(57)【要約】本願は、哺乳動物(例えば、アルツハイマー病を有する哺乳動物)内のアミロイドβレベルを減少させるための方法および物質を提供する。例えば、本願は、アルツハイマー病の1つまたは複数の症状を軽減させるためにポテト多糖調製物を含有する組成物を使用するための方法を提供する。いくつかの場合では、本明細書において提供されるポテト多糖調製物を含有する組成物は、CNS由来アミロイドβポリペプチドの結合、隔離、および/または分解を増加させ、これにより神経原線維プラークの形成を阻害するために使用され得る。【特許請求の範囲】
【請求項１】
アルツハイマー病を有する哺乳動物内のアミロイドβレベルを減少させるための方法であって、生のポテトから得られたポテト多糖調製物を含む組成物を該哺乳動物に投与する工程を含み、該哺乳動物内のアミロイドβのレベルが減少される、方法。
【請求項２】
哺乳動物がヒトである、請求項1記載の方法。
【請求項３】
哺乳動物内のアミロイドβのレベルが血中で減少する、請求項1記載の方法。
【請求項４】
哺乳動物内のアミロイドβのレベルが脂肪組織中で減少する、請求項1記載の方法。
【請求項５】
組成物が、哺乳動物に投与されるポテト多糖調製物のポテト多糖成分を該哺乳動物の体重1kg当たり0.05mg〜50mgでもたらす量の該ポテト多糖調製物を含む、請求項1記載の方法。
【請求項６】
組成物が、ポテト多糖調製物を1mg〜100mg含む、請求項1記載の方法。
【請求項７】
組成物が、ポテト多糖調製物を6mg〜20mg含む、請求項1記載の方法。
【請求項８】
組成物が、ポテト多糖調製物のポテト多糖成分を1mg〜100mg含む、請求項1記載の方法。
【請求項９】
組成物が、ポテト多糖調製物のポテト多糖成分を6mg〜20mg含む、請求項1記載の方法。
【請求項１０】
組成物が錠剤の形態である、請求項1記載の方法。
【請求項１１】
組成物がαリポ酸を含む、請求項1記載の方法。
【請求項１２】
組成物がαトコフェロールを含む、請求項1記載の方法。
【請求項１３】
ポテト多糖調製物が、哺乳動物に投与されるポテト多糖調製物のポテト多糖成分を該哺乳動物の体重1kg当たり0.075mg〜0.5mgでもたらす量である、請求項1記載の方法。
【請求項１４】
ポテト多糖調製物の少なくとも約80パーセントがポテト多糖である、請求項1記載の方法。
【請求項１５】
ポテト多糖調製物の少なくとも約90パーセントがポテト多糖である、請求項1記載の方法。
【請求項１６】
ポテト多糖調製物の少なくとも約95パーセントがポテト多糖である、請求項1記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
1.技術分野
本願は、アルツハイマー病を有する哺乳動物内のアミロイドβレベルを減少させるための方法および物質に関する。例えば、本願は、アルツハイマー病の1つまたは複数の症状を軽減させるためにポテト多糖調製物を含有する組成物を使用することに関する。いくつかの場合では、本願は、CNS由来アミロイドβポリペプチドを分解するためにポテト多糖調製物を含有する組成物を使用することに関する。
【背景技術】
【０００２】
2.背景情報
ポテトは、ポテト植物から得られるデンプン質の食用塊茎であり、世界の多くの食糧供給の不可欠な部分をなす。実際に、ポテトは世界で4番目に多い食用作物である。世界中で主要なポテトの種は、ジャガイモ(Solanum tuberosum)である。
【発明の概要】
【０００３】
概要
本願は、哺乳動物(例を挙げると、アルツハイマー病を有する哺乳動物)内のアミロイドβレベルを減少させるための方法および物質を提供する。例えば、本願は、アルツハイマー病の1つまたは複数の症状を軽減させるためにポテト多糖調製物を含有する組成物を使用するための方法を提供する。いくつかの場合では、本明細書において提供されるポテト多糖調製物を含有する組成物は、CNS由来アミロイドβポリペプチドの結合、隔離、および/または分解を増加させるために使用され得る。いくつかの場合では、本明細書において提供されるポテト多糖調製物を含有する組成物は、CNS由来アミロイドβポリペプチドを、例えば末梢の作用部位で、分解するため、および/または神経原線維プラークの形成を阻害するために使用され得る。
【０００４】
アルツハイマー病の1つまたは複数の症状を軽減させるために本明細書において記載されるポテト多糖調製物を含有する組成物を使用できることは、臨床医および患者に患者の生活の質を改善するための有効な治療レジメンを提供することができる。
【０００５】
本願は、ポテト多糖調製物を含有する組成物(例を挙げると、栄養補助組成物)も提供する。例えば、本願は、ポテト多糖調製物を含有する栄養補助組成物、ポテト多糖調製物を得るための方法、ポテト多糖調製物を含有する栄養補助組成物を作製するための方法、およびアルツハイマー病に関与するポリペプチドの発現を増加させるかまたは低下させるための方法を提供する。
【０００６】
いくつかの場合では、本明細書において提供される組成物(例を挙げると、本明細書において提供される栄養補助組成物およびポテト多糖調製物)は、アルツハイマー病およびCNS由来アミロイドβポリペプチドの代謝に関与するポリペプチドの発現を増加させるかまたは低下させるために使用され得る。例えば、本明細書において提供されるポテト多糖調製物を含有する組成物または本明細書において提供されるポテト多糖調製物は、低密度リポタンパク質受容体関連タンパク質1(LRP1)ポリペプチド、アミロイドβ(A4)前駆体タンパク質結合ファミリーBメンバー1(APBB1)ポリペプチド、インスリン分解酵素(IDE)ポリペプチド、グルタチオンペルオキシダーゼ3(GPX3)ポリペプチド、グルタチオンペルオキシダーゼ4(GPX4)ポリペプチド、またはこれらの組み合わせの発現を増加させるために使用され得る。いくつかの場合では、本明細書において提供されるポテト多糖調製物を含有する組成物または本明細書において提供されるポテト多糖調製物は、インスリン様成長因子1(IGF1)、誘導型一酸化窒素合成酵素2(NOS2)、またはこれらの組み合わせの発現を低下させるために使用され得る。
【０００７】
いくつかの場合では、本明細書において提供される組成物(例を挙げると、本明細書において提供される栄養補助組成物およびポテト多糖調製物)は、CNS由来アミロイドβポリペプチドの結合、隔離、および/または分解に関与するポリペプチドの、脂肪組織中の発現を増加させるかまたは低下させるために使用され得る。例えば、本明細書において提供されるポテト多糖調製物を含有する組成物または本明細書において提供されるポテト多糖調製物は、LRP1ポリペプチド、APBB1ポリペプチド、IDEポリペプチド、GPX3ポリペプチド、またはこれらの組み合わせの発現を増加させるために使用され得る。
【０００８】
いくつかの場合では、本明細書において提供される組成物(例を挙げると、本明細書において提供される栄養補助組成物およびポテト多糖調製物)は、CNS由来アミロイドβポリペプチドの結合、隔離、および/または分解に関与するポリペプチドの、血液中の発現を増加させるかまたは低下させるために使用され得る。例えば、本明細書において提供されるポテト多糖調製物を含有する組成物または本明細書において提供されるポテト多糖調製物は、APBB1ポリペプチド、IDEポリペプチド、GPX4ポリペプチド、またはこれらの組み合わせの発現を増加させるために使用され得る。
【０００９】
