(57)【要約】  本開示は、非ホジキンリンパ腫、慢性リンパ球性白血病および／または急性リンパ芽球性白血病の処置のための、抗ＣＤ１９抗体およびブルトン型チロシンキナーゼ（ＢＴＫ）阻害剤の医薬品の組み合わせについて記載する。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
配列ＳＹＶＭＨ（配列番号１）のＨＣＤＲ１領域、配列ＮＰＹＮＤＧ（配列番号２）のＨＣＤＲ２領域、配列ＧＴＹＹＹＧＴＲＶＦＤＹ（配列番号３）のＨＣＤＲ３領域、配列ＲＳＳＫＳＬＱＮＶＮＧＮＴＹＬＹ（配列番号４）のＬＣＤＲ１領域、配列ＲＭＳＮＬＮＳ（配列番号５）のＬＣＤＲ２領域および配列ＭＱＨＬＥＹＰＩＴ（配列番号６）のＬＣＤＲ３領域を含む、ＣＤ１９に特異的な抗体と、ブルトン型チロシンキナーゼ（ＢＴＫ）阻害剤とを含む相乗効果のある組み合わせにおいて、非ホジキンリンパ腫、慢性リンパ球性白血病および／または急性リンパ芽球性白血病の処置に使用されることを特徴とする、相乗効果のある組み合わせ。
【請求項２】
請求項１に記載の組み合わせにおいて、前記抗体は、配列
2018516905.tif 000030
の可変重鎖、および配列
2018516905.tif 000031
の可変軽鎖を含むことを特徴とする組み合わせ。
【請求項３】
請求項１または２に記載の組み合わせにおいて、前記抗体は、配列
2018516905.tif 000032
の重鎖定常ドメインを含むことを特徴とする組み合わせ。
【請求項４】
請求項１乃至３の何れか１項に記載の組み合わせにおいて、前記抗体は、配列
2018516905.tif 000033
の軽鎖定常ドメインを含むことを特徴とする組み合わせ。
【請求項５】
請求項１乃至４の何れか１項に記載の組み合わせにおいて、ＣＤ１９に特異的な前記抗体および前記ブルトン型チロシンキナーゼ（ＢＴＫ）阻害剤は、別々に投与されることを特徴とする組み合わせ。
【請求項６】
請求項１乃至５の何れか１項に記載の組み合わせにおいて、前記ブルトン型チロシンキナーゼ（ＢＴＫ）阻害剤は、ＣＤ１９に特異的な前記抗体の投与前に投与されることを特徴とする組み合わせ。
【請求項７】
請求項１乃至６の何れか１項に記載の組み合わせにおいて、ＣＤ１９に特異的な前記抗体および前記ブルトン型チロシンキナーゼ（ＢＴＫ）阻害剤は、同時に投与されることを特徴とする組み合わせ。
【請求項８】
請求項１乃至７の何れか１項に記載の組み合わせにおいて、ＣＤ１９に特異的な前記抗体および前記ブルトン型チロシンキナーゼ（ＢＴＫ）阻害剤は、患者において両方の薬剤が同時に有効であるときに投与されることを特徴とする組み合わせ。
【請求項９】
請求項１乃至８の何れか１項に記載の組み合わせにおいて、前記ブルトン型チロシンキナーゼ（ＢＴＫ）阻害剤は、イブルチニブであることを特徴とする組み合わせ。
【請求項１０】
請求項１乃至９の何れか１項に記載の組み合わせにおいて、慢性リンパ球性白血病の前記処置に使用されることを特徴とする組み合わせ。
【請求項１１】
請求項１乃至１０の何れか１項に記載の組み合わせにおいて、急性リンパ芽球性白血病の前記処置に使用されることを特徴とする組み合わせ。
【請求項１２】
請求項１乃至１１の何れか１項に記載の組み合わせにおいて、非ホジキンリンパ腫の前記処置に使用され、前記非ホジキンリンパ腫は、濾胞性リンパ腫、小リンパ球性リンパ腫、粘膜関連リンパ組織、辺縁帯、びまん性大細胞型Ｂ細胞、バーキット細胞およびマントル細胞からなる群から選択されることを特徴とする組み合わせ。
【請求項１３】
請求項１２に記載の組み合わせにおいて、前記非ホジキンリンパ腫は、濾胞性リンパ腫であることを特徴とする組み合わせ。
【請求項１４】
請求項１２に記載の組み合わせにおいて、前記非ホジキンリンパ腫は、小リンパ球性リンパ腫であることを特徴とする組み合わせ。
【請求項１５】
請求項１２に記載の組み合わせにおいて、前記非ホジキンリンパ腫は、粘膜関連リンパ組織であることを特徴とする組み合わせ。
【請求項１６】
請求項１２に記載の組み合わせにおいて、前記非ホジキンリンパ腫は、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫であることを特徴とする組み合わせ。
【請求項１７】
請求項１２に記載の組み合わせにおいて、前記非ホジキンリンパ腫は、バーキットリンパ腫であることを特徴とする組み合わせ。
【請求項１８】
請求項１２に記載の組み合わせにおいて、前記非ホジキンリンパ腫は、マントル細胞リンパ腫であることを特徴とする組み合わせ。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本開示は、非ホジキンリンパ腫、慢性リンパ球性白血病および／または急性リンパ芽球性白血病の処置のための、抗ＣＤ１９抗体およびブルトン型チロシンキナーゼ（ＢＴＫ）阻害剤の医薬品の組み合わせに関する。
【背景技術】
【０００２】
Ｂ細胞は、液性免疫反応において大きい役割を果たすリンパ球である。Ｂ細胞は、ほとんどの哺乳動物の骨髄で産生され、循環血中のリンパ球プールの５〜１５％に相当する。Ｂ細胞の主な機能は、様々な抗原に対する抗体を作ることであり、Ｂ細胞は適応免疫系の本質的な成分である。
【０００３】
免疫系の調節におけるその決定的な役割のため、Ｂ細胞の調節異常は、リンパ腫および白血病などの種々の障害に関連する。これらには、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）および急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）が含まれる。
【０００４】
ＮＨＬは、リンパ球から生じる不均一な悪性腫瘍である。米国（Ｕ．Ｓ．）における発生率は年間６５，０００人、死亡率は約２０，０００人と推定される（Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｓｏｃｉｅｔｙ，２００６；およびＳＥＥＲ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｓｔａｔｉｓｔｉｃｓ  Ｒｅｖｉｅｗ）。本疾患はすべての年齢で起こる可能性があり、通常の発症は４０歳を超える成人から始まり、発生率は年齢と共に増加する。ＮＨＬは、リンパ節、血液、骨髄および脾臓に蓄積するリンパ球のクローン増殖を特徴とするが、主要な臓器の何れも関係し得る。病理学者および臨床医により使用される現在の分類体系は、ＮＨＬを前駆体および成熟Ｂ細胞新生物または成熟Ｔ細胞新生物にまとめた、腫瘍の世界保健機関（ＷＨＯ）分類（Ｗｏｒｌｄ  Ｈｅａｌｔｈ  Ｏｒｇａｎｉｚａｔｉｏｎ  Ｃｌａｓｓｉｆｉｃａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｔｕｍｏｕｒｓ）である。ＰＤＱは、現在、臨床試験への組み入れのためＮＨＬを低悪性度（ｉｎｄｏｌｅｎｔ）または高悪性度（ａｇｇｒｅｓｓｉｖｅ）に分類している。低悪性度ＮＨＬ群は、主に濾胞性亜型、小リンパ球性リンパ腫、ＭＡＬＴ（粘膜関連リンパ組織）および辺縁帯からなり、低悪性度は、新たに診断されたＢ細胞ＮＨＬ患者の約５０％を包含する。高悪性度ＮＨＬは、主にびまん性大細胞型Ｂ細胞（ＤＬＢＬ、ＤＬＢＣＬまたはＤＬＣＬ）（新たに診断された全患者の４０％がびまん性大細胞を有する）、バーキット細胞およびマントル細胞と組織学的に診断された患者を含む。ＮＨＬの臨床経過はばらつきが大きい。臨床経過の主要な決定因子は、組織学的サブタイプである。大部分の低悪性度型のＮＨＬは、不治の疾患と考えられる。患者は、最初に化学療法または抗体療法の何れかに反応するが、大部分は再発する。これまでの研究からは、早期介入による生存期間の改善が立証されていない。無症候性患者では、患者が症状を示すようになるか、または疾患の進行速度が加速していると思われるまで「経過観察を行う（ｗａｔｃｈ  ａｎｄ  ｗａｉｔ）」ことが容認される。本疾患は、時間経過と共により高悪性度の組織型に変化することがある。生存期間中央値は８〜１０年であり、低悪性度患者は、多くの場合、その疾患の処置段階において３つ以上の処置を受ける。症状を示す低悪性度ＮＨＬ患者の初期処置は、歴史的に併用化学療法であった。最も多く使われている薬として、シクロホスファミド、ビンクリスチンおよびプレドニゾン（ＣＶＰ）；またはシクロホスファミド、アドリアマイシン、ビンクリスチン、プレドニゾン（ＣＨＯＰ）が挙げられる。患者の約７０％〜８０％は、それらの初期化学療法に反応し、寛解の期間は２〜３年程度持続する。最終的に患者の大半が再発する。抗ＣＤ２０抗体、リツキシマブの発見および臨床使用により、反応率および生存率が著しく改善されている。大部分の患者の現在の標準治療は、リツキシマブ＋ＣＨＯＰ（Ｒ−ＣＨＯＰ）またはリツキシマブ＋ＣＶＰ（Ｒ−ＣＶＰ）である。インターフェロンがアルキル化剤と併用してＮＨＬの初期処置として承認されているが、米国では使用が限定される。リツキシマブ療法は、いくつかのタイプのＮＨＬにおいて有効であることが示されており、現在低悪性度（濾胞性リンパ腫）および高悪性度ＮＨＬ（びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫）の両方の第１選択治療として承認されている。しかしながら、抗ＣＤ２０モノクローナル抗体（ｍＡｂ）には、一次耐性（再発した低悪性度患者で５０％の奏効）、獲得耐性（再処置時の奏効率５０％）、稀な完全奏効（再発した母集団で完全奏効率２％）、および再発パターンの継続を含め、かなりの限界がある。最後に、多くのＢ細胞はＣＤ２０を発現せず、したがって多くのＢ細胞障害は抗ＣＤ２０抗体療法を用いて処置できない。
【０００５】
