(57)【要約】ＰＤＫ１によるＰＩＦ媒介性基質結合を阻害する化合物の使用法が記載され、上記方法は、ＲＳＫ２依存性またはＡＫＴ非依存性であるがん成長または増殖のインヒビターとして有用である。がんを処置するためのこのような方法における使用のためのこのような化合物の組成物もまた記載される。さらに別の局面において、本発明は、患者もしくは生物学的サンプル中でのがんの成長および生存に影響が及ぼされるキナーゼ活性化経路を阻害するための方法を提供し、上記方法は、式Ｉの化合物の有効な阻害量を、上記患者に投与するか、または上記生物学的サンプルと接触させる工程を包含する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
必要性のある被験体においてがんを処置するための方法であって、該方法において、がん成長または生存は、ＰＤＫ１−ＰＩＦ媒介性基質相互作用に依存し、該被験体に、本明細書で記載されるとおりの式Ｉの化合物：
【化２２】
2018538244.tif 000031
またはその薬学的に受容可能な塩の治療上有効な量を投与する工程を包含し、ここで：
Ｒ１は、水素もしくは必要に応じて置換されたＣ１−６脂肪族であるか、あるいは：
Ｒ１および環Ａ４上の置換基は、これらの間にある原子と一緒になって、窒素、酸素、もしくは硫黄から独立して選択される１〜３個のヘテロ原子を有する必要に応じて置換された５〜７員の部分不飽和もしくは芳香族の縮合環を形成し；
Ｘは、−Ｃ（Ｏ）−もしくは−Ｓ（Ｏ）２−であり、
Ｌ１は、共有結合であるか、またはＣ１−４アルキレン、Ｃ２−４アルケニレン、もしくはＣ２−４アルキニレンから選択される必要に応じて置換された二価の基であり、ここでＬ１の１個もしくはこれより多くのメチレン単位は、−Ｃｙ１−、−Ｏ−、−Ｓ−、−Ｎ（Ｒ２）−、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ２）−、−Ｎ（Ｒ２）Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ２）−、−Ｎ（Ｒ２）Ｃ（Ｏ）−、−Ｎ（Ｒ２）Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−ＯＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ２）−、−Ｓ（Ｏ）２−、−Ｓ（Ｏ）２Ｎ（Ｒ２）−、−Ｎ（Ｒ２）Ｓ（Ｏ）２−、−ＯＣ（Ｏ）−、または−Ｃ（Ｏ）Ｏ−によって必要に応じてかつ独立して置き換えられ；
Ｃｙ１は、フェニレン、３〜７員の飽和もしくは部分不飽和のカルボシクリレン、窒素、酸素、もしくは硫黄から独立して選択される１〜２個のヘテロ原子を有する４〜７員の飽和もしくは部分不飽和のヘテロシクリレン、または窒素、酸素、もしくは硫黄から独立して選択される１〜３個のヘテロ原子を有する５〜６員のヘテロアリーレンから選択される必要に応じて置換された二価の環であり；
各Ｒ２は、水素もしくは必要に応じて置換されたＣ１−６脂肪族であり；
Ａ１は、共有結合であるか、あるいは３〜７員の飽和もしくは部分不飽和の単環式カルボシクリレン、７〜１０員の飽和もしくは部分不飽和の二環式カルボシクリレン、窒素、酸素、もしくは硫黄から独立して選択される１〜２個のヘテロ原子を有する４〜７員の飽和もしくは部分不飽和の単環式ヘテロシクリレン、窒素、酸素、もしくは硫黄から独立して選択される１〜３個のヘテロ原子を有する７〜１０員の飽和もしくは部分不飽和の二環式ヘテロシクリレン、フェニレン、８〜１０員の二環式アリーレン、窒素、酸素、もしくは硫黄から独立して選択される１〜３個のヘテロ原子を有する５〜６員の単環式ヘテロアリーレン、または窒素、酸素、もしくは硫黄から独立して選択される１〜４個のヘテロ原子を有する８〜１０員の二環式ヘテロアリーレンから選択される必要に応じて置換された二価の環であり；
Ｌ２は、共有結合、アルキリデニレン、もしくは必要に応じて置換されたアルキレン鎖であり、ここでＬ２の１個もしくはこれより多くのメチレン単位は、−Ｏ−、−Ｓ−、−Ｎ（Ｒ２）−、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ２）−、−Ｎ（Ｒ２）Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ２）−、−Ｎ（Ｒ２）Ｃ（Ｏ）−、−Ｎ（Ｒ２）Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−ＯＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ２）−、−Ｓ（Ｏ）２−、−Ｓ（Ｏ）２Ｎ（Ｒ２）−、−Ｎ（Ｒ２）Ｓ（Ｏ）２−、−ＯＣ（Ｏ）−、もしくは−Ｃ（Ｏ）Ｏ−によって必要に応じてかつ独立して置き換えられ；
環Ａ２は、３〜７員の飽和もしくは部分不飽和の単環式炭素環式環、７〜１０員の飽和もしくは部分不飽和の二環式炭素環式環、窒素、酸素、もしくは硫黄から独立して選択される１〜２個のヘテロ原子を有する４〜７員の飽和もしくは部分不飽和の単環式複素環式環、窒素、酸素、もしくは硫黄から独立して選択される１〜３個のヘテロ原子を有する７〜１０員の飽和もしくは部分不飽和の二環式複素環式環、フェニル環、８〜１０員の二環式アリール環、窒素、酸素、もしくは硫黄から独立して選択される１〜３個のヘテロ原子を有する５〜６員の単環式ヘテロアリール環、窒素、酸素、もしくは硫黄から独立して選択される１〜４個のヘテロ原子を有する８〜１０員の二環式ヘテロアリール環、または窒素、酸素、もしくは硫黄から独立して選択される０〜４個のヘテロ原子を有する１０〜１６員の飽和、部分不飽和、もしくは芳香族の三環式環であり、ここで環Ａ２は、１〜４個のＲｘ基で必要に応じて置換され；
各Ｒｘは、独立して、−Ｒ、必要に怖じて置換されたアルキリデニル、オキソ、ハロ、−ＮＯ２、−ＣＮ、−ＯＲ、−ＳＲ、−Ｎ（Ｒ’）２、−Ｃ（Ｏ）Ｒ、−ＣＯ２Ｒ、−Ｃ（Ｏ）Ｃ（Ｏ）Ｒ、−Ｃ（Ｏ）ＣＨ２Ｃ（Ｏ）Ｒ、−Ｓ（Ｏ）Ｒ、−Ｓ（Ｏ）２Ｒ、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）２、−Ｓ（Ｏ）２Ｎ（Ｒ’）２、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ、−Ｎ（Ｒ’）Ｃ（Ｏ）Ｒ、−Ｎ（Ｒ’）Ｎ（Ｒ’）２、−Ｎ（Ｒ’）ＯＲ、−Ｎ（Ｒ’）Ｃ（＝ＮＲ’）Ｎ（Ｒ’）２、−Ｃ（＝ＮＲ’）Ｎ（Ｒ’）２、−Ｃ＝ＮＯＲ、−Ｎ（Ｒ’）Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）２、−Ｎ（Ｒ’）Ｓ（Ｏ）２Ｎ（Ｒ’）２、−Ｎ（Ｒ’）Ｓ（Ｏ）２Ｒ、または−ＯＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）２であり；
各Ｒは、独立して、水素、あるいはＣ１−６脂肪族、３〜７員の飽和もしくは部分不飽和の単環式炭素環式環、７〜１０員の飽和もしくは部分不飽和の二環式炭素環式環、窒素、酸素、もしくは硫黄から独立して選択される１〜２個のヘテロ原子を有する４〜７員の飽和もしくは部分不飽和の単環式複素環式環、窒素、酸素、もしくは硫黄から独立して選択される１〜３個のヘテロ原子を有する７〜１０員の飽和もしくは部分不飽和の二環式複素環式環、フェニル環、８〜１０員の二環式アリール環、窒素、酸素、もしくは硫黄から独立して選択される１〜３個のヘテロ原子を有する５〜６員のヘテロアリール環、または窒素、酸素、もしくは硫黄から独立して選択される１〜４個のヘテロ原子を有する８〜１０員の二環式ヘテロアリール環から選択される必要に応じて置換された基であり；
各Ｒ’は、独立して、−Ｒであるか、または同じ窒素上の２個のＲ’基は、これらの間にある原子と一緒になって、窒素、酸素、もしくは硫黄から独立して選択される１〜４個のヘテロ原子を有する必要に応じて置換された５〜８員の飽和、部分不飽和、もしくは芳香族の環を形成し；
Ｌ３は、共有結合もしくは必要に応じて置換されたＣ１−４アルキレン鎖であり、ここでＬ３の１個もしくはこれより多くのメチレン単位は、−Ｏ−、−Ｓ−、−Ｎ（Ｒ２）−、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ２）−、−Ｎ（Ｒ２）Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ２）−、−Ｎ（Ｒ２）Ｃ（Ｏ）−、−Ｎ（Ｒ２）Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−ＯＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ２）−、−Ｓ（Ｏ）２−、−Ｓ（Ｏ）２Ｎ（Ｒ２）−、−Ｎ（Ｒ２）Ｓ（Ｏ）２−、−ＯＣ（Ｏ）−、もしくは−Ｃ（Ｏ）Ｏ−によって必要に応じてかつ独立して置き換えられ；
環Ａ３は、３〜７員の飽和もしくは部分不飽和の単環式炭素環式環、７〜１０員の飽和もしくは部分不飽和の二環式炭素環式環、窒素、酸素、もしくは硫黄から独立して選択される１〜２個のヘテロ原子を有する４〜７員の飽和もしくは部分不飽和の単環式複素環式環、窒素、酸素、もしくは硫黄から独立して選択される１〜３個のヘテロ原子を有する７〜１０員の飽和もしくは部分不飽和の二環式複素環式環、フェニル環、８〜１０員の二環式アリール環、窒素、酸素、もしくは硫黄から独立して選択される１〜３個のヘテロ原子を有する５〜６員の単環式ヘテロアリール環、または窒素、酸素、もしくは硫黄から独立して選択される１〜４個のヘテロ原子を有する８〜１０員の二環式ヘテロアリール環から選択される必要に応じて置換された環であり；
環Ａ４は、窒素、酸素、もしくは硫黄から独立して選択される１〜３個のヘテロ原子を有する５〜６員のヘテロアリール環、または窒素、酸素、もしくは硫黄から独立して選択される１〜４個のヘテロ原子を有する８〜１０員の二環式ヘテロアリール環であり；ここで環Ａ４上の任意の置換可能な炭素は、Ｒ３、Ｒ４、もしくはＲ５で必要に応じて置換され、環Ａ４上の任意の置換可能な窒素は、Ｒ６で必要に応じて置換され；
Ｒ３、Ｒ４、およびＲ５の各々は、独立して、−Ｒ、−ハロ、−ＮＯ２、−ＣＮ、−ＯＲ、−ＳＲ、−Ｎ（Ｒ’）２、−Ｃ（Ｏ）Ｒ、−ＣＯ２Ｒ、−Ｃ（Ｏ）Ｃ（Ｏ）Ｒ、−Ｃ（Ｏ）ＣＨ２Ｃ（Ｏ）Ｒ、−Ｓ（Ｏ）Ｒ、−Ｓ（Ｏ）２Ｒ、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）２、−Ｓ（Ｏ）２Ｎ（Ｒ’）２、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ、−Ｎ（Ｒ’）Ｃ（Ｏ）Ｒ、−Ｎ（Ｒ’）Ｎ（Ｒ’）２、−Ｎ（Ｒ’）ＯＲ、−Ｎ（Ｒ’）Ｃ（＝ＮＲ’）Ｎ（Ｒ’）２、−Ｃ（＝ＮＲ’）Ｎ（Ｒ’）２、−Ｃ＝ＮＯＲ、−Ｎ（Ｒ’）Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）２、−Ｎ（Ｒ’）Ｓ（Ｏ）２Ｎ（Ｒ’）２、−Ｎ（Ｒ’）Ｓ（Ｏ）２Ｒ、もしくは−ＯＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）２であるか；あるいは：
Ｒ３およびＲ４、またはＲ４およびＲ５は、これらの間にある原子と一緒になって、４〜７員の部分不飽和の炭素環式環、フェニル、窒素、酸素、もしくは硫黄から独立して選択される１〜３個のヘテロ原子を有する５〜６員の部分不飽和の複素環式環、または窒素、酸素、もしくは硫黄から独立して選択される１〜３個のヘテロ原子を有する５〜６員のヘテロアリール環から選択される必要に応じて置換された縮合環を形成し；
各Ｒ６は、独立して、−Ｒ、−Ｃ（Ｏ）Ｒ、−ＣＯ２Ｒ、−Ｃ（Ｏ）Ｃ（Ｏ）Ｒ、−Ｃ（Ｏ）ＣＨ２Ｃ（Ｏ）Ｒ、−Ｓ（Ｏ）Ｒ、−Ｓ（Ｏ）２Ｒ、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）２、もしくは−Ｓ（Ｏ）２Ｎ（Ｒ’）２であるか；あるいは：
Ｒ３およびＲ６は、これらの間にある原子と一緒になって、窒素、酸素、もしくは硫黄から独立して選択される１〜３個のヘテロ原子を有する５〜６員の飽和もしくは部分不飽和の複素環式環または窒素、酸素、もしくは硫黄から独立して選択される１〜３個のヘテロ原子を有する５〜６員のヘテロアリール環から選択される必要に応じて置換された縮合環を形成し；
ただし：
Ａ１が二価の単環式環であり、Ｌ１が共有結合である場合、Ｌ２は、−Ｏ−ではない；
Ａ１が二価の単環式もしくは二環式の環である場合、Ｌ１およびＬ２は、同時に共有結合ではない；ならびに
Ｌ１、Ａ１、およびＬ２は、同時に共有結合ではない、
方法。
【請求項２】
前記化合物は、式Ｉｓの化合物：
【化２３】
2018538244.tif 000032
またはその薬学的に受容可能な塩であり、ここで
環Ａ４上の任意の置換可能な炭素は、Ｒ３、Ｒ４、もしくはＲ５で必要に応じて置換され、環Ａ４上の任意の置換可能な窒素は、Ｒ６で必要に応じて置換され；
Ｒ３、Ｒ４、およびＲ５の各々は、独立して、−Ｒ、−ハロ、−ＮＯ２、−ＣＮ、−ＯＲ、−ＳＲ、−Ｎ（Ｒ’）２、−Ｃ（Ｏ）Ｒ、−ＣＯ２Ｒ、−Ｃ（Ｏ）Ｃ（Ｏ）Ｒ、−Ｃ（Ｏ）ＣＨ２Ｃ（Ｏ）Ｒ、−Ｓ（Ｏ）Ｒ、−Ｓ（Ｏ）２Ｒ、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）２、−Ｓ（Ｏ）２Ｎ（Ｒ’）２、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ、−Ｎ（Ｒ’）Ｃ（Ｏ）Ｒ、−Ｎ（Ｒ’）Ｎ（Ｒ’）２、−Ｎ（Ｒ’）ＯＲ、−Ｎ（Ｒ’）Ｃ（＝ＮＲ’）Ｎ（Ｒ’）２、−Ｃ（＝ＮＲ’）Ｎ（Ｒ’）２、−Ｃ＝ＮＯＲ、−Ｎ（Ｒ’）Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）２、−Ｎ（Ｒ’）Ｓ（Ｏ）２Ｎ（Ｒ’）２、−Ｎ（Ｒ’）Ｓ（Ｏ）２Ｒ、もしくは−ＯＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）２であるか；あるいは：
Ｒ３およびＲ４、またはＲ４およびＲ５は、これらの間にある原子と一緒になって、４〜７員の部分不飽和の炭素環式環、フェニル、窒素、酸素、もしくは硫黄から独立して選択される１〜３個のヘテロ原子を有する５〜６員の部分不飽和の複素環式環、または窒素、酸素、もしくは硫黄から独立して選択される１〜３個のヘテロ原子を有する５〜６員のヘテロアリール環から選択される必要に応じて置換された縮合環を形成し；
各Ｒ６は、独立して、−Ｒ、−Ｃ（Ｏ）Ｒ、−ＣＯ２Ｒ、−Ｃ（Ｏ）Ｃ（Ｏ）Ｒ、−Ｃ（Ｏ）ＣＨ２Ｃ（Ｏ）Ｒ、−Ｓ（Ｏ）Ｒ、−Ｓ（Ｏ）２Ｒ、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）２もしくは−Ｓ（Ｏ）２Ｎ（Ｒ’）２であるか；あるいは：
Ｒ３およびＲ６は、これらの間にある原子と一緒になって、窒素、酸素、もしくは硫黄から独立して選択される１〜３個のヘテロ原子を有する５〜６員の飽和もしくは部分不飽和の複素環式環、または窒素、酸素、もしくは硫黄から独立して選択される１〜３個のヘテロ原子を有する５〜６員のヘテロアリール環から選択される必要に応じて置換された縮合環を形成し；
Ｒ７は、水素もしくはメチルであり；そして
各Ｒ８は、独立して、水素もしくはハロである、
請求項１に記載の方法。
【請求項３】
環Ａ３は、フェニルであり、該フェニルは、メタ位もしくはオルト位において１個もしくは２個のフッ素によって置換されている、請求項１〜２のいずれかに記載の方法。
【請求項４】
前記化合物は、式Ｉｙの化合物：
【化２４】
2018538244.tif 000033
であり、ここでＲ３は、−Ｒ、−ハロ、−ＮＯ２、−ＣＮ、−ＯＲ、−ＳＲ、−Ｎ（Ｒ’）２、−Ｃ（Ｏ）Ｒ、−ＣＯ２Ｒ、−Ｃ（Ｏ）Ｃ（Ｏ）Ｒ、−Ｃ（Ｏ）ＣＨ２Ｃ（Ｏ）Ｒ、−Ｓ（Ｏ）Ｒ、−Ｓ（Ｏ）２Ｒ、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）２、−Ｓ（Ｏ）２Ｎ（Ｒ’）２、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ、−Ｎ（Ｒ’）Ｃ（Ｏ）Ｒ、−Ｎ（Ｒ’）Ｎ（Ｒ’）２、−Ｎ（Ｒ’）ＯＲ、−Ｎ（Ｒ’）Ｃ（＝ＮＲ’）Ｎ（Ｒ’）２、−Ｃ（＝ＮＲ’）Ｎ（Ｒ’）２、−Ｃ＝ＮＯＲ、−Ｎ（Ｒ’）Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）２、−Ｎ（Ｒ’）Ｓ（Ｏ）２Ｎ（Ｒ’）２、−Ｎ（Ｒ’）Ｓ（Ｏ）２Ｒ、もしくは−ＯＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）２である、請求項１〜３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項５】
前記化合物は、式Ｉｚの化合物：
【化２５】
2018538244.tif 000034
またはその薬学的に受容可能な塩である、請求項４に記載の方法。
【請求項６】
前記化合物は、
【化２６】
2018538244.tif 000035
ならびにこれらの薬学的に受容可能な塩からなる群より選択される、請求項５に記載の方法。
【請求項７】
前記がんは、白血病、リンパ腫、および骨髄腫からなる群より選択される血液のがんである、請求項１〜６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項８】
前記血液のがんは、未分化大細胞型リンパ腫、非ホジキンリンパ腫、ホジキンリンパ腫、Ｂ細胞リンパ腫、Ｔ細胞リンパ腫、マントル細胞リンパ腫、組織球性リンパ腫、Ｔ細胞白血病、慢性リンパ性白血病、多発性骨髄腫、慢性骨髄性白血病、急性リンパ性（リンパ芽球性）白血病、急性骨髄性白血病、急性骨髄芽球性白血病、および形質細胞白血病から選択される、請求項７に記載の方法。
【請求項９】
被験体においてがんを処置することにおける使用のための薬学的組成物であって、ここで該がんの成長もしくは増殖は、ＰＤＫ１−ＰＩＦ媒介性基質相互作用に依存性であり、該組成物は、式Ｉの化合物および薬学的に受容可能なキャリアを含む製剤を含む、薬学的組成物。
【請求項１０】
被験体においてがんを処置するための併用療法における使用のための薬学的組成物であって、該組成物は、式Ｉの化合物および薬学的に受容可能なキャリアを含む製剤を含み、ここで該併用療法は、第２の抗がん剤の有効量をさらに含む、薬学的組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願への相互参照
本願は、２０１５年１０月２３日に出願された米国仮特許出願番号第６２／２４５，６０６号に基づく優先権を主張しており、その全体の内容は、参考として本明細書によって援用される。
【背景技術】
【０００２】
背景
３−ホスホイノシチド依存性プロテインキナーゼ−１（ＰＤＫ１（ＰＤＰＫ１としても公知））は、細胞成長および生存において重要な他のキナーゼ（Ａｋｔ（プロテインキナーゼＢ）、ＰＫＣ、ＲＳＫ（Ｓ６Ｋ）、およびＳＧＫファミリーのメンバーが挙げられる）を活性化する支配的なキナーゼである。ＰＤＫ１は、Ｔループリン酸化の活性化を介して基質キナーゼを活性化する（Ｂｅｌｈａｍら，  Ｃｕｒｒ．  Ｂｉｏｌ．，  １９９９，  ９：Ｒ９３−Ｒ９６）。
【０００３】
ＰＤＫ１は、Ｎ末端キナーゼ（触媒性）ドメインおよびＣ末端ｐｌｅｃｋｓｔｒｉｎ相同性（ＰＨ）ドメインからなる５５６アミノ酸のタンパク質である。ＰＨドメインは、ホスファチジルイノシトール（ＰＩ）（３，４）−ビスホスフェートおよびホスファチジルイノシトール（３，４，５）−トリホスフェートと相互作用して、ある特定のＰＤＫ１基質（顕著なことには、Ａｋｔを含む）の局在化および活性化に寄与する。Ａｋｔの活性化は、膜での上記キナーゼおよびＰＤＫ１のＰＨドメインおよびＡｋｔの適切な配向を要すると考えられる。Ａｋｔは、それ自体、がんと関連することが公知であり（Ｍａｎｎｉｎｇら，  Ｃｅｌｌ，  ２００７，  １２９（７）：１２６１−１２７４）、ヒトのがんにおいて頻繁に変異または過剰活性化される。
【０００４】
しかし、ＰＤＫ１は、このＰＩ依存性（ＰＨ媒介性）機構を通じてある特定のその基質と相互作用し得る一方で、別個のＰＩ非依存性機構を通じて他の基質と相互作用し得る。そのＮ末端キナーゼドメインは、３つのリガンド結合部位を有する；基質結合部位、ＡＴＰ結合部位、および基質との相互作用のためのドッキング部位（ＰＩＦポケットとしても公知）である。このドッキング部位は、プロテインキナーゼＣ関連キナーゼ−２（ＰＲＫ２）の領域（ＰＤＫ１相互作用フラグメント（ＰＩＦ）といわれる）へのその結合に言及して、「ＰＩＦポケット」としても公知である（Ｂｉｏｎｄｉら，  ＥＭＢＯ  Ｊ．，  ２０００，  １９（５）：９７９−９８８）。Ｓ６ＫおよびプロテインキナーゼＣを含むいくつかのＰＤＫ１基質は、このＰＩＦポケットドッキング部位での結合を要する。
【０００５】
注記されるように、ＰＤＫ１は、他のキナーゼの活性を調節することにおいて重要である。ＰＤＫ１の主な標的は、プロテインキナーゼのＡＧＣサブファミリー（Ａｌｅｓｓｉら，  Ｂｉｏｃｈｅｍ．  Ｓｏｃ．  Ｔｒａｎｓ，  ２００１，  ２９（２）：１−１４）、例えば、プロテインキナーゼＢ（ＰＫＢ、Ａｋｔとしても公知）のアイソフォーム、ｐ７０リボソームＳ６キナーゼ（Ｓ６Ｋ）（Ａｖｒｕｃｈら，  Ｐｒｏｇ．  Ｍｏｌ．  Ｓｕｂｃｅｌｌ．  Ｂｉｏｌ．，  ２００１，  ２６：１１５）、ｐ９０リボソームＳ６キナーゼ（ＲＳＫ１−４）（Ｆｒｏｄｉｎら，  ＥＭＢＯ  Ｊ．，  ２０００，  １９：２９２４−２９３４）、ＩＫＫおよびプロテインキナーゼＣ（ＰＫＣ）ファミリーのメンバー（Ｌｅ  Ｇｏｏｄら，  Ｓｃｉｅｎｃｅ，  １９９８，  ２８１：２０４２−２０４５）である。ＰＤＫ１媒介性シグナル伝達は、インスリン、増殖因子、および細胞外マトリクス細胞結合（インテグリンシグナル伝達）に応じて増大し、多様な細胞事象（例えば、細胞生存、成長、増殖、およびグルコース調節（Ｌａｗｌｏｒら，  Ｊ．  Ｃｅｌｌ  Ｓｃｉ．，  ２００１，  １１４：２９０３−２９１０；  Ｌａｗｌｏｒら，  ＥＭＢＯ  Ｊ．，  ２００２，  ２１：３７２８−３７３８））を生じる。上記で言及されるいくつかのＰＤＫ１基質のうち、ＡＫＴに大きく注意が集められる。強力かつ選択的なＡＫＴインヒビターの開発は挑戦し続けられており、わずか２種の化合物が、臨床開発に成功した：ＡＺＤ５３６３およびＭＫ２２０６。これらの化合物は、ある特定の腫瘍タイプにおいて有望な抗がん活性を示した。しかし、これらの化合物を使用するより近年の研究は、驚くべきことに、多くの腫瘍タイプがＡＫＴ阻害に感受性でなく、活性化ＡＫＴを全くもしくはほとんど発現しないことを明らかにした。
【０００６】
ＰＤＫ１は、ＡＫＴキナーゼの活性化にとって極めて重要なＡＫＴの活性化ループの中のＴｈｒ３０６をリン酸化することが公知である唯一のキナーゼである。従って、ＰＤＫ１は、ＡＫＴ活性化において極めて重要な役割を果たす。適切な薬物様特性を有する強力かつ選択的なＰＤＫ１インヒビターを開発しようとする努力は、不成功に終わってしまい、臨床開発に入った化合物はなかった。ＰＤＫ１インヒビターであるＧＳＫ２３３４４７０およびＢＸ−３２０／−７９５での報告された前臨床試験研究は、中程度の効力を示したので、ＰＤＫ１は、がん細胞成長を促進するにあたって律速ではない可能性があることが提唱された。あるいは、これらのインヒビターは、効果を生じるために十分な阻害を達成できない不十分な薬理学的特性を有し得るか、または使用したがん細胞は、成長に関してＰＤＫ１に依存しなかった。
【０００７】
腫瘍抑制因子である、テンシン相同性を有するホスファターゼ（ＰＴＥＮ）は、ホスファチジルイノシトール３−キナーゼ（ＰＩ３Ｋ）によって開始される細胞生存シグナル伝達経路の重要な負の調節因子である。ＰＤＫ１／Ａｋｔ経路は、レセプターチロシンキナーゼ（ＲＴＫ）、Ｒａｓ、ＰＩ−３キナーゼ、またはＰＴＥＮにおける変異を介して、多くのがんにおいて活性化される（Ｃｕｌｌｙら，  Ｎａｔｕｒｅ  Ｒｅｖｉｅｗｓ  Ｃａｎｃｅｒ，  ２００６，  ６：１８４−１９２）。上昇したＰＤＫ１活性化およびシグナル伝達は、明確な遺伝的事象（例えば、ＰＴＥＮ変異またはある特定の鍵となる調節タンパク質の過剰発現）から生じるいくつかのがんにおいて検出されてきた（Ｇｒａｆｆ，  Ｅｘｐｅｒｔ  Ｏｐｉｎ．  Ｔｈｅｒ．  Ｔａｒｇｅｔｓ，  ２００２，  ６：１０３−１１３，  Ｂｒｏｇｎａｒｄら，  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．，  ２００１，  ６１：３９８６−３９９７）。実際に、ＰＴＥＮは、ヒトのがんにおいて最も頻繁に変異される遺伝子のうちの１つである。ＰＤＫ１は、急性骨髄性白血病において過剰発現されることが見出された（Ｚａｂｋｉｅｗｉｃｚら，  Ｈａｅｍａｔｏｌｏｇｉｃａ，  ２０１４，  ９９（５）：８５８−８６４）。抗がん化合物としてのＰＤＫ１インヒビターの可能性は、ＰＤＫ１に対して指向されるアンチセンスオリゴヌクレオチドでのＰＴＥＮ陰性ヒトがん細胞株（Ｕ８７ＭＧ）のトランスフェクションによって示された。ＰＤＫ１プロテインレベルにおける得られた低下は、細胞増殖および生存における低下をもたらした（Ｆｌｙｎｎら，  Ｃｕｒｒ．  Ｂｉｏｌ．，  ２０００，  １０：１４３９−１４４２）。
【０００８】
ＲＳＫ２（ｐ９０ＲＳＫ２）は、ヒトにおいて公知の４種のリボソームＳ６キナーゼ（Ｓ６Ｋ）のうちの１つ、ＭＡＰＫ／ＥＲＫ経路によって活性化されるセリン／スレオニンキナーゼのファミリーである。ＲＳＫは、２つのキナーゼドメインを含む：Ｃ末端ドメインは、ＲＳＫ２を自己リン酸化し、これは、その活性化に必須である；活性化ＲＳＫ２のＮ末端ドメインは、下流の基質（例えば、ある特定の転写調節因子）をリン酸化する。ＲＳＫ２が、ＡＫＴに依存性ではない腫瘍において鍵となる役割を果たすか、またはＡＫＴインヒビターでの処置の際に、ＡＫＴシグナル伝達を迂回するために鍵となる抵抗機構を提供することは考えられる。
【０００９】
