(57)【要約】式Ｉを有する化合物１は、ＨＣＶ抗ウイルス性プロチドである。これは、驚いたことにエタノールに溶解し、これにより、吸着メソ多孔質担体またはＰｏｕｔｏｎタイプＩＩＩまたはＩＶのＳＥＤＤＳのような医薬配合物の調製が促進される。2018507233.tif 000026【選択図】なし
2018507233.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式Ｉ：
【化１】
2018507233.tif 000023
の化合物を含む医薬組成物であって、該医薬組成物がさらにエタノールを含む、前記医薬組成物。
【請求項２】
組成物がさらにＳｏｌｕｔｏｌ  ＨＳ１５を含有する、請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
化合物Ｉが、エタノール中に１５０〜３０００ｍｇ／ｍＬ、好ましくは２５０〜２７００ｍｇ／ｍＬの範囲で存在する、請求項１または２に記載の組成物。
【請求項４】
ａ）２００〜７５０ｍｇの式Ｉの化合物；
ｂ）４０〜４００ｍｇのエタノール；
ｃ）核形成阻害剤；
ｄ）ＨＬＢ＞１２である親水性界面活性剤；を含み、ならびに、所望により
ｅ）トリグリセリド、ジグリセリド、モノグリセリドまたはそれらの混合物；および／または：
ｆ）プロピレングリコール、ポリエチレングリコール、グリセロール、２−（２−エトキシエトキシ）エタノール、およびそれらの混合物から選択される親水性共溶媒；
を含んでいてもよい、医薬的に許容しうる単位剤形の形にある請求項１に記載の組成物。
【請求項５】
単位剤形が、５０〜２５０ｍｇ、好ましくは５９〜２２２ｍｇのエタノールを含む、請求項４に記載の組成物。
【請求項６】
核形成阻害剤が、
Ｎ−ビニルラクタムのホモポリマー、
Ｎ−ビニルラクタムのコポリマー、
セルロースエステル、
セルロースエーテル、
ポリアルキレンオキシド、
ポリアクリレート、
ポリメタクリレート、
ポリアクリルアミド、
ポリビニルアルコール、
酢酸ビニルポリマー、
オリゴ糖、または
多糖、
から選択される親水性ポリマーである、請求項４または５に記載の組成物。
【請求項７】
親水性ポリマーが、
Ｎ−ビニルピロリドンのホモポリマー、
Ｎ−ビニルピロリドンのコポリマー、
Ｎ−ビニルピロリドンと酢酸ビニルのコポリマー、
Ｎ−ビニルピロリドンとプロピオン酸ビニルのコポリマー、
ポリエチレングリコール／ポリビニルカプロラクタム／ポリ酢酸ビニルのグラフトコポリマー（例えばＳｏｌｕｐｌｕｓ）、
ポリビニルピロリドン、
メチルセルロース、
エチルセルロース、
ヒドロキシアルキルセルロース、
ヒドロキシプロピルセルロース、
ヒドロキシアルキルアルキルセルロース、
ヒドロキシプロピルメチルセルロース、
フタル酸セルロース、
コハク酸セルロース、
酢酸フタル酸セルロース、
フタル酸ヒドロキシプロピルメチルセルロース、
コハク酸ヒドロキシプロピルメチルセルロース、
酢酸コハク酸ヒドロキシプロピルメチルセルロース、
ポリエチレンオキシド、
ポリプロピレンオキシド、
エチレンオキシドとプロピレンオキシドのコポリマー、
メタクリル酸／アクリル酸エチルコポリマー、
メタクリル酸／メタクリル酸メチルコポリマー、
メタクリル酸ブチル／メタクリル酸２−ジメチルアミノエチルコポリマー、
ポリ（ヒドロキシアルキルアクリレート）、
ポリ（ヒドロキシアルキルメタクリレート）、
酢酸ビニルとクロトン酸のコポリマー、
部分的に加水分解されたポリ酢酸ビニル、
カラゲナン、
ガラクトマンナン、
キサンタンガム、
またはそれらの組み合わせ、
から選択される、請求項６に記載の組成物。
【請求項８】
核形成阻害剤がポリビニルピロリドンを含む、請求項７に記載の組成物。
【請求項９】
親水性界面活性剤が、
ポリオキシエチレンヒマシ油誘導体、
ポリオキシエチレンソルビタンのモノ脂肪酸エステル、
ポリオキシエチレンアルキルエーテル、
ポリオキシエチレンアルキルアリールエーテル、
ポリエチレングリコール脂肪酸エステル、
アルキレングリコール脂肪酸モノエステル、
スクロース脂肪酸エステル、または
ソルビタン脂肪酸モノエステル、
を含む、請求項４〜８のいずれかに記載の組成物。
【請求項１０】
親水性界面活性剤が、
ポリオキシエチレングリセロールトリリシノレエート、
ポリオキシル３５ヒマシ油（Ｃｒｅｍｏｐｈｏｒ  ＥＬ；ＢＡＳＦ  Ｃｏｒｐ．）、
ポリオキシエチレングリセロールオキシステアレート、例えば、ポリエチレングリコール４０水素化ヒマシ油（ポリオキシル４０水素化ヒマシ油またはマクロゴールグリセロールヒドロキシステアレートとしても知られる、Ｃｒｅｍｏｐｈｏｒ  ＲＨ４０）、
ポリエチレングリコール６０水素化ヒマシ油（Ｃｒｅｍｏｐｈｏｒ  ＲＨ６０）、
ポリオキシエチレン（２０）ソルビタンのモノ脂肪酸エステルのようなポリオキシエチレンソルビタンのモノ脂肪酸エステル、例えば、ポリオキシエチレン（２０）ソルビタンモノオレエート（Ｔｗｅｅｎ  ８０）、ポリオキシエチレン（２０）ソルビタンモノステアレート（Ｔｗｅｅｎ  ６０）、ポリオキシエチレン（２０）ソルビタンモノパルミテート（Ｔｗｅｅｎ  ４０）、またはポリオキシエチレン（２０）ソルビタンモノラウレート（Ｔｗｅｅｎ  ２０）、
ポリオキシエチレン（３）ラウリルエーテル、
ポリオキシエチレン（５）セチルエーテル、
ポリオキシエチレン（２）ステアリルエーテル、
ポリオキシエチレン（５）ステアリルエーテル、
ポリオキシエチレン（２）ノニルフェニルエーテル、
ポリオキシエチレン（３）ノニルフェニルエーテル、
ポリオキシエチレン（４）ノニルフェニルエーテル、
ポリオキシエチレン（３）オクチルフェニルエーテル、
ＰＥＧ−２００モノラウレート、
ＰＥＧ−２００ジラウレート、
ＰＥＧ−３００ジラウレート、
ＰＥＧ−４００ジラウレート、
ＰＥＧ−３００ジステアレート、
ＰＥＧ−３００ジオレエート、
プロピレングリコールモノラウレート（例えばラウログリコールＦＣＣ）、
Ｄ−アルファ−トコフェリルポリエチレングリコール１０００スクシネート、
スクロースモノステアレート、
スクロースジステアレート、
スクロースモノラウレート、
スクロースジラウレート、
ソルビタンモノラウレート、
ソルビタンモノオレエート、
ソルビタンモノパルミテート、
ソルビタンステアレート、
またはそれらの組み合わせを含む、請求項９に記載の組成物。
【請求項１１】
界面活性剤がＳｏｌｕｔｏｌ  ＨＳ１５を含む、請求項１０に記載の組成物。
【請求項１２】
親水性共溶媒がポリエチレングリコール４００を含む、請求項４〜１１のいずれかに記載の組成物。
【請求項１３】
グリセリドがＣａｐｍｕｌ  ＭＣＭである、請求項４〜１２のいずれかに記載の組成物。
【請求項１４】
比表面積が１００〜１０００ｍ２／ｇ、好ましくは１００〜８００ｍ２／ｇである無機メソ多孔質担体上に吸着している、請求項１〜１３のいずれかに記載の組成物。
【請求項１５】
担体が、アエロジル、ノイシリン、ＣａＣＯ３、ＭｇＣＯ３、およびそれらの混合物から選択される、請求項１４に記載の組成物。
【請求項１６】
硬質シェルまたは好ましくは軟質ゲルカプセルに封入されている、請求項４〜１５のいずれかに記載の組成物。
【請求項１７】
投与量単位が３４０〜５８０ｍｇの化合物１を含有する、請求項４〜１５のいずれかに記載の組成物。  
【請求項１８】
式Ｉ：
【化２】
2018507233.tif 000024
の化合物を、
ａ）０〜８０％のトリグリセリド、ジグリセリド、モノグリセリドまたはそれらの混合物、
ｂ）エタノール、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール、およびそれらの混合物から選択される０〜５０％の親水性共溶媒；
ｃ）核形成阻害剤；
ｄ）ＨＬＢ＞１２である親水性界面活性剤；
をｗ：ｗで含む医薬的に許容しうるビヒクル中に含む、医薬組成物であって、ａ：ｂ：ｃ：ｄの％ｗ：ｗ比が以下の表から選択され、合計１００になる、前記医薬組成物：
【表１】
2018507233.tif 000025
【請求項１９】
式Ｉの化合物が、Ｐ（Ｓ）ジアステレオマーに関して、少なくとも９０％、好ましくは少なくとも９５％、鏡像異性的に純粋である、請求項１８に記載の医薬組成物。
【請求項２０】
核形成阻害剤が、
Ｎ−ビニルラクタムのホモポリマー、
Ｎ−ビニルラクタムのコポリマー、
セルロースエステル、
セルロースエーテル、
ポリアルキレンオキシド、
ポリアクリレート、
ポリメタクリレート、
ポリアクリルアミド、
ポリビニルアルコール、
酢酸ビニルポリマー、
オリゴ糖、または
多糖、
から選択される親水性ポリマーである、請求項１８または１９に記載の医薬組成物。
【請求項２１】
親水性ポリマーが、
Ｎ−ビニルピロリドンのホモポリマー、
Ｎ−ビニルピロリドンのコポリマー、
Ｎ−ビニルピロリドンと酢酸ビニルのコポリマー、
Ｎ−ビニルピロリドンとプロピオン酸ビニルのコポリマー、
ポリエチレングリコール／ポリビニルカプロラクタム／ポリ酢酸ビニルのグラフトコポリマー（例えばＳｏｌｕｐｌｕｓ）、
ポリビニルピロリドン、
メチルセルロース、
エチルセルロース、
ヒドロキシアルキルセルロース、
ヒドロキシプロピルセルロース、
ヒドロキシアルキルアルキルセルロース、
ヒドロキシプロピルメチルセルロース、
フタル酸セルロース、
コハク酸セルロース、
酢酸フタル酸セルロース、
フタル酸ヒドロキシプロピルメチルセルロース、
コハク酸ヒドロキシプロピルメチルセルロース、
酢酸コハク酸ヒドロキシプロピルメチルセルロース、
ポリエチレンオキシド、
ポリプロピレンオキシド、
エチレンオキシドとプロピレンオキシドのコポリマー、
メタクリル酸／アクリル酸エチルコポリマー、
メタクリル酸／メタクリル酸メチルコポリマー、
メタクリル酸ブチル／メタクリル酸２−ジメチルアミノエチルコポリマー、
ポリ（ヒドロキシアルキルアクリレート）、
ポリ（ヒドロキシアルキルメタクリレート）、
酢酸ビニルとクロトン酸のコポリマー、
部分的に加水分解されたポリ酢酸ビニル、
カラゲナン、
ガラクトマンナン、
キサンタンガム、
またはそれらの組み合わせ、
から選択される、請求項２０に記載の医薬組成物。
【請求項２２】
親水性界面活性剤が、
ポリオキシエチレンヒマシ油誘導体、
ポリオキシエチレンソルビタンのモノ脂肪酸エステル、
ポリオキシエチレンアルキルエーテル、
ポリオキシエチレンアルキルアリールエーテル、
ポリエチレングリコール脂肪酸エステル、
アルキレングリコール脂肪酸モノエステル、
