(57)【要約】  本明細書に提供されるのは、任意の哺乳動物における貧血、RBC輸血を必要とする貧血、低もしくは中間-1リスクの骨髄異形成症候群(MDS)、及び/又は非増殖性慢性骨髄単球性白血病(CMML)の対象における治療方法であって、治療を必要とする対象へのアクチビン-ActRIIシグナル伝達インヒビターの投与を含む、方法である。【選択図】図１
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
対象における血液関連障害を治療する方法であって、
(a)該対象における環状鉄芽球である赤芽球のパーセンテージを決定すること;及び
(b)該対象における赤芽球の少なくとも10％、11％、12％、13％、14％、15％、16％、17％、18％、19％、又は20％が環状鉄芽球である場合、ActRIIシグナル伝達インヒビターの0.1mg/kg〜2.0mg/kgの医薬有効用量を該対象に投与すること
を含む、前記方法。
【請求項２】
前記血液関連障害が、貧血、輸血を必要とする貧血、骨髄異形成症候群(MDS)、又は非増殖性慢性骨髄単球性白血病(CMML)である、請求項1記載の方法。
【請求項３】
前記対象における環状鉄芽球である赤芽球のパーセンテージが初回で決定される、請求項1又は2記載の方法。
【請求項４】
前記初回が、前記対象への前記ActRIIシグナル伝達インヒビターの医薬有効用量の投与から1日、2日、3日、4日、5日、6日、1週間、2週間、3週間、4週間、5週間、6週間、7週間、8週間、3カ月、4カ月、5カ月、又は6カ月以内である、請求項3記載の方法。
【請求項５】
対象における血液関連障害を治療する方法であって、(i)該対象における環状鉄芽球である赤芽球の初期のパーセンテージと比較したときの該対象における環状鉄芽球である赤芽球のパーセンテージの長期低下;及び/又は(ii)該対象に該ActRIIシグナル伝達インヒビターの初期用量を投与する前の期間の該対象におけるヘモグロビンレベルと比較したときの該対象におけるヘモグロビンレベルの長期増大を達成するために、該対象にアクチビン受容体II型(ActRII)シグナル伝達インヒビターを医薬有効用量でかつ一定期間投与することを含み;ここで、該医薬有効用量が0.1mg/kg〜2.0mg/kgであり、かつ該対象における環状鉄芽球である赤芽球の初期のパーセンテージが、少なくとも10％、11％、12％、13％、14％、15％、16％、17％、18％、19％、又は少なくとも20％である、前記方法。
【請求項６】
前記血液関連障害が、貧血、MDS、又は非増殖性CMMLである、請求項5記載の方法。
【請求項７】
対象における貧血を治療する方法であって、(i)該対象における環状鉄芽球である赤芽球の初期のパーセンテージと比較したときの該対象における環状鉄芽球である赤芽球のパーセンテージの長期低下;及び/又は(ii)該対象に該ActRIIシグナル伝達インヒビターの初期用量を投与する前の期間の該対象におけるヘモグロビンレベルと比較したときの該対象におけるヘモグロビンレベルの長期増大を達成するために、該対象にアクチビン受容体II型(ActRII)シグナル伝達インヒビターを医薬有効用量でかつ一定期間投与することを含み;ここで、該医薬有効用量が0.1mg/kg〜2.0mg/kgであり、かつ該対象における環状鉄芽球である赤芽球の初期のパーセンテージが、少なくとも10％、11％、12％、13％、14％、15％、16％、17％、18％、19％、又は少なくとも20％である、前記方法。
【請求項８】
前記対象がRBC輸血を必要とする対象である、請求項7記載の方法。
【請求項９】
対象におけるMDSを治療する方法であって、(i)該対象における環状鉄芽球である赤芽球の初期のパーセンテージと比較したときの該対象における環状鉄芽球である赤芽球のパーセンテージの長期低下;及び/又は(ii)該対象に該ActRIIシグナル伝達インヒビターの初期用量を投与する前の期間の該対象におけるヘモグロビンレベルと比較したときの該対象におけるヘモグロビンレベルの長期増大を達成するために、該対象にActRIIシグナル伝達インヒビターを医薬有効用量でかつ一定期間投与することを含み;ここで、該医薬有効用量が0.1mg/kg〜2.0mg/kgであり、かつ該対象における環状鉄芽球である赤芽球の初期のパーセンテージが、少なくとも10％、11％、12％、13％、14％、15％、16％、17％、18％、19％、又は少なくとも20％である、前記方法。
【請求項１０】
対象における非増殖性CMMLを治療する方法であって、(i)該対象における環状鉄芽球である赤芽球の初期のパーセンテージと比較したときの該対象における環状鉄芽球である赤芽球のパーセンテージの長期低下;及び/又は(ii)該対象に該ActRIIシグナル伝達インヒビターの初期用量を投与する前の期間の該対象におけるヘモグロビンレベルと比較したときの該対象におけるヘモグロビンレベルの長期増大を達成するために、該対象にActRIIシグナル伝達インヒビターを医薬有効用量でかつ一定期間投与することを含み;ここで、該医薬有効用量が0.1mg/kg〜2.0mg/kgであり、かつ該対象における環状鉄芽球である赤芽球の初期のパーセンテージが、少なくとも10％、11％、12％、13％、14％、15％、16％、17％、18％、19％、又は少なくとも20％である、前記方法。
【請求項１１】
前記ActRIIシグナル伝達インヒビター投与の期間が、1、2、3、4、5、又は6カ月である、請求項5〜10のいずれか一項記載の方法。
【請求項１２】
前記対象における環状鉄芽球である赤芽球の初期のパーセンテージが、該対象に該ActRIIシグナル伝達インヒビターの初期用量を投与する前の期間の該対象における環状鉄芽球である赤芽球のパーセンテージである、請求項5〜11のいずれか一項記載の方法。
【請求項１３】
前記対象における環状鉄芽球である赤芽球のパーセンテージの長期低下が、前記ActRIIシグナル伝達インヒビター投与の期間後、少なくとも1、2、3、4、5、6、12、18、又は24カ月間維持される、請求項5〜12のいずれか一項記載の方法。
【請求項１４】
前記対象における環状鉄芽球である赤芽球のパーセンテージの長期低下が、前記ActRIIシグナル伝達インヒビター投与の期間後、少なくとも6、12、18、又は24カ月間、該対象における環状鉄芽球である赤芽球の初期のパーセンテージを少なくとも1.5、2.5、5.0、7.5、又は10.0倍下回るものである、請求項5〜13のいずれか一項記載の方法。
【請求項１５】
前記対象における初期のヘモグロビンレベルが、該対象に該ActRIIシグナル伝達インヒビターの初期用量を投与する前の期間の該対象におけるヘモグロビンレベルである、請求項5〜14のいずれか一項記載の方法。
【請求項１６】
前記対象における初期のヘモグロビンレベルが約11g/dL未満である、請求項5〜15のいずれか一項記載の方法。
【請求項１７】
前記対象におけるヘモグロビンレベルの長期増大が、前記ActRIIシグナル伝達インヒビター投与の期間後、少なくとも3、4、5、6、12、18、又は24カ月間維持される、請求項5〜16のいずれか一項記載の方法。
【請求項１８】
前記対象におけるヘモグロビンレベルの長期増大が、前記ActRIIシグナル伝達インヒビター投与の期間後、少なくとも3、4、5、6、12、18、又は24カ月間の該対象における約11g/dL〜18g/dLのヘモグロビンレベルである、請求項5〜17のいずれか一項記載の方法。
【請求項１９】
前記対象が、前記ActRIIシグナル伝達インヒビター投与の期間後、少なくとも3、4、5、6、12、18、又は24カ月間、赤血球輸血を必要としない、請求項5〜17のいずれか一項記載の方法。
【請求項２０】
前記ActRIIシグナル伝達インヒビターが3週間に1回投与される、請求項1〜19のいずれか一項記載の方法。
【請求項２１】
前記ActRIIシグナル伝達インヒビターが、(i)28日に1回;又は(ii)42日に1回投与される、請求項1〜19のいずれか一項記載の方法。
【請求項２２】
前記ActRIIシグナル伝達インヒビターが注射によって投与される、請求項1〜21のいずれか一項記載の方法。
【請求項２３】
前記ActRIIシグナル伝達インヒビターが皮下投与される、請求項16記載の方法。
【請求項２４】
前記ActRIIシグナル伝達インヒビター投与の期間から6、12、18、及び/又は24カ月後の前記対象における環状鉄芽球である赤芽球のさらなるパーセンテージを決定することをさらに含む、請求項1〜23のいずれか一項記載の方法。
【請求項２５】
前記対象における環状鉄芽球である赤芽球のパーセンテージがプルシアンブルー染色によって決定される、請求項1〜24のいずれか一項記載の方法。
【請求項２６】
前記ActRIIシグナル伝達インヒビター投与の期間から6、12、18、及び/又は24カ月後の前記対象におけるさらなるヘモグロビンレベルを決定することをさらに含む、請求項1〜25のいずれか一項記載の方法。
【請求項２７】
対象における血液関連障害を治療する方法であって:
(a)該対象における環状鉄芽球である赤芽球のパーセンテージを決定すること;及び
(b)(i)該対象における環状鉄芽球である赤芽球のパーセンテージが、少なくとも10％、11％、12％、13％、14％、15％、16％、17％、18％、19％、もしくは少なくとも20％である場合、ActRIIシグナル伝達インヒビターを該対象に0.1mg/kg〜2.0mg/kgの医薬有効用量で短期間投与すること、又は(ii)該対象における環状鉄芽球である赤芽球のパーセンテージが10％未満である場合、ActRIIシグナル伝達インヒビターを該対象に0.1mg/kg〜2.0mg/kgの医薬有効用量で長期間投与すること
を含む、前記方法。
【請求項２８】
前記血液関連障害が、貧血、輸血を必要とする貧血、MDS、又は非増殖性CMMLである、請求項27記載の方法。
【請求項２９】
対象における貧血を治療する方法であって:
(a)該対象における環状鉄芽球である赤芽球の第1のパーセンテージを決定すること;及び
(b)(i)該対象における環状鉄芽球である赤芽球の第1のパーセンテージが、少なくとも10％、11％、12％、13％、14％、15％、16％、17％、18％、19％、もしくは少なくとも20％である場合、ActRIIシグナル伝達インヒビターを該対象に0.1mg/kg〜2.0mg/kgの医薬有効用量で短期間投与すること、又は(ii)該対象における環状鉄芽球である赤芽球の該パーセンテージが10％未満である場合、ActRIIシグナル伝達インヒビターを該対象に0.1mg/kg〜2.0mg/kgの医薬有効用量で長期間投与すること
を含む、前記方法。
【請求項３０】
前記対象が輸血を必要とする対象である、請求項29記載の方法。
【請求項３１】
対象におけるMDSを治療する方法であって:
(a)該対象における環状鉄芽球である赤芽球の第1のパーセンテージを決定すること;及び
(b)(i)該対象における環状鉄芽球である赤芽球の第1のパーセンテージが、少なくとも10％、11％、12％、13％、14％、15％、16％、17％、18％、19％、もしくは少なくとも20％である場合、ActRIIシグナル伝達インヒビターを該対象に0.1mg/kg〜2.0mg/kgの医薬有効用量で短期間投与すること、又は(ii)該対象における環状鉄芽球である赤芽球の該パーセンテージが10％未満である場合、ActRIIシグナル伝達インヒビターを該対象に0.1mg/kg〜2.0mg/kgの医薬有効用量で長期間投与すること
を含む、前記方法。
【請求項３２】
対象における非増殖性CMMLを治療する方法であって:
(a)該対象における環状鉄芽球である赤芽球の第1のパーセンテージを決定すること;及び
(b)(i)該対象における環状鉄芽球である赤芽球の第1のパーセンテージが、少なくとも10％、11％、12％、13％、14％、15％、16％、17％、18％、19％、もしくは少なくとも20％である場合、ActRIIシグナル伝達インヒビターを該対象に0.1mg/kg〜2.0mg/kgの医薬有効用量で短期間投与すること、又は(ii)該対象における環状鉄芽球である赤芽球の該パーセンテージが10％未満である場合、ActRIIシグナル伝達インヒビターを該対象に0.1mg/kg〜2.0mg/kgの医薬有効用量で長期間投与すること
を含む、前記方法。
【請求項３３】
前記ActRIIシグナル伝達インヒビターが短期間投与された前記対象における環状鉄芽球である赤芽球の第1のパーセンテージが、該短期間のActRIIシグナル伝達インヒビターの投与後、少なくとも6、12、18、もしくは24カ月間、10％、9％、8％、7％、6％、5％、4％、3％、2％未満、又は1％未満にまで低下する、請求項27〜32のいずれか一項記載の方法。
【請求項３４】
前記対象におけるヘモグロビンレベルが約11g/dL未満である、請求項27〜33のいずれか一項記載の方法。
【請求項３５】
前記ActRIIシグナル伝達インヒビターが短期間投与された前記対象におけるヘモグロビンレベルが、該ActRIIシグナル伝達インヒビター投与の期間から少なくとも3、4、5、6、12、18、又は24カ月後、約11g/dL〜18g/dLである、請求項27〜34のいずれか一項記載の方法。
【請求項３６】
前記短期間が、1、2、3、4、又は5カ月である、請求項27〜35のいずれか一項記載の方法。
【請求項３７】
前記長期間が、少なくとも6、12、18、又は24カ月である、請求項27〜35のいずれか一項記載の方法。
【請求項３８】
前記対象が、前記ActRIIシグナル伝達インヒビターの投与の期間後、少なくとも3、4、5、6、12、18、又は24カ月間、赤血球輸血を必要としない、請求項27〜36のいずれか一項記載の方法。
【請求項３９】
前記ActRIIシグナル伝達インヒビターが3週間に1回投与される、請求項27〜38のいずれか一項記載の方法。
【請求項４０】
前記ActRIIシグナル伝達インヒビターが、(i)28日に1回;又は(ii)42日に1回投与される、請求項27〜38のいずれか一項記載の方法。
【請求項４１】
前記ActRIIシグナル伝達インヒビターが注射によって投与される、請求項27〜40のいずれか一項記載の方法。
【請求項４２】
前記ActRIIシグナル伝達インヒビターが皮下投与される、請求項41記載の方法。
【請求項４３】
前記ActRIIシグナル伝達インヒビター投与の期間から6、12、18、及び/又は24カ月後の前記対象における環状鉄芽球である赤芽球の第2のパーセンテージを決定することをさらに含む、請求項27〜42のいずれか一項記載の方法。
【請求項４４】
前記対象における環状鉄芽球である赤芽球のパーセンテージがプルシアンブルー染色によって決定される、請求項27〜43のいずれか一項記載の方法。
【請求項４５】
前記ActRIIシグナル伝達インヒビター投与の期間から6、12、18、及び/又は24カ月後の前記対象におけるヘモグロビンレベルを決定することをさらに含む、請求項27〜43のいずれか一項記載の方法。
【請求項４６】
対象における血液関連障害を治療する方法であって:
(a)該対象が、少なくとも10％、11％、12％、13％、14％、15％、16％、17％、18％、19％、又は少なくとも20％の該対象における環状鉄芽球である赤芽球のパーセンテージを有することを決定すること;
(b)該対象にActRIIシグナル伝達インヒビターの0.1mg/kg〜2.0mg/kgの初期用量を投与すること;
(c)一定期間後、該対象における環状鉄芽球である赤芽球の第2のパーセンテージを決定すること;及び
(d)任意に、該対象に該ActRIIシグナル伝達インヒビターの調整用量を投与すること
を含む、前記方法。
【請求項４７】
前記血液関連障害が、貧血、輸血を必要とする貧血、MDS、又は非増殖性CMMLである、請求項46記載の方法。
【請求項４８】
対象における貧血を治療する方法であって:
(a)該対象が、少なくとも10％、11％、12％、13％、14％、15％、16％、17％、18％、19％、又は少なくとも20％の該対象における環状鉄芽球である赤芽球のパーセンテージを有することを決定すること;
(b)該対象にActRIIシグナル伝達インヒビターの0.1mg/kg〜2.0mg/kgの初期用量を投与すること;
(c)一定期間後、該対象における環状鉄芽球である赤芽球の第2のパーセンテージを決定すること;及び
(d)任意に、該対象に該ActRIIシグナル伝達インヒビターの調整用量を投与すること
を含む、前記方法。
【請求項４９】
前記対象が輸血を必要とする対象である、請求項48記載の方法。
【請求項５０】
対象におけるMDSを治療する方法であって:
(a)該対象が、少なくとも10％、11％、12％、13％、14％、15％、16％、17％、18％、19％、又は少なくとも20％の該対象における環状鉄芽球である赤芽球のパーセンテージを有することを決定すること;
(b)該対象にActRIIシグナル伝達インヒビターの0.1mg/kg〜2.0mg/kgの初期用量を投与すること;
(c)一定期間後、該対象における環状鉄芽球である赤芽球の第2のパーセンテージを決定すること;及び
(d)任意に、該対象に該ActRIIシグナル伝達インヒビターの調整用量を投与すること
を含む、前記方法。
【請求項５１】
対象における非増殖性慢性骨髄単球性白血病(CMML)を治療する方法であって:
(a)該対象が、少なくとも10％、11％、12％、13％、14％、15％、16％、17％、18％、19％、又は少なくとも20％の該対象における環状鉄芽球である赤芽球のパーセンテージを有することを決定すること;
(b)該対象にActRIIシグナル伝達インヒビターの0.1mg/kg〜2.0mg/kgの初期用量を投与すること;
(c)一定期間後、該対象における環状鉄芽球である赤芽球の第2のパーセンテージを決定すること;及び
(d)任意に、該対象に該ActRIIシグナル伝達インヒビターの調整用量を投与すること
を含む、前記方法。
【請求項５２】
前記一定期間が、1、2、3、4、5、又は6カ月である、請求項46〜51のいずれか一項記載の方法。
【請求項５３】
前記初期用量が注射によって投与される、請求項46〜52のいずれか一項記載の方法。
【請求項５４】
前記初期用量が皮下投与される、請求項53記載の方法。
【請求項５５】
前記初期用量が3週間に1回投与される、請求項46〜54のいずれか一項記載の方法。
【請求項５６】
前記初期用量が、(i)28日に1回;又は(ii)42日に1回投与される、請求項46〜54のいずれか一項記載の方法。
【請求項５７】
前記初期用量が、前記対象における環状鉄芽球である赤芽球の第1のパーセンテージの決定の直後又は最大でもその1日、2日、3日、4日、5日、6日、もしくは1週間、2週間、1カ月、2カ月、3カ月、4カ月、5カ月、6カ月、7カ月、8カ月、9カ月、10カ月、11カ月、もしくは12カ月以内に、該対象に投与される、請求項46〜56のいずれか一項記載の方法。
【請求項５８】
前記調整用量が、前記対象における環状鉄芽球である赤芽球の第2のパーセンテージの決定の直後又は最大でもその1日、2日、3日、4日、5日、6日、もしくは1週間、2週間、1カ月、2カ月、3カ月、4カ月、5カ月、6カ月、7カ月、8カ月、9カ月、10カ月、11カ月、もしくは12カ月以内に、該対象に投与される、請求項46〜56のいずれか一項記載の方法。
【請求項５９】
前記対象における環状鉄芽球である赤芽球の第2のパーセンテージが、少なくとも10％、11％、12％、13％、14％、15％、16％、17％、18％、19％、又は少なくとも20％である場合、前記ActRIIシグナル伝達インヒビターの調整用量が前記初期用量よりも多い、請求項46〜58のいずれか一項記載の方法。
【請求項６０】
前記調整用量が、前記初期用量よりも約0.05mg/kg、約0.1mg/kg、約0.15mg/kg、約0.25mg/kg、約0.3mg/kg、約0.35mg/kg、約0.4mg/kg、もしくは約0.5mg/kg、0.75mg/kg、1.0mg/kg、1.33mg/kg、1.5mg/kg、又は約1.75mg/kg多い、請求項59記載の方法。
【請求項６１】
前記調整用量が、前記初期用量よりも高い頻度で投与される、請求項59又は60のいずれか一項記載の方法。
【請求項６２】
前記調整用量が、5、10、15、20、25、28、30、35、又は40日毎に投与される、請求項59〜61のいずれか一項記載の方法。
【請求項６３】
前記調整用量が注射によって投与される、請求項46〜62のいずれか一項記載の方法。
【請求項６４】
前記調整用量が皮下投与される、請求項63記載の方法。
【請求項６５】
前記対象における環状鉄芽球である赤芽球の第2のパーセンテージが、10％、9％、8％、7％、6％、5％、4％、3％、2％未満、又は1％未満である場合、前記調整用量が該対象に投与されない、請求項46〜57のいずれか一項記載の方法。
【請求項６６】
前記調整用量が、最大でも1、2、3、4、5、又は6カ月間しか投与されない、請求項46〜64のいずれか一項記載の方法。
【請求項６７】
前記対象が、前記ActRIIシグナル伝達インヒビターの投与の期間後、少なくとも3、4、5、6、12、18、又は24カ月間、赤血球輸血を必要としない、請求項46〜66のいずれか一項記載の方法。
【請求項６８】
前記ActRIIシグナル伝達インヒビターが3週間に1回投与される、請求項46〜67のいずれか一項記載の方法。
【請求項６９】
前記ActRIIシグナル伝達インヒビターが、(i)28日に1回;又は(ii)42日に1回投与される、請求項46〜67のいずれか一項記載の方法。
【請求項７０】
前記対象における環状鉄芽球である赤芽球のパーセンテージがプルシアンブルー染色によって決定される、請求項46〜69のいずれか一項記載の方法。
【請求項７１】
対象における血液関連障害を治療する方法であって:
(a)該対象における環状鉄芽球である赤芽球のパーセンテージを決定すること;
(b)該対象における環状鉄芽球である該対象における赤芽球のパーセンテージが、少なくとも10％、11％、12％、13％、14％、15％、16％、17％、18％、19％、又は少なくとも20％である場合、ActRIIシグナル伝達インヒビターを該対象に0.1mg/kg〜2.0mg/kgの医薬有効用量で投与すること;
(c)ActRIIシグナル伝達インヒビターが該対象に投与された後の該対象におけるヘモグロビンのレベルを決定すること;及び
(d)該対象におけるヘモグロビンのレベルが少なくとも11g/dLである場合、該対象への該ActRIIシグナル伝達インヒビターの投与を中止すること
を含む、前記方法。
【請求項７２】
前記血液関連障害が、貧血、輸血を必要とする貧血、MDS、又は非増殖性CMMLである、請求項71記載の方法。
【請求項７３】
対象における貧血を治療する方法であって:
(a)該対象における環状鉄芽球である赤芽球のパーセンテージを決定すること;
(b)該対象における環状鉄芽球である該対象における赤芽球のパーセンテージが、少なくとも10％、11％、12％、13％、14％、15％、16％、17％、18％、19％、又は少なくとも20％である場合、ActRIIシグナル伝達インヒビターを該対象に0.1mg/kg〜2.0mg/kgの医薬有効用量で投与すること;
(c)ActRIIシグナル伝達インヒビターが該対象に投与された後の該対象におけるヘモグロビンのレベルを決定すること;及び
(d)該対象におけるヘモグロビンのレベルが少なくとも11g/dLである場合、該対象への該ActRIIシグナル伝達インヒビターの投与を中止すること
を含む、前記方法。
【請求項７４】
前記対象がRBC輸血を必要とする、請求項73記載の方法。
【請求項７５】
対象におけるMDSを治療する方法であって:
(a)該対象における環状鉄芽球である赤芽球のパーセンテージを決定すること;
(b)該対象における環状鉄芽球である赤芽球のパーセンテージが、少なくとも10％、11％、12％、13％、14％、15％、16％、17％、18％、19％、又は少なくとも20％である場合、ActRIIシグナル伝達インヒビターを該対象に0.1mg/kg〜2.0mg/kgの医薬有効用量で投与すること;
(c)ActRIIシグナル伝達インヒビターが該対象に投与された後の該対象におけるヘモグロビンのレベルを決定すること;及び
(d)該対象におけるヘモグロビンのレベルが少なくとも11g/dLである場合、該対象への該ActRIIシグナル伝達インヒビターの投与を中止すること
を含む、前記方法。
【請求項７６】
対象における非増殖性CMMLを治療する方法であって:
(a)該対象における環状鉄芽球である赤芽球のパーセンテージを決定すること;
(b)該対象における環状鉄芽球である赤芽球のパーセンテージが、少なくとも10％、11％、12％、13％、14％、15％、16％、17％、18％、19％、又は少なくとも20％である場合、ActRIIシグナル伝達インヒビターを該対象に0.1mg/kg〜2.0mg/kgの医薬有効用量で投与すること;
(c)ActRIIシグナル伝達インヒビターが該対象に投与された後の該対象におけるヘモグロビンのレベルを決定すること;及び
(d)該対象におけるヘモグロビンのレベルが少なくとも11g/dLである場合、該対象への該ActRIIシグナル伝達インヒビターの投与を中止すること
を含む、前記方法。
【請求項７７】
前記ActRIIシグナル伝達インヒビターが、前記対象に3週間に1回投与される、請求項71〜76のいずれか一項記載の方法。
【請求項７８】
前記ActRIIシグナル伝達インヒビターが、(i)28日に1回;又は(ii)42日に1回投与される、請求項71〜76のいずれか一項記載の方法。
【請求項７９】
前記ActRIIシグナル伝達インヒビターが注射によって投与される、請求項27〜40のいずれか一項記載の方法。
【請求項８０】
前記ActRIIシグナル伝達インヒビターが皮下投与される、請求項79記載の方法。
【請求項８１】
前記ヘモグロビンのレベルが、前記ActRIIシグナル伝達インヒビターが投与された後、6、12、18、及び/又は24カ月以内に決定される、請求項71〜80のいずれか一項記載の方法。
【請求項８２】
血液関連障害を有する対象における赤血球産生を促進する方法であって:
(a)該対象における環状鉄芽球である赤芽球のパーセンテージを決定すること;
(b)ActRIIシグナル伝達インヒビターの医薬有効用量を該対象に第1の期間投与すること;
(c)該第1の期間の後、工程(a)の該対象における環状鉄芽球である赤芽球のパーセンテージが、11％、12％、13％、14％、15％、16％、17％、18％、19％、又は20％を上回っていた場合、該対象に投与される該ActRIIシグナル伝達インヒビターの用量を低下させるか、該対象への該ActRIIシグナル伝達インヒビターの投与の頻度を低下させるか、又は該ActRIIシグナル伝達インヒビターの投与を中止すること
を含む、前記方法。
【請求項８３】
前記血液関連障害が、貧血、輸血を必要とする貧血、MDS、又は非増殖性CMMLである、請求項82記載の方法。
【請求項８４】
(i)前記第1の期間中の前記対象における血液学的パラメータをモニタリングすること;及び(ii)該対象における血液学的パラメータが正常化している場合、該対象への該ActRIIシグナル伝達インヒビターの投与を低下させるか又は中止することをさらに含む、請求項82又は83記載の方法。
【請求項８５】
(i)前記第1の期間中の前記対象における血液学的パラメータをモニタリングすること;及び(ii)該対象における血液学的パラメータが正常化している場合、該対象への前記ActRIIシグナル伝達インヒビターの投与の用量を低下させることをさらに含む、請求項82〜84のいずれか一項記載の方法。
【請求項８６】
(i)前記第1の期間中の前記対象における血液学的パラメータをモニタリングすること;及び(ii)該対象における血液学的パラメータが正常化している場合、該対象への前記ActRIIシグナル伝達インヒビターの投与の頻度を低下させることをさらに含む、請求項82〜85のいずれか一項記載の方法。
【請求項８７】
(i)前記第1の期間中の前記対象における血液学的パラメータをモニタリングすること;及び (ii)該対象における血液学的パラメータが正常化している場合、該対象への前記ActRIIシグナル伝達インヒビターの投与を中止することをさらに含む、請求項82〜86のいずれか一項記載の方法。
【請求項８８】
前記対象における正常化した血液学的パラメータが、参照集団における該血液学的パラメータのレベルである、請求項82〜87のいずれか一項記載の方法。
【請求項８９】
前記対象における正常化した血液学的パラメータが、該対象に前記ActRIIシグナル伝達インヒビターの初期用量を投与する前の期間の該対象における該血液学的パラメータと比較して、少なくとも10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、又は100％の該対象における該血液学的パラメータの改善である、請求項82〜87のいずれか一項記載の方法。
【請求項９０】
前記対象に前記ActRIIシグナル伝達インヒビターの初期用量を投与する前の期間が、1日、2日、3日、4日、5日、6日、1週間、2週間、3週間、4週間、5週間、6週間、7週間、8週間、3カ月、4カ月、5カ月、又は6カ月である、請求項89記載の方法。
【請求項９１】
前記第1の期間が、少なくとも1カ月、2カ月、3カ月、4カ月、5カ月、6カ月、7カ月、8カ月、9カ月、10カ月、11カ月、又は1年である、請求項82〜90のいずれか一項記載の方法。
【請求項９２】
前記血液学的パラメータが、ヘモグロビンレベル、ヘマトクリット、赤血球数、又は前記対象における環状鉄芽球である赤芽球のパーセンテージである、請求項82〜91のいずれか一項記載の方法。
【請求項９３】
前記ActRIIシグナル伝達インヒビターが、前記対象に3週間に1回投与される、請求項82〜92のいずれか一項記載の方法。
【請求項９４】
前記ActRIIシグナル伝達インヒビターが、(i)28日に1回;又は(ii)42日に1回投与される、請求項82〜92のいずれか一項記載の方法。
【請求項９５】
前記ActRIIシグナル伝達インヒビターが注射によって投与される、請求項82〜94のいずれか一項記載の方法。
【請求項９６】
前記ActRIIシグナル伝達インヒビターが皮下投与される、請求項95記載の方法。
【請求項９７】
前記ActRIIシグナル伝達インヒビターの医薬有効用量が0.1mg/kg〜2.0mg/kgである、請求項82〜96のいずれか一項記載の方法。
【請求項９８】
前記対象における赤芽球の少なくとも10％、11％、12％、13％、14％、15％、16％、17％、18％、19％、又は20％が環状鉄芽球である場合、該対象が、1以上の血液学的パラメータの正常化を達成する増大した可能性を有する、請求項1〜97のいずれか一項記載の方法。
【請求項９９】
前記血液学的パラメータが、ヘモグロビンレベル、ヘマトクリット、赤血球数、又は前記対象における環状鉄芽球である赤芽球のパーセンテージである、請求項98記載の方法。
【請求項１００】
前記正常化した血液学的パラメータが、参照集団における該血液学的パラメータのレベルである、請求項98又は99記載の方法。
【請求項１０１】
前記正常化した血液学的パラメータが、前記対象に前記ActRIIシグナル伝達インヒビターの初期用量を投与する前の期間の該対象における該血液学的パラメータと比較して、少なくとも10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、又は100％の改善である、請求項98〜100のいずれか一項記載の方法。
【請求項１０２】
前記対象に前記ActRIIシグナル伝達インヒビターの初期用量を投与する前の期間が、1日、2日、3日、4日、5日、6日、1週間、2週間、3週間、4週間、5週間、6週間、7週間、8週間、3カ月、4カ月、5カ月、又は6カ月である、請求項101記載の方法。
【請求項１０３】
対象における好中球のレベルを増大させる方法であって、該対象にアクチビン受容体II型(ActRII)シグナル伝達インヒビターの医薬有効用量を投与することを含む、前記方法。
【請求項１０４】
好中球のレベルの低下と関連する疾患を治療するためのものである、請求項103記載の方法。
【請求項１０５】
対象における血小板のレベルを増大させる方法であって、該対象にアクチビン受容体II型(ActRII)シグナル伝達インヒビターの医薬有効用量を投与することを含む、前記方法。
【請求項１０６】
血小板のレベルの低下と関連する疾患を治療するためのものである、請求項105記載の方法。
【請求項１０７】
前記ActRIIシグナル伝達インヒビターの医薬有効用量が0.1mg/kg〜2.0mg/kgである、請求項103〜106のいずれか一項記載の方法。
【請求項１０８】
前記ActRIIシグナル伝達インヒビターが:
(a)配列番号2と90％同一のもの;
(b)配列番号2と95％同一のもの;
(c)配列番号2と98％同一のもの;
(d)配列番号2;
(e)配列番号3と90％同一のもの;
(f)配列番号3と95％同一のもの;
(g)配列番号3と98％同一のもの;
(h)配列番号3;
(i)配列番号6と90％同一のもの;
(j)配列番号6と95％同一のもの;
(k)配列番号6と98％同一のもの;
(l)配列番号6;
(m)配列番号7と90％同一のもの;
(n)配列番号7と95％同一のもの;
(o)配列番号7と98％同一のもの;
(p)配列番号7;
(q)配列番号12と90％同一のもの;
(r)配列番号12と95％同一のもの;
(s)配列番号12と98％同一のもの;
(t)配列番号12;
(u)配列番号17と90％同一のもの;
(v)配列番号17と95％同一のもの;
(w)配列番号17と98％同一のもの;
(x)配列番号17;
(y)配列番号20と90％同一のもの;
(z)配列番号20と95％同一のもの;
(aa)配列番号20と98％同一のもの;
(bb)配列番号20;
(cc)配列番号21と90％同一のもの;
(dd)配列番号21と95％同一のもの;
(ee)配列番号21と98％同一のもの;
(ff)配列番号21;
(gg)配列番号25と90％同一のもの;
(hh)配列番号25と95％同一のもの;
(ii)配列番号25と98％同一のもの;及び
(jj)配列番号25
からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むポリペプチドである、請求項1〜107のいずれか一項記載の方法。
【請求項１０９】
前記ActRIIシグナル伝達インヒビターがActRIIAシグナル伝達インヒビターである、請求項1〜108のいずれか一項記載の方法。
【請求項１１０】
前記ActRIIAシグナル伝達インヒビターが:
(a)配列番号2と90％同一のもの;
(b)配列番号2と95％同一のもの;
(c)配列番号2と98％同一のもの;
(d)配列番号2;
(e)配列番号3と90％同一のもの;
(f)配列番号3と95％同一のもの;
(g)配列番号3と98％同一のもの;
(h)配列番号3;
(i)配列番号6と90％同一のもの;
(j)配列番号6と95％同一のもの;
(k)配列番号6と98％同一のもの;
(l)配列番号6;
(m)配列番号7と90％同一のもの;
(n)配列番号7と95％同一のもの;
(o)配列番号7と98％同一のもの;及び
(p)配列番号7
からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むポリペプチドである、請求項109記載の方法。
【請求項１１１】
前記ActRIIシグナル伝達インヒビターが、配列番号7のアミノ酸配列を含むポリペプチドである、請求項1〜110のいずれか一項記載の方法。
【請求項１１２】
前記ActRIIシグナル伝達インヒビターが、ActRIIAの細胞外ドメイン及びヒトIgG1 Fcドメインからなるヒト化融合タンパク質である、請求項1〜106のいずれか一項記載の方法。
【請求項１１３】
前記ActRIIシグナル伝達インヒビターが、ActRIIBのシグナル伝達インヒビターである、請求項1〜107のいずれか一項記載の方法。
【請求項１１４】
前記ActRIIBシグナル伝達インヒビターが:
(a)配列番号17と90％同一のもの;
(b)配列番号17と95％同一のもの;
(c)配列番号17と98％同一のもの;
(d)配列番号17;
(e)配列番号20と90％同一のもの;
(f)配列番号20と95％同一のもの;
(g)配列番号20と98％同一のもの;
(h)配列番号20;
(i)配列番号21と90％同一のもの;
(j)配列番号21と95％同一のもの;
(k)配列番号21と98％同一のもの;
(l)配列番号21;
(m)配列番号25と90％同一のもの;
(n)配列番号25と95％同一のもの;
(o)配列番号25と98％同一のもの;及び
(p)配列番号25
からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むポリペプチドである、請求項113記載の方法。
【請求項１１５】
前記ActRIIシグナル伝達インヒビターが、配列番号25のアミノ酸配列を含むポリペプチドである、請求項114記載の方法。
【請求項１１６】
前記ActRIIシグナル伝達インヒビターが、ActRIIBの細胞外ドメイン及びヒトIgG1 Fcドメインからなるヒト化融合タンパク質である、請求項1〜107のいずれか一項記載の方法。
【請求項１１７】
前記対象がヒトである、請求項1〜116のいずれか一項記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
(1.関連出願の相互参照)
本出願は、2014年12月3日に出願された米国仮特許出願第62/086,977号の優先権の恩典を主張する。本出願は、その各々の内容全体が、引用によりかつあらゆる目的のために本明細書中に組み込まれる、2014年12月5日に出願された米国仮特許出願第62/088,478号; 2015年4月28日に出願された米国仮特許出願第62/153,872号; 2015年6月10日に出願された米国仮特許出願第62/173,782号;及び2015年9月15日に出願された米国仮特許出願第62/218,728号の優先権の恩典も主張する。
【０００２】
(2.配列表)
本出願は、2015年11月19日に作成された、93,638バイトのサイズの、ファイル名「12827_978_228_Sequence_Listing.txt」として提出された、配列表のコンピュータ可読形態(CRF)コピーとともに出願されており、このコピーは、配列表のハードコピーと同一であり、引用により完全にかつあらゆる目的のために本明細書中に組み込まれている。
【０００３】
(3.分野)
本明細書に提供されるのは、(i)貧血;(ii)RBC輸血を必要とする貧血;(iii)骨髄異形成症候群(MDS);及び/又は(iv)非増殖性慢性骨髄単球性白血病(CMML)の対象における長期治療の方法であって、該長期治療を必要とする対象へのアクチビン-ActRIIシグナル伝達インヒビターの投与を含む、方法である。そのようなアクチビン-ActRIIシグナル伝達インヒビターは、ActRIIA及び/又はActRIIBシグナル伝達のシグナル伝達インヒビターであることができる。本明細書に提供されるのは、(i)貧血;(ii)赤血球(RBC)輸血を必要とする貧血;(iii)MDS;及び/又は(iv)非増殖性CMMLの対象における長期治療の方法であって、該対象が環状鉄芽球を有する、方法である。
【背景技術】
【０００４】
(4.背景)
貧血とは、血液中の赤血球の数が減少し又はヘモグロビンの量が正常未満になることである。貧血は、ヘモグロビンの酸素結合能の低下によっても引き起こされ得る。貧血は、最も一般的な血液障害である。貧血は、無効造血によって引き起こされ得る。無効造血は、活発な赤血球産生が行われるが、成熟赤血球が適切な割合で発生しない場合に存在する。前駆細胞は、成熟赤血球の段階に達する前に、アポトーシスを経る。MDSは、無効造血を特徴とする造血幹細胞障害を含む。さらに、MDS障害は、環状鉄芽球を特徴とする障害を含む。環状鉄芽球は、異常赤芽球である。さらに、MDSと関連する特定の体細胞突然変異は、環状鉄芽球形成及び無効造血を引き起こす。スプライシング因子3B1(SF3B1)における優性突然変異は、環状鉄芽球の形成と関連している。環状鉄芽球は、核の外周の少なくとも3分の1にわたって最低5つの鉄含有(鉄沈着性)顆粒が存在する赤芽球である。例えば、Muftiらの文献、2008, Haematologica, 93(11):1712-7を参照されたい。環状鉄芽球は、鉄担持ミトコンドリアを含有する。環状鉄芽球の存在は、プルシアンブルー染色及び可視化によって検出することができる。環状鉄芽球は、末梢血及び/又は骨髄塗抹標本で検出することができる。
【０００５】
2つの関連するII型受容体、ActRIIA及びActRIIBが、アクチビンのII型受容体として同定されている(Mathews及びValeの文献、1991, Cell 65:973-982; Attisanoらの文献、1992, Cell 68: 97-108)。アクチビンの他に、ActRIIA及びActRIIBは、BMP7、Nodal、GDF8、及びGDF11を含む、いくつかの他のTGF-βファミリータンパク質と生化学的に相互作用することができる(Yamashitaらの文献、1995, J. Cell Biol. 130:217-226; Lee及びMcPherronの文献、2001, Proc. Natl. Acad. Sci. 98:9306-9311; Yeo及びWhitmanの文献、2001, Mol. Cell 7: 949-957; Ohらの文献、2002, Genes Dev. 16:2749-54)。ALK4は、アクチビン、特に、アクチビンAの主なI型受容体であり、ALK-7は、同様に、アクチビン、特に、アクチビンBの受容体としての役割を果たし得る。
【０００６】
アクチビン受容体IIA型(ActRIIA)の細胞外ドメイン(ECD)及びヒトIgG1 Fcドメインからなるヒト化融合タンパク質は、高い親和性でアクチビン-Aに結合し、内在性ActRIIA受容体を介するシグナル伝達を遮断する。アクチビン-Aは、RBC成熟の後期に影響を及ぼす赤血球分化因子である(Murata M、Onomichi K、Eto Y、Shibai H、及びMuramatsu M.の文献、チャイニーズハムスター卵巣細胞における赤血球分化因子の発現(Expression of erythroid differentiation factor in Chinese hamster ovary cells.)、Biochem Biophys Res Commun 1988; 151: 230-5.)。ActRIIシグナル伝達インヒビターは、RBCレベルを増大させることについて記載されている(例えば、特許出願公開第20110038831号;第20100204092号;第20100068215号;第20100028332号;第20100028331号;及び第20090163417号)。
【発明の概要】
【０００７】
(5.概要)
本明細書に提供されるのは、対象における血液関連障害を治療する方法であって、(a)該対象における環状鉄芽球である赤芽球のパーセンテージを決定すること;及び(b)該対象における赤芽球の少なくとも10％、11％、12％、13％、14％、15％、16％、17％、18％、19％、又は20％が環状鉄芽球である場合、ActRIIシグナル伝達インヒビターの0.1mg/kg〜2.0mg/kgの医薬有効用量を該対象に投与することを含む、方法である。ある実施態様において、該血液関連障害は、貧血、骨髄異形成症候群(MDS)、又は非増殖性慢性骨髄単球性白血病(CMML)である。ある実施態様において、該対象における環状鉄芽球である赤芽球のパーセンテージは、初回で決定される。ある実施態様において、該初回は、該対象への該ActRIIシグナル伝達インヒビターの医薬有効用量の投与から1日、2日、3日、4日、5日、6日、1週間、2週間、3週間、4週間、5週間、6週間、7週間、8週間、3カ月、4カ月、5カ月、又は6カ月以内である。
【０００８】
本明細書に提供されるのは、対象における血液関連障害を治療する方法であって、(i)該対象における環状鉄芽球である赤芽球の初期のパーセンテージと比較したときの該対象における環状鉄芽球である赤芽球のパーセンテージの長期低下;及び/又は(ii)該対象に該ActRIIシグナル伝達インヒビターの初期用量を投与する前の期間の該対象におけるヘモグロビンレベルと比較したときの該対象におけるヘモグロビンレベルの長期増大を達成するために、該対象にアクチビン受容体II型(ActRII)シグナル伝達インヒビターを医薬有効用量でかつ一定期間投与することを含み;ここで、該医薬有効用量が0.1mg/kg〜2.0mg/kgであり、かつ該対象における環状鉄芽球である赤芽球の初期のパーセンテージが、少なくとも10％、11％、12％、13％、14％、15％、16％、17％、18％、19％、又は少なくとも20％である、方法である。ある実施態様において、該血液関連障害は、貧血、MDS、又は非増殖性CMMLである。本明細書に提供されるのは、対象における貧血を治療する方法であって、(i)該対象における環状鉄芽球である赤芽球の初期のパーセンテージと比較したときの該対象における環状鉄芽球である赤芽球のパーセンテージの長期低下;及び/又は(ii)該対象に該ActRIIシグナル伝達インヒビターの初期用量を投与する前の期間の該対象におけるヘモグロビンレベルと比較したときの該対象におけるヘモグロビンレベルの長期増大を達成するために、該対象にアクチビン受容体II型(ActRII)シグナル伝達インヒビターを医薬有効用量でかつ一定期間投与することを含み;ここで、該医薬有効用量が0.1mg/kg〜2.0mg/kgであり、かつ該対象における環状鉄芽球である赤芽球の初期のパーセンテージが、少なくとも10％、11％、12％、13％、14％、15％、16％、17％、18％、19％、又は少なくとも20％である、方法である。ある実施態様において、対象は、RBC輸血を必要とする対象である。本明細書に提供されるのは、対象におけるMDSを治療する方法であって、(i)該対象における環状鉄芽球である赤芽球の初期のパーセンテージと比較したときの該対象における環状鉄芽球である赤芽球のパーセンテージの長期低下;及び/又は(ii)該対象に該ActRIIシグナル伝達インヒビターの初期用量を投与する前の期間の該対象におけるヘモグロビンレベルと比較したときの該対象におけるヘモグロビンレベルの長期増大を達成するために、該対象にActRIIシグナル伝達インヒビターを医薬有効用量でかつ一定期間投与することを含み;ここで、該医薬有効用量が0.1mg/kg〜2.0mg/kgであり、かつ該対象における環状鉄芽球である赤芽球の初期のパーセンテージが、少なくとも10％、11％、12％、13％、14％、15％、16％、17％、18％、19％、又は少なくとも20％である、方法である。本明細書に提供されるのは、対象における非増殖性CMMLを治療する方法であって、(i)該対象における環状鉄芽球である赤芽球の初期のパーセンテージと比較したときの該対象における環状鉄芽球である赤芽球のパーセンテージの長期低下;及び/又は(ii)該対象に該ActRIIシグナル伝達インヒビターの初期用量を投与する前の期間の該対象におけるヘモグロビンレベルと比較したときの該対象におけるヘモグロビンレベルの長期増大を達成するために、該対象にActRIIシグナル伝達インヒビターを医薬有効用量でかつ一定期間投与することを含み;ここで、該���薬有効用量が0.1mg/kg〜2.0mg/kgであり、かつ該対象における環状鉄芽球である赤芽球の初期のパーセンテージが、少なくとも10％、11％、12％、13％、14％、15％、16％、17％、18％、19％、又は少なくとも20％である、方法である。
【０００９】
ある実施態様において、該ActRIIシグナル伝達インヒビター投与の期間は、1、2、3、4、5、又は6カ月である。ある実施態様において、該対象における環状鉄芽球である赤芽球の初期のパーセンテージは、該対象に該ActRIIシグナル伝達インヒビターの初期用量を投与する前の期間の該対象における環状鉄芽球である赤芽球のパーセンテージである。ある実施態様において、該対象における環状鉄芽球である赤芽球のパーセンテージの長期低下は、該ActRIIシグナル伝達インヒビター投与の期間後、少なくとも1、2、3、4、5、6、12、18、又は24カ月間維持される。ある実施態様において、該対象における環状鉄芽球である赤芽球のパーセンテージの長期低下は、該ActRIIシグナル伝達インヒビター投与の期間後、少なくとも6、12、18、又は24カ月間、該対象における環状鉄芽球である赤芽球の初期のパーセンテージを少なくとも1.5、2.5、5.0、7.5、又は10.0倍下回るものである。ある実施態様において、該対象における初期のヘモグロビンレベルは、該対象に該ActRIIシグナル伝達インヒビターの初期用量を投与する前の期間の該対象におけるヘモグロビンレベルである。ある実施態様において、該対象における初期のヘモグロビンレベルは、約11g/dL未満である。ある実施態様において、該対象におけるヘモグロビンレベルの長期増大は、該ActRIIシグナル伝達インヒビター投与の期間後、少なくとも3、4、5、6、12、18、又は24カ月間維持される。ある実施態様において、該対象におけるヘモグロビンレベルの長期増大は、該ActRIIシグナル伝達インヒビター投与の期間後、少なくとも3、4、5、6、12、18、又は24カ月間の該対象における約11g/dL〜18g/dLのヘモグロビンレベルである。ある実施態様において、該対象は、該ActRIIシグナル伝達インヒビター投与の期間後、少なくとも3、4、5、6、12、18、又は24カ月間、赤血球輸血を必要としない。
【００１０】
ある実施態様において、該ActRIIシグナル伝達インヒビターは、3週間に1回投与される。ある実施態様において、該ActRIIシグナル伝達インヒビターは、(i)28日に1回;又は(ii)42日に1回投与される。ある実施態様において、該ActRIIシグナル伝達インヒビターは、注射によって投与される。ある実施態様において、該ActRIIシグナル伝達インヒビターは、皮下投与される。
【００１１】
ある実施態様において、本方法は、該ActRIIシグナル伝達インヒビター投与の期間から6、12、18、及び/又は24カ月後の該対象における環状鉄芽球である赤芽球のさらなるパーセンテージを決定することをさらに含む。ある実施態様において、該対象における環状鉄芽球である赤芽球のパーセンテージは、プルシアンブルー染色によって決定される。ある実施態様において、本方法は、該ActRIIシグナル伝達インヒビター投与の期間から6、12、18、及び/又は24カ月後の該対象におけるさらなるヘモグロビンレベルを決定することをさらに含む。
【００１２】
また本明細書に提供されるのは、対象における血液関連障害を治療する方法であって:(a)該対象における環状鉄芽球である赤芽球の第1のパーセンテージを決定すること;及び(b)(i)該対象における環状鉄芽球である赤芽球の第1のパーセンテージが、少なくとも10％、11％、12％、13％、14％、15％、16％、17％、18％、19％、もしくは少なくとも20％である場合、ActRIIシグナル伝達インヒビターを該対象に0.1mg/kg〜2.0mg/kgの医薬有効用量で短期間投与すること、又は(ii)該対象における環状鉄芽球である赤芽球の該パーセンテージが10％未満である場合、ActRIIシグナル伝達インヒビターを該対象に0.1mg/kg〜2.0mg/kgの医薬有効用量で長期間投与することを含む、方法である。ある実施態様において、該血液関連障害は、貧血、輸血を必要とする貧血、MDS、又は非増殖性CMMLである。また本明細書に提供されるのは、対象における貧血を治療する方法であって:(a)該対象における環状鉄芽球である赤芽球の第1のパーセンテージを決定すること;及び(b)(i)該対象における環状鉄芽球である赤芽球の第1のパーセンテージが、少なくとも10％、11％、12％、13％、14％、15％、16％、17％、18％、19％、もしくは少なくとも20％である場合、ActRIIシグナル伝達インヒビターを該対象に0.1mg/kg〜2.0mg/kgの医薬有効用量で短期間投与すること、又は(ii)該対象における環状鉄芽球である赤芽球の該パーセンテージが10％未満である場合、ActRIIシグナル伝達インヒビターを該対象に0.1mg/kg〜2.0mg/kgの医薬有効用量で長期間投与することを含む、方法である。ある実施態様において、該対象は、輸血を必要とする対象である。また本明細書に提供されるのは、対象におけるMDSを治療する方法であって:(a)該対象における環状鉄芽球である赤芽球の第1のパーセンテージを決定すること;及び(b)(i)該対象における環状鉄芽球である赤芽球の第1のパーセンテージが、少なくとも10％、11％、12％、13％、14％、15％、16％、17％、18％、19％、もしくは少なくとも20％である場合、ActRIIシグナル伝達インヒビターを該対象に0.1mg/kg〜2.0mg/kgの医薬有効用量で短期間投与すること、又は(ii)該対象における環状鉄芽球である赤芽球の該パーセンテージが10％未満である場合、ActRIIシグナル伝達インヒビターを該対象に0.1mg/kg〜2.0mg/kgの医薬有効用量で長期間投与することを含む、方法である。また本明細書に提供されるのは、対象における非増殖性CMMLを治療する方法であって:(a)該対象における環状鉄芽球である赤芽球の第1のパーセンテージを決定すること;及び(b)(i)該対象における環状鉄芽球である赤芽球の第1のパーセンテージが、少なくとも10％、11％、12％、13％、14％、15％、16％、17％、18％、19％、もしくは少なくとも20％である場合、ActRIIシグナル伝達インヒビターを該対象に0.1mg/kg〜2.0mg/kgの医薬有効用量で短期間投与すること、又は(ii)該対象における環状鉄芽球である赤芽球の該パーセンテージが10％未満である場合、ActRIIシグナル伝達インヒビターを該対象に0.1mg/kg〜2.0mg/kgの医薬有効用量で長期間投与することを含む、方法である。
【００１３】
ある実施態様において、該ActRIIシグナル伝達インヒビターが短期間投与された該対象における環状鉄芽球である該対象における赤芽球の第1のパーセンテージは、該短期間のActRIIシグナル伝達インヒビターの投与後、少なくとも6、12、18、又は24カ月間、10％、9％、8％、7％、6％、5％、4％、3％、2％未満、又は1％未満にまで低下する。ある実施態様において、該対象におけるヘモグロビンレベルは、約11g/dL未満である。ある実施態様において、該ActRIIシグナル伝達インヒビターが短期間投与された該対象におけるヘモグロビンレベルは、該ActRIIシグナル伝達インヒビター投与の期間から少なくとも3、4、5、6、12、18、又は24カ月後、約11g/dL〜18g/dLである。ある実施態様において、該短期間は、1、2、3、4、又は5カ月である。ある実施態様において、該長期間は、少なくとも6、12、18、又は24カ月である。ある実施態様において、該対象は、該ActRIIシグナル伝達インヒビター投与の期間後、少なくとも3、4、5、6、12、18、又は24カ月間、赤血球輸血を必要としない。
【００１４】