ＮＨＬに加えて、Ｂ細胞の調節異常に起因するいくつかのタイプの白血病が存在する。慢性リンパ球性白血病（「慢性リンパ性白血病」または「ＣＬＬ」とも呼ばれる）は、Ｂリンパ球の異常蓄積により引き起こされる成人白血病の一種である。ＣＬＬでは、悪性リンパ球は正常かつ成熟しているように見えることがあるが、効率的に感染に対処することができない。ＣＬＬは、成人における白血病の最も一般的な形態である。男性の方が女性よりもＣＬＬを２倍発症しやすい。しかしながら、重要な危険因子は年齢である。新規症例の７５％超が５０歳を超える患者で診断される。毎年１０，０００例超が診断され、死亡数は年間ほぼ５，０００例である（Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｓｏｃｉｅｔｙ，２００６；およびＳＥＥＲ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｓｔａｔｉｓｔｉｃｓ  Ｒｅｖｉｅｗ）。ＣＬＬは不治の疾患であるが、ほとんどの場合にゆっくりと進行する。ＣＬＬの多くの人は、何年間も通常の活動的な生活を送る。初期ＣＬＬは、一般に、その発症が遅いために処置されない。早期介入により生存時間または生活の質が改善されないと考えられるからである。代わりに、その状態が時間経過と共にモニターされる。初期のＣＬＬ処置は、正確な診断および疾患の進行に応じて様々である。ＣＬＬ療法に使用される薬は数十存在する。併用化学療法レジメン、たとえばＦＣＲ（フルダラビン、シクロホスファミドおよびリツキシマブ）、およびＢＲ（イブルチニブおよびリツキシマブ）は、新たに診断されたＣＬＬおよび再発したＣＬＬの両方に効果的である。同種異系骨髄（幹細胞）移植は、そのリスクのためにＣＬＬの第１選択治療として使用されることが稀である。
【０００６】
もう１つのタイプの白血病は、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）であり、急性リンパ性白血病とも呼ばれる。ＡＬＬは、骨髄における悪性の幼若白血球（リンパ芽球とも呼ばれる）の過剰産生および連続的増殖を特徴とする。「急性」は、循環血中のリンパ球（「芽球」）が未分化、未成熟状態であること、および疾患が急速に進行し、処置しないまま放置した場合、平均余命が数週間〜数カ月であることを指す。ＡＬＬは小児期に最も多く見られ、発生率のピークは４〜５歳である。１２〜１６歳の小児は、他の年齢の小児よりＡＬＬで死亡しやすい。現在、小児ＡＬＬの少なくとも８０％は治癒可能と考えられる。診断される症例は毎年４，０００例未満であり、死亡数は年間ほぼ１，５００である（Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｓｏｃｉｅｔｙ，２００６；およびＳＥＥＲ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｓｔａｔｉｓｔｉｃｓ  Ｒｅｖｉｅｗ）。
【０００７】
ヒトＣＤ１９分子は、以下に限定されるものではないが、プレＢ細胞、発生初期のＢ細胞｛すなわち、未成熟Ｂ細胞）、最終分化を経て形質細胞となる成熟Ｂ細胞、および悪性Ｂ細胞など、ヒトＢ細胞の表面上に発現する構造的に異なる細胞表面受容体である。ＣＤ１９は、大部分のプレＢ急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、非ホジキンリンパ腫、Ｂ細胞慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）、前リンパ球性白血病、有毛細胞白血病、通常の急性リンパ性白血病、および一部のヌル細胞型急性リンパ芽球性白血病に発現する（Ｎａｄｌｅｒ  ｅｔ  ａｌ，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１３１：２４４−２５０（１９８３），Ｌｏｋｅｎ  ｅｔ  ａｌ，Ｂｌｏｏｄ，７０：１３１６−１３２４（１９８７），Ｕｃｋｕｎ  ｅｔ  ａｌ，Ｂｌｏｏｄ，７１：１３−２９（１９８８），Ａｎｄｅｒｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ，１９８４．Ｂｌｏｏｄ，６３：１４２４−１４３３（１９８４），Ｓｃｈｅｕｅｒｍａｎｎ，Ｌｅｕｋ．Ｌｙｍｐｈｏｍａ，１８：３８５−３９７（１９９５））。形質細胞上のＣＤ１９の発現から、ＣＤ１９が多発性骨髄腫、形質細胞腫、ワルデンシュトレーム腫瘍などの分化したＢ細胞腫瘍上に発現し得ることがさらに示唆される（Ｇｒｏｓｓｂａｒｄ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｒ．Ｊ．Ｈａｅｍａｔｏｌ，１０２：５０９−１５（１９９８）；Ｔｒｅｏｎ  ｅｔ  ａｌ，Ｓｅｍｉｎ．Ｏｎｃｏｌ，３０：２４８−５２（２００３））。
【０００８】
したがって、ＣＤ１９抗原は、非ホジキンリンパ腫（本明細書に記載の各サブタイプを含む）、慢性リンパ球性白血病および／または急性リンパ芽球性白血病の処置における免疫療法の標的となる。
【０００９】
いくつかのＣＤ１９療法が示されてきた。ＣＤ３−ζおよび４−ＢＢ共刺激ドメインの両方を含む抗ＣＤ１９キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を発現するＴ細胞が進行ＣＬＬの３患者に投与された。その全体を援用するＫａｌｏｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｔ  ｃｅｌｌｓ  ｗｉｔｈ  Ｃｈｉｍｅｒｉｃ  Ａｎｔｉｇｅｎ  Ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ  Ｈａｖｅ  Ｐｏｔｅｎｔ  Ａｎｔｉｔｕｍｏｒ  Ｅｆｆｅｃｔｓ  ａｎｄ  Ｃａｎ  Ｅｓｔａｂｌｉｓｈ  Ｍｅｍｏｒｙ  ｉｎ  Ｐａｔｉｅｎｔｓ  ｗｉｔｈ  Ａｄｖａｎｃｅｄ  Ｌｅｕｋｅｍｉａ，Ｓｃｉｅｎｃｅ  Ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎａｌ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，ｖｏｌ．３，ｎｏ．９５（１０  Ａｕｇｕｓｔ  ２０１１）。その全体を援用するＳａｄｅｌａｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｔｈｅ  ｐｒｏｍｉｓｅ  ａｎｄ  ｐｏｔｅｎｔｉａｌ  ｐｉｔｆａｌｌｓ  ｏｆ  ｃｈｉｍｅｒｉｃ  ａｎｔｉｇｅｎ  ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ，Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｏｐｉｎｉｏｎ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，Ｅｌｓｅｖｉｅｒ，ｖｏｌ．２１，ｎｏ．２，２  Ａｐｒｉｌ  ２００９にも、抗ＣＤ１９キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）が記載されている。しかしながら、Ｋａｌｏｓ  ｅｔ  ａｌ．もＳａｄｅｌａｉｎ  ｅｔ  ａｌ．も、本明細書に例示されるようなブルトン型チロシンキナーゼ（ＢＴＫ）阻害剤と併用した、ＣＤ１９に特異的な抗体を記載していない。
【００１０】
非特異的Ｂ細胞リンパ腫におけるＣＤ１９抗体の使用は、何れもその全体を援用する国際公開第２００７０７６９５０号パンフレット（米国特許第２００７１５４４７３号明細書）において、考えられる併用相手の長いリスト内でイブルチニブの粗略な言及と共に考察されているが、本明細書に例示される抗体を教示しておらず、また本明細書に例示されるような非ホジキンリンパ腫、慢性リンパ球性白血病および／または急性リンパ芽球性白血病の処置における組み合わせの相乗効果も示唆していない。
【００１１】
ＣＬＬ、ＮＨＬおよびＡＬＬにおけるＣＤ１９抗体の使用は、その全体を援用するＳｃｈｅｕｅｒｍａｎｎ  ｅｔ  ａｌ．，ＣＤ１９  Ａｎｔｉｇｅｎ  ｉｎ  Ｌｅｕｋｅｍｉａ  ａｎｄ  Ｌｙｍｐｈｏｍａ  Ｄｉａｇｎｏｓｉｓ  ａｎｄ  ｌｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ，Ｌｅｕｋｅｍｉａ  ａｎｄ  Ｌｙｍｐｈｏｍａ，Ｖｏｌ．１８，３８５−３９７（１９９５）に記載されているが、本明細書に例示される組み合わせを示唆していない。
【００１２】
ＣＤ１９に特異的な別の抗体は、すべてその全体を援用する国際公開第２００５０１２４９３号パンフレット（米国特許第７１０９３０４号明細書）、国際公開第２０１００５３７１６号パンフレット（米国特許出願第１２／２６６，９９９号明細書）（Ｉｍｍｕｎｏｍｅｄｉｃｓ）；国際公開第２００７００２２２３号パンフレット（米国特許第８０９７７０３号明細書）（Ｍｅｄａｒｅｘ）；国際公開第２００８０２２１５２号パンフレット（米国特許出願第１２／３７７，２５１号明細書）および国際公開第２００８１５０４９４号パンフレット（Ｘｅｎｃｏｒ）、国際公開第２００８０３１０５６号パンフレット（米国特許出願第１１／８５２，１０６号明細書）（Ｍｅｄｉｍｍｕｎｅ）；国際公開第２００７０７６９５０号パンフレット（米国特許出願第１１／６４８，５０５号明細書）（Ｍｅｒｃｋ  Ｐａｔｅｎｔ  ＧｍｂＨ）；国際公開第２００９／０５２４３１号パンフレット（米国特許出願第１２／２５３，８９５号明細書）（Ｓｅａｔｔｌｅ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ）；ならびに国際公開第２０１００９５０３１号パンフレット（米国特許出願第１２／７１０，４４２号明細書）（Ｇｌｅｎｍａｒｋ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）、国際公開第２０１２０１０５６２号パンフレットおよび国際公開第２０１２０１０５６１号パンフレット（Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ）、国際公開第２０１１１４７８３４号パンフレット（Ｒｏｃｈｅ  Ｇｌｙｃａｒｔ）、ならびに国際公開第２０１２／１５６４５５号パンフレット（Ｓａｎｏｆｉ）に記載されている。