スクロース脂肪酸エステル、または
ソルビタン脂肪酸モノエステル、
を含む、請求項１８〜２１のいずれかに記載の医薬組成物。
【請求項２３】
親水性界面活性剤が、
ポリオキシエチレングリセロールトリリシノレエート、
ポリオキシル３５ヒマシ油（Ｃｒｅｍｏｐｈｏｒ  ＥＬ；ＢＡＳＦ  Ｃｏｒｐ．）、
ポリオキシエチレングリセロールオキシステアレート、例えば、ポリエチレングリコール４０水素化ヒマシ油（ポリオキシル４０水素化ヒマシ油またはマクロゴールグリセロールヒドロキシステアレートとしても知られる、Ｃｒｅｍｏｐｈｏｒ  ＲＨ４０）、
ポリエチレングリコール６０水素化ヒマシ油（Ｃｒｅｍｏｐｈｏｒ  ＲＨ６０）、
ポリオキシエチレン（２０）ソルビタンのモノ脂肪酸エステルのようなポリオキシエチレンソルビタンのモノ脂肪酸エステル、例えば、ポリオキシエチレン（２０）ソルビタンモノオレエート（Ｔｗｅｅｎ  ８０）、ポリオキシエチレン（２０）ソルビタンモノステアレート（Ｔｗｅｅｎ  ６０）、ポリオキシエチレン（２０）ソルビタンモノパルミテート（Ｔｗｅｅｎ  ４０）、またはポリオキシエチレン（２０）ソルビタンモノラウレート（Ｔｗｅｅｎ  ２０）、
ポリオキシエチレン（３）ラウリルエーテル、
ポリオキシエチレン（５）セチルエーテル、
ポリオキシエチレン（２）ステアリルエーテル、
ポリオキシエチレン（５）ステアリルエーテル、
ポリオキシエチレン（２）ノニルフェニルエーテル、
ポリオキシエチレン（３）ノニルフェニルエーテル、
ポリオキシエチレン（４）ノニルフェニルエーテル、
ポリオキシエチレン（３）オクチルフェニルエーテル、
ＰＥＧ−２００モノラウレート、
ＰＥＧ−２００ジラウレート、
ＰＥＧ−３００ジラウレート、
ＰＥＧ−４００ジラウレート、
ＰＥＧ−３００ジステアレート、
ＰＥＧ−３００ジオレエート、
プロピレングリコールモノラウレート（例えばラウログリコールＦＣＣ）、
Ｄ−アルファ−トコフェリルポリエチレングリコール１０００スクシネート、
スクロースモノステアレート、
スクロースジステアレート、
スクロースモノラウレート、
スクロースジラウレート、
ソルビタンモノラウレート、
ソルビタンモノオレエート、
ソルビタンモノパルミテート、
ソルビタンステアレート、
またはそれらの組み合わせを含む、請求項２２に記載の医薬組成物。
【請求項２４】
界面活性剤がＳｏｌｕｔｏｌ  ＨＳ１５を含む、請求項２３に記載の医薬組成物。
【請求項２５】
親水性共溶媒がポリエチレングリコール４００を含む、請求項１８〜２４のいずれかに記載の医薬組成物。
【請求項２６】
親水性共溶媒がエタノールを含む、請求項１８〜２５のいずれかに記載の医薬組成物。
【請求項２７】
化合物１が、エタノール１ｍＬあたり１５０〜３０００ｍｇ／ｍＬ、好ましくは２５０〜２７００ｍｇ／ｍＬの範囲で存在する、請求項２６に記載の医薬組成物。
【請求項２８】
単位剤形の形にあり、２００〜７５０ｍｇの式Ｉの化合物および４０〜４００ｍｇのエタノールを含む、請求項２６または２７に記載の医薬組成物。
【請求項２９】
単位剤形が、５０〜２５０ｍｇ、好ましくは５９〜２２２ｍｇのエタノールを含む、請求項２８に記載の医薬組成物。
【請求項３０】
単位剤形が３４０〜５８０ｍｇの化合物１を含有する、請求項２８または２９に記載の医薬組成物。
【請求項３１】
グリセリドがＣａｐｍｕｌ  ＭＣＭを含む、請求項１８〜３０のいずれかに記載の医薬組成物。
【請求項３２】
比表面積が１００〜１０００ｍ２／ｇ、好ましくは１００〜８００ｍ２／ｇである無機メソ多孔質担体上に吸着している、請求項１８〜３１のいずれかに記載の医薬組成物。
【請求項３３】
担体が、アエロジル、ノイシリン、ＣａＣＯ３、ＭｇＣＯ３、およびそれらの混合物から選択される、請求項３２に記載の医薬組成物。
【請求項３４】
単位剤形の形にあり、硬質シェルまたは好ましくは軟質ゲルカプセルに封入されている、請求項１８〜３３のいずれかに記載の医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本出願は、Ｃ型肝炎ウイルス感染症、肝線維症および肝機能障害などの疾患状態の処置方法に有用なガレヌス組成物（galenic composition）に関する。
【背景技術】
【０００２】
Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）感染症は、米国でもっとも一般的な慢性血液媒介性感染症である。新規感染症の数は減少しているが、慢性感染症の負担は大きく、疾病対策センターは米国における感染者を３９０万人（１．８％）と見積もっている。慢性肝疾患は米国における成人の死亡原因の第１０位であり、年間約２５０００人が死亡している、すなわち全死因の約１％を占める。調査により、慢性肝疾患の４０％がＨＣＶに関連し、毎年推定８０００〜１００００人が死亡していることが示されている。ＨＣＶ関連の末期肝疾患は、成人の肝移植がもっとも頻繁に適応されている。
【０００３】
慢性Ｃ型肝炎ウイルスの抗ウイルス療法は、この１０年の間に進化してきており、処置の有効性に著しい改善が見られる。それにもかかわらず、標準治療（ＳＯＣ）の併用療法を用いても、大きな割合の患者では治療がうまくいかず、すなわち、応答しないか再発してしまう。これらの患者は、今のところ効果的な治療法の選択肢を有さない。とりわけ、肝生検において進行した線維症または硬変を有する患者は、腹水、黄疸、静脈瘤出血、脳症および進行性肝障害を含む進行した肝疾患の合併症を発症するリスクが顕著であるほか、肝細胞癌のリスクが著しく上昇する。
【０００４】
慢性ＨＣＶ感染症の高い有病率は、米国における慢性肝疾患の将来的負担に関する重要な公衆衛生上の暗示を有する。国民健康栄養調査（ＮＨＡＮＥＳ  ＩＩＩ）から得られたデータは、新規ＨＣＶ感染率の大幅な上昇は、１９６０年代の終わり〜１９８０年代初頭に、とりわけ２０〜４０歳の人で起こったことを示している。２０年以上の長期間にわたるＨＣＶ感染者の数は、１９９０年から２０１５年で７５００００人から３００万人超に、４倍より多く増大した可能性があると推定される。３０または４０年間にわたる感染者における対応する増大は、さらに大きいであろう。ＨＣＶ関連の慢性肝疾患のリスクは感染期間に関連し、硬変のリスクは、２０年より長く感染している感染者で漸増し、硬変関連の罹患率および死亡率の実質的増加は、１９６５年〜１９８５年に感染した患者で起こっていると思われる。
【０００５】
ＨＣＶは、フラビウイルス科のエンベロープを持つプラス鎖ＲＮＡウイルスである。一本鎖のＨＣＶのＲＮＡゲノムは、約９５００ヌクレオチドｍの長さを有し、約３０００アミノ酸の単一の大きなポリタンパク質をコードする単一のオープンリーディングフレーム（ＯＲＦ）を有する。感染細胞において、このポリタンパク質は細胞プロテアーゼおよびウイルスプロテアーゼにより多様な部位で切断されて、ウイルスの構造タンパク質および非構造（ＮＳ）タンパク質（ＮＳ２、ＮＳ３、ＮＳ４、ＮＳ４Ａ、ＮＳ４Ｂ、ＮＳ５ＡおよびＮＳＳＢ）を生じる。
【０００６】
ＰＣＴ／ＳＥ２０１４／０５１００５には、とりわけ、式
【０００７】
【化１】
2018507233.tif 000003
【０００８】
の化合物およびＨＣＶ複製の阻害におけるその有効性が開示されている。化合物１はいわゆるプロチド(protide)、すなわち、おもに肝細胞においてｉｎ  ｖｉｖｏでヌクレオシドモノホスフェートを放出するホスホルアミデートプロドラッグであることは、明らかであろう。市販のＨＣＶ薬であるソホスブビル
【０００９】
【化２】
2018507233.tif 000004
【００１０】
は、そのようなプロチドのさらなる例である。経口投薬用のプロチド配合物は、とりわけ、ヌクレオシド足場(scaffold)の剛性、分子の異なる領域間の親油性および極性の相違、ならびに化合物１の２’位における複雑なジ−ハロ立体中心を含む電子的効果を考慮すると、難しい可能性がある。とりわけ、添付の実施例に示すように、化合物１の従来の医薬的に許容しうる賦形剤および配合物は、水に暴露されたときに不溶性ゲルを生じる傾向があり、例えば、経口投与中に胃液および腸液での医薬組成物の溶解中に起こると推測される。このゲルは胃腸管による化合物１の取り込みを妨げ、これにより不良な薬物動態をもたらす。ソホスブビルとは異なり、化合物１を結晶質形態で製造することは難しいことが証明されている。すなわち、化合物１は一般に非晶質材料として単離される。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１１】
【特許文献１】ＰＣＴ／ＳＥ２０１４／０５１００５号
【発明の概要】
【００１２】
本発明は、以下に包括的に開示し請求するように、化合物１が医薬的に許容しうる溶媒であるエタノールに対し驚くべき溶解性を有するという研究結果から発展させたものである。参考として、市販のソホスブビルの公表されている溶解度は、２５ｍｇ／ｍＬ（Ｃａｙｍａｎ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ，製品情報  商品番号１５４０２およびＡｐｅｘ  ＢＴ  カタログ番号Ａ３７３８）〜１００ｍｇ／ｍＬ（Ｓｅｌｌｅｃｋｃｈｅｍ製品情報カタログ番号Ｓ２７９４）でさまざまである。対照的に、添付する実施例に示すように、エタノールに対する化合物１の溶解度は非常に大きい可能性がある。
【００１３】
本発明の第１の観点に従って、式１：
【００１４】
【化３】
2018507233.tif 000005
【００１５】
の化合物を含む医薬組成物を提供する。該医薬組成物は、さらにエタノールを含む。
【発明を実施するための形態】
【００１６】
化合物１の他のリンを含むジアステレオマーが存在する場合、式Ｉの化合物は、Ｐ（Ｓ）ジアステレオマーに関して少なくとも９０％、好ましくは少なくとも９５％、鏡像異性的に純粋であることが好ましい。
【００１７】
化合物１は、本発明の組成物中に、典型的にはエタノール１ｍＬあたり１５０〜３０００ｍｇ／ｍＬ、一般的には２５０〜２７００ｍｇ／ｍＬ、例えば、２５０〜１５００ｍｇ／ｍＬ、２５０〜７５０ｍｇ／ｍＬまたは２５０〜５００ｍｇ／ｍＬ、例えば、３００〜１５００ｍｇ／ｍＬ、３００〜７５０ｍｇ／ｍＬまたは３００〜５００ｍｇ／ｍＬの範囲で存在する。
【００１８】