ＲＳＫ２は、ＰＩ非依存性ＰＩＦポケット機構を通じてＰＤＫ１によるリン酸化を通じて活性化されることは公知であり、種々の細胞タイプにおいて細胞増殖を促進し、ある特定のがんに寄与し得る。例えば、ＲＳＫ２は、骨髄性白血病におけるある特定の形態で活性化されることが示された。ＲＳＫ２の阻害は、Ｍｏｌｍ１４およびＭｖ（４；１１）白血病細胞、ならびにＡＭＬ患者に由来する初代サンプルにおいてアポトーシス性細胞死を誘導したが、Ｂａ／Ｆ３もしくはＫ５６２細胞、またはＣＭＬ患者に由来する初代サンプルにおいてアポトーシスに影響を及ぼさなかった（Ｅｌｆら，  Ｂｌｏｏｄ，  ２０１１，  １１７（２５）：６８８５−６８９４）。別個に、ＲＳＫ２阻害は、ある特定の骨髄腫細胞においてアポトーシスを誘導したこと、およびレセプターチロシンキナーゼである線維芽細胞増殖因子レセプター３（ＦＧＦＲ３）がＲＳＫ２を活性化し、これは、造血性形質転換を誘導し得ることが報告された（Ｋａｎｇら，  Ｊ．  Ｂｉｏｌ．  Ｃｈｅｍ．，  ２００８，  ２８３（８）：４６５２−４６５７；  Ｋａｎｇら，  Ｍｏｌ．  Ｃｅｌｌ．  Ｂｉｏｌ．，  ２００９，  ２９（８）：２１０５−２１１７）。
結果的に、特異的な薬理学的なおよび治療上の特徴を有するＰＤＫ１の有効なインヒビターが必要である。本発明は、これらおよび他の必要性を満たす。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【００１０】
【非特許文献１】Ｂｅｌｈａｍら，  Ｃｕｒｒ．  Ｂｉｏｌ．，  １９９９，  ９：Ｒ９３−Ｒ９６
【非特許文献２】Ｍａｎｎｉｎｇら，  Ｃｅｌｌ，  ２００７，  １２９（７）：１２６１−１２７４
【非特許文献３】Ｂｉｏｎｄｉら，  ＥＭＢＯ  Ｊ．，  ２０００，  １９（５）：９７９−９８８
【非特許文献４】Ａｌｅｓｓｉら，  Ｂｉｏｃｈｅｍ．  Ｓｏｃ．  Ｔｒａｎｓ，  ２００１，  ２９（２）：１−１４
【非特許文献５】Ａｖｒｕｃｈら，  Ｐｒｏｇ．  Ｍｏｌ．  Ｓｕｂｃｅｌｌ．  Ｂｉｏｌ．，  ２００１，  ２６：１１５
【非特許文献６】Ｆｒｏｄｉｎら，  ＥＭＢＯ  Ｊ．，  ２０００，  １９：２９２４−２９３４）
【非特許文献７】Ｌｅ  Ｇｏｏｄら，  Ｓｃｉｅｎｃｅ，  １９９８，  ２８１：２０４２−２０４５
【非特許文献８】Ｌａｗｌｏｒら，  Ｊ．  Ｃｅｌｌ  Ｓｃｉ．，  ２００１，  １１４：２９０３−２９１０
【非特許文献９】Ｌａｗｌｏｒら，  ＥＭＢＯ  Ｊ．，  ２００２，  ２１：３７２８−３７３８
【非特許文献１０】Ｃｕｌｌｙら，  Ｎａｔｕｒｅ  Ｒｅｖｉｅｗｓ  Ｃａｎｃｅｒ，  ２００６，  ６：１８４−１９２
【非特許文献１１】Ｇｒａｆｆ，  Ｅｘｐｅｒｔ  Ｏｐｉｎ．  Ｔｈｅｒ．  Ｔａｒｇｅｔｓ，  ２００２，  ６：１０３−１１３
【非特許文献１２】Ｂｒｏｇｎａｒｄら，  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．，  ２００１，  ６１：３９８６−３９９７
【非特許文献１３】Ｚａｂｋｉｅｗｉｃｚら，  Ｈａｅｍａｔｏｌｏｇｉｃａ，  ２０１４，  ９９（５）：８５８−８６４
【非特許文献１４】Ｆｌｙｎｎら，  Ｃｕｒｒ．  Ｂｉｏｌ．，  ２０００，  １０：１４３９−１４４２
【非特許文献１５】Ｋａｎｇら，  Ｊ．  Ｂｉｏｌ．  Ｃｈｅｍ．，  ２００８，  ２８３（８）：４６５２−４６５７
【非特許文献１６】Ｋａｎｇら，  Ｍｏｌ．  Ｃｅｌｌ．  Ｂｉｏｌ．，  ２００９，  ２９（８）：２１０５−２１１７
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【００１１】
発目の要旨
ある特定の化合物がＰＩ非依存性ＰＩＦポケット媒介性基質結合を損なうかもしくはブロックし、そして血液のがんおよび他のがんにおいて広い抗腫瘍活性を有することが、いまや見出された。他方では、これらの化合物が、ＰＤＫ１のコンホメーションを改変してＰＩＦ結合をブロックし、それによって、ＡＴＰ結合をブロックすることによってもＰＤＫ１キナーゼ活性化をなお阻害しながら、ＰＩ非依存性（ＰＩＦ依存性）基質の結合およびリン酸化を防止するようであるということが、いまや見出された。この二重機構的機能は、ＰＩ依存性およびＰＩ非依存性の基質リン酸化の両方に影響を及ぼすことによって、ＰＤＫ１シグナル伝達を効果的に阻害するために極めて重要であり得る。この機能は、従って、これらの化合物を、Ａｋｔ非依存性であるかまたはＡｋｔインヒビターへの抵抗性が生じるがんの処置において有用にし得る。さらに、このような二重機構インヒビターは、ＡＫＴが活性であろうとなかろうと、成長に関してＲＳＫ２活性またはＰＤＫ１の下流にある他のＰＩＦ依存性基質に依存性であるがんの処置において有用性を有し得る。
【００１２】
本発明に従う方法は、式Ｉの化合物：
【化１】
2018538244.tif 000002
またはその薬学的に受容可能な塩を使用し、ここでＡ１、環Ａ２、環Ａ３、環Ａ４、Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３、Ｘ、およびＲ１の各々は、本明細書中のクラスおよびサブクラスで定義されかつ記載されるとおりである。このような化合物は、ある特定のプロテインキナーゼ（例えば、ＰＤＫ１、ＲＳＫ２、Ａｋｔ）に影響を及ぼす細胞生存経路の調節因子として有用であるので、例えば、ＰＤＫ１媒介性、ＲＳＫ２媒介性、およびＡｋｔ媒介性の疾患の処置のために有用である。
【００１３】
ある特定の実施形態において、本発明は、記載されるとおりの式Ｉの化合物を含む薬学的組成物を提供し、ここで上記化合物は、がんの成長および生存に影響を及ぼされるＰＤＫ１−ＰＩＦ媒介性基質相互作用依存性がん生存経路（例えば、ＲＳＫ２依存性経路）またはＡｋｔ非依存性経路を阻害するために有効な量で存在する。ある特定の他の実施形態において、本発明は、式Ｉの化合物を含み、そして必要に応じてさらなる治療剤をさらに含む薬学的組成物を提供する。さらに他の実施形態において、上記さらなる治療剤は、がんの処置のための薬剤である。
【００１４】
さらに別の局面において、本発明は、患者もしくは生物学的サンプル中でのがんの成長および生存に影響が及ぼされるキナーゼ活性化経路を阻害するための方法を提供し、上記方法は、式Ｉの化合物の有効な阻害量を、上記患者に投与するか、または上記生物学的サンプルと接触させる工程を包含する。なお別の局面において、本発明は、このようなキナーゼ活性化経路が関わる任意の障害を処置するための方法を提供し、上記方法は、必要性のある被験体に、式Ｉの化合物の治療上有効な量を投与する工程を包含する。このような方法は、本明細書で詳細に記載される。
【図面の簡単な説明】
【００１５】
【図１】図１Ａは、ホスファチジルイノシトール（ＰＩ）依存性（ＰＨ媒介性）またはＰＩ非依存性（ＰＩＦ媒介性）の細胞経路のエレメントの間の相互作用を示す；図１Ｂは、ＰＤＫ１とＡｋｔとの間のＰＨドメイン相互作用を示す；図１Ｃは、ＰＤＫ１とＡｋｔとの間のＰＩＦ媒介性相互作用を示す；図１Ｄは、ＰＤＫ１とＲＳＫ２との間のＰＩＦ媒介性相互作用を示す。
【００１６】
【図２】図２Ａおよび図２Ｂは、式Ｉの代表的化合物：化合物１（図２Ａ）および化合物２（図２Ｂ）のＰＤＫ１キナーゼ活性阻害曲線を示す。
【００１７】
【図３】図３は、試験化合物によるインビトロでの血液腫瘍細胞株の増殖の阻害を示す。
【００１８】
【図４】図４Ａ〜４Ｄは、試験化合物によるいくつかの血液腫瘍細胞株：ＭＶ４−１１（図４Ａ）、Ｃ１４９８（図４Ｂ）、およびＡ２０（図４Ｃ）における成長阻害を示す。図４Ｄは、図４Ａ〜４Ｃの鍵を提供し、各細胞株における化合物に関するＩＣ５０データを提供する。
【００１９】
【図５】図５Ａは、ビヒクルもしくは試験化合物で処理したＭＶ４−１１細胞のＦＡＣＳドットプロットを示す。パラメーターは、ヨウ化プロピジウム（ＰＩ；垂直軸）に対してアネキシンＶ（ＡＶ；水平軸）である；図５Ｂは、図５ＡにおけるプロットのＰＩ＋ＡＶ＋およびＰＩ−ＡＶ＋に関するゲート四分円中の総細胞の％を示す；図５Ｃは、図５Ａ中のプロットのＰＩ−ＡＶ＋四分円中の細胞によって測定される場合に、試験化合物がアポトーシスを誘導する能力の用量−応答関係を示す。
【００２０】
【図６】図６Ａは、試験化合物の種々の濃度でのリン酸化ＲＳＫ２（ｐＲＳＫ２）およびリン酸化ＰＤＫ１（ｐＰＤＫ１）レベルのウェスタンブロットを示す；図６Ｂは、コントロールサンプル中で検出されたそれぞれのリン酸化されたタンパク質のパーセンテージとして表される、試験化合物の種々の濃度への２４時間曝露で検出されたｐＲＳＫ２およびｐＰＤＫ１の量（ＧＡＰＤＨに対して正規化した６Ａの定量化）を示す；図６Ｃは、コントロールサンプル中で検出されたそれぞれのリン酸化されたタンパク質のパーセンテージとして表される、種々の時間にわたる３０ｎＭ  試験化合物への曝露に基づいて検出されたｐＲＳＫ２およびｐＰＤＫ１の量を示す。
【００２１】
【図７】図７Ａは、３種の試験化合物の種々の濃度でのリン酸化ＲＳＫ２（ｐＲＳＫ２）およびリン酸化ＰＤＫ１（ｐＰＤＫ１）レベルのウェスタンブロットを示す；図７Ｂおよび図７Ｃは、コントロールサンプル中で検出されたそれぞれのリン酸化されたタンパク質のパーセンテージとして表される、試験化合物の種々の濃度への曝露後に検出されたｐＰＤＫ１およびｐＲＳＫ２の量（ＧＡＰＤＨに対して正規化した７Ａの定量化）を示す。
【００２２】
【図８】図８Ａは、３種の試験化合物の種々の濃度でのリン酸化ＲＳＫ２（ｐＲＳＫ２）、リン酸化ＰＤＫ１（ｐＰＤＫ１）、リン酸化Ａｋｔ（ｐＡｋｔ）、およびリン酸化ＩＫＫ（ｐＩＫＫ）レベルのウェスタンブロットを示す；図８Ｂ〜８Ｅは、コントロールサンプル中で検出されたそれぞれのリン酸化されたタンパク質のパーセンテージとして表される、試験化合物の種々の濃度への曝露後に検出されたｐＰＤＫ１、ｐＲＳＫ２、ｐＡｋｔ、およびｐＩＫＫの量（ＧＡＰＤＨに対して正規化した８Ａの定量化）を示す。
【００２３】
【図９】図９Ａ〜９Ｃは、化合物１へのＫＧ−１細部株感受性、ならびに１００ｎＭ  化合物濃度でのｐＲＳＫ２およびｐＰＤＫ１レベルの阻害を示す。
【００２４】
【図１０】図１０Ａ〜１０Ｄは、化合物の単一用量後のＭＶ４−１１腫瘍異種移植片に由来する腫瘍サンプルのウェスタンブロット分析の定量化から得られる例示的データを示す。図１０Ａおよび図１０Ｂは、コントロールサンプル中で検出されたレベルのパーセンテージとして表される、試験化合物への４時間曝露および８時間曝露後のｐＰＤＫ１レベルを示す。図１０Ｃおよび図１０Ｄは、コントロールサンプル中で検出されたレベルのパーセンテージとして表される、試験化合物への８時間曝露後のｐＲＳＫ２レベルおよびｐＡｋｔレベルを示す。棒の上の数字は、ＬＣ−ＭＳ／ＭＳによって決定される場合、腫瘍に存在する化合物の濃度（ｍＭ）を示す。
【００２５】
【図１１】図１１Ａは、マウス異種移植片モデルにおいて、式Ｉの化合物に曝露した種々の処置群に関して時間の関数としてメジアンＭＶ４−１１腫瘍容積を示す；図１１Ｂは、処置群にわたる腫瘍容積分布を示す；図１１Ｃは、種々の処置群に関して時間の関数として％群平均体重を示す。
【００２６】
【図１２】図１２Ａは、共結晶（その中で化合物３がＰＤＫ１に結合されている）の三次元表示を示す；図１２Ｂは、共結晶（その中で化合物３（薄い方の灰色）またはＡＴＰ（濃い方の灰色）がＰＤＫ１に結合されている）の比較三次元表示を示す；図１２Ｃは、共結晶（その中で化合物３（濃い方の灰色）またはＧＳＫ２３３４４７０（薄い方の灰色）がＰＤＫ１に結合されている）の比較三次元表示を示す；図１２Ｄは、共結晶（その中で化合物３（薄い方の灰色）またはＢＸ−３２０（濃い方の灰色）がＰＤＫ１に結合されている）の比較三次元表示を示す；図１２Ｅは、共結晶（その中で化合物３（中間の灰色）、ＧＳＫ２３３４４７０（最も薄い灰色）、またはＢＸ−３２０（最も濃い灰色）がＰＤＫ１に結合されている）の比較三次元表示を示す
【００２７】
【図１３】図１３Ａは、共結晶（その中で化合物３（中間の灰色）、ＧＳＫ２３３４４７０（最も薄い灰色）、またはＢＸ−３２０（最も濃い灰色）がＰＤＫ１に結合されている）の三次元表示を示す；図１３Ｂは、試験化合物のＰＩＦ−ｔｉｄｅブロッキングの相対的活性が評価され得るＰＩＦ−ｔｉｄｅ結合アッセイの概念的な概要を図示する；図１３Ｃは、ＤＭＳＯコントロールのパーセンテージとして表される、試験化合物の存在下および非存在下でのＰＤＫ１による測定されたＰＩＦ−ｔｉｄｅ結合を示す。
【発明を実施するための形態】
【００２８】
ある特定の実施形態の詳細な説明
本発明の方法において有用な化合物
ＰＤＫ１は、ホスファチジルイノシトール（ＰＩ）依存性（ＰＨ媒介性）またはＰＩ非依存性（ＰＩＦ媒介性）機構を通じて、その基質と相互作用し得る。ここで本発明者らは、ＡＴＰ結合ポケットおよび適応性（ａｄａｐｔｉｖｅ）（「アロステリック」）ポケットの両方を占めかつＰＩ非依存性基質結合をブロックし、そして固形腫瘍および血液のがんにおいて抗腫瘍活性を有する化合物のファミリーを記載する。式Ｉの化合物は、以下で記載されるように、がん細胞（例えば、Ａｋｔ阻害に抵抗性である細胞、またはＲＳＫ２活性に依存性である細胞）の成長および生存を損なう能力において明白である、明確な活性プロフィールを有する。
【００２９】
従って、一局面において、本発明は、式Ｉの化合物：
【化２】
2018538244.tif 000003
またはその薬学的に受容可能な塩の使用法を提供し、ここで：
Ｒ１は、水素もしくは必要に応じて置換されたＣ１−６脂肪族であるか、または：
Ｒ１および環Ａ４上の置換基は、これらの間にある原子と一緒になって、窒素、酸素、もしくは硫黄から独立して選択される１〜３個のヘテロ原子を有する必要に応じて置換された５〜７員の部分不飽和もしくは芳香族の縮合環を形成し；
Ｘは、−Ｃ（Ｏ）−もしくは−Ｓ（Ｏ）２−であり、
Ｌ１は、共有結合であるか、またはＣ１−４アルキレン、Ｃ２−４アルケニレン、もしくはＣ２−４アルキニレンから選択される必要に応じて置換された二価の基であり、ここでＬ１の１個もしくはこれより多くのメチレン単位は、−Ｃｙ１−、−Ｏ−、−Ｓ−、−Ｎ（Ｒ２）−、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ２）−、−Ｎ（Ｒ２）Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ２）−、−Ｎ（Ｒ２）Ｃ（Ｏ）−、−Ｎ（Ｒ２）Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−ＯＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ２）−、−Ｓ（Ｏ）２−、−Ｓ（Ｏ）２Ｎ（Ｒ２）−、−Ｎ（Ｒ２）Ｓ（Ｏ）２−、−ＯＣ（Ｏ）−、もしくは−Ｃ（Ｏ）Ｏ−によって必要に応じてかつ独立して置き換えられ；
Ｃｙ１は、フェニレン、３〜７員の飽和もしくは部分不飽和のカルボシクリレン、窒素、酸素、もしくは硫黄から独立して選択される１〜２個のヘテロ原子を有する４〜７員の飽和もしくは部分不飽和のヘテロシクリレン、または窒素、酸素、もしくは硫黄から独立して選択される１〜３個のヘテロ原子を有する５〜６員のヘテロアリーレンから選択される必要に応じて置換された二価の環であり；
各Ｒ２は、水素もしくは必要に応じて置換されたＣ１−６脂肪族であり；
Ａ１は、共有結合であるか、あるいは３〜７員の飽和もしくは部分不飽和の単環式カルボシクリレン、７〜１０員の飽和もしくは部分不飽和の二環式カルボシクリレン、窒素、酸素、もしくは硫黄から独立して選択される１〜２個のヘテロ原子を有する４〜７員の飽和もしくは部分不飽和の単環式ヘテロシクリレン、窒素、酸素、もしくは硫黄から独立して選択される１〜３個のヘテロ原子を有する７〜１０員の飽和もしくは部分不飽和の二環式ヘテロシクリレン、フェニレン、８〜１０員の二環式アリーレン、窒素、酸素、もしくは硫黄から独立して選択される１〜３個のヘテロ原子を有する５〜６員の単環式ヘテロアリーレン、または窒素、酸素、もしくは硫黄から独立して選択される１〜４個のヘテロ原子を有する８〜１０員の二環式ヘテロアリーレンから選択される必要に応じて置換された二価の環であり；
Ｌ２は、共有結合、アルキリデニレン、，または必要に応じて置換されたアルキレン鎖であり、ここでＬ２の１個もしくはこれより多くのメチレン単位は、−Ｏ−、−Ｓ−、−Ｎ（Ｒ２）−、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ２）−、−Ｎ（Ｒ２）Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ２）−、−Ｎ（Ｒ２）Ｃ（Ｏ）−、−Ｎ（Ｒ２）Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−ＯＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ２）−、−Ｓ（Ｏ）２−、−Ｓ（Ｏ）２Ｎ（Ｒ２）−、−Ｎ（Ｒ２）Ｓ（Ｏ）２−、−ＯＣ（Ｏ）−、もしくは−Ｃ（Ｏ）Ｏ−によって必要に応じてかつ独立して置き換えられ；
環Ａ２は、３〜７員の飽和もしくは部分不飽和の単環式炭素環式環、７〜１０員の飽和もしくは部分不飽和の二環式炭素環式環、窒素、酸素、もしくは硫黄から独立して選択される１〜２個のヘテロ原子を有する４〜７員の飽和もしくは部分不飽和の単環式複素環式環、窒素、酸素、もしくは硫黄から独立して選択される１〜３個のヘテロ原子を有する７〜１０員の飽和もしくは部分不飽和の二環式複素環式環、フェニル環、８〜１０員の二環式アリール環、窒素、酸素、もしくは硫黄から独立して選択される１〜３個のヘテロ原子を有する５〜６員の単環式ヘテロアリール環、窒素、酸素、もしくは硫黄から独立して選択される１〜４個のヘテロ原子を有する８〜１０員の二環式ヘテロアリール環、または窒素、酸素、もしくは硫黄から独立して選択される０〜４個のヘテロ原子を有する１０〜１６員の飽和、部分不飽和、もしくは芳香族の三環式環であり、ここで環Ａ２は、１〜４個のＲｘ基で必要に応じて置換され；
各Ｒｘは、独立して、−Ｒ、必要に応じて置換されたアルキリデニル、オキソ、ハロ、−ＮＯ２、−ＣＮ、−ＯＲ、−ＳＲ、−Ｎ（Ｒ’）２、−Ｃ（Ｏ）Ｒ、−ＣＯ２Ｒ、−Ｃ（Ｏ）Ｃ（Ｏ）Ｒ、−Ｃ（Ｏ）ＣＨ２Ｃ（Ｏ）Ｒ、−Ｓ（Ｏ）Ｒ、−Ｓ（Ｏ）２Ｒ、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）２、−Ｓ（Ｏ）２Ｎ（Ｒ’）２、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ、−Ｎ（Ｒ’）Ｃ（Ｏ）Ｒ、−Ｎ（Ｒ’）Ｎ（Ｒ’）２、−Ｎ（Ｒ’）ＯＲ、−Ｎ（Ｒ’）Ｃ（＝ＮＲ’）Ｎ（Ｒ’）２、−Ｃ（＝ＮＲ’）Ｎ（Ｒ’）２、−Ｃ＝ＮＯＲ、−Ｎ（Ｒ’）Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）２、−Ｎ（Ｒ’）Ｓ（Ｏ）２Ｎ（Ｒ’）２、−Ｎ（Ｒ’）Ｓ（Ｏ）２Ｒ，もしくは−ＯＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）２であり；
各Ｒは、独立して、水素、あるいはＣ１−６脂肪族、３〜７員の飽和もしくは部分不飽和の単環式炭素環式環、７〜１０員の飽和もしくは部分不飽和の二環式炭素環式環、窒素、酸素、もしくは硫黄から独立して選択される１〜２個のヘテロ原子を有する４〜７員の飽和もしくは部分不飽和の単環式複素環式環、窒素、酸素、もしくは硫黄から独立して選択される１〜３個のヘテロ原子を有する７〜１０員の飽和もしくは部分不飽和の二環式複素環式環、フェニル環、８〜１０員の二環式アリール環、窒素、酸素、もしくは硫黄から独立して選択される１〜３個のヘテロ原子を有する５〜６員のヘテロアリール環、または窒素、酸素、もしくは硫黄から独立して選択される１〜４個のヘテロ原子を有する８〜１０員の二環式ヘテロアリール環から選択される必要に応じて置換された基であり；
各Ｒ’は、独立して、−Ｒであるか、または同じ窒素上の２個のＲ’基は、これらの間にある原子と一緒になって、窒素、酸素、もしくは硫黄から独立して選択される１〜４個のヘテロ原子を有する必要に応じて置換された５〜８員の飽和、部分不飽和、もしくは芳香族の環を形成し；
Ｌ３は、共有結合もしくは必要に応じて置換されたＣ１−４アルキレン鎖であり、ここでＬ３の１個もしくはこれより多くのメチレン単位は、−Ｏ−、−Ｓ−、−Ｎ（Ｒ２）−、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ２）−、−Ｎ（Ｒ２）Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ２）−、−Ｎ（Ｒ２）Ｃ（Ｏ）−、−Ｎ（Ｒ２）Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−ＯＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ２）−、−Ｓ（Ｏ）２−、−Ｓ（Ｏ）２Ｎ（Ｒ２）−、−Ｎ（Ｒ２）Ｓ（Ｏ）２−、−ＯＣ（Ｏ）−、もしくは−Ｃ（Ｏ）Ｏ−によって必要に応じてかつ独立して置き換えられ；
環Ａ３は、３〜７員の飽和もしくは部分不飽和の単環式炭素環式環、７〜１０員の飽和もしくは部分不飽和の二環式炭素環式環、窒素、酸素、もしくは硫黄から独立して選択される１〜２個のヘテロ原子を有する４〜７員の飽和もしくは部分不飽和の単環式複素環式環、窒素、酸素、もしくは硫黄から独立して選択される１〜３個のヘテロ原子を有する７〜１０員の飽和もしくは部分不飽和の二環式複素環式環、フェニル環、８〜１０員の二環式アリール環、窒素、酸素、もしくは硫黄から独立して選択される１〜３個のヘテロ原子を有する５〜６員の単環式ヘテロアリール環、または窒素、酸素、もしくは硫黄から独立して選択される１〜４個のヘテロ原子を有する８〜１０員の二環式ヘテロアリール環から選択される必要に応じて置換された環であり；
環Ａ４は、窒素、酸素、もしくは硫黄から独立して選択される１〜３個のヘテロ原子を有する５〜６員のヘテロアリール環、または窒素、酸素、もしくは硫黄から独立して選択される１〜４個のヘテロ原子を有する８〜１０員の二環式ヘテロアリール環であり；ここで環Ａ４上の任意の置換可能な炭素は、Ｒ３、Ｒ４、もしくはＲ５で必要に応じて置換され、環Ａ４上の任意の置換可能な窒素は、Ｒ６で必要に応じて置換され；
Ｒ３、Ｒ４、およびＲ５の各々は、独立して、−Ｒ、−ハロ、−ＮＯ２、−ＣＮ、−ＯＲ、−ＳＲ、−Ｎ（Ｒ’）２、−Ｃ（Ｏ）Ｒ、−ＣＯ２Ｒ、−Ｃ（Ｏ）Ｃ（Ｏ）Ｒ、−Ｃ（Ｏ）ＣＨ２Ｃ（Ｏ）Ｒ、−Ｓ（Ｏ）Ｒ、−Ｓ（Ｏ）２Ｒ、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）２、−Ｓ（Ｏ）２Ｎ（Ｒ’）２、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ、−Ｎ（Ｒ’）Ｃ（Ｏ）Ｒ、−Ｎ（Ｒ’）Ｎ（Ｒ’）２、−Ｎ（Ｒ’）ＯＲ、−Ｎ（Ｒ’）Ｃ（＝ＮＲ’）Ｎ（Ｒ’）２、−Ｃ（＝ＮＲ’）Ｎ（Ｒ’）２、−Ｃ＝ＮＯＲ、−Ｎ（Ｒ’）Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）２、−Ｎ（Ｒ’）Ｓ（Ｏ）２Ｎ（Ｒ’）２、−Ｎ（Ｒ’）Ｓ（Ｏ）２Ｒ、もしくは−ＯＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）２であるか；あるいは：
Ｒ３およびＲ４、またはＲ４およびＲ５は、これらの間にある原子と一緒になって、４〜７員の部分不飽和の炭素環式環、フェニル、窒素、酸素、もしくは硫黄から独立して選択される１〜３個のヘテロ原子を有する５〜６員の部分不飽和の複素環式環、または窒素、酸素、もしくは硫黄から独立して選択される１〜３個のヘテロ原子を有する５〜６員のヘテロアリール環から選択される必要に応じて置換された縮合環を形成し；
各Ｒ６は、独立して、−Ｒ、−Ｃ（Ｏ）Ｒ、−ＣＯ２Ｒ、−Ｃ（Ｏ）Ｃ（Ｏ）Ｒ、−Ｃ（Ｏ）ＣＨ２Ｃ（Ｏ）Ｒ、−Ｓ（Ｏ）Ｒ、−Ｓ（Ｏ）２Ｒ、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）２、もしくは−Ｓ（Ｏ）２Ｎ（Ｒ’）２であるか；あるいは：
Ｒ３およびＲ６は、これらの間にある原子と一緒になって、窒素、酸素、もしくは硫黄から独立して選択される１〜３個のヘテロ原子を有する５〜６員の飽和もしくは部分不飽和の複素環式環、または窒素、酸素、もしくは硫黄から独立して選択される１〜３個のヘテロ原子を有する５〜６員のヘテロアリール環から選択される必要に応じて置換された縮合環を形成し；
ただし：
Ａ１が二価の単環式環でありかつＬ１が共有結合である場合、Ｌ２は、−Ｏ−ではない；
Ａ１が二価の単環式もしくは二環式の環である場合、Ｌ１およびＬ２は、同時に共有結合ではない；ならびに
Ｌ１、Ａ１、およびＬ２は、同時に共有結合ではない。
【００３０】
例えば、本明細書で記載されるとおりの式Ｉの化合物は、がん細胞の成長、増殖、もしくは生存を阻害するために使用され得、上記がん細胞においてＰＤＫ１−ＰＩＦ媒介性基質相互作用依存性細胞生存経路が影響を及ぼされる。
【００３１】
いくつかの実施形態において、本発明は、ＰＤＫ１−ＰＩＦ媒介性基質相互作用依存性がん生存経路の阻害を通じてがん細胞アポトーシスを誘導することによって、必要性のある被験体においてがんを処置するための方法を提供し、上記方法は、上記被験体に、本明細書で記載されるとおりの式Ｉの化合物の治療上有効な量を投与する工程を包含する。
【００３２】
いくつかの実施形態において、本発明は、ＰＤＫ１−ＰＩＦ媒介性基質相互作用依存性のがん細胞の成長もしくは増殖を阻害することによって、必要性のある被験体においてがんを処置するための方法を提供し、上記方法は、上記被験体に、本明細書で記載されるとおりの式Ｉの化合物の治療上有効な量を投与する工程を包含する。
【００３３】
いくつかの実施形態において、本発明は、ＰＤＫ１−ＰＩＦ媒介性基質相互作用に依存性であるＡｋｔ非依存性のがん細胞の成長もしくは増殖経路を阻害することによって、がん細胞の成長もしくは増殖を阻害するための方法を提供し、上記方法は、上記がん細胞と、本明細書で記載されるとおりの式Ｉの化合物の有効量とを接触させる工程を包含する。
【００３４】
いくつかの実施形態において、本発明は、ＰＤＫ１−ＰＩＦ媒介性基質相互作用に依存性であるＡｋｔ非依存性がん細胞生存経路を阻害することによって、がん細胞のアポトーシスを誘導するための方法を提供し、上記方法は、上記がん細胞と、本明細書で記載されるとおりの式Ｉの化合物の有効量とを接触させる工程を包含する。
【００３５】
