(57)【要約】本発明は、概して、ウイルス感染症を治療および予防する化合物を含む組成物および使用方法に関する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
以下のバイオマーカー：
(a)112.027 amuの精密質量を有しかつ少なくとも2.36%の相対存在量を有するバイオマーカー1；
(b)126.032 amuの精密質量を有しかつ少なくとも33.26%の相対存在量を有するバイオマーカー2；
(c)155.095 amuの精密質量を有しかつ少なくとも1.86%の相対存在量を有するバイオマーカー3；
(d)160.087 amuの精密質量を有しかつ少なくとも5.03%の相対存在量を有するバイオマーカー4；
(e)166.099 amuの精密質量を有しかつ少なくとも9.26%の相対存在量を有するバイオマーカー5；または
(f)507.342 amuの精密質量を有しかつ少なくとも0.60%の相対存在量を有するバイオマーカー8
のうちのいずれか1つ、または任意の組み合わせを含み、
各バイオマーカーがサンブクス・ニグラ（Sambucus nigra）中に見いだされ、かつ
相対存在量が、1 mg/mlの組成物中にスパイクされた0.01 mg/mlクルクミンと比較した場合の相対存在量である、組成物。
【請求項２】
バイオマーカー1〜5および8のうち少なくとも2つ、3つ、4つ、5つ、または全部を有する、請求項1記載の組成物。
【請求項３】
以下の追加のバイオマーカー：
(g)358.146 amuの精密質量を有するバイオマーカー6；
(h)478.295 amuの精密質量を有するバイオマーカー7；
(i)606.436 amuの精密質量を有するバイオマーカー9
のうちのいずれか1つ、または任意の組み合わせ、または全部をさらに含み、
各バイオマーカーがサンブクス・ニグラ中に見いだされる、請求項1〜2のいずれか一項記載の組成物。
【請求項４】
(j)少なくとも11.37%の相対存在量を有するバイオマーカー6；
(k)少なくとも1.20%の相対存在量を有するバイオマーカー7；および
(l)少なくとも0.07%の相対存在量を有するバイオマーカー9
をさらに含み、
相対存在量が、1 mg/mlの組成物中にスパイクされた0.01 mg/mlクルクミンと比較した場合の相対存在量である、請求項3記載の組成物。
【請求項５】
(a)2.36%〜6.94%の相対存在量を有するバイオマーカー1；
(b)33.26%〜85.75%の相対存在量を有するバイオマーカー2；
(c)1.86%〜4.69%の相対存在量を有するバイオマーカー3；
(d)5.03%〜12.89%の相対存在量を有するバイオマーカー4；
(e)9.26%〜24.11%の相対存在量を有するバイオマーカー5；
(f)0.60%〜1.75%の相対存在量を有するバイオマーカー8
をさらに含み、
相対存在量が、1 mg/mlの組成物中にスパイクされた0.01 mg/mlクルクミンと比較した場合の相対存在量である、請求項1記載の組成物。
【請求項６】
(j)11.37%〜31.81%の相対存在量を有するバイオマーカー6；
(k)1.20%〜3.40%の相対存在量を有するバイオマーカー7；および
(l)0.07%〜1.38%の相対存在量を有するバイオマーカー9
をさらに含み、
相対存在量が、1 mg/mlの組成物中にスパイクされた0.01 mg/mlクルクミンと比較した場合の相対存在量である、請求項4記載の組成物。
【請求項７】
各バイオマーカーの質量が、リアルタイム直接分析-TOF（Direct Analysis in Real Time-TOF）(DART-TOF)質量分析計によって決定されるような質量である、請求項1〜6のいずれか一項記載の組成物。
【請求項８】
バイオマーカー1〜9のうち少なくとも1つが、合成的に得られる、請求項1〜7のいずれか一項記載の組成物。
【請求項９】
バイオマーカー1〜9のうち少なくとも1つが、生物から得られる、請求項1〜7のいずれか一項記載の組成物。
【請求項１０】
バイオマーカー1〜9のうち少なくとも1つが、サンブクス・ニグラ果実から得られる、請求項9記載の組成物。
【請求項１１】
バイオマーカーの相対存在量について、少なくとも90%、好ましくは少なくとも95%、または少なくとも98%のバッチ間化学一貫性を有する、請求項1〜10のいずれか一項記載の組成物。
【請求項１２】
抗ウイルス薬をさらに含む、請求項1〜11のいずれか一項記載の組成物。
【請求項１３】
抗インフルエンザ薬をさらに含む、請求項12記載の組成物。
【請求項１４】
抗インフルエンザ薬が、オセルタミビル、ザナミビル、リマンタジン、アマンタジン、ペラミビル、もしくはそれらの塩、またはそれらの任意の組み合わせである、請求項13記載の組成物。
【請求項１５】
抗インフルエンザ薬が、オセルタミビル、その塩、またはそれらの任意の組み合わせである、請求項14記載の組成物。
【請求項１６】
経口投与用に製剤化されている、請求項1〜15のいずれか一項記載の組成物。
【請求項１７】
ロゼンジ、散剤、錠剤、ゲルキャップ、遅延放出カプセル剤、急速放出カプセル剤、ゼラチン、液体溶液、および／または溶解性フィルムのうちの1つまたは複数である、請求項16記載の組成物。
【請求項１８】
局所適用、静脈内投与、および／または鼻腔内送達用に製剤化されている、請求項1〜15のいずれか一項記載の組成物。
【請求項１９】
インフルエンザウイルスに対して500μg/mlより低いIC50を有する、請求項1〜18のいずれか一項記載の組成物。
【請求項２０】
バイオマーカー1〜5および8のうち少なくとも1つが、インフルエンザウイルスへ結合することができ、細胞中へのインフルエンザウイルス侵入をブロックすることができる、請求項1〜19のいずれか一項記載の組成物。
【請求項２１】
バイオマーカー1〜5および8のうち少なくとも1つが、インフルエンザウイルスのヘマグルチニンに結合することができる、請求項20記載の組成物。
【請求項２２】
請求項1〜21記載の組成物のいずれか1つを対象へ投与する段階を含み、対象が治療される、インフルエンザおよび／またはインフルエンザ様疾患を有する対象を治療する方法。
【請求項２３】
対象が、熱、頭痛、筋肉痛、咳、粘液流出、もしくは鼻閉、またはそれらの任意の組み合わせを有する、請求項22記載の方法。
【請求項２４】
対象がインフルエンザを有し、かつ、インフルエンザウイルスAおよび／またはインフルエンザウイルスBウイルスに感染している、請求項22〜23のいずれか一項記載の方法。
【請求項２５】
インフルエンザウイルスが、H1N1、H3N2、H3N5、H5N1、および／またはインフルエンザBウイルスである、請求項24記載の方法。
【請求項２６】
対象がインフルエンザ様疾患を有し、かつ、ライノウイルスに感染している、請求項22〜23のいずれか一項記載の方法。
【請求項２７】
対象に、24時間の期間中に総計1〜5,000 mg、好ましくは10〜1,500 mg、50〜1,000 mg、または100〜500 mgのバイオマーカーを投与する、請求項22〜26のいずれか一項記載の方法。
【請求項２８】
組成物を少なくとも3日間、少なくとも1日1回投与する、請求項22〜27のいずれか一項記載の方法。
【請求項２９】
請求項1〜21記載の組成物のいずれか1つを対象へ投与する段階を含み、対象が治療される、エンベロープウイルスに感染している対象を治療する方法。
【請求項３０】
対象が、HIV、ヘルペスコンプレックスウイルス（herpes complex virus）、フラビウイルスウイルス、インフルエンザウイルスAウイルス、および／またはインフルエンザウイルスBウイルスに感染している、請求項29記載の方法。
【請求項３１】
対象がフラビウイルスウイルスに感染しており、かつ、フラビウイルスウイルスがジカウイルスおよび／またはデングウイルスである、請求項29〜30のいずれか一項記載の方法。
【請求項３２】
対象がジカウイルスに感染している、請求項31記載の方法。
【請求項３３】
対象に、24時間の期間中に総計1〜5,000 mg、好ましくは10〜1,500 mg、50〜1,000 mg、または100〜500 mgのバイオマーカーを投与する、請求項29〜32のいずれか一項記載の方法。
【請求項３４】
組成物を少なくとも3日間、少なくとも1日1回投与する、請求項29〜33のいずれか一項記載の方法。
【請求項３５】
請求項1〜21記載の組成物のいずれか1つを対象へ投与する段階を含み、インフルエンザおよび／またはインフルエンザ様疾患が予防される、対象におけるインフルエンザおよび／またはインフルエンザ様疾患を予防する方法。
【請求項３６】
インフルエンザウイルスAおよび／またはインフルエンザウイルスBウイルスによって引き起こされるインフルエンザが予防される、請求項35記載の方法。
【請求項３７】
インフルエンザウイルスが、H1N1、H3N2、H3N5、H5N1、および／またはインフルエンザBウイルスである、請求項36記載の方法。
【請求項３８】
ライノウイルスによって引き起こされるインフルエンザ様疾患が予防される、請求項35記載の方法。
【請求項３９】
対象に、24時間の期間中に総計1〜5,000 mg、好ましくは10〜1,500 mg、50〜1,000 mg、または100〜500 mgのバイオマーカーを投与する、請求項35〜38のいずれか一項記載の方法。
【請求項４０】
組成物を少なくとも3日間、少なくとも1日1回投与する、請求項35〜39のいずれか一項記載の方法。
【請求項４１】
請求項1〜21記載の組成物のいずれか1つを対象へ投与する段階を含み、エンベロープウイルス感染症が予防される、対象におけるエンベロープウイルス感染症を予防する方法。
【請求項４２】
予防されるエンベロープウイルス感染症が、HIV、ヘルペスコンプレックスウイルス、フラビウイルスウイルス、インフルエンザウイルスAウイルス、および／またはインフルエンザウイルスBウイルスによる感染症である、請求項41記載の方法。
【請求項４３】
フラビウイルスウイルス感染症が予防され、かつ、フラビウイルスウイルスがジカウイルスおよび／またはデングウイルスである、請求項41〜42のいずれか一項記載の方法。
【請求項４４】
ジカウイルス感染症が予防される、請求項43記載の方法。
【請求項４５】
対象に、24時間の期間中に総計1〜5,000 mg、好ましくは10〜1,500 mg、50〜1,000 mg、または100〜500 mgのバイオマーカーを投与する、請求項41〜44のいずれか一項記載の方法。
【請求項４６】
組成物を少なくとも3日間、少なくとも1日1回投与する、請求項41〜45のいずれか一項記載の方法。
【請求項４７】
バイオマーカーの相対存在量について、少なくとも90%、好ましくは少なくとも95%または少なくとも98%のバッチ間化学一貫性を有する組成物
を製造する、請求項1〜21のいずれか一項記載の組成物の製造方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願の相互参照
本出願は、2015年8月31日に出願された米国仮出願第62/212,339号の恩典を主張し、その内容は参照により本出願に組み入れられる。
【０００２】
発明の背景
A．発明の分野
本発明は、ウイルス感染症を予防および治療することができる化合物の混合物を含有する製剤に関する。
【背景技術】
【０００３】
B．関連技術の説明
ウイルスは、ほんの僅かなタンパク質、およびほんの僅かな遺伝子を含有する核酸から主に構成される比較的単純な粒子であり；しかしながら、タンパク質および核酸は、ウイルス種間で大幅に異なり得る。ウイルス構成要素のばらつきは、ウイルス感染症の疾患、合併症、および症状の大きなばらつきをもたらす。ウイルス感染症は、良性の皮膚増殖から、感染した人の免疫系の不全または出血まで異なる状態を引き起こし得、これは、治療をしないと死に至り得る。
【０００４】
抗ウイルス薬の開発は困難である。ウイルス間の大きなばらつきは、一般的な抗ウイルス治療の開発を困難にする。さらに、ウイルスは、複製のために宿主細胞を必要とし、ウイルス粒子を作るために自己の機構で宿主細胞を乗っ取り；従って、ウイルスのライフサイクルの宿主依存性部分を標的化する治療は、しばしば、宿主生物に有害であり得る。さらに、多くのウイルスのライフサイクルは期間が非常に短く、多くのウイルスは高い突然変異率を有し、耐性発現に起因して、治療は効能が短命となる。現在、大抵の抗ウイルス薬は、ウイルスの特定のサブセットである、HIV、ヘルペスウイルス、BおよびC型肝炎ウイルス、ならびにインフルエンザA型およびB型ウイルスを標的にしている。ジカのますます高まる蔓延および胎児への脅威と戦うために、ジカウイルスに対する薬物を開発することにも大きな関心がある。不運にも、これらのウイルスは、生命を脅かすウイルスのほんのごく一部でしかなく、耐性発現のために、治療のいくつかは既に陳腐化している。より多くの抗ウイルス治療および有効な予防手段が必要とされている。
【０００５】
動物に感染する多くのウイルスはいくつかの共通点を有している。それらのうちの多くは、宿主細胞から出芽する際に、宿主細胞膜のほんの一部にそれら自体を包む。このエンベロープは、典型的に、宿主細胞由来のリン脂質およびタンパク質ならびにいくつかのウイルス糖タンパク質から構成される。エンベロープウイルスの全てにわたる共通の構成要素、例えば、リン脂質、またはウイルスエンベロープの高い曲率は、全てのエンベロープウイルスに対する広域抗ウイルス薬を開発するために使用され得る標的であり得る。加えて、広域抗ウイルス薬は、ウイルス糖タンパク質の保存されたアミノ酸、アミノ酸配列モチーフ、および／またはアミノ酸構造モチーフを標的化し得る。さらに、個々の活性物が僅かな異なるウイルスに対して有効である活性成分の組み合わせは、組み合わせて、広域抗ウイルス保護を提供し得る。
【０００６】
エンベロープウイルスに対する広域治療は非常に関心が高く、何故ならば、そのような治療は、HIV、単純ヘルペスウイルス、ジカウイルス、デングウイルス、およびインフルエンザウイルスに対して有効であり得るためである。
【０００７】
フラビウイルス属のエンベロープウイルスである、ジカウイルスを治療および予防することに対する関心が、ウイルスの急速な蔓延に起因して最近高まった。ジカはジカ熱を引き起こすことが示され、これは、成人にとってはめったに致命的ではないが、ジカ感染症が妊婦から胎児へ感染すると、胎児は、小頭症、眼の欠損、聴覚障害、および成長障害を含む出生時欠損を発症し得る(Center for Disease Control and Prevention, Zika, 2016)。現在、ジカについての予防接種は存在せず、ジカを予防するための最善の方法は、蚊に刺されることを避けることである(同上)。さらに、ジカに対するいくつかの抗体は、抗体依存性感染増強を通していくつかの細胞タイプのジカウイルス感染を実際は促進し得る。
【０００８】
フラビウイルス属のエンベロープウイルスである、デングウイルスによる感染症は、世界の人口の3分の1超が存在する、熱帯地方および亜熱帯地方における病気および死亡の主な原因である(Center for Disease Control and Prevention, Dengue, 2016)。デングは、デング熱およびデング出血熱(DHF)を引き起こすことが示された。DHFは、即座の適切な治療無しでは、循環系の不全およびショック、そして恐らく死を引き起こし得る(同上)。現在、デングウイルス感染症について立証された有効な治療は存在しないが、補液療法がDHFの症状の緩和において有用であり得る(同上)。さらに、デングウイルスに対するいくつかの抗体は、抗体依存性感染増強を通していくつかの細胞タイプのデングウイルス感染を実際は促進する。
【０００９】
インフルエンザは、インフルエンザA型またはB型ウイルス感染によって引き起こされる急性呼吸器疾患である(Nicholson et al. 1998)。インフルエンザ症状としては、寒気、咳、疲労、熱、頭痛、筋肉痛、および／または咽喉痛が挙げられ得、重症度は、風邪に似ている軽度の症状から、寒気、咳、疲労、熱、頭痛、筋肉痛、および／または咽喉痛の組み合わせのような典型的な「フルー」様症状、肺炎および二次細菌感染を含む生命を脅かす症状までの範囲に及ぶ(U.S. Food and Drug Administration 2013; Kong 2009)。ヒトにおけるインフルエンザ罹患率は、全ての年齢について、しかし特に小児、高齢者、妊婦、および慢性疾患を有する患者について、高い(Fields et al. 2001; Thompson et al. 2003)。
【００１０】
インフルエンザパンデミックは、インフルエンザウイルスの継続的な突然変異に部分的に起因する、不運にも一般的な出来事である。2003年に、鳥インフルエンザ(H5N1)は400人を上回るヒトに感染し、15ヶ国において少なくとも258人の死をもたらした(WHO, 2009)。2009年に、メキシコにおけるH1N1豚インフルエンザ発生は、200を超える国々へ広がり、2010年5月時点で18,000人を上回る死が報告され、世界中の実際の死は201,000人を上回ると推定される(WHO 2010; Dawood et al. 2012)。非パンデミックの年でさえ、死亡率は高い。2013年には、米国単独においておよそ3,700人のインフルエンザ関連死があった(Center for Disease Control and Prevention 2015)。
【００１１】
インフルエンザ感染症およびパンデミックを予防しようとする試みは、予防接種ならびに抗ウイルス薬を含む(Kong 2009)。予防接種は最も有効な予防ツールと考えられ；しかしながら、それらは、どのウイルスが次のシーズン中に最も一般的になるかという推定に基づいて、ほんの僅かなインフルエンザウイルスから保護するために通常作製される(Subbarao et al. 2006; Center for Disease Control and Prevention 2014)。従って、予防接種は有用であり得るが、シーズンについて最も一般的になると予測されなかったウイルスに対して有効でない場合がある。現在、使用できる抗インフルエンザ薬はほとんどない。米国において、5つの抗インフルエンザ薬のみが承認されている：アマンタジン、リマンタジン、オセルタミビル、ザナミビル、およびペラミビル(Kong 2009; FDA 2014)。しかしながら、パンデミックインフルエンザウイルスは、一般に、アマンタジンおよびリマンタジンに感受性ではなく、承認薬についての作用方法に対するウイルス耐性が、増加しているようである(Belshe et al. 1989; Hayden 1994; Le et al. 2005; Jefferson et al. 2006; Moscona 2005)。
【００１２】
