(57)【要約】  抗ＰＤ−Ｌ１抗体を開示する。こうした抗体を含む薬学的組成物、およびこうした抗体を用いて、Ｔ細胞消耗またはＴ細胞アネルギーを示すＴ細胞において、Ｔ細胞機能を回復する方法もまた開示する。
2018508475.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ＰＤ−Ｌ１に結合可能であり、場合によって単離されており、アミノ酸配列ｉ）〜ｖｉ）：
【化１】
2018508475.tif 000018
を有する抗体または抗原結合性断片、あるいは配列（ｉ）〜（ｖｉ）の１またはそれより多くにおいて、１または２または３アミノ酸が別のアミノ酸で置換されているその変異体である、式中、Ｘ１＝存在しないまたはＧ、Ｘ２＝ＧまたはＳ、Ｘ３＝ＧまたはＹ、Ｘ４＝Ｓ、ＧまたはＨ、Ｘ５＝ＹまたはＧ、Ｘ６＝Ｇ、ＮまたはＹ、Ｘ７＝ＬまたはＹ、Ｘ８＝ＹまたはＧ、Ｘ９＝ＩまたはＹである、前記抗体または抗原結合性断片。
【請求項２】
ＨＣ−ＣＤＲ３が、ＳＧＨＧＹＳＹＧＡＦＤＹ（配列番号２５）、ＧＧＳＹＧＳＬＹＡＦＤＩ（配列番号２３）、またはＧＧＹＧＧＮＳＬＹＡＦＤＩ（配列番号２４）の１つである、請求項１の抗体または抗原結合性断片。
【請求項３】
以下のＣＤＲ：
【化２】
2018508475.tif 000019
を取り込む少なくとも１つの軽鎖可変領域を有する、請求項１または請求項２の抗体または抗原結合性断片。
【請求項４】
以下のＣＤＲ：
【化３】
2018508475.tif 000020
を取り込む少なくとも１つの軽鎖可変領域を有する、請求項１または請求項２の抗体または抗原結合性断片。
【請求項５】
以下のＣＤＲ：
【化４】
2018508475.tif 000021
を取り込む少なくとも１つの軽鎖可変領域を有する、請求項１または請求項２の抗体または抗原結合性断片。
【請求項６】
以下のＣＤＲ：
【化５】
2018508475.tif 000022
を取り込む少なくとも１つの軽鎖可変領域を有する、請求項１または請求項２の抗体または抗原結合性断片。
【請求項７】
以下のＣＤＲ：
【化６】
2018508475.tif 000023
を取り込む少なくとも１つの重鎖可変領域を有する、式中、Ｘ１＝存在しないまたはＧ、Ｘ２＝ＧまたはＳ、Ｘ３＝ＧまたはＹ、Ｘ４＝Ｓ、ＧまたはＨ、Ｘ５＝ＹまたはＧ、Ｘ６＝Ｇ、ＮまたはＹ、Ｘ７＝ＬまたはＹ、Ｘ８＝ＹまたはＧ、Ｘ９＝ＩまたはＹである、請求項１〜６のいずれか一項の抗体または抗原結合性断片。
【請求項８】
以下のＣＤＲ：
【化７】
2018508475.tif 000024
を取り込む少なくとも１つの重鎖可変領域を有する、請求項１〜７のいずれか一項の抗体または抗原結合性断片。
【請求項９】
以下のＣＤＲ：
【化８】
2018508475.tif 000025
を取り込む少なくとも１つの重鎖可変領域を有する、請求項１〜７のいずれか一項の抗体または抗原結合性断片。
【請求項１０】
以下のＣＤＲ：
【化９】
2018508475.tif 000026
を取り込む少なくとも１つの重鎖可変領域を有する、請求項１〜７のいずれか一項の抗体または抗原結合性断片。
【請求項１１】
ヒトまたはネズミＰＤ−Ｌ１に特異的に結合する、請求項１〜１０のいずれか一項記載の抗体または抗原結合性断片。
【請求項１２】
ヒトＰＤ−１およびヒトＰＤ−Ｌ１の間の相互作用を阻害するか、またはネズミＰＤ−１およびネズミＰＤ−Ｌ１の間の相互作用を阻害する、先行する請求項いずれか記載の抗体または抗原結合性断片。
【請求項１３】
Ｔ細胞消耗またはＴ細胞アネルギーを示すＴ細胞において、Ｔ細胞機能を回復させるために有効である、請求項１〜１２のいずれか一項記載の抗体または抗原結合性断片。
【請求項１４】
ＰＤ−Ｌ１に結合する、請求項１〜１３のいずれか一項記載の、抗体または抗原結合性断片を含む、場合によって単離された、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ複合体。
【請求項１５】
ＰＤ−Ｌ１に結合可能であり、以下のＣＤＲ：
【化１０】
2018508475.tif 000027
を含む、単離軽鎖可変領域ポリペプチド。
【請求項１６】
ＰＤ−Ｌ１に結合可能であり、以下のＣＤＲ：
【化１１】
2018508475.tif 000028
を含む、式中、Ｘ１＝存在しないまたはＧ、Ｘ２＝ＧまたはＳ、Ｘ３＝ＧまたはＹ、Ｘ４＝Ｓ、ＧまたはＨ、Ｘ５＝ＹまたはＧ、Ｘ６＝Ｇ、ＮまたはＹ、Ｘ７＝ＬまたはＹ、Ｘ８＝ＹまたはＧ、Ｘ９＝ＩまたはＹである、単離重鎖可変領域ポリペプチド。
【請求項１７】
ＨＣ−ＣＤＲ３が、ＳＧＨＧＹＳＹＧＡＦＤＹ（配列番号２５）、ＧＧＳＹＧＳＬＹＡＦＤＩ（配列番号２３）、またはＧＧＹＧＧＮＳＬＹＡＦＤＩ（配列番号２４）の１つである、請求項１６の単離重鎖可変領域ポリペプチド。
【請求項１８】
請求項１６または１７記載の重鎖可変領域ポリペプチドと組み合わされた、請求項１５の単離軽鎖可変領域ポリペプチド。
【請求項１９】
ＰＤ−Ｌ１に結合可能であり、重鎖および軽鎖可変領域配列を含む抗体または抗原結合性断片であって：
重鎖が、それぞれ、ＨＣ−ＣＤＲ１：ＳＹＡＩＳ（配列番号２１）、ＨＣ−ＣＤＲ２  ＲＩＩＰＩＬＧＩＡＮＹＡＱＫＦＱＧ（配列番号２２）、ＨＣ−ＣＤＲ３：Ｘ１Ｘ２Ｘ３Ｘ４Ｘ５Ｘ６ＳＸ７Ｘ８ＡＦＤＸ９（配列番号２６）に、少なくとも８５％の全体の配列同一性を有する、ＨＣ−ＣＤＲ１、ＨＣ−ＣＤＲ２、ＨＣ−ＣＤＲ３を含み、式中、Ｘ１＝存在しないまたはＧ、Ｘ２＝ＧまたはＳ、Ｘ３＝ＧまたはＹ、Ｘ４＝Ｓ、ＧまたはＨ、Ｘ５＝ＹまたはＧ、Ｘ６＝Ｇ、ＮまたはＹ、Ｘ７＝ＬまたはＹ、Ｘ８＝ＹまたはＧ、Ｘ９＝ＩまたはＹである、そして
軽鎖が、ＬＣ−ＣＤＲ１：ＴＧＳＳＳＮＩＧＡＧＹＤＶＨ（配列番号１８）、ＳＧＲＳＳＮＩＡＳＨＤＶＦ（配列番号９）、ＧＧＤＮＩＧＲＫＳＶＨ（配列番号１２）、またはＳＧＳＳＳＮＩＧＮＮＹＶＳ（配列番号１５）の１つ；ＬＣ−ＣＤＲ２：ＧＮＳＮＲＰＳ（配列番号１９）、ＥＴＮＫＲＰＷ（配列番号１０）、ＤＤＧＤＲＰＳ（配列番号１３）、またはＤＮＮＥＲＬＳ（配列番号１６）の１つ；ＬＣ−ＣＤＲ３：ＱＳＹＤＳＳＬＳＧＳＹＶＶ（配列番号２０）、ＧＡＷＤＳＧＬＴＧＭＬ（配列番号１１）、ＱＡＷＤＳＴＶＶ（配列番号１４）、またはＧＴＷＤＳＳＬＳＶＶＶ（配列番号１７）の１つに、少なくとも８５％の全体の配列同一性を有する、ＬＣ−ＣＤＲ１、ＬＣ−ＣＤＲ２、ＬＣ−ＣＤＲ３を含む、前記抗体または抗原結合性断片。
【請求項２０】
ＰＤ−Ｌ１に結合可能であり、場合によって単離された、重鎖および軽鎖可変領域配列を含む抗体または抗原結合性断片であって：
重鎖配列が、配列番号８、３５、５、６または７の重鎖配列（図２）に少なくとも８５％の配列同一性を有し、そして
軽鎖配列が、軽鎖配列：配列番号４、１、２または３（図１）に少なくとも８５％の配列同一性を有する
前記抗体または抗原結合性断片。
【請求項２１】
ＰＤ−Ｌ１に結合可能であり、二重特異性抗体または二重特異性抗原結合性断片である、場合によって単離された、抗体または抗原結合性断片であって、（ｉ）請求項１〜２０のいずれか一項記載の抗原結合性断片またはポリペプチド、および（ｉｉ）ＰＤ−Ｌ１以外のターゲットタンパク質への結合が可能な抗原結合性断片を含む、前記抗体または抗原結合性断片。
【請求項２２】
ＰＤ−Ｌ１以外のターゲットタンパク質に結合可能である、抗原結合性断片が、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＩＣＯＳ、ＣＤ４０、ＣＤ１２２、ＯＸ４０、４−１ＢＢ、ＧＩＴＲ、ＬＡＧ−３、Ｂ７−Ｈ３、Ｂ７−Ｈ４、ＢＴＬＡ、ＣＴＬＡ−４、Ａ２ＡＲ、ＶＩＳＴＡ、ＴＩＭ−３、ＰＤ−１、ＫＩＲ、ＨＥＲ−２、ＨＥＲ−３、ＥＧＦＲ、ＥｐＣＡＭ、ＣＤ３０、ＣＤ３３、ＣＤ３８、ＣＤ２０、ＣＤ２４、ＣＤ９０、ＣＤ１５、ＣＤ５２、ＣＡ−１２５、ＣＤ３４、ＣＡ−１５−３、ＣＡ−１９−９、ＣＥＡ、ＣＤ９９、ＣＤ１１７、ＣＤ３１、ＣＤ４４、ＣＤ１２３、ＣＤ１３３、ＡＢＣＢ５およびＣＤ４５の１つに結合可能である、請求項２１の抗体または抗原結合性断片。
【請求項２３】
請求項１〜２２のいずれか一項の抗体または抗原結合性断片またはポリペプチド、および少なくとも１つの薬学的に許容されうるキャリアーを含む、組成物。
【請求項２４】
請求項１〜２２のいずれか一項の抗体または抗原結合性断片またはポリペプチドをコードする、単離核酸。
【請求項２５】
請求項２４の核酸を含むベクター。
【請求項２６】
請求項２５のベクターを含む宿主細胞。
【請求項２７】
請求項１〜２２のいずれか一項の抗体または抗原結合性断片またはポリペプチドを作製するための方法であって、抗体または抗原結合性断片またはポリペプチドをコードするベクターを発現するために適切な条件下で、請求項２６の宿主細胞を培養し、そして抗体または抗原結合性断片またはポリペプチドを回収する工程を含む、前記方法。
【請求項２８】
療法または医学的治療法において使用するための、請求項１〜２２のいずれか一項記載の抗体、抗原結合性断片またはポリペプチド。
【請求項２９】
Ｔ細胞機能不全障害の治療において使用するための、請求項１〜２２のいずれか一項記載の抗体、抗原結合性断片またはポリペプチド。
【請求項３０】
癌の治療において使用するための、請求項１〜２２のいずれか一項記載の抗体、抗原結合性断片またはポリペプチド。
【請求項３１】
感染性疾患の治療において使用するための、請求項１〜２２のいずれか一項記載の抗体、抗原結合性断片またはポリペプチド。
【請求項３２】
Ｔ細胞機能不全障害の治療において使用するための薬剤製造における、請求項１〜２２のいずれか一項記載の抗体、抗原結合性断片またはポリペプチドの使用。
【請求項３３】
癌の治療において使用するための薬剤製造における、請求項１〜２２のいずれか一項記載の抗体、抗原結合性断片またはポリペプチドの使用。
【請求項３４】
感染性疾患の治療において使用するための薬剤製造における、請求項１〜２２のいずれか一項記載の抗体、抗原結合性断片またはポリペプチドの使用。
【請求項３５】
請求項１〜２２のいずれか一項記載の抗体、抗原結合性断片またはポリペプチドを、機能不全Ｔ細胞に投与する工程を含む、Ｔ細胞機能を増進させる、ｉｎ  ｖｉｔｒｏまたはｉｎ  ｖｉｖｏの方法。
【請求項３６】
Ｔ細胞機能不全障害を患う患者に、請求項１〜２２のいずれか一項記載の抗体、抗原結合性断片またはポリペプチドを投与する工程を含む、Ｔ細胞機能不全障害を治療する方法。
【請求項３７】
癌を患う患者に、請求項１〜２２のいずれか一項記載の抗体、抗原結合性断片またはポリペプチドを投与する工程を含む、癌を治療する方法。
【請求項３８】
感染性疾患を患う患者に、請求項１〜２２のいずれか一項記載の抗体、抗原結合性断片またはポリペプチドを投与する工程を含む、感染性疾患を治療する方法。
【請求項３９】
ＰＤ−Ｌ１を含有するかまたは含有すると推測される試料を、請求項１〜２２のいずれか一項記載の抗体または抗原結合性断片と接触させ、そして抗体または抗原結合性断片およびＰＤ−Ｌ１の複合体の形成を検出する工程を含む方法。
【請求項４０】
被験体における疾患または状態を診断する方法であって、ｉｎ  ｖｉｔｒｏで、被験体由来の試料を、請求項１〜２２のいずれか一項記載の抗体または抗原結合性断片と接触させ、そして抗体または抗原結合性断片およびＰＤ−Ｌ１の複合体の形成を検出する工程を含む、前記方法。
【請求項４１】
ＰＤ−１またはＰＤ−Ｌ１ターゲティング剤での治療のため、被験体を選択するかまたは層別化する方法であって、ｉｎ  ｖｉｔｒｏで、被験体由来の試料を、請求項１〜２２のいずれか一項記載の抗体または抗原結合性断片と接触させ、そして抗体または抗原結合性断片およびＰＤ−Ｌ１の複合体の形成を検出する工程を含む、前記方法。
【請求項４２】
ｉｎ  ｖｉｔｒｏでＰＤ−Ｌ１を検出するための、請求項１〜２２のいずれか一項記載の抗体または抗原結合性断片の使用。
【請求項４３】
ｉｎ  ｖｉｔｒｏ診断剤としての、請求項１〜２２のいずれか一項記載の抗体または抗原結合性断片の使用。
【請求項４４】
Ｔ細胞を、請求項１〜２２のいずれか一項記載の抗体、抗原結合性断片またはポリペプチドと、ｉｎ  ｖｉｔｒｏまたはｅｘ  ｖｉｖｏで接触させる、Ｔ細胞集団を拡大するための方法。
【請求項４５】
Ｔ細胞機能不全障害を有する被験体の治療法であって、Ｔ細胞集団を拡大させるように、請求項１〜２２のいずれか一項記載の抗体、抗原結合性断片またはポリペプチドの存在下で、被験体由来の血液試料から得たＴ細胞を培養し、拡大されたＴ細胞を収集し、そして治療の必要がある被験体に、拡大されたＴ細胞を投与する工程を含む、前記方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、プログラム細胞死リガンド１（ＰＤ−Ｌ１）に結合する抗体に関する。
【背景技術】
【０００２】
Ｔ細胞消耗（ｅｘｈａｕｓｔｉｏｎ）は多くの慢性感染および癌の間に生じるＴ細胞機能不全状態である。該状態は、劣ったＴ細胞エフェクター機能、阻害性受容体の持続的な発現、および機能するエフェクターまたは記憶Ｔ細胞のものとは異なる転写状態によって定義される。消耗は、感染および腫瘍の最適な制御を防止する（Ｅ  Ｊｏｈｎ  Ｗｈｅｒｒｙ，  Ｎａｔｕｒｅ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  １２，  ４９２−４９９（２０１１））。
【０００３】
Ｔ細胞消耗は、段階的および進行性のＴ細胞機能喪失によって特徴付けられる。消耗は、慢性リンパ球性脈絡髄膜炎ウイルス感染中によく定義され、そして一般的に、Ｂ型肝炎ウイルス、Ｃ型肝炎ウイルスおよびヒト免疫不全ウイルス感染を含む多くの慢性感染後に、ならびに腫瘍転移中に起こる、抗原持続状態下で発展する。表現型的および機能的欠陥の漸次的変化が現れる可能性があり、そしてこれらの細胞は原型エフェクター、記憶およびまたアネルギー性Ｔ細胞とは異なるため、消耗は均一に機能しなくなった状態ではない。消耗Ｔ細胞は、最も一般的には、高度慢性感染中に出現し、そして抗原刺激のレベルおよび期間は該プロセスの決定的な決定要因である（Ｙｉら，  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  ２０１０年４月；  １２９（４）：４７４−４８１）。
【０００４】
循環ヒト腫瘍特異的ＣＤ８＋  Ｔ細胞は、細胞傷害性である可能性があり、そしてｉｎ  ｖｉｖｏでサイトカインを産生する可能性があることから、自己および腫瘍特異的ヒトＣＤ８＋  Ｔ細胞が、ペプチド、不完全フロイントアジュバント（ＩＦＡ）、およびＣｐＧでのワクチン接種などの強力な免疫療法後、または養子移入後に、機能的反応能に到達する可能性もあることが示される。末梢血と対照的に、腫瘍部位に浸潤するＴ細胞は、しばしば機能的に不全であり、異常な低サイトカイン産生および阻害性受容体ＰＤ−１、ＣＴＬＡ−４、およびＴＩＭ−３の上方制御を示す。黒色腫組織から単離されたＴ細胞は、短期ｉｎ  ｖｉｔｒｏ培養後にＩＦＮ−γ産生を回復しうるため、機能的不全は可逆性である。しかし、依然として、この機能障害が、さらなる分子経路、おそらくは動物モデルにおいて定義されるようなＴ細胞消耗またはアネルギーと似た経路を伴うかどうかを決定する必要がある（Ｂａｉｔｓｃｈら，  Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｉｎｖｅｓｔ．  ２０１１；１２１（６）：２３５０−２３６０）。
【０００５】
プログラム細胞死１（ＰＤ−１）は、ＣＤ２７９とも称され、ヒトにおいてはＰＤＣＤ１遺伝子によってコードされる、Ｉ型膜タンパク質である。該タンパク質は２つのリガンド、ＰＤ−Ｌ１およびＰＤ−Ｌ２を有する。ＰＤ−Ｌ１はまた、ＣＤ２７４またはＢ７相同体１（Ｂ７−Ｈ１）とも称され、ヒトにおいてはＣＤ２７４遺伝子によってコードされる、４０ｋＤａ  Ｉ型膜貫通タンパク質である。
【０００６】
ＰＤ−１は、活性化Ｔ細胞表面上で発現され、そしてＰＤ−Ｌ１は、抗原提示細胞（ＡＰＣ）、例えば樹状細胞およびマクロファージの表面上で発現される。ＰＤ−Ｌ１はまた、乳癌、肺癌、膀胱癌、頭頸部癌、および他の癌を含む、いくつかの癌において過剰発現される。ＰＤ−Ｌ１またはＰＤ−Ｌ２がＰＤ−１に結合する際、阻害性シグナルがＴ細胞内に伝達され、これはサイトカイン産生を減少させ、そしてＴ細胞増殖を抑制する。
【０００７】
ＰＤ−１経路は、Ｔ細胞消耗の重要な免疫阻害仲介因子である。ＰＤ−１は、自己免疫を制限するため、感染に対する炎症性反応の間、末梢中のすでに活性化されたＴ細胞の活性を制限するよう機能する。この経路の遮断は、Ｔ細胞活性化、拡大、およびエフェクター機能増進を導きうる。こうしたものとして、ＰＤ−１はＴ細胞反応を負に制御する。ＰＤ−１は、慢性疾患状態における消耗Ｔ細胞のマーカーとして同定されてきており、そしてＰＤ−１：ＰＤ−Ｌ１相互作用の遮断は、Ｔ細胞機能を部分的に回復することが示されてきている（Ｓａｋｕｉｓｈｉら，  ＪＥＭ  Ｖｏｌ．  ２０７，  ２０１０年９月２７日，  ｐｐ２１８７−２１９４）。
【０００８】
ＰＤ−１経路を阻害することによる持続性感染および癌の治療のための方法および組成物が、ＷＯ  ２００６／１３３３９６に開示される。ＰＤ−Ｌ１に対するヒトモノクローナル抗体は、ＷＯ  ２００７／００５８７４、ＵＳ２０１１／２０９２３０、ＵＳ８，２１７，１４９およびＷＯ  ２０１４／０５５８９７に記載される。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００９】
【特許文献１】ＷＯ  ２００６／１３３３９６
【特許文献２】ＷＯ  ２００７／００５８７４
【特許文献３】ＵＳ２０１１／２０９２３０
【特許文献４】ＵＳ８，２１７，１４９
【特許文献５】ＷＯ  ２０１４／０５５８９７
【非特許文献】
【００１０】
【非特許文献１】Ｅ  Ｊｏｈｎ  Ｗｈｅｒｒｙ，  Ｎａｔｕｒｅ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  １２，  ４９２−４９９（２０１１）
【非特許文献２】Ｙｉら，  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  ２０１０年４月；  １２９（４）：４７４−４８１
【非特許文献３】Ｂａｉｔｓｃｈら，  Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｉｎｖｅｓｔ．  ２０１１；１２１（６）：２３５０−２３６０
【非特許文献４】Ｓａｋｕｉｓｈｉら，  ＪＥＭ  Ｖｏｌ．  ２０７，  ２０１０年９月２７日，  ｐｐ２１８７−２１９４
【発明の概要】
【００１１】
本発明は、ＰＤ−Ｌ１に結合する抗体または抗原結合性断片に関する。重鎖および軽鎖ポリペプチドもまた開示する。抗体、抗原結合性断片およびポリペプチドは、単離および／または精製型で提供されてもよく、そして研究、療法および診断において使用するために適した組成物に処方されてもよい。
【００１２】
いくつかの態様において、抗体または抗原結合性断片またはポリペプチドは、Ｔ細胞消耗またはＴ細胞アネルギーを示すＴ細胞、例えばＣＤ８＋  Ｔ細胞において、Ｔ細胞機能を回復させるために有効であってもよい。
【００１３】
本発明の１つの側面において、抗体または抗原結合性断片を提供し、抗体のアミノ酸配列は、アミノ酸配列ｉ）〜ｉｉｉ）、またはアミノ酸配列ｉｖ）〜ｖｉ）、または好ましくはアミノ酸配列ｉ）〜ｖｉ）：
【００１４】
【化１】
2018508475.tif 000003
【００１５】
あるいは配列（ｉ）〜（ｖｉ）の１またはそれより多くにおいて、１または２または３アミノ酸が別のアミノ酸で置換されているその変異体を含んでもよく、式中、Ｘ１＝存在しない（すなわちアミノ酸なし）またはＧ、Ｘ２＝ＧまたはＳ、Ｘ３＝ＧまたはＹ、Ｘ４＝Ｓ、ＧまたはＨ、Ｘ５＝ＹまたはＧ、Ｘ６＝Ｇ、ＮまたはＹ、Ｘ７＝ＬまたはＹ、Ｘ８＝ＹまたはＧ、Ｘ９＝ＩまたはＹである。
【００１６】
いくつかの態様において、ＨＣ−ＣＤＲ３は、ＧＧＳＹＧＳＬＹＡＦＤＩ（配列番号２３）、ＧＧＹＧＧＮＳＬＹＡＦＤＩ（配列番号２４）、またはＳＧＨＧＹＳＹＧＡＦＤＹ（配列番号２５）の１つである。
【００１７】
いくつかの態様において、抗体または抗原結合性断片は、以下のＣＤＲ：
【００１８】
【化２】
2018508475.tif 000004
【００１９】
を取り込む少なくとも１つの軽鎖可変領域を含んでもよい。
いくつかの態様において、抗体または抗原結合性断片は、以下のＣＤＲ：
【００２０】
【化３】
2018508475.tif 000005
【００２１】
を取り込む少なくとも１つの軽鎖可変領域を含んでもよい。
いくつかの態様において、抗体または抗原結合性断片は、以下のＣＤＲ：
【００２２】
【化４】
2018508475.tif 000006
【００２３】
を取り込む少なくとも１つの軽鎖可変領域を含んでもよい。
いくつかの態様において、抗体または抗原結合性断片は、以下のＣＤＲ：
【００２４】
【化５】
2018508475.tif 000007
【００２５】
を取り込む少なくとも１つの軽鎖可変領域を含んでもよい。
いくつかの態様において、抗体または抗原結合性断片は、以下のＣＤＲ：
【００２６】
【化６】
2018508475.tif 000008
【００２７】
を取り込む少なくとも１つの重鎖可変領域を含んでもよく、式中、Ｘ１＝存在しないまたはＧ、Ｘ２＝ＧまたはＳ、Ｘ３＝ＧまたはＹ、Ｘ４＝Ｓ、ＧまたはＨ、Ｘ５＝ＹまたはＧ、Ｘ６＝Ｇ、ＮまたはＹ、Ｘ７＝ＬまたはＹ、Ｘ８＝ＹまたはＧ、Ｘ９＝ＩまたはＹである。
【００２８】
いくつかの態様において、抗体または抗原結合性断片は、以下のＣＤＲ：
【００２９】
【化７】
2018508475.tif 000009
【００３０】
を取り込む少なくとも１つの重鎖可変領域を含んでもよい。
いくつかの態様において、抗体または抗原結合性断片は、以下のＣＤＲ：
【００３１】
【化８】
2018508475.tif 000010
【００３２】
を取り込む少なくとも１つの重鎖可変領域を含んでもよい。
いくつかの態様において、抗体または抗原結合性断片は、以下のＣＤＲ：
【００３３】
【化９】
2018508475.tif 000011
【００３４】