いくつかの場合では、本明細書において提供される組成物(例を挙げると、本明細書において提供される栄養補助組成物およびポテト多糖調製物)は、酸化ストレスおよび炎症誘発経路に関与するポリペプチドの発現を増加させるかまたは低下させるために使用され得る。例えば、本明細書において提供されるポテト多糖調製物を含有する組成物または本明細書において提供されるポテト多糖調製物は、インスリン様成長因子1(IGF1)ポリペプチド、誘導型一酸化窒素合成酵素2(NOS2)ポリペプチド、またはこれらの組み合わせの発現を低下させるために使用され得る。
【００１０】
概して、本願の1つの局面は、アルツハイマー病を有する哺乳動物内のアミロイドβレベルを減少させるための方法を特徴とする。方法は、生のポテトから得られたポテト多糖調製物を含む組成物を前記哺乳動物に投与する工程を含むか、または該工程から本質的になり、該哺乳動物内のアミロイドβのレベルが減少される。哺乳動物は、ヒトであり得る。哺乳動物内のアミロイドβのレベルは、血中で減少し得る。哺乳動物内のアミロイドβのレベルは、脂肪組織中で減少し得る。組成物は、哺乳動物に投与されるポテト多糖調製物のポテト多糖成分を哺乳動物の体重1kg当たり0.05mg〜50mgでもたらす量のポテト多糖調製物を含み得る。組成物は、ポテト多糖調製物を1mg〜100mg含み得る。組成物は、ポテト多糖調製物を6mg〜20mg含み得る。組成物は、ポテト多糖調製物のポテト多糖成分を1mg〜100mg含み得る。組成物は、ポテト多糖調製物のポテト多糖成分を6mg〜20mg含み得る。組成物は、錠剤の形態であり得る。組成物は、αリポ酸を含み得る。組成物は、αトコフェロールを含み得る。ポテト多糖調製物は、哺乳動物に投与されるポテト多糖調製物のポテト多糖成分を哺乳動物の体重1kg当たり0.075mg〜0.5mgでもたらす量であり得る。ポテト多糖調製物の少なくとも約80パーセントは、ポテト多糖であり得る。ポテト多糖調製物の少なくとも約90パーセントは、ポテト多糖であり得る。ポテト多糖調製物の少なくとも約95パーセントは、ポテト多糖であり得る。
【００１１】
特に定義した場合を除いて、本明細書において使用される技術用語および科学用語はすべて本発明が属する技術分野における当業者によって一般的に解釈されるものと同じ意味を有する。本明細書において記載されるものと類似または同等の方法および物質が本発明の実施または試験に使用され得るが、好適な方法および物質は以下に記載されている。本明細書において言及されるすべての刊行物、特許出願、特許、および他の参照文献は、その全体が参照により組み入れられる。矛盾する場合、定義を含めて本明細書が優先される。さらに、物質、方法、および実施例は、例示にすぎず限定を意図するものではない。
【００１２】
本発明の他の特徴および利点は、下記の詳細な説明から、および特許請求の範囲から明らかになるであろう。
【図面の簡単な説明】
【００１３】
【図１】生のポテト(ラセット・バーバンク(Russet Burbank))の10％ACN抽出物のHPLCクロマトグラムである。
【図２】図1に示す生のポテトの10％ACN抽出物から回収し再精製した3.5分ピーク物質のHPLCクロマトグラムである。
【図３】3.5分HPLCピーク物質のLC/MSトレースである。
【図４】3.5分HPLCピーク物質の全NMRスペクトルである。
【図５】3.5分HPLCピーク物質の拡大NMRスペクトルである。
【図６】生のラセット・バーバンクポテトから得た3.5分HPLCピーク物質の誘導体化糖フラグメントのトータルイオンクロマトグラムである。
【図７】ジアセトアミドのフラグメンテーションパターンである。ピークフラグメンテーションパターンが上のパネルに、化合物ライブラリの対応フラグメンテーションが下のパネルに、両者を重ねあわせたものが中央のパネルに示されている。
【図８】3-アセトキシピリジンのフラグメンテーションパターンである。ピークフラグメンテーションパターンが上のパネルに、化合物ライブラリの対応フラグメンテーションが下のパネルに、両者を重ねあわせたものが中央のパネルに示されている。
【図９】3,4-フランジメタノール,ジアセテートのフラグメンテーションパターンである。ピークフラグメンテーションパターンが上のパネルに、化合物ライブラリの対応フラグメンテーションが下のパネルに、両者を重ねあわせたものが中央のパネルに示されている。
【図１０】1,2,3-プロパントリオールジアセテートのフラグメンテーションパターンである。ピークフラグメンテーションパターンが上のパネルに、化合物ライブラリの対応フラグメンテーションが下のパネルに、両者を重ねあわせたものが中央のパネルに示されている。
【図１１】イミダゾール,2-アセトアミノ-5-メチルのフラグメンテーションパターンである。ピークフラグメンテーションパターンが上のパネルに、化合物ライブラリの対応フラグメンテーションが下のパネルに、両者を重ねあわせたものが中央のパネルに示されている。
【図１２】6,7-ジヒドロ-5H-ピロール[2,1,c][1,2,4]トリアゾール-3-カルボン酸のフラグメンテーションパターンである。ピークフラグメンテーションパターンが上のパネルに、化合物ライブラリの対応フラグメンテーションが下のパネルに、両者を重ねあわせたものが中央のパネルに示されている。
【図１３】酢酸,1-(2-メチルテトラゾール-5-イル)エテニルエステルのフラグメンテーションパターンである。ピークフラグメンテーションパターンが上のパネルに、化合物ライブラリの対応フラグメンテーションが下のパネルに、両者を重ねあわせたものが中央のパネルに示されている。
【図１４】1,2,3,4-ブタントリオール,テトラアセテート(異性体1)のフラグメンテーションパターンである。ピークフラグメンテーションパターンが上のパネルに、化合物ライブラリの対応フラグメンテーションが下のパネルに、両者を重ねあわせたものが中央のパネルに示されている。
【図１５】1,2,3,4-ブタントリオール,テトラアセテート(異性体2)のフラグメンテーションパターンである。ピークフラグメンテーションパターンが上のパネルに、化合物ライブラリの対応フラグメンテーションが下のパネルに、両者を重ねあわせたものが中央のパネルに示されている。
【図１６】ペンタエリスリトールテトラアセテートのフラグメンテーションパターンである。ピークフラグメンテーションパターンが上のパネルに、化合物ライブラリの対応フラグメンテーションが下のパネルに、両者を重ねあわせたものが中央のパネルに示されている。
【図１７】1,2,3,4,5-ペンタ-o-アセチル-D-キシリトール(異性体1)のフラグメンテーションパターンである。ピークフラグメンテーションパターンが上のパネルに、化合物ライブラリの対応フラグメンテーションが下のパネルに、両者を重ねあわせたものが中央のパネルに示されている。
【図１８】1,2,3,4,5-ペンタ-o-アセチル-D-キシリトール(異性体2)のフラグメンテーションパターンである。ピークフラグメンテーションパターンが上のパネルに、化合物ライブラリの対応フラグメンテーションが下のパネルに、両者を重ねあわせたものが中央のパネルに示されている。
【図１９】3,5-ジアセトキシベンジルアルコールのフラグメンテーションパターンである。ピークフラグメンテーションパターンが上のパネルに、化合物ライブラリの対応フラグメンテーションが下のパネルに、両者を重ねあわせたものが中央のパネルに示されている。