風邪およびフルーについての民間薬である、サンブクス・ニグラL.（Sambucus nigra L.）(ニワトコ)が、ニワトコ抽出物から作製されたシロップ剤として服用された場合、インフルエンザウイルスAおよびB感染症の治療において有効であることが臨床試験において示された(Roxas and Jurenka 2007; Zakay‐Rones et al. 1995; 2004)。これらの研究は、タミフル（登録商標）と比較した場合に比較的多い投薬量の抽出物(例えば、1000倍を超えてより多いwt./vol.)が、フルー様症状の期間を潜在的に短縮し得ることを実証した。より多い投薬量は、治療の頻度を増加させることによって達成され、これは、患者コンプライアンスの低下をもたらし得る。いくつかのニワトコ生成物の抗インフルエンザ活性は、3つのフラボノイドの存在に起因する：アヴェリオノール（averionol）；トリステノノール（tristenonol）；およびイストロシアニジン（istrocyanidin）(Roschek and Alberte 2008)。アヴェリオノール、トリステノノール、およびイストロシアニジンを含有する抽出物が使用され、これらの3つの化合物は、いくつかのインフルエンザ株を含むいくつかのウイルスに特異的に結合し得、HIVを抑制し得ることが示された(US 2009/0149530)。さらに、US 2009/0149530は、アヴェリオノール、トリステノノール、およびイストロシアニジンを含有し得る抽出物からの未同定の活性成分が、いくつかのウイルスの感染症をインビトロで抑制し得ることを開示している(同上)。
【発明の概要】
【００１３】
本発明は、エンベロープウイルス感染症、インフルエンザおよびインフルエンザ様疾患を含む、ウイルス感染症の治療および予防に直面している現在の問題の解決法を提供する。本発明者らは、驚くべきことに、ニワトコ中に見いだされるいくつかの化合物の組み合わせがウイルス感染症を予防および治療し得ることを見出した。本発明者らはまた、化合物の特定の相対濃度が、ウイルス感染症を予防および治療する組み合わされた化合物の能力を増強することを見出した。加えて、本発明者らは、抗インフルエンザ化合物などの追加の抗ウイルス薬と共に本発明の化合物を使用することが、ウイルス感染症を予防および治療する組み合わされた化合物の能力を増強することを見出した。
【００１４】
一局面において、6つのバイオマーカーのいずれか1つ、任意の組み合わせ、または全部の組成物を開示する。一つの場合において、組成物は、112.027 amuの精密質量を有するバイオマーカー1、126.032 amuの精密質量を有するバイオマーカー2、155.095 amuの精密質量を有するバイオマーカー3、160.087 amuの精密質量を有するバイオマーカー4、166.099 amuの精密質量を有するバイオマーカー5、および／または507.342 amuの精密質量を有するバイオマーカー8のいずれか1つ、任意の組み合わせ、または全部を含み、各バイオマーカーはサンブクス・ニグラに見いだされる。組成物中の成分の量は変動し得る(例えば、量は、0.000001% w/w程度の低い量から80% w/w程度の高い量、またはその中の任意の範囲であり得る)。一つの場合において、バイオマーカー1は少なくとも2.36%の相対存在量を有し、バイオマーカー2は少なくとも33.26%の相対存在量を有し、バイオマーカー3は少なくとも1.86%の相対存在量を有し、バイオマーカー4は少なくとも5.03%の相対存在量を有し、バイオマーカー5は少なくとも9.26%の相対存在量を有し、バイオマーカー8は少なくとも0.60%の相対存在量を有し、相対存在量は、1 mg/mlの組成物中にスパイクされた0.01 mg/mlクルクミンと比較した場合の相対存在量である。別の場合において、組成物は、バイオマーカー1〜5および8のうち少なくとも2つ、3つ、4つ、5つ、または全部を含む。
【００１５】
別の局面において、358.146 amuの精密質量を有するバイオマーカー6、478.295 amuの精密質量を有するバイオマーカー7、および606.436 amuの精密質量を有するバイオマーカー9のいずれか1つ、または任意の組み合わせ、または全部をさらに含む組成物を開示し、各バイオマーカーはサンブクス・ニグラ中に見いだされる。一つの場合において、バイオマーカー6は少なくとも11.37%の相対存在量を有し、バイオマーカー7は少なくとも1.20%の相対存在量を有し、かつ、バイオマーカー9は少なくとも0.07%の相対存在量を有し、相対存在量は、1 mg/mlの組成物中にスパイクされた0.01 mg/mlクルクミンと比較した場合の相対存在量である。別の場合において、バイオマーカー1は2.36%〜6.94%の相対存在量を有し、バイオマーカー2は33.26%〜85.75%の相対存在量を有し、バイオマーカー3は1.86%〜4.69%の相対存在量を有し、バイオマーカー4は5.03%〜12.89%の相対存在量を有し、バイオマーカー5は9.26%〜24.11%の相対存在量を有し、バイオマーカー8は0.60%〜1.75%の相対存在量を有し、相対存在量は、1 mg/mlの組成物中にスパイクされた0.01 mg/mlクルクミンと比較した場合の相対存在量である。別の場合において、バイオマーカー6は11.37%〜31.81%の相対存在量を有し、バイオマーカー7は1.20%〜3.40%の相対存在量を有し、かつ、バイオマーカー9は0.07%〜1.38%の相対存在量を有し、相対存在量は、1 mg/mlの組成物中にスパイクされた0.01 mg/mlクルクミンと比較した場合の相対存在量である。さらに別の場合において、各バイオマーカーの質量は、リアルタイム直接分析-TOF（Direct Analysis in Real Time-TOF）(DART-TOF)質量分析計によって決定されるような質量である。
【００１６】
別の局面において、バイオマーカー1〜9のうち少なくとも1つは、合成的に得られる。さらに別の局面において、バイオマーカー1〜9のうち少なくとも1つは、生物から得られる。一つの場合において、バイオマーカー1〜9のうち少なくとも1つは、サンブクス・ニグラ果実から得られる。別の場合において、組成物は、バイオマーカーの相対存在量について、少なくとも90%、好ましくは少なくとも95%、または少なくとも98%のバッチ間化学一貫性を有する。さらに別の場合において、組成物は抗ウイルス薬をさらに含む。別の場合において、組成物は抗インフルエンザ薬を含む。一つの場合において、抗インフルエンザ薬は、オセルタミビル、ザナミビル、リマンタジン、アマンタジン、ペラミビル、もしくはそれらの塩、またはそれらの任意の組み合わせである。
【００１７】
一局面において、組成物は経口投与用に製剤化されている。一つの場合において、組成物は、ロゼンジ、散剤、錠剤、ゲルキャップ、遅延放出カプセル剤、急速放出カプセル剤、ゼラチン、液体溶液、および／または溶解性フィルムのうちの1つまたは複数である。別の局面において、組成物は、局所適用、静脈内投与、および／または鼻腔内送達用に製剤化されている。一つの場合において、組成物は、インフルエンザウイルスに対して500μg/mlより低いIC50を有する。別の場合において、バイオマーカー1〜5および8のうち少なくとも1つは、インフルエンザウイルスへ結合し、そして細胞中へのインフルエンザウイルス侵入をブロックすることができる。さらに別の場合において、バイオマーカー1〜5および8のうち少なくとも1つは、インフルエンザウイルスのヘマグルチニンに結合することができる。
【００１８】
別の局面において、組成物は、本明細書に記載される1つまたは複数の成分をさらに含み得る。例えば、組成物は、1つまたは複数のpH調整剤、構造化剤、無機塩、および保存剤より選択される1つまたは複数の追加の成分を含み得る。
【００１９】
対象におけるインフルエンザおよび／またはインフルエンザ様疾患を治療または予防する方法がさらに開示され、この方法は、本発明の組成物のいずれか1つを対象へ投与する段階を含む。さらに、本発明の組成物のいずれか1つを対象へ投与することによって、本発明の組成物のいずれか1つを対象へ投与する方法を開示する。特定の場合において、対象は、インフルエンザおよび／またはインフルエンザ様疾患と診断された。
【００２０】
一局面において、本明細書に開示される組成物のいずれか1つを対象へ投与することによって、インフルエンザおよび／またはインフルエンザ様疾患を有する対象を治療する方法が開示され、対象が治療される。別の場合において、対象は、熱、頭痛、筋肉痛、咳、粘液流出、もしくは鼻閉、またはそれらの任意の組み合わせを有する。さらに別の場合において、インフルエンザは、インフルエンザウイルスAおよび／またはインフルエンザウイルスBウイルスによって引き起こされる。一つの場合において、インフルエンザウイルスは、H1N1、H3N2、H3N5、H5N1、および／またはインフルエンザBウイルスである。一つの場合において、インフルエンザ様疾患は、ライノウイルスによって引き起こされる。別の場合において、対象に、24時間の期間中に総計1〜5,000 mg、好ましくは10〜1,500 mg、50〜1,000 mg、または100〜500 mgのバイオマーカーを投与する。さらに別の場合において、組成物を少なくとも3日間、少なくとも1日1回投与する。一つの場合において、バイオマーカー1〜9のうち少なくとも1つは、合成的に得られる。別の場合において、バイオマーカー1〜9のうち少なくとも1つは、生物から得られる。さらに別の場合において、バイオマーカー1〜9のうち少なくとも1つは、サンブクス・ニグラ果実から得られる。一つの場合において、組成物は、バイオマーカーの相対存在量について、少なくとも95%のバッチ間化学一貫性を有する。一つの場合において、組成物は抗ウイルス薬をさらに含む。別の場合において、組成物は抗インフルエンザ薬を含む。さらに別の場合において、抗インフルエンザ薬は、オセルタミビル、ザナミビル、リマンタジン、アマンタジン、ペラミビル、もしくはそれらの塩、またはそれらの任意の組み合わせである。一つの場合において、抗インフルエンザ薬は、オセルタミビル、その塩、またはそれらの任意の組み合わせである。
【００２１】
別の局面において、本明細書に開示される組成物のいずれか1つを対象へ投与することによって、インフルエンザおよび／またはインフルエンザ様疾患を有する対象を治療するための方法が開示され、組成物が経口投与用に製剤化されている。一つの場合において、組成物は、ロゼンジ、散剤、錠剤、ゲルキャップ、遅延放出カプセル剤、急速放出カプセル剤、ゼラチン、液体溶液、および／または溶解性フィルムのうちの1つまたは複数である。別の場合において、組成物は、局所適用、静脈内投与、および／または鼻腔内送達用に製剤化されている。さらに別の場合において、組成物は、インフルエンザウイルスに対して500μg/mlより低いIC50を有する。一つの場合において、バイオマーカー1〜5および8のうち少なくとも1つは、インフルエンザウイルスへ結合することができ、細胞中へのインフルエンザウイルス侵入をブロックすることができる。別の場合において、バイオマーカー1〜5および8のうち少なくとも1つは、インフルエンザウイルスのヘマグルチニンに結合することができる。
【００２２】
一局面において、本明細書に開示される組成物のいずれか1つを対象へ投与することによって、エンベロープウイルスに感染している対象を治療するための方法を開示する。一つの場合において、対象は、HIV、ヘルペスコンプレックスウイルス（herpes complex virus）、フラビウイルスウイルス、インフルエンザウイルスAウイルス、および／またはインフルエンザウイルスBウイルスに感染している。別の場合において、対象はフラビウイルスウイルスに感染しており、かつ、フラビウイルスウイルスはジカウイルスおよび／またはデングウイルスである。さらに別の場合において、対象はジカウイルスに感染している。一つの場合において、対象に、24時間の期間中に総計1〜5,000 mg、好ましくは10〜1,500 mg、50〜1,000 mg、または100〜500 mgのバイオマーカーを投与する。別の場合において、組成物を少なくとも3日間、少なくとも1日1回投与する。
【００２３】
別の局面において、本明細書に開示される組成物のいずれか1つを対象へ投与することによって、エンベロープウイルスに感染している対象を治療するための方法が開示され、組成物が経口投与用に製剤化されている。一つの場合において、組成物は、ロゼンジ、散剤、錠剤、ゲルキャップ、遅延放出カプセル剤、急速放出カプセル剤、ゼラチン、液体溶液、および／または溶解性フィルムのうちの1つまたは複数である。別の場合において、組成物は、局所適用、静脈内投与、および／または鼻腔内送達用に製剤化されている。さらに別の場合において、組成物は、インフルエンザウイルスに対して500μg/mlより低いIC50を有する。一つの場合において、バイオマーカー1〜5および8のうち少なくとも1つは、インフルエンザウイルスへ結合し、そして細胞中へのインフルエンザウイルス侵入をブロックすることができる。別の場合において、バイオマーカー1〜5および8のうち少なくとも1つは、インフルエンザウイルスのヘマグルチニンに結合することができる。
【００２４】
さらに別の局面において、本明細書に開示される組成物のいずれか1つを対象へ投与することによって、インフルエンザまたはインフルエンザ様疾患を予防する方法を開示する。一つの場合において、インフルエンザは、インフルエンザウイルスAおよび／またはインフルエンザウイルスBウイルスによって引き起こされる。別の場合において、インフルエンザウイルスは、H1N1、H3N2、H3N5、H5N1、および／またはインフルエンザBウイルスである。さらに別の場合において、インフルエンザ様疾患は、ライノウイルスによって引き起こされる。さらに別の場合において、対象に、24時間の期間中に総計1〜5,000 mg、好ましくは10〜1,500 mg、50〜1,000 mg、または100〜500 mgのバイオマーカーを投与する。一つの場合において、組成物を少なくとも3日間、少なくとも1日1回投与する。別の場合において、バイオマーカー1〜9のうち少なくとも1つは、合成的に得られる。さらに別の場合において、バイオマーカー1〜9のうち少なくとも1つは、生物から得られる。一つの場合において、バイオマーカー1〜9のうち少なくとも1つは、サンブクス・ニグラ果実から得られる。別の場合において、組成物は、バイオマーカーの相対存在量について、少なくとも90%、好ましくは少なくとも95%、または少なくとも98%のバッチ間化学一貫性を有する。さらに別の場合において、組成物は抗インフルエンザ薬をさらに含む。一つの場合において、抗インフルエンザ薬は、オセルタミビル、ザナミビル、リマンタジン、アマンタジン、ペラミビル、もしくはそれらの塩、またはそれらの任意の組み合わせである。別の場合において、抗インフルエンザ薬は、オセルタミビル、その塩、またはそれらの任意の組み合わせである。
【００２５】
一局面において、本明細書に開示される組成物のいずれか1つを対象へ投与することによって、インフルエンザおよび／またはインフルエンザ様疾患を予防する方法提供され、組成物が経口投与用に製剤化されている。一つの場合において、組成物は、ロゼンジ、散剤、錠剤、ゲルキャップ、遅延放出カプセル剤、急速放出カプセル剤、ゼラチン、液体溶液、および／または溶解性フィルムのうちの1つまたは複数である。別の場合において、組成物は、局所適用、静脈内投与、および／または鼻腔内送達用に製剤化されている。さらに別の場合において、組成物は、インフルエンザウイルスに対して500μg/mlより低いIC50を有する。一つの場合において、バイオマーカー1〜5および8のうち少なくとも1つは、インフルエンザウイルスへ結合し、そして細胞中へのインフルエンザウイルス侵入をブロックすることができる。別の場合において、バイオマーカー1〜5および8のうち少なくとも1つは、インフルエンザウイルスのヘマグルチニンに結合することができる。
【００２６】
一局面において、本明細書に開示される組成物のいずれか1つを対象へ投与することによって、エンベロープウイルスによる対象の感染を予防するための方法を開示する。一つの場合において、エンベロープウイルスは、HIV、ヘルペスコンプレックスウイルス、フラビウイルスウイルス、インフルエンザウイルスAウイルス、および／またはインフルエンザウイルスBウイルスである。別の場合において、フラビウイルスウイルス感染による感染症が予防され、フラビウイルスウイルスはジカウイルスおよび／またはデングウイルスである。さらに別の場合において、フラビウイルスはジカウイルスである。さらに別の場合において、対象に、24時間の期間中に総計1〜5,000 mg、好ましくは10〜1,500 mg、50〜1,000 mg、または100〜500 mgのバイオマーカーを投与する。一つの場合において、組成物を少なくとも3日間、少なくとも1日1回投与する。別の場合において、バイオマーカー1〜9のうち少なくとも1つは、合成的に得られる。さらに別の場合において、バイオマーカー1〜9のうち少なくとも1つは、生物から得られる。一つの場合において、バイオマーカー1〜9のうち少なくとも1つは、サンブクス・ニグラ果実から得られる。別の場合において、組成物は、バイオマーカーの相対存在量について、少なくとも90%、好ましくは少なくとも95%、または少なくとも98%のバッチ間化学一貫性を有する。さらに別の場合において、組成物は抗インフルエンザ薬をさらに含む。一つの場合において、抗インフルエンザ薬は、オセルタミビル、ザナミビル、リマンタジン、アマンタジン、ペラミビル、もしくはそれらの塩、またはそれらの任意の組み合わせである。別の場合において、抗インフルエンザ薬は、オセルタミビル、その塩、またはそれらの任意の組み合わせである。
【００２７】
一局面において、本明細書に開示される組成物のいずれか1つを対象へ投与することによって、エンベロープウイルスによる対象の感染を予防する方法が開示され、組成物が経口投与用に製剤化されている。一つの場合において、組成物は、ロゼンジ、散剤、錠剤、ゲルキャップ、遅延放出カプセル剤、急速放出カプセル剤、ゼラチン、液体溶液、および／または溶解性フィルムのうちの1つまたは複数である。別の場合において、組成物は、局所適用、静脈内投与、および／または鼻腔内送達用に製剤化されている。さらに別の場合において、組成物は、インフルエンザウイルスに対して500μg/mlより低いIC50を有する。一つの場合において、バイオマーカー1〜5および8のうち少なくとも1つは、インフルエンザウイルスへ結合し、そして細胞中へのインフルエンザウイルス侵入をブロックすることができる。別の場合において、バイオマーカー1〜5および8のうち少なくとも1つは、インフルエンザウイルスのヘマグルチニンに結合することができる。
【００２８】
別の局面において、バイオマーカーの相対存在量について、少なくとも90%、好ましくは少なくとも95%または少なくとも98%のバッチ間化学一貫性を有する組成物を製造することによって、本明細書に開示される組成物のいずれか1つを製造する方法を開示する。
【００２９】