いくつかの実施形態において、本発明は、がん細胞の成長もしくは増殖を阻害するための方法を提供し、上記がん細胞の成長もしくは増殖は、ＰＤＫ１によるＰＩＦ媒介性基質結合に依存性であり、上記方法は、上記がん細胞と本明細書で記載されるとおりの式Ｉの化合物とを、上記がん細胞の成長もしくは増殖を阻害するために十分な量で接触させる工程を包含する。
【００３６】
いくつかの実施形態において、本発明は、がん細胞のアポトーシスを誘導するための方法を提供し、上記がん細胞の成長もしくは増殖は、ＰＤＫ１によるＰＩＦ媒介性基質結合に依存性であり、上記方法は、上記がん細胞と、本明細書で記載されるとおりの式Ｉの化合物の有効量とを接触させる工程を包含する。
【００３７】
いくつかの実施形態において、本発明は、がん細胞においてＰＤＫ１によるＰＩＦ媒介性基質結合を阻害するための方法を提供し、上記方法は、上記細胞と式Ｉの化合物とを接触させる工程を包含し、それによって上記がん細胞の成長もしくは増殖は阻害される。
【００３８】
いくつかの実施形態において、本発明は、がん細胞においてアポトーシスを誘導するための方法を提供し、上記方法は、がん細胞と、ＰＤＫ１によるＰＩＦ媒介性基質結合を阻害する本明細書で記載されるとおりの式Ｉの化合物とを接触させる工程を包含する。
【００３９】
いくつかの実施形態において、本発明は、がんの処置における使用のための医薬を調製するための方法を提供し、上記がんの成長もしくは生存は、ＰＤＫ１−ＰＩＦ媒介性基質相互作用に依存性であり、上記医薬は、本明細書で記載されるとおりの式Ｉの化合物の治療上有効な量および薬学的に受容可能な賦形剤を含む。
【００４０】
いくつかの実施形態において、本発明は、容器およびがんの処置における使用のための医薬を含む製品を提供し、上記がんの成長もしくは生存は、ＰＤＫ１−ＰＩＦ媒介性基質相互作用に依存性であり、ここで上記医薬は、本明細書で記載されるとおりの式Ｉの化合物および薬学的に受容可能な賦形剤を含む。
【００４１】
別の局面において、本明細書で記載されるとおりの式Ｉの化合物は、がん細胞の成長、増殖、もしくは生存を阻害するために使用され得、上記がん細胞において、ＲＳＫ２依存性細胞生存経路が影響を及ぼされる。
【００４２】
いくつかの実施形態において、本発明は、ＲＳＫ２依存性生存経路の阻害を通じてがん細胞アポトーシスを誘導することによって、必要性のある被験体においてがんを処置するための方法を提供し、上記方法は、上記被験体に、本明細書で記載されるとおりの式Ｉの化合物の治療上有効な量を投与する工程を包含する。
【００４３】
いくつかの実施形態において、本発明は、ＲＳＫ２依存性がん細胞の成長もしくは増殖を阻害することによって、必要性のある被験体においてがんを処置するための方法を提供し、上記方法は、上記被験体に、本明細書で記載されるとおりの式Ｉの化合物の治療上有効な量を投与する工程を包含する。
【００４４】
いくつかの実施形態において、本発明は、がん細胞の成長もしくは増殖を阻害するための方法を提供し、上記がん細胞の成長もしくは増殖は、ＲＳＫ２のキナーゼ活性に依存性であり、上記方法は、上記がん細胞と本明細書で記載されるとおりの式Ｉの化合物とを、上記がん細胞においてＲＳＫ２活性を阻害するために十分な量で接触させる工程を包含する。
【００４５】
いくつかの実施形態において、本発明は、がん細胞においてアポトーシスを誘導するための方法を提供し、上記方法は、がん細胞と、ＰＤＫ１によるＲＳＫ２活性化を阻害する本明細書で記載されるとおりの式Ｉの化合物とを接触させる工程を包含する。
【００４６】
別の局面において、本明細書で記載されるとおりの式Ｉの化合物は、がん細胞の成長、増殖、もしくは生存を阻害するために使用され得、上記がん細胞において、Ａｋｔ非依存性細胞生存経路が影響を及ぼされ得る。このような細胞は、Ａｋｔ活性の阻害またはＡｋｔ媒介性生存経路の活性の阻害に抵抗性であると考えられる。従って、Ａｋｔがたとえ実質的に不活性であるとしても生存し得るか、またはＡｋｔインヒビターに抵抗性であるかもしくは応答しない細胞は、本明細書で記載されるとおりの式Ｉの化合物によってなお阻害され得る。
【００４７】
いくつかの実施形態において、本発明は、Ａｋｔ非依存性がん細胞生存経路の阻害を通じてがん細胞アポトーシスを誘導することによって、必要性のある被験体においてがんを処置するための方法を提供し、上記方法は、上記被験体に、本明細書で記載されるとおりの式Ｉの化合物の治療上有効な量を投与する工程を包含する。
【００４８】
いくつかの実施形態において、本発明は、Ａｋｔ非依存性がん細胞の成長もしくは増殖を阻害することによって、必要性のある被験体においてがんを処置するための方法を提供し、上記方法は、上記被験体に、本明細書で記載されるとおりの式Ｉの化合物の治療上有効な量を投与する工程を包含する。
【００４９】
いくつかの実施形態において、本発明は、がん細胞の成長もしくは増殖を阻害するための方法を提供し、上記がん細胞の成長もしくは増殖は、Ａｋｔのキナーゼ活性に依存性でなく、上記方法は、上記がん細胞と本明細書で記載されるとおりの式Ｉの化合物とを、上記がん細胞の成長もしくは増殖を阻害するために十分な量で接触させる工程を包含する。
【００５０】
いくつかの実施形態において、本発明は、がん細胞のアポトーシスを誘導するための方法を提供し、上記がん細胞の成長もしくは増殖は、Ａｋｔのキナーゼ活性に依存性でなく、上記方法は、上記がん細胞と本明細書で記載されるとおりの式Ｉの化合物の有効量とを接触させる工程を包含する。
【００５１】
いくつかの実施形態において、本発明は、がん細胞においてアポトーシスを誘導するための方法を提供し、上記がん細胞において生存性は、Ａｋｔ非依存性であり、上記方法は、上記がん細胞と、上記がん細胞においてＰＤＫ１によるＰＩＦ媒介性基質結合に干渉するために有効である本明細書で記載されるとおりの式Ｉの化合物の量とを接触させる工程を包含する。
【００５２】
いくつかの実施形態において、本発明は、がん細胞のＡｋｔ非依存性の成長もしくは増殖を阻害するための方法を提供し、上記方法は、上記がん細胞と本明細書で記載されるとおりの式Ｉの化合物の有効量とを接触させる工程を包含する。
【００５３】
いくつかの実施形態において、本発明は、がんを有する被験体を処置するための方法を提供し、上記がんの成長もしくは増殖は、Ａｋｔ非依存性であり、上記方法は、上記被験体に、がんの成長もしくは増殖を損なうために有効である本明細書で記載されるとおりの式Ｉの化合物の量を投与する工程を包含する。
【００５４】
いくつかの実施形態において、本発明は、がん細胞においてアポトーシスを誘導するための方法を提供し、上記がん細胞において、生存性は、ＲＳＫ２依存性またはＡｋｔ非依存性であり、上記方法は、上記がん細胞と、上記がん細胞においてＰＤＫ１によるＰＩＦ媒介性基質結合に干渉するために有効である本明細書で記載されるとおりの式Ｉの化合物の量とを接触させる工程を包含する。
【００５５】
いくつかの実施形態において、本発明は、がん細胞のアポトーシスを誘導するための方法を提供し、上記がん細胞の成長もしくは増殖は、ＰＤＫ１  ＰＩＦ結合活性に依存性であり、上記方法は、上記がん細胞と、本明細書で記載されるとおりの式Ｉの化合物の有効量とを接触させる工程を包含する。
【００５６】
いくつかの実施形態において、本発明は、がん細胞のアポトーシスを誘導するための方法を提供し、上記がん細胞の成長もしくは増殖は、ＰＤＫ１  ＰＩＦ結合活性に依存性であり、上記方法は、上記がん細胞と本明細書で記載されるとおりの式Ｉの化合物の有効量とを接触させる工程を包含する。
【００５７】
いくつかの実施形態において、本発明は、がん細胞のアポトーシスを誘導するための方法を提供し、上記がん細胞の成長もしくは増殖は、ＲＳＫ２活性に依存性であり、上記方法は、上記がん細胞と本明細書で記載されるとおりの式Ｉの化合物の有効量とを接触させる工程を包含する。
【００５８】
ある特定の実施形態において、本発明の方法は、式Ｉａの化合物：
【化３】
2018538244.tif 000004
またはその薬学的に受容可能な塩を使用し、ここで：
Ｒ１は、水素もしくは必要に応じて置換されたＣ１−６脂肪族であるか、または：
Ｒ１および環Ａ４上の置換基は、これらの間にある原子と一緒になって、窒素、酸素、もしくは硫黄から独立して選択される１〜３個のヘテロ原子を有する必要に応じて置換された５〜７員の部分不飽和もしくは芳香族の縮合環を形成し；
Ｘは、−Ｃ（Ｏ）−もしくは−Ｓ（Ｏ）２−であり、
Ｌ１は、共有結合、またはＣ１−４アルキレン、Ｃ２−４アルケニレン、もしくはＣ２−４アルキニレンから選択される必要に応じて置換された二価の基であり、ここでＬ１の１個もしくはこれより多くのメチレン単位は、−Ｃｙ１−、−Ｏ−、−Ｓ−、−Ｎ（Ｒ２）−、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ２）−、−Ｎ（Ｒ２）Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ２）−、−Ｎ（Ｒ２）Ｃ（Ｏ）−、−Ｎ（Ｒ２）Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−ＯＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ２）−、−Ｓ（Ｏ）２−、−Ｓ（Ｏ）２Ｎ（Ｒ２）−、−Ｎ（Ｒ２）Ｓ（Ｏ）２−、−ＯＣ（Ｏ）−、もしくは−Ｃ（Ｏ）Ｏ−によって必要に応じてかつ独立して置き換えられ；
Ｃｙ１は、フェニレン、３〜７員の飽和もしくは部分不飽和のカルボシクリレン、窒素、酸素、もしくは硫黄から独立して選択される１〜２個のヘテロ原子を有する４〜７員の飽和もしくは部分不飽和のヘテロシクリレン、または窒素、酸素、もしくは硫黄から独立して選択される１〜３個のヘテロ原子を有する５〜６員のヘテロアリーレンから選択される必要に応じて置換された二価の環であり；
各Ｒ２は、水素もしくは必要に応じて置換されたＣ１−６脂肪族であり；
Ａ１は、共有結合であるか、あるいは３〜７員の飽和もしくは部分不飽和の単環式カルボシクリレン、７〜１０員の飽和もしくは部分不飽和の二環式カルボシクリレン、窒素、酸素、もしくは硫黄から独立して選択される１〜２個のヘテロ原子を有する４〜７員の飽和もしくは部分不飽和の単環式ヘテロシクリレン、窒素、酸素、もしくは硫黄から独立して選択される１〜３個のヘテロ原子を有する７〜１０員の飽和もしくは部分不飽和の二環式ヘテロシクリレン、フェニレン、８〜１０員の二環式アリーレン、窒素、酸素、もしくは硫黄から独立して選択される１〜３個のヘテロ原子を有する５〜６員の単環式ヘテロアリーレン、または窒素、酸素、もしくは硫黄から独立して選択される１〜４個のヘテロ原子を有する８〜１０員の二環式ヘテロアリーレンから選択される必要に応じて置換された二価の環であり；
Ｌ２は、共有結合、アルキリデニレン、もしくは必要に応じて置換されたアルキレン鎖であり、ここでＬ２の１個もしくはこれより多くのメチレン単位は、−Ｏ−、−Ｓ−、−Ｎ（Ｒ２）−、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ２）−、−Ｎ（Ｒ２）Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ２）−、−Ｎ（Ｒ２）Ｃ（Ｏ）−、−Ｎ（Ｒ２）Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−ＯＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ２）−、−Ｓ（Ｏ）２−、−Ｓ（Ｏ）２Ｎ（Ｒ２）−、−Ｎ（Ｒ２）Ｓ（Ｏ）２−、−ＯＣ（Ｏ）−、もしくは−Ｃ（Ｏ）Ｏ−によって必要に応じてかつ独立して置き換えられ；
環Ａ２は、３〜７員の飽和もしくは部分不飽和の単環式炭素環式環、７〜１０員の飽和もしくは部分不飽和の二環式炭素環式環、窒素、酸素、もしくは硫黄から独立して選択される１〜２個のヘテロ原子を有する４〜７員の飽和もしくは部分不飽和の単環式複素環式環、窒素、酸素、もしくは硫黄から独立して選択される１〜３個のヘテロ原子を有する７〜１０員の飽和もしくは部分不飽和の二環式複素環式環、フェニル環、８〜１０員の二環式アリール環、窒素、酸素、もしくは硫黄から独立して選択される１〜３個のヘテロ原子を有する５〜６員の単環式ヘテロアリール環、窒素、酸素、もしくは硫黄から独立して選択される１〜４個のヘテロ原子を有する８〜１０員の二環式ヘテロアリール環、または窒素、酸素、もしくは硫黄から独立して選択される０〜４個のヘテロ原子を有する１０〜１６員の飽和、部分不飽和、もしくは芳香族の三環式環であり、ここで環Ａ２は、１〜４個のＲｘ基で必要に応じて置換され；
各Ｒｘは、独立して、−Ｒ、必要に応じて置換されたアルキリデニル、オキソ、ハロ、−ＮＯ２、−ＣＮ、−ＯＲ、−ＳＲ、−Ｎ（Ｒ’）２、−Ｃ（Ｏ）Ｒ、−ＣＯ２Ｒ、−Ｃ（Ｏ）Ｃ（Ｏ）Ｒ、−Ｃ（Ｏ）ＣＨ２Ｃ（Ｏ）Ｒ、−Ｓ（Ｏ）Ｒ、−Ｓ（Ｏ）２Ｒ、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）２、−Ｓ（Ｏ）２Ｎ（Ｒ’）２、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ、−Ｎ（Ｒ’）Ｃ（Ｏ）Ｒ、−Ｎ（Ｒ’）Ｎ（Ｒ’）２、−Ｎ（Ｒ’）ＯＲ、−Ｎ（Ｒ’）Ｃ（＝ＮＲ’）Ｎ（Ｒ’）２、−Ｃ（＝ＮＲ’）Ｎ（Ｒ’）２、−Ｃ＝ＮＯＲ、−Ｎ（Ｒ’）Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）２、−Ｎ（Ｒ’）Ｓ（Ｏ）２Ｎ（Ｒ’）２、−Ｎ（Ｒ’）Ｓ（Ｏ）２Ｒ、もしくは−ＯＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）２であり；
各Ｒは、独立して、水素であるか、あるいはＣ１−６脂肪族、３〜７員の飽和もしくは部分不飽和の単環式炭素環式環、７〜１０員の飽和もしくは部分不飽和の二環式炭素環式環、窒素、酸素、もしくは硫黄から独立して選択される１〜２個のヘテロ原子を有する４〜７員の飽和もしくは部分不飽和の単環式複素環式環、窒素、酸素、もしくは硫黄から独立して選択される１〜３個のヘテロ原子を有する７〜１０員の飽和もしくは部分不飽和の二環式複素環式環、フェニル環、８〜１０員の二環式アリール環、窒素、酸素、もしくは硫黄から独立して選択される１〜３個のヘテロ原子を有する５〜６員のヘテロアリール環、または窒素、酸素、もしくは硫黄から独立して選択される１〜４個のヘテロ原子を有する８〜１０員の二環式ヘテロアリール環から選択される必要に応じて置換された基であり；
各Ｒ’は、独立して、−Ｒであるか、あるいは同じ窒素上の２個のＲ’基は、これらの間にある原子と一緒になって、窒素、酸素、もしくは硫黄から独立して選択される１〜４個のヘテロ原子を有する必要に応じて置換された５〜８員の飽和、部分不飽和、もしくは芳香族の環を形成し；
Ｌ３は、共有結合もしくは必要に応じて置換されたＣ１−４アルキレン鎖であり、ここでＬ３の１個もしくはこれより多くのメチレン単位は、−Ｏ−、−Ｓ−、−Ｎ（Ｒ２）−、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ２）−、−Ｎ（Ｒ２）Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ２）−、−Ｎ（Ｒ２）Ｃ（Ｏ）−、−Ｎ（Ｒ２）Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−ＯＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ２）−、−Ｓ（Ｏ）２−、−Ｓ（Ｏ）２Ｎ（Ｒ２）−、−Ｎ（Ｒ２）Ｓ（Ｏ）２−、−ＯＣ（Ｏ）−、もしくは−Ｃ（Ｏ）Ｏ−によって必要に応じてかつ独立して置き換えられ；
環Ａ３は、３〜７員の飽和もしくは部分不飽和の単環式炭素環式環、７〜１０員の飽和もしくは部分不飽和の二環式炭素環式環、窒素、酸素、もしくは硫黄から独立して選択される１〜２個のヘテロ原子を有する４〜７員の飽和もしくは部分不飽和の単環式複素環式環、窒素、酸素、もしくは硫黄から独立して選択される１〜３個のヘテロ原子を有する７〜１０員の飽和もしくは部分不飽和の二環式複素環式環、フェニル環、８〜１０員の二環式アリール環、窒素、酸素、もしくは硫黄から独立して選択される１〜３個のヘテロ原子を有する５〜６員の単環式ヘテロアリール環、または窒素、酸素、もしくは硫黄から独立して選択される１〜４個のヘテロ原子を有する８〜１０員の二環式ヘテロアリール環から選択される必要に応じて置換された環であり；
環Ａ４は、窒素、酸素、もしくは硫黄から独立して選択される１〜３個のヘテロ原子を有する５〜６員のヘテロアリール環、または窒素、酸素、もしくは硫黄から独立して選択される１〜４個のヘテロ原子を有する８〜１０員の二環式ヘテロアリール環であり；ここで環Ａ４上の任意の置換可能な炭素は、Ｒ３、Ｒ４、もしくはＲ５で必要に応じて置換され、環Ａ４上の任意の置換可能な窒素は、Ｒ６で必要に応じて置換され；
Ｒ３、Ｒ４、およびＲ５の各々は、独立して、−Ｒ、−ハロ、−ＮＯ２、−ＣＮ、−ＯＲ、−ＳＲ、−Ｎ（Ｒ’）２、−Ｃ（Ｏ）Ｒ、−ＣＯ２Ｒ、−Ｃ（Ｏ）Ｃ（Ｏ）Ｒ、−Ｃ（Ｏ）ＣＨ２Ｃ（Ｏ）Ｒ、−Ｓ（Ｏ）Ｒ、−Ｓ（Ｏ）２Ｒ、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）２、−Ｓ（Ｏ）２Ｎ（Ｒ’）２、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ、−Ｎ（Ｒ’）Ｃ（Ｏ）Ｒ、−Ｎ（Ｒ’）Ｎ（Ｒ’）２、−Ｎ（Ｒ’）ＯＲ、−Ｎ（Ｒ’）Ｃ（＝ＮＲ’）Ｎ（Ｒ’）２、−Ｃ（＝ＮＲ’）Ｎ（Ｒ’）２、−Ｃ＝ＮＯＲ、−Ｎ（Ｒ’）Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）２、−Ｎ（Ｒ’）Ｓ（Ｏ）２Ｎ（Ｒ’）２、−Ｎ（Ｒ’）Ｓ（Ｏ）２Ｒ、もしくは−ＯＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）２であるか；あるいは：
Ｒ３およびＲ４、またはＲ４およびＲ５は、これらの間にある原子と一緒になって、４〜７員の部分不飽和の炭素環式環、フェニル、窒素、酸素、もしくは硫黄から独立して選択される１〜３個のヘテロ原子を有する５〜６員の部分不飽和の複素環式環、または窒素、酸素、もしくは硫黄から独立して選択される１〜３個のヘテロ原子を有する５〜６員のヘテロアリール環から選択される必要に応じて置換された縮合環を形成し；
各Ｒ６は、独立して、−Ｒ、−Ｃ（Ｏ）Ｒ、−ＣＯ２Ｒ、−Ｃ（Ｏ）Ｃ（Ｏ）Ｒ、−Ｃ（Ｏ）ＣＨ２Ｃ（Ｏ）Ｒ、−Ｓ（Ｏ）Ｒ、−Ｓ（Ｏ）２Ｒ、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）２、もしくは−Ｓ（Ｏ）２Ｎ（Ｒ’）２であるか；あるいは：
Ｒ３およびＲ６は、これらの間にある原子と一緒になって、窒素、酸素、もしくは硫黄から独立して選択される１〜３個のヘテロ原子を有する５〜６員の飽和もしくは部分不飽和の複素環式環、または窒素、酸素、もしくは硫黄から独立して選択される１〜３個のヘテロ原子を有する５〜６員のヘテロアリール環から選択される必要に応じて置換された縮合環を形成する。
【００５９】
ある特定の実施形態において、本発明の方法は、式Ｉａ（上記）の化合物、またはその薬学的に受容可能な塩を使用し、ここで：
Ｒ１は、水素もしくは必要に応じて置換されたＣ１−６脂肪族であり；
Ｘは、−Ｃ（Ｏ）−もしくは−Ｓ（Ｏ）２−であり；
Ｌ１は、共有結合もしくは必要に応じて置換されたＣ１−４アルキレンであり；
Ａ１は、３〜７員の飽和もしくは部分不飽和の単環式カルボシクリレン、７〜１０員の飽和もしくは部分不飽和の二環式カルボシクリレン、窒素、酸素、もしくは硫黄から独立して選択される１〜２個のヘテロ原子を有する４〜７員の飽和もしくは部分不飽和の単環式ヘテロシクリレン、窒素、酸素、もしくは硫黄から独立して選択される１〜３個のヘテロ原子を有する７〜１０員の飽和もしくは部分不飽和の二環式ヘテロシクリレン、フェニレン、８〜１０員の二環式アリーレン、窒素、酸素、もしくは硫黄から独立して選択される１〜３個のヘテロ原子を有する５〜６員の単環式ヘテロアリーレン、または窒素、酸素、もしくは硫黄から独立して選択される１〜４個のヘテロ原子を有する８〜１０員の二環式ヘテロアリーレンから選択される必要に応じて置換された二価の環であり；
Ｌ２は、共有結合もしくは必要に応じて置換されたアルキレン鎖であり；
環Ａ２は、３〜７員の飽和もしくは部分不飽和の単環式炭素環式環、７〜１０員の飽和もしくは部分不飽和の二環式炭素環式環、窒素、酸素、もしくは硫黄から独立して選択される１〜２個のヘテロ原子を有する４〜７員の飽和もしくは部分不飽和の単環式複素環式環、窒素、酸素、もしくは硫黄から独立して選択される１〜３個のヘテロ原子を有する７〜１０員の飽和もしくは部分不飽和の二環式複素環式環、フェニル環、８〜１０員の二環式アリール環、窒素、酸素、もしくは硫黄から独立して選択される１〜３個のヘテロ原子を有する５〜６員の単環式ヘテロアリール環、窒素、酸素、もしくは硫黄から独立して選択される１〜４個のヘテロ原子を有する８〜１０員の二環式ヘテロアリール環、または窒素、酸素、もしくは硫黄から独立して選択される０〜４個のヘテロ原子を有する１０〜１６員の飽和、部分不飽和、もしくは芳香族の三環式環であり、ここで環Ａ２は、１〜４個のＲｘ基で必要に応じて置換され；
各Ｒｘは、独立して、−Ｒ、必要に応じて置換されたアルキリデニル、オキソ、−ハロ、−ＮＯ２、−ＣＮ、−ＯＲ、−ＳＲ、−Ｎ（Ｒ’）２、−Ｃ（Ｏ）Ｒ、−ＣＯ２Ｒ、−Ｃ（Ｏ）Ｃ（Ｏ）Ｒ、−Ｃ（Ｏ）ＣＨ２Ｃ（Ｏ）Ｒ、−Ｓ（Ｏ）Ｒ、−Ｓ（Ｏ）２Ｒ、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）２、−Ｓ（Ｏ）２Ｎ（Ｒ’）２、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ、−Ｎ（Ｒ’）Ｃ（Ｏ）Ｒ、−Ｎ（Ｒ’）Ｎ（Ｒ’）２、−Ｎ（Ｒ’）ＯＲ、−Ｎ（Ｒ’）Ｃ（＝ＮＲ’）Ｎ（Ｒ’）２、−Ｃ（＝ＮＲ’）Ｎ（Ｒ’）２、−Ｃ＝ＮＯＲ、−Ｎ（Ｒ’）Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）２、−Ｎ（Ｒ’）Ｓ（Ｏ）２Ｎ（Ｒ’）２、−Ｎ（Ｒ’）Ｓ（Ｏ）２Ｒ、もしくは−ＯＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）２であり；
各Ｒは、独立して、水素であるか、あるいはＣ１−６脂肪族、３〜７員の飽和もしくは部分不飽和の単環式炭素環式環、７〜１０員の飽和もしくは部分不飽和の二環式炭素環式環、窒素、酸素、もしくは硫黄から独立して選択される１〜２個のヘテロ原子を有する４〜７員の飽和もしくは部分不飽和の単環式複素環式環、窒素、酸素、もしくは硫黄から独立して選択される１〜３個のヘテロ原子を有する７〜１０員の飽和もしくは部分不飽和の二環式複素環式環、フェニル環、８〜１０員の二環式アリール環、窒素、酸素、もしくは硫黄から独立して選択される１〜３個のヘテロ原子を有する５〜６員のヘテロアリール環、または窒素、酸素、もしくは硫黄から独立して選択される１〜４個のヘテロ原子を有する８〜１０員の二環式ヘテロアリール環から選択される必要に応じて置換された基であり；
各Ｒ’は、独立して、−Ｒであるか、または同じ窒素上の２個のＲ’基は、これらの間にある原子と一緒になって、窒素、酸素、もしくは硫黄から独立して選択される１〜４個のヘテロ原子を有する必要に応じて置換された５〜８員の飽和、部分不飽和、もしくは芳香族の環を形成し；
Ｌ３は、共有結合もしくは必要に応じて置換されたＣ１−４アルキレン鎖であるか；または
Ｌ３は、置換されていないメチレン、またはメチルもしくはエチルで置換されたメチレンであり；
環Ａ３は、７〜１０員の飽和もしくは部分不飽和の二環式炭素環式環、窒素もしくは硫黄から独立して選択される１〜２個のヘテロ原子を有する４〜７員の飽和もしくは部分不飽和の単環式複素環式環、窒素、酸素、もしくは硫黄から独立して選択される１〜３個のヘテロ原子を有する７〜１０員の飽和もしくは部分不飽和の二環式複素環式環、フェニル環、８〜１０員の二環式アリール環、窒素、酸素、もしくは硫黄から独立して選択される１〜３個のヘテロ原子を有する５〜６員の単環式ヘテロアリール環、または窒素、酸素、もしくは硫黄から独立して選択される１〜４個のヘテロ原子を有する８〜１０員の二環式ヘテロアリール環から選択される必要に応じて置換された環であり；
環Ａ４は、
【化４】
2018538244.tif 000005
であり；そして
Ｒ３は、−Ｒ、−ハロ、−ＮＯ２、−ＣＮ、−ＯＲ、−ＳＲ、−Ｎ（Ｒ’）２、−Ｃ（Ｏ）Ｒ、−ＣＯ２Ｒ、−Ｃ（Ｏ）Ｃ（Ｏ）Ｒ、−Ｃ（Ｏ）ＣＨ２Ｃ（Ｏ）Ｒ、−Ｓ（Ｏ）Ｒ、−Ｓ（Ｏ）２Ｒ、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）２、−Ｓ（Ｏ）２Ｎ（Ｒ’）２、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ、−Ｎ（Ｒ’）Ｃ（Ｏ）Ｒ、−Ｎ（Ｒ’）Ｎ（Ｒ’）２、−Ｎ（Ｒ’）ＯＲ、−Ｎ（Ｒ’）Ｃ（＝ＮＲ’）Ｎ（Ｒ’）２、−Ｃ（＝ＮＲ’）Ｎ（Ｒ’）２、−Ｃ＝ＮＯＲ、−Ｎ（Ｒ’）Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）２、−Ｎ（Ｒ’）Ｓ（Ｏ）２Ｎ（Ｒ’）２、−Ｎ（Ｒ’）Ｓ（Ｏ）２Ｒ、もしくは−ＯＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）２であり；
Ｒ４は、−Ｒ、−ハロ、−ＮＯ２、−ＣＮ、−ＯＲ、−ＳＲ、−Ｎ（Ｒ’）２、−Ｃ（Ｏ）Ｒ、−ＣＯ２Ｒ、−Ｃ（Ｏ）Ｃ（Ｏ）Ｒ、−Ｃ（Ｏ）ＣＨ２Ｃ（Ｏ）Ｒ、−Ｓ（Ｏ）Ｒ、−Ｓ（Ｏ）２Ｒ、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）２、−Ｓ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）２、−Ｓ（Ｏ）２Ｎ（Ｒ’）２、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ、−Ｎ（Ｒ’）Ｃ（Ｏ）Ｒ、−Ｎ（Ｒ’）Ｎ（Ｒ’）２、−Ｎ（Ｒ’）ＯＲ，−Ｎ（Ｒ’）Ｃ（＝ＮＲ’）Ｎ（Ｒ’）２、−Ｃ（＝ＮＲ’）Ｎ（Ｒ’）２、−Ｃ＝ＮＯＲ、−Ｎ（Ｒ’）Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）２、−ＮＨＳ（Ｏ）Ｃ１−６アルキル、−Ｎ（Ｒ’）Ｓ（Ｏ）２Ｎ（Ｒ’）２、−Ｎ（Ｒ’）Ｓ（Ｏ）２Ｒ、もしくは−ＯＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）２であるか；あるいは：
