(57)【要約】  本発明は、５．５〜８．５のｐＨ範囲で高湿（６５〜８０重量％）および低塩（２．０重量％未満）の栄養素濃度の高い環境中で病原体および腐敗微生物の生育を阻害する方法を説明する。発酵由来抗菌ペプチドとともに有機酸またはその塩を適用することは、亜硝酸ナトリウムまたは硝酸ナトリウムなどの化学物質を必要とすることなく、胞子および栄養細胞の生育を制限するための強健な溶液を提供する。【選択図】図１
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
約６５重量％〜約８０重量％の含水量、約２．０重量％未満の含塩量、および約５．５〜約８．５のｐＨ範囲を有する食品または飲料品中の病原体および腐敗微生物の生育を制御する抗菌組成物であって、有機酸またはその塩および発酵由来抗菌ペプチドを含む、抗菌組成物。
【請求項２】
前記病原体はリステリア属である、請求項１に記載の抗菌組成物。
【請求項３】
前記病原体はクロストリジウム属を含む胞子形成体のクラスの属である、請求項１に記載の抗菌組成物。
【請求項４】
前記腐敗微生物は、ラクトバチルス属、ロイコノストック属、シュードモナス属、およびブロコトリックス属である、請求項１に記載の抗菌組成物。
【請求項５】
前記食品は、動物食肉、飲料、飼料、または農産物からなる群から選択される、請求項１に記載の抗菌組成物。
【請求項６】
前記食品または飲料品の包装条件は、真空、非真空および雰囲気を変化させた条件のうちの１つである、請求項１に記載の抗菌組成物。
【請求項７】
前記有機酸は、酢酸、乳酸、プロピオン酸、クエン酸、またはそれらの塩からなる群から選択される、請求項１に記載の抗菌組成物。
【請求項８】
前記有機酸は、少なくとも約０．２７５重量％の濃度の酢酸またはその塩である、請求項７に記載の抗菌組成物。
【請求項９】
前記酢酸またはその塩のｐＨは、約５．０〜約８．０である、請求項７に記載の組成物の抗菌薬。
【請求項１０】
前記発酵由来抗菌薬はバクテリオシンである、請求項１に記載の抗菌組成物。
【請求項１１】
前記バクテリオシンは、密接に関連する細菌の増殖を殺滅または阻害するある特定の細菌によって産生されるリボソームで合成される抗菌ペプチド、例えば、ナイシン、サカシン、ペヂオシン、ラクトシン、およびこれらの誘導体または類似体である、請求項１０に記載の抗菌組成物。
【請求項１２】
前記バクテリオシンは、約１ｐｐｍ〜約５０ｐｐｍの範囲にあるナイシンである、請求項１１に記載の抗菌組成物。
【請求項１３】
前記ナイシンのｐＨは約３．０〜約６．５である、請求項１２に記載の抗菌組成物。
【請求項１４】
前記組成物の抗菌活性は静菌性または殺菌性である、請求項１に記載の抗菌組成物。
【請求項１５】
前記組成物は粉状または液状である、請求項１に記載の抗菌組成物。
【請求項１６】
溶液中の前記組成物は約５〜約８のｐＨを有する、請求項１に記載の抗菌組成物。
【請求項１７】
先行請求項のいずれか一項に記載の抗菌薬を使用する方法であって、
約６５重量％〜約８０重量％の含水量、約５．５〜約８．５の範囲にあるｐＨ、および約２．０重量％未満の含塩量を有する食品または飲料品を提供すること、ならびに
病原体の増殖および腐敗微生物の増殖を制御するために、前記食品または飲料品を有機酸またはその塩および発酵由来抗菌ペプチドを含む抗菌組成物と接触させること
を含む、方法。
【請求項１８】
前記食品または飲料品は、合成過程または発酵過程のいずれかに由来する硝酸塩および亜硝酸塩を含有しない、請求項１７に記載の方法。
【請求項１９】
前記病原体はリステリア属である、請求項１７に記載の方法。
【請求項２０】
前記病原体はクロストリジウム属を含む胞子形成体のクラスの属である、請求項１７に記載の方法。
【請求項２１】
前記腐敗微生物は、ラクトバチルス属、ロイコノストック属、シュードモナス属、およびブロコトリックス属のいずれかである、請求項１７に記載の方法。
【請求項２２】
前記食品または飲料品は、動物食肉、飲料、飼料、または農産物からなる群から選択される、請求項１７に記載の方法。
【請求項２３】
前記食品または飲料品の包装条件は、真空、非真空および雰囲気を変化させた条件のうちの１つである、請求項１７に記載の方法。
【請求項２４】
以下の条件：１）約６５重量％〜約８０重量％の含水量、２）約５．５〜約８．５の範囲にあるｐＨ、および３）約２．０重量％未満の含塩量、を含む食品または飲料品を含む抗菌系であって、有機酸またはその塩、発酵由来ペプチドも含み、前記有機酸またはその塩および発酵由来ペプチドは、前記条件における前記食品または飲料品中の微生物の増殖を制御するよう組み合わせで操作できる、抗菌系。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は概して、病原体および腐敗微生物を阻害する組成物および方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
合成添加物または化学添加物を含んでいない食物がより健康に良いと考える消費者数は増大の一途である。これらの消費者の傾向および選好性に応じて、食品業界は、従来のように調製された製品と比較して類似の微生物安全特徴を保有しながらクリーンラベルなおよび／または人工保存料を含有しない天然製品などの種々の代替物を提供することに対する尽力に焦点を絞ってきた。
【０００３】
硝酸ナトリウムおよび亜硝酸ナトリウムの塩などの保存処理薬（「保存処理された」）は、それらが、加工食肉製品の望ましい色彩および風味に属する特徴を与えることに加えて、抗菌活性および抗酸化活性の機能的利点を提供するので、加工された食肉製造物の微生物的安全性を確保する長い歴史を有している（例えば、その全体が参照により本明細書に組み込まれるＰｅｇｇ，Ｒ．Ｂ．、およびＦ．Ｓｈａｈｉｄｉ．２０００．Ｎｉｔｒｉｔｅ  ｃｕｒｉｎｇ  ｏｆ  ｍｅａｔ：  ｔｈｅ  Ｎ−ｎｉｔｒｏｓａｍｉｎｅ  ｐｒｏｂｌｅｍ  ａｎｄ  ｎｉｔｒｉｔｅ  ａｌｔｅｒｎａｔｉｖｅｓ．Ｆｏｏｄ  ＆  Ｎｕｔｒｉｔｉｏｎ  Ｐｒｅｓｓ，Ｉｎｃ．，Ｔｒｕｍｂｕｌｌ，ＣＴを参照されたい）。