本発明のいくつかの局面において、組成物は、1つまたは複数の栄養補助的にかつ／または薬学的に許容される担体または希釈剤をさらに含み得る。これらの担体／希釈剤は、アジュバント、賦形剤、またはビヒクル、例えば、保存剤、充填剤、崩壊剤、湿潤剤、乳化剤、懸濁化剤、甘味剤、矯味矯臭剤、香料、抗細菌剤、抗真菌剤、滑沢剤、ビタミン、ポリマー、シロキサン含有化合物、精油、構造化剤、および分配剤（dispensing agent）であり得る。各担体は、製剤の他の成分と適合性でありかつ対象に対して有害でないという意味で許容される。本発明のいくつかの局面において、担体は、以下からなる群より選択される少なくとも1つの親水性ポリマー化合物を含み得る：ガム、セルロースエーテル、アクリル樹脂、炭水化物担体、タルク、ラクトース、マンニトール、グルコース、水、ゼラチン、タンパク質由来化合物、ポリビニルピロリドン、ステアリン酸マグネシウム、およびそれらの任意の組み合わせ。希釈剤／担体の非限定的な例は、本明細書の全体にわたって確認され、参照によりこのセクションに組み入れられる。そのような成分の量は、組成物の重量または体積で0.0001%から99.9%までの範囲であり得るか、または本明細書の他のセクションに開示されるようなその間の任意の整数もしくは範囲であり得、これらは参照によりこの段落に組み入れられる。
【００３０】
組成物は、室温で1ヶ月間、6ヶ月間、12ヶ月間、18ヶ月間、または24ヶ月間、保存することができる。本発明のいくつかの局面において、組成物は、散剤、錠剤、ゲルキャップ、ビーズ、食用錠剤、溶解性フィルム、空気中に分散され得る液体、ゼラチン、ローション剤、経皮パッチ、または経口投与用の液体溶液として製剤化される。本発明のいくつかの局面において、製剤化された組成物は、固体ナノ粒子、脂質含有ナノ粒子、脂質ベースの担体、密封コンジット、ストロー、密封バッグ、またはそれらの任意の組み合わせ中に含まれ得る。本発明の他の局面において、組成物は、注射による投与用に製剤化され得る。
【００３１】
本発明の組成物を含むキットも意図される。ある態様において、組成物は容器中に含まれる。容器は、ボトル、ディスペンサー、パッケージ、またはストローであり得る。容器は、所定量の組成物を分配することができる。ある局面において、組成物は、丸剤、錠剤、カプセル剤、経皮パッチ、食用咀嚼剤（edible chew）、クリーム、ローション剤、ゲル、スプレー、ミスト、ドロップ、粉末、または液体として分配される。容器はその表面上に印を含むことができる。印は、単語、略語、絵、または記号であり得る。
【００３２】
本明細書において議論される任意の態様は、本発明の任意の方法または組成物に関して実施され得、逆もまた同様であることが意図される。さらに、本発明の組成物は、本発明の方法を達成するために使用され得る。
【００３３】
本発明の組成物を含むプロダクトも意図される。非限定的な局面において、プロダクトは栄養補助的プロダクトであり得る。栄養補助的プロダクトは、本明細書の他のセクションに記載されるものまたは当業者に公知のものであり得る。他の非限定的な局面において、プロダクトは薬学的プロダクトであり得る。薬学的かつ／または栄養補助的プロダクトは、本明細書の他のセクションに記載されるものまたは当業者に公知のものであり得る。プロダクトの非限定的な例としては、丸剤、錠剤、食用咀嚼剤、カプセル剤、クリーム、ローション剤、ゲル、スプレー、ミスト、溶解性フィルム、経皮パッチ、または液体などが挙げられる。
【００３４】
本発明の以下の態様1〜47をさらに開示する。
態様1は、以下のバイオマーカー：(a)112.027 amuの精密質量を有しかつ少なくとも2.36%の相対存在量を有するバイオマーカー1；(b)126.032 amuの精密質量を有しかつ少なくとも33.26%の相対存在量を有するバイオマーカー2；(c)155.095 amuの精密質量を有しかつ少なくとも1.86%の相対存在量を有するバイオマーカー3；(d)160.087 amuの精密質量を有しかつ少なくとも5.03%の相対存在量を有するバイオマーカー4；(e)166.099 amuの精密質量を有しかつ少なくとも9.26%の相対存在量を有するバイオマーカー5；または(f)507.342 amuの精密質量を有しかつ少なくとも0.60%の相対存在量を有するバイオマーカー8、のうちのいずれか1つ、または任意の組み合わせを含む組成物であり、各バイオマーカーはサンブクス・ニグラ中に見いだされ、かつ相対存在量は、1 mg/mlの組成物中にスパイクされた0.01 mg/mlクルクミンと比較した場合の相対存在量である。
態様2は、バイオマーカー1〜5および8のうち少なくとも2つ、3つ、4つ、5つ、または全部を有する、態様1記載の組成物である。
態様3は、態様1〜2のいずれか1つに記載の組成物であり、組成物は、以下の追加のバイオマーカー：(g)358.146 amuの精密質量を有するバイオマーカー6；(h)478.295 amuの精密質量を有するバイオマーカー7；(i)606.436 amuの精密質量を有するバイオマーカー9、のうちのいずれか1つ、または任意の組み合わせ、または全部をさらに含み、各バイオマーカーはサンブクス・ニグラ中に見いだされる。
態様4は、態様3記載の組成物であり、さらに以下を含み：(j)少なくとも11.37%の相対存在量を有するバイオマーカー6；(k)少なくとも1.20%の相対存在量を有するバイオマーカー7；および(l)少なくとも0.07%の相対存在量を有するバイオマーカー9、相対存在量は、1 mg/mlの組成物中にスパイクされた0.01 mg/mlクルクミンと比較した場合の相対存在量である。
態様5は、態様1記載の組成物であり、さらに以下を含み：(a)2.36%〜6.94%の相対存在量を有するバイオマーカー1；(b)33.26%〜85.75%の相対存在量を有するバイオマーカー2；(c)1.86%〜4.69%の相対存在量を有するバイオマーカー3；(d)5.03%〜12.89%の相対存在量を有するバイオマーカー4；(e)9.26%〜24.11%の相対存在量を有するバイオマーカー5；(f)0.60%〜1.75%の相対存在量を有するバイオマーカー8、相対存在量は、1 mg/mlの組成物中にスパイクされた0.01 mg/mlクルクミンと比較した場合の相対存在量である。
態様6は、態様4記載の組成物であり、さらに以下を含み：(j)11.37%〜31.81%の相対存在量を有するバイオマーカー6；(k)1.20%〜3.40%の相対存在量を有するバイオマーカー7；および(l)0.07%〜1.38%の相対存在量を有するバイオマーカー9、相対存在量は、1 mg/mlの組成物中にスパイクされた0.01 mg/mlクルクミンと比較した場合の相対存在量である。
態様7は、態様1〜6のいずれかに記載の組成物であり、各バイオマーカーの質量は、リアルタイム直接分析-TOF(DART-TOF)質量分析計によって決定されるような質量である。
態様8は、態様1〜7のいずれか1つに記載の組成物であり、バイオマーカー1〜9のうち少なくとも1つは、合成的に得られる。
態様9は、態様1〜7のいずれか1つに記載の組成物であり、バイオマーカー1〜9のうち少なくとも1つは、生物から得られる。
態様10は、態様9記載の組成物であり、バイオマーカー1〜9のうち少なくとも1つは、サンブクス・ニグラ果実から得られる。
態様11は、態様1〜10のいずれか1つに記載の組成物であり、組成物は、バイオマーカーの相対存在量について、少なくとも90%、好ましくは少なくとも95%、または少なくとも98%のバッチ間化学一貫性を有する。
態様12は、態様1〜11のいずれか1つに記載の組成物であり、組成物は抗ウイルス薬をさらに含む。
態様13は、態様12記載の組成物であり、組成物は抗インフルエンザ薬をさらに含む。
態様14は、態様13記載の組成物であり、抗インフルエンザ薬は、オセルタミビル、ザナミビル、リマンタジン、アマンタジン、ペラミビル、もしくはそれらの塩、またはそれらの任意の組み合わせである。
態様15は、態様14記載の組成物であり、抗インフルエンザ薬は、オセルタミビル、その塩、またはそれらの任意の組み合わせである。
態様16は、態様1〜15のいずれか1つに記載の組成物であり、組成物は経口投与用に製剤化されている。
態様17は、態様16記載の組成物であり、組成物は、ロゼンジ、散剤、錠剤、ゲルキャップ、遅延放出カプセル剤、急速放出カプセル剤、ゼラチン、液体溶液、および／または溶解性フィルムのうちの1つまたは複数である。
態様18は、態様1〜15のいずれか1つに記載の組成物であり、組成物は、局所適用、静脈内投与、および／または鼻腔内送達用に製剤化されている。
態様19は、態様1〜18のいずれか1つに記載の組成物であり、組成物は、インフルエンザウイルスに対して500μg/mlより低いIC50を有する。
態様20は、態様1〜19のいずれかに記載の組成物であり、バイオマーカー1〜5および8のうち少なくとも1つは、インフルエンザウイルスへ結合することができ、細胞中へのインフルエンザウイルス侵入をブロックすることができる。
態様21は、態様20記載の組成物であり、バイオマーカー1〜5および8のうち少なくとも1つは、インフルエンザウイルスのヘマグルチニンに結合することができる。
態様22は、インフルエンザおよび／またはインフルエンザ様疾患を有する対象を治療する方法であり、この方法は、態様1〜21記載の組成物のいずれか1つを対象へ投与する段階を含み、対象が治療される。
態様23は、態様22に記載の方法であり、対象は、熱、頭痛、筋肉痛、咳、粘液流出、もしくは鼻閉、またはそれらの任意の組み合わせを有する。
態様24は、態様22〜23のいずれか1つに記載の方法であり、対象はインフルエンザを有し、かつ、インフルエンザウイルスAおよび／またはインフルエンザウイルスBウイルスに感染している。
態様25は、態様24に記載の方法であり、インフルエンザウイルスは、H1N1、H3N2、H3N5、H5N1、および／またはインフルエンザBウイルスである。
態様26は、態様22〜23のいずれか1つに記載の方法であり、対象はインフルエンザ様疾患を有し、かつ、ライノウイルスに感染している。
態様27は、態様22〜26のいずれか1つに記載の方法であり、対象に、24時間の期間中に総計1〜5,000 mg、好ましくは10〜1,500 mg、50〜1,000 mg、または100〜500 mgのバイオマーカーを投与する。
態様28は、態様22〜27のいずれか1つに記載の方法であり、組成物を少なくとも3日間、少なくとも1日1回投与する。
態様29は、エンベロープウイルスに感染している対象を治療する方法であり、この方法は、態様1〜21記載の組成物のいずれか1つを対象へ投与する段階を含み、対象が治療される。
態様30は、態様29に記載の方法であり、対象は、HIV、ヘルペスコンプレックスウイルス、フラビウイルスウイルス、インフルエンザウイルスAウイルス、および／またはインフルエンザウイルスBウイルスに感染している。
態様31は、態様29〜30のいずれか1つに記載の方法であり、対象はフラビウイルスウイルスに感染しており、かつ、フラビウイルスウイルスはジカウイルスおよび／またはデングウイルスである。
態様32は、態様31に記載の方法であり、対象はジカウイルスに感染している。
態様33は、態様29〜32のいずれか1つに記載の方法であり、対象に、24時間の期間中に総計1〜5,000 mg、好ましくは10〜1,500 mg、50〜1,000 mg、または100〜500 mgのバイオマーカーを投与する。
態様34は、態様29〜33のいずれか1つに記載の方法であり、組成物を少なくとも3日間、少なくとも1日1回投与する。
態様35は、対象におけるインフルエンザおよび／またはインフルエンザ様疾患を予防する方法であり、この方法は、態様1〜21記載の組成物のいずれか1つを対象へ投与する段階を含み、インフルエンザおよび／またはインフルエンザ様疾患が予防される。
態様36は、インフルエンザウイルスAおよび／またはインフルエンザウイルスBウイルスによって引き起こされるインフルエンザが予防される、態様35記載の方法である。
態様37は、態様36に記載の方法であり、インフルエンザウイルスは、H1N1、H3N2、H3N5、H5N1、および／またはインフルエンザBウイルスである。
態様38は、ライノウイルスによって引き起こされるインフルエンザ様疾患が予防される、態様35記載の方法である。
態様39は、態様35〜38のいずれか1つに記載の方法であり、対象に、24時間の期間中に総計1〜5,000 mg、好ましくは10〜1,500 mg、50〜1,000 mg、または100〜500 mgのバイオマーカーを投与する。
態様40は、態様35〜39のいずれか1つに記載の方法であり、組成物を少なくとも3日間、少なくとも1日1回投与する。
態様41は、対象におけるエンベロープウイルス感染症を予防する方法であり、この方法は、態様1〜21記載の組成物のいずれか1つを対象へ投与する段階を含み、エンベロープウイルス感染症が予防される。
態様42は、態様41に記載の方法であり、予防されるエンベロープウイルス感染症は、HIV、ヘルペスコンプレックスウイルス、フラビウイルスウイルス、インフルエンザウイルスAウイルス、および／またはインフルエンザウイルスBウイルスによる感染症である。
態様43は、態様41〜42のいずれか1つに記載の方法であり、フラビウイルスウイルス感染症が予防され、かつ、フラビウイルスウイルスはジカウイルスおよび／またはデングウイルスである。
態様44は、態様43に記載の方法であり、ジカウイルス感染症が予防される。
態様45は、態様41〜44のいずれか1つに記載の方法であり、対象に、24時間の期間中に総計1〜5,000 mg、好ましくは10〜1,500 mg、50〜1,000 mg、または100〜500 mgのバイオマーカーを投与する。
態様46は、態様41〜45のいずれか1つに記載の方法であり、組成物を少なくとも3日間、少なくとも1日1回投与する。
態様47は、態様1〜21のいずれかに記載の組成物の製造方法であり、製造方法は、バイオマーカーの相対存在量について、少なくとも90%、好ましくは少なくとも95%または少なくとも98%のバッチ間化学一貫性を有する組成物を製造する。
【００３５】
「治療剤」は、ここで具体的に特許請求される化合物を包含する。それはまた、そのような化合物をその栄養補助的にかつ／または薬学的に許容される塩と一緒に包含する。有用な塩は、当業者に公知であり、無機酸、有機酸、無機塩基、または有機塩基との塩を含む。本発明において有用な治療剤は、単独で、または、他の栄養補助的かつ／または薬学的賦形剤または不活性成分と組み合わせて、にかかわらず、ヒトまたは動物へ投与されると、所望の、有利な、かつしばしば薬理学的な効果を与える化合物である。
【００３６】
用語「バイオマーカー」は、バイオマーカーとして定義される化合物、その類似体、その誘導体、またはその任意の類似体もしくは誘導体の塩形態を指す。
【００３７】
用語「精密質量」は、既知の電荷のイオンについて実験的に決定された分子の測定された質量を指す。精密質量についての単位としては、原子質量単位(amu)およびミリ統一原子質量単位（milli unified atomic mass unit）(mmu)が挙げられる。用語「分子量」は、化合物中に存在する異なる同位体組成の全てを有するがそれらの天然存在量について加重された分子の平均重量を指す。
【００３８】
用語「相対存在量」は、参照化合物の存在量と比べての関心対象の化合物の存在量を指す。特定の局面において、相対存在量は、参照化合物についての質量分析ピークの生の強度に対する、関心対象の化合物についての質量分析ピークの生の強度である。一つの非限定的な場合において、質量分析ピークは、DART-TOF質量分析の使用によって得ることができる。別の特定の局面において、参照化合物は、関心対象の化合物を含有するサンプル中へスパイクまたはドープされる化合物である。さらに別の特定の局面において、参照化合物は、相対存在量を決定するためのサンプルへのその添加より前には、サンプル中に存在しない化合物である。別の特定の局面において、参照化合物はクルクミンであり得る。
【００３９】
本明細書に記載される精密質量および相対存在量は、特定の機器および特定の設定を使用する実験に基づき、機器ごとに変化し得る。各測定において変動性がある。従って、精密質量および相対存在量は、当業者によって理解されるように、近似であると定義される。一つの非限定的な態様において、これらの用語は、20%以内、好ましくは10%、好ましくは5%以内、より好ましくは1%以内、最も好ましくは0.5%以内であるように定義される。一つの非限定的な態様において、精密質量は、+/- 20 mmu以内、好ましくは10 mmu、より好ましくは5 mmu以内、最も好ましくは1 mmu以内の誤差を有する。一つの非限定的な態様において、相対存在量は、+/- 20%、好ましくは10%、好ましくは5%以内、より好ましくは1%以内、最も好ましくは0.5%以内の誤差を有する。
【００４０】
用語「実質的に」およびその変形物は、当業者によって理解されるように、指定されるものを必ずしも完全にではないが大部分はであると定義され、一つの非限定的な態様において、実質的には、10%以内、5%以内、1%以内、または0.5%以内の範囲を指す。
【００４１】
「患者」、「対象」、または「個体」は、哺乳動物(例えば、ヒト、霊長動物、イヌ、ネコ、ウシ、ヒツジ、ブタ、ウマ、マウス、ラット、ハムスター、ウサギ、またはモルモット)を指す。特定の局面において、患者、対象、または個体はヒトである。
【００４２】
「阻害する」もしくは「減らす」またはこれらの用語の任意の変形物は、所望の結果を達成するための任意の測定可能な減少または完全な阻害を含む。
【００４３】
「有効な」もしくは「治療する」もしくは「予防する」またはこれらの用語の任意の変形物は、所望の、期待される、または意図される結果を達成するために適切な、を意味する。
【００４４】
「類似体」および「アナログ」は、化合物を参照する場合、修飾された化合物を指し、1つまたは複数の原子が他の原子によって置換されているか、または1つまたは複数の原子が化合物から削除されているか、または1つまたは複数の原子が化合物へ付加されているか、またはそのような修飾の任意の組み合わせがある。原子のそのような付加、削除または置換は、化合物を構成する一次構造に沿って、任意の点で、または複数の点で、行われ得る。
【００４５】
親化合物に関して、「誘導体」は、化学的に修飾された親化合物またはその類似体を指し、少なくとも1つの置換基が親化合物またはその類似体中には存在しない。一つのそのような非限定的な例は、共有結合によって修飾された親化合物である。典型的な修飾は、アミド、炭水化物、アルキル基、アシル基、エステル、ペグ化などである。
【００４６】
「治療的に等価の」化合物は、疾患または状態の治療において、1つまたは複数の他の化合物と本質的に同じ効果を有するものである。治療的に等価である化合物は、化学的に等価、生物学的に等価、または一般的に等価であってもなくてもよい。
【００４７】