Ｒ３およびＲ４は、これらの間にある原子と一緒になって、４〜７員の部分不飽和の炭素環式環、フェニル、窒素、酸素、もしくは硫黄から独立して選択される１〜３個のヘテロ原子を有する５〜６員の部分不飽和の複素環式環、または窒素、酸素、もしくは硫黄から独立して選択される１〜３個のヘテロ原子を有する５〜６員のヘテロアリール環から選択される必要に応じて置換された縮合環を形成する。
【００６０】
このような化合物およびそれらの調製法は、国際特許公開ＷＯ  ２０１１−０４４１５７  Ａ１（その内容全体は、本明細書に参考として援用される）に詳細に記載される。
【００６１】
ある特定の実施形態において、本発明は、式Ｉの化合物の使用法を提供し、ここで環Ａ３は、フェニルであり、メタ位もしくはオルト位で１個もしくは２個のフッ素によって置換されている。
【００６２】
ある特定の実施形態において、本発明の方法は、式Ｉｓの化合物：
【化５】
2018538244.tif 000006
またはその薬学的に受容可能な塩を使用し、
ここでＡ１、Ａ２、Ｌ１およびＬ２の各々は、式Ｉに関して定義されるとおりであり、そして
環Ａ４上の任意の置換可能な炭素は、Ｒ３、Ｒ４、もしくはＲ５で必要に応じて置換され、環Ａ４上の任意の置換可能な窒素は、Ｒ６で必要に応じて置換され；
Ｒ３、Ｒ４、およびＲ５の各々は、独立して、−Ｒ、−ハロ、−ＮＯ２、−ＣＮ、−ＯＲ、−ＳＲ、−Ｎ（Ｒ’）２、−Ｃ（Ｏ）Ｒ、−ＣＯ２Ｒ、−Ｃ（Ｏ）Ｃ（Ｏ）Ｒ、−Ｃ（Ｏ）ＣＨ２Ｃ（Ｏ）Ｒ、−Ｓ（Ｏ）Ｒ、−Ｓ（Ｏ）２Ｒ、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）２、−Ｓ（Ｏ）２Ｎ（Ｒ’）２、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ、−Ｎ（Ｒ’）Ｃ（Ｏ）Ｒ、−Ｎ（Ｒ’）Ｎ（Ｒ’）２、−Ｎ（Ｒ’）ＯＲ、−Ｎ（Ｒ’）Ｃ（＝ＮＲ’）Ｎ（Ｒ’）２、−Ｃ（＝ＮＲ’）Ｎ（Ｒ’）２、−Ｃ＝ＮＯＲ、−Ｎ（Ｒ’）Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）２、−Ｎ（Ｒ’）Ｓ（Ｏ）２Ｎ（Ｒ’）２、−Ｎ（Ｒ’）Ｓ（Ｏ）２Ｒ、もしくは−ＯＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）２であるか；あるいは：
Ｒ３およびＲ４、またはＲ４およびＲ５は、これらの間にある原子と一緒になって、４〜７員の部分不飽和の炭素環式環、フェニル、窒素、酸素、もしくは硫黄から独立して選択される１〜３個のヘテロ原子を有する５〜６員の部分不飽和の複素環式環、または窒素、酸素、もしくは硫黄から独立して選択される１〜３個のヘテロ原子を有する５〜６員のヘテロアリール環から選択される必要に応じて置換された縮合環を形成し；
各Ｒ６は、独立して、−Ｒ、−Ｃ（Ｏ）Ｒ、−ＣＯ２Ｒ、−Ｃ（Ｏ）Ｃ（Ｏ）Ｒ、−Ｃ（Ｏ）ＣＨ２Ｃ（Ｏ）Ｒ、−Ｓ（Ｏ）Ｒ、−Ｓ（Ｏ）２Ｒ、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）２、もしくは−Ｓ（Ｏ）２Ｎ（Ｒ’）２であるか；あるいは：
Ｒ３およびＲ６は、これらの間にある原子と一緒になって、窒素、酸素、もしくは硫黄から独立して選択される１〜３個のヘテロ原子を有する５〜６員の飽和もしくは部分不飽和の複素環式環、または窒素、酸素、もしくは硫黄から独立して選択される１〜３個のヘテロ原子を有する５〜６員のヘテロアリール環から選択される必要に応じて置換された縮合環を形成し；
Ｒ７は、水素もしくはメチルであり；そして
各Ｒ８は、独立して、水素もしくはハロである。
【００６３】
ある特定の実施形態において、本発明の方法は、式Ｉｗの化合物：
【化６】
2018538244.tif 000007
またはその薬学的に受容可能な塩を使用し、
ここでＡ１、Ａ２、Ｌ１およびＬ２の各々は、式Ｉに関して定義されるとおりであり、環Ａ４上の任意の置換可能な炭素は、Ｒ３、Ｒ４、もしくはＲ５で必要に応じて置換され、環Ａ４上の任意の置換可能な窒素は、Ｒ６で必要に応じて置換され；
Ｒ３、Ｒ４、およびＲ５の各々は、独立して、−Ｒ、−ハロ、−ＮＯ２、−ＣＮ、−ＯＲ、−ＳＲ、−Ｎ（Ｒ’）２、−Ｃ（Ｏ）Ｒ、−ＣＯ２Ｒ、−Ｃ（Ｏ）Ｃ（Ｏ）Ｒ、−Ｃ（Ｏ）ＣＨ２Ｃ（Ｏ）Ｒ、−Ｓ（Ｏ）Ｒ、−Ｓ（Ｏ）２Ｒ、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）２、−Ｓ（Ｏ）２Ｎ（Ｒ’）２、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ、−Ｎ（Ｒ’）Ｃ（Ｏ）Ｒ、−Ｎ（Ｒ’）Ｎ（Ｒ’）２、−Ｎ（Ｒ’）ＯＲ、−Ｎ（Ｒ’）Ｃ（＝ＮＲ’）Ｎ（Ｒ’）２、−Ｃ（＝ＮＲ’）Ｎ（Ｒ’）２、−Ｃ＝ＮＯＲ、−Ｎ（Ｒ’）Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）２、−Ｎ（Ｒ’）Ｓ（Ｏ）２Ｎ（Ｒ’）２、−Ｎ（Ｒ’）Ｓ（Ｏ）２Ｒ、もしくは−ＯＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）２であるか；あるいは：
Ｒ３およびＲ４、またはＲ４およびＲ５は、これらの間にある原子と一緒になって、４〜７員の部分不飽和の炭素環式環、フェニル、窒素、酸素、もしくは硫黄から独立して選択される１〜３個のヘテロ原子を有する５〜６員の部分不飽和の複素環式環、または窒素、酸素、もしくは硫黄から独立して選択される１〜３個のヘテロ原子を有する５〜６員のヘテロアリール環から選択される必要に応じて置換された縮合環を形成し；
各Ｒ６は、独立して、−Ｒ、−Ｃ（Ｏ）Ｒ、−ＣＯ２Ｒ、−Ｃ（Ｏ）Ｃ（Ｏ）Ｒ、−Ｃ（Ｏ）ＣＨ２Ｃ（Ｏ）Ｒ、−Ｓ（Ｏ）Ｒ、−Ｓ（Ｏ）２Ｒ、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）２、もしくは−Ｓ（Ｏ）２Ｎ（Ｒ’）２であるか；あるいは：
Ｒ３およびＲ６は、これらの間にある原子と一緒になって、窒素、酸素、もしくは硫黄から独立して選択される１〜３個のヘテロ原子を有する５〜６員の飽和もしくは部分不飽和の複素環式環、または窒素、酸素、もしくは硫黄から独立して選択される１〜３個のヘテロ原子を有する５〜６員のヘテロアリール環から選択される必要に応じて置換された縮合環を形成する。
【００６４】
ある特定の実施形態において、本発明の方法は、式Ｉｘの化合物：
【化７】
2018538244.tif 000008
またはその薬学的に受容可能な塩を使用し、
ここでＡ１、Ａ２、Ｌ１およびＬ２の各々は、式Ｉに関して定義されるとおりであり、そしてＲ３およびＲ４の各々は、独立して、−Ｒ、−ハロ、−ＮＯ２、−ＣＮ、−ＯＲ、−ＳＲ、−Ｎ（Ｒ’）２、−Ｃ（Ｏ）Ｒ、−ＣＯ２Ｒ、−Ｃ（Ｏ）Ｃ（Ｏ）Ｒ、−Ｃ（Ｏ）ＣＨ２Ｃ（Ｏ）Ｒ、−Ｓ（Ｏ）Ｒ、−Ｓ（Ｏ）２Ｒ、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）２、−Ｓ（Ｏ）２Ｎ（Ｒ’）２、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ、−Ｎ（Ｒ’）Ｃ（Ｏ）Ｒ、−Ｎ（Ｒ’）Ｎ（Ｒ’）２、−Ｎ（Ｒ’）ＯＲ、−Ｎ（Ｒ’）Ｃ（＝ＮＲ’）Ｎ（Ｒ’）２、−Ｃ（＝ＮＲ’）Ｎ（Ｒ’）２、−Ｃ＝ＮＯＲ、−Ｎ（Ｒ’）Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）２、−Ｎ（Ｒ’）Ｓ（Ｏ）２Ｎ（Ｒ’）２、−Ｎ（Ｒ’）Ｓ（Ｏ）２Ｒ、もしくは−ＯＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）２であるか；あるいは：
Ｒ３およびＲ４は、これらの間にある原子と一緒になって、４〜７員の部分不飽和の炭素環式環、フェニル、窒素、酸素、もしくは硫黄から独立して選択される１〜３個のヘテロ原子を有する５〜６員の部分不飽和の複素環式環、または窒素、酸素、もしくは硫黄から独立して選択される１〜３個のヘテロ原子を有する５〜６員のヘテロアリール環から選択される必要に応じて置換された縮合環を形成する。
【００６５】
ある特定の実施形態において、本発明の方法は、式Ｉｙの化合物：
【化８】
2018538244.tif 000009
またはその薬学的に受容可能な塩を使用し、
ここでＡ１、Ａ２、Ｌ１およびＬ２の各々は、式Ｉに関して定義されるとおりであり、そしてＲ３は、−Ｒ、−ハロ、−ＮＯ２、−ＣＮ、−ＯＲ、−ＳＲ、−Ｎ（Ｒ’）２、−Ｃ（Ｏ）Ｒ、−ＣＯ２Ｒ、−Ｃ（Ｏ）Ｃ（Ｏ）Ｒ、−Ｃ（Ｏ）ＣＨ２Ｃ（Ｏ）Ｒ、−Ｓ（Ｏ）Ｒ、−Ｓ（Ｏ）２Ｒ、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）２、−Ｓ（Ｏ）２Ｎ（Ｒ’）２、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ、−Ｎ（Ｒ’）Ｃ（Ｏ）Ｒ、−Ｎ（Ｒ’）Ｎ（Ｒ’）２、−Ｎ（Ｒ’）ＯＲ、−Ｎ（Ｒ’）Ｃ（＝ＮＲ’）Ｎ（Ｒ’）２、−Ｃ（＝ＮＲ’）Ｎ（Ｒ’）２、−Ｃ＝ＮＯＲ、−Ｎ（Ｒ’）Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）２、−Ｎ（Ｒ’）Ｓ（Ｏ）２Ｎ（Ｒ’）２、−Ｎ（Ｒ’）Ｓ（Ｏ）２Ｒ、もしくは−ＯＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）２である。
【００６６】
ある特定の実施形態において、本発明の方法は、式Ｉｚの化合物：
【化９】
2018538244.tif 000010
またはその薬学的に受容可能な塩を使用し、
ここでＡ１、Ａ２、Ｌ１およびＬ２は、式Ｉに関して定義されるとおりである。
【００６７】
ある特定の実施形態において、本発明の方法は、以下の化合物のうちのいずれかを使用する：
【化１０−１】
2018538244.tif 000011
【化１０−２】
2018538244.tif 000012
【化１０−３】
2018538244.tif 000013
【化１０−４】
2018538244.tif 000014
【化１０−５】
2018538244.tif 000015
【化１０−６】
2018538244.tif 000016
【化１０−７】
2018538244.tif 000017
またはその薬学的に受容可能な塩。
【００６８】
ある特定の実施形態において、本発明の方法は、以下の化合物のうちのいずれかを使用する：
【化１１】
2018538244.tif 000018
３−［４−（３−アミノ−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｂ］ピリジン−５−イル）−ベンジルアミノ］−６−シアノ−ピラジン−２−カルボン酸［１−（３，４−ジフルオロ−フェニル）−エチル］−アミド（化合物３）、
【化１２】
2018538244.tif 000019
３−［４−（３−アミノ−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｂ］ピラジン−５−イル）−ベンジルアミノ］−６−シアノ−ピラジン−２−カルボン酸［１−（３，４−ジフルオロ−フェニル）−エチル］−アミド（化合物１）、
【化１３】
2018538244.tif 000020
６−シアノ−３−［４−（３−メチルアミノ−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｂ］ピリジン−５−イル）−ベンジルアミノ］−ピラジン−２−カルボン酸［１−（３，４−ジフルオロ−フェニル）−エチル］−アミド（化合物２）、または前述のうちのいずれかの薬学的に受容可能な塩。
【００６９】
別の局面において、本発明は、がんの処置のための医薬の調製のための本明細書で記載されるとおりの式Ｉの化合物の使用であって、このがんにおいて、ＰＤＫ１−ＰＩＦ媒介性基質相互作用依存性細胞生存経路が影響を及ぼされる使用を提供する。
【００７０】
別の局面において、本発明は、がんの処置のための医薬の調製のための本明細書で記載されるとおりの式Ｉの化合物の使用であって、このがんにおいて、ＲＳＫ２依存性細胞生存経路が影響を及ぼされる使用を提供する。
【００７１】
別の局面において、本発明は、がんの処置のための医薬の調製のための本明細書で記載されるとおりの式Ｉの化合物の使用であって、このがんにおいて、Ａｋｔ非依存性細胞生存経路が影響を及ぼされる使用を提供する。
【００７２】
具体的な官能基および化学用語の定義は、以下でより詳細に記載される。本発明の目的のために、化学元素は、元素周期表（ＣＡＳバージョン、  Ｈａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ａｎｄ  Ｐｈｙｓｉｃｓ，  第７５版、中表紙）に従って同定され、具体的な官能基は、一般に、その中で記載されるように定義される。さらに、有機化学の一般原理、ならびに具体的な官能部分および反応性は、以下に記載される：Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，  Ｔｈｏｍａｓ  Ｓｏｒｒｅｌｌ，  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  Ｂｏｏｋｓ，  Ｓａｕｓａｌｉｔｏ，  １９９９；  Ｓｍｉｔｈ  ａｎｄ  Ｍａｒｃｈ  Ｍａｒｃｈ’ｓ  Ａｄｖａｎｃｅｄ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，  第５版，  Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ，  Ｉｎｃ．，  Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，  ２００１；  Ｌａｒｏｃｋ，  Ｃｏｍｐｒｅｈｅｎｓｉｖｅ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎｓ，  ＶＣＨ  Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ，  Ｉｎｃ．，  Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，  １９８９；  Ｃａｒｒｕｔｈｅｒｓ，  Ｓｏｍｅ  Ｍｏｄｅｒｎ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｏｆ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，  第３版，  Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｐｒｅｓｓ，  Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ，  １９８７；これらの各々の内容全体は、本明細書に参考として援用される。
【００７３】
別段述べられなければ、本明細書で示される構造はまた、この構造の全ての異性形態（例えば、エナンチオマー、ジアステレオマー、および幾何（もしくはコンホメーション））形態を含むことが意味される；例えば、各不斉中心に関するＲ配置およびＳ配置、ＺおよびＥ二重結合異性体、ならびにＺおよびＥコンホメーション異性体。従って、本発明の化合物の単一の立体化学異性体、ならびにエナンチオマー、ジアステレオマー、および幾何（またはコンホメーションの）混合物は、本発明の範囲内である。別段述べられなければ、本発明の化合物の全ての互変異性形態は、本発明の範囲内である。さらに、別段述べられなければ、本明細書で示される構造はまた、１もしくはこれより多くの同位体が富化された原子の存在においてのみ異なる化合物を含むことが意味される。例えば、重水素もしくはトリチウムによる水素の置換、または１３Ｃ富化もしくは１４Ｃ富化炭素による炭素の置換を含む本発明の構造を有する化合物は、本発明の範囲内である。このような化合物は、例えば、分析ツールとして、生物学的アッセイにおけるプローブとして、または本発明に従う治療剤として、有用である。
【００７４】
特定のエナンチオマーが好ましい場合、それは、いくつかの実施形態においては、相当するエナンチオマーを実質的に含まずに提供されてもよく、「光学的に富化（ｏｐｔｉｃａｌｌｙ  ｅｎｒｉｃｈｅｄ）」されているともいわれ得る。「光学的に富化」されているとは、本明細書で使用される場合、その化合物が１種のエナンチオマーの顕著により大きな割合で構成されることを意味する。ある特定の実施形態において、その化合物は、好ましいエナンチオマーの少なくとも約９０重量％で構成される。他の実施形態において、その化合物は、好ましいエナンチオマーの少なくとも約９５重量％、９８重量％、もしくは９９重量％で構成される。好ましいエナンチオマーは、当業者に公知の任意の方法（キラル高速液体クラマトグラフィー（ＨＰＬＣ）ならびにキラル塩の形成および結晶化が挙げられる）によってラセミ混合物から単離され得るか、または不斉合成によって調製され得る。例えば、Ｊａｃｑｕｅｓら，  Ｅｎａｎｔｉｏｍｅｒｓ，  Ｒａｃｅｍａｔｅｓ  ａｎｄ  Ｒｅｓｏｌｕｔｉｏｎｓ  （Ｗｉｌｅｙ  Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ，  Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，  １９８１）；  Ｗｉｌｅｎら，  Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ  ３３：２７２５  （１９７７）；  Ｅｌｉｅｌ，  Ｅ．Ｌ．，  Ｓｔｅｒｅｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ｏｆ  Ｃａｒｂｏｎ  Ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ  （ＭｃＧｒａｗ−Ｈｉｌｌ，  ＮＹ，  １９６２）；  Ｗｉｌｅｎ，  Ｓ．Ｈ．  Ｔａｂｌｅｓ  ｏｆ  Ｒｅｓｏｌｖｉｎｇ  Ａｇｅｎｔｓ  ａｎｄ  Ｏｐｔｉｃａｌ  Ｒｅｓｏｌｕｔｉｏｎｓ  ｐ．  ２６８  （Ｅ．Ｌ．  Ｅｌｉｅｌ，  Ｅｄ．，  Ｕｎｉｖ．  ｏｆ  Ｎｏｔｒｅ  Ｄａｍｅ  Ｐｒｅｓｓ，  Ｎｏｔｒｅ  Ｄａｍｅ，  ＩＮ  １９７２）を参照のこと。
【００７５】
用語「ヘテロ原子（ｈｅｔｅｒｏａｔｏｍ）」とは、酸素、硫黄、窒素、リン、もしくはケイ素（窒素、硫黄、リン、もしくはケイ素の任意の酸化形態；任意の塩基性窒素の四級化形態；または複素環式環の置換可能な窒素、例えば、Ｎ（３，４−ジヒドロ−２Ｈ−ピロリル中にあるような）、ＮＨ（ピロリジニル中にあるような）もしくはＮＲ＋（Ｎ置換されたピロリジニル中にあるような）を含む）のうちの１もしくはこれより多くを意味する。
【００７６】
「ＰＤＫ１触媒活性（ＰＤＫ１  ｃａｔａｌｙｔｉｃ  ａｃｔｉｖｉｔｙ）」とは、本明細書で使用される場合、ＰＤＫ１キナーゼ触媒活性をいう。従って、ＰＤＫ１触媒活性が提供された化合物の存在下で低減される場合、ＰＤＫ１基質（例えば、自己リン酸化の場合には、ＡｋｔもしくはＰＤＫ１それ自体）のリン酸化が、その提供される化合物の非存在下でのリン酸化速度に対して低減される。いくつかの実施形態において、ＰＤＫ１触媒活性に対する提供される化合物のＩＣ５０は、１μＭ未満である。他の実施形態において、ＰＤＫ１触媒活性に対する提供される化合物のＩＣ５０は、５００ｎＭ未満である。他の実施形態において、ＰＤＫ１触媒活性に対する提供される化合物のＩＣ５０は、１００ｎＭ未満である。他の実施形態において、ＰＤＫ１触媒活性に対する提供される化合物のＩＣ５０は、１０ｎＭ未満である。他の実施形態において、ＰＤＫ１触媒活性に対する提供される化合物のＩＣ５０は、１ｎＭ未満である。他の実施形態において、ＰＤＫ１触媒活性に対する提供される化合物のＩＣ５０は、０．１ｎＭ〜１０μＭである。他の実施形態において、ＰＤＫ１触媒活性に対する提供される化合物のＩＣ５０は、０．１ｎＭ〜１μＭである。他の実施形態において、ＰＤＫ１触媒活性に対する提供される化合物のＩＣ５０は、０．１ｎＭ〜１００ｎＭである。他の実施形態において、ＰＤＫ１触媒活性に対する提供される化合物のＩＣ５０は、０．１ｎＭ〜１０ｎＭである。
【００７７】
「ＰＤＫ１  ＰＩＦ結合活性（ＰＤＫ１  ＰＩＦ−ｂｉｎｄｉｎｇ  ａｃｔｉｖｉｔｙ）」とは、本明細書で使用される場合、ＰＤＫ１によるＰＩＦ依存性基質結合に言及する。従って、ＰＤＫ１  ＰＩＦ結合活性が、提供される化合物の存在下で低減される場合、ＰＩＦ結合依存性ＰＤＫ１基質（例えば、ＲＳＫ２）のリン酸化は、提供される化合物の非存在下でのリン酸化速度に対して低減される。いくつかの実施形態において、ＰＤＫ１  ＰＩＦ結合活性に対する提供される化合物のＩＣ５０は、１μＭ未満である。他の実施形態において、ＰＤＫ１  ＰＩＦ結合活性に対する提供される化合物のＩＣ５０は、５００ｎＭ未満である。他の実施形態において、ＰＤＫ１  ＰＩＦ結合活性に対する提供される化合物のＩＣ５０は、１００ｎＭ未満である。他の実施形態において、ＰＤＫ１  ＰＩＦ結合活性に対する提供される化合物のＩＣ５０は、１０ｎＭ未満である。他の実施形態において、ＰＤＫ１  ＰＩＦ結合活性に対する提供される化合物のＩＣ５０は、１ｎＭ未満である。他の実施形態において、ＰＤＫ１  ＰＩＦ結合活性に対する提供される化合物のＩＣ５０は、０．１ｎＭ〜１０μＭである。他の実施形態において、ＰＤＫ１  ＰＩＦ結合活性に対する提供される化合物のＩＣ５０は、０．１ｎＭ〜１μＭである。他の実施形態において、ＰＤＫ１  ＰＩＦ結合活性に対する提供される化合物のＩＣ５０は、０．１ｎＭ〜１００ｎＭである。他の実施形態において、ＰＤＫ１  ＰＩＦ結合活性に対する提供される化合物のＩＣ５０は、０．１ｎＭ〜１０ｎＭである。
【００７８】
「ＲＳＫ２活性化活性（ＲＳＫ２  ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ  ａｃｔｉｖｉｔｙ）」とは、本明細書で使用される場合、ＲＳＫ２のリン酸化（例えば、ＰＤＫ１による）に言及する。従って、ＲＳＫ２活性化活性が、提供される化合物の存在下で低減される場合、ＲＳＫ２のリン酸化は、提供される化合物の非存在下でのリン酸化速度に対して低減される。いくつかの実施形態において、ＲＳＫ２活性化活性に対する提供される化合物のＩＣ５０は、１μＭ未満である。他の実施形態において、ＲＳＫ２活性化活性に対する提供される化合物のＩＣ５０は、５００ｎＭ未満である。他の実施形態において、ＲＳＫ２活性化活性に対する提供される化合物のＩＣ５０は、１００ｎＭ未満である。他の実施形態において、ＲＳＫ２活性化活性に対する提供される化合物のＩＣ５０は、１０ｎＭ未満である。他の実施形態において、ＲＳＫ２活性化活性に対する提供される化合物のＩＣ５０は、１ｎＭ未満である。他の実施形態において、ＲＳＫ２活性化活性に対する提供される化合物のＩＣ５０は、０．１ｎＭ〜１０μＭである。他の実施形態において、ＲＳＫ２活性化活性に対する提供される化合物のＩＣ５０は、０．１ｎＭ〜１μＭである。他の実施形態において、ＲＳＫ２活性化活性に対する提供される化合物のＩＣ５０は、０．１ｎＭ〜１００ｎＭである。他の実施形態において、ＲＳＫ２活性化活性に対する提供される化合物のＩＣ５０は、０．１ｎＭ〜１０ｎＭである。
【００７９】
別の局面において、本明細書で記載されるとおりの式Ｉの化合物は、ある特定のＰＤＫ１活性（ＰＩ非依存性ＰＩＦポケット基質結合およびＰＤＫ１−ＰＩＦ媒介性基質相互作用依存性の細胞成長もしくは増殖が挙げられる）を阻害する（すなわち、低減する）ことによって緩和され得る１もしくはこれより多くの疾患、障害、および／もしくは状態の処置のために有用である。本明細書で使用される場合、用語「処置（ｔｒｅａｔｍｅｎｔ）」、「処置する（ｔｒｅａｔ）」、および「処置する（ｔｒｅａｔｉｎｇ）」とは、本明細書で記載されるように、疾患もしくは障害を、またはこれらの１もしくはこれより多くの症状を改善する、緩和する、それらの開始を遅らせる、またはそれらの進行を阻害することに言及する。いくつかの実施形態において、処置は、１もしくはこれより多くの症状が発生した後に投与され得る。他の実施形態において、処置は、症状の非存在下で投与され得る。例えば、処置は、症状の開始前に（例えば、症状の履歴に鑑みておよび／または遺伝的もしくは他の感受性因子に鑑みて）、感受性のある個体へと投与され得る。処置はまた、症状が消散した後に、例えば、それらの再発を防止もしくは遅らせるために継続され得る。
【００８０】
一局面において、本発明は、必要性のある被験体にいてがんを処置するための方法を提供する。いくつかの実施形態において、提供される方法は、提供される化合物の治療上有効な量を上記被験体に投与する工程を包含する。用語「がん（ｃａｎｃｅｒ）」とは、異常な細胞成長および／もしくは増殖が関わる疾患もしくは障害を含む。いくつかの実施形態において、本発明に従って処置されるがんは、非限定的な例によれば、神経膠腫、甲状腺がん、乳がん、肺がん（例えば、小細胞肺がん、非小細胞肺がん）、胃がん、子宮頸がん、黒色腫、皮膚がん、結腸直腸がん、消化管間質腫瘍、膵臓がん、胆管がん、卵巣がん、子宮内膜がん、前立腺がん、腎細胞がん、未分化大細胞型リンパ腫、白血病（例えば、急性骨髄性白血病、Ｔ細胞白血病、慢性リンパ性白血病）、多発性骨髄腫、悪性中皮腫、悪性黒色腫、結腸がん（例えば、マイクロサテライト不安定性の高い結腸直腸がん）である。
【００８１】
別の局面において、本発明は、血液のがんであるがんを処置するための方法を提供する。いくつかの実施形態において、提供される方法は、上記被験体に提供される化合物の治療上有効な量を投与する工程を包含する。用語「血液のがん（ｈｅｍａｔｏｌｏｇｉｃ  ｃａｎｃｅｒ）」とは、造血器官の組織における異常な細胞成長および／もしくは増殖が関わる血液由来の腫瘍および疾患もしくは障害（例えば、リンパ腫、白血病、および骨髄腫）を含む。本発明に従って処置され得る血液のがんとしては、非限定的な例によれば、未分化大細胞型リンパ腫、非ホジキンリンパ腫、ホジキンリンパ腫、Ｂ細胞リンパ腫（例えば、ＡＢＣびまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、ＧＣＢびまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫）、Ｔ細胞リンパ腫、マントル細胞リンパ腫、組織球性リンパ腫、Ｔ細胞白血病、慢性リンパ性白血病、多発性骨髄腫、慢性骨髄性白血病、急性リンパ性白血病、急性骨髄性白血病、および急性骨髄芽球性白血病、形質細胞白血病が挙げられる。