【０００４】
しかしながら、このような保存処理薬を用いて製造される加工食肉の消費は近年、がんの原因となるＮ−ニトロソ化合物および多環式芳香族炭化水素の形成のため大腸がんの危険性の増大と関連付けられている（例えば、その全体が参照により本明細書に組み込まれるＳａｎｔａｒｅｌｌｉ，Ｒ．Ｌ．，Ｐｉｅｒｒｅ，Ｆ．、およびＣｏｒｐｅｔ，Ｄ．Ｅ．２００８．Ｐｒｏｃｅｓｓｅｄ  ｍｅａｔ  ａｎｄ  ｃｏｌｏｒｅｃｔａｌ  ｃａｎｃｅｒ：  ａ  ｒｅｖｉｅｗ  ｏｆ  ｅｐｉｄｅｍｉｏｌｏｇｉｃ  ａｎｄ  ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  ｅｖｉｄｅｎｃｅ．Ｎｕｔｒｉｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｃａｎｃｅｒ，６０（２），１３１〜１４４を参照されたい）。そのうえ、国際がん研究機関（ＩＡＲＣ，ＷＨＯの支部）および米国がん研究協会（ＡＩＣＲ）は近年、ヒトに対するグループ１の発がん因子として加工食肉を分類した（例えば、その全体が参照により本明細書に組み込まれるＢｏｕｖａｒｄら．２０１５（国際がん研究機関モノグラフワーキンググループの代理），Ｔｈｅ  Ｃａｒｃｉｎｏｇｅｎｉｃｉｔｙ  ｏｆ  ｃｏｎｓｕｍｐｔｉｏｎ  ｏｆ  ｒｅｄ  ａｎｄ  ｐｒｏｃｅｓｓｅｄ  ｍｅａｔ．Ｔｈｅ  Ｌａｎｃｅｔ  Ｏｎｃｏｌｏｇｙ．オンライン公開：２０１５年１０月２６日を参照されたい）。
【０００５】
合成のまたは天然のいずれかの源に由来する保存処理薬を用いずに調製される食肉製品（「保存処理されていない」または「硝酸塩もしくは亜硝酸塩を含有しない」）は、それらの抗菌性の特質により、病原体の増殖をより起こしやすい。リステリア・モノサイトゲネス（Ｌｉｓｔｅｒｉａ  ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓ）属およびクロストリジウム属は、「保存処理されていない」または「硝酸塩もしくは亜硝酸塩を含有しない」製品において特に懸念される２つの病原体である。リステリア・モノサイトゲネスは、冷蔵温度でさえ増殖でき、したがってすぐに食べられる（ＲＴＥ）肉製品および家禽製品の保存期間の延長において食品安全性の危険を有する可能性のある低温菌である。加工食肉および加工家禽と関係するクロストリジウム・ボツリヌム（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｂｏｔｕｌｉｎｕｍ）およびクロストリジウム・パーフリンジェンス（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｐｅｒｆｒｉｎｇｅｎｓ）などの胞子形成腸内毒素原性属のクロストリジウムも、特に懸念される。ＲＴＥ加工食肉製品を製造する上で適用される熱は栄養細胞を阻害するのに十分であるが、胞子は失活しないであろうし、むしろ出芽して栄養細胞へと発達し得る。
【０００６】
腐敗生命体もまた、生の（新鮮な）および保存処理されていない両方のＲＴＥ冷蔵食肉および家禽の保存期間を短縮する上で重要な役割を担っている。例えば、シュードモナスおよびラクトバチルスの属は主として、異臭、変色、ガスおよび粘り気のような望ましくない欠陥の原因である。
【０００７】
加えて、近年では、食品中のナトリウム含有量を削減する動きがある（例えば、２０１５年のＤｉｅｔａｒｙ  Ｇｕｉｄｅｌｉｎｅｓ  Ａｄｖｉｓｏｒｙ  Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅの科学報告書．Ａｄｖｉｓｏｒｙ  Ｒｅｐｏｒｔ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｓｅｃｒｅｔａｒｙ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ  ａｎｄ  Ｈｕｍａｎ  Ｓｅｒｖｉｃｅｓ  ａｎｄ  ｔｈｅ  Ｓｅｃｒｅｔａｒｙ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒｅを参照されたい）。ナトリウムは有効な保存料であり、ナトリウムの削減によって、製造物は病原体および腐敗微生物増殖のより高い危険性に対してより易損性になり、したがって、製品の保存期間は結果的により短くなる（例えば、その全体が参照により本明細書に組み込まれるＤｅｓｍｏｎｄ，Ｅ．２００６．Ｒｅｄｕｃｉｎｇ  ｓａｌｔ：  Ａ  ｃｈａｌｌｅｎｇｅ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  ｍｅａｔ  ｉｎｄｕｓｔｒｙ，Ｍｅａｔ  Ｓｃｉｅｎｃｅ，７４（２００６），ｐｐ.１８８〜１９６頁を参照されたい）。
【０００８】
保存処理された製品において、およそ５０ｐｐｍの低レベルの亜硝酸ナトリウムは、加工された食肉製造物におけるクロストリジウム属の阻害に十分である（例えば、その全体が参照により本明細書に組み込まれるＨｕｓｔａｄ，Ｇ．Ｏ．、Ｊ．Ｇ．Ｃｅｒｖｅｎｙ、Ｈ．Ｔｒｅｎｋ、Ｒ．Ｈ．Ｄｅｉｂｅｌ、Ｄ．Ａ．Ｋａｕｔｔｅｒ、Ｔ．Ｆａｚｉｏ、Ｒ．Ｗ．Ｊｏｈｎｓｔｏｎ、およびＯ．Ｅ．Ｋｏｌａｒｉ．１９７３．Ｅｆｆｅｃｔ  ｏｆ  ｓｏｄｉｕｍ  ｎｉｔｒｉｔｅ  ａｎｄ  ｓｏｄｉｕｍ  ｎｉｔｒａｔｅ  ｏｎ  ｂｏｔｕｌｉｎａｌ  ｔｏｘｉｎ  ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｎｉｔｒｏｓａｍｉｎｅ  ｆｏｒｍａｔｉｏｎ  ｉｎ  ｗｉｅｎｅｒｓ．Ａｐｐｌ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．２６：  ２２〜２６を参照されたい）。