ある実施態様において、該ActRIIシグナル伝達インヒビターは、3週間に1回投与される。ある実施態様において、該ActRIIシグナル伝達インヒビターは、(i)28日に1回;又は(ii)42日に1回投与される。ある実施態様において、該ActRIIシグナル伝達インヒビターは、注射によって投与される。ある実施態様において、該ActRIIシグナル伝達インヒビターは、皮下投与される。
【００１５】
ある実施態様において、本方法は、該ActRIIシグナル伝達インヒビター投与の期間から6、12、18、及び/又は24カ月後の該対象における環状鉄芽球である赤芽球の第2のパーセンテージを決定することをさらに含む。ある実施態様において、該対象における環状鉄芽球である赤芽球のパーセンテージは、プルシアンブルー染色によって決定される。ある実施態様において、本方法は、該ActRIIシグナル伝達インヒビター投与の期間から6、12、18、及び/又は24カ月後の該対象におけるヘモグロビンレベルを決定することをさらに含む。
【００１６】
また本明細書に提供されるのは、対象における血液関連障害を治療する方法であって:(a)該対象が、少なくとも10％、11％、12％、13％、14％、15％、16％、17％、18％、19％、又は少なくとも20％の該対象における環状鉄芽球である赤芽球のパーセンテージを有することを決定すること;(b)該対象にActRIIシグナル伝達インヒビターの0.1mg/kg〜2.0mg/kgの初期用量を投与すること;(c)一定期間後、該対象における環状鉄芽球である赤芽球の第2のパーセンテージを決定すること;及び(d)任意に、該対象に該ActRIIシグナル伝達インヒビターの調整用量を投与することを含む、方法である。ある実施態様において、該血液関連障害は、貧血、輸血を必要とする貧血、MDS、又は非増殖性CMMLである。また本明細書に提供されるのは、対象における貧血を治療する方法であって:(a)該対象が、少なくとも10％、11％、12％、13％、14％、15％、16％、17％、18％、19％、又は少なくとも20％の該対象における環状鉄芽球である赤芽球のパーセンテージを有することを決定すること;(b)該対象にActRIIシグナル伝達インヒビターの0.1mg/kg〜2.0mg/kgの初期用量を投与すること;(c)一定期間後、該対象における環状鉄芽球である赤芽球の第2のパーセンテージを決定すること;及び(d)任意に、該対象に該ActRIIシグナル伝達インヒビターの調整用量を投与することを含む、方法である。ある実施態様において、該対象は、輸血を必要とする対象である。また本明細書に提供されるのは、対象におけるMDSを治療する方法であって:(a)該対象が、少なくとも10％、11％、12％、13％、14％、15％、16％、17％、18％、19％、又は少なくとも20％の該対象における環状鉄芽球である赤芽球のパーセンテージを有することを決定すること;(b)該対象にActRIIシグナル伝達インヒビターの0.1mg/kg〜2.0mg/kgの初期用量を投与すること;(c)一定期間後、該対象における環状鉄芽球である赤芽球の第2のパーセンテージを決定すること;及び(d)任意に、該対象に該ActRIIシグナル伝達インヒビターの調整用量を投与することを含む、方法である。また本明細書に提供されるのは、対象における非増殖性慢性骨髄単球性白血病(CMML)を治療する方法であって:(a)該対象が、少なくとも10％、11％、12％、13％、14％、15％、16％、17％、18％、19％、又は少なくとも20％の該対象における環状鉄芽球である赤芽球のパーセンテージを有することを決定すること;(b)該対象にActRIIシグナル伝達インヒビターの0.1mg/kg〜2.0mg/kgの初期用量を投与すること;(c)一定期間後、該対象における環状鉄芽球である赤芽球の第2のパーセンテージを決定すること;及び(d)任意に、該対象に該ActRIIシグナル伝達インヒビターの調整用量を投与することを含む、方法である。
【００１７】
ある実施態様において、該一定期間は、1、2、3、4、5、又は6カ月である。ある実施態様において、該初期用量は、注射によって投与される。ある実施態様において、該初期用量は、皮下投与される。ある実施態様において、該初期用量は、3週間に1回投与される。ある実施態様において、該初期用量は、(i)28日に1回;又は(ii)42日に1回投与される。
【００１８】
ある実施態様において、該初期用量は、該対象における環状鉄芽球である赤芽球の第1のパーセンテージの決定の直後又は最大でもその1日、2日、3日、4日、5日、6日、もしくは1週間、2週間、1カ月、2カ月、3カ月、4カ月、5カ月、6カ月、7カ月、8カ月、9カ月、10カ月、11カ月、もしくは12カ月以内に、該対象に投与される。ある実施態様において、該調整用量は、該対象における環状鉄芽球である赤芽球の第2のパーセンテージの決定の直後又は最大でもその1日、2日、3日、4日、5日、6日、もしくは1週間、2週間、1カ月、2カ月、3カ月、4カ月、5カ月、6カ月、7カ月、8カ月、9カ月、10カ月、11カ月、もしくは12カ月以内に、該対象に投与される。ある実施態様において、該対象における環状鉄芽球である赤芽球の第2のパーセンテージが、少なくとも10％、11％、12％、13％、14％、15％、16％、17％、18％、19％、又は少なくとも20％である場合、該ActRIIシグナル伝達インヒビターの調整用量は、該初期用量よりも多い。ある実施態様において、該調整用量は、該初期用量よりも約0.05mg/kg、約0.1mg/kg、約0.15mg/kg、約0.25mg/kg、約0.3mg/kg、約0.35mg/kg、約0.4mg/kg、もしくは約0.5mg/kg、0.75mg/kg、1.0mg/kg、1.33mg/kg、1.5mg/kg、又は約1.75mg/kg多い。ある実施態様において、該調整用量は、該初期用量よりも高い頻度で投与される。ある実施態様において、該調整用量は、5、10、15、20、25、28、30、35、又は40日毎に投与される。ある実施態様において、該調整用量は、注射によって投与される。ある実施態様において、該調整用量は、皮下投与される。ある実施態様において、該対象における環状鉄芽球である赤芽球の第2のパーセンテージが、10％、9％、8％、7％、6％、5％、4％、3％、2％未満、又は1％未満である場合、該調整用量は、該対象に投与されない。ある実施態様において、該調整用量は、最大でも1、2、3、4、5、又は6カ月間しか投与されない。
【００１９】
ある実施態様において、該対象は、該ActRIIシグナル伝達インヒビター投与の期間後、少なくとも3、4、5、6、12、18、又は24カ月間、赤血球輸血を必要としない。ある実施態様において、該ActRIIシグナル伝達インヒビターは、3週間に1回投与される。ある実施態様において、該ActRIIシグナル伝達インヒビターは、(i)28日に1回;又は(ii)42日に1回投与される。ある実施態様において、該対象における環状鉄芽球である赤芽球のパーセンテージは、プルシアンブルー染色によって決定される。
【００２０】
また本明細書に提供されるのは、対象における血液関連障害を治療する方法であって:(a)該対象における環状鉄芽球である赤芽球のパーセンテージを決定すること;(b)該対象における環状鉄芽球である該対象における赤芽球のパーセンテージが、少なくとも10％、11％、12％、13％、14％、15％、16％、17％、18％、19％、又は少なくとも20％である場合、ActRIIシグナル伝達インヒビターを該対象に0.1mg/kg〜2.0mg/kgの医薬有効用量で投与すること;(c)ActRIIシグナル伝達インヒビターが該対象に投与された後の該対象におけるヘモグロビンのレベルを決定すること;及び(d)該対象におけるヘモグロビンのレベルが少なくとも11g/dLである場合、該対象への該ActRIIシグナル伝達インヒビターの投与を中止することを含む、方法である。ある実施態様において、該血液関連障害は、貧血、輸血を必要とする貧血、MDS、又は非増殖性CMMLである。また本明細書に提供されるのは、対象における貧血を治療する方法であって:(a)該対象における環状鉄芽球である赤芽球のパーセンテージを決定すること;(b)該対象における環状鉄芽球である該対象における赤芽球のパーセンテージが、少なくとも10％、11％、12％、13％、14％、15％、16％、17％、18％、19％、又は少なくとも20％である場合、ActRIIシグナル伝達インヒビターを該対象に0.1mg/kg〜2.0mg/kgの医薬有効用量で投与すること;(c)ActRIIシグナル伝達インヒビターが該対象に投与された後の該対象におけるヘモグロビンのレベルを決定すること;及び(d)該対象におけるヘモグロビンのレベルが少なくとも11g/dLである場合、該対象への該ActRIIシグナル伝達インヒビターの投与を中止することを含む、方法である。ある実施態様において、該対象は、RBC輸血を必要とする。また本明細書に提供されるのは、対象におけるMDSを治療する方法であって:(a)該対象における環状鉄芽球である赤芽球のパーセンテージを決定すること;(b)該対象における環状鉄芽球である赤芽球のパーセンテージが、少なくとも10％、11％、12％、13％、14％、15％、16％、17％、18％、19％、又は少なくとも20％である場合、ActRIIシグナル伝達インヒビターを該対象に0.1mg/kg〜2.0mg/kgの医薬有効用量で投与すること;(c)ActRIIシグナル伝達インヒビターが該対象に投与された後の該対象におけるヘモグロビンのレベルを決定すること;及び(d)該対象におけるヘモグロビンのレベルが少なくとも11g/dLである場合、該対象への該ActRIIシグナル伝達インヒビターの投与を中止することを含む、方法である。また本明細書に提供されるのは、対象における非増殖性CMMLを治療する方法であって:(a)該対象における環状鉄芽球である赤芽球のパーセンテージを決定すること;(b)該対象における環状鉄芽球である赤芽球のパーセンテージが、少なくとも10％、11％、12％、13％、14％、15％、16％、17％、18％、19％、又は少なくとも20％である場合、ActRIIシグナル伝達インヒビターを該対象に0.1mg/kg〜2.0mg/kgの医薬有効用量で投与すること;(c)ActRIIシグナル伝達インヒビターが該対象に投与された後の該対象におけるヘモグロビンのレベルを決定すること;及び (d)該対象におけるヘモグロビンのレベルが少なくとも11g/dLである場合、該対象への該ActRIIシグナル伝達インヒビターの投与を中止することを含む、方法である。
【００２１】
ある実施態様において、該ActRIIシグナル伝達インヒビターは、該対象に3週間に1回投与される。ある実施態様において、該ActRIIシグナル伝達インヒビターは、(i)28日に1回;又は(ii)42日に1回投与される。ある実施態様において、該ActRIIシグナル伝達インヒビターは、注射によって投与される。ある実施態様において、該ActRIIシグナル伝達インヒビターは、皮下投与される。
【００２２】
ある実施態様において、ヘモグロビンのレベルは、該ActRIIシグナル伝達インヒビターが投与された後、6、12、18、及び/又は24カ月以内に決定される。
【００２３】
また本明細書に提供されるのは、血液関連障害を有する対象における赤血球産生を促進する方法であって:(a)該対象における環状鉄芽球である赤芽球のパーセンテージを決定すること;(b)ActRIIシグナル伝達インヒビターの医薬有効用量を該対象に第1の期間投与すること;(c)該第1の期間の後、工程(a)の該対象における環状鉄芽球である赤芽球のパーセンテージが、11％、12％、13％、14％、15％、16％、17％、18％、19％、又は20％を上回っていた場合、該対象に投与される該ActRIIシグナル伝達インヒビターの用量を低下させるか、該対象への該ActRIIシグナル伝達インヒビターの投与の頻度を低下させるか、又は該ActRIIシグナル伝達インヒビターの投与を中止することを含む、方法である。ある実施態様において、該血液関連障害は、貧血、輸血を必要とする貧血、MDS、又は非増殖性CMMLである。ある実施態様において、本方法は、(i)該第1の期間中の該対象における血液学的パラメータをモニタリングすること;及び(ii)該対象における血液学的パラメータが正常化している場合、該対象への該ActRIIシグナル伝達インヒビターの投与を低下させるか又は中止することをさらに含む。ある実施態様において、本方法は、(i)該第1の期間中の該対象における血液学的パラメータをモニタリングすること;及び(ii)該対象における血液学的パラメータが正常化している場合、該対象への該ActRIIシグナル伝達インヒビターの投与の用量を低下させることをさらに含む。ある実施態様において、本方法は、(i)該第1の期間中の該対象における血液学的パラメータをモニタリングすること;及び(ii)該対象における血液学的パラメータが正常化している場合、該対象への該ActRIIシグナル伝達インヒビターの投与の頻度を低下させることをさらに含む。ある実施態様において、本方法は、(i)該第1の期間中の該対象における血液学的パラメータをモニタリングすること;及び(ii)該対象における血液学的パラメータが正常化している場合、該対象への該ActRIIシグナル伝達インヒビターの投与を中止することをさらに含む。ある実施態様において、該対象における正常化した血液学的パラメータは、参照集団における該血液学的パラメータのレベルである。ある実施態様において、該対象における正常化した血液学的パラメータは、該対象に該ActRIIシグナル伝達インヒビターの初期用量を投与する前の期間の該対象における該血液学的パラメータと比較して、少なくとも10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、又は100％の該対象における該血液学的パラメータの改善である。ある実施態様において、該対象に該ActRIIシグナル伝達インヒビターの初期用量を投与する前の期間は、少なくとも1日、2日、3日、4日、5日、6日、1週間、2週間、3週間、4週間、5週間、6週間、7週間、8週間、3カ月、4カ月、5カ月、又は6カ月である。ある実施態様において、該血液学的パラメータは、ヘモグロビンレベル、ヘマトクリット、赤血球数、又は該対象における環状鉄芽球である赤芽球のパーセンテージである。
【００２４】
ある実施態様において、該ActRIIシグナル伝達インヒビターは、該対象に3週間に1回投与される。ある実施態様において、該ActRIIシグナル伝達インヒビターは、(i)28日に1回;又は(ii)42日に1回投与される。ある実施態様において、該ActRIIシグナル伝達インヒビターは、注射によって投与される。ある実施態様において、該ActRIIシグナル伝達インヒビターは、皮下投与される。
【００２５】
ある実施態様において、該対象における赤芽球の少なくとも10％、11％、12％、13％、14％、15％、16％、17％、18％、19％、又は20％が環状鉄芽球である場合、該対象は、1以上の血液学的パラメータの正常化を達成する増大した可能性を有する。ある実施態様において、該血液学的パラメータは、ヘモグロビンレベル、ヘマトクリット、赤血球数、又は該対象における環状鉄芽球である赤芽球のパーセンテージである。
【００２６】
ある実施態様において、該正常化した血液学的パラメータは、参照集団における該血液学的パラメータのレベルである。ある実施態様において、該正常化した血液学的パラメータは、該対象に該ActRIIシグナル伝達インヒビターの初期用量を投与する前の期間の該対象における該血液学的パラメータと比較して、少なくとも10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、又は100％の該対象における該血液学的パラメータの改善である。ある実施態様において、該対象に該ActRIIシグナル伝達インヒビターの初期用量を投与する前の期間は、1日、2日、3日、4日、5日、6日、1週間、2週間、3週間、4週間、5週間、6週間、7週間、8週間、3カ月、4カ月、5カ月、又は6カ月である。
【００２７】
本明細書に提供されるのは、対象における貧血の長期治療の方法であって、(i)該対象における環状鉄芽球と正常赤芽球との初期比と比較したときの該対象における環状鉄芽球と正常赤芽球との比の長期低下;及び(ii)該対象に該ActRIIインヒビターを投与する前の該対象におけるヘモグロビンレベルと比較したときの該対象におけるヘモグロビンレベルの長期増大を達成するために、該対象にアクチビン受容体II型(ActRII)インヒビターを医薬有効用量でかつ一定期間投与することを含み;ここで、該医薬有効用量が0.75mg/kg〜2.0mg/kgであり、かつ該対象における初期の環状鉄芽球と正常赤芽球との比が、少なくとも1:10、少なくとも1:7、又は少なくとも1:5である、方法である。ある実施態様において、該対象は、輸血を必要とする対象である。
【００２８】
本明細書に提供されるのは、対象における低又は中間-1リスクの骨髄異形成症候群(MDS)の長期治療の方法であって、(i)該対象における環状鉄芽球と正常赤芽球との初期比と比較したときの該対象における環状鉄芽球と正常赤芽球との比の長期低下;及び(ii)該対象に該ActRIIインヒビターを投与する前の該対象におけるヘモグロビンレベルと比較したときの該対象におけるヘモグロビンレベルの長期増大を達成するために、該対象にアクチビン受容体II型(ActRII)インヒビターを医薬有効用量でかつ一定期間投与することを含み;ここで、該医薬有効用量が0.75mg/kg〜2.0mg/kgであり、かつ該対象における初期の環状鉄芽球と正常赤芽球との比が、少なくとも1:10、少なくとも1:7、又は少なくとも1:5である、方法である。
【００２９】
本明細書に提供されるのは、対象における非増殖性慢性骨髄単球性白血病(CMML)の長期治療の方法であって、(i)該対象における環状鉄芽球と正常赤芽球との初期比と比較したときの該対象における環状鉄芽球と正常赤芽球との比の長期低下;及び(ii)該対象に該ActRIIインヒビターを投与する前の該対象におけるヘモグロビンレベルと比較したときの該対象におけるヘモグロビンレベルの長期増大を達成するために、該対象にアクチビン受容体II型(ActRII)インヒビターを医薬有効用量でかつ一定期間投与することを含み;ここで、該医薬有効用量が0.75mg/kg〜2.0mg/kgであり、かつ該対象における初期の環状鉄芽球と正常赤芽球との比が、少なくとも1:10、少なくとも1:7、又は少なくとも1:5である、方法である。
【００３０】
また本明細書に提供されるのは、対象における好中球のレベルを増大させる方法であって、該対象にアクチビン受容体II型(ActRII)シグナル伝達インヒビターの医薬有効用量を投与することを含む、方法である。
【００３１】
また本明細書に提供されるのは、対象における血小板のレベルを増大させる方法であって、該対象にアクチビン受容体II型(ActRII)シグナル伝達インヒビターの医薬有効用量を投与することを含む、方法である。
【００３２】
ある実施態様において、該ActRIIシグナル伝達インヒビターは:(a)配列番号2と90％同一のもの;(b)配列番号2と95％同一のもの;(c)配列番号2と98％同一のもの;(d)配列番号2;(e)配列番号3と90％同一のもの;(f)配列番号3と95％同一のもの;(g)配列番号3と98％同一のもの;(h)配列番号3;(i)配列番号6と90％同一のもの;(j)配列番号6と95％同一のもの;(k)配列番号6と98％同一のもの;(l)配列番号6;(m)配列番号7と90％同一のもの;(n)配列番号7と95％同一のもの;(o)配列番号7と98％同一のもの;(p)配列番号7;(q)配列番号12と90％同一のもの;(r)配列番号12と95％同一のもの;(s)配列番号12と98％同一のもの;(t)配列番号12;(u)配列番号17と90％同一のもの;(v)配列番号17と95％同一のもの;(w)配列番号17と98％同一のもの;(x)配列番号17;(y)配列番号20と90％同一のもの;(z)配列番号20と95％同一のもの;(aa)配列番号20と98％同一のもの;(bb)配列番号20;(cc)配列番号21と90％同一のもの;(dd)配列番号21と95％同一のもの;(ee)配列番号21と98％同一のもの;(ff)配列番号21;(gg)配列番号25と90％同一のもの;(hh)配列番号25と95％同一のもの;(ii)配列番号25と98％同一のもの;及び(jj)配列番号25からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むポリペプチドである。
【００３３】
ある実施態様において、該ActRIIシグナル伝達インヒビターは、ActRIIAシグナル伝達インヒビターである。ある実施態様において、該ActRIIAシグナル伝達インヒビターは:(a)配列番号2と90％同一のもの;(b)配列番号2と95％同一のもの;(c)配列番号2と98％同一のもの;(d)配列番号2;(e)配列番号3と90％同一のもの;(f)配列番号3と95％同一のもの;(g)配列番号3と98％同一のもの;(h)配列番号3;(i)配列番号6と90％同一のもの;(j)配列番号6と95％同一のもの;(k)配列番号6と98％同一のもの;(l)配列番号6;(m)配列番号7と90％同一のもの;(n)配列番号7と95％同一のもの;(o)配列番号7と98％同一のもの;及び(p)配列番号7からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むポリペプチドである。
【００３４】
ある実施態様において、該ActRIIシグナル伝達インヒビターは、配列番号7のアミノ酸配列を含むポリペプチドである。ある実施態様において、該ActRIIシグナル伝達インヒビターは、ActRIIAの細胞外ドメイン及びヒトIgG1 Fcドメインからなるヒト化融合タンパク質である。
【００３５】
ある実施態様において、該ActRIIシグナル伝達インヒビターは、ActRIIBのシグナル伝達インヒビターである。ある実施態様において、該ActRIIBシグナル伝達インヒビターは:(a)配列番号17と90％同一のもの;(b)配列番号17と95％同一のもの;(c)配列番号17と98％同一のもの;(d)配列番号17;(e)配列番号20と90％同一のもの;(f)配列番号20と95％同一のもの;(g)配列番号20と98％同一のもの;(h)配列番号20;(i)配列番号21と90％同一のもの;(j)配列番号21と95％同一のもの;(k)配列番号21と98％同一のもの;(l)配列番号21;(m)配列番号25と90％同一のもの;(n)配列番号25と95％同一のもの;(o)配列番号25と98％同一のもの;及び(p)配列番号25からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むポリペプチドである。
【００３６】
ある実施態様において、該ActRIIシグナル伝達インヒビターは、配列番号25のアミノ酸配列を含むポリペプチドである。
【００３７】
ある実施態様において、該ActRIIシグナル伝達インヒビターは、ActRIIAの細胞外ドメイン及びヒトIgG1 Fcドメインからなるヒト化融合タンパク質である。
【００３８】
ある実施態様において、対象はヒトである。
【００３９】
ある実施態様において、該ActRIIシグナル伝達インヒビターの用量は、0.1〜2.25mg/kgである。ある実施態様において、該ActRIIシグナル伝達インヒビターの用量は、0.1〜2.0mg/kgである。ある実施態様において、該ActRIIシグナル伝達インヒビターの用量は、0.7〜2.0mg/kgである。ある実施態様において、該ActRIIシグナル伝達インヒビターの用量は、約0.1mg/kg、0.125mg/kg、0.3mg/kg、0.5mg/kg、0.7mg/kg、1.0mg/kg、1.25mg/kg、1.33mg/kg、1.5mg/kg、1.75mg/kg、2.0mg/kg、又は2.25mg/kgである。ある実施態様において、該ActRIIシグナル伝達インヒビターの用量は、0.1mg/kg〜0.5mg/kg、0.3mg/kg〜0.7mg/kg、0.5mg/kg〜1.0mg/kg、0.7mg/kg〜1.25mg/kg、1.0mg/kg〜2.0mg/kg、又は1.5〜2.25mg/kgである。
【図面の簡単な説明】
【００４０】
(6.図面の簡単な説明)
【図１】図1は、実施例2の投与レジメン及び試験設計を記載している。第8.2節を参照されたい。ActRIIA-Iは、ActRIIAシグナル伝達インヒビター(配列番号7)を指す。
【００４１】
【図２】図2は、高輸血負荷(HTB)対象について56日以上のRBC輸血非依存(RBC-TI)又は低輸血負荷(LTB)対象について8週間の無輸血期間にわたる1.5g/dL以上の平均ヘモグロビン(Hb)増加を伴う56日以上のRBC-TIを達成する対象の比率を記載している。ActRIIA-Iは、ActRIIAシグナル伝達インヒビター(配列番号7)を指す。
【００４２】
【図３】図3は、1.0mg/kg用量のActRIIA(配列番号7)を投与された例示的なHTB対象によって受容されるヘモグロビンレベル(Hb、g/dL)及びRBC輸血単位の数を示している。図3は、例示的なHTB対象が、56日よりも長い間、RBC-TIを達成することを示している。
【００４３】
【図４】図4は、示された用量でのActRIIAシグナル伝達インヒビター(配列番号7)による治療の後のHTBレスポンダー(n＝19)における輸血負荷応答の最大持続期間を示している。ActRIIA-Iは、ActRIIAシグナル伝達インヒビター(配列番号7)を指す。
【００４４】
【図５】図5は、示された用量でのActRIIAシグナル伝達インヒビター(配列番号7)による治療の後、56日間以上RBC-TIを達成しているHTB対象(n＝5)におけるRBC-TI応答の最大持続期間を示している。ActRIIA-Iは、ActRIIAシグナル伝達インヒビター(配列番号7)を指す。
【００４５】
【図６】図6は、示された用量でのActRIIAシグナル伝達インヒビター(配列番号7)による治療の後、56日間以上のRBC-TI及び1.5g/dL以上の平均Hb増加を達成しているLTB対象(n＝9)の比率を示している。ActRIIA-Iは、ActRIIAシグナル伝達インヒビター(配列番号7)を指す。
【００４６】
【図７】図7は、示された用量でのActRIIA(配列番号7)による治療の後、56日間以上のRBC-TI及び1.5g/dL以上の平均Hb増加を達成しているLTB対象(n＝5)におけるRBC-TI応答の最大持続期間を示している。ActRIIA-Iは、ActRIIAシグナル伝達インヒビター(配列番号7)を指す。
【００４７】
【図８】図8は、実施例2の投与レジメン及び試験設計を記載している。第8.3節を参照されたい。BL＝ベースライン。ActRIIB-Iは、ActRIIBシグナル伝達インヒビター(配列番号25)を指す。
【００４８】
【図９】図9は、示された用量でのActRIIBシグナル伝達インヒビター(配列番号25)による治療の後のLTB対象における最大ヘモグロビン増加を示している。
【００４９】
【図１０】図10は、示された用量でのActRIIBシグナル伝達インヒビター(配列番号25)による治療の後のLTB対象における網状赤血球の増加を記載している。
【００５０】
【図１１】図11は、示された用量でかつ示された治療レジメンに従ってActRIIBシグナル伝達インヒビター(配列番号25)が投与された例示的なLTB対象におけるヘモグロビンレベルを記載している。BL＝ベースライン。
【００５１】
【図１２】図12は、示された用量でかつ示された治療レジメンに従ってActRIIBシグナル伝達インヒビター(配列番号25)が投与された例示的なLTB対象におけるヘモグロビンレベルを記載している。BL＝ベースライン。
【００５２】
【図１３】図13は、示された用量でかつ示された治療レジメンに従ってActRIIBシグナル伝達インヒビター(配列番号25)が投与された例示的なHTB対象におけるヘモグロビンレベルを記載している。BL＝ベースライン。
【００５３】
【図１４】図14は、1.0mg/kg用量のActRIIA-hFc(配列番号7)を投与された例示的なHTB対象によって受容されるヘモグロビンレベル(Hb、g/dL)及びRBC輸血単位の数を示している。図14は、例示的なHTB対象が、ActRIIA-hFc(配列番号7)による治療の開始後、少なくとも337日間、RBC-TIを達成することを示している。
【００５４】
【図１５】図15は、1.0mg/kg用量のActRIIA(配列番号7)を投与された例示的なLTB対象によって受容されるヘモグロビンレベル(Hb、g/dL)及びRBC輸血単位の数を示している。図15は、例示的なLTB対象が、ActRIIA-hFc(配列番号7)による治療の開始後、少なくとも337日間、Hbレベルの持続的増加を達成することを示している。
【００５５】
【図１６】図16は、輸血非依存を達成する資格のある対象における輸血負荷を示している。対象は、0.75mg/kg〜1.75mg/kgのActRIIB-hFcで治療された。
【００５６】
【図１７】図17は、ActRIIA-hFC融合体(配列番号7)を投与されている患者において任意の8週間の期間にわたってLTB患者についての1.5g/dL以上の平均ヘモグロビン増加を伴うRBC輸血非依存(RBC-TI)を達成している対象の比率を記載している。濃い灰色の陰影はHTBを示し、薄い灰色の陰影はLTB患者を示している。
【００５７】
【図１８】図18は、12カ月のActRIIA-hFc(配列番号7)治療延長試験の過程における例示的なHTB対象のヘモグロビン応答を示している。最初の治療用量と最後の治療用量が矢印で示されている。輸血事象が棒で示されている。ヘモグロビン(Hgb)の結果(単位はg/dL)が時間(単位は日)に対してプロットされている。
【００５８】
【図１９】図19は、12カ月のActRIIA-hFc(配列番号7)治療延長試験の過程における例示的なLTB対象のヘモグロビン応答を示している。Hgb(単位はg/L)の平均変化が時間(単位は月)に対してプロットされている。
【００５９】
【図２０】図20は、1.0mg/kg(対象は下の4つの棒で表されている)及び1.75mg/kg(対象は一番上の棒で表されている)の用量でActRIIA-hFc(配列番号7)治療を受けている間に、12カ月のActRIIA-hFc(配列番号7)治療延長試験の過程において6人の対象で認められた輸血非依存応答を示している。4人の患者は、試験の全体を通じて継続的な輸血非依存を経験した(真ん中の4本の棒)。1人の患者は、ActRIIA-hFc(配列番号7)治療から約1カ月後に、輸血非依存を獲得した(一番上の棒)。1人の患者は、間欠的に、約2カ月間、輸血非依存を経験した(一番下の棒)。
【発明を実施するための形態】
【００６０】
(7.詳細な説明)
(7.1  概観)
血液関連障害を有する患者における環状鉄芽球のレベルを用いて、アクチビン-ActRIIシグナル伝達のインヒビターによる治療に応答する患者を特定することができることが予期せず分かった。そのような血液関連障害は、(i)貧血;(ii)RBC輸血を必要とする貧血;(iii)MDS;及び/又は(iv)非増殖性CMMLであることができる。第7.8節を参照されたい。理論によって束縛されるものではないが、血液関連障害を有する患者における赤芽球の約15％以上の環状鉄芽球は、同じ血液関連障害を有するが、赤芽球の約15％未満の環状鉄芽球を有する患者と比べて、該患者におけるアクチビン-ActRIIシグナル伝達のインヒビターに対する臨床応答の改善を予測するものである。そのような臨床応答の改善は、血液学的パラメータ(例えば、ヘモグロビンレベル、赤血球レベル、及びヘマトクリット)の応答の増大であることができる。そのような臨床応答の改善は、輸血負荷の低下に現れ得る。さらに、そのような臨床応答の改善は、アクチビン-ActRIIシグナル伝達のインヒビターの継続投与を受けなくても患者の長期利益をもたらすことができる。言い換えると、本明細書に提供される方法は、アクチビン-ActRIIシグナル伝達のインヒビターの投与が中止された後の期間、患者における1以上の血液学的パラメータの改善をもたらすことができる。
【００６１】
したがって、本明細書に提供されるのは、血液関連障害を有する患者を治療する方法であって、(a)赤芽球中の環状鉄芽球のパーセンテージを決定すること;及び(b)赤芽球の約15％以上が環状鉄芽球である場合、アクチビン-ActRIIシグナル伝達のインヒビターを該患者に投与することを含む、方法である。より具体的には、本明細書に提供されるのは、血液関連障害を有する患者を治療する方法であって、(a)該患者における赤芽球中の環状鉄芽球のパーセンテージを決定すること;(b)アクチビン-ActRIIシグナル伝達のインヒビターを該患者に投与すること;及び(c)赤芽球の少なくとも約15％が環状鉄芽球である場合、(i)一定期間後、アクチビン-ActRIIシグナル伝達のインヒビターの用量を低下させるかもしくはアクチビン-ActRIIシグナル伝達のインヒビターの投与を中止すること、及び/又は(ii)一定期間後、アクチビン-ActRIIシグナル伝達のインヒビターの投与の頻度を減少させることを含む、方法である。これらの方法の詳細な説明は、第7.3節及び第7.4節に見出すことができる。
【００６２】
(7.2  用語及び略語)
本明細書で使用されるように、「ActRII」は、アクチビン受容体II型を指す。本明細書で使用されるように、「ActRIIA」は、アクチビン受容体IIA型を指す。例えば、Mathews及びValeの文献、1991, Cell 65:973-982を参照されたい。GenBank(商標)アクセッション番号NM_001278579.1は、例示的なヒトActRIIA核酸配列を提供する。GenBank(商標)アクセッション番号NP_001265508.1は、例示的なヒトActRIIAアミノ酸配列を提供する。本明細書で使用されるように、「ActRIIB」は、アクチビン受容体IIB型を指す。例えば、Attisanoらの文献、1992, Cell 68: 97-108を参照されたい。GenBank(商標)アクセッション番号NM_001106.3は、例示的なヒトActRIIB核酸配列を提供する。GenBank(商標)アクセッション番号NP_001097.2は、例示的なヒトActRIIBアミノ酸配列を提供する。
【００６３】
本明細書で使用されるように、「ActRIIA-mFc」又は「mActRIIA-Fc」は、マウスアクチビンIIA型受容体-IgG1融合タンパク質を指す。例えば、米国特許第8,173,601号を参照されたい。本明細書で使用されるように、「mActRIIB-Fc」又は「ActRIIB-mFc」は、マウスアクチビンIIB型受容体-IgG1融合タンパク質を指す。例えば、米国特許第8,173,601号を参照されたい。本明細書で使用されるように、「hActRIIA-Fc」又は「ActRIIA-hFc」は、ヒトアクチビンIIA型受容体-IgG1融合タンパク質を指す。例えば、米国特許第8,173,601号を参照されたい。具体的な実施態様において、hActRIIA-Fcは、ソタテルセプト(配列番号7)である。本明細書で使用されるように、「hActRIIB-Fc」又は「ActRIIB-hFc」は、ヒトアクチビンIIB型受容体-IgG1融合タンパク質を指す。例えば、米国特許第8,173,601号を参照されたい。具体的な実施態様において、hActRIIB-Fcは、ラスパテルセプト(配列番号25)である。
【００６４】
本明細書で使用されるように、「ALK」は、未分化リンパ腫キナーゼを指す。
【００６５】
本明細書で使用されるように、「BL」は、ベースラインを指す。
【００６６】
本明細書で使用されるように、「BMP7」は、骨形成タンパク質7を指す。
【００６７】
本明細書で使用されるように、「CMML」は、慢性骨髄単球性白血病を指す。
【００６８】
本明細書で使用されるように、「DEXA」は、二重エネルギーX線吸収測定を指す。
【００６９】
本明細書で使用されるように、「DNMT3A」は、DNA(シトシン-5)-メチルトランスフェラーゼ3Aを指す。GenBank(商標)アクセッション番号NM_153759.3、NM_022552.4、NM_175629.2、及びNM_175630.1は、ヒトDNMT3Aの例示的な核酸配列を提供する。GenBank(商標)アクセッション番号NP_715640.2、NP_783329.1、NP_783328.1、及びNP_072046.2は、ヒトDNMT3Aの例示的なアミノ酸配列を提供する。
【００７０】
本明細書で使用されるように、「ECD」は、細胞外ドメインを指す。
【００７１】
本明細書で使用されるように、「EPO」は、エリスロポエチンを指す。
【００７２】
本明細書で使用されるように、「ESA」は、赤血球産生刺激剤を指す。
【００７３】
本明細書で使用されるように、「G-CSF」は、顆粒球コロニー刺激因子を指す。
【００７４】
本明細書で使用されるように、「GM-CSG」は、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子を指す。
【００７５】
本明細書で使用されるように、「Hb」は、ヘモグロビンを指す。
【００７６】
本明細書で使用されるように、「HBML」は、ミツバチメリチンを指す。
【００７７】
本明細書で使用されるように、「HI-E」は、赤血球の血液学的改善を指す。ある実施態様において、HI-Eは、IWGによって定義されている通りである。ある実施態様において、HI-Eは、改変された2006年IWGによって定義されている通りである。ある実施態様において、低輸血負荷患者のHI-Eは、患者における少なくとも8週間の少なくとも1.5g/dLのヘモグロビン濃度の増加である。ある実施態様において、高輸血負荷患者のHI-Eは、8週間にわたる少なくとも4単位のRBC輸血の低下である。
【００７８】
本明細書で使用されるように、「HTB」は、高輸血負荷を指す。ある実施態様において、HTB対象は、8週間にわたって、4 RBC単位以上を投与される。
【００７９】
本明細書で使用されるように、「IgG」は、免疫グロブリンGを指す。
【００８０】
本明細書で使用されるように、「Int-1」は、中間1のIPSSスコアを指す。第7.8節を参照されたい。
【００８１】
本明細書で使用されるように、「IPSS」は、国際予後判定スコアリングシステムを指す。第7.8節を参照されたい。
【００８２】
本明細書で使用されるように、「IWG」は、国際作業グループを指す。例えば、Chesonらの文献、Blood. 2000 96:3671-3674を参照されたい。ある実施態様において、IWGは、改変された2006年基準を指す。例えば、Chesonらの文献、2006, Blood, 108(2)を参照されたい。
【００８３】
本明細書で使用されるように、「LTB」は、低輸血負荷を指す。ある実施態様において、LTB対象は、8週間にわたって、4 RBC単位未満を投与される。
【００８４】
本明細書で使用されるように、「MDS」は、骨髄異形成症候群を指す。
【００８５】
本明細書で使用されるように、「PD」は、薬力学を指す。
【００８６】
本明細書で使用されるように、「PK」は、薬物動態を指す。
【００８７】
本明細書で使用されるように、「qCT」は、定量的コンピュータ断層撮影を指す。
【００８８】
本明細書で使用されるように、「RARS」は、環状鉄芽球を伴う不応性貧血を指す。
【００８９】
本明細書で使用されるように、「RBC」は、赤血球を指す。
【００９０】
本明細書で使用されるように、「RBC-TI」は、赤血球輸血非依存を指す。
【００９１】
本明細書で使用されるように、「RCMD-RS」は、環状鉄芽球を伴う多血球系異形成を伴う難治性血球減少を指す。
【００９２】
本明細書で使用されるように、「RS」は、環状鉄芽球を指す。
【００９３】
本明細書で使用されるように、「SC」は、皮下を指す。
【００９４】
本明細書で使用されるように、「SETBP1」は、SET結合タンパク質1を指す。GenBank(商標)アクセッション番号NM_015559.2及びNM_001130110.1は、ヒトSETBP1の例示的な核酸配列を提供する。GenBank(商標)アクセッション番号NP_056374.2及びNP_001123582.1は、ヒトSETBP1の例示的なアミノ酸配列を提供する。
【００９５】
本明細書で使用されるように、「SF3B1」は、スプライシング因子3B1を指す。GenBank(商標)アクセッション番号NM_012433.3、NM_001005523.2、及びNM_001308824.1は、ヒトSF3B1の例示的な核酸配列を提供する。GenBank(商標)アクセッション番号NP_001295753.1、NP_001005526.1、及びNP_036565.2は、ヒトSF3B1の例示的なアミノ酸配列を提供する。
【００９６】
本明細書で使用されるように、「SPR」は、表面プラズモン共鳴を指す。
【００９７】
本明細書で使用されるように、「SRSF2」は、セリン/アルギニンに富むスプライシング因子2を指す。GenBank(商標)アクセッション番号NM_003016.4及びNM_001195427.1は、ヒトSRSF2の例示的な核酸配列を提供する。GenBank(商標)アクセッション番号NP_001182356.1及びNP_003007.2は、ヒトSRSF2の例示的なアミノ酸配列を提供する。
【００９８】
本明細書で使用されるように、「TET2」は、tetメチルシトシンジオキシゲナーゼ2を指す。GenBank(商標)アクセッション番号NM_001127208.2及びNM_017628.4は、ヒトTET2の例示的な核酸配列を提供する。GenBank(商標)アクセッション番号NP_001120680.1及びNP_060098.3は、ヒトTET2の例示的なアミノ酸配列を提供する。
【００９９】
本明細書で使用されるように、「TGF」は、形質転換成長因子を指す。
【０１００】
本明細書で使用されるように、「TPA」は、組織プラスミノーゲン活性化因子を指す。
【０１０１】
(7.3  治療方法)
ある実施態様において、本明細書に提供されるのは、血液関連障害を有する対象を治療する方法であって、(a)該対象における環状鉄芽球である赤芽球のパーセンテージを決定すること;及び(b)該対象における赤芽球の少なくとも10％、11％、12％、13％、14％、15％、16％、17％、18％、19％、又は20％が環状鉄芽球である場合、ActRIIシグナル伝達インヒビターの医薬有効用量を該対象に投与することを含む、方法である。ある実施態様において、ActRIIシグナル伝達のインヒビターは、該対象における赤芽球の少なくとも15％が環状鉄芽球である場合、該対象に投与される。ある実施態様において、該対象における環状鉄芽球である赤芽球のパーセンテージは、初回で決定される。ある実施態様において、該初回は、該対象への該ActRIIシグナル伝達インヒビターの医薬有効用量の投与から1日、2日、3日、4日、5日、6日、1週間、2週間、3週間、4週間、5週間、6週間、7週間、8週間、3カ月、4カ月、5カ月、又は6カ月以内である。ある実施態様において、該血液関連障害は、第7.8節に記載の血液関連障害である。ある実施態様において、該対象は、第7.8節に記載の対象である。ある実施態様において、該対象は、11g/dL未満のヘモグロビンレベルを有する。ある実施態様において、該対象は、参照集団と比較して減少したヘモグロビンレベルを有する。ある実施態様において、該参照集団は、第7.10節に記載されている通りである。ある実施態様において、該対象は、貧血を有する。ある実施態様において、該対象は、RBC輸血を必要とする対象である。ある実施態様において、該対象は、MDSを有する。ある実施態様において、該対象は、非増殖性CMMLを有する。ある実施態様において、該対象における赤芽球の少なくとも10％、11％、12％、13％、14％、15％、16％、17％、18％、19％、又は20％が環状鉄芽球である場合、該対象は、1以上の血液学的パラメータの正常化を達成する増大した可能性を有する。ある実施態様において、該対象における赤芽球の少なくとも15％が環状鉄芽球である場合、該対象は、1以上の血液学的パラメータの正常化を達成する増大した可能性を有する。ある実施態様において、該血液学的パラメータは、ヘモグロビンレベルである。ある実施態様において、該血液学的パラメータは、ヘマトクリットである。ある実施態様において、該血液学的パラメータは、赤血球数である。ある実施態様において、該血液学的パラメータは、該対象における環状鉄芽球である赤芽球のパーセンテージである。ある実施態様において、正常化した血液学的パラメータは、参照集団における該血液学的パラメータのレベルである。ある実施態様において、該参照集団は、第7.10節に記載の参照集団である。ある実施態様において、1以上の血液学的パラメータの正常化は、該対象に前記ActRIIシグナル伝達インヒビターの初期用量を投与する前の期間の該対象における該血液学的パラメータと比較して、少なくとも10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、又は100％の該対象における該血液学的パラメータの改善である。ある実施態様において、該対象に該ActRIIシグナル伝達インヒビターの初期用量を投与する前の期間は、1日、2日、3日、4日、5日、6日、1週間、2週間、3週間、4週間、5週間、6週間、7週間、8週間、3カ月、4カ月、5カ月、又は6カ��である。ある実施態様において、該対象における環状鉄芽球である赤芽球のパーセンテージは、第7.10節に記載のアッセイに従って決定される。ある実施態様において、環状鉄芽球は、第7.10節に記載のアッセイに従って同定される。ある実施態様において、環状鉄芽球は、プルシアンブルー染色に従って同定される。ある実施態様において、赤芽球は、第7.10節に記載のアッセイに従って同定される。ある実施態様において、該対象におけるヘモグロビンレベルは、第7.10節に記載のアッセイに従って決定される。ある実施態様において、該医薬有効用量は、第7.7節に記載の用量である。ある実施態様において、該医薬有効用量は、第7.7節に記載の頻度で投与される。ある実施態様において、該医薬有効用量は、第7.7節に記載の通りに投与される。ある実施態様において、該医薬有効用量は、第7.7節に記載の初期用量である。ある実施態様において、該医薬有効用量は、第7.7節に記載の調整用量である。ある実施態様において、ActRIIシグナル伝達インヒビターは、第7.11節に記載の組成物として投与される。ある実施態様において、該組成物は、第7.7節に記載の頻度で投与される。ある実施態様において、該組成物は、第7.7節に記載の通りに投与される。ある実施態様において、該ActRIIシグナル伝達インヒビターは、第7.9節に記載のActRIIシグナル伝達インヒビターである。ある実施態様において、該ActRIIシグナル伝達インヒビターは、ActRIIAシグナル伝達インヒビターである。ある実施態様において、該ActRIIAシグナル伝達インヒビターは、21日に1回、皮下投与される。ある実施態様において、該ActRIIシグナル伝達インヒビターは、ActRIIA-Fc、例えば、ActRIIA-hFc(例えば、配列番号7)である。ある実施態様において、該ActRIIシグナル伝達インヒビターは、ActRIIBシグナル伝達インヒビターである。ある実施態様において、該ActRIIBシグナル伝達インヒビターは、21日に1回、皮下投与される。ある実施態様において、該ActRIIシグナル伝達インヒビターは、ActRII-Fc、例えば、ActRIIB-hFc(例えば、配列番号25)である。
【０１０２】
ある実施態様において、本明細書に提供されるのは、対象における血液関連障害を治療する方法であって、(i)該対象における環状鉄芽球である赤芽球の初期のパーセンテージと比較したときの該対象における環状鉄芽球である赤芽球のパーセンテージの長期低下;及び(ii)該対象に該ActRIIシグナル伝達インヒビターの初期用量を投与する前の期間の該対象におけるヘモグロビンレベルと比較したときの該対象におけるヘモグロビンレベルの長期増大を達成するために、該対象にアクチビン受容体II型(ActRII)シグナル伝達インヒビターを医薬有効用量でかつ一定期間投与することを含み;ここで、該医薬有効用量が0.1mg/kg〜2.0mg/kgであり、かつ該対象における赤芽球の少なくとも10％、11％、12％、13％、14％、15％、16％、17％、18％、19％、又は少なくとも20％が環状鉄芽球である、方法である。ある実施態様において、該医薬有効用量は、0.75mg/kg〜2.0mg/kgである。ある実施態様において、該血液関連障害は、第7.8節に記載の血液関連障害である。ある実施態様において、該対象は、第7.8節に記載の対象である。ある実施態様において、該対象における赤芽球の15％は、環状鉄芽球である。ある実施態様において、該対象に該ActRIIシグナル伝達インヒビターの初期用量を投与する前の期間は、1日、2日、3日、4日、5日、6日、1週間、2週間、3週間、4週間、5週間、6週間、7週間、8週間、3カ月、4カ月、5カ月、又は6カ月である。ある実施態様において、該対象は、RBC輸血を必要とする対象である。本明細書で使用されるように、「環状鉄芽球(ring sideroblasts)」及び「環状鉄芽球(ringed sideroblasts)」及び「RS」は、互換的に使用される。ある実施態様において、該ActRIIシグナル伝達インヒビターは、最大でも1、2、3、4、5、又は6カ月間しか投与されない。ある実施態様において、該対象における環状鉄芽球である赤芽球の初期のパーセンテージは、該対象に該ActRIIシグナル伝達インヒビターの初期用量を投与する前の期間の該対象における環状鉄芽球である赤芽球のパーセンテージである。ある実施態様において、該対象に該ActRIIシグナル伝達インヒビターの初期用量を投与する前の期間は、1日、2日、3日、4日、5日、6日、1週間、2週間、3週間、4週間、5週間、6週間、7週間、8週間、3カ月、4カ月、5カ月、又は6カ月である。ある実施態様において、該対象における環状鉄芽球である赤芽球のパーセンテージの長期低下は、該ActRIIシグナル伝達インヒビター投与の期間後、少なくとも3、4、5、6、12、18、又は24カ月間維持される。ある実施態様において、該対象における環状鉄芽球である赤芽球のパーセンテージの長期低下は、該ActRIIシグナル伝達インヒビターの最後の用量が投与された後、かつ該ActRIIシグナル伝達インヒビターのさらなる投与なしで、少なくとも3、4、5、6、12、18、又は24カ月間維持される。ある実施態様において、該対象における環状鉄芽球である赤芽球のパーセンテージの長期低下は、該ActRIIシグナル伝達インヒビター投与の期間後、少なくとも6、12、18、又は24カ月間、該対象における環状鉄芽球である赤芽球の初期のパーセンテージを少なくとも1.5、2.5、5.0、7.5、又は10.0倍下回るものである。ある実施態様において、該対象におけるヘモグロビンレベルの長期増大は、該ActRIIシグナル伝達インヒビター投与の期間後、少なくとも3、4、5、6、12、18、又は24カ月間維持される。ある実施態様において、該対象におけるヘモグロビンレベルの長期増大は、該ActRIIシグナル伝達インヒビター投与の期間後、少なくとも3、4、5、6、12、18、又は24カ月間の該対象における約11g/dL〜18g/dLのヘモグロビンレベルである。ある実施態様において、該対象は、該ActRIIシグナル伝達インヒビター投与の期間後、少なくとも3、4、5、6、12、18、又は24カ月間、RBC輸血を必要としない。ある実施態様において、本方法は、ActRIIシグナル伝達インヒビター投与後、少なくとも3、4、5、6、12、18、又は24カ月間、該対象におけるRBC輸血の必要性を消失させる。ある実施態様において、該対象における環状鉄芽球である赤芽球のパーセンテージの長期低下は、該ActRIIシグナル伝達インヒビターの最後の用量が投与された後、かつ該ActRIIシグナル伝達インヒビターのさらなる投与なしで、少なくとも6、12、18、又は24カ月間、該対象における環状鉄芽球である赤芽球の初期のパーセンテージを少なくとも1.5、2.5、5.0、7.5、又は10.0倍下回るものである。ある実施態様において、該対象におけるヘモグロビンレベルの長期増大は、該ActRIIシグナル伝達インヒビターの最後の用量が投与された後、かつ該ActRIIシグナル伝達インヒビターのさらなる投与なしで、少なくとも3、4、5、6、12、18、又は24カ月間維持される。ある実施態様において、該対象におけるヘモグロビンレベルの長期増大は、該ActRIIシグナル伝達インヒビターの最後の用量が投与された後、かつ該ActRIIシグナル伝達インヒビターのさらなる投与なしで、少なくとも3、4、5、6、12、18、又は24カ月間の該対象における約11g/dL〜18g/dLのヘモグロビンレベルである。ある実施態様において、該対象は、該ActRIIシグナル伝達インヒビターの最後の用量が投与された後、かつ該ActRIIシグナル伝達インヒビターのさらなる投与なしで、少なくとも3、4、5、6、12、18、又は24カ月間RBC輸血を必要としない。ある実施態様において、本方法は、該ActRIIシグナル伝達インヒビターの最後の用量が投与された後、かつ該ActRIIシグナル伝達インヒビターのさらなる投与なしで、少なくとも3、4、5、6、12、18、又は24カ月間、該対象におけるRBC輸血の必要性を消失させる。
【０１０３】
ある実施態様において、本方法は、該ActRIIシグナル伝達インヒビター投与の期間から6、12、18、及び/又は24カ月後の該対象における環状鉄芽球である赤芽球のさらなるパーセンテージを決定することをさらに含む。ある実施態様において、本方法は、該ActRIIシグナル伝達インヒビター投与の期間から6、12、18、及び/又は24カ月後の該対象におけるさらなるヘモグロビンレベルを決定することをさらに含む。
【０１０４】
ある実施態様において、該対象における環状鉄芽球である赤芽球のパーセンテージは、第7.10節に記載のアッセイに従って決定される。ある実施態様において、環状鉄芽球は、第7.10節に記載のアッセイに従って同定される。ある実施態様において、環状鉄芽球は、プルシアンブルー染色に従って同定される。ある実施態様において、赤芽球は、第7.10節に記載のアッセイに従って同定される。ある実施態様において、該対象におけるヘモグロビンレベルは、第7.10節に記載のアッセイに従って決定される。ある実施態様において、該対象は、第7.8節に記載の対象である。ある実施態様において、該対象における赤芽球の少なくとも10％、11％、12％、13％、14％、15％、16％、17％、18％、19％、又は少なくとも20％は、環状鉄芽球である。ある実施態様において、該対象は、第7.8節に記載の対象である。ある実施態様において、該対象における赤芽球の少なくとも15％は、環状鉄芽球である。ある実施態様において、該対象は、11g/dL未満のヘモグロビンレベルを有する。ある実施態様において、該対象は、参照集団と比較して減少したヘモグロビンレベルを有する。ある実施態様において、該参照集団は、第7.10節に記載の通りである。ある実施態様において、該対象は、貧血を有する。ある実施態様において、該対象は、RBC輸血を必要とする対象である。ある実施態様において、該対象は、MDSを有する。ある実施態様において、該対象は、非増殖性CMMLを有する。