【００８２】
本明細書で使用される場合、用語「前がん状態（ｐｒｅｃａｎｃｅｒｏｕｓ  ｃｏｎｄｉｔｉｏｎ）」とは、がん性になる傾向にあるかもしくはがん性になる可能性が高い状態、異常な組織成長、または病変を意味する。前がん状態としては、例えば、日光角化症、大腸腺腫性ポリープ、子宮頚部異形成、および先行する血液障害（ａｎｔｅｃｅｄｅｎｔ  ｈｅｍａｔｏｌｏｇｉｃａｌ  ｄｉｓｏｒｄｅｒ）（例えば、骨髄線維症、再生不良性貧血、発作性夜間ヘモグロビン尿症、真正多血症、および骨髄異形成症候群）が挙げられる。
【００８３】
アッセイ
がんの成長、増殖、もしくは生存の有用なインヒビターを開発するために、ＰＤＫ１−ＰＩＦ媒介性基質相互作用依存性細胞生存経路を低減し得る候補インヒビターが、インビトロで同定され得る。提供される化合物の活性は、当該分野で公知の方法および／もしくは本明細書で提供されるそれら方法を利用してアッセイされ得る。
【００８４】
ＰＤＫ１−ＰＩＦ媒介性基質相互作用依存性細胞生存経路を低減する化合物は、生物学的に活性なＰＤＫ１およびこれらの経路の他のエレメント（組換えもしくは天然に存在するかのいずれか）を使用して同定および試験され得る。ＰＤＫ１、ＲＳＫ２、およびＡｋｔは、例えば、天然の細胞において見出され得るか、インビトロで単離され得るか、または細胞において共発現もしくは発現され得る。インヒビターの存在下でのＰＤＫ１−ＰＩＦ媒介性基質相互作用依存性細胞生存経路における、そのインヒビターの非存在下での活性に対する低減を測定することは、当該分野で公知の種々の方法を使用して（例えば、本明細書で記載されるアッセイにおいて）行われ得る。ＰＤＫ１−ＰＩＦ媒介性基質相互作用依存性細胞生存経路のエレメントの活性をアッセイするための他の方法は、当該分野で公知である。適切なアッセイ法の選択は、当業者の能力の十分に範囲内である。
【００８５】
化合物は、これら化合物がＰＤＫ１−ＰＩＦ媒介性基質相互作用依存性細胞生存経路に関する表現型において検出可能な変化を引き起こす能力に関して細胞モデルもしくは動物モデルにおいてさらに試験される。細胞培養に加えて、動物モデルは、ＰＤＫ１のインヒビターが動物モデルにおいてがんを処置する能力に関して、上記インヒビターを試験するために使用され得る。
【００８６】
化合物は、動物モデルまたは健康な被験体もしくは患者においてＰＤＫ１活性の阻害をモニターするための生体マーカーとして働き得る遺伝子もしくはタンパク質の発現を選択的に阻害または誘導するそれら化合物の能力に関してさらに試験される。
【００８７】
薬学的組成物
別の局面において、本発明は、提供される化合物を、薬学的に受容可能な賦形剤（例えば、キャリア）と必要に応じて組み合わせて含む薬学的組成物を提供する。
【００８８】
提供される薬学的組成物は、本明細書で開示される化合物の光学異性体、ジアステレオマー、または薬学的に受容可能な塩を含む。例えば、いくつかの実施形態において、薬学的組成物は、薬学的に受容可能な塩を含む。その薬学的組成物中に含まれる化合物は、薬学的に受容可能なキャリアに共有結合的に結合され得る。あるいは、その薬学的組成物中に含まれる本発明の化合物は、薬学的に受容可能なキャリアに共有結合的に連結されない。
【００８９】
「薬学的に受容可能なキャリア（ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｌｙ  ａｃｃｅｐｔａｂｌｅ  ｃａｒｒｉｅｒ）」とは、本明細書で使用される場合、薬学的賦形剤、例えば、提供される方法に従って使用される化合物と有害に反応しない、経口適用もしくは非経口適用に適切な、薬学的に、生理学的に、受容可能な有機キャリアもしくは無機キャリア物質に言及する。適切な薬学的に受容可能なキャリアとしては、水、塩溶液（例えば、リンゲル溶液）、アルコール、オイル、ゼラチンおよび炭水化物（例えば、ラクトース、アミロースもしくはデンプン）、脂肪酸エステル、ヒドロキシメチルセルロース、およびポリビニルピロリドンが挙げられる。このような調製物は、滅菌され得、そして望ましい場合、提供される方法に従って使用される化合物と有害に反応しない補助剤（例えば、滑沢剤、保存剤、安定化剤、湿潤剤、乳化剤、浸透圧に影響を及ぼすための塩、緩衝化剤、着色物質および／または芳香物質など）と混合され得る。
【００９０】
提供される化合物は、単独で投与され得るか、または１もしくはこれより多くの他の薬物とともに、患者に共投与され得る。共投与は、個々に、または組み合わせて（１種より多くの化合物）、化合物の同時または逐次的投与を含むことが意味される。いくつかの実施形態において、調製物は、他の活性物質と（例えば、代謝的分解を低減するために）組み合わせられ得る。
【００９１】
製剤
本発明の化合物は、広く種々の経口、非経口、および局所的な剤形において調製および投与され得る。いくつかの実施形態において、提供される化合物は、注射によって（例えば、静脈内に、筋肉内に、皮内に、皮下に、十二指腸内に、もしくは腹腔内に）投与される。いくつかの実施形態において、本明細書で記載される化合物は、吸入によって、例えば、鼻内に投与される。いくつかの実施形態において、提供される化合物は、経皮的に投与される。複数の投与経路（例えば、筋肉内、経口、経皮）が、本発明の化合物を投与するために使用され得ることもまた、想定される。本発明はまた、１もしくはこれより多くの提供される化合物および１もしくはこれより多くの薬学的に受容可能なキャリアもしくは賦形剤を含む薬学的組成物を提供する。
【００９２】
薬学的組成物を提供される化合物から調製するために、薬学的に受容可能なキャリアは、固体もしくは液体のいずれかであり得る。固体形態の調製物としては、散剤、錠剤、丸剤、カプセル剤、カシェ剤、坐剤、および分散性粒剤が挙げられる。いくつかの実施形態において、固体キャリアは、希釈剤、矯味矯臭剤、結合剤、保存剤、錠剤崩壊剤、もしくは被包化物質としても作用し得る、１もしくはこれより多くの物質である。
【００９３】
いくつかの実施形態において、組成物が散剤である場合、そのキャリアは、微細に分割された活性な構成要素と混合されている、微細に分割された固体である。いくつかの実施形態において、組成物が錠剤のために製剤化される場合、その活性な構成要素は、適切な割合で必要な結合特性を有するキャリアと混合され、望ましい形状およびサイズに圧縮される。
【００９４】
いくつかの実施形態において、提供される散剤および錠剤は、５％〜７０％の活性化合物を含む。適切なキャリアとしては、炭酸マグネシウム、ステアリン酸マグネシウム、タルク、糖、ラクトース、ペクチン、デキストリン、デンプン、ゼラチン、トラガカント、メチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウム、低融点ワックス、カカオ脂などが挙げられる。いくつかの実施形態において、組成物は、カシェ剤もしくはロゼンジのために製剤化される。いくつかの実施形態において、錠剤、散剤、カプセル剤、丸剤、カシェ剤、および／もしくはロゼンジは、経口投与に適した固体剤形として使用される。
【００９５】
いくつかの実施形態において、坐剤を調製するために、低融点ワックス（例えば、脂肪酸グリセリドもしくはカカオ脂の混合物）は、最初に融解され、その活性な構成要素が、その中に均質に分散される。その融解した均質な混合物は、次いで、都合の良いサイズの型へと注がれ、冷却および固化させられる。
【００９６】
液体形態の調製物としては、液剤、懸濁物、およびエマルジョン、例えば、水もしくは水／プロピレングリコールの溶液が挙げられる。いくつかの実施形態において、非経口注射のために、液体調製物は、水性のポリエチレングリコール溶液中の液剤において製剤化され得る。
【００９７】
非経口適用が必要とされるかもしくは望ましい場合、本発明の化合物の特に適切な混合物は、注射用の滅菌液剤、好ましくは油性もしくは水性の液剤、ならびに懸濁物、エマルジョン、または埋没物（坐剤が挙げられる）である。特に、非経口投与のためのキャリアとしては、デキストロース、塩類溶液、純水、エタノール、グリセロール、プロピレングリコール、ラッカセイ油、ゴマ油、ポリオキシエチレン−ブロックコポリマーなどの水性溶液などが挙げられる。アンプルは、都合の良い単位投与量である。本発明の化合物はまた、リポソームへと組みこまれ得るか、または経皮的なポンプもしくはパッチを介して投与され得る。本発明における使用に適した薬学的混合物は、例えば、Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ  （第１７版，  Ｍａｃｋ  Ｐｕｂ．  Ｃｏ．，  Ｅａｓｔｏｎ，  ＰＡ）およびＷＯ  ９６／０５３０９（これらの各々は、参考として援用される）に記載されるものを含む。
【００９８】
経口使用に適した水性液剤は、活性な構成要素を水の中に溶解し、望ましい場合には、適切な着色剤、香料、安定化剤、および濃化剤を添加することによって調製され得る。経口使用に適した水性懸濁物は、微細に分割した活性な構成要素を、粘性物質（例えば、天然もしくは合成のガム、樹脂、メチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウム、および他の周知の懸濁剤）を含む水の中に分散させることによって作製され得る。
【００９９】
使用直前に、経口投与のための液体形態の調製物へと変換することが意図された固体形態の調製物もまた、含まれる。このような液体形態としては、液剤、懸濁物、およびエマルジョンが挙げられる。これらの調製物は、活性な構成要素に加えて、着色剤、香料、安定化剤、緩衝化剤、人工および合成の甘味料、分散剤、濃化剤、可溶化剤などを含み得る。
【０１００】
いくつかの実施形態において、提供される薬学的組成物は、単位剤形にある。このような形態において、組成物は、活性な構成要素の適切な量を含む単位用量へとさらに分けられる。その単位剤形は、パッケージされた調製物（そのパッケージは、薬学的組成物の不連続な量を含む（例えば、パッケージされた錠剤、カプセル剤、およびバイアルもしくはアンプル中の散剤））であり得る。いくつかの実施形態において、その単位剤形は、カプセル剤、錠剤、カシェ剤、もしくはロゼンジ自体であるか、またはその単位剤形は、パッケージされた形態にあるこれらのうちのいずれかの適切な数である。
【０１０１】
単位剤形中の活性な構成要素の量は、特定の適用およびその活性な構成要素の有効性に従って、０．１ｍｇ〜１００００ｍｇ、より代表的には１．０ｍｇ〜１０００ｍｇ、最も代表的には１０ｍｇ〜５００ｍｇで変動され得るかまたは調節され得る。いくつかの実施形態において、提供される組成物は、他の適合性の治療剤を含む。
【０１０２】
いくつかの化合物は、水中で制限された溶解度を有し得、組成物において界面活性剤もしくは他の適切な共溶媒を必要とし得る。このような共溶媒としては、以下が挙げられる：ポリソルベート２０、６０および８０、プルロニックＦ−６８、Ｆ−８４およびＰ−１０３、シクロデキストリン、およびポリオキシ３５ヒマシ油。このような共溶媒は、代表的には、約０．０１重量％〜約２重量％の間のレベルで使用される。
【０１０３】
いくつかの実施形態において、単純な水性の液剤のものより大きな粘性は、製剤を分散させることにおける変動性を低減するために、製剤の懸濁物もしくはエマルジョンの構成要素の物理的分離を低減するために、ならびに／または他の点で製剤を改善するために、望ましい可能性がある。このような粘性を確立する薬剤としては、例えば、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、カルボキシメチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、コンドロイチン硫酸およびその塩、ヒアルロン酸およびその塩、ならびに前述の組み合わせが挙げられる。このような薬剤は、代表的には、約０．０１重量％〜約２重量％の間のレベルで使用される。
【０１０４】
提供される組成物は、徐放性および／もしくは快適さを提供する構成要素をさらに含み得る。このような構成要素としては、高分子量のアニオン性疑似粘液（ｍｕｃｏｍｉｍｅｔｉｃ）ポリマー、ゲル化ポリサッカリド、および微細に分割された薬物キャリア物質が挙げられる。これらの構成要素は、以下でより詳細に考察される：米国特許第４，９１１，９２０号；同第５，４０３，８４１号；同第５，２１２，１６２号；および同第４，８６１，７６０号。これら特許の内容全体は、全ての目的のためにそれらの全体において本明細書に参考として援用される。
【０１０５】
有効投与量
提供される薬学的組成物は、治療上有効な量において、すなわち、その意図された目的を達成するために有効な量において、その活性成分が含まれる組成物を含む。特定の適用のために有効なその実際の量は、処置されている状態にとりわけ依存する。ある特定の実施形態において、がんを処置するための方法において投与される場合、提供される組成物は、所望の結果（例えば、被験体におけるがん細胞数の低減）を達成するために有効な活性成分の量を含む。
【０１０６】
哺乳動物に投与される投与量および頻度（単一もしくは複数の用量）は、種々の要因に依存して変動し得る（ＰＤＫ１−ＰＩＦ媒介性基質相互作用依存性細胞生存経路の増大した活性を生じる疾患、その哺乳動物が別の疾患に罹患しているか、およびその投与経路；レシピエントのサイズ、年齢、性別、健康状態、体重、ボディーマスインデックス、および食餌；処置されている疾患（例えば、がん）の性質およびその症状の程度、現行の処置の種類、処置されている疾患に由来する合併症または他の健康状態に関連する問題が挙げられる）。他の治療レジメンもしくは治療剤は、本発明の方法および化合物とともに使用され得る。
【０１０７】
本明細書で記載される任意の化合物に関して、治療上有効な量は、最初に細胞培養アッセイから決定され得る。標的濃度は、例えば、本明細書で記載される方法を使用して測定される場合にＰＤＫ１−ＰＩＦ媒介性基質相互作用依存性細胞生存経路の活性を低減し得る活性化合物のそれら濃度である。
【０１０８】
ヒトにおける使用のための治療上有効な量は、動物モデルから決定され得る。例えば、ヒトに関する用量は、動物において有効であることが見出された濃度を達成するように製剤化され得る。ヒトにおける投与量は、上記で記載されるように、ＰＤＫ１阻害をモニタリングし、投与量を上下に調節することによって、調節され得る。
【０１０９】
投与量は、患者の要件および使用されている化合物に依存して変動され得る。いくつかの実施形態において、患者に投与される用量は、経時的に患者において有益な治療応答をもたらすために十分である。その用量サイズはまた、任意の有害副作用の存在、性質および程度によって決定される。いくつかの実施形態において、処置は、その化合物の至適用量未満であるより小さな投与量で開始される。その後、その投与量は、状況下での最適な効果が達成されるまで少しずつ増大される。本発明の一実施形態において、投与量範囲は、０．００１％〜１０％  ｗ／ｖである。別の実施形態において、その投与量範囲は、０．１％〜５％  ｗ／ｖである。
【０１１０】
組み合わせ
別の局面において、本発明は、本明細書で提供される式Ｉの化合物または薬学的組成物を、１もしくはこれより多くの第２の活性薬剤と組み合わせて、および／または放射線療法もしくは手術と組み合わせて、投与する工程を包含する方法を提供する。
【０１１１】
別の局面において、本発明は、被験体においてがんを処置するための併用療法における使用のための薬学的組成物を提供し、上記方法は、式Ｉの化合物および薬学的に受容可能なキャリアを含む製剤を含み、ここでその併用療法は、第２の抗がん剤の有効量をさらに含む。
【０１１２】
本発明はまた、患者が、式Ｉの化合物および第２の抗がん剤の組み合わせの有効量を投与され得る治療を包含する。このような併用療法において、このような薬剤が単独で投与される場合には治療量以下であるが、組み合わせにおいて、上記薬剤は、治療上有効であるように相加的もしくは相乗効果的（ｓｕｐｒａ−ａｄｄｉｔｉｖｅ）様式で作用する、その組み合わせの中の薬剤の各々の量を投与することは可能である。しかし、いくつかの組み合わせは、別な方法では単独で治療上有効であると考えられるが、組み合わせがより有効であると判明している量にある化合物を使用し得る。がんにおいて、特に、標準ケアは、患者におけるある部分セットでは有効である処置が、寿命を長くすることによって、もしくはより高い退縮確率を達成することによって、患者のより大きなセットにおいて有効である新たな標準ケアへと変えられるように、薬剤の組み合わせによって変化し得る。
【０１１３】
式Ｉの化合物と他の薬剤との有効な組み合わせは、その組み合わせの前臨床試験および臨床的試験を通じて同定され得、多くの要因（疾患タイプおよび発生のステージ、患者の全体的な健康状態、薬剤の毒性および副作用などが挙げられる）に依存する。
【０１１４】
式Ｉの化合物と組み合わせて第２の活性薬剤として使用され得る化学療法性の抗がん剤の例としては、以下が挙げられるが、これらに限定されない：アルキル化剤（例えば、メクロレタミン、クロラムブシル、シクロホスファミド、メルファラン、イホスファミド）、代謝拮抗物質（例えば、メトトレキサート）、ａｕｒｏｒａキナーゼインヒビター（例えば、ＺＭ４４７４３９、ヘスペリジン、ＶＸ−６８０  ＡＺＤ１１５２）；プリンアンタゴニストおよびピリミジンアンタゴニスト（例えば、６−メルカプトプリン、５−フルオロウラシル（５−ＦＵ）、シタラビン（Ａｒａ−Ｃ）、ゲムシタビン）、紡錘体毒素（ｓｐｉｎｄｌｅ  ｐｏｉｓｏｎ）（例えば、ビンブラスチン、ビンクリスチン、ビノレルビン、パクリタキセル）、ポドフィロトキシン（例えば、エトポシド、イリノテカン、トポテカン）、抗生物質（例えば、ドキソルビシン、ダウノルビシン、ブレオマイシン、マイトマイシン）、ニトロソウレア（例えば、カルムスチン、ロムスチン）、無機イオン（例えば、白金錯体（例えば、シスプラチン、カルボプラチン））、酵素（例えば、アスパラギナーゼ）、ホルモン（例えば、タモキシフェン、ロイプロリド、フルタミド、およびメゲストロール）、トポイソメラーゼＩＩインヒビターもしくは毒素、ＥＧＦＲ（Ｈｅｒ１、ＥｒｂＢ−１）インヒビター（例えば、ゲフィチニブ）、抗体（例えば、ベバシズマブ、リツキシマブ）、ＩＭＩＤ（例えば、サリドマイド、レナリドミド）、種々の標的化薬剤（例えば、ＨＤＡＣインヒビター（例えば、ボリノスタット）、Ｂｃｌ−２インヒビター、ＶＥＧＦインヒビター、プロテアソームインヒビター（例えば、ボルテゾミブ）、サイクリン依存性キナーゼ（ｃｄｋ）インヒビター（例えば、セイリシクリブ）、キノロン誘導体（例えば、ボサロキシン（ｖｏｓａｒｏｘｉｎ））、およびデキサメタゾン）。
【０１１５】
他の実施形態において、式Ｉの化合物は、以下とともに併用療法において使用され得る：ＰＤＫ１インヒビター、例えば、ＧＳＫ２３３４４７０（ＧｌａｘｏＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅ）、ＢＸ−７９５、ＢＸ−９１２、およびＢＸ−３２０（Ｂｅｒｌｅｘ）；Ａｋｔインヒビター、例えば、ＭＫ−２２０６（Ｍｅｒｃｋ）；ＰＩ３Ｋインヒビター、例えば、ＧＤＣ−０９４１（ピクチリシブ（ｐｉｃｔｉｌｉｓｉｂ）、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ）、イデラリシブ（Ｇｉｌｅａｄ）；ＢＴＫインヒビター、例えば、ＧＳ−４０５９（Ｇｉｌｅａｄ）。
【０１１６】
血液腫瘍および固形腫瘍の処置において、第２の薬剤は、ＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１のインヒビター、例えば、ニボルマブ（オプジーボ）、ペンブロリズマブ（キイトルーダ、ＭＫ−３４７５）、ピディリズマブ（ｐｉｄｉｌｉｚｕｍａｂ）（ＣＴ−０１１）、ＢＭＳ  ９３６５５９、およびＭＰＤＬ３２８ＯＡ；ＣＴＬＡ−４インヒビター、例えば、イピリムマブ（ヤーボイ）およびトレメリムマブ；ならびにホスファチジルセリンインヒビター、例えば、バビツキシマブ（ＰＧＮ４０１）が挙げられ得る。
【０１１７】
急性骨髄性白血病の処置において、第２の薬剤としては、例えば、シタラビン（ａｒａ−Ｃ）、ダウノルビシン、およびボサロキシンが挙げられる。
【０１１８】
ＣＬＬの処置において、第２の薬剤としては、例えば、ＰＣＩ−３２７６５（イブルチニブ）が挙げられる。
【０１１９】
骨髄腫の処置において、第２の薬剤としては、例えば、レナリドミド（レブリミド（登録商標））およびボルテゾミブ（ベルケイド（登録商標））が挙げられる。
【０１２０】
均等物
以下の代表例は、本発明を例証する一助とすることが意図され、本発明の範囲を限定することは意図されず、本発明の範囲を限定すると解釈されるべきではない。実際に、本発明の種々の改変およびその多くのさらなる実施形態は、本明細書で示されかつ記載されるものに加えて、以下の実施例および本明細書で引用される科学文献および特許文献への言及を含む、この文書の全内容から当業者に明らかになる。それらの引用される参考文献の内容が、当該分野の技術水準を例証する一助とするために、本明細書に参考として援用されることは、さらに認識されるべきである。
【０１２１】
本明細書で記載される化合物調製に関して、逆相ＨＰＬＣを使用して化合物を精製する場合に、化合物は、モノフルオロ酢酸、ジフルオロ酢酸もしくはトリフルオロ酢酸の塩として存在し得ることは、認識される。
【０１２２】
本発明が、本明細書で記載される個々の化合物を企図することは、さらに認識される。例示される個々の化合物が単離され、および／または塩として、例えば、トリフルオロ酢酸塩として特徴付けられる場合、本発明は、その塩の遊離塩基、ならびにその遊離塩基の他の薬学的に受容可能な塩を企図する。
【０１２３】
以下の実施例は、その種々の実施形態およびその均等物において、本発明の実施に適合され得る重要なさらなる情報、例証およびガイダンスを含む。
【実施例】
【０１２４】
いかなる特定の理論によっても拘束されることを望まないが、式Ｉの化合物が、ＰＤＫ１の不活性コンホメーションを結合する（ＩＣ５０＜２０ｎＭ）と考えられる。その化合物は、適応性（アロステリック）ポケットの中深くに結合し、Ｎ末端ドメインにおいて歪みを引き起こし、それによって、ＰＩＦポケットに摂動を起こさせ、従って、ＰＩ非依存性基質結合を負に調節する。化合物２は、例えば、急性骨髄性白血病、多発性骨髄腫、ＤＬＢＣＬ、およびマントル細胞リンパ腫を含む血液のがんに由来する２０を超える細胞株のパネルにおいて評価したところ、ＥＣ５０＝３〜９００ｎＭを有する強力な抗増殖活性を示す。経路調節と相関する抗増殖活性は、ＰＤＫ１、ＲＳＫ２、およびＡＫＴのリン酸化の阻害によって評価した。興味深いことに、ＰＤＫ１リン酸化の阻害は、時間依存性であり、４時間より２４時間後に、２〜５倍大きな阻害を示した。さらに、化合物２は、２４時間後に実質的なアポトーシスを生じた。化合物２を、ＰＤＫ１インヒビターであるＧＳＫ２３３４４７０と比較したところ、匹敵する生化学的有効性を示したが、化合物２は、試験した全ての細胞株におけるＰＤＫ１リン酸化およびＲＳＫ２リン酸化を阻害することにおいて１０倍〜３０倍、より強力であった。さらに、化合物２は、７２時間生存性アッセイにおいてＧＳＫ２３３４４７０より少なくとも１０倍強力であった。
【０１２５】
マウスにおいて、化合物１および化合物２は、４〜８時間のＴｍａｘおよび長い半減期を伴って、経口的に生物学的に利用可能であった（％Ｆ＞４０％）。経路調節を、マウスにおけるＭＶ４−１１異種移植片を使用してインビボで評価した。強力な経路調節が、化合物１および化合物２の単一の経口用量の４時間後および２４時間後に観察された。効力を、ＭＶ４−１１異種移植片における２１日投与によって評価した。化合物１および化合物２の両方が、９６〜９７％に達するＴＧＩおよび最高用量において動物のうちの７０〜１００％における部分的退縮を伴う用量関連効力を示す。
【０１２６】
いかなる特定の理論によっても拘束されることを望まないが、ＰＤＫ１の不活性コンホメーションを標的化し、ＰＩ非依存性基質結合を阻害することは、固形がんおよび血液のがんの処置のために、特に、ＰＤＫ１キナーゼインヒビターもしくはＡｋｔインヒビターの有効性が不十分である状況において、広い可能性を有すると考えられる。
【０１２７】
実施例１−ＰＤＫ１キナーゼ活性アッセイ
全長ＰＤＫ１タンパク質（ＳｉｇｎａｌＣｈｅｍ）を、ＧＳＴ−λ−ホスファターゼ（社内で生成）を使用して脱リン酸化し、これをその後、グルタチオン−アガロースビーズ（Ｇｏｌｄ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）を使用して除去した。全長ＡＫＴ  Ｓｅｒ４７６Ａｓｐ（５ｎＭ）を、ＰＤＫ１（４０ｐＭ  リン酸化もしくは１００ｐＭ  非リン酸化）、１００ｎＭ  ＦＩＴＣ−Ｃｒｏｓｓｔｉｄｅ（ＧＳＫ−３  Ｓｅｒ  ２１ペプチド、ＣＧＳＧＳＧＲＰＲＴＳＳＦＡＥＧ（配列番号１）；ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ）および２４μＭ  ＡＴＰとともに、２時間、１０ｍＭ  ＭｇＣｌ２、０．０１％  Ｔｒｉｔｏｎ  Ｘ−１００、および１ｍＭ  ジチオスレイトール（ＤＴＴ）を含む１０ｍＭ  Ｔｒｉｓ（ｐＨ７．５）中で、試験化合物（これを、Ｅｃｈｏ  ５５５アコースティックディスペンサー（Ｌａｂｃｙｔｅ）を使用して添加した）の存在下または非存在下で、インキュベートした。次いで、Ｔｂ−ｐＣｒｏｓｓｔｉｄｅ抗体（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ）を、２ｎＭの最終濃度へと添加し、その反応を、さらに３０分間インキュベートした。蛍光共鳴エネルギー転移（ＦＲＥＴ）を、λｅｘ＝３４０ｎｍ、λｅｍ１＝４８５ｎｍ、λｅｍ２＝５２０ｎｍでのＴｅｃａｎ  Ｉｎｆｉｎｉｔｅ  Ｆ５００プレートリーダーを使用して測定した。
【０１２８】