医薬的に許容可能で取り扱いが容易な溶媒であるエタノール中で化合物１のそのような高濃度溶液が形成する能力は、バルク状薬剤物質の調製、後処理および保存のようなガレヌス（galenic）プロセスにおいて、ならびに、物理化学的および薬物動態学的特性が異なるいくつかの抗ウイルス薬を錠剤またはカプセルなどの共通の単位剤形に共に配合しなければならない併用ＨＣＶ抗ウイルス製品の調製において、利益をもたらす。
【００１９】
本発明のさまざまな観点での使用に関し、エタノールは、典型的には少なくとも９５％、例えば少なくとも９８％、例えば少なくとも９９％無水である。エタノールは、１００％脱水エタノールであることが好ましい。
【００２０】
本発明のある態様において、医薬組成物はさらにＳｏｌｕｔｏｌ  ＨＳ１５を含む。
本発明の上記観点のある態様において、従来の医薬的に許容しうる混和性溶媒との混加物であってもよい化合物１のエタノール溶液を、比表面積が１００〜１０００ｍ２／ｇ、例えば１００〜８００ｍ２／ｇである無機メソ多孔質担体に吸着させ、これにより、錠剤化プロセスに適した、または硬質ゲルもしくは軟質ゲルカプセルの充填物に適した固体担体を形成する。代表的な無機メソ多孔質担体としては、アエロジル、ノイシリン、ＣａＣＯ３、ＭｇＣＯ３、およびそれらの混合物が挙げられる。
【００２１】
エタノール中の化合物１の上記溶液の他の利点は、それらが自己乳化型薬物分散系の調製に十分に適応している点である。
したがって、本発明の第２の観点は、
ａ）２００〜７５０ｍｇの式Ｉの化合物；
ｂ）４０〜４００ｍｇのエタノール；
ｃ）核形成阻害剤；
ｄ）ＨＬＢ＞１２である親水性界面活性剤；
ならびに、所望により
ｅ）トリグリセリド、ジグリセリド、モノグリセリドまたはそれらの混合物；および／または：
ｆ）プロピレングリコール、ポリエチレングリコール、グリセロール、２−（２−エトキシエトキシ）エタノール、およびそれらの混合物から選択される親水性共溶媒；
を含む、単位剤形の形にある医薬組成物を提供する。
【００２２】
ある態様において、各単位剤形は、３４０〜５８０ｍｇの化合物１、例えば、４００、４５０または５００ｍｇの化合物１を含有する。
ある態様において、各単位剤形は、５０〜２５０ｍｇのエタノール、好ましくは５９〜２２２ｍｇのエタノールを含む。
【００２３】
本発明に有用な医薬的に許容しうる核形成阻害剤としては、
Ｎ−ビニルラクタムのホモポリマー、
Ｎ−ビニルラクタムのコポリマー、
セルロースエステル、
セルロースエーテル、
ポリアルキレンオキシド、
ポリアクリレート、
ポリメタクリレート、
ポリアクリルアミド、
ポリビニルアルコール、
酢酸ビニルポリマー、
オリゴ糖、または
多糖、
から選択される１以上の親水性ポリマーが挙げられる。
【００２４】
いくつかの態様において、核形成阻害剤は、
Ｎ−ビニルピロリドンのホモポリマー、
Ｎ−ビニルピロリドンのコポリマー、
Ｎ−ビニルピロリドンと酢酸ビニルのコポリマー、
Ｎ−ビニルピロリドンとプロピオン酸ビニルのコポリマー、
ポリエチレングリコール／ポリビニルカプロラクタム／ポリ酢酸ビニルのグラフトコポリマー（例えばＳｏｌｕｐｌｕｓ）、
ポリビニルピロリドン、
メチルセルロース、
エチルセルロース、
ヒドロキシアルキルセルロース、
ヒドロキシプロピルセルロース、
ヒドロキシアルキルアルキルセルロース、
ヒドロキシプロピルメチルセルロース、
フタル酸セルロース、
コハク酸セルロース、
酢酸フタル酸セルロース、
フタル酸ヒドロキシプロピルメチルセルロース、
コハク酸ヒドロキシプロピルメチルセルロース、
酢酸コハク酸ヒドロキシプロピルメチルセルロース、
ポリエチレンオキシド、
ポリプロピレンオキシド、
エチレンオキシドとプロピレンオキシドのコポリマー、
メタクリル酸／アクリル酸エチルコポリマー、
メタクリル酸／メタクリル酸メチルコポリマー、
メタクリル酸ブチル／メタクリル酸２−ジメチルアミノエチルコポリマー、
ポリ（ヒドロキシアルキルアクリレート）、
ポリ（ヒドロキシアルキルメタクリレート）、
酢酸ビニルとクロトン酸のコポリマー、
部分的に加水分解されたポリ酢酸ビニル、
カラゲナン、
ガラクトマンナン、
キサンタンガム、
またはそれらの組み合わせ、
から選択される１以上の親水性ポリマーを含む。
【００２５】
いくつかの態様において、核形成阻害剤はポリビニルピロリドンを含む。
いくつかの態様において、親水性界面活性剤は、
ポリオキシエチレンヒマシ油誘導体、
ポリオキシエチレンソルビタンのモノ脂肪酸エステル、
ポリオキシエチレンアルキルエーテル、
ポリオキシエチレンアルキルアリールエーテル、
ポリエチレングリコール脂肪酸エステル、
アルキレングリコール脂肪酸モノエステル、
スクロース脂肪酸エステル、または
ソルビタン脂肪酸モノエステル、
を含む。
【００２６】
代表的親水性界面活性剤としては、
ポリオキシエチレングリセロールトリリシノレエート、
ポリオキシル３５ヒマシ油（Ｃｒｅｍｏｐｈｏｒ  ＥＬ；ＢＡＳＦ  Ｃｏｒｐ．）、
ポリオキシエチレングリセロールオキシステアレート、例えば、ポリエチレングリコール４０水素化ヒマシ油（ポリオキシル４０水素化ヒマシ油またはマクロゴールグリセロールヒドロキシステアレートとしても知られる、Ｃｒｅｍｏｐｈｏｒ  ＲＨ４０）、
ポリエチレングリコール６０水素化ヒマシ油（Ｃｒｅｍｏｐｈｏｒ  ＲＨ６０）、
ポリオキシエチレン（２０）ソルビタンのモノ脂肪酸エステルのようなポリオキシエチレンソルビタンのモノ脂肪酸エステル、例えば、ポリオキシエチレン（２０）ソルビタンモノオレエート（Ｔｗｅｅｎ  ８０）、ポリオキシエチレン（２０）ソルビタンモノステアレート（Ｔｗｅｅｎ  ６０）、ポリオキシエチレン（２０）ソルビタンモノパルミテート（Ｔｗｅｅｎ  ４０）、またはポリオキシエチレン（２０）ソルビタンモノラウレート（Ｔｗｅｅｎ  ２０）、
ポリオキシエチレン（３）ラウリルエーテル、
ポリオキシエチレン（５）セチルエーテル、
ポリオキシエチレン（２）ステアリルエーテル、
ポリオキシエチレン（５）ステアリルエーテル、
ポリオキシエチレン（２）ノニルフェニルエーテル、
ポリオキシエチレン（３）ノニルフェニルエーテル、
ポリオキシエチレン（４）ノニルフェニルエーテル、
ポリオキシエチレン（３）オクチルフェニルエーテル、
ＰＥＧ−２００モノラウレート、
ＰＥＧ−２００ジラウレート、
ＰＥＧ−３００ジラウレート、
ＰＥＧ−４００ジラウレート、
ＰＥＧ−３００ジステアレート、
ＰＥＧ−３００ジオレエート、
プロピレングリコールモノラウレート（例えばラウログリコールＦＣＣ）、
Ｄ−アルファ−トコフェリルポリエチレングリコール１０００スクシネート、
スクロースモノステアレート、
スクロースジステアレート、
スクロースモノラウレート、
スクロースジラウレート、
ソルビタンモノラウレート、
ソルビタンモノオレエート、
ソルビタンモノパルミテート、
ソルビタンステアレート、
またはそれらの組み合わせが挙げられる。
【００２７】
特定の態様において、界面活性剤はＳｏｌｕｔｏｌ  ＨＳ１５を含む。
いくつかの態様において、親水性共溶媒はポリエチレングリコール４００を含む。
いくつかの態様において、グリセリドはＣａｐｍｕｌ  ＭＣＭである。
【００２８】
本発明の上記第２の観点に従った医薬組成物は、比表面積が１００〜１０００ｍ２／ｇ、例えば１００〜８００ｍ２／ｇである無機メソ多孔質担体上に吸着させることができる。代表的な担体としては、アエロジル、ノイシリン、ＣａＣＯ３、ＭｇＣＯ３、およびそれらの混合物が挙げられる。そのような医薬組成物は、従来の錠剤配合物に包含させるのに有用であり、または硬質シェルもしくは好ましくは軟質ゲルカプセルの充填剤として有用である。
【００２９】
理論に結び付けようとするものではないが、メソ多孔質担体への吸着は、自然結晶化の抑制により非晶質形態の安定性を促進すると考えられる。これに加えて、メソ多孔質担体への吸着は、化合物１がゲル化を示す傾向を低下させると予想される。
【００３０】
担体は、典型的には、微孔質無機物質、表面積が大きなコロイド無機吸着性物質、またはナノ粒子吸着剤、例えば、シリカ、シリケート、三ケイ酸マグネシウム、ケイ酸アルミニウムマグネシウム（Ｎｅｕｓｉｌｉｎ）、微孔質ケイ酸カルシウム（ＦｌｏｒｉｔｅＴＭ  ＲＥ）、水酸化マグネシウムまたはタルカムであろう。
【００３１】
代表的な担体としては、フュームドシリカナノ粒子のようなシリカベースの材料、例えば、アエロジル、ノイシリン、不規則性メソ多孔質シリカ（Ｓｙｌｏｉｄ）、またはＭＣＭシリーズ（ＭＣＭ−４１）もしくはＳＢＡシリーズ（ＳＢＡ−１５）のような規則性メソ多孔質シリカベースの材料（ＯＭＳ）、またはさまざまな形態のメソ多孔質非シリケートオキシド（ＭＮＳＯ）、またはメソ多孔質ＣａＣＯ３、ＭｇＣＯ３、およびそれらの混合物が挙げられる。
【００３２】
他の代表的担体としては、表面を修飾したメソ多孔質ケイ素（熱的に炭化したＰＳｉ（ＴＣＰＳｉ）、熱的に酸化したＰｓｉ（ＴＯＰＳｉ）および不規則性メソ多孔質シリカ（Ｓｙｌｏｉｄ  ＡＬ−１および２４４））が挙げられる。
【００３３】
以下に、本発明に従った担持可能な組成物、例えば錠剤を提供するのに適した性質を有する多孔質吸着性担体のリストを提供する。多孔質吸着性材料は、望ましい多孔度の組成物または錠剤が得られるならば、単独または組み合わせで用いることができる。
【００３４】
この目的を達成するために、錠剤は、ある種の圧縮力を用いることにより錠剤に圧縮されることに、留意すべきである。しかしながら、圧縮力は、錠剤の硬度および破砕性に関する要件が危うくなるほど小さくてはならない。すなわち、これらの要件により、錠剤は十分に頑強であることが確実になる。
【００３５】
３０％ｖ／ｖ以上の多孔度を有する錠剤を得るために用いることができる適した医薬的に許容しうる賦形剤は、金属酸化物、金属ケイ酸塩、金属炭酸塩、金属リン酸塩、金属硫酸塩、誘導体からなる群より選択される。金属は、典型的には、ナトリウム、カリウム、マグネシウム、カルシウム、亜鉛、アルミニウム、チタンおよびケイ素からなる群より選択される。本発明に従った使用に適した金属酸化物は、酸化マグネシウム、酸化カルシウム、酸化亜鉛、酸化アルミニウム、Ｔｒｏｎｏｘ  Ａ−ＨＰ−３２８およびＴｒｏｎｏｘ  Ａ−ＨＰ−１００を含む二酸化チタン、Ａｅｒｏｓｉｌ、Ｃａｂ−Ｏ−Ｓｉｌ、Ｓｙｌｏｉｄ、Ａｅｒｏｐｅｒｌ、Ｓｕｎｓｉｌ（ケイ素ビーズ）、Ｚｅｏｆｒｅｅ、Ｓｉｐｅｒｎａｔを含む二酸化ケイ素、およびそれらの混合物からなる群より選択することができる。
【００３６】
特定の態様において、金属酸化物は、二酸化チタンまたは二酸化ケイ素またはそれらの混合物である。