【図２０】β-D-ガラクトピラノース,ペンタアセテートのフラグメンテーションパターンである。ピークフラグメンテーションパターンが上のパネルに、化合物ライブラリの対応フラグメンテーションが下のパネルに、両者を重ねあわせたものが中央のパネルに示されている。
【図２１】D-マンニトールヘキサアセテートのフラグメンテーションパターンである。ピークフラグメンテーションパターンが上のパネルに、化合物ライブラリの対応フラグメンテーションが下のパネルに、両者を重ねあわせたものが中央のパネルに示されている。
【図２２】ガラクチコール(galacticol),ヘキサアセテートのフラグメンテーションパターンである。ピークフラグメンテーションパターンが上のパネルに、化合物ライブラリの対応フラグメンテーションが下のパネルに、両者を重ねあわせたものが中央のパネルに示されている。
【図２３】シクロヘキサンカルボン酸,1,2,4,5-テトラキス(アセトキシ),(1α,3α,4α,5β)-(-)のフラグメンテーションパターンである。ピークフラグメンテーションパターンが上のパネルに、化合物ライブラリの対応フラグメンテーションが下のパネルに、両者を重ねあわせたものが中央のパネルに示されている。
【図２４】ムコ-イノシトール,ヘキサアセテートのフラグメンテーションパターンである。ピークフラグメンテーションパターンが上のパネルに、化合物ライブラリの対応フラグメンテーションが下のパネルに、両者を重ねあわせたものが中央のパネルに示されている。
【図２５】D-グルシトール-ヘキサアセテートのフラグメンテーションパターンである。ピークフラグメンテーションパターンが上のパネルに、化合物ライブラリの対応フラグメンテーションが下のパネルに、両者を重ねあわせたものが中央のパネルに示されている。
【図２６】ミオ-イノシトール,ヘキサアセテートのフラグメンテーションパターンである。ピークフラグメンテーションパターンが上のパネルに、化合物ライブラリの対応フラグメンテーションが下のパネルに、両者を重ねあわせたものが中央のパネルに示されている。
【図２７】生のオーガニック・イエロー(Organic Yellow)ポテトの10%ACN抽出物のHPLCクロマトグラムである。
【図２８】生のパープル(Purple)ポテトの10%ACN抽出物のHPLCクロマトグラムである。
【図２９】生のアイダホ・ラセット(Idaho Russet)ポテトの10%ACN抽出物のHPLCクロマトグラムである。
【図３０】生のユーコン・ゴールド(Yukon Gold)ポテトの10%ACN抽出物のHPLCクロマトグラムである。
【図３１】生のカンショの10%ACN抽出物のHPLCクロマトグラムである。
【図３２】茹でたパープルポテトの10%ACN抽出物のHPLCクロマトグラムである。
【図３３】アイダホ・ラセットポテトからの2つのプールした分画回収物のHPLCクロマトグラムである。
【図３４】3gのパープルポテトからの分画回収物のHPLCクロマトグラムである。
【図３５】ラット脂肪組織試料における、ポテト多糖調製物で処置したZDFおよび未処置の対照ZDFの間の閾値サイクル数の差異を実証する、IDEについてのリアルタイムPCR増幅プロットである。対照ラットの組織についてのより大きいサイクル数は、より低い遺伝子発現と等しい。
【図３６】ラット血液試料における、ポテト多糖調製物で処置したZDFおよび未処置の対照ZDFの間の閾値サイクル数の差異を実証する、IDEについてのリアルタイムPCR増幅プロットである。対照ラットの組織についてのより大きいサイクル数は、より低い遺伝子発現と等しい。
【図３７】リアルタイムPCR分析によって計測したIDE遺伝子発現のパーセント変化をプロットしたグラフである。IDE遺伝子発現の増強は、独立t検定により脂肪組織および血液試料についてそれぞれ44.9±2.8％(n=9、p=0.02)および51.3±6.2％(n=6、p=0.04)であると決定した。
【発明を実施するための形態】
【００１４】
詳細な説明
本願は、哺乳動物(例を挙げると、アルツハイマー病を有する哺乳動物)内のアミロイドβレベルを減少させるための方法および物質を提供する。本明細書において記載されるように、ポテト多糖調製物を含有する組成物は、アルツハイマー病の1つまたは複数の症状を軽減させるために使用され得る。例えば、本明細書において提供されるポテト多糖調製物を含有する組成物は、アルツハイマー病の1つまたは複数の症状を軽減させるために、任意の適切な哺乳動物(例を挙げると、ラット、マウス、イヌ、ネコ、ウマ、ウシ、ヤギ、ブタ、ニワトリ、アヒル、ウサギ、ヒツジ、サル、またはヒト)に投与され得る。アルツハイマー病の症状の例は、最近の出来事を思い出すのが困難であること(例を挙げると、短期記憶の喪失)、言語に関する障害、失見当識(簡単に道に迷うことを含む)、気分変動、意欲の喪失、セルフケアをしなくなること、行動の問題、またはこれらの組み合わせを非限定的に含む。
【００１５】
本明細書において提供されるポテト多糖調製物を含有する組成物(例を挙げると、本明細書において提供される栄養補助組成物)を哺乳動物に投与するために、任意の適切な投与経路(例を挙げると、経口または非経口投与)が使用され得る。例えば、本明細書において提供されるポテト多糖調製物を含有する組成物は、経口投与され得る。いくつかの場合では、本明細書において提供されるポテト多糖調製物を含有する組成物は、注射によって投与され得る。
【００１６】
本明細書において提供される組成物(例を挙げると、栄養補助組成物)は、1つまたは複数のポテト多糖調製物を含み得る。ポテト多糖調製物は、ポテトの水抽出物から得られ、かつC18カートリッジ(例を挙げると、Sep-Pak Plus C-18カートリッジ)から10%アセトニトリルで溶出する能力を有する多糖物質を含有する調製物であり得る。いくつかの場合では、ポテト多糖調製物は、ポテトから得られる、実施例1に記載されるような3.5分で溶出するピークのもののHPLC特性を有する多糖物質を含有する調製物であり得る(図1、2、および27〜33も参照されたい)。いくつかの場合では、本明細書において提供されるポテト多糖調製物の多糖は、極性の水溶性多糖であり得る。いくつかの場合には、本明細書において提供されるポテト多糖調製物の多糖は、高度に置換された複合キシログルカン物質であり得る。
【００１７】
いくつかの場合では、ポテト多糖調製物は、ポテトから得られる、誘導体化した時にGC/MSを使用した評価で少なくとも次のアシル化糖をもたらす多糖物質を含有する調製物であり得る：(a)ミオ-イノシトール(内部標準として役立つよう1倍に設定)、(b)ミオ-イノシトール含量の約40倍〜約60倍のグルコース(例を挙げると、ミオ-イノシトール含量の約50倍のグルコース)、(c)ミオ-イノシトール含量の約10倍〜約20倍のキシロース(例を挙げると、ミオ-イノシトール含量の約15倍のキシロース)、(d)ミオ-イノシトール含量の約5倍〜約15倍のマンノース(例を挙げると、ミオ-イノシトール含量の約10倍のマンノース)、および(e)ミオ-イノシトール含量の約3倍〜約7倍のガラクトース(例を挙げると、ミオ-イノシトール含量の約5倍のガラクトース)。誘導体化手順は、多糖物質の乾燥残渣を形成し、次いでトリフルオロ酢酸を使用して加水分解することを含み得る。次いで、得られた物質を、水素化ホウ素ナトリウムを使用して還元し、ホウ酸塩の除去後、最終生成物を、無水酢酸およびピリジンを使用してアシル化する。次いで、反応の最終生成物を、アシル化糖を同定するためにGC/MSに直接注入する。
【００１８】
