルで構成される小さな、単純なタンパク質である。プロテインＡは、黄色ブドウ球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ）由来の表面タンパク質である。このスカフォールドドメインは、５８個のアミノ酸からなり、このうち１３個が無作為化されて、多数のリガンド変異体とアフィボディライブラリが生成される（例えば、米国特許第５８３１０１２号明細書参照）。アフィボディ分子模倣体抗体；分子量は、１５０ｋＤａである抗体の分子量に対して、６ｋＤａである。その小さなサイズにも拘らず、アフィボディ分子の結合部位は、抗体の結合部位に類似している。
【０１４２】
アンチカリンは、Ｐｉｅｒｉｓ  ＰｒｏｔｅｏＬａｂ  ＡＧ社によって開発された製品である。これは、リポカリンに由来し、化学的に影響され易い、または不溶性の化合物の生理学的輸送または貯蔵に通常関与する、小さな、かつロバストなタンパク質の広範囲にわたるグループである。いくつかの天然のリポカリンは、ヒトの組織または体液中に存在する。タンパク質構造は、剛性のフレームワークの上部に超可変ループを有する免疫グロブリンを思い出させる。しかしながら、抗体またはその組換えフラグメントと対照的に、リポカリンは、単一の免疫グロブリンドメインよりも僅かに大きいだけである、１６０〜１８０個のアミノ酸残基を有する単ポリペプチド鎖で構成される。結合ポケットを構成する４つのループのセットは、顕著な構造的可塑性を示し、かつ種々の側鎖を許容する。ゆえに、結合部位は、独自のプロセスにおいて再構築されて、親和性および特異性が高い、異なる形状の規定された標的分子を認識することができる。リポカリンファミリの一タンパク質、オオモンシロチョウ（Ｐｉｅｒｉｓ  Ｂｒａｓｓｉｃａｅ）のビリン−結合タンパク質（ＢＢＰ）が用いられて、４つのループのセットに突然変異を起こさせることによって、アンチカリンが開発された。アンチカリンを記載する特許出願の一例が、ＰＣＴ公報国際公開第１９９９／１６８７３号パンフレットにある。
【０１４３】
アフィリン分子は、タンパク質および小分子に対する特異的な親和性について設計される、小さな非免疫グロブリンタンパク質である。新しいアフィリン分子は、２つのライブラリから非常に迅速に選択され得、それらはそれぞれ、ヒト由来の異なるスカフォールドタンパク質に基づく。アフィリン分子は、免疫グロブリンタンパク質に対して少しの構造相同性も示さない。現在では、２つのアフィリンスカフォールドが使用されており、一方が、ヒトの構造的な眼水晶体タンパク質、ガンマクリスタリンであり、他方が、「ユビキチン」スーパーファミリタンパク質である。ヒトスカフォールドは双方とも、非常に小さく、高い温度安定性を示し、かつｐＨ変化および変性剤に対してほぼ耐性である。この高い安定性は主に、タンパク質の拡張ベータシート構造に起因する。ガンマクリスタリン由来タンパク質の例が、国際公開第２００１／０４１４４号パンフレットに記載されており、「ユビキチン様」タンパク質の例が、国際公開第２００４／１０６３６８号パンフレットに記載されている。
【０１４４】
タンパク質エピトープ模擬物（ＰＥＭ）は、タンパク質のベータヘアピン二次構造を模倣する中サイズの、環状の、ペプチド様の分子（ＭＷ１〜２ｋＤａ）であり、主要な二次構造がタンパク質−タンパク質相互作用に関与する。
【０１４５】
抗体の生成
（ｉ）抗体をコードする核酸
本開示は、先に記載される抗体鎖のセグメントまたはドメインを含むポリペプチドをコードする、実質的に精製された核酸分子を提供する。特定の実施形態において、核酸分子は、表１において同定される核酸分子である。本開示の一部の他の核酸分子は、表１において同定される核酸分子のヌクレオチド配列と実質的に（例えば、少なくとも６５、８０％、８５％、９０％、９５％、または９９％）同一であるヌクレオチド配列を含む。先に言及される核酸の、従来の、かつ適切な発現ベクター中へのサブクローニング、および適切な発現系における前記発現ベクターの発現は、ＩＬ−１７Ｃに特異的に結合するこれらのポリヌクレオチドによってコードされるポリペプチドを生じさせる。
【０１４６】
また、本開示において提供されるのは、先に示される抗体の重鎖または軽鎖由来の少なくとも１つのＣＤＲ領域、通常３つ全てのＣＤＲ領域をコードするポリヌクレオチドである。一部の他のポリヌクレオチドは、先に示される抗体の重鎖および／または軽鎖の可変領域配列の全てまたは実質的に全てをコードする。組成物が遺伝コードを構成するため、種々の核酸配列が、各免疫グロブリンアミノ酸配列をコードすることとなる。
【０１４７】
ポリヌクレオチド配列は、ＩＬ−１７Ｃまたはその結合フラグメントに特異的な抗体をコードする既存の配列（例えば、以下の実施例に記載される配列）の新規の固相ＤＮＡ合成によって、またはＰＣＲ突然変異誘発によって、生産され得る。核酸の直接的化学合成は、当該技術において知られている方法、例えばＮａｒａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，（１９７９）Ｍｅｔｈ．Ｅｎｚｙｍｏｌ．６８：９０のホスホトリエステル法；Ｂｒｏｗｎ  ｅｔ  ａｌ．，（１９７９）Ｍｅｔｈ．Ｅｎｚｙｍｏｌ．  ６８：１０９のリン酸ジエステル法；Ｂｅａｕｃａｇｅ  ｅｔ  ａｌ．，（１９８１）Ｔｅｔｒａ．Ｌｅｔｔ．，２２：１８５９のジエチルホスホロアミデート法；および米国特許第４４５８０６６号明細書の固体支持体法によって達成され得る。ＰＣＲによるポリヌクレオチド配列への突然変異の導入は、例えば、ＰＣＲ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ：Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ  ａｎｄ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ  ｆｏｒ  ＤＮＡ  Ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ，Ｈ．Ａ．Ｅｒｌｉｃｈ（Ｅｄ．），Ｆｒｅｅｍａｎ  Ｐｒｅｓｓ，ＮＹ，ＮＹ，１９９２；ＰＣＲ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ：Ａ  Ｇｕｉｄｅ  ｔｏ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ａｎｄ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ，Ｉｎｎｉｓ  ｅｔ  ａｌ．（Ｅｄ．），Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ，１９９０；Ｍａｔｔｉｌａ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９１）Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．１９：９６７；およびＥｃｋｅｒｔ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９１）ＰＣＲ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ａｎｄ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ  １：１７に記載されるように実行され得る。
【０１４８】
また、本開示において提供されるのは、先に記載される抗体または抗体フラグメントを産生する発現ベクターおよび宿主細胞である。種々の発現ベクターが、ＩＬ−１７Ｃ特異的抗体鎖または結合フラグメントをコードするポリヌクレオチドを発現するために使用され得る。ウイルスベースの発現ベクターおよび非ウイルス発現ベクターの双方が、哺乳類の宿主細胞において抗体を産生するのに用いられ得る。非ウイルスベクターおよび非ウイルス系として、典型的にはタンパク質またはＲＮＡを発現する発現カセットを有するプラスミド、エピソームベクター、およびヒト人工染色体（例えば、Ｈａｒｒｉｎｇｔｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９７）Ｎａｔ  Ｇｅｎｅｔ  １５：３４５参照）が挙げられる。例えば、哺乳類（例えばヒト）細胞におけるポリヌクレオチドおよびポリペプチドの発現に有用な非ウイルスベクターとして、ｐＴｈｉｏＨｉｓ  Ａ，Ｂ＆Ｃ、ｐｃＤＮＡ３．１／Ｈｉｓ、ｐＥＢＶＨｉｓ  Ａ，Ｂ＆Ｃ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）、ＭＰＳＶベクター、および他のタンパク質を発現する、当該技術において知られている他の多数のベクターが挙げられる。有用なウイルスベクターは、レトロウイルス、アデノウイルス、アデノ随伴ウイルス、ヘルペスウイルス、ＳＶ４０、乳頭腫ウイルス、ＨＢＰ  Ｅｐｓｔｅｉｎ  Ｂａｒｒウイルス、ワクシニアウイルス、およびＳｅｍｌｉｋｉ  Ｆｏｒｅｓｔウイルス（ＳＦＶ）に基づくベクターが挙げられる。Ｂｒｅｎｔ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９５）Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．４９：８０７；およびＲｏｓｅｎｆｅｌｄ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９２）Ｃｅｌｌ  ６８：１４３参照。
【０１４９】
発現ベクターの選択は、ベクターが発現されることになる、意図された宿主細胞によって決まる。典型的には、発現ベクターは、抗体鎖またはフラグメントをコードするポリヌクレオチドに機能可能に連結するプロモータおよび他の調節配列（例えばエンハンサ）を含有する。一部の実施形態において、誘導条件下以外では、挿入された配列の発現を防止する誘導プロモータが使用される。誘導プロモータとして、例えば、アラビノース、ｌａｃＺ、メタロチオネインプロモータ、またはヒートショックプロモータが挙げられる。形質転換された生体の培養体は、発現産物が宿主細胞によってより都合よく許容される配列をコードするように集団にバイアスをかけることなく、非誘導条件下で拡張され得る。プロモータに加えて、他の調節要素が、抗体鎖またはフラグメントの効率的な発現のために必要とされてもよいし、所望されてもよい。当該要素は典型的に、ＡＴＧ開始コドンおよび隣接するリボソーム結合部位または他の配列を含む。また、発現効率は、使用される細胞系に適したエンハンサの包含によって、増強され得る（例えば、Ｓｃｈａｒｆ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９４）Ｒｅｓｕｌｔｓ  Ｐｒｏｂｌ．Ｃｅｌｌ  Ｄｉｆｆｅｒ．２０：１２５；およびＢｉｔｔｎｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，（１９８７）Ｍｅｔｈ．Ｅｎｚｙｍｏｌ．，１５３：５１６参照）。例えば、ＳＶ４０エンハンサまたはＣＭＶエンハンサが、哺乳類宿主細胞における発現を増大させるのに用いられてよい。
【０１５０】
発現ベクターはまた、挿入された抗体配列によってコードされるポリペプチドとの融合タンパク質を形成するような分泌シグナル配列位置を提供してよい。より多くの場合、挿入された抗体配列は、ベクター内の包含前に、シグナル配列に連結される。抗体の軽鎖および重鎖の可変ドメインをコードする配列を受け入れるのに用いられることになるベクターはまた、定常領域またはその一部をコードしてもよい。そのようなベクターは、定常領域との融合タンパク質としての、可変領域の発現を可能にし、これによって無傷の抗体または抗体フラグメントが産生される。典型的には、そのような定常領域は、ヒトのものである。
【０１５１】