「非経口注射」は、ヒトなどの動物の皮膚または粘膜の1つまたは複数の層の下へのまたはこれ(ら)を通っての注射による小分子薬物の投与を指す。
【００４８】
「バイオアベイラビリティー」は、治療剤が製剤から吸収される程度を指す。
【００４９】
対象への治療剤の送達または投与に関して、「全身」は、治療剤が対象の血漿中に生物学的に有意なレベルで検出可能であることを示す。
【００５０】
「制御放出」は、血液(例えば、血漿)濃度が、約1時間以上、好ましくは12時間以上の期間にわたって治療範囲内にしかし毒性濃度未満に維持されるような速度での、治療剤の放出を指す。
【００５１】
「薬学的に許容される担体」は、動物またはヒトなどの哺乳動物へ本発明の薬物化合物を送達するための薬学的に許容される溶媒、懸濁化剤またはビヒクルを指す。
【００５２】
「栄養補助的に許容される担体」は、動物またはヒトなどの哺乳動物へ本発明の化合物を送達するための栄養補助的に許容される溶媒、懸濁化剤またはビヒクルを指す。
【００５３】
「薬学的に許容される」成分、賦形剤またはコンポーネントは、合理的なベネフィット／リスク比に見合った、過度の有害な副作用(例えば、毒性、炎症およびアレルギー反応)のない、ヒトおよび／または動物との使用に適しているものである。
【００５４】
「栄養補助的に許容される」成分、賦形剤またはコンポーネントは、合理的なベネフィット／リスク比に見合った、過度の有害な副作用(例えば、毒性、炎症およびアレルギー反応)のない、ヒトおよび／または動物との使用に適しているものである。
【００５５】
用語「約」または「およそ」または「実質的に不変の」は、当業者によって理解されるように、近似であると定義され、一つの非限定的な態様において、これらの用語は、10%以内、好ましくは5%以内、より好ましくは1%以内、最も好ましくは0.5%以内であるように定義される。さらに、「実質的に非水性の」は、重量または体積で5%未満、4%未満、3%未満、2%未満、1%未満、またはそれ以下の水を指す。
【００５６】
特許請求の範囲および／または明細書において用語「含む」と共に使用される場合の、単語「1つの（a）」または「1つの（an）」の使用は、「1つ」を意味し得るが、それはまた、「1つまたは複数」、「少なくとも1つ」、および「1つまたは2つ以上」の意味と一致している。
【００５７】
本明細書および特許請求の範囲において使用される場合、単語「含む（comprising）」(および含むの任意の形態、例えば、「含む（comprise）」および「含む（comprises）」)、「有する（having）(および有するの任意の形態、例えば、「有する（have）」および「有する（has）」)、「包含する（including）」(および包含するの任意の形態、例えば、「包含する（includes）」および「包含する（include）」)または「含有する（containing）」(および含有するの任意の形態、例えば、「含有する（contains）」および「含有する（contain）」)は、包含的または非限定的であり、追加の、記載されていない要素または方法段階を除外しない。
【００５８】
組成物およびそれらの使用方法は、本明細書の全体にわたって開示される成分または段階のいずれか「を含む」、「から本質的になる」、または「からなる」ことができる。移行句「から本質的になる」に関して、一つの非限定的な局面において、本明細書に開示される組成物および方法の基本的かつ新規の特徴は、インフルエンザおよびフルー様症状を減らすまたは予防する組成物の能力を含む。
【００５９】
本発明の他の目的、特徴および利点は、以下の詳細な説明から明らかとなるであろう。しかしながら、詳細な説明および実施例は、本発明の具体的な態様を示すが、例示のためにのみ提供されることが理解されるべきである。さらに、本発明の精神および範囲内の変更および改変が、この詳細な説明から当業者に明らかとなるであろうことが意図される。
【図面の簡単な説明】
【００６０】
以下の図面は、本明細書の一部分を形成し、本発明のある局面をさらに示すために含まれる。本発明は、本明細書に提示される具体的な態様の詳細な説明と組み合わせてこれらの図面の1つまたは複数を参照することによって、よりよく理解され得る。
【００６１】
【図１】HSRx 351治療群(●)およびプラセボ群(■)における視覚的アナログスケールスコアの推移。データは平均値 ± SDとして提示される；0=問題無し、10=顕著な問題。図はKong 2009からの引用である。
【図２】治療の48時間後のHSRx 351群およびプラセボ群におけるインフルエンザ症状から回復した患者のパーセンテージ。図はKong 2009からの引用である。
【図３】HSRx 351と共にインキュベートされたMDCK細胞のインフルエンザA(H1N1)ウイルス感染の用量依存的阻害曲線。IC50値およびIC100値を、ベストフィットのライン(R2=0.92; n=22)を使用して決定した。図はRoschek Jr 2009からの引用である。
【図４】血球凝集アッセイは、HSRx 351が赤血球へのインフルエンザウイルスAの結合を妨げることを実証する。図の凡例：RBC = 赤血球；PBS = リン酸緩衝食塩水；pAB = 抗-インフルエンザ抗体；ウイルス = インフルエンザウイルスA；HS9 = HSRx 351。RBC + PBS行は、PBS単独中では赤血球は血球凝集できないことを示す陰性対照行である。ウイルス + PBS + RBC行は、右から左へ漸増する濃度のウイルスが赤血球の血球凝集を増加させることを示す陰性対照行である(左の2つのウェル中の拡散した赤色を参照のこと)。pAb + ウイルス + RBC行は、ヘマグルチニンに対する抗体の行にわたる一定濃度が、血球凝集を阻害することを示す陽性対照行であり、血球凝集の阻害は、対応のウイルス + PBS + RBCウェル（特に、左から2番目および3番目のウェル）と比較しての陽性対照行における赤血球の分散の減少によって実証された。3つのHS9 + ウイルス + RBC行は、一定濃度のHSRx 351(HS9)が、ヘマグルチニンに対する抗体と同様に、血球凝集を阻害することを示す実験行である。
【図５】IC50に必要な、HSRx 351中での、および単独の場合の、バイオマーカー6の濃度。HSRx 351中の場合に対するバイオマーカー6単独の濃度の比率は、バイオマーカー6とHSRx 351の他の成分との相乗活性を示唆している。
【図６】IC50に必要な、HSRx 351中での、およびアナログ単独の場合の、バイオマーカー7の濃度。HSRx 351中のバイオマーカー7に対するバイオマーカー7アナログ単独の濃度の比率は、バイオマーカー7とHSRx 351の他の成分との相乗活性を示唆している。
【図７】HSRx 351と共にインキュベートされた細胞のジカウイルス感染の用量依存的阻害。
【図８Ａ】175 mg経口ロゼンジ(A)の摂取後のヒト血液中のバイオマーカー6、7、および9のバイオアベイラビリティー。摂取後4時間までの間にヒト患者から採取された血液のDART-TOF分析によって、血清レベルを決定した。
【図８Ｂ】350 mgドリンク(B)の摂取後のヒト血液中のバイオマーカー6、7、および9のバイオアベイラビリティー。摂取後4時間までの間にヒト患者から採取された血液のDART-TOF分析によって、血清レベルを決定した。
【発明を実施するための形態】
【００６２】
詳細な説明
本発明者らは、驚くべきことに、ニワトコ中に見いだされ得るいくつかの化合物の組み合わせが、インフルエンザおよびインフルエンザ様疾患を予防および治療することができ、エンベロープウイルス感染症を予防および治療することができることを見出した。本発明者らはまた、化合物の特定の相対濃度が、ウイルス感染症を予防および治療する組み合わされた化合物の能力を増強するように作用することを見出した。加えて、本発明者らは、抗インフルエンザ化合物などの追加の薬物と共に本発明の化合物を使用することが、ウイルス感染症を予防および治療する組み合わされた化合物の能力を増強することを見出した。理論によって拘束されることを望まないが、本明細書に開示される化合物および組成物は、細胞中へのウイルスの侵入をブロックすることができると考えられる。インフルエンザウイルスの非限定的な例としては、インフルエンザウイルスAおよびインフルエンザウイルスB属内のウイルスが挙げられる。これらの属内のインフルエンザウイルスの非限定的な例としては以下が挙げられる：H1N1、H3N2、H3N5、H5N1、およびインフルエンザBウイルス。インフルエンザ様疾患を引き起こすウイルスの非限定的な例としては、ライノウイルスが挙げられる。エンベロープウイルスの非限定的な例としては、ジカウイルス、デングウイルス、HIV、および単純ヘルペスウイルスが挙げられる。本明細書に開示される化合物および組成物は、インフルエンザ感染症と関連する症状および／またはフルー様症状を治療および予防することができるとさらに考えられる。症状の非限定的な例としては、寒気、咳、疲労、熱、頭痛、筋肉痛、および／または咽喉痛が挙げられる。
【００６３】
A．組成物の化合物
本発明の組成物は、112.027 amu、126.032 amu、155.095 amu、160.087 amu、166.099 amu、および507.342 amuの精密質量によって定義されるサンブクス・ニグラL.(ニワトコ)中に見いだされるバイオマーカーのうちの1つまたは複数、ならびにそれらの組み合わせを含むことができる。別の態様において、組成物は、ニワトコ中に見いだされる約358.146 amu、478.295 amu、および606.436 amuの精密質量によって定義されるバイオマーカーのうちの1つまたは複数、ならびにそれらの任意の組み合わせをさらに含んでもよい。理論によって拘束されることを望まないが、本発明のバイオマーカーは細胞中へのウイルス侵入をブロックすると考えられる。
【００６４】
好ましい態様において、バイオマーカーまたはバイオマーカーの組み合わせは、バイオマーカーの相対存在量について、90%のバッチ間化学一貫性を有する。別の好ましい態様において、化合物または化合物の組み合わせは、バイオマーカーの相対存在量について、95%および／または98%のバッチ間化学一貫性を有する。
【００６５】
本発明のいくつかの局面において、組成物の化合物ならびに誘導体および類似体は、公知の合成方法によって作製することができきる。本発明のいくつかの局面において、組成物の化合物および／または組成物は、化学合成における当業者に公知の方法に従って化合物および／または組成物を生成することによって、合成的に得ることができる。一つの場合において、化合物および／または組成物は、有機化学方法によって合成される。
【００６６】
本発明のいくつかの局面において、組成物の化合物および／または組成物は、果実、植物、動物、真菌、細菌、および／または古細菌などの生物の抽出物から単離され得る。果実の非限定的な例としてはニワトコ果実が挙げられる。組成物の化合物または組成物は、抽出物とCO2とを接触させること、抽出物とH2Oとを、またはEtOH:H2Oの任意の組み合わせとを接触させること、抽出物を分離するポリマーを利用する任意の方法などの、公知の抽出方法を使用して、生物から抽出することができる。ポリマー分離のために使用されるポリマーの非限定的な例としてはADS 5ポリマー(Nankai University, China)が挙げられる。抽出物は、ニワトコ中に見いだされる112.027 amu、126.032 amu、155.095 amu、160.087 amu、166.099 amu、および507.342 amuの精密質量によって定義される化合物のいずれか1つまたは組み合わせを含み得る。一つの場合において、抽出物はまた、ニワトコ中に見いだされる約358.146 amu、478.295 amu、および606.436 amuの精密質量によって定義される化合物のうちの1つまたは複数、およびそれらの任意の組み合わせを含み得る。
【００６７】
本発明のいくつかの局面において、1つまたは複数の、組成物の化合物ならびにその誘導体および類似体は、当業者に知られている公知の合成方法によって作製することができ、1つまたは複数の、組成物の化合物ならびにその誘導体および類似体は、他の供給源、例えば、しかしこれらに限定されないが、果実および植物の抽出物より単離されてもよい。
【００６８】
B．DART TOF/MSによって定義される活性物
本発明の組成物は、ニワトコ中に見いだされる約112.027 amu、126.032 amu、155.095 amu、160.087 amu、166.099 amu、および507.342 amuの精密質量によって定義される化合物のうちの1つまたは複数、ならびにそれらの任意の組み合わせを含むことができる。本発明の組成物は、以下をさらに含むことができる：ニワトコ中に見いだされる約358.146 amu、478.295 amu、および606.436 amuの精密質量によって定義される化合物のうちの1つまたは複数、ならびにそれらの任意の組み合わせ；他の生成物；ならびに／またはそれらの任意の組み合わせ。
【００６９】
本明細書に記載される精密質量および相対存在量は、特定の機器および特定の設定を使用する実験に基づき、機器ごとに変化し得る。各測定において変動性がある。従って、精密質量および相対存在量は、当業者によって理解されるように、近似であると定義される。一つの非限定的な態様において、これらの用語は、20%以内、好ましくは10%、好ましくは5%以内、より好ましくは1%以内、最も好ましくは0.5%以内であるように定義される。一つの非限定的な態様において、精密質量は、+/- 20 mmu以内、好ましくは10 mmu、より好ましくは5 mmu以内、最も好ましくは1 mmu以内の誤差を有する。一つの非限定的な態様において、相対存在量は、+/- 20%、好ましくは10%、好ましくは5%以内、より好ましくは1%以内、最も好ましくは0.5%以内の誤差を有する。
【００７０】
非限定的な例において、本発明の化合物は、リアルタイム直接分析(DART)飛行時間/質量分析(TOF/MS)を使用して同定することができる。具体的には、Jeol USA (Peabody, MA)製のJEOL DART（商標）AccuTOF質量分析計(JMS-T100LC)を使用することができる。精密質量は、サンプルから生成されたイオンの測定された質量からプロトンの質量(1.007825 amu)を引くことによって決定され得る。化合物の質量は、Dip-ITサンプラーおよびDip-ITサンプラーホルダー(ionSense（商標）)によってイオン流へサンプルを直接導入することによって、サンプルにおいて決定され得る。サンプル調製はDARTでのシンプルな分析のためには必要とされないが、化学物質がドープ／スパイクされた溶液が、既知量に対する定量化のために使用することができる。非限定的な例として、クルクミンは、ニワトコ抽出物中に存在せず、従って、生物活性分子の定量的化学的プロフィールを作成するために使用することができる。
DARTイオン源についての設定は以下であり得る：
ガス：He
フロー：2.52 LPM @ 50 PSI
温度：250 C
ニードル電圧：3000V
グリッド電極電圧：250V
放電電極電圧：400V。
JEOL AccuTOF MSについての設定は以下であり得る：
ピーク電圧：1000V
オリフィス1温度：120 C
検出器電圧：2600V
リフレクトロン電圧：990.0V。
【００７１】
サンプルは、DART-TOF MSによって6つのレプリケートで分析され得る。これらの6つのレプリケートを分析し、サンプルの単一の、平均化され、フィルタリングされ、かつ統計的に有意なDARTフィンガープリントを作ることができる。このプロセッシングされたフィンガープリントは、次いで、質量の比較によって生物活性マーカーの存在を決定するために使用することができる。これらの生物活性マーカーの最初の発見および同定に起因して、任意の抽出物または化学物質の混合物中のそれらの存在を決定するためはシンプルな質量比較で十分である。
【００７２】
全てのMSは、質量許容（予想される[M+H]または[M-H]値を囲む許容可能な報告される質量の範囲）を有する。AccuTOFについて、その質量許容は20ミリ質量単位(mmu)未満である(予想される質量 +/-10 mmu)。同じサンプルおよびイオン源を前提として、他のTOF-MSはより高いまたはより低い質量許容を有し得る。
【００７３】
別の非限定的な例において、本発明の化合物は、DARTイオン源についての以下の設定を使用して陽イオンモード([M+H]+)で実行されるJeol USA (Peabody, MA)製のJEOL DART（商標）AccuTOF質量分析計(JMS-T100LC)を使用することによって、DART TOF/MSによって決定することができる：
ガス：He
フロー：3.98 L/分
ニードル電圧：3500 V
温度：300℃
電極1電圧：150 V
電極2電圧：250 V。
JEOL AccuTOF MSについての設定は以下であり得る：
ピーク電圧：1000V
オリフィス1電圧：20 V
リングレンズ電圧：5 V
オリフィス2電圧：5 V
検出器電圧：2550V。
【００７４】
100〜1000 amuの必要とされる質量範囲の全体にわたって質量マーカーを提供するUltra Chemical (North Kingston, RI)製のPEG 600の10%(重量/体積)溶液を使用して、較正を各サンプルで内部的に行うことができる。較正許容は5 mmuへ維持され得る。シグナルがトータルイオンクロマトグラム(TIC)において達成されるまで、ホウケイ酸ガラス融点毛細管の閉じた末端を使用して、サンプルはDART Heプラズマ中へ導入され得る。次いで、TICがベースラインレベルをリターンしたら、次のサンプルが導入され得る。
【００７５】
C．追加の抗ウイルス薬
抗ウイルス薬は、非限定的に、宿主細胞中へのウイルス侵入を阻害する、宿主細胞からのウイルスの出芽を防ぐ、宿主細胞中での複製を防ぐ、またはウイルス粒子を破壊もしくは阻害することができる。抗ウイルス薬としては、1つもしくは少数のウイルスに特異的であるもの、またはいくつかのタイプのウイルスに対して広域であるものが挙げられる。抗ウイルス薬としては、配合剤および単剤であるものが挙げられる。抗インフルエンザ薬は抗ウイルス薬の非限定的な例である。一態様において、本明細書に開示される組成物は、少なくとも1つの追加の抗ウイルス薬をさらに含む。
【００７６】