図２Ａおよび図２Ｂは、化合物１および化合物２に関するこのアッセイでのＰＤＫ１キナーゼ活性阻害曲線を示す。各グラフ中の挿入図の値は、ＩＣ５０値を提供する。これらのデータは、式Ｉの代表的化合物が、リン酸化ＰＤＫ１および非リン酸化ＰＤＫ１の両方の強力なインヒビターであることを確認する。
【０１２９】
実施例２−選択性
化合物１および化合物２の選択性を、Ｕｐｓｔａｔｅ（現Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）によって提供される２７０種の異なるヒトキナーゼのパネルにおいて評価した。その化合物を、１０μＭ  濃度において試験したところ、化合物２に関しては２０種のキナーゼ（ＰＤＫ１を含む）および化合物１に関しては１８種のキナーゼ（ＰＤＫ１を含む）に対して９０％より大きいかまたは９０％に等しい阻害を示し、これは、この高濃度（ＰＤＫ１に関してはＩＣ５０濃度の１，０００倍より高い）において大きな選択性（キノームのうちの１０％未満の阻害）を示した。
【０１３０】
実施例３−細胞増殖アッセイ（ＭＴＳ）
細胞増殖を、ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ  ９６  Ａｑｕｅｏｕｓ  Ｎｏｎ−Ｒａｄｉｏａｃｔｉｖｅ  Ｃｅｌｌ  Ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ  Ａｓｓａｙ（Ｐｒｏｍｅｇａ）を使用して測定した。ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ  ９６（登録商標）  ＡＱｕｅｏｕｓ  Ａｓｓａｙは、テトラゾリウム化合物［３−（４，５−ジメチルチアゾール−２−イル）−５−（３−カルボキシメトキシフェニル）−２−（４−スルホフェニル）−２Ｈ−テトラゾリウム、分子内塩；ＭＴＳ］および電子カップリング試薬（フェナジンメトサルフェート）ＰＭＳの溶液から構成される。ＭＴＳは、組織培養培地中に溶解性であるホルマゾン生成物へと細胞によって生体還元される。４９０ｎｍでのホルマゾン生成物の吸光度は、さらなる加工処理なしに、アッセイプレートから直接測定され得る。４９０ｎｍ吸光度の量によって測定される場合のホルマザン生成物の量は、培養物中の生細胞の数に直接比例する。細胞を、９６ウェルもしくは３８４ウェルの透明プレートへと、２００μＬ（９６ウェル）もしくは５０μＬ（３８４ウェル）の容積において、細胞株に依存して９６ウェルプレートに関しては１，０００〜４０，０００  細胞／ウェルもしくは３８４ウェルプレートに関しては１，２００〜２５，０００細胞／ウェルの範囲に及ぶ最適化した密度で、播種した。４〜６時間の回復後、ＤＭＳＯ中で連続希釈した化合物を、（０．１％  ｖ／ｖ  最終ＤＭＳＯ濃度）を使用して細胞に添加した。次いで、細胞を、３７℃において加湿インキュベーター中、５％  ＣＯ２で７２時間成長させた。ＤＰＢＳ中の２０：１の［３−（４，５−ジメチルチアゾール−２−イル）−５−（３−カルボキシメトキシフェニル）−２−（４−スルホフェニル）−２Ｈ−テトラゾリウム］（ＭＴＳ）：フェナジンメトサルフェート（ＰＭＳ）溶液を、使用直前に作製し、各ウェルに添加し、細胞を、１．５時間、３７℃においてインキュベートした。次いで、４９０ｎｍでの吸光度を、プレートリーダーを使用して測定した。吸光度値を、コントロール（０．１％  ｖ／ｖ  ＤＭＳＯの存在下でインキュベートした細胞）の％として正規化した。シグモイド用量応答曲線を、最高値を１００％に抑えて、ｌｏｇ（インヒビター）  対  応答−可変傾き（４パラメーター）モデル（ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍ  ｖｅｒｓｉｏｎ  ６．００  ｆｏｒ  Ｗｉｎｄｏｗｓ（登録商標），  ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｓｏｆｔｗａｒｅ，  Ｌａ  Ｊｏｌｌａ  Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ  ＵＳＡ）を使用して、プロットした。最低値を、より高い濃度範囲においてプラトーに達しなかった化合物に関して０％に抑えた。プラトーに達した化合物に関する曲線を、測定点に正確にマッチさせた。高いプラトー（＞２０％）に達する曲線に関しては、ＥＣ５０を、細胞成長の５０％阻害を生じる濃度として報告する。本発明の化合物が血液のがんの生存性に影響を及ぼす可能性を決定するために、種々の腫瘍タイプを表す細胞株を選択して試験した。試験したヒト細胞株は、以下であった：ＭＯＬＭ−１３（急性骨髄性白血病（ＡＭＬ））、ＭＶ４−１１（ＡＭＬ）、Ｕ−２９３２（ＡＢＣびまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫）、Ｕ−９３７（組織球性リンパ腫）、Ｕ−２６６（多発性骨髄腫）、ＲＰＭＩ−８２２６（多発性骨髄腫）、ＣＭＫ（巨核芽球性細胞株）、ＳＵ−ＤＨＬ−４（ＧＣＢびまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫）、ＫＧ１（ＡＭＬ）、Ｍｅｃ−１（慢性Ｂ細胞白血病）、ＭＯＬＭ−１６（ＡＭＬ）、Ｊｅｋｏ（Ｂ細胞リンパ腫）、ＷＳＵ−ＤＬＣＬ２（Ｂ細胞リンパ腫）、ＪＪＮ３（形質細胞白血病）、ＳＵ−ＤＨＬ−６（ＧＣＢびまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫）、およびＺ−１３８（マントル細胞リンパ腫）。さらに、２種のマウス細胞株を試験した：Ａ２０（ＡＭＬ）およびＣ１４９８（ＡＢＣびまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫）。化合物３、化合物１、化合物２、ＧＳＫ−２３３４４７０（ＰＤＫ１インヒビター，  ＧｌａｘｏＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅ，  図１２Ａ〜１２Ｅ）、ＭＫ−２２０６（ＡＫＴインヒビター；  Ｍｅｒｃｋ）、およびＧＤＣ−０９４１（ピクチリシブ；汎ＰＩ３Ｋインヒビター；Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ）を、このアッセイにおいて効果に関して試験した。代表的化合物である化合物３、化合物１、および化合物２は、種々の細胞株に対して３ｎＭ〜８５３ｎＭの間のＥＣ５０を有する細胞増殖の強力な阻害を示し、これは、腫瘍タイプにわたって広い効果を示した（表１）。
【表１】
2018538244.tif 000021
【０１３１】
図３に示されるように、ＭＫ−２２０６およびＧＤＣ−０９４１化合物は、ＭＫ−２２０６に関しては０．１μＭ〜１０．７μＭの範囲に及ぶ活性（１６種の細胞株のうちの９種に関してＥＣ５０＞１μＭ）およびＧＤＣ−０９４１に関しては０．０５μＭ〜６．１μＭの範囲に及ぶ活性（１６種の細胞株のうちの３種に関してＥＣ５０＞１μＭ）で、細胞増殖アッセイでの有効性において実質的変動性を示した。これは、１μＭ未満の濃度で全ての細胞株の、および大部分の場合に、５００ｎＭ未満の濃度（１６種の細胞株のうちの１５種）で、成長阻害を示す化合物２に関して観察された有効性とは対照的である。これらのデータは、本発明の化合物が、同じ経路において他のキナーゼを標的とするインヒビターに対して感受性が低い種々の腫瘍において有用であり得、潜在的に、第１選択治療剤として、または他のキナーゼインヒビターが無効な処置であるかまたは無効な処置になっている症例において、救済治療剤として有用であることを示唆する。
【０１３２】
実施例４−細胞増殖アッセイ（ＭＴＳ）
細胞株の部分セットに関して、代表的な式Ｉの化合物を、ＧＳＫ２３３４４７０と比較し、より詳細に調査した。表２は、７種の細胞株における細胞増殖の阻害に関して、種々の化合物の比較ＥＣ５０データを示す。大部分の場合（７種の細胞株のうちの６種）、試験化合物は、ＧＳＫ２３３４４７０より７倍〜５０倍の範囲で強力である。
【表２】
2018538244.tif 000022
【０１３３】
成長阻害曲線のさらなる試験は、細胞殺滅（実験の開始時にプレートされたより７２時間後に残っている細胞が少ない）を示すより高濃度で、おそらくアポトーシスの誘導によって試験化合物が低いプラトーを生じる（ドキソルビシン（広く使用されかつ有効な抗がん薬）について観察されるように、＜２０％）ことを示す（図４Ａ〜４Ｄ）。対照的に、ＧＳＫ２３３４４７０およびＭＫ−２２０６の曲線は、ＭＶ４−１１およびＣ１４９８に関して２０％を下回ってプラトーに達しない。これは、これらの化合物が細胞成長を部分的に阻害するが、細胞死を誘導しないことを示唆する。有効ながん薬物は、細胞死を示す成長阻害を誘導する（図４Ａ〜４Ｄおよび図５Ａ〜５Ｃにおいてドキソルビシンによって例証されるとおり）。これらのデータは、式Ｉの化合物が抗がん剤としての有用性を有し得ることを示唆する。
【０１３４】
実施例５−アポトーシスの誘導
アポトーシスの誘導を、フローサイトメトリー用のＡｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ  ４８８  Ａｎｎｅｘｉｎ  ５／Ｄｅａｄ  Ｃｅｌｌ  Ａｐｏｐｔｏｓｉｓキット（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を使用して、本質的に製造業者の説明書に従って評価した。細胞を、３ｍＬ  完全増殖培地中（３×１０５  細胞／ウェル）で６ウェル組織培養プレートに播種し、１時間、３７℃において加湿インキュベーター中、５％  ＣＯ２で平衡化させた。ＤＭＳＯ（コントロール）、試験化合物、もしくはドキソルビシンを、各ウェルに添加した（０．１％  最終ＤＭＳＯ濃度）。細胞を、２４時間、インキュベーターに戻した。分析の日に、１×１０５  細胞を製造業者の説明書に従って標識し、フローサイトメトリー（ＢＤ  ＦＡＣＳＣａｌｉｂｕｒＴＭ，  ＧＨ）によって分析して、アポトーシス細胞（アネキシンＶ陽性、ＡＶ＋）および／またはアポトーシス死細胞（ＡＶ＋およびヨウ化プロピジウム陽性（ＰＩ＋））のパーセントを決定した。
【０１３５】
この実施例は、化合物１および化合物２が、５０ｎＭ程度の低さの濃度でアポトーシスを誘導することにおいて有効であることを示す。これは、５０〜１００ｎＭ範囲において２０％を十分に下回ってプラトーを示す図３の成長阻害データと一致する。対照的に、ＧＳＫ−２３３４４７０は、３００ｎＭ程度の高さの濃度ですらアポトーシス誘導の徴候を示さない。
【０１３６】
実施例６−ウェスタンブロット分析
リンタンパク質分析のために、細胞を、１０％  ＦＢＳおよびペニシリン／ストレプトマイシンを補充した培地中、１０ｃｍのペトリ皿（１０×１０６  細胞／ディッシュ）に播種した。３７℃で１時間細胞を回復させた後、化合物を、ＤＭＳＯ（０．１％  最終）中で添加し、４時間または２４時間、３７℃でインキュベートした。次いで、細胞を、遠心分離によって採取し、冷ＰＢＳで洗浄した。細胞ペレットを、２×ＨａｌｔＴＭ  プロテアーゼおよびホスファターゼインヒビターカクテル（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）、２ｍＭ  オルトバナジン酸ナトリウム、１０ｍＭ  ＥＤＴＡおよび４ｍＭ  ＰＭＳＦを補充した細胞抽出緩衝液（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）中に再懸濁した。サンプルを、超音波処理によって溶解し、氷上で３０分間インキュベートした。細胞デブリを遠心分離によって除去し、タンパク質濃度を、ＢＣＡ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ａｓｓａｙ  Ｋｉｔ（Ｐｉｅｒｃｅ）を使用して決定した。清澄にした溶解物を、還元剤を有するＬＤＳサンプル緩衝液（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）中に希釈した。７０℃へと加熱した後に、サンプルを冷却し、５０μｇ／ウェルで４〜１２％  Ｂｉｓ−Ｔｒｉｓゲル（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）上に載せた。ゲルを、１１０Ｖで泳動させ、タンパク質をＰＶＤＦ膜に転写した。膜を、ＴＢＳブロッキング緩衝液（Ｌｉ−Ｃｏｒ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）中で１時間ブロックした。一次抗体（Ｃｅｌｌ  Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ，  Ｓａｎｔ  Ｃｒｕｚ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）を、０．１％  Ｔｗｅｅｎ−２０およびβ−アクチン抗体の１：２０，０００希釈物を有するブロッキング緩衝液中に添加し（１：１，０００希釈）、１４時間、４℃でインキュベートした。ブロットを、ＴＢＳ−Ｔ中で洗浄した。標識結合体化ヤギ抗ウサギ二次抗体（ＩＲｄｙｅ（登録商標）  ８００ＣＷ；  Ｌｉ−Ｃｏｒ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）を、０．１％  Ｔｗｅｅｎ−２０および０．０２％  ＳＤＳを有するブロッキング緩衝液中で添加し、１時間インキュベートした。ＴＢＳ−Ｔ中で、続いて、ＴＢＳ中で洗浄した後、膜を、Ｏｄｙｓｓｅｙ画像化システム（Ｌｉ−Ｃｏｒ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）でスキャンした。バンドを、ＩｍａｇｅＪを使用して定量化した。
【０１３７】
図６Ａは、化合物２およびＧＳＫ−２３３４４７０が、ＰＤＫ１リン酸化およびＲＳＫ２リン酸化を各々調節することを示す。図６Ｃは、化合物２が、ＰＤＫ１およびＲＳＫ２の両方のリン酸化を阻害するにあたって、ＧＳＫ−２３３４４７０より１０倍強力であるようであることを示す（図５Ｂ中の破線を参照のこと）。図６Ｃは、ＲＳＫ２リン酸化の化合物２（３０ｎＭ）阻害が、強力でありかつ時間依存性であるようであるのに対して、同じ濃度のＧＳＫ２３３４４７０は、ＲＳＫ２リン酸化に対してほとんどもしくは全く効果を有しないことを示す。その一方で、ＰＤＫ１リン酸化の阻害は、両方の化合物に関して時間依存性であり、化合物２は、４時間〜２４時間の間の曝露でＰＤＫ１リン酸化の１／５低下を示す。これは、ＰＤＫ１脱リン酸化が、長期のＰＤＫ１占有を要する遅いプロセスであることを示唆する。ＰＤＫ１は、自己リン酸化によって活性化されるので、インヒビターがなお存在する間に一旦ＰＤＫ１が非リン酸化になった後に、その経路が完全に閉じられることに注意すべきである。１００ｎＭ濃度では、化合物２は、Ｐ−ＰＤＫ１の９０％阻害およびＰ−ＲＳＫ２の＞９５％阻害を達成する一方で、ＧＳＫ２３３４４７０は、同じ濃度で、それぞれ７０％阻害および５５％阻害を達成するに過ぎない。この食い違いは、化合物２が１００ｎＭでアポトーシスを誘導する一方で、ＧＳＫ２３３４４７０が、アポトーシスの証拠もなく、部分的な成長阻害を達成するに過ぎない理由を説明し得る。示されないデータでは、ごく弱いＡＫＴ−Ｔ３０８シグナルが観察された。ＭＫ−２２０６  Ａｋｔインヒビターは、上記の実施例４で記載されるＭＴＳ細胞増殖アッセイでは有効でなかったことに注意のこと。これは、この細胞株におけるＰＤＫ１媒介性生存が、主にＲＳＫ２を経ることを示唆する。これは、ＲＳＫ２  ｓｉＲＮＡが、ＭＶ４−１１細胞の成長を阻害し、アポトーシスを誘発することを示す文献データと一致する（Ｅｌｆら，  Ｂｌｏｏｄ，  ２０１１，  １１７（２５）：６８８５−６８９４）。
【０１３８】
図７Ａ〜Ｃは、Ｃ１４９８  Ｂ細胞リンパ腫細胞株（ＡＢＣタイプ）が、３０〜１００ｎＭ範囲において＞９０％  Ｐ−ＲＳＫ２阻害および約８０％  Ｐ−ＰＤＫ１阻害を示して、化合物２に感受性であることを示す。ＧＳＫ２３３４４７０の効果は、遙かに弱く、３００ｎＭにおいて、Ｐ−ＰＤＫ１およびＰ−ＲＳＫ２両方のおよそ７５％阻害に達する。相応して、化合物２は、２００ｎＭで８０％  成長阻害を示す一方で、ＧＳＫ２３３４４７０は、５〜１０μＭの濃度になるまでこの効果を達成しない。ＭＶ４−１１のように、Ｃ１４９８は、ＡＫＴもしくはＩＫＫの顕著なリン酸化を示さない。これは、ＰＤＫ１媒介性生存が、主にＲＳＫ２を経ることを示唆する。興味深いことには、ＡＫＴインヒビターであるＭＫ−２２０６での処理が、ＰＤＫ１およびＲＳＫ２のリン酸化を増強するようである。
【０１３９】
図８Ａ〜８Ｅは、Ａ２０  ＡＭＬ細胞が、３００ｎＭ  化合物がＰ−ＲＳＫ２の＞９０％  阻害を達成するために必要とされる、およびＰ−ＰＤＫが７０％  阻害においてプラトーに達するという点において、化合物２に対する感受性が低いことを示す。これは、ＭＶ４−１１およびＣ１４９８と比較した場合、増殖アッセイにおいて実質的により高いＥＣ５０と一致する。Ａ２０細胞は、ＧＳＫ２３３４４７０に対してさらに感受性が低く、最高濃度において４５％  Ｐ−ＰＤＫ１阻害を示すに過ぎない。先の細胞株とは対照的に、Ａ２０は、ＡＫＴ活性化を示し、Ｐ−ＡＫＴレベルは、ＡＫＴインヒビターであるＭＫ−２２０６に対して感受性である。これは、図３に示されるとおりのＭＫ−２２０６による強力な成長阻害と一致する。Ｐ−ＡＫＴレベルはまた、ＧＳＫ２３３４４７０によってほとんど影響を及ぼされないと同時に、化合物２に対して感受性である。これらデータは、化合物２およびＭＫ−２２０６による経路調節と、細胞成長の阻害との間の明確な相関を示す一方で、ＧＳＫ２３３４４７０は、２つのアッセイにおいて中程度の効果を示すに過ぎない。
【０１４０】
図９Ａ〜Ｃは、ＫＧ−１細胞株が、１００ｎＭ  化合物においてｐＲＳＫ２レベルおよびｐＰＤＫ１レベルを＞８０％  阻害して、化合物１に感受性であることを示す。Ｃ１４９８細胞株と同様に、ＫＧ−１細胞は、顕著なＡＫＴリン酸化を示さない。
【０１４１】
まとめると、上記データは、７０〜８０％  Ｐ−ＰＤＫ１阻害および＞９０％  Ｐ−ＲＳＫ２阻害が、細胞増殖を有効に阻害しかつアポトーシスを潜在的に誘発するために必要とされ得ることを示す。重要なことには、成長阻害およびアポトーシスは、いくつかの細胞株においてＡＫＴおよびＩＫＫの阻害を必要とせず、代わりに、細胞生存の鍵となる駆動因子としてＰ−ＲＳＫ２を指し示す。これは、予測外の知見であるが、式Ｉの化合物の重要な抗がん可能性を強調する。ＧＳＫ２３３４４７０は、細胞においてＰ−ＰＤＫ１を明確に阻害し得る一方で、この化合物は、化合物２と比較した場合に、経路調節および成長阻害アッセイにおいて、代表的には１／１０〜１／３０倍の低さの有効性である。同じことが、試験した最高濃度で６５〜８５％に達するＰ−ＲＳＫ２阻害にも当てはまる。これは、ＧＳＫ２３３４４７０が動物研究において効力を示すことができず、薬物候補として進められなかった理由を説明し得る。
【０１４２】
化合物１をも、上記のアッセイにおいて評価したところ、化合物２について記載されるものに類似の結果を提供した。
【０１４３】
実施例７−腫瘍異種移植片における経路調節
インビトロで増殖させたＭＶ４−１１細胞を、９週齢の雌性ＮＣｒ  ｎｕ／ｎｕマウスの右側腹部へと皮下移植した。移植の日に、ＭＶ４−１１細胞を、対数増殖期の間に採取し、５０％  ＭａｔｒｉｇｅｌＴＭ（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）を含むリン酸緩衝化生理食塩水（ＰＢＳ）中に１×１０８  細胞／ｍＬの濃度で再懸濁した。異種移植片を、各試験動物の右側腹部へと１×１０７  ＭＶ−４−１１細胞（０．１ｍＬ  懸濁物）を皮下移植することによって開始し、腫瘍を、その容積が１７５〜２２５ｍｍ３の目標範囲に達するようにモニターした。移植の２週間後に、動物を、およそ２００ｍｍ３の平均腫瘍容積を有する、３匹の動物の個々の群に割り当てた。動物に、５ｍＬ／ｋｇ  ビヒクル（１％  ＤＭＡ／９９％  Ｌａｂｒａｓｏｌ）、化合物１（１％  ＤＭＡ／９９％  Ｌａｂｒａｓｏｌ中で）、化合物２（１％  ＤＭＡ／９９％  Ｌａｂｒａｓｏｌ中で）、ＧＤＣ０９４１（脱イオン水中で０．５％  メチルセルロース：０．２％  Ｔｗｅｅｎ  ８０）を強制経口投与することによって、ならびにＧＳＫ２３３４４７０（１％  ＤＭＳＯ、２０％  ＰＥＧ４００（ｐＨ  ４．２）中で）の腹腔内注射（１０ｍＬ／ｋｇ）によって、投与した。実際の投与濃度は、図１０Ａ〜１０Ｄに示される。投与の８時間後に、イソフルラン麻酔下での心臓穿刺によって全血液容積を集め、腫瘍を摘出し、液体窒素中で急速凍結し、さらなる分析まで−８０℃で貯蔵した。腫瘍を、液体窒素中でＢｉｏｐｕｌｖｅｒｉｚｅｒを使用して粉砕し、２本のサンプルチューブに分けた：１本は、ウェスタンブロット分析用、１本はＬＣ−ＭＳ／ＭＳによる化合物レベルの分析用。ウェスタンブロット分析を、上記のように行った。ＭＳ分析に関しては、腫瘍サンプルを、Ｖｉｒｓｏｎｉｃ  １００超音波ホモジナイザーでホモジナイズした。各サンプルを、まず秤量し、次いで、２０：８０  メタノール：水の適切な容積を添加して、９ｍＬ／ｇ  サンプルにした。次いで、サンプルを氷上でホモジナイズし、分析するまで凍結して貯蔵した。標準物質を、ＢＡＬＢ／ｃマウス血漿またはブランクのホモジナイズした腫瘍組織中に調製した。標準物質およびサンプルを、ＰＥ  Ｓｃｉｅｘ  ＡＰＩ４０００機器で分析し、化合物濃度を定量し、腫瘍組織１グラムあたりのｎｇ  化合物へと逆算し、１ｇ  腫瘍組織が１ｍＬ  容積に等しいと仮定してμＭ濃度に変換した。
【０１４４】
ＭＶ４−１１腫瘍をマウスに移植して、腫瘍におけるＰＤＫ１シグナル伝達のモジュレーターとしての式Ｉの代表的化合物の有用性をインビボで評価した。図１０Ａおよび図１０Ｂに示されるように、化合物１および化合物２は、化合物の単一の強制経口投与の４時間後および８時間後に、ＭＶ４−１１腫瘍においてＰＤＫ１を阻害する。その阻害は、用量依存性であり、最高濃度においてＰＤＫ１リン酸化の５０〜６０％  阻害に達して、８時間でより強く、インビトロで細胞において観察されたＰ−ＰＤＫ１の時間依存性阻害を反映する。そのＰ−ＰＤＫ１阻害は、投与の８時間後に８０〜９０％までの阻害を伴う、ＲＳＫ２リン酸化およびＡＫＴリン酸化の強い抑制を生じる（図１０Ｃ〜Ｄ）。腫瘍中の化合物１および化合物２の濃度は、与えられた用量におよそ相当する。ＰＩ３ＫインヒビターであるＧＤＣ０９４１は、８時間でＰＤＫ１の４５％  阻害を生じるが、Ｐ−ＰＤＫ１の２５％  阻害およびＰ−ＡＫＴの阻害なしを生じるに過ぎない。５０ｍｇ／ｋｇ  ＧＤＣ０９４１という高用量にもかかわらず、腫瘍曝露は、化合物１および化合物２の１ｍｇ／ｋｇ  用量で達成された曝露に匹敵する０．４〜１．４ｍＭに過ぎなかった。この観察と一致して、５０ｍｇ／ｋｇ  ＧＤＣ０９４１に関して観察された経路調節効果は、１ｍｇ／ｋｇの化合物１または化合物２のものに匹敵した。５０ｍｇ／ｋｇでＩＰ投与したＰＤＫ１インヒビターであるＧＳＫ２３３４４７０は、５０ｍｇ／ｋｇ  ＧＤＣ０９４１および１ｍｇ／ｋｇの化合物１または化合物２のものに匹敵する毛色調節および腫瘍曝露を示した。
【０１４５】
これら実験からのデータは、式Ｉの化合物が、ヒトのがんを処置するために直接関連する生理学的である用量で、インビボで腫瘍における強いＰＤＫ１経路調節を生じ得ることを示し、従って、ヒトのがんの潜在的治療としての本発明の化合物の有用性を強調する。さらに、式Ｉの化合物の効果は、ＰＤＫ１活性またはＰＩ３Ｋ経路を標的とする他の化合物と非常に都合良く匹敵する。
【０１４６】
実施例８−腫瘍異種移植片効力
ＭＶ４−１１細胞を、インビトロで増殖させ、実施例７に記載されるように、９週齢の雌性ＮＣｒ  ｎｕ／ｎｕマウスの右側腹部へと皮下移植した。動物に、水（逆浸透，  １ｐｐｍ  Ｃｌ）、ならびに１８．０％  粗タンパク質、５．０％  粗脂肪、および５．０％  粗線維からなるＮＩＨ  ３１  Ｍｏｄｉｆｉｅｄ  ａｎｄ  Ｉｒｒａｄｉａｔｅｄ  Ｌａｂ  Ｄｉｅｔ（登録商標）を制約なしに給餌した。腫瘍移植の１４日後を、研究の１日目と指定し、動物を、７群に分け、各々は、１０匹のマウスからなり、個々の腫瘍容積は、１０８〜２８８ｍｍ３を有し、群平均腫瘍容積（ＭＴＶ）は、１６２〜１６５ｍｍ３を有した。研究の１日目に、強制経口投与による投与は、以下のとおりに開始した：投与容積は、０．１００ｍＬ／２０グラム  体重（５ｍＬ／ｋｇ）であり、各個々の動物の体重に応じて決定した。群１のマウスに、ビヒクルを与え、コントロール群として供した。群２〜４に、５ｍｇ／ｋｇ、１１ｍｇ／ｋｇ、および２５ｍｇ／ｋｇの化合物１をそれぞれ（ｑｄ×２１）与えた。群５〜７に、５ｍｇ／ｋｇ、１１ｍｇ／ｋｇ、および２５ｍｇ／ｋｇの化合物２をそれぞれ（ｑｄ×２１）与えた。投与溶液を、Ｌａｂｒａｓｏｌ（登録商標）（ビヒクル）中の１％  ジメチルニトロソアミン（ＤＭＡ）中で適切な量の粉末を溶解して５ｍｇ／ｍＬ  溶液を得ることによって、１週間間に１回調製した。その５ｍｇ／ｍＬ  溶液は、５ｍＬ／ｋｇの投与容積中で２５ｍｇ／ｋｇ  投与量を提供した。その５ｍｇ／ｍＬ  溶液のアリコートを、２．２ｍｇ／ｍＬおよび１ｍｇ／ｍＬの濃度へとビヒクル中で希釈したところ、これは、５ｍＬ／ｋｇの投与容積でそれぞれ、１１ｍｇ／ｋｇおよび５ｍｇ／ｋｇの投与量を提供した。
【０１４７】
腫瘍を、カリパスを使用して１週間に２回測定した。研究エンドポイントは、コントロール群において２０００ｍｍ３の平均腫瘍容積または２２日間として定義し、どちらが先に来るにせよ、研究は２２日目で終了させた。動物を、１〜５日目に１日に１回、次いで、研究が修了するまで１週間に２回体重測定した。そのマウスを、任意の有害な処置関連（ＴＲ）副作用の明らかな徴候に関して頻繁に観察し、観察された場合には、臨床徴候を記録した。個々の体重減少を、プロトコルに従ってモニターし、その体重が受容可能な体重減少に関する限界を超えた任意の動物を、安楽死させた。群平均体重減少もまた、プロトコルに従ってモニターした。投与を、その体重が受容可能な平均体重減少に関する限界を超えた任意の群において一時中止した。平均体重が回復した場合には、投与をその群において再開し得るが、より低用量もしくはより低頻度の投与スケジュールで再開し得る。受容可能な毒性を、研究の間に２０％未満の群平均体重減少および１０％以下の処置関連（ＴＲ）死亡として定義した。より高い毒性を生じる任意の投与レジメンは、最大耐量（ＭＴＤ）を上回ると見做した。死亡を、臨床徴候および／または剖検によって証明される場合、処置副作用に帰し得るのであれば、ＴＲとして分類したか、あるいは投与期間の間にもしくは最後の用量の１４日間以内に未知の原因に起因するのであれば、ＴＲとして分類されてもよい。死亡は、死亡が処置副作用に関連したという証拠が存在しなければ、非処置関連（ＮＴＲ）として分類した。