抗体鎖を収容し、かつ発現する宿主細胞は、原核生物であっても真核生物であってもよい。大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）は、本開示のポリヌクレオチドのクローニングおよび発現に有用である原核生物宿主の一つである。使用に適した他の微生物宿主として、桿菌、例えば枯草菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｕｂｔｉｌｉｓ）および他のエンテロバクター科、例えばサルモネラ（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ）属、セラチア（Ｓｅｒｒａｔｉａ）属、および種々のシュードモナス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）属の種が挙げられる。これらの原核生物宿主において、当業者は、発現ベクターを作製することもでき、これは典型的に、宿主細胞に適合する発現制御配列（例えば複製起源）を含有する。また、種々の周知の多くのプロモータが存在するであろう。例えば、ラクトースプロモータ系、トリプトファン（ｔｒｐ）プロモータ系、ベータラクタマーゼプロモータ系、またはファージラムダ由来のプロモータ系がある。プロモータは典型的に、場合によってはオペレータ配列により、発現を制御し、そして、転写および翻訳を開始かつ完了するためのリボソーム結合部位配列等を有する。他の微生物、例えば酵母もまた、本開示のポリペプチドを発現するのに使用され得る。昆虫細胞が、バキュロウイルスベクターと組み合わせて用いられてもよい。
【０１５２】
一部の好ましい実施形態において、哺乳類宿主細胞が、本開示の、ＩＬ−１７Ｃに特異的な抗体または抗体フラグメントを発現かつ生成するのに用いられる。例えばこれは、内在性免疫グロブリン遺伝子を発現するハイブリドーマ細胞株であってよい。好ましくは、外来性発現ベクターを収容する哺乳類細胞株が用いられ、動物またはヒトのあらゆる正常な致死細胞、または正常もしくは異常な不死細胞（例えば、ＳＰ２／０骨髄腫細胞、ＣＨＯ細胞、ＨｅＬａ細胞、ＰＥＲ．０６細胞、ＣＯＳ細胞、ＨＫＢ１１細胞、ＮＳ０細胞）が挙げられる。例えば、無傷の免疫グロブリンを分泌することができる、ＣＨＯ細胞株、種々のＣｏｓ細胞株、ＨｅＬａ細胞、骨髄腫細胞株、形質転換されたＢ細胞、およびハイブリドーマが挙げられるいくつかの適切な宿主細胞株が開発されている。ポリペプチドを発現するための哺乳類組織細胞培養の使用が、例えば、Ｗｉｎｎａｃｋｅｒ，ＦＲＯＭ  ＧＥＮＥＳ  ＴＯ  ＣＬＯＮＥＳ，ＶＣＨ  Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ，Ｎ．Ｙ．，Ｎ．Ｙ．，１９８７において一般に考察されている。哺乳類宿主細胞用の発現ベクターは、発現制御配列、例えば複製起源、プロモータ、およびエンハンサ（例えば、Ｑｕｅｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，（１９８６）Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｒｅｖ．  ８９：４９−６８参照）、ならびに必要なプロセシング情報部位、例えばリボソーム結合部位、ＲＮＡスプライス部位、ポリアデニル化部位、および転写ターミネータ配列を含み得る。これらの発現ベクターは、通常、哺乳類の遺伝子に、または哺乳類のウイルスに由来するプロモータを含有する。適切なプロモータは、構成的であり、細胞型特異的であり、時期特異的であり、かつ／または変調可能もしくは調節可能であり得る。有用なプロモータとして、メタロチオネインプロモータ、構成的アデノウイルス主要後期プロモータ、デキサメタゾン誘導可能ＭＭＴＶプロモータ、ＳＶ４０プロモータ、ＭＲＰ  ｐｏｌ  ＩＩＩプロモータ、構成的ＭＰＳＶプロモータ、テトラサイクリン誘導可能ＣＭＶプロモータ（例えばヒト最初期ＣＭＶプロモータ）、構成的ＣＭＶプロモータ、および当該技術において知られているプロモータ−エンハンサの組合せが挙げられるが、これらに限定されない。
【０１５３】
注目するポリヌクレオチド配列を含有する発現ベクターを導入する方法は、細胞宿主型に応じて変わる。例えば、塩化カルシウムトランスフェクションは一般的に、原核生物細胞に利用されるが、リン酸カルシウム処置またはエレクトロポーレーションは、他の細胞宿主に用いられ得る（一般に、前掲のＳａｍｂｒｏｏｋ，ｅｔ  ａｌ．参照）。他の方法として、例えば、エレクトロポーレーション、リン酸カルシウム処理、リポソーム媒介形質転換、インジェクションおよびマイクロインジェクション、弾道法、ウイロゾーム、免疫リポソーム、ポリカチオン核酸結合体、裸ＤＮＡ、人工ビリオン、ヘルペスウイルス構造タンパク質ＶＰ２２への融合（Ｅｌｌｉｏｔ  ａｎｄ  Ｏ’Ｈａｒｅ，（１９９７）Ｃｅｌｌ  ８８：２２３）、剤増強ＤＮＡ吸収、ならびにエキソビボ形質導入が挙げられる。組換えタンパク質の長期の、高収率産生のために、安定した発現が多くの場合所望されることとなる。
【０１５４】
（ｉｉ）モノクローナル抗体の生成
モノクローナル抗体（ｍＡｂ）は、従来のモノクローナル抗体の方法論が挙げられる種々の技術、例えばＫｏｈｌｅｒ  ａｎｄ  Ｍｉｌｓｔｅｉｎ，（１９７５）Ｎａｔｕｒｅ  ２５６：４９５の標準的な体細胞ハイブリダイゼーション技術によって生産され得る。モノクローナル抗体を生産する多くの技術、例えば、Ｂ−リンパ球のウイルス性形質転換または発癌性形質転換が使用され得る。
【０１５５】
ハイブリドーマを調製するための動物系は、マウス系である。マウスにおけるハイブリドーマ生産は、確立した手順である。融合用の免疫化脾細胞の単離のための免疫化プロトコルおよび免疫化技術が、当該技術において知られている。融合パートナー（例えばマウス骨髄腫細胞）および融合手順もまた知られている。
【０１５６】
本開示のキメラ抗体またはヒト化抗体は、先に記載されるように調製されたマウスのモノクローナル抗体の配列に基づいて調製され得る。重鎖および軽鎖の免疫グロブリンをコードするＤＮＡは、標準的な分子生物学技術を用いて、注目するマウスハイブリドーマから得られ得、そして非マウス（例えばヒト）免疫グロブリン配列を含有するように操作され得る。例えば、キメラ抗体を生成するために、マウス可変領域は、当該技術において知られている方法（例えば、Ｃａｂｉｌｌｙ  ｅｔ  ａｌ．の米国特許第４８１６５６７号明細書参照）を用いて、ヒト定常領域に結合され得る。ヒト化抗体を生成するために、マウスＣＤＲ領域は、当該技術において知られている方法を用いて、ヒトフレームワーク中に挿入され得る。例えば、Ｗｉｎｔｅｒ  ｅｔ  ａｌ．の米国特許第５２２５５３９号明細書、ならびにＱｕｅｅｎ  ｅｔ  ａｌ．の米国特許第５５３０１０１号明細書；米国特許第５５８５０８９号明細書；米国特許第５６９３７６２号明細書および米国特許第６１８０３７０号明細書参照。
【０１５７】
ある実施形態において、本開示の抗体は、ヒトモノクローナル抗体である。そのようなヒトモノクローナル抗体は、マウス系ではなくヒト免疫系の一部を保持する遺伝子導入マウスまたはトランスクロモソミックマウスを用いて、生成され得る。これらの遺伝子導入マウスおよびトランスクロモソミックマウスは、本明細書中でそれぞれＨｕＭＡｂマウスおよびＫＭマウスと呼ぶマウスを含み、そして一括して本明細書中で「ヒトＩｇマウス」と呼ぶ。
【０１５８】
ＨｕＭＡｂマウス（登録商標）（Ｍｅｄａｒｅｘ，Ｉｎｃ．）は、非再配列ヒト重鎖（μおよびγ）およびκ軽鎖の免疫グロブリン配列を、内在性のμ鎖遺伝子座およびκ鎖遺伝子座を不活化する標的突然変異と共にコードするヒト免疫グロブリン遺伝子ミニ遺伝子座を含有する（例えば、Ｌｏｎｂｅｒｇ，ｅｔ  ａｌ．，（１９９４）  Ｎａｔｕｒｅ  ３６８（６４７４）：８５６−８５９参照）。したがって、マウスは、マウスＩｇＭまたはκの発現の引下げを示し、そして免疫化に応じて、ヒトの導入された重鎖および軽鎖の導入遺伝子は、クラススイッチおよび体細胞突然変異を受けて、親和性の高いヒトＩｇＧＫモノクローナルを生成する（Ｌｏｎｂｅｒｇ  ｅｔ  ａｌ．（１９９４）Ｈａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ  １１３：４９−１０１；Ｌｏｎｂｅｒｇ  ａｎｄ  Ｈｕｓｚａｒ，（１９９５）Ｉｎｔｅｒｎ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３：６５−９３、およびＨａｒｄｉｎｇ  ａｎｄ  Ｌｏｎｂｅｒｇ，（１９９５）Ａｎｎ．Ｎ．Ｙ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．７６４：５３６−５４６）。ＨｕＭＡｂマウスの調製および使用、ならびにそのようなマウスによって保持されるゲノム修飾はさらに、Ｔａｙｌｏｒ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９２）Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ２０：６２８７−６２９５；Ｃｈｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９３）Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  ５：６４７−６５６；Ｔｕａｉｌｌｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９３）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９４：３７２０−３７２４；Ｃｈｏｉ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９３）Ｎａｔｕｒｅ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ  ４：１１７−１２３；Ｃｈｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９３）ＥＭＢＯ  Ｊ．１２：８２１−８３０；Ｔｕａｉｌｌｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９４）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５２：２９１２−２９２０；Ｔａｙｌｏｒ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９４）Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  ５７９−５９１；およびＦｉｓｈｗｉｌｄ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９６）Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  １４：８４５−８５１に記載されている。これらの全ての内容は、その全体が参照によって本明細書中に明確に組み込まれる。さらに、米国特許第５５４５８０６号明細書；米国特許第５５６９８２５号明細書；米国特許第５６２５１２６号明細書；米国特許第５６３３４２５号明細書；米国特許第５７８９６５０号明細書；米国特許第５８７７３９７号明細書；米国特許第５６６１０１６号明細書；米国特許第５８１４３１８号明細書；米国特許第５８７４２９９号明細書；および米国特許第５７７０４２９号明細書（全てＬｏｎｂｅｒｇ  ａｎｄ  Ｋａｙ）；米国特許第５５４５８０７号明細書（Ｓｕｒａｎｉ  ｅｔ  ａｌ．）；ＰＣＴ公報国際公開第１９９２／１０３９１８号パンフレット、国際公開第１９９３／１２２２７号パンフレット、国際公開第１９９４／２５５８５号パンフレット、国際公開第１９９７／１１３８５２号パンフレット、国際公開第１９９８／２４８８４号パンフレットおよび国際公開第１９９９／４５９６２号パンフレット（全てＬｏｎｂｅｒｇ  ａｎｄ  Ｋａｙ）；ならびにＰＣＴ公報国際公開第２００１／１４４２４号パンフレット参照。
【０１５９】
別の実施形態において、本開示のヒト抗体は、導入遺伝子および導入染色体上にヒト免疫グロブリン配列を有するマウス、例えばヒト重鎖導入遺伝子およびヒト軽鎖導入染色体を有するマウスを用いて、与えられ得る。そのようなマウスは、本明細書中で「ＫＭマウス」と呼び、Ｉｓｈｉｄａ  ｅｔ  ａｌ．のＰＣＴ公報国際公開第２００２／４３４７８号パンフレットに詳細に記載されている。
【０１６０】
さらに、代わりのトランスジェニック動物系、例えばＸｅｎｏｍｏｕｓｅ（Ａｂｇｅｎｉｘ，Ｉｎｃ．）が用いられ得る。そのようなマウスは、例えば、Ｋｕｃｈｅｒｌａｐａｔｉ  ｅｔ  ａｌ．の米国特許第５９３９５９８号明細書；米国特許第６０７５１８１号明細書；米国特許第６１１４５９８号明細書；米国特許第６１５０５８４号明細書および米国特許第６１６２９６３号明細書に記載されている。
【０１６１】