抗インフルエンザ剤は、インフルエンザウイルス量を減少させるまたはウイルス感染症を予防するために使用される、化合物または組成物である。抗インフルエンザ剤の非限定的な例としては、オセルタミビル(タミフル（登録商標）としても公知)、ザナミビル(リレンザ（登録商標）)、ペラミビル(ラピバブ（登録商標）)、リマンタジン(フルマジン（登録商標）としても公知)、およびアマンタジン(シンメトレル（登録商標）としても公知)が挙げられる。いくつかの抗インフルエンザ剤は、ノイラミニダーゼを阻害し、これは、感染細胞からのウイルスの子孫の放出を妨げる。感染細胞からのウイルスの子孫の放出を妨げる抗インフルエンザ剤の非限定的な例としては、ノイラミニダーゼ阻害剤、例えば、オセルタミビル、ザナミビル、およびペラミビルが挙げられる。いくつかの抗インフルエンザ剤は、ウイルスコード化M2イオンチャネルをブロックする。M2イオンチャネルをブロックする抗インフルエンザ剤の非限定的な例は、リマンタジンおよびアマンタジンである。インフルエンザウイルスの非限定的な例としては、インフルエンザウイルスAおよびインフルエンザウイルスB属のウイルスが挙げられる。一つの場合において、ウイルスとしては、H1N1、H3N2、H3N5、H5N1、およびインフルエンザBが挙げられるが、これらに限定されない。一態様において、本明細書に開示される組成物は、オセルタミビル、ザナミビル、ペラミビル、リマンタジンおよびアマンタジンであり得るが、これらに限定されない、少なくとも1つの追加の抗インフルエンザ剤をさらに含む。
【００７７】
D．成分の量
本発明の組成物は、本明細書において議論される成分の任意の量を含み得ることが意図される。組成物はまた、本明細書の全体にわたって記載される追加の成分の任意の数の組み合わせを含むことができる(例えば、安定剤、充填剤、薬学的にかつ／もしくは栄養補助的に許容される塩、ならびに／または追加の薬学的かつ／もしくは栄養補助的成分)。組成物中の任意の成分の濃度は変動し得る。非限定的な態様において、例えば、組成物は、例えば、
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またはその中で誘導可能な任意の範囲の、本明細書および特許請求の範囲の全体にわたって記載される成分のうち少なくとも1つを、最終形態において、含む、これ(ら)から本質的になる、またはこれ(ら)からなることができる。非限定的な局面において、パーセンテージは、総組成物の重量もしくは体積または相対存在量によって計算することができる。当業者は、濃度は、所与の組成物中の成分の添加、置換、および／または除去に依存して変動し得ることを理解するだろう。
【００７８】
E．追加の成分
本発明の化合物は、ヒトまたは非ヒト動物患者への投与のための任意の好適な組成物形態へ製剤化することができる。
【００７９】
組成物は、投与様式および投薬形態の性質に依存して、特許請求される化合物単独からなってもよく、または、特許請求される化合物、ならびに任意の好適な追加の成分、例えば、1つまたは複数の薬学的にかつ／または栄養補助的に許容される担体、希釈剤、アジュバント、賦形剤、またはビヒクル、例えば、保存剤、充填剤、崩壊剤、湿潤剤、乳化剤、懸濁化剤、甘味剤、矯味矯臭剤、芳香剤、抗細菌剤、抗真菌剤、滑沢剤および分配剤を含んでもよい。各担体は、製剤の他の成分と適合性でありかつ患者に対して有害でないという意味で許容可能でなければならない。
【００８０】
1．賦形剤
本発明の組成物中に用いられる賦形剤は、固体、半固体、液体、またはそれらの組み合わせであり得る。好ましくは、賦形剤は固体である。賦形剤を含有する本発明の組成物は、例えば、賦形剤と特許請求される化合物とを混合することを含む、任意の公知の技術によって調製され得る。本発明の薬学的組成物は、投与単位当たり所望量の特許請求される化合物を含有し、経口投与に意図される場合、例えば、錠剤、カプレット剤、丸剤、硬もしくは軟カプセル剤、ロゼンジ、カシェ剤、分配可能な散剤（dispensable powder）、顆粒剤、懸濁剤、エリキシル剤、ディスパージョンの形態、またはそのような投与に合理的に適した任意の他の形態であり得る。非経口投与に意図される場合、それは、例えば、懸濁剤または経皮パッチの形態であり得る。直腸投与に意図される場合、それは、例えば、坐剤の形態であり得る。現在好ましいのは、錠剤またはカプセル剤などの、所定量の特許請求される化合物を各々が含有する分離した投与単位である経口投薬形態である。
【００８１】
2．担体／希釈剤
好適な担体または希釈剤としては、説明的に、個々にまたは組み合わせてのいずれかで、ラクトース、例えば、無水ラクトースおよびラクトース一水和物；デンプン、例えば、直接圧縮可能なデンプンおよび加水分解デンプン(例えば、Celutab（商標）およびEmdex（商標）)、マンニトール、ソルビトール、キシリトール、デキストロース(例えば、Cerelose（商標）2000)およびデキストロース一水和物、第二リン酸カルシウム二水和物、スクロースベースの希釈剤、粉砂糖、第一硫酸カルシウム一水和物、硫酸カルシウム二水和物、顆粒状乳酸カルシウム三水和物、デキストレート（dextrate）、イノシトール、加水分解穀物固形物、アミロース、セルロース、例えば、微結晶性セルロース、アルファおよびアモルファスセルロースの食品等級源(例えば、RexcelJ)、粉末セルロース、ヒドロキシプロピルセルロース(HPC)およびヒドロキシプロピルメチルセルロース(HPMC)、炭酸カルシウム、グリシン、クレイ、ベントナイト、ブロック共重合体、ポリビニルピロリドンなどが挙げられるが、これらに限定されない。そのような担体または希釈剤は、存在する場合、組成物の総重量の約5%〜約99.999%、約10%〜約85%、および20%〜約80%を合計で構成する。選択される担体または希釈剤は、好ましくは、好適な流動性および、錠剤が望まれる場合は、圧縮性を示す。
【００８２】
3．崩壊剤
本発明の組成物は、特に錠剤製剤のために、賦形剤として、1つまたは複数の薬学的にかつ／または栄養補助的に許容される崩壊剤を任意で含むことができる。好適な崩壊剤としては、個々にまたは組み合わせてのいずれかで、デンプン、例えば、デンプングリコール酸ナトリウムおよびアルファ化トウモロコシデンプン、クレイ、セルロース、例えば、精製セルロース、微結晶性セルロース、メチルセルロース、カルボキシメチルセルロースおよびカルボキシメチルセルロースナトリウム、クロスカルメロースナトリウム、アルギネート、クロスポビドン、ならびにガム、例えば、寒天、グアー、ローカストビーン、カラヤ、ペクチンおよびトラガカントガムが挙げられるが、これらに限定されない。崩壊剤は、組成物の調製中の任意の好適な段階で、特に、顆粒化前にまたは圧縮前の滑沢化段階中に、添加され得る。そのような崩壊剤は、存在する場合、組成物の総重量の約0.2%〜約30%、好ましくは約0.2%〜約10%、より好ましくは約0.2%〜約5%を合計で構成する。
【００８３】
4．結合剤
本発明の組成物は、特に錠剤製剤のために、結合剤または接着剤を含むことができる。そのような結合剤および接着剤は、好ましくは、サイジング、滑沢化、圧縮、および包装などの通常の処理操作を可能にするために錠剤化される粉末に十分な凝集力を与えることができるが、さらに摂取後に錠剤が崩壊し、組成物が吸収されることを可能にする。そのような結合剤はまた、いったん塩が溶液中に溶解されると、本発明の共結晶の結晶化または再結晶を防止または阻害し得る。好適な結合剤および接着剤としては、個々にまたは組み合わせてのいずれかで、アカシア；トラガカント、スクロース、ゼラチン、グルコース、デンプン、例えば、しかしこれに限定されないが、アルファ化デンプン、セルロース、例えば、しかしこれらに限定されないが、メチルセルロースおよびカルメロースナトリウム、アルギン酸およびアルギン酸の塩；ケイ酸アルミニウムマグネシウム、PEG、グアーガム、多糖類酸、ベントナイト、ポビドン、ポリメタクリレート、HPMC、ヒドロキシプロピルセルロース、およびエチルセルロースが挙げられるが、これらに限定されない。そのような結合剤および／または接着剤は、存在する場合、薬学的組成物の総重量の約0.5%〜約25%、好ましくは約0.75%〜約15%、より好ましくは約1%〜約10%を合計で構成する。結合剤の多くは、アミド、エステル、エーテル、アルコールまたはケトン基を含むポリマーであり、そういうものとして、本発明の薬学的組成物中に含まれ得る。ポリビニルピロリドンは、徐放性錠剤用に使用される結合剤の非限定的な例である。ポリマー結合剤は、様々な分子量、架橋度、およびポリマー等級を有し得る。ポリマー結合剤はまた、共重合体、例えば、エチレンオキシド単位およびプロピレンオキシド単位の混合物を含有するブロック共重合体であり得る。所与のポリマー中のこれらの単位の比率の変動は、特性および性能に影響を与える。
【００８４】
5．湿潤剤
湿潤剤が本発明の組成物中で使用され得る。湿潤剤は、組成物のバイオアベイラビリティーを改善し得る状態である、水と密接に会合している状態に結晶を維持するように選択され得る。そのような湿潤剤はまた、可溶化することまたは結晶の溶解度を増加させることにおいて有用であり得る。界面活性剤は湿潤剤として使用され得る。本発明の組成物中で湿潤剤として使用され得る界面活性剤の非限定的な例としては、第四級アンモニウム化合物、例えば、塩化ベンザルコニウム、塩化ベンゼトニウムおよび塩化セチルピリジニウム、スルホコハク酸ジオクチルナトリウム、ポリオキシエチレンアルキルフェニルエーテル、ポロキサマー(ポリオキシエチレンおよびポリオキシプロピレンブロック共重合体)、ポリオキシエチレン脂肪酸グリセリドおよび油、例えば、ポリオキシエチレン(8)カプリル酸/カプリン酸モノ-およびジグリセリド、ポリオキシエチレン(35)ヒマシ油およびポリオキシエチレン(40)水添ヒマシ油、ポリオキシエチレンアルキルエーテル、例えば、ポリオキシエチレン(20)セトステアリルエーテル、ポリオキシエチレン脂肪酸エステル、例えば、ポリオキシエチレン(40)ステアレート、ポリオキシエチレンソルビタンエステル、例えば、ポリソルベート20およびポリソルベート80、プロピレングリコール脂肪酸エステル、例えば、プロピレングリコールラウレート、ラウリル硫酸ナトリウム、脂肪酸およびその塩、例えば、オレイン酸、オレイン酸ナトリウムおよびオレイン酸トリエタノールアミン、グリセリル脂肪酸エステル、例えば、グリセリルモノステアレート、ソルビタンエステル、例えば、ソルビタンモノラウレート、ソルビタンモノオレエート、ソルビタンモノパルミテートおよびソルビタンモノステアレート、チロキサポール、ならびにそれらの混合物が挙げられる。そのような湿潤剤は、存在する場合、薬学的組成物の総重量の約0.25%〜約15%、好ましくは約0.4%〜約10%、より好ましくは約0.5%〜約5%を合計で構成する。
【００８５】
6．滑沢剤
滑沢剤は本発明の組成物中に含まれ得る。好適な滑沢剤としては、個々にまたは組み合わせてのいずれかで、グリセリルベハペート（glyceryl behapate）、ステアリン酸およびその塩、例えば、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸カルシウムおよびステアリン酸ナトリウム；水添植物油、コロイダルシリカ、タルク、ろう、ホウ酸、安息香酸ナトリウム、酢酸ナトリウム、フマル酸ナトリウム、塩化ナトリウム、DL-ロイシン、PEG(例えば、Dow Chemical CompanyのCarbowax（商標）4000およびCarbowax（商標）6000)、オレイン酸ナトリウム、ラウリル硫酸ナトリウム、およびラウリル硫酸マグネシウムが挙げられるが、これらに限定されない。そのような滑沢剤は、存在する場合、組成物の総重量の約0.1%〜約10%、好ましくは約0.2%〜約8%、より好ましくは約0.25%〜約5%を合計で構成する。
【００８６】
7．他の薬剤
界面活性剤、乳化剤、または発泡剤が組成物中で使用され得る。乳化剤は、軟ゼラチンカプセル剤内に成分を可溶化するのを助けるために使用することができる。界面活性剤、乳化剤、または発泡剤の非限定的な例としては、D-ソルビトール、エタノール、カラゲナン、カルボキシビニルポリマー、カルメロースナトリウム、グアーガム、グリセロール、グリセロール脂肪酸エステル、コレステロール、サラシミツロウ、スルホコハク酸ジオクチルナトリウム、スクロース脂肪酸エステル、ステアリルアルコール、ステアリン酸、ポリオキシル40ステアレート、ソルビタンセスキオレエート、セタノール、ゼラチン、ソルビタン脂肪酸エステル、タルク、ソルビタントリオレエート、パラフィン、ジャガイモデンプン、ヒドロキシプロピルセルロース、プロピレングリコール、プロピレングリコール脂肪酸エステル、ペクチン、ポリオキシエチレン(105)ポリオキシプロピレン(5)グリコール、ポリオキシエチレン(160)ポリオキシプロピレン(30)グリコール、ポリオキシエチレン水添ヒマシ油、ポリオキシエチレン水添ヒマシ油40、ポリオキシエチレン水添ヒマシ油60、ポリオキシル35ヒマシ油、ポリソルベート20、ポリソルベート60、ポリソルベート80、マクロゴール400、ミリスチン酸オクチルドデシル、メチルセルロース、ソルビタンモノオレエート、グリセロールモノステアレート、ソルビタンモノパルミテート、ソルビタンモノラウレート、ラウリルジメチルアミンオキシド液、ラウリル硫酸ナトリウム、ラウロマクロゴール、乾燥炭酸ナトリウム、酒石酸、水酸化ナトリウム、精製大豆レシチン、大豆レシチン、炭酸カリウム、炭酸水素ナトリウム、中鎖トリグリセリド、無水クエン酸、綿実油-大豆油混合物、および流動パラフィンが挙げられる。
【００８７】
F．ビヒクル
様々な送達システムが当技術分野において公知であり、本発明の治療剤または組成物を投与するために使用することができる；例えば、リポソームカプセル化、微粒子、マイクロカプセル、受容体媒介エンドサイトーシスなど。投与の方法としては、非経口、動脈内、筋肉内、静脈内、鼻腔内、および経口経路が挙げられるが、これらに限定されない。組成物は、錠剤、ロゼンジ、顆粒剤、カプセル剤、丸剤、アンプル、坐剤またはエアロゾル形態の形態で提供され得る。組成物はまた、水性もしくは非水性希釈剤中の活性成分の懸濁剤、液剤、および乳剤、シロップ剤、顆粒剤（granulate）または散剤の形態で提供され得る。
【００８８】
G．製剤および投与
組成物は、例えば、薬学的組成物(医薬)、および市販の組成物(OTC)、栄養補助食品などであり得る。本発明に従う組成物は、経口または非経口経路に適した製剤を含む。具体的な経路の非限定的な例としては、皮内、皮下、筋肉内、静脈内、局所注射、直腸、鼻腔内吸入、送気、局所(経皮、頬および舌下を含む)、膣内、非経口(皮下、筋肉内、静脈内および皮内を含む)、ならびに経肺投与が挙げられる。製剤は、好都合なことに、単位投薬形態で提示され得、当技術分野において周知の任意の方法によって調製され得る。そのような方法は、1つまたは複数の補助的成分を構成する、担体と活性成分とを会合させる段階を含む。一般に、製剤は、活性成分と好適な担体（例えば、液体担体もしくは細かく分割された固体担体または両方）とを一様にまたは密に会合させ、次いで、必要に応じて生成物を形作ることによって調製される。経口投与に適した本発明の製剤は、各々が所定量の活性成分を含有する、カプセル剤、カシェ剤もしくは錠剤などの分離した単位として、または水中油型液状エマルジョン、油中水型液状エマルジョンとして、または水溶液（例えば、茶）中のサプリメントとして、提示され得る。活性成分はまたボーラス、舐剤、またはパスタ剤として提示され得る。有用な注射用調製物としては、水性または油性ビヒクル中の化合物組成物の滅菌懸濁剤、液剤または乳剤が挙げられる。組成物はまた、製剤化剤、例えば、懸濁化剤、安定剤および／または分散剤を含有することができる。注射用製剤は、単位投薬形態で、例えば、アンプルでまたは複数回用量容器で提示され得、添加された保存剤を含有し得る。あるいは、注射用製剤は、使用前に、滅菌パイロジェンフリー水、緩衝液、デキストロース溶液などを含むがこれらに限定されない、好適なビヒクルで再構成するための粉末形態で提供され得る。この目的のために、化合物組成物は、凍結乾燥などの、任意の当技術分野において公知の技術によって乾燥され、使用前に再構成され得る。
【００８９】
口腔内における局所投与に適した製剤としては、風味付けされた基剤、通常はスクロースおよびアカシアまたはトラガカント中に活性成分を含むロゼンジ、ゼラチンおよびグリセリン、またはスクロースおよびアカシアなどの不活性基剤中に活性成分を含むトローチ剤、好適な液体担体中に活性成分を含む洗口剤、ならびに活性成分を含むチョコレートが挙げられる。
【００９０】
本発明に従う局所投与に適した製剤は、軟膏剤、クリーム、懸濁剤、ローション剤、散剤、液剤、パスタ剤、ゲル、スプレー、エアロゾルまたはオイルとして製剤化され得る。あるいは、製剤は、活性成分、および任意で1つまたは複数の賦形剤または希釈剤を含浸させた、包帯または絆創膏などのパッチまたは手当て用品を含み得る。局所製剤は、好ましくは、皮膚を通って血流中への活性成分の吸収を促進する化合物を含む。
【００９１】
担体が固体である、鼻腔内投与に適した製剤は、例えば約20〜約500ミクロンの範囲内の粒度を有する粗い粉末を含み、これは、嗅剤を吸う方法で、即ち、鼻の近くに保たれた粉末の容器から鼻の通路を通って急速に吸入することによって、投与される。ネブライザーの非限定的な例によるなどの、鼻腔内投与用の、担体が液体である好適な製剤としては、薬剤の水性または油性液剤が挙げられる。製剤は、好ましくは、皮膚を通って血流中への活性成分の吸収を促進する化合物を含み得る。
【００９２】
非経口投与に適した製剤としては、抗酸化剤、緩衝液、静菌薬、および製剤を意図されるレシピエントの血液と等張にする溶質を含有し得る、水性および非水性等張滅菌注射液剤；ならびに、懸濁化剤および増粘剤、ならびに血液成分または1つもしくは複数の器官へ化合物を標的化するように設計されているリポソームまたは他の微粒子システムを含み得る、水性および非水性滅菌懸濁剤が挙げられる。製剤は、単位用量または複数回用量または複数回用量密封容器、例えば、アンプルおよびバイアルで提示され得、使用直前に、滅菌液体担体、例えば注射用水の添加のみを必要とするフリーズドライ(凍結乾燥)状態で保存され得る。即時注射液剤および懸濁剤は、前述の種類の滅菌散剤、顆粒剤および錠剤から調製され得る。
【００９３】
経口投与用の液体調製物は、例えば、エリキシル剤、液剤、シロップ剤または懸濁剤の形態をとり得るか、または、それらは、使用前に水または他の好適なビヒクルで構成するための乾燥プロダクトとして提示され得る。そのような液体調製物は、薬学的にかつ／または栄養補助的に許容される添加剤、例えば、懸濁化剤(例えば、ソルビトールシロップ、セルロース誘導体または水添食用脂)；乳化剤(例えば、レシチンまたはアカシア)；非水性ビヒクル(例えば、扁桃油、油状エステル、エチルアルコール、または分画された植物油)；および保存剤(例えば、p-ヒドロキシ安息香酸メチルもしくはプロピルまたはソルビン酸)を用いて、従来の手段によって調製され得る。調製物はまた、必要に応じて、緩衝塩、保存剤、矯味矯臭剤、着色剤および甘味剤を含有し得る。
【００９４】
頬投与について、組成物は、従来の方法で製剤化された錠剤またはロゼンジの非限定的な例の形態をとり得る。
【００９５】
直腸および膣内投与経路について、化合物組成物は、カカオ脂または他のグリセリドなどの従来の坐剤基剤を含有する、液剤(停留浣腸用)、坐剤または軟膏剤として製剤化され得る。
【００９６】