シリケートは以下の群に分類することができる：
・含水ケイ酸アルミニウムまたはアルカリ土類。Ｎｅｕｓｉｌｉｎはこの群に属し、合成重合に基づいている（ケイ酸アルミニウムマグネシウム）。
・二酸化ケイ素は、多孔質および非孔質シリケートに細分される。
・非孔質コロイドシリカ、例えばＡｅｒｏｓｉｌ（フュームドシリカ）
・多孔質シリカゲル、例えば、Ｓｙｌｏｉｄ、Ｐｏｒａｓｉｌ、Ｌｉｃｈｒｏｓｏｒｐ
・その他、例えば、Ｚｅｏｐｈａｒｍ  Ｓ１７０、Ｚｅｏｐｈａｒｍ  ６０００、Ａｅｒｏｐｅｒｌ  ３００
したがって、本発明に従った担持可能な錠剤は、Ａｅｒｏｓｉｌタイプのフュームドシリカを含む非孔質シリケート、および／または例えばＳｙｌｏｉｄ、ＰｏｒａｓｉｌおよびＬｉｃｈｒｏｓｏｒｐを含む多孔質シリケートである、金属酸化物を含有することができる。
【００３７】
他の態様において、本発明に従って用いるための医薬的に許容しうる賦形剤は、ケイ酸ナトリウム、ケイ酸カリウム、ケイ酸マグネシウム、例えばＨｕｂｅｒｓｏｒｐのような合成ケイ酸カルシウムを含むケイ酸カルシウム、Ｆｌｏｒｉｔｅなどの微孔質ケイ酸カルシウム、ケイ酸亜鉛、ケイ酸アルミニウム、例えばＺｅｏｌｅｘのようなアルミノケイ酸ナトリウム、ケイ酸アルミニウムマグネシウム、メタケイ酸アルミニウムマグネシウム、メタケイ酸アルミニウム、Ｎｅｕｓｉｌｉｎ  ＳＧ２およびＮｅｕｓｉｌｉｎ  ＵＳ２、ならびにそれらの混合物からなる群より選択される金属ケイ酸塩である。
【００３８】
ケイ酸アルミニウムは、３０〜８０、例えば５０〜６０オングストロームの典型的平均細孔サイズと、２５０〜４００ｍ２／ｇ、例えば約３００ｍ２／ｇの表面積とを有する、高度に多孔質の材料である。本発明の組成物は、典型的には３０％ｖ／ｖ以上の多孔度を有し、これは、適量の医薬的活性成分の吸収に必要な多孔度である。他の態様において、多孔度は４０％ｖ／ｖ以上、５０％ｖ／ｖ以上、６０％ｖ／ｖ以上、７０％ｖ／ｖ以上、８０％ｖ／ｖ以上、または９０％ｖ／ｖ以上である。Ｎｅｕｓｉｌｉｎなどのケイ酸アルミニウムについて多孔度を測定した後、ケイ酸アルミニウムおよび所望による医薬的に許容しうる賦形剤がその多孔度をどの程度利用するかを計算する。
【００３９】
担持前の顆粒または錠剤の多孔度は、顆粒または錠剤の密度ｐｔおよび成分の“真密度”ｐｓに基づき計算される。顆粒または錠剤の多孔度εは式１に従って計算する：
【００４０】
【数１】
2018507233.tif 000006
【００４１】
顆粒または錠剤の密度は、顆粒または錠剤の重量と体積の比に基づく。成分の“真密度”は、Ｍｉｃｒｏｍｅｒｉｔｉｃｓ  Ａｃｃｕｐｙｃ  １３３０を用いてヘリウム中で決定したガスピクノメーター密度(gas pycnometric density)に基づく。
【００４２】
本発明の組成物の他の態様において、ケイ酸アルミニウムは、典型的には約２０％ｗ／ｗ以上の濃度で存在する。多孔度が高いほど高濃度のケイ酸アルミニウムが望ましいことは明らかであり、したがって、本発明の組成物の他の態様において、ケイ酸アルミニウムは、非担持組成物中に、約２５％ｗ／ｗ以上、約３０％ｗ／ｗ以上、約３５％ｗ／ｗ以上、約４０％ｗ／ｗ以上、約４５％ｗ／ｗ以上、約５０％ｗ／ｗ以上、約６０％ｗ／ｗ以上、約７０％以上、約８０％以上、約９０％以上、約９５％以上、または約９８％以上の濃度で存在する。
【００４３】
ケイ酸アルミニウムは、典型的には、３０〜８０、例えば５０〜６０オングストロームの平均細孔サイズと、２５０〜４００ｍ２／ｇ、例えば約３００ｍ２／ｇの表面積を有する。ある態様において、ケイ酸アルミニウムは、メタケイ酸アルミニウムマグネシウム、ケイ酸アルミニウムマグネシウム、およびメタケイ酸アルミニウム、およびそれらの混合物から選択される。ケイ酸アルミニウムの典型例は、Ｎｅｕｓｉｌｉｎ  ＳＧ２、およびＮｅｕｓｉｌｉｎ  ＵＳ２、およびそれらの混合物、とりわけＡｌ２・ＭｇＯ・ｙＳｉＯ２・ｘＨ２Ｏ［式中、ｙは１．５〜２であり、ｘは１〜１０である］であり、メタケイ酸アルミニウムマグネシウム、例えばＡｌ２Ｏ３−ＭｇＯ・２ＳｉＯ２・５Ｈ２Ｏが好ましい。
【００４４】
上記のように、適した医薬的に許容しうる賦形剤は、炭酸ナトリウム、炭酸水素ナトリウム、炭酸カリウム、炭酸水素カリウム、炭酸カルシウム、炭酸マグネシウム、炭酸亜鉛、および炭酸アルミニウム、およびそれらの混合物からなる群より選択される炭酸塩のような金属炭酸塩であることができる。
【００４５】
本発明に従って用いるのに適した他の金属塩は、リン酸ナトリウム、リン酸水素二ナトリウム、リン酸二水素ナトリウム、リン酸カリウム、リン酸水素二カリウム、リン酸二水素カリウム、リン酸カルシウム、リン酸マグネシウム、リン酸亜鉛およびリン酸アルミニウムからなる群より選択される金属リン酸塩である。より具体的には、医薬的に許容しうる賦形剤は、二塩基性無水リン酸カルシウム、二塩基性リン酸カルシウム二水和物、および三塩基性リン酸カルシウムからなる群より選択されるリン酸カルシウムであることができる。
【００４６】
二塩基性無水リン酸カルシウムは、典型的には、Ａ−Ｔａｂ、リン酸一水素カルシウム、オルトリン酸カルシウム、Ｄｉ−Ｃａｆｏｓ  ＡＮ、オルトリン酸二カルシウム、Ｅ３４１、Ａｎｈｙｄｒｏｕｓ  Ｅｍｃｏｍｐｒｅｓｓ、Ｆｕｊｉｃａｌｉｎ、リン酸カルシウム塩（１：１）、および第二級リン酸カルシウム、およびそれらの混合物からなる群より選択される。二塩基性リン酸カルシウム二水和物は、Ｃａｆｏｓ、オルトリン酸水素カルシウム二水和物、リン酸一水素カルシウム二水和物、Ｃａｌｉｐｈａｒｍ、Ｃａｌｓｔａｒ、Ｄｉ−Ｃａｆｏｓ、オルトリン酸二カルシウム、ＤＩ−ＴＡＢ、Ｅｍｃｏｍｐｒｅｓｓ、リン酸カルシウム塩（１：１）二水和物、第二級リン酸カルシウム、Ｆｕｊｉｃｌｉｎ  ＳＧからなる群より選択することができる。
【００４７】
三塩基性リン酸カルシウムの例は、例えば、ヒドロキシアパタイト、リン酸カルシウム塩（２：３）、沈降リン酸カルシウム、第三級リン酸カルシウム、Ｔｒｉ−Ｃａｆｏｓ、二オルトリン酸三カルシウム、オルトリン酸三カルシウム、リン酸三カルシウム、ＴＲＩ−ＣＡＬ、ＷＧ、ＴＲＩ−ＴＡＢである。
【００４８】
他の適した金属塩は、金属硫酸塩、例えば、硫酸ナトリウム、硫酸水素ナトリウム、硫酸カリウム、硫酸水素カリウム、硫酸カルシウム、硫酸マグネシウム、硫酸亜鉛および／または硫酸アルミニウムなどである。
【００４９】
適した硫酸カルシウムの例は、例えば、硬石膏、無水石膏、無水硫酸石灰、Ｄｅｓｔａｂ、Ｄｒｉｅｒｔｅ、Ｅ５１６、カルステナイト、ムリアサイト、およびＳｎｏｗ  Ｗｈｉｔｅを含む無水硫酸カルシウム、または、雪花石膏、Ｃａｌ−Ｔａｂ、Ｃｏｍｐａｃｔｒｏｌ、Ｄｅｓｔａｂ、Ｅ５１６、石膏、ライトスパー(light spar)、ミネラルホワイト(mineral white)、天然硫酸カルシウム、沈降硫酸カルシウム、サティナイト(satinite)、繊維石膏、セレナイト、白土およびＵＳＧ  Ｔｅｒｒａ  Ａｌｂａを含む硫酸カルシウム二水和物である。
【００５０】
上記多孔質吸着性材料のいずれか１つは、それらが単独で、または混合物で、上記の適した多孔度をもたらす限り、本発明の態様であることとする。以下の特定の態様は、形はどうあれ本発明を限定するものと解釈すべきではなく、特定の好ましい態様を強調しているに過ぎない。
【００５１】
他の態様において、多孔質吸着性材料は、多孔質二酸化ケイ素、例えば、ケイ酸ナトリウム、ケイ酸カリウム、ケイ酸マグネシウム、合成ケイ酸カルシウム、微孔質ケイ酸カルシウムを含むケイ酸カルシウム、ケイ酸亜鉛、ケイ酸アルミニウム、アルミノケイ酸ナトリウム、水和ケイ酸アルミニウム、またはアルカリ土類、メタケイ酸マグネシウムアルミニウム、ケイ酸アルミニウムマグネシウム、メタケイ酸アルミニウム、非孔質コロイドシリカ、多孔質シリカゲル、沈降シリケート、およびそれらの混合物から選択される。他の態様において、多孔質吸着性材料は、金属炭酸塩および金属リン酸塩から選択される。典型的には、多孔質吸着性材料は、メタケイ酸アルミニウムマグネシウム、沈降シリケート、および微孔質ケイ酸カルシウムから選択される。
【００５２】
ここまで、本発明をエタノールに対する化合物１の驚くべき溶解性に関連して記載してきたが、必ずしもエタノール溶液を包含していなくても特定のＳＥＤＤＳ配合物は化合物１に適合することができることを、理解すべきである。したがって、本発明の第３の観点は、式Ｉ：
【００５３】
【化４】
2018507233.tif 000007
【００５４】
の化合物を、
ａ）０〜８０％のトリグリセリド、ジグリセリド、モノグリセリドまたはそれらの混合物、
ｂ）エタノール、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール、グリセロール、２−（２−エトキシエトキシ）エタノール、およびそれらの混合物から選択される０〜５０％の親水性共溶媒；
ｃ）核形成阻害剤；
ｄ）ＨＬＢ＞１２である親水性界面活性剤；
をｗ：ｗで含む医薬的に許容しうるビヒクル中に含む、医薬組成物を提供する。これに関し、ａ：ｂ：ｃ：ｄの％ｗ：ｗ比は以下の表から選択され、合計１００になる：
【００５５】
【表１】
2018507233.tif 000008
【００５６】
先に記載した観点と同様に、式Ｉの化合物は、Ｐ（Ｓ）ジアステレオマーに関して、一般に少なくとも９０％、好ましくは少なくとも９５％、鏡像異性的に純粋である。
核形成阻害剤、親水性界面活性剤およびトリグリセリドは、すべて先に定義したとおりである。親水性共溶媒は、特に医薬組成物がＰｏｕｔｏｎタイプＩＶのＳＥＤＤＳである場合、エタノールを包含することが好ましい。
【実施例】
【００５７】
さまざまな態様、調製例および比較例を、以下の実施例でさらに詳細に開示する。これらは、決して特許請求の範囲を限定することを意図したものではない。
実施例１．化合物１の調製
【００５８】
【化５】
2018507233.tif 000009
【００５９】
段階ａ）（４Ｓ，５Ｒ）−４−ヒドロキシ−５−（ヒドロキシメチル）ジヒドロフラン−２（３Ｈ）−オン（２８ａ）
デオキシ−Ｄ−リボース（４００．０ｇ、２．９８ｍｏｌ）を窒素下で水（１．６ｋｇ）に溶解し、溶液を３〜７℃に冷却した。３〜７℃で臭素（８００ｇ、１０．０ｍｏｌ、３．３６当量）を撹拌しつつ約２時間かけて加え、撹拌を３〜７℃で約１時間継続した。反応混合物を徐々に２０〜２５℃に温めた後、約２０時間撹拌した。
【００６０】