【０１０５】
ある実施態様において、該医薬有効用量は、第7.7節に記載の用量である。ある実施態様において、該医薬有効用量は、第7.7節に記載の頻度で投与される。ある実施態様において、該医薬有効用量は、第7.7節に記載の通りに投与される。ある実施態様において、該医薬有効用量は、初期用量である。ある実施態様において、該初期用量は、第7.4節に記載の方法に従って投与される。ある実施態様において、該医薬有効用量は、調整用量である。ある実施態様において、該調整用量は、第7.4節に記載の方法に従って投与される。
【０１０６】
ある実施態様において、ActRIIシグナル伝達インヒビターは、第7.11節に記載の組成物として投与される。ある実施態様において、該組成物は、第7.7節に記載の頻度で投与される。ある実施態様において、該組成物は、第7.7節に記載の通りに投与される。
【０１０７】
ある実施態様において、該ActRIIシグナル伝達インヒビターは、第7.9節に記載のActRIIシグナル伝達インヒビターである。ある実施態様において、該ActRIIシグナル伝達インヒビターは、ActRIIAシグナル伝達インヒビターである。ある実施態様において、該ActRIIAシグナル伝達インヒビターは、21日に1回、皮下投与される。ある実施態様において、該ActRIIシグナル伝達インヒビターは、ActRIIA-Fc、例えば、ActRIIA-hFc(例えば、配列番号7)である。ある実施態様において、該ActRIIシグナル伝達インヒビターは、ActRIIBシグナル伝達インヒビターである。ある実施態様において、該ActRIIBシグナル伝達インヒビターは、21日に1回、皮下投与される。ある実施態様において、該ActRIIシグナル伝達インヒビターは、ActRII-Fc、例えば、ActRIIB-hFc(例えば、配列番号25)である。
【０１０８】
ある実施態様において、本明細書に提供されるのは、対象における血液関連障害を治療する方法であって:(a)該対象における環状鉄芽球である赤芽球のパーセンテージを決定すること;及び(b)(i)該対象における環状鉄芽球である赤芽球のパーセンテージが、少なくとも10％、11％、12％、13％、14％、15％、16％、17％、18％、19％、もしくは少なくとも20％である場合、ActRIIシグナル伝達インヒビターを該対象に0.1mg/kg〜2.0mg/kgの医薬有効用量で短期間投与すること、又は(ii)該対象における環状鉄芽球である赤芽球のパーセンテージが10％、9％、8％、7％、6％、5％、4％、3％、2％、もしくは1％未満である場合、ActRIIシグナル伝達インヒビターを該対象に0.1mg/kg〜2.0mg/kgの医薬有効用量で長期間投与することを含む、方法である。ある実施態様において、該血液関連障害は、第7.8節に記載の血液関連障害である。ある実施態様において、該対象は、第7.8節に記載の対象である。ある実施態様において、該医薬有効用量は、0.75mg/kg〜2.0mg/kgである。ある実施態様において、該対象は、RBC輸血を必要とする対象である。ある実施態様において、該対象への該ActRIIシグナル伝達インヒビターの短い投与期間は、1、2、3、4、又は5カ月である。ある実施態様において、該対象への該ActRIIシグナル伝達インヒビターの長い投与期間は、少なくとも6、12、18、又は24カ月である。具体的な実施態様において、該短い投与期間に続き、該ActRIIシグナル伝達インヒビターの最後の投与から少なくとも0、3、4、5、6、12、28、24、又は48カ月後、環状鉄芽球のレベルを試験する。ある実施態様において、該ActRIIシグナル伝達インヒビターは、第7.9節に記載のActRIIシグナル伝達インヒビターである。ある実施態様において、該ActRIIシグナル伝達インヒビターは、ActRIIAシグナル伝達インヒビターである。ある実施態様において、該ActRIIAシグナル伝達インヒビターは、21日に1回、皮下投与される。ある実施態様において、該ActRIIシグナル伝達インヒビターは、ActRIIA-Fc、例えば、ActRIIA-hFc(例えば、配列番号7)である。ある実施態様において、該ActRIIシグナル伝達インヒビターは、ActRIIBシグナル伝達インヒビターである。ある実施態様において、該ActRIIBシグナル伝達インヒビターは、21日に1回、皮下投与される。ある実施態様において、該ActRIIシグナル伝達インヒビターは、ActRII-Fc、例えば、ActRIIB-hFc(例えば、配列番号25)である。
【０１０９】
ある実施態様において、本方法は、該ActRIIシグナル伝達インヒビター投与の期間から6、12、18、及び/又は24カ月後の該対象における環状鉄芽球である赤芽球のさらなるパーセンテージを決定することをさらに含む。ある実施態様において、本方法は、該ActRIIシグナル伝達インヒビター投与の期間から6、12、18、及び/又は24カ月後の該対象におけるさらなるヘモグロビンレベルを決定することをさらに含む。
【０１１０】
ある実施態様において、本方法は、該ActRIIシグナル伝達インヒビター投与の期間から6、12、18、及び/又は24カ月後の該対象における環状鉄芽球である赤芽球のさらなるパーセンテージを決定することをさらに含む。ある実施態様において、本方法は、該ActRIIシグナル伝達インヒビター投与の期間から6、12、18、及び/又は24カ月後の該対象におけるヘモグロビンレベルを決定することをさらに含む。ある実施態様において、本方法は、ActRIIシグナル伝達インヒビター投与後、少なくとも3、4、5、6、12、18、又は24カ月間、該対象における赤血球輸血の必要性を消失させる。ある実施態様において、本方法は、該ActRIIシグナル伝達インヒビターの最後の用量が投与された後、かつ該ActRIIシグナル伝達インヒビターのさらなる投与なしで、少なくとも3、4、5、6、12、18、又は24カ月間、該対象における赤血球輸血の必要性を消失させる。
【０１１１】
ある実施態様において、該対象における環状鉄芽球である赤芽球のパーセンテージは、第7.10節に記載のアッセイに従って決定される。ある実施態様において、環状鉄芽球は、第7.10節に記載のアッセイに従って同定される。ある実施態様において、環状鉄芽球は、プルシアンブルー染色に従って同定される。ある実施態様において、赤芽球は、第7.10節に記載のアッセイに従って同定される。ある実施態様において、該対象におけるヘモグロビンレベルは、第7.10節に記載のアッセイに従って決定される。ある実施態様において、該対象におけるヘモグロビンレベルは、第7.10節に記載のアッセイに従って決定される。
【０１１２】
ある実施態様において、該対象は、第7.8節に記載の対象である。ある実施態様において、該対象における赤芽球の少なくとも10％、11％、12％、13％、14％、15％、16％、17％、18％、19％、又は少なくとも20％は、環状鉄芽球である。ある実施態様において、該対象における赤芽球の少なくとも15％は、環状鉄芽球である。ある実施態様において、該対象は、11g/dL未満のヘモグロビンレベルを有する。ある実施態様において、該対象は、参照集団と比較して減少したヘモグロビンレベルを有する。ある実施態様において、該参照集団は、第7.10節に記載の通りである。ある実施態様において、該対象は、貧血を有する。ある実施態様において、該対象は、RBC輸血を必要とする対象である。ある実施態様において、該対象は、MDSを有する。ある実施態様において、該対象は、非増殖性CMMLを有する。
【０１１３】
ある実施態様において、該医薬有効用量は、第7.7節に記載の用量である。ある実施態様において、該医薬有効用量は、第7.7節に記載の頻度で投与される。ある実施態様において、該医薬有効用量は、第7.7節に記載の通りに投与される。ある実施態様において、該医薬有効用量は、初期用量である。ある実施態様において、該初期用量は、第7.4節に記載の方法に従って投与される。ある実施態様において、該医薬有効用量は、調整用量である。ある実施態様において、該調整用量は、第7.4節に記載の方法に従って投与される。
【０１１４】
ある実施態様において、ActRIIシグナル伝達インヒビターは、第7.11節に記載の組成物として投与される。ある実施態様において、該組成物は、第7.7節に記載の頻度で投与される。ある実施態様において、該組成物は、第7.7節に記載の通りに投与される。
【０１１５】
ある実施態様において、該ActRIIシグナル伝達インヒビターは、第7.9節に記載のActRIIシグナル伝達インヒビターである。ある実施態様において、該ActRIIシグナル伝達インヒビターは、ActRIIAシグナル伝達インヒビターである。ある実施態様において、該ActRIIAシグナル伝達インヒビターは、21日に1回、皮下投与される。ある実施態様において、該ActRIIシグナル伝達インヒビターは、ActRIIA-Fc、例えば、ActRIIA-hFc(例えば、配列番号7)である。ある実施態様において、該ActRIIシグナル伝達インヒビターは、ActRIIBシグナル伝達インヒビターである。ある実施態様において、該ActRIIBシグナル伝達インヒビターは、21日に1回、皮下投与される。ある実施態様において、該ActRIIシグナル伝達インヒビターは、ActRII-Fc、例えば、ActRIIB-hFc(例えば、配列番号25)である。
【０１１６】
ある実施態様において、本明細書に提供されるのは、対象における血液関連障害を治療する方法であって、該対象にアクチビン受容体II型(ActRII)シグナル伝達インヒビターの医薬有効用量を投与することを含み、ここで、該対象が、1以上の突然変異を含むSF3B1を発現する、方法である。ある実施態様において、該1以上の突然変異は、非コード領域にある。ある実施態様において、該1以上の突然変異は、コード領域にある。ある実施態様において、SF3B1は、SF3B1タンパク質である。ある実施態様において、SF3B1は、SF3B1をコードする遺伝子である。ある実施態様において、該対象は、第7.8節に記載の対象である。ある実施態様において、該血液関連障害は、第7.8節に記載の血液関連障害である。ある実施態様において、該SF3B1における1以上の突然変異は、第7.8節に記載の通りである。ある実施態様において、該対象における赤芽球の少なくとも10％、11％、12％、13％、14％、15％、16％、17％、18％、19％、又は少なくとも20％は、環状鉄芽球である。ある実施態様において、該対象における赤芽球の少なくとも15％は、環状鉄芽球である。ある実施態様において、該対象は、11g/dL未満のヘモグロビンレベルを有する。ある実施態様において、該対象は、参照集団と比較して減少したヘモグロビンレベルを有する。ある実施態様において、該参照集団は、第7.10節に記載の通りである。ある実施態様において、該対象は、貧血を有する。ある実施態様において、該対象は、RBC輸血を必要とする対象である。ある実施態様において、該対象は、MDSを有する。ある実施態様において、該対象は、非増殖性CMMLを有する。ある実施態様において、本明細書に提供される方法に従って治療される対象は、血小板減少症を有する。ある実施態様において、該医薬有効用量は、第7.7節に記載の用量である。ある実施態様において、該医薬有効用量は、ActRIIシグナル伝達インヒビターの0.1mg/kg〜2.0mg/kgである。ある実施態様において、該医薬有効用量は、ActRIIシグナル伝達インヒビターの0.75mg/kg〜2.0mg/kgである。ある実施態様において、該医薬有効用量は、第7.7節に記載の頻度で投与される。ある実施態様において、該医薬有効用量は、第7.7節に記載の通りに投与される。ある実施態様において、該医薬有効用量は、初期用量である。ある実施態様において、該初期用量は、第7.4節に記載の方法に従って投与される。ある実施態様において、該医薬有効用量は、調整用量である。ある実施態様において、該調整用量は、第7.4節に記載の方法に従って投与される。ある実施態様において、ActRIIシグナル伝達インヒビターは、第7.11節に記載の組成物として投与される。ある実施態様において、該組成物は、第7.7節に記載の頻度で投与される。ある実施態様において、該組成物は、第7.7節に記載の通りに投与される。ある実施態様において、該ActRIIシグナル伝達インヒビターは、第7.9節に記載のActRIIシグナル伝達インヒビターである。ある実施態様において、該ActRIIシグナル伝達インヒビターは、ActRIIAシグナル伝達インヒビターである。ある実施態様において、該ActRIIAシグナル伝達インヒビターは、21日に1回、皮下投与される。ある実施態様において、該ActRIIシグナル伝達インヒビターは、ActRIIA-Fc、例えば、ActRIIA-hFc(例えば、配列番号7)である。ある実施態様において、��ActRIIシグナル伝達インヒビターは、ActRIIBシグナル伝達インヒビターである。ある実施態様において、該ActRIIBシグナル伝達インヒビターは、21日に1回、皮下投与される。ある実施態様において、該ActRIIシグナル伝達インヒビターは、ActRII-Fc、例えば、ActRIIB-hFc(例えば、配列番号25)である。好中球レベルを増大させる必要のある対象は、環状鉄芽球、貧血、RBC輸血を必要とする貧血、非増殖性CMML、及び/又はMDSを有する対象であることができる。
【０１１７】
(7.3.1  遺伝マーカー)
ある実施態様において、本明細書に提供されるのは、対象における血液関連障害を治療する方法であって、該対象にアクチビン受容体II型(ActRII)シグナル伝達インヒビターの医薬有効用量を投与することを含み、ここで、該対象が、1以上の突然変異を含むSF3B1を発現する、方法である。ある実施態様において、該1以上の突然変異は、非コード領域にある。ある実施態様において、該1以上の突然変異は、コード領域にある。ある実施態様において、SF3B1は、SF3B1タンパク質である。ある実施態様において、SF3B1は、SF3B1をコードする遺伝子である。ある実施態様において、該対象は、第7.8節に記載の対象である。ある実施態様において、該血液関連障害は、第7.8節に記載の血液関連障害である。ある実施態様において、該SF3B1における1以上の突然変異は、第7.8節に記載の通りである。ある実施態様において、該対象における赤芽球の少なくとも10％、11％、12％、13％、14％、15％、16％、17％、18％、19％、又は少なくとも20％は、環状鉄芽球である。ある実施態様において、該対象における赤芽球の少なくとも15％は、環状鉄芽球である。ある実施態様において、該対象は、11g/dL未満のヘモグロビンレベルを有する。ある実施態様において、該対象は、参照集団と比較して減少したヘモグロビンレベルを有する。ある実施態様において、該参照集団は、第7.10節に記載の通りである。ある実施態様において、該対象は、貧血を有する。ある実施態様において、該対象は、RBC輸血を必要とする対象である。ある実施態様において、該対象は、MDSを有する。ある実施態様において、該対象は、非増殖性CMMLを有する。ある実施態様において、本明細書に提供される方法に従って治療される対象は、血小板減少症を有する。ある実施態様において、該医薬有効用量は、第7.7節に記載の用量である。ある実施態様において、該医薬有効用量は、ActRIIシグナル伝達インヒビターの0.1mg/kg〜2.0mg/kgである。ある実施態様において、該医薬有効用量は、ActRIIシグナル伝達インヒビターの0.75mg/kg〜2.0mg/kgである。ある実施態様において、該医薬有効用量は、第7.7節に記載の頻度で投与される。ある実施態様において、該医薬有効用量は、第7.7節に記載の通りに投与される。ある実施態様において、該医薬有効用量は、初期用量である。ある実施態様において、該初期用量は、第7.4節に記載の方法に従って投与される。ある実施態様において、該医薬有効用量は、調整用量である。ある実施態様において、該調整用量は、第7.4節に記載の方法に従って投与される。ある実施態様において、ActRIIシグナル伝達インヒビターは、第7.11節に記載の組成物として投与される。ある実施態様において、該組成物は、第7.7節に記載の頻度で投与される。ある実施態様において、該組成物は、第7.7節に記載の通りに投与される。ある実施態様において、該ActRIIシグナル伝達インヒビターは、第7.9節に記載のActRIIシグナル伝達インヒビターである。ある実施態様において、該ActRIIシグナル伝達インヒビターは、ActRIIAシグナル伝達インヒビターである。ある実施態様において、該ActRIIAシグナル伝達インヒビターは、21日に1回、皮下投与される。ある実施態様において、該ActRIIシグナル伝達インヒビターは、ActRIIA-Fc、例えば、ActRIIA-hFc(例えば、配列番号7)である。ある実施態様において、��ActRIIシグナル伝達インヒビターは、ActRIIBシグナル伝達インヒビターである。ある実施態様において、該ActRIIBシグナル伝達インヒビターは、21日に1回、皮下投与される。ある実施態様において、該ActRIIシグナル伝達インヒビターは、ActRII-Fc、例えば、ActRIIB-hFc(例えば、配列番号25)である。好中球レベルを増大させる必要のある対象は、環状鉄芽球、貧血、RBC輸血を必要とする貧血、非増殖性CMML、及び/又はMDSを有する対象であることができる。
【０１１８】
(7.4  調整投与の方法)
ある実施態様において、本明細書に提供されるのは、対象における血液関連障害を治療する方法であって:(a)該対象における赤芽球の少なくとも10％、11％、12％、13％、14％、15％、16％、17％、18％、19％、又は少なくとも20％が環状鉄芽球であること決定すること;(b)該対象にActRIIシグナル伝達インヒビターの0.1mg/kg〜2.0mg/kgの初期用量を投与すること;(c)一定期間後、該対象における環状鉄芽球である赤芽球の第2のパーセンテージを決定すること;及び(d)任意に、該対象に該ActRIIシグナル伝達インヒビターの調整用量を投与することを含む、方法である。ある実施態様において、該血液関連障害は、第7.8節に記載の血液関連障害である。ある実施態様において、該対象は、第7.8節に記載の対象である。ある実施態様において、該初期用量は、0.75mg/kg〜2.0mg/kgである。ある実施態様において、該対象は、RBC輸血を必要とする対象である。ある実施態様において、該初期用量は、該対象における環状鉄芽球である赤芽球の第1のパーセンテージの決定の直後又は最大でもその1日、2日、3日、4日、5日、6日、もしくは1週間、2週間、1カ月、2カ月、3カ月、4カ月、5カ月、6カ月、7カ月、8カ月、9カ月、10カ月、11カ月、もしくは12カ月以内に、該対象に投与される。ある実施態様において、該対象への該初期用量の投与から該対象における環状鉄芽球である赤芽球の第2のパーセンテージの決定までの期間は、1日、2日、3日、4日、5日、6日、もしくは1週間、2週間、1カ月、2カ月、3カ月、4カ月、5カ月、6カ月、7カ月、8カ月、9カ月、10カ月、11カ月、又は12カ月である。ある実施態様において、該調整用量は、該対象における環状鉄芽球である赤芽球の第2のパーセンテージの決定の直後又は最大でもその1日、2日、3日、4日、5日、6日、もしくは1週間、2週間、1カ月、2カ月、3カ月、4カ月、5カ月、6カ月、7カ月、8カ月、9カ月、10カ月、11カ月、もしくは12カ月以内に、該対象に投与される。ある実施態様において、該ActRIIシグナル伝達インヒビターの調整用量は、該対象における環状鉄芽球である赤芽球の第2のパーセンテージが、少なくとも10％、11％、12％、13％、14％、15％、16％、17％、18％、19％、又は少なくとも20％である場合、該初期用量よりも少ない。ある実施態様において、該対象における環状鉄芽球である赤芽球の第2のパーセンテージは、少なくとも15％である。ある実施態様において、該調整用量は、該対象における環状鉄芽球である赤芽球の第2のパーセンテージが、10％、9％、8％、7％、6％、5％、4％、3％、2％、又は1％未満である場合、該対象に投与されない。ある実施態様において、本方法は、ActRIIシグナル伝達インヒビター投与後、少なくとも3、4、5、6、12、18、又は24カ月間、該対象における赤血球輸血の必要性を消失させる。
【０１１９】
ある実施態様において、該対象は、第7.8節に記載の対象である。ある実施態様において、該対象における赤芽球の少なくとも10％、11％、12％、13％、14％、15％、16％、17％、18％、19％、又は少なくとも20％は、環状鉄芽球である。ある実施態様において、該対象における赤芽球の少なくとも15％は、環状鉄芽球である。ある実施態様において、該対象は、11g/dL未満のヘモグロビンレベルを有する。ある実施態様において、該対象は、参照集団と比較して減少したヘモグロビンレベルを有する。ある実施態様において、該参照集団は、第7.10節に記載の通りである。ある実施態様において、該対象は、貧血を有する。ある実施態様において、該対象は、RBC輸血を必要とする対象である。ある実施態様において、該対象は、MDSを有する。ある実施態様において、該対象は、非増殖性CMMLを有する。ある実施態様において、該医薬有効用量は、第7.7節に記載の初期用量である。ある実施態様において、該用量は、第7.7節に記載の調整用量である。ある実施態様において、該医薬有効用量は、調整用量である。ある実施態様において、該医薬有効用量は、第7.7節に記載の頻度で投与される。ある実施態様において、該医薬有効用量は、第7.7節に記載の通りに投与される。ある実施態様において、ActRIIシグナル伝達インヒビターは、第7.11節に記載の組成物として投与される。ある実施態様において、該組成物は、第7.7節に記載の頻度で投与される。ある実施態様において、該組成物は、第7.7節に記載の通りに投与される。ある実施態様において、該ActRIIシグナル伝達インヒビターは、第7.9節に記載のActRIIシグナル伝達インヒビターである。ある実施態様において、該ActRIIシグナル伝達インヒビターは、ActRIIAシグナル伝達インヒビターである。ある実施態様において、該ActRIIAシグナル伝達インヒビターは、21日に1回、皮下投与される。ある実施態様において、該ActRIIシグナル伝達インヒビターは、ActRIIA-Fc、例えば、ActRIIA-hFc(例えば、配列番号7)である。ある実施態様において、該ActRIIシグナル伝達インヒビターは、ActRIIBシグナル伝達インヒビターである。ある実施態様において、該ActRIIBシグナル伝達インヒビターは、21日に1回、皮下投与される。ある実施態様において、該ActRIIシグナル伝達インヒビターは、ActRII-Fc、例えば、ActRIIB-hFc(例えば、配列番号25)である。
【０１２０】
ある実施態様において、本明細書に提供されるのは、血液関連障害を有する対象における赤血球産生を促進する方法であって:(a)該対象における環状鉄芽球である赤芽球のパーセンテージを決定すること;(b)ActRIIシグナル伝達インヒビターの医薬有効用量を該対象に第1の期間投与すること;及び(c)該第1の期間の後、工程(a)の該対象における環状鉄芽球である赤芽球のパーセンテージが、11％、12％、13％、14％、15％、16％、17％、18％、19％、又は20％を上回っていた場合、該対象に投与される該ActRIIシグナル伝達インヒビターの用量を低下させるか、該対象への該ActRIIシグナル伝達インヒビターの投与の頻度を低下させるか、又は該ActRIIシグナル伝達インヒビターの投与を中止することを含む、方法である。ある実施態様において、本方法は、(i)該第1の期間中の該対象における血液学的パラメータをモニタリングすること;及び(ii)該対象における血液学的パラメータが正常化している場合、例えば、該対象における血液学的パラメータが少なくとも参照集団における血液学的パラメータのレベルにある場合、該対象への該ActRIIシグナル伝達インヒビターの投与を低下させる(例えば、その用量を低下させるもしくはその頻度を低下させる)か、又は該対象への該ActRIIシグナル伝達インヒビターの投与を中止することをさらに含む。ある実施態様において、該参照集団は、第7.10節に記載の参照集団である。ある実施態様において、本方法は、(i)該第1の期間中の該対象における血液学的パラメータをモニタリングすること;及び(ii)該対象における血液学的パラメータが正常化している場合、例えば、該対象における該血液学的パラメータが、第2の期間中の該対象における該血液学的パラメータと比較して、少なくとも10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、又は100％改善している場合、該対象への該ActRIIシグナル伝達インヒビターの投与を低下させる(例えば、その用量を低下させるもしくはその頻度を低下させる)か、又は該対象への該ActRIIシグナル伝達インヒビターの投与を中止することをさらに含み、ここで、該第2の期間は、該対象に該ActRIIシグナル伝達インヒビターの初期用量を投与する前の期間である。ある実施態様において、該第1の期間は、少なくとも1カ月、2カ月、3カ月、4カ月、5カ月、6カ月、7カ月、8カ月、9カ月、10カ月、11カ月、又は1年である。ある実施態様において、該第2の期間は、1日、2日、3日、4日、5日、6日、1週間、2週間、3週間、4週間、5週間、6週間、7週間、8週間、3カ月、4カ月、5カ月、又は6カ月である。ある実施態様において、該血液学的パラメータは、ヘモグロビンレベルである。ある実施態様において、該血液学的パラメータは、ヘマトクリットである。ある実施態様において、該血液学的パラメータは、赤血球数である。ある実施態様において、該血液学的パラメータは、該対象における環状鉄芽球である赤芽球のパーセンテージである。ある実施態様において、該ActRIIシグナル伝達インヒビターの低下した用量は、第7.7節に記載の用量である。ある実施態様において、該ActRIIシグナル伝達インヒビターの低下した投与の頻度は、第7.7節に記載の頻度である。ある実施態様において、該血液関連障害は、第7.8節に記載の血液関連障害である。ある実施態様において、該対象は、第7.8節に記載の対象である。ある実施態様において、該医薬有効用量は、第7.7節に記載の初期用量である。ある実施態様において、該用量は、第7.7節に記載の調整用量である。ある実施態様において、該医薬有効用量は、調整用量である。ある実施態様において、該医薬有効用量は、第7.7節に記載の頻度で投与される。ある実施態様において、該医薬有効用量は、第7.7節に記載の通りに投与される。ある実施態様において、ActRIIシグナル伝達インヒビターは、第7.11節に記載の組成物として投与される。ある実施態様において、該組成物は、第7.7節に記載の頻度で投与される。ある実施態様において、該組成物は、第7.7節に記載の通りに投与される。ある実施態様において、該ActRIIシグナル伝達インヒビターは、第7.9節に記載のActRIIシグナル伝達インヒビターである。ある実施態様において、該ActRIIシグナル伝達インヒビターは、ActRIIAシグナル伝達インヒビターである。ある実施態様において、該ActRIIAシグナル伝達インヒビターは、21日に1回、皮下投与される。ある実施態様において、該ActRIIシグナル伝達インヒビターは、ActRIIA-Fc、例えば、ActRIIA-hFc(例えば、配列番号7)である。ある実施態様において、該ActRIIシグナル伝達インヒビターは、ActRIIBシグナル伝達インヒビターである。ある実施態様において、該ActRIIBシグナル伝達インヒビターは、21日に1回、皮下投与される。ある実施態様において、該ActRIIシグナル伝達インヒビターは、ActRII-Fc、例えば、ActRIIB-hFc(例えば、配列番号25)である。
【０１２１】
(7.5  好中球レベルを増大させる方法)
ある実施態様において、本明細書に提供されるのは、好中球のレベルを増大させる必要のある対象における好中球のレベルを増大させる方法であって、該対象にアクチビン受容体II型(ActRII)シグナル伝達インヒビターの医薬有効用量を投与することを含む、方法である。ある実施態様において、該好中球レベルは、絶対好中球数である。ある実施態様において、該対象における好中球のレベルは、該対象に該ActRIIシグナル伝達インヒビターの初期用量を投与する前の期間の該対象における好中球のレベルと比較して、1リットル当たり少なくとも0.1×109個、1リットル当たり0.5×109個、1リットル当たり1.0×109個、1リットル当たり5×109個、1リットル当たり1.0×1010個、1リットル当たり5×1010個、又は1.0×1011個増大する。ある実施態様において、該対象における好中球のレベルは、該対象に該ActRIIシグナル伝達インヒビターの初期用量を投与する前の期間の該対象における好中球のレベルと比較して、少なくとも1.2倍、1.3倍、1.4倍、1.5倍、2倍、2.5倍、3倍、3.5倍、4倍、4.5倍、5倍、6倍、7倍、8倍、9倍、又は10倍増大する。ある実施態様において、該対象における好中球のレベルは、該対象に該ActRIIシグナル伝達インヒビターの初期用量を投与する前の期間の該対象における好中球のレベルと比較して、最大でも1.2倍、1.3倍、1.4倍、1.5倍、2倍、2.5倍、3倍、3.5倍、4倍、4.5倍、5倍、6倍、7倍、8倍、9倍、又は10倍しか増大しない。ある実施態様において、該対象における好中球のレベルは、該対象に該ActRIIシグナル伝達インヒビターの医薬有効用量を投与した後、少なくとも1、2、3、4、5、又は6カ月間増大する。ある実施態様において、該対象における好中球のレベルは、該対象への該ActRIIシグナル伝達インヒビターの医薬有効用量の投与が終了した後、少なくとも1、2、3、4、5、又は6カ月間増大する。第7.4節も参照されたい。ある実施態様において、該対象に該ActRIIシグナル伝達インヒビターの初期用量を投与する前の期間は、1日、2日、3日、4日、5日、6日、1週間、2週間、3週間、4週間、5週間、6週間、7週間、8週間、3カ月、4カ月、5カ月、又は6カ月である。ある実施態様において、該好中球レベルは、第7.10節に記載の通りに測定される。ある実施態様において、該絶対好中球数は、第7.10節に記載の通りに測定される。ある実施態様において、該対象は、第7.8節に記載の対象である。ある実施態様において、該対象における赤芽球の少なくとも10％、11％、12％、13％、14％、15％、16％、17％、18％、19％、又は少なくとも20％は、環状鉄芽球である。ある実施態様において、該対象における赤芽球の少なくとも15％は、環状鉄芽球である。ある実施態様において、該対象は、11g/dL未満のヘモグロビンレベルを有する。ある実施態様において、該対象は、参照集団と比較して減少したヘモグロビンレベルを有する。ある実施態様において、該参照集団は、第7.10節に記載の通りである。ある実施態様において、該対象は、貧血を有する。ある実施態様において、該対象は、RBC輸血を必要とする対象である。ある実施態様において、該対象は、MDSを有する。ある実施態様において、該対象は、非増殖性CMMLを有する。ある実施態様において、本明細書に提供される方法に従って治療される対象は、血小板減少症を有する。ある実施態様において、該医薬有効用量���、第7.7節に記載の用量である。ある実施態様において、該医薬有効用量は、第7.7節に記載の頻度で投与される。ある実施態様において、該医薬有効用量は、第7.7節に記載の通りに投与される。ある実施態様において、該医薬有効用量は、初期用量である。ある実施態様において、該初期用量は、第7.4節に記載の方法に従って投与される。ある実施態様において、該医薬有効用量は、調整用量である。ある実施態様において、該調整用量は、第7.4節に記載の方法に従って投与される。ある実施態様において、ActRIIシグナル伝達インヒビターは、第7.11節に記載の組成物として投与される。ある実施態様において、該組成物は、第7.7節に記載の頻度で投与される。ある実施態様において、該組成物は、第7.7節に記載の通りに投与される。ある実施態様において、該ActRIIシグナル伝達インヒビターは、第7.9節に記載のActRIIシグナル伝達インヒビターである。ある実施態様において、該ActRIIシグナル伝達インヒビターは、ActRIIAシグナル伝達インヒビターである。ある実施態様において、該ActRIIAシグナル伝達インヒビターは、21日に1回、皮下投与される。ある実施態様において、該ActRIIシグナル伝達インヒビターは、ActRIIA-Fc、例えば、ActRIIA-hFc(例えば、配列番号7)である。ある実施態様において、該ActRIIシグナル伝達インヒビターは、ActRIIBシグナル伝達インヒビターである。ある実施態様において、該ActRIIBシグナル伝達インヒビターは、21日に1回、皮下投与される。ある実施態様において、該ActRIIシグナル伝達インヒビターは、ActRII-Fc、例えば、ActRIIB-hFc(例えば、配列番号25)である。好中球レベルを増大させる必要のある対象は、環状鉄芽球、貧血、RBC輸血を必要とする貧血、非増殖性CMML、及び/又はMDSを有する対象であることができる。
【０１２２】
(7.6  血小板レベルを増大させる方法)
ある実施態様において、本明細書に提供されるのは、血小板のレベルを増大させる必要のある対象における血小板のレベルを増大させる方法であって、該対象にアクチビン受容体II型(ActRII)シグナル伝達インヒビターの医薬有効用量を投与することを含む、方法である。ある実施態様において、該対象における血小板のレベルは、該対象に該ActRIIシグナル伝達インヒビターの初期用量を投与する前の期間の該対象における血小板のレベルと比較して、1リットル当たり少なくとも1×1010個、1リットル当たり3×1010個、1リットル当たり5×1010個、1リットル当たり1×1011個、1リットル当たり5×1011個、又は1リットル当たり少なくとも1×1012個増大する。ある実施態様において、該対象における血小板のレベルは、該対象に該ActRIIシグナル伝達インヒビターの初期用量を投与する前の期間の該対象における血小板のレベルと比較して、少なくとも1.2倍、1.3倍、1.4倍、1.5倍、2倍、2.5倍、3倍、3.5倍、4倍、4.5倍、5倍、6倍、7倍、8倍、9倍、又は10倍増大する。ある実施態様において、該対象における血小板のレベルは、該対象に該ActRIIシグナル伝達インヒビターの初期用量を投与する前の期間の該対象における血小板のレベルと比較して、最大でも1.2倍、1.3倍、1.4倍、1.5倍、2倍、2.5倍、3倍、3.5倍、4倍、4.5倍、5倍、6倍、7倍、8倍、9倍、又は10倍しか増大しない。ある実施態様において、該対象に該ActRIIシグナル伝達インヒビターの初期用量を投与する前の期間は、1日、2日、3日、4日、5日、6日、1週間、2週間、3週間、4週間、5週間、6週間、7週間、8週間、3カ月、4カ月、5カ月、又は6カ月である。ある実施態様において、該対象における血小板のレベルは、該対象に該ActRIIシグナル伝達インヒビターの医薬有効用量を投与した後、少なくとも1、2、3、4、5、又は6カ月間増大する。ある実施態様において、該対象における好中球のレベルは、該対象への該ActRIIシグナル伝達インヒビターの医薬有効用量の投与が終了した後、少なくとも1、2、3、4、5、又は6カ月間増大する。第7.4節も参照されたい。ある実施態様において、該血小板レベルは、第7.10節に記載の通りに測定される。
【０１２３】
ある実施態様において、該対象は、第7.8節に記載の対象である。ある実施態様において、該対象における赤芽球の少なくとも10％、11％、12％、13％、14％、15％、16％、17％、18％、19％、又は少なくとも20％は、環状鉄芽球である。ある実施態様において、該対象における赤芽球の少なくとも15％は、環状鉄芽球である。ある実施態様において、該対象は、11g/dL未満のヘモグロビンレベルを有する。ある実施態様において、該対象は、参照集団と比較して減少したヘモグロビンレベルを有する。ある実施態様において、該参照集団は、第7.10節に記載の通りである。ある実施態様において、該対象は、貧血を有する。ある実施態様において、該対象は、RBC輸血を必要とする対象である。ある実施態様において、該対象は、MDSを有する。ある実施態様において、該対象は、非増殖性CMMLを有する。ある実施態様において、本明細書に提供される方法に従って治療される対象は、好中球減少症を有する。
【０１２４】
ある実施態様において、該医薬有効用量は、第7.7節に記載の用量である。ある実施態様において、該医薬有効用量は、第7.7節に記載の頻度で投与される。ある実施態様において、該医薬有効用量は、第7.7節に記載の通りに投与される。ある実施態様において、該医薬有効用量は、初期用量である。ある実施態様において、該初期用量は、第7.4節に記載の方法に従って投与される。ある実施態様において、該医薬有効用量は、調整用量である。ある実施態様において、該調整用量は、第7.4節に記載の方法に従って投与される。
【０１２５】
ある実施態様において、ActRIIシグナル伝達インヒビターは、第7.11節に記載の組成物として投与される。ある実施態様において、該組成物は、第7.7節に記載の頻度で投与される。ある実施態様において、該組成物は、第7.7節に記載の通りに投与される。
【０１２６】
ある実施態様において、該ActRIIシグナル伝達インヒビターは、第7.9節に記載のActRIIシグナル伝達インヒビターである。ある実施態様において、該ActRIIシグナル伝達インヒビターは、ActRIIAシグナル伝達インヒビターである。ある実施態様において、該ActRIIAシグナル伝達インヒビターは、21日に1回、皮下投与される。ある実施態様において、該ActRIIシグナル伝達インヒビターは、ActRIIA-Fc、例えば、ActRIIA-hFc(例えば、配列番号7)である。ある実施態様において、該ActRIIシグナル伝達インヒビターは、ActRIIBシグナル伝達インヒビターである。ある実施態様において、該ActRIIBシグナル伝達インヒビターは、21日に1回、皮下投与される。ある実施態様において、該ActRIIシグナル伝達インヒビターは、ActRII-Fc、例えば、ActRIIB-hFc(例えば、配列番号25)である。
【０１２７】
好中球レベルを増大させる必要のある対象は、環状鉄芽球、貧血、RBC輸血を必要とする貧血、非増殖性CMML、及び/又はMDSを有する対象であることができる。
【０１２８】
(7.7  用量)
本明細書に提供されるのは、血液関連障害(例えば、貧血、RBC輸血を必要とする貧血、MDS、及び/又は非増殖性CMML)の対象における治療方法であって、治療を必要とする対象に、ActRIIのシグナル伝達インヒビター(第7.9節参照)の医薬有効用量を投与することを含む、方法である。ある実施態様において、ActRIIシグナル伝達インヒビターは、第7.9.1節に記載されているようなActRIIAのシグナル伝達インヒビターである。他の実施態様において、ActRIIシグナル伝達インヒビターは、第7.9.2節に記載されているようなActRIIBのシグナル伝達インヒビターである。ある実施態様において、ActRIIシグナル伝達インヒビターは、ActRIIAシグナル伝達インヒビターとActRIIBシグナル伝達インヒビターの組合せである。ある実施態様において、該ActRIIシグナル伝達インヒビターは、配列番号7である。ある実施態様において、該ActRIIシグナル伝達インヒビターは、配列番号25である。
【０１２９】
本明細書に提供される用量は、例えば、貧血、RBC輸血を必要とする貧血、MDS、及び/又は非増殖性CMMLなどの血液関連疾患の治療で使用することができる。ある実施態様において、該用量は、医薬有効用量である。
【０１３０】
ある実施態様において、該ActRIIシグナル伝達インヒビターの医薬有効用量は、貧血の1以上の症状を改善するのに十分な用量である。ある実施態様において、該ActRIIシグナル伝達インヒビターの医薬有効用量は、貧血の少なくとも1つの症状が悪化するのを防ぐのに十分な用量である。貧血の非限定的な例としては、疲労、精力減退、頻拍、息切れ、頭痛、集中力欠如、目眩、蒼白、下肢痙攣、及び不眠症が挙げられる。
【０１３１】
ある実施態様において、該ActRIIシグナル伝達インヒビターの医薬有効用量は、非増殖性CMMLの1以上の症状を改善するのに十分な用量である。ある実施態様において、該ActRIIシグナル伝達インヒビターの医薬有効用量は、非増殖性CMMLの1以上の症状が悪化するのを防ぐのに十分な用量である。CMMLの症状の非限定的な例としては、脾腫、肝肥大、貧血、疲労、息切れ、白血球減少、高頻度の感染、血小板減少、易皮下出血又は易出血、発熱、体重減少、蒼白、及び食欲不振が挙げられる。
【０１３２】
ある実施態様において、該ActRIIシグナル伝達インヒビターの医薬有効用量は、MDSの1以上の症状を改善するのに十分な用量である。ある実施態様において、該ActRIIシグナル伝達インヒビターの医薬有効用量は、MDSの1以上の症状が悪化するのを防ぐのに十分な用量である。MDSの症状の非限定的な例としては、貧血、息切れ、疲労、蒼白、白血球減少、高頻度の感染、好中球減少、血小板減少、易皮下出血又は易出血、体重減少、発熱、食欲不振、衰弱、及び骨痛が挙げられる。
【０１３３】
ある実施態様において、該ActRIIシグナル伝達インヒビターは、0.2マイクログラム/kg以上の血清濃度、例えば、1マイクログラム/kg又は2マイクログラム/kg又はそれを上回る血清レベルを達成するのに十分な間隔及び量で投与される。投与レジメンは、0.2〜15マイクログラム/kg、任意に、1〜5マイクログラム/kgの血清濃度に達するように設計することができる。ヒトでは、0.2マイクログラム/kgの血清レベルを0.1mg/kg以上の単一用量で達成することができ、1マイクログラム/kgの血清レベルを0.3mg/kg以上の単一用量で達成することができる。分子の観察される血清半減期は、約20〜30日であり、ほとんどのFc融合タンパク質よりも実質的に長く、したがって、例えば、0.2〜0.4mg/kgを1週間に1回もしくは2週間に1回の頻度で投与することにより、持続的有効血清レベルを達成することができるか、又は投与間の間隔をより長くして、より大きい用量を使用することができる。例えば、1〜3mg/kgの用量を1カ月に1回もしくは2カ月に1回の頻度で使用することができ、骨に対する効果は、投与が、3、4、5、6、9、12カ月、又はそれより長い期間に1回しか必要ないほど十分に長持ちし得る。該ActRIIシグナル伝達インヒビターの血清レベルは、当業者に公知の任意の手段によって測定することができる。例えば、該ActRIIシグナル伝達インヒビターに対する抗体を用いて、例えば、ELISAを用いて、該ActRIIシグナル伝達インヒビターの血清レベルを決定することができる。具体的な実施態様において、本明細書に提供される方法は、骨密度及び骨強度に対する顕著な効果も達成する。
【０１３４】
ある実施態様において、該ActRIIシグナル伝達インヒビターの用量は、約0.1mg/kg、約0.3mg/kg、約0.5mg/kg、0.75mg/kg、約1.0mg/kg、約1.25mg/kg、約1.5mg/kg、約1.75mg/kg、約2.0mg/kg、又は約2.25mg/kgである。ある実施態様において、該ActRIIシグナル伝達インヒビターの用量は、0.1mg/kg〜2.25mg/kgである。ある実施態様において、該ActRIIシグナル伝達インヒビターの用量は、0.1mg/kg〜1mg/kgである。ある実施態様において、該ActRIIシグナル伝達インヒビターの用量は、0.3mg/kg〜1.25mg/kgである。ある実施態様において、該ActRIIシグナル伝達インヒビターの用量は、0.5mg/kg〜1.5mg/kgである。ある実施態様において、該ActRIIシグナル伝達インヒビターの用量は、0.1mg/kg〜2.0mg/kgである。ある実施態様において、該ActRIIシグナル伝達インヒビターの用量は、0.75mg/kg〜1.0mg/kg、1.0mg/kg〜1.25mg/kg、1.25mg/kg〜1.5mg/kg、1.5mg/kg〜1.75mg/kg、又は1.75mg/kg〜2.0mg/kgである。ある実施態様において、該ActRIIシグナル伝達インヒビターの用量は、医薬有効用量である。本明細書に提供される用量(例えば、ActRIIシグナル伝達インヒビターの用量又は第2の活性剤の用量)とともに使用されるとき、「約」という語は、言及された数の1、5、又は10％以内の任意の数を指す。
【０１３５】
ある実施態様において、該ActRIIシグナル伝達インヒビターの用量は、医薬有効用量である。ある実施態様において、該ActRIIシグナル伝達インヒビターの医薬有効用量は、約0.1mg/kg、約0.3mg/kg、約0.5mg/kg、0.75mg/kg、約1.0mg/kg、約1.25mg/kg、約1.5mg/kg、約1.75mg/kg、約2.0mg/kg、又は約2.25mg/kgである。ある実施態様において、該ActRIIシグナル伝達インヒビターの医薬有効用量は、0.1mg/kg〜2.25mg/kgである。ある実施態様において、該ActRIIシグナル伝達インヒビターの医薬有効用量は、0.1mg/kg〜1mg/kgである。ある実施態様において、該ActRIIシグナル伝達インヒビターの医薬有効用量は、0.3mg/kg〜1.25mg/kgである。ある実施態様において、該ActRIIシグナル伝達インヒビターの医薬有効用量は、0.5mg/kg〜1.5mg/kgである。ある実施態様において、該ActRIIシグナル伝達インヒビターの医薬有効用量は、0.1mg/kg〜2.0mg/kgである。ある実施態様において、該ActRIIシグナル伝達インヒビターの医薬有効用量は、0.75mg/kg〜1.0mg/kg、1.0mg/kg〜1.25mg/kg、1.25mg/kg〜1.5mg/kg、1.5mg/kg〜1.75mg/kg、又は1.75mg/kg〜2.0mg/kgである。
【０１３６】
ある実施態様において、該ActRIIシグナル伝達インヒビターの用量は、初期用量である。ある実施態様において、該ActRIIシグナル伝達インヒビターの初期用量は、約0.1mg/kg、約0.3mg/kg、約0.5mg/kg、0.75mg/kg、約1.0mg/kg、約1.25mg/kg、約1.5mg/kg、約1.75mg/kg、約2.0mg/kg、又は約2.25mg/kgである。ある実施態様において、該ActRIIシグナル伝達インヒビターの初期用量は、0.1mg/kg〜2.25mg/kgである。ある実施態様において、該ActRIIシグナル伝達インヒビターの初期用量は、0.1mg/kg〜1mg/kgである。ある実施態様において、該ActRIIシグナル伝達インヒビターの初期用量は、0.3mg/kg〜1.25mg/kgである。ある実施態様において、該ActRIIシグナル伝達インヒビターの初期用量は、0.5mg/kg〜1.5mg/kgである。ある実施態様において、該ActRIIシグナル伝達インヒビターの初期用量は、0.1mg/kg〜2.0mg/kgである。ある実施態様において、該ActRIIシグナル伝達インヒビターの初期用量は、0.75mg/kg〜1.0mg/kg、1.0mg/kg〜1.25mg/kg、1.25mg/kg〜1.5mg/kg、1.5mg/kg〜1.75mg/kg、又は1.75mg/kg〜2.0mg/kgである。ある実施態様において、該ActRIIシグナル伝達インヒビターの初期用量は、(i)28日に1回;又は(ii)42日に1回投与される。ある実施態様において、該ActRIIシグナル伝達インヒビターの初期用量は、3週間に1回投与される。
【０１３７】
ある実施態様において、該用量は、調整用量である。ある実施態様において、該ActRIIシグナル伝達インヒビターの調整用量は、約0.1mg/kg、約0.3mg/kg、約0.5mg/kg、0.75mg/kg、約1.0mg/kg、約1.25mg/kg、約1.5mg/kg、約1.75mg/kg、約2.0mg/kg、又は約2.25mg/kgである。ある実施態様において、該ActRIIシグナル伝達インヒビターの調整用量は、0.1mg/kg〜2.25mg/kgである。ある実施態様において、該ActRIIシグナル伝達インヒビターの調整用量は、0.1mg/kg〜1mg/kgである。ある実施態様において、該ActRIIシグナル伝達インヒビターの調整用量は、0.3mg/kg〜1.25mg/kgである。ある実施態様において、該ActRIIシグナル伝達インヒビターの調整用量は、0.5mg/kg〜1.5mg/kgである。ある実施態様において、該ActRIIシグナル伝達インヒビターの調整用量は、0.1mg/kg〜2.0mg/kgである。ある実施態様において、該ActRIIシグナル伝達インヒビターの調整用量は、0.75mg/kg〜1.0mg/kg、1.0mg/kg〜1.25mg/kg、1.25mg/kg〜1.5mg/kg、1.5mg/kg〜1.75mg/kg、又は1.75mg/kg〜2.0mg/kgである。ある実施態様において、該ActRIIシグナル伝達インヒビターの調整用量は、(i)28日に1回;又は(ii)42日に1回投与される。ある実施態様において、該ActRIIシグナル伝達インヒビターの調整用量は、3週間に1回投与される。
【０１３８】
ある実施態様において、該ActRIIシグナル伝達インヒビターの調整用量は、初期用量よりも多い。ある実施態様において、該ActRIIシグナル伝達インヒビターの調整用量は、該ActRIIシグナル伝達インヒビターの初期用量よりも約2.5mg、約5mg、約10mg、約15mg、約20mg、もしくは約35mg多いか、又は該ActRIIシグナル伝達インヒビターの初期用量よりも約0.05mg/kg、約0.1mg/kg、約0.15mg/kg、約0.25mg/kg、約0.3mg/kg、約0.35mg/kg、約0.4mg/kg、もしくは約0.5mg/kg多い。ある実施態様において、該ActRIIシグナル伝達インヒビターの調整用量は、該ActRIIシグナル伝達インヒビターの初期用量よりも高い頻度で投与される。ある実施態様において、該ActRIIシグナル伝達インヒビターの調整用量は、5、10、15、20、25、28、30、35、又は40日毎に投与される。ある実施態様において、該ActRIIシグナル伝達インヒビターの調整用量は、1又は2週間毎に投与される。
【０１３９】
ある実施態様において、該ActRIIシグナル伝達インヒビターの調整用量は、初期用量よりも少ない。ある実施態様において、該ActRIIシグナル伝達インヒビターの調整用量は、該ActRIIシグナル伝達インヒビターの初期用量よりも約2.5mg、約5mg、約10mg、約15mg、約20mg、もしくは約35mg少ないか、又は該ActRIIシグナル伝達インヒビターの初期用量よりも約0.05mg/kg、約0.1mg/kg、約0.15mg/kg、約0.25mg/kg、約0.3mg/kg、約0.35mg/kg、約0.4mg/kg、もしくは約0.5mg/kg少ない。ある実施態様において、該ActRIIシグナル伝達インヒビターの調整用量は、該ActRIIシグナル伝達インヒビターの初期用量よりも低い頻度で投与される。ある実施態様において、該ActRIIシグナル伝達インヒビターの調整用量は、30、35、40、42、50、60、70、80、又は90日毎に投与される。ある実施態様において、該ActRIIシグナル伝達インヒビターの調整用量は、4、5、6、7、又は8週間毎に投与される。
【０１４０】
ある実施態様において、該ActRIIシグナル伝達インヒビターの用量は、注射によって投与される。ある実施態様において、該ActRIIシグナル伝達インヒビターの用量は、28日に1回又は42日に1回投与される。ある実施態様において、該ActRIIシグナル伝達インヒビターの用量は、21日に1回投与される。ある実施態様において、該ActRIIシグナル伝達インヒビターは、配列番号7である。
【０１４１】
ある実施態様において、該ActRIIシグナル伝達インヒビターの用量は、注射によって投与される。ある実施態様において、該ActRIIシグナル伝達インヒビターの用量は、皮下投与される。ある実施態様において、該ActRIIシグナル伝達インヒビターの用量は、3週間に1回投与される。ある実施態様において、該ActRIIシグナル伝達インヒビターは、配列番号25である。
【０１４２】
ある実施態様において、本明細書に提供される方法に従って対象に投与されるActRIIシグナル伝達インヒビターの用量は、該対象における環状鉄芽球である赤芽球のパーセンテージを、該対象に該ActRIIシグナル伝達インヒビターの初期用量を投与する前の期間の該対象における環状鉄芽球である赤芽球のパーセンテージと比較して、少なくとも5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、又は少なくとも100％減少させるのに十分である。ある実施態様において、本明細書に提供される方法に従って対象に投与されるActRIIシグナル伝達インヒビターの用量は、該対象における環状鉄芽球である赤芽球のパーセンテージを、該対象に該ActRIIシグナル伝達インヒビターの初期用量を投与する前の期間の該対象における環状鉄芽球である赤芽球のパーセンテージと比較して、最大でも5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、又は最大でも100％減少させるのに十分である。ある実施態様において、該対象に該ActRIIシグナル伝達インヒビターを投与する前の期間は、1日、2日、3日、4日、5日、6日、1週間、2週間、3週間、4週間、5週間、6週間、7週間、8週間、3カ月、4カ月、5カ月、又は6カ月である。ある実施態様において、本明細書に提供される方法に従って対象に投与されるActRIIシグナル伝達インヒビターの用量は、該対象における環状鉄芽球である赤芽球のパーセンテージを、該ActRIIシグナル伝達インヒビターの投与後、少なくとも3、4、5、6、12、18、24、又は48カ月間減少させるのに十分である。ある実施態様において、本明細書に提供される方法に従って対象に投与されるActRIIシグナル伝達インヒビターの用量は、該対象における環状鉄芽球である赤芽球のパーセンテージを、該ActRIIシグナル伝達インヒビターの投与後、無制限に減少させるのに十分である。ある実施態様において、該用量は、0.1mg/kg〜2.0mg/kgである。ある実施態様において、該用量は、0.75mg/kg〜2.0mg/kgである。ある実施態様において、該対象における環状鉄芽球である赤芽球のパーセンテージは、第7.10節に記載のアッセイに従って決定される。ある実施態様において、本明細書に提供される方法に従って対象に投与されるActRIIシグナル伝達インヒビターの用量は、該対象における環状鉄芽球のレベルを、該対象に該ActRIIシグナル伝達インヒビターの初期用量を投与する前の期間の該対象における環状鉄芽球のレベルと比較して、少なくとも5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、又は少なくとも100％減少させるのに十分である。ある実施態様において、本明細書に提供される方法に従って対象に投与されるActRIIシグナル伝達インヒビターの用量は、該対象における環状鉄芽球のレベルを、該対象に該ActRIIシグナル伝達インヒビターの初期用量を投与する前の期間の該対象における環状鉄芽球のレベルと比較して、最大でも5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、又は最大でも100％減少させるのに十分である。ある実施態様において、該対象に該ActRIIシグナル伝達インヒビターの初期用量を投与す���前の期間は、1日、2日、3日、4日、5日、6日、1週間、2週間、3週間、4週間、5週間、6週間、7週間、8週間、3カ月、4カ月、5カ月、又は6カ月である。ある実施態様において、本明細書に提供される方法に従って対象に投与されるActRIIシグナル伝達インヒビターの用量は、該対象における環状鉄芽球のレベルを、該ActRIIシグナル伝達インヒビターの投与後、少なくとも3、4、5、6、12、18、24、又は48カ月間減少させるのに十分である。ある実施態様において、本明細書に提供される方法に従って対象に投与されるActRIIシグナル伝達インヒビターの用量は、該対象における環状鉄芽球のレベルを、該ActRIIシグナル伝達インヒビターの投与後、無制限に減少させるのに十分である。ある実施態様において、該用量は、0.1mg/kg〜2.0mg/kgである。ある実施態様において、該用量は、0.75mg/kg〜2.0mg/kgである。ある実施態様において、該対象における環状鉄芽球のレベルは、第7.10節に記載のアッセイに従って決定される。