鼻投与または吸入もしくは送気による投与について、化合物組成物は、好都合なことに、好適な噴射剤、例えば、ジクロロジフルオロメタン、トリクロロフルオロメタン、ジクロロテトラフルオロエタン、フルオロカーボン、二酸化炭素または他の好適なガスを使用してネブライザーまたは加圧パックからエアロゾルスプレーの形態で送達され得る。加圧エアロゾルの場合、投薬単位は、定量を送達するためのバルブを提供することによって決定され得る。吸入器または注入器における使用のためのカプセルおよびカートリッジ(例えば、ゼラチンから構成されるカプセルおよびカートリッジ)は、化合物とラクトースまたはデンプンのような好適な粉末基剤との粉末混合物を含有することで製剤化され得る。
【００９７】
長期送達について、化合物組成物は、埋め込みまたは筋肉内注射による投与用のデポー調製物として製剤化され得る。化合物組成物は、好適なポリマー性もしくは疎水性材料(例えば、許容される油中のエマルジョンとして)またはイオン交換樹脂を用いて、または難溶性誘導体として、例えば、難溶性塩として、製剤化され得る。あるいは、経皮吸収のために化合物組成物を徐々に放出する、接着性ディスクまたはパッチとして製造された経皮送達システムが使用され得る。この目的のために、浸透増強剤が、化合物組成物の経皮透過を促進するために使用され得る。好適な経皮パッチは、例えば、米国特許第5,407,713号；米国特許第5,352,456号；米国特許第5,332,213号；米国特許第5,336,168号；米国特許第5,290,561号；米国特許第5,254,346号；米国特許第5,164,189号；米国特許第5,163,899号；米国特許第5,088,977号；米国特許第5,087,240号；米国特許第5,008,110号；および米国特許第4,921,475号に記載されている。
【００９８】
あるいは、他の送達システムを用いることができる。リポソームおよびエマルジョンは、化合物組成物を送達するために使用され得る送達ビヒクルの周知の例である。より大きな毒性という代償を通常払うが、ジメチルスルホキシド(DMSO)などのある有機溶媒も用いることができる。
【００９９】
特に上述された成分に加えて、本発明において有用な製剤は、問題の製剤のタイプに関して当技術分野において通常の他の薬剤を含むことができることが理解されるべきである。例えば、経口投与に適した製剤は、甘味剤、増粘剤、および矯味矯臭剤などのさらなる薬剤を含み得る。本発明の薬剤、組成物および方法は他の好適な組成物および療法と組み合わされることも意図される。
【０１００】
一態様において、本発明の薬学的かつ／または栄養補助的組成物は、治療が必要な領域へ局所投与され得；そのような局所投与は、例えば、局所注入によって、注射によって、またはカテーテルによって、達成され得る。別の態様において、本発明の化合物または組成物は、疾患部位で活性化合物のピーク濃度を達成するような方法で投与される。疾患部位でのピーク濃度は、例えば、任意で食塩水中の、薬剤を静脈内注射することによって、または、例えば、活性成分を含有する錠剤、カプセル剤またはシロップ剤を経口投与することによって、達成され得る。
【０１０１】
H．他の薬学的かつ／または栄養補助的薬剤
本発明の薬学的、OTC、かつ／または栄養補助的製剤は、他の薬物または生物学的に活性な薬剤と同時にまたは連続して投与され得る。例としては、抗インフルエンザ剤、抗酸化剤、フリーラジカル捕捉剤、鎮痛薬、麻酔薬、肛門直腸薬、抗ヒスタミン薬、抗炎症剤、例えば非ステロイド性抗炎症薬、抗生物質、抗真菌薬、抗ウイルス薬、抗菌剤、抗癌活性物、抗新生物薬、生物学的に活性なタンパク質およびペプチド、酵素、止血薬、ステロイド、例えばホルモンおよびコルチコステロイドなどが挙げられるが、これらに限定されない。
【０１０２】
I．治療方法および投薬量
好ましい単位投薬製剤は、薬剤の、日用量もしくは単位、サブ日用量（daily subdose）、またはその適切なフラクションを含有するものである。治療量は、経験的に決定され得、治療される病状、治療される対象、ならびに薬剤の効能および毒性で変動する。同様に、好適な投薬製剤および薬剤投与方法は、当業者によって容易に決定され得る。
【０１０３】
いくつかの態様において、本発明の治療方法は、疾患、状態、または障害を治療するために有効な量で、本明細書に記載される安定した製剤を、そのような疾患または状態を有する対象へ投与することによって、疾患、状態または障害を治療することを含み得る。いくつかの態様において、対象に、ここで特許請求される化合物を含む安定した製剤を投与する。疾患、状態、または障害は、インフルエンザウイルスによって引き起こされ得る。さらに、疾患、状態、または障害は、インフルエンザ、フルー、および／またはフルー様症状を有する疾患、ならびに関連する疾患、状態、および障害であり得る。予防的投与について、組成物は、前述の状態のうちの1つを発症するリスクがある患者へ投与され得る。
【０１０４】
投与される組成物の量は、例えば、治療される特定の適応症、投与様式、所望の利益が予防的または治療的であるかどうか、治療される適応症の重症度、ならびに患者の年齢および体重などを含む、様々な因子に依存する。有効投薬量の決定は、十分に当業者の能力内にある。本発明のいくつかの局面において、化合物組成物の総投薬量は、他の因子の中でも、成分の活性、そのバイオアベイラビリティー、投与様式、および上記で議論した様々な因子に依存して、典型的に、約0.0001または0.001または0.01 mg/kg患者/日から約100 mg/kg患者/日までの範囲内であるが、より高くてもより低くてもよい。投薬量および間隔は、治療または予防効果を維持するために十分である化合物の血漿レベルを提供するように、個々に調節され得る。例えば、化合物は、特に、投与様式、治療される特定の適応症、および処方医師の判断に依存して、週1回、週数回(例えば、1日おき)、1日1回、または1日複数回、投与することができる。別の非限定的な例において、化合物は、1日間、2日間、3日間、4日間、5日間、6日間、1週間、またはそれ以上、対象へ投与することができる。当業者は、過度の実験なしに有効な局所投薬量を最適化することができる。
【０１０５】
J．キット
本発明の別の局面において、本明細書に記載されるような疾患、状態または障害を治療するためのキット。例えば、本発明の組成物はキット中に含まれ得る。キットは容器を含み得る。容器は、ボトル、金属チューブ、ラミネートチューブ、プラスチックチューブ、ディスペンサー、ストロー、加圧容器、バリア容器、パッケージ、コンパートメント、または、ディスパージョンもしくは組成物または所望のボトル、ディスペンサー、もしくはパッケージが保持される他のタイプの容器、例えば、射出またはブロー成形プラスチック容器を含み得る。キットおよび／または容器は、その表面上に印を含むことができる。印は、例えば、単語、句、略語、絵、または記号であり得る。
【０１０６】
容器は、所定量の組成物を分配することができる。他の態様において、容器は、所望量の組成物を分配するために圧搾することができる(例えば、金属、ラミネート、またはプラスチックチューブ)。組成物は、スプレー、エアロゾル、液体、流体、半固体、または固体として分配することができる。好ましい態様において、組成物は錠剤またはロゼンジとして分配される。容器は、スプレー、ポンプ、または圧搾メカニズムを有し得る。キットはまた、キットコンポーネントの使用ならびに容器中に含まれる任意の他の組成物の使用のための説明書を含むことができる。説明書は、組成物を適用、使用、および維持する方法の説明を含み得る。組成物は、化合物組成物を含有する1つまたは複数の単位投薬形態を含有し得る、パックまたはディスペンサーデバイスで、必要に応じて、提示され得る。パックは、例えば、金属箔またはプラスチック箔、例えば、ブリスターパックを含み得る。パックまたはディスペンサーデバイスは、投与についての説明書を伴い得る。
【実施例】
【０１０７】
本発明を具体例によってより詳細に説明する。以下の実施例は、説明の目的のために提示され、いかなる方法によっても本発明を限定するようには意図されない。当業者は、本質的に同じ結果をもたらすように変更または改変され得る様々な重要でないパラメータを容易に認識するだろう。
【０１０８】
結果は、組み合わせて、驚くべきことに、本明細書に開示される組成物は、インフルエンザおよびインフルエンザ様疾患を治療および予防するために使用することができ、かつ、エンベロープウイルス感染症を治療および予防するために使用することができることを示している。
【０１０９】
実施例1
(精密質量および相対存在量による化合物の特徴付け)
本発明者らは、驚くべきことに、ニワトコ中に見いだされるいくつかの化合物の組み合わせが、インフルエンザウイルス感染症を予防および治療することができることを見出した。本発明者らはまた、化合物の特定の相対濃度が、インフルエンザウイルス感染症を予防および治療する組み合わされた化合物の能力を増強するように作用することを見出した。加えて、本発明者らは、追加の抗インフルエンザ化合物と共に本発明の化合物を使用することもまた、インフルエンザウイルス感染症を予防および治療する組み合わされた化合物の能力を増強することを見出した。本発明の化合物は、112.027 amu、126.032 amu、155.095 amu、160.087 amu、166.099 amu、および507.342 amuの精密質量でサンブクス・ニグラ中に見いだされる化合物によって定義されるバイオマーカー化合物を含む。これらの化合物は、合成的に生成されてもよく、または生物、例えば、しかしこれに限定されないが、サンブクス・ニグラから単離されてもよい。組成物は、358.146 amu、478.295 amu、および606.436 amuの精密質量でサンブクス・ニグラ中に見いだされるバイオマーカー化合物をさらに含有し得る。化合物は、当業者に公知の方法によって特徴付けられ得る。
【０１１０】
本明細書に記載される精密質量および相対存在量は、特定の機器および特定の設定を使用する実験に基づき、機器ごとに変化し得る。各測定において変動性がある。従って、精密質量および相対存在量は、当業者によって理解されるように、近似であると定義される。一つの非限定的な態様において、これらの用語は、20%以内、好ましくは10%、好ましくは5%以内、より好ましくは1%以内、最も好ましくは0.5%以内であるように定義される。一つの非限定的な態様において、精密質量は、+/- 20 mmu以内、好ましくは10 mmu、より好ましくは5 mmu以内、最も好ましくは1 mmu以内の誤差を有する。一つの非限定的な態様において、相対存在量は、+/- 20%、好ましくは10%、好ましくは5%以内、より好ましくは1%以内、最も好ましくは0.5%以内の誤差を有する。
【０１１１】
精密質量についての方法：化合物を特徴付けし、相対存在量を、飛行時間/質量分析(TOF-MS)と組み合わされたリアルタイム直接分析(DART)イオン源を使用して決定した。具体的には、DART TOF-MSは、Jeol USA (Peabody, MA)製のJEOL DART（商標）AccuTOF質量分析計(JMS-T100LC)であった。Dip-ITサンプラーおよびDip-ITサンプラーホルダー(ionSense（商標）)によってイオン流へサンプルを直接導入することによって、化合物の質量をサンブクス・ニグラ抽出物サンプルにおいて決定した。
【０１１２】
DARTイオン源についての設定は以下であった：
ガス：He
フロー：2.52 LPM @ 50 PSI
温度：250 C
ニードル電圧：3000V
グリッド電極電圧：250V
放電電極電圧：400V。
【０１１３】
JEOL AccuTOF MSについての設定は以下であった：
ピーク電圧：1000V
オリフィス1温度：120 C
検出器電圧：2600V
リフレクトロン電圧：990.0V。
【０１１４】
抽出物サンプルを、DART-TOF MSによって6つのレプリケートで分析した。これらの6つのレプリケートを分析し、抽出物の単一の、平均化され、フィルタリングされ、かつ統計的に有意なDARTフィンガープリントを作った。このプロセッシングされたフィンガープリントを、次いで、質量の比較によって生物活性マーカーの存在を決定するために使用した。これらの生物活性マーカーの最初の発見および同定に起因して、任意の抽出物または化学物質の混合物中のそれらの存在を決定するためにはシンプルな質量比較で十分であった。AccuTOFについて、その質量許容は20ミリ質量単位(mmu)未満である(予想される質量 +/-10 mmu)。同じ抽出物およびイオン源を前提として、他のTOF質量分析計はより高いまたはより低い質量許容を有し得る。
【０１１５】
相対存在量についての方法：サンプル調製はDARTでのシンプルな分析のためには必要とされないが、クルクミンがドープ／スパイクされた溶液を、既知量に対する定量化によって試験組成物の相対存在量を決定するために使用した。ルチンなどの、周知でありかつニワトコ中に天然に存在する標準は、様々な影響（成育条件、収穫時期、植物健康など）を考慮すると変動するだろう。バイオマーカーを定量化する目的のためには、ルチン(または他の天然に生じる標準)の自然な変動は、バイオマーカーの絶対的な定量化についての基礎として使用することを許容できないものにする。その一貫性のなさを除去するために、ニワトコに対して天然ではない化合物(この場合、クルクミン)を、生物活性分子の定量的化学的プロフィールについての基礎として使用した。
【０１１６】
不明の濃度の本明細書に開示されるバイオマーカーを含むサンプルの相対存在量を決定するために、開示される組成物の1 mg/mlサンプルに、0.01 mg/mlクルクミンをドープ／スパイクした。次いで、上記で使用したDART-TOF法によって、サンプルを分析した。
【０１１７】
表1は、9個全てのバイオマーカーを含む組成物の非限定的な好ましい態様中で見いだされる本明細書に開示されるバイオマーカーの相対存在量を開示する。
【０１１８】
（表１）0.01 mg/mlクルクミンがスパイクされた1 mg/mlの組成物を使用して決定された好ましい活性組成物中のバイオマーカーの相対存在量
2018526444.tif 000003
【０１１９】
実施例2
(実施例3〜8についての製剤)
インビトロおよびインビボ抗ウイルス活性を有するバイオマーカー1〜9を含む用量が信頼できるニワトコ抽出物を、概して、Fink et al. 2009およびRoschek Jr. et al. 2009に記載される方法に従って生成した。
【０１２０】
概して、ニワトコ果実(サンブクス・ニグラL.)をすりつぶし、EtOH:H2O(4:1, v/v)で抽出した。収集されたフラクションを50℃で一晩乾燥し、結晶性粉末を得た。手順を複数回繰り返し、抽出物の再現性を確認した。
【０１２１】
実施例3
(安全性)
HSRx 351を試験し、インビトロで細胞毒性を確認した。標準ミトコンドリアレダクターゼ活性アッセイ(MTT)を使用して、HSRx 351は毒性の徴候を示さないと確認された。MTTアッセイはMDCK細胞中での細胞代謝を測定した。試験したいずれの濃度(0.02 mg/ml〜2.4 mg/ml)でも毒性は示されなかった。
【０１２２】
実施例4
(バイオアベイラビリティー)
HSRx 351を試験し、175 mgのHSRx 351を含有する経口ロゼンジおよび350 mgのHSRx 351を含有するドリンクを使用して、ヒト対象中でのバイオアベイラビリティーを決定した。バイオマーカーが、早くも摂取の20分後にヒト対象の血液中に見られ、一方、一部が4時間にわたって血流中に残ったと決定された。手順および結果はRoschek and Alberte 2008に記載されており、結果を下記表2、図8A、および図8Bに示す。
【０１２３】
ロゼンジ − 簡潔には、6人の対象に、研究の開始前に24時間、フラボノイドを含まない食事をさせた。血液サンプルを、0〜480分間の間、いくつかの時間間隔で収集した。対象に、時間0の直後に、175 mgのHSRx 351を含有するロゼンジを与え、ロゼンジを口腔内で徐々に溶解させた。
【０１２４】
ドリンク − 簡潔には、1人の対象は、血液収集の開始およびドリンクの摂取前に24時間、絶食した。研究の経過中、対象は、フラボノイドを含まない食物および水のみを受容した。血液サンプルを、0〜360分間の間、いくつかの時間間隔で収集した。対象に、時間0の直後に、合計350 mgのHSRx 351を含有した2つのロゼンジをその中に溶解された状態で含有した8オンスドリンクを与えた。
【０１２５】
（表２）ロゼンジを口腔中で溶解させることによってまたは溶解されたロゼンジを摂取することによって経口的に送達されたHSRx 351中のバイオマーカー6、7、および9のパーセントバイオアベイラビリティー(Roschek and Alberte 2008から引用)
2018526444.tif 000004
【０１２６】
実施例5
(インフルエンザ感染症および／またはインフルエンザ様症状の治療)
バイオマーカー1〜9を含む開示される組成物の好ましい態様である、HSRx 351を、組成物の抗ウイルス特性およびヒト対象におけるインフルエンザの症状を軽減する効能を確認するために試験した。
【０１２７】
ヒト研究 − ヒト研究について、6つのフルーおよび／またはフルー様症状を治療するHSRx 351の能力を評価した。研究は、HSRx 351が6つ全ての症状を減らすことを示した。使用した方法論はKong 2009に記載されている。
【０１２８】
治療：簡潔には、HSRx 351組成物を、合計175 mgのバイオマーカー1〜9を含有する徐々に溶解するロゼンジとして製剤化した。HSRx 351を欠いたことを除けば外見、味および組成が同一のプラセボロゼンジを、同様のパッケージングで供給した。無作為化・二重盲検・プラセボ対照パイロット臨床試験を行い、フルーおよび／またはフルー様症状の治療についての試験組成物の効能を評価した。24時間未満の間フルー症状を示したが他の点では健康な64人のボランティア(年齢の範囲16〜60歳)を、研究に包含した。参加者は、以下の症状のうち少なくとも3つを有した：熱、頭痛、筋肉痛、咳、粘液流出、および鼻閉。妊娠中であった、授乳中であった、慢性疾患に罹患していた、細菌感染症の疑いがあった、別の臨床試験に参加していた、またはフルー薬物治療、抗ウイルス療法もしくはインフルエンザ予防接種を最近受けた患者は、研究から除外された。患者に、各食事前に1つおよび就寝前に1つ、2日間1日当たりHSRx 351ロゼンジ(n=32)またはプラセボロゼンジ(n=32)のいずれかを4つ服用するように命じた。治験責任医師が患者を研究へ登録すると決定した直後に、薬剤の最初の用量を投与した。
【０１２９】
評価：6つのフルー様症状の重症度をアセスメントし、HSRx 351の効能を確認した：熱、頭痛、筋肉痛、咳、粘液流出、および鼻閉。プラセボおよび治療群が臨床的に比較可能であったかどうかを確認するために、患者の症状を、0 =問題無しから10 =顕著な問題までの視覚的アナログスケール(VAS)において、治療開始時にアセスメントした(ベースライン)。その後、患者に、2日間の治療中、ロゼンジの投与後1日4回、VASによって症状を自己評価し、症状改善を採点するように指示した。アセスメントを統計解析のために使用した。