さらに、ヒト免疫グロブリン遺伝子を発現する、代わりのトランスクロモソミック動物系が、当該技術において入手可能であり、本開示の抗体を与えるのに用いられ得る。例えば、ヒト重鎖導入染色体およびヒト軽鎖導入染色体の双方を有する、「ＴＣマウス」と呼ばれるマウスが用いられ得る；そのようなマウスは、Ｔｏｍｉｚｕｋａ  ｅｔ  ａｌ．，（２０００）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９７：７２２−７２７に記載されている。さらに、ヒトの重鎖および軽鎖の導入染色体を有するウシが、当該技術に記載されており（Ｋｕｒｏｉｗａ  ｅｔ  ａｌ．，（２００２）Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ２０：８８９−８９４）、本開示の抗体を与えるために用いられ得る。
【０１６２】
また、好ましくは、本開示のヒトモノクローナル抗体は、ヒト免疫グロブリン遺伝子のライブラリをスクリーニングするファージディスプレイ法を用いて調製され得る。ヒト抗体を単離するそのようなファージディスプレイ法は、当該技術において確立されており、または以下の実施例に記載されている。例えば：米国特許第５２２３４０９号明細書；米国特許第５４０３４８４号明細書；および米国特許第５５７１６９８号明細書（Ｌａｄｎｅｒ  ｅｔ  ａｌ．）；米国特許第５４２７９０８号明細書および米国特許第５５８０７１７号明細書（Ｄｏｗｅｒ  ｅｔ  ａｌ．）；米国特許第５９６９１０８号明細書および米国特許第６１７２１９７号明細書（ＭｃＣａｆｆｅｒｔｙ  ｅｔ  ａｌ．）；ならびに米国特許第５８８５７９３号明細書；米国特許第６５２１４０４号明細書；米国特許第６５４４７３１号明細書；米国特許第６５５５３１３号明細書；米国特許第６５８２９１５号明細書および米国特許第６５９３０８１号明細書（Ｇｒｉｆｆｉｔｈｓ  ｅｔ  ａｌ．）参照。
【０１６３】
本開示のヒトモノクローナル抗体はまた、ヒト免疫グロブリン遺伝子のライブラリをスクリーニングするリボソームディスプレイ法、ｍＲＮＡディスプレイ法、細菌ディスプレイ法、および酵母ディスプレイ法を用いて調製され得る。一般に、ヒト抗体ライブラリを提示する真核生物細胞は、当該技術において標準的である（Ｐｌｕｅｃｋｔｈｕｎ，Ａ．（１９９７）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．  ９４（１０）：４９３７−４２；Ｌｉｐｏｖｓｅｋ  ｅｔ  ａｌ．（２００４）Ｉｍｍ．Ｍｅｔｈｏｄｓ  ２９０（１−２）：５１−６７；Ｈｅ  ｅｔ  ａｌ．（２００７）Ｎａｔｕｒｅ  ４（３）：２８１−２８８；Ｇｏｌｄ  ｅｔ  ａｌ．（２００１）Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ  ９８（９）：４８２５−６；Ｆｕｋｕｄａ  Ｉ，Ｋｏｊｏｈ  Ｋ，Ｔａｂａｔａ  Ｎ，ｅｔ  ａｌ．（２００６）Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．  ３４（１９）：ｅ１２７；Ｆｒａｎｃｉｓｃｏ  ｅｔ  ａｌ．（１９９３）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．９０：１０４４４−４８；Ｇｅｏｒｇｉｏｕ  ｅｔ  ａｌ．（１９９７）Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．１５（１）：２９−３４；Ｂｏｄｅｒ  ｅｔ  ａｌ．（２０００）Ｐｒｏｃ  Ｎａｔ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ，９７（２０）：１０７０１−１０７０５；Ｗｅａｖｅｒ−Ｆｅｌｄｈａｕｓ  ｅｔ  ａｌ．（２００４）ＦＥＢＳ  Ｌｅｔｔｅｒｓ  ５６４（１−２）：２４−３４参照）。
【０１６４】
本開示のヒトモノクローナル抗体はまた、ヒト抗体応答が免疫化直後に生じ得るように、ヒト免疫細胞が再構成されているＳＣＩＤマウスを用いて、調製され得る。そのようなマウスは、例えば、Ｗｉｌｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．の米国特許第５４７６９９６号明細書および米国特許第５６９８７６７号明細書に記載されている。
【０１６５】
（ｉｉｉ）フレームワークまたはＦｃ操作
フレームワーク修飾の１タイプは、フレームワーク領域内の、または１つもしくは複数のＣＤＲ領域内の、１つまたは複数の残基を突然変異させて、Ｔ細胞エピトープを除去することによって、抗体の潜在的免疫原性を引き下げることを包含する。このアプローチは「脱免疫化」とも呼ばれ、Ｃａｒｒ  ｅｔ  ａｌ．による米国特許出願公開第２００３／０１５３０４３号明細書においてさらに詳細に記載されている。
【０１６６】
フレームワークまたはＣＤＲ領域内でなされる修飾に加えて、またはその代わりに、本開示の抗体は、Ｆｃ領域内に修飾を含むように、典型的には抗体の１つまたは複数の機能的特性、例えば血清半減期、補体結合、Ｆｃ受容体結合、および／または抗原依存性の細胞障害を変えるように、操作されてよい。さらに、本開示の抗体は、ここでも抗体の１つまたは複数の機能的特性を変えるように、化学的に修飾されてもよいし（例えば、１つまたは複数の化学的部分が、抗体に付着されてよい）、修飾されてそのグリコシル化を変えてもよい。これらの実施形態はそれぞれ、以下でさらに詳細に記載される。
【０１６７】
一実施形態において、ＣＨ１のヒンジ領域は、ヒンジ領域内のシステイン残基の数が変更されるように、例えば、増大または減少するように、修飾される。このアプローチは、Ｂｏｄｍｅｒ  ｅｔ  ａｌ．によって米国特許第５６７７４２５号明細書にさらに記載されている。ＣＨ１のヒンジ領域内のシステイン残基の数は、例えば、軽鎖および重鎖のアセンブリを促進するように、または抗体の安定性を増大もしくは減少させるように、変更される。
【０１６８】
別の実施形態において、抗体のＦｃヒンジ領域が、抗体の生物学的半減期を減少させるように突然変異する。より詳細には、１つまたは複数のアミノ酸突然変異が、Ｆｃ−ヒンジフラグメントのＣＨ２−ＣＨ３ドメインインターフェース領域中に導入されて、抗体のブドウ球菌プロテインＡ（ＳｐＡ）結合が、生来のＦｃ−ヒンジドメインＳｐＡ結合と比較して、損なわれる。このアプローチは、Ｗａｒｄ  ｅｔ  ａｌ．によって、米国特許第６１６５７４５号明細書にさらに詳細に記載されている。
【０１６９】
さらに他の実施形態において、Ｆｃ領域は、少なくとも１つのアミノ酸残基を、異なるアミノ酸残基で置換することによって変更されて、抗体のエフェクタ機能が変更される。例えば、１つまたは複数のアミノ酸が、異なるアミノ酸残基で置換されて、抗体は、エフェクタリガンドに対する親和性が変更されるが、親抗体の抗原−結合能力を保持し得る。親和性が変更されているエフェクタリガンドは、例えば、Ｆｃ受容体であっても補体のＣ１成分であってもよい。対応する修飾アイソタイプバージョンは、科学界においてＩｇＧ１ｆ  ＬＡＬＡとして知られている。先で既に言及されるように、このアプローチは、米国特許第５６２４８２１号明細書および米国特許第５６４８２６０号明細書（双方ともＷｉｎｔｅｒ  ｅｔ  ａｌ．による）にさらに詳細に記載されている。
【０１７０】
別の実施形態において、アミノ酸残基から選択される１つまたは複数のアミノ酸は、異なるアミノ酸残基と置換されて、抗体は、Ｃ１ｑ結合が変更され得、かつ／または補体依存性細胞障害（ＣＤＣ）が引き下げられ得、もしくは無効にされ得る。このアプローチは、Ｉｄｕｓｏｇｉｅ  ｅｔ  ａｌ．による米国特許第６１９４５５１号明細書にさらに詳細に記載されている。
【０１７１】
別の実施形態において、１つまたは複数のアミノ酸残基は、変更されることによって、補体を固定する抗体の能力を変える。このアプローチは、Ｂｏｄｍｅｒ  ｅｔ  ａｌ．によってＰＣＴ公報国際公開第１９９４／２９３５１号パンフレットにさらに記載されている。
【０１７２】
さらに別の実施形態において、Ｆｃ領域は、１つまたは複数のアミノ酸を修飾することによって、抗体依存的細胞障害活性（ＡＤＣＣ）を媒介し、かつ／またはＦｃγ受容体に対する抗体の親和性を増大させる抗体の能力を高めるように、修飾される。このアプローチは、ＰｒｅｓｔａによってＰＣＴ公報国際公開第２０００／４２０７２号パンフレットにさらに記載されている。さらに、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩ、ＦｃγＲＩＩＩ、およびＦｃＲｎに対するヒトＩｇＧ１上の結合部位がマッピングされ、そして結合が向上した変異体が記載されている（Ｓｈｉｅｌｄｓ  ｅｔ  ａｌ．，（２００１）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７６：６５９１−６６０４参照）。
【０１７３】
さらに別の実施形態において、抗体のグリコシル化が修飾される。例えば、アグリコシル化抗体が調製され得る（すなわち、抗体がグリコシル化を欠く）。グリコシル化は、例えば「抗原」に対する抗体の親和性を増大させるように、変更され得る。そのような炭水化物修飾は、例えば抗体配列内のグリコシル化の１つまたは複数の部位を変えることによって、達成され得る。例えば、１つまたは複数の可変領域フレームワークグリコシル化部位の除去をもたらす１つまたは複数のアミノ酸置換がなされることによって、当該部位にてグリコシル化を除去することができる。そのようなアグリコシル化は、抗原に対する抗体の親和性を増大させ得る。そのようなアプローチは、Ｃｏ  ｅｔ  ａｌ．によって米国特許第５７１４３５０号明細書および米国特許第６３５０８６１号明細書にさらに詳細に記載されている。
【０１７４】
加えて、または代わりに、グリコシル化のタイプが変更されている抗体、例えば、フコシル残基の量が引き下げられている低フコシル化抗体、またはバイセクティングＧｌｃＮａｃ構造体が増大している抗体が調製され得る。そのようなグリコシル化パターンの変更は、抗体のＡＤＣＣ能を増大させることが実証された。そのような炭水化物修飾は、例えばグリコシル化機構が変更されている宿主細胞において抗体を発現させることによって、達成され得る。グリコシル化機構が変更されている細胞は、当該技術において記載されており、本開示の組換え抗体を発現することによって、グリコシル化が変更されている抗体を産生する宿主細胞として用いられ得る。例えば、Ｈａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．による欧州特許第１１７６１９５号明細書は、フコシル基転移酵素をコードするＦＵＴ８遺伝子が機能的に破壊されて、細胞株において発現される抗体が低フコシル化を示す細胞株を記載している。ＰｒｅｓｔａによるＰＣＴ公報国際公開第２００３／０３５８３５号パンフレットは、フコースをＡｓｎ（２９７）結合炭水化物に付着させる能力が低下して、その宿主細胞内で発現される抗体の低フコシル化をももたらす変異体ＣＨＯ細胞株、Ｌｅｃｌ３細胞を記載している（Ｓｈｉｅｌｄｓ  ｅｔ  ａｌ．，（２００２）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７７：２６７３３−２６７４０も参照）。Ｕｍａｎａ  ｅｔ  ａｌ．によるＰＣＴ公報国際公開第１９９９／５４３４２号パンフレットは、糖タンパク質修飾糖転移酵素（例えば、ベータ（１，４）−Ｎアセチルグルコサミン転移酵素ＩＩＩ（ＧｎＴＩＩＩ））を発現して、操作された細胞株において発現される抗体が、抗体のＡＤＣＣ活性を増大させるバイセクティングＧｌｃＮａｃ構造体の増大を示すように操作された細胞株を記載している（Ｕｍａｎａ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９９）Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．１７：１７６−１８０も参照）。
【０１７５】
別の実施形態において、抗体は、その生物学的半減期を増大させるように修飾される。種々のアプローチが可能である。例えば、以下の突然変異の１つまたは複数が導入されてよい：Ｗａｒｄの米国特許第６２７７３７５号明細書に記載されているようなＴ２５２Ｌ、Ｔ２５４Ｓ、およびＴ２５６Ｆ。これ以外にも、生物学的半減期を増大させるために、抗体は、Ｐｒｅｓｔａ  ｅｔ  ａｌ．によって米国特許第５８６９０４６号明細書および米国特許第６１２１０２２号明細書に記載されるように、ＩｇＧのＦｃ領域のＣＨ２ドメインの２つのループからとられるサルベージ受容体結合エピトープを含有するように、ＣＨ１領域またはＣＬ領域内で変えられてよい。
【０１７６】
医薬組成物