【０１４３】
ある実施態様において、本明細書に提供される方法に従って対象に投与されるActRIIシグナル伝達インヒビターの用量は、該対象におけるヘモグロビンのレベルを、該対象に該ActRIIシグナル伝達インヒビターの初期用量を投与する前の期間の該対象におけるヘモグロビンのレベルと比較して、少なくとも5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、100％、150％、200％、300％、400％、又は少なくとも500％増大させるのに十分である。ある実施態様において、本明細書に提供される方法に従って対象に投与されるActRIIシグナル伝達インヒビターの用量は、該対象におけるヘモグロビンのレベルを、該対象に該ActRIIシグナル伝達インヒビターの初期用量を投与する前の期間の該対象におけるヘモグロビンのレベルと比較して、最大でも5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、100％、150％、200％、300％、400％、又は最大でも500％増大させるのに十分である。ある実施態様において、本明細書に提供される方法に従って対象に投与されるActRIIシグナル伝達インヒビターの用量は、該対象におけるヘモグロビンのレベルを、該対象に該ActRIIシグナル伝達インヒビターの初期用量を投与する前の期間の該対象におけるヘモグロビンのレベルと比較して、少なくとも5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、又は少なくとも60％増大させるのに十分である。ある実施態様において、本明細書に提供される方法に従って対象に投与されるActRIIシグナル伝達インヒビターの用量は、該対象におけるヘモグロビンのレベルを、該対象に該ActRIIシグナル伝達インヒビターの初期用量を投与する前の期間の該対象におけるヘモグロビンのレベルと比較して、最大でも5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、又は最大でも60％増大させるのに十分である。ある実施態様において、本明細書に提供される方法に従って対象に投与されるActRIIシグナル伝達インヒビターの用量は、ヘモグロビンのレベルを、該対象に該ActRIIシグナル伝達インヒビターの初期用量を投与する前の期間の該対象におけるヘモグロビンのレベルと比較して、少なくとも0.5g/dL、1.0g/dL、1.1g/dL、1.3g/dL、1.5g/dL、1.8 gg/dL、2.0g/dL、2.2g/dL、2.4g/dL、2.6g/dL、2.8g/dL、3.0g/dL、3.2g/dL、3.4g/dL、3.6g/dL、3.8g/dL、4.0g/dL、4.2g/dL、4.4g/dL、又は少なくとも4.6g/dL増大させるのに十分である。ある実施態様において、本明細書に提供される方法に従って対象に投与されるActRIIシグナル伝達インヒビターの用量は、ヘモグロビンのレベルを、該対象に該ActRIIシグナル伝達インヒビターの初期用量を投与する前の期間の該対象におけるヘモグロビンのレベルと比較して、最大でも0.5g/dL、1.0g/dL、1.1g/dL、1.3g/dL、1.5g/dL、1.8 gg/dL、2.0g/dL、2.2g/dL、2.4g/dL、2.6g/dL、2.8g/dL、3.0g/dL、3.2g/dL、3.4g/dL、3.6g/dL、3.8g/dL、4.0g/dL、4.2g/dL、4.4g/dL、又は最大でも4.6g/dL増大させるのに十分である。ある実施態様において、該対象に該ActRIIシグナル伝達インヒビターの初期用量を投与する前の期間は、1日、2日、3日、4日、5日、6日、1週間、2週間、3週間、4週間、5週間、6週間、7週間、8週間、3カ月、4カ月、5カ月、又は6カ月である。ある実施態様において、本明細書に提供される���法に従って対象に投与されるActRIIシグナル伝達インヒビターの用量は、該対象におけるヘモグロビンのレベルを、該ActRIIシグナル伝達インヒビターの投与後、少なくとも3、4、5、6、12、18、24、又は48カ月間増大させるのに十分である。ある実施態様において、本明細書に提供される方法に従って対象に投与されるActRIIシグナル伝達インヒビターの用量は、該対象におけるヘモグロビンのレベルを、該ActRIIシグナル伝達インヒビターの投与後、無制限に増大させるのに十分である。ある実施態様において、該用量は、0.1mg/kg〜2.0mg/kgである。ある実施態様において、該用量は、0.75mg/kg〜2.0mg/kgである。
【０１４４】
ある実施態様において、本明細書に提供される方法に従って対象に投与されるActRIIシグナル伝達インヒビターの用量は、該対象における網状赤血球のレベルを、該対象に該ActRIIシグナル伝達インヒビターの初期用量を投与する前の期間の該対象における網状赤血球のレベルと比較して、少なくとも5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、又は100％増大させるのに十分である。ある実施態様において、本明細書に提供される方法に従って対象に投与されるActRIIシグナル伝達インヒビターの用量は、該対象における網状赤血球のレベルを、該対象に該ActRIIシグナル伝達インヒビターの初期用量を投与する前の期間の該対象における網状赤血球のレベルと比較して、最大でも5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、又は最大でも100％、150％、200％、300％、400％、又は最大でも500％増大させるのに十分である。ある実施態様において、該対象に該ActRIIシグナル伝達インヒビターの初期用量を投与する前の期間は、1日、2日、3日、4日、5日、6日、1週間、2週間、3週間、4週間、5週間、6週間、7週間、8週間、3カ月、4カ月、5カ月、又は6カ月である。ある実施態様において、本明細書に提供される方法に従って対象に投与されるActRIIシグナル伝達インヒビターの用量は、該対象における網状赤血球のレベルを、該ActRIIシグナル伝達インヒビターの投与後、少なくとも3、4、5、6、12、18、24、又は48カ月間増大させるのに十分である。ある実施態様において、本明細書に提供される方法に従って対象に投与されるActRIIシグナル伝達インヒビターの用量は、該対象における網状赤血球のレベルを、該ActRIIシグナル伝達インヒビターの投与後、無制限に増大させるのに十分である。ある実施態様において、該用量は、0.1mg/kg〜2.0mg/kgである。ある実施態様において、該用量は、0.75mg/kg〜2.0mg/kgである。
【０１４５】
ある実施態様において、本明細書に提供される方法に従って対象に投与されるActRIIシグナル伝達インヒビターの用量は、該対象における赤血球輸血依存を、該対象に該ActRIIシグナル伝達インヒビターの初期用量を投与する前の期間の赤血球輸血依存と比較して減少させるのに十分である。ある実施態様において、本明細書に提供される方法に従って対象に投与されるActRIIシグナル伝達インヒビターの用量は、該対象における赤血球輸血の頻度を、該対象に該ActRIIシグナル伝達インヒビターの初期用量を投与する前の期間の該対象における赤血球輸血の頻度と比較して減少させるのに十分である。ある実施態様において、本明細書に提供される方法に従って治療される対象に投与されるActRIIシグナル伝達インヒビターの用量は、赤血球輸血を、少なくとも30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、又は少なくとも100％低下させるのに十分である。ある実施態様において、本明細書に提供される方法に従って治療される対象に投与されるActRIIシグナル伝達インヒビターの用量は、赤血球輸血を、最大でも30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、又は最大でも100％低下させるのに十分である。ある実施態様において、本明細書に提供される方法に従って治療される対象に投与されるActRIIシグナル伝達インヒビターの用量は、該対象に輸血される赤血球の単位を、該対象に該ActRIIシグナル伝達インヒビターの初期用量を投与する前の期間の該対象に輸血される赤血球の単位と比較して、少なくとも4、5、6、7、8、9、11、12、又は13単位低下させるのに十分である。ある実施態様において、該対象に該ActRIIシグナル伝達インヒビターの初期用量を投与する前の期間は、1日、2日、3日、4日、5日、6日、1週間、2週間、3週間、4週間、5週間、6週間、7週間、8週間、3カ月、4カ月、5カ月、又は6カ月である。ある実施態様において、本明細書に提供される方法に従って治療される対象に投与されるActRIIシグナル伝達インヒビターの用量は、赤血球輸血の頻度を、少なくとも30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、又は100％低下させるのに十分である。ある実施態様において、本明細書に提供される方法に従って治療される対象に投与されるActRIIシグナル伝達インヒビターの用量は、赤血球輸血の頻度を、最大でも30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、又は100％低下させるのに十分である。ある実施態様において、本明細書に提供される方法に従って対象に投与されるActRIIシグナル伝達インヒビターの用量は、該対象における赤血球輸血の必要性を、該ActRIIシグナル伝達インヒビターの投与後、少なくとも3、4、5、6、12、18、24、又は48カ月間消失させるのに十分である。ある実施態様において、本明細書に提供される方法に従って対象に投与されるActRIIシグナル伝達インヒビターの用量は、該対象における赤血球輸血の必要性を、該ActRIIシグナル伝達インヒビターの投与後、無制限に消失させるのに十分である。ある実施態様において、該用量は、0.1mg/kg〜2.0mg/kgである。ある実施態様において、該用量は、0.75mg/kg〜2.0mg/kgである。ある実施態様において、1 RBC単位は、約150mL、200mL、250mL、300mL、350mL、100〜200mL、150〜250mL、200〜300mL、又は250〜350mLのRBCを指す。
【０１４６】
ある実施態様において、本明細書に提供される方法に従って対象に投与されるActRIIシグナル伝達インヒビターの用量は、該対象における輸血負荷を、該対象に該ActRIIシグナル伝達インヒビターの初期用量を投与する前の期間の該対象における輸血負荷と比較して、少なくとも5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、又は少なくとも100％減少させるのに十分である。ある実施態様において、本明細書に提供される方法に従って対象に投与されるActRIIシグナル伝達インヒビターの用量は、該対象における輸血負荷を、該対象に該ActRIIシグナル伝達インヒビターの初期用量を投与する前の期間の該対象における輸血負荷と比較して、最大でも5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、又は最大でも100％減少させるのに十分である。ある実施態様において、本明細書に提供される方法に従って対象に投与されるActRIIシグナル伝達インヒビターの用量は、該対象における輸血負荷を、該対象に該ActRIIシグナル伝達インヒビターの初期用量を投与する前の期間の該対象における輸血負荷と比較して、少なくとも33％減少させるのに十分である。ある実施態様において、本明細書に提供される方法に従って対象に投与されるActRIIシグナル伝達インヒビターの用量は、該対象における輸血負荷を、該対象に該ActRIIシグナル伝達インヒビターの初期用量を投与する前の期間の該対象における輸血負荷と比較して、少なくとも50％減少させるのに十分である。ある実施態様において、該対象に該ActRIIシグナル伝達インヒビターの初期用量を投与する前の期間は、1日、2日、3日、4日、5日、6日、1週間、2週間、3週間、4週間、5週間、6週間、7週間、8週間、3カ月、4カ月、5カ月、又は6カ月である。ある実施態様において、本明細書に提供される方法に従って対象に投与されるActRIIシグナル伝達インヒビターの用量は、該対象における輸血負荷を、該ActRIIシグナル伝達インヒビターの投与後、少なくとも3、4、5、6、12、18、24、又は48カ月間減少させるのに十分である。ある実施態様において、本明細書に提供される方法に従って対象に投与されるActRIIシグナル伝達インヒビターの用量は、該対象における輸血負荷を、該ActRIIシグナル伝達インヒビターの投与後、無制限に減少させるのに十分である。ある実施態様において、該用量は、0.1mg/kg〜2.0mg/kgである。ある実施態様において、該用量は、0.75mg/kg〜2.0mg/kgである。
【０１４７】
ある実施態様において、本明細書に提供される方法に従って対象に投与されるActRIIシグナル伝達インヒビターの用量は、該対象における鉄キレート療法(例えば、用量又は頻度)を、該対象に該ActRIIシグナル伝達インヒビターの初期用量を投与する前の期間の該対象における鉄キレート療法(例えば、用量又は頻度)と比較して、少なくとも5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、又は少なくとも100％減少させるのに十分である。ある実施態様において、本明細書に提供される方法に従って対象に投与されるActRIIシグナル伝達インヒビターの用量は、該対象における鉄キレート療法(例えば、用量又は頻度)を、該対象に該ActRIIシグナル伝達インヒビターの初期用量を投与する前の期間の該対象における鉄キレート療法(例えば、用量又は頻度)と比較して、最大でも5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、又は最大でも100％減少させるのに十分である。ある実施態様において、該対象に該ActRIIシグナル伝達インヒビターの初期用量を投与する前の期間は、1日、2日、3日、4日、5日、6日、1週間、2週間、3週間、4週間、5週間、6週間、7週間、8週間、3カ月、4カ月、5カ月、又は6カ月である。ある実施態様において、本明細書に提供される方法に従って対象に投与されるActRIIシグナル伝達インヒビターの用量は、該対象における鉄キレート療法(例えば、用量又は頻度)を、該ActRIIシグナル伝達インヒビターの投与後、少なくとも3、4、5、6、12、18、24、又は48カ月間減少させるのに十分である。ある実施態様において、本明細書に提供される方法に従って対象に投与されるActRIIシグナル伝達インヒビターの用量は、該対象における鉄キレート療法(例えば、用量又は頻度)を、該ActRIIシグナル伝達インヒビターの投与後、無制限に減少させるのに十分である。ある実施態様において、該用量は、0.1mg/kg〜2.0mg/kgである。ある実施態様において、該用量は、0.75mg/kg〜2.0mg/kgである。
【０１４８】
ある実施態様において、本明細書に提供される方法に従って対象に投与されるActRIIシグナル伝達インヒビターの用量は、該対象における血清フェリチンレベルを、該対象に該ActRIIシグナル伝達インヒビターの初期用量を投与する前の期間の該対象における血清フェリチンレベルと比較して、少なくとも5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、又は少なくとも50％減少させるのに十分である。ある実施態様において、本明細書に提供される方法に従って対象に投与されるActRIIシグナル伝達インヒビターの用量は、該対象における血清フェリチンレベルを、該対象に該ActRIIシグナル伝達インヒビターの初期用量を投与する前の期間の該対象における血清フェリチンレベルと比較して、最大でも5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50減少させるのに十分である。ある実施態様において、該対象に該ActRIIシグナル伝達インヒビターの初期用量を投与する前の期間は、1日、2日、3日、4日、5日、6日、1週間、2週間、3週間、4週間、5週間、6週間、7週間、8週間、3カ月、4カ月、5カ月、又は6カ月である。ある実施態様において、本明細書に提供される方法に従って対象に投与されるActRIIシグナル伝達インヒビターの用量は、該対象における血清フェリチンレベルを、該ActRIIシグナル伝達インヒビターの投与後、少なくとも3、4、5、6、12、18、24、又は48カ月間減少させるのに十分である。ある実施態様において、本明細書に提供される方法に従って対象に投与されるActRIIシグナル伝達インヒビターの用量は、該対象における血清フェリチンレベルを、該ActRIIシグナル伝達インヒビターの投与後、無制限に減少させるのに十分である。ある実施態様において、該用量は、0.1mg/kg〜2.0mg/kgである。ある実施態様において、該用量は、0.75mg/kg〜2.0mg/kgである。
【０１４９】
ある実施態様において、本明細書に提供される方法に従って対象に投与されるActRIIシグナル伝達インヒビターの用量は、該対象に該ActRIIシグナル伝達インヒビターの初期用量を投与する前の期間の該対象における赤血球の血液学的改善と比較して、少なくとも1.5g/dL、1.8g/dL、2.0g/dL、2.2g/dL、2.4g/dL、2.6g/dL、2.8g/dL、3.0g/dL、3.2g/dL、3.4g/dL、3.6g/dL、3.8g/dL、又は少なくとも4.0g/dLの該対象における赤血球の血液学的改善をもたらすのに十分である。ある実施態様において、該対象に該ActRIIシグナル伝達インヒビターの初期用量を投与する前の期間は、1日、2日、3日、4日、5日、6日、1週間、2週間、3週間、4週間、5週間、6週間、7週間、8週間、3カ月、4カ月、5カ月、又は6カ月である。ある実施態様において、本明細書に提供される方法に従って対象に投与されるActRIIシグナル伝達インヒビターの用量は、該対象における赤血球の血液学的改善を、該ActRIIシグナル伝達インヒビターの投与後、少なくとも3、4、5、6、12、18、24、又は48カ月間もたらすのに十分である。ある実施態様において、本明細書に提供される方法に従って対象に投与されるActRIIシグナル伝達インヒビターの用量は、該対象における赤血球の血液学的改善を、該ActRIIシグナル伝達インヒビターの投与後、無制限にもたらすのに十分である。ある実施態様において、低輸血負荷患者の赤血球の血液学的改善は、少なくとも8週間の少なくとも1.5g/dLの該患者におけるヘモグロビン濃度の増加である。ある実施態様において、高輸血負荷患者の赤血球の血液学的改善は、8週間にわたる少なくとも4単位のRBC輸血の低下である。ある実施態様において、該用量は、0.1mg/kg〜2.0mg/kgである。ある実施態様において、該用量は、0.75mg/kg〜2.0mg/kgである。
【０１５０】
ある実施態様において、本明細書に提供される方法に従って対象に投与されるActRIIシグナル伝達インヒビターの用量は、該対象における好中球のレベルを、該対象に該ActRIIシグナル伝達インヒビターの初期用量を投与する前の期間の該対象における好中球のレベルと比較して、少なくとも5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、100％、150％、200％、300％、400％、又は少なくとも500％増大させるのに十分である。ある実施態様において、本明細書に提供される方法に従って対象に投与されるActRIIシグナル伝達インヒビターの用量は、該対象における好中球のレベルを、該対象に該ActRIIシグナル伝達インヒビターの初期用量を投与する前の期間の該対象における好中球のレベルと比較して、最大でも5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、100％、150％、200％、300％、400％、又は最大でも500％増大させるのに十分である。ある実施態様において、本明細書に提供される方法に従って対象に投与されるActRIIシグナル伝達インヒビターの用量は、該好中球のレベルを、該ActRIIシグナル伝達インヒビターの投与前の期間の該対象における好中球のレベルと比較して、少なくとも1リットル当たり0.1×109個、1リットル当たり0.5×109個、1リットル当たり1.0×109個、1リットル当たり5×109個、1リットル当たり1.0×1010個、1リットル当たり5×1010個、又は1リットル当たり1.0×1011個増大させるのに十分である。ある実施態様において、該対象に該ActRIIシグナル伝達インヒビターの初期用量を投与する前の期間は、1日、2日、3日、4日、5日、6日、1週間、2週間、3週間、4週間、5週間、6週間、7週間、8週間、3カ月、4カ月、5カ月、又は6カ月である。ある実施態様において、本明細書に提供される方法に従って対象に投与されるActRIIシグナル伝達インヒビターの用量は、該対象における好中球のレベルを、該ActRIIシグナル伝達インヒビターの投与後、少なくとも3、4、5、6、12、18、24、又は48カ月間増大させるのに十分である。ある実施態様において、本明細書に提供される方法に従って対象に投与されるActRIIシグナル伝達インヒビターの用量は、該対象における好中球のレベルを、該ActRIIシグナル伝達インヒビターの投与後、無制限に増大させるのに十分である。ある実施態様において、該用量は、0.1mg/kg〜2.0mg/kgである。ある実施態様において、該用量は、0.75mg/kg〜2.0mg/kgである。
【０１５１】
ある実施態様において、本明細書に提供される方法に従って対象に投与されるActRIIシグナル伝達インヒビターの用量は、該対象における血小板のレベルを、該対象に該ActRIIシグナル伝達インヒビターの初期用量を投与する前の期間の該対象における血小板のレベルと比較して、少なくとも5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、100％、150％、200％、300％、400％、又は最大でも500％増大させるのに十分である。ある実施態様において、本明細書に提供される方法に従って対象に投与されるActRIIシグナル伝達インヒビターの用量は、該対象における血小板のレベルを、該対象に該ActRIIシグナル伝達インヒビターの初期用量を投与する前の期間の該対象における血小板のレベルと比較して、最大でも5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、100％、150％、200％、300％、400％、又は最大でも500％増大させるのに十分である。ある実施態様において、本明細書に提供される方法に従って対象に投与されるActRIIシグナル伝達インヒビターの用量は、血小板のレベルを、該対象に該ActRIIシグナル伝達インヒビターの初期用量を投与する前の期間の該対象における血小板のレベルと比較して、少なくとも1リットル当たり1×1010個、1リットル当たり3×1010個、1リットル当たり5×1010個、1リットル当たり1×1011個、1リットル当たり5×1011個、又は1リットル当たり少なくとも1×1012個増大させるのに十分である。ある実施態様において、該対象に該ActRIIシグナル伝達インヒビターの初期用量を投与する前の期間は、1日、2日、3日、4日、5日、6日、1週間、2週間、3週間、4週間、5週間、6週間、7週間、8週間、3カ月、4カ月、5カ月、又は6カ月である。ある実施態様において、本明細書に提供される方法に従って対象に投与されるActRIIシグナル伝達インヒビターの用量は、該対象における血小板のレベルを、該ActRIIシグナル伝達インヒビターの投与後、少なくとも3、4、5、6、12、18、24、又は48カ月間増大させるのに十分である。ある実施態様において、本明細書に提供される方法に従って対象に投与されるActRIIシグナル伝達インヒビターの用量は、該対象における血小板のレベルを、該ActRIIシグナル伝達インヒビターの投与後、無制限に増大させるのに十分である。ある実施態様において、該用量は、0.1mg/kg〜2.0mg/kgである。ある実施態様において、該用量は、0.75mg/kg〜2.0mg/kgである。
【０１５２】
本明細書に提供される用量(例えば、ActRIIシグナル伝達インヒビターの用量又は第2の活性剤の用量)とともに使用されるとき、「約」という語は、言及された数の1、5、又は10％以内の任意の数を指す。
【０１５３】
ある実施態様において、本明細書に記載のActRIIシグナル伝達インヒビターは、皮下又は静脈内投与される。ある実施態様において、本明細書に記載のActRIIシグナル伝達インヒビターは、3週間に1回皮下投与される。ある実施態様において、ActRIIA-hFC(配列番号7;ソタテルセプトとも呼ばれる)は、本明細書に提供される方法に従って治療される対象に、3週間に1回皮下投与される。ある実施態様において、ActRIIB-hFC(配列番号25;ラスパテルセプトとも呼ばれる)は、本明細書に提供される方法に従って治療される対象に、3週間に1回皮下投与される。
【０１５４】
(7.8  患者集団)
本明細書に記載の方法に従って治療される対象は、任意の哺乳動物、例えば、齧歯類及び霊長類、好ましい実施態様においては、ヒトであることができる。ある実施態様において、該対象はヒトである。ある実施態様において、本明細書に記載の方法を用いて、任意の哺乳動物、例えば、齧歯類及び霊長類、好ましい実施態様においては、ヒト対象における貧血、RBC輸血を必要とする貧血、MDS、及び/又は非増殖性CMMLを治療することができる。ある実施態様において、本明細書に記載の方法を用いて、任意の哺乳動物、例えば、齧歯類及び霊長類、好ましい実施態様においては、ヒト対象における好中球のレベルを増大させることができる。ある実施態様において、本明細書に記載の方法を用いて、任意の哺乳動物、例えば、齧歯類及び霊長類、好ましい実施態様においては、ヒト対象における血小板のレベルを増大させることができる。
【０１５５】
ある実施態様において、本明細書に提供される方法に従って治療される対象における環状鉄芽球である赤芽球のパーセンテージは、少なくとも10％、11％、12％、13％、14％、15％、16％、17％、18％、19％、又は少なくとも20％である。ある実施態様において、本明細書に提供される方法に従って治療される対象における環状鉄芽球である赤芽球のパーセンテージは、少なくとも15％である。ある実施態様において、本明細書に提供される方法に従って治療される対象における環状鉄芽球である赤芽球のパーセンテージは、約15％である。ある実施態様において、本明細書に提供される方法に従って治療される対象における環状鉄芽球である赤芽球のパーセンテージは、約10％〜約20％である。ある実施態様において、本明細書に提供される方法に従って治療される対象における環状鉄芽球である赤芽球のパーセンテージは、約12％〜17％である。ある実施態様において、本明細書に提供される方法に従って治療される対象は、少なくとも1:10、少なくとも1:7、又は少なくとも1:5の環状鉄芽球と正常赤芽球との比を有する。
【０１５６】
ある実施態様において、本明細書に提供される方法に従って治療される対象は、血液関連障害を有する。ある実施態様において、該血液関連障害は、貧血である。ある実施態様において、該血液関連障害は、輸血を必要とする貧血である。ある実施態様において、該血液関連障害は、MDSである。ある実施態様において、該血液関連障害は、非増殖性CMMLである。
【０１５７】
ある実施態様において、本明細書に提供される方法に従って治療される対象は、貧血と診断されている。いくつかの態様において、貧血対象は、9.0g/dL以下のHbレベルを有する。いくつかの態様において、貧血対象は、本明細書に提供される方法による治療の前の84日で2単位以上のRBC輸血を必要とする。ある実施態様において、該対象は、高輸血負荷(HTB)を有する。HTB対象は、56日につき少なくとも4単位のRBC輸血を必要とする。ある実施態様において、該対象は、低輸血負荷(LTB)を有する。LTB対象は、56日につき4単位未満のRBC輸血を必要とする。ある実施態様において、該対象は、RBC輸血を必要とする対象である。ある実施態様において、本明細書に提供される方法に従って治療される対象は、例えば、X連鎖鉄芽球性貧血、常染色体劣性ピリドキシン不応性鉄芽球性貧血、X連鎖鉄芽球性貧血及び脊髄小脳性運動失調症、ミオパチー、乳酸アシドーシス及び鉄芽球性貧血、ミオパチー、乳酸アシドーシス及び鉄芽球性貧血、チアミン応答性巨赤芽球性貧血、ピアソン骨髄膵臓症侯群、環状鉄芽球を伴う不応性貧血、環状鉄芽球及び顕著な血小板増加を伴う不応性貧血、並びにエタノール誘導性及び薬物誘導性鉄芽球性貧血などの、鉄芽球性貧血を有する。ある実施態様において、本明細書に提供される方法に従って治療される対象は、貧血と診断されており、該対象における赤芽球の少なくとも10％、11％、12％、13％、14％、15％、16％、17％、18％、19％、又は少なくとも20％は、環状鉄芽球である。ある実施態様において、該対象における赤芽球の少なくとも15％は、環状鉄芽球である。
【０１５８】
ある実施態様において、本明細書に提供される方法に従って治療される対象は、IPSSによって定義されるMDSと診断されている。ある実施態様において、本明細書に提供される方法に従って治療される対象は、IPSSによって定義されるMDSと診断されており、該対象における赤芽球の少なくとも10％、11％、12％、13％、14％、15％、16％、17％、18％、19％、又は少なくとも20％は、環状鉄芽球である。ある実施態様において、該対象における赤芽球の少なくとも15％は、環状鉄芽球である。
【０１５９】
IPSSは、骨髄異形成症候群における予後判定の評価において利用される、国際予後判定スコアリングシステムを指す。例えば、Greenbergらの文献、Blood, 1997; 89(6):2079-2088、及びErratum in Blood, 1998; 91:1100を参照されたい。IPSSは、基準点数システムを利用して、骨髄異形成症候群患者の転帰を、低リスク(0点; 5.7年の生存中央値)、中間1(0.5〜1点; 3.5年の生存中央値);中間2リスク(1.5〜2.0点; 1.2年の生存中央値);又は高リスク(2.5〜3.5点; 0.4年の生存中央値)と特徴付けている。該点数システムは、(i)対象における骨髄芽球のパーセンテージ;(ii)対象の核型;並びに(iii)対象における血球減少(10g/dL未満のヘモグロビン濃度、1,800/μL未満の絶対好中球数、及び100,000/μL未満の血小板数と定義される)を評価する。
【０１６０】
ある実施態様において、本明細書に提供される方法に従って治療される対象は、IPSS-Rによって定義されるMDSと診断されている。ある実施態様において、本明細書に提供される方法に従って治療される対象は、IPSS-Rによって定義されるMDSと診断されており、該対象における赤芽球の少なくとも10％、11％、12％、13％、14％、15％、16％、17％、18％、19％、又は少なくとも20％は、環状鉄芽球である。ある実施態様において、該対象における赤芽球の少なくとも15％は、環状鉄芽球である。
【０１６１】
IPSS-Rは、骨髄異形成症候群における予後判定の評価において利用される、国際予後判定スコアリングシステム改定版を指す。例えば、Greenbergらの文献、Blood, 2012; 120(12):2454-2465、及びErratum in Blood, 1998; 91:1100を参照されたい。IPSS-Rは、基準点数システムを利用して、骨髄異形成症候群患者の転帰を、超低リスク(1.5点以下; 8.8年の生存中央値)、低リスク(1.5点超、3点以下; 5.3年の生存中央値); 中間リスク(3点超、4.5点以下; 3年の生存中央値); 高リスク(4.5点超、6点以下; 1.6年の生存中央値);又は超高リスク(6点超; 0.8年の生存中央値)と特徴付けている。該点数システムは、とりわけ、(i)対象における骨髄芽球のパーセンテージ;(ii)対象の核型;並びに(iii)対象における血球減少(10g/dL未満のヘモグロビン濃度、1,800/μL未満の絶対好中球数、及び100,000/μL未満の血小板数と定義される)を評価する。
【０１６２】
ある実施態様において、本明細書に提供される方法に従って治療される対象は、非増殖性CMMLと診断されている。ある実施態様において、本明細書に提供される方法に従って治療される対象は、非増殖性CMMLと診断されており、該対象における赤芽球の少なくとも10％、11％、12％、13％、14％、15％、16％、17％、18％、19％、又は少なくとも20％は、環状鉄芽球である。
【０１６３】
ある実施態様において、本明細書に提供される方法に従って治療される対象は、MDSを有する。ある実施態様において、該MDSは、IPSSによって定義される低リスクMDSである。ある実施態様において、該MDSは、IPSSによって定義される中間-1リスクMDSである。ある実施態様において、該MDSは、IPSSによって定義される中間-2リスクMDSである。ある実施態様において、該MDSは、IPSSによって定義される高リスクMDSである。ある実施態様において、該MDSは、IPSS-Rによって定義される超低リスクMDSである。ある実施態様において、該MDSは、IPSS-Rによって定義される低リスクMDSである。ある実施態様において、該MDSは、IPSS-Rによって定義される中間リスクMDSである。ある実施態様において、該MDSは、IPSS-Rによって定義される高リスクMDSである。ある実施態様において、該MDSは、IPSS-Rによって定義される超高リスクMDSである。ある実施態様において、本明細書に提供される方法に従って治療される対象は、(i)MDSを有し、かつ(ii)RARSを有する。ある実施態様において、本明細書に提供される方法に従って治療される対象は、(i)MDSを有し、かつ(ii)RCMD-RSを有する。ある実施態様において、本明細書に提供される方法に従って治療される対象は、(i)MDSを有し、(ii)RARSを有し、かつ(iii)RCMD-RSを有する。ある実施態様において、本明細書に提供される方法に従って治療される対象は、(i)MDSを有し、かつ(ii)該対象における赤芽球の少なくとも15％は環状鉄芽球である。ある実施態様において、本明細書に提供される方法に従って治療される対象は、(i)MDSを有し、(ii)RARSを有し、かつ(iii)該対象における赤芽球の少なくとも15％は環状鉄芽球である。ある実施態様において、本明細書に提供される方法に従って治療される対象は、(i)MDSを有し、(ii)RCMD-RSを有し、かつ(iii)該対象における赤芽球の少なくとも15％は環状鉄芽球である。ある実施態様において、本明細書に提供される方法に従って治療される対象は、(i)MDSを有し、(ii)RARSを有し、(iii)RCMD-RSを有し、かつ(iv)該対象における赤芽球の少なくとも15％は環状鉄芽球である。ある実施態様において、本明細書に提供される方法に従って治療される対象は、(i)MDSを有し、(ii)RARSを有し、かつ(iii)1以上の突然変異を有するSF3B1を発現する。ある実施態様において、本明細書に提供される方法に従って治療される対象は、(i)MDSを有し、(ii)RCMD-RSを有し、かつ(iii)1以上の突然変異を有するSF3B1を発現する。ある実施態様において、本明細書に提供される方法に従って治療される対象は、(i)MDSを有し、(ii)RARSを有し、(iii)RCMD-RSを有し、かつ(iv)1以上の突然変異を有するSF3B1を発現する。ある実施態様において、本明細書に提供される方法に従って治療される対象は、(i)MDSを有し、(ii)該対象における赤芽球の少なくとも15％は環状鉄芽球であり、かつ(iii)1以上の突然変異を有するSF3B1を発現する。ある実施態様において、本明細書に提供される方法に従って治療される対象は、(i)MDSを有し、(ii)RARSを有し、(iii)該対象における赤芽球の少なくとも15％は環状鉄芽球であり、かつ(iv)1以上の突然変異を有するSF3B1を発現する。ある実施態様において、本明細書に提供される方法に従って治療される対象は、(i)MDSを有し、(ii)RCMD-RSを有し、(iii)該対象における赤芽球の少なくとも15％は環状鉄芽球であり、かつ(iv)1以上の突然変異を有するSF3B1を発現する。��る実施態様において、本明細書に提供される方法に従って治療される対象は、(i)MDSを有し、(ii)RARSを有し、(iii)RCMD-RSを有し、(iv)該対象における赤芽球の少なくとも15％は環状鉄芽球であり、かつ(v)1以上の突然変異を有するSF3B1を発現する。
【０１６４】
ある実施態様において、本明細書に提供される方法に従って治療される対象は、非増殖性CMMLを有する。ある実施態様において、本明細書に提供される方法に従って治療される対象は、(i)非増殖性CMMLを有し、かつ(ii)RARSを有する。ある実施態様において、本明細書に提供される方法に従って治療される対象は、(i)非増殖性CMMLを有し、かつ(ii)RCMD-RSを有する。ある実施態様において、本明細書に提供される方法に従って治療される対象は、(i)非増殖性CMMLを有し、(ii)RARSを有し、かつ(iii)RCMD-RSを有する。ある実施態様において、本明細書に提供される方法に従って治療される対象は、(i)非増殖性CMMLを有し、かつ(ii)該対象における赤芽球の少なくとも15％は環状鉄芽球である。ある実施態様において、本明細書に提供される方法に従って治療される対象は、(i)非増殖性CMMLを有し、(ii)RARSを有し、かつ(iii)該対象における赤芽球の少なくとも15％は環状鉄芽球である。ある実施態様において、本明細書に提供される方法に従って治療される対象は、(i)非増殖性CMMLを有し、(ii)RCMD-RSを有し、かつ(iii)該対象における赤芽球の少なくとも15％は環状鉄芽球である。ある実施態様において、本明細書に提供される方法に従って治療される対象は、(i)非増殖性CMMLを有し、(ii)RARSを有し、(iii)RCMD-RSを有し、かつ(iv)該対象における赤芽球の少なくとも15％は環状鉄芽球である。ある実施態様において、本明細書に提供される方法に従って治療される対象は、(i)非増殖性CMMLを有し、かつ(ii)1以上の突然変異を有するSF3B1を発現する。ある実施態様において、本明細書に提供される方法に従って治療される対象は、(i)非増殖性CMMLを有し、(ii)RARSを有し、かつ(iii)1以上の突然変異を有するSF3B1を発現する。ある実施態様において、本明細書に提供される方法に従って治療される対象は、(i)非増殖性CMMLを有し、(ii)RCMD-RSを有し、かつ(iii)1以上の突然変異を有するSF3B1を発現する。ある実施態様において、本明細書に提供される方法に従って治療される対象は、(i)非増殖性CMMLを有し、(ii)RARSを有し、(iii)RCMD-RSを有し、かつ(iv)1以上の突然変異を有するSF3B1を発現する。ある実施態様において、本明細書に提供される方法に従って治療される対象は、(i)非増殖性CMMLを有し、(ii)該対象における赤芽球の少なくとも15％は環状鉄芽球であり、かつ(iii)1以上の突然変異を有するSF3B1を発現する。ある実施態様において、本明細書に提供される方法に従って治療される対象は、(i)非増殖性CMMLを有し、(ii)RARSを有し、(iii)該対象における赤芽球の少なくとも15％は環状鉄芽球であり、かつ(iv)1以上の突然変異を有するSF3B1を発現する。ある実施態様において、本明細書に提供される方法に従って治療される対象は、(i)非増殖性CMMLを有し、(ii)RCMD-RSを有し、(iii)該対象における赤芽球の少なくとも15％は環状鉄芽球であり、かつ(iv)1以上の突然変異を有するSF3B1を発現する。ある実施態様において、本明細書に提供される方法に従って治療される対象は、(i)非増殖性CMMLを有し、(ii)RARSを有し、(iii)RCMD-RSを有し、(iv)該対象における赤芽球の少なくとも15％は環状鉄芽球であり、かつ(v)1以上の突然変異を有するSF3B1を発現する。
【０１６５】
ある実施態様において、本明細書に提供される方法に従って治療される対象は、無効造血と関連する突然変異を有する遺伝子を発現する。ある実施態様において、本明細書に提供される方法に従って治療される対象は、1以上の突然変異を含む1以上のスプライシング因子遺伝子を発現する。具体的な実施態様において、本明細書に提供される方法に従って治療される対象は、1以上の突然変異を有するSF3B1を発現する。ある実施態様において、該1以上の突然変異は、非コード領域にある。ある実施態様において、SF3B1は、SB3B1をコードする遺伝子である。ある実施態様において、該1以上の突然変異は、コード領域にある。ある実施態様において、SF3B1は、SF3B1タンパク質である。ある実施態様において、SF3B1タンパク質における該1以上の突然変異は、E622D、R625C、H662Q、H662D、K66N、K666T、K666Q、K666E、A672D、K700E、I704Nからなる群から選択される。ある実施態様において、本明細書に提供される方法に従って治療される対象は、突然変異E622Dを有するSF3B1タンパク質を発現する。ある実施態様において、本明細書に提供される方法に従って治療される対象は、突然変異R625Cを有するSF3B1タンパク質を発現する。ある実施態様において、本明細書に提供される方法に従って治療される対象は、突然変異H662Qを有するSF3B1タンパク質を発現する。ある実施態様において、本明細書に提供される方法に従って治療される対象は、突然変異H662Dを有するSF3B1タンパク質を発現する。ある実施態様において、本明細書に提供される方法に従って治療される対象は、突然変異K66Nを有するSF3B1タンパク質を発現する。ある実施態様において、本明細書に提供される方法に従って治療される対象は、突然変異K666Tを有するSF3B1タンパク質を発現する。ある実施態様において、本明細書に提供される方法に従って治療される対象は、突然変異K666Qを有するSF3B1タンパク質を発現する。ある実施態様において、本明細書に提供される方法に従って治療される対象は、突然変異K666Eを有するSF3B1タンパク質を発現する。ある実施態様において、本明細書に提供される方法に従って治療される対象は、突然変異A672Dを有するSF3B1タンパク質を発現する。ある実施態様において、本明細書に提供される方法に従って治療される対象は、突然変異K700Eを有するSF3B1を発現する。ある実施態様において、本明細書に提供される方法に従って治療される対象は、突然変異I704Nを有するSF3B1タンパク質を発現する。具体的な実施態様において、本明細書に提供される方法に従って治療される対象は、1以上の突然変異を有するSRSF2を発現する。具体的な実施態様において、本明細書に提供される方法に従って治療される対象は、1以上の突然変異を有するDNMT3Aを発現する。具体的な実施態様において、本明細書に提供される方法に従って治療される対象は、1以上の突然変異を有するTET2を発現する。具体的な実施態様において、本明細書に提供される方法に従って治療される対象は、1以上の突然変異を有するSETBP1を発現する。
【０１６６】
ある実施態様において、本明細書に提供される方法に従って治療される対象は、血小板減少症を有する。ある実施態様において、本明細書に提供される方法に従って治療される対象は、1リットル当たり1×1011個未満の血小板を有する。ある実施態様において、本明細書に提供される方法に従って治療される対象は、好中球減少症を有する。ある実施態様において、本明細書に提供される方法に従って治療される対象は、1リットル当たり1×109個未満の絶対好中球数を有する。
【０１６７】
ある実施態様において、本明細書に提供される方法に従って治療される対象は、1μL当たり13,000個未満の白血球、1μL当たり12,000個未満の白血球、1μL当たり11,000個未満の白血球、1μL当たり10,000個未満の白血球、1μL当たり7,500個未満の白血球、又は1μL当たり500個未満の白血球を有する。
【０１６８】
ある実施態様において、本明細書に提供される方法に従って治療される対象におけるヘモグロビンレベルは、10g/dL、9g/dL、8g/dL、又は7g/dL未満である。ある実施態様において、本明細書に提供される方法に従って治療される対象におけるヘモグロビンレベルは、7g/dL〜7.5g/dL、7.5g/dL〜8g/dL、8g/dL〜8.5g/dL、8.5g/dL〜9.0g/dL、9.0g/dL〜9.5g/dL、又は9.5g/dL〜10.0g/dLである。
【０１６９】
ある実施態様において、本明細書に提供される方法に従って治療される対象は、低輸血負荷を有する。ある実施態様において、本明細書に提供される方法に従って治療される低輸血負荷を有する対象は、8週間につき、最大でも0、1、2、又は3単位の赤血球しか必要としない。ある実施態様において、本明細書に提供される方法に従って治療される対象は、高輸血負荷を有する。ある実施態様において、本明細書に提供される方法に従って治療される高輸血負荷を有する対象は、8週間につき、少なくとも4、5、6、7、8、9、10、11、12、又は13単位の赤血球を必要とする。
【０１７０】
ある実施態様において、本明細書に提供される方法に従って治療される対象は、1以上のESAに対して全く応答しないか、又は応答が消失しているか、又は応答する可能性が低い。
【０１７１】
ある実施態様において、本明細書に提供される方法に従って治療される対象は、1以上のESAによる前治療を受けたことがあるか、又は1以上のESAによる治療を現在受けている。ある実施態様において、本明細書に提供される方法に従って治療される対象は、低メチル化剤による前治療を受けたことがある。ある実施態様において、本明細書に提供される方法に従って治療される対象は、レナリドミドによる前治療を受けたことがある。ある実施態様において、本明細書に提供される方法に従って治療される対象は、アザシチジン、デシタビン、ESA、G-CSF、GM-CSG、又はレナリドミドによる治療を受けたことがない。ある実施態様において、本明細書に提供される方法に従って治療される対象は、1以上のESAによる治療に応答しない。ある実施態様において、本明細書に提供される方法に従って治療される対象は、1以上のESAによる治療に対して不応性である。ある実施態様において、本明細書に提供される方法に従って治療される対象は、1以上のESAによる治療に対して不応性になる。ある実施態様において、本明細書に提供される方法に従って治療される対象は、事前のESA治療に対して不応性である。ある実施態様において、事前のESA治療に対して不応性である対象は、単剤か又は(例えば、G-CSFとの)組合せかのいずれかとしての事前のESA含有レジメンに対する無応答又はもはや維持されない応答の記録を有しており; ESAレジメンは、(a)少なくとも8用量又は同等量に対して40,000IU/週を超える組換えヒトエリスロポエチン、又は(b)少なくとも4用量又は同等量に対して3週間に1回の500μgを超えるダルベポエチンαのいずれかでなければならない。ある実施態様において、本明細書に提供される方法に従って治療される対象は、事前のESA治療に不耐性である。ある実施態様において、事前のESA治療に不耐性である対象は、不耐性又は有害事象による、導入後の任意の時点での、単剤か又は(例えば、G-CSFとの)組合せかのいずれかとしての事前のESA含有レジメンの中止の記録を有している。ある実施態様において、本明細書に提供される方法に従って治療される対象は、ESAに不適格である。ある実施態様において、ESAに不適格である対象は、以前にESAで治療されていない対象の200U/Lを超える内在性の血清エリスロポエチンレベルに基づくと、ESAに対して応答する可能性が低い。
【０１７２】
ある実施態様において、本明細書に記載の方法に従って治療される対象は、任意の年齢であることができる。ある実施態様において、本明細書に記載の方法に従って治療される対象は、18歳未満である。具体的な実施態様において、本明細書に記載の方法に従って治療される対象は、13歳未満である。別の具体的な実施態様において、本明細書に記載の方法に従って治療される対象は、12歳未満、11歳未満、10歳未満、9歳未満、8歳未満、7歳未満、6歳未満、又は5歳未満である。別の具体的な実施態様において、本明細書に記載の方法に従って治療される対象は、1〜3歳、3〜5歳、5〜7歳、7〜9歳、9〜11歳、11〜13歳、13〜15歳、15〜20歳、20〜25歳、25〜30歳、又は30歳超である。別の具体的な実施態様において、本明細書に記載の方法に従って治療される対象は、30〜35歳、35〜40歳、40〜45歳、45〜50歳、50〜55歳、55〜60歳、又は60歳超である。別の具体的な実施態様において、本明細書に記載の方法に従って治療される対象は、60〜65歳、65〜70歳、70〜75歳、75〜80歳、又は80歳超である。
【０１７３】
ある実施態様において、本明細書に記載の方法に従って治療される対象は、MDSを有する。ある実施態様において、本明細書に記載の方法に従って治療される対象は、MDS及び無傷の第5番染色体q領域を有する。ある実施態様において、本明細書に提供される方法に従って治療される対象は、MDS、無傷の第5番染色体q領域を有し、実証されたレナリドミドによる治療の失敗を有しない。ある実施態様において、本明細書に提供される方法に従って治療される対象は、MDS、無傷の第5番染色体q領域、及び実証されたレナリドミドによる治療の失敗を有する。ある実施態様において、本明細書に記載の方法に従って治療される対象は、第5番染色体q領域の欠失を伴うMDSを有する。第5番染色体q領域の欠失を伴うMDSは、第5番染色体の長腕の欠失を含み、とりわけ、卵形大赤血球を伴う大赤血球性貧血、正常〜わずかに低い白血球数、正常〜高い血小板数、並びに骨髄及び血液中の5％未満の芽球を特徴とする。ある実施態様において、本明細書に提供される方法に従って治療される対象は、第5番染色体q領域の欠失を伴うMDSを有し、レナリドミドによる治療の失敗の記録を有しない。ある実施態様において、本明細書に提供される方法に従って治療される対象は、第5番染色体q領域の欠失を伴うMDS及びレナリドミドによる治療の失敗の記録を有する。ある実施態様において、レナリドミドによる治療の失敗は、レナリドミドに対する応答の消失、レナリドミドによる治療から4カ月後のレナリドミドに対する無応答、レナリドミドによる治療に対する不耐性、又はレナリドミドによる治療を不可能にする血球減少を含む。
【０１７４】
ある実施態様において、本明細書に提供される方法に従って治療される対象は、骨髄及び血液中に5％未満の芽球を有する。
【０１７５】
ある実施態様において、本明細書に提供される方法に従って治療される対象は、500mIU/mLを超えるEPO血清濃度を有する。ある実施態様において、本明細書に提供される方法に従って治療される対象は、200mIU/mLを超えるEPO血清濃度を有する。
【０１７６】
(7.9  ActRII受容体のシグナル伝達インヒビター)
本明細書に包含されるActRII受容体のインヒビターとしては、ActRIIAシグナル伝達インヒビター及びActRIIBシグナル伝達インヒビターが挙げられる(下記参照)。ある実施態様において、ActRII受容体シグナル伝達インヒビターは、ActRIIAに特異的である。他の実施態様において、ActRII受容体シグナル伝達インヒビターは、ActRIIBに特異的である。ある実施態様において、ActRII受容体シグナル伝達インヒビターは、ActRIIAを優先的に阻害する。他の実施態様において、ActRII受容体シグナル伝達インヒビターは、ActRIIBを優先的に阻害する。ある実施態様において、ActRII受容体シグナル伝達インヒビターは、ActRIIAとActRIIBの両方を阻害する。
【０１７７】
ある実施態様において、ActRII受容体のシグナル伝達インヒビターは、ActRIIのアクチビン結合ドメインを含むポリペプチドであることができる。理論によって束縛されるものではないが、そのようなアクチビン結合ドメインを含むポリペプチドは、アクチビンを捕捉し、それにより、アクチビンシグナル伝達を妨げる。これらのアクチビン結合ドメインを含むポリペプチドは、ActRII受容体の細胞外ドメインの全て又は一部(すなわち、ActRIIAの細胞外ドメインの全てもしくは一部又はActRIIBの細胞外ドメインの全てもしくは一部)を含み得る。具体的な実施態様において、ActRII受容体の細胞外ドメインは、可溶性である。
【０１７８】