【００１３】
ＣＤ１９に特異的な抗体および他の薬の組み合わせは、その全体を援用する国際公開第２０１０１５１３４１号パンフレット（米国特許出願第１３／３７７，５１４号明細書）（Ｔｈｅ  Ｆｅｉｎｓｔｅｉｎ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ）；米国特許第５６８６０７２号明細書（Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  ｏｆ  Ｔｅｘａｓ）、ならびに国際公開第２００２０２２２１２号パンフレット（国際出願ＰＣＴ／米国特許出願第０１／２９０２６号明細書明細書）（ＩＤＥＣ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）、国際公開第２０１３／０２４０９７号パンフレット（米国特許出願第１４／１２６，９２８号明細書）（ＭｏｒｐｈｏＳｙｓ  ＡＧ）および国際公開第２０１３／０２４０９５号パンフレット（米国特許出願第１４／１２７，２１７号明細書）（ＭｏｒｐｈｏＳｙｓ  ＡＧ）に記載されている。
【００１４】
いくつかのブルトン型チロシンキナーゼ阻害剤が市販されている。ＰＣＩ−３２７６５とも呼ばれ、商品名Ｉｍｂｒｕｖｉｃａで販売されているイブルチニブは、Ｂ細胞悪性腫瘍を標的とする抗癌薬である。イブルチニブは、すべてその全体を援用する米国特許第７，５１４，４４４号明細書；同第８，００８，３０９号明細書；同第８，６９７，７１１号明細書；同第８，７３５，４０３号明細書；同第８，９５７，０７９号明細書；および同第８，７５４，０９０号明細書に記載されている。
【００１５】
イブルチニブは、リツキシマブ（抗ＣＤ２０抗体）と併用して試験されてきた。Ｂｕｒｇｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｌａｎｃｅｔ  Ｏｎｃｏｌ．，２０１４  Ｓｅｐｔｅｍｂｅｒ，１５（１９）：１０９０−１０９９。イブルチニブは、インビトロで特定のＣＤ２０抗体のＡＤＣＣ活性を潜在的に阻害する。Ｄｕｏｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，ｍＡｂｓ，Ｊａｎ／Ｆｅｂ  ２０１５，１９２−１９８，およびＫｏｈｒｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ，２０１４，１２３：１９５７−１９６０。
【００１６】
抗癌剤の発見および開発における近年の進展にもかかわらず、ＣＤ１９発現腫瘍に関係する癌の多くの形態は依然として予後不良であることは明らかである。したがって、そうした形態の癌を処置するための改良された方法が求められている。
【発明の概要】
【００１７】
従来技術は、単独でも組み合わせでも、非ホジキンリンパ腫、慢性リンパ球性白血病および／または急性リンパ芽球性白血病の処置における、例示した抗体およびイブルチニブの組み合わせの相乗効果を示唆していない。
【００１８】
一態様では、本開示は、ＣＤ１９に特異的な抗体およびブルトン型チロシンキナーゼ（ＢＴＫ）阻害剤の相乗効果のある組み合わせに関する。こうした組み合わせは、非ホジキンリンパ腫、慢性リンパ球性白血病および／または急性リンパ芽球性白血病などのＢ細胞悪性腫瘍の処置に有用である。
【００１９】
インビトロモデルは、ある化合物または化合物の組み合わせがヒトにおいてどのように挙動するかを示唆すると考えられる。
【００２０】
このインビトロモデルのＭＥＣ−１細胞から、本組み合わせがヒトの慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）の処置においてどのように作用するかが示唆される。このインビトロモデルのＲａｍｏｓ細胞からは、本組み合わせがヒトの非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）の処置においてどのように作用するかが示唆される。ＭＥＣ−１細胞（ＤＳＭＺ＃  ＡＣＣ４９７）は、慢性Ｂ細胞白血病細胞株である。Ｒａｍｏｓ細胞（ＡＴＣＣ番号ＣＲＬ−１５９６）は、ヒトバーキットリンパ腫細胞である。
【００２１】
さらに、化合物がインビトロで組み合わされると、組み合わせが相加作用のみを有することが予想される。驚くべきことに、本発明者らは、ＣＤ１９に特異的な特定の抗体およびイブルチニブの組み合わせが、抗体およびイブルチニブ単独と比較してインビトロで相乗効果レベルの特異的な細胞殺傷に関与することを見出した。具体的には、本発明者らは、ＭＯＲ００２０８およびイブルチニブの組み合わせが、ＭＥＣ−１細胞において、抗体およびイブルチニブ単独と比較してインビトロで相乗効果レベルの特異的な細胞殺傷に関与することを見出した。
【００２２】
加えておよびさらに意外にも、本発明者らは、ＣＤ１９に特異的な特定の抗体およびイブルチニブの組み合わせが抗体およびイブルチニブ単独と比較してある機能特性を有することを見出した。
【００２３】
要約すると、例示した抗ＣＤ１９抗体およびイブルチニブの組み合わせは、ＣＬＬに関係するモデルにおいて相乗的に挙動した。ＣＬＬはＢ細胞関連障害であり、かつＣＤ１９がＢ細胞上に高度に発現するため、例示した組み合わせは、同じ作用機序を有すると考えられ、他のＢ細胞関連障害、たとえばＡＬＬおよびＮＨＬの処置でも相乗的に挙動するはずである。
【００２４】
したがって、例示したＣＤ１９に特異的な抗体およびイブルチニブの組み合わせは、非ホジキンリンパ腫、慢性リンパ球性白血病および／または急性リンパ芽球性白血病のヒトの処置において効果的であるはずである。例示したＣＤ１９に特異的な抗体およびイブルチニブの組み合わせの予想される有効性は、臨床試験において確認されるであろう。
【００２５】
イブルチニブおよび他のブルトン型チロシンキナーゼ（ＢＴＫ）阻害剤は、すべてＢ細胞発生に決定的な役割を果たすチロシン−プロテインキナーゼＢＴＫ酵素を阻害することにより作用するため、イブルチニブおよび他のブルトン型チロシンキナーゼ（ＢＴＫ）阻害剤の作用機序が類似していることから、例示した抗ＣＤ１９抗体およびイブルチニブ以外のブルトン型チロシンキナーゼ（ＢＴＫ）阻害剤の組み合わせで非ホジキンリンパ腫、慢性リンパ球性白血病および／または急性リンパ芽球性白血病を有するヒトを処置したときも相乗作用が見られるはずであると考えられる。
【００２６】
例示した抗ＣＤ１９抗体および他の抗ＣＤ１９抗体はＣＤ１９に結合するため、任意の抗ＣＤ１９抗体およびブルトン型チロシンキナーゼ（ＢＴＫ）阻害剤、たとえばイブルチニブの組み合わせで非ホジキンリンパ腫、慢性リンパ球性白血病および／または急性リンパ芽球性白血病を有するヒトを処置するときも相乗作用が見られるはずであると考えられる。
【００２７】
本開示の態様は、ＣＤ１９に特異的な抗体が配列ＳＹＶＭＨ（配列番号１）のＨＣＤＲ１領域、配列ＮＰＹＮＤＧ（配列番号２）のＨＣＤＲ２領域、配列ＧＴＹＹＹＧＴＲＶＦＤＹ（配列番号３）のＨＣＤＲ３領域、配列ＲＳＳＫＳＬＱＮＶＮＧＮＴＹＬＹ（配列番号４）のＬＣＤＲ１領域、配列ＲＭＳＮＬＮＳ（配列番号５）のＬＣＤＲ２領域および配列ＭＱＨＬＥＹＰＩＴ（配列番号６）のＬＣＤＲ３領域ならびにイブルチニブを含む、相乗効果のある組み合わせを含む。好ましい態様では、この組み合わせは、非ホジキンリンパ腫、慢性リンパ球性白血病および／または急性リンパ芽球性白血病の処置に使用される。
【図面の簡単な説明】
【００２８】
【図１】図１は、Ｒａｍｏｓ細胞に対するＭＯＲ００２０８およびイブルチニブの単独および組み合わせの細胞毒性作用を示す。Ｒａｍｏｓ細胞は４０μＭのイブルチニブで２４時間にわたり前処理した。
【図２】図２は、ＭＥＣ−１細胞に対するＭＯＲ００２０８およびイブルチニブの単独および組み合わせの細胞毒性作用を示す。ＭＥＣ−１細胞は３０μＭのイブルチニブで２４時間にわたり前処理した。
【図３】図３は、ＭＥＣ−１細胞に対するＭＯＲ００２０８およびイブルチニブの単独および組み合わせの細胞毒性作用を示す。ＭＥＣ−１細胞は３０μＭのイブルチニブで２４時間にわたり前処理した。
【図４】図４は、ＭＯＲ００２０８の可変ドメインのアミノ酸配列を示す。
【図５】図５は、ＭＯＲ００２０８のＦｃ領域のアミノ酸配列を示す。
【図６】図６は、ＭＥＣ−１細胞株におけるＭＯＲ００２０８およびイブルチニブの単独および組み合わせの細胞毒性を示す。
【図７】図７は、ＭＥＣ−１細胞株におけるＭＯＲ００２０８およびイブルチニブの単独および組み合わせの細胞毒性を示す。
【図８】図８は、ＭＥＣ−１細胞株におけるＭＯＲ００２０８およびイブルチニブの単独および組み合わせの細胞毒性を示す。
【図９】図９は、ＭＥＣ−１細胞株におけるＭＯＲ００２０８およびイブルチニブの組み合わせのＣｈｏｕ−Ｔａｌａｙの併用係数（Ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ  Ｉｎｄｅｘ）曲線を示す。
【図１０】図１０は、ＭＥＣ−１細胞株におけるＭＯＲ００２０８およびイブルチニブの組み合わせのＣｈｏｕ−Ｔａｌａｙの併用係数曲線を示す。
【図１１】図１１は、ＭＥＣ−１細胞株におけるＭＯＲ００２０８およびイブルチニブの組み合わせのＣｈｏｕ−Ｔａｌａｙの併用係数曲線を示す。
【図１２】図１２は、ＭＥＣ−１細胞株におけるＭＯＲ００２０８およびイブルチニブの組み合わせのＣｌａｒｋｅ  ｅｔ  ａｌ．の相乗作用の計算結果を示す。
【図１３】図１３は、ＭＥＣ−１細胞株におけるＭＯＲ００２０８およびイブルチニブの組み合わせのＣｌａｒｋｅ  ｅｔ  ａｌ．の相乗作用の計算結果を示す。
【図１４】図１４は、ＭＥＣ−１細胞株におけるＭＯＲ００２０８およびイブルチニブの組み合わせのＣｌａｒｋｅ  ｅｔ  ａｌ．の相乗作用の計算結果を示す。
【図１５】図１５は、ＭＥＣ−１細胞株におけるＭＯＲ００２０８およびイブルチニブの組み合わせのＣｌａｒｋｅ  ｅｔ  ａｌ．の相乗作用の計算結果を示す。