一部の態様において、本開示は、ＩＬ−１７Ｃに特異的な、単離された抗体または単離された抗体フラグメントを含む組成物に言及し、前記単離された抗体または前記単離された抗体フラグメントは、ＩＬ−１７Ｃホモダイマーに二価結合して、前記単離された抗体または前記単離された抗体フラグメントおよび１つのＩＬ−１７Ｃホモダイマーからなる複合体を形成する。更なる態様において、前記組成物は、医薬組成物である。更なる態様において、前記医薬組成物は、疾患の処置に用いられる。
【０１７７】
本開示の医薬組成物は、当該技術において知られている種々の方法によって投与され得る。投与の経路および／またはモードは、所望される結果に応じて変わる。投与が、静脈内投与、筋肉内投与、腹膜内投与、もしくは皮下投与であることが、または標的部位の近位に投与されることが好ましい。医薬的に許容可能なキャリアは、（例えば、注射または点滴による）静脈内投与、筋肉内投与、皮下投与、非経口投与、脊髄投与、または表皮投与に適しているべきである。投与の経路に応じて、活性化合物、すなわち抗体、抗体フラグメント、二重特異的分子、および多特異的分子は、酸の作用、および化合物を不活性化する虞がある他の自然条件から化合物を保護する物質で、コーティングされてよい。
【０１７８】
医薬的に、キャリアは組成物を増強し、もしくは安定化させ、または組成物の調製をし易くする。医薬的に許容可能なキャリアとして、生理的に適合する溶媒、分散媒、コーティング、抗菌剤および抗真菌剤、ならびに等張剤および吸収遅延剤等が挙げられる。
【０１７９】
組成物は、滅菌されており、かつ流体であるべきである。適切な流動性は、例えば、コーティング、例えばレシチンの使用によって、分散系の場合では、必要とされる粒子サイズの維持によって、そして界面活性剤の使用によって、維持され得る。多くの場合、組成物中に等張剤、例えば、糖、ポリアルコール、例えばマンニトールまたはソルビトール、および塩化ナトリウムを含むことが好ましい。注射可能な組成物の長期の吸収は、組成物中に、吸収を遅延させる剤、例えば、モノステアリン酸アルミニウムまたはゼラチンを含めることによって、もたらされ得る。
【０１８０】
本開示の医薬組成物は、周知の、かつ当該技術においてルーチン的に実行される方法に従って、調製され得る。例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ，Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏ．，２０ｔｈ  ｅｄ．，２０００；およびＳｕｓｔａｉｎｅｄ  ａｎｄ  Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  Ｒｅｌｅａｓｅ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｊ．Ｒ．Ｒｏｂｉｎｓｏｎ，ｅｄ．，Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，１９７８参照。医薬組成物は好ましくは、ＧＭＰ条件下で調製される。典型的に、ＩＬ−１７Ｃ抗体またはＩＬ−１７Ｃ抗体フラグメントの治療的に有効な用量または効果的な用量が、本開示の医薬組成物に使用される。抗体または抗体フラグメントは、当業者に知られている従来の方法によって、医薬的に許容可能な剤型に製剤化される。投薬レジメンは、所望される最適の応答（例えば治療応答）を実現するように調整される。例えば、単回ボーラス投与されてもよいし、いくつかの分割用量が経時的に投与されてもよいし、治療状況の緊急性によって示されると共に、用量が比例して引き下げられても増大されてもよい。投与の簡略化および投薬量の均一性のために投薬量単位形態で親組成物を製剤化することが、とりわけ有利である。本明細書中で用いられる投薬単位形態は、処置されることになる対象にとってのユニタリ投薬量として適した、物理的に不連続な単位を指す；各単位は、必要とされる医薬キャリアを伴って、所望される治療効果を生じさせるように算出された所定の量の活性化合物を含有する。
【０１８１】
本開示の医薬組成物中の活性成分の実際の投薬量レベルは、特定の患者に所望される治療応答を達成するのに有効な活性成分の量、組成物、および投与モードが、患者に毒性であることなく得られるように、変化してよい。選択される投薬量レベルは、使用される本開示の特定の組成物、またはそのエステル、塩もしくはアミドの活性、投与経路、投与時間、使用されることになる特定の化合物の排泄速度、処置の期間、使用される特定の組成物と併用される他の薬物、化合物および／または材料、ならびに処置されることになる患者の年齢、性別、体重、症状、健康状態および過去の病歴等の因子が挙げられる種々の薬物動態学的因子によって決まる。
【０１８２】
医師または獣医は、所望される治療効果を達成するのに必要とされるレベルよりも低いレベルにて、医薬組成物に使用される本開示の抗体の服用を始めて、所望される効果が達成されるまで、投薬量を徐々に増大させてよい。通常、本明細書中に記載されるアレルギー性炎症性障害の処置のための、本開示の組成物の有効な用量は、投与手段、標的部位、患者の生理学的状態、患者がヒトであるか動物であるか、投与される他の医薬品、そして処置が予防であるか治療であるかが挙げられる、様々な多くの因子に応じて変えてよい。処置投薬量は、安全性および有効性を最適化するように決められる必要がある。抗体の全身投与について、投薬量は、宿主体重の約０．０００１〜１００ｍｇ／ｋｇ、より普通には０．０１〜１５ｍｇ／ｋｇに及ぶ。例示的な処置レジームは、２週毎に１回、１ヵ月に１回、または３〜６ヵ月毎に１回の全身投与を伴う。抗体の硝子体内投与について、投薬量は約０．０００１〜約１０ｍｇに及ぶ。例示的な処置レジームは、２週毎に１回、１ヵ月に１回、または３〜６ヵ月毎に１回の全身投与を伴う。
【０１８３】
本開示の抗体または抗体フラグメントは通常、複数回投与される。単回投薬間の間隔は、毎週、毎月、または毎年であってよい。全身投与の一部の方法において、投薬量は、１〜１０００μｇ／ｍｌの、そして一部の方法において、２５〜５００μｇ／ｍｌの血漿抗体濃度を達成するように調整される。
【０１８４】
これ以外にも、抗体または抗体フラグメントは、徐放製剤として投与されてよく、その場合には、より低い頻度での投与が必要とされる。投薬量および頻度は、患者における抗原−結合部分の半減期に応じて変わる。一般に、ヒト抗体およびヒト化抗体は、キメラ抗体および非ヒト抗体よりも長い半減期を示す。投与の投薬量および頻度は、処置が予防であるか治療であるかに応じて変えてよい。予防的用途において、比較的低い投薬量が、長期間にわたって比較的低頻度にて投与される。一部の患者は、死亡するまで処置を受け続ける。治療用途において、疾患の進行が遅らされ、または終了するまで、好ましくは患者が疾患の徴候の部分的または完全な改善を示すまで、比較的短い間隔での比較的高い投薬量が、時折必要とされる。その後、患者は、予防レジームを施されてよい。
【０１８５】
抗体または抗体フラグメントを含む医薬組成物または滅菌組成物を調製するために、抗体または抗体フラグメントは、医薬的に許容可能なキャリアまたは賦形剤と混合される。
【０１８６】
抗体または抗体フラグメントの所望される用量は、モル／体重ｋｇベースで、抗体またはポリペプチドの場合とほぼ同じである。抗体または抗体フラグメントの所望される血漿濃度は、モル／体重ｋｇベースについてである。用量は、少なくとも１５μｇ、少なくとも２０μｇ、少なくとも２５μｇ、少なくとも３０μｇ、少なくとも３５μｇ、少なくとも４０μｇ、少なくとも４５μｇ、少なくとも５０μｇ、少なくとも５５μｇ、少なくとも６０μｇ、少なくとも６５μｇ、少なくとも７０μｇ、少なくとも７５μｇ、少なくとも８０μｇ、少なくとも８５μｇ、少なくとも９０μｇ、少なくとも９５μｇ、または少なくとも１００μｇであってよい。対象に施される服用回数は、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、または１２回以上を数えてよい。
【０１８７】
本開示の抗体または抗体フラグメントについて、患者に投与される投薬量は、患者の体重について０．０００１ｍｇ／ｋｇから１００ｍｇ／ｋｇであってよい。投薬量は、患者の体重について０．０００１ｍｇ／ｋｇ〜２０ｍｇ／ｋｇ、０．０００１ｍｇ／ｋｇ〜１０ｍｇ／ｋｇ、０．０００１ｍｇ／ｋｇ〜５ｍｇ／ｋｇ、０．０００１〜２ｍｇ／ｋｇ、０．０００１〜１ｍｇ／ｋｇ、０．０００１ｍｇ／ｋｇ〜０．７５ｍｇ／ｋｇ、０．０００１ｍｇ／ｋｇ〜０．５ｍｇ／ｋｇ、０．０００１ｍｇ／ｋｇ〜０．２５ｍｇ／ｋｇ、０．０００１〜０．１５ｍｇ／ｋｇ、０．０００１〜０．１０ｍｇ／ｋｇ、０．００１〜０．５ｍｇ／ｋｇ、０．０１〜０．２５ｍｇ／ｋｇ、または０．０１〜０．１０ｍｇ／ｋｇであってよい。
【０１８８】
本開示の抗体または抗体フラグメントの投薬量は、患者のキログラム（ｋｇ）体重を用いて、ｍｇ／ｋｇで投与されることになる用量を乗じて算出され得る。
【０１８９】
本開示の抗体または抗体フラグメントの投薬量は、患者の体重について１５０μｇ／ｋｇ以下、１２５μｇ／ｋｇ以下、１００μｇ／ｋｇ以下、９５μｇ／ｋｇ以下、９０μｇ／ｋｇ以下、８５μｇ／ｋｇ以下、８０μｇ／ｋｇ以下、７５μｇ／ｋｇ以下、７０μｇ／ｋｇ以下、６５μｇ／ｋｇ以下、６０μｇ／ｋｇ以下、５５μｇ／ｋｇ以下、５０μｇ／ｋｇ以下、４５μｇ／ｋｇ以下、４０μｇ／ｋｇ以下、３５μｇ／ｋｇ以下、３０μｇ／ｋｇ以下、２５μｇ／ｋｇ以下、２０μｇ／ｋｇ以下、１５μｇ／ｋｇ以下、１０μｇ／ｋｇ以下、５μｇ／ｋｇ以下、２．５μｇ／ｋｇ以下、２μｇ／ｋｇ以下、１．５μｇ／ｋｇ以下、１μｇ／ｋｇ以下、０．５μｇ／ｋｇ以下、または０．５μｇ／ｋｇ以下であってよい。
【０１９０】
本開示の抗体または抗体フラグメントの単位用量は、０．１ｍｇ〜２０ｍｇ、０．１ｍｇ〜１５ｍｇ、０．１ｍｇ〜１２ｍｇ、０．１ｍｇ〜１０ｍｇ、０．１ｍｇ〜８ｍｇ、０．１ｍｇ〜７ｍｇ、０．１ｍｇ〜５ｍｇ、０．１〜２．５ｍｇ、０．２５ｍｇ〜２０ｍｇ、０．２５〜１５ｍｇ、０．２５〜１２ｍｇ、０．２５〜１０ｍｇ、０．２５〜８ｍｇ、０．２５ｍｇ〜７ｍｇ、０．２５ｍｇ〜５ｍｇ、０．５ｍｇ〜２．５ｍｇ、１ｍｇ〜２０ｍｇ、１ｍｇ〜１５ｍｇ、１ｍｇ〜１２ｍｇ、１ｍｇ〜１０ｍｇ、１ｍｇ〜８ｍｇ、１ｍｇ〜７ｍｇ、１ｍｇ〜５ｍｇ、または１ｍｇ〜２．５ｍｇであってよい。
【０１９１】
本開示の抗体または抗体フラグメントの服用は、繰り返されてよく、そして投与は、少なくとも１日、２日、３日、５日、１０日、１５日、３０日、４５日、２ヵ月、７５日、３ヵ月、または少なくとも６ヵ月の単位で区切られてよい。
【０１９２】
特定の患者に有効な量は、処置されることになる症状、患者の全体的な健康、投与の方法、経路および用量、ならびに副作用の重篤度等の因子に応じて変えてよい（例えば、Ｍａｙｎａｒｄ，ｅｔ  ａｌ．（１９９６）  Ａ  Ｈａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  ＳＯＰｓ  ｆｏｒ  Ｇｏｏｄ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ，Ｉｎｔｅｒｐｈａｒｍ  Ｐｒｅｓｓ，Ｂｏｃａ  Ｒａｔｏｎ，Ｆｌａ．；Ｄｅｎｔ（２００１）  Ｇｏｏｄ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  ａｎｄ  Ｇｏｏｄ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ，Ｌｏｎｄｏｎ，ＵＫ参照）。
【０１９３】
投与経路は、例えば、局所塗布または皮膚への塗布、静脈内、腹膜内、脳内、筋肉内、眼内、動脈内、脳脊髄内、病巣内への注射もしくは点滴、または徐放系もしくは移植片によるものであってよい（例えば、Ｓｉｄｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．（１９８３）Ｂｉｏｐｏｌｙｍｅｒｓ  ２２：５４７−５５６；Ｌａｎｇｅｒ，ｅｔ  ａｌ．（１９８１）Ｊ．Ｂｉｏｍｅｄ．Ｍａｔｅｒ．Ｒｅｓ．１５：１６７−２７７；Ｌａｎｇｅｒ（１９８２）  Ｃｈｅｍ．Ｔｅｃｈ．１２：９８−１０５；Ｅｐｓｔｅｉｎ，ｅｔ  ａｌ．（１９８５）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８２：３６８８−３６９２；Ｈｗａｎｇ，ｅｔ  ａｌ．（１９８０）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ７７：４０３０−４０３４；米国特許第６３５０４６６号明細書および米国特許第６３１６０２４号明細書参照）。必要な場合、組成物はまた、可溶化剤および局所麻酔薬、例えば注射部位の痛みを和らげるリドカインを含んでもよい。また、例えば、吸入器またはネビュライザ、およびエアロゾル製剤を用いて、肺投与が施されてもよい。例えば、米国特許第６０１９９６８号明細書、米国特許第５９８５３２０号明細書、米国特許第５９８５３０９号明細書、米国特許第５９３４２７２号明細書、米国特許第５８７４０６４号明細書、米国特許第５８５５９１３号明細書、米国特許第５２９０５４０号明細書、および米国特許第４８８００７８号明細書；ならびにＰＣＴ公報国際公開第１９９２／１９２４４号パンフレット、国際公開第１９９７／３２５７２号パンフレット、国際公開第１９９７／４４０１３号パンフレット、国際公開第１９９８／３１３４６号パンフレット、および国際公開第１９９９／６６９０３号パンフレット参照。これらの出願はそれぞれ、その全体が参照によって本明細書中に組み込まれる。