ある実施態様において、アクチビン結合ドメインを含むポリペプチドは、抗体のFc部分に連結される(すなわち、ActRII受容体のアクチビン結合ドメインを含むポリペプチドと抗体のFc部分とを含むコンジュゲートが作製される)。理論によって束縛されるものではないが、抗体部分は、コンジュゲートに増大した安定性を付与する。ある実施態様において、アクチビン結合ドメインは、リンカー、例えば、ペプチドリンカーを介して、抗体のFc部分に連結される。
【０１７９】
本明細書に記載の組成物及び方法で使用されるActRII受容体のシグナル伝達インヒビターは、細胞外又は細胞内のどちらかで直接的又は間接的にActRIIA及び/又はActRIIBを阻害する分子を含む。いくつかの実施態様において、本明細書に記載の組成物及び方法で使用されるActRIIA及び/又はActRIIBのシグナル伝達インヒビターは、受容体それ自体との相互作用を介して、ActRIIA及び/又はActRIIBを阻害する。他の実施態様において、本明細書に記載の組成物及び方法で使用されるActRIIA及び/又はActRIIBのシグナル伝達インヒビターは、ActRIIA及び/又はActRIIBリガンド、例えば、アクチビンとの相互作用を介して、ActRIIA及び/又はActRIIBを阻害する。
【０１８０】
(7.9.1  ActRIIAのシグナル伝達インヒビター)
本明細書で使用されるように、「ActRIIA」という用語は、任意の種由来のアクチビン受容体IIa型(ActRIIA)タンパク質のファミリー及び突然変異生成又は他の修飾によってそのようなActRIIAタンパク質から得られた変異体を指す。本明細書中でのActRIIAに対する言及は、現在同定されている形態のいずれか1つに対する言及であると理解される。ActRIIAファミリーのメンバーは、一般に、システインに富む領域を含むリガンド結合細胞外ドメイン、膜貫通ドメイン、及び予想上のセリン/トレオニンキナーゼ活性を有する細胞質ドメインから構成される、膜貫通タンパク質である。
【０１８１】
本明細書に記載の組成物及び方法で使用されるActRIIAシグナル伝達インヒビターとしては、限定するものではないが、アクチビン結合可溶性ActRIIAポリペプチド;アクチビン(特に、βA又はβBとも呼ばれる、アクチビンA又はBサブユニット)に結合し、ActRIIA結合を破壊する抗体; ActRIIAに結合し、アクチビン結合を破壊する抗体;アクチビン又はActRIIA結合について選択された非抗体タンパク質(そのようなタンパク質並びにその設計及び選択方法については、例えば、その各々が引用により完全に本明細書中に組み込まれる、WO/2002/088171号、WO/2006/055689号、WO/2002/032925号、WO/2005/037989号、US 2003/0133939号、及びUS 2005/0238646号を参照);並びにFcドメインにコンジュゲートすることができる、アクチビン又はActRIIA結合について選択されたランダム化ペプチドが挙げられる。
【０１８２】
ある実施態様において、アクチビン又はActRIIA結合活性を有する2以上の異なるタンパク質(又は他の部分)、特に、それぞれI型(例えば、可溶性I型アクチビン受容体)及びII型(例えば、可溶性II型アクチビン受容体)結合部位を遮断するアクチビンバインダーを1つに連結させて、ActRIIAを阻害し、したがって、本明細書に記載の組成物及び方法で使用することができる、二機能性又は多機能性結合分子を作出することができる。ある実施態様において、ActRIIAを阻害するアクチビン-ActRIIAシグナル伝達軸アンタゴニストとしては、核酸アプタマー、小分子、並びに本明細書に記載の組成物及び方法で使用される他の薬剤が挙げられる。
【０１８３】
((a)ActRIIAポリペプチドを含むActRIIAシグナル伝達インヒビター)
「ActRIIAポリペプチド」という用語には、ActRIIAファミリーメンバーの任意の天然のポリペプチド並びに有用な活性を保持するその任意の変異体(突然変異体、断片、融合体、及びペプチド模倣形態を含む)を含むポリペプチドが含まれる。例えば、ActRIIAポリペプチドには、ActRIIAポリペプチドの配列と少なくとも約80％同一な、及び任意に、少なくとも85％、90％、95％、97％、98％、99％、又はそれを上回って同一な配列を有する任意の公知のActRIIAの配列に由来するポリペプチドが含まれる。例えば、ActRIIAポリペプチドは、ActRIIAタンパク質及び/又はアクチビンに結合し、それらの機能を阻害することができる。ActRIIBポリペプチドは、骨成長及び骨石灰化を促進するその能力について選択することができる。ActRIIAポリペプチドの例としては、ヒトActRIIA前駆ポリペプチド(配列番号1)並びに可溶性ヒトActRIIAポリペプチド(例えば、配列番号2、3、7、及び12)が挙げられる。そのアミノ酸配列が配列番号1に示されているActRIIA前駆ポリペプチドに関して、ヒトActRIIA前駆ポリペプチドのシグナルペプチドは、アミノ酸位置1〜20に位置し;細胞外ドメインは、アミノ酸位置21〜135に位置し、ヒトActRIIA前駆ポリペプチド(配列番号1)のN結合型グリコシル化部位は、配列番号1のアミノ酸位置43及び56に位置する。配列番号1のヒトActRIIB前駆ポリペプチドをコードする核酸配列は、配列番号4(GenbankエントリーNM_001616のヌクレオチド164〜1705)として開示されている。配列番号2の可溶性ヒトActRIIAポリペプチドをコードする核酸配列は、配列番号5として開示されている。該配列の説明については、表21を参照されたい。
【０１８４】
具体的な実施態様において、本明細書に記載の組成物及び方法で使用されるActRIIAポリペプチドは、可溶性ActRIIAポリペプチドである。ActRIIAタンパク質の細胞外ドメインは、アクチビンに結合することができ、かつ通常、可溶性であり、したがって、可溶性アクチビン結合ActRIIAポリペプチドと呼ぶことができる。したがって、本明細書で使用される場合、「可溶性ActRIIAポリペプチド」という用語は、通常、ActRIIAタンパク質の任意の天然の細胞外ドメインを含む、ActRIIAタンパク質の細胞外ドメインを含むポリペプチド並びにその任意の変異体(突然変異体、断片、及びペプチド模倣形態を含む)を指す。可溶性ActRIIAポリペプチドは、アクチビンに結合することができる;しかしながら、野生型ActRIIAタンパク質は、アクチビンへの結合に関してGDF8/11と比べて顕著な選択性を示さない。天然又は改変ActRIIAタンパク質を第2のアクチビン選択的結合剤とカップリングさせることにより、該タンパク質に、アクチビンに対する特異性の付加を与えることができる。可溶性アクチビン結合ActRIIAポリペプチドの例としては、配列番号2、3、7、12、及び13に示される可溶性ポリペプチドが挙げられる。可溶性アクチビン結合ActRIIAポリペプチドの他の例は、ActRIIAタンパク質の細胞外ドメインに加えて、シグナル配列、例えば、ミツバチメリチンリーダー配列(配列番号8)、組織プラスミノーゲン活性化因子(TPA)リーダー(配列番号9)、又は天然のActRIIAリーダー(配列番号10)を含む。配列番号13に示されるActRIIA-hFcポリペプチドでは、TPAリーダーが使用されている。
【０１８５】
ある実施態様において、本明細書に記載の組成物及び方法で使用されるActRIIAのシグナル伝達インヒビターは、抗体のFc部分に連結されたActRIIAのアクチビン結合ドメインを含むコンジュゲート/融合タンパク質を含む。ある実施態様において、該アクチビン結合ドメインは、リンカー、例えば、ペプチドリンカーを介して、抗体のFc部分に連結される。任意に、Fcドメインは、Asp-265、リジン322、及びAsn-434などの残基に1以上の突然変異を有する。ある場合には、これらの突然変異のうちの1つ又は複数(例えば、Asp-265突然変異)を有する突然変異体Fcドメインは、野生型Fcドメインと比べてFcγ受容体に結合する能力が低下している。他の場合には、これらの突然変異のうちの1つ又は複数(例えば、Asn-434突然変異)を有する突然変異体Fcドメインは、野生型Fcドメイン比べてMHCクラスI関連Fc受容体(FcRN)に結合する能力が増大している。Fcドメインに融合したActRIIAの可溶性細胞外ドメインを含む例示的な融合タンパク質は、配列番号6、7、12、及び13に示されている。
【０１８６】
具体的な実施態様において、本明細書に記載の組成物及び方法で使用されるActRIIAシグナル伝達インヒビターは、抗体のFc部分に連結されたActRIIAの細胞外ドメイン、又はその一部を含み、ここで、該ActRIIAシグナル伝達インヒビターは、配列番号6、7、12、及び13から選択されるアミノ酸配列と少なくとも75％同一であるアミノ酸配列を含む。別の具体的な実施態様において、本明細書に記載の組成物及び方法で使用されるActRIIAシグナル伝達インヒビターは、抗体のFc部分に連結されたActRIIAの細胞外ドメイン、又はその一部を含み、ここで、該ActRIIAシグナル伝達インヒビターは、配列番号6、7、12、及び13から選択されるアミノ酸配列と少なくとも80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、又は99％同一であるアミノ酸配列を含む。
【０１８７】
ある実施態様において、本明細書に記載の組成物及び方法で使用されるActRIIAのシグナル伝達インヒビターは、ActRIIAの細胞外ドメインの切断形態を含む。切断は、ActRIIAポリペプチドのカルボキシ末端及び/又はアミノ末端にあることができる。ある実施態様において、切断は、成熟したActRIIAポリペプチドの細胞外ドメインと比べて、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、又は25アミノ酸長いものであることができる。ある実施態様において、切断は、成熟したActRIIAポリペプチドの細胞外ドメインの1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、又は25個のN末端アミノ酸であることができる。ある実施態様において、切断は、成熟したActRIIAポリペプチドの細胞外ドメインの1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、又は25個のC末端アミノ酸であることができる。例えば、ActRIIAの切断形態としては、アミノ酸20〜119; 20〜128; 20〜129; 20〜130; 20〜131; 20〜132; 20〜133; 20〜134; 20〜131; 21〜131; 22〜131; 23〜131; 24〜131;及び25〜131を有するポリペプチドが挙げられ、ここで、該アミノ酸位置は、配列番号1におけるアミノ酸位置を指す。
【０１８８】
ある実施態様において、本明細書に記載の組成物及び方法で使用されるActRIIAのシグナル伝達インヒビターは、1以上のアミノ酸置換を有するActRIIAの細胞外ドメインを含む。ある実施態様において、本明細書に記載の組成物及び方法で使用されるActRIIAのシグナル伝達インヒビターは、アミノ酸置換も保有するActRIIA細胞外ドメインの切断形態を含む。
【０１８９】
具体的な実施態様において、本明細書に記載の組成物及び方法で使用されるActRIIAシグナル伝達インヒビターは、ヒトActRIIA受容体の細胞外ドメインとIgG1のFc部分の融合タンパク質である。別の具体的な実施態様において、本明細書に記載の組成物及び方法で使用されるActRIIAシグナル伝達インヒビターは、ヒトActRIIA受容体の切断された細胞外ドメインとIgG1のFc部分の融合タンパク質である。別の具体的な実施態様において、本明細書に記載の組成物及び方法で使用されるActRIIAシグナル伝達インヒビターは、ヒトActRIIA受容体の切断された細胞外ドメインとIgG1のFc部分の融合タンパク質であり、ここで、該ヒトActRIIA受容体の切断された細胞外ドメインは、1以上のアミノ酸置換を保有する。
【０１９０】
ActRIIAポリペプチドの機能的に活性のある断片は、例えば、ActRIIAポリペプチドをコードする核酸の対応する断片から組換え産生されたポリペプチドをスクリーニングすることにより得ることができる。さらに、断片を、従来のメリフィールド固相f-Moc又はt-Boc化学などの当技術分野で公知の技術を用いて化学合成することができる。該断片を(組換えによるか又は化学合成によって)産生し、試験して、ActRIIAタンパク質又はアクチビンによって媒介されるシグナル伝達のアンタゴニスト(インヒビター)として機能し得るペプチジル断片を同定することができる。
【０１９１】
さらに、ActRIIAポリペプチドの機能的に活性のある変異体は、例えば、ActRIIAポリペプチドをコードする対応する突然変異核酸から組換え産生された修飾ポリペプチドのライブラリーをスクリーニングすることにより得ることができる。該変異体を産生し、試験して、ActRIIAタンパク質又はアクチビンによって媒介されるシグナル伝達のアンタゴニスト(インヒビター)として機能し得るものを同定することができる。ある実施態様において、ActRIIAポリペプチドの機能的変異体は、配列番号2又は3から選択されるアミノ酸配列と少なくとも75％同一であるアミノ酸配列を含む。ある場合には、該機能的変異体は、配列番号2又は3から選択されるアミノ酸配列と少なくとも80％、85％、90％、95％、97％、98％、99％、又は100％同一なアミノ酸配列を有する。
【０１９２】
機能的変異体は、例えば、ActRIIAポリペプチドの構造を、治療効力、又は安定性(例えば、エクスビボでの保存期間及びインビボでのタンパク質分解に対する抵抗性)を増強するような目的で修飾することにより作製することができる。アクチビン結合を保持するように選択された場合のそのような修飾ActRIIAポリペプチドは、天然のActRIIAポリペプチドの機能的等価物とみなされる。修飾ActRIIAポリペプチドは、例えば、アミノ酸置換、欠失、又は付加により産生することもできる。例えば、ロイシンとイソロイシンもしくはバリンとの、アスパラギン酸とグルタミン酸との、トレオニンとセリンとの単独置換、又はあるアミノ酸と構造的に関連するアミノ酸との同様の置換(例えば、保存的突然変異)によって、得られる分子の生物活性が大きく影響を受けることはないであろうと予想するのは合理的である。保存的置換は、その側鎖において関連があるアミノ酸のファミリー内で起こる置換である。ActRIIAポリペプチドのアミノ酸配列の変化によって機能的ホモログが生じるかどうかは、野生型ActRIIAポリペプチドと同様の様式で細胞内の応答を引き起こす変異体ActRIIAポリペプチドの能力を評価することにより容易に決定することができる。
【０１９３】
ある実施態様において、本明細書に提供されるのは、ActRIIAポリペプチドのグリコシル化を改変することができる該ポリペプチドの特定の突然変異である。そのような突然変異を、1以上のグリコシル化部位、例えば、O結合型又はN結合型グリコシル化部位を導入又は除去するように選択することができる。アスパラギン結合型グリコシル化認識部位は、通常、適当な細胞グリコシル化酵素によって特異的に認識されるアスパラギン-X-トレオニン(又はアスパラギン-X-セリン)(ここで、「X」は、任意のアミノ酸である)というトリペプチド配列を含む。改変は、野生型ActRIIAポリペプチドの配列への1以上のセリンもしくはトレオニン残基の付加、又は該残基による置換によって行うこともできる(O結合型グリコシル化部位の場合)。グリコシル化認識部位の1番目もしくは3番目のアミノ酸位置のうちの一方もしくは両方における種々のアミノ酸置換もしくは欠失(及び/又は2番目の位置におけるアミノ酸欠失)は、修飾されたトリペプチド配列中での非グリコシル化をもたらす。ActRIIAポリペプチド上の炭水化物部分の数を増加させる別の手段は、ActRIIAポリペプチドへのグリコシドの化学的又は酵素的カップリングによるものである。使用されるカップリング様式に応じて、糖(複数可)を、(a)アルギニン及びヒスチジン;(b)遊離カルボキシル基;(c)遊離スルフヒドリル基、例えば、システインの遊離スルフヒドリル基;(d)遊離ヒドロキシル基、例えば、セリン、トレオニン、もしくはヒドロキシプロリンの遊離ヒドロキシル基;(e)芳香族残基、例えば、フェニルアラニン、チロシン、もしくはトリプトファンの芳香族残基;又は(f)グルタミンのアミド基に結合させることができる。これらの方法は、引用により本明細書中に組み込まれる、1987年9月11日に公開されたWO 87/05330号、及びAplin及びWristonの文献(1981) CRC Crit. Rev. Biochem., pp. 259-306に記載されている。ActRIIAポリペプチド上に存在する1以上の炭水化物部分の除去は、化学的に及び/又は酵素的に達成することができる。化学的脱グリコシル化は、例えば、化合物トリフルオロメタンスルホン酸、又は同等の化合物へのActRIIAポリペプチドの暴露を含み得る。この処理は、結合糖(N-アセチルグルコサミン又はN-アセチルガラクトサミン)を除くほとんど又は全ての糖の切断をもたらすが、アミノ酸配列は無傷のまま残す。化学的脱グリコシル化は、Hakimuddinらの文献(1987) Arch. Biochem. Biophys. 259:52及びEdgeらの文献(1981) Anal. Biochem. 118:131によりさらに記載されている。ActRIIAポリペプチド上の炭水化物部分の酵素的切断は、Thotakuraらの文献(1987) Meth. Enzymol. 138:350により記載されているような種々のエンドグリコシダーゼ及びエキソグリコシダーゼの使用により達成することができる。ActRIIAポリペプチドの配列は、適切な場合、使用される発現系の種類に応じて調整することができるが、それは、哺乳動物、酵母、昆虫、及び植物の細胞が全て、該ペプチドのアミノ酸配列によって影響され得る異なるグリコシル化パターンを導入することができるためである。一般に、ヒトで使用されるActRIIAタンパク質は、適切なグリコシル化を提供する哺乳動物細胞株、例えば、HEK293又はCHO細胞株で発現されるが、他の発現系、例えば、他の哺乳動物発現細胞株、グリコシル化酵素が改変されている酵母細胞株、及び昆虫細胞も同様に有���であると考えられる。
【０１９４】
本明細書にさらに提供されるのは、突然変異体、特に、ActRIIAポリペプチドのコンビナトリアル突然変異体のセット、及び切断突然変異体を作製する方法であり;コンビナトリアル突然変異体のプールは、機能的変異体配列を同定するのに特に有用である。そのようなコンビナトリアルライブラリーをスクリーニングする目的は、例えば、アゴニストもしくはアンタゴニストのいずれかとして作用することができるか、又はその代わりに、新規の活性を全て併せ持つ、ActRIIAポリペプチド変異体を作製することであり得る。種々のスクリーニングアッセイは以下に提供されており、そのようなアッセイを用いて、変異体を評価することができる。例えば、ActRIIAポリペプチド変異体を、ActRIIAリガンドに結合する能力、ActRIIAリガンドのActRIIAポリペプチドへの結合を妨げる能力、又はActRIIAリガンドによって引き起こされるシグナル伝達に干渉する能力についてスクリーニングすることができる。
【０１９５】
天然のActRIIAポリペプチドと比べて選択的な又は全般的に増大した効力を有する、コンビナトリアル由来の変異体を作製することができる。同様に、突然変異生成により、対応する野生型ActRIIAポリペプチドとは劇的に異なる細胞内半減期を有する変異体を生じさせることができる。例えば、改変タンパク質を、タンパク質分解、又は天然のActRIIAポリペプチドの破壊、さもなければ、不活化をもたらす他の細胞プロセスに対してより安定な状態又はあまり安定でない状態にするにすることができる。そのような変異体、及びそれらをコードする遺伝子を用いて、ActRIIAポリペプチドの半減期を調節することにより、ActRIIAポリペプチドレベルを改変することができる。例えば、短い半減期は、より一時的な生物学的効果を生じることができ、対象内の組換えActRIIAポリペプチドレベルのより厳しい制御を可能にすることができる。Fc融合タンパク質では、突然変異をリンカー(存在する場合)及び/又はFc部分中で生成させて、タンパク質の半減期を変化させることができる。
【０１９６】
コンビナトリアルライブラリーは、各々が潜在的ActRIIAポリペプチド配列の少なくとも一部を含むポリペプチドのライブラリーをコードする遺伝子の縮重ライブラリーによって生成させることができる。例えば、潜在的ActRIIAポリペプチドヌクレオチド配列の縮重セットが、個々のポリペプチドとして、又はその代わりに、より大きな融合タンパク質のセット(例えば、ファージディスプレイの場合)として発現可能となるように、合成オリゴヌクレオチドの混合物を遺伝子配列に酵素的に連結することができる。
【０１９７】
潜在的ホモログのライブラリーを縮重オリゴヌクレオチド配列から作製することができる多くの方法がある。縮重遺伝子配列の化学合成を自動DNA合成装置で実行することができ、その後、合成遺伝子を発現用の適当なベクターに連結することができる。縮重オリゴヌクレオチドの合成は、当技術分野で周知である(例えば、Narang, S Aの文献(1983) Tetrahedron 39:3; Itakuraらの文献(1981) Recombinant DNA, Proc. 3rd Cleveland Sympos. Macromolecules, AG Walton, Amsterdam編: Elsevier pp 273-289; Itakuraらの文献(1984) Annu. Rev. Biochem. 53:323; Itakuraらの文献(1984) Science 198:1056; Ikeらの文献(1983) Nucleic Acid Res. 11:477を参照されたい)。そのような技術は、他のタンパク質の定方向進化において利用されている(例えば、Scottらの文献(1990) Science 249:386-390; Robertsらの文献(1992) PNAS USA 89:2429-2433; Devlinらの文献(1990) Science 249: 404-406; Cwirlaらの文献(1990) PNAS USA 87: 6378-6382;並びに米国特許第5,223,409号、第5,198,346号、及び第5,096,815号を参照されたい)。
【０１９８】
或いは、他の形態の突然変異生成を用いて、コンビナトリアルライブラリーを作製することができる。例えば、ActRIIAポリペプチド変異体を、例えば、アラニンスキャニング突然変異生成などを用いるスクリーニングによって(Rufらの文献(1994) Biochemistry 33:1565-1572; Wangらの文献(1994) J. Biol. Chem. 269:3095-3099; Balintらの文献(1993) Gene 137:109-118; Grodbergらの文献(1993) Eur. J. Biochem. 218:597-601; Nagashimaらの文献(1993) J. Biol. Chem. 268:2888-2892; Lowmanらの文献(1991) Biochemistry 30:10832-10838;及びCunninghamらの文献(1989) Science 244:1081-1085)、リンカースキャニング突然変異生成によって(Gustinらの文献(1993) Virology 193:653-660; Brownらの文献(1992) Mol. Cell Biol. 12:2644-2652; McKnightらの文献(1982) Science 232:316);飽和突然変異生成によって(Meyersらの文献(1986) Science 232:613); PCR突然変異生成によって(Leungらの文献(1989) Method Cell Mol Biol 1:11-19);又は化学的突然変異生成などを含むランダム突然変異生成によって(Millerらの文献(1992) 細菌遺伝学の短期講座(A Short Course in Bacterial Genetics)、CSHL Press, Cold Spring Harbor, N.Y.;及びGreenerらの文献(1994) Strategies in Mol Biol 7:32-34)、ライブラリーから作製し、単離することができる。特にコンビナトリアル設定でのリンカースキャニング突然変異生成は、ActRIIAポリペプチドの切断(生物活性)形態を同定する魅力的な方法である。
【０１９９】
点突然変異及び切断によって作製されたコンビナトリアルライブラリーの遺伝子産物をスクリーニングするための、さらに言うなら、特定の性質を有する遺伝子産物のcDNAライブラリーをスクリーニングするための、広範な技術が当技術分野で公知である。そのような技術は、一般に、ActRIIAポリペプチドのコンビナトリアル突然変異生成によって作製される遺伝子ライブラリーの迅速スクリーニングに適用可能である。大きな遺伝子ライブラリーのスクリーニングに最も広く使用されている技術は、通常、遺伝子ライブラリーを複製可能な発現ベクターにクローニングすること、適当な細胞を得られたベクターのライブラリーで形質転換すること、及びコンビナトリアル遺伝子を、所望の活性の検出によって、その産物が検出された遺伝子をコードするベクターの比較的簡単な単離が容易になる条件下で発現させることを含む。好ましいアッセイとしては、アクチビン結合アッセイ及びアクチビン媒介性細胞シグナル伝達アッセイが挙げられる。
【０２００】
ある実施態様において、ActRIIAポリペプチドは、ActRIIAポリペプチドに天然に存在する任意の修飾に加えて、翻訳後修飾をさらに含み得る。そのような修飾としては、アセチル化、カルボキシル化、グリコシル化、リン酸化、脂質化、及びアシル化が挙げられるが、これらに限定されない。結果として、修飾されたActRIIAポリペプチドは、非アミノ酸要素、例えば、ポリエチレングリコール、脂質、多糖又は単糖、及びホスフェートを含有し得る。ActRIIAポリペプチドの機能性に対するそのような非アミノ酸要素の効果は、当業者に公知の任意の方法によって試験することができる。ActRIIAポリペプチドが、該ActRIIAポリペプチドの新生形態を切断することによって細胞内で産生される場合、翻訳後プロセシングもまた、該タンパク質の正確なフォールディング及び/又は機能に重要であり得る。様々な細胞(例えば、CHO、HeLa、MDCK、293、W138、NIH-3T3、又はHEK293)は、そのような翻訳後活性のための特異的細胞装置及び特徴的機構を有しており、該細胞を、ActRIIAポリペプチドの正確な修飾及びプロセシングを保証するように選択することができる。
【０２０１】
ある態様において、ActRIIAポリペプチドの機能的変異体又は修飾形態には、ActRIIAポリペプチドの少なくとも一部及び1以上の融合ドメインを有する融合タンパク質が含まれる。そのような融合ドメインのよく知られた例としては、ポリヒスチジン、Glu-Glu、グルタチオンSトランスフェラーゼ(GST)、チオレドキシン、プロテインA、プロテインG、免疫グロブリン重鎖定常領域(Fc)、マルトース結合タンパク質(MBP)、又はヒト血清アルブミンが挙げられるが、これらに限定されない。融合ドメインを、所望の特性を付与するように選択することができる。例えば、いくつかの融合ドメインは、親和性クロマトグラフィーによる融合タンパク質の単離に特に有用である。親和性精製の目的で、親和性クロマトグラフィー用の関連するマトリックス、例えば、グルタチオン、アミラーゼ、及びニッケル又はコバルトコンジュゲート樹脂が使用される。そのようなマトリックスの多くは、「キット」形態で入手可能であり、これには、例えば、(HIS6)融合パートナーと合わせて有用な、Pharmacia GST精製システム及びQIAexpress(商標)システム(Qiagen)がある。別の例として、融合ドメインを、ActRIIAポリペプチドの検出を容易にするように選択することができる。そのような検出ドメインの例としては、様々な蛍光タンパク質(例えば、GFP)及び通常、特異的抗体が利用可能な短いペプチド配列である「エピトープタグ」が挙げられる。特異的モノクローナル抗体がすぐに利用可能である周知のエピトープタグとしては、FLAG、インフルエンザウイルスヘマグルチニン(HA)、及びc-mycタグが挙げられる。場合により、融合ドメインは、例えば、第Xa因子又はトロンビン用のプロテアーゼ切断部位を有し、該部位は、関連するプロテアーゼが融合タンパク質を部分消化し、それにより、組換えタンパク質をそれから遊離させることを可能にする。その後、遊離したタンパク質を、後続のクロマトグラフィー分離によって融合ドメインから単離することができる。ある好ましい実施態様において、ActRIIAポリペプチドを、インビボでActRIIAポリペプチドを安定化するドメイン(「スタビライザー」ドメイン)と融合させる。「安定化する」とは、血清半減期を延長する全てのことを意味し、これは、破壊の減少によるものか、腎臓によるクリアランスの減少によるものか、又は他の薬物動態作用によるものかを問わない。免疫グロブリンのFc部分との融合は、広範なタンパク質に望ましい薬物動態特性を付与することが知られている。同様に、ヒト血清アルブミンへの融合は、望ましい特性を付与することができる。選択され得る他のタイプの融合ドメインとしては、多量体化(例えば、二量体化、四量体化)ドメイン及び(望ましい場合、追加の生物学的機能、例えば、骨成長又は筋肉成長のさらなる刺激を付与する)機能ドメインが挙げられる。
【０２０２】
融合タンパク質の様々なエレメントを、所望の機能と一致する任意の方法で配置し得ることが理解される。例えば、ActRIIAポリペプチドを異種ドメインのC末端に配置することができ、又はその代わりに、異種ドメインをActRIIAポリペプチドのC末端に配置することができる。ActRIIAポリペプチドドメイン及び異種ドメインは、融合タンパク質中で隣接している必要がなく、追加のドメイン又はアミノ酸配列を、どちらかのドメインのC末端もしくはN末端、又はこれらのドメインの間に含めることができる。
【０２０３】
ある実施態様において、本明細書に記載のActRIIAポリペプチドは、ActRIIAポリペプチドを安定化することができる1以上の修飾を含む。例えば、そのような修飾は、ActRIIAポリペプチドのインビトロ半減期を向上させるか、ActRIIAポリペプチドの循環半減期を向上させるか、又はActRIIAポリペプチドのタンパク質分解を低下させる。そのような安定化修飾としては、融合タンパク質(例えば、ActRIIAポリペプチド及びスタビライザードメインを含む融合タンパク質を含む)、グリコシル化部位の修飾(例えば、ActRIIAポリペプチドへのグリコシル化部位の付加を含む)、並びに炭水化物部分の修飾(例えば、ActRIIAポリペプチドからの炭水化物部分の除去を含む)が挙げられるが、これらに限定されない。融合タンパク質の場合、ActRIIAポリペプチドを、スタビライザードメイン、例えば、IgG分子(例えば、Fcドメイン)に融合させる。本明細書で使用されるように、「スタビライザードメイン」という用語は、融合タンパク質の場合に見られる融合ドメイン(例えば、Fc)を指すだけでなく、炭水化物部分などの非タンパク質性修飾、又はポリエチレングリコールなどの非タンパク質性ポリマーも含む。
【０２０４】
ある実施態様において、他のタンパク質から単離されているか、又は別の方法で他のタンパク質を実質的に含まない、単離及び/又は精製された形態のActRIIAポリペプチドを、本明細書に記載の方法及び組成物とともに使用することができる。ActRIIAポリペプチドは、通常、組換え核酸からの発現によって産生される。
【０２０５】
ある態様において、本明細書に提供されるのは、本明細書に開示される断片、機能的変異体、及び融合タンパク質を含む、ActRIIAポリペプチドのいずれか(例えば、可溶性ActRIIAポリペプチド)をコードする単離された及び/又は組換え核酸である。例えば、配列番号4は、天然のヒトActRIIA前駆ポリペプチドをコードし、一方、配列番号5は、ActRIIAのプロセシングされた細胞外ドメインをコードする。対象核酸は、一本鎖又は二本鎖であり得る。そのような核酸は、DNA又はRNA分子であり得る。これらの核酸を、例えば、ActRIIAポリペプチドを作製する方法で、又は直接的な治療剤として(例えば、遺伝子療法の手法で)使用することができる。
【０２０６】
ある態様において、ActRIIAポリペプチドをコードする対象核酸には、配列番号4又は5の変異体である核酸が含まれることがさらに理解される。変異体ヌクレオチド配列には、1以上のヌクレオチド置換、付加、又は欠失によって異なる配列、例えば、アレル変異体が含まれる。
【０２０７】
ある実施態様において、本明細書に提供されるのは、配列番号4又は5と少なくとも80％、85％、90％、95％、97％、98％、99％、又は100％同一である単離された又は組換え核酸配列である。当業者は、配列番号4又は5に相補的な核酸配列、及び配列番号4又は5の変異体も本明細書に包含されることを理解しているであろう。さらなる実施態様において、本明細書に提供される核酸配列は、単離されたもの、組換え体、及び/もしくは異種ヌクレオチド配列と融合したもの、又はDNAライブラリー中のものであることができる。
【０２０８】
他の実施態様において、本明細書に提供される核酸は、極めてストリンジェントな条件下で、配列番号4もしくは5に表記されたヌクレオチド配列、配列番号4もしくは5の相補配列、又はこれらの断片にハイブリダイズするヌクレオチド配列も含む。上で論じたように、当業者は、DNAハイブリダイゼーションを促進する適切なストリンジェンシー条件を変化させることができることを容易に理解するであろう。当業者は、DNAハイブリダイゼーションを促進する適切なストリンジェンシー条件を変化させることができることを理解しているであろう。例えば、ハイブリダイゼーションを、約45℃での6.0×塩化ナトリウム/クエン酸ナトリウム(SSC)、次いで、50℃での2.0×SSCの洗浄で実施することができる。例えば、洗浄工程での塩濃度を、50℃で約2.0×SSCの低いストリンジェンシーから50℃で約0.2×SSCの高いストリンジェンシーまで選択することができる。さらに、洗浄工程での温度を、室温、約22℃での低いストリンジェンシー条件から約65℃での高いストリンジェンシー条件へと上昇させることができる。温度と塩の両方を変化させることができ、又は他の変数を変化させながら、温度もしくは塩濃度を一定に保つことができる。一実施態様において、室温での6×SSC、次に、室温での2×SSCでの洗浄の低いストリンジェンシー条件下でハイブリダイズする核酸を、本明細書に記載の方法及び組成物とともに使用することができる。
【０２０９】
遺伝暗号の縮重のために配列番号4又は5に示される核酸とは異なる単離された核酸も本明細書に包含される。例えば、いくつかのアミノ酸は、複数のトリプレットによって指定される。同じアミノ酸を特定するコドン、又はシノニム(例えば、CAUとCACは、ヒスチジンについてのシノニムである)は、タンパク質のアミノ酸配列に影響を及ぼさない「サイレント突然変異」を生じさせることができる。しかしながら、対象タンパク質のアミノ酸配列の変化を実際にもたらすDNA配列多型が哺乳動物細胞の間に存在すると考えられる。当業者は、特定のタンパク質をコードする核酸の1以上のヌクレオチドにおけるこれらの変異(variation)(ヌクレオチドの最大約3〜5％)が、天然のアレル変異(variation)が原因で、所与の種の個体間に存在し得ることを理解しているであろう。ありとあらゆるそのようなヌクレオチド変異(variation)及び結果として生じるアミノ酸多型が本明細書に包含される。
【０２１０】
ある実施態様において、組換え核酸を、発現コンストラクト中の1以上の調節ヌクレオチド配列に機能的に連結することができる。調節ヌクレオチド配列は、通常、発現に使用される宿主細胞に適したものである。種々の宿主細胞について、数多くの種類の適切な発現ベクター及び好適な調節配列が当技術分野で公知である。一般に、該1以上の調節ヌクレオチド配列としては、プロモーター配列、リーダー又はシグナル配列、リボソーム結合部位、転写開始及び終結配列、翻訳開始及び終結配列、並びにエンハンサー又はアクチベーター配列が挙げられるが、これらに限定されない。当技術分野で公知の構成的又は誘導性プロモーターが本明細書で企図される。プロモーターは、天然プロモーター、又は複数のプロモーターのエレメントを組み合わせるハイブリッドプロモーターのどちらかであり得る。発現コンストラクトは、細胞内でプラスミドなどのエピソーム上に存在してもよく、又は発現コンストラクトは、染色体に挿入されてもよい。好ましい実施態様において、発現ベクターは、形質転換した宿主細胞の選択を可能にする選択可能マーカー遺伝子を含む。選択可能マーカー遺伝子は当技術分野で周知であり、使用される宿主細胞によって異なる。
【０２１１】
ある態様において、対象核酸は、ActRIIAポリペプチドをコードし、少なくとも1つの調節配列に機能的に連結されているヌクレオチド配列を含む発現ベクター中に提供される。調節配列は当技術分野で認められており、ActRIIAポリペプチドの発現を導くように選択される。したがって、調節配列という用語は、プロモーター、エンハンサー、及び他の発現制御エレメントを含む。例示的な調節配列は、Goeddelの文献;遺伝子発現技術:酵素学の方法(Gene Expression Technology: Methods in Enzymology), Academic Press, San Diego, Calif.(1990)に記載されている。例えば、それに機能的に連結されたときDNA配列の発現を制御する多種多様な発現制御配列のいずれかをこれらのベクター中で用いて、ActRIIAポリペプチドをコードするDNA配列を発現させることができる。そのような有用な発現制御配列としては、例えば、SV40の初期及び後期プロモーター、tetプロモーター、アデノウイルス又はサイトメガロウイルス前初期プロモーター、RSVプロモーター、lacシステム、trpシステム、TAC又はTRCシステム、その発現がT7 RNAポリメラーゼによって誘導されるT7プロモーター、ラムダファージの主要オペレーター及びプロモーター領域、fdコートタンパク質の制御領域、3-ホスホグリセレートキナーゼ又は他の解糖系酵素のプロモーター、酸ホスファターゼ、例えば、Pho5のプロモーター、酵母のα接合因子のプロモーター、バキュロウイルス系のポリヘドロンプロモーター、並びに原核もしくは真核細胞又はそれらのウイルスの遺伝子の発現を制御することが知られている他の配列、並びにこれらの様々な組合せが挙げられる。発現ベクターの設計は、形質転換される宿主細胞の選択及び/又は発現が望まれるタンパク質の種類のような因子によって決まることが理解されるべきである。さらに、ベクターのコピー数、そのコピー数を制御する能力、及び該ベクターによってコードされる任意の他のタンパク質、例えば、抗生物質マーカーの発現も考慮されるべきである。
【０２１２】
本明細書に提供される組換え核酸は、クローニングされた遺伝子、又はその一部を、原核細胞、真核細胞(酵母、鳥類、昆虫、もしくは哺乳動物)、又はその両方における発現に好適なベクター中に連結することにより産生することができる。組換えActRIIAポリペプチドの産生用の発現ビヒクルとしては、プラスミド及び他のベクターが挙げられる。例えば、好適なベクターとしては、大腸菌(E. coli)などの原核細胞における発現用の、以下のタイプのプラスミド: pBR322由来プラスミド、pEMBL由来プラスミド、pEX由来プラスミド、pBTac由来プラスミド、及びpUC由来プラスミドが挙げられる。
【０２１３】
いくつかの哺乳動物発現ベクターは、細菌におけるベクターの増殖を促進する原核生物配列と、真核細胞で発現される1以上の真核生物転写ユニットの両方を含む。pcDNAI/amp、pcDNAI/neo、pRc/CMV、pSV2gpt、pSV2neo、pSV2-dhfr、pTk2、pRSVneo、pMSG、pSVT7、pko-neo 及びpHyg由来ベクターは、真核細胞のトランスフェクションに好適な哺乳動物発現ベクターの例である。これらのベクターのうちのいくつかは、原核細胞と真核細胞の両方における複製及び薬物耐性選択を容易にするために、pBR322などの細菌プラスミド由来の配列で修飾されている。或いは、ウシパピローマウイルス(BPV-1)、又はエプスタイン-バーウイルス(pHEBo、pREP由来、及びp205)などのウイルスの派生物を、真核細胞におけるタンパク質の一過性発現に使用することができる。(レトロウイルスを含む)他のウイルス発現系の例は、以下の遺伝子療法送達系の記載において見出すことができる。プラスミドの調製及び宿主生物の形質転換に利用される様々な方法は、当技術分野で周知である。原核細胞と真核細胞の両方に関する他の好適な発現系、及び一般的な組換え手順については、分子クローニング  実験マニュアル(Molecular Cloning A Laboratory Manual)、第3版、Sambrook、Fritsch、及びManiatis編(Cold Spring Harbor Laboratory Press, 2001)を参照されたい。いくつかの例において、バキュロウイルス発現系の使用によって組換えポリペプチドを発現させることが望ましい場合がある。そのようなバキュロウイルス発現系の例としては、pVL由来ベクター(例えば、pVL1392、pVL1393、及びpVL941)、pAcUW由来ベクター(例えば、pAcUW1)、並びにpBlueBac由来ベクター(例えば、β-gal含有pBlueBac III)が挙げられる。
【０２１４】
好ましい実施態様において、Pcmv-Scriptベクター(Stratagene, La Jolla, Calif.)、pcDNA4ベクター(Invitrogen, Carlsbad, Calif.)、及びpCI-neoベクター(Promega, Madison, Wis.)などのベクターを、CHO細胞内での対象ActRIIAポリペプチドの産生のために設計する。明らかになるように、対象遺伝子コンストラクトを用いて、例えば、精製用の、融合タンパク質又は変異体タンパク質を含む、タンパク質を産生するために、培養で増殖した細胞内での対象ActRIIAポリペプチドの発現を生じさせることができる。
【０２１５】
本開示は、1以上の該対象ActRIIAポリペプチドのコード配列(例えば、配列番号4又は5)を含む組換え遺伝子でトランスフェクトされた宿主細胞に関するものでもある。宿主細胞は、任意の原核又は真核細胞であり得る。例えば、本明細書に提供されるActRIIAポリペプチドを、大腸菌などの細菌細胞、昆虫細胞(例えば、バキュロウイルス発現系を用いる)、酵母、又は哺乳動物細胞で発現させることができる。他の好適な宿主細胞は、当業者に公知である。
【０２１６】
したがって、本明細書に提供されるのは、ActRIIAポリペプチドを産生する方法である。例えば、ActRIIAポリペプチドをコードする発現ベクターでトランスフェクトされた宿主細胞を、ActRIIAポリペプチドの発現が生じるのを可能にする適当な条件下で培養することができる。ActRIIAポリペプチドを分泌させ、細胞とActRIIAポリペプチドを含む培地の混合物から単離することができる。或いは、ActRIIAポリペプチドを細胞質内又は膜画分に保持し、細胞を回収し、溶解させ、タンパク質を単離することができる。細胞培養物には、宿主細胞、培地、及び他の副産物が含まれる。細胞培養用の好適な培地は、当技術分野で周知である。対象ActRIIAポリペプチドは、イオン交換クロマトグラフィー、ゲル濾過クロマトグラフィー、限外濾過、電気泳動、ActRIIAポリペプチドの特定のエピトープに特異的な抗体による免疫親和性精製、及びActRIIAポリペプチドに融合したドメインに結合する物質による親和性精製(例えば、プロテインAカラムを用いて、ActRIIA-Fc融合体を精製することができる)を含む、タンパク質を精製するための当技術分野で公知の技術を用いて、細胞培養培地、宿主細胞、又はその両方から単離することができる。好ましい実施態様において、ActRIIAポリペプチドは、その精製を容易にするドメインを含む融合タンパク質である。好ましい実施態様において、精製は、例えば、以下のもの:プロテインAクロマトグラフィー、Qセファロースクロマトグラフィー、フェニルセファロースクロマトグラフィー、サイズ排除クロマトグラフィー、及び陽イオン交換クロマトグラフィーのうちの3つ以上を、任意の順序で含む、一連のカラムクロマトグラフィー工程により達成される。精製は、ウイルス濾過及びバッファー交換で終了させることができる。本明細書で実証されるように、ActRIIA-hFcタンパク質は、サイズ排除クロマトグラフィーにより決定して98％を超える純度及びSDS PAGEにより決定して95％を超える純度に精製された。この精製レベルは、マウスの骨に対する望ましい効果並びにマウス、ラット、及び非ヒト霊長類における許容し得る安全性プロファイルを達成するのに十分であった。
【０２１７】
別の実施態様において、組換えActRIIAポリペプチドの所望の部分のN末端におけるポリ-(His)/エンテロキナーゼ切断部位配列などの精製リーダー配列をコードする融合遺伝子は、Ni2+金属樹脂を用いる親和性クロマトグラフィーによる発現された融合タンパク質の精製を可能にすることができる。次いで、精製リーダー配列をエンテロキナーゼによる処理によって後から除去し、精製ActRIIAポリペプチドを提供することができる(例えば、Hochuliらの文献(1987) J. Chromatography 411:177;及びJanknechtらの文献、PNAS USA 88:8972を参照されたい)。
【０２１８】
融合遺伝子を作製する技術は周知である。本質的に、異なるポリペプチド配列をコードする様々なDNA断片の接続は、ライゲーションのための平滑末端又は互い違い末端、適切な末端を提供するための制限酵素消化、必要な場合の付着末端の充填(filling-in)、望ましくない接続を避けるためのアルカリホスファターゼ処理、及び酵素的ライゲーションを利用する従来の技術に従って実施される。別の実施態様において、融合遺伝子は、自動化DNA合成装置を含む従来の技術によって合成することができる。或いは、後からアニーリングさせてキメラ遺伝子配列を生成させることができる2つの連続する遺伝子断片間の相補的突出を生じさせるアンカープライマーを用いて、遺伝子断片のPCR増幅を実施することができる(例えば、分子生物学の最新プロトコル(Current Protocols in Molecular Biology)、Ausubelら編、John Wiley & Sons: 1992を参照されたい)。
【０２１９】
ActRIIA-Fc融合タンパク質は、安定にトランスフェクトされたCHO-DUKX Bl 1細胞で、配列番号9の組織プラスミノーゲンリーダー配列を用いて、pAID4ベクター(SV40 ori/エンハンサー、CMVプロモーター)から発現させることができる。Fc部分は、配列番号7に示されるヒトIgGl Fc配列である。ある実施態様において、発現させたとき、含まれるタンパク質は、ActRIIA-Fc融合タンパク質1分子当たり、平均で約1.5〜2.5モルのシアル酸を有する。
【０２２０】
ある実施態様において、ActRIIA-Fc融合体の長い血清半減期は、ヒト対象で25〜32日であることができる。さらに、CHO細胞で発現される物質は、ヒト293細胞で発現されるActRIIA-hFc融合タンパク質について報告されたものよりも高いアクチビンBリガンドに対する親和性を有することができる(del Reらの文献、J Biol Chem. 2004 Dec 17;279(51):53126-35)。さらに、理論によって束縛されるものではないが、TPAリーダー配列の使用は、他のリーダー配列よりも大きな産生をもたらし、天然のリーダーで発現されるActRIIA-Fcとは異なり、極めて純粋なN末端配列を提供することができる。天然のリーダー配列の使用は、各々異なるN末端配列を有する2つの主要な種のActRIIA-Fcを生じさせることができる。
【０２２１】
(7.9.2  ActRIIBのシグナル伝達インヒビター)
本明細書で使用されるように、「ActRIIB」という用語は、任意の種由来のアクチビン受容体IIB型(ActRIIB)タンパク質のファミリー及び突然変異生成又は他の修飾によってそのようなActRIIBタンパク質から得られた変異体を指す。本明細書中でのActRIIBに対する言及は、該受容体の現在同定されている形態のいずれか1つに対する言及であると理解される。ActRIIBファミリーのメンバーは、一般に、システインに富む領域を含むリガンド結合細胞外ドメイン、膜貫通ドメイン、及び予想上のセリン/トレオニンキナーゼ活性を有する細胞質ドメインから構成される、膜貫通タンパク質である。
【０２２２】
本明細書に記載の組成物及び方法で使用されるActRIIBシグナル伝達インヒビターとしては、限定するものではないが、アクチビン結合可溶性ActRIIBポリペプチド;アクチビン(特に、βA又はβBとも呼ばれる、アクチビンA又はBサブユニット)に結合し、ActRIIB結合を破壊する抗体; ActRIIBに結合し、アクチビン結合を破壊する抗体;アクチビン又はActRIIB結合について選択された非抗体タンパク質;及びFcドメインにコンジュゲートすることができる、アクチビン又はActRIIB結合について選択されたランダム化ペプチドが挙げられる。
【０２２３】
ある実施態様において、アクチビン又はActRIIB結合活性を有する2以上の異なるタンパク質(又は他の部分)、特に、それぞれI型(例えば、可溶性I型アクチビン受容体)及びII型(例えば、可溶性II型アクチビン受容体)結合部位を遮断するアクチビンバインダーを1つに連結させて、ActRIIBを阻害し、したがって、本明細書に記載の組成物及び方法で使用することができる、二機能性又は多機能性結合分子を作出することができる。ある実施態様において、ActRIIBを阻害するアクチビン-ActRIIBシグナル伝達軸アンタゴニストとしては、核酸アプタマー、小分子、並びに本明細書に記載の組成物及び方法で使用される他の薬剤が挙げられる。
【０２２４】
((a)ActRIIBポリペプチドを含むActRIIBシグナル伝達インヒビター)
本明細書で使用されるように、「ActRIIBポリペプチド」という用語は、ActRIIBファミリーメンバーの任意の天然のポリペプチド並びに有用な活性を保持するその任意の変異体(突然変異体、断片、融合体、及びペプチド模倣形態を含む)を含むポリペプチドを指す。例えば、ActRIIBポリペプチドには、ActRIIBポリペプチドの配列と少なくとも約80％同一な、及び任意に、少なくとも85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％、又はそれを上回って同一な配列を有する任意の公知のActRIIB受容体の配列に由来するポリペプチドが含まれる。例えば、ActRIIBポリペプチドは、ActRIIBタンパク質及び/又はアクチビンに結合し、それらの機能を阻害することができる。ActRIIBポリペプチドの例としては、ヒトActRIIB前駆ポリペプチド(配列番号16又は配列番号28)が挙げられる。そのアミノ酸配列が配列番号16又は配列番号28に示されているActRIIB前駆ポリペプチド(すなわち、ヒトActRIIB前駆ポリペプチド)に関して、該ActRIIB前駆ポリペプチドのシグナルペプチドは、アミノ酸1〜18に位置し;細胞外ドメインは、アミノ酸19〜134に位置し、潜在的N結合型グリコシル化部位は、アミノ酸位置42及び65に位置する。配列番号16のヒトActRIIB前駆ポリペプチドをコードする核酸配列は、配列番号19として開示されている(配列番号19は、アミノ酸位置64に対応するコドンでアラニンを提供するが、その代わりにアミノ酸位置64に対応するコドンでアルギニンを提供するように、当技術分野で公知の方法を用いて、当業者により、容易に修飾されることができる)。該配列の説明については、表21を参照されたい。
【０２２５】
別途、具体的に表記されない限り、本明細書に記載の全てのActRIIB関連ポリペプチドに関するアミノ酸の付番は、配列番号16及び配列番号28(これらは、位置64で発現されるアミノ酸だけが異なる)に関するアミノ酸付番に基づく。例えば、ActRIIBポリペプチドがアミノ酸位置79で置換/突然変異を有すると記載されている場合、位置79は、ActRIIBポリペプチドが由来する配列番号16又は配列番号28中の79番目のアミノ酸を指すものと理解されるべきである。同様に、ActRIIBポリペプチドがアミノ酸位置64でアラニン又はアルギニンを有すると記載されている場合、位置64は、ActRIIBポリペプチドが由来する配列番号16又は配列番号28中の64番目のアミノ酸を指すものと理解されるべきである。
【０２２６】
ある実施態様において、本明細書に記載の組成物及び方法で使用されるActRIIBのシグナル伝達インヒビターは、ActRIIBのアクチビン結合ドメインを含むポリペプチドを含む。いくつかの実施態様において、ActRIIBのアクチビン結合ドメインは、ActRIIBの細胞外ドメイン、又はその部分を含む。具体的な実施態様において、ActRIIBの細胞外ドメイン又はその部分は可溶性である。ActRIIBポリペプチドの例示的な修飾形態は、その開示が引用により完全に本明細書中に組み込まれる、米国特許出願公開第20090005308号及び第20100068215号に開示されている。
【０２２７】
具体的な実施態様において、本明細書に記載の組成物及び方法で使用されるActRIIBポリペプチドは、可溶性ActRIIBポリペプチドである。「可溶性ActRIIBポリペプチド」という用語は、通常、ActRIIBタンパク質の任意の天然の細胞外ドメインを含む、ActRIIBタンパク質の細胞外ドメインを含むポリペプチド並びにその任意の変異体(突然変異体、断片、及びペプチド模倣形態を含む)を指す。可溶性ActRIIBポリペプチドは、アクチビンに結合することができる;しかしながら、野生型ActRIIBタンパク質は、アクチビンへの結合に関してGDF8/11と比べて顕著な選択性を示さない。ある実施態様において、様々な結合特性を有するActRIIBの改変形態を本明細書に提供される方法で使用することができる。そのような改変形態は、例えば、その開示が引用により完全に本明細書中に組み込まれる、国際特許出願公開第WO 2006/012627号及びWO 2010/019261号に開示されている。天然又は改変ActRIIBタンパク質を第2のアクチビン選択的結合剤とカップリングさせることにより、該タンパク質に、アクチビンに対する特異性の付加を与えることができる。例示的な可溶性ActRIIBポリペプチドとしては、ヒトActRIIBポリペプチドの細胞外ドメイン(例えば、配列番号17、18、23、26、27、29、30、31、32、33、36、37、42、及び43)が挙げられる。