を取り込む少なくとも１つの重鎖可変領域を含んでもよい。
抗体は、図１または３に示すＣＤＲを取り込む少なくとも１つの軽鎖可変領域を含んでもよい。抗体は、図２または３に示すＣＤＲを取り込む少なくとも１つの重鎖可変領域を含んでもよい。
【００３５】
抗体は、配列番号１、９、１０、１１；もしくは２、１２、１３、１４；もしくは３、１５、１６、１７；もしくは４、１８、１９、２０の１つのアミノ酸配列、あるいは図１に示すアミノ酸配列の１つ、あるいは配列番号１、９、１０、１１；もしくは２、１２、１３、１４；もしくは３、１５、１６、１７；もしくは４、１８、１９、２０の１つに、または図１に示すＶＬ鎖アミノ酸配列のアミノ酸配列に、少なくとも７０％、より好ましくは少なくとも７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の１つの配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、少なくとも１つの軽鎖可変領域（ＶＬ）を含んでもよい。
【００３６】
抗体は、配列番号５、２１、２２、２３；もしくは６、２１、２２、２３；もしくは７、２１、２２、２４；もしくは８、２１、２２、２５；もしくは３５、２１、２２、２５の１つのアミノ酸配列、あるいは図２に示すアミノ酸配列の１つ、あるいは配列番号５、２１、２２、２３；もしくは６、２１、２２、２３；もしくは７、２１、２２、２４；もしくは８、２１、２２、２５；もしくは３５、２１、２２、２５の１つに、または図２に示すＶＨ鎖アミノ酸配列のアミノ酸配列に、少なくとも７０％、より好ましくは少なくとも７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の１つの配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、少なくとも１つの重鎖可変領域（ＶＨ）を含んでもよい。
【００３７】
抗体は、配列番号１、９、１０、１１；もしくは２、１２、１３、１４；もしくは３、１５、１６、１７；もしくは４、１８、１９、２０の１つのアミノ酸配列、あるいは図１に示すアミノ酸配列の１つ（あるいは配列番号１、９、１０、１１；もしくは２、１２、１３、１４；もしくは３、１５、１６、１７；もしくは４、１８、１９、２０の１つに、または図１に示すＶＬ鎖アミノ酸配列のアミノ酸配列の１つに、少なくとも７０％、より好ましくは少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の１つの配列同一性を有するアミノ酸配列）を含む少なくとも１つの軽鎖可変領域、および配列番号５、２１、２２、２３；もしくは６、２１、２２、２３；もしくは７、２１、２２、２４；もしくは８、２１、２２、２５；もしくは３５、２１、２２、２５の１つのアミノ酸配列、あるいは図２に示すアミノ酸配列の１つ（あるいは配列番号５、２１、２２、２３；もしくは６、２１、２２、２３；もしくは７、２１、２２、２４；もしくは８、２１、２２、２５；もしくは３５、２１、２２、２５の１つに、または図２に示すＶＨ鎖アミノ酸配列のアミノ酸配列の１つに、少なくとも７０％、より好ましくは少なくとも７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の１つの配列同一性を有するアミノ酸配列）を含む少なくとも１つの重鎖可変領域を含んでもよい。
【００３８】
抗体は、場合によってＰＤ−Ｌ１、場合によってヒトまたはネズミＰＤ−Ｌ１に結合してもよい。抗体は、場合によって上述のようなアミノ酸配列構成要素を有してもよい。抗体はＩｇＧであってもよい。１つの態様において、ＰＤ−Ｌ１に結合する本明細書に記載するような抗体または抗原結合性断片を含む、場合によって単離されたｉｎ  ｖｉｔｒｏ複合体を提供する。
【００３９】
抗体は、場合によって、ヒトＰＤ−１およびヒトＰＤ−Ｌ１の間、またはネズミＰＤ−１およびネズミＰＤ−Ｌ１の間の相互作用または機能的関連を阻害するかまたは防止してもよい。ＰＤ−１およびＰＤ−Ｌ１の間の相互作用または機能的関連のこうした阻害または防止は、ＰＤ−１のＰＤ−Ｌ１仲介性活性化またはＰＤ−Ｌ１／ＰＤ−１シグナル伝達を阻害するかまたは防止してもよい。
【００４０】
本発明のいくつかの側面において、以下のＣＤＲ：
【００４１】
【化１０】
2018508475.tif 000012
【００４２】
を含む、単離重鎖可変領域ポリペプチドを提供し、式中、Ｘ１＝存在しないまたはＧ、Ｘ２＝ＧまたはＳ、Ｘ３＝ＧまたはＹ、Ｘ４＝Ｓ、ＧまたはＨ、Ｘ５＝ＹまたはＧ、Ｘ６＝Ｇ、ＮまたはＹ、Ｘ７＝ＬまたはＹ、Ｘ８＝ＹまたはＧ、Ｘ９＝ＩまたはＹである。
【００４３】
いくつかの態様において、ＨＣ−ＣＤＲ３は、ＧＧＳＹＧＳＬＹＡＦＤＩ（配列番号２３）、ＧＧＹＧＧＮＳＬＹＡＦＤＩ（配列番号２４）、またはＳＧＨＧＹＳＹＧＡＦＤＹ（配列番号２５）の１つである。
【００４４】
本発明の１つの側面において、重鎖および軽鎖可変領域配列を含む抗体または抗原結合性断片であって：
重鎖が、それぞれ、ＨＣ−ＣＤＲ１：ＳＹＡＩＳ（配列番号２１）、ＨＣ−ＣＤＲ２  ＲＩＩＰＩＬＧＩＡＮＹＡＱＫＦＱＧ（配列番号２２）、ＨＣ−ＣＤＲ３：Ｘ１Ｘ２Ｘ３Ｘ４Ｘ５Ｘ６ＳＸ７Ｘ８ＡＦＤＸ９（配列番号２６）またはＧＧＳＹＧＳＬＹＡＦＤＩ（配列番号２３）またはＧＧＹＧＧＮＳＬＹＡＦＤＩ（配列番号２４）またはＳＧＨＧＹＳＹＧＡＦＤＹ（配列番号２５）の１つに、少なくとも８５％の全体の配列同一性を有する、ＨＣ−ＣＤＲ１、ＨＣ−ＣＤＲ２、ＨＣ−ＣＤＲ３を含み、式中、Ｘ１＝存在しないまたはＧ、Ｘ２＝ＧまたはＳ、Ｘ３＝ＧまたはＹ、Ｘ４＝Ｓ、ＧまたはＨ、Ｘ５＝ＹまたはＧ、Ｘ６＝Ｇ、ＮまたはＹ、Ｘ７＝ＬまたはＹ、Ｘ８＝ＹまたはＧ、Ｘ９＝ＩまたはＹである、そして
軽鎖が、ＬＣ−ＣＤＲ１：ＳＧＲＳＳＮＩＡＳＨＤＶＦ（配列番号９）、ＧＧＤＮＩＧＲＫＳＶＨ（配列番号１２）、ＳＧＳＳＳＮＩＧＮＮＹＶＳ（配列番号１５）、またはＴＧＳＳＳＮＩＧＡＧＹＤＶＨ（配列番号１８）の１つ、ＬＣ−ＣＤＲ２：ＥＴＮＫＲＰＷ（配列番号１０）、ＤＤＧＤＲＰＳ（配列番号１３）、ＤＮＮＥＲＬＳ（配列番号１６）、またはＧＮＳＮＲＰＳ（配列番号１９）の１つ、ＬＣ−ＣＤＲ３：ＧＡＷＤＳＧＬＴＧＭＬ（配列番号１１）、ＱＡＷＤＳＴＶＶ（配列番号１４）、ＧＴＷＤＳＳＬＳＶＶＶ（配列番号１７）、またはＱＳＹＤＳＳＬＳＧＳＹＶＶ（配列番号２０）の１つに、少なくとも８５％の全体の配列同一性を有する、ＬＣ−ＣＤＲ１、ＬＣ−ＣＤＲ２、ＬＣ−ＣＤＲ３を含む、前記抗体または抗原結合性断片を提供する。
【００４５】
いくつかの態様において、配列同一性の度合いは、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の１つであってもよい。
【００４６】
本発明の別の側面において、場合によって単離された、重鎖および軽鎖可変領域配列を含む抗体または抗原結合性断片であって：
重鎖配列が、配列番号５、６、７、８または３５の重鎖配列（図２）に少なくとも８５％の配列同一性を有し、そして
軽鎖配列が、軽鎖配列：配列番号１、２、３または４（図１）に少なくとも８５％の配列同一性を有する
前記抗体または抗原結合性断片を提供する。いくつかの態様において、配列同一性の度合いは、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の１つであってもよい。
【００４７】
いくつかの態様において、抗体、抗原結合性断片またはポリペプチドは、配置ＨＣＦＲ１：ＨＣ−ＣＤＲ１：ＨＣＦＲ２：ＨＣ−ＣＤＲ２：ＨＣＦＲ３：ＨＣ−ＣＤＲ３：ＨＣＦＲ４にしたがって、ＣＤＲ間の可変領域重鎖フレームワーク配列をさらに含む。フレームワーク配列は、ヒトコンセンサスフレームワーク配列由来であってもよい。
【００４８】
本発明の１つの側面において、場合によって本明細書に記載するような軽鎖可変領域ポリペプチドと組み合わされた、単離重鎖可変領域ポリペプチドであって、以下のＣＤＲ：
【００４９】
【化１１】
2018508475.tif 000013
【００５０】
を含む、前記単離重鎖可変領域ポリペプチドを提供し、式中、Ｘ１＝存在しないまたはＧ、Ｘ２＝ＧまたはＳ、Ｘ３＝ＧまたはＹ、Ｘ４＝Ｓ、ＧまたはＨ、Ｘ５＝ＹまたはＧ、Ｘ６＝Ｇ、ＮまたはＹ、Ｘ７＝ＬまたはＹ、Ｘ８＝ＹまたはＧ、Ｘ９＝ＩまたはＹである。
【００５１】
いくつかの態様において、ＨＣ−ＣＤＲ３は、ＧＧＳＹＧＳＬＹＡＦＤＩ（配列番号２３）、ＧＧＹＧＧＮＳＬＹＡＦＤＩ（配列番号２４）、またはＳＧＨＧＹＳＹＧＡＦＤＹ（配列番号２５）の１つである。
【００５２】
いくつかの態様において、抗体、抗原結合性断片またはポリペプチドは、配置ＬＣＦＲ１：ＬＣ−ＣＤＲ１：ＬＣＦＲ２：ＬＣ−ＣＤＲ２：ＬＣＦＲ３：ＬＣ−ＣＤＲ３：ＬＣＦＲ４にしたがって、ＣＤＲ間の可変領域軽鎖フレームワーク配列をさらに含む。フレームワーク配列は、ヒトコンセンサスフレームワーク配列由来であってもよい。
【００５３】
いくつかの態様において、抗体または抗体結合性断片は、ヒト定常領域をさらに含んでもよい。例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３およびＩｇＧ４の１つより選択されるものである。
【００５４】
いくつかの態様において、抗体または抗体結合性断片は、ネズミ定常領域をさらに含んでもよい。例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２Ａ、ＩｇＧ２ＢおよびＩｇＧ３の１つより選択されるものである。
【００５５】
本発明の別の側面において、ＰＤ−Ｌ１に結合可能であり、二重特異性抗体または二重特異性抗原結合性断片である、場合によって単離された、抗体または抗原結合性断片を提供する。二重特異性抗体または抗原結合性断片は、（ｉ）本明細書に記載するようなＰＤ−Ｌ１への結合が可能な抗原結合性断片またはポリペプチド、および（ｉｉ）ＰＤ−Ｌ１以外のターゲットタンパク質への結合が可能な抗原結合性断片を含む。
【００５６】
いくつかの態様において、ＰＤ−Ｌ１以外のターゲットタンパク質は、細胞表面受容体、例えばＴ細胞の細胞表面上に発現される受容体であってもよい。いくつかの態様において、細胞表面受容体は、免疫チェックポイント受容体、例えば共刺激受容体または阻害性受容体であってもよい。いくつかの態様において、共刺激受容体は、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＩＣＯＳ、ＣＤ４０、ＣＤ１２２、ＯＸ４０、４−１ＢＢおよびＧＩＴＲより選択可能である。いくつかの態様において、阻害性受容体は、ＬＡＧ−３、Ｂ７−Ｈ３、Ｂ７−Ｈ４、ＢＴＬＡ、ＣＴＬＡ−４、Ａ２ＡＲ、ＶＩＳＴＡ、ＴＩＭ−３、ＰＤ−１、およびＫＩＲより選択されることも可能である。
【００５７】
いくつかの態様において、ＰＤ−Ｌ１以外のターゲットタンパク質は、その発現が癌と関連する癌マーカーであってもよい。いくつかの態様において、癌マーカーは細胞表面で発現されてもよい。いくつかの態様において、癌マーカーは、ＨＥＲ−２、ＨＥＲ−３、ＥＧＦＲ、ＥｐＣＡＭ、ＣＤ３０、ＣＤ３３、ＣＤ３８、ＣＤ２０、ＣＤ２４、ＣＤ９０、ＣＤ１５、ＣＤ５２、ＣＡ−１２５、ＣＤ３４、ＣＡ−１５−３、ＣＡ−１９−９、ＣＥＡ、ＣＤ９９、ＣＤ１１７、ＣＤ３１、ＣＤ４４、ＣＤ１２３、ＣＤ１３３、ＡＢＣＢ５およびＣＤ４５より選択されることも可能である。
【００５８】
本発明の別の側面において、組成物、例えば薬学的組成物または薬剤を提供する。組成物は、本明細書に記載するような抗体、抗原結合性断片またはポリペプチド、および少なくとも１つの薬学的に許容されうるキャリアー、賦形剤、アジュバントまたは希釈剤を含んでもよい。
【００５９】
本発明の別の側面において、本明細書に記載するような抗体、抗原結合性断片またはポリペプチドをコードする単離核酸を提供する。核酸は、配列番号２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４または３６（図４）の１つの配列、あるいは遺伝暗号の結果として縮重しているコード配列を有してもよいし、あるいはこれらに少なくとも７０％、場合によって、７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の１つの同一性を有するヌクレオチド配列を有してもよい。
【００６０】
本発明の１つの側面において、本明細書記載の核酸を含むベクターを提供する。本発明の別の側面において、ベクターを含む宿主細胞を提供する。例えば、宿主細胞は、真核、または哺乳動物、例えばチャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）、またはヒトであってもよく、あるいは原核細胞、例えば大腸菌（Ｅ．  ｃｏｌｉ）であってもよい。本発明の１つの側面において、本明細書に記載するような抗体または抗原結合性断片またはポリペプチドを作製するための方法であって、抗体または抗原結合性断片またはポリペプチドをコードするベクターを発現するために適切な条件下で、本明細書に記載するような宿主細胞を培養し、そして抗体または抗原結合性断片またはポリペプチドを回収する工程を含む、前記方法を提供する。
【００６１】
本発明の別の側面において、療法または医学的治療法において使用するための抗体、抗原結合性断片またはポリペプチドを提供する。本発明の別の側面において、Ｔ細胞機能不全障害の治療において使用するための、本明細書に記載するような抗体、抗原結合性断片またはポリペプチドを提供する。本発明の別の側面において、Ｔ細胞機能不全障害の治療において使用するための薬剤または薬学的組成物製造における、本明細書に記載するような抗体、抗原結合性断片またはポリペプチドの使用を提供する。
【００６２】
本発明の別の側面において、Ｔ細胞機能を増進させる方法であって、本明細書に記載するような抗体、抗原結合性断片またはポリペプチドを、機能不全Ｔ細胞に投与する工程を含む、前記方法を提供する。方法はｉｎ  ｖｉｔｒｏまたはｉｎ  ｖｉｖｏで実行可能である。
【００６３】
本発明の別の側面において、Ｔ細胞機能不全障害を治療する方法であって、本明細書に記載するような抗体、抗原結合性断片またはポリペプチドを、Ｔ細胞機能不全障害を患う患者に投与する工程を含む、前記方法を提供する。
【００６４】
本発明の別の側面において、癌の治療において使用するための抗体、抗原結合性断片またはポリペプチドを提供する。本発明の別の側面において、癌の治療において使用するための薬剤または薬学的組成物の製造における、本明細書に記載するような抗体、抗原結合性断片またはポリペプチドの使用を提供する。
【００６５】
本発明の別の側面において、腫瘍細胞を死滅させる方法であって、本明細書に記載するような抗体、抗原結合性断片またはポリペプチドを、腫瘍細胞に投与する工程を含む、前記方法を提供する。方法はｉｎ  ｖｉｔｒｏまたはｉｎ  ｖｉｖｏで実行可能である。腫瘍細胞の死滅は、例えば、抗体依存性細胞仲介性細胞傷害性（ＡＤＣＣ）、補体依存性細胞傷害性（ＣＤＣ）の結果であってもよいし、あるいは抗体、抗原結合性断片またはポリペプチドにコンジュゲート化された薬剤の作用を通じてもよい。
【００６６】
本発明の別の側面において、癌を治療する方法であって、本明細書に記載するような抗体、抗原結合性断片またはポリペプチドを、癌を患う患者に投与する工程を含む、前記方法を提供する。
【００６７】
癌はＰＤ−Ｌ１を過剰発現する癌であってもよいし、またはＰＤ−Ｌ１を過剰発現する細胞を含んでもよい。癌は結腸直腸癌または黒色腫であってもよい。
本発明の別の側面において、被験体において免疫反応を調節する方法であって、被験体における免疫反応が調節されるように、本明細書に記載するような抗体、抗原結合性断片またはポリペプチドを被験体に投与する工程を含む、前記方法を提供する。
【００６８】
本発明の別の側面において、腫瘍細胞の増殖を阻害する方法であって、本明細書に記載するような抗体、抗原結合性断片またはポリペプチドを投与する工程を含む、前記方法を提供する。該方法は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏまたはｉｎ  ｖｉｖｏで実行可能である。いくつかの態様において、被験体における腫瘍細胞の増殖を阻害する方法であって、本明細書に記載するような抗体、抗原結合性断片またはポリペプチドの療法的有効量を被験体に投与する工程を含む、前記方法を提供する。
【００６９】
本発明の別の側面において、ＰＤ−Ｌ１を含有するかまたは含有すると推測される試料を、本明細書に記載するような抗体または抗原結合性断片と接触させ、そして抗体または抗原結合性断片およびＰＤ−Ｌ１の複合体の形成を検出する工程を含む方法を提供する。
【００７０】
本発明の別の側面において、被験体における疾患または状態を診断する方法であって、ｉｎ  ｖｉｔｒｏで、被験体由来の試料を、本明細書に記載するような抗体または抗原結合性断片と接触させ、そして抗体または抗原結合性断片およびＰＤ−Ｌ１の複合体の形成を検出する工程を含む、前記方法を提供する。
【００７１】
本発明のさらなる側面において、ｉｎ  ｖｉｔｒｏでＰＤ−Ｌ１を検出するための本明細書に記載するような抗体または抗原結合性断片の使用を提供する。本発明の別の側面において、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ診断剤としての、本明細書に記載するような抗体または抗原結合性断片の使用を提供する。
【００７２】
本発明の方法において、抗体、抗原結合性断片またはポリペプチドを、本明細書に記載するような組成物として提供してもよい。
いくつかの態様において、抗体は、本明細書に記載するようなクローンＡ１、Ｃ２、Ｃ４、Ｈ１２またはＨ１２＿ＧＬであってもよい。
【図面の簡単な説明】
【００７３】
ここで、付随する図に言及しながら、本発明の原理を例示する態様および実験を論じる。
【図１−１】抗ＰＤ−Ｌ１抗体クローンＡ１、Ｃ２、Ｃ４、Ｈ１２およびＨ１２＿ＧＬの軽鎖可変ドメイン配列。ＣＤＲを下線で示し、そして別個に示す。
【図１−２】抗ＰＤ−Ｌ１抗体クローンＡ１、Ｃ２、Ｃ４、Ｈ１２およびＨ１２＿ＧＬの軽鎖可変ドメイン配列。ＣＤＲを下線で示し、そして別個に示す。
【図２−１】抗ＰＤ−Ｌ１抗体クローンＡ１、Ｃ２、Ｃ４、Ｈ１２およびＨ１２＿ＧＬの重鎖可変ドメイン配列。ＣＤＲを下線で示し、そして別個に示す。
【図２−２】抗ＰＤ−Ｌ１抗体クローンＡ１、Ｃ２、Ｃ４、Ｈ１２およびＨ１２＿ＧＬの重鎖可変ドメイン配列。ＣＤＲを下線で示し、そして別個に示す。
【図２−３】抗ＰＤ−Ｌ１抗体クローンＡ１、Ｃ２、Ｃ４、Ｈ１２およびＨ１２＿ＧＬの重鎖可変ドメイン配列。ＣＤＲを下線で示し、そして別個に示す。
【図３】抗ＰＤ−Ｌ１抗体クローンＡ１、Ｃ２、Ｃ４、Ｈ１２およびＨ１２＿ＧＬの軽鎖および重鎖ＣＤＲ配列を示す表。
【図４−１】抗ＰＤ−Ｌ１抗体クローンＡ１、Ｃ２、Ｃ４、Ｈ１２およびＨ１２＿ＧＬの重鎖および軽鎖可変ドメイン配列のヌクレオチドおよびコードされるアミノ酸配列。
【図４−２】抗ＰＤ−Ｌ１抗体クローンＡ１、Ｃ２、Ｃ４、Ｈ１２およびＨ１２＿ＧＬの重鎖および軽鎖可変ドメイン配列のヌクレオチドおよびコードされるアミノ酸配列。
【図４−３】抗ＰＤ−Ｌ１抗体クローンＡ１、Ｃ２、Ｃ４、Ｈ１２およびＨ１２＿ＧＬの重鎖および軽鎖可変ドメイン配列のヌクレオチドおよびコードされるアミノ酸配列。
【図４−４】抗ＰＤ−Ｌ１抗体クローンＡ１、Ｃ２、Ｃ４、Ｈ１２およびＨ１２＿ＧＬの重鎖および軽鎖可変ドメイン配列のヌクレオチドおよびコードされるアミノ酸配列。
【図５】抗ＰＤ−Ｌ１、ヒトＦｃコンジュゲート化抗体Ａ１、Ｃ２、Ｃ４、Ｈ１２ならびに対照抗体Ａ３（ヒトＰＤ−Ｌ１には結合するがネズミＰＤ−Ｌ１には結合しない）およびＥ３（ヒトまたはネズミＰＤ−Ｌ１に結合しない）の結合を示すバーチャート。
【図６】ＥＬＩＳＡによって決定されるような、ヒトＦｃコンジュゲート化抗体Ａ１、Ｃ２、Ｃ４およびＨ１２による、ヒトＰＤ−１／ヒトＰＤ−Ｌ１相互作用の阻害を示すチャート。
【図７】ＥＬＩＳＡによって決定されるような、ヒトＦｃコンジュゲート化抗体Ａ１、Ｃ２、Ｃ４およびＨ１２による、ネズミＰＤ−１／ネズミＰＤ−Ｌ１相互作用の阻害を示すチャート。
【図８】Ｈ１２（ＩｇＧ１）および商業的抗マウスＰＤ−Ｌ１抗体による、ネズミＰＤ−１／ネズミＰＤ−Ｌ１相互作用の阻害を示すチャート。
【図９】抗体Ｈ１２、ニボルマブ（商業的抗ＰＤ−１抗体）、ならびにアイソタイプ対照および抗体不含対照に反応した消耗Ｔ細胞のＩＦＮγ分泌を示すバーチャート。
【図１０】抗体、抗ＰＤ−Ｌ１  Ｈ１２、ニボルマブ、ならびにアイソタイプ対照および抗体不含対照に反応した消耗Ｔ細胞のＩＦＮγ分泌を示すバーチャート。
【図１１】表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）によって決定されるような、ヒトＰＤ−Ｌ１に対する抗ＰＤ−Ｌ１  Ｈ１２のアフィニティを示すセンソグラム。ＫＤ＝３．１３ｘ１０−１０Ｍ。
【図１２】表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）によって決定されるような、ネズミＰＤ−Ｌ１に対する抗ＰＤ−Ｌ１  Ｈ１２のアフィニティを示すセンソグラム。ＫＤ＝３．０４ｘ１０−９Ｍ。
【図１３】ニボルマブ、ラブロリズマブ（どちらも商業的抗ＰＤ−１抗体）、抗体Ｈ１２、ならびにアイソタイプ対照および抗体不含対照に反応した、混合リンパ球反応（ＭＬＲ）における、（Ａ）解離肺腫瘍組織および（Ｂ）同種樹状細胞（ＤＣ）と共培養した解離肺腫瘍組織のＩＦＮγ分泌を示すバーチャート。
【図１４】ニボルマブ、ラブロリズマブ、抗体Ｈ１２−ＩｇＧ４、抗体Ｈ１２−ＩｇＧ１の存在下、ならびにアイソタイプ対照および抗体不含対照で、インフルエンザとともにＰＢＭＣを培養した後のＩＦＮγ分泌を示すバーチャート。
【図１５】異なる抗原：ヒト（ｈｕ）ＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１、ＰＤ−Ｌ２、ＴＩＭ−３、ＬＡＧ−３、ＣＴＬ−Ａ４、ＢＬＴＡ、ＩＣＯＳおよびＣＤ２８、ならびにカニクイザル（ｃｙｎｏｍｏｌｇｕｓ）およびマウス（ｍｏ）ＰＤ−Ｌ１に対するＨ１２でのＥＬＩＳＡを示すバーチャート。