【０００９】
それにもかかわらず、補助抗菌薬の添加なしで使用する場合１５６ｐｐｍの亜硝酸ナトリウムという最大許容レベルは、リステリア・モノサイトゲネスの阻害に不十分である（例えば、その全体が参照により本明細書に組み込まれるＦａｒｂｅｒ，Ｊ．Ｍ．、Ｒ．Ｃ．ＭｃＫｅｌｌａｒ、およびＷ．Ｈ．Ｒｏｓｓ．１９９５．Ｍｏｄｅｌｌｉｎｇ  ｔｈｅ  ｅｆｆｅｃｔｓ  ｏｆ  ｖａｒｉｏｕｓ  ｐａｒａｍｅｔｅｒｓ  ｏｎ  ｔｈｅ  ｇｒｏｗｔｈ  ｏｆ  Ｌｉｓｔｅｒｉａ  ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓ  ｏｎ  ｌｉｖｅｒ  ｐａｔｅ．Ｆｏｏｄ  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．１２：  ４４７〜４５３を参照されたい）。
【００１０】
類似のまたは匹敵する結果が、先に列挙した例において説明したような亜硝酸ナトリウムと等価の類似の濃度を送達するために使用される硝酸塩または亜硝酸塩（合成法または発酵法のいずれかに由来）の代替源の場合にリステリア属およびクロストリジウム属の阻害において期待される。
【００１１】
先行研究は、ＲＴＥ加工食肉への応用におけるこれらの病原体の阻害について有機酸またはその塩を研究してきた。特に、複数の研究は、ＲＴＥ食肉製品およびＲＴＥ家禽製品における許容され得る感覚属性を提供すると期待される濃度（１％未満）で使用する場合の酢酸またはその塩単独では、シチメンチョウ胸肉中のＣ．パーフリンジェンスを阻害できなかったことを示唆している（例えば、その全体が参照により本明細書に組み込まれるＪｕｎｅｊａ，Ｖ．Ｋ．、およびＨ．Ｔｈｉｐｐａｒｅｄｄｉ．２００４．Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ  ｅｆｆｅｃｔｓ  ｏｆ  ｏｒｇａｎｉｃ  ａｃｉｄ  ｓａｌｔｓ  ｏｎ  ｇｒｏｗｔｈ  ｏｆ  Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｐｅｒｆｒｉｎｇｅｎｓ  ｆｒｏｍ  ｓｐｏｒｅ  ｉｎｏｃｕｌａ  ｄｕｒｉｎｇ  ｃｈｉｌｌｉｎｇ  ｏｆ  ｍａｒｉｎａｔｅｄ  ｇｒｏｕｎｄ  ｔｕｒｋｅｙ  ｂｒｅａｓｔ．Ｉｎｔ．Ｊ．Ｆｏｏｄ  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．９３：  １５５〜１６３を参照されたい）。
【００１２】
さらなる研究は、０．３〜０．５％の二酢酸ナトリウムが、単独でまたは追加の抗菌薬とともに使用される場合、亜硝酸ナトリウムを用いておよび用いずに製造したシチメンチョウスラリー中のリステリア・モノサイトゲネスを制御する上で有効であることを実証した（例えば、その全体が参照により本明細書に組み込まれるＳｃｈｌｙｔｅｒ，Ｊ．Ｈ．、Ｇｌａｓｓ，Ｋ．Ａ．、Ｌｏｅｆｆｅｌｈｏｌｚ，Ｊ．、Ｄｅｇｎａｎ，Ａ．Ｊ．、Ｌｕｃｈａｎｓｋｙ，Ｊ．Ｂ．，１９９３．Ｔｈｅ  ｅｆｆｅｃｔｓ  ｏｆ  ｄｉａｃｅｔａｔｅ  ｗｉｔｈ  ｎｉｔｒｉｔｅ，ｌａｃｔａｔｅ，ｏｒ  ｐｅｄｉｏｃｉｎ  ｏｎ  ｔｈｅ  ｖｉａｂｉｌｉｔｙ  ｏｆ  Ｌｉｓｔｅｒｉａ  ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓ  ｉｎ  ｔｕｒｋｅｙ  ｓｌｕｒｒｉｅｓ．Ｉｎｔ．Ｊ．Ｆｏｏｄ  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．１９，２７１〜２８１を参照されたい）。しかしながら、示唆されるレベルは米国における食肉製品および家禽製品中の最大許容レベル（製品製造物の０．２５％、ＦＳＩＳ７１２０リスト）よりも高かったので、最終製品に許容し得ない風味を与えると予想される。さらに、他の試みは、リステリア・モノサイトゲネスを制御するためにペジオシンと組み合わせたプロピオン酸またはその塩の使用を実証した。それにもかかわらず、今日まで、公知の方法は、保存処理されていない食肉製品および家禽製品における主たる病原体の危険性の１つであるクロストリジウム属の制御に対処できていない。
【００１３】
有機酸との組み合わせでナイシンを利用することは公知ではあるが、これらの系の効能は乳化剤を必要とし、かつこれらの個々の成分の連続的な添加に依存した。さらに、これらの成分は、保存処理されていない、高湿および低ナトリウムの加工された食肉を表す、本明細書で指定される条件下で、懸念の病原体および腐敗微生物を阻害する効能を実証しなかった（例えば、その全体が参照により本明細書に組み込まれるＪａｃｏｂｕｓらに対する米国特許出願公開第２０１３／００１２４２８Ａ１号を参照されたい）。
【００１４】
その全体が参照により本明細書に組み込まれるＨｅｎｓｏｎらに対する米国特許第６５０９０５０Ｂ１号は、ブロスモデルにおけるリステリア・モノサイトゲネスおよび保存処理された食肉の系における腐敗微生物を制御する上での、有機酸またはその塩と組み合わせたポリリン酸の使用を実証した。当該技術分野で公知のように、リン酸類は、湿気を保有するためおよび収量を改善するために食肉の応用において典型的に使用される。しかしながら、低ナトリウムの保存処理されていない食肉の系における病原体の阻害についてこのアプローチの効能の証拠はなかった。そのうえ、当該文書に説明されたリン酸類のレベルは、米国において現に許容されているものよりも高い（０．５％ＦＳＩＳ７１２０リスト）。
【００１５】