【図１６】図１６は、ＭＥＣ−１細胞株におけるＭＯＲ００２０８およびイブルチニブの組み合わせのＣｌａｒｋｅ  ｅｔ  ａｌ．の相乗作用の計算結果を示す。
【図１７】図１７は、ＭＥＣ−１細胞株におけるＭＯＲ００２０８およびイブルチニブの組み合わせのＣｌａｒｋｅ  ｅｔ  ａｌ．の相乗作用の計算結果を示す。
【図１８】図１８は、ＭＥＣ−１細胞株におけるＭＯＲ００２０８およびイブルチニブの組み合わせのＣｌａｒｋｅ  ｅｔ  ａｌ．の相乗作用の計算結果を示す。
【図１９】図１９は、ＭＥＣ−１細胞株におけるＭＯＲ００２０８およびイブルチニブの組み合わせのＣｌａｒｋｅ  ｅｔ  ａｌ．の相乗作用の計算結果を示す。
【図２０】図２０は、ＭＥＣ−１細胞株におけるＭＯＲ００２０８およびイブルチニブの組み合わせのＣｌａｒｋｅ  ｅｔ  ａｌ．の相乗作用の計算結果を示す。
【発明を実施するための形態】
【００２９】
「相乗作用」、「協力作用」または「相乗的」は、組み合わせの予想される相加作用を超えるものを意味する。ある組み合わせの「相乗作用」、「協力作用」または「相乗的」作用は、本明細書ではＣｈｏｕ  ｅｔ  ａｌ．、Ｃｌａｒｋｅ  ｅｔ  ａｌ．および／またはＷｅｂｂ  ｅｔ  ａｌ．の方法により決定される。その全体を援用するＴｉｎｇ−Ｃｈａｏ  Ｃｈｏｕ，Ｔｈｅｏｒｅｔｉｃａｌ  Ｂａｓｉｓ，Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  Ｄｅｓｉｇｎ，ａｎｄ  Ｃｏｍｐｕｔｅｒｉｚｅｄ  Ｓｉｍｕｌａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｓｙｎｅｒｇｉｓｍ  ａｎｄ  Ａｎｔａｇｏｎｉｓｍ  ｉｎ  Ｄｒｕｇ  Ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ  Ｓｔｕｄｉｅｓ，Ｐｈａｒｍａｃｏｌ  Ｒｅｖ  ５８：６２１−６８１（２００６）を参照されたい。さらにその全体を援用するＣｌａｒｋｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｉｓｓｕｅｓ  ｉｎ  ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  ｄｅｓｉｇｎ  ａｎｄ  ｅｎｄｐｏｉｎｔ  ａｎａｌｙｓｉｓ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｓｔｕｄｙ  ｏｆ  ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  ｃｙｔｏｔｏｘｉｃ  ａｇｅｎｔｓ  ｉｎ  ｖｉｖｏ  ｉｎ  ｂｒｅａｓｔ  ｃａｎｃｅｒ  ａｎｄ  ｏｔｈｅｒ  ｍｏｄｅｌｓ，Ｂｒｅａｓｔ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ａｎｄ  Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ４６：２５５−２７８（１９９７）も参照されたい。さらにその全体を援用するＷｅｂｂ，Ｊ．Ｌ．（１９６３）Ｅｎｚｙｍｅ  ａｎｄ  Ｍｅｔａｂｏｌｉｃ  Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ，Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋも参照されたい。
【００３０】
「抗体」という用語は、ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＤおよびＩｇＥなどの任意のアイソタイプを含むモノクローナル抗体を意味する。ＩｇＧ抗体は、ジスルフィド結合により連結された２つの同一重鎖および２つの同一軽鎖からなる。重鎖および軽鎖は、それぞれ定常領域および可変領域を含む。各可変領域は、抗原のエピトープへの結合を主に担う「相補性決定領域」（「ＣＤＲ」）または「超可変領域」と呼ばれる３つのセグメントを含む。それらは、Ｎ末端から順に番号が付されＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３と呼ばれる。ＣＤＲの外側の可変領域のより高度に保存された部分は、「フレームワーク領域」と呼ばれる。「抗体フラグメント」は、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、ｄｓＦｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２フラグメント、またはそれぞれＣＤＲおよびフレームワーク領域を含む少なくとも１つの可変重鎖または可変軽鎖を含む他のフラグメントを意味する。
【００３１】
「ブルトン型チロシンキナーゼ（ＢＴＫ）阻害剤」は、Ｂ細胞発生において重要な役割を果たすチロシン−プロテインキナーゼＢＴＫ酵素を阻害することにより機能する薬剤のクラスである。具体的には、ＢＴＫは、ホスファチジルイノシトール（３，４，５）−三リン酸（ＰＩＰ３）に結合するＰＨドメインを含む。ＰＩＰ３結合は、ＢＴＫにホスホリパーゼＣをリン酸化させ、その結果、ＰＩＰ２、ホスファチジルイノシトールが加水分解され、２つのセカンドメッセンジャー、イノシトールトリホスフェート（ＩＰ３）およびジアシルグリセロール（ＤＡＧ）が生じ、その後、２つのセカンドメッセンジャーはＢ細胞のシグナル伝達において下流タンパク質の活性の調節に入る。
【００３２】
ブルトン型チロシンキナーゼ（ＢＴＫ）阻害剤はイブルチニブを含む。イブルチニブは、Ｐｈａｒｍａｃｙｃｌｉｃｓ，ＩｎｃおよびＪｏｈｎｓｏｎ＆Ｊｏｈｎｓｏｎ’ｓ  Ｊａｎｓｓｅｎ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ（商標名Ｉｍｂｒｕｖｉｃａ、ＰＣＩ−３２７６５とも名称される）により販売される。イブルチニブは、現在、少なくとも１種の療法を受けたことがあるマントル細胞リンパ腫（ＭＣＬ）、少なくとも１種の療法を受けたことがある慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）、１７ｐ欠失の慢性リンパ球性白血病、およびワルデンシュトレーム型マクログロブリン血症の患者の処置についてラベル表示されている。イブルチニブの式は、１−［（３Ｒ）−３−［４−アミノ−３−（４−フェノキシフェニル）−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−１−イル］−１−ピペリジニル］−２−プロペン−１−オンであり、以下の構造を有する。
2018516905.tif 000002
【００３３】
イブルチニブはＢＴＫの小分子阻害剤である。イブルチニブは、ＢＴＫ活性部位のシステイン残基と共有結合を形成し、ＢＴＫ酵素活性の阻害をもたらす。ＢＴＫは、Ｂ細胞抗原受容体（ＢＣＲ）およびサイトカイン受容体経路のシグナル伝達分子である。Ｂ細胞表面受容体を介したシグナル伝達におけるＢＴＫの役割は、Ｂ細胞の輸送、走化性および接着に必要な経路の活性化である。非臨床試験から、イブルチニブは、インビボで悪性Ｂ細胞の増殖、生存、ならびにインビトロで細胞遊走および基質接着を阻害することが示される。
【００３４】
別のブルトン型チロシンキナーゼ（ＢＴＫ）阻害剤として、
すべてその全体を援用する国際公開第２０１２１７０９７６号パンフレット（米国特許出願第１４／１１２，４２８号明細書）、国際公開第２０１３０１０３８０号パンフレット（米国特許出願第１４／２３３，４７８号明細書）および国際公開第２０１４１１３９３２号パンフレット（米国特許出願第１４／１６０，５８７号明細書）に記載されたＡＣＰ−１９６（Ａｃｅｒｔａ  Ｐｈａｒｍａ  ＢＶ）；
ＢＧＢ−３１１１（ＢｅｉＧｅｎｅ，Ｃｏ．，Ｌｔｄ．）およびＣＣ−２９２  Ｅｖａｎｓ  ｅｔ  ａｌ．２０１３
が挙げられる。
【００３５】
「ＶＨ」は、抗体の免疫グロブリン重鎖の可変領域または抗体フラグメントを指す。「ＶＬ」は、抗体の免疫グロブリン軽鎖の可変領域または抗体フラグメントを指す。
【００３６】
「ＣＤ１９」という用語は、ＣＤ１９として知られるタンパク質を指し、以下の同義語：Ｂ４、Ｂリンパ球抗原ＣＤ１９、Ｂリンパ球表面抗原Ｂ４、ＣＶＩＤ３、分化抗原ＣＤ１９、ＭＧＣ１２８０２およびＴ細胞表面抗原Ｌｅｕ−１２を有する。
【００３７】
ヒトＣＤ１９は、下記のアミノ酸配列を有する。
2018516905.tif 000003
【００３８】
「ＭＯＲ００２０８」は抗ＣＤ１９抗体である。可変ドメインのアミノ酸配列は、図４に記載される。ＭＯＲ００２０８の重鎖および軽鎖のＦｃ領域のアミノ酸配列は、図５に示される。「ＭＯＲ００２０８」および「ＸｍＡｂ  ５５７４」は、図４および５に示される抗体を表す同義語として使用される。ＭＯＲ００２０８抗体は、その全体を援用する米国特許出願第１２／３７７，２５１号明細書に記載される。
【００３９】
米国特許出願第１２／３７７，２５１号明細書には、以下のような４Ｇ７  Ｈ１．５２  Ｈｙｂｒｉｄ  Ｓ２３９Ｄ／Ｉ３３２Ｅ／４Ｇ７  Ｌ１．１５５と命名された抗体が記載される（後にＭＯＲ００２０８と命名される）。
＞４Ｇ７  Ｈ１．５２  Ｈｙｂｒｉｄ  Ｓ２３９Ｄ／Ｉ３３２Ｅ
2018516905.tif 000004
＞４Ｇ７  Ｌ１．１５５
2018516905.tif 000005
【００４０】
ＣＤ１９に特異的な別の抗体は、その全体を援用する米国特許第７，１０９，３０４号明細書（Ｉｍｍｕｎｏｍｅｄｉｃｓ）；その全体を援用する米国特許出願第１１／９１７，７５０号明細書（Ｍｅｄａｒｅｘ）；その全体を援用する米国特許出願第１１／８５２，１０６号明細書（Ｍｅｄｉｍｍｕｎｅ）；その全体を援用する米国特許出願第１１／６４８，５０５号明細書（Ｍｅｒｃｋ  Ｐａｔｅｎｔ  ＧｍｂＨ）；その全体を援用する米国特許第７，９６８，６８７号明細書（Ｓｅａｔｔｌｅ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ）；およびその全体を援用する米国特許出願第１２／７１０，４４２号明細書（Ｇｌｅｎｍａｒｋ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）に記載される。