【図１６】（Ａ）ＣＴ２６細胞株を用いたマウス結腸癌モデルおよび（Ｂ）Ｂ１６Ｆ１０細胞株を用いたマウス黒色腫モデルにおける、抗体Ｈ１２による腫瘍増殖の阻害を示すグラフ。
【図１７】ヒトＰＤ−Ｌ１でトランスフェクションしたＨＥＫ２９３−６Ｅ細胞を用いたブロッキングアッセイによって決定した際の、抗体Ｈ１２−ＩｇＧ１、Ｈ１２−ＩｇＧ４、Ｈ１２＿ＧＬ−ＩｇＧ１、およびＨ１２＿ＧＬ−ＩｇＧ４によるＰＤ−１およびＰＤ−Ｌ１の間の相互作用のブロッキングの効率を示すグラフ。
【図１８】マウスモデルにおいて、腫瘍増殖を抗ＰＤ−Ｌ１抗体Ｈ１２が制御するｉｎ  ｖｉｖｏ効率を示すグラフ。ＭＣ３８細胞をマウス内に接種し、そして動物あたり２００μｇの示す抗体の５用量を第８日から腹腔内投与した。（Ａ）および（Ｂ）は、２回の独立の実験に関する腫瘍増殖（平均±ＳＥＭ）の結果を示す。
【図１９】ヒトＰＤ−Ｌ１に対する抗体Ｈ１２、Ｃ４およびアテゾリズマブの結合、および結合のアビディティを示すグラフ。（Ａ）ヒトＰＤ−Ｌ１に対するＨ１２、Ｃ４、アテゾリズマブおよびアイソタイプ対照抗体の結合（２つ組の平均±ＳＥＭ）。（Ｂ）ヒトＰＤ−Ｌ１へのＨ１２、Ｃ４、アテゾリズマブおよびアイソタイプ対照抗体の結合のアビディティ（２つ組の平均±ＳＥＭ）。
【図２０】ＭＤＡ−ＭＢ−２３１ヒト乳癌細胞に対するＨ１２  ＩｇＧ１、Ｃ４  ＩｇＧ１、アテゾリズマブおよびＤＥＮ  ＩｇＧ１抗体の結合を示すグラフ。平均蛍光指数（ＭＦＩ）を示す（２つ組の平均±ＳＥＭ）。
【図２１】Ｈ１２、Ｃ４、アテゾリズマブおよびアイソタイプ対照抗体の存在下での、ＰＤ−１へのＰＤ−Ｌ１の結合を示すグラフ。グラフは、抗体が、ＰＤ−Ｌ１のその受容体ＰＤ−１への結合をブロッキングする能力を示す（２つ組の平均±ＳＥＭ）。
【発明を実施するための形態】
【００７４】
抗体
本発明記載の抗体は、好ましくは、ＰＤ−Ｌ１（抗原）、好ましくはヒトまたはネズミＰＤ−Ｌ１に、場合によって０．１〜４ｎＭの範囲のＫＤで結合する。
【００７５】
本発明記載の抗体は、単離型で提供されてもよい。
本発明記載の抗体は、以下の特性の少なくとも１つを示してもよい：
ａ）１μＭまたはそれ未満、好ましくは、≦１０ｎＭ、≦１ｎＭ、≦５００ｐＭ、≦４００ｐＭまたは≦３００ｐＭの１つのＫＤで、ヒト、マウスまたはカニクイザルＰＤ−Ｌ１に結合する；
ｂ）ヒトＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ２、ＴＩＭ−３、ＬＡＧ３、ＩＣＯＳ、ＣＴＬＡ−４、ＢＴＬＡまたはＣＤ２８に実質的に結合しない
ｃ）ヒトＰＤ−１およびヒトＰＤ−Ｌ１の間の相互作用を阻害するかまたは防止する、あるいはネズミＰＤ−１およびネズミＰＤ−Ｌ１の間の相互作用を阻害するかまたは防止する；
ｄ）混合リンパ球反応（ＭＬＲ）アッセイ（例えばＢｒｏｍｅｌｏｗら  Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｍｅｔｈｏｄｓ，  ２００１  Ｊａｎ  １；２４７（１−２）：１−８を参照されたい）においてＴ細胞増殖を増加させる；
ｅ）ＭＬＲアッセイにおいてインターフェロン−ガンマ産生を増加させる； 
ｆ）ｅｘ  ｖｉｖｏで、腫瘍浸潤リンパ球によるインターフェロン−ガンマ産生を増加させる；
ｇ）感染に反応して、リンパ球によるインターフェロン−ガンマ産生を増加させる；
ｈ）腫瘍増殖を、場合によってｉｎ  ｖｉｖｏで阻害する；
ｉ）アテゾリズマブ（ＭＰＤＬ３２８０Ａ；ＲＧ７４４６）による結合のアフィニティより高いアフィニティまたはそれと類似のアフィニティで、ＰＤ−Ｌ１（場合によってヒトＰＤ−Ｌ１）に結合する；
ｊ）アテゾリズマブによる結合のアビディティより高いアビディティまたはそれと類似のアビディティで、ＰＤ−Ｌ１（場合によってヒトＰＤ−Ｌ１）に結合する；
ｋ）アテゾリズマブによる相互作用の阻害／防止より大きな度合いで、またはそれと類似の度合いで、ＰＤ−Ｌ１およびＰＤ−１（場合によってヒトＰＤ−Ｌ１およびヒトＰＤ−１）の間の相互作用を阻害するかまたは防止する。
【００７６】
「抗体」によって、本発明者らは、その断片または誘導体、あるいは合成抗体または合成抗体断片も含める。
モノクローナル抗体技術に関連した今日の技術を考慮すると、抗体は、大部分の抗原に対して調製可能である。抗原結合部分は、抗体の部分（例えばＦａｂ断片）または合成抗体断片（例えば一本鎖Ｆｖ断片［ＳｃＦｖ］）であってもよい。選択した抗原に対する適切なモノクローナル抗体は、既知の技術、例えば、“Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：  Ａ  ｍａｎｕａｌ  ｏｆ  ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ”，  Ｈ  Ｚｏｌａ（ＣＲＣ  Ｐｒｅｓｓ，  １９８８）に、そして“Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ｈｙｂｒｉｄｏｍａ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：  Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ  ａｎｄ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ”，  Ｊ  Ｇ  Ｒ  Ｈｕｒｒｅｌｌ（ＣＲＣ  Ｐｒｅｓｓ，  １９８２）に開示されるものによって調製可能である。キメラ抗体は、Ｎｅｕｂｅｒｇｅｒら（１９８８，  ８ｔｈ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  Ｓｙｍｐｏｓｉｕｍ  Ｐａｒｔ  ２，  ７９２−７９９）によって論じられる。
【００７７】
モノクローナル抗体（ｍＡｂ）は、本発明の方法において有用であり、そして抗原上の単一のエピトープを特異的にターゲティングする抗体の均質な集団である。
ポリクローナル抗体は、本発明の方法において有用である。単一特異的ポリクローナル抗体が好ましい。当該技術分野に周知の方法を用いて、適切なポリクローナル抗体を調製してもよい。
【００７８】
ＦａｂおよびＦａｂ２断片などの、抗体の抗原結合性断片もまた用いて／提供してもよく、遺伝子操作した抗体および抗体断片もまた用いて／提供してもよい。抗体の可変重鎖（ＶＨ）および可変軽鎖（ＶＬ）ドメインは、抗原認識に関与し、この事実は、初期のプロテアーゼ消化実験によって最初に認識された。さらなる確認は、齧歯類抗体の「ヒト化」によって見出された。齧歯類起源の可変ドメインを、ヒト起源の定常ドメインに融合させて、生じる抗体が、齧歯類親抗体の抗原特異性を保持するようにしてもよい（Ｍｏｒｒｉｓｏｎら（１９８４）  Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ  ８１，  ６８５１−６８５５）。
【００７９】
抗原特異性は可変ドメインによって与えられ、そして定常ドメインからは独立であることは、すべて１またはそれより多くの可変ドメインを含有する抗体断片の細菌発現を伴う実験から知られる。これらの分子には、Ｆａｂ様分子（Ｂｅｔｔｅｒら（１９８８）  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４０，  １０４１）；  Ｆｖ分子（Ｓｋｅｒｒａら（１９８８）  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４０，  １０３８）；  ＶＨおよびＶＬパートナードメインが柔軟なオリゴペプチドを通じて連結される、一本鎖Ｆｖ（ＳｃＦｖ）分子（Ｂｉｒｄら（１９８８）  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４２，  ４２３；  Ｈｕｓｔｏｎら（１９８８）  Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ  ８５，  ５８７９）；ならびに単離Ｖドメインを含む単一ドメイン抗体（ｄＡｂ）（Ｗａｒｄら（１９８９）  Ｎａｔｕｒｅ  ３４１，  ５４４）が含まれる。特異的結合部位を保持する抗体断片合成に関与する技術の一般的な概説は、Ｗｉｎｔｅｒ  ＆  Ｍｉｌｓｔｅｉｎ（１９９１）  Ｎａｔｕｒｅ  ３４９，  ２９３−２９９中に見出されるはずである。
【００８０】
「ＳｃＦｖ分子」によって、本発明者らは、ＶＨおよびＶＬパートナードメインが、例えば柔軟なオリゴペプチドによって、共有結合されている分子を意味する。
Ｆａｂ、Ｆｖ、ＳｃＦｖおよびｄＡｂ抗体断片は、すべて大腸菌において発現可能であり、そして大腸菌から分泌可能であり、したがって、多量の前記断片の容易な産生が可能になる。
【００８１】
全抗体、およびＦ（ａｂ’）２断片は「二価」である。「二価」によって、本発明者らは、前記抗体およびＦ（ａｂ’）２断片が２つの抗原結合部位を有することを意味する。対照的に、Ｆａｂ、Ｆｖ、ＳｃＦｖおよびｄＡｂ断片は一価であり、１つの抗原結合部位しか持たない。また、当該技術分野に周知であるようなファージディスプレイ技術を用いて、ＰＤ−Ｌ１に結合する合成抗体を作製してもよい。
【００８２】
本出願はまた、ＰＤ−Ｌ１に結合可能であり、そして二重特異性抗体または二重特異性抗原結合性断片である、抗体または抗原結合性断片も提供する。いくつかの態様において、二重特異性抗体または二重特異性抗原結合性断片は単離されていてもよい。
【００８３】
いくつかの態様において、二重特異性抗体および二重特異性抗原結合性断片は、本発明記載の抗原結合性断片またはポリペプチドを含む。いくつかの態様において、二重特異性抗体および二重特異性抗原結合性断片は、ＰＤ−Ｌ１に結合可能な抗原結合性断片であって、ＰＤ−Ｌ１に結合可能な抗原結合性断片が本発明記載の抗原結合性断片またはポリペプチドを含むかまたはこれらからなる、前記断片を含む。
【００８４】
いくつかの態様において、二重特異性抗体および二重特異性抗原結合性断片は、ＰＤ−Ｌ１に結合可能な抗原結合性断片、および別のターゲットタンパク質に結合可能な抗原結合性断片を含む。
【００８５】
別のターゲットタンパク質に結合可能な抗原結合性断片は、ＰＤ−Ｌ１以外の別のタンパク質に結合可能であってもよい。
いくつかの態様において、ターゲットタンパク質は、細胞表面受容体である。いくつかの態様において、ターゲットタンパク質は、免疫細胞、例えばＴ細胞の細胞表面上に発現される細胞表面受容体であってもよい。いくつかの態様において、細胞表面受容体は、免疫チェックポイント受容体であってもよい。いくつかの態様において、免疫チェックポイント受容体は、共刺激受容体であってもよい。いくつかの態様において、共刺激受容体は、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＩＣＯＳ、ＣＤ４０、ＣＤ１２２、ＯＸ４０、４−１ＢＢおよびＧＩＴＲより選択可能である。いくつかの態様において、免疫チェックポイント受容体は、阻害性受容体であってもよい。いくつかの態様において、阻害性受容体は、ＬＡＧ−３、Ｂ７−Ｈ３、Ｂ７−Ｈ４、ＢＴＬＡ、ＣＴＬＡ−４、Ａ２ＡＲ、ＶＩＳＴＡ、ＴＩＭ−３、ＰＤ−１、およびＫＩＲより選択されることも可能である。
【００８６】
いくつかの態様において、ターゲットタンパク質は癌マーカーであってもよい。すなわち、ターゲットタンパク質は、その発現（例えば上方制御された発現）が癌と関連するタンパク質であってもよい。いくつかの態様において、癌マーカーは、細胞表面で発現されてもよい。いくつかの態様において、癌マーカーは受容体であってもよい。いくつかの態様において、癌マーカーは、ＨＥＲ−２、ＨＥＲ−３、ＥＧＦＲ、ＥｐＣＡＭ、ＣＤ３０、ＣＤ３３、ＣＤ３８、ＣＤ２０、ＣＤ２４、ＣＤ９０、ＣＤ１５、ＣＤ５２、ＣＡ−１２５、ＣＤ３４、ＣＡ−１５−３、ＣＡ−１９−９、ＣＥＡ、ＣＤ９９、ＣＤ１１７、ＣＤ３１、ＣＤ４４、ＣＤ１２３、ＣＤ１３３、ＡＢＣＢ５およびＣＤ４５より選択されることも可能である。
【００８７】
いくつかの態様において、ＣＤ２７に関する抗原結合性断片は、例えば抗ＣＤ２７抗体クローン０３２３（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）またはバルリルマブ（Ｃｅｌｌｄｅｘ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ）のＣＤＲ、軽鎖および重鎖可変ドメインまたは他のＣＤ２７結合性断片を含んでもよい。いくつかの態様において、ＣＤ２８に関する抗原結合性断片は、例えば抗ＣＤ２８抗体クローンＣＤ２８．６（ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）、クローンＣＤ２８．２、クローンＪＪ３１９（Ｎｏｖｕｓ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｓ）、クローン２０４．１２、クローンＢ−２３、クローン１０Ｆ３（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  Ｐｉｅｒｃｅ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ）、クローン３７４０７（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ）、クローン２０４−１２（Ａｂｎｏｖａ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）、クローン１５Ｅ８（ＥＭＤ  Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）、クローン２０４−１２、クローンＹＴＨ９１３．１２（ＡｂＤ  Ｓｅｒｏｔｅｃ）、クローンＢ−Ｔ３（Ａｃｒｉｓ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ）、クローン９Ｈ６Ｅ２（Ｓｉｎｏ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ）、クローンＣ２８／７７（ＭｙＢｉｏＳｏｕｒｃｅ．ｃｏｍ）、クローンＫＯＬＴ−２（ＡＬＰＣＯ）、クローン１５２−２Ｅ１０（Ｓａｎｔａ  Ｃｒｕｚ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）、またはクローンＸＰＨ−５６（Ｃｒｅａｔｉｖｅ  Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ）のＣＤＲ、軽鎖および重鎖可変ドメインまたは他のＣＤ２８結合性断片を含んでもよい。いくつかの態様において、ＩＣＯＳに関する抗原結合性ドメインは、例えば抗ＩＣＯＳ抗体クローンＩＳＡ−３（ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）、クローンＳＰ９８（Ｎｏｖｕｓ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｓ）、クローン１Ｇ１、クローン３Ｇ４（Ａｂｎｏｖａ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）、クローン６６９２２２（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ）、クローンＴＱ０９（Ｃｒｅａｔｉｖｅ  Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ）、またはクローンＣ３９８．４Ａ（ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ）のＣＤＲ、軽鎖および重鎖可変ドメインまたは他のＩＣＯＳ結合性断片を含んでもよい。いくつかの態様において、ＣＤ４０に関する抗原結合性断片は、例えば抗ＣＤ４０抗体クローン８２１１１（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ）、またはＡＳＫＰ１２４０（Ｏｋｉｍｕｒａら，  ＡＭ  Ｊ  Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ（２０１４）  １４（６）  １２９０−１２９９）のＣＤＲ、軽鎖および重鎖可変ドメインまたは他のＣＤ４０結合性断片を含んでもよい。いくつかの態様において、ＣＤ１２２に関する抗原結合性断片は、抗ＣＤ１２２抗体クローンｍｉｋβ２（ＰｈａｒＭｉｎｇｅｎ）のＣＤＲ、軽鎖および重鎖可変ドメインまたは他のＣＤ１２２結合性断片を含んでもよい。いくつかの態様において、ＯＸ４０に関する抗原結合性断片は、ＵＳ  ２０１３０２８０２７５、ＵＳ  ８２８３４５０またはＷＯ２０１３０３８１９１に開示される抗ＯＸ４０抗体、例えばクローン１２Ｈ３またはクローン２０Ｅ５のＣＤＲ、軽鎖および重鎖可変ドメインまたは他のＯＸ４０結合性断片を含んでもよい。いくつかの態様において、４−１ＢＢに関する抗原結合性断片は、例えば、抗４−１ＢＢ抗体ＰＦ−０５０８２５６６（Ｆｉｓｈｅｒら，  Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ（２０１２）  ６１：  １７２１−１７３３）、またはウレルマブ（ＢＭＳ−６６５５１３；  Ｂｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ  Ｓｑｕｉｂｂ；  ＬｉおよびＬｉｕ，  Ｃｌｉｎ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ（２０１３）；  ５：  ４７−５３）のＣＤＲ、軽鎖および重鎖可変ドメインまたは他の４−１ＢＢ結合性断片を含んでもよい。いくつかの態様において、ＧＩＴＲに関する抗原結合性断片は、例えば抗ＧＩＴＲ抗体ＴＲＸ−５１８（ＴｏｌｅｒｘＲ；  Ｓｃｈａｅｒら，（２０１０）  １１（１２）：  １３７８−１３８６）、またはクローンＡＩＴ  ５１８Ｄ（ＬｉｆｅＳｐａｎ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）のＣＤＲ、軽鎖および重鎖可変ドメインまたは他のＧＩＴＲ結合性断片を含んでもよい。いくつかの態様において、ＬＡＧ３に関する抗原結合性断片は、例えば抗ＬＡＧ３抗体クローン１７Ｂ４（Ｅｎｚｏ  Ｌｉｆｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）、クローン３３３２１０（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ）、またはクローン１４Ｌ６７６（Ｕｎｉｔｅｄ  Ｓｔａｔｅｓ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ）のＣＤＲ、軽鎖および重鎖可変ドメインまたは他のＬＡＧ３結合性断片を含んでもよい。いくつかの態様において、Ｂ７−Ｈ３に関する抗原結合性断片は、例えばＵＳ  ２０１３００７８２３４、ＷＯ２０１４１６０６２７またはＷＯ２０１１１０９４００に開示される抗Ｂ７−Ｈ３抗体クローンのＣＤＲ、軽鎖および重鎖可変ドメインまたは他のＢ７−Ｈ３結合性断片を含んでもよい。いくつかの態様において、Ｂ７−Ｈ４に関する抗原結合性断片は、例えばＷＯ２０１３０６７４９２、ＷＯ２００９０７３５３３またはＥＰ２９３４５７５に開示される抗Ｂ７−Ｈ４抗体クローン、例えばクローン２Ｈ９のＣＤＲ、軽鎖および重鎖可変ドメインまたは他のＢ７−Ｈ４結合性断片を含んでもよい。いくつかの態様において、ＢＴＬＡに関する抗原結合性断片は、例えば抗ＢＴＬＡ抗体クローン１Ｂ７、クローン２Ｇ８、クローン４Ｃ５（Ａｂｎｏｖａ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）、クローン４Ｂ８（ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ−ｏｎｌｉｎｅ）、クローンＭＩＨ２６（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  Ｐｉｅｒｃｅ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ）、クローンＵＭＡＢ６１（ＯｒｉＧｅｎｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）、クローン３３０１０４（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ）、クローン１Ｂ４（ＬｉｆｅＳｐａｎ  ＢｉｏＳｃｉｅｎｃｅｓ）、クローン４４０２０５、クローン５Ｅ７（Ｃｒｅａｔｉｖｅ  Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ）のＣＤＲ、軽鎖および重鎖可変ドメインまたは他のＢＴＬＡ結合性断片を含んでもよい。いくつかの態様において、ＣＴＬＡ４に関する抗原結合性断片は、例えば抗ＣＴＬＡ４抗体クローン２Ｆ１、クローン１Ｆ４（Ａｂｎｏｖａ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）、クローン９Ｈ１０（ＥＭＤ  Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）、クローンＢＮＵ３（ＧｅｎｅＴｅｘ）、クローン１Ｅ２、クローンＡＳ３２（ＬｉｆｅＳｐａｎ  ＢｉｏＳｃｉｅｎｃｅｓ）  クローンＡ３．４Ｈ２．Ｈ１２（Ａｃｒｉｓ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ）、クローン０６０（Ｓｉｎｏ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ）、クローンＢＵ５Ｇ３（Ｃｒｅａｔｉｖｅ  Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ）、クローンＭＩＨ８（ＭＢＬ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ）、クローンＡ３．６Ｂ１０．