いくつかの場合では、ポテト多糖調製物は、ポテトから得られる、誘導体化しGC/MSを使用して評価した時に少なくとも4つの主要な成分(3,4-フランジメタノール,ジアセテート；1,2,3,4,5-ペンタ-o-アセチル-D-キシリトール(異性体1)；3,5-ジアセトキシ-ベンジルアルコール；およびD-グルシトール-ヘキサアセテート)をもたらす多糖物質を含有する調製物であり得る。例を挙げると、実施例1を参照されたい。いくつかの場合では、ポテト多糖調製物は、ポテトから得られる、誘導体化しGC/MSを使用して評価した時に表1に列挙した化合物をもたらすかまたは図6に示すプロファイルをもたらす多糖物質を含有する調製物であり得る。
【００１９】
いくつかの場合では、本明細書において提供されるポテト多糖調製物は、実質的に純粋なポテト多糖調製物であり得る。典型的には、実質的に純粋なポテト多糖調製物とは、例えば、HPLCを使用して評価した時に、単一ピークの物質(例を挙げると、単一ピークの多糖物質)を含有する調製物である(例を挙げると、図2および32を参照されたい)。いくつかの場合では、本明細書において提供されるポテト多糖調製物の60、70、75、80、85、90、95、または99パーセント超が、ポテトから得られた多糖物質であり得る。
【００２０】
本明細書において提供されるポテト多糖調製物を得るために、任意の適切なポテト種または変種が使用され得る。例えば、本明細書において提供されるポテト多糖調製物を得るために、ジャガイモ、サツマイモ(Ipomoea batatas)、アカウレ(S. acaule)、S. ブカソビイ(S. bukasovii)、S. レプトフィエス(S. leptophyes)、S. メギスタクロロバム(S. megistacrolobum)、S. コマーソニイ(S. commersonii)、またはS. インフンジブリフォーメ(S. infundibuliforme)が使用され得る。いくつかの場合では、本明細書において提供されるポテト多糖調製物を得るために、ジャガイモのポテト変種、例えば、オーガニック・イエロー、パープルもしくはブルー(blue)変種、クリーム・オブ・ザ・クロップ(Cream of the Crop)、アディロンダック・ブルー(Adirondack Blue)、アディロンダック・レッド(Adirondack Red)、アガタ(Agata)、アーモンド(Almond)、アンデス・ゴールド(Andes Gold)、アンデス・サン(Andes Sun)、アプライン(Apline)、アルトゥラス(Alturas)、アマンディーヌ(Amandine)、アナベル(Annabelle)、アニヤ(Anya)、アラン・ビクトリー(Arran Victory)、アトランティック(Atlantic)、アバランチ(Avalanche)、バンベルク(Bamberg)、バノック・ラセット(Bannock Russet)、ベル・ド・フォントネ(Belle de Fontenay)、BF-15、ビルトスター(Bildtstar)、ビンチェ(Bintje)、ブレイザー・ラセット(Blazer Russet)、ブルー・コンゴ(Blue Congo)、ボノット(Bonnotte)、ブリティッシュ・クイーンズ(British Queens)、カブリタス(Cabritas)、カモタ(Camota)、カネラ・ラセット(Canela Russet)、カーラ(Cara)、カローラ(Carola)、シェリナ(Chelina)、チロエ(Chiloe)、シエロ(Cielo)、クラベラ・ブランカ(Clavela Blanca)、デジレ(Desiree)、エスティマ(Estima)、フィアナ(Fianna)、フィンガーリング(Fingerling)、フラバ(Flava)、ジャーマン・バターボール(German Butterball)、ゴールデン・ワンダー(Golden Wonder)、ゴールドラッシュ(Goldrush)、ホーム・ガード(Home Guard)、イノベーター(Innovator)、アイリッシュ・コブラー(Irish Cobbler)、ジャージー・ロイヤル(Jersey Royal)、ケネベック(Kennebec)、ケールズ・ピンク(Kerr's Pink)、ケストレル(Kestrel)、ケウカ・ゴールド(Keuka Gold)、キング・エドワード(King Edward)、キプフラー(Kipfler)、レディ・バルフォア(Lady Balfour)、ラングレード(Langlade)、リンダ(Linda)、マーシー(Marcy)、マルフォナ(Marfona)、マリス・パイパー(Maris Piper)、マークイーズ(Marquis)、メガチップ(Megachip)、モナリザ(Monalisa)、ニコラ(Nicola)、パチャコナ(Pachacona)、パイク(Pike)、ピンク・アイ(Pink Eye)、ピンク・ファー・アップル(Pink Fir Apple)、プリムラ(Primura)、ランガー・ラセット(Ranger Russet)、ラーテ(Ratte)、レコード(Record)、レッド・ラソーダ(Red LaSoda)、レッド・ノーランド(Red Norland)、レッド・ポンティアック(Red Pontiac)、ルースター(Rooster)、ラセット・バーバンク、ラセット・ノーコター(Russet Norkotah)、セルマ(Selma)、シェポーディー(Shepody)、ジーグリンデ(Sieglinde)、シルバートン・ラセット(Silverton Russet)、シルコ(Sirco)、スノーデン(Snowden)、スプンタ(Spunta)、アップ・トゥ・デート(Up to date)、ストブラバ(Stobrawa)、スーペリア(Superior)、ビバルディ(Vivaldi)、ビテロッテ(Vitelotte)、イエロー・フィン(Yellow Finn)、またはユーコン・ゴールドが使用され得る。
【００２１】
本明細書において提供されるポテト多糖調製物を得るために、任意の適切な方法が使用され得る。例えば、生のポテト物質は、水中で均質化(例を挙げると、ポリトロンホモジナイザーを用いて均質化)し、時折振盪しながら室温で一定期間(例を挙げると、約1時間)維持することができる。このホモジネートを、遠心分離(例を挙げると、4000gで10分間遠心分離)して、あらゆる大きな固形物を除去することができる。得られた上清を固相抽出カートリッジ(例を挙げると、Sep-Pak Plus C-18カートリッジなどのC18カートリッジ)に充填し、10パーセントアセトニトリルで多糖物質を溶出することができる。溶出後、多糖物質を乾燥させ保管(例を挙げると、約4℃で保管)することができる。
【００２２】
本願は、本明細書において提供される1つまたは複数のポテト多糖調製物を含有する栄養補助組成物も提供する。例えば、アイダホ・ラセットポテトから得られた本明細書において提供されるポテト多糖調製物は、栄養補助組成物に製剤化され得る。
【００２３】