【０１４８】
処置効力を、最終日からのデータを使用して決定した。最終日でのＭＴＶ（ｎ）（動物の数、ｎに対するメジアン腫瘍容積）を、各群に関して決定した。ビヒクル  ｐ．ｏ．  ｑｄ×２１を受けた群１のマウスを、以下の式に従って決定された腫瘍成長阻害（ＴＧＩ）の分析のためのコントロール群として供した：％ＴＧＩ＝[１−（ＭＴＶ薬物処置／ＭＴＶコントロール）]×１００。処置効力をまた、研究の間に観察された退縮応答の発生率および大きさから決定した。処置は、動物において腫瘍の部分退縮（ＰＲ）または完全退縮（ＣＲ）を引き起こし得る。ＰＲ応答において、その腫瘍容積は、研究の過程の間で３回連続測定にわたってその１日目の容積の５０％もしくはこれより小さく、これらの３回の測定のうちの１回もしくはこれより多くに関して１３．５ｍｍ３に等しいかまたはこれより大きい。ＣＲ応答において、その腫瘍容積は、研究の過程の間で３回連続測定にわたって１３．５ｍｍ３未満であった。
【０１４９】
２２日目に、群１のＭＴＶは、１４２１ｍｍ３であり、範囲は、６５０〜２８９０ｍｍ３であった（図１１Ａおよび図１１Ｂ）。
【０１５０】
化合物１での処置への応答（群２〜４）：  ２２日目に、群２〜４のＭＴＶは、それぞれ、４４６ｍｍ３、２８８ｍｍ３、および６３ｍｍ３であり、これらは、６９％、８０％および９６％のＴＧＩに相当した（図１１Ａおよび図１１Ｂ）。用量関連ＴＧＩは、潜在的な治療活性に関する閾値を達成したが、１１ｍｇ／ｋｇおよび２５ｍｇ／ｋｇのレジメンのみが、コントロールと有意差があった（群１  対  群２、Ｐ＞０．０５；  群１  対  群３、Ｐ＜０．０５；群１  対  群４、Ｐ＜０．００１）。群２および群３において退縮応答は全く記録されなかったのに対して、群４は、７つのＰＲを生じた。全３群のメジアン腫瘍成長は、コントロールに関するものと比較して遅れた（図１１Ａ）。
【０１５１】
化合物２での処置への応答（群５〜７）：  群５〜７は、それぞれ、５ｍｇ／ｋｇ、１１ｍｇ／ｋｇ、および２５ｍｇ／ｋｇの化合物２（ｐ．ｏ．  ｑｄ×２１）を受けた。２２日目に、群５〜７のＭＴＶは、それぞれ、３２０ｍｍ３、１０８ｍｍ３、および４０ｍｍ３であり、これらは、７７％、９２％、および９７％のＴＧＩに相当した（図１０（Ａ〜Ｂ））。その用量関連ＴＧＩは、潜在的な治療活性に関する閾値を達成したが、１１ｍｇ／ｋｇおよび２５ｍｇ／ｋｇのレジメンのみが、コントロールと有意差があった（群１  対  群５、Ｐ＞０．０５；群１  対  群６、Ｐ＜０．０１；群１  対  群７、Ｐ＜０．００１）。群５において退縮応答は全く記録されなかったが、群６は３つのＰＲを生じ、群７は、８つのＰＲを生じた。全３群のメジアン腫瘍成長は、コントロールに関するものと比較して遅れた（図１０（Ａ））。
【０１５２】
副作用：  図１１Ｃは、各群に関する１日目からの％平均体重（ＢＷ）変化を示す。ＴＲ死亡は研究において評価せず、最大平均ＢＷ減少は、全群に関して受容可能な限界内であった。
【０１５３】
このＭＶ４−１１異種移植片研究は、潜在的な抗がん治療としての式Ｉの化合物の有用性を示す。強い腫瘍退縮応答は、観察された中程度の体重減少および処置関連死亡なしに鑑みれば、特に印象的である。
【０１５４】
実施例９−結晶構造
ＰＤＫ１（残基５１〜３６０）は、ＧＳＴ融合タンパク質としてＥ．ｃｏｌｉにおいて発現させ、ＧＳＨアフィニティークロマトグラフィーによって精製し、切断し、透析し、濃縮した。ＰＤＫ１  ５１〜３６０を化合物と混合し、共結晶を、ハンギングドロップ蒸気拡散法を使用して生成した。
【０１５５】
図１２Ａ〜１２Ｅは、ＡＴＰならびにＧＳＫ２３３４４７０およびＢＸ−３２０  ＰＤＫ１インヒビターに対して対比させた場合の、本発明の化合物に関して観察された種々のＰＤＫ１−リガンド構造を図示する。１２Ａ）：ＰＤＫ１に結合した化合物３（式Ｉの代表的化合物）の結晶構造。化合物３は、ＡＴＰのプリンポケットの中に結合し、そのタンパク質のコアへと深く達し、そのタンパク質の表面に再配向されるＤＦＧループのＰｈｅのために結合ポケットを占有し、Ｐｈｅは、その化合物に対して隠れている。１２Ｂ）：ＡＴＰ（ＰＤＢコード１ｈ１ｗ）および化合物３に結合したＰＤＫ１の重ね合わせ。大部分は、その２種のタンパク質骨格は、密接に重なるが、顕著な摂動（ｐｅｒｔｕｒｂａｔｉｏｎ）は、タンパク質のＮ末端（上側）ローブ（ｌｏｂｅ）において認められる。ＡＴＰおよび化合物３に特有である鍵となるコンホメーションは、それぞれ、薄い方の灰色および濃い方の灰色で示される。Ｐｈｅ／ＤＦＧループの２つの異なる位置が示される。化合物３が結合した構造において、Ｐｈｅ残基は、ＡＴＰ結合構造においてＡＴＰのホスフェートによって占有される領域にある。対照的に、そのＰｈｅ残基は、化合物３の化合物によって占有される領域である、ＡＴＰ結合構造におけるタンパク質のコアに向いている。従って、ＡＴＰおよび化合物３は、ＰＤＫ１の２つの相互に排他的なコンホメーションを結合する。化合物３の結合が、ＡＴＰ結合構造と比較して、ＰＤＫ１タンパク質のαＢヘリックスおよびαＣヘリックスの変形を引き起こすこともまた認められる。１２Ｃ）：ＰＤＫ１構造と化合物３およびＧＳＫ２３３４４７０（ＧＳＫ、薄い方の灰色）との重ね合わせ。化合物３とＧＳＫ２３３４４７０結合構造との間の差異は、Ｎ末端（上側）ローブに主に位置する。化合物３は、本発明の化合物に特有でありかつＧＳＫ２３３４４７０によって接近されない領域を占有する。αＢヘリックスおよびαＣヘリックスの位置は、ＧＳＫ２３３４４７０結合構造と比較した場合に異なり、これは、ＡＴＰ結合構造に密接に似ている。１２Ｄ）：ＰＤＫ１構造と、化合物３およびＢＸ−３２０（濃い方の灰色）との重ね合わせ。化合物３は、本発明の化合物に特有であるＰＤＫ１の領域を占有し、ＤＦＧループ、ならびにαＢヘリックスおよびαＣヘリックスを置き換えるＰＤＫ１におけるコンホメーション変化を引き起こす。ＢＸ−３２０化合物によって占有される空間は、それ自体、ＧＳＫ２３３４４７０とは視覚的に異なるが、これら２種の化合物とのＰＤＫ１結合構造は、実質的に同一であり、ＡＴＰ結合構造に密接に似ている。１２Ｅ）化合物３、ＧＳＫ２３３４４７０、およびＢＸ−３２０を有するＮ末端キナーゼドメインの上面図。全３種の化合物が、ＡＴＰのプリンを結合するポケットを占有する。さもなければ、上記化合物は、そのタンパク質の表面に沿って位置するＢＸ−３２０（図１２Ｅ）およびＧＳＫ２３３４４７０とは異なる領域を占有し、式Ｉの化合物のみがそのタンパク質のコアの中に達する。ここで上記化合物は、ＡＴＰ結合構造によって規定されるように、保持する相互作用、ならびにそれらの天然のコンホメーションにおいてαＢヘリックスおよびαＣヘリックスを破壊する。これは、αＢヘリックスおよびαＣヘリックスが基質結合において、およびキナーゼの触媒として活性なコンホメーションを安定化することにおいて役割を果たすので、重要である。
【０１５６】
実施例１０−蛍光ＰＩＦ−ｔｉｄｅ結合アッセイ
ペプチド結合アッセイを、以下のプローブで行った：ＦＩＴＣ−ＲＥＰＲＩＬＳＥＥＥＱＥＭＦＲＤＦＤＹＩＡＤＷＣ（配列番号２）またはＦＩＴＣ−ＥＥＱＥＭＦＲＤＦＤＹＩＡＤＷ（配列番号３）（カスタム合成）。全長のリン酸化ＰＤＫ１を、その標識したペプチドとともに１時間、化合物もしくはＤＭＳＯ（０．１％  最終濃度）の存在下で、１０ｍＭ  ＭｇＣｌ２、０．０１％  Ｔｒｉｔｏｎ  Ｘ−１００、および１ｍＭ  ＤＴＴを含む１０ｍＭ  Ｔｒｉｓ（ｐＨ７．５）中でインキュベートした。蛍光偏光度を、λｅｘ＝５３５ｎｍ、λｅｍ１＝５９０ｎｍで、Ｔｅｃａｎ  Ｉｎｆｉｎｉｔｅ  Ｆ５００プレートリーダーを使用して測定した。
【０１５７】
ＦＲＥＴベースのペプチド結合アッセイを、ＦＩＴＣ−ＲＥＰＲＩＬＳＥＥＥＱＥＭＦＲＤＦＤＹＩＡＤＷＣ（配列番号２）で行った。全長のリン酸化ＰＤＫ１を、その標識したペプチドおよび０．４ｎＭ  抗６Ｈｉｓ−Ｔｂクリプターゼ抗体（Ｃｉｓｂｉｏ  Ｂｉｏａｓｓａｙｓ）とともに１時間、化合物もしくはＤＭＳＯ（０．１％  最終濃度）の存在下で、１０ｍＭ  ＭｇＣｌ２、０．０１％  Ｔｒｉｔｏｎ  Ｘ−１００、０．０１％  カゼインおよび１ｍＭ  ＤＴＴを含む１０ｍＭ  Ｔｒｉｓ（ｐＨ７．５）中でインキュベートした。
【０１５８】
図１３Ａは、ＰＤＫ１のＮ末端ローブの最も上にあるＰＩＦ−ｔｉｄｅ結合ポケット（黒丸）の概要とともに、化合物３（中間の灰色）、ならびに比較化合物であるＧＳＫ２３３４４７０（最も薄い灰色）およびＢＸ−３２０（最も濃い灰色）に結合したＰＤＫ１の重ね合わせを示す。認められ得るように、式Ｉの代表的化合物（中間の灰色）は、αＢヘリックスおよびαＣヘリックスを押し出し、それによって、ＰＩＦ結合ポケットの構造に摂動を起こさせる。これを実験的に試験するために、ＰＤＫ１へのＰＩＦ−ｔｉｄｅ結合を測定するための結合アッセイを開発した。このアッセイにおいて、ＰＩＦポケットに摂動を起こすことなくＰＤＫ１のＡＴＰ結合ポケットに結合する化合物は、図１３Ｂ（左半分）に図示されるように、蛍光偏光度によって測定される場合にＰＩＦ−ｔｉｄｅ結合の影響を示さない。しかし、ＰＤＫ１のＡＴＰ結合ポケットに結合し、かつＰＩＦポケットに摂動を起こさせる化合物は、図１３Ｂ（右半分）に図示されるように、蛍光偏光度によって測定される場合に低下したＰＩＦ−ｔｉｄｅ結合を示す。これらの結合研究からの結果は、化合物のＰＤＫ１飽和量を使用して、図１３Ｃに示される：予測されるとおり、図１３Ｃ）は、ＢＸ−７９５（密接に似ておりかつＢＸ−３２０と同じ結合様式を有するＰＤＫ１インヒビター）がＰＩＦ−ｔｉｄｅ結合の干渉を示さない一方で、試験した全３種の式Ｉの化合物（化合物３、化合物１、および化合物２）が、ＰＩＦ−ｔｉｄｅ結合の顕著な阻害を示す（残りのバックグラウンドシグナルは、ＰＩＦ−ｔｉｄｅの非特異的結合にあるとされる）ことを示す。従って、式Ｉの化合物は、キナーゼ活性の阻害に加えて、ＰＩＦ依存性基質相互作用に干渉し得る。図１３Ｄにおいて、ＰＤＫ１へのＰＩＦ−ｔｉｄｅ結合に対する化合物の影響をモニターするための第２の方法のデータが示される。このアッセイにおいて、ＰＤＫ１上の６Ｈｉｓタグを認識する抗体に結合したＴｂキレートと、ＦＩＴＣ標識したＰＩＦ−ｔｉｄｅとの間のＦＲＥＴをモニターする。汎キナーゼインヒビターであるスタウロスポリン（これは、ＰＩＦ−ｔｉｄｅポケットを破壊しない）は、ＰＤＫ１とＰＩＦ−ｔｉｄｅとの間でＦＲＥＴを阻害しない一方で、化合物１および化合物２は、１０ｎＭ  化合物でほぼ完全な阻害を示す。図６（Ｃ）において、化合物２は、４時間で９０％  Ｐ−ＲＳＫ２阻害および４０％  Ｐ−ＰＤＫ１阻害を示した一方で、ＧＳＫ２３３４４７０は、５０％  Ｐ−ＰＤＫ１阻害を（２４時間で）示すにも拘わらず、わずかな２０％  Ｐ−ＲＳＫ２阻害を示したに過ぎなかった。これは、ＲＳＫ２リン酸化が、ＧＳＫ−２３３４４７０によるより化合物２によるＰＤＫ１の阻害に感受性であることを示す。ＰＩＦポケットおよび従ってＰＩＦ媒介性ＲＳＫ２基質結合の摂動は、化合物２へのこの増強された感受性を説明し得る。これは、ＰＤＫ１触媒性インヒビターに関しては観察されなかった本発明の化合物の特有かつ新規な局面であり、本発明の化合物の増強された細胞ベースの有効性および抗がん薬としてのそれらの有用性にとって決定的に重要であり得る。
【０１５９】
本発明のある特定の実施形態は、以下の番号付けされた段落において列挙される以下の実施形態によって例証される：
１．必要性のある被験体においてがんを処置するための方法であって、ここでがん成長または生存は、ＰＤＫ１−ＰＩＦ媒介性基質相互作用に依存性であり、上記方法は、式Ｉａの化合物：
【化１４】
2018538244.tif 000023
またはその薬学的に受容可能な塩の治療上有効な量を上記被験体に投与する工程を包含し、ここで：
Ｒ１は、水素もしくは必要に応じて置換されたＣ１−６脂肪族であるか、または：
Ｒ１および環Ａ４上の置換基は、これらの間にある原子と一緒になって、窒素、酸素、もしくは硫黄から独立して選択される１〜３個のヘテロ原子を有する必要に応じて置換された５〜７員の部分不飽和もしくは芳香族の縮合環を形成し；
Ｘは、−Ｃ（Ｏ）−もしくは−Ｓ（Ｏ）２−であり、
Ｌ１は、共有結合であるか、またはＣ１−４アルキレン、Ｃ２−４アルケニレン、もしくはＣ２−４アルキニレンから選択される必要に応じて置換された二価の基であり、ここでＬ１の１個もしくはこれより多くのメチレン単位は、−Ｃｙ１−、−Ｏ−、−Ｓ−、−Ｎ（Ｒ２）−、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ２）−、−Ｎ（Ｒ２）Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ２）−、−Ｎ（Ｒ２）Ｃ（Ｏ）−、−Ｎ（Ｒ２）Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−ＯＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ２）−、−Ｓ（Ｏ）２−、−Ｓ（Ｏ）２Ｎ（Ｒ２）−、−Ｎ（Ｒ２）Ｓ（Ｏ）２−、−ＯＣ（Ｏ）−、もしくは−Ｃ（Ｏ）Ｏ−によって必要に応じてかつ独立して置き換えられ；
Ｃｙ１は、フェニレン、３〜７員の飽和もしくは部分不飽和のカルボシクリレン、窒素、酸素、もしくは硫黄から独立して選択される１〜２個のヘテロ原子を有する４〜７員の飽和もしくは部分不飽和のヘテロシクリレン、または窒素、酸素、もしくは硫黄から独立して選択される１〜３個のヘテロ原子を有する５〜６員のヘテロアリーレンから選択される必要に応じて置換された二価の環であり；
各Ｒ２は、水素もしくは必要に応じて置換されたＣ１−６脂肪族であり；
Ａ１は、共有結合であるか、あるいは３〜７員の飽和もしくは部分不飽和の単環式カルボシクリレン、７〜１０員の飽和もしくは部分不飽和の二環式カルボシクリレン、窒素、酸素、もしくは硫黄から独立して選択される１〜２個のヘテロ原子を有する４〜７員の飽和もしくは部分不飽和の単環式ヘテロシクリレン、窒素、酸素、もしくは硫黄から独立して選択される１〜３個のヘテロ原子を有する７〜１０員の飽和もしくは部分不飽和の二環式ヘテロシクリレン、フェニレン、８〜１０員の二環式アリーレン、窒素、酸素、もしくは硫黄から独立して選択される１〜３個のヘテロ原子を有する５〜６員の単環式ヘテロアリーレン、または窒素、酸素、もしくは硫黄から独立して選択される１〜４個のヘテロ原子を有する８〜１０員の二環式ヘテロアリーレンから選択される必要に応じて置換された二価の環であり；
Ｌ２は、共有結合、アルキリデニレン、もしくは必要に応じて置換されたアルキレン鎖であり、ここでＬ２の１個もしくはこれより多くのメチレン単位は、−Ｏ−、−Ｓ−、−Ｎ（Ｒ２）−、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ２）−、−Ｎ（Ｒ２）Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ２）−、−Ｎ（Ｒ２）Ｃ（Ｏ）−、−Ｎ（Ｒ２）Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−ＯＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ２）−、−Ｓ（Ｏ）２−、−Ｓ（Ｏ）２Ｎ（Ｒ２）−、−Ｎ（Ｒ２）Ｓ（Ｏ）２−、−ＯＣ（Ｏ）−、もしくは−Ｃ（Ｏ）Ｏ−によって必要に応じてかつ独立して置き換えられ；
環Ａ２は、３〜７員の飽和もしくは部分不飽和の単環式炭素環式環、７〜１０員の飽和もしくは部分不飽和の二環式炭素環式環、窒素、酸素、もしくは硫黄から独立して選択される１〜２個のヘテロ原子を有する４〜７員の飽和もしくは部分不飽和の単環式複素環式環、窒素、酸素、もしくは硫黄から独立して選択される１〜３個のヘテロ原子を有する７〜１０員の飽和もしくは部分不飽和の二環式複素環式環、フェニル環、８〜１０員の二環式アリール環、窒素、酸素、もしくは硫黄から独立して選択される１〜３個のヘテロ原子を有する５〜６員の単環式ヘテロアリール環、窒素、酸素、もしくは硫黄から独立して選択される１〜４個のヘテロ原子を有する８〜１０員の二環式ヘテロアリール環、または窒素、酸素、もしくは硫黄から独立して選択される０〜４個のヘテロ原子を有する１０〜１６員の飽和、部分不飽和、もしくは芳香族の三環式環であり、ここで環Ａ２は、１〜４個のＲｘ基で必要に応じて置換され；
各Ｒｘは、独立して、−Ｒ、必要に応じて置換されたアルキリデニル、オキソ、ハロ、−ＮＯ２、−ＣＮ、−ＯＲ、−ＳＲ、−Ｎ（Ｒ’）２、−Ｃ（Ｏ）Ｒ、−ＣＯ２Ｒ、−Ｃ（Ｏ）Ｃ（Ｏ）Ｒ、−Ｃ（Ｏ）ＣＨ２Ｃ（Ｏ）Ｒ、−Ｓ（Ｏ）Ｒ、−Ｓ（Ｏ）２Ｒ、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）２、−Ｓ（Ｏ）２Ｎ（Ｒ’）２、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ、−Ｎ（Ｒ’）Ｃ（Ｏ）Ｒ、−Ｎ（Ｒ’）Ｎ（Ｒ’）２、−Ｎ（Ｒ’）ＯＲ、−Ｎ（Ｒ’）Ｃ（＝ＮＲ’）Ｎ（Ｒ’）２、−Ｃ（＝ＮＲ’）Ｎ（Ｒ’）２、−Ｃ＝ＮＯＲ、−Ｎ（Ｒ’）Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）２、−Ｎ（Ｒ’）Ｓ（Ｏ）２Ｎ（Ｒ’）２、−Ｎ（Ｒ’）Ｓ（Ｏ）２Ｒ、もしくは−ＯＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）２であり；
各Ｒは、独立して、水素、あるいはＣ１−６脂肪族、３〜７員の飽和もしくは部分不飽和の単環式炭素環式環、７〜１０員の飽和もしくは部分不飽和の二環式炭素環式環、窒素、酸素、もしくは硫黄から独立して選択される１〜２個のヘテロ原子を有する４〜７員の飽和もしくは部分不飽和の単環式複素環式環、窒素、酸素、もしくは硫黄から独立して選択される１〜３個のヘテロ原子を有する７〜１０員の飽和もしくは部分不飽和の二環式複素環式環、フェニル環、８〜１０員の二環式アリール環、窒素、酸素、もしくは硫黄から独立して選択される１〜３個のヘテロ原子を有する５〜６員のヘテロアリール環、または窒素、酸素、もしくは硫黄から独立して選択される１〜４個のヘテロ原子を有する８〜１０員の二環式ヘテロアリール環から選択される必要に応じて置換された基であり；
各Ｒ’は、独立して、−Ｒであるか、または同じ窒素上の２個のＲ’基は、これらの間にある原子と一緒になって、窒素、酸素、もしくは硫黄から独立して選択される１〜４個のヘテロ原子を有する必要に応じて置換された５〜８員の飽和、部分不飽和、もしくは芳香族の環を形成し；
Ｌ３は、共有結合もしくは必要に応じて置換されたＣ１−４アルキレン鎖であり、ここでＬ３の１個もしくはこれより多くのメチレン単位は、−Ｏ−、−Ｓ−、−Ｎ（Ｒ２）−、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ２）−、−Ｎ（Ｒ２）Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ２）−、−Ｎ（Ｒ２）Ｃ（Ｏ）−、−Ｎ（Ｒ２）Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−ＯＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ２）−、−Ｓ（Ｏ）２−、−Ｓ（Ｏ）２Ｎ（Ｒ２）−、−Ｎ（Ｒ２）Ｓ（Ｏ）２−、−ＯＣ（Ｏ）−、もしくは−Ｃ（Ｏ）Ｏ−によって必要に応じてかつ独立して置き換えられ；
環Ａ３は、３〜７員の飽和もしくは部分不飽和の単環式炭素環式環、７〜１０員の飽和もしくは部分不飽和の二環式炭素環式環、窒素、酸素、もしくは硫黄から独立して選択される１〜２個のヘテロ原子を有する４〜７員の飽和もしくは部分不飽和の単環式複素環式環、窒素、酸素、もしくは硫黄から独立して選択される１〜３個のヘテロ原子を有する７〜１０員の飽和もしくは部分不飽和の二環式複素環式環、フェニル環、８〜１０員の二環式アリール環、窒素、酸素、もしくは硫黄から独立して選択される１〜３個のヘテロ原子を有する５〜６員の単環式ヘテロアリール環、または窒素、酸素、もしくは硫黄から独立して選択される１〜４個のヘテロ原子を有する８〜１０員の二環式ヘテロアリール環から選択される必要に応じて置換された環であり；
環Ａ４は、窒素、酸素、もしくは硫黄から独立して選択される１〜３個のヘテロ原子を有する５〜６員のヘテロアリール環、または窒素、酸素、もしくは硫黄から独立して選択される１〜４個のヘテロ原子を有する８〜１０員の二環式ヘテロアリール環であり；ここで環Ａ４上の任意の置換可能な炭素は、Ｒ３、Ｒ４、もしくはＲ５で必要に応じて置換され、環Ａ４上の任意の置換可能な窒素は、Ｒ６で必要に応じて置換され；
Ｒ３、Ｒ４、およびＲ５の各々は、独立して、−Ｒ、−ハロ、−ＮＯ２、−ＣＮ、−ＯＲ、−ＳＲ、−Ｎ（Ｒ’）２、−Ｃ（Ｏ）Ｒ、−ＣＯ２Ｒ、−Ｃ（Ｏ）Ｃ（Ｏ）Ｒ、−Ｃ（Ｏ）ＣＨ２Ｃ（Ｏ）Ｒ、−Ｓ（Ｏ）Ｒ、−Ｓ（Ｏ）２Ｒ、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）２、−Ｓ（Ｏ）２Ｎ（Ｒ’）２、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ、−Ｎ（Ｒ’）Ｃ（Ｏ）Ｒ、−Ｎ（Ｒ’）Ｎ（Ｒ’）２、−Ｎ（Ｒ’）ＯＲ、−Ｎ（Ｒ’）Ｃ（＝ＮＲ’）Ｎ（Ｒ’）２、−Ｃ（＝ＮＲ’）Ｎ（Ｒ’）２、−Ｃ＝ＮＯＲ、−Ｎ（Ｒ’）Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）２、−Ｎ（Ｒ’）Ｓ（Ｏ）２Ｎ（Ｒ’）２、−Ｎ（Ｒ’）Ｓ（Ｏ）２Ｒ、もしくは−ＯＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）２であるか；あるいは：
Ｒ３およびＲ４、またはＲ４およびＲ５は、これらの間にある原子と一緒になって、４〜７員の部分不飽和の炭素環式環、フェニル、窒素、酸素、もしくは硫黄から独立して選択される１〜３個のヘテロ原子を有する５〜６員の部分不飽和の複素環式環、または窒素、酸素、もしくは硫黄から独立して選択される１〜３個のヘテロ原子を有する５〜６員のヘテロアリール環から選択される必要に応じて置換された縮合環を形成し；
各Ｒ６は、独立して、−Ｒ、−Ｃ（Ｏ）Ｒ、−ＣＯ２Ｒ、−Ｃ（Ｏ）Ｃ（Ｏ）Ｒ、−Ｃ（Ｏ）ＣＨ２Ｃ（Ｏ）Ｒ、−Ｓ（Ｏ）Ｒ、−Ｓ（Ｏ）２Ｒ、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）２、もしくは−Ｓ（Ｏ）２Ｎ（Ｒ’）２であるか；あるいは：
Ｒ３およびＲ６は、これらの間にある原子と一緒になって、窒素、酸素、もしくは硫黄から独立して選択される１〜３個のヘテロ原子を有する５〜６員の飽和もしくは部分不飽和の複素環式環、または窒素、酸素、もしくは硫黄から独立して選択される１〜３個のヘテロ原子を有する５〜６員のヘテロアリール環から選択される必要に応じて置換された縮合環を形成する、
方法。
２．ＰＤＫ１−ＰＩＦ媒介性基質相互作用依存性がん生存経路の阻害を通じてがん細胞アポトーシスを誘導することによって、必要性のある被験体においてがんを処置するための方法であって、上記方法は、上記被験体に、実施形態１に記載されるとおりの式Ｉａの化合物の治療上有効な量を投与する工程を包含する方法。
３．ＰＤＫ１−ＰＩＦ媒介性基質相互作用依存性のがん細胞の成長もしくは増殖を阻害することによって、必要性のある被験体においてがんを処置するための方法であって、上記方法は、上記被験体に、実施形態１に記載されるとおりの式Ｉａの化合物の治療上有効な量を投与する工程を包含する方法。
４．ＰＤＫ１−ＰＩＦ媒介性基質相互作用に依存性のＡｋｔ非依存性がん細胞成長もしくは増殖経路を阻害することによって、がん細胞の成長もしくは増殖を阻害するための方法であって、上記方法は、上記がん細胞と、実施形態１に記載されるとおりの式Ｉａの化合物の有効量とを接触させる工程を包含する方法。
５．ＰＤＫ１−ＰＩＦ媒介性基質相互作用に依存性のＡｋｔ非依存性がん細胞生存経路を阻害することによって、がん細胞のアポトーシスを誘導するための方法であって、上記方法は、上記がん細胞と、実施形態１に記載されるとおりの式Ｉａの化合物の有効量とを接触させる工程を包含する方法。
６．がん細胞の成長もしくは増殖を阻害するための方法であって、上記がん細胞の成長もしくは増殖は、ＰＤＫ１によるＰＩＦ媒介性基質結合に依存し、上記方法は、上記がん細胞と実施形態１に記載されるとおりの式Ｉａの化合物とを、上記がん細胞の成長もしくは増殖を阻害するために十分な量で接触させる工程を包含する方法。
７．がん細胞のアポトーシスを誘導するための方法であって、上記がん細胞の成長もしくは増殖は、ＰＤＫ１によるＰＩＦ媒介性基質結合に依存性であり、上記方法は、上記がん細胞と、実施形態１に記載されるとおりの式Ｉａの化合物の有効量とを接触させる工程を包含する方法、
８．がん細胞においてＰＤＫ１によるＰＩＦ媒介性基質結合を阻害するための方法であって、上記方法は、上記細胞と実施形態１に記載されるとおりの式Ｉａの化合物とを接触させる工程を包含し、それによって上記がん細胞の成長もしくは増殖が阻害される、方法。
９．がん細胞においてアポトーシスを誘導するための方法であって、がん細胞と、ＰＤＫ１によるＰＩＦ媒介性基質結合を阻害する実施形態１に記載されるとおりの式Ｉａの化合物とを接触させる工程を包含する方法。
１０．がんの処置における使用のための医薬の調製における実施形態１に記載されるとおりの式Ｉａの化合物の使用であって、上記がんの成長もしくは生存は、ＰＤＫ１−ＰＩＦ媒介性基質相互作用に依存する、使用。
１１．がんの処置のための容器および医薬の使用であって、上記がんの成長もしくは生存は、ＰＤＫ１−ＰＩＦ媒介性基質相互作用に依存性であり、ここで上記医薬は、実施形態１に記載されるとおりの式Ｉａの化合物および薬学的に受容可能な賦形剤を含む、使用。
１２．がん細胞の成長、増殖、もしくは生存を阻害するための方法であって、上記がん細胞においてＰＤＫ１−ＰＩＦ媒介性基質相互作用依存性細胞生存経路が影響を及ぼされ、上記方法は、上記細胞と、実施形態１に記載されるとおりの式Ｉａの化合物とを接触させる工程を包含し、それによって、上記がん細胞の成長もしくは増殖が阻害される方法。