Ｇ１、またはクローンＬ３Ｄ１０（ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ）のＣＤＲ、軽鎖および重鎖可変ドメインまたは他のＣＴＬＡ４結合性断片を含んでもよい。いくつかの態様において、Ａ２ＡＲに関する抗原結合性断片は、例えば抗Ａ２ＡＲ抗体クローン７Ｆ６（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ；  Ｋｏｓｈｉｂａら  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ（１９９９）；  ５５：  ６１４−６２４のＣＤＲ、軽鎖および重鎖可変ドメインまたは他のＡ２ＡＲ結合性断片を含んでもよい。いくつかの態様において、ＶＩＳＴＡに関する抗原結合性断片は、例えばＷＯ２０１５０９７５３６またはＵＳ２０１４０１０５９１２に開示される抗ＶＩＳＴＡ抗体、例えばクローン１３Ｆ３のＣＤＲ、軽鎖および重鎖可変ドメインまたは他のＶＩＳＴＡ結合性断片を含んでもよい。いくつかの態様において、ＴＩＭ−３に関する抗原結合性断片は、例えば抗ＴＩＭ−３抗体クローンＦ３８−２Ｅ２（ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ）、クローン２Ｅ２（Ｍｅｒｃｋ  Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ；  Ｐｉｒｅｓ  ｄａ  Ｓｉｌｖａら，  Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｒｅｓ（２０１４）  ２（５）：  ４１０−４２２）、クローン６Ｂ６Ｅ２、クローン０２４（Ｓｉｎｏ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ）  クローン３４４８０１（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ）、クローンＥ−１８、クローンＨ−１９１（Ｓａｎｔａ  Ｃｒｕｚ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）、またはクローン１３Ａ２２４（Ｕｎｉｔｅｄ  Ｓｔａｔｅｓ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ）のＣＤＲ、軽鎖および重鎖可変ドメインまたは他のＴＩＭ−３結合性断片を含んでもよい。いくつかの態様において、ＰＤ−１に関する抗原結合性断片は、例えば抗ＰＤ−１抗体クローンＪ１１６、クローンＭＩＨ４（ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）、クローン７Ａ１１Ｂ１（Ｒｏｃｋｌａｎｄ  Ｉｍｍｕｎｏｃｈｅｍｉｃａｌｓ  Ｉｎｃ．）、クローン１９２１０６（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ）、クローンＪ１１０、クローンＪ１０５（ＭＢＬ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ）、クローン１２Ａ７Ｄ７、クローン７Ａ１１Ｂ１（Ａｂｂｉｏｔｅｃ）、クローン＃９Ｘ２１（ＭｙＢｉｏＳｏｕｒｃｅ．ｃｏｍ）、クローン４Ｈ４Ｄ１（Ｐｒｏｔｅｉｎｔｅｃｈ  Ｇｒｏｕｐ）、クローンＤ３Ｗ４Ｕ、クローンＤ３Ｏ４Ｓ（Ｃｅｌｌ  Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）、クローンＲＭＰ１−３０、クローンＲＭＰ１−１４（Ｍｅｒｃｋ  Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）、クローンＥＨ１２．２Ｈ７（ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ）、クローン１０Ｂ１２２７（Ｕｎｉｔｅｄ  Ｓｔａｔｅｓ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ）、クローンＵＭＡＢ１９８、クローンＵＭＡＢ１９７（Ｏｒｉｇｅｎｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）、ニボルマブ（ＢＭＳ−９３６５５８）、ラムブロリズマブ、あるいはＷＯ  ２０１０／０７７６３４またはＷＯ  ２００６／１２１１６８に記載される抗ＰＤ−１抗体のＣＤＲ、軽鎖および重鎖可変ドメインまたは他のＰＤ−１結合性断片を含んでもよい。いくつかの態様において、ＫＩＲに関する抗原結合性断片は、例えば抗ＫＩＲ抗体クローン１−７Ｆ９（Ｒｏｍａｇｎｅら，  Ｂｌｏｏｄ（２００９）  １１４（１３）：  ２６６７−２６７７）、リリルマブ（ＢＭＳ−９８６０１５；  Ｓｏｌａら，  Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ  Ｃａｎｃｅｒ（２０１３）；  １：Ｐ４０）あるいはＵＳ  ２０１５／０３４４５７６またはＷＯ  ２０１４／０６６５３２に記載される抗ＫＩＲのＣＤＲ、軽鎖および重鎖可変ドメインまたは他のＫＩＲ結合性断片を含んでもよい。いくつかの態様において、ＨＥＲ−２に関する抗原結合性断片は、例えば抗ＨＥＲ−２抗体、トラスツズマブ（ハーセプチン）、あるいはＷＯ  ２００３／００６５０９またはＷＯ  ２００８／０１９２９０に記載される抗ＨＥＲ−２抗体のＣＤＲ、軽鎖および重鎖可変ドメインまたは他のＨＥＲ−２結合性断片を含んでもよい。いくつかの態様において、ＨＥＲ−３に関する抗原結合性断片は、例えば抗ＨＥＲ−３抗体クローンＭＭ−１２１（Ｌｙｕら，  Ｉｎｔ．  Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｅｘｐ  Ｐａｔｈｏｌ（２０１５）  ８（６）：  ６１４３−６１５６）、ＭＥＨＤ７９４５Ａ（Ｓｃｈａｅｆｅｒら，  Ｃａｎｃｅｒ  Ｃｅｌｌ（２０１１）  ２０（４）：  ４７２−４８６）、ＡＭＧ  ８８８（Ｕ３−１２８７；  Ａｕｒｉｓｉｃｃｈｉｏら，  Ｏｎｃｏｔａｒｇｅｔ（２０１２）  ３（８）：  ７４４−７５８）あるいはＷＯ２００８／１００６２４またはＷＯ  ２０１３０４８８８３に記載される抗ＨＥＲ−３抗体のＣＤＲ、軽鎖および重鎖可変ドメインまたは他のＨＥＲ−３結合性断片を含んでもよい。いくつかの態様において、ＥＧＦＲに関する抗原結合性断片は、例えば抗ＥＧＦＲ抗体パニツムマブ（ＡＢＸ−ＥＧＦ；  Ｖｅｃｔｉｂｉｘ）、セツキシマブ（エルビタックス）、ニモツズマブ、マタズマブ（ＥＭＤ  ７２００）または抗体クローン０４８−００６（Ｓｏｇａｗａら，  Ｎｕｃｌ  Ｍｅｄ  Ｃｏｍｍ（２０１２）  ３３（７）：  ７１９−７２５）のＣＤＲ、軽鎖および重鎖可変ドメインまたは他のＥＧＦＲ結合性断片を含んでもよい。いくつかの態様において、ＥｐＣＡＭに関する抗原結合性断片は、例えば抗ＥｐＣＡＭ抗体エドレコロマブ、ＩＮＧ−１、３６２２Ｗ４、またはアデカツムマブ（Ｍｕｎｚら，  Ｃａｎｃｅｒ  Ｃｅｌｌ  Ｉｎｔ（２０１０）  １０：４４）のＣＤＲ、軽鎖および重鎖可変ドメインまたは他のＥｐＣＡＭ結合性断片を含んでもよい。いくつかの態様において、ＣＤ３０に関する抗原結合性断片は、例えば抗ＣＤ３０抗体ブレンツキシマブ（ｃＡＣ１０）、クローンＳＧＮ−３０（Ｗａｈｌら，  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ  ２
００２  ６２（１３）：３７３６−３７４２）、クローン５Ｆ１１（Ｂｏｒｃｈｍａｎｎら，  Ｂｌｏｏｄ（２００３）  １０２（１）：  ３７３７−３７４２）、あるいはＷＯ  １９９３０２４１３５またはＷＯ  ２００３０５９２８２に記載される抗ＣＤ３０抗体のＣＤＲ、軽鎖および重鎖可変ドメインまたは他のＣＤ３０結合性断片を含んでもよい。いくつかの態様において、ＣＤ３３に関する抗原結合性断片は、例えば抗ＣＤ３３抗体リンツズマブ（ＳＧＮ−３３）、ゲムツズマブ（Ｍｙｌｏｔａｒｇ）、またはクローンｈＰ６７．７（Ｓｉｅｖｅｒｓら，  Ｂｌｏｏｄ（１９９９）  ９３（１１）：  ３６７８−３６８４）のＣＤＲ、軽鎖および重鎖可変ドメインまたは他のＣＤ３３結合性断片を含んでもよい。いくつかの態様において、ＣＤ３８に関する抗原結合性断片は、例えば抗ＣＤ３８抗体ダラツムマブ（ダルザレックス）、ＳＡＲ６５０９８４（Ｍａｒｔｉｎら，  Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｏｎｃｏｌ（２０１４）  ３２：５ｓ，（ｓｕｐｐｌ；  ａｂｓｔｒ  ８５３２）またはＭＯＲ２０２（ＭｏｒｐｈｏＳｙｓ  ＡＧ）、あるいはＷＯ  ２００６０９９８７５またはＵＳ  ２０１００２８５００４に記載される抗ＣＤ３８抗体のＣＤＲ、軽鎖および重鎖可変ドメインまたは他のＣＤ３８結合性断片を含んでもよい。いくつかの態様において、ＣＤ２０に関する抗原結合性断片は、例えば抗ＣＤ２０抗体リツキシマブ、オクレリズマブ、オファツムマブ、オビヌツズマブまたはＢＭ−ｃａ（Ｋｏｂａｙａｓｈｉら，  Ｃａｎｃｅｒ  Ｍｅｄ（２０１３）  ２（２）：  １３０−１４３）のＣＤＲ、軽鎖および重鎖可変ドメインまたは他のＣＤ２０結合性断片を含んでもよい。いくつかの態様において、ＣＤ２４に関する抗原結合性断片は、例えば抗ＣＤ２４抗体クローンｅＢｉｏＳＮ３（ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）、クローンＭＬ５（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）、またはＷＯ  ２００８０５９４９１に記載される抗ＣＤ２４抗体のＣＤＲ、軽鎖および重鎖可変ドメインまたは他のＣＤ２４結合性断片を含んでもよい。いくつかの態様において、ＣＤ９０に関する抗原結合性断片は、例えば抗ＣＤ９０抗体クローン５Ｅ１０（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）のＣＤＲ、軽鎖および重鎖可変ドメインまたは他のＣＤ９０結合性断片を含んでもよい。いくつかの態様において、ＣＤ１５に関する抗原結合性断片は、例えば抗ＣＤ１５抗体クローンＣ３Ｄ−１、Ｃａｒｂ−３（ＤＡＫＯ  Ａ／Ｓ）、ＭＭＡ（Ｒｏｃｈｅ）またはＢＹ８７（Ａｂｃａｍ）のＣＤＲ、軽鎖および重鎖可変ドメインまたは他のＣＤ１５結合性断片を含んでもよい。いくつかの態様において、ＣＤ５２に関する抗原結合性断片は、例えば抗ＣＤ５２抗体アレムツズマブ、クローンＨＩ１８６、またはクローンＹＴＨ３４．５（ＡｂＤ  Ｓｅｒｏｔｅｃ）のＣＤＲ、軽鎖および重鎖可変ドメインまたは他のＣＤ５２結合性断片を含んでもよい。いくつかの態様において、ＣＡ−１２５に関する抗原結合性断片は、例えば抗ＣＡ−１２５抗体オレゴボマブのＣＤＲ、軽鎖および重鎖可変ドメインまたは他のＣＡ−１２５結合性断片を含んでもよい。いくつかの態様において、ＣＤ３４に関する抗原結合性断片は、例えば抗ＣＤ３４抗体クローン５６１（ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ）、クローン５８１（Ｂｅｃｋｔｏｎ  Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ）、またはクローン５Ｆ３（Ｓｉｇｍａ  Ａｌｄｒｉｃｈ）のＣＤＲ、軽鎖および重鎖可変ドメインまたは他のＣＤ３４結合性断片を含んでもよい。いくつかの態様において、ＣＡ−１５−３に関する抗原結合性断片は、例えば抗ＣＡ−１５−３抗体クローン２Ｆ１６（ＵＳＢｉｏｌｏｇｉｃａｌ）、クローンＴＡ９９８（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）、クローン１Ｄ１（Ｓｉｇｍａ  Ａｌｄｒｉｃｈ）、またはＭａｂ  ＡＲ２０．５（Ｑｉら，  Ｈｙｂｒｉｄ  Ｈｙｂｒｉｄｏｍｉｃｓ（２００１）  ２０（５−６）：  ３１３−３２４）のＣＤＲ、軽鎖および重鎖可変ドメインまたは他のＣＡ−１５−３結合性断片を含んでもよい。いくつかの態様において、ＣＡ−１９−９に関する抗原結合性断片は、例えば抗ＣＡ−１９−９抗体クローン１１６−ＮＳ−１９−９（ＤＡＫＯ  Ａ／Ｓ）、クローンＳＰＭ１１０、またはクローン１２１ＳＬＥ（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）のＣＤＲ、軽鎖および重鎖可変ドメインまたは他のＣＡ−１９−９結合性断片を含んでもよい。いくつかの態様において、ＣＥＡに関する抗原結合性断片は、例えば抗ＣＥＡ抗体ラベツズマブ、Ｃ２−４５（協和発酵キリン株式会社）あるいはＩｍａｋｉｉｒｅら，  Ｉｎｔ  Ｊ  Ｃａｎｃｅｒ（２００４）  １０８：  ５６４−５７０またはＷＯ  ２０１１０３４６６０に開示される抗ＣＥＡ抗体のＣＤＲ、軽鎖および重鎖可変ドメインまたは他のＣＥＡ結合性断片を含んでもよい。いくつかの態様において、ＣＤ９９に関する抗原結合性断片は、例えば抗ＣＤ９９抗体クローンＣ７Ａ（Ｍｏｒｉｃｏｌｉら，  Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｍｅｔｈｏｄｓ（２０１４）  ４０８：  ３５−４５）またはクローン１２Ｅ７（ＤＡＫＯ  Ａ／Ｓ）のＣＤＲ、軽鎖および重鎖可変ドメインまたは他のＣＤ９９結合性断片を含んでもよい。いくつかの態様において、ＣＤ１１７に関する抗原結合性断片は、例えば抗ＣＤ１１７抗体クローンＣＫ６（Ｌｅｂｒｏｎら，  Ｃａｎｃｅｒ  Ｂｉｏｌ  Ｔｈｅｒ（２０１４）  １５（９）：  １２０８−１２１８）、またはクローン１０４Ｄ２（Ｓｉｇｍａ  Ａｌｄｒｉｃｈ）のＣＤＲ、軽鎖および重鎖可変ドメインまたは他のＣＤ１１７結合性断片を含んでもよい。いくつかの態様において、ＣＤ３１に関する抗原結合性断片は、例えば抗ＣＤ３１抗体クローンＪＣ７０Ａ（ＤＡＫＯ  Ａ／Ｓ）のＣＤＲ、軽鎖および重鎖可変ドメインまたは他のＣＤ３１結合性断片を含んでもよい。いくつかの態様において、ＣＤ４４に関する抗原結合性断片は、例えば抗ＣＤ４４抗体ＰＦ−０３４７５９５２（Ｒｕｎｎｅｌｓら，  Ａｄｖ  Ｔｈｅｒ（２０１０）；  ２７（３）：  １６８−１８０）、ＲＧ７３５６（Ｖｕｇｔｓら，  ＭＡｂｓ（２０１４）  ６（２）：  ５６７−５７５）、クローンＩＭ７、またはクローンＡ３Ｄ８（Ｓｉｇｍａ  Ａｌｄｒｉｃｈ）のＣＤＲ、軽鎖および重鎖可変ドメインまたは他のＣＤ４４結合性断片を含んでもよい。いくつかの態様において、ＣＤ１２３に関する抗原結合性断片は、例えば抗ＣＤ１２３抗体ＣＳＬ３６２（Ｎｉｅｖｅｒｇａｌｌら，  Ｂｌｏｏｄ（２０１４）  １２３（８）：１２１８−１２���８）、ＣＳＬ３６０（Ｈｅら，  Ｌｅｕｋ  Ｌｙｍｐｈｏｍａ（２０１５）  ５６（５）：  １４０６−１４１５）、７３Ｇ（Ｊｉｎら，  Ｃｅｌｌ  Ｓｔｅｍ  Ｃｅｌｌ（２００９）  ５（１）：  ３１−４２）、クローン６Ｈ６（ＡｂＤ  Ｓｅｒｏｔｅｃ）またはＷＯ  ２０１４１３０６３５に記載される抗ＣＤ１２３抗体のＣＤＲ、軽鎖および重鎖可変ドメインまたは他のＣＤ１２３結合性断片を含んでもよい。いくつかの態様において、ＣＤ１３３に関する抗原結合性断片は、例えば抗ＣＤ１３３抗体クローン６Ｂ３、クローン９Ｇ４、クローンＡＣ１４１（Ｗａｎｇら，  Ｈｙｂｒｉｄｏｍａ（Ｌａｒｃｈｍｔ）（２０１０）  ２９（３）：  ２４１−２４９）、クローン６Ｂ６（Ｃｈｅｎら，  Ｈｙｂｒｉｄｏｍａ（Ｌａｒｃｈｍｔ）（２０１０）  ２９（４）：  ３０５−３１０、クローンＡＣ１１３（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ  Ｂｉｏｔｅｃ）、またはＷＯ  ２０１１１４９４９３に記載される抗ＣＤ１３３抗体のＣＤＲ、軽鎖および重鎖可変ドメインまたは他のＣＤ１３３結合性断片を含んでもよい。いくつかの態様において、ＡＢＣＢ５に関する抗原結合性断片は、例えば抗ＡＢＣＢ５抗体クローン５Ｈ３Ｃ６（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）のＣＤＲ、軽鎖および重鎖可変ドメインまたは他のＡＢＣＢ５結合性断片を含んでもよい。いくつかの態様において、ＣＤ４５に関する抗原結合性断片は、例えば抗ＣＤ４５抗体ＹＡＭＬ５６８（Ｇｌａｔｔｉｎｇら，  Ｊ  Ｎｕｃｌ  Ｍｅｄ（２００６）  ４７（８）：  １３３５−１３４１）またはクローンＢＲＡ−５５（Ｓｉｇｍａ  Ａｌｄｒｉｃｈ）のＣＤＲ、軽鎖および重鎖可変ドメインまたは他のＣＤ４５結合性断片を含んでもよい。
【００８８】
本発明記載の二重特異性抗体の抗原結合性断片または二重特異性抗原結合性断片は、抗原に結合可能なポリペプチドの任意の断片であってもよい。いくつかの態様において、抗原結合性断片は、ともに抗体の抗原結合性領域または抗原結合性断片を定義する少なくとも３つの軽鎖ＣＤＲ（すなわちＬＣ−ＣＤＲ１、ＬＣ−ＣＤＲ２およびＬＣ−ＣＤＲ３）および３つの重鎖ＣＤＲ（すなわちＨＣ−ＣＤＲ１、ＨＣ−ＣＤＲ２およびＨＣ−ＣＤＲ３）を含む。いくつかの態様において、抗原結合性断片は、抗体または抗原結合性断片の軽鎖可変ドメインおよび重鎖可変ドメインを含んでもよい。いくつかの態様において、抗原結合性断片は、抗体または抗原結合性断片の軽鎖ポリペプチドおよび重鎖ポリペプチドを含んでもよい。
【００８９】
本発明記載の二重特異性抗体および二重特異性抗原結合性断片は、任意の適切な形式、例えば本明細書にその全体が援用されるＫｏｎｔｅｒｍａｎｎ  ＭＡｂｓ  ２０１２，  ４（２）：  １８２−１９７に記載される形式で提供されてもよい。例えば、二重特異性抗体または二重特異性抗原結合性断片は、二重特異性抗体コンジュゲート（例えばＩｇＧ２、Ｆ（ａｂ’）２またはＣｏｖＸ−Ｂｏｄｙ）、二重特異性ＩｇＧまたはＩｇＧ様分子（例えばＩｇＧ、ｓｃＦｖ４−Ｉｇ、ＩｇＧ−ｓｃＦｖ、ｓｃＦｖ−ＩｇＧ、ＤＶＤ−Ｉｇ、ＩｇＧ−ｓＶＤ、ｓＶＤ−ＩｇＧ、２イン１−ＩｇＧ、ｍＡｂ２、またはＴａｎｄｅｍａｂ共通ＬＣ）、非対称二重特異性ＩｇＧまたはＩｇＧ様分子（例えばｋｉｈ  ＩｇＧ、ｋｉｈ  ＩｇＧ共通ＬＣ、ＣｒｏｓｓＭａｂ、ｋｉｈ  ＩｇＧ−ｓｃＦａｂ、ｍＡｂ−Ｆｖ、電荷対（ｃｈａｒｇｅ  ｐａｉｒ）またはＳＥＥＤ−ｂｏｄｙ）、小分子二重特異性抗体分子（例えばＤｉａｂｏｄｙ（Ｄｂ）、ｄｓＤｂ、ＤＡＲＴ、ｓｃＤｂ、ｔａｎｄＡｂｓ、タンデムｓｃＦｖ（ｔａＦｖ）、タンデムｄＡｂ／ＶＨＨ、三重ボディ、三重ヘッド、Ｆａｂ−ｓｃＦｖ、またはＦ（ａｂ’）２−ｓｃＦｖ２）、二重特異性ＦｃおよびＣＨ３融合タンパク質（例えばｔａＦｖ−Ｆｃ、Ｄｉ−ディアボディ、ｓｃＤｂ−ＣＨ３、ｓｃＦｖ−Ｆｃ−ｓｃＦｖ、ＨＣＡｂ−ＶＨＨ、ｓｃＦｖ−ｋｉｈ−Ｆｃ、またはｓｃＦｖ−ｋｉｈ−ＣＨ３）、または二重特異性融合タンパク質（例えばｓｃＦｖ２−アルブミン、ｓｃＤｂ−アルブミン、ｔａＦｖ−毒素、ＤＮＬ−Ｆａｂ３、ＤＮＬ−Ｆａｂ４−ＩｇＧ、ＤＮＬ−Ｆａｂ４−ＩｇＧ−サイトカイン２）であってもよい。特に、Ｋｏｎｔｅｒｍａｎｎ  ＭＡｂｓ  ２０１２，  ４（２）：  １８２−１９の図２を参照されたい。
【００９０】
当業者は、本発明記載の二重特異性抗体および二重特異性抗原結合性断片を設計し、そして調製することが可能である。
二重特異性抗体を産生するための方法には、例えば還元可能ジスルフィドまたは還元不能チオエーテル結合を用いた、例えば本明細書にその全体が援用されるＳｅｇａｌおよびＢａｓｔ，  ２００１．  二重特異性抗体の産生。  Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ．  １４：ＩＶ：２．１３：２．１３．１−２．１３．１６に記載されるような、抗体または抗体断片の化学的架橋が含まれる。例えば、Ｎ−スクシニミジル−３−（−２−ピリジルジチオ）−プロピオネート（ＳＰＤＰ）を用いて、例えばヒンジ領域ＳＨ基を通じてＦａｂ断片を化学的に架橋して、ジスルフィド連結二重特異性Ｆ（ａｂ）２ヘテロ二量体を生成してもよい。
【００９１】
二重特異性抗体を産生するための他の方法には、抗体産生ハイブリドーマを、例えばポリエチレングリコールで融合させて、例えばＤ．  Ｍ．およびＢａｓｔ，  Ｂ．  Ｊ．  ２００１．  二重特異性抗体の産生。  Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ．  １４：ＩＶ：２．１３：２．１３．１−２．１３．１６に記載されるような二重特異性抗体を分泌可能なクアドローマ細胞を産生することが含まれる。
【００９２】
本発明記載の二重特異性抗体および二重特異性抗原結合性断片はまた、組換え的に、例えばどちらも本明細書にその全内容が援用される、Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ：  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ａｎｄ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ，  第２版（Ｈｕｍａｎａ  Ｐｒｅｓｓ，  ２０１２），  第４０章：  Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｂｉｓｐｅｃｉｆｉｃ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：  Ｄｉａｂｏｄｉｅｓ  ａｎｄ  Ｔａｎｄｅｍ  ｓｃＦｖ（Ｈｏｒｎｉｇ  ａｎｄ  Ｆａｒｂｅｒ−Ｓｃｈｗａｒｚ）、または  Ｆｒｅｎｃｈ，  二重特異性抗体作製法，  Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｍｏｌ．  Ｍｅｄ．  ２０００；  ４０：３３３−３３９に記載されるような、抗原結合性分子のためのポリペプチドをコードする核酸構築物からの発現によって産生可能である。例えば、２つの抗原結合性断片のための軽鎖および重鎖可変ドメイン（すなわちＰＤ−Ｌ１に結合可能な抗原結合性断片のための軽鎖および重鎖可変ドメイン、ならびに別のターゲットタンパク質に結合可能な抗原結合性断片のための軽鎖および重鎖可変ドメイン）をコードし、そして抗原結合性断片間に適切なリンカーまたは二量体化ドメインをコードする配列を含むＤＮＡ構築物を、分子クローニング技術によって調製してもよい。その後、組換え二重特異性抗体を、適切な宿主細胞（例えば哺乳動物宿主細胞）において構築物を発現させる（例えばｉｎ  ｖｉｔｒｏ）ことによって産生してもよく、そして次いで、発現した組換え二重特異性抗体を場合によって精製してもよい。