本明細書において提供される組成物(例を挙げると、本明細書において提供される栄養補助組成物またはポテト多糖調製物)を製剤化するために、任意の適切な量の本明細書において提供されるポテト多糖調製物が使用され得る。例えば、アルツハイマー病を有する哺乳動物内のアミロイドβレベルを減少させるための組成物を製剤化するために、本明細書において提供されるポテト多糖調製物が使用され得る。組成物は、ポテト多糖調製物のポテト多糖成分を約1mg〜約750mg(例を挙げると、約1mg〜約500mg、約1mg〜約250mg、約5mg〜約40mg、約5mg〜約30mg、約5mg〜約20mg、約6mg〜約50mg、約6mg〜約20mg、約10mg〜約25mg、または約15mg〜約20mg)含有し得る。いくつかの場合では、組成物(例えば、栄養補助組成物)は、哺乳動物(例を挙げると、ヒト)に対して1日当たり体重1kg当たり約0.05mgのポテト多糖成分〜体重1kg当たり約0.5mgのポテト多糖成分を送達するように製剤化され得る。例えば、栄養補助組成物は、ヒトが1日に1回飲み込むことで体重1kg当たり約0.05mgのポテト多糖成分〜体重1kg当たり約0.5mgのポテト多糖成分を提供することができる、単一の経口用組成物に製剤化され得る。
【００２４】
本明細書において提供される組成物(例を挙げると、本明細書において提供される栄養補助組成物またはポテト多糖調製物)を製剤化するために、任意の適切な方法が使用され得る。例えば、本明細書において記載される成分を有する組成物(例を挙げると、栄養補助組成物)を作製するために、一般的な製剤混合法および調製法が使用され得る。さらに、本明細書において提供される組成物(例を挙げると、本明細書において提供される栄養補助組成物またはポテト多糖調製物)は、任意の形態であり得る。例えば、本明細書において提供される組成物(例を挙げると、本明細書において提供される栄養補助組成物またはポテト多糖調製物)は、丸剤、カプセル剤、錠剤、ジェルキャップ、栄養シェイク飲料、栄養バー、直腸坐剤、舌下坐剤、鼻腔スプレー、吸入剤、または注射用アンプルに製剤化され得る。いくつかの場合では、本明細書において提供される組成物(例を挙げると、栄養補助組成物)は、本明細書において提供される1つまたは複数のポテト多糖調製物を単独で、またはゼラチン、セルロース、デンプン、糖、ベントナイト、乳酸、マンニトール、αリポ酸、αトコフェロール、L-アスコルビン酸塩、もしくはこれらの組み合わせを非限定的に含む他の成分と組み合わせて含み得る。
【００２５】
いくつかの場合では、本明細書において提供されるポテト多糖調製物を含有する組成物または本明細書において提供されるポテト多糖調製物は、LRP1ポリペプチド、APBB1ポリペプチド、IDEポリペプチド、GPX3ポリペプチド、GPX4ポリペプチド、またはこれらの組み合わせの発現を増加させるために使用され得る。いくつかの場合では、本明細書において提供されるポテト多糖調製物を含有する組成物または本明細書において提供されるポテト多糖調製物は、IGF1ポリペプチド、NOS2ポリペプチド、またはこれらの組み合わせの発現を低下させるために使用され得る。
【００２６】
ヒトでは、本明細書において提供されるポテト多糖調製物を含有する組成物または本明細書において提供されるポテト多糖調製物は、ヒトLRP1ポリペプチド、ヒトAPBB1ポリペプチド、ヒトIDEポリペプチド、ヒトGPX3ポリペプチド、ヒトGPX4ポリペプチド、またはこれらの組み合わせの発現を増加させるために使用され得る。いくつかの場合では、本明細書において提供されるポテト多糖調製物を含有する組成物または本明細書において提供されるポテト多糖調製物は、ヒトIGF1ポリペプチド、ヒトNOS2ポリペプチド、またはこれらの組み合わせの発現を低下させるために使用され得る。
【００２７】
ヒトLRP1ポリペプチドは、GenBank(登録商標)アクセッション番号NP_002323.2(GI番号126012562)に記されたアミノ酸配列を有し得、GenBank(登録商標)アクセッション番号NG_016444(GI番号284813599)に記された核酸配列によってコードされ得る。ヒトAPBB1ポリペプチドは、GenBank(登録商標)アクセッション番号O00213.2(GI番号12229629)に記されたアミノ酸配列を有し得、GenBank(登録商標)アクセッション番号NG_029615.1(GI番号342349296)に記された核酸配列によってコードされ得る。ヒトIDEポリペプチドは、GenBank(登録商標)アクセッション番号AAA52712.1(GI番号184556)に記されたアミノ酸配列を有し得、GenBank(登録商標)アクセッション番号NG_013012.1(GI番号260593646)に記された核酸配列によってコードされ得る。ヒトGPX3ポリペプチドは、GenBank(登録商標)アクセッション番号NP_002075.2(GI番号6006001)に記されたアミノ酸配列を有し得、GenBank(登録商標)アクセッション番号NC_000005.10(GI番号568815593)に記された核酸配列によってコードされ得る。ヒトGPX4ポリペプチドは、GenBank(登録商標)アクセッション番号AAH22071.1(GI番号34784795)に記されたアミノ酸配列を有し得、GenBank(登録商標)アクセッション番号NC_000019.10(GI番号568815579)に記された核酸配列によってコードされ得る。ヒトIGF1ポリペプチドは、GenBank(登録商標)アクセッション番号NP_001104753.1(GI番号163659899)に記されたアミノ酸配列を有し得、GenBank(登録商標)アクセッション番号NC_000012.12(GI番号568815586)に記された核酸配列によってコードされ得る。ヒトNOS2ポリペプチドは、GenBank(登録商標)アクセッション番号AAI30284.1(GI番号120660146)に記されたアミノ酸配列を有し得、GenBank(登録商標)アクセッション番号NG_011470.1(GI番号22480926)に記された核酸配列によってコードされ得る。
【００２８】
いくつかの場合では、本明細書において提供されるポテト多糖調製物または本明細書において提供される栄養補助組成物は、CNS由来アミロイドβポリペプチドの代謝に関与するポリペプチドの、脂肪組織区画内の発現を増加させるために使用され得る。例えば、本明細書において提供されるポテト多糖調製物または本明細書において提供される栄養補助組成物は、LRP1ポリペプチド、APBB1ポリペプチド、IDEポリペプチド、GPX3ポリペプチド、またはこれらの組み合わせの発現を増加させるために使用され得る。ヒトでは、本明細書において提供されるポテト多糖調製物を含有する組成物または本明細書において提供されるポテト多糖調製物は、ヒトLRP1ポリペプチド、ヒトAPBB1ポリペプチド、ヒトIDEポリペプチド、ヒトGPX3ポリペプチド、またはこれらの組み合わせの、ヒト脂肪細胞中の発現を増加させるために使用され得る。
【００２９】
いくつかの場合では、本明細書において提供されるポテト多糖調製物または本明細書において提供される栄養補助組成物は、CNS由来アミロイドβポリペプチドの代謝に関与するポリペプチドの、白血球組織区画内の発現を増加させるために使用され得る。例えば、本明細書において提供されるポテト多糖調製物または本明細書において提供される栄養補助組成物は、APBB1ポリペプチド、IDEポリペプチド、GPX4ポリペプチド、またはこれらの組み合わせの発現を増加させるために使用され得る。ヒトでは、本明細書において提供されるポテト多糖調製物を含有する組成物または本明細書において提供されるポテト多糖調製物は、ヒトAPBB1ポリペプチド、ヒトIDEポリペプチド、ヒトGPX4ポリペプチド、またはこれらの組み合わせの、ヒト白血球中の発現を増加させるために使用され得る。
【００３０】