【００４１】
「Ｆｃ領域」は、抗体の定常領域を意味し、ヒトではＩｇＧ１、２、３、４サブクラスまたは他の定常領域であってもよい。ヒトＦｃ領域の配列は、ＩＭＧＴ，Ｈｕｍａｎ  ＩＧＨ  Ｃ−ＲＥＧＩＯＮｓ，ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｉｍｇｔ．ｏｒｇ／ＩＭＧＴｒｅｐｅｒｔｏｉｒｅ／Ｐｒｏｔｅｉｎｓ／ｐｒｏｔｅｉｎ／ｈｕｍａｎ／ＩＧＨ／ＩＧＨＣ／Ｈｕ＿ＩＧＨＣａｌｌｇｅｎｅｓ．ｈｔｍｌ（２０１１年５月１６日に検索）で入手可能である。
【００４２】
「ＲｅｆｍＡｂ３３」は、アミノ酸配列が以下の通りである抗体である。
Ｆｃ領域を含む重鎖：
2018516905.tif 000006
【００４３】
Ｆｃ領域を含む軽鎖：
2018516905.tif 000007
【００４４】
ＲｅｆｍＡｂ３３はＲＳＶに特異的であり、ＭＯＲ００２０８と同じＦｃ領域を共有するため、アイソタイプコントロールとして使用される。
【００４５】
「組み合わせ」は、品目、たとえば抗体およびイブルチニブなどの化合物の２つ以上を意味する。
【００４６】
本開示は、記載された組み合わせを含む組み合わせ、医薬品および医薬組成物にさらに関する。本発明の相乗効果のある組み合わせの２つの成分、たとえばＣＤ１９に特異的な抗体およびイブルチニブは、物理的にまたは時間的に一緒に、同時に、別々にまたは続けて投与してもよい。
【００４７】
イブルチニブは、現在、経口摂取され、１日１回投与されるのが現状である。ＭＯＲ００２０８は、現在、静脈内投与され、週１回または２週間に１回投与されるのが現状である。
【００４８】
好ましくは、両方の薬剤の投与により、両方の薬剤が患者に同時に有効であり得る。たとえば、ＭＯＲ２０８が週１回投与され、イブリチニブが１日１回投与される場合、両方の薬剤の活性物質が同時に患者に存在する。一実施形態では、イブルチニブは、ＣＤ１９に特異的な抗体、たとえばＭＯＲ００２０８の投与前および／または別々に投与される。
【００４９】
同時にとは、２つの成分が、両方の成分（薬剤）が同時に患者に有効であるときに投与されることを意味する。「協力作用」は、両方の薬剤が同時に患者に有効であることを意味する。
【００５０】
一緒に投与するとは、同時に投与することを意味し得る。
【００５１】
２つの成分は、異なる医薬組成物中で製剤化してもよい。医薬組成物は、有効な作用物質、たとえばヒトの治療に使用するための抗体を含む。医薬組成物は、許容可能キャリアまたは賦形剤を含んでもよい。
【００５２】
「投与される」または「投与」は、以下に限定されるものではないが、たとえば、静脈内経路、筋肉内経路、皮内経路もしくは皮下経路または粘膜経路などの注射用形態による送達、たとえば吸入用の鼻スプレーもしくはエアロゾルとしての送達、または摂取可能な溶液、カプセルもしくは錠剤としての送達を含む。
【００５３】
化合物または組み合わせの「治療有効量」は、既定の疾患または障害およびその合併症の臨床症状を治癒させるか、軽減するか、または部分的に阻止するのに十分な量を指す。特定の治療目的に効果的である量は、被検体の疾患または傷害の重症度、ならびに体重および全身状態によって異なる。適切な投与量の決定は、通常の実験を用いて数値のマトリックスを構築し、マトリックス内の様々な点を試験することにより達成してもよいことが理解されるであろう。これらは、すべて訓練を受けた医師または臨床科学者の通常の技術の範囲内である。
【００５４】
本明細書の「ＣＤＲ」は、Ｃｈｏｔｈｉａ  ｅｔ  ａｌまたはＫａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．により定義される。その全体を援用するＣｈｏｔｈｉａ  Ｃ，Ｌｅｓｋ  ＡＭ．（１９８７）Ｃａｎｏｎｉｃａｌ  ｓｔｒｕｃｔｕｒｅｓ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  ｈｙｐｅｒｖａｒｉａｂｌｅ  ｒｅｇｉｏｎｓ  ｏｆ  ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎｓ．Ｊ  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ．，１９６（４）：９０１−１７を参照されたい。その全体を援用するＫａｂａｔ  Ｅ．Ａ，Ｗｕ  Ｔ．Ｔ．，Ｐｅｒｒｙ  Ｈ．Ｍ．，Ｇｏｔｔｅｓｍａｎ  Ｋ．Ｓ．ａｎｄ  Ｆｏｅｌｌｅｒ  Ｃ．（１９９１）．Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ．５ｔｈ  ｅｄｉｔ．，ＮＩＨ  Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ  ｎｏ．９１−３２４２，ＵＳ  Ｄｅｐｔ．ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ  ａｎｄ  Ｈｕｍａｎ  Ｓｅｒｖｉｃｅｓ，Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ，ＤＣを参照されたい。
【００５５】
「交差競合」は、抗体または他の結合剤が標準的な競合結合アッセイにおいて他の抗体または結合剤のＣＤ１９への結合に干渉する能力を意味する。抗体または他の結合剤が別の抗体または結合分子のＣＤ１９への結合に干渉できる能力または程度と、したがってそれが本発明による交差競合とされ得るかどうかとは、標準的な競合結合アッセイを用いて決定することができる。１つの好適なアッセイは、表面プラズモン共鳴技術を用いて相互作用の程度を測定できるＢｉａｃｏｒｅ技術（たとえば、ＢＩＡｃｏｒｅ  ３０００装置（Ｂｉａｃｏｒｅ，Ｕｐｐｓａｌａ，Ｓｗｅｄｅｎ）の使用による）を使用するものである。交差競合を測定するための別のアッセイは、ＥＬＩＳＡ系アプローチを使用する。抗体をその交差競合に基づき「エピトープビニング」するためのハイスループットプロセスは、国際公開第２００３／４８７３１号パンフレットに記載される。
【００５６】
「エピトープ」という用語は、抗体に特異的に結合できるまたは他の方法で分子と相互作用できる任意のタンパク質決定基を含む。エピトープ決定基は、一般に、アミノ酸または炭水化物もしくは糖側鎖などの分子の化学的に活性な表面分子群からなり、特定の三次元構造特徴および特定の荷電特徴を有し得る。エピトープは「リニア」でも、または「コンフォメーショナル」でもよい。「リニアエピトープ」という用語は、タンパク質と相互作用分子（抗体など）との間の相互作用点のすべてがタンパク質の一次アミノ酸配列に沿って直線状に生じるエピトープを指す（連続的）。「コンフォメーショナルエピトープ」という用語は、不連続アミノ酸が三次元構造で集合したエピトープを指す。コンフォメーショナルエピトープでは、相互作用点は、タンパク質上の互いに離されたアミノ酸残基を横断して生じる。
【００５７】
「同じエピトープに結合する」は、ある抗体または他の結合剤が、ＣＤ１９および例示した抗体と同じエピトープに結合する能力を意味する。例示した抗体およびＣＤ１９に対する他の抗体のエピトープは、標準的なエピトープマッピング技術を用いて決定することができる。エピトープマッピング技術は、当該技術分野において周知であり、Ｅｐｉｔｏｐｅ  Ｍａｐｐｉｎｇ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌ．６６（Ｇｌｅｎｎ  Ｅ．Ｍｏｒｒｉｓ，Ｅｄ．，１９９６）Ｈｕｍａｎａ  Ｐｒｅｓｓ，Ｔｏｔｏｗａ，Ｎｅｗ  Ｊｅｒｓｅｙを含む。たとえば、リニアエピトープは、たとえば、タンパク質分子の一部に対応する大量のペプチドを固体支持体上に同時に合成し、ペプチドを依然として支持体に結合させたままペプチドを抗体と反応させることにより決定してもよい。こうした技術は当該技術分野において公知であり、たとえば、米国特許第４，７０８，８７１号明細書；Ｇｅｙｓｅｎ  ｅｔ  ａｌ，（１９８４）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８：３９９８−４００２；Ｇｅｙｓｅｎ  ｅｔ  ａｌ，（１９８５）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８２：７８−１８２；Ｇｅｙｓｅｎ  ｅｔ  ａｌ，（１９８６）Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２３：７０９−７１５に記載される。同様に、コンフォメーショナルエピトープも、たとえば、水素／重水素交換、Ｘ線結晶解析および二次元核磁気共鳴などにより、アミノ酸の空間構造を決定することによって容易に同定される。たとえば、Ｅｐｉｔｏｐｅ  Ｍａｐｐｉｎｇ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ，ｓｕｐｒａを参照されたい。タンパク質の抗原性領域も、たとえば、Ｏｘｆｏｒｄ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｇｒｏｕｐから入手可能なＯｍｉｇａ  ｖｅｒｓｉｏｎ  １．０ソフトウェアプログラムを用いて計算されたものなど、標準的な抗原性およびハイドロパシープロットを用いて同定することができる。このコンピュータープログラムは、抗原性プロファイルの決定にＨｏｐｐ／Ｗｏｏｄｓ  ｍｅｔｈｏｄ、Ｈｏｐｐ  ｅｔ  ａｌ，（１９８１）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ  ＵＳＡ  ７８：３８２４−３８２８を、ハイドロパシープロットにＫｙｔｅ−Ｄｏｏｌｉｔｔｌｅ技術、Ｋｙｔｅ  ｅｔ  ａｌ，（１９８２）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１５７：１０５−１３２を利用する。