今日まで、亜硝酸ナトリウムを用いずに製造されたＲＴＥ冷蔵食肉におけるリステリア属およびクロストリジウム属の同時阻害は報告されていない。高湿（６５〜８０重量％）、低塩（２重量％未満）、およびｐＨ範囲５．５〜８．５において許容され得る風味を有する「保存処理されていない」または「亜硝酸塩を含有しない」系で、食品由来の病原体および腐敗微生物に対する効能を実証できる方法を有することが望まれる。
【００１６】
それゆえ、食品中のナトリウムレベルを低下させることに加えて化学的保存料をクリーンラベル選択肢と置き換えることの累積的な効果は、保存期間を妥協するよう食品製造元に強いてきた。特に、上記のような保存処理されていない食肉の応用などの、微生物の増殖に好ましい高湿および低ナトリウムの食品は、危険下にある。亜硝酸ナトリウムを用いて製造される従来の加工食肉製品および加工家禽製品中の食品由来の病原体および腐敗微生物を制御するいくつかのやり方（方法および抗菌薬）はあるが、このような妥協を排除し、亜硝酸ナトリウムを用いずに（保存処理されていないでまたは亜硝酸塩を含有しないで）製造されるクリーンラベル製品の安全性を高めるための方法に対する当該技術分野での需要がある。多様なマトリックスおよび応用において広範な抗菌特性を有する１つの溶液を用いて病原体および腐敗微生物を阻害する方法を実証することも好ましい。
【００１７】
本発明は、このような阻害方法を提供する。本発明のこれらのおよび他の利点は、追加の本発明の特徴と共に、本明細書に提供される本発明の説明から明らかであろう。
【発明の概要】
【００１８】
本明細書に説明される本発明は、有効量の抗菌組成物の適用によって、５．５〜８．５のｐＨ範囲にある６５〜８０重量％の特徴的な高湿および低塩（２．０重量％未満）の培地中で病原体および腐敗生命体の増殖を阻害する方法に関連し、従来の保存料に対する強健な代替物を供給する。当該抗菌組成物は、有機酸またはその塩および発酵由来抗菌ペプチドを含んでおり、いかなる乳化剤およびまたはキレート剤も含有しない。当該抗菌組成物は、加工のすべての段階で適用できるが、加工食肉へ適用される場合、事前混合および事前調理に制限されない。当該抗菌組成物は、噴霧、直接添加、注入、ポンピング転回、マッサージなどによって適用することもできる。
【００１９】
提供される方法は、すぐに食べられる食品、特に食肉および家禽、ならびに洗浄剤、動物飼料、化粧品、および医薬品を含むがこれらに限定しない系における病原体ならびに腐敗微生物の増殖を抑制できる。
【００２０】
有機酸は、酢酸、クエン酸もしくはプロピオン酸、またはこれらの塩から選択される。有機酸の塩によって概して意味されるのは、有機酸のナトリウム塩、カリウム塩、カルシウム塩およびマグネシウム塩を含むがこれらに限定されない有機酸の一価または二価の金属塩である。発酵由来抗菌薬は、バクテリオシンまたはその類似体もしくは誘導体から構成され、それにより、バクテリオシンは、密接に関連する細菌の増殖を殺滅または阻害するある特定の細菌によって産生される、リボソームで合成される抗菌ペプチドである。
【００２１】
この抗菌介入は、真空条件、非真空条件、および雰囲気を変化させた条件などの種々の包装条件を含む食物系および非食物系へ適用される。
【００２２】
本発明の１つの例示的な実施形態において、約６５重量％〜約８０重量％の含水量、約２．０重量％未満の含塩量を有する、および約５．５〜約８．５のｐＨ範囲を有する食品または飲料品における病原体および腐敗微生物の生育を制御する抗菌組成物が提供される。当該組成物には、有機酸またはその塩および発酵由来抗菌ペプチドが含まれる。上述の病原体は、リステリア属であり得、および／またはクロストリジウム属を含むあるクラスの胞子形成体の属であり得る。腐敗微生物は、ラクトバチルス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｉ）、ロイコノストック（Ｌｅｕｃｏｎｏｓｔｏｃ）、シュードモナス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）、およびブロコトリックス（Ｂｒｏｃｈｏｔｈｒｉｘ）の属であり得る。
【００２３】
当該食品は、動物食肉、飲料、飼料、または農産物からなる群から選択され得る。食品または飲料品の包装条件は、真空条件、非真空条件および雰囲気を変化させた条件のうちの１つであり得る。
【００２４】
本態様による従属的な実施形態において、当該有機酸は、酢酸、乳酸、プロピオン酸、クエン酸、またはこれらの塩からなる群から選択される。１つの具体的な非限定例として、当該有機酸は、少なくとも約０．２７５重量％の濃度の酢酸またはその塩である。酢酸またはその塩のｐＨは、約５．０〜約８．０である。
【００２５】
本態様による別の従属的な実施形態において、当該発酵由来抗菌薬はバクテリオシンである。バクテリオシンは、密接に関連する細菌の増殖を殺滅または阻害する、ある特定の細菌によって産生される、リボソームで合成される抗菌ペプチドであり、例えば、ナイシン、サカシン、ペヂオシン、ラクトシン、およびこれらの誘導体または類似体である。１つの具体的な非限定例として、バクトシンは、約５ｐｐｍ〜約５０ｐｐｍの範囲のナイシンである。ナイシンのｐＨは、約３．０〜約６．５である。
【００２６】
本発明による別の従属的な態様において、当該組成物の抗菌活性は、静菌性または殺菌性である。当該組成物は、粉状または液状であり得る。溶液中にある場合、当該組成物は、約５〜約８のｐＨを有する。
【００２７】
本発明の別の例示的な実施形態において、食品または飲料品における病原体および腐敗微生物の生育を制御するための方法が提供される。当該方法には、約６５重量％〜約８０重量％の含水量、約５．５〜約８．５の範囲にあるｐＨ、および約２．０重量％未満の含塩量を有する食品または飲料品を提供することが含まれる。当該方法には、病原体の増殖および腐敗微生物の増殖を制御するために、当該食品または飲料品を、有機酸またはその塩および発酵由来抗菌ペプチドを含む抗菌組成物と接触させることも含まれる。