いくつかの場合では、本明細書において提供されるポテト多糖調製物または本明細書において提供される栄養補助組成物は、酸化ストレスおよび炎症誘発経路に関与するポリペプチドの発現を増加させるかまたは低下させるために使用され得る。例えば、本明細書において提供されるポテト多糖調製物を含有する組成物または本明細書において提供されるポテト多糖調製物は、IGF1ポリペプチド、NOS2ポリペプチド、またはこれらの組み合わせの発現を低下させるために使用され得る。ヒトでは、本明細書において提供されるポテト多糖調製物を含有する組成物または本明細書において提供されるポテト多糖調製物は、IGF1ポリペプチド、NOS2ポリペプチド、またはこれらの組み合わせの、ヒト白血球中の発現を低下させるために使用され得る。
【００３１】
本願は、特許請求の範囲に記載された発明の範囲を限定するものではない次の実施例においてさらなる説明を提供する。
【実施例】
【００３２】
実施例1-ポテト多糖調製物の同定および特徴付け
ジャガイモ種のラセットポテト変種6gを、ポリトロンホモジナイザーを用いて50mLの遠心分離管において20mLの水中で均質化し、室温で1時間放置した。ホモジネートを4000rpmで10分間遠心分離した。Sep-Pak Plus C-18カートリッジを10mLの100％アセトニトリル(ACN)で活性化し、10mLの0.05％トリフルオロ酢酸水溶液(TFA水)で洗浄した。カートリッジに上清を10mL充填し、カートリッジを通過するH2Oをすべて1.5mLのエッペンドルフチューブに回収した。次に、10mLの2%ACN(0.05%TFA水中)をカラムに通過させ、溶出液を1.5mLのエッペンドルフチューブに回収した。次に、10mLの5%ACN(0.05%TFA水中)を使用してカラムを洗浄し、溶出液を1.5mLのエッペンドルフチューブに回収した。最後に、10mLの10%ACN(0.05%TFA水中)を、カラムを通過した後に1.5mLのエッペンドルフチューブに回収した。全ての画分を乾燥させ、同じACN濃度の乾燥画分を、HPLCを介したさらなる精製のために1本のチューブに1mLの0.05％TFA水で再構成するか、または細胞処理に使用するために1mLのリン酸緩衝食塩水で再構成した。
【００３３】
フォトダイオードアレイ検出器を備えたWaters 2695分離モジュールを使用して10%ACN抽出物を精製した。移動相として0.05%TFA水を用いた分離のためにXterraRP C18カラム(4.6Ｘ150mm)を使用した。各HPLCランは、0〜2.5%ACNの範囲の20分間の勾配とした。注入容量は100μLであり、流速は0.5mL/分であった。10％ACN抽出物のHPLC分画により、3.5、3.9、および12.1分で溶出した3つの主要なUV吸収ピークを得た(図1)。3.5分画分の回収およびHPLC再精製により、198.3nmで最大吸光度を示す対称ピークを得た(図2)。
【００３４】
対称性の3.5分HPLCピーク物質のさらなる化学的特徴付けを実施した。プールした3.5分HPLC画分を乾燥させ、1mLのTFA水で再構成し、タンデムLC/MS/MS(図3)およびNMR化学分析(図4および5)に供した。NMR分析では、試料をさらに分析するために、溶媒として酸化ジュウテリウム(D2O)を使用して試料の1H-NMRを行った。4.65PPMでの水のピークは溶媒で抑制され、スペクトルは数時間取得した。1.9PPMでのアセトニトリルと共に、アセトアミドが3.2PPMで検出された。1.05PPM、1.17PPM(ブロードピーク)、1.189PPM、および1.864PPMで小さなピークが検出された。プロトンNMRにおける高分子物質の1つの特徴は、1.17PPMでのシフトなどのピークのブロード化であった。NMRにおけるこれらのシフトは4.8PPMのピークを表し得、多糖などの極性の水溶性高分子を示唆した。まとめると、これらの結果から、3.5分で溶出するHPLC精製画分に含有される高分子量多糖物質の存在が確認された。
【００３５】
さらなる分析により、3.5分で溶出するHPLC精製画分は多糖物質(例を挙げると、高度に置換された複合キシログルカン物質)を含有することが確認された。多糖物質をガスクロマトグラフィー/質量分析法(GC/MS)によって分析可能にするために、その誘導体化糖フラグメントへと変換した。簡潔に記載すると、試料を濃縮して乾燥残渣にし、これをトリフルオロ酢酸を使用して加水分解した。次いでこれを水素化ホウ素ナトリウムを使用して還元し、ホウ酸塩の除去後、最終生成物を無水酢酸およびピリジンを使用してアシル化した。反応の最終生成物を、あらゆるアシル化糖を同定するためにGC/MSに直接注入した。最終分析に基づくと、より大きな糖が試料中に存在していた。トータルイオンクロマトグラム(TIC)を添付の図6に示し、適切なピーク標識を以下の表1に示す。同定した主要な成分は、太字で表示する(ピーク3、12、14、および21)。各化合物について対応するフラグメンテーションは、図7〜26に提供する。各フラグメンテーションについて、ピークフラグメンテーションパターンが上部にあり、化合物ライブラリの対応フラグメンテーションが下部にあり、両者を重ねあわせたものが中央にある。最後に、標識していないピークは、カラムブリードであるか、または化合物ライブラリとは十分な一致がなかった。
【００３６】
（表１）GC/MS結果の概要
2018509479.tif 000002
2018509479.tif 000003
2018509479.tif 000004
【００３７】
これらの結果は、より大きな糖の構成単位として働く糖モノマーの存在を実証している。これら様々な分析から、ポテト多糖調製物は高度に置換された複合キシログルカンであることが明らかになった。
【００３８】
実施例2-カンショおよび複数のポテト変種がポテト多糖物質の存在を示す
ジャガイモの複数の変種(オーガニック・イエロー、パープル、アイダホ・ラセット、およびユーコン・ゴールド)からのポテト物質6グラムおよびカンショ(サツマイモ)からの物質6グラムを、20mLの水中に抽出した。次いでその水10mLをsep-pakカートリッジに充填し、次いでカートリッジを10mLの10%ACNで溶出した。次いでACNを乾燥させ、残渣を1mLの水に溶解した。HPLCを使用して、この水100μLを注入して評価した。
【００３９】
HPLCクロマトグラムは、試験した全5種類のポテトについては最初のピーク(210nmで3.5分)の量が同じであることを実証した(図27〜31)。
【００４０】
別の実験では、茹でたパープルポテトから物質を抽出し分析した。3.5分のピークは、茹でたポテトでは減少しなかった(図32)。
【００４１】
アイダホ・ラセットポテトからの2つのプールした分画回収物から3.5分ピークを回収し、乾燥させ、100μLの水で再構成した。次いで物質をHPLCに注入して、3.5分で単一のピークを得た(図33)。まとめると、これらの結果は、ジャガイモ種およびサツマイモ種内のポテトがポテト多糖物質を含有することを実証している。
【００４２】
実施例3-ポテト多糖調製物の分析
ポテト多糖調製物を、パープルポテト3gからHPLCを使用して精製した。ポテト多糖ピークは、約5分で溶出した(図34)。このピークは、3.5分ピークを得るために使用したカラムと比較して異なるクロマトグラフィーカラム(10mm x150mm)を使用して得られた。このカラムはより大きな分取カラムであり、流量は1.5mL/分であったので、ポテト多糖の溶出時間は5分であった。
【００４３】