【０１９４】
本開示の組成物はまた、当該技術において知られている種々の方法の１つまたは複数を用いて、１つまたは複数の投与経路を介して投与されてもよい。当業者によって理解されるように、投与経路および／または投与モードは、所望される結果に応じて変わることとなる。本開示の抗体または抗体フラグメントについて選択された投与経路として、例えば注射または点滴による、静脈内、筋肉内、皮内、腹膜内、皮下、脊髄、または他の非経口の投与経路が挙げられる。非経口投与は、通常注射による、経腸投与および局所投与以外の投与モードを意味し得、静脈内、筋肉内、動脈内、髄腔内、嚢内、眼窩内、心臓内、皮内、腹膜内、経気管、皮下、表皮下、関節内、被膜下、クモ膜下、脊椎内、硬膜外、そして胸骨内の注射および点滴が挙げられるが、これらに限定されない。これ以外にも、本開示の組成物は、局所、表皮、または粘膜の投与経路等の非経口でない経路（ｎｏｎ−ｐａｒｅｎｔｅｒａｌ  ｒｏｕｔｅ）を介して、例えば、鼻腔内に、経口的に、経膣的に、経直腸的に、舌下的に、または局所的に投与されてよい。
【０１９５】
本開示の抗体または抗体フラグメントと組み合わせて施され得る更なる療法（例えば、予防剤または治療剤）は、本開示の抗体または抗体フラグメントから、５分未満、３０分未満、１時間、約１時間、約１時間〜約２時間、約２時間〜約３時間、約３時間〜約４時間、約４時間〜約５時間、約５時間〜約６時間、約６時間〜約７時間、約７時間〜約８時間、約８時間〜約９時間、約９時間〜約１０時間、約１０時間〜約１１時間、約１１時間〜約１２時間、約１２時間〜１８時間、１８時間〜２４時間、２４時間〜３６時間、３６時間〜４８時間、４８時間〜５２時間、５２時間〜６０時間、６０時間〜７２時間、７２時間〜８４時間、８４時間〜９６時間、または９６時間〜１２０時間の間隔をおいて施されてよい。２つ以上の療法が、患者の同じ１度の来院中に施されてもよい。
【０１９６】
本開示の抗体または抗体フラグメントおよび他の療法は、周期的に施されてよい。サイクリング療法は、ある期間の第１の療法（例えば、第１の予防剤または治療剤）の施与、その後のある期間の第２の療法（例えば、第２の予防剤または治療剤）の施与、および場合によってはその後のある期間の第３の療法（例えば、予防剤または治療剤）の施与等、そしてこの連続して起こる施与の繰返し、すなわち、複数療法の１つに対する耐性の進行を抑制して、複数療法の１つの副作用を回避し、もしくは軽減し、かつ／または療法の有効性を向上させるためのサイクルを包含する。
【０１９７】
ある実施形態において、本開示の抗体または抗体フラグメントは、適切なインビボ分布を確実にするように製剤化されてよい。例えば、血液脳関門（ＢＢＢ）は、親水性が高い多くの化合物を排除する。本開示の治療化合物は、（所望される場合に）ＢＢＢを越えることを確実にするために、例えば、リポソーム内に製剤化されてよい。リポソームを調製する方法について、例えば米国特許第４５２２８１１号明細書；米国特許第５３７４５４８号明細書；および米国特許第５３９９３３１号明細書参照。リポソームは、特定の細胞または器官中に選択的に輸送される１つまたは複数の部分を含むので、標的薬物送達を増強し得る（例えば、Ｖ．Ｖ．Ｒａｎａｄｅ（１９８９）Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．２９：６８５参照）。例示的な標的部分として、葉酸塩またはビオチン（例えば、Ｌｏｗ  ｅｔ  ａｌの米国特許第５４１６０１６号明細書参照）；マンノシド（Ｕｍｅｚａｗａ  ｅｔ  ａｌ．，（１９８８）Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．１５３：１０３８）；抗体（Ｐ．Ｇ．Ｂｌｏｅｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．（１９９５）ＦＥＢＳ  Ｌｅｔｔ．  ３５７：１４０；Ｍ．Ｏｗａｉｓ  ｅｔ  ａｌ．（１９９５）Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂ．Ａｇｅｎｔｓ  Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ．３９：１８０）；界面活性剤プロテインＡ受容体（Ｂｒｉｓｃｏｅ  ｅｔ  ａｌ．（１９９５）Ａｍ．Ｊ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．１２３３：１３４）；ｐ１２０（Ｓｃｈｒｅｉｅｒ  ｅｔ  ａｌ（１９９４）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６９：９０９０）が挙げられる；また、Ｋ．Ｋｅｉｎａｎｅｎ；Ｍ．Ｌ．Ｌａｕｋｋａｎｅｎ（１９９４）ＦＥＢＳ  Ｌｅｔｔ．  ３４６：１２３；Ｊ．Ｊ．Ｋｉｌｌｉｏｎ；Ｉ．Ｊ．Ｆｉｄｌｅｒ（１９９４）Ｉｍｍｕｎｏｍｅｔｈｏｄｓ  ４：２７３も参照。
【０１９８】
本開示は、本開示の抗体または抗体フラグメントを含む医薬組成物を単独で、または他の療法と組み合わせて、それを必要とする対象に投与する／施すためのプロトコルを提供する。本開示の併用療法（例えば、予防剤または治療剤）は、付随的に、または連続して、対象に施されてよい。本開示の併用療法（例えば、予防剤または治療剤）は、周期的に施されてもよい。サイクリング療法は、ある期間の第１の療法（例えば、第１の予防剤または治療剤）の施与、その後のある期間の第２の療法（例えば、第２の予防剤または治療剤）の施与、そしてこの連続して起こる施与の繰返し、すなわち、複数療法（例えば剤）の１つに対する耐性の進行を抑制して、複数療法（例えば剤）の１つの副作用を回避し、もしくは軽減し、かつ／または療法の有効性を向上させるためのサイクルを包含する。
【０１９９】
本開示の併用療法（例えば、予防剤または治療剤）は、対象に同時に施されてよい。用語「同時に」は、正確に同時の療法（例えば、予防剤または治療剤）の施与に制限されない。むしろ、本開示の抗体または抗体フラグメントを含む医薬組成物が、別のやり方で投与される場合よりも、対象に順々に、そしてある時間間隔内で投与されて、本開示の抗体が、他の療法と協働して大きな利益を実現し得ることが意味される。例えば、各療法は、対象に同時に施されてもよいし、異なる時点にてあらゆる順序で連続して施されてもよい；しかしながら、同時に施されないならば、所望の治療効果または予防効果を実現するように、十分に近い時間内に施されるべきである。各療法は、対象に別々に、あらゆる適切な形態で、そしてあらゆる適切な経路によって、施されてよい。種々の実施形態において、療法（例えば、予防剤または治療剤）は、対象に、１５分未満、３０分未満、１時間未満、約１時間未満、約１時間〜約２時間、約２時間〜約３時間、約３時間〜約４時間、約４時間〜約５時間、約５時間〜約６時間、約６時間〜約７時間、約７時間〜約８時間、約８時間〜約９時間、約９時間〜約１０時間、約１０時間〜約１１時間、約１１時間〜約１２時間、２４時間、４８時間、７２時間、または１週間の間隔をおいて施される。他の実施形態において、２つ以上の療法（例えば、予防剤または治療剤）が、患者の同じ来院中に施される。
【０２００】
併用療法の予防剤または治療剤は、同じ医薬組成物に入れられて対象に投与されてよい。これ以外にも、併用療法の予防剤または治療剤は、別個の医薬組成物に入れられて対象に同時に投与されてよい。予防剤または治療剤は、同じ投与経路によって、または異なる投与経路によって、対象に投与されてよい。
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【実施例】
【０２０１】
実施例１：抗原の生成
ヒト、カニクイザル、およびマウス由来のＩＬ−１７Ｃのアミノ酸配列をアラインした。
【０２０２】
リーダー配列なしで、７９％の相同性が、全３種の間で共有されている。
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【０２０３】
抗原の生産および品質管理
異なる種由来のＩＬ−１７Ｃを、異なる事業者から購入し、またはインハウス生産して、必要に応じて可溶化した。ＥＣＬ（商標）ビオチン化モジュールのビオチン化試薬を、タンパク質１００μｇあたり４μｌ加えて、室温にて暗所で穏やかに撹拌しながら６０分間インキュベートした。続いて、Ｚｅｂａ（商標）Ｄｅｓａｌｔスピンカラムを用いて、ビオチン化されたタンパク質を精製し、ＯＤ２８０ｎｍを判定した。
【０２０４】
ＥＣＬ（商標）ビオチン化モジュール（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ；＃１０６１９１８）を用いて、抗原をビオチン化した。ビオチン化後、Ｚｅｂａ（商標）Ｄｅｓａｌｔスピンカラム（Ｐｉｅｒｃｅ；＃８９８８９）を用いて、産物を精製した。
【０２０５】
高圧サイズ排除クロマトグラフィ（ＨＰ−ＳＥＣ）および動的光散乱法（ＤＬＳ）による、ＳＤＳ−ＰＡＧＥにおける、そして本来の状態における、変性、還元および変性、非還元条件下での分析を含む品質管理に、ビオチン化された、そしてビオチン化されていない、マウス、カニクイザルおよびヒトのＩＬ−１７Ｃをかけた。
【０２０６】
Ｗｙａｔｔ  ｍｉｎｉＤＡＷＮ  ＴｒｅｏｓおよびＷｙａｔｔ  Ｏｐｔｉｌａｂ  ｒＥＸ（Ｗｙａｔｔ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  Ｅｕｒｏｐｅ，Ｄｅｒｎｂａｃｈ、独国）と組み合わせたＤｉｏｎｅｘ  ＵｌｔｉＭａｔｅ  ３０００  Ｔｉｔａｎｉｕｍ  ＨＰＬＣ系（Ｄｉｏｎｅｘ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ，Ｇｅｒｍｅｒｉｎｇ、独国）で、ＨＰ−ＳＥＣを実行した。分離について、Ｔｏｓｏｈ  ＴＳＫ−Ｇｅｌ  Ｇ３０００ＳＷｘｌカラムを用いた（Ｔｏｓｏｈ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ，Ｓｔｕｔｔｇａｒｔ、独国）。各サンプルについて、１５μｇのタンパク質をカラム上にロードして、０．５ｍｌ／分の流量にて分離を実行し、２８０ｎｍでのＵＶ吸収を分析して記録した。泳動バッファを、４９ｍＭのＮａＨ２ＰＯ４、５１ｍＭのＮａ２ＨＰＯ４、１００ｍＭのＫ２ＳＯ４、０．０００５％のＴｗｅｅｎ−８０で、ｐＨ６．８にて構成した。
【０２０７】
０．２〜１．０ｍｇ／ｍｌのタンパク質濃度で、ＤｙｎａＰｒｏ  Ｔｉｔａｎキュベット系（Ｗｙａｔｔ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  Ｅｕｒｏｐｅ，Ｄｅｒｎｂａｃｈ、独国）を用いて、全てのＤＬＳ実験を実行した。析出または粒子形成の場合、実験前に、サンプルを１０．０００ｇで５分間遠心分離した。
【０２０８】
マウスおよびヒトのＩＬ−１７受容体Ｅ／Ｆｃのクローニングおよび生産
ＫｐｎＩおよびＥｃｏＲＶを用いて、マウスＩＬ−１７受容体Ｅ（ＵｎｉＰｒｏｔ  Ｑ８ＢＨ０６、アイソフォーム１）およびヒトＩＬ−１７受容体Ｅ（ＵｎｉＰｒｏｔ  Ｑ８ＮＦＲ９）の細胞外ドメイン（ＥＣＤ）を、発現ベクターｐＭＡＸ＿ｖｋ＿Ｆｃ２＿Ｈｉｓ中にクローニングして、Ｃ末端Ｆｃ２＿Ｈ融合構築体を生成した。天然のリーダー（ＡＧ００１５８）の他に、Ｖκ−リーダーを有する第２の構築体を生成した（ＡＧ００１５９）。
【０２０９】