【００２８】
従属的な実施形態において、当該食品または飲料品を提供する段階には、合成方法または発酵方法のいずれかに由来する硝酸塩および亜硝酸塩を含有しない食品または飲料品を提供することが含まれる。当該病原体は、リステリア属であり得る。当該病原体はまた、クロストリジウム属を含むあるクラスの胞子形成体の属であり得る。当該腐敗微生物は、ラクトバチルス、ロイコノストック、シュードモナス、およびブロコトリックスの属のうちのいずれかである。当該食品または飲料品は、動物の食肉、飲料、飼料、または農産物からなる群から選択される。当該食品または飲料品の包装条件は、真空条件、非真空条件および雰囲気を変化させた条件のうちの１つである。
【００２９】
さらに別の例示的な実施形態において、本発明は、次の条件、すなわち、１）約６５重量％〜約８０重量％の含水量、２）約５．５〜約８．５の範囲にあるｐＨ、および３）約２．０重量％未満の含塩量、を含む食品または飲料品を含む抗菌系を提供し、当該系は、有機酸またはその塩、発酵由来ペプチドも含み、そこで当該有機酸またはその塩および当該発酵由来ペプチドは、当該条件において当該食品または当該飲料品における微生物増殖を制御するために適用される。
【００３０】
本発明の他の態様、目的および利点は、添付の図面とともに理解される、以下の詳細な説明からより明らかとなるであろう。
【００３１】
本明細書に組み込まれおよび本明細書の一部を形成する添付の図面は、本発明のいくつかの態様を示し、本明細書とともに、本発明の原理を説明するよう機能する。当該図面において、以下がある。
【図面の簡単な説明】
【００３２】
【図１】表面接種された、１４週間４℃にて真空包装中で保存された保存処理されていない惣菜型シチメンチョウ薄片上でのＬ．モノサイトゲネスの生育の阻害を示す。
【図２】１３週間４℃での真空包装条件下の、保存処理されていない惣菜型シチメンチョウ薄片上の表面接種後のＬ．モノサイトゲネスに対する、ペプチド成分の単独のおよび有機酸またはその塩との組み合わせでの抗菌効能を実証する。
【図３】表面接種された、１１週間４℃にて非真空包装条件下で保存された保存処理されていない惣菜型シチメンチョウ薄片上でのＬ．モノサイトゲネスの増殖を示す。
【図４】７週間４℃にて真空包装条件で保存された保存処理されていない惣菜型シチメンチョウ薄片中の乳酸細菌に対する抗菌適用の効能を明らかにする。
【図５】８週間４℃にて真空包装条件で保存処理された惣菜型シチメンチョウ薄片上の表面接種後のＬ．モノサイトゲネスに対する抗菌適用の効能を実証する。
【図６】３５日間４℃での新鮮鶏胸フィレ肉中の腐敗微生物（総プレート計数）に対する有機酸またはその塩および抗菌ペプチドの抗菌効能を実証する。
【図７】３５日間４℃での新鮮鶏胸フィレ肉中のシュードモナス属の増殖に対する有機酸またはその塩および抗菌ペプチドの抗菌効能を実証する。
【発明を実施するための形態】
【００３３】
本発明はある特定の好ましい実施形態と関連して説明されるだろうが、本発明を当該実施形態に制限する意図はない。対照的に、当該意図は、添付の特許請求の範囲によって定義されるような本発明の精神および範囲内に含まれるような代替物、改変物および等価物をすべて網羅することである。
【００３４】
本発明の詳細な説明
保存処理されていない、高湿および低ナトリウムの系は、病原体および腐敗細菌の生育にとってより好ましい生息環境であり、それゆえ、公衆衛生の危険性および加工機器に対する経済的な損失を最小限にするために効率的な抗菌薬（複数可）を用いて形成されるべきである。
【００３５】
説明される方法における抗菌製剤は、有機酸またはその塩および抗菌ペプチドからなり、それにより当該有機酸は好ましくは少なくとも０．２７５重量％の包含レベルの酢酸であり、当該抗菌ペプチドはナイシンであり、１〜５０ｐｐｍ、好ましくは７〜３０ｐｐｍの範囲の活性を送達する量で使用される。胞子形成体の毒素産生を遅延させることに加えて、当該抗菌組成物は静菌性であり、いくつかの場合において、増殖性病原体および腐敗細菌を制御する殺菌性である。結果的に、当該抗菌組成物は、製品の安全性を高め、保存期間を延長できる。
【００３６】
抗菌効能を達成するのに必要なナイシンレベルを、ペディオコッカス・ペントサセウス（Ｐｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｅｎｔｏｓａｃｅｕｓ）ＦＢＢ６３を指標株として使用する、すでに説明されている寒天内拡散アッセイの変更を実施することによって算出した（例えば、Ｊｏｚａｌａ，Ａ．Ｆ．、Ｓｉｌｖａ，Ｄ．Ｐ．、Ｖｉｃｅｎｔｅ，Ａ，Ａ、Ｔｅｉｘｅｉｒａ，Ｊ．Ａ．、Ｊｕｎｉｏｒ，Ａ．Ｐ．、およびＰｅｎｎａ，Ｔ．Ｃ．Ｖ．２０１１．Ｐｒｏｃｅｓｓｉｎｇ  ｏｆ  ｂｙｐｒｏｄｕｃｔｓ  ｔｏ  ｉｍｐｒｏｖｅ  ｎｉｓｉｎ  ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ  ｂｙ  Ｌａｃｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｌａｃｔｉｓ．  Ａｆｒ．Ｊ  Ｂｉｏｔｅｃｈ  １０：  １４９２０〜１４９２５を参照されたい）。発酵由来ナイシンの活性を、商業的に公知の標準試料のナイサプリンと比較した。こうして得られる変換因子（１任意単位（ＡＵ）／ｇ＝１．０４×国際単位（ＩＵ）／ｇ）を、抗菌効果に必要とされる百万分率（ｐｐｍ）でのレベルを算出する上で使用した（１ｐｐｍ＝４０ＩＵ）。
【００３７】
概略された好ましい範囲内での当該成分の各々の種々の比を含む組成物は、組成物Ａ〜Ｊとして順番に呼ばれる。当該組成物において、重量％による参照は、当該組成物が導入される食品を考慮する重量％を意味する。