実施例4-Zucker糖尿病肥満ラットにおけるアミロイドβレベルを減少させるためのポテト多糖調製物の使用
アルツハイマー病を有する哺乳動物内のアミロイドβレベルを減少させる、ポテト多糖調製物の能力を評価するために、本実施例に記載のように実験動物の4グループのラットから血液、肝臓、および腹部脂肪を採取し、秤量し、検査した。
【００４４】
ポテト多糖調製物の抽出および精製
典型的には、ポテト6gをポリトロンホモジナイザーを用いて50mLの遠心分離管において20mLの水中で均質化し、室温で1時間放置した。ホモジネートを4000rpmで10分間遠心分離し、上清画分を確保した。10mLの100％アセトニトリル(ACN)に続いて10mLの0.05％トリフルオロ酢酸水溶液(TFA水)で予め活性化したSep-Pak Plus C-18カートリッジに10mLの上清画分を通して浸透させた。連続的な低ACN洗浄の後、半精製ポテト多糖調製物を10mLの0.05％TFA水中10％ACNで溶出した。溶出液画分を乾燥させ、HPLCを介したさらなる精製のために1mLの0.05％TFA水で再構成した。
【００４５】
再構成した10％ACN溶出液画分を、Waters Xterra RP C18カラム(4.6X150mm)と、フォトダイオードアレイ検出器を備えたWaters 2695分離モジュールとを利用したHPLC精製に供した。HPLC精製には、0.5mL/分の流速で0.05％TFA水において0〜2.5％のなだらかな20分間の勾配を採用した。3.5分での主要な198nm UV吸収ピークの回収およびHPLC再精製により、高精製ポテト多糖調製物を含有する対称HPLCピークを得た。精製されたHPLC画分を乾燥させ、生物学的実験で使用するためにリン酸緩衝食塩水(PBS)で再構成した。
【００４６】
ポテト多糖調製物の製剤化
精製ポテト多糖調製物(5mg/mL濃度の貯蔵液10mL)を4℃で保管した。試験用ベヒクルは、滅菌水(カタログ番号002488、Butler Schein)であった。毎週、貯蔵液を滅菌水で1:100希釈し(0.05mg/mL)、1日分のアリコートに分注した。すべてのベヒクルおよび薬剤溶液を4℃で保管し、1mL/動物(推定体重350gに基づいて0.15mg/kg用量)の量で経口胃管栄養法(PO)によって室温で毎日投与した。
【００４７】
インビボ動物モデル
Zucker糖尿病肥満(ZDF)ラットモデルを使用した(Carley and Severson, Biochim. Biophys. Acta, 1734: 112-26 (2005))。
【００４８】
実験動物
22匹の7週齢雄Zucker糖尿病肥満ラット(ZDF、コード：370)および22匹の7〜8週齢雄ZDF痩せ型ラット(コード：371)をCharles Rivers Laboratories(Wilmington、MA)から購入した。試験動物はベースライン採血前に4日間の順化期間をとり、その時点でベースライン体重に基づいて各系統から2匹の余分な動物を試験から除外した。ラットは、PhysioGenix社に到着後、1ケージ当たり２匹収容し、Innoviveケージングシステム(San Diego、CA)中で維持した。Innoviveシステムが1時間当たり80回の換気および正圧を確実に維持するようケージを毎日モニターした。Guide for Care and Use of Laboratory Animals(第8版)に従って、ラット部屋を華氏66〜75度の温度および30％〜70％の相対湿度に維持した。部屋は毎日12時間(午前7:00〜午後7:00)人工光によって照らした。動物は、絶食実験中を除き、試験期間中は水およびPurina 5008げっ歯類飼料(Waldschimdt's, Madison, WI)を自由に摂取させた。
【００４９】
投薬およびグループ分け
試験には2種類のラットを使用した：ホモ接合型肥満ZDF/ZDFおよびヘテロ接合型痩せ型同腹仔。次いでグループ内のラットをランダムに選び10匹のグループに分けた。グループ1はホモ接合型ZDF/ZDFのベヒクル給餌ラット、グループ2はホモ接合型ZDF/ZDFのポテト多糖調製物給餌、グループ3は痩せ型のベヒクル給餌ラット、およびグループ4は痩せ型のポテト多糖調製物給餌ラットであった。ベヒクルは蒸留水であり、ポテト多糖調製物は、動物1匹当たり0.05mgの投薬量で経口胃管栄養法を介して毎日毎朝与えた。用量は、通常1mLの水で与えた。ラットは、グループごとにケージに入れ、12時間明/12時間暗(午前7時〜午後7時)で維持した。試験は28日間に及び、試験の28日目に絶食時血糖データを収集した後、イソフルラン過剰投与および開胸によってすべての動物を安楽死させた。下行大静脈を介して採血した。肝臓および腹部脂肪を採取して秤量し、左外側肝葉の一部および腹部脂肪を個別の組織学的検査カセットに入れ、液体窒素中で急速冷凍した。全般的な病理学的所見を記録した。
【００５０】
RNA単離
ラット組織試料から抽出した全RNAを、RNeasyミニキット(Qiagen、Valencia、CA)を使用して単離および精製した。典型的には、100mgの組織を1.8mLのRLT溶解緩衝液(Qiagen)に再懸濁し、ポリトロンホモジナイザーを用いて30秒間均質化した。血液RNAは、PAX RNAキット(Qiagen)を使用して単離した。
【００５１】
DNAマイクロアレイ分析
DNAマイクロアレイ分析は、Agilentによって提供されたシステムを使用して実施した。アレイは、1チップ当たりアレイを4つ含んでいた(Agilent 4X44Kチップ)。全RNAを、T7プライマーを使用して逆転写(1000ng)し、シアニン-3色素を使用して標識および転写した。各アレイは、少なくとも1.65μgの標識cRNAと65℃で18時間ハイブリダイズさせた。アレイは、Agilentアレイスキャナーを使用して走査した。マイクロアレイプラットフォームは、遺伝子発現における最小で15％の変化を測定することができる。
【００５２】
リアルタイムPCR分析
DNAマイクロアレイデータセットを検証するために遺伝子発現のリアルタイムPCR分析を実施した。GAPDHを参照遺伝子として使用した。リアルタイムPCRマスターミックスは、25μLの2xユニバーサルマスターミックスと、2.5μLの20x検出セット(プライマーおよびプローブを含む)と、21.5μLの水とを含んでいた。PCRは、Applied Biosystems 7500配列検出システムで実施した。サーモサイクラーの条件は、95℃で15秒間の変性および60℃で60秒間のアニーリング/伸長を含んでいた。40サイクルのPCRの前に10分間95℃にした。反応を三つ組で実施した。Applied Biosystems 7500ソフトウェアを使用して式2-ΔΔCtを使用して遺伝子の相対量を測定した。
【００５３】
結果
ベヒクル対照ZDFラットと比べて、ZDFラット(n=10)への精製ポテト多糖調製物のインビボ投与は、表2に示されるように、脂肪組織試料において、相互作用性LRP1、APBB1、IDE、およびGPX3遺伝子の発現の、それぞれ変化倍率1.8、1.9、1.5、および2.4と規格化された統計的に有意な増強を引き起こした。同様に、ベヒクル対照ZDFラットと比べて、ZDFラット(n=7)への精製ポテト多糖調製物のインビボ投与は、表3に示されるように、血液試料において、相互作用性APBB1、IDE、およびGPX4遺伝子の発現の、それぞれ変化倍率1.7、1.5、および2.6と規格化された統計的に有意な増強を引き起こした。ベヒクル対照ZDFラットと比べて、ZDFラット(n=7)への精製ポテト多糖調製物のインビボ投与は、表4に示されるように、血液試料において、IGF1およびNOS2炎症誘発遺伝子の発現の、それぞれ変化倍率-1.7および-4.6と規格化された非常に劇的で統計的に有意な減少を引き起こした。