【００９３】
非修飾親抗体に比較して、抗原に対する抗体のアフィニティが改善されている修飾抗体を生成する、アフィニティ成熟プロセスによって抗体を産生してもよい。当該技術分野に知られる方法、例えばＭａｒｋｓら，  Ｒｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  １０：７７９−７８３（１９９２）；  Ｂａｒｂａｓら  Ｐｒｏｃ  Ｎａｔ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ  ９１：３８０９−３８１３（１９９４）；  Ｓｃｈｉｅｒら  Ｇｅｎｅ  １６９：１４７−１５５（１９９５）；  Ｙｅｌｔｏｎら  Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  １５５：１９９４−２００４（１９９５）；  Ｊａｃｋｓｏｎら，  Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  １５４（７）：３３１  ０−１５  ９（１９９５）；およびＨａｗｋｉｎｓら，  Ｊ．  Ｍｏｌ．  Ｂｉｏｌ．  ２２６：８８９−８９６（１９９２）によって、アフィニティ成熟抗体を産生してもよい。
【００９４】
本発明記載の抗体は、好ましくはＰＤ−Ｌ１に対する特異的結合を示す。ターゲット分子に特異的に結合する抗体は、好ましくは、他のターゲットに結合するよりもより高いアフィニティで、および／またはより長い期間ターゲットに結合する。本発明の抗体は、ＣＤ２８ファミリーの別のメンバーに対するより、ＰＤ−Ｌ１により高いアフィニティで結合しうる。いくつかの態様において、本発明の抗体は、ＰＤ−Ｌ２、ＴＩＭ−３、ＬＡＧ−３、ＩＣＯＳ、ＢＴＬＡ、ＣＤ２８またはＣＴＬＡ−４の１またはそれより多くに対するよりも、ＰＤ−Ｌ１により高いアフィニティで結合しうる。１つの態様において、非関連ターゲットに対する抗体の結合の度合いは、例えばＥＬＩＳＡによってまたはラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）によって測定されるような、ターゲットに対する抗体の結合の約１０％未満である。あるいは、結合特異性は、本発明の抗ＰＤ−Ｌ１抗体が、別のターゲット分子、例えばＣＤ２８ファミリーの別のメンバーに対する抗体のＫＤよりも少なくとも０．１桁分（すなわち０．１ｘ１０ｎ、式中、ｎは桁を示す整数である）高いＫＤで、ＰＤ−Ｌ１に結合する結合アフィニティの観点から、反映されうる。これは、場合によって、少なくとも０．２、０．３、０．４、０．５、０．６、０．７、０．８、０．９、１．０、１．５、または２．０の１つであってもよい。
【００９５】
本発明記載の抗体は、好ましくは、≦１０ｎＭ、≦１ｎＭ、≦５００ｐＭ、≦４００ｐＭまたは≦３００ｐＭの１つの解離定数（ＫＤ）を有する。ＫＤは、約０．１〜約４ｎＭの範囲であってもよい。抗体のそのターゲットに対する結合アフィニティは、しばしば、解離定数（ＫＤ）の観点で記載される。結合アフィニティは、当該技術分野に知られる方法によって、例えば、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）によって、または抗体のＦａｂ型および抗原分子で行う放射標識抗原結合アッセイ（ＲＩＡ）によって、測定可能である。
【００９６】
本発明記載の抗体は、好ましくは、アテゾリズマブ（ＭＰＤＬ３２８０Ａ；ＲＧ７４４６）による結合のアフィニティより高いアフィニティまたはそれと類似のアフィニティで、ＰＤ−Ｌ１（例えばヒトＰＤ−Ｌ１）への結合を示す。
【００９７】
本明細書において、参照抗体に比較して、所定のターゲット分子に対して「より高いアフィニティ」を示す抗体は、ターゲット分子に対する参照抗体の結合の強度に比較した際、より高い強度でそのターゲット分子に結合する。所定のターゲット分子に対する抗体のアフィニティを定量的に決定することも可能である。
【００９８】
アテゾリズマブに比較したＰＤ−Ｌ１に対する本発明記載の抗体の結合の相対的アフィニティを、本明細書に記載するように、例えばＥＬＩＳＡによって決定することも可能である。いくつかの態様において、本発明記載の抗体は、ＰＤ−Ｌ１に対するアテゾリズマブの解離定数（ＫＤ）より小さいまたは該ＫＤと等しい、ＰＤ−Ｌ１に対するＫＤを有することも可能である。
【００９９】
いくつかの態様において、本発明記載の抗体は、所定のアッセイにおいて、ＰＤ−Ｌ１に対するアテゾリズマブのアフィニティよりも、１．０１倍またはそれより高い、１．０５倍またはそれより高い、１．１倍またはそれより高い、１．１５倍またはそれより高い、１．２倍またはそれより高い、１．２５倍またはそれより高い、１．３倍またはそれより高い、１．３５倍またはそれより高い、１．４倍またはそれより高い、１．４５倍またはそれより高い、１．５倍またはそれより高い、ＰＤ−Ｌ１に対するアフィニティを有することも可能である。いくつかの態様において、本発明記載の抗体は、所定のアッセイにおいて、ＰＤ−Ｌ１に対するアテゾリズマブのＫＤ値よりも、０．９９倍またはそれより低い、０．９５倍またはそれより低い、０．９倍またはそれより低い、０．８５倍またはそれより低い、０．８倍またはそれより低い、０．７５倍またはそれより低い、０．７倍またはそれより低い、０．６５倍またはそれより低い、０．６倍またはそれより低い、０．５５倍またはそれより低い、０．５倍またはそれより低いＫＤ値で、ＰＤ−Ｌ１に結合可能である。
【０１００】
本発明記載の抗体は、好ましくは、アテゾリズマブによる結合のアビディティより高いアビディティまたはそれと類似のアビディティで、ＰＤ−Ｌ１（例えばヒトＰＤ−Ｌ１）に結合する。
【０１０１】
本明細書において、参照抗体に比較して、所定のターゲット分子に対して「より高いアビディティ」を示す抗体は、そのターゲット分子に結合して、該ターゲット分子に参照抗体が結合することによって形成される抗体：ターゲット複合体に比較した際、より強い抗体：ターゲット複合体（例えばより安定な抗体：ターゲット複合体）を形成する。所定のターゲット分子に対する抗体のアビディティを定量的に決定することも可能である。
【０１０２】
アテゾリズマブに比較したＰＤ−Ｌ１に対する本発明記載の抗体の結合の相対的アビディティを、本明細書に記載するように、ＥＬＩＳＡによって決定することも可能である。いくつかの態様において、本発明記載の抗体は、ＰＤ−Ｌ１に対するアテゾリズマブの結合のアビディティより高いまたは該アビディティと等しい、ＰＤ−Ｌ１に対する結合のアビディティを有することも可能である。
【０１０３】
いくつかの態様において、本発明記載の抗体は、所定のアッセイにおいて、ＰＤ−Ｌ１に対するアテゾリズマブの結合のアビディティよりも、１．０１倍またはそれより高い、１．０５倍またはそれより高い、１．１倍またはそれより高い、１．１５倍またはそれより高い、１．２倍またはそれより高い、１．２５倍またはそれより高い、１．３倍またはそれより高い、１．３５倍またはそれより高い、１．４倍またはそれより高い、１．４５倍またはそれより高い、１．５倍またはそれより高い、ＰＤ−Ｌ１に対する結合のアビディティを有することも可能である。
【０１０４】
本発明記載の抗体は、好ましくは、アテゾリズマブによる、ＰＤ−Ｌ１およびＰＤ−１の間の相互作用の阻害／防止より高い度合い、またはそれと類似の度合いで、ＰＤ−Ｌ１およびＰＤ−１（例えばヒトＰＤ−Ｌ１およびヒトＰＤ−１）の間の相互作用を阻害するかまたは防止する。アテゾリズマブに比較した、ＰＤ−Ｌ１に対する本発明記載の抗体のＰＤ−Ｌ１およびＰＤ−１の間の相互作用の相対的阻害／防止は、本明細書に記載するように、例えばＥＬＩＳＡによって決定可能である。いくつかの態様において、本発明記載の抗体は、アテゾリズマブによる、ＰＤ−Ｌ１およびＰＤ−１の間の相互作用の阻害／防止より高い、またはそれと等しい度合いで、ＰＤ−Ｌ１およびＰＤ−１の間の相互作用を阻害／防止することも可能である。いくつかの態様において、本発明記載の抗体は、所定のアッセイにおいて、アテゾリズマブによる、ＰＤ−Ｌ１およびＰＤ−１の間の相互作用の阻害／防止よりも、１．０１倍またはそれより高い、１．０５倍またはそれより高い、１．１倍またはそれより高い、１．１５倍またはそれより高い、１．２倍またはそれより高い、１．２５倍またはそれより高い、１．３倍またはそれより高い、１．３５倍またはそれより高い、１．４倍またはそれより高い、１．４５倍またはそれより高い、１．５倍またはそれより高い度合いで、ＰＤ−Ｌ１およびＰＤ−１の間の相互作用を阻害／防止することも可能である。
【０１０５】
いくつかの態様において、本発明記載の抗体は、アテゾリズマブによるＰＤ−Ｌ１およびＰＤ−１の間の相互作用の阻害に関するＩＣ５０値よりも低い、相互作用の最大半量阻害値（すなわちＰＤ−Ｌ１およびＰＤ−１の間の相互作用の阻害に関するＩＣ５０値）で、ＰＤ−Ｌ１およびＰＤ−１の間の相互作用を阻害／防止することも可能である。いくつかの態様において、本発明記載の抗体は、所定のアッセイにおいて、アテゾリズマブによるＰＤ−Ｌ１およびＰＤ−１の間の相互作用の阻害に関するＩＣ５０値の０．９９倍またはそれより低い、０．９５倍またはそれより低い、０．９倍またはそれより低い、０．８５倍またはそれより低い、０．８倍またはそれより低い、０．７５倍またはそれより低い、０．７倍またはそれより低い、０．６５倍またはそれより低い、０．６倍またはそれより低い、０．５５倍またはそれより低い、０．５倍またはそれより低いＩＣ５０値で、ＰＤ−Ｌ１およびＰＤ−１の間の相互作用を阻害／防止することも可能である。
【０１０６】
本発明記載の抗体は、結合する抗原の生物学的活性を阻害するかまたは減少させる「アンタゴニスト」抗体であることも可能である。ＰＤ−１およびＰＤ−Ｌ１の間の相互作用のブロッキングは、ＰＤ−１によって仲介される免疫阻害シグナル伝達経路を阻害することによって、Ｔ細胞機能の回復を補助する。
【０１０７】
ＰＤ−Ｌ１はまた、Ｂ７−１（ＣＤ８０）に結合することも示されてきており、その相互作用はまた、Ｔ細胞増殖およびサイトカイン産生を抑制する。
いくつかの側面において、抗体は、クローンＡ１またはＡ１の変異体である。Ａ１は、以下のＣＤＲ配列を含む：
【０１０８】
【化１２】
2018508475.tif 000014
【０１０９】
ＣＤＲ配列はＫａｂａｔ定義によって決定される。
いくつかの側面において、抗体は、クローンＣ２またはＣ２の変異体である。Ｃ２は、以下のＣＤＲ配列を含む：
【０１１０】
【化１３】
2018508475.tif 000015
【０１１１】
ＣＤＲ配列はＫａｂａｔ定義によって決定される。
いくつかの側面において、抗体は、クローンＣ４またはＣ４の変異体である。Ｃ４は、以下のＣＤＲ配列を含む：
【０１１２】
【化１４】
2018508475.tif 000016
【０１１３】
ＣＤＲ配列はＫａｂａｔ定義によって決定される。
いくつかの側面において、抗体は、クローンＨ１２またはＨ１２の変異体である。いくつかの側面において、抗体は、クローンＨ１２＿ＧＬ、またはＨ１２＿ＧＬの変異体である。Ｈ１２およびＨ１２＿ＧＬは、各々、以下のＣＤＲ配列を含む：
【０１１４】
【化１５】
2018508475.tif 000017
【０１１５】
ＣＤＲ配列はＫａｂａｔ定義によって決定される。
本発明記載の抗体は、Ａ１、Ｃ２、Ｃ４、Ｈ１２、またはＨ１２＿ＧＬのＣＤＲ、あるいは配列番号１および５；２および６；３および７；４および８；または４および３５の１つを含んでもよい。本発明記載の抗体において、６つのＣＤＲ配列の１つまたは２つまたは３つまたは４つは多様であってもよい。変異体は、６つのＣＤＲ配列の１つまたは２つにおいて、１つまたは２つのアミノ酸置換を有してもよい。
【０１１６】
抗ＰＤ−Ｌ１クローンのＶＨおよびＶＬ鎖のアミノ酸配列を図１および２に示す。コードヌクレオチド配列を図４に示す。
軽鎖および重鎖ＣＤＲはまた、いくつかの異なるフレームワーク領域と組み合わせて特に有用でありうる。したがって、ＬＣ−ＣＤＲ１〜３またはＨＣ−ＣＤＲ１〜３を有する軽鎖および／または重鎖は、代替フレームワーク領域を所持してもよい。適切なフレームワーク領域は、当該技術分野に周知であり、そして例えば、本明細書に援用されるＭ．  Ｌｅｆｒａｎｃ  ＆  Ｇ．  Ｌｅｆｒａｎｃ  （２００１）  ”Ｔｈｅ  Ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎ  ＦａｃｔｓＢｏｏｋ”，  Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓに記載される。
【０１１７】
本明細書において、抗体は、配列番号１および５；２および６；３および７；４および８；または４および３５のＶＨおよび／またはＶＬアミノ酸配列の１またはそれより多く、あるいは図１および２に示すアミノ酸配列の１つに高い割合の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨおよび／またはＶＬ鎖を有してもよい。
【０１１８】
例えば、本発明記載の抗体には、ＰＤ−Ｌ１に結合し、そして配列番号１〜８および３５の１つのＶＨまたはＶＬ鎖アミノ酸配列に、あるいは図１および２に示すアミノ酸配列の１つに、少なくとも７０％、より好ましくは少なくとも７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の１つの配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、ＶＨ鎖またはＶＬ鎖を有する抗体が含まれる。
【０１１９】
本発明記載の抗体は、検出可能に標識されるか、または少なくとも検出可能であってもよい。例えば、抗体を、放射性原子または着色分子または蛍光分子または任意の他の方法で容易に検出可能な分子で標識してもよい。適切な検出可能分子には、蛍光タンパク質、ルシフェラーゼ、酵素基質、および放射標識が含まれる。結合部分を直接、検出可能標識で標識してもよいし、または間接的に標識してもよい。例えば、結合部分は、それ自体標識されている別の抗体によって検出可能な、非標識抗体であってもよい。あるいは、第二の抗体が該抗体に結合したビオチンを有してもよく、そしてビオチンに対する標識ストレプトアビジンの結合を用いて、第一の抗体を間接的に標識する。
【０１２０】
検出法
本明細書記載の抗体または抗原結合性断片を、ＰＤ−Ｌ１に対する抗体または抗原結合性断片の結合を伴う方法で用いてもよい。こうした方法は、抗体または抗原結合性断片およびＰＤ−Ｌ１の結合した複合体の検出を伴うことも可能である。こうしたものとして、１つの態様において、ＰＤ−Ｌ１を含有するかまたは含有すると推測される試料を、本明細書に記載するような抗体または抗原結合性断片と接触させ、そして抗体または抗原結合性断片およびＰＤ−Ｌ１の複合体の形成を検出する工程を含む方法を提供する。
【０１２１】
サンドイッチアッセイ、例えばＥＬＩＳＡなどのイムノアッセイを含む適切な方法形式は、当該技術分野に周知である。該方法は、抗体または抗原結合性断片、またはＰＤ−Ｌ１、あるいは両方を、検出可能標識、例えば蛍光、発光または放射標識で標識することを伴ってもよい。ＰＤ−Ｌ１発現を、例えば生検によって得られた組織試料の免疫組織化学（ＩＨＣ）によって測定することも可能である。
【０１２２】
この種の方法は、ＰＤ−Ｌ１またはＰＤ−１の検出およびまたは定量化を必要とする疾患または状態の診断法の基礎を提供しうる。こうした方法を、ｉｎ  ｖｉｔｒｏで、患者試料に対して、または患者試料のプロセシング後に行ってもよい。試料をひとたび収集したら、診断のｉｎ  ｖｉｔｒｏ法が実行されるために、患者が居合わせる必要はなく、そしてしたがって、方法は、ヒトまたは動物の身体に対して行わないものであることも可能である。
【０１２３】
こうした方法は、患者試料に存在するＰＤ−Ｌ１の量を決定することを伴ってもよい。該方法は、診断に到達するプロセスの一部として、標準または参照値に対して、決定した量を比較する工程をさらに含んでもよい。他の診断試験を、本明細書に記載するものと組み合わせて用いて、診断または予後診断の正確さを増進するか、あるいは本明細書に記載する試験を用いることによって得られる結果を確認してもよい。
【０１２４】
癌細胞は、ＰＤ−Ｌ１および／またはＰＤ−１の発現を上方制御することによって、ＰＤ−１経路を利用して免疫抑制環境を生成し、腫瘍微小環境に浸潤する任意のＴ細胞上の阻害性ＰＤ−１受容体の活性化を可能にし、そしてそれによってその活性を抑制することも可能である。ＰＤ−Ｌ１および／またはＰＤ−１発現の上方制御が、多くの異なる癌タイプで立証されてきており、そして高いＰＤ−Ｌ１／ＰＤ−１発現はまた、劣った臨床転帰に結びつけられてきている。
【０１２５】
患者試料に存在するＰＤ−Ｌ１またはＰＤ−１のレベルは、患者が抗ＰＤ−Ｌ１抗体での治療に反応しうることを示しうる。試料中の高レベルのＰＤ−Ｌ１またはＰＤ−１の存在を用いて、抗ＰＤ−Ｌ１抗体での治療のために患者を選択することも可能である。したがって、本発明の方法を用いて、抗ＰＤ−Ｌ１療法を用いた治療のための患者を選択することも可能である。
【０１２６】
ＰＤ−Ｌ１またはＰＤ−１の試料における検出を、患者におけるＴ細胞機能不全障害または癌性状態の診断、癌性状態に対する素因の診断の目的のために、あるいは癌性状態の予後を提供する（予言する）ために、用いてもよい。診断または予後は、存在する（以前診断された）良性または悪性であってもよい癌性状態に関連することも可能であり、推測される癌性状態に関連することも可能であり、あるいは患者における癌性状態（以前未診断であってもよい）に関してスクリーニングすることに関連することも可能である。
【０１２７】
１つの態様において、Ｔ細胞消耗の度合いおよび疾患状態の重症度を示すために、ＣＤ８＋  Ｔ細胞上のＰＤ−１発現レベルを検出してもよい。
１つの態様において、疾患状態、例えば組織炎症または癌の存在または重症度を示すため、例えば抗原提示細胞または腫瘍細胞上のＰＤ−Ｌ１発現のレベルを検出してもよい。
【０１２８】
任意の組織または体液から試料を採取してもよい。試料は：ある量の血液；フィブリン塊および血球を除去した後に得られる、血液の液体部分を含んでもよい、個体の血液由来のある量の血清；組織試料または生検；あるいは前記個体から単離された細胞を含んでもよいし、またはこれらに由来してもよい。
【０１２９】
本発明記載の方法は、好ましくはｉｎ  ｖｉｔｒｏで行われる。用語「ｉｎ  ｖｉｔｒｏ」は、培養中の細胞を用いた実験を含むよう意図され、一方、用語「ｉｎ  ｖｉｖｏ」は、損なわれていない（ｉｎｔａｃｔ）多細胞生物を用いた実験を含むよう意図される。
【０１３０】
療法適用
本発明記載の抗体、抗原結合性断片およびポリペプチド、ならびにこうした剤を含む組成物を、医学的治療の方法において使用するために提供してもよい。治療を、治療を必要とする疾患または状態を有する被験体に提供してもよい。疾患または状態は、癌に関連するＴ細胞機能不全障害、または癌、または感染に関連するＴ細胞機能不全障害、または感染を含む、Ｔ細胞機能不全障害の１つであってもよい。
【０１３１】
Ｔ細胞機能不全障害は、正常Ｔ細胞機能が損なわれて、例えば外因性病原体、例えば微生物、細菌およびウイルスによる感染によって生じる、あるいはある型の癌におけるもの（例えば腫瘍関連抗原の型）などのある疾患状態にある宿主によって生成される、病原性抗原に対する被験体の免疫反応の下方制御を引き起こす疾患または状態であってもよい。
【０１３２】
Ｔ細胞機能不全障害は、Ｔ細胞消耗またはＴ細胞アネルギーを含んでもよい。Ｔ細胞消耗は、ＣＤ８＋  Ｔ細胞が、増殖できないか、または抗原刺激に反応してＴ細胞エフェクター機能、例えば細胞傷害性およびサイトカイン（例えばＩＦＮγ）分泌を発揮できない状態を含む。消耗Ｔ細胞はまた、ＰＤ−１の持続発現によって特徴付けられることも可能であり、この場合、ＰＤ−１：ＰＤ−Ｌ１相互作用の遮断はＴ細胞消耗を逆転させ、そして抗原特異的Ｔ細胞反応を回復させることも可能である。
【０１３３】
Ｔ細胞機能不全障害は、感染として、または感染に対する有効な免疫反応を開始することが出来ない状態として現れることも可能である。感染は、慢性、持続性、不顕性または緩慢であってもよく、そして細菌、ウイルス、真菌または寄生虫感染の結果であってもよい。こうしたものとして、細菌、ウイルスまたは真菌感染を有する患者に、治療を提供してもよい。細菌感染の例には、ヘリコバクター・ピロリ（Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ  ｐｙｌｏｒｉ）での感染が含まれる。ウイルス感染の例には、ＨＩＶ、Ｂ型肝炎またはＣ型肝炎での感染が含まれる。
【０１３４】
Ｔ細胞機能不全障害は、癌、例えば腫瘍免疫エスケープと関連してもよい。多くのヒト腫瘍は、Ｔ細胞によって認識され、そして免疫反応を誘導可能な腫瘍関連抗原を発現する。しかし、免疫回避は一般的であり、そしてＰＤ−Ｌ１を含む多くの可溶性因子によって仲介されると考えられる。こうしたものとして、ＰＤ−１およびＰＤ−Ｌ１の相互作用のブロッキングは、腫瘍細胞に対するこの負の免疫制御シグナルを阻害し、そして腫瘍特異的ＣＤ８＋  Ｔ細胞免疫を増進させることも可能である。
【０１３５】
Ｔ細胞機能不全障害、例えばＴ細胞消耗の徴候がない場合の癌もまた、治療可能であるが、本発明記載の抗体、抗原結合性断片またはポリペプチドの使用は、被験体がＰＤ−１シグナル伝達を抑制し、そして限定された障害、回避または腫瘍免疫エスケープの誘導を伴って、有効な免疫反応を開始することを可能にする。こうした治療において、抗体、抗原結合性断片またはポリペプチドは、腫瘍免疫エスケープの発展の防止を伴う癌の治療を提供可能である。
【０１３６】