反応混合物を−５〜−７℃に冷却し、反応温度を−３〜−７℃に維持しつつ水酸化ナトリウム溶液（２７．６５％、７２０ｇ、１．６７当量）を加えた。その後、温度を０〜５℃に調整し、０〜５℃で水性水酸化ナトリウム（９％、４７０ｇ、１．０６ｍｏｌ、０．３５当量）を加えて、最終ｐＨ＝１．４０を得た。
【００６１】
水を、スクラバー（冷却した、１４％水酸化ナトリウム、０．９Ｌ）を用い、減圧下で、最終的にｐ＜５ｍｂａｒおよび５０℃において留去した。生成物から残留水を除去するために、２−プロパノールを残渣に少しずつ加えた後、減圧下で共沸蒸留した。最終的な含水量をＫＦ滴定により決定すると１％未満であった。２−プロパノール（４００ｍＬ）を残渣に加えた後、混合物を濾過した。濾過ケークを２−プロパノール（１Ｌ）で洗浄した。溶媒を減圧下で留去した。トルエン（４００ｍＬ）を加え、残留する２−プロパノールおよび場合によってはさらに多くの水を除去するために、蒸留を再開した。４７４．６ｇ（収率１２０％）の残渣を得た。
段階ｂ）（４Ｓ，５Ｒ）−４−（（トリイソプロピルシリル）オキシ）−５−（（（トリイソプロピルシリル）オキシ）メチル）ジヒドロフラン−２（３Ｈ）−オン（２８ｂ）
化合物２８ａ（４７０．９ｇ、２９．７ｍｏｌ）をＤＭＦ（１．２Ｌ）に溶解し、１０〜１５℃に冷却した。イミダゾール（７０７．０ｇ、１０．４ｍｏｌ、３．５当量）を加え、混合物の温度を３〜７℃に調整した。ＴＩＰＳ−Ｃｌ（１１４５ｇ、５．９４ｍｏｌ、２．０当量）を、３〜７℃に冷却しつつ２時間かけて加えた。反応混合物を３〜７℃でさらに１／２時間撹拌した後、徐々に２０〜２５℃に温め、２０時間撹拌した。反応の推移を以下のようにモニタリングした：反応混合物の試料を乾燥ＤＭＦで１０倍に希釈し、Ｎ，Ｏ−ビス（トリメチルシリル）トリフルオロアセトアミド（０．２５ｍＬ）をＤＭＦ中の試料０．５ｍＬに加え、ＧＣにより分析した。反応が終了していなかった場合、ＴＩＰＳ−Ｃｌの必要量を計算して加え、撹拌をさらに２０時間継続した。
【００６２】
反応が終了したら、メタノール（５０ｍＬ）を加え、混合物を２０〜２５℃で１／２〜１時間撹拌した。水（１．２ｋｇ）を加え、混合物の温度を１５〜２５℃に調整した。ｐＨを、３６％塩酸（４９１ｇ、４，７ｍｏｌ）を慎重に加えることによりｐＨ２．０〜２．５に調整した。トルエン（０．９ｋｇ）を加え、相を分離した。有機相を５％水性塩化ナトリウム（１ｋｇ）で２回洗浄した。水相をトルエン（０．９ｋｇ）で洗浄した。有機相を組み合わせ、硫酸ナトリウム（１５０ｇ）で最低１時間乾燥した。懸濁液を、シリカゲル６０（２１０ｇ）およびトルエンから調製したカラムで濾過し、カラムをトルエン（１．１ｋｇ）で洗浄した。組み合わせた濾液を５０℃の減圧下で濃縮乾燥し、これにより表題化合物を得た（１３３８ｇ、粗生物２ａから８４．４％）。純度（ＧＣ）：９３．９％。
段階ｃ）（３Ｓ，４Ｒ，５Ｒ）−３−フルオロ−４−（（トリイソプロピルシリル）オキシ）−５−（（（トリイソプロピルシリル）オキシ）メチル）−ジヒドロフラン−２（３Ｈ）−オン（２８ｃ）
化合物２８ｂ（４５０．０ｇ、１．０１ｍｏｌ）およびＮＦＳＩ（３４８．０ｇ、１．１０ｍｏｌ）を、アルゴン下でＭｅ−ＴＨＦ（２．２Ｌ）に溶解した。該溶液を−７５℃より低温に冷却し、リチウムビス（トリメチルシリル）アミド（ＴＨＦ中に２０．２％、１．１９０ｋｇ、１．４２当量）を３〜４時間かけて加えた。反応の推移をＧＣによりモニタリングし、終了したと判断したら、メチルスルフィド（６ｇ、０．１ｍｏｌ）を加えて残留ＮＦＳＩを失活させ、さらに２０〜３０分間にわたり撹拌を継続した。反応混合物を水性１２．５％塩化アンモニウム（１．７ｋｇ）に移し、混合物を室温まで温めた。水層（Ａｑ．１）を分離し、有機相を純水（１Ｌ）で洗浄した。水性洗液（Ａｑ．２）を分離し、有機相を確保した。Ａｑ．１をヘプタン（０．６ｋｇ）で洗浄した。水相を分離した後、廃棄した。Ａｑ．２を有機相に加え、混合物を１分間撹拌した。水相を分離し、廃棄した。２つの有機相を組み合わせ、５０℃で減圧濃縮した。ヘプタン（０．７ｋｇ）を残渣に加え、得られた懸濁液を濾過した。濾過ケークをヘプタン（０．２ｋｇ）で洗浄し、組み合わせた濾液を５０℃で減圧濃縮し、これにより５０６ｇの粗生成物を得た。粗生成物をヘプタンとトルエンの混合物（０．５Ｌ、３：１）に溶解し、シリカゲルでのクロマトグラフィー（シリカゲル６０、２．５ｋｇおよびヘプタン／トルエン  ３：１ｖ／ｖ）により精製した。カラムをヘプタン／トルエン（３：１、５．０Ｌ）、ヘプタン／トルエン（２：１、２．５Ｌ）、ヘプタン／トルエン（３：１、２．５Ｌ）およびトルエン（７．５Ｌ）で溶離した。約１Ｌの画分を収集し、純粋な化合物２ｃを保持する画分を組み合わせて濃縮し、化合物２ｃとジ−フルオロ化合物の混合物を保持する画分を組み合わせて再精製した。
【００６３】
上記手順を、４５０ｇおよび５２５ｇの化合物２ｂで開始して２回繰り返した。表題化合物の全収量は、８７７．１ｇ（５９．２％）＋再生材料からの１０４．１ｇ（７．０ｇ）であった。純度（ＧＣ）：９２．４％。
段階ｄ）（３Ｓ，４Ｒ，５Ｒ）−３−クロロ−３−フルオロ−４−（（トリイソプロピルシリル）オキシ）−５−（（（トリイソプロピルシリル）オキシ）メチル）−ジヒドロフラン−２（３Ｈ）−オン（２８ｄ）
化合物２８ｃ（４００．０ｇ、０．８６ｍｏｌ）およびＮＣＳ（１３８．０ｇ、１．０４ｍｏｌ、１．２当量）を、約２０℃のアルゴン下でＴＨＦ（２．０Ｌ）中で撹拌した。懸濁液を−７０℃より低温に冷却し、リチウムビス（トリメチルシリル）アミド（ＴＨＦ中に２０．２％、１．１５０ｋｇ、１．６当量）を１〜１．５時間かけて加えた。反応をＧＣによりモニタリングし、終了したと判断したら、混合物を塩化アンモニウムの１２．５％水溶液（１．５ｋｇ）に移した。混合物を室温まで温めた。撹拌を中断し、水層を分離し、ヘプタン（０．８Ｌ）で洗浄した後、廃棄した。
【００６４】
母相である有機相を５５℃の減圧下で濃縮乾燥した後、ヘプタン洗液に加えた。このようにして組み合わせた有機相を、５％水性塩化ナトリウムで洗浄した。相を分離し、水相をヘプタン（０．２Ｌ）で洗浄した後、廃棄した。有機相を減圧濃縮し、これにより４４０ｇの粗生成物を得た。
【００６５】
該手順を、４２６．５ｇの化合物２ｃで開始して繰り返し、これにより４７３ｇの粗生成物を得た。
組み合わせた粗生成物をヘプタンとトルエンの混合物（１．０Ｌ、２：１）に溶解し、シリカゲル６０（２．２５ｋｇ）およびヘプタン／トルエン２：１ｖ／ｖから調製したシリカゲルカラムで精製した。カラムをヘプタン／トルエン（２：１、１５Ｌ）で溶離した。約１Ｌの画分を収集し、純粋な化合物２ｄの画分を組み合わせて減圧濃縮し、これにより表題化合物を得た（６６７．３ｇ、７５．１％）。
段階ｅ）（３Ｓ，４Ｒ，５Ｒ）−３−クロロ−３−フルオロ−４−ヒドロキシ−５−（ヒドロキシメチル）ジヒドロフラン−２（３Ｈ）−オン（２８ｅ）
化合物２８ｄ（６１３．０ｇ、１．１１ｍｏｌ）を、窒素およびメタノール（１．２Ｌ）を満たした３Ｌガラス反応器に加えた。撹拌エマルションに３７％塩酸（３６８．０ｇ、３．７３ｍｏｌ、３．４当量）を加え、混合物を徐々に加熱還流した（７３℃）。該混合物を２０時間還流し続けた後、１５〜２０℃まで冷却し、ヘプタン（４×６００ｍＬ）で抽出した。残留メタノール溶液を、８０〜９０℃の水浴を用い、最終的にｐ＜３５ｍｂａｒで、減圧濃縮乾燥した。ジオキサン（６００ｍＬ）を加え、上記のように再蒸留し、これにより表題化合物（２００．７ｇ、９８％）を得た。
段階ｆ  （２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ）−４−クロロ−４−フルオロ−２−（（（４−メチルベンゾイル）オキシ）メチル）−５−オキソテトラヒドロフラン−３−イル４−メチルベンゾエート（２８ｆ）
機械的攪拌、温度計および添加漏斗を備え、窒素で満たされている３Ｌガラス反応器中のジオキサン（１．４Ｌ）中の化合物２８ｅ（２００．７ｇ、１．１１ｍｏｌ）の溶液を、水浴上で４０〜４５℃に加熱した。塩化ｐ−トルオイル（３６０．５ｇ、２．３３ｍｏｌ、２．１当量）を加えた後、反応温度が７０℃未満で保持されるようにトリエチルアミン（２５８．３ｇ、２．５５ｍｏｌ、２．３当量）を３５分間加えた。その後、得られた懸濁液を６５℃で２時間攪拌した後、１５℃に冷却して濾過した。８００ｍＬの濾過ケークをジオキサン（８００ｍＬ、１５℃）で洗浄すると、白色濾過ケークが残り、これを廃棄した。濾液を、６５℃の水浴を用い、最終的に３５ｍｂａｒで、減圧濃縮した。溶液の温度が４０〜４５℃で保持されるように、２−プロパノール（１．５０Ｌ）を残留オイル（５１０ｇ）に加えた。該溶液に種結晶を入れ、放置して慎重に室温まで冷却した。冷却工程中に、ｐＨを測定するために、０．２５ｍＬの試料を取って０．２５ｍＬの水と混合した。ｐＨ２．５〜３．５が得られるまでトリエチルアミン（１５ｇ）を加えた。室温に達したら（１時間）、結晶懸濁液を１０±１℃に冷却し、この温度で１５時間保持した。表題生成物を濾過により単離し、２−プロパノール（６００ｍＬ、５〜１０℃）で洗浄した後、通気口付きオーブンにおいて３０〜５０℃で乾燥した。収量：３７４．２ｇ、８０％、純度（ＨＰＬＣ）：９９．４％。融点：８８．０〜８９．５℃（１℃／分）結晶形が変化した後、９７〜９８℃で溶融する。
段階ｇ）（２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ）−４−クロロ−４−フルオロ−５−ヒドロキシ−２−（（（４−メチルベンゾイル）オキシ）メチル）−テトラヒドロフラン−３−イル  ４−メチルベンゾエート（２８ｇ）
機械的攪拌機、温度計および添加漏斗を備える３Ｌの反応フラスコに窒素を満たした。該フラスコに酢酸エチル（１０００ｇ）を入れ、１０℃に冷却した。リチウムトリ−ｔｅｒｔ−ブトキシアルミニウムヒドリド（ＴＨＦ中の３０％溶液、３５ｇ、０．０５当量）を加えた。１０℃での撹拌を５〜１０分間続けた後、化合物２８ｆ（３７０．０ｇ、０．８８ｍｏｌ）を加えた。さらにリチウムトリ−ｔｅｒｔ−ブトキシアルミニウムヒドリド（ＴＨＦ中の３０％溶液、９３３．８ｇ、１．１０ｍｏｌ、１．２５当量）を、反応温度を１０℃で維持しつつ７０分間にわたり加えた。温度を１０〜１５℃で維持して、失活混合物（１．４５ｋｇ（３Ｍ  ＨＣｌ中の１０％ＮａＣｌ−１０％ＮＨ４Ｃｌ））上に反応混合物を注ぎ入れることにより、反応を失活させた。得られた懸濁液を２０〜２５℃に温めた。水性物を分離して廃棄し、有機相を酸性水（１．０Ｌ＋１０ｍＬの３Ｍ  ＨＣｌ）で洗浄した後、２５％塩化ナトリウム（２５０ｍＬ）で洗浄した。有機相を、最終的にｐ＜３５ｍｂａｒおよび４５℃で濃縮乾燥した。残渣をトルエン（０．４５ｋｇ）に再び溶解し、溶液をｐ＜３５ｍｂａｒおよび４５℃で再び濃縮し、これにより、表題化合物を、固体状塩化ナトリウムを少し含有するオイルとして得た（４１２．６ｇ、１１１％）。純度（ＨＰＬＣ）９７．５％。