【００５８】
実施形態
本開示の態様は、非ホジキンリンパ腫、慢性リンパ球性白血病および／または急性リンパ芽球性白血病の処置に使用される、ＣＤ１９に特異的な抗体およびブルトン型チロシンキナーゼ（ＢＴＫ）阻害剤を含む組み合わせである。実施形態において本組み合わせは相乗的である。
【００５９】
本明細書において、例示した抗ＣＤ１９抗体およびイブルチニブの組み合わせは、ＣＬＬに関係するインビトロモデルにおいて相乗的に挙動した。ＣＬＬはＢ細胞関連障害であり、ＣＤ１９がＢ細胞上に高度に発現するため、例示した組み合わせは同じ作用機序を有するはずであり、他のＢ細胞関連障害、たとえばＡＬＬおよびＮＨＬの処置でも相乗的に挙動するはずである。したがって、例示したＣＤ１９に特異的な抗体およびイブルチニブの組み合わせは、非ホジキンリンパ腫、慢性リンパ球性白血病および／または急性リンパ芽球性白血病のヒトの処置において効果的であるはずである。例示したＣＤ１９に特異的な抗体およびイブルチニブの組み合わせの予想される有効性は、臨床試験において確認されるであろう。
【００６０】
慢性Ｂ細胞白血病細胞株ＭＥＣ−１細胞（ＤＳＭＺ＃  ＡＣＣ４９７）を試験した。このインビトロモデルのＭＥＣ−１細胞からは、本組み合わせがヒトの慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）の処置においてどのように作用するかが示唆される。Ｃｈｏｕインデックスの値からは、ＭＯＲ００２０８およびイブルチニブ単独と比較するとＭＥＣ−１細胞の特異的殺傷においてＭＯＲ００２０８およびイブルチニブの組み合わせの明らかな協力作用が示される。
【００６１】
以下の別の細胞株も評価される：ヒトバーキットリンパ腫細胞であるＲａｍｏｓ細胞（ＡＴＣＣ番号ＣＲＬ−１５９６）。ＨＧ−３（ＤＳＭＺ＃ＡＣＣ７６５）およびＣＩＩ（ＤＳＭＺ＃ＡＣＣ７７３）は、慢性リンパ球性白血病細胞株である。Ｓｕ−ＤＨＬ  ６（ＤＳＭＺ＃ＡＣＣ５７２）、Ｕ２９３２（ＤＳＭＺ＃ＡＣＣ６３３）およびＯＣＩ−ＬＹ７（ＤＳＭＺ＃ＡＣＣ６８８）は、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）細胞株である。ＪＶＭ−２（ＡＴＣＣ（登録商標）ＣＲＬ−３００２）は、マントル細胞リンパ腫細胞株である。ＢＡＬＬ−１（ＤＳＭＺ＃ＡＣＣ７４２）は、急性リンパ芽球性白血病細胞株である。
【００６２】
このインビトロモデルにおけるＲａｍｏｓ細胞からは、本組み合わせがヒトの非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）の処置においてどのように作用するかが示唆される。このインビトロモデルにおけるＨＧ−３細胞およびＣＩＩ細胞からは、本組み合わせがヒトの慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）の処置においてどのように作用するかが示唆される。このインビトロモデルにおけるＳｕ−ＤＨＬ  ６細胞、Ｕ２９３２細胞およびＯＣＩ−ＬＹ７細胞からは、本組み合わせがヒトの非ホジキンリンパ腫の処置においてどのように作用するかが示唆される。このインビトロモデルにおけるＪＶＭ−２細胞からは、本組み合わせがヒトの非ホジキンリンパ腫の処置においてどのように作用するかが示唆される。このインビトロモデルにおけるＢＡＬＬ−１細胞からは、本組み合わせがヒトの急性リンパ芽球性白血病の処置においてどのように作用するかが示唆される。
【００６３】
要約すると、例示した抗ＣＤ１９抗体およびイブルチニブの組み合わせは、ＣＬＬに関係するモデルにおいて相乗的に挙動する。
【００６４】
したがって、例示したＣＤ１９に特異的な抗体およびイブルチニブの組み合わせは、非ホジキンリンパ腫、慢性リンパ球性白血病および／または急性リンパ芽球性白血病のヒトの処置において効果的であるはずである。
【００６５】
イブルチニブおよび他のブルトン型チロシンキナーゼ（ＢＴＫ）阻害剤は、すべてＢ細胞発生に決定的な役割を果たすチロシン−プロテインキナーゼＢＴＫ酵素を阻害することにより作用するため、イブルチニブおよび他のブルトン型チロシンキナーゼ（ＢＴＫ）阻害剤の作用機序は類似していることから、例示した抗ＣＤ１９抗体およびイブルチニブ以外のブルトン型チロシンキナーゼ（ＢＴＫ）阻害剤の組み合わせで非ホジキンリンパ腫、慢性リンパ球性白血病および／または急性リンパ芽球性白血病を有するヒトを処置したときも相乗作用が見られるはずであると考えられる。
【００６６】
例示した抗ＣＤ１９抗体および他の抗ＣＤ１９抗体はＣＤ１９に結合するため、たとえば、すべてその全体を援用する米国特許出願第１２／３７７，２５１号明細書（Ｘｅｎｃｏｒ）、国際公開第２００５０１２４９３号パンフレット、国際公開第２０１００５３７１６号パンフレット（Ｉｍｍｕｎｏｍｅｄｉｃｓ）；国際公開第２００７００２２２３号パンフレット（Ｍｅｄａｒｅｘ）；国際公開第２００８０２２１５２号パンフレット（Ｘｅｎｃｏｒ）；国際公開第２００８０３１０５６号パンフレット（Ｍｅｄｉｍｍｕｎｅ）；国際公開第２００７／０７６９５０号パンフレット（Ｍｅｒｃｋ  Ｐａｔｅｎｔ  ＧｍｂＨ）；国際公開第２００９／０５２４３１号パンフレット（Ｓｅａｔｔｌｅ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ）；および国際公開第２０１００９５０３１号パンフレット（Ｇｌｅｎｍａｒｋ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）に記載される任意の抗ＣＤ１９抗体とブルトン型チロシンキナーゼ（ＢＴＫ）阻害剤との組み合わせを用いて、非ホジキンリンパ腫、慢性リンパ球性白血病および／または急性リンパ芽球性白血病を有するヒトを処置するときも相乗作用が見られるはずであると考えられる。
【００６７】
実施形態では、ＣＤ１９に特異的な抗体は、配列ＳＹＶＭＨ（配列番号１）のＨＣＤＲ１領域、配列ＮＰＹＮＤＧ（配列番号２）のＨＣＤＲ２領域、配列ＧＴＹＹＹＧＴＲＶＦＤＹ（配列番号３）のＨＣＤＲ３領域、配列ＲＳＳＫＳＬＱＮＶＮＧＮＴＹＬＹ（配列番号４）のＬＣＤＲ１領域、配列ＲＭＳＮＬＮＳ（配列番号５）のＬＣＤＲ２領域および配列ＭＱＨＬＥＹＰＩＴ（配列番号６）のＬＣＤＲ３領域を含む抗体と交差競合する抗体を含む。
【００６８】
実施形態では、ＣＤ１９に特異的な抗体は、配列ＳＹＶＭＨ（配列番号１）のＨＣＤＲ１領域、配列ＮＰＹＮＤＧ（配列番号２）のＨＣＤＲ２領域、配列ＧＴＹＹＹＧＴＲＶＦＤＹ（配列番号３）のＨＣＤＲ３領域、配列ＲＳＳＫＳＬＱＮＶＮＧＮＴＹＬＹ（配列番号４）のＬＣＤＲ１領域、配列ＲＭＳＮＬＮＳ（配列番号５）のＬＣＤＲ２領域および配列ＭＱＨＬＥＹＰＩＴ（配列番号６）のＬＣＤＲ３領域を含む抗体と同じエピトープに結合する抗体を含む。
【００６９】
実施形態では、ＣＤ１９に特異的な抗体は、配列ＳＹＶＭＨ（配列番号１）のＨＣＤＲ１領域、配列ＮＰＹＮＤＧ（配列番号２）のＨＣＤＲ２領域、配列ＧＴＹＹＹＧＴＲＶＦＤＹ（配列番号３）のＨＣＤＲ３領域、配列ＲＳＳＫＳＬＱＮＶＮＧＮＴＹＬＹ（配列番号４）のＬＣＤＲ１領域、配列ＲＭＳＮＬＮＳ（配列番号５）のＬＣＤＲ２領域および配列ＭＱＨＬＥＹＰＩＴ（配列番号６）のＬＣＤＲ３領域を含む。
【００７０】
実施形態では、ＣＤ１９に特異的な抗体は、配列
2018516905.tif 000008
の可変重鎖、および配列
2018516905.tif 000009
の可変軽鎖を含む。
【００７１】
ある種の実施形態では、前記抗体は、配列
2018516905.tif 000010
の重鎖定常ドメインを含む。
【００７２】
実施形態では、ＣＤ１９に特異的な抗体は、配列
2018516905.tif 000011
の軽鎖定常ドメインを含む。
【００７３】
実施形態では、ブルトン型チロシンキナーゼ（ＢＴＫ）阻害剤は、イブルチニブである。
【００７４】
実施形態では、組み合わせの成分、ＣＤ１９に特異的な抗体およびイブルチニブは、別々に投与される。一実施形態では、イブルチニブは、ＣＤ１９に特異的な抗体の投与前に投与される。
【００７５】
実施形態では、組み合わせの成分は、両方の成分（薬剤）が患者において同時に有効であるときに投与される。「協力作用」は、両方の薬剤が同時に患者において有効であることを意味する。実施形態では、組み合わせの成分は、物理的にまたは時間的に一緒に、同時に、別々にまたは続けて投与される。実施形態では、組み合わせの成分は同時に投与される。
【００７６】
実施形態では、組み合わせは医薬組成物である。実施形態では、組成物は許容可能なキャリアを含む。実施形態では、組み合わせは有効量で投与される。
【００７７】
別の態様では、配列ＳＹＶＭＨ（配列番号１）のＨＣＤＲ１領域、配列ＮＰＹＮＤＧ（配列番号２）のＨＣＤＲ２領域、配列ＧＴＹＹＹＧＴＲＶＦＤＹ（配列番号３）のＨＣＤＲ３領域、配列ＲＳＳＫＳＬＱＮＶＮＧＮＴＹＬＹ（配列番号４）のＬＣＤＲ１領域、配列ＲＭＳＮＬＮＳ（配列番号５）のＬＣＤＲ２領域および配列ＭＱＨＬＥＹＰＩＴ（配列番号６）のＬＣＤＲ３領域を含む、ＣＤ１９に特異的な抗体と、イブルチニブとの相乗効果のある組み合わせは、単離されたヒトＰＢＭＣの存在下において、イブルチニブ単独より少なくとも２倍、３倍、４倍または５倍優れた有効性でＡＤＣＣによりＭＥＣ−１細胞の殺傷に関与することができる。
【００７８】
本開示の態様は、非ホジキンリンパ腫、慢性リンパ球性白血病および／または急性リンパ芽球性白血病の処置のための、配列ＳＹＶＭＨ（配列番号１）のＨＣＤＲ１領域、配列ＮＰＹＮＤＧ（配列番号２）のＨＣＤＲ２領域、配列ＧＴＹＹＹＧＴＲＶＦＤＹ（配列番号３）のＨＣＤＲ３領域、配列ＲＳＳＫＳＬＱＮＶＮＧＮＴＹＬＹ（配列番号４）のＬＣＤＲ１領域、配列ＲＭＳＮＬＮＳ（配列番号５）のＬＣＤＲ２領域および配列ＭＱＨＬＥＹＰＩＴ（配列番号６）のＬＣＤＲ３領域を含む、ＣＤ１９に特異的な抗体と、イブルチニブとの相乗効果のある組み合わせを含む。実施形態では、非ホジキンリンパ腫は、濾胞性リンパ腫、小リンパ球性リンパ腫、粘膜関連リンパ組織、辺縁帯、びまん性大細胞型Ｂ細胞、バーキット細胞およびマントル細胞からなる群から選択される。