ＰＤ−Ｌ１を過剰発現する癌もまた、治療可能である。例えば、ＰＤ−Ｌ１を過剰発現するこうした腫瘍細胞を、抗ＰＤ−Ｌ１抗体での処理によって、抗体依存性細胞仲介性細胞傷害性（ＡＤＣＣ）、補体依存性細胞傷害性（ＣＤＣ）によって、または抗ＰＤ−Ｌ１抗体−薬剤コンジュゲートを用いて、直接死滅させることも可能である。
【０１３７】
治療は、Ｔ細胞機能不全障害の防止、例えば感染の防止、あるいは癌の発展または進行の防止を目的としてもよい。こうしたものとして、抗体、抗原結合性断片およびポリペプチドを用いて、薬学的組成物または薬剤を処方して、そして被験体を疾患状態の発展に対して予防的に治療してもよい。これは、疾患状態の症状の開始前に行ってもよく、そして／または感染または癌発展のリスクがより高いと見なされる被験体に対して行ってもよい。
【０１３８】
治療は、ワクチン、例えばＴ細胞ワクチンとの併用療法を含んでもよく、これは、同時、別個または連続療法を伴ってもよいし、あるいは単一組成物中のワクチンおよび抗体、抗原結合性断片またはポリペプチドの組み合わせ投与であってもよい。この背景において、抗体、抗原結合性断片またはポリペプチドを、ワクチンに対するアジュバントとして提供してもよい。消耗Ｔ細胞の限定された増殖能は、Ｔ細胞免疫療法の失敗の主な理由とされてきており、そしてＴ細胞消耗をブロッキングするかまたは逆転させることが可能な剤の組み合わせは、Ｔ細胞免疫療法の有効性を改善するための潜在的な戦略である（Ｂａｒｂｅｒら，  Ｎａｔｕｒｅ  Ｖｏｌ  ４３９，  Ｎｏ．９  ｐ６８２−６８７  Ｆｅｂ  ２００６）。
【０１３９】
抗体、抗原結合性断片またはポリペプチドの投与は、好ましくは、「療法的有効量」であり、これは、個体に利益を示すために十分な量である。投与する実際の量、ならびに投与速度および時間経過は、治療する疾患の性質および重症度に応じるであろう。治療の処方、例えば投薬量の決定等は、開業医および他の医師の責任の範囲内であり、そして典型的には、治療しようとする障害、個々の患者の状態、送達部位、投与法、および医師に知られる他の要因が考慮されるであろう。上述の技術およびプロトコルの例は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，  第２０版，  ２０００，  Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ，  Ｗｉｌｌｉａｍｓ  ＆  Ｗｉｌｋｉｎｓ刊行に見出されうる。
【０１４０】
薬学的に有用な組成物および薬剤の処方
本発明記載の抗体、抗原結合性断片およびポリペプチドは、臨床的使用のための薬学的組成物として処方可能であり、そして薬学的に許容されうるキャリアー、希釈剤、賦形剤またはアジュバントを含んでもよい。
【０１４１】
本発明にしたがって、薬学的に有用な組成物の産生のためにも方法を提供し、こうした産生法は：本明細書に記載するような抗体、抗原結合性断片またはポリペプチドを単離し；そして／または本明細書に記載するような単離抗体、抗原結合性断片またはポリペプチドを、薬学的に許容されうるキャリアー、アジュバント、賦形剤または希釈剤と混合する工程より選択される１またはそれより多い工程を含んでもよい。
【０１４２】
例えば、本発明のさらなる側面は、Ｔ細胞機能不全障害の治療において使用するための薬剤または薬学的組成物を処方するかまたは産生する方法であって、本明細書に記載するような抗体、抗原結合性断片またはポリペプチドを、薬学的に許容されうるキャリアー、アジュバント、賦形剤または希釈剤と混合することによって、薬学的組成物または薬剤を処方する工程を含む、前記方法に関する。
【０１４３】
感染
感染は、いかなる感染または感染性疾患、例えば細菌、ウイルス、真菌、または寄生虫感染であってもよい。いくつかの態様において、慢性／持続性感染、例えばこうした感染がＴ細胞機能不全またはＴ細胞消耗に関連する場合の感染を治療することが特に望ましい可能性もある。
【０１４４】
Ｔ細胞消耗が、多くの慢性感染（ウイルス、細菌および寄生虫感染を含む）中に、ならびに癌において（Ｗｈｅｒｒｙ  Ｎａｔｕｒｅ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  Ｖｏｌ．  １２，  Ｎｏ．６，  ｐ４９２−４９９，  ２０１１年６月）生じるＴ細胞機能不全状態であることがよく確立されている。
【０１４５】
感染または感染性疾患は、ＰＤ−１が上方制御されているものであり（例えば、Ｒａｄｚｉｅｗｉｃｚ  Ｈら，  Ｊ  Ｖｉｒｏｌ．  ２００７；８１（６）：２５４５−２５５３およびＧｏｌｄｅｎ−Ｍａｓｏｎ  Ｌら，  Ｊ  Ｖｉｒｏｌ．  ２００７；８１（１７）：９２４９−９２５８に報告される通り）、それによってまた、ＰＤ−１：ＰＤ−Ｌ１相互作用が疾患状態の一部であることを示すものであってもよい。
【０１４６】
治療可能な細菌感染の例には、バチルス属（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）種、百日咳菌（Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ  ｐｅｒｔｕｓｓｉｓ）、クロストリジウム属（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ）種、コリネバクテリウム属（Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ）種、コレラ菌（Ｖｉｂｒｉｏ  ｃｈｌｏｅｒａｅ）、スタフィロコッカス属（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ）種、ストレプトコッカス属（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ）種、エシェリキア属（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ）、クレブシエラ属（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ）、プロテウス属（Ｐｒｏｔｅｕｓ）、エルシニア属（Ｙｅｒｓｉｎｉａ）、エルウィナ属（Ｅｒｗｉｎａ）、サルモネラ属（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ）、リステリア属（Ｌｉｓｔｅｒｉａ）種、ヘリコバクター・ピロリ、ミコバクテリア（例えば結核菌（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ））および緑膿菌（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）が含まれる。例えば、細菌感染は、敗血症または結核であってもよい。
【０１４７】
Ｙａｏら（樹状細胞上のＰＤ−１は、細菌感染に対する生得的免疫を妨害する。  Ｂｌｏｏｄ  １１３（２３）：５８１１−５８１８  ２００９年６月４日）は、リステリア菌（Ｌｉｓｔｅｒｉａ  ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓ）による感染に対する生得的免疫反応中、ＤＣ機能の負の制御におけるＰＤ−１を確立した。Ｂｒａｈｍａｍｄａｍら（抗ＰＤ−１抗体の遅延された投与は、免疫機能不全を逆転させ、そして敗血症中の生存を改善する。  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｌｅｕｋｏｃｙｔｅ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  ｖｏ．８８，  ｎｏ．２  ２３３−２４０，  ２０１０年８月）は、敗血症の２４時間後に投与された抗ＰＤ−１抗体が、リンパ球およびＤＣの敗血症誘導性枯渇を防止し、Ｂｃｌ−ｘＬを増加させ、アポトーシスをブロッキングし、そして生存を改善させることを報告した。Ｔｉｍ３：ガレクチン−９相互作用は、Ｔ細胞消耗を仲介し、そして結核菌による感染に対する生得的および獲得免疫反応を仲介すると報告されてきている（Ｊａｙａｒａｍａｎら，  Ｔｈｅ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  ２０１２，  １８８，  ７０．６）。
【０１４８】
治療可能なウイルス感染の例には、インフルエンザウイルス、麻疹ウイルス、Ｂ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ）、Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）、リンパ球性脈絡髄膜炎ウイルス（ＬＣＭＶ）、単純ヘルペスウイルスおよびヒトパピローマウイルスが含まれる。
【０１４９】
慢性ウイルス感染、例えばＨＣＶ、ＨＢＶ、およびＨＩＶによって引き起こされるものは、一般的に、免疫クリアランスを逃れる機構を伴う。ＰＤ−１およびＴＩＭ−３の発現は、Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）に対するＴ細胞反応欠損と相関すると同定されてきている（ＭｃＭａｈａｎら，  Ｔｈｅ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎ  Ｖｏｌ．  １２０，  Ｎｏ．  １２  ｐ４５４６−４５５７，  ２０１０年１２月）。ＭｃＭａｈａｎら（上記）は、ＨＣＶにおいて、ウイルス持続の発展に先だって、ＨＣＶ特異的ＣＴＬ上にＴＩＭ−３およびＰＤ−１の二重発現レベルがあり、予後情報を提供することを見出した。Ｂａｒｂｅｒら（Ｎａｔｕｒｅ  Ｖｏｌ  ４３９，  Ｎｏ．  ９  ｐ６８２−６８７  ２００６年２月）は、ＰＤ−１が慢性ウイルス感染中に上方制御されていると報告した。彼らは、ＬＣＭＶに感染したマウスにおいて、ＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１阻害経路の遮断が、ＣＤ８  Ｔ細胞に対して有益な効果を有し、これらの細胞が増殖を経て、サイトカインを分泌し、感染細胞を死滅させ、そしてウイルス負荷を減少させる能力を回復させると報告した。ＰＤ−１はまた、ＨＩＶ感染においても上方制御される（Ｓａｉｄら，  Ｎａｔｕｒｅ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ  Ｖｏｌ．  １６，  Ｎｏ．４  ｐ４５２−４６０  ２０１０年４月）。慢性ウイルス感染の動物モデルにおいて、ＰＤ−１およびＰＤ−Ｌ１の間の相互作用をブロッキングすると、ウイルスクリアランスおよびＴ細胞機能の改善に寄与した（Ｓａｉｄら、上記）。
【０１５０】
治療可能な真菌感染の例には、アルテルナリア属（Ａｌｔｅｒｎａｒｉａ）種、アスペルギルス属（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ）種、カンジダ属（Ｃａｎｄｉｄａ）種およびヒストプラズマ属（Ｈｉｓｔｏｐｌａｓｍａ）種による感染が含まれる。真菌感染は、真菌敗血症またはヒストプラズマ症であることも可能である。
【０１５１】
Ｃｈａｎｇら（負の共刺激分子ＰＤ−１およびＣＴＬＡ−４の遮断は、原発性および続発性真菌敗血症において生存を改善する。  Ｃｒｉｔｉｃａｌ  Ｃａｒｅ  ２０１３，  １７：Ｒ８５）は、抗ＰＤ１抗体が原発性および続発性真菌敗血症において生存を改善する際に非常に有効であると報告した。Ｌａｚａｒ−Ｍｏｌｎａｒら（ＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ共刺激経路は、病原性真菌ヒストプラズマ・カプスラーツム（Ｈｉｓｔｏｐｌａｓｍａ  ｃａｐｓｕｌａｔｕｍ）に対する宿主耐性に決定的な影響を及ぼす  ＰＮＡＳ  ｖｏｌ．  １０５，  ｎｏ．７，  ｐ２６５８−２６６３，  ２００８年２月１９日）は、抗ＰＤ−１抗体がヒストプラズマ・カプスラーツムに感染したマウスの生存を有意に増加させることを報告した。こうしたものとして、真菌感染を仲介する際のＴ細胞消耗の重要性がよく確立されている。
【０１５２】
治療可能な寄生虫感染の例には、プラスモジウム属種（例えば熱帯熱マラリア原虫（Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ  ｆａｌｃｉｐａｒｕｍ）、ネズミマラリア原虫（Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ  ｙｏｅｌｉ）、卵形マラリア原虫（Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ  ｏｖａｌｅ）、三日熱マラリア原虫（Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ  ｖｉｖａｘ）、またはプラスモジウム・シャバウディ・シャバウディ（Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ  ｃｈａｂａｕｄｉ  ｃｈａｂａｕｄｉ））による感染が含まれる。寄生虫感染は、例えばマラリア、リーシュマニア症およびトキソプラズマ症であってもよい。
【０１５３】
ヒトが熱帯熱マラリア原虫に感染すると、ＰＤ−１のより高い発現が生じ、そしてマウスではＴ細胞消耗が生じることが示されてきている（Ｂｕｔｌｅｒら，  Ｎａｔｕｒｅ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  Ｖｏｌ．１３，  Ｎｏ．１２，  ｐ  １８８−１９５  ２０１２年２月）。抗ＰＤ−Ｌ１および抗ＬＡＧ−３モノクローナル抗体を用いてｉｎ  ｖｉｖｏでＰＤ−Ｌ１およびＬＡＧ−３を遮断すると、マウスにおいて、ＣＤ４＋  Ｔ細胞機能の回復、いくつかの濾胞ヘルパーＴ細胞、胚中心Ｂ細胞および形質芽細胞の増幅、防御抗体の増進ならびに血液段階マラリアの迅速な一掃に寄与した。これはまた、慢性感染の発展も遮断することも示された（Ｂｕｔｌｅｒら、上記）。
【０１５４】
癌
癌は、任意の望ましくない細胞増殖（または望ましくない細胞増殖によって現れる任意の疾患）、新生物または腫瘍、あるいは望ましくない細胞増殖、新生物または腫瘍に対するリスクまたは素因の増加であることも可能である。癌は、良性または悪性であってもよく、そして原発性または続発性（転移性）であってもよい。新生物または腫瘍は、細胞の任意の異常な成長または増殖であってもよく、そして任意の組織に位置していてもよい。組織の例には、副腎、副腎髄質、肛門、虫垂、膀胱、血液、骨、骨髄、脳、乳房、盲腸、中枢神経系（脳を含むまたは除く）、小脳、子宮頸部、結腸、十二指腸、子宮内膜、上皮細胞（例えば腎上皮）、胆嚢、食道、グリア細胞、心臓、回腸、空腸、腎臓、涙腺、喉頭、肝臓、肺、リンパ、リンパ節、リンパ芽球、上顎骨、縦隔、腸間膜、子宮筋、上咽頭、頤、口腔、卵巣、膵臓、耳下腺、末梢神経系、腹膜、胸膜、前立腺、唾液腺、Ｓ状結腸、皮膚、小腸、柔組織、脾臓、胃、精巣、胸腺、甲状腺、舌、扁桃腺、気管、子宮、外陰部、白血球が含まれる。
【０１５５】
治療されうる腫瘍は、神経系または非神経系腫瘍であってもよい。神経系腫瘍は、中枢または末梢神経系のいずれから生じてもよく、例えば神経膠腫、髄芽腫、髄膜腫、神経線維腫、上衣腫、シュワン腫、神経線維肉腫、星状細胞腫および乏突起神経膠腫であってもよい。非神経系癌／腫瘍は、任意の他の非神経組織で生じてもよく、例には、黒色腫、中皮腫、リンパ腫、骨髄腫、白血病、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、ホジキンリンパ腫、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）、皮膚Ｔ細胞リンパ腫（ＣＴＣＬ）、慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）、肝細胞腫、類表皮癌、前立腺癌、乳癌、肺癌、結腸癌、卵巣癌、膵臓癌、胸腺癌、ＮＳＣＬＣ、血液学的癌および肉腫が含まれる。
【０１５６】
養子Ｔ細胞移入療法（ａｄｏｐｔｉｖｅ  Ｔ  ｃｅｌｌ  ｔｒａｎｓｆｅｒ  ｔｈｅｒａｐｙ）
養子Ｔ細胞移入療法は、一般的に、典型的には血液試料を抜き取り、そこから白血球を分離し、ｉｎ  ｖｉｔｒｏまたはｅｘ  ｖｉｖｏで拡大し、そして同じ被験体または異なる被験体のいずれかに戻すことによって、白血球が被験体から除去されるプロセスを指す。治療は、典型的には、被験体において必要とされるＴ細胞集団の活性型の量／濃度を増加させることを目的とする。こうした治療は、Ｔ細胞消耗を経験している被験体において有益でありうる。
【０１５７】
Ｔ細胞消耗機構を遮断するかまたは逆転させることが可能な抗体は、Ｔ細胞活性を増進させ、そしてＴ細胞拡大を促進する手段を提供する。
したがって、本発明のさらなる側面において、Ｔ細胞を、ｉｎ  ｖｉｔｒｏまたはｅｘ  ｖｉｖｏで、本発明記載の抗体、抗原結合性断片またはポリペプチドと接触させる、Ｔ細胞集団を拡大するための方法を提供する。
【０１５８】
該方法は、場合によって、以下の工程：被験体から血液試料を採取する工程；血液試料からＴ細胞を単離する工程；ｉｎ  ｖｉｔｒｏまたはｅｘ  ｖｉｖｏ細胞培養中でＴ細胞を培養し（ここで該細胞を抗体、抗原結合性断片またはポリペプチドと接触させてもよい）、Ｔ細胞の拡大集団を収集する工程；Ｔ細胞をアジュバント、希釈剤、またはキャリアーと混合する工程；拡大Ｔ細胞を被験体に投与する工程の１またはそれより多くを含んでもよい。
【０１５９】
したがって、本発明のいくつかの側面において、Ｔ細胞機能不全障害を有する被験体の治療法であって、治療が必要な被験体から血液試料を得て、Ｔ細胞集団が拡大されるように、本発明記載の抗体、抗原結合性断片またはポリペプチドの存在下で、血液試料から得たＴ細胞を培養し、拡大されたＴ細胞を収集し、そして拡大されたＴ細胞を、治療が必要な被験体に投与する工程を含む、前記治療法を提供する。
【０１６０】
治療が必要な被験体からＴ細胞を得てもよく、そして単離し、そして／または精製してもよい。これらはＣＤ４＋および／またはＣＤ８＋  Ｔ細胞集団であってもよい。Ｔ細胞は、Ｔ細胞消耗を経験している集団に相当してもよく、そして場合によってＰＤ−１および／またはＰＤ−Ｌ１の上方制御された発現を有してもよい。
【０１６１】
培養中、Ｔ細胞が望ましい細胞数に拡大することを可能にする条件下で、そしてそれに適した期間、Ｔ細胞を、抗体、抗原結合性断片またはポリペプチドと接触させてもよい。適切な期間の後、Ｔ細胞を採取し、場合によって濃縮してもよく、そして適切なキャリアー、アジュバントまたは希釈剤と混合し、そして被験体の体内に戻してもよい。被験体は、こうした療法の１またはそれより多い周期を経てもよい。
【０１６２】
Ｔ細胞拡大法は、当該技術分野に周知であり、例えばＫａｌａｍａｓｚら，  Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ  ２００４  Ｓｅｐ−Ｏｃｔ；  ２７（５）：４０５−１８；  Ｍｏｎｔｅｓら，  Ｃｌｉｎ  Ｅｘｐ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ２００５  Ｎｏｖ；１４２（２）：２９２−３０２；  ＷｏｅｌｆｌおよびＧｒｅｅｎｂｕｒｇ  Ｎａｔｕｒｅ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ９  ｐ９５０−９６６  ２７  Ｍａｒｃｈ  ２０１４；  ＴｒｉｃｋｅｔｔおよびＫｗａｎ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｖｏｌ．  ２７５，  Ｉｓｓｕｅｓ  １−２，  １  Ａｐｒｉｌ  ２００３，  ｐ２５１−２５５；  Ｂｕｔｌｅｒら  ＰＬｏＳＯＮＥ  ７（１）  １２  Ｊａｎ  ２０１２に記載されるものがある。
【０１６３】
同時または連続投与
治療しようとする状態に応じて、組成物を単独で、あるいは他の治療と組み合わせて、同時にまたは連続してのいずれかで投与してもよい。
【０１６４】
本明細書において、本発明の抗体、抗原結合性断片またはポリペプチド、および抗感染剤または化学療法剤（療法剤）を同時にまたは連続して投与してもよい。
いくつかの態様において、本発明の抗体、抗原結合性断片またはポリペプチドでの治療には、化学療法が付随してもよい。
【０１６５】
同時投与は、抗体、抗原結合性断片またはポリペプチドおよび療法剤の一緒の投与、例えば両方の剤を含有する薬学的組成物（組み合わせ調製物）、あるいは互いの直後の、そして場合によって同じ投与経路を通じた、例えば同じ動脈、静脈または他の血管への投与を指す。
【０１６６】
連続投与は、抗体、抗原結合性断片またはポリペプチドまたは療法剤の１つの投与に続く、所定の時間間隔後の他の剤の別個の投与を指す。２つの剤が同じ経路で投与される必要はないが、いくつかの態様ではこれに当てはまる。時間間隔は、任意の時間間隔であってもよい。
【０１６７】
抗感染剤
感染治療において、本発明の抗体、抗原結合性断片またはポリペプチドを、上述のように、抗感染剤と組み合わせて投与してもよい。抗感染剤は、感染の原因となる微生物またはウイルスに対する作用を有することが知られる剤であってもよい。
【０１６８】
適切な抗感染剤には、抗生物質（例えばペニシリン、セファロスポリン、リファマイシン、リピアルマイシン、キノロン、スルホンアミド、マクロライド、リンコサミド、テトラサイクリン、環状リポペプチド、グリシルサイクリン、オキサゾリジノン、およびリピアルマイシン）、抗ウイルス剤（例えば逆転写酵素阻害剤、インテグラーゼ阻害剤、転写因子阻害剤、アンチセンスおよびｓｉＲＮＡ剤およびプロテアーゼ阻害剤）、抗真菌剤（例えばポリエン、イミジアゾール、トリアゾール、チアゾール、アリルアミン、およびエキノキャンディン）、および抗寄生虫剤（例えば抗線虫剤、抗条虫剤、抗吸虫剤、抗アメーバ剤および抗原生動物剤）が含まれる。
【０１６９】
化学療法