段階ｈ）（２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ）−４，５−ジクロロ−４−フルオロ−２−（（（４−メチルベンゾイル）オキシ）メチル）テトラヒドロフラン−３−イル  ４−メチルベンゾエート（２８ｈ）
機械的攪拌、温度測定および冷却器を備える２０００ｍＬの反応フラスコに窒素を満たし、トルエン（７４０ｍＬ）、化合物２８ｇ（４１１．５ｇ、０．８８ｍｏｌ）および塩化チオニル（１７４．０ｇ、１．４６ｍｏｌ、１．６６当量）を入れた。反応フラスコを５０℃に予熱した水浴に入れ、ＤＭＦ（０．５０ｍＬ）を加えた。冷却器の上端に冷却スクラバー（７００ｇの２７．６５％水酸化ナトリウム）を接続し、窒素の定常流を施用した。ＤＭＦを加えた直後に反応は開始し、これをＨＰＬＣにより追跡した。約３時間後、ガス発生は減少し、温度を６０〜６５℃に上昇させた。６０〜６５℃での加熱をさらに４．５時間継続した後、亜硫酸エステルは消失した。溶媒および残留塩化チオニルを、６０〜６５℃の水浴を用いて減圧下で留去した（５００ｍＬ）。トルエン（６５０ｍＬ）を残留オイルに加え、混合物を５℃に冷却した。水（６５０ｍＬ）を加え、１０℃未満の温度で３Ｍ水酸化ナトリウム（４０ｍＬ）を加えることによりｐＨを２．０〜３．０に調整した。温度を２０〜２２℃に調整し、水相を分離した。有機相を２５％塩化ナトリウム（２５０ｍＬ）で洗浄した。水相をトルエン（２５０ｍＬ）で逆洗した。組み合わせた有機相を硫酸マグネシウム（２５ｇ）で乾燥し、濾過した。溶媒の蒸発（最終的にｐ＜３５ｍｂａｒおよび６０℃）により、表題化合物が淡褐色オイルとして生じた（３７８．５ｇ、収率９７％）。クロロベンゼン（２００ｇ）を残渣に加え、混合物を上記条件を用いて濃縮した。残渣をクロロベンゼン（２００．０ｇ）に再び溶解し、混合物を濃縮した。
段階ｉ）（２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｒ）−５−（４−ベンズアミド−２−オキソ−３，４−ジヒドロピリミジン−１（２Ｈ）−イル）−４−クロロ−４−フルオロ−２−（（（４−メチルベンゾイル）オキシ）メチル）テトラヒドロフラン−３−イル  ４−メチルベンゾエート（２８ｉ）
５００ｍＬの丸底フラスコにＮ−ベンゾイルシトシン（３６．６ｇ、１７０ｍｍｏｌ、１．５当量）、クロロベンゼン（１６５ｇ、１５０ｍＬ）および硫酸アンモニウム（０．４５ｇ、３．４ｍｍｏｌ、０．０３当量）を入れ、この懸濁液にＨＭＤＳ（２９．３ｇ、１８１．３ｍｍｏｌ、１．６当量）を加えた。該懸濁液を加熱還流した。反応混合物が澄んだ溶液になったら、これをさらに１時間還流した後、６０℃での減圧蒸留により濃縮した（留出物：１５０ｍＬ）。クロロベンゼン（１２５ｍＬ）を残渣に加えた。
【００６６】
化合物２８ｈ（５０ｇ、１１３．３ｍｍｏｌ）中の残留トルエンを、クロロベンゼンからの減圧蒸留により除去した。この同時蒸発からの残渣を１，２−ジクロロエタン（２００ｍＬ）に溶解し、この溶液をクロロベンゼン中のシリル化ヌクレオシドの溶液に入れた。塩化スズ（ＩＶ）（５９．０ｇ、２２６．６ｍｍｏｌ、２当量）を加え、混合物を窒素下で加熱還流した。反応混合物を還流下で６５時間にわたり撹拌した。反応混合物を５℃に冷却し、温度を１０〜１２℃で維持しつつ酢酸エチル（９９．８ｇ、１０当量）を加えた。混合物の全重量：６０１．７ｇ。この混合物の４分の１（１５０．４ｇ、理論上２８．３ｍｍｏｌ）を２５０ｍＬの三口丸底フラスコに入れ、５℃に冷却し、ジクロロメタン（１４７．５ｇ、４×ＥｔＯＡｃの体積）をＣｅｌｉｔｅ（６．２５ｇ）と一緒に加えた。温かい（約６０℃）５０％ＮａＯＨ溶液（１７．６ｇ、７．７６当量）を、温度が５〜１２℃で維持されるような速度で混合物に加えた。該混合物を１０℃で２０分間撹拌した後、温度を２５℃に調整し、混合物をこの温度で３０分間撹拌した。懸濁液をＣｅｌｉｔｅのパッド（１２．５ｇ）で濾過し、濾過ケークをジクロロメタン（１９０ｍＬ）で洗浄した。組み合わせた濾液および洗液を６０℃での減圧蒸留により濃縮乾燥した。
【００６７】
ジクロロメタン（８６ｍＬ）、続いてトルエン（６２ｍＬ）を残渣に加えた。ジクロロメタン含有物を５０℃での減圧蒸留により除去した。得られた懸濁液を室温で１７時間攪拌した後、粗製表題化合物を濾過により単離した。濾過ケークをトルエン（２５ｍＬ）で洗浄し、湿潤生成物を４０℃の通気口付き乾燥器で乾燥し、これにより表題化合物を固体として得た（５．５６ｇ、３１．７％）。
段階ｊ）（２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｒ）−４−クロロ−５−（２，４−ジオキソ−３，４−ジヒドロピリミジン−１（２Ｈ）−イル）−４−フルオロ−２−（（（４−メチルベンゾイル）オキシ）メチル）テトラヒドロフラン−３−イル  ４−メチルベンゾエート（２８ｊ）
化合物２８ｉ（１５．２ｇ、２４．５ｍｍｏｌ）を６５％ＡｃＯＨ／水（１５２ｍＬ、ｖ／ｖ）に懸濁させ、懸濁液を２０時間にわたり加熱還流した。反応混合物を放置して室温まで冷却した後、水（５３ｍＬ）を加え、混合物を室温で１．５時間撹拌した。懸濁液を濾過し、濾過ケークを水（２×２５ｍＬ）で洗浄した。湿潤濾過ケークを４０℃の通気口付き乾燥器で２０時間乾燥し、これにより表題化合物を固体として得た（１０．８ｇ、８５％）。
段階ｋ）１−（（２Ｒ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｒ）−３−クロロ−３−フルオロ−４−ヒドロキシ−５−（ヒドロキシメチル）テトラヒドロフラン−２−イル）ピリミジン−２，４（１Ｈ，３Ｈ）−ジオン（２８ｋ）
化合物２８ｊ（８．０ｇ、１５．５ｍｍｏｌ）をＭｅＯＨ（８０ｍＬ）中に懸濁させ、ｎ−プロピルアミン（９．１ｇ、１５４．８ｍｍｏｌ、１０当量）を加え、混合物を３０℃に加熱し、この温度で２４時間撹拌した。溶媒を４０℃での減圧蒸留により除去した。残渣を水（２０ｍＬ）に取り、水相をＤＣＭ（３×４０ｍＬ）で洗浄し、組み合わせた有機相を水（５ｍＬ）で洗浄した。２つの水相を組み合わせ、３Ｍ  ＨＣｌ（約７ｍＬ）でｐＨを１．０に調整した。酸性水相をＭｅ−ＴＨＦ（４×４０ｍＬ）で抽出し、組み合わせた有機相を４０℃での減圧蒸留により濃縮乾燥した。残渣に酢酸イソプロピル（８０ｍＬ）を加え、濁った混合物を６０℃で減圧濃縮した。酢酸イソプロピル（４０ｍＬ）を加え、減圧蒸留を続けた。得られた濃厚懸濁液に酢酸イソプロピル（１０ｍＬ）を加えた。該懸濁液を室温に冷却し、３０分間撹拌した。粗製表題化合物を濾過により収集し、濾過ケークを酢酸イソプロピル（２×４ｍＬ）で洗浄した。得られた粗生物をＭｅ−ＴＨＦ（３５ｍＬ）に溶解し、酢酸イソプロピル（７０ｍＬ）を加え、混合物を６０℃での減圧蒸留により濃縮した（留出物：７０ｍＬ）。追加的に酢酸イソプロピル（３０ｍＬ）を加え、蒸留を続けた（留出物：３０ｍＬ）。懸濁液を室温に冷却し、４５分間撹拌した後、濾過した。濾過ケークを酢酸イソプロピル（２×４ｍＬ）で洗浄した後、室温で減圧乾燥した。表題化合物を収率７０％（３．０ｇ）で非晶質固体として単離した。純度（ＨＰＬＣ）９８．５％。
段階ｌ）（Ｓ）−イソプロピル  ２−（（（Ｓ）−（（（２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｒ）−４−クロロ−５−（２，４−ジオキソ−３，４−ジヒドロピリミジン−１（２Ｈ）−イル）−４−フルオロ−３−ヒドロキシテトラヒドロフラン−２−イル）メトキシ）（フェノキシ）ホスホリル）アミノ）プロパノエート（２８）
ＴＨＦ（０．０７％水、１２ｍＬ）を化合物２８ｋ（５００ｍｇ、１．７８ｍｍｏｌ）に加え、溶液を窒素下で−１０℃に冷却した。ＴＨＦ中の２０重量％のｔｅｒｔ−ブチルマグネシウムクロリド（２．２０ｇ、３．７４ｍｍｏｌ、２．１当量）を、−１０℃で２０分かけてシリンジで加えた。シリンジを５００μＬのＴＨＦですすぎ、すすぎ液を反応混合物に加えた。形成した懸濁液を−１０℃で４０分間撹拌した。ＴＨＦ（１０ｍＬ）およびＤＭＰＵ（２．０ｍＬ、１６．９ｍｍｏｌ、９．５当量）中の（Ｓ）−イソプロピル−２（（（Ｓ）（ペルフルオロフェノキシ）（フェノキシ）ホスホリル）−アミノ）プロパノエート（１．０１ｇ、２．２３ｍｍｏｌ、１．２５当量）の溶液を、−１０℃において８７分間かけてシリンジで加えた後、反応混合物を−１０℃で２２時間撹拌した。温度を５℃未満に維持しつつ１Ｍ  ＨＣｌ（４．６ｍＬ、２．６当量）を加えることにより、反応を失活させた。トルエン（２０ｍＬ）を加え、混合物を２５℃に加熱し、この温度で５分間撹拌した。相を分離し、水相をトルエン／ＴＨＦ（１：１、１０ｍＬ）で抽出した。有機相を１Ｍ  ＨＣｌ（２×１０ｍＬ）および５％Ｎａ２ＣＯ３（２×１０ｍＬ）で洗浄した。組み合わせた塩基性水相をトルエン（１×１０ｍＬ）およびトルエン／ＴＨＦ（１：１、２×１０ｍＬ）で抽出し、組み合わせた有機相を２５％ＮａＣｌ（１５ｍＬ）で洗浄した。その後、すべての有機相を組み合わせ、溶媒を６０℃での減圧蒸留により除去した。２−プロパノール（２０ｍＬ）およびｎ−ヘプタン（３０ｍＬ）を残渣に加え、懸濁液を一晩５℃に冷却した。懸濁液を濾過し、濾液を５０℃での減圧蒸留により濃縮した。残渣をポンプで３時間乾燥し、これにより表題化合物をフォームとして得た（８７４ｍｇ、８９％）。粗生物の純度（ＨＰＬＣ）９１．８％。
【００６８】
化合物２８について得たＮＭＲスペクトルは、公開されているスペクトルデータと一致していた：
1H NMR (500 MHz, DMSO) δ1.15 (d, 6H), 1.23 (d, 3H), 3.80 (tq, 1H), 4.04 (m, 1H), 4.31 (m, 3H), 4.86 (hept, 1H), 5.63 (dd, 1H), 6.09 (dd, 1H), 6.24 (d, 1H), 6.66 (d, 1H), 7.21 (m, 3H), 7.38 (m, 2H), 7.58 (d, 1H), 11.63 (m, 1H).