【０１３０】
統計解析：連続的であると見なされた変数を、スチューデントのt分布法を使用して構築された95%信頼区間を伴って、平均値として表した。標準偏差および総範囲を分布の指標として使用した。群間解析および郡内解析の両方を、5%の有意水準で両側検定を使用して行った。群間および郡内の両方を比較するために、繰り返し測定を伴う分散分析モデルを使用して、連続的に分布した変数を解析した。
【０１３１】
結果：プラセボ群およびHSRx 351治療群の間で人口統計学的特徴における明らかな差は観察されなかった(表3)。最初の治療前に、患者のフルー様症状を評価した(表4)。熱についての平均VASスコア(p=0.0256)を除いて、最初の治療前の大抵の症状の平均VASスコアは、2つの群間で有意差を示さなかった(p>0.05)(表5A)。
【０１３２】
（表３）包含された患者の人口統計学的特徴(Kong 2009から引用)
2018526444.tif 000005
【０１３３】
（表４）研究の開始時の治療群および対照群における症状の分布(Kong 2009から引用)
2018526444.tif 000006
【０１３４】
熱：研究の開始時に、HSRx 351群中の32人中15人(46.9%)の患者が、プラセボ群中の32人中9人(28.1%)の患者が熱を有した(表4)。温度は37.3〜38.8℃の範囲であった。治療の最初の24時間後、HSRx 351群は、2.67 ±1.80から0.47 ±0.64(p<0.0001)への平均VASスコアの減少によって証明されたように、熱の有意な減少を示し(図1)、熱患者の60%が平熱へ戻った(図2)。HSRx 351群中の熱を有した全ての患者が48時間以内に平熱へ戻った(図2)。プラセボ群において、大多数の患者は、48時間治療期間以内に熱のいかなる改善も示さず、この群における2人の患者のみ(22%)が平熱へ戻った(図2)。
【０１３５】
頭痛：研究の開始時に、両方の群における全ての患者が頭痛を報告した(表4)。治療の24時間を通して、HSRx 351群は頭痛症状の有意な減少を示した。平均VASスコアは4.47 ±2.14から1.53 ±1.41(p<0.0001)へ減少した(図1)。48時間までに、HSRx 351群についての平均VASスコアは0に近くなり(0.28 ±0.63)(図1)、この群における患者の78%は頭痛を有さず(図2)、一方、残りの22%は軽度の頭痛(VAS=1)しか報告しなかった。対照的に、プラセボ群において頭痛はより重篤になり、ここで、平均VASスコアは、48時間治療期間にわたって3.78 ±1.66から5.25 ±1.34(p<0.0001)へ増加した(図1)。プラセボ群におけるいずれの単一の個々の対象によっても、頭痛の改善は報告されなかった。
【０１３６】
筋肉痛：両方の群における患者の90%超が筋肉痛を報告した(表4)。HSRx 351群における平均VASスコアは、24時間以内に2.87 ±2.13から1.19 ±1.05(p=0.0002)へ減少し(図1)、これは症状の有意な改善を示している。48時間までに、患者の87%は筋肉痛から完全に回復し(図2)、平均VASスコアは0.16 ±0.45に達した(図1)。プラセボ群は、平均VASスコアが48時間時に2.13 ±2.10から3.47 ±1.50(p=0.0013)へ増加したように、筋肉痛の悪化を報告した(図1)。
【０１３７】
鼻閉：HSRx 351群における全ての患者およびプラセボ群における患者の87.5%は、研究への登録時に、鼻閉を報告した(表4)。治療の24時間までに、HSRx 351群は症状の有意な改善を示した。この群についての平均VASスコアは、4.03 ±2.10から1.47 ±1.14(p<0.0001)へ減少した(図1)。48時間までに、平均VASスコアは0.56 ±0.62へ低下し(図1)、患者の50%は症状を有さなかった(図2)。対照的に、プラセボ群における鼻閉は、48時間時に、大抵の個人において悪化した。この群における平均VASスコアは3.30 ±1.71から4.26 ±1.81(p=0.049)へ増加した(図1)。プラセボ群における患者30人中2人(7%)のみが鼻閉の緩和を示した。
【０１３８】
鼻粘液流出：鼻粘液流出は、両方の研究群の患者においてあまり一般的でなくかつあまり重篤でない症状であった。HSRx 351群における患者の50%のみおよびプラセボ群における患者の34.3%が、鼻粘液流出を報告した(表4)。HSRx 351群における患者は24時間治療にわたっていくらかの改善を示し(図1)、改善は有意ではなかった(p=0.26)。治療の48時間までに、HSRx 351群は有意な症状改善を示し、平均VASスコアは1.94 ±1.61から0.50 ±0.52(p=0.0019)へ減少し(図1)、患者16人中8人(50%)が症状を報告せず、残りの50%が軽度の症状(VAS=1)しか報告しなかった。プラセボ群において、16人中1人(6%)のみが症状改善を報告したが、残りの15人の患者は症状改善を示さなかった。
【０１３９】
咳：両方の群における患者の50パーセントが研究への登録時に咳を報告した(表4)。HSRx 351群において、咳は他の症状よりも長く持続した。この群について24時間治療期間にわたって有意な改善は記録されなかった(図1)。48時間までに、患者16人中5人(31%)が咳の軽減を示し、6人の患者(37%)が症状改善(VAS=1)を示した。平均VASスコアは2.07 ±2.19から1.00 ±0.926へ減少したが(図1)、この減少は統計的に有意ではなかった(p=0.093)。しかしながら、群間比較(表5C)は、HSRx 351群において咳も有意に改善された(p<0.0001)ことを明らかにした。プラセボ群において、患者16人中14人(87%)が症状の悪化を示し、残りの2人の患者(13%)は僅かな症状改善を示した。プラセボ群における平均VASスコアは2.19 ±1.47から3.69 ±1.25(p=0.0041)へ増加した(図1)。
【０１４０】
有害効果：治療に関連する有害反応はいずれの群によっても報告されなかった。
【０１４１】
結果：結果は、HSRx 351がフルー様症状を迅速に軽減し得ることを示している。HSRx 351群は、治療開始の24時間以内に症状の有意な改善を示し、一方、プラセボ群は症状改善をそれほど示さなかった。24時間以内に、全身症状(熱、頭痛、および筋肉痛)ならびに鼻症状(鼻閉)が全て、HSRx 351治療群において有意に減少した。咳および鼻粘液流出は、24時間時には有意な改善を示さななかったが、治療の48時間以内に改善を示した。治療の48時間時に、HSRx 351治療患者のほぼ90%が症状を有さなかったかまたは軽度の症状(VAS=1)しか有さなかった。以前に、ニワトコシロップ剤が、フルー症状の期間を3〜4日間短縮することが示された(Zakay‐Rones et al. 1995; Zakay‐Rones et al. 2004)。比較して、2〜2.5日間のみの短縮が、ノイラミニダーゼ阻害薬であるオセルタミビルおよびザナミビル治療について報告された(Monto et al. 1999; Makela et al. 2000; Nicholson et al. 2000)。これらの結果は、驚くべきことに、HSRx 351が、症状を改善しそしてインフルエンザの期間を短縮する点で、現在使用されている抗ウイルス薬またはニワトコシロップ剤と比べて同様のまたはさらに優れた効能を有することを示している。
【０１４２】
ここでの臨床研究において、HSRx 351を受容した患者は、抗ウイルス治療において一般的な2つの有害事象である(Nicholson et al. 2000)、悪心および嘔吐を含むいかなる有害事象も報告しなかったため、HSRx 351は安全であることが示された。
【０１４３】
（表５）治療の開始(A)、24時間(B)および48時間(C)の時点でのHSRx 351治療群およびプラセボ治療群のVASスコアの比較(Kong 2009から引用)
2018526444.tif 000007
スコア0は問題が無いことを示し、スコア10は顕著な問題があることを示す
【０１４４】
実施例6
(タミフル（登録商標）と組み合わせてのインフルエンザ感染症および／またはインフルエンザ様症状の治療)
インフルエンザ症状を有したが他の点では健康な対象を登録し、タミフル（登録商標）と組み合わせた場合のインフルエンザまたはインフルエンザ様疾患の徴候および症状の改善に対するHSRx 351の効果を評価した。研究は、無作為化・一重盲検・プラセボ対照・比較治療臨床研究およびアセスメントであった。
【０１４５】
方法論：包含／除外基準の全てを満たし、かつ、インフルエンザまたはインフルエンザ様疾患と一致した症状を示した58人の対象を、治療群DまたはCに登録した。除外基準は、16歳未満および70歳超の対象、または、妊娠中であった、授乳中であった、慢性疾患に罹患していた、細菌感染症の疑いがあった、別の臨床試験に参加していた、またはフルー薬物治療、抗ウイルス療法もしくはインフルエンザ予防接種を最近受けた個人を含んだ。
【０１４６】
対象を無作為化し、5日間の治療レジメンに置いた。群Cは、5日間1日2回、カプセル形態の75 mgのタミフル（登録商標）(リン酸オセルタミビル)を受容した29人の対象を含有した。群Dは、5日間1日2回、カプセル形態の75 mgのタミフル（登録商標）(リン酸オセルタミビル)およびHSRx 351の2つの175 mgロゼンジを受容した29人の対象を含有した。スクリーニング受診後、対象は第3、5、および10日に受診のために戻った。
【０１４７】
治験責任医師がアセスメントする症状および全体的な健康に基づいて、治療の効能を評価した。アセスメントされた症状は以下であった：1)痛みおよび疼痛；2)咳の程度；3)咳の頻度；4)睡眠の質；5)気道中の粘液流出；6)鼻閉；および7)熱低下。症状をベースライン受診時にアセスメントし、2つの群が研究の開始時に臨床的に比較可能であったかどうかを確認した。対象は、ベースライン受診時に、および次いで、5日間治療中に1日4回、および治療終了後5日間中に1日2回、0 =問題無しから10 =顕著な問題まで、視覚的アナログスケール(VAS)において症状を採点した。対象はまた、いかなる有害事象も記録するように指示された。再受診時に、研究者は、同じスケールを使用して対象をアセスメントした。
【０１４８】
統計解析／結果 − 生存分析を行い、群CおよびDのインフルエンザ症状関数を経時的に比較した。生存関数およびハザード関数が計算された時間依存事象は、各対象についての最終データ収集受診であった。一般化線形混合モデルを実行し、タミフル（登録商標）(リン酸オセルタミビル)のみの治療群Cと比べての併用治療群Dにおけるより少ない有害事象という仮説を試験した。β重みおよびR2のようなパラメータ推定値を、5%に設定されたP値有意水準と共に評価した。
【０１４９】
結果：HSRx 351の追加の使用は、咳の程度の軽減を除いて（ここで、両方の群が有意差を示さなかった(両方とも誤差の範囲であった)）、全てのパラメータにおいて、対象がインフルエンザおよびインフルエンザ様疾患から回復する速度を増加させた。表6Bを参照のこと。併用治療はまた、フルーおよびインフルエンザ様疾患の症状を減少させ、タミフル（登録商標）の使用からの有害な副作用を減少させた。表6Aおよび6Bを参照のこと。
【０１５０】
（表６Ａ）タミフル（登録商標）と組み合わせてのインフルエンザ感染症および／またはインフルエンザ様症状の治療の臨床研究についての予備結果
2018526444.tif 000008
【０１５１】
（表６Ｂ）タミフル（登録商標）と組み合わせてのインフルエンザ感染症および／またはインフルエンザ様症状の治療の臨床研究についての予備統計結果
2018526444.tif 000009
【０１５２】
実施例7
(インフルエンザ感染症の予防)
HSRx 351、バイオマーカー6、およびバイオマーカー7のアナログ、3-ヒドロキシフラバノン(「バイオマーカー7アナログ」)を試験し、インビトロおよびインビボの両方での組成物のインフルエンザウイルス感染症予防特性を確認した。HSRx 351は、培養下のメイディン・ダービー・イヌ腎臓上皮(MDCK)細胞のH1N1、H3N2、およびH5N1感染を予防し、赤血球へのウイルス結合を妨げると確認された。
【０１５３】
血球凝集抑制アッセイにおける予防 − 血球凝集は、インフルエンザウイルスなどのいくつかのウイルスにおいて見出され得る、ヘマグルチニンへの赤血球の結合を伴う凝集のある形態である。ウイルスの高濃度では、赤血球は、ウイルスのヘマグルチニンタンパク質に結合し、溶液中に懸濁され続ける。ウイルスのより低濃度では、赤血球は、代わりに、溶液の底に沈み得る。ここで、HSRx 351は、インフルエンザウイルスのヘマグルチニンタンパク質への赤血球の結合を妨げると確認された(図4)。
【０１５４】
方法：ウェルをリン酸緩衝食塩水で調製した。希釈が左から右へ増加する(ウイルスの濃度は左から右へ減少する)、インフルエンザウイルスA(A/PR/8/34)(ATCC)の連続希釈物を、リン酸緩衝食塩水(PBS)中に赤血球のみを含有しかつウイルスを含有しなかった陰性対照行(上部行)を除いて、ウェルの全ての行にわたって調製した。ヘマグルチニンを阻害する一定濃度の抗体(pAB)を、ウイルスも含有する陽性対照行(上部から第3番目の行)へ添加した。HSRx 351(HS9)を、3つの試験行(3つの下部行)へ一定濃度で添加し、血球凝集を阻害するHSRx 351の能力を三つ組みで試験した。陰性 + ウイルス対照行(上部から第2番目の行)を、pABもHSRx 351も添加しないが、他の行におけるウェルと同じ濃度でPBS中にウイルスを希釈することによって作った。一定濃度の赤血球(RBC)を全てのウェルへ添加した。血球凝集のレベルを各ウェルの目視検査によって決定した。赤血球が底で沈み、濃赤色ドットを形成しているウェルは、血球凝集がほとんどない〜全くない、および、赤血球へのウイルス結合がほとんどない〜全くないことを示す。赤血球が濃赤色ドットを形成するように沈んではいないが、代わりに、溶液中に分散されているウェルは、血球凝集および赤血球へのウイルス結合を示す。血球凝集の阻害は、試験ウェル(3つの下部行)中の赤血球の分散の量と、同じウイルス希釈物を含有する陰性 + ウイルス対照ウェル(上部から第2番目の行)とを比較することによって、決定することができる。
【０１５５】
結果：陰性対照行(上部行、RBC + PBS)は、PBS単独中では赤血球は血球凝集できないことを示した。陰性 + ウイルス対照行(上部から第2番目、ウイルス + PBS + RBC)は、ウイルスが赤血球の血球凝集を引き起こすことができ(左の2つのウェル中の拡散した赤色を参照のこと)、しかし、ウイルス濃度の減少は血球凝集の量を減少させるため(中央ウェル中のあまり拡散していない赤色、および右の2つのウェル中の、ほとんど拡散していない〜全く拡散してない赤色を参照のこと)、そのような能力はウイルス濃度に依存することを示した。陽性対照行(上部から第3番目の行、pAb + ウイルス + RBC)は、一定濃度のpABが、陰性 + ウイルス対照行と比較した場合、ある濃度のウイルスでの血球凝集を阻害することを示している（左から第2および第3番目のウェルを参照のこと）。HSRx 351を含む3つの試験行(3つの下部行、HS9 + ウイルス + RBC)は、一定濃度のHSRx 351(HS9)が、pABと同様に血球凝集を阻害することを示した（左から第2および第3番目のウェルを参照のこと）。従って、HSRx 351は、血球凝集を減少させることが示され、HSRx 351の成分がインフルエンザウイルスAのヘマグルチニンに結合し、赤血球へのウイルスの結合を妨げ得ることを示唆している。
【０１５６】
細胞培養研究における予防 − ウイルスフォーカス減少感染アッセイを使用し、ウイルス感染症の予防を確認した。方法は、Roschek Jr 2009に記載されるものに従った。簡潔には、HSRx 351、バイオマーカー6アナログ、バイオマーカー7アナログ、または陽性対照：オセルタミビルもしくはアマンタジンを、EtOH中に溶解し、次いで、ダルベッコ改変イーグル培地(DMEM)中に希釈した。フォーカス形成単位(FFU)のウイルス株：H1N1ウイルス株A/PR/8/34(ATCC, Manassas, VA; ATCC No. VR-1469)；H3N2(ATCC)；またはH5N1(ATCC)；を、HSRx 351、バイオマーカー6アナログ、バイオマーカー7アナログ、または対照希釈物と共に室温で1時間インキュベートした。次いで、FFUを、室温で1時間、コンフルエントなMDCK細胞に感染させた。次いで、細胞をFormalde-フレッシュで固定し、EtOHで透過処理した。ヤギインフルエンザAウイルスIgGポリクローナル抗体(H&L)、およびウサギ抗-ヤギホースラディシュペルオキシダーゼコンジュゲート化アフィニティー精製抗体(Chemicon, Temecula, CA)、ならびにAEC色素原基質(Dako, Carpinteria, CA)を使用して、FFUを視覚化した。
【０１５７】
結果：HSRx 351、バイオマーカー6アナログ、またはバイオマーカー7アナログのいずれかと共にウイルスをプレインキュベーションすると、試験化合物／組成物へ予め曝露されなかったウイルスと比べて、MDCK細胞へ結合されるかつ／またはMDCK細胞中に見いだされるFFUを減少させた。ウイルスについてのインビトロHSRx 351 IC50値は、表7に示されるように決定された。さらに、H1N1感染の100%阻害が1,000μg/mlで達成された(図3)。さらに、バイオマーカー6アナログおよび7アナログについての活性は、HSRx 351中のバイオマーカーの濃度に基づいてHSRx 351の全活性を説明しないことがわかった。実際に、HSRx 351組成物は、組成物中のバイオマーカー6またはバイオマーカー7の濃度によって予想されるものと比べて、それぞれ、18倍を超えておよび500倍を超えて、より高い活性を有した(図5および図6)。これは、HSRx 351のバイオマーカー間で相乗効果が存在し得ることを示唆している。
【０１５８】
（表７）いくつかのインフルエンザウイルスに対するHSRx 351、バイオマーカー6アナログ、およびバイオマーカー7アナログの活性(Roschek Jr 2009から一部引用)
2018526444.tif 000010
【０１５９】
実施例8
(タミフル（登録商標）と組み合わせてのインフルエンザ感染症の予防)
ヒト患者における予防 − ヒト研究について、フルーおよび／またはフルー様症状を予防するタミフル（登録商標）と組み合わせてのHSRx 351の能力を評価した。健康な対象を登録し、タミフル（登録商標）と組み合わせた場合の、インフルエンザを予防することに対するHSRx 351の効果を評価した。研究は、無作為化・一重盲検・プラセボ対照・比較治療臨床研究およびアセスメントであった。研究は、組み合わせがフルーおよび／またはフルー様症状を予防したことを示した。