化学療法は、薬剤または電離放射線（例えばＸ線またはγ線を用いた放射療法）での癌の治療を指す。好ましい態様において、化学療法は、薬剤での治療を指す。薬剤は、化学実体、例えば小分子薬剤、抗生物質、ＤＮＡ挿入剤、タンパク質阻害剤（例えばキナーゼ阻害剤）、あるいは生物学的剤、例えば抗体、抗体断片、核酸またはペプチドアプタマー、核酸（例えばＤＮＡ、ＲＮＡ）、ペプチド、ポリペプチド、またはタンパク質であってもよい。薬剤を、薬学的組成物または薬剤として処方してもよい。処方は、１またはそれより多い薬剤（例えば１またはそれより多い活性剤）を１またはそれより多い薬学的に許容されうる希釈剤、賦形剤またはキャリアーと一緒に含んでもよい。
【０１７０】
治療は、１より多い薬剤の投与を伴ってもよい。治療しようとする状態に応じて、薬剤は、単独で、あるいは他の治療と組み合わせて同時にまたは連続してのいずれかで投与されてもよい。例えば、化学療法は、２つの薬剤の投与を伴う併用療法であってもよく、これらの１つまたはそれより多くが、癌を治療するよう意図されてもよい。
【０１７１】
化学療法は、１またはそれより多い投与経路、例えば非経口、静脈内注射、経口、皮下、皮内または腫瘍内経路によって投与されてもよい。
化学療法は治療措置にしたがって投与されてもよい。治療措置は、医者または医師によって準備されることが可能であり、そして治療を必要とする患者に合わせてあつらえることも可能である、化学療法投与のあらかじめ決定されたタイムテーブル、計画、スキームまたはスケジュールであってもよい。
【０１７２】
治療措置は：患者に投与する化学療法のタイプ；各薬剤または放射線の用量；投与間の時間間隔；各治療の長さ；あるとすれば任意の治療休止日の数および性質等の１またはそれより多くを指してもよい。併用療法に関して、各薬剤をどのように投与するかを示す単一の治療措置を提供してもよい。
【０１７３】
化学療法薬剤および生物製剤は以下から選択してもよい：
・アルキル化剤、例えばシスプラチン、カルボプラチン、メクロレタミン、シクロホスファミド、クロラムブシル、イホスファミド；
・プリンまたはピリミジン代謝拮抗剤、例えばアザチオプリンまたはメルカプトプリン；
・アルカロイドおよびテルペノイド、例えばビンカアルカロイド（例えばビンクリスチン、ビンブラスチン、ビノレルビン、ビンデシン）、ポドフィロトキシン、エトポシド、テニポシド、タキサン、例えばパクリタキセル（タキソールＴＭ）、ドセタキセル；
・トポイソメラーゼ阻害剤、例えばＩ型トポイソメラーゼ阻害剤、カンプトテシン、イリノテカンおよびトポテカン、またはＩＩ型トポイソメラーゼ阻害剤、アムサクリン、エトポシド、リン酸エトポシド、テニポシド；
・抗腫瘍抗生物質（例えばアントラサイクリン抗生物質）、例えばダクチノマイシン、ドキソルビシン（アドリアマイシンＴＭ）、エピルビシン、ブレオマイシン、ラパマイシン；
・抗体に基づく剤、例えば抗ＰＤ−１抗体、抗ＴＩＭ−３抗体、抗ＣＴＬＡ−４、抗ＬＡＧ−３、抗４−１ＢＢ、抗ＧＩＴＲ、抗ＣＤ２７、抗ＢＬＴＡ、抗ＯＸ４０、抗ＶＥＧＦ、抗ＴＮＦα、抗ＩＬ−２、抗ＧｐＩＩｂ／ＩＩＩａ、抗ＣＤ−５２、抗ＣＤ２０、抗ＲＳＶ、抗ＨＥＲ２／ｎｅｕ（ｅｒｂＢ２）、抗ＴＮＦ受容体、抗ＥＧＦＲ抗体、モノクローナル抗体または抗体断片、例には：セツキシマブ、パニツムマブ、インフリキシマブ、バシリキシマブ、ベバシズマブ（アバスチン（登録商標））、アブシキシマブ、ダクリズマブ、ゲムツズマブ、アレムツズマブ、リツキシマブ（マブテラ（登録商標））、パリビズマブ、トラスツズマブ、エタネルセプト、アダリムマブ、ニモツズマブが含まれる
・ＥＧＦＲ阻害剤、例えばエルロチニブ、セツキシマブおよびゲフィチニブ
・抗血管新生剤、例えばベバシズマブ（アバスチン（登録商標））
・癌ワクチン、例えばシプルーセル−Ｔ（プロベンジ（登録商標））。
【０１７４】
１つの態様において、化学療法剤は、抗ＰＤ−１抗体、抗ＴＩＭ−３抗体、抗ＣＴＬＡ−４、抗ＬＡＧ３、抗４１ＢＢ、抗ＧＩＴＲ、抗ＣＤ２７、抗ＢＬＴＡ、抗ＯＸ４０、抗ＶＥＧＦ、抗ＴＮＦα、抗ＩＬ２、抗ＧｐＩＩｂ／ＩＩＩａ、抗ＣＤ−５２、抗ＣＤ２０、抗ＲＳＶ、抗ＨＥＲ２／ｎｅｕ（ｅｒｂＢ２）、抗ＴＮＦ受容体、抗ＥＧＦＲ抗体または他の抗体である。いくつかの態様において、化学療法剤は、免疫チェックポイント阻害剤または共刺激分子である。
【０１７５】
さらなる化学療法薬剤は:１３−シス−レチノイン酸、２−クロロデオキシアデノシン、５−アザシチジン５−フルオロウラシル、６−メルカプトプリン、６−チオグアニン、アブラキサン、アキュタン（登録商標）、アクチノマイシン−Ｄ、アドリアマイシン（登録商標）、アドルシル（登録商標）、アフィニトール（登録商標）、アグリリン（登録商標）、Ａｌａ−コート（登録商標）、アルデスロイキン、アレムツズマブ、ＡＬＩＭＴＡ、アリトレチノイン、アルカバン−ＡＱ（登録商標）、アルケラン（登録商標）、オールトランスレチノイン酸、アルファ・インターフェロン、アルトレタミン、アメトプテリン、アミフォスチン、アミノグルテチミド、アナグレリド、アナンドロン（登録商標）、アナストロゾール、アラビノシルシトシン、アラネスプ（登録商標）、アレジア（登録商標）、アリミデックス（登録商標）、アロマシン（登録商標）、アラノン（登録商標）、亜ヒ酸、アスパラギナーゼ、ＡＴＲＡ  アバスチン（登録商標）、アザシチジン、ＢＣＧ、ＢＣＮＵ、ベンダムスチン、ベバシズマス、ベキサロテン、ＢＥＸＸＡＲ（登録商標）、ビカルタミド、ＢｉＣＮＵ、ブレノキサン（登録商標）、ブレオマイシン、ボルテゾミブ、ブスルファン、ブスルフェックス（登録商標）、カルシウムロイコボリン、カンパス（登録商標）、カンプトサル（登録商標）、カンプトテシン−１１、カペシタビン、カラックＴＭ、カルボプラチン、カルムスチン、カソデックス（登録商標）、ＣＣ−５０１３、ＣＣＩ−７７９、ＣＣＮＵ、ＣＤＤＰ、ＣｅｅＮＵ、セルビジン（登録商標）、セツキシマブ、クロラムブシル、シスプラチン、シトロボルム因子、クラドリビン、コルチゾン、コスメゲン（登録商標）、ＣＰＴ−１１、シクロホスファミド、シタドレン（登録商標）、シタラビン  シトサール−Ｕ（登録商標）、シトキサン（登録商標）、ダコゲン、ダクチノマイシン、ダルベポエチン・アルファ、ダサチニブ、ダウノマイシン、ダウノルビシン、ダウノルビシン塩酸、ダウノルビシン・リポソーマル、ダウノキソーム（登録商標）、デカドロン、デシタビン、デルタ−コルテフ（登録商標）、デルタゾン（登録商標）、デニロイキン、ディフチトックス、デポシトＴＭ、デキサメタゾン、酢酸デキサメタゾン、リン酸デキサメタゾンナトリウム、デキサゾン、デクスラゾキサン、ＤＨＡＤ、ＤＩＣ、ジオデックス、ドセタキセル、ドキシル（登録商標）、ドキソルビシン、ドキソルビシン・リポソーマル、ドロキシアＴＭ、ＤＴＩＣ、ＤＴＩＣ−Ｄｏｍｅ（登録商標）、デュラロン（登録商標）、エリガードＴＭ、エレンスＴＭ、エロキサチンＴＭ、エルスパー（登録商標）、エンシット（登録商標）、エピルビシン、エポエチン・アルファ、エルビタックス、エルロチニブ、エルウィニアＬ−アスパラギナーゼ、エストラムスチン、エチオール・エトポフォス（登録商標）、エトポシド、リン酸エトポシド、ユーレキシン（登録商標）、エベロリムス、エビスタ（登録商標）、エキセメスタン、ファスロデックス（登録商標）、フェマラ（登録商標）、フィルグラスチム、フロクスウリジン、フルダラ（登録商標）、フルダラビン、フルオロプレックス（登録商標）、フルオロウラシル、フロキシメステロン、���ルタミド、フォリン酸、ＦＵＤＲ（登録商標）、フルベストラント、ゲフィチニブ、ゲムシタビン、ゲムツヅマブ・オゾガマイシン、グリーベックＴＭ、グリアデル（登録商標）ウェーハ、ゴセレリン、顆粒球コロニー刺激因子、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子、ハーセプチン（登録商標）、ヘキサドロール、ヘキサレン（登録商標）、ヘキサメチルメラミン、ＨＭＭ、ヒカムチン（登録商標）、ヒドレア（登録商標）、酢酸ヒドロコルト（登録商標）、ヒドロコルチゾン、リン酸ヒドロコルチゾンナトリウム、コハク酸ヒドロコルチゾンナトリウム、リン酸ヒドロコルトン、ヒドロキシ尿素、イブリツモマブ、イブリツモマブ・チウキセタン、イダマイシン（登録商標）、イダルビシン、イフェックス（登録商標）、ＩＦＮ−アルファ、イホスファミド、ＩＬ−１１、ＩＬ−２、メシル酸イマチニブ、イミダゾールカルボキサミド、インターフェロン・アルファ、インターフェロン・アルファ−２ｂ（ＰＥＧコンジュゲート）、インターロイキン−２、インターロイキン−１１、イントロンＡ（登録商標）（インターフェロン・アルファ−２ｂ）、イレッサ（登録商標）、イリノテカン、イソトレチノイン、イキサベピロン、イキセンプラＴＭ、キドロラーゼ、ラナコート（登録商標）、ラパチニブ、Ｌ−アスパラギナーゼ、ＬＣＲ、レナリドミド、レトロゾール、ロイコボリン、ロイケラン、ロイカインＴＭ、リュープロリド、リューロクリスチン、ロイスタチンＴＭ、リポソーマルＡｒａ−Ｃ、液体プレド（登録商標）、ロムスチン、Ｌ−ＰＡＭ、Ｌ−サルコリシン、リュプロン（登録商標）、リュプロンデポ（登録商標）、マツラン（登録商標）、マキシデックス、メクロレタミン、メクロレタミン塩酸、メドラロン（登録商標）、メドロール（登録商標）、メゲース（登録商標）、メゲストロール、酢酸メゲストロール、メルファラン、メルカプトプリン、メスナ、メスネックスＴＭ、メトトレキセート、メトトレキセートナトリウム、メチルプレドニゾロン、メチコルテン（登録商標）、マイトマイシン、マイトマイシン−Ｃ、ミトキサントロン、Ｍ−プレドニゾール（登録商標）、ＭＴＣ、ＭＴＸ、ムスターゲン（登録商標）、ムスチン、ムタマイシン（登録商標）、ミレラン（登録商標）、ミロセルＴＭ、ミロターグ（登録商標）、ナベルビン（登録商標）、ネララビン、ネオサール（登録商標）、ニューラスタＴＭ、ニューメガ（登録商標）、ニューポゲン（登録商標）、ネキサバール（登録商標）、ニランドロン（登録商標）、ニルタミド、ニペント（登録商標）、ナイトロジェンマスタード、ノバルデックス（登録商標）、ノバントロン（登録商標）、オクトレオチド、酢酸オクトレオチド、オンコスパー（登録商標）、オンコビン（登録商標）、オンタック（登録商標）、オンキサルＴＭ、オプレベルキン、オラプレッド（登録商標）、オラゾン（登録商標）、オキサリプラチン、パクリタキセル、パクリタキセルタンパク質結合型、パミドロネート、パニツムマブ、パンレチン（登録商標）、パラプラチン（登録商標）、ペディアプレド（登録商標）、ＰＥＧインターフェロン、ペガスパルガーゼ、ペグフィルグラスティム、ＰＥＧ−イントロンＴＭ、ＰＥＧ−Ｌ−アスパラギナーゼ、ＰＥＭＥ���ＲＥＸＥＤ、ペントスタチン、フェニルアラニンマスタード、プラチノール（登録商標）、プラチノール−ＡＱ（登録商標）、プレドニゾロン、プレドニゾン、プレロン（登録商標）、プロカルバジン、ＰＲＯＣＲＩＴ（登録商標）、プロロイキン（登録商標）、カルムスチン・インプラント・プリネトール（登録商標）を含むプロリフプロスパン２０、ラロキシフェン、レブリミド（登録商標）、リューマトレックス（登録商標）、リツキサン（登録商標）、リツキシマブ、ロフェロン−Ａ（登録商標）（インターフェロン・アルファ−２ａ）、リューベックス（登録商標）、ルビドマイシン塩酸、サンドスタチン（登録商標）、サンドスタチンＬＡＲ（登録商標）、サルグラモスチン、ソリュ−コルテフ（登録商標）、ソリュ−メドロール（登録商標）、ソラフェニブ、ＳＰＲＹＣＥＬＴＭ、ＳＴＩ−５７１、ストレプトゾシン、ＳＵ１１２４８、スニチニブ、スーテント（登録商標）、タモキシフェン、タルセバ（登録商標）、タルグレチン（登録商標）、タキソール（登録商標）、タキソテール（登録商標）、テモダール（登録商標）、テモゾロミド、テムシロリムス、テニポシド、ＴＥＳＰＡ、サリドマイド、タロミド（登録商標）、テラシス（登録商標）、チオグアニン、チオグアニンタブロイド（登録商標）、チオホスホアミド、チオプレックス（登録商標）、チオテパ、ＴＩＣＥ（登録商標）、トポサール（登録商標）、トポテカン、トレミフェン、トリセル（登録商標）、トシツモマブ、トラスツズマブ、トレアンダ（登録商標）、トレチノイン、トレキサールＴＭ、トリセノックス（登録商標）、ＴＳＰＡ、ＴＹＫＥＲＢ（登録商標）、ＶＣＲ、ベクチビックスＴＭ、ベルバン（登録商標）、ベルケード（登録商標）、ベペシド（登録商標）、ベサノイド（登録商標）、ビアデュルＴＭ、ビダザ（登録商標）、ビンブラスチン、硫酸ビンブラスチン、ビンカサールＰｆｓ（登録商標）、ビンクリスチン、ビノレルビン、酒石酸ビノレルビン、ＶＬＢ、ＶＭ−２６、ボリノスタット、ＶＰ−１６、ヴモン（登録商標）、キセロダ（登録商標）、ザノサール（登録商標）、ゼバリンＴＭ、ジネカード（登録商標）、ゾラデックス（登録商標）、ゾレドロン酸、ゾリンザ、ゾメタ（登録商標）より選択されてもよい。
【０１７６】
投与経路
本発明の側面にしたがった抗体、抗原結合性断片、ポリペプチドおよび他の療法剤、薬剤および薬学的組成物を、限定されるわけではないが、非経口、静脈内、動脈内、筋内、皮下、皮内、腫瘍内および経口を含む、いくつかの経路による投与のために処方してもよい。抗体、抗原結合性断片、ポリペプチドおよび他の療法剤は、液体または固体型で処方可能である。ヒトまたは動物の体の選択した領域への注射による投与のため、液体処方物を処方してもよい。
【０１７７】
投薬計画（ｄｏｓａｇｅ  ｒｅｇｉｍｅ）
抗体、抗原結合性断片またはポリペプチドの多数回の用量を提供してもよい。用量の１つまたはそれより多くまたは各々には、別の療法剤の同時または連続投与が付随していてもよい。
【０１７８】
多数回用量は、あらかじめ決定した時間間隔によって分かれていてもよく、これは１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、または３１日、あるいは１、２、３、４、５または６ヶ月の１つより選択されてもよい。例えば、用量を、７、１４、２１または２８日ごとに１回投与してもよい（プラスまたはマイナス３、２、または１日）。
【０１７９】
キット
本発明のいくつかの側面において、部分のキットを提供する。いくつかの態様において、キットは、あらかじめ決定された量の抗体、抗原結合性断片またはポリペプチドを有する少なくとも１つの容器を有してもよい。キットは、薬剤または薬学的組成物の形で、抗体、抗原結合性断片またはポリペプチドを提供してもよく、そして明記する疾患または状態を治療するため、患者に投与するための使用説明書とともに提供されてもよい。抗体、抗原結合性断片またはポリペプチドを、腫瘍へのまたは血液への注射または注入に適切であるように処方してもよい。
【０１８０】
いくつかの態様において、キットはさらに、あらかじめ決定した量の別の療法剤（例えば抗感染剤または化学療法剤）を有する少なくとも１つの容器を含んでもよい。こうした態様において、キットはまた、２つの薬剤または薬学的組成物が特定の疾患または状態に対する組み合わせ治療を提供するように、これらを同時にまたは別個に投与可能であるように、第二の薬剤または薬学的組成物も含んでもよい。療法剤はまた、腫瘍または血液への注射または注入に適切であるように処方してもよい。
【０１８１】
被験体
治療しようとする被験体は、任意の動物またはヒトであってもよい。被験体は好ましくは哺乳動物、より好ましくはヒトである。被験体は、非ヒト哺乳動物であってもよいが、より好ましくはヒトである。被験体は男性または女性であってもよい。被験体は患者であってもよい。被験体は治療が必要な疾患または状態を有すると診断されていてもよいし、あるいはこうした疾患または状態を有すると推測されていてもよい。
【０１８２】
タンパク質発現
細胞において本発明記載のポリペプチドを産生するために適した分子生物学技術は、当該技術分野に周知であり、例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋら，  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：  Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，  ニューヨーク：Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｐｒｅｓｓ，  １９８９に示されるものがある。
【０１８３】
ポリペプチドはヌクレオチド配列から発現されてもよい。ヌクレオチド配列は、細胞中に存在するベクターに含有されてもよいし、または細胞のゲノム内に取り込まれていてもよい。
【０１８４】
「ベクター」は、本明細書において、細胞内に外因性遺伝物質をトランスファーするためのビヒクルとして用いられるオリゴヌクレオチド分子（ＤＮＡまたはＲＮＡ）である。ベクターは、細胞において、遺伝物質を発現させるための発現ベクターであることも可能である。こうしたベクターには、発現しようとする遺伝子配列をコードするヌクレオチド配列に機能可能であるように連結されたプロモーター配列が含まれることも可能である。ベクターにはまた、末端コドンおよび発現エンハンサーも含まれることも可能である。当該技術分野に知られる任意の適切なベクター、プロモーター、エンハンサーおよび終結コドンを用いて、本発明記載のベクターからポリペプチドを発現させることも可能である。適切なベクターには、プラスミド、バイナリーベクター、ウイルスベクターおよび人工染色体（例えば酵母人工染色体）が含まれる。
【０１８５】
本明細書において、用語「機能可能であるように連結される」には、選択されたヌクレオチド配列および制御ヌクレオチド配列（例えばプロモーターおよび／またはエンハンサー）が、制御配列の影響または調節下で、ヌクレオチド配列の発現を達成するような方式で、共有連結される（それによって発現カセットを形成する）状況が含まれうる。したがって、制御配列がヌクレオチド配列の転写を達成可能であるならば、制御配列は、選択されたヌクレオチド配列に、機能可能であるように連結されている。適切な場合、生じた転写物は、次いで、望ましいタンパク質またはポリペプチドに翻訳されることも可能である。
【０１８６】
本発明記載のペプチドを産生するため、ポリペプチドの発現に適した任意の細胞が使用可能である。細胞は、原核細胞または真核細胞であることも可能である。適切な原核細胞には大腸菌が含まれる。真核細胞の例には、酵母細胞、植物細胞、昆虫細胞または哺乳動物細胞が含まれる。いくつかの場合、ある原核細胞は、真核細胞と同じ翻訳後修飾を可能にしないため、細胞は原核細胞ではない。さらに、真核細胞では非常に高い発現レベルが可能であり、そして適切なタグを用いると、真核細胞からタンパク質を精製することがより容易でありうる。培地へのタンパク質の分泌を増進させる特定のプラスミドもまた、利用可能である。
【０１８７】
関心対象のポリペプチドを産生する方法は、ポリペプチドを発現するように修飾された細胞の培養または発酵を伴うことも可能である。培養または発酵は、栄養素、空気／酸素および／または増殖因子の適切な供給を提供されるバイオリアクター中で実行可能である。細胞から、培地／発酵ブロスを分配し、タンパク質内容物を抽出し、そして個々のタンパク質を分離して、分泌されたポリペプチドを単離することによって、分泌されたタンパク質を収集することも可能である。培養、発酵および分離技術は、当業者に周知である。
【０１８８】
バイオリアクターには、その中で細胞を培養可能である１またはそれより多い容器が含まれる。バイオリアクター中の培養は、連続して生じてもよく、リアクター内への反応物の連続流動、およびリアクターからの培養細胞の連続流動が伴う。あるいは、培養はバッチで生じてもよい。バイオリアクターは、培養中の細胞のために最適な条件が提供されるように、ｐＨ、酸素、容器内へのおよび容器外への流速、および容器内の攪拌などの環境条件を監視し、そして調節する。
【０１８９】
関心対象のポリペプチドを発現する細胞の培養後、好ましくはそのポリペプチドを単離する。当該技術分野に知られる、細胞培養からポリペプチド／タンパク質を分離するための任意の適切な方法が使用可能である。培養から関心対象のポリペプチド／タンパク質を単離するため、まず、関心対象のポリペプチド／タンパク質を含有する培地から、培養された細胞を分離する必要がある可能性もある。関心対象のポリペプチド／タンパク質が細胞から分泌される場合、分泌されたポリペプチド／タンパク質を含有する培地から、遠心分離によって細胞を分離することも可能である。関心対象のポリペプチド／タンパク質が細胞内に集積する場合、遠心分離前に、例えば超音波、迅速凍結融解または浸透圧溶解を用いて、細胞を破壊する必要があるであろう。遠心分離は、培養細胞を含有するペレット、または培養細胞の細胞破片、ならびに培地および関心対象のポリペプチド／タンパク質を含有する上清を生じるであろう。
【０１９０】
次いで、他のタンパク質および非タンパク質構成要素も含有しうる上清または培地から、関心対象のポリペプチド／タンパク質を単離することが望ましい可能性もある。上清または培地からポリペプチド／タンパク質構成要素を分離するための一般的なアプローチは、沈殿による。異なる溶解度のポリペプチド／タンパク質は、硫酸アンモニウムなどの沈殿剤の異なる濃度で沈殿する。例えば、低濃度の沈殿剤では、水溶性タンパク質が抽出される。したがって、増加する濃度の沈殿剤を添加することによって、異なる溶解度のタンパク質が区別可能である。続いて、透析を用いて、分離されたタンパク質から硫酸アンモニウムを除去することも可能である。
【０１９１】
異なるポリペプチド／タンパク質を区別するための他の方法が当該技術分野に知られ、例えばイオン交換クロマトグラフィおよびサイズクロマトグラフィがある。これらを沈殿の代替法として用いてもよいし、または沈殿に続いて行ってもよい。
【０１９２】
関心対象のポリペプチド／タンパク質が、ひとたび培養から単離されたら、タンパク質を濃縮する必要がある可能性もある。関心対象のタンパク質を濃縮するためのいくつかの方法が当該技術分野に知られ、例えば限外濾過または凍結乾燥がある。
【０１９３】
配列同一性
アミノ酸またはヌクレオチド配列同一性パーセントを決定する目的のための整列を、当業者に知られる多様な方式で達成してもよく、例えば公的に入手可能なコンピュータソフトウェア、例えばＣｌｕｓｔａｌＷ  １．８２．  Ｔ−ｃｏｆｆｅｅまたはＭｅｇａｌｉｇｎ（ＤＮＡＳＴＡＲ）ソフトウェアを用いてもよい。こうしたソフトウェアを用いる場合、好ましくは、デフォルトパラメータ、例えばギャップペナルティおよび伸長ペナルティに関するものを用いる。ＣｌｕｓｔａｌＷ  １．８２のデフォルトパラメータは：タンパク質ギャップ・オープンペナルティ＝１０．０、タンパク質ギャップ伸長ペナルティ＝０．２、タンパク質マトリックス＝Ｇｏｎｎｅｔ、タンパク質／ＤＮＡ  ＥＮＤＧＡＰ＝−１、タンパク質／ＤＮＡ  ＧＡＰＤＩＳＴ＝４である。