双方の構築体を、ＨＫＢ１１細胞内で一過性に発現させた。細胞懸濁液を、トランスフェクションの３日後にスケールアップし、細胞培養体の上澄みを、トランスフェクションの６日後に収穫した。濾過滅菌後、溶液を、プロテインＡ親和性クロマトグラフィにかけた。バッファ交換をＰＢＳに実行して、サンプルを濾過滅菌した（０．２μｍの細孔サイズ）。タンパク質濃度を、ＵＶ分光測光法によって判定した。産物の純度を、ＨＰ−ＳＥＣおよびＤＬＳによる、ＳＤＳ−ＰＡＧＥにおける、そして本来の状態における、変性、還元および変性、非還元条件下で分析した。
【０２１０】
実施例２：Ｆａｂフラグメントおよび抗体の生成
抗体生成のために、ＭｏｒｐｈｏＳｙｓ  Ｙｌａｎｔｈｉａ（登録商標）ライブラリを用いて、ヒトＩＬ−１７Ｃに対するＦａｂフラグメントを選択した。ＭｏｒｐｈｏＳｙｓ  Ｙｌａｎｔｈｉａ（登録商標）ライブラリ（Ｔｉｌｌｅｒ  ｅｔ  ａｌ．ｍＡｂｓ  ５：３，１−２６；Ｍａｙ／Ｊｕｎｅ（２０１３）および米国特許第８７２８９８１号明細書）は、市販のファージミドライブラリであり、Ｆａｂをファージ表面上に提示するＣｙｓＤｉｓｐｌａｙ（登録商標）技術を使用する（Ｌｏｈｎｉｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，国際公開第２００１／０５９５０号パンフレット）。
【０２１１】
１．パニング戦略
１つのＩＬ−１７Ｃホモダイマーのみへの二価結合等の特異的な特性を有する抗体を選択するために、溶液パニングを実行した。自然なホモダイマー状態の抗原が、溶液中で最も良く示され得るので、可溶性の抗原上へのパニングが、ＩＬ−１７Ｃに二価結合するクローンを同定する可能性を高くする。
【０２１２】
反復的な３ラウンドのパニングによって、ＭｏｒｐｈｏＳｙｓ  Ｙｌａｎｔｈｉａ（登録商標）ライブラリから組換え抗体を生成した。したがって、ビオチン化されたヒトＩＬ−１７Ｃ、またはビオチン化されたマウスＩＬ−１７Ｃを抗原として用いて、溶液中でファージライブラリとインキュベートした。溶液パニングの前提条件は、生物活性を保存しての抗原のビオチン化であった。溶液パニングの間、Ｆａｂ提示ファージ、およびビオチン化された抗原を、溶液中でインキュベートして、ファージによる抗原のアクセシビリティを促進した。
【０２１３】
各ファージプールについて、ストレプトアビジンビーズ（Ｄｙｎａｂｅａｄｓ（登録商標）Ｍ−２８０  Ｓｔｒｅｐｔａｖｉｄｉｎ；Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を、１×Ｃｈｅｍｉｂｌｏｃｋｅｒ中でブロックした。同時に、各パニングについて、Ｙｌａｎｔｈｉａ（登録商標）ファージ−抗体を、等容量の２×Ｃｈｅｍｉｂｌｏｃｋｅｒ／Ｔｗｅｅｎ２０でブロックした。
【０２１４】
次に、ビオチン化された抗原１００ｎＭを、プレ吸着され、かつブロックされたファージ粒子に加えて、室温にてインキュベートした。ブロックされたストレプトアビジンビーズを用いて、ファージ−抗原複合体を捕捉して、ストレプトアビジンビーズに結合したファージ粒子を、磁気セパレータで収集した。ＰＢＳ、Ｔｗｅｅｎ２０、およびＰＢＳを用いたいくつかの洗浄ステップによって、非特異的に結合したファージを洗浄除去して、ＤＤＴを用いて、特異的に結合したファージをストレプトアビジンビーズから溶出した。次に、ＤＴＴ溶出液を、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）ＴＧ１中に移して、ファージ感染のために３７℃にてインキュベートした。細菌のペレットを、増殖培地中に再懸濁し、ＬＢ／Ｃａｍアガープレート上にプレーティングして、一晩インキュベートした。コロニーをプレートからこすり取って、ファージレスキュー、選択したクローンのポリクローナル増幅、およびファージ生産に用いた。
【０２１５】
ストリンジェンシーを上げて、特異性および親和性が低い抗体を捨てるために、洗浄ステップを長くし、かつ抗原濃度を引き下げて、以降のパニングラウンド２および３を同様に実行した。パニングの３ラウンドを通じて一貫して、または交互に、抗原を用いた。２つの異なる設定内でカルボキシビーズパニングラウンド１〜３に用いる抗原を、表３に示す。
2018506296.tif 000014
【０２１６】
３ラウンドのパニング後、第３ラウンドのアウトプットを用いて、単一コロニーを生じさせて、これらのＦａｂ産生コロニーをランダムに選んで３８４ウェルプレート中に入れた。
【０２１７】
２．ヒト、カニクイザル、およびマウスのＩＬ−１７Ｃに特異的なクローンを同定するための、ＥＬＩＳＡを介したパニングアウトプットの一次スクリーニング
一次ＥＬＩＳＡスクリーニングを介して、ＩＬ−１７ＣへのＦａｂの特異性を調査した。粗細菌溶解物中の可溶性Ｆａｂフラグメントの迅速な発現を促進するために、以前に記載されるようにして、ペリプラズム抽出物を調製した（Ｒａｕｃｈｅｎｂｅｒｇｅｒ  ｅｔ  ａｌ．（２００３）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７８．４０：３８１９４−２０５）。初期ヒットのＥＬＩＳＡスクリーニングに、Ｆａｂ含有大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）溶解物を用いた。
【０２１８】
ビオチン化された抗原のＥＬＩＳＡスクリーニングについて、ＰＢＳ中に１：１０００で希釈したＦｄフラグメント特異的ヒツジ抗ヒトＩｇＧ（結合部位、＃ＰＣ０７５）で、Ｍａｘｉｓｏｒｐ（商標）３８４ウェルプレートをコーティングした。ＰＢＳ中５％スキムミルク粉末でのブロッキング後、Ｙｌａｎｔｈｉａ（登録商標）−Ｆａｂ含有大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）溶解物を加えて、抗Ｆｄ抗体によってプレートに捕捉した。ＰＢＳＴによる広範囲な洗浄後、０．５μｇ／ｍｌのビオチン化されたヒトＩＬ−１７Ｃを加えた。別の洗浄手順の後、捕捉したＹｌａｎｔｈｉａ（登録商標）−Ｆａｂフラグメントを、ビオチン化されたヒトＩＬ−１７Ｃに結合させ、これを、アルカリホスファターゼに結合するストレプトアビジンとのインキュベーションに続く、ＡｔｔｏＰｈｏｓ蛍光基質（Ｒｏｃｈｅ：＃１１６８１９８２００１）の付加によって、検出した。５３５ｎｍの蛍光放射を、４３０ｎｍの励起により記録した。結合が非特異的なＦａｂフラグメントを発現するクローンを排除するために、ネガティブコントロール抗原としての無関係な抗原のカウンタースクリーニングを同時に実行した。ビオチン化されたヒトＩＬ−１７Ｃのバックグラウンドに対して５倍超の、そして無関係な抗原のバックグラウンドに対して２倍未満のＥＬＩＳＡシグナルを、ポジティブヒットとみなした。
【０２１９】
ヒトＩＬ−１７Ｃに加えて、カニクイザルおよびマウスのＩＬ−１７Ｃに交差反応的に結合するクローンの更なる選択のために、カニクイザルおよびマウスのビオチン化されたＩＬ−１７Ｃに同じスクリーニングを実行した。マウスおよびカニクイザルのＩＬ−１７Ｃ抗原にも交差反応性であると同定されたクローンを組み合わせて、別個の圧迫プレート上に収集してから、受容体結合阻害アッセイにおいてスクリーニングにかけた。
【０２２０】
合計４６０８個の個々のＦａｂフラグメントを選んで、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）内で産生させた。そこから、１４９１のヒットが、ＥＬＩＳＡスクリーニングにおいて、細菌溶解調製物中のヒトＩＬ−１７Ｃに特異的に結合すると同定された。ヒトＩＬ−１７Ｃに特異的に結合すると同定された１４９１のヒットをさらに、カニクイザルおよびマウスのビオチン化されたＩＬ−１７Ｃ抗原へのＥＬＩＳＡ結合について試験した。これらのうち、７２３のＦａｂが、カニクイザルおよびマウスのビオチン化されたＩＬ−１７Ｃに交差反応性であることがわかった。
【０２２１】
３．アンタゴニスト活性についての、ＩＬ−１７Ｃ特異的クローンの二次スクリーニング
次のスクリーニングステップにおいて、これらのＦａｂの抑制機能性を調査した。したがって、Ｆａｂ含有細菌抽出物を、高スループットｍ／ｈｕＩＬ１７ＲＥ／Ｆｃ受容体阻害アッセイにおいて、阻害活性の有無に関してスクリーニングした。
【０２２２】
活性を中和するＦａｂ含有粗細菌溶解物を高スループットスクリーニングモードで試験するために、ＭＡ６０００  ３８４ウェルプレート（Ｍｅｓｏ  Ｓｃａｌｅ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ，ＭＳＤ）を、ＰＢＳ中０．５〜０．６μｇ／ｍｌの、マウスまたはヒトのＩＬ１７ＲＥ／Ｆｃキメラタンパク質３０μｌで、４℃にて一晩コーティングした。その翌日、２０〜２５μｌのＦａｂ含有大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）溶解物を、１〜２ｎＭの等容量のビオチン化されたマウスＩＬ−１７ＣまたはヒトＩＬ−１７Ｃと、ＲＴにて３０分間プレインキュベートして、Ｆａｂ−抗原複合体を形成した。ＰＢＳ中５％ＢＳＡによる１時間のプレートのブロッキング後に、マウスまたはヒトのＩＬ１７ＲＥ／Ｆｃでコーティングしたウェルに複合体を加えて、ＭＳＤ  Ｓｅｃｔｏｒ  Ｉｍａｇｅｒを用いたストレプトアビジン−ＥＣＬを介して、受容体の結合を検出した。
【０２２３】
ｍ／ｈｕＩＬ−１７ＲＥ阻害アッセイにおける＞６０％のシグナル低下を、ポジティブヒットと定義した。合計で、受容体阻害スクリーニングにより、ＩＬ−１７Ｃの、各受容体への結合（ヒトまたはマウスのＩＬ１７ＲＥ／Ｆｃ）を阻害する２８５個のクローンが生じた。
【０２２４】
４．固有クローンの同定
ＩＬ−１７Ｃの、ヒトまたはマウスそれぞれのＩＬ−１７ＲＥ受容体への結合を阻止すると同定されたクローンを選んで、別の圧迫プレート上に乗せ、そして各候補の重鎖遺伝子および軽鎖遺伝子の配列を決定して、全２８５クローンの固有配列を同定した。
【０２２５】
配列決定したクローンのうち、１７個の固有クローンを同定することができた。最も頻度が高い重鎖は、８抗体のＶＨ３−２３であり、３抗体がＶＨ３−０７鎖を有し、２抗体がＶＨ３−１１およびＶＨ１−４６を、１抗体がＶＨ３−１５またはＶＨ３−２１の重鎖をそれぞれ有する。最も頻度が高い軽鎖は、８抗体のＶｌａｍｂｄａ３−１であり、４抗体がＶｋａｐｐａ１−１２鎖を、２抗体がＶｌａｍｂｄａ２−２３を、そして１抗体がＶｋａｐｐａ１−０６、Ｖｋａｐｐａ１−５１またはＶｋａｐｐａ３−１５の軽鎖をそれぞれ有する。それぞれのフレームワークおよび重鎖／軽鎖は、米国特許出願第１３／３２１５６４号明細書または米国特許出願第１３／２９９３６７号明細書に開示されるように、Ｙｌａｎｔｈｉａ（登録商標）抗体ライブラリに提供される。これらの出願は双方とも、参照によって本明細書中に組み込まれる。
【０２２６】
５．発現ベクター中へのＦａｂコーディングＤＮＡのクローニング、および発現／精製
１７個の全固有Ｙｌａｎｔｈｉａ（登録商標）抗体を、細菌Ｆａｂ発現ベクター中にサブクローニングした。発現および精製のために、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）を、Ｆａｂコーディング発現ベクターで形質転換した。細胞培養体の上澄みを、発現の誘導後に収穫し、Ｈｉｓタグ特異的親和性クロマトグラフィ（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を介した精製にかけて、Ｈｉｓタグ付きＦａｂを精製した。全てのサンプルを濾過滅菌した（０．２μｍの細孔サイズ）。Ｌａｂｃｈｉｐ  Ｓｙｓｔｅｍ（Ｃａｌｉｐｅｒ  ＧＸＩＩ，Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ）を用いた、またはＳＤＳ−ＰＡＧＥでの、変性、還元、および非還元条件下で、Ｆａｂの純度を分析した。タンパク質濃度を、ＵＶ−分光測光法によって判定した。
【０２２７】
６．Ｙｌａｎｔｈｉａ（登録商標）抗体のＩｇＧ変換、および発現／精製
１７個の固有Ｙｌａｎｔｈｉａ（登録商標）クローンを、サブクローニング手順によって、ＦａｂからＩｇＧフォーマットに変換した。１７個の全抗体コーディングベクターを、酵素によって消化して、生じたベクターバックボーンを、Ｙｌａｎｔｈｉａ（登録商標）哺乳類発現カセットと連結し、さらに各全長ＩｇＧベクター中にサブクローニングした。
【０２２８】