13C NMR (126 MHz, DMSO) δ19.64 (d), 21.26, 21.30, 49.67, 64.32, 67.89, 74.42 (d), 78.81, 87.60 (m), 102.27, 113.96 (d), 119.96 (d), 124.52, 129.56, 139.91, 150.01, 150.53 (d), 162.52, 172.45 (d).
31P NMR (162 MHz, DMSO) δ3.76.
19F NMR (376 MHz, DMSO) δ -119.05.
実施例１Ａ  キラルホスホルアミデート試薬の調製
【００６９】
【化６】
2018507233.tif 000010
【００７０】
段階ａ）Ｌ−アラニンイソプロピルエステルヒドロクロリド（Ｉ−５２ａ）
塩化チオニル（８０．２ｇ、０．６７４ｍｏｌ、１．５当量）を、冷却しつつ、−７〜０℃の２−プロパノール（４００ｍＬ）に３０分間かけて加えた後、０℃のＬ−アラニン（４０．０ｇ、０．４４９ｍｏｌ）を加えた。流量測定器、および２７．６５％水酸化ナトリウム（２２８ｇ）と水（２２５ｇ）の混合物を含むスクラバーを、出口に取り付けた。反応混合物を６７℃で２時間撹拌した後、７０℃で１時間および２０〜２５℃で一晩撹拌した。該反応混合物を、６０℃の浴から、減圧下（２５０〜５０ｍＢａｒ）、４７〜５０℃で蒸留した。蒸留が非常に遅くなったらトルエン（１００ｍＬ）を残留オイルに加え、６０℃の浴からの減圧下（１５０〜５０ｍＢａｒ）、４８〜５１℃での蒸留を、蒸留が非常に遅くなるまで継続した。ｔ−ブチルメチルエーテル（ｔＢＭＥ）（４００ｍＬ）を残留オイルに加え、二相系に、効率的な攪拌下、３４〜３５℃で種結晶を入れた。結晶化が観察されたら、１時間かけて混合物を２３℃に冷却し、沈殿物を濾過により単離した。濾過ケークをｔＢＭＥ（１００ｍＬ）で洗浄し、加熱することなく減圧下で恒量まで乾燥し、これにより表題化合物（６７．７ｇ、９０％）を白色固体として得た。
段階ｂ）（Ｓ）−イソプロピル  ２−（（（Ｓ）−（ペルフルオロフェノキシ）（フェノキシ）ホスホリル）アミノ）プロパノエート（Ｉ−５２）
ジクロロリン酸フェニル（６２．８８ｇ、０．２９８ｍｏｌ、１．０当量）を、窒素下で、０℃のＤＣＭ（３１０ｍＬ）中のＬ−アラニンイソプロピルエステルヒドロクロリド（５０．０ｇ、０．２９８ｍｏｌ）の溶液に加えた−添加は、ＤＣＭ（３９ｍＬ）での洗浄により終了した。混合物を冷却し、トリエチルアミン（６３．３５ｇ、０．６２６ｍｏｌ、２．１当量）を、冷却して温度を−１４℃以下に維持しつつ７０分間かけて加え、添加を、ＤＣＭ（３９ｍＬ）での洗浄により終了した。混合物を−１５〜−２０℃で１時間撹拌した後、−８℃に加熱し、ＤＣＭ（７８ｍＬ）中のペンタフルオロフェノール（６０．３８ｇ、０．３２８ｍｏｌ、１．１当量）およびトリエチルアミン（３３．１９ｇ、０．３２８ｍｏｌ、１．１当量）の溶液を、冷却して温度を０℃以下に維持しつつ、４２分間かけて加えた−添加は、ＤＣＭ（３９ｍＬ）での洗浄により終了した。混合物を０℃で１時間撹拌した後、＋５℃で一晩撹拌した。形成した沈殿物を濾過により除去し、濾過ケークをＤＣＭ（９５ｍＬ）で洗浄した。組み合わせた濾液を５℃で水洗した（２×１９０ｍＬ）。有機相を減圧下（６５０〜６００ｍＢａｒ）、３２〜３８℃で蒸留し、約１７０ｍＬの残留体積の部分的に結晶化した塊が得られるまで蒸留を継続した。酢酸エチル（３８５ｍＬ）を加え、得られた透明溶液を減圧下（３００〜２５０ｍＢａｒ）、４３〜４５℃で蒸留した。約３４５ｍＬの残留体積が得られるまで蒸留を継続した。透明溶液を３６℃に冷却し、Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．，２０１１，７６，８３１１−８３１９に記載されているように調製した（Ｓ）−イソプロピル  ２−（（（Ｓ）（ペルフルオロフェノキシ）（フェノキシ）ホスホリル）アミノ）プロパノエート（２０ｍｇ）の種結晶を加えることにより、結晶化を誘導した。混合物を１時間かけて２７℃に冷却した後、ｎ−ヘプタン（７７０ｍＬ）を４７分間かけて加え、該混合物をさらに３７分間撹拌した。トリエチルアミン（６．０３ｇ、０．２当量）を加え、混合物を２３〜２５℃で一晩撹拌した。沈殿物を濾過により単離した。濾過ケークを酢酸エチル：ｎ−ヘプタン（１：９、８０ｍＬ）で洗浄し、加熱することなく減圧下（０．１ｍＢａｒ未満）で恒量まで乾燥し、これにより表題化合物（７５．６４ｇ、５６％）を白色結晶質材料として得た。
1H NMR (CDCl3, 300 MHz) δ 7.38-7.32 (m, 2 H), 7.27-7.24 (m, 2 H), 7.23-7.19 (m, 1 H), 5.10-4.98 (m, 1 H), 4.20-4.08 (m, 1 H), 4.03-3.96 (m, 1 H), 1.46 (dd, 7.2, 0.6 Hz, 3 H), 1.26-1.23 (2xd, 6 H);
13CNMR (CDCl3, 100 MHz) δ 172.7 (d, J = 8.8 Hz), 150.4 (d, J = 7.1 Hz), 143.4-143.0 (m), 141.0-140.2 (m), 140.0-139.8 (m), 137.6-137.2 (m), 136.8-136.2 (m), 130.0 (d, J = 0.82 Hz), 125.8 (d, J = 1.4 Hz), 120.3 (d, J = 5.0 Hz), 69.8, 50.6, (d, J = 1.9 Hz), 21.8 (d, J = 1.9 Hz), 21.2 (d, J = 4.4 Hz);
表題化合物の結晶化特性およびＮＭＲスペクトルデータは、公開されているデータ（Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．，２０１１，７６，８３１１−８３１９）と一致しており、したがって、表題化合物のリン原子のＳ立体化学的構造が裏付けられた。
実施例２．レプリコンアッセイ
本発明の組成物を、ＨＣＶレプリコンとしても知られるＨＣＶ機能細胞複製細胞株を阻害する化合物を同定することを目的とする細胞アッセイにおいて、ＨＣＶ  ＲＮＡ複製の阻害活性に関し試験することができる。適した細胞アッセイは、複数標的スクリーニング戦略においてＬｏｈｍａｎｎ  ｅｔ  ａｌ．（１９９９），Ｓｃｉｅｎｃｅ  ｖｏｌ．２８５  １１０−１１３頁により記載されているものにＫｒｉｅｇｅｒ  ｅｔ  ａｌ．（２００１），Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｖｉｒｏｌｏｇｙ  ７５：４６１４−４６２４により記載されている変更を加えたバイシストロン性発現構築物に基づく。
【００７１】
該アッセイでは、安定的にトランスフェクトされた細胞株Ｈｕｈ−７  ｌｕｃ／ｎｅｏ（以後Ｈｕｈ−Ｌｕｃとよぶ）を利用する。この細胞株は、レポーター部分（ＦｆＬ−ルシフェラーゼ）および選択可能なマーカー部分（ｎｅｏＲ、ネオマイシンホスホトランスフェラーゼ）により先行される脳心筋炎ウイルス（ＥＭＣＶ）からの内部リボソーム進入部位（ＩＲＥＳ）から翻訳されたＨＣＶ１ｂ型の野生型ＮＳ３−ＮＳ５Ｂ領域を含むバイシストロン性発現構築物をコードするＲＮＡを持つ。該構築物には、ＨＣＶ１ｂ型からの５’および３’ＮＴＲ（非翻訳領域）が隣接している。Ｇ４１８（ｎｅｏＲ）の存在下でのレプリコン細胞の継続培養は、ＨＣＶ  ＲＮＡの複製に依存する。自律的および高レベルに複製するＨＣＶ  ＲＮＡであって、とりわけルシフェラーゼをコードするＨＣＶ  ＲＮＡを発現する、安定的にトランスフェクトされたレプリコン細胞を、抗ウイルス性化合物をスクリーニングするために用いる。
【００７２】
レプリコン細胞を、さまざまな濃度で加えられた試験化合物および対照化合物の存在下で３８４ウェルプレートに入れる。３日間インキュベートした後、ルシフェラーゼ活性をアッセイする（標準的なルシフェラーゼアッセイの基質および試薬、ならびにＰｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ  ＶｉｅｗＬｕｘＴＭ  ｕｌｔｒａＨＴＳマイクロプレート撮像装置を用いて）ことにより、ＨＣＶ複製を測定する。対照培養物中のレプリコン細胞は、あらゆる阻害剤の非存在下で高いルシフェラーゼ発現を有する。ルシフェラーゼ活性に対する化合物の阻害活性をＨｕｈ−Ｌｕｃ細胞においてモニタリングして、各試験化合物に関する用量−応答曲線を可能にする。その後、ＥＣ５０値を計算する。この値は、検出されるルシフェラーゼ活性のレベル、より具体的には、遺伝子的に連結されたＨＣＶレプリコンＲＮＡが複製する能力を、５０％低下させるのに必要な化合物の量を表す。
【００７３】
化合物１は０．０５５ｕＭ（ｎ＞１０）のＥＣ５０値を示し、Ｈｕｈ−Ｌｕｃ細胞株における細胞毒性は５０μＭを上回っていた。
実施例３−比較例−カプセル内の化合物１の溶解
溶解試験。３５０ｍｇの化合物１を硬質ゼラチンカプセルに満たした。ＵＳＰ法７１１に従って、１００ｒｐｍ、３７℃、媒体９００ｇで、２０、４５、９０分後に５ｍＬをサンプリングして、バスケット溶解試験を実施した。試料をＲＰ−ＵＰＬＣにより分析した。カプセルは崩壊して水不溶性の塊になり、これは、９０分の間に溶解または大きな変化を起こさなかった。塊は湿っているときは非常に粘り気があったが、空気中では乾燥して硬い塊になった。この塊は、意外にも７０％ＥｔＯＨに溶解することが観察された。
【００７４】
【表２】
2018507233.tif 000011
【００７５】
実施例４−比較例−カプセル中の化合物１および従来の液体配合物のイヌにおける薬物動態
ＰＫ試験において、硬質ゼラチンカプセルに満たした２×３５０ｍｇの化合物１をビーグル犬に経口投与し、化合物１を含有する２０％ヒドロキシプロピルβシクロデキストリンの溶液の経口投与と比較した。雄ビーグル犬に５０ｍｇ／ｋｇを単回経口投与した後のＰＫパラメーター：
【００７６】
【表３】
2018507233.tif 000012
【００７７】
実施例５−従来の液体配合物と比較した、本発明のエタノールを含まない態様中の化合物１のマウスにおける薬物動態
従来のポリエチレングリコール配合物中の化合物１をマウスに経口投与した後の血漿ヌクレオシドの暴露。