【０２２８】
ActRIIB前駆アミノ酸配列、すなわち、配列番号16のアミノ酸64に対応する位置のアラニン(本明細書中、「A64」と呼ばれる)を有する、Hildenらの文献(Blood, 1994, 83(8):2163-70)によって開示されたActRIIB細胞外配列を有するFc融合タンパク質は、アクチビン及びGDF-11に対する比較的低い親和性を保有することが示されている。対照的に、ActRIIB前駆アミノ酸配列の位置64のアルギニン(本明細書中、「R64」と呼ばれる)を有するFc融合タンパク質は、低ナノモル濃度から高ピコモル濃度の範囲のアクチビン及びGDF-11に対する親和性を有する(例えば、その開示が完全に本明細書中に組み込まれる、米国特許出願公開第20100068215号を参照されたい)。位置64のアルギニンを有するActRIIB前駆アミノ酸配列は、配列番号28に示されている。したがって、ある実施態様において、本明細書に記載の組成物及び方法に従って使用されるActRIIBポリペプチドは、(i)ActRIIB前駆アミノ酸配列、すなわち、配列番号16のアミノ酸64に対応する位置のアラニン;又は(ii)ActRIIB前駆アミノ酸配列、すなわち、配列番号28の位置64のアルギニンのどちらかを含み得る。他の実施態様において、本明細書に記載の組成物及び方法に従って使用されるActRIIBポリペプチドは、ActRIIB前駆アミノ酸配列、すなわち、配列番号16又は配列番号28のアミノ酸64に対応する位置にアラニンでもアルギニンでもないアミノ酸を含み得る。
【０２２９】
ActRIIBの細胞外ドメインのC末端におけるプロリンノットの欠失は、アクチビンに対する受容体の親和性を低下させることが示されている(例えば、Attisanoらの文献、Cell, 1992, 68(1):97-108を参照されたい)。配列番号28のアミノ酸20〜119を含むActRIIB-Fc融合タンパク質(すなわち、配列番号32)の「ActRIIB(20-119)-Fc」は、プロリンノット領域及び完全な膜近傍領域を含む、配列番号28のアミノ酸20〜134を含むActRIIB-Fc融合タンパク質(すなわち、配列番号31)の「ActRIIB(20-134)-Fc」と比べて、GDF-11及びアクチビンに対する結合が低下している。しかしながら、配列番号28のアミノ酸20〜129を含むActRIIB-Fc融合タンパク質の「ActRIIB(20-129)-Fc」は、プロリンノット領域が破壊されているにもかかわらず、ActRIIBの非切断型細胞外ドメインと比べて、同様の、しかし、若干低下した活性を保持している。したがって、配列番号28(又は配列番号16)のアミノ酸134、133、132、131、130、及び129で終結する細胞外ドメインを含むActRIIBポリペプチドは全て活性を有すると考えられるが、アミノ酸134又は133で終結するコンストラクトが最も高い活性を有し得る。同様に、配列番号28のP129及びP130の突然変異がリガンド結合をそれほど減少させないという事実によって示されるように、残基129〜134のいずれかでの突然変異は、リガンド結合親和性を大幅に変化させるとは考えられない。したがって、本明細書に記載の方法及び組成物に従って使用されるActRIIBポリペプチドは、配列番号28(又は配列番号16)のアミノ酸109(すなわち、最後のシステイン)で早くも終わり得るが、配列番号28(又は配列番号16)のアミノ酸位置109と119又はその間で終わる形態は、低下したリガンド結合能を有すると考えられる。
【０２３０】
配列番号16及び配列番号28のアミノ酸29は、ActRIIB前駆体配列中の最初のシステインに相当する。配列番号16もしくは配列番号28のN末端のアミノ酸29、又はこれらのアミノ酸位置の前から始まるActRIIBポリペプチドは、リガンド結合活性を保持していると考えられる。配列番号16又は配列番号28の位置24におけるアラニンからアスパラギンへの突然変異は、リガンド結合にそれほど影響を及ぼすことなく、N結合型グリコシル化配列を導入する。これは、配列番号16又は配列番号28のアミノ酸20〜29に対応するシグナル切断ペプチドとシステイン架橋領域の間の領域中の突然変異が良好に許容されることを裏付けるものである。特に、配列番号16又は配列番号28のアミノ酸位置20、21、22、23、及び24から始まるActRIIBポリペプチドは活性を保持しており、配列番号16又は配列番号28のアミノ酸位置25、26、27、28、及び29から始まるActRIIBポリペプチドも活性を保持すると考えられる。配列番号16又は配列番号28のアミノ酸位置22、23、24、又は25から始まるActRIIBポリペプチドは最も大きい活性を有する。
【０２３１】
まとめると、本明細書に記載の方法及び組成物に従って使用されるActRIIB前駆タンパク質(すなわち、配列番号16又は配列番号28)の活性部分(すなわち、ActRIIBポリペプチド)は、通常、配列番号16又は配列番号28のアミノ酸29〜109を含み、そのようなActRIIBポリペプチドは、例えば、配列番号16又は配列番号28のアミノ酸19〜29のいずれか1つに対応する残基から始まり、配列番号16又は配列番号28のアミノ酸109〜134のいずれか1つに対応する位置で終わることができる。本明細書に包含されるActRIIBポリペプチドの具体的な例としては、配列番号16又は配列番号28の19〜29、20〜29、又は21〜29のアミノ酸位置から始まり、配列番号16又は配列番号28の119〜134、119〜133、又は129〜134、129〜133のアミノ酸位置で終わるものが挙げられる。本明細書に包含されるActRIIBポリペプチドの他の具体的な例としては、配列番号16又は配列番号28の20〜24(又は21〜24、又は22〜25)のアミノ酸位置から始まり、配列番号16又は配列番号28の109〜134(もしくは109〜133)、119〜134(もしくは119〜133)、又は129〜134(もしくは129〜133)のアミノ酸位置で終わるものが挙げられる。これらの範囲に含まれる変異体ActRIIBポリペプチド、特に、配列番号16又は配列番号28の対応する部分との少なくとも80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、又は99％の配列同一性又は配列相同性を有するものも企図される。
【０２３２】
ある実施態様において、本明細書に記載の組成物及び方法で使用されるActRIIBのシグナル伝達インヒビターは、ActRIIBの細胞外ドメインの切断形態を含む。切断は、ActRIIBポリペプチドのカルボキシ末端及び/又はアミノ末端にあることができる。ある実施態様において、切断は、成熟したActRIIBポリペプチド細胞外ドメインと比べて、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、又は25アミノ酸長いものであることができる。ある実施態様において、切断は、成熟したActRIIBポリペプチド細胞外ドメインの1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、又は25個のN末端アミノ酸であることができる。ある実施態様において、切断は、成熟したActRIIBポリペプチド細胞外ドメインの1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、又は25個のC末端アミノ酸であることができる。例えば、ActRIIBの切断形態としては、アミノ酸20〜119; 20〜128; 20〜129; 20〜130; 20〜131; 20〜132; 20〜133; 20〜134; 20〜131; 21〜131; 22〜131; 23〜131; 24〜131;及び25〜131を有するポリペプチドが挙げられ、ここで、該アミノ酸位置は、配列番号16又は配列番号28におけるアミノ酸位置を指す。
【０２３３】
ActRIIBのさらなる例示的な切断形態としては、(i)配列番号16又は配列番号28のアミノ酸21〜29のいずれかのアミノ酸から始まり(任意に、配列番号16又は配列番号28の22〜25から始まり)、配列番号16又は配列番号28のアミノ酸109〜134のいずれかで終わるポリペプチド;(ii)配列番号16又は配列番号28のアミノ酸20〜29のいずれかから始まり(任意に、配列番号16又は配列番号28の22〜25から始まり)、配列番号16又は配列番号28のアミノ酸109〜133のいずれかで終わるポリペプチド;(iii)配列番号16又は配列番号28のアミノ酸20〜24のいずれかから始まり(任意に、配列番号16又は配列番号28の22〜25から始まり)、配列番号16又は配列番号28のアミノ酸109〜133のいずれかで終わるポリペプチド;(iv)配列番号16又は配列番号28のアミノ酸21〜24のいずれかから始まり、配列番号16又は配列番号28のアミノ酸109〜134のいずれかで終わるポリペプチド;(v)配列番号16又は配列番号28のアミノ酸20〜24のいずれかから始まり、配列番号16又は配列番号28のアミノ酸118〜133のいずれかで終わるポリペプチド;(vi)配列番号16又は配列番号28のアミノ酸21〜24のいずれかから始まり、配列番号16又は配列番号28のアミノ酸118〜134のいずれかで終わるポリペプチド;(vii)配列番号16又は配列番号28のアミノ酸20〜24のいずれかから始まり、配列番号16又は配列番号28のアミノ酸128〜133のいずれかで終わるポリペプチド;(viii)配列番号16又は配列番号28のアミノ酸20〜24のいずれかから始まり、配列番号16又は配列番号28のアミノ酸128〜133のいずれかで終わるポリペプチド;(ix)配列番号16又は配列番号28のアミノ酸21〜29のいずれかから始まり、配列番号16又は配列番号28のアミノ酸118〜134のいずれかで終わるポリペプチド;(x)配列番号16又は配列番号28のアミノ酸20〜29のいずれかから始まり、配列番号16又は配列番号28のアミノ酸118〜133のいずれかで終わるポリペプチド;(xi)配列番号16又は配列番号28のアミノ酸21〜29のいずれかから始まり、配列番号16又は配列番号28のアミノ酸128〜134のいずれかで終わるポリペプチド;及び(xii)配列番号16又は配列番号28のアミノ酸20〜29のいずれかから始まり、配列番号16又は配列番号28のアミノ酸128〜133のいずれかで終わるポリペプチドが挙げられる。具体的な実施態様において、ActRIIBポリペプチドは、配列番号16もしくは配列番号28のアミノ酸位置25から始まり、配列番号16もしくは配列番号28のアミノ酸位置131で終わるアミノ酸配列を含むか、それらから本質的になるか、又はそれらからなる。別の具体的な実施態様において、ActRIIBポリペプチドは、配列番号17、18、23、26、27、29、30、31、32、33、36、37、42、もしくは43のアミノ酸配列からなるか、又はそれらから本質的になる。
【０２３４】
本明細書に開示されるActRIIBポリペプチドはいずれも、ホモ二量体として産生することができる。本明細書に開示されるActRIIBポリペプチドはいずれも、IgG重鎖由来の定常領域、例えば、Fcドメインを含む異種部分を有する融合タンパク質として製剤化することができる。本明細書に開示されるActRIIBポリペプチドはいずれも、任意に、配列番号16又は配列番号28に対する1以上の追加のアミノ酸置換、欠失、又は挿入と組み合わせて、配列番号16又は配列番号28の位置79に対応する位置に酸性アミノ酸を含むことができる。
【０２３５】
具体的な実施態様において、本明細書に記載の組成物及び方法で使用されるActRIIBのシグナル伝達インヒビターは、1以上のアミノ酸置換/突然変異を有するActRIIBの細胞外ドメインを含む。そのようなアミノ酸置換/突然変異は、例えば、配列番号16又は配列番号28のアミノ酸位置79のロイシンからアスパラギン酸又はグルタミン酸などの酸性アミノ酸への交換であり得る。例えば、配列番号16又は配列番号28の位置L79をActRIIB細胞外ドメインポリペプチド中で改変して、改変されたアクチビン-ミオスタチン(GDF-11)結合特性を付与することができる。L79A及びL79P突然変異は、アクチビン結合よりも大きい程度にGDF-11結合を低下させる。L79E及びL79D突然変異はGDF-11結合を保持する一方で、大きく低下したアクチビン結合を示す。
【０２３６】
ある実施態様において、本明細書に記載の組成物及び方法で使用されるActRIIBのシグナル伝達インヒビターは、アミノ酸置換、例えば、配列番号16又は配列番号28のアミノ酸位置79のロイシンからアスパラギン酸又はグルタミン酸などの酸性アミノ酸への交換も保有するActRIIB細胞外ドメインの切断形態を含む。具体的な実施態様において、本明細書に記載の組成物及び方法で使用されるアミノ酸置換も保有するActRIIBポリペプチドの細胞外ドメインの切断形態は、配列番号23である。切断され及び/又は1以上のアミノ酸置換を保有するActRIIBの形態は、上で論じられているような抗体のFcドメインに連結させることができる。
【０２３７】
ActRIIBポリペプチドの機能的に活性のある断片は、例えば、ActRIIBポリペプチドをコードする核酸の対応する断片から組換え産生されたポリペプチドをスクリーニングすることにより得ることができる。さらに、断片を、従来のメリフィールド固相f-Moc又はt-Boc化学などの当技術分野で公知の技術を用いて化学合成することができる。該断片を(組換えによるか又は化学合成によって)産生し、試験して、ActRIIBタンパク質又はアクチビンによって媒介されるシグナル伝達のアンタゴニスト(インヒビター)として機能し得るペプチジル断片を同定することができる。
【０２３８】
さらに、ActRIIBポリペプチドの機能的に活性のある変異体は、ActRIIBポリペプチドをコードする対応する突然変異核酸から組換え産生された修飾ポリペプチドのライブラリーをスクリーニングすることにより得ることができる。該変異体を産生し、試験して、ActRIIBタンパク質又はアクチビンによって媒介されるシグナル伝達のアンタゴニスト(インヒビター)として機能し得るものを同定することができる。ある実施態様において、ActRIIBポリペプチドの機能的変異体は、配列番号17、18、23、26、27、29、30、31、32、33、36、37、42、及び43から選択されるアミノ酸配列と少なくとも75％同一であるアミノ酸配列を含む。ある実施態様において、該機能的変異体は、配列番号17、18、23、26、27、29、30、31、32、33、36、37、42、及び43から選択されるアミノ酸配列と少なくとも80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、又は99％同一なアミノ酸配列を有する。
【０２３９】
機能的変異体は、例えば、ActRIIBポリペプチドの構造を、治療効力、又は安定性(例えば、エクスビボでの保存期間及びインビボでのタンパク質分解に対する抵抗性)を増強するような目的で修飾することにより作製することができる。アクチビン結合を保持するように選択された場合のそのような修飾ActRIIBポリペプチドは、天然のActRIIBポリペプチドの機能的等価物とみなすことができる。修飾ActRIIBポリペプチドは、例えば、アミノ酸置換、欠失、又は付加により産生することもできる。例えば、ロイシンとイソロイシンもしくはバリンとの、アスパラギン酸とグルタミン酸との、トレオニンとセリンとの単独置換、又はあるアミノ酸と構造的に関連するアミノ酸との同様の置換(例えば、保存的突然変異)によって、得られる分子の生物活性が大きく影響を受けることはないであろうと予想するのは合理的である。保存的置換は、その側鎖において関連があるアミノ酸のファミリー内で起こる置換である。ActRIIBポリペプチドのアミノ酸配列の変化によって機能的ホモログが生じるかどうかは、野生型ActRIIBポリペプチドと同様の様式で細胞内の応答を引き起こす変異体ActRIIBポリペプチドの能力を評価することにより容易に決定することができる。
【０２４０】
本明細書に提供されるのは、突然変異体、特に、ActRIIBポリペプチドのコンビナトリアル突然変異体のセット、及び切断突然変異体を作製する方法であり;コンビナトリアル突然変異体のプールは、機能的変異体配列を同定するのに特に有用である。そのようなコンビナトリアルライブラリーをスクリーニングする目的は、例えば、アゴニストもしくはアンタゴニストのいずれかとして作用することができるか、又はその代わりに、新規の活性を全て併せ持つ、ActRIIBポリペプチド変異体を作製することであり得る。
【０２４１】
ActRIIBのリガンド結合ポケットは、配列番号16又は配列番号28の残基Y31、N33、N35、L38〜T41、E47、E50、Q53〜K55、L57、H58、Y60、S62、K74、W78〜N83、Y85、R87、A92、及びE94〜F101によって規定されることが示されている。これらの位置では、保存的突然変異は許容されるが、K74A突然変異は、R40A、K55A、F82A、及び位置L79での突然変異がそうであるように、良好に許容されると考えられる。R40は、ゼノパス(Xenopus)ではKであり、この位置の塩基性アミノ酸が許容されることを示している。Q53は、ウシActRIIBではR、及びゼノパスActRIIBではKであり、それゆえ、R、K、Q、N、及びHを含むアミノ酸がこの位置で許容される。したがって、本明細書に記載の方法及び組成物で使用されるActRIIBポリペプチドの一般式は、配列番号16又は配列番号28のアミノ酸29〜109を含むが、任意に、配列番号16又は配列番号28の20〜24又は22〜25の範囲のアミノ酸位置から始まり、配列番号16又は配列番号28の129〜134の範囲のアミノ酸位置で終わり、リガンド結合ポケット内に1、2、5、又は15以下の保存的アミノ酸変化を含み、かつリガンド結合ポケット内の配列番号16又は配列番号28のアミノ酸位置40、53、55、74、79、及び/又は82に0、1、又はそれより多くの非保存的変化を含むものである。そのようなActRIIBポリペプチドは、配列番号16又は配列番号28のアミノ酸29〜109の配列との80％、90％、95％、又は99％を超える配列同一性又は配列相同性を保持し得る。ばらつきが特に良好に許容され得る結合ポケットの外側の部位としては、ActRIIBの細胞外ドメインのアミノ末端及びカルボキシ末端、並びに位置42〜46及び65〜73が挙げられる。配列番号16又は配列番号28の位置65におけるアスパラギンからアラニンへの変化(N65A)は、A64バックグラウンドでのリガンド結合を実際に改善し、したがって、R64バックグラウンドでのリガンド結合に悪影響を及ぼさないと考えられる。この変化は、おそらくは、A64バックグラウンドでのN65におけるグリコシル化を消失させ、したがって、この領域での顕著な変化が許容される可能性が高いことを示している。R64A変化はあまり許容されないが、R64Kは良好に許容され、したがって、Hなどの別の塩基性残基は、位置64で許容され得る。
【０２４２】
リガンド結合ドメイン内に突然変異を有するActRIIBポリペプチドの具体的な例として、変異体ActRIIBポリペプチドが、アクチビンではなく、GDF8に優先的に結合するように、ActRIIBのリガンド結合ドメインの正電荷を有するアミノ酸残基Asp(D80)を異なるアミノ酸残基に突然変異させることができる。具体的な実施態様において、D80残基を、非荷電アミノ酸残基、負電荷を有する(negative)アミノ酸残基、及び疎水性アミノ酸残基:からなる群から選択されるアミノ酸残基に変化させる。さらなる具体的な例として、疎水性残基L79を酸性アミノ酸のアスパラギン酸又はグルタミン酸に改変して、GDF11結合を保持したまま、アクチビン結合を大きく低下させることができる。当業者によって認識されるように、記載された突然変異、変異体、又は修飾の大部分は、核酸レベルで、又は場合によっては、翻訳後修飾もしくは化学合成により生成させることができる。そのような技術は、当技術分野で周知である。
【０２４３】
具体的な実施態様において、本明細書に記載の組成物及び方法で使用されるActRIIBのシグナル伝達インヒビターは、抗体のFc部分に連結したActRIIB受容体の細胞外ドメイン(例えば、アクチビン結合ドメイン)を含むコンジュゲート/融合タンパク質を含む。そのようなコンジュゲート/融合タンパク質は、本明細書に開示されるActRIIBポリペプチドのいずれか(例えば、配列番号17、18、23、26、27、29、30、31、32、33、36、37、42、もしくは43のいずれか)、当技術分野で公知の任意のActRIIBポリペプチド、又は当技術分野で公知の及び/もしくは本明細書に提供される方法を用いて作製される任意のActRIIBポリペプチドを含み得る。
【０２４４】
ある実施態様において、該細胞外ドメインは、リンカー、例えば、ペプチドリンカーを介して、抗体のFc部分に連結される。例示的なリンカーとしては、短いポリペプチド配列、例えば、2〜10個、2〜5個、2〜4個、2〜3個のアミノ酸残基(例えば、グリシン残基)、例えば、Gly-Gly-Glyリンカーなどが挙げられる。具体的な実施態様において、該リンカーは、アミノ酸配列Gly-Gly-Gly(GGG)を含む。別の具体的な実施態様において、該リンカーは、アミノ酸配列Thr-Gly-Gly-Gly(TGGG)を含む。任意に、Fcドメインは、Asp-265、リジン322、及びAsn-434などの残基に1以上の突然変異を有する。ある場合には、これらの突然変異のうちの1つ又は複数(例えば、Asp-265突然変異)を有する突然変異体Fcドメインは、野生型Fcドメインと比べて、Fcγ受容体に結合する能力が低下している。他の場合には、これらの突然変異のうちの1つ又は複数(例えば、Asn-434突然変異)を有する突然変異体Fcドメインは、野生型Fcドメインと比べて、MHCクラスI関連Fc-受容体(FcRN)に結合する能力が増大している。Fcドメインに融合したActRIIBの可溶性細胞外ドメインを含む例示的な融合タンパク質は、配列番号20、21、24、25、34、35、38、39、40、41、44、46、及び47に示されている。
【０２４５】
具体的な実施態様において、本明細書に記載の組成物及び方法で使用されるActRIIBシグナル伝達インヒビターは、抗体のFc部分に連結されたActRIIBの細胞外ドメイン、又はその部分を含み、ここで、該ActRIIBシグナル伝達インヒビターは、配列番号20、21、24、25、34、35、38、39、40、41、44、46、及び47から選択されるアミノ酸配列と少なくとも75％同一であるアミノ酸配列を含む。別の具体的な実施態様において、本明細書に記載の組成物及び方法で使用されるActRIIBシグナル伝達インヒビターは、抗体のFc部分に連結されたActRIIBの細胞外ドメイン、又はその部分を含み、ここで、該ActRIIBシグナル伝達インヒビターは、配列番号20、21、24、25、34、35、38、39、40、41、44、46、及び47から選択されるアミノ酸配列と少なくとも80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、又は99％同一であるアミノ酸配列を含む。
【０２４６】
具体的な実施態様において、本明細書に記載の組成物及び方法で使用されるActRIIBシグナル伝達インヒビターは、ヒトActRIIB受容体の細胞外ドメインとIgG1のFc部分の融合タンパク質である。別の具体的な実施態様において、本明細書に記載の組成物及び方法で使用されるActRIIBシグナル伝達インヒビターは、ヒトActRIIB受容体の切断された細胞外ドメインとIgG1のFc部分の融合タンパク質である。別の具体的な実施態様において、本明細書に記載の組成物及び方法で使用されるActRIIBシグナル伝達インヒビターは、ヒトActRIIB受容体の切断された細胞外ドメインとIgG1のFc部分の融合タンパク質であり、ここで、該ヒトActRIIB受容体の切断された細胞外ドメインは、配列番号16又は配列番号28のアミノ酸79に対応するアミノ酸位置にアミノ酸置換を保有する。一実施態様において、配列番号16又は配列番号28のアミノ酸79に対応するアミノ酸位置でのアミノ酸置換は、ロイシンからアスパラギン酸への置換(すなわち、L79D突然変異)である。
【０２４７】
具体的な実施態様において、本明細書に記載の組成物及び方法で使用されるActRIIBシグナル伝達インヒビターは、配列番号24又は25であり、これらは、ヒトActRIIB受容体の細胞外ドメインとIgG1のFc部分の融合タンパク質を表し、ここで、該ActRIIB細胞外ドメインは、配列番号28のアミノ酸25〜131を含み、L79D突然変異を有する。配列番号24のActRIIB-Fc融合タンパク質をコードする核酸配列は、配列番号45に示されている。
【０２４８】
別の具体的な実施態様において、本明細書に記載の組成物及び方法で使用されるActRIIBシグナル伝達インヒビターは、配列番号34又は35であり、これらは、ヒトActRIIB受容体の細胞外ドメインとIgG1のFc部分の融合タンパク質を表し、ここで、該ActRIIB細胞外ドメインは、配列番号16のアミノ酸25〜131を含み、L79D突然変異を有する。
【０２４９】
アスパラギン結合型グリコシル化認識部位は、通常、適当な細胞グリコシル化酵素によって特異的に認識されるアスパラギン-X-トレオニン(又はアスパラギン-X-セリン)(ここで、「X」は、任意のアミノ酸である)というトリペプチド配列を含む。改変は、野生型ActRIIBポリペプチドの配列への1以上のセリンもしくはトレオニン残基の付加、又はそれらによる置換によって行うこともできる(O結合型グリコシル化部位の場合)。グリコシル化認識部位の1番目もしくは3番目のアミノ酸位置のうちの一方もしくは両方における種々のアミノ酸置換もしくは欠失(及び/又は2番目の位置におけるアミノ酸欠失)は、修飾されたトリペプチド配列中での非グリコシル化をもたらす。ActRIIBポリペプチド上の炭水化物部分の数を増加させる別の手段は、ActRIIBポリペプチドへのグリコシドの化学的又は酵素的カップリングによるものである。使用されるカップリング様式に応じて、糖(複数可)を、(a)アルギニン及びヒスチジン;(b)遊離カルボキシル基;(c)遊離スルフヒドリル基、例えば、システインの遊離スルフヒドリル基;(d)遊離ヒドロキシル基、例えば、セリン、トレオニン、もしくはヒドロキシプロリンの遊離ヒドロキシル基;(e)芳香族残基、例えば、フェニルアラニン、チロシン、もしくはトリプトファンの芳香族残基;又は(f)グルタミンのアミド基に結合させることができる。これらの方法は、引用により本明細書中に組み込まれる、1987年9月11日に公開されたWO 87/05330号、並びにAplin及びWristonの文献(1981) CRC Crit. Rev. Biochem., pp. 259-306に記載されている。ActRIIBポリペプチド上に存在する1以上の炭水化物部分の除去は、化学的に及び/又は酵素的に達成することができる。化学的脱グリコシル化は、例えば、化合物トリフルオロメタンスルホン酸、又は同等の化合物へのActRIIBポリペプチドの暴露を含み得る。この処理は、結合糖(N-アセチルグルコサミン又はN-アセチルガラクトサミン)を除くほとんど又は全ての糖の切断をもたらすが、アミノ酸配列は無傷のまま残す。化学的脱グリコシル化は、Hakimuddinらの文献(1987) Arch. Biochem. Biophys. 259:52によって、及びEdgeらの文献(1981) Anal. Biochem. 118:131によってさらに記載されている。ActRIIBポリペプチド上の炭水化物部分の酵素的切断は、Thotakuraらの文献(1987) Meth. Enzymol. 138:350により記載されているような種々のエンドグリコシダーゼ及びエキソグリコシダーゼの使用により達成することができる。ActRIIBポリペプチドのアミノ酸配列は、適切な場合、使用される発現系の種類に応じて調整することができるが、それは、哺乳動物、酵母、昆虫、及び植物の細胞が全て、該ペプチドのアミノ酸配列によって影響され得る異なるグリコシル化パターンを導入することができるためである。一般に、ヒトで使用されるActRIIBタンパク質は、適切なグリコシル化を提供する哺乳動物細胞株、例えば、HEK293又はCHO細胞株で発現されるが、他の発現系、例えば、他の哺乳動物発現細胞株、グリコシル化酵素が改変されている酵母細胞株、及び昆虫細胞も同様に有用であると考えられる。
【０２５０】
具体的な実施態様において、本明細書に包含されるのは、ActRIIB(R64)-Fc形態と比べて、ActRIIB-Fc融合タンパク質の血清半減期を延長するさらなるN結合型グリコシル化部位(N-X-S/T)の付加を含む突然変異ActRIIBポリペプチドである。具体的な実施態様において、配列番号16又は配列番号28の位置24におけるアスパラギン(A24N)の導入は、より長い半減期を付与するNXT配列の生成をもたらす。他のNX(T/S)配列は、42〜44(NQS)及び65〜67(NSS)に見出すことができるが、後者は、位置64のRでは(すなわち、R64ポリペプチド中では)効率的にグリコシル化することができない。N-X-S/T配列は、通常、上で詳述されている、ActRIIBのリガンド結合ポケットの外側の位置で導入することができる。非内在性N-X-S/T配列の導入のための特に好適な部位としては、配列番号16又は配列番号28のアミノ酸20〜29、20〜24、22〜25、109〜134、120〜134、又は129〜134が挙げられる。N-X-S/T配列は、ActRIIB配列とFc又は他の融合体成分との間のリンカーに導入することもできる。そのような部位は、既存のSもしくはTに対して正しい位置にNを導入することによるか、又は既存のNに対応する位置にSもしくはTを導入することにより、最小限の労力で導入することができる。したがって、N結合型グリコシル化部位を生成させる望ましい改変は: A24N、R64N、S67N(おそらくは、N65A改変と併存する)、E106N、R112N、G120N、E123N、P129N、A132N、R112S、及びR112Tである(これらの位置に対応する全てのアミノ酸位置について、それらを配列番号16又は配列番号28に見出すことができる)。グリコシル化によって保護が生じるので、グリコシル化されると予測される任意のSを、免疫原性部位を生成させることなく、Tに改変することができる。同様に、グリコシル化されると予測される任意のTをSに改変することができる。したがって、改変S67T及びS44Tは本明細書に包含される。同様に、A24N変異体において、S26T改変を使用することができる。したがって、ActRIIBポリペプチドは、1以上の追加の非内在性N結合型グリコシル化コンセンサス配列を含むことができる。
【０２５１】
種々のスクリーニングアッセイが本明細書に提供されており、そのようなアッセイを用いて、ActRIIBポリペプチド変異体を評価することができる。例えば、ActRIIBポリペプチド変異体を、ActRIIBリガンドに結合する能力、ActRIIBリガンドのActRIIBポリペプチドへの結合を妨げる能力、又はActRIIBリガンドによって生じるシグナル伝達に干渉する能力についてスクリーニングすることができる。ActRIIBポリペプチド又はその変異体の活性を、細胞ベースのアッセイ又はインビボアッセイで試験することもできる。
【０２５２】
天然のActRIIBポリペプチドと比べて選択的な又は全般的に増大した効力を有する、コンビナトリアル由来の変異体を作製することができる。同様に、突然変異生成により、対応する野生型ActRIIBポリペプチドとは劇的に異なる細胞内半減期を有する変異体を生じさせることができる。例えば、改変タンパク質を、タンパク質分解、又は天然のActRIIBポリペプチドの破壊、さもなければ、不活化をもたらす他の細胞プロセスに対してより安定な状態又はあまり安定でない状態にするにすることができる。そのような変異体、及びそれらをコードする遺伝子を用いて、ActRIIBポリペプチドの半減期を調節することにより、ActRIIBポリペプチドレベルを改変することができる。例えば、短い半減期は、より一時的な生物学的効果を生じることができ、対象内の組換えActRIIBポリペプチドレベルのより厳しい制御を可能にすることができる。Fc融合タンパク質では、突然変異をリンカー(存在する場合)及び/又はFc部分中で生成させて、タンパク質の半減期を改変することができる。
【０２５３】
コンビナトリアルライブラリーは、各々の潜在的ActRIIBポリペプチド配列の少なくとも一部を含むポリペプチドのライブラリーをコードする遺伝子の縮重ライブラリーによって生成させることができる。例えば、潜在的ActRIIBポリペプチドヌクレオチド配列の縮重セットが、個々のポリペプチドとして、又はその代わりに、より大きな融合タンパク質のセット(例えば、ファージディスプレイの場合)として発現可能となるように、合成オリゴヌクレオチドの混合物を酵素的に連結して遺伝子配列にすることができる。
【０２５４】
潜在的ホモログのライブラリーを縮重オリゴヌクレオチド配列から作製することができる多くの方法がある。縮重遺伝子配列の化学合成を自動DNA合成装置で実行することができ、その後、合成遺伝子を発現用の適当なベクターに連結することができる。縮重オリゴヌクレオチドの合成は、当技術分野で周知である(例えば、Narang, S Aの文献(1983) Tetrahedron 39:3; Itakuraらの文献(1981) Recombinant DNA, Proc. 3rd Cleveland Sympos. Macromolecules, AG Walton編、Amsterdam: Elsevier pp 273-289; Itakuraらの文献(1984) Annu. Rev. Biochem. 53:323; Itakuraらの文献(1984) Science 198:1056; Ikeらの文献(1983) Nucleic Acid Res. 11:477を参照されたい)。そのような技術は、他のタンパク質の定方向進化において利用されている(例えば、Scottらの文献(1990) Science 249:386-390; Robertsらの文献(1992) PNAS USA 89:2429-2433; Devlinらの文献(1990) Science 249: 404-406; Cwirlaらの文献(1990) PNAS USA 87: 6378-6382;並びに米国特許第5,223,409号、第5,198,346号、及び第5,096,815号を参照されたい)。
【０２５５】
或いは、他の形態の突然変異生成を用いて、コンビナトリアルライブラリーを作製することができる。例えば、ActRIIBポリペプチド変異体を、例えば、アラニンスキャニング突然変異生成などを用いるスクリーニングによって(Rufらの文献(1994) Biochemistry 33:1565-1572; Wangらの文献(1994) J. Biol. Chem. 269:3095-3099; Balintらの文献(1993) Gene 137:109-118; Grodbergらの文献(1993) Eur. J. Biochem. 218:597-601; Nagashimaらの文献(1993) J. Biol. Chem. 268:2888-2892; Lowmanらの文献(1991) Biochemistry 30:10832-10838;及びCunninghamらの文献(1989) Science 244:1081-1085)、リンカースキャニング突然変異生成によって(Gustinらの文献(1993) Virology 193:653-660; Brownらの文献(1992) Mol. Cell Biol. 12:2644-2652; McKnightらの文献(1982) Science 232:316);飽和突然変異生成によって(Meyersらの文献(1986) Science 232:613); PCR突然変異生成によって(Leungらの文献(1989) Method Cell Mol Biol 1:11-19);又は化学的突然変異生成などを含むランダム突然変異生成によって(Millerらの文献(1992) 細菌遺伝学の短期講座(A Short Course in Bacterial Genetics)、CSHL Press, Cold Spring Harbor, N.Y.;及びGreenerらの文献(1994) Strategies in Mol Biol 7:32-34)、ライブラリーから作製し、単離することができる。特にコンビナトリアル設定でのリンカースキャニング突然変異生成は、ActRIIBポリペプチドの切断(生物活性)形態を同定する魅力的な方法である。
【０２５６】
点突然変異及び切断によって作製されたコンビナトリアルライブラリーの遺伝子産物をスクリーニングするための、さらに言うなら、特定の性質を有する遺伝子産物のcDNAライブラリーをスクリーニングするための、広範な技術が当技術分野で公知である。そのような技術は、一般に、ActRIIBポリペプチドのコンビナトリアル突然変異生成によって作製される遺伝子ライブラリーの迅速スクリーニングに適用可能である。大きな遺伝子ライブラリーのスクリーニングに最も広く使用されている技術は、通常、遺伝子ライブラリーを複製可能な発現ベクターにクローニングすること、適当な細胞を得られたベクターのライブラリーで形質転換すること、及びコンビナトリアル遺伝子を、所望の活性の検出によって、その産物が検出された遺伝子をコードするベクターの比較的簡単な単離が容易になる条件下で発現させることを含む。好ましいアッセイとしては、アクチビン結合アッセイ及びアクチビン媒介性細胞シグナル伝達アッセイが挙げられる。
【０２５７】
ある実施態様において、ActRIIBポリペプチドは、ActRIIBポリペプチドに天然に存在する任意の修飾に加えて、翻訳後修飾をさらに含み得る。そのような修飾としては、アセチル化、カルボキシル化、グリコシル化、リン酸化、脂質化、及びアシル化が挙げられるが、これらに限定されない。結果として、修飾されたActRIIBポリペプチドは、非アミノ酸要素、例えば、ポリエチレングリコール、脂質、多糖又は単糖、及びホスフェートを含有し得る。ActRIIBポリペプチドの機能性に対するそのような非アミノ酸要素の効果は、当業者に公知の任意の方法によって試験することができる。ActRIIBポリペプチドが、ActRIIBポリペプチドの新生形態を切断することによって細胞内で産生される場合、翻訳後プロセシングもまた、タンパク質の正確なフォールディング及び/又は機能に重要であり得る。様々な細胞(例えば、CHO、HeLa、MDCK、293、W138、NIH-3T3、又はHEK293)は、そのような翻訳後活性のための特異的細胞装置及び特徴的機構を有しており、該細胞を、ActRIIBポリペプチドの正確な修飾及びプロセシングを保証するために選択することができる。
【０２５８】
ある態様において、ActRIIBポリペプチドの機能的変異体又は修飾形態には、ActRIIBポリペプチドの少なくとも一部及び1以上の融合ドメインを有する融合タンパク質が含まれる。そのような融合ドメインのよく知られた例としては、ポリヒスチジン、Glu-Glu、グルタチオンSトランスフェラーゼ(GST)、チオレドキシン、プロテインA、プロテインG、免疫グロブリン重鎖定常領域(Fc)、マルトース結合タンパク質(MBP)、又はヒト血清アルブミンが挙げられるが、これらに限定されない。融合ドメインを、所望の特性を付与するように選択することができる。例えば、いくつかの融合ドメインは、親和性クロマトグラフィーによる融合タンパク質の単離に特に有用である。親和性精製の目的で、親和性クロマトグラフィー用の関連するマトリックス、例えば、グルタチオン、アミラーゼ、及びニッケル又はコバルトコンジュゲート樹脂が使用される。そのようなマトリックスの多くは、「キット」形態で入手可能であり、これには、例えば、(HIS6)融合パートナーと合わせて有用な、Pharmacia GST精製システム及びQIAexpress(商標)システム(Qiagen)がある。別の例として、融合ドメインを、ActRIIBポリペプチドの検出を容易にするように選択することができる。そのような検出ドメインの例としては、様々な蛍光タンパク質(例えば、GFP)及び通常、特異的抗体が利用可能な短いペプチド配列である「エピトープタグ」が挙げられる。特異的モノクローナル抗体がすぐに利用可能である周知のエピトープタグとしては、FLAG、インフルエンザウイルスヘマグルチニン(HA)、及びc-mycタグが挙げられる。場合により、融合ドメインは、例えば、第Xa因子又はトロンビン用のプロテアーゼ切断部位を有し、該部位は、関連するプロテアーゼが融合タンパク質を部分消化し、それにより、組換えタンパク質をそれから遊離させることを可能にする。その後、遊離したタンパク質を、後続のクロマトグラフィー分離によって融合ドメインから単離することができる。ある好ましい実施態様において、ActRIIBポリペプチドを、インビボでActRIIBポリペプチドを安定化するドメイン(「スタビライザー」ドメイン)と融合させる。「安定化する」とは、血清半減期を延長する全てのことを意味し、これは、破壊の減少によるものか、腎臓によるクリアランスの減少によるものか、又は他の薬物動態作用によるものかを問わない。免疫グロブリンのFc部分との融合は、広範なタンパク質に望ましい薬物動態特性を付与することが知られている。同様に、ヒト血清アルブミンへの融合は、望ましい特性を付与することができる。選択され得る他のタイプの融合ドメインとしては、多量体化(例えば、二量体化、四量体化)ドメイン及び(望ましい場合、追加の生物学的機能、例えば、骨成長又は筋肉成長のさらなる刺激を付与する)機能ドメインが挙げられる。
【０２５９】
融合タンパク質の様々なエレメントを、所望の機能と一致する任意の方法で配置し得ることが理解される。例えば、ActRIIBポリペプチドを異種ドメインのC末端に配置することができ、又はその代わりに、異種ドメインをActRIIBポリペプチドのC末端に配置することができる。ActRIIBポリペプチドドメイン及び異種ドメインは、融合タンパク質中で隣接している必要がなく、追加のドメイン又はアミノ酸配列を、どちらかのドメインのC末端もしくはN末端、又はこれらのドメインの間に含めることができる。
【０２６０】
ある実施態様において、ActRIIBポリペプチドは、ActRIIBポリペプチドを安定化することができる1以上の修飾を含む。例えば、そのような修飾は、ActRIIBポリペプチドのインビトロ半減期を向上させるか、ActRIIBポリペプチドの循環半減期を向上させるか、又はActRIIBポリペプチドのタンパク質分解を低下させる。そのような安定化修飾としては、融合タンパク質(例えば、ActRIIBポリペプチド及びスタビライザードメインを含む融合タンパク質を含む)、グリコシル化部位の修飾(例えば、ActRIIBポリペプチドへのグリコシル化部位の付加を含む)、並びに炭水化物部分の修飾(例えば、ActRIIBポリペプチドからの炭水化物部分の除去を含む)が挙げられるが、これらに限定されない。融合タンパク質の場合、ActRIIBポリペプチドを、スタビライザードメイン、例えば、IgG分子(例えば、Fcドメイン)に融合させる。本明細書で使用されるように、「スタビライザードメイン」という用語は、融合タンパク質の場合に見られる融合ドメイン(例えば、Fc)を指すだけでなく、炭水化物部分などの非タンパク質性修飾、又はポリエチレングリコールなどの非タンパク質性ポリマーも含む。
【０２６１】
ある実施態様において、他のタンパク質から単離されているか、又は別の方法で他のタンパク質を実質的に含まない、単離及び/又は精製された形態のActRIIBポリペプチドを本明細書に記載の方法及び組成物とともに使用することができる。ActRIIBポリペプチドは、通常、組換え核酸からの発現によって産生される。
【０２６２】
ある態様において、本明細書に提供されるのは、本明細書に開示される断片、機能的変異体、及び融合タンパク質を含む、ActRIIBポリペプチドのいずれか(例えば、可溶性ActRIIBポリペプチド)をコードする単離された及び/又は組換え核酸である。例えば、配列番号19は、天然のヒトActRIIB前駆ポリペプチドをコードする。対象核酸は、一本鎖又は二本鎖であり得る。そのような核酸は、DNA又はRNA分子であり得る。これらの核酸を、例えば、ActRIIBポリペプチドを作製する方法で、又は直接的な治療剤として(例えば、遺伝子療法の手法で)使用することができる。
【０２６３】
ある態様において、ActRIIBポリペプチドをコードする核酸は、配列番号19の変異体並びに可溶性ActRIIBポリペプチドをコードする核酸配列(例えば、配列番号17、18、23、26、27、29、30、31、32、33、36、37、42、及び43をコードする核酸)の変異体である核酸を含むことがさらに理解される。変異体ヌクレオチド配列には、1以上のヌクレオチド置換、付加、又は欠失によって異なる配列、例えば、アレル変異体が含まれる。
【０２６４】
ある実施態様において、使用することができる単離された又は組換え核酸配列は、配列番号19又は可溶性ActRIIBポリペプチドをコードする核酸配列(例えば、配列番号17、18、23、26、27、29、30、31、32、33、36、37、42、及び43をコードする核酸)と少なくとも80％、85％、90％、95％、97％、98％、99％、又は100％同一である。当業者は、配列番号19又は可溶性ActRIIBポリペプチドをコードする核酸配列(例えば、配列番号17、18、23、26、27、29、30、31、32、33、36、37、42、及び43をコードする核酸)に相補的な核酸配列、並びに配列番号19又は可溶性ActRIIBポリペプチドをコードする核酸配列(例えば、配列番号17、18、23、26、27、29、30、31、32、33、36、37、42、及び43をコードする核酸)の変異体を、本明細書に記載の方法及び組成物とともに使用することができることを理解するであろう。さらなる実施態様において、該核酸配列は、単離されたもの、組換え体、及び/もしくは異種ヌクレオチド配列と融合したもの、又はDNAライブラリー中のものであることができる。
【０２６５】
他の実施態様において、使用することができる核酸は、配列番号19に表記されるヌクレオチド配列もしくは可溶性ActRIIBポリペプチドをコードする核酸配列(例えば、配列番号17、18、23、26、27、29、30、31、32、33、36、37、42、及び43をコードする核酸)、配列番号19もしくは可溶性ActRIIBポリペプチドをコードする核酸配列(例えば、配列番号17、18、23、26、27、29、30、31、32、33、36、37、42、及び43をコードする核酸)の相補的配列、又はこれらの断片に高いストリンジェンシー条件下でハイブリダイズするヌクレオチド配列も含む。上で論じたように、当業者は、DNAハイブリダイゼーションを促進する適切なストリンジェンシー条件を変化させることができることを容易に理解するであろう。当業者は、DNAハイブリダイゼーションを促進する適切なストリンジェンシー条件を変化させることができることを理解するであろう。例えば、ハイブリダイゼーションを、約45℃での6.0×塩化ナトリウム/クエン酸ナトリウム(SSC)、次いで、50℃での2.0×SSCの洗浄で実施することができる。例えば、洗浄工程での塩濃度を、50℃で約2.0×SSCの低いストリンジェンシーから50℃で約0.2×SSCの高いストリンジェンシーまで選択することができる。さらに、洗浄工程での温度を、室温、約22℃での低いストリンジェンシー条件から約65℃での高いストリンジェンシー条件へと上昇させることができる。温度と塩の両方を変化させることができ、又は他の変数を変化させながら、温度もしくは塩濃度を一定に保つことができる。一実施態様において、室温での6×SSC、次に、室温での2×SSCでの洗浄の低いストリンジェンシー条件下でハイブリダイズする核酸を、本明細書に記載の方法及び組成物とともに使用することができる。
【０２６６】
遺伝暗号の縮重のために配列番号19又は可溶性ActRIIBポリペプチドをコードする核酸配列(例えば、配列番号17、18、23、26、27、29、30、31、32、33、36、37、42、及び43をコードする核酸)に示される核酸とは異なる単離された核酸を使用することもできる。例えば、いくつかのアミノ酸は、複数のトリプレットによって指定される。同じアミノ酸を特定するコドン、又はシノニム(例えば、CAUとCACは、ヒスチジンについてのシノニムである)は、タンパク質のアミノ酸配列に影響を及ぼさない「サイレント突然変異」を生じさせることができる。しかしながら、対象タンパク質のアミノ酸配列の変化を実際にもたらすDNA配列多型が哺乳動物細胞の間に存在すると考えられる。
当業者は、特定のタンパク質をコードする核酸の1以上のヌクレオチドにおけるこれらの変異(variation)(ヌクレオチドの最大約3〜5％)が、天然のアレル変異(variation)が原因で、所与の種の個体間に存在し得ることを理解しているであろう。ありとあらゆるそのようなヌクレオチド変異(variation)及び結果として生じるアミノ酸多型を本明細書に記載の方法及び組成物とともに使用することができる。
【０２６７】
ある実施態様において、組換え核酸を、発現コンストラクト中の1以上の調節ヌクレオチド配列に機能的に連結することができる。調節ヌクレオチド配列は、通常、発現に使用される宿主細胞に適したものである。種々の宿主細胞について、数多くの種類の適切な発現ベクター及び好適な調節配列が当技術分野で公知である。一般に、該1以上の調節ヌクレオチド配列としては、プロモーター配列、リーダー又はシグナル配列、リボソーム結合部位、転写開始及び終結配列、翻訳開始及び終結配列、並びにエンハンサー又はアクチベーター配列が挙げられるが、これらに限定されない。当技術分野で公知の構成的又は誘導性プロモーターを本明細書に記載の方法及び組成物とともに使用することができる。プロモーターは、天然プロモーター、又は複数のプロモーターのエレメントを組み合わせるハイブリッドプロモーターのどちらかであり得る。発現コンストラクトは、細胞内でプラスミドなどのエピソーム上に存在してもよく、又は発現コンストラクトは、染色体に挿入されてもよい。好ましい実施態様において、発現ベクターは、形質転換した宿主細胞の選択を可能にする選択可能マーカー遺伝子を含む。選択可能マーカー遺伝子は当技術分野で周知であり、使用される宿主細胞によって異なる。
【０２６８】
ある態様において、対象核酸は、ActRIIBポリペプチドをコードし、少なくとも1つの調節配列に機能的に連結されているヌクレオチド配列を含む発現ベクター中に提供される。調節配列は当技術分野で認められており、ActRIIBポリペプチドの発現を導くように選択される。したがって、調節配列という用語は、プロモーター、エンハンサー、及び他の発現制御エレメントを含む。例示的な調節配列は、Goeddelの文献;遺伝子発現技術:酵素学の方法(Gene Expression Technology: Methods in Enzymology), Academic Press, San Diego, Calif.(1990)に記載されている。例えば、それに機能的に連結されたときDNA配列の発現を制御する多種多様な発現制御配列のいずれかをこれらのベクター中で用いて、ActRIIBポリペプチドをコードするDNA配列を発現させることができる。そのような有用な発現制御配列としては、例えば、SV40の初期及び後期プロモーター、tetプロモーター、アデノウイルス又はサイトメガロウイルス前初期プロモーター、RSVプロモーター、lacシステム、trpシステム、TAC又はTRCシステム、その発現がT7 RNAポリメラーゼによって誘導されるT7プロモーター、ラムダファージの主要オペレーター及びプロモーター領域、fdコートタンパク質の制御領域、3-ホスホグリセレートキナーゼ又は他の解糖系酵素のプロモーター、酸ホスファターゼ、例えば、Pho5のプロモーター、酵母のα接合因子のプロモーター、バキュロウイルス系のポリヘドロンプロモーター、並びに原核もしくは真核細胞又はそれらのウイルスの遺伝子の発現を制御することが知られている他の配列、並びにこれらの様々な組合せが挙げられる。発現ベクターの設計は、形質転換される宿主細胞の選択及び/又は発現が望まれるタンパク質の種類のような因子によって決まることが理解されるべきである。さらに、ベクターのコピー数、そのコピー数を制御する能力、及び該ベクターによってコードされる任意の他のタンパク質、例えば、抗生物質マーカーの発現も考慮されるべきである。
【０２６９】
組換え核酸は、クローニングされた遺伝子、又はその一部を、原核細胞、真核細胞(酵母、鳥類、昆虫、もしくは哺乳動物)、又はその両方における発現に好適なベクター中に連結することにより産生することができる。組換えActRIIBポリペプチドの産生用の発現ビヒクルとしては、プラスミド及び他のベクターが挙げられる。例えば、好適なベクターとしては、大腸菌(E. coli)などの原核細胞における発現用の、以下のタイプのプラスミド: pBR322由来プラスミド、pEMBL由来プラスミド、pEX由来プラスミド、pBTac由来プラスミド、及びpUC由来プラスミドが挙げられる。
【０２７０】
いくつかの哺乳動物発現ベクターは、細菌におけるベクターの増殖を促進する原核生物配列と、真核細胞で発現される1以上の真核生物転写ユニットの両方を含む。pcDNAI/amp、pcDNAI/neo、pRc/CMV、pSV2gpt、pSV2neo、pSV2-dhfr、pTk2、pRSVneo、pMSG、pSVT7、pko-neo 及びpHyg由来ベクターは、真核細胞のトランスフェクションに好適な哺乳動物発現ベクターの例である。これらのベクターのうちのいくつかは、原核細胞と真核細胞の両方における複製及び薬物耐性選択を容易にするために、pBR322などの細菌プラスミド由来の配列で修飾されている。或いは、ウシパピローマウイルス(BPV-1)、又はエプスタイン-バーウイルス(pHEBo、pREP由来、及びp205)などのウイルスの派生物を、真核細胞におけるタンパク質の一過性発現に使用することができる。(レトロウイルスを含む)他のウイルス発現系の例は、以下の遺伝子療法送達系の記載において見出すことができる。プラスミドの増殖及び宿主生物の形質転換に利用される様々な方法は、当技術分野で周知である。原核細胞と真核細胞の両方に関する他の好適な発現系、及び一般的な組換え手順については、分子クローニング  実験マニュアル(Molecular Cloning A Laboratory Manual)、第3版、Sambrook、Fritsch、及びManiatis編(Cold Spring Harbor Laboratory Press, 2001)を参照されたい。いくつかの例において、バキュロウイルス発現系の使用によって組換えポリペプチドを発現させることが望ましい場合がある。そのようなバキュロウイルス発現系の例としては、pVL由来ベクター(例えば、pVL1392、pVL1393、及びpVL941)、pAcUW由来ベクター(例えば、pAcUW1)、並びにpBlueBac由来ベクター(例えば、β-gal含有pBlueBac III)が挙げられる。