発現および精製のために、ＩｇＧの重鎖および軽鎖の双方をコードするｐＹＭｅｘ１０真核生物発現ベクターＤＮＡで、真核生物ＨＫＢ１１細胞をトランスフェクションした。細胞培養体の上澄みを、トランスフェクションの３日後に収穫して、標準的なプロテインＡ親和性クロマトグラフィ（ＭａｂＳｅｌｅｃｔ  ＳＵＲＥ，ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）にかけて、抗体を精製した。全てのサンプルを濾過滅菌した（０．２μｍの細孔サイズ）。Ｌａｂｃｈｉｐ  Ｓｙｓｔｅｍ（Ｃａｌｉｐｅｒ  ＧＸＩＩ，Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ）を用いた、またはＳＤＳ−ＰＡＧＥでの、変性、還元、および非還元条件下で、ＩｇＧの純度を分析した。タンパク質濃度を、ＵＶ−分光測光法によって判定し、ＨＰ−ＳＥＣを実行して、ＩｇＧ調製物を本来の状態で分析した。
【０２２９】
１７個の全固有Ｙｌａｎｔｈｉａ（登録商標）ＩｇＧを、探索スケールで、ＨＫＢ１１細胞において、ヒトＩｇＧ１アイソタイプフォーマットで生産した。１７個の全ＩｇＧは、良好な発現収率（＞５ｍｇ／Ｌ）を示し、３／１７個のみが、不所望の凝集傾向に起因して、品質管理分析をパスしなかった。
【０２３０】
全体として、１４個の個々の抗体は、良好な量が生産され得、ＳＥＣにおける品質管理をパスした（＞９０％のモノマー含有量）。１４個の精製した全ＩｇＧ１抗体を、ＩＬ−１７Ｃへの結合についてＥＬＩＳＡで試験して、更なる機能試験にかけた。
【０２３１】
７．ＩＬ−１７Ｃホモダイマーに二価結合するＩＬ−１７Ｃ特異的抗体の、サイズ排除クロマトグラフィを介した同定
可溶性のホモダイマーとして、ＩＬ−１７Ｃは、分子量がそれぞれ２１，７６５Ｄａである２つのＩＬ−１７Ｃモノマーで構成される。したがって、ホモダイマーＩＬ−１７Ｃは、総分子量が約４４ｋＤａであり、基本的に３つの異なる方法で３つの異なる複合体を形成するように、モノクローナル抗体によって結合され得る（図１）。
【０２３２】
抗体の特異性に応じて、３つの複合体：２つのホモダイマーが１つの抗体と結合する複合体（クラスＩ）、２つのホモダイマーが２つの抗体と結合する複合体（クラスＩＩ）、または１つのホモダイマーが１つの抗体と結合する複合体（クラスＩＩＩ）のうち、主に１つが形成される。したがって、形成される複合体は、分子量が異なり、クラスＩ複合体は分子量が約２７０ｋＤａであり、クラスＩＩ複合体は分子量が約３８０ｋＤａであり、そしてクラスＩＩＩ複合体は分子量が約１９０ｋＤａである。
【０２３３】
１つのＩＬ−１７Ｃホモダイマーに二価結合し、かつ、分子量が２００ｋＤａ未満のクラスＩＩＩ複合体を主に形成する抗体を選択するために、抗体を、ヒトＩＬ−１７Ｃホモダイマーとインキュベートして、サイズ排除クロマトグラフィにかけた。
【０２３４】
等モル量の抗原および各抗体を混合することによって、結合モードの分析をした。抗原−抗体相互作用によって生じた複合体を、サイズ排除クロマトグラフィ（ＳＥＣ）で分析し、各複合体のサイズを、ＭＡＬＳによって判定した。形成された各複合体を、光散乱検出器によって検出した。
【０２３５】
検出された複合体の、複合体の理論分子量１：１（約１９０ｋＤａ）、１：２（約２７０ｋＤａ）、および２：２（約３８０ｋＤａ）との比較によって、結合モードを推測した。
【０２３６】
２つの抗体（ｍａｂ＿１、ｍａｂ＿８）は、主にクラスＩＩＩ複合体を形成するので、１つのＩＬ−１７Ｃホモダイマーに二価結合することが見出された（図２、図３）。双方の抗体は、米国特許出願第１３／３２１５６４号明細書または米国特許出願第１３／２９９３６７号明細書に開示されるように、Ｙｌａｎｔｈｉａ（登録商標）抗体ライブラリに提供される、ＶＨ３−２３重鎖およびＶｌａｍｂｄａ３−１軽鎖を有する。これらの出願は双方とも、参照によって本明細書中に組み込まれる。
【０２３７】
対照的に、１つのＩＬ−１７Ｃホモダイマーに二価結合しない他の抗体は、分子量が２００ｋＤａ未満（クラスＩＩＩ）の複合体を形成せずに、クラスＩおよびクラスＩＩのような、または他のより大きな複合体を形成すると同定された（図６）。
【０２３８】
実施例３：受容体阻害活性についての、ＩＬ−１７Ｃ特異的ＩｇＧの特性評価
精製したＩＬ−１７Ｃ特異的ＩｇＧを、ｍＩＬ−１７ＲＥ相互作用アッセイで試験した。したがって、ＭＡ６０００  ３８４ウェルプレート（Ｍｅｓｏ  Ｓｃａｌｅ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ，ＭＳＤ）を、ＰＢＳ中７５ｎｇ／ｍｌのマウスＩＬ１７ＲＥ／Ｆｃキメラタンパク質３０μｌで、４℃にて一晩、コーティングした。その翌日、抗体段階希釈液（０．００１〜１００ｎＭの濃度）を、等容量のビオチン化されたＩＬ−１７Ｃと、ＲＴにて３０分間プレインキュベートした。ＰＢＳＴ中２．５％ＢＳＡによる１時間のプレートのブロッキング後に、コーティングしたＩＬ１７ＲＥ／Ｆｃに、以前に形成された抗体−リガンド複合体を１時間加えて、ＭＳＤ  Ｓｅｃｔｏｒ  Ｉｍａｇｅｒを用いたストレプトアビジン−ＥＣＬを介して、受容体の結合を検出した。結果を表４に示す。
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【０２３９】
実施例４：ＩＬ−１７Ｃ駆動ＮＦ−κＢリポータアッセイにおける機能試験
マウスＩＬ−１７ＲＥを過剰発現するＮＩＨ３Ｔ３細胞中でのＮＦ−κＢリポータ遺伝子のＩＬ−１７Ｃ駆動活性化を監視する機能細胞ベースアッセイで、ヒト、マウスおよびカニクイザルのＩＬ−１７Ｃの生物学的活性を阻害する能力について、精製したＩＬ−１７Ｃ特異的ＩｇＧをさらに試験した。
【０２４０】
１０％ＦＢＳおよび１％ペニシリン／ストレプトマイシン（Ｐｅｎ／Ｓｔｒｅｐ）を補ったＤＭＥＭ中で、３７℃、５％ＣＯ２にて、ＮＩＨ３Ｔ３細胞を培養した。アッセイのために、Ｐｏｌｙｐｌｕｓ  ｊｅｔ−ＰＥＩトランスフェクション剤を用いて、総量１００ｎｇのＤＮＡ（２０ｎｇのマウスＩＬ−１７ＲＥ発現構築体、５０ｎｇのＮＦ−κＢルシフェラーゼリポータ構築体、および３０ｎｇのｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔ）により、ＮＩＨ３Ｔ３細胞を懸濁液中でトランスフェクションした。要するに、５μｌの１５０ｍＭ  ＮａＣｌ（ウェルあたり）中にＤＮＡを希釈して、８μ１の１５０ｍＭ  ＮａＣｌ（ウェルあたり）中に０．２μｌのｊｅｔ−ＰＥＩを調製した。室温にて５分のインキュベーション後、ＪｅｔＰＥＩ溶液をＤＮＡ溶液に加えて、室温にて２０〜３０分間、さらにインキュベートした。ＮＩＨ３Ｔ３細胞を希釈して、８７μｌの培地中に約４０，０００細胞を有するようにした。細胞をＤＮＡ−ＪｅｔＰＥＩ混合物（８７μｌの細胞および１３μｌのＤＮＡ−ＪｅｔＰＥＩ混合物／ウェル）に加えて、最終容量を９６ウェルプレート中に移した。
【０２４１】
加湿した５％ＣＯ２インキュベータ内での３７℃において一晩のインキュベーション後、培地を取り出して、５％ＦＢＳおよび１％ペニシリン／ストレプトマイシンを含有する９０μｌ培地で置換した。等容量の、精製した組換えＩＬ−１７Ｃ（ヒトＩＬ−１７Ｃ（Ｎｏｖｕｓ  ＃ＮＢＰ１−４２９１０）、マウスｍＩＬ−１７Ｃ（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ  ＃２３０６−ｍｌ−０２５）、またはカニクイザルＩＬ−１７Ｃ（インハウスで生産））と室温にて３０分間プレインキュベートしたＤＰＢＳ中に調製した抗体段階希釈液の１０μｌを、細胞に加えた。ＩＬ−１７Ｃの最終濃度は、０．５ｎｇ／ｍｌであった。プレートをＣＯ２インキュベータ内で３７℃にてインキュベートした後、１００μｌのＳｔｅａｄｙＬｉｔｅ  Ｐｌｕｓ（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ）を加えてから、Ｅｎｖｉｓｉｏｎ（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ）で発光を読み出す。
【０２４２】
２つの抗体（ｍａｂ＿１、ｍａｂ＿８）は、表５に示すように、ＩＬ−１７Ｃ媒介シグナル伝達を最も効果的に阻害することが見出された。
2018506296.tif 000016
【０２４３】
実施例５：一次ヒトケラチン生成細胞中でのＩＬ−１７Ｃ駆動ＤＥＦ４Ｂ遺伝子発現の機能試験
更なる機能実験において、ヒトケラチン生成細胞中でのＩＬ−１７Ｃ媒介ベータデフェンシン２発現を、ｍａｂ＿１およびｍａｂ＿８の存在下および不在下で分析した。
【０２４４】
ＮＨＥＫ（正常なヒト表皮ケラチン生成細胞）を、Ｌｏｎｚａから得て、サプリメント入りケラチン生成細胞増殖培地（ＫＧＭ−Ｇｏｌｄ（商標）Ｂｕｌｌｅｔ  ｋｉｔ，Ｌｏｎｚａ）中で、メーカーのプロトコルに従って、培養した。継代３まで継代培養して、そこで低温保存したＮＨＥＫを解凍して直ちに、９６ウェル細胞培養プレート内のＫＧＭ細胞培地中に、３０，０００細胞／ウェルとなるように播種した。２日後に、培地を取り出して、ヒドロコルチゾンなしのＫＧＭ−Ｇｏｌｄに変更してから、ｈＩＬ−１７Ｃ（Ｎｏｖｕｓ  ＃ＮＢＰ１−４２９１０）およびｈＴＮＦα（Ｐｅｐｒｏｔｅｃｈ  ＃３００−０１Ａ）を加えて、それぞれ１０ｎｇ／ｍｌの最終濃度にした。
【０２４５】
抗体を試験するために、ヒトＩＬ−１７Ｃを最初に、ＤＰＢＳ中に調製した等容量の抗体段階希釈液と室温にて３０分間プレインキュベートした。細胞を４８時間培養してから、ＲＮｅａｓｙ  ９６  Ｋｉｔ（Ｑｉａｇｅｎ）を用いて総ＲＮＡを抽出し、Ｔａｑｍａｎ（登録商標）Ｒｅｖｅｒｓｅ  Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ  Ｒｅａｇｅｎｔｓ（Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）を用いて逆転写し、ベータデフェンシン２（ＤＥＦＢ４Ａ）の発現を、定量ＰＣＲ（ｑＰＣＲ）で判定した。要するに、Ｔａｑｍａｎ（登録商標）ユニバーサルＰＣＲマスターミックス／Ｎｏ  ＡｍｐＥｒａｓｅ（登録商標）ＵＮＧ、およびＤＥＦ４Ｂ用に予めデザインされたＡｓｓａｙ−ｏｎ−ｄｅｍａｎｄ  Ｇｅｎｅ発現プライマー／プローブセット（＃Ｈｓ００８２３６３８＿ｍ１，全てＡｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）を用いて、１０μｌ  ＰＣＲ反応液を調製した。ＶｉｉＡ７（商標）Ｒｅａｌ−Ｔｉｍｅ  ＰＣＲ機器（Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）でｑＰＣＲを実行した。ハウスキーピング遺伝子、β−アクチン（Ｔａｑｍａｎプライマーセット＃４３１０８８１Ｅ）またはＧＡＰＤＨ（Ｔａｑｍａｎプライマーセット＃４３１０８９３Ｅ）に対して、遺伝子発現を標準化した。
【０２４６】
双方の抗体（ｍａｂ＿１、ｍａｂ＿８）は、ベータデフェンシン２の発現を効果的に引き下げることを示し、ヒトＩＬ−１７Ｃの生物学的活性を中和する能力を確認した（表６）。
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【０２４７】
実施例６：一価Ｆａｂフォーマットおよび二価ＩｇＧフォーマットの親和性判定
さらに、一価Ｆａｂおよび二価ＩｇＧの親和性を、ＳＥＴによって判定した。したがって、ＥＣ５０判定のために、精製したＦａｂおよびＩｇＧを、ヒトまたはマウスのＩＬ−１７Ｃについて滴定した。結果により、主にクラスＩＩＩ複合体を形成するＩｇＧ抗体によって発揮される、提唱された結合力効果が確認された。
【０２４８】
溶液平衡滴定（ＳＥＴ）を、基本的に、文献に記載されているように実行した（Ｆｒｉｑｕｅｔ  ｅｔ  ａｌ．，（１９８５）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈ．７７：３０５−１９）。ＳＥＴ法の感度および精度を向上させるために、古典的なＥＬＩＳＡからＥＣＬベースの技術に変えた（Ｈａｅｎｅｌ  ｅｔ  ａｌ．（２００５）Ａｎａｌ  Ｂｉｏｃｈｅｍ．３３９．１：１８２−８４）。
【０２４９】
表６に示すように、ｍａｂ＿１  ＩｇＧ抗体およびｍａｂ＿８  ＩｇＧ抗体の、判定したＥＣ５０値は、各Ｆａｂと比較して、ヒトＩＬ−１７Ｃ、そしてまたマウスＩＬ−１７Ｃに対して、有意に向上した。このことは、１つのＩＬ−１７Ｃホモダイマーに対する二価結合に基づく高い結合力効果を示している。
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【０２５０】
実施例７：ＥＬＩＳＡベースの交差競合アッセイ
以下の標準的な手順に従うＥＬＩＳＡアッセイを用いて、抗ＩＬ−１７Ｃ抗体または別のＩＬ−１７Ｃ結合剤の交差競合を検出することができる。
【０２５１】