【０１６０】
方法論：簡潔には、HSRx 351組成物を、75mgのタミフル（登録商標）と組み合わせて投与される合計175 mgのバイオマーカー1〜9を含有する徐々に溶解するロゼンジとして製剤化した。タミフル（登録商標）(非盲検)を伴う、無作為化・一重盲検・比較治療臨床研究およびアセスメントを行い、フルーおよび／またはフルー様症状の予防についての試験組成物の効能を評価した。
【０１６１】
包含／除外基準の全てを満たし、かつ、研究の開始時にQuickVueインフルエンザA+Bキット(Quidell Corporation, SAN DIEGO, CA)によってインフルエンザAまたはBについて2回陰性結果を示し、かつ、インフルエンザについて他のいかなる症状も示さなかった、健康な個人を、予防群CまたはDへ登録した。除外基準は、16歳未満および70歳超の対象、または、妊娠中であった、授乳中であった、慢性疾患に罹患していた、細菌感染症の疑いがあった、別の臨床試験に参加していた、またはフルー薬物治療、抗ウイルス療法もしくはインフルエンザ予防接種を最近受けた個人を含んだ。
【０１６２】
対象を無作為化し、10日間の予防レジメンに置いた。群Cは、タミフル（登録商標）(リン酸オセルタミビル)単独を受容した30人の対象を含有した。群Dは、タミフル（登録商標）(リン酸オセルタミビル)およびHSRx 351を受容した30人の対象を含有した。両方の群における対象に、1日当たり75mgのタミフル（登録商標）(リン酸オセルタミビル)を含有する1カプセルを服用するように命じ、群D中の対象には、タミフル（登録商標）(リン酸オセルタミビル)の服用の直後に、各175 mgのHSRx 351を含有する2つのロゼンジをさらに服用するように命じた。処置レジメンに10日間従った。治験責任医師が患者を研究へ登録すると決定した直後に、薬剤の最初の用量を投与した。スクリーニング受診後、対象は、第3、5、および10日に、受診および評価のために戻った。
【０１６３】
評価：治験責任医師がアセスメントする症状および全体的な健康に基づいて、処置の効能を評価した。アセスメントされた症状は以下であった：1)痛みおよび疼痛；2)咳の程度；3)咳の頻度；4)睡眠の質；5)気道中の粘液流出；6)鼻閉；および7)熱低下。症状をベースライン受診時にアセスメントし、2つの群が研究の開始時に臨床的に比較可能であったかどうかを確認した。対象は、ベースライン受診時に、および次いで10日間中に1日4回、0から10（0は症状無しであり、10は顕著な問題である）まで症状を採点した。対象はまたいかなる有害事象も記録した。再受診時に、研究者は、同じスケールを使用して対象をアセスメントした。さらに、Becton Dickinson Flexible Flocked Nasal Swabを使用し、対象の鼻スワブを採取し、リアルタイムポリメラーゼ連鎖反応(PCR)手順を使用して第1、2、3および4受診時(それぞれ、第1、3、5および10日)のインフルエンザウイルス感染症の存在および量(もしあれば)を決定した。
【０１６４】
統計解析 − 群Dにおける対象はインフルエンザウイルス感染症に罹患しなかったため、統計的な比較研究を行うことができなかった。
【０１６５】
結果：CDCが中程度の流行年(2014-2015)と分類した年に、研究を行った。インフルエンザ様疾患は、連続14週間、2%のナショナルベースラインを超えて上昇し、6%のピークに達した。デュプリケートで採取および分析されたQuickVue鼻スワブは、研究の開始時に患者について全て陰性であった。第1、3、5および10日に患者から採取した鼻スワブのPCR分析によって、いずれの群の患者も研究の経過にわたってフルーを罹患しなかったことが確認された。
【０１６６】
5つの医療関連有害事象が、研究の経過にわたって群C(タミフル（登録商標）単独)において報告され、一方、1つのみの医療関連有害事象が群D(タミフル（登録商標）およびHSRx 351)において報告された。
【０１６７】
結果は、タミフル（登録商標）と組み合わせてのHSRx 351は、フルーおよびフルー様感染症を予防することができることを示している。研究の間、タミフル（登録商標）と組み合わせてのHSRx 351群中の対象は、フルーに罹患しなった。さらに、HSRx 351は、タミフル（登録商標）単独の服用で生じた有害事象の数を減少させることが示された。
【０１６８】
実施例9
(相乗効果)
前述したように、本明細書における実験結果は、本明細書に開示されるバイオマーカー間の相乗作用を示唆している(図5および図6)。さらに、本明細書に開示されるバイオマーカーの予想される作用方法に起因して、バイオマーカーは、別個のメカニズムによって作用する他の抗ウイルス化合物と相乗的に作用すると考えられる。そのような相乗作用をさらに確認し、他の化合物／組成物との相乗作用を確認するために、1つまたは複数の本明細書に開示されるバイオマーカーを、1つまたは複数の本明細書に開示される他のバイオマーカー、および／または1つまたは複数の抗インフルエンザ薬と組み合わせて試験することができる。組み合わせ研究は、細胞培養、動物研究、ヒト研究などにおいて、組み合わせの、インフルエンザウイルス感染症の治療および／または予防、細胞生存率、細胞毒性、副作用などについての競合的な、相加的な、または相乗的な相互作用を示すことができる。研究の非限定的な例としては、上記およびここに記載されるものならびに当業者に公知のものが挙げられ得る。非限定的な例として、HSRx 351およびオセルタミビルの組み合わせが試験され得る。
【０１６９】
組み合わせの競合的な、相加的な、または相乗的な相互作用を確認するために行われ得る組み合わせアッセイの非限定的な例は、薬物相互作用および相乗効果を調べるために一般的に使用される相互作用マトリックスを利用し得る。一つの場合において、相互作用マトリックスは、細胞培養におけるインフルエンザウイルス感染の予防研究において使用される。簡潔には、実験は25個のサンプルを有し得る：第1試験化合物／組成物(例えば、HSRx 351)単独を含む4個、第2試験化合物／組成物(例えば、オセルタミビル)単独を含む4個、化学物質を含まない1個、ならびに第1および第2試験化合物／組成物の組み合わせであり得る残りの16個。出発濃度(例えばHSRx 351について1 mg/ml)からの第1試験化合物／組成物の1:4希釈物、および出発濃度(例えばオセルタミビルについて1.0μg/ml)からの第2試験化合物／組成物の1:4希釈物が、試験され得る。インフルエンザウイルスの感染および培養を、阻害化合物の常時存在下で生じさせ得る。この方法で、実験は、予防的処置に置かれながら感染される患者をシミュレートし、第1試験化合物／組成物単独、第2試験化合物／組成物単独、およびある範囲の濃度でのこれら2つの組み合わせによる感染の予防を試験する。データは、競合的な、相加的な、または相乗的な相互作用を確認するためにBerenbaumの方法論で分析され得る(Berenbaum 1977)。
【０１７０】
実施例10
(インフルエンザへの直接結合アッセイ)
上記に示されたように、HSRx 351は、インフルエンザウイルスを使用する血球凝集を阻害することが示され、これは、ウイルスヘマグルチニンタンパク質によってのみ媒介され(図4)、インフルエンザヘマグルチニンへの組成物の結合を示唆している。さらに、インフルエンザウイルスおよびヘマグルチニンへのHSRx 351中の試験バイオマーカーの直接結合を、Roscheck Jr 2009に記載される方法を使用して評価した。バイオマーカー3、6、7アナログ、および9はH1N1ウイルス粒子に結合し、バイオマーカー6および7はヘマグルチニンに結合すると予想されることが示された。使用される方法論は、Roschek Jr 2009に記載されている。
【０１７１】
ウイルス粒子 − 簡潔には、H1N1ウイルス粒子を、HSRx 351または合成バイオマーカー6もしくは7アナログと共にインキュベートし、HSRx 351中の化合物の結合を可能にした。インキュベーション後、未結合化合物を、リン酸緩衝食塩水(PBS)で100 kDa分子量カットオフメンブレンフィルター(Amicon 100 kDaフィルター, Ultracel PL-100; Millipore Corp. Billerica, MA)を通してウイルス粒子を3回洗浄することによって、除去した。次いで、ウイルス粒子を収集し、100% EtOH中に固定した。固定されたウイルス粒子、および未結合化学物質を含有する洗浄フラクションを収集し、比較のためにDART TOF-MSによって直接分析した。
【０１７２】
結果：バイオマーカー3、6、7、および9は、洗浄フラクションと比べて、固定されたウイルスサンプル中に有意に富化されたとDART TOF-MSによって同定された(バイオマーカー6およびバイオマーカー7についてはRoschek Jr 2009を参照のこと)。
【０１７３】
ヘマグルチニン − 簡潔には、Chem 3D Ultra (Cambridgesoft, Cambridge, MA)分子モデリングパッケージを使用する三次元自由エネルギー最小化を、分子力学ツー・レベル・オブ・セオリーを使用してバイオマーカー6および7の自由エネルギー最小化のために用いた。
【０１７４】
結果：最小自由エネルギーモデリング解析によって、バイオマーカー6および7のAおよびB環が、それぞれ、10.5Åおよび109Åのフェノール環間距離を有する軸を形成することが明らかとなった。この距離は、宿主細胞受容体結合およびウイルス侵入を担う、インフルエンザウイルスのヘマグルチニン(HA)結合ドメインポケットのサイズ制限(14〜15Å)内に十分にある。バイオマーカー6のフェノール領域は、ウイルスマンノースリッチHA結合ドメインへ結合する可能性が最も高い。
【０１７５】
実施例11
(ジカウイルスの阻害)
HSRx 351を試験し、インビトロでジカウイルス感染症予防特性を確認した。HSRx 351は、100μg/ml未満およびおよそ80μg/mlのIC50で、培養下のアフリカミドリザル線維芽細胞様腎細胞(Vero E6細胞)のジカ感染を予防すると確認された。
【０１７６】
細胞培養研究におけるジカ予防 −ウイルスプラーク減少中和試験(PRNT)を使用し、ウイルス感染症の予防を確認した。簡潔には、HSRx 351を200μl DMSO中に溶解し、次いで、ダルベッコ改変イーグル培地(DMEM), pH 7.2中に希釈した。ジカウイルス株のプラーク形成単位(PFU)を、室温で1時間、HSRx 351または対照希釈物と共にインキュベートした。次いで、PFUを、室温で1時間、コンフルエントなVero細胞に感染させた。ニュートラルレッドでの染色によって、プラークを視覚化した。
【０１７７】
結果：HSRx 351と共にウイルスをプレインキュベーションすると、試験組成物へ予め曝露されなかったウイルスと比べて、Vero E6細胞へ結合されるかつ／またはVero E6細胞中に見いだされるプラーク形成単位(PFU)を減少させた。図7を参照のこと。ジカウイルスについてのインビトロHSRx 351 IC50値は、およそ80μg/mlであると決定された。さらに、ジカ感染の100%阻害が250μg/mlで達成された。
【０１７８】
実施例12
(他のエンベロープウイルスの阻害)
HSRx 351を試験し、エンベロープウイルスであるHIV(複数のサブタイプ)、単純ヘルペス1型(HSV-1)、およびデング(DEN-2)についてインビトロでウイルス感染症予防特性を確認した。HSRx 351は、表8に示されるようなウイルスの各々についてのIC50で、培養下の細胞の感染を予防すると確認された。これらの結果は、他のエンベロープウイルスの追加の結合、治療、予防、および阻害結果と組み合わせて、驚くべきことに、本明細書に開示される組成物が、エンベロープウイルスに対する広域抗ウイルス組成物であることを示している。
【０１７９】
細胞培養研究における感染予防 − ウイルスフォーカス減少感染アッセイを使用し、ウイルス感染症の予防を確認した。簡潔には、HSRx 351を100% DMSO中に溶解し、次いで、ダルベッコ改変イーグル培地(DMEM)中に希釈した。プラーク形成単位(PFU)またはフォーカス形成単位(FFU)の試験ウイルス株を、HSRx 351または対照希釈物と共に室温で1時間インキュベートした。次いで、PFU/FFUを、室温で1時間、HIVについてはコンフルエントなGHOST細胞(実験条件についてはFink et al., 2009を参照のこと)、HSV-1についてはVero細胞、またはデングウイルスについてはLLCMK2細胞に感染させた。次いで、細胞をFormalde-フレッシュで固定し、EtOHで透過処理した。デングウイルスに対するヤギIgGポリクローナル抗体(H&L)、およびウサギ抗-ヤギホースラディシュペルオキシダーゼコンジュゲート化アフィニティー精製抗体(Chemicon, Temecula, CA)、ならびにAEC色素原基質(Dako, Carpinteria, CA)を使用して、デング感染細胞中のFFUを視覚化した。光学顕微鏡を使用し、HSV-1についての感染率を決定した。蛍光顕微鏡を使用し、HIVについての感染率を決定した。
【０１８０】
結果：HSRx 351と共にウイルスをプレインキュベーションすると、試験組成物へ予め曝露されなかったウイルスと比べて、細胞へ結合されるかつ／または細胞中に見いだされるFFUおよびPFUを減少させた。HIV-1サブタイプB1、B2、C1、およびC2についてのインビトロHSRx 351 IC50値は、201μg/ml〜36μg/mlの範囲であると決定された。HSV-1についてのインビトロHSRx 351 IC50値は40μg/mlであり、DEN-2についてそれは63μg/mlであった。
【０１８１】
（表８）いくつかのエンベロープウイルスに対するHSRX 351の活性
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【０１８２】
実施例13
(デングウイルスへの直接結合アッセイ)
上記に示されたように、HSRx 351は、デングウイルスを阻害することが示され、デングへの組成物の結合を示唆している。さらに、デングウイルスへのHSRx 351の直接結合を評価した。HSRx 351中のいくつかの化合物がインビトロでデングウイルスに結合することが示された。
【０１８３】
ウイルス粒子 − 簡潔には、デングウイルス粒子(DEN-2)をHSRx 351と共にインキュベートし、HSRx 351中の化合物の結合を可能にした。インキュベーション後、未結合化合物を、リン酸緩衝食塩水(PBS)で100 kDa分子量カットオフメンブレンフィルター(Amicon 100 kDaフィルター, Ultracel PL-100; Millipore Corp. Billerica, MA)を通してウイルス粒子を3回洗浄することによって、除去した。次いで、ウイルス粒子を収集し、100% EtOH中に固定した。固定されたウイルス粒子、および未結合化学物質を含有する洗浄フラクションを収集し、比較のためにDART TOF-MSによって直接分析した。
【０１８４】
結果：バイオマーカー3、6、7、および9は、洗浄フラクションと比べて、固定されたウイルスサンプル中に有意に富化されたとDART TOF-MSによって同定された。
【０１８５】
実施例14
(ヒトライノウイルスの阻害)
HSRx 351を試験し、一般的にヒトに感染しかつ風邪と関連する非エンベロープウイルスであるヒトライノウイルス(HRV)についてインビトロでウイルス感染症予防特性を確認した。HSRx 351は、90μg/mlのIC50で、培養下のHeLa細胞のHRV-16感染を予防すると確認された。これらの結果は、インフルエンザおよびインフルエンザ様疾患治療および予防、インフルエンザウイルスについての阻害および結合研究と共に、驚くべきことに、本明細書に開示される組成物は、インフルエンザおよびインフルエンザ様疾患を治療および予防するために使用することができることを示している。
【０１８６】
細胞培養研究におけるヒトライノウイルス予防 − ウイルスフォーカス減少感染アッセイを使用し、ウイルス感染症の予防を確認した。簡潔には、HSRx 351を100% DMSO中に溶解し、次いで、ダルベッコ改変イーグル培地/F12(DMEM/F12), pH 7.2中に希釈した。HRV-16ウイルス株のプラーク形成単位(PFU)を、室温で1時間、HSRx 351または対照希釈物と共にインキュベートした。次いで、PFUを、室温で1時間、80%コンフルエントなHeLa細胞に感染させた。次いで、細胞をFormalde-フレッシュで固定し、EtOHで透過処理した。ヤギHRVウイルスIgGポリクローナル抗体(H&L)、およびウサギ抗-ヤギホースラディシュペルオキシダーゼコンジュゲート化アフィニティー精製抗体(Chemicon, Temecula, CA)、ならびにAEC色素原基質(Dako, Carpinteria, CA)を使用して、PFUを視覚化した。
【０１８７】
結果：HSRx 351と共にウイルスをプレインキュベーションすると、試験化合物／組成物へ予め曝露されなかったウイルスと比べて、HeLa細胞へ結合されるかつ／またはHeLa細胞中に見いだされるPFUを減少させた。ヒトライノウイルスについてのインビトロHSRx 351 IC50値は、90μg/mlであると決定された。
【０１８８】
本明細書において開示および特許請求した組成物および／または方法の全てを、本開示に照らして、過度の実験なしに実施および実行することができる。本発明の組成物および方法を好ましい態様によって説明してきたが、本発明の概念、趣旨および範囲から逸脱することなく、組成物および／または方法、ならびに本明細書に記載の方法の段階または段階の順序に変動を適用できることは、当業者には明らかであろう。より具体的には、化学的にかつ生理学的に関連する特定の薬剤で、同一のまたは同様の結果を達成しながら、本明細書に記載の薬剤を代用することができることは明らかであろう。当業者に明らかな全てのそのような同様の代用物および改変は、添付の特許請求の範囲により定義される本発明の趣旨、範囲および概念内にあると見なされる。
【０１８９】
参考文献
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【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８Ａ】
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【図８Ｂ】
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【国際調査報告】
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