【０２７１】
好ましい実施態様において、Pcmv-Scriptベクター(Stratagene, La Jolla, Calif.)、pcDNA4ベクター(Invitrogen, Carlsbad, Calif.)、及びpCI-neoベクター(Promega, Madison, Wis.)などのベクターを、CHO細胞内での対象ActRIIBポリペプチドの産生のために設計する。明らかになるように、対象遺伝子コンストラクトを用いて、例えば、精製用の、融合タンパク質又は変異体タンパク質を含む、タンパク質を産生するために、培養で増殖した細胞内での対象ActRIIBポリペプチドの発現を生じさせることができる。
【０２７２】
本開示は、1以上の該対象ActRIIBポリペプチドのコード配列(例えば、配列番号19又は可溶性ActRIIBポリペプチドをコードする核酸配列(例えば、配列番号17、18、23、26、27、29、30、31、32、33、36、37、42、及び43をコードする核酸))を含む組換え遺伝子でトランスフェクトされた宿主細胞に関するものでもある。宿主細胞は、任意の原核又は真核細胞であり得る。例えば、ActRIIBポリペプチドを、大腸菌などの細菌細胞、昆虫細胞(例えば、バキュロウイルス発現系を用いる)、酵母、又は哺乳動物細胞で発現させることができる。他の好適な宿主細胞は、当業者に公知である。
【０２７３】
したがって、本明細書に提供されるのは、ActRIIBポリペプチドを産生する方法である。例えば、ActRIIBポリペプチドをコードする発現ベクターでトランスフェクトされた宿主細胞を、ActRIIBポリペプチドの発現が生じるのを可能にする適当な条件下で培養することができる。ActRIIBポリペプチドを分泌させ、細胞とActRIIBポリペプチドを含む培地の混合物から単離することができる。或いは、ActRIIBポリペプチドを細胞質内又は膜画分に保持し、細胞を回収し、溶解させ、タンパク質を単離することができる。細胞培養物には、宿主細胞、培地、及び他の副産物が含まれる。細胞培養用の好適な培地は、当技術分野で周知である。対象ActRIIBポリペプチドを、イオン交換クロマトグラフィー、ゲル濾過クロマトグラフィー、限外濾過、電気泳動、ActRIIBポリペプチドの特定のエピトープに特異的な抗体による免疫親和性精製、及びActRIIBポリペプチドに融合しているドメインに結合する物質による親和性精製(例えば、プロテインAカラムを用いて、ActRIIB-Fc融合体を精製することができる)を含む、タンパク質を精製するための当技術分野で公知の技術を用いて、細胞培養培地、宿主細胞、又はその両方から単離することができる。好ましい実施態様において、ActRIIBポリペプチドは、その精製を容易にするドメインを含む融合タンパク質である。好ましい実施態様において、精製は、例えば、以下のもの:プロテインAクロマトグラフィー、Qセファロースクロマトグラフィー、フェニルセファロースクロマトグラフィー、サイズ排除クロマトグラフィー、及び陽イオン交換クロマトグラフィーのうちの3つ以上を、任意の順序で含む、一連のカラムクロマトグラフィー工程により達成される。精製は、ウイルス濾過及びバッファー交換で終了させることができる。本明細書で実証されるように、ActRIIB-hFcタンパク質は、サイズ排除クロマトグラフィーにより決定して98％を超える純度及びSDS PAGEにより決定して95％を超える純度に精製された。この精製レベルは、マウスの骨に対する望ましい効果並びにマウス、ラット、及び非ヒト霊長類における許容し得る安全性プロファイルを達成するのに十分であった。
【０２７４】
別の実施態様において、組換えActRIIBポリペプチドの所望の部分のN末端におけるポリ-(His)/エンテロキナーゼ切断部位配列などの精製リーダー配列をコードする融合遺伝子は、Ni2+金属樹脂を用いる親和性クロマトグラフィーによる発現された融合タンパク質の精製を可能にすることができる。次いで、精製リーダー配列をエンテロキナーゼによる処理によって後から除去し、精製ActRIIBポリペプチドを提供することができる(例えば、Hochuliらの文献(1987) J. Chromatography 411:177;及びJanknechtらの文献、PNAS USA 88:8972を参照されたい)。
【０２７５】
融合遺伝子を作製する技術は周知である。本質的に、異なるポリペプチド配列をコードする様々なDNA断片の接続は、ライゲーションのための平滑末端又は互い違い末端、適切な末端を提供するための制限酵素消化、必要な場合の付着末端の充填(filling-in)、望ましくない接続を避けるためのアルカリホスファターゼ処理、及び酵素的ライゲーションを利用する従来の技術に従って実施される。別の実施態様において、融合遺伝子は、自動化DNA合成装置を含む従来の技術によって合成することができる。或いは、後からアニーリングさせてキメラ遺伝子配列を生成させることができる2つの連続する遺伝子断片間の相補的突出を生じさせるアンカープライマーを用いて、遺伝子断片のPCR増幅を実施することができる(例えば、分子生物学の最新プロトコル(Current Protocols in Molecular Biology)、Ausubelら編、John Wiley & Sons: 1992を参照されたい)。
【０２７６】
ActRIIB-Fc融合タンパク質は、安定にトランスフェクトされたCHO-DUKX Bl 1細胞で、配列番号8の組織プラスミノーゲンリーダー配列を用いて、pAID4ベクター(SV40 ori/エンハンサー、CMVプロモーター)から発現させることができる。Fc部分は、配列番号7に示されるヒトIgGl Fc配列を含むことができる。ある実施態様において、発現させたとき、含まれるタンパク質は、ActRIIB-Fc融合タンパク質1分子当たり、平均で約1.5〜2.5モルのシアル酸を有する。
【０２７７】
ある実施態様において、ActRIIB-Fc融合体の長い血清半減期は、ヒト対象で25〜32日であることができる。さらに、CHO細胞で発現される物質は、ヒト293細胞で発現されるActRIIB-hFc融合タンパク質について報告されたものよりも高いアクチビンBリガンドに対する親和性を有することができる(del Reらの文献、J Biol Chem. 2004 Dec 17;279(51):53126-35)。さらに、理論によって束縛されるものではないが、TPAリーダー配列の使用は、他のリーダー配列よりも大きな産生をもたらし、天然のリーダーで発現されるActRIIB-Fcとは異なり、極めて純粋なN末端配列を提供することができる。天然のリーダー配列の使用は、各々異なるN末端配列を有する2つの主要な種のActRIIB-Fcを生じさせることができる。
【０２７８】
(7.9.3  他のActRII受容体シグナル伝達インヒビター)
ある実施態様において、本明細書に記載の組成物及び方法で使用されるActRII受容体のシグナル伝達インヒビターは、核酸化合物である。
【０２７９】
ActRII受容体を阻害する核酸化合物のカテゴリーの例としては、アンチセンス核酸、siRNA又はRNAiコンストラクト、及び触媒核酸コンストラクトが挙げられる。核酸化合物は、一本鎖又は二本鎖であり得る。二本鎖化合物は、鎖のどちらか一方が一本鎖である突出又は非相補性領域を含むこともできる。一本鎖化合物は、自己相補性領域を含むことができ、これは、該化合物が、二本鎖らせん構造の領域を含む、いわゆる「ヘアピン」又は「ステムループ」構造を形成し得ることを意味する。
【０２８０】
ある実施態様において、ActRII受容体を阻害する核酸化合物は、1000以下、500以下、250以下、100以下、又は50、35、30、25、22、20、もしくは18以下のヌクレオチドの全長ActRII受容体核酸配列又はアクチビン核酸配列(例えば、βA又はβBとも呼ばれる、アクチビンA又はアクチビンBサブユニットの核酸配列)からなる領域に相補的であるヌクレオチド配列を含み得る。具体的な実施態様において、相補性領域は、少なくとも8ヌクレオチド、任意に、少なくとも10又は少なくとも15ヌクレオチド、任意に、15〜25ヌクレオチドである。相補性領域は、標的転写物のイントロン、コード配列、又は非コード配列、例えば、コード配列部分に含まれ得る。一般に、ActRII受容体を阻害する核酸化合物は、約8〜約500ヌクレオチド又は塩基対長の長さを有し、任意に、長さは、約14〜約50ヌクレオチドである。ActRII受容体を阻害する核酸化合物は、DNA(特にアンチセンスとして使用される)、RNA、又はRNA:DNAハイブリッドであり得る。どの1つの鎖も、DNAとRNAの混合物、及びDNA又はRNAのどちらかに容易に分類することができない修飾形態を含み得る。同様に、二本鎖核酸化合物は、DNA:DNA、DNA:RNA、又はRNA:RNAであり得、どの1つの鎖も、DNAとRNAの混合物、及びDNA又はRNAのどちらかに容易に分類することができない修飾形態も含み得る。
【０２８１】
ActRII受容体を阻害する核酸化合物は、骨格(ヌクレオチド間結合を含む、天然の核酸の糖-リン酸部分)又は塩基部分(天然の核酸のプリンもしくはピリミジン部分)に対する1以上の修飾を含む、種々の修飾のいずれかを含み得る。ある実施態様において、アンチセンス核酸化合物は、約15〜約30ヌクレオチドの長さを有し、多くの場合、特定の特徴、例えば、血清中での安定性、細胞内での安定性、又は例えば、経口送達化合物の場合は胃、及び吸入化合物の場合は肺などの、該化合物が送達される可能性が高い場所での安定性を改善する1以上の修飾を含む。RNAiコンストラクトの場合、標的転写物に相補的な鎖は、通常、RNA又はその修飾物である。他の鎖は、RNA、DNA、又は任意の他の変形物であり得る。二本鎖又は一本鎖「ヘアピン」RNAiコンストラクトの二重鎖部分は、ある実施態様において、それがDicer基質としての役割を果たす限り、18〜40ヌクレオチド長、及び任意に、約21〜23ヌクレオチド長の長さを有する。触媒的又は酵素的核酸は、リボザイム又はDNA酵素であり得、修飾形態も含み得る。ある実施態様において、ActRII受容体を阻害する核酸化合物は、生理的条件下で及び非センス又はセンス対照がほとんど又は全く効果がない濃度で、その標的の発現を約50％、60％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、99％、又はそれより大きく阻害し得る。核酸化合物の効果を試験するための濃度としては、1、5、10マイクロモル濃度、又はそれを上回る濃度が挙げられる。
【０２８２】
他の実施態様において、本明細書に記載の組成物及び方法で使用されるActRII受容体のシグナル伝達インヒビターは、抗体である。そのような抗体としては、アクチビン(特に、βA又はβBとも呼ばれる、アクチビンA又はBサブユニット)に結合し、ActRII受容体結合を破壊する抗体;及びActRII受容体ポリペプチド(例えば、可溶性ActRIIA又は可溶性ActRIIBポリペプチド)に結合し、アクチビン結合を破壊する抗体が挙げられる。
【０２８３】
ActRII受容体ポリペプチド又はアクチビンポリペプチドに由来する免疫原を使用することにより、抗タンパク質/抗ペプチド抗血清又はモノクローナル抗体を標準的なプロトコルによって作製することができる(例えば、抗体:実験マニュアル(Antibodies: A Laboratory Manual)、Harlow及びLane編(Cold Spring Harbor Press: 1988)を参照されたい)。哺乳動物、例えば、マウス、ハムスター、又はウサギを、ActRII受容体ポリペプチドの免疫原性形態、抗体応答を誘発することができる抗原性断片、又は融合タンパク質で免疫することができる。タンパク質又はペプチドに免疫原性を付与する技術には、担体へのコンジュゲーション又は当技術分野で周知の他の技術が含まれる。ActRII受容体又はアクチビンポリペプチドの免疫原性部分は、アジュバントの存在下で投与することができる。免疫の進捗は、血漿又は血清中の抗体力価の検出によりモニタリングすることができる。標準的なELISA又は他の免疫アッセイを抗原としての免疫原とともに用いて、抗体のレベルを評価することができる。
【０２８４】
動物をActRII受容体ポリペプチドの抗原性調製物で免疫した後、抗血清を得ることができ、望ましい場合、ポリクローナル抗体を血清から単離することができる。モノクローナル抗体を産生するために、抗体産生細胞(リンパ球)を免疫動物から回収し、標準的な体細胞融合法によって骨髄腫細胞などの不死化細胞と融合させて、ハイブリドーマ細胞を得ることができる。そのような技術は当技術分野で周知であり、例えば、ハイブリドーマ技術(Kohler及びMilstein(1975) Nature, 256: 495-497により最初に開発されたもの)、ヒトB細胞ハイブリドーマ技術(Kozbarらの文献(1983) Immunology Today, 4: 72)、及びヒトモノクローナル抗体を産生するためのEBVハイブリドーマ技術(Coleらの文献(1985)モノクローナル抗体及び癌療法(Monoclonal Antibodies and Cancer Therapy)、Alan R. Liss, Inc. pp. 77-96)を含む。ハイブリドーマ細胞を、ActRII受容体ポリペプチドと特異的に反応する抗体の産生について免疫化学的にスクリーニングし、モノクローナル抗体を、そのようなハイブリドーマ細胞を含む培養物から単離することができる。
【０２８５】
本明細書で使用される「抗体」という用語は、その断片を含むことが意図され、該断片もまた、対象ポリペプチドと特異的に反応する。抗体を従来の技術を用いて断片化し、該断片を、全抗体について上で記載されているのと同じ方法で、有用性についてスクリーニングすることができる。例えば、F(ab)2断片は、抗体をペプシンで処理することにより作製することができる。得られたF(ab)2断片を処理して、ジスルフィド架橋を還元し、Fab断片を産生することができる。抗体は、抗体の少なくとも1つのCDR領域によって付与されるActRII受容体又はアクチビンポリペプチドに対する親和性を有する二重特異性、単鎖、キメラ、ヒト化、及び完全ヒト分子を含むことがさらに意図される。抗体は、それに付着し、検出されることができる標識をさらに含むことができる(例えば、該標識は、放射性同位体、蛍光化合物、酵素、又は酵素補因子であることができる)。
【０２８６】
ある実施態様において、抗体は組換え抗体であり、この用語は、一部は分子生物学の技術によって作製される任意の抗体を包含し、これには、CDR移植又はキメラ抗体、ライブラリー選択抗体ドメインから組み立てられたヒト抗体又は他の抗体、単鎖抗体、並びに単ドメイン抗体(例えば、ヒトVHタンパク質又はラクダ科VHHタンパク質)が含まれる。ある実施態様において、抗体はモノクローナル抗体であることができ、及びある実施態様において。例えば、ActRII受容体ポリペプチド又はアクチビンポリペプチドに特異的に結合するモノクローナル抗体を作製する方法は、検出可能な免疫応答を刺激するのに有効な量の抗原ポリペプチドを含む免疫原性組成物をマウスに投与し、該マウスから抗体産生細胞(例えば、脾臓由来の細胞)を取得し、該抗体産生細胞を骨髄腫細胞と融合させて、抗体産生ハイブリドーマを取得し、該抗体産生ハイブリドーマを試験して、該抗原に特異的に結合するモノクローナル抗体を産生するハイブリドーマを同定することを含み得る。ひとたび取得されれば、ハイブリドーマを、細胞培養物中で、及び任意に、ハイブリドーマ由来細胞が抗原に特異的に結合するモノクローナル抗体を産生する培養条件で増殖させることができる。モノクローナル抗体は、該細胞培養物から精製してもよい。
【０２８７】
抗体に関して使用される「と特異的に反応する」という形容詞は、当技術分野で一般に理解されているように、抗体が特定のタイプの生物学的試料中の関心対象の抗原の存在を最小限検出するのに有用であるほど、抗体が関心対象の抗原(例えば、ActRII受容体ポリペプチド)と関心対象ではない他の抗原との間で十分に選択的であることを意味することが意図される。治療への応用などの、抗体を利用する特定の方法において、より高度の結合特異性が望ましい場合がある。モノクローナル抗体は、通常、所望の抗原と交差反応性ポリペプチドとを効果的に識別する傾向が(ポリクローナル抗体と比較して)より高い。抗体:抗原相互作用の特異性に影響を及ぼす1つの特徴は、抗原に対する抗体の親和性である。所望の特異性は様々な異なる親和性を伴って達成され得るが、通常、好ましい抗体は、約10-6、10-7、10-8、10-9、又はそれ未満の親和性(解離定数)を有する。アクチビンとActRII受容体の異常に強力な結合を考慮すると、中和抗アクチビン又は抗ActRII受容体抗体は、通常、10-10以下の解離定数を有すると考えられる。
【０２８８】
さらに、望ましい抗体を同定するために抗体をスクリーニングするために使用される技術は、得られる抗体の特性に影響を及ぼし得る。例えば、抗体を溶液中の抗原に結合させるのに使用する場合、溶液結合を試験することが望ましい場合がある。抗体と抗原の相互作用を試験して、特に望ましい抗体を同定するために、種々の異なる技術が利用可能である。そのような技術としては、ELISA、表面プラズモン共鳴結合アッセイ(例えば、Biacore(商標)結合アッセイ、Biacore AB, Uppsala, Sweden)、サンドイッチアッセイ(例えば、IGEN International社, Gaithersburg, Md.の常磁性ビーズシステム)、ウェスタンブロット、免疫沈降アッセイ、及び免疫組織化学が挙げられる。
【０２８９】
ある実施態様において、本明細書に記載の組成物及び方法で使用されるActRII受容体シグナル伝達インヒビターには、別の形態のアクチビン、特に、I型受容体結合ドメイン中に改変を有し、II型受容体に結合することができ、かつ活性のある三重複合体を形成しないものが含まれる。ある実施態様において、アクチビンA、B、C、もしくはE、又は特に、ActRII受容体発現を阻害する核酸、例えば、アンチセンス分子、siRNA、又はリボザイムを、本明細書に記載の組成物及び方法で使用することができる。ある実施態様において、本明細書に記載の組成物及び方法で使用されるActRII受容体シグナル伝達インヒビターは、特に、GDF8及びGDF11に関して、TGF-βファミリーの他のメンバーと比べて、アクチビン媒介性シグナル伝達の阻害に選択性を示す。
【０２９０】
他の実施態様において、本明細書に記載の組成物及び方法で使用されるActRII受容体のシグナル伝達インヒビターは、ActRII受容体アンタゴニスト活性を有する非抗体タンパク質であり、これには、インヒビン(すなわち、インヒビンαサブユニット)、フォリスタチン(例えば、フォリスタチン-288及びフォリスタチン-315)、ケルベロス(Cerberus)、フォリスタチン関連タンパク質(「FSRP」)、エンドグリン、アクチビンC、α(2)-マクログロブリン、並びにM108A(位置108におけるメチオニンからアラニンへの変化)突然変異体アクチビンAが含まれる。
【０２９１】
具体的な実施態様において、本明細書に記載の組成物及び方法で使用されるActRII受容体シグナル伝達インヒビターは、アクチビン生物活性に拮抗し、及び/又はアクチビンに結合するフォリスタチンポリペプチドである。「フォリスタチンポリペプチド」という用語には、フォリスタチンの任意の天然のポリペプチド並びに有用な活性を保持するその任意の変異体(突然変異体、断片、融合体、及びペプチド模倣形態を含む)を含むポリペプチドが含まれ、フォリスタチンの任意の機能的単量体又は多量体がさらに含まれる。アクチビン結合特性を保持するフォリスタチンポリペプチドの変異体は、フォリスタチンとアクチビンの相互作用に関する以前の研究に基づいて同定することができる。例えば、引用により完全に本明細書中に含まれるWO2008/030367号には、アクチビン結合に重要であることが示されている具体的なフォリスタチンドメイン(「FSD」)が開示されている。フォリスタチンポリペプチドには、フォリスタチンポリペプチドの配列と少なくとも約80％同一な、及び任意に、少なくとも85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％、又はそれを上回って同一な配列を有する任意の公知のフォリスタチンの配列に由来するポリペプチドが含まれる。フォリスタチンポリペプチドの例としては、成熟フォリスタチンポリペプチドもしくはより短いアイソフォーム、又は例えば、引用により完全に本明細書中に含まれるWO2005/025601号に記載されているヒトフォリスタチン前駆ポリペプチドの他の変異体が挙げられる。
【０２９２】
具体的な実施態様において、本明細書に記載の組成物及び方法で使用されるActRII受容体シグナル伝達インヒビターは、アクチビン生物活性に拮抗し、及び/又はアクチビンに結合するフォリスタチン様関連遺伝子(FLRG)である。「FLRGポリペプチド」という用語には、FLRGの任意の天然のポリペプチド並びに有用な活性を保持するその任意の変異体(突然変異体、断片、融合体、及びペプチド模倣形態を含む)を含むポリペプチドが含まれる。アクチビン結合特性を保持するFLRGポリペプチドの変異体は、FLRGとアクチビンの相互作用をアッセイするルーチンの方法を用いて同定することができる。例えば、引用により完全に本明細書中に含まれる米国特許第6,537,966号を参照されたい。FLRGポリペプチドには、FLRGポリペプチドの配列と少なくとも約80％同一な、及び任意に、少なくとも85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％、又はそれを上回って同一な配列を有する任意の公知のFLRGの配列に由来するポリペプチドが含まれる。
【０２９３】
ある実施態様において、フォリスタチンポリペプチド及びFLRGポリペプチドの機能的変異体又は修飾形態には、フォリスタチンポリペプチド又はFLRGポリペプチドの少なくとも一部と、例えば、ポリペプチドの単離、検出、安定化、又は多量体化を容易にするドメインなどの1以上の融合ドメインとを有する融合タンパク質が含まれる。好適な融合ドメインは、ActRIIA及びActRIIBポリペプチドに関して上で詳細に論じられている。一実施態様において、ActRII受容体シグナル伝達インヒビターは、Fcドメインに融合したフォリスタチンポリペプチドのアクチビン結合部分を含む融合タンパク質である。別の実施態様において、ActRII受容体シグナル伝達インヒビターは、Fcドメインに融合したFLRGポリペプチドのアクチビン結合部分を含む融合タンパク質である。
【０２９４】
(7.10  アッセイ)
様々なActRIIポリペプチド変異体、又は可溶性ActRIIポリペプチド変異体を、ActRIIを阻害するその能力について試験することができる。さらに、化合物を、ActRIIを阻害するその能力について試験することができる。ひとたびActRII活性のシグナル伝達インヒビターが確認されれば、これらの化合物を本発明の方法とともに使用することができる。ActRIIは、ActRIIA又はActRIIBであることができる。下記のアッセイは、ActRIIAについて記載されているが、ActRIIBについても同様に実施することができる。これらのアッセイを用いて、(i)対象において、貧血、RBC輸血を必要とする貧血、MDS、及び/もしくは非増殖性CMMLの対象亜集団を特定し;(ii)対象において、貧血、RBC輸血を必要とする貧血、MDS、及び/もしくは非増殖性CMMLの対象を診断し;(iii)対象において、貧血、RBC輸血を必要とする貧血、MDS、及び/もしくは非増殖性CMMLの疾患持続及び/もしくは進行をモニタリングし;(iv)対象において、貧血、RBC輸血を必要とする貧血、MDS、及び/もしくは非増殖性CMMLの対象における治療に対する本明細書に提供される方法の効力をモニタリングし;並びに/又は(v)対象において、本明細書に記載のActRIIシグナル伝達インヒビターの効力をモニタリングすることができる。
【０２９５】
(7.10.1  参照集団)
ある実施態様において、参照集団の大きさは、約1、5、10、25、50、75、100、200、250、300、400、500、又は1000個体であることができる。ある実施態様において、参照集団は、ランダムボランティアからなる。ある実施態様において、参照集団は、健常人からなる。ある実施態様において、参照集団は、第7.8節に記載の患者集団と同じ年齢、体重、及び/又は性別の人々からなる。ある実施態様において、参照集団は、血液関連障害を有しない人々からなる。ある実施態様において、参照集団は、血液関連障害を有する人々からなり、ここで、該参照集団の人々は、環状鉄芽球を有しない。ある実施態様において、参照集団は、血液関連障害を有する人々からなり、ここで、該人々における赤芽球の15％、14％、13％、12％、11％、10％、9％、8％、7％、6％、5％、4％、3％、2％、又は1％未満は、環状鉄芽球である。ある実施態様において、参照集団は、血液関連障害を有する人々からなり、ここで、該人々における赤芽球の15％未満は、環状鉄芽球である。ある実施態様において、血液関連障害は、第7.8節に記載の血液関連障害である。ある実施態様において、参照集団は、貧血を有しない人々からなる。ある実施態様において、参照集団は、RBC輸血を必要とする貧血を有しない人々からなる。ある実施態様において、参照集団は、MDSを有しない人々からなる。ある実施態様において、参照集団は、非増殖性CMMLを有しない人々からなる。
【０２９６】
(7.10.2  環状鉄芽球)
環状鉄芽球は、異常赤芽球である。さらに、MDSと関連する特定の体細胞突然変異は、環状鉄芽球形成及び無効造血を引き起こす。スプライシング因子3B1(SF3B1)における優性突然変異は、環状鉄芽球の形成と関連している。本明細書で使用されるように、「RS+」は、対象における赤芽球の少なくとも15％が環状鉄芽球である対象を指す。ある実施態様において、環状鉄芽球のパーセンテージは、環状鉄芽球である赤芽球のパーセンテージである。ある実施態様において、環状鉄芽球のパーセンテージは、環状鉄芽球である赤血球前駆細胞のパーセンテージである。環状鉄芽球は、核の外周の少なくとも3分の1にわたって最低5つの鉄含有(鉄沈着性)顆粒が存在する赤芽球である。試料中の環状鉄芽球の同定の説明については、Muftiらの文献、2008, Haematologica, 93(11):1712-7を参照されたい。環状鉄芽球において、鉄担持ミトコンドリアは、プルシアンブルーで染色したとき、青い顆粒の核周囲環として可視化される。環状鉄芽球は、末梢血及び/又は骨髄塗抹標本で検出することができる。本明細書に提供される方法の特定の態様において、環状鉄芽球は、骨髄穿刺液中にある。
【０２９７】
(7.10.3  スクリーニングアッセイ)
様々なActRIIポリペプチド変異体、又は可溶性ActRIIポリペプチド変異体を、ActRIIを阻害するその能力について試験することができる。さらに、化合物を、ActRIIを阻害するその能力について試験することができる。ひとたびActRII活性のシグナル伝達インヒビターが確認されれば、これらの化合物を本明細書に提供される方法とともに使用することができる。ActRIIは、ActRIIA又はActRIIBであることができる。下記のアッセイは、ActRIIAについて記載されているが、ActRIIBについても同様に実施することができる。
【０２９８】
例えば、骨産生又は骨破壊に関与する遺伝子の発現に対するActRIIAポリペプチド変異体の効果を評価することができる。これは、必要な場合、1以上の組換えActRIIAリガンドタンパク質(例えば、アクチビン)の存在下で実施することができ、細胞を、ActRIIAポリペプチド及び/又はその変異体、並びに任意にActRIIAリガンドを産生するようにトランスフェクトすることができる。同様に、ActRIIAポリペプチドをマウス又は他の動物に投与することができ、1以上の骨特性、例えば、密度又は体積を評価することができる。骨折の治癒速度を評価することもできる。二重エネルギーx線吸収法(DEXA)は、動物の骨密度を評価するための十分に確立された非侵襲的な定量技術である。ヒトにおいて、中枢DEXAシステムを用いて、脊椎及び骨盤の骨密度を評価することができる。これらは、全骨密度の最良の予測因子である。末梢DEXAシステムを用いて、例えば、手、手首、足首、及び足の骨を含む、末梢骨の骨密度を評価することができる。CATスキャンを含む、従来のx線イメージングシステムを用いて、骨成長及び骨折治癒を評価することができる。さらに、定量的コンピュータ断層撮影(qCT)を用いて、骨密度を測定することができる。骨の機械的強度を評価することもできる。
【０２９９】
ある態様において、本明細書に提供されるのは、アクチビン-ActRIIAシグナル伝達経路のアゴニスト又はアンタゴニストとなる化合物(薬剤)を同定するためのActRIIAポリペプチド(例えば、可溶性ActRIIAポリペプチド)及びアクチビンポリペプチドの使用である。このスクリーニングを通じて同定された化合物を試験して、骨の成長又は石化をインビトロで調節するその能力を評価することができる。任意に、これらの化合物を動物モデルでさらに試験して、インビボで組織成長を調節するその能力を評価することができる。
【０３００】
アクチビン及びActRIIAポリペプチドを標的とすることによって組織成長を調節する治療剤をスクリーニングする数多くの手法がある。ある実施態様において、化合物のハイスループットスクリーニングを実施して、骨に対するアクチビン又はActRIIA媒介性効果を撹乱する薬剤を同定することができる。ある実施態様において、アッセイを実施して、アクチビンに対するActRIIAポリペプチドの結合を特異的に阻害し又は低下させる化合物をスクリーニング及び同定する。或いは、アッセイを用いて、アクチビンに対するActRIIAポリペプチドの結合を増強する化合物を同定することができる。さらなる実施態様において、化合物を、アクチビン又はActRIIAポリペプチドと相互作用するその能力によって同定することができる。
【０３０１】
種々のアッセイ形式が十分であり、本開示を考慮すれば、本明細書に明示的に記載されていないものが、それにもかかわらず、当業者によって理解されるであろう。本明細書に記載されているように、本明細書で使用される試験化合物(薬剤)は、任意のコンビナトリアル化学法によって作出することができる。或いは、対象化合物は、インビトロ又はインビボで合成された天然の生体分子であることができる。組織成長のモジュレーターとして作用するその能力について試験される化合物(薬剤)は、例えば、細菌、酵母、植物、もしくは他の生物により産生されるか(例えば、天然物)、化学的に産生されるか(例えば、ペプチド模倣体を含む小分子)、又は組換えで産生されることができる。本明細書で企図される試験化合物としては、非ペプチド有機分子、ペプチド、ポリペプチド、ペプチド模倣体、糖、ホルモン、及び核酸分子が挙げられる。具体的な実施態様において、試験薬剤は、約2,000ダルトン未満の分子量を有する小有機分子である。
【０３０２】
試験化合物は、単一の別個の実体として提供するか、又は例えば、コンビナトリアル化学によってより複雑度の高いライブラリー中に提供することができる。これらのライブラリーは、例えば、アルコール、ハロゲン化アルキル、アミン、アミド、エステル、アルデヒド、エーテル、及び他のクラスの有機化合物を含むことができる。試験系に対する試験化合物の提示は、特に、最初のスクリーニング工程において、単離された形態か、又は化合物の混合物としてかのいずれかであり得る。任意に、該化合物は、他の化合物で誘導体化され、該化合物の単離を容易にする誘導体化基を有することができる。誘導体化基の非限定的な例としては、ビオチン、フルオレセイン、ジゴキシゲニン、緑色蛍光タンパク質、同位体、ポリヒスチジン、磁気ビーズ、グルタチオンSトランスフェラーゼ(GST)、光活性化クロスリンカー、又はこれらの任意の組合せが挙げられる。
【０３０３】
化合物及び天然抽出物のライブラリーを試験する多くの薬物スクリーニングプログラムにおいて、所与の期間に調査される化合物の数を最大にするためには、ハイスループットアッセイが望ましい。精製又は半精製されたタンパク質を用いて得ることができるような、無細胞系で実施されるアッセイは、試験化合物によって媒介される分子標的の変化の迅速な発生及び比較的容易な検出を可能にするように作製することができるという点で、多くの場合、「一次」スクリーニングとして好ましい。さらに、試験化合物の細胞毒性又はバイオアベイラビリティの効果は、通常、インビトロ系では無視することができ、その代わりに、このアッセイは、主として、ActRIIAポリペプチドとアクチビンの間の結合親和性の変化として現われ得るような分子標的に対する薬物の効果に焦点を当てている。
【０３０４】
単に例証するために、例示的なスクリーニングアッセイにおいて、関心対象の化合物を、通常アクチビンに結合することができる単離及び精製されたActRIIAポリペプチドと接触させる。その後、化合物とActRIIAポリペプチドの混合物に、ActRIIAリガンドを含む組成物を添加する。ActRIIA/アクチビン複合体の検出及び定量は、ActRIIAポリペプチドとアクチビンの間の複合体形成の阻害(又は強化)における化合物の効力を決定するための手段を提供する。化合物の効力は、様々な濃度の試験化合物を用いて得られたデータから用量応答曲線を作成することにより評価することができる。さらに、対照アッセイを実施して、比較用のベースラインを提供することもできる。例えば、対照アッセイでは、単離及び精製されたアクチビンを、ActRIIAポリペプチドを含む組成物に添加し、ActRIIA／アクチビン複合体の形成を試験化合物の非存在下で定量する。一般に、反応物を混合し得る順序を変えることができ、また、反応物を同時に混合することができることが理解されるであろう。さらに、精製タンパク質の代わりに、細胞の抽出物及び溶解物を用いて、好適な無細胞アッセイ系を提供することができる。
【０３０５】
ActRIIAポリペプチドとアクチビンの間の複合体形成は、種々の技術により検出することができる。例えば、複合体の形成の調節は、例えば、検出可能に標識されたタンパク質、例えば、放射性標識された(例えば、32P、35S、14C、もしくは3H)、蛍光標識された(例えば、FITC)、又は酵素標識されたActRIIAポリペプチド又はアクチビンを用いて、免疫アッセイによるか、又はクロマトグラフィー検出によって定量することができる。
【０３０６】
ある実施態様において、本明細書で企図されるのは、直接的に又は間接的に、ActRIIAポリペプチドとその結合タンパク質との間の相互作用の程度を測定する際の蛍光偏光アッセイ及び蛍光共鳴エネルギー遷移(FRET)アッセイの使用である。さらに、他の検出様式、例えば、光導波路(PCT公開WO 96/26432号及び米国特許第5,677,196号)、表面プラズモン共鳴(SPR)、表面電荷センサー、並びに表面力センサーに基づく検出様式は、本発明に記載の多くの実施態様と適合する。
【０３０７】
さらに、「ツーハイブリッドアッセイ」としても知られる相互作用トラップアッセイを、ActRIIAポリペプチドとその結合タンパク質との間の相互作用を撹乱又は強化する因子の同定のために使用することができる。例えば、米国特許第5,283,317号; Zervosらの文献(1993) Cell 72:223-232; Maduraらの文献(1993) J Biol Chem 268:12046-12054; Bartelらの文献(1993) Biotechniques 14:920-924;及びIwabuchiらの文献(1993) Oncogene 8:1693-1696)を参照されたい。具体的な実施態様において、本明細書で企図されるのは、ActRIIAポリペプチドとその結合タンパク質との間の相互作用を断ち切る化合物(例えば、小分子又はペプチド)を同定するためのリバースツーハイブリッドシステムの使用である。例えば、Vidal及びLegrainの文献(1999) Nucleic Acids Res 27:919-29; Vidal及びLegrainの文献(1999) Trends Biotechnol 17:374-81;並びに米国特許第5,525,490号;第5,955,280号;及び第5,965,368号を参照されたい。
【０３０８】
ある実施態様において、対象化合物は、ActRIIA又はアクチビンポリペプチドと相互作用するその能力によって同定される。該化合物とActRIIA又はアクチビンポリペプチドとの間の相互作用は、共有結合性であっても非共有結合性であってもよい。例えば、そのような相互作用は、光架橋、放射性標識リガンド結合、及び親和性クロマトグラフィーを含む、インビトロの生化学的方法を用いて、タンパク質レベルで同定することができる(Jakoby W Bらの文献、1974, Methods in Enzymology 46: 1)。ある場合には、該化合物を、メカニズムに基づくアッセイ、例えば、アクチビン又はActRIIAポリペプチドに結合する化合物を検出するアッセイでスクリーニングすることができる。これは、固相又は流体相の結合事象を含み得る。或いは、アクチビン又はActRIIAポリペプチドをコードする遺伝子を、レポーターシステム(例えば、β-ガラクトシダーゼ、ルシフェラーゼ、又は緑色蛍光タンパク質)とともに細胞内にトランスフェクトし、好ましくは、ハイスループットスクリーニングによるか又はライブラリーの個々のメンバーを用いて、ライブラリーに対してスクリーニングすることができる。メカニズムに基づく他の結合アッセイ、例えば、自由エネルギーの変化を検出する結合アッセイを使用することができる。結合アッセイは、ウェル、ビーズ、もしくはチップに固定されているか、又は固定された抗体によって捕捉されているか、又はキャピラリー電気泳動によって分解される標的を用いて実施することができる。結合した化合物は、通常、比色又は蛍光又は表面プラズモン共鳴を用いて検出することができる。
【０３０９】
ある態様において、本明細書に提供されるのは、骨形成を調節(刺激又は阻害)し、及び骨量を増加させるための方法及び薬剤である。それゆえ、同定された任意の化合物を、全細胞又は組織中で、インビトロ又はインビボで試験して、骨の成長又は石化を調節するその能力を確認することができる。当技術分野で公知の様々な方法をこの目的のために使用することができる。特に、該化合物を骨代謝回転を増加させるその能力について試験することができる。
【０３１０】
例えば、骨又は軟骨の成長に対するActRIIA又はアクチビンポリペプチド又は試験化合物の効果は、Msx2の誘導又は骨前駆細胞から骨芽細胞への分化を細胞ベースのアッセイで測定することにより決定することができる(例えば、Daluiskiらの文献、Nat Genet. 2001, 27(1):84-8; Hinoらの文献、Front Biosci. 2004, 9:1520-9を参照されたい)。細胞ベースのアッセイの別の例は、間葉前駆細胞及び骨芽細胞における対象ActRIIA又はアクチビンポリペプチド及び試験化合物の骨形成活性を解析することを含む。例証するために、アクチビン又はActRIIAポリペプチドを発現する組換えアデノウイルスを構築して、多能性間質前駆細胞C3H10T1/2細胞、前骨芽C2Cl2細胞、及び骨芽TE-85細胞に感染させることができる。その後、骨形成活性は、アルカリホスファターゼ、オステオカルシン、及び基質石灰化の誘導を測定することにより決定される(例えば、Chengらの文献、J bone Joint Surg Am. 2003, 85-A(8): 1544-52を参照されたい)。
【０３１１】
また本明細書に提供されるのは、骨又は軟骨の成長を測定するためのインビボアッセイである。例えば、Namkung-Matthaiらの文献、Bone, 28:80-86(2001)には、骨折後の初期における骨修復を研究するラット骨粗鬆症モデルが開示されている。また、Kuboらの文献、Steroid Biochemistry & Molecular Biology, 68:197-202(1999)には、骨折後の後期における骨修復を研究するラットの骨粗鬆症モデルが開示されている。Anderssonらの文献、J. Endocrinol. 170:529-537には、マウス骨粗鬆症モデルが記載されている。このモデルでは、マウスから卵巣が摘出され、それにより、マウスは相当な骨ミネラル含量及び骨ミネラル密度を失い、骨梁は骨ミネラル密度の約50％を失う。骨密度は、副甲状腺ホルモンなどの因子の投与により、卵巣摘出マウスで増加させることができる。ある態様において、当技術分野で公知の骨折治癒アッセイを使用することができる。これらのアッセイは、骨折法、組織学的解析、及び生体力学解析を含み、これらは、例えば、骨折を引き起こし、及びその程度を測定するための実験プロトコル、並びに修復過程のその開示について引用により完全に本明細書中に組み込まれる、米国特許第6,521,750号に記載されている。
【０３１２】
(7.11  医薬組成物)
ある実施態様において、アクチビン-ActRIIアンタゴニスト(例えば、ActRIIポリペプチド)は、本明細書に提供される方法とともに使用される医薬として許容し得る担体とともに製剤化される。例えば、ActRIIポリペプチドは、単独で又は医薬製剤(治療的組成物)の成分として投与することができる。対象化合物は、ヒト又は動物用医薬品で使用される任意の好都合な方法での投与のために製剤化することができる。ActRIIは、ActRIIA又はActRIIBであることができる。
【０３１３】
ある実施態様において、本発明の治療法は、該組成物を全身に又はインプラントもしくは装置として局所に投与することを含む。投与されるとき、本発明で使用するための治療的組成物は、当然ながら、パイロジェンフリーの生理的に許容される形態にある。上記の組成物中に任意に含めることもできるActRIIアンタゴニスト以外の治療的に有用な薬剤は、対象化合物(例えば、ActRIIポリペプチド、例えば、ActRIIA及び/又はActRIIBポリペプチド(第7.9節参照))と同時に又は連続的に投与することができる。
【０３１４】
通常、ActRIIアンタゴニストは非経口投与される。非経口投与に好適な医薬組成物は、1以上のActRIIポリペプチドを、1以上の医薬として許容し得る滅菌等張性水性もしくは非水性溶液、分散液、懸濁液、もしくはエマルジョン、又は使用直前に滅菌注射溶液もしくは分散液へと再構成され得る滅菌粉末と組み合わせて含むことができ、これらは、抗酸化剤、緩衝剤、静菌薬、製剤を意図されるレシピエントの血液と等張にする溶質、又は懸濁化剤もしくは増粘剤を含有することができる。本発明の医薬組成物中で利用され得る好適な水性及び非水性担体の例としては、水、エタノール、ポリオール(例えば、グリセロール、プロピレングリコール、ポリエチレングリコールなど)、及びこれらの好適な混合物、植物油、例えば、オリーブ油、並びに注射可能な有機エステル、例えば、オレイン酸エチルが挙げられる。適切な流動性は、例えば、レシチンなどのコーティング材料の使用によって、分散液の場合、必要とされる粒径の維持によって、及び界面活性剤の使用によって維持することができる。
【０３１５】
さらに、該組成物は、標的組織部位(例えば、骨)に送達するための形態で封入又は注射することができる。ある実施態様において、本明細書に提供される組成物は、1以上の治療的化合物(例えば、ActRIIAポリペプチド)を標的組織部位(例えば、骨)に送達し、成長する組織に構造を提供し、最適には体内に再吸収されることができるマトリックスを含むことができる。例えば、該マトリックスは、ActRIIAポリペプチドの低速放出を提供することができる。そのようなマトリックスは、他のインプラント型医療用途に現在使用されている材料から形成されてもよい。
【０３１６】
マトリックス材料の選択は、生体適合性、生体分解性、機械的特性、美容上の外観、及び界面特性に基づく。対象組成物の特定の用途により、適切な製剤が規定される。該組成物用の潜在的マトリックスは、生体分解性でかつ化学的に規定されている硫酸カルシウム、リン酸三カルシウム、ハイドロキシアパタイト、ポリ乳酸、及びポリ無水物であってもよい。他の潜在的材料は、骨又は皮膚コラーゲンなどの生体分解性でかつ生物学的に十分に規定されているものである。さらなるマトリックスは、純粋なタンパク質又は細胞外マトリックス成分から構成される。他の潜在的マトリックスは、焼成ハイドロキシアパタイト、バイオガラス、アルミン酸塩、又は他のセラミックスなどの、非生体分解性でかつ化学的に規定されているものである。マトリックスは、上述のタイプの材料のいずれかの組合せ、例えば、ポリ乳酸とハイドロキシアパタイト又はコラーゲンとリン酸三カルシウムから構成されていてもよい。バイオセラミックスは、例えば、カルシウム-アルミネート-ホスフェート中の組成を変化させ、並びに加工して、孔径、粒径、粒子形状、及び生体分解性を変化させることができる。
【０３１７】
ある実施態様において、本発明の方法は、各々所定の量の薬剤を活性成分として含む、例えば、カプセル剤、カシェ剤、丸剤、錠剤、ロゼンジ剤(フレーバー付きの主成分、通常、スクロース及びアラビアゴムもしくはトラガカントを使用)、散剤、顆粒剤の形態で、又は水性もしくは非水性液中の液剤もしくは懸濁剤として、又は水中油型もしくは油中水型液体エマルジョンとして、又はエリキシル剤もしくはシロップ剤として、又はトローチ剤(不活性基剤、例えば、ゼラチン及びグリセリン、もしくはスクロース及びアラビアゴムを使用)として、並びに/或いは洗口液などとして、経口投与することができる。薬剤は、ボーラス剤、舐剤、又はペースト剤として投与することもできる。
【０３１８】
経口投与用の固体剤形(カプセル剤、錠剤、丸剤、糖衣錠、散剤、顆粒剤など)中で、本明細書に提供される1以上の治療的化合物を、1以上の医薬として許容し得る担体、例えば、クエン酸ナトリウムもしくは第二リン酸カルシウム、並びに/又は以下のもの:(1)充填剤もしくは増量剤、例えば、デンプン、ラクトース、スクロース、グルコース、マンニトール、及び/もしくはケイ酸;(2)結合剤、例えば、カルボキシメチルセルロース、アルギネート、ゼラチン、ポリビニルピロリドン、スクロース、及び/もしくはアラビアゴムなど;(3)保湿剤、例えば、グリセロール;(4)崩壊剤、例えば、寒天-寒天、炭酸カルシウム、ジャガイモもしくはタピオカデンプン、アルギン酸、特定のケイ酸塩、及び炭酸ナトリウム;(5)溶解遅延剤、例えば、パラフィン;(6)吸収促進剤、例えば、四級アンモニウム化合物;(7)湿潤剤、例えば、セチルアルコール及びモノステアリン酸グリセロールなど;(8)吸収剤、例えば、カオリン及びベントナイト粘土;(9)滑沢剤、例えば、タルク、ステアリン酸カルシウム、ステアリン酸マグネシウム、固体ポリエチレングリコール、ラウリル硫酸ナトリウム、及びこれらの混合物;並びに(10)着色剤のうちのいずれかと混合することができる。カプセル剤、錠剤、及び丸剤の場合、医薬組成物は、緩衝化剤を含むこともできる。同様のタイプの固体組成物を、ラクトース又は乳糖、及び高分子量ポリエチレングリコールなどような賦形剤を用いる軟及び硬充填ゼラチンカプセル中の充填剤として利用することもできる。
【０３１９】
経口投与用の液体剤形としては、医薬として許容し得るエマルジョン、マイクロエマルジョン、液剤、懸濁剤、シロップ剤、及びエリキシル剤が挙げられる。活性成分に加えて、該液体剤形は、当技術分野で一般に使用される不活性希釈剤、例えば、水又は他の溶媒、可溶化剤及び乳化剤、例えば、エチルアルコール、イソプロピルアルコール、炭酸エチル、酢酸エチル、ベンジルアルコール、安息香酸ベンジル、プロピレングリコール、1,3-ブチレングリコール、油(特に、綿実油、ピーナッツ油、トウモロコシ油、胚種油、オリーブ油、ヒマシ油、及びゴマ油)、グリセロール、テトラヒドロフリルアルコール、ポリエチレングリコール、並びにソルビタンの脂肪酸エステル、並びにこれらの混合物を含むことができる。不活性希釈剤の他に、経口組成物は、補助剤、例えば、湿潤剤、乳化剤及び懸濁化剤、甘味剤、香味剤、着色剤、芳香剤、及び防腐剤を含むこともできる。
【０３２０】
懸濁剤は、活性化合物に加えて、懸濁化剤、例えば、エトキシ化イソステアリルアルコール、ポリオキシエチレンソルビトール、及びソルビタンエステル、微結晶性セルロース、アルミニウムメタヒドロキシド、ベントナイト、寒天-寒天、及びトラガカント、並びにこれらの混合物を含むことができる。
【０３２１】
本発明の組成物は、補助剤、例えば、防腐剤、湿潤剤、乳化剤、及び分散剤を含むこともできる。微生物の作用の防止は、様々な抗菌剤及び抗真菌剤、例えば、パラベン、クロロブタノール、フェノールソルビン酸などを含めることにより確保することができる。等張剤、例えば、糖、塩化ナトリウムなどを該組成物中に含めることが望ましい場合もある。さらに、注射用医薬形態の持続的吸収は、吸収を遅延させる薬剤、例えば、モノステアリン酸アルミニウム及びゼラチンを含めることによりもたらすことができる。
【０３２２】
投薬レジメンは、本発明の対象化合物(例えば、ActRIIポリペプチド、例えば、ActRIIA及び/又はActRIIBポリペプチド(第7.9節参照))の作用を修飾する様々な因子を考慮して、担当医により決定されるということが理解される。様々な因子としては、形成されることが望まれる骨重量の量、骨密度低下の程度、骨損傷の部位、損傷した骨の状態、対象の年齢、性別、及び食習慣、骨量減少に寄与し得る任意の疾患の重症度、投与の時間、並びに他の臨床的因子が挙げられるが、これらに限定されない。任意に、投薬量は、再構成で使用されるマトリックスのタイプ及び組成物中の化合物のタイプによって異なり得る。最終組成物への他の既知の成長因子の添加も、投薬量に影響を及ぼし得る。進捗は、例えば、X線(DEXAを含む)、組織形態計測的測定、及びテトラサイクリン標識による骨成長及び/又は修復の定期的評価によってモニタリングすることができる。
【０３２３】
ある実施態様において、本明細書に提供されるのは、ActRIIポリペプチドのインビボ産生のための遺伝子療法である。そのような療法は、上記の障害を有する細胞又は組織へのActRIIポリヌクレオチド配列の導入によって、その治療効果を達成する。ActRIIポリヌクレオチド配列の送達は、キメラウイルスなどの組換え発現ベクター、又はコロイド分散系を用いて達成することができる。ActRIIポリヌクレオチド配列の治療的送達に好ましいのは、標的化リポソームの使用である。ActRIIポリペプチドは、ActRIIA及び/又はActRIIBポリペプチド(第7.9節参照))であることができる。
【０３２４】
本明細書に教示される遺伝子療法に利用することができる様々なウイルスベクターとしては、アデノウイルス、ヘルペスウイルス、ワクシニア、又は好ましくは、レトロウイルスなどのRNAウイルスが挙げられる。好ましくは、レトロウイルスベクターは、マウス又はトリレトロウイルスの派生物である。単一の異種遺伝子を挿入することができるレトロウイルスベクターの例としては:モロニーマウス白血病ウイルス(MoMuLV)、ハーベイマウス肉腫ウイルス(HaMuSV)、マウス乳癌ウイルス(MuMTV)、及びラウス肉腫ウイルス(RSV)が挙げられるが、これらに限定されない。いくつかのさらなるレトロウイルスベクターは、複数の遺伝子を組み込むことができる。これらのベクターは全て、遺伝子導入された細胞を同定及び作製することができるように、選択可能マーカーの遺伝子を転移し又は組み込むことができる。レトロウイルスベクターは、例えば、糖、糖脂質、又はタンパク質を付着させることによって標的特異的にすることができる。好ましい標的化は、抗体を用いて達成される。当業者は、特異的ポリヌクレオチド配列をレトロウイルスゲノムに挿入するか、又はウイルスエンベロープに付着させて、ActRIIポリヌクレオチドを含むレトロウイルスベクターの標的特異的送達を可能にすることができることを認識しているであろう。好ましい実施態様において、該ベクターは、骨又は軟骨に標的化される。
【０３２５】
或いは、組織培養細胞を、従来のリン酸カルシウムトランスフェクションによって、レトロウイルス構造遺伝子gag、pol、及びenvをコードするプラスミドで直接トランスフェクトすることができる。その後、これらの細胞を、関心対象の遺伝子を含むベクタープラスミドでトランスフェクトする。得られた細胞は、レトロウイルスベクターを培養培地中に放出する。
【０３２６】
ActRIIポリヌクレオチドの別の標的化送達系は、コロイド分散系である。コロイド分散系としては、高分子複合体、ナノカプセル、ミクロスフェア、ビーズ、並びに水中油型エマルジョン、ミセル、混合ミセル、及びリポソームを含む脂質ベースの系が挙げられる。本発明の好ましいコロイド系は、リポソームである。リポソームは、インビトロ及びインビボでの送達ビヒクルとして有用である人工膜小胞である。RNA、DNA、及び無傷のビリオンを水性内部に封入し、生物活性形態で細胞に送達することができる(例えば、Fraley,らの文献、Trends Biochem. Sci., 6:77, 1981を参照されたい)。リポソームビヒクルを用いる効率的な遺伝子導入法は当技術分野で公知であり、例えば、Manninoらの文献、Biotechniques, 6:682, 1988を参照されたい。リポソームの組成物は、通常、リン脂質の組合せであり、これは、通常、ステロイド、特にコレステロールと組み合わされている。他のリン脂質又は他の脂質を使用することもできる。リポソームの物理学的特徴は、pH、イオン強度、及び二価カチオンの存在によって決まる。
【０３２７】
リポソーム産生において有用な脂質の例としては、ホスファチジル化合物、例えば、ホスファチジルグリセロール、ホスファチジルコリン、ホスファチジルセリン、ホスファチジルエタノールアミン、スフィンゴ脂質、セレブロシド、及びガングリオシドが挙げられる。例示的なリン脂質としては、卵ホスファチジルコリン、ジパルミトイルホスファチジルコリン、及びジステアロイルホスファチジルコリンが挙げられる。リポソームの標的化も、例えば、臓器特異性、細胞特異性、及びオルガネラ特異性に基づいて可能であり、当技術分野で公知である。
【０３２８】
ある実施態様において、ActRIIAシグナル伝達インヒビターは、医薬組成物中で実質的に純粋である。具体的には、医薬組成物中の化合物の高々20％、10％、5％、2.5％、1％、0.1％、又は高々0.05％が、ActRIIシグナル伝達インヒビター及び医薬として許容し得る担体以外の化合物である。
【０３２９】
好ましい実施態様において、医薬組成物は、皮下投与用に製剤化される。
【０３３０】
(8.実施例)
(8.1  実施例1)
(8.1.1  ActRIIA-Fc融合タンパク質)
最小限のリンカーが間に挟まれたヒト又はマウスFcドメインに融合したヒトActRIIAの細胞外ドメインを有する可溶性ActRIIA融合タンパク質が提供される。これらのコンストラクトは、それぞれ、ActRIIA-hFc及びActRIIA-mFcと呼ばれる。ActRIIA-hFcは、配列番号7として提供される。
【０３３１】