【００３８】
実施例１．系における高湿および低ナトリウムを有する保存処理されていない食肉中のＬ．モノサイトゲネスの生育を阻害する方法
【００３９】
本実施形態は、高湿および低ナトリウムの系、例えば、すぐに食べられる保存処理されていない惣菜型のシチメンチョウ製品におけるＬ．モノサイトゲネスのような病原体の生育を制御する抗菌組成物を説明する。
【００４０】
保存処理されていない惣菜型のシチメンチョウ（７０％シチメンチョウ胸肉、２５．６％水、２％デンプン、１％糖、１％塩、０．４％リン酸ナトリウム、０％亜硝酸ナトリウム）を、医薬品および医薬部外品の製造管理および品質管理の基準の下で調製した。各処理について適切なレベルの抗菌薬を非食肉成分とともに添加し、チャブへと詰め、７３．８℃の最終温度へと加熱した。最終食品組成物の湿度は７２％〜７６％の範囲にあり、５６ｇの１人前あたり３５０〜４５０ｍｇの低ナトリウムレベルおよび６．１〜６．４のｐＨ値を有していた。
【００４１】
当該食品を薄片にし（腐敗微生物の混入を防止するために清潔にした薄片化装置を用いて２２〜２８ｇ／片）、本明細書に記載の試験において使用するまで４℃で保存した。加熱した薄片に、ＦＳＬ−Ｃ１−１０９（血清型４ｂ）株、ＬＭ１０１Ｍ（４ｂ）株、ＬＭ３１０（４ｂ）株、ＬＭ１３２（１／２ａ）株、およびＬＭ１０８Ｍ（１／２ｂ）株を含む３ｌｏｇＣＦＵ／ｇの５株混合のＬ．モノサイトゲネスを表面接種し、真空包装（１００ｇ／包装）し、本試験の間４℃で保存した。Ｌ．モノサイトゲネスの数を、接種した試料から三つ組で数え上げた。各時点で、接種した処理物を滅菌処理したＢｕｔｔｅｒｆｉｅｌｄの緩衝液中で均質化し、Ｏｘｆｏｒｄ変法寒天上に播種した（３５℃、４８時間）。初日から２．０ｌｏｇＣＦＵ／ｍｌ超を保有する処理物は、腐っているとみなし、本試験から外した。
【００４２】
好ましい実施形態において、抗菌薬の適用は、４℃での１４週間の保存の間にＬ．モノサイトゲネスの増殖の阻害を実証した。処理は、（ｉ）抗菌薬を有していない対照、（ｉｉ）２．０重量％での組成物Ｂ、（ｉｉｉ）２．７重量％での組成物Ｃ、および（ｉｖ）１５６ｐｐｍの浸潤する亜硝酸ナトリウムおよび３．８重量％の乳酸−二酢酸カリウムで製剤化された対照（当該業界で典型的に使用される配合物）を含んだ。本結果を図１に表す。
【００４３】
接種されていないシチメンンチョウ惣菜片を官能検査へ供して、５名の訓練されたパネリストによって知覚される全体的な許容性を決定した。検査試料を、抗菌薬および亜硝酸ナトリウムを含有しない対照と比較し、対照と類似である記述子（塩味の、甘い、酸っぱい、シチメンチョウの風味）を用いて、当該パネリストによって許容され得るとみなした。
【００４４】
別の好ましい実施形態において、緩衝された酢および抗菌ペプチドは、４℃で１３週間の真空包装下で、保存処理されていない惣菜型のシチメンチョウ片におけるＬ．モノサイトゲネスの生育を制御する上で、抗菌ペプチド単独よりも大きな効能を実証した。処理は、（ｉ）抗菌薬を有していない対照、（ｉｉ）抗菌ペプチド単独を含有している１．２重量％での組成物Ａ、（ｉｉｉ）３．２重量％での組成物Ｂ、および（ｉｖ）３．９重量％での組成物Ｃを含んだ。本結果を図２に表す。
【００４５】
別の好ましい実施形態において、保存処理されていない惣菜型シチメンチョウ材料は、非真空条件で包装されおよび４℃で１１週間保存された複数片におけるＬ．モノサイトゲネスの生育を支援しなかった。処理は、（ｉ）抗菌薬を有していない対照、（ｉｉ）１．８５重量％での組成物Ｄ、（ｉｉｉ）２．９５重量％での組成物Ｅ、および（ｉｖ）３．１５重量％での組成物Ｆを含んだ。本結果を図３に表す。
【００４６】
実施例２．系における高湿および低ナトリウムを有する保存処理されていない食肉中の乳酸菌の増殖などの腐敗微生物を阻害する方法
【００４７】
本実施形態は、腐敗細菌、特に乳酸菌を制御するための抗菌組成物を組み合わせる方法の効能を説明する。本実験は、実施例１において説明されるような高湿および低ナトリウム条件を有し４℃で７週間の保存試験へ供される保存処理されていない食肉モデルにおいて実施した。保存処理されていない惣菜型シチメンチョウの３つの材料を、実施例１において記載された手順の通り調製した。処理は、（ｉ）抗菌薬を有していない対照、（ｉｉ）２．０重量％での組成物Ｂ、および（ｉｉｉ）２．３６重量％での組成物Ｇを含んだ。本明細書で説明される加熱後の食品における背景細菌叢の初期数は、取り扱いおよび薄片化の間の混入状況を反映する。乳酸菌のプレート計数を、ブロモクレゾール紫標識薬を含むＡＰＴ寒天上に接種されていない二つ組の試料を播種することによって測定した。プレートを２５℃で４８時間インキュベートした。本結果を図４に表す。
【００４８】
これらの結果は、緩衝された酢および抗菌ペプチドの組み合わせが、乳酸および抗菌ペプチドの組み合わせよりも、負荷のかかった特異的な条件下で腐敗細菌を制御する上でより有効であることを示している。
【００４９】
実施例３．クロストリジウム・スポロゲネス（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｓｐｏｒｏｇｅｎｅｓ）の増殖を制御する方法
【００５０】
Ｃ．スポロゲネスＰＡ３６７９に対する抗菌活性を、先行発明がＣ．ボツリヌムについての無毒の代理物であると立証した変法加熱食肉培地を用いるブロス試験において実証した。処理は、（ｉ）抗菌薬を有していない対照、（ｉｉ）２．０重量％での組成物Ｂ、および（ｉｉｉ）２．７重量％での組成物Ｃを含んだ。すべての処理で、２．０ｌｏｇＣＦＵ／ｇを目標に８５℃で５分間熱ショックを与えておいた胞子を接種し、２５℃で３〜４日間嫌気的にインキュベートした。Ｃ．スポロゲネスの増殖を、ＭｃＬｕｎｇ変法寒天上に適切な希釈物を播種することおよび３５〜３７℃で３日間のインキュベーションによってモニターした。各処理を二つ組でアッセイした。本結果を表１に示す。