１３．がん細胞の成長、増殖もしくは生存を阻害するための方法であって、上記がん細胞においてＲＳＫ２依存性細胞生存経路が影響を及ぼされ、上記方法は、上記細胞と、実施形態１に記載されるとおりの式Ｉａの化合物とを接触させる工程を包含し、それによって上記がん細胞の成長もしくは増殖が阻害される方法。
１４．ＲＳＫ２依存性生存経路の阻害を通じてがん細胞アポトーシスを誘導することによって、必要性のある被験体においてがんを処置するための方法であって、上記方法は、上記被験体に、実施形態１に記載されるとおりの式Ｉａの化合物の治療上有効な量を投与する工程を包含する方法。
１５．ＲＳＫ２依存性がん細胞の成長もしくは増殖を阻害することによって、必要性のある被験体においてがんを処置するための方法であって、上記方法は、上記被験体に、実施形態１に記載されるとおりの式Ｉａの化合物の治療上有効な量を投与する工程を包含する方法。
１６．がん細胞の成長もしくは増殖を阻害するための方法であって、上記がん細胞の成長もしくは増殖は、ＲＳＫ２のキナーゼ活性に依存性であり、上記方法は、上記がん細胞と、実施形態１に記載されるとおりの式Ｉａの化合物とを、上記がん細胞においてＲＳＫ２活性を阻害するための十分な量で接触させる工程を包含する方法。
１７．がん細胞においてアポトーシスを誘導するための方法であって、がん細胞と、ＰＤＫ１によるＲＳＫ２活性化を阻害する実施形態１に記載されるとおりの式Ｉａの化合物とを接触させる工程を包含する方法。
１８．がん細胞の成長、増殖、もしくは生存を阻害するための方法であって、上記がん細胞においてＡｋｔ非依存性細胞生存経路が影響を及ぼされ、上記方法は、上記細胞と実施形態１に記載されるとおりの式Ｉａの化合物とを接触させる工程を包含し、それによって上記がん細胞の成長もしくは増殖が阻害される方法。
１９．上記細胞は、Ａｋｔ活性の阻害またはＡｋｔ媒介性生存経路の活性の阻害に抵抗性であると考えられる、実施形態１８に記載の方法。
２０．Ａｋｔ非依存性がん細胞生存経路の阻害を通じてがん細胞アポトーシスを誘導することによって、必要性のある被験体においてがんを処置するための方法であって、上記方法は、上記被験体に、実施形態１に記載されるとおりの式Ｉａの化合物の治療上有効な量を投与する工程を包含する方法。
２１．Ａｋｔ非依存性がん細胞の成長もしくは増殖を阻害することによって、必要性のある被験体においてがんを処置するための方法であって、上記方法は、上記被験体に、実施形態１に記載されるとおりの式Ｉａの化合物の治療上有効な量を投与する工程を包含する方法。
２２．がん細胞の成長もしくは増殖を阻害するための方法であって、上記がん細胞の成長もしくは増殖は、Ａｋｔのキナーゼ活性に依存性ではなく、上記方法は、上記がん細胞と実施形態１に記載されるとおりの式Ｉａの化合物とを、上記がん細胞の成長もしくは増殖を阻害するために十分な量で接触させる工程を包含する方法。
２３．がん細胞のアポトーシスを誘導するための方法であって、上記がん細胞の成長もしくは増殖は、Ａｋｔのキナーゼ活性に依存性ではなく、上記方法は、上記がん細胞と、実施形態１に記載されるとおりの式Ｉａの化合物の有効量とを接触させる工程を包含する方法。
２４．がん細胞においてアポトーシスを誘導するための方法であって、上記がん細胞において生存性は、Ａｋｔ非依存性であり、上記方法は、上記がん細胞と、上記がん細胞においてＰＤＫ１によるＰＩＦ媒介性基質結合に干渉するために有効である実施形態１に記載されるとおりの式Ｉａの化合物の量とを接触させる工程を包含する方法。
２５．がん細胞のＡｋｔ非依存性の成長もしくは増殖を阻害するための方法であって、上記方法は、上記がん細胞と、実施形態１に記載されるとおりの式Ｉａの化合物の有効量とを接触させる工程を包含する方法。
２６．がんを有する被験体を処置するための方法であって、上記がんの成長もしくは増殖は、Ａｋｔ非依存性であり、上記方法は、上記被験体に、上記がんの成長もしくは増殖を損なうために有効である実施形態１に記載されるとおりの式Ｉａの化合物の量を投与する工程を包含する方法。
２７．がん細胞においてアポトーシスを誘導するための方法であって、上記がん細胞において、生存性はＲＳＫ２依存性またはＡｋｔ非依存性であり、上記方法は、上記がん細胞と、上記がん細胞においてＰＤＫ１によるＰＩＦ媒介性基質結合に干渉するために有効である実施形態１に記載されるとおりの式Ｉａの化合物の量とを接触させる工程を包含する方法。
２８．がん細胞のアポトーシスを誘導するための方法であって、上記がん細胞の成長もしくは増殖は、ＰＤＫ１  ＰＩＦ結合活性に依存性であり、上記方法は、上記がん細胞と、実施形態１に記載されるとおりの式Ｉａの化合物の有効量とを接触させる工程を包含する方法。
２９．がん細胞のアポトーシスを誘導するための方法であって、上記がん細胞の成長もしくは増殖は、ＰＤＫ１  ＰＩＦ結合活性に依存性であり、上記方法は、上記がん細胞と、実施形態１に記載されるとおりの式Ｉａの化合物の有効量とを接触させる工程を包含する方法。
３０．がん細胞のアポトーシスを誘導するための方法であって、上記がん細胞の成長もしくは増殖は、ＲＳＫ２活性に依存性であり、上記方法は、上記がん細胞と、実施形態１に記載されるとおりの式Ｉａの化合物の有効量とを接触させる工程を包含する方法。
３１．上記がんまたはがん細胞は、ＰＤＫ１インヒビターでの処置に不応性である、実施形態１〜３０のいずれか１つに記載の方法。
３２．上記がんまたはがん細胞は、Ａｋｔインヒビターでの処置に不応性である、施形態１〜３１のいずれか１つに記載の方法。
３３．
Ａ１が二価の単環式環でありかつＬ１が共有結合である場合、Ｌ２は、−Ｏ−ではない；
Ａ１が二価の単環式もしくは二環式の環である場合、Ｌ１およびＬ２は、同時に共有結合ではない；ならびに
Ｌ１、Ａ１、およびＬ２は、同時に共有結合ではない、
実施形態１〜３２のいずれか１つに記載の方法。
３４．
Ｒ１は、水素もしくは必要に応じて置換されたＣ１−６脂肪族であり；
Ｘは、−Ｃ（Ｏ）−もしくは−Ｓ（Ｏ）２−であり；
Ｌ１は、共有結合もしくは必要に応じて置換されたＣ１−４アルキレンであり；
Ａ１は、３〜７員の飽和もしくは部分不飽和の単環式カルボシクリレン、７〜１０員の飽和もしくは部分不飽和の二環式カルボシクリレン、窒素、酸素、もしくは硫黄から独立して選択される１〜２個のヘテロ原子を有する４〜７員の飽和もしくは部分不飽和の単環式ヘテロシクリレン、窒素、酸素、もしくは硫黄から独立して選択される１〜３個のヘテロ原子を有する７〜１０員の飽和もしくは部分不飽和の二環式ヘテロシクリレン、フェニレン、８〜１０員の二環式アリーレン、窒素、酸素、もしくは硫黄から独立して選択される１〜３個のヘテロ原子を有する５〜６員の単環式ヘテロアリーレン、または窒素、酸素、もしくは硫黄から独立して選択される１〜４個のヘテロ原子を有する８〜１０員の二環式ヘテロアリーレンから選択される必要に応じて置換された二価の環であり；
Ｌ２は、共有結合もしくは必要に応じて置換されたアルキレン鎖であり；
環Ａ２は、３〜７員の飽和もしくは部分不飽和の単環式炭素環式環、７〜１０員の飽和もしくは部分不飽和の二環式炭素環式環、窒素、酸素、もしくは硫黄から独立して選択される１〜２個のヘテロ原子を有する４〜７員の飽和もしくは部分不飽和の単環式複素環式環、窒素、酸素、もしくは硫黄から独立して選択される１〜３個のヘテロ原子を有する７〜１０員の飽和もしくは部分不飽和の二環式複素環式環、フェニル環、８〜１０員の二環式アリール環、窒素、酸素、もしくは硫黄から独立して選択される１〜３個のヘテロ原子を有する５〜６員の単環式ヘテロアリール環、窒素、酸素、もしくは硫黄から独立して選択される１〜４個のヘテロ原子を有する８〜１０員の二環式ヘテロアリール環、または窒素、酸素、もしくは硫黄から独立して選択される０〜４個のヘテロ原子を有する１０〜１６員の飽和、部分不飽和、もしくは芳香族の三環式環であり、ここで環Ａ２は、１〜４個のＲｘ基で必要に応じて置換され；
各Ｒｘは、独立して、−Ｒ、必要に応じて置換されたアルキリデニル、オキソ、−ハロ、−ＮＯ２、−ＣＮ、−ＯＲ、−ＳＲ、−Ｎ（Ｒ’）２、−Ｃ（Ｏ）Ｒ、−ＣＯ２Ｒ、−Ｃ（Ｏ）Ｃ（Ｏ）Ｒ、−Ｃ（Ｏ）ＣＨ２Ｃ（Ｏ）Ｒ、−Ｓ（Ｏ）Ｒ、−Ｓ（Ｏ）２Ｒ、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）２、−Ｓ（Ｏ）２Ｎ（Ｒ’）２、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ、−Ｎ（Ｒ’）Ｃ（Ｏ）Ｒ、−Ｎ（Ｒ’）Ｎ（Ｒ’）２、−Ｎ（Ｒ’）ＯＲ、−Ｎ（Ｒ’）Ｃ（＝ＮＲ’）Ｎ（Ｒ’）２、−Ｃ（＝ＮＲ’）Ｎ（Ｒ’）２、−Ｃ＝ＮＯＲ、−Ｎ（Ｒ’）Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）２、−Ｎ（Ｒ’）Ｓ（Ｏ）２Ｎ（Ｒ’）２、−Ｎ（Ｒ’）Ｓ（Ｏ）２Ｒ、もしくは−ＯＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）２であり；
各Ｒは、独立して、水素、あるいはＣ１−６脂肪族、３〜７員の飽和もしくは部分不飽和の単環式炭素環式環、７〜１０員の飽和もしくは部分不飽和の二環式炭素環式環、窒素、酸素、もしくは硫黄から独立して選択される１〜２個のヘテロ原子を有する４〜７員の飽和もしくは部分不飽和の単環式複素環式環、窒素、酸素、もしくは硫黄から独立して選択される１〜３個のヘテロ原子を有する７〜１０員の飽和もしくは部分不飽和の二環式複素環式環、フェニル環、８〜１０員の二環式アリール環、窒素、酸素、もしくは硫黄から独立して選択される１〜３個のヘテロ原子を有する５〜６員のヘテロアリール環、または窒素、酸素、もしくは硫黄から独立して選択される１〜４個のヘテロ原子を有する８〜１０員の二環式ヘテロアリール環から選択される必要に応じて置換された基であり；
各Ｒ’は、独立して、−Ｒであるか、または同じ窒素上の２個のＲ’基が、これらの間にある原子と一緒になって、窒素、酸素、もしくは硫黄から独立して選択される１〜４個のヘテロ原子を有する必要に応じて置換された５〜８員の飽和、部分不飽和、もしくは芳香族の環を形成し、；
Ｌ３は、共有結合もしくは必要に応じて置換されたＣ１−４アルキレン鎖であるか；あるいは
Ｌ３は、置換されていないメチレン、またはメチルもしくはエチルで置換されたメチレンであり；
環Ａ３は、７〜１０員の飽和もしくは部分不飽和の二環式炭素環式環、窒素もしくは硫黄から独立して選択される１〜２個のヘテロ原子を有する４〜７員の飽和もしくは部分不飽和の単環式複素環式環、窒素、酸素、もしくは硫黄から独立して選択される１〜３個のヘテロ原子を有する７〜１０員の飽和もしくは部分不飽和の二環式複素環式環、フェニル環、を有する８〜１０員の二環式アリール環、窒素、酸素、もしくは硫黄から独立して選択される１〜３個のヘテロ原子５〜６員の単環式ヘテロアリール環、または窒素、酸素、もしくは硫黄から独立して選択される１〜４個のヘテロ原子を有する８〜１０員の二環式ヘテロアリール環から選択される必要に応じて置換された環であり；
環Ａ４は、
【化１５】
2018538244.tif 000024
であり；そして
Ｒ３は、−Ｒ、−ハロ、−ＮＯ２、−ＣＮ、−ＯＲ、−ＳＲ、−Ｎ（Ｒ’）２、−Ｃ（Ｏ）Ｒ、−ＣＯ２Ｒ、−Ｃ（Ｏ）Ｃ（Ｏ）Ｒ、−Ｃ（Ｏ）ＣＨ２Ｃ（Ｏ）Ｒ、−Ｓ（Ｏ）Ｒ、−Ｓ（Ｏ）２Ｒ、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）２、−Ｓ（Ｏ）２Ｎ（Ｒ’）２、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ、−Ｎ（Ｒ’）Ｃ（Ｏ）Ｒ、−Ｎ（Ｒ’）Ｎ（Ｒ’）２、−Ｎ（Ｒ’）ＯＲ、−Ｎ（Ｒ’）Ｃ（＝ＮＲ’）Ｎ（Ｒ’）２、−Ｃ（＝ＮＲ’）Ｎ（Ｒ’）２、−Ｃ＝ＮＯＲ、−Ｎ（Ｒ’）Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）２、−Ｎ（Ｒ’）Ｓ（Ｏ）２Ｎ（Ｒ’）２、−Ｎ（Ｒ’）Ｓ（Ｏ）２Ｒ、もしくは−ＯＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）２であり；
Ｒ４は、−Ｒ、−ハロ、−ＮＯ２、−ＣＮ、−ＯＲ、−ＳＲ、−Ｎ（Ｒ’）２、−Ｃ（Ｏ）Ｒ、−ＣＯ２Ｒ、−Ｃ（Ｏ）Ｃ（Ｏ）Ｒ、−Ｃ（Ｏ）ＣＨ２Ｃ（Ｏ）Ｒ、−Ｓ（Ｏ）Ｒ、−Ｓ（Ｏ）２Ｒ、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）２、−Ｓ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）２、−Ｓ（Ｏ）２Ｎ（Ｒ’）２、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ、−Ｎ（Ｒ’）Ｃ（Ｏ）Ｒ、−Ｎ（Ｒ’）Ｎ（Ｒ’）２、−Ｎ（Ｒ’）ＯＲ，−Ｎ（Ｒ’）Ｃ（＝ＮＲ’）Ｎ（Ｒ’）２、−Ｃ（＝ＮＲ’）Ｎ（Ｒ’）２、−Ｃ＝ＮＯＲ、−Ｎ（Ｒ’）Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）２、−ＮＨＳ（Ｏ）Ｃ１−６アルキル、−Ｎ（Ｒ’）Ｓ（Ｏ）２Ｎ（Ｒ’）２、−Ｎ（Ｒ’）Ｓ（Ｏ）２Ｒ、もしくは−ＯＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）２であるか；あるいは
Ｒ３およびＲ４は、これらの間にある原子と一緒になって、４〜７員の部分不飽和の炭素環式環、フェニル、窒素、酸素、もしくは硫黄から独立して選択される１〜３個のヘテロ原子を有する５〜６員の部分不飽和の複素環式環、または窒素、酸素、もしくは硫黄から独立して選択される１〜３個のヘテロ原子を有する５〜６員のヘテロアリール環から選択される必要に応じて置換された縮合環を形成する、
実施形態１〜３３のいずれか１つに記載の方法。
３５．上記化合物は、式Ｉｓの化合物：
【化１６】
2018538244.tif 000025
またはその薬学的に受容可能な塩であり、ここで：
環Ａ４上の任意の置換可能な炭素は、Ｒ３、Ｒ４、もしくはＲ５で必要に応じて置換され、環Ａ４上の任意の置換可能な窒素は、Ｒ６で必要に応じて置換され；
Ｒ３、Ｒ４、およびＲ５の各々は、独立して、−Ｒ、−ハロ、−ＮＯ２、−ＣＮ、−ＯＲ、−ＳＲ、−Ｎ（Ｒ’）２、−Ｃ（Ｏ）Ｒ、−ＣＯ２Ｒ、−Ｃ（Ｏ）Ｃ（Ｏ）Ｒ、−Ｃ（Ｏ）ＣＨ２Ｃ（Ｏ）Ｒ、−Ｓ（Ｏ）Ｒ、−Ｓ（Ｏ）２Ｒ、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）２、−Ｓ（Ｏ）２Ｎ（Ｒ’）２、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ、−Ｎ（Ｒ’）Ｃ（Ｏ）Ｒ、−Ｎ（Ｒ’）Ｎ（Ｒ’）２、−Ｎ（Ｒ’）ＯＲ、−Ｎ（Ｒ’）Ｃ（＝ＮＲ’）Ｎ（Ｒ’）２、−Ｃ（＝ＮＲ’）Ｎ（Ｒ’）２、−Ｃ＝ＮＯＲ、−Ｎ（Ｒ’）Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）２、−Ｎ（Ｒ’）Ｓ（Ｏ）２Ｎ（Ｒ’）２、−Ｎ（Ｒ’）Ｓ（Ｏ）２Ｒ、もしくは−ＯＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）２であるか；あるいは：
Ｒ３およびＲ４、またはＲ４およびＲ５は、これらの間にある原子と一緒になって、４〜７員の部分不飽和の炭素環式環、フェニル、窒素、酸素、もしくは硫黄から独立して選択される１〜３個のヘテロ原子を有する５〜６員の部分不飽和の複素環式環、または窒素、酸素、もしくは硫黄から独立して選択される１〜３個のヘテロ原子を有する５〜６員のヘテロアリール環から選択される必要に応じて置換された縮合環を形成し；
各Ｒ６は、独立して、−Ｒ、−Ｃ（Ｏ）Ｒ、−ＣＯ２Ｒ、−Ｃ（Ｏ）Ｃ（Ｏ）Ｒ、−Ｃ（Ｏ）ＣＨ２Ｃ（Ｏ）Ｒ、−Ｓ（Ｏ）Ｒ、−Ｓ（Ｏ）２Ｒ、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）２、もしくは−Ｓ（Ｏ）２Ｎ（Ｒ’）２であるか；あるいは：
Ｒ３およびＲ６は、これらの間にある原子と一緒になって、窒素、酸素、もしくは硫黄から独立して選択される１〜３個のヘテロ原子を有する５〜６員の飽和もしくは部分不飽和の複素環式環、または窒素、酸素、もしくは硫黄から独立して選択される１〜３個のヘテロ原子を有する５〜６員のヘテロアリール環から選択される必要に応じて置換された縮合環を形成し；
Ｒ７は、水素もしくはメチルであり；そして
各Ｒ８は、独立して、水素もしくはハロである、
実施形態１〜３３のいずれか１つに記載の方法。
３６．環Ａ３は、フェニルであり、該フェニルは、メタ位もしくはオルト位で１個もしくは２個のフッ素によって置換されている、実施形態１〜３５のいずれか１つに記載の方法。
３７．上記化合物は、式Ｉｗの化合物：
【化１７】
2018538244.tif 000026
またはその薬学的に受容可能な塩であり、
ここで環Ａ４上の任意の置換可能な炭素は、Ｒ３、Ｒ４、もしくはＲ５で必要に応じて置換され、環Ａ４上の任意の置換可能な窒素は、Ｒ６で必要に応じて置換され；
Ｒ３、Ｒ４、およびＲ５の各々は、独立して、−Ｒ、−ハロ、−ＮＯ２、−ＣＮ、−ＯＲ、−ＳＲ、−Ｎ（Ｒ’）２、−Ｃ（Ｏ）Ｒ、−ＣＯ２Ｒ、−Ｃ（Ｏ）Ｃ（Ｏ）Ｒ、−Ｃ（Ｏ）ＣＨ２Ｃ（Ｏ）Ｒ、−Ｓ（Ｏ）Ｒ、−Ｓ（Ｏ）２Ｒ、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）２、−Ｓ（Ｏ）２Ｎ（Ｒ’）２、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ、−Ｎ（Ｒ’）Ｃ（Ｏ）Ｒ、−Ｎ（Ｒ’）Ｎ（Ｒ’）２、−Ｎ（Ｒ’）ＯＲ、−Ｎ（Ｒ’）Ｃ（＝ＮＲ’）Ｎ（Ｒ’）２、−Ｃ（＝ＮＲ’）Ｎ（Ｒ’）２、−Ｃ＝ＮＯＲ、−Ｎ（Ｒ’）Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）２、−Ｎ（Ｒ’）Ｓ（Ｏ）２Ｎ（Ｒ’）２、−Ｎ（Ｒ’）Ｓ（Ｏ）２Ｒ、もしくは−ＯＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）２であるか；あるいは：
Ｒ３およびＲ４、またはＲ４およびＲ５は、これらの間にある原子と一緒になって、４〜７員の部分不飽和の炭素環式環、フェニル、窒素、酸素、もしくは硫黄から独立して選択される１〜３個のヘテロ原子を有する５〜６員の部分不飽和の複素環式環、または窒素、酸素、もしくは硫黄から独立して選択される１〜３個のヘテロ原子を有する５〜６員のヘテロアリール環から選択される必要に応じて置換された縮合環を形成し；
各Ｒ６は、独立して、−Ｒ、−Ｃ（Ｏ）Ｒ、−ＣＯ２Ｒ、−Ｃ（Ｏ）Ｃ（Ｏ）Ｒ、−Ｃ（Ｏ）ＣＨ２Ｃ（Ｏ）Ｒ、−Ｓ（Ｏ）Ｒ、−Ｓ（Ｏ）２Ｒ、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）２、もしくは−Ｓ（Ｏ）２Ｎ（Ｒ’）２であるか；あるいは：
Ｒ３およびＲ６は、これらの間にある原子と一緒になって、窒素、酸素、もしくは硫黄から独立して選択される１〜３個のヘテロ原子を有する５〜６員の飽和もしくは部分不飽和の複素環式環、または窒素、酸素、もしくは硫黄から独立して選択される１〜３個のヘテロ原子を有する５〜６員のヘテロアリール環から選択される必要に応じて置換された縮合環を形成する、
実施形態１〜３６のいずれか１つに記載の方法。
３８．上記化合物は、式Ｉｘの化合物：
【化１８】
2018538244.tif 000027
またはその薬学的に受容可能な塩であり、ここで
Ｒ３およびＲ４の各々は、独立して、−Ｒ、−ハロ、−ＮＯ２、−ＣＮ、−ＯＲ、−ＳＲ、−Ｎ（Ｒ’）２、−Ｃ（Ｏ）Ｒ、−ＣＯ２Ｒ、−Ｃ（Ｏ）Ｃ（Ｏ）Ｒ、−Ｃ（Ｏ）ＣＨ２Ｃ（Ｏ）Ｒ、−Ｓ（Ｏ）Ｒ、−Ｓ（Ｏ）２Ｒ、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）２、−Ｓ（Ｏ）２Ｎ（Ｒ’）２、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ、−Ｎ（Ｒ’）Ｃ（Ｏ）Ｒ、−Ｎ（Ｒ’）Ｎ（Ｒ’）２、−Ｎ（Ｒ’）ＯＲ、−Ｎ（Ｒ’）Ｃ（＝ＮＲ’）Ｎ（Ｒ’）２、−Ｃ（＝ＮＲ’）Ｎ（Ｒ’）２、−Ｃ＝ＮＯＲ、−Ｎ（Ｒ’）Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）２、−Ｎ（Ｒ’）Ｓ（Ｏ）２Ｎ（Ｒ’）２、−Ｎ（Ｒ’）Ｓ（Ｏ）２Ｒ、もしくは−ＯＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）２であるか；あるいは：
Ｒ３およびＲ４は、これらの間にある原子と一緒になって、４〜７員の部分不飽和の炭素環式環、フェニル、窒素、酸素、もしくは硫黄から独立して選択される１〜３個のヘテロ原子を有する５〜６員の部分不飽和の複素環式環、または窒素、酸素、もしくは硫黄から独立して選択される１〜３個のヘテロ原子を有する５〜６員のヘテロアリール環から選択される必要に応じて置換された縮合環を形成する、
実施形態１〜３３のいずれか１つに記載の方法。
３９．上記化合物は、式Ｉｙの化合物：
【化１９】
2018538244.tif 000028
であり、ここでＲ３は、−Ｒ、−ハロ、−ＮＯ２、−ＣＮ、−ＯＲ、−ＳＲ、−Ｎ（Ｒ’）２、−Ｃ（Ｏ）Ｒ、−ＣＯ２Ｒ、−Ｃ（Ｏ）Ｃ（Ｏ）Ｒ、−Ｃ（Ｏ）ＣＨ２Ｃ（Ｏ）Ｒ、−Ｓ（Ｏ）Ｒ、−Ｓ（Ｏ）２Ｒ、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）２、−Ｓ（Ｏ）２Ｎ（Ｒ’）２、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ、−Ｎ（Ｒ’）Ｃ（Ｏ）Ｒ、−Ｎ（Ｒ’）Ｎ（Ｒ’）２、−Ｎ（Ｒ’）ＯＲ、−Ｎ（Ｒ’）Ｃ（＝ＮＲ’）Ｎ（Ｒ’）２、−Ｃ（＝ＮＲ’）Ｎ（Ｒ’）２、−Ｃ＝ＮＯＲ、−Ｎ（Ｒ’）Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）２、−Ｎ（Ｒ’）Ｓ（Ｏ）２Ｎ（Ｒ’）２、−Ｎ（Ｒ’）Ｓ（Ｏ）２Ｒ、もしくは−ＯＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）２である、実施形態１〜３３のいずれか１つに記載の方法。
４０．上記化合物は、式Ｉｚの化合物：
【化２０】
2018538244.tif 000029
またはその薬学的に受容可能な塩である、実施形態３９に記載の方法。
４１．上記化合物は、
【化２１】
2018538244.tif 000030
およびその薬学的に受容可能な塩からなる群より選択される、実施形態１〜４０のいずれか１つに記載の方法。
４２．上記化合物は、ＰＩ非依存性、ＰＩＦポケット媒介性基質結合を低下もしくは防止するという点で特徴付けられる、実施形態１〜４１のいずれか１つに記載の方法。
４３．上記化合物は、ＰＤＫ１のコンホメーションを改変して、ＰＩＦ結合をブロックし、それによって、ＰＩ非依存性（ＰＩＦ依存性）基質の結合およびリン酸化を防止するという点で特徴付けられる、実施形態１〜４２のいずれか１つに記載の方法。
４４．上記化合物は、ＰＩＦ媒介性ＲＳＫ２基質結合に摂動を起こさせるという点で特徴付けられる、実施形態１〜４３のいずれか１つに記載の方法。
４５．上記化合物は、ＰＤＫ１キナーゼ活性を阻害するという点で特徴付けられる、実施形態１〜４４のいずれか１つに記載の方法。
４６．上記化合物は、ＰＤＫ１のＡＴＰ結合ポケットを占めるという点で特徴付けられる、実施形態１〜４５のいずれか１つに記載の方法。
４７．上記化合物は、ＡＴＰ結合をブロックすることによってＰＤＫ１キナーゼ活性を阻害するという点で特徴付けられる、実施形態１〜４６のいずれか１つに記載の方法。
４８．上記がんは、白血病、リンパ腫、および骨髄腫からなる群より選択される血液のがんである、実施形態１〜４７のいずれか１つに記載の方法。
４９．前記血液のがんは、未分化大細胞型リンパ腫、非ホジキンリンパ腫、ホジキンリンパ腫、Ｂ細胞リンパ腫、Ｔ細胞リンパ腫、マントル細胞リンパ腫、組織球性リンパ腫、Ｔ細胞白血病、慢性リンパ性白血病、多発性骨髄腫、慢性骨髄性白血病、急性リンパ性（リンパ芽球性）白血病、急性骨髄性白血病、急性骨髄芽球性白血病、および形質細胞白血病から選択される、実施形態４８に記載の方法。
５０．被験体においてがんを処置することにおける使用のための薬学的組成物であって、ここで上記がんの成長もしくは増殖は、ＰＤＫ１−ＰＩＦ媒介性基質相互作用に依存性であり、上記組成物は、実施形態１または３３〜４１のいずれかに記載されるとおりの化合物および薬学的に受容可能なキャリアを含む製剤を含む、組成物。
６０．被験体においてがんを処置するための併用療法における使用のための薬学的組成物であって、上記組成物は、実施形態１または３３〜４１のいずれか１つに記載されるとおりの化合物および薬学的に受容可能なキャリアを含む製剤を含み、ここで上記併用療法は、第２の抗がん剤の有効量をさらに含む、組成物。
【０１６０】
本発明者らは、本発明の多くの実施形態を記載してきた一方で、本発明者らの基本例が本発明の化合物および方法を利用する他の実施形態を提供するために変更され得ることは、明らかである。従って、本発明の範囲は例示によって表されてきた具体的実施形態によってではなく、添付の特許請求項の範囲によって規定されるべきであることが認識される。
【図１】
2018538244.tif 000036
【図２】
2018538244.tif 000037
【図３】
2018538244.tif 000038
【図４】
2018538244.tif 000039
【図５】
2018538244.tif 000040
【図６】
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【図７】
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【図８】
2018538244.tif 000043
【図９】
2018538244.tif 000044
【図１０】
2018538244.tif 000045
【図１１】
2018538244.tif 000046
【図１２】
2018538244.tif 000047
【図１３】
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【国際調査報告】
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