【００７９】
実施形態では、非ホジキンリンパ腫は、濾胞性リンパ腫である。実施形態では、非ホジキンリンパ腫は、小リンパ球性リンパ腫である。実施形態では、非ホジキンリンパ腫は、粘膜関連リンパ組織である。実施形態では、非ホジキンリンパ腫は、辺縁帯リンパ腫である。実施形態では、非ホジキンリンパ腫は、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫である。実施形態では、非ホジキンリンパ腫は、バーキットリンパ腫である。実施形態では、非ホジキンリンパ腫は、マントル細胞リンパ腫である。
【００８０】
実施形態では、組み合わせは、慢性リンパ球性白血病の処置のためのものである。実施形態では、組み合わせは、急性リンパ芽球性白血病の処置のためのものである。
【００８１】
もう１つの態様は、非ホジキンリンパ腫、慢性リンパ球性白血病および／または急性リンパ芽球性白血病の処置を必要とする個体の、非ホジキンリンパ腫、慢性リンパ球性白血病および／または急性リンパ芽球性白血病を処置する方法であって、ＣＤ１９に特異的な抗体およびブルトン型チロシンキナーゼ（ＢＴＫ）阻害剤の投与を含む方法を含む。本方法の実施形態では、配列ＳＹＶＭＨ（配列番号１）のＨＣＤＲ１領域、配列ＮＰＹＮＤＧ（配列番号２）のＨＣＤＲ２領域、配列ＧＴＹＹＹＧＴＲＶＦＤＹ（配列番号３）のＨＣＤＲ３領域、配列ＲＳＳＫＳＬＱＮＶＮＧＮＴＹＬＹ（配列番号４）のＬＣＤＲ１領域、配列ＲＭＳＮＬＮＳ（配列番号５）のＬＣＤＲ２領域および配列ＭＱＨＬＥＹＰＩＴ（配列番号６）のＬＣＤＲ３領域を含む、ＣＤ１９に特異的な抗体を含む。本方法の実施形態では、抗体は、例示したＣＤ１９に特異的な抗体を含む。本方法の実施形態では、ブルトン型チロシンキナーゼ（ＢＴＫ）阻害剤は、イブルチニブである。
【００８２】
もう１つの態様は、イブルチニブとの相乗効果のある組み合わせにおける、非ホジキンリンパ腫、慢性リンパ球性白血病および／または急性リンパ芽球性白血病の処置のための薬物の製造における、配列ＳＹＶＭＨ（配列番号１）のＨＣＤＲ１領域、配列ＮＰＹＮＤＧ（配列番号２）のＨＣＤＲ２領域、配列ＧＴＹＹＹＧＴＲＶＦＤＹ（配列番号３）のＨＣＤＲ３領域、配列ＲＳＳＫＳＬＱＮＶＮＧＮＴＹＬＹ（配列番号４）のＬＣＤＲ１領域、配列ＲＭＳＮＬＮＳ（配列番号５）のＬＣＤＲ２領域および配列ＭＱＨＬＥＹＰＩＴ（配列番号６）のＬＣＤＲ３領域を含む、ＣＤ１９に特異的な抗体の使用を含む。
【実施例】
【００８３】
実施例１：ＭＯＲ００２０８およびイブルチニブを単独および組み合わせて使用するＭＥＣ−１細胞の細胞毒性
材料
試験対象の細胞株：ＭＥＣ−１細胞（ＤＳＭＺ＃  ＡＣＣ４９７）。以下の細胞株を試験する：慢性Ｂ細胞白血病細胞株；ＪＶＭ−２（ＡＴＣＣ（登録商標）ＣＲＬ−３００２）マントル細胞リンパ腫細胞株；Ｒａｍｏｓ細胞（ＡＴＣＣ番号ＣＲＬ−１５９６）、ヒトバーキットリンパ腫細胞；ＨＧ−３（ＤＳＭＺ＃ＡＣＣ７６５）およびＣＩＩ（ＤＳＭＺ＃ＡＣＣ７７３）は、慢性リンパ球性白血病細胞株であり；Ｓｕ−ＤＨＬ  ６（ＤＳＭＺ＃ＡＣＣ５７２）、Ｕ２９３２（ＤＳＭＺ＃ＡＣＣ６３３）およびＯＣＩ−ＬＹ７（ＤＳＭＺ＃ＡＣＣ６８８）は、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）細胞株であり；ＪＶＭ−２（ＡＴＣＣ（登録商標）ＣＲＬ−３００２）は、マントル細胞リンパ腫細胞株であり；ＢＡＬＬ−１（ＤＳＭＺ＃ＡＣＣ７４２）は、急性リンパ芽球性白血病細胞株である。
【００８４】
使用した細胞株の培養条件は、供給者の情報に従う。
【００８５】
細胞培地：イスコフ改変ダルベッコ培地（ＩＭＤＭ）、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、Ｃａｔ  Ｎｏ．：３１９８０−０４８；ＲＰＭＩ１６４０、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、Ｃａｔ  Ｎｏ．：３１８７０−０７４；ＧｌｕｔａＭＡＸ、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、Ｃａｔ  Ｎｏ．：３５０５０−３８  ロットＮｏ．：１５０４６４７；ＦＣＳ：Ｓｉｇｍａ  Ｃａｔ  Ｎｏ．：Ｆ７５２４  ロットＮｏ．：１１１Ｍ３３９６。
【００８６】
ＮＫ：ＲＰＭＩ１６４０、ＧｌｕｔａＭＡＸＴＭ含有、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、Ｃａｔ  Ｎｏ．：３１８７０−０７４、１０％ＦＣＳ；Ｂｉｏｃｏｌｌ：Ｂｉｏｃｈｒｏｍｅ  ＡＧ  Ｃａｔ  Ｎｏ．：Ｌ６１１５  ロットＮｏ．：００３４Ｄ；ＭＡＣＳ  ＮＫ細胞アイソレーションキット：Ｍｉｌｔｅｎｙｉ  Ｂｉｏｔｅｃ  Ｃａｔ  Ｎｏ．：１３０−０９２−６５７  ロットＮｏ．：５１５０１３０１１５；イブルチニブ：Ｓｅｌｌｅｃｋ  Ｃｈｅｍ  ロットＮｏ．：Ｓ２６８０；ＦＣＳ：Ｓｉｇｍａ  Ｃａｔ  Ｎｏ．：Ｆ７５２４  ロットＮｏ．：１１１Ｍ３３９６；およびＭＯＲ００２０８と同じＦｃ領域を含むＲｅｆｍＡｂ３３（抗ＲＳＶ）。
【００８７】
方法
ＭＥＣ−１細胞株（ＣＬＬ）を対象として、ＭＯＲ００２０８およびイブルチニブ単独および組み合わせの細胞毒性を試験した。以下の標的細胞株：ＪＶＭ−２、Ｒａｍｏｓ、ＨＧ−３、ＣＩＩ、Ｓｕ−ＤＨＬ  ６、Ｕ２９３２、ＯＣＩ−ＬＹ７、ＪＶＭ−２およびＢＡＬＬ−１を対象として、ＭＯＲ００２０８およびイブルチニブ単独および組み合わせの細胞毒性を試験する。
【００８８】
イブルチニブは、ブルトン型チロシンキナーゼの共有結合性阻害剤であり、標的細胞株の増殖を妨げると考えられる。ＭＯＲ００２０８は、ＣＤ１９を標的とし、ＡＤＣＣを介して標的細胞殺傷に関与する。標的細胞殺傷は、以下のパラメーター：０．０３３〜３３μＭの濃度範囲、具体的には０．３μＭ、１．０μＭおよび３．０μＭでのイブルチニブ；０．００１〜１０ｎＭの濃度範囲、具体的には０．０１ｎＭ、０．１ｎＭおよび１０ｎＭでのＭＯＲ００２０８、ならびにＭＯＲ００２０８およびイブルチニブの組み合わせを用いて測定する。ＲｅｆｍＡｂ３３またはＮＫ細胞単独を対照として使用する。イブルチニブ群およびＭＯＲ００２０８＋イブルチニブ組み合わせ群では、標的細胞は、ＡＤＣＣアッセイ測定前の７日間にわたりイブルチニブで前処理する。標的細胞をカウントし、最終濃度１μｇ／ｍｌのＣＦＳＥを用いて染色する。ＤＭＳＯ処理した標的細胞の場合、５×１０５／ｍｌの細胞密度に相当する２：１のエフェクター：標的（Ｅ：Ｔ）比を選択する。阻害剤処理した細胞のＥ：Ｔ比を調整することにより、イブルチニブ処理により引き起こされる標的細胞に対する増殖作用を含めた。ＮＫ細胞をカウントし、１×１０６／ｍｌに調整する。標的細胞殺傷アッセイは、以下の通り行った。９６ウェルプレートを使用し、１ウェルごとに１００μｌの標的細胞懸濁液を、続いて各ウェルにＮＫ細胞の細胞懸濁液１００μｌを加え、Ｅ：Ｔ比２：１とした。抗体は培地中１０〜０．００１ｎＭの範囲に希釈した。細胞を遠心し、標的：エフェクター細胞ペレットを１００μｌの抗体含有培地またはそれに対応する対照溶液に再懸濁した。アッセイは、３７℃においてＣＯ２インキュベーターで４時間インキュベートした。氷上で１０分のインキュベーション後、５０μｌのＤＡＰＩ溶液を各ウェルに加え（最終濃度１μｇ／ｍｌ）、氷上で１０分間インキュベートした。細胞殺傷の測定は、ＦＡＣＳ−Ｖｅｒｓｅを用いて行った。死標的細胞はＤＡＰＩ陽性であった。
【００８９】
上述の方法に従ってＭＥＣ−１細胞およびＲＡＭＯＳ細胞の両方を用いて予備実験を行った。図１〜３は予備実験の結果を示す。
【００９０】
ＭＥＣ−１細胞に対するＡＤＣＣの関与を判定するため、ＭＯＲ００２０８およびイブルチニブの組み合わせにより全体で３回の実験を行った。実験１〜３のＡＤＣＣ用量反応曲線を図６〜８に示す。
【００９１】
実験１〜３の死細胞率（％）（生データ）を下記１〜９に示す。
【００９２】
実験１：
2018516905.tif 000012
2018516905.tif 000013
2018516905.tif 000014
【００９３】
実験２：
2018516905.tif 000015
2018516905.tif 000016
2018516905.tif 000017
【００９４】
実験３：
2018516905.tif 000018
2018516905.tif 000019
2018516905.tif 000020
【００９５】
協力作用の計算
生データ（死細胞％）を以下の通り解析する。１）生データ（死細胞％）からバックグラウンド（対照）を差し引き、処理群ごとに特異的殺傷を得る；次いで２）特異的殺傷の値を、ＭＯＲ００２０８＋イブルチニブの組み合わせを１に設定することにより規格化する。
【００９６】
ＭＯＲ００２０８およびイブルチニブ単独と比較して例示した抗ＣＤ１９抗体およびイブルチニブの組み合わせの相乗作用を判定するため、併用係数（ＣＩ）の計算を完了させる。そうした計算は、その全体を援用するＴｉｎｇ−Ｃｈａｏ  Ｃｈｏｕ，  Ｔｈｅｏｒｅｔｉｃａｌ  Ｂａｓｉｓ，Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  Ｄｅｓｉｇｎ，ａｎｄ  Ｃｏｍｐｕｔｅｒｉｚｅｄ  Ｓｉｍｕｌａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｓｙｎｅｒｇｉｓｍ  ａｎｄ  Ａｎｔａｇｏｎｉｓｍ  ｉｎ  Ｄｒｕｇ  Ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ  Ｓｔｕｄｉｅｓ，Ｐｈａｒｍａｃｏｌ  Ｒｅｖ  ５８：６２１−６８１（２００６）、およびその全体を援用するＣｈｏｕ  ＴＣ，Ｔａｌａｌａｙ  Ｐ，Ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ  ａｎａｌｙｓｉｓ  ｏｆ  ｄｏｓｅ−ｅｆｆｅｃｔ  ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐｓ：ｔｈｅ  ｃｏｍｂｉｎｅｄ  ｅｆｆｅｃｔｓ  ｏｆ  ｍｕｌｔｉｐｌｅ  ｄｒｕｇｓ  ｏｒ  ｅｎｚｙｍｅ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ．Ａｄｖ  Ｅｎｚｙｍｅ  Ｒｅｇｕｌ  ２２：２７−５５（１９８４）に記載される。Ｃｈｏｕ−Ｔａｌａｌａｙの方法は、ＣＩ−ｉｓｏｂｏｌ法を用いて行う。