【００５１】
【表１】
2018516543.tif 000003
【００５２】
表１に表すデータを基にして当業者によって容易に認識されるように、抗菌ペプチドと組み合わせた、緩衝された酢の適用は、Ｃ．スポロゲネスの生育を防止する上で有効である。
【００５３】
実施例４．系における高湿および低ナトリウムを有する保存処理されていない食肉モデル（従来の使用レベルよりも低レベルの保存処理薬を用いる）中のＬ．モノサイトゲネス増殖物の生育を阻害する方法
【００５４】
本実施形態は、複数の系で色彩および風味の属性に寄与するのに必要とされる最少量の保存処理薬を用いて製造された食肉モデルにおけるＬ．モノサイトゲネスなどの病原体の生育を制御する抗菌組成物を使用する方法を説明する。例えば、市販の加工された食肉製造物において、最大１５６ｐｐｍの浸潤する亜硝酸ナトリウムを、抗菌薬とともに使用して、冷蔵保存にて典型的な９０日間の保存期間を達成する。好ましい実施形態において、浸潤する亜硝酸ナトリウムのレベルは、説明される抗菌組成物との組み合わせで２０ｐｐｍ亜硝酸ナトリウムと同程度まで低く顕著に低下し、同じ保存期間延長を達成した。
【００５５】
惣菜型の保存処理されたシチメンンチョウ食品（７０％シチメンンチョウ胸肉、２５．６％水、２％デンプン、１％糖、１％塩、および０．４％リン酸ナトリウム）を、医薬品および医薬部外品の製造管理および品質管理の基準の下で調製した。各処理について適切なレベルの抗菌薬を、非食肉成分とともに添加し、チャブへと詰め、７３．８℃の最終温度へと加熱した。最終食品組成物の組成は、高湿（７６％水分）で、低ナトリウム（３４０ｍｇのナトリウム／１人前５６ｇ）およびほぼ中性のｐＨ（６．１〜６．３）であることがわかった。加熱した薄片を接種し、真空包装し、４℃で保存して、実施例１において説明したようなＬ．モノサイトゲネスの制御についての効能を評価した。処理は、（ｉ）重量による８０ｐｐｍの亜硝酸ナトリウム、（ｉｉ）重量による４０ｐｐｍの亜硝酸ナトリウム＋２．０重量％での組成物Ｈ、および（ｉｉｉ）重量による２０ｐｐｍの亜硝酸ナトリウム＋２．７重量％での組成物Ｉを含んだ。本結果を図５に表す。
【００５６】
接種していないシチメンンチョウ惣菜片を官能検査へ供し、５名の訓練されたパネリストによって知覚されるような全体的な許容性を決定した。試料を、追加の抗菌薬を有していない８０ｐｐｍの浸潤する亜硝酸ナトリウム（重量による）を含有する対照試料と比較し、対照と類似である記述子（保存処理されている、いい香りのする、甘い、ピリッと塩辛い、酸っぱい、シチメンチョウの風味）を用いて、パネリストによって許容され得るとみなした。
【００５７】
図５に示される結果は、保存処理薬（亜硝酸ナトリウム）と組み合わせた、緩衝された酢および抗菌ペプチドの配合物が、保存処理薬単独よりも有効であることを実証する。さらに、当該抗菌組成物は、微生物的質を損なうことなく、食肉製品の保存処理薬（亜硝酸ナトリウム）のレベルを低下させる可能性を有している。
【００５８】
類似の利点が、合成源または天然源のいずれかの硝酸ナトリウムまたは亜硝酸ナトリウムを製造物中に使用する場合に、病原体および腐敗生命体を阻害する上で期待される。
【００５９】
実施例５．保存処理されていないニワトリの生地中のクロストリジウム・ボツリヌムによる毒素産生を防止または遅延させる方法
【００６０】
本実施形態は、接種された、保存処理されていないニワトリ食肉生地におけるクロストリジウム・ボツリヌムによって産生される毒素（１００ｃｆｕ／ｇ）を防止または遅延させる方法を説明する。保存処理されていない（亜硝酸ナトリウム非含有の）ニワトリ食肉生地を、医薬品および医薬部外品の製造管理および品質管理の基準の下で調製した。製造物を、ニワトリ食肉（７０％）、水（２３％）、遺伝子改変したトウモロコシデンプン（２．１％）、塩（１．５％）、カラギーナン（０．２％）、およびリン酸ナトリウム（０．４％）を用いて調製した。処理は、本試験において、（ｉ）抗菌薬を有していない対照、（ｉｉ）２．０重量％での組成物Ｂ、（ｉｉｉ）２．７重量％での組成物Ｃを含んだ。事前に挽いておいた食肉（１／８”）をボウルチョッパーの中で非食肉成分と混合して、食肉生地を調製し、袋に入れ、平らにして、使用まで冷凍保存した。
【００６１】
検査のため、凍結した生地を解凍し、８０℃で１０分間熱ショックを与えておいたＣ．ボツリヌム胞子を接種した。２つの個々のバッチの食肉生地に、タンパク質分解性（３３Ａ、３６Ａ、６２Ａ、７７Ａ、５３Ｂ、１１３Ｂ、２１３Ｂ、ＡＣＣ１Ｂ）株または非タンパク質分解性（Ｋ８５、Ｋ８６、Ｋ８７、Ｋ８８、Ｋ８９）株のいずれかを接種し、水浴を用いて袋の中で７３．８℃の内部温度に加熱した。試料を冷却し、２６．６℃で２日間インキュベートした。毒素産生を検討するために、試料を２４時間および４８時間で取り出し、抽出物を採取し、マウスへ投与して毒素の存在を検証した。非タンパク質分解性株のみを接種した別のバッチの食肉生地を７℃で最長８週間インキュベートした。週間隔で試料を採取し、毒素活性化のためトリプシン処理し（ｔｒｙｓｐｓｉｎｉｚｅｄ）、毒素のバイオアッセイのために抽出物をマウスへ投与した。
【００６２】