【００７８】
【表４】
2018507233.tif 000013
【００７９】
実施例５．エタノールに対する化合物１の溶解度
１００．４３ｍｇの化合物１を秤量してガラスバイアルに入れた。３７μＬの９９％エタノールを、最終濃度が２７００ｍｇ／ｍＬになるように加えた。配合物を、薬物物質が完全に溶解するまで、軽く撹拌しつつ５０〜６０℃に加熱した。透明シロップが得られ、冷却し、４８時間より長時間室温で保管した後、該溶液は透明なままで、可視的な結晶はなかった。
実施例６．エタノールに対する化合物１の溶解度
２００．２６ｍｇの化合物１を秤量してガラスバイアルに入れた。６７μＬの９９％エタノールを、最終濃度が３０００ｍｇ／ｍＬになるように加えた。配合物を、薬物物質が完全に溶解するまで、静かに撹拌しつつ５０〜６０℃に加熱した。透明シロップが得られた。冷却し、室温で保管した後、該溶液はわずかに不透明な半固体に固化し、可視的な結晶はなかった。
実施例７．配合物Ａ  ６０ｍｇ／ｍＬ
ビヒクル：
９５％エタノール、  ７．５％ｖ／ｖ
ＰＥＧ４００、  ８７．５％ｖ／ｖ
Ｔｗｅｅｎ  ８０    ５．０％ｖ／ｖ
ＰＶＰ    ２０ｍｇ／ｍｌ
７．５ｍＬの６０ｍｇ／ｍＬの化合物１の手順：
１．４５０．３６ｍｇの化合物１を秤量する
２．９５％エタノール−７．５％ｖ／ｖに溶解する。７．５ｍＬ＝０．５６ｍＬ
３．溶解するまで超音波処理および加温する。
４．６．５６ｍＬのＰＥＧ４００を加える。澄んだ均質溶液が得られるまで混合する。
５．０．３８ｍＬのＴｗｅｅｎ  ８０を加える。澄んだ均質溶液が得られるまで混合する。
６．１５０．１６ｍｇのポリビニルピロリドンを秤量し、上記溶液に加える。澄んだ等方性の均質溶液が得られるまで混合する。
【００８０】
配合物Ａは、目視検査により観察して少なくとも２カ月間は物理的に安定であり、可視的な相分離または沈殿は生じなかった。配合物ＡおよびＢをｐＨ＝２の緩衝液に希釈係数１０で希釈することによりｉｎ  ｖｉｔｒｏ試験を実施し、１００μＬを９００μＬの緩衝液に希釈した。静かに撹拌した後、滑らかな均質エマルションを得た。該エマルションを光学顕微鏡法により観察した。配合物Ａは、液滴の直径が５μｍ未満であるマクロエマルションを形成した。該配合物は、緩衝液で１：１０に希釈して動的光散乱による測定も行い、ＤｙｎａＰｒｏ  Ｎａｎｏｓｔａｒ検出器（Ｗｙａｔｔ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）でのエマルション液滴の流体力学直径は１１１６ｎｍであった。
【００８１】
配合物Ａを２つの用量レベルでラットに経口投与すると、以下の薬物動態を示した：
【００８２】
【表５】
2018507233.tif 000014
【００８３】
実施例８．配合物Ｂ  ２００ｍｇ／ｍＬ
ビヒクル：
９５％エタノール、  ７．５％ｖ／ｖ
ＰＥＧ４００、  ６２．５％ｖ／ｖ
Ｓｏｌｕｔｏｌ  ＨＳ１５、  ３０％ｖ／ｖ
ＰＶＰ    ２０ｍｇ／ｍｌ
２ｍＬの２００ｍｇ／ｍＬの手順：
１．４００．０７ｍｇの化合物１を秤量する
２．９５％エタノール−７．５％ｖ／ｖに溶解する。２ｍＬ＝０．１５ｍＬ
３．溶解するまで超音波処理および加温する。
４．１．２５ｍＬのＰＥＧ４００を加える。澄んだ均質溶液が得られるまで混合する。
５．半固体が完全に液化するまでＳｏｌｕｔｏｌ  ＨＳ１５を徐々に加温する。
６．０．６ｍＬのＳｏｌｕｔｏｌ  ＨＳ１５を加える。澄んだ均質溶液が得られるまで混合する。
７．４０．０６ｍｇのポリビニルピロリドンを秤量し、上記溶液に加える。澄んだ等方性の均質溶液が得られるまで混合する。
【００８４】
配合物Ｂは、目視検査により観察して少なくとも２カ月間は物理的に安定であり、可視的な相分離または沈殿は生じなかった。配合物ＢをｐＨ＝２の緩衝液に希釈係数１０で希釈することによりｉｎ  ｖｉｔｒｏ試験を実施し、１００μＬを９００μＬの緩衝液に希釈した。静かに撹拌した後、滑らかな均質エマルションを得た。配合物Ｂは、光学顕微鏡法により倍率４００倍で測定して、液滴サイズが１μｍ未満であるコロイド状ミクロエマルションを形成した。サブミクロン粒子のブラウン運動も観察した。これは、エマルションのコロイド的性質を示していた。２００ｍｇ／ｍＬの（１）を有し、緩衝液で１：１０に希釈された配合物Ｂの動的光散乱により、エマルション液滴は、ＤｙｎａＰｒｏ  Ｎａｎｏｓｔａｒ検出器（Ｗｙａｔｔ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）で５４２ｎｍの流体力学直径を有していた。
【００８５】
配合物Ｂを２つの用量レベルでラットに経口投与すると、以下の薬物動態を示した：
【００８６】
【表６】
2018507233.tif 000015
【００８７】
実施例９：追加的配合物
以下の表中の配合物は、実質的に実施例６および７に示したように調製した。
【００８８】
【表７】
2018507233.tif 000016
【００８９】
実施例１０：配合物Ｃ、２００ｍｇ／ｍＬ：
化合物１                    ２００ｍｇ  
９５％エタノール            １００μＬ
Ｓｏｌｕｔｏｌ  ＨＳ１５    ３００μＬ
Ｃａｐｍｕｌ  ＭＣＭ        ３００μＬ
Ｍｉｇｌｙｏｌ  ８１２      ３００μＬ
混合後に等方性濃縮物が得られ、これは室温保管で３カ月超にわたり物理的に安定であった。１０：１０００の水性希釈により滑らかなマクロエマルションを得た。
実施例１１：配合物Ｄ、５０ｍｇ／ｍＬ：
化合物１                    ５０ｍｇ  
ＰＥＧ  ４００              １００μＬ
Ｓｏｌｕｔｏｌ  ＨＳ１５    ３００μＬ
Ｃａｐｍｕｌ  ＭＣＭ        ３００μＬ
Ｍｉｇｌｙｏｌ  ８１２      ３００μＬ
混合後に等方性濃縮物が得られ、これは室温保管で３カ月超にわたり物理的に安定であった。１０：１０００の水性希釈により滑らかなミクロエマルションを得た。
実施例１２：配合物Ｅ、２００ｍｇ／ｍＬ：
化合物１                    ２００ｍｇ  
９５％エタノール            ７５μＬ
Ｖｉｔ  Ｅ  ＴＰＧＳ（Ｄ−アルファ−トコフェリルポリエチレングリコール１０００スクシネート）                ２５０μ
ＰＥＧ  ４００              ６７５μＬ
混合後に等方性濃縮物が得られ、これは室温で３カ月超にわたり安定であった。１０：１０００の水性希釈により滑らかなコロイド状ミクロエマルションを得た。
実施例１３：エタノールを含まないＳＥＤＤＳ      ５０ｍｇ／ｍＬ：
化合物１                    ５０ｍｇ  
ＰＥＧ  ４００              ７００μＬ
Ｓｏｌｕｔｏｌ  ＨＳ１５    ３００μＬ
この実施例は、室温保管で１カ月未満の物理的安定性、相分離および／またはゲル化を示したが、これは、比較的低濃度の化合物１中でのソルトールの不安定性を反映していると考えられる。とりわけ、同様にエタノールを含まない組成物である上記配合物Ｄは安定であった。これは、おそらくグリセリド含有物による安定化に起因する。化合物１の濃度がより高い可能性があるエタノール含有組成物では、ソルトールの安定性は容易に達成される。      
実施例１４：多孔質シリカゲル担体：
配合
【００９０】
【表８】
2018507233.tif 000017
【００９１】
製造方法
・化合物１を秤量してガラスバイアルに入れた。
・エタノール９５％をピペットでガラスバイアルに加えた
・化合物１を放置して溶解させた
・Ｓｙｌｏｉｄ  ＸＰＤをガラスバイアルに加え、スパチュラでゆっくり撹拌した。混合物を一晩放置した
・混合物を秤量してカプセルに入れた
実施例１５：配合物Ｅ
配合
【００９２】
【表９】
2018507233.tif 000018
【００９３】
製造方法
・化合物１を秤量してガラスバイアルに入れた。
・エタノール９５％をピペットでガラスバイアルに加えた
・化合物１を放置して溶解させた
・Ｓｏｌｕｔｏｌ  ＨＳ−１５を溶融させ、ピペットでガラスバイアルに加えた。該溶液をスパチュラでゆっくり撹拌した。
【００９４】
・混合物を秤量してカプセルに入れた。
実施例１６：エタノールを含まないカプセル（比較例）
配合
【００９５】
【表１０】
2018507233.tif 000019
【００９６】
製造方法
・３５０ｍｇの化合物１を手動で秤量してカプセルに入れた。
実施例１７：放出速度の決定
分析方法
溶解設定装置１（バスケット）Ｅｒｗｅｋａ  ＤＴ５０：
・媒体    ９００ｍＬ  ０．１Ｍ  ＨＣｌ
・温度    ３７℃
・撹拌速度    １００ｒｐｍ
・サンプリング体積    ５．００ｍＬ
・サンプリング時間    ２０、４５および９０分
・フィルター    ０．４５μｍ  ＰＰ膜
ＵＰＬＣ設定
・カラム：Ａｃｑｕｉｔｙ  ＨＳＳ  ＰＦＰ  ５０＊２．１ｍｍ、１．８μｍ
・移動相Ａ：５ｍＭ  酢酸アンモニウム
・移動相Ｂ：アセトニトリル
・勾配  ０．６０ｍＬ／分：
０分：２０％  Ｂ、２．５０分：４０％  Ｂ、２．６０分：９９％  Ｂ、３．００分：９９％  Ｂ、３．１０分：２０％  Ｂ
・注入量    １μＬ
・カラム温度：５０℃
結果
（比較）実施例１６の配合物
【００９７】
【表１１】
2018507233.tif 000020
【００９８】
実施例１４の配合物（固体担体）
【００９９】
【表１２】
2018507233.tif 000021
【０１００】
実施例１５の配合物（配合物Ｅ）
【０１０１】
【表１３】
2018507233.tif 000022
【０１０２】
エタノール含有配合物Ｅは、カプセルに直接入れた活性成分より実質的に良好な放出を示し、カプセル内の固体担体上に吸着している化合物１のエタノール溶液で、さらに良好な放出が見られたことは、上記から明らかである。
【国際調査報告】
2018507233.tif 000027
2018507233.tif 000028
2018507233.tif 000029
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