ActRIIA-hFc及びActRIIA-mFcタンパク質をCHO細胞株で発現させた。3つの異なるリーダー配列を検討した:
【０３３２】
(i)ミツバチメリチン(HBML):配列番号8
【０３３３】
(ii)組織プラスミノーゲン活性化因子(TPA):配列番号9
【０３３４】
(iii)天然のActRIIA:配列番号10
【０３３５】
選択された形態はTPAリーダーを利用しており、配列番号13に示される以下のプロセシングされていないアミノ酸配列を有する。このポリペプチドは、配列番号14によってコードされる。
【０３３６】
(8.1.2  ActRIIB-Fc融合タンパク質)
ヒトFcドメインに融合したヒトActRIIBの細胞外ドメインとアクチビンとの結晶構造から、リガンド結合における細胞外ドメインの最後(C末端)の15個のアミノ酸(本明細書において「尾部」と呼ばれる)の役割は示されなかった。この配列は、結晶構造では解像されず、これらの残基が、結晶中で均一に納まらなかった柔軟なループ中に存在することを示唆している。Thompsonらの文献、EMBO J. 2003 Apr 1 ;22(7):1555-66。この配列はまた、ActRIIBとActRIIAの間であまり保存されていない。したがって、これらの残基は、基本的又はバックグラウンドActRIIB-Fc融合コンストラクトでは削除された。さらに、バックグラウンド形態における位置64は、アラニンによって占められており、これは、通常、「野生型」形態と考えられるが、A64Rアレルが天然に生じる。したがって、バックグラウンドActRIIB-Fc融合体は、配列番号21として開示されている配列を有する。
【０３３７】
驚くことに、C末端尾部がアクチビン及びGDF-11結合を増強することが分かり、したがって、ActRIIB-Fcの好ましいバージョンは、配列番号20の配列を有する。
【０３３８】
本明細書に記載の方法に従って使用し得る種々のActRIIB変異体は、引用により完全に本明細書中に組み込まれる、WO2006/012627号として公開された国際特許出願(例えば、59〜60ページ参照)に記載されている。
【０３３９】
(8.2  実施例2:低もしくは中間-1(Int-1)-リスクMDS又は非増殖性CMML及びRBC輸血を必要とする貧血を有する対象におけるActRIIA-hFc(配列番号7)の非盲検第2相用量設定試験)
(8.2.1  序論)
MDSの顕著な特徴である貧血は、特に、赤血球産生刺激剤(ESA)が失敗した後、治療するのが難しい。ActRIIA-hFc(配列番号7;「ソタテルセプト」)は、後期赤血球産生に作用して、循環中への成熟赤血球の放出を増大させるアクチビンIIA型受容体融合タンパク質である(Carrancioらの文献、Br J Haematol 2014;165:870-82)。ActRIIA-hFc(配列番号7)による対象の治療は、健常対象において赤血球産生を刺激し、かつヘモグロビン(Hb)レベルを顕著に増大させ(Shermanらの文献、J Clin Pharmacol 2013;53:1121-30)、低リスクMDSを有する対象における貧血の治療のためのその臨床開発を支持した。
【０３４０】
(8.2.2  材料及び方法)
本実施例の主要な目的は、貧血及びIPSSによって定義される低もしくはInt-1-リスクMDS又は非増殖性CMML(白血球＜13,000/μL)を有する対象における赤血球の血液学的改善(HI-E;改変されたIWG 2006基準)をもたらす、安全で、忍容性があり、かつ有効なActRIIA-hFc(配列番号7)の用量を決定することである。副次的な目的には、8週間以上のRBC-輸血非依存(RBC-TI)の割合が含まれる。適格な対象は、ESA(500mIU/mLを超える血清エリスロポエチン[EPO])に対して全く応答しないか、応答が消失しているか、又は応答する可能性が低い、貧血(9.0g/dL以下のHbに対して、登録前の12週間で2 RBC単位以上の輸血の必要性)を有していた。本実施例で検討される対象の説明については、表1を参照されたい。対象は、3週間に1回、0.1、0.3、0.5、又は1.0mg/kgの用量レベルのActRIIA-hFc(配列番号7)を皮下に投与された。試験設計の概略については、図1を参照されたい。
【０３４１】
(8.2.3  結果)
合計54人のMDS対象を検討した: ActRIIA-hFc(配列番号7)の0.1、0.3、0.5、及び1.0mg/kgの用量群に、それぞれ、7人、6人、21人、及び20人。年齢中央値は71歳(範囲56〜86歳)であり、診断からの時間の中央値は4年(範囲0〜31年)であり;ほとんどの対象は男性であった(70％)。対象は、治療開始前の8週間で中央値にして6 RBC単位(範囲0〜18)を投与された。45人の対象(83％)は、治療開始前の8週間で4 RBC単位以上を投与され(高輸血負荷; HTB)、9人の対象(17％)は、治療開始前の8週間で4単位未満を投与された(低輸血負荷; LTB)。19人の対象(35％)はIPSS低リスクMDSを、34人の対象(63％)はIPSS Int-1-リスクMDSを有しており; IPSSリスクデータは、患者1人分、欠けていた。51人の対象(94％)は、ESAによる前治療を、30人(56％)は低メチル化剤による前治療を、26人(48％)はレナリドミドによる前治療を、及び26人(48％)は、他のMDS治療による前治療を受けており; 15人の対象(28％)は、500mIU/mLを上回る血清EPOを有していた。
【０３４２】
有効性について評価可能な53人の対象のうち、HI-Eは、全体として21人の対象(40％)で認められた: ActRIIA-hFc(配列番号7)の0.1、0.3、0.5、及び1.0mg/kgの用量群に、それぞれ、0人、4人(67％)、8人(40％)、及び9人(45％)の対象。44人のHTB対象のうちの19人は、4 RBC単位以上/8週間の輸血負荷の低下を伴って応答し;輸血応答の持続期間は用量依存的であるように思われた。ActRIIA-hFcによる治療後、56日よりも長い間、RBC-TIを達成した例示的なHTB対象については、図3を参照されたい。ActRIIA-hFc(配列番号7)による治療の後のHTBレスポンダーにおける輸血負荷応答の最大持続期間を示している図4を参照されたい。5人のHTB対象は、8週間以上のRBC-TIを達成し、RBC-TI持続期間は、59〜345+日であった。ActRIIA-hFc(配列番号7)による治療後、少なくとも56日間、RBC-TIを達成しているHTB対象におけるRBC-TI応答の最大持続期間を示している図5を参照されたい。表2も参照されたい。
【０３４３】
8週間以上、RBC-TIを達成しているHTB対象のサブセットは、ActRIIA-hFc(配列番号7)による治療の前に環状鉄芽球である赤芽球のパーセンテージが増加していた。
【０３４４】
9人のLTB対象のうちの8人は、1.3〜3.8g/dLの範囲の、輸血による影響を受けていない、Hb増加を示した。これらのうち、2人の対象は、8週間以上持続した1.5g/dL以上のHb増加を有していた。11.0g/dLを超えるHbを有する対象は、プロトコル通りに投与延期の対象としたが、これは、Hb増加の持続可能性に影響を及ぼしたかも知れない。8週間以上のRBC-TIは、6人のLTB対象で達成された。ActRIIA-hFc(配列番号7)による治療後、少なくとも56日間のRBC-TI及び少なくとも1.5g/dLの平均Hb増加を達成しているLTB対象の比率を示している図6を参照されたい。ActRIIA-hFc(配列番号7)による治療後、少なくとも56日間のRBC-TI及び少なくとも1.5g/dLの平均Hb増加を達成しているLTBにおけるRBC-TI応答の最大持続期間を示している図7を参照されたい。血小板及び好中球レベルの増大は、それぞれ、ベースラインの血小板減少を有する対象及びベースラインの好中球減少を有する対象で見られた。
【０３４５】
ActRIIA-hFc(配列番号7)は、概して、忍容性が良好であった。20人の対象(37％)は、1以上の治療関連有害事象(AE)の疑いを報告し;疲労(11％)、頭痛(9.3％)、食欲減退(7.4％)、及び吐き気(7.4％)が最も一般的なものであった。
【０３４６】
治療を中止した35人の対象(65％)のうち、28人は治療効果がないために中止し、4人はAEのために中止した。中止に至ったAEのうち、3つは、治療関連であることが疑われ:それぞれ、ActRIIA-hFc(配列番号7)の0.3、0.5、及び1.0mg/kgの用量群において、1人の患者はグレード2の溶血性貧血を有し、1人の患者はグレード3の高血圧を有し、1人の患者はグレード2の筋無力症を有していた。他の中止の理由は、同意の撤回(n＝2; 4％)及び患者の判断(n＝1; 2％)であった。
【０３４７】
(8.2.4  結論)
ActRIIA-hFc(配列番号7)は、低リスクMDS対象において、試験した用量レベルで忍容性が良好であり、ESA不応性で貧血である低リスクMDS対象のこの主にHTBのコホートにおける臨床活性の有望な証拠を示している。さらに、これらのデータは、ActRIIインヒビター、例えば、ActRIIA-hFc(配列番号7)による治療の前の対象における環状鉄芽球の存在が、長期治療、RBC輸血非依存、及びヘモグロビンレベルの長期増大の指標となり得ることを示している。
【０３４８】
表1.対象のベースライン特徴。
【表１】
2018501307.tif 000003
a0年は、最初の診断から1年未満を示す; b4単位以上/8週間のRBC輸血負荷を有する対象;c4単位未満/8週間のRBC輸血負荷を有する対象; dMDSに対する、非ESA、非低メチル化、及び非レナリドミド治療; EPO、エリスロポエチン; ESA、赤血球産生刺激剤; Hb、ヘモグロビン; HTB、高輸血負荷; Int、中間; IPSS、国際予後判定スコアリングシステム; LTB、低輸血負荷; MDS、骨髄異形成症候群; RBC、赤血球。
【０３４９】
表2. HTB対象(n＝44)における輸血応答
【表２】
2018501307.tif 000004
【０３５０】
(8.3  実施例3: ActRIIB-hFcは、低又は中間-1リスクMDSを有する対象において、ヘモグロビンを増加させ、かつ輸血負荷を低下させる:第2相試験の予備的結果)
(8.3.1  序論)
改変されたアクチビン受容体IIB型とIgG Fcとを含む組換え融合タンパク質であるActRIIB-hFc(配列番号25;ラスパテルセプトとも呼ばれる)を利用して、MDSなどの無効造血による貧血を治療した。MDSを有する対象は、上昇したエリスロポエチン(EPO)レベルを有することが多く、赤血球産生刺激剤(ESA)に対して無応答又は不応性であり得る。MDS対象は、増大した血清GDF11レベル(Suragani Rらの文献、Nature Medicine 2014)及び骨髄での増大したSmad 2/3シグナル伝達(Zhou Lらの文献、Blood 2008)を有することも示されている。ActRIIB-hFc(配列番号25)は、GDF11を含むTGF-βスーパーファミリーのリガンドに結合し、Smad 2/3シグナル伝達を阻害し、ESAとは異なる機序を介して後期の赤血球分化を促進する。mActRIIB-Fc(マウスバージョンのActRIIB-hFc(配列番号25))は、MDSのマウスモデルにおいて、Smad 2シグナル伝達を低下させ、ヘモグロビン(Hb)レベルを増大させ、かつ骨髄赤血球過形成を減少させた(Suragani Rらの文献、Nature Medicine 2014)。健常ボランティアの研究において、ActRIIB-hFc(配列番号25)は忍容性が良好であり、かつHbレベルを増大させた(Attie Kらの文献、Am J Hematol 2014)。
【０３５１】
(8.3.2  材料及び方法)
本実施例は、高輸血負荷(HTB、4単位以上のRBC/ベースライン前の8週間と定義される)又は低輸血負荷(LTB、4単位未満のRBC/ベースライン前の8週間と定義される)のいずれかを有する低又はInt-1リスクMDSの対象(表3及び表4参照)における貧血に対するActRIIB-hFc(配列番号25)の効果を評価するための用量設定を提示している。結果には、赤血球応答(LTB対象におけるHbの増加又はHTB対象における輸血負荷の低下)、安全性、忍容性、PK、及びPDバイオマーカーが含まれる。
【０３５２】
組入れ基準には、低又はInt-1リスクMDS、少なくとも18歳、貧血(HTB対象であるか、又はLTB対象において10.0g/dL未満のベースラインHbを有するかのいずれかと定義される)、500U/Lを超えるEPOか又はESAに対して無応答/不応性、事前のアザシチジン又はデシタビンなし、及びESA、G-CSF、GM-CSF、又はレナリドミドによる最近の治療なしが含まれた。用量漸増期には、ActRIIB-hFc(配列番号25)を、皮下(SC)注射により、3週間に1回、7つの連続コホート(n＝3〜6)において、0.125、0.25、0.5、0.75、1.0、1.33、及び1.75mg/kgの用量レベルで、最大5用量で投与し、3カ月間の経過観察を行った。拡大コホート(n＝30)を計画し、この試験を終える対象は全て、12カ月の延長試験に登録することができる。実験設計及び投与レジメンの説明については、図8を参照されたい。
【０３５３】
(8.3.3  結果)
データは、26人の対象(7人のLTB/19人のHTB)について入手可能であった。年齢中央値は71歳(範囲: 27〜88歳)であり、50％が女性であり、54％が事前のEPO治療を受けており、15％が事前のレナリドミドを投与されていた。69％はWHOサブタイプRCMDであり、残りの対象は、del(5q)、RARS、又はRAEB-1であった。LTB対象(n＝7)の平均(SD)ベースラインHbは9.1(0.4)g/dLであった。治療前の8週間で輸血される平均(SD)単位RBCは、LTB対象については0.9(1.1)単位及びHTB対象については6.3(2.4)単位であった。表3及び4を参照されたい。
【０３５４】
7人のLTB対象のうちの2人は、ベースラインと比較して、8週間にわたる1.5g/dL以上の平均Hbの増加を有していた。LTB対象における平均最大Hb増加は、0.125(n＝1)、0.25(n＝1)、0.75(n＝3)、及び1.75(n＝2)mg/kg用量群で、それぞれ、0.8、1.0、2.2、及び2.7g/dLであった。ActRIIB-hFc(配列番号25)による治療の後のLTB対象における最大ヘモグロビン増加を示している図9を参照されたい。ActRIIB-hFc(配列番号25)が投与されたLTB対象は、網状赤血球及びヘモグロビンレベルの増大を示した。図10〜12及び表5を参照されたい。7人のLTB対象のうちの6人は、試験中、8週間以上、RBC輸血非依存(RBC-TI)を達成した。
【０３５５】
19人のHTB対象のうちの6人は、治療前の8週間と比較して、治療期間中の8週間の間隔にわたり輸血されたRBC単位が4単位以上又は50％以上低下しており;これら6人の対象のうち5人は、試験中8週間以上(範囲71〜152日)、RBC-TIを達成した。ヘモグロビンレベルの増大は、ActRIIB-hFc(配列番号25)が投与されたHTB対象で認められた。例えば、図13を参照されたい。試験薬投与後の好中球数の増加は、一部の対象で認められた。8週間以上、RBC-TIを達成している対象のサブセットでは、ActRIIB-hFc(配列番号25)による対象の治療の前に環状鉄芽球である赤芽球のパーセンテージが増加していた。表7を参照されたい。
【０３５６】
ActRIIB-hFc(配列番号25)は、概して、忍容性が良好であった。最もよく見られる有害事象は、因果関係に関係なく:下痢(n＝4、グレード1/2)、骨痛、疲労、筋攣縮、筋肉痛、及び鼻咽頭炎(各々n＝3、グレード1/2)であった。
【０３５７】
表3.ベースライン特徴
【表３】
2018501307.tif 000005
【０３５８】
表4.示された用量のActRIIB(配列番号25)で治療された対象におけるHI-E応答率の有効性のまとめ
【表４】
2018501307.tif 000006
【０３５９】
表5. LTB対象におけるヘモグロビン応答
【表５】
2018501307.tif 000007
【０３６０】
表6.示された用量のActRIIB(配列番号25)で治療されたHTB対象における輸血応答
【表６】
2018501307.tif 000008
【０３６１】
表7.環状鉄芽球(RS)形態及び突然変異解析によるIWG応答率
【表７】
2018501307.tif 000009
aコホート4: 0.75mg/kg(n＝3);コホート5: 1.0mg/kg(n＝3);コホート6: 1.33mg/kg(n＝6);コホート7: 1.75mg/kg(n＝2); b輸血非依存になった3人の対象を含む。
【０３６２】
(8.3.4  結論)
低又はInt-1 MDS対象における予備的データに基づいて、3週間毎に最大5用量でSC投与されたActRIIB-hFc(配列番号25)は、望ましい安全性プロファイルを伴って、Hbレベルを増大させたか又は輸血の必要性を減少させた。これらのデータは、ActRIIB-hFc(配列番号25)によるMDSを有する対象のより長期の治療のさらなる評価を強く支持する。
【０３６３】
(8.4  実施例4: ActRIIB-hFc(配列番号25)は、低又は中間-1リスクMDSを有する対象において、ヘモグロビンを増加させ、かつ輸血負荷を低下させる:第2相PACE-MDS試験の予備的結果)
(8.4.1  序論)
ActRIIB-hFc(配列番号25)は、無効造血を伴う貧血の治療のための現在検討中の融合タンパク質(改変アクチビン受容体IIB/IgG Fc)である。MDS対象は、増大したGDF11レベル(Suraganiの文献、Nat Med 2014)及び骨髄での異常なSmad2,3シグナル伝達を有する。ActRIIB-hFc(配列番号25)は、GDF11、アクチビンB、及びBMP6を含むTGF-βスーパーファミリーリガンドに結合し、Smad2,3シグナル伝達を阻害し、ESAとは異なり、後期の赤血球分化を促進する。健常ボランティアの研究において、ActRIIB-hFc(配列番号25)は忍容性が良好であり、かつHbレベルを増大させた(Attieの文献、Am J Hematol 2014)。
【０３６４】
(8.4.2  目的)
本実施例に提示されるデータは、輸血依存(TD)又は非輸血依存(NTD)の低又はint-1リスクMDSを有する対象における貧血に対するActRIIB-hFc(配列番号25)の効果を評価するための現在進行中の第2相多施設非盲検用量設定試験からのものである。試験結果には、赤血球応答、安全性、忍容性、薬物動態バイオマーカー、及び薬力学バイオマーカーが含まれた。低輸血負荷(LTB)対象では、赤血球応答をヘモグロビン濃度の増加と定義した。高輸血負荷(HTB)対象では、赤血球応答を輸血負荷の低下と定義した。
【０３６５】
(8.4.3  方法)
組入れ基準には、低又はint-1リスクMDS、年齢18歳以上、Hb＜10.0g/dL(LTB、4単位未満のRBC/ベースライン前の8週間と定義される)又は4単位以上のRBC/ベースライン前の8週間(HTB)のいずれかと定義される貧血を有する、EPO＞500U/Lか又はESAに対して無応答/不応性、事前のアザシチジン又はデシタビンなし、及びESA、G-CSF、GM-CSF、又はレナリドミドによる最近の治療なしが含まれた。ActRIIB-hFc(配列番号25)を、皮下(SC)注射により、3週間に1回、連続コホート(n＝各々3〜6)において、0.125〜1.75mg/kgの範囲の用量レベルで、最大5用量で投与し、3カ月間の経過観察を行った。拡大コホート(n＝30)は現在進行中であり、応答に対する個々の対象の用量漸増が許容されている。この試験を終える対象は全て、12カ月の延長試験に登録することができる。
【０３６６】
(8.4.4  結果)
本実施例は、第II相試験に登録された58人の対象のうちの44人の対象(19人の女性、25人の男性; 15人のLTB対象、29人のHTB対象)についての予備的な安全性及び有効性データを提供している。対象の年齢中央値は71歳であった。対象の61％は事前のEPO治療を受けていた。対象の21％は事前のレナリドミド治療を受けていた。対象の73％は、RARS又はRCMD-RSを有していた。対象の80％は、骨髄中に15％を超える環状鉄芽球を有していた。
【０３６７】
0.75mg/kg〜1.75mg/kgのActRIIB-hFc(配列番号25)で治療されたLTB対象(n＝13)は、主要エンドポイントについての77％の応答率(2週間以上の1.5g/dL以上のHb増加)及び62％のIWG HI-E(国際作業グループによる赤血球の血液学的改善)応答率(8週間以上の1.5g/dL以上のHb増加)を有していた。ヘモグロビンの平均(標準偏差)最大変化は、低用量群の0.9(標準偏差: 0.1)g/dLと比較して、高用量群で2.7(標準偏差: 1.1)g/dLであった。
【０３６８】
0.75mg/kg〜1.75mg/kg(n＝13)のActRIIB-hFc(配列番号25)で治療されたHTB対象は、50％のHI-E応答率(4 RBC単位以上/8週間の低下)を有していた。HI-E応答率は、15％以上の環状鉄芽球を有する対象(n＝30)については63％、SF3B1突然変異を有する対象(n＝10)については80％であった。ActRIIB-hFc(配列番号25)は、概して、忍容性が良好であった。最もよく見られる有害事象は、因果関係に関係なく、下痢、鼻咽頭炎、筋肉痛、骨痛、気管支炎、頭痛、及び筋攣縮であった。
【０３６９】
(8.4.5  結論)
低/Int-1 MDS対象における予備的データに基づいて、3カ月間の治療的用量レベルでのActRIIB-hFc(配列番号25)治療は、望ましい安全性プロファイルを伴って、54％の対象でHbレベルの増大及び/又は輸血の必要性の減少についてのHI-E応答をもたらした。より高い応答率は、環状鉄芽球及びSF3B1突然変異を有する対象で認められた。これらのデータは、MDSを有する対象におけるActRIIB-hFc(配列番号25)による有効な治療のバイオマーカーとしての環状鉄芽球レベル及びSF3B1突然変異保有率の利用を強く支持する。
【０３７０】
(8.5  実施例5:低もしくは中間-1(Int-1)-リスクMDS又は非増殖性CMML及びRBC輸血を必要とする貧血を有する対象におけるActRIIA-hFc(配列番号7)の非盲検第2相用量設定試験)
(8.5.1  序論)
実施例2(第8.2節)の序論(第8.2.1節)並びに材料及び方法(第8.2.2節)を参照されたい。本実施例は、後日、第2相試験で得られた、実施例2(第8.2節)の追加データを提示している。
【０３７１】
(8.5.2  結果)
合計59人のMDS対象を、0.1mg/kg、0.3mg/kg、0.5mg/kg、1.0mg/kg、又は2.0mg/kgのいずれかのActRIIA-hFc(配列番号7)で治療した。表8は、各治療群についての対象のベースライン特徴を提供している。
【０３７２】
有効性について評価可能な53人の対象のうち、HI-Eは、全体として23人の対象(43％)で認められた: ActRIIA-hFc(配列番号7)の0.1、0.3、0.5、及び1.0mg/kg用量群において、それぞれ、0人、4人(67％)、9人(45％)、及び10人(50％)の対象。さらに、わずか0.3mg/kgのActRIIA-hFc(配列番号7)によるHTB対象の治療は、4 RBC単位以上/8週間の輸血負荷低下をもたらした(表9参照)。輸血応答の持続期間は、用量依存的であるように思われた。さらに、45人の評価可能なHTB対象のうち、6人(13)は、少なくとも8週間、RBC-TIを達成した(表9参照)。1.0mg/kgの用量でのActRIIA-hFc(配列番号7)による治療の開始後、少なくとも337日間、RBC-TIを達成した例示的なHTB対象については、図13を参照されたい。
【０３７３】
表8.対象のベースライン特徴。
【表８】
2018501307.tif 000010
a0年は、最初の診断から1年未満を示す; b4単位以上/8週間のRBC輸血負荷を有する対象; c4単位未満/8週間のRBC輸血負荷を有する対象; d MDSに対する非ESA、非低メチル化、及び非レナリドミド治療; EPO、エリスロポエチン; ESA、赤血球産生刺激剤; Hb、ヘモグロビン; HTB、高輸血負荷; Int、中間; IPSS、国際予後判定スコアリングシステム; LTB、低輸血負荷; MDS、骨髄異形成症候群; RBC、赤血球。
【０３７４】
表9. HTB対象(n＝45)における輸血応答
【表９】
2018501307.tif 000011
【０３７５】
さらに、ActRIIA-hFc(配列番号7)で治療された8人のLTB対象のうち、5人(63％)は、任意の8週間の無輸血期間にわたって少なくとも1.5g/dLの平均Hb増加を伴うRBC-TIを達成した。特に、0.5mg/kgのActRIIA-hFc(配列番号7)で治療されたLTB対象の33％及び1.0mg/kgのActRIIA-hFc(配列番号7)で治療されたLTB対象の80％は、任意の8週間の無輸血期間にわたって少なくとも1.5g/dLの平均Hb増加を伴うRBC-TIを達成した。ActRIIA-hFc(配列番号7)で治療された治療LTB対象における最大平均Hb増加は、1.45g/dL〜4.44g/dLの範囲であった。ActRIIA-hFc(配列番号7)で治療されたLTB対象におけるRBC-TIの持続期間は、76〜472日の範囲であった。11.0g/dLを超えるHbレベルを有するLTB対象は、投与延期の対象としたが、これは、Hbレベル増大の持続期間の評価に影響を及ぼしたかも知れない。1.0mg/kgの用量でのActRIIA-hFc(配列番号7)による治療の開始後、少なくとも358日間、RBC-TI及びヘモグロビンレベルの持続的増大を達成した例示的なLTB対象については、図14を参照されたい。
【０３７６】
さらに、治療有効性とベースライン時の環状鉄芽球(RS)の存在との関連を評価した(表10参照)。HI-Eは、RS-陽性対象の50％で達成された。対照的に、HI-Eは、RS-陰性対象の10％でしか達成されなかった。
【０３７７】
表10. ActRIIA-hFc(配列番号7)で治療された対象における環状鉄芽球の状況
【表１０】
2018501307.tif 000012
aRS状況は、利用可能な場合は、ベースラインからのものであり、それ以外の場合は、ベースライン後からのものである; 16人の対象については、RS状況が不明であった; b＞15％のRS; c≦15％のRS
【０３７８】
ActRIIA-hFc(配列番号7)は、概して、忍容性が良好であった。表11を参照されたい。4人の対象は、治療関連有害事象の疑いのため、治療を中止した:対象A(0.3mg/kg用量群)、グレード2の溶血性貧血;対象B(0.5mg/kg用量群)、グレード3の高血圧;対象C(1.0mg/kg用量群)、グレード2の筋無力症;対象D(2.0mg/kg用量群)、及びグレード2の下痢を伴うグレード2の血圧の上昇。
【０３７９】
(8.5.3  結論)
ActRIIA-hFc(配列番号7)は、低リスクMDS対象において、試験した用量レベルで忍容性が良好であり、ESA不応性で貧血である低リスクMDS対象のこの主にHTBのコホートにおける臨床活性の有望な証拠を示している。さらに、これらのデータは、ActRIIシグナル伝達インヒビター、例えば、ActRIIA-hFc(配列番号7)による治療の前の対象における環状鉄芽球の存在が、長期治療、RBC輸血非依存、ヘモグロビンレベルの長期増大、及び治療の有効性の増強の指標となり得ることを示している。
【０３８０】
表11.示された用量のActRIIA-hFc(配列番号7)で治療された対象における有害事象
【表１１】
2018501307.tif 000013
【０３８１】
(8.6  実施例6: ActRIIB-hFcは、低又は中間-1リスクMDSを有する対象において、ヘモグロビンを増加させ、かつ輸血負荷を低下させる:第2相試験の予備的結果)
(8.6.1  序論)
実施例3(第8.3節)の序論(第8.3.1節)並びに材料及び方法(第8.3.2節)を参照されたい。本実施例は、後日、第2相試験で得られた、実施例3(第8.3節)の追加データを提示している。
【０３８２】
(8.6.2  結果)
データは、44人の対象(15人のLTB/29人のHTB)について入手可能であった。表12は、本実施例で検討された対象のベースライン特徴を提供している。
【０３８３】
赤血球応答をActRIIB-hFc(配列番号25)で治療した対象で評価した。LTB対象について、主要エンドポイントは、少なくとも2週間の少なくとも1.5g/dLのヘモグロビン増加であった。HTB対象について、主要エンドポイントは、8週間にわたる少なくとも4単位又は少なくとも50％のRBC輸血の低下であった。低用量(0.125〜0.5mg/kgのActRIIB-hFc(配列番号25))が投与された対象の33％(3/9)が主要エンドポイントを達成した一方で、高用量(0.75〜1.75mg/kgのActRIIB-hFc(配列番号25))が投与された対象の63％(22/35)が主要エンドポイントを達成した。
【０３８４】
さらに、IWG HI-Eを評価した。LTB対象について、IWG HI-Eは、少なくとも8週間の少なくとも1.5g/dLのヘモグロビン増加である。HTB対象について、IWG HI-Eは、8週間にわたる少なくとも4単位のRBC輸血の低下である。低用量(0.125〜0.5mg/kgのActRIIB-hFc(配列番号25))が投与された対象の22％(2/9)がIWG HI-Eを達成した一方で、高用量(0.75〜1.75mg/kgのActRIIB-hFc(配列番号25))が投与された対象の54％(19/35)がIWG HI-Eを達成した。
【０３８５】
環状鉄芽球は異常赤芽球である。さらに、MDSと関連する特定の体細胞突然変異は、環状鉄芽球形成及び無効造血を引き起こす。スプライシング因子3B1(SF3B1)における優性突然変異は、環状鉄芽球の形成と関連している。本明細書で使用されるように、「RS+」は、少なくとも15％の環状鉄芽球を指す。したがって、環状鉄芽球、体細胞突然変異、及び無効造血の存在と赤血球応答及び輸血非依存との関連を、高用量(0.75mg/kg〜1.75mg/kg)のActRIIB-hFc(配列番号25)で治療した対象で評価した(表13及び表14参照)。ActRIIB-hFcで治療された対象は、IWG HI-E及び輸血非依存を達成した(表13、表14、及び図16参照)。これらのデータは、対象がRS+であり、かつ/又はSF3B1突然変異(複数可)を有するとき、ActRIIB-hFc(配列番号25)で治療された対象で赤血球応答の増加があったことを示している。
【０３８６】
表12. ActRIIB-hFc(配列番号25)で治療された対象のベースライン特徴
【表１２】
2018501307.tif 000014
【０３８７】
表13. RS+及びSF3B1突然変異陽性対象における赤血球応答。LTB対象について、IWG HI-Eは、少なくとも8週間の少なくとも1.5g/dLのヘモグロビン増加である。HTB対象について、IWG HI-Eは、8週間にわたる少なくとも4単位のRBC輸血の低下である。
【表１３】
2018501307.tif 000015
【０３８８】
表14. RS+及びSF3B1突然変異陽性対象における輸血非依存。輸血非依存は、治療時の少なくとも8週間のRBC無輸血を指す。
【表１４】
2018501307.tif 000016
【０３８９】
(8.6.3  結論)
MDS対象への3週間毎のActRIIB-hFc(配列番号25)の皮下投与は、概して、安全でかつ忍容性が良好であった。赤血球応答(IWG HI-E)は、少なくとも0.75mg/kgの用量のActRIIB-hFc(配列番号25)で治療された対象の54％で達成された。さらに、高率の赤血球応答が、環状鉄芽球又はSF3B1の突然変異を有する対象で見られた。さらに、輸血非依存は、少なくとも0.75mg/kgの用量のActRIIB-hFc(配列番号25)で治療された対象の36％で達成された。
【０３９０】
(8.7  実施例7:低リスクMDS及び輸血を必要とする貧血を有する対象におけるActRIIA-hFC(配列番号7)の第2相用量設定試験)
実施例2(第8.2節)の序論(第8.2.1節)並びに材料及び方法(第8.2.2節)を参照されたい。本実施例は、後日、第2相試験で得られた、実施例2(第8.2節)の追加データを提示している。
【０３９１】
治療有効性とベースライン時の環状鉄芽球(RS)の存在との関連をさらに評価した(表15参照)。
【０３９２】
任意の8週間の期間にわたるRBC-TI(LTB患者について、1.5g/dL以上の平均Hb増加を伴う)の達成を図17に示す。
【０３９３】
表15.赤血球応答: ActRIIA-hFC融合体(配列番号7)で治療された対象における鉄芽球性対非鉄芽球性MDS。HI-Eは、ソタテルセプトの1.0mg/kg用量群の64％の鉄芽球患者及び20％の非鉄芽球患者で達成された(カイ二乗検定P＝0.11)。
【表１５】
2018501307.tif 000017
aRS状況は、入手可能な場合、ベースラインからのものである; 6人の患者については、RS状況が不明であった。
【０３９４】
(8.8  実施例8: ActRIIB-hFcは、低又は中間-1リスクMDSを有する対象において、ヘモグロビンを増加させ、かつ輸血負荷を低下させる:第2相試験の予備的結果(続き))
(8.8.1  序論)
実施例3(第8.3節)の序論(第8.3.1節)並びに材料及び方法(第8.3.2節)を参照されたい。本実施例は、後日、第2相試験で得られた、実施例3(第8.3節)の追加データを提示している。
【０３９５】
(8.8.2  結果)
合計49人のMDS対象を検討した。表16に示すように、49人のMDS対象のうちの27人を3カ月間のActRIIB-hFc(配列番号25)用量漸増試験(0.125mg/kg〜1.75mg/kg)に登録し、22人の対象を後続の延長試験に登録した。表17は、本実施例で検討された対象のベースライン特徴を提供している。
【０３９６】
(3カ月間の用量漸増試験)
赤血球応答をActRIIB-hFc(配列番号25)で治療した対象で評価した。表18を参照されたい。LTB対象について、主要エンドポイントは、少なくとも2週間間の少なくとも1.5g/dLのヘモグロビン増加であった。HTB対象について、主要エンドポイントは、8週間にわたる少なくとも4単位又は少なくとも50％のRBC輸血の低下であった。低用量(0.125〜0.5mg/kgのActRIIB-hFc(配列番号25))が投与された対象の33％(3/9)が主要エンドポイントを達成した一方で、高用量(0.75〜1.75mg/kgのActRIIB-hFc(配列番号25))が投与された対象の58％(23/40)が主要エンドポイントを達成した。
【０３９７】
さらに、IWG HI-Eを評価した。表18を参照されたい。LTB対象について、IWG HI-Eは、少なくとも8週間の少なくとも1.5g/dLのヘモグロビン増加である。HTB対象について、IWG HI-Eは、8週間にわたる少なくとも4単位のRBC輸血の低下である。低用量(0.125〜0.5mg/kgのActRIIB-hFc(配列番号25))が投与された対象の22％(2/9)がIWG HI-Eを達成した一方で、高用量(0.75〜1.75mg/kgのActRIIB-hFc(配列番号25))が投与された対象の48％(19/40)がIWG HI-Eを達成した。
【０３９８】
さらに、輸血非依存を評価した。表18を参照されたい。ActRIIB-hFc(配列番号25)治療の前に少なくとも2 RBC単位を投与されている対象については、輸血非依存を、ActRIIB-hFc(配列番号25)治療を受けている間の輸血なしでの少なくとも8週間の達成と定義した。低用量(0.125〜0.5mg/kgのActRIIB-hFc(配列番号25))が投与された対象の14％(1/7)が輸血非依存を達成した一方で、高用量(0.75〜1.75mg/kgのActRIIB-hFc(配列番号25))が投与された対象の37％(11/30)が輸血非依存を達成した。4/6のLTB対象及び7/24のHTB対象が輸血非依存を達成した。11人の輸血非依存患者のうちの10人では、ActRIIB-hFc(配列番号25)治療から最初の6週間以内に効果が見られた。
【０３９９】
環状鉄芽球、体細胞突然変異、及び無効造血の存在と赤血球応答及び輸血非依存との関連を、高用量(0.75mg/kg〜1.75mg/kg)のActRIIB-hFc(配列番号25)で治療した対象で評価した。表19を参照されたい。高用量群の全ての対象のうちの19/40(48％)がIWG HI-Eを達成した。環状鉄芽球(RS)陽性対象(その骨髄中に少なくとも15％の赤血球前駆体を有するものと定義される)の19/35(54％)がIWG HI-Eを達成し、RS陰性対象の0/4(0％)がIWG HI-Eを達成した。200mU/mLを下回るEPOレベルを有するRS陽性対象の14/23(61％)がIWG HI-Eを達成し、200mU/mLを下回るEPOレベルを有するRS陽性対象の5/12(42％)がIWG HI-Eを達成した。SF3B1突然変異を保有する16/26(62％)の対象及びSF3B1突然変異を保有しない3/13(23％)の対象がIWG HI-Eを達成した。
【０４００】
まとめると、本実施例で提示されている結果は、ActRIIB-hFc(配列番号25)治療が、とりわけ、高用量群の対象において、強力な赤血球応答及び輸血非依存をもたらすことを示した。さらに、赤血球応答の強化がRS+陽性及びSF3B1突然変異陽性対象で見られた。
【０４０１】
ActRIIA-hFc(配列番号7)は、概して、忍容性が良好であった。表20を参照されたい。大多数の有害事象(AE)は、グレード1又は2であった。関連する可能性がある2つの重篤な有害事象(SAE)が認められた:グレード3の筋肉痛(90日目に発症)及びグレード3の全身状態の悪化(44日目に発症、66日目に再発、関連なし)。関連する可能性がある1つの重篤でないグレード3の芽細胞数のAEが認められた。
【０４０２】
表16. ActRIIB-hFc(配列番号25)で治療された対象の投与スケジュール
【表１６】
2018501307.tif 000018
a出発用量レベル;用量レベルを、8人の対象では1.33mg/kgに、2人の対象では1.75mg/kgに増大させた。
【０４０３】
表17. ActRIIB-hFc(配列番号25)で治療された対象のベースライン特徴
【表１７】
2018501307.tif 000019
【０４０４】
表18. ActRIIB-hFc(配列番号25)で治療された対象における赤血球応答及び輸血非依存
【表１８】
2018501307.tif 000020
*11人の輸血非依存患者のうちの10人では、ActRIIB-hFc(配列番号25)治療から最初の6週間以内に効果が見られた。
【０４０５】
表19. ActRIIB-hFc(配列番号25)で治療された対象における赤血球応答及び輸血非依存
【表１９】
2018501307.tif 000021
【０４０６】
表20.因果関係に関係なく、ActRIIB-hFc(配列番号25)で治療された4人以上の対象で報告された有害事象(全てのグレード):
【表２０】
2018501307.tif 000022
【０４０７】
(延長試験)
3カ月間の用量漸増試験を終えた対象は、後続の12カ月間の延長試験に登録する資格があった。ActRIIB-hFc(配列番号25)の出発用量レベルは、その治療が3カ月よりも長い間中断されている対象については、1.0mg/kgであった。そのActRIIB-hFc(配列番号25)治療が中断されていない対象は、3カ月間の治療プロトコルにおけるその最後の用量と同じ用量レベルでその治療を継続した。
【０４０８】
合計58人の対象を3カ月間の治療試験に登録した。これらのうち、9人の低輸血負荷患者及び13人の高輸血負荷患者の22人の対象を12カ月間の延長試験に登録した。延長試験では、17/22人の対象が、その中断されていないActRIIB-hFc(配列番号25)治療を継続し、5/22人の対象が3カ月を超える中断の後に登録された。
【０４０９】
9人の低輸血負荷患者について、1カ月での平均ヘモグロビン増加は、約2g/dLであり、2.5〜3.0g/dLに増加し、6カ月間維持された。これについてのデータは入手可能である。
【０４１０】
13人の高輸血負荷患者について、43％が輸血非依存を達成し、数人の患者は、この輸血非依存を6カ月よりも長い間維持し、最も長く継続している輸血非依存患者は、ほぼ8カ月に達していた。これらの患者は全て、試験を継続した。
【０４１１】
図18は、例示的な対象の結果を示している。RS陽性HTB対象を、最初の3カ月間の治療試験において、0.75mg/kgの用量のActRIIB-hFc(配列番号25)で治療し、11カ月間のActRIIB-hFc(配列番号25)治療中断の後、12カ月間の延長試験に登録した。この治療中断の間、対象はEPOを投与された。
【０４１２】
持続性のあるヘモグロビン応答がLTB対象で認められた。8/9人の対象がIWG HI-Eを達成した。図19は、例示的な対象のヘモグロビン応答を示している。
【０４１３】
12カ月間の延長試験に属する対象は、持続性のある輸血非依存応答を示した。図20は、6人の対象の結果を示している。5人の対象は、2〜7カ月後、1.0mg/kg(4人の対象)及び1.75mg/kg(1人の対象)の用量でのActRIIB-hFc(配列番号25)治療を受けている間に、継続的な輸血非依存応答を示している。1人の対象(図20の最後の列)は、1.0mg/kgから1.33mg/kg及び1.75mg/kgへと2回の用量漸増を受けた。この後者の対象は、間欠的に、約2カ月間、輸血非依存を経験し、IWG HI-E応答を達成し続けている。
【０４１４】
結論として、本実施例に提示されている結果は、ActRIIB-hFc(配列番号25)で治療された低リスクRS陽性MDS対象が、とりわけ、0.75mg/kg以上の用量で治療された場合、大幅な血液学的改善を示すことを示した。ActRIIB-hFc(配列番号25)治療は、概して、忍容性が良好であった。ActRIIB-hFc(配列番号25)による長期治療は、ヘモグロビンレベルの増大の持続及び輸血非依存の維持を示した。
【０４１５】
(8.9  実施例9: IPSS-R超低、低、又は中間-リスクMDSによる貧血を治療するためのActRIIB-hFc(配列番号25)の第III相試験)
本実施例は、RBC輸血を必要とする、環状鉄芽球を有する(赤芽球の少なくとも15％が環状鉄芽球である)対象におけるIPSS-R超低、低、又は中間-リスクMDSによる貧血の治療のためのActRIIB-hFc(配列番号25)の有効性及び安全性を決定するための第3相二重盲検プラセボ対照多施設無作為化試験の概観を提供している。
【０４１６】
貧血は、骨髄異形成症候群を有する患者で最も広く普及している血球減少のうちの1つであると考えられる。骨髄異形成症候群は、赤血球、白血球、及び/又は血小板の無効産生に関連する障害を説明するために使用される総称である。重症度は軽度(無症状)から重度にまで及び、貧血は、RBC輸血を必要とする患者を結果的に生み出し得、RBC輸血は、鉄過剰症による合併症をさらにもたらし得る。本試験の目的は、IPSS-R超低、低、又は中間-リスクMDSと分類され、存在する環状鉄芽球を有し、かつRBC輸血を必要とする貧血患者におけるプラセボと比べたActRIIB-hFc(配列番号25)の安全性及び有効性を評価することである。本試験の設計により、ActRIIB-hFc(配列番号25)群又はプラセボ群のいずれかへの患者の初期の無作為化の期間、次いで、二重盲検治療期間、その後、MDS疾患評価診察が可能になる。この疾患評価診察によって治験責任医師から判断されるような臨床的利益を受けていると決定される患者については、試験の二重盲検延長期間に入ることが許される。ひとたび患者が研究治療を中止した場合、患者は治療後の経過観察期間に入る。
【０４１７】
(8.9.1  試験設計)
対象に、ActRIIB-hFc(配列番号25)の1.0mg/kgの初期用量を、3週間に1回、皮下投与する。対照対象には、プラセボを、3週間に1回、皮下投与する。
【０４１８】
((a)組入れ基準)
本試験への対象参加の組入れ基準には、以下のものが含まれる:(1)対象は同意書に署名する時点で18歳以上である;(2)対象は、超低、低、又は中間リスク疾患の国際予後判定スコアリングシステム-改定(IPSS-R)分類を満たすMDSの診断を受けており、かつ:(a)骨髄中の赤血球前駆体の15％よりも多くが環状鉄芽球であり、かつ(b)骨髄中に5％よりも少ない芽球を有する;(3) 8週間の期間に2単位よりも多い赤血球輸血を必要とする対象;(4)0、1、又は2の東部共同腫瘍学グループ(Eastern Cooperative Oncology Group)(ECOG)スコア;(5)事前のESA治療に対して不応性/不耐性/不適格である対象;事前のESA治療に対して不応性であるものは、単剤か又は(例えば、G-CSFとの)組合せかのいずれかとしての事前のESA含有レジメンに対する無応答又はもはや維持されない応答の記録を必要とする; ESAレジメンは、(a)少なくとも8用量又は同等量に対して40,000IU/週を超える組換えヒトエリスロポエチン、又は(b)少なくとも4用量又は同等量に対して3週間に1回の500μgを超えるダルベポエチンαのいずれかでなければならない;事前のESA治療に対して不耐性であるものは、不耐性又は有害事象による、導入後の任意の時点での、単剤か又は(例えば、G-CSFとの)組合せかのいずれかとしての事前のESA含有レジメンの中止の記録を必要とする; ESAに不適格であるものは、以前にESAで治療されていない対象の200U/Lを超える内在性の血清エリスロポエチンレベルに基づく、ESAに対する低い応答の可能性を必要とする。
【０４１９】
((b)除外基準)
以下のいずれかが存在すると、対象は本試験への登録から除外される:(1)基礎MDS疾患のための疾患修飾剤(例えば、免疫調節薬、低メチル化剤、もしくは免疫抑制療法)又は実験的薬剤による事前の治療;(2)細胞遺伝学的異常のdel 5qと関連するMDS;(3)二次性MDS、すなわち、化学的損傷又は他の疾患のための化学療法及び/もしくは放射線による治療の結果として生じたことが知られているMDS;(4)鉄、ビタミンB12、もしくは葉酸不足による既知の臨床的に重大な貧血、又は自己免疫もしくは遺伝性溶血性貧血、又は胃腸出血;鉄欠乏は、鉄の骨髄穿刺液染色、20％以下の計算されたトランスフェリン飽和(鉄/全鉄結合能)、又は15μg/L以下の血清フェリチンによって決定される;(6)事前の同種異系又は自己幹細胞移植;(7)急性骨髄性白血病(AML)の診断の既往歴;(8)無作為化前の5週間以内の以下のいずれかの使用:抗癌細胞傷害性化学療法剤又は治療、コルチコステロイド(MDS以外の身体疾患についての無作為化前の1週間以上、安定又は減少用量を服用している対象を除く)、鉄キレート化剤(無作為化前の少なくとも8週間、安定又は減少用量を服用している対象を除く)、他のRBC造血成長因子(例えば、インターロイキン-3);(9)対象が、5年以上の間、疾患に罹っていない場合を除く、MDS以外の悪性腫瘍の既往歴;以下の既往/併発疾患を有する対象は許容される:皮膚の基底又は扁平上皮細胞癌、子宮頸部の上皮内癌、乳房の上皮内癌、前立腺癌の偶発的な組織学的所見(腫瘍、節、転移の臨床病期判定システムを用いて、T1a又はT1b);或いは(10)無作為化前の8週間以内の大きな手術;対象は、無作為化前のいかなる過去の手術からも完全に回復していなければならない。
【０４２０】
((c)転帰測定)
本試験のための主要な転帰測定は、任意の連続56日間、RBC輸血非依存である(すなわち、RBC輸血を必要としない)、ActRIIB-hFc(配列番号25)が投与された対象の比率の決定である。
【０４２１】
副次的な転帰測定は、ActRIIB-hFc(配列番号25)の投与後、任意の連続84日間、RBC輸血非依存を有する(すなわち、RBC輸血を必要としない)、ActRIIB-hFc(配列番号25)が投与された対象の比率の決定を含む。ActRIIB-hFc(配列番号25)の投与後16週間にわたって輸血されるRBC単位の数が減少した、ActRIIB-hFc(配列番号25)が投与された対象の比率も決定する。さらに、ActRIIB-hFc(配列番号25)が投与された対象におけるRBC輸血非依存の最大持続期間も決定する。最後に、ActRIIB-hFc(配列番号25)が投与された対象がRBC輸血非依存に達するのに必要とされる時間も決定する; RBC輸血非依存になるまでの時間は、無作為化から輸血非依存が最初に認められる日付(例えば、RBC輸血なしの56日のうちの1日目)までの時間と定義される。
【０４２２】
ActRIIB-hFc(配列番号25)の投与後、任意の連続56日間にわたって、改変された赤血球の血液学的改善を達成している、ActRIIB-hFc(配列番号25)が投与された対象の比率も決定する。ある態様において、赤血球の血液学的改善は、IWGによって定義されている通りである。ある態様において、赤血球の血液学的改善は、改変された2006年IWGによって定義されている通りである。ある態様において、低輸血負荷患者の赤血球の血液学的改善は、患者における少なくとも8週間の少なくとも1.5g/dLのヘモグロビン濃度の増加である。ある態様において、高輸血負荷患者の赤血球の血液学的改善は、8週間にわたる少なくとも4単位のRBC輸血の低下である。
【０４２３】
ActRIIB-hFc(配列番号25)が投与され、かつRBC輸血の非存在下、任意の連続56日間にわたって(対象へのActRIIB-hFc(配列番号25)の投与前の対象におけるヘモグロビン濃度と比較して)少なくとも1.0g/dLのヘモグロビンの増加を達成している対象の比率も決定する。
【０４２４】
ActRIIB-hFc(配列番号25)投与前の血清フェリチンレベルと比較したときのActRIIB-hFc(配列番号25)が投与された対象における血清フェリチンレベルの平均減少も決定する。共分散分析(ANCOVA)を用いて、層別化因子及びベースライン(ActRIIB-hFC(配列番号25)投与前)血清フェリチン値を共変数として、群間治療差を比較する。
【０４２５】
ActRIIB-hFc(配列番号25)投与前の鉄キレート療法使用と比較したときのActRIIB-hFc(配列番号25)が投与された対象における鉄キレート療法使用の平均減少も決定する。各対象についての日々の鉄キレート療法用量の変化をベースライン後の平均日用量とベースラインの平均日用量の差として計算する。共分散分析(ANCOVA)を用いて、層別化因子並びにベースライン鉄キレート療法値及び共変数を用いて、群間治療差を比較する。
【０４２６】
ActRIIB-hFc(配列番号25)の投与後、任意の連続56日間にわたって、好中球の血液学的改善を達成している、ActRIIB-hFc(配列番号25)が投与された対象の比率も決定する。ある態様において、好中球の血液学的改善は、IWGによって定義されている通りである。ある態様において、好中球の血液学的改善は、対象へのActRIIB-hFc(配列番号25)の投与後、対象での連続56日間にわたる少なくとも100％及び500/uLを超える好中球の増加である。
【０４２７】
急性骨髄性白血病に進行する対象の比率も決定する。
【０４２８】
欧州癌研究治療機構(The European Organization for Research and Treatment of Cancer)の生活の質に関するアンケートも利用し、評価する。
【０４２９】
有害事象、全生存、集団薬物動態、及び有害事象も評価する。
【０４３０】
(9.配列の説明)
表21.配列情報
【表２１】
2018501307.tif 000023
2018501307.tif 000024
2018501307.tif 000025
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2018501307.tif 000027
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2018501307.tif 000035
2018501307.tif 000036
2018501307.tif 000037
【０４３１】
(10.等価物)
本発明は、その具体的な実施態様に関して詳細に記載されているが、機能的に等価であるバリエーションが本発明の範囲内にあることが理解されるであろう。実際、本明細書に示され、記載されたものに加えた本発明の様々な変更は、前述の説明及び付随する図面から当業者に明らかになるであろう。そのような変更は、添付の特許請求の範囲の範囲内に含まれることが意図される。当業者は、本明細書に記載の本発明の具体的な実施態様の多くの等価物を認識するか、又はルーチンの実験だけを用いて、それらを確認することができるであろう。そのような等価物は、以下の特許請求の範囲によって包含されることが意図される。
【０４３２】
本明細書に言及された全ての刊行物、特許、及び特許出願は、各々の個々の刊行物、特許、又は特許出願が、その全体として引用により具体的かつ個別に組み込まれることが示される場合と同じ程度に、引用により本明細書中に組み込まれる。
【図１】
2018501307.tif 000038
【図２】
2018501307.tif 000039
【図３】
2018501307.tif 000040
【図４】
2018501307.tif 000041
【図５】
2018501307.tif 000042
【図６】
2018501307.tif 000043
【図７】
2018501307.tif 000044
【図８】
2018501307.tif 000045
【図９】
2018501307.tif 000046
【図１０】
2018501307.tif 000047
【図１１】
2018501307.tif 000048
【図１２】
2018501307.tif 000049
【図１３】
2018501307.tif 000050
【図１４】
2018501307.tif 000051
【図１５】
2018501307.tif 000052
【図１６】
2018501307.tif 000053
【図１７】
2018501307.tif 000054
【図１８】
2018501307.tif 000055
【図１９】
2018501307.tif 000056
【図２０】
2018501307.tif 000057
【配列表】
2018501307000001.xml
【手続補正書】
【提出日】平成29年8月31日(2017.8.31)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】配列表
【補正方法】追加
【補正の内容】
【配列表】
2018501307000001.app
【国際調査報告】
2018501307.tif 000094
2018501307.tif 000095
2018501307.tif 000096
2018501307.tif 000097