クロストリジウム培養物を増殖および収集し、マウス毒素バイオアッセイを実施する上で、標準的なプロトコルに従った（ＦＤＡ  Ｂａｃｔｅｒｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ  Ｍａｎｕａｌ  ｆｏｒ  Ｆｏｏｄｓ，第１７章，２０１５）。簡潔には、各観察時に、接種した試料を秤量し等容積のゲル−リン酸緩衝液を添加し（ｐＨ６．２に調整）、冷蔵下で遠心分離して、毒素アッセイのための上清水溶液を収集した。この混合物をミリポアフィルタで濾過して、マウスの非特異的死亡を回避した。非タンパク質分解性株を接種した試料については、トリプシン処理を濾過の後に実施して、毒素を活性化した。各観察時に各検査試料あたりこのように収集した食肉抽出物濾液を希釈し、一対のマウスへ腹腔内注射を介して投与した（０．５ｍｌ）。マウスを４８時間観察し、Ｃ．ボツリヌム中毒に関する症状および死亡特徴について検討した。食肉抽出物投与後の死亡は、毒素産生の推定的な証拠である。さらなる確認を、事前にインキュベートした（３７℃で３０分間）抗毒素調製物を２匹の追加のマウスに負荷することによって達成した（保護された対照）。注射液中に存在する化学物質または外傷などの非特異的理由による死亡を無視し、負荷を反復して食肉試料中の毒素の存在を確認した。本試験の結果を表２よび表３に示す。本結果は、抗菌組成物を用いて調製した製造物が、タンパク質分解性または非タンパク質分解性Ｃ．ボツリヌム株のカクテルを接種した試料において３０℃でインキュベーションの２４時間まで、毒素形成を遅延する上で有効であったことを実証する。さらに、抗菌組成物は、７℃で９週間インキュベートした非タンパク質分解性試料を接種した試料において毒素形成を遅延する上でも有効であった。
【表２】
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【表３】
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【００６３】
実施例６．新鮮なニワトリ胸フィレ肉中の腐敗微生物に対する抗菌組成物の効能
【００６４】
骨なし、皮なしの、保存処理されていないニワトリ胸フィレ肉を真空崩壊させて、食肉ブロックに基づいて１２％の即席マリネを得た。マリネしたニワトリ胸フィレ肉を、腐敗するまで（６．０ｌｏｇ  ｃｆｕ／ｇ以上）４℃でプラスチック製の袋の中で（真空なしで密封）保存した。試料を０、７、１４、２１、２８、および３５日目に二つ組で播種した。２５ｇの試料を各処理袋から無菌条件下で採取し、０．１％のペプトン水中で希釈し（１：２）、１分間均質化した。試料をトリプシン処理したダイズ寒天およびシュードモナス寒天基材の上に播種した。処理は、（ｉ）抗菌薬を有していない対照、（ｉｉ）２．０重量％ｓでの組成物Ｂ、および（ｉｉｉ）１．６重量％での組成物Ｊを含んだ。
【００６５】
図６および図７に表す結果は、抗菌薬のないマリネしたニワトリ胸フィレ肉が１４日目までに腐った（総プレート計数６．０ｌｏｇ  ｃｆｕ／ｇ超）のに対し、組成物Ｂ（１．６重量％）または組成物Ｊ（２．０重量％）を用いて製造したニワトリ胸フィレ肉は、冷蔵保存で３５日に保存期間を延長したことを実証する。
【００６６】
本明細書で引用される公開物、特許出願、および特許を含む参考文献はすべて、各参考文献が個々におよび具体的に、参照により組み込まれているよう示されおよび本明細書でその全体において明らかにしたかのような場合と同じ程度まで、参照により本明細書により組み込まれる。
【００６７】
本発明を説明する文脈における（特に後続の特許請求の範囲の文脈における）「ａ」および「ａｎ」および「ｔｈｅ」という用語ならびに類似の指示物の使用は、本明細書において別段の記載がない限りまたは文脈により明確な矛盾がない限り、単数形および複数形の両方を網羅するよう解釈されることになっている。「を含んでいる（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」、「を有している」、「を含んでいる（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」、および「含有している」という用語は、別段の記載がない限り、オープンエンドの用語として解釈されることになっている（すなわち、「を含んでいるが、これ（ら）に限定しない」という意味）。本明細書における値の範囲の列挙は単に、本明細書において別段の記載がない限り、当該範囲内に収まる各個別の値を個々に指す簡略的な方法として機能するよう意図されており、各個別の値は、本明細書でここに列挙されたかのように、本明細書へと組み込まれる。本明細書に説明される方法はすべて、本明細書において別段の記載がない限り、または文脈によって明確に矛盾していない限り、何らかの適切な順序で実施することができる。本明細書に提供されるいかなるおよびすべての例の使用、または例示的な言語（例えば、「のような」）は、本発明をより良好に明らかにするよう意図されており、別段の請求がない限り、本発明の範囲に制限を与えるものではない。本明細書における言語は、本発明の実施に対して必須であるのと同じくらい、請求されていないいかなる要素も示さないと解釈されるべきではない。
【００６８】
本発明の好ましい実施形態は、本発明を実施するために本発明者が知っている最良の様式を含み、本明細書において説明される。それらの好ましい実施形態の変更は、上述の明細書を読み取る際に当業者に明らかとなり得る。本発明者は、当業者が適切であるような変更を採用することを期待しており、本発明者らは、本明細書で具体的に説明したもの以外を本発明のために実施されるよう意図する。したがって、本発明には、適用可能な法律によって認可されるような、添付の特許請求の範囲において列挙される主題の変更および等価物をすべて含む。その上、上述の要素に関して考えられ得る変更すべてにおける当該要素のいかなる組み合わせも、本明細書で別段の記載がない限り、または文脈によって明らかに矛盾しない限り、本発明によって包含される。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【国際調査報告】
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