ＥＬＩＳＡアッセイの一般原則は、ＥＬＩＳＡプレートのウェル上への、抗ＩＬ−１７Ｃ抗体のコーティングを包含する。次に、第２の、潜在的に交差競合する、抗ＩＬ−１７Ｃ抗体の過剰量を、溶液中に加える（すなわち、ＥＬＩＳＡプレートに結合しない）。続いて、限られた量のＩＬ−１７Ｃ−Ｆｃを、当該ウェルに加える。
【０２５２】
ウェル上にコーティングされている抗体、および溶液中の抗体は、限られた数のＩＬ−１７Ｃ分子の結合について、競合することとなる。次に、プレートを洗浄して、コーティングした抗体に結合しなかったＩＬ−１７Ｃ分子を除去し、そしてまた、第２の、溶液相の抗体、および、第２の、溶液相の抗体とＩＬ−１７Ｃとの間で形成されたあらゆる複合体を除去する。次に、結合したＩＬ−１７Ｃの量を、適切なＩＬ−１７Ｃ検出試薬を用いて測定する。したがって、ＩＬ−１７Ｃは、タグ、例えばＦｃ、Ｆｌａｇその他と融合し得、これを適切なタグ特異的剤を介して検出することができる。
【０２５３】
コーティングした抗体と交差競合する、溶液中の抗体は、コーティングした抗体が、第２の、溶液相の抗体の不在下で結合することができるＩＬ−１７Ｃ分子の数と比較して、コーティングした抗体が結合することができるＩＬ−１７Ｃ分子の数の引下げをもたらすことができる。
【０２５４】
このアッセイを、Ａｂ−ＸおよびＡｂ−Ｙと呼ばれる２つの抗体について、以下でさらにより詳細に記載する。Ａｂ−Ｘを、固定する抗体とするように選択する例において、Ａｂ−Ｘを、ＥＬＩＳＡプレートのウェル上にコーティングする。その後、後に加える試薬の非特異的結合を最小限に抑えるのに適したブロッキング溶液で、プレートをブロッキングする。次に、過剰量のＡｂ−ＹをＥＬＩＳＡプレートに加えて、１ウェルあたりのＡｂ−Ｙ  ＩＬ−１７Ｃ結合部位のモル数が、ＥＬＩＳＡプレートのコーティング中に、１ウェルあたりに用いられるＡｂ−Ｘ  ＩＬ−１７Ｃ結合部位のモル数よりも少なくとも１０倍高くなるようにする。ＩＬ−１７Ｃを加えて、１ウェルあたりに加えられるＩＬ−１７Ｃのモル数が、各ウェルをコーティングするのに用いられるＡｂ−Ｘ  ＩＬ−１７Ｃ結合部位のモル数よりも少なくとも２５倍低くなるようにする。適切なインキュベーション期間の後、ＥＬＩＳＡプレートを洗浄して、ＩＬ−１７Ｃ抗原に特異的な検出試薬を加えて、コーティングされた抗ＩＬ−１７Ｃ抗体（この場合、Ａｂ−Ｘ）によって特異的に結合されるＩＬ−１７Ｃ分子の量を測定する。アッセイ用のバックグラウンドシグナルは、コーティングされた抗体（この場合、Ａｂ−Ｘ）、第２の溶液相の抗体（この場合、Ａｂ−Ｙ）、バッファのみ（すなわち、ＩＬ−１７Ｃなし）、および検出試薬が入ったウェルにおいて得られるシグナルと定義される。アッセイ用のポジティブコントロールシグナルは、コーティングされた抗体（この場合、Ａｂ−Ｘ）、第２の溶液相の抗体バッファのみ（すなわち、第２の溶液相の抗体なし）、ＩＬ−１７Ｃ検出試薬が入ったウェルにおいて得られるシグナルと定義される。ＥＬＩＳＡアッセイは、ポジティブコントロールシグナルが、バックグラウンドシグナルの少なくとも６倍であるようにランされる必要がある。
【０２５５】
コーティング抗体としてどの抗体を用いるべきか、そして第２の（競合体）抗体としてどれを用いるべきかの選択に由来するあらゆる人為結果（例えば、ＩＬ−１７Ｃに対する、Ａｂ−ＸとＡｂ−Ｙ間の、有意に異なる親和性）を回避するために、交差ブロッキングアッセイは、２つのフォーマット：１）Ａｂ−Ｘが、ＥＬＩＳＡプレート上にコーティングされる抗体であり、Ａｂ−Ｙが、溶液中にある競合体抗体である、フォーマット１、および２）Ａｂ−Ｙが、ＥＬＩＳＡプレート上にコーティングされる抗体であり、Ａｂ−Ｘが、溶液中にある競合体抗体である、フォーマット２でランされることを必要とする。
【０２５６】
実施例８：水素／重水素交換質量分析を用いたエピトープ判定
ＨＤＸ質量分析（ＨＤＸ  ＭＳとも呼ぶ）は、タンパク質の不安定なプロトンが、水溶液中の溶媒のプロトンと交換される原則を利用するものである。反応動態は、温度、ｐＨ、各アミノ酸の酸性度、および問題のプロトンの溶媒への曝露の程度に依存する。溶媒を水素ベースの水溶液から重水素ベースの水溶液に置換することによって、重水素は、タンパク質の溶媒露出領域において迅速に組み込まれて、各水素原子を置換する。タンパク質の消化の後、質量分析を用いて、ペプチド質量を分析する。重水素の組込み直後の質量の増加を同定することができる。抗体フラグメントが結合した抗原のペプチド質量を、抗体フラグメントが結合していない抗原のペプチド質量と比較することによって、抗体のエピトープを決定することができる。
【０２５７】
したがって、（各抗体と）複合化されていない、そして複合化された抗原サンプルを、種々のインキュベーション時間（例えば０秒、１０秒、３０秒、２分、１０分、３０分、１時間）、重水素溶媒に曝す。所定の各時点にて、サンプルを、ペプシンカラム中への注入によって迅速に消化して、特定の重水素パターンを保存するために、低ｐＨおよび低温を用いて、重水素交換条件をクエンチする。生じた重水素化されたペプチドおよび重水素化されていないペプチドを脱塩して、逆相（ＲＰ）ナノＵＰＬＣ分離を用いて分離して、高解像度Ｑ−ＩＭＳ−ＴＯＦ質量スペクトロメータ中に注入する。完全な抗原サンプルのペプチド配列カバー率を最大にするように、クロマトグラフィ条件を最適化する。
【０２５８】
抗体のエピトープを同定するために、各ペプチドの重水素の組込みの動態速度を、非結合状態および複合化状態で比較する。複合化状態での特定のペプチドの組込み速度の低下は、結合抗体による、周囲の溶媒からのペプチドの遮蔽に由来する。視覚化のために、重水素の差分取込みを、抗原の配列上にプロットする。
【０２５９】
液体ハンドリングおよびクロマトグラフィのセットアップ
自動化水素−重水素交換質量分析（ＨＤＸ  ＭＳ）実験を、Ｔ．Ｅ．Ｗａｌｅｓ  ａｎｄ  Ｊ．Ｒ．Ｅｎｇｅｎ（Ｍａｓｓ  Ｓｐｅｃｔｒｏｍ  Ｒｅｖ．２００６  Ｊａｎ−Ｆｅｂ；２５（１）：１５８−７０）によって記載される方法に基づいて、設計する。用いた分析装置は、ＨＤＸ  Ｍａｎａｇｅｒ、ナノＵＰＬＣクロマトグラフィ系、および高解像度質量スペクトロメータからなり、Ｗａｔｅｒｓ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ（Ｍｉｌｆｏｒｄ，ＭＡ、米国）によって供給される。要するに、冷蔵サンプルコンパートメントを２℃に維持した、Ｗａｔｅｒｓの自動化ＨＤＸ  ｍａｎａｇｅｒで、液体のハンドリング操作を実行する。ＨＤＸ  Ｍａｎａｇｅｒは、ＰＡＬ  ＨＴＳ  Ｌｉｑｕｉｄハンドラ、２つのＷａｔｅｒｓ  Ｍ−クラスＵＰＬＣ  Ｐｕｍｐｓｙｓｔｅｍｓ、ならびにサンプルトラッピングおよびクロマトグラフィ分離用の冷蔵コンパートメントで構成される。液体ハンドリング系を用いて、種々の時間についてタンパク質複合体サンプルをインキュベートすることによって、重水素交換を実行する。続いて、サンプルを、６−ポート注入バルブ中に注入して、２０℃のＷａｔｅｒｓ  Ｐｅｐｓｉｎカラム上で、オンラインで消化する。タンパク質分解ペプチドを、Ｗａｔｅｒｓ  Ｔｒａｐｐｉｎｇカラム上に自動的に収集し、Ｗａｔｅｒｓ  Ｃ−１８逆相カラム中に注入して、分離する。脱塩して分離したタンパク質分解ペプチドを、Ｓｙｎａｐｔ  Ｇ２ｓｉ質量スペクトロメータのエレクトロスプレーイオン化（ＥＳＩ）源中に直接注入する。
【０２６０】
質量分光解析
Ｗａｔｅｒｓ  Ｓｙｎａｐｔ  Ｇ２ｓｉ（Ｑ−ＩＭＳ−ＴＯＦ）質量スペクトロメータを用いて、タンパク質分解ペプチドを同定する。溶出ピークが同時の場合、イオン移動度分離を用いて、更なる解析度を獲得する。また、断片化ＭＳ／ＭＳ分析を用いて、より高い解析度を達成することができる。この場合、重水素スクランブリングによる情報の損失を回避するために、電子移動解離（ＥＴＤ）を用いて、各ペプチドの断片化を初期化する。
【０２６１】
タンパク質およびタンパク質：Ｆａｂ複合体の調製
５０μｇ  ＩＬ−１７Ｃを、１：１のモル比でＦａｂと混合することによって、タンパク質：Ｆａｂ複合体を調製して、４℃にて少なくとも２時間インキュベートする。
【０２６２】
オンイクスチェンジ実験（ｏｎ−ｅｘｃｈａｎｇｅ  ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔ）のために、ＩＬ−１７ＣまたはＩＬ−１７Ｃ：Ｆａｂ複合体を、Ｄ２Ｏバッファで希釈する。重水素組込みの動態を洞察するために、Ｄ２Ｏバッファ中でのインキュベーションの種々の時点（例えば０秒、１０秒、３０秒、２分、１０分、３０分、および１時間）にて、サンプルを分析する。還元バッファを加えることによって混合物を還元してから、クエンチバッファでクエンチする。混合してクエンチした溶液を、クロマトグラフィ系中に注入すると、ＬＣ−ＭＳが自動的に消化し、分離し、かつ分析する。サンプルとコントロールとの間の重水素化の平均変化を、サンプルとコントロールとの重水素取込みレベル間の差異として算出する。
【０２６３】
データ処理
ＷａｔｅｒｓのソフトウェアパッケージＭａｓｓＬｙｎｘ、ＨＤＸ  Ｍａｎａｇｅｒ、ＢｉｏｐｈａｒｍａＬｙｎｘ、およびＤｙｎａｍｉｘを用いて、質量分光計の生データを評価する。分光計のデータを記録するために、ソフトウェアＭａｓｓＬｙｎｘおよびＨＤＸ  Ｍａｎａｇｅｒを用いる。続いて、ＢｉｏｐｈａｒｍａＬｙｎｘを用いて、全タンパク質分解ペプチドを同定する。この情報を用いて、個々のペプチドそれぞれの重水素取込み量を、ＷａｔｅｒｓのＤｙｎａｍｉｘソフトウェアを用いて評価する。
【０２６４】
重水素の取込みレベルを、重水素化サンプルと非重水素化参照ペプチドとの間の質量差異として報告する。処理したデータを手動で評価して、自動化プロセシングステップの誤りおよびエラーを訂正するように調整する。各ペプチドの全体にわたって重水素含有量を非局在化する（すなわち、観察された重水素化レベルを、そのペプチド中のアミノ酸の数で割る）ことによって、タンパク質配列の各残基に、重水素取込みレベルを割り当てる。
【０２６５】
複数のペプチドによって残基がカバーされるならば、その残基をカバーする全てのペプチドの、標準化された重水素取込みが、ソフトウェアによって平均される。可能ならば、ＭＳ／ＭＳ分析由来の追加情報を用いて、分析の解析度を高める。
【０２６６】
結果
抗体ｍａｂ＿１およびｍａｂ＿８について、先に概説したように、水素−重水素交換質量分析（ＨＤＸ  ＭＳ）を用いて、エピトープを判定した。双方の抗体、ｍａｂ＿１およびｍａｂ＿８について、ＨＤＸ  ＭＳエピトープマッピングを介して、ヒトＩＬ−１７Ｃ上の同じ保護領域を同定した。カバーマップ（図８Ａおよび図８Ｂ）は明らかに、双方の抗体について、ヒトＩＬ−１７Ｃ上の主要なエピトープとして、領域ＰＶＬＲＰＥＥＶＬ（配列番号２７、配列番号１のａａ８９〜９７）を同定している。
【０２６７】
また、保護が非常に弱いヒトＩＬ−１７Ｃ上の３つの更なる領域（ａａ９８〜１１１（ＡＤＴＨＱＲＳＩＳＰＷＲＹ；配列番号２９）、ａａ１３２〜１４６（ＣＲＧＣＩＤＡＲＴＧＲＥＴＡＡＬ；配列番号３０）およびａａ１９２〜１９７（ＴＣＶＬＰＲＳＶ；配列番号３１）を、双方の抗体について同定した。しかしながら、保護のレベルが低いために、これらの領域は、エピトープの必須の部分ではない。
【０２６８】
結果は、ＩＬ−１７Ｃ上の領域ＰＶＬＲＰＥＥＶＬ（配列番号２７）に結合する、例示した抗体もまた、１つのＩＬ−１７Ｃホモダイマーへの二価結合を示すことを示している。
【０２６９】
実施例９：ＳＥＣによる更なる抗体の複合体判定
また、更なる抗体を、実施例２、７節に記載する方法に従って、結合特性について分析した。
【０２７０】
５つの更なる抗体が、サイズ排除クロマトグラフィ（ＳＥＣ）において、１つのＩＬ−１７Ｃホモダイマーへの二価結合を示す。５つの全抗体についてのＳＥＣ由来の結果を、図４〜図５に例示する。
【０２７１】
図６に、１つのＩＬ−１７Ｃホモダイマーに二価結合しない２つの抗体を例示する。双方の抗体は、分子量が２００ｋＤａ未満の複合体（クラスＩＩＩ）を形成しないが、とりわけ、クラスＩおよびクラスＩＩのようなより大きな複合体を形成する。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８Ａ】
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【図８Ｂ】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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