【０１９４】
本発明には、記載する側面および好ましい特徴の組み合わせが含まれるが、こうした組み合わせが明らかに許容されえないかまたは明らかに回避される場合を除く。
本明細書に用いるセクション見出しは、構成上の目的のみのためであり、そして記載する主題を限定するとは意図されないものとする。
【０１９５】
本発明の側面および態様はここで、例として、付随する図を参照しながら例示されるであろう。さらなる側面および態様は、当業者には明らかであろう。本文に言及するすべての文書が本明細書に援用される。
【０１９６】
本明細書全体にわたって、続く請求項を含めて、背景が別であることを必要としない限り、単語「含む」、ならびに変形、例えば「含む」および「含んでいる」は、言及する整数または工程、あるいは整数または工程の群の包含を意味するが、いかなる他の整数または工程、あるいは整数または工程の群も排除しないことが理解されるであろう。
【０１９７】
本明細書および付随する請求項において、単数形「ａ」、「ａｎ」、および「ｔｈｅ」には、背景が明らかに別のように示さない限り、複数の指示対象が含まれることに留意しなければならない。範囲は、本明細書において、「約」１つの特定の値から、そして／または「約」別の特定の値までとして表されることも可能である。こうした範囲を示した場合、別の態様には、１つの特定の値から、そして／または他の特定の値までが含まれる。同様に、値を近似値で表した場合、先行する「約」を使用することによって、特定の値が別の態様を形成することが理解されるであろう。
【実施例】
【０１９８】
実施例
本発明者は、以下の実施例に、ヒトおよびネズミＰＤ−Ｌ１に特異的に結合し、ＰＤ−１経路を阻害し、そして、消耗したＴ細胞活性を回復する、単離された抗体、または、その抗原結合分のヌクレオチド配列及びアミノ酸配列の同定を記載する。
【０１９９】
実施例１：抗ヒトＰＤ−Ｌ１抗体の単離
ｉｎ  ｖｉｔｒｏ選択を介してヒト抗体ファージディスプレイライブラリーから、抗ＰＤ−Ｌ１抗体を単離した。
【０２００】
ストレプトアビジン−磁気ビーズを、ビオチン化ヒトＰＤ−Ｌ１でコーティングし、そして磁気ソーティングを用いて、抗ＰＤ−Ｌ１特異的ファージをつり上げるために、該ビーズを用いた。潜在的な抗ビオチン抗体を除去するためのいくつかの工程を、選択プロセスに付加した。
【０２０１】
最初に、抗原としてヒトＰＤ−Ｌ１を用いたＥＬＩＳＡによって、特異的Ｆａｂ抗体を同定した。ヒトＰＤ−Ｌ１：クローンＡ１、Ｃ２、Ｃ４およびＨ１２からの解離が緩慢であることに基づいて、さらなる特徴付けのため、４つのクローンを得た。ＤＮＡフィンガープリンティングによって、第一のクローン性スクリーニングを行い；次いで、配列決定によって、クローン性を確認した。
【０２０２】
実施例２：ヒトおよびネズミＰＤ−Ｌ１への結合
ヒトおよびネズミＰＤ−Ｌ１を、ヒトＦｃにカップリングし、そして抗体結合を調べるため、ＥＬＩＳＡプレート上にコーティングして、抗原として用いた。
【０２０３】
簡潔には、ＥＬＩＳＡプレートを、炭酸緩衝液中のヒトまたはネズミＰＤ−Ｌ１−Ｆｃでコーティングし、次いで、プレートをカゼイン溶液でブロッキングし、そしてＰＢＳ  Ｔｗｅｅｎ−２０中で徹底的に洗浄した後、Ｆａｂ形式の抗ＰＤ−Ｌ１抗体を、ＰＢＳ中の７％ミルクの存在下で、ＥＬＩＳＡウェルに添加した。室温で９０分間攪拌下に置き、そして徹底的に洗浄した後、ＨＲＰにカップリングしたヤギ抗ヒトＦａｂ抗体を添加した。１時間後、プレートを洗浄し、そしてＴＭＢ基質を添加した。１Ｍ  ＨＣｌで反応を停止し、そして６７０ｎｍを参照しながら、４５０ｎｍで光学密度を測定した。
【０２０４】
図５に結果を示す。Ａ１、Ｃ２、Ｃ４およびＨ１２抗体は、ヒトおよびネズミＰＤ−Ｌ１の両方を認識可能であり（それぞれ、黒塗りおよび斜線のバー）、そしてカップリングしたＦｃ部分は認識不能である（白抜きのバー）ことが見出された。ヒトＰＤ−Ｌ１を認識するが、ネズミＰＤ−Ｌ１を認識しないクローンＡ３、およびヒトまたはネズミＰＤ−Ｌ１のいずれも認識しないクローンＥ３が対照として含まれた。
【０２０５】
抗体クローンＡ１、Ｃ２、Ｃ４およびＨ１２は、各々、ヒトＰＤ−Ｌ１およびネズミＰＤ−Ｌ１に対して交差反応性であることが見出された。Ｈ１２は、ヒトＰＤ−Ｌ１およびネズミＰＤ−Ｌ１に類似の結合を示した。
【０２０６】
実施例３：ｉｎ  ｖｉｔｒｏでのＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１相互作用のブロッキング
抗原としてヒトＦｃにカップリングしたＰＤ−１を用いたＥＬＩＳＡアッセイによって、ＰＤ−１へのＰＤ−Ｌ１の結合をブロッキングする能力に関して、抗ＰＤ−Ｌ１抗体を調べた。ビオチン化ヒトまたはネズミＰＤ−Ｌ１を、ＰＤ−１上に添加する前に、Ａ１、Ｃ４、Ｃ２またはＨ１２  Ｆａｂの存在下でプレインキュベーションした。ストレプトアビジン−ＨＲＰ／ＴＭＢ基質を用いて、ＰＤ−１へのＰＤ−Ｌ１の結合を決定した。これらの研究の結果を図６および７に示す。
【０２０７】
Ｆａｂとして発現される抗体Ａ１、Ｃ２、Ｃ４およびＨ１２は、すべて、用量依存方式で、ヒトＰＤ−１へのヒトＰＤ−Ｌ１の結合を有効に阻害することが見出された（図６）。クローンＡ１、Ｃ２およびＣ４は、類似の効率で、この相互作用を阻害することが見出され、一方、Ｈ１２は、Ａ１、Ｃ２およびＣ４よりもわずかにより有効であることが見出された（図６）。
【０２０８】
Ｆａｂとして発現する抗体Ａ１、Ｃ２、Ｃ４およびＨ１２はまた、ネズミＰＤ−１へのネズミＰＤ−Ｌ１の結合もブロッキング可能であることが見出された（図７）。抗体Ａ１、Ｃ２およびＣ４は、ネズミＰＤ−Ｌ１およびネズミＰＤ−１の間の相互作用を、ヒトＰＤ−１へのヒトＰＤ−Ｌ１の結合をブロッキングするために必要な濃度よりも高い濃度で、妨害することが見出された一方、Ｈ１２は、ヒトＰＤ−Ｌ１およびヒトＰＤ−１の間の相互作用をブロッキングするために必要なものと類似の濃度で、結合を中和可能であることが見出された（図７）。
【０２０９】
また、ネズミＰＤ−Ｌ１およびネズミＰＤ−１の間の結合の阻害を、ＩｇＧ１形式で発現される抗体Ｈ１２によってもまた調べ、そして商業的に入手可能な抗ネズミＰＤ−Ｌ１  ＩｇＧ抗体［１０Ｆ．９Ｇ２（ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ，  Ｉｎｃ、米国カリフォルニア州サンディエゴ）］による阻害に比較した。結果を図８に示す。抗体Ｈ１２は、商業的に入手可能な抗ネズミＰＤ−Ｌ１  ＩｇＧ抗体に比較した際、より低い抗体濃度で、ネズミＰＤ−Ｌ１およびネズミＰＤ−１の間の相互作用阻害に有意により有効であることが見出された。
【０２１０】
実施例４：消耗Ｔ細胞活性の回復
抗ＰＤ−Ｌ１抗体Ｈ１２が消耗Ｔ細胞活性を回復する能力を調べた。
簡潔には、Ｔ細胞を健康なドナーから単離し、そして別のドナーから得た単球由来樹状細胞と、同種反応において、７日間培養した（５０，０００Ｔ細胞／５，０００  ＤＣ）。消耗を達成するため、Ｔ細胞は２周期の刺激を経た。抗体Ｈ１２または抗ＰＤ−１抗体ニボルマブの存在下、５日間刺激の第２周期において、消耗Ｔ細胞を培養した後、上清中のＩＦＮ−γを測定し、そしてトリチウム標識チミジンを用いて、増殖を定量化した。
【０２１１】
結果を図９および１０に示す。抗体Ｈ１２は、Ｔ細胞消耗を抑制することが見出され、Ｔ細胞のＩＦＮ−γ分泌（図９）および増殖（図１０）の両方を回復した。増殖およびＩＦＮ−γ分泌は、１０００ｎｇ／ｍｌのＨ１２の処理によって、１０００ｎｇ／ｍｌのニボルマブでの処理と類似のレベルまで回復した。顕著なことに、増殖およびＩＦＮ−γ分泌は、２００ｎｇ／ｍｌおよび４０ｎｇ／ｍｌ濃度では、ニボルマブよりも、Ｈ１２抗体で処理したＴ細胞に関してより高かった。
【０２１２】
実施例５：ＰＤ−Ｌ１に関する抗体アフィニティ
ヒトＰＤ−Ｌ１およびネズミＰＤ−Ｌ１に対する抗体Ｈ１２のアフィニティを、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）分析によって調べた。簡潔には、ＦｃにカップリングしたヒトまたはマウスＰＤ−Ｌ１を、Ｐｒｏｔｅｏｎ  ＸＰＲ３６バイオアナライザー（ＢｉｏＲａｄ）と適合するセンサーチップ上に固定した。次いで、未精製Ｈ１２  Ｆａｂ抽出物を、チップ上に流し、そして会合／解離を記録し、そして分析し、そしてアフィニティ（ＫＤ）を計算した。
【０２１３】
結果を図１１および１２に示す。Ｈ１２は、ＫＤ＝０．３１３ｎＭでヒトＰＤ−Ｌ１に、そしてＫＤ＝３．０４ｎＭでネズミＰＤ−Ｌ１に高いアフィニティを有することが見出された。
【０２１４】
実施例６：腫瘍を治療するための抗ＰＤ−Ｌ１抗体の使用：腫瘍浸潤性リンパ球のｅｘ  ｖｉｖｏ活性化
認可後、シンガポール国立癌センターから肺腫瘍試料を得た。ヒト腫瘍解離キットおよび組織解離デバイスを用いて、試料を解離させた。
【０２１５】
腫瘍解離混合物を、抗ＰＤＬ−１  ＩｇＧ１クローンＨ１２と７日間培養した後、ＥＬＩＳＡによって上清中のＩＦＮ−γを測定した。ニボルマブおよびラムブロリズマブをアッセイ中の陽性対照として用い（どちらも抗ＰＤ−１抗体である）、アイソタイプ抗体を陰性対照として用いた。
【０２１６】
図１３Ａは、抗体の存在下で７日間培養した後の、腫瘍浸潤リンパ球によるＩＦＮ−γの分泌を示す。Ｈ１２は、用量依存方式で、リンパ球がＩＦＮ−γを分泌するように再活性化した。
【０２１７】
解離混合物の別の分画を、同種樹状細胞（ＤＣ）と共培養して、混合リンパ球反応（ＭＬＲ）を開始した。細胞をまず、抗体なしで７日間培養し、そして次いで、Ｈ１２または対照抗体の存在下で７日間培養した。これらの２周期後、ＥＬＩＳＡによって上清中のＩＦＮ−γをアッセイした。
【０２１８】
図１３Ｂは、抗体の存在下でのＭＬＲ後のＩＦＮ−γの分泌を示す。Ｈ１２は、用量依存方式で、腫瘍リンパ球がＩＦＮ−γを分泌する能力を回復した。
実施例７：感染を治療するための抗ＰＤ−Ｌ１抗体の使用：インフルエンザの存在下でのＴ細胞の自己活性化
インフルエンザ陽性ドナーから血液を収集した。単球由来ＤＣをインフルエンザウイルスＡ／ＰＲ／８／３４（Ｈ１Ｎ１）に感染させた。５日間の最初の培養周期では、感染ＤＣを同じドナー由来のＰＢＭＣと混合した。次いで、第二周期では、Ｈ１２または対照抗体の存在下で、細胞を５日間培養した。これらの２周期後、培養中の細胞の大部分は、インフルエンザ特異的Ｔ細胞である。培養２周期の終了時、ＥＬＩＳＡによって、上清中のＩＦＮ−γをアッセイした。このアッセイにおいて、Ｈ１２をＩｇＧ１抗体としてまたはＩｇＧ４抗体としてのいずれかで試験した。
【０２１９】
図１４は、抗体の存在下で、インフルエンザとＰＢＭＣを培養した後に分泌されたＩＦＮ−γを示す。Ｈ１２−ＩｇＧ１およびＨ１２−ＩｇＧ４はどちらも、用量依存方式で、ウイルス刺激に際して、リンパ球がＩＦＮ−γを分泌する能力を回復可能であった。
【０２２０】
実施例８：Ｈ１２の特異性／交差反応性
Ｈ１２によるＣＤ２８ファミリーの多様なメンバーの認識を、ＥＬＩＳＡによって試験した。
【０２２１】
図１５は、異なる抗原：ヒト（ｈｕ）ＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１、ＰＤ−Ｌ２、ＴＩＭ−３、ＬＡＧ−３、ＣＴＬ−Ａ４、ＢＬＴＡ、ＩＣＯＳおよびＣＤ２８、ならびにカニクイザル（ｃｙ）およびマウス（ｍｏ）ＰＤ−Ｌ１に対するＨ１２でのＥＬＩＳＡを示す。Ｈ１２はＰＤ−Ｌ１分子に対する特異性、および種間の交差反応性を示した。
【０２２２】
実施例９：Ｈ１２抗体の予備的ｉｎ  ｖｉｖｏ有効性
２つの腫瘍モデル：ＣＴ２６細胞株を用いた結腸癌モデルおよびＢ１６Ｆ１０細胞株を用いた黒色腫モデルにおいて、Ｈ１２を試験した。
【０２２３】
Ｂａｌｂ／ＣまたはＣ５７ＢＬ／６マウスの左脇腹に、それぞれ、０．５ｘ１０６  ＣＴ２６または０．２ｘ１０６  Ｂ１６Ｆ１０腫瘍細胞を第０日に接種し、そして第７日、第１１日、第１４日、第１８日および第２１日に、２５０μｇのＨ１２またはアイソタイプＩｇＧ１を腹腔内注射した。次いで、腫瘍増殖を分析し、ノギスでサイズを測定し、そして以下のように体積を計算した。Ｖ＝Ｉ２ｘＬ／２（Ｉ＝短い側およびＬ＝長い側）。
【０２２４】
図１６Ａおよび１６Ｂは、両方のモデルにおける腫瘍接種後の腫瘍増殖を示す。Ｈ１２は、両方のモデルにおいて、腫瘍増殖を阻害した。
実施例１０：操作Ｈ１２抗体を用いたデータ
生殖系列フレームワークにフレームワークを変換するため、Ｈ１２クローンを操作した；新規クローンＨ１２＿ＧＬの重鎖はわずかに修飾され、軽鎖はＨ１２の元来のクローンと同じままであった。
【０２２５】
Ｈ１２＿ＧＬをブロッキングアッセイにおいて試験した。簡潔には、製造者のプロトコルにしたがって、２９３ｔｆｅｃｔｉｎ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を用い、ヒトＰＤ−Ｌ１タンパク質を発現するｐｃＤＮＡ３．１プラスミドでＨＥＫ２９３細胞をトランスフェクションした。ＰＥＣｙ７（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）にコンジュゲート化された商業的抗マウスまたは抗ヒトＰＤ−Ｌ１で、ＰＤ−Ｌ１発現を確認した。フィコエリトリン（ＰＥ）で標識した５０〜１００ｎＭの組換えヒトＰＤ−１を用いて、トランスフェクション細胞上に発現されるＰＤ−Ｌ１に結合させた。連続希釈抗体（抗ＰＤ−Ｌ１  Ｈ１２、Ｈ１２＿ＧＬまたはアイソタイプ対照）をヒトＰＤ−１−ＰＥと３０分間混合した後、ＰＤ−Ｌ１トランスフェクション細胞に添加した。細胞をＰＢＳで３回洗浄し、そしてＢＤ  ＦＡＣＳＣａｎｔｏ  ＩＩ（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）上ですべてのデータを収集し、そしてＢＤ  ＦＡＣＳＤｉｖａソフトウェア（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）上で分析した。
【０２２６】
図１７は、Ｈ１２＿ＧＬが、Ｈ１２と同程度に効率的にＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１相互作用をブロッキングしたことを示す。
実施例１１：抗ＰＤ−Ｌ１抗体Ｈ１２のｉｎ  ｖｉｖｏ効率：マウスモデルにおける腫瘍増殖の調節
Ｈ１２はマウスＰＤ−Ｌ１と交差反応することが示されたため、結腸癌ＭＣ３８細胞を用いて、マウスモデルにおいて、腫瘍増殖を制御する能力に関して、この抗体を評価した。
【０２２７】
２００万のＭＣ３８細胞を、第０日、マウスに皮下接種し、そして動物あたり２００μｇの５回用量の抗ＰＤ−Ｌ１  Ｈ１２  ＩｇＧ１またはアイソタイプ対照抗体を、第８日から腹腔内注射した。実験全体で、腫瘍サイズを測定した。
【０２２８】
２回の独立の実験の結果を図１８Ａおよび１８Ｂに示す。グラフは、抗ＰＤ−Ｌ１抗体Ｈ１２または陰性アイソタイプ対照の存在下で、ＭＣ３８腫瘍増殖モデルにおける腫瘍増殖（平均±ＳＥＭ）を示す。どちらの実験においても、Ｈ１２は、腫瘍増殖を制御可能であった。
【０２２９】
実施例１２：抗ＰＤ−Ｌ１  ｍＡｂのターゲットへの結合およびアテゾリズマブとの比較
ヒトＰＤ−Ｌ１への抗ＰＤ−Ｌ１クローンＨ１２およびＣ４の結合を、商業的に入手可能な抗ＰＤ−Ｌ１  ＩｇＧ１抗体であるアテゾリズマブのものに比較した。
【０２３０】
抗体をプレートにコーティングし、そして多様な濃度のビオチン化ＰＤ−Ｌ１を添加した。結合をＥＬＩＳＡによって測定した。抗体を、コーティング緩衝液中、２μｇ／ｍＬで、ｍａｘｉｓｏｒｐプレート上にコーティングし、そして４℃で一晩インキュベーションした。翌日、プレートを洗浄緩衝液（ＰＢＳ＋０．０５％Ｔｗｅｅｎ−２０）で洗浄し、そしてカゼインで、室温で１時間ブロッキングした。次いで、再び、洗浄緩衝液を用いてプレートを洗浄した。次いで、多様な濃度のビオチン化ヒトＰＤ−Ｌ１をプレートに添加し、そして次いで、プレートを室温で１時間インキュベーションした。次いで、再び、洗浄緩衝液を用いてプレートを洗浄した。次いで、ストレプトアビジン−ＨＲＰを添加し、そして室温で１時間インキュベーションして、異なる抗体に結合したビオチン化ヒトＰＤ−Ｌ１を検出した。次いで、再び、洗浄緩衝液を用いてプレートを洗浄した。最後に、ＴＭＢを添加して、ＥＬＩＳＡを現像し；１Ｍ  Ｈ−Ｃｌを用いて、ＨＲＰによるＴＭＢ変換を停止した。
【０２３１】
単一の濃度でプレート上に結合させ、そして多様な濃度の抗体を添加する、ＰＤ−Ｌ１抗原を用いたＥＬＩＳＡによって、アビディティもまた評価した。二次抗体を用いて、抗原に複合体化した抗ＰＤ−Ｌ１抗体を検出した。ニュートラアビジンを、コーティング緩衝液中、２μｇ／ｍＬでｍａｘｉｓｏｒｐプレート上にコーティングし、そして４℃で一晩インキュベーションした。翌日、プレートを洗浄緩衝液（ＰＢＳ＋０．０５％Ｔｗｅｅｎ−２０）で洗浄し、そしてカゼインで、室温で１時間ブロッキングした。次いで、再び、洗浄緩衝液を用いてプレートを洗浄した。次いで、ビオチン化ヒトＰＤ−Ｌ１を０．２μｇ／ｍＬでプレートに添加し、そして室温で１時間インキュベーションした。次いで、再び、洗浄緩衝液を用いてプレートを洗浄した。次いで、異なる抗体を多様な濃度で添加し、そして室温で１時間インキュベーションした。次いで、再び、洗浄緩衝液を用いてプレートを洗浄した。次いで、抗ヒトＦｃ−ＨＲＰを添加し、室温で１時間インキュベーションした。次いで、再び、洗浄緩衝液を用いてプレートを洗浄した。最後に、ＴＭＢを添加して、ＥＬＩＳＡを現像し；１Ｍ  Ｈ−Ｃｌを用いて、ＨＲＰによるＴＭＢ変換を停止した。
【０２３２】
図１９Ａは、ＰＤ−Ｌ１への抗体（およびアイソタイプ対照）の結合を提示する（２つ組の平均±ＳＥＭ）。Ｈ１２は、ＰＤ−Ｌ１に関して、アテゾリズマブと類似の結合曲線を示す。ＰＤ−Ｌ１に対するＨ１２のアフィニティは、ＰＤ−Ｌ１に対するアテゾリズマブのアフィニティより高い。
【０２３３】
図１９Ｂは、そのターゲットに対する抗体のアビディティを提示する（２つ組の平均±ＳＥＭ）。Ｈ１２は、アテゾリズマブと類似のＰＤ−Ｌ１に対する高いアビディティを示し、一方、Ｃ４は、中程度のアビディティを示す。ＰＤ−Ｌ１に対するＨ１２のアビディティは、ＰＤ−Ｌ１に対するアテゾリズマブのアビディティより高い。
【０２３４】
細胞膜で恒常的にＰＤ−Ｌ１を発現するＭＤＡ−ＭＢ−２３１ヒト乳癌細胞株への結合を調べることによってもまた、ＰＤ−Ｌ１への結合を試験した。フローサイトメトリーによって、抗体の結合を測定した。
【０２３５】
図２０は、抗体の異なる濃度に関する平均蛍光指数（ＭＦＩ）を提示する（２つ組の平均±ＳＥＭ）。抗ＰＤ−Ｌ１抗体Ｈ１２  ＩｇＧ１およびＣ４  ＩｇＧ１は、ＰＤ−Ｌ１を発現する細胞に効率的に結合する。
【０２３６】
実施例１３：抗ＰＤ−Ｌ１抗体のｉｎ  ｖｉｔｒｏ活性：ＰＤ−１へのＰＤ−Ｌ１結合のブロッキング
抗体がＰＤ−Ｌ１のその受容体ＰＤ−１への結合をブロッキングする能力をＥＬＩＳＡによって評価した。簡潔には、抗体をＰＤ−Ｌ１とプレインキュベーションし、そして次いで、ＰＤ−１をコーティングしたＥＬＩＳＡプレート上に添加した。洗浄後、ＰＤ−１に結合したＰＤ−Ｌ１の存在を、抗体で検出した。
【０２３７】
図２１は、抗ＰＤ−Ｌ１抗体（またはアイソタイプ対照）の存在下または非存在下で、ＰＤ−１へのＰＤ−Ｌ１の結合を調べる実験の結果を提示する（２つ組の平均±ＳＤ）。抗ＰＤ−Ｌ１抗体Ｈ１２およびＣ４は、ＰＤ−Ｌ１のその受容体ＰＤ−１への結合をブロッキング可能である。Ｈ１２およびＣ４の両方が、アテゾリズマブよりも高い効率で、ＰＤ−Ｌ１およびＰＤ−１の間の相互作用をブロッキング可能であった。
【図１−１】
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【図１−２】
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【図２−１】
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【図２−２】
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【図２−３】
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【図３】
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【図４−１】
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【図４−２】
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【図４−３】
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【図４−４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７】
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【図１８】
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【図１９】
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【図２０】
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【図２１】
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【配列表】
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【国際調査報告】
2018508475.tif 000056
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