【００９７】
半数影響式（Ｍｅｄｉａｎ  ｅｆｆｅｃｔ  ｅｑｕａｔｉｏｎ）
半数影響式は、阻害剤（薬剤など）の作用をＦａ／Ｆｕ＝（Ｄ／Ｄ５０）＾ｍとしてモデル化する。式中、Ｄは用量であり、ＦａおよびＦｕは、用量Ｄにより影響を受けたまたは受けない系の割合であり（Ｆａ＋Ｆｕ＝１）；Ｄ５０は、半数影響を発揮する用量（たとえば、ＩＣ５０、ＥＤ５０、ＬＤ５０）である。定数ｍは、用量作用曲線の形状を決定する。
【００９８】
本発明者らは、ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍを使用して非線形回帰計算を行い、パラメーターｍおよびＤ５０を推定する。
【００９９】
ＣＩ−ｉｓｏｂｏｌ法
ＣＩ−ｉｓｏｂｏｌ法は、薬剤間の協力作用の定量的評価を与える。併用係数（ＣＩ）は、単独および組み合わせた薬剤処理の用量作用データから推定する。ＣＩが１未満であると協力作用を示し；ＣＩ＝１であると相加作用を示し；ＣＩ＞１であると拮抗作用を示す。薬剤相互作用（協力作用または拮抗作用）が顕著であるほど、ＣＩ値は１から離れる。
【０１００】
形式的には、組み合わせ薬剤処理の併用係数（ＣＩ）は、ＣＩ＝Ｄ１／Ｄｘ１＋Ｄ２／Ｄｘ２と定義される。
【０１０１】
ここで、Ｄ１およびＤ２は、それぞれ組み合わせの薬剤１および薬剤２の用量であり；Ｄｘ１、およびＤｘ２は、組み合わせの作用と同じ作用を与えると考えられる薬剤１および薬剤２のみを用いた処理の用量である。用量Ｄｘ１およびＤｘ２は、単独の薬剤処理の用量作用データから推定する必要がある。本質的には、半数影響式は各薬剤のデータにフィッティングさせる。薬剤の半数影響式から、本発明者らは、作用（すなわちＦａ、Ｆｕ）を発揮するのに必要な用量（すなわちＤ）を推定することができる。ある点が相加作用を示す線から離れているほど、１とそのＣＩとの差が大きくなり、したがって（相乗または拮抗）作用が強くなる。
【０１０２】
結果
Ｃｈｏｕインデックス曲線を図９〜１１に示す。３つの実験（同じ濃度の）で得られたデータをマージして、イブルトニイブ濃度ごとに１つの曲線を作成した。
【０１０３】
Ｃｈｏｕインデックス値から、ＭＯＲ００２０８およびイブルチニブ単独と比較すると、ＭＥＣ−１細胞の特異的殺傷におけるＭＯＲ００２０８およびイブルチニブの組み合わせの明らかな協力作用が示される。
【０１０４】
したがって、ＭＯＲ００２０８およびイブルチニブの組み合わせは、ヒトの非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）および急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）の処置でも相乗的に挙動するであろう。
【０１０５】
追加解析
組み合わせて使用するときの単剤の作用を計算し比較するための別のアプローチは、１９６３年に最初にＷｅｂｂ  Ｊ．Ｌ．により“Ｅｎｚｙｍｅｓ  ａｎｄ  ｍｅｔａｂｏｌｉｃ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ”に記載された分画産物の概念である。この解析方法では、いくつかの薬剤の作用は、作用が非競合である限り、同じ細胞分画に向かい得ると考えられており、これはＭＯＲ００２０８およびイブルチニブに当てはまり、したがって、測定された組み合わせ作用は単独作用の理論的合計より小さくなる。分画産物の概念によると、２つの薬剤が標的細胞分画の５０％を殺傷するときは常に、組み合わせの作用が７５％（適用した式：１−（１−０．５）×（１−０．５）＝０．７５）に過ぎず、期待される１００％ではない。依然として生存しており、２つの薬剤の１つに感受性を示すのは標的細胞の５０％のみであるためである。
【０１０６】
組み合わせて使用するときの単剤の作用を計算し比較するための別のアプローチは、その全体を援用するＣｌａｒｋｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｉｓｓｕｅｓ  ｉｎ  ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  ｄｅｓｉｇｎ  ａｎｄ  ｅｎｄｐｏｉｎｔ  ａｎａｌｙｓｉｓ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｓｔｕｄｙ  ｏｆ  ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  ｃｙｔｏｔｏｘｉｃ  ａｇｅｎｔｓ  ｉｎ  ｖｉｖｏ  ｉｎ  ｂｒｅａｓｔ  ｃａｎｃｅｒ  ａｎｄ  ｏｔｈｅｒ  ｍｏｄｅｌｓ，Ｂｒｅａｓｔ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ａｎｄ  Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ４６：２５５−２７８（１９９７）のアプローチである。
【０１０７】
表１〜１６の死細胞％（生データ）は、以下のように解析した：
拮抗的（ＡＢ）／Ｃ＜（Ａ／Ｃ）×（Ｂ／Ｃ）
相加的（ＡＢ）／Ｃ＝（Ａ／Ｃ）×（Ｂ／Ｃ）
相乗的（ＡＢ）／Ｃ＞（Ａ／Ｃ）×（Ｂ／Ｃ）
ＡはＭＯＲ００２０８を単独で用いた処理であり；Ｂはイブルチニブを単独で用いた処理であり；Ｃは対照ＤＭＳＯ＋ＲｅｆＭａｂ３３に対する反応であり；ＡＢは処理ＡおよびＢの組み合わせである。
【０１０８】
実験１
2018516905.tif 000021
【０１０９】
この表１に示したデータのＣｌａｒｋｅ解析をさらに図１２に図示する。
2018516905.tif 000022
【０１１０】
この表２に示したデータのＣｌａｒｋｅ解析をさらに図１３に図示する。
2018516905.tif 000023
【０１１１】
この表３に示したデータのＣｌａｒｋｅ解析をさらに図１４に図示する。
【０１１２】
実験２
2018516905.tif 000024
【０１１３】
この表４に示したデータのＣｌａｒｋｅ解析をさらに図１５に図示する。
2018516905.tif 000025
【０１１４】
この表５に示したデータのＣｌａｒｋｅ解析をさらに図１６に図示する。
2018516905.tif 000026
【０１１５】
この表６に示したデータのＣｌａｒｋｅ解析をさらに図１７に図示する。
【０１１６】
実験３
2018516905.tif 000027
【０１１７】
この表７に示したデータのＣｌａｒｋｅ解析をさらに図１８に図示する。
2018516905.tif 000028
【０１１８】
この表８に示したデータのＣｌａｒｋｅ解析をさらに図１９に図示する。
2018516905.tif 000029
【０１１９】
この表９に示したデータのＣｌａｒｋｅ解析をさらに図２０に図示する。
【０１２０】
Ｃｌａｒｋｅの結果
各濃度での実験１〜３から、Ｃｌａｒｋｅ  ｅｔ  ａｌ．の方法を用いてＭＯＲ００２０８＋イブルチニブの組み合わせの明らかな相乗作用が示される。しかしながら、Ｃｌａｒｋｅ  ｅｔ  ａｌ．の方法からは、少数ながらイブルチニブ活性が対照のそれより低かった実験にもかかわらず、協力作用が示される。
【０１２１】
本記述、具体的な例およびデータは例示的な実施形態を示しているが、例示として提示しており、本発明を限定することを意図するものではないことが理解されるであろう。本明細書に含まれる考察、開示およびデータから本発明における様々な変更形態および修正形態が明らかになり、したがってこれらは本発明の一部と見なされる。
【図１】
2018516905.tif 000034
【図２】
2018516905.tif 000035
【図３】
2018516905.tif 000036
【図４】
2018516905.tif 000037
【図５】
2018516905.tif 000038
【図６】
2018516905.tif 000039
【図７】
2018516905.tif 000040
【図８】
2018516905.tif 000041
【図９】
2018516905.tif 000042
【図１０】
2018516905.tif 000043
【図１１】
2018516905.tif 000044
【図１２】
2018516905.tif 000045
【図１３】
2018516905.tif 000046
【図１４】
2018516905.tif 000047
【図１５】
2018516905.tif 000048
【図１６】
2018516905.tif 000049
【図１７】
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【図１８】
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【図１９】
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【図２０】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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