【００５４】
（表２）ポテト多糖調製物のインビボ投与の後の、ベヒクル対照ZDFラットと比べたZucker糖尿病肥満ラット(n=10)の脂肪組織におけるLRP1、APBB1、IDE、およびGPX3の増強した遺伝子発現。上に記載されるように、データセットはDNAマイクロアレイ分析によって導き出された。ND=遺伝子発現未検出。
2018509479.tif 000005
【００５５】
（表３）ポテト多糖調製物のインビボ投与の後の、ベヒクル対照ZDFラットと比べたZucker糖尿病肥満ラット(n=7)の血液試料におけるAPBB1、IDE、およびGPX4の増強した遺伝子発現。上に記載されるように、データセットはDNAマイクロアレイ分析によって導き出された。ND=遺伝子発現未検出。
2018509479.tif 000006
【００５６】
（表４）ポテト多糖調製物のインビボ投与の後の、ベヒクル対照ZDFラットと比べたZucker糖尿病肥満ラット(n=7)の血液試料におけるIGF1およびNOS2炎症誘発遺伝子の減少した発現。上に記載されるように、データセットはDNAマイクロアレイ分析によって導き出された。
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【００５７】
DNAマイクロアレイデータセットを検証するためにIDE発現のリアルタイムPCR分析を実施した。特に、DNAマイクロアレイ分析によって観察された脂肪組織および血液白血球試料におけるIDE遺伝子発現の増強が、リアルタイムPCR分析によって確認された。図37に示されるように、IDE遺伝子発現の増強は、脂肪組織および血液試料についてそれぞれ44.9±2.8％(n=9、p=0.02)および51.3±6.2％(n=6、p=0.04)であると決定した。それぞれのリアルタイムPCRトレースを図35および36に示す。
【００５８】
これらの結果は、ポテト多糖調製物が、アルツハイマー病を有する哺乳動物内のアミロイドβレベルを減少させるための抗神経変性剤として使用され得ることを実証している。
【００５９】
実施例5-APP SWE/PSEN1dE9マウスの認知力を改善するためのポテト多糖調製物の使用
投薬およびグループ分け
APP SWE/PSEN1dE9マウスをアルツハイマー病のモデルとして使用する。グループ内のマウスをランダムに選択し、XまたはYのグループに分ける。グループには、0mg/kg/日(対照)〜最大で0.5mg/kg/日までの範囲の投薬量でポテト多糖調製物を与える。1回量は0.15mg/kg/日である。ベヒクルは蒸留水であり、ポテト多糖調製物は、評価すべき投薬量で経口胃管栄養法を介して毎日毎朝与える。用量は、通常1mLの水で与える。マウスは、グループごとにケージに入れ、12時間明/12時間暗(午前7時〜午後7時)で維持する。試験は数か月間続ける。典型的なプロトコルは、20週齢でのポテト多糖調製物の投与から開始して30週齢に至るまで継続し、3つのグループ(動物20匹/グループ)を含む：ベヒクル、5μg/日のポテト多糖調製物、および20μg/日のポテト多糖調製物。
【００６０】
データ収集
体重は毎週記録する。ベースライン分析のために全血、血清、および血漿を0日目に採取する。終了時に全血、血清、および血漿を採取する。終了時に脳組織および血管を採取し液体窒素中で急速冷凍する。凍結組織試料を用いて全ゲノムマイクロアレイを実施する。全血は、後に行われ得る遺伝子発現分析のためにPAX RNA採血管に保存する。終了時に、動物の脳組織中のプラーク発生量を測定するための組織学的検査を実施する。血液または組織中のアミロイドβポリペプチドであるAPPまたはAP4を測定するための任意の適切な方法が使用される。試験動物の認知力は、モリス水迷路法を使用することによって評価する。
【００６１】
他の態様
本発明をその詳細な説明と共に記載したが、先の記載は例示を意図したものであり、添付の特許請求の範囲によって規定される発明の範囲を限定するものではないことが理解されるべきである。他の局面、利点、および変更は、添付の特許請求の範囲に含まれる。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７】
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【図１８】
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【図１９】
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【図２０】
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【図２１】
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【図２２】
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【図２３】
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【図２４】
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【図２５】
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【図２６】
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【図２７】
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【図２８】
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【図２９】
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【図３０】
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【図３１】
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【図３２】
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【図３３】
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【図３４】
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【図３５】
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【図３６】
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【図３７】
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【